(57)【要約】  本発明は、脱毛の治療のための製品および方法に関する。具体的には、本出願は、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分を含む組成物の投与を含む、脱毛を予防および治療するための組成物および方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の約１μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリア、ならびに／またはミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質およびミトコンドリア糖からなる群から選択されるミトコンドリア成分を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、脱毛を予防、改善または治療する方法。
【請求項２】
前記治療が、毛包の矮小化を阻止すること、毛包の矮小化を遅延すること、毛包の矮小化を改善すること、毛包の伸長を誘導すること、毛包の伸長を促進すること、毛包内の細胞増殖を誘導すること、毛包内の細胞増殖を促進すること、毛髪繊維の伸長を誘導すること、毛髪繊維の伸長を促進すること、毛髪繊維の太さを改善すること、毛包の成長周期相の持続期間を変更することおよびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記治療が、毛包の伸長を誘導または促進することである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記治療が、毛包内の細胞増殖を誘導または促進することである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物が約５μｇ／ｍｌ〜約５０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が約１２．５μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分が融解される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ミトコンドリア成分の少なくとも一部が無傷ミトコンドリアに含まれる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物がコロイド、液体、ローション、クリーム、軟膏、フォームまたはゲルとして製剤化される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ミトコンドリアが、胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞、血液細胞、植物組織、植物細胞および培養物中で増殖させた植物細胞からなる群から選択される細胞または組織に由来する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が局所投与、経口投与、皮下投与、皮内投与、経皮投与または全身投与により投与される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物がヒト頭皮に投与される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が、毛髪の活力に有害な影響を与える疾患、障害または状態に罹患している、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が脱毛症に罹患している、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象がミトコンドリア疾患に罹患している、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ミトコンドリア疾患がミトコンドリアＤＮＡの欠失である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ミトコンドリアＤＮＡの欠失が４９７７ｂｐの欠失である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ミトコンドリア疾患がピアソン症候群である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象が癌に罹患しており、放射線または化学療法で治療される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象が自己免疫障害に罹患している、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記自己免疫疾患が円形脱毛症である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象が３０歳超、４０歳超、５０歳超または６０歳超である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象が男性である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
脱毛を予防、改善または治療するための化粧品組成物であって、前記組成物が、有効量の約１μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリア、ならびに／またはミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質およびミトコンドリア糖からなる群から選択されるミトコンドリア成分を含み、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリア、および／またはミトコンドリア成分の１つ以上が凍結または融解され、前記組成物がさらに化粧品に許容される担体を含み、ヒト皮膚への局所投与用に製剤化される、前記化粧品組成物。
【請求項２５】
前記組成物が、約５μｇ／ｍｌ〜約５０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物が、約１２．５μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物が凍結される、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物が融解される、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ミトコンドリア成分の少なくとも一部が無傷ミトコンドリアに含まれる、請求項２４〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物がスクロースを含む、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記組成物が約１００ｍＭ〜約４００ｍＭスクロースを含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記組成物が約２００ｍＭ〜約２５０ｍＭスクロース、約１ｍＭ  ＥＧＴＡ／Ｔｒｉｓおよび約１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＭＯＰＳを含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分が、工程（ａ）〜（ｄ）：
（ａ）ヒトまたは植物の組織または器官の試料を得る工程、
（ｂ）組織または器官をホモジナイズする工程、
（ｃ）液相を分離する工程、ならびに
（ｄ）無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分を液相から単離する工程
を含む方法により得ることができるか、または得られる、請求項２４〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記方法がさらに、工程（ｅ）無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分を凍結することを含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分が、胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞、血液細胞、植物組織、植物細胞および培養物中で増殖させた植物細胞からなる群から選択される細胞または組織から得ることができるか、または得られる、請求項２４〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞または血液細胞がヒトである、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記植物細胞が新芽細胞である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
前記植物細胞がジャガイモ細胞である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３９】
請求項２４〜３８のいずれか一項に記載の化粧品組成物を含む、ローション、クリーム、軟膏、ゲル、石鹸、シャンプーまたはコンディショナー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、毛包などの発毛器官および細胞の治療のための組成物および方法に関する。具体的には、本出願は、無傷および／または破壊されたミトコンドリアを含む組成物および製剤、ならびに脱毛の予防および治療のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚内にある毛包は発毛器官である。毛包は、毛乳頭、毛乳頭の周りの毛母基、毛根鞘およびバルジを含むいくつかの部分からなる。毛乳頭細胞は毛包下部に存在し、毛包マトリックスは、毛乳頭、毛根鞘および毛髪繊維を取り囲む。
【０００３】
毛髪は、成長期（成長相）、退行期（退行または退縮相）および休止期（静止または休止相）と呼ばれるいくつかの相周期で成長する。通常最大８５〜９０％の毛包が成長期相にあり、１０〜１４％が休止期相、１〜２％が退行期相にある。
【０００４】
成長期は毛包の活発な成長相である。この相中、毛髪は、２８日ごとに約１ｃｍの速度で成長する。頭髪は、２〜７年間この活発な成長相にとどまる。毛包が成長期相にとどまる時間は、遺伝的に決定される。成長期相の最後で、未知のシグナルにより、毛包が退行期相に移行する。退行期相は約２〜３週間続き、毛髪は、その血液供給から隔離される。退行期相の最後で、毛包は静止状態の休止期相に入る。休止期相の最後で、毛包は成長期相に再び入る。毛乳頭と毛包の基部が再結合し、新しい毛髪が形成される。古い毛髪がまだ脱落していない場合、新しい毛髪が、古い毛髪を押し上げ、成長周期が再開する。
【０００５】
３０歳超の男性の４０％超を含む、何百万もの人が脱毛の影響を受けている。Ｚｈｅｎｇおよび協同者らは、毛髪試料におけるｍｔＤＮＡ  ４９７７ｂｐの欠失を同定し、欠失量が、年齢と共に指数関数的に増加して、全ｍｔＤＮＡの０％から１．４３６％まで増加することを同定した（Ｂｏｓｎ．Ｊ．Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．、２０１２、第１２巻（３）、１８７〜１９２頁）。遺伝的素因、自己免疫反応、瘢痕、疾患および感染症を含む、数多くの他の因子が、脱毛の原因となり得る。脱毛は最終的に完全な禿頭に至る場合がある。脱毛症は、毛髪が身体のある部位から喪失される医学的状態である。脱毛症としては、男性型禿頭症としても公知のアンドロゲン性脱毛症、および自己免疫障害であると考えられる円形脱毛症が挙げられる。
【０００６】
脱毛症の１つの症状としては、毛包の矮小化がある。矮小化過程において、毛包は、休止期段階後、長い停滞期相に入る。次に続く成長期の周期で、毛包はますます小さくなり、毛髪は短く細いものになる。矮小化した毛包からは、最終的に肉眼では分からない細い毛幹が形成される。最後に、毛包は、毛幹の形成を停止し、脱毛部分は、毛髪が全くない状態になり得る。
【０００７】
局所ミノキシジルおよび経口送達フィナステリドなどの薬物を含む、脱毛を治療するためのいくつかの方法が利用できる。しかし、これらの治療は、自然な毛髪成長の回復においては限られた成功しか収めておらず、様々な不要な副作用を引き起こす可能性がある。脱毛の外科的治療としては毛包の移植があり、この手法では、毛包が、頭皮の非禿頭領域から脱毛領域に移植される。
【０００８】
ミノキシジルおよびフィナステリドが脱毛を制御する正確な機構（複数可）は、完全に解明されていないが、ミノキシジルは主に休止期を短縮し、フィナステリドは主に成長期を延長すると考えられている（Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  Ａ．Ｇ．ら、Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｎ  ｈａｉｒ  ｇｒｏｗｔｈ、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、２００４、（１５０）：１８６〜１９４；Ｖａｎ  Ｎｅｓｔｅ  Ｄ．ら、Ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ａｎａｇｅｎ  ｈａｉｒ  ｉｎ  ｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、２０００、（１４３）：８０４〜８１０）。
【０００９】
米国特許第７，２７９，３２６号は、野生型ミトコンドリアＤＮＡゲノムを哺乳動物細胞に送達するための組成物に関する。米国特許第９，６０３，８７２号は、ミトコンドリア機能障害から生じる障害の治療におけるミトコンドリア置換の方法、キットおよび組成物に関する。米国特許出願公開第２００４／０１２２１０９号は、毛髪を成長させ、脱毛を予防するための調製物に関する。ドイツ特許第１０  ２０１３  ２２５  ５８８号は、チコリエキスを含む毛髪治療組成物の化粧的、非治療的使用に関する。
【００１０】
該分野における進展にもかかわらず、脱毛を予防、治療および改善する安全で効率的な治療法に対する未だ満たされていない必要性が依然存在する。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、脱毛の予防または治療のための組成物、製剤および方法を提供する。本発明は、一部、毛包の伸長に対するおよび毛乳頭細胞の機能に対するミトコンドリア成分の予想外の明らかな効果に基づくものである。
【００１２】
任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、本発明の方法による毛包の治療は、それだけに限らないが、脱毛症を患う対象など、それを必要とする対象の毛髪成長を促進し得る。本発明の方法による脱毛症に罹患している対象を治療するための無傷ミトコンドリアおよび／または破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分の使用は、ミトコンドリアまたはミトコンドリア成分が、生理学的起源のものであるため、他の公知の方法を使用するよりも安全であり得る。
【００１３】
一態様において、本発明は、脱毛を予防、改善または治療するための化粧品組成物であって、前記組成物が、有効量の約１μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリア、ならびに／またはミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質およびミトコンドリア糖からなる群から選択されるミトコンドリア成分を含み、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分の１つ以上が凍結または融解され、前記組成物がさらに化粧品に許容される担体を含み、ヒト皮膚への局所投与用に製剤化される、前記化粧品組成物を提供する。
【００１４】
特定の実施形態において、組成物は、約５μｇ／ｍｌ〜約９０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、約５μｇ／ｍｌ〜約８０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、約５μｇ／ｍｌ〜約７０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、約５μｇ／ｍｌ〜約６０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、または約５μｇ／ｍｌ〜約５０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む。特定の実施形態において、組成物は約１２．５μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００１５】
特定の実施形態において、組成物は、少なくとも約１μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約３μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約５μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約１０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約２０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約３０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約４０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、または少なくとも約５０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００１６】
特定の実施形態において、組成物は凍結される。特定の実施形態において、組成物は０℃またはより低温で凍結される。特定の実施形態において、組成物は−２０℃またはより低温で凍結される。特定の実施形態において、組成物は−７０℃またはより低温で凍結される。特定の実施形態において、組成物は液体窒素で凍結される。
【００１７】
特定の実施形態において、組成物は、凍結された後融解される。特定の実施形態において、組成物は融解され、室温である。特定の実施形態において、組成物は融解され、１５℃〜３０℃の温度である。特定の実施形態において、組成物は融解され、４℃である。
【００１８】
