(57)【要約】本発明はヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗体及びこのような抗体を含む組成物を提供する。また、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を使って線維症及び癌を治療する方法が本発明で提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（“ＦＡＭ１９Ａ５”）タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む基準抗体とヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに対する結合に対して交差競合する、分離された抗体、又はその抗原結合部分（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）であって、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む、分離された抗体、又はその抗原結合部分。
【請求項２】
配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（“ＦＡＭ１９Ａ５”）タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む基準抗体と同一のヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する、分離された抗体、又はその抗原結合部分（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）であって、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むか；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むか；又は
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む、分離された抗体、又はその抗原結合部分。
【請求項３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６である、少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合することを特徴とする、請求項１又は２に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項４】
アミノ酸残基（ｉ）４６〜５１（すなわち、ＤＳＳＱＰＲ）、（ｉｉ）４６、５０及び５２（すなわち、Ｄ−−−Ｐ−Ｒ）、又は（ｉｉｉ）４６、４７、４８及び５０（すなわち、ＤＳＳ−Ｐ）に相当する一つ以上のアミノ酸で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６であるＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合することを特徴とする、請求項３に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９である、少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合することを特徴とする、請求項１又は２に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項６】
ＥＰ２、ＥＰ４、及び／又はＥＰ８と確認された少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、ＥＰ２はアミノ酸ＤＳＳＱＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６）を含み、ＥＰ４はアミノ酸ＡＲＣＡＣＲＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）を含み、ＥＰ８はアミノ酸ＴＣＴＱＰＧＧＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）を含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項７】
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０を含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１を含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２を含み；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２を含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３を含み；及び／又は
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４を含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項８】
（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５を含む重鎖可変ドメイン及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９を含む軽鎖可変ドメイン；（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６を含む重鎖可変ドメイン及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０を含む軽鎖可変ドメイン；又は（ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含む重鎖可変ドメイン及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む軽鎖可変ドメインを含むことを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項９】
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含むことを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項１０】
キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項１１】
前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０を含む重鎖；及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４を含む軽鎖を含むことを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項１２】
次の特性の一つ以上を含むことを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体：
（ａ）線維症の減少、反転、遅延及び／又は予防；
（ｂ）過度な細胞外基質（ＥＣＭ）形成の減少；
（ｃ）腫瘍の成長又は進行の遅延；
（ｄ）酵素結合免疫吸着測定分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（ｅ）ＥＬＩＳＡによって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（ｆ）反応性神経膠症開始の減少、反転、遅延及び／又は予防；
（ｇ）反応性星状膠細胞の過度な増殖の抑制；
（ｈ）ニューロカン及びニューロン−グリア抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカン発現の減少；
（ｉ）ニューロンの核のｃ−ｆｏｓ及びｐＥＲＫ発現の増加；
（ｊ）ニューロンの生存促進；
（ｋ）ニューロンのＧＡＰ４３発現の増加；及び
（ｌ）軸索再成長の促進。
【請求項１３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、９、又は１０と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列から本質的に構成されるか又は構成される配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）エピトープであって、前記エピトープは、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む軽鎖可変ドメインを含む基準抗体に特異的に結合することができる、配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）エピトープ。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又は請求項１３に記載のエピトープを暗号化する核酸。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体及び担体を含む組成物。
【請求項１６】
脳癌を治療するための請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と対象の生物学的サンプルを接触させる段階を含む、診断が必要な対象の診断方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
（電子方式で提出された配列リストの参照）
本出願とともに提出されたＡＳＣＩＩテキストファイル形式の電子方式で提出された配列リスト（ファイル名：３７６３．００５ＰＣ０２＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：１６６，８８９バイト；生成日：２０１８年６月２６日）の内容はその全部を参照することによりこの明細書に組み込まれる。
【０００２】
（技術分野）
本発明は配列相同性１９を有するファミリ、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する抗体、このような抗体を含む組成物、及び対象の線維症及び／又は癌（例えば、脳腫瘍、例えば膠芽細胞腫）のような障害や疾患を予防するか治療するための前記抗体の使用方法を提供する。
【０００３】
〔背景技術〕
ＦＡＭ１９Ａ５は５個の高度に相同性である小型タンパク質からなるＴＡＦＡタンパク質サブファミリのメンバーである（Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004)）。これらのタンパク質は固定位置に保存されたシステイン残基を含み、ＣＣ−ケモカインファミリのメンバーであるマクロファージ炎症性タンパク質１−アルファ（ＭＩＰ−１−アルファ）に関連する。ＴＡＦＡタンパク質は脳と脊髄の特定領域で優勢に発現する。これらのタンパク質は神経形成過程で成人神経幹細胞によって生成されて分泌されると思われる。
【０００４】
ＦＡＭ１９Ａ５は脊椎動物の脳で優勢に発現し、完全な中枢神経系の発生、分化、形成に重要であると思われ、中枢神経系の損傷及び／又は疾患の予防又は治療に使われることができる（アメリカ特許公開第２０１５／０１１８２３０号）。
【０００５】
神経系の調節に加え、またＦＡＭ１９Ａ５は兔疫細胞を調節するのに一定の役割をすることができる。線維症は健康に関連した有り勝ちな症状であり、多様な病理学的過程でよく発生し、線維芽細胞を刺激して結合組織を変形させるサイトカインを放出する単核兔疫細胞を浸潤させることを特徴とする。よって、ＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合し、ＦＡＭ１９Ａ５活性を調整することができる抗体を開発する必要がある。
【０００６】
〔発明の概要〕
〔課題を解決するための手段〕
（発明の簡単な概要）
配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（“ＦＡＭ１９Ａ５”）タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む基準抗体とヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに対する結合に対して交差競合する、分離された抗体（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）、又はその抗原結合部分が本発明で提供され、（ｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むか；（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むか；（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む。
【０００７】
また、配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（“ＦＡＭ１９Ａ５”）タンパク質に特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む基準抗体と同一であるＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する、分離された抗体（“抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体”）、又はその抗原結合部分が本発明で提供され、（ｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むか；（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むか；又は（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む。
【０００８】
いくつかの具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６である、少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はアミノ酸残基（ｉ）４６〜５１（すなわち、ＤＳＳＱＰＲ）、（ｉｉ）４６、５０、及び５２（すなわち、Ｄ−−−Ｐ−Ｒ）、又は（ｉｉｉ）４６、４７、４８、及び５０（すなわち、ＤＳＳ−Ｐ）に相応する一つ以上のアミノ酸で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６である、ＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９である、少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。
【０００９】
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はＥＰ２、ＥＰ４、及び／又はＥＰ８と確認された少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、ＥＰ２はアミノ酸ＤＳＳＱＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６）を含み、ＥＰ４はアミノ酸ＡＲＣＡＣＲＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）を含み、ＥＰ８はアミノ酸ＴＣＴＱＰＧＧＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）を含む。
【００１０】
いくつかの具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０を含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１を含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２を含み；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２を含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３を含み；及び／又は
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４を含む。
【００１１】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５を含む重鎖可変ドメイン及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９を含む軽鎖可変ドメイン；（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６を含む重鎖可変ドメイン及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０を含む軽鎖可変ドメイン；又は（ｉｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含む重鎖可変ドメイン及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００１２】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００１３】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０を含む重鎖；及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４を含む軽鎖を含む。
【００１４】
いくつかの具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体である。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は次の特性の一つ以上を含む：（ａ）線維症の減少、反転、遅延及び／又は予防；（ｂ）過度な細胞外基質（ＥＣＭ）形成の減少；（ｃ）腫瘍の成長又は進行の遅延；（ｄ）酵素結合免疫吸着測定分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；（ｅ）ＥＬＩＳＡによって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；（ｆ）反応性神経膠症開始の減少、反転、遅延及び／又は予防；（ｇ）反応性星状膠細胞の過度な増殖の抑制；（ｈ）ニューロカン及びニューロン−グリア抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカン発現の減少；（ｉ）ニューロンの核のｃ−ｆｏｓ及びｐＥＲＫ発現の増加；（ｊ）ニューロンの生存促進；（ｋ）ニューロンでＧＡＰ４３発現の増加；及び（ｌ）軸索の再成長の促進。
【００１５】
また、本発明は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、９、又は１０と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列から本質的に構成されるか構成される配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）エピトープを提供し、前記エピトープは、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む軽鎖可変ドメインを含む基準抗体に特異的に結合することができる。
【００１６】
また、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はＦＡＭ１９Ａ５エピトープを暗号化する核酸が本発明に開示される。
【００１７】
また、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はＦＡＭ１９Ａ５エピトープを含む組成物が提供される。
【００１８】
いくつかの様態において、また、本発明は脳癌を治療するための抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を提供する。
【００１９】
他の様態において、本発明は、本発明に開示した抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と対象の生物学的サンプルを接触させる段階を含む、診断が必要な対象を診断する方法を提供する。
【００２０】
（具体例）
具体例１．配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合し、次の特性の一つ以上を示す分離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合部分：
（ａ）線維症の減少、反転、遅延及び／又は予防；
（ｂ）過度な細胞外基質（ＥＣＭ）形成の減少；及び
（ｃ）腫瘍の成長又は進行の遅延。
【００２１】
具体例２．次の特性の一つ以上をさらに含む、具体例１のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分：
（ｄ）酵素結合免疫吸着測定分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（ｅ）ＥＬＩＳＡによって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（ｆ）反応性神経膠症開始の減少、反転、遅延及び／又は予防；
（ｇ）反応性星状膠細胞の過度な増殖の抑制；
（ｈ）ニューロカン及びニューロン−グリア抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカン発現の減少；
（ｉ）ニューロンの核のｃ−ｆｏｓ及びｐＥＲＫ発現の増加；
（ｊ）ニューロンの生存促進；
（ｋ）ニューロンでＧＡＰ４３発現の増加；及び
（ｌ）軸索の再成長の促進。
【００２２】
具体例３．
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含む基準抗体；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含む基準抗体；又は
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む基準抗体
とヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに対する結合に対して交差競合する、具体例１又は２のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００２３】
具体例４．
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含む基準抗体；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含む基準抗体；又は
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含み、重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む基準抗体
と同一のヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する、具体例１又は２のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００２４】
具体例５．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６である、少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する、具体例３又は４のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００２５】
具体例６．モノクローナル抗体又はその抗原結合部分が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６である、ＦＡＭ１９Ａ５にのみ結合する、具体例２〜５のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００２６】
具体例７．モノクローナル抗体又はその抗原結合部分が追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープにさらに結合する、具体例２〜５のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００２７】
具体例８．追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される、具体例７のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００２８】
具体例９．重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、具体例１〜８のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００２９】
具体例１０．重鎖ＣＤＲ１がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０を含む、具体例９のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３０】
具体例１１．重鎖ＣＤＲ２がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１を含む、具体例９又は１０のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３１】
具体例１２．重鎖ＣＤＲ３がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２を含む、具体例９〜１１のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３２】
具体例１３．軽鎖ＣＤＲ１がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２を含む、具体例９〜１２のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３３】
具体例１４．軽鎖ＣＤＲ２がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３を含む、具体例９〜１３のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３４】
具体例１５．軽鎖ＣＤＲ３がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４を含む、具体例９〜１４のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３５】
具体例１６．（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む軽鎖可変ドメインを含む、具体例１〜１５のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３６】
具体例１７．重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、具体例１〜１６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３７】
具体例１８．重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％ｏ、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、具体例１〜１７のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００３８】
具体例１９．モノクローナル抗体が単一ドメイン抗体である、具体例１〜１８のいずれか一つのモノクローナル抗体。
【００３９】
具体例２０．モノクローナル抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、これらの変異体、又はこれらの組合せからなる群から選択される、具体例１〜１９のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００４０】
具体例２１．モノクローナル抗体がヒトＩｇＧ１抗体である、具体例２０のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００４１】
具体例２２．モノクローナル抗体がヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４アイソタイプ抗体を含む、具体例２０のモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００４２】
具体例２３．Ｆｃ機能がない不変領域をさらに含む、具体例１〜２２のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００４３】
具体例２４．キメラ抗体、ヒト抗体、又はヒト化抗体である、具体例１〜２３のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
【００４４】
具体例２５．モノクローナル抗体が、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５８、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６０を含む重鎖；及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６２、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６４を含む軽鎖を含む、具体例１〜２４のいずれか一つのモノクローナル抗体。
【００４５】
具体例２６．その抗原結合部分がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、具体例１〜２５のいずれか一つのその抗原結合部分。
【００４６】
具体例２７．第２結合部分を有する分子に連結された具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分を含む二重特異性分子。
【００４７】
具体例２８．ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、９、又は１０と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるアミノ酸配列から本質的に構成されるか構成される配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）エピトープであり、前記エピトープは、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む軽鎖可変ドメインを含む基準抗体に特異的に結合することができるエピトープ。
【００４８】
具体例２９．具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、具体例２７の二重特異性分子、又は具体例２８のエピトープを暗号化する核酸。
【００４９】
具体例３０．具体例２９の核酸を含むベクター。
【００５０】
具体例３１．遺伝子治療法に使うための、具体例３０のベクター。
【００５１】
具体例３２．具体例３０の発現ベクターによって形質転換された細胞。
【００５２】
具体例３３．製剤に連結された、具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分又は具体例２７の二重特異性分子を含む免疫抱合体。
【００５３】
具体例３４．（ｉ）具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、又は具体例３３の免疫抱合体、及び（ｉｉ）担体を含む組成物。
【００５４】
具体例３５．（ｉ）具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、又は具体例２７の二重特異性分子、及び（ｉｉ）使用説明書を含むキット。
【００５５】
具体例３６．具体例２８のエピトープで非ヒト動物を免疫化する段階、及び抗体、又はその抗原結合部分を生成する段階を含む、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分の製造方法。
【００５６】
具体例３７．適切な条件ので具体例３２の細胞を培養する段階、及び抗体又はその抗原結合部分を分離する段階を含む、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分の生成方法。
【００５７】
具体例３８．線維症の開始が遅延されるように具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、具体例２７の二重特異性分子、又は具体例３３の免疫抱合体を投与する段階を含む、治療が必要な対象の線維症を減少、反転、及び／又は予防する方法。
【００５８】
具体例３９．具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、具体例２７の二重特異性分子、又は具体例３３の免疫抱合体を対象に投与する段階を含み、過剰のＥＣＭの形成が減少する、治療が必要な対象の過度な細胞外基質（ＥＣＭ）の形成を減少させる方法。
【００５９】
具体例４０．具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、具体例２７の二重特異性分子、又は具体例３３の免疫抱合体を対象に投与する段階を含む、治療が必要な対象の肝癌、肺癌、腎癌、乳房癌、及び／又は膵膓癌を予防、改善、又は治療する方法。
【００６０】
具体例４１．肝癌が肝細胞癌である、具体例４０の方法。
【００６１】
具体例４２．具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、具体例２７の二重特異性分子、又は具体例３３の免疫抱合体を対象に投与する段階を含む、治療が必要な対象の線維症に関連する肝癌、肺癌、腎癌、乳房癌、及び／又は膵膓癌を予防、改善、又は治療する方法。
【００６２】
具体例４３．線維症は、肝線維症、肺線維症、腎臓線維症、骨髓線維症、膵膓線維症、皮膚線維症、心臓線維症、動脈線維症、関節線維症、乳房線維症、筋肉線維症、後腹膜線維症、甲状腺線維症、リンパ節線維症、膀胱線維症、及び／又は胸膜胸膜線維症を含む、具体例３８又は４２の方法。
【００６３】
具体例４４．モノクローナル抗体又はその抗原結合部分は、静脈内、経口、非経口、髄腔内、脳室内、肺、皮下、又は心室内経路を介して投与される、具体例３８〜４３のいずれか一つの方法。
【００６４】
具体例４５．対象はヒトである、具体例３８〜４４のいずれか一つの方法。
【００６５】
具体例４６．具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、具体例２７の二重特異性分子、又は具体例３３の免疫抱合体を対象から獲得したサンプルと接触させる段階を含む、治療が必要な対象からのサンプルのＦＡＭ１９Ａ５の水準を測定する方法。
【００６６】
具体例４７．ＦＡＭ１９Ａ５の水準が基準サンプルと比較して対象のサンプルで増加する、具体例４６の方法。
【００６７】
具体例４８．具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、具体例２７の二重特異性分子、又は具体例３３の免疫抱合体を対象から獲得したサンプルと接触させる段階を含む、診断が必要な対象の線維症を診断する方法。
【００６８】
具体例４９．線維症は肝又は肺の線維症である、具体例４８の方法。
【００６９】
具体例５０．ＦＡＭ１９Ａ５の水準が線維症がない対象の基準サンプルのＦＡＭ１９Ａ５の水準と比較して対象のサンプルで増加する、具体例４８又は４９の方法。
【００７０】
具体例５１．具体例１〜２６のいずれか一つのモノクローナル抗体又はその抗原結合部分、具体例２７の二重特異性分子、又は具体例３３の免疫抱合体を対象から獲得したサンプルと接触させる段階を含む、診断が必要な対象の線維症を有する腫瘍を診断する方法。
【００７１】
具体例５２．ＦＡＭ１９Ａ５の水準が腫瘍のい対象の基準サンプルのＦＡＭ１９Ａ５の水準と比較して対象のサンプルで増加する、具体例５１の方法。
【００７２】
具体例５３．サンプルは、血液、血清、血漿、脳脊髄液、組職生検、器官生検、又はこれらの組合せである、具体例４６〜５２のいずれか一つの方法。
【００７３】
具体例５４．サンプルは新鮮な腫瘍サンプル、凍結された腫瘍サンプル、又はホルマリン固定パラフィン包埋サンプルである、具体例４６〜５２のいずれか一つの方法。
【００７４】
具体例５５．接触段階は分析を行う段階を含む、具体例４６〜５２のいずれか一つの方法。
【００７５】
具体例５６．分析はウエスタンブロット分析、スロットブロット分析、酵素結合免疫吸着測定分析（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定分析（ＲＩＡ）、フローサイトメトリー基盤免疫蛍光分析（ＦＡＣＳ）、質量分光法、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、又はこれらの組合せを含む、具体例５４の方法。
【００７６】
〔図面の簡単な説明〕
〔図１〕ヒトＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド上でのエピトープＦ１−Ｆ６（ＢＳＡにコンジュゲートされた）のアミノ酸配列とこれらの位置を示す。これらの相異なるエピトープ断片の大きさは括弧内に表示する。
【００７７】
〔図２〕抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１−６５、２−１３、及び３−２の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。３−２抗体の場合、二つの相異なるアイソタイプ、すなわちヒトＩｇＧ１（“ｈ３−２”）及びマウスＩｇＧ１（“ｍ３−２”）が示される。各抗体に対して、第１、第２、第３、第４、第５、及び第６棒（左側から始めて）はそれぞれエピトープ断片Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、及びＦ６に対する結合を表示する。右側から最も遠くある棒は陽性対照群（すなわち、Ｈｉｓタグを有するＦＡＭ１９Ａ５タンパク質）である。正確なＯ．Ｄ．値が各棒上に表示される。
【００７８】
〔図３Ａ〜図３Ｃ〕次の１３個の相異なるＦＡＭ１９Ａ５エピトープＦ２断片突然変異ペプチドに対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体３−２及び１−２８の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す：（ｉ）Ｆ２−０１−ＢＳＡ（＃１）、（ｉｉ）Ｆ２−０２−ＢＳＡ（＃２）、（ｉｉｉ）Ｆ２−０３−ＢＳＡ（＃３）、（ｉｖ）Ｆ２−０４−ＢＳＡ（＃４）、（ｖ）Ｆ２−０５−ＢＳＡ（＃５）、（ｖｉ）Ｆ２−０６−ＢＳＡ（＃６）、（ｖｉｉ）Ｆ２−０７−ＢＳＡ（＃７）、（ｖｉｉｉ）Ｆ２−０８−ＢＳＡ（＃８）、（ｉｘ）Ｆ２−０９−ＢＳＡ（＃９）、（ｘ）Ｆ２−１０−ＢＳＡ（＃１０）、（ｘｉ）Ｆ２−１１−ＢＳＡ（＃１１）、（ｘｉｉ）Ｆ２−１２−ＢＳＡ（＃１２）、及び（ｘｉｉｉ）Ｆ２−１３−ＢＳＡ（＃１３）。図３ＡはヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する３−２抗体に対する結果を示す。図３ＢはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有する３−２抗体に対する結果を示す。図３Ｃは１−２８抗体に対する結果を示す。正確なＯ．Ｄ．値は各棒上に表示される。
【００７９】
〔図４〕ＦＡＭ１９Ａファミリの相異なるメンバー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１−５）のアミノ酸整列を示す。メンバーの中で最大のアミノ酸多様性を有する領域をボックスで表示し、ＥＰ１〜ＥＰ８で示す。ＩｇＧ抗体（“ＩｇＧのみ”）は対照群として提示される。ｙ軸はＯ．Ｄ．値を提供する。
【００８０】
〔図５〕ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ１〜Ｍ８に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１−６５、１−２８、２−１３、及び３−２の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。各抗体に対して、８個の棒は突然変異Ｍ１〜Ｍ８に相当する（左側から右側へ）。
【００８１】
〔図６Ａ〕相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体間の交差競合を評価するために使用された２部位サンドイッチＥＬＩＳＡ分析の図解を示す。
【００８２】
〔図６Ｂ〕６個の相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、すなわち１−６５、Ｐ２−Ａ０３、Ｐ２−Ｆ１１、１３Ｂ４、２−１３、及び３−２に対する交差競合分析の結果を示す。用語“Ｓ／Ｎ”は信号対ノイズの比を意味し、これは次のように測定される：［１０ｎｇ／ｍＬ抗原のＯ．Ｄ．］／［０ｎｇ／ｍＬ抗原のＯ．Ｄ．］。灰色ボックスは交差競合を示す（すなわち、２以下のＳ／Ｎ比）。
【００８３】
〔図７Ａ及び図７Ｂ〕ＦＡＭ１９Ａ５に対するいくつかの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。次の抗体に対する結果が表示される：１−６５、１３Ｂ４、１３Ｆ７、１−２８、２−１３、３−２、Ｐ１−Ａ０３、Ｐ１−Ａ０８、Ｐ１−Ｄ０３、Ｐ１−Ｆ０２、Ｐ１−Ｇ０９、Ｐ２−Ａ０１、Ｐ２−Ａ０３、Ｐ２−Ｃ１２、Ｐ２−Ｆ０７、及びＰ２−Ｆ１１（左側から右側へ）。図７Ａは抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の多様な濃度に対する結果を棒グラフで示したものである。図７Ｂは相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＫｄ（ｎＭ）を表示する。
【００８４】
〔図８〕胆管結紮（ＢＤＬ）によって誘発された肝線維症を有するラット（ｎ＝５）（“疾患モデル”）の血清中のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準を元気なラット（“正常”）（ｎ＝３）と比較したものを示す。ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準は正常対照群の動物で観察された水準に対して倍数変化で表示される。“＊”は正常対照群動物と比較して統計的に有意な差（ｐ＜０．００５）を示す。
【００８５】
〔図９〕３ｍｇ／ｋｇブレオマイシンの気管内注射によって誘発された特発性肺線維症を有するラット（ｎ＝５）（“疾患モデル”）の血清中のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準を元気なラット（“正常”）（ｎ＝５）と比較したものを示す。ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準は正常対照群動物で観察された水準に比べて倍数変化で表示される。“＊”は正常対照群動物と比較して統計的に有意な差（ｐ＜０．００５）を示す。
【００８６】
〔図１０〕肝線維症、例えば肝硬変が確認されたヒト患者（患者＃１−１０）と元気な個体（正常＃１−３）の血清中のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質水準の倍数変化を示す。各棒グラフ上に提示された具体的な値は元気な個体の血清から検出されたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の平均濃度に対する倍数変化を示す。
【００８７】
〔図１１〕対照群抗体（“ＮＨＩ”）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（“１−６５”、“３−２”、及び“１−２８”）で治療された心筋梗塞誘発動物での左心室組職のＨ＆Ｅ（ヘマトキシリン及びエオシン）染色を比較したものを示す。元気な動物（すなわち、非心筋梗塞誘発、“ナイーブ”）が追加対照群として使われた。
【００８８】
〔図１２Ａ及び図１２Ｂ〕心筋梗塞誘発動物の左心室組職でのコラーゲン蓄積を比較したものを示す。心筋梗塞誘発動物は、対照群抗体（“ＮＨＩ”）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（“１−６５”、“３−２”、及び”１−２８”）のいずれか一つが投与された。元気な動物（すなわち、非心筋梗塞誘発、“ナイーブ”）が追加対照群として使われた。図１２Ａはマッソントリクローム染色を使ったコラーゲン蓄積を示す。図１２Ｂは全体左心室領域に対する線維性領域の比率でコラーゲン蓄積（すなわち、線維性領域）を示す。データは平均±Ｓ．Ｄ．で表示される（ｎ＝グループ当たり５〜８）。棒上の“＊＊＊／＊＊”は“ナイーブ”グループ（元気な動物）と比較して統計的に有意な差を示す（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．０５）。棒上の“＃”は”ＮＨＩ“グループ（心筋梗塞誘発＋対照群抗体）と比較して統計的に有意な差を示す（ｐ＜０．０５）。
【００８９】
〔図１３〕３人の相異なる肝癌患者の肝生検でのＦＡＭ１９Ａ５タンパク質発現の免疫組職化学分析を示す。図示のように、各患者は多様な程度の線維症を有する：（ｉ）段階＃０（左側カラム）、（ｉｉ）段階＃２（中間カラム）、及び（ｉｉｉ）段階＃４（右側カラム）。下側列は上側列でボックスで表示された領域をより大きく拡大したものである。矢印はＦＡＭ１９Ａ５−陽性の肝星細胞の例を表示する。
【００９０】
〔図１４Ａ〕動物の体重（ｇ）を時間の関数として示す（接種後経過週）。動物の一部はＨｅｐ３Ｂ細胞のみ接種され、正常ヒト兔疫グロブリン（円、グループ：“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＮＨＩ”、ｎ＝３）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（閉ボックス、グループ：“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”、ｎ＝３）のいずれか一つで治療された。他の動物はＨｅｐ３Ｂ細胞とヒトの肝星細胞（ＨＨＳｔｅＣ）の両者が接種され、正常ヒト兔疫グロブリン（ダイヤモンド、グループ：“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＮＨＩ”、ｎ＝３）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（開ボックス、グループ：“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”、ｎ＝３）のいずれか一つで治療された。データは平均±Ｓ．Ｄ．で表示される。
【００９１】
〔図１４Ｂ〕相異なるグループの動物で観察された平均腫瘍体積を時間の関数として示す（接種後経過週）。図示したグループは図１４Ａで説明したものと同一である。腫瘍体積は次の式によって計算された：０．５×長さ×幅２＝腫瘍体積（ｍｍ３）。データは平均±Ｓ．Ｄ．で表示される。
【００９２】
