(57)【要約】  γｃサイトカインの活性を抑制するための、γｃサブユニット結合部位のコンセンサス配列に基づいた安定なペプチドアンタゴニストを開示する。このペプチドアンタゴニストは、γｃサイトカインファミリーの複数のメンバーの活性を抑制することができる。γｃファミリーサイトカインは、白血病、自己免疫疾患、膠原病、糖尿病、皮膚疾患、変性性神経疾患、移植片対宿主病（GvHD）などの重要なヒト疾患と関連している。したがって、γｃサイトカイン活性の阻害剤は、治療剤および美容剤、ならびに研究ツールとして有用である。
2020513020.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン（IL）タンパク質のヘリックスＤ内のγｃボックス領域のアミノ酸配列を少なくとも２つ含む複合ペプチドであって、
該複合ペプチドが、Ｄ／Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ／Ｑ／Ｎ−Ｓ／Ｒ−Ｘ−Ｉ／Ｋ−Ｘ−Ｌ／Ｉ−Ｘ−Ｑ（配列番号２）（式中、Ｘは任意のアミノ酸を示す）で示されるアミノ酸配列を含むこと、
該複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、および
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること
を特徴とする複合ペプチド。
【請求項２】
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、グラブス触媒で触媒された閉環メタセシス反応によって連結され、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを形成している、請求項１に記載の複合ペプチド。
【請求項３】
前記複合ペプチドのアミノ酸が、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造のアミノ酸、（Ｌ）立体化学構造のアミノ酸、（Ｒ）立体化学構造のアミノ酸および（Ｓ）立体化学構造のアミノ酸からなる群から選択され、
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、Ｒ−プロペニルアラニン（CAS：288617-76-5；R3Ala）、Ｓ−プロペニルアラニン（CAS：288617-71-0；S3Ala）、Ｄ−アリルグリシン（CAS：170642-28-1；D3Gly）、Ｌ−アリルグリシン（CAS：146549-21-5；L3Gly）、Ｒ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-77-6；R5Ala）、Ｓ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-73-2；S5Ala）、Ｒ−ペンテニルグリシン（CAS：1093645-21-6；R5Gly）、Ｓ−ペンテニルグリシン（CAS：856412-22-1；S5Gly）、Ｒ−ブテニルアラニン（CAS：1311933-82-0；R4Ala）、Ｓ−ブテニルアラニン（CAS：288617-72-1；S4Ala）、Ｒ−ブテニルグリシン（CAS：865352-21-2；R4Gly）、Ｓ−ブテニルグリシン（CAS：851909-08-5；S4Gly）、Ｒ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-78-7；R6Ala）、Ｓ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-74-3；S6Ala）、Ｒ−ヘキセニルグリシン（CAS：1208226-88-3；R6Gly）、Ｓ−ヘキセニルグリシン（CAS：1251904-51-4；S6Gly）、Ｒ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-84-2；R7Ala）、Ｓ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-83-1；S7Ala）、Ｒ−ヘプテニルグリシン（CAS：1262886-63-4；R7Gly）、Ｓ−ヘプテニルグリシン（CAS：1058705-57-9；S7Gly）、ジ置換ビスプロペニルグリシン（CAS：1311992-97-8；bis3Gly）、ジ置換ビスペンテニルグリシン（CAS：1068435-19-7；bis5Gly）、ジ置換ビスブテニルグリシン（bis4Gly）、ジ置換ビスヘキセニルグリシン（bis6Gly）、ジ置換ビスヘプテニルグリシン（bis7Gly）、Ｒ−オクテニルアラニン（CAS：945212-26-0；R8Ala）、Ｓ−オクテニルアラニン（CAS：288617-75-4；S8Ala）、Ｒ−オクテニルグリシン（CAS：1191429-20-5；R8Gly）およびＳ−オクテニルグリシン（CAS：1262886-64-5；S8Gly）からなる群から選択される、請求項１に記載の複合ペプチド。
【請求項４】
前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントによって連結された前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、ｎ−２個のアミノ酸によって隔てられており、ｎが、前記ペプチド内炭化水素リンカーエレメントが結合している該少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸とこれらに挟まれているアミノ酸の数の総和である、請求項１に記載の複合ペプチド。
【請求項５】
前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントによって連結された前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、３個のアミノ酸によって隔てられている場合、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントが、前記複合ペプチドの１回転αヘリックスの両端を架橋している、請求項１に記載の複合ペプチド。
【請求項６】
前記複合ペプチドが、１個以上の連続していない１回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの該１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置が、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋４番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、該１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋４番目が、該１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり、ｉ番目およびｉ＋４番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸が含まれる、請求項５に記載の複合ペプチド。
【請求項７】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、Ｒ−プロペニルアラニン（CAS：288617-76-5；R3Ala）、Ｓ−プロペニルアラニン（CAS：288617-71-0；S3Ala）、Ｄ−アリルグリシン（CAS：170642-28-1；D3Gly）およびＬ−アリルグリシン（CAS：146549-21-5；L3Gly）からなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、Ｒ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-77-6；R5Ala）、Ｓ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-73-2；S5Ala）、Ｒ−ペンテニルグリシン（CAS：1093645-21-6；R5Gly）およびＳ−ペンテニルグリシン（CAS：856412-22-1；S5Gly）からなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１で示される、請求項６に記載の複合ペプチド。
【請求項８】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式２で示される、請求項６に記載の複合ペプチド。
【請求項９】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、Ｒ−ブテニルアラニン（CAS：1311933-82-0；R4Ala）、Ｓ−ブテニルアラニン（CAS：288617-72-1；S4Ala）、Ｒ−ブテニルグリシン（CAS：865352-21-2；R4Gly）およびＳ−ブテニルグリシン（CAS：851909-08-5；S4Gly）からなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式３で示される、請求項６に記載の複合ペプチド。
【請求項１０】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式４で示される、請求項６に記載の複合ペプチド。
【請求項１１】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、Ｒ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-78-7；R6Ala）、Ｓ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-74-3；S6Ala）、Ｒ−ヘキセニルグリシン（CAS：1208226-88-3；R6Gly）およびＳ−ヘキセニルグリシン（CAS：1251904-51-4；S6Gly）からなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式５で示される、請求項６に記載の複合ペプチド。
【請求項１２】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式６で示される、請求項６に記載の複合ペプチド。
【請求項１３】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、Ｒ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-84-2；R7Ala）、Ｓ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-83-1；S7Ala）、Ｒ−ヘプテニルグリシン（CAS：1262886-63-4；R7Gly）およびＳ−ヘプテニルグリシン（CAS：1058705-57-9；S7Gly）からなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式７で示される、請求項６に記載の複合ペプチド。
【請求項１４】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式８で示される、請求項６に記載の複合ペプチド。
【請求項１５】
前記複合ペプチドが２個以上の連続した１回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの第１の１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置が、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋４番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、第１の１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋４番目が、第１の１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；該複合ペプチドの第２の１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置が、該複合ペプチドのｉ＋４番目からｉ＋８番目のアミノ酸に相当し、ｉ＋４番目が、第２の１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋８番目が、第２の１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；ｉ番目、ｉ＋４番目およびｉ＋８番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸を含む、請求項５に記載の複合ペプチド。
【請求項１６】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、ジ置換ビスプロペニルグリシン（CAS：1311992-97-8；bis3Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式９で示される、請求項１５に記載の複合ペプチド。
【請求項１７】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、ジ置換ビスペンテニルグリシン（CAS：1068435-19-7；bis5Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１０で示される、請求項１５に記載の複合ペプチド。
【請求項１８】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、ジ置換ビスブテニルグリシン（bis4Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１１で示される、請求項１５に記載の複合ペプチド。
【請求項１９】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸がbis5Glyであり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１２で示される、請求項１５に記載の複合ペプチド。
【請求項２０】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸がbis4Glyであり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１３で示される、請求項１５に記載の複合ペプチド。
【請求項２１】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、ジ置換ビスヘキセニルグリシン（bis6Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１４で示される、請求項１５に記載の複合ペプチド。
【請求項２２】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸がbis3Glyであり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１５で示される、請求項１５に記載の複合ペプチド。
【請求項２３】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、ジ置換ビスヘプテニルグリシン（bis7Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１６で示される、請求項１５に記載の複合ペプチド。
【請求項２４】
前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素によって連結された前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、６個の残基によって隔てられている場合、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントが、前記複合ペプチドの２回転αヘリックスの両端を架橋している、請求項１に記載の複合ペプチド。
【請求項２５】
前記複合ペプチドが、１個以上の連続していない２回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの該２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置が、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋７番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、該２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋７番目が、該２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり、ｉ番目およびｉ＋７番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸が含まれる、請求項２４に記載の複合ペプチド。
【請求項２６】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、Ｒ−オクテニルアラニン（CAS：945212-26-0；R8Ala）、Ｓ−オクテニルアラニン（CAS：288617-75-4；S8Ala）、Ｒ−オクテニルグリシン（CAS：1191429-20-5；R8Gly）およびＳ−オクテニルグリシン（CAS：1262886-64-5；S8Gly）からなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１７で示される、請求項２５に記載の複合ペプチド。
【請求項２７】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R8Ala、S8Ala、R8GlyおよびS8Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１８で示される、請求項２５に記載の複合ペプチド。
【請求項２８】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式１９で示される、請求項２５に記載の複合ペプチド。
【請求項２９】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式２０で示される、請求項２５に記載の複合ペプチド。
【請求項３０】
前記複合ペプチドが２個以上の連続した２回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの第１の２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置が、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋７番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、第１の２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋７番目が、第１の２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；該複合ペプチドの第２の２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置が、該複合ペプチドのｉ＋７番目からｉ＋１４番目のアミノ酸に相当し、ｉ＋７番目が、第２の２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋１４番目が、第２の２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；ｉ番目、ｉ＋７番目およびｉ＋１４番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸を含む、請求項２４に記載の複合ペプチド。
【請求項３１】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R8Ala、S8Ala、R8GlyおよびS8Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸がbis5Glyであり、ｉ＋１４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R8Ala、S8Ala、R8GlyおよびS8Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式２１で示される、請求項３０に記載の複合ペプチド。
【請求項３２】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸がbis6Glyであり、ｉ＋１４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式２２で示される、請求項３０に記載の複合ペプチド。
【請求項３３】
ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸がbis7Glyであり、ｉ＋１４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸が、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントが式２３で示される、請求項３０に記載の複合ペプチド。
【請求項３４】
前記複合ペプチドの誘導体が、該複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項３５】
前記複合ペプチドが、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制する、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項３６】
シグナルペプチドをさらに含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項３７】
前記複合ペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖残基に結合した１つ以上のさらなる分子をさらに含む、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項３８】
前記１つ以上のさらなる分子が、ウシ血清アルブミン（BSA）、アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）、IgGのFc領域、足場として機能する生体タンパク質、細胞特異的抗原に対する抗体、受容体、リガンド、金属イオンおよびポリエチレングリコール（PEG）からなる群から選択される、請求項３７に記載の複合ペプチド。
【請求項３９】
前記複合ペプチドが、インターロイキン（IL）タンパク質のヘリックスＤ内のγｃボックス領域のアミノ酸配列を少なくとも２つ含むこと、
前記複合ペプチドが、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列を含むこと、
前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、および
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていることを特徴とする、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項４０】
前記複合ペプチドが、インターロイキン（IL）タンパク質のヘリックスＤ内のγｃボックス領域のアミノ酸配列を少なくとも２つ含むこと、
前記複合ペプチドが、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列を含むこと、
前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、および
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていることを特徴とする、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項４１】
IL-15、IL-21またはその組み合わせの細胞増殖促進活性を抑制する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項４２】
IL-15のSTAT5シグナル伝達活性を抑制する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項４３】
IL-21のSTAT3シグナル伝達活性を抑制する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項４４】
少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを有する前記複合ペプチドの胃内での安定性が、ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを有していない非修飾複合ペプチドよりも向上している、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項４５】
医薬組成物であって、治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含み、該複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項４６】
前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節する、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
γｃサイトカイン介在性疾患を予防または治療する方法であって、
治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を、前記予防または治療を必要とする対象に投与することによって、γｃサイトカイン介在性疾患を予防または治療することを含み、
前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、
前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、
前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに
前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むこと
を特徴とする方法。
【請求項４８】
前記γｃサイトカイン介在性疾患が、CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫症、セリアック病、橋本甲状腺炎、関節リウマチ、糖尿病、乾癬、多発性硬化症、ぶどう膜炎、眼炎症、移植片対宿主病（GvHD）、炎症性腸疾患（IBD）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）全身性エリテマトーデスおよび円形脱毛症からなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患を予防するまたは治療する方法であって、
治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を、前記予防または治療を必要とする対象に投与することによって、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患を予防または治療することを含み、
前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、
前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、
前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに
前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むこと
を特徴とする方法。
【請求項５０】
前記HAM/TSPに伴う疾患が、成人Ｔ細胞白血病（ATL）、HTLV関連脊髄症／熱帯性痙性不全対麻痺症（HAM/TSP）、およびHTLVに伴うその他の非腫瘍性炎症性疾患（ぶどう膜炎（HTLV-1関連ぶどう膜炎）、関節症、肺疾患、皮膚炎、外分泌腺症、筋炎など）からなる群から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
炎症性呼吸器疾患を予防または治療する方法であって、
治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を、前記予防または治療を必要とする対象に投与することによって、炎症性呼吸器疾患を予防または治療することを含み、
前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、
前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、
前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに
前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むこと
を特徴とする方法。
【請求項５２】
前記炎症性呼吸器疾患が、喘息、副鼻腔炎、花粉症、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、アレルギー性鼻炎、急性耳炎、慢性耳炎および肺線維症からなる群から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
美容状態を予防または治療する方法であって、
治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を、前記予防または治療を必要とする対象に投与することによって、美容状態を予防または治療することを含み、
前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、
前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、
前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに
前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むこと
を特徴とする方法。
【請求項５４】
前記美容状態が、ざ瘡、脱毛、日焼け、爪の維持および老化の出現からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
患者の状態の予防用または治療用キットであって、
治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を含み、
前記状態が、γｃサイトカイン介在性疾患、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患、炎症性呼吸器疾患、美容状態またはこれらの組み合わせであること、
前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、
前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、
前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、
前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに
前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むこと
を特徴とするキット。
【請求項５６】
前記状態が、CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫症、セリアック病、橋本甲状腺炎、関節リウマチ、糖尿病、乾癬、多発性硬化症、ぶどう膜炎、眼炎症、移植片対宿主病（GvHD）、炎症性腸疾患（IBD）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、全身性エリテマトーデス、円形脱毛症、成人Ｔ細胞白血病（ATL）、HTLV関連脊髄症／熱帯性痙性不全対麻痺症（HAM/TSP）、HTLVに伴うその他の非腫瘍性炎症性疾患（ぶどう膜炎（HTLV-1関連ぶどう膜炎）、関節症、肺疾患、皮膚炎、外分泌腺症、筋炎など）、喘息、副鼻腔炎、花粉症、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、アレルギー性鼻炎、急性耳炎、慢性耳炎、肺線維症、ざ瘡、脱毛、日焼け、爪の維持および老化の出現のうちの１種以上である、請求項５５に記載のキット。