特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも一部は、無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも５％は、無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも１０％は、無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも２０％は、無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも４０％は、無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも６０％は、無傷ミトコンドリアに含まれる。
【００１９】
特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも一部は、破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも５％は、破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも１０％は、破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも２０％は、破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも４０％は、破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも６０％は、破壊されたミトコンドリアに含まれる。
【００２０】
特定の実施形態において、組成物は糖を含む。特定の実施形態において、組成物はスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は約１０ｍＭ〜約１０００ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は約１００ｍＭ〜約４００ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は約２００ｍＭ〜約２５０ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は少なくとも約１０ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は少なくとも約１００ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は少なくとも約２００ｍＭスクロースを含む。
【００２１】
特定の実施形態において、組成物はスクロース、ＥＧＴＡ／ＴｒｉｓおよびＴｒｉｓ／ＭＯＰＳを含む。特定の実施形態において、組成物は約２００ｍＭ〜約２５０ｍＭスクロース、約１ｍＭ  ＥＧＴＡ／Ｔｒｉｓおよび約１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＭＯＰＳを含む。
【００２２】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、エクスビボで行われる方法により得ることができるか、または得られる。特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、工程（ａ）〜（ｄ）：（ａ）ヒトまたは植物の組織または器官の試料を得る工程、（ｂ）組織または器官をホモジナイズする工程、（ｃ）液相を分離する工程、ならびに（ｄ）無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分を液相から単離する工程を含む方法により得ることができるか、または得られる。特定の実施形態において、方法はさらに、工程（ｅ）無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分を凍結することを含む。特定の実施形態において、方法の工程（ｃ）の液相は、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離することにより、および／または５μｍカットオフフィルターを通して濾過することにより分離される。特定の実施形態において、方法の工程（ｄ）の無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、７０００ｇ、４℃で１５分間遠心分離することにより液相から単離される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００２３】
特定の実施形態において、組成物は水中で製剤化されない。特定の実施形態において、組成物は水溶液として製剤化されない。特定の実施形態において、組成物は懸濁液として製剤化されない。特定の実施形態において、組成物は、コロイド、ローション、クリーム、軟膏、フォームまたはゲルとして製剤化される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００２４】
別の態様において、本発明はさらに、本明細書に記載の組成物または製剤のいずれか一つを含む、パーソナル衛生用、皮膚用または毛髪用製品を提供する。
【００２５】
特定の実施形態において、製品は凍結される。特定の実施形態において、製品は融解される。特定の実施形態において、製品はローション、クリーム、軟膏、フォーム、ゲル、石鹸、シャンプーまたはコンディショナーである。
【００２６】
さらに別の態様において、本発明はさらに、有効量の約１μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリア、ならびに／またはミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質およびミトコンドリア糖からなる群から選択されるミトコンドリア成分を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、脱毛を予防、改善または治療する方法を提供する。
【００２７】
特定の実施形態において、治療は、毛包の矮小化を阻止すること、毛包の矮小化を遅延すること、毛包の矮小化を改善すること、毛包の伸長を誘導すること、毛包の伸長を促進すること、毛包内の細胞増殖を誘導すること、毛包内の細胞増殖を促進すること、毛髪繊維の伸長を誘導すること、毛髪繊維の伸長を促進すること、毛髪繊維の太さを改善すること、毛包の成長周期相の持続期間を変更することおよびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００２８】
特定の実施形態において、治療は毛包の伸長を誘導または促進することである。特定の実施形態において、治療は毛包内の細胞増殖を誘導または促進することである。
【００２９】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は融解される。
【００３０】
特定の実施形態において、組成物は、コロイド、液体、ローション、クリーム、軟膏、フォームまたはゲルとして製剤化される。
【００３１】
特定の実施形態において、ミトコンドリアは、胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞、血液細胞、植物組織、植物細胞および培養物中で増殖させた植物細胞からなる群から選択される細胞または組織に由来する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。特定の実施形態において、植物組織は、ジャガイモ組織または新芽組織である。特定の実施形態において、植物細胞はジャガイモ細胞または新芽細胞である。
【００３２】
特定の実施形態において、組成物は、局所投与、経口投与、皮下投与、皮内投与、経皮投与または全身投与により投与される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。特定の実施形態において、組成物は局所投与により投与される。特定の実施形態において、組成物は全身投与により投与される。特定の実施形態において、組成物はヒト頭皮に投与される。
【００３３】
特定の実施形態において、対象は、毛髪の活力に有害な影響を与える疾患、障害または状態に罹患している。特定の実施形態において、対象は脱毛症に罹患している。特定の実施形態において、対象はミトコンドリア疾患に罹患している。特定の実施形態において、ミトコンドリア疾患は、ミトコンドリアＤＮＡの欠失である。特定の実施形態において、ミトコンドリアＤＮＡの欠失は、４９７７ｂｐの欠失である。特定の実施形態において、ミトコンドリア疾患はピアソン症候群である。特定の実施形態において、対象は癌に罹患している。特定の実施形態において、対象は放射線で治療されるか、または放射線で治療されるべきである。特定の実施形態において、対象は化学療法で治療されるか、または化学療法で治療されるべきである。特定の実施形態において、対象は自己免疫障害に罹患している。特定の実施形態において、自己免疫障害は円形脱毛症である。
【００３４】
特定の実施形態において、対象は、３０歳超、４０歳超、５０歳超または６０歳超である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。特定の実施形態において、対象は男性である。
【００３５】
別の態様によれば、本発明は、有効量の無傷ミトコンドリアおよび／または破壊されたミトコンドリアを含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、毛包の治療方法を提供する。
【００３６】
別の態様によれば、本発明は、有効量の無傷ミトコンドリアおよび／または破壊されたミトコンドリアを含む組成物を、脱毛症に罹患している対象に投与することを含む、脱毛症の治療方法を提供する。
【００３７】
いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、ミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質、ミトコンドリア糖、ミトコンドリア構造、ミトコンドリアマトリックスの少なくとも一部およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別個の実施形態表す。
【００３８】
いくつかの実施形態によれば、無傷ミトコンドリアを含む組成物はさらに高張液を含む。いくつかの実施形態によれば、高張液は糖を含む。別の実施形態によれば、高張液はスクロースを含む。
【００３９】
別の実施形態によれば、組成物の濃度は最大約５０μｇ／ｍｌである。別の実施形態によれば、組成物の濃度は約１０〜２０μｇ／ｍｌである。別の実施形態によれば、組成物の濃度は約１０〜１５μｇ／ｍｌである。別の実施形態によれば、組成物の濃度は約１２．５μｇ／ｍｌである。別の実施形態によれば、組成物の濃度は約５〜５０μｇ／ｍｌである。
【００４０】
別の実施形態によれば、本発明の方法はさらに、少なくとも１つの毛髪成長誘導剤の投与を含む。いくつかの実施形態によれば、少なくとも１つの毛髪成長誘導剤は、フィナステリド、デュタステリド、ミノキシジル、コペキシル、酸化型補酵素Ｑ、還元型補酵素Ｑ、Ｌ−カルニチン酒石酸塩、カフェインおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００４１】
別の実施形態によれば、細胞または組織は、同種および異種から選択される供給源に由来する。
【００４２】
別の実施形態によれば、対象は、毛包の治療から利益を得る疾患または障害に罹患している。別の実施形態によれば、毛包の治療から利益を得る疾患または障害は脱毛症である。
【００４３】
本発明のさらなる実施形態、特徴、利点および適用性の全範囲は、以下に示す詳細な説明および図面から明らかになるであろう。しかし、詳細な説明は、本発明の実施形態を示しているが、本発明の精神および範囲内での様々な変更および修正が、この詳細な説明から当業者に明らかになるため、例としてのみ示されていることが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】未処理（ビヒクル）ヒト毛包（ｈＨＦ）の伸長と、シクロスポリンＡでまたは様々な濃度の本発明による凍結融解したヒト胎盤ミトコンドリア組成物で処理したｈＨＦの伸長とを比較した棒グラフを示す図である。
【図２Ａ】ヒト毛乳頭細胞数（図２Ａ）、ＶＥＧＦ分泌（図２Ｂ）およびクエン酸シンターゼの活性（図２Ｃ）に対する本発明による新鮮なヒト胎盤ミトコンドリア組成物の効果を比較した棒グラフを示す図である。
【図２Ｂ】ヒト毛乳頭細胞数（図２Ａ）、ＶＥＧＦ分泌（図２Ｂ）およびクエン酸シンターゼの活性（図２Ｃ）に対する本発明による新鮮なヒト胎盤ミトコンドリア組成物の効果を比較した棒グラフを示す図である。
【図２Ｃ】ヒト毛乳頭細胞数（図２Ａ）、ＶＥＧＦ分泌（図２Ｂ）およびクエン酸シンターゼの活性（図２Ｃ）に対する本発明による新鮮なヒト胎盤ミトコンドリア組成物の効果を比較した棒グラフを示す図である。
【図３】新鮮なおよび凍結融解したマウス胎盤ミトコンドリアにおける経時的なＯ２消費（蛍光による）を示すドットプロットグラフを示す図である。
【図４Ａ】マンニトール（図４Ａ）またはスクロース（図４Ｂ）を含有する緩衝液中にインキュベートした新鮮なジャガイモミトコンドリアの酸素消費（蛍光による）と、凍結融解サイクル（各々図４Ｃおよび図４Ｄ）後の対応するミトコンドリアの酸素消費とを比較したドットプロットグラフを示す図である。
【図４Ｂ】マンニトール（図４Ａ）またはスクロース（図４Ｂ）を含有する緩衝液中にインキュベートした新鮮なジャガイモミトコンドリアの酸素消費（蛍光による）と、凍結融解サイクル（各々図４Ｃおよび図４Ｄ）後の対応するミトコンドリアの酸素消費とを比較したドットプロットグラフを示す図である。
【図４Ｃ】マンニトール（図４Ａ）またはスクロース（図４Ｂ）を含有する緩衝液中にインキュベートした新鮮なジャガイモミトコンドリアの酸素消費（蛍光による）と、凍結融解サイクル（各々図４Ｃおよび図４Ｄ）後の対応するミトコンドリアの酸素消費とを比較したドットプロットグラフを示す図である。
【図４Ｄ】マンニトール（図４Ａ）またはスクロース（図４Ｂ）を含有する緩衝液中にインキュベートした新鮮なジャガイモミトコンドリアの酸素消費（蛍光による）と、凍結融解サイクル（各々図４Ｃおよび図４Ｄ）後の対応するミトコンドリアの酸素消費とを比較したドットプロットグラフを示す図である。
【図５】マンニトールまたはスクロースを含む緩衝液中でインキュベートした新鮮なおよび融解したジャガイモミトコンドリアからのクエン酸シンターゼの放出を比較した棒グラフを示す図である。
【図６Ａ】単離緩衝液（図６Ａ）またはＰＢＳ（図６Ｂ）中でインキュベートしたマウス胎盤ミトコンドリアの酸素消費（蛍光による）を比較したドットプロットグラフを示す図である。
【図６Ｂ】単離緩衝液（図６Ａ）またはＰＢＳ（図６Ｂ）中でインキュベートしたマウス胎盤ミトコンドリアの酸素消費（蛍光による）を比較したドットプロットグラフを示す図である。
【図６Ｃ】単離緩衝液またはＰＢＳ中でインキュベートしたミトコンドリアからのクエン酸シンターゼの放出を比較した棒グラフを示す図である。
【図７Ａ】単離緩衝液またはＯｐｔｉＭＥＭ細胞培地（Ｇｉｂｃｏ）中でインキュベートしたマウス胎盤ミトコンドリアの酸素消費（蛍光による）を比較したドットプロットグラフを示す図である。
【図７Ｂ】単離緩衝液またはＯｐｔｉＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中でインキュベートしたミトコンドリアからのクエン酸シンターゼの放出を比較した棒グラフを示す図である。
【図８】開始時（Ｔ０）および２４時間インキュベーション後（Ｔ２４時）のヒト満期胎盤ミトコンドリアの培地へのプロゲステロンの分泌を比較した棒グラフを示す図である。
【図９】新芽ミトコンドリアでの処理前および処理後のヒト毛包毛乳頭細胞（ｈＦＤＰＣ）中のＡＴＰレベルを比較した棒グラフを示す図である。
【図１０Ａ】クエン酸シンターゼ（ＣＳ）酵素活性（図１０Ａ）、細胞増殖（図１０Ｂ）およびＶＥＧＦ分泌（図１０Ｃ）に対するヒト毛包毛乳頭細胞（ｈＦＤＰＣ）におけるヒト胎盤ミトコンドリアの効果を示す棒グラフを示す図である。
【図１０Ｂ】クエン酸シンターゼ（ＣＳ）酵素活性（図１０Ａ）、細胞増殖（図１０Ｂ）およびＶＥＧＦ分泌（図１０Ｃ）に対するヒト毛包毛乳頭細胞（ｈＦＤＰＣ）におけるヒト胎盤ミトコンドリアの効果を示す棒グラフを示す図である。
【図１０Ｃ】クエン酸シンターゼ（ＣＳ）酵素活性（図１０Ａ）、細胞増殖（図１０Ｂ）およびＶＥＧＦ分泌（図１０Ｃ）に対するヒト毛包毛乳頭細胞（ｈＦＤＰＣ）におけるヒト胎盤ミトコンドリアの効果を示す棒グラフを示す図である。
【図１１Ａ】ＲＯＳ（図１１Ａおよび図１１Ｂ）およびＩＬ−１α（図１１Ｃおよび図１１Ｄ）のＵＶ−Ｂにより誘導される産生に対するヒト皮膚（ｈＦＤＰＣ）における新芽ミトコンドリアの効果を示す棒グラフを示す図である。
【図１１Ｂ】ＲＯＳ（図１１Ａおよび図１１Ｂ）およびＩＬ−１α（図１１Ｃおよび図１１Ｄ）のＵＶ−Ｂにより誘導される産生に対するヒト皮膚（ｈＦＤＰＣ）における新芽ミトコンドリアの効果を示す棒グラフを示す図である。
【図１１Ｃ】ＲＯＳ（図１１Ａおよび図１１Ｂ）およびＩＬ−１α（図１１Ｃおよび図１１Ｄ）のＵＶ−Ｂにより誘導される産生に対するヒト皮膚（ｈＦＤＰＣ）における新芽ミトコンドリアの効果を示す棒グラフを示す図である。
【図１１Ｄ】ＲＯＳ（図１１Ａおよび図１１Ｂ）およびＩＬ−１α（図１１Ｃおよび図１１Ｄ）のＵＶ−Ｂにより誘導される産生に対するヒト皮膚（ｈＦＤＰＣ）における新芽ミトコンドリアの効果を示す棒グラフを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本発明は、毛包を治療し、それにより毛髪の活力を改善するための組成物、製剤、製品および方法を初めて開示する。本発明は、一部、本明細書において以下に例証されるように、ヒト毛包の伸長に対するおよびヒト毛包毛乳頭細胞の増殖に対するミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分の予想外の有益な効果に基づくものである。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、本発明の製品および方法の使用により、治療した部分において長く太い毛髪が増加し、脱落する毛髪が減少する。
【００４６】
一態様において、本発明は、有効量の約１μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリア、ならびに／またはミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質およびミトコンドリア糖からなる群から選択されるミトコンドリア成分を含む組成物であって、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分の１つ以上が凍結または融解され、組成物がさらに担体を含み、ヒト皮膚への局所投与用に製剤化される、前記組成物を提供する。
【００４７】
