(57)【要約】  Ｔ細胞媒介免疫を必要とする又はこれがあればより効果的になるワクチンの効力を増加させるシステム及び方法が記載されている。システム及び方法は、投与されたワクチン抗原に特異的であるＴ細胞受容体を発現するようにＴ細胞を遺伝的に改変するポリヌクレオチドを利用する。
2020504133.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象においてワクチン接種の効力を改善する方法であって、
ワクチン抗原を有する又はワクチン抗原を受けることになっている対象を同定するこことと、
ワクチン抗原の受け取りの臨床的に関連するタイムウィンドウ内で対象に治療有効量のナノ粒子（ＮＰ）を投与することとを含み、
前記ＮＰは、（ｉ）ワクチン抗原に特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチド（ＰＮ）；並びに（ｉｉ）Ｔ細胞ターゲティング及び送達剤（Ｔ−ＤＡ）を含み、
それによって、ワクチン抗原単独の投与と比べてワクチン接種の効力を改善する、方法。
【請求項２】
ワクチン抗原がメソセリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
年齢又は免疫状態に起因して、対象がワクチン効力を改善される必要がある、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
免疫状態が低Ｔ細胞数である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ワクチン接種が、ＡＩＤＳ、マラリア、ヘルペス、クラミジア、エプスタインバーウイルス、肺炎球菌又はＢ型肝炎の治療を提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ワクチン接種によりがんの治療が提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ＴＣＲがクラスＩ制限である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ＴＣＲがクラスＩＩ制限である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ＴＣＲがクラスＩ制限であり、改善されたワクチン効力が、Ｔ細胞傷害性応答を改善するＣＤ８＋Ｔヘルパー細胞活性に起因する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＴＣＲがクラスＩＩ制限であり、改善されたワクチン効力が、抗体応答を改善するＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞活性に起因する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＴＣＲが、配列番号１、４、１８、２１、２３、２５、２７、２９〜３２、３４及び３６から選択されるα鎖を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ＴＣＲが、配列番号２、３、１９、２２、２４、２６、２８、３３、３５及び３７から選択されるβ鎖を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ＴＣＲが、配列番号５〜１２、１５、１６及び３９から選択される配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ワクチン抗原が、ウイルス抗原を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ウイルス抗原が、アデノウイルス、アレナウイルス、ブニアウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、ハンタウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、パラミクソウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、海綿状ウイルス又はトガウイルスに由来する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ウイルス抗原が、サイトメガロウイルス、風邪ウイルス、エプスタインバーウイルス、フルウイルス、Ａ型、Ｂ型、又はＣ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、天然痘ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ウエストナイルウイルス又はジカウイルスにより発現されるペプチドである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ウイルス抗原が、
エンベロープ糖タンパク質Ｂ及び／若しくはＣＭＶ  ｐｐ６５から選択されるサイトメガロウイルス抗原；
ＥＢＶ  ＥＢＮＡＩ、ＥＢＶ  Ｐ１８及び／若しくはＥＢＶ  Ｐ２３から選択されるエプスタインバー抗原；
Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、Ｍ及び／若しくはＬタンパク質又はプレＳ抗原から選択される肝炎ワクチン抗原；
糖タンパク質Ｄから選択される単純ヘルペスワクチン抗原；
ＨＩＶ  ｇｐ３２、ＨＩＶ  ｇｐ４１、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ｇｐ１６０、ＨＩＶ  Ｐ１７／２４、ＨＩＶ  Ｐ２４、ＨＩＶ  Ｐ５５  ＧＡＧ、ＨＩＶ  Ｐ６６  ＰＯＬ、ＨＩＶ  ＴＡＴ、ＨＩＶ  ＧＰ３６、Ｎｅｆタンパク質及び／若しくはＨＩＶ逆転写酵素から選択されるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ワクチン抗原；
Ｌ１タンパク質から選択されるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ウイルス抗原；
赤血球凝集素及びノイラミニダーゼから選択されるインフルエンザワクチン抗原；
タンパク質Ｅ、Ｍ−Ｅ、Ｍ−Ｅ−ＮＳ１、ＮＳ１若しくはＮＳ１−ＮＳ２Ａから選択される日本脳炎ワクチン抗原；
サーカムスポロゾイト（ＣＳＰ）、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ若しくはフルクトース二リン酸アルドラーゼから選択されるマラリアワクチン抗原；
麻疹ウイルス融合タンパク質から選択される麻疹ワクチン抗原；
狂犬病糖タンパク質若しくは狂犬病核タンパク質から選択される狂犬病ワクチン抗原；
ＲＳＶ融合タンパク質若しくはＭ２タンパク質から選択される呼吸器合胞体ワクチン抗原；
ＶＰ７ｓｃから選択されるロタウイルスワクチン抗原；
タンパク質Ｅ１若しくはＥ２から選択される風疹ワクチン抗原；
ｇｐｌ若しくはｇｐｌｌから選択される水痘帯状疱疹ワクチン抗原；又は
前膜、エンベロープ（Ｅ）、Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ若しくは非構造タンパク質１、２、３、４、若しくは５から選択されるジカワクチン抗原
である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
ウイルス抗原が、Ｎｅｆ（６６〜９７）、Ｎｅｆ（１１６〜１４５）、Ｇａｇ  ｐ１７（１７〜３５）、Ｇａｇ  ｐ１７〜ｐ２４（２５３〜２８４）、Ｐｏｌ３２５〜３５５（ＲＴ  １５８〜１８８）、ＣＳＰセントラルリピート領域又はＥタンパク質ドメインＩＩＩから選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
ウイルス抗原が、配列番号１２８〜１３４から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
ワクチン抗原が、がん抗原を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
がん抗原が、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、メソセリン、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１若しくはＷＴ１又はＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、メソセリン、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１若しくはＷＴ１の断片を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
がん抗原が、配列番号１３５〜１４１から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
ワクチン抗原を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
臨床的に関連するタイムウィンドウ内でワクチンアジュバントを投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
ワクチンアジュバントが、（ｉ）ＣｐＧ、Ｃｐｇ−２８、ポリ（Ｉ：Ｃ）、α−ガラクトセラミド、ＭＰＬＡ、ＶＴＸ−２３３７、ＥＭＤ１２０１０８１）イミキモド、ＭＧＮ１７０３、Ｇ１００、ＣＢＬＢ５０２、ヒルトノール及びイミキモド、並びに／又は（ｉｉ）１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ワクチンアジュバントが、ＳＴＩＮＧアゴニストである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
ＳＴＩＮＧアゴニストが、ｃ−ｄｉＧＭＰ、ｃ−ｄｉＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、ｃ−ＡＩＭＰ、（３’、２’）ｃ−ＡＩＭＰ、（２’、２’）ｃ−ＡＩＭＰ、（２’、３’）ｃ−ＡＩＭＰ、ｃ−ＡＩＭＰ（Ｓ）、ｃ−（ｄＡＭＰ−ｄＩＭＰ）、ｃ−（ｄＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、ｃ−（２’ＦｄＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、（２’，３’）ｃ−（ＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、ｃ−［２’ＦｄＡＭＰ（Ｓ）−２’ＦｄＩＭＰ（Ｓ）］、ｃ−［２’ＦｄＡＭＰ（Ｓ）−２’ＦｄＩＭＰ（Ｓ）］（ＰＯＭ）２及び／又はＤＭＸＡＡから選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ポリヌクレオチドが、プラスミド、ミニサークルプラスミド又は自己複製ｍＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
投与が筋肉内注射を介して為される、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
ナノ粒子がポリ（β−アミノエステル）ポリマーを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
ナノ粒子が脂質コーティングを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
脂質コーティングが、リポソーム、脂質二重層又はポリマーミセルである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ナノ粒子が、ポリ（β−アミノエステル）ポリマー及びＰＧＡコーティングを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
Ｔ−ＤＡが、ポリ（β−アミノエステル）ポリマーに共有結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
Ｔ−ＤＡが、Ｔ細胞にインビボで選択的に結合する結合ドメインを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
Ｔ−ＤＡが、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞にインビボ及びエクスビボで選択的に結合する結合ドメインを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
Ｔ−ＤＡが、配列番号４１〜５８から選択される配列を含む結合ドメインを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
ナノ粒子が、エンドソーム放出剤（ＥＲＡ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
ＥＲＡが配列番号４０及び５９〜８０又はこの組合せのいずれか１つから選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ナノ粒子が、核ターゲティング剤（ＮＴＡ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
ＮＴＡが、配列番号８１〜１２７又はこの組合せのいずれか１つから選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ナノ粒子が、ｉＰＢ７トランスポサーゼ、Ｓ／ＭＡＲエレメント、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼ含有プラスミド、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ含有プラスミド、ホモサピエンストランスポゾン由来Ｂｕｓｔｅｒ１トランスポサーゼ様タンパク質遺伝子；ヒト内在性レトロウイルスＨプロテアーゼ／インテグラーゼ由来ＯＲＦ１；ホモサピエンスＣａｓ−Ｂｒ−Ｍ（マウス）エコトロピックレトロウイルス形質転換配列；ホモサピエンス内在性レトロウイルス配列Ｋ；ホモサピエンス内在性レトロウイルスファミリーＷ配列；ホモサピエンスＬＩＮＥ−１タイプトランスポサーゼドメイン；又はホモサピエンスｐｏｇｏ転位因子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
ｉＰＢ７トランスポサーゼが配列番号１４２を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
投与することにより、投与の１０日以内に、９日以内に、８日以内に、７日以内に、６日以内に、５日以内に、４日以内に又は３日以内にＴ細胞が選択的にポリヌクレオチドを発現する、請求項１に記載の方法。
【請求項４５】
ワクチン抗原、及びＴ細胞により発現されるとワクチン抗原に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチド（ＰＮ）を含むキット。
【請求項４６】
ポリヌクレオチドがナノ粒子内にある、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
コードされたＴＣＲがクラスＩ制限である、請求項４５に記載のキット。
【請求項４８】
コードされたＴＣＲがクラスＩＩ制限である、請求項４５に記載のキット。
【請求項４９】
コードされたＴＣＲが、配列番号１、４、１８、２１、２３、２５、２７、２９〜３２、３４及び３６から選択されるα鎖を含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項５０】
コードされたＴＣＲが、配列番号２、３、１９、２２、２４、２６、２８、３３、３５及び３７から選択されるβ鎖を含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項５１】
コードされたＴＣＲが配列番号５〜１２、１５、１６及び３９から選択される配列を含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項５２】
ワクチン抗原がウイルス抗原を含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項５３】
ウイルス抗原が、アデノウイルス、アレナウイルス、ブニアウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、ハンタウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、パラミクソウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、海綿状ウイルス又はトガウイルスに由来する、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】
ウイルス抗原が、サイトメガロウイルス、風邪ウイルス、エプスタインバーウイルス、フルウイルス、Ａ型、Ｂ型、又はＣ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、天然痘ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ウエストナイルウイルス又はジカウイルスにより発現されるペプチドである、請求項５２に記載のキット。
【請求項５５】
ウイルス抗原が、
エンベロープ糖タンパク質Ｂ及び／若しくはＣＭＶ  ｐｐ６５から選択されるサイトメガロウイルス抗原；
ＥＢＶ  ＥＢＮＡＩ、ＥＢＶ  Ｐ１８及び／若しくはＥＢＶ  Ｐ２３から選択されるエプスタインバー抗原；
Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、Ｍ及び／若しくはＬタンパク質又はプレＳ抗原から選択される肝炎ワクチン抗原；
糖タンパク質Ｄから選択される単純ヘルペスワクチン抗原；
ＨＩＶ  ｇｐ３２、ＨＩＶ  ｇｐ４１、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ｇｐ１６０、ＨＩＶ  Ｐ１７／２４、ＨＩＶ  Ｐ２４、ＨＩＶ  Ｐ５５  ＧＡＧ、ＨＩＶ  Ｐ６６  ＰＯＬ、ＨＩＶ  ＴＡＴ、ＨＩＶ  ＧＰ３６、Ｎｅｆタンパク質及び／若しくはＨＩＶ逆転写酵素から選択されるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ワクチン抗原；
Ｌ１タンパク質から選択されるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ウイルス抗原；
赤血球凝集素及びノイラミニダーゼから選択されるインフルエンザワクチン抗原；
タンパク質Ｅ、Ｍ−Ｅ、Ｍ−Ｅ−ＮＳ１、ＮＳ１若しくはＮＳ１−ＮＳ２Ａから選択される日本脳炎ワクチン抗原；
サーカムスポロゾイト（ＣＳＰ）、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ若しくはフルクトース二リン酸アルドラーゼから選択されるマラリアワクチン抗原；
麻疹ウイルス融合タンパク質から選択される麻疹ワクチン抗原；
狂犬病糖タンパク質若しくは狂犬病核タンパク質から選択される狂犬病ワクチン抗原；
ＲＳＶ融合タンパク質若しくはＭ２タンパク質から選択される呼吸器合胞体ワクチン抗原；
ＶＰ７ｓｃから選択されるロタウイルスワクチン抗原；
タンパク質Ｅ１若しくはＥ２から選択される風疹ワクチン抗原；
ｇｐｌ若しくはｇｐｌｌから選択される水痘帯状疱疹ワクチン抗原；又は
前膜、エンベロープ（Ｅ）、Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ若しくは非構造タンパク質１、２、３、４、若しくは５から選択されるジカワクチン抗原
である、請求項５２に記載のキット。
【請求項５６】
ウイルス抗原が、Ｎｅｆ（６６〜９７）、Ｎｅｆ（１１６〜１４５）、Ｇａｇ  ｐ１７（１７〜３５）、Ｇａｇ  ｐ１７〜ｐ２４（２５３〜２８４）、Ｐｏｌ３２５〜３５５（ＲＴ  １５８〜１８８）、ＣＳＰセントラルリピート領域又はＥタンパク質ドメインＩＩＩから選択される、請求項５２に記載のキット。
【請求項５７】
ウイルス抗原が、配列番号１２８〜１３４の１つを含む、請求項５２に記載のキット。
【請求項５８】
ワクチン抗原ががん抗原である、請求項４５に記載のキット。
【請求項５９】
がん抗原が、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、メソセリン、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１又はＷＴ１を含む、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
がん抗原が、配列番号１３５〜１４１の１つを含む、請求項５８に記載のキット。
【請求項６１】
ワクチンアジュバントをさらに含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項６２】
ワクチンアジュバントが、（ｉ）ＣｐＧ、Ｃｐｇ−２８、ポリ（Ｉ：Ｃ）、α−ガラクトセラミド、ＭＰＬＡ、ＶＴＸ−２３３７、ＥＭＤ１２０１０８１）イミキモド、ＭＧＮ１７０３、Ｇ１００、ＣＢＬＢ５０２、ヒルトノール及びイミキモド、並びに／又は（ｉｉ）１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）から選択される、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
ワクチンアジュバントがＳＴＩＮＧアゴニストを含む、請求項６１に記載のキット。
【請求項６４】
ＳＴＩＮＧアゴニストが、ｃ−ｄｉＧＭＰ、ｃ−ｄｉＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、ｃ−ＡＩＭＰ、（３’、２’）ｃ−ＡＩＭＰ、（２’、２’）ｃ−ＡＩＭＰ、（２’、３’）ｃ−ＡＩＭＰ、ｃ−ＡＩＭＰ（Ｓ）、ｃ−（ｄＡＭＰ−ｄＩＭＰ）、ｃ−（ｄＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、ｃ−（２’ＦｄＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、（２’，３’）ｃ−（ＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、ｃ−［２’ＦｄＡＭＰ（Ｓ）−２’ＦｄＩＭＰ（Ｓ）］、ｃ−［２’ＦｄＡＭＰ（Ｓ）−２’ＦｄＩＭＰ（Ｓ）］（ＰＯＭ）２及び／又はＤＭＸＡＡから選択される、請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
ポリヌクレオチドが、プラスミド、ミニサークルプラスミド又は自己複製ｍＲＮＡを含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項６６】
筋肉内注射用の注射器をさらに含む、請求項６５に記載のキット。
【請求項６７】
ナノ粒子が、ポリ（β−アミノエステル）ポリマーを含む、請求項４６に記載のキット。
【請求項６８】
ナノ粒子が、脂質コーティングを含む、請求項４６に記載のキット。
【請求項６９】
脂質コーティングが、リポソーム、脂質二重層又はポリマーミセルである、請求項６８に記載のキット。
【請求項７０】
ナノ粒子が、ポリ（β−アミノエステル）ポリマー及びＰＧＡコーティングを含む、請求項４６に記載のキット。
【請求項７１】
Ｔ−ＤＡをさらに含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項７２】
ナノ粒子が、ポリマー及びポリマーに共有結合しているＴ−ＤＡを含む、請求項４６に記載のキット。
【請求項７３】
Ｔ−ＤＡが、Ｔ細胞にインビボで選択的に結合する結合ドメインを含む、請求項７１又は７２に記載のキット。
【請求項７４】
Ｔ−ＤＡが、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞にインビボ及びエクスビボで選択的に結合する結合ドメインを含む、請求項７１又は７２に記載のキット。
【請求項７５】
ナノ粒子が、エンドソーム放出剤（ＥＲＡ）を含む、請求項４６に記載のキット。
【請求項７６】
ＥＲＡが、配列番号４０及び５９〜８０又はこの組合せのいずれか１つから選択される、請求項７５に記載のキット。
【請求項７７】
ナノ粒子が、核ターゲティング剤（ＮＴＡ）を含む、請求項４６に記載のキット。
【請求項７８】
ＮＴＡが、配列番号８１〜１２７又はこの組合せのいずれか１つから選択される、請求項７７に記載のキット。
【請求項７９】
ナノ粒子が、ｉＰＢ７トランスポサーゼ、Ｓ／ＭＡＲエレメント、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼ含有プラスミド、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ含有プラスミド；ホモサピエンストランスポゾン由来Ｂｕｓｔｅｒ１トランスポサーゼ様タンパク質遺伝子；ヒト内在性レトロウイルスＨプロテアーゼ／インテグラーゼ由来ＯＲＦ１；ホモサピエンスＣａｓ−Ｂｒ−Ｍ（マウス）エコトロピックレトロウイルス形質転換配列；ホモサピエンス内在性レトロウイルス配列Ｋ；ホモサピエンス内在性レトロウイルスファミリーＷ配列；ホモサピエンスＬＩＮＥ−１タイプトランスポサーゼドメイン；又はホモサピエンスｐｏｇｏ転位因子を含む、請求項４６に記載のキット。
【請求項８０】
ｉＰＢ７トランスポサーゼが配列番号１４２を含む、請求項７９に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年１月５日に提出された米国仮特許出願第６２／４４２，９０３号明細書の優先権を主張し、前記特許文献は、本明細書に完全に記述されているかのようにその全体を参照により本明細書に組み込む。
【０００２】
「Ｆ０５３−００５５ＰＣＴ配列表＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」と題する、２０１８年１月５日に又はそのころに作成された、ファイルサイズ１１４ＫＢのコンピュータ読取り可能テキストファイルは、本出願のための配列表を含有しており、それによりその全体を参照により本明細書に組み込む。
【０００３】
本開示は、Ｔ細胞媒介免疫を必要とするか又はＴ細胞媒介免疫をより効果的にする、ワクチンの効力を高めるシステム及び方法を提供する。このシステム及び方法は、投与されたワクチン抗原に特異的であるＴ細胞受容体を発現するように、Ｔ細胞を遺伝的に改変するポリヌクレオチドを利用する。
【背景技術】
【０００４】
リンパ球は、免疫記憶に基づく自己／非自己認識及び後天性長期免疫に関与している免疫系の細胞である。リンパ球は、Ｂ細胞又はＴ細胞として広く特徴付けることが可能である。Ｂ細胞は、可溶性抗原に結合する受容体として務める膜結合免疫グロブリン（抗体）分子の存在により特徴付けられる。Ｔ細胞は、膜結合Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の存在により特徴付けられる。ＴＣＲは、抗原が主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に会合している時だけ抗原に結合する（すなわち、抗原は可溶性ではない）。Ｔ細胞応答の特異性は、特定の抗原に結合する特定のＴＣＲにより与えられる。
【０００５】
Ｔリンパ球はＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。これらのタイプのＴ細胞は、それぞれ細胞表面分子ＣＤ４及びＣＤ８の発現により一部区別される。しかし、これらの細胞は異なる機能も有する。ＣＤ４＋細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ）とも呼ばれ、他の細胞型の活性を促進する。例えば、ＣＤ４＋  ＴＨ１細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞及びマクロファージを活性化して貪食された微生物を抱える細胞を破壊させる種々のサイトカインを分泌する。ＣＤ４＋  ＴＨ２細胞は、Ｂ細胞を活性化して抗体を産生させるサイトカインを分泌する。ＣＤ８＋細胞は、異常な又は感染細胞を直接死滅させることが可能な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）である。
