(57)【要約】神経変性疾患の処置。神経変性疾患、特に筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの運動ニューロン疾患の予防および処置の方法、ならびにその方法に用いる組成物および組合せ製剤を記載する。これらの方法は、このような予防または処置を必要とする対象の中枢神経系において、ｃ−Ａｂｌを阻害すること、およびＮＦκＢ活性化を阻害することを含む。組成物は、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤を含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｃ−Ａｂｌを阻害するステップ、ならびにｐ３８および／またはＪＮＫ  ＭＡＰキナーゼの阻害を介してＮＦκＢを阻害するステップを含む、運動ニューロン疾患を予防または処置する方法であって、このような予防または処置を必要とする対象の中枢神経系において行う方法。
【請求項２】
ｃ−ＡｂｌおよびＮＦκＢ活性化が、前記対象のミクログリア細胞、アストロサイト、またはニューロンにおいて阻害される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｃ−Ａｂｌが、ミクログリア細胞の活性化および／またはＴＤＰ４３の封入体の形成を阻害するように阻害される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＴＤＰ４３の封入体の形成が、ＴＤＰ４３の脱アセチル化を誘導することによって阻害される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ｃ−Ａｂｌ阻害が、前記対象におけるＥＧＦＲシグナルを減少させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ｃ−Ａｂｌの阻害剤を前記対象に投与することによってｃ−Ａｂｌが阻害される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ｃ−Ａｂｌ阻害剤が、Ｐ−糖タンパク質阻害剤と共に前記対象に同時投与されるか、または逐次投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ＮＦκＢ活性化が、ＩＬ−１βおよびＮＦκＢの産生を阻害するように、ならびに／またはＴＤＰ４３の封入体の形成を阻害するように阻害される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＮＦκＢ活性化がｐ３８  ＭＡＰＫを阻害することによって阻害される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＮＦκＢ活性化が、ＪＮＫ  ＭＡＰＫを阻害することによって阻害される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ｐ３８およびＪＮＫ  ＭＡＰキナーゼが、低分子阻害剤を前記対象に投与することによって阻害される、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記阻害剤が、ＰＦ−０３７１５４５５、ドラマピモド、ＶＸ−７０２、ＰＨ−７９７８０４、ロスマピモド、ＳＢ２０３５８０、ＰＦ−０３７１５４５５、ラリメチニブ、ＴＡＫ−７１５、タルマピモド、ＶＸ−７４５、ＢＭＳ−５８２９４９、ＡＺＤ６７０３、ＳＢ２２００２５、ドラマピモド、ＳＢ２０２１９０および７−ヒドロキシスタウロスポリン、レスタウルチニブ、タマチニブ、ＮＶＰ−ＴＡＥ６８４、ＧＳＫ−１８３８７０５Ａ、スタウロスポリン、フェドレチニブ、ニロチニブ、ＡＳＴ−４８７、ＫＷ−２４４９、ＪＮＪ−２８３１２１４１、ＳＢ２０３５８０、ならびに上記のいずれか２つ以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記阻害剤がニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ；または前記化合物の２つ以上の組合せである、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
ｃ−ＡｂｌおよびＮＦκＢ活性化が、ニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ、または前記化合物の２つ以上の組合せを前記対象に投与することによって阻害される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤が、前記対象の脳または脊髄に直接投与される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が、Ｐ−糖タンパク質阻害剤と共に前記対象に同時投与されるか、または逐次投与される、請求項１３および１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記運動ニューロン疾患が筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記運動ニューロン疾患が家族性運動ニューロン疾患である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
運動ニューロン疾患の予防または処置に使用するための、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤。
【請求項２０】
運動ニューロン疾患の予防または処置のための薬剤の製造における、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤の使用。
【請求項２１】
前記ｃ−Ａｂｌ阻害剤がミクログリア細胞の活性化および／またはＴＤＰ４３の封入体の形成を阻害する、請求項１９に記載の使用の阻害剤、または請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記ｃ−Ａｂｌ阻害剤が、ＴＤＰ４３の脱アセチル化を誘導することによって、ＴＤＰ４３の封入体の形成を阻害する、請求項１９または２１のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤、または請求項２０〜２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が、ＩＬ−１βおよびＮＦκＢの産生を阻害するように、ならびに／またはＴＤＰ４３の介在物の形成を阻害するように、ＮＦκＢ活性化を阻害する、請求項１９、２１、もしくは２２のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤、または請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２４】
前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が、ｐ３８ＭＡＰＫを阻害することによってＮＦκＢ活性化を阻害する、請求項１９もしくは２１のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤、または請求項２０〜２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が、ＪＮＫ  ＭＡＰＫを阻害することによってＮＦκＢ活性化を阻害する、請求項１９または２１のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤、または請求項２１〜２２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２６】
前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が、ｐ３８ＭＡＰＫの低分子阻害剤である、請求項２４に記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項２７】
前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が、ＪＮＫ  ＭＡＰＫの低分子阻害剤である、請求項２６に記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項２８】
前記阻害剤が、ＰＦ−０３７１５４５５、ドラマピモド、ＶＸ−７０２、ＰＨ−７９７８０４、ロスマピモド、ＳＢ２０３５８０、ＰＦ−０３７１５４５５、ラリメチニブ、ＴＡＫ−７１５、タルマピモド、ＶＸ−７４５、ＢＭＳ−５８２９４９、ＡＺＤ６７０３、ＳＢ２２００２５、ドラマピモド、ＳＢ２０２１９０および７−ヒドロキシスタウロスポリン、レスタウルチニブ、タマチニブ、ＮＶＰ−ＴＡＥ６８４、ＧＳＫ−１８３８７０５Ａ、スタウロスポリン、フェドレチニブ、ニロチニブ、ＡＳＴ−４８７、ＫＷ−２４４９、ＪＮＪ−２８３１２１４１およびＳＢ２０３５８０、ならびに上記のいずれか２つ以上の組み合わせからなる群より選択される、請求項２６または２７に記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項２９】
前記阻害剤がニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ；または前記化合物の２つ以上の組合せである、請求項２３または２４に記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項３０】
前記ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤がニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ；または前記化合物の２つ以上の組合せである、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項３１】
前記ｃ−Ａｂｌの阻害剤、および前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が、前記脳または脊髄に直接投与される、請求項２６〜３０のいずれかに記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項３２】
Ｐ−糖タンパク質阻害剤をさらに含む、請求項２６〜３０のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項３３】
前記運動ニューロン疾患がＡＬＳである、請求項２６〜３１のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項３４】
前記運動ニューロン疾患が家族性運動ニューロン疾患である、請求項２６〜３３のいずれか一項に記載の使用のための阻害剤または使用。
【請求項３５】
ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤、および薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を含み、前記ｃ−Ａｂｌの阻害剤および前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が異なる化合物である、医薬組成物。
【請求項３６】
複合製剤であって、（ａ）ｃ−Ａｂｌの阻害剤；および（ｂ）ＮＦκＢ活性化の阻害剤を含み、前記ｃ−Ａｂｌの阻害剤および前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤が異なる化合物である、複合製剤。
【請求項３７】
請求項３５に記載の医薬組成物、またはＰ−糖タンパク質阻害剤をさらに含む、請求項３８に記載の複合製剤。