本発明の原理によれば、本明細書で提供される組成物は、化粧目的を主に意図するものである。特定の実施形態において、本発明の組成物および／または製剤および／または製品は、化粧品であり、化粧品に許容される担体を含む。しかし、これらの組成物は、治療法でも採用され得る。特定の実施形態において、本発明の組成物および／または製剤および／または製品は、医薬および／または治療用であり、薬学的に許容される担体を含む。
【００４８】
本明細書で使用する用語「化粧品組成物」は、人体への適用に好適な組成物に関する。用語「化粧品に許容される担体」は、化粧品組成物中で従来用いられるすべての担体、および／または賦形剤、および／または希釈剤を指す。本明細書で使用する用語「医薬組成物」は、人体への適用に好適な組成物に関する。用語「薬学的に許容される担体」は、医薬組成物中で従来用いられるすべての担体および／または賦形剤および／または希釈剤を指す。本明細書で使用する用語「局所投与」は、体表への投与を指す。
【００４９】
本明細書で使用する用語「化粧品」または「化粧品組成物」は、対象に何らかの方法で直接適用されるあらゆる種類の製品を含むことがさらに意図され、本明細書で開示される化粧剤の発明品に加えて、従来の成分、例えば、ラノリン、蜜蝋、オレイン酸、鯨蝋、アーモンド油、ヒマシ油、トラガカントガム、粘土、マグネシア、タルク、ステアリン酸金属塩、チョーク、炭酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、カオリンなどを含むことが意図される。これらの組成物は、脂肪を含むもしくは脂肪を含まないクリーム、乳状懸濁液または油中水もしくは水中油型のエマルジョン、ローション、ゲルもしくはゼリー、コロイドもしくは非コロイド水溶液もしくは油性溶液、ペースト、石鹸、エアロゾル、可溶性錠剤（水などの流体に溶解される）またはスティックの形態を取り得る。本発明による化粧品組成物は、従来のビヒクルまたは担体、例えば、溶媒、脂肪、油および鉱物ワックス、脂肪酸およびその誘導体、アルコールおよびその誘導体、グリコールおよびその誘導体、グリセロールおよびその誘導体、ソルビトールおよびその誘導体、アニオン、カチオンまたは非イオン性界面活性剤、乳化剤、保存剤、香料なども含有し得る。
【００５０】
本明細書で使用する用語「組成物」および「本発明の組成物」は互換的に用いられる。いくつかの実施形態によれば、本明細書で使用する用語「本発明の組成物」は、無傷ミトコンドリアおよび／または破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分を含む組成物を指す。いくつかの実施形態によれば、本明細書で使用する用語「本発明の組成物」は、無傷ミトコンドリアおよび破壊されたミトコンドリアからなる群から選択されるミトコンドリアを指す。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、破壊されたミトコンドリアを含む。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は無傷ミトコンドリアを含む。他の実施形態によれば、本発明の組成物は、無傷ミトコンドリアおよび破壊されたミトコンドリアを含む。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、少なくとも１つのミトコンドリア成分を含む。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、破壊されたミトコンドリアおよび少なくとも１つのミトコンドリア成分を含む。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、破壊されたミトコンドリア、ならびに破壊されたミトコンドリアから放出および／または分泌される少なくとも１つのミトコンドリア成分を含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、部分的に精製されたミトコンドリアを含む。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、単離されたミトコンドリアを含む。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、ミトコンドリアにより馴化された培地を含む。他の実施形態によれば、本発明の組成物は、破壊されたミトコンドリア、少なくとも１つのミトコンドリア成分、単離されたミトコンドリア、部分的に精製されたミトコンドリア、無傷ミトコンドリア、ミトコンドリアにより馴化された培地およびこれらの組み合わせからなる群の少なくとも１つを含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。本明細書で使用する用語「ミトコンドリアにより馴化された培地」は、ミトコンドリアがインキュベートされた培地であり、ミトコンドリア成分および／またはミトコンドリアから分泌される成分を含有する培地を指す。
【００５１】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は凍結される。特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は融解される。本明細書で使用する用語「融解される」は、少なくとも１回凍結されたが現在は凍結していないなど、少なくとも１回の凍結融解サイクルを経たことを意味する。
【００５２】
特定の実施形態において、組成物は、約５μｇ／ｍｌ〜約９０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、約５μｇ／ｍｌ〜約８０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、約５μｇ／ｍｌ〜約７０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、約５μｇ／ｍｌ〜約６０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、約５μｇ／ｍｌ〜約５０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分または約５μｇ／ｍｌ〜約３０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む。特定の実施形態において、組成物は約１２．５μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む。本明細書で使用する用語「約」は、示された値の+／−１０％を指す。
【００５３】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物中の全ミトコンドリア成分の総濃度は約１０〜２０μｇ／ｍｌである。他の実施形態によれば、濃度は約１０〜１５μｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態によれば、濃度は約１２．５μｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態によれば、濃度は少なくとも約１０μｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態によれば、濃度は少なくとも約１２．５μｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態によれば、濃度は約５０μｇ／ｍｌ以下である。いくつかの実施形態によれば、濃度は約１〜５０μｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態によれば、濃度は約５〜５０μｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態によれば、濃度は約０．１〜５０μｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態によれば、濃度は約１００μｇ／ｍｌ以下である。
【００５４】
特定の実施形態において、組成物は少なくとも約１μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約３μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約５μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約１０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約２０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約３０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、少なくとも約４０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分、または少なくとも約５０μｇ／ｍｌのミトコンドリア成分を含む。
【００５５】
特定の実施形態において、組成物は凍結される。特定の実施形態において、組成物は０℃またはより低温で凍結される。特定の実施形態において、組成物は−２０℃またはより低温で凍結される。特定の実施形態において、組成物は−７０℃またはより低温で凍結される。特定の実施形態において、組成物は液体窒素で凍結される。
【００５６】
特定の実施形態において、組成物は凍結された後融解される。特定の実施形態において、組成物は融解され、室温である。特定の実施形態において、組成物は融解され、１５℃〜３０℃の温度である。特定の実施形態において、組成物は融解され、４℃である。
【００５７】
特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも一部は無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも５％は無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも１０％は無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも２０％は無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも４０％は無傷ミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも５０％は無傷ミトコンドリアに含まれる。
【００５８】
特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも一部は破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも５％は破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも１０％は破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも２０％は破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも４０％は破壊されたミトコンドリアに含まれる。特定の実施形態において、ミトコンドリア成分の少なくとも５０％は破壊されたミトコンドリアに含まれる。
【００５９】
特定の実施形態において、組成物は糖を含む。特定の実施形態において、組成物はスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は約１０ｍＭ〜約１０００ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は約１００ｍＭ〜約４００ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は約２００ｍＭ〜約２５０ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は少なくとも約１０ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は少なくとも約１００ｍＭスクロースを含む。特定の実施形態において、組成物は少なくとも約２００ｍＭスクロースを含む。
【００６０】
特定の実施形態において、組成物はスクロース、ＥＧＴＡ／ＴｒｉｓおよびＴｒｉｓ／ＭＯＰＳを含む。特定の実施形態において、組成物は約２００ｍＭ〜約２５０ｍＭスクロース、約１ｍＭ  ＥＧＴＡ／Ｔｒｉｓおよび約１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＭＯＰＳを含む。
【００６１】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、エクスビボで行われる方法により得ることができるか、または得られる。特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、工程（ａ）〜（ｄ）：（ａ）ヒトまたは植物の組織または器官の試料を得る工程、（ｂ）組織または器官をホモジナイズする工程、（ｃ）液相を分離する工程、ならびに（ｄ）無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分を液相から単離する工程を含む方法により得ることができるか、または得られる。特定の実施形態において、方法はさらに、工程（ｅ）無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分を凍結することを含む。特定の実施形態において、方法の工程（ｃ）の液相は、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離することにより、および／または５μｍカットオフフィルターを通して濾過することにより分離される。特定の実施形態において、方法の工程（ｄ）の無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、７０００ｇ、４℃で１５分間遠心分離することにより液相から単離される。
【００６２】
特定の実施形態において、組成物は水を欠く。特定の実施形態において、組成物は水中で製剤化されない。特定の実施形態において、組成物は水溶液として製剤化されない。特定の実施形態において、組成物は懸濁液として製剤化されない。特定の実施形態において、組成物は、コロイド、ローション、クリーム、軟膏、フォームまたはゲルとして製剤化される。
【００６３】
別の態様において、本発明はさらに、本明細書に記載の組成物または製剤のいずれか一つを含む、パーソナル衛生用製品、皮膚用製品または毛髪用製品を提供する。
【００６４】
特定の実施形態において、製品は凍結される。特定の実施形態において、製品は融解される。特定の実施形態において、製品はローション、クリーム、軟膏、フォーム、ゲル、石鹸、シャンプーまたはコンディショナーである。
【００６５】
本明細書で使用する用語「ローション」は、皮膚への適用が意図される低粘度の局所調製物を指す。本明細書で使用する用語「クリーム」は、例えば、ハンドクリーム、クレンジングクリーム、乳液、コールドクリーム、ヘアクリーム、クリームファンデーション、美容洗浄剤、フェイシャルパックなどを含むすべての化粧品材料を指す。用語「軟膏」は、油性、水溶性およびエマルジョンタイプの基剤、例えば、ペトロラタム、ラノリン、ポリエチレングリコール、ならびにこれらの混合物を有する製剤（クリームを含む）を包含する。本明細書で使用する用語「フォーム」は、液体または固体中に気体のポケットを捕捉することにより形成される物質を指す。用語「ゲル」は、粘度が高く流動性がない分散液を一般に意味する。用語「石鹸」は、その一般的な意味で本明細書で用いられ、すなわち、脂肪族、アルカンまたはアルケンモノカルボン酸のアルカリ金属またはアルカノールアンモニウム塩である。用語「シャンプー」は、毛髪に適用され、次いで洗い流されることになる、毛髪洗浄用調製物を指す。本明細書で使用する用語「ヘアコンディショナー」は、毛髪の質感および外観を変化させるヘアケア製品を指す。ヘアコンディショナーは、毛髪に適用され、もみこまれる粘性の液体である場合が多い。ヘアコンディショナーは、通常、毛髪をシャンプーで洗浄した後に用いられる。
【００６６】
さらに別の態様において、本発明はさらに、有効量の約１μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリア、ならびに／またはミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質およびミトコンドリア糖からなる群から選択されるミトコンドリア成分を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、対象の脱毛を予防、改善または治療する方法を提供する。
【００６７】
特定の実施形態において、治療は、毛包の矮小化を阻止すること、毛包の矮小化を遅延すること、毛包の矮小化を改善すること、毛包の伸長を誘導すること、毛包の伸長を促進すること、毛包内の細胞増殖を誘導すること、毛包内の細胞増殖を促進すること、毛髪繊維の伸長を誘導すること、毛髪繊維の伸長を促進すること、毛髪繊維の太さを改善すること、毛包の成長周期相の持続期間を変更することおよびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００６８】
特定の実施形態において、治療は毛包の伸長を誘導または促進することである。特定の実施形態において、治療は毛包内の細胞増殖を誘導または促進することである。
【００６９】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は融解される。
【００７０】
特定の実施形態において、組成物は懸濁液、コロイド、液体、ローション、クリーム、軟膏、フォームまたはゲルとして製剤化される。
【００７１】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞、血液細胞、植物組織、植物細胞および培養物中で増殖させた植物細胞からなる群から選択される細胞または組織に由来する。特定の実施形態において、植物組織は、ジャガイモ組織または新芽組織である。特定の実施形態において、植物細胞はジャガイモ細胞または新芽細胞である。
【００７２】
本発明による無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、本明細書に開示される方法により、または当技術分野で公知の任意の他の方法により得られ得る。市販のミトコンドリア単離キットとしては、例えば、とりわけミトコンドリア単離キットＭＩＴＯＩＳＯ１（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｒｄｉｃｈ）が挙げられる。
