(57)【要約】  本発明は、化合物１、（１）の固体形態、すなわち結晶フォームＡに関し、化合物１の前記固体形態を生成する方法を開示する。また、その水和物および非結晶形態を含む、化合物１の固体形態も開示される。本発明は、さらに、化合物１の結晶フォームＡを含む医薬組成物、前記形態を調製する方法、ならびにアルツハイマー病または脳アミロイドアンギオパチーの治療または予防に前記形態および医薬組成物を使用する方法も開示する。【化１】2020505367.tif 000025
2020505367.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物
【化１】
2020505367.tif 000024
の結晶フォームＡ。
【請求項２】
実質的に純粋な形態である、請求項１に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項３】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．７、１４．８および１９．５°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである、請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項４】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１４．８、１８．７および１９．５°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである、請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項５】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．７、１４．８、１８．７、１９．５および２１．４°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである、請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項６】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．７、１４．８、１８．７、１９．５、２１．４、２１．７、２５．５、２９．９、３５．０、３７．８°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである、請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項７】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、図１に示すＸ線粉末回析パターンと実質的に同じＸ線粉末回析パターンを有する、請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項８】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１２．１、１９．４および２４．０°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析を有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである、微粉化形態の請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項９】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１２．１、１５．９、１８．５、１９．４、２４．０°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである、微粉化形態の請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項１０】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．６、１２．１、１４．７、１５．９、１８．５、１９．４、２１．２、２４．０、２４．７、２９．７°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである、微粉化形態の請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項１１】
ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、図３に示すＸ線粉末回析パターンと実質的に同じＸ線粉末回析パターンを有する、微粉化形態の請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項１２】
図２に示すものと実質的に同じ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す、請求項１または２に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物の結晶フォームＡと、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
薬剤として使用するための請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【請求項１５】
アルツハイマー病の治療または予防に使用するための請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物の結晶フォームＡ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドの特殊な固体形態、すなわちフォームＡに関する。本発明は、さらに、前記固体形態を調製する方法、前記固体形態を含む医薬組成物、ならびにアルツハイマー病または脳アミロイドアンギオパチーの治療または予防に前記固体形態および医薬組成物を使用する方法も開示する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、世界中で最も蔓延している神経障害の１つであり、かつ最も一般的で衰弱性の加齢関連の状態であり、進行性の健忘症、認知症、ならびに最終的には包括的な認知障害および死亡を引き起こす。現在、利用可能な唯一の薬物療法は、コリンエステラーゼ阻害剤等の対症療法薬（ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ  ｄｒｕｇ）、またはＡＤの二次的な行動性の症状を制御するために使用される他の薬剤である。ＡＤ病原性カスケードを標的とする治験中の処置として、アミロイド−β（Ａβ）種の産生、蓄積または毒性後遺症を妨げることを意図されたものが挙げられる（Ｋｒａｍｐ  ＶＰ，Ｈｅｒｒｌｉｎｇ  Ｐ，２０１１）。下記によりＡβを減少させることを標的とする戦略は潜在的な治療的価値がある：（１）Ａβに対する能動的なまたは受動的な免疫療法によりアミロイドクリアランスを増強すること；（２）ベータ部位ＡＰＰクリアランス酵素１（ＢＡＣＥ−１、アミロイド前駆体タンパク質［ＡＰＰ］のプロセシングに関与する酵素）の阻害により産生を減少させること。ＡＤの有効な疾患修飾治療法はまだ文献に記載されていない。
【０００３】
脳アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）は、大脳皮質および軟髄膜重層の小型から中型の動脈壁、小動脈壁および毛細血管壁へのアミロイドβ（Ａβ）、特にＡβ４０の進行性沈着を特徴とする、一般的な加齢性脳小血管病である（Ｃｈａｒｉｄｉｍｏｕ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。ＣＡＡは、アルツハイマー病（ＡＤ）と共存することが多い。軽症のＣＡＡは、往々にして症状を現わさないが；ＣＡＡは、重篤な血管疾患も引き起こす恐れがあり、無症候性微小脳出血から突発性脳内出血、重症の発作まで、多様な脳出血の危険因子である。
【０００４】
ＡＰＯＥ４は、ＡＤおよびＣＡＡの両方についての強力な遺伝的危険因子である（Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。ヒトＡｐｏＥ４は、染色体１９に位置している（ｇｅｎｅ  ＡＰＯＥ，Ｕｎｉｐｒｏｔ  Ｐ０２６４９）。ヒトの場合、３つの主要なイソ型（ａｐｏＥ２、−３および−４）が知られている。ＡｐｏＥ４（１１２位および１５８位にＡｒｇを有する）は、ヒトにおいて５〜３５％の対立遺伝子頻度を有し（Ｖｅｒｇｈｅｓｅ  ＰＢ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）、ＡｐｏＥ４同型接合体は、一般集団の約２〜３％を占めると推定される（Ｑｕｉｎｔｉｎｏ−Ｓａｎｔｏｓ  ＳＲ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【０００５】
（１）Ａβに対する能動的または受動的免疫療法を用いたアミロイドクリアランスの増強；（２）βサイト−ＡＰＰ切断酵素−１（ＢＡＣＥ−１、アミロイド前駆体タンパク質［ＡＰＰ］のプロセシングに関与する酵素）の阻害を介した産生の低減により、Ａβを低減することを目標とする戦略は、特に、ＡｐｏＥ４対立遺伝子の１つまたは２つのコピーを担持する患者において、ＡＤおよびＣＡＡの治療または予防に有望な治療価値を有する。
【０００６】
以後、化合物１と呼ばれる、Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド
【化１】
2020505367.tif 000003
は、既に国際公開第２０１２／０９５４６９Ａ１号パンフレットに記載されている、経口で有効なＢＡＣＥ阻害剤である。しかし、医薬組成物で使用するために、特定の化合物が有望な候補として見出された後も、固体状態および／もしくは液体製剤中での安定性、吸湿性、結晶性、毒性の考慮、融点、または水および水性媒体中での溶解性などのいくつかの重要なパラメータに関してその特性を微調整する必要が依然としてある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、原薬および製剤開発に使用するための化合物１の固体形態が求められる。化合物１の固体形態は、水和物形態を含む１つまたは複数の多形体として調製することができることが判明している。これらの多形体は、薬理学的特性をさらに改善するために活用することができると共に、原薬および製剤開発に使用することができる物理的特性を呈示する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様では、式１の化合物の結晶フォームＡが本明細書に提供される。
【０００９】
別の態様では、式１の化合物の結晶フォームＡと、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物が本明細書に提供される。
【００１０】
別の態様では、薬剤として使用するための式１の化合物の結晶フォームＡが本明細書に提供される。
【００１１】
さらに別の態様では、アルツハイマー病または脳アミロイドアンギオパチーの治療または予防に使用するための式１の化合物の結晶フォームＡが本明細書に提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ＣｕＫα線を用いて測定したとき、式１の化合物の非微粉化結晶フォームＡのＸ線粉末回析パターンを示す。
【図２】非微粉化結晶フォームＡのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図３】ＣｕＫα線を用いて測定したとき、式１の化合物の微粉化結晶フォームＡのＸ線粉末回析パターンを示す。
【図４】ＣｕＫα線を用いて測定したとき、式１の化合物の結晶フォームＢのＸ線粉末回析パターンを示す。
【図５】結晶フォームＢのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図６】ＣｕＫα線を用いて測定したとき、式１の化合物の水和物フォームＨＡのＸ線粉末回析パターンを示す。
【図７】式１の化合物の水和物フォームＨＡのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図８】ＣｕＫα線を用いて測定したとき、式１の化合物の非結晶形態のＸ線粉末回析パターンを示す。
【図９】式１の化合物の非結晶形態のｍＤＳＣサーモグラムを示す。
【図１０】単独で与えた場合の、および強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤イトラコナゾールまたは強力なＣＹＰ３Ａ４誘導剤リファンピシンと組み合わせて与えた場合の、化合物１のＰＫを評価するための、健康対象における２パート非盲検２期間固定シーケンス研究（ｔｗｏ  ｐａｒｔ，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｔｗｏ−ｐｅｒｉｏｄ，ｆｉｘｅｄ−ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｓｔｕｄｙ）のデザインを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