【請求項３８】
前記Ｐ−糖タンパク質阻害剤は、シクロスポリンＡ、ケトコナゾール、キニジン、リトナビル、ベラパミル、エベロリムス、エラクリダール、および上記のいずれか二つ以上の組合せからなる群より選択される、請求項７〜１８のいずれか一項に記載の方法、または請求項３５もしくは３７に記載の医薬組成物、または請求項３６に記載の組合せ製剤。
【請求項３９】
ニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ、または前記化合物の２つ以上の組合せ；およびＰ−糖タンパク質阻害剤を含む、組成物。
【請求項４０】
ニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ、または前記化合物の２つ以上の組合せ；およびＰ−糖タンパク質阻害剤、ならびに薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項４１】
（ａ）ニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ、または前記化合物の２つ以上の組み合わせ；および（ｂ）Ｐ−糖タンパク質阻害剤を含む、組み合わされた調製物。
【請求項４２】
前記Ｐ糖タンパク質阻害剤は、シクロスポリンＡ、ケトコナゾール、キニジン、リトナビル、ベラパミル、エベロリムス、エラクリダール、および上記のいずれか２つ以上の組合せからなる群より選択される、請求項３９に記載の組成物、請求項４０に記載の医薬組成物、または請求項４１に記載の組合せ製剤。
【請求項４３】
前記Ｐ−糖タンパク質阻害剤がキニジンである、請求項４３に記載の組成物、請求項４２に記載の医薬組成物、または請求項４１に記載の組合せ製剤。
【請求項４４】
ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤、ならびに薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物であって、前記医薬組成物がＣＮＳへの直接投与に適しているか、またはＣＮＳへの投与に適応している医薬組成物。
【請求項４５】
内因性ＣＳＦ中に存在する１以上の電解質を含み、前記１以上の電解質がナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リン、および塩化物イオンから選択される、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
１５０ｍＭのナトリウムイオン、３ｍＭのカリウムイオン、１．４ｍＭのカルシウムイオン、０．８ｍＭのマグネシウムイオン、１．０ｍＭのリンイオン、および１５５ｍＭの塩化物イオンを含む溶液を含む、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記ｃ−Ａｂｌの阻害剤、および前記ＮＦκＢ活性化の阻害剤がニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ；または前記化合物の２つ以上の組合せである、請求項４４〜４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
運動ニューロン疾患の予防または処置に使用するための、請求項３９〜４７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、または組合せ製剤。
【請求項４９】
運動ニューロン疾患の予防または処置のための医薬の製造における、請求項３５〜４７のいずれか一項に記載の組成物、医薬組成物、または組合せ製剤の使用。
【請求項５０】
前記運動ニューロン疾患が筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項３５〜４９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５１】
前記運動ニューロン疾患が家族性運動ニューロン疾患である、請求項４８〜５０のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経変性疾患、特に筋萎縮性側索硬化症のような運動ニューロン疾患の処置、および当該方法に使用するための組成物または組合せ製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）は、発話、歩行、呼吸、嚥下などの必須随意筋活動を制御する細胞である運動ニューロンを破壊する進行性神経疾患の群である。通常、脳の神経細胞（上位運動ニューロン）からのメッセージは、脳幹および脊髄の神経細胞（下位運動ニューロン）に伝えられ、そこから特定の筋肉に伝えられる。上位運動ニューロンは下位運動ニューロンを指示して、歩行または咀嚼などの運動を生み出す。下位運動ニューロンは、腕、脚、胸部、顔面、咽頭、舌の動きを制御する。
【０００３】
最下位の運動ニューロンと筋肉との間にシグナルの途絶があると、筋肉は適切に働かなくなる。筋肉は徐々に弱くなり、無駄に衰弱し始め、制御不能な単収縮（線維束性収縮と呼ばれる）を起こすことがある。上位運動ニューロンと下位運動ニューロンとの間にシグナルの途絶があると、四肢の筋肉はこわばり（痙縮と呼ばれる）を生じ、運動は遅く、かつ努力性となり、膝および足首のけいれんなどの腱反射は過剰に活動するようになる。時間がたつにつれて、随意運動を制御する能力が失われることがある。
【０００４】
ＭＮＤは、遺伝性（家族性）か散発性かによって分類され、変性が上位運動ニューロン、下位運動ニューロン、またはその両方に影響を及ぼすかどうかによって分類される。成人では、最も一般的なＭＮＤは筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）であり、上位運動ニューロンと下位運動ニューロンの両方を侵す。それは遺伝性かつ散発性の型を有し、腕、脚、または顔面筋を侵しうる。原発性側索硬化症（ＰＬＳ）は上位運動ニューロンの疾患であり、一方進行性筋萎縮症（ＰＭＡ）は脊髄の下位運動ニューロンのみに影響を及ぼす。進行性球麻痺（ＰＢＰ）では、脳幹の最下位運動ニューロンが最も影響を受け、不明瞭発語ならびに咀嚼および嚥下困難を引き起こす。腕および脚には、ほぼ常に軽度の異常徴候がみられる。
【０００５】
【表１】
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【０００６】
ＡＬＳは、全ての随意筋へのシグナルを破壊する進行性で最終的に致死的な障害である。運動ニューロン疾患およびＡＬＳという用語は、しばしば互換的に使われる。ＡＬＳは４０〜６０歳の人に最も多く発症するが、より若年の、およびより高齢の個体でも当該疾患を発症する可能性がある。男性の方が女性よりも侵されやすい。ＡＬＳの家族型はＡＬＳの症例の１０％以下を占め、現在までに１０より多い遺伝子が同定されている。しかし、発見された遺伝子変異のほとんどは、非常に少数の症例を占めている。成人に最もよくみられるＡＬＳの家族型は、第２１染色体に位置するスーパーオキシドジスムターゼ遺伝子またはＳＯＤ１の突然変異によって引き起こされる。
【０００７】
現在のところ、ＡＬＳまたはその他のＭＮＤに対する治癒または標準処置はない。リルゾール（Ｒｉｌｕｔｅｋ（登録商標））は、ＡＬＳを治療するために米国食品医薬品局によって承認された唯一の処方された薬であり、２〜３カ月延命するが、症状は軽減せず、悪心および疲労などの望ましくない副作用がある。この薬物は、運動ニューロンにシグナルを伝達する神経伝達物質グルタミン酸の体内での自然産生を減少させる。過度に多量のグルタミン酸は運動ニューロンを傷害し、神経シグナル伝達を阻害しうると考えられている。
【０００８】
哺乳類の中枢神経系（ＣＮＳ）は免疫学的に特権があると考えられており、常在免疫細胞は比較的少なく、特異性の高い血液脳関門（ＢＢＢ）がある。しかしながら、神経変性疾患における免疫および炎症性異常の存在を支持するかなりの証拠がある。神経炎症は、ミクログリア（ミクログリオーシス）、アストログリオーシス、浸潤性免疫細胞の活性化と増殖を特徴とする。それは、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ＡＬＳを含む多くの神経変性疾患の病理学的特徴である。神経炎症応答は、運動ニューロンの生存に有益なこともあれば有害なこともある。これらの別個の作用は、ミクログリア／マクロファージおよびアストロサイトの異なる活性化状態によって誘発され、浸潤性Ｔ細胞によって調節される（非特許文献１）。
【０００９】
ミクログリアは、ＣＮＳにおける免疫防御の第一線として作用し、その過程を通して周囲の環境を調査する。ミクログリアはＣＮＳの病理学的変化に感受性があり、損傷した組織からの危険シグナルに応答する。ＡＬＳにおける運動ニューロン損傷の初期段階の間、運動ニューロンからの修復シグナルがミクログリア細胞の活性化をＭ２表現型に誘導すると考えられている。Ｍ２ミクログリアは神経保護因子（例えば神経栄養因子および抗炎症因子）を放出して、運動ニューロンを修復し、さらなる損傷から保護する。アストロサイトは、神経栄養因子を分泌することによって神経保護プロセスにも関与する。疾患が進行すると、損傷した運動ニューロンは、ミクログリアを細胞傷害性Ｍ１表現型に変換する危険シグナルを放出する。Ｍ１ミクログリアは炎症誘発性サイトカイン（例えば腫瘍壊死因子α、ＴＮＦ−α、インターロイキン−１β、ＩＬ−１β）を放出し、活性酸素種を放出することで神経毒性を促進する。これらの炎症誘発性サイトカインはさらにミクログリアを活性化し、過剰な神経毒性をもたらす。また、Ｍ１ミクログリアは、アストロサイトの活性化を促進する。活性化されたアストロサイトは、活性酸素種および炎症誘発性サイトカインの放出を伴う有害な炎症表現型を獲得し、その結果、ミクログリアの活性化がさらに誘導され、運動ニューロンの変性が増強される。活性化されたグリア細胞はまた、末梢単球／マクロファージおよびＴ細胞をＣＮＳに動員し、これは運動ニューロン変性をさらに悪化させる。ＡＬＳにおける神経炎症反応は、非特許文献１およびＬｅｗｉｓら（非特許文献２）によってレビューされている。
【００１０】
主としてミクログリア上に発現するパターン認識受容体（ＰＲＲ）は、組織傷害または損傷に対する最初のレスポンダーである。ＰＲＲは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と呼ばれる独特の微生物構造、例えば微生物核酸、細菌分泌システム、および微生物細胞壁の成分を検出する。損傷した宿主細胞はまた、危険関連分子パターン（ＤＡＭＰ）、例えばＡＴＰ、高移動度グループボックス１（ＨＭＧＢ１）、熱ショックタンパク質ｈｓｐ７０およびｈｓｐ９０を放出することによってＰＲＲを誘発することができる。ＰＲＲは、膜表面、例えばＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）とＣ型レクチン受容体（ＣＬＲ）、または細胞質内、例えばＮｏｄ様受容体（ＮＬＲ）、ＲＩＧ−Ｉ様受容体（ＲＬＲ）、およびＡＩＭ２様受容体（ＡＬＲ）のいずれかであり得る。ＰＡＭＰおよびＤＡＭＰに遭遇する多くのＰＲＲは、核内因子−κＢ（ＮＦκＢ）、アクチベータータンパク質１（ＡＰ１）、およびインターフェロン調節因子（ＩＲＦ）による遺伝子転写を促進するシグナル伝達カスケードを誘発する。標的遺伝子は、サイトカイン、インターフェロン、および他の炎症誘発性または殺菌性タンパク質をコードする。
【００１１】