〔図１４Ｃ及び図１４Ｄ〕接種後４２日目に図１４Ａで説明した動物から分離された腫瘍の写真撮影イメージ及び重量（ｇ）をそれぞれ示す。図１４Ｃで、（ｉ）左上側は“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＮＨＩ”グループ（ｎ＝２）からの腫瘍；（ｉｉ）右上側は“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＮＨＩ”グループ（ｎ＝２）からの腫瘍；（ｉｉｉ）左下側は“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”グループ（ｎ＝３）からの腫瘍；（ｉｖ）右下側は“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”グループ（ｎ＝３）からの腫瘍である。図１４Ｄは相異なるグループから分離された腫瘍の平均重量（ｇ）を示す。
【００９３】
〔図１５Ａ及び図１５Ｂ〕外傷性脳損傷後の反応性神経膠症に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図１５Ａは相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物の脳組職の損傷された領域の代表的な免疫組職化学イメージを提供する：（ｉ）１−６５（２／４）（第１列）；（ｉｉ）１−２８（第２列）；（ｉｉｉ）２−１３（第３列）；及び（ｉｖ）３−２（第４列）。脳組職切片はＧＦＡＰ（グリア細胞繊維性酸性タンパク質、緑色）及びネスチン（赤色）で染色された。これらは脳損傷後の反応性星状膠細胞で誘発されると知られている。点線（白色）はＴＢＩに露出された後の病巣境界を表示する。図１５Ｂは１−６５、１−２８、２−１３、及び３−２抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物のＴＢＩ病巣の中心からＧＦＡＰ−及び／又はネスチン−陽性星状膠細胞の平均距離を提供する。
【００９４】
〔図１６Ａ〕抗体投与スケジュール及び膠芽腫癌細胞をマウスに頭蓋内注射することを描いた図解を提供する。
【００９５】
〔図１６Ｂ〕組職サンプルの透明性を評価するＣＬＡＲＩＴＹを使って膠芽細胞腫動物モデルで抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。ヒトＩｇＧ対照群抗体（左側）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（右側）のいずれか一つで治療された動物から収去された脳の不透明な腫瘍領域は点線で表示される。
【００９６】
〔図１７Ａ及び図１７Ｂ〕ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を使って膠芽細胞腫動物モデルの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。図１７Ａは対照群ヒトＩｇＧ抗体（上側列）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（下側列）のいずれか一つで治療された動物からの脳組職切片の４個の代表的なＨ＆Ｅ染色イメージを提供する。膠芽細胞腫はこのイメージの暗領域に相当する。図１７Ｂは対照群のパーセントとしてデータを提供することにより図１７Ａに提示されたデータを定量する。黒色棒は（ヒトＩｇＧ抗体で治療された）対照群に相当する。灰色棒は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療されたグループに相当する。ｘ軸の数字は図１７Ａに示した代表イメージに相当する。
【００９７】
〔図１８Ａ〜図１８Ｄ〕Ｈｏｅｃｈｓｔ核染色を使って膠芽細胞腫動物モデルの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。図１８Ａは対照群ヒトＩｇＧ抗体（上側列）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（下側列）で治療された動物から４個の代表的な脳組職切片のイメージを示す。各イメージで、薄い灰色領域は腫瘍に相当する。図１８Ｂは図１８Ａの４個の代表的な脳組職切片で測定された腫瘍内の細胞数（Ｈｏｅｓｃｈｓｔ陽性染色）（“スポット数”）及び腫瘍体積（“体積”）に対する数値を示した表を提供する。図１８Ｃ（細胞数）及び１８Ｄ（腫瘍体積）は図１８Ｂに提示されたデータをグラフで示したものである。図１８Ｃ及び図１８Ｄで、データは対照群動物で観察された相応する値の％として表示される。ｘ軸の数字は図１８Ａの代表脳組職切片に相当する。黒色棒は対照群ヒトＩｇＧ抗体で治療された動物に相当する。灰色棒は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物に相当する。
【００９８】
〔図１９Ａ及び図１９Ｂ〕膠芽細胞腫マウスモデルの血管正常化に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図１９Ａは対照群ヒトＩｇＧ抗体（左側イメージ）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（右側イメージ）で治療された動物から分離された脳の類似領域内でのＣＤ３１発現（血管マーカー）の免疫組職化学分析を提供する。図１９Ａで、白色点線は膠芽細胞腫の外部境界を表示する。図１９Ｂは図１９Ａの代表領域の拡大図を提供する。
【００９９】
〔図２０Ａ及び図２０Ｂ〕膠芽細胞腫マウスモデルの腫瘍へのマクロファージの浸潤に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図２０Ａは対照群ヒトＩｇＧ抗体（上側イメージ）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（下側イメージ）で治療されたマウスの膠芽細胞腫のＩｂａｌ発現（マクロファージマーカー）の免疫組職化学イメージを提供する。図２０Ｂは図２０Ａに示さしたイメージで観察されたマクロファージの体積を比較した結果である。
【０１００】
〔図２１〕対照群ヒトＩｇＧ抗体（上側列）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（下側列）のいずれか一つで治療されたラット神経膠腫モデルの脳のＭＲＩスキャンイメージを示す。これらのイメージは次のような腫瘍の多様な特性を示す：（ｉ）Ｔ２−形態学的分析；（ｉｉ）Ｒ２−流体含量；（ｉｉｉ）ＣＢＶ−脳血管体積；（ｉｖ）ＥｎｈＲａｔｅ（増強率）及びＩＡＵＣ３０（３０秒での曲線下の初期面積）−組職透過性。このイメージで、腫瘍は黒色点マークで表示される。
【０１０１】
〔図２２〕マウス脳癌モデルで、生存に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。黒色円はヒトＩｇＧ対照群抗体で治療された動物を示す。白色円は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物を示す。
【０１０２】
〔発明を実施するための形態〕
配列相同性１９を有するヒトファミリ、メンバーＡ５に特異的に結合し、本発明に開示される特性の一つ以上を示す分離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合部分が本発明に開示され、前記特性は、例えば線維症の減少、反転、遅延及び／又は予防、過度な細胞外基質（ＥＣＭ）形成の減少、腫瘍の成長又は進行の遅延、酵素結合免疫吸着測定分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合、ＥＬＩＳＡによって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合、反応性神経膠症開始の減少、反転、遅延及び／又は予防、反応性星状膠細胞の過度な増殖の抑制、ニューロカン及びニューロン−グリア抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカン発現の減少、ニューロンの核のｃ−ｆｏｓ及びｐＥＲＫ発現の増加、ニューロンの生存促進、ニューロンでＧＡＰ４３発現の増加、及び軸索の再成長の促進である。
【０１０３】
本発明に開示される内容の容易な理解のために、多数の用語及び文句が定義される。追加的な定義は詳細な説明全般で提示される。
【０１０４】
Ｉ．定義
本発明全般で、用語“１個の”又は“ある”存在はその存在の１個以上を意味する；例えば“１個の抗体”は１個以上の抗体を示すものとして理解される。このように、用語“１個の”（又は“ある”）、“１個以上の”及び“少なくとも１個の”は本発明で互いに交換して使われることができる。
【０１０５】
また、“及び／又は”は、本発明で使用する場合、２個の明示した特徴又は成分のそれぞれが残りの１個とともに又は単独で具体的に開示されるものに解釈されなければならない。よって、“Ａ及び／又はＢ”のような文句で使用された用語“及び／又は”は“Ａ及びＢ”、“Ａ又はＢ”、“Ａ”（単独）、及び“Ｂ”（単独）を含もうとするものである。同様に、“Ａ、Ｂ及び／又はＣ”のような文句で使用された用語“及び／又は”はＡ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）の様態をそれぞれ含もうとするものである。
【０１０６】
ある様態が“含む”とともに提示されれば“構成される”及び／又は“本質的に構成される”の観点で説明された他の類似した様態も提供されるものに理解される。
【０１０７】
他に定義しない限り、本発明で使用される全ての技術及び科学用語は本発明が属する当業者に通常に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、文献（the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology (Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press); the Dictionary of Cell and Molecular Biology (3rd ed., 1999, Academic Press); 及び the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology (Revised, 2000, Oxford University Press）)は本発明で使用される大部分の用語に対する一般的な辞書的意味を当業者に提供する。
【０１０８】
単位、接頭辞及び記号は国際単位系（Ｓｙｓｔｅｍｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅＵｎｉｔｅｓ（ＳＩ））で承認された形態に表示される。数値範囲はその範囲を限定する数字を包括的に含む。特に指示しない限り、アミノ酸配列はアミノからカルボキシの方向に左側から右側に書かれる。本発明に提供された表題は本発明の多様な様態の制限ではなく、これらは全体的に明細書を参照することができる。よって、以下で定義される用語はその全体が明細書を参照してより充分に定義される。
【０１０９】
用語“約”はおよそ、概略で、前後の、又はある領域内を意味するために本発明で使われる。用語“約”が数値範囲とともに使われるとき、それは提示された数値の上下に境界を拡張させることによって該当範囲を変形する。一般的に、用語“約”は、例えば上に又は下に（より高く又はより低く）１０パーセントの変動まで言及された値の上下に数値を変形することができる。
【０１１０】
用語“配列相同性１９を有するファミリ、メンバーＡ５”又は“ＦＡＭ１９Ａ５”は５個の高度の相同性のタンパク質のＴＡＦＡファミリ（ＦＡＭ１９ファミリともいう）に属するタンパク質をいい、脳と脊髄で主に発現する。また、ＦＡＭ１９Ａ５はＴＡＦＡ５又はケモカイン類似タンパク質ＴＡＦＡ−５とも知られている。
【０１１１】
ヒトにおいて、ＦＡＭ１９Ａ５を暗号化する遺伝子は染色体２２に位置する。３種のヒトＦＡＭ１９Ａ５（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７）アイソフォームがあり、これらは次のように選択的スプライシングによって生成されると思われる：アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７−１）、これは１３２個のアミノ酸で構成される；アイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７−２）、これは１２５個のアミノ酸で構成される；及びアイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７−３）、これは５３個のアミノ酸で構成される。ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質は膜結合形態と可溶性（分泌された）形態として存在すると思われる。アイソフォーム１は１個の膜貫通領域を有する膜タンパク質であると思われる。アイソフォーム２は分泌されたタンパク質（可溶性）として文献（Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004)）に報告されており、アミノ酸位置１−２５にシグナルペプチドを含む。アイソフォーム３はＥＳＴデータに基づいて予想される。以下は３種の公知のヒトＦＡＭ１９Ａ５アイソフォームのアミノ酸配列である。
【０１１２】
（Ｉ）アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７−１、膜貫通タンパク質）：このアイソフォームを標準配列として選択された。
【０１１３】
【化１】
2020529198.tif 000002
【０１１４】
（ＩＩ）アイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７−２、可溶性タンパク質）：
【０１１５】
【化２】
2020529198.tif 000003
【０１１６】
（ＩＩＩ）アイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７−３）：
【０１１７】
【化３】
2020529198.tif 000004
【０１１８】
用語“ＦＡＭ１９Ａ５”は細胞によって自然に発現するＦＡＭ１９Ａ５の任意の変異体又はアイソフォームを含む。よって、本発明に開示される抗体は同種の相異なるアイソフォーム（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５の相異なるアイソフォーム）と交差反応することができるか、又はヒト以外の種のＦＡＭ１９Ａ５（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ５）と交差反応することができる。もしくは、抗体はヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的であり得、他の種とは交差反応性を示すことができないこともある。ＦＡＭ１９Ａ５、又はその任意の変異体及びアイソフォームはこれらを自然に発現する細胞又は組職から分離されるか又は組み換え方式で生成されることができる。ヒトＦＡＭ１９Ａ５を暗号化するポリヌクレオチドはＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｎｏ．ＢＣ０３９３９６を有し、次の配列を有する：
【０１１９】
【表１Ａ】
2020529198.tif 000005
【０１２０】
用語“抗体”及び“抗体ら”は当該分野の用語であり、本発明で相互交換して使用することができ、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を有する分子を意味する。本発明で使用される用語は全ての抗体及び任意の抗原結合断片（すなわち、“抗原結合部分”）又はこれらの単鎖を含む。一具体例において、“抗体”はジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２個の重鎖（Ｈ）と２個の軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質、又はその抗原結合部分を意味する。他の具体例において、“抗体”は単一可変領域、例えばＶＨＨドメインを含む単鎖抗体を意味する。各重鎖は重鎖可変領域（本発明ではＶＨと略記する）と重鎖不変領域からなる。特定の自然発生抗体において、重鎖不変領域は３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる。特定の自然発生抗体において、各軽鎖は軽鎖可変領域（本発明ではＶＬと略記する）と軽鎖不変領域からなる。軽鎖不変領域は１個のドメインＣＬからなる。
【０１２１】
ＶＨ及びＶＬ領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と称する、より保存性の領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称する、超可変性領域にさらに細分されることができる。それぞれのＶＨ及びＶＬは３個のＣＤＲと４個のＦＲからなり、これらはＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順にアミノ末端からカルボキシ末端に向かって配列される。重鎖及び軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の不変領域は、免疫システムの多様な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び正統補体システムの第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組職又は因子と兔疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【０１２２】
用語“Ｋａｂａｔナンバリング”及び類似の用語は当該分野で認められており、抗体、又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域でアミノ酸残期をナンバリングするシステムを意味する。特定の様態で、抗体のＣＤＲはＫａｂａｔナンバリングシステムによって決定されることができる（例えば、Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 and Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使えば、抗体重鎖分子内でＣＤＲは典型的にアミノ酸位置３１〜３５（これは選択的に３５以後に１個又は２個の追加のアミノ酸を含むことができる；Ｋａｂａｔナンバリング方式で３５Ａ及び３５Ｂと言及される）（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０〜６５（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置９５〜１０２（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使えば、抗体軽鎖分子内でＣＤＲは典型的にアミノ酸位置２４〜３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０〜５６（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置８９〜９７（ＣＤＲ３）に存在する。特定の具体例において、本発明で説明される抗体のＣＤＲはＫａｂａｔナンバリング方式で決定された。
【０１２３】
文句“Ｋａｂａｔによるアミノ酸位置ナンバリング”、“Ｋａｂａｔ位置”及びこれらの文法的変異は文献（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）で抗体編成の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に対して使用されたナンバリングシステムを意味する。このナンバリングシステムを使えば、実際の線形アミノ酸配列はより少ない又は追加のアミノ酸を含むことができる。これは可変領域のＦＷ又はＣＤＲの短縮、又はＦＷ又はＣＤＲへの挿入に相当する。例えば、重鎖可変領域はＨ２の残期５２以後の単一アミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによれば、残期５２ａ）及び重鎖ＦＷ残期８２以後の挿入された残期（例えば、Ｋａｂａｔによれば、残期８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含むことができる（表１ｂ参照）。
【０１２４】
【表１Ｂ】
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【０１２５】
残期のＫａｂａｔナンバリングは“標準”Ｋａｂａｔナンバリングされた配列と抗体配列の相同性領域で整列によって特定の抗体に対して決定されることができる。Ｃｈｏｔｈｉａはその代わりに構造ループの位置を言及する（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの端部はＫａｂａｔナンバリング慣例を用いてナンバリングされたとき、ループの長さによってＨ３２〜Ｈ３４の範囲で変わる（これは、Ｋａｂａｔナンバリング方式がＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を位置させるからである；３５Ａも３５Ｂも存在しなければ、ループは３２で終わる；３５Ａのみ存在すれば、ループは３３で終わる；３５Ａと３５Ｂが共に存在すれば、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域はＫａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループ間の妥協点を表示し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使われる。
【０１２６】
ＩＶＩＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）はＣＤＲを含む兔疫グロブリン可変領域に対するナンバリングシステムを提供する。例えば、文献（Lefranc, M.P. et al, Dev. Comp. Immunol. 27: 55-77(2003)）を参考し、これは本発明に参照することにより組み込まれる。ＥＶＩＧＴナンバリングシステムは５，０００個を超える配列の整列、構造データ、及び超可変ループの特性化に基づいており、全ての種に対して可変領域とＣＤＲ領域の容易な比較ができるようにする。ＩＭＧＴナンバリングスキーマによれば、ＶＨ−ＣＤＲ１は位置２６〜３５にあり、ＶＨ−ＣＤＲ２は位置５１〜５７にあり、ＶＨ−ＣＤＲ３は位置９３〜１０２にあり、ＶＬ−ＣＤＲ１は位置２７〜３２にあり、ＶＬ−ＣＤＲ２は位置５０〜５２にあり、ＶＬ−ＣＤＲ３は位置８９〜９７にある。
【０１２７】
本発明で論議される全ての重鎖不変領域アミノ酸位置に対し、ナンバリングは配列化した最初のヒトＩｇＧ１である骨髄腫タンパク質ＥＵのアミノ酸配列を説明した文献（Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Set USA 63(1):78-85）で最初に説明されたＥＵインデックスによる。また、ＥｄｅｌｍａｎらのＥＵインデックスは文献（Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda）にも提示されている。よって、文句“Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックス”又は“ＫａｂａｔのＥＵインデックス”及び“Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックスによる位置”及びこれらの文法的変異はＫａｂａｔ  １９９１に提示されたもののようなＥｄｅｌｍａｎらのヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体に基づく残期ナンバリングシステムを意味する。
【０１２８】
可変領域（重鎖及び軽鎖の両者）及び軽鎖不変領域アミノ酸配列に使用されるナンバリングシステムはＫａｂａｔ  １９９１に提示されたものである。
【０１２９】
抗体は兔疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＤ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、又は任意のサブクラス（例えば、ヒトでＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４；及びマウスでＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３）を有することができる。兔疫グロブリン、例えばＩｇＧ１はいくつかのアロタイブとして存在し、これらは多くても少数のアミノ酸が互いに異なる。本発明に開示される抗体は、通常知られたアイソタイプ、クラス、サブクラス、又はアロタイブのいずれかから由来することができる。特定の具体例において、本発明に開示される抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラス又はこれらの任意のハイブリッドである。特定の具体例において、抗体はヒトＩｇＧ１サブクラス又はヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
【０１３０】
“抗体”は、例として、自然発生及び非自然発生抗体；モノクローナル及びポリクローナル抗体；キメラ及びヒト化抗体；ヒト及び非ヒト抗体、完全合成抗体；単鎖抗体；単一特異的抗体；（二重特異性抗体を含む）多重特異的抗体；２個の重鎖と２個の軽鎖分子を含む四量体抗体；抗体軽鎖モノマー；抗体重鎖モノマー；抗体軽鎖二量体；抗体重鎖二量体；抗体軽鎖−抗体重鎖対；細胞内抗体；ヘテロ結合抗体；１価抗体；ラクダ化抗体；アフィボディー；（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、及び充分に抗原結合することができる単一モノマー可変抗体ドメイン（例えば、ＶＨドメイン又はＶＬドメイン）からなる結合分子を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む（Harmen M. M. and Haard H. J. Appl Microbiol Biotechnol. 77(1): 13-22 (2007)参照）。
【０１３１】
本発明で使用される用語抗体の“抗原結合部分”は抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する能力を保有した抗体の１個以上の断片を意味する。このような“断片”は、例えば、約８〜約１５００個のアミノ酸の長さ、適切には約８〜約７４５個のアミノ酸の長さ、より適切には約８〜約３００個、例えば約８〜約２００個のアミノ酸、又は約１０個〜約５０又は１００個のアミノ酸の長さである。抗体の抗原結合機能は全長抗体の断片によって遂行されることができるというのが明かされた。抗体、例えば、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の“抗原結合部分”と言う用語に含まれる結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィドブリッジによって連結された２個のＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一腕のＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、及びジスルフィド連結されたＦｖｓ（ｓｄＦｖ）；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et ( a1l9.8, 9) Nature 341:544- 546）；及び（ｖｉ）分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）又は（ｖｉｉ）合成リンカーによって選択的に連結されることができる２個以上の分離されたＣＤＲの組合せを含む。また、Ｆｖ断片の２個のドメインであるＶＬとＶＨは別個の遺伝子によってコーディングされるが、これらは合成リンカーによって、組み換え方法を使用して、連結されることができる。これにより、ＶＬとＶＨ領域が対を成して１価分子を形成した単一タンパク質鎖となることができる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と言う）（例えば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426; and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)参照）。このような単鎖抗体も抗体の“抗原結合部分”という用語内に含まれる。これらの抗体断片は当業者に公知となった従来の技術によって得られ、断片は無損傷抗体と同一の方式で有用にスクリーニングされる。抗原結合部分は組み換えＤＮＡ技術によって、又は無損傷兔疫グロブリンの酵素又は化学切断によって生成されることができる。
【０１３２】
本発明で使用される用語“可変領域”又は“可変ドメイン”は当該分野で通常に互いに交換して使われる。可変領域は典型的に抗体の一部分、一般的に軽鎖又は重鎖の一部分、典型的に成熟した重鎖においてアミノ末端約１１０〜１２０個のアミノ酸と成熟した軽鎖において約９０〜１１５個のアミノ酸を意味し、これらは抗体別に配列が広範囲に異なり、特定抗原に対する特定抗体の結合及び特異性のため使われる。配列変動性は相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中し、可変領域でより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。
【０１３３】
軽鎖及び重鎖のＣＤＲは抗原と抗体の相互作用及び特異性を主に担当すると思われる。特定の具体例において、可変領域はヒト可変領域である。特定の具体例において、可変領域はげっ歯類又はネズミ科ＣＤＲとヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の具体例において、可変領域は霊長類（例えば、非ヒトの霊長類）可変領域である。特定の具体例において、可変領域はげっ歯類又はネズミ科ＣＤＲと霊長類（例えば、非ヒトの霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【０１３４】
本発明で使用される用語“重鎖”は、抗体に関連して使われるとき、不変ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の相異なるタイプ、例えばアルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）を意味することができ、これらはそれぞれＩｇＧのサブクラス、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含めて、抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭクラスを発生させる。
【０１３５】
本発明で使用される用語“軽鎖”は、抗体に関連して使われるとき、不変ドメインのアミノ酸配列に基づいて任意の相異なるタイプ、例えばカッパ（κ）及びラムダ（λ）を意味することができる。軽鎖アミノ酸配列は当該分野によく知られている。特定の具体例において、軽鎖はヒト軽鎖である。
【０１３６】
用語“ＶＬ”及び“ＶＬドメイン”は互いに交換して使われ、抗体の軽鎖可変領域を意味する。
【０１３７】
用語“ＶＨ”及び“ＶＨドメイン”は互いに交換して使われ、抗体の重鎖可変領域を意味する。
【０１３８】
本発明で使用される用語“不変領域”又は“不変ドメイン”は互いに交換することができ、当該分野での通常の意味を有する。不変ドメインは抗体部分であり、例えば抗体と抗原の結合には直接関与しないがＦｃ受容体との相互作用のような多様なエフェクター機能を示すことができる軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシ末端部分である。兔疫グロブリン分子の不変領域は、一般的に兔疫グロブリン可変領域に比べてもっと保存性のアミノ酸配列を有する。
【０１３９】
“Ｆｃ領域”（断片結晶化可能な領域）又は“Ｆｃドメイン”又は“Ｆｃ”は免疫システムの多様な細胞（例えば、エフェクター細胞）上に位置するＦｃ受容体又は正統補体システムの第１成分（Ｃ１ｑ）との結合を含み、宿主組職又は因子と兔疫グロブリンの結合を媒介する抗体の重鎖のＣ末端領域を意味する。よって、Ｆｃ領域は第１不変領域兔疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＬ）を除いた抗体の不変領域を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤ抗体アイソタイプにおいて、Ｆｃ領域は抗体の２個の重鎖の第２（ＣＨ２）及び第３（ＣＨ３）不変ドメインから来由した２個の同じタンパク質断片を含む；ＩｇＭ及びＩｇＥＦｃ領域は、各ポリペプチド鎖に３個の重鎖不変ドメイン（ＣＨドメイン２〜４）を含む。ＩｇＧの場合、Ｆｃ領域は兔疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３とＣγ１とＣγ２間のヒンジを含む。兔疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は多様であるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は一般的に位置Ｃ２２６又はＰ２３０にあるアミノ酸残期（又はこれら２個のアミノ酸間のアミノ酸）から重鎖のカルボキシ末端まで延びるのように限定され、ここでナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスによる。ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０まで延び、ＣＨ３ドメインはＦｃ領域でＣｍドメインのＣ末端側に位置する。それはＩｇＧの約アミノ酸３４１から約アミノ酸４４７まで延びる。本発明で使用されるＦｃ領域は任意のアロタイブ変異体を含む自生配列Ｆｃ、又は変異体Ｆｃ（例えば、非自然発生Ｆｃ）であり得る。また、Ｆｃは分離された状態の領域を意味するか又は“Ｆｃ融合タンパク質”（例えば、抗体又は免疫付着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ））とも言う、“Ｆｃ領域を含む結合タンパク質”のような、Ｆｃを含むタンパク質ポリペプチドに関連した領域を意味する。
【０１４０】
“自生配列Ｆｃ領域”又は“自生配列Ｆｃ”は自然で発見されたＦｃ領域のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を含む。自生配列ヒトＦｃ領域は、自生配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域；自生配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；自生配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；及び自生配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域だけではなく、これらの自然発生変異体を含む。自生配列ＦｃはＦｅの多様なアロタイブを含む（例えば、Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1; Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(２０１４年１０月２０日オンライン公開)参照）。
【０１４１】
“Ｆｃ受容体”又は“ＦｃＲ”は兔疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲはＦｃγファミリの受容体を含み、これら受容体の対立遺伝子変異及び他の方式でスプライスされた形態を含む。Ｆｃγファミリは３個の活性化受容体（マウスでＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、及びＦｃγＲＩＶ；ヒトでＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡ）と１個の抑制性受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）からなる。ヒトＩｇＧ１は大部分のヒトＦｃ受容体と結合し、最も強いＦｃエフェクター機能を導出する。それが結合する活性化Ｆｃ受容体の種類に対してはネズミ科ＩｇＧ２ａと同等であると見なされる。一方、ヒトＩｇＧ４は最小限のＦｃエフェクター機能を導出する（Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (２０１４年１０月２０日オンライン公開)参照）。
【０１４２】
不変領域は、１個以上のエフェクター機能を除去するために、例えば組み換え技術によって操作可能である。“エフェクター機能”は抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドの相互作用、又はそれから生ずる生化学的イベントを意味する。例示的な“エフェクター機能”はＣ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＦｃγＲ−媒介エフェクター機能、例えばＡＤＣＣ及び抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）、及び細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）のダウン調節を含む。このようなエフェクター機能は一般的にＦｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変領域）と組み換えられることを必要とする。よって、用語“Ｆｃ機能がない不変領域”はＦｃ領域によって媒介された１個以上のエフェクター機能が減少するかない不変領域を含む。
【０１４３】
抗体のエフェクター機能は相異なる接近法によって減少又は回避することができる。抗体のエフェクター機能はＦｃ領域を欠いた抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂ）を使って減少するか回避することができる。もしくは、Ｆｃ領域の他の価値ある属性（例えば、延ばされた半減期及びヘテロ二量化）は保有しながら抗体のエフェクター機能を減少させるためにいわゆるアグリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体がＦｃ領域で特定の残期に連結された糖を除去することによって生成されることができる。アグリコシル化抗体は、例えば糖が付着された残期を欠失又は変更して糖を酵素的に除去することにより、グリコシル化阻害剤の存在の下で培養された細胞で抗体を生成することにより、又はタンパク質をグリコシル化することができない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞）で抗体を発現することにより生成されることができる（例えば、アメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号参照）。他の接近法は、エフェクター機能が減少したＩｇＧサブクラスからのＦｃ領域を用いるものである。例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体はＩｇＧ１及びＩｇＧ３より低い水準のＦｃエフェクター機能を有することを特徴とする。Ｆｃ部分のＣＨ２ドメインでヒンジ領域に最も近くにある残期が抗体のエフェクター機能を担当し、それは自然免疫システムのエフェクター細胞上でＣ１ｑ（補体）及びＩｇＧ−Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対してかなり重畳した結合部位を含む（Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(２０１４年１０月２０日オンライン公開)参照）。よって、Ｆｃエフェクター機能が減少するかない抗体は、例えばＩｇＧ４アイソタイプのＩｇＧ抗体からＣＨ２ドメインとＩｇＧ１アイソタイプのＩｇＧ抗体からＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２からヒンジ領域とＩｇＧ４からＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域（例えば、Lau C. et al. J. Immunol. 191:4769-4777 (2013)参照）、又は変更されたＦｃエフェクター機能、例えばＦｃ機能が減少するかない突然変異を有するＦｃ領域を生成することによって製造できる。突然変異を有するこのようなＦｃ領域は当該分野に知られている。例えば、アメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号とそれに引用されたアメリカ出願及びＰＣＴ出願と文献（An et al. mAbs 1:6, 572- 579 (2009)）を参照し、これらの内容はその全体を本発明に参照することにより組み込まれる。
【０１４４】
“ヒンジ”、“ヒンジドメイン”、“ヒンジ領域”又は“抗体ヒンジ領域”は互いに交換して使われ、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインとに連結し、ヒンジの上部、中央、及び下部の部分を含む重鎖不変領域のドメインを意味する（Roux et al. J. Immunol. 1998 161:4083参照）。ヒンジは抗体の結合領域とエフェクター領域との間に可撓性の水準を変化させ、また２個の重鎖不変領域間に分子間ジスルフィド結合のための部位を提供する。本発明で使用されるヒンジは全てのＩｇＧアイソタイプに対してＧｌｕ２１６から始まってＧｌｙ２３７で終わる（Roux et al 19., 98 J Immunol 161:4083参照）。野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４ヒンジの配列が当該分野に知られている（例えば、Kabat E.A. et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(２０１４年１０月２０日オンライン公開)）参照）。
【０１４５】
用語“ＣＨ１ドメイン”は重鎖不変ドメインで可変領域とヒンジを連結する重鎖不変領域を意味する。本発明で使用されるＣＨ１ドメインはＡ１１８から始まってＶ２１５で終わる。用語“ＣＨ１ドメイン”は野生型ＣＨ１ドメインだけでなく、その自然に存在する変異体（例えば、アロタイブ）を含む。（野生型及びアロタイブを含む）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のＣＨ１ドメイン配列は当該分野に知られている。例えば（Kabat EA et a (1991) supra and Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(２０１４年１０月２０日オンライン公開)）を参照する。例示的なＣＨ１ドメインは、抗体の生物学的活性、例えば半減期を変形する突然変異を有するＣＨ１ドメインを含み、これらは、例えばアメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号及びそれに引用されたアメリカ特許及び出願とＰＣＴ出願に開示されている。
【０１４６】
用語“ＣＨ２ドメイン”は重鎖不変ドメインでヒンジとＣＨ３ドメインを連結する重鎖不変領域を意味する。本発明で使用されるＣＨ２ドメインはＰ２３８から始まってＫ３４０で終わる。用語“ＣＨ２ドメイン”は野生型ＣＨ２ドメインだけでなくその自然に存在する変異体（例えば、アロタイブ）を含む。（野生型及びアロタイブを含む）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のＣＨ２ドメイン配列は当該分野に知られている。例えば（Kabat E.A. et al., (1991) supra and Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(２０１４年１０月２０日オンライン公開)）を参照する。例示的なＣＨ２ドメインは、抗体の生物学的活性、例えば半減期及び／又は減少したＦｃエフェクター機能を変形する突然変異を有するＣＨ２ドメインを含み、これらは、例えばアメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号及びそれに引用されたアメリカ特許及び出願とＰＣＴ出願に開示されている。
【０１４７】
用語“ＣＨ３ドメイン”は重鎖不変ドメインでＣＨ２ドメインに対してＣ末端である重鎖不変領域を意味する。本発明で使用されるＣＨ３ドメインはＧ３４１から始まってＫ４４７で終わる。用語“ＣＨ３ドメイン”は野生型ＣＨ３ドメインだけでなくその自然に存在する変異体（例えば、アロタイブ）を含む。（野生型及びアロタイブを含む）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のＣＨ３ドメイン配列は当該分野に知られている。例えば（Kabat E.A. et al., (1991) supra and Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(２０１４年１０月２０日オンライン公開)をを参照する。例示的なＣＨ３ドメインは、抗体の生物学的活性、例えば半減期を変形する突然変異を有するＣＨ３ドメインを含み、これらは、例えばアメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号及びそれに引用されたアメリカ特許及び出願とＰＣＴ出願に開示されている。
【０１４８】
本発明で使用される“アイソタイプ”は重鎖不変領域遺伝子によって暗号化される抗体クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体）を意味する。
【０１４９】
“アロタイブ”は少数のアミノ酸に違いがある特定のアイソタイプグループ内で自然発生した変異体を意味する（例えば、Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1参照）。本発明で説明される抗体は任意のアロタイブを有することができる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアロタイブは当該分野に知られている例えば（Kabat E.A. et al. (1991)(上記); Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(２０１４年１０月２０日オンライン公開)；及びLefranc M.P.ｄ, mAbs 1:4, 1- 7(2009)）を参照する。
【０１５０】
文句“抗原を認識する抗体”及び“抗原に特異的な抗体”は用語“抗原に特異的に結合する抗体”と本発明で互いに交換して使われる。
【０１５１】
本発明で使用される“分離された抗体”は相異なる抗原特異性を有する他の抗体が実質的にない抗体を意味する（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する分離された抗体はＦＡＭ１９Ａ５以外の抗原に特異的に結合する抗体が実質的にない）。しかし、ＦＡＭ１９Ａ５のエピトープに特異的に結合する分離された抗体は相異なる種からの他のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対して交差反応性を有することができる。
【０１５２】