多形体および特性
本発明は、フォームＡである、Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドの多形形態を提供する。Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドは、「式１の化合物」または「化合物１」とも呼ばれ、国際公開第２０１２／０９５４６９Ａ１号パンフレット、実施例３４に初めて記載された。国際公開第２０１２／０９５４６９Ａ１号パンフレットは、その全体、特に、実施例３４の合成に関する開示を参照により本明細書に組み込むものとする。
【００１４】
本明細書に記載される通り、化合物１の遊離塩基は、水和物形態を含む１つまたは複数の多形体として存在する結晶形態であってよい。これらの多形体（あるいは、当技術分野において多形形態もしくは結晶形態としても知られる）は、それらのＸ線粉末回析パターン、分光、物理化学的および薬物動態特性、ならびにそれらの熱力学的安定性に関して異なっている。
【００１５】
いくつかの理由で、化合物１の異なる多形形態を利用できることが望ましい。個別の多形体は、融点、吸湿性、溶解性、流動性、または熱力学的安定性などの異なる物理的特性を呈示し得ることから、個別の多形体は、例えば、カプセルなどの個別の投与形態、または最適な薬物動態特性を有する薬物形態の製造において、所与の使用または態様のために最も好適な形態の選択を可能にする。
【００１６】
驚くことに、特定の条件下で、Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドの新たな固体形態（これらは、本明細書で、以後、フォームＡ、フォームＢ、水和物フォームＨＡ、および非結晶形態と記載される）を提供することができ、これらは、有利な用途および特性を有することが判明している。特に、式１の化合物のフォームＡは、ストレス条件に付すと、優れた安定性を示す。化合物１の特定の多形体、すなわちフォームＡは、本明細書に開示する他のあらゆる化合物１の固体形態よりも安定している。フォームＡのこの高度の安定性は、医薬組成物における使用の好適性に関して、例えば、貯蔵寿命および製造し易さに関して有利な特性および利益を提供する。
【００１７】
粉砕または微粉化による粒径縮小は、比表面積を増大して、溶解を高めると共に、バルク材料の均質性を改善する。従って、本明細書には、式１の化合物の微粉化結晶フォームＡも提供される。
【００１８】
本発明は、遊離形態のＮ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミド（化合物１）の結晶フォームＡを提供する。「遊離形態」という用語は、塩形成のない化合物そのものを指す。
【００１９】
さらに、本明細書には、遊離形態のフォームＢ、水和物フォームＨＡおよび非結晶形態も開示する。
【００２０】
一実施形態では、式１の化合物は、結晶フォームＡである。結晶フォームＡは、限定されないが、以下：図１のＸ線粉末回析パターン、図２の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを含む分析測定から得られる１つまたは複数の特性シグナルを参照にして定義することができる。結晶フォームＡ（多形体フォームＡとも呼ばれる）はまた、下記の特性シグナルの１つまたは複数を参照にして定義することもできる。
【００２１】
一実施形態では、結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１４．８、１８．７および１９．５°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００２２】
一実施形態では、結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．７、１４．８および１９．５°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００２３】
一実施形態では、結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．７、１４．８、１８．７、１９．５および２１．４°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００２４】
一実施形態では、結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．７、１４．８、１８．７、１９．５、２１．４、２１．７、２５．５、２９．９、３５．０、３７．８°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００２５】
一実施形態では、式１の化合物の結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、図１に示すＸ線粉末回析パターンと実質的に同じＸ線粉末回析パターンを示す。
【００２６】
さらに別の実施形態では、式１の化合物の結晶フォームＡは、図２に示すものと実質的に同じ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【００２７】
さらに別の実施形態では、式１の化合物の結晶フォームＡは、約１７１℃の融解開始を有する示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【００２８】
本発明の一実施形態では、実質的に純粋な形態のＮ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドの結晶フォームＡが提供される。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「実質的に純粋な」は、Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドの結晶形態および非結晶形態の水和物を含め、結晶質に関して用いられるとき、化合物の重量に基づいて、Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドの９０重量％超、例えば、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、および９９重量％超の純度を有することを意味し、また、約１００重量％に等しい純度も含む。
【００３０】
別の実施形態では、式１の化合物は、微粉化結晶フォームＡである。微粉化結晶フォームＡは、限定されないが、以下：図３のＸ線粉末回析パターンを含む分析測定から得られる１つまたは複数の特性シグナルを参照にして定義することができる。微粉化結晶フォームＡはまた、下記の特性シグナルの１つまたは複数を参照にして定義することもできる。
【００３１】
一実施形態では、微粉化結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１２．１、１９．４、２４．０°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００３２】
一実施形態では、微粉化結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１２．１、１５．９、１８．５、１９．４、２４．０°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００３３】
一実施形態では、微粉化結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．６、１２．１、１４．７、１５．９、１８．５、１９．４、２１．２、２４．０、２４．７、２９．７°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００３４】
一実施形態では、式１の化合物の微粉化結晶フォームＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、図３に示すＸ線粉末回析パターンと実質的に同じＸ線粉末回析パターンを示す。
【００３５】
Ｘ線回折ピーク位置に関する用語「実質的に同一」は、典型的なピークの位置および強度の変動性が考慮されることを意味する。例えば、ピーク位置（２θ）は、ある程度の装置間変動性（典型的には０．２°程度）を示すであろうことが当業者により認識されるだろう。さらに、相対ピーク強度は、装置間の変動性、ならびに結晶化度、優先配向、調製された試料の表面および当業者に既知の他の要因に起因する変動性を示し、定性的な尺度のみとして見なされるべきであることが当業者に認識されるだろう。「図Ｘに示すＸ線粉末回析パターンと実質的に同じＸ線粉末回析パターン」を有する結晶フォームＡという表現は、「図Ｘに示す代表的Ｘ線粉末回析パターンを特徴とするＸ線粉末回析パターン」を有する結晶フォームＡという表現と置き換えられ得る。
【００３６】
用いられる測定条件に依存する測定誤差を有するＸ線回折パターンが得られ得ることも当業者に理解されるだろう。特に、Ｘ線回折パターンでの強度は、用いられる測定条件に依存して変動し得ることが一般に知られている。相対強度も実験条件に依存して変動し得ることから、強度の厳格な順序を考慮すべきではないことをさらに理解すべきである。加えて、従来のＸ線回折パターンの回折角の測定誤差は概して約５％以下であり、そのような測定誤差の程度は、上述の回折角に関するとして考慮されるべきである。従って、本発明の結晶形態は、本明細書で開示された添付の図１に示すＸ線回折パターンと完全に同一のＸ線回折パターンを示す結晶形態に限定されないことを理解しなければならない。添付の図１で開示されたものと実質的に同一のＸ線回折パターンを示すあらゆる結晶形態が、本発明の範囲に含まれる。Ｘ線回折パターンの実質的な同一性を確認する能力は、当業者の範囲内である。
【００３７】
結晶フォームＢは、限定されないが、以下：図４のＸ線粉末回析パターン、図５の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを含む分析測定から得られる１つまたは複数の特性シグナルを参照にして定義することができる。結晶フォームＢ（多形体Ｂとも呼ばれる）はまた、下記の特性シグナルの１つまたは複数を参照にして定義することもできる：
【００３８】
結晶フォームＢは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１３．５、２０．５、２３．１°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００３９】
結晶フォームＢは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．７、１３．５、１６．６、２０．５、２３．１°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００４０】
結晶フォームＢは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１０．７、１３．５、１６．６、１６．８、１７．４、１９．７、２０．５、２１．３、２３．１、２７．２°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００４１】
式１の化合物の結晶フォームＢは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、図４に示すＸ線粉末回析パターンと実質的に同じＸ線粉末回析パターンを示す。
【００４２】
式１の化合物の結晶フォームＢは、図５に示すものと実質的に同じ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【００４３】
結晶水和物フォームＨＡは、限定されないが、以下：図６のＸ線粉末回析パターン、図７の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを含む分析測定から得られる１つまたは複数の特性シグナルを参照にして定義することができる。結晶水和物フォームＨＡ（本明細書において水和物フォームＨＡとも呼ばれる）はまた、下記の特性シグナルの１つまたは複数を参照にして定義することもできる：
【００４４】
水和物フォームＨＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１４．０、１４．３、１８．３°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００４５】
水和物フォームＨＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１４．０、１４．３、１６．１、１７．７、１８．３°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つもしくは３つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００４６】