Ｔｏｌｌ様受容体／インターロイキン−１受容体（ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒ）スーパーファミリーは、細胞外免疫グロブリン様ドメインと細胞内Ｔｏｌｌ／インターロイキン−１Ｒ（ＴＩＲ）ドメインを特徴とする構造的に相同なタンパク質の群である。ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒスーパーファミリーの要素は、免疫応答において基本的な役割を果たす。これらの受容体は微生物成分を検出し、複数の炎症性遺伝子の発現増加をもたらす複雑なシグナル伝達経路を誘発する。スーパーファミリーには、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）サブファミリー、インターロイキン−１受容体（ＩＬ−１Ｒ）サブファミリー、およびＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質（例えばＭｙＤ８８）が含まれる。
【００１２】
ＮＬＲおよびＡＬＲのサブセットは、別個の防御機構を誘発する。これらのタンパク質は、インフラマソームとよばれる細胞質のタンパク質複合体を集合させる。いったん活性化されると、インフラマソームはプロカスパーゼ−１（カスパーゼ−１の前駆分子）に、それ自体のカスパーゼ活性化とリクルートドメイン（ＣＡＲＤ）を介して、またはアダプタータンパク質ＡＳＣのＣＡＲＤを介して結合し、それはインフラマソーム形成の間に結合する。インフラマソームは、プロカスパーゼ−１分子の自己触媒的切断を誘導してカスパーゼ−１を形成し、これは、初期の炎症シグナルに応答して様々なプロセスを行うことができ、それには、炎症誘発性サイトカインであるプロインターロイキン（ＩＬ）−１βのＩＬ−１βへのタンパク質分解的切断が含まれる。
【００１３】
Ｉ型ＩＬ−１受容体／ＩＬ−１アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）複合体を介してＩＬ−１βシグナルが伝達され、グリアにおける炎症誘発性サイトカイン（腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、ＩＬ−６、およびインターフェロン）ならびに好中球動員ケモカイン（ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ２）のＮＦκＢ依存性転写を引き起こす。ＩＬ−１βは（ＮＦ−κＢを活性化することによって）自体の遺伝子の発現を誘導し、これはＩＬ−１応答を増幅する正のフィードバックループとして働く。
【００１４】
ＲＮＡ結合タンパク質、特にトランス活性応答（ＴＡＲ）ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ４３）は、運動ニューロン疾患および関連神経変性疾患の病因の中心である。ＴＤＰ４３は、ほとんどの型のＡＬＳに特徴的なタンパク質封入体の主要な構成成分である。ＴＤＰ４３は、ＲＮＡおよびＤＮＡの結合に関与する２つのＲＮＡ認識モチーフ（ＲＲＭ）、ならびにグリシンに富むカルボキシ末端ドメインを含む。ＴＤＰ４３は、主に核局在性である。罹患した脳および脊髄にみられる病的ＴＤＰ−４３は、主に細胞質に異常に凝集している。散発性およびＴＤＰ４３変異家族性症例のほぼ全例が、ＴＤＰ４３凝集を有する（非特許文献３）。沈降したＴＤＰ４３タンパク質は、ポリリン酸化され、ユビキチン化される。リン酸化は、凝集と強固に関連している。ＴＤＰ４３のアセチル化も、凝集プロセスの一部である。アセチル化はＲＮＡ結合を障害し、ＡＬＳにおける病理学的封入体に大部分類似する不溶性の高リン酸化ＴＤＰ４３種の蓄積を促進する。アセチル化は、ＴＤＰ４３のＲＲＭ内のリシン残基上で起こる。細胞質ヒストンデアセチラーゼ６（ＨＤＡＣ６）は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴＤＰ４３と相互作用する。ＨＤＡＣ６はＴＤＰ４３を脱アセチル化することが示されているが、細胞質のＴＤＰ４３凝集体は効率的に脱アセチル化できなかった（非特許文献４）。
【００１５】
ＡＬＳのＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスモデルは、ＡＬＳに対して最も広く用いられている動物モデルである（非特許文献５）。これらのマウスでは、ＡＬＳを引き起こすヒトＳＯＤ１遺伝子（Ｇ９３Ａ）の家族性変異が、内因性マウスＳＯＤ１プロモーターの制御下で全身にトランスジェニックに発現する。導入遺伝子の挿入は下位運動ニューロンの変性疾患を引き起こし、進行性の麻痺を引き起こし、最終的には死に至り、導入遺伝子コピーの数は疾患の重症度と相関する。ＴＤＰ４３の細胞質の誤局在化は、疾患の末期に生じる。
【００１６】
ｍＳＯＤマウスモデルは、ＡＬＳ患者で観察される神経炎症応答の多くの側面を再現する。ｍＳＯＤマウスでは、活性化ミクログリアの数の増加が疾患の早期の前症状段階で観察され、末期への疾患進行に伴い、腰髄中のミクログリア数はさらに２倍近く増加する。いくつかの研究では、ｍＳＯＤマウスにおける炎症応答の調節が疾患進行を変化させることが実証されており、ｍＳＯＤマウスにおけるミクログリオーシスが運動ニューロン変性に寄与しているという示唆に至る。しかし、ｍＳＯＤマウスにおいて炎症誘発性サイトカインであるＴＮＦ−αをアブレーションした実験、またはミクログリアの増殖が遮断された実験では、疾患進行の速度に影響は認められず、ミクログリオーシスはｍＳＯＤマウスモデルにおいて神経変性を増悪させないことが示唆された。
【００１７】
いくつかの証拠は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）シグナル伝達経路が神経変性状態の病理に役割を果たし得ることを示唆する。ＥＧＦＲ阻害剤による処置は、緑内障のラットモデル（非特許文献６）および脊髄損傷のラットモデル（非特許文献７）のいずれにおいても神経保護作用を有することが報告されている。両試験において、当該著者らは、ＥＧＦＲ阻害が反応性アストロサイトを標的とすることを示唆している。さらに、ヒトＡＬＳ患者の脊髄においても、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスモデル（非特許文献８）と同様に、ＥＧＦＲ  ｍＲＮＡ発現が１０倍超アップレギュレートされることが認められ、ＥＧＦＲの薬理学的阻害はこの疾患の進行を遅らせるための実行可能な戦略であり得ることが示唆された。
【００１８】
ＳＯＤ１マウスおよびＡＬＳ患者の脊髄におけるＥＧＦＲ濃度は、対照と比較して約１０倍増加している（非特許文献９）。ＥＧＦＲは、脊髄損傷の結果としてアストロサイト活性化に強く関与している（非特許文献１０；非特許文献１１）。活性化アストロサイトはグリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）を発現し、軸索および樹状突起の精製を阻害し、神経細胞アポトーシスを誘導することができるＴＮＦ、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６を含む種々の炎症性サイトカインを放出する（非特許文献１１）。さらに、ＥＧＦＲ阻害薬はニューロン再生を促進することが示されている一方で、ＥＧＦ自体はアストロサイト形成を増加させることができる（非特許文献１２）。このように、ＥＧＦＲは、脊髄におけるアストロサイト活性化において中心的な役割を果たすことができる。
【００１９】
図１に示すように、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ、ＪａｋＳＴＡＴおよびＮＦκＢを含む複数の経路を介してＥＧＦＲシグナルが伝達される。これらの経路に加えて、ＥＧＦＲはチロシンキナーゼであるｃ−Ａｂｌを刺激し、ＥＧＦＲの内在化およびオートファジーを阻害する。受容体のインターナリゼーションはＥＧＦＲシグナル伝達の低下をもたらすため、ｃ−Ａｂｌの遮断はＥＧＦＲシグナル伝達を低下させる（非特許文献１３）。加えて、ｃ−Ａｂｌ阻害に起因するオートファジーの刺激は、ＴＤＰ４３を含むミスフォールドタンパク質のクリアランスを加速する。
【００２０】
ＥＧＦＲはミクログリアの活性化および増殖にも関与しており（非特許文献１４）、ＥＧＦＲの遮断によりＬＰＳに対するミクログリアの応答が劇的に低下する。同様に、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＥＧＦＲ遮断は、ミクログリアおよびアストロサイトの活性化、瘢痕形成を減少させ、軸索の伸長を増強する（非特許文献１４）。これらの観察は、ＡＬＳにおけるグリア細胞のＭＮ毒性表現型への形質転換が、ＥＧＦＲの遮断により有意に修飾され得ることを示唆する。非特許文献１５は、非小細胞肺癌の治療薬として市販されているＥＧＦＲ阻害薬であるエルロチニブがＡＬＳのＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスモデルにおいて有益な効果を示すか否かを検証する試験について記載している。当該著者らは、エルロチニブが中枢神経系に浸透し、疾患の発症および進行の複数の読み取り値によって測定されるように、わずかではあるが統計的に有意な症状の遅延をもたらしたと報告している。しかし、この処置は寿命を延ばすことができず、モータシナプスを保護せず、アストロサイトおよびミクログリアのマーカーの調節とは相関しなかった。当該著者らは、エルロチニブはＡＬＳのＳＯＤ１マウスモデルの処置には有効ではないと結論づけている。当該著者らは、このマウスモデルではエルロチニブの有効性が認められず、皮膚刺激および下痢を含む薬物の望ましくない副作用が認められたことから、エルロチニブはＡＬＳの処置の良好な臨床候補とは思われないと結論付けている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１３；８（４）：８８８−８９９
【非特許文献２】Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ８０３７０１
【非特許文献３】Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１１  Ｎｏｖ  ３０；１３（１）：３８−５０
【非特許文献４】Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１５  Ｊａｎ  ５；６：５８４５
【非特許文献５】Ｇｕｒｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：１７７２−１７７５
【非特許文献６】Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２６：７５３２−７５４０
【非特許文献７】Ｅｒｓｃｈｂａｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２７：６４２８−６４３５
【非特許文献８】Ｏｆｆｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３８：８５−９３
【非特許文献９】Ｏｆｆｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００９  Ｊｕｎ；３８（２）：８５−９３
【非特許文献１０】Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｉｎｔ．２０１１  Ｊｕｎ；５８（７）：８１２−９
【非特許文献１１】Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ２０１４，１１：７１
【非特許文献１２】Ｍｏｎｊｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００３  Ｄｅｃ  ５；３０２（５６５１）：１７６０−５
【非特許文献１３】Ｋｕｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９９７  Ａｕｇ  １；１７（１５）：５８２０−９