【０００６】
ワクチンは、特定の病原体（例えば、感染性微生物）又は異常な細胞型（例えば、がん細胞）に対する免疫系応答を、病原体又は異常な細胞型の抗原に先制して免疫系を曝すことにより引き起こす製剤である。病原体抗原は、病原体のインタクトではあるが非感染性の形態（例えば、加熱殺菌した形態）であり得る。抗原は、病原体のタンパク質若しくはタンパク質断片であってもよく、又は異常な細胞型により優先的に発現されるタンパク質若しくはタンパク質断片であってもよい。免疫系が先制曝露に続いてワクチン抗原を認識すると、抗原に再び遭遇した場合、免疫系が効果的な応答を迅速で効果的に開始することができるように、免疫系は長期免疫記憶をもたらすことが可能である。
【０００７】
ワクチンが対象に送達されると、免疫系の抗原提示細胞（ＡＰＣ）が抗原成分を取り入れて、抗原成分又はその断片をＢ細胞及びＴ細胞に提示する。提示された抗原に特異的である受容体を発現するＢ細胞は、身体中を循環する抗体を産生し分泌して、後になって再び抗原に遭遇した場合、迅速で頑強な免疫応答を誘発することになる。標準ワクチンは、Ｂ細胞により作り出されるそのような抗体応答を介して機能するように設計される。しかし、Ｂ細胞免疫の有効性は可溶性の（すなわち、細胞外）病原体に限られる。細胞内に存在する病原体（例えば、ＡＩＤＳ、マラリア、ヘルペス、及びクラミジアを引き起こす病原体）及び細胞表面に結合している病原体（例えば、がん抗原）は、Ｂ細胞抗体にとってそれほど感受性ではない。さらに、Ｂ細胞免疫の有効性は、ワクチン抗原がＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞により同様に認識されると増強される。
【０００８】
細胞結合性のままである抗原では、効果的な免疫化にはＴ細胞媒介免疫が必要である。しかしながら、Ｔ細胞媒介免疫を必要とするワクチンは失敗することが多い。なぜならば、宿主（例えば、ヒト、研究動物）には、提示されたワクチン抗原を認識して結合する特定のＴＣＲを発現するＴ細胞がないからである。免疫系が低下した人（例えば、年配者）は特にこの問題を受けやすい。なぜならば、彼らは新しいＴ細胞の産生が減少しているので彼らのＴＣＲレパートリーに「穴」が生じているからである。これらの問題点に起因して、ワクチンは無効になり、患者は細胞結合性抗原（例えば、細胞内感染症及びがん）に伴う状態に対する防御が不十分なままになることがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
現在、医師がＴ細胞媒介免疫を必要とする感染症及びがんを治療するのに使用することが可能な信頼できるワクチンは全くない。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
本開示は、Ｔ細胞媒介免疫を必要とし、これによって効力が増すワクチンの有効性を、高めるシステム及び方法を提供する。システム及び方法は、対象に投与されるワクチン抗原を認識して結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するよう、Ｔ細胞を遺伝的に改変することに依存している。対象が、ワクチン抗原を認識して結合するＴＣＲを発現するＴ細胞を有することを確実にすることにより、Ｔ細胞媒介ワクチン接種の有効性は大いに拡大される。
【００１１】
特定の実施形態は、対象に投与されるワクチン抗原に結合するＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを対象に投与することを含む。
【００１２】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドはナノ粒子（ＮＰ）の一部として対象に投与される。ＮＰは、ポリヌクレオチドの送達及び／又は発現を増強する特長を含むことが可能である。例えば、特定の実施形態では、ＮＰはポリヌクレオチドを濃縮して酵素的分解から保護する担体分子を含む。特定の実施形態では、ＮＰはカプセル化ポリヌクレオチドを遮蔽しオフターゲット結合を低減する又は防ぐコーティングを含む。
【００１３】
特定の実施形態では、ＮＰは選択的Ｔ細胞ターゲティング及び送達剤（Ｔ−ＤＡ）を含む。Ｔ−ＤＡはＮＰが対象に送達されるのを可能にし、ポリヌクレオチドを選択されたＴ細胞へ選択的に送達する。ＣＤ４＋Ｔ細胞をＴＣＲを発現するように選択的に改変するのは、Ｂ細胞媒介ワクチン接種の効力を改善するのに特に有用である。ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞をＴＣＲを発現するように選択的に改変するのは、Ｔ細胞媒介ワクチン接種を改善するのに特に有用である。両方のアプローチが、Ｔ細胞にワクチン抗原認識能力を与える。重要なのは、Ｔ−ＤＡを組み込む実施形態では、対象の既存のＴ細胞を、例えば、ＮＰの筋肉内投与に続いてインビボで改変可能なことである。
【００１４】
ＮＰは、対象のＴ細胞に送達されるポリヌクレオチドの発現を促進する他の特長も含むことが可能である。例えば、ＮＰはエンドソーム放出剤及び／又は核ターゲティング剤を含むことが可能である。エンドソーム放出剤は、標的にされたＴ細胞のエンドソームからの送達されたポリヌクレオチドの逃避を促進する。核ターゲティング剤はポリヌクレオチドを標的にされた細胞の核の方に及び／又はその中に向ける。
【００１５】
特定の実施形態はこれらの特長の態様を組み合わせる。例えば、ＮＰは、（ｉ）対象に投与されるワクチン抗原に結合するＴＣＲをコードするポリヌクレオチド；（ｉｉ）濃縮する担体分子；（ｉｉｉ）コーティング；（ｉｖ）限定されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞）にＮＰを選択的に向けるＴ−ＤＡ；（ｖ）エンドソーム放出剤；及び（ｉｖ）核ターゲティング剤を含んでもよい。このＮＰは、ワクチン抗原を受ける臨床的に関連するタイムウィンドウ内で対象に投与することが可能である。
【００１６】
本明細書に開示されるシステム及び方法は、強力なＴ細胞免疫を必要とする慢性状態を治療するワクチンの効力を高めるのに特に有用である。そのような慢性状態の例は、慢性感染症（例えば、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、マラリア、ヘルペス、クラミジア、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、肺炎球菌、及びＢ型肝炎）及びがんを含む。
【００１７】
本明細書に提出されている図面の多くはカラーの方がよく理解される。出願者らは、図面のカラー版を最初の提出物の一部と考え、後の手続きにおいて図面のカラー画像を提出する権利を留保する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】理論上の、Ｔ細胞受容体プログラミングを通じてワクチン失敗を予防する全体的アプローチを図解する、概略図である。ナノ粒子（ＮＰ）を使用して、操作されたＴＣＲ遺伝子を循環宿主Ｔ細胞中に導入し、Ｔ細胞に抗原認識能力を付与し、次にこの能力は移されたＴＣＲにより認識されるペプチドワクチンを使用して選択的に拡大される。
【図２】従来のワクチンに対する開示されたシステム及び方法の利点を図解する概略図である。上パネルは、免疫された個人が有する適切な受容体のあるＴ細胞があまりに少ないためにワクチン抗原／アジュバントの注射が失敗することがいかに多いのかを示している。中パネルは、ＮＰをどのように使用すれば、操作されたＴＣＲ遺伝子を循環Ｔ細胞中に導入し、Ｔ細胞に抗原認識能力を付与することができるかを図解している。次に、これらの能力は移されたＴＣＲにより認識されるペプチドワクチンを使用して選択的に拡大される。下パネルは、ワクチン特異的ＴＣＲを有するプログラミングＣＤ４ヘルパーＴ細胞が、高親和性記憶Ｂ細胞を生み出すことにより保護的抗体の産生をブーストすることが可能になる様子を示している。
【図３Ａ】ＤＮＡ保有ナノ粒子（ＮＰ）の筋肉内注射により、ワクチン特異的ＴＣＲを末梢性Ｔ細胞レパートリー中に効率的に導入することが可能になる。記載される実験で使用されるＴ細胞標的ＤＮＡナノ粒子の概略図である。ＮＰは、プラスミドＤＮＡをポリ（β−アミノエステル）ポリマーと混合することにより調製し、このポリマーはプラスミドＤＮＡをナノサイズ複合体に濃縮する。粒子は、抗ＣＤ８抗体をポリグルタミン酸（ＰＧＡ）に連結させ、粒子に静電気的に吸着されたコンジュゲートを形成することにより標的にした。挿入図はＮＰの電子顕微鏡写真であり；スケールバーは１００ｎｍ。２つのナノ粒子カプセル化プラスミドも描かれており、プラスミドはＯＶＡ特異的ＯＴ−１  ＴＣＲ及び機能亢進性ｉＰＢ７トランスポサーゼをコードしている。
【図３Ｂ】ＤＮＡ保有ナノ粒子（ＮＰ）の筋肉内注射により、ワクチン特異的ＴＣＲを末梢性Ｔ細胞レパートリー中に効率的に導入することが可能になる。流入領域リンパ節でのリンパ球の細胞数測定分析。それぞれのパネルの下左４分の１区及び下右４分の１区の細胞のパーセントは、それぞれ：８２．７及び１７．３（ワクチンのみ、０日目）；７５．１及び２４．８（ワクチンのみ、７日目）；８５．３及び１４．７（ワクチンのみ、３０日目）；８５．３及び１４．７（ＯＶＡ  ＴＣＲナノ粒子のみ、０日目）；８４．２及び１５．７（ＯＶＡ  ＴＣＲナノ粒子のみ、７日目）；８７．５及び１２．４（ＯＶＡ  ＴＣＲナノ粒子のみ、３０日目）；８６．７及び１３．２（ワクチン＋ＯＶＡ  ＴＣＲナノ粒子、０日目）；８０．３及び１６．７（ワクチン＋ＯＶＡ  ＴＣＲナノ粒子、７日目）；８０．６及び１９．１（ワクチン＋ＯＶＡ  ＴＣＲナノ粒子、３０日目）である。
【図３Ｃ】ＤＮＡ保有ナノ粒子（ＮＰ）の筋肉内注射により、ワクチン特異的ＴＣＲを末梢性Ｔ細胞レパートリー中に効率的に導入することが可能になる。３０日目のＮＰプログラムされたＯＶＡ反応性記憶Ｔ細胞の絶対数を示すプロット。
【図４Ａ】ＴＣＲ１０４５をコードするＴ細胞標的ＮＰをメソセリン（ＭＳＬＮ）ワクチンと組み合わせると、確立した膵管腺癌を抱えたＫｒａｓＬＳＬ−Ｇ１２Ｄ／＋；Ｔｒｐ５３ＬＳＬ−Ｒ１７２Ｈ／＋；ｐ４８Ｃｒｅ／＋（ＫＰＣ）マウスの生存を有意に延ばす。生後４か月ＫＰＣマウスの膵臓における腫瘍塊の例。
【図４Ｂ】ＴＣＲ１０４５をコードするＴ細胞標的ＮＰをメソセリン（ＭＳＬＮ）ワクチンと組み合わせると、確立した膵管腺癌を抱えたＫｒａｓＬＳＬ−Ｇ１２Ｄ／＋；Ｔｒｐ５３ＬＳＬ−Ｒ１７２Ｈ／＋；ｐ４８Ｃｒｅ／＋（ＫＰＣ）マウスの生存を有意に延ばす。ＴＣＲ１０４５をコードするＴ細胞標的ＮＰ、ＭＳＬＮワクチン、又は両方を受けるＫＰＣマウスの生存。対照は何の治療も受けない。ｍｓ＝平均生存。
【図５】ＣＤ４膜貫通ドメインをコードする代表的な遺伝子配列（配列番号４０）。
【図６】マウスコドン最適化ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼをコードする代表的なｃＤＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＥＦ５８７６９８；配列番号１４２）。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
リンパ球は、自己／非自己認識及び免疫記憶に基づく後天性長期免疫に関与している免疫系の細胞である。リンパ球は、Ｂ細胞又はＴ細胞として広く特徴付けることが可能である。Ｂ細胞は、可溶性抗原に結合する受容体として務める膜結合免疫グロブリン（抗体）分子の存在により特徴付けられる。Ｔ細胞は、膜結合Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の存在により特徴付けられる。ＴＣＲは、抗原が主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に会合している時だけ抗原に結合する（すなわち、抗原は可溶性ではない）。Ｔ細胞応答の特異性は、特定の抗原に結合する特定のＴＣＲにより与えられる。
【００２０】
Ｔリンパ球は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。これらのタイプのＴ細胞は、それぞれ細胞表面分子ＣＤ４及びＣＤ８の発現により一部区別される。しかし、これらの細胞は異なる機能も有する。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ）とも呼ばれ、他の細胞型の活性を促進する。例えば、ＣＤ４＋  ＴＨ１細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞及びマクロファージを活性化して貪食された微生物を抱える細胞を破壊させる種々のサイトカインを分泌する。ＣＤ４＋  ＴＨ２細胞は、Ｂ細胞を活性化して抗体を産生させるサイトカインを分泌する。ＣＤ８＋細胞は、異常な又は感染細胞を直接死滅させることが可能な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）である。
【００２１】
ワクチンは、特定の抗原に対する免疫系応答を、抗原に先制して免疫系を曝すことにより引き起こす製剤である。病原体抗原は、病原体のインタクトではあるが非感染性の形態（例えば、加熱殺菌した）が可能である。抗原は、病原体のタンパク質若しくはタンパク質断片又は異常な細胞型（例えば、がん細胞）により発現されるタンパク質若しくはタンパク質断片でも可能である。免疫系が先制曝露に続いて抗原を認識すると、抗原に再び遭遇した場合、免疫系が効果的な応答を迅速で効果的に開始することができるように、免疫系は長期免疫記憶をもたらすことが可能である。
【００２２】
ワクチンが対象に送達されると、免疫系の抗原提示細胞（ＡＰＣ）が抗原成分を取り入れて、抗原成分又はその断片をＢ細胞及びＴ細胞に提示する。提示された抗原に特異的である受容体を発現するＢ細胞は、身体中を循環する抗体を産生し分泌して、後になって再び抗原に遭遇した場合、迅速で頑強な免疫応答を誘発することになる。標準ワクチンは、Ｂ細胞により作り出されるそのような抗体応答を介して機能するように設計される。しかし、Ｂ細胞免疫の有効性は可溶性（すなわち、細胞外）病原体に限られる。細胞内に存在する（例えば、ＡＩＤＳ、マラリア、ヘルペス、及びクラミジアを引き起こす病原体）又は細胞結合性のままである（例えば、がん細胞抗原）病原体はＢ細胞抗体にとってそれほど感受性ではない。さらに、Ｂ細胞免疫の有効性は、ワクチン抗原がＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞により同様に認識されると増強される。
【００２３】
細胞結合性（例えば、細胞内又は膜結合）である抗原では、効果的な免疫化にはＴ細胞媒介免疫が必要である。しかしながら、Ｔ細胞媒介免疫を必要とするワクチンは失敗することが多い。なぜならば、宿主（例えば、ヒト、研究動物）には、提示されたワクチン抗原を認識して結合する特定のＴＣＲを発現するＴ細胞がないからである。免疫系が低下した人（例えば、年配者）は特にこの問題を受けやすい。なぜならば、彼らは新しいＴ細胞の産生が減少しているので彼らのＴＣＲレパートリーに「穴」が生じているからである。これらの問題点に起因して、ワクチンは無効になり、患者は細胞内病原体による感染及び／又はがんに対する防御が不十分なままになることがある。
【００２４】
現在、医師がＴ細胞媒介免疫を必要とする感染症及びがんを治療するのに使用することが可能な信頼できるワクチンは全くない。
【００２５】
本開示は、Ｔ細胞媒介免疫を必要とし、これによって効力が増すワクチンの有効性を高めるシステム及び方法を提供する。システム及び方法は、対象に投与されるワクチン抗原を認識して結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するようＴ細胞を遺伝的に改変することに依存している。対象が、ワクチン抗原を認識して結合するＴＣＲを発現するＴ細胞を有することを確実にすることにより、Ｔ細胞媒介ワクチン接種の有効性は大いに拡大される。
【００２６】
特定の実施形態は、対象に投与されるワクチン抗原に結合するＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを対象に投与することを含む。
【００２７】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドはナノ粒子（ＮＰ）の一部として対象に投与される。ＮＰは、ポリヌクレオチドの送達及び／又は発現を増強する特長を含むことが可能である。例えば、特定の実施形態では、ＮＰはポリヌクレオチドを濃縮して酵素的分解から保護する担体分子を含む。本明細書の他の場所でさらに詳細に開示されるように、そのような担体は正電荷を帯びた脂質及び／又はポリマーを含むことが可能である。特定の実施形態では、ポリ（β−アミノエステル）が利用される。
【００２８】
特定の実施形態では、ＮＰはカプセル化ポリヌクレオチドを遮蔽しオフターゲット結合を低減する又は防ぐコーティングを含む。オフターゲット結合は、ＮＰの表面電荷を中性又は負に下げることにより低減される又は防がれる。本明細書の他の場所でさらに詳細に開示されるように、コーティングは中性若しくは負のポリマー及び／又はリポソームベースのコーティングを含むことが可能である。特定の実施形態では、ＮＰコーティングとしてポリグルタミン酸（ＰＧＡ）が利用される。使用する場合、コーティングは必ずしも全ＮＰを被覆する必要はないが、ＮＰによるオフターゲット結合を低減するのに十分でなければならない。
【００２９】
特定の実施形態では、ＮＰは選択的Ｔ細胞ターゲティング及び送達剤（Ｔ−ＤＡ）を含む。Ｔ−ＤＡはＮＰが対象に送達されるのを可能にし、ポリヌクレオチドを選択されたＴ細胞へ選択的に送達する。ＣＤ４＋Ｔ細胞をＴＣＲを発現するように選択的に改変するのは、Ｂ細胞媒介ワクチン接種の効力を改善するのに特に有用である。ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞をＴＣＲを発現するように選択的に改変するのは、Ｔ細胞媒介ワクチン接種を改善するのに特に有用である。両方のアプローチが、Ｔ細胞にワクチン抗原認識能力を与える。重要なのは、Ｔ−ＤＡを組み込む実施形態では、対象の既存のＴ細胞を、例えば、ＮＰの筋肉内投与に続いてインビボで改変可能なことである。
【００３０】
ＮＰは、対象のＴ細胞に送達されるポリヌクレオチドの発現を促進する他の特長も含むことが可能である。例えば、ＮＰはエンドソーム放出剤及び／又は核ターゲティング剤を含むことが可能である。エンドソーム放出剤は、標的にされたＴ細胞のエンドソームからの送達されたポリヌクレオチドの逃避を促進する。核ターゲティング剤はポリヌクレオチドを標的にされた細胞の核の方に及び／又はその内部に向ける。
【００３１】
特定の実施形態はこれらの特長の態様を組み合わせる。例えば、ＮＰは、（ｉ）対象に投与されるワクチン抗原に結合するＴＣＲをコードするポリヌクレオチド；（ｉｉ）正電荷を帯びた担体；（ｉｉｉ）中性又は負電荷を帯びたコーティング；（ｉｖ）限定されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞）にＮＰを選択的に向けるＴ−ＤＡ；（ｖ）エンドソーム放出剤；及び（ｉｖ）核ターゲティング剤を含むことが可能である。このＮＰは、ワクチン抗原を受ける臨床的に関連するタイムウィンドウ内で対象に投与することが可能である。
【００３２】
本明細書に開示されるシステム及び方法は、強力なＴ細胞免疫を必要とする慢性感染症及びがんを治療するワクチンの効力を高めるのに特に有用である。そのような慢性感染症の例は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、マラリア、ヘルペス、クラミジア、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、肺炎球菌、及びＢ型肝炎を含む。
【００３３】
図２は、本明細書に開示されるシステム及び方法の根底にある模式図を提供する。上の３つのパネルは、従来のワクチン抗原投与で観察される不十分なＴ細胞プライミングを描いている。中の３つのパネルは、投与されたワクチン抗原を認識して増加したＴ細胞プライミングをもたらしＴ細胞媒介免疫を支援するＣＤ８＋Ｔ細胞の遺伝子再プログラミングを描いている。下の３つのパネルは、投与されたワクチン抗原を認識して増加したＴ細胞プライミングをもたらし、Ｂ細胞による頑強な抗体産生を助け支援するＣＤ４＋Ｔ細胞の遺伝子再プログラミングを描いている。したがって、特定の実施形態は、対象に投与されるワクチン抗原に結合するＴＣＲを発現するようにＴ細胞を遺伝的に再プログラミングするポリヌクレオチドを対象に投与することを含む。
【００３４】
本開示の態様は、今やさらに詳細に、以下の順で記載される：（Ｉ）ＴＣＲ；（ＩＩ）操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチド（ＰＮ）；（ＩＩＩ）ナノ粒子（ＮＰ）；（ＩＶ）Ｔ細胞ターゲティング及び送達剤（Ｔ−ＤＡ）；（Ｖ）エンドソーム放出剤（ＥＲＡ）；（ＶＩ）核ターゲティング剤（ＮＴＡ）；（ＶＩＩ）ワクチン抗原；（ＶＩＩＩ）ワクチンアジュバント；（ＩＸ）組成物；（Ｘ）キット；及び（ＸＩ）使用方法。
【００３５】
Ｉ．Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）。示されているように、ＴＣＲは、Ｔ細胞の表面に見出され、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に会合している抗原を認識して結合する分子である。
【００３６】
それぞれのＴＣＲは、２つのジスルフィド連結ヘテロ二量体膜貫通タンパク質を含む。すなわち、それぞれのＴＣＲはヘテロ二量体である。末梢血中のＴ細胞の９５％において、それぞれのＴＣＲはアルファ（α）鎖及びベータ（β）鎖を含む。末梢血中のＴ細胞の残りの５％は、ガンマ（γ）鎖及びデルタ（Δ）鎖を含む。
【００３７】
それぞれのＴＣＲ鎖は可変ドメインを含み、これがＴ細胞の抗原特異性を与える。これらの可変ドメインはＩｇ可変（Ｖ）鎖のドメインに類似している。
【００３８】
鎖の他の部分は、定常ドメイン、膜貫通ドメイン及び短い細胞質側テイルのようないくつかの不変のドメインを含む。膜アンカーＣ末端ドメインはＩｇ定常（Ｃ）ドメインに類似している。
【００３９】
機能的形態を達成するため、ＴＣＲはＣＤ３に非共有結合的に会合して、ＴＣＲ−ＣＤ３膜複合体を形成する。ＣＤ３は、ＴＣＲのシグナル伝達エレメントであり、γ、Δ、イプシロン（Ε）、ゼータ（Ζ）及びイータ（Η）鎖と呼ばれる不変タンパク質の群で構成されている。γ、Δ、及びΕ鎖は構造的に関係しており、それぞれがＩｇ様細胞外定常ドメイン、続いて膜貫通領域及び４０アミノ酸を超える細胞質ドメインを含有する。Ｚ及びＨ鎖ははっきり異なる構造を有し、両方とも９アミノ酸のみの非常に短い細胞外領域、膜貫通領域並びにＺ及びＨ鎖でそれぞれ１１３及び１１５アミノ酸を含む長い細胞質側テイルを有する。ＣＤ３複合体中の不変タンパク質鎖は会合して、Ｅ鎖とγ鎖（Ｅγ）の若しくはＥ鎖とΔ鎖（ＥΔ）の又はＺとＨ鎖（ＺＨ）の非共有結合ヘテロ二量体、又は２つのＺ鎖（ＺＺ）のジスルフィド連結ホモ二量体を形成する。ＣＤ３複合体の９０％はＺＺホモ二量体を組み入れている。
【００４０】
ＣＤ３鎖の細胞質領域は、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）と名付けられたモチーフを含む。このモチーフは、Ｂ細胞受容体複合体のＩｇ−α／Ｉｇ−βヘテロ二量体並びにＩｇＥ及びＩｇＧに対するＦｃ受容体を含むいくつかの他の受容体に見出される。ＩＴＡＭ部位は細胞質チロシンキナーゼと会合し、ＴＣＲ媒介トリガーに続くシグナル伝達に関与する。ＣＤ３では、γ、Δ及びＥ鎖はそれぞれがＩＴＡＭの単一コピーを含有し、Ｚ及びＨ鎖はその長い細胞質領域に３つのＩＴＡＭを抱える。実際、Ｔ細胞活性化シグナル伝達経路において主要な役割はＺ及びＨ鎖に帰されてきた。
【００４１】
開示されたシステム及び方法の特定の適用内での使用のために特定のＴＣＲを同定し選択する数多くの方法がある。例えば、特定の抗原断片に結合する数多くのＴＣＲの配列は公知であり一般に公開されている。
【００４２】
ＴＣＲは、例えば、特定のワクチン抗原／ＭＨＣ複合体に結合するＴ細胞を単離し、その複合体に結合するＴＣＲ鎖を配列決定することにより、特定のワクチンでの使用のために同定することも可能である。例として、抗原特異的Ｔ細胞は、抗原／ＭＨＣ複合体の存在下で単離されたヒトＴ細胞をインビトロ培養することにより誘導してもよい。抗原／ＭＨＣ複合体に結合するＴＣＲをコードするＴＣＲ遺伝子は、ＴＣＲα鎖遺伝子及びＴＣＲβ鎖遺伝子に特有の配列に対応するプライマーを使用する５’ＲＡＣＥ手順により容易にクローニングすることが可能である。
【００４３】
特定のペプチド抗原に結合しているＭＨＣ分子の細胞外ドメインを含む天然のＴＣＲリガンドの種々の類似体が作成されてきた。いくつかのそのような類似体は、リンパ球膜の洗剤抽出物として精製される又は組換えタンパク質として産生されてきた（例えば、Ｓｈａｒｍａら、ＰＮＡＳ．８８：１１４６５〜６９頁、１９９１年；Ｋｏｚｏｎｏら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６９：１５１〜５４頁、１９９４年；Ａｒｉｍｉｌｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９７１〜７７頁、１９９５年；Ｎａｇ、ＰＮＡＳ  ９０：１６０４〜０８頁、１９９３年；Ｎａｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１０４１３〜１８頁、１９９６年；Ｒｈｏｄｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：４８８５〜９１頁、１９９６年；Ｆｒｅｍｏｎｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２：１００１頁、１９９６年；Ｓｈａｒｍａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１１４０５頁、１９９１年；Ｎｉｃｏｌｌｅら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：１３６１頁、１９９４年；Ｓｐａｃｋら、ＣＮＳ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ．４：２２５頁、１９９８年参照）。そのような類似体を使用すれば、特定の適用のためにＴ細胞を単離し、次に目的のＴＣＲを配列決定することが可能になる。
【００４４】
特定の実施形態では、配列決定に続いてＴＣＲ鎖を対にする（すなわち、ペアード鎖分析を実施する）ことが必要である場合がある。種々の方法を利用して、対合により遺伝的に改変されたＴ細胞により発現されると抗原／ＭＨＣ複合体に結合するＴＣＲが生じるように、抗原／ＭＨＣ複合体に結合する単離されたαとβ鎖を対にすることが可能である。特定の実施形態では、例えば、仮に単細胞から配列決定する場合のような、αとβ鎖対合情報が手順において失われない実施形態では、配列決定後対合は不必要である又は比較的単純である場合がある。特定の実施形態では、鎖対合はコンピュータ方法によりｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで支援されてもよい。例えば、特殊化した、一般に公開されている免疫学遺伝子整列ソフトウェアがＩＭＧＴ、ＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ、ＶＤＪＳｏｌｖｅｒ、ＳｏＤＡ、ｉＨＭＭｕｎｅ−ａｌｉｇｎ、又はＶＤＪ遺伝子セグメントに注釈を付けるための他の類似するツールから入手可能である。
【００４５】
特定の実施形態では、鎖対合はＶＤＪ抗体を使用して実施してもよい。例えば、同定されたセグメントに対する抗体を得て、その抗体を使用して、その（表面）受容体中でその遺伝子セグメントを発現する細胞のサブセットを、（例えば、ＦＡＣＳ、又はマイクロビーズを用いた免疫磁気選択を使用して）精製してもよい。次に、所望の遺伝子セグメントについて精製された細胞のこのサブセットから配列決定してもよい。必要であれば、この二次配列決定は第１ラウンドの配列決定よりも深く（すなわち、より高い分解能で）行ってもよい。この二次配列データセットでは、誘導されるクロノタイプの数ははるかに少なくなり、鎖対合の作業は大いに楽になる。遺伝子セグメントに応じて、例えば、誘導されるα鎖は１つ及び誘導されるβ鎖は１つだけになる可能性がある。