【００７３】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、以下の工程を含む方法により得ることができるか、または得られる：（１）胎盤を、氷冷ＩＢ緩衝液（単離緩衝液：２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳ）＋０．２％ＢＳＡを用いて洗い流し、血液を除去した。（２）胎盤を５ｍｌ  ＩＢ＋０．２％ＢＳＡ中でハサミを用いて小片に切り刻んだ。（３）懸濁液を１０ｍｌガラスポッターに移し、Ｄｏｕｎｃｅガラスホモジナイザーを用いて５回の完全な上下サイクルでホモジナイズした。（４）ホモジネートを１５ｍｌ管に移し、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。（５）上清を清潔な遠心分離管に移し、ペレットをＩＢ緩衝液に再懸濁し、第２の遠心分離工程を行った。（６）工程４および５からの上清を５μｍのフィルターを通して濾過し、任意の細胞または大きな細胞残屑を除去した。（７）上清を回収し、７０００×ｇで１５分間遠心分離した。（８）ミトコンドリアペレットを１０ｍｌ氷冷ＩＢ緩衝液中で洗浄し、ミトコンドリアを７０００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離することにより回収した。（９）上清を廃棄し、ミトコンドリアを含有するペレットを２００μｌのＩＢ緩衝液に再懸濁した。
【００７４】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は以下の工程を含む方法により得ることができるか、または得られる：（１）胎盤を、氷冷ＩＢ緩衝液（単離緩衝液：２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳ）＋０．２％ＢＳＡを用いて洗浄し、血液を除去した。（２）胎盤を５ｍｌ  ＩＢ＋０．２％ＢＳＡ中でハサミを用いて小片に切り刻んだ。（３）懸濁液を１０ｍｌガラスポッターに移し、Ｄｏｕｎｃｅガラスホモジナイザーを用いて５回の完全な上下サイクルでホモジナイズした。（４）ホモジネートを１５ｍｌ管に移し、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。（５）上清を清潔な遠心分離管に移し、ペレットをＩＢ緩衝液に再懸濁し、第２の遠心分離工程を行った。（６）工程４および５からの上清を５μｍのフィルターを通して濾過し、任意の細胞または大きな細胞残屑を除去した。（７）上清を回収し、７０００×ｇで１５分間遠心分離した。（８）ミトコンドリアペレットを１０ｍｌ氷冷ＩＢ緩衝液中で洗浄し、ミトコンドリアを７０００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離することにより回収した。（９）上清を廃棄し、ミトコンドリアを含有するペレットを２００μｌのＩＢ緩衝液に再懸濁した。
【００７５】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は以下の工程を含む方法により得ることができるか、または得られる：（１）ジャガイモを４℃で一晩冷却し、小片に切断し、マンニトールまたはスクロース含有緩衝液中（組織：体積１：４の比）でブレンダーを用いて３０分間粉砕した。（２）混合物をチーズクロスを通して濾過し、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。（３）上清を新しい管に移し、８０００ｇで１０分間遠心分離した。（４）マンニトールまたはスクロースで処理した組織のペレットを、１ｍｌ洗浄緩衝液（０．７Ｍマンニトール、１０ｍＭ  ＫＰＩ  ｐＨ６．５）または単離緩衝液各々で洗浄し、８０００ｇ、４℃で１０分間遠心分離し、１００μｌの洗浄緩衝液／単離緩衝液に再懸濁した。
【００７６】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は以下の工程を含む方法により得ることができるか、または得られる：（１）胎盤を、氷冷Ｍ１緩衝液（単離緩衝液：２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳ）＋０．２％ＢＳＡを用いて洗浄し、血液を除去した。（２）胎盤を５ｍｌ  Ｍ１＋０．２％ＢＳＡ中でハサミを用いて小片に切り刻んだ。（３）懸濁液を１０ｍｌガラスポッターに移し、Ｄｏｕｎｃｅガラスホモジナイザーを用いて５回の完全な上下サイクルでホモジナイズした。（４）ホモジネートを１５ｍｌ管に移し、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。（５）上清を清潔な遠心分離管に移し、ペレットをＭ１緩衝液に再懸濁し、第２の遠心分離工程を行った。（６）工程４および５からの上清を５μｍのフィルターを通して濾過し、任意の細胞または大きな細胞残屑を除去した。（７）上清を回収し、７０００×ｇで１５分間遠心分離した。（８）ミトコンドリアペレットを１０ｍｌ氷冷Ｍ１緩衝液中で洗浄し、ミトコンドリアを７０００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離することにより回収した。（９）上清を廃棄し、ミトコンドリアを含有するペレットを２００μｌのＭ１緩衝液に再懸濁した。
【００７７】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は以下の工程を含む方法により得ることができるか、または得られる：（１）４００ｇのリョクトウ芽を洗浄し、切り刻んだ。（２）２Ｌのスクロース緩衝液（２５０ｍＭスクロース、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中でホモジナイズした。（３）６００ｇ、４℃で遠心分離した。（４）５μｍカットオフにより濾過した。（５）８０００ｇ、４℃で遠心分離した。（６）ペレットを洗浄し、８０００ｇ、４℃で遠心分離した。
【００７８】
特定の実施形態において、組成物は局所投与、経口投与、皮下投与、皮内投与、経皮投与または全身投与により投与される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。特定の実施形態において、組成物は局所投与により投与される。特定の実施形態において、組成物は全身投与により投与される。特定の実施形態において、組成物はヒト頭皮に投与される。
【００７９】
特定の実施形態において、対象は、毛髪の活力に有害な影響を与える疾患、障害または状態に罹患している。特定の実施形態において、対象は脱毛症に罹患している。特定の実施形態において、対象はミトコンドリア疾患に罹患している。特定の実施形態において、ミトコンドリア疾患は、ミトコンドリアＤＮＡの欠失である。特定の実施形態において、ミトコンドリアＤＮＡの欠失は、４９７７ｂｐの欠失である。特定の実施形態において、ミトコンドリア疾患はピアソン症候群である。特定の実施形態において、対象は癌に罹患している。特定の実施形態において、対象は放射線で治療されるか、または放射線で治療されるべきである。特定の実施形態において、対象は化学療法で治療されるか、または化学療法で治療されるべきである。特定の実施形態において、対象は自己免疫障害に罹患している。特定の実施形態において、自己免疫障害は円形脱毛症である。
【００８０】
特定の実施形態において、対象は、３０歳超、４０歳超、５０歳超または６０歳超である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。特定の実施形態において、対象は男性である。
【００８１】
特定の実施形態において、無傷ミトコンドリア、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は機能性ミトコンドリアである。別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアは機能性ミトコンドリアである。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは単離されたミトコンドリアである。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは無傷ミトコンドリアである。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは部分的に機能性である。本明細書で使用する用語「部分的に機能性のミトコンドリア」は、ミトコンドリアの少なくとも１つの機能的特性、例えば、それだけに限らないが、酸素消費を欠くミトコンドリアを指す。いくつかの実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアは非機能性ミトコンドリアである。いくつかの実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアは部分的に機能性のミトコンドリアである。
【００８２】
いくつかの実施形態によれば、用語「機能性ミトコンドリア」は、酸素を消費するミトコンドリアを指す。別の実施形態によれば、機能性ミトコンドリアは、無傷の外膜を有する。いくつかの実施形態によれば、機能性ミトコンドリアは無傷ミトコンドリアである。別の実施形態において、機能性ミトコンドリアは、経時的に増加量で酸素を消費する。別の実施形態において、ミトコンドリアの機能性は、酸素消費により測定される。別の実施形態において、ミトコンドリアの酸素消費は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、それだけに限らないが、ＭｉｔｏＸｐｒｅｓｓ蛍光プローブ（Ｌｕｘｃｅｌ）により測定され得る。いくつかの実施形態によれば、機能性ミトコンドリアは、ＡＤＰおよび基質、例えば、それだけに限らないが、グルタミン酸塩、リンゴ酸塩またはコハク酸塩の存在下で酸素消費量の増加を示すミトコンドリアである。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態において、機能性ミトコンドリアは、ＡＴＰを産生するミトコンドリアである。別の実施形態において、機能性ミトコンドリアは、それら自身のＲＮＡおよびタンパク質を製造することが可能なミトコンドリアであり、自己複製構造である。別の実施形態において、機能性ミトコンドリアは、ミトコンドリアリボソームおよびミトコンドリアｔＲＮＡ分子を産生する。
【００８３】
当技術分野で公知であるように、機能性胎盤ミトコンドリアは、プロゲステロンの産生に関与する（例えば、Ｔｕｃｋｅｙ  ＲＣ、Ｐｌａｃｅｎｔａ、２００５、２６（４）：２７３〜８１参照）。いくつかの実施形態によれば、機能性ミトコンドリアは、プロゲステロンまたはプレグネノロンを産生するミトコンドリアである。いくつかの実施形態によれば、機能性ミトコンドリアは、プロゲステロンを分泌するミトコンドリアである。非限定的例において、胎盤、または培養物中で増殖させた胎盤細胞に由来するミトコンドリアはプロゲステロンまたはプレグネノロンを産生する。いくつかの実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは胎盤、または培養物中で増殖させた胎盤細胞に由来し、ミトコンドリアはプロゲステロンまたはプレグネノロンを産生する。いくつかの実施形態によれば、本発明の無傷ミトコンドリアにおけるプロゲステロンまたはプレグネノロンの産生は、凍結融解サイクル後損なわれない。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリアの機能性は、ミトコンドリアのプロゲステロンの産生、またはミトコンドリアのプロゲステロン前駆体、例えば、それだけに限らないがプレグネノロンの産生を測定することにより測定される。プロゲステロンの産生は、当技術分野で公知の任意のアッセイ、例えば、それだけに限らないがラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定され得る。
【００８４】
本明細書で使用する用語「部分的に精製されたミトコンドリア」は、他の細胞成分から単離されたミトコンドリアを指し、ミトコンドリア成分の重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の２０〜８０％、３０〜８０％または４０〜７０％を構成する（Ｈａｒｔｗｉｇら、Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、２００９、（９）：３２０９〜３２１４に例証されている）。別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアは無傷細胞を含有していない。
【００８５】
別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアにおけるミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の少なくとも２０％を構成する。別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアにおけるミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の２０％〜４０％を構成する。別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアにおけるミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の４０％〜８０％を構成する。別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアにおけるミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の３０％〜７０％を構成する。別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアにおけるミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の５０％〜７０％を構成する。別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアにおけるミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の６０％〜７０％を構成する。別の実施形態によれば、部分的に精製されたミトコンドリアにおけるミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の８０％未満を構成する。
【００８６】
本明細書で使用する用語「ミトコンドリアタンパク質」は、ゲノムＤＮＡまたはｍｔＤＮＡによりコードされるミトコンドリアタンパク質を含む、ミトコンドリアにおいてその機能を果たすタンパク質を指す。本明細書で使用する用語「細胞タンパク質」は、ミトコンドリアが産生される細胞または組織に由来するすべてのタンパク質を指す。
【００８７】
本明細書で使用する用語「単離されたミトコンドリア」は、他の細胞成分から単離されたミトコンドリアを指し、ミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の８０％超を構成する。単離されたミトコンドリアの調製には、緩衝液の組成の変更、または追加の洗浄工程、クリーニングサイクル、遠心分離サイクルおよび超音波処理サイクルが必要とされ得、これらは、部分的に精製されたミトコンドリアの調製には不要である。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、このような追加の工程およびサイクルは、単離されたミトコンドリアの機能性を害する可能性がある。
【００８８】
別の実施形態によれば、単離されたミトコンドリアにおけるミトコンドリアの重量は、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の９０％超を構成する。単離されたミトコンドリアを得る方法の非限定的例としては、ＭＡＣＳ（登録商標）技術（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）がある。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、ミトコンドリアの重量が、ミトコンドリアと他の細胞内画分との合計重量の９５％超を構成する単離されたミトコンドリアは、機能性ミトコンドリアではない。別の実施形態によれば、単離されたミトコンドリアは無傷細胞を含有していない。いくつかの実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは単離されたミトコンドリアである。
【００８９】
本明細書で使用する用語「無傷ミトコンドリア」は、外膜、内膜、クリステ（内膜により形成される）およびマトリックスを含むミトコンドリアを指す。別の実施形態において、無傷ミトコンドリアはミトコンドリアＤＮＡを含む。本明細書で使用する用語「ミトプラスト」は外膜を欠くミトコンドリアを指す。別の実施形態によれば、ミトコンドリア膜の無傷性は、当技術分野で公知の任意の方法により決定され得る。非限定的例において、ミトコンドリア膜の無傷性は、テトラメチルローダミンメチルエステル（ＴＭＲＭ）またはテトラメチルローダミンエチルエステル（ＴＭＲＥ）蛍光プローブを用いて測定される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。顕微鏡下で観察された、ＴＭＲＭまたはＴＭＲＥ染色を示すミトコンドリアは無傷のミトコンドリア外膜を有する。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア膜の無傷性は、ミトコンドリア外のクエン酸シンターゼの存在をアッセイすることにより測定される。いくつかの実施形態によれば、クエン酸シンターゼを放出するミトコンドリアはミトコンドリアの無傷性を損なう。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア膜の無傷性は、ＡＤＰの存在と連結したミトコンドリアの酸素消費量を測定することにより決定される。いくつかの実施形態によれば、ＡＤＰの存在下でのミトコンドリアの酸素消費の増加は、無傷のミトコンドリア膜を示している。いくつかの実施形態によれば、本発明による無傷ミトコンドリアは部分的に精製されたミトコンドリアである。いくつかの実施形態によれば、本発明による無傷ミトコンドリアは単離されたミトコンドリアである。いくつかの実施形態によれば、機能性ミトコンドリアは無傷ミトコンドリアである。
【００９０】
本明細書で使用する用語「ミトコンドリア膜」は、ミトコンドリア内膜、ミトコンドリア外膜またはこれらの組み合わせからなる群から選択されるミトコンドリア膜を指す。
【００９１】
本明細書で使用する用語「破壊されたミトコンドリア」は、内側および外側のミトコンドリア膜が、例えば、せん断（断裂）、穿孔、貫通されているミトコンドリアを指す。いくつかの実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアは、１超の片／部分にせん断されたミトコンドリアである。破壊されたミトコンドリアは、本明細書に記載の方法または当技術分野で公知の任意の他の方法により破壊された無傷ミトコンドリアであることが理解されるべきである。
【００９２】