【非特許文献１４】ＴａｎｏｓおよびＰｅｎｄｅｒｇａｓｔ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００６，２８１（４３）３２７１４−２３
【非特許文献１５】Ｑｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．２０１２  Ｊｕｌ  ２３；９：１７８
【非特許文献１６】Ｌｅ  Ｐｉｃｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，８（４）：ｅ６２３４２；１−１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
従って、ＡＬＳ、および他の神経変性疾患の処置の改善に対する緊急の必要性が残されている。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明者らは、ＡＬＳのような神経変性疾患の効果的な処置には、複数の機能不全経路およびプロセスを非細胞自律的に同時に修正する必要があることを認識している。
【００２４】
ＡＬＳを処置する別の方法の探索において、本発明者らは、驚くべきことに、ＡＬＳ患者由来ｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅにおけるストレス活性化ＭＡＰキナーゼｐ３８（ＭＡＰＫ１４）およびＪＮＫ（ＭＡＰＫ８）の発現の阻害が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでその毒性作用から運動ニューロンを保護することを見出した。さらに、ＩＫＫｂ（ＩκＢのリン酸化を介するＮＦκＢの活性化因子）の発現阻害も運動ニューロンを保護した。これは、Ｆｒａｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，（Ｎｅｕｒｏｎ，２０１５，８１，１００９−１０２３）が、ＡＬＳにＮＦκＢシグナルが関与しているが（Ｓｗａｒｕｐ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８，２４２９−２４４７）、アストロサイトＮＦκＢが運動ニューロン死に関与していないことを報告したことから驚くべきことである。
【００２５】
本発明者らは、ｐ３８  ＭＡＰＫで媒介されたＮＦκＢの活性化がＡＬＳ  ｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅ機能不全に関与していることを提唱する。さらに、ＪＮＫで媒介されたｃ−ｊｕｎの活性化、ひいてはＡＰ−１で媒介された炎症も、ＡＬＳアストロサイトで役割を果たしている。
【００２６】
本発明によれば、神経変性疾患を予防または処置する方法が提供され、それは：そのような予防または処置を必要とする対象の中枢神経系（ＣＮＳ）におけるｃ−Ａｂｌを阻害することを含む。
【００２７】
本発明によれば、神経変性疾患の予防または処置に使用するための、ｃ−Ａｂｌの阻害剤およびＭＡＰＫ  ｐ３８／ＪＮＫの阻害剤も提供される。
【００２８】
本明細書中で使用される用語「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ）」、「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）」、「阻害剤」等は、少なくとも示されたタンパク質の発現の阻害；またはタンパク質自体の作用の阻害に関連する任意の阻害を含み得る。
【００２９】
本発明はまた、神経変性疾患の予防または処置のための薬剤の製造におけるｃ−Ａｂｌおよびｐ３８ＭＡＰＫ／ＪＮＫの阻害剤の使用を提供する。
【００３０】
ＣＮＳ内では、ｃ−ＡｂｌおよびＭＡＰＫ  ｐ３８／ＪＮＫは、ミクログリア、アストロサイト、またはニューロンにおいて、ミクログリアおよびアストロサイトにおいて、ミクログリアおよびニューロンにおいて、アストロサイトおよびニューロンにおいて、またはミクログリア、アストロサイトおよびニューロンにおいて阻害され得る。
【００３１】
ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１またはＨＥＲ１としても知られる）は、ＥｒｂＢファミリーの受容体の要素である。ファミリーの他の要素は、ＥｒｂＢ２／ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＥｒｂＢ３／ＨＥＲ３およびＥｒｂＢ４／ＨＥＲ４である。これらはすべて膜貫通型糖タンパク質であり、以下のものからなる：（ｉ）システインに富む細胞外Ｎ末端リガンド結合ドメインと二量体化アーム；（ｉｉ）疎水性膜貫通ドメイン；および（ｉｉｉ）いくつかのリン酸化部位を有する細胞内、高度に保存された細胞質Ｃ末端チロシンキナーゼドメイン。ＥＧＦＲのエクトドメインは、閉じた不活性なコンホメーションと開いた活性なコンホメーションをもち、互いに平衡状態を保っている。リガンドがない場合には閉じたコンホメーションが有利である。リガンドが結合すると平衡がずれて開いたコンホメーションが安定化し、二量体化アームが別の受容体分子の同一の二量体化アームと相互作用してホモ二量体を形成できるようになる。ＥＧＦＲはまた、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４を含むＨＥＲファミリーの他の要素とのヘテロ二量体化を促進する。このように、ＥＧＦＲは、単独で、ホモ二量体化を介して、または他のＨＥＲファミリー要素とのヘテロ二量体化を介して、細胞シグナル伝達カスケードを開始することができる。
【００３２】
ＥＧＦＲのシグナル伝達カスケードには、ＫＲＡＳ−ＢＲＡＦ−ＭＥＫ−ＥＲＫ経路、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ホスホリパーゼＣγタンパク質経路、抗アポトーシスＡＫＴキナーゼ経路およびＳＴＡＴシグナル伝達経路が含まれる（図１）。また、ＥＧＦＲはホスホリパーゼＣを活性化し、ＰＩＰ２を加水分解してイノシトールトリスホスフェート（ＩＰ３）および１，２−ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）を生成する。ＩＰ３は、小胞体からのＣａ２＋放出を誘導して、カルシウム調節経路を活性化する。ＤＡＧは、プロテインキナーゼＣ経路を活性化する。ＥＧＦＲ経路においてＰＫＣによって調節されるシグナルモジュールの１つは、ＮＦκＢモジュールである。ＥＧＦＲによって活性化される他のシグナルモジュールには、ＦＡＫ、ＪＮＫ、ｐ３８  ＭＡＰＫおよびＥＲＫ５モジュールが含まれる。ＥＧＦＲは、ＲＡＣ１およびＣＤＣ４２などのＧタンパク質の活性化を介してＪＮＫ経路を誘導し、ＪＮＫキナーゼを動員するとともにアクチン重合を調節する。
【００３３】
いくつかの例において、ＥＧＦＲシグナル伝達は、レセプターのインターナリゼーションによって媒介される相同的脱感作を介して阻害され得る（Ｙａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．２０１４，１２４，２８７−９３）。
【００３４】
様々な細胞プロセスにおけるＥＧＦＲの機能的関与を考慮して、ＥＧＦＲ媒介効果を標的とし、妨害するいくつかのアプローチが開発されている。様々なヒト悪性腫瘍におけるＥＧＦＲを標的とするために現在用いられている２つの異なる治療的アプローチは、低分子チロシンキナーゼ阻害剤、およびモノクローナル抗体の使用である。チロシンキナーゼ阻害薬はＥＧＦＲの細胞内チロシンキナーゼドメインを標的とし、一方抗ＥＧＦＲ抗体はＥＧＦＲの細胞外ドメインに結合する。さらに、ＥＧＦＲシグナル伝達は、受容体内在化を介して阻害されうる。
【００３５】
ＥＧＦＲ内在化を増加させる剤は、神経変性疾患、特に運動ニューロン疾患の予防または処置のための本発明の方法において使用することができる。
【００３６】
ＥＧＦＲの内在化は、ｃ−Ａｂｌにより阻害される（ＴａｎｏｓおよびＰｅｎｄｅｒｇａｓｔ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００６，２８１（４３）３２７１４−２３）ため、ｃ−Ａｂｌの阻害剤は受容体の内在化を亢進させ、細胞外ＥＧＦによる受容体刺激の抑制をもたらす。
【００３７】
ＥＧＦＲの抑制は、アストロサイトおよびミクログリアの活性化を低下させ、ＩＬ−１βおよびＴＬＲリガンドに対するＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒ応答を抑制する。
【００３８】
本発明の一態様において、ｃ−Ａｂｌは、ＥＧＦＲによるＨＤＡＣ６のリン酸化を阻害するように阻害される。これは、例えば、ＥＧＦＲの内在化を促進することによって達成され得る。ＨＤＡＣ６は、ＴＤＰ４３を脱アセチル化することが示されている（Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ．２０１５  Ｊａｎ  ５；６：５８４５）。ＥＧＦＲで媒介されるＨＤＡＣ６のリン酸化（Ｔｙｒ５７０で）はＨＤＡＣ６脱アセチル化酵素活性を阻害することから（Ｄｅｒｉｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｓｉｇｎａｌ．２００９  Ｄｅｃ  ２２；２（１０２）：ｒａ８４）、内在化を介したＥＧＦＲシグナル伝達の遮断はＨＤＡＣ６活性を亢進させ、したがってＴＤＰ４３脱アセチル化が亢進し、それによってＴＤＰ４３凝集が低下する。
【００３９】
ＡＬＳおよび他の神経変性疾患では、細胞内にタンパク凝集体が高頻度に認められ、プロテアソームまたはオートファジー機構の機能不全が示唆される。これは、ｃ−Ａｂｌ活性により増加するＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を介している可能性がある（Ｅｒｔｍｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２００７  ２１，９３６−９４２）。
【００４０】
ｍＳＯＤ１マウスのミクログリアおよびアストロサイトにおいて、ＮＦκＢ活性の上昇は関連する運動ニューロン壊死をもたらす（Ｆｒａｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．２０１４  Ｍａｒ  ５；８１（５）：１００９−２３）。脳では、ＮＦκＢ活性の低下は中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）後ニューロン損傷の低下と関連している（Ｖａｒｔａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．２０１１  Ｏｃｔ  １４；８：１４０）。運動ニューロンでは、壊死は、ＮＦκＢ製造を増加させるＲｉｐ−１を介して媒介され、これは、ＮＦκＢを標的とすることが治療的選択肢であり得ることを示唆する。しかし、この転写因子の普遍的で多機能的な特性は、これを困難にしている。
【００４１】