【００４６】
特定の実施形態では、鎖対合はマルチウェル配列決定を使用して実施してもよい。例えば、遺伝子セグメント精製細胞又は非精製細胞をマイクロウェルプレートに単離してもよく、それぞれのマイクロウェルは非常に少ない数の細胞を有する。それぞれのウェルにおいて細胞を個々に増幅し配列決定することが可能であり、これは、単細胞ベースで配列決定することにより目的の鎖を対合する別の手段を提供し、誘導されたαとβ鎖の対合を促進する。ＰａｉｒＳＥＱ（登録商標）（Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）のようなアッセイも開発されている。
【００４７】
特定のワクチン適用のための目的のＴＣＲの選択及び／又は同定に続いて、遺伝的に改変されたＴ細胞により発現された場合、発現されたＴＣＲが意図されるワクチン／ＭＨＣ複合体に結合しＴ細胞が活性化される限り、ＴＣＲのいかなる部分でも使用することが可能でありＴＣＲのバリアントを使用することが可能である。
【００４８】
特定の実施形態では、操作されたＴＣＲは、目的の標的（例えば、ペプチド−ＭＨＣ複合体）に特異的なＶα／β及びＣα／β鎖（例えば、Ｖα−Ｃα、Ｖβ−Ｃβ、Ｖα―Ｖβ）を含む又はＶα−Ｃα、Ｖβ−Ｃβ、Ｖα―Ｖβ対を含む一本鎖Ｔ細胞受容体（ｓｃＴＣＲ）を含む。
【００４９】
特定の実施形態では、操作されたＴＣＲは、公知の又は同定されたＴＣＲ  Ｖα、Ｖβ、Ｃα、又はＣβのアミノ酸配列に少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、又は１００％同一である配列を含み、それぞれのＣＤＲは目的の標的に特異的に結合するＴＣＲ又はこの断片若しくは誘導体からゼロ変化又は１つ、２つ、若しくは３つ以下の変化を含む。
【００５０】
特定の実施形態では、操作されたＴＣＲは、公知の又は同定されたＴＣＲ（例えば、高親和性ＴＣＲ）のＶα、Ｖβ、Ｃα、又はＣβに由来する又はこれに基づくＶα、Ｖβ、Ｃα、又はＣβ領域を含み、公知の又は同定されたＴＣＲのＶα、Ｖβ、Ｃα、又はＣβと比べた場合、１つ以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）挿入、１つ以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）欠失、１つ以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）アミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換又は非保存的アミノ酸置換）、又は上記変化の組合せを含む。挿入、欠失又は置換は、それぞれのＣＤＲがゼロ変化又は１つ、２つ、若しくは３つ以下の変化を含むという条件で、及び改変Ｖα、Ｖβ、Ｃα、又はＣβ領域を含有する標的結合ドメインが野生型に類似する親和性及び作用でそれでもその標的に特異的に結合することが可能であるという条件で、これらの領域のアミノ末端若しくはカルボキシ末端又は両末端でを含む、Ｖα、Ｖβ、Ｃα又はＣβ領域のいかなる場所でもよい。
【００５１】
ＴＣＲが結合することが可能であるＭＨＣ分子には、ＭＨＣクラスＩ分子及びＭＨＣクラスＩＩ分子の２種類がある。本明細書に記載される発現されたＴＣＲ及び特定の使用という文脈では、ＭＨＣクラスＩ制限又はＭＨＣクラスＩＩ制限ＴＣＲを発現するのが有用でありうる。したがって、これらの異なるクラスのＭＨＣ分子の考察を行う。
【００５２】
ＭＨＣクラスＩ分子は、β２ミクログロブリン（β２ｍ）と呼ばれる１２ｋＤａの単形性（ヒトでは）非ＭＨＣコード軽鎖タンパク質と非共有結合している多形性の重鎖（α）を含む。重α鎖は、それぞれが９０アミノ酸（Ｎ末端にα１、α２及びα３）を含む３つの細胞外ドメイン、４０アミノ酸の膜貫通領域及び３０アミノ酸の細胞質側テイルを含む、４５ｋＤａの多形性膜貫通糖タンパク質である。α１及びα２ドメイン、膜末梢部ドメインが、８〜１０アミノ酸のペプチドに結合するのに十分なサイズを有するペプチド結合溝又は間隙を形成し、α３ドメインは細胞膜の近位である。β２ｍは細胞膜に留められていない単一の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインを有し、α３鎖と主に相互作用し、α３は特徴的なＩｇ折重なりも有する。ヒトでは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−Ｃと呼ばれる３つのα鎖遺伝子があり、その遺伝子ごとに複対立遺伝子が同定されている。マウスでは、Ｈ−２Ｋ、Ｈ−２Ｄ及びＨ−２Ｌと呼ばれる３つのα鎖遺伝子がある。
【００５３】
ＭＨＣクラスＩＩ分子は、２つの異なるポリペプチド鎖、３３ｋＤのα鎖及び２８ｋＤａのβ鎖を含み、この２つの鎖は非共有結合的相互作用により会合する。クラスＩ  ＭＨＣ分子と同様、クラスＩＩ  ＭＨＣ分子は、細胞外ドメイン、膜貫通セグメント及び細胞質側テイルを含有する膜結合糖タンパク質である。これらの非共有結合ヘテロ二量体複合体中のそれぞれの鎖は、２つの細胞外ドメイン：α１とα２ドメイン及びβ１とβ２ドメインを含む。クラスＩＩ分子の膜末梢部ドメインはα１及びβ１ドメインで構成されペプチドに結合するのに十分なサイズを有するペプチド結合溝又は間隙を形成し、このペプチドは典型的には１３〜１８アミノ酸である。膜近位ドメイン、α２及びβ２はＩｇ定常（Ｃ）ドメインに構造的類似性を有する。
【００５４】
哺乳動物において会合してＭＨＣ複合体を形成する種々のポリペプチド鎖をコードする遺伝子は、広範囲に詳細に研究され記載されてきた。ヒトでは、ＭＨＣ分子（クラスＩ  β２ｍの例外はあるが）は第６染色体上に位置するゲノムのＨＬＡ領域にコードされている。ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ及びＨＬＡ−Ｃと呼ばれる３つのクラスＩ  ＭＨＣα鎖コード遺伝子座がある。ＭＨＣクラスＩＩタンパク質の場合には、ＨＬＡ−ＤＲ（Ａ及びＢ）、ＨＬＡ−ＤＰ（Ａ及びＢ）、及びＨＬＡ−ＤＱ（Ａ及びＢ）と呼ばれるαとβ鎖遺伝子座の３つの対がある。ラットでは、クラスＩα遺伝子はＲＴ１．Ａと呼ばれ、クラスＩＩ遺伝子はＲＴ１．Ｂα及びＲＴ１．Ｂβと呼ばれる。ＭＨＣ複合体の構造、機能及び遺伝学に関するさらに詳細な記述は、例えば、免疫生物学：Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｔｒａｖｅｒｓ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌｔｄ．／Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｉｎｃ．（１９９７）、及びｉｎ  Ｂｏｄｍｅｒら、（１９９４）「Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＬＡ  ｓｙｓｔｅｍ」Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ４４巻、１〜１８頁に見出すことができる。
【００５５】
Ｔ細胞発生中、胸腺中のＴ細胞はペプチド／ＨＬＡ複合体を提示されこの相互作用に基づいて選択を受ける。Ｔ細胞選択により、ＨＬＡ拘束性として公知の、特定のクラスのＨＬＡ分子との相互作用に制限されるＴ細胞をもたらすことが可能である。例えば、選択中、Ｔ細胞はＴＣＲとペプチド／ＨＬＡクラスＩ複合体の間の効果的な相互作用に起因して分化してクラスＩ制限ＣＤ８＋Ｔ細胞になることが可能である、又はＴＣＲとペプチド／ＨＬＡクラスＩＩ複合体の間の効果的な相互作用に起因してクラスＩＩ制限ＣＤ４＋Ｔ細胞になることが可能である。ＴＣＲの相補性領域１〜３（ＣＤＲ１〜３）はペプチド／ＨＬＡ複合体に結合する。したがって、ＣＤＲ１〜３のアミノ酸配列は、Ｔ細胞がＨＬＡクラスＩ又はＨＬＡクラスＩＩ制限かどうかの決定要因となりうる。共受容体発現もＴ細胞クラス制限の重要な特長である。抗原に応答してＴ細胞活性化のためのシグナル伝達を始めるため、ＨＬＡクラスＩ分子はＣＤ４＋共受容体と相互作用することが可能であり、ＨＬＡクラスＩＩ分子はＣＤ８＋共受容体と相互作用することが可能である。したがって、ペプチド／ＨＬＡクラスＩ複合体に結合するＴＣＲを発現するように操作されたＴ細胞は、共受容体ＣＤ８を発現する場合は活性化することが可能であり、ペプチド／ＨＬＡクラスＩＩ複合体に結合するＴＣＲを発現するように操作されたＴ細胞は共受容体ＣＤ４を発現する場合は活性化することが可能である。
【００５６】
したがって、以下のことを改変する遺伝子操作がなければ、ＣＤ８＋Ｔ細胞はＭＨＣクラスＩ分子を認識し、ＣＤ４＋Ｔ細胞はＭＨＣクラスＩＩ分子を認識する。次に特定の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞はＨＬＡクラスＩ制限ＴＣＲを発現するように遺伝的に改変することが可能であり、ＣＤ４＋Ｔ細胞はＨＬＡクラスＩＩ制限ＴＣＲを発現するように遺伝的に改変することが可能である。
【００５７】
特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００５８】
【化１】
2020504133.tif 000003
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００５９】
【化２】
2020504133.tif 000004
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００６０】
【化３】
2020504133.tif 000005
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００６１】
【化４】
2020504133.tif 000006
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲは：
【００６２】
【化５】
2020504133.tif 000007
の配列を有するヒトα鎖可変ドメインを含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲは：
【００６３】
【化６】
2020504133.tif 000008
の配列を有するヒトβ鎖可変ドメインを含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはＣＬＬＲＮＨＤＫＬＩＦ（配列番号９）又はＣＡＶＧＮＹＧＧＳＱＧＮＬＩＦ（配列番号１０）のＣＤＲ３配列を有するヒトα鎖可変ドメインを含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはＣＡＳＳＱＤＳＹＮＥＱＦＦ（配列番号１１）又はＣＡＳＳＬＡＧＧＹＧＤＴＱＹＦ（配列番号１２）のＣＤＲ３配列を有するヒトβ鎖可変ドメインを含むことが可能である。これらのα及びβ  ＣＤＲ３、可変ドメイン並びに／又は鎖配列を含むＴＣＲは、メソセリン（ＭＳＬＮ）ペプチド−ＨＬＡ複合体に結合する。特定の実施形態では、これらのα及びβ  ＣＤＲ３、可変ドメイン並びに／又は鎖配列を含むＴＣＲは、ＳＬＬＦＬＬＦＳＬ（配列番号１３）：ＨＬＡ−Ａ＊２０１複合体又はＶＬＰＬＴＶＡＥＶ（配列番号１４）：ＨＬＡ−Ａ＊２０１複合体に結合する。ＭＳＬＮは、悪性中皮腫並びに膵臓、卵巣及び肺腺癌を含む、多くのヒトがんにおいて高度に発現される腫瘍抗原である。ＭＳＬＮは、その正常な発現が中皮細胞に限られているのでがん免疫療法の魅力的な標的であり、この細胞はそれほど重要ではない。特定の実施形態では、ＭＳＬＮに特異的であるヒトＴＣＲのα及びβ遺伝子はコドン最適化されておりブタテッショウウイルス−１  ２Ａエレメントにより連結されている。ヒトＭＳＬＮに特異的なＴＣＲ配列はＳｔｒｏｍｎｅｓ、ＩＭら、（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ２８（５）：６３８〜６５２頁及び国際公開第２０１７／１１２９４４号に記載されている。
【００６４】
特定の実施形態では、ＴＣＲは、Ｓｔｒｏｍｎｅｓ、ＩＭら、（２０１５）上記に記載されるＬＤＹＡＮＫＭＩ（配列番号１５）のＣＤＲ３配列を有するマウスＶα４鎖及びＰＱＤＴＱＹＦＦ（配列番号１６）のＣＤＲ３配列を有するＶβ９鎖を含むことが可能である。マウスＴＣＲは、ＴＣＲ１０４５と呼ばれるが、組換えマウスＭｓｌｎを発現するように操作されＭｓｌｎ４０６〜４１４エピトープに特異的であるＭｓｌｎ−／−マウスのＴ細胞クローンに由来していた。ＴＣＲ１０４５はＭｓｌｎ４０６〜４１４ペプチド（ＧＱＫＭＮＡＱＡＩ、配列番号１７）に高親和性で結合する。特定の実施形態では、ＴＣＲ１０４５のＶα４及びＶβ９遺伝子はコドン最適化されておりブタテッショウウイルス−１  ２Ａエレメントにより連結されている。
【００６５】
特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００６６】
【化７】
2020504133.tif 000009
を含むことが可能である。このαとβ鎖組合せはＨＩＶ  ＧａｇペプチドＳＬ９（ＳＬＹＮＴＶＡＴＬ（配列番号２０））に結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞に抗ＨＩＶ活性を与える（例えば、Ｖａｒｅｌａ−Ｒｏｈｅｎａ、ら、２００８年．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．１４（１２）：１３９０〜１３９５頁参照）。
【００６７】
特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００６８】
【化８】
2020504133.tif 000010
を含むことが可能である。このαとβ鎖組合せはＥＢＶ抗原に結合する（例えば、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ、ら、２０１３年．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９：１５４２〜１５４６頁参照）。
【００６９】
特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００７０】
【化９】
2020504133.tif 000011
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００７１】
【化１０】
2020504133.tif 000012
を含むことが可能である。これらのαとβ鎖組合せはヒトＷｉｌｍｓ腫瘍タンパク質１（ＷＴ−１）抗原に結合する（例えば、米国特許出願公開第２０１６／００８３４４９号参照）。ＷＴ１は、急性骨髄性白血病及び非小細胞肺がん、乳がん、膵臓がん、卵巣がん並びに結腸直腸がんを含むいくつかのがんにおいて過剰発現される細胞内タンパク質である。ＷＴ−１エピトープに結合するＴＣＲで操作されたＴ細胞が、再発急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、又は慢性骨髄性白血病の高いリスクを抱え、以前ドナー幹細胞移植で治療を受けた患者に対する臨床試験で調べられている（トライアル番号ＮＣＴ０１６４０３０１）。
【００７２】
特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００７３】
【化１１】
2020504133.tif 000013
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００７４】
【化１２】
2020504133.tif 000014
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００７５】
【化１３】
2020504133.tif 000015
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００７６】
【化１４】
2020504133.tif 000016
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００７７】
【化１５】
2020504133.tif 000017
を含むことが可能である。これらのαとβ鎖組合せはＭＡＧＥ  Ａ３／ＭＡＧＥ  Ａ６抗原に結合する（例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２４６９５９号参照）。ＭＡＧＥ  Ａタンパク質は、その発現が多くのがんで上方調節されている精巣特異的Ｅ３ユビキチンリガーゼ成分である。ＭＡＧＥ  Ａ３及びＡ６は、膀胱がん、食道がん、頭頚部がん、肺がん及び卵巣がんを含む一般的な固形腫瘍で頻繁に過剰発現されている。ＭＡＧＥ  Ａ３／ＭＡＧＥ  Ａ６抗原に結合するＴＣＲで操作されたＴ細胞が、ＨＬＡ−ＤＰＢ１＊０４：０１陽性であり、その腫瘍がＭＡＧＥ  Ａ３及び／又はＭＡＧＥ  Ａ６陽性である患者に対する臨床試験で調べられている（トライアル番号ＮＣＴ０３１３９３７０）。
【００７８】
特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００７９】
【化１６】
2020504133.tif 000018
を含むことが可能である。特定の実施形態では、ＴＣＲはα鎖：
【００８０】
【化１７】
2020504133.tif 000019
を含むことが可能である。これらのαとβ鎖組合せはＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号３８）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合する。ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号３８）ペプチドはがん／精巣ファミリーのヒト腫瘍抗原ＮＹ−ＥＳＯ−１に由来する。ＮＹ−ＥＳＯ−１は、がんワクチン又は免疫療法の考えられる標的として研究中である。ＮＹ−ＥＳＯ−１は多くの予後不良メラノーマにおいて高度に発現される。ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号３８）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲで操作されたＴ細胞が、卵巣がんを抱えた患者の臨床試験で調べられている（トライアル番号ＮＣＴ０１５６７８９１）。Ｒｏｂｂｉｎｓ  ＰＦら、（２００８）Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８０（９）：６１１６〜６１３１頁及び米国特許第８，００８，４３８号は、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（配列番号３８）−ＨＬＡ−Ａ＊０２０１複合体に結合するＴＣＲ  α及びβ鎖配列を開示している。
【００８１】
特定の実施形態では、ＴＣＲは国際公開第２０１１０３９５０７号に記載されているＴＣＲのような操作されたＴＣＲを含むことが可能である。そのようなＴＣＲは内部自己開裂ブタテッショウウイルス  ２Ａ配列により分離されているα鎖とβ鎖を含み、ヒトヘルペスウイルス−５、又はサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）抗原に結合する。一例は抗ＣＭＶ人工ＴＣＲ：
【００８２】
【化１８】
2020504133.tif 000020
を含む。
【００８３】
ＩＩ．ＴＣＲをコードするポリヌクレオチド（ＰＮ）。ＰＮは、Ｔ細胞中に導入されると、ＰＮがコードされたＴＣＲの発現を引き起こすように、抗原／ＭＨＣ複合体に結合するＴＣＲをコードする核酸配列を含む核酸分子を記述している。投与されたＰＮは遺伝子を含むことが可能である。用語「遺伝子」とは、本明細書に記載されるシステム又は方法において使用するためのＴＣＲをコードする核酸配列のことである。「遺伝子」の定義は、種々の配列多形性、突然変異及び／又はバリアントを含み、そのような変更はコードされたＴＣＲの機能に著しい影響を与えない。用語「遺伝子」は、コード配列だけではなく、プロモーター、エンハンサー及び終止領域などの調節領域も含んでいてよい。この用語は、ｍＲＮＡ転写物からスプライスされたすべてのイントロン及び他のＤＮＡ配列を、別のスプライス部位から生じるバリアントと共に含むことがさらに可能である。ＴＣＲをコードする核酸配列には、ＴＣＲの発現を指示するＤＮＡ又はＲＮＡが可能である。これらの核酸配列は、ＲＮＡに転写されるＤＮＡ鎖配列でもタンパク質に翻訳されるＲＮＡ配列でもよい。核酸配列は、完全長核酸配列並びに完全長タンパク質に由来する非完全長配列の両方を含む。配列は、導入されて特定のＴ細胞でコドン選択を与えることがある天然の配列（単数又は複数）の縮重コドンも含むことが可能である。ＴＣＲをコードする多くの遺伝子配列が一般に公開されているデータベース及び出版物で入手可能である。当業者であれば、目的のＴＣＲの同定に基づいてそのような遺伝子配列を引き出すことも可能である。
【００８４】
「コードする」とは、プラスミド、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなどのＰＮ中のヌクレオチドの配列の特性のことである。ＰＮは、例えば、遺伝子により作成されるｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞又は他の生物系においてタンパク質を産生するならば、タンパク質をコードすることが可能である。
【００８５】
特定の実施形態では、ＰＮは、ＴＣＲを発現するための遺伝子を含むプラスミド、ｃＤＮＡ又はｍＲＮＡを含む。適切なプラスミドは、遺伝子をＴ細胞に移入するのに使用することが可能な標準プラスミドベクター及びミニサークルプラスミドを含む。ＰＮ（例えば、ミニサークルプラスミド）は遺伝物質（例えば、抗原に特異的なＴＣＲをコードする配列）のＴ細胞への移入を促進するいかなる追加の配列情報でもさらに含むことが可能である。例えば、ＰＮは、一般的プロモーター、組織特異的プロモーター、細胞特異的プロモーター及び／又は核若しくは細胞質に特異的なプロモーターのようなプロモーターを含むことが可能である。プロモーター及びプラスミド（例えば、ミニサークルプラスミド）は当技術分野では一般的に周知であり、従来の技法を使用して調製することが可能である。
【００８６】
さらに本明細書に記載されるように、ＰＮを使用してＴ細胞をトランスフェクトすることが可能である。他の方法で明記されていなければ、用語トランスフェクトする（ｔｒａｎｓｆｅｃｔ）、トランスフェクトされた（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ）、又はトランスフェクトする（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎｇ）は、Ｔ細胞中での外来性ＰＮ又はそこから発現されたポリペプチドの存在を示すのに使用することが可能である。当技術分野では公知であるように、いくつかのベクターはリンパ球へのＰＮの移入を媒介することができることが公知である。
【００８７】
特定の実施形態では、トランスフェクトされたＰＮは、オフターゲットバイスタンダー細胞に影響を与えずにＴ細胞の抗原特異性を編集する（すなわち、本明細書に記載される選択的送達を提供する）ことが可能である。例えば、送達された遺伝子はＴ細胞特異的プロモーターの制御下で発現させることが可能である。特定の実施形態では、そのようなプロモーターは非ウイルス遺伝子移入のための高次コイルのＤＮＡ分子の一形態であるミニサークルプラスミドに含めることが可能であり、このプラスミドには細菌の複製起点も抗生物質耐性マーカーもない。したがって、このプラスミドは、遺伝子治療で現在使用されている標準プラスミドよりも小さく潜在的に安全である。
【００８８】
例えば、急速に分裂するＴ細胞において移入されたＴＣＲ遺伝子の発現を維持するため、スキャフォールド／マトリックス結合領域をＰＮ中に挿入することも可能である。Ｓ／ＭＡＲエレメントに連結されている発現カセットを含むＰＮは、分裂中の細胞において染色体外的に自己複製することが可能である。特定の実施形態では、ＰｉｇｇｙＢａｃ又はＳｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ含有プラスミドを使用してＴＣＲ遺伝子をトランスフェクトされた細胞のゲノム中に安定的に組み込むことも可能である。発現を維持する他の選択肢は、ホモサピエンストランスポゾン由来Ｂｕｓｔｅｒ１トランスポサーゼ様タンパク質遺伝子；ヒト内在性レトロウイルスＨプロテアーゼ／インテグラーゼ由来ＯＲＦ１；ホモサピエンスＣａｓ−Ｂｒ−Ｍ（マウス）エコトロピックレトロウイルス形質転換配列；ホモサピエンス内在性レトロウイルス配列Ｋ；ホモサピエンス内在性レトロウイルスファミリーＷ；ホモサピエンスＬＩＮＥ−１タイプトランスポサーゼドメイン；及びホモサピエンスｐｏｇｏ転位因子を含む。特定の実施形態は機能亢進性ｉＰＢ７トランスポサーゼを利用することが可能である。
【００８９】
送達されるＰＮがｍＲＮＡである場合、骨格改変はｍＲＮＡの安定性を高め、早すぎる開裂に抵抗性にすることが可能である。
【００９０】
特定の実施形態では、自己複製ｍＲＮＡ構築物を使用すれば、宿主ゲノム組み込みを必要とせずに持続的なトランス遺伝子発現を確実にすることが可能である。自己複製ＲＮＡとは、翻訳すると、シスコード化遺伝子が元の鋳型分子から新たなＲＮＡコピーを作成できるように、ＲＮＡ複製機構をコードするＲＮＡ分子を指すことが可能である。自己複製ＲＮＡは、アルファウイルス及びペスチウイルスなどのＲＮＡウイルス由来の配列を使用して設計することが可能である。ｍＲＮＡの送達のための自己複製ＲＮＡ分子を設計し使用する技法は、例えば、国際公開第２０１１／００５７９９号、国際公開第２００９／１４６８６７号、及びＧｅａｌｌ、Ａら  ２０１２年．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１０９（３６）：１４６０４〜１４６０９頁に見出すことができる。
【００９１】
特定の実施形態では、ＰＮは合成ｍＲＮＡを含む。特定の実施形態では、合成ｍＲＮＡは５’−キャッピングを使用して細胞内安定性が高まるように設計される。複数の異なる５’−キャップ構造体を使用すれば、合成ｍＲＮＡ分子の５’−キャップを作成することが可能である。例えば、アンチリバースキャップアナログ（ＡＲＣＡ）キャップは、１つのグアニンがＮ７メチル基並びに３’−Ｏ−メチル基を含有する５’−５’三リン酸グアニン−グアニン結合を含有する。合成ｍＲＮＡ分子は、５’−キャップ構造体を作成する原因となる酵素を使用して転写後にキャップしてもよい。例えば、組換えワクシニアウイルスキャッピング酵素及び組換え２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ酵素は、ｍＲＮＡの最も５’にあるヌクレオチドとグアニンヌクレオチドの間にキャノニカル５’−５’三リン酸結合を作り出すことが可能であり、そこではグアニンはＮ７メチル化を含有し、最終５’−ヌクレオチドはＣａｐ１構造を生み出す２’−Ｏ−メチルを含有する。これにより、さらに高い翻訳能力及び細胞安定性を有するキャップが得られ、細胞炎症誘発性サイトカインの活性化が低下する。
【００９２】
合成ｍＲＮＡ又は他のＰＮは環状にしてもよい。ＰＮは環化される又はコンカテマー化されて、翻訳能力のある分子を生み出し、ポリＡ結合タンパク質と５’−末端結合タンパク質の間の相互作用を支援してもよい。環状化又はコンカテマー化の機構は少なくとも３つの異なる経路：１）化学的、２）酵素的、及び３）リボザイム触媒される、を通じて起こることがある。新たに形成された５’−／３’−結合は分子内でも分子間でもよい。
【００９３】
第１の経路では、ＰＮの５’−末端及び３’−末端は、互いに近づくと、分子の５’−末端と３’−末端の間で新たな共有結合を形成する化学的反応基を含有することができる。有機溶媒中で合成ＰＮ分子の３’−末端で３’−アミノ終結ヌクレオチドが５’−ＮＨＳ−エステル部分に求核攻撃を受けて新たな５’−／３’−アミド結合を形成するように、５’−末端はＮＨＳ−エステル反応基を含有していてもよく、３’−末端は３’−アミノ終結ヌクレオチドを含有していてもよい。