【請求項５７】
前記ペプチド内炭化水素リンカーエレメントに存在する１つ以上の炭素−炭素二重結合が、１個以上のさらなる化学官能基を付加するための１つ以上の有機化学反応に利用される、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の複合ペプチド。
【請求項５８】
前記１つ以上の有機化学反応がアルケン反応を含む、請求項５７に記載の複合ペプチド。
【請求項５９】
前記アルケン反応が、ヒドロホウ素化、オキシ水銀化、水和、塩素化、臭素化、ＨＦ、ＨＢｒ、ＨＣｌまたはＨＩの付加、ジヒドロキシル化、エポキシ化、水素化およびシクロプロパン化からなる群から選択される、請求項５８に記載の複合ペプチド。
【請求項６０】
前記１個以上のさらなる化学官能基が、アルケン反応後に付加可能であり、前記１個以上のさらなる化学官能基の付加が、１個以上の化学置換基の共有結合付加を含み、前記１個以上の化学置換基の共有結合付加が、エポキシドおよび水酸基による求核反応を含む、請求項５９に記載の複合ペプチド。
【請求項６１】
前記１個以上のさらなる化学官能基が、ビオチン、放射性同位元素、治療剤、ラパマイシン、ビンブラスチン、タキソール、非タンパク質性蛍光化学基、FITC、ヒドラジド、ローダミン、マレイミド、タンパク質性蛍光基、GFP、YFPおよびmCherryからなる群から選択される、請求項６０に記載の複合ペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権および関連出願の相互参照
本出願は、2017年4月7日に出願された米国仮出願第62/483,210号の利益を主張するものであり、この出願は引用によりその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
電子形式の配列表
本願は、ASCIIテキストファイルとして作成された電子形式の配列表とともにEFS-Web経由で出願されたものである。この電子形式の配列表は、BION010WOSEQLIST.txtのファイル名で提供され、2018年3月30日に最終更新されたものであり、60,939バイトのサイズである。この電子形式の配列表に記載の情報は、米国特許法1.52条(e)に従い、本明細書の一部を構成するものとしてその全体が援用される。
【０００３】
技術分野
いくつかの実施形態は、上皮細胞、間質細胞および免疫細胞から主に産生され、多様なリンパ球の正常な活性化および病的な活性化を制御する哺乳動物サイトカイン群であるγｃファミリーサイトカインのペプチドアンタゴニストに関する。また、いくつかの実施形態は、特定のヒト疾患の治療のための、前記ペプチドの治療的使用に関する。さらに、本発明の実施形態は、前記ペプチドの薬用化粧品としての用途に関する。さらに、前記ペプチドの標的疾患、薬用化粧品としての用途、投与方法、製造方法および商品化方法について開示する。
【背景技術】
【０００４】
先行技術の記載
サイトカインは、細胞の増殖、細胞の機能分化、およびプログラム細胞死（アポトーシス細胞死）の促進や予防などの様々な細胞機能に介在する多様な可溶性因子群である。サイトカインは、特化した腺組織から産生されるホルモンとは異なり、上皮細胞、間質細胞、免疫細胞などの種々の細胞から産生されうる。
【０００５】
γｃファミリーサイトカインは、上皮細胞、間質細胞および免疫細胞から主に産生され、多様なリンパ球の正常な活性化および病的な活性化を制御する哺乳動物サイトカイン群である。これらのサイトカインは、胸腺におけるＴ細胞の初期発生や末梢におけるＴ細胞のホメオスタシスに必須である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
いくつかの実施形態において、インターロイキン（IL）タンパク質のヘリックスＤ内のγｃボックス領域のアミノ酸配列を少なくとも２つ含む複合ペプチドであって、該複合ペプチドが、Ｄ／Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ／Ｑ／Ｎ−Ｓ／Ｒ−Ｘ−Ｉ／Ｋ−Ｘ−Ｌ／Ｉ−Ｘ−Ｑ（配列番号２）（式中、Ｘは任意のアミノ酸を示す）で示されるアミノ酸配列を含むこと、該複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、および前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていることを特徴とする複合ペプチドを提供する。
【０００７】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸は、グラブス触媒で触媒された閉環メタセシス反応によって連結され、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを形成している。
【０００８】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドのアミノ酸は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造のアミノ酸、（Ｌ）立体化学構造のアミノ酸、（Ｒ）立体化学構造のアミノ酸および（Ｓ）立体化学構造のアミノ酸からなる群から選択され、前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸は、Ｒ−プロペニルアラニン（CAS：288617-76-5；R3Ala）、Ｓ−プロペニルアラニン（CAS：288617-71-0；S3Ala）、Ｄ−アリルグリシン（CAS：170642-28-1；D3Gly）、Ｌ−アリルグリシン（CAS：146549-21-5；L3Gly）、Ｒ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-77-6；R5Ala）、Ｓ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-73-2；S5Ala）、Ｒ−ペンテニルグリシン（CAS：1093645-21-6；R5Gly）、Ｓ−ペンテニルグリシン（CAS：856412-22-1；S5Gly）、Ｒ−ブテニルアラニン（CAS：1311933-82-0；R4Ala）、Ｓ−ブテニルアラニン（CAS：288617-72-1；S4Ala）、Ｒ−ブテニルグリシン（CAS：865352-21-2；R4Gly）、Ｓ−ブテニルグリシン（CAS：851909-08-5；S4Gly）、Ｒ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-78-7；R6Ala）、Ｓ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-74-3；S6Ala）、Ｒ−ヘキセニルグリシン（CAS：1208226-88-3；R6Gly）、Ｓ−ヘキセニルグリシン（CAS：1251904-51-4；S6Gly）、Ｒ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-84-2；R7Ala）、Ｓ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-83-1；S7Ala）、Ｒ−ヘプテニルグリシン（CAS：1262886-63-4；R7Gly）、Ｓ−ヘプテニルグリシン（CAS：1058705-57-9；S7Gly）、ジ置換ビスプロペニルグリシン（CAS：1311992-97-8；bis3Gly）、ジ置換ビスペンテニルグリシン（CAS：1068435-19-7；bis5Gly）、ジ置換ビスブテニルグリシン（bis4Gly）、ジ置換ビスヘキセニルグリシン（bis6Gly）、ジ置換ビスヘプテニルグリシン（bis7Gly）、Ｒ−オクテニルアラニン（CAS：945212-26-0；R8Ala）、Ｓ−オクテニルアラニン（CAS：288617-75-4；S8Ala）、Ｒ−オクテニルグリシン（CAS：1191429-20-5；R8Gly）およびＳ−オクテニルグリシン（CAS：1262886-64-5；S8Gly）からなる群から選択される。
【０００９】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントによって連結された前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸は、ｎ−２個のアミノ酸によって隔てられており、ｎは、前記ペプチド内炭化水素リンカーエレメントが結合している該少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸とこれらに挟まれているアミノ酸の数の総和である。
【００１０】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントによって連結された前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、３個のアミノ酸によって隔てられている場合、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、前記複合ペプチドの１回転αヘリックスの両端を架橋している。
【００１１】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記複合ペプチドが、１個以上の連続していない１回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの該１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋４番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、該１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋４番目が、該１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり、ｉ番目およびｉ＋４番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸が含まれる。
【００１２】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、Ｒ−プロペニルアラニン（CAS：288617-76-5；R3Ala）、Ｓ−プロペニルアラニン（CAS：288617-71-0；S3Ala）、Ｄ−アリルグリシン（CAS：170642-28-1；D3Gly）およびＬ−アリルグリシン（CAS：146549-21-5；L3Gly）からなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、Ｒ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-77-6；R5Ala）、Ｓ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-73-2；S5Ala）、Ｒ−ペンテニルグリシン（CAS：1093645-21-6；R5Gly）およびＳ−ペンテニルグリシン（CAS：856412-22-1；S5Gly）からなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１で示される。
【００１３】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式２で示される。
【００１４】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、Ｒ−ブテニルアラニン（CAS：1311933-82-0；R4Ala）、Ｓ−ブテニルアラニン（CAS：288617-72-1；S4Ala）、Ｒ−ブテニルグリシン（CAS：865352-21-2；R4Gly）およびＳ−ブテニルグリシン（CAS：851909-08-5；S4Gly）からなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式３で示される。
【００１５】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式４で示される。
【００１６】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、Ｒ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-78-7；R6Ala）、Ｓ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-74-3；S6Ala）、Ｒ−ヘキセニルグリシン（CAS：1208226-88-3；R6Gly）およびＳ−ヘキセニルグリシン（CAS：1251904-51-4；S6Gly）からなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式５で示される。
【００１７】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式６で示される。
【００１８】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、Ｒ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-84-2；R7Ala）、Ｓ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-83-1；S7Ala）、Ｒ−ヘプテニルグリシン（CAS：1262886-63-4；R7Gly）およびＳ−ヘプテニルグリシン（CAS：1058705-57-9；S7Gly）からなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式７で示される。
【００１９】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式８で示される。
【００２０】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記複合ペプチドが２個以上の連続した１回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの第１の１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋４番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、第１の１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋４番目が、第１の１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；該複合ペプチドの第２の１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ＋４番目からｉ＋８番目のアミノ酸に相当し、ｉ＋４番目が、第２の１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋８番目が、第２の１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；ｉ番目、ｉ＋４番目およびｉ＋８番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸を含む。
【００２１】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、ジ置換ビスプロペニルグリシン（CAS：1311992-97-8；bis3Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式９で示される。
【００２２】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、ジ置換ビスペンテニルグリシン（CAS：1068435-19-7；bis5Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１０で示される。
【００２３】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、ジ置換ビスブテニルグリシン（bis4Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１１で示される。
【００２４】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸はbis5Glyであり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１２で示される。
【００２５】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸はbis4Glyであり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１３で示される。
【００２６】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、ジ置換ビスヘキセニルグリシン（bis6Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R4Ala、S4Ala、R4GlyおよびS4Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１４で示される。
【００２７】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸はbis3Glyであり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１５で示される。
【００２８】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、ｉ＋４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、ジ置換ビスヘプテニルグリシン（bis7Gly）であり、ｉ＋８番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R3Ala、S3Ala、D3GlyおよびL3Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１６で示される。
【００２９】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素によって連結された前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、６個の残基によって隔てられている場合、前記少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、前記複合ペプチドの２回転αヘリックスの両端を架橋している。
【００３０】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記複合ペプチドが、１個以上の連続していない２回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの該２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋７番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、該２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋７番目が、該２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり、ｉ番目およびｉ＋７番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸が含まれる。
【００３１】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、Ｒ−オクテニルアラニン（CAS：945212-26-0；R8Ala）、Ｓ−オクテニルアラニン（CAS：288617-75-4；S8Ala）、Ｒ−オクテニルグリシン（CAS：1191429-20-5；R8Gly）およびＳ−オクテニルグリシン（CAS：1262886-64-5；S8Gly）からなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１７で示される。
【００３２】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R8Ala、S8Ala、R8GlyおよびS8Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R5Ala、S5Ala、R5GlyおよびS5Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１８で示される。
【００３３】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式１９で示される。
【００３４】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式２０で示される。
【００３５】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記複合ペプチドが２個以上の連続した２回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの第１の２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋７番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、第１の２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋７番目が、第１の２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；該複合ペプチドの第２の２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ＋７番目からｉ＋１４番目のアミノ酸に相当し、ｉ＋７番目が、第２の２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋１４番目が、第２の２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；ｉ番目、ｉ＋７番目およびｉ＋１４番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸を含む。
【００３６】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R8Ala、S8Ala、R8GlyおよびS8Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸はbis5Glyであり、ｉ＋１４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R8Ala、S8Ala、R8GlyおよびS8Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式２１で示される。
【００３７】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸はbis6Glyであり、ｉ＋１４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R7Ala、S7Ala、R7GlyおよびS7Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式２２で示される。
【００３８】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、ｉ番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、ｉ＋７番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸はbis7Glyであり、ｉ＋１４番目の前記α−アルケニル置換アミノ酸は、R6Ala、S6Ala、R6GlyおよびS6Glyからなる群から選択され、閉環メタセシス反応によって形成された前記炭化水素リンカーエレメントは式２３で示される。
【００３９】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドの誘導体は、該複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制する。
【００４１】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、シグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、前記複合ペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖残基に結合した１つ以上のさらなる分子をさらに含む。いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドにさらに含まれる前記１つ以上のさらなる分子は、ウシ血清アルブミン（BSA）、アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）、IgGのFc領域、足場として機能する生体タンパク質、細胞特異的抗原に対する抗体、受容体、リガンド、金属イオンおよびポリエチレングリコール（PEG）からなる群から選択される。
【００４２】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、インターロイキン（IL）タンパク質のヘリックスＤ内のγｃボックス領域のアミノ酸配列を少なくとも２つ含む複合ペプチドであって、該複合ペプチドが、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列を含むこと、該複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、および前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていることを特徴とする。
【００４３】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、インターロイキン（IL）タンパク質のヘリックスＤ内のγｃボックス領域のアミノ酸配列を少なくとも２つ含む複合ペプチドであって、該複合ペプチドが、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列を含むこと、該複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、および前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていることを特徴とする。
【００４４】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、IL-15、IL-21またはその組み合わせの細胞増殖促進活性を抑制する。いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、IL-15のSTAT5シグナル伝達活性を抑制する。いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、IL-21のSTAT3シグナル伝達活性を抑制する。
【００４５】
いくつかの実施形態において、治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を提供する。該医薬組成物の実施形態のいくつかにおいて、前記複合ペプチドは、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される。前記医薬組成物の実施形態のいくつかにおいて、前記複合ペプチドまたはその誘導体は、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節する。
【００４６】
いくつかの実施形態において、γｃサイトカイン介在性疾患を予防または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、該方法は、治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を、前記予防または治療を必要とする対象に投与することによって、γｃサイトカイン介在性疾患を予防または治療することを含み、前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする。
【００４７】
いくつかの実施形態において、前記γｃサイトカイン介在性疾患は、CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫症、セリアック病、橋本甲状腺炎、関節リウマチ、糖尿病、乾癬、多発性硬化症、ぶどう膜炎、眼炎症、移植片対宿主病（GvHD）、炎症性腸疾患（IBD）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）全身性エリテマトーデスおよび円形脱毛症からなる群から選択される。
【００４８】
いくつかの実施形態において、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患を予防するまたは治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、該方法は、治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を、前記予防または治療を必要とする対象に投与することによって、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患を予防または治療することを含み、前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする。
【００４９】
いくつかの実施形態において、前記HAM/TSPに伴う疾患は、成人Ｔ細胞白血病（ATL）、HTLV関連脊髄症／熱帯性痙性不全対麻痺症（HAM/TSP）、およびHTLVに伴うその他の非腫瘍性炎症性疾患（ぶどう膜炎（HTLV-1関連ぶどう膜炎）、関節症、肺疾患、皮膚炎、外分泌腺症、筋炎など）からなる群から選択される。
【００５０】
いくつかの実施形態において、炎症性呼吸器疾患を予防または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、該方法は、治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を、前記予防または治療を必要とする対象に投与することによって、炎症性呼吸器疾患を予防または治療することを含み、前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする。
【００５１】
いくつかの実施形態において、前記炎症性呼吸器疾患は、喘息、副鼻腔炎、花粉症、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、アレルギー性鼻炎、急性耳炎、慢性耳炎および肺線維症からなる群から選択される。
【００５２】
いくつかの実施形態において、美容状態を予防または治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、該方法は、治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含む医薬組成物を、前記予防または治療を必要とする対象に投与することによって、美容状態を予防または治療することを含み、前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする。
【００５３】
いくつかの実施形態において、前記美容状態は、ざ瘡、脱毛、日焼け、爪の維持および老化の出現からなる群から選択される。
【００５４】
