(57)【要約】  本発明は、１３Ｃ及び／又は２Ｈ同位体により増強されたアンブロキソール（「同位体増強アンブロキソール」）、並びにオートファジー性感染症の治療におけるその使用に関し、オートファジー性感染症は特に結核などの肺のマイコバクテリア並びに他の感染症、病状及び／又は状態であり、特に薬物耐性及び多剤耐性結核を含む。医薬組成物は、同位体増強アンブロキソールを単独で、又は追加のオートファジーモジュレータ（オートファジーを促進又は阻害する活性を有する化学物質）を含む追加の生物活性剤、特にリファマイシン系抗生物質と組み合わせて含み、それによりオートファジー介在性病状及び／又は状態、特に肺で発生するオートファジー介在性病状及び／又は状態、例えばマイコバクテリア感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、シェーグレン病、並びに肺癌（病状及び／又は状態、特に肺の病状及び／又は状態の中でも小細胞肺癌及び非小細胞肺癌）に対して有用である。患者の肺で主に発生するオートファジー性病状及び／又は状態を特に含む、オートファジー性病状及び／又は状態を治療するための方法は、本発明の更なる実施形態を示す。更なる実施形態は、本明細書での他の箇所で開示される本発明の化合物の合成方法を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学構造
【化１】
2020506236.tif 000003
の化合物、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、立体異性体（エナンチオマー又はジアステレオマーを含む）、溶媒和物若しくは多形体。
【請求項２】
次の請求項１に記載の化合物
【化２】
2020506236.tif 000004
、又はそれらの薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
【請求項３】
次の請求項１に記載の化合物
【化３】
2020506236.tif 000005
、又はそれらの薬学的に許容可能な塩若しくはエナンチオマー。
【請求項４】
次の請求項１に記載の化合物
【化４】
2020506236.tif 000006
、又はそれらの薬学的に許容可能。
【請求項５】
次の請求項１に記載の化合物
【化５】
2020506236.tif 000007
、又はそれらの薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
次の請求項１に記載の化合物
【化６】
2020506236.tif 000008
、又はそれらの薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
次の請求項１に記載の化合物
【化７】
2020506236.tif 000009
、又はそれらの薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
次の請求項１に記載の化合物
【化８】
2020506236.tif 000010
、又はそれらの薬学的に許容可能な塩。
【請求項９】
有効量の請求項１から８のいずれかに記載の同位体標識アンブロキソール化合物の少なくとも１つを、薬学的に許容可能な担体、添加物又は賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項１０】
追加の生物活性剤を更に含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記追加の生物活性剤はオートファジーモジュレータである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記追加の生物活性剤は抗結核剤である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記追加の生物活性剤はリファマイシンである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記リファマイシンは、リファンピン、リファブチン、リファキシミン、リファペンチン及びそれらの混合物である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
リファマイシンは、リファンピン、リファブチン又はそれらの混合物である、請求項１３又は１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記リファマイシンはリファンピンである、請求項１３から１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗結核剤は、エタンブトール、イソニアジド、エチオナミド、プロチオナミド、ピラジナミド、リファンピシン、又はこれらの混合物である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１８】
前記オートファジーモジュレータは、アステミゾール、クリソファノール、エメチン、クロロサリチルアニリド、オキシコナゾール、シブトラミン、プロアジフェン、酒石酸ジヒドロエルゴタミン、テルフェナジン、トリフルプロマジン、アミオダロン、サポニン、ビンブラスチン、タンニン酸、フェンチクロール、リンゴ酸ピゾチリン、ピペラセタジン、オキシフェンサイクリミン、グリブリド、ヒドロキシクロロキン、メトトリメプラジン、メパルトリシン、チアミラールナトリウム、トリクロカルバン、ジフェニドール、カランジン、クロバンジオールジアセテート、ネロリドール、フルオキセチン、ヘレニン、デヒドロアビエタミド、フタル酸ジブチル、１８−アミノアビエタ−８，１１，１３−硫酸トリエン、酢酸ポドフィリン、ベルバミン、ロテノン、ルベスセンシンＡ、モリン、ピロマイシン、ポミフェリン、ガルデニンＡ、α−マンゴスチン、アボカデン、ブチル化ヒドロキシトルエン、フィシオン、テトランドリン、マラチオン、イソリキリチゲニン、クロフォクトール、イソレセルピン、４，４’−ジメトキシダルベルギオン及び４−メチルダフネチン、ベンゼトニウム、ニクロサミド、モネンシン、ブロムペリドール、レボブノロール、デヒドロイソアンドステロン３−アセテート、セルトラリン、タモキシフェン、レセルピン、ヘキサクロロフェン、ジピリダモール、ハルマリン、プラゾシン、リドフラジン、チエチルペラジン、デキストロメトルファン、デシプラミン、メベンダゾール、カンレノン、クロルプロチキセン、マプロチリン、ホモクロルシクリジン、ロペラミド、ニカルジピン、デクスフェンフルラミン、ニルバジピン、ドスレピン、ビペリデン、デナトニウム、エトミデート、トレミフェン、トモキセチン、クロルギリン、ゾテピン、β−エスシン、トリジヘキセチル、セフタジジム、メトキシ−６−ハルマラン、メレンゲストロール、アルベンダゾール、リマンタジン、クロルプロマジン、ペルゴリド、クロペラスチン、プレドニカルバート、ハロペリドール、クロトリマゾール、ニトロフラール、イオパン酸、ナフトピジル、メチマゾール、トリメプラジン、エトキシキン、クロコルトロン、ドキシサイクリン、メシル酸ピルリンドール、ドキサゾシン、デプトロピン、ノコダゾール、スコポラミン、オキシベンゾン、ハルシノニド、オキシブチニン、ミコナゾール、クロミプラミン、シプロヘプタジン、ドキセピン、ジクロニン、サルブタモール、フラボキサート、アモキサピン、フェノフィブラート、ピメチキセン、それらの薬学的に許容される塩又は代替の薬学的に許容される塩、及び混合物である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記追加の生物活性剤は抗癌剤である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２０】
前記抗癌剤は肺癌の治療に有効である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２１】
前記肺癌は小細胞肺癌である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２２】
前記肺癌は非小細胞肺癌である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２３】
経口、吸入又は経肺剤形である、請求項９から１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
