(57)【要約】  本発明は、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）のＩｇＭプロテアーゼ抗原を含むワクチンであって、最大２８日齢（好ましくは、子ブタが離乳する前）の子ブタに該ワクチンを投与することによる、ストレプトコッカス・スイスに対する母体由来抗ストレプトコッカス・スイス抗体を有する子ブタを防御するための方法における使用のためのワクチンに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）のＩｇＭプロテアーゼ抗原を含むワクチンであって、最大２８日齢の子ブタに該ワクチンを投与することによる、ストレプトコッカス・スイスに対する母体由来抗ストレプトコッカス・スイス抗体を有する子ブタを防御するための方法における使用のためのワクチン。
【請求項２】
該方法が、該ワクチンの１ショットを投与することからなることを特徴とする、請求項１記載の使用のためのワクチン。
【請求項３】
該方法において、子ブタが離乳する齢の前に該ワクチンを投与することを特徴とする、前記請求項のいずれか１項記載の使用のためのワクチン。
【請求項４】
該方法が、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）による病原性感染に関連した臨床徴候に対する防御を付与するためのものであることを特徴とする、前記請求項のいずれか１項記載の使用のためのワクチン。
【請求項５】
該方法が、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）による病原性感染に関連した死亡率の増加に対する防御を付与するためのものであることを特徴とする、前記請求項のいずれか１項記載の使用のためのワクチン。
【請求項６】
ＩｇＭプロテアーゼ抗原がワクチンの用量当たり２５０μｇ未満、好ましくは用量当たり１２０μｇ未満の量で存在することを特徴とする、前記請求項のいずれか１項記載の使用のためのワクチン。
【請求項７】
最大２８日齢の子ブタにワクチンを投与することによるストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）に対する母体由来抗ストレプトコッカス・スイス抗体を有する子ブタを防御するためのワクチンの製造のための、ストレプトコッカス・スイスのＩｇＭプロテアーゼ抗原の使用。
【請求項８】
ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）のＩｇＭプロテアーゼ抗原を含むワクチンを最大２８日齢の子ブタに投与することによる、ストレプトコッカス・スイスに対する母体由来抗ストレプトコッカス・スイス抗体を有する子ブタを防御するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）による病原性感染に対する若い子ブタの防御に関する。
【背景技術】
【０００２】
ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）はブタの共生日和見病原体である。特にストレス下において、該細菌は病原性感染を引き起こし、疾患を誘発しうる。現代のブタ生産条件下では、例えば子ブタの離乳および若い子ブタの輸送によって大きなストレスが誘発される。これにより、ストレプトコッカス・スイスは、主要なブタ病原体になっている。それはヒト髄膜炎および連鎖球菌毒性ショック様症候群の新進の人獣共通の感染因子でもある。ストレプトコッカス・スイスは高被包性の病原体であり、莢膜多糖抗原の多様性に基づいて複数の血清型が記載されている。ストレプトコッカス・スイスは、宿主免疫系を回避するために病原性因子の武器を用いる。同時に、これらの特性は、この重要な病原体と戦うための有効なワクチンの開発を妨げている。最近、ストレプトコッカス・スイスに対するワクチンに関する総説が公開された（Ｍａｒｉｅｌａ  Ｓｅｇｕｒａ：“Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅｓ：ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  １４，２０１５，Ｉｓｓｕｅ  １２，ｐ．１５８７−１６０８）。この総説には、臨床分野の情報および実験データがまとめられ比較されており、以下に概説するとおりのストレプトコッカス・スイスに対するワクチン開発の現状の概要が示されている。