いくつかの実施形態において、患者の状態の予防用または治療用キットを提供する。該キットの実施形態のいくつかにおいて、前記状態は、γｃサイトカイン介在性疾患、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患、炎症性呼吸器疾患、美容状態またはこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、前記キットは医薬組成物を含み、該医薬組成物は、治療有効量の複合ペプチドまたはその誘導体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせとを含み、前記複合ペプチドが、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されること、前記複合ペプチドが、少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸を含むこと、前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸が、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されていること、前記複合ペプチドまたはその誘導体が、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節すること、ならびに前記誘導体が、前記複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする。
【００５５】
前記キットの実施形態のいくつかにおいて、前記状態は、CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫症、セリアック病、橋本甲状腺炎、関節リウマチ、糖尿病、乾癬、多発性硬化症、ぶどう膜炎、眼炎症、移植片対宿主病（GvHD）、炎症性腸疾患（IBD）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、全身性エリテマトーデス、円形脱毛症、成人Ｔ細胞白血病（ATL）、HTLV関連脊髄症／熱帯性痙性不全対麻痺症（HAM/TSP）、HTLVに伴うその他の非腫瘍性炎症性疾患（ぶどう膜炎（HTLV-1関連ぶどう膜炎）、関節症、肺疾患、皮膚炎、外分泌腺症、筋炎など）、喘息、副鼻腔炎、花粉症、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、アレルギー性鼻炎、急性耳炎、慢性耳炎、肺線維症、ざ瘡、脱毛、日焼け、爪の維持および老化の出現のうちの１種以上である。
【００５６】
前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記ペプチド内炭化水素リンカーエレメントに存在する１つ以上の炭素−炭素二重結合は、１個以上のさらなる化学官能基を付加するための１つ以上の有機化学反応に利用される。前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記１つ以上の有機化学反応はアルケン反応を含む。前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記アルケン反応は、ヒドロホウ素化、オキシ水銀化、水和、塩素化、臭素化、ＨＦ、ＨＢｒ、ＨＣｌまたはＨＩの付加、ジヒドロキシル化、エポキシ化、水素化およびシクロプロパン化からなる群から選択される。前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記１個以上のさらなる化学官能基は、アルケン反応後に付加可能であり、前記１個以上のさらなる化学官能基の付加は、１個以上の化学置換基の共有結合付加を含み、前記１個以上の化学置換基の共有結合付加は、エポキシドおよび水酸基による求核反応を含む。前記複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、前記１個以上のさらなる化学官能基は、ビオチン、放射性同位元素、治療剤、ラパマイシン、ビンブラスチン、タキソール、非タンパク質性蛍光化学基、FITC、ヒドラジド、ローダミン、マレイミド、タンパク質性蛍光基、GFP、YFPおよびmCherryからなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１Ａ】ヒトγｃサイトカインファミリーのメンバーのヘリックスＤ領域のアライメントを示す。
【００５８】
【図１Ｂ】γｃサイトカインのヘリックスＤ領域付近にコンセンサス配列を有するγｃボックスモチーフ（配列番号１０）とIL-2/IL-15ボックスモチーフ（配列番号１１）を示す。
【００５９】
【図２】各アミノ酸の生化学的特性を示す図である。
【００６０】
【図３Ａ】PT-18増殖アッセイにおけるIL-15活性およびIL-9活性のBNZ-γによる抑制を示す。
【００６１】
【図３Ｂ】IL-2またはIL-15と0μM、0.1μM、1μMもしくは10μMのBNZ-γの存在下において増殖させたCTLL-2細胞の増殖アッセイの結果を示す。
【００６２】
【図３Ｃ】NK92増殖アッセイにおけるIL-15活性およびIL-21活性の配列番号３による抑制を示す。
【００６３】
【図３Ｄ】IL-2、IL-15またはIL-21の存在下において増殖させたNK92細胞の増殖アッセイの結果と、配列番号３のμＭレベルの用量反応性を示す。
【００６４】
【図４Ａ】IL-15を介したSTAT5のチロシンリン酸化のBNZ-γによる抑制を示す。
【００６５】
【図４Ｂ】配列番号３によって、CTLL-2細胞におけるIL-15を介したSTAT5のリン酸化が抑制されたが、IL-2を介したSTAT5のリン酸化は抑制されなかったこと、および配列番号３によってNK92細胞におけるIL-21を介したSTAT3のリン酸化が抑制されたことを示す。
【００６６】
【図５Ａ】HAM/TSP患者の末梢血を使用したエクスビボＴ細胞増殖アッセイの結果を示す。Ｔ細胞の増殖はBNZ-γの添加によって抑制される。
【００６７】
【図５Ｂ】HAM/TSP患者の末梢血を使用したエクスビボＴ細胞増殖アッセイにおけるCD4+CD25+細胞集団を示し、培養物にBNZ-γを添加するとCD4+CD25+細胞が減少することを示す。
【００６８】
【図５Ｃ】HAM/TSP患者の末梢血を使用したエクスビボＴ細胞増殖アッセイにおけるCD4+Ki67細胞集団を示し、培養物にBNZ-γを添加するとCD4+Ki67細胞が減少することを示す。
【００６９】
【図５Ｄ】HAM/TSP患者の末梢血を使用したエクスビボＴ細胞増殖アッセイにおいてGuava染色した生細胞の割合（％）を示す。培養物へのBNZ-γの添加による影響は見られない。
【００７０】
【図６】様々なヒトγｃサイトカインファミリーのメンバーのヘリックスＤ領域と配列番号３の配列のアラインメントを示す。黒く塗りつぶした部分は、ヒトγｃサイトカインファミリーのメンバーのアミノ酸配列のうち、配列番号３の配列中の対応するアミノ酸と同一である部分を示す。
【００７１】
【図７】αヘリックス二次構造において１回転のαヘリックスの両端（ｉ番目およびｉ＋４番目のアミノ酸）または２回転のαヘリックスの両端（ｉ番目およびｉ＋７番目のアミノ酸）を架橋するペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む一連の配列番号３含有カスタムペプチド誘導体によるIL-15活性の抑制をNK92増殖アッセイで測定し、非修飾の配列番号３に対する相対量として示した結果を示す。
【００７２】
【図８Ａ】１つの炭化水素リンカーエレメントを含む代表的な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体（配列番号３９）、および２つの炭化水素リンカーエレメントを含み、（Ｄ）立体化学構造の特定の位置に特定のアミノ酸を含む別の代表的な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体（配列番号５７）のプロテアーゼ安定性の経時変化を模擬腸液中で６０分間測定し、非修飾の配列番号３と比較した結果を示す。
【００７３】
【図８Ｂ】１つの炭化水素リンカーエレメントを含む代表的な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体（配列番号３９）のプロテアーゼ安定性の経時変化を模擬腸液中で１２０分間測定し、２つの炭化水素リンカーエレメントを含む代表的な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体（配列番号８３）と比較した結果を示す。
【００７４】
【図９】ヒトNK92細胞株において、配列番号８３（10μM）により、IL-15またはIL-21の誘導によるインターフェロンγ（IFNγ）遺伝子の転写が抑制されたが、非γｃサイトカインであるIL-12の誘導によるIFNγ遺伝子の転写は抑制されなかったことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００７５】
概要
これまでに100種を超えるサイトカインが同定されており、これらは始原遺伝子プールにおける遺伝子重複により発達したものであると考えられている（Bazan, J.F. 1990, Immunol. Today 11:350-354参照）。この見解を裏付けるものとして、一般にサイトカイン群は、複数のサブユニットからなる受容体系において構成分子を共有している。Ｔ細胞において共有されるサイトカインサブユニットとして最もよく報告されているものとして、共通γサブユニット（γｃサブユニット）が挙げられる。
【００７６】
γｃサブユニットは、６種の既知のサイトカイン（インターロイキン２（IL-2）、インターロイキン４（IL-4）、インターロイキン７（IL-7）、インターロイキン９（IL-9）、インターロイキン１５（IL-15）およびインターロイキン２１（IL-21）；「γｃサイトカイン」または「γｃファミリーサイトカイン」と総称される）により共有されており、これらのサイトカインからの細胞活性化シグナルの変換において不可欠な役割を担っている。γｃサブユニットに加えて、それぞれのγｃサイトカインに固有のサイトカイン特異的受容体サブユニットが１つまたは２つ存在し、これらのサブユニットはγｃサブユニットと複合体を形成することにより完全な機能を発揮する受容体となる（Rochman et al., 2009, Nat Rev Immunol. 9: 480-90.参照）。
【００７７】
γｃファミリーサイトカインは、上皮細胞、間質細胞および免疫細胞から主に産生され、多様なリンパ球の正常な活性化および病的な活性化を制御する哺乳動物サイトカイン群である。これらのサイトカインは、胸腺におけるＴ細胞の初期発生や末梢におけるＴ細胞のホメオスタシスに必須である。たとえば、γｃサブユニット欠損マウスにおいては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞は発生しない（Sugamura et al., 1996, Annu. Rev. Immunol.14:179-205参照）。
【００７８】
γｃサイトカインは、免疫系を構成するリンパ系細胞、特にＴ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の発生において重要な役割を果たしている。さらに、γｃサイトカインは様々なヒト疾患に関与することが知られている。したがって、γｃサイトカイン活性を抑制する因子は、リンパ球サブセットの発生機序を解明し、かつ免疫疾患およびγｃサイトカイン介在性疾患を治療するための有用なツールになると考えられる。
【００７９】
γｃサブユニットをコードする遺伝子がマウスの生殖細胞系において欠失したり、あるいはヒトにおいてγｃサブユニットが変異すると、ＮＫ細胞、Ｔ細胞およびＢ細胞の正常な形態またはこれらの細胞の機能が破綻することによって、重症複合免疫不全症（SCID）を引き起こすことが知られている。このようなマウスおよびヒト患者から得たリンパ球ではγｃサイトカインに対する応答が欠失していることを示した過去の研究から、γｃサブユニットは、γｃサイトカイン（IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21）のシグナル伝達において重要な役割を果たしていることが示されている（Sugamura et al., 1995 Adv. Immunol. 59:225-277においてレビューされている）。このことから、γｃサブユニットとγｃサイトカインの相互作用を妨害することによって、γｃサイトカインファミリーのメンバーによる細胞内シグナル伝達事象を効率的に阻害できると考えられる。したがって、本発明の実施形態によるアンタゴニストペプチドは、γｃサイトカインファミリーのメンバーの制御異常による疾患に罹患したヒトにおける病原性変化を効果的に阻止できると期待される。
【００８０】
抗体を使用して個々のγｃサイトカインの活性を調節する方法に代わるものとして、本出願人らは、複数種のγｃサイトカインの活性を抑制する新規低分子化合物を開発した。この低分子化合物を本明細書において「Simul-Block」と呼ぶ。化学物質とペプチドの両方を含むこの低分子化合物は、抗体と比べて免疫原性が低い。Simul-Blockはこのような特性を有することから、臨床的介入においてγｃサイトカイン活性を調節するためのより効率的な戦略として優れている。
【００８１】
γｃサイトカインに関連する病理
最近の研究において、γｃサイトカインの発現制御異常および機能不全が、様々なヒトの免疫疾患および造血器疾患を引き起こしうることが示されている。
【００８２】
IL-2
IL-2は、Ｔ細胞増殖因子のプロトタイプであると歴史的に考えられてきたが、IL-2の発現を欠損したノックアウトマウスの作製によって、IL-2はインビボにおける通常のＴ細胞の増殖および発生には重要ではないことが明らかとなっている。しかしながら、IL-2の過剰発現は、制御性Ｔ細胞（Treg）サブセットを選択的に増加させることが示されている（Antony et al., 2006, J. Immunol. 176:5255-66.参照）。Tregは、他の細胞の免疫応答を抑制することにより末梢性寛容を維持する（Sakaguchi et al., 2008, Cell 133:775-87においてレビューされている）。末梢性寛容の破綻はヒトにおいて自己免疫疾患を引き起こすと考えられている。
【００８３】
したがって、Tregの免疫抑制能は自己免疫疾患の発症を防いでいると考えられている（Sakaguchi et al., 2008, Cell 133:775-87参照）。また、Tregはがんにも関与しており、充実性腫瘍および血液悪性腫瘍ではTreg数の増加が見られる（De Rezende et al., 2010, Arch. Immunol. Ther. Exp. 58:179-190参照）。
【００８４】
IL-4
IL-4は非冗長性のサイトカインであり、ヘルパーＴ細胞からTh2（ヘルパーＴ２型）サブセットへの分化に関与する。Th2は、未熟Ｂ細胞からIgE産生形質細胞への分化を促進する。IgE濃度はアレルギー性喘息において上昇する。したがって、IL-4はアレルギー性喘息の発症に関与する。IL-4を標的とする抗体を使用して、アレルギー性喘息の治療、さらにはアレルギー性喘息の発症の予防を行うことができる（Le Buanec et al., 2007, Vaccine 25:7206-16.参照）。
【００８５】
IL-7
IL-7は、Ｂ細胞の発生および胸腺におけるＴ細胞の初期発生に必須である。マウスにおいては、IL-7の発現異常によってＴ細胞性白血病が引き起こされる（Fisher et al., 1993, Leukemia 2:S66-68.参照）。しかしながら、ヒトでは、IL-7の制御異常はＴ細胞性白血病を引き起こさないと見られている。ヒトでは、IL-7単独のアップレギュレーション、または別のγｃサイトカインファミリーのメンバーであるIL-15とIL-7のアップレギュレーションは、大型顆粒リンパ球性（LGL）白血病に関与することが知られている。
【００８６】
IL-9
IL-9の役割は、γｃサイトカインファミリーの他のメンバーと比べて未だ明らかになっていない点が多い。IL-9遺伝子欠損マウスは一見正常であり、リンパ球コンパートメントおよび造血コンパートメントの細胞サブセットの欠如も見られない。しかしながら、最近の研究では、IL-9がインビボにおいてTh17（インターロイキン１７によって誘導されるヘルパーＴ）細胞の発生に関与していることが明らかとなっている（Littman et al., 2010, Cell 140(6):845-58；およびNowak et al., 2009, J. Exp. Med. 206: 1653-60参照）。
【００８７】
IL-15
IL-15は、ＮＫ細胞、ＮＫ−Ｔ細胞、上皮内リンパ球（IEL）のサブセットのいくつか、γδ Ｔ細胞、およびメモリー型CD8 Ｔ細胞の発生において極めて重要な役割を果たしている（Waldmann, 2007, J. Clin. Immunol. 27:1-18；およびTagaya et al., 1996, EMBO J. 15:4928-39.参照）。マウスにおけるIL-15の過剰発現は、ＮＫ−Ｔ細胞型およびCD8細胞型のＴ細胞白血病を引き起こす（Fehniger et al., 2001, J. Exp. Med. 193:219-31；およびSato et al. 2011 Blood 117:4032-40参照）。これらの文献で報告された事例では、白血病細胞がCD8抗原を発現していることから、これらの実験的に誘導された白血病はヒトのLGL（大型顆粒リンパ球）白血病に類似していると見られる。
【００８８】
さらに、IL-15を介したオートクリン機構がCD4 Ｔリンパ球の白血病化に関与している可能性が疑われている（Azimi et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. 95:2452-7；Azimi et al., 1999, J. Immunol. 163:4064-72；Azimi et al., 2000, AIDS Res. Hum. Retroviruses 16:1717-22；およびAzimi et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. 98:14559-64参照）。たとえば、ヒトにおいて成人Ｔ細胞性白血病を引き起こすCD4指向性HTLV-Iは、IL-15およびIL-15Rαを産生することにより、このウイルスによって形質転換されたＴ細胞の増殖をオートクリン的に誘導する（Azimi et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. 95:2452-7）。
【００８９】
IL-15は、白血病化に加えて、自己免疫疾患であるセリアック病（ＣＤ）の発症にも関与していることが最近の研究で示されている。IL-15は、細胞溶解酵素（すなわちグランザイムおよびパーフォリン）ならびにインターフェロンγの発現を誘導することにより、ＮＫ細胞、CD8細胞および腸管上皮内リンパ球（IEL）細胞からリンホカイン活性化キラー（LAK）細胞への分化を刺激することが知られている。セリアック病（以降ＣＤと呼ぶ）は、特定のHLA-DQアレルを発現する個体がグルテンを含む食物を摂取することによって発症する免疫介在性腸疾患である。
【００９０】
西洋人におけるセリアック病（ＣＤ）の罹患率は１％である。現在、ＣＤに対する唯一の治療法として、患者の食事からグルテンを完全に除去することがなされている。ＣＤの病理は、腸管粘膜固有層に浸潤した活性化CD8 Ｔ細胞によって引き起こされる広範な腸管粘膜損傷を主な原因として起こる。このようなCD8 Ｔ細胞は、IL-15が関与するメカニズムを介して活性化されると見られる。最近の報告の一つでは、腸細胞による異所性IL-15の過剰発現によってマウスの腸疾患が発症することが実証されており、この腸疾患はＣＤ患者の病変に酷似している。IL-15活性を中和することにより病変が劇的に縮小した。したがって、IL-15によるCD8 Ｔ細胞の活性化を阻害する介入は、従来のグルテン除去食に代わるＣＤの管理戦略になると考えられる。
【００９１】
IL-21
IL-21は、γｃファミリーのメンバーとして、ごく最近になって発見されたサイトカインである。γｃファミリーの他のメンバーとは異なり、IL-21は強力な増殖促進作用を持たないと考えられている。IL-21は細胞増殖制御因子としてよりも、むしろ分化因子として機能すると考えられている（Tagaya, 2010, J. Leuk. Biol. 87:13-15参照）。
【００９２】
γｃサイトカイン介在性疾患を治療するための現在の戦略
γｃサイトカインは多くのヒト疾患に関与すると考えられていることから、γｃサイトカインファミリーの活性を抑制することによりγｃサイトカイン関連疾患を治療する方法がいくつか提案されている。このような方法として、インビボにおいてサイトカイン特異的モノクローナル抗体を使用して標的のサイトカイン活性を中和する方法；特定のサイトカインに固有のサイトカイン受容体サブユニット（共有γｃサブユニット以外のサブユニット）を標的とするモノクローナル抗体を使用して選択的にサイトカイン活性を抑制する方法；および細胞内サイトカインシグナル伝達経路の下流を阻害する化学阻害薬を使用する方法が挙げられる。
【００９３】
治療薬を設計するに当たり、サイトカイン特異的抗体が第一の選択肢となる場合が多い。しかしながら、受容体の構成分子を共有するサイトカインは重複した機能を示し（Paul, W.E., 1989, Cell 57:521-24参照）、２種以上のサイトカインが同時に作用して疾患を引き起こすこともある（後述の実施例を参照されたい）。このことから、１種のサイトカインのみを中和するアプローチは、サイトカイン関連ヒト疾患の治療に効果的ではない可能性がある。
【００９４】
共有されている受容体構成分子を認識する抗体を用いて、複数種のサイトカインの機能を抑制する治療薬を設計する戦略も提案されている。しかしながら、サイトカイン受容体系は複数のサブユニットから構成されることを特徴とすること、および１種のサイトカインに対する機能性受容体は様々な構成を有しうることから、この方法を採用することは困難である。
【００９５】
たとえば、IL-15の機能性受容体はIL-15Rβ/γｃまたはIL-15Rα/β/γｃである（Dubois et al., 2002, Immunity 17:537-47.参照）。IL-15Rβ受容体（TMβ1）に対する抗体は、IL-15の機能を効率的に抑制するが、その抑制作用は受容体複合体がIL-15Rα分子を含まない場合に限られる（Tanaka et al., 1991, J. Immunol. 147:2222-28.参照）。したがって、共有サブユニットまたは固有サブユニットに対して作製されたモノクローナル抗受容体抗体の有効性は状況に左右され、インビボにおいては予測不能である。
【００９６】
疾患の病理に関連した生物学的活性因子や受容体に対してモノクローナル抗体を臨床適用することは、確立された手法ではあるが、実際に成功を収めている事例は少ない。さらに、臨床に適したモノクローナル抗体療法の確立は時間を要する困難な作業であり、中和抗体の作製が成功するかどうかは運に大きく左右される。たとえば、γｃサブユニットはγｃファミリーサイトカインによるシグナル伝達に介在するという非常に重要な役割を果たしていることから、γｃサブユニットに対するポリクローナル抗体やモノクローナル抗体を作製する試みが多数なされており、マウスおよびヒトのγｃサブユニットを認識する抗体が多数市販されている。しかしながら、奇妙なことに、これらの抗γｃサブユニット抗体ではγｃサイトカインの機能を阻害することはできない。
【００９７】
モノクローナル抗体の治療適用に関する別の問題として、通常、モノクローナル抗体は、ヒトタンパク質でげっ歯類を免疫することにより作製されるため、作製された抗体は異種タンパク質であり、したがって免疫原性が高いことが挙げられる。この問題を回避するため、モノクローナル抗体のアミノ酸配列を分子修飾して、抗体分子がヒト免疫グロブリンとして認識されるような処理（ヒト化と呼ばれる方法）を行うが、この方法は時間を要する上に費用もかかる。
【００９８】
複数種のγｃサイトカインを抑制するための既存の別法の一例としてのJAK3のターゲティング
γｃサブユニットとγｃサイトカインの相互作用によって、ヤヌスキナーゼ３（Jak3）と呼ばれる細胞内タンパク質チロシンキナーゼが活性化される。次いで、Jak3は、STAT5やPI3キナーゼなどの複数のシグナル伝達分子をリン酸化する。γｃサブユニットとJak3の相互作用は非常に特異的である。実際、シグナル伝達のためにJak3を動員する受容体分子は他に存在しない（O’Shea, 2004, Ann. Rheum. Dis. 63:(suppl. II):ii67-7参照）。したがって、Jak3キナーゼの活性を阻害することによって、γｃサブユニットを介したサイトカインのシグナル伝達を抑制することができる。これを踏まえて、Jak3のキナーゼ活性を標的とした様々な化学阻害薬が上市されている（Pesu et al., 2008, Immunol. Rev. 223:132-142.参照）。その一例としてCP690,550が挙げられる。
【００９９】
これらのプロテインキナーゼ阻害剤の主な欠点は、Jak3キナーゼに対する特異性が欠如していることである。これらのプロテインキナーゼ阻害剤は、多くのプロテインキナーゼに共通する生化学的反応であるATP（アデノシン３リン酸）分子とJak3キナーゼの結合を妨害する。このため、様々な組織の正常細胞が良好に機能するために必須の、Jak3キナーゼとは無関係の様々な細胞内タンパク質キナーゼの作用も阻害してしまう傾向がある。したがって、γｃサブユニットを介したシグナル伝達をより特異的に阻害できる薬剤が必要とされている。
【０１００】
したがって、γｃサイトカイン関連疾患を治療するための代替戦略が強く求められている。
【０１０１】
γｃボックスの発見
γｃサイトカインのＣ末端（ヘリックスＤ）には、複数のサブユニットから構成されるサイトカイン受容体に共通するγｃサブユニットと相互作用するとされている部位が含まれる（Bernard et al., 2004 J. Biol. Chem. 279:24313-21.）。マウスおよびヒトにおいて同定されたすべてのγｃサイトカインのアミノ酸配列について生化学的特性を比較したところ、これらのアミノ酸配列における疎水性、親水性、塩基性／酸性などの化学的性質が、アミノ酸配列が全く同一でない場合でも、ヘリックスＤの多くの位置においてγｃサイトカインファミリーのメンバー間で保存されていることが明らかとなっている。
【０１０２】
これとは対照的に、γｃサイトカインであるIL-4と関連するが、γｃサブユニットとは結合しないIL-13の配列は、ヘリックスＤ領域においてγｃサイトカインとは有意な相同性を示さない。このことから、ヘリックスＤ領域の配列相同性がγｃサブユニットに対する結合性と相関していることが示唆される。図１Ａに示すように、ヒトγｃサイトカインファミリーのメンバーのヘリックスＤ領域のアミノ酸配列をアライメントすると、これらのサイトカインの間において中程度の配列相同性を有するモチーフ（本明細書において「γｃボックス」と呼ぶ）が存在することが分かる。
【０１０３】
γｃボックス（配列番号１０）は、１９個のアミノ酸を含み、１９個のアミノ酸残基のうち、４番目、５番目および１３番目は完全に保存されており、それぞれフェニルアラニン、ロイシンおよびグルタミンである。γｃボックスの６番目、７番目および１１番目は保存性が低く、同じ生理化学的特性を持つ互いに関連した２個または３個のアミノ酸のうちの１個がこれらの位置を占めている。すなわち、６番目には極性アミノ酸であるグルタミン酸、アスパラギンまたはグルタミンが存在していてもよく；７番目には無極性アミノ酸であるセリンまたはアルギニンが存在することができ；１１番目には無極性脂肪族アミノ酸であるロイシンまたはイソロイシンが存在する。また、９番目および１６番目には、無極性アミノ酸であるイソロイシンまたは極性アミノ酸であるリシンが存在していてもよい。図１Ｂを参照されたい。γｃサイトカインのサブファミリー間では、γｃボックスのアミノ酸組成の９番目および１６番目に差異が見られる。生物種間でγｃサイトカインを比較すると、IL-2/15サブファミリーでは、イソロイシンが９番目および１６番目に存在することが多いが、γｃファミリーのその他のメンバーではリシンがこれらの位置を占めることが多いことが分かる。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、イソロイシンとリシンは生化学的性質が異なるため、IL-2/15サブファミリーと他のγｃサイトカインの間の特定の立体構造における差異は、これらのアミノ酸に起因している可能性がある。
【０１０４】
γｃサイトカイン間におけるγｃボックスモチーフの保存性は、ヘリックスＤ領域に存在するグルタミン（Gln、Ｑ）残基がγｃサイトカインとγｃサブユニットの結合に極めて重要であるという知見からも裏付けられる（Bernard et al., 2004 J. Biol. Chem. 279: 24313-21.）。
【０１０５】
γｃサイトカイン活性のペプチド阻害剤
γｃサイトカインとγｃサブユニットの相互作用を妨害することによって、γｃファミリーサイトカインの活性を阻害してもよく、たとえば、複数のサブユニットから構成されるサイトカイン受容体のシグナル伝達を刺激することなく、γｃサブユニットと相互作用することが可能な競合阻害剤を導入することによって、γｃファミリーサイトカインの活性を阻害してもよい。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、γｃファミリーサイトカインとγｃサブユニットの結合に関与する保存されたγｃボックスモチーフは、γｃサイトカインのシグナル伝達を抑制するペプチド阻害剤の設計に利用することが可能な、コア配列となる基礎的なアミノ酸配列を提供するものである。
【０１０６】
本明細書において、γｃサイトカインのシグナル伝達を調節するための、安定な複合ペプチド、ならびにその組成物、キットおよび／またはシステムを提供する。「複合ペプチド」、「オリゴペプチド」、「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本発明の実施形態に従って提供される「カスタムペプチド誘導体」を指す場合、区別なく使用することができ、これらの用語は、任意の長さの一連のアミノ酸残基を指すために使用することができる。本発明の実施形態によるペプチドは、鎖状であってもよく、環状であってもよい。本発明の実施形態によるペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造のアミノ酸、（Ｌ）立体化学構造のアミノ酸、（Ｒ）立体化学構造のアミノ酸、（Ｓ）立体化学構造のアミノ酸、およびこれらの組み合わせを含んでいてもよい。
【０１０７】
コア配列であるγｃボックスのアミノ酸配列は、Ｄ／Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ／Ｑ／Ｎ−Ｓ／Ｒ−Ｘ−Ｉ／Ｋ−Ｘ−Ｌ／Ｉ−Ｘ−Ｑ（配列番号２）（式中、Ｘは任意のアミノ酸を示す）を含む。本明細書に記載の実施形態の少なくともいくつかは、１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制することが可能な、コア配列であるγｃボックスのアミノ酸配列を含むカスタムペプチド誘導体に関する。カスタムペプチド誘導体は、コア配列であるγｃボックスのアミノ酸配列と約５０％、約５０〜６０％、約６０〜７０％、約７０〜８０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％または約９９．８％の同一性を示すアミノ酸配列をその一部に有するあらゆるペプチドを含む。さらに、カスタムペプチド誘導体は、コア配列であるγｃボックスに含まれるアミノ酸と類似した生理化学的特性を有するアミノ酸をその一部に含むアミノ酸配列を有するあらゆるペプチドを含む。類似した生理化学的特性を有するアミノ酸としては、たとえば、芳香族アミノ酸であるフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンおよびヒスチジンが挙げられる。図２は、類似した生理化学的特性を有するアミノ酸を図示したものであり、これらのアミノ酸は、コア配列であるγｃボックスを含むアミノ酸配列中のアミノ酸残基を置換するために使用してもよい。コア配列であるγｃボックスを含むペプチド誘導体は、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、２２アミノ酸長、２３アミノ酸長、２４アミノ酸長、２５〜３０アミノ酸長、３０〜３５アミノ酸長、３５〜４０アミノ酸長、４０〜４５アミノ酸長または４５〜５０アミノ酸長であってもよく、５０アミノ酸長を超えてもよい。いくつかの実施形態において、前記カスタムペプチド誘導体は、既存の生体タンパク質／ペプチドのＮ末端、Ｃ末端および／または側鎖残基に結合していてもよい。
【０１０８】
本明細書に記載の実施形態のいくつかは、コア配列であるγｃボックスを含むカスタムペプチド誘導体の１個以上のヘリックス二次構造の形成を向上および／または安定化させることに関する。いくつかの実施形態において、コア配列であるγｃボックスを含むカスタムペプチド誘導体のヘリックス二次構造は、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメント（科学論文では「ステープル」と呼ばれることが多い）を組み込むことによって向上および／または安定化される。
【０１０９】