いくつかの実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアは、ミトコンドリアから少なくとも１つのミトコンドリア成分が放出されたミトコンドリアである。いくつかの実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアは、内側および外側のミトコンドリア膜が、例えば、せん断（断裂）、穿孔、貫通されており、少なくとも１つのミトコンドリア成分が放出されたミトコンドリアを対象とする。いくつかの実施形態によれば、無傷ミトコンドリアの破壊により、少なくとも１つのミトコンドリア成分が放出される。いくつかの実施形態によれば、少なくとも１つのミトコンドリア成分が放出された破壊されたミトコンドリアは、放出された成分と共に投与されることが理解されるべきである。
【００９３】
本明細書で使用する用語「ミトコンドリア成分」は、ミトコンドリアに含まれる任意の成分を指す。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、ミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質、ミトコンドリア糖、ミトコンドリア構造、ミトコンドリアマトリックスの少なくとも一部およびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの成分である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００９４】
本明細書で使用する用語「ミトコンドリア構造」は、ミトコンドリアに存在する構造および／またはオルガネラ、例えば、それだけに限らないが、マトリックス顆粒、ＡＴＰシンターゼ粒子、ミトコンドリアリボソームおよびクリステを指す。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、無傷機能性ミトコンドリアの少なくとも１つの機能を維持する。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、単一型のミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質、ミトコンドリア構造またはミトコンドリア糖を含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、少なくとも１つの機能タンパク質を含む。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、ミトコンドリアマトリックスの少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、ミトコンドリアマトリックス全体を含む。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、ミトコンドリアマトリックスの少なくとも一部、およびそこに含まれる成分、例えば、それだけに限らないが、タンパク質、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）またはイオンの少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、ミトコンドリアマトリックスの少なくとも一部、およびそこに含まれる以下の成分：ミトコンドリアタンパク質、ミトコンドリア核酸、ミトコンドリア脂質、ミトコンドリア糖およびミトコンドリア構造の少なくとも１つを含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。本明細書で使用する用語「ミトコンドリアマトリックス」は、ミトコンドリア内膜内の粘着性物質を指す。
【００９５】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、ミトコンドリアから分泌または放出される成分、例えば、それだけに限らないが、ミトコンドリアタンパク質であることが理解されるべきである。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリアから分泌または放出されるミトコンドリア成分は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、それだけに限らないが、ミトコンドリアがインキュベートされた馴化培地からミトコンドリア成分を取り出すことにより取り出され得る。
【００９６】
いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、ミトコンドリア画分を細胞から単離する当技術分野で公知の任意の方法、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、ＵＳＡ）製の培養細胞用のミトコンドリア単離キットを用いて行われる方法により得られ得る。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア画分または成分は、ミトコンドリアの単離または部分的精製の副産物として産生される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００９７】
いくつかの実施形態によれば、本発明によるミトコンドリア成分はプロゲステロンを含む。いくつかの実施形態によれば、プロゲステロンは、破壊されたミトコンドリアから放出される。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、破壊されたミトコンドリアおよびミトコンドリアから放出されたプロゲステロンを含む。非限定的例において、胎盤または培養物中で増殖させた胎盤細胞由来のミトコンドリアの破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分はプロゲステロンを含み得る。いくつかの実施形態によれば、プロゲステロンを含む破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、５α−レダクターゼファミリーの酵素を阻害する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。本明細書で使用する用語「５α−レダクターゼファミリー」は、ステロイド代謝、主にテストステロンの５α−ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）への変換に関与する酵素のファミリーである。当技術分野で公知であるように、ＤＨＴは、毛包の矮小化および脱毛症に影響を与える。したがって、５α−レダクターゼファミリーの酵素の阻害、ひいてはＤＨＴレベルの低下は、脱毛の阻止に役立ち得、さらに毛髪再成長を誘導し得る。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、プロゲステロンを含むミトコンドリア成分は、５α−レダクターゼの阻害、ひいてはテストステロンの５α−ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）への変換の防止により脱毛／脱毛症を治療するのに有効であり得る。
【００９８】
本発明のいくつかの実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアおよび／またはミトコンドリア成分は、無傷および／または単離されたおよび／または部分的に精製されたミトコンドリアから得られることが理解されるべきである。本発明の実施形態によれば、ミトコンドリア成分は、当技術分野で公知の任意の方法により無傷ミトコンドリアから得られることがさらに理解されるべきである。いくつかの実施形態によれば、本発明のミトコンドリア成分は、無傷ミトコンドリアを高張液から低張液に移すことにより得られる。いくつかの実施形態によれば、無傷ミトコンドリアを高張液から低張液に移すことにより、少なくとも１つのミトコンドリア成分が放出される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【００９９】
いくつかの実施形態によれば、本発明は、有効量の少なくとも１つのミトコンドリア成分を含む組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、毛包の治療方法を提供する。いくつかの実施形態によれば、本発明は、少なくとも１つのミトコンドリア成分を含む有効量の組成物を脱毛症に罹患している対象に投与することを含む、脱毛症の治療方法を提供する。
【０１００】
本明細書で使用する用語「低張」、「等張」および「高張」は、無傷ミトコンドリア内の溶質濃度に対する濃度に関する。
【０１０１】
他の実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアは、無傷ミトコンドリアを低張液、例えば、それだけに限らないが、低張リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）にさらすことにより得られる。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、無傷ミトコンドリアを低張液にさらすことで、ミトコンドリアが破裂または穿孔され、したがって破壊されたミトコンドリアが得られ、ミトコンドリア成分、例えば、それだけに限らないが、ミトコンドリアマトリックスの少なくとも一部が放出され得る。
【０１０２】
いくつかの実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアは、ミトコンドリアを高張液から低張液に移すことにより得られる。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、無傷ミトコンドリアを高張液から低張液に移すことで、ミトコンドリアが破裂、破壊または穿孔され、したがって破壊されたミトコンドリアが得られ、ミトコンドリア成分、例えば、それだけに限らないが、ミトコンドリアマトリックスの少なくとも一部が放出され得る。非限定的例において、無傷ミトコンドリアの破裂、破壊または穿孔により、ミトコンドリアタンパク質、例えば、クエン酸シンターゼが放出され得る。いくつかの実施形態によれば、クエン酸シンターゼの放出は、破壊されたミトコンドリアを示すものとして用いられる。いくつかの実施形態によれば、本発明によるミトコンドリア成分は、無傷ミトコンドリア内の浸透圧を上昇させることにより無傷ミトコンドリアから放出される。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、ミトコンドリア膜が穿孔および／または断裂されるように無傷ミトコンドリア内で浸透圧を上昇させることで、ミトコンドリアが破壊され、本発明によるミトコンドリア成分が放出され得る。
【０１０３】
いくつかの実施形態によれば、本発明による無傷ミトコンドリアを含む組成物は、高張液として製剤化される。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、高張液を含む。いくつかの実施形態によれば、本発明による高張液は糖を含む。本明細書で使用する用語「糖」は糖、オリゴ糖または多糖を指し得る。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、糖はスクロースである。いくつかの実施形態によれば、本発明による高張液中の糖の濃度は、単離緩衝液中の糖の濃度と同様である。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリア機能を保持するように作用するのに十分な糖の濃度は、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分である。いくつかの実施形態によれば、単離緩衝液は高張である。他の実施形態によれば、本発明による高張液中の糖の濃度は、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度である。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物はさらに、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度を含む。
【０１０４】
別の実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度は、１００ｍＭ〜４００ｍＭ、好ましくは１００ｍＭ〜２５０ｍＭ、最も好ましくは２００ｍＭ〜２５０ｍＭの濃度である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度は１００ｍＭ〜１５０ｍＭである。別の実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度は１５０ｍＭ〜２００ｍＭである。別の実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度は１００ｍＭ〜２００ｍＭである。別の実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度は１００ｍＭ〜４００ｍＭである。別の実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度は１５０ｍＭ〜４００ｍＭである。別の実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度は２００ｍＭ〜４００ｍＭである。別の実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度は少なくとも１００ｍＭである。任意の理論または作用機構に拘束されることは望まないが、１００ｍＭ未満の糖の濃度はミトコンドリアを無傷で保持するのに十分でない可能性がある。いくつかの実施形態によれば、１００ｍＭ超の糖の濃度は高張である。
【０１０５】
いくつかの実施形態によれば、本発明による破壊されたミトコンドリアを含む組成物は低張液として製剤化される。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は低張液を含む。低張液の非限定的例としては、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）がある。いくつかの実施形態によれば、ＰＢＳ中のミトコンドリアは破壊されたミトコンドリアである。他の実施形態によれば、単離緩衝液中のミトコンドリアは無傷ミトコンドリアである。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリアを無傷で保持するのに十分な糖の濃度を含む単離緩衝液中のミトコンドリアは無傷ミトコンドリアである。
【０１０６】
いくつかの実施形態によれば、本発明の無傷ミトコンドリアはイオン交換阻害剤にさらされる。いくつかの実施形態によれば、本発明の無傷ミトコンドリアは、イオン交換阻害剤にさらすことにより縮小される。別の実施形態によれば、本発明の無傷ミトコンドリアは、イオン交換阻害剤にさらすことにより縮小された。いくつかの実施形態によれば、本発明の無傷ミトコンドリアは、部分的精製または単離後にイオン交換阻害剤にさらされる。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明の無傷ミトコンドリアは、部分的精製または単離中にイオン交換阻害剤にさらされる。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。他の実施形態によれば、本発明の無傷ミトコンドリアに由来する細胞または組織は、ミトコンドリアの部分的精製または単離前にイオン交換阻害剤にさらされる。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、イオン交換阻害剤はＣＧＰ３７１５７である。本明細書で使用する用語「ＣＧＰ」および「ＣＧＰ３７１５７」は、互換的に用いられる。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、ミトコンドリアＮａ＋／Ｃａ２＋交換体、例えば、ＣＧＰ３７１５７をブロックする剤は、ミトコンドリア核分裂を誘起し得、ミトコンドリアＡＴＰ産生を増加し得、ミトコンドリアを縮小し得る。ミトコンドリア核分裂は、自然核分裂、または適当な剤、例えば、ＣＧＰ３７１５７により誘起される核分裂を指す。別の実施形態によれば、本発明の最終組成物は、遊離イオン交換阻害剤を欠く。本明細書で使用する場合、イオン交換阻害剤を欠く組成物は、本発明のミトコンドリアに結合しないイオン交換阻害剤を欠く組成物を指す。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、本発明のミトコンドリアに結合したイオン交換阻害剤を含む。いくつかの実施形態によれば、イオン交換阻害剤を欠く組成物は、１μＭ未満、好ましくは０．５μＭ未満、最も好ましくは０．１μＭ未満の濃度でイオン交換阻害剤を含む。
【０１０７】
別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、それが投与される対象とは異なる対象に由来する。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、同種および異種から選択される供給源からのものである。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、同種および異種から選択される供給源からの細胞または組織に由来する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１０８】
本明細書で使用する同種供給源のミトコンドリアは、同じ種から治療される対象とは異なる対象由来のミトコンドリアを指す。本明細書で使用する場合、異種供給源のミトコンドリアは、異なる種から治療される対象とは異なる対象由来のミトコンドリアを指す。いくつかの実施形態によれば、異種供給源は植物供給源である。
【０１０９】
別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、哺乳動物対象に由来する。別の実施形態によれば、哺乳動物対象は、ヒト対象である。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、哺乳動物細胞に由来する。別の実施形態によれば、哺乳動物細胞は、ヒト細胞である。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、培養物中の細胞に由来する。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、組織に由来する。
【０１１０】