【０００３】
現在使用されているワクチンは、主として全細胞バクテリンである。しかし、現地報告は疾患の防除および管理の難しさを記載しており、特に「ワクチンの失敗」が一般的である。保菌ブタが主要感染源であり、垂直感染および水平感染の両方が集団内の疾患の広がりに関与している。離乳および輸送のようなストレス条件下で保菌動物を感受性動物と混合すると、通常、臨床疾患が生じる。早期の薬物投与を伴う離乳および隔離状態での早期の離乳の実施は、ストレプトコッカス・スイス感染を排除しない。したがって、疾患を予防するための有効な防除手段は、予防的／発症予防的（ｍｅｔａｐｈｙｌａｃｔｉｃ）処置（許容される場合）およびワクチン接種に基づくものとなる。現在、現地（フィールド）での免疫化の努力は市販または自原性（ａｕｔｏｇｅｎｏｕｓ）バクテリンの使用に焦点が合わされている。これらのワクチン接種戦略は、子ブタまたは雌ブタに適用されている。離乳期以降、離乳および一般的な後続輸送にも関連したストレスゆえに、子ブタはストレプトコッカス・スイス感染に対してより感受性である。したがって、子ブタに受動免疫を試み伝達させ、幼児期におけるこれらのストレス環境下のストレプトコッカス・スイスに対する防御を付与するために、しばしば、雌ブタにおける分娩前免疫化が用いられる。更に、雌ブタのワクチン接種はより低コストかつ労働集約的であり、したがって、子ブタのワクチン接種の経済的な代替手段に相当する。しかし、入手可能な結果は、バクテリンでの雌ブタのワクチン接種も議論の余地があることを示しているようである。多くの場合、ワクチン接種された雌ブタは、出産前に２回ワクチン接種された場合であってもワクチン接種に十分には又は全く応答せず、このことは、同腹仔に伝達される母体免疫を低下させる。また、母体免疫が十分なレベルで伝達されたとしても、多くの場合、母体抗体は４〜７週齢の最も重要な期間の防御をもたらすには低レベル過ぎる。
【０００４】
子ブタにおいては、自原性バクテリンが、現地特に欧州において頻繁に使用される。それらは、臨床上の問題を有する農場で分離された毒性株から製造され、同じ農場に適用される。自原性バクテリンの欠点の１つは、ワクチンの安全性データが欠如しており、重篤な副作用が生じうることである。サンプリング誤差（僅か１つまたは２つのブタまたはサンプルしか使用していないことによるもの）により、最近の感染症突発に関連した株または血清型を特定できないことがある。これができないことは風土病罹患集団において特に問題となりうる。最後に、自原性バクテリンの最も重要なジレンマは、それらの実際の有効性が十分には研究されていないことである。自原性ワクチンの適用は経験的であるため、これらのワクチンで得られた結果に一貫性がないことは驚くことではない。
【０００５】
しかし、子ブタにワクチンを接種する場合、もう１つの懸念がある。子ブタは、離乳直後に防御されるためには、離乳前にそのワクチン接種を受ける必要があり、したがって、非常に若い齢、典型的には２８日齢に達する前に、ワクチン接種を受ける必要がある。そのような若い動物の能動的ワクチン接種は、雌ブタの自然感染または能動免疫化により産生された母体抗体との干渉の可能性の懸念をもたらす（Ｂａｕｍｓ  ＣＧ，Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  Ｃ，Ｋｏｃｋ  Ｃら，“Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｕｔｏｇｅｎｏｕｓ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ  ｂａｃｔｅｒｉｎ  ｉｎ  ｐｒｅｐａｒｔｕｒｉｅｎｔ  ｓｏｗｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｉｇｌｅｔｓ  ｉｎ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｗｅａｎｉｎｇ”，Ｃｌｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０；１７：１５８９−１５９７）。