本明細書において「ステープル」、「炭化水素」、「炭化水素リンカーエレメント」、「炭化水素リンカー鎖」、「リンカーエレメント」、「リンカー鎖」または「リンカー」という用語は、少なくとも１〜約２０個の炭素原子を含む（直線状または分岐状の）あらゆる炭素含有化学鎖を指す。この炭素含有化学鎖は、該鎖内に共有結合された１つ以上の化学置換基を有していてもよい。前記炭素含有化学鎖は、Ｚ体もしくはＥ体の幾何学的立体構造またはＺ体の幾何学的立体構造とＥ体の幾何学的立体構造の組み合わせにおいて１つ以上の炭素−炭素二重結合を有していてもよい。前記炭素含有化学鎖は、１つ以上の炭素−炭素三重結合をさらに有していてもよい。いくつかの実施形態において、前記炭素含有化学鎖は、Ｚ体もしくはＥ体の幾何学的立体構造またはＺ体の幾何学的立体構造とＥ体の幾何学的立体構造の組み合わせにおいて１つ以上の炭素−炭素二重結合を有していてもよく、１つ以上の炭素−炭素三重結合をさらに有していてもよい。前記炭素含有化学鎖には、各ハロゲン原子によって許容される化学的原子価に応じて、共有結合によりハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素および／またはヨウ素の１つ以上）からなる置換基がさらに組み込まれていてもよい。前記炭素含有化学鎖には、各ヘテロ原子によって許容される化学的原子価に応じて、共有結合によりヘテロ原子（酸素、窒素および／または硫黄の１つ以上）からなる置換基が組み込まれていてもよい。また、共有結合により前記炭素含有化学鎖に組み込まれていてもよい基としては、置換または非置換の１つ以上の芳香族炭素環系（例として、フェニル、ナフチル、アントラシルなどが挙げられるが、これらに限定されない）、置換または非置換の１つ以上のヘテロアリール環系（例として、フラン、チオフェン、ピロール、ピリジン、ピラン、オキサジン、チアジン、ピリミジン、ピリダジン、ピラジン、チイン、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、インドール、キノロン、イソオキサゾール、オキサゾール、イソチアゾール、チアゾールなどが挙げられるが、これらに限定されない）、置換または非置換の１つ以上の非芳香族炭素環系（例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない）、および置換または非置換の１つ以上のヘテロシクリル環系（例として、エチレンオキシド、エチレンイミン、エチレンスルフィド、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオピラン、ジオキサン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンなどが挙げられるが、これらに限定されない）が挙げられるが、これらに限定されない。適切な置換基としては、アルキル、アルカリール、アリール、アラルキル、アルコキシ、チオアルコキシ、アリールオキシ、ハロアルキル、ハロ、オキソ、ニトロ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルカンスルホニル、アミノ、アミド、アジド、シアノ、PEG、アフィニティ標識、標的化部分、脂肪酸由来アシル基、ビオチン、放射性同位元素、治療薬（例として、ラパマイシン、ビンブラスチン、タキソールなどが挙げられるが、これらに限定されない）、非タンパク質性蛍光化学基（例として、FITC、ヒドラジド、ローダミン、マレイミドなどが挙げられるが、これらに限定されない）、およびタンパク質性蛍光基（例として、GFP、YFP、mCherryが挙げられるが、これらに限定されない）のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、１つ以上のリンカーエレメントを介して本開示による２つ以上の別個のカスタムペプチド誘導体を連結することができる。いくつかの実施形態において、１つ以上のリンカーエレメントを介して２つ以上の別個のカスタムペプチド誘導体を連結する場合、このリンカーエレメントをペプチド間リンカーエレメントと呼ぶ。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、コア配列であるγｃボックスを含むカスタムペプチド誘導体は、２個以上のα−アルケニル置換アミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、２個以上のα−アルケニル置換アミノ酸は、該α−アルケニル置換アミノ酸に組み込まれた１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結される。いくつかの実施形態において、ペプチド合成過程において前記α−アルケニル置換アミノ酸を利用して、閉環メタセシス反応によりペプチド内炭化水素リンカーエレメントの形成を触媒する。ペプチド内リンカーエレメントは、本開示のカスタムペプチド誘導体の同じ配列上の離れたアミノ酸同士を連結する。いくつかの実施形態において、本開示のペプチドは鎖状または環状である。いくつかの実施形態において、１つ以上のペプチドに、ペプチド間炭化水素リンカーとペプチド内炭化水素リンカーの組み合わせが含まれる。鎖状ペプチドと環状ペプチドをどのように組み合わせてもよく、ペプチド間炭化水素リンカーとペプチド内炭化水素リンカーをどのように組み合わせてもよく、ペプチド間炭化水素リンカーとペプチド内炭化水素リンカーがどのような数であってもよいことは、当業者であれば十分に理解できるであろう。たとえば、環状ペプチドは、該環状ペプチド内の２個の置換アミノ酸（たとえばα−アルケニル置換アミノ酸）を連結する１つ以上のペプチド内リンカーを有していてもよい。前記環状ペプチドは、１つ以上のペプチド間リンカーを介して、１個以上の置換アミノ酸（たとえばα−アルケニル置換アミノ酸）を含む別のペプチドにさらに連結されていてもよい。
【０１１２】
α−アルケニル置換アミノ酸の例として、Ｒ−プロペニルアラニン（CAS：288617-76-5；R3Ala）、Ｓ−プロペニルアラニン（CAS：288617-71-0；S3Ala）、Ｄ−アリルグリシン（CAS：170642-28-1；D3Gly）、Ｌ−アリルグリシン（CAS：146549-21-5；L3Gly）、Ｒ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-77-6；R5Ala）、Ｓ−ペンテニルアラニン（CAS：288617-73-2；S5Ala）、Ｒ−ペンテニルグリシン（CAS：1093645-21-6；R5Gly）、Ｓ−ペンテニルグリシン（CAS：856412-22-1；S5Gly）、Ｒ−ブテニルアラニン（CAS：1311933-82-0；R4Ala）、Ｓ−ブテニルアラニン（CAS：288617-72-1；S4Ala）、Ｒ−ブテニルグリシン（CAS：865352-21-2；R4Gly）、Ｓ−ブテニルグリシン（CAS：851909-08-5；S4Gly）、Ｒ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-78-7；R6Ala）、Ｓ−ヘキセニルアラニン（CAS：288617-74-3；S6Ala）、Ｒ−ヘキセニルグリシン（CAS：1208226-88-3；R6Gly）、Ｓ−ヘキセニルグリシン（CAS：1251904-51-4；S6Gly）、Ｒ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-84-2；R7Ala）、Ｓ−ヘプテニルアラニン（CAS：1311933-83-1；S7Ala）、Ｒ−ヘプテニルグリシン（CAS：1262886-63-4；R7Gly）、Ｓ−ヘプテニルグリシン（CAS：1058705-57-9；S7Gly）、ジ置換ビスプロペニルグリシン（CAS：1311992-97-8；bis3Gly）、ジ置換ビスペンテニルグリシン（CAS：1068435-19-7；bis5Gly）、ジ置換ビスブテニルグリシン（bis4Gly）、ジ置換ビスヘキセニルグリシン（bis6Gly）、ジ置換ビスヘプテニルグリシン（bis7Gly）、Ｒ−オクテニルアラニン（CAS：945212-26-0；R8Ala）、Ｓ−オクテニルアラニン（CAS：288617-75-4；S8Ala）、Ｒ−オクテニルグリシン（CAS：1191429-20-5；R8Gly）、およびＳ−オクテニルグリシン（CAS：1262886-64-5；S8Gly）（表１参照）が挙げられるが、これらに限定されない。その他のアミノ酸置換も包含され、これらも本開示の範囲内である。
【０１１３】
本明細書で開示されたペプチドの実施形態において、どの位置のどのアミノ酸を置換アミノ酸（たとえばα−アルケニル置換アミノ酸）としてもよいことは、当業者であれば容易に理解できるであろう。いくつかの実施形態において、（たとえば炭化水素リンカーエレメントを介した）１つ以上のペプチド間結合および／またはペプチド内結合を形成可能な他のアミノ酸修飾も企図される。
【０１１４】
ペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、タンパク質分解に対するペプチドの感受性を低下させることによって、ペプチドの安定性を向上させることが示されている（Walensky and Bird, 2014, J. Med. Chem. 57:6275-88においてレビューされている（この文献は参照によってその全体が本明細書に援用される））。したがって、いくつかの実施形態において、ペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、セリンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、アスパラギンペプチドリアーゼまたはこれらの組み合わせによる分解に対するペプチドの感受性を低下させる。いくつかの実施形態において、ペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、生物活性を有するペプチド二次構造を安定化させることによって、特定のペプチドのαヘリックス領域に起因する生物学的活性を向上させる。いくつかの実施形態において、生物学的活性は、サイトカインの作用の抑制に相当する。
【０１１５】
本出願人らは、γｃサブユニットに結合するサイトカインに保存されているγｃボックスモチーフの同定に基づいて、ヒトIL-2のγｃボックスのアミノ酸配列の一部とIL-15のγｃボックスのアミノ酸配列の一部を組み合わせた人工複合ペプチドである１９ｍｅｒの新規なカスタムペプチド誘導体を開発した。この１９ｍｅｒのペプチド（本明細書においてBNZ-γと呼ぶ）は、
2020513020.tif 000003
で示されるアミノ酸配列からなり、太字で示したアミノ酸は、IL-2とIL-15の間で保存されているアミノ酸を示し、下線を引いたアミノ酸は、生理化学的特性が保存されている残基を示している。
【０１１６】
本出願人らは、１９ｍｅｒのBNZ-γがIL-15またはIL-9により誘導された細胞増殖を抑制するが、IL-3またはIL-4により誘導された細胞増殖は抑制しないことを見出した。図３Ａおよび実施例２を参照されたい。さらに本出願人らは、BNZ-γが、IL-15を介した細胞内サイトカインシグナル伝達分子（STAT-5）のリン酸化を抑制することを実証した。図４Ａおよび実施例５を参照されたい。これらの結果は、保存されたγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体が複数種のγｃサイトカインの活性を抑制できることを実証している。
【０１１７】
いくつかの実施形態は、１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制可能な、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示される１９ｍｅｒのBNZ-γのアミノ酸配列を含むカスタムペプチド誘導体に関する。１９ｍｅｒのBNZ-γのアミノ酸配列を含むカスタムペプチド誘導体は、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列と約５０％、約５０〜６０％、約６０〜７０％、約７０〜８０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％または約９９．８％の同一性を示すアミノ酸配列をその一部に含むあらゆるペプチドを含む。さらに、カスタムペプチド誘導体は、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示される配列に含まれるアミノ酸と類似した生理化学的特性を有するアミノ酸をその一部に含むアミノ酸配列を有するあらゆるペプチドを含む。いくつかの実施形態において、カスタムペプチド誘導体のアミノ酸残基は、BNZ-γのアミノ酸残基と類似した生理化学的特性を有するが、γｃサイトカインファミリーの６つのメンバーに対するその生物学的抑制作用の特異性は元の１９ｍｅｒのペプチドのものとは異なる。BNZ-γのペプチド誘導体は、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、２２アミノ酸長、２３アミノ酸長、２４アミノ酸長、２５〜３０アミノ酸長、３０〜３５アミノ酸長、３５〜４０アミノ酸長、４０〜４５アミノ酸長または４５〜５０アミノ酸長であってもよく、５０アミノ酸長を超えていてもよい。いくつかの実施形態において、前記カスタムペプチド誘導体は、既存の生体タンパク質／ペプチドのＮ末端、Ｃ末端および／または側鎖残基に結合されていてもよい。その他の分子として、本発明の複合ペプチドを安定化させるタンパク質もしくはペプチド、またはその他の部分が挙げられ、たとえば、ウシ血清アルブミン（BSA）、アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）、IgGのFc領域、足場として機能する生体タンパク質、細胞特異的抗原に対する抗体、受容体、リガンド、金属イオンおよびポリエチレングリコール（PEG）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示されたカスタムペプチド誘導体は、いずれも１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むことができる。いくつかの実施形態において、１９ｍｅｒのBNZ-γ（配列番号１）は、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、１９ｍｅｒのBNZ-γ（配列番号１）は、配列番号１上で４残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、１９ｍｅｒのBNZ-γ（配列番号１）は、配列番号１上で７残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、１９ｍｅｒのBNZ-γ（配列番号１）は、配列番号１上で４残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントと、配列番号１上で７残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に１９ｍｅｒのBNZ-γ（配列番号１）が含まれている場合、配列番号１の最初の残基のＮ末端側の位置に、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号１の最初の残基のＮ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号１の最初の残基のＮ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号１の最初の残基のＮ末端側の位置に存在していてもよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に１９ｍｅｒのBNZ-γ（配列番号１）が含まれている場合、配列番号１の最後の残基のＣ末端側の位置に、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号１の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号１の最後の残基のＣ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号１の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に１９ｍｅｒのBNZ-γ（配列番号１）が含まれている場合、配列番号１の最初の残基のＮ末端側の位置にも配列番号１の最後の残基のＣ末端側の位置にも、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号１の最初の残基のＮ末端側の位置および配列番号１の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号１の最初の残基のＮ末端側の１つの位置に存在していてもよく、配列番号１の最後の残基のＣ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号１の最初の残基のＮ末端側の位置および配列番号１の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。
【０１２２】
１９ｍｅｒのBNZ-γ（配列番号１）の実施形態のいくつかにおいて、配列番号１の１個以上の残基に結合した１つ以上のさらなる部分に存在する各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していないか、または配列番号１の１個以上の残基に結合した１つ以上のさらなる部分に存在する各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して１個以上のアミノ酸が連結されている。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号１に結合した１つ以上のさらなる部分に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号１に結合した１つ以上のさらなる部分に存在していてもよい。
【０１２３】
１９ｍｅｒのBNZ-γの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個または２個は、天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造もしくは（Ｌ）立体化学構造の非天然アミノ酸、または（Ｒ）立体化学構造もしくは（Ｓ）立体化学構造の非天然アミノ酸を含んでいてもよい。１９ｍｅｒのBNZ-γの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸またはその組み合わせを含む。１９ｍｅｒのBNZ-γの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、（Ｄ）立体化学構造、（Ｌ）立体化学構造またはその組み合わせを含む。１９ｍｅｒのBNZ-γの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、（Ｒ）立体化学構造、（Ｓ）立体化学構造またはその組み合わせを含む。
【０１２４】
１９ｍｅｒのBNZ-γの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個または２個は、α炭素の置換側鎖またはα炭素の非置換側鎖を介して連結されている。１９ｍｅｒのBNZ-γの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、α炭素の置換側鎖、α炭素の非置換側鎖またはその組み合わせを介して連結されている。Ｄ／Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ／Ｑ／Ｎ−Ｓ／Ｒ−Ｘ−Ｉ／Ｋ−Ｘ−Ｌ／Ｉ−Ｘ−Ｑ（配列番号２）（式中、Ｘは任意のアミノ酸を示す）を含むγｃボックスのアミノ酸配列は、γｃサイトカインファミリーの各メンバーのヘリックスＤにおいて同定された保存配列であり、複数のサブユニットからなる各サイトカイン受容体に共通するγｃサブユニットとの相互作用にとって重要である。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示されたカスタムペプチド誘導体は、いずれも１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むことができる。いくつかの実施形態において、配列番号２の複合ペプチドは、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、配列番号２の複合ペプチドは、配列番号２上で４残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、配列番号２の複合ペプチドは、配列番号２上で７残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、配列番号２の複合ペプチドは、配列番号２上で４残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントと、配列番号２上で７残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に配列番号２の複合ペプチドが含まれている場合、配列番号２の最初の残基のＮ末端側の位置に、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号２の最初の残基のＮ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号２の最初の残基のＮ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号２の最初の残基のＮ末端側の位置に存在していてもよい。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に配列番号２の複合ペプチドが含まれている場合、配列番号２の最後の残基のＣ末端側の位置に、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号２の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号２の最後の残基のＣ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号２の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に配列番号２の複合ペプチドが含まれている場合、配列番号２の最初の残基のＮ末端側の位置にも配列番号２の最後の残基のＣ末端側の位置にも、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号２の最初の残基のＮ末端側の位置および配列番号２の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号２の最初の残基のＮ末端側の１つの位置に存在していてもよく、配列番号２の最後の残基のＣ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号２の最初の残基のＮ末端側の位置および配列番号２の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。
【０１２９】
配列番号２の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、配列番号２の１個以上の残基に結合した１つ以上のさらなる部分に存在する各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していないか、または配列番号２の１個以上の残基に結合した１つ以上のさらなる部分に存在する各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して１個以上のアミノ酸が連結されている。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号２に結合した１つ以上のさらなる部分に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号２に結合した１つ以上のさらなる部分に存在していてもよい。
【０１３０】
配列番号２の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個または２個は、天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造もしくは（Ｌ）立体化学構造の非天然アミノ酸、または（Ｒ）立体化学構造もしくは（Ｓ）立体化学構造の非天然アミノ酸を含んでいてもよい。配列番号２の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸またはその組み合わせを含む。配列番号２の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、（Ｄ）立体化学構造、（Ｌ）立体化学構造またはその組み合わせを含む。配列番号２の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、（Ｒ）立体化学構造、（Ｓ）立体化学構造またはその組み合わせを含む。
【０１３１】
配列番号２の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個または２個は、α炭素の置換側鎖またはα炭素の非置換側鎖を介して連結されている。配列番号２の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、α炭素の置換側鎖、α炭素の非置換側鎖またはその組み合わせを介して連結されている。
【０１３２】
いくつかの実施形態は、IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9またはIL-7のγｃボックスモチーフ（図１Ａに示す）を含むカスタムペプチド誘導体に関する。別の実施形態は、ヒトIL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9およびIL-7のγｃボックスモチーフのうちの２つ以上のアミノ酸配列を組み合わせた人工複合ペプチドであるカスタムペプチド誘導体に関する。いくつかの実施形態は、IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9またはIL-7のγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体であって、IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9またはIL-7のγｃボックスモチーフのアミノ酸配列と約５０％、約５０〜６０％、約６０〜７０％、約７０〜８０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％または約９９．８％の同一性を示す部分アミノ酸配列を有するカスタムペプチド誘導体に関する。IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9またはIL-7のγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体には、IL-15、IL-2、IL-21、IL-4、IL-9またはIL-7のγｃボックスモチーフの配列に含まれるアミノ酸と類似した生理化学的特性を有するアミノ酸を含む部分アミノ酸配列を有するペプチド誘導体がさらに含まれる。
【０１３３】
いくつかの実施形態は、γｃサイトカインのメンバーのうちの１つ、すべてのメンバー、または選択されたメンバーの機能を抑制することができるカスタムペプチド誘導体に関する。いくつかの実施形態において、前記カスタムペプチド誘導体は、γｃサイトカインファミリーの個々のメンバーを選択的に標的とする。たとえば、カスタムペプチド誘導体は、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15またはIL-21の機能を選択的に抑制することができる。別の実施形態において、カスタムペプチド誘導体は、γｃサイトカインファミリーのメンバーのうち、２つ以上を抑制することができる。
【０１３４】
たとえば、本発明の実施形態によるカスタムペプチド誘導体は、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21のうちの１種以上の機能とIL-2の機能；IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21のうちの１種以上の機能とIL-4の機能；IL-9、IL-15およびIL-21のうちの１種以上の機能とIL-7の機能；IL-2、IL-4、IL-7、IL-15およびIL-21のうちの１種以上の機能とIL-9の機能；IL-2、IL-4、IL-7、IL-9およびIL-21のうちの１種以上の機能とIL-15の機能；またはIL-2、IL-4、IL-7、IL-9およびIL-15のうちの１種以上の機能とIL-21の機能を選択的に抑制することができる。別の実施形態において、カスタムペプチド誘導体は、γｃサイトカインファミリーのすべてのメンバーを包括的に標的とすることができる。
【０１３５】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本発明のカスタムペプチド誘導体は、たとえば競合阻害剤などとして、γｃサイトカインとγｃサブユニットの結合を抑制することにより、γｃサイトカインのすべてメンバーまたは選択されたメンバーの機能を抑制することができる。このようなカスタムペプチド誘導体は、臨床薬剤などの様々な用途に使用してもよい。
【０１３６】