ＮＦκＢの活性化は、ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒシグナル伝達経路によっても増加する。それらの同族リガンドを認識すると、ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒタンパク質はホモまたはヘテロ二量体化し（ＴＬＲ１／２、ＴＬＲ２／６、ＩＬ−１Ｒ／ＩＬ−１ＲａｃＰ）、ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質（すなわち、ＭｙＤ８８、ＭＡＬ／ＴＩＲＡＰ、ＴＲＩＦ、およびＴＲＡＭ）の異なる組み合わせのＴＩＲドメインへの動員を介してシグナル伝達カスケードを開始する。スーパーファミリーのすべての受容体は、ＴＬＲ３を除いて、ＭｙＤ８８を用いてそのシグナル伝達経路を開始する。場合によっては、ＭｙＤ８８は、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１／２、およびＴＬＲ２／６の刺激によって引き起こされる応答において、ＭＡＬ／ＴＩＲＡＰのような他のアダプターと協調して作用する。ＴＬＲ３で媒介されたシグナル伝達には、アダプター分子ＴＲＩＦのみが必要であり、それは、他のアダプターＴＲＡＭと会合してＴＬＲ４によっても動員される。
【００４２】
本出願人は、ＳＯＤ１マウスの脊髄中のＩＬ−１βレベルの増加、ｍＳＯＤ１のＩＬ−１β産生増加能、およびそのようなＩＬ−１βがＡＬＳ進行およびＮＦκＢ活性化を促進するという事実（Ｍｅｉｓｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２０１０  Ｊｕｌ  ２０；１０７（２９）：１３０４６−５０）が、ＴＬＲ４／ＩＬ−１シグナル伝達経路、ＩＬ−１βおよび自然免疫系の調節は、特にＭＮＤ、ＡＬＳ等の神経変性疾患の予防および処置に有益であり得ることを示唆することを認識している。さらに、ミクログリアにおいてＬＰＳ応答を発生させるために活性型ＥＧＦＲが明らかに必要であること（Ｑｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（２０１２）９，１７８）から、ＥＧＦＲの内在化の亢進により、ＴＬＲ刺激性およびＮＦκＢ介在性の炎症が低下しうることが示唆されている。
【００４３】
ストレス活性化タンパク質キナーゼ（ＳＡＰＫ）ｐ３８（ａ．ｋ．ａ．ＭＡＰＫ１１−１４）およびＪＮＫ（ａ．ｋ．ａ．ＭＡＰＫ８−１０）は、ＮＦκＢ活性化の増加を介して炎症誘発性サイトカインの産生を媒介する。それらは、サイトカイン受容体活性化、ＴＬＲ／ＩＬ−１Ｒ活性化、およびｒａｃ１のようないくつかの低分子量ＧＴＰ結合タンパク質からのシグナルを伝達するのに役立つ（ＺａｒｕｄｉｎおよびＨａｎ，Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．（２００５）１５，１１−１８）。このように、これらのキナーゼは、複数の経路によって媒介されるサイトカイン産生の炎症誘発性フィードバック刺激の中心である。
【００４４】
Ｐ−糖タンパク質は膜貫通型薬物排出ポンプであり、ＣＮＳへの薬物の侵入を減少させるための最も重要な薬物輸送体である。いくつかの実施形態において、ｃ−Ａｂｌの阻害剤（特に、ｃ−Ａｂｌチロシンキナーゼの低分子阻害剤）を、Ｐ−糖タンパク質の阻害剤（例えば、シクロスポリンＡ、ケトコナゾール、キニジン、リトナビル、ベラパミル、エベロリムス、またはエラクリダール（ＧＦ１２０９１８））と共に投与して、阻害剤（複数可）のＣＮＳ曝露を増加させることができる。
【００４５】
本発明の一態様によれば、ｃ−Ａｂｌシグナル伝達の阻害は、ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブを対象に投与することによって達成される。ニロチニブはｃ−Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害薬であり、ｃ−ｋｉｔおよびｐ３８およびＪＮＫ  ＭＡＰキナーゼのキナーゼ活性も阻害する。バフェチニブおよびボスチニブも同様の活性を有する。したがって、これらの化合物の１つ以上を投与すると、ｃ−Ａｂｌ活性が低下するため、アストロサイトおよびミクログリアの活性化が低下し、ＨＤＡＣ６活性が上昇し、それによりＴＤＰ４３のアセチル化状態が低下する（したがって凝集が阻害される）。
【００４６】
さらに、ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブは、ｐ３８およびＪＮＫ  ＭＡＰキナーゼの遮断を介してＮＦκＢの活性化を阻害し、オートファジーの加速を介してミスフォールドおよび凝集したＴＤＰ４３の除去を刺激すると考えられる。
【００４７】
ニロチニブは、Ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）基質である（Ｍａｈｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００８  Ｄｅｃ；６８（２３）：９８０９−９８１６参照）。
【００４８】
バフェチニブは、Ｂｃｒ／Ａｂｌ融合タンパク質チロシンキナーゼに特異的に結合し、阻害する経口活性２−フェニルアミノピリミジン誘導体である。
【００４９】
ボスチニブは、ＡｂｌおよびＳｒｃキナーゼの両方を標的とする合成キノロン誘導体およびデュアルキナーゼ阻害薬である。
【００５０】
所望により、ニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブ（またはその１つ以上の組み合わせ）を同時投与するか、あるいはＰ−ｇｐ阻害剤（シクロスポリンＡ、ケトコナゾール、キニジン、リトナビル、ベラパミル、エベロリムス、またはエラクリダール（ＧＦ１２０９１８）など）と逐次投与して、ＣＮＳ曝露を増加させる。
【００５１】
本発明によれば、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、ＮＦκＢ活性化の阻害剤およびオートファジーの刺激剤を含み、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を有する医薬組成物が提供され、ｃ−Ａｂｌシグナル伝達の阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤は、異なる化合物である。
【００５２】
本発明によれば、（ａ）ｃ−Ａｂｌの阻害剤；および（ｂ）ＮＦκＢ活性化の阻害剤を含み、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤は異なる化合物である組合せ製剤も提供される。
【００５３】
本発明によれば、Ｐ−糖タンパク質阻害剤をさらに含む本発明の医薬組成物、または組合せ製剤がさらに提供される。
【００５４】
本発明によれば、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、ＮＦκＢ活性化の阻害剤、およびＰ−糖タンパク質阻害剤を含む組成物も提供される。
【００５５】
本発明によれば、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、ＮＦκＢ活性化の阻害剤、Ｐ−糖タンパク質阻害剤、および薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物も提供される。
【００５６】
本発明によれば、（ａ）ｃ−Ａｂｌの阻害剤；（ｂ）ＮＦκＢ活性化の阻害剤；および（ｃ）Ｐ−糖タンパク質阻害剤を含む組合せ製剤も提供される。ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化は、同じ化合物、または異なる化合物であり得る。所望により、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤は、ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブであってもよい。あるいは、（特に、ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤が同じ化合物である場合）ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤は、ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブを除外することができる。
【００５７】
ｃ−Ａｂｌの阻害剤、ＮＦκＢ活性化の阻害剤、およびＰ−糖タンパク質阻害剤は、一緒に（すなわち同時投与）、または連続的に、任意の順序で投与することができる。１つの好ましい態様において、Ｐ−糖タンパク質阻害剤は、ｃ−Ａｂｌの阻害剤およびＮＦκＢ活性化の阻害剤の前に投与される。
【００５８】
本発明によれば、ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブ；およびＰ−糖タンパク質阻害剤を含む組成物も提供される。組成物は、ニロチニブ、およびバフェチニブ；ならびにＰ−糖タンパク質阻害剤を含み得；またはニロチニブおよびボスチニブ；ならびにＰ−糖タンパク質阻害剤を含み得；または、バフェチニブおよびボスチニブ；ならびにＰ−糖タンパク質阻害剤を含み得；あるいは、ニロチニブ、バフェチニブおよびボスチニブ；ならびにＰ−糖タンパク質阻害剤を含み得る。同じ組合せは、以下に開示する本発明の態様においても準用することができる。ニロチニブは、本発明の全ての局面において使用するために特に好ましい化合物である。
【００５９】
本発明によれば、ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブ；およびＰ−糖タンパク質阻害剤、ならびに薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物も提供される。
【００６０】
さらに、（ａ）ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブ；および（ｂ）Ｐ−糖タンパク質阻害剤を含む組合せ製剤が提供される。
【００６１】
Ｐ−糖タンパク質阻害剤は、シクロスポリンＡ、ケトコナゾール、キニジン、リトナビル、ベラパミル、エベロリムス、またはエラクリダール（ｅｌａｃｒｉｄａｒ）（ＧＦ１２０９１８）、またはキニジンからなる群から選択され得る。特定の実施形態では、Ｐ−糖タンパク質阻害剤はエラクリダールである。これらの化合物の任意の２つ以上の組合せを使用することもできる。
【００６２】
本発明によれば、神経変性疾患の予防または処置に使用するための本発明の組成物、医薬組成物、または組合せ製剤がさらに提供される。
【００６３】
また、本発明によれば、神経変性疾患の予防または処置のための医薬の調製における、本発明の組成物、医薬組成物、または組合せ製剤の使用が提供される。
【００６４】
本発明によれば、有効量のニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブを投与することを含む、神経変性疾患を予防または処置する方法；およびそのような予防または処置を必要とする対象にＰ−糖タンパク質阻害剤を提供する。
【００６５】
ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブとＰ−糖タンパク質阻害剤は、同時投与され得るか、または逐次投与され得る。
【００６６】
神経変性疾患は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などの運動ニューロン疾患である可能性がある。
【００６７】
神経変性疾患は、家族性または散発性の神経変性疾患でありうる。本発明の好ましい態様において、神経変性疾患（特にＡＬＳのような運動ニューロン疾患）は、家族性神経変性疾患である。本発明の別の好ましい態様において、神経変性疾患（特にＡＬＳのような運動ニューロン疾患）は、散発性神経変性疾患である。
【００６８】
本発明の組合せ製剤の成分は、同時使用、分離使用、または逐次使用のためのものであってよい。
【００６９】