いくつかの実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、植物組織、植物細胞または培養物中で増殖させた植物細胞に由来する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明による、植物組織、植物細胞または培養物中で増殖させた植物細胞にミトコンドリアが由来することは、ミトコンドリアが植物プロトプラストに由来することを指す。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。本発明による植物ミトコンドリアは、ミトコンドリアを含むことが当技術分野で公知の任意の植物種、植物器官、植物細胞または培養物中で増殖させた植物細胞に由来し得る。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。非限定的例において、本発明による植物ミトコンドリアは、貯蔵器官（例えば、ジャガイモ、糖またはビート）、緑葉（例えば、タバコ、豆またはペチュニア）またはもやし（例えば、小麦、トウモロコシまたは緑豆）に由来し得る。いくつかの実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、ジャガイモに由来する。いくつかの実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、藻類、例えば、それだけに限らないが、ドナリエラに由来する。実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは動物対象、好ましくは哺乳動物対象、最も好ましくはヒト対象または培養物中で増殖させたヒト細胞から得られる。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは細胞壁を欠く細胞、好ましくは哺乳動物細胞、最も好ましくはヒト細胞から得られる。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１１１】
別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、ヒト胎盤、培養物中で増殖させたヒト胎盤細胞およびヒト血液細胞からなる群から選択される細胞または組織に由来する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞および血液細胞からなる群から選択される細胞または組織に由来する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、ヒト胎盤、培養物中で増殖させたヒト胎盤細胞、ヒト血液細胞、植物組織、植物細胞および培養物中で増殖させた植物細胞からなる群から選択される細胞または組織に由来する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞、血液細胞、植物組織、植物細胞および培養物中で増殖させた植物細胞からなる群から選択される細胞または組織に由来する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１１２】
いくつかの実施形態によれば、本発明によるミトコンドリア成分は胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞および血液細胞からなる群から選択される細胞または組織由来のミトコンドリアから産生される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明によるミトコンドリア成分は、ヒト胎盤、培養物中で増殖させたヒト胎盤細胞およびヒト血液細胞からなる群から選択される細胞または組織由来のミトコンドリアから産生される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明によるミトコンドリア成分は、胎盤、培養物中で増殖させた胎盤細胞、血液細胞、植物組織、植物細胞および培養物中で増殖させた植物細胞からなる群から選択される細胞または組織由来のミトコンドリアから産生される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明によるミトコンドリア成分は、ヒト胎盤、培養物中で増殖させたヒト胎盤細胞およびヒト血液細胞からなる群から選択される細胞または組織由来のミトコンドリアから産生される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明によるミトコンドリア成分は、ヒト胎盤、培養物中で増殖させたヒト胎盤細胞、ヒト血液細胞、植物組織、植物細胞および培養物中で増殖させた植物細胞からなる群から選択される細胞または組織由来のミトコンドリアから産生される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１１３】
本明細書で使用する語句「培養物中で増殖させた細胞」または「培養物中で増殖させた組織」は、細胞または組織が由来する生体外の液体、半固体または固体培地中で各々増殖させた多数の細胞または組織を指す。いくつかの実施形態によれば、培養物中で増殖させた細胞はバイオリアクター中で増殖させた細胞である。非限定的例によれば、細胞は、バイオリアクター（例えば、それだけに限らないが、国際公開第２００８／１５２６４０号に開示されているバイオリアクター）中で増殖され得、次いでミトコンドリアが細胞から単離されるか、または部分的に精製される。
【０１１４】
別の実施形態によれば、本発明のミトコンドリアは、凍結融解サイクルを経た。いくつかの実施形態によれば、本発明の無傷ミトコンドリアは凍結融解サイクルを経た。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、凍結融解サイクルを経た無傷ミトコンドリアは、凍結融解サイクルを経ていない対照無傷ミトコンドリアと比較して、融解後、少なくとも同程度の酸素消費量を示す。したがって、凍結融解サイクルを経た無傷ミトコンドリアは、凍結融解サイクルを経ていない対照ミトコンドリアと少なくとも同様の機能性がある。
【０１１５】
本明細書で使用する用語「凍結融解サイクル」は、本発明のミトコンドリアを０℃未満の温度に凍結し、ミトコンドリアを０℃未満の温度で規定された時間維持し、ミトコンドリアを室温もしくは体温または本発明の方法による投与を可能にする０℃超の任意の温度に融解することを指す。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。本明細書で使用する用語「室温」は１８℃〜２５℃の温度を指す。本明細書で使用する用語「体温」は３５．５℃〜３７．５℃、好ましくは３７℃の温度を指す。
【０１１６】
別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、少なくとも−１９６℃の温度で凍結された。別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、少なくとも−７０℃の温度で凍結された。別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、少なくとも−２０℃の温度で凍結された。別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、少なくとも−４℃の温度で凍結された。別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、少なくとも０℃の温度で凍結された。別の実施形態によれば、ミトコンドリアは徐々に凍結される。いくつかの実施形態によれば、ミトコンドリアの凍結はフラッシュ凍結によるものである。本明細書で使用する用語「フラッシュ凍結」は、ミトコンドリアを極低温にさらすことによりミトコンドリアを急速に凍結することを指す。非限定的例において、フラッシュ凍結は、液体窒素を用いて凍結することを含み得る。
【０１１７】
別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、融解前に少なくとも３０分間凍結された。別の実施形態によれば、凍結融解サイクルは、融解前にミトコンドリアを少なくとも３０、６０、９０、１２０、１８０、２１０分間凍結することを含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、融解前に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２４、４８、７２、９６、１２０時間凍結された。各凍結時間は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、融解前に少なくとも４、５、６、７、３０、６０、１２０、３６５日間凍結された。各凍結時間は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、凍結融解サイクルは、融解前にミトコンドリアを少なくとも１、２、３週間凍結することを含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、凍結融解サイクルは、融解前にミトコンドリアを少なくとも１、２、３、４、５、６ヶ月間凍結することを含む。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１１８】
別の実施形態において、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、融解前に−７０℃で少なくとも３０分間凍結された。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、ミトコンドリアを凍結し、それを長期間後融解する可能性は、ミトコンドリアの簡単な貯蔵および使用を可能にし、長期貯蔵後でも再生可能な結果をもたらす。いくつかの実施形態によれば、本発明による破壊されたミトコンドリアは、凍結融解サイクルを経た無傷ミトコンドリアから調製／産生される。
【０１１９】
別の実施形態によれば、融解は室温である。別の実施形態において、融解は体温である。別の実施形態によれば、融解は、本発明の方法による投与を可能にする温度で行われる。別の実施形態によれば、融解は徐々に行われる。
【０１２０】
本明細書で使用する用語「単離緩衝液」は、本発明のミトコンドリアがそこで部分的に精製または単離された緩衝液を指す。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。本発明による無傷ミトコンドリアは単離緩衝液中で単離または部分的に精製され、破壊されたミトコンドリアは、本明細書に記載の方法または当技術分野で公知の任意の他の方法により単離された／部分的に精製された無傷ミトコンドリアから産生されることが理解されるべきである。非限定的例において、単離緩衝液は２００ｍＭスクロース、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳおよび１ｍＭ  ＥＧＴＡを含む。いくつかの実施形態によれば、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）は、部分的精製または単離中に単離緩衝液に添加される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、０．２％ＢＳＡは、部分的精製または単離中に単離緩衝液に添加される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、ＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）は、部分的精製または単離中に単離緩衝液に添加される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、０．２％ＨＳＡは、部分的精製または単離中に単離緩衝液に添加される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。他の実施形態によれば、ＨＳＡまたはＢＳＡは、部分的精製または単離後に、本発明のミトコンドリアから洗い流される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。任意の機構または理論に拘束されることは望まないが、単離緩衝液中でのミトコンドリアの凍結により、凍結前に単離緩衝液を凍結緩衝液と交換するか、または融解時に凍結緩衝液を交換する必要がないため、時間と単離工程が節約される。
【０１２１】
別の実施形態によれば、凍結融解サイクルを経たミトコンドリアは、凍結緩衝液中で凍結された。別の実施形態によれば、凍結融解サイクルを経た無傷ミトコンドリアは、単離緩衝液中で凍結された。別の実施形態によれば、凍結融解サイクルを経た無傷ミトコンドリアは、単離緩衝液と同じ成分を含む緩衝液中で凍結された。
【０１２２】
別の実施形態によれば、凍結緩衝液は抗凍結剤を含む。いくつかの実施形態によれば、抗凍結剤は糖、オリゴ糖または多糖である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、凍結緩衝液中の糖の濃度は、ミトコンドリア機能を保持するように作用するのに十分な糖の濃度である。別の実施形態によれば、単離緩衝液は糖を含む。別の実施形態によれば、単離緩衝液中の糖の濃度は、ミトコンドリア機能を保持するように作用するのに十分な糖の濃度である。別の実施形態によれば、単離緩衝液中の糖の濃度は、ミトコンドリアを無傷で保持するように作用するのに十分な糖の濃度である。別の実施形態によれば、凍結緩衝液中の糖の濃度は、ミトコンドリアを無傷で保持するように作用するのに十分な糖の濃度である。別の実施形態によれば、糖はスクロースである。任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、スクロースを含む凍結緩衝液または単離緩衝液中で凍結された無傷ミトコンドリアは、凍結融解サイクルを経ていないか、またはスクロースを含まない凍結緩衝液もしくは単離緩衝液中で凍結された対照ミトコンドリアと比較して、融解後少なくとも同程度の酸素消費量を示す。
【０１２３】
いくつかの実施形態によれば、破壊されたミトコンドリアは凍結融解サイクルを経た。いくつかの実施形態によれば、本発明によるミトコンドリア成分は凍結融解サイクルを経た。いくつかの実施形態によれば、凍結融解サイクルを経た破壊されたミトコンドリアは、凍結緩衝液中で凍結された。いくつかの実施形態によれば、凍結融解サイクルを経たミトコンドリア成分は、凍結緩衝液中で凍結された。いくつかの実施形態によれば、凍結融解サイクルを経た破壊されたミトコンドリアは、低張液、例えば、それだけに限らないが、ＰＢＳ中で凍結された。いくつかの実施形態によれば、凍結融解サイクルを経たミトコンドリア成分は、低張液、例えば、それだけに限らないが、ＰＢＳ中で凍結された。
【０１２４】
いくつかの実施形態によれば、凍結融解サイクルを経た破壊されたミトコンドリアは、単離緩衝液中で凍結された。別の実施形態によれば、凍結融解サイクルを経た破壊されたミトコンドリアは、単離緩衝液と同じ成分を含む緩衝液中で凍結された。いくつかの実施形態によれば、凍結融解サイクルを経たミトコンドリア成分は、単離緩衝液中で凍結された。別の実施形態によれば、凍結融解サイクルを経たミトコンドリア成分は、単離緩衝液と同じ成分を含む緩衝液中で凍結された。
【０１２５】
それだけに限らないが局所経路を含む、対象への投与に好適な任意の経路は、本発明の方法に従って用いられ得る。いくつかの実施形態によれば、投与は局所投与である。いくつかの実施形態によれば、組成物は局所投与用に製剤化される。
【０１２６】
別の実施形態によれば、投与は非経口経路によるものである。いくつかの実施形態によれば、非経口投与のための本発明の組成物の調製物は、滅菌水溶液もしくは非水溶液、懸濁液またはエマルジョンを含み、各々、本発明の別個の実施形態を表す。非水溶媒またはビヒクルの非限定的例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えば、オリーブ油およびトウモロコシ油、ゼラチンおよび注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルがある。
【０１２７】
いくつかの実施形態によれば、非経口投与は、皮内または皮下投与である。上記投与経路は各々、本発明の別個の実施形態を表す。別の実施形態によれば、非経口投与は、ボーラス注射により行われる。好ましい投与様式は、治療される特定の適応症に依存し、当業者に明らかである。
【０１２８】
別の実施形態によれば、組成物の局所投与は、注射によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による注射は、頭皮への注射である。注射による投与のために、組成物は、水溶液中で、例えば、それだけに限らないが、ハンクス溶液、リンガー溶液または生理食塩緩衝液を含む生理学的に相溶性の緩衝液中で製剤化され得る。注射用製剤は、任意で添加される保存剤と共に、単位剤形で、例えば、アンプル中、または複数回投与容器中で提供され得る。
【０１２９】
水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含有し得る。任意で、懸濁液は、好適な安定剤、または活性成分の溶解度を増加させて高度に濃縮された溶液の調製を可能にする剤も含有し得る。
【０１３０】
別の実施形態によれば、注射用に製剤化された組成物は、油性または水性ビヒクル中の溶液、懸濁液、分散液またはエマルジョンの形態であり得、製剤化剤、例えば、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤を含有し得る。好適な親油性溶媒またはビヒクルの非限定的例としては、脂肪油、例えば、ゴマ油または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリドが挙げられる。
【０１３１】
いくつかの実施形態によれば、投与は局所投与である。いくつかの実施形態によれば、組成物は局所投与用に製剤化される。本明細書で使用する用語「局所投与」は、体表への投与を指す。局所使用のための製剤の非限定的例としては、クリーム、軟膏、ローション、ゲル、フォーム、懸濁液、水溶液または共溶媒溶液、膏薬および噴霧可能な液体形態が挙げられる。本発明の方法での使用に好適な他の好適な局所用製品の形態は、例えば、エマルジョン、ムース、ローション、溶液および血清が挙げられる。
【０１３２】
局所投与用に製剤化される組成物は、水で洗い流せない（油中水型）クリームまたは水で洗い流せる（水中油型）クリーム、軟膏、ローション、ゲル、懸濁液、水溶液または共溶媒溶液、膏薬、エマルジョン、創傷被覆材、被覆包帯または他のポリマー被覆材、スプレー、エアロゾル、リポソームおよび薬物の局所投与に好適な任意の他の許容される担体を含み得る。
【０１３３】
当技術分野で周知であるように、組成物の物理化学的特性は、それだけに限らないが、増粘剤、ゲル化剤、湿潤化剤、凝集化剤、懸濁化剤などを含む、様々な賦形剤の添加により操作され得る。これらの任意選択の賦形剤により、投与がより快適または便宜的であり得るように、得られた製剤の物性が決定される。選択された賦形剤は、好ましくは製剤の貯蔵安定性を高めるべきであり、いずれの場合もそれを妨害してはならないことを当業者であれば認識されるであろう。