実際、免疫化雌ブタから吸乳または離乳している子ブタのワクチン接種はいずれも、８週齢における顕著な能動免疫応答および防御に関連していなかった。この失敗は母体抗体または他の初乳成分の強力な阻害効果に関連していた。これに関して、母体抗体とストレプトコッカス・スイスに対する抗体の能動的産生との間の干渉は、自原性ストレプトコッカス・スイス莢膜型１／２ワクチン製剤でのワクチン接種の後の現地調査（ｆｉｅｌｄ  ｓｔｕｄｙ）においても実証可能であった（Ｌａｐｏｉｎｔｅ  Ｌ，Ｄ’Ａｌｌａｉｒｅ  Ｓ，Ｌｅｂｒｕｎ  Ａら：“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ａｎ  ａｕｔｏｇｅｎｏｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｎｄ  ｓｅｒｏｌｏｇｉｃ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｆｏｒ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ  ｃａｐｓｕｌａｒ  ｔｙｐｅ  １／２”：Ｃａｎ  Ｊ  Ｖｅｔ  Ｒｅｓ．２００２；６６：８−１４）。４日齢の吸乳子ブタにおける単一用量ストレプトコッカス・スイス血清型１４バクテリン法の有効性を測定するための現地調査も、同種チャレンジに対して子ブタを防御することができなかった（Ａｍａｓｓ  ＳＦ，Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ＧＷ，Ｋｎｏｘ  ＫＥら，“Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｕｔｏｇｅｎｏｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ  ｉｎ  ｐｉｇｌｅｔｓ”：Ｖｅｔ  Ｍｅｄ．１９９９，９４，４８０−４８４）。したがって、子ブタにおける合理的なワクチン接種プログラムを実施する前に、抗体動態の知見が重要であると思われる。採用される戦略は、ブタにおける受動母体免疫と能動免疫化との間の最小の干渉、および臨床徴候のほぼ発生開始時（典型的には離乳の２〜３週間後）におけるブタに対する最大の防御を可能にすべきである。
【０００６】
他の実験用ワクチンも当技術分野において記載されている。Ｋａｉ−Ｊｅｎ  Ｈｓｕｅｈら（“Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ  ｂａｃｔｅｒｉｎ  ｐｌｕｓ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｓａｏ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｓｏｗｓ  ｃｏｎｖｅｙｓ  ｐａｓｓｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｔｈｅｉｒ  ｐｉｇｌｅｔｓ”：ＢＭＣ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ＢＭＣ  ｓｅｒｉｅｓ−ｏｐｅｎ，ｉｎｃｌｕｓｉｖｅ  ａｎｄ  ｔｒｕｓｔｅｄ，１３：１５，７  Ｊａｎｕａｒｙ  ２０１７）は、バクテリン＋サブユニットが、子ブタに防御免疫を付与するためのその母ブタのワクチン接種の成功のための基礎となりうることを示している。
【０００７】
生弱毒化ワクチンも当技術分野で検討されている。ストレプトコッカス・スイス血清型２の非被包性同質遺伝子的突然変異体は、無毒性であることが明らかに示されている。しかし、非被包性血清型２突然変異体に基づく生ワクチン製剤は、死亡に対する部分的な防御を誘導したに過ぎず、野生型株でチャレンジされたブタにおける臨床徴候の発生を予防することができなかった（Ｗｉｓｓｅｌｉｎｋ  ＨＪ，Ｓｔｏｃｋｈｏｆｅ−Ｚｕｒｗｉｅｄｅｎ  Ｎ，Ｈｉｌｇｅｒｓ  ＬＡら，“Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｌｉｖｅ  ａｎｄ  ｋｉｌｌｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ａ  ｎｏｎ−ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ｍｕｔａｎｔ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ  ｓｅｒｏｔｙｐｅ  ２．”：Ｖｅｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００２，８４：１５５−１６８）。