吸入又は経肺剤形である、請求項９から１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
前記追加の生物活性剤は、少なくとも１つのオートファジーモジュレータ、抗結核剤、又はそれらの混合物である、請求項１０、１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２６】
前記化合物は、０．０５〜２０ミクロンの範囲内の平均粒径を有する粒子として前記組成物に含まれる、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２７】
前記化合物は、０．０５〜５ミクロンの範囲内の平均粒径を有する粒子として前記組成物に含まれる、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２８】
前記化合物は、０．０５〜０．２５ミクロンの範囲内の平均粒径を有する粒子として前記組成物に含まれる、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項２９】
前記化合物は、１〜３ミクロンの範囲内の平均粒径を有する粒子として前記組成物に含まれる、請求項１９又は２０に記載の組成物。
【請求項３０】
懸濁液であり、該懸濁液を噴霧することによって患者又は対象の肺に送達される、請求項９から２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
乾燥粉末吸入によって患者の肺に送達される、請求項９から２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
定量吸入器によって患者の肺に送達される、請求項９から２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
必要とする患者又は対象のオートファジー介在性病状又は状態を治療するための方法であって、有効量の請求項１から８のいずれかに記載の化合物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項３４】
必要とする患者又は対象のオートファジー介在性病状又は状態を治療するための方法であって、有効量の請求項９から３１のいずれかに記載の組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項３５】
必要とする患者又は対象の肺疾患又は肺の状態を治療するための方法であって、有効量の請求項９から３１のいずれかに記載の組成物を前記患者又は対象に投与することを含む、方法。
【請求項３６】
前記肺疾患又は肺の状態は、マイコバクテリア感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、シェーグレン病、及び肺癌（小細胞肺癌及び非小細胞肺癌）である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記マイコバクテリア感染症は結核菌である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記マイコバクテリア感染症は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ又はＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記肺疾患又は肺の状態は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、アシネトバクターバウマニー又は吸入炭疽によって引き起こされる感染症である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記肺疾患又は肺の状態はＣＯＰＤである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記肺疾患又は肺の状態は喘息である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記肺疾患又は肺の状態は嚢胞性線維症である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
前記肺疾患又は肺の状態はシェーグレン病である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４４】
前記肺疾患又は肺の状態は肺癌である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４５】
患者又は対象に投与される医薬組成物に請求項１から８のいずれかに記載の同位体標識化合物の少なくとも１つを含む、前記患者又は対象への投与後にアンブロキソールのバイオアベイラビリティを増大する方法。
【請求項４６】
前記医薬組成物は、少なくとも１つの追加の生物活性剤を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
１−ヒドロキシ−４−アミノシクロヘキサンに同位体標識ジブロモアミノ置換ベンズアルデヒドを縮合して同位体標識イミンをもたらし、続いて該イミンを還元して同位体標識アンブロキソールを生成することを含む、同位体標識アンブロキソールを合成する方法
【請求項４８】
エナンチオマー富化１−ヒドロキシ−４−アミノシクロヘキサンを用いて、同位体標識ベンズアルデヒド類似体との縮合によって前記イミンを生成し、続いて該イミンを含有する化合物を、任意で同位体富化された還元剤を用いて還元してアンブロキソールを合成する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４９】
前記同位体富化シクロヘキサン誘導体は、図２に記載されたものである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
必要とする患者又は対象のオートファジー介在性病状又は状態を治療するための請求項１から８のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項５１】
必要とする患者又は対象のオートファジー介在性病状又は状態を治療するための請求項９から３１のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項５２】
必要とする患者又は対象におけるオートファジーによって介在された肺疾患又は肺の状態を治療するための請求項９から２８のいずれかに記載の組成物の使用。
【請求項５３】
前記肺疾患又は肺の状態は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、アシネトバクターバウマニー又は吸入炭疽によって引き起こされる感染症である、請求項５２に記載の使用。
【請求項５４】
前記肺疾患又は肺の状態は、マイコバクテリア感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、シェーグレン病、及び肺癌（小細胞肺癌及び非小細胞肺癌）である、請求項５２に記載の使用。
【請求項５５】
前記マイコバクテリア感染症は結核菌である、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
前記マイコバクテリア感染症は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ又はＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓである、請求項５４に記載の使用。
【請求項５７】
記肺疾患又は肺の状態はＣＯＰＤである、請求項５４に記載の使用。
【請求項５８】
前記肺疾患又は肺の状態は喘息である、請求項５４に記載の使用。
【請求項５９】
前記肺疾患又は肺の状態は嚢胞性線維症である、請求項５４に記載の使用。
【請求項６０】
前記肺疾患又は肺の状態はシェーグレン病である、請求項５４に記載の使用。
【請求項６１】