“結合親和性”は一般的に分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）間の非共有相互作用の合計強度を意味する。特に指示しない限り、本発明で使用される“結合親和性”は結合対の構成員（例えば、抗体と抗原）間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を意味する。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は一般的に解離定数（ＫＤ）によって表示されることができる。親和性は、これに制限されるものではないが、平衡解離定数（ＫＤ）、及び平衡結合定数（ＫＡ）を含む、当該分野に知られている多数の方式で測定及び／又は表示されることができる。ＫＤはｋｏｆｆ／ｋｏｎから計算され、モル濃度（Ｍ）として表示され、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆから計算される。ｋｏｎは、例えば抗原に対する抗体の結合速度定数を意味し、ｋｏｆｆは、例えば抗原に対する抗体の解離速度定数を意味する。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは免疫分析（例えば、酵素免疫吸着（ＥＬＩＳＡ））、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）又は結合平衡除外法（ＫＩＮＥＸＡ（登録商標））のような、当業者に公知となった技術によって決定されることができる。
【０１５３】
本発明で使用される用語“特異的に結合する”、“特異的に認識する”、“特異的結合”、“選択的結合”及び“選択的に結合する”は抗体に関連して類似の用語で、抗原（例えば、エピトープ又は免疫複合体）に結合する分子（例えば、抗体）に関連する用語であり、このような結合は当業者によって理解される通りである。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば免疫分析、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂｏｉｓｅ、インド）、又は当該分野に公知となった他の分析によって決定されたとき、一般的にもっと低い親和性で他のペプチド又はポリペプチドに結合することができる。特定の具体例において、抗原に特異的に結合する分子は、この分子が他の抗原に結合するときのＫＡより少なくとも２ｌｏｇｓ、２．５ｌｏｇｓ、３ｌｏｇｓ、４ｌｏｇｓ又はそれ以上大きなＫＡでその抗原に結合する。
【０１５４】
抗体は典型的に１０−５〜１０−１１Ｍ以下の解離定数によって反映される、高親和性で同族抗原に特異的に結合する。約１０−４Ｍを超えるＫＤは一般的に非特異的結合を示すと見なされる。本発明で使用される抗原と“特異的に結合する”抗体は高親和性で抗原及び実質的に同じ抗原に結合する抗体を意味し、これは、例えば決まった抗原を使って免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）又はＢＩＡＣＯＲＥＴＭ  ２０００機器で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定されたとき、１０−７Ｍ以下、好ましくは１０−８Ｍ以下、より好ましくは１０−９Ｍ以下、及び最もましくは１０−８Ｍ〜１０−１０Ｍ以下のＫＤを有することを意味し、これは関係ない抗原には高親和性で結合しない。
【０１５５】
本発明で使用される用語“抗原”は任意の天然又は合成免疫原性物質、例えばタンパク質、ペプチド又はハブテンを意味する。抗原はＦＡＭ１９Ａ５又はその断片であり得る。
【０１５６】
本明細書で使用される“エピトープ”は当該分野の用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局所領域を意味する。エピトープは、例えばポリペプチドの連続（ｃｏｎｔｉｇｕｏｕｓ）アミノ酸（線形又は連続エピトープ）であり得るか、又はエピトープは、例えばポリペプチド又はポリペプチドらの２個以上の非連続領域（立体構造、非線形、不連続、又は非連続エピトープ）が合わせられたものであり得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、いつもそうではないが、典型的に変性溶媒に露出されるときに保有され、３次フォルディングによって形成されたエピトープは典型的に変性溶媒で処理するときに喪失される。エピトープは典型的に独特な空間立体構造で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は２０個のアミノ酸を含む。エピトープが特定の抗体によって結合されたことを決定する方法（すなわち、エピトープマッピング）は当該分野によく知られており、これは、例えば免疫ブロッティング及び免疫沈降分析を含み、（例えば、ＦＭＡＭ１９Ａ５からの）重畳又は連続ペプチドが特定の抗体（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体）との反応性に対して試験される。エピトープの空間的立体形態を決定する方法は当該分野の技術及び本発明で説明されるものなどを含み、例えばＸ線結晶学、２次元核磁気共鳴及びＨＤＸ−ＭＳを含む（例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)参照）。
【０１５７】
特定の具体例において、抗体が結合したエピトープは、例えばＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡ分析、質量分光法と結合された水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレイ質量分析法）、アレイ基盤オリゴペプチド走査分析、及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）によって決定されることができる。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は当該分野に公知となった方法のいずれかを使って達成されることができる（例えば、Giege R. et al. (1994) Acta Crystallogr D. Biol Crystallogr. 50(Pt 4): 339-350; McPherson A. (1990) Eur. J. Biochem. 189: 1-23; Chayen N.E. (1997) Structure 5: 1269- 1274; McPherson A. (1976) J. Biol. Chem. 251 : 6300-6303参照）。抗体：抗原結晶はよく知られているＸ線回折技術を使って研究されることができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Yale University, 1992, distributed by Molecular Simulations, Inc.によって配布; 例えば, Meth. Enzymol. (1985) volume. 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,; アメリカ特許公開第２００４／００１４１９４号参照), BUSTER (Bricogne G (1993) Acta. Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 49(Pt1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth. Enzymol. 276A: 361-423, ed Carter C.W.; Roversi P. et al., (2000) Acta. Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 56(Pt 10): 1316-1323参照)のようなコンピュータソフトウェアを使って整理されることができる。突然変異誘発マッピング研究は当業者に公知となった任意の方法を使って達成されることができる。アラニン走査突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の内容は、例えば文献（Champe M. et al., (1995) J. Biol. Chem. 270: 1388-1394 and Cunningham B.C. & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085）を参考する。
【０１５８】
用語“エピトープマッピング”は抗体−抗原認識に対する分子決定基の確認過程を意味する。
【０１５９】
２個以上の抗体に関連して、用語“同じエピトープに結合する”は特定の方法によって決定されたとき、抗体がアミノ酸残期の同じセグメントに結合することを意味する。抗体が本発明で説明される抗体と“ＦＡＭ１９Ａ５上の同じエピトープ”に結合するかを決定する技術は、例えばエピトープマッピング法、例えばエピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線分析及び水素／重水素交換質量分光法（ＨＤＸ−ＭＳ）を含む。他の方法は抗体と抗原断片又は抗原の突然変異された変異体の結合をモニタリングし、ここで抗原配列内でアミノ酸残期の変形による結合の損失が主にエピトープ成分の表示として見なされる。また、エピトープマッピングのためのコンピュータ組合せ方法も使われることができる。これらの方法は組み換えファージディスプレイペプチドライブラリから特定の短いペプチドを親和性分離することができる該当抗体の能力に依存する。同じＶＨ及びＶＬ又は同じＣＤＲ１、２及び３配列を有する抗体は同じエピトープに結合すると予想される。
【０１６０】
“標的との結合に対して他の抗体と競合する”抗体は他の抗体と標的の結合を（部分的に又は完全に）阻害する抗体を意味する。２個の抗体が標的との結合に対して互いに競合するか、すなわち１個の抗体が他の抗体と標的の結合を阻害するか否かと阻害する程度は公知となった競合実験によって決定されることができる。特定の具体例において、抗体は他の抗体と標的の結合で競合し、この結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％まで阻害する。阻害又は競合の水準は、抗体が“遮断抗体”（すなわち、標的と先にインキュベーションされた低温抗体）であるかによって違うことができる。競合分析は、例えばEd Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi: 10.1101/pdb.prot4277 or in Chapter 11 of "Using Antibodies" by Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999）の第１１章に説明された通りに遂行されることができる。競合抗体は（例えば、立体障害によって）同じエピトープ、重畳エピトープ又は隣接エピトープに結合する。
【０１６１】
他の競合結合分析は、固相直接又は間接放射性免疫測定（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合分析（Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)参照）；固相直接標識分析、固相直接標識サンドイッチ分析（Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)参照）；１−１２５標識を使った固相直接標識ＲＩＡ（Morel et αΙ., ΜοΙ. Immunol. 25(1):7 (1988)参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Cheung et al, Virology 176:546 (1990)）；及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer et al, Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)）を含む。
【０１６２】
“二重特異性”又は“二元機能抗体”は２個の相異なる重鎖／軽鎖対と２個の相異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体はハイブリドーマの融合又はＦａｂ’断片の連結を含むさまざまな方法によって生成されることができる。例えば（Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)）を参照する。
【０１６３】
本発明で使用される用語“モノクローナル抗体”は特定のエピトープに対して単一結合特異性及び親和性を示す抗体又は全ての抗体が特定のエピトープに対して単一結合特異性及び親和性を示す抗体の組成物を意味する。よって、用語“ヒトモノクローナル抗体”は単一結合特異性を示し、ヒト生殖細胞兔疫グロブリン配列から来由した可変及び選択的不変領域を有する抗体又は抗体組成物を意味する。一具体例において、ヒトモノクローナル抗体はトランスジェニック非ヒト動物、例えば不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子と軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成される。
【０１６４】
本発明で使用される用語“組み換えヒト抗体”は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に対して導入遺伝子又はトランス染色体性（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）である動物（例えば、マウス）から分離された抗体又はそれから製造されたハイブリドーマ、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）から分離された抗体、（ｃ）組み換え、組合ヒト抗体ライブラリから分離された抗体、及び（ｄ）他のＤＮＡ配列に対するヒト兔疫グロブリン遺伝子配列をスプライシングを伴う任意の他の手段によって製造、発現、生成又は分離された抗体のような、組み換え手段によって製造、発現、生成又は分離された全てのヒト抗体を含む。このような組み換えヒト抗体は生殖細胞遺伝子によって暗号化されるが、例えば抗体成熟化中に発生する後続再配列及び突然変異を含む特定のヒト生殖細胞兔疫グロブリン配列を用いる可変及び不変領域を含む。当該分野に公知となったように（例えば、Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9): 1117- 1125参照）、可変領域は外来抗原に対して特異的な抗体を形成するように再配列した多様な遺伝子によって暗号化した、抗原結合ドメインを含む。再配列に加え、可変領域は外来抗原に対する抗体の親和性を増加させるために多数の単一アミノ酸変化（体細胞突然変異又は超突然変異という）によってさらに変形されることができる。不変領域は抗原に対する追加の反応によって変わるであろう（すなわち、アイソタイプスイッチ）。よって、抗原に反応して軽鎖及び重鎖兔疫グロブリンポリペプチドを暗号化する再配列されて体細胞突然変異された核酸分子は元の核酸分子と配列同一性を有することができないが、その代わりに実質的に同一であるかほぼ同一であろう（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。
【０１６５】
“ヒト”抗体（ＨｕＭＡｂ）はフレームワークとＣＤＲ領域の両者がヒト生殖細胞兔疫グロブリン配列から来由した可変領域を有する抗体を意味する。また、この抗体が不変領域を含めば、不変領域もヒト生殖細胞兔疫グロブリン配列から来由する。本発明で説明される抗体は、ヒト生殖細胞兔疫グロブリン配列によって暗号化されないアミノ酸残期を含むことができる（例えば、試験管内無作為又は部位特異的突然変異の誘発によって又は生体内体細胞突然変異によって導入した突然変異）。しかし、本発明で使用される用語“ヒト抗体”はマウスのような他の哺乳類種の生殖細胞から来由したＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体は含まない。用語“ヒト”抗体と“完全なヒト”抗体は同義語として使われる。
【０１６６】
用語“ヒト化”抗体は非ヒト抗体のＣＤＲドメイン外のアミノ酸の一部、大部分又は全部がヒト兔疫グロブリンから来由した相応するアミノ酸に置換された抗体を意味する。抗体のヒト化形態の一具体例において、ＣＤＲドメイン外のアミノ酸の一部、大部分又は全部がヒト兔疫グロブリンからのアミノ酸に置換され、１個以上のＣＤＲ領域内のアミノ酸の一部、大部分又は全部はそのまま残る。アミノ酸の添加、欠失、挿入、置換又は変形は、これらが抗体が特定抗原に結合する能力を無くさない限り、許容される。“ヒト化”抗体は元の抗体のものと類似した抗原特異性を保有する。
【０１６７】
“キメラ抗体”は１個の種から可変領域が来由し、他の種から不変領域が来由した抗体、例えばマウス抗体から可変領域が来由し、ヒト抗体から不変領域が来由した抗体を意味する。
【０１６８】
本発明で使用される用語“交差反応する”は相異なる種からのＦＡＭ１９Ａ５に結合する本発明で説明される抗体の能力を意味する。例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する本発明で説明される抗体は他の種のＦＡＭ１９Ａ５（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ５）にも結合することができる。本発明で使用される交差反応性は結合分析（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）で精製された抗原との特異的反応性を検出することにより、又はＦＡＭ１９Ａ５を生理学的に発現する細胞との結合、又は機能的相互作用を検出することにより測定されることができる。交差反応性を決定するための方法は、本発明で説明される標準結合分析、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）  ２０００ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）を使ったＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析、又はフローサイトメトリー技術を含む。
【０１６９】
本発明で、ある物体に適用された用語“自然発生”は物体が自然で発見されることができるという事実を意味する。例えば、自然の出処から分離されることができ、実験室でヒトによって意図的に変形されなかった有機体に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチド配列は自然発生的である。
【０１７０】
“ポリペプチド”は少なくとも２個の連続的に連結されたアミノ酸残期を含む鎖を意味し、鎖の長さに上限はない。タンパク質において１個以上のアミノ酸残期は、これに制限されるものではないが、グリコシル化、リン酸化又はジスルフィド結合形成のような変形を含むことができる。“タンパク質”は１個以上のポリペプチドを含むことができる。
【０１７１】
本発明で使用される用語“核酸分子”はＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含む。核酸分子は一本鎖又は二本鎖であり得、ｃＤＮＡであり得る。
【０１７２】
用語“ベクター”はそれが連結された他の核酸を輸送することができる核酸分子を意味する。一種類のベクターは“プラスミド”であり、これは追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされることができる円形の二重本ＤＮＡループを意味する。他の種類のベクターはウイルスベクターであり、ここで追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされることができる。特定のベクター（例えば、バクテリア複製起源を有するバクテリアベクター及びエピソーム哺乳類ベクター）はこれらが導入された宿主細胞で自己複製することができる。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入されるとき、宿主細胞のゲノムに統合することができ、これにより宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターはこれらが作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは本発明で“組み換え発現ベクター”（又は簡単に“発現ベクター”）と言及される。一般的に、組み換えＤＮＡ技術で有用性を有する発現ベクターは主にプラスミド形態である。本明細書で、“プラスミド”と“ベクター”はプラスミドがベクターの最もよく使われる形態であるから互いに交換して使われることができる。しかし、ウイルス（例えば、複製結合レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルス）ベクターのような他の形態の発現ベクターも含まれ、これらは同等な機能をする。
【０１７３】
本発明で使用される用語“組み換え宿主細胞”（簡単に“宿主細胞”）は細胞に自然に存在しない核酸を含む細胞を意味し、組み換え発現ベクターが導入された細胞であり得る。このような用語は特定の該当細胞だけではなく、このような細胞の子孫も言及することが理解されなければならない。突然変異又は環境的影響によって後続世代では特定の変形が起こることができるから、このような子孫は実際に母細胞と同一であることはできないが、依然として本発明で使用される用語“宿主細胞”の範囲内に含まれる。
【０１７４】
本発明で使用される用語“結合する”は２個以上の分子の会合を意味する。結合は共有結合又は非共有結合であり得る。また、結合は（組み換え方式で融合する）遺伝子結合であり得る。また、結合は化学的結合及び組み換えタンパク質生成のような当該分野に認められたさまざまな技術を使って達成されることができる。
【０１７５】
本明細書で使用される用語“投与する”は治療剤又は治療剤を含む組成物を当業者に公知となった多様な方法及び送逹システムのいずれかを使用して対象に物理的に導入することを意味する。本発明で説明される抗体に対する相異なる投与経路は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄又は他の非経口投与経路、例えば注射又は注入によるものを含む。本発明で使用される文句“非経口投与”は腸内及び局所投与以外の他の投与方式を意味し、一般的に注射による投与方式を意味し、これに制限されるものではないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脳室内、硝子体内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入だけでなく、生体内電気穿孔を含む。もしくは、本発明で説明される抗体は、非非経口経路を介して、例えば局所、上皮又は粘膜投与経路を介して、例えば鼻腔内、経口、経膣、直腸、舌下又は局所経路を介して投与されることができる。また、投与は、例えば１回、多数回、及び／又は一回以上の延ばされた期間にかけて遂行されることができる。
【０１７６】
本発明で使用される用語“治療する”、“治療する”及び“治療”は疾患に関連する症状、余病、状態又は生化学的指標の進行、発生、深刻性又は再発を反転、改善、緩和、阻害又は遅延させる目的で対象に対して遂行される、あるいは対象に活性剤を投与する介入又は過程の種類を意味する。治療は疾患を有する対象又は疾患を持っていない対象（例えば、予防のため）の全てに対して行われることができる。
【０１７７】
本明細書で使用される用語“対象”は任意のヒト又は非ヒト動物を含む。用語“非ヒト動物”は全ての脊椎動物、例えば哺乳類及び非哺乳類、例えば非ヒトの霊長類、羊、犬、牛、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。
【０１７８】
本発明で使用される用語“神経膠症の開始”又は“反応性神経膠症の開始”は神経膠症の手始め又は開始を含む。神経膠症は、例えば外傷、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応、及び／又は神経変性疾患による損傷や傷害に反応して起こる中枢神経系（ＣＮＳ、例えば脳及び／又は脊髄）の膠細胞の非特異的反応性変化であり、星状膠細胞、小膠細胞及び乏突起膠細胞を含む、膠細胞のいくつかの相異なるタイプの増殖や肥大を含む。神経膠症の開始は瘢痕形成をもたらすことができ、これは外傷を受けるか損傷されたＣＮＳの部分の軸索再生を阻害する。神経膠症の開始の有害な効果は、ニューロンに対する非可逆的又は永久的損傷及び／又は周辺ニューロンの回復不能を含む。よって、用語“神経膠症の開始の遅延”及び“反応性神経膠症の開始の遅延”は神経膠症の手始めや開始及びそれに関連したＣＮＳに対する有害な効果の阻害、遅延、抑制、又は予防を含む。
【０１７９】
本発明で使用される用語“反応性星状膠細胞の過度な増殖”は、例えばＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応、及び／又は神経変性疾患による周辺ニューロンの破壊による星状膠細胞数の異常増加を含む。反応性星状膠細胞の過度な増殖は、外傷を受けるか損傷されたＣＮＳの部分の軸索の再生を阻害する瘢痕形成、炎症の悪化、神経毒性水準の反応性酸素種の生成及び放出、潜在的興奮毒性グルタミン酸塩の放出、発作発生に対する潜在的寄与、血液脳関門機能の損傷、外傷及び脳卒中中の細胞毒性浮腫、晩成痛症に寄与することができる星状膠細胞の晩成サイトカイン活性化に対する可能性、及びＣＮＳ損傷後の二次変性を含むＣＮＳの有害な効果をもたらすことができる（Sofroniew, Michael V. (2009) Trends in Neurosciences, 32(12):638-47; McGraw, J. et al. (2001) Journal of Neuroscience Research 63(2):109-15; and Sofroniew, M. V. (2005) The Neuroscientist 11(5): 400-7参照）。よって、用語“反応性星状膠細胞の過度な増殖の抑制”は反応性星状膠細胞の過度な又は異常な増殖及びそれに関連したＣＮＳに対する有害な効果の阻害、遅延、抑制、阻止、又は予防を含む。
【０１８０】
本発明で使用される用語“コンドロイチン硫酸プロテオグリカン”はタンパク質コアとコンドロイチン硫酸からなるプロテオグリカンを含む。ＣＳＰＧとも知られているコンドロイチン硫酸プロテオグリカンは発生中のＣＮＳ及び成人ＣＮＳを介して広く発現する細胞外基質分子である。ＣＳＧＰは神経発生及び神経膠瘢痕形成に重要な役割をし、これらはＣＮＳの損傷後の軸索再生を阻害する。公知のＣＳＰＧはアグリカン（ＣＳＰＧ１）、ベルシカン（ＣＳＰＧ２）、ニューロカン（ＣＳＰＧ３）、ＣＳＰＧ４（又はニューロン−グリア抗原２（ＮＧ２））、ＣＳＰＧ５、ＳＭＣ３（ＣＳＰＧ６、染色体３の構造維持）、ブレビカン（ＣＳＰＧ７）、及びＣＤ４４（ＣＳＰＧ８、分化４４のクラスタ）、ホスファカンニューロカン（ＣＳＰＧ３）を含む（Rhodes, K. E. and Fawcett, J. W. (2004) Journal of Anatom.204(l):33-48参照）。よって、用語“コンドロイチン硫酸プロテオグリカン発現の減少”は一つ以上のＣＳＧＰの水準の低減、阻害、減少を含むか、又は一つ以上のＣＳＧＰの活性の減少又は一つ以上のＣＳＧＰを非活性にすることを含む。特定の具体例において、この用語は、ニューロカン、ＮＧ２又は両者の水準を低減、阻害、減少させることを含むか、又はニューロカン、ＮＧ２又は両者の活性を減少させること又はニューロカン、ＮＧ２又は両者を非活性にすることを含む。
【０１８１】
本発明で使用される用語“ニューロン”は電気化学的信号を介して情報を加工して伝達する電気的に興奮可能な細胞を含む。ニューロンは脳及びＣＮＳの脊髄の重要構成要素であり、末梢神経系（ＰＮＳ）の神経節を有し、互いに連結されることにより、神経網構造を形成することができる。典型的なニューロンは、細胞体（ソーマ）、樹状突起、及び軸索からなる。ニューロンのソーマ（細胞体）は核を含む。ニューロンの樹状突起は多くの分岐を有する細胞延長部であり、ここでニューロンへの入力の大部分が発生する。軸索はソーマから延びる微細なケーブル型突出部であり、ソーマから遠く神経信号を運び、また特定種類の情報をソーマに運ぶ。用語“ニューロンの再成長の促進”は、好ましくは傷害又は損傷の後、ニューロンの成長の刺激、促進、増加、又は活性化を含む。
【０１８２】
本発明で使用される用語“ｃ−ｆｏｓ”は癌原遺伝子ｃ−ｆｏｓを含み、これは神経伝達物質の刺激によって早く誘発される。ｃ−ｆｏｓはマウス及びヒトを含む多くの種に存在する。ｃ−ｆｏｓ遺伝子及びタンパク質は公知となており、特性化されている（Curran, T, The c-fos proto-oncogene, pp 307-327 (The Oncogene Handbook, Reddy EP et al., (eds.) Elsevier)(1988)参照）。ｃ−ｆｏｓの発現は当該分野に公知となった方法、例えばノーザンブロット、定量的ＰＣＲ、又は免疫組職化学によって決定されることができる。用語“ｃ−ｆｏｓの発現の増加”はｃ−ｆｏｓ  ｍＲＮＡ、ｃ−ｆｏｓタンパク質、又はｃ−ｆｏｓタンパク質活性の水準の増加を含む。
【０１８３】
本発明で使用される用語“ｐＥＲＫ”はリン酸化細胞外信号調節キナーゼを含む。細胞外信号調節キナーゼ又はＥＲＫはＥＲＫ１及びＥＲＫ２を含み、これはマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ファミリのメンバーである。ＥＲＫはその上流キナーゼによってリン酸化を介して活性化してｐＥＲＫを形成し、これは以後に下流標的を活性化させる。ＥＲＫは学習の根幹となる神経及びシナプス可塑性、及び記憶及び痛み過敏性に関連する（Ji R.R. et al., Nat Neurosci (1999) 2:1114-1119参照）。ＥＲＫ遺伝子、タンパク質、リン酸化、及び活性化は公知となって、特性化されており、ＥＲＫ及びｐＥＲＫの発現は当該分野に公知となった方法（例えば、ノーザンブロット、定量的ＰＣＲ、又は免疫組職化学）によって決定されることができる（Gao Y. J. and Ji R. R., Open Pain J. (2009) 2:11-17参照）。用語“ｐＥＲＫの発現の増加”はＥＲＫ  ｍＲＮＡ、ＥＲＫタンパク質、又はｐＥＲＫ活性の水準の増加を含む。
【０１８４】
本発明で使用される用語“ＧＡＰ４３”は“成長関連タンパク質４３”ともいい、軸索形成、再生、及び可塑性を促進する神経組職特異的タンパク質である（Benowitz L. I. and Routtenberg A. (1997) Trends in Neurosciences 20 (2): 84-91; Aarts L. H. et al., (1998) Advances in Experimental Medicine and Biology 446: 85-106参照）。ヒトＧＡＰ４３はＧＡＰ４３遺伝子によって暗号化される。ヒトＧＡＰ４３はポリペプチド配列（ＵｎｉＰｒｏｔ：ＫＢ−Ｐ１７６７７）であり、このポリペプチドを暗号化するｃＤＮＡが当該分野に知られている（Kosik K. S. et al., (1988) Neuron 1(2): 127-32; Ng S. C. et al., (1988) Neuron 1(2): 133-9参照）。ＧＡＰ４３の発現は当該分野に公知となった方法（例えば、ノーザンブロット、定量的ＰＣＲ、又は免疫組職化学）によって決定されることができる。用語“ニューロンのＧＡＰ４３の増加”はＧＡＰ４３  ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質の水準の増進や増加、又はＧＡＰ４３タンパク質の活性の増加を含む。
【０１８５】
本明細書で使用される用語“治療上有効量”は単独で又は他の治療剤と組み合わせて、対象の疾患又は障害を“治療するのに”効果的な、あるいは疾患又は障害（例えば、中枢神経系損傷）の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させるのに効果的な薬物の量を意味する。“治療上有効量”は疾患又は障害（例えば、外傷性脳損傷のような中枢神経系損傷又は本発明に開示される他の疾患）を持っているか有する危険がある対象に一部の改善や利益を提供する薬物又は治療剤の量を含む。よって、“治療上有効量”は疾患又は障害の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させるか又は一部の緩和、軽減を提供し、及び／又は少なくとも１個の指標（例えば、神経膠症）を減少させ、及び／又は疾患又は障害の少なくとも１個の臨床症状を減少させる量である。
【０１８６】
ＩＩ．抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体
特別な機能的特徴や特性を特徴とする抗体、例えばモノクローナル抗体が本発明に開示される。例えば、前記抗体は可溶性ＦＡＭ１９Ａ５及び膜結合ＦＡＭ１９Ａ５を含むヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。可溶性及び／又は膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合することに加え、本発明で説明される抗体は次の機能的特性の一つ以上を示す：
（ａ）線維症の減少、反転、遅延及び／又は予防；
（ｂ）過度な細胞外基質（ＥＣＭ）形成の減少；
（ｃ）腫瘍の成長又は進行の遅延；
（ｄ）酵素結合免疫吸着測定分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（ｅ）ＥＬＩＳＡによって測定されたとき、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（ｆ）反応性神経膠症開始の減少、反転、遅延及び／又は予防；
（ｇ）反応性星状膠細胞の過度な増殖の抑制；
（ｈ）ニューロカン及びニューロン−グリア抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカン発現の減少；
（ｉ）ニューロンの核のｃ−ｆｏｓ及びｐＥＲＫ発現の増加；
（ｊ）ニューロンの生存促進；
（ｋ）ニューロンのＧＡＰ４３発現の増加；及び
（ｌ）軸索再成長の促進。
【０１８７】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えば１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０−１０Ｍ（０．１ｎＭ）以下、１０−１１Ｍ以下、又は１０−１２Ｍ（１ｐＭ）以下、例えば１０−１２Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍ、又は１０−９Ｍ〜１０−７Ｍ、例えば１０−１２Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−７Ｍ又は５×１０−７ＭのＫＤの高親和性で可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５又は膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。多様な種のヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する抗体の結合能力を評価する標準分析は当該分野に知られている。例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング及びＲＩＡを含む。適切な分析が実施例で詳細に説明される。抗体の結合キネティクス（例えば、結合親和性）もＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析又はＫＩＮＥＸＡ（登録商標）のような当該分野に公知となった標準分析によって評価されることができる。ＦＡＭ１９Ａ５の機能的特性（例えば、リガンド結合）に対する抗体の効果を評価する分析が以下でかつ実施例でより詳細に説明される。
【０１８８】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えばＥＬＩＳＡによって決定されるとき、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０−９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１２Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−９Ｍ〜１０−７Ｍ、又は１０−８Ｍ〜１０−７ＭのＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５と結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、１０ｎＭ以下、例えば０．１〜１０ｎＭ、０．１〜５ｎＭ、０．１〜１ｎＭ、０．５〜１０ｎＭ、０．５〜５ｎＭ、０．５〜１ｎＭ、１〜１０ｎＭ、１〜５ｎＭ、又は５〜１０ｎＭのＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５と結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＬＩＳＡによって決定されるとき、約１ｐＭ、２ｐＭ、３ｐＭ、４ｐＭ、５ｐＭ、６ｐＭ、７ｐＭ、８ｐＭ、９ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、１００ｐＭ、２００ｐＭ、３００ｐＭ、４００ｐＭ、５００ｐＭ、６００ｐＭ、７００ｐＭ、８００ｐＭ又は９００ｐＭ、又は約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ又は９ｎＭ、又は約１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ又は９０ｎＭのＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５と特異的に結合する。
【０１８９】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えばＥＬＩＳＡによって決定されるとき、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０−９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１２Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１１Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍ、１０−９Ｍ〜１０−７Ｍ、又は１０−８Ｍ〜１０−７ＭのＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５と結合する。特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＬＩＳＡによって決定されるとき、１０ｎＭ以下、例えば０．１〜１０ｎＭ、０．１〜５ｎＭ、０．１〜１ｎＭ、０．５〜１０ｎＭ、０．５〜５ｎＭ、０．５〜１ｎＭ、１〜１０ｎＭ、１〜５ｎＭ又は５〜１０ｎＭのＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５と特異的に結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＬＩＳＡによって決定されるとき、約１ｐＭ、２ｐＭ、３ｐＭ、４ｐＭ、５ｐＭ、６ｐＭ、７ｐＭ、８ｐＭ、９ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、１００ｐＭ、２００ｐＭ、３００ｐＭ、４００ｐＭ、５００ｐＭ、６００ｐＭ、７００ｐＭ、８００ｐＭ又は９００ｐＭ、又は約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ又は９ｎＭ、又は約１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ又は９０ｎＭのＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５と結合する。
【０１９０】
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は反応性神経膠症の開始を減少、予防、反転、遅延、又は阻害することができ、例えば外傷、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応、及び／又は神経変性疾患による傷害や損傷に反応して生じた中枢神経系（ＣＮＳ、例えば脳及び／又は脊髄）の膠細胞の非特異的反応性変化を遅延、阻止、又は抑制することができる。
【０１９１】
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、反応性星状膠細胞の過度な又は異常増殖及びこれに関連したＣＮＳに対する有害な効果を遅延、阻害、阻止、抑制、制限、又は予防することができる。例えば、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えばＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応、及び／又は神経変性疾患によるニューロンの破壊による星状膠細胞数の異常増加を阻害するか予防することができ、ＣＮＳの瘢痕形成を阻害するか予防することができ、神経毒性水準の反応性酸素種の放出又は潜在的興奮毒性グルタミン酸塩の放出を阻害するか減少させることができ、発作、痛症、及び／又はＣＮＳ損傷後の二次変性を減少させるか阻害することができる。本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、好ましくはＣＮＳ損傷又は傷害の後のニューロンの再成長を促進、刺激、増加又は活性化することができる。
【０１９２】
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、アグリカン（ＣＳＰＧ１）、ベルシカン（ＣＳＰＧ２）、ニューロカン（ＣＳＰＧ３）、ＣＳＰＧ４（又はニューロン−グリア抗原２（ＮＧ２））、ＣＳＰＧ５、ＳＭＣ３（ＣＳＰＧ６、染色体３の構造維持）、ブレビカン（ＣＳＰＧ７）、ＣＤ４４（ＣＳＰＧ８、分化４４のクラスタ）、ホスファカンニューロカン（ＣＳＰＧ３）又はこれらの任意の組合せのような、タンパク質コアとコンドロイチン硫酸（ＣＳＧＰｓ）からなるプロテオグリカンを含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を阻害することができる。いくつかの具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はニューロカン及び／又はＮＧ２の水準を阻害、低減、又は減少させるか、又はニューロカン及び／又はＮＧ２の活性を阻害、低減、又は減少させる。
【０１９３】
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はニューロンの核のｃ−ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させることができ、例えばｃ−ｆｏｓ及びｐＥＲＫのｍＲＮＡ、タンパク質及び／又はタンパク質活性を増加させることができる。また、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＧＡＰ４３  ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質の発現水準を増加又は増進させることができるか、又はＧＡＰ４３タンパク質活性を増加又は増進させることができる。
【０１９４】
特定の具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は本発明に開示されるＣＤＲ又は可変領域を含む抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、２−１３、３−２、又は１−２８）とヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに対する結合に対して交差競合する（又は結合を阻害する）。
【０１９５】
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体の結合を阻害し、（ｉ）基準抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含み、基準抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むか；（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むか；（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む。いくつかの具体例において、基準抗体は（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９６】
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、このような基準抗体とヒトＦＡＭ１９Ａ５の結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％まで阻害する。競合抗体は（例えば、立体障害によって）同じエピトープ、重畳エピトープ又は隣接エピトープと結合する。２個の抗体が標的との結合に対して互いに競合するか否かはＲＩＡ及びＥＩＡのような当該分野に公知となった競合実験によって決定されることができる。
【０１９７】
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む本発明に開示される基準抗体と同一のＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、（ｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むか；（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むか；（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含む。いくつかの具体例において、基準抗体は、（ｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８を含む重鎖可変ドメイン、及び（ｉｉ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１９８】
２個の抗体が同じエピトープに結合するか否かを決定する技術は、例えばエピトープマッピング方法、例えばエピトープの原子分解能を提供する抗原抗体複合体結晶のＸ線分析及び水素／重水素交換質量分光法（ＨＤＸ−ＭＳ）、抗体と抗原断片又は抗原の突然変異された変異体の結合をモニタリングする方法（ここで、抗原配列内でアミノ酸残期の変形による結合は損失が主にエピトープ成分の表示として見なされる）、エピトープマッピングのためのコンピュータ組合方法を含む。
【０１９９】
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えば抗体とヒトＦＡＭ１９Ａ５の断片の結合によって決定されるとき、成熟したヒトＦＡＭ１９Ａ５の少なくとも１個のエピトープと結合することができる。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＴＬＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸残期４２〜６１）のアミノ酸配列を有する少なくとも1つのエピトープに結合するか、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６のアミノ酸配列内に位置する断片、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を有するエピトープと結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸残期４６〜５１（すなわち、ＤＳＳＱＰＲ）、例えばアミノ酸残期４６、５０及び５２（すなわち、Ｄ−−−Ｐ−Ｒ）、例えばアミノ酸残期４６、４７、４８及び５０（すなわち、ＤＳＳ−Ｐ）に相当する１個以上のアミノ酸で結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９のアミノ酸配列内に位置する断片、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を有するエピトープに結合する。
