(57)【要約】  ＣＯＨ２９（（Ｎ−（４−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５−フェニルチアゾール−２−イル）−３，４−ジヒドロキシベンズアミド））を投与することによって、対象におけるがんを治療する方法が、本明細書において特に提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんの治療を必要としている対象のがんを治療する方法であって、
有効量の、構造：
【化１】
2020505435.tif 000018
の化合物を投与することを含み、
前記有効量が、少なくとも投与日当たり約５０ｍｇである、
方法。
【請求項２】
前記有効量が、投与日当たり約５０ｍｇ〜投与日当たり約２４００ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物を２１日間にわたって毎日投与した後で７日間にわたって前記化合物を投与しないことを含む、一連の治療を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記一連の治療が、２８日ごとに繰り返される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記投与が、１日当たり１回である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記対象が、固形腫瘍がん対象である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記対象が、乳がん対象又は卵巣がん対象である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記対象が、難治性固形腫瘍がん対象である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記対象が、乳がん対象である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記乳がん対象が、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与が、前記対象におけるＤＮＡ修復を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記投与が、前記対象における塩基除去修復（ＢＥＲ）、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）又は二本鎖ＤＮＡ切断修復を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記投与が、前記対象におけるγ−Ｈ２ＡＸタンパク質の活性又は発現を増大させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記投与が、前記対象におけるＲａｄ５１タンパク質の活性又は発現を低下させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記投与が、前記対象におけるＢＲＣＡ１タンパク質の活性又は発現を低下させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記投与が、前記対象におけるＰＡＲＰ１タンパク質の活性又は発現を低下させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
薬学的に許容される賦形剤、及び構造：
【化２】
2020505435.tif 000019
の化合物を含む、医薬組成物であって、
前記化合物が、少なくとも約５０ｍｇの量で存在する、
医薬組成物。
【請求項１８】
前記有効量が、約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１７に記載の医薬組成物を２１日間にわたって毎日供給した後で、前記医薬組成物を７日間にわたって投与しないように構成された供給器を含む、キット。
【請求項２０】
前記対象が、血液がん対象である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象が、白血病がん対象である、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、それらの全体を参照により本明細書に組み込む、２０１７年２月６日に出願された米国仮特許出願第６２／４５５，４３０号及び２６、２０１７年５月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／５１１，７４７号の優先権を主張する。
【０００２】
ファイル０４８４４０−６４８００１ＷＯ．ＴＸＴ、２０１８年２月５日作成、１，０９７バイト、マシンフォーマットＩＢＭ−ＰＣ、ＭＳ−Ｗｉｎｄｏｗｓオペレーティングシステムに記載された配列表は、あらゆる目的のために、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【背景技術】
【０００３】
代謝拮抗薬ヒドロキシ尿素（ＨＵ）は、慢性骨髄性白血病及び頭頸部がん等を含む種々のヒトがんを治療するために使用されてきた（１）。ヒドロキシ尿素の主要な抗がん標的は、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）であり、リボヌクレオチドレダクターゼは、リボヌクレオチドを、対応するデオキシ形態に還元して、ＤＮＡの複製及び修復のためのｄＮＴＰを供給する（３、４）。ヒトＲＲは、ｈＲＲＭ１サブユニット及びｈＲＲＭ２サブユニットから構成される（３、４）。遺伝毒性刺激の後、代替的なＲＲ酵素は、ｈＲＲＭ１及びｐ５３Ｒ２（腫瘍抑制タンパク質ｐ５３によってトランス活性化されたｈＲＲＭ２のホモログ）から構成されるＤＮＡ修復のためのｄＮＴＰを供給するように誘導される（５）。細胞内において、ＨＵは、遊離基が仲介する触媒作用（３）をクエンチする酸化的転換（６）によって遊離基を生成させることにより、両方の種類のＲＲ（４）を阻害することが知られている。しかしながら、薬理学的には、ＨＵ療法には、インビボにおける短い半減期及び厄介な副作用、最も特定すると骨髄抑制、並びに胃腸及び皮膚に及ぼす効果という難点がある（７）。
【０００４】
ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ−１（ＰＡＲＰ１）及びＰＡＲＰ２は両方とも、腫瘍の進行に関与するＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ（ＡＲＴ）である。ＰＡＲＰ１等のＰＡＲＰ活性を有するＡＲＴメンバーは、高度に保存された活性部位配列を有する、触媒作用のある保存ドメインを含有する（１２〜１４）。一本鎖ＤＮＡ切断の後、ＰＡＲＰ１は、β−ＮＡＤ＋基質からＡＤＰ−リボースポリマーを合成し、これらをアクセプタータンパク質（それ自体又は他のタンパク質）のグルタメート残基、リシン残基又はアスパルテート残基に移送するが、これらは、後でポリ（ＡＤＰ−リボース）グリコヒロドラーゼ（ＰＡＲＧ）によって分解される。一本鎖ＤＮＡ切断修復（ＳＳＢＲ）又は塩基除去修復（ＢＥＲ）の最中、ＰＡＲＰ１及びＰＡＲＰ２は、Ｘ線修復補完タンパク質−１（ＸＲＣＣ１）と相互作用して、ＳＳＢＲ／ＢＥＲ  因子、ＤＮＡ  ポリメラーゼβ又はＤＮＡリガーゼＩＩＩをＤＮＡ損傷部位に補充する（１２〜１４）。ＰＡＲＰ１がない場合、ＤＮＡ複製中に一本鎖切断が存在し続けることにより、停滞した複製フォークが生じるが、この複製フォークの分解には、ＢＲＣＡ１又はＢＲＣＡ２が仲介する相同修復（ＨＲ）が必要になる（１５、１６）。ＢＲＣＡ１とＢＲＣＡ２は、家族性乳がんの発症に関連付けられた腫瘍抑制遺伝子である（１１）。したがって、ＢＲＣＡ１の非存在下においては、二本鎖切断が蓄積して、アポトーシスによる細胞死が起きる。ＢＲＣＡ１／２欠損腫瘍は、ＰＡＲＰ１阻害剤に感受性が高いものであり得るが、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する獲得耐性という難点を有し得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
よって、当技術分野においては、現在の療法に伴う副作用及び／又は獲得耐性を回避してＢＲＣＡ１／２欠損腫瘍を治療する必要性がある。したがって、当技術分野における上記及び他の課題に対する解決法が、本明細書において提供される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様において、それを必要としている対象のがんを治療する方法が提供される。本方法は、有効量の、構造：
【０００７】
【化１】
2020505435.tif 000003
を有する化合物を投与することを含み、
有効量が、少なくとも投与日当たり約５０ｍｇである。
【０００８】
別の態様において、薬学的に許容される賦形剤及び構造
【０００９】
【化２】
2020505435.tif 000004
を有する化合物を含む、医薬組成物であって、本化合物が、約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇの量で存在する、
医薬組成物を提供する。
【００１０】
別の態様において、本明細書において開示された医薬組成物を２１日間にわたって毎日供給した後で７日間にわたって医薬組成物を投与しないように構成された供給器を含む、キットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】ＢＲＣＡ１ステータスは、ＣＯＨ２９細胞毒性及び抗腫瘍活性に影響する。図１Ａ：ＣＯＨ２９と一緒に７２時間インキュベートして溶解させたｗｔ（野生型）ＢＲＣＡ１（ＯＶ９０）発現又は突然変異ＢＲＣＡ１（ＵＷＢ１．２８９）発現卵巣がん細胞（細胞生存可能性をＭＴＴアッセイによって査定した）に関する用量応答曲線であり、図示されている点は、エラーバーを示した状態で、３回の独立した実験の平均を表しており；雌のＮＳＧマウスの乳房脂肪体に含まれるＨＣＣ１９３７（図１Ｂ）細胞及びＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１（図１Ｃ）細胞によって確立された腫瘍外植体の成長（マウスは、表示のように、ＣＯＨ２９又はビヒクルによって処理されており、結果は、１グループ当たり４匹のマウスから取得した腫瘍測定値の平均±標準誤差である）。
【図１Ｂ】ＢＲＣＡ１ステータスは、ＣＯＨ２９細胞毒性及び抗腫瘍活性に影響する。図１Ａ：ＣＯＨ２９と一緒に７２時間インキュベートして溶解させたｗｔ（野生型）ＢＲＣＡ１（ＯＶ９０）発現又は突然変異ＢＲＣＡ１（ＵＷＢ１．２８９）発現卵巣がん細胞（細胞生存可能性をＭＴＴアッセイによって査定した）に関する用量応答曲線であり、図示されている点は、エラーバーを示した状態で、３回の独立した実験の平均を表しており；雌のＮＳＧマウスの乳房脂肪体に含まれるＨＣＣ１９３７（図１Ｂ）細胞及びＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１（図１Ｃ）細胞によって確立された腫瘍外植体の成長（マウスは、表示のように、ＣＯＨ２９又はビヒクルによって処理されており、結果は、１グループ当たり４匹のマウスから取得した腫瘍測定値の平均±標準誤差である）。
【図１Ｃ】ＢＲＣＡ１ステータスは、ＣＯＨ２９細胞毒性及び抗腫瘍活性に影響する。図１Ａ：ＣＯＨ２９と一緒に７２時間インキュベートして溶解させたｗｔ（野生型）ＢＲＣＡ１（ＯＶ９０）発現又は突然変異ＢＲＣＡ１（ＵＷＢ１．２８９）発現卵巣がん細胞（細胞生存可能性をＭＴＴアッセイによって査定した）に関する用量応答曲線であり、図示されている点は、エラーバーを示した状態で、３回の独立した実験の平均を表しており；雌のＮＳＧマウスの乳房脂肪体に含まれるＨＣＣ１９３７（図１Ｂ）細胞及びＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１（図１Ｃ）細胞によって確立された腫瘍外植体の成長（マウスは、表示のように、ＣＯＨ２９又はビヒクルによって処理されており、結果は、１グループ当たり４匹のマウスから取得した腫瘍測定値の平均±標準誤差である）。
【図２Ａ】患者コホートにおけるＲＲＭ２発現とＰＡＲＰ１との相関の図である。乳がん（図２Ａ）及び卵巣がん（図２Ｂ）における臨床成果の公開データベースから抽出された、ＲＲＭ２及びＰＡＲＰ１の発現の回帰プロット。
【図２Ｂ】患者コホートにおけるＲＲＭ２発現とＰＡＲＰ１との相関の図である。乳がん（図２Ａ）及び卵巣がん（図２Ｂ）における臨床成果の公開データベースから抽出された、ＲＲＭ２及びＰＡＲＰ１の発現の回帰プロット。
【図３Ａ】ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１欠損ヒト乳がん細胞におけるＰＡＲＰ１を阻害する。（図３Ａ）：突然変異又はｗｔ  ＢＲＣＡ１（いずれの場合においても、ｗｔ＝＋ＢＲＣＡ１）を発現した乳がん細胞株（ＨＣＣ１９３７）及び卵巣がん細胞株（ＵＷＢ１．２８９）の同質遺伝子型の組における、ＰＡＲＰ１活性に及ぼされるＣＯＨ２９の効果を、Ｍａｔｅｒｉａｌｓ＆Ｍｅｔｈｏｄｓに記載の手順を使用して２反復で査定した。
【図３Ｂ】ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１欠損ヒト乳がん細胞におけるＰＡＲＰ１を阻害する。図３Ｂ：同質遺伝子型ＨＣＣ１９３７／ＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞株における、ＰＡＲＰ１  タンパク質発現に及ぼされるＣＯＨ２９の効果を、一次抗体として抗ヒトＰＡＲＰ１抗体を使用して、ウエスタンブロット分析によって査定した。ローディングコントロールは、β−アクチンである。
【図４Ａ】ＣＯＨ２９及びシスプラチンによって二重に処理した後の、細胞生存能力に及ぼされるＢＲＣＡ１の効果。図４Ｂ：５μＭ  ＣＯＨ２９単独、４μＭシスプラチン単独又は同じ濃度のこれらの２種の薬物の組合せの存在下において、提示された細胞における２４時間生存可能性のヒストグラム（３回の独立した実験の平均が示されている）。
【図４Ｂ】ＣＯＨ２９及びシスプラチンによって二重に処理した後の、細胞生存能力に及ぼされるＢＲＣＡ１の効果。図４Ａ：ある固定濃度のＣＯＨ２９（１２．５μＭ）＋シスプラチン（１２．５、２５、５０及び１００μＭ）によって２４時間処理されており、ＭＴＴアッセイ（図示されている点は、エラーバーを示した状態で、３回の独立した実験の平均を表している）によって査定された、ＨＣＣ１９３７及びＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞の生存可能性。
【図５Ａ】ゼブラフィッシュ遺伝毒性アッセイにおけるＨＵに比較したＣＯＨ２９の効果。
【図５Ｂ】ゼブラフィッシュ遺伝毒性アッセイにおけるＨＵに比較したＣＯＨ２９の効果。図５Ｂ：ゼブラフィッシュ（０、５、１０、２０、５０ｍＭ、ｎ＝５０、３反復で実施）における、異なる濃度が相異なる一系列のＨＵに関する棒グラフ。
【図５Ｃ】ゼブラフィッシュ遺伝毒性アッセイにおけるＨＵに比較したＣＯＨ２９の効果。図５Ｃ：提示のように、ＣＯＨ２９に曝露された４ｄｐｆにおける野生型ゼブラフィッシュ胚。
【図５Ｄ】ゼブラフィッシュ遺伝毒性アッセイにおけるＨＵに比較したＣＯＨ２９の効果。図５Ａ：提示のように（眼及び心臓の発生の形態変化が矢印によって指し示されている）、ＨＵに曝露された４ｄｐｆ（受精後日数）における野生型ゼブラフィッシュ胚。図５Ｄ：ゼブラフィッシュ（０、１０、２０、５０、１００μＭ、ｎ＝４６、３反復で実施）における、異なる濃度が相異なる一系列のＣＯＨ２９の効果に関する棒グラフ。
【図６】ＣＯＨ２９処理が、ＤＮＡ損傷チェックポイントを活性化させている．  ウエスタンブロットによって査定された、ｐ５３を発現したヒト乳がん細胞（ＭＣＦ−７）又はｐ５３を欠損したヒト乳がん細胞（ＭＣＦ−７  ｐ５３−／−）、及び、トリプルネガティブ乳がん細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）における、ＤＮＡ損傷チェックポイントタンパク質に及ぼされるＣＯＨ２９処理の効果。
【図７Ａ】ＣＯＨ２９は、ＤＤＲを活性化させ、ＢＲＣＡ１野生型ヒト肺がん細胞におけるＲＡＤ５１発現を抑制する。図７Ａ：ＤＤＲ関連タンパク質に及ぼされるＣＯＨ２９の効果を、ウエスタンブロット分析によって細胞質及び核において査定した。ここで、細胞は、提示の用量において４８時間ＣＯＨ２９によって処理されており、細胞溶解物は、提示の抗体を使用して、イムノブロッティングに供した（ＦＯＸＯ３活性は、下流標的ｐ２７Ｋｉｐ１のレベルによって提示されており、β−チューブリン及びラミンＡ／Ｃは、Ｃｙｔ．及びＮｕｃ．抽出物の分画及びローディングコントロールを表す）。
【図７Ｂ】ＣＯＨ２９は、ＤＤＲを活性化させ、ＢＲＣＡ１野生型ヒト肺がん細胞におけるＲＡＤ５１発現を抑制する。図７Ｂ〜図７Ｄ：ＤＤＲ関連タンパク質、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＴＭ（図７Ｂ）、γ−Ｈ２ＡＸ（図７Ｃ）及びｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ５３（図７Ｄ）の共局在化に及ぼされるＣＯＨ２９の効果の図であり、核におけるｆｏｘｏ３は、間接免疫蛍光法  アッセイによって査定した。各タンパク質に関しては、３００個の染色済み細胞の平均を分析したが、ヒストグラムは、陽性核（５個以上の病巣）を伴う細胞の百分率（％）を示しており、ここで、生物学的反復の回数は、３であり、エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を表しており、ｐ値（対応のあるｔ検定）は、提示のとおりである）。
【図７Ｃ】ＣＯＨ２９は、ＤＤＲを活性化させ、ＢＲＣＡ１野生型ヒト肺がん細胞におけるＲＡＤ５１発現を抑制する。図７Ｂ〜図７Ｄ：ＤＤＲ関連タンパク質、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＴＭ（図７Ｂ）、γ−Ｈ２ＡＸ（図７Ｃ）及びｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ５３（図７Ｄ）の共局在化に及ぼされるＣＯＨ２９の効果の図であり、核におけるｆｏｘｏ３は、間接免疫蛍光法  アッセイによって査定した。各タンパク質に関しては、３００個の染色済み細胞の平均を分析したが、ヒストグラムは、陽性核（５個以上の病巣）を伴う細胞の百分率（％）を示しており、ここで、生物学的反復の回数は、３であり、エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を表しており、ｐ値（対応のあるｔ検定）は、提示のとおりである）。
【図７Ｄ】ＣＯＨ２９は、ＤＤＲを活性化させ、ＢＲＣＡ１野生型ヒト肺がん細胞におけるＲＡＤ５１発現を抑制する。図７Ｂ〜図７Ｄ：ＤＤＲ関連タンパク質、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＴＭ（図７Ｂ）、γ−Ｈ２ＡＸ（図７Ｃ）及びｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ５３（図７Ｄ）の共局在化に及ぼされるＣＯＨ２９の効果の図であり、核におけるｆｏｘｏ３は、間接免疫蛍光法  アッセイによって査定した。各タンパク質に関しては、３００個の染色済み細胞の平均を分析したが、ヒストグラムは、陽性核（５個以上の病巣）を伴う細胞の百分率（％）を示しており、ここで、生物学的反復の回数は、３であり、エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を表しており、ｐ値（対応のあるｔ検定）は、提示のとおりである）。
【図８Ａ】ＮＨＥＪ  ＤＮＡ修復に及ぼされるＣＯＨ２９の効果。細胞を薬物に２４時間曝露した後におけるＥＪ２（図８Ａ）（代替的なＮＨＥＪ経路）又はＥＪ５（図８Ｂ）（ＮＨＥＪ  経路）細胞のＦＡＣＳ分析によって査定された、示された用量における、ＣＯＨ２９単独の活性又はＣＯＨ２９とシスプラチンとの組合せの活性。
【図８Ｂ】ＮＨＥＪ  ＤＮＡ修復に及ぼされるＣＯＨ２９の効果。細胞を薬物に２４時間曝露した後におけるＥＪ２（図８Ａ）（代替的なＮＨＥＪ経路）又はＥＪ５（図８Ｂ）（ＮＨＥＪ  経路）細胞のＦＡＣＳ分析によって査定された、示された用量における、ＣＯＨ２９単独の活性又はＣＯＨ２９とシスプラチンとの組合せの活性。
【図９Ａ】ＣＯＨ２９は、ヒト肺がん細胞におけるＲＡＤ５１を抑制している。図９Ａ：ＲＡＤ５１タンパク質に及ぼされるＣＯＨ２９の効果を、一次抗体として抗ヒトＲＡＤ５１抗体を使用する間接免疫蛍光法アッセイによって査定した。
【図９Ｂ】ＣＯＨ２９は、ヒト肺がん細胞におけるＲＡＤ５１を抑制している。図９Ｂ：ＲＡＤ５１タンパク質に及ぼされるＣＯＨ２９の効果を、一次抗体として抗ヒトＲＡＤ５１抗体を使用するウエスタンブロット分析（ローディングコントロールは、β−アクチンだった）によって査定したが、この分析に関しては、Ａ５４９肺がん細胞を、提示の用量において２４時間ＣＯＨ２９によって処理し、ＣＯＨ−２９処理後のγ−Ｈ２ＡＸの発現パターンも、図９Ａ及び図９Ｂにおいて同様に分析した。
【図１０】リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）のＭ２サブユニットの表面にあるポケット部に結合するＣＯＨ２９の能力を、図示する図である。
【図１１Ａ】７２時間の毒性アッセイのときに、ゲムシタビン（ＫＢ−Ｇｅｍ）耐性細胞株（図１１Ａ）及びヒドロキシ尿素（ＫＢＨＵＲ）耐性細胞株（図１１Ｂ）における、ＣＯＨ２９の活性を、図示する図である。ヒドロキシ尿素（濃度２〜５０ｍｍｏｌ／Ｌ）、ゲムシタビン（濃度２０〜５００μｍｏｌ／Ｌ）及びＣＯＨ２９（濃度２〜２５０μｍｏｌ／Ｌ）を、ＣＯＨ２９に対するヒドロキシ尿素耐性細胞又はゲムシタビン耐性細胞の７２時間生存可能性の比較に基づいて、ＫＢＨＵＲ及びゲムシタビンのそれぞれに関するリアルタイム成長曲線のために使用した。
【図１１Ｂ】７２時間の毒性アッセイのときに、ゲムシタビン（ＫＢ−Ｇｅｍ）耐性細胞株（図１１Ａ）及びヒドロキシ尿素（ＫＢＨＵＲ）耐性細胞株（図１１Ｂ）における、ＣＯＨ２９の活性を、図示する図である。ヒドロキシ尿素（濃度２〜５０ｍｍｏｌ／Ｌ）、ゲムシタビン（濃度２０〜５００μｍｏｌ／Ｌ）及びＣＯＨ２９（濃度２〜２５０μｍｏｌ／Ｌ）を、ＣＯＨ２９に対するヒドロキシ尿素耐性細胞又はゲムシタビン耐性細胞の７２時間生存可能性の比較に基づいて、ＫＢＨＵＲ及びゲムシタビンのそれぞれに関するリアルタイム成長曲線のために使用した。
【図１２Ａ】マウス異種移植片におけるＣＯＨ２９の活性を、図示する図である。がん細胞を植え込み、腫瘍が測定可能になるまで皮下部位で成長するままにした。経口用ＣＯＨ２９を５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇで１日２回投薬することによって１２日間処理された白血病性（ＭＯＬＴ−４）マウス（図１２Ａ）、及び、２００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ又は４００ｍｇ／ｋｇの経口用ＣＯＨ２９によって７日間処理された卵巣がんを有するマウス（ＴＯＶ１１２Ｄ）（図１２Ｂ）（１グループ当たり４匹の動物に関する平均±ＳＤが示されている）に関する、皮下異種移植片成長曲線。
【図１２Ｂ】マウス異種移植片におけるＣＯＨ２９の活性を、図示する図である。がん細胞を植え込み、腫瘍が測定可能になるまで皮下部位で成長するままにした。経口用ＣＯＨ２９を５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇで１日２回投薬することによって１２日間処理された白血病性（ＭＯＬＴ−４）マウス（図１２Ａ）、及び、２００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ又は４００ｍｇ／ｋｇの経口用ＣＯＨ２９によって７日間処理された卵巣がんを有するマウス（ＴＯＶ１１２Ｄ）（図１２Ｂ）（１グループ当たり４匹の動物に関する平均±ＳＤが示されている）に関する、皮下異種移植片成長曲線。
【図１２Ｃ】マウス異種移植片におけるＣＯＨ２９の活性を、図示する図である。がん細胞を植え込み、腫瘍が測定可能になるまで皮下部位で成長するままにした。図１２Ｃは、ビヒクル（ｓｏｌｕｔｏｌ−１５）又は１００ｍｇ／ｋｇの経口用ＣＯＨ２９によって１２日間処理されたマウスから得たＭＯＬＴ−４腫瘍異種移植片におけるＲＮＲの活性を、図示する図である。