水和物フォームＨＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、１４．０、１４．３、１６．１、１７．７、１８．３、１９．６、２１．４、２１．６、２４．１、２５．８°から選択される屈折角２シータ（θ）値を有する少なくとも１つ、２つ、３つ、４つもしくは５つのピークを伴うＸ線粉末回析パターンを有し、ここで、前記値は、±０．２°２θである。
【００４７】
式１の化合物の水和物フォームＨＡは、ＣｕＫα線を用いて測定されるとき、図６に示すＸ線粉末回析パターンと実質的に同じＸ線粉末回析パターンを示す。
【００４８】
式１の化合物の水和物フォームＨＡは、図７に示すものと実質的に同じ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、用語「水和物」は、１つまたは複数の水分子と化合物１の分子複合体を指す。これはまた、半水和物形態も包含し、これは、水分子と無水化合物の分子比が、１：２である水和物として定義される。例えば、水和物フォームＨＡは、半水和物である。
【００５０】
非結晶形態は、限定されないが、以下：図８に示すＸ線粉末回析パターンと実質的に同じＸ線粉末回析パターン、および図９の変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）サーモグラムに対する参照を含む分析測定により定義することができる。
【００５１】
結晶化を促進するために、種結晶を任意の結晶混合物に添加してもよい。特定の多形体の成長を制御するため、または結晶生成物の粒度分布を制御するために、種結晶の添加を使用してもよい。従って、必要とされる種結晶の量の計算は、例えば、”Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｃｏｏｌｉｎｇ  ｏｆ  Ｂａｔｃｈ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅｒｓ，”Ｊ．Ｗ．Ｍｕｌｌｉｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｎｙｖｌｔ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７１，２６，３６９−３７７に記載されている通り、利用可能な種結晶のサイズおよび平均生成物粒子の所望のサイズに応じて変動する。一般に、バッチ中の結晶の成長を効果的に制御するために、小さいサイズの種結晶が必要である。小さいサイズの種結晶は、大きな結晶の篩い分け、粉砕、もしくは微粉化、または溶液の微小結晶化によって生成することができる。所望の結晶形態を形成するために、結晶の粉砕または微粉化によって結晶性に一切の変化（すなわち、非結晶または別の多形体への変化）が起こらないように、注意を払うべきである。
【００５２】
治療方法
本発明は、治療または予防を必要とする対象における、ＢＡＣＥ阻害によりモジュレートされた疾患、状態および／もしくは障害、例えば、本明細書に記載されるものなどの治療または予防方法も提供し、この方法は、有効量の式１の化合物、特に多形体フォームＡを前記対象に投与するステップを含む。
【００５３】
本方法の一実施形態では、ＢＡＣＥ阻害は、ＢＡＣＥ−１の阻害である。
【００５４】
本方法の別の実施形態では、疾患または障害は、アルツハイマー病または脳アミロイドアンギオパチーである。
【００５５】
一実施形態では、本発明は、アルツハイマー病または脳アミロイドアンギオパチーの治療または予防のための薬剤の製造を目的とする、式１の化合物の結晶フォームＡの使用を提供する。
【００５６】
別の態様では、薬剤として使用するための式１の化合物の結晶フォームＡが本明細書に提供される。
【００５７】
さらに別の態様では、アルツハイマー病または脳アミロイドアンギオパチーの治療または予防に使用するための式１の化合物の結晶フォームＡが本明細書に提供される。
【００５８】
医薬組成物
式１の化合物、特に多形体フォームＡは、ＢＡＣＥ阻害によりモジュレートされた疾患、状態および／もしくは障害、例えば、アルツハイマー病または脳アミロイドアンギオパチーの特に治療または予防のために有効な医薬組成物中の活性薬剤として好適である。様々な実施形態の医薬組成物は、１もしくは複数種の薬学的に許容される担体と一緒に、薬学的に有効な量の式１の結晶性化合物、特に多形体フォームＡを有する。
【００５９】
本明細書で使用されるとき、「医薬組成物」は、経口投与に適した単位用量固体形態（典型的には、カプセル、より具体的には硬質ゼラチンカプセル）中に、フォームＡと、少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む。薬学的に許容される担体のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに見出すことができる。フォームＡに好適な製剤の例を実施例６および７に記載する。
【００６０】
従って、一態様では、式１の化合物の多形体フォームＡを含む医薬組成物が本明細書に提供される。一実施形態では、医薬組成物は、式１の化合物の多形体フォームＡと、少なくとも１種の薬学的に許容される担体とを含む。
【００６１】
定義
本明細書で使用されるとき、用語「化合物１」、「Ｃｍｐｄ  １」、「式１の化合物」は、Ｎ−（６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−（トリフルオロメチル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−１，４−オキサジン−３−イル）−５−フルオロピリジン−２−イル）−３−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ピコリンアミドを指し、下記の構造式を有する：
【化２】
2020505367.tif 000004
【００６２】
実施例１では、別の化学命名フォーマットを用いて、「化合物１」は、３−クロロ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸［６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロメチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−５−フルオロ−ピリジン−２−イル］−アミドとも呼ばれる。
【００６３】
本明細書で使用されるとき、「結晶フォームＡ」、「多形体フォームＡ」および「フォームＡ」は、置き換え可能に使用されて、意味に違いはない。
【００６４】
本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容される担体」は、当業者には公知のように、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、界面活性剤、抗酸化剤、保存料（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、防腐剤、薬物、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、着香料、色素など、およびそれらの組合せを含む（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐｐ．１２８９−１３２９を参照されたい）。任意の通常の担体が活性成分と不適合性である場合を除いて、治療または医薬組成物でのその使用が考慮される。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、用語「アルツハイマー病」または「ＡＤ」は、文脈から、前臨床アルツハイマー病のみ、または臨床アルツハイマー病のみのいずれかが意図されることが明らかである場合を除き、前臨床および臨床アルツハイマー病の両方を包含する。
【００６６】
本明細書で使用されるとき、用語「アルツハイマー病の治療」は、アルツハイマー病の少なくとも１つの症状を改善するために、式１の化合物、特に多形体フォームＡを患者に投与することを指す。
【００６７】
本明細書で使用される場合、用語「アルツハイマー病の予防」は、ＡＤの予防的処置を指し、即ち、ＡＤの発症または悪化の遅延を指す。例えば、ＡＤの発症または悪化は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０年にわたり遅延される。一実施形態では、「アルツハイマー病の予防」は、前臨床ＡＤの予防的処置を指し、即ち、前臨床ＡＤの発症または悪化の遅延を指す。さらなる実施形態では、前臨床ＡＤの発症または悪化は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０年にわたり遅延される。別の実施形態では、「アルツハイマー病の予防」は、臨床ＡＤの予防的処置を指し、即ち、臨床ＡＤの発症または悪化の遅延を指す。さらなる実施形態では、臨床ＡＤの発症または悪化は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０年にわたり遅延される。
【００６８】
本明細書で使用される場合、用語「臨床アルツハイマー病」または「臨床ＡＤ」は、ＡＤに起因する軽度認知障害（ＭＣＩ）またはＡＤに起因する認知症のいずれかのみが意図されていることが文脈から明らかでない限り、ＡＤに起因するＭＣＩと、ＡＤに起因する認知症との両方を包含する。欧州医薬品庁（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ（ＥＭＡ））は、その‘Ｄｒａｆｔ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＡＤ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｄｅｍｅｎｔｉａｓ’（ＥＭＡ／ヒト用医薬品委員会（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ（ＣＨＭＰ））／５３９９３１／２０１４）の中で、下記に記載するように、ＡＤに起因するＭＣＩおよびＡＤ認知症の診断のためのアメリカ国立老化研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ａｇｉｎｇ）基準の概要を示す。
【００６９】
ＡＤに起因するＭＣＩの診断には、下記により明らかになる個人内減退の証拠が必要とされる：
ａ）自己または情報提供者の報告および／または臨床医の判断により認められるように、既に達成したレベルからの認知の変化。
ｂ）年齢が一致した規範値および教育が一致した規範値と比較した、少なくとも１つのドメインでの認知障害（ただし、必ずしもエピソード記憶ではない）；２つ以上の認識ドメインでの障害は許容される。
ｃ）機能的能力の独立性は維持されるが、たとえこれが援助を伴うのみであっても、基準は、手段的日常生活動作（ＩＡＤＬ）の実施での「軽度の問題」も受け入れる（即ち、独立を主張するのではなく、基準は、機能的喪失に起因して軽度の依存を可能にする）。
ｄ）名目上はｃ（上記）の関数である認知症はない。
ｅ）他の潜在的な認知症疾患の非存在下でのＡＤの表現型と一致する臨床症状。診断の信頼性の向上が、下記により提案されている：
１）最適：陽性Ａβバイオマーカー、および陽性変性バイオマーカー
２）あまり最適ではない：
ｉ．変性バイオマーカーなしの陽性Ａβバイオマーカー
ｉｉ．Ａβバイオマーカーを試験しない陽性変性バイオマーカー
【００７０】
ＡＤ認知症の診断には、下記が必要とされる：
ａ）認知および機能の個人内減退により決定される認知症の存在。
ｂ）潜行性の発症および進行性の認知減退。
ｃ）２つ以上の認知ドメインでの機能障害；健忘性の症状が最も一般的ではあるが、この基準は、非健忘性の症状（例えば、実行機能および視空間能力の機能障害）に基づく診断を可能にする。
ｄ）他の認知性障害と関連した顕著な特徴の欠如。
【００７１】
診断の信頼性の向上は、上記のＡＤセクションに起因してＭＣＩで論じたバイオマーカーアルゴリズムにより示唆され得る。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「前臨床アルツハイマー病」または「前臨床ＡＤ」は、臨床症状の非存在下でのＡＤのインビボ分子バイオマーカーの存在を指す。アメリカ国立老化研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ａｇｉｎｇ）およびＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎは、前臨床ＡＤの様々な病期を示すスキーム（下記の表Ａに示す）を提供している（Ｓｐｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【００７３】
【表１】
2020505367.tif 000005
【００７４】