いくつかの実施形態は、γｃサイトカインの選択されたメンバーのうち、１つ、２つまたはそれ以上のメンバーの機能を調節（増強または抑制を含む）することができるカスタムペプチド誘導体に関する。いくつかの実施形態において、前記カスタムペプチド誘導体は、γｃサイトカインファミリーの個々のメンバーを選択的に標的とする。たとえば、カスタムペプチド誘導体は、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15またはIL-21の機能を選択的に増強または抑制することができる。別の実施形態において、カスタムペプチド誘導体は、γｃサイトカインファミリーのメンバーのうち、２つ以上を増強または抑制することができる。特定の実施形態において、カスタムペプチド誘導体は、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）を含んでいてもよく、γｃサイトカインのうち、１種、２種またはそれ以上の活性を増強または抑制することができる。特定の実施形態において、カスタムペプチド誘導体は、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）を含んでいてもよく、少なくともIL-15およびIL-21の活性を抑制することができる。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示された保存されているγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体のうちの１つ以上は、１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制することができる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された保存されているγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体のうちの１つ以上は、１種以上のγｃサイトカインにより誘導された細胞増殖を抑制することによって、該１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制することができる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された保存されているγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体のうちの１つ以上は、１種以上のγｃサイトカインを介した細胞内サイトカインシグナル伝達分子のリン酸化を抑制することによって、該１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制することができる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された保存されているγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体のうちの１つ以上は、１種以上のγｃサイトカインにより誘導された細胞増殖を抑制し、かつ該１種以上のγｃサイトカインを介した細胞内サイトカインシグナル伝達分子のリン酸化を抑制することによって、該１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制することができる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された保存されているγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体のうちの１つ以上は、１つ以上のその他の機構によって１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制することができる。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示された１つ以上のペプチド配列は、本明細書で開示されたサイトカイン（たとえば、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21）のうちの１種以上によって誘導された１種以上の細胞の増殖を抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された１つ以上のペプチド配列は、本明細書で開示されたサイトカインすべてによって誘導された１種以上の細胞の増殖を抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された１つ以上のペプチド配列は、本明細書で開示されたサイトカインすべてではなく、その一部によって誘導された１種以上の細胞の増殖を抑制する。たとえば、２１ｍｅｒの配列番号３は、IL-15またはIL-21により誘導された細胞増殖を抑制したが、IL-2、IL-4またはIL-9により誘導された細胞増殖は抑制しなかった。図３Ｃおよび実施例２を参照されたい。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示された保存されているγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体のうちの１つ以上は、本明細書で開示された１種以上のγｃサイトカイン（たとえば、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21）を介した１種以上の細胞内サイトカインシグナル伝達分子のリン酸化を抑制することによって、該１種以上のγｃサイトカインの活性を抑制することができる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された保存されているγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体のうちの１つ以上は、本明細書で開示されたすべてのγｃサイトカインを介した１種以上の細胞内サイトカインシグナル伝達分子のリン酸化を抑制することができる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された保存されているγｃボックスモチーフを含むカスタムペプチド誘導体のうちの１つ以上は、本明細書で開示されたすべてのγｃサイトカインではなく、その一部を介した１種以上の細胞内サイトカインシグナル伝達分子のリン酸化を抑制することができる。たとえば、配列番号３は、IL-15を介した細胞内サイトカインシグナル伝達分子STAT-5のリン酸化を抑制したが、IL-2を介したSTAT-5のリン酸化は抑制しなかった。
【０１４０】
さらに、たとえば、配列番号３は、IL-21を介した細胞内サイトカインシグナル伝達分子STAT-3のリン酸化を抑制した。図４Ｂおよび実施例５を参照されたい。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、カスタムペプチド誘導体は、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列と約５０％、約５０〜６０％、約６０〜７０％、約７０〜８０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％または約９９．８％の同一性を示すアミノ酸配列をその一部に含むあらゆるペプチドを含む。さらに、カスタムペプチド誘導体は、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示される配列に含まれるアミノ酸と類似した生理化学的特性を有するアミノ酸を含むアミノ酸配列をその一部に含むあらゆるペプチドを含む。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、本発明のカスタムペプチド誘導体のアミノ酸残基は、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）のアミノ酸残基と類似した生理化学的特性を保持しているが、γｃサイトカインファミリーの６つのメンバー（すなわち、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15またはIL-21）に対するその生物学的抑制作用の特異性は、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示される元のペプチドのものとは異なる。Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示される配列を含むペプチド誘導体は、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、２２アミノ酸長、２３アミノ酸長、２４アミノ酸長、２５〜３０アミノ酸長、３０〜３５アミノ酸長、３５〜４０アミノ酸長、４０〜４５アミノ酸長または４５〜５０アミノ酸長であってもよく、５０アミノ酸長を超えていてもよい。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、前記カスタムペプチド誘導体は、既存の生体タンパク質／ペプチドのＮ末端、Ｃ末端および／または側鎖残基に結合されていてもよい。いくつかの実施形態において、配列番号３の複合ペプチドは、該複合ペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖を介して別の部分に結合していてもよい。該別の分子として、本発明の複合ペプチドを安定化させるタンパク質もしくはペプチド、またはその他の部分が挙げられ、たとえば、ウシ血清アルブミン（BSA）、アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）、IgGのFc領域、足場として機能する生体タンパク質、細胞特異的抗原に対する抗体、受容体、リガンド、金属イオンおよびポリエチレングリコール（PEG）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示されたカスタムペプチド誘導体は、いずれも１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むことができる。いくつかの実施形態において、配列番号３の複合ペプチドは、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、配列番号３の複合ペプチドは、配列番号３上で４残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、配列番号３の複合ペプチドは、配列番号３上で７残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。いくつかの実施形態において、配列番号３の複合ペプチドは、配列番号３上で４残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントと、配列番号３上で７残基離れた２個のアミノ酸を連結する１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に配列番号３の複合ペプチドが含まれている場合、配列番号３の最初の残基のＮ末端側の位置に、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号３の最初の残基のＮ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号３の最初の残基のＮ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号３の最初の残基のN末端側の位置に存在していてもよい。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に配列番号３の複合ペプチドが含まれている場合、配列番号３の最後の残基のＣ末端側の位置に、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号３の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号３の最後の残基のＣ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号３の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、長いペプチド配列の一部に配列番号３の複合ペプチドが含まれている場合、配列番号３の最初の残基のＮ末端側の位置にも配列番号３の最後の残基のＣ末端側の位置にも、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していなくてもよく、あるいは各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの１個以上が、配列番号３の最初の残基のＮ末端側の位置および配列番号３の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号３の最初の残基のＮ末端側の１つの位置に存在していてもよく、配列番号３の最後の残基のＣ末端側の１つの位置に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号３の最初の残基のＮ末端側の位置および配列番号３の最後の残基のＣ末端側の位置に存在していてもよい。
【０１４８】
配列番号３の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、配列番号３の１個以上の残基に結合した１つ以上のさらなる部分に存在する各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸が存在していないか、または配列番号３の１個以上の残基に結合した１つ以上のさらなる部分に存在する各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して１個以上のアミノ酸が連結されている。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個または１個が、配列番号３に結合した１つ以上のさらなる部分に存在していてもよい。いくつかの実施形態において、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個または５個が、配列番号３に結合した１つ以上のさらなる部分に存在していてもよい。
【０１４９】
配列番号３の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個または２個は、天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造もしくは（Ｌ）立体化学構造の非天然アミノ酸、または（Ｒ）立体化学構造もしくは（Ｓ）立体化学構造の非天然アミノ酸を含んでいてもよい。配列番号３の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸またはその組み合わせを含む。配列番号３の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、（Ｄ）立体化学構造、（Ｌ）立体化学構造またはその組み合わせを含む。配列番号３の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、（Ｒ）立体化学構造、（Ｓ）立体化学構造またはその組み合わせを含む。
【０１５０】
配列番号３の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個または２個は、α炭素の置換側鎖またはα炭素の非置換側鎖を介して連結されている。配列番号３の複合ペプチドの実施形態のいくつかにおいて、各ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されたアミノ酸のうちの０個、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個は、α炭素の置換側鎖、α炭素の非置換側鎖またはその組み合わせを介して連結されている。
【０１５１】
本発明の実施形態によるペプチドは、希少アミノ酸（たとえば、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシンなど）、有機酸、もしくはアミド、および／または一般的なアミノ酸の誘導体の１つ以上を含んでいてもよい。一般的なアミノ酸の誘導体としては、たとえば、Ｃ末端カルボン酸がエステル化（たとえばベンジルエステル、メチルエステルもしくはエチルエステル）もしくはアミド化されており、かつ／またはＮ末端のアミノ基が修飾（たとえばアセチル化、もしくはアルコキシカルボニルアミノ）されており、かつ側鎖が様々に修飾および／または置換されていてもよいアミノ酸が挙げられる。本発明の実施形態によるカスタムペプチド誘導体に含まれていてもよい側鎖の修飾、置換またはその組み合わせとして、α−メチル化、α−アルケニル化、アルキル化、メチル化、ベンジル化、ｔ−ブチル化、トシル化、アルコキシカルボニルアミノ化などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５２】
一般的なアミノ酸以外に含まれていてもよい残基としては、ペニシラミン、テトラメチレンシステイン、ペンタメチレンシステイン、メルカプトプロピオン酸、ペンタメチレン−メルカプトプロピオン酸、２−メルカプトベンゼン、２−メルカプトアニリン、２−メルカプトプロリン、オルニチン、ジアミノ酪酸、アミノアジピン酸、ｍ−アミノメチル安息香酸、およびジアミノプロピオン酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５３】
本発明の実施形態によるペプチドは、当業者に公知の様々な方法により製造または入手することができる。たとえば、本発明の実施形態によるペプチドは、このペプチドをコードするヌクレオチド配列に基づいて、遺伝子工学的方法によって製造してもよく、ペプチド固相合成法などを用いて化学的に合成してもよく、これらを組み合わせた方法により製造または入手してもよい。固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造もしくは（Ｌ）立体化学構造の非天然アミノ酸、および／または（Ｒ）立体化学構造もしくは（Ｓ）立体化学構造の非天然アミノ酸を容易に組み込むことができるであろう。さらに、固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、α置換された（α−アルケニル置換などの）天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造、（Ｌ）立体化学構造、（Ｒ）立体化学構造もしくは（Ｓ）立体化学構造のうちの１つ以上を有するα置換された（α−アルケニル置換などの）非天然アミノ酸、またはその組み合わせを利用して、本発明の実施形態による１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むペプチドを製造または入手することができるであろう。いくつかの実施形態において、α置換アミノ酸（たとえばα−アルケニル置換アミノ酸）を連結するペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、１つ以上の閉環メタセシス反応を触媒することによって形成させることができる。いくつかの実施形態において、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、ペプチド合成過程において、樹脂に結合させたペプチドに対してベンジリデンビス（トリシクロヘキシル−ホスフィン）−ジクロロルテニウム（グラブス触媒）を作用させて、閉環メタセシス反応を触媒することにより形成させることができる。いくつかの実施形態において、１種以上の公知のペプチド合成法においてその他の閉環合成反応および／または閉環機構を行うことも企図される。いくつかの実施形態において、１つ以上のペプチド間炭化水素リンカーエレメントは、ペプチド合成過程において、樹脂に結合させたペプチドに対してベンジリデンビス（トリシクロヘキシル−ホスフィン）−ジクロロルテニウム（グラブス触媒）を作用させて、閉環メタセシス反応を触媒することにより形成させることができる。いくつかの実施形態において、１種以上の公知のペプチド合成法においてその他の閉環合成反応および／または閉環機構を行うことも企図される。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、複合ペプチド内の少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸は、少なくとも１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを介して連結されている。いくつかの実施形態において、ペプチド内炭化水素リンカーエレメントによって連結された前記少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸は、ｎ−２個のアミノ酸によって隔てられており、ｎは、前記ペプチド内炭化水素リンカーエレメントが結合している該少なくとも２個のα−アルケニル置換アミノ酸とこれらに挟まれているアミノ酸の数の総和である。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、前記複合ペプチドの二次構造において１回転のαヘリックスに相当するアミノ酸位置に組み込まれる。いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドが、１個以上の連続していない１回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの該１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋４番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、該１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋４番目が、該１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり、ｉ番目およびｉ＋４番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸が含まれ、ｉ番目およびｉ＋４番目が４残基離れている（４残基間隔にある）。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、複合ペプチドが２個以上の１回転αヘリックスを含むように、２つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む複合ペプチドを容易に合成することができる。いくつかの実施形態において、２個以上の１回転αヘリックスは連続しておらず、すなわち、２個以上の１回転αヘリックスは置換アミノ酸を共有していない。たとえば、いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、式１、式２、式３、式４、式５、式６、式７および／または式８（表１参照）で示される１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むことができ、該１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、該複合ペプチドの２個以上の連続していない１回転αヘリックスの各両端を架橋している。
【０１５７】
本発明の実施形態による１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む特定のペプチドに制限されるものではないが、４残基離れた２個のアミノ酸すなわち１回転αヘリックスの両端（ｉ番目およびｉ＋４番目）を連結する１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むペプチドの代表的な例において、該ペプチドの固相合成過程においてグラブス触媒を使用して閉環メタセシス反応を触媒する前に、ペプチドを固相支持体上の樹脂に結合させたまま、ｉ番目とｉ＋４番目にＳ−ペンテニルアラニン（S5Ala）を組み込むことができる。このような方法によって、以下に示すような、４残基離れた位置を架橋するペプチド内炭化水素リンカーエレメント（配列番号７８）を含むペプチド配列が得られる。
【化１】
2020513020.tif 000004
【０１５８】
いくつかの実施形態において、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、前記複合ペプチドの二次構造において２回転のαヘリックスに相当するアミノ酸位置に組み込まれる。いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドが、１個以上の連続していない２回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの該２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋７番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、該２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋７番目が、該２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり、ｉ番目およびｉ＋７番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸が含まれ、ｉ番目およびｉ＋７番目が、７残基離れている（７残基間隔にある）。
【０１５９】
本発明の実施形態による１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む特定のペプチドに制限されるものではないが、７残基離れた２個のアミノ酸すなわち２回転αヘリックスの両端（ｉ番目およびｉ＋７番目）を連結する１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むペプチドの代表的な例において、該ペプチドの固相合成過程においてグラブス触媒を使用して閉環メタセシス反応を触媒する前に、ペプチドを固相支持体上の樹脂に結合したまま、ｉ番目にＲ−オクテニルアラニン（R8Ala）を組み込み、ｉ＋７番目にＳ−ペンテニルアラニン（S5Ala）を組み込むことができる。このような方法によって、以下に示すような、７残基離れた位置を架橋するペプチド内炭化水素リンカーエレメント（配列番号７９）を含むペプチド配列が得られる。
【化２】
2020513020.tif 000005
【０１６０】
配列番号７９において、オクテニルアラニン（R8Ala）とＳ−ペンテニルアラニン（S5Ala）の位置は入れ替えることができ、Ｓ−ペンテニルアラニン（S5Ala）をｉ番目に組み込み、Ｒ−オクテニルアラニン（R8Ala）をｉ＋７番目に組み込むことができる（配列番号８０）ことは、当業者であれば十分に理解できるであろう。
【０１６１】
本発明の実施形態による１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む特定のペプチドに制限されるものではないが、７残基離れた２個のアミノ酸すなわち２回転αヘリックスの両端（ｉ番目およびｉ＋７番目）を連結する１つのペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むペプチドの代表的な例において、該ペプチドの固相合成過程においてグラブス触媒を使用して閉環メタセシス反応を触媒する前に、ペプチドを固相支持体上の樹脂に結合したまま、ｉ番目にＳ−オクテニルアラニン（S8Ala）を組み込み、ｉ＋７番目にＲ−ペンテニルアラニン（R5Ala）を組み込むことができる。このような方法によって、以下に示すような、７残基離れた位置を架橋するペプチド内炭化水素リンカーエレメント（配列番号８１）を含むペプチド配列が得られる。
【化３】
2020513020.tif 000006
【０１６２】
配列番号８１において、Ｓ−オクテニルアラニン（S8Ala）とＲ−ペンテニルアラニン（R5Ala）の位置は入れ替えることができ、Ｒ−ペンテニルアラニン（R5Ala）をｉ番目に組み込み、Ｓ−オクテニルアラニン（S8Ala）をｉ＋７番目に組み込むことができる（配列番号８２）ことは、当業者であれば十分に理解できるであろう。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、複合ペプチドが２個以上の２回転αヘリックスを含むように、２つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む複合ペプチドを容易に合成することができる。いくつかの実施形態において、２個以上の２回転αヘリックスは連続しておらず、すなわち、２個以上の２回転αヘリックスは、置換アミノ酸を共有していない。たとえば、いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、式１７、式１８、式１９および／または式２０（表１参照）で示される１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むことができ、該１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、該複合ペプチドの２個以上の連続していない２回転αヘリックスの各両端を架橋している。
【０１６４】
固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、固相ペプチド合成過程において、グラブス触媒を使用して閉環メタセシス反応を触媒する前に、ペプチドを固相支持体上の樹脂に結合したまま、該ペプチド内の対となる重複しないアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸を組み込み、対になった各α−アルケニル置換アミノ酸が、１回転αヘリックスを隔てて（４残基離れて）位置するか、または２回転αヘリックスを隔てて（７残基離れて）位置するようにすることによって、本発明の実施形態による２つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むペプチドを容易に合成することができる。いくつかの実施形態において、単一のペプチドは、１回転αヘリックスの（４残基離れた）両端を架橋する２つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むことができるか、あるいは２回転αヘリックスの（７残基離れた）両端を架橋する炭化水素リンカーエレメントを含むことができるか、あるいは１回転αヘリックスの（４残基離れた）両端を架橋するペプチド内炭化水素リンカーエレメントと、２回転αヘリックスの（７残基離れた）両端を架橋するペプチド内炭化水素リンカーエレメントの組み合わせを含むことができる。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドが２個以上の連続した１回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの第１の１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋４番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、第１の１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋４番目が、第１の１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；該複合ペプチドの第２の１回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置が、該複合ペプチドのｉ＋４番目からｉ＋８番目のアミノ酸に相当し、ｉ＋４番目が、第２の１回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋８番目が、第２の１回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；ｉ番目、ｉ＋４番目およびｉ＋８番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸を含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、複合ペプチドが２個以上の１回転αヘリックスを含むように、２つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む複合ペプチドを容易に合成することができる。いくつかの実施形態において、２個以上の１回転αヘリックスは連続しており、すなわち、２個以上の１回転αヘリックスは、置換アミノ酸を共有している。したがって、２個の１回転αヘリックスが連続している場合、最初の１回転αヘリックスの最後の位置は、これに続いて連続する１回転αヘリックスの最初の位置に相当する。いくつかの実施形態において、共有される置換アミノ酸はジ置換アミノ酸である（表１参照）。
【０１６７】
したがって、いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、式９、式１０、式１１、式１２、式１３、式１４、式１５および／または式１６（表１参照）で示される１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むことができ、該１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、該複合ペプチドの２個の連続した１回転αヘリックスの各両端を架橋している。
【０１６８】
たとえば、いくつかの実施形態において、固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、固相ペプチド合成過程において、グラブス触媒を使用して閉環メタセシス反応を触媒する前に、ペプチドを固相支持体上の樹脂に結合したまま、１回転αヘリックスを隔てて（４残基離れて）該ペプチドのＮ末端側に位置する一方のα−アルケニル置換アミノ酸と、１回転αヘリックスを隔てて（４残基離れて）該ペプチドのＣ末端側に位置する別のα−アルケニル置換アミノ酸とから等距離の位置に、ジ置換α−アルケニルグリシンを組み込むことによって、本発明の実施形態による２つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むペプチドを容易に合成することができる。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドが２個以上の連続した２回転αヘリックスを含む場合、該複合ペプチドの第１の２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置は、該複合ペプチドのｉ番目からｉ＋７番目のアミノ酸に相当し、ｉ番目が、第１の２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋７番目が、第１の２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；該複合ペプチドの第２の２回転αヘリックスに対応するアミノ酸位置が、該複合ペプチドのｉ＋７番目からｉ＋１４番目のアミノ酸に相当し、ｉ＋７番目が、第２の２回転αヘリックスの最初のアミノ酸位置であり、ｉ＋１４番目が、第２の２回転αヘリックスの最後のアミノ酸位置であり；ｉ番目、ｉ＋７番目およびｉ＋１４番目のアミノ酸位置にα−アルケニル置換アミノ酸を含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、複合ペプチドが２個以上の２回転αヘリックスを含むように、２つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む複合ペプチドを容易に合成することができる。いくつかの実施形態において、２個以上の２回転αヘリックスは連続しており、すなわち、２個以上の２回転αヘリックスは置換アミノ酸を共有している。したがって、２個の２回転αヘリックスが連続している場合、最初の２回転αヘリックスの最後の位置は、これに続いて連続する２回転αヘリックスの最初の位置に相当する。いくつかの実施形態において、共有される置換アミノ酸はジ置換アミノ酸である（表１参照）。