【図１２Ｄ】マウス異種移植片におけるＣＯＨ２９の活性を、図示する図である。がん細胞を植え込み、腫瘍が測定可能になるまで皮下部位で成長するままにした。図１２Ｄは、ＭＯＬＴ−４腫瘍異種移植片から得た、腫瘍内ｄＴＮＰプールに及ぼされる経口用ＣＯＨ２９の効果を、図示する図である。
【図１３Ａ】インビトロ（図１３Ａ）及びマウス乳房脂肪体の同所性腫瘍異種移植片（図１３Ｂ）における、ＨＣＣ１９３７  ＢＲＣＡ１欠損及びＨＣＣ１９３７  ＢＲＣＡ１野生型乳がん細胞におけるＣＯＨ２９の効果を、図示する図である。
【図１３Ｂ】インビトロ（図１３Ａ）及びマウス乳房脂肪体の同所性腫瘍異種移植片（図１３Ｂ）における、ＨＣＣ１９３７  ＢＲＣＡ１欠損及びＨＣＣ１９３７  ＢＲＣＡ１野生型乳がん細胞におけるＣＯＨ２９の効果を、図示する図である。
【図１４】ＣＯＨ２９の臨床プロトコルに関する実験設計スキームを図示する、図である。ＣＯＨ２９は、用量レベルに応じて、２１日間にわたって１日１回又は１日２回経口投与される。ＰＫサンプリングの時間経過は、サイクル１の最初の投薬前に開始し、その後、第１のＣＯＨ２９の投薬から１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、６時間後、８時間後、２４時間後（すなわち、２日目における朝の投薬の前）及び１６８時間後（すなわち、８日目における朝の投薬の前）に開始した。血液サンプリングは、研究対象薬物の投与前、及び必要に応じて、後続サイクルの１日目の投薬前に実施したが、研究の終了時に、ＰＢＭＣ  ＰＤ研究のために実施されている。
【図１５】ＣＯＨ２９（用量規定毒性（「ＤＬＴ」）に基づく）に関する加速漸増第Ｉ相設計（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｔｉｔｒａｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｄｅｓｉｇｎ）を、図示する図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
規定
本明細書において、「患者」、「対象」「それを必要としている患者」及び「それを必要としている対象」は、相互変換可能に使用されており、本明細書において上述したように、ＣＯＨ２９の投与又は他の抗がん剤と組み合わせたＣＯＨ２９の投与によって治療することができる疾患又は状態に罹っている又は罹りやすい生物を指す。いくつかの実施形態において、疾患又は状態は、がんである。対象の非限定的な例には、ヒト、他の哺乳類、ウシ、ラット、マウス、イヌ、サル、ヤギ、ヒツジ、乳牛、シカ及び哺乳類ではない他の動物が挙げられる。いくつかの実施形態において、患者は、ヒトである。
【００１３】
本明細書において使用されている「がん対象」は、本明細書において記述されたがんを有する対象を指す。がん対象は、本明細書において記述されたがんのうちの少なくとも１つを有し得る。したがって、例えば、がん対象は、「乳がん対象」（例えば、乳がんを有する対象）を指してもよいし、又は「卵巣がん対象」（例えば、卵巣がんを有する対象）を指してもよい。がん対象は、特定の遺伝型又は表現型の特徴（例えば、欠損遺伝子生成物又は特定の抗がん剤に対する耐性）を示すがんを有し得る。したがって、がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象であってよく、ここで、ＢＲＣＡ１欠損対象が、ＢＲＣＡ１欠損遺伝子又はＢＲＣＡ１欠損タンパク質（例えば、「「ＢＲＣＡ１欠損」）を含むがんを有する対象である。いくつかの実施形態において、「ＢＲＣＡ１欠損対象」は、ＢＲＣＡ１遺伝子が発現しないこと（例えば、対照又は健康な対象に比べて減少した発現）、対象において機能的ＢＲＣＡ１が存在しないこと（例えば、対照又は健康な対象に比べて減少した量）、又は、対象において少なくとも部分的にがんを直接若しくは間接的に引き起こすＢＲＣＡ１の低減された発現を指す。いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ１欠損対象は、ＢＲＣＡ１遺伝子の発現がないこと、対象において機能的ＢＲＣＡ１が存在しないことを示す。がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象」であってよく、ここで、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象は、当技術分野において公知の少なくともひとつのＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性があるがんを有する対象である。がん対象は、「ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象」であってよく、ここで、このような対象は、当技術分野において公知の少なくともひとつのＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性があるがんを有する。がん対象は、ひとつより多い遺伝型又は表現型の特徴を示すがんを有し得る（例えば、乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損及び少なくともひとつのＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性を有するがんを有し得る）。
【００１４】
「ＣＯＨ２９」は、式（Ｎ−（４−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５−フェニルチアゾール−２−イル）−３，４−ジヒドロキシベンズアミド）
【００１５】
【化３】
2020505435.tif 000005
を有する化合物を指す。
【００１６】
ＣＯＨ２９及びＣＯＨ２９の合成は、それらの全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第７，９５６，０７６号、第８，３７２，９８３号及び国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ１３／２４４９０号において記述されている。
【００１７】
ＣＯＨ２９は、例えば乳がん対象、卵巣がん対象、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象を含む、本明細書において記述されたがん対象に投与することができる。投与は、本明細書に記載の治療有効量におけるものであってよい。
【００１８】
「ＢＲＣＡ１」は、一般的な通常の意味に従って使用されており、同じ又は類似した名称のタンパク質及びそのタンパク質の機能的フラグメント及びホモログを指す。この「ＢＲＣＡ１」という用語は、ＢＲＣＡ１の組換え形態又は天然形態（例えば、乳がん１、早期発症；ＧＩ  Ｎｏ：１６９８３９９）又はＢＲＣＡ１活性を維持している（例えば、ＢＲＣＡ１に比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％の活性に収まっている）ＢＲＣＡ１のバリアントを含む。
【００１９】
「γ−Ｈ２ＡＸ」は、一般的な通常の意味に従って使用されており、同じ又は類似した名称のタンパク質及びそのタンパク質の機能的フラグメント及びホモログを指す。この「γ−Ｈ２ＡＸ」という用語は、γ−Ｈ２ＡＸの任意の組換え形態又は天然形態（例えば、γ  ヒストンＨ２ＡＸ；ＧＩ  Ｎｏ：４５０４２５３）又はγ−Ｈ２ＡＸ活性を維持している（例えば、γ−Ｈ２ＡＸに比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％の活性に収まっている）γ−Ｈ２ＡＸのバリアントを含む。
【００２０】
「Ｒａｄ５１」は、一般的な通常の意味に従って使用されており、同じ又は類似した名称のタンパク質及びそのタンパク質の機能的フラグメント及びホモログを指す。この「Ｒａｄ５１」という用語は、Ｒａｄ５１の任意の組換え形態又は天然形態（例えば、ＧＩ  Ｎｏ：４９１６８６０２）又はＲａｄ５１活性を維持している（例えば、Ｒａｄ５１に比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％の活性に収まっている）Ｒａｄ５１のバリアントを含む。
【００２１】
「ＰＡＲＰ１」は、一般的な通常の意味に従って使用されており、同じ又は類似した名称のタンパク質及びそのタンパク質の機能的フラグメント及びホモログを指す。この「ＰＡＲＰ１」という用語は、ＰＡＲＰ１の任意の組換え形態又は天然形態（例えば、ポリ［ＡＤＰ−リボース］ポリメラーゼ１；ＧＩ  Ｎｏ：１５６５２３９６８））又はＰＡＲＰ１活性を維持している（例えば、ＰＡＲＰ１に比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％の活性に収まっている）ＰＡＲＰ１のバリアントを含む。「ＰＡＲＰ１阻害剤」は、ＰＡＲＰ１（ＮＡＤ＋  ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ１）の活性を阻害する組成物（例えば、化合物、ペプチド、タンパク質、核酸又は抗体）である。
【００２２】
「ＰＡＲＰ１阻害剤」は、ＰＡＲＰ１の活性又は発現を阻害することによってがんを治療するときに効果的な、組成物（例えば、化合物、ポリペプチド、アミノ酸、ポリヌクレオチド、核酸又は抗体）である。ＰＡＲＰ１阻害剤の非限定的な例には、オラパリブ、ベリパリブ、イニパリブ及びニラパリブが挙げられる。
【００２３】
「ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤」は、ＤＮＡを損傷させることによってがんを治療するときに有効な組成物（例えば、化合物、ポリペプチド、アミノ酸、ポリヌクレオチド、核酸又は抗体）である。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、化学療法用物質であってよい。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ損傷作用のある作用物質は、照射（例えば、γ線照射）を含む。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤の相互作用は、直接的であってもよいし（例えば、ＤＮＡ自体と結合又は相互作用すること）、又は間接的であってもよい（例えば、ＤＮＡと相互作用する他の分子と結合又は相互作用すること）。本明細書において、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤には例えば、アルキル化剤（例えば、エチレンイミン、メチルメラミン、ニトロソ尿素、ニトロゲンマスタード、ブスルファン、シクロホスファミド及びプロカルバジン）、代謝拮抗物質、アントラサイクリン、白金主体型作用物質、タキサン、キナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）、トポイソメラーゼ阻害剤及びヌクレオチドアナログが挙げられる。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、ＤＮＡ塩基対の間にインターカレートし、又はＤＮＡにある副溝若しくは主溝の中に結合する、組成物を含む。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、トポイソメラーゼＩ剤、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、トポイソメラーゼＩＩ剤、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、アドリアマイシン（例えば、ドキソルビシン）、エトポシド、一本鎖切断剤（例えば、ＢＣＮＵ（カルムスチン）、ＣＣＮＵ（ロムスチン））、ＤＴＩＣ（ダカルバジン）、シトキサン（シクロホスファミド）、イホスファミド、ブレオマイシン及びミトマイシンＣである。
【００２４】
「化学療法用物質」又は「化学療法剤」は、純粋な通常の意味に従って使用されており、抗腫瘍性特性又は細胞の成長若しくは増殖を阻害する能力を有する化学組成物又は化合物を指す。
【００２５】
抗がん薬シスプラチンは、例えば卵巣がん、睾丸がん、生殖細胞腫瘍、小細胞肺がん、リンパ球種、頭頸部がん及び膀胱がんが挙げられる、様々なヒトがんを治療するために使用されてきた。本明細書において「白金主体型化合物」又は「白金含有作用物質」は、有機及び／又は無機官能基によって取り囲まれた中心にある白金原子を含有する重金属錯体を含む、化合物を指す。白金主体型薬物も、白金主体型化合物に含まれる。白金主体型化合物の非限定的な例には、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、トリプラチン、テトラニトレート、薬学的に許容されるこれらの塩、これらの立体異性体、これらの誘導体、これらのアナログ及びこれらの組合せが挙げられる。「シスプラチン」という用語は、それらの全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第４，１７７，２６３号、第４，５８４，３１６号、第５，６４８，３６２号及び第５，３９９，６９４号において記述されたもの等の誘導体及びアナログを含む。
【００２６】
シスプラチンの抗がん活性は、求核性基を有するシスプラチンクロリドイオンを伴う交換反応を必要とする、標的細胞におけるＤＮＡの架橋に主に起因する。シスプラチンは、ｄ（ＧｐＧ）又はｄ（ＡｐＧ）配列を有する鎖内付加体の形成によって、ＤＮＡ中に二座配位による傷害を生じさせる。シスプラチンは、ＤＮＡ複製に干渉し得る鎖間架橋を生成することもできる。これらの傷害は、ＤＮＡ損傷チェックポイントを活性化させて、細胞周期の進行を停止させる。患者における二次腫瘍の形成は、シスプラチン療法に伴う主要な課題のうちの１つである。シスプラチンに関する他の副作用は、腎毒性、神経毒性、嘔気、中毒性難聴、骨髄毒性及び電解質平衡障害を含み得る。シスプラチン耐性は、がん患者においても見受けられる。
【００２７】
「治療する」又は「治療」という用語は、外傷、疾患、病理又は状態の治療又は緩和の成功に関する任意の徴候を指しており、軽減；寛解；症状の減弱、又は、外傷、病理若しくは状態を患者にとってより耐えられるものにすること；変性又は劣化の速度の減速；変性の最終地点の衰弱作用を減じること；患者の物理的又は精神的なウェルビーイングの改善等、任意の目標パラメータ又は主観的パラメータも含める。症状の治療又は緩和は、診察、神経精神病学的検査及び／又は精神医学的評価の結果を含む、目標パラメータ又はパラメータに基づくことができる。「治療する」という用語及びその活用形は、外傷、病理、状態又は疾患の予防を含む。
【００２８】
本明細書において使用されているとき、「がん」という用語は、白血病、癌腫及び肉腫を含む、哺乳類において見受けられるすべての種類のがん、新生物、悪性又は良性腫瘍を指す。例示的ながんには、乳がん、卵巣がん、結腸がん、肝臓がん、腎臓がん及び膵臓がんが挙げられる。さらなる例には、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（「ＡＭＬ」）又は慢性骨髄性白血病（「ＣＭＬ」））、脳がん、肺がん、非小細胞肺がん、メラノーマ、肉腫及び前立腺がん、子宮頸がん、胃がん、頭頸部がん、子宮がん、中皮腫、転移性骨がん、髄芽腫、ホジキン病、非ホジキン性リンパ球種、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、原発性血小板血症、原発性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、悪性膵インスリゾーマ、悪性カルチノイド、尿中膀胱がん、前癌性皮膚傷害、睾丸がん、リンパ球種、甲状腺がん、神経芽細胞腫、食道がん、尿生殖路がん、悪性高カルシウム血症、子宮内膜がん、副腎皮質がん、膵臓内分泌腺及び外分泌腺の新生物が挙げられる。
【００２９】
「白血病」という用語は、造血器官の進行性悪性疾患を広範に指しており、一般に、血液及び骨髄に含まれる白血球及び白血球の前駆物質の誤った増殖及び発達を特徴とする。一般に、白血病は臨床的には、（１）  疾患の持続期間及び特質（急性又は慢性）；（２）  関与する細胞の種類；骨髄性（骨髄系）、リンパ様（リンパ行性）又は単球性；及び（３）  血液中の異常細胞の数の増加の有無（白血病性又は非白血病性（亜白血病性））に基づいて分類される。マウス白血病モデルは、インビボにおける抗白血病活性を予測するものとして、幅広く受け入れられている。Ｐ３８８細胞アッセイにおける検査で陽性と出る化合物は一般に、治療される白血病の種類にかかわりなく、ある程度のレベルの抗白血病活性を示すと考えられている。したがって、本開示は、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血病性白血病、白血球血症性白血病、好塩基性白血病、芽細胞白血病、ウシ白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、胎生細胞性白血病、好酸球性白血病、グロス白血病、有毛細胞白血病、血球芽細胞性白血病、血液芽球性白血病、組織球性白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ系白血病、リンパ芽細胞性白血病、リンパ球性白血病、リンパ行性白血病、リンパ様白血病、リンパ肉腫細胞性白血病、マスト細胞白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄性白血病、骨髄性顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ白血病、プラスマ細胞白血病、多発性骨髄腫、プラスマ細胞性白血病、前骨髄球性白血病、リーデル細胞白血病、シリング白血病、幹細胞白血病、亜白血病性白血病及び未分化細胞白血病することを含む、白血病を治療する方法を含む。
【００３０】
「肉腫」という用語は一般に、胚性結合組織に似た物質から構成されたおり、一般には、線維状又は均一な物質に埋め込まれた状態の密に詰め込まれた細胞から構成される、腫瘍を指す。抗腫瘍性チオール結合ミトコンドリア型酸化剤と抗がん剤との組合せによって治療され得る肉腫には、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アベメシー肉腫（Ａｂｅｍｅｔｈｙ’ｓ  ｓａｒｃｏｍａ）、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、胞巣状南部肉腫、エナメル上皮歯牙肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫、絨毛癌、胎児性肉腫、ウィルムシ腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質性肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞性肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキンス肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ球種、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クプファー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫型肉腫、傍骨肉腫、網赤血球肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫及び毛細血管拡張性肉腫が挙げられる。
【００３１】
「メラノーマ」という用語は、皮膚及び他の器官のメラノサイト系に起因した腫瘍を意味するように取り扱われる。抗腫瘍性チオール結合ミトコンドリア型酸化剤と抗がん剤との組合せによって治療され得るメラノーマには例えば、末端黒子型メラノーマ、無色素性メラノーマ、良性若年性メラノーマ、クラウドマンメラノーマ、Ｓ９１メラノーマ、ハーディング−パッセーメラノーマ、若年性メラノーマ、悪性黒子型メラノーマ、悪性メラノーマ、結節性メラノーマ、爪下メラノーマ及び表在拡大型メラノーマが挙げられる。
【００３２】
「癌腫」という用語は、周囲の組織に浸潤して転移を起こしやすい上皮細胞から構成される、悪性新生物を指す。抗腫瘍性チオール結合ミトコンドリア型酸化剤と抗がん剤との組合せによって治療される得る例示的な癌腫には例えば、細葉細胞癌、小葉癌、腺嚢癌、腺様嚢胞癌、腺癌、副腎皮質癌、肺胞性癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌、基底細胞性癌、類基底細胞癌、基底有棘細胞癌、細気管支肺胞性癌、細気管支癌、気管支原性癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛癌、コロイド腺癌、面皰癌、子宮体癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱状癌、円柱状細胞癌、管癌、硬性癌、胎児性癌、脳様癌、類表皮癌、腺上皮癌、外方発育癌、潰瘍癌、線維性癌、膠様質癌、膠様癌、巨細胞癌、巨細胞性癌、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母組織癌、血液様癌、幹細胞癌、ハースル細胞癌、ヒアリン癌、副腎様癌、小児胎児性癌、上内皮癌、表皮内癌、上皮内癌、クロムペッヘル癌、クルチッキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌、レンズ様癌、脂肪腫性癌、リンパ上皮癌、髄様性癌、髄様癌、黒色癌、軟癌、粘液性癌、粘液分泌性癌、粘液細胞性癌、粘液表皮癌、粘液様癌、粘液癌、粘液腫様癌、鼻咽腔癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭状癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、軟性癌、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫性癌、シュナイダー癌、硬性癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、バレイショ状癌、回転楕円面細胞癌、紡錘細胞癌、海綿状癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、ひも状癌、毛細血管拡張症性癌、毛細血管拡張性癌、移行細胞癌、結節性癌、結節癌、いぼ状癌及び絨毛性癌が挙げられる。
【００３３】
「がんモデル生物」は、がんを示唆する表現型又はがん誘発要素の生体内における活性を示す、生体（例えば、がん細胞株）である。がんモデル生物は、本明細書において記述されたがんの表現型を示し得る。したがって、がんモデル生物は例えば、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性がある又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性がある、ＢＲＣＡ１欠損がん細胞株であってよい。多種多様な生体ががんモデル生物として作用することが可能であり、例えば、がん細胞、並びにげっ歯類（例えば、マウス又はラット）及び霊長類（ヒト等）等の哺乳類生体を挙げることができる。がん細胞株は、インビボにおけるがんに類似した表現型又は遺伝子型を示す細胞として、当業者によって幅広く理解されている。本明細書において使用されているがん細胞株は、動物（例えば、マウス）及びヒト由来の細胞株を含む。
【００３４】
「抗がん剤」は、純粋な通常の意味に従って使用されており、抗腫瘍性特性又は細胞の成長若しくは増殖を阻害する能力を有する組成物（例えば、化合物、ポリペプチド、アミノ酸、ポリヌクレオチド、核酸又は抗体）を指す。一部の実施形態において、抗がん剤は、化学療法用物質である。一部の実施形態において、抗がん剤は、本明細書において、がんを治療する方法に有用であると認められている作用物質である。一部の実施形態において、抗がん剤は、ＦＤＡ又は米国以外の国に属する類似の規制規正機関により、がんの治療用として承認された作用物質である。抗がん剤は、特定のがん又は特定の組織に対して選択的であり得る。
【００３５】