本明細書で使用されるとき、用語「脳アミロイドアンギオパチー」または「ＣＡＡ」は、皮質および軟髄膜血管壁へのβアミロイド（Ａβ）タンパク質の蓄積を特徴とする疾患を指す。ＣＡＡは、高齢者における血管壁破壊および血管機能不全の一般的な原因であり、そのため、致死的または障害を引き起こす脳内出血（ＩＣＨ）ならびに虚血性傷害および痴呆の主要原因となっている（Ｇｕｒｏｌ  ＭＥ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。本明細書で使用されるとき、用語「脳アミロイドアンギオパチー」または「ＣＡＡ」は、文脈から、ＣＡＡ−１型またはＣＡＡ−２型のみが意図されることが明らかである場合を除き、ＣＡＡ−１型およびＣＡＡ−２型の両方を包含する。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＡＡ−１型」は、皮質毛細血管壁へのＡβタンパク質沈着を特徴とする毛細血管ＣＡＡ（ｃａｐＣＡＡ）を指す（Ｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【００７６】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＡＡ−２型」は、皮質毛細血管を除く、軟髄膜および皮質血管壁へのＡβタンパク質沈着を特徴とするＣＡＡを指す（Ｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【００７７】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＡＡの治療」は、ＣＡＡまたはＣＡＡの臨床症状の少なくとも１つの症状、例えば、ＩＣＨ、虚血性傷害、もしくは痴呆の発現を遅らせる、または停止するために、式１の化合物、特に多形体フォームＡを患者に投与することを指す。ＣＡＡの発現は、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）トレーサー、例えば、１８Ｆ−フロルベタビル（ｆｌｏｒｂｅｔａｐｉｒ）を用いて、皮質（例えば、後頭葉）および軟髄膜血管壁へのＡβの蓄積を測定することにより評価することができる（Ｇｕｒｏｌ  ＭＥ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。あるいは、ＣＡＡの発現は、ＣＡＡの出血マーカとして微小脳出血（ＣＭＢ）をモニターすることにより評価することもできる（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＳＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＣＭＢをモニターするのに好適な技術としては、例えば、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）磁化率強調画像法（ＳＷＩ）およびＭＲＩ  Ｔ２＊強調グラディエントエコー画像法（ＧＲＥ）が挙げられ、Ｃｈｅｎｇ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３に記載されている。さらに、健康な高齢個体よりもＣＡＡと診断された患者、またはＡＤもしくは軽度の認知障害（ＭＣＩ）に罹患した患者において、白質病変（ＷＭＨ）がはるかに多量に発生する（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＳＭ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。従って、ＣＡＡ発現は、ＭＲＩを用いたＷＭＨ量の測定によってモニターすることができる（Ｃｈｅｎ  ＹＷ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。「ＣＡＡの治療」は、ＣＡＡの治療を受けている患者における脳虚血事象の可能性を低減するという利益を結果として有することが期待される。従って、本発明の一実施形態では、用語「ＣＡＡの治療」は、用語「脳内出血の治療」と同等である。本発明の別の実施形態では、用語「ＣＡＡの治療」は、用語「ＣＡＡの治療および／または脳内出血の治療」と同等である。本発明のさらに別の実施形態では、用語「ＣＡＡの治療」は、用語「ＣＡＡの治療およびそれに関連する脳内出血の治療」と同等である。
【００７８】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＡＡの予防」は、ＣＡＡの予防治療；ＣＡＡの開始もしくは進行の遅延；またはＣＡＡの臨床症状の少なくとも１つの開始もしくは進行の遅延を指す。例えば、ＣＡＡの開始もしくは進行は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０年間遅延させる。本発明の一実施形態では、用語「ＣＡＡの予防」は、用語「脳内出血の予防」と同等である。本発明の別の実施形態では、用語「ＣＡＡの予防」は、用語「ＣＡＡの予防および／または脳内出血の予防」と同等である。本発明のさらに別の実施形態では、用語「ＣＡＡの予防」は、用語「ＣＡＡの予防およびそれに関連する脳内出血の予防」と同等である。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＡＡの発現の遺伝的素因」は、限定されないが、遺伝的素因が、以下：ダウン症候群；アミロイド前駆体タンパク質もしくはプレセニリン−１に関する遺伝子の突然変異；またはＡｐｏＥ４対立遺伝子の１つもしくは２つのコピーの存在に起因する状況を含む。
【００８０】
本明細書で使用されるとき、用語「患者」は、ヒト対象を指す。
【００８１】
用語「治療上有効な量」は、初期ベースライン値に対するＣＳＦまたは血漿Ａβ１−４０レベルの減少により証明されるように、患者中でＢＡＣＥ−１の阻害を誘発するであろう化合物１の量を指す。Ａβ１−４０レベルを、標準的なイムノアッセイ技術を使用して測定し得、例えば、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）９６ウェルＭＵＬＴＩ−ＡＲＲＡＹヒト／齧歯動物（４Ｇ８）Ａβ４０  Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ａｓｓａｙ（＃Ｋ１１０ＦＴＥ−３，Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＵＳＡ）を使用して測定し得る。
【００８２】
【表２】
2020505367.tif 000006
【００８３】
【表３】
2020505367.tif 000007
【００８４】
【表４】
2020505367.tif 000008
【実施例】
【００８５】
以下の実施形態で、本発明の様々な態様を説明する。実施例１および２は、どのようにして化合物１を調製することができるか、さらには、どのようにしてそれを結晶化して、フォームＡを生成することができるかを示す。実施例３および４では、フォームＡのＸＲＰＤおよびＤＳＣ分析を説明する。実施例５では、フォームＡの微粉化手順および対応するＸＲＰＤデータを説明する。実施例６および７では、フォームＡを含む製剤ならびにその製造方法を説明する。実施例８、９および１０では、フォームＢの製造方法、ならびにフォームＢのＸＲＰＤおよびＤＳＣ分析を説明する。実施例１１、１２および１３では、水和物フォームＨＡの製造方法、ならびに水和物フォームＨＡのＤＳＣおよびＸＲＰＤ分析を説明する。実施例１４および１５では、非結晶形態の製造方法およびｍＤＳＣ分析を説明する。実施例１６は、フォームＡの安定性データを示す。実施例１７では、単独で投与した場合と、強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤イトラコナゾールまたは強力なＣＹＰ３Ａ４誘導剤リファンピシンと組み合わせた場合の、遊離塩基化合物１の薬物動態のヒトにおける試験を説明する。
【００８６】
実施例１：化合物１の調製
化合物１の調製は、国際特許出願公開第２０１２／０９５４６９Ａ１号パンフレット（実施例３４）で説明されている。化合物１を、下記で説明するようにも調製し得る。
【００８７】
ＮＭＲ方法論
特に断らない限り、陽子スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ４００ＭＨｚウルトラシールド分光計で記録する。化学シフトを、メタノール（δ３．３１）、ジメチルスルホキシド（δ２．５０）またはクロロホルム（δ７．２９）と比較してｐｐｍで報告する。少量の乾燥試料（２〜５ｍｇ）を適切な重水素化溶媒（０．７ｍＬ）に溶解させる。シミングは自動化されており、当業者に公知の手順に従ってスペクトルを得る。
【００８８】
フォームＡについてのＸＲＰＤ法：
反射配置でのＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線回析装置を用いて、Ｘ線粉末回析（ＸＲＰＤ）分析を実施した。測定値は、下記の条件下で、約３０ｋＶおよび４０ｍＡで取得した。
【００８９】
【表５】
2020505367.tif 000009
【００９０】
Ｘ線回析パターンは、全パターンの識別のために、ＣｕＫα線を用いて２°〜４０°（２θ）で記録した。
【００９１】
フォームＢ、水和物ＨＡ、非結晶形態についてのＸＲＰＤ法：
反射配置でのＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線回析装置を用いて、Ｘ線粉末回析（ＸＲＰＤ）分析を実施した。測定値は、下記の条件下で、約４０ｋＶおよび４０ｍＡで取得した。
【００９２】
【表６】
2020505367.tif 000010
【００９３】
Ｘ線回析パターンは、全パターンの識別のために、ＣｕＫα線を用いて２°〜４５°（２θ）で記録した。全ての２シータ（２θ）値は、＋／−０．２°内である。
【００９４】
一般的なクロマトグラフィー情報
ＨＰＬＣ法Ｈ１（ＲｔＨ１）：
ＨＰＬＣ−カラムの寸法：３．０×３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムの種類：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８、１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ；Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−勾配：３．２５分で３０〜１００％Ｂ、流速＝０．７ｍｌ／分
【００９５】
ＬＣＭＳ法Ｈ２（ＲｔＨ２）：
ＨＰＬＣ−カラムの寸法：３．０×３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムの種類：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８、１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ、Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−勾配：３．２５分で１０〜１００％Ｂ、流速＝０．７ｍｌ／分
【００９６】
ＵＰＬＣＭＳ法Ｈ３（ＲｔＨ３）：
ＨＰＬＣ−カラムの寸法：２．１×５０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムの種類：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＨＳＳ  Ｔ３、１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ギ酸＋３．７５ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ）ＡＣＮ＋０．０４Ｖｏｌ．−％ギ酸
ＨＰＬＣ−勾配：１．４分で２〜９８％Ｂ、９８％Ｂ  ０．７５分、流速＝１．２ｍｌ／分
ＨＰＬＣ−カラムの温度：５０℃
【００９７】
ＬＣＭＳ法Ｈ４（ＲｔＨ４）：
ＨＰＬＣ−カラムの寸法：３．０×３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムの種類：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８、１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ；Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−勾配：３．２５分で７０〜１００％Ｂ、流速＝０．７ｍｌ／分
【００９８】
ＬＣＭＳ法Ｈ５（ＲｔＨ５）：
ＨＰＬＣ−カラムの寸法：３．０×３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムの種類：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８、１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ；Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−勾配：３．２５分で８０〜１００％Ｂ、流速＝０．７ｍｌ／分
【００９９】
ＬＣＭＳ法Ｈ６（ＲｔＨ６）：
ＨＰＬＣ−カラムの寸法：３．０×３０ｍｍ
ＨＰＬＣ−カラムの種類：Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８、１．８μｍ