【０１３４】
軟膏およびクリームは、例えば、好適な増粘化および／またはゲル化剤の添加された水性または油性基材と共に製剤化され得る。ローションは、水性または油性基材と共に製剤化され得、一般に1つ以上の乳化剤、安定化剤、分散化剤、懸濁化剤、増粘化剤または着色剤も含有する。
【０１３５】
例えば、クリーム製剤は、活性化合物に加えて（ａ）疎水性成分、（ｂ）親水性水性成分、および（ｃ）少なくとも１つの乳化剤を含み得る。クリームの疎水性成分は、鉱油、黄色ソフトパラフィン（ワセリン）、白色ソフトパラフィン（ワセリン）、パラフィン（固形パラフィン）、重いパラフィン油、含水羊毛脂（含水ラノリン）、羊毛脂（ラノリン）、羊毛アルコール（ラノリンアルコール）、ペトロラタムおよびラノリンアルコール、蜜蝋、セチルアルコール、アーモンド油、落花生油、ヒマシ油、水素化ヒマシ油ワックス、綿実油、オレイン酸エチル、オリーブ油、ゴマ油およびこれらの混合物からなる群により例証される。クリームの親水性水性成分は、水単独、プロピレングリコールまたはあるいは任意の薬学的に許容される緩衝液または溶液により例証される。乳化剤は、クリームを安定化させ、液滴の合体を防止するためにクリームに添加される。乳化剤は表面張力を低下させ、安定したコヒーレントな界面膜を形成する。好適な乳化剤は、それだけに限らないが、コレステロール、セトステアリルアルコール、羊毛脂（ラノリン）、羊毛アルコール（ラノリンアルコール）、含水羊毛脂（含水ラノリン）およびこれらの混合物からなる群により例証され得る。
【０１３６】
局所懸濁液は、例えば、活性化合物に加えて（ａ）水性媒体、および（ｂ）懸濁化剤または増粘剤を含み得る。任意で追加の賦形剤が添加される。好適な懸濁化剤または増粘剤は、それだけに限らないがメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘導体、アルギン酸およびその誘導体、キサンタンガム、グアーガム、アラビアガム、トラガカント、ゼラチン、アカシア、ベントナイト、デンプン、微結晶セルロース、ポビドンおよびこれらの混合物からなる群により例証され得る。水性懸濁液は、任意で、追加の賦形剤、例えば、湿潤化剤、凝集化剤、増粘剤などを含有し得る。好適な湿潤化剤は、それだけに限らないがグリセロールポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびこれらの混合物、ならびに界面活性剤からなる群により例証される。懸濁液中の湿潤化剤の濃度は、湿潤化剤の実現可能な最低濃度で、懸濁液中での医薬粉末の最適な分散が得られるように選択されるべきである。好適な凝集化剤は、それだけに限らないが電解質、界面活性剤およびポリマーからなる群により例証される。懸濁化剤、湿潤化剤および凝集化剤は、医薬有効剤の安定な懸濁液を形成するのに有効な量で提供される。本明細書で使用する用語「活性化合物」はミトコンドリア、ミトコンドリア成分またはこれらの組み合わせを指す。
【０１３７】
局所ゲル製剤は、例えば、活性化合物に加えて、少なくとも１つのゲル化剤および酸性化合物を含み得る。好適なゲル化剤は、それだけに限らないが親水性ポリマー、天然および合成ガム、架橋タンパク質およびこれらの混合物からなる群により例証され得る。ポリマーは、例えば、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースならびにアミロース、デキストラン、キトサン、プルランおよび他の多糖の同様の誘導体；架橋タンパク質、例えば、アルブミン、ゼラチンおよびコラーゲン；アクリルベースのポリマーゲル、例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ、Ｅｕｄｒａｇｉｔおよびヒドロキシエチルメタクリレートベースのゲルポリマー、ポリウレタンベースのゲル、ならびにこれらの混合物を含み得る。
【０１３８】
本発明の局所組成物はさらに、溶液として製剤化され得る。このような溶液は、活性化合物に加えて、それだけに限らないが水、緩衝化溶液、有機溶媒、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、グリコフロール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、乳酸エチル、乳酸メチル、Ｎ−メチルピロリドン、エトキシル化トコフェロールおよびこれらの混合物からなる群に例証される少なくとも１つの共溶媒を含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は局所投与される。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、それを必要とする対象の頭皮に局所投与される。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による局所投与は、毛包への投与である。別の実施形態によれば、本発明の方法による局所投与は、本発明の組成物が、シャンプー、軟膏、スプレー、ゲルまたは液体として製剤化される場合の投与である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１４０】
いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、化粧品製剤として製剤化される。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、局所投与のための化粧品製剤として製剤化される。化粧品製剤の非限定的例としては、それだけに限らないがトニック、ローション、クリーム、軟膏、ゲル、シャンプー、スプレー（エアロゾルまたはミスト）、コンディショナー、毛染め剤、リンスなどが挙げられる。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、血行促進剤、例えば、それだけに限らないが、セファランチン、塩化カルプロニウム、センブリエキスおよびニンニクエキスを含む。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、局所刺激剤、例えば、それだけに限らないが、トウガラシチンキ、カンタリスチンキ、ショウガチンキ、ノニル酸バニルアミドなどを含む。いくつかの実施形態によれば、本発明の組成物は、化粧品材料、例えば、それだけに限らないが、香料、保湿成分、染料、毛髪軟化成分、毛髪調整成分などを含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態によれば、それを必要とする対象への投与は、局所、皮下、皮内および組織または器官への直接注射からなる群から選択される経路によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による直接注射による投与は、それを必要とする対象の頭皮への注射である。
【０１４２】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による毛包の治療は、破壊されたミトコンドリアを含む組成物の投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による脱毛症に罹患している対象の治療は、破壊されたミトコンドリアを含む組成物の投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による毛包の治療は、破壊されたミトコンドリア、および破壊されたミトコンドリアから放出される少なくとも１つのミトコンドリア成分を含む組成物の投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による脱毛症に罹患している対象の治療は、破壊されたミトコンドリア、および破壊されたミトコンドリアから放出される少なくとも１つのミトコンドリア成分を含む組成物の投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による毛包の治療は、少なくとも１つのミトコンドリア成分の投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による脱毛症に罹患している対象の治療は、少なくとも１つのミトコンドリア成分の投与によるものである。
【０１４３】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による毛包の治療は、無傷ミトコンドリアの投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による脱毛症に罹患している対象の治療は、無傷ミトコンドリアの投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による毛包の治療は、部分的に精製されたミトコンドリアの投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による脱毛症に罹患している対象の治療は、部分的に精製されたミトコンドリアの投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による毛包の治療は、単離されたミトコンドリアの投与によるものである。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による脱毛症に罹患している対象の治療は、単離されたミトコンドリアの投与によるものである。
【０１４４】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による毛包の治療は、無傷ミトコンドリアおよび／または破壊されたミトコンドリアおよび／または少なくとも１つのミトコンドリア成分の投与によるものである。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、本発明の方法による脱毛症に罹患している対象の治療は、無傷ミトコンドリアおよび／または破壊されたミトコンドリアおよび／または少なくとも１つのミトコンドリア成分の投与によるものである。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１４５】
本明細書で使用する用語「毛包」は、皮膚内にある発毛器官を指し、毛乳頭細胞、毛包マトリックス、毛根鞘および毛髪繊維を含む。本明細書で使用する毛包の伸長は、毛包の任意の部分、例えば、それだけに限らないが、毛根鞘の伸長に関する。本明細書で使用する用語「毛包成長周期」は、上記の背景技術に開示されているように、本質的に成長期、退行期および休止期相を含む成長周期に関する。
【０１４６】
本明細書で使用する用語「治療する」、「本発明に従って治療する」、「治療」、「本発明による治療」および「毛包（ｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ、ｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｌｅ、およびａ  ｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｌｅ）を治療する」は、互換的であり、毛包の伸長を誘導すること、毛包の伸長を促進すること、毛髪繊維の伸長を誘導すること、毛髪繊維の伸長を促進すること、毛髪繊維の太さを改善すること、毛包内の細胞増殖を誘導すること、毛包内の細胞増殖を促進すること、毛包の矮小化を阻止すること、毛包の矮小化を遅延すること、毛包の矮小化を改善すること、毛包の成長周期相の持続期間を変更することおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの治療に関する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、毛包の成長周期相の持続期間は、成長期相の伸長に関する。
【０１４７】
いくつかの実施形態によれば、毛包の治療は、毛包の伸長を誘導することに関する。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療は、毛包の伸長を促進することに関する。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療は、毛包の伸長を誘導または促進することに関する。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療は、毛髪繊維の伸長を誘導することに関する。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療は、毛髪繊維の伸長を促進することに関する。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療は、毛髪繊維の伸長を含む。本明細書で使用する用語「毛包（ｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｌｅｓおよびｈａｉｒ  ｆｏｌｌｉｃｌｅ）内の細胞」は、互換的であり、毛包、例えば、それだけに限らないが、毛乳頭細胞に含まれる細胞に関する。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療は、毛乳頭細胞の増殖を誘導することを含む。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療は、毛乳頭細胞の増殖を促進することを含む。いくつかの実施形態によれば、本発明による治療は、毛包内の細胞、例えば、それだけに限らないが、毛乳頭細胞の機能に影響を与えることを含む。
【０１４８】
任意の理論または機構に拘束されることは望まないが、本発明による毛包の治療は、毛髪成長、毛髪の脱落の予防、毛髪の脱落の減速、毛髪成長速度の増加、毛量の増加、毛髪の太さの改善、毛髪強度の改善またはこれらの組み合わせの少なくとも１つをもたらし得る。
【０１４９】
本明細書で使用するそれを必要とする対象は、毛包の治療が有益となる疾患または障害に罹患している対象である。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療が有益となる疾患または障害は脱毛症である。いくつかの実施形態によれば、毛包の治療が有益となる疾患または障害は、脱毛、毛髪成長障害、毛髪菲薄化、毛髪成長速度の遅延およびこれらの組み合わせの原因となり得る当技術分野で公知の任意の疾患または障害である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。他の実施形態よれば、毛包の治療が有益となる疾患または障害は、脱毛、毛髪成長障害、毛髪菲薄化、毛髪成長速度の遅延およびこれらの組み合わせからなる群から選択される副作用を引き起こすことが当技術分野で公知の任意の疾患または障害である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。他の実施形態よれば、毛包の治療が有益となる疾患または障害は、脱毛、毛髪成長障害、毛髪菲薄化、毛髪成長速度の遅延およびこれらの組み合わせを誘導する治療方法を有することが当技術分野で公知の任意の疾患または障害である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。毛髪障害を誘発し得る治療方法の非限定的例としては、様々な癌型の治療のための化学療法がある。
【０１５０】
本明細書で使用する用語「脱毛症」は、それだけに限らないが男性型禿頭症と一般に称されるアンドロゲン性脱毛症を含む、頭部または身体からの脱毛を指す。
【０１５１】
本明細書で使用する用語「有効量」は、本発明による毛包において所望の効果を得るのに十分な本発明の組成物の量を指す。いくつかの実施形態によれば、有効量は、脱毛症の改善をもたらす本発明の組成物の量である。
【０１５２】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法はさらに、少なくとも１つの毛髪成長誘導剤の投与を含む。いくつかの実施形態によれば、本明細書で使用する毛髪成長誘導剤は、毛髪成長に対する効果、例えば、それだけに限らないが、毛髪成長の誘導、毛髪の脱落の予防、毛髪の脱落の減速、毛髪成長速度の増加、毛量の増加、毛髪の太さの改善、毛髪強度の改善またはこれらの組み合わせを有する当技術分野で公知の任意の物質または組成物である。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、毛髪成長誘導剤は、フィナステリド、デュタステリド、ミノキシジル、コペキシル、酸化型補酵素Ｑ、還元型補酵素Ｑ、Ｌ−カルニチン酒石酸塩、カフェインおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別個の実施形態を表す。
【０１５３】
本発明のいくつかの実施形態によれば、ミトコンドリアおよび／または少なくとも１つのミトコンドリア成分は少なくとも１つの毛髪成長誘導剤と共に投与されることに留意されるべきである。しかし、本発明は、公知の毛髪成長誘導剤、例えば、それだけに限らないが、フィナステリド、デュタステリド、ミノキシジル、コペキシル、酸化型補酵素Ｑ、還元型補酵素Ｑ、Ｌ−カルニチン酒石酸塩、カフェインおよびこれらの組み合わせ単独での投与を排除する。
【０１５４】
以下の実施例は、本発明をより完全に理解するために提供される。本発明の原理を例示するために示された特定の技術、条件、材料、比率および報告されたデータは、例示的なものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１５５】
実施例
実施例１：顕微解剖されたヒト毛包（ｈＨＦ）は、凍結融解したヒトミトコンドリア組成物の存在下で毛包の伸長を示す。
ミトコンドリアを、以下のプロトコルに従ってヒト満期胎盤から単離した：
１．胎盤を、氷冷ＩＢ緩衝液（単離緩衝液：２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳ）＋０．２％ＢＳＡを用いて洗い流し、血液を除去した。
２．胎盤を５ｍｌ  ＩＢ＋０．２％ＢＳＡ中でハサミを用いて小片に切り刻んだ。
３．懸濁液を１０ｍｌガラスポッターに移し、Ｄｏｕｎｃｅガラスホモジナイザーを用いて５回の完全な上下サイクルでホモジナイズした。
４．ホモジネートを１５ｍｌ管に移し、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。
５．上清を清潔な遠心分離管に移し、ペレットをＩＢ緩衝液に再懸濁し、第２の遠心分離工程を行った。
６．工程４および５からの上清を５μｍのフィルターを通して濾過し、任意の細胞または大きな細胞残屑を除去した。
７．上清を回収し、７０００×ｇで１５分間遠心分離した。
８．ミトコンドリアペレットを１０ｍｌ氷冷ＩＢ緩衝液中で洗浄し、ミトコンドリアを７０００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離することにより回収した。
９．上清を廃棄し、ミトコンドリアを含有するペレットを２００μｌのＩＢ緩衝液に再懸濁した。