前記肺疾患又は肺の状態は肺癌である、請求項５４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本出願は、同じ発明の名称の２０１７年２月７日出願の米国仮特許出願第６２／４５５，８２２号の優先権の利益を主張するものであり、その出願の全内容が本出願に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、１３Ｃ及び／又は２Ｈ同位体により増強されたアンブロキソール（「同位体増強アンブロキソール」）、並びにオートファジー性感染症の治療におけるその使用に関し、オートファジー性感染症は特に結核などの肺のマイコバクテリア感染症であり、特に薬物耐性及び多剤耐性結核を含み、更にメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、カルバペネム耐性アシネトバクターバウマニー、及び吸入炭疽（炭疽菌によって生じる）によって引き起こされる肺炎などの様々なリファンピン感受性肺感染症も含む。医薬組成物は、同位体増強アンブロキソールを単独で、又は追加のオートファジーモジュレータ（オートファジーを促進又は阻害する活性を有する化学物質）を含む追加の生物活性剤と組み合わせて含み、それによりオートファジー介在性病状及び／又は状態、特に肺で発生するオートファジー介在性病状及び／又は状態、例えばマイコバクテリア感染症、非マイコバクテリア肺感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、シェーグレン病、並びに肺癌（特に小細胞肺癌及び非小細胞肺癌）に対して有用である。患者の肺で主に発生するオートファジー性病状及び／又は状態を特に含む、オートファジー性病状及び／又は状態を治療するための方法は、本発明の更なる実施形態を示す。更なる実施形態は、本明細書での他の箇所で開示される本発明の化合物の合成方法を含む。
【背景技術】
【０００３】
本発明者の未公開データは、アンブロキソールがオートファジーの強力な誘導物質であることを明らかにしている。しかしながら、ヒトでのその血漿半減期はわずか３．７２時間であり（１）、これは有効濃度を提供するために１日に複数回の投与が必要であることを意味している。アンブロキソールの主要な排出経路は、グルクロニド（２）コンジュゲートの尿中排泄によるものであり、従って代謝又は組織の薬物動態若しくは薬力学を変化させるいずれの他の因子も予測されていない。
【０００４】
ヒトミクロソームによるアンブロキソールの主要な代謝は、ｃｙｐ３Ａ４が介在するジブロモアントラニル酸（ＤＢＡＡ）への酸化によることが示された（３）。図１を参照。従って、結核（ＴＢ）などのオートファジー介在性病状及び／又は状態の疾患の治療におけるアンブロキソールのいずれの可能性のある使用も、リファンピンなどの多くのＴＢ薬のｃｙｐ３Ａ４を誘発する性質によって大きく損なわれ得る。あるいは、ｃｙｐ３Ａ４阻害薬をアンブロキソールと共に使用すると、アンブロキソールはｃｙｐ３４Ａによって代謝されなくなるため、アンブロキソールのレベルが所望のレベルより高くなる可能性もある。よって残念なことに、ｃｙｐ３Ａ４に対するアンブロキソールの固有の感受性は、治療されるＴＢなどの疾患を有するヒトにおいてリファンピン若しくは他の抗ＴＢ剤を投与すること、又はｃｙｐ３Ａ４阻害化合物をいつ投与するかを困難とする。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
更に、アンブロキソールは肺濃縮効果を示し、これは結核などの肺疾患におけるアンブロキソールの治療効果を高める。肺組織が、より一般的に理解されている肝臓発現のように多くのｃｙｐ３Ａ４を発現することはほとんど認識されておらず、そしてｃｙｐ３Ａ４は、ヒトの肺の気管支腺、細気管支円柱及び末端上皮、ＩＩ型肺胞上皮、並びに肺胞マクロファージを含む部位に見られる（４）。従って、アンブロキソールを吸入形態で投与したとしても、アンブロキソールは、本質的にかつ予想外にも肺組織のＣｙｐ３Ａ４によって不活性形態へと代謝され、それによりアンブロキソールに対する肺の曝露レベルが限定される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一実施形態では、本発明者は、ｃｙｐ３Ａ４代謝に対する耐性を有するアンブロキソールの同位体増強形態（同位体増強アンブロキソール１〜４：添付の図１を参照）を開示する。この一連の化合物は、特に経口又は吸入により、アンブロキソールのより最適な使用が可能であり、そしてｃｙｐ３Ａ４の存在、誘発又は阻害による血漿又は肺組織レベルでの予期せぬ変化に対して本質的に耐性を有する。
【０００７】
本発明によると、アンブロキソールの以下の１３Ｃ及び／又は２Ｈ同位体が提供される。よって第１の実施形態は、化学式
【化１】
2020506236.tif 000002
の同位体標識化合物、又はそれらの薬学的に許容可能な塩、立体異性体（ジアステレオマー及び／若しくはエナンチオマーを含む）、溶媒和物若しくは多形体を対象とする。
【０００８】
別の実施形態では、本発明は、有効量の少なくとも１つの上述の同位体標識アンブロキソール化合物を、薬学的に許容可能な添加物、担体及び／又は賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物を対象とする。上述の医薬組成物は、任意で少なくとも１つの追加の生物活性剤、好ましくは抗癌剤（好ましくは小細胞肺癌及び非小細胞肺癌を含む肺癌の治療に有効な抗癌剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル（タキソール）、アルブミン結合パクリタキセル（ｎａｂ−パクリタキセル、アブラキサン）、ドセタキセル（タキソテール）、ゲムシタビン（ジェムザール）、ビノレルビン（ナベルビン）、イリノテカン（カンプトサール）、エトポシド（ＶＰ−１６）、ビンブラスチン、ペメトレキセド（アリムタ）、及びこれらの混合物）、又は特に結核感染若しくは別のオートファジー介在性疾患を含むマイコバクテリア感染症の治療に有用な薬剤と組み合わされてもよい。特定の実施形態では、追加の生物活性剤は、エタンブトール、イソニアジド、エチオナミド、プロチオナミド、ピラジナミド、リファンピシン、又はこれらの混合物などの抗結核剤である。他の実施形態では、追加の生物活性剤は、本明細書の他の箇所に記載されているオートファジーモジュレータである。更に他の実施形態では、追加の生物活性剤は、本明細書に記載の抗結核剤及び／又は追加のオートファジーモジュレータの両方を含んでもよい。更に他の実施形態では、生物活性剤はリファンピン、並びにリファブチン、リファキシミン及びリファペンチンなどの他のリファマイシン誘導体であるか又はこれらを含み、これらはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ（ＭＡＣ）及びＭ．  ｋａｎｓａｓｉｉなどの非結核性マイコバクテリア肺（ＮＴＭ）感染症のための投薬計画において、極めて重要な薬剤である。
【０００９】
別の実施形態では、本発明は、特に患者の肺に主に局在するオートファジー介在性病状又は状態を含む、患者のオートファジー介在性病状又は状態を治療するための方法を対象とし、その方法は、有効量の少なくとも１つの同位体標識アンブロキソール化合物を、任意で少なくとも１つの追加の生物活性剤と組み合わせて必要とする患者に投与するステップを含み、その生物活性剤は、抗結核剤及び／又はオートファジーモジュレータを含んでもよい。本発明の化合物及び任意の薬剤を用いて、あらゆるオートファジー介在性病状及び／又は状態が治療され得るが、好ましい実施形態では、本発明の方法は、患者の肺に主に見られる疾患の治療を対象とする。本発明よって治療できる肺の病状及び／又は状態としては、例えばマイコバクテリア感染症（特に結核を含む）が挙げられるが、結核性及び非結核性マイコバクテリア（Ｍ．  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍ．  ａｖｉｕｍ及びＭ．  ａｂｓｃｅｓｓｕｓなど）；メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、カルバペネム耐性アシネトバクターバウマニー及び吸入炭疽によって引き起こされる肺炎などの非マイコバクテリア肺感染症；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；喘息；肺線維症；嚢胞性線維症；シェーグレン病；並びに肺癌（小細胞及び非小細胞肺癌）などの他の感染症も含まれる。更に他の実施形態では、上記生物活性剤は、リファンピン、並びにリファブチン、リファキシミン及びリファペンチンなどの他のリファマイシン誘導体であるか又はこれらを含み、これらはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘ（ＭＡＣ）、Ｍ．  ｋａｎｓａｓｉｉ、及びＭ．  ａｂｓｃｅｓｓｕｓなどの非結核性マイコバクテリア肺（ＮＴＭ）感染症のための投薬計画において、極めて重要な薬剤である。ＴＢに関して、標準的な「短期」治療は、リファンピンでの６ヶ月の治療を含む。ＮＴＭの治療においては、更に長い治療期間が必要となる。ＭＡＣに関して、薬物治療の停止は１２ヶ月の喀痰培養陰性（ＳＣＮ）の後にしか推奨されず、従って１年を大きく越える治療は一般的である。Ｍ．  ｋａｎｓａｓｉｉについても、ＳＣＮとなった後の少なくとも１２ヶ月の治療を伴う、２０ヶ月にわたる治療が推奨される。これらは、ほとんどの細菌性疾患に比べて極めて長い治療期間であるが、本明細書に記載の薬剤によるリファンピン、リファブチン、リファキシミン及びリファペンチン（好ましくはリファンピン）などのリファマイシン誘導体の増強作用によって、これらの治療が意義ある改善をされて、治療時間を短縮することができる。