ＨＰＬＣ−溶出液：Ａ）水＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ；Ｂ）ＡＣＮ＋０．０５Ｖｏｌ．−％ＴＦＡ
ＨＰＬＣ−勾配：３．２５分で４０〜１００％Ｂ、流速＝０．７ｍｌ／分
【０１００】
ａ）２−ブロモ−５−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン
ジイソプロピルアミン（２５．３ｇ、２５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  ３７０ｍｌ溶液を、−７５℃でドライアイスアセトン浴により冷却した。この温度を−５０℃未満に維持しつつ、ＢｕＬｉ（１００ｍｌ、２５０ｍｍｏｌ、ヘキサン中に２．５Ｍ）を滴下した。この混合物の温度が再び−７５℃に達した後、ＴＨＦ  ４５ｍｌ中の２−ブロモ−５−フルオロピリジン（３６．７ｇ、２０８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。この混合物を−７５℃で１ｈにわたり撹拌した。トリエチルクロロシラン（３９．２ｇ、２６０ｍｍｏｌ）を素早く添加した。この温度は−５０℃未満を維持した。冷却浴を取り外し、この反応混合物を−１５℃まで上昇させ、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０％）に注いだ。ＴＢＭＥを添加して層を分離させた。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４．Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過し、蒸発させて褐色液体を得、この液体を０．５ｍｍＨｇで蒸溜させて、表題の化合物をわずかに黄色の液体（沸点１０５〜１１１℃）として得た。 ＨＰＬＣ：ＲｔＨ４＝２．２８４分；ＥＳＩＭＳ：２９０，２９２［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．１４（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｄ，１Ｈ），１．００−０．８２（ｍ，１５Ｈ）．
【０１０１】
ｂ）１−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−エタノン
ジイソプロピルアミン（２５．４ｇ、２５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  ５００ｍｌ溶液を、−７５℃まで冷却した。この温度を−５０℃未満に維持しつつ、ＢｕＬｉ（１００ｍｌ、２５０ｍｍｏｌ、ヘキサン中に２．５Ｍ）を滴下した。この反応温度が再び−７５℃に達した後、２−ブロモ−５−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン（５６．０４ｇ、１９３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  ６０ｍｌ溶液を滴下した。この混合物を、７０分にわたりドライアイス浴中で撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２１．８７ｇ、２５０ｍｍｏｌ）を素早く添加し、この反応温度は−５７℃まで上昇した。この反応混合物を１５分にわたりドライアイス浴中で撹拌し、次いで−４０℃まで上昇させた。この反応混合物を、２Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２５０ｍｌ、５００ｍｍｏｌ）、水２５０ｍｌおよびブライン１００ｍｌの混合物に注いだ。この混合物をＴＢＭＥで抽出し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４．Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過し、蒸発させて黄色油状物を得、この油状物を、ヘキサン／０〜５％ＴＢＭＥで溶出させることによりシリカゲルカラムで精製し、表題の化合物５８．５ｇを黄色液体として得た。ＴＬＣ（Ｈｅｘ／ＴＢＭＥ９９／１）：Ｒｆ＝０．２５；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ４＝１．９２１分；ＥＳＩＭＳ：３３２，３３４［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．５７（ｄ，１Ｈ），２．６８（ｓ，３Ｈ），１．００−０．８４（ｍ，１５Ｈ）．
【０１０２】
ｃ）（Ｓ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−２−トリメチルシラニルオキシ−プロピオニトリル
最初に、乾燥ＤＣＭ（≦０．００１％水）１００ｍｌに水（５４ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を溶解させることにより、触媒溶液を調製した。チタン（ＩＶ）ブトキシド（５００ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ  ２０ｍｌ溶液をよく撹拌しつつ、この湿ったＤＣＭ（４４ｍｌ、含水量１．３２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた透明溶液を１ｈにわたり還流させた。次に、この溶液をｒｔまで冷却し、２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−６−｛［（Ｅ）−（Ｓ）−１−ヒドロキシメチル−２−メチル−プロピルイミノ］−メチル｝−フェノール［ＣＡＳ  １５５０５２−３１−６］（４６９ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた黄色溶液を、１ｈにわたりｒｔで撹拌した。この触媒溶液（０．０２３Ｍ、４６．６ｍｌ、１．０７ｍｍｏｌ）を、１−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−２−イル）−エタノン（３５．５３ｇ、１０７ｍｍｏｌ）およびトリメチルシリルシアニド（１２．７３ｇ、１２８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ  ２２３ｍｌ溶液に添加した。この混合物を２日にわたり撹拌し、蒸発させて表題の粗化合物４７ｇをオレンジ色油状物として得た。 ＨＰＬＣ：ＲｔＨ５＝２．７７３分；ＥＳＩＭＳ：４３１，４３３［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．４６（ｄ，１Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ），１．００（ｔ，９Ｈ），１．０３−０．８７（ｍ，１５Ｈ），０．２０（ｓ，９Ｈ）．
【０１０３】
ｄ）（Ｒ）−１−アミノ−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−プロパン−２−オールヒドロクロリド
ボランジメチルスルフィド錯体（１６．５５ｇ、２１８ｍｍｏｌ）を、粗（Ｓ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−２−トリメチルシラニルオキシ−プロピオニトリル（４７ｇ、１０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  ４７０ｍｌ溶液に添加した。この混合物を２ｈにわたり還流させた。加熱浴を取り外し、この反応混合物を、ＭｅＯＨを注意深く滴下することによりクエンチした。ガスの発生が止んだ後、６Ｍ  ＨＣｌ水溶液（２３．６ｍｌ、１４２ｍｍｏｌ）を緩やかに添加した。得られた溶液を蒸発させ、残留物をＭｅＯＨに溶解させて蒸発させ（２回）、さらなる反応に十分に純粋な黄色泡状物４４．５ｇを得た。 ＨＰＬＣ：ＲｔＨ１＝２．６１７分；ＥＳＩＭＳ：３６３，３６５［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．９３（ｓ，ｂｒ，３Ｈ），７．５３（ｄ，１Ｈ），６．１１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），３．３６−３．２７（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．０９（ｍ，１Ｈ），１．５３（ｓ，３Ｈ），０．９９−０．８１（ｍ，１５Ｈ）．
【０１０４】
ｅ）（Ｒ）−Ｎ−（２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−ニトリベンゼンスルホンアミド
粗（Ｒ）−１−アミノ−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−トリエチルシラニル−ピリジン−２−イル）−プロパン−２−オールヒドロクロリド（４３．５ｇ、１０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  ３３５ｍｌ溶液に、ＮａＨＣＯ３（２１．０２ｇ、２５０ｍｍｏｌ）の水５００ｍｌ溶液を添加した。この混合物を０〜５℃まで冷却し、４−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（２６．５ｇ、１２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  １００ｍｌ溶液を滴下した。得られた乳濁液を、温度がｒｔに達しつつ一晩撹拌した。この混合物をＴＢＭＥで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４．Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過し、蒸発させてオレンジ色樹脂を得、この樹脂を、ヘキサン／１０〜２０％ＥｔＯＡｃで溶出させることによりシリカゲルカラムで精製し、表題の化合物３７．５６ｇを黄色樹脂として得た。ＴＬＣ（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ３／１）：Ｒｆ＝０．３４；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ４＝１．６７８分；ＥＳＩＭＳ：５４８，５５０［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．４０（ｄ，２Ｈ），８．０６（ｔ，１Ｈ），７．９７（ｄ，２Ｈ），７．４５（ｄ，１Ｈ），５．４２（ｓ，１Ｈ），３．２３（ｄ，２Ｈ），１．４４（ｓ，３Ｈ）０．９７−０．８１（ｍ，１５Ｈ）；キラルＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  １２１３、ＵＶ２１０ｎｍ）：９０％ｅｅ．
【０１０５】
ｆ）６−ブロモ−３−フルオロ−２−［（Ｓ）−２−メチル−１−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン−２−イル］−４−トリエチルシラニル−ピリジン
トリフェニルホスフィン（２１．５５ｇ、８２ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−Ｎ−（２−（６−ブロモ−３−フルオロ−４−（トリエチルシリル）ピリジン−２−イル）−２−ヒドロキシプロピル）−４−ニトロベンゼンスルホンアミド（３７．５６ｇ、６９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  ５１０ｍｌ溶液を、４℃まで冷却した。温度を１０℃未満に維持しつつ、ジエチルアゾジカルボキシレートのトルエン溶液（４０重量％、３８．８ｇ、８９ｍｍｏｌ）を滴下した。冷却浴を取り外し、この反応混合物を１ｈにわたりｒｔで撹拌した。この反応混合物をトルエン約１０００ｍｌで希釈し、減圧下でＴＨＦを除去した。得られた粗生成物のトルエン溶液を、ヘキサン／５〜１７％ＥｔＯＡｃで溶出させることによりシリカゲルカラムで予備精製した。最も純粋な画分をまとめ、蒸発させ、ＴＢＭＥ／ヘキサンから結晶化させて、表題の化合物２９．２ｇを白色結晶として得た。 ＨＰＬＣ：ＲｔＨ４＝２．５４６分；ＥＳＩＭＳ：５３０，５３２［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．４０（ｄ，２Ｈ），８．１９（ｄ，２Ｈ），７．３９（ｄ，１Ｈ），３．１４（ｓ，１Ｈ），３．０２（ｓ，１Ｈ），２．０１（ｓ，３Ｈ）１．０３−０．８３（ｍ，１５Ｈ）；α［Ｄ］−３５．７°（ｃ＝０．９７，ＤＣＭ）．
【０１０６】
ｇ）６−ブロモ−３−フルオロ−２−［（Ｓ）−２−メチル−１−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン−２−イル］−ピリジン