１０．タンパク質含有量をブラッドフォードアッセイで決定した。
【０１５６】
ミトコンドリアを、２μｇ／μｌの濃度で１．５ｍｌエッペンドルフ管中のＩＢ（２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳ）中でフラッシュ凍結した。
【０１５７】
成長期のサブフェイズＶＩ（新しい毛幹が皮膚表面から突出する）の主にヒト毛包（ｈＨＦ）を含有する頭皮試料を、選択的美容整形術を受けた男性から得た（インフォームドコンセントを得た）。毛包を顕微解剖し、最初に刺激なしでｈＨＦ培養培地で１日（０〜１日目）培養して、その成長可能性を確認し、このようにして実験に最適な毛包の選択を可能にした。
【０１５８】
次に、ｈＨＦを、５、１２．５または５０μｇ／ｍｌの融解したミトコンドリアまたは陽性対照としてシクロスポリンＡ（公知のｈＨＦ成長誘導剤）を補足したｈＨＦ培養培地で１日（１〜２日目）培養した。１２個の毛包を各処理で使用した。５日後に１日（５〜６日目）２回目の処理を受けた、５μｇ／ｍｌのミトコンドリア組成物で処理したｈＨＦを除いて、すべての処理は１回行われた。すべての処理でｈＨＦ培養培地を一日おきに交換した。
【０１５９】
５日目および９日目に、ｈＨＦを含有するウェルを撮影し、各毛包の伸長を（ミリメートルで）測定した。ＩｍａｇｅＪソフトウェア（ＮＩＨ、ＵＳＡ）で画像分析を行った。
【０１６０】
図１に示すように、各処理群のｈＨＦの成長率を、（図１において「ビヒクル」の印を付けた）ｈＨＦ培地中でインキュベートした未処理のｈＨＦの成長と比較して測定した。融解したミトコンドリアで処理したｈＨＦはすべて、ｈＨＦ培地中でインキュベートしたｈＨＦと比較して高い成長を示した。１２．５μｇ／ｍｌの融解したミトコンドリアで処理したｈＨＦは高い伸長（１９％）を示した。
【０１６１】
例２：ヒト毛包毛乳頭細胞と新鮮なミトコンドリアとのインキュベーションは高い細胞増殖をもたらす
ヒト毛包毛乳頭細胞（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）を２４ウェルプレート（６０，０００細胞／ウェル）に播種した。細胞を１２．５μｇ／ｍｌの濃度で５μｇのヒト胎盤ミトコンドリアで処理した。ミトコンドリアを凍結融解サイクルなしで実施例１と同様に産生した。２４時間のインキュベーション後、培地を交換し、細胞をさらに５日間増殖させた。
【０１６２】
図２Ａから分かるように、細胞数は、ミトコンドリアで処理した細胞中で高かった。当技術分野で公知であるように、ヒト毛包毛乳頭細胞は、ＶＥＧＦ−Ａを産生する（Ｌａｃｈｇａｒ  Ｓ．ら、Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  ｉｓ  ａｎ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈａｉｒ  ｄｅｒｍａｌ  ｐａｐｉｌｌａ  ｃｅｌｌｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１９９６、（１０６）：１７〜２３）。図２Ｂから分かるように、ミトコンドリアで処理した細胞は、より高い細胞数との相関においてより多くのＶＥＧＦ−Ａを培地に分泌する（ＶＥＧＦ−Ａレベルを、Ｒ＆Ｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ製のＥＬＩＳＡキットを用いて評価した）。図２Ｃから分かるように、クエン酸シンターゼの活性レベルは、ミトコンドリアで３時間処理した細胞において高かった。
【０１６３】
実施例３：凍結および融解したミトコンドリアは、凍結していないミトコンドリアの酸素消費と同程度の酸素消費を示す。
ミトコンドリアを以下のプロトコルに従ってマウス満期胎盤から単離した：
１．胎盤を、氷冷ＩＢ緩衝液（単離緩衝液：２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳ）＋０．２％ＢＳＡを用いて洗い流し、血液を除去した。
２．胎盤を５ｍｌ  ＩＢ＋０．２％ＢＳＡ中でハサミを用いて小片に切り刻んだ。
３．懸濁液を１０ｍｌガラスポッターに移し、Ｄｏｕｎｃｅガラスホモジナイザーを用いて５回の完全な上下サイクルでホモジナイズした。
４．ホモジネートを１５ｍｌ管に移し、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。
５．上清を清潔な遠心分離管に移し、ペレットをＩＢ緩衝液に再懸濁し、第２の遠心分離工程を行った。
６．工程４および５からの上清を５μｍのフィルターを通して濾過し、任意の細胞または大きな細胞残屑を除去した。
７．上清を回収し、７０００×ｇで１５分間遠心分離した。
８．ミトコンドリアペレットを１０ｍｌ氷冷ＩＢ緩衝液中で洗浄し、ミトコンドリアを７０００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離することにより回収した。
９．上清を廃棄し、ミトコンドリアを含有するペレットを２００μｌのＩＢ緩衝液に再懸濁した。
１０．タンパク質含有量をブラッドフォードアッセイで決定した。
【０１６４】
凍結したミトコンドリア対凍結していないミトコンドリアの活性を比較するために、ミトコンドリアを、１．５ｍｌエッペンドルフ管中のＩＢ（２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳ）中で液体窒素を用いてフラッシュ凍結し、−７０℃で３０分間保持した。ミトコンドリアを手で急速に融解し、１００μｇのミトコンドリアによるＯ２消費を、ＭｉｔｏＸｐｒｅｓｓ蛍光プローブ（Ｌｕｘｃｅｌ）およびテカンプレートリーダーを用いて測定した。酸素消費を、２５ｍＭコハク酸塩（Ｓ）の存在下でまたは２５ｍＭコハク酸塩および１．６５ｍＭ  ＡＤＰ（Ｓ＋ＡＤＰ）の存在下で測定した。蛍光の変化を、０時での蛍光レベルと比較して求めた。図３からは、Ｏ２消費、およびＯ２消費量が、（「新鮮」の印を付けた）凍結していないミトコンドリアと比較して、（「凍結」の印を付けた）凍結および融解したミトコンドリアと同程度であったことが分かる。
【０１６５】
凍結したミトコンドリアとは対照的に、冷却（４℃で４日間保持）したマウス胎盤ミトコンドリアは、新鮮なミトコンドリアよりもＡＴＰが少なかった（表１）。
【０１６６】
【表１】
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【０１６７】
実施例４：スクロースまたはマンニトール含有緩衝液中でインキュベートした新鮮なジャガイモ由来ミトコンドリア対融解したジャガイモ由来ミトコンドリアにおける酸素消費の比較
ミトコンドリアを、マンニトールを含む緩衝液（０．７ｍＭマンニトール、１０ｍＭ  ＫＰＩ（ｐＨ６．５）、１μＭ  ＥＤＴＡ、２μＭシステイン、０．１％脂肪酸不含ＢＳＡを補足）またはスクロースを含む単離緩衝液（ＩＢ）（２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡ／Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／Ｍｏｐｓ  ｐＨ７．４、０．２％脂肪酸不含ＢＳＡを補足）中で３０ｇのジャガイモから単離した。簡単に言えば、ジャガイモを４℃で一晩冷却し、小片に切断し、マンニトールまたはスクロース含有緩衝液中（組織：体積１：４の比）でブレンダーを用いて３０秒間粉砕した。混合物をチーズクロスを通して濾過し、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。懸濁液を新しい管に移し、８０００ｇで１０分間遠心分離した。マンニトール／スクロースで処理した組織のペレットを１ｍｌ洗浄緩衝液（０．７Ｍマンニトール、１０ｍＭ  ＫＰＩ  ｐＨ６．５）または単離緩衝液各々で洗浄し、８０００ｇ、４℃で１０分間遠心分離し、１００μｌ洗浄緩衝液／単離緩衝液に再懸濁した。
【０１６８】
５０μｇの新鮮なミトコンドリア、または液体窒素でスナップ凍結させ、液体窒素中で２４時間保持し、室温で融解したミトコンドリアの酸素消費を、ＭｉｔｏＸｐｒｅｓｓ蛍光プローブ（Ｌｕｘｃｅｌ）およびテカンプレートリーダーを用いて、コハク酸塩（Ｓ）、コハク酸塩＋ＡＤＰ（Ｓ＋Ａ）、グルタミン酸塩およびマレイン酸塩（Ｇ／Ｍ）またはグルタミン酸塩、マレイン酸塩およびＡＤＰ（Ｇ／Ｍ＋ＡＤＰ）の存在下で測定した。
【０１６９】
図４から分かるように、マンニトールを含む緩衝液中でインキュベートした新鮮なミトコンドリア（図４Ａ）は、スクロースを含む緩衝液中でインキュベートした新鮮なミトコンドリア（図４Ｂ）よりも酸素消費が低く、遅かった。マンニトールを含む緩衝液中で凍結および融解したミトコンドリア（図４Ｃ）は酸素消費を示さなかった。スクロースを含む緩衝液中で凍結および融解したミトコンドリア（図４Ｄ）は、対応する新鮮なミトコンドリア（図４Ｂ）と同程度の酸素消費を示した。
【０１７０】
実施例５：スクロースまたはマンニトール含有緩衝液中でインキュベートした新鮮なジャガイモ由来ミトコンドリア対融解したジャガイモ由来ミトコンドリアの膜完全性の比較
ミトコンドリアをジャガイモから単離し、実施例４に記載するように処理した。次に、５０μｇのミトコンドリアホモジネートを７０００ｇで１０分間遠心分離し、上清を新しい管に回収し、ペレットを溶解緩衝液に再懸濁した。ミトコンドリア内膜の完全性を評価するために、１６μｇのミトコンドリア上清および４μｇのミトコンドリアペレットを、キットＣＳ０７２０（Ｓｉｇｍａ）を用いてクエン酸シンターゼの放出について調査した。図５は、スクロースまたはマンニトールでインキュベートした、新鮮なミトコンドリアまたは凍結融解サイクル後のミトコンドリアいずれかのクエン酸シンターゼの放出を示している。図５からは、マンニトール含有緩衝液中で単離および凍結したミトコンドリアは、クエン酸シンターゼの放出により証明されるように膜完全性を低下させたことが分かる。
【０１７１】
実施例６：単離緩衝液中でインキュベートしたミトコンドリア対ＰＢＳ中でインキュベートしたミトコンドリアの酸素消費および膜完全性の比較
ミトコンドリアを、単離緩衝液（ＩＢ）（２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡ／Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／Ｍｏｐｓ  ｐＨ７．４、０．２％脂肪酸不含ＢＳＡを補足）を用いてマウス満期胎盤から単離した。ミトコンドリアペレットを、ＩＢに懸濁し、氷上でインキュベートするか、またはＰＢＳに懸濁し、３７℃で１０分間インキュベートした。インキュベートした５０μｇのミトコンドリアの酸素消費を、ＭｉｔｏＸｐｒｅｓｓ蛍光プローブ（Ｌｕｘｃｅｌ）を用いて、コハク酸塩（Ｓ）またはコハク酸塩＋ＡＤＰ（Ｓ＋Ａ）の存在下で測定した。図６から分かるように、ＰＢＳでインキュベートしたミトコンドリア（図６Ｂ）は、非連結ミトコンドリアに相当する酸素消費を示し、ＩＢ中でインキュベートしたミトコンドリア（図６Ａ）は、連結ミトコンドリアに相当する酸素消費を示す。
【０１７２】
ＣＳ０７２０キット（Ｓｉｇｍａ）を用いてクエン酸シンターゼの放出を測定することにより、ＩＢ中でインキュベートしたミトコンドリアのミトコンドリア内膜完全性を、ＰＢＳ中でインキュベートしたミトコンドリアの内膜完全性と比較した。図６Ｃからは、ＰＢＳ中でインキュベートしたミトコンドリアは、クエン酸シンターゼの放出により証明されるように膜完全性が低下したことが分かる。
【０１７３】
実施例７：単離緩衝液中でインキュベートしたミトコンドリア対細胞培養培地中でインキュベートしたミトコンドリアの酸素消費および膜完全性の比較
ミトコンドリアを、単離緩衝液（ＩＢ）（２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡ／Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／Ｍｏｐｓ  ｐＨ７．４、０．２％脂肪酸不含ＢＳＡを補足）を用いてマウス満期胎盤から単離した。ミトコンドリアペレットを、氷上のＩＢ中、またはＯｐｔｉＭＥＭ細胞培地（Ｇｉｂｃｏ；２．５ｇｒ／Ｌグルコース＝約１３．８ｍＭ）のいずれかに３７℃で１時間懸濁した。
【０１７４】
インキュベートした５０μｇのミトコンドリアの酸素消費を、ＭｉｔｏＸｐｒｅｓｓ蛍光プローブ（Ｌｕｘｃｅｌ）を用いて、コハク酸塩＋ＡＤＰ（Ｓ＋Ａ）の存在下で測定した。図７Ａから、培地中でインキュベートしたミトコンドリアは、非連結ミトコンドリアに相当する酸素消費を示し、ＩＢ中でインキュベートしたミトコンドリアは、連結ミトコンドリアに相当する酸素消費を示すことが分かる。
【０１７５】
ＣＳ０７２０キット（Ｓｉｇｍａ）を用いてクエン酸シンターゼの放出を測定することにより、ＩＢ中でインキュベートしたミトコンドリアのミトコンドリア内膜完全性を、培地中でインキュベートしたミトコンドリアのミトコンドリア内膜完全性と比較した。図７Ｂからは、培地中でインキュベートしたミトコンドリアは、クエン酸シンターゼの放出により証明されるように膜完全性が低下したことが分かる。
【０１７６】
実施例８：胎盤ミトコンドリアはプロゲステロンを産生できる。
ミトコンドリアを以下のプロトコルに従ってヒト満期胎盤から単離した。
１．胎盤を、氷冷Ｍ１緩衝液（単離緩衝液：２００ｍＭスクロース、１ｍＭ  ＥＧＴＡおよび１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＭＯＰＳ）＋０．２％ＢＳＡを用いて洗い流し、血液を除去した。
２．胎盤を５ｍｌ  Ｍ１＋０．２％ＢＳＡ中でハサミを用いて小片に切り刻んだ。
３．懸濁液を１０ｍｌガラスポッターに移し、Ｄｏｕｎｃｅガラスホモジナイザーを用いて５回の完全な上下サイクルでホモジナイズした。
４．ホモジネートを１５ｍｌ管に移し、６００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。
５．上清を清潔な遠心分離管に移し、ペレットをＭ１緩衝液に再懸濁し、第２の遠心分離工程を行った。
６．工程４および５からの上清を５μｍのフィルターを通して濾過し、任意の細胞または大きな細胞残屑を除去した。
７．上清を回収し、７０００×ｇで１５分間遠心分離した。
８．ミトコンドリアペレットを１０ｍｌ氷冷Ｍ１緩衝液中で洗浄し、ミトコンドリアを７０００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離することにより回収した。
９．上清を廃棄し、ミトコンドリアを含有するペレットを２００μｌのＭ１緩衝液に再懸濁した。
１０．タンパク質含有量をブラッドフォードアッセイで決定した。
【０１７７】
単離されたミトコンドリアの機能性を確認するために、プロゲステロンを産生するその能力を調査した（機能性満期胎盤ミトコンドリアの独特の特徴）。ミトコンドリア（５０μｇ）を２００μｌのウシ胎児血清中で３７℃、５％ＣＯ２で２４時間（Ｔ２４時）インキュベートした。培地へのプロゲステロン分泌レベルをＡ．Ｍ．Ｌ．（Ｈｅｒｚｅｌｉａ、Ｉｓｒａｅｌ）でのラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により決定した。図８から分かるように、培地中のプロゲステロンレベルは、Ｔ０よりも２４時間後に高く、２４時間インキュベートしたミトコンドリアはプロゲステロン産生がより高いことを示している。
【０１７８】
実施例９：ヒト毛包毛乳頭細胞（ｈＦＤＰＣ）は、新鮮な新芽ミトコンドリア組成物の存在下でＡＴＰ含有量の増加を示す。
ミトコンドリアを以下のプロトコルに従って新芽から単離した：
１．４００ｇのリョクトウ芽を洗浄し、切り刻んだ。
２．２Ｌのスクロース緩衝液（２５０ｍＭスクロース、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中でホモジナイズした。
３．６００ｇ、４℃で遠心分離した。
４．５μｍカットオフにより濾過した。
５．８０００ｇ、４℃で遠心分離した。
６．ペレットを洗浄し、８０００ｇ、４℃で遠心分離した。
【０１７９】
図９から分かるように、ナイーブｈＦＤＰＣ（対照）中のＡＴＰレベルは、新芽ミトコンドリア（ＭＮＶ−ＰＬＴ）により顕著（ｐ＜０．０５）に増加する。
【０１８０】
実施例１０：ヒト毛包毛乳頭細胞（ｈＦＤＰＣ）は、ヒト胎盤ミトコンドリア組成物の存在下でクエン酸シンターゼ（ＣＳ）酵素活性、増殖およびＶＥＧＦ分泌の増加を示す。
ミトコンドリアを実施例８と同様に産生したが、スクロース緩衝液（２５０ｍＭスクロース、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）を使用した。図１０Ａ〜１０Ｃから分かるように、クエン酸シンターゼ（ＣＳ）酵素活性、ｈＦＤＰＣ増殖およびｈＦＤＰＣ  ＶＥＧＦ分泌はすべて、ヒト胎盤ミトコンドリア組成物の存在下ですべて顕著（ｐ＜０．０５）に増加する。
【０１８１】
実施例１１：ヒト皮膚は、新鮮な新芽ミトコンドリア組成物の存在下でＵＶ−ＢおよびＲＯＳから保護される。
ミトコンドリアを実施例９と同様に産生した。図１１Ａ〜１１Ｄから分かるように、ＵＶ−Ｂ放射は、皮膚細胞内でＲＯＳ（図１１Ａおよび図１１Ｂ）およびＩＬ−１α（図１１Ｃおよび図１１Ｄ）の産生を増加させるが、新芽ミトコンドリアは、細胞の培地に添加された場合（図１１Ａおよび図１１Ｃ）および細胞に局所適用された場合（図１１Ｂおよび図１１Ｄ）の両方でこれらの作用を顕著（ｐ＜０．０５）に低減することができた。
【０１８２】
実施例１２：ピアソン症候群に罹患している７歳の少年における毛髪の活力の改善
ｍｔＤＮＡ中のヌクレオチド５８３５〜９７５３の欠失を有する７歳の男性患者は、ピアソン症候群と診断された。患者は、患者の母親由来の健康なミトコンドリアでエクスビボで富化された自己ＣＤ３４＋細胞による単一ラウンドの治療を受けた。ナイーブＣＤ３４＋細胞を健康なミトコンドリアとインキュベートすることにより、ＣＤ３４＋細胞を調製すると、細胞のミトコンドリア含有量が１．６倍増となった（ＣＳ活性により実証されるようにミトコンドリア含有量で６０％増）。意外にも、単一ラウンドの治療しか受けなかったにも関わらず、患者において毛髪の脱落が阻止され、驚くべきことに、頭部で十分な毛髪が再生された。
【０１８３】
特定の実施形態の前記の説明は、本発明の一般的性質を完全に明らかにするので、当業者は既存の知識を適用することにより、過度の実験をせずに、一般的概念から逸脱することなく、このような特定の実施形態を様々な用途に対して容易に修正および／または適合することができるので、このような適合および修正は開示された実施形態の均等物の意味および範囲内にあると理解されるべきであり、理解されることが意図される。本明細書で採用する表現または用語は、説明を目的としており、限定のためのものではないことが理解されるべきである。様々な開示された機能を実行するための手段、材料および工程は、本発明から逸脱することなく様々な代替形態を取り得る。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【国際調査報告】
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