本明細書において使用されているとき、「投与する」という用語は、対象への経口投与、座薬としての投与、局所的な接触、静脈内投与、非経口投与、腹腔内投与、筋肉内投与、病巣内投与、髄腔内投与、鼻腔内投与若しくは皮下投与、又は、徐放性デバイス、例えば小型浸透圧ポンプの植込みを意味する。投与は、非経口及び経粘膜（例えば、口腔、舌下、口蓋、歯肉、鼻、膣、直腸又は経皮）を含む、任意の経路によるものである。非経口投与には例えば、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、皮内投与、皮下投与、腹腔内投与、脳室内投与及び頭蓋内投与が挙げられる。他の送達様式には、限定されるわけではないがリポソーム製剤、静脈内点滴、経皮パッチ等の使用が挙げられる。
【００３６】
「共投与する」は、本明細書において記述された組成物が、ひとつ以上のさらなる療法の施用と同時に、直前に、又は直後に投与されることを意味する。例えば、ＣＯＨ２９は、患者に単独で投与されてもよいし、又は共投与されてもよい。共投与は、個別の又は（１種より多い化合物又は作用物質の）組合せの化合物を同時投与又は逐次投与することを意味する。したがって、調合剤は所望に応じて、（例えば、代謝分解を低減するために）他の活性物質と組み合わせることもできる。
【００３７】
本明細書において開示された組成物は、アプリケータースティック、溶液、懸濁液、乳液、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、塗料、粉末及びエーロゾルとして配合されたとき、局所的な経路によって経皮送達することができる。経口用調合剤には、患者による消化に適した錠剤、丸剤、散剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ロゼンジ、カシェ、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤等が挙げられる。固体形態調合剤には、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ、座薬及び分散性顆粒剤が挙げられる。液体形態調合剤には、溶液、懸濁液及び乳液、例えば、水又は水／プロピレングリコール溶液が挙げられる。本発明の組成物は、持続放出及び／又は快適さをもたらすための成分をさらに含んでもよい。このような成分は、高分子量のアニオン性疑似粘液状ポリマー、ゲル化作用のある多糖及び細かく砕いた薬物キャリア基質を含む。これらの成分は、米国特許第４，９１１，９２０号、第５，４０３，８４１号、第５，２１２，１６２号及び第４，８６１，７６０号においてさらに詳細に論述されている。これらの特許の全内容は、あらゆる目的のためにそれらの全体を参照により本明細書に組み込む。本明細書において開示された組成物は、体内で徐放するための微小球として送達することもできる。例えば、微小球は、皮下で徐放される薬物含有微小球の皮内注射（Ｒａｏ，Ｊ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ  Ｓｃｉ．Ｐｏｌｙｍ．Ｅｄ．７：６２３〜６４５頁、１９９５年を参照されたい）によって投与することもできるし、生分解性の注射用ゲル製剤（例えば、Ｇａｏ  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２：８５７〜８６３頁、１９９５年を参照されたい）投与することもできるし、又は、経口投与のための微小球体（例えば、Ｅｙｌｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９：６６９−６７４頁、１９９７年を参照されたい）として投与することもできる。別の実施形態において、本発明の組成物の製造は、細胞膜と融合し又はエンドサイトーシスされるリポソームの使用によって送達することが可能であり、すなわち、受容体リガンドにある表面膜タンパク質受容体に結合して、エンドサイトーシスを起こすものである、リポソームに結合した受容体リガンドを用いことによって送達することが可能である。リポソームの使用によって、特に、リポソーム表面が、標的細胞に対して特異的である、又はそうでない場合は、特異的な器官に優先的に案内される、受容体リガンドを有する場合、インビボにおいて、本発明の組成物の送達を標的細胞に集中させることができる。（例えば、Ａｌ−Ｍｕｈａｍｍｅｄ、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．１３：２９３〜３０６頁、１９９６年、Ｃｈｏｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：６９８〜７０８頁、１９９５年、Ｏｓｔｒｏ，Ａｍ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４６：１５７６−１５８７、１９８９を参照されたい）。本組成物は、ナノ粒子として送達することもできる。
【００３８】
一部の実施形態において、２種以上の異なる医薬組成物は、共投与される。場合によっては、２種以上の異なる医薬組成物は、同時に共投与される。場合によっては、２種以上の異なる医薬組成物は、複数回の投与の間に時間間隔を空けないようにして、逐次共投与される。他の場合において、２種以上の異なる医薬組成物は、ある間隔を空けて逐次共投与される。特定の実施形態において、２種以上の異なる医薬の共投与の間にある間隔は、これらの異なる医薬の投与の間において、約０．２５時間、約０．５時間、約１時間、約２時間、約３時間、約１２時間、約１日又は約２日以上であり得る。
【００３９】
「有効量」は、当該化合物が存在しないときとの比較で、ある化合物が明示された目的を達成する（例えば、当該化合物の投与が目的とする効果を達成すること、疾患を治療すること、酵素活性を低下させること、酵素活性を増大させること、シグナリング経路を低減すること、又は、疾患又は状態に関するひとつ以上の症状を低減すること）ために十分な量である。「治療有効量」の一例は、疾患に関するひとつ又は複数の症状の治療、予防又は低減に寄与するために十分な量であり、この量もまた、「治療有効量」と呼ばれることもある。ひとつ又は複数の症状の「低減」（及びこの語句の文法的な等価物）は、症状（ひとつ又は複数）の重症度若しくは頻度を減少させること、又は、症状（ひとつ又は複数）をなくすことを意味する。厳密な量は、治療の目的に依存し得るが、当業者ならば、公知の技法を使用して確定可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（第１〜３巻、１９９２年）、Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ  （１９９９年）、Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ  （１９９９）、及び、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、２００３年、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓを参照されたい）。
【００４０】
哺乳類に投与される投薬量及び頻度（単回投薬又は多回投薬）は、種々の因子、例えば、哺乳類が別の疾患を罹患しているかどうか及び投与経路；レシピエントのサイズ、年齢、性別、健康状態、体重、ボディマス指数及び食事；治療される疾患の症状の性質及び程度、同時進行している治療の種類、治療される疾患に起因した合併症、又は、他の心臓関連の問題に応じて変化し得る。他の治療レジメン又は作用物質が、本開示の方法及び化合物と一緒に使用されてもよい。確立された投薬量（例えば、頻度及び持続期間）に関する調整及び操作は、十分に当業者の能力に含まれる。
【００４１】
本明細書において記述された治療有効量は最初に、細胞培養アッセイから判定することができる。目標濃度は、本明細書において記述された方法又は当技術分野において公知の方法を使用して測定したときに、本明細書において記述された方法を達成することができる、活性化合物（ひとつ又は複数）の濃度であり得る。
【００４２】
当技術分野において周知のように、ヒトにおける使用のための治療有効量は、動物モデルから決定することもできる。例えば、ヒト用の用量は、動物において効果的であると判明した濃度を達成するように配合され得る。上記のように、ヒトにおける投薬量は、化合物の有効性をモニタリングし、投薬量を増えるように又は減るように調節することによって、調節することができる。上記方法及び他の方法に基づいてヒトにおける最大の有効性を達成するように用量を調節することは、十分に、当業者の能力に含まれる。
【００４３】
投薬量は、患者及び利用される化合物に関する要件に応じて変化し得る。本開示との関連において、患者に投与される用量は、有益な治療的応答を患者に長期的に及ぼすために十分なものにすべきである。用量のサイズもまた、何らかの有害な副作用の存在、性質及び程度によって決定することができる。特定の状況に適した投薬量の決定は、作業実施者の技術に含まれる。一般に、治療は、本化合物の最適な用量を下回るより少ない投薬量で開始される。その後は、ある状況下において最適な効果に到達するまで、少しずつ投薬量を増大させる。投薬量の量及び間隔は、個別に調節して、治療される特定の臨床学的適応症を治療するために効果的な投与化合物のレベルをもたらすことができる。これにより、個体の疾患状態の重症度に釣り合う治療レジメンをもたらすことができる。
【００４４】
本明細書において規定のように、タンパク質と阻害剤との相互作用に関する「阻害」、「阻害する」及び「阻害している」等の用語は、活阻害剤の非存在下におけるタンパク質の活性又は機能との比較で、タンパク質の活性又は機能に悪影響する（例えば、減少させる）ことを意味する。ある遺伝子を阻害することとの関連で使用されている場合、「阻害している」は、阻害剤の非存在下における遺伝子の活性又は発現との比較で、遺伝子の活性又は発現に悪影響する（例えば、減少させる）ことを意味する。一部の実施形態において、阻害は、疾患又は疾患の症状の低減を指す。一部の実施形態において、阻害は、特定のタンパク質又は核酸標的の活性の低減を指す。したがって、阻害は、少なくとも部分的に、部分的に若しくは全体的に刺激を遮断すること、活性化を減少、予防若しくは遅延させること、又は、シグナル伝達若しくは酵素活性若しくはタンパク質の量を不活性化、脱感作化若しくはダウンレギュレートすることを含む。
【００４５】
「相乗効果」、「相乗作用」「相乗的」、「複合した相乗的な量」及び「相乗的治療効果」という用語は、本明細書において相互変換可能に使用されており、組合せで投与された化合物の実測効果を指しており、ここで、この実測効果は、単独で投与された各化合物の個別の効果の合計より大きい。
【００４６】
「医薬組成物」という用語は、他の化学成分を含有する、化合物ＣＯＨ２９の混合物を指す。場合によっては、さらなる化学成分は、キャリア、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、及び／又は賦形剤。医薬組成物は、生体への本化合物の投与を容易化する。化合物を投与する技法には、限定されるわけではないが、静脈内投与、経口投与、エーロゾル投与、非経口投与、点眼、肺内投与及び局所投与が挙げられる。
【００４７】
「有害効果又は副作用」という用語は、所望される薬物又は治療の効果に加えて起きる、望ましくない二次的な効果を指す。重症なものである場合、有害効果は、処方された治療へのノンコンプライアンスにつながる可能性がある。
【００４８】
「用量規定毒性又はＤＬＴ」という用語は、患者が治験中の薬物による治療を施されている間にモニタリングされる毒性を指しており、安全性分析の一部でもある。「用量規定毒性又はＤＬＴ」という用語は、次のもののうちのいずれかを指す：グレード４  血小板減少症（血小板数＜２５，０００／ｍｍ３）；グレード３  血小板減少症（血小板数２５，０００〜５０，０００／ｍｍ３）、出血又は輸血の必要性を伴う；発熱性好中球減少症（ＮＣＩ  ＣＴＣに準拠、絶対好中球数（ＡＮＣ）＜１．０×１０９／Ｌ、発熱＞３８．５℃）；並びに、研究対象薬物に関連付けられていると調査者が考える任意の他の＞グレード３非血液学的毒性。
【００４９】
「最大耐量又はＭＴＤ」という用語は、ある「許容される」レベルの毒性を生じさせる用量、又は、もし超過すれば毒性に関して「許容されない」危険性に動物又は患者を晒すことになる用量を指しており、比較的高い用量の薬物が可能な中で最も大きい有益な抗腫瘍効果を達成するように選択されるがん及びＨＩＶの治療における第Ｉ相臨床試験の主要な目的である。ＭＴＤは、治療された患者母集団において特定の頻度のＤＬＴを生じさせる、用量も指し得る。
【００５０】
「ヒト等価用量又はヒト等価濃度（ＨＥＣ）」という用語は、ヒトに投与された場合において、より少ない用量による試験動物において生じた効果に等しい効果を生じさせる、化学物質（薬物）の量を指す。
【００５１】
「腫瘍縮小効果」という用語は、抗がん剤の有効性を評価するための臨床試験における臨床試験における一般的なエンドポイントを指しており、相効率（ＯＲＲ）、無増悪期間（ＴＴＰ）、無病生存率（ＤＦＳ）及び無増悪生存率（ＰＦＳ）等のいくつかの用語を包含する。
【００５２】
「バイオマーカー」という用語は、ある個体における疾患の重症度又は存在に関する測定可能な指標を指す。提案されたバイオマーカーが認可されたらすぐに、当該バイオマーカーを使用して、個体における疾患危険性もしくは疾患の存在を診断するか、又は、個体における疾患に治療を適合させる（薬物治療又は投与レジームの選択）ことができる。可能性のある薬物療法を評価するときにおいて、バイオマーカーは、生存率又は不可逆的罹患率等、自然のエンドポイントの代用品として使用することもできる。ある治療がバイオマーカーを改変し、これが、健康の改善に直接関係している場合、バイオマーカーは、臨床学的な利益を評価するための代用エンドポイントとして作用する。使用の主要な領域は、薬物開発工程である。
【００５３】
方法
第１の態様において、それを必要としている対象におけるがんを治療する方法であるが、本明細書において提供される。本方法は、ある有効量のＣＯＨ２９を対象に投与することを含む。対象は、本明細書において記載された、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。したがって、いくつかの実施形態において、対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象である。いくつかの実施形態において、対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象のうちの少なくともひとつである。いくつかの実施形態において、対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象、及び、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象のうちの少なくとも一種であってよい（すなわち、がんは、ＢＲＣＡ１欠損、及び、ＰＡＲＰ１阻害剤又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤のうちの少なくともひとつに対する耐性を有する）。いくつかの実施形態において、がんは、ゲムシタビン耐性がんである。いくつかの実施形態において、がんは、ヒドロキシ尿素耐性がんである。
【００５４】
いくつかの実施形態において、対象は、乳がん対象、卵巣がん対象、結腸がん対象、肝臓がん対象、腎臓がん対象、肺がん対象、非小細胞肺がん対象、脳がん対象、前立腺がん対象、膵臓がん対象、メラノーマ対象、白血病対象又は肉腫対象である。
【００５５】
いくつかの実施形態において、対象は、乳がん対象又は卵巣がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、乳がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、卵巣がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、結腸がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、肝臓がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、腎臓がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、肺がん対象又は非小細胞肺がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、脳がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、前立腺がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、膵臓がん対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、メラノーマ対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、白血病対象であってよい。いくつかの実施形態において、対象は、肉腫対象であってよい。
【００５６】
がん対象（例えば、乳がん、卵巣がん、肺がん、前立腺がん又は膵臓がん対象）は、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象のうちのひとつであってもよい。したがって、いくつかの実施形態において、がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象である。いくつかの実施形態において、がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象である。いくつかの実施形態において、がん対象は、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。いくつかの実施形態において、がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象及びＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象である。いくつかの実施形態において、がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。いくつかの実施形態において、がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。
【００５７】
したがって、いくつかの実施形態において、対象は、乳がん又は卵巣がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象である。ＢＲＣＡ１欠損対象は、乳がんを有し得る。ＢＲＣＡ１欠損対象は、卵巣がんを有し得る。
【００５８】
いくつかの実施形態において、対象は、乳がん又は卵巣がんを有するＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象である。ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象は、乳がんを有し得る。ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象は、卵巣がんを有し得る。
【００５９】
いくつかの実施形態において、対象は、限定されるわけではないがシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、アドリアマイシン、ミトキサントロン、ＶＰ１６、ＣＰＴ１１又はカンプトテシンが挙げられる、少なくともひとつのＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性を特徴とするがんを有する、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。いくつかの実施形態において、対象は、乳がん、卵巣がん、結腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、脳がん、前立腺がん、膵臓がん、メラノーマ、白血病又は肉腫を有する、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。対象は、乳がんを有するＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。対象は、卵巣がんを有するＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。
【００６０】
いくつかの実施形態において、対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象及びＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象である。対象は、乳がん又は卵巣がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象、及び、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象であってよい。対象は、乳がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象及びＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象であってよい。対象は、卵巣がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象及びＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象であってよい。
【００６１】
いくつかの実施形態において、対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。対象は、乳がん又は卵巣がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。対象は、乳がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。対象は、卵巣がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。
【００６２】
いくつかの実施形態において、対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。対象は、乳がん又は卵巣がんを有するＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。対象は、乳がんを有するＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象  であってよい。対象は、卵巣がんを有するＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。
【００６３】
いくつかの実施形態において、対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。対象は、乳がん又は卵巣がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。対象は、乳がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。対象は、卵巣がんを有するＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい。
【００６４】