６−ブロモ−３−フルオロ−２−［（Ｓ）−２−メチル−１−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン−２−イル］−４−トリエチルシラニル−ピリジン（５ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（１．１３ｇ、９．４３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ  ２５ｍｌ溶液に、フッ化カリウム（１．１ｇ、１８．８５ｍｍｏｌ）を添加した。ＤＭＦ（３５ｍｌ）を添加し、この懸濁液をｒｔで１ｈにわたり撹拌した。この反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびＴＢＭＥの混合物に注いだ。層を分離させ、ブラインおよびＴＢＭＥで洗浄した。まとめた有機層をＭｇＳＯ４．Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過し、蒸発させて黄色油状物を得、この油状物をＴＢＭＥ／ヘキサンから結晶化させて、表題の化合物３．４５ｇを白色結晶として得た。 ＨＰＬＣ：ＲｔＨ６＝２．６１２分；ＥＳＩＭＳ：４１６，４１８［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．４１（ｄ，２Ｈ），８．１９（ｄ，２Ｈ），７．４８（ｄｄ，１Ｈ），７．３５（ｔ，１Ｈ），３．１４（ｓ，１Ｈ），３．０３（ｓ，１Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ）；α［Ｄ］−３５．７°（ｃ＝０．８９，ＤＣＭ）．
【０１０７】
ｈ）（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル
（Ｒ）−３，３，３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１１．９３ｇ、６４．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５８ｍｌ）溶液の脱気／窒素によるフラッシュを２回行った。水浴による冷却を使用して反応温度を約２５℃に維持しつつ、ＫＯｔＢｕ（６．２１ｇ、５５．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１７ｍｌ）溶液を滴下した。１５分後、固体の６−ブロモ−３−フルオロ−２−［（Ｓ）−２−メチル−１−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−アジリジン−２−イル］−ピリジン（１７．７８ｇ、４２．７ｍｍｏｌ）を添加し、３ｈにわたり撹拌し続けた。この反応混合物を、１Ｍ  ＨＣｌ（５６ｍｌ）、ブラインおよびＴＢＭＥの混合物に注いだ。層を分離させ、ブラインおよびＴＢＭＥで洗浄した。まとめた有機層をＭｇＳＯ４．Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過し、次いで蒸発させた。この粗反応生成物を、シリカゲル（ヘキサン／２５〜３３％ＴＢＭＥ）によるクロマトグラフィーにより精製して、表題の化合物１６．９３ｇを黄色樹脂として得、この樹脂には異性体副生成物が混入していた（１Ｈ−ＮＭＲにより比７０：３０）。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ６＝２．３８０分；ＥＳＩＭＳ：６０２，６０４［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．３２（ｄ，２Ｈ），８．０７（ｄ，２Ｈ），７．４６−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．３０−７．２３（ｍ，１Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ），３．３９−４．３０（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｄ，１Ｈ），３．８４（ｄ，１Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．５６（ｓ，３Ｈ），１．４０−１．３４（ｍ，３Ｈ）＋異性体副生成物．
【０１０８】
ｉ）（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオンアミド
（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオン酸エチルエステル（１６．９３ｇ、２８．１ｍｍｏｌ）のＮＨ３／ＭｅＯＨ（７Ｍ、４８２ｍｌ）溶液を、２６ｈにわたり密閉容器中において５０℃で撹拌した。この反応混合物を蒸発させ、残留物をＤＣＭから結晶化させて、表題の化合物９．１１ｇを無色結晶として得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ６＝２．４２２分；ＥＳＩＭＳ：５７３，５７５［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．３３（ｄ，２Ｈ），８．０６（ｄ，２Ｈ），７．４２（ｄｄ，１Ｈ），７．３０−７．２６（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），５．５７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），４．１５（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ）．
【０１０９】
ｊ）Ｎ−［（Ｒ）−１−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（（Ｒ）−１−シアノ−２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−エトキシ）−１−メチル−エチル］−４−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド
（Ｒ）−２−［（Ｒ）−２−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（４−ニトロ−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロポキシ］−３，３，３−トリフルオロ−２−メチル−プロピオンアミド（８．４３ｇ、１４．７０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５．１２ｍｌ、３６．８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ  ８５ｍｌ懸濁液を、０〜５℃まで冷却した。無水トリフルオロ酢酸（２．４９ｍｌ、１７．６４ｍｍｏｌ）を３０分間かけて滴下した。追加のトリエチルアミン（１．５４ｍｌ、１１．０７ｍｍｏｌ）および無水トリフルオロ酢酸（０．７５ｍｌ、５．２９ｍｍｏｌ）を添加して、この反応を完了させた。この反応混合物を、アンモニア水溶液（２５％）１４ｍｌおよび水１４ｍｌの添加によりクエンチした。この乳濁液を１５分にわたり撹拌し、さらに水およびＤＣＭを添加し、次いで層を分離させた。有機層をＭｇＳＯ４  Ｈ２Ｏで乾燥させ、ろ過し、次いで蒸発させた。シリカゲル（ヘキサン／１０〜２５％ＥｔＯＡｃ）によるカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題の化合物８．０９ｇを黄色樹脂として得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ６＝３．１２０分；ＥＳＩＭＳ：５５５，５５７［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：８．３５（ｄ，２Ｈ），８．１１（ｄ，２Ｈ），７．５０（ｄｄ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，１Ｈ），６．７８（ｓ，１Ｈ），４．３９（ｄ  １Ｈ），４．２２（ｄ，１Ｈ），１．６８（ｓ，６Ｈ）．
【０１１０】
ｋ）（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン
Ｎ−［（Ｒ）−１−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２−（（Ｒ）−１−シアノ−２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−エトキシ）−１−メチル−エチル］−４−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（９．１８ｇ、１６．５３ｍｍｏｌ）およびＮ−アセチルシステイン（５．４０ｇ、３３．１０ｍｍｏｌ）のエタノール９２ｍｌ溶液を脱気し、窒素でフラッシュした。Ｋ２ＣＯ３（４．５７ｇ、３３．１ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を３日にわたり８０℃で撹拌した。この反応混合物を真空中で元々の体積の約１／４まで濃縮し、水とＴＢＭＥとの間で分配した。有機層を、１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて黄色油状物を得た。シリカ（ヘキサン／１４〜５０％（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ  ９５：５））によるカラムクロマトグラフィーにより、表題の化合物４．５５ｇをオフホワイトの固体として得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ２＝２．７４１分；ＥＳＩＭＳ：３７０，３７２［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｂｒ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．７１−７．６２（ｍ，２Ｈ），５．９７（ｓ，ｂｒ，２Ｈ），４．０２（ｄ  １Ｈ），３．７０（ｄ，１Ｈ），１．５１（ｓ，３Ｈ），１．４７（ｓ，３Ｈ）．
【０１１１】
ｌ）（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン
ガラス／ステンレス鋼製オートクレーブを窒素でパージし、エチレングリコール（１３０ｍｌ）中のＣｕ２Ｏ（０．４６４ｇ、３．２４ｍｍｏｌ）、アンモニア（１０１ｍｌ、２５％、水溶液、６４８ｍｍｏｌ、３０当量）、および（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−ブロモ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン（８ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）を添加した。このオートクレーブを閉じ、この懸濁液を６０℃まで加熱し、溶液を約４８時間（最高圧力０．７バール、内部温度５９〜６０℃）にわたり撹拌した。この反応混合物を、酢酸エチルおよび水で希釈した。有機相を水で洗浄し、１２％含アンモニア水溶液で４回洗浄し、最後にブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、次いで蒸発させた。粗生成物（７ｇ、ある程度のエチレングリコールを含む、定量的収量）を、さらに精製することなく次の工程で使用した。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝０．６０分；ＥＳＩＭＳ：３０７［（Ｍ＋Ｈ）＋］．
【０１１２】
ｍ）［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イルアミン（６．６２ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ２Ｏ（４．７２ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）およびＨｕｅｎｉｇ塩基（５．６６ｍｌ、３２．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１８５ｍｌ）溶液を、１８時間にわたりｒｔで撹拌した。この反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄した。水層をジクロロメタンで逆抽出し、まとめた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、蒸発させて薄緑色固体（１４ｇ）を得た。粗生成物を、シリカゲル（シクロヘキサン：酢酸エチル  ９５：５から６０：４０へ）上でクロマトグラフィーにかけて、表題の化合物７．６８ｇを得た。
ＴＬＣ（シクロヘキサン：酢酸エチル  ３：１）：Ｒｆ＝０．２１；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝１．１４分；ＥＳＩＭＳ：４０８［（Ｍ＋Ｈ）＋］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１１．４７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝１０．４２，８．７８Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．７８，２．６４Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝２．３８Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１１．８０Ｈｚ，１Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．６５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．５５（ｓ，９Ｈ）．