【０００８】
過去数年間に、抗原性または免疫原性ストレプトコッカス・スイス分子の広範な一覧が報告されており、これらのほとんどは、感染したブタもしくはヒトからの回復期血清および／または実験室で産生された免疫血清を使用するイムノプロテオミクスにより見出された。ＷＯ２０１５／１８１３５６（ＩＤＴ  Ｂｉｏｌｏｇｉｋａ  ＧｍｂＨ）は、ＩｇＭプロテアーゼ抗原（全タンパク質、または全タンパク質の約３５％のみに相当する高度に保存されたＭａｃ−１ドメイン）が、バクテリンを含有する初回（プライム）ワクチン接種と組合された２用量の該ＩｇＭプロテアーゼ抗原を投与するワクチン接種法において、子ブタにおいて防御免疫応答を誘発しうることを示している。ＩｇＭプロテアーゼ抗原が単独で防御免疫を付与しうるかどうかは明らかではない。これに加えて、該データは、９週齢［したがって、離乳の２〜３週間後（すなわち、５〜７週齢）のリスク期間（すなわち、病原性ストレプトコッカス・スイス感染のピーク発生期間）のかなり後］でチャレンジ感染を受けた５〜７週齢の子ブタにおけるワクチン接種の成功を示しているに過ぎない。ＩｇＭプロテアーゼ抗原が母体免疫との干渉の一般的問題を克服しうるかどうかは示されていない。それどころか、動物が５〜７週齢でワクチン接種されるという選択は、ＭＤＡとの干渉が存在する場合、それを回避することが意図されていることを明らかに示している。したがって、実際の状況（ワクチン接種時のＭＤＡの存在、および離乳または輸送のストレスの２〜３週間後のチャレンジ感染）下の有効性の証明が全く無いため、示されているＩｇＭプロテアーゼ／バクテリンワクチン戦略が実際に有効であるかどうかは尚も疑わしい。同様に、市販が許可されている多数の認可バクテリンワクチンは、それらが動物試験において有効であったことを本質的に示している（そうでなければ、それらは、商業的に使用されることが許可されなかったであろう）が、それらは、しばしば実際の現実の状況下では防御をもたらすことができない。ＷＯ２０１７／００５９１３（Ｉｎｔｅｒｖａｃｃ  ＡＢ）もＩｇＭプロテアーゼ抗原（特に、ヌクレオチダーゼに融合したＩｇＭプロテアーゼポリペプチド）の使用を記載しているが、血清応答を誘発しうるという特性しか示されていないことが注目される。ＩｇＭプロテアーゼ抗原に関する防御効果は、この国際特許出願には示されていない。
【発明の概要】
【０００９】
発明の目的
本発明の目的は、潜在的にワクチン接種される対象動物（すなわち、雌ブタおよび／またはその後代）が抗Ｓｓｕｉｓ抗体に関して血清陽性である実際の条件下、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）（Ｓｓｕｉｓ）に対して、特にこの細菌による病原性感染に関連した臨床徴候および／またはそれに起因する死亡に対して若い子ブタの防御に有効であるワクチン接種戦略を見出すことである。
【００１０】
発明の概括
本発明の目的を達成するために、子ブタ自体に投与するためのワクチン、特に、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）のＩｇＭプロテアーゼ抗原を含む（好ましくは、ワクチン中の唯一のＳｓｕｉｓ特異的抗原としてＩｇＭプロテアーゼ抗原を含む）ワクチンであって、ストレプトコッカス・スイスに対して子ブタを防御するために最大２８日齢の子ブタに該ワクチンを投与することによる、母体由来抗ストレプトコッカス・スイス抗体を有する子ブタの（予防的）治療方法における使用のためのワクチンを、本発明において案出した。ＩｇＭプロテアーゼ抗原でのワクチン接種の齢は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８日齢の任意の齢でありうる。当技術分野、特にＷＯ２０１７／００５９１３から公知のとおり、ＩｇＭプロテアーゼ抗原に対する陽性免疫応答は、出生日以降の若い子ブタにおいて得られうる。