【００１０】
別の実施形態では、同位体増強アンブロキソールは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、カルバペネム耐性アシネトバクターバウマニー及び吸入炭疽によって引き起こされる肺炎などの非マイコバクテリア肺感染症の治療のために、リファンピン、並びにリファブチン、リファキシミン及びリファペンチンなどの他のリファマイシン誘導体の単独又はこれらの混合物の治療効果を高めることができ、その方法は、有効量の上記薬剤のうちの１つ以上を、治療を必要とする患者に投与することを含む。
【００１１】
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の同位体標識アンブロキソール化合物を必要とする患者に投与した後に、患者の体内でのアンブロキソールの薬物動態及び／又はバイオアベイラビリティを改善する方法を対象とする。
【００１２】
更に別の実施形態では、本発明は、同位体標識アンブロキソールを合成する方法を対象とし、その方法は（本出願の図２に示すように）、図示されている構成の４アミノシクロヘキサノール（図２）を同位体標識ジブロモアミノベンズアルデヒドと反応させて、同位体標識イミン（図２）をもたらし、これを更に還元して本発明の同位体標識化合物のうちの１つ以上をもたらすことを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の様々な同位体標識アンブロキソール誘導体を示す。図１に示されている化合物は、ｔｒａｎｓ−４−［（２−アミノ−３，５−ジブロモベンジル）アミノ］シクロヘキサノール（アンブロキソール）、ｔｒａｎｓ−４−｛［（２−アミノ−３，５−ジブロモベンジル）（２Ｈ１，１Ｈ１）メチル］アミノ］シクロヘキサノール（同位体増強アンブロキソール１）、ｔｒａｎｓ−４−｛［（２−アミノ−３，５−ジブロモベンジル）（２Ｈ２）メチル］アミノ］シクロヘキサノール（同位体増強アンブロキソール２）、ｔｒａｎｓ−４−｛［（２−アミノ−３，５−ジブロモベンジル）（２Ｈ２，１３Ｃ）メチル］アミノ］シクロヘキサノール（同位体増強アンブロキソール３）、及びｔｒａｎｓ−４−｛［（２−アミノ−３，５−ジブロモベンジル）（２Ｈ１，１Ｈ１，１３Ｃ）メチル］アミノ］シクロヘキサノール（同位体増強アンブロキソール４）を含む。これらの同位体アンブロキソール化合物は、Ｃｙｐ３Ａ４代謝に対する耐性を有する。この図は、アンブロキソール及び同位体形態１〜４、並びにこれらがｃｙｐ３Ａ４代謝に対してどのように耐性を示すかを示している。
【図２】スキーム１は、本発明の同位体標識アンブロキソール化合物を生成するための合成スキームを提供する。この方法では、エナンチオマー富化１−ヒドロキシ−４−アミノシクロヘキサンは、示されているように、同位体富化ジブロモアミノベンズアルデヒドと反応する。続いて、形成されたイミンを、同位体標識還元剤を用いた還元に供して、最終的な同位体標識アンブロキソールをもたらす。本発明の化合物の様々な反復過程が、ジブロモアミノベンズアルデヒド化合物中の同位体標識された原子又は還元剤を変更することによって、容易にもたらされる。
【図３】野生型細胞の用量応答を示す。この図は、６．２５μＭの低濃度でさえオートファジーにプラスの効果を有した（対照に対するｔ検定、ｐ＝０．０２５）ことをはっきりと示している。このデータは、０〜２００μＭのアンブロキソール濃度範囲にわたって、アンブロキソール濃度が高いほど、オートファジーが強く誘発されることを示している。
【図４】図３のデータを生成するために使用したものと同じ用量応答試験によるが、野生型細胞ではなく、ＡＴＧ５ノックアウト細胞での試験結果を示す。この図４に示すデータは、６．２５μＭの低濃度のアンブロキソールでさえ、オートファジーの明らかな増加をもたらす（対照に対するｔ検定、ｐ＝０．０００８）ことを示している。ここでもまた、はっきりとした用量応答が観察された。
【図５−６】図５及び６は、オートファジーの誘導物質としてのアンブロキソールの活性を測定するための、ＴＦＥＢ核転位のアンブロキソール誘発を示す。これら両方のデータセットのシグモイドフィッティングは、アンブロキソールが誘発する最大オートファジーの５０％が、約５０μＭにおいて見られることを示した。ここでもまた、２５μＭにおいて有意な増加が観察された。オートファジーのＬＣ３マーカーとは異なり、アンブロキソールは常にｐｐ２４２より低い効果をもたらした。全ての場合において、アンブロキソールのレベルの上昇がオートファジー応答を増加させることは明らかである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本明細書及び添付の請求項で使用される場合、単数形「ある（ａ、ａｎ）」及び「上記、前記（ｔｈｅ）」は、明示的かつ明確に１つの指示対象に限定されていない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。従って、例えば「ある化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」についての言及には、２つ以上の異なる化合物が含まれる。本明細書で使用される場合、用語「含む」及びその文法的変化形は、ある列記での複数の項目の記述が、置換可能な他の同様の項目又は列記された項目に追加できる他の項目を排除するものではなく、非限定的であることを意図している。本明細書にある範囲が記載されている場合、その範囲内のいずれの単一の整数もまた、その範囲の使用の状況がその範囲内のある整数を具体的に排除しない限り、その範囲に含まれることに留意されたい。
【００１５】
本明細書で使用される場合、用語「化合物」又は「薬剤」は、別段の記載がない限り、本明細書で開示されるいずれの具体的な化学化合物も指し、これは特に、アンブロキソール若しくはその誘導体、又は他のオートファジーモジュレータを含み、該当する場合にはそれらの互変異性体、位置異性体、幾何異性体を含み、該当する場合にはそれら光学異性体（例えばエナンチオマー）を含み、それらの薬学的に許容可能な塩を含む。文脈におけるその使用の範囲内で、用語「化合物」は通常は単一の化合物を指すが、文脈において該当する場合には、開示されている化合物の立体異性体、位置異性体及び／又は光学異性体（ラセミ混合物を含む）、並びに特定のエナンチオマー又はエナンチオマー富化混合物、並びにジアステレオマー及びエピマーを含むことができる。この用語はまた、文脈において、化合物の投与及び作用部位への送達を促進するために修飾された、化合物のプロドラッグ形態も指す。
【００１６】
用語「患者」又は「対象」は、文脈において本明細書を通して、本発明の方法及び組成物を用いた予防的処置（予防）を含む治療が提供される動物、通常は家畜を含む飼育動物（イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）及び好ましくはヒトを含む哺乳類を記載するために使用される。ヒト患者などの特定の動物に特異的な状態又は病状の治療については、用語「患者」はその特定の動物、多くはヒトを指す。
【００１７】
用語「有効」又は「薬学的に有効」は、本明細書において、別段の記載がない限り、文脈において意図される結果、通常は患者又は対象の肺での特定の治療の状況におけるオートファジーの調節をもたらす又はそれに影響を与えるために使用される化合物又は組成物の量を記載するために使用される。
【００１８】