いくつかの実施形態において、がん対象は、乳がん対象及びＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象のうちの少なくともひとつである。したがって、いくつかの実施形態において、乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象でもある。いくつかの実施形態において、乳がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象でもある。いくつかの実施形態において、乳がん対象は、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象でもある。乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象及びＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象であってよい（例えば、乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損を有し、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性がある、がんを有する）。乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい（例えば、乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損を有し、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性がある、がんを有する）。乳がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい（例えば、乳がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性があるがんを有する）。乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい（例えば、乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損を有し、ＰＡＲＰ１阻害剤及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性がある、がんを有する）。
【００６５】
いくつかの実施形態において、がん対象は、卵巣がん対象、及び、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象のうちの少なくともひとつである。したがって、いくつかの実施形態において、卵巣がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象でもある。いくつかの実施形態において、卵巣がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象でもある。いくつかの実施形態において、卵巣がん対象は、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象でもある。卵巣がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象及びＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象であってよい（例えば、卵巣がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損を有し、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性がある、がんを有する）。卵巣がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい（例えば、卵巣がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損を有し、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性がある、がんを有する）。卵巣がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい（例えば、卵巣がん対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性があるがんを有する）。卵巣がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってよい（例えば、卵巣がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損を有し、ＰＡＲＰ１阻害剤及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性がある、がんを有する）。
【００６６】
いくつかの実施形態において、がん対象は、乳がん対象、卵巣がん対象、結腸がん対象、肝臓がん対象、腎臓がん対象、肺がん対象、非小細胞肺がん対象、脳がん対象、前立腺がん対象、膵臓がん対象、メラノーマ対象、白血病対象又は肉腫対象である。いくつかの実施形態において、がん対象は、乳がん対象又は卵巣がん対象である。いくつかの実施形態において、がん対象は、乳がん対象である。いくつかの実施形態において、がん対象は、卵巣がん対象である。
【００６７】
対象は、本明細書において記述されたがんを有してもよく、ここで、がんは、ＢＲＣＡ１欠損、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のうちの少なくともひとつを示す。がんは、乳がん、卵巣がん、結腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、脳がん、前立腺がん、膵臓がん、メラノーマ、白血病又は肉腫であってよい。がんは、ＢＲＣＡ１欠損を有する上記がんのうちの１つであってよい。がんは、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性を有する上記がんのうちの１つであってよい。がんは、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性を有する上記がんのうちの１つであってよい。
【００６８】
いくつかの実施形態において、がんは、ＢＲＣＡ１欠損、及び、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のうちの少なくともひとつを有する。いくつかの実施形態において、がんは、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性を有し、ＢＲＣＡ１欠損又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対するＢＲＣＡ１耐性のうちの少なくともひとつを有する。いくつかの実施形態において、がんは、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性を有し、ＢＲＣＡ１欠損又はＰＡＲＰ１阻害剤に対するＢＲＣＡ１耐性のうちの少なくともひとつを有する。
【００６９】
がんは、乳がん又は卵巣がんであってよい。がんは、乳がんであってよい。がんは、卵巣がんであってよい。がんは、結腸がんであってよい。がんは、肝臓がんであってよい。がんは、腎臓がんであってよい。がんは、肺がん又は非小細胞肺がんであってよい。がんは、脳がんであってよい。がんは、前立腺がんであってよい。がんは、膵臓がんであってよい。がんは、メラノーマであってよい。がんは、白血病であってよい。がんは、肉腫であってよい。
【００７０】
いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、がん対象（例えば、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象）における特定のタンパク質の活性又は発現を低下させる。阻害は、プロテアソームの補充によってタンパク質の分解を誘導することができる、標的タンパク質へのＣＯＨ−２９の結合に起因し得る。同様に、タンパク質レベルの変化は、対応する遺伝子の発現パターンを調節することができる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、対象におけるＰＡＲＰ１、Ｒａｄ５１又はＢＲＣＡ１の活性又は発現を阻害する。分析は、ＣＯＨ２９治療の結果として差次的発現した遺伝子を同定するために実施されてもよい（例えば、マイクロアレイ分析）。したがって、ＣＯＨ２９を投与することは、対象におけるＢＲＣＡ１タンパク質の活性又は発現を低下させることができる。ＣＯＨ２９を投与することは、対象におけるＰＡＲＰ１タンパク質の活性又は発現を低下させることができる。ＣＯＨ２９を投与することは、対象におけるＲａｄ５１タンパク質の活性又は発現を低下させることができる。対象は、その実施形態を含む本明細書において記述されたがん対象であってよい。いくつかの実施形態において、がん対象は、乳がん対象、卵巣がん対象、結腸がん対象、肝臓がん対象、腎臓がん対象、肺がん対象、非小細胞肺がん対象、脳がん対象、前立腺がん対象又は膵臓がん対象である。がん対象は、乳がん対象又は卵巣がん対象であってよい。
【００７１】
いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９治療済みのＢＲＣＡ１欠損対象のＲＮＡ発現プロファイルは、ＢＲＣＡ１＋（例えば、無傷のＢＲＣＡ１）であるＣＯＨ２９治療済みのがん対象のＲＮＡ発現プロファイルと比較することができる。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１＋であるがん対象の場合に比べてより大きな程度で、ＢＲＣＡ１欠損対象におけるタンパク質の活性又は発現をより大きな程度で阻害する。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１＋であるがん対象の場合に比べてより大きな程度で、ＢＲＣＡ１欠損対象におけるＰＡＲＰ１を阻害する。ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１＋であるがん対象の場合に比べてより大きな程度で、ＢＲＣＡ１欠損対象におけるＲａｄ５１阻害することができる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、合成致死性によって、ＢＲＣＡ１欠損対象を治療する。ＢＲＣＡ１欠損対象は、その実施形態を含めて、本明細書において記述されたとおりである。いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ１欠損対象は、乳がん対象又は卵巣がん対象でもある。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、がんにおける特定のタンパク質の活性又は発現を低下させる（例えば、ＢＲＣＡ１欠損であり、又はＰＡＲＰ１阻害剤若しくはＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤の片方若しくは両方に耐性がある、がん）。阻害は、プロテアソームの補充によってタンパク質の分解を誘導することができる、標的タンパク質へのＣＯＨ−２９の結合に起因し得る。同様に、タンパク質レベルの変化は、対応する遺伝子の発現パターンを調節することができる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、がんにおけるＰＡＲＰ１、Ｒａｄ５１又はＢＲＣＡ１の活性又は発現を阻害する。分析は、ＣＯＨ２９治療の結果として差次的発現した遺伝子を同定するために実施されてもよい（例えば、マイクロアレイ分析）。したがって、ＣＯＨ２９を投与することは、がんにおけるＢＲＣＡ１タンパク質の活性又は発現を低下させることができる。ＣＯＨ２９を投与することは、がんにおけるＰＡＲＰ１タンパク質の活性又は発現を低下させることができる。ＣＯＨ２９を投与することは、がんにおけるＲａｄ５１タンパク質の活性又は発現を低下させることができる。がんは、その実施形態を含む本明細書において記述されたがんであってよい。いくつかの実施形態において、がんは、乳がん、卵巣がん、結腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、脳がん、前立腺がん又は膵臓がんである。がんは、乳がん又は卵巣がんであってよい。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９によって治療されたＢＲＣＡ１欠損がんのＲＮＡ発現プロファイルは、ＣＯＨ２９によって治療されたＢＲＣＡ１＋がんのＲＮＡ発現プロファイルと比較することができる。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１＋であるがんの場合に比べてより大きな程度で、ＢＲＣＡ１欠損したがんにおけるタンパク質の活性又は発現を阻害する。ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１＋であるがんの場合に比べてより大きな程度で、ＢＲＣＡ１欠損したがんにおけるＰＡＲＰ１を阻害することができる。ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１＋であるがんの場合に比べてより大きな程度で、ＢＲＣＡ１欠損したがんにおけるＲａｄ５１を阻害することができる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、合成致死性によって、ＢＲＣＡ１欠損したがんを治療する。がんは、その実施形態を含む本明細書において記述されたがんであってよい。がんは、乳がん又は卵巣がんであってよい。
【００７４】
ＣＯＨ２９は、合成致死性によって、ＢＲＣＡ１欠損ヒトがんに対する特異性を示し得る。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、その実施形態を含むＢＲＣＡ１欠損対象を治療する。いくつかの実施形態において、合成致死性は、ＢＲＣＡ１欠損がん中の第２のタンパク質の阻害に起因する。第２のタンパク質は、ＰＡＲＰ１であってよい。ＢＲＣＡ１欠損を有するがんの発現プロファイルは、ＢＲＣＡ１＋がん細胞に比較することができる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１欠損したがんにおけるＰＡＲＰ１活性を約１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％，６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％低下させる。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１＋がん細胞の場合に比べてより大きなＢＲＣＡ１欠損がん細胞における有効性により、ＰＡＲＰ１活性を阻害する。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１欠損したがんにおけるＰＡＲＰ１発現を約５％、１０％、１５％、２０％を、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％減少させる。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１＋がん細胞の場合に比べてより大きなＢＲＣＡ１欠損がん細胞における有効性により、ＰＡＲＰ１発現を阻害する。
【００７５】
ＣＯＨ２９の投与は、対象におけるＤＮＡ修復を阻害することができる。ＣＯＨ２９の投与は、塩基除去修復（ＢＥＲ）を阻害することができる（例えば、例えば特異的なグリコシラーゼを用いた損傷塩基の除去によって酸化的アルキル化、脱アミノ化及び脱プリン化／脱ピリミジン化による損傷に起因した塩基の傷害を修正することによる、損傷ＤＮＡの修復）。ＣＯＨ２９の投与は、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）を阻害することができる（例えば、短い一本鎖ＤＮＡセグメントの除去によって紫外線への曝露に起因した損傷等のかさ高いＤＮＡ付加体に起因したＤＮＡ損傷を修正する）。ＣＯＨ２９の投与は、（例えば、非相同末端結合（ＮＨＥＪ経路）、マイクロホモロジー媒介末端結合（ＭＭＥＪ）経路又は相同組換え（ＨＲ）を使用して）対象における二本鎖ＤＮＡ切断修復を阻害することができる。ＣＯＨ２９の投与は、対象における塩基除去修復、ヌクレオチド除去修復又は二本鎖ＤＮＡ切断修復を阻害することができる。
【００７６】
いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の遺伝毒性プロファイル、及びこの結果としての、ＤＮＡ損傷チェックポイントを活性化させてＤＮＡ損傷を誘導するＣＯＨ２９の能力は、例えばＡＴＭ、ｆｏｘｏ３、γ−Ｈ２ＡＸ、ｐ５３又はＲａｄ５１等のタンパク質に関する調節された活性又は発現の検出によって、査定することができる。
【００７７】
調節は、タンパク質の活性若しくは発現の増大又は活性若しくは発現の減少であってもよい。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、対象におけるγ−Ｈ２ＡＸの活性又は発現を増大させる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、対象におけるγ−Ｈ２ＡＸの活性又は発現を増大させる。ＣＯＨ２９の投与は、対象におけるγ−Ｈ２ＡＸの活性又は発現を、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍又は２０倍増大させることができる。増大させたγ−Ｈ２ＡＸ活性又は発現は、ＤＮＡ損傷チェックポイントの活性化及びＤＮＡ損傷の誘導を指し示すことができる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、その実施形態を含む本明細書において記述されたがんにおけるγ−Ｈ２ＡＸ活性又は発現を増大させる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、その実施形態を含む本明細書において記述されたがんにおけるγ−Ｈ２ＡＸ活性又は発現を増大させる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、トリプルネガティブ乳がんにおけるγ−Ｈ２ＡＸ活性又は発現を増大させる。したがって、いくつかの実施形態において、ある有効量のＣＯＨ２９を投与することは、トリプルネガティブ乳がんを治療する。
【００７８】
ＣＯＨ２９は、ＤＮＡ二本鎖切断（ＤＳＢ）修復を阻害することができる。ＤＳＢは、例えば相同組換え（ＨＲ）又は非相同末端結合（ＮＨＥＪ）経路によって修復することができる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＨＲを阻害する。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＮＨＥＪ経路を阻害する。ＤＮＡ損傷反応は、例えばＢＲＣＡ１及びＲａｄ５１等のＨＲ修復に関与するタンパク質のタンパク質レベルの抑制によって、長期化することができる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、対象又はがんにおけるＲａｄ５１の活性又は発現を減少させる。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、対象又はがんにおけるＢＲＣＡ１の活性又は発現を減少させる。いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ１又はＲａｄ５１の発現は、対象又はがんにおいて減少する。いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ１及びＲａｄ５１の発現は、対象又はがんにおいて減少する。
【００７９】
別の態様において、それを必要としている対象におけるがんを治療する方法が、本明細書において提供される。本方法は、複合した相乗的な量においてＣＯＨ２９及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、その実施形態を含めて、本明細書において記述されたとおりである。したがって、特定の実施形態において、対象は、ＢＲＣＡ１が欠損した対象又はＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象である。対象は、ＢＲＣＡ１が欠損した対象であってよい。対象は、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象であってよい。
【００８０】
がんは、乳がん、卵巣がん、結腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、脳がん、前立腺がん、膵臓がん、メラノーマ、白血病又は肉腫であってよい。がんは、乳がん又は卵巣がんであってよい。したがって、いくつかの実施形態において、対象は、乳がん対象又は卵巣がん対象である。対象は、乳がん対象であってよい。対象は、卵巣がん対象であってよい。対象は、それらの実施形態を含む本明細書において記述されたひとつ以上の表現型又は遺伝子型を示すこともできる（例えば、乳がん対象は、ＢＲＣＡ１が欠損した対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象であってもよい）。いくつかの実施形態において、対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象及びＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。対象は、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性を有するがんを有し得る。本明細書における方法は、ある有効量のＣＯＨ２９を共投与することによって、少なくともひとつのＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性を有するがんの治療を提供することができる。
【００８１】
いくつかの実施形態において、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、ＤＮＡ損傷作用のある化学療法剤である。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、アルキル化剤であってよい。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、その実施形態を含む本明細書において記述された代謝拮抗物質であってよい。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、アントラサイクリンであってよい。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、白金主体型作用物質であってよい。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、タキサンであってよい。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、キナーゼ阻害剤であってよい。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤であってよい。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、トポイソメラーゼ阻害剤であってよい。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、ヌクレオチドアナログであってよい。いくつかの実施形態において、がんの阻害は、ＤＮＡ損傷作用のあるがん用作用物質及びＣＯＨ２９の存在下で相乗的に増進される。
【００８２】
いくつかの実施形態において、上記治療する方法は、合成致死性によって少なくとも２種のタンパク質を阻害することを含む。タンパク質のうちの少なくともひとつは、ＢＲＣＡ１であってよい。タンパク質のうちの少なくともひとつは、Ｒａｄ５１であってよい。タンパク質のうちの少なくともひとつは、ＰＡＲＰ１であってよい。いくつかの実施形態において、ＰＡＲＰ１の阻害は、ＢＲＣＡ１欠損対象におけるものであってよい。いくつかの実施形態において、ＰＡＲＰ１の阻害は、ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤及びＣＯＨ２９の存在下において、相乗的に増進される。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、本明細書に記載のそれらの誘導体を含む、ゲムシタビン、γ線照射又はシスプラチンであってよい。
【００８３】
ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、本明細書において記述されたその誘導体を含む、シスプラチンであってよい。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与は、単独で投与された場合におけるシスプラチンの細胞毒性より大きなレベルにまでシスプラチンの細胞毒性を増大させる（例えば、複合した相乗的な量においてＣＯＨ２９とシスプラチンとを一緒に投与する）。シスプラチンは、抗がん活性が標的細胞におけるＤＮＡ架橋に主に起因する、幅広く使用されている化学療法用物質である。したがって、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９及びシスプラチンの共投与は、ＣＯＨ２９又はシスプラチンが単独で投与された場合におけるがん細胞の生存能力の低下より大きながん細胞の生存能力の低下を起こす（例えば、複合した相乗的な量においてＣＯＨ２９とシスプラチンとを一緒に投与する）。
【００８４】
ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、ゲムシタビンであってよい。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９及びゲムシタビンの共投与は、ＣＯＨ２９又はゲムシタビンが単独で投与されたときのがん細胞の生存能力の低下に比べてより大きな、がん細胞の生存能力の低下が起きる（例えば、ＣＯＨ２９及びゲムシタビンを一緒にして、複合した相乗的な量で投与する）。ＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤は、γ線照射であってよい。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９の投与及びγ線照射による治療は、ＣＯＨ２９又はγ線照射が単独で投与されたときのがん細胞の生存能力の低下に比べてより大きな、がん細胞の生存能力の低下を起こす。ＣＯＨ２９は、γ線照射による治療の前、最中又は後に投与することができる。
【００８５】
別の態様において、それを必要としている対象におけるがんを治療する方法が、本明細書において提供される。本方法は、有効量の構造：
【００８６】
【化４】
2020505435.tif 000006
を有する化合物を含み、
有効量が、少なくとも投与日当たり約５０ｍｇである。
【００８７】
いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１０ｍｇ〜投与日当たり約２４００ｍｇまでである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１００ｍｇ〜投与日当たり約２４００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２００ｍｇ〜投与日当たり約２４００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約３００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約４００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約５００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約６００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約７００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約８００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約９００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１１００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１２００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１３００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１４００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１５００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１６００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１７００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１８００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１９００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２１００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２２００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２３００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２４００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２５００ｍｇである。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約３０００である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約３５００である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約４０００である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約４５００である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約５０００である。
【００８８】
いくつかの実施形態において、本方法は、本化合物を２１日間にわたって毎日投与した後で７日間にわたって本化合物を投与しないことを含む、一連の治療を含む。いくつかの実施形態において、一連の治療は、２８日間毎日繰り返される。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり１回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１００ｍｇ又は投与日当たり約２００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり２回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約３００ｍｇ又は投与日当たり約４００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり３回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約６００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり４回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約８００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり５回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり６回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１２００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり７回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１４００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり８回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１６００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり９回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約１８００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり１０回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２０００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり１１回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２２００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与は、１日当たり１２回である。いくつかの実施形態において、有効量は、投与日当たり約２４００ｍｇである。
【００８９】
上記において開示されたそれを必要としている対象のがんを治療するための任意の態様又はその実施形態に加えて、いくつかの実施形態において、対象は、固形腫瘍がん対象である。いくつかの実施形態において、対象は、乳がん対象又は卵巣がん対象である。いくつかの実施形態において、対象は、難治性固形腫瘍がん対象である。いくつかの実施形態において、対象は、乳がん対象である。いくつかの実施形態において、乳がん対象は、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である。
【００９０】
医薬組成物
別の態様において、薬学的に許容される賦形剤及び構造：
【００９１】
【化５】
2020505435.tif 000007
を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩若しくは溶媒和物を含む、医薬組成物であって、
化合物が、少なくとも約５０ｍｇの有効量で存在する、医薬組成物が提供される。
【００９２】
一部の実施形態において、有効量は、約５０ｍｇ〜約２４００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約２０００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約１６００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約１２００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約８００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約５００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約４００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約３００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇである。一部の実施形態において、上記量は、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約８００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約２０００ｍｇ又は約２４００ｍｇである。
【００９３】
投薬量
一態様において、ＣＯＨ２９製剤は、本明細書において記述された疾患及び状態の治療のために使用される。さらに、そのような治療を必要としている対象にある本明細書において記述された疾患又は状態のいずれかを治療する方法は、治療有効量のＣＯＨ２９製剤を前記対象に投与することを含む。
【００９４】
場合によっては、ＣＯＨ２９の最大耐量（ＭＴＤ）及び最大応答用量（ＭＲＤ）は、確立された動物及びヒト実験プロトコル及び本明細書において記述された例によって、決定される。場合によっては、ＣＯＨ２９の毒性及び治療有効性は、細胞培養又は実験動物における標準的な薬学的手順によって決定され、限定されるわけではないが、ＬＤ５０（母集団のうちの５０％にとって致命的な用量）及びＥＤ５０（母集団のうちの５０％において治療的に有効な用量）を決定するためも含める。有毒な効果と治療効果との用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０との比として表すことができる。高い治療指数を示すＣＯＨ２９投薬量は、興味深いものである。場合によっては、細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための種々の投薬量を配合するときに使用される。ＣＯＨ２９の投薬量は好ましくは、最小の毒性を伴うＥＤ５０を含む種々の循環濃度に収まる。
【００９５】
一部の実施形態において、本明細書において記述された医薬組成物は、１日当たりの用量が、約５０ｍｇ〜約５０００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約４００〜約８００ｍｇのＣＯＨ２９又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物となるように、それを必要としている対象に提供される。特定の実施形態において、本明細書において記述されたＣＯＨ２９医薬組成物は、ＣＯＨ２９又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物に対して約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約６１ｍｇ、約６２ｍｇ、約６３ｍｇ、約６４ｍｇ、約６５ｍｇ、約６６ｍｇ、約６７ｍｇ、約６８ｍｇ、約６９ｍｇ、約７０ｍｇ、約７１ｍｇ、約７２ｍｇ、約７３ｍｇ、約７４ｍｇ、約７５ｍｇ、約７６ｍｇ、約７７ｍｇ、約７８ｍｇ、約７９ｍｇ、約８０ｍｇ、約８１ｍｇ、約８２ｍｇ、約８３ｍｇ、約８４ｍｇ、約８５ｍｇ、約８６ｍｇ、約８７ｍｇ、約８８ｍｇ、約８９ｍｇ、約９０ｍｇ、約９１ｍｇ、約９２ｍｇ、約９３ｍｇ、約９４ｍｇ、約９５ｍｇ、約９６ｍｇ、約９７ｍｇ、約９８ｍｇ、約９９ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０１ｍｇ、約１０２ｍｇ、約１０３ｍｇ、約１０４ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１０６ｍｇ、約１０７ｍｇ、約１０８ｍｇ、約１０９ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１１ｍｇ、約１１２ｍｇ、約１１３ｍｇ、約１１４ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１１６ｍｇ、約１１７ｍｇ、約１１８ｍｇ、約１１９ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２１ｍｇ、約１２２ｍｇ、約１２３ｍｇ、約１２４ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１２６ｍｇ、約１２７ｍｇ、約１２８ｍｇ、約１２９ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３１ｍｇ、約１３２ｍｇ、約１３３ｍｇ、約１３４ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１３６ｍｇ、約１３７ｍｇ、約１３８ｍｇ、約１３９ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４１ｍｇ、約１４２ｍｇ、約１４３ｍｇ、約１４４ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１４６ｍｇ、約１４７ｍｇ、約１４８ｍｇ、約１４９ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６１０ｍｇ、約６２０ｍｇ、約６３０ｍｇ、約６４０ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６６０ｍｇ、約６７０ｍｇ、約６８０ｍｇ、約６９０ｍｇ、約７００ｍｇ、７１０ｍｇ、約７２０ｍｇ、約７３０ｍｇ、約７４０ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７６０ｍｇ、約７７０ｍｇ、約７８０ｍｇ、約７９０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８１０ｍｇ、約８２０ｍｇ、約８３０ｍｇ、約８４０ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８６０ｍｇ、約８７０ｍｇ、約８８０ｍｇ、約８９０ｍｇ、約９００ｍｇ、９１０ｍｇ、約９２０ｍｇ、約９３０ｍｇ、約９４０ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９６０ｍｇ、約９７０ｍｇ、約９８０ｍｇ、約９９０ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ若しくは約２４００ｍｇ、又は、これらの中から導出可能な任意の範囲の１日用量で、提供される。本明細書において記述された１日当たりの用量は、ｂ．ｉ．ｄ．、ｔ．ｉ．ｄ．又はｑ．ｉ．ｄ．等で与えられる分割用量の形態において１日当たり１回又は１日当たり複数回与えることが可能であり、ここで、分割用量の数は、１日当たりの用量に等しい。
【００９６】
一部の実施形態において、本化合物は、１日当たり１回投与される。一部の実施形態において、本化合物は、１日当たり２回投与される。一部の実施形態において、１００ｍｇの本化合物は、１日当たり１回投与される。一部の実施形態において、１００ｍｇの本化合物は、１回が１００ｍｇの用量で、１日当たり１回投与される。一部の実施形態において、２００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与される。一部の実施形態において、２００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与され、ここで、２回の１００ｍｇの用量が約１２時間空けて投与される。一部の実施形態において、３００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与され、ここで、１回の２００ｍｇの用量が投与され、続いて、１００ｍｇの用量が約１２時間後に投与される。一部の実施形態において、２００ｍｇの本化合物が朝に投与され、１００ｍｇの本化合物が夕方に投与される。一部の実施形態において、３００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与される。一部の実施形態において、４００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与される。一部の実施形態において、４００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与され、ここで、２回の２００ｍｇの用量が、約１２時間空けて投与される。一部の実施形態において、６００ｍｇの本化合物が、１日当たり投与される。一部の実施形態において、６００ｍｇの本化合物が、１日当たり投与され、ここで、２回の３００ｍｇの用量が、約１２時間空けて投与される。いくつかの実施形態において、８００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与され、ここで、２回の４００ｍｇの用量が、約１２時間空けて投与される。一部の実施形態において、９００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与される。一部の実施形態において、１２００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与される。一部の実施形態において、１２００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与される。一部の実施形態において、１２００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与され、ここで、２回の６００ｍｇの用量が、約１２時間空けて投与される。一部の実施形態において、１６００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与される。一部の実施形態において、１６００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与され、ここで、２回の８００ｍｇの用量が、約１２時間空けて投与される。一部の実施形態において、１８００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与され、ここで、２回の９００ｍｇの用量が、約１２時間空けて投与される。一部の実施形態において、２４００ｍｇの本化合物は、１日当たり２回投与され、ここで、２回の１２００ｍｇの用量が、約１２時間空けて投与される。
【００９７】
さらなる実施形態において、ＣＯＨ２９医薬組成物に適した１日分投薬量は、体重当たりで、ＣＯＨ２９又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物に対して、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１００．０ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、ＣＯＨ２９医薬組成物に適した１日分投薬量は、体重当たりで、ＣＯＨ２９又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物に対して、約０．７５ｍｇ／ｋｇ〜約７５ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態において、ＣＯＨ２９医薬組成物に適した１日分投薬量は、体重当たりで、ＣＯＨ２９又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物に対して、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態において、ＣＯＨ２９医薬組成物に適した１日分投薬量は、ＣＯＨ２９又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物に対して約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、約２２ｍｇ／ｋｇ、約２３ｍｇ／ｋｇ、約２４ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約２６ｍｇ／ｋｇ、約２７ｍｇ／ｋｇ、約２８ｍｇ／ｋｇ、約２９ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、３１ｍｇ／ｋｇ、約３２ｍｇ／ｋｇ、約３３ｍｇ／ｋｇ、約３４ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約３６ｍｇ／ｋｇ、約３７ｍｇ／ｋｇ、約３８ｍｇ／ｋｇ、約３９ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、４１ｍｇ／ｋｇ、約４２ｍｇ／ｋｇ、約４３ｍｇ／ｋｇ、約４４ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約４６ｍｇ／ｋｇ、約４７ｍｇ／ｋｇ、約４８ｍｇ／ｋｇ、約４９ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ又は約１００ｍｇ／ｋｇである。
【００９８】
一部の実施形態において、本明細書において記述されたＣＯＨ２９医薬組成物は、ＣＯＨ２９の最大耐量（ＭＴＤ）で提供される。他の実施形態において、投与されるＣＯＨ２９医薬組成物の量は、最大耐量（ＭＴＤ）に対して約１０％〜約９０％、ＭＴＤに対して約２５％〜約７５％、又は、ＭＴＤに対して約５０％である。一部の他の実施形態、投与されるＣＯＨ２９医薬組成物の量は、ＣＯＨ２９のＭＴＤに対して、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％以上、又は、これらの中から導出可能な任意の範囲である。