【００１１】
驚くべきことに、子ブタが最大２８日齢でワクチン接種され、該動物がストレスにより誘発される離乳後２〜３週間の早い齢での細菌による病原性感染を受ける場合でさえも、ＩｇＭプロテアーゼ抗原を使用することにより（例えば、ワクチンにおいてこのＳｓｕｉｓ特異的抗原のみを使用する場合でさえ）、母体抗Ｓｓｕｉｓ抗体との干渉は、ストレプトコッカス・スイスに対する防御を得るのに問題とはならないことが見出された。これは、免疫化母動物の初乳により得られる短寿命の受動的防御に頼る代わりに、子ブタ自体をワクチン接種し、能動的防御を誘導するための特有の選択肢を提供する。離乳のストレスまた離乳処置直後の若い動物の輸送のストレスにより誘発されるストレプトコッカス・スイスに起因する疾患に対して子ブタを防御するためには、子ブタの離乳前でさえもワクチン接種が行われうることが示されている。より高齢の動物（この場合、ＭＤＡとの動物の干渉は典型的には問題とならない）で防御効果をもたらすことが示された抗原は、早い齢、典型的には離乳後２〜３週間の時期にストレスにより誘発される更に明らかな防御効果を得るためにＭＤＡ陽性動物をワクチン接種するのに有用であることが、本発明において初めて示された。
【００１２】
本発明はまた、最大２８日齢の子ブタにワクチンを投与することによりストレプトコッカス・スイスに対する母体由来抗ストレプトコッカス・スイス抗体を有する子ブタを防御するためのワクチンの製造のための、ストレプトコッカス・スイスのＩｇＭプロテアーゼ抗原の使用、および、ストレプトコッカス・スイスのＩｇＭプロテアーゼ抗原を含むワクチンを最大２８日齢の子ブタに投与することによる、ストレプトコッカス・スイスに対する母体由来抗ストレプトコッカス・スイス抗体を有する子ブタを防御するための方法に関する。
【００１３】
ワクチンにおいては、抗原は、典型的には薬学的に許容される担体、すなわち、生体適合性媒体（すなわち、ワクチンの投与後に宿主動物の免疫系に抗原を提示しうる、対象動物において有意な有害反応を投与後に誘発しない媒体）と組合されることが注目される。そのような薬学的に許容される担体は、例えば、水および／または任意の他の生体適合性溶媒を含有する液体、あるいは固体担体、例えば、凍結乾燥ワクチンを得るために一般に使用される固体担体（糖および／またはタンパク質に基づくもの）であることが可能であり、これは、所望により、免疫刺激性物質（アジュバント）を含んでいてもよい。所望により、他の物質、例えば安定剤、粘度調整剤または他の成分が、ワクチンの意図される用途または要求される特性に応じて添加されてもよい。
【００１４】
定義
ワクチンは、対象動物に安全に投与され、そして、病原性微生物に対してその動物において防御免疫を誘導しうる、すなわち、該微生物に対する防御を成功裏に誘導しうる医薬組成物である。
【００１５】
ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）のＩｇＭプロテアーゼ抗原は、ブタＩｇＭを特異的に分解する（そしてブタＩｇＧまたはブタＩｇＡを分解しない；Ｓｅｅｌｅら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２０１３，１９５  ９３０−９４０；およびＶａｃｃｉｎｅ  ３３：２２０７−２２１２；５  Ｍａｙ  ２０１５）酵素であり、ＩｄｅＳｓｕｉｓと称されるタンパク質またはその免疫原性部分（典型的には完全長酵素の少なくとも約３０〜３５％の長さを有する）である。酵素全体は約１００〜１２５ｋＤａの重量を有し、これは約１０００〜１１５０アミノ酸に相当し、そのサイズは、ストレプトコッカス・スイスＳ．スイスの血清型に左右される。ＷＯ  ２０１５／１８１３５６においては、ストレプトコッカス・スイスのＩｇＭプロテアーゼ抗原に相当する幾つかの配列、すなわち、配列番号１、配列番号２、配列番号６、配列番号７および配列番号５が示されており、後者は完全長酵素の免疫原性部分（Ｍａｃ−１ドメイン、すなわち、配列番号７のアミノ酸８０〜４１４として示される）である。