【０２００】
いくつかの具体例において、少なくとも１個のエピトープは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの具体例において、少なくとも１個のエピトープは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を有する。
【０２０１】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、７、８、９又は１０のヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープにのみ、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸配列内に位置する断片、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、７、８、９又は１０の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を有するエピトープに結合する。
【０２０２】
いくつかの具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６又はその断片と天然立体配座（すなわち、未変性）状態で結合する。いくつかの具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９又はその断片と天然立体配座（すなわち未変性）状態で結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はグリコシル化及び非グリコシル化ヒトＦＡＭ１９Ａ５の両者と結合する。
【０２０３】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は１個以上の追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープとさらに結合する。よって、特定の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６のエピトープと追加のエピトープ又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９のエピトープと追加のエピトープに結合する。他の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のエピトープ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９のエピトープ及び追加のエピトープに結合することができる。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６のエピトープ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０のエピトープ及び追加のエピトープに結合する。
【０２０４】
いくつかの具体例において、１個以上の追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、ＱＬＡＡＧＴＣＥＩＶＴＬＤＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、エピトープＦ１）、ＴＬＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、エピトープＦ２）、ＴＡＲＣＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、エピトープＦ３）、ＡＲＰＡＣＶＤＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、エピトープＦ４）、ＣＤＭＬＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬＬＩＮＲＳＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、エピトープＦ５）、又はＮＲＳＧＷＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴＴＶＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０、エピトープＦ６）、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０又はこれらの任意の組合せのアミノ酸配列内に位置する断片から選択される。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０のアミノ酸配列内に位置する断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０のいずれかの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を有する断片を含む。いくつかの具体例において、１個以上の追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、７、８、９又は１０、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸配列内に位置する断片、例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、６、７、８、９又は１０の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を有する断片、又はこれらの任意の組合せから選択される。いくつかの具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、１個以上の追加のエピトープに天然立体配座（すなわち、未変性）状態で結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、１個以上の追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープのグリコシル化及び非グリコシル化形態の両者に結合する。
【０２０５】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＥＰ２、ＥＰ４及び／又はＥＰ８として確認された少なくとも１個のＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、ここで、ＥＰ２はアミノ酸ＤＳＳＱＰ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６６）を含むか、本質的に構成されるか又は構成され、ＥＰ４はアミノ酸ＡＲＣＡＣＲＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６８）を含むか、本質的に構成されるか又は構成され、ＥＰ８はアミノ酸ＴＣＴＱＰＧＧＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７２）を含むか、本質的に構成されるか構成される。いくつかの具体例において、少なくとも１個のエピトープは、ＥＰ２、ＥＰ４又はＥＰ８と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、単にＥＰ２にのみ結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＥＰ４及びＥＰ８に結合する。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６５［［ＥＰ１−ＩＶＴＬＤ］］、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６７［［ＥＰ３−ＲＴＩＡＲ］］、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６９［［ＥＰ５−ＡＲＰＡ］］、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７０［［ＥＰ６−ＫＴＫＱＷＣＤＭＬ］］、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７１［［ＥＰ７−ＧＣＤＬＬＩＮＲ］］、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される一つ以上のＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。
【０２０６】
特定の具体例において、例えば免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴、又は結合平衡除外法によって測定されるとき、ＦＡＭ１９Ａファミリの他のタンパク質より２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又はそれより高親和性でＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）と結合する抗体又はその抗原結合部分が本発明で提供される。特定の具体例において、例えば免疫分析によって測定されるとき、ＦＡＭ１９Ａファミリの他のタンパク質との交差反応性なしにＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に結合する抗体又はその抗原結合部分が本発明で提供される。
【０２０７】
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は自生抗体ではないか又は自然発生抗体ではない。例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、より多いか、より少ないか、又は相異なるタイプの翻訳後修飾を有することにより、自然発生の抗体のものとは異なる翻訳後修飾を有する。
【０２０８】
III．例示的な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体
本発明に開示される方法に使用可能な特定の抗体は実施例１で分離された抗体２−１３、３−２、１−６５及び１−２８のＣＤＲ及び／又は可変領域を有する抗体、例えばモノクローナル抗体だけでなくこれらの可変領域又はＣＤＲ配列と少なくとも８０％同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％同一性）を有する抗体である。２−１３、３−２、１−６５及び１−２８のＶＨアミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５〜３８として提示される。２−１３、３−２、１−６５及び１−２８のＶＨアミノ酸配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９〜４２として提示される。
【０２０９】
【表２】
2020529198.tif 000007
【０２１０】
【表３】
2020529198.tif 000008
【０２１１】
【表４】
2020529198.tif 000009
【０２１２】
【表５】
2020529198.tif 000010
【０２１３】
したがって、重鎖及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分が本発明で提供され、重鎖可変領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、３６又は３８のアミノ酸配列を含む。他の具体例において、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、３６又は３８からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲを含む。
【０２１４】
また、重鎖及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分が提供され、軽鎖可変領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、４０又は４２のアミノ酸配列を含む。他の具体例において、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、４０又は４２からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲを含む。
【０２１５】
特定の具体例において、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、３６又は３８からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、４０又は４２からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲを含む。
【０２１６】
また、重鎖及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分が提供され、（ｉ）重鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９のアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）重鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４０のアミノ酸配列を含み；又は（ｉｉｉ）重鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３８のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含む。
【０２１７】
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分が本発明で提供され、重鎖可変領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３５、３６又は３８として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２１８】
また、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分が本発明で提供され、軽鎖可変領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、４０又は４２として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２１９】
また、重鎖及び軽鎖可変領域を含む、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分が本発明で提供され、重鎖可変領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯｓ：３５、３６又は３８として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３９、４０又は４２として提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２２０】
いくつかの具体例において、本発明は分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分を提供し、これは、
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯｓ：３５及び３９をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯｓ：３６及び４０をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；又は
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯｓ：３８及び４２をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２１】
特定の具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、（ｉ）２−１３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はこれらの組合せ、及び／又は２−１３の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はこれらの任意の組合せ；（ｉｉ）３−２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はこれらの組合せ、及び／又は３−２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はこれらの任意の組合せ；又は（ｉｉｉ）１−２８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はこれらの組合せ、及び／又は１−２８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はこれらの任意の組合せを含む。
【０２２２】
２−１３に対するＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯｓ：１１、１２及び１３として提示される。２−１３に対するＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３、２４及び２５として提示される。３−２に対するＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４、１５及び１６として提示される。３−２に対するＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６、２７及び２８として提示される。１−２８に対するＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０、２１及び２２として提示される。１−２８に対するＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２、３３及び３４として提示される。１−６５に対するＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７、１８及び１９として提示される。１−６５に対するＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９、３０及び３１として提示される。
【０２２３】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２２４】
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＨ  ＣＤＲの１個、２個、又は３個の全部を含む。
【０２２５】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２２６】
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＬ  ＣＤＲの１個、２個、又は３個の全部を含む。
【０２２７】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２２８】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２２９】
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＨ  ＣＤＲの１個、２個、又は３個の全部を含む。
【０２３０】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２３１】
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＬ  ＣＤＲの１個、２個、又は３個の全部を含む。
【０２３２】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２３３】
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＨ  ＣＤＲの１個、２個、又は３個の全部を含む。
【０２３４】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２３５】
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＬ  ＣＤＲの１個、２個、又は３個の全部を含む。
【０２３６】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２３７】
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＨ  ＣＤＲの１個、２個、又は３個の全部を含む。
【０２３８】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２３９】
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＬ  ＣＤＲの１個、２個、又は３個の全部を含む。
【０２４０】
いくつかの具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３
（ｄ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３
を含む。
【０２４１】
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は前記ＣＤＲの１個、２個、３個、４個、５個又は６個を含む。
【０２４２】
本発明で説明されるＶＨドメイン、又はその１個以上のＣＤＲは重鎖、例えば全長重鎖を形成するために不変ドメインに連結されることができる。同様に、本発明で説明されるＶＬドメイン、又はその１個以上のＣＤＲは軽鎖、例えば全長軽鎖を形成するために不変ドメインに連結されることができる。全長重鎖と全長軽鎖は組み合せられて全長抗体を形成することができる。
【０２４３】
したがって、特定の具体例において、抗体軽鎖及び重鎖、例えば分離された軽鎖及び重鎖を含む抗体が本発明で提供される。軽鎖に関連して、特定の具体例において、本発明で説明される抗体の軽鎖はカッパ軽鎖である。他の特定の具体例において、本発明で説明される抗体の軽鎖はラムダ軽鎖である。さらに他の特定の具体例において、本発明で説明される抗体の軽鎖はヒトカッパ軽鎖又はヒトラムダ軽鎖である。特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本発明で説明される抗体は本発明で説明される任意のＶＬ又はＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、ここで、軽鎖の不変領域はヒトカッパ軽鎖不変領域のアミノ酸配列を含む。特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本発明で説明される抗体は本発明で説明されるＶＬ又はＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、ここで、軽鎖の不変領域はヒトラムダ軽鎖不変領域のアミノ酸配列を含む。ヒト不変領域配列の非制限的例は当該分野に説明され、例えば（アメリカ特許第５，６９３，７８０号及びKabat EA et al, (1991)（上記））を参照する。
【０２４４】
重鎖に関連して、いくつかの具体例において、本発明で説明される抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖であり得る。他の特定の具体例において、本発明で説明される抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖を含むことができる。一具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本発明で説明される抗体は本発明で説明されるＶＨ又はＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、ここで、重鎖の不変領域はヒトガンマ（γ）重鎖不変領域のアミノ酸配列を含む。他の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本発明で説明される抗体は本発明で説明されるＶＨ又はＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、ここで、重鎖の不変領域は本発明で説明されるとか当該分野に公知となったヒト重鎖のアミノ酸配列を含む。ヒト不変領域配列の非制限的例は当該分野に公知となっており、例えば（アメリカ特許第５，６９３，７８０号及びKabat EA et al., (1991)（上記））を参照する。
【０２４５】
いくつかの具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本発明で説明される抗体は本発明で説明されるＶＨ又はＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ又はＶＬ  ＣＤＲを含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、ここで、不変領域はＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ兔疫グロブリン分子、又はヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ兔疫グロブリン分子の不変領域のアミノ酸配列を含む。他の特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本発明で説明される抗体は本発明で説明される任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、不変領域はＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ兔疫グロブリン分子、兔疫グロブリン分子の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）の不変領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの具体例において、不変領域はサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）及びアロタイブ（例えば、Ｇ１ｍ、Ｇ２ｍ、Ｇ３ｍ及びｎＧ４ｍ）及びこれらの変異体を含む、自然発生のヒトＩｇＧの不変領域のアミノ酸配列を含む。例えば（Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520（２０１４年１０月２０日オンライン公開）及びJefferis R. and Lefranc MP, mAbs 1:4, 1-7(2009)を参照する。いくつかの具体例において、不変領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４、又はこれらの変異体の不変領域のアミノ酸配列を含む。
【０２４６】
特定の具体例において、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＦｃエフェクター機能、例えば補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を持っていない。エフェクター機能はＦｃ領域によって媒介され、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインでヒンジ領域に最も近くにある残期が抗体のエフェクター機能を担当し、それは自然免疫システムのエフェクター細胞上でＣ１ｑ（補体）及びＩｇＧ−Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対してかなり重畳した結合部位を含む。また、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体はＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体より低い水準のＦｃエフェクター機能を有する。抗体のエフェクター機能は次のような当該分野に公知となった相異なる接近法によって減少するか回避されることができる：（１）Ｆｃ領域を欠いた抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂ）の使用；（２）例えば、糖が付着された残期の欠失又は変更、酵素的に糖の除去、グリコシル化阻害剤の存在の下で培養された細胞で抗体の生成、又はタンパク質をグリコシル科することができない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞、アメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号参照）での抗体の発現によって生成されることができる、アグリコシル化抗体の生成；（３）エフェクター機能が減少したＩｇＧサブクラスからＦｃ領域（例えば、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４抗体からのＦｃ領域又はＩｇＧ２又はＩｇＧ４抗体からのＣＨ２ドメインを含むキメラＦｃ領域）の利用（例えば、アメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号及びLau C. et al. J. Immunol. 191:4769- 4777 (2013)参照）；及び（４）Ｆｃ機能が減少するかない状態をもたらす突然変異を有するＦｃ領域の生成（例えば、アメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号及びそれに引用されたアメリカ出願及びＰＣＴ出願とAn et al. mAbs 1:6, 572-579 (2009)を参照）。
【０２４７】
したがって、いくつかの具体例において、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂである。このような抗体断片は当該分野によく知られており、以上で説明されている。
【０２４８】
いくつかの具体例において、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＦｃエフェクター機能が減少するかないＦｃ領域を含む。いくつかの具体例において、不変領域は、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４のＦｃ領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４アイソタイプのものである。いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はＩｇＧ４アイソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ２ドメインとＩｇＧ１アイソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２からのヒンジ領域とＩｇＧ４からのＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域、又はＦｃ機能が減少するかない突然変異を有するＦｃ領域を含む。Ｆｃエフェクター機能が減少するかないＦｃ領域は当該分野に公知となったものを含む。例えば、（Lau C. et al. J. Immunol. 191:4769-4777 (2013)；An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009)；及びアメリカ特許公開第２０１２０１００１４０号及びそれに引用されたアメリカ特許と特許公開及びＰＣＴ公開）を参照する。また、Ｆｃエフェクター機能が減少するかないＦｃ領域は当業者によって易しく作られることができる。
【０２４９】
ＩＶ．核酸分子
本発明で説明される他の様態は本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分のいずれか１個を暗号化する１個以上の核酸分子に関するものである。核酸は、全体細胞に、細胞溶解物に、又は部分的に精製された形態又は実質的に純粋な形態に存在することができる。核酸はアルカリ性／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、制限酵素、アガロースゲル電気泳動及び当該分野に公知となった他の技術を含む標準技術によって、他の細胞成分又は他の汚染物、例えば他の細胞核酸（例えば、他の染色体ＤＮＡ、例えば自然で分離されたＤＮＡに連結された染色体ＤＮＡ）又はタンパク質から精製されたとき、“分離されるか”又は“実質的に純粋である”（F. Ausubel, et al. , ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York参照）。本発明で説明される核酸は、例えばＤＮＡ又はＲＮＡであり得、イントロン配列を含むことも含まないこともできる。特定の具体例において、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【０２５０】
本発明で説明される核酸は標準分子生物学技術によって得られることができる。ハイブリドーマ（例えば、以下でより詳細に説明するように、ヒト兔疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスから製造されたハイブリドーマ）によって発現した抗体の場合、このハイブリドーマによって製造された抗体の軽鎖及び重鎖を暗号化するｃＤＮＡは標準ＰＣＲ増幅又はｃＤＮＡクローニング技術によって獲得されることができる。兔疫グロブリン遺伝子ライブラリ（例えば、ファージディスプレイ技術を使用する）から得られた抗体の場合、この抗体を暗号化する核酸がライブラリから回収されることができる。
【０２５１】
本発明で説明される特定の核酸分子は２−１３、３−２、１−６５及び１−２８モノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬ配列を暗号化するものである。２−１３、３−２、１−６５及び１−２８のＶＨ配列を暗号化する例示的なＤＮＡ配列はそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３、４４、４５及び４６として提示される。２−１３、３−２、１−６５及び１−２８のＶＬ配列を暗号化する例示的なＤＮＡ配列はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４７、４８、４９及び５０として提示される。
【０２５２】
【表６】
2020529198.tif 000011
【０２５３】
【表７】
2020529198.tif 000012
【０２５４】
本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の製造方法は、シグナルペプチドとともに重鎖及び軽鎖を暗号化するヌクレオチド配列、例えばそれぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４３及び４７、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯｓ：４４及び４８、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４６及び５０を含む細胞株で重鎖及び軽鎖を発現させることを含むことができる。これらのヌクレオチド配列を含む宿主細胞が本発明に含まれる。
【０２５５】
ＶＨ及びＶＬセグメントを暗号化するＤＮＡ断片が得られた後、これらのＤＮＡ断片は、例えば可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子又はｓｃＦｖ遺伝子に転換するために、標準組み換えＤＮＡ技術によってさらに操作されることができる。これらの操作において、ＶＬ又はＶＨ暗号化ＤＮＡ断片は抗体不変領域又は可撓性リンカーのような他のタンパク質を暗号化する他のＤＮＡ断片に作動可能に連結される。これに関連した使用される用語“作動可能に連結される”は２個のＤＮＡ断片によって暗号化したアミノ酸配列がインフレーム（ｉｎ−ｆｒａｍｅ）を維持するように２個のＤＮＡ断片が連結されることを意味する。
【０２５６】
ＶＨ領域を暗号化する分離されたＤＮＡはＶＨ暗号化ＤＮＡを重鎖不変領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及び／又はＣＨ３）を暗号化する他のＤＮＡ分子に作動可能に連結することにより全長重鎖遺伝子に転換されることができる。ヒト重鎖不変領域遺伝子の配列は当該分野に公知となっており（例えば、Kabat, E. A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照）、これらの領域を含むＤＮＡ断片が標準ＰＣＲ増幅によって得られることができる。重鎖不変領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ不変領域、例えばＩｇＧ２及び／又はＩｇＧ４不変領域であり得る。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子の場合、ＶＨ暗号化ＤＮＡは単に重鎖ＣＨ１不変領域のみを暗号化する他のＤＮＡ分子に作動可能に連結されることができる。
【０２５７】
ＶＬ領域を暗号化する分離されたＤＮＡはＶＬ暗号化ＤＮＡを軽鎖不変領域ＣＬを暗号化する他のＤＮＡ分子に作動可能に連結することにより、全長軽鎖遺伝子に転換されることができる。ヒト軽鎖不変領域遺伝子の配列は当該分野に公知となっており（例えば、Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照）、これらの領域を含むＤＮＡ断片が標準ＰＣＲ増幅によって得られることができる。軽鎖不変領域はカッパ又はラムダ不変領域であり得る。
【０２５８】
ｓｃＦｖ遺伝子を生成するために、ＶＨ及びＶＬ暗号化ＤＮＡ断片が可撓性リンカーを暗号化する、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３を暗号化する他の断片に作動可能に連結され、これによりＶＬとＶＨ領域が可撓性リンカーによって連結された状態でＶＨ及びＶＬ配列が連続単鎖タンパク質として発現することができる（例えば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554参照）。
【０２５９】
いくつかの具体例において、本発明は抗体又はその抗原結合部分を暗号化するヌクレオチド配列を含む分離された核酸分子を含むベクターを提供する。他の具体例において、ベクターは遺伝子療法に使われることができる。
【０２６０】
本発明に適切なベクターは、発現ベクター、ウイルスベクター、及びプラスミドベクターを含む。一具体例において、ベクターはウイルスベクターである。
【０２６１】
本発明で使用されるように、発現ベクターは、適切な宿主細胞に導入されたとき、挿入されたコーディング配列の転写及び翻訳のための必須要素、又はＲＮＡウイルスベクターの場合、複製及び翻訳のための必須要素を含む任意の核酸構成物を意味する。発現ベクターは、プラスミド、ファージミド、ウイルス、及びこれらの誘導体を含むことができる。
【０２６２】
本発明の発現ベクターは、本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分を暗号化するポリヌクレオチドを含むことができる。一具体例において、抗体又はその抗原結合部分に対するコーディング配列は発現制御配列に作動可能に連結される。本発明で使用されるように、２個の核酸配列は、これらが各成分核酸配列がその機能性を保有するように許容する方式で共有連結されるとき、作動可能に連結されるものである。コーディング配列及び遺伝子発現制御配列は、コーディング配列の発現又は転写及び／又は翻訳が遺伝子発現制御配列の影響又は制御下の方式でこれらが共有連結されるとき、作動可能に連結されると言われる。２個のＤＮＡ配列は５’遺伝子発現配列でプローモーターの誘導がコーディング配列の転写をもたらし、２個のＤＮＡ配列の連結の本質が（１）フレームシフト突然変異の導入をもたらすか、（２）コーディング配列の転写を指示するプローモーター領域の能力を妨げるか、又は（３）タンパク質に翻訳される対応ＲＮＡ転写体の能力を妨げなければ、作動可能に連結されると言われる。よって、遺伝子発現配列は、この遺伝子発現配列がコーディング核酸配列の転写を行うことができれば、コーディング核酸配列に作動可能に連結されたものであり、これによって得られた転写体は所望の抗体又はその抗原結合部分に翻訳される。
【０２６３】
ウイルスベクターは、これに制限されるものではないが、レトロウイルス、例えばＭｏｌｏｎｅｙネズミ科白血病ウイルス、Ｈａｒｖｅｙネズミ科肉腫ウイルス、ネズミ科乳房腫瘍ウイルス、及びＲｏｕｓ肉腫ウイルス；レンチウイルス；アデノウイルス；アデノ関連ウイルス；ＳＶ４０タイプウイルス；ポリオーマバイロス；エプスタインバーウイルス；乳頭種ウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；及びＲＮＡウイルス、例えばレトロウイルスからの核酸配列を含む。当該分野に公知となった他のベクターも易しく用いることができる。特定のウイルスベクターは非必須遺伝子が関心の遺伝子に置換された非細胞変性（ｎｏｎ−ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ）真核生物ウイルスに基づく。非細胞変性ウイルスはレトロウイルスを含み、そのライフサイクルはゲノムウイルスＲＮＡのＤＮＡへの逆転写と後続の宿主細胞ＤＮＡへのプロウイルス組み込みを伴う。レトロウイルスはヒト遺伝子療法試験のために承認された。複製欠損性（すなわち、所望のタンパク質の合成を指示することができるが感染性粒子は製造することができない）があるレトロウイルスが最も有用である。このような遺伝子操作されたレトロウイルス発現ベクターは生体内遺伝子の高効能形質転換で一般的な有用性を有する。複製欠損性レトロウイルスを生成する標準プロトコル（プラスミドへの外来遺伝子物質の統合、プラスミドによるパッケージング細胞株のトランスフェクション、パッケージング細胞株による組み換えレトロウイルスの生成、組職培地からウイルス粒子の収集、及びウイルス粒子による標的細胞の感染段階）は文献（Kriegler, M., Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, W.H. Freeman Co., New York (1990) and Murry, E. J., Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Humana Press, Inc., Cliffton, N.J. (1991)に提供される。
【０２６４】
一具体例において、ウイルスは二本鎖ＤＮＡウイルスであるアデノ関連ウイルスである。アデノ関連ウイルスは複製欠損となるように操作されることができ、広範囲な細胞タイプ及び種を感染させることができる。また、アデノ関連ウイルスは熱及び脂質溶媒安全性；造血細胞を含む多様な系統の細胞で高い形質転換頻度；及び重複感染阻害の欠如のような利点を有し、これにより多くの一連の形質転換を許容する。報道によれば、アデノ関連ウイルスは部位特異的方式でヒト細胞ＤＮＡに統合されることができ、これにより挿入突然変異誘発の確率及びレトロウイルス感染の挿入された遺伝子発現特徴の変動性を最小化する。また、野生型アデノ関連ウイルス感染が選択圧の不在の下で１００代継代以上の間に組職培養物で追跡された。これはアデノ関連ウイルスゲノム統合が相対的に安定したイベントであることを示唆する。また、アデノ関連ウイルスは染色体外方式で機能することができる。
【０２６５】
他の具体例において、ベクターはレンチウイルスから来由する。特定の具体例において、ベクターは非分裂細胞を感染させることができる組み換えレンチウイルスのベクターである。
【０２６６】
レンチウイルスゲノム及びプロウイルスＤＮＡは典型的にレトロウイルスで発見される３個の遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖを有し、これらの側面には２個の長い末端反復（ＬＴＲ）配列がある。ｇａｇ遺伝子は内部構造（基質、カプシド及びヌクレオカプシド）タンパク質を暗号化し、ｐｏｌ遺伝子はＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）、プロテアーゼ及びインテグラーゼを暗号化し、ｅｎｖ遺伝子はウイルス外被糖タンパク質を暗号化する。５’及び３’ＬＴＲはビリオンＲＮＡの転写及びポリアデニル化を促進する作用をする。ＬＴＲは、ウイルス複製に必要な他のシス作用配列を全部含む。レンチウイルスは、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ｎｅｆ及びｖｐｘ（ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２及び／又はＳＩＶで）を含む追加の遺伝子を有する。
【０２６７】
５’ＬＴＲに隣接してゲノムの逆転写に必要な配列（ｔＲＮＡプライマー結合部位）があり、Ｐｓｉ部位は粒子へのウイルスＲＮＡのキャプシド形成（ｅｎｃａｐｓｉｄａｔｉｏｎ）に効果的である。キャプシド形成（又は感染性ビリオンへのレトロウイルスＲＮＡのパッケージング）に必須な配列がウイルスゲノムから抜ける場合、このシス欠陷はゲノムＤＮＡのキャプシド形成を防止する。
【０２６８】
しかし、得られた突然変異は全てのビリオンタンパク質の合成を依然として指示することができる。本発明はパッケージング機能を有する２個以上のベクター、すなわちｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖだけでなくｒｅｖ及びｔａｔに適切な宿主細胞をトランスフェクションすることを含む非分裂細胞を感染させることができる組み換えレンチウイルスの生成方法を提供する。以下で開示するように、機能的ｔａｔ遺伝子を欠いたベクターは特定の用途に好ましい。したがって、例えば、第１ベクターはウイルスｇａｇとウイルスｐｏｌを暗号化する核酸を提供することができ、他のベクターはウイルスｅｎｖを暗号化する核酸を提供することができ、これによりパッケージング細胞が生成される。パッケージング細胞に、移植ベクターとして確認された、異種遺伝子を提供するベクターを導入することは該当外来遺伝子を有する感染性ウイルス粒子を放出する生産細胞を提供する。
【０２６９】
ベクター及び外来遺伝子の前記のような構成形態によって、第２ベクターはウイルス外被（ｅｎｖ）遺伝子を暗号化する核酸を提供することができる。ｅｎｖ遺伝子はレトロウイルスを含む、ほとんど全ての適切なウイルスから来由することができる。いくつかの具体例において、ｅｎｖタンパク質はヒト及び他の種の細胞の形質転換を許容する両種性外膜タンパク質である。
【０２７０】
レトロウイルス来由ｅｎｖ遺伝子の例は、これに制限されるものではないが、Ｍｏｌｏｎｅｙネズミ科白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ又はＭＭＬＶ）、Ｈａｒｖｅｙネズミ科肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ又はＨＳＶ）、ネズミ科乳房腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ又はＭＭＴＶ）、ギボン（ｇｉｂｂｏｎ）猿白血病ウイルス（ＧａＬＶ又はＧＡＬＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）及びＲｏｕｓ肉腫ウイルス（ＲＳＶ）を含む。他のｅｎｖ遺伝子、例えば水泡性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）タンパク質Ｇ（ＶＳＶＧ）、肝炎ウイルス及びインフルエンザのものも使われることができる。
【０２７１】
ウイルスｅｎｖ核酸配列を提供するベクターは本発明の他の所で説明される調節配列と作動可能に会合される。