【００９９】
別の態様において、本明細書において開示された医薬組成物を２１日間にわたって毎日投与した後で７日間にわたって医薬組成物を投与しないように構成された供給器を含む、キットが提供される。
【０１００】
一部の実施形態において、供給器は、１日当たり１〜６つの医薬組成物投薬単位を吐出するように構成される。
【０１０１】
一部の実施形態において、キットは、前記医薬組成物を７日間投与しない間毎日投与するための７つのプラセボ製剤投薬単位をさらに含む。
【実施例】
【０１０２】
ＤＮＡ損傷作用のある薬物の有効性は、細胞のＤＮＡ修復能（９）によって大きく影響及び調節される。実際、ＤＮＡ修復の小分子阻害剤は、前臨床研究（１８）において、従来の化学療法薬と組み合わせられてきており、これは、ＤＮＡ修復の仕組みが、新規ながん治療のための有望な目標であることを指し示している。さらに、ＰＡＲＰ阻害剤は、臨床試験において、白金化学療法と組み合わせられてきた（１９、２０）。これらの報告と一致する事柄としては特に、ＣＯＨ２９がシスプラチンの細胞、特にＢＲＣＡ１欠損細胞に対する感受性を向上することが発見された。これは、ＣＯＨ２９の合成致死性が、ＨＲ欠損細胞におけるＮＥＲ又はＢＥＲに依存することを示唆している。ＣＯＨ２９は、いくつかのＤＮＡ修復経路（ＮＥＲ、ＢＥＲ及びＨＲ）に干渉し得、シスプラチンの存在下又は非存在下においてＢＲＣＡ１欠損細胞中に観察される細胞毒性に寄与し得る。したがって、ＣＯＨ２９は、強力なＤＮＡ修復阻害剤として活用できる可能性がある。
【０１０３】
すべての細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）から入手した。細胞は、３７℃で５％ＣＯ２中において、培地（Ｓｉｇｍａ）１ｍｌ当たり１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン及び１００Ｕのペニシリン及び１００μｇのストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ）中に取り込んだ状態で維持した。ＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞を単離するために、ＨＣＣ１９３７親細胞に、完全長ＢＲＣＡ１  ｃＤＮＡを発現したｐｃＤＮＡ３．１プラスミドをトランスフェクトした。安定なトランスフェクタントクローンを選択し、薬物感受性アッセイに使用した。安定なトランスフェクションという目的で、製造業者の取扱い説明書に従ってＦＵＧＥＮＥ（Ｒ）６ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎ試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｍｏｎｚａ、Ｉｔａｌｙ）を使用して、３０〜４０％のコンフルエントの細胞を、２ｍｇのプラスミドＤＮＡと一緒に終夜インキュベートした。次いで、細胞を、ピューロマイシン（１μｇ／ｍｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ、ＵＳＡ）中に取り込んだ状態で選択した。２０〜３０日後、ＨＣＣ１９３７トランスフェクションからの生存ピューロマイシン耐性コロニーを展開し、スクリーニングした。ピューロマイシンを安定に発現し、成長可能性を保持していたクローンを、ウエスタンブロット分析によってＢＲＣＡ１発現についてアッセイした。ピューロマイシン耐性ｃＤＮＡ／トランスフェクタント細胞におけるＢＲＣＡ１発現の回復を、ウエスタンブロット分析によって評価した。これらのトランスフェクション細胞は、ＢＲＣＡ１タンパク質の発現の増大を示していたが、これは、タンパク質発現の効果的な回復を示唆している。
【０１０４】
ＣＯＨ２９は、Ｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｈｏｐｅにおいて合成し、精製した。γ−Ｈ２ＡＸを、ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ、ＵＳＡ）から購入した。Ｒａｄ５１をＮｏｖｕｓ（Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ、ＣＯ、ＵＳＡ）から購入した。β−アクチンは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ、ＵＳＡ）から得た。ＦＯＸＯ３に特異的な抗体（Ｈ−１４４及びＮ−１６、１：１０００）、ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｈ２ＡＸ  ｓｅｒｉｎｅ−１３９（γ−Ｈ２ＡＸ、１：１，０００）、ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ５３  ｓｅｒｉｎｅ−１５（ｐ５３−ｐＳ１５、１：１，０００）、Ｒａｄ５１（１：１０００）、β−チューブリン（１：１０００）、ラミンＡ／Ｃ（１：２０００希釈）ＰＡＲＰ及びａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ及びａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧを、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ、ＵＳＡ）から得た。ＦＯＸＯ３（１：１，０００）及びｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＴＭ  ｓｅｒｉｎｅ−１９８１（ＡＴＭ−ｐＳ１９８１、１：１，０００希釈）に対するＡｂは、それぞれＥｐｉｔｏｍｉｃｓ（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）及びＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）から得た。ｐ５３−ｐＳ１５に対するＡｂを、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｎｖｅｒｓ、ＭＡ）から購入した。抗ｐ２７Ｋｉｐ１  Ａｂを、ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入した。Ａｌｅｘａ  ４８８（緑色）共役及びＡｌｅｘａ  ５９４（赤色）共役二次Ａｂを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）から得た。Ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ（分子全体）−ＦＩＴＣ抗体を、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）から購入した。ＲＨＯＤＡＭＩＮＥ  ＲＥＤ−Ｘ（商標）Ｇｏａｔ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）から購入した。
【０１０５】
先述のように（２１、２２）、免疫蛍光法実験を実施した。具体的には、Ａ５４９細胞をカバーガラス上で成長させた。２４時間又は４８時間のＣＯＨ２９（１μＭ又は１０μＭ）による治療後、４％パラホルムアルデヒドによって１０分間細胞を固定し、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００（０．５％）によって透過処理した。これらのカバーガラスをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）によって洗浄し、ＰＢＳ含有２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）によってブロッキングし、ＦＯＸＯ３又はＡＴＭ−ｐＳ１９８１又はγ−Ｈ２ＡＸ又はｐ５３−ｐＳ１５（１：５０〜１：２００希釈）に対して特異的なＡｂと一緒にインキュベートし、続いて、Ａｌｅｘａ  ４８８−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ又はａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ（１：２００）、Ａｌｅｘａ  ５９４−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｎｔｉ−ｇｏａｔ（１：１００）二次Ａｂ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）と一緒にインキュベートした。細胞を４’，６−ジアミジノ−２−フェニリンドール（ＤＡＰＩ；Ｓｉｇｍａ）と一緒にインキュベートして、核を染色した。特異的染色を可視化し、Ｌｅｉｃａ  ＳＰ２  ＡＯＢＳ共焦点レーザー走査型顕微鏡によって画像を取得した。病巣陽性細胞を測定するために、約３００個の細胞を共焦点顕微鏡法によって無作為に捕集し、使用した。検討する病巣陽性細胞の百分率は、少なくとも５個の病巣を含有する細胞から計算した。提示されている各エラーバーは、標準偏差の平均である。
【０１０６】
細胞より下のレベルへの分画のために、細胞をトリプシン処理し、冷ＰＢＳ溶液によって２回洗浄した。１，２００ｇで５分間遠心分離した後、０．２％ＮＯＮＩＤＥＴ（商標）Ｐ−４０（ＮＰ−４０）を含有するバッファー（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ）中で細胞をインキュベートし、プロテアーゼ阻害剤（それぞれ５μｇ／ｍｌのペプスタチン、ロイペプチン及びアプロチニン）及びホスファターゼ阻害剤を氷上で５分間添加した。１，０００ｇにおける５分間の遠心分離後、上澄みを（すなわち、細胞質画分）を収集し、同じバッファーによってペレットを２回洗浄した。洗浄した試料は、核分画のための０．５％ＮＰ−４０を含有する分画バッファーによって、４０分間氷上に抽出した。すべての試料を超音波処理し、１６，０００ｇにおける１５分間の遠心分離によって清澄化した。すべての画分のタンパク質濃度を、Ｂｉｏ−Ｒａｄタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）によって判定した。先述のように（２１，２２）、イムノブロッティングを実施した。簡単に言うと、等しい量のゆでたタンパク質試料にＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）を施し、ニトロセルロースメンブレン（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）上に移した。メンブレンは、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）を含有するトリス緩衝生理食塩水に取り込んだ状態で、３％ＢＳＡ中において１時間ブロッキングし、１％ＢＳＡを含有するＴＢＳＴ中に希釈した一次抗体（１：５００又は１：１０００）と一緒に１時間インキュベートした。ＴＢＳＴによる２回の洗浄後、メンブレンを、ホースラディッシュペルオキシダーゼ共役二次Ａｂ（１：３０００希釈）と一緒に室温で１時間インキュベートした。Ｗｅｓｔ−Ｑ化学発光キット（ＧｅｎＤＥＰＯＴ、Ｂａｒｋｅｒ、ＴＸ）によって、イムノブロットをフィルム上に可視化した。
【０１０７】
ＭＴＴと一緒にインキュベートし、生存細胞によって形成されたＭＴＴホルマザンを、５６０ｎｍの波長でマイクロプレートリーダーによってモニタリングすることによって、ＭＴＴ細胞毒性アッセイを実施したが、生存率は、次の式を使用して決定した：
（Ａｔｅｓｔ−Ａｂｌａｎｋ）／（Ａｃｏｎｔｒｏｌ−Ａｂｌａｎｋ）×１００％。半自動的な蛍光に基づくデジタルイメージング顕微鏡法システム（ＤＩＭＳＣＡＮ）を使用して、９６ウェルプレート内で細胞毒性を判定した。ＤＩＭＳＣＡＮは、デジタルイメージング顕微鏡法を使用して、生細胞を定量化し、これによって、ＦＤＡ（フルオレセインジアセテート；Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）を選択的に蓄積させる。ＤＩＭＳＣＡＮは、デジタル式スレッショルド化及びエオシンＹ（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  Ｂａｋｅｒ、Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ、ＰＡ）によるクエンチによってバックグラウンド蛍光を除いた後で、ウェル１個当たりの全蛍光（生存細胞の数に比例する）を定量化することによって、４ｌｏｇの動的範囲にわたって細胞毒性を測定することができる。細胞は、細胞株の成長速度に応じて、ウェル１個当たり２，０００〜５，０００個の細胞として、１００μＬの完全培地中で９６ウェルプレートに播種した。終夜インキュベーションした後、５０μＬの培地中で様々な濃度において試験化合物を各ウェルに加えた。３７℃で９６時間薬物と一緒にインキュベーションした後、ＦＤＡ（最終濃度：１０ｍｇ／ｍＬ）及びエオシンＹ［最終濃度：０．１％（ｗ／ｖ）］を各ウェルに加え、細胞を３７℃でさらに２０分間インキュベートした。次いで、ウェル１個当たりの全蛍光を、ＤＩＭＳＣＡＮを使用して測定したが、この結果は、処理済みのウェルにおける蛍光の、無処理のウェルにおける蛍光に対する比（生存率）として表した。
【０１０８】
正所性腫瘍モデル。Ｃｉｔｙ  ｏｆ  ＨｏｐｅのＩＡＣＵＣによって承認されたプロトコルを使用して、マウスにおける実験を実施した。ＨＣＣ１９３７及びＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞は、ゆっくりと成長する腫瘍を形成するため、ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して植え込まれた。腫瘍を確定させるために、５０％ＭＡＴＲＩＧＥＬ（商標）を含有する２００μＬの無血清培地中の４×１０６細胞を、１組の８週齢の雌のＮＳＧマウスの鼠径部の周りにある乳房脂肪体に注射した。初期腫瘍が直径１３ｍｍに到達したらすぐに、これらの初期腫瘍を切開して取り出し、３ｍｍの小片に切り刻み、実験マウスの乳房脂肪体の鼠径部に植え込んだ。腫瘍は、２８日間の期間にわたって測定されたが、各時点において、スチューデントｔ検定を使用して、３０％ｓｏｌｕｔｏｌ中の４００ｍｇ／ｋｇのＣＯＨ２９を毎日強制摂食させることと、対応するビヒクル対照との統計学的有意性を判定した。０．０５未満のｐ値（両側検定）は、統計学的有意性を指し示していると考えた。
【０１０９】
先述のように（２３）、ＥＪ２細胞を生成して、ＧＦＰの蛍光強度のモニタリングによってＡｌｔ−ＮＨＥＪを評価し、ＥＪ５細胞を使用して、ＮＪＥＪを判定した。細胞を６ウェルプレートに播種し、異なる濃度のＣＯＨ２９又はシスプラチンによって２４時間処理した。次いで、細胞をトリプシン処理し、洗浄し、フローサイトメトリーによって分析した。
【０１１０】
抗ヒトＢＲＣＡ１  ｓｉＲＮＡ発現を発現するプラスミドの構築を、先述のように実施した（２４）。したがって、これまでに公開された抗ヒトＢＲＣＡ１  ｓｉＲＮＡ配列を利用した（５’−ＵＣＡＣＡＧＵＧＵＣＣＵＵＵＡＵＧＵＡ−３”［配列番号：１］及び
５’−ＵＡＣＡＵＡＡＡＧＧＡＣＡＣＵＧＵＧＡ−３’［配列番号：２］）。いずれの場合においても、ｓｉＲＮＡをコードするアニールしたオリゴヌクレオチド二本鎖を、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ依存性Ｈ１  ＲＮＡプロモーターの制御下で発現するように発現ベクターｐｓｉＲＮＡ−ｈＨ１ｚｅｏ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）中にサブクローン化した。電気穿孔法によって、等モル濃度で提示のプラスミドを用いて、細胞をトランスフェクトした。
【０１１１】
ＲＮＥＡＳＹ（Ｒ）Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ  Ｉｎｃ．）を使用して、全ＲＮＡを単離した。ゲノムＤＮＡのコンタミネーションを、ＤＮＡｓｅ  Ｉ処理によって除去した。単離されたＲＮＡの完全性を、１％アガロースゲル（ＳｅａＫｅｍ、ＦＭＣ、Ｒｏｃｋｌａｎｄ、ＭＥ、ＵＳＡ）又はＡｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いて、電気泳動によって検査した。ＲＮＡ濃度（Ａ２６０／Ａ２８０比）を、紫外分光光度法によって判定した。ＭＭＬＶ逆転写酵素及びプライマー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）としてのランダムヘキサマーを使用して、全ＲＮＡからｃＤＮＡを調製した。ｃＤＮＡ試料を使用して、リアルタイムＰＣＲによって、遺伝子の発現を定量化した。ＢＲＣＡ１用のプライマーは、ＡＰＰＬＩＥＤ  ＢＩＯＳＹＳＴＥＭＳ（Ｒ）、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡから購入した。１８Ｓ及びβ−アクチンのためのさらなるプライマー及びプローブを、ＡＰＰＬＩＥＤ  ＢＩＯＳＹＳＴＥＭＳ（Ｒ）ガイドライン（ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳ（Ｒ）ソフトウェア；ＡＰＰＬＩＥＤ  ＢＩＯＳＹＳＴＥＭＳ（Ｒ））に従って、リアルタイムＰＣＲ要件に適合するように設計した。プライマーの配列は、ＡＧＧＡＡＴＴＧＣＧＧＧＡＧＧＡＡＡＡＴＧＧＧＴ（配列番号：３）及びＧＣＣＣＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＴＴＴＣＴＧＴＣＣＴ（配列番号：４）だった。
【０１１２】
製造業者のプロトコルに従ってＰＡＲＰ１化学発光法アッセイキット（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を使用して、ＰＡＲＰ１活性を判定した。簡単に言うと、試験用阻害剤、陽性対照、基質対照及びブランク反応を使用して、２５℃において１時間、ＰＡＲＰアッセイバッファー中で活性化されたＤＮＡによって、リボシル化反応を実施した。検出は、ストレプトアビジン−ＨＲＰによるものであり、化学発光性基質Ａ及びＢを光度計で読み取った。
【０１１３】
ゼブラフィッシュ（ダニオ・レリオ（Ｄａｎｉｏ  ｒｅｒｉｏ））をＴａｉｐｅｉ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙのｚｅｂｒａｆｉｓｈ  Ｃｏｒｅ  ｆａｃｉｌｉｔｙから入手し、明が１４時間で暗が１０時間のサイクルにより２８℃に維持した。胚を２８℃でインキュベートし、異なる発生段階を、記述されたようにして判定した（２５）。異なる濃度のＨＵ（０、５、１０、２０、５０ｍＭ）又はＣＯＨ２９（０、１０、２０、５０、１００μＭ）を用いて、２０ｈｐｆにおいて野生型胚を処理して、変異原性効果を評価した。１５個の胚を、ウェルの状態に応じて処理した。処理済みの胚は、２ｄｐｆ、３ｄｐｆ、４ｄｐｆ、５ｄｐｆ及び６ｄｐｆにおいて観察した。６ｄｐｆにおいて、魚類が示す発生異常の百分率及び生存率を判定した。Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ７０−ＦＬＡ倒立型蛍光顕微鏡を使用して、胚を観察した。画像は、ＳＰＯＴデジタルカメラシステム（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｓｔｅｒｌｉｎｇ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、Ｍｉｃｈｉｇａｎ、ＵＳＡ）を使用して撮影し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアによってまとめた（２６）。
【０１１４】
ＰＡＲＴＥＫ（Ｒ）ＧＥＮＯＭＩＣＳ  ＳＵＩＴＥ（商標）（バージョン６．６；Ｐａｒｔｅｋ，Ｉｎｃ．）を使用して、マイクロアレイ試料をＲＭＡ正規化したが（２７）、遺伝子は、当該遺伝子が少なくとも１．２倍の変化及び０．０５未満の誤発見率（ＦＤＲ）を示した場合に、差次的発現していると規定された。ＦＤＲ値は、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ及びＨｏｃｈｂｅｒｇ（２８）の方法を使用して、線型対比ｐ値によるＡＮＯＶＡの分布から計算した。遺伝子オントロジー（ＧＯ）（２９）エンリッチメント分析を、ＰＡＲＴＥＫ（Ｒ）ＧＥＮＯＭＩＣＳ  ＳＵＩＴＥ（商標）の中で実施したが、ＧＯカテゴリーは、Ｆｉｓｈｅｒの正確検定ｐ値が０．０５未満である場合に有意だと規定した。
【０１１５】
ＲＲＭ２−ＰＡＲＰ１相関分析は、Ｉｖｓｈｉｎａらの研究に基づいて、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ（Ｒ）Ｕ１３３Ａ＆Ｂ（ＧＳＥ４９２２）を使用して、パラフィンに埋め込んだ２８９個の乳がん腫瘍試料の遺伝子発現プロファイル作成処理から判定した。（３０）Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  Ｒパッケージ、６４ビット、バージョン３．０．２を使用して、統計学的分析を実施した。（３１）スピアマンの順位相関を使用して、相関分析を実施した。Ｐ＜０．０５及びｒ＞０．５のレベルは、統計学的に有意であると考えた。
【０１１６】
ＳＶ４０複製起点を含有するｐＳＶＯ＋プラスミドのインビトロ複製を、これまでに公開された態様で（２６）、修正を加えて実施した。最終的な２５μＬの反応容積は、３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ＝７．２）、７ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５  ｍＭ  ＤＴＴ、５μＣｉ［α−３２Ｐ］−ｄＣＴＰ、１μＭ  ｄＣＴＰ、それぞれ１００μＭのｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及びｄＧＴＰ、それぞれ２００μＭのＣＴＰ、ＵＴＰ及びＧＴＰ、４ｍＭ  ＡＴＰ、４０ｍＭのクレアチンリン酸、５０μｇのクレアチンホスホキナーゼ、５０ｎｇのｐＳＶＯ＋、０．１〜１．０μｇのＴＡｇ（滴定アッセイによって判定された最適な濃度）並びに（滴定アッセイによって判定された）最適な量のＨｅＬａ抽出物（Ｃｈｉｍｅｒｘ；Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）を内包していた。ＤＮＡ複製の阻害を定量化するために、反応の開始前に３０分間ＣＯＨ２９の濃度を高めながらＨｅＬａ抽出物をインキュベートした。ＨｅＬａ化合物混合物を残りのＳＶ４０ＤＮＡ複製成分に加え、３７℃で１時間インキュベートし、ＷＨＡＴＭＡＮ（Ｒ）ＤＥ８１フィルターにスポットし、１００ｍＭピロリン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）及び３００ｍＭギ酸アンモニウム（ｐＨ７．４）によって洗浄した後、乾燥させた。次いで、新たに合成されたＤＮＡ娘鎖中に導入された放射性標識材料の量を、液体シンチレーション計数によって判定した。
【０１１７】
いかなる特定の理論にも拘束されることはないが、ＣＯＨ２９抗がん活性は、ＤＮＡ複製のためのデオキシリボヌクレオチドの生合成用の酵素であるヒトリボヌクレオチドレダクターゼ（ｈＲＲ）の阻害に少なくとも部分的に起因し得る。さらに、塩基除去修復複合体の成分として、リボヌクレオチドレダクターゼもまた、ＤＮＡ修復に関与する。この結果、いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、修復用複合体に属するいくつかのさらなる成分を標的とすることが、本明細書において発見された。さらに、いくつかの実施形態において、ＢＲＣＡ１欠損ヒト乳がん又は卵巣がん細胞は、野生型ＢＲＣＡ１の相当物に比べてＣＯＨ２９に対する感受性がより高い。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＢＲＣＡ１突然変異細胞において、シスプラチン等のＤＮＡ架橋薬との間に相乗効果を示す。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、いかなる特定の理論にも拘束されるわけではないが相同組換え（ＨＲ）経路によって二本鎖切断（ＤＳＢ）の修復に関与するＲＡＤ５１を抑制することが、本明細書において発見された。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、複数のＤＮＡ修復経路を標的としており、潜在的には、遺伝的背景（突然変異）に起因したバックアップ用のＤＮＡの修復を調節する。いくつかの実施形態において、ＣＯＨ２９は、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、ＰＡＲＰ１阻害剤）に対する獲得耐性を克服することができる。いかなる特定の理論にも拘束されるわけではないが、薬理学的には、ＣＯＨ２９は、ゲムシタビン耐性ヒトがん細胞の増殖を抑制し、シスプラチン又はγ線照射と相乗作用することが、本明細書において発見された。