【０１７１】
したがって、いくつかの実施形態において、前記複合ペプチドは、式２１、式２２および／または式２３（表１参照）で示される１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むことができ、該１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントは、該複合ペプチドの２個の連続した２回転αヘリックスの各両端を架橋している。２個の２回転αヘリックスが連続している場合、最初の２回転αヘリックスの最後の位置は、これに続いて連続する２回転αヘリックスの最初の位置に相当する。
【０１７２】
たとえば、いくつかの実施形態において、固相ペプチド合成法に熟練した当業者であれば、固相ペプチド合成過程において、グラブス触媒を使用して閉環メタセシス反応を触媒する前に、ペプチドを固相支持体上の樹脂に結合したまま、２回転αヘリックスを隔てて（７残基離れて）該ペプチドのＮ末端側に位置する一方のα−アルケニル置換アミノ酸と、２回転αヘリックスを隔てて（７残基離れて）該ペプチドのＣ末端側に位置する別のα−アルケニル置換アミノ酸とから等距離の位置に、ジ置換α−アルケニルグリシンを組み込むことによって、本発明の実施形態による２つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むペプチドを容易に合成することができる。
【０１７３】
本発明の実施形態による１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むペプチドは、BocまたはFmocで保護され、かつα−アルケニルで置換された市販の天然アミノ酸、（Ｄ）立体化学構造もしくは（Ｌ）立体化学構造の非天然アミノ酸または（Ｒ）立体化学構造もしくは（Ｓ）立体化学構造の非天然アミノ酸を利用した固相ペプチド合成法によって作製することができる。本発明の実施形態によるカスタムペプチド誘導体の合成において使用してもよい、Fmocで保護されたα−アルケニル置換アミノ酸および閉環メタセシス反応により得られる炭化水素リンカーエレメントとして、以下の表１に示すものが挙げられるが、これらに限定されない。
【表１】
2020513020.tif 000007
2020513020.tif 000008
2020513020.tif 000009
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2020513020.tif 000011
【０１７４】
いくつかの実施形態において、１つ以上の化学反応によりペプチド内炭化水素リンカーに官能基をさらに付加することができる。いくつかの実施形態において、ペプチド内炭化水素リンカー（たとえば表１の式１〜式２３）中の１つ以上の炭素−炭素二重結合を利用して、有機化学反応を行い、１個以上のさらなる化学官能基を付加することができる。たとえば、本発明の実施形態による１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体に対してアルケン反応を行ってもよい。前記アルケン反応としては、ヒドロホウ素化、オキシ水銀化、水和、塩素化、臭素化、ＨＦ、ＨＢｒ、ＨＣｌまたはＨＩの付加、ジヒドロキシル化、エポキシ化、水素化およびシクロプロパン化が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ペプチド内炭化水素リンカーエレメントの１個以上のさらなる化学官能基は、アルケン反応後に付加することができる。このような反応の一例として、エポキシドと水酸基などによる求核反応などの、二重結合に対する１個以上の化学基置換基の付加反応が挙げられるが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、アルケン反応を利用して、本発明の実施形態による１つ以上のペプチド間炭化水素リンカーエレメントおよび／またはペプチド内炭化水素リンカーエレメントに、ビオチン、放射性同位元素、治療薬（例として、ラパマイシン、ビンブラスチン、タキソールなどが挙げられるが、これらに限定されない）、非タンパク質性蛍光化学基（例として、FITC、ヒドラジド、ローダミン、マレイミドなどが挙げられるが、これらに限定されない）、またはタンパク質性蛍光基（例として、GFP、YFP、mCherryが挙げられるが、これらに限定されない）を結合してもよい。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、１回転αヘリックスの（４残基間隔にある）両端を架橋するペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体を提供する。いくつかの実施形態において、２回転αヘリックスの（７残基間隔にある）両端を架橋するペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体を提供する。いくつかの実施形態において、α−アルケニル置換アミノ酸を利用した閉環反応によって合成された１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体に含まれるアミノ酸の数は特に限定されない。いくつかの実施形態において、α−アルケニル置換アミノ酸を利用した閉環反応によって合成された１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体は、２〜約２００アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、α−アルケニル置換アミノ酸を利用した閉環反応によって合成された１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体は、２アミノ酸長、５アミノ酸長、１０アミノ酸長、１５アミノ酸長、２０アミノ酸長、２５アミノ酸長、３０アミノ酸長、３５アミノ酸長、４０アミノ酸長、４５アミノ酸長、５０アミノ酸長、５５アミノ酸長、６０アミノ酸長、６５アミノ酸長、７０アミノ酸長、７５アミノ酸長、８０アミノ酸長、８５アミノ酸長、９０アミノ酸長、９５アミノ酸長、１００アミノ酸長、１０５アミノ酸長、１１０アミノ酸長、１１５アミノ酸長、１２０アミノ酸長、１２５アミノ酸長、１３０アミノ酸長、１３５アミノ酸長、１４０アミノ酸長、１４５アミノ酸長、１５０アミノ酸長、１５５アミノ酸長、１６０アミノ酸長、１６５アミノ酸長、１７０アミノ酸長、１７５アミノ酸長、１８０アミノ酸長、１８５アミノ酸長、１９０アミノ酸長、１９５アミノ酸長もしくは２００アミノ酸、またはこれらの数値のいずれか２つによって定義される範囲内のアミノ酸長である。
【０１７６】
１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む複合ペプチドの例を表２に示すが、これらに限定されない。表２に記載の例において、本発明の実施形態による（４残基間隔にある）１回転αヘリックスおよび／もしくは（７残基間隔にある）２回転αヘリックスのペプチド内炭化水素リンカーエレメント、ならびに／または特定のアミノ酸立体化学構造（たとえば、表２の「ｄ」は、（Ｄ）立体化学構造を示す）を有する本発明の実施形態によるカスタムペプチド誘導体の合成に有用な特定のα−アルケニル置換アミノ酸は、特に限定されない。
【表２】
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2020513020.tif 000013
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【０１７７】
当業者であれば、保存されたγｃボックスモチーフに関する本明細書における開示、および図２に示したアミノ酸の生化学的特性に関する知識に基づいて、１つ以上の炭化水素リンカーエレメントを有していてもよい本発明のカスタムペプチド誘導体を合成することができる。さらに、実施形態のいくつかは、本発明のペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドに関する。「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」および「核酸」という用語は区別なく使用することができ、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、これらのＤＮＡの転写産物（たとえばＲＮＡ分子）のいずれかを意味すると理解される。ペプチド自体を投与するのではなく、ポリヌクレオチドを細胞または対象に投与することによって、該細胞または該対象においてペプチドを発現させることができる。さらに、いくつかの実施形態は、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む遺伝子コンストラクトに関する。遺伝子コンストラクトは、プロモーターやエンハンサーなどのさらなる制御エレメントをさらに含むことができ、必要に応じて選択マーカーを含んでいてもよい。
【０１７８】
γｃサイトカイン介在性疾患の治療方法
いくつかの実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療におけるγｃアンタゴニストペプチドの使用に関する。本発明の実施形態によるカスタムペプチド誘導体を使用することによって、治療剤の設計（ペプチドのカスタム設計）を柔軟に行うことができ、抗サイトカイン抗体または抗サイトカイン受容体抗体を用いた従来の戦略では達成が不可能なさらに包括的な成果を上げることが可能となる。
【０１７９】
本明細書において、γｃファミリーサイトカインの作用を阻害するための新規な方法を提供する。この手法によって、γｃサイトカインの制御異常または機能不全に関連する疾患の治療に効果的な臨床的介入方法を提供することができる。γｃサイトカインとγｃサブユニットの相互作用を妨害することによって治療可能な疾患としては、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、セリアック病（CD）、橋本甲状腺炎、自己免疫性甲状腺炎などの自己免疫疾患；関節リウマチなどの膠原病；炎症性腸疾患；糖尿病（１型糖尿病）；乾癬などの皮膚の自己免疫疾患；多発性硬化症などの変性性神経疾患；ぶどう膜炎または眼炎症、および交感性眼炎；移植片対宿主病（GvHD）；重症筋無力症；炎症性腸疾患（IBD）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）；全身性エリテマトーデス；ならびに円形脱毛症が挙げられる。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγｃアンタゴニストペプチドは、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩ型およびII型（HTLV-IおよびHTLV-II）に関連する疾患の治療に使用してもよく、このような疾患として、成人Ｔ細胞性白血病（ATL）；HTLV関連脊髄症／熱帯性痙性不全対麻痺症（HAM/TSP）；およびぶどう膜炎（HTLV-1関連ぶどう膜炎）、関節症、肺疾患、皮膚炎、外分泌腺症、筋炎などのHTLVに関連するその他の非新生物性炎症性疾患が挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγｃアンタゴニストペプチドは、インフルエンザ、AIDS、HBV、ヘルペスなどのその他のウイルス性疾患または寄生虫疾患の治療に使用してもよい。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγｃアンタゴニストペプチドを免疫抑制剤として様々な臓器の移植前、移植中または移植後に投与してもよい。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγｃアンタゴニストペプチドは、喘息などの免疫性疾患およびその他の炎症性呼吸器疾患の治療に使用してもよく、このような疾患として、副鼻腔炎、花粉症、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、アレルギー性鼻炎、急性耳炎、慢性耳炎、肺線維症などが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、γｃアンタゴニストペプチドは、アレルゲン、化学薬剤または急性呼吸器疾患を引き起こす一般的なその他の要因への暴露により引き起こされるアレルギー反応を治療または予防するために投与してもよい。いくつかの実施形態において、γｃアンタゴニストペプチドは、ウイルス、細菌、化学薬品、または生化学薬品によって引き起こされる炎症反応を治療または予防するために投与してもよい。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のγｃアンタゴニストペプチドは、LGL白血病、上皮内リンパ腫、難治性セリアック病における白血病、NK白血病／リンパ腫、NK-T白血病／リンパ腫などのいくつかのタイプの悪性腫瘍を治療するために投与してもよい。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の実施形態によるカスタムペプチド誘導体は、抗炎症性を有することから、抗老化成分として軟膏に配合することによって、ざ瘡、脱毛および日焼けの治療、爪のケアなどの美容目的に使用することができる。
【０１８５】
いくつかの実施形態は、γｃサイトカインのすべてのメンバーまたは選択されたメンバーの機能を抑制することができる治療用アンタゴニストペプチドに関する。いくつかの実施形態において、治療用アンタゴニストペプチドは、γｃサイトカインファミリーの個々のメンバーを選択的に抑制する（カスタムペプチド）。別の一実施形態において、治療用アンタゴニストペプチドは、γｃサイトカインファミリーのすべてのメンバーを包括的に抑制することができる（Simul-Block）。いくつかの実施形態において、治療用アンタゴニストペプチドは、γｃサイトカインのサブセットを選択的に抑制する。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本発明のペプチドアンタゴニストは、たとえば競合阻害剤などとして、γｃサイトカインとγｃサブユニットの結合を抑制することにより、γｃサイトカインのすべてメンバーまたは選択されたメンバーの機能を抑制することができる。
【０１８６】
γｃサイトカインファミリーのうち、IL-4以外のメンバーのいくつか、すなわち、IL-2、IL-7およびIL-15は、実験マウスモデルにおいて移植片対宿主病（GvHD）に関与することが報告されている（Miyagawa et al., 2008 J. Immunol. 181:1109-19.）。一実施形態は、ヒトのGvHDを治療することにより移植組織または移植骨髄細胞の生着を可能とするための、IL-2、IL-7およびIL-15の活性を選択的に抑制する治療用アンタゴニストペプチドの使用に関する。別の実施形態は、GvHDを治療するための、IL-2とIL-7の組み合わせ、IL-2とIL-15の組み合わせ、またはIL-7とIL-15の組み合わせを選択的に抑制する治療用アンタゴニストペプチドの使用に関する。別の実施形態は、IL-2、IL-7またはIL-15を選択的に抑制する複数の治療用アンタゴニストペプチドの組み合わせの使用に関する。
【０１８７】
いくつかの実施形態は、Tregが関与するとされている自己免疫疾患の治療のための、IL-2の機能を選択的に抑制する治療用アンタゴニストペプチドの使用に関する。いくつかの実施形態において、ペプチドを用いてTregを抑制することによって、がんに対するヒトの自然免疫を増強することができ、これによって、新規の抗がん療法を提供することができる。
【０１８８】
いくつかの実施形態は、喘息を治療するための、IL-4を選択的に抑制する治療用アンタゴニストペプチドの使用に関する。
【０１８９】
いくつかの実施形態は、LGL白血病の治療剤としての、IL-7を選択的に抑制する治療用アンタゴニストペプチドの単独使用、またはγｃサイトカインファミリーのメンバーであるIL-15を選択的に抑制する治療用アンタゴニストペプチドと組み合わせた使用に関する。いくつかの実施形態において、IL-7活性とIL-15活性の両方を選択的に抑制する治療用アンタゴニストペプチドを使用して、LGL白血病を治療することができる。いくつかの実施形態は、LGL白血病を治療するための、BNZ-γの使用に関する。いくつかの実施形態において、IL-15のみを選択的に抑制する特異的なγｃアンタゴニストペプチドまたはIL-15とIL-7の両方を選択的に抑制する特異的なγｃアンタゴニストペプチドを、CD4/CD8 Ｔリンパ球関連白血病（HTLV-Iによって引き起こされる白血病など）の治療剤として使用する。
【０１９０】
いくつかの実施形態は、Th17細胞の発生異常が関与するヒト疾患の治療剤としての、IL-9の活性のみを選択的に抑制するγｃアンタゴニストペプチドの使用、またはγｃサイトカインファミリーのその他のメンバーとIL-9の活性を選択的に抑制するγｃアンタゴニストペプチドの使用に関する。
【０１９１】
いくつかの実施形態は、セリアック病（ＣＤ）を治療するための治療剤としての、IL-15活性を選択的に抑制する治療用アンタゴニストペプチドの使用に関する。最近の報告の一つでは、IL-15に加えてIL-21もセリアック病の病因に関与している可能性が示唆されている（Bodd et al., 2010, Mucosal Immunol. 3:594-601.参照）。さらに、別の最近の研究では、IL-2、IL-15およびIL-21の相乗作用が難治性セリアック病の発生機序に大きく関与していることが特定されている（Kooy-Winkelaar, et al., 2017 Proc Natl Acad Sci U S A 114: E980-9.）。このことは、従来の抗サイトカイン抗体または抗サイトカイン受容体抗体を用いたセリアック病の最適な治療法において、IL-2系、IL-15系、IL-21系またはこれらの組み合わせに属する１つ以上の構成分子を認識する少なくとも２種の抗体を組み合わせることによって、有益な効果が得られることを示唆している。いくつかの実施形態において、IL-2活性、IL-15活性もしくはIL-21活性、IL-2活性とIL-15活性の組み合わせ、IL-2活性とIL-21活性の組み合わせ、および／またはIL-15活性とIL-21活性の組み合わせを選択的に抑制するカスタムペプチド誘導体からなるアンタゴニストペプチドは、セリアック病を治療するための治療剤として使用される。いくつかの実施形態において、IL-2とIL-15の組み合わせ、IL-2とIL-21の組み合わせ、および／またはIL-15とIL-21の組み合わせを選択的に抑制するカスタムペプチド誘導体からなるアンタゴニストペプチドの効果は、相加効果であってもよく、相乗効果であってもよい。
【０１９２】
相加効果は、特定の組み合わせによる効果が、該組み合わせに含まれる各薬剤の効果の総和と等しい場合に観察される（たとえば、２種以上のペプチドの組み合わせによる効果は、各ペプチドの効果の総和と等しい）。相乗効果は、特定の組み合わせによる効果が、該組み合わせに含まれる各薬剤の効果の総和よりも大きい場合に観察される（たとえば、２種以上のペプチドの組み合わせによる効果は、各ペプチドの効果の総和よりも大きい）。相乗効果は相加効果よりも大きくなる。相加効果、相乗効果またはこれらの両方は、ヒト患者、非ヒト患者、患者ではないヒトボランティア、インビボモデル、エクスビボモデル、インビトロモデルなどで見られる場合がある。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示された２種以上のペプチドを併用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された２種以上のペプチドは、併用した場合に相加効果を示す。いくつかの実施形態において、本明細書で開示された２種以上のペプチドは、併用した場合に相乗効果を示す。相乗効果は、約１倍を超え約１００倍以下の範囲であってもよい。いくつかの実施形態において、相乗効果は約２倍〜約２０倍である。いくつかの実施形態において、相乗効果は約２０倍〜約１００倍である。いくつかの実施形態において、相乗効果は、１倍を超え、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍もしくは１００倍、またはこれらの数値のいずれか２つによって定義される範囲内の倍率である。
【０１９４】
γｃアンタゴニストペプチドは、治療目的での使用だけでなく、消費者製品に使用することもできる。いくつかの実施形態は、老化防止用、抗炎症用、抗ざ瘡用、他の関連する適用のスキンケア製品におけるγｃアンタゴニストペプチドの使用に関する。いくつかの実施形態は、自己免疫疾患によって引き起こされた脱毛を治療するための抗脱毛成分としての、ヘアケア製品におけるγｃアンタゴニストペプチドの使用に関する。
【０１９５】
別の一実施形態は、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示される１９ｍｅｒのアミノ酸配列またはＰ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示される２１ｍｅｒのアミノ酸配列と類似した空間的構造を有し、γｃサブユニットのポケットにはまり込むことによって、γｃサブユニットに結合しようとするγｃサイトカインのアクセスを構造的に阻害することが可能な（非ペプチド性、非タンパク質性の）化合物の開発に関する。いくつかの実施形態は、γｃサイトカイン活性の阻害剤としての、類似構造を有する化合物の使用に関する。このような、既存の生体ペプチド／タンパク質と類似した構造を有する合成化合物の開発をさらに改善するための分子擬態戦略は、Orzaez et al., 2009 Chem. Med. Chem. 4:146-160.に記載されている。別の一実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示される１９ｍｅｒのアミノ酸配列またはＰ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示される２１ｍｅｒのアミノ酸配列と類似した立体構造を有する（非ペプチド性、非タンパク質性の）化合物の投与に関する。
【０１９６】
いくつかの実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列のペプチドの投与に関する。別の一実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド誘導体の投与であって、該ペプチド誘導体のアミノ酸配列が、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列のペプチドと類似した生理化学的特性を有しているが、異なる生物学的活性を有することを特徴とする投与に関する。別の一実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、既存の生体タンパク質／ペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖残基に結合した、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列のペプチドの患者への投与に関する。別の一実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列のペプチドの投与に関する。
【０１９７】
いくつかの実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列のペプチドの投与に関する。別の一実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド誘導体の投与であって、該ペプチド誘導体のアミノ酸配列が、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列のペプチドと類似した生理化学的特性を有しているが、異なる生物学的活性を有することを特徴とする投与に関する。別の一実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、既存の生体タンパク質／ペプチドのＮ末端、Ｃ末端または側鎖残基に結合した、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列のペプチドの患者への投与に関する。別の一実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む、Ｐ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列のペプチドの投与に関する。
【０１９８】
いくつかの実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列を含むペプチドに対して作製されたポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体、またはＰ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列を含むペプチドに対して作製されたポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体の免疫原としての患者への投与に関する。別の一実施形態は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療のための、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド誘導体に対して作製されたポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体、またはＰ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列を含むペプチド誘導体に対して作製されたポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体の免疫原としての患者への投与であって、該ペプチド誘導体のアミノ酸配列が、Ｉ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｑ−Ｒ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｉ−Ｖ−Ｑ−Ｓ−Ｉ−Ｉ−Ｎ−Ｔ−Ｓ（配列番号１）またはＰ−Ｋ−Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ−Ｒ−Ｆ−Ｖ−Ｈ−Ｌ−Ｖ−Ｑ−Ｍ−Ｆ−Ｉ−Ｈ−Ｑ−Ｓ−Ｌ−Ｓ（配列番号３）で示されるアミノ酸配列のペプチドと類似した生理化学的特性を有しているが、異なる生物学的活性を有することを特徴とする投与に関する。
【０１９９】
γｃアンタゴニストペプチドの投与
本発明の実施形態は、疾患治療用医薬品を製造するための、γｃアンタゴニストペプチドの使用を包含する。さらに、本発明の実施形態は、γｃアンタゴニストペプチドと薬学的に許容される担体との組み合わせを含む医薬組成物を包含する。この医薬組成物は、薬学的に許容される担体と無毒かつ治療に有効な量のγｃアンタゴニストペプチドを含むことができ、または本発明の実施形態に記載の別の組成物を含むことができる。
【０２００】
本発明の実施形態は、適切な希釈剤または担体中に有効量のγｃサイトカインアンタゴニストを含む医薬組成物の使用方法を提供する。本発明の実施形態によるγｃアンタゴニストは、薬学的に有用な組成物を調製するための公知の方法により製剤化することができる。γｃアンタゴニストは、活性物質として単独で使用されるか、または他の公知の活性物質と併用され、薬学的に適切な希釈剤（たとえばリン酸塩、酢酸塩、Tris-HCl）、保存剤（たとえばチメロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、乳化作用を有する化合物、可溶化剤、アジュバントおよび／または担体（ウシ血清アルブミンなど）と組み合わせて混合物とすることができる。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、本明細書で開示された複合ペプチドまたはその誘導体のうちの１つ以上を含む１つ以上の組成物およびキットが企図される。いくつかの実施形態において、１つ以上の組成物およびキットは、１種以上の疾患の治療および／または予防に使用される。いくつかの実施形態において、１つ以上の組成物およびキットは、γｃサイトカイン介在性疾患の治療および／または予防に使用される。いくつかの実施形態において、１つ以上の組成物およびキットは、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患の治療および／または予防に使用される。いくつかの実施形態において、１つ以上の組成物およびキットは、炎症性呼吸器疾患の治療および／または予防に使用される。いくつかの実施形態において、１つ以上の組成物およびキットは、美容状態の治療および／または予防に使用される。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、本発明による１つ以上の複合ペプチドを含む１つ以上の組成物およびキットは、本明細書に記載の投与経路のいずれかを介して、該複合ペプチドの投与を必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキットは、本発明の複合ペプチドまたはその誘導体のうちの１つ以上を治療有効量で含み、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15およびIL-21からなる群から選択される１種以上のγｃサイトカインの活性を調節する。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキットは、本発明の複合ペプチドまたはその誘導体のうちの１つ以上を治療有効量で含み、１種以上の疾患を予防および／または治療する。いくつかの実施形態において、本発明による１つ以上の複合ペプチドを含む前記１つ以上の組成物およびキットは、１種以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、添加剤またはその組み合わせをさらに含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれる１つ以上の複合ペプチドは、１種以上の疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれる１つ以上の複合ペプチドは、γｃサイトカイン介在性疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれる１つ以上の複合ペプチドは、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれる１つ以上の複合ペプチドは、炎症性呼吸器疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれる１つ以上の複合ペプチドは、美容状態の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドは、１種以上の疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドは、γｃサイトカイン介在性疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドは、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドは、炎症性呼吸器疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドは、美容状態の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドの１つ以上の誘導体は、１種以上の疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドの１つ以上の誘導体は、γｃサイトカイン介在性疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドの１つ以上の誘導体は、HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）に伴う疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドの１つ以上の誘導体は、炎症性呼吸器疾患の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の組成物およびキット中に含まれ、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択される１つ以上の複合ペプチドの１つ以上の誘導体は、美容状態の治療および／または予防を目的として、対象への投与に適するように製剤化される。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の複合ペプチドの１つ以上の誘導体は、前記１つ以上の複合ペプチドと約５０％〜約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、前記１つ以上の複合ペプチドの１つ以上の誘導体は、前記１つ以上の複合ペプチドと５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％もしくは９９．８％の同一性、またはこれらの数値のいずれか２つによって定義される範囲内の数値の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、前記１種以上のγｃサイトカイン介在性疾患は、CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ウェゲナー肉芽腫症、セリアック病、橋本甲状腺炎、関節リウマチ、糖尿病、乾癬、多発性硬化症、ぶどう膜炎、眼炎症および移植片対宿主病（GvHD）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、前記HAM/TSPに伴う疾患は、成人Ｔ細胞白血病（ATL）、HTLV関連脊髄症／熱帯性痙性不全対麻痺症（HAM/TSP）、およびHTLVに伴うその他の非腫瘍性炎症性疾患（ぶどう膜炎（HTLV-1関連ぶどう膜炎）、関節症、肺疾患、皮膚炎、外分泌腺症、筋炎など）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、前記炎症性呼吸器疾患は、喘息、副鼻腔炎、花粉症、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、アレルギー性鼻炎、急性耳炎、慢性耳炎および肺線維症からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、前記１種以上の美容疾患は、ざ瘡、脱毛、日焼け、爪の維持および老化の出現からなる群から選択される。