【００９４】
第２の経路では、Ｔ４  ＲＮＡリガーゼを使用して、５’−リン酸化ＰＮを核酸の３’−ヒドロキシル基に酵素的に連結させて新たなホスホロジエステル結合を形成してもよい。例での反応では、１μｇの核酸分子を、１〜１０ユニットのＴ４  ＲＮＡリガーゼ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｉｐｓｗｉｃｈ、Ｍａｓｓ．）と一緒に製造業者のプロトコルに従って３７℃で１時間インキュベートすることが可能である。ライゲーション反応は、５’−及び３’−領域両方と近位で塩基対合して酵素的ライゲーション反応を支援することができるスプリットオリゴヌクレオチドの存在下で起きてもよい。
【００９５】
第３の経路では、ｃＤＮＡ鋳型の５’−又は３’−末端は、インビトロでの転写中、結果としての核酸分子が核酸分子の５’−末端を核酸分子の３’−末端にライゲートすることができる活性なリボザイム配列を含有することができるように、リガーゼリボザイム配列をコードする。リガーゼリボザイムは、グループＩイントロン、グループＩイントロン、デルタ型肝炎ウイルス、ヘアピンリボザイム由来でもよく、又はＳＥＬＥＸ（試験管内進化法）により選択してもよい。リボザイムリガーゼ反応は０〜３７℃の温度で１〜２４時間かかる場合がある。
【００９６】
特定の実施形態では、ＰＮは、目的の抗原／ＭＨＣ複合体に特異的に結合するＴＣＲ  α及びβ鎖をコードする、すなわち、ＰＮはＴＣＲ  α及びβ鎖可変領域をコードする。特定の実施形態では、ＰＮは、ＴＣＲ定常ドメイン、膜貫通ドメイン及び／又は細胞質側テイルをさらにコードすることが可能である。ＴＣＲのこれらの部分の配列及び構造は当業者には公知であり、公開データベースで容易にアクセスすることが可能である。一例として、配列番号４０はＣＤ４膜貫通ドメインをコードする代表的遺伝子配列を提供する（図５参照）。特定の実施形態では、ＰＮはインバリアントＣＤ３鎖（すなわち、γ、Δ、Σ、Ｚ、Ｈ）及び／又はＩＴＡＭモチーフ（例えば、ＣＤ３−Ｚ、ＦｅＲ−γ、ＣＤ３−γ、ＣＤ３−Δ、ＣＤ３−Σ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ及び／又はＣＤ６６ｄに由来する）をコードすることが可能である。
【００９７】
特定の実施形態では、ＰＮはスペーサー領域をコードする配列を含むことが可能である。スペーサー配列の長さは、標的認識、結合及びＴ細胞活性化を最適化するように個々の抗原／ＭＨＣ複合体についてカスタマイズすることが可能である。特定の実施形態では、スペーサー長は、抗原／ＭＨＣ複合体エピトープの位置、エピトープに対するＴＣＲの親和性並びに／又は抗原／ＭＨＣ複合体認識に応答してインビトロ及び／若しくはインビボで増殖するＴＣＲを発現しているＴ細胞の能力に基づいて選択することが可能である。
【００９８】
典型的には、スペーサー領域は、ＴＣＲのα及びβ鎖とＴＣＲの膜貫通ドメインの間に見出される。スペーサー領域はα及びβ鎖の柔軟性を提供することが可能であり、遺伝的に改変されたＴ細胞において高発現レベルを可能にする。特定の実施形態では、スペーサー領域は、少なくとも１０〜２５０アミノ酸、少なくとも１０〜２００アミノ酸、少なくとも１０〜１５０アミノ酸、少なくとも１０〜１００アミノ酸、少なくとも１０〜５０アミノ酸、又は少なくとも１０〜２５アミノ酸及び収載されている範囲のいずれかの終点間のいかなる整数でも含むことが可能である。特定の実施形態では、スペーサー領域は、２５０アミノ酸若しくはそれよりも少ない；２００アミノ酸若しくはそれよりも少ない；１５０アミノ酸若しくはそれよりも少ない；１００アミノ酸若しくはそれよりも少ない；５０アミノ酸若しくはそれよりも少ない；４０アミノ酸若しくはそれよりも少ない；３０アミノ酸若しくはそれよりも少ない；２０アミノ酸若しくはそれよりも少ない；又は１０アミノ酸若しくはそれよりも少ない、アミノ酸を有する。
【００９９】
特定の実施形態では、スペーサー領域は、免疫グロブリン様分子のヒンジ領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３若しくはヒトＩｇＧ４由来のヒンジ領域のすべて又は一部に由来することが可能である。特定の実施形態では、ヒンジ領域のすべて又は一部は、免疫グロブリンの定常領域の１つ以上のドメインと組み合わせることが可能である。例えば、ヒンジ領域の一部は、ＣＨ２若しくはＣＨ３ドメイン又はそのバリアントのすべて又は一部と組み合わせることが可能である。
【０１００】
特定の実施形態では、Ｔ細胞へのＰＮの導入は、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、遺伝子配列を含有するウイルス又はバクテリオファージベクターを用いた感染、受容体媒介エンドサイトーシス、細胞融合、染色体媒介遺伝子移入、微小核体媒介遺伝子移入、スフェロプラスト融合、等を含む、当技術分野で公知のいかなる方法でも実行することが可能である。細胞中への外来遺伝子の導入のためには数多くの技法が当技術分野では公知であり（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒ  ａｎｄ  Ｂｅｈｒ、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ、２１７、５９９〜６１８頁（１９９３）；Ｃｏｈｅｎら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ、２１７、６１８〜６４４頁（１９９３）；Ｃｌｉｎｅ、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ、２９、６９〜９２頁（１９８５）参照）、Ｔ細胞の必要な発生及び生理的機能が破壊されないという条件で、本開示に従って使用してもよい。特定の実施形態では、技法により、遺伝子が細胞によって発現可能であり好ましくは遺伝性でありその細胞子孫により発現可能であるように、Ｔ細胞への遺伝子の安定な移入が提供される。特定の実施形態では、技法により、細胞内での遺伝子の一時的な発現が提供される。Ｔ細胞を遺伝的に改変するのに使用することが可能な組換えＤＮＡ技法の当技術分野で一般的に公知の方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、（編）、１９９３年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ＮＹ；及びＫｒｉｅｇｌｅｒ、１９９０年、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹに記載されている。
【０１０１】
ＩＩＩ．ナノ粒子（ＮＰ）。特定の実施形態では、ＰＮはナノ粒子（ＮＰ）を使用してＴ細胞に投与される。特定のＮＰ実施形態は正電荷担体を含む。担体は、ＰＮを濃縮し酵素分解から保護するように機能する。担体として使用するのに特に有用な物質は、正電荷脂質及び／又はポリ（β−アミノエステル）を含むポリマーを含む。
【０１０２】
正電荷脂質の追加の例は、ジパルミトイルホスファチジン酸又はジステアロイルホスファチジン酸とヒドロキシエチレンジアミンとのエステルのようなホスファチジン酸とアミノアルコールとのエステルを含む。正電荷脂質のさらに詳細な例は、３β−［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ヂメチルアミノエチル）カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−ｃｈｏｌ）；Ｎ，Ｎ’−ジメチル−Ｎ，Ｎ’−ジオクトアシルアンモニウムブロマイド（ＤＤＡＢ）；Ｎ，Ｎ’−ジメチル−Ｎ，Ｎ’−ジオクトアシルアンモニウムクロライド（ＤＤＡＣ）；１，２−ジオレオイルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムクロライド（ＤＯＲＩ）；１，２−ジオレオイルオキシ−３−［トリメチルアンモニオ］−プロパン（ＤＯＴＡＰ）；Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）；ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）；１，２−ジオクタデシルオキシ−３−［トリメチルアンモニオ］−プロパン（ＤＳＴＡＰ）；及び、例えば、Ｍａｒｔｉｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  ２００５年、１１、３７５〜３９４頁に記載されているカチオン性脂質を含む。
【０１０３】
本開示内で担体として使用可能な正電荷ポリマーの例は、ポリアミン；ポリ有機アミン（例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリエチレンイミンセルロース）；ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）；ポリアミノ酸（例えば、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリアルギニン）；多糖（例えば、セルロース、デキストラン、ＤＥＡＥデキストラン、デンプン）；スペルミン、スペルミジン、ポリ（ビニルベンジルトリアルキルアンモニウム）、ポリ（４−ビニル−Ｎ−アルキル−ピリジニウム）、ポリ（アクリロイル−トリアルキルアンモニウム）、及びＴａｔタンパク質を含む。
【０１０４】
前記を限定せずに、本明細書に開示される特定の実施形態は、多孔質網状組織を形成することができるいかなる物質からでも構築される多孔質ＮＰも利用することが可能である。例示的物質は、生体適合性ポリマー、金属、遷移金属及びメタロイドを含む。例示的生体適合性ポリマーは、寒天、アガロース、アルギネート、アルギネート／カルシウムホスフェートセメント（ＣＰＣ）、β−ガラクトシダーゼ（β−ＧＡＬ）、（１，２，３，４，６−ペンタアセチル  α−Ｄ−ガラクトース）、セルロース、キチン、キトサン、コラーゲン、エラスチン、ゼラチン、ヒアルロン酸コラーゲン、ヒドロキシアパタイト、ポリ（３−ヒドロキシブチレート−コ−３−ヒドロキシ−ヘキサン酸）（ＰＨＢＨＨｘ）、ポリ（ラクチド）、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、絹、ダイズタンパク質及びダイズタンパク質分離物を単独で又は他の任意のポリマー組成物と組み合わせて、いかなる濃度でも及びいかなる比でも含む。種々のグレードを使用して異なるポリマータイプを異なる比で混ぜ合わせると、寄与しているポリマーのそれぞれから借りる特徴を得ることができる。種々の末端基の化学的特徴も取り入れることが可能である。
【０１０５】
特定の実施形態では、ＮＰはカプセル化ＰＮを遮蔽しオフターゲット結合を低減する又は防ぐコーティングを含む。オフターゲット結合は、ＮＰの表面電荷を中性又は負に下げることにより低減する又は防がれる。コーティングは、中性又は負電荷ポリマー及び／又はリポソームベースのコーティングを含むことが可能である。特定の実施形態では、コーティングは、カプセル化核酸を選択された細胞中に放出する前に環境に暴露されるのを妨げるのに十分な親水性及び／又は電荷的に中性の親水性ポリマーの高密度表面コーティングである。特定の実施形態では、コーティングは、ＮＰの表面の少なくとも８０％又は少なくとも９０％を覆う。特定の実施形態では、コーティングは、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）を含む。
【０１０６】
コーティングとして使用可能な追加の電荷的に中性のポリマーの例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ポリ（プロピレングリコール）；及びポリアルキレンオキシドコポリマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）、ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐ．、Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ、ＮＪ）を含む。
【０１０７】
電荷的に中性のポリマーは双性イオン性ポリマーも含む。双性イオン性とは、正と負の電荷の両方を有しつつ全体的には電荷的中性という特性のことである。双性イオン性ポリマーは細胞とタンパク質の付着に抵抗する細胞膜の領域のような振る舞いをすることが可能である。
【０１０８】
双性イオン性ポリマーは、双性イオン性基を有するペンダント基（すなわち、ポリマー骨格から吊り下がっている基）を含む双性イオン性構成単位を含む。例示的な双性イオン性ペンダント基はカルボキシベタイン基（例えば、−Ｒａ−Ｎ＋（Ｒｂ）（Ｒｃ）−Ｒｄ−ＣＯ２−、Ｒａはポリマー骨格をカルボキシベタイン基のカチオン性窒素中心に共有結合的に連結させるリンカー基であり、Ｒｂ及びＲｃは窒素置換基であり、Ｒｄはカチオン性窒素中心をカルボキシベタイン基のカルボキシ基に共有結合的に連結させるリンカー基である）を含む。
【０１０９】
負電荷ポリマーの例は、アルギン酸；カルボン酸多糖；カルボキシメチルセルロース；カルボキシメチルセルロースシステイン；カラゲナン（例えば、Ｇｅｌｃａｒｉｎ（登録商標）２０９、Ｇｅｌｃａｒｉｎ（登録商標）３７９）；コンドロイチン硫酸；グリコサミノグリカン；ムコ多糖；負電荷多糖（例えば、デキストラン硫酸）；ポリ（アクリル酸）；ポリ（Ｄ−アスパラギン酸）；ポリ（Ｌ−アスパラギン酸）；ポリ（Ｌ−アスパラギン酸）ナトリウム塩；ポリ（Ｄ−グルタミン酸）；ポリ（Ｌ−グルタミン酸）；ポリ（Ｌ−グルタミン酸）ナトリウム塩；ポリ（メタクリル酸）；アルギン酸ナトリウム（例えば、Ｐｒｏｔａｎａｌ（登録商標）ＬＦ  １２０Ｍ、Ｐｒｏｔａｎａｌ（登録商標）ＬＦ  ２００Ｍ、Ｐｒｏｔａｎａｌ（登録商標）ＬＦ  ２００Ｄ）；カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）；硫酸化多糖（ヘパリン、アガロペクチン）；ペクチン、ゼラチン及びヒアルロン酸を含む。
【０１１０】
特定の実施形態では、本明細書で開示されるポリマーは「星形ポリマー」を含むことが可能であり、これは２つ以上のポリマー分岐がコアから伸びている分岐状ポリマーのことである。コアは、そこから分岐が重合により伸びることが可能である２つ以上の官能基を有する原子の群である。
【０１１１】
特定の実施形態では、分岐は双性イオン性又は負電荷ポリマー分岐である。星ポリマーでは、分岐前駆体は、加水分解、紫外線照射又は熱を介して双性イオン性又は負電荷ポリマーに変換することが可能である。ポリマーは、原子移動ラジカル重合（ＡＴＲＰ）、可逆的付加開裂連鎖移動重合（ＲＡＦＴ）、光重合、開環重合（ＲＯＰ）、縮合、マイケル付加、分岐生成／伸長反応又は他の反応を含む、不飽和単量体の重合に効果的ないかなる重合法によって得てもよい。
【０１１２】
リポソームは、少なくとも１つの同心円状脂質二重層を含む微小な小胞である。脂質を形成する小胞は、最終複合体の流動性又は強剛性の指定された程度を達成するように選択される。特定の実施形態では、リポソームは粒子を取り囲む外層である脂質組成物を提供する。
【０１１３】
リポソームは、中性（コレステロール）又は双極性でも可能であり、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）及びスフィンゴミエリン（ＳＭ）のようなリン脂質並びにジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む他のタイプの双極性脂質を含み、炭化水素鎖長は１４〜２２の範囲で飽和している、又は１つ以上の二重Ｃ＝Ｃ結合を有する。安定なリポソームを、単独で又は他の脂質成分と組み合わせて作成することができる脂質の例は、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、セファリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸、セレブロシド、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）及びジオレオイルホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）のようなリン脂質である。リポソーム中に組み込まれることが可能な追加のリン無含有脂質は、ステアリルアミン、ドデシルアミン、ヘキサデシルアミン、ミリスチン酸イソプロピル、トリエタノールアミン−ラウリルサルフェート、アルキルアリルサルフェート、アセチルパルミテート、グリセロールリシノレエート、ヘキサデシルステレエート、両性アクリルポリマー、ポリエトキシル化脂肪酸アミド、ＤＤＡＢ、ジオクタデシルジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＭＡ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ＤＯＰＧ、及びジセチルホスフェートを含む。特定の実施形態では、本明細書に開示されるリポソームを作成するのに使用される脂質は、コレステロール、水素化ダイズホスファチジルコリン（ＨＳＰＣ）及び誘導体化小胞形成脂質ＰＥＧ−ＤＳＰＥを含む。
【０１１４】
リポソームを形成する方法は、例えば、米国特許第４，２２９，３６０号、米国特許第４，２２４，１７９号、米国特許第４，２４１，０４６号、米国特許第４，７３７，３２３号、米国特許第４，０７８，０５２号、米国特許第４，２３５，８７１号、米国特許第４，５０１，７２８号及び米国特許第４，８３７，０２８号、並びにＳｚｏｋａら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７頁（１９８０）及びＨｏｐｅら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐ．４０：８９頁（１９８６）に記載されている。
【０１１５】
ＮＰは、楕円体、立方状、ピラミッド形、長方形、円柱状、ドーナツ形及び同類のものを含む、種々の異なる形状が可能である。ＰＮは種々の方法でＮＰ中に含めることが可能である。例えば、ＰＮはＮＰ中にカプセル化することが可能である。他の態様では、ＰＮは、ＮＰの表面に又は表面のすぐ下の近傍に会合させる（例えば、共有結合的に及び／又は非共有結合的に）ことが可能である。特定の実施形態では、ＰＮはＮＰ中に組み入れる、例えば、ＮＰの材料中に組み込むことが可能である。例えば、ＰＮはポリマーＮＰのポリマーマトリックス中に組み入れることが可能である。当業者であれば、細胞へのＰＮの送達を可能にするようにＰＮを運ぶ種々の方法を認識する。
【０１１６】
ＮＰのサイズは、広い範囲にわたり変動することが可能であり、異なる方法で測定することが可能である。例えば、ＮＰは最小寸法１００ｎｍを有することが可能である。ＮＰは、５００ｎｍに等しい若しくはそれ未満、１５０ｎｍ未満、１００ｎｍ未満、９０ｎｍ未満、８０ｎｍ未満、７０ｎｍ未満、６０ｎｍ未満、５０ｎｍ未満、４０ｎｍ未満、３０ｎｍ未満、２０ｎｍ未満、又は１０ｎｍ未満の最小寸法を有することも可能である。特定の実施形態では、ＮＰは、５ｎｍ〜５００ｎｍ、１０ｎｍ〜１００ｎｍ、２０ｎｍ〜９０ｎｍ、３０ｎｍ〜８０ｎｍ、４０ｎｍ〜７０ｎｍ、及び４０ｎｍ〜６０ｎｍの範囲に及ぶ最小寸法を有することが可能である。特定の実施形態では、寸法はＮＰ又は被覆ＮＰの直径である。特定の実施形態では、ＮＰの集団は５００ｎｍに等しい若しくはそれ未満、１００ｎｍ未満、９０ｎｍ未満、８０ｎｍ未満、７０ｎｍ未満、６０ｎｍ未満、５０ｎｍ未満、４０ｎｍ未満、３０ｎｍ未満、２０ｎｍ未満、又は１０ｎｍ未満の平均最小寸法を有することが可能である。特定の実施形態では、組成物中のＮＰの集団は、５ｎｍ〜５００ｎｍ、１０ｎｍ〜１００ｎｍ、２０ｎｍ〜９０ｎｍ、３０ｎｍ〜８０ｎｍ、４０ｎｍ〜７０ｎｍ、及び４０ｎｍ〜６０ｎｍの範囲に及ぶ平均直径を有することが可能である。ＮＰの寸法は、例えば動的光散乱及び／又は電子顕微鏡などの従来の技法を使用して決定することが可能である。
【０１１７】
ＩＶ．Ｔ細胞ターゲティング及び送達剤（Ｔ−ＤＡ）。特定の実施形態では、ＮＰは、インビボ又はエクスビボでの選ばれた細胞型へのＰＮの選択的送達を可能にするＴ細胞ターゲティング及び送達剤（Ｔ−ＤＡ）を含む。
【０１１８】
Ｔ−ＤＡは目的のＴ細胞に選択的に結合する。特定の実施形態では、Ｔ−ＤＡは、Ｔ細胞型により発現されるマーカーを標的にすることにより受容体媒介エンドサイトーシスを通じて特定のＴ細胞集団へのＮＰの選択的送達を達成する。例えば、以前示されたように、ＣＤ４＋Ｔ細胞はその表面にＣＤ４タンパク質を発現し、ＣＤ８＋Ｔ細胞はその表面にＣＤ８タンパク質を発現する。
【０１１９】
本明細書で使用される「ナイーブ」Ｔ細胞とは、非ナイーブＴ細胞と比べた場合、ＣＤ６２Ｌ及びＣＤ４５ＲＡを発現しＣＤ４５ＲＯを発現しない非抗原経験Ｔ細胞のことである。特定の実施形態では、ナイーブＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７及びＣＤ４５ＲＡを含む表現型マーカーの発現によりさらに特徴付けることが可能である。Ｔ−ＤＡはＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７及び／又はＣＤ４５ＲＡに結合して、ナイーブＴ細胞へのＰＮの選択的送達を達成することが可能である。
【０１２０】
ＣＤ３はすべての成熟Ｔ細胞上で発現される。したがって、Ｔ−ＤＡはＣＤ３に結合してすべての成熟Ｔ細胞へのＰＮの選択的送達を達成することが可能である。活性化Ｔ細胞は４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）を発現する。したがって、Ｔ−ＤＡは４−１ＢＢに結合して活性化Ｔ細胞へのＰＮの選択的送達を達成することが可能である。ＣＤ５及びトランスフェリン受容体もＴ細胞上で発現され、これらを使用すればＴ細胞へのＰＮの選択的送達を達成することが可能である。
【０１２１】
本明細書で使用される「セントラルメモリー」Ｔ細胞（又は「ＴＣＭ」）とは、ナイーブ細胞と比べた場合、その表面でＣＤ６２Ｌ又はＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＯを発現するがＣＤ４５ＲＡを発現しない又はその発現が減少している抗原経験ＣＴＬのことである。特定の実施形態では、セントラルメモリー細胞は、ナイーブ細胞と比べた場合、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＯ及びＣＤ９５の発現に陽性でありＣＤ４５ＲＡの発現が減少している。Ｔ−ＤＡは、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２５、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＯ及び／又はＣＤ９５に結合してＴＣＭへのポリヌクレオチドの選択的送達を達成することが可能である。
【０１２２】
本明細書で使用される「エフェクターメモリー」Ｔ細胞（又は「ＴＥＭ」）とは、セントラルメモリー細胞と比べた場合、その表面でＣＤ６２Ｌを発現しない又はその発現が減少しており、ナイーブ細胞と比べた場合、ＣＤ４５ＲＡを発現しない又はその発現が減少している抗原経験Ｔ細胞のことである。特定の実施形態では、エフェクターメモリー細胞は、ナイーブ細胞又はセントラルメモリー細胞と比べて、ＣＤ６２Ｌ及びＣＣＲ７の発現に陰性であり、ＣＤ２８及びＣＤ４５ＲＡの発現が変化しやすい。エフェクターＴ細胞は、メモリー又はナイーブＴ細胞と比べて、グランザイムＢ及びパーフォリンに陽性である。Ｔ−ＤＡはグランザイムＢ及び／又はパーフォリンに結合してＴＥＭへのＰＮの選択的送達を達成することが可能である。
【０１２３】
リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）はすべてのＴ細胞、Ｂ細胞及び単球／マクロファージにより発現される。したがって、Ｔ−ＤＡはＬＦＡ−１に結合して、Ｔ細胞、Ｂ細胞及び単球／マクロファージへのＰＮの選択的送達を達成することが可能である。
【０１２４】
「選択的送達」とは、ＰＮが送達され１つ以上の選択された細胞集団により発現されることを意味する。特定の実施形態では、選択的送達は選択されたＴ細胞集団に限定されている。特定の実施形態では、投与されたＰＮの少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％は送達され及び／又はＴ細胞集団により発現される。特定の実施形態では、選択的送達は、選択されていない細胞が送達されたＰＮを発現しないことを保証する。例えば、ＰＮがＴＣＲをコードしている場合、Ｔ細胞のみがＴＣＲ発現に必要なＺ鎖を有するために選択性を保証することが可能である。選択的送達は、選択されていない細胞中へのＰＮ取り込みがないことに基づいている又はＰＮがプラスミドＤＮＡを含む場合ＰＮ配列内の特異的プロモーターの存在に基づいていることも可能である。例えば、プラスミドＤＮＡは、Ｔ細胞のための末梢ｌｃｋプロモーターのようなＴ細胞特異的プロモーターを含むことが可能である。特定の実施形態では、標的Ｔ細胞へのＴ−ＤＡの選択的結合に起因して選択的送達が観察される。
【０１２５】
示されるように、Ｔ−ＤＡは、Ｔ細胞上に見出されるモチーフに対する結合ドメインを含むことが可能である。Ｔ−ＤＡは、選択されたＴ細胞中への選択的取り込みを可能にするいかなる選択的結合機構でも含むことが可能である。特定の実施形態では、Ｔ−ＤＡは、Ｔ細胞受容体モチーフ；Ｔ細胞α鎖；Ｔ細胞β鎖；ＣＣＲ７；ＣＤ３；ＣＤ４；ＣＤ８；ＣＤ２８；ＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ６２Ｌ；ＣＤ１２７；ＬＦＡ−１；及びその組合せに対する結合ドメインを含む。
【０１２６】
特定の実施形態では、結合ドメインは、細胞マーカーリガンド、受容体リガンド、抗体、ペプチド、ペプチドアプタマー、核酸、核酸アプタマー、スピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ）又はこの組合せを含む。Ｔ−ＤＡという文脈内では、結合ドメインは、別の物質に結合してエンドサイトーシスを媒介することができる複合体を形成するいかなる物質でも含む。
【０１２７】
「抗体」は結合ドメインの一例であり、全抗体又は抗体の結合断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ及び一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）若しくは選択された細胞により発現されるモチーフに特異的に結合する免疫グロブリンの任意の生物学的に効果的な断片を含む。抗体又は抗原結合断片は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ミニボディ及び線形抗体のすべて又は一部を含む。
【０１２８】
ヒト起源又はヒト化抗体由来の抗体はヒトでの免疫原性が低下している又はなく、非ヒト抗体と比べて非免疫原性エピトープの数が少ない。抗体及びその断片は一般的に、ヒト対象における抗原性のレベルが低い又はないように選択される。
【０１２９】
Ｔ細胞により発現されるモチーフに特異的に結合する抗体は、モノクローナル抗体を得る方法、ファージディスプレイの方法、ヒト若しくはヒト化抗体を産生する方法又は当技術分野の当業者には公知である抗体を産生するように操作されたトランスジェニック動物若しくは植物を使用する方法（例えば、米国特許第６，２９１，１６１号及び米国特許第６，２９１，１５８号参照）を使用して調製することが可能である。部分的な又は完全な合成抗体のファージディスプレイライブラリーは入手可能であり、Ｔ細胞モチーフに結合することが可能な抗体又はその断片を求めてスクリーニングすることが可能である。例えば、結合ドメインは、目的の標的に特異的に結合するＦａｂ断片を求めてＦａｂファージライブラリーをスクリーニングすることにより同定してもよい（Ｈｏｅｔら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：３４４頁、２００５年参照）。ヒト抗体のファージディスプレイライブラリーも入手可能である。さらに、簡便な系（例えば、マウス、ＨｕＭＡｂマウス（登録商標）、ＴＣマウス（商標）、ＫＭ−マウス（登録商標）、ラマ、ニワトリ、ラット、ハムスター、ウサギ、等）で免疫原として目的の標的を使用するハイブリドーマ発生のための従来の戦略を使用すれば、結合ドメインを発生させることが可能である。特定の実施形態では、抗体は選択されたＴ細胞により発現されるモチーフに特異的に結合し、非特異的構成要素又は無関係な標的とは交差反応しない。同定された後は、抗体をコードするアミノ酸配列又はポリヌクレオチド配列を単離する及び／又は決定することが可能である。