【０１１８】
ＣＯＨ２９は、いかなる特定の理論にも拘束されるわけではないが、ｈＲＲＭ１とｈＲＲＭ２との界面に配置されたｈＲＲＭ２サブユニットにある構造的に保存されたリガンド結合用のポケット部を占有する、芳香族置換されたチアゾール化合物である（図１０）。いくつかの実施形態において、このポケット部に結合することにより、ｈＲＲＭ１／ｈＲＲＭ２組立体を阻害し、ＲＲ活性を効果的に阻害する。インビトロにおいて、ＣＯＨ２９は、複数のヒトがん細胞株中で活性であるが、非常に強力であり、大抵の場合において１０μＭ未満のＩＣ５０を有することが示された。ＣＯＨ２９は、ＮＣＩ−６０細胞株パネルにおいて広範な活性を有すること、及び、例えばヒト卵巣がん細胞株が挙げられる複数のヒト乳がん細胞株が、ＣＯＨ２９に対して感受性が良いことが、示されてきた（６）。乳がん及び卵巣がんは、母集団（３２）に比べて突然変異ＢＲＣＡ１遺伝子のキャリアの方がより高い頻度で発生する。したがって、本明細書においては、ＢＲＣＡ１を欠損したヒトがん細胞がＣＯＨ２９に対する高められた感受性を実証するかどうかを調査した。実際、図１Ａに提示のように、ホモ接合型２５９４ｄｅｌＣ突然変異（３３）によって短縮されたＢＲＣＡ１タンパク質を発現するＵＷＢ１．２８９卵巣がん細胞株は、野生型ＢＲＣＡ１（ＩＣ５０：３１．５７±３．３５μＭ）を発現したＯＶ９０ヒト卵巣がん細胞株に比べて、ＣＯＨ２９（ＩＣ５０：１２．３０±１．１５μＭ）に対する感受性がより高かった。
【０１１９】
ＣＯＨ２９の効果は、同一の遺伝的背景を有し、ＢＲＣＡ１発現のみが異なる、複数の乳がん細胞において査定して、突然変異ＢＲＣＡ１が細胞毒性を増大させる程度を判定した。最初に、ＢＲＣＡ１発現をサイレンシングする効果を検査した。ＨＣＣ１９３７は、短縮されたＢＲＣＡ１タンパク質の内因性発現をもたらす、挿入突然変異に対してホモ接合型のヒト乳がん細胞であり（３４）、ＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１は、ヒト野生型ＢＲＣＡ１タンパク質を発現した安定なトランスフェクタントクローンである。ＢＲＣＡ１発現は、これらの細胞におけるＲＮＡ干渉によって抑制された。１０μＭ  ＣＯＨ２９によって７２時間処理した後、対照ｓｉＲＮＡをトランスフェクションしたＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞のうちの７２％が、生存した。対照的に、ＢＲＣＡ１  ｓｉＲＮＡをトランスフェクションした細胞のうち５３％のみが生き残った。ＣＯＨ２９細胞毒性に及ぼされる野生型ＢＲＣＡ１発現を回復する効果を、ＨＣＣ１９３７と、ＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞とを比較することによって調査した。相異なる用量のＣＯＨ２９によって７２時間処理された場合、野生型ＢＲＣＡ１を発現した細胞は、ＢＲＣＡ１突然変異ＨＣＣ１９３７細胞（ＩＣ５０：７．２５±０．６４μＭ）に比べてＣＯＨ２９（ＩＣ５０：３５．０１±３．６３μＭ）に対する感受性が格段に低かった。リアルタイム逆転写酵素ポリメラーゼ鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）は、ＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞が、ＨＣＣ１９３７より約２．５倍高いレベルのＢＲＣＡ１を発現することを示した。
【０１２０】
ＣＯＨ２９に対するＢＲＣＡ１欠損細胞の感受性を、正所性腫瘍外植体モデルにおいてさらに確認した。マウスの乳房脂肪体に植え込まれたＨＣＣ１９３７腫瘍の成長は、４００ｍｇ／ｋｇのＣＯＨ２９を毎日経口投薬することによって、ビヒクルに比較して有意に（ｐ＝０．０００７）抑制された（図１Ｂ）。対照的に、同質遺伝子型ＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞によって確立された腫瘍は、ビヒクル対照の場合に比べてＣＯＨ２９処理済みのマウスの方が有意により小さいということはなかった（ｐ＝０．１５７７；図１Ｃ）。
【０１２１】
卵巣がん細胞におけるＣＯＨ２９による処理への応答に及ぼされるＢＲＣＡ１突然変異の影響もまた、検査した。ＵＷＢ１．２８９＋ＢＲＣＡ１は、ヒト野生型ＢＲＣＡ１遺伝子を発現した卵巣がん細胞の安定なトランスフェクタントクローンであり、ＵＷＢ１．２８９は、ネオマイシン耐性遺伝子を発現した対照プラスミドをトランスフェクトした親細胞である。これらの細胞は、相異なる用量のＣＯＨ２９によって７２時間処理した。ｗｔ  ＢＲＣＡ１を発現した細胞は、ＣＯＨ２９に対する感受性が減じていた（ＵＷＢ１．２８９＋ＢＲＣＡ１及びＵＷＢ１．２８９のそれぞれに関して、ＩＣ５０：２３．５２±２．３８μＭ及び１２．３０±１．１５μＭ）。ＲＴ−ＰＣＲアッセイは、ＵＷＢ１．２８９＋ＢＲＣＡ１細胞が、ＵＷＢ１．２８９より約３．０８倍高いレベルのＢＲＣＡ１を発現することを示した。この結果は、ＣＯＨ２９が、ＢＲＣＡ１を欠損したヒトがん細胞において、より大きな致死性を誘導し得ることを示唆している。ＣＯＨ２９に関するさらなる薬理学的データが、表１及び表２において提供されている。特に重要であるのは、ＣＯＨ２９が、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素又はシスプラチンに耐性がある様々なヒトがん細胞の成長を抑制するという発見である（表１及び図１１Ａ（ＫＢ−Ｇｅｍ）及び図１１Ｂ（ＫＢＨＵＲ））。
【０１２２】
ＣＯＨ２９は、リンパ球種（ＭＯＬＴ−４）（図１２Ａ）及び卵巣（ＴＯＶ１１２Ｄ）（図１２Ｂ）マウス異種移植片腫瘍を阻害した。腫瘍リボヌクレオチドレダクターゼ活性も低下したが、これに対応して、腫瘍内ｄＮＴＦプールが減少した（図１２Ｃ及び図１２Ｄ）。ＣＯＨ２９は、ＨＣＣ１９３７  ＢＲＣＡ１野生型乳がん細胞の場合に比べて、インビトロにおけるＨＣＣ１９３７  ＢＲＣＡ１欠損乳がん細胞（図１３Ａ）及びマウス乳房脂肪体正所性腫瘍異種移植片（図１３Ｂ）のときに、有意により効果的であることが示された。
【０１２３】
ＣＯＨ２９がＢＲＣＡ１突然変異ヒトがん細胞を優先的に溶解させる機構を確認するという目的で、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ（Ｒ）遺伝子Ｃ臀部（Ｒ）マイクロアレイプラットフォームを使用して、ゲノムワイドマイクロアレイ分析を実施して、ＣＯＨ２９処理によって影響される遺伝子発現プロファイル及び経路を確認した。ＢＲＣＡ１を欠損したＣＯＨ２９処理済みのＨＣＣ１９３７乳がん細胞のＲＮＡ発現プロファイルを、ＣＯＨ２９処理済みのＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞のＲＮＡ発現プロファイルと比較した。ＨＣＣ１９３７−ＣＯＨ２９細胞と、ＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１−ＣＯＨ２９細胞との両方が、ＤＮＡ修復遺伝子に関する遺伝子オントロジー（ＧＯ）エンリッチメントを示しており（表１ａ；ｐ値は、０．００４６〜０．００６９の範囲である）、これは、ＣＯＨ２９がＤＮＡ修復経路に干渉することを示唆している。例えば、ＤＮＡ修復に関与するＤＮＡライゲーションは、表現型の効果に関係し得るＨＣＣ１９３７細胞中では、より強く強化される。ＢＲＣＡ１野生型細胞において、ＣＯＨ２９によって誘導されたＤＮＡ損傷のシグナリングは、ＢＲＣＡ１及びＲａｄ５１の発現を抑制したが、これは、ＣＯＨ２９は、相同組換え（ＨＲ）経路を阻害して、ＣＯＨ２９活性化ＤＤＲ（ＤＮＡ損傷応答）によって誘導される二本鎖切断（ＤＳＢ）を維持できることを示唆している。
【０１２４】
【表１】
2020505435.tif 000008
【０１２５】
【表２】
2020505435.tif 000009
【０１２６】
公に利用することが可能な乳がん及び卵巣がん患者コホートにおける遺伝子発現の研究を検査して、ＲＲＭ２とＰＡＲＰ１との遺伝子発現相関を検証した。卵巣がんコホート（ｎ＝９０、ｐ＝０、ｒ＝０．６２；図２Ｂ）に関するＡｎｇｌｅｓｉｏらの調査（３５）のときの、乳がんコホート（ｎ＝２８９、Ｐ＝０、ｒ＝０．５６；図２Ａ）に関するＩｖｓｈｉｎａらの調査（３０）、並びに、ＲＲＭ２及びＰＡＲＰ１遺伝子発現の相関分析における、ＲＲＭ２とＰＡＲＰ１との相関を観察した。選択された患者コホートにおけるさらなる遺伝子型と表現型との相関は、慣例的な乳房及び卵巣用の化学療法と組み合わせたＣＯＨ２９による標的化治療に関する危険性プロファイルを決定するために役立ち得る。
【０１２７】
ＣＯＨ２９がＢＲＣＡ１突然変異ヒトがん細胞を優先的に溶解させることになる機構を、標的タンパク質を同定しようとする試みによって探索した。標的タンパク質（１種又は複数）の発現プロファイルは、ＣＯＨ２９との相互作用によって影響され得る。例えば、標的タンパク質へのＣＯＨ−２９の結合は、プロテアソームの補充によって、標的タンパク質の分解を誘導することができる。同様に、タンパク質レベルの変化は、対応する遺伝子の発現パターンを改変し得る。マイクロアレイ分析を実施して、ＣＯＨ２９治療の結果として差次的発現した遺伝子を同定した。ＢＲＣＡ１を欠損したＣＯＨ２９治療済みのＨＣＣ１９３７乳がん細胞のＲＮＡ発現プロファイルを、ＣＯＨ２９治療済みのＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞のＲＮＡ発現プロファイルと比較した。差次的発現した遺伝子のクラスタリングは、図２Ａ及び２Ｂに示されている。
【０１２８】
ＣＯＨ２９がｈＰＡＲＰ１を阻害したかどうかを判定するために、ＰＡＲＰ１活性を、ＣＯＨ２９によって処理された細胞又は処理されなかった細胞の溶解物中において、４時間、８時間又は２４時間検査した。ＢＲＣＡ１を欠損したヒト乳がんＨＣＣ１９３７細胞においては、２４時間のＣＯＨ２９インキュベーションは、ＰＡＲＰ１活性を４１．０８％低下させたが（無処理の場合における７２６１７７ｃｐｓと、ＣＯＨ２９処理された場合における４２７８５１ｃｐｓとの対比）、同様に処理されたＢＲＣＡ１を含有するＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞においては、ＰＡＲＰ１活性が１２．６６％（無処理の場合における２３３６８７８ｃｐｓと、ＣＯＨ−２９処理された場合における２０４１０９７ｃｐｓとの対比）低下した（図３Ａ）。
【０１２９】
ＣＯＨ２９によるＰＡＲＰ１の阻害は、ＵＷＢ１．２８９ヒト卵巣がん株においては、より劇的なものだった（図３Ａ）。ＰＡＲＰ１活性は、８時間のＣＯＨ２９処理後のＢＲＣＡ１を欠損したＵＷＢ１．２８９細胞において、３１．７９％低下したが（無処理の場合における１１３５５９ｃｐｓと、ＣＯＨ２９処理した場合における７７４６１１との対比）、ＰＡＲＰ１活性は、同様に処理されたｗｔ  ＢＲＣＡ１を発現したＵＷＢ１．２８９＋ＢＲＣＡ１細胞においては、４６．３１％（無処理の場合における１４５７６９ｃｐｓと、ＣＯＨ２９処理した場合における２１２９９４４ｃｐｓとの対比）上昇した。総合すると、これは、ＣＯＨ２９がＰＡＲＰ１を阻害し、これにより、ＢＲＣＡ１欠損ヒトがん細胞における有効性が高まることを指し示している。
【０１３０】
ＰＡＲＰ１のタンパク質レベルに及ぼされるＣＯＨ２９の効果もまた、検査した。ＣＯＨ２９による２４時間の処理は、ＨＣＣ１９３７  ＢＲＣＡ１欠損乳がん細胞において、ＰＡＲＰ１タンパク質を漸減させており、程度は減じるが、ＨＣＣ１９３７−ＢＲＣＡ１  ｗｔ細胞においてもＰＡＲＰ１タンパク質を漸減させている（図３Ｂ）。わずかな低下が、４時間のＣＯＨ２９処理の間に観察された。対照的に、４時間のＡＢＴ−８８８処理は、ＢＲＣＡ１ステータスにかかわらず、ＨＣＣ１９３７細胞中におけるＰＡＲＰ１の有意な低下をもたらした（図３Ｂ）。
【０１３１】
ＢＲＣＡ１突然変異細胞のバックグラウンドにおいてＰＡＲＰ１を阻害することによって得られた合成致死性は、ＤＮＡ損傷作用のある薬物の細胞毒性を増大させ得る。（１８）ＣＯＨ２９によるＰＡＲＰ１の阻害が、ＢＲＣＡ１欠損ヒトがん細胞におけるシスプラチンの細胞毒性を向上するかどうかを、検査した。シスプラチンは、抗がん活性が標的細胞におけるＤＮＡ架橋に主に起因する、幅広く使用されている化学療法用物質である。ｗｔ  ＢＲＣＡ１（ＨＣＣ１９３７＋）を発現したヒト乳がん株ＨＣＣ１９３７の安定なトランスフェクタント又は対照トランスフェクタント（ＨＣＣ１９３７）細胞を、同時に、ＣＯＨ２９及びシスプラチンによって２４時間処理した。生存能力の有意な低下は、２種の薬物による処理後のＨＣＣ１９３７＋ＢＲＣＡ１細胞に比較すると、ＨＣＣ１９３７細胞において起きた（図４Ａ）。並行して実施された対照実験は、ＣＯＨ２９単独又はシスプラチン単独による単一の処理が、度合いは減じているが同様のレベルの２種の細胞株に対する影響をもたらすことを示した（図４Ｂ；同様に表３も参照されたい）。ＣＯＨ２９とゲムシタビン又はγ線照射とのさらなる相乗効果が、観察された（表２）。
【０１３２】
【表３】
2020505435.tif 000010
【０１３３】
ＲＲ阻害薬ヒドロキシ尿素は、遺伝毒性のあるものであることが知られている（３６、３７）。ＣＯＨ２９もＲＲを阻害するため、同様の結果が、ＣＯＨ２９に関しても予想される。ヒト細胞において、このような損傷は、ＤＮＡ損傷チェックポイントを活性化させて、細胞周期の進行を停止させ、これによって、修復のための時間を確保する。いかなる特定の理論にも拘束されることはないが、ＤＮＡ損傷によって開始されるシグナリングは最初に、「毛細血管拡張性運動失調症変異」（ＡＴＭ）及び「ＡＴＭ  ａｎｄ  Ｒａｄ  ３−ｒｅｌａｔｅｄ」（ＡＴＲ）によって仲介される。Ｃｈｋ１及びＣｈｋ２は、Ｃｄｃ２５ホスファターゼをリン酸化する、シグナリングイベントのための下流キナーゼを表す。同様に、Ｃｄｃ２５の阻害は、Ｃｄｋ／サイクリン複合体を抑制して、細胞周期を停止させる（３９）。ＤＮＡ損傷チェックポイントに及ぼされるＣＯＨ２９の効果を査定するために、ｐ５３ステータスが異なる２種の細胞株を利用した。野生型ｐ５３によって活性化されたＤＮＡ損傷チェックポイント（図６の左側のパネル）を内包するＭＣＦ７細胞のＣＯＨ２９処理は、ＡＴＭのリン酸化によって証拠立てられる。下流キナーゼＣＨＫ１及びＣＨＫ２もまた、リン酸化された。ｐ５３（ＭＣＦ−７  ｐ５３−／−）を欠損したＭＣＦ７細胞において、これらのタンパク質もまた、ＣＯＨ２９処理後に同様に修飾された（図６の中央のパネル）。ＤＮＡが損傷すると、ＡＴＭ又はＡＴＲがγ−Ｈ２ＡＸをリン酸化して、損傷したＤＮＡの部位に修復タンパク質を補充する（３９）。γ−Ｈ２ＡＸレベルの増大は、両方の細胞株において、ＣＯＨ２９処理後に起きた。したがって、ＣＯＨ２９処理は、ｐ５３に独立した様式でＤＮＡ損傷チェックポイントを活性化させる。最後に、低減されたレベルのプロゲステロン受容体、エストロゲン受容体及びＨｅｒ２受容体を発現する「トリプルネガティブ」ヒト乳がん細胞におけるＣＯＨ２９の影響を、検査した（３３）。ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞がＣＯＨ２９によって処理された場合、上記キナーゼに関して類似の活性化プロファイルが観察された（図６、右側パネル）。
【０１３４】
ＢＲＣＡ１野生型細胞におけるＣＯＨ２９の効果を、さらに評価した。図７Ａに提示のように、ＣＯＨ２９もまた、核におけるγ−Ｈ２ＡＸ、ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ５３及びｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＴＭの蓄積を誘導した。さらに、ｆｏｘｏ３及びその標的タンパク質ｐ２７の誘導を、ＣＯＨ２９処理済み細胞において観察した（図７Ａ）。さらに、共焦点免疫蛍光法顕微鏡法によって、γ−Ｈ２ＡＸ、ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ５３及びｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＴＭは、核において、ｆｏｘｏ３と共局在化することが判明した（図７Ｂ、図７Ｃ及び図７Ｄ）。この結果は、ＣＯＨ２９が、ＢＲＣＡ１野生型ＮＳＣＬＣ  Ａ５４９細胞においても同様にＤＮＡ損傷を誘導することを指し示している。ＤＮＡ二本鎖切断（ＤＳＢ）は、相同組換え（ＨＲ）又は非相同末端結合（ＮＨＥＪ）経路によって修復することができる。ＤＳＢ  ＤＮＡ修復におけるＣＯＨ２９の役割をさらに解明するという目的で、ＣＯＨ２９は、細胞において、ＧＦＰを主体とした染色体リポーターＥＪ５−ＧＦＰによって、ＮＨＥＪ修復効率にわずかな効果を及ぼすことが判定された（図８Ａ〜図８Ｂ）。しかしながら、ＨＲ修復の原因である重要なタンパク質であるＲａｄ５１の発現に及ぼされるＣＯＨ２９の効果は、ウエスタン分析によると、ＢＲＣＡ１野生型ＮＳＣＬＣ  Ａ５４９細胞の核において、ダウンレギュレーションされた（図７Ａ）。さらに、ＣＯＨ２９は、細胞中におけるＤＳＢマーカーγ−Ｈ２ＡＸの蓄積を伴う、ＢＲＣＡ１及びＲａｄ５１病巣形成のタンパク質レベルを抑制しており（図９Ａ及び図９Ｂ）、これは、ＣＯＨ２９が、ＢＲＣＡ１野生型Ａ５４９細胞におけるＨＲ経路のダウンレギュレーションによって、ＤＮＡ損傷反応（ＤＤＲ）によって誘導されるＤＳＢを長期化できる可能性があることを示唆している。
【０１３５】
ＣＯＨ２９の遺伝毒性を査定するという目的で、１〜７ｄｐｆ（受精後日数）にわたって、種々の用量のＣＯＨ２９（０〜１００μＭ）を用いて野生型ゼブラフィッシュ胚を処理し、発生的欠陥を引き起こすことが知られたＨＵ（０〜５０ｍＭ）によって同様に処理された胚に対して比較した。予想されたとおり、ＨＵは、４ｄｐｆで眼及び心臓に欠陥を発生させており（図５Ａ）、突然変異胚の数が用量に応じて増加した（図５Ｂ）。対照的に、ＣＯＨ２９の存在下においては、発生的欠陥がないこと（図５Ｃ）又は生存可能性（図５Ｄ）の低下が観察された。
【０１３６】
本明細書において、ＣＯＨ２９は、インビトロ研究とインビボ研究との両方において、ＢＲＣＡ１野生型細胞株の場合よりＢＲＣＡ１欠損の場合の方がより活性であることが確認された。ＢＲＣＡ１は、ＤＮＡ損傷に対する細胞応答のメディエーターのうちの１つである。したがって、本明細書においては、ＣＯＨ２９処理済みのＢＲＣＡ１欠損及びＢＲＣＡ１野生型細胞に関する差次的遺伝子発現の分析を実施し、ＰＡＲＰ１がさらなる阻害されたタンパク質であることを確認した。ＣＯＨ２９によって増大したＤＮＡ損傷作用のある作用物質であるシスプラチンの活性。ＣＯＨ２９は、ｐ５３においてＤＮＡ損傷チェックポイントを独立に活性化させ、この核Ｒａｄ５１は、ダウンレギュレーションされる。
【０１３７】
ヒト細胞において、シスプラチンによって形成され得る架橋等のＤＮＡの損傷は通常、ＢＥＲ経路によって修復される。ＲＲは修復のために必要なｄＮＴＰを提供するため、酵素は、Ｓ期中に起きるＢＥＲ密接に関与する。Ｇ１期において、ｐ５３誘導可能なサブユニットｐ５３Ｒ２は、ＢＥＲのためのｄＮＴＰを提供する。ＣＯＨ２９によるＲＲの阻害は、インビボでｄＮＴＰの漸減を起こすことが報告されている（６）。
【０１３８】
ＣＯＨ２９は、本発明者らのデータがＨＲ複合タンパク質Ｒａｄ５１の抑制を示していることによって示唆されているとおり、二本鎖ＤＮＡ切断修復に影響し得る。これは、ＣＯＨ２９が細胞内においてＲａｄ５１タンパク質のレベルを漸減させるという観察によって、指し示されている（図７Ａ）。ＤＮＡ損傷に応答して、ＲＡＤ５１は、サイトゾルから核に移行して、ｓｓＤＮＡにヌクレオフィラメントを形成するが、これは、ＨＲ経路を促進するために必須のステップである（４５、４６）。無処理の細胞において、Ｒａｄ５１の大部分は、サイトゾルにおいて発現している（図７Ｂ、上側パネル）。ＣＯＨ２９への曝露に応答してＲａｄ５１が劇的に低下することと、これと同時進行して、核におけるγ−Ｈ２ＡＸの発現が有意に増大することとは、Ｒａｄ５１が、ＣＯＨ２９に誘導されるＤＳＢにおいて役割を担い得ることを示唆している。このＲａｄ５１に及ぼされるＣＯＨ２９の効果は、複製フォークを停滞させることが知られたＨＵに関して文献で記述されたものに類似しているが（４７）、ここでは、重要な相違点として、ＣＯＨ２９が、ＨＵ（６）より２０倍強力であり、認識可能なほどに遺伝毒性のあるものではないという点がある（図５Ａ〜図５Ｄ）。
【０１３９】
さらに、ＣＯＨ２９は、別の重要なＨＲ成分であるＢＲＣＡ１も抑制した。ＰＡＲＰの阻害は、Ｅ２Ｆ４及びｐ１３０によって仲介されるＢＲＣＡ１及びＲＡＤ５１の発現をダウンレギュレートすることが、報告されてきた（４８）。ＨＲ  ＤＮＡ修復の仕組みを妨害する阻害剤の開発（５１）は、高められたＲａｄ５１発現が数多くの種類のがんにおいて観察されてきており、不良な予後及び薬物耐性と相関している（５２、５３）ため、魅力的なものになってきた。Ｒａｄ５１発現レベルをアップレギュレートすることによるＨＲ能の増大は、ＰＡＲＰ阻害剤に対するがん細胞の耐性の原因になり得ることが報告されてきた（５４）。ＢＲＣＡ１欠損細胞においてさえ、５３ＢＰ１の喪失は、部分的なＨＲ修復を可能にし、ＰＡＲＰ阻害剤に対する獲得耐性を仲介することができる（５５）。ＣＯＨ２９によって誘導される発現レベルのダウンレギュレートによって、Ｒａｄ５１機能を不活性化することは、がんのための潜在的な療法として作用し得る。本発明者らのデータは、ＣＯＨ２９が細胞中においてＢＥＲ、ＮＥＲ及びＨＲ修復経路に干渉し得ることを示しており、これは、ＣＯＨ２９が、遺伝的背景又はＰＡＲＰ阻害剤に対する耐性に起因したバックアップ用のＤＮＡ修復を目的とし得ることを示唆している。
【０１４０】
合成致死性又は他の手段によってＤＮＡ損傷作用のある薬物の効能を増大させることには、ＤＮＡ修復能をインビボで抑制することによって、これらの薬物の変異原性潜在能力を高めてしまう危険性が伴う。ｄｓＢ修復経路の場合、ＰＯＬＤ１の不活性化（上記を参照されたい）は、結腸直腸腺腫及び結腸直腸癌（４９）を引き起こすことが示された。ＲＡＤ５１の多形は、特定のヒトがん型の発症に関連付けられている（５０）。しかしながら、本明細書におけるデータは、ＣＯＨ２９処理が、ＨＵとは異なり、ゼブラフィッシュの胚発生中における眼で見える形態学的異常をもたらさないことを示していた。ここで記述された進歩は、ヒトがんを治療するための現在の戦略のさらなる改善につながる可能性がある。様々なヒト乳がん細胞に及ぼされるＣＯＨ−２９の効果は、表３に示されている。
【０１４１】
【表４】
2020505435.tif 000011
【０１４２】
臨床研究
ファースト−イン−ヒューマン第Ｉ相、単一施設、用量漸増、安全性研究。ＣＯＨ２９に関する実験設計スキームは、図１４に示されている。
【０１４３】
選択基準：（１）  標準療法に対して難治性である又は標準療法が存在しない組織学的に確認された進行した固形腫瘍を患っている１８歳以上の男性患者及び女性患者；（２）  患者は、測定可能な又は評価可能な疾患を有さなければならない；（３）  患者は、骨髄の３０％以下に影響する先行の放射線療法を受けていた場合に、参加することが可能である；（４）  患者は、登録前に４週間以上にわたって臨床的に安定な治療された脳転移の既往がある場合に、登録されることが可能である；（５）  ２以下のＥＣＯＧパフォーマンスステータス；（６）  治療する臨床医の査定によって判定される１２週間超の平均余命；並びに（７）  標準的な実験アセスメントに従った十分な器官機能。
【０１４４】
除外基準：（１）  患者は、研究する治療の開始前に、４週間以上にわたって先行の化学療法又は放射線を受けていなければならない；（２）  患者は、丸剤を飲み込むことができず、又は飲み込むことを望まない；（３）  直近３か月以内での心筋梗塞を含む活動性心臓疾患、症候性冠動脈疾患若しくは心臓ブロック又は無制御のうっ血性心不全；及び（４）  妊婦である又は活発に授乳している女性。
【０１４５】