用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及び「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などは、本明細書で使用される場合、本明細書の他の箇所に記載されているオートファジー介在性病状若しくは状態のリスクがある患者、又はその病状若しくは状態に苦しんでいる患者に対して効果をもたらすいずれかの行為を指す。その効果は、その病状若しくは状態の治癒、進行の阻害、又はオートファジー介在性病状若しくは状態の１つ以上の症状の改善、軽減若しくは抑制であり得る。本明細書で使用される場合、「治療」は、予防的処置及び治療的処置の両方を包含する。
【００１９】
本明細書で使用される場合、用語「オートファジー介在性病状又は状態」又は「オートファジー介在性肺疾患」は、オートファジー又は細胞の自己消化の途絶によってもたらされる、患者又は対象の肺で発生する病状又は状態を指す。オートファジーは、タンパク質及びオルガネラ分解に関与する細胞経路であり、ヒトの疾患と多くの関連を有する。オートファジー機能障害は、多数の病状及び／又は状態の中でも特に、癌、神経変性、微生物感染及び老化に関連する。オートファジーは、細胞の保護プロセスとして主要な役割を果たすが、細胞死においても役割を果たす。オートファジーによって仲介される病状及び／又は状態は、その病状及び／又は状態が、治療される患者又は対象でのオートファジーの増加又は低減に応じて現れる可能性があり、そして治療は患者又は対象でのオートファジーの阻害剤又は作動薬の投与が必要となるという事実を意味する。
【００２０】
オートファジーによって仲介される病状及び／又は状態（これは、その病状及び／又は状態が、治療される患者又は対象でのオートファジーの増加又は低減に応じて現れる可能性があり、そして治療は患者又は対象でのオートファジーの阻害剤又は作動薬の投与が必要となるという事実を意味する）としては、例えば、癌の転移を含む癌；リソソーム蓄積症（以下で説明される）；神経変性（例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、他の運動失調を含む）；免疫応答（Ｔ細胞成熟、Ｂ細胞及びＴ細胞ホメオスタシス、炎症を阻害するカウンタ）及び慢性炎症性疾患（オートファジーに欠陥がある場合に過剰なサイトカインを促進し得る）、例えば、クローン病を含む炎症性腸疾患、関節リウマチ、狼瘡、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患／ＣＯＰＤ、肺線維症、嚢胞性線維症、シェーグレン病など；脂質代謝膵島の機能及び／又は構造に影響を及ぼす高血糖障害、糖尿病（Ｉ型及びＩＩ型）が挙げられ、過剰なオートファジーは、重度のインスリン抵抗性、高インスリン血症、インスリン抵抗性糖尿病（例えばメンデンホール症候群、ウェルナー症候群、妖精症、及び脂肪萎縮性糖尿病）、脂質異常症（例えば、肥満の対象に発現する高脂血症、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の上昇、高密度リポタンパク質の低下（ＨＤＬ）、及びトリグリセリドの上昇）、並びにメタボリックシンドロームを含む膵臓β細胞死及びこれに関連した高血糖障害；肝疾患（細胞成分の小胞体の過剰なオートファジーによる除去）；腎疾患（プラークのアポトーシス、糸球体疾患）；心血管疾患（特に虚血、脳卒中、圧負荷、及び再灌流での合併症を含む）；筋変性及び萎縮；老化の症状（筋萎縮、虚弱、代謝障害、軽度の炎症、アテローム性動脈硬化、及び関連状態（例えば脳卒中、老化関連認知症及び散発的形態のアルツハイマー病を含む、心臓並びに神経の中枢及び末梢の両方での症状）、前癌状態、並びにうつ病を含む精神状態などの老化関連症状及び慢性状態の発症、重症度又は頻度の改善若しくは遅延を含む）；脳卒中及び脊髄損傷；動脈硬化；細菌性、真菌性、細胞性及びウイルス性（感染症に関連した二次的病状又は状態を含む）を含み、特にＡＩＤＳ及び結核を含む感染症（微生物感染、微生物を除去し、微生物産物に対する保護炎症応答をもたらし、微生物の成長の増強、自然免疫の調節のための微生物による宿主のオートファジーの適応を制限する）；発達（赤血球分化を含む）；胚発生／受胎能／不妊（胚着床、及び栄養素の経胎盤供給の終了後の新生児生存、プログラム細胞死での死細胞の除去）；並びに老化（オートファジーの増加は、損傷したオルガネラ又は凝集した巨大分子の除去をもたらし、健康を増進させて寿命を延ばすが、小児／若年成人におけるオートファジーのレベルの上昇は、筋肉及び臓器の消耗をもたらす場合があり、これは老化／早老症を引き起こす）をもたらすおそれがある。
【００２１】
用語「リソソーム蓄積障害」は、リソソーム蓄積の欠陥から生じる病状又は状態を指す。これらの病状又は状態は一般に、リソソームの機能不全時に発生する。リソソーム蓄積障害は、通常は脂質、糖タンパク質又はムコ多糖類の代謝に必要な単一酵素の欠乏の結果としてのリソソームの機能障害によって引き起こされる。リソソーム蓄積障害（集合的に）は、約１：５，０００〜１：１０，０００の発生率で生じる。リソソームは、不要な物質を細胞が利用できる物質へと処理するため、一般に細胞のリサイクルセンターと呼ばれる。リソソームはこの不要な物質を、高度に特殊化された酵素によって分解する。リソソーム障害は一般的に、ある特定の酵素が余りに少量しか存在しない、又は完全に失われている場合に引き起こされる。これが起こると、物質は細胞内に蓄積される。換言すれば、リソソームが正常に機能しない場合、分解及びリサクルすることになっている過剰な産物が細胞内に蓄積される。リソソーム蓄積障害は遺伝子疾患であるが、本明細書に記載のオートファジーモジュレータ（ａｕｔｏｓｔａｔｉｎｓ）を用いて治療できる可能性がある。これらの疾患は全て、共通の生化学的特徴、即ち全てのリソソーム疾患がリソソーム内部における物質の異常な蓄積に由来するという特徴を共有している。リソソーム蓄積症は小児に多く、その結果、多くは人生の早い段階（多くは生後数ヶ月又は数年以内）で死亡する。他の多くの小児は、彼らの特定の障害の様々な症状に長年苦しめられた後、この疾患によって死亡する。
【００２２】
リソソーム蓄積症の例としては、例えば、活性化因子欠損症／ＧＭ２ガングリオシドーシス、αマンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステリルエステル蓄積症、慢性ヘキソサミニダーゼＡ欠乏症、シスチン症、ダノン病、ファブリー病、ファーバー病、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病（Ｉ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型）、ＧＭ１−ガングリオシドーシス（小児期、後期小児期／若年期、及び成年期／慢性を含む）、ハンター症候群（ＭＰＳ  ＩＩ型）、Ｉ−Ｃｅｌｌ病／ムコリピドーシスＩＩ型、小児遊離シアル酸蓄積症（ＩＳＳＤ）、若年性ヘキソサミニダーゼＡ欠乏症、クラッベ病、リソソーム酸性リパーゼ欠損症、異染性白質ジストロフィー、ハーラー症候群、シャイエ症候群、ハーラー−シャイエ症候群、サンフィリッポ症候群、モルキオ症候群Ａ型及びＢ型、マロトー−ラミー症候群、スライ症候群、ムコリピドーシス、マルチプルスルファターゼ欠損症、ニーマン−ピック病、神経セロイドリポフスチン症、ＣＬＮ６疾患、ヤンスキー−ビールショースキー病、ポンペ病、濃化異骨症、サンドホフ病、シンドラー病、テイ−サックス病、並びにウォルマン病が特に挙げられる。
【００２３】
好ましい態様では、同位体標識アンブロキソールは、非結核及び結核を含むマイコバクテリア感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、シェーグレン病、並びに肺癌（小細胞及び非小細胞肺癌）などのオートファジー介在性肺疾患の治療に多く用いられる。同位体増強アンブロキソールは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、カルバペネム耐性アシネトバクターバウマニー、及び吸入炭疽によって引き起こされる肺炎などの非マイコバクテリア肺感染症の治療のために、リファンピン、並びにリファブチン、リファキシミン及びリファペンチンなどの他のリファマイシン誘導体（単独又はこれらの混合物）の治療効果を高めることもできる。
【００２４】