【０２７２】
特定の具体例において、ベクターは非分裂細胞を形質転換するベクターの能力を損傷させなく、ＨＩＶ毒性遺伝子ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ及びｎｅｆが欠失されたレンチウイルスベクターを含む。
【０２７３】
いくつかの具体例において、ベクターは３’ＬＴＲのＵ３領域の欠失を含むレンチウイルスベクターを含む。Ｕ３領域の欠失は完全欠失又は部分欠失であり得る。
【０２７４】
いくつかの具体例において、本発明で説明されるＦＶＩＩＩヌクレオチド配列を含む本発明のレンチウイルスベクターは、細胞において、（ａ）ｇａｇ、ｐｏｌ、又はｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子を含む第１ヌクレオチド配列及び（ｂ）異種ｅｎｖ遺伝子を含む第２ヌクレオチド配列でトランスフェクションされることができる。レンチウイルスベクターは機能的ｔａｔ遺伝子を欠いている。他の具体例において、細胞はｒｅｖ遺伝子を含む第４ヌクレオチド配列でさらにトランスフェクションされる。特定の具体例において、レンチウイルスベクターは、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ及びｎｅｆ、又はこれらの任意の組合せから選択された機能的遺伝子を欠いている。
【０２７５】
特定の具体例において、レンチウイルスベクターは、ｇａｇタンパク質、Ｒｅｖ反応要素、中心ポリプリントラック（ｃＰＰＴ）、又はこれらの任意の組合せを暗号化する１個以上のヌクレオチド配列を含む。
【０２７６】
レンチウイルスベクターの例は、ＷＯ９９３１２５１、Ｗ０９７１２６２２、Ｗ０９８１７８１５、Ｗ０９８１７８１６及びＷＯ９８１８９３４に開示され、これらはその全体が本発明に参照することにより組み込まれる。
【０２７７】
他のベクターはプラスミドベクターを含む。プラスミドベクターは当該分野に広範囲に説明され、当業者に知られている。例えば（Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989）を参照する。去る数年間プラスミドベクターは、宿主ゲノム内で複製することも統合されることもできないため、生体内で細胞に遺伝子を送逹するのに特に有益なものと判明された。しかし、宿主細胞と両立するプローモーターを有するこのプラスミドはプラスミド内で作動可能に暗号化した遺伝子からペプチドを発現することができる。商業的供給者から入手可能な通常に使用される一部のプラスミドは、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、多様なｐｃＤＮＡプラスミド、ｐＲＣ／ＣＭＶ、多様なｐＣＭＶプラスミド、ｐＳＶ４０、及びｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔを含む。特定のプラスミドの追加の例は、ｐｃＤＮＡ３．１、カタログ番号Ｖ７９０２０；ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇｒｏ、カタログ番号Ｖ８７０２０；ｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ−Ｈｉｓ、カタログ番号Ｖ８６３２０；及びｐＢｕｄＣＥ４．１、カタログ番号Ｖ５３２２０を含み、これらの全部はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）の製品である。他のプラスミドも当業者によく知られている。さらに、プラスミドはＤＮＡの特定の断片を除去及び／又は付加するために標準分子生物学技術を使って注文設計可能である。
【０２７８】
Ｖ．抗体生成
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその断片は、抗体の合成のための当該分野に公知となった任意の方法によって、例えば化学的合成又は組み換え発現技術によって生成されることができる。本発明で説明される方法は、特に指示しない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組み換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び変形、核酸雑種形成、及び当該分野技術範囲内の関連分野の従来の技術を用いる。これら技術は参照資料に記述され、つぎの文献に詳細に記載される。例えば（Maniatis T. et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J. et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM. et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B. et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press）を参照する。
【０２７９】
特定の具体例において、本発明で説明される抗体は、例えば合成、ＤＮＡ配列の遺伝子組み換えによる生成を伴う任意の手段によって製造、発現、生成又は分離された抗体（例えば、組み換え抗体）である。特定の具体例において、このような抗体は生体内動物又は哺乳類（例えば、ヒト）の抗体生殖細胞レパートリー内に自然に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列又はアミノ酸配列）を含む。
【０２８０】
特定の様態で、本発明で説明される細胞又は宿主細胞を培養する段階を含むＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を製造する方法が本発明で提供される。特定の様態で、本発明で説明される細胞又は宿主細胞（例えば、本発明で説明される抗体を暗号化するポリヌクレオチドを含む細胞又は宿主細胞）を使って抗体又はその抗原結合断片を発現（例えば、組み換え方式で発現）する段階を含むＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を製造する方法が本発明で提供される。特定の具体例において、細胞は分離された細胞である。特定の具体例において、外因性ポリヌクレオチドが細胞に導入された。特定の具体例において、前記方法は、細胞又は宿主細胞から獲得された抗体又はその抗原結合断片を精製する段階をさらに含む。
【０２８１】
ポリクローナル抗体を生成する方法は当該分野に知られている（例えば、Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., eds., John Wiley and Sons, New York参照）。
【０２８２】
モノクローナル抗体はハイブリードマの使用、組み換え、及びファージディスプレイ技術、又はこれらの組合せを含む当該分野に公知となった幅広い多様な技術を使って製造されることができる。例えば、モノクローナル抗体は当該分野に公知となったものなどを含むハイブリードマ技術によって生成されることができる。これらは、例えば、Harlow E & Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling GJ et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)に教示されている。本発明で使用される用語“モノクローナル抗体”はハイブリードマ技術によって生成された抗体に制限されない。例えば、モノクローナル抗体は本発明で説明される抗体又はその断片、例えばこのような抗体の軽鎖及び／又は重鎖を外因性発現する宿主細胞から組み換え方式で生成されることができる。
【０２８３】
特定の具体例において、本発明で使用される“モノクローナル抗体”は単一細胞（例えば、組み換え抗体を生成するハイブリードマ又は宿主細胞）によって生成された抗体であり、前記抗体は、例えばＥＬＩＳＡ又は当該分野に公知となった他の抗原結合又は競合結合分析によって又は本発明で提供される実施例で決定されたように、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する。特定の具体例において、モノクローナル抗体はキメラ抗体又はヒト化抗体であることができる。特定の具体例において、モノクローナル抗体は１価抗体又は多価（例えば、２価）抗体である。特定の具体例において、モノクローナル抗体は単一特異的又は多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）である。本発明で説明されるモノクローナル抗体は、例えば、Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495に説明されたハイブリードマ方法で製造されることができるとか、又は例えば本発明で説明される技術を使ってファージライブラリから分離されることができる。クローン細胞株及びそれによって発現したモノクローナル抗体の製造のための他の方法も当該分野によく知られている（例えば、Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., 上記、参照）。
【０２８４】
ハイブリードマ技術を使って特定の抗体を生成してスクリーニングする方法は通常のものであり、当該分野によく知られている。例えば、ハイブリードマ方法において、マウス又は他の適切な宿主動物、例えば羊、ヤギ、兎、ラット、ハムスター又はマカク猿が免疫化され、これにより抗体を生成するか生成することができるリンパ球を導出し、前記抗体は免疫化に使用されたタンパク質（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する。もしくは、リンパ球が試験管内免疫化されることができる。ついで、リンパ球はポリエチレングリコールのような適切な融合剤を使って骨髓腫細胞と融合され、これによりハイブリードマ細胞が形成される（Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59- 103 (Academic Press, 1986)参照）。さらに、ＲＦＭＭＳ（繰り返し免疫化多重部位）技術が動物の免疫化に使われることができる（Kilpatrick KE et al., (1997) Hybridoma 16:381-9、その全体が参照として組み込まれる）。
【０２８５】
いくつかの具体例において、マウス（又は他の動物、例えばニワトリ、ラット、猿、ろ馬、豚、羊、ハムスター又は犬）が抗原（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５、例えばヒトＦＡＭ１９Ａ５）で免疫化されることができ、一旦免疫反応が検出されれば、例えば抗原に特異的な抗体がマウス血清から検出されれば、マウス脾臓が収去され、脾臓細胞が分離される。ついで、脾臓細胞がよく知られている技術によって任意の適切な骨髓腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  （ＡＴＣＣ）  （Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア）から入手可能な細胞株ＳＰ２０からの細胞と融合してハイブリードマが形成される。ハイブリードマは制限された希釈によって選択されてクローニングされる。特定の具体例において、免疫化したマウスのリンパ節が収去され、ＮＳＯ骨髓腫細胞と融合する。
【０２８６】
このように製造されたハイブリードマ細胞は、好ましく未融合、親骨髓腫細胞の成長や生存を抑制する一つ以上の物質を含む適切な培養培地で種まきされて成長する。例えば、親骨髓腫細胞が酵素 ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＦＩＰＲＴ）を欠いていれば、ハイブリードマの培養培地は典型的にハイポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質はＨＧＰＲＴ−欠乏細胞の成長を防止する。
【０２８７】
特定の具体例は、効果的に融合し、選択された抗体生成細胞による抗体の安定的な高水準の生成を支援し、ＨＡＴ培地のような培地に敏感な骨髓腫細胞を用いる。このような骨髓腫細胞株は、特にマウス骨髓腫細胞株、例えばＮＳＯ細胞株又はＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、アメリカのカリフォルニア）から入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍から来由したもの及びＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、アメリカのメリーランド）から入手可能なＳＰ−２又はＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞である。ヒト骨髓腫及びマウス−ヒト異種骨髓腫細胞株もヒトモノクローナル抗体の生成のために提示された（Kozbor D (1984) J Immunol 133: 3001- 5; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)参照）。
【０２８８】
ハイブリードマ細胞が成長した培養培地はＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に対して指定されたモノクローナル抗体の生成に対して分析される。ハイブリードマ細胞によって生成されたモノクローナル抗体の結合特異性は当該分野に公知となった方法、例えば免疫沈降又は試験管内結合分析、例えば放射免疫測定分析（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着測定分析（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
【０２８９】
所望の特異性、親和性及び／又は活動性を有する抗体を生成するハイブリードマ細胞が確認された後、制限希釈過程によってクローンがサブクローニングされ、標準方法によって成長することができる（Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 上記、参照）。この過程のための適切な培養培地は、例えばＤ−ＭＥＭ又はＲＰＭＩ１６４０培地を含む。また、ハイブリードマ細胞は動物で腹水腫瘍として生体内成長することができる。
【０２９０】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えばタンパク質Ａ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又は親和性クロマトグラフィーのような従来の兔疫グロブリン精製過程によって培養培地、腹水流体、又は血清から適切に分離される。
【０２９１】
本発明で説明される抗体は、特定のＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）を認識し、当業者に公知となった任意の技術によって生成されることができる抗体断片を含む。例えば、本発明で説明されるＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片生成）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片生成）のような酵素を使用し、兔疫グロブリン分子のタンパク質加水分解切断によって生成されることができる。Ｆａｂ断片は抗体分子の２個の同じアームの一つに相当し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対を成す完全な軽鎖を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片はヒンジ領域で二硫化物結合によって連結された抗体分子の２個の抗原結合アームを含む。
【０２９２】
また、本発明で説明される抗体又はその抗原結合断片も当該分野に公知となった多様なファージディスプレイ方法を使って生成されることができる。ファージディスプレイ方法で、機能的抗体ドメインがこれらを暗号化するポリヌクレオチド配列を有するファージ粒子の表面に展示される。特に、ＶＨ及びＶＬドメインを暗号化するＤＮＡ配列が動物のｃＤＮＡライブラリ（例えば、侵犯された組職のマウス又はニワトリｃＤＮＡライブラリのようなヒト又は非ヒトライブラリ）から増幅される。ＶＨ及びＶＬドメインを暗号化するＤＮＡはＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーとともに組み換えされ、ファージミッドベクターにクローニングされる。このベクターが大腸菌に電気穿孔され、大腸菌がヘルパーファージで感染される。前記方法に使用されるファージは典型的にｆｄ及びＭ１３を含む線状ファージであり、ＶＨ及びＶＬドメインは一般的にファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩのいずれか一つに組み換え方式で融合する。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージが、例えば標識された抗原又は固体表面又はビードに結合するか捕捉された抗原を使って抗原とともに選択されるか確認されることができる。本発明で説明される抗体の製造に使用可能なファージディスプレイ方法の例は、Brinkman U et al., (1995) J Immunol Methods 182: 41-50; Ames RS et al., (1995) J Immunol Methods 184: 177- 186; Kettleborough CA et al., (1994) Eur J Immunol 24: 952-958; Persic L et al., (1997) Gene 187: 9-18; Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280;；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号；国際特許公開第ＷＯ９０／０２８０９号、同第ＷＯ９１／１０７３号７、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９３／１１２３６号、同第ＷＯ９５／１５９８２号、同第ＷＯ９５／２０４０１号、及び同第ＷＯ９７／１３８４４号；及びアメリカ特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号及び同第５，９６９，１０８号に説明されたものなどを含む。
【０２９３】
前記参照資料に説明されたように、ファージ選択後、ファージから抗体コーディング領域が分離され、これを使ってヒト抗体、又は任意の他の所望の抗原結合断片を含む全体抗体が生成され、例えば、以下で説明されるように、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及びバクテリアを含む任意の所望の宿主で発現する。また、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片のような抗体断片を組み換え方式で製造する技術がＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号；Mullinax RL et al., (1992) BioTechniques 12(6): 864-9; Sawai H et al., (1995) Am J Reprod Immunol 34: 26-34; 及び Better M et al., (1988) Science 240: 1041-1043.に説明されたものなどの当該分野に公知となった方法を使って用いられることができる。
【０２９４】
一様態で、全体抗体を生成するために、ＶＨ又はＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制限部位を保護するための側面配列を含むＰＣＲプライマーが鋳型、例えばｓｃＦｖクローンからＶＨ又はＶＬ配列を増幅するのに使われることができる。当業者に公知となったクローニング技術を用い、ＰＣＲ増幅されたＶＨドメインがＶＨ不変領域を発現するベクターにクローニングされることができ、ＰＣＲ増幅されたＶＬドメインはＶＬ不変領域、例えばヒトカッパー又はラムダ不変領域を発現するベクターにクローニングされることができる。また、ＶＨ及びＶＬドメインが必要な不変領域を発現する一つのベクターにクローニングされることもできる。そして、当業者に公知となった技術を使って重鎖保存ベクターと軽鎖保存ベクターが細胞株に一緒に形質転換され、これにより全長抗体、例えばＩｇＧを発現する安定した又は一時的細胞株が生成される。
【０２９５】
キメラ抗体は抗体の相異なる部分が相異なる兔疫グロブリン分子から来由した分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の不変領域に融合した非ヒト動物（例えば、マウス、ラット又はニワトリ）モノクローナル抗体の可変領域を含むことができる。キメラ抗体を製造する方法は当該分野に知られている。例えば、Morrison SL (1985) Science 229: 1202-7; Oi VT & Morrison SL (1986) BioTechniques 4: 214- 221; Gillies SD et al., (1989) J Immunol Methods 125: 191-202；及びアメリカ特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、及び同第６，３３１，４１５号を参照する。
【０２９６】
ヒト化抗体は決まった抗原に結合することができ、ヒト兔疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域及び非ヒト兔疫グロブリン（例えば、マウス又はニワトリ兔疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の具体例において、また、ヒト化抗体は兔疫グロブリン不変領域（Ｆｃ）、典型的にヒト兔疫グロブリンの不変領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む。また、この抗体は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４領域を含むことができる。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む兔疫グロブリンの任意の部類、及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択されることができる。ヒト化抗体は当該分野に公知となった多様な技術を使って生成されることができ、これらは、これらに制限されないが、ＣＤＲ−グラフティング（ヨーロッパ特許第ＥＰ２３９４００号；国際特許公開第ＷＯ９１／０９９６７号；及びアメリカ特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第５，５８５，０８９号）、ベニヤリング又はリサーフェシング（ヨーロッパ特許第ＥＰ５９２１０６号及び同第ＥＰ５１９５９６号；Padlan EA (1991) Mol Immunol 28(4/5): 489-498; Studnicka GM et al., (1994) Prot Engineering 7(6): 805-814; and Roguska MA et al., (1994) PNAS 91: 969-973), ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ（アメリカ特許第５，５６５，３３２号）、及び例えばアメリカ特許第６，４０７，２１３号、アメリカ特許第５，７６６，８８６号、国際特許公開第ＷＯ９３／１７１０５号；Tan P et al., (2002) J Immunol 169: 1119-25; Caldas C et al., (2000) Protein Eng.13(5): 353-60; Morea V et al., (2000) Methods 20(3): 267- 79; Baca M et al., (1997) J Biol Chem 272(16): 10678-84; Roguska MA et al., (1996) Protein Eng 9(10): 895 904; Couto JR et al., (1995) Cancer Res. 55 (23 Supp): 5973s-5977s; Couto JR et al., (1995) Cancer Res 55(8): 1717-22; Sandhu JS (1994) Gene 150(2): 409-10 and Pedersen JT et al., (1994) J Mol Biol 235(3): 959-73に開示された技術を含む。また、アメリカ特許出願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４Ａ１号（２００５年２月２４日）を参照し、これはその全体が本発明に参照として組み込まれる。
【０２９７】
多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）を製造する方法が説明された。例えば、アメリカ特許第７，９５１，９１７号；同第７，１８３，０７６号；同第８，２２７，５７７号；同第５，８３７，２４２号；同第５，９８９，８３０号；同第５，８６９，６２０号；同第６，１３２，９９２号及び同第８，５８６，７１３号を参照する。
【０２９８】
単一ドメイン抗体、例えば軽鎖を欠いた抗体は当該分野によく知られた方法によって製造されることができる（Riechmann L & Muyldermans S (1999) J Immunol 231 : 25-38; Nuttall SD et al., (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263; Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74(4): 277-302；アメリカ特許第６，００５，０７９；及び国際特許公開第ＷＯ９４／０４６７８号、同第ＷＯ９４／２５５９１号及び同第ＷＯ０１／４４３０１号参照）。
【０２９９】
また、ＦＡＭ１９Ａ５抗原に免疫特異的に結合する抗体は当業者によく知られた技術を使って抗原を“擬態する”抗イディオタイプ抗体を生成するのに用いられることができる（例えば、Greenspan NS & Bona CA (1989) FASEB J 7(5): 437-444; and Nissinoff A (1991) J Immunol 147(8): 2429-2438参照）。
【０３００】
特定の具体例において、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と同一であるＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）のエピトープに結合する、本発明で説明される抗体はヒト抗体又はその抗原結合断片である。特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５に対する結合から、本発明で説明される抗体（例えば、２−１３及び３−２）を競争的に遮断する（例えば、容量依存的方式で）、本発明で説明される抗体はヒト抗体又はその抗原結合断片である。
【０３０１】
ヒト抗体は当該分野に公知となった任意の方法で製造されることができる。例えば、機能的内因性兔疫グロブリンは発現することができないがヒト兔疫グロブリン遺伝子は発現するトランスジェニックマウスが使われることができる。特に、ヒト軽鎖及び重鎖兔疫グロブリン遺伝子複合体がマウス胚幹細胞に無作為に又は相同性組み換えによって導入されることができる。もしくは、ヒト可変領域、不変領域、及び多様性領域がヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えてマウス胚幹細胞に導入されることができる。マウス重鎖及び軽鎖兔疫グロブリン遺伝子は相同性組み換えによってヒト兔疫グロブリン遺伝子坐の導入と同時に又は別に非機能的になることができる。特に、ＪＨ領域のホモ接合性欠失は内因性抗体の生成を防止する。変形された胚幹細胞は拡張されて微量注射され、これによりキメラマウスが生成される。そして、キメラマウスはヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を生成するように育成される。このトランスジェニックマウスは選択された抗原で、例えば抗原（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５）の全部又は一部によって正常方式で免疫化される。従来のハイブリードマ技術を使って抗原に対して指定されたモノクローナル抗体が免疫化したトランスジェニックマウスから獲得されることができる。トランスジェニックマウスによって隠されたヒト兔疫グロブリン導入遺伝子はＢ細胞分化中に再配列を成し、続いて類型転換及び体細胞突然変異を経る。よって、このような技術を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体を生成することができる。ヒト抗体を製造する前記技術の概略的な内容は、Lonberg N & Huszar D (1995) Int Rev Immunol 13 :65-93を参照する。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を製造する技術及びこのような抗体を製造するためのプロトコルの詳細な考察のためには、例えば国際特許公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号及び同第ＷＯ９６／３３７３５号；及びアメリカ特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号及び同第５ｍ９３９，５９８号を参照する。ヒト抗体を生成することができるマウスの例は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ（Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｉｎｃ．；アメリカ特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，１８４号）、ＨＵＡＢ−ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｍｅｄｅｒｅｘ、Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ  Ｐｈａｒｍ；アメリカ特許第５，５４５，８０６号及び同第５，５６９，８２５）、ＴＲＡＮＳ  ＣＨＲＯＭＯ  ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｋｉｒｉｎ）及びＫＭ  ＭＯＵＳＥＴＭ（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）を含む。
【０３０２】
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合するヒト抗体はヒト兔疫グロブリン配列から来由した抗体ライブラリを使う前述したファージディスプレイ方法を含む当該分野に公知となった多様な方法によって製造されることができる。また、アメリカ特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号及び同第５，８８５，７９３号；国際特許公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、及び同第ＷＯ９１／１０７４１号を参照する。
【０３０３】
いくつかの具体例において、ヒト抗体はマウス−ヒトハイブリードマを使って製造されることができる。例えば、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）によって形質転換されたヒト末梢血リンパ球がマウス骨髓腫細胞と融合してヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス−ヒトハイブリードマが生成されることができ、これらのマウス−ヒトハイブリードマは標的抗原（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５、例えばヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものなどを決定するためにスクリーニングされることができる。このような方法は当該分野に公知となって説明されており、例えば、Shinmoto H et al., (2004) Cytotechnology 46: 19-23; Naganawa Y et al., (2005) Human Antibodies 14: 27-31を参照する。
【０３０４】
ＶＩ．抗体操作方法
以上で論議されたように、本発明で開示されるＶＨ及びＶＬ配列を有する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＶＨ及び／又はＶＬ配列、又はそれに付着された不変領域（等）を変形することにより新しい抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を生成するのに使われることができる。よって、本発明で説明される他の様態で、本発明に説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、例えば２−１３及び３−２の構造的特徴はヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する結合のような本発明に説明される抗体の少なくとも一つの機能的特性を保有した構造的に関連した抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を生成するのに使われる。例えば、この操作方法の出発物質は本発明で提供されるＶＨ及び／又はＶＬ配列、又はその一つ以上のＣＤＲ領域である。操作された抗体を生成するために、本発明で提供されるＶＨ及び／又はＶＬ配列の一つ以上、又はその一つ以上のＣＤＲ領域を実際に製造（すなわち、タンパク質として発現）することが必要ではない。むしろ、前記配列（等）に含有された情報が元の配列（等）から来由した“第２世代”配列（等）を生成するための出発物質として使われ、そして“第２世代”配列（等）がタンパク質として製造されて発現する。
【０３０５】
したがって、次の段階を含む抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を製造するための方法が本発明で提供される：
（ａ）（ｉ）表２に提示されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列又は表４に提示された重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む重鎖可変領域配列；及び（ｉｉ）表３に提示されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列又は表５に提示された軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域配列を提供する段階；
（ｂ）重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列内の少なくとも一つのアミノ酸残基を変更することにより少なくとも一つの変更された抗体又は抗原結合部分配列を生成する段階；及び
（ｃ）変更された抗体又は抗原結合部分配列をタンパク質として発現する段階。
【０３０６】
標準分子生物学技術が変更された抗体又は抗原結合部分配列を製造して発現するために使われることができる。
【０３０７】
いくつかの具体例において、変更された抗体又は抗原結合部分配列（等）によって暗号化した抗体又はその抗原結合部分は本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の機能的特性を一つ、一部、又は全部保有したものであり、これらの特性は次を含む：
（１）例えば、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されたとき、例えば１０ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭ）のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（２）例えば、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定されたとき、例えば１ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ〜１ｎＭ）のＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（３）例えば、ＥＬＩＳＡによって測定されたとき、例えば１ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ〜１ｎＭ）のＥＣ５０で膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（４）反応性神経膠症の開始の減少、反転、遅延、及び／又は予防；
（５）反応性星状膠細胞の過度な増殖の抑制；
（６）ニューロカン及びニューロン−グリア抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現の減少；
（７）ニューロンの核でｃ−ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現の増加；
（８）ニューロンの生存の促進；
（９）ニューロンでＧＡＰ４３の発現の増加；
（１０）軸索の再成長の促進；及び
（１１）２−１３、３−２、又は１−２８とヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する結合に対して一方向又は両方向に競合。
【０３０８】
変更された抗体又はその抗原結合部分は前記（１）〜（１１）で提示された機能的特性を１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、１０個以上、又は全部を示すことができる。変更された抗体又はその抗原結合部分の機能的特性は当該分野で利用可能な及び／又は実施例に提示されたものなどの本発明で説明される標準分析（例えば、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ）を使って評価されることができる。
【０３０９】
本発明で説明される抗体操作方法の特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体コーディング配列の全部又は一部に沿って無作為に又は選択的に突然変異が導入されることができ、得られた変形された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は本発明に説明されたように結合活性及び／又は他の機能的特性に対してスクリーニングされることができる。突然変異方法は当該分野に説明されている。例えば、ＳｈｏｒｔによるＰＣＴ特許公開第ＷＯ０２／０９２７８０号は、飽和突然変異誘発、合成ライゲーション組立、又はこれらの組合せを使って抗体突然変異を生成してスクリーニングする方法を説明する。もしくはＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．によるＰＣＴ特許公開第ＷＯ０３／０７４６７９号は抗体の物理化学的特性を最適化するためにコンピュータスクリーニング方法を使う方法を説明する。
【０３１０】
ＶＩＩ．細胞及びベクター
特定の様態で、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本発明で説明される抗体（又はその抗原結合断片）を発現する（例えば、組み換え方式で）細胞（例えば、宿主細胞）及び関連のポリヌクレオチド及び発現ベクターが本発明で提供される。宿主細胞、例えば哺乳類細胞で組み換え発現のための抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又は断片を暗号化するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）行って本発明で提供される。また、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ヒト又はヒト化抗体）を組み換え方式で発現するこのようなベクターを含む宿主細胞が本発明で提供される。特定の様態で、宿主細胞からこのような抗体を発現する段階を含む、本発明で説明される抗体の製造方法が本発明で提供される。
【０３１１】
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本発明で説明される抗体（例えば、全長抗体、抗体の重鎖及び／又は軽鎖、又は本発明で説明される単鎖抗体）の組み換え発現は前記抗体を暗号化するポリヌクレオチドを含む発現ベクターの構成を伴う。本発明で説明される抗体分子、抗体の重鎖及び／又は軽鎖、又はその断片（例えば、重鎖及び／又は軽鎖可変ドメイン）を暗号化するポリヌクレオチドが獲得された後、抗体の製造のためのベクターが当該分野によく知られた技術を用いる組み換えＤＮＡ技術によって生成されることができる。よって、ヌクレオチド配列を暗号化する抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）を含むポリヌクレオチドの発現によるタンパク質の製造方法が本発明で説明される。当業者によく知られた方法を使って抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）コーディング配列と適切な転写及び翻訳制御信号を含む発現ベクターが構成されることができる。これらの方法は、例えば試験管内組み換えＤＮＡ技術、合成技術、及び生体内遺伝子組み換えを含む。また、プローモーターに作動可能に結合された、本発明で説明される抗体分子、抗体の重鎖又は軽鎖、抗体の重鎖又は軽鎖可変ドメイン又はその断片、又は重鎖又は軽鎖ＣＤＲを暗号化するヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターが提供される。このようなベクターは、例えば抗体分子の不変領域（例えば、国際特許公開第ＷＯ８６／０５８０７号及び同第ＷＯ８９／０１０３６号；及びアメリカ特許第５，１２２，４６４号参照）を暗号化するヌクレオチド配列を含むことができ、抗体の可変ドメインが全体重鎖、全体軽鎖、又は全体重鎖と軽鎖の発現のためにこのようなベクターにクローニングされることができる。
【０３１２】
発現ベクターは従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に伝達されることができ、得られた細胞は従来の技術によって培養されて本発明で説明される抗体（例えば、２−１３、３−２、又は１−２８のＶＨ及び／又はＶＬ、又はＶＨ及び／又はＶＬＣＤＲの中で一つ以上を含む抗体）又はその断片が生成されることができる。したがって、宿主細胞でこのような配列の発現のためのプローモーターに作動可能に結合された、本発明で説明される抗体又はその断片、又はその重鎖又は軽鎖、又はその断片、又は本発明で説明される単鎖抗体を暗号化するポリヌクレオチドを含む宿主細胞が本発明で提供される。特定の具体例において、二重鎖抗体の発現のために、重鎖と軽鎖を個別的に二つとも暗号化するベクターが以下で詳細に説明されるように全体兔疫グロブリン分子の発現のために宿主細胞で同時に発現することができる。特定の具体例において、宿主細胞は本発明で説明される抗体の重鎖と軽鎖、又はその断片を暗号化するポリヌクレオチドを含むベクターを含む。特定の具体例において、宿主細胞は二つの相異なるベクターを含み、第１ベクターは本発明で説明される抗体の重鎖又は重鎖可変領域、又はその断片を暗号化するポリヌクレオチドを含み、第２ベクターは本発明で説明される抗体の軽鎖又は軽鎖可変領域、又はその断片を暗号化するポリヌクレオチドを含む。他の具体例において、第１宿主細胞は本発明で説明される抗体の重鎖又は重鎖可変領域、又はその断片を暗号化するポリヌクレオチドを含む第１ベクターを含み、第２宿主細胞は本発明で説明される抗体の軽鎖又は軽鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含む。特定の具体例において、第１細胞によって発現した重鎖／軽鎖可変領域が第２細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合して本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合断片を形成する。特定の具体例において、このような第１宿主細胞とこのような第２宿主細胞を含む宿主細胞の集団が本発明で提供される。
【０３１３】
特定の具体例において、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖／軽鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含む第１ベクター、及び本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖／重鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含むベクターの集団が本発明で提供される。
【０３１４】
多様な宿主発現システムが本発明で説明される抗体分子を発現するために用いられることができる。このような宿主発現システムは、関心のコーディング配列が生成され、ついで精製されることができるビークルを表すだけでなく、適切なヌクレオチドコーディング配列で形質転換又は形質転換されたとき、本発明で説明される抗体分子を原位置で発現することができる細胞を示す。これらは、これらに制限されないが、微生物、例えば抗体コーディング配列を含む組み換えバクテリアファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターによって形質転換されたバクテリア（例えば、大腸菌及び枯草菌）；抗体コーディング配列を含む組み換え酵母発現ベクターによって形質転換された酵母（例えば、サッカロミセスピチア）；抗体コーディング配列を含む組み換えウイルス（例えば、バキュロウィルス）発現ベクターで感染された昆虫細胞システム；抗体コーディング配列を含む組み換えウイルス（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）発現ベクターで感染されるか組み換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞システム（例えば、緑藻類、例えば緑藻クラミドモナス）；又は哺乳類細胞のゲノムから来由したプローモーター（例えば、メタロチオネインプローモーター）又は哺乳類ウイルスから来由したプローモーター（例えば、アデノウイルス後期プローモーター；ワクシニアアウイルス７．５Ｋプローモーター）を含む組み換え発現構成物を隠している哺乳類細胞システム（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳＯ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７０３０、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒｌ。ｌ、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）を含む。特定の具体例において、本発明で説明される抗体又はその抗原結合断片を発現するための細胞はＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯ  ＧＳ  ＳＹＳＴＥＭ（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。特定の具体例において、本発明で説明される抗体を発現するための細胞はヒト細胞、例えばヒト細胞株である。特定の具体例において、哺乳類発現ベクターはＰＯＰＴＩＶＥＣＴＭ又はｐｃＤＮＡ３．３である。特定の具体例において、大腸菌のようなバクテリア細胞、又は真核生物細胞（例えば、哺乳類細胞）が、特に全体組み換え抗体分子の発現のために、組み換え抗体分子の発現に使われる。例えば、中国ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳類細胞はヒトサイトメガロウイルスからの主要中間早期遺伝子プローモーター要素のようなベクターとともに抗体に対する効果的な発現システムとなる（Foecking MK & Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-5; and Cockett MI et al., (1990) Biotechnology 8(7): 662-7参照）。特定の具体例において、本発明で説明される抗体はＣＨＯ細胞又はＮＳＯ細胞によって生成される。特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する本発明で説明される抗体を暗号化するヌクレオチド配列の発現は構成的プローモーター、誘導プローモーター又は組職��異的プローモーターによって調節される。