ヒトにおける最大安全初期用量は、ＦＤＡ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ及び次のステップに基づいて計算される：ステップ１  無毒性量（ＮＯＡＥＬ）を決定する；ステップ２  ヒト等価用量計算（ＨＥＤ）；ステップ３  最も適切な種からＨＥＤを選択する；ステップ４  安全率を適用する（標準は、１０で割ることである）。体表面積に基づいたヒト等価用量への動物用量の変換が、下記の表４に示されている。
【０１４６】
【表５】
2020505435.tif 000012
【０１４７】
前臨床毒性学
毒性に関する懸念は、ＦＤＡによって推奨されている２種の動物毒物学研究において、観察されなかった。このパイロット研究においては、腫瘍異種移植片の成長を阻害することが観察された最も低い用量は、ＩＬ２−ｒｇ（ＫＯ）／ＮＯＤ−Ｓｃｉｄマウスにおいて、毎日の経口投与による５０ｍｇ／ｋｇだった。１０日目又は２１日目において毒性を示さなかった用量の１０倍に等価な用量のときの、ラット及びイヌにおける毒性研究。これらの結果は、下記の表５に示されている。
【０１４８】
【表６】
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【０１４９】
臨床研究において使用される用量レベルは、下記の表６に示されている。１日２８０ｍｇの用量は、ラット（より感受性の高い種）における２５０ｍｇ／ｋｇ／日のＮＯＡＥＬのＨＥＤの１０分の１と、イヌにおける８４ｍｇ／ｋｇ／日との対比である。
【０１５０】
【表７】
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【０１５１】
加速漸増第Ｉ相設計は、図１５に示されている。患者内用量漸増が許可されており、設計は、２つの中等度の毒性又は１つの用量規定毒性（ＤＬＴ）が見受けられる場合、標準的な３＋３に戻る。
【０１５２】
ＤＬＴ規定に関しては、グレード３以上の非血液学的毒性は、次の説明に従って、用量を制限するものであると考えられる：グレード３の下痢は、治療に対して難治性であり、２４時間以内にグレード１以下に補正することができない場合にのみ、用量を制限するものであると考えられる。出血性又はグレード４の下痢は、用量を制限するものであり；グレード３嘔気及び嘔吐は、制吐療法に対して難治性であり、２４時間以内にグレード１以下に補正することができない場合にのみ、用量を制限するものであると考えられ；ＩＶ流体によって２４時間以内にグレード１以下に補正されないクレアチニンにおけるグレード３の上昇は、用量を制限するものであると考えられる。クレアチニンにおけるすべてのグレード４の上昇は、用量を制限するものであり；２４時間以内にグレード１又はベースラインに補正することができないグレード３電解質毒性は、用量を制限するものであると考えられる。腫瘍疼痛は、当該腫瘍疼痛が鎮痛薬による最適な治療に対して難治性ではない限り、用量を制限するものであるとは考えられない。グレード４に関しては、次の事柄が検討される：グレード４血小板減少症；５日以上持続するグレード４好中球減少症又は発熱性好中球減少症；グレード４溶血；未解決の毒性の結果としての２週間超の治療の遅延；及び、任意の度合いの貧血、５日以上持続するグレード４好中球減少症の非存在下における白血球過小症又はリンパ球減少症は、用量を制限するものであるとは考えられない。
【０１５３】
最大用量レベルは、最も近い動物研究において達成された最も高いレベルに対応する、２４００ｍｇ／日（用量レベル８）に上限を定めた。リアルタイムＰＫモニタリングを実施して、投薬が、動物毒物学研究において観察された最大レベルである５０００ｈｒ・ｎｇ／ｍＬのＡＵＣを超えないことを確実にする。患者内用量の漸増は、用量レベルがクリアされた場合に許される。
【０１５４】
第１の患者は、用量レベル１に参加したが（１日に１００ｍｇを２回）、いかなるＤＬＴも伴うことなくクリアした。第２の患者は、用量レベル３に参加したが（１日に２００ｍｇを２回）、グレード２皮膚発疹の中等度の毒性を有していた。第３の患者は、用量レベル５に参加した（１日に４００ｍｇを２回で、いかなるＤＬＴも伴うことなくクリアした。第４の患者は、用量レベル７に参加したが（１日に８００ｍｇを２回）、グレード２下痢の中等度の毒性を有していた。ここで、本試行は、標準的な３＋３用量漸増設計に変わった。第５の患者は、用量レベル７で参加した。第６の患者は、用量レベル７でスクリーニングしている。リアルタイムＰＫモニタリングを、サイクル１のときに患者ごとに実施し、これまでにＦＤＡによって設定されたＡＵＣ安全性しきい値を超えることがないようにした。
【０１５５】
患者は、２８日サイクルのうちの２１日間にわたって、経口用ＣＯＨ２９を１日２回受け取る。用量レベルは、投与日当たり２００〜２４００ｍｇの範囲である。用量漸増は、加速用量設定相（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｄｏｓｅ−ｆｉｎｄｉｎｇ  ｐｈａｓｅ）中に用量レベルの跳躍（用量の２倍化）を可能にするサイモンの加速漸増設計を利用して、追求される。ＰＤ査定は、細胞アポトーシスの度合いを判定するためのプラスマＣＫ１８レベルの測定、ＲＮＲ阻害を評価するための末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるｄＮＴＰ不足レベルの評価、及び、ＰＡＲＰ阻害を査定するためのＰＢＭＣにおけるＰＡＲ発現の測定を含む。デュアルカラー式免疫組織染色を使用する腫瘍ＲＲＭ２発現の定量化は、ＣＯＨ２９に対する抗腫瘍応答の予測用バイオマーカーとして探索されている。
【０１５６】
番号付きの実施形態
１．  がんの治療を必要としている対象のがんを治療する方法であって、
有効量の、構造：
【０１５７】
【化６】
2020505435.tif 000016
を有する化合物を投与することを含み、
前記有効量が、少なくとも投与日当たり約５０ｍｇである、
方法。
【０１５８】
２．  前記有効量が、投与日当たり約５０ｍｇ〜投与日当たり約２４００ｍｇである、実施形態１の方法。
【０１５９】
３．  前記有効量が、投与日当たり約１００ｍｇ〜投与日当たり約２４００ｍｇである、実施形態１又は２の方法。
【０１６０】
４．  前記有効量が、投与日当たり約２００ｍｇ〜投与日当たり約２４００ｍｇである、実施形態１〜３のいずれか１つの方法。
【０１６１】
５．  前記有効量が、投与日当たり約１００ｍｇである、実施形態１〜３のいずれか１つの方法。
【０１６２】
６．  前記有効量が、投与日当たり約２００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１６３】
７．  前記有効量が、投与日当たり約３００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１６４】
８．  前記有効量が、投与日当たり約４００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１６５】
９．  前記有効量が、投与日当たり約５００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１６６】
１０．  前記有効量が、投与日当たり約６００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１６７】
１１．  前記有効量が、投与日当たり約７００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１６８】
１２．  前記有効量が、投与日当たり約８００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１６９】
１３．  前記有効量が、投与日当たり約９００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７０】
１４．  前記有効量が、投与日当たり約１０００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７１】
１５．  前記有効量が、投与日当たり約１１００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７２】
１６．  前記有効量が、投与日当たり約１２００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７３】
１７．  前記有効量が、投与日当たり約１３００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７４】
１８．  前記有効量が、投与日当たり約１４００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７５】
１９．  前記有効量が、投与日当たり約１５００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７６】
２０．  前記有効量が、投与日当たり約１６００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７７】
２１．  前記有効量が、投与日当たり約１７００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７８】
２２．  前記有効量が、投与日当たり約１８００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１７９】
２３．  前記有効量が、投与日当たり約１９００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１８０】
２４．  前記有効量が、投与日当たり約２０００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１８１】
２５．  前記有効量が、投与日当たり約２１００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１８２】
２６．  前記有効量が、投与日当たり約２２００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１８３】
２７．  前記有効量が、投与日当たり約２３００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１８４】
２８．  前記有効量が、投与日当たり約２４００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１８５】
２９．  前記有効量が、投与日当たり約２５００ｍｇである、実施形態１〜４のいずれか１つの方法。
【０１８６】
３０．  前記化合物を２１日間にわたって毎日投与した後で７日間にわたって前記化合物を投与しないことを含む一連の治療を含む、実施形態１〜２９のいずれか１つの方法。
【０１８７】
３１．  前記一連の治療が、２８日間毎日繰り返される、実施形態１〜３０のいずれか１つの方法。
【０１８８】
３２．  前記投与することが、１日当たり１回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０１８９】
３３．  前記有効量が、投与日当たり約１００ｍｇ又は投与日当たり約２００ｍｇである、実施形態３２の方法。
【０１９０】
３４．  前記投与することが、１日当たり２回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０１９１】
３５．  前記有効量が、投与日当たり約３００ｍｇ又は投与日当たり約４００ｍｇである、実施形態３４の方法。
【０１９２】
３６．  前記投与することが、１日当たり３回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０１９３】
３７．  前記有効量が、投与日当たり約６００ｍｇである、実施形態３５の方法。
【０１９４】
３８．  前記投与することが、１日当たり４回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０１９５】
３９．  前記有効量が、投与日当たり約８００ｍｇである、実施形態３８の方法。
【０１９６】
４０．  前記投与することが、１日当たり５回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０１９７】
４１．  前記投与することが、１日当たり６回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０１９８】
４２．  前記有効量が、投与日当たり約１２００ｍｇである、実施形態４１の方法。
【０１９９】
４３．  前記投与することが、１日当たり７回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０２００】
４４．  前記投与することが、１日当たり８回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０２０１】
４５．  前記有効量が、投与日当たり約１６００ｍｇである、実施形態４４の方法。
【０２０２】
４６．  前記投与することが、１日当たり９回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０２０３】
４７．  前記投与することが、１日当たり１０回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０２０４】
４８．  前記投与することが、１日当たり１１回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０２０５】
４９．  前記投与することが、１日当たり１２回である、実施形態１〜３１のいずれか１つの方法。
【０２０６】
５０．  前記有効量が、投与日当たり約２４００ｍｇである、実施形態４９の方法。
【０２０７】
５１．  前記対象が、固形腫瘍がん対象である、実施形態１〜５０の１つの方法。
【０２０８】
５２．  前記対象が、乳がん対象又は卵巣がん対象である、実施形態１〜５１のいずれか１つの方法。
【０２０９】
５３．  前記対象が、難治性固形腫瘍がん対象である、実施形態１〜５２のいずれか１つの方法。
【０２１０】
５４．  前記対象が、乳がん対象である、実施形態５１又は５３の方法。
【０２１１】
５５．  前記乳がん対象が、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である、実施形態５４の方法。
【０２１２】
５６．  前記投与することが、前記対象におけるＤＮＡ修復を阻害する、実施形態１〜５５のいずれか１つの方法。
【０２１３】
５７．  前記投与することが、前記対象における塩基除去修復（ＢＥＲ）、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）又は二本鎖ＤＮＡ切断修復を阻害する、実施形態１〜５５のいずれか１つの方法。
【０２１４】
５８．  前記投与することが、前記対象におけるγ−Ｈ２ＡＸタンパク質の活性又は発現を増大させる、実施形態１〜５５のいずれか１つの方法。
【０２１５】
５９．  前記投与することが、前記対象におけるＲａｄ５１タンパク質の活性又は発現を低下させる、実施形態１〜５５のいずれか１つの方法。
【０２１６】
６０．  前記投与することが、前記対象におけるＢＲＣＡ１タンパク質の活性又は発現を低下させる、実施形態１〜５５の１つの方法。
【０２１７】
６１．  前記投与することが、前記対象におけるＰＡＲＰ１タンパク質の活性又は発現を低下させる、実施形態１〜５５の１つの方法。
【０２１８】
６２．  薬学的に許容される賦形剤及び構造
【０２１９】
【化７】
2020505435.tif 000017
を有する化合物を含む、医薬組成物であって、
前記化合物が、少なくとも約５０ｍｇの量で存在する、
医薬組成物。
【０２２０】
６３．  前記有効量が、約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇである、実施形態６２の医薬組成物。
【０２２１】
６４．  前記量が、約５０ｍｇ〜約５００ｍｇである、実施形態６２又は６３の医薬組成物。
【０２２２】
６５．  前記量が、約５０ｍｇ〜約４００ｍｇである、実施形態６２〜６４のいずれか１つの医薬組成物。
【０２２３】
６６．  前記量が、約５０ｍｇ〜約３００ｍｇである、実施形態６２〜６５のいずれか１つの医薬組成物。
【０２２４】
６７．  前記量が、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇである、実施形態６２〜６６のいずれか１つの医薬組成物。
【０２２５】
６８．  前記量が、約１００ｍｇ〜約２００ｍｇである、実施形態６２〜６７のいずれか１つの医薬組成物。
【０２２６】
６９．  前記量が、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ又は約５００ｍｇである、実施形態６２〜６８のいずれか１つの医薬組成物。
【０２２７】
７０．  経口用医薬組成物である、実施形態６２〜６９のいずれか１つの医薬組成物。
【０２２８】
７１．  前記経口用医薬組成物が、錠剤又はカプセル剤である、実施形態６２〜７０のいずれか１つの医薬組成物。
【０２２９】
７２．  実施形態６２〜７１の１つの医薬組成物を２１日間毎日投与した後で７日間にわたって前記医薬組成物を投与しないように構成された供給器を含む、キット。
【０２３０】
７３．  前記供給器が、１日当たり１〜６つの医薬組成物投薬単位を吐出するように構成される、実施形態７２のキット。
【０２３１】
７４．  前記医薬組成物を７日間投与しない間毎日投与するための７つのプラセボ製剤投薬単位をさらに含む、実施形態７２又は７３のキット。
【０２３２】
７５．  前記対象が、血液がん対象である、実施形態１〜５０のいずれか１つの方法。
【０２３３】
７６．  前記対象が、白血病がん対象である、実施形態１〜５０及び７５のいずれか１つの方法。
【図１Ａ】
2020505435.tif 000020
【図１Ｂ】
2020505435.tif 000021
【図１Ｃ】
2020505435.tif 000022
【図２Ａ】
2020505435.tif 000023
【図２Ｂ】
2020505435.tif 000024
【図３Ａ】
2020505435.tif 000025
【図３Ｂ】
2020505435.tif 000026
【図４Ａ】
2020505435.tif 000027
【図４Ｂ】
2020505435.tif 000028
【図５Ａ】
2020505435.tif 000029
【図５Ｂ】
2020505435.tif 000030
【図５Ｃ】
2020505435.tif 000031
【図５Ｄ】
2020505435.tif 000032
【図６】
2020505435.tif 000033
【図７Ａ】
2020505435.tif 000034
【図７Ｂ】
2020505435.tif 000035
【図７Ｃ】
2020505435.tif 000036
【図７Ｄ】
2020505435.tif 000037
【図８Ａ】
2020505435.tif 000038
【図８Ｂ】
2020505435.tif 000039
【図９Ａ】
2020505435.tif 000040
【図９Ｂ】
2020505435.tif 000041
【図１０】
2020505435.tif 000042
【図１１Ａ】
2020505435.tif 000043
【図１１Ｂ】
2020505435.tif 000044
【図１２Ａ】
2020505435.tif 000045
【図１２Ｂ】
2020505435.tif 000046
【図１２Ｃ】
2020505435.tif 000047
【図１２Ｄ】
2020505435.tif 000048
【図１３Ａ】
2020505435.tif 000049
2020505435.tif 000050
【図１３Ｂ】
2020505435.tif 000051
2020505435.tif 000052
【図１４】
2020505435.tif 000053
【図１５】
2020505435.tif 000054
【配列表】
2020505435000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年11月8日(2019.11.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
【化１】
2020505435.tif 000055
の化合物を含む、がんの治療を必要としている対象のがんを治療するための医薬組成物であって、
有効量として１日当たり少なくとも約５０ｍｇの前記化合物を対象に投与する、
前記医薬組成物。
【請求項２】
前記有効量が、１日当たり約５０ｍｇ〜約２４００ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記治療が、前記化合物を２１日間にわたって毎日投与した後で７日間にわたって前記化合物を投与しない一連の治療を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記一連の治療が、２８日ごとに繰り返される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記投与が、１日当たり１回である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記対象が、固形腫瘍がん対象である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記対象が、乳がん対象又は卵巣がん対象である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記対象が、難治性固形腫瘍がん対象である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記対象が、乳がん対象である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記乳がん対象が、ＢＲＣＡ１欠損対象、ＰＡＲＰ１阻害剤に対する耐性のある対象又はＤＮＡ損傷作用のある抗がん剤に対する耐性のある対象である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記投与が、前記対象におけるＤＮＡ修復を阻害する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記投与が、前記対象における塩基除去修復（ＢＥＲ）、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）又は二本鎖ＤＮＡ切断修復を阻害する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記投与が、前記対象におけるγ−Ｈ２ＡＸタンパク質の活性又は発現を増大させる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記投与が、前記対象におけるＲａｄ５１タンパク質の活性又は発現を低下させる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記投与が、前記対象におけるＢＲＣＡ１タンパク質の活性又は発現を低下させる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記投与が、前記対象におけるＰＡＲＰ１タンパク質の活性又は発現を低下させる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
薬学的に許容される賦形剤、及び構造：
【化２】
2020505435.tif 000056
の化合物を含む、医薬組成物であって、
前記化合物が、少なくとも約５０ｍｇの量で存在する、
医薬組成物。
【請求項１８】
前記有効量が、約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１７に記載の医薬組成物を２１日間にわたって毎日供給した後で、前記医薬組成物を７日間にわたって投与しないように構成された供給器を含む、キット。
【請求項２０】
前記対象が、血液がん対象である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象が、白血病がん対象である、請求項２０に記載の方法。
【国際調査報告】
2020505435.tif 000057
2020505435.tif 000058