（同位体標識アンブロキソールと同時投与できる）追加のオートファジーモジュレータには、アステミゾール、クリソファノール、エメチン、クロロサリチルアニリド、オキシコナゾール、シブトラミン、プロアジフェン、酒石酸ジヒドロエルゴタミン、テルフェナジン、トリフルプロマジン、アミオダロン、サポニン、ビンブラスチン、タンニン酸、フェンチクロール、リンゴ酸ピゾチリン、ピペラセタジン、オキシフェンサイクリミン、グリブリド、ヒドロキシクロロキン、メトトリメプラジン、メパルトリシン、チアミラールナトリウム、トリクロカルバン、ジフェニドール、カランジン、クロバンジオールジアセテート、ネロリドール、フルオキセチン、ヘレニン、デヒドロアビエタミド、フタル酸ジブチル、１８−アミノアビエタ−８，１１，１３−硫酸トリエン、酢酸ポドフィリン、ベルバミン、ロテノン、ルベスセンシンＡ、モリン、ピロマイシン、ポミフェリン、ガルデニンＡ、α−マンゴスチン、アボカデン、ブチル化ヒドロキシトルエン、フィシオン、テトランドリン、マラチオン、イソリキリチゲニン、クロフォクトール、イソレセルピン、４，４’−ジメトキシダルベルギオン及び４−メチルダフネチン、並びにこれらの混合物が含まれる。アンブロキソールと同時投与できる他の薬剤には、ベンゼトニウム、ニクロサミド、モネンシン、ブロムペリドール、レボブノロール、デヒドロイソアンドステロン３−アセテート、フルベンダゾール、セルトラリン、タモキシフェン、レセルピン、ヘキサクロロフェン、ジピリダモール、ハルマリン、プラゾシン、リドフラジン、チエチルペラジン、デキストロメトルファン、デシプラミン、メベンダゾール、カンレノン、クロルプロチキセン、マプロチリン、ホモクロルシクリジン、ロペラミド、ニカルジピン、デクスフェンフルラミン、ニルバジピン、ドスレピン、ビペリデン、デナトニウム、エトミデート、トレミフェン、トモキセチン、クロルギリン、ゾテピン、β−エスシン、トリジヘキセチル、セフタジジム、メトキシ−６−ハルマラン、メレンゲストロール、アルベンダゾール、リマンタジン、クロルプロマジン、ペルゴリド、クロペラスチン、プレドニカルバート、ハロペリドール、クロトリマゾール、ニトロフラール、イオパン酸、ナフトピジル、メチマゾール、トリメプラジン、エトキシキン、クロコルトロン、ドキシサイクリン、メシル酸ピルリンドール、ドキサゾシン、デプトロピン、ノコダゾール、スコポラミン、オキシベンゾン、ハルシノニド、オキシブチニン、ミコナゾール、クロミプラミン、シプロヘプタジン、ドキセピン、ジクロニン、サルブタモール、フラボキサート、アモキサピン、フェノフィブラート、ピメチキセン、又はそれらの薬学的に許容される塩、代替の塩、及び混合物が含まれる。これらの薬剤のうちの１つ以上を吸入／経肺剤形で調剤することができるが、多くの場合にこれらの薬剤は、他の投与経路（即ち経口、非経口など）を介して、アンブロキソールと単に同時投与される。
【００２５】
アンブロキソールと同時投与できる他の薬剤としては、例えばエタンブトール、イソニアジド、エチオナミド、プロピオンアミド、ピラジナミド、リファンピシン、アミノサリチル酸、ベダキリン、リファブチン、リファペンチン、カプレオマイシン、サイクロセリン、及びこれらの混合物などの抗結核剤が挙げられる。エタンブトール、イソニアジド、エチオナミド、プロピオンアミド、ピラジナミド、リファンピシン、及びこれらの混合物の使用が好ましい。
【００２６】
用語「同時投与」又は「併用療法」は、同時に、又は本明細書で更に定義される若しくは当業者によって特定されることができる投薬若しくは投与スケジュール内で、本明細書の他の箇所に記載されているオートファジー介在性病状又は状態を治療するために少なくとも２つの有効量の活性化合物を使用する療法を記載するために使用される。その２つの化合物は、同一の組成物で投与されてもよい。用語「同時投与」は、好ましくは２つの活性化合物を患者に同時に投与することを含むが、個々の化合物の有効量が患者の体内に同時に存在しさえすれば、これらの化合物を患者に必ずしも同時に投与する必要はない。更に、特定の実施形態では、同時投与は２つの化合物が大きく異なる時点で投与されるが、これら２つの化合物の効果が同時に存在するという事実を指す。よって、用語「同時投与」は、アンブロキソールを少なくとも１つの追加の活性剤（別のオートファジーモジュレータを含む）と概ね同時に同時投与する場合、又はその他の生物活性剤の投与の１〜数分から約２４時間以上前若しくは後に同時投与する場合の投与を含む。追加の生物活性剤はいずれの生物活性剤であってもよいが、多くの場合、同位体標識アンブロキソール又はその１つの誘導体の活性を増強する役割を果たす追加のオートファジー介在性化合物である。
【００２７】
本発明は、本発明の化合物及びその誘導体の薬学的に許容可能な塩、即ち酸又は塩基付加塩を含む組成物を含む。本発明において有用な上述のベースとなる化合物の薬学的に許容可能な酸付加塩を調製するために使用できる酸は、非毒性酸付加塩、即ち薬学的に許容可能な陰イオンを含有する塩、例えば、特に塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、重酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、サッカラート、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩［即ち１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３ナフトエ酸塩）］を形成する酸である。
【００２８】
薬学的に許容可能な塩基付加塩はまた、本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩の形態を生成するためにも使用することができる。酸性である本発明の化合物の薬学的に許容可能な塩基塩を調製するための試薬として使用できる化学塩基は、その化合物と非毒性塩基塩を形成する化学塩基である。そのような非毒性塩基塩には特に、限定するものではないが、アルカリ金属陽イオン（例えばカリウム及びナトリウム）及びアルカリ土類金属陽イオン（例えばカルシウム及びマグネシウム）などの薬学的に許容可能な陽イオン、Ｎ−メチルグルカミン−（メグルミン）などのアンモニウム又は水溶性アミン付加塩、及び低級アルカノールアンモニウムに由来するもの、並びに薬学的に許容可能な有機アミンの他の塩基塩が含まれる。
【００２９】
上述のように、医薬組成物は、少なくとも１つの同位体標識アンブロキソール及び任意の生物活性剤（オートファジーモジュレータを含む）に加えて、薬学的に許容可能な賦形剤、添加剤又は不活性担体を含んでもよい。その薬学的に許容可能な賦形剤、添加剤又は不活性担体は、固体、半固体、及び液体から選ばれた形態であってもよい。その薬学的に許容可能な賦形剤又は添加剤は、デンプン、結晶セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルポリピロリドン、酢酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ショ糖、ゼラチン、ケイ酸、ポリエチレングリコール、水、アルコール、プロピレングリコール、植物油、トウモロコシ油、落花生油、オリーブ油、界面活性剤、潤滑剤、崩壊剤、防腐剤、香料、顔料、及び他の従来の添加剤から選択されてもよい。医薬組成物は、活性成分を薬学的に許容可能な賦形剤又は添加剤と混合することによって製剤されることができる。
【００３０】
医薬組成物は、滅菌等張水溶液、丸薬、ドロップ、ペースト、クリーム、スプレー（エアゾールを含む）、カプセル、錠剤、糖衣錠、顆粒、坐剤、液体、ローション、懸濁液、エマルジョン、軟膏、ゲルなどから選ばれた形態であってもよい。投与経路は、皮下、静脈内、腸管、非経口、経口、口腔内、経鼻、筋肉内、経皮、鼻腔内、気管内、肺内、腹腔内、及び局所投与から選ばれてもよい。医薬組成物は、送達される１つ以上の化合物、該当する場合には同時投与される１つ以上の化合物、並びにその医薬組成物を用いて治療される病状及び／又は状態に応じて、即時放出性、持続／制御放出性、又は即時放出性と持続／制御放出性の組み合わせにされてもよい。医薬組成物は、良好な薬務に合致したあらゆる種類の効果的な投与を促進するために、異なる複数の区画又は層で製剤されてもよい。特に患者の肺に主に局在する病状及び／又は状態の治療のために、経口及び吸入剤形が好ましい。
【００３１】
対象又は患者は、例えばヒト、飼育動物などの哺乳類、又は他の動物から選択されることができる。対象は、本明細書の他の箇所に記載されたオートファジーに関連した病状、状態又は症状のうちの１つ以上を有し得る。
【００３２】