完全長酵素の免疫原性部分の他の例は、ＷＯ２０１７／００５９１３に記載されている。特に、ＩｇＭプロテアーゼは、ＷＯ２０１５／１８１８３５６の配列番号１のプロテアーゼ、または重複領域において少なくとも９０％もしくは更には９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％、最大１００％の配列同一性を有するタンパク質でありうる。アミノ酸配列の同一性は、デフォルトパラメーターでｂｌａｓｔｐアルゴリズムを使用して、ＢＬＡＳＴプログラムで確定されうる。種々の血清型のストレプトコッカス・スイスのＩｇＭプロテアーゼは９０％より高い配列同一性を有すると予想され、特に、それは９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％、最大１００％であると予想される。例えば、抗原の組換え製造系の収率を最適化するように製造された人工タンパク質は、全酵素と比較して低いアミノ酸配列同一性、例えば８５％、８０％、７５％、７０％または更には６０％をもたらしうる一方で、必要な免疫原性機能を維持しており、本発明の意義におけるストレプトコッカス・スイスのＩｇＭプロテアーゼ抗原であると理解される。
【００１６】
微生物に対する防御は、その微生物による病原性感染またはその感染から生じる障害を予防し、改善しまたは治癒させるのを補助し、例えば、該病原体による感染に起因する１以上の臨床徴候を予防または軽減する。
【００１７】
ワクチンの１ショット（ｏｎｅ  ｓｈｏｔ；１回の注射）を投与することからなるワクチン接種方法は、ワクチンの１ショットのみの後で防御免疫が付与されることを意味し、したがって、前記防御免疫を得るための追加（ブースター）ワクチン接種が省略されることを意味する。２ショット療法においては、最初（初回）のワクチン接種は、典型的には、該初回投与から６週間以内、一般には初回投与から３週間または更には２週間以内に追加ワクチン接種によって増強され、その２回目（追加）の投与の後で初めて、防御免疫、すなわち、前記の防御の成功が達成されると理解される。
【００１８】
発明の実施形態
本発明の第１の実施形態においては、該方法は、該ワクチンの１ショットを投与することからなる。より一層驚くべきことに、該ワクチンの１ショットは、ＭＤＡ陽性子ブタにおいて防御免疫を誘導しうるようである。当技術分野においては、非生ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）ワクチンは常に初回−追加療法で投与されているが、それでも、比較的低い有効性しかもたらしていない。本発明において使用される抗原に関しては、当技術分野（ＷＯ２０１５／１８１３５６およびＷＯ２０１７／００５９１３を参照されたい）は、この抗原を２ショット投与療法において一貫して使用している。したがって、ＩｇＭプロテアーゼ（のみ）を抗原として含有するワクチンの単回投与（１用量）でさえも、ストレプトコッカス・スイスに対する抗体、特に母体由来抗体を有する動物において防御免疫を誘導しうることを見出したのは非常に驚くべきことであった。
【００１９】
もう１つの実施形態においては、該ワクチンは、子ブタが離乳する齢の前に投与される。換言すれば、該ワクチンは、子ブタが実際に離乳する前に投与される。この早い齢でのワクチン接種は、離乳直後の２〜３週間の短い期間内にストレスにより誘発されるストレプトコッカス・スイスによる病原性感染に対して防御しうることが示されている。
【００２０】
更にもう１つの実施形態においては、該ワクチンは、ストレプトコッカス・スイスによる病原性感染に関連した臨床徴候に対する防御を付与するためのものである。ストレプトコッカス・スイスによる病原性感染に関連した典型的な臨床徴候は、直腸温上昇、運動障害（跛行、関節腫張）、呼吸数増加および神経学的徴候（例えば、振戦、痙攣、斜頸、運動失調）である。これらの徴候の１以上の予防、改善および治癒は、それが、病原性感染が抑制されている指標であるというだけでなく、子ブタに有益であろう。
【００２１】
更にもう１つの実施形態においては、該ワクチンは、ストレプトコッカス・スイスによる病原性感染に関連した死亡率の増加に対する防御を付与するためのものである。