【０１１３】
ｎ）（（２Ｒ，５Ｒ）−５−｛６−［（３−クロロ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−３−フルオロ−ピリジン−２−イル｝−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
［（２Ｒ，５Ｒ）−５−（６−アミノ−３−フルオロ−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．３ｇ、８．１２ｍｍｏｌ）、３−クロロ−５−トリフルオロメチルピコリン酸（２．２ｇ、９．７４ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１．９９ｇ、１４．６２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ塩酸塩（２．３３ｇ、１２．１８ｍｍｏｌ）の混合物を、４８時間にわたりｒｔにてＤＭＦ（８１ｍｌ）中で撹拌した。この反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、次いで蒸発させた。粗生成物（１２ｇ）を、シリカゲル（シクロヘキサンからシクロヘキサン：酢酸エチル  １：１）上でクロマトグラフィーにかけて、表題化合物５．２ｇを得た。
ＴＬＣ（シリカ、シクロヘキサン：酢酸エチル  ３：１）：Ｒｆ＝０．４７；ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝１．４０分；ＥＳＩＭＳ：６１５，６１６［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｃｌ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：１１．６８（ｓ，１Ｈ），１０．４１（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．８２，０．６９Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．９１，３．１４Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｄｄ，Ｊ＝１．８８，０．６３Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄｄ，Ｊ＝９．７９，９．１６Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝２．１３Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄ，Ｊ＝１１．８０Ｈｚ，１Ｈ），１．７５（ｓ，３Ｈ），１．６２（ｓ，３Ｈ），１．６０（ｓ，９Ｈ）．
【０１１４】
ｏ）３−クロロ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボン酸［６−（（３Ｒ，６Ｒ）−５−アミノ−３，６−ジメチル−６−トリフルオロメチル−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−５−フルオロ−ピリジン−２−イル］−アミド
ジクロロメタン（８１ｍｌ）中の（（２Ｒ，５Ｒ）−５−｛６−［３−クロロ−５−トリフルオロメチル−ピリジン−２−カルボニル）−アミノ］−３−フルオロ−ピリジン−２−イル｝−２，５−ジメチル−２−トリフルオロメチル−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４．９９ｇ、８．１３ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（６．２６ｍｌ、８１ｍｍｏｌ）の混合物を、１８時間にわたりｒｔで撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を適切な有機溶媒（例えば、酢酸エチルおよびアンモニア水溶液）で希釈した。氷を加え、有機相を水およびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、次いで蒸発させて表題の化合物３．７８ｇを得た。
ＨＰＬＣ：ＲｔＨ３＝０．８７分；ＥＳＩＭＳ：５１４，５１６［（Ｍ＋Ｈ）＋，１Ｃｌ］；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．１１（ｓ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），８．６９（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８０−７．６８（ｍ，１Ｈ），５．８８（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），１．５１（ｓ，３Ｈ），１．４９（ｓ，３Ｈ）．
【０１１５】
実施例２：フォームＡの結晶化手順
実施例１の手順により得られた化合物１  １重量を、７０〜８０℃でＩＰＡｃ  ５．１１重量に溶解させた。この溶液をろ過し（フィルタ＜２μｍ）、次いでｎ−ヘプタン１．５２重量を添加した。この溶液を５５℃まで冷却し、フォームＡ  ０．５重量／重量％を播種した。この懸濁液を３０〜６０分にわたり５５℃で保持し、次いで２時間かけて３５℃まで冷却した。この懸濁液を１時間にわたり熟成させ、次いでｎ−ヘプタン８．２重量を３時間かけて添加した。この懸濁液を１時間にわたり熟成し、次いで２時間かけて０〜５℃まで冷却し、少なくとも２時間にわたり熟成した。この懸濁液を真空下でろ過し、ケーキを１０／９０重量／重量の酢酸イソプロピル／ｎ−ヘプタンで洗浄した。このケーキを、乾燥するまで４０〜４５℃にて真空下で乾燥させ、フォームＡを生成した。
【０１１６】
実施例３：フォームＡのＸＲＰＤ分析
結晶性化合物１をＸＲＰＤで分析し、１０個の最も特徴的なピークを表１に示す（図２も参照されたい）。
【０１１７】
【表７】
2020505367.tif 000011
【０１１８】
実施例４：フォームＡのＤＳＣ分析
ＴＡ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製のＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒを用いて、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により結晶フォームＡを分析したところ、約１７１℃での融解開始を有することが判明した（図２を参照されたい）。加熱速度は、毎分１０℃で実施した。
【０１１９】
実施例５：微粉化手順および微粉化フォームＡのＸＲＰＤ
結晶フォームＡを下記の方法に従って微粉化した：
【０１２０】
直径５０ｍｍのリングと共に、スパイラルジェットミル機器を使用した。キャリアガスは窒素であり、エネルギーは、１８００ｋＪ／ｋｇ（Ｍｉｄｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｏｗｄｅｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０４（１９９９）１１３−１２０に従う射出装置および粉砕ノズル数および直径、射出装置および粉砕ノズル圧力、ならびに供給速度を考慮した累積パラメータ）でターゲティングした。
【０１２１】
微粉化結晶フォームＡをＸＲＰＤにより分析して、１０の最も特徴的なピークを表３に示す（図３も参照されたい）。
【０１２２】
【表８】
2020505367.tif 000012
【０１２３】
Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線回析装置を用いて、反射配置でのＸ線粉末回析（ＸＲＰＤ）分析を実施した。測定値は、表４に示す条件下で、約３０ｋＶおよび４０ｍＡで取得した。
【０１２４】
【表９】
2020505367.tif 000013
【０１２５】
Ｘ線回析パターンは、全パターンの識別のために、ＣｕＫα線を用いて２°〜４０°（２θ）で記録した。
【０１２６】
実施例６：フォームＡを含む医薬組成物−製剤「Ａ」
フォームＡを、表５に示す成分を含む、１、１０、２５および７５ｍｇ用量強度の硬質ゼラチンカプセル剤（例えばＣａｐｓｕｇｅｌ、サイズ３）として製剤化した（製剤Ａ）。下記および表６で説明するように、バッチ製造を実行した。
【０１２７】
【表１０】
2020505367.tif 000014
【０１２８】
【表１１】
2020505367.tif 000015
【０１２９】
供給要件および／または利用可能な設備チェーンに応じて、他のバッチサイズを用意し得る。他のバッチサイズのための個々の成分の重量は、述べた組成に比例的に対応する。
【０１３０】
フォームＡ製剤Ａの製造プロセスの説明：１ｍｇおよび１０ｍｇの硬質ゼラチンカプセル剤
１．フォームＡ原薬とマンニトールの一部とをブレンドする。
２．工程１の混合物を篩にかける。
３．工程２の混合物をブレンドする。
４．マンニトールの一部を篩にかけ、工程３の混合物に添加する。
５．工程４の混合物をブレンドする。
６．マンニトール、アルファ化デンプン、低置換ヒドロキシプロピルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースの残余を篩にかける。篩にかけた成分を、工程５の混合物に添加する。
７．工程６の混合物をブレンドする。
８．工程７のブレンドを篩にかける。
９．工程８の混合物をブレンドする。
１０．ヒドロキシプロピルセルロースを、撹拌しつつ純水に溶解させて、結合剤溶液を形成する。結合剤溶液を工程９のブレンドに添加し、高剪断造粒機（例えばＣｏｌｌｅｔｔｅ）を使用して塊を造粒する。
１１．必要に応じて、工程１０からの塊の湿式スクリーニングを実施する。
１２．流動床乾燥機（例えばＡｅｒｏｍａｔｉｃ）中で、工程１１の湿った顆粒を乾燥させる。
１３．工程１２の乾燥した顆粒をスクリーニングする。
１４．マンニトール、低置換ヒドロキシプロピルセルロースおよびタルクを篩にかけ、工程１３の篩にかけた顆粒に添加する。
１５．工程１４の混合物をブレンドする。
１６．フマル酸ステアリルナトリウムを篩にかけ、工程１５の混合物に添加する。
１７．工程１６の混合物をブレンドして、最終ブレンドを得る。
１８．カプセル充填機（例えばＨ＆Ｋ）を使用して、工程１７からの最終ブレンドをカプセル封入する。
【０１３１】
フォームＡ製剤Ａの製造プロセスの説明：２５ｍｇおよび７５ｍｇの硬質ゼラチンカプセル剤
１．フォームＡ原薬、マンニトール、アルファ化デンプン、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースを篩にかける。
２．工程１の篩にかけた材料をブレンドする。
３．工程２の混合物を篩にかける。
４．工程３の混合物をブレンドする。
５．ヒドロキシプロピルセルロースを、撹拌しつつ純水に溶解させて、結合剤溶液を形成する。結合剤溶液を工程４のブレンドに添加し、高剪断造粒機（例えばＣｏｌｌｅｔｔｅ）を使用して塊を造粒する。
６．必要に応じて、工程６からの塊の湿式スクリーニングを実施する。
７．流動床乾燥機（例えばＡｅｒｏｍａｔｉｃ）中で、工程６の湿った顆粒を乾燥させる。
８．工程７の乾燥した顆粒をスクリーニングする。
９．マンニトール、低置換ヒドロキシプロピルセルロースおよびタルクを篩にかけ、工程８の篩にかけた顆粒に添加する。
１０．工程９の混合物をブレンドする。
１１．フマル酸ステアリルナトリウムを篩にかけ、工程１０に添加する。
１２．工程１１の混合物をブレンドして、最終ブレンドを得る。
１３．工程１２の最終ブレンドをカプセル封入する。
【０１３２】
上記で説明したプロセスを、利用可能な設備チェーンおよびバッチスケールに応じて適度に調整し得る。設備サイズの適応により、様々なバッチサイズを用意し得る。他のバッチサイズに関する個々の成分の重量は、例えばスケールアップおよび承認後の変更に関するＦＤＡガイダンスに示されているように、プロセスのスケールアップおよび移行を可能にするために必要とされ得る通常の適応内で、述べた組成に比例的に対応する。
【０１３３】
実施例７：フォームＡを含むさらなる医薬組成物−製剤「Ｂ」
フォームＡを、表７に示す成分を含む硬質ゼラチンカプセル剤（例えばＣａｐｓｕｇｅｌ、サイズ２または３）としてさらに製剤化した（製剤Ｂ）。下記および表８で説明するように、製剤Ｂの製造を実行した。
【０１３４】
【表１２】
2020505367.tif 000016
【０１３５】