【０３１５】
バクテリアシステムでは、多くの発現ベクターが発現する抗体分子に意図された用途によって有益に選択されることができる。例えば、抗体分子の医薬組成物の生成のために多量の抗体が生成されなければならない場合、易しく精製される融合タンパク質生成物を高水準で発現するように指示するベクターが好ましい。このようなベクターは、これらに制限されないが、大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（Ruether U & Mueller- Hill B (1983) EMBO J 2: 1791-1794）（抗体コーディング配列はｌａｃ  Ｚコーディング領域とフレーム単位でベクターに個別的にライゲーションされることができ、これにより融合タンパク質が生成される）；ｐＩＮベクター（Inouye S & Inouye M (1985) Nuc Acids Res 13: 3101-3109; Van Heeke G & Schuster SM (1989) J Biol Chem 24: 5503-5509）；などを含む。例えば、ｐＧＥＸベクターがグルタチオン５−トランスフェーラゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現するために使われることができる。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、基質グルタチオンアガロースビードへの吸着及び結合後、遊離グルタチオンの存在の下で溶出させることにより、溶解された細胞から易しく精製されることができる。ｐＧＥＸベクターはトロンビン又は因子Ｘａプロテアーゼ切断部位を含むように設計され、これによりクローニングされた標的遺伝子生成物がＧＳＴ部分から放出されることができる。
【０３１６】
昆虫システムでは、例えばオートグラファカルフォルニア核ポリヘドロシスウイルス（ＡｃＮＰＶ）が外来遺伝子の発現のためのベクターとして使われることができる。このウイルスはスポドプテラフルギペルダ細胞で成長する。抗体コーディング配列はウイルスの非必須領域（例えば、ポリへドリン遺伝子）に個別的にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプローモーター（例えば、ポリへドリンプローモーター）の制御の下に置かれることができる。
【０３１７】
哺乳類宿主細胞では、多くのウイルスに基づく発現システムが用いられることができる。アデノウイルスが発現ベクターとして使われる場合、関心の抗体コーディング配列がアデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば後期プローモーターと三者リーダー配列にライゲーションされることができる。そして、このキメラ遺伝子が試験管内又は生体内組み換えによってアデノウイルスゲノムに挿入されることができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１又はＥ３）への挿入は感染された宿主で抗体分子を発現することができる生育性組み換えウイルスをもたらす（例えば、Logan J & Shenk T (1984) PNAS 81(12): 3655-9参照）。また、挿入された抗体コーディング配列の効果的な翻訳のために特定の開始信号が必要であり得る。これらの信号はＡＴＧ開始コドンと隣接配列を含む。また、開始コドンは所望のコーディング配列のリーディングフレームと同一の位相になければならなく、これにより全体挿入体の翻訳が保障される。これらの外因性翻訳制御信号及び開始コドンは天然及び合成の多様な起源を有することができる。発現の効率は、適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネーターなどを含ませることにより増進することができる（例えば、Bitter G et al., (1987) Methods Enzymol. 153: 516-544参照）。
【０３１８】
また、挿入された配列の発現を調整するか、又は所望の特定の方式で遺伝子生成物を変形して加工する宿主細胞菌株が選択されることができる。タンパク質生成物のこのような変形（例えば、グリコシル化）及び加工（例えば、切断）はタンパク質の機能に重要であり得る。相異なる宿主細胞はタンパク質及び遺伝子生成物の翻訳後加工及び変形のための特徴的で特異的なメカニズムを有する。発現した外来タンパク質の正確な変形及び加工を保障するための適切な細胞株又は宿主システムが選択されることができる。このために、一次転写体の適切な加工、グリコシル化、及び遺伝子生成物のリン酸化のための細胞性機構を有する真核生物宿主細胞が使われることができる。このような哺乳類宿主細胞は、これらに制限されないが、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄ、ＮＳＯ（何の兔疫グロブリン鎖も内因的に生成しないマウス骨髓腫細胞株）、ＣＲＬ７０３０、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒｌ．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞を含む。特定の具体例において、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はＣＨＯ細胞のような哺乳類細胞で生成される。
【０３１９】
特定の具体例において、本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分はフコース含量が減少するかフコース含量を有しない。このような抗体は当業者に公知となった技術を使って生成されることができる。例えば、これらの抗体はフコシル化能力が欠乏するか欠けた細胞で発現することができる。特定の例で、１，６−フコシルトランスフェーラゼの対立形質が全てノックアウトされた細胞株を使ってフコース含量が減少した抗体又はその抗原結合部分が製造されることができる。ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）がフコース含量が減少した抗体又はその抗原結合部分を製造するのに使用可能なこのようなシステムの一例である。
【０３２０】
組み換えタンパク質の高収率生成のために、適切な発現細胞が生成されることができる。例えば、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を安定に発現する細胞株が操作されることができる。特定の具体例において、本発明で提供される細胞は軽鎖／軽鎖可変ドメインと重鎖／重鎖可変ドメインを発現し、これらは会合して本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分を形成する。
【０３２１】
特定の様態で、ウイルス複製起源を含む発現ベクターを使うこと以外に、宿主細胞が適切な発現制御要素（例えば、プローモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）によって制御されるＤＮＡ、及び選択性マーカーによって形質転換されることができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入の後、操作された細胞は孵化した培地で１〜２日間成長することができ、選択性培地に移される。組み換えプラスミドで選択性マーカーは選択に対する耐性を付与し、細胞はその染色体にプラスミドを安定に統合することができるようになり、成長して中心部を形成し、これは順に細胞株にクローニングされて拡張されることができる。この方法は本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を発現する細胞株を操作するのに有益に使われることができる。このような操作された細胞株は抗体分子と直接的に又は間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価に有用であり得る。
【０３２２】
多くのシステムが使われることができ、このシステムは、これらに制限されないが、単純ヘルペスウィルスチミジンキナーゼ（Wigler M et al., (1977) Cell 11(1): 223-32）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェーラゼ（Szybalska EH & Szybalski W (1962) PNAS 48(12): 2026-2034）及びアデニンホスホリボシルトランスフェーラゼ（Lowy I et al., (1980) Cell 22(3): 817-23）遺伝子を含み、これらはそれぞれｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−又はａｐｒｔ−細胞に用いられることができる。また、代謝拮抗物質耐性が次の遺伝子に対する選択の根拠として使われることができる（Wigler M et al., (1980) PNAS 77(6): 3567-70; O'Hare K et al., (1981) PNAS 78: 1527-31）；ｇｐｔ、これはミコフェノール酸に耐性を付与する（Mulligan RC & Berg P (1981) PNAS 78(4): 2072-6）；ｎｅｏ、これはアミノグリコシドＧ−４１８に耐性を付与する（Wu GY & Wu CH (1991) Biotherapy 3: 87-95; Tolstoshev P (1993) Ann Rev Pharmacol Toxicol 32: 573-596; Mulligan RC (1993) Science 260: 926-932; and Morgan RA & Anderson WF (1993) Ann Rev Biochem 62: 191-217; Nabel GJ & Feigner PL (1993) Trends Biotechnol 11(5): 211-5）；及びｈｙｇｒｏ、これはハイグロマイシンに耐性を付与する（Santerre RF e.g., (1984) Gene 30(1-3): 147-56）。組み換えＤＮＡ技術分野に通常公知となった方法が所望の組み換えクローンを選択するために一般的に適用され、このような方法は、例えばAusubel FM et al., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler M, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); and in Chapters 12 and 13, Dracopoli NC et al., (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colbere-Garapin F et al., (1981) JMolBiol 150: 1-14に説明され、これらはその全体が参照として本発明に組み込まれる。
【０３２３】
抗体分子の発現水準はベクター増幅によって増加することができる（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ＣＲ  ＆  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ  ＣＣＧ、ＤＮＡクローニングにおいて哺乳類細胞でクローニングされた遺伝子の発現のための遺伝子増幅に基づくベクターの使用、Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、１９８７）参照）。抗体を発現するベクターシステムでマーカーが増幅可能な場合、宿主細胞の培養物に存在する抑制剤水準の増加はマーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅された領域は抗体遺伝子に関連するので、抗体の生成も増加する（Crouse GF et ah, (1983) Mol Cell Biol 3: 257-66）。
【０３２４】
宿主細胞は本発明で説明される二つ以上の発現ベクターによって同時形質転換されることができ、第１ベクターは重鎖来由のポリペプチドを暗号化し、第２ベクターは軽鎖来由のポリペプチドを暗号化する。２個のベクターは同じ選択性マーカーを含むことができ、これは重鎖と軽鎖ポリペプチドの同じ発現ができるようにする。宿主細胞は二つ以上の発現ベクターの相異なる量で同時形質転換されることができる。例えば、宿主細胞は第１発現ベクターと第２発現ベクターの次の一つの比で形質転換されることができる：１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、又は１：５０．
もしくは、重鎖と軽鎖ポリペプチドを二つとも暗号化して発現することができる単一ベクターが使われることができる。このような状況で、軽鎖は、毒性無含有重鎖の過剰を避けるために、重鎖の前に置かれなければならない（Proudfoot NJ (1986) Nature 322: 562-565; and Kohler G (1980) PNAS 77: 2197-2199）。重鎖及び軽鎖のコーディング配列をｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡを含むことができる。発現ベクターはモノシストロン性又はマルチシストロン性であることができる。モノシストロン性核酸構成物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれ以上の遺伝子／ヌクレオチド配列、又は２−５、５−１０又は１０−２０個範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列を暗号化することができる。例えば、バイシストロン性核酸構成物は次の順に、プローモーター、第１遺伝子（例えば、本発明で説明される抗体の重鎖）、及び第２遺伝子（例えば、本発明で説明される抗体の軽鎖）を含むことができる。このような発現ベクターにおいて、二つの遺伝子の転写はプローモーターによってなされることができ、第１遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳はｃａｐ依存性スキャニングメカニズムによってなされることができ、第２遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳はｃａｐ独立的メカニズムによって、例えばＩＲＥＳによってなされることができる。
【０３２５】
本発明で説明される抗体分子が組み換え発現によって生成されれば、それは兔疫グロブリン分子の精製に対して当該分野に公知となった任意の方法によって、例えばクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にタンパク質Ａ後特定抗原に対する親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差等溶解性、又はタンパク質精製のための任意の他の標準技術によって精製されることができる。また、本発明で説明される抗体は、精製を容易にするために、本発明で説明されるかそれとも当該分野に公知となった異種ポリペプチド配列と融合することができる。
【０３２６】
特定の具体例において、本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分が分離されるか精製される。一般に、分離された抗体は、分離された抗体以外の相異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に持っていないものである。例えば、特定の具体例において、本発明で説明される抗体の製造物は細胞性物質及び／又は化学的前駆体を実質的に持っていない。“細胞性物質を実質的に持っていない”とは、抗体が分離されるか組み換え方式で生成された細胞の細胞性成分から抗体が分離された抗体の製造物を含むことを意味する。よって、細胞性物質を実質的に持っていない抗体は異種タンパク質（また、本発明で“汚染タンパク質”とも言う）及び／又は抗体の変異体、例えば抗体の相異なる翻訳後変形された形態又は抗体（又は抗体結合部分）の他の相異なるバージョンを約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％又は０．１％（乾燥重量基準）を有する抗体の製造物を含む。抗体が組み換え方式で生成される場合、一般に培養培地を実質的に持っていなく、すなわち培養培地はタンパク質製造物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、又は０．１％未満である。抗体が化学的合成によって生成される場合、一般的に化学的前駆体又は他の化学物質を実質的に持っていなく、すなわちタンパク質の合成に関連する化学的前駆体又は他の化学物質から分離される。よって、抗体のこのような製造物は関心抗体以外の化学的前駆体又は化合物を約３０％、２０％、１０％、又は５％（乾燥重量基準）未満を有する。特定の具体例において、本発明で説明される抗体は分離されるか精製される。
【０３２７】
ＶＩＩＩ．分析
本発明で説明される抗体は、例えば標準ＥＬＩＳＡによってＦＡＭ１９Ａ５に対する結合に対して試験されることができる。簡単に言えば、マイクロタイタープレートが精製されたＦＡＭ１９Ａ５によってＰＢＳの１−２μｇ／ｍＬの量でコートされた後、ＰＢＳの５％牛血清アルブミンで遮断される。抗体の希釈物（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５免疫化したマウスの血漿の希釈物）が各ウェルに添加され、３７℃で１〜２時間インキュベーションされる。プレートがＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄された後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートされた２次試薬（例えば、ヒト抗体に対する、ヤギ−抗−ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬）とともに３７℃で１時間インキュベーションされる。洗浄後、プレートはＡＢＴＳ基質（Ｍｏｓｓ  Ｉｎｃ．、社製：ＡＢＴＳ−１０００）で展開され、ＯＤ  ４１５−４９５で分光光度計によって分析される。そして、免疫化したマウスからの血清がヒトＦＡＭ１９Ａ５を発現する細胞株には結合するがＦＡＭ１９Ａ５を発現しない対照群細胞株には結合しないものに対してフローサイトメトリーによってさらにスクリーニングされる。簡単に言えば、１：２０希釈物でＦＡＭ１９Ａ５発現ＣＨＯ細胞を抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体とともにインキュベーションすることにより、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合が評価される。細胞が洗浄され、ＰＥ標識された抗ヒトＩｇＧ  Ａｂによって結合が検出される。フローサイトメトリーはＦＡＣＳフローサイトメトリーギ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＳａｎＪｏｓｅ、カリフォルニア）を使って遂行される。好ましく、最高力価が発生したマウスが融合に使われる。
【０３２８】
前述したＥＬＩＳＡ分析は抗体をスクリーニングするのに使われることができ、よってＦＡＭ１９Ａ５免疫原との陽性反応性を示す抗体を生成するハイブリードマのスクリーニングにも使われることができる。そして、ＦＡＭ１９Ａ５に、好ましくは高親和性で結合する抗体を生成するハイブリードマがサブクローニングされ、さらに特性化されることができる。そして、親細胞の反応性を保有した１個のクローンが細胞銀行の形成及び抗体の精製のために各ハイブリードマから選択されることができる（ＥＬＩＳＡによる）。
【０３２９】
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を精製するために、選択されたハイブリードマがモノクローナル抗体の精製のために２リットルスピナーフラスコで成長することができる。上澄み液が濾過されて濃縮された後、タンパク質Ａ−セファロース親和性クロマトグラフィー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ニュージャージー）が遂行されることができる。純度を保障するために、溶出されたＩｇＧはゲル電気泳動及び高性能液体クロマトグラフィーによって点検されることができる。バッファー溶液がＰＢＳに交換されることができ、１．４３の減衰係数を用いてＯＤ２８０によって濃度が決定されることができる。モノクローナル抗体は等分されて−８０℃で保管されることができる。
【０３３０】
選択された抗ＦＡＭ１９Ａ５モノクローナル抗体が独特なエピトープに結合するかを決定するために、各抗体は商業的に利用可能な試薬（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、イリノイ）を使ってビオチン化されることができる。ビオチン化したＭＡｂ結合はストレプトアビジン標識プローブで検出されることができる。標識されなかったモノクローナル抗体とビオチン化したモノクローナル抗体を使った競合研究が前述したようにＦＡＭ１９Ａ５コートされたＥＬＩＳＡプレートを使って遂行されることができる。
【０３３１】
精製された抗体のアイソタイプを決定するために、アイソタイプＥＬＩＳＡが特定のアイソタイプの抗体に特異的な試薬を使って遂行されることができる。例えば、ヒトモノクローナル抗体のアイソタイプを決定するために、マイクロタイタープレートのウェルが４℃で一晩の間に抗ヒト兔疫グロブリン１μｇ／ｍＬでコーティングされることができる。１％ＢＳＡで遮断された後、プレートは１μｇ／ｍＬ未満のテストモノクローナル抗体又は精製されたアイソタイプ対照群と周囲温度で１〜２時間反応される。そして、ウェルはヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＭ特異的アルカリ性ホスファターゼコンジュゲートプローブのいずれと反応することができる。プレートは前述したように展開されて分析される。
【０３３２】
ＦＡＭ１９Ａ５を発現する生きている細胞に対するモノクローナル抗体の結合を試験するために、実施例で説明されたようにフローサイトメトリーが使われることができる。簡単に言えば、（標準成長条件で成長された）膜結合ＦＡＭ１９Ａ５を発現する細胞株が０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ内で多様な濃度のモノクローナル抗体とともに４℃で１時間混合される。洗浄後、細胞は１次抗体染色と同一の条件の下でフルオレセイン標識された抗ＩｇＧ抗体と反応する。単一細胞に対してゲート特性を有する直進及び側面スキャターを使うＦＡＣＳｃａｎ機器によってサンプルが分析されることができ、標識された抗体の結合が決定される。フローサイトメトリーに加え、あるいはフローサイトメトリーの代わりに蛍光顕微鏡を使う他の分析も使われることができる。細胞は前述したように正確に染色され、蛍光顕微鏡によって検査されることができる。この方法は個別細胞の視覚化を許容するが、抗原の密度によって感度が低下することができる。
【０３３３】
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はウエスタンブロッティングによってＦＡＭ１９Ａ５抗原との反応性に対してさらに試験されることができる。簡単に言えば、ＦＡＭ１９Ａ５を発現する細胞からの細胞抽出物が製造され、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動を受けることができる。電気泳動の後、分離された抗原がニトロセルローズ膜に移され、２０％マウス血清で遮断され、試験されるモノクローナル抗体によってプローブされる。抗ＩｇＧアルカリ性ホスファターゼを使ってＩｇＧ結合が検出されることができ、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質精製（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ミズーリ）によって展開されることができる。
【０３３４】
多様な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合親和性、交差反応性、及び結合キネティクスを分析するための方法は当該分野に公知となった標準分析、例えばＢＩＡＣＯＲＥＴＭ  ２０００  ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）を使うＢＩＡＣＯＲＥＴＭ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を含む。
【０３３５】
一具体例において、抗体はヒトＦＡＭ１９Ａ５の可溶性形態に特異的に結合する。一具体例において、抗体はヒトＦＡＭ１９Ａ５の膜結合形態に特異的に結合する。抗体はＦＡＭ１９Ａ５の特定エピトープ（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６内の断片）に特異的に結合することができる。特定の具体例において、抗体はヒトＦＡＭ１９Ａ５に、好ましくは高親和性で特異的に結合し、ＦＡＭ１９タンパク質サブファミリの他のメンバーとは交差反応しない。
【０３３６】
ＩＸ．二重特異性分子
本発明で説明される抗体は二重特異性分子を形成するのに使われることができる。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、又はその抗原結合部分は他の機能分子、例えば他のペプチド又はタンパク質（例えば、他の抗体又は受容体リガンド）に誘導体化されるか結合することができ、これにより少なくとも二つの相異なる結合部位又は標的分子に結合する二重特異性分子が生成される。ＩＬ−６、ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ＥＧＦ及びＴＧＦａのようなサイトカインが転写３のタンパク質信号変換剤及び活性剤（ＳＴＡＴ３）を活性化することにより神経膠症及び／又は反応性アストログリア増殖症開始の触発剤として関与する（Balasingam et al., J. Neurosci. 14(2):846-56 (1994); Winter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.20; 92(13):5865- 9 (1995)参照）、これらは、ＣＮＳ損傷の後、多くの様態の反応性アストログリア増殖症を調節する（Herrmann J. E. e.g., J. Neurosci. 28(28): 7231-7243 (2008)参照）。例えば、ＳＴＡＴ３の不在又は減少はグリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）の上向調節の減衰、星状膠細胞の肥大の不全、及び増加した炎症伝播、増加した病巣体積及びＣＮＳ損傷後部分的に弱化した運動回復をもたらす（Herrmann J. E. et al., J. Neurosci. 28(28): 7231- 7243 (2008)参照）。よって、例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は組合治療のために神経膠症の開始及び／又は反応性星状膠細胞の過度な増殖を阻害することに関与する任意のタンパク質に特異的に結合する抗体又はｓｃＦｖ、例えばＩＬ−６ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ＥＧＦ又はＴＧＦαに対する抗体と結合することができる。
【０３３７】
また、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、対象の中枢神経系損傷（例えば、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、又は脳腫瘍）、脳脊髓系損傷、退行性脳障害（例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳ）、退行性脳脊髓又は神経障害、又は神経障害性の痛み（以下のＸＩＩＩ章の疾患又は障害参照）を含む疾患又は障害を治療する抗体又はｓｃＦｖと結合することができる。例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は多発性硬化症を治療する抗体又はｓｃＦｖ、例えばナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ）、又はアレムツズマブ（Ｌｅｍｔｒａｄａ）と結合することができる。
【０３３８】
本発明で説明される抗体は実際に二つ以上の他の機能分子と誘導体化するか結合することができ、よって３個以上の相異なる結合部位及び／又は標的分子に結合する多重特異的分子が生成される。このような多重特異的分子もやはり本発明で使用される用語“二重特異性分子”に含まれる。本発明で説明される二重特異性分子を生成するために、本発明で説明される抗体は一つ以上の他の結合分子、例えば他の抗体、その抗原結合部分、タンパク質又は結合擬態体と（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合又は他の方式によって）機能的に結合することができ、これにより二重特異性分子が得られる。一具体例において、二重特異性分子はＦＡＭ１９Ａ５とＶＥＧＦに結合する。他の具体例において、二重特異性分子はＦＡＭ１９Ａ５とＥＧＦに結合する。
【０３３９】
したがって、ＦＡＭ１９Ａ５に対する少なくとも一つの第１結合特異性及び第２標的エピトープに対する第２結合特異性を含む二重特異性分子が本発明で提供される。二重特異性分子が多重特異性である本発明で説明される一具体例において、前記分子は第３結合特異性をさらに含むことができる。
【０３４０】
一具体例において、本発明で説明される二重特異性分子は結合特異性として少なくとも一つの抗体、又は例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含むそれの抗原結合部分を含む。また、抗体は軽鎖又は重鎖二量体、又はＦｖ又は単鎖構成物のようなそれの最小断片であり得、これはその内容が確かに本願に参照として組み込まれるＬａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．のアメリカ特許第４，９４６，７７８号に説明される。
【０３４１】
ヒトモノクローナル抗体が好ましいが、本発明で説明される二重特異性分子に用いられることができる他の抗体はマウス、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体である。
【０３４２】
本発明で説明される二重特異性分子は、当該分野に公知となった方法を使って構成性結合特異性をコンジュゲートすることによって製造されることができる。例えば、二重特異性分子の各結合特異性が個別的に生成された後、互いにコンジュゲートされることができる。結合特異性がタンパク質又はペプチドの場合、多様なカップリング剤又は架橋剤が共有コンジュゲーションのために使われることができる。架橋剤の例は、タンパク質Ａ、カルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、及びスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）を含む（例えば、Karpovsky et al., (1984) J. Exp. Med. 160: 1686; Liu, MA et al., (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648参照）。他の方法は、Paulus (1985) Be bring Ins. Mitt. No. 78, 118-132; Brennan et al., (1985) Science 229:81-83), and Glennie et al., (1987) J. Immunol. 139: 2367-2375に説明されたものなどを含む。好適なコンジュゲート剤はＳＡＴＡ及びスルホ−ＳＭＣＣであり、二つともＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、イリノイ）で購入することができる。
【０３４３】
結合特異性が抗体の場合、二つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によってコンジュゲートされることができる。特に好適な具体例において、ヒンジ領域はコンジュゲーションの前に奇数のスルフヒドリル残基、好ましく１個のスルフヒドリル残基を含むように変形される。
【０３４４】
もしくは、結合特異性は二つとも同じベクターで暗号化され、同じ宿主細胞で発現して組み立てられることができる。この方法は二重特異性分子がｍＡｂ  ｘ  ｍＡｂ、ｍＡｂ  ｘ  Ｆａｂ、ｍＡｂ  ｘ  （ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ  ｘ  Ｆ（ａｂ’）２又はリガンドｘ  Ｆａｂ融合タンパク質の場合に特に有用である。二重特異的抗体は、各重鎖のＣ末端にｓｃＦｖを含む抗体を含むことができる。本発明で説明される二重特異性分子は一つの単鎖抗体と結合決定基を含む単鎖分子、又は２個の結合決定基を含む単鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性分子は少なくとも２個の単鎖分子を含むことができる。二重特異性分子を製造する方法は、例えばアメリカ特許第５，２６０，２０３号；アメリカ特許第５，４５５，０３０号；アメリカ特許第４，８８１，１７５号；アメリカ特許第５，１３２，４０５号；アメリカ特許第５，０９１，５１３号；アメリカ特許第５，４７６，７８６号；アメリカ特許第５，０１３，６５３号；アメリカ特許第５，２５８，４９８；及びアメリカ特許第５，４８２，８５８に説明される。
【０３４５】
特異的標的に対する二重特異性分子の結合は当該分野に認められた方法、例えば酵素結合免疫吸着測定分析（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定分析（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、又はウエスタンブロット分析を使って確認されることができる。これらの各分析は一般的に関心複合体に特異的な標識された試薬（例えば、抗体）を用いて特に関心あるタンパク質抗体複合体の存在を検出する。
【０３４６】
Ｘ．診断
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に付着される部分は結合部分、標識化部分、及び生理学的活性部分からなる群から選択される。
【０３４７】
本発明で説明される抗体はサンプル検査及び生体内映像化を含む診断目的のために使われることができ、この目的のために抗体（又はその結合部分）は適切な検出可能な製剤にコンジュゲートされて免疫抱合体を形成することができる。診断目的のための適切な製剤は、全身映像化のための放射性同位元素、及びサンプル検査のための放射性同位元素、酵素、蛍光標識及び他の適切な抗体タグを含む検出可能な標識である。
【０３４８】
検出可能な標識は試験管内診断分野で現在使われる多様な種類のいずれかであり得る。これらはコロイド金のような金属ゾルを含む微粒子標識、例えばＮ２Ｓ２、Ｎ３Ｓ又はＮ４タイプのペプチドキレート剤とともに提示されるＩ１２５又はＴｃ９９のような同位体、蛍光マーカー、発光マーカー、リン光マーカーなどを含む発色団だけでなく、与えられた基質を検出可能なマーカーに転換する酵素標識、及び重合酵素連鎖反応によるもののような増幅後に現れるポリヌクレオチドタグを含む。適切な酵素標識は西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼなどを含む。例えば、標識は酵素アルカリ性ホスファターゼであり得る。これは、アダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、ジソジウム３−（４−（メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’−（５’−クロロ）トリシクロ｛３．３．１．１３、７｝デカン｝−４−イル）フェニルフォスフェート（ＣＳＰＤ）だけでなく、ＣＤＰ及びＣＤＰ−ＳＴＡＲ（登録商標）のような１，２−ジオキセタン基質又は当業者によく知られた他の発光基質、例えばテルビウム（ＩＩＩ）及びユーロピウム（ＩＩＩ）のような適切なランタン族のキレートの転換後、化学発光の存在又は形成を測定することによって検出される。検出手段は選択された標識によって決定される。標識又はその反応生成物の出現は肉眼で確認されることができ、標識が微粒子であり、適切な水準で蓄積された場合には、分光光度計、照度計、蛍光光度計などの機器を使用して確認されることができ、全ての場合、標準慣例に従う。
【０３４９】
また、本発明で説明される抗体は治療剤とコンジュゲートされることができ、これにより抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）のような免疫抱合体が形成される。適切な治療剤は神経膠症及び／又は反応性アストログリア増殖症の開始を調整する製剤及び／又は退行性脳障害、中枢神経系損傷、又は神経障害性の痛みを治療する製剤を含む。退行性脳障害を治療するための治療剤は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療するための薬物を含む。これは、このような退行性脳障害の治療に通常使われる薬物、例えば以下のＸＩＩ章に開示される薬物を含む。
【０３５０】
免疫抱合体は当該分野に公知となった方法によって製造されることができる。好ましくは、コンジュゲーション方法は結合をもたらし、これは実質的に（又はほとんど）非免疫原性、例えばペプチド−（すなわち、アミド−）、スルフィド−、（立体障害）、ジスルフィド−、ヒドラゾン−、及びエーテル結合である。これら結合はほとんど非免疫原性であり、血清内で適切な安全性を示す（例えば、Senter, P. D., Curr. Opin. Chem. Biol. 13 (2009) 235-244; WO 2009/059278; WO 95/17886参照）。
【０３５１】
部分及び抗体の生化学的性質によって、相異なるコンジュゲーション戦略が用いられることができる。部分が５０〜５００個のアミノ酸の自然発生又は組み換え部分の場合、タンパク質コンジュゲートの合成化学を説明したテキストブックにある標準過程に従い、これは当業者が易しく従うことができる（例えば、Hackenberger, C. P. R., and Schwarzer, D., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 47 (2008) 10030-10074参照）。一具体例において、マレインイミド部分と抗体又は部分内のシステイン残基の反応が使われる。これは、例えば抗体のＦａｂ又はＦａｂ’断片が使われる場合、カップリング化学に特に適している。もしくは、一具体例において、抗体又は部分のＣ末端端部とのカップリングが遂行される。タンパク質、例えばＦａｂ断片のＣ末端変形は、例えばSunbul, M. and Yin, J., Org. Biomol. Chem. 7 (2009) 3361-3371に説明されたとおりに遂行されることができる。
【０３５２】
一般に、部位特異的反応及び共有カップリングは天然アミノ酸を既存の残りの官能基の反応性に直交する反応性を有するアミノ酸に変形することに基づく。例えば、希少配列部内の特異的システインはアルデヒド内で酵素転換されることができる（M. A., and Dierks, T., ChemBioChem. 10 (2009) 425-427参照）。また、与えられた配列部で天然アミノ酸と特定酵素の特異的酵素反応性を用いることにより所望のアミノ酸変形を獲得することができる（例えば、Taki, M. et al., Prot. Eng. Des. Sel. 17 (2004) 119-126; Gautier, A. e.g., Chem. Biol. 15 (2008) 128-136; and Protease-catalyzed formation of C ‐ N bonds is used by Bordusa, F., Highlights in Bioorganic Chemistry (2004) 389-403参照）。
【０３５３】
また、部位特異的反応及び共有カップリングは適切な変形試薬と末端アミノ酸の選択的反応によって達成されることができる。Ｎ末端システインとベンゾニトリルの反応性を用いて部位特異的共有カップリングが達成されることができる（ Ren, H. e.g., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48 (2009) 9658-9662参照）。また、自然化学ライゲーションはＣ末端システイン残基に基づくことができる（Taylor, E. Vogel; Imperiali, B, Nucleic Acids and Molecular Biology (2009), 22 (Protein Engineering), 65-96参照）。
【０３５４】
ＥＰ１０７４５６３は負で荷電されたアミノ酸ストレッチ内のシステインと正で荷電されたアミノ酸ストレッチに位置するシステインの早い反応に基づくコンジュゲーション方法を説明する。
【０３５５】
また、部分は合成ペプチド又はペプチド擬態体であり得る。ポリペプチドが化学的に合成された場合、直交化学反応性を有するアミノ酸がこのような合成中に統合されることができる（例えば、de Graaf, A. J. et al., Bioconjug. Chem. 20 (2009) 1281-1295参照）。かなり多様な直交官能基に成敗が依存し、合成ペプチドに導入することができるから、このようなペプチドとリンカーのコンジュゲーションが標準化学となる。
【０３５６】
単一標識ポリペプチドを獲得するために、１：１化学量論のコンジュゲートが他のコンジュゲーション副産物からクロマトグラフィーによって分離されることができる。この過程は染料標識された結合対構成員と荷電されたリンカーの使用によって容易になることができる。この種類の標識されて高度に負で荷電された結合対構成員を使うことにより、単一コンジュゲートされたポリペプチドが非標識ポリペプチド及び二つ以上のリンカーを有するポリペプチドから易しく分離される。その理由は、電荷及び分子量の差が分離に使われることができるからである。蛍光染料が標識された１価バインダーのような未結合成分から複合体を精製するのに有用であり得る。
【０３５７】
ＸＩ．医薬組成物
生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤（Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, ペンシルバニア）の中で所望程度の純度を有する本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分を含む組成物が本発明で提供される。許容される担体、賦形剤又は安定剤は用いられた投薬量及び濃度で受恵者に非毒性であり、バッファー、例えばリン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０個残期未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は兔疫グロブリン；親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシン；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えば、Ｚｎタンパク質複合体）；及び／又は非イオン界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【０３５８】
特定の具体例において、医薬組成物は、本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、及び選択的に１種以上の追加の予防又は治療剤を、薬学的に許容される担体内に含む。特定の具体例において、医薬組成物は本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分の有効量、及び選択的に１種以上の追加の予防又は治療剤を、薬学的に許容される担体内に含む。いくつかの具体例において、抗体は医薬組成物に含まれた唯一の活性成分である。本発明で説明される医薬組成物はＦＡＭ１９Ａ５活性を増進、誘導又は活性化させ、中枢神経系損傷、退行性脳障害又は神経障害性の痛みのような状態を治療するのに有用であることができる。
【０３５９】
非経口剤に使用された薬学的に許容される担体は水性ビークル、非水性ビークル、抗菌剤、等張剤、バッファー、抗酸化剤、局所痲酔剤、懸濁及び分散剤、乳化剤、封鎖又はキレート剤及び他の薬学的に許容される物質を含む。水性ビークルの例は、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、等張デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロース及びラクテートリンガー注射液を含む。非水性非経口ビークルは、植物起源の固定油、綿実油、トウモロコシ油、胡麻油及びピーナッツ油を含む。静菌又は静真菌濃度の抗菌剤が複数回容器にパッケージされた非経口剤に添加されることができ、これらは、フェノール又はクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル及びプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル（ｐｒｏｐｙｌ  ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｅｓｔｅｒ）、チメロサール、塩化ベンザルコニウム及び塩化ベンゼトニウムを含む。等張剤は、塩化ナトリウム及びデキストロースを含む。バッファーは、リン酸塩及びクエン酸を含む。抗酸化剤は、重硫酸ナトリウムを含む。局所痲酔剤は、塩酸プロカインを含む。懸濁及び分散剤は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリドンを含む。乳化剤は、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）を含む。金属イオン封鎖又はキレート剤は、ＥＤＴＡを含む。また、薬学的担体は水混和性ビークルのために、エチルアルコール、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコールを含み、ｐＨ調整のために、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸又は乳酸を含む。
【０３６０】