【００２２】
更にもう１つの実施形態においては、ＩｇＭプロテアーゼ抗原は、該ワクチンの用量当たり２５０μｇ未満、好ましくは、該ワクチンの用量当たり１２０μｇ未満の量で存在する。最小量は、防御免疫が尚も得られうる量である。これは常套的な実験により確立可能であり、とりわけ、選択されたＩｇＭプロテアーゼ抗原の免疫原性、そしてまた、要求される防御レベルに左右される。本ワクチンの場合、最小量は用量当たり該抗原１μｇであると考えられるが、それはより高い任意の用量、例えば、用量当たり２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０μｇ、または６１〜１１９の範囲の、より高い任意の整数値のμｇ、最大１２０μｇでありうる。
【００２３】
次に、以下の非限定的な実施例に基づいて本発明を更に説明する。
【００２４】
実施例
実施例１
子ブタのためのストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）に対する防御はリスク期間（典型的には４〜７週齢）に必要とされるため、３週齢の抗Ｓｓｕｉｓ陽性子ブタにおいてＩｇＭプロテアーゼ含有ワクチンが１ショットワクチンとして有効であるかどうかを評価した。本研究の目的は、通常のバクテリンワクチンと比較して、該ワクチンが１ショットワクチン（２つの異なる製剤におけるもの）として有効であるかどうかを試験することであった。
【００２５】
研究設計
３０頭の３週齢抗Ｓｓｕｉｓ  ＭＤＡ陽性子ブタを実験に使用した。子ブタを、それぞれ１０頭の子ブタの３つの群（異なる同腹子を均等に分配）に割り当てた。群１には、商業的に入手可能なＥｍｕｌｓｉｇｅｎ（エマルシゲン）アジュバント（Ｐｈｉｂｒｏ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｔｅａｎｅｃｋ，ＵＳＡ）中の用量当たり２５０μｇ（ＢＳＡを標準として使用するブラッドフォードタンパク質アッセイにより確定）の組換えｒＩｄｅＳｓｕｉｓ  ＩｇＭプロテアーゼ抗原（Ｓｅｅｌｅら：Ｖａｃｃｉｎｅ  ３３：２２０７−２２１２；５  Ｍａｙ  ２０１５，ｐａｒ．２．２．）で、３週齢で筋肉内に１回ワクチン接種した。群２には、商業的に入手可能なＸ−Ｓｏｌｖｅアジュバント（ＭＳＤ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｏｘｍｅｅｒ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）中の組換えｒＩｄｅＳｓｕｉｓ  ＩｇＭプロテアーゼ（用量当たり２５０μｇ；ウシ血清アルブミンを標準として使用するブラッドフォードタンパク質アッセイ）で、３週齢で筋肉内（２ｍｌ）に１回ワクチン接種した。群３には、商業的に入手可能なワクチンＰｏｒｃｉｌｉｓ  Ｓｔｒｅｐｓｕｉｓ（ＭＳＤ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ）に存在する抗原と同等の不活化ストレプトコッカス・スイス血清型２細菌を使用して、Ｘ−Ｓｏｌｖｅ中のバクテリンワクチン（２×１０９細胞）で、３週齢で筋肉内に１回ワクチン接種した。４週齢で子ブタを離乳させた。６週齢で子ブタをチャレンジ室に輸送し、直ちにチャレンジした。輸送とチャレンジとの間に、模擬自然ストレスに対する順応期間は無かった。子ブタをＳｓｕｉｓ血清型２の毒性培養物でチャレンジした。チャレンジ後、０（無徴候）〜３（重度の場合）の通常のスコア化系を用いて、病原性Ｓｓｕｉｓ感染に関連した臨床徴候、例えば鬱状態、運動障害、呼吸数増加および神経徴候に関して、子ブタを毎日観察した。その他のパラメーターに関して、同じスコア化系（０は視認不能なパラメーター、最大数は重度の場合）を用いた。ワクチン接種およびチャレンジの直前に、全細胞に対する実験用Ｓｓｕｉｓ抗体ＥＬＩＳＡを使用する抗体測定のために血清を収集した。チャレンジの前および後の一定の時点で、チャレンジ株の再分離のためにヘパリン血を収集した。研究の終了時（チャレンジの７日後）に、全ての生存子ブタを安楽死させ、死後検査を行った。
【００２６】
結果