【０２０７】
適切な担体およびそれらの製剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th ed. 1980 Mack Publishing CO.に記載されている。さらに、このような組成物は、ポリエチレングリコール（PEG）もしくは金属イオンと複合体化させたγｃアンタゴニスト；ポリ酢酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲルなどの高分子化合物に組み込んだγｃアンタゴニスト；またはリポソーム、マイクロエマルション、ミセル、単層小胞、多層小胞、赤血球ゴーストもしくはスフェロプラストに組み込んだγｃアンタゴニストを含むことができる。このような組成物とすることによって、γｃアンタゴニストの物理的状態、溶解性、安定性、インビボでの放出速度、およびインビボでのクリアランス率を変化させることができる。γｃアンタゴニストは、細胞に特異的な抗原、受容体またはリガンドに対する抗体と結合させることができ、あるいは、組織特異的受容体に対するリガンドとカップリングさせることができる。
【０２０８】
本発明の実施形態によるγｃアンタゴニストの投与方法は、疾患の種類、対象の状態、および／または標的部位などの要因に応じて適宜選択してもよい。γｃアンタゴニストは、局所投与、経口投与、非経口投与、直腸投与または吸入投与することができる。「非経口」は、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、大槽内注射および点滴を含む。このような投与方法で投与される組成物は、通常、有効量のγｃアンタゴニストを単独で含有するか、または有効量のその他の活性物質と組み合わせて含有する。いくつかの投与経路を介して投与することができ、たとえば、非経口投与経路、皮下投与経路、関節腔内投与経路、気管支内投与経路、腹腔内投与経路、関節包内投与経路、軟骨内投与経路、腔内投与経路、体腔内投与経路、小脳内投与経路、脳室内投与経路、結腸内投与経路、頸管内投与経路、胃内投与経路、肝内投与経路、心筋内投与経路、骨内投与経路、骨盤内投与経路、心膜内投与経路、腹膜内投与経路、胸膜内投与経路、前立腺内投与経路、肺内投与経路、直腸内投与経路、腎内投与経路、網膜内投与経路、脊髄内投与経路、滑液包投与経路、胸腔内投与経路、子宮内投与経路、膀胱内投与経路、病巣内投与経路、ボーラス投与、経膣投与経路、直腸投与経路、頬側投与経路、舌下投与経路、鼻腔内投与経路または経皮投与経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０９】
本明細書で開示された前記１つ以上の複合ペプチドは、様々なパラメータに基づいて当業者により決定された任意の用量、任意の投与経路および任意の投与頻度で投与することができる。前記パラメータとして、治療の対象となる状態、状態の重症度、患者のコンプライアンス、治療の有効性、副作用などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１０】
本発明の実施形態による医薬組成物中の前記ペプチドの含有量、前記医薬組成物の剤形、投与頻度などは、疾患の種類、対象の状態および／または標的部位などの要因に応じて適宜選択してもよい。前記医薬組成物中の用量および所望の薬剤濃度は、意図する用途、患者の体重および年齢、投与経路などの様々なパラメータに応じて変化しうる。当技術分野において許容される慣行に従って、最初に動物を使用した予備試験を行い、ヒトへの投与を行う次の段階へと移行させる。
【０２１１】
一実施形態において、少なくとも１つのγｃアンタゴニストペプチドをコードするポリヌクレオチドを用いて遺伝子組換えした宿主細胞を対象に投与することによって、増殖性疾患を治療し、かつ／または悪性細胞の増殖を低下させる。宿主細胞においてポリヌクレオチドが発現されることによって、前記対象においてペプチドが産生される。宿主細胞は対象と同種または対象由来であることが好ましい。
【０２１２】
さらなる一態様において、γｃアンタゴニストペプチドを、別の治療法、たとえば、がん細胞の増殖および成長を抑制する治療法と組み合わせて使用することができる。「併用療法」には、特異的療法のレジメンの一部として、γｃアンタゴニストペプチドを別の治療剤と併用投与することにより、これらの治療剤の共同作用により有益な効果を得ることが含まれる。これらの治療剤の併用投与は、通常、定められた期間（選択された組み合わせに応じて、通常、数分間、数時間、数日間または数週間）にわたって実施される。
【０２１３】
併用療法は、これらの治療剤を連続して投与することを含み、すなわち、これらの治療剤を異なる時間に投与すること、およびこれらの治療剤のすべて、またはこれらの治療剤の少なくとも２種を実質的に同時に投与することを含む。実質的に同時の投与は、たとえば、各治療剤を決まった割合で含む単一のカプセルを対象に投与するか、または治療剤ごとに製造された単一のカプセルを複数種併せて対象に投与することにより達成することができる。各治療剤の連続投与または実質的に同時の投与は、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、粘膜組織からの直接吸収などの（ただしこれらに限定されない）適切な経路を介して行うことができる。前記複数種の治療剤は、同じ経路または異なる経路で投与することができる。各治療剤を投与する順序はそれほど重要視されない。
【０２１４】
さらに、併用療法は、その他の生物学的活性成分（たとえば、別の第２の治療剤などが挙げられるが、これに限定されない）および／または非薬物療法（たとえば、手術または放射線療法などが挙げられるが、これらに限定されない）をさらに組み合わせて前記複数の治療剤を投与することを含む。併用療法が放射線療法をさらに含む場合、治療剤と放射線療法の組み合わせによる共同作用によって有益な効果がもたらされる限り、放射線療法は任意の適切な時間に行ってもよい。たとえば、適切に実施された場合、治療剤の投与中に、たとえば数日間または数週間にわたって放射線療法を一時的に中断したとしても有益な効果を得ることができる。
【０２１５】
特定の実施形態において、γｃアンタゴニストペプチドは、化学療法剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍剤、抗有糸分裂剤、抗ウイルス剤、抗新生物剤、免疫療法剤および放射線療法剤からなる群から選択される少なくとも１つの抗増殖剤と組み合わせて投与することができる。
【０２１６】
特定の実施形態において、γｃアンタゴニストペプチドは、ステロイド、コルチコステロイドおよび非ステロイド系抗炎症剤からなる群から選択される少なくとも１種の抗炎症剤と組み合わせて投与することができる。
【０２１７】
さらに、本明細書で提供される方法を実施するためのキットを提供する。いくつかの実施形態において、前記キットは、本明細書に記載の実施形態のいずれかによる１つ以上のγｃアンタゴニストを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、前記キットは説明書を含んでいてもよい。説明書は文章でも図でもよく、録音テープ、録音CD、ビデオテープ、DVD、CD-ROMなどの記録媒体に記録したものであってもよい。前記キットは包装を含んでいてもよい。
【０２１８】
用語の定義
本明細書において「患者」または「対象」は、本明細書で開示された複合ペプチドの実施形態のいずれかが投与されるレシピエントを指し、動物界のすべての生物を包含する。いくつかの実施形態において、ヒトおよびその他の霊長類（たとえば、チンパンジーならびにその他の類人猿およびサル類）、農場動物（たとえば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマ）、家畜哺乳動物（たとえば、イヌおよびネコ）、実験動物（たとえば、マウス、ラット、モルモットなどのげっ歯類）、鳥類（たとえば、ニワトリ、七面鳥およびその他のキジ類、アヒル、ガチョウなどの、家禽、野鳥および狩猟鳥）など（ただし、これらに限定されない）のあらゆる脊椎動物が含まれる。好ましい実施形態において、前記動物は、ヒト、ウシ、ヒツジ、ブタ、ネコ、スイギュウ、イヌ、ヤギ、ウマ、ロバ、シカ、霊長類などの哺乳動物科の動物である。ヒトが最も好ましい。いくつかの実施形態において、前記患者は雄性または雌性である。
【０２１９】
本明細書において「治療する」またはこの用語の変化形（たとえば、「治療」、「治療すること」など）は、生物学的病態を有すると診断された患者のあらゆる治療を指す。生物学的病態としては、CD4白血病、CD8白血病、LGL白血病、自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、ヴェーゲナー肉芽腫症、セリアック病、橋本甲状腺炎、膠原病、関節リウマチ、炎症性腸疾患、糖尿病、乾癬、変性性神経疾患、多発性硬化症、ぶどう膜炎、眼炎症、移植片対宿主病（GvHD）、重症筋無力症、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩ型およびII型（HTLV-IおよびHTLV-II）関連疾患、成人Ｔ細胞性白血病（ATL）、HTLV関連脊髄症／熱帯性痙性不全対麻痺症（HAM/TSP）、ぶどう膜炎（HTLV-1関連ぶどう膜炎）、関節症、肺疾患、皮膚炎、外分泌腺症、筋炎、インフルエンザ、AIDS、HBV、ヘルペス、喘息、副鼻腔炎、花粉症、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、アレルギー性鼻炎、急性耳炎、慢性耳炎、肺線維症、NK白血病／リンパ腫、NK-T白血病／リンパ腫などが挙げられる。
【０２２０】
本明細書において、「治療」は、
（ｉ）目的の生物学的病態に関連する症状をまだ呈していないが、その恐れのある患者において、該生物学的病態に関連する症状の発生を予防もしくは遅延すること；
（ii）目的の生物学的病態を有すると診断された患者において、該生物学的病態に関連する症状を緩和すること；
（iii）目的の生物学的病態を有すると診断された患者またはその恐れのある患者において、該生物学的病態に関連する合併症、状態もしくは疾患の発生を予防、遅延もしくは緩和すること；
（iv）生物学的病態の進行を減速、遅延もしくは阻止すること；
（ｖ）炎症における細胞事象を予防、遅延、減速、阻止もしくは緩和すること；ならびに／または
（vi）組織学的異常および／もしくはその他の生物学的病態の臨床的測定値を予防、遅延、減速、阻止もしくは緩和すること
を含む。
【０２２１】
本明細書において「症状」は、患者が罹患している特定の病態または疾患の一般的な徴候または指標を指す。
【０２２２】
本明細書において「有効量」は、所望の生体応答の誘導に必要な量を指す。本発明の実施形態によれば、γｃアンタゴニストの有効量は、生物学的病態の治療おいて使用される少なくとも１つの生物学的因子において観察可能な効果を得るのに必要な量である。
【０２２３】
「組換えＤＮＡ技術」または「組換え」は、クローニングしたＤＮＡ配列または合成ＤＮＡ配列を用いて形質転換またはトランスフェクトした微生物細胞（たとえば、細菌、酵母）、無脊椎動物（昆虫）細胞、哺乳動物細胞、または生物（たとえば、トランスジェニック動物、もしくはトランスジェニック植物）から特定のポリペプチドを産生させることによって、異種ペプチドを生合成することが可能な技術および方法の使用を指す。天然のグリコシル化パターンは哺乳動物細胞発現系のみにおいて見られる。原核生物の発現系は、合成タンパク質をグリコシル化することはできない。酵母細胞および昆虫細胞は、天然のグリコシル化パターンとは異なりうる特有のグリコシル化パターンを示す。
【０２２４】
「ヌクレオチド配列」は、個別のフラグメントの形態のポリヌクレオチド、またはこれよりも大きなＤＮＡコンストラクトの一部を構成するポリヌクレオチドであり、内在性物質による汚染のない実質的に純粋な形態でＤＮＡまたはＲＮＡから少なくとも一旦単離されたものであり、（Current Protocols in Molecular Biologyに概説されているような）標準的な分子生物学的方法によってヌクレオチド配列の同定、操作および回収が可能な量または濃度のポリヌクレオチドを指す。
【０２２５】
「組換え発現ベクター」は、（１）プロモーターおよびエンハンサーなどの、遺伝子発現を制御する単一または複数の遺伝因子、（２）本発明の実施形態によるポリペプチドをコードする構造配列またはコード配列、ならびに（３）適切な転写開始配列および翻訳開始配列および所望に応じて終止配列からなるアセンブリを含む転写単位を含むプラスミドを指す。酵母系および哺乳動物系での使用を意図した場合の構成要素として、翻訳されたポリペプチドを酵母宿主細胞または哺乳動物宿主細胞により細胞外分泌させることが可能なシグナル配列が含まれていることが好ましい。
【０２２６】
「組換え微生物発現系」は、染色体ＤＮＡに組換え転写単位が安定に組み込まれているか、または残存プラスミドの構成要素としての組換え転写単位が挿入された適切な微生物（たとえば、大腸菌などの細菌、Ｓ．セレビシエなどの酵母）の実質的に均質な単一培養系を指す。通常、組換え微生物発現系を構成する宿主細胞は、形質転換された単一の祖先細胞の子孫である。組換え微生物発現系では、発現対象のヌクレオチド構造配列に連結された制御因子の誘導によって異種ポリペプチドが発現される。
【０２２７】
本明細書において使用された節の見出しは、本発明を系統立てて述べることのみを目的として設けられており、本明細書に記載の主題を制限するものであると解釈すべきではない。本出願において引用された、特許、特許出願、記事、書籍、論文およびインターネットウェブページなどの（ただしこれらに限定されない）あらゆる学術文献および類似の資料は、任意の目的に対して引用によりその全体が本明細書に明示的に援用される。援用された引用文献に記載の用語の定義が、本発明の教示における用語の定義と異なる場合、本発明の教示における用語の定義を採用するものとする。本発明の教示において述べた温度、濃度、時間などの前に「約」という意味を含む用語が置かれている場合、ごくわずかな逸脱は、本発明の教示の範囲内であることは十分に理解される。
【０２２８】
特定の実施形態および実施例において本発明を開示したが、当業者であれば、具体的に開示された実施形態から別の実施形態ならびに／または本発明の使用、当業者に明らかな変更およびこれらの等価物にまで、本発明を拡大することができることを理解するであろう。さらに、本発明のいくつかのバリエーションを示し、詳細に説明したが、本開示に鑑みれば、本発明の範囲内のその他の変更も当業者であれば容易に理解できるであろう。
【０２２９】
さらに、本発明の実施形態の特定の特徴および態様の様々な組み合わせ、またはその下位の組み合わせも可能であり、本発明の範囲内であることが企図される。本明細書で開示された実施形態の様々な特徴および態様は、本明細書で開示された様々な態様または実施形態を構成することを目的として、別の特徴および態様と組み合わせてもよく、別の特徴および態様と置き換えてもよいと理解されるべきである。したがって、本明細書で開示された本発明の範囲は、本明細書で開示された前述の特定の実施形態によって限定されるべきではない。
【０２３０】
しかしながら、当業者であれば、本発明の要旨および範囲内の様々な変更および修飾は明らかであることから、本発明の好ましい実施形態を示した詳細な説明は、本発明を説明することのみを目的としたものであると理解すべきである。
【０２３１】
以下の実施例は本発明を説明することを目的として提供され、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０２３２】
実施例１：γｃアンタゴニストペプチドの抑制活性の評価方法
本発明の実施形態に従って調製したカスタムペプチド誘導体の、γｃサイトカインファミリーの１メンバーの作用に対する抑制能は、哺乳動物細胞アッセイを使用して、γｃサイトカインファミリーの該１メンバーに応答した哺乳動物細胞の増殖を測定することにより評価する。
【０２３３】
６種のγｃサイトカインそれぞれに対して、指標細胞株として、NK92（American Type Culture Collection（ATCC）（カタログNo.CRL-2407）から入手可能なヒトNK細胞株NK92）、CTLL-2（ATCCから入手可能なマウスCD8 T細胞株）ならびにPT-18（マウス肥満細胞株）およびそのサブクローンPT-18βを使用し、これらの細胞にヒトIL-2Rβ遺伝子をトランスフェクトし、IL-2およびIL-15に対する応答性を付与する（Tagaya et al., 1996, EMBO J. 15:4928-39）。これらのトランスフェクト細胞を使用して、γｃサイトカインの増殖促進活性を定量する（具体的な方法については、Wiley and Sonsから出版されているCurrent protocols in Immunologyを参照されたい）。WST-1比色定量アッセイを使用して様々な濃度で測定すると、指標細胞は半線形の用量依存的な応答を示す（試薬および方法の詳細な説明については、クロンテック社製PT3946-1および添付のユーザーマニュアルを参照されたい；これらは参照により本明細書に援用される）。
【０２３４】
指標細胞株において最大応答の５０％〜７０％および９５％の応答を誘導するのに適切なサイトカイン用量が決定されたら、サイトカインと指標細胞を含む各ウェルに、精製カスタムペプチド誘導体または合成カスタムペプチド誘導体を様々な濃度（１pM〜10μM）で加える。４５０ｎｍにおける光吸収度の低下を指標として、サイトカイン刺激細胞の増殖に対する抑制作用を評価する。
【０２３５】
実施例２：BNZ-γおよび配列番号３による特定のγｃサイトカインの増殖促進活性の選択的抑制
選択したγｃサイトカインの増殖促進活性に対するBNZ-γペプチドの特異的抑制能を、前記PT-18β細胞を使用して測定した（図３Ａ）。PT-18β細胞の増殖を支持する非γｃサイトカインであるIL-3をネガティブコントロールとして使用した。簡潔に述べると、HEK293T細胞により産生されたBNZ-γペプチドを２種の希釈倍率で希釈したもの（BNZ-γ発現コンストラクトをトランスフェクトしたHEK293T細胞の上清を１：２０または１：５０で希釈したもの）を添加して、またはBNZ-γペプチドを添加せずに、IL-3、IL-9、IL-15またはIL-4（培養物中の各サイトカイン濃度：１nM）の存在下でPT-18β細胞をインキュベートした。
【０２３６】
BNZ-γペプチドおよびサイトカインを導入した２日後に、WST-1アッセイを用いて細胞の増殖応答を測定した。IL-3（非γｃサイトカイン）の増殖促進活性はBNZ-γによって抑制されなかった。これに対して、IL-15およびIL-9の活性は、BNZ-γペプチドによって顕著に低下した（p<0.01、スチューデントのｔ検定）。別のγｃサイトカインであるIL-4で刺激した細胞増殖は、BNZ-γペプチドの添加による影響を受けなかった。IL-3、IL-9、IL-15およびIL-4についての結果を図３Ａに示す。
【０２３７】
同様のアッセイにおいてマウス細胞株CTLL-2を使用した。このアッセイでは、10%ウシ胎仔血清を添加したRPMI中に0.5nMの組換えIL-2を加えて細胞を培養した。増殖アッセイは以下のようにして構築した。細胞を３回洗浄してサイトカインを除去した。最終濃度50pMでIL-2またはIL-15を加えた96ウェルプレートの各ウェルに１×105個の細胞を播種した。様々な濃度のBNZ-γペプチド（0.1μg/ml、1μg/mlおよび10μg/ml）を各ウェルに加えた。細胞を２０時間培養し、培養終了の４時間前に３Ｈチミジンをプレートに加えた。細胞を回収し、プレートリーダーで測定した。データを図３Ｂに示す。
【０２３８】
ヒトNK細胞株NK92を使用して、IL-2、IL-15およびIL-21に対する配列番号３の用量反応性を評価した。10%ウシ胎仔血清を添加したRPMI中に0.5nMの組換えIL-2を加えて細胞を培養した。増殖アッセイは以下のようにして構築した。細胞を３回洗浄してサイトカインを除去し、次いで、最大応答の70%までNK92細胞の増殖を誘導可能な濃度の各サイトカインを96ウェルプレートに加え、各ウェルあたり2.5×104個の細胞を播種した。市販の配列番号３（純度：>99%）を、IL-2に対しては0〜10μMの最終濃度で各ウェルに加え、IL-15に対しては0〜0.1μMの最終濃度で各ウェルに加え、IL-21に対しては0〜0.1μMの最終濃度で各ウェルに加えた。配列番号３およびサイトカインを導入した２日後に、WST-1アッセイを用いて細胞の増殖応答を測定した。別のγｃサイトカインであるIL-2で刺激した細胞増殖は、10μM以下の濃度の配列番号３の添加による影響を受けなかった。これに対して、IL-15およびIL-21の活性は、配列番号３によって強力に抑制された。データを図３Ｄに示す。
【０２３９】
実施例３：細胞増殖マーカーとしての３Ｈチミジンの取り込みの分析によるγｃサイトカイン活性の抑制の測定方法
γｃサイトカインにより指標細胞集団の増殖を誘導し、カスタムペプチド誘導体からなるアンタゴニストペプチドによる細胞増殖の抑制を３Ｈチミジン取り込みアッセイにより測定する。簡潔に述べると、各サイトカインの存在下において増殖中の20〜50,000個の細胞に、放射性同位元素で標識したチミジン（１μCi）を加える。慣用のセルハーベスター装置（たとえば、パーキンエルマー社製のFiltermateユニバーサルハーベスター）を使用して、細胞に結合した放射能をガラス繊維フィルターで捕捉し、βカウンター（たとえば、1450 Triluxマイクロプレートシンチレーションカウンター）を使用して放射能を測定することにより、細胞に取り込まれた放射能を測定する。
【０２４０】
実施例４：細胞増殖マーカーとしての細胞追跡色素の取り込みの分析によるγｃサイトカイン活性の抑制の測定方法
選択したγｃサイトカインの存在下、または選択したγｃサイトカインと選択したカスタムペプチド誘導体の存在下で指標細胞をインキュベートする。次いで、たとえばCMFDA（インビトロジェン社製C2925）などの細胞追跡色素を使用して細胞集団をインビトロで標識し、細胞分裂ごとの細胞内の緑色蛍光の減衰をフローサイトメーター（たとえばベクトン・ディッキンソン社製FACScalibur）を使用して観察する。通常、γｃサイトカインによる刺激に応答して、細胞分裂回数に対応した７〜１０個の異なるピークが緑色蛍光チャネルに現われる。選択したγｃサイトカインとカスタムペプチド誘導体からなるアンタゴニストペプチドを加えてインキュベートした細胞では、抑制の程度に応じてピークの数が１〜３個にまで減少する。
【０２４１】
実施例５：カスタムペプチド誘導体からなるアンタゴニストによる細胞内シグナル伝達の抑制
γｃサイトカインとその受容体の結合は、細胞増殖を刺激するだけでなく、様々な細胞内事象を引き起こす（Rochman et al. 2009 Nat. Rev. Immunol. 9:480-90, Pesu et al. 2005 Immunol. Rev. 203:127-142.）。γｃサイトカインがその受容体に結合すると、即座に、Jak3（ヤヌスキナーゼ３）と呼ばれるチロシンキナーゼが細胞膜上の該受容体に動員される。このキナーゼは、γｃサブユニット、STAT5（シグナル伝達兼転写活性化因子５）、PI3（ホスファチジルイノシトール３）キナーゼのサブユニットなどの様々な種類のタンパク質のチロシン残基をリン酸化する。これらのタンパク質のうち、STAT5のリン酸化は、γｃサイトカインによって惹起される細胞増殖に関与することが多くの研究において示されている（Hennighausen and Robinson, 2008 Genes Dev. 22:711-21.においてレビューされている）。公表されているこれらのデータに従って、BNZ-γペプチドが、IL-15で刺激したPT-18β細胞におけるSTAT5分子のチロシンリン酸化を抑制するかどうかを試験した（図４Ａに結果を示す）。
【０２４２】
BNZ-γペプチドの存在下または非存在下において、IL-15でPT-18β細胞を刺激した。Tagaya et al. 1996 EMBO J. 15:4928-39.に記載の慣用の方法に従って、細胞から細胞質タンパク質を抽出した。抽出した細胞質タンパク質を標準的なSDS-PAGE（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）で分離し、抗リン酸化STAT5抗体（Cell Signaling Technology、カタログNo.9354、マサチューセッツ州ダンヴァーズ）を用いた免疫ブロット法によりリン酸化の状態を確認した（図４Ａ、上パネル参照）。次いで、各レーンの総タンパク質量がほぼ同じであることを確認するため、膜を剥離し、抗STAT5抗体（Cell Signaling Technology、カタログNo.9358）を用いて再度検出した（図４Ａ、下パネル参照）。
【０２４３】
これらの結果から、PT-18β細胞において、シグナル伝達の指標となるSTAT5のチロシンリン酸化がIL-15により誘導されたこと、およびSTAT5のチロシンリン酸化がBNZ-γペプチドにより顕著に低下したことが示された。
【０２４４】
IL-15の誘導によるJak3を介したSTAT5のチロシンリン酸化と同様に、IL-21受容体への結合を介したJak-STATシグナル伝達が、Jakを介したSTAT3のチロシンリン酸化を選択的に誘導することが当技術分野においてよく知られている（Habib et al. 2003 J Allergy Clin Immunol. 112:1033-45）。これらの公表データに従って、CTLL-2細胞でのIL-2またはIL-15の誘導によるSTAT5分子のチロシンリン酸化に対する配列番号３の抑制能、およびNK92細胞でのIL-21の誘導によるSTAT3分子のチロシンリン酸化に対する配列番号３の抑制能について試験した（図４Ｂに結果を示す）。
【０２４５】
配列番号３の存在下または非存在下において、IL-2またはIL-15でCTLL-2細胞を刺激した。また、ポジティブコントロールとして、抗IL-2抗体（R&Dシステムズ、カタログNo.MAB202、ミネソタ州ミネアポリス）または抗IL-15抗体（R&Dシステムズ、カタログNo.MAB247、ミネソタ州ミネアポリス）の存在下において、IL-2またはIL-15でCTLL-2細胞を刺激した。さらに、配列番号３の存在下または非存在下において、IL-21でNK92細胞を刺激した。ポジティブコントロールとして、抗IL-21抗体（Mabtech、カタログNo.3540-1-250、オハイオ州シンシナティ）の存在下において、IL-21でNK92細胞を刺激した。Tagaya et al. 1996 EMBO J. 15:4928-39.に記載の慣用の方法に従って、細胞から細胞質タンパク質を抽出した。抽出した細胞質タンパク質を標準的なSDS-PAGE（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）で分離し、抗リン酸化STAT5抗体（Cell Signaling Technology、カタログNo.9354、マサチューセッツ州ダンヴァーズ）または抗リン酸化STAT3抗体（Cell Signaling Technology、カタログNo. 9145、マサチューセッツ州ダンヴァーズ）を用いた免疫ブロット法によりリン酸化の状態を確認した（図４Ｂ、上パネル参照）。次いで、各レーンの総タンパク質量がほぼ同じであることを確認するため、膜を剥離し、抗STAT5抗体（Cell Signaling Technology、カタログNo.9358）または抗STAT3抗体（Cell Signaling Technology、カタログNo.9139）を用いて再度検出した（図４Ｂ、下パネル参照）。
【０２４６】
実施例６：BNZ-γから誘導されるアンタゴニストペプチドの合理的設計
ペプチド誘導体は、Ｄ／Ｅ−Ｆ−Ｌ−Ｅ／Ｑ／Ｎ−Ｓ／Ｒ−Ｘ−Ｉ／Ｋ−Ｘ−Ｌ／Ｉ−Ｘ−Ｑ（配列番号２）（式中、Ｘは任意のアミノ酸を示す）で示されるコア配列に基づいて、該コア配列中の各アミノ酸を、図２に示した同一の生理化学的特性を有するアミノ酸で置換することにより調製される。
【０２４７】
別の方法として、カスタムペプチドまたはそのペプチド誘導体は、γｃサイトカインファミリーの様々なメンバーのヘリックスＤ領域の配列アラインメントに基づいて調製することもできる。たとえば、図６に示すように、γｃサイトカインファミリーのメンバー（配列番号４〜配列番号９）において保存されている１つ以上の配列を組み合わせてペプチド（たとえば配列番号３）を作製することができる。
【０２４８】
実施例７：カスタムペプチド誘導体からなるアンタゴニストペプチドによる抑制の特異性を同定する方法
６種の各γｃサイトカインに応答したサイトカイン応答性細胞株の増殖に対するカスタムペプチド誘導体の抑制能を分析することによって、カスタムペプチド誘導体からなるアンタゴニストペプチドによるγｃサイトカインの抑制の特異性を測定する。たとえば、マウス細胞株CTLL-2を使用して、候補ペプチドがIL-2およびIL-15の機能を抑制するかどうかを判定する。また、PT-18（β）細胞を使用して、候補ペプチドがIL-4およびIL-9の機能を抑制するかどうかを判定する。また、PT-18（7α）細胞を使用して、候補ペプチドがIL-7の機能を抑制するかどうかを判定する。さらに、PT-18（21α）細胞を使用して、候補ペプチドがIL-21の機能を抑制するかどうかを判定する。PT-18（β）は、遺伝子のトランスフェクションによりヒトIL-2Rβを外因性に発現するPT-18細胞のサブクローンを指し（Tagayaら、1996参照）、PT-18（7α）は、遺伝子のトランスフェクションによりヒトIL-7Rαを発現するサブクローンを指し、PT-18（21Rα）細胞はヒトIL-21Rαを発現する。
【０２４９】
別の方法において、様々なサイトカインに応答する別の細胞株を使用する。このような細胞株として、ATCCより市販されているヒトNK細胞株NK92（カタログNo.CRL-2407）が挙げられる。この細胞株はIL-2依存性細胞株であり、IL-9、IL-7、IL-15、IL-12、IL-18、IL-21などの他のサイトカインにも応答性を示す（Gong et al. 1994 Leukemia 8: 652-658, Kingemann et al., 1996, Biol Blood Marrow Transplant 2:68;75, Hodge DL et al., 2002 J. Immunol. 168:9090-8）。
【０２５０】