本明細書で使用する「組合せ製剤」という用語は、組合せ成分（ａ）および（ｂ）が独立して、または組合せ成分（ａ）および（ｂ）の区別された量を有する異なる固定組合せの使用によって投与することができるという意味で「部分のキット」を指す。これらの成分は、同時に投与することも、次々と投与することもできる。成分が次々に投与される場合、好ましくは、成分の併用における処置された障害または疾患に対する効果が、組合せ成分（ａ）および（ｂ）のいずれか一方のみを使用することによって得られる効果よりも大きいように、投与間の時間間隔が選択される。
【００７０】
配合された製剤の成分は、１つの組み合わせた単位投与形態で、または成分（ａ）の第１の単位投与形態として、および成分（ｂ）の別々の第２の単位投与形態として存在し得る。組合せ製剤中で投与される組合せ成分（ａ）の組合せ成分（ｂ）に対する総量の比は、例えば、治療すべき患者部分集団のニーズ、または例えば患者の特定の疾患、年齢、性別、もしくは体重による場合がある単一の患者のニーズに対処するために、変化させることができる。
【００７１】
好ましくは、少なくとも１つの有益な効果、例えば、成分の１つの効果の強化、または組合せ成分（ａ）と（ｂ）の効果の相互強化、例えば、組み合わせ成分（ａ）と（ｂ）の一方もしくは両方の非有効用量と比較して、相加効果以上の、追加の有利な効果、副作用が少なく、毒性が少ないか、治療効果が組み合わさっており、非常に好ましくは、組合せ成分（ａ）と（ｂ）の相乗効果がある。
【００７２】
本発明の態様において、神経変性疾患は、ＡＬＳ、ＰＬＳ、ＰＭＡ、ＰＢＰ、または偽球麻痺、またはアルツハイマー病、またはパーキンソン病、または前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）などの運動ニューロン疾患である。
【００７３】
本明細書中で使用される用語「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「処置（ｔｒｅａｔ）」等は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを指す。その効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に予防することの観点から予防的であり得、ならびに／または疾患および／もしくは疾患に起因する有害作用の部分的もしくは完全な治癒の観点から治療的であり得る。本明細書中で使用される「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の処置を網羅し、（ａ）疾患の素因となりうるがまだそれを有すると診断されていない対象において疾患が発生するのを防ぐこと；（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その発症を停止または遅延させること；および（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち疾患の退行を引き起こすことを含む。
【００７４】
本明細書で使用する用語「対象」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。用語「非ヒト動物」は、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマなどの全ての哺乳動物を含む。
【００７５】
本発明の方法において、ｃ−Ａｂｌの阻害剤およびｐ３８  ＭＡＰＫのようなＳＡＰＫの阻害剤（および適宜、Ｐ−糖タンパク質阻害剤）の治療有効量を対象に投与すべきであることは理解されるであろう。
【００７６】
「治療有効量」とは、ｃ−Ａｂｌの阻害剤およびＳＡＰＫの阻害剤の量であって、疾患を処置するために対象に投与された場合に、疾患のためのそのような処置を行うのに十分である量を指す。「治療有効量」は、使用される阻害剤（複数可）、疾患およびその重症度、ならびに処置される対象の年齢、体重などに応じて変化するであろう。
【００７７】
例えば、ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブの治療有効量は、同時投与したか、またはＰ−ｇｐ阻害剤と逐次投与する場合に１日２回３００〜４００ｍｇである。または、ニロチニブ、バフェチニブもしくはボスチニブの治療有効量はまた、Ｐ−ｇｐ阻害剤なしで投与する場合、例えば、ＣＮＳに直接（例えば、脳または脊髄に直接）投与する場合には、１日２回、３００〜４００ｍｇであり得る。
【００７８】
ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤は、全身または局所経路を含むＣＮＳへの薬物送達に適した任意の利用可能な方法および経路を用いて、対象に投与することができる。一般に、本発明により意図される投与の経路は、経腸、非経口、または吸入経路を含むが、必ずしもそれらには限定されない。
【００７９】
吸入投与以外の非経口の投与の経路には、局所、経皮、皮下、筋肉内、眼窩内、被膜内、脊髄内、胸骨内、髄腔内、および静脈内経路、すなわち消化管を介する以外の任意の投与の経路が含まれるが、必ずしもそれらには限定されない。非経口投与は、全身送達または局所送達を行うために行われ得る。全身送達が望まれる場合、投与は、典型的には、医薬製剤の浸潤性または全身吸収された局所または粘膜投与を含む。経腸の投与の経路には、経口および直腸（例えば、坐剤を用いる）送達が含まれるが、必ずしもそれらには限定されない。
【００８０】
従来のおよび薬学的に許容される投与の経路には、鼻腔内、筋肉内、気管内、髄腔内、頭蓋内、皮下、皮内、局所、静脈内、腹腔内、動脈内（例えば、頸動脈を介して）、脊髄または脳送達、直腸、鼻腔、経口、ならびに他の経腸および非経口の投与の経路が含まれる。
【００８１】
所望により、ｃ−Ａｂｌの阻害剤および／またはＮＦκＢ活性化の阻害剤を、例えば、脳動脈内の部位に、または脳組織内に直接注射および／または送達することによって投与する。
【００８２】
本発明の態様において、ｃ−Ａｂｌの阻害剤および／またはＮＦκＢ活性化の阻害剤は、ＣＮＳへの直接送達、特に脊髄または脳中への送達によって、例えば脳室内（ＩＣＶ）投与によって投与される。脳中への直接投与は、在宅カニューレまたはポンプ（例えば、適当な位置に皮下に移植される）のような制御された送達装置と組み合わせて行うことができる。ヒト対象へのＩＣＶ投与の適切な方法は、例えば、Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２０１５；１２５（３）：１３３９−１３４６に記載されている。
【００８３】
本発明の組成物は、例えばヒト対象のＣＮＳへの、特に脊髄または脳中への直接的な投与に適した、またはそれに適応した製剤で提供することができる。所望により、処方物は、内因性ＣＳＦ中に存在する１以上の電解質を含む。好ましい局面において、１つ以上の電解質は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リン、および塩化物イオンから選択される。上記電解質の全てを含む処方物を、使用することができる。本発明の好ましい態様では、処方物は、処置される対象、例えばヒト対象の内因性ＣＳＦの電解質濃度に密接に一致する溶液を含む。例えば、処方物は、１００〜２００ｍＭのナトリウムイオン；１〜５ｍＭのカリウムイオン；１〜２ｍＭのカルシウムイオン；０．５〜１．５ｍＭのマグネシウムイオン；０．５〜１．５ｍＭのリンイオン；および１００〜２００ｍＭの塩化物イオンのいずれか（または各々）を含む溶液を含むことができる。例えば、本発明の好ましい組成の１つにおいて、処方物は、１５０ｍＭのナトリウムイオン、３ｍＭのカリウムイオン、１．４ｍＭのカルシウムイオン、０．８ｍＭのマグネシウムイオン、１．０ｍＭのリンイオン、および１５５ｍＭの塩化物イオンを含む溶液を含む。
【００８４】
本発明の一態様において、例えばヒト対象のＣＮＳ、特に脊髄または脳中に直接投与するのに適した、または適応された本発明の組成物は、Ｐ−糖タンパク質阻害剤を含まない。
【００８５】
阻害剤（複数可）は、単回投与または反復投与で投与することができる。適切な投与の頻度は、少なくとも１日１回、隔日、１週間に１回、２、３、または４週間に１回、１ヵ月に１回、２ヵ月に１回、または３〜６ヵ月に１回でよい。例えば、半減期を考慮すると、ニロチニブの適切な投与の頻度は、１日に少なくとも２回である。阻害剤（複数可）は、少なくとも１週間、少なくとも１ヵ月、少なくとも３〜６ヵ月、少なくとも１、２、３、４、もしくは５年間、または疾患の経過中、または対象の生涯の期間にわたって投与することができる。
【００８６】
ｃ−Ａｂｌの阻害剤、およびＮＦκＢ活性化の阻害剤が異なる化合物である場合には、それらを同時投与するか、または逐次投与することができる。阻害剤が連続的に投与される場合、それらは任意の順序で投与され得る。投与すべき第２の阻害剤は、第１の阻害剤が依然として有効である間に投与すべきであることは理解されるであろう。逐次投与のタイミングは、阻害剤のそれぞれの半減期、およびそれらのバイオアベイラビリティなどの種々の要因に依存するであろう。しかしながら、典型的には、阻害剤は互いに９６、７２、４８、３６、２４、１２、６、５、４、３、２、または１時間以内に投与されるべきであると予想される。
【００８７】
Ｐ−ｇｐ阻害剤が使用される場合、これをｃ−ＡｂｌおよびＮＦκＢ活性化の阻害剤（複数可）と同時投与することができ、またはＰ−ｇｐ阻害剤ならびにｃ−ＡｂｌおよびＮＦκＢ活性化の阻害剤（複数可）を、例えば互いに９６、７２、４８、３６、２４、１２、６、５、４、３、２、または１時間以内に逐次投与することができる（すなわち、Ｐ−ｇｐ阻害剤は、ｃ−ＡｂｌおよびＮＦκＢ活性化の阻害剤（複数可）の前または後に投与することができる）。例えば、ｃ−ＡｂｌおよびＮＦκＢ活性化の阻害剤がニロチニブである場合、Ｐ−ｇｐ阻害剤およびニロチニブを同時投与するか、または連続的に、例えば互いに９６、７２、４８、３６、２４、１２、６、５、４、３、２、もしくは１時間以内に投与することができる。Ｐ−ｇｐ阻害剤はニロチニブの前に投与してもよいか、またはニロチニブはＰ−ｇｐ阻害剤の前に投与してもよい。特定の実施形態では、Ｐ−ｇｐ阻害剤はエラクリダールである。
【００８８】
ｃ−Ａｂｌの阻害剤およびＮＦκＢ活性化の阻害剤と同時投与または逐次投与されるＰ−ｇｐ阻害剤の量は、使用される特定の阻害剤に依存する可能性が高い。しかしながら、当業者は、ｃ−Ａｂｌの阻害剤およびＮＦκＢ活性化の阻害剤の治療有効量が処置される対象のＣＮＳに浸透することを確実にするために投与するための各阻害剤の適切な量を容易に決定することができる。例えば、下記実施例１で得られた結果に基づき、ヒト対象に対するニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブの治療有効量は、同時投与した場合には１日２回３００〜４００ｍｇであるか、またはＰ−ｇｐ阻害剤エラクリダールの１日当たり１００ｍｇと逐次投与することが期待される。
【００８９】
医薬組成物を調製する方法は、当業者に公知であるか、明らかであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、第１７版、１９８５参照。
【００９０】
本発明の組成物は、適切な薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な希釈剤、または薬学的に許容可能な賦形剤との組み合わせによって、医薬組成物に処方され得、固体、半固体、液体または気体形態、例えば、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液、注射、吸入剤およびエアロゾルの製剤に処方され得る。
【００９１】
薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４など；緩衝液、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、トリス緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；洗剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０などの非イオン性洗剤；グリセロール等を含んでもよい。