医薬組成物は、対象に対する任意の投与経路に合うように製剤化されることができる。投与経路の具体的な例は、鼻腔内、経口、非経口、髄腔内、脳室内、肺、皮下、又は心室内経路を含む。皮下、筋肉内又は静脈内注射を特徴とする非経口投与も本発明で考慮される。注射可能物質が従来の形態に、液体溶液又は懸濁液、注射前に液体中で溶液又は懸濁液になるのに適した固体形態、又はエマルジョンに製造されることができる。また、注射可能物質、溶液及びエマルジョンは１種以上の賦形剤を含む。適切な賦形剤は、例えば水、食塩水、デキストロース、グリセロール又はエチルアルコールである。これに加え、必要に応じて、投与される医薬組成物も少量の非毒性補助物質、例えば湿潤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解度増進剤、及び他のこのような製剤、例えば酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエチルアルコールアミン及びシクロデキストリンを含むことができる。
【０３６１】
抗体の非経口投与のための製剤は、直ぐ注射可能な滅菌溶液、皮下注射用錠剤を含む使用直前に溶媒と直ぐ合わせられることができる滅菌乾燥可溶性製品、例えば凍結乾燥された粉末、すぐ注射可能な滅菌懸濁液、使用直前にビークルと直ぐ合わせられることができる滅菌乾燥不溶性製品及び滅菌エマルジョンを含む。溶液は水性又は非水性であり得る。
【０３６２】
静脈内投与される場合、適切な担体は、生理学的食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、及び増粘及び溶解剤を含む溶液、例えばグルコース、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコール及びこれらの混合物を含む。
【０３６３】
抗体を含む局所用混合物は局所及び全身投与について説明したように製造される。得られた混合物は、溶液、懸濁液、エマルジョンなどであり得、クリーム、ゲル、軟膏、エマルジョン、溶液、エリクサー、ローション、懸濁液、チンキ剤、ペースト、フォーム、エアロゾル、灌注剤、スプレー、座薬、包帯、皮膚パッチ又は局所投与に適した任意の他の剤形として製剤化されることができる。
【０３６４】
本明細書で説明される抗体又はその抗原結合部分は、例えば吸入による、局所投与のためのエアロゾルとして製剤化されることができる（例えば、アメリカ特許第４，０４４，１２６号、同第４，４１４，２０９号及び同第４，３６４，９２３号参照、この出願は炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイドの送逹のためのエアロゾルを説明する）。気道に投与するためのこの製剤は噴霧器用のエアロゾル又は溶液の形態であるか、又は吸入剤用の超微粒粉末であり得、単独で使われるか又はラクトースのような非活性担体と組み合わせられる。このような場合、製剤の粒子は、一具体例で５０ミクロン未満、一具体例で１０ミクロン未満の直径を有する。
【０３６５】
本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分は局部又は局所適用、例えば皮膚及び粘膜に局所適用、例えば目に局所適用のために、ゲル、クリーム及びローションに製剤化されることができ、目に適用又は嚢内又は髄腔内適用のために製剤化されることができる。局所投与は経皮送逹のために考慮され、また眼又は粘膜投与、又は吸入療法のために考慮される。他の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて又は単独で抗体の点鼻液も投与されることができる。イオン泳動及び電気泳動装置を含む経皮パッチが当業者に公知となっており、抗体を投与するために使われることができる。例えば、このようなパッチは、アメリカ特許第６，２６７，９８３号、同第６，２６１，５９５号、同第６，２５６，５３３号、同第６，１６７，３０１号、同第６，０２４，９７５号、同第６，０１０，７１５号、同第５，９８５，３１７号、同第５，９８３，１３４号、同第５，９４８，４３３号及び同第５，８６０，９５７号に説明されている。
【０３６６】
特定の具体例において、本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分を含む医薬組成物は凍結乾燥された粉末であり、これは、溶液、エマルジョン及び他の混合物として投与のために再構成できる。また、凍結乾燥された粉末は固体又はゲルとして復元及び製剤化できる。凍結乾燥された粉末は、本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分、又はその薬学的に許容される誘導体を適切な溶媒に溶解することにより製造される。いくつかの具体例において、凍結乾燥された粉末は滅菌状態である。溶媒は粉末又は粉末から製造された再構成溶液の安全性又は他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含むことができる。使用可能な賦形剤は、これに制限されるものではないが、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース又は他の適切な製剤を含む。また、溶媒は、一具体例で弱中性のｐＨのバッファー、例えばクエン酸塩、リン酸ナトリウム又はカリウムリン又は当業者に知られた他のバッファーを含むことができる。溶液の後続滅菌濾過の後、当業者に公知となった標準条件下の凍結乾燥は所望の製剤を提供する。一具体例において、得られた溶液は凍結乾燥用バイアルに配分される。各バイアルは化合物の単回投与量又は複数回投与量を含む。凍結乾燥された粉末は適切な条件の下で、例えば約４℃〜室温で保管されることができる。
【０３６７】
注射用水によるこの凍結乾燥された粉末の再構成は非経口投与に使用するための製剤を提供する。再構成のために、凍結乾燥された粉末が滅菌水又は他の適切な担体に添加される。正確な量は選択された化合物による。このような量は経験で決定されることができる。
【０３６８】
また、本発明で説明される抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体及び本発明で提供される他の組成物は、治療される対象の特定の組職、受容体、又は他の身体領域に標的化するように製剤化されることができる。このような多くの標的化方法が当業者によく知られている。このような全ての標的化方法を本組成物に使うことが本発明で考慮される。標的化方法の非制限的例は、例えば、アメリカ特許第６，３１６，６５２号、同第６，２７４，５５２号、同第６，２７１，３５９号、同第６，２５３，８７２号、同第６，１３９，８６５号、同第６，１３１，５７０号、同第６，１２０，７５１号、同第６，０７１，４９５号、同第６，０６０，０８２号、同第６，０４８，７３６号、同第６，０３９，９７５号、同第６，００４，５３４号、同第５，９８５，３０７号、同第５，９７２，３６６号、同第５，９００，２５２号、同第５，８４０，６７４号、同第５，７５９，５４２号及び第５，７０９，８７４号を参考する。特定の具体例において、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は中枢神経系損傷、退行性脳障害又は神経障害性の痛みを治療することを目標とする。
【０３６９】
生体内投与に使われる組成物は滅菌されることができる。例えば、滅菌濾過膜を用いる濾過によって易しく滅菌される。
【０３７０】
ＸＩＩ．キット
本発明で説明される１個以上の抗体、又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又はその免疫抱合体を含むキットが本発明で提供される。特定の具体例において、本発明で提供される１個以上の抗体又はその抗原結合部分のような本発明で説明される医薬組成物の成分の１個以上で満たされた１個以上の容器、選択的な使用指示を含む薬学的パック又はキットが本発明で提供される。いくつかの具体例において、キットは本発明で説明される医薬組成物及び本発明で説明されるもののような任意の予防又は治療剤を含む。
【０３７１】
ＸＩＩＩ．治療上用途及び方法
一様態で、本発明で説明される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を治療が必要な対象に投与する段階を含む、対象のＣＮＳの損傷や傷害を緩和するための方法が本発明で提示される。
【０３７２】
一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、対象の神経膠症の始まり又は開始及びこれに関連するＣＮＳに対する有害な効果を阻害、遅延、抑制、阻止、減少、反転、又は予防するための方法が本発明で提示される。一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、対象の反応性星状膠細胞の過度な又は異常増殖及びこれに関連するＣＮＳに対する有害な効果を阻害、遅延、抑制、製紙、減少、反転、又は予防するための方法が本発明で提示される。一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、対象のコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現（ニューロカン、ＮＧ２又は両者の水準を含む）を低下、阻害又は減少させるための、又はニューロカン、ＮＧ２又は両者の活性を減少させるか又は非活性化させるための方法が本発明で提示される。一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、対象の好ましくは損傷や傷害後のニューロンの成長を刺激、促進、増加、又は活性化させるための方法が本発明で提示される。一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、治療が必要な対象の好ましくはニューロンの核のｃ−ｆｏｓ  ｍＲＮＡ、ｃ−ｆｏｓタンパク質、又はｃ−ｆｏｓタンパク質活性の水準を増加させ、ＥＲＫ  ｍＲＮＡ、ＥＲＫタンパク質又はｐＥＲＫ活性の水準を増加させるための方法が本発明で提示される。一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、治療が必要な対象の好ましくはニューロンのＧＡＰ４３  ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質の水準を増進又は増加させるか、又はＧＡＰ４３タンパク質の活性を増加させるための方法が本発明で提示される。一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、治療が必要な対象のニューロンの生存を増進又は促進し及び／又は軸索の再成長を促進するための方法が本発明で提示される。一具体例において、対象は、ヒト、好ましくは、例えばＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応、及び／又は神経変性疾患による、ニューロンの傷害又は損傷を有するヒトである。
【０３７３】
いくつかの具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、治療が必要な対象の中枢神経系損傷、脳脊髓系損傷、退行性脳障害、退行性脳脊髓又は神経障害、又は神経障害性の痛みを含む疾患又は障害を治療するための方法が本発明で提示される。
【０３７４】
一具体例において、中枢神経系損傷は、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、脳腫瘍（例えば、神経膠腫又は膠芽細胞腫）、又はこれらの組合せである。一具体例において、退行性脳障害は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、又はこれらの組合せである。よって、一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、治療が必要な対象の外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、脳腫瘍（例えば、神経膠腫又は膠芽細胞腫）、又はこれらの組合せを治療するための方法が本発明に開示される。一具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子、又は免疫抱合体、又はその組成物を対象に投与する段階を含む、治療が必要な対象のハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳを治療するための方法が本発明に開示される。いくつかの具体例において、対象はヒトである。
【０３７５】
いくつかの具体例において、本発明に開示される方法は脳腫瘍を治療するのに使われることができ、前記方法は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、本発明に開示されるものなど）を治療が必要な対象に投与する段階を含む。特定の具体例において、脳腫瘍は神経膠腫又は膠芽細胞腫である。
【０３７６】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の投与は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を受けなかった対象の相応値）と比較して腫瘍（例えば、膠芽細胞腫）の成長を減少させる。特定の具体例において、腫瘍成長（例えば、腫瘍体積又は重量）は基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を受けなかった対象の相応値）と比較して少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は１００％まで減少する。
【０３７７】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の投与は、腫瘍（例えば、膠芽細胞腫）の血管正常化を促進する。特定の具体例において、血管正常化は、（ｉ）血管数の増加、（ｉｉ）血管連結性の改善、（ｉｉｉ）血管透過性の減少、（ｉｖ）血流速度増加、又は（ｖ）これらの任意の組合せを含む。特定の具体例において、本発明に開示される方法は、腫瘍に拡張される血管の数を（厚さ増加及び連結性改善とともに）少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％又はそれ以上まで増加させる。
【０３７８】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の投与は、腫瘍（例えば、膠芽細胞腫）に兔疫細胞の浸潤を増加させる。いくつかの具体例において、腫瘍への兔疫細胞の浸潤は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に露出されない腫瘍に存在する兔疫細胞の数）と比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％又はそれ以上まで増加する。特定の具体例において、兔疫細胞は、マクロファージ、樹状細胞、小膠細胞、及びＴリンパ球を含む。追加の具体例において、ここで開示される方法は腫瘍に存在する兔疫細胞の細胞体積を増加させる。特定の具体例において、兔疫細胞の細胞体積は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に露出されない腫瘍に存在する兔疫細胞の体積）と比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％又はそれ以上まで増加する。
【０３７９】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、本発明に開示されるものなど）の投与は、腫瘍（例えば、脳腫瘍）を有する対象の生存を増加させる。特定の具体例において、生存は、基準（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を受けなかった対象の相応値）と比較して少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％又はそれ以上まで増加する。いくつかの具体例において、生存は少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週、３週、４週、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、２年、３年、４年、又は５年又はそれ以上まで増加する。
【０３８０】
いくつかの具体例において、本発明の方法で治療することができる脳腫瘍（例えば、膠芽細胞腫）は、転移性、切除不能、先行癌治療法に対する耐性であることができる。特定の具体例において、先行癌治療法は化学療法を含む。いくつかの具体例において、化学療法は、白金基盤治療法を含む。いくつかの具体例において、白金基盤治療法は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、トリプラチン、テトラニトレート、フェナントリプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される白金基盤抗新生物剤を含む。特定の具体例において、白金基盤治療法は、シスプラチンを含む。追加の具体例において、白金基盤治療法は、カルボプラチンを含む。いくつかの具体例において、先行癌治療法は、免疫療法（例えば、抗ＰＤ−１抗体）を含む。
【０３８１】
いくつかの具体例において、（脳腫瘍、例えば膠芽細胞腫を治療するための）本発明の方法に有用な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、癌の治療に使われる他の化合物、薬物及び／又は製剤と組み合わせて提供されることができる。このような化合物、薬物及び／又は製剤は、例えば化学療法薬物、小分子薬物、又は与えられた癌に対する免疫反応を刺激する抗体を含むことができる。いくつかの具体例において、本発明で説明される方法は、標準癌治療（例えば、手術、放射線及び化学療法）と組み合わせて使われる。他の具体例において、本発明で説明される方法は、維持療法、例えば腫瘍の発生や再発を予防するための療法として使われる。
【０３８２】
いくつかの具体例において、本発明で有用な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は二つ以上の免疫腫瘍学剤と組み合せられることができ、例えば免疫経路で多重要素を標的とする組合的接近法と組み合せられることができ、例えば次の一つ以上と組み合せられることができる：腫瘍抗原提示を増進させる療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞性ワクチン、ＣｐＧオルリゴヌクレオチド、イミキモド）；ＣＴＬＡ−４及び／又はＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２経路を阻害し及び／又はＴｒｅｇ又は他の免疫抑制細胞（例えば、骨髓腫来由抑制剤細胞）を枯渇させるか遮断することにより、否定的免疫調節を阻害する療法；ＣＤ−１３７、ＯＸ−４０、及び／又はＣＤ４０又はＧＩＴＲ経路を刺激し及び／又はＴ細胞エフェクター機能を刺激する作動剤によって、肯定的免疫調節を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させる療法；ＣＤ２５の拮抗剤（例えば、ダクリズマブ）を使うか又は生体外抗ＣＤ２５ビード枯渇によって、Ｔｒｅｇ、例えば腫瘍のＴｒｅｇを枯渇させるか阻害する療法；腫瘍の抑制剤骨髓腫細胞の機能に影響を及ぼす療法；腫瘍細胞の免疫原性を増進させる療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子組み換え細胞、例えばキメラ抗原受容体によって変形された細胞を含む養子Ｔ細胞又はＮＫ細胞伝達（ＣＡＲ−Ｔ療法）；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、又は酸化窒素シンテターゼのような代謝酵素を阻害する療法；Ｔ細胞アネルギー又は消尽を反転／予防する療法；腫瘍部位で自然免疫活性化及び／又は炎症を触発する療法；免疫刺激性サイトカインの投与；又は免疫抑制性サイトカインの遮断。一部の例で、本発明で有用な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と組み合せられることができる追加の抗癌剤は、これらに制限されないが、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌｌ抗体、抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ４、ＡＣＴ３５及び／又はＴＸＧＰ１Ｌとも言う）抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、又はこれらの任意の組合せの一つ以上を含むことができる。
【０３８３】
特定の具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は治療が必要な対象の線維症を治療、減少、反転、予防、改善、制御、又は阻害することができ、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を前記対象に投与する段階を含む。一具体例において、線維症は陽性である（すなわち、症状を引き起こさない）。他の具体例において、線維症は病理学的状態に関連し、再発性であっても再発性ではなくてもよい。いくつかの具体例において、線維症は、肝線維症、肺線維症、腎臓線維症、骨髓線維症、膵膓線維症、皮膚線維症、心臓線維症、動脈線維症、関節線維症、乳房線維症、筋肉線維症、後腹膜線維症、甲状腺線維症、リンパ節線維症、膀胱線維症、及び胸膜線維症からなる群から選択される。一具体例において、線維症は、肝線維症又は肺線維症である。他の具体例において、線維症は、肝癌、肺癌、腎癌、乳房癌、脳癌及び／又は膵膓癌のような癌から来由する腫瘍に関連する。一具体例において、前記方法は、線維症、線維症に関連した症状、線維症の基底原因、又はこれらの組合せを弱化、反転、緩和、改善、阻害、又は遅延又は予防する。
【０３８４】
他の具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、治療が必要な対象の障害又は疾患に関連した線維症を治療、減少、反転、予防、改善、制御、又は阻害することができ、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を前記対象に投与する段階を含む。用語“疾患又は障害に関連した線維症”は疾患又は障害を伴う線維症、又は疾患又は障害に起因するかそれから生じた結果である線維症を言う。この用語は、前記開示された疾患や障害から生ずるかそれによって引き起こされる線維症、又はその疾患や障害を伴う線維症を含む。
【０３８５】
さらに他の具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、治療が必要な対象の肝癌、肺癌、腎癌、乳房癌、脳癌（例えば、神経膠腫又は膠芽細胞腫）、及び／又は膵膓癌を治療、減少、反転、予防、遅延、改善、制御、又は阻害することができ、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を前記対象に投与する段階を含む。いくつかの具体例において、肝癌、肺癌、腎癌、乳房癌、脳癌、及び／又は膵膓癌は線維症に関連するか線維症によって引き起こされる。いくつかの具体例において、脳癌は神経膠腫又は膠芽細胞腫である。
【０３８６】
いくつかの具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子又は免疫抱合体の治療上有効量が投与される。対象（例えば、ヒト）を治療するとき、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子又は免疫抱合体の治療上有効量は、お年、性別、疾患の重症度のような要因に依存する。典型的に、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子又は免疫抱合体は一日に０．０１μｇ〜１０００ｍｇの容量で投与される。
【０３８７】
いくつかの具体例において、本発明に開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異性分子又は免疫抱合体、又はその組成物は、静脈内、経口、非経口、腱硝内、髄腔内、脳室内、肺、皮下、又は心室内経路に投与される。
【０３８８】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、又はその組成物は線維症を治療するための一つ以上の追加の製剤（例えば、特発性肺線維症のためのピルフェニドン（ＥＳＢＲＪＥＴ（登録商標））又はニンテダニブ（ＯＦＥＶ））と組み合わせて投与されることができる。一つ以上の追加の治療薬物の容量及び投与は当該分野に知られており、例えば各薬物の製品ラベルに説明されている。
【０３８９】
いくつかの具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、又はその組成物は、中枢神経系損傷（例えば、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、又は脳腫瘍（例えば、神経膠腫又は膠芽細胞腫））、脳脊髓系損傷、退行性脳障害（例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳ）、退行性脳脊髓又は神経障害、又は神経障害性の痛みを治療するための一つ以上の追加の製剤と組み合わせて投与されることができる。例えば、ハンチントン病の治療のための非制限的な例示的製剤は、テトラベナジン（ＸＥＮＡＺＩＮＥ（登録商標））、抗精神病剤、例えばハロペリドール（ＨＡＬＤＯＬ（登録商標））、クロルプロマジン、リスペリドン（ＲＩＳＰＥＲＤＡＬ（登録商標））及びクエチアピン（ＳＥＲＯＱＵＥＬ（登録商標））を含む。
【０３９０】
パーキンソン病の治療のための非制限的な例示的製剤は、レボドパ（カルビドパとともに又は単独で）、ドパミン作動剤、例えばプラミペキソール（ＭＩＲＡＰＥＸ（登録商標））、ロピニロ−ル（ＲＥＱＵＩＰ（登録商標））、及びロチゴチン（ＮＥＵＰＲＯ（登録商標））、及びアポモルヒネ（ＡＰＯＫＹＮ（登録商標））、セレギリン（ＥＬＤＥＰＲＹＬ（登録商標）及びＺＥＬＡＰＡＲ（登録商標））、ラサギリン（ＡＺＩＬＥＣＴ（登録商標））、エンタカホン（ＣＯＭＴＡＮ（登録商標））、ベンズトロピン（ＣＯＧＥＮＴＩＮ（登録商標））、トリヘキシフェニジル、及びアマンタジンを含む。
【０３９１】
アルツハイマー病の治療のための非制限的な例示的製剤は、ドネペジル（ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標））、ガランタミン（ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標））、及びリバスティグミン（ＥＸＥＬＯＮ（登録商標））を含む。
【０３９２】
多発性硬化症の治療のための非制限的な例示的製剤は、ガラティラメルアセテート（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））、ジメチルフマレート（ＴＥＣＦＩＤＥＲＡ（登録商標））、フィンゴリモド（ＧＩＬＥＮＹＡ（登録商標））、テリフルノミド（ＡＵＢＡＧＩＯ（登録商標））、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（登録商標））、及びミトキサンゴロンを含む。
【０３９３】
ＡＬＳの治療のための非制限的な例示的製剤は、リルゾール（ＲＩＬＵＴＥＫ（登録商標））を含む。
【０３９４】
一つ以上の追加の治療薬物の容量及び投与は当該分野に知られており、例えば各薬物の製品ラベルに説明されている。
【０３９５】
次の実施例は制限ではなくて例示のために提供される。
【０３９６】
（実施例）
以降の実施例で次の実験方法及び詳細な内容が参照される。
【０３９７】
（実施例１：ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の発現及び精製）
組み換えヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を製造して精製し、精製されたタンパク質を結合親和性分析に基づく抗体スクリーニング分析に使った。まず、ＦＡＭ１９Ａ５遺伝子を含むＬＰＳ−ｈＴプラスミドをバクテリアに形質転換してタンパク質過剰発現を誘導した。製造の後、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質をＮｉ−ＮＴＡ親和性クロマトグラフィー（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，アメリカのカリフォルニア）を使って精製した。イミダゾールを徐々に高い濃度にしてＮｉカラムからＨｉｓタグされたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を除去した。溶液中のタンパク質発現はクマシーブリリアントブルーＲ−２５０染料を使って測定した。ＦＡＭ１９Ａ５イミダゾール含有溶液のみ取り、ＰＢＳを使ってＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を濃縮した。濃縮が完了したとき、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の純度及び濃度をウェスタンブロッティング分析で測定した。ついで、濃縮されたタンパク質を使ってＦＡＭ１９Ａ５特異的抗体をスクリーニングした。
【０３９８】
（実施例２：ＦＡＭ１９Ａ５抗体ライブラリの生成）
油中水エマルジョンアジュバント（ＲＩＢＩ＋ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳアジュバント、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，アメリカのミズーリ）を含むＴＤＷ及びＣＷＳの細胞壁成分をエマルジョン化した後、これを３匹のニワトリに皮下注射した。ニワトリはおよそ２〜３週の間隔で総３回免疫化した。免疫化したニワトリから得られた抗体の力価を、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を過剰発現したＨＥＫ２９３Ｔ細胞の細胞溶解物を使って免疫ブロッティングで測定した。
【０３９９】
ＴＲＩ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、アメリカのカルフォルニア）を使用して免疫化したニワトリから単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ライブラリを製造し、前記説明した免疫化したニワトリの脾臓、骨髄及び滑液嚢からＲＮＡを抽出した。
【０４００】
オリゴ−ｄＴプライマーとＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴＴＭ  ＩＩＩ第１鎖合成システム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使って第１鎖ｃＤＮＡを合成した。ニワトリの免疫システムから得られたｃＤＮＡに対し、拡張型高忠実度ＰＣＲシステム（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，アメリカのインディアナ）を使って単鎖可変領域ライブラリを生成した。各反応で、１μＬのｃＤＮＡ、各プライマー６０ｐｍｏｌ、１０×反応バッファー溶液１０μＬ、２．５ｍＭ  ｄＮＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，アメリカのウィスコンシン）８μＬ、及びＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ０．５μＬを水と混合した。最終体積は１００μＬであった。ＰＣＲ反応を次の条件の下で遂行した：（ｉ）９４℃で１５秒、（ｉｉ）５６℃で３０秒、及び（ｉｉｉ）７２℃で９０秒の３０サイクル、その後７２℃で１０分間の最終拡張。約３５０ｂｐの長さを有する断片を含むＰＣＲ生成物を１．５％アガロースゲル上にローディングし、電気泳動後、ＱＩＡＧＥＮ  Ｇｅｌ  ＩＩ抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，アメリカのカルフォルニア）を使って前記ヌクレオチド断片を精製した。精製されたＰＣＲ生成物をＯＤ  ２６０ｎｍで判読して定量した（１ユニットＯＤ＝５０μｇ／ｍｌ）。
【０４０１】
２次ＰＣＲから２個のＶＨ及びＶＬ１次生成物を重畳拡張ＰＣＲによって無作為に連結した。各ＰＣＲ反応物を精製されたＶＬ及びＶＨ生成物１００ｎｇ、各プライマー６０ｐｍｏｌ、１０×反応バッファー１０μＬ、２．５ｍＭ  ｄＮＴＰ  ８μＬ、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ０．５μＬ及び最終体積１００μＬとなる水と混合した。ＰＣＲを次の条件の下で遂行した：（ｉ）９４℃で１５秒、（ｉｉ）５６℃で３０秒、及び（ｉｉｉ）７２℃で２分の２５サイクル、その後７２℃で１０分間の最終拡張。約７００ｂｐの長さを有する単鎖可変領域断片を含むＰＣＲ生成物を１．５％アガロースゲル上にローディングし、電気泳動後、ＱＩＡＧＥＮ  Ｇｅｌ  ＩＩ抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ）を使って前記ヌクレオチド断片を精製した。精製されたＰＣＲ生成物をＯＤ２６０ｎｍで判読して定量した（１ユニットＯＤ＝５０μｇ／ｍｌ）。
【０４０２】
ＰＣＲ生成物のｓｃＦｖ断片とベクターｐＣｏｍｂ３Ｘ−ＳＳ（Ｔｈｅ  Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅアメリカのカルフォルニア）をＳｆｉ  Ｉ制限酵素で酵素切断した。精製された重畳ＰＣＲ生成物１０μｇをＳｉｆ  Ｉ  ３６０ユニット（１６ユニット当たり１μｇ  ＤＮＡ、Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，アメリカのカルフォルニア）、１０×反応バッファー２０μＬ及び最終体積が２００μＬとなる量の水と混合した。ｐＣｏｍｂ３Ｘ−ＳＳベクター２０μｇをＳｆｉ  Ｉ１２０ユニット（６ユニット当たり１μｇ  ＤＮＡ）、１０×反応バッファー溶液２０μＬ及び最終体積が２００μＬとなる量の水と混合した。混合物を８時間の間に５０℃で酵素切断した。その後、ｓｃＦｖ断片（約７００ｂｐ）及びベクター（約３４００ｂｐ）を含む酵素切断された生成物を１％アガロース上にローディングし、ゲル抽出キットＩＩ  ＱＩＡＧＥＮ（ＱＩＡＧＥＮ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，アメリカのカルフォルニア）を使って精製した。Ｓｆｉ  Ｉ制限されたｐＣｏｍｂ３Ｘベクター１４００ｎｇと酵素切断されたｓｃＦｖ断片７００ｎｇを５×リガーゼバッファー、Ｔ４  ＤＮＡリガーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，アメリカのカルフォルニア）及び最終体積が２００μＬとなる量の水と混合した。混合物を１６時間の間に１６℃でインキュベーションしてライゲーションを遂行した。
【０４０３】
エタノールで沈澱した後、ＤＮＡペレットを水１５μＬに溶解した。ライブラリを生成するために、ライゲーションサンプルをバイブレーター遺伝子（Ｇｅｎｅ  ｐｕｌｓｅｒ：Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，アメリカのカルフォルニア）を使って電気穿孔によって大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）菌株ＥＲ２７３８（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｉｔｃｈｉｎ，Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｎｅ，ＳＧ４ＯＴＹ，英国のイングランド）に形質転換した。細胞を５ｍＬスーパーブロス（ＳＢ）培地とと混合し、３７℃で１時間の間に２５０ｒｐｍで撹拌しながらインキュベーションした。ついで、１００ｍｇ／ｍＬカナマイシン３μＬをＳＢ培地１０ｍＬに添加した。ライブラリサイズを決定するために、０．１μＬ、１μＬ及び１０μＬの培養物サンプルを５０μｇ／ｍＬカナマイシンを含むルリアブロス（ＬＢ）寒天板上に擦って塗った。１時間の撹拌後、１００ｍｇ／ｍＬカナマイシン４．５μＬをＬＢ培養物に添加し、さらに１時間撹拌した。ついで、水に入れたＶＣＭ１３ヘルパーファージ２ｍＬ（＞１０１１ｃｆｕ／ｍｌ）を１００ｍｇ／ｍＬカナマイシン９２．５μＬを含む予熱されたＬＢ（１８３ｍＬ）とともにＬＢ培地に添加した。この混合物をさらに２時間の間に３７℃で２５０ｒｐｍで撹拌した。ついで、カナマイシン２８０μＬ（５０ｍｇ／ｍＬ）を培養物に添加し、３７℃で一晩撹拌した。翌日、バクテリアペレットを高速遠心分離機（Ｂｅｃｋｍａｎ、ＪＡ−１０ローター）を使い、４℃で３，０００ｇで遠心分離した。その後、バクテリアペレットを使ってファージミドＤＮＡを抽出し、上澄み液を滅菌遠心分離瓶に移して入れた。ついで、ポリエチレングリコール−８０００（ＰＥＧ−８０００、Ｓｉｇｍａ）８ｇと塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）６ｇを上澄み液に添加した後、氷内で３０分間維持した。その後、上澄み液を４℃で１５，０００ｇで１５分間遠心分離した。ついで、上澄み液を捨て、ファージペレットを緩衝食塩水（ＴＢＳ）で懸濁した。
【０４０４】
（実施例３：固定された抗原上でのライブラリパニング（バイオパニング）（ｂｉｏ−ｐａｎｎｉｎｇ））
磁気ビード（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２７０  Ｅｐｏｘｙ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使ってバイオパニングを遂行した。室温で２０時間の間にビードとタンパク質を一緒に撹拌させておよそ１×１０７ビードを組み換えＦＡＭ１９Ａ５タンパク質５μｇでコーティングした。コーティングが完了した後、ビードをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で４回洗浄し、室温で３％ＢＳＡを含むＰＢＳ内で１時間遮断した。ついで、コーティングされたビードを前記説明したファージディスプレイされたｓｃＦｖとともに室温で２時間培養した。抗原コーティングされたビードに結合されなかったファージを除去するために、ビードを０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳで洗浄した。ついで、結合されたファージを０．１Ｍグリシン／塩化水素（０．１Ｍグリシン−ＨＣｌ、ｐＨ２．２）５０μＬで溶出し、塩化水素とともに２Ｍ  Ｔｒｉｓ（トリス−ＨＣｌ、ｐＨ９．１）３μＬで中和させた。このファージ含有上澄み液を使って大腸菌ＥＲ２７３８細胞を感染させ、ＶＣＳＭ１３ヘルパーファージを使用して一晩増幅して救済した。また、５０μｇ／ｍＬカナマイシンを含むＬＢ寒天板上にファージ感染された培養物をブロッティングすることにより、ファージ感染された培養物からファージ力価によって投入量（インプット）及び生成量（アウトプット）を決定した。翌日、ＰＥＧ−８０００とＮａＣｌを使ってファージを沈澱させた後、バイオパニングに使った。前記過程を繰り返して総５回のバイオパニングを遂行した。各増幅でファージをスクリーニングし、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する高親和性を選択した。
【０４０５】
（実施例４：ファージＥＬＩＳＡによるクローンの選択）
バイオパニングから選択されたクローンを分析するために、ファージディスプレイされたｓｃＦｖから個別クローンを無作為に選択し、ＥＬＩＳＡを使って選択されたクローンがＦＡＭ１９Ａ５組み換えタンパク質に結合するかを確認した。ＦＡＭ１９Ａ５組み換えタンパク質を０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３バッファーで希釈し、ウェル当たり１００ｎｇのタンパク質を使い、１６時間の間に４℃で９６ウェルマイクロタイタープレートをコーティングした。翌日、プレートを１時間の間に３７℃で３％ＢＳＡ／ＰＢＳで遮断した。ついで、ファージ上澄み液を６％ＢＳＡ／ＰＢＳと混合し、３７℃で２時間培養した。ついで、上澄み液を含むプレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳで洗浄した。ＨＲＰコンジュゲートされたＭ１３抗体（ａ−Ｍ１３−ＨＲＰ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，アメリカのイリノイ）を１／５０００に希釈した。希釈された抗体５０μＬをプレートに添加し、３７℃で１時間インキュベーションした。インキュベーション及び洗浄の後、色展開のために、プレートに０．０５Ｍクエン酸緩衝液、１μｇ／ｍＬの２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリル−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ，Ａｍｒｅｓｃｏ，Ｓｏｌｏｎ，アメリカのオハイオ）、及び０．１％Ｈ２Ｏ２を添加した。４０５ｎｍで各ウェルの吸光度を測定した。
【０４０６】
ついで、ＦＡＭ１９Ａ５組み換えタンパク質に結合するとともに高吸光度を示す２４個クローンを分析し、これらから独特の配列を有する１３個のｓｃＦｖクローンを獲得した。追加選択後、クローン２−１３、１−２８及び３−２を獲得した。
【０４０７】
（実施例５：抗ＦＡＭ１９Ａ５−ＩｇＧ２／４抗体の生成）
抗ＦＡＭ１９Ａ５  ｓｃＦｖを哺乳類発現ベクターにサブクローニングした。ＦＡＭ１９Ａ５  ｓｃＦｖ遺伝子配列で、ヒトＣκ遺伝子を軽鎖可変領域に連結し、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３遺伝子のヒト兔疫グロブリンアイソタイプＩｇＧ２／４を重鎖可変領域に連結した。制限部位（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ，アメリカ）を付加することにより、各軽鎖と各重鎖を有する抗体を合成した。クローニングを容易にするために、合成された遺伝子を変形された制限部位を有する哺乳類細胞発現ベクターに挿入した。まず、軽鎖遺伝子をＨｉｎｄ  ＩＩＩ及びＸｂａＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，英国）制限酵素を使ってベクターに挿入し、ついでＮｈｅＩ及びＢａｍＨＩ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，英国）制限酵素を使ってベクターに重鎖遺伝子を付加した。
【０４０８】
抗ＦＡＭ１９Ａ５−ＩｇＧ２／４抗体を発現及び精製するために、哺乳類細胞形質転換及び過剰発現注射システムを使った。細胞培養体積の１／１０に相応する１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ、Ｍｅｒｃｋ）内にポリエチレンイミン（ＰＥＩ，Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，アメリカのペンシルバニア）４μｇと哺乳類発現ベクター２μｇ／ｍＬを混合した。混合物を室温で１５分間放置した。混合物をＨＥＫ２９３Ｆ細胞（２×１０６細胞／ｍＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に添加した後、６日間１３５ｒｐｍの撹拌条件で、７％ＣＯ２及び３７℃で１００Ｕ／ｍＬペニシリン及びストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＦＲＥＥＳＴＹＬＥＴＭ  ２９３発現培地内でインキュベーションした。細胞培養上澄み液から発現した抗ＦＡＭ１９Ａ５  ＩｇＧ２／４抗体を精製するために、タンパク質Ａビード（ＲｅｐｌｉＧｅｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，アメリカのマサチューセッツ）親和性ゲルクロマトグラフィーを使った。タンパク質Ａクロマトグラフィーは４−１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ勾配ゲル電気泳動上で進んだ。タンパク質の大きさ及び収率をクマシーブリリアントブルー染色で確認した。
【０４０９】
（実施例６：ＦＡＭ１９Ａ５エピトープ断片Ｆ１−Ｆ６を使うエピトープマッピング分析）
ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の重畳ペプチド断片（Ｆ１−Ｆ６、図１参照）を合成してＢＳＡにコンジュゲートした。ＢＳＡコンジュゲートされたペプチド断片Ｆ１−Ｆ６に対する相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合をＥＬＩＳＡ分析によって決定した。簡単に言えば、ＦＡＭ１９Ａ５断片Ｆ１−Ｆ６（５０ｍＭカーボネートバッファー（Ｂｉｏｓｅｓａｎｇ）に１μｇ／ｍＬで希釈するかその濃度分析のためには２０μｇ／ｍＬで希釈）を使って４℃で一晩の間に９６ウェルイムノプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のウェルをコーティングした（１００μＬ／ウェル）後、ついで１ｘＰＢＳで２回洗浄した。ついで、プレートを室温で１時間の間に遮断バッファー（１００μＬ／ウェル）で遮断させた。１時間のインキュベーションの間、関連の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を希釈バッファーに１μｇ／ｍＬ（又はその濃度分析の場合、２０μｇ／ｍＬ）で希釈した。プレートを洗浄した後（１ｘＰＢＳを使って２回）、希釈された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を適切なウェルに添加し、プレートを１時間の間に室温でインキュベーションした。ついで、プレートを洗浄バッファーで総５回洗浄した。ついで、ＯＤＰ基質（滅菌脱イオン水９ｍＬと１０ｘ安定なペルオキシド安定バッファー（Ｔｈｅｒｍｏ）１ｍＬにＯＤＰ錠剤（Ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩、Ｔｈｅｒｍｏ）１個を溶解して製造）を各ウェルに添加し、１０分間色変化反応が起こるようにした。ウェルに２Ｎ  Ｈ２Ｓ０４（Ｄａｅｊｕｎｇ）１００μＬを添加して反応を中断させた。９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使って４９２ｎｍで各ウェルの吸光度値を検出した。
【０４１０】
図２に示したように、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体３−２はエピトープ断片Ｆ２に強く結合し、残りの断片に対する結合は最小であった。これは抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１−２８に対しても同様であった（データは図示せず）。一方、１−６５抗体はエピトープ断片Ｆ５にのみ強く結合した。面白いことに、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体２−１３はＦ１−Ｆ６エピトープ断片の何とも結合しなかったことが現れた。
【０４１１】
ついで、３−２及び１−２８が結合したエピトープ断片Ｆ２内の特異的アミノ酸残基を確認するために、Ｆ２断片の相異なるアミノ酸残基を表９（以下）に示した通りに、アラニン又はバリンに置換した。突然変異された残基は太字で下線表示した。示した抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合親和性を前述したようにＥＬＩＳＡを使って測定した。
【０４１２】
【表８】
2020529198.tif 000013
【０４１３】
図３Ａ及び図３Ｂに示したように、３−２抗体は突然変異Ｆ２ペプチド断片＃１、２、４−６及び９−１３に強く結合し、断片＃３、７及び８に対する結合は減少した。後者の３個の突然変異Ｆ２ペプチド断片はそれぞれアミノ酸残基Ｄ５、Ｐ９及びＲ１１（前記表９でＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に従ってナンバリング）にアラニン置換を含み、これは３−２抗体が主にこれらのアミノ酸残基でＦＡＭ１９Ａ５に結合することを示唆する。