本発明の化合物は、オートファジー介在性疾患及び／若しくは状態並びにその病状若しくは状態に関連した１つ以上の症状を治療するために、又はこれらが生じる可能性を低減するために、有効量で投与されることができる。当業者であれば、動物対象、年齢、性別、体重、患者の体内の病状又は状態の部位、過去の病歴、他の薬物などを含むがこれらに限定されない様々な可わり得る要素を考慮に入れることにより、活性成分の有効量を容易に決定することができる。
【００３３】
例えば、ヒト患者に関するオートファジー介在性病状、状態及び／又は症状の治療に有用な活性成分の用量は有効量であり、１日あたりわずか５０〜１００μｇ又は更に少量から少なくとも約５００ｍｇ以上まで（最大数グラム以上）の範囲とすることができ、薬物の送達及び治療される病状又は状態と合致した方法で投与されることができる。経口投与の場合、活性成分は通常は１日１〜４回以上投与される。経皮パッチ又は他の局所投与は、活性成分の吸収性及び患者の皮膚への送達に応じて、継続的に、又は１日１回以上、若しくは１日１回未満、薬物を投与することができる。当然のことながら、非経口投与が好ましい治療選択肢である特定の例においては、筋肉内投与又はゆっくりとしたＩＶ点滴を用いて活性成分を投与することができる。ヒト患者に投与される活性成分の量は、好ましくは約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇ、約１．２５〜約５．７ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【００３４】
本発明の化合物の用量は、オートファジー介在性病状、状態又は症状の発生の最初の兆候で投与されてもよい。例えば、その用量は、肺若しくは心臓の機能のために、並びに／又は炎症関連代謝障害又は結核の際に現れる病状若しくは状態、又はこれらに関連した病状若しくは状態（疼痛、高血圧、腎不全又は肺不全を含む）のうちのいずれか１つ以上を治療する、又はこれらが生じる可能性を低減するために投与されてもよい。活性成分の用量は、診断前の関連症状の最初の兆候で、ただし疾患若しくは障害を見越して、又は身体機能の低下又はオートファジー介在性障害若しくは状態に関連した他の症状又は二次的病状若しくは状態のうちのいずれか１つ以上を見越して、投与されてもよい。
【００３５】
本発明の好ましい態様では、同位体標識アンブロキソールは、多くの場合は経口投与によって患者又は対象に投与され、更に多くの場合には気管内投与を含む肺内投与によって患者又は対象の肺に投与される。肺内投与のための本発明の医薬組成物は、通常は吸入剤として使用される。その組成物は、乾燥粉末吸入剤、吸入懸濁液、吸入溶液、カプセル化吸入剤、及び本明細書において以下に記載されるような吸入剤の同様の公知の形態にされることができる。このような吸入剤の形態は、本発明の医薬組成物を、使用前に定量吸入器、乾燥粉末吸入器、アトマイザー容器、噴霧器などの適切な吸入器に充填することによって調製されることができる。上述の吸入剤の形態の中で粉末吸入剤が好ましいが、噴霧懸濁液及び定量吸入器も効果的に使用されることができる。
【００３６】
本発明の医薬組成物を粉末形態で使用する場合、粉末の平均粒径は特に限定されないが、肺の中に粒子が滞留することを考慮して、粒子は約０．０１〜２０μｍ、多くの場合に０．０５〜約５μｍ（マクロファージ及び肺上皮細胞の両方を標的とするために）、多くの場合に約０．０５〜約０．２５μｍ（肺上皮細胞を標的とするために）、多くの場合に約１〜３μｍ（肺マクロファージを標的とするために）、及び特に約１〜５μｍ、より多くの場合に約１〜２μｍ（ミクロン）であることが好ましい。本発明の粉末状医薬組成物の粒径分布は特に限定されないが、対象の肺への送達を最大化するために、約２５μｍ以上のサイズを有する粒子が、粒子の約５％以下、好ましくは１％以下を占めることが好ましい。
【００３７】
粉末形態の本発明の医薬組成物は、例えば乾燥微粉化法、噴霧乾燥法、及び当該技術分野において公知の標準的な調剤法を用いて製造されることができる。
【００３８】
限定でない例として、乾燥微粉化法によれば、粉末形態の医薬組成物は、化合物又は化合物と他の活性剤との混合物と、肺組織での即時放出を提供する賦形剤とを含有する水溶液（又は水性分散液）を乾燥させ、乾燥産物を微粒子化することによって調製されることができる。より具体的には、薬学的に許容可能な担体、添加剤又は賦形剤を水性媒体に溶解（又は分散）させた後、有効量の本発明の化合物を添加し、ホモジナイザーなどを用いて撹拌することによって溶解（又は分散）させて、水溶液（又は水性分散液）を得る。その水性媒体は、水のみ、又は水と低級アルコールとの混合物にし得る。使用可能な低級アルコールの例としては、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、及び同様の水混和性アルコールが挙げられる。エタノールが特に好ましい。得られた水溶液（又は水性分散液）をブロワー、凍結乾燥などによって乾燥させた後、得られた産物をジェットミル、ボールミル又は同様の装置を用いて粉砕又は微粒子化して微粒子にし、上述の平均粒径を有した粉末を得る。必要であれば、上述の添加剤を、上述のステップのいずれにおいても添加することができる。
【００３９】
噴霧乾燥法によれば、粉末形態の本発明の医薬組成物は、例えば、アンブロキソール及び／又は１つ以上のアンブロキソール誘導体と、任意で本明細書に記載の追加のオートファジーモジュレータ及び／又は１つ以上の抗結核剤などの１つ以上の追加の薬剤と、任意で微粒子化のための賦形剤、添加剤及び／又は担体とを含有する水溶液（又は水性分散液）を噴霧乾燥することによって、調製されることができる。その水溶液（又は水性分散液）は、上述の乾燥微粉化法の手順に従って調製されることができる。噴霧乾燥プロセスは、公知の方法を用いて実施されることができ、それにより上述の平均粒径を有する球形の粒子の形態の粉末状医薬組成物が得られる。
【００４０】
吸入懸濁液、吸入溶液、カプセル化吸入剤などもまた、乾燥微粉化法、噴霧乾燥法などによって製造された粉末の形態の医薬組成物を用いて、又は公知の調製方法に従って、肺を経て投与することができる担体、添加剤若しくは賦形剤、及びイソニアジド、尿素又はこれらの混合物を用いることによって、調製されることができる。
【００４１】
更に、本発明の医薬組成物を含む吸入剤は、好ましくはエアロゾルとして使用される。エアロゾルは、例えば本発明の医薬組成物及び噴射剤をエアロゾル容器に充填することによって調製されることができる。必要であれば、分散剤、溶媒などを添加してもよい。エアロゾルは、２相系、３相系、及びダイヤフラム系（二重容器）として調製されてもよい。エアロゾルは、粉末、懸濁液、溶液などのいずれの形態でも使用されることができる。
【００４２】
使用可能な噴射剤の例としては、液化ガス噴射剤、圧縮ガスなどが挙げられる。使用可能な液化ガス噴射剤としては、例えばフッ素化炭化水素（例えばＨＣＦＣ−２２、ＨＣＦＣ−１２３、ＨＦＣ−１３４ａ、ＨＦＣ−２２７などのＣＦＣ置換物）、液化石油、ジメチルエーテルなどが挙げられる。使用可能な圧縮ガスとしては、例えば可溶性ガス（例えば二酸化炭素、酸化窒素）、不溶性ガス（例えば窒素）などが挙げられる。
【００４３】
分散剤及び溶媒は、上述の添加剤から適切に選択されてもよい。エアロゾルは例えば、本発明の組成物を調製するステップと、その組成物及び噴射剤をエアロゾル容器に充填して密閉するステップとを含む公知の２ステップ法によって調製されることができる。
【００４４】
本発明によるエアロゾルのある好ましい実施形態として、以下のエアロゾルを挙げることができる。使用される化合物の例としては、単独の又は本発明の他の化合物若しくは他の抗マイコバクテリア剤と組み合わされた同位体標識化合物が挙げられる。噴射剤としては、ＨＦＣ−１３４ａ、ＨＦＣ−２２７及び同様のＣＦＣ置換物などのフッ素化炭化水素が好ましい。使用可能な溶媒の例としては、水、エタノール、２−プロパノールなどが挙げられる。水及びエタノールが特に好ましい。特に、約０：１〜１０：１の範囲内の水：エタノールの重量比を使用することができる。
【００４５】
本発明のエアロゾルは、最終的な組成物に含まれる本発明の化合物の重量に対して、約０．０１〜約１０４重量％（好ましくは約０．１〜１０３重量％）の量の賦形剤、約１０２〜１０７重量％（好ましくは約１０３〜１０６重量％）の量の噴射剤、約０〜１０６重量％（好ましくは約１０〜１０５重量％）の量の溶媒、及び０〜１０３重量％（好ましくは約０．０１〜１０２重量％）の量の分散剤を含有する。