【００９２】
薬学的に許容される担体、賦形剤、および希釈剤は、使用される用量および濃度でレシピエントに対して無毒であり、例えば、緩衝液、例えばリン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸；アスコルビン酸、グルタチオン、システイン、メチオニン、クエン酸を含む抗酸化剤；保存剤（例えばエタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クロル−ｍ−クレゾール、メチルもしくはプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、またはそれらの組み合わせ）；アミノ酸、例えばアルギニン、グリシン、オルニチン、リシン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリンおよびそれらの組み合わせ；単糖類、二糖類および他の炭水化物；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えばゼラチンもしくは血清アルブミン；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばトレハロース、スクロース、ラクトース、グルコース、マンノース、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボース、ラフィノース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルコサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸；および／または非イオン性界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ、Ｂｒｉｊ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むことができる。
【００９３】
経口製剤については、本発明の医薬組成物は、錠剤、粉末、顆粒またはカプセルを製造するための適切な添加物、例えばラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプンまたはジャガイモデンプンなどの従来の添加物；結晶セルロース、セルロース誘導体、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチンなどの結合剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプンまたはカルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤；タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；ならびに必要に応じて希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤および香味剤を含んでもよい。
【００９４】
注射用の医薬組成物は、活性成分を水性または非水性溶媒、例えば植物または他の類似の油、プロピレングリコール、合成脂肪酸グリセリド、注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）、高級脂肪酸またはプロピレングリコールのエステルに溶解、懸濁または乳化することにより；ならびに所要に応じて、従来の添加剤、例えば可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤および保存剤と共に処方することができる。非経口ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液、または固定油が含まれる。静脈内用のビヒクルとしては、流体および栄養補充物、電解質補充物（例えばリンガーデキストロースをベースとしたもの）等が挙げられる。典型的には、注射用組成物は、液体溶液または懸濁液として調製される；注射前の液体ビヒクル中または懸濁液中の溶液に適した固体形態も調製することができる。
【００９５】
医薬組成物は、液体形態、凍結乾燥形態、または凍結乾燥形態から再構成された液体形態であり得、凍結乾燥した調製物は、投与前に滅菌溶液で再構成される。凍結乾燥された組成物を再構成するための標準的な手順は、ある体積の純水（典型的には、凍結乾燥の間に除去される体積に等しい）を添加して戻すことである；しかし、抗菌剤を含む溶液は、非経口投与のための医薬組成物の製造のために使用され得る；Ｃｈｅｎ（１９９２）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｉｎｄ  Ｐｈａｒｍ  １８，１３１１−５４もまた参照のこと。
【００９６】
処方物の張性を調節するために、張性剤を処方物に含めることができる。例示的な張性剤には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、およびアミノ酸、糖の群からの任意の成分、ならびにそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの実施形態において、水性製剤は等張であるが、高張液または低張液が適している場合がある。用語「等張性」は、それが比較される他の何らかの溶液と同じ張性を有する溶液、例えば、生理食塩溶液または血清を示す。
【００９７】
本発明の実施形態は、以下に添付図面を参照して、例のみによって説明される：
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】図１は、ＥＧＦＲシグナル伝達の模式図を示す。
【図２ａ】図２は、２人のＡＬＳ患者（ＡＬＳ１とＡＬＳ２）の線維芽細胞に由来するｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅがマウス運動ニューロンと共培養された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでのニロチニブ、バフェチニブ、ボスチニブの効果を示す。ＡＬＳｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅを、共培養におけるマウスＨｂ９−ＧＦＰ運動ニューロン播種前に、種々の濃度のニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブで２４時間前処理した。その後、運動ニューロン播種の２４時間後および７２時間後に生存運動ニューロン数を測定し、運動ニューロン生存率を算出した後、それぞれの線の無処置対照に正規化した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．０１、＊＊＊  Ｐ＜０．００１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡ。データは、平均値±標準偏差である。ｎ＝５〜６。
【図２ｂ】図２は、２人のＡＬＳ患者（ＡＬＳ１とＡＬＳ２）の線維芽細胞に由来するｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅがマウス運動ニューロンと共培養された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでのニロチニブ、バフェチニブ、ボスチニブの効果を示す。ＡＬＳｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅを、共培養におけるマウスＨｂ９−ＧＦＰ運動ニューロン播種前に、種々の濃度のニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブで２４時間前処理した。その後、運動ニューロン播種の２４時間後および７２時間後に生存運動ニューロン数を測定し、運動ニューロン生存率を算出した後、それぞれの線の無処置対照に正規化した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．０１、＊＊＊  Ｐ＜０．００１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡ。データは、平均値±標準偏差である。ｎ＝５〜６。
【図２ｃ】図２は、２人のＡＬＳ患者（ＡＬＳ１とＡＬＳ２）の線維芽細胞に由来するｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅがマウス運動ニューロンと共培養された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでのニロチニブ、バフェチニブ、ボスチニブの効果を示す。ＡＬＳｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅを、共培養におけるマウスＨｂ９−ＧＦＰ運動ニューロン播種前に、種々の濃度のニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブで２４時間前処理した。その後、運動ニューロン播種の２４時間後および７２時間後に生存運動ニューロン数を測定し、運動ニューロン生存率を算出した後、それぞれの線の無処置対照に正規化した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．０１、＊＊＊  Ｐ＜０．００１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡ。データは、平均値±標準偏差である。ｎ＝５〜６。
【図２ｄ】図２は、２人のＡＬＳ患者（ＡＬＳ１とＡＬＳ２）の線維芽細胞に由来するｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅがマウス運動ニューロンと共培養された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでのニロチニブ、バフェチニブ、ボスチニブの効果を示す。ＡＬＳｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅを、共培養におけるマウスＨｂ９−ＧＦＰ運動ニューロン播種前に、種々の濃度のニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブで２４時間前処理した。その後、運動ニューロン播種の２４時間後および７２時間後に生存運動ニューロン数を測定し、運動ニューロン生存率を算出した後、それぞれの線の無処置対照に正規化した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．０１、＊＊＊  Ｐ＜０．００１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡ。データは、平均値±標準偏差である。ｎ＝５〜６。