ヒトNK細胞株NK92を使用して、配列番号３によるγｃサイトカインの抑制の特異性を測定した。このアッセイでは、10%ウシ胎仔血清を添加したRPMI中に0.5nMの組換えIL-2を加えて細胞を培養した。抑制特異性アッセイは以下のようにして構築した。細胞を３回洗浄してサイトカインを除去した。最大応答の70%までNK92細胞の増殖を誘導可能な濃度の各サイトカインを96ウェルプレートに加え、各ウェルあたり2.5×104個の細胞を播種した。市販の配列番号３（純度：70%）を最終濃度が2.5μMとなるように各ウェルに加えた。配列番号３およびサイトカインを導入した２日後に、WST-1アッセイを用いて細胞の増殖応答を測定した。γｃサイトカインとしてIL-2、IL-4またはIL-9を加えて刺激した細胞増殖は、配列番号３の添加による影響を受けなかった。これに対して、IL-15およびIL-21の活性は、配列番号３によって有意に低下した。IL-2、IL-4、IL-9、IL-15およびIL-21についての結果を図３Ｃに示す。
【０２５１】
実施例８：ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体の向上した抑制活性
ヒトNK細胞株NK92を使用して、ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体の向上した抑制活性を評価した。10%ウシ胎仔血清を添加したRPMI中に0.5nMの組換えIL-2を加えて細胞を培養した。増殖アッセイは以下のようにして構築した。細胞を３回洗浄してサイトカインを除去した。最終濃度が0.25ng/mLとなるようにIL-15を加えた96ウェルプレートの各ウェルに2.5×104個の細胞を播種した。ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む様々な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体、または修飾していない市販の配列番号３を等濃度で各ウェルに加えた。これらのペプチドおよびサイトカインを導入した２日後に、WST-1アッセイを用いて細胞の増殖応答を測定した。ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含む様々な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体は、非修飾の配列番号３よりも向上した抑制活性を示した。データを図７に示す。
【０２５２】
実施例９：ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体の、模擬腸液中でのプロテアーゼ安定性の経時変化の測定
本発明の実施形態による１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体の胃内安定性を評価するため、１つの炭化水素リンカーエレメントを含む代表的な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体（配列番号３９）、および２つの炭化水素リンカーエレメントを含み、（Ｄ）立体化学構造の特定の位置に特定のアミノ酸を含む別の代表的な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体（配列番号５７）のプロテアーゼ安定性の経時変化を模擬腸液中で６０分間測定し、非修飾の配列番号３と比較した。ペプチドはいずれも市販の合成品を購入して使用した。模擬腸液はUSP規格に従って調製した（米国薬局方第36版、Test Solutions）。10mg/mLの各ペプチド50μLを、事前に加温した（３７℃の）模擬腸液450μLと混合し、６０分間の測定時間において所定の時間間隔で反応混合物から一部を採取し、0.1MのHClで反応を停止させた。ペプチドの安定性は、粒子径3.6μm、非多孔性；注入量5.0μL（0.5mL/分）；移動相Ａ：0.1%TFA添加25%アセトニトリル；移動相Ｂ：0.1%TFA添加100%アセトニトリルの設定でPhenomenex社製のAerisペプチドカラム（4.6×250mm）を使用して逆相HPLCで測定した。緩衝液のグラジエントは、100%のＡから100%のＢへと２６分間かけて多段階で行った。時点０分を未消化ペプチド100%とし、その後の時点でのデータをプロットし、滑らかな曲線を引いて60分のエンドポイントとつなげた（図８Ａ）。実験の結果、模擬腸液中の未消化ペプチドの割合（％）は、１つ以上の炭化水素リンカーエレメントを含み、（Ｄ）立体化学構造の特定の位置に特定のアミノ酸を含む場合に非修飾ペプチドよりも顕著に増加することが示された。データを図８Ａに示す。
【０２５３】
実施例１０：γｃアンタゴニストペプチドの調製
カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドは、手動の方法および自動の方法で化学的に合成される。
【０２５４】
手動合成：
１個のアミノ酸のカルボキシル基すなわちＣ末端を、別のアミノ酸のアミノ基すなわちＮ末端とカップリングすることを含む古典的な液相合成法を使用する。別の方法においては、固相ペプチド合成法（SPPS）が使用される。
【０２５５】
自動合成：
多数の民間企業が有償で自動ペプチド合成を提供している。これらの会社では、アプライドバイオシステムズ（ABI）社より提供されている合成機などの様々な市販のペプチド合成機が使用されている。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドは自動ペプチド合成機で合成される。
【０２５６】
実施例１１：組換え技術を使用したカスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの生物学的製造
カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドは、BNZ-γペプチドまたは配列番号３の配列を含むペプチドもしくはその誘導体の構造を強化もしくは安定化させ、その生物学的活性を向上させる公知のヒトタンパク質に由来するペプチド、適切なタグペプチドおよびシグナルペプチドを含むペプチド前駆体として生物学的に合成される。所望により、ペプチドのＮ末端の前に適切な酵素切断配列を設計し、最終的に得られるタンパク質からタグペプチドまたは任意のペプチド部分を取り除いてもよい。
【０２５７】
カスタムペプチド誘導体をコードし、３’末端に終止コドンを有するヌクレオチド配列を市販のベクターに挿入する。この市販のベクターは、カスタムペプチド誘導体および終止コドンをコードするヌクレオチド配列とタグ部分との間を切断する適切なタンパク質分解酵素（たとえばエンテロキナーゼ）によって認識されて消化される特別なペプチド配列と、大腸菌のチオレドキシンに由来するタグ部分とを有する。適切なベクターの一例として、インビトロジェン社（カリフォルニア州）より入手可能なpThioHisプラスミドが挙げられる。他の発現ベクターを使用してもよい。
【０２５８】
実施例１２：免疫処置を目的としたカスタムペプチドおよびその誘導体の担体タンパク質への結合
カスタムペプチドに対する抗体の目的および作製
BNZ-γおよび別のカスタムペプチド誘導体（配列番号３の配列を含むペプチドまたはその誘導体など）を使用して、動物を免疫し、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を得る。グルタルアルデヒドまたはｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを使用した慣用の方法によって、適切な担体タンパク質（たとえば、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（KLH）など）のＮ末端またはＣ末端にペプチドを結合させる。次いで、結合させたペプチドを適切なアジュバントとともに使用して、ウサギ、げっ歯類、ロバなどの動物を免疫する。慣用の方法を用いて、得られた抗体の特異性を試験する。得られた抗体が免疫原性ペプチドと反応する場合、実施例１〜３に記載の細胞増殖アッセイを用いて各γｃサイトカイン活性に対する抑制能を試験する。ペプチド誘導体は複合体であることから、２種の異なるサイトカインを同時に認識する単一の抗体を作製することが可能である。
【０２５９】
実施例１３：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの大量生産方法
組換えタンパク質の大量生産は、他の文献に記載されているような無細胞系を使用して行う（Takai et al., 2010 Curr. Pharm. Biotechnol. 11(3):272-8参照）。簡潔に述べると、γｃアンタゴニストペプチドとタグをコードするcDNAを適切なベクターにサブクローニングし（Takai et al., 2010 Curr. Pharm. Biotechnol. 11(3):272-8参照）、インビトロ転写を行い、直ちにインビトロ翻訳を行うことによって、タグ付加ペプチドを産生させる。次いで、タグ付加エピトープを認識する固相化抗体を使用して、得られたポリペプチド前駆体を精製し、タンパク質分解酵素で処理する。慣用の１８％トリシンSDS-PAGE（インビトロジェン）および慣用のクマシー染色を使用して、溶出液（目的のカスタムペプチド誘導体がその大部分を占める）の純度を試験する。ペプチドの純度が所望の数値（>98%）に満たない場合、混合物を慣用のHPLC（高速液体クロマトグラフィー）でさらに精製する。
【０２６０】
実施例１４：HAM/TSPにおけるサイトカイン機能の阻害のための、カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの使用
HTLV-1関連脊髄症（HAM）／熱帯性痙性不全対麻痺症（TSP）は、ヒトＴリンパ球向性ウイルス１型（HTLV-I）に感染した患者の一部に見られる慢性進行性脊髄症である。HTLV-Iに対する免疫応答に伴ってリンパ球が脊髄に浸潤し、特定のサイトカインが放出される。これらのサイトカインのいくつかによって神経損傷が起こりうる。
【０２６１】
HAM/TSP患者は、自己免疫疾患に類似した免疫亢進を示す（Oh et al. 2008 Neurol Clin. 26:781-785）。この亢進状態は、HAM/TSP患者のＴ細胞を外来性サイトカインの非存在下で約１週間にわたってエクスビボ培養した場合にその自発的増殖能を確認することによって実証することができる。HAM/TSP患者におけるＴ細胞の自発的増殖は、IL-2、IL-9およびIL-15のオートクリンループ／パラクリンループに少なくとも部分的に起因する。IL-2受容体またはIL-15受容体に対する阻害抗体を添加することによって、HAM/TSPエクスビボ培養系におけるＴ細胞の自発的増殖を抑制できることが示されている。
【０２６２】
これらの観察結果や、エクスビボ研究より得られた他のデータは、HAM/TSPの臨床的治療において２種のモノクローナル抗体（抗IL-2受容体αまたは抗Tacと抗IL-15受容体β鎖）を用いることの論理的根拠となっている（Azimi et al. 2001 Proc. Natl. Acad. Sci. 98:14559-64., Azimi et al., 1999 J. Immunol 163:4064-72）。本明細書に記載の実施形態による抗サイトカイン受容体アンタゴニストは、HAM/TSPの治療のための治療用免疫調節剤として有用なだけではなく、HAM/TSPにおける免疫応答を調節できる。本発明の実施形態による抗サイトカイン受容体アンタゴニストによってHAM/TSPにおける免疫応答を調節できるということは、この抗サイトカイン受容体アンタゴニストをその他の自己免疫疾患の治療においても使用できるという概念を実証するものである。
【０２６３】
本明細書に記載の実施形態によるカスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの有効性を実証するため、HAM/TSPエクスビボ培養系を使用したＴ細胞自発的増殖アッセイにおいて、HTLV-Iに対する免疫応答に対するBNZ-γペプチドの阻害能を試験した。この増殖アッセイは、BNZ-γ添加または非添加のHAM/TSP患者血液試料を用いて実施した。このアッセイを使用して、BNZ-γが、エクスビボのHAM/TSP患者血液培養物中に存在するIL-2やIL-15などのサイトカインの機能を阻害し、これらの試料中のＴ細胞の自発的増殖を阻止できることが評価された。
【０２６４】
エクスビボＴ細胞自発的増殖アッセイにおいて、HAM/TSP患者から得られたPBMCを96ウェルプレートの１ウェルあたり１×106個の密度で播種し、10%FCS添加RPMI中で培養した。BNZ-γペプチドの濃度を段階的に上昇させて各ウェルに添加した。コントロールとして、関連性がないペプチドを同様にして使用した。ＣＯ２インキュベーター内において３７℃で３日間、４日間および６日間にわたり細胞をインキュベートした。１μCiの３Ｈチミジンを細胞に加えた。さらに６時間インキュベートした後、細胞を回収し、増殖率を測定した。代表的なHAM/TSP患者におけるデータを図５Ａ〜５Ｄに示す。図５Ａ〜５Ｄに示すように、BNZ-γペプチドは約１μg/mlの濃度においてHAM/TSP培養物中のＴ細胞の自発的増殖を抑制することができる。
【０２６５】
他の免疫学的マーカーについてもこのアッセイで測定した。ウイルスタンパク質の４量体を使用したエクスビボ培養において、ウイルス特異的CD8細胞の割合（％）を測定した。Ｔ細胞活性化の指標であるCD4+CD25+細胞集団、およびＴ細胞増殖の指標であるKi67染色をフローサイトメトリーアッセイで観察した。
【０２６６】
さらなる分子に結合した別の形態のBNZ-γペプチド誘導体または配列番号３の配列を含むカスタムペプチドもしくはその誘導体を使用して、同様のアッセイをさらに実施することもできる。このような形態のペプチドは、化学合成後に結合可能なアルブミン、BSA、またはPEGを含むものである。カスタムペプチド（たとえばBNZ-γペプチドコンジュゲート）または配列番号３の配列を含むカスタムペプチドもしくはその誘導体のその他の生物学的形態として、カスタムペプチドに融合された公知のタンパク質部分（ヒトIgGのFc領域が挙げられるが、これに限定されない）を含むものが挙げられる。
【０２６７】
実施例１５：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者における成人Ｔ細胞性白血病（ATL）を治療する方法
成人Ｔ細胞性白血病に罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば、BNZ-γ、配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはこれらの誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり前記患者に投与する。患者が寛解に入れば治療が有効であると判断する。
【０２６８】
実施例１６：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者のHAM/TSPを治療する方法
HAM/TSPに罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば、BNZ-γ、配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはこれらの誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり前記患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２６９】
実施例１７：サイトカイン機能の阻害のための、カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの使用
少なくともIL-15およびIL-21の機能の低減を必要とする病態に罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば配列番号３の配列を含む複合ペプチドまたはその誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり前記患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２７０】
実施例１８：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者のセリアック病を治療する方法
セリアック病では、腸管の粘膜固有層および上皮においてIL-15が慢性的にアップレギュレートされており、これは粘膜損傷の重症度と直接相関しており（Jabri et al. 2000 Gastroenterology 118:867-879., Maiuri et al. 2000 Gastroenterology 119:996-1006., Mention et al. 2003 Gastroenterology 125:730-45.; Di Sabatino et al. 2006 Gut 55:469-77.）、IL-21の産生および機能は疾患の進行に正の調節を行う（De Nitto et al. 2009 World J Gastroenterol 15:4609-14.）。また、IL-15は、セリアック病の粘膜環境で観察されるIL-21の発現上昇とも直接相関しており、この発現上昇を正に制御することが示されている（Sarra et al. 2013 Mucosal Immunol 6: 244-55.）。さらに、最近の研究では、IL-2、IL-15およびIL-21の相乗作用が難治性セリアック病の発生機序に大きく関与していることが特定されている（Kooy-Winkelaar, et al., 2017 Proc Natl Acad Sci U S A 114: E980-9.）。
【０２７１】
セリアック病に罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば、BNZ-γ、配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはこれらの誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり前記患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２７２】
実施例１９：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者の関節リウマチを治療する方法
関節リウマチ（RA）では、患者の滑液およびリウマトイド結節においてIL-15の発現が上昇しており、これによって、関節リウマチ環境下におけるCD4+Ｔ細胞およびCD8+Ｔ細胞の経内皮遊走が増加しており、血清中IL-15濃度は疾患の進行と正相関を示す（Oppenheimer-Marks et al. 1998 J Clin Invest 101:1261-72., Harada et al. 1999 Arthritis Rheum 42:1508-16., Gonzalez-Alvaro et al. 2003 Clin Exp Rheumatol 21:639-42., Hessian et al. 2003 Arthritis Rheum 48:334-8., Ruckert et al. 2009 Immunology 126:63-73.）。また、関節リウマチにおいて、IL-21は、炎症促進性サイトカインであるTNF-αおよびIL-6の発現、ならびに滑膜線維芽細胞（FLS）の浸潤および遊走に正の影響を与える。滑膜線維芽細胞は、患者体内で活発に増殖および浸潤することによって関節リウマチの発生機序に重要な役割を果たしている（Xing et al. 2016 Clin Exp Immunol 184:147-58., Xing et al. 2016 Scand J Immunol 83:64-71.）。
【０２７３】
関節リウマチに罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば、BNZ-γ、配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはこれらの誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり前記患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２７４】
実施例１９：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者の多発性硬化症を治療する方法
多発性硬化症（MS）では、患者の血清および脳脊髄液においてIL-15の発現が上昇している（Kivisakk et al. 1998 Clin Exp Immunol 111:193-7., Pashenkov et al. 1999 Scand J Immunol 50:302-8., Vaknin-Dembinsky et al. 2008 J Neuroimmunol 195:135-9.）。多発性硬化症患者の脳病変では、IL-15濃度の上昇に伴ってアストロサイトおよびＢ細胞も見られる（Saikali et al. 2010 J Immunol 185:5693-703., Schneider et al. 2011 J Immunol 187:4119-28.）。多発性硬化症において、IL-21の産生は疾患の進行を正に調節し、急性および慢性の多発性硬化症病変のCD4+細胞ではIL-21の発現が大幅に上昇している（Tzartos et al. 2011 Am J Pathol 178:794-802., Ghalamfarsa et al. 2016 J Immunotoxicol 13:274-85.）。
【０２７５】
多発性硬化症に罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはその誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２７６】
実施例２０：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者の１型糖尿病を治療する方法
１型糖尿病（T1D）では、患者の血清においてIL-15の発現が上昇している（Kuczynski et al. 2005 Diabetes Res Clin Pract 69:231-6.）。非肥満糖尿病マウスモデルの膵島炎の発症時にIL-15のシグナル伝達を抑制することによって、１型糖尿病を完全に予防できたことが報告されている（Bobbala et al. 2012 Diabetologia 55: 3010-3020.）。１型糖尿病患者のヒト膵島でもIL-15の発現が観察される（Chen et al. 2013 Proc Natl Acad Sci U S A 110:13534-9.）。さらに、IL-21の産生増加は１型糖尿病の進行と相関する（Ferreira et al. 2015 Diabetologia 58: 781-90.）。
【０２７７】
１型糖尿病に罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはその誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２７８】
実施例２１：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者の乾癬を治療する方法
乾癬患者の皮膚病変においてIL-15の発現が上昇する（Waldmann 2013 J Investig Dermatol Symp Proc 16:S28-30.）。IL-21の産生およびその機能は、乾癬性疾患の進行を正に調節し（Caruso et al. 2009 Cell Cycle 8: 3629-30., Botti et al. 2012 Curr Pharm Biotechnol 13: 1861-7.）、患者血清中ではγｃサイトカインの発現が上昇しており、γｃサイトカインの発現は疾患の重症度に関連している（He et al. 2012 Br J Dermatol 167: 191-3.）。
【０２７９】
乾癬に罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはその誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２８０】
実施例２２：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者の炎症性腸疾患を治療する方法
炎症性腸疾患（IBD）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）では、炎症を起こした粘膜においてIL-15濃度の上昇が観察される（Liu et al. 2000 J Immunol 164:3608-15., Vainer et al. 2000 Cytokine 12:1531-6.）。また、炎症性腸疾患患者では、腸においてIL-21濃度の上昇も見られ（Monteleone et al. 2005 Gastroenterology 128: 687-94.）、これは、腸粘膜の炎症の増加と正相関する（De Nitto et al. 2010 World J Gastroenterol 16: 3638-41.）。
【０２８１】
炎症性腸疾患に罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはその誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２８２】
実施例２３：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者の全身性エリテマトーデスを治療する方法
全身性エリテマトーデス（SLE）では、患者血清中においてIL-15の発現が上昇している（Aringer et al. 2001 Rheumatology (Oxford) 40:876-81.）。IL-15のシグナル伝達異常は、SLEの発生機序と正の関係にある（Baranda et al. 2005 Rheumatology (Oxford) 44:1507-13.）。また、SLEでは、患者血清中においてIL-21の発現が上昇している（Nakou et al. 2013 Clin Exp Rheumatol 31:172-9.）。IL-21の遺伝的多型もSLEと正の関係にある（Sawalha et al. 2008 Ann Rheum Dis 67:458-61.）。SLEにおいてIL-21の産生は、SLEの発生機序において観察されるＴ細胞異常およびＢ細胞異常と正に相関し（Terrier et al. 2012 J Rheumatol 39:1819-28.）、BXSB-Yaaマウス疾患モデルにおいてIL-21のシグナル伝達は、SLEの病変の進行に重要な役割を果たしている（Bubier et al. 2009 Proc Natl Acad Sci U S A 106: 1518-23.）。
【０２８３】
全身性エリテマトーデスに罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはその誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２８４】
実施例２４：カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチドの投与によりヒト患者の円形脱毛症疾患を治療する方法
円形脱毛症疾患（AAD）では、患者の頭皮病変の生検試料においてIL-15の発現が上昇しており（Fuentes-Duculan et al. 2016 Exp Dermatol 4:282-6., Waldmann 2013 J Investig Dermatol Symp Proc 16:S28-30.）、γｃサイトカインであるIL-2およびIL-15を標的とする各抗体は、円形脱毛症疾患マウスモデルにおいて抑制活性を示したが、各阻害抗体単独では確立した円形脱毛症疾患を回復させることはできなかった（Xing et al. 2014 Nat Med 9:1043-9.）。円形脱毛症疾患患者の血清では、IL-21の発現が健常コントロールよりも上昇している（Atwa et al. 2016 Int J Dermatol 55:666-72.）。また、ゲノムワイド関連研究では、IL-2およびIL-21は、円形脱毛症疾患と正相関することが示されている（Jagielska et al. 2012 J Invest Dermatol 132:2192-7, Petukhova et al. 2010 Nature 466:113-7.）。
【０２８５】
円形脱毛症疾患に罹患しているヒト患者を特定する。カスタムペプチド誘導体からなるγｃアンタゴニストペプチド、たとえば、BNZ-γ、配列番号３の配列を含むカスタムペプチドまたはこれらの誘導体を、医師によって決定された有効量で、医師によって決定された期間にわたり前記患者に投与する。患者の症状が改善したり、あるいは疾患の進行が停止または遅延した場合に、治療が有効であると判断する。
【０２８６】
実施例２５：ペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体の、模擬腸液中でのプロテアーゼ安定性の経時変化の測定
本発明の実施形態による１つ以上のペプチド内炭化水素リンカーエレメントを含むカスタムペプチド誘導体の胃内安定性を評価するため、１つの炭化水素リンカーエレメントを含む代表的な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体（配列番号３９）、および２つの炭化水素リンカーエレメントを含み、（Ｄ）立体化学構造の特定の位置に特定のアミノ酸を含む別の代表的な配列番号３含有カスタムペプチド誘導体（配列番号５７）のプロテアーゼ安定性の経時変化を模擬腸液中で６０分間測定し、非修飾の配列番号３と比較した。さらに、プロテアーゼ安定性を評価するための別の経時変化実験を模擬腸液中で１２０分間かけて実施し、代表的な２種の配列番号３含有カスタムペプチド誘導体を比較した。すなわち、第１のカスタムペプチド誘導体は、１つの炭化水素リンカーエレメントを含み（配列番号３９）、第２のカスタムペプチド誘導体は、２つの炭化水素リンカーエレメントを含んでいた（配列番号８３）。ペプチドはいずれも市販の合成品を購入して使用した。模擬腸液はUSP規格に従って調製した（米国薬局方第36版、Test Solutions）。10mg/mLの各ペプチド50μLを、事前に加温した（３７℃の）模擬腸液450μLと混合し、６０分間の測定時間において所定の時間間隔で反応混合物から一部を採取し、0.1MのHClで反応を停止させた。ペプチドの安定性は、粒子径3.6μm、非多孔性；注入量5.0μL（0.5mL/分）；移動相Ａ：0.1%TFA添加25%アセトニトリル；移動相Ｂ：0.1%TFA添加100%アセトニトリルの設定でPhenomenex社製のAerisペプチドカラム（4.6×250mm）を使用して逆相HPLCで測定した。緩衝液のグラジエントは、100%のＡから100%のＢへと２６分間かけて多段階で行った。時点０分を未消化ペプチド100%とし、その後の時点でのデータをプロットし、滑らかな曲線を引いて６０分のエンドポイント（図８Ａ）または１２０分のエンドポイント（図８Ｂ）とつなげた。実験の結果、模擬腸液中の未消化ペプチドの割合（％）は、１つ以上の炭化水素リンカーエレメントを含み、（Ｄ）立体化学構造の特定の位置に特定のアミノ酸を含む場合に顕著に増加することが示された。データを図８Ａおよび図８Ｂに示す。
【０２８７】
実施例２６：代表的なカスタムペプチド誘導体によるサイトカイン誘導性遺伝子転写の抑制
サイトカインの一種であるインターフェロンγ（IFNγ）は、様々なヒト免疫炎症性疾患病態における炎症のマーカーとして有用である。IFNγ遺伝子の転写は、IL-15、IL-21、非γｃサイトカインであるIL-12、およびその他の選択されたサイトカインによって誘導可能である。したがって、サイトカイン誘導性のIFNγ転写に対する阻害能の測定は、カスタムペプチド誘導体の生物学的活性を測定する別のアプローチとして有用である。
【０２８８】
NK92細胞をPBSで洗浄することにより静止期状態とし、サイトカインの非存在下で４８時間培養した。10μMの配列番号８３で細胞を１０分間処理した後、１ng/mLのヒトIL-15、IL-21またはIL-12で２時間刺激した。コントロール条件として、サイトカインのみで処理した群と、NK92細胞にペプチド処理もサイトカイン刺激も行わなかった別の処理群も実験に含めた。ペプチドおよびサイトカインとともにインキュベーション後、細胞を回収し、RNAを単離してcDNAを作製し、qPCR分析の鋳型として使用してIFNγ転写産物を定量した。配列番号８３は、IL-15またはIL-21の誘導によるIFNγ遺伝子の転写を抑制したが、非γｃサイトカインであるIL-12の誘導によるIFNγ遺伝子の転写は阻害しなかった。データを図９に示す。
【０２８９】
引用文献
本開示において引用した文献は、本明細書の一部を構成するものとしてその全体が援用される。
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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