【００４６】
本発明の医薬組成物は、本発明の治療方法での使用に関して、安全かつ効果的である。本発明の組成物の投薬量は、投与される活性物質の種類（例えば同位体標識アンブロキソールと、任意での追加のオートファジーモジュレータ並びに／又は任意でのエタンブトール、イソニアジド、エチオナミド、プロチオナミド、ピラジナミド、リファンピシン、これらの混合物及び任意の追加の抗結核剤などの抗結核剤）や、診断を受ける対象の特質（身長、体重など）に応じて変わることがあり、その組成物は、オートファジーによって仲介される肺疾患のうちのいずれか１つ以上を治療するのに有効な量で投与される。例えば、その組成物は好ましくは、活性成分（同位体標識アンブロキソール及び任意の薬剤）を、少なくとも約０．５〜１０ｍｇ、約１ｍｇ〜約１５ｍｇ、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ、少なくとも約２５ｍｇ、少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約６０ｍｇ、少なくとも約７５ｍｇ、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約１５０ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約２５０ｍｇ、少なくとも約３００ｍｇ、少なくとも約３５０ｍｇ、少なくとも約４００ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇ、少なくとも約７５０ｍｇ、少なくとも約１０００ｍｇの用量でヒト成人に与え、そして１用量以上を１日４回以上与えることができるようにして投与される。
【００４７】
粉末、溶液、懸濁液などの本発明の医薬組成物の形態は、投与される物質の種類に従って適切に選択され得る。
【００４８】
投与経路としては、吸入器を用いた口からの直接吸入により通常は気道内へ、特に肺組織に直接投与され、含有された活性物質は即時の効果をもたらす。更に、その組成物は、即時放出製剤として、制御放出製剤として、又は治療を直ぐに開始できかつ作用部位において活性剤の有効濃度を維持するためにある期間にわたって持続させることができるように即時放出製剤と制御放出製剤の組み合わせとして調剤される。
【００４９】
以下、本発明の好ましい実施形態を示す。
【００５０】
吸入用のアンブロキソール粒子
２つの主要な方策は、粒子サイズに基づく。
ａ）マクロファージの標的化：肺感染症の場合、アンブロキソールのマクロファージ送達が最適であり（例えばＴＢに関して）、１〜２ミクロンの最小サイズのアンブロキソール粒子が、食作用過程を最適化するので最も適当である。これらの１〜２ミクロンの粒子は、安定化コーティング、又はマクロファージの食作用若しくは動員を増強するためのコーティングで更にコーティングされ得る。
これらの１〜２ミクロンの粒子は、噴霧又はＭＤＩによってそのまま送達されることができ、吸入用の乾燥粉末の場合、噴霧乾燥によってロイシンなどの賦形剤の他の粒子に取り込まれてもよい。
ｂ）肺上皮細胞の標的化：肺上皮細胞を治療するためには、これらの細胞の主要な取り込み経路は、マクロファージの食作用でなくエンドサイトーシスであるため、更に小さなアンブロキソール粒子が必要となり得る。従って、０．０５〜０．２ミクロンのアンブロキソール粒子が最も適当であるが、これらは肺送達自体にはあまりにも小さすぎるため、噴霧される水性エアロゾル、又は噴霧乾燥されたＭＭＡＤの２〜５ミクロンの人工的に作り出された粒子に取り込まれる。
【実施例】
【００５１】
本発明の化合物の合成は、本出願の図２に示されている化学的スキームに従って進む。本質的には、所定構造の１−ヒドロキシル−４−アミノシクロヘキサン（図２）を、図２に示すように、同位体標識された２臭素化アミノ−ベンズアルデヒド化合物と反応させる。最終的な同位体標識アンブロキソールにおいて望まれる同位体置換に応じて、アルデヒド−アルデヒド部分の炭素及び水素置換基のうちの一方又は両方を同位体標識することができる。本質的には、同位体標識２臭素化アミノ−ベンズアルデヒド化合物を１−ヒドロキシル−４−アミノシクロヘキサンと縮合することによって、同位体標識イミン化合物を生成し、続いてこれをイミンの還元（任意で同位体標識された還元剤で）に供して、同位体標識アンブロキソール化合物を生成する。
【００５２】
用量応答試験
アンブロキソールの用量応答試験を実施した。生じたデータを添付の図３〜６に示す。簡潔に述べると、野生型及びＡＴＧ５ノックアウトからの骨髄由来マクロファージを、オートファジーの既知の誘導物質ｐｐ２４２及びＬＣ３を用いて最初に調べ、オートファジーのマーカーとしてのＣｅｌｌｏｍｉｃｓによって点を定量化し、オートファジーのｐｐ２４２誘発を１００％として使用して、アンブロキソールに対するオートファジーの用量応答を明らかにした。野生型細胞の用量応答を図３に示す。６．２５μＭの低濃度でさえ、オートファジーに対するプラスの効果を明らかに有していた（対照に対するｔ検定、ｐ＝０．０２５）。更に、０〜２００μＭのアンブロキソール濃度の範囲で、高いアンブロキソール濃度ほどオートファジーの強い誘発をもたらすことが明らかである。
【００５３】
本発明者は次に、上述と同一の試験をＡＴＧ５ノックアウト細胞で実施した。データを図４に示す。ここでもまた、６．２５μＭの低濃度のアンブロキソールでさえ、オートファジーの明らかな増加をもたらした（対照に対するｔ検定、ｐ＝０．０００８）。ここでもまた、明らかな用量応答が観察された。なお、アンブロキソールに対する応答は、ｐｐ２４２よりもはるかに高いレベルに達したことに留意されたい。これについてのある解釈は、アンブロキソールが誘発するオートファジーの増加の１つ以上の標的が、既知の誘導物質ｐｐ２４２とは異なるというものである。
【００５４】
本発明者は次に、上述したＴＦＥＢ核転位のアンブロキソールによる誘発を調べた。２回の別の実験結果を、それぞれ図５及び６に示す。これら両方のデータセットのシグモイドフィッティングは、アンブロキソールが誘発する最大オートファジーの５０％が、約５０μＭにおいて見られることを示した。ここでもまた、２５μＭにおいて有意な増加が観察された。オートファジーのＬＣ３マーカーとは異なり、アンブロキソールは常にｐｐ２４２より低い効果をもたらした。
【００５５】
実施した試験から、あらゆる場合において、アンブロキソールのレベルを上昇させると、オートファジーの応答が増大することは明らかである。
【００５６】
参考文献
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２．関隆, 松村理一郎, 公平宏. 1977年 A Clinico-Pharmacological Study on trans-4-(2-Amino-3, 5 dibrornobenzylamino) cyclohexanol hydrochloride. 臨床薬理 8:25-31.
３．Ishiguro N, Senda C, Kishimoto W, Sakai K, Funae Y, Igarashi T. 2000年 Identification of CYP3A4 as the predominant isoform responsible for the metabolism of ambroxol in human liver microsomes. Xenobiotica 30:71-80.
４．Anttila S, Hukkanen J, Hakkola J, Stjernvall T, Beaune P, Edwards RJ, Boobis AR, Pelkonen O, Raunio H. 1997年 Expression and localization of CYP3A4 and CYP3A5 in human lung. American journal of respiratory cell and molecular biology 16:242-249.
【図１（１）】
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【図１（２）】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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