【図２ｅ】図２は、２人のＡＬＳ患者（ＡＬＳ１とＡＬＳ２）の線維芽細胞に由来するｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅがマウス運動ニューロンと共培養された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでのニロチニブ、バフェチニブ、ボスチニブの効果を示す。ＡＬＳｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅを、共培養におけるマウスＨｂ９−ＧＦＰ運動ニューロン播種前に、種々の濃度のニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブで２４時間前処理した。その後、運動ニューロン播種の２４時間後および７２時間後に生存運動ニューロン数を測定し、運動ニューロン生存率を算出した後、それぞれの線の無処置対照に正規化した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．０１、＊＊＊  Ｐ＜０．００１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡ。データは、平均値±標準偏差である。ｎ＝５〜６。
【図２ｆ】図２は、２人のＡＬＳ患者（ＡＬＳ１とＡＬＳ２）の線維芽細胞に由来するｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅがマウス運動ニューロンと共培養された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでのニロチニブ、バフェチニブ、ボスチニブの効果を示す。ＡＬＳｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅを、共培養におけるマウスＨｂ９−ＧＦＰ運動ニューロン播種前に、種々の濃度のニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブで２４時間前処理した。その後、運動ニューロン播種の２４時間後および７２時間後に生存運動ニューロン数を測定し、運動ニューロン生存率を算出した後、それぞれの線の無処置対照に正規化した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．０１、＊＊＊  Ｐ＜０．００１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡ。データは、平均値±標準偏差である。ｎ＝５〜６。
【図２ｇ】図２は、２人のＡＬＳ患者（ＡＬＳ１とＡＬＳ２）の線維芽細胞に由来するｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅがマウス運動ニューロンと共培養された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでのニロチニブ、バフェチニブ、ボスチニブの効果を示す。ＡＬＳｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅを、共培養におけるマウスＨｂ９−ＧＦＰ運動ニューロン播種前に、種々の濃度のニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブで２４時間前処理した。その後、運動ニューロン播種の２４時間後および７２時間後に生存運動ニューロン数を測定し、運動ニューロン生存率を算出した後、それぞれの線の無処置対照に正規化した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．０１、＊＊＊  Ｐ＜０．００１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡ。データは、平均値±標準偏差である。ｎ＝５〜６。
【図３】図３は、ｐ３８ＭＡＰＫ（ＭＡＰＫ１４）、およびＪＮＫ（ＭＡＰＫ８）を標的とするｓｈＲＮＡによる患者および対照からのｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅの５日間処理の効果を示しており、これらの酵素の発現の阻害が共培養運動ニューロンを保護することを実証している。パーセンテージ運動ニューロン生存率を算出した後、それぞれの線の無処置対照に正規化した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊  Ｐ＜０．０１、＊＊＊  Ｐ＜０．００１。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡ。データは、平均値±標準偏差である。ｎ＝５〜６。
【実施例】
【００９９】
例１−ＡＬＳのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおけるニロチニブ、バフェチニブおよびボスチニブの効果
この例では、ＡＬＳのｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおける運動ニューロン生存に対するニロチニブ、バフェチニブおよびボスチニブの効果について述べる。このモデルは、共培養においてヒト線維芽細胞由来アストロサイトおよびマウスＨｂ９−ＧＦＰ＋運動ニューロンを用いる（Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，ＰＮＡＳ  １１１，８２９−８３２）。線維芽細胞を誘導された神経前駆細胞（ｉＮＰＣ）に再プログラミングし、アストロサイトに分化させた。ＡＬＳ患者由来のアストロサイトは、共培養において野生型Ｈｂ９−ＧＦＰ＋マウス運動ニューロンの死を引き起こし、これは正常（非ＡＬＳ）患者由来のアストロサイトには見られない特性である。興味深いことに、ＡＬＳアストロサイトは代謝および酸化ストレスにいくらかの異常を示し、それは運動ニューロンの存在下で１０〜１５倍増加する。
【０１００】
材料および方法
ｉＮＰＣは、既に記載されているように（Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．５  ２０１４，ＰＮＡＳ  １１１，８２９−８３２）ＡＬＳ患者線維芽細胞に由来し、補足したＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）（１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、５０単位／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｏｎｚａ）、１×Ｎ−２サプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で少なくとも５日間培養することによりｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅに分化させた。マウスＨｂ９ＧＦＰ＋運動ニューロンは、既に記載されているように、胚様体を介してマウスＨｂ９−ＧＦＰ＋胚性幹細胞から分化した（Ｈａｉｄｅｔ−Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ．２０１１，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２９，８２４−８２８；Ｗｉｃｈｔｅｒｌｅ  ｅｔ  ａｌ．２００２，Ｃｅｌｌ  １１０，３８５−３９７）。
【０１０１】
３，０００個のヒトｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅを、フィブロネクチン被覆３８４ウェルプレート上でウェル当たり播種した。２４時間後、ニロチニブ、バフェチニブまたはボスチニブ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ｃａｔ．＃１００１０４２２、＃１９１６９および＃１２０３０、それぞれ）を、１００％薬剤グレードＤＭＳＯでＥｃｈｏ５５０液体ハンドラー（Ｌａｂｃｙｔｅ）を用いてｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅ培地に送達した。ＤＭＳＯの最終濃度は、すべてのウェルで培地中で０．２４％（ｖ／ｖ）であった。プレートを、１，７６０×ｇで６０秒間遠心分離した。２４時間後、２，０００個のマウスＨｂ９−ＧＦＰ＋運動ニューロンを、運動ニューロン媒体（ＫｎｏｃｋＯｕｔ  ＤＭ（４５％ｖ／ｖ）、Ｆ１２媒体（４５％ｖ／ｖ）、ＫＯ血清置換（１０％ｖ／ｖ）、５０単位／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｏｎｚａ）、１ｍＭ  Ｌグルタミン、１×Ｎ−２サプリメント（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、０．１５％濾過グルコース、０．０００８％（ｖ／ｖ）２−メルカプトエタノール、２０ｎｇ／ｍｌ  ＧＤＮＦ、２０ｎｇ／ｍｌ  ＢＤＮＦ、２０ｎｇ／ｍｌ  ＣＮＴＦ）中でウェル当たり播種し、前処理されたｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅの上で共培養した。プレートを、１，７６０×ｇで６０秒間遠心分離した。ＩＮＣＥＬＬ分析装置２０００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、２４時間後および７２時間後にＨｂ９ＧＦＰ＋運動ニューロンを撮像し、ＩＮＣＥＬＬ分析装置ソフトウェア（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて生存運動ニューロンの数を計数した。
【０１０２】
共培養において７２時間後に生存した生存運動ニューロン（少なくとも１つの軸索を有するＧＦＰ＋運動ニューロンと定義）２５の数を、共培養における２４時間後の生存運動ニューロンの数のパーセンテージとして算出した。次いで、運動ニューロンの生存率を、個々のｉＡｓｔｒｏｃｙｔｅ系統ごとにＤＭＳＯ対照に正規化した。Ｄｕｎｎｅｔｔの事後検定による一元ＡＮＯＶＡを行った。
【０１０３】
結果
図２にプロットした結果は、ニロチニブ、バフェチニブおよびボスチニブが、３人の異なる患者からの共培養において、運動ニューロン生存の用量依存的な増加を促進することを示しており、ニロチニブ、バフェチニブおよびボスチニブがＡＬＳ患者において有益な効果をもたらすことを示唆している。しかしながら、このような生存率の増加は、マシチニブおよびカネルチニブでは認められなかった。
【０１０４】
結論
これらの結果から、ＡＬＳアストロサイト／運動ニューロン共培養における運動ニューロン生存率の低下によって明らかになったように、ＡＬＳ患者由来アストロサイトの毒性性質は、ニロチニブ、バフェチニブおよびボスチニブによって低下すると結論付けられた。ストレス活性化キナーゼの抑制も、運動ニューロンを保護した。理論に拘束されることを望まないが、これらの結果は、ニロチニブ、バフェチニブおよびボスチニブによるｃ−Ａｂｌおよびｐ３８およびＪＮＫ  ＭＡＰキナーゼの阻害と一致している。このような阻害は、ＮＦκＢの生成を阻害し、それによって運動ニューロンを保護することが期待される。
【図１】
2020532576.tif 000004
【図２ａ】
2020532576.tif 000005
【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図２ｄ】
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【図２ｅ】
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【図２ｆ】
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【図２ｇ】
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【図３】
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【国際調査報告】
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