【０４１４】
１−２８抗体は突然変異Ｆ２ペプチド断片＃１、２、６及び８−１３には強く結合した反面、ペプチド断片＃３、４、５及び７に対して１−２８抗体はずっと減少した結合を示した（図３Ｃ参照）。このデータは、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１−２８がエピトープＦ２断片内で主にアミノ酸残基Ｄ５、Ｓ６、Ｓ７及びＰ９（前記表９でＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６に従ってナンバリング）でＦＡＭ１９Ａ５に結合することを示唆する。
【０４１５】
（実施例７：ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ１−Ｍ８を使うエピトープマッピング分析）
本発明で開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合エピトープをもっと特性化するために、相異なるＦＡＭ１９ファミリメンバー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１−５）のアミノ酸配列を図４に示したように整列した。この整列に基づき、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質のアミノ酸配列がＦＡＭ１９Ａファミリの残りのメンバー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１−４）と最も有意な差があった８個の領域が確認された（Ｍ１−Ｍ８）。これらの領域のアミノ酸配列をＦＡＭ１９Ａ１−４タンパク質の相応する領域のコンセンサス配列に置換した（表１０参照、突然変異されたアミノ酸残基は太字で下線表示した）。
【０４１６】
突然変異ＦＡＭ１９Ａ５発現ファージを次のように製造した。ファージ培養のための培地を製造するために、２Ｍグルコース（Ｄ−（＋）−グルコース、Ｓｉｇｍａ）５５．６ｍＬ、１Ｍ  ＭｇＣ１２（塩化マグネシウム、Ｊｕｎｓｅｉ）５ｍＬ、３４ｍｇ／ｍＬクロラムフェニコール（Ｓｉｇｍａ）１ｍＬを２ｘ  ＹＴ培地に添加した。モノファージＥＬＩＳＡを介して獲得したコロニーを選択し、製造された培地（２ｘ  ＹＴ−ＧＭＣ）５ｍＬに入れ、シェーキングインキュベーター（ＶＳ−８４８０、Ｖｉｓｉｏｎ）で３７℃で１６時間培養した。各培養物１００μＬを個別的に１０ｍＬ  ２ｘ  ＹＴ−ＧＭＣに移し、Ｏ．Ｄ．６００ｎｍ検出値が０．５となるまでインキュベーターで３７℃で培養した。Ｏ．Ｄ．６００ｎｍで検出値が０．５に到逹すれば、各培養物５ｍＬを被感染サンプルとして獲得した。サンプル製造の後、Ｍ１ヘルパーファージ５０μＬを個別サンプルに添加した後、シェーキングなしに３０分、シェーキングしながらさらに３０分間３７℃でインキュベーションした。個別培養物をマイクロ遠心分離機（Ｍｉｃｒｏ１２、Ｈａｎｉｌ）によって３，８５０ｒｐｍで１５分間遠心分離した。遠心分離された培養物の上澄み液を除去して別に保管し、１Ｍ  ＩＰＴＧ（ＡＧ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）１ｍＬ、１Ｍ  ＭｇＣｌ２  ５ｍＬ、７０μｇ／μＬカナマイシン（Ｂｉｏｐｕｒｅ）１ｍＬ及びクロラムフェニコール１ｍＬを含む２ｘ  ＹＴ培地５ｍＬをその代わりに入れた。得られたペレットを新たに添加された培地に完全に分散させた後、撹拌しながら１６時間の間に３０℃でインキュベーションした。
【０４１７】
【表９】
2020529198.tif 000014
【０４１８】
図５に示したように、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１−２８及び３−２はＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ２に結合することができなかった。表１０（上記）に示したように、Ｍ２突然変異はアミノ酸残基２１−２５（すなわち、エピトープＥＰ２）に置換を有し、これはＦＡＭ１９Ａ５のエピトープ断片内の領域に相応する。このデータは実施例１−６のデータと一致し、ＦＡＭ１９Ａ５に対する１−２８及び３−２抗体の結合においてエピトープ断片Ｆ２の重要性を確認させる。
【０４１９】
２−１３抗体は１−２８、３−２及び１−６５抗体と完全に相異なるエピトープでＦＡＭ１９Ａ５に結合することが現れた。図５に示したように、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ１−Ｍ３及びＭ５−Ｍ７に対して中間乃至高い結合を有したが、突然変異Ｍ４及びＭ８とは結合することができなかった。これは、ＦＡＭ１９Ａ５に対する２−１３抗体結合においてエピトープＥＰ４及びＥＰ８の重要性を示唆する。２−１３抗体が実施例７でＦＡＭ１９Ａ５エピトープ断片の何とも結合することができなかったことを考慮すれば（図２参照）、このデータも２−１３抗体が線形エピトープと反対の立体構造的エピトープを有することを示唆する。
【０４２０】
（実施例８：交差競合分析）
以下で説明するように、２部位サンドイッチＥＬＩＳＡを使って類似の結合エピトープを有する相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が互いに交差競合するかを評価した（図６Ａ参照）。
【０４２１】
まず、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度に１ｘ  ＰＢＳで希釈した。希釈された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（１ｘ  ＰＢＳに１０μｇ／ｍＬ）（“捕捉抗体”）を使っておよそ１時間の間に３７℃で９６ウェルプレートをコーティングした（１００μＬ／ウェル）。インキュベーションの後、プレートを洗浄バッファー（０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０／ＰＢＳ；０．０１％ＰＢＳＴともいう）で総５回洗浄し、３７℃で１時間の間に遮断溶液（５％ＢＳＡ／ＰＢＳ；５％ＰＢＳＡともいう、２５０μＬ／ウェル）で遮断させた後、再び洗浄した。ついで、１００μｇ／ｍＬ  ＦＡＭ１９Ａ５抗原（５％ＢＳＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳで希釈；５％ＰＢＳＡＴともいう；“希釈バッファー”）を各ウェルに添加し、３７℃で２時間の間に９６ウェルプレートをインキュベーションした。インキュベーションの後、プレートを０．０１％ＰＢＳＴで総５回洗浄した。最後の洗浄後、ビオチン化抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（“検出抗体”）（５％ＰＢＳＡＴで１μｇ／ｍＬに希釈）を関連のウェル（１００μＬ体積）に添加し、プレートを３７℃でさらに１時間インキュベーションした。その後、プレートを０．０１％ＰＢＳＴでさらに洗浄した（総５回洗浄）。ついで、希釈された（５％ＰＢＳＡＴ中の１／２０００）ストレプトアビジン−ＨＲＰ（１ｍｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ、アメリカ）１００μＬをウェルに添加し、プレートを室温で３０分間インキュベーションした。ついで、プレートを洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）１００μＬで処理した。室温でさらに３０分インキュベーションした後、ＴＭＢ基質を添加して色変化反応を誘導した。硫酸（２Ｎ  Ｈ２Ｓ０４）５０μＬを使って反応を中断させ、９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使って６２０ｎｍの基準波長で４５０ｎｍでの吸光度によって色変化範囲を検出した。
【０４２２】
図６Ｂに示したように、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１−６５、Ｐ２−Ａ０３、Ｐ２−Ｆ１１及び１３Ｂ４はいずれも互いに交差競合した。１−６５抗体と同様に、Ｐ２−Ａ０３、Ｐ２−Ｆ１１及び１３Ｂ４抗体はいずれもエピトープＭ６、Ｍ７及び／又はＭ８で（すなわち、Ｆ５及び／又はＦ６エピトープ断片内で）ＦＡＭ１９Ａ５に結合する（データは図示せず）。一方、抗体２−１３と３−２は残りの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と交差競合しなかった。これは、これらの抗体が主にＦ２エピトープ断片で結合することを示した前述したエピトープマッピング分析を確認させる。
【０４２３】
（実施例９：結合親和性分析）
ＦＡＭ１９Ａ５に対する相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合親和性を決定するために、前述したようにＥＬＩＳＡ分析を使った（例えば、実施例６参照）。図７Ａ及び図７Ｂに示したように、１−２８、３−２及び１−６５抗体は類似の結合親和性でＦＡＭ１９Ａ５に結合した（それぞれＫｄ＝０．１７ｎＭ、０．１２ｎＭ及び０．１０ｎＭ）。２−１３抗体は約２．７７ｎＭのＫｄ値で結合した（図７Ｂ参照）。
【０４２４】
（実施例１０：肝肝線維症での血清分析）
本発明で開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の生体内機能評価のために、肝線維症のラットモデル（すなわち、胆管結紮（ＢＬＤ）誘導肝線維症Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットモデル）を使って肝線維症のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準を測定した（Kountouras et al., Br J Exp Path 65:305-311 (1984)参照）。簡単に言えば、動物をケタミンとキシラジンで痲酔した。１．５ｃｍ中間腺切開を遂行し、総胆管を位置させ、３−０絹糸結紮で二重結紮を遂行した。その後、肝線維症誘導後２１日目に動物から全血を収集し、全血から血清を分離した。
【０４２５】
血清中のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準をＦＡＭ１９Ａ５サンドイッチＥＬＩＳＡ分析で測定した。９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを、１００μＬ体積で１−６５ヒトＩｇＧ１抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１μｇ／ｍＬで一晩コーティングした。その後、プレートをＰＢＳで洗浄し、ついで室温で１時間の間にＰＢＳ中の１％ＢＳＡで遮断した。その後、プレートをＰＢＳで再洗浄し、標準物質とサンプルおよそ１００μＬを適切なウェルに分配した。その後、プレートを２時間の間に室温でインキュベーションした。その後、プレートを０．０５％ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０（すなわち、洗浄バッファー）で洗浄し、ヤギａ−兎ＩｇＧ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、Ｃａｔ  ＃  ＳＣ−２０３０、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡに１：５０００希釈）にコンジュゲートされた検出抗体（西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）およそ１００μＬをウェルに添加した。プレートをさらに１時間の間に室温でインキュベーションした。洗浄バッファーで追加洗浄した後、Ｏ−フェニレンジアミンジヒドロクロリド（ＯＰＤ）基質およそ１００μＬを各ウェルに添加し、プレートを室温で展開させた。約１０分後、１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４（硫酸）およそ１００μＬのをウェルに添加して反応を中断させた。９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ，Ｖｅｒｓａ  Ｍａｘ）を用いて４９２ｎｍの波長で吸光度を測定した。
【０４２６】
図８に示したように、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準は、正常（すなわち、非ＢＤＬ誘導）ラットと比較して、ＢＤＬ誘導肝線維症ＳＤラット（“疾患モデル”）の血清で３倍以上も高かった。
【０４２７】
（実施例１１：肺線維症での血清分析）
ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準が肺線維症でも増加したかを評価するために、気管内注射でブレオマイシン３ｍｇ／ｋｇを投与することにより、７週齢の雄性ＳＤラットに特発性肺線維症を誘導した。ブレオマイシン投与後２４日目に動物から全血を収集し、全血から血清を分離した。血清中のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準を、前記実施例１０で示したように、ＦＡＭ１９Ａ５サンドイッチＥＬＩＳＡ分析で測定した。図９に示したように、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準は、正常（すなわち、特発性肺線維症がない）ラットと比較して、肺線維症誘導されたＳＤラット（“疾患モデル”）の血清で１．５倍以上も高かった。
【０４２８】
（実施例１２：ヒト肝線維症患者の血清分析）
肝細胞の損傷時、血清中のＡＳＴ及び／又はＡＬＴ水準が増加することができ、このような増加は主に肝損傷を示唆すると思われる（Gowda et al., Pan Afr Medjy. M (2009); Giannini et al., Arch Intern Med 163:218-224 (2003)参照）。しかし、損傷が深刻なとき（例えば、肝硬変）ＡＳＴ及びＡＬＴ水準を正常として示すことができる。よって、ＦＡＭ１９Ａ５発現が肝損傷のより良い指標であるかを評価するために、ＦＡＭ１９Ａ５サンドイッチＥＬＩＳＡ分析を用い、肝硬変が確認されたヒト患者の血清に対してＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準を測定した。
【０４２９】
２−１３抗ＦＡＭ１９Ａ５ヒトＩｇＧ１抗体を５０ｍＭ炭酸塩バッファー（Ｂｉｏ−Ｗｏｒｌｄ，Ｃａｔ．Ｃ２０７０−９．６，Ｌｏｔ．Ｃ７０−９．６１６Ｚ１１Ｃ）中に１μｇ／μＬの濃度で再構成した。その後、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体をＰＢＳ中に１：１０００の比率で希釈し、ついでこれを用いて９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを一晩コーティングした。翌日、プレートをＰＢＳで洗浄し、ついで約１時間の間に室温でＰＢＳ中の１％ＢＳＡで遮断した。その後、プレートをＰＢＳで再洗浄し、標準物質とサンプルおよそ１００μＬを適切なウェルに分配した。プレートを２時間の間に室温でインキュベーションした。その後、プレートを０．０５％ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０（すなわち、洗浄バッファー）で洗浄した。その後、（１μｇ／μＬの濃度で再構成された）３−２抗ＦＡＭ１９Ａ５マウスＩｇＧ２ａ抗体をＰＢＳ中の１％ＢＳＡに１：２０００の比率で希釈した。この希釈された抗体およそ１μＬを各ウェルに添加し、プレートを室温でさらに２時間の間にインキュベーションした。洗浄バッファーでさらに洗浄した後、ろ馬α−マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ，Ｃａｔ．７１５−０３５−１５１，Ｌｏｔ．１２２４０１）（ＰＢＳ中の１％ＢＳＡに１：５０００希釈）にコンジュゲートされた西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）およそ１００μＬをウェルに添加した。その後、プレートを室温で１時間の間にインキュベーションした。インキュベーションの後、プレートを洗浄バッファーで洗浄し、１−ＳＴＥＰＴＭ  Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ基質溶液（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｃａｔ．３４０２８，Ｌｏｔ．ＱＪ２０４３６５４０）およそ１μＬを各ウェルに添加した。１０分間インキュベーションした後、１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４（硫酸）およそ１００μＬをウェルに添加して反応を中断させた。９６ウェルマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ，Ｖｅｒｓａ  Ｍａｘ）を用いて４５０ｎｍの波長で吸光度を測定した。
【０４３０】
図１０に示したように、肝硬変を有する患者は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質水準が正常の元気な個体の血清で観察されたものよりおよそ２−６倍高かった。このようなデータは前述した動物研究と一致し、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の血清濃度が肝硬変に対する理想的な診断マーカーであり得ることを示唆する。
【０４３１】
（実施例１３：心筋梗塞に対する効果分析）
心筋梗塞中に起こる虚血性細胞死は修復反応をもたらし、このとき、損傷された組職が線維症傷跡に代替される。その後、周辺組職の再形成（例えば、左心室壁の薄肉化及び心室膨脹）が続き、結局心臓機能が損傷される（Talman et al., Cell Tissue Res 365(3):563-581 (2016); Firth et al., Cardiovasc Drugs Ther 4:1363-1374 (1990)参照）。心筋梗塞に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を評価するために、マウ虚血性再灌流モデルを使った。簡単に言えば、Ｂａｌｂ／ｃＡｎＮＣｒｌｊＯｒｉマウス（６週齢、雄性）（Ｏｒｉｅｎｔ  Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．，韓国のソウル）を購入し、およそ１週間の間に特殊な病源菌無含有（ＳＰＦ）の条件の下で閉じ込めた。その後、マウスをＺｏｌｅｔｉｌ  ５０（ＶＩＲＢＡＣ，フランス）とキシラジン（Ｒｏｍｐｕｎ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ  ＡＧ，ドイツ）で深く痲酔した。痲酔後、開胸術をマウスに施行して冠状動脈を露出させ、７−０縫合糸とＰＥ２０チューブを使って動脈を結紮して心筋梗塞を誘導した。空気挿管後、ベンチレーターに気管内チューブを連結してマウスの呼吸を強制で維持した。虚血状態を４０分間維持し、ＰＥ２０チューブを除去して血液を再灌流させた。心筋梗塞誘導後３日目に抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（１−６５、３−２、又は１−２８抗体）を静脈内注射でマウスに投与し、毎週総３回注射した。ナイーブ（すなわち、元気な）マウスとＮＨＩマウスを対照群として使った。
【０４３２】
心筋梗塞誘導後２１日目にマウスを殺して心臓を収去した。心臓組職を１０％ホルマリン溶液に固定した。その後、固定された心臓組職を頂部付近で２ｍｍ厚さで横方向にスライスしてパラフィンブロックに入れ、５μｍ切片にさらにスライスしてガラス組職スライド上に装着して分析した。心臓組職サンプルに対してヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を遂行し、心筋梗塞関連組職再形成に対するそれぞれの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（すなわち、１−６５、３−２、及び１−２８抗体）の効果を評価した。
【０４３３】
予想通りに、ＮＨＩ対照群からの心臓組職は左心室の有意な膨脹と左心室壁の薄肉化を示した（図１１（“ＮＨＩ”）参照）。反面、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が投与されたマウスからの心臓組職はナイーブ（“元気な”）動物からの心臓組職と類似した（すなわち、左心室の膨脹減少及び左心室壁組職の保存）。
【０４３４】
この効果を確認するために、コラーゲンを染色するマッソントリクローム染色を心臓組職切片に遂行した。前述したように、コラーゲンは細胞外基質（ＥＣＭ）の主要成分であるので、組職サンプルで増加したコラーゲン蓄積部のマッソントリクローム染色は線維症の正確な指標であり得る。光学顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５３，日本国）を使って染色されたスライドを撮影し、全体左心室領域に対する線維性領域の比率をイメージ分析装置で計算した。
【０４３５】
図１２Ａに示したように、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が投与された抗体（１−６５、３−２及び１−２８）を受けたマウスはＮＨＩ対照群に比べてコラーゲンの蓄積がよほど少なかった。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体治療群では、全体左心室領域のおよそ１０−１５％が線維性組職からなった（図１２Ｂ参照）。反面、ＮＨＩ対照群のマウスでは、線維性領域が全体左心室領域のおよそ２０％を構成した。相異なるＦＡＭ１９Ａ５抗体の中でも１−６５抗体が最大効果を有することが現れた。
【０４３６】
総合すれば、前記結果は、心筋梗塞直後、ＦＡＭ１９Ａ５抗体の投与が組職再形成及び線維症形成を大きく改善することができることを証明する。
【０４３７】
（実施例１４：ヒト肝癌患者分析）
肝線維症と肝硬変は肝癌の主な危険因子である。ヒト肝癌患者で、癌性組織周辺に肝硬変と類似した線維症が頻繁に発生する。したがって、肝癌でのＦＡＭ１９Ａ５発現を評価するために、免疫組職化学を使ってヒトの肝生検体でＦＡＭ１９Ａ５タンパク質発現を測定した。簡単に言えば、多様な程度の線維症（すなわち、段階＃０〜段階＃４）を有する肝癌患者から肝サンプルを獲得した。組職サンプルを抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に免疫染色した後、ヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）で対比染色した。
【０４３８】
図１３に示したように、段階＃０の患者に比べ、段階＃２及び段階＃４の癌患者の肝組織ではＦＡＭ１９Ａ５タンパク質発現に有意な増加があった。増加したＦＡＭ１９Ａ５発現は傷跡形成領域付近と肝星霜細胞に主に集中した。ＦＡＭ１９Ａ５発現の増加は疾患の進行に関連し、段階＃２肝組職に比べ、段階＃４肝組織はずっと高い水準のＦＡＭ１９Ａ５を発現した。総合すれば、このデータはＦＡＭ１９Ａ５がヒト肝癌にも重要な役割をすることを証明する。
【０４３９】
（実施例１５：肝癌異種移植モデルにおける抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体投与効能の分析）
ヒト肝癌に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の抗腫瘍効能を評価するために、肝癌の異種移植マウスモデルを使った。簡単に言えば、ヌードマウスを購入し、特殊な病原体未感染（ＳＰＦ）の条件で閉じ込めた。およそ１週間の適応期間の後、Ｈｅｐ３Ｂ細胞及び／又はヒト肝星細胞（ＨＨＳｔｅＣ）を動物に皮下注射した。このために、細胞を先にトリプシンで処理して単一細胞懸濁液を製造した。ついで、細胞を洗浄し、およそ５×１０６のＨｅｐ３Ｂ及び／又は０．４×１０６のＨＨＳｔｅＣ細胞をＤＭＥＭ培地１００μＬに再懸濁した。ついで、インスリン注射器を使って細胞をヌードマウスの右脇腹に細胞を皮下注射した。注射後約３週目に腫瘍形成に対して動物を観察した。
【０４４０】
腫瘍形成時（注射後から３週）、正常ヒト兔疫グロブリン（ＮＨＩ、対照群）又は３−２ヒトＩｇＧ１抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（２．５ｍｇ／ｋｇ）のいずれか一つを動物に静脈内注射した。動物は総３週間毎週１回抗体を投与した。体重と腫瘍大きさを毎週評価した。接種後４２日目に動物を殺し、腫瘍をさらに分析した。
【０４４１】
図１４Ａに示したように、全ての相異なるグループの動物は実験期間始終類似の体重を有する。図１４Ｂ〜図１４Ｄに示したように、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の投与は単にＨｅｐ３Ｂ細胞のみ接種された動物に対して最小限の抗腫瘍効果を有する（すなわち、“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＮＨＩ”及び“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”）。しかし、Ｈｅｐ３Ｂ細胞とＨＨＳｔｅＣが共に接種された動物では、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の投与が腫瘍の大きさ／重量の有意な減少をもたらした（すなわち、“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＮＨＩ”ｖ．“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”）。このようなデータは腫瘍内微小環境で肝細胞の肝星細胞と抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の相互作用が肝癌を治療することができることを提示する。
【０４４２】
（実施例１６：外傷性脳損傷後の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体投与の効果）
外傷性脳損傷に対する本発明で開示される抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を評価するために、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）モデルを使った。簡単に言えば、Ｃ５７ＢＬ／６成体雄マウス（８−９週齢）をイソフルランで深く痲酔した。１分間頭蓋冠上に（液体窒素を使って予め冷却させた）鉄棒をおいて極低温ＴＢＩを遂行した。ついで、マウスの皮膚を縫合し、正常マウスと同一の方式で閉じこめた（Moon et al., Neuro Report 22: 304-308 (2011)参照）。ＴＢＩ誘導の後、およそ１日目にリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に希釈された相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（１−６５（２／４）；１−２８；２−１３；及び３−２）１００μｇを動物に静脈内投与した。
【０４４３】
ＴＢＩ誘導後の５日目（ＴＢＩ５Ｄ）に動物を殺し、ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で灌流させ、脳組職を収去した。収去された脳組職をさらに２４時間の間に４％ＰＦＡ溶液に固定させた。ついで、脳組職を３０％スクロース内で冷凍防止し、クリオスタットで連続的に切片化し（４０μｍ）、使用時まで−２０℃で５０％グリセロール／５０％ＰＢＳ中に保管した。
【０４４４】
神経膠症に関連した反応性星状膠細胞（ネスチン及びＧＦＡＰ発現に対して陽性）を染色させるために、脳組職切片を３０分間ＰＢＳ中の３％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）と０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で遮断させた。ついで、１次抗体を４℃で一晩の間に切片とともにインキュベーションした。この研究に使用された１次抗体はマウス抗ネスチン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、アメリカメサチュセツ）及び兎抗ＧＦＡＰ（Ｄａｋｏ、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、アメリカカリフォルニア）であった。ＰＢＳで数回洗浄した後、適切な２次抗体を３０分間適用した。Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、アメリカカリフォルニア）で核を標識した。ついで、切片を洗浄し、蛍光又は共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ、Ｗｅｔｚｌａｒ、ドイツ）の下に装着して観察した。
【０４４５】
効果を定量するために、まず各イメージでＧＦＡＰ陰性領域のＲＯＩ（関心領域）を特定した後、相応するＲＯＩの面積（μｍ２、Ａ）をＬＡＳ  ＡＦ  ｌｉｔｅソフトウェア（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍ  ＣＭＳ  ＧｍｂＨ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、ドイツ）を使って計算した。また、半影と接している損傷深部の境界線の側面長（μｍ、Ｂ）を同じソフトウェアで測定した。Ａ／Ｂの値は病巣深部からの平均長を示す（Ａ／Ｂ、μｍ）。
【０４４６】
図１５Ａ及び図１５Ｂに示したように、１−２８、２−１３、及び３−２抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は外傷性脳損傷後、反映領域で反応性神経膠症の開始を同様に減少、反転、及び／又は予防した。全体的な効果は１−６５抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と類似しており、この抗体は外傷性脳損傷後に反応性星状膠細胞の生成を有意に弱化させると既に提示された抗体である（アメリカ特許第９，５７９，３９８参照）。１−６５抗体と違うエピトープでＦＡＭ１９Ａ５タンパク質が結合するにもかかわらず、１−２８、２−１３、及び３−２抗体は外傷性脳損傷後に投与されたときに効果的であった。
【０４４７】
（実施例１７：マウス膠芽細胞腫細胞株ＧＬ−２６１癌細胞におけるＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果の評価）
膠芽細胞腫モデルを誘導するために、４週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの頭を脳固定装置に固定し、ＧＬ−２６１細胞（１ｘ１０５細胞／５μＬ）を頭蓋内注射して（頭蓋内注射部位：前頂まで前方に０．２ｍｍ、正中線まで側面に２．２ｍｍ、頭蓋表面から尾状核被殻の中央に深さ３．５ｍｍ）膠芽細胞腫を誘導した（図１６Ａ）。ヒトＩｇＧ（陰性対照群）と抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体をそれぞれ各動物にＧＬ−２６１接種した後、７日目に静脈内注射した。各マウスは、ヒトＩｇＧ対照群抗体又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のいずれか一つを２．５ｍｇ／ｋｇの容量で週１回で、３回投与された（図１６Ａ）。
【０４４８】
ＧＬ−２６１接種後に２３日目から死亡が発生し始め、全ての生存したマウスを殺して脳を除去し、４％パラホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝食塩水で固定させた。脳組職の腫瘍の大きさを測定するために、次の３種の分析方法を使った：１．組職浄化（ＣＬＡＲＩＴＹ）（図１６Ｂ）、２．ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色（図１７Ａ及び図１７Ｂ）、及び３．Ｈｏｅｃｈｓｔ核染色（図１８Ａ−図１８Ｄ）。
【０４４９】
（１）組職透明性を確保するために、分析組職をまずヒドロゲルモノマー溶液（Ａ４Ｐ０）に浸し、１日間４℃で保管して組職全体にヒドロゲルが侵透するようにした。その後、温度を３７℃に上昇させて重合を誘導して網状構造を形成した。ついで、電気泳動組職透明化（ＥＴＣ）を用いて組職から脂質を除去した。製造された組職をライトボックスに入れた。相対的に不透明な組職の表面を腫瘍表面と見なし、スケールバーを使用しておおよその腫瘍質量を測定した。
【０４５０】
（２）ヘマトキシリン及びエオシン染色（Ｈ＆Ｅ染色）は２４時間の間に４％パラホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝食塩水で固定した後、３０％スクロースを含むリン酸緩衝食塩水に２４時間の間にさらに懸濁させた。ついで、組職を脳組職用鋳型に入れ、３０％糖溶液を含むＯＣＴ化合物をドライアイス上で凍結させ、クリオスタットミクロトーム（Ｌｅｉｃａ）を使って脳組職を３０μｍに薄く切断した。
【０４５１】
Ｈ＆Ｅ染色の完了後、スライドスキャナー（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ／ＡｘｉｏＳｃａｎＺ）を介して、準備された見本のイメージを獲得し、ＺＥＮ顕微鏡及びイメージングソフトウェア（Ｚｅｉｓｓ）を使って腫瘍の境界表面を任意に特定して腫瘍の表面積値を獲得した。
【０４５２】
（３）Ｈｏｅｃｈｓｔ染色のために薄く切断された組職をＨｏｅｃｈｓｔ含有リン酸緩衝食塩水（１：２０００）で３０分間処理した。共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）を使って、準備された見本の蛍光イメージを獲得し、ＩＭＡＲＩＳ  ３Ｄソフトウェア（Ｂｉｔｐｌａｎｅ）を使って腫瘍境界を決定して腫瘍の体積及び腫瘍内の細胞数を獲得した。
【０４５３】
図１６Ｂ、図１７Ａ、図１７Ｂ、及び図１８Ａ−図１８Ｄに示したように、各マウスの腫瘍大きさの測定は３種の実験方法の全部で、ヒトＩｇＧ治療されたグループと比較して、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体治療されたグループで膠芽細胞腫の大きさが有意に減少したことを示した。
【０４５４】
（実施例１８：膠芽細胞腫マウスモデルにおけるＦＡＭ１９Ａ５抗体治療後血管正常化の促進）
膠芽細胞腫誘導マウスモデル（実施例１７参照）を殺して獲得した脳を２４時間の間に４％パラホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で固定した後、３０％スクロースを含むＰＢＳで２４時間の間にさらに浸潤させた。ついで、脳を脳組職用鋳型に入れ、３０％糖溶液を含むＯＣＴ化合物とともにドライアイス上で凍結させた。ついで、凍結された脳をクリオスタットミクロトームを使って３０μｍに薄く切断した。免疫組職化学を行って膠芽細胞腫誘導マウスの脳からＣＤ３１タンパク質（血管内皮細胞に対するマーカー）の発現パターンを決定した。共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）を使って、準備された見本の蛍光イメージを獲得した。
【０４５５】
同等な表面積を試験したとき（図１９Ａ、白点で境界表示）、対照群では血管の数とその連結性が非常に不良であったが（図１９Ａ、左側カラム）、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体治療されたグループでは血管の数とその連結性が相対的に高かった（図１９Ａ、右側カラム）。これに関連して、図１９Ａの代表領域をもっと大きく拡大した図１９Ｂを参照する。
【０４５６】
前記結果は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体治療が血管正常化を促進することができ、膠芽細胞腫の治療を容易にすることができることを示唆した。
【０４５７】
（実施例１９：膠芽細胞腫のマウスモデルにおけるＦＡＭ１９Ａ５抗体治療後の兔疫細胞の分布差）
膠芽細胞腫誘導マウスモデル（実施例１７参照）から分離された脳を２４時間の間に４％パラホルムアルデヒドを含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で固定した後、３０％スクロースを含むＰＢＳで２４時間の間にさらに透過させた。ついで、脳を脳組職用鋳型に入れ、３０％糖溶液を含むＯＣＴ化合物とともにドライアイス上で凍結させた。ついで、凍結された脳をクリオスタットミクロトームを使って３０μｍに薄く切断した。ＧＦＡＰ（星状膠細胞マーカー）及びＩｂａ−１（マクロファージマーカー）に対して免疫組職化学を行って膠芽細胞腫で星状膠細胞とマクロファージの分布を観察した。
【０４５８】
対照群では膠芽細胞腫で星状膠細胞が観察されなかったが、ＦＡＭ１９Ａ５抗体治療されたグループではこの腫瘍で相対的に多くの数の星状膠細胞が維持された。腫瘍の星状膠細胞は周辺ニューロン又はニューロンの細胞外環境に対して肯定的な効果を有することに期待される。さらに、膠芽細胞腫へのマクロファージ浸潤水準の分析は、陰性対照群であるヒトＩｇＧ治療されたグループと比較して、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体−治療されたグループでマクロファージ浸潤が劇的に増加したことを提示した（図２０Ａ及び図２０Ｂ）。
【０４５９】
これらの結果は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体治療が膠芽細胞腫へのマクロファージの浸潤を促進することができ、膠芽細胞腫の治療を容易にすることができることを示唆した。
【０４６０】
（実施例２０：Ｃ６腫瘍細胞を使ったラット神経膠腫モデルにおけるＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効能の評価）
同系の遺伝子ラット神経膠腫モデルを誘導するために、１．８ｘ１０５／１μＬのＣ６腫瘍細胞を脳固定装置フレームを使って頭蓋内注射によって雄ウィスター系ラットに接種した。腫瘍接種後７日目から各ラットにヒトＩｇＧ（陰性対照群）抗体又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を２．５ｍｇ／ｋｇの容量で３日ごとに２回静脈内投与した。各ラットの接種された腫瘍の大きさ、位置及び定性的結果を分析するために、腫瘍細胞接種後７日目に２−３日の間隔でＭＲＩスキャンイメージを撮影した。
【０４６１】
Ｔ２−加重イメージスキャンは、接種された腫瘍の位置、大きさなどに対して視覚的で定性的な評価を提供する基本的な形態分析である。腫瘍組職内部の流体含量を示すのに使われるＲ２マッピング分析は腫瘍内部の浮腫体積を視覚的に確認することができるようにする。全体血流を検出するのに使われる映像分析方法を使って高分子量Ｔ２造影剤ＭＩＯＮ（大きさ：２０±５ｎｍ、容量：５ｍｇ／ｋｇ）の注射前後のＲ２＊値変化を導出し、ｄｅｌＲ２＊マッピングによってＣＢＶ（脳血液体積）を計算した。Ｒ２の変量によってＣＢＶ（脳血液体積）値を導出し、これを使って脳組職の一般血液体積を視覚的に分析した。増強率（ＥｎｈＲａｔｅ）及び曲線下の面積（ＡＵＣ）が組職透過性検出に対する代表変数であった。
【０４６２】
イメージスキャン結果（図２１）に示したように、Ｔ２加重イメージは、ヒトＩｇＧ抗体（陰性対照群）と比較して、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体投与が腫瘍の成長を効果的に抑制したことを提示した。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が投与された動物のＲ２マッピング結果は、ヒトＩｇＧ（陰性対照群）治療された動物と比較したとき、腫瘍の壊死領域が減少し、その結果、腫瘍の深部で水含量が減少したことを示した。ＣＢＶ分析結果は、ヒトＩｇＧ（陰性対照群）治療された動物と比較して、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体投与された動物の腫瘍組職内部に相対的に大きな血液体積を示し、これは腫瘍組職の内部での血流速度の増進を証明した。最後に、腫瘍組職透過性の評価は、ヒトＩｇＧ（陰性対照群）治療された動物と比較して、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体投与された動物で透過性の減少を示した。“ＩＡＵＣ３０”は３０秒での曲線下の初期面積を示す。
【０４６３】
ヒトＩｇＧで治療された陰性対照群と比較して、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療されたラット神経膠腫Ｃ６腫瘍細胞モデルにおけるこのような発見は壊死領域の減少とそれによる浮腫の改善を提示する。効果的な腫瘍成長抑制は腫瘍細胞透過性の減少及び血流速度の改善によって起こった。
【０４６４】
（実施例２１：ＧＬ２６１腫瘍細胞を使ったマウス脳癌モデルにおける抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効能の評価）
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果をさらに評価するために、ＧＬ２６１  Ｒｅｄ−ＦＬｕｃ細胞を使ってマウスに脳癌を誘導した。簡単に言えば、ＧＬ２６１  Ｒｅｄ−ＦＬｕｃ細胞（３ｘ１０５）をＣ５７ＢＬ／６マウスの脳に注射した（第０日）。ついで、注射後３日目にマウスにヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ、ｃａｔ．＃１４５０６）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（３−２クローン、Ｌｏｔ＃１７１１２３）の一つを静脈内投与した。抗体は５ｍｇ／ｋｇの容量で総４週間週１回投与した。最後の抗体投与（第２４日）後、全ての動物が死ぬまで生存に対してマウスをモニタリングした。
【０４６５】
図２２に示したように、ヒトＩｇＧグループでは最後のマウスがＧＬ２６１細胞注射後２８日目に死んだ。一方、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物では最後のマウスが１週遅く死んだ（すなわち、ＧＬ２６１細胞注射後３５日目）。この結果は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が脳癌を有する動物の生存を増進させることができることを証明することにより、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効能をもっと確認させた。
【０４６６】
発明の内容及び要約書部分の覗いた詳細な説明が請求範囲を解釈するのに使用されることができることが認められなければならない。発明の内容及び要約書部分は本発明者（ら）によって考察された本発明の例示的な具体例を全部ではないが１個以上を提示することができ、よって本発明及び添付の請求項を決して制限しない。
【０４６７】
本発明は明示された機能及びその関係の具現を例示する機能的構成要素の助けにより以上で説明された。この機能的構成要素の区分は、説明の便宜のために、任意に定義された。明示された機能及びその関係が適切に遂行される限り、代替の境界も定義されることができる。
【０４６８】
特定の具体例についての前述した説明は本発明の一般的な性質を充分に明らかにするものであり、第３者は当該分野の知識を適用することにより、本発明の一般的な概念から逸脱しなくて過度な実験なしに、このような特定の具体例を多様な用途に合わせて易しく変形及び／又は改造することができる。よって、このような改造及び変形はこの明細書に提示された教示及び指針に基づいて開示された具体例の等価物の意味及び範囲内にあるであろう。本発明で使用される文句又は用語は制限するためのものではなくて説明のためのものであることが理解されなければならなく、本発明の用語又は文句は前記教示及び指針を考慮して当業者によって解釈されなければならない。
【０４６９】
本発明の範囲は前述された例示的な具体例のいずれかによって制限されてはいけなく、以降の請求項及びその等価物によってのみ限定されなければならない。
【０４７０】
本発明で引用された全ての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト及び受託番号／データベース配列（ポリヌクレオチド及びポリペプチド配列の両者を含み）はそれぞれの個別刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト又は受託番号／データベース配列が参考として含まれるように具体的にかつ個別的に指示されたものと同じ程度に全ての目的のためにその全部を参照することにより本発明に組み込まれる。
【０４７１】
このＰＣＴ出願は２０１７年６月２７日付で提出されたアメリカ仮出願第６２／５２５，６３５号、２０１７年１１月７日付で提出された同第６２／５８２，８８７の優先権の利益を主張し、その全部を参照することにより本発明に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０４７２】
【図１】ヒトＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド上でのエピトープＦ１−Ｆ６（ＢＳＡにコンジュゲートされた）のアミノ酸配列とこれらの位置を示す。これらの相異なるエピトープ断片の大きさは括弧内に表示する。
【図２】抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１−６５、２−１３、及び３−２の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。３−２抗体の場合、二つの相異なるアイソタイプ、すなわちヒトＩｇＧ１（“ｈ３−２”）及びマウスＩｇＧ１（“ｍ３−２”）が示される。各抗体に対して、第１、第２、第３、第４、第５、及び第６棒（左側から始めて）はそれぞれエピトープ断片Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５、及びＦ６に対する結合を表示する。右側から最も遠くある棒は陽性対照群（すなわち、Ｈｉｓタグを有するＦＡＭ１９Ａ５タンパク質）である。正確なＯ．Ｄ．値が各棒上に表示される。
【図３Ａ】次の１３個の相異なるＦＡＭ１９Ａ５エピトープＦ２断片突然変異ペプチドに対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体３−２及び１−２８の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す：（ｉ）Ｆ２−０１−ＢＳＡ（＃１）、（ｉｉ）Ｆ２−０２−ＢＳＡ（＃２）、（ｉｉｉ）Ｆ２−０３−ＢＳＡ（＃３）、（ｉｖ）Ｆ２−０４−ＢＳＡ（＃４）、（ｖ）Ｆ２−０５−ＢＳＡ（＃５）、（ｖｉ）Ｆ２−０６−ＢＳＡ（＃６）、（ｖｉｉ）Ｆ２−０７−ＢＳＡ（＃７）、（ｖｉｉｉ）Ｆ２−０８−ＢＳＡ（＃８）、（ｉｘ）Ｆ２−０９−ＢＳＡ（＃９）、（ｘ）Ｆ２−１０−ＢＳＡ（＃１０）、（ｘｉ）Ｆ２−１１−ＢＳＡ（＃１１）、（ｘｉｉ）Ｆ２−１２−ＢＳＡ（＃１２）、及び（ｘｉｉｉ）Ｆ２−１３−ＢＳＡ（＃１３）。図３ＡはヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する３−２抗体に対する結果を示す。正確なＯ．Ｄ．値は各棒上に表示される。
【図３Ｂ】次の１３個の相異なるＦＡＭ１９Ａ５エピトープＦ２断片突然変異ペプチドに対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体３−２及び１−２８の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す：（ｉ）Ｆ２−０１−ＢＳＡ（＃１）、（ｉｉ）Ｆ２−０２−ＢＳＡ（＃２）、（ｉｉｉ）Ｆ２−０３−ＢＳＡ（＃３）、（ｉｖ）Ｆ２−０４−ＢＳＡ（＃４）、（ｖ）Ｆ２−０５−ＢＳＡ（＃５）、（ｖｉ）Ｆ２−０６−ＢＳＡ（＃６）、（