【０１３０】
特定の実施形態では、選択されたＴ−ＤＡの結合ドメインは、Ｔ細胞受容体モチーフ抗体；Ｔ細胞α鎖抗体；Ｔ細胞β鎖抗体；ＣＣＲ７抗体；ＣＤ３抗体；ＣＤ４抗体；ＣＤ８抗体；ＣＤ２８抗体；ＣＤ４５ＲＡ抗体；ＣＤ６２Ｌ抗体；ＣＤ１２７抗体；及び／又はＬＦＡ−１抗体を含む。これらの結合ドメインは、前述の抗体のｓｃＦｖ断片からなることも可能である。
【０１３１】
特定の実施形態では、Ｔ−ＤＡはＣＤ４に結合する抗体又は抗体断片を含む。ＣＤ４に結合する抗体の例は、米国特許出願公開第２０１３０１９５８８１号に記載されている、ＴＮＸ−３５５である。ＴＮＸ−３５５抗ＣＤ４抗体は、ＧＹＴＦＴＳＹＶＩＨ（配列番号４１）を含むＣＤＲＨ１配列、ＹＩＮＰＹＮＤＧＴＤＹＤＥＫＦＫＧ（配列番号４２）を含むＣＤＲＨ２配列及びＥＫＤＮＹＡＴＧＡＷＦＡＹ（配列番号４３）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖；並びにＫＳＳＱＳＬＬＹＳＴＮＱＫＮＹＬＡ（配列番号４４）を含むＣＤＲＬ１配列、ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号４５）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＹＹＳＹＲＴ（配列番号４６）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態では、ＣＤ４に結合する抗体は市販の抗体を含む。市販の抗ＣＤ４抗体の例は、ＢｉｏＸＣｅｌｌ（Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）社製のＣｌｏｎｅ  ＧＫ１．５、カタログ番号ＢＥ０００３−１である。
【０１３２】
特定の実施形態では、Ｔ−ＤＡはＣＤ８に結合する抗体又は抗体断片を含む。ＣＤ８に結合する抗体の例はＯＫＴ８であり、この配列は米国特許出願公開第２０１６０１７６９６９号に記載されている。ＯＫＴ８抗ＣＤ８抗体は、ＦＮＩＫＤＴＹ（配列番号４７）を含むＣＤＲＨ１配列、ＤＰＡＮＤＮ（配列番号４８）を含むＣＤＲＨ２配列及びＧＹＧＹＹＶＦＤＨ（配列番号４９）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖；並びにＲＳＩＳＱＹ（配列番号５０）を含むＣＤＲＬ１配列、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５１）を含むＣＤＲＬ２配列及びＨＮＥＮＰＬＴ（配列番号５２）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態では、ＣＤ８に結合する抗体は市販の抗体を含む。市販の抗ＣＤ８抗体の例は、ＢｉｏＸＣｅｌｌ（Ｗｅｓｔ  Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ）社製のＣｌｏｎｅ２．４３、カタログ番号ＢＰ００６１である。
【０１３３】
特定の実施形態では、Ｔ−ＤＡはＣＤ３に結合する抗体又は抗体断片を含む。ＣＤ３に結合する抗体の例はＯＫＴ３であり、この配列は米国特許第６，４９１，９１６号に記載されている。ＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体は、ＲＹＴＭＨ（配列番号５３）を含むＣＤＲＨ１配列、ＹＩＮＰＳＲＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号５４）を含むＣＤＲＨ２配列及びＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号５５）を含むＣＤＲＨ３配列を含む可変重鎖；並びにＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮ（配列番号５６）を含むＣＤＲＬ１配列、ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号５７）を含むＣＤＲＬ２配列及びＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号５８）を含むＣＤＲＬ３配列を含む可変軽鎖を含む。特定の実施形態では、ＣＤ３に結合する抗体は市販の抗体を含む。市販の抗ＣＤ３抗体の例は、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）社製のＣｌｏｎｅ  ＫＴ３、カタログ番号ＭＡ５−１６７６３である。
【０１３４】
特定の実施形態では、結合ドメインＶＨ領域は公知のモノクローナル抗体のＶＨに由来する又はこれに基づくことが可能であり、公知の抗体のＶＨと比べた場合、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）の挿入、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）の欠失、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換又は非保存的アミノ酸置換）又は上記変化の組合せを含有することが可能である。挿入、欠失又は置換は、それぞれのＣＤＲがゼロ変化又は１つ、２つ、又は３つ以下の変化を含むという条件で、及び改変ＶＨ領域を含有する結合ドメインがそれでも野生型結合ドメインに類似する親和性でその標的に特異的に結合することが可能であるという条件で、アミノ末端若しくはカルボキシ末端又はこの領域の両末端を含むＶＨ領域のいかなる場所にあってもよい。
【０１３５】
特定の実施形態では、結合ドメイン中のＶＬ領域は公知のモノクローナル抗体のＶＬに由来する又はこれに基づいており、公知のモノクローナル抗体のＶＬと比べた場合、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）の挿入、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）の欠失、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）又は上記変化の組合せを含有する。挿入、欠失又は置換は、それぞれのＣＤＲがゼロ変化又は１つ、２つ、又は３つ以下の変化を含むという条件で、及び改変ＶＬ領域を含有する結合ドメインがそれでも野生型結合ドメインに類似する親和性でその標的に特異的に結合することが可能であるという条件で、アミノ末端若しくはカルボキシ末端又はこの領域の両末端を含むＶＬ領域のいかなる場所にあってもよい。
【０１３６】
特定の実施形態では、結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）の若しくは重鎖可変領域（ＶＨ）の、又は両方のアミノ酸配列に少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、又は１００％同一である配列を含む又は配列であり、それぞれのＣＤＲは、目的の標的に特異的に結合するモノクローナル抗体又はこの断片若しくは誘導体から、ゼロ変化又は１つ、２つ、若しくは３つ以下の変化を含む。
【０１３７】
ペプチドアプタマーは、両末端でタンパク質スキャフォールドに結合しているペプチドループ（標的タンパク質に特異的である）を含む。この二重の構造上の制約はペプチドアプタマーの結合親和性を抗体に匹敵するレベルまで大いに高める。可変ループ長は典型的には８〜２０アミノ酸（例えば、８〜１２アミノ酸）であり、スキャフォールドは、安定していて、可溶性であり、小さく、及び非毒性であるいかなるタンパク質でもよい（例えば、チオレドキシン−Ａ、ステフィンＡ三重変異体、緑色蛍光タンパク質、エグリンＣ、及び細胞転写因子Ｓｐｌ）。ペプチドアプタマー選択は、酵母ツーハイブリッドシステム（例えば、Ｇａｌ４酵母ツーハイブリッドシステム）又はＬｅｘＡインターラクショントラップシステムなどの異なるシステムを使用して行うことが可能である。
【０１３８】
核酸アプタマーは、Ｏｓｂｏｒｎｅら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１：５〜９頁、１９９７年；及びＣｅｒｃｈｉａら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５２８：１２〜１６頁、２００２年により記載されるように、標的タンパク質又は他の分子に高親和性及び特異性で結合するよう指示する特定の球状構造に折り畳まれることにより機能する一本鎖核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）リガンドである。特定の実施形態では、アプタマーは小さい（１５ＫＤ；又は１５〜８０ヌクレオチド若しくは２０〜５０ヌクレオチド）。アプタマーは一般に、ＳＥＬＥＸ（試験管内進化法；例えば、Ｔｕｅｒｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９：５０５〜５１０頁、１９９０年；Ｇｒｅｅｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ．７５〜８６頁、１９９１年；及びＧｏｌｄら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６４：７６３〜７９７頁、１９９５年参照）と名付けられた手法により１０１４〜１０１５ランダムオリゴヌクレオチド配列からなるライブラリーから単離される。アプタマーを作成するさらなる方法は、例えば、米国特許第６，３４４，３１８号；米国特許第６，３３１，３９８号；米国特許第６，１１０，９００号；米国特許第５，８１７，７８５号；米国特許第５，７５６，２９１号；米国特許第５，６９６，２４９号；米国特許第５，６７０，６３７号；米国特許第５，６３７，４６１号；米国特許第５，５９５，８７７号；米国特許第５，５２７，８９４号；米国特許第５，４９６，９３８号；米国特許第５，４７５，０９６号；及び米国特許第５，２７０，１６号に記載されている。スピーゲルマーは、少なくとも１つのβリボース単位がβ−Ｄ−デオキシリボース又は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−リボース、β−Ｌ−リボースから選択される改変糖単位により置き換えられていることを除くと、核酸アプタマーに類似している。
【０１３９】
結合ドメインは、アフィボディ（ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ）；アフィリン（ａｆｆｉｌｉｎ）（Ｅｂｅｒｓｂａｃｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７２：１７２頁、２００７年）；アルマジロリピートタンパク質（例えば、Ｍａｄｈｕｒａｎｔａｋａｍら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２１：１０１５頁、２０１２年；ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ２００９／０４０３３８参照）；アトリマー（ａｔｒｉｍｅｒｓ）；アビマー（ａｖｉｍｅｒｓ）；Ｃ型レクチンドメイン（Ｚｅｌｅｎｓｋｙ  ａｎｄ  Ｇｒｅａｄｙ、ＦＥＢＳ  Ｊ．２７２：６１７９頁、２００５年；Ｂｅａｖｉｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８９：７５３頁、１９９２年及びＳａｔｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１００：７７７９頁、２００３年）；細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質−４（Ｗｅｉｄｌｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎ．Ｐｒｏｔｅｏ．１０：１５５頁、２０１３年）；設計アンキリンリピートタンパク質（ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ａｎｋｙｒｉｎ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）（ＤＡＲＰｉｎｓ）（Ｂｉｎｚら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３２：４８９頁、２００３年及びＢｉｎｚら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５７５頁、２００４年）；フィブリノーゲンドメイン（例えば、Ｗｅｉｓｅｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：１３８８頁、１９８５年参照）；フィブロネクチン結合ドメイン（アドネクチン又はモノボディ）（Ｒｉｃｈａｒｄｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２６：１４７５頁、２００３年；Ｐａｒｋｅｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌｅｃ．１８：４３５頁、２００５年及びＨａｃｋｅｌら、（２００８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８１：１２３８〜１２５２頁）；フィノマー（ｆｙｎｏｍｅｒｓ）；クニッツドメイン（例えば、米国特許第６，４２３，４９８号参照）；ロイシンリッチリピートドメイン（Ｓｔｕｍｐｐら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３２：４７１頁、２００３年）；リポカリンドメイン（例えば、国際公開第２００６／０９５１６４号、Ｂｅｓｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９６：１８９８頁、１９９９年及びＳｃｈｏｎｆｅｌｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）１０６：８１９８頁、２００９年参照）；ｍＡｂ２又はＦｃａｂ（商標）（例えば、ＰＣＴ特許出願公開番号ＷＯ２００７／０９８９３４；ＷＯ２００６／０７２６２０）；ｓｃＴＣＲ（例えば、Ｌａｋｅら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：７４５頁、１９９９年；Ｍａｙｎａｒｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３０６：５１頁、２００５年；米国特許第８，３６１，７９４号参照）；テトラトリコペプチドリピートドメイン（Ｍａｉｎら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  １１：４９７頁、２００３年及びＣｏｒｔａｊａｒｅｎａら、ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．３：１６１頁、２００８年）；Ｖ様ドメイン（例えば、米国特許出願公開第２００７／００６５４３１号参照）；又は同類のもの（例えば、Ｎｏｒｄら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８：６０１頁、１９９５年；Ｎｏｒｄら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：７７２頁、１９９７年；Ｎｏｒｄら、Ｅｕｒｏ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６８：４２６��頁、２００１年；Ｂｉｎｚら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１２５７頁、２００５年；Ｂｏｅｒｓｍａ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：８４９頁、２０１１年参照）から選択することも可能である。
【０１４０】
ポリ（エチレンイミン）／ＤＮＡ（ＰＥＩ／ＤＮＡ）複合体のようなＴ細胞による内部移行及び／又はＴ細胞のトラスフェクションを促進することが可能な他の作用物質も使用することが可能である。
【０１４１】
Ｖ．エンドソーム放出剤（ＥＲＡ）。エンドソーム放出剤（ＥＲＡ）は、Ｔ細胞のエンドソームからのカーゴ退出を促進するいかなる化合物又はペプチドをも含む。例示的なＥＲＡは、イミダゾール、ポリ又はオリゴイミダゾール、ＰＥＩ、ペプチド、融合誘導ペプチド、ポリカルボキシレート、ポリカチオン、マスクオリゴ又はポリカチオン又はアニオン、アセタール、ポリアセタール、ケタール／ポリケタール、オルトエステル、マスク又は非マスクカチオン又はアニオン電荷を有するポリマー、両親媒性ブロックコポリマー及びマスク又は非マスクカチオン又はアニオン電荷を有するデンドリマーを含む。
【０１４２】
多くのＥＲＡが、エンドソームからの脱出を促進しポリヌクレオチドをインタクトで核中に送達するウイルスエレメントから改作される。一特定の例として、Ｈ５ＷＹＧペプチドを使用すれば低ｐＨで膜の溶解を誘導することが可能である。ヒスチジンリッチペプチドＨ５ＷＹＧは、アミノ酸の５つがヒスチジン残基で置き換えられているインフルエンザウイルス赤血球凝集素のＨＡ−２サブユニットのＮ末端配列の誘導体である。Ｈ５ＷＹＧは、ヒスチジン残基がプロトン化されているので、わずかに酸性ｐＨで膜を選択的に不安定化することができる。セムリキ森林ウイルス由来のＥ１タンパク質も有用なＥＲＡである。
【０１４３】
特定の実施形態では、ＥＲＡは疎水性膜トランスロケーション配列（ＭＴＳ）を含む。例示的な疎水性ＭＴＳ含有ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（配列番号５９）を有するＲＦＧＦである。疎水性ＭＴＳを含有するＲＦＧＦ類似体（例えば、アミノ酸配列ＡＡＬＬＰＶＬＬＡＡＰ（配列番号６０））も使用することが可能である。
【０１４４】
追加の例示的ＥＲＡは、以下を含む。
【０１４５】
【表１】
2020504133.tif 000021
【０１４６】
ＶＩ．核ターゲティング剤。核ターゲティング剤（ＮＴＡ）とは、細胞の核への細胞輸送及び／又は核中への進入を増強する配列のことである。一般に、ＮＴＡは３〜１００アミノ酸長、３〜５０、４〜３０、又は４〜２０アミノ酸長の短いアミノ酸配列のクラスである。
【０１４７】
微小管関連配列（ＭＴＡＳ）ＮＴＡは、微小管との相互作用を促進して核への輸送を増強する配列を含む。例示的なＭＴＡＳはＰＬＫＴＰＧＫＫＫＫＧＫＰＧＫＲＫＥＱＥＫＫＫＲＲＴＲ（配列番号８１）を含む。
【０１４８】
核移行シグナル（ＮＬＳ）ＮＴＡは、核輸送機械との相互作用を促進する配列を含む。例示的なＮＬＳ配列は、ＧＲＹＬＴＱＥＴＮＫＶＥＴＹＫＥＱ  ＰＬＫＴＰＧＫＫＫＫＧＫＰ（配列番号８２）を含む。
【０１４９】
特定の実施形態は、ヒト副甲状腺ホルモン関係タンパク質（ＰＴＨｒＰ、ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ：Ｐ１２２７２）に由来するＮＴＡを利用し、これはオーバーラップＭＴＡＳ及びＮＬＳ配列を含むタンパク質である。特定の実施形態では、オーバーラップＭＴＡＳ及びＮＬＳ配列を含むＮＴＡは、ＧＲＹＬＴＱＥＴＮＫＶＥＴＹＫＥＱＰＬＫＴＰＧＫＫＫＫＧＫＰＧＫＲＫＥＱＥＫＫＫＲＲＴＲ（配列番号８３；Ｎａｒａｙａｎａｎら、Ｓｃｉ  Ｒｅｐ．２０１３年；３：２１８４頁参照）を含む。
【０１５０】
追加の例示的ＮＬＳ配列は、（ｉ）ＳＶ４０ラージＴ抗原ＮＬＳ（ＰＫＫＫＲＫＶ）（配列番号８４）により例証されるモノパータイトＮＬＳ；（ｉｉ）可変数のスペーサーアミノ酸により分離されている２つの塩基性ドメインを含み、ゼノパスヌクレオプラスミンＮＬＳ（ＫＲＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＫＫＫＬ）（配列番号８５）により例証されるバイパータイトＮＬＳ；並びに（ｉｉｉ）ｈｎＲＮＰ  Ａ１タンパク質のＭ９、インフルエンザウイルス核タンパク質ＮＬＳ及び酵母Ｇａ１４タンパク質ＮＬＳのような非カノニカル配列（Ｄｉｎｇｗａｌｌ  ａｎｄ  Ｌａｓｋｅｙ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  １６：４７８〜４８１頁、１９９１年）を含む。特定の実施形態では、ＮＬＳは高度にカチオン性又は塩基性ペプチドでありうる。特定の実施形態では、ＮＬＳは２つ以上のＡｒｇ又はＬｙｓアミノ酸残基を含む。特定の実施形態では、ＮＬＳはインポーチン及びカリオフェリンのようなサイトゾルタンパク質に結合することが可能であり、これらのタンパク質はＮＬＳ含有配列を認識してこれを核膜孔複合体に輸送する。
【０１５１】
特定の実施形態では、送達されたＰＮ、特にプラスミドＤＮＡの核中への移入を指示するため、ＰＮ（例えば、ナノ粒子カプセル化プラスミド）をＳＶ４０  Ｔ−Ａｇ−由来ＮＬＳペプチドにコンジュゲートすることが可能である。例示的なＳＶ４０  Ｔ−Ａｇ−由来ＮＬＳペプチドは、ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号８６）；ＰＫＫＫＲＭＶ（配列番号８７）；ＰＫＫＫＲＫＶＥＤＰ（配列番号８８）；ＰＫＫＧＳＫＫＡ（配列番号８９）；ＰＫＴＫＲＫＶ（配列番号９０）；ＣＧＧＰＫＫＫＲＫＶＧ（配列番号９１）；ＰＫＫＫＩＫＶ（配列番号９２）；ＣＹＤＤＥＡＴＡＤＳＱＨＳＴＰＰＫＫＫＲＫＶＥＤＰＫＤＦＥＳＥＬＬＳ（配列番号９３）；及びＣＧＹＧＰＫＫＫＲＫＶＧＧ（配列番号９４）を含む。
【０１５２】
追加の例示的ＮＬＳ配列は以下を含む。
【０１５３】
【表２】
2020504133.tif 000022
【０１５４】
例示的なＮＬＳは、Ｃｏｋｏｌら、２０００年、ＥＭＢＯ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、１（５）：４１１〜４１５頁；Ｂｏｕｌｉｋａｓ、１９９３年、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｅｕｋａｒｙｏｔ．Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．、３：１９３〜２２７頁；Ｃｏｌｌａｓら、１９９６年、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５：４５１〜４５８頁；Ｃｏｌｌａｓ  ａｎｄ  Ａｌｅｓｔｒｏｍ、１９９７年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．７５：６３３〜６４０頁；Ｃｏｌｌａｓ  ａｎｄ  Ａｌｅｓｔｒｏｍ、１９９８年、Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、７：３０３〜３０９頁；Ｃｏｌｌａｓ  ａｎｄ  Ａｌｅｓｔｒｏｍ、１９９６年、Ｍｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｄｅｖｅｌ．、４５：４３１〜４３８頁、並びに、米国特許第７，５３１，６２４号、米国特許第７，４９８，１７７号、米国特許第７，３３２，５８６号及び米国特許第７，５５０，６５０号にも記載されている。
【０１５５】
特定の実施形態では、ＮＴＡは、ＮＰ、例えば、ＰＢＡＥのポリマーに共有結合している。
【０１５６】
ＶＩＩ．ワクチン抗原。本開示の教示内では、Ｔ細胞は遺伝的に改変されて、対象に投与されるワクチン抗原に特異的なＴＣＲを発現する。ワクチン抗原は、身体に導入されると、Ｔ細胞活性化及び／又は抗体産生のような免疫応答を刺激する物質である。ワクチン抗原は、死滅した細菌若しくはウイルスのような天然のインタクトの病原体、又は生きた弱毒化ウイルスを含むことが可能であり、又は単一ウイルス若しくは細菌タンパク質のような病原体の一部、若しくはサブユニットだけを含むことが可能である。ワクチン抗原は、がん抗原又はこの断片を含むことも可能である。
【０１５７】
例示的ウイルスワクチン抗原は、アデノウイルス、アレナウイルス、ブニアウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、ハンタウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、パラミクソウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、海綿状ウイルス又はトガウイルスに由来することが可能である。特定の実施形態では、ワクチン抗原は、ＣＭＶ、ＥＢＶ、インフルエンザウイルス、Ａ型、Ｂ型、又はＣ型肝炎、単純ヘルペス、ＨＩＶ、インフルエンザ、日本脳炎、麻疹、ポリオ、狂犬病、呼吸器合胞体、風疹、天然痘、水痘帯状疱疹、ウエストナイル及び／又はジカを含むウイルスにより発現されるペプチドを含む。
【０１５８】
全病原体由来であるワクチン抗原の例は、ＯＰＶポリオワクチンに使用される弱毒化ポリオウイルス及びＩＰＶポリオワクチンに使用される死滅したポリオウイルスを含む。
【０１５９】
さらなる特定の例として、ＣＭＶワクチン抗原は、エンベロープ糖タンパク質Ｂ及びＣＭＶ  ｐｐ６５を含み；ＥＢＶワクチン抗原は、ＥＢＶ  ＥＢＮＡＩ、ＥＢＶ  Ｐ１８及びＥＢＶ  ｐ２３を含み；肝炎ワクチン抗原は、Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、Ｍ及びＬタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスのプレＳ抗原、ＨＢＣＡＧ  ＤＥＬＴＡ、ＨＢＶ  ＨＢＥ、Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡ、ＨＣＶ  ＮＳ３並びにＨＣＶ  ＮＳ４を含み；単純ヘルペスワクチン抗原は最初期タンパク質及び糖タンパク質Ｄを含み；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ワクチン抗原は、ＨＩＶ  ｇｐ３２、ＨＩＶ  ｇｐ４１、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ｇｐ１６０、ＨＩＶ  Ｐ１７／２４、ＨＩＶ  Ｐ２４、ＨＩＶ  Ｐ５５  ＧＡＧ、ＨＩＶ  Ｐ６６  ＰＯＬ、ＨＩＶ  ＴＡＴ、ＨＩＶ  ＧＰ３６、Ｎｅｆタンパク質及び逆転写酵素のようなｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖ遺伝子の遺伝子産物を含み；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ウイルス抗原はＬ１タンパク質を含み；インフルエンザワクチン抗原は赤血球凝集素及びノイラミニダーゼを含み；日本脳炎ワクチン抗原は、タンパク質Ｅ、Ｍ−Ｅ、Ｍ−Ｅ−ＮＳ１、ＮＳ１、ＮＳ１−ＮＳ２Ａ及び８０％  Ｅを含み；マラリアワクチン抗原は、プラスモジウムタンパク質サーカムスポロゾイト（ＣＳＰ）、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ及びフルクトース二リン酸アルドラーゼを含み；麻疹ワクチン抗原は麻疹ウイルス融合タンパク質を含み、狂犬病ワクチン抗原は、狂犬病糖タンパク質及び狂犬病核タンパク質を含み；呼吸器合胞体ワクチン抗原は、ＲＳＶ融合タンパク質及びＭ２タンパク質を含み；ロタウイルスワクチン抗原はＶＰ７ｓｃを含み；風疹ワクチン抗原はタンパク質Ｅ１及びＥ２を含み；水痘帯状疱疹ワクチン抗原はｇｐｌ及びｇｐｌｌを含み；並びにジカワクチン抗原は、前膜、エンベロープ（Ｅ）、Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ及び非構造タンパク質１−５を含む。
【０１６０】
追加の特定の例示的ウイルス抗原配列は以下を含む。
【０１６１】
【表３】
2020504133.tif 000023
ウイルス抗原の追加の例はＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、編者．Ｆｉｅｌｄｓ、Ｂ．Ｎ．及びＫｎｉｐｅ、Ｄ．Ｍ．（Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年）を参照されたい。