ワクチン類は、いずれも許容できない部位反応または全身反応を誘発しなかったため、安全と見なされることが可能であった。安楽死前の期間（第７日）のチャレンジ後データを表１に示す。
【表１】
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【００２７】
関節（線維性物質が存在する場合、スコアは０〜３）、関節再分離（ＣＦＵの量が１０００を超える場合、スコアは０〜４）、内臓（肺および腹腔／胸膜および心膜に関してはスコアは０〜３、髄膜に関してはスコアは０〜４）および臓器再分離（ＣＦＵの量が１０００を超える場合、スコアは０〜４）の死後スコアを表２に示す。
【表２】
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【００２８】
結論
バクテリン群３と比較して、２つのＩｇＭプロテアーゼワクチン群１（Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎアジュバント）および２（Ｘ−Ｓｏｌｖｅアジュバント）の全てのパラメーターが改善された。ＸＳｏｌｖｅ中で製剤化されたワクチンは、群１で使用したワクチンより良好な防御を誘導するようであり：試験された８つ全てのパラメーターが、群３と比較して、群２においては有意に改善され、８つのパラメーターのうちの３つ（すなわち、「生存時間」、「関節再分離スコア」および「内臓スコア」）が、群３と比較して、群１においては有意に改善された。結論として、結果が示すところによると、２５０μｇ／用量での１ショットＩｇＭプロテアーゼサブユニットワクチンは、ワクチン接種の３週間後、離乳の２週間後および輸送の直後にチャレンジされた場合に、３週齢ＭＤＡ陽性子ブタにおいて、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）血清型２による病原性感染に対する防御を誘導した。
【００２９】
実施例２
離乳前の早い齢のＭＤＡ陽性子ブタを使用して、第１の実験（前記の実施例１を参照されたい）と基本的に同じである第２の実験を行い、ただし、この場合は、より低い用量のＩｇＭプロテアーゼを使用し（各場合において用量当たり１２０μｇ）、第１群（群１）においては、代替的なＸｓｏｌｖｅアジュバント（これは、実施例１で使用したＸｓｏｌｖｅアジュバントと同じ構成成分を含有するが、僅か６０％の濃度でそれを含有し、したがって、より穏和なものである）を使用した。群２は、ミョウバンに基づくアジュバントであるＥｍｕｎａｄｅ（エムネード）（ＭＳＤ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｏｘｍｅｅｒ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）中で製剤化された抗原の投与を受けた。群３は、陰性チャレンジ対照群として用いた。この実験では陽性対照群を用いなかった。
【００３０】
それらの２つの実験の間の他の差異は、この実験においては、子ブタはワクチン接種日に少し老齢（３  １／２週）であり、チャレンジ日に１週間老齢（７週）であることである。
【００３１】
該ワクチンは投与後に安全であるようであった。チャレンジ実験の結果を以下に示す。
【表３】
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【００３２】
臨床段階の結果は、各ワクチンに関して、全てのパラメーターが改善されることを示している。死後データを表４に示す。該死後データからも分かるとおり、第１の実験で使用したアジュバントより低い用量で穏和なアジュバントを使用しても、該ワクチンはストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）に対して防御しうる。これらのデータに基づけば、前記の本発明の使用のための該ワクチンの特定の実施形態において、１２０μｇ未満の用量、特に１〜１２０μｇの用量を用いた場合にもストレプトコッカス・スイスに対する防御が得られうると考えられる。
【表４】
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【国際調査報告】
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