製剤Ｂでは、粉砕プロセスの頑健性を改善するために、フォームＡ原薬とマンニトールとを共粉砕する。生の原薬の粉砕は、材料の流動性の低さおよび粘着傾向に起因して困難であることを発見した。共粉砕プロセスに適したミルの例として、Ｈｏｓｏｋａｗａ  Ａｌｐｉｎｅミル、例えばＡＳ、ＡＦＧおよびＪＳシステムモデル；またはＦｌｕｉｄ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ＆  Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙミル、例えばＲｏｔｏ−Ｊｅｔシステムモデルが挙げられるがこれらに限定されない。この共粉砕されたブレンドは、医薬品を製造するためにさらに加工される医薬中間体（ＰＩ）と考えられる。製剤Ｂ中で利用される、共粉砕されたブレンドは、フォームＡ原薬  ５０重量／重量％およびマンニトール５０重量／重量％を含む。フォームＡ原薬最大７０重量／重量％およびマンニトール最大３０重量／重量％（即ち、７０：３０−フォームＡ原薬：マンニトール）を含む、共粉砕されたブレンドの実験室スケールの開発試験および小スケールのパイロット製造は、ブレンドの低い材料特性および粉砕チャンバへの付着に起因して、厄介なプロセスをもたらす。フォームＡ原薬とマンニトール１５重量／重量％との共粉砕は失敗した。続いて、この比率での製造試験の肯定的な読み取りに基づいて、５０：５０重量／重量％（または１：１）の比率のフォームＡ原薬対マンニトールを使用した。
【０１３６】
製剤ＡおよびＢを湿式造粒技術により製造する。困難な原薬の物理的特性、即ち、低い嵩密度、低い流動性、および湿潤性を克服するために、湿式造粒を選択した。製剤Ａ中においてそれぞれ充填剤および結合剤として使用したアルファ化デンプンおよびヒドロキシプロピルセルロースを、微結晶セルロースおよびヒプロメロースに置き換えた。実験は、アルファ化デンプンではなく微結晶セルロースを充填剤として使用すると、より速い溶解プロファイルおよび顆粒特性の改善がもたらされることを示した。さらなる実験は、ヒドロキシプロピルセルロースではなくヒプロメロースを結合剤として使用すると、顆粒特性および造粒プロセスの改善がもたらされることを示した。
【０１３７】
【表１３】
2020505367.tif 000017
【０１３８】
表８には、特定のバッチサイズのための成分が記載されている。臨床要件および／または利用可能な設備および／または利用可能な出発物質に応じて、他のバッチサイズを利用し得る。他のバッチサイズのための個々の成分の重量は、述べた組成に比例的に対応する。
【０１３９】
製造プロセスの説明
下記で説明するプロセスは、同一の基本製造工程を維持しつつ、異なるバッチサイズおよび／または設備特性を補償するために、および／または過去の製造バッチの経験に基づいて、適度に調整され得る。
【０１４０】
ＰＩ製造
１．フォームＡ原薬およびマンニトールをブレンドする。
２．工程１のブレンドを篩にかける。
３．工程２の篩にかけた材料を共粉砕する。
４．工程３の共粉砕した材料をブレンドして、フォームＡ  ＰＩを得る。
【０１４１】
フォームＡ製剤Ｂ：１５ｍｇおよび５０ｍｇの硬質ゼラチンカプセル剤
１．フォームＡ  ＰＩ、マンニトール、微結晶セルロースおよび低置換ヒドロキシプロピルセルロースを篩にかける。
２．工程１の篩にかけた材料をブレンドする。
３．工程２の混合物を篩にかける。
４．工程３の混合物をブレンドする。
５．ヒプロメロースを、撹拌しつつ純水に溶解させて、結合剤溶液を形成する。結合剤溶液を工程４のブレンドに添加し、高剪断造粒機（例えばＣｏｌｌｅｔｔｅ  Ｍｏｄｅｌ  ＧＲＡＬ）を使用して塊を造粒する。必要に応じてさらなる精製水を添加する。目標の総水量：約２５％。
６．工程５の湿った顆粒の目視観察／評価に基づいて、湿式スクリーニングを実施する（任意選択）。
７．流動床乾燥機（例えばＡｅｒｏｍａｔｉｃ）中で、工程６の湿った顆粒を乾燥させる。
８．工程７の乾燥した顆粒をスクリーニングする。
９．低置換ヒドロキシプロピルセルロースおよびタルクを篩にかけ、工程８の篩にかけた顆粒に添加する。
１０．工程９の混合物をブレンドする。
１１．フマル酸ステアリルナトリウムを篩にかけ、工程１０に添加する。
１２．工程の１１の混合物をブレンドして最終ブレンドを得る。
１３．工程１２の最終ブレンドをカプセル封入して硬質ゼラチンカプセル剤にする。
【０１４２】
実施例８：フォームＢの結晶化手順
３．５ｇのフォームＡを２０ｍｌガラスバイアル内の５ｍｌのＴＨＦに懸濁させた。懸濁液を３００ｒｐｍで、室温にて１週間攪拌した。懸濁液を遠心分離ろ過チューブによりろ過した後、固体を室温で一晩乾燥させて、約１．３９ｇのフォームＢを取得した。
【０１４３】
実施例９：フォームＢのＸＲＰＤ分析
結晶フォームＢをＸＲＰＤにより分析し、１０の最も特徴的なピークを表９に示す（図４も参照されたい）。
【０１４４】
【表１４】
2020505367.tif 000018
【０１４５】
実施例１０：フォームＢのＤＳＣ分析
ＴＡ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製のＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒを用いて、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によりフォームＢを分析したところ、フォームＡへの変態により約１１９℃で変換の開始、続いて、フォームＡと一致して、約１７０℃で融解開始を示す（図５を参照されたい）。加熱速度は、毎分１０℃で実施した。
【０１４６】
実施例１１：半水和物フォームＨＡの結晶化手順
２．５ｇのフォームＡを６５℃の１５ｍｌ  ＩＰＡｃ／０．３７５ｍｌ水の混合物に、３００ｒｐｍで攪拌（攪拌棒）しながら溶解させた。透明な溶液を２０分にわたり４５℃まで冷却させた。注入ポンプにより、７ｍｌのｎ−ヘプタンを溶液に１０分かけて５００ｒｐｍ（攪拌棒）で滴下した。溶液を２時間かけて１５℃まで冷却させた。２００ｒｐｍ（パドル）で２０ｍｌのｎ−ヘプタンを５０分かけて添加し、次いで３７ｍｌのｎ−ヘプタンを９３分かけて添加した。懸濁液を１５℃で一晩（少なくとも１０時間）攪拌し、ろ過した後、ｎ−ヘプタンで洗浄した。固体を室温で乾燥させて、１．７８ｇの半水和物フォームＨＡを取得した。
【０１４７】
実施例１２：半水和物フォームＨＡのＸＲＰＤ分析
結晶性半水和物フォームＨＡをＸＲＰＤにより分析し、１０の最も特徴的なピークを表１０に示す（図６も参照されたい）。
【０１４８】
【表１５】
2020505367.tif 000019
【０１４９】
実施例１３：半水和物フォームＨＡのＤＳＣ分析
ＴＡ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製のＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒを用いて、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によりフォームＨＡを分析したところ、約９８℃で脱水温度の開始、続いて、再結晶化の後、フォームＡと一致して、１７０℃で融解開始を有することが判明した。加熱速度は、毎分１０℃で実施した（孔をあけたパン）（図７を参照されたい）。
【０１５０】
実施例１４：非結晶形態の調製
２．０ｇのフォームＡを１００ｍｌの１，４−ジオキサンに溶解させてから、アセトンドライアイス浴により凍結させた。サンプルを１日かけて凍結乾燥させた後、ＸＲＰＤにより特性決定した。回析ピークは観察されなかった。固体を７０℃の真空オーブン内で２時間乾燥させた後、−２０℃で保存した。（図８を参照されたい。）
【０１５１】
実施例１５：非結晶形態のＤＳＣ分析
変調温度振幅１Ｋおよび６０ｓの期間で、−２０℃から２００℃まで２Ｋ／分にて、ＴＡ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製のＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｅｒを用いたｍＤＳＣにより、非結晶形態を分析した。約５９℃でガラス転移を検出した後、再結晶化が起こった。得られた形態の融点は、フォームＡのそれと一致する（図９を参照されたい）。
【０１５２】
実施例１６：高温／湿度に１週間曝露した場合の結晶フォームＡの化学的安定性
結晶性材料を高温および／または湿度に少なくとも３週間曝露することにより、結晶フォームＡの安定性を試験した。高温および／または湿度での保存後、バルク結晶性材料をサンプリングし、アセトニトリル：水（８０：２０）に溶解させてから、下記の条件を用いて、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣで純度を分析した：
【０１５３】
【表１６】
2020505367.tif 000020
【０１５４】
この試験の結果を以下の表１２に示す。
【０１５５】
【表１７】
2020505367.tif 000021
【０１５６】
表１２に概要を示すフォームＡの安定性データを、同じ条件下で試験し、いずれの場合も、ＸＲＰＤ分析により示されるフォームＡへの変換が起こったフォームＢ、水和物フォームＨＡ、および非結晶形態と比較した。フォームＡが、最も熱力学的に安定した多形体であることが判明した。
【０１５７】
実施例１７：単独で投与した場合での、および強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤イトラコナゾールまたは強力なＣＹＰ３Ａ４誘導剤リファンピシンと一緒に投与した場合での、遊離塩基化合物１の薬物動態のヒト研究
健康な志願者での薬物間相互作用（ＤＤＩ）研究において、化合物１のＰＫへの強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤（イトラコナゾール）および強力なＣＹＰ３Ａ４誘導剤（リファンピシン）の影響を評価した。ＤＤＩ研究のデザインを図１０で概説する。イトラコナゾールは、２００ｍｇ  ｑ．ｄ．の用量で、化合物１を単独で投与した場合と比較して、化合物１と一緒に投与した場合に、化合物１の平均ＡＵＣを２〜３倍に増加し、化合物１の平均Ｃｍａｘを２５％増加させた（表１３）。リファンピシンは、６００ｍｇ  ｑ．ｄ．の用量で、化合物１と単独で投与した場合と比較して、化合物１と一緒に投与した場合に、化合物１の平均ＡＵＣを５〜６倍減少させ、化合物１の平均Ｃｍａｘを２．５倍減少させた（表１４）。まとめると、フェーズ１研究における化合物１曝露への強力なＣＹＰ３Ａ４誘導剤および強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤の影響は、ＣＹＰ３Ａ４が化合物１の排除にとって非常に重要であること、および化合物１を投与する場合に強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤またはＣＹＰ３Ａ４誘導剤との共処置の影響を考慮する必要があることを示す。
【０１５８】
【表１８】
2020505367.tif 000022
【０１５９】
処置および対象に関する影響が固定されたＡＮＯＶＡモデルを、各対数変換ＰＫパラメータに適合させた。結果を逆変換して、「調整された幾何平均」、「幾何平均の比」および「９０％ＣＩ」を得た。
【０１６０】
【表１９】
2020505367.tif 000023
【０１６１】
処置および対象に関する影響が固定されたＡＮＯＶＡモデルを、各対数変換ＰＫパラメータに適合させた。結果を逆変換して、「調整された幾何平均」、「幾何平均の比」および「９０％ＣＩ」を得た。
【０１６２】
参考文献
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Ｔｈａｌ  ＤＲ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｔｗｏ  ｔｙｐｅｓ  ｏｆ  ｓｐｏｒａｄｉｃ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｍｙｌｏｉｄ  ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．；６１：２８２−２９３．
Ｖｅｒｇｈｅｓｅ  ＰＢ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．；１０（３）：２４１−２５２．
【０１６３】
本明細書に引用される全ての参照文献、例えば、科学出版物または特許出願公開は、各々の参照文献が、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれると明示的かつ個別に示されたのと同じ範囲まで、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。前述した発明は、明瞭な理解を目的とする説明および例として幾分詳細に記載してきたが、当業者であれば、本発明の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、本発明にある程度の変更および修正を加え得ることは容易に明らかであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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