【０１６２】
特定の実施形態では、ワクチン抗原は細菌感染に関連する細胞により発現される。例示的な細菌は、炭疽菌；グラム陰性桿菌、クラミジア、ジフテリア、ヘモフィリスインフルエンザ、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、百日咳毒素、肺炎球菌、リケッチア、ブドウ球菌、ストレプトコッカス及び破傷風を含む。
【０１６３】
細菌ワクチン抗原の特定の例として、炭疽菌ワクチン抗原は、炭疽菌防御抗原を含み；グラム陰性桿菌ワクチン抗原はリポ多糖を含み；ヘモフィリスインフルエンザワクチン抗原は莢膜多糖を含み；ジフテリアワクチン抗原はジフテリア毒素を含み；マイコバクテリウム・ツベルクローシスワクチン抗原はミコール酸、熱ショックタンパク質６５（ＨＳＰ６５）、３０ｋＤａメジャー分泌タンパク質及び抗原８５Ａを含み；百日咳毒素ワクチン抗原は赤血球凝集素、パータクチン、ＦＩＭ２、ＦＩＭ３及びアデニル酸シクラーゼを含み；肺炎球菌ワクチン抗原はニューモリシン及び肺炎球菌莢膜多糖を含み；リケッチアワクチン抗原はｒｏｍｐＡを含み；ストレプトコッカスワクチン抗原はＭタンパク質を含み；並びに破傷風ワクチン抗原は破傷風毒素を含む。
【０１６４】
特定の実施形態では、ワクチン抗原は多剤耐性「スーパーバグス」に由来する。スーパーバグスの例は、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、アシネトバクター・バウマンニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及びエンテロバクテリアセエ科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａ）（エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、エンテロバクター属種（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．）を含む）を含む。
【０１６５】
ワクチン抗原は、免疫系を刺激してがんと闘うために、がん細胞により特異的に又は優先的に発現されるタンパク質も含むことが可能である。がん抗原の例は、Ａ３３；ＢＡＧＥ；Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）；Ｂｃｌ−２；β−カテニン；ＣＡ１９−９；ＣＡ１２５；カルボキシ−アンヒドラーゼ−ＩＸ（ＣＡＩＸ）；ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２１；ＣＤ２２；ＣＤ２４；ＣＤ３３；ＣＤ３７；ＣＤ４５；ＣＤ１２３；ＣＤ１３３；ＣＥＡ；ｃ−Ｍｅｔ；ＣＳ−１；サイクリンＢ１；ＤＡＧＥ；ＥＢＮＡ；ＥＧＦＲ；エフリンＢ２；エストロゲン受容体；ＦＡＰ；フェリチン；葉酸結合タンパク質；ＧＡＧＥ；Ｇ２５０；ＧＤ−２；ＧＭ２；ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ  １７）；ＨＥＲ−２／ｎｅｕ；ＨＰＶ  Ｅ６；ＨＰＶ  Ｅ７；Ｋｉ−６７；Ｌ１−ＣＡＭ；ＬＲＰ；ＭＡＧＥ；ＭＡＲＴ；メソセリン；ＭＵＣ；ＭＵＭ−１−Ｂ；ｍｙｃ；ＮＹＥＳＯ−１；ｐ５３、ＰＲＡＭＥ；プロゲステロン受容体；ＰＳＡ；ＰＳＣＡ；ＰＳＭＡ；ｒａｓ；ＲＯＲｌ；サバイビン；ＳＶ４０  Ｔ；テネイシン；ＴＳＴＡチロシナーゼ；ＶＥＧＦ；及びＷＴ１を含む。
【０１６６】
さらに詳細な例として、がんワクチン抗原は以下のものを含む又はこれに由来することが可能である。
【０１６７】
【表４】
2020504133.tif 000024
2020504133.tif 000025
【０１６８】
ＶＩＩＩ．ワクチンアジュバント。ワクチンはワクチンアジュバントと一緒に投与される場合が多い。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強し、本明細書ではこの用語の慣用で使用される材料をいう。正確な作用様式がすべてのアジュバントについて理解されているわけではないが、そのように理解されていないからといって多種多様なワクチンのためのその臨床使用の妨げとはならない。
【０１６９】
例示的なワクチンアジュバントは、任意の種類のＴｏｌｌ様受容体リガンド若しくはこの組合せ（例えば、ＣｐＧ、Ｃｐｇ−２８（ＴＬＲ９アゴニスト）、ポリリボイノシンポリリボシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））、α−ガラクトセラミド、ＭＰＬＡ、モトリモド（ＶＴＸ−２３３７、ＶｅｎｔｉＲｘにより開発された新規のＴＬＲ８アゴニスト）、ＩＭＯ−２０５５（ＥＭＤ１２０１０８１）、ＴＭＸ−１０１（イミキモド）、ＭＧＮ１７０３（ＴＬＲ９アゴニスト）、Ｇ１００（ＴＬＲ４アゴニストグルコピラノシル脂質Ａの安定化エマルジョン）、エントリモド（ＣＢＬＢ５０２としても公知のサルモネラフラジェリンの誘導体）、ヒルトノール（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ）（ＴＬＲ３アゴニスト）、及びイミキモド）、及び／又は１７−ＤＭＡＧ（１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）のような熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）の阻害剤を含む。
【０１７０】
特定の実施形態では、スクアレンベースのアジュバントが使用可能である。スクアレンはトリテルペンとして公知の分子の群の一部であり、トリテルペンはすべて３０炭素分子を有する炭化水素である。スクアレンは、米糠、小麦麦芽、アマランサス種子及びオリーブのようなある特定の植物源由来、並びにサメ肝油のような動物源由来が可能である。特定の実施形態では、スクアレンベースのアジュバントはＭＦ５９（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）である。ＭＦ５９（登録商標）に類似するが臨床前研究使用のために設計されているスクアレンベースのアジュバントの例は、Ａｄｄａｖａｘ（商標）（インビボＧｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）である。ＭＦ５９はインフルエンザワクチンでの使用がＦＤＡ承認されており、研究によれば、ＭＦ５９は妊娠中の使用は安全であることが示されている（Ｔｓａｉ  Ｔ、ら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２０１０年．１７：２８（７）：１８７７〜８０頁；Ｈｅｉｋｋｉｎｅｎ  Ｔ、ら、Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ．２０１２年．２０７（３）：１７７頁）。特定の実施形態では、スクアレンベースのアジュバントは、０．１％〜２０％（ｖ／ｖ）スクアレンオイルを含むことが可能である。特定の実施形態では、スクアレンベースのアジュバントは、５％（ｖ／ｖ）スクアレンオイルを含むことが可能である。
【０１７１】
特定の実施形態では、アジュバントミョウバンが使用可能である。ミョウバンとは、２つの硫酸基、一価カチオン及びアルミニウム又はクロムのような三価金属を含有する塩のファミリーである。ミョウバンはＦＤＡ承認アジュバントである。特定の実施形態では、ワクチンはミョウバンを１〜１０００ｕｇ／用量又は０．１ｍｇ〜１０ｍｇ／用量の量で含むことが可能である。特定の実施形態では、アジュバントＶａｘｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（Ｖｉｃａｌ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）が使用可能である。Ｖａｘｆｅｃｔｉｎ（登録商標）はカチオン性脂質ベースのアジュバントである。
【０１７２】
特定の実施形態では、１つ以上のＳＴＩＮＧアゴニストがワクチンアジュバントとして使用される。「ＳＴＩＮＧ」は「インターフェロン遺伝子の刺激物質」の略語であり、この物質は「小胞体インターフェロン刺激物質（ＥＲＩＳ）」、「ＩＲＦ３活性化の媒介物（ＭＩＴＡ）」、「ＭＰＹＳ」又は「膜貫通タンパク質１７３（ＴＭ１７３）」としても公知である。ＳＴＩＮＧは膜貫通受容体タンパク質であり、ヒトでは遺伝子ＴＭＥＭ１７３によりコードされている。ＳＴＩＮＧの活性化により、ＩＲＦ３（インターフェロン調節因子３）経路を介して１型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−ａ及びＩＦＮ−β）が産生され、ＮＦ−κＢ経路及び／又はＮＬＲＰ３インフラマソームを介して炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−ａ及びＩＬ−１β）が産生される。
【０１７３】
ヒト及びマウスＳＴＩＮＧは天然には、侵入細菌又は古細菌により放出される外来性（３’、３）環状ジヌクレオチド（ｃ−ｄｉＧＭＰ、ｃ−ｄｉＡＭＰ及びｃ−ＧＡＭＰ）の結合を介して；及び外来性二重鎖ＤＮＡ（例えば、侵入細菌、ウイルス又は原虫により放出される外来性二重鎖ＤＮＡ）の存在下で酵素環状ＧＭＰ−ＡＭＰシンターゼ（ｃＧＡＳ；Ｃ６ｏｒｆｌ５０又はＭＢ２１Ｄ１としても公知である）により産生される内在性環状ジヌクレオチドである（２’、３’）環状グアノシンモノホスフェート−アデノシンモノホスフェート（（２’、３’）ｃ−ＧＡＭＰ）の結合を介しての２つの方法で活性化される。
【０１７４】
用語「ＳＴＩＮＧアゴニスト」とは、インビトロ又はインビボでＳＴＩＧ受容体を活性化する物質のことである。化合物は、（ｉ）ＳＴＩＮＧを含有するヒト又は動物細胞においてインビトロで１型インターフェロンを誘導する；及び（ｉｉ）ＳＴＩＮＧを含有しない又は機能性ＳＴＩＮＧを含有しないヒト又は動物細胞においてインビトロで１型インターフェロンを誘導しない場合は、ＳＴＩＮＧアゴニストと見なすことが可能である。リガンドがＳＴＩＮＧアゴニストかどうかを確かめる典型的な試験は、野生型ヒト又は動物細胞系において及びＳＴＩＮＧコード遺伝子が少数の塩基又はもっと長い欠失により遺伝的に不活化されている対応する細胞系（例えば、ホモ接合性ＳＴＩＮＧノックアウト細胞系）においてリガンドをインキュベートすることである。ＳＴＩＮＧのアゴニストは野生型細胞では１型インターフェロンを誘導するが、ＳＴＩＮＧが不活化されている細胞では１型インターフェロンを誘導しない。
【０１７５】
特定の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、２つのヌクレオチド間に１つ若しくは２つのリン酸ジエステル結合及び／又は１つ若しくは２つのホスホロチオエートジエステル結合のある環状分子を含む。これは、（３’、５’）−（３’、５’）ヌクレオチド結合（（３’、３’）と略記される）；（３’、５’）−（２’、５’）ヌクレオチド結合（（３’、２’）と略記される）；（２’、５’）−（３’、５’）ヌクレオチド結合（（２’、３’）と略記される）；及び（２’、５’）−（２’、５’）ヌクレオチド結合（（２’、２’）と略記される）を含む。「ヌクレオチド」とは糖部分の５’、３’又は２’位でリン酸基に連結している任意のヌクレオシドのことである。
【０１７６】
特定の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは式：
【０１７７】
【化１９】
2020504133.tif 000026
の化合物を含む。
【０１７８】
特定の実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、以下に示すように、独立して９−プリン、９−アデニン、９−グアニン、９−ヒポキサンチン、９−キサチンチン、９−尿酸、又は９−イソグアニンでもよい。
【０１７９】
【化２０】
2020504133.tif 000027
【０１８０】
特定の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ジチオ−（ＲＰ、ＲＰ）−［環状［Ａ（２’、５’）ｐＡ（３’、５’）ｐ］］（２’−５’、３’−５’混合リン酸ジエステル結合（ＭＬ）ＲＲ−Ｓ２  ｃ−ジ−ＡＭＰ又はＭＬ  ＲＲ−Ｓ２  ＣＤＡとしても公知である）、ＭＬ  ＲＲ−Ｓ２−ｃ−ジ−ＧＭＰ（ＭＬ−ＣＤＧ）、ＭＬ  ＲＲ−Ｓ２  ｃＧＡＭＰ又はこの任意の混合物を含むことが可能である。
【０１８１】
ｃ−ジＧＭＰの構造は：
【０１８２】
【化２１】
2020504133.tif 000028
を含む。
【０１８３】
ｃ−ジＡＭＰの構造は：
【０１８４】
【化２２】
2020504133.tif 000029
を含む。
【０１８５】
ｃ−ＧＡＭＰの構造は：
【０１８６】
【化２３】
2020504133.tif 000030
を含む。
【０１８７】
ＳＴＩＮＧアゴニストの追加の特定の例は、ｃ−ＡＩＭＰ；（３’、２’）ｃ−ＡＩＭＰ；（２’、２’）ｃ−ＡＩＭＰ；（２’、３’）ｃ−ＡＩＭＰ；ｃ−ＡＩＭＰ（Ｓ）；ｃ−（ｄＡＭＰ−ｄＩＭＰ）；ｃ−（ｄＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）；ｃ−（２’ＦｄＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）；（２’、３’）ｃ−（ＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）；ｃ−［２’ＦｄＡＭＰ（Ｓ）−２’ＦｄＩＭＰ（Ｓ）］；ｃ−［２’ＦｄＡＭＰ（Ｓ）−２’ＦｄＩＭＰ（Ｓ）］（ＰＯＭ）２；及びＤＭＸＡＡを含む。ＳＴＩＮＧアゴニストの追加の例は、国際公開第２０１６／１４５１０２号に記載されている。
【０１８８】
他の免疫刺激物質もワクチンアジュバントとして使用可能である。追加の例示的小分子免疫刺激物質は、ＴＧＦ−β阻害剤、ＳＨＰ阻害剤、ＳＴＡＴ−３阻害剤及び／又はＳＴＡＴ−５阻害剤を含む。免疫抑制シグナル又は発がん過程（ｋｒａｓのような）を下方調節することができる例示的なｓｉＲＮＡを使用可能であり、免疫刺激性タンパク質をコードするいかなるプラスミドＤＮＡ（ミニサークルＤＮＡのような）も使用可能である。
【０１８９】
例示的なサイトカインは、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＴＮＦα、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ又はＧＭ−ＣＳＦを含む。特定の実施形態では、免疫刺激物質は、サイトカイン及び／又はＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β若しくはＩＦＮ−γ又はＧＭ−ＣＳＦと組み合わせたＩＬ−２、ＩＬ−１２若しくはＩＬ−１５のようなサイトカインの組合せ、又はこの任意の効果的な組合せ、又はサイトカインの他の任意の効果的な組合せでもよい。上で同定されたサイトカインはＴＨ１応答を刺激するが、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、又はこの任意の効果的な組合せのようなＴＨ２応答を刺激するサイトカインを使用してもよい。その上、ＴＨ１応答を刺激するサイトカインをＴＨ２応答を刺激するサイトカインと共に組み合わせたものを使用してもよい。
【０１９０】
先行する段落で言及した分子由来の免疫刺激物質も使用可能である。例えば、ＲＬＩはＩＬ−１５単独の５０倍の効力を示すＩＬ−１５−ＩＬ−１５受容体−α融合タンパク質である。ＩＬ−１５は抗腫瘍免疫応答に複数の点で特に影響を与える。ＩＬ−１５は単球を刺激性抗原提示細胞に分化させ；腫瘍反応性Ｔ細胞のエフェクター機能及び増殖を促進し；ＮＫ細胞を動員し活性化することが可能である。
【０１９１】
ＩＸ．組成物。本明細書で開示されるポリヌクレオチド、ＮＰ、ワクチン抗原及び／又はワクチンアジュバント（個別に、合わせて、又は「活性成分」と呼ばれるグループ化された組合せで）は、対象への投与のために処方される組成物の一部として提供することが可能である。
【０１９２】
特定の実施形態では、活性成分は、例えば、少なくとも０．１％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも１％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも１０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも２０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも３０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも４０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも５０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも６０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも７０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも８０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも９０％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；少なくとも９５％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）；又は少なくとも９９％ｗ／ｖ若しくはｗ／ｗの活性成分（複数可）を含むことが可能な組成物の一部として提供される。
【０１９３】
細胞がエクスビボで遺伝的に改変されている場合、組成物は１０２よりも多い細胞、１０３よりも多い細胞、１０４よりも多い細胞、１０５よりも多い細胞、１０６よりも多い細胞、１０７よりも多い細胞、１０８よりも多い細胞、１０９よりも多い細胞、１０１０よりも多い細胞、又は１０１１よりも多い細胞を含むことが可能である。特定の実施形態では、組成物は、対象に投与される場合、キログラムあたり１００万〜２０００万の遺伝的に改変された細胞を提供するように目盛定めすることが可能である。
【０１９４】
本明細書で開示される組成物は、例えば、注射、吸入、輸注、灌流、洗浄又は摂取による投与のために処方することが可能である。組成物は、例えば、静脈内、皮内、動脈内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所的、クモ膜下腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内、経口及び／又は皮下投与のために、さらに詳しくは、静脈内、皮内、動脈内、結節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所的、クモ膜下腔内、腫瘍内、筋肉内、小胞内、経口及び／又は皮下注射によりさらに処方することが可能である。
【０１９５】
注射では、組成物は、ハンクス液、リンガー液又は生理食塩水を含む緩衝液のような水溶液として処方することが可能である。水溶液は、懸濁、安定化及び／又は分散剤のような調合剤を含有することが可能である。代わりに、製剤は、使用前の適切な媒体、例えば、発熱性物質除去蒸留水での構成のために凍結乾燥及び／又は粉末形態が可能である。
【０１９６】
経口投与では、組成物は、錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液及び同類のものとして処方することが可能である。例えば、粉末、カプセル及び錠剤のような経口固体製剤では、適切な賦形剤は、結合剤（トラガカントガム、アカシア、コーンスターチ、ゼラチン）、糖、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール及びソルビトールのような充填剤；リン酸二カルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム；トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のようなセルロース標品；造粒剤；並びに結合剤を含む。必要に応じて、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸、架橋ポリビニルピロリドン、寒天若しくはアルギン酸又はアルギン酸ナトリウムのようなこの塩のような崩壊剤を添加することが可能である。必要に応じて、固体剤形を、標準技法を使用して糖衣をかける又は腸溶性にすることが可能である。ペパーミント、冬緑油、チェリーフレーバリング、オレンジフレーバリング、等のような香味剤も使用可能である。
【０１９７】
吸入による投与では、適切な噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適切な気体を使用して、加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレーとして処方することが可能である。加圧エアロゾルの場合、計量された量を送達するバルブを提供することにより投薬単位を決定してもよい。治療薬とラクトース又はデンプンのような適切な粉末基剤の粉末混合物を含有する、吸入器又は注入器での使用のためのゼラチンのカプセル及びカートリッジを処方してもよい。
【０１９８】
本明細書で開示されるいかなる組成製剤も、研究のためであれ、予防及び／又は治療治療のためであれ、投与の利益に勝る著しく有害な、アレルギー性の又は他の都合の悪い反応を起こさない担体を含む他のいかなる薬学的に許容される担体でも有利に含むことが可能である。例示的な薬学的に許容される担体及び製剤はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０年に開示されている。さらに、製剤は、生物学的標準品の米国ＦＤＡ事務所及び／又は他の関連する外国規制当局が要求する無菌性、発熱性、総括安全及び純度標準を満たすように調製することが可能である。
【０１９９】
例示的な一般に使用される薬学的に許容される担体は、あるとあらゆる増量剤若しくは充填剤、溶媒若しくは共溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、保存剤、等張剤、吸収遅延剤、塩、安定化剤、緩衝剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、ゲル、結合剤、崩壊剤及び／又は滑沢剤を含む。
【０２００】
例示的な緩衝剤は、クエン酸緩衝液、コハク酸緩衝液、酒石酸緩衝液、フマル酸緩衝液、グルコン酸緩衝液、シュウ酸緩衝液、乳酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液及び／又はトリメチルアミン塩を含む。
【０２０１】
例示的な保存剤は、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、ベンザルコニウムハライド、塩化ヘキサメトニウム、メチル又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール及び３−ペンタノールを含む。
【０２０２】
例示的な等張剤は、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール又はマンニトールのような三価又はそれよりも高い糖アルコールを含む多価糖アルコールを含む。
【０２０３】
例示的な安定化剤は、有機糖、多価糖アルコール、ポリエチレングリコール；含硫黄還元剤、アミノ酸、低分子量ポリペプチド、タンパク質、免疫グロブリン、親水性ポリマー又は多糖を含む。
【０２０４】
組成物はデポ標品としても処方することが可能である。デポ標品は、ポリマー若しくは疎水性材料（例えば、許容性油中の乳剤として）又はイオン交換樹脂を用いて、又はやや難溶性誘導体として、例えば、やや難溶性塩として処方することが可能である。
【０２０５】
さらに、組成物は、少なくとも１つの活性成分を含有する固体ポリマーの半透明マトリックスを利用して徐放性システムとして処方することが可能である。種々の徐放性材料が確立されており、当業者には周知である。徐放性システムは、その化学的性質に応じて、数週間から１００日以上までの間投与に続いて活性成分を放出することができる。
【０２０６】
Ｘ．キット。活性成分の組合せはキットとしても提供することが可能である。キットは、本明細書に記載され個別に又は種々の組合せで処方される１つ以上のＰＮ、ＮＰ、ワクチン抗原及び／又はワクチンアジュバントを含む容器を含むことが可能である。一般的に、キットは、本明細書の別の場所に記載されている病原体又はがん抗原のような特定の感染病原体又はがん抗原に対するワクチン効力を増強するのに特有のＰＮ、ＮＰ、ワクチン抗原及び／又はワクチンアジュバントを含む。
【０２０７】
キットは、医薬品又は生物由来物質の製造、使用又は販売を規制する政府機関により規定される形態で通知書も含むことが可能であり、この通知書はヒト投与のための製造、使用又は販売についての政府機関による承認を反映している。通知書は、提供されている活性成分を対象に投与することが可能であると表明してもよい。キットは、さらにキットを使用するための説明書、例えば、投与のためのＰＮ、ＮＰ、ワクチン抗原及び／又はワクチンアジュバントの準備；関連廃棄物の適正処理；及び同類のものに関する説明書を含むことが可能である。説明書はキット内に提供される印刷された説明書の形態が可能であり、又は説明書はキット自体の一部に印刷することが可能である。説明書は、シート、パンフレット、小冊子、ＣＤ−Ｒｏｍ若しくはコンピュータ読取り可能デバイスの形態でもよく、又はウェブサイトのような遠隔地で説明書への指示を提供することが可能である。特定の実施形態では、キットは、注射器、アンプル、管類、マスク、注射キャップ、スポンジ、無菌アドヘシブストリップ、クロラプレップ、手袋及び同類のもののようなキットを効果的に使用するために必要な必須の医療用品の一部又はすべてを含むことも可能である。本明細書に記載されるキットのいずれかの内容物に変化を加えることが可能である。キットの説明書は、本明細書に記載される新しい臨床用途を実現するための活性成分の使用を指示する。
【０２０８】
ＸＩ．使用方法。組成物は、形成された後、対象においていくつかの適用に利用される。対象は、ヒト対象、獣医動物（イヌ、ネコ、爬虫類、鳥、等及び動物園にいる動物も含む）、家畜（ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、ニワトリ、等）及び研究動物（サル、ラット、マウス、魚、等）を含む。「治療を必要とする対象」は、状態（例えば、感染症、がん）を抱えた対象のような治療を必要とする対象、並びに、状態（例えば、感染症、がん）を有する若しくは発症する傾向がある対象、又は病原体への曝露若しくはがん再発について高いリスクのグループにいる対象のような状態を予防するべき対象を含む。
【０２０９】
当業者であれば、免疫系はワクチン接種に続いて自然免疫応答及び適応免疫応答を生じることを認識している。自然免疫応答は一般に、実質的に抗原特異性ではなく及び／又は免疫記憶を生じないと特徴付けることが可能である。適応免疫応答は、実質的に抗原特異性であり、時間をかけて成熟する（例えば、抗原に対する親和性及び／又は結合活性を増加させる）と特徴付けることが可能であり、免疫記憶を生じることが可能である。自然と適応免疫の間のこれらの及び他の機能的な違いは識別することが可能であるが、当業者であれば、自然及び適応免疫系は統合することが可能であり、したがって、歩調を合わせることが可能であることは認識している。
【０２１０】
特定の実施形態では、適応免疫応答は、ワクチン抗原への「無感作」対象の最初の曝露により起こる免疫応答を指す「一次免疫応答」が可能である。例えば、一次抗体応答の場合、例えば、組成物、用量及び対象に応じて３〜１４日の遅延又は潜伏期の後、ワクチン抗原に対する抗体を産生することが可能である。一般に、ＩｇＭ産生は数日間続き、続いてＩｇＧが産生され、ＩｇＭ応答は減少することがある。抗体産生は数週間後に終わるが、記憶細胞を生み出すことが可能である。一次免疫応答はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞活性化及び増殖の引き金も引く。特定の実施形態では、適応免疫応答は、本明細書で開示されるワクチン抗原への対象の２度目の及びそれに続く曝露により起こる免疫応答を指す「二次免疫応答」、「既往応答」、又は「ブースター応答」が可能である。一般に、二次免疫応答では、記憶細胞はワクチン抗原に応答し、したがって、二次免疫応答は定性的に及び／又は定量的に一次免疫応答とは異なることが可能である。例えば、一次免疫応答と比べて、二次免疫応答の遅延期はもっと短くなることがあり、ピーク応答はもっと高くなることがあり、もっと高い親和性抗体及びＴＣＲを産生することがあり、及び／又は応答はもっと長い期間持続することがある。特定の実施形態では、「免疫応答」は、記憶Ｔ細胞（例えば、ＴＣＭ及び／又はＴＥＭ）の増殖、持続、及び／又は活性により測定可能である。
【０２１１】
特定の実施形態では、ワクチン接種の効力を改善することにより、臨床的に関連するタイムウィンドウ内で治療有効量の本明細書で開示される組成物の投与後以下のうちの少なくとも１つが生じる：ＣＤ４＋及び／若しくはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化及び／若しくは増殖が増加する、記憶Ｔ細胞（例えば、ＴＣＭ及び／又はＴＥＭ）の産生及び保持が増加する、二次免疫応答前の遅延期が短縮する、二次免疫応答中のピーク応答がもっと高くなる、並びに／又は二次免疫応答の持続性が大きくなる。
【０２１２】
特定の実施形態では、ワクチン接種の効力を改善することにより、臨床的に関連するタイムウィンドウ内で治療有効量の本明細書で開示される組成物の投与後以下のうち：予防処置が改善される及び／又は治療処置が改善される、の少なくとも１つが生じる。
【０２１３】
予防処置は、潜在的な障害若しくは疾患の発生若しくは重症度を予防する若しくは低減する又は潜在的な障害若しくは疾患の発症を減速する若しくは少なくする。予防ワクチン処置は、感染性病原体又はがんのタイプに対して対象の免疫を増加する。したがって、特定の実施形態では、ワクチンは、例えば、免疫学的に無感作である（例えば、感染性病原体又はがんに対し以前曝露も経験もない）対象に予防的に投与してもよい。
【０２１４】
組成物は、状態（例えば、ＨＩＶ、マラリア、ヘルペス、クラミジア、ＥＢＶ、肺炎球菌及び／若しくは肝炎により引き起こされる感染症又はがん）を発症するリスクのある又はそのような感染症をもたらす病原体に暴露されたことがある対象において、感染症又は関連する疾患の発症を予防する、低減する又は遅らせるために予防的に投与することが可能である。例えば、組成物は、ＨＩＶ、マラリア、ヘルペス、クラミジア、ＥＢＶ、肺炎球菌及び／若しくは肝炎に暴露された可能性のある対象に、又はＨＩＶ、マラリア、ヘルペス、クラミジア、ＥＢＶ、肺炎球菌及び／若しくは肝炎への曝露又はがん再発の高リスクがある対象に投与することが可能である。
【０２１５】
治療処置は、既存の障害又は疾患を低減する、除去する、又はこの進行を減速することを含む。特定の実施形態では、ワクチンは感染性病原体又はがんに暴露されたことのある対象に治療的に投与してもよい。したがって、ワクチンを使用すれば、ＨＩＶ感染及びＡＩＤＳという文脈でのＴ細胞数の減少のような感染性病原体に伴う症状を寛解することが可能になる。
【０２１６】
特定の実施形態では、ワクチン接種の効力を改善することにより改善された抗感染症効果が提供される。抗感染症効果は、感染する細胞の数を低減し、細胞が感染するまでの時間を延ばし、より高い感染レベルになるのを予防し、感染細胞の数を減らし、感染組織の体積を減らし、平均余命を増やし、免疫クリアランスに対する感染細胞の感受性を誘導し、感染症に伴う疼痛を低減し、及び／又は治療されている感染症に伴う症状を予防する、低減する、遅らせる、若しくは除去することが可能である。
【０２１７】
特定の実施形態では、ワクチン接種の効力を改善することにより改善された抗ガン効果が提供される。抗ガン効果は、がん細胞の発生の減少、がん細胞の数の減少、転移の発生の減少、転移の数の減少、腫瘍量の減少、平均余命の増加、免疫クリアランスに対するがん細胞の感受性の誘導、がん細胞増殖の阻害、腫瘍成長の阻害、対象寿命の延長、がんに伴う疼痛の低減及び／又は治療に続くがんのぶり返し若しくは再発の低減若しくは遅延を含むことが可能である。
【０２１８】
特定の対象に投与される活性成分の実際の用量は、標的、体重、感染症又はがんの存在及び／又は重症度、感染症又はがんの段階、以前の又は同時的な治療介入、対象の特発性、並びに投与経路を含む身体的及び生理的要因のようなパラメータを考慮に入れて、医師、獣医師、又は研究者が決定することが可能である。
【０２１９】
投与では、治療有効量（本明細書では用量とも呼ばれる）は、最初にインビトロアッセイ及び／又は動物モデル研究の結果に基づいて見積もることが可能である。
【０２２０】
組成物の例示的な用量は、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０又は２５０μｇ／ｋｇ体重又はｍｇ／ｋｇ体重を含むが、これよりも高い及び／又は低い用量を使用することが可能である。時間の関数としての投与することが可能な用量の数は、１、２、３、４、５又は６週間にわたり１から２、３、４又は５用量が可能であるが、少なくとも一部対象の免疫状態に応じて増やす又は減らすことが可能である。
【０２２１】
遺伝的に改変された細胞が組成物の一部として投与される場合、投与する例示的な治療有効量は、１０２よりも多い細胞、１０３よりも多い細胞、１０４よりも多い細胞、１０５よりも多い細胞、１０６よりも多い細胞、１０７よりも多い細胞、１０８よりも多い細胞、１０９よりも多い細胞、１０１０よりも多い細胞、又は１０１１よりも多い細胞を含むことが可能である。特定の実施形態では、治療有効量は、キログラムあたり１００万〜２０００万の細胞を含む。
【０２２２】
特定の実施形態では、組成物は最初に投与され、その後、さらなる投与により維持されることが可能である。例えば、組成物は筋肉内注射により投与することが可能である。次に、対象のレベルは経口剤形により維持されるが、患者の状態に応じて、他の投与形態を使用してもよい。ワクチン及びＮＰ組成物の例では、組成物は単一用量として投与してもよく、又は組成物はセットのブースター用量を組み込んでもよい。例えば、ブースター用量は、感染性病原体の複数の分岐群に対する保護を提供するためにワクチン抗原及びＴＣＲのバリアントを含んでいてもよい。
【０２２３】
特定の実施形態では、１つ以上の組成物中の投与のための活性成分は、（ｉ）ＰＮ及び／又はＮＰ内のＰＮ、（ｉｉ）ワクチン抗原並びに（ｉｉｉ）ワクチンアジュバントが可能である。特定の実施形態では、組み合わせて含まれる場合、組合せ中の置換成分は、１対１対１；１対２対１；１対３対１；１対４対１；１対５対１；１対１０対１；１対２対２；１対２対３；１対３対４；１対４対２；１対５対３；９対１０対２０；５対２対１；５対３対１１；５対４対１；５対５対１；５対１００対１；５対２０対２；５対２対３；５対１４対２００；５対１０対２０のような例示的な比；又は意図している効果に到達するための組合せ中の置換成分の数及び同一性に応じて、追加の有利な比で提供することが可能である。当業者であれば理解するように、組合せ中の置換成分は、同じ組成物内で又は異なる組成物内で提供することが可能である。
【０２２４】
治療有効量は、治療レジメンの過程で（例えば、ＱＩＤ、ＴＩＤ、ＢＩＤ、毎日１回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、毎週１回、２週間に１回、３週間に１回、毎月１回、２か月に１回、３か月に１回、４か月に１回、５か月に１回、６か月に１回、７か月に１回、８か月に１回、９か月に１回、１０か月に１回、１１か月に１回、又は毎年１回）単一又は複数用量を投与することにより達成することが可能である。
【０２２５】
特定の実施形態では、ＰＮ（種々の開示された形態のいずれかで（例えば、裸で又はＮＰ内で））は、ワクチン抗原の１か月以内に、ワクチン抗原の３週間以内に、ワクチン抗原の２週間以内に、ワクチン抗原の１週間以内に、ワクチン抗原の７日以内に、ワクチン抗原の６日以内に、ワクチン抗原の５日以内に、ワクチン抗原の４日以内に、ワクチン抗原の３日以内に、ワクチン抗原の２日以内に、ワクチン抗原の２４時間以内に、ワクチン抗原の２２時間以内に、ワクチン抗原の２０時間以内に、ワクチン抗原の１８時間以内に、ワクチン抗原の１６時間以内に、ワクチン抗原の１４時間以内に、ワクチン抗原の１２時間以内に、ワクチン抗原の１０時間以内に、ワクチン抗原の８時間以内に、ワクチン抗原の６時間以内に、ワクチン抗原の４時間以内に、ワクチン抗原の２時間以内に、又はワクチン抗原の１時間以内に投与される。「以内に」はワクチン投与の前又は後を含み、これらの時間のそれぞれが臨床的に関連するタイムウィンドウを提供することが可能である。
【０２２６】
特定の実施形態では、増強されたワクチン効力は対象の状態の発症を減らす。状態は、血液検査、生検組織の評価及び状態の症状のような臨床エンドポイントを通じて熱、悪寒、発疹、関節痛、悪心、嘔吐、赤目、がん再発、等として評価することが可能である。
【０２２７】
他の方法で示されていなければ、本開示の実行は、免疫学、分子生物学、微生物学、細胞生物学及び組換えＤＮＡの従来の技法を用いることが可能である。これらの方法は以下の出版物に記載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、（１９８９）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ、ら、編、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、（１９８７）；ｔｈｅ  ｓｅｒｉｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＩＮ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）；Ｍ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、ら、ＰＣＲ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  ａｔ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１）；ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎら、編、ＰＣＲ  ２：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、（１９９５）；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、編．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、（１９８８）；及びＲ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、編．Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（１９８７）を参照されたい。
【０２２８】
公開されているデータベースが提供する配列情報を使用すれば、本明細書に開示されるシステム及び方法を用いて使用することが可能な追加の遺伝子及びタンパク質配列を同定することが可能である。
【０２２９】
本明細書に開示される及び参照される配列のバリアントも含まれる。タンパク質のバリアントは、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有するタンパク質を含むことが可能である。本明細書で使用されるように、「保存的置換」は、以下の保存的置換群：群１：アラニン（Ａｌａ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）；群２：アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）；群３：アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）；群４：アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）；群５：イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、バリン（Ｖａｌ）；及び群６：フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）の１つに見出される置換を含む。
【０２３０】
さらに、アミノ酸は、類似する機能又は化学構造若しくは組成（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、硫黄含有）により保存的置換群にグループ分けすることが可能である。例えば、脂肪族グループは、置換を目的に、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅを含むことができる。互いに保存的置換と見なされるアミノ酸を含有する他の群は：硫黄含有：Ｍｅｔ及びシステイン（Ｃｙｓ）；酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、及びＧｌｎ；小脂肪族、非極性又はわずかに極性残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、及びＧｌｙ；極性、負電荷残基及びそのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、及びＧｌｎ；極性、正電荷残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、及びＬｙｓ；大きな脂肪族、非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、及びＣｙｓ；並びに大きな芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、及びＴｒｐを含む。追加の情報はＣｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙに見出せる。
【０２３１】
他の場所で示したように、遺伝子配列のバリアントは、コードされた産物の機能に統計的に有意な程度に影響を与えないコドン最適化バリアント、配列多形性、スプライスバリアント及び／又は突然変異を含むことが可能である。
【０２３２】
本明細書に開示されるタンパク質、核酸及び遺伝子配列のバリアントは、本明細書に開示されるタンパク質、核酸又は遺伝子配列に少なくとも７０％配列同一性、８０％配列同一性、８５％配列同一性、９０％配列同一性、９５％配列同一性、９６％配列同一性、９７％配列同一性、９８％配列同一性、又は９９％配列同一性を有する配列も含む。
【０２３３】
「％配列同一性」とは、配列を比較することにより決定される場合、２つ以上の配列の間の関係のことである。当技術分野では、「同一性」とは、一連のそのような配列間の適合により決定されるタンパク質、核酸、又は遺伝子配列の間の配列関連性の程度も意味する。「同一性」（「類似性」と呼ばれることが多い）は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ、Ａ．Ｍ．、編）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ、Ｄ．Ｗ．、編）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ、Ｐａｒｔ  Ｉ（Ｇｒｉｆｆｉｎ、Ａ．Ｍ．、ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ、Ｈ．Ｇ．、編）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＪ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ、Ｇ．、編）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ、Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ、Ｊ．、編）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ（１９９２）に記載される方法を含む、公知の方法により容易に計算することが可能である。同一性を決定するのに好ましい方法は、試験される配列間で最良の適合を与えるように設計される。同一性及び類似性を決定するための方法は一般に入手可能なコンピュータプログラムに成文化されている。配列アライメント及びパーセント同一性計算は、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥバイオインフォマティックスコンピューティングスイートのＭｅｇａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ、Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）を使用して実施してもよい。配列の複数のアライメントも、デフォルトパラメータ（ギャップペナルティー＝１０、ギャップ長ペナルティー＝１０）を用いてアライメントのＣｌｕｓｔａｌ法（Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ  ＣＡＢＩＯＳ、５、１５１〜１５３頁（１９８９））を使用して実施することが可能である。関連するプログラムは、プログラムのＧＣＧスイート（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ９．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）；ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ、ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０頁（１９９０）；ＤＮＡＳＴＡＲ（ＤＮＡＳＴＡＲ、Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）；及びスミスウォーターマンアルゴリズムを組み込んでいるＦＡＳＴＡプログラム（Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．、［Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．］（１９９４）、Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｄａｔｅ  １９９２年、１１１〜２０頁．編者：Ｓｕｈａｉ、Ｓａｎｄｏｒ．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｐｌｅｎｕｍ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．）も含む。本開示の文脈内では、配列分析ソフトウェアが分析のために使用される場合、分析の結果は参照されるプログラムの「デフォルト値」に基づいていることは理解される。本明細書で使用されるように、「デフォルト値」は任意のセットの値又はパラメータを意味し、これらは最初に初期化されるときにソフトウェアと一緒に本来ロードされる。
【０２３４】
例示的な実施形態及び下の実施例は、本開示の特定の実施形態を実証するために含まれる。当業者であれば、本開示に照らせば、本明細書に開示される特定の実施形態には多くの変化を加えることが可能であり、それでも本開示の精神と範囲から逸脱することなく同様の又は類似の結果が得られることを認識するはずである。
【０２３５】
例示的な実施形態
１．Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチドの治療有効量を対象に投与し、コードされたＴＣＲは投与の臨床的に関連するタイムウィンドウ内に対象に投与されたワクチン抗原に特異的に結合し、それによって対象をワクチン接種することを含む、対象をワクチン接種する方法。
２．投与が、ワクチン抗原単独の投与と比べた場合、ワクチン接種の効力を改善する、実施形態１の方法。
３．年齢又は免疫状態に起因して、対象がワクチン効力を改善される必要がある、実施形態１又は２の方法。
４．免疫状態が低Ｔ細胞数を含む、実施形態３の方法。
５．ワクチン接種が、ＡＩＤＳ、マラリア、ヘルペス、クラミジア、エプスタインバーウイルス、肺炎球菌又はＢ型肝炎の治療を提供する、実施形態１〜４のいずれかの方法。
６．ＴＣＲがクラスＩ制限である、実施形態１〜５のいずれかの方法。
７．ＴＣＲがクラスＩＩ制限である、実施形態１〜５のいずれかの方法。
８．ＴＣＲがクラスＩ制限であり、改善されたワクチン効力がＴ細胞傷害性応答を改善するＣＤ８＋Ｔヘルパー細胞活性に起因する、実施形態６の方法。
９．ＴＣＲがクラスＩＩ制限であり、改善されたワクチン効力がＢ細胞抗体応答を改善するＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞活性に起因する、実施形態７の方法。
１０．ＴＣＲが、α鎖及びβ鎖の可変領域を含む、実施形態１〜９のいずれかの方法。
１１．ＴＣＲが、α鎖及びβ鎖の定常領域を含む、実施形態１〜１０のいずれかの方法。
１２．ＴＣＲが、膜貫通ドメイン及び細胞質側テイルを含む、実施形態１〜１１のいずれかの方法。
１３．ＴＣＲが、配列番号１、４、１８、２１、２３、２５、２７、２９〜３２、３４及び３６から選択されるα鎖を含む、実施形態１〜１２のいずれかの方法。
１４．ＴＣＲが、配列番号２、３、１９、２２、２４、２６、２８、３３、３５及び３７から選択されるβ鎖を含む、実施形態１〜１３のいずれかの方法。
１５．ＴＣＲが、配列番号５〜１２、１５、１６及び３９から選択される配列を含む、実施形態１〜１２のいずれかの方法。
１６．ワクチン抗原が、ウイルス抗原を含む、実施形態１〜１５のいずれかの方法。
１７．ウイルス抗原が、アデノウイルス、アレナウイルス、ブニアウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、ハンタウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、パラミクソウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、海綿状ウイルス又はトガウイルスに由来する、実施形態１６の方法。
１８．ウイルス抗原が、サイトメガロウイルス、風邪ウイルス、エプスタインバーウイルス、フルウイルス、Ａ型、Ｂ型、又はＣ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、天然痘ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ウエストナイルウイルス又はジカウイルスにより発現されるペプチドを含む、実施形態１６又は１７の方法。
１９．ウイルス抗原が、エンベロープ糖タンパク質Ｂ及び／若しくはＣＭＶ  ｐｐ６５から選択されるサイトメガロウイルス抗原；ＥＢＶ  ＥＢＮＡＩ、ＥＢＶ  Ｐ１８及び／若しくはＥＢＶ  ｐ２３から選択されるエプスタインバー抗原；Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、Ｍ及び／若しくはＬタンパク質又はプレＳ抗原から選択される肝炎ワクチン抗原；糖タンパク質Ｄから選択される単純ヘルペスワクチン抗原；ＨＩＶ  ｇｐ３２、ＨＩＶ  ｇｐ４１、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ｇｐ１６０、ＨＩＶ  Ｐ１７／２４、ＨＩＶ  Ｐ２４、ＨＩＶ  Ｐ５５  ＧＡＧ、ＨＩＶ  Ｐ６６  ＰＯＬ、ＨＩＶ  ＴＡＴ、ＨＩＶ  ＧＰ３６、Ｎｅｆタンパク質及び／若しくはＨＩＶ逆転写酵素から選択されるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ワクチン抗原；Ｌ１タンパク質から選択されるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ウイルス抗原；赤血球凝集素及びノイラミニダーゼから選択されるインフルエンザワクチン抗原；タンパク質Ｅ、Ｍ−Ｅ、Ｍ−Ｅ−ＮＳ１、ＮＳ１若しくはＮＳ１−ＮＳ２Ａから選択される日本脳炎ワクチン抗原；サーカムスポロゾイト（ＣＳＰ）、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ若しくはフルクトース二リン酸アルドラーゼから選択されるマラリアワクチン抗原；麻疹ウイルス融合タンパク質から選択される麻疹ワクチン抗原；狂犬病糖タンパク質若しくは狂犬病核タンパク質から選択される狂犬病ワクチン抗原；ＲＳＶ融合タンパク質若しくはＭ２タンパク質から選択される呼吸器合胞体ワクチン抗原；ＶＰ７ｓｃから選択されるロタウイルスワクチン抗原；タンパク質Ｅ１若しくはＥ２から選択される風疹ワクチン抗原；ｇｐｌ若しくはｇｐｌｌから選択される水痘帯状疱疹ワクチン抗原；又は前膜、エンベロープ（Ｅ）、Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ若しくは非構造タンパク質１、２、３、４若しくは５から選択されるジカワクチン抗原を含む、実施形態１６〜１８のいずれかの方法。
２０．ウイルス抗原が、Ｎｅｆ（６６〜９７）、Ｎｅｆ（１１６〜１４５）、Ｇａｇ  ｐ１７（１７〜３５）、Ｇａｇ  ｐ１７〜ｐ２４（２５３〜２８４）、Ｐｏｌ３２５〜３５５（ＲＴ  １５８〜１８８）、ＣＳＰセントラルリピート領域又はＥタンパク質ドメインＩＩＩから選択される、実施形態１６〜１８のいずれかの方法。
２１．ウイルス抗原が、配列番号１２８〜１３４のいずれか１つを含む、実施形態１６〜２０のいずれかの方法。
２２．ワクチン抗原が、がん抗原を含む、実施形態１〜１５のいずれかの方法。
２３．がん抗原が、Ａ３３；ＢＡＧＥ；Ｂｃｌ−２；β−カテニン；ＣＡ１２５；ＣＡ１９−９；ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２１；ＣＤ２２；ＣＤ３３；ＣＤ３７；ＣＤ４５；ＣＤ１２３；ＣＥＡ；ｃ−Ｍｅｔ；ＣＳ−１；サイクリンＢ１；ＤＡＧＥ；ＥＢＮＡ；ＥＧＦＲ；エフリンＢ２；エストロゲン受容体；ＦＡＰ；フェリチン；葉酸結合タンパク質；ＧＡＧＥ；Ｇ２５０；ＧＤ−２；ＧＭ２；ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ  １７）；ＨＥＲ−２／ｎｅｕ；ＨＰＶ  Ｅ６；ＨＰＶ  Ｅ７；Ｋｉ−６７；ＬＲＰ；メソセリン；ｐ５３、ＰＲＡＭＥ；プロゲステロン受容体；ＰＳＡ；ＰＳＭＡ；ＭＡＧＥ；ＭＡＲＴ；メソセリン；ＭＵＣ；ＭＵＭ−１−Ｂ；ｍｙｃ；ＮＹＥＳＯ−１；ｒａｓ；ＲＯＲｌ；サバイビン；テネイシン；ＴＳＴＡチロシナーゼ；ＶＥＧＦ；又はＷＴ１を含む、実施形態２２の方法。
２４．がん抗原が、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、メソセリン、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１又はＷＴ１を含む、実施形態２２又は２３の方法。
２５．がん抗原が配列番号１３５〜１４１のいずれか１つを含む、実施形態２２〜２４のいずれかの方法。
２６．ワクチンアジュバントを投与することをさらに含む、実施形態１〜２５のいずれかの方法。
２７．ワクチンアジュバントが、（ｉ）ＣｐＧ、Ｃｐｇ−２８、ポリ（Ｉ：Ｃ）、α−ガラクトセラミド、ＭＰＬＡ、ＶＴＸ−２３３７、ＥＭＤ１２０１０８１）イミキモド、ＭＧＮ１７０３、Ｇ１００、ＣＢＬＢ５０２、ヒルトノール及びイミキモドから選択されるＴｏｌｌ様受容体リガンド、並びに／又は（ｉｉ）１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）を含む、実施形態２６の方法。
２８．ワクチンアジュバントがＳＴＩＮＧアゴニストを含む、実施形態２６の方法。
２９．ＳＴＩＮＧアゴニストが、ｃ−ｄｉＧＭＰ、ｃ−ｄｉＡＭＰ、ｃ−ＧＡＭＰ、ｃ−ＡＩＭＰ、（３’、２’）ｃ−ＡＩＭＰ、（２’、２’）ｃ−ＡＩＭＰ、（２’、３’）ｃ−ＡＩＭＰ、ｃ−ＡＩＭＰ（Ｓ）、ｃ−（ｄＡＭＰ−ｄＩＭＰ）、ｃ−（ｄＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、ｃ−（２’ＦｄＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、（２’，３’）ｃ−（ＡＭＰ−２’ＦｄＩＭＰ）、ｃ−［２’ＦｄＡＭＰ（Ｓ）−２’ＦｄＩＭＰ（Ｓ）］、ｃ−［２’ＦｄＡＭＰ（Ｓ）−２’ＦｄＩＭＰ（Ｓ）］（ＰＯＭ）２及び／又はＤＭＸＡＡを含む、実施形態２８の方法。
３０．ポリヌクレオチドが、プラスミド、ミニサークルプラスミド又は自己複製ｍＲＮＡ分子を含む、実施形態１〜２９のいずれかの方法。
３１．投与が筋肉内注射を介してを含む、実施形態１〜３０のいずれかの方法。
３２．ポリヌクレオチドがナノ粒子内にある、実施形態１〜３１のいずれかの方法。
３３．ナノ粒子が、リポソーム、ポリマー粒子、金属粒子、ポリマーミセル、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）／ＤＮＡ複合体又はこの組合せを含む、実施形態３２の方法。
３４．ナノ粒子がポリ（β−アミノエステル）ポリマーを含む、実施形態３２又は３３の方法。
３５．ナノ粒子が脂質コーティングを含む、実施形態３２〜３４のいずれかの方法。
３６．脂質コーティングがリポソーム、脂質二重層又はポリマーミセルを含む、実施形態３５の方法。
３７．ナノ粒子がＰＧＡコーティングを有するポリ（β−アミノエステル）を含む、実施形態３２〜３６のいずれかの方法。
３８．ナノ粒子がＴ細胞ターゲティング及び送達剤（Ｔ−ＤＡ）を含む、実施形態３２〜３７のいずれかの方法。
３９．Ｔ−ＤＡが、Ｔ細胞にインビボで選択的に結合する結合ドメインを含む、実施形態３８の方法。
４０．Ｔ−ＤＡが、Ｔ細胞受容体モチーフ；Ｔ細胞α鎖；Ｔ細胞β鎖；ＣＣＲ７；ＣＤ３；ＣＤ４；ＣＤ８；ＣＤ２８；ＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ６２Ｌ；ＣＤ１２７；又はＬＦＡ−１に選択的に結合する結合ドメインを含む、実施形態３８の方法。
４１．Ｔ−ＤＡ結合ドメインがＣＤ４に選択的に結合する、実施形態４０の方法。
４２．Ｔ−ＤＡ結合ドメインが配列番号４１〜４６のいずれか１つを含む、実施形態４１の方法。
４３．Ｔ−ＤＡ結合ドメインがＣＤ８に選択的に結合する、実施形態４０の方法。
４４．Ｔ−ＤＡ結合ドメインが配列番号４７〜５２のいずれか１つを含む、実施形態４３の方法。
４５．Ｔ−ＤＡ結合ドメインがＣＤ３に選択的に結合する、実施形態４０の方法。
４６．Ｔ−ＤＡ結合ドメインが配列番号５３〜５８のいずれか１つを含む、実施形態４５の方法。
４７．Ｔ−ＤＡがＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞にインビボ及びエクスビボで選択的に結合する結合ドメインを含む、実施形態３８〜４０のいずれかの方法。
４８．Ｔ−ＤＡ結合ドメインが、Ｔ細胞受容体モチーフ抗体；Ｔ細胞α鎖抗体；Ｔ細胞β鎖抗体；ＣＣＲ７抗体；ＣＤ３抗体；ＣＤ４抗体；ＣＤ８抗体；ＣＤ２８抗体；ＣＤ４５ＲＡ抗体；ＣＤ６２Ｌ抗体；ＣＤ１２７抗体；ＬＦＡ−１抗体；又は前述の抗体の効果的な断片を含む、実施形態３９〜４７のいずれかの方法。
４９．ナノ粒子がエンドソーム放出剤（ＥＲＡ）を含む、実施形態３２〜４８のいずれかの方法。
５０．ＥＲＡが配列番号４０及び５９〜８０又はこの組合せのいずれか１つを含む、実施形態４９の方法。
５１．ナノ粒子が核ターゲティング剤（ＮＴＡ）を含む、実施形態３２〜５０のいずれかの方法。
５２．ＮＴＡが配列番号８１〜１２７又はこの組合せのいずれか１つを含む、実施形態５１の方法。
５３．ナノ粒子が、ｉＰＢ７トランスポサーゼ、Ｓ／ＭＡＲエレメント、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼ含有プラスミド、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ含有プラスミド、ホモサピエンストランスポゾン由来Ｂｕｓｔｅｒ１トランスポサーゼ様タンパク質遺伝子；ヒト内在性レトロウイルスＨプロテアーゼ／インテグラーゼ由来ＯＲＦ１；ホモサピエンスＣａｓ−Ｂｒ−Ｍ（マウス）エコトロピックレトロウイルス形質転換配列；ホモサピエンス内在性レトロウイルス配列Ｋ；ホモサピエンス内在性レトロウイルスファミリーＷ配列；ホモサピエンスＬＩＮＥ−１タイプトランスポサーゼドメイン；又はホモサピエンスｐｏｇｏ転位因子を含む、実施形態３２〜５２のいずれかの方法。
５４．ｉＰＢ７トランスポサーゼが配列番号１４２を含む、実施形態５３の方法。
５５．投与することにより、投与の１０日以内に、９日以内に、８日以内に、７日以内に、６日以内に、５日以内に、４日以内に又は３日以内にＴ細胞が選択的にポリヌクレオチドを発現する、実施形態１〜５４のいずれかの方法。
５６．ワクチン抗原、及びＴ細胞により発現されるとワクチン抗原に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチド（ＰＮ）を含むキット。
５７．ＴＣＲがクラスＩ制限である、実施形態５６のキット。
５８．ＴＣＲがクラスＩＩ制限である、実施形態５６のキット。
５９．ＴＣＲがα鎖及びβ鎖の可変領域を含む、実施形態５６〜５８のいずれかのキット。
６０．ＴＣＲがα鎖及びβ鎖の定常領域を含む、実施形態５６〜５９のいずれかのキット。
６１．ＴＣＲが膜貫通ドメイン及び細胞質側テイルを含む、実施形態５６〜６０のいずれかのキット。
６２．ＴＣＲが配列番号１、４、１８、２１、２３、２５、２７、２９〜３２、３４及び３６を含むα鎖を含む、実施形態５６〜６１のいずれかのキット。
６３．ＴＣＲが配列番号２、３、１９、２２、２４、２６、２８、３３、３５及び３７を含むβ鎖を含む、実施形態５６〜６２のいずれかのキット。
６４．ＴＣＲが配列番号５〜１２、１５、１６及び３９を含む、実施形態５６〜６１のいずれかのキット。
６５．ワクチン抗原がウイルス抗原を含む、実施形態５６〜６４のいずれかのキット。
６６．ウイルス抗原が、アデノウイルス、アレナウイルス、ブニアウイルス、コロナウイルス、フラビウイルス、ハンタウイルス、ヘパドナウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、パラミクソウイルス、パルボウイルス、ピコルナウイルス、ポックスウイルス、オルソミクソウイルス、レトロウイルス、レオウイルス、ラブドウイルス、ロタウイルス、海綿状ウイルス又はトガウイルスに由来する、実施形態６５のキット。
６７．ウイルス抗原が、サイトメガロウイルス、風邪ウイルス、エプスタインバーウイルス、フルウイルス、Ａ型、Ｂ型、又はＣ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、風疹ウイルス、天然痘ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ウエストナイルウイルス又はジカウイルスにより発現されるペプチドを含む、実施形態６５のキット。
６８．ウイルス抗原が、エンベロープ糖タンパク質Ｂ及び／若しくはＣＭＶ  ｐｐ６５から選択されるサイトメガロウイルス抗原；ＥＢＶ  ＥＢＮＡＩ、ＥＢＶ  Ｐ１８及び／若しくはＥＢＶ  Ｐ２３から選択されるエプスタインバー抗原；Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、Ｍ及び／若しくはＬタンパク質又はプレＳ抗原から選択される肝炎ワクチン抗原；糖タンパク質Ｄから選択される単純ヘルペスワクチン抗原；ＨＩＶ  ｇｐ３２、ＨＩＶ  ｇｐ４１、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＩＶ  ｇｐ１６０、ＨＩＶ  Ｐ１７／２４、ＨＩＶ  Ｐ２４、ＨＩＶ  Ｐ５５  ＧＡＧ、ＨＩＶ  Ｐ６６  ＰＯＬ、ＨＩＶ  ＴＡＴ、ＨＩＶ  ＧＰ３６、Ｎｅｆタンパク質及び／若しくはＨＩＶ逆転写酵素から選択されるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ワクチン抗原；Ｌ１タンパク質から選択されるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ウイルス抗原；赤血球凝集素及びノイラミニダーゼから選択されるインフルエンザワクチン抗原；タンパク質Ｅ、Ｍ−Ｅ、Ｍ−Ｅ−ＮＳ１、ＮＳ１若しくはＮＳ１−ＮＳ２Ａから選択される日本脳炎ワクチン抗原；サーカムスポロゾイト（ＣＳＰ）、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ若しくはフルクトース二リン酸アルドラーゼから選択されるマラリアワクチン抗原；麻疹ウイルス融合タンパク質から選択される麻疹ワクチン抗原；狂犬病糖タンパク質若しくは狂犬病核タンパク質から選択される狂犬病ワクチン抗原；ＲＳＶ融合タンパク質若しくはＭ２タンパク質から選択される呼吸器合胞体ワクチン抗原；ＶＰ７ｓｃから選択されるロタウイルスワクチン抗原；タンパク質Ｅ１若しくはＥ２から選択される風疹ワクチン抗原；ｇｐｌ若しくはｇｐｌｌから選択される水痘帯状疱疹ワクチン抗原；又は前膜、エンベロープ（Ｅ）、Ｅタンパク質のドメインＩＩＩ若しくは非構造タンパク質１、２、３、４若しくは５から選択されるジカワクチン抗原を含む、実施形態６５〜６７のいずれかのキット。
６９．ウイルス抗原が、Ｎｅｆ（６６〜９７）、Ｎｅｆ（１１６〜１４５）、Ｇａｇ  ｐ１７（１７〜３５）、Ｇａｇ  ｐ１７〜ｐ２４（２５３〜２８４）、Ｐｏｌ３２５〜３５５（ＲＴ  １５８〜１８８）、ＣＳＰセントラルリピート領域又はＥタンパク質ドメインＩＩＩを含む、実施形態６５〜６８のいずれかのキット。
７０．ウイルス抗原が配列番号１２８〜１３４のいずれかを含む、実施形態６５〜６９のいずれかのキット。
７１．ワクチン抗原ががん抗原を含む、実施形態５６〜７０のいずれかのキット。
７２．がん抗原が、Ａ３３；ＢＡＧＥ；Ｂｃｌ−２；β−カテニン；ＣＡ１２５；ＣＡ１９−９；ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２１；ＣＤ２２；ＣＤ３３；ＣＤ３７；ＣＤ４５；ＣＤ１２３；ＣＥＡ；ｃ−Ｍｅｔ；ＣＳ−１；サイクリンＢ１；ＤＡＧＥ；ＥＢＮＡ；ＥＧＦＲ；エフリンＢ２；エストロゲン受容体；ＦＡＰ；フェリチン；葉酸結合タンパク質；ＧＡＧＥ；Ｇ２５０；ＧＤ−２；ＧＭ２；ｇｐ７５、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ  １７）；ＨＥＲ−２／ｎｅｕ；ＨＰＶ  Ｅ６；ＨＰＶ  Ｅ７；Ｋｉ−６７；ＬＲＰ；メソセリン；ｐ５３、ＰＲＡＭＥ；プロゲステロン受容体；ＰＳＡ；ＰＳＭＡ；ＭＡＧＥ；ＭＡＲＴ；メソセリン；ＭＵＣ；ＭＵＭ−１−Ｂ；ｍｙｃ；ＮＹＥＳＯ−１；ｒａｓ；ＲＯＲｌ；サバイビン；テネイシン；ＴＳＴＡチロシナーゼ；ＶＥＧＦ；又はＷＴ１を含む、実施形態７１のキット。
７３．がん抗原が、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、メソセリン、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１又はＷＴ１を含む、実施形態７１又は７２のキット。
７４．がん抗原が配列番号１３５〜１４１のいずれか１つを含む、実施形態７３のキット。
７５．ワクチンアジュバントを投与することをさらに含む、実施形態５６〜７４のいずれかのキット。
７６．ワクチンアジュバントが、ＳＴＩＮＧアゴニストを含む、実施形態７５のキット。
７７．ポリヌクレオチドが、プラスミド、ミニサークルプラスミド又は自己複製ｍＲＮＡ分子を含む、実施形態５６〜７６のいずれかのキット。
７８．ポリヌクレオチドがナノ粒子内にある、実施形態５６〜７７のいずれかのキット。
７９．ナノ粒子が、リポソーム、ポリマー粒子、金属粒子、ポリマーミセル、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）／ＤＮＡ複合体又はこの組合せを含む、実施形態７８のキット。
８０．ナノ粒子がポリ（β−アミノエステル）ポリマーを含む、実施形態７８のキット。
８１．ナノ粒子が脂質コーティングを含む、実施形態７８〜８０のいずれかのキット。
８２．脂質コーティングがリポソーム、脂質二重層又はポリマーミセルを含む、実施形態８１のキット。
８３．ナノ粒子がＰＧＡコーティングを有するポリ（β−アミノエステル）ポリマーを含む、実施形態７８〜８２のいずれかのキット。
８４．ナノ粒子がＴ細胞ターゲティング及び送達剤（Ｔ−ＤＡ）を含む、実施形態７８〜８３のいずれかのキット。
８５．Ｔ−ＤＡが、Ｔ細胞受容体モチーフ；Ｔ細胞α鎖；Ｔ細胞β鎖；ＣＣＲ７；ＣＤ３；ＣＤ４；ＣＤ８；ＣＤ２８；ＣＤ４５ＲＡ；ＣＤ６２Ｌ；ＣＤ１２７；又はＬＦＡ−１に選択的に結合する結合ドメインを含む、実施形態８４のキット。
８６．Ｔ−ＤＡ結合ドメインがＣＤ４に選択的に結合する、実施形態８５のキット。
８７．Ｔ−ＤＡ結合ドメインが配列番号４１〜４６のいずれか１つを含む、実施形態８６のキット。
８８．Ｔ−ＤＡ結合ドメインがＣＤ８に選択的に結合する、実施形態８５のキット。
８９．Ｔ−ＤＡ結合ドメインが配列番号４７〜５２のいずれか１つを含む、実施形態８８のキット。
９０．Ｔ−ＤＡ結合ドメインがＣＤ３に選択的に結合する、実施形態８５のキット。
９１．Ｔ−ＤＡ結合ドメインが配列番号５３〜５８のいずれか１つを含む、実施形態９０のキット。
９２．Ｔ−ＤＡがＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞にインビボ及びエクスビボで選択的に結合する結合ドメインを含む、実施形態８４又は８５のキット。
９３．Ｔ−ＤＡ結合ドメインが、Ｔ細胞受容体モチーフ抗体；Ｔ細胞α鎖抗体；Ｔ細胞β鎖抗体；ＣＣＲ７抗体；ＣＤ３抗体；ＣＤ４抗体；ＣＤ８抗体；ＣＤ２８抗体；ＣＤ４５ＲＡ抗体；ＣＤ６２Ｌ抗体；ＣＤ１２７抗体；ＬＦＡ−１抗体；又は前述の抗体の効果的な断片を含む、実施形態８５〜９２のいずれかのキット。
９４．ナノ粒子がエンドソーム放出剤（ＥＲＡ）を含む、実施形態５６〜９３のいずれかのキット。
９５．ＥＲＡが配列番号４０及び５９〜８０、又はこの組合せのいずれか１つを含む、実施形態９４のキット。
９６．ナノ粒子が核ターゲティング剤（ＮＴＡ）を含む、実施形態５６〜９５のいずれかのキット。
９７．ＮＴＡが配列番号８１〜１２７、又はこの組合せのいずれか１つを含む、実施形態９６のキット。
９８．ナノ粒子が、ｉＰＢ７トランスポサーゼ、Ｓ／ＭＡＲエレメント、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼ含有プラスミド、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ  Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼ含有プラスミド、ホモサピエンストランスポゾン由来Ｂｕｓｔｅｒ１トランスポサーゼ様タンパク質遺伝子；ヒト内在性レトロウイルスＨプロテアーゼ／インテグラーゼ由来ＯＲＦ１；ホモサピエンスＣａｓ−Ｂｒ−Ｍ（マウス）エコトロピックレトロウイルス形質転換配列；ホモサピエンス内在性レトロウイルス配列Ｋ；ホモサピエンス内在性レトロウイルスファミリーＷ配列；ホモサピエンスＬＩＮＥ−１タイプトランスポサーゼドメイン；又はホモサピエンスｐｏｇｏ転位因子を含む、実施形態５６〜９７のいずれかのキット。
９９．ｉＢＰ７トランスポサーゼが配列番号１４２を含む、実施形態９８のキット。
１００．ワクチン抗原認識能力を対象のＴ細胞に提供するための実施形態１〜９９のいずれかの方法又はキットの使用。
１０１．対象の免疫系をワクチン抗原に応答性にするための実施形態１〜９９のいずれかの方法又はキットの使用。
１０２．ワクチン抗原に応答性の対象の免疫系を増加するための実施形態１〜９９のいずれかの方法又はキットの使用。
【実施例】
【０２３６】
多くのワクチンは、ワクチン抗原と反応するＴＣＲを産生するようにＴ細胞をプログラムする薬剤と同時送達すれば、その影響を増強することが可能である。この前提は、ＣＤ８標的ナノ粒子（ＮＰ）に卵白アルブミン（ＯＶＡ）特異的ＯＴ−Ｉ  ＴＣＲをコードするプラスミドを充填することにより試験した（図３Ａ）。これらのＤＮＡ保有ＮＰの設計は、腫瘍認識能力を循環リンパ球中にプログラムするように開発されたバージョンに基づいており、それらの研究では、ＮＰにリンパ球ターゲティングリガンドを供給すると、キメラ抗原受容体遺伝子が宿主Ｔ細胞中にトランスフェクトされることが実証された。このＮＰプラットフォームは、Ｔ細胞がワクチン特異的ＴＣＲを発現するように宿主Ｔ細胞をプログラムするように改作された。Ｐ１４  ＴＣＲトランスジェニックマウス（リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスに特異的であるＣＤ８  Ｔ細胞のみを含有する）は、ＯＶＡ特異的ＯＴ−１  ＴＣＲをコードする遺伝子を送達する１０１１のＴ細胞標的ＮＰの単一用量を、ｍｙｃタグ及び機能亢進性ｉＰＢ７トランスポサーゼと一緒に筋肉内に注射した。これらのＮＰは単独で又はＯＶＡペプチドワクチンと組み合わせて注射された。対照として、マウスはＯＶＡワクチンのみで免疫される、又は非治療のままにした。ＮＰプログラム（ＯＶＡ−テトラマー＋）Ｔ細胞のパーセントをフローサイトメトリーにより定量化することができるように、免疫化後７日目及び３０日目に流入領域リンパ節を単離した。筋肉内に注射されたＮＰが操作されたＴＣＲ遺伝子を宿主Ｔ細胞中に効果的に送達し、その結果Ｔ細胞がワクチン抗原を認識することが見出された（図３Ｂ）。その急速なワクチン誘導増殖に続いて、ＮＰプログラムＴ細胞は長命の記憶Ｔ細胞に分化する（図３Ｂ、３Ｃ）。
【０２３７】
ＫｒａｓＬＳＬ−Ｇ１２Ｄ／＋；Ｔｒｐ５３ＬＳＬ−Ｒ１７２Ｈ／＋；ｐ４８Ｃｒｅ／＋（ＫＰＣ）マウスモデルを利用して、臨床的に関連するインビボ試験システムにおいてＮＰワクチン戦略を試験した。ＫＰＣモデルは、膵臓腫瘍形成を駆動することが公知の内在性遺伝子座で突然変異Ｋｒａｓ及びｐ５３を発現する。このモデルは、分子進行、病理組織学及び臨床症候群を含む、ヒト膵管腺癌（ＰＤＡ）の基本的な特長を再現する（図４Ａ）。規定された腫瘍量（２〜５ｍｍ径、高解像度超音波により決定した場合）を保有するＫＰＣマウスに、腫瘍抗原メソセリン（ＭＳＬＮ）−特異的受容体ＴＣＲ１０４５（Ｓｔｒｏｍｎｅｓ、ＩＭ、ら（２０１５）、上記）をコードする遺伝子を送達する１０１３のＴ細胞標的ＮＰの単一用量を、ｍｙｃタグ及び機能亢進性ｉＰＢ７トランスポサーゼと一緒に筋肉内に注射した（「カット及びペースト」機構を経由する染色体中へのベクターの効率的組み込みを確実にするため）。特定の実施形態では、機能亢進性ｉＰＢ７トランスポサーゼは、マウスコドン最適化ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポサーゼｃＤＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号：ＥＦ５８７６９８、Ｃａｄｉｎａｎｏｓ、Ｊ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｌｅｙ、Ａ（２００７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３５：ｅ８７、図６参照、配列番号１４２）である。これらのＮＰは、単独で、又はＭＳＬＮワクチン（マウスＭＳＬＮを発現している弱毒化組換えアデノウイルスの５×１０８ｐｆｕ）と組み合わせて注射した。対照として、マウスはＭＳＬＮワクチンのみで免疫する、又は治療しなかった。ＴＣＲ１０４５ＮＰとＭＳＬＮワクチンの両方の組合せで治療した動物のみが腫瘍退縮を示し、生存も平均２７日改善した（図４Ｂ）。
【０２３８】
当業者であれば理解するように、本明細書に開示されるそれぞれの実施形態は、その特定の記述されている要素、ステップ、成分又は構成要素を含む、本質的にからなる又はからなることが可能である。本明細書で使用されるように、移行用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）を意味するが、不特定の要素、ステップ、成分、又は構成要素を包含することに限定されず、これを多量にさえ包含することが可能である。移行句「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は明記されていないいかなる要素、ステップ、成分又は構成要素も排除する。移行句「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、実施形態の範囲を明記された要素、ステップ、成分、又は構成要素に、及びその実施形態に実質的な影響を与えない要素、ステップ、成分、又は構成要素に限定する。本明細書で使用されるように、重大な影響がでれば、ワクチン投与の７日以内にワクチン抗原に対する対象の免疫系応答を増加させる能力が統計的に有意に減少すると考えられる。
【０２３９】
他の方法に示されていなければ、明細書及び特許請求の範囲で使用される成分の量、分子量、反応条件のような特性、その他を表す数はすべて、あらゆる場合に用語「約（ａｂｏｕｔ）」が修飾していると理解されるべきである。したがって、反対の指示がなければ、明細書及び添付の特許請求の範囲で述べられている数のパラメータは、本発明が得ようとしている所望の特性に応じて変動する場合がある近似値である。何はともあれ、均等論の適用を特許請求の範囲に限定しようとする企てとしてではなく、それぞれの数のパラメータは、少なくとも、報告されている有効数字の数に照らして、及び通常の切り上げ法を適用することにより解釈するべきである。さらに明快さが求められる場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、表示されている数値又は範囲と併せて使用される場合、当業者により合理的にその用語に帰せられる意味を有する、すなわち、表示されている数値又は範囲よりも幾分多く又は幾分少なく、表示されている値の±２０％；表示されている値の±１９％；表示されている値の±１８％；表示されている値の±１７％；表示されている値の±１６％；表示されている値の±１５％；表示されている値の±１４％；表示されている値の±１３％；表示されている値の±１２％；表示されている値の±１１％；表示されている値の±１０％；表示されている値の±９％；表示されている値の±８％；表示されている値の±７％；表示されている値の±６％；表示されている値の±５％；表示されている値の±４％；表示されている値の±３％；表示されている値の±２％；又は表示されている値の±１％の範囲以内を意味する。
【０２４０】
本発明の広い範囲を示す数の範囲及びパラメータは近似値であるけれども、特定の実施例で示される数値はできる限り正確に報告されている。しかし、いかなる数値もそのそれぞれの試験測定値に見出される標準偏差から必然的に生じるある種の誤差を本来含有する。
【０２４１】
本発明を説明するという文脈で（特に、以下の特許請求の範囲という文脈で）使用される用語「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」及び類似の指示対象は、本明細書で他の方法で指示されていなければ又は明らかに文脈に矛盾しなければ、単数と複数の両方を包含すると解釈するべきである。本明細書の値の範囲の列挙は、その範囲内に収まるそれぞれ別々の値に個々に言及する速記方法としての役割を果たすことを意図しているだけである。本明細書で他の方法で指示されていなければ、それぞれ個々の値は、それが本明細書で個別に列挙されるかの如く明細書に組み込まれる。本明細書に記載される方法はすべて、本明細書で他の方法で指示されていなければ又は明らかに文脈に矛盾しなければ、いかなる適切な順番で実施することも可能である。本明細書で提供されるありとあらゆる実施例、又は例示的言語（例えば、「のような」）の使用は、本発明をもっとよく明らかにするためだけに意図されており、他の方法で請求される本発明の範囲を制限しない。本明細書の言語は、本発明の実行に不可欠ないかなる請求されていない要素も示していないと解釈されるべきである。
【０２４２】
本明細書で開示される本発明の代わりの要素又は実施形態のグループ分けは限定として解釈するべきではない。それぞれのグループのメンバーは、個別に又は本明細書に見出されるグループの他のメンバー又は他の要素と任意に組み合わせて言及し請求してもよい。グループの１つ以上のメンバーは、便宜上及び／又は特許要件という理由でグループに含まれても、グループから削除してもよいことは予想される。いかなるそのような包含又は削除が起きた場合でも、本明細書は、改変されたグループを含有し、したがって添付の特許請求の範囲で使用されるすべてのマーカッシュグループの書面による明細を満たすと見なされる。
【０２４３】
本発明を実行するために発明者らが公知の最良の様式を含む、本発明の特定の実施形態が本明細書に記載されている。当然のことながら、前述の説明を読めば、これらの記載されている実施形態の変動は当業者に明らかになる。発明者らは当業者であればそのような変動を適切だとして用いることを予測しており、発明者らは、本発明が、本明細書に具体的に記載される以外の方法で実施されることを予定している。したがって、本発明は、準拠法が認めるように、ここに添付される特許請求の範囲に列挙される主題のあらゆる改変及び等価物を含む。さらに、この考え得るあらゆる変動における上記の要素のいかなる組合せも、本明細書で他の方法で指示されていなければ又は明らかに文脈に矛盾しなければ、本発明により包含される。
【０２４４】
さらに、本明細書全体で特許及び印刷された出版物を数多く参照してきた。上に挙げる参考文献及び印刷された出版物のそれぞれを参照によりその全体を本明細書に個別に組み込む。
【０２４５】
最後に、本明細書で開示される本発明の実施形態が本発明の原理を説明していることは理解されるべきである。用いてもよい他の改変は本発明の範囲内である。したがって、例として、しかし限定せずに、本発明の代わりの構成は本明細書の教えに従って利用してもよい。したがって、本発明は正確に示され記載されている発明に限定されない。
【０２４６】
本明細書に示される特徴は、本発明の好ましい実施形態の例として及び実例となる議論のみを目的としており、本発明の種々の実施形態の原理及び概念上の態様の最も有用で容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために提示されている。これに関して、本発明の根本的な理解に必要である以上に詳細に本発明の構造的詳細を明らかにしようと試みてはおらず、本発明のいくつかの形態を当業者にとって明らかにする図面及び／又は実施例を用いた説明は実際に具体化してもよい。
【０２４７】
本開示において使用される定義及び説明は、以下の実施例で明白に曖昧さを残さず改変されなければ又はその意味の適用がいかなる解釈も無意味にする若しくは本質的に無意味にする場合、いかなる将来の解釈においても、支配的であることを意味し意図している。用語の解釈が用語を無意味にする若しくは本質的に無意味にすると考えられる場合、Ｗｅｂｓｔｅｒ’ｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ、第３版又はｔｈｅ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（編者．Ａｎｔｈｏｎｙ  Ｓｍｉｔｈ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、２００４年）のような当業者に公知である辞書からその定義を採用するべきである。
【図１】
2020504133.tif 000031
【図２】
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【図３Ａ】
2020504133.tif 000033
【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
2020504133.tif 000035
【図４Ａ】
2020504133.tif 000036
【図４Ｂ】
2020504133.tif 000037
【図５】
2020504133.tif 000038
【図６】
2020504133.tif 000039
【配列表】
2020504133000001.app
【国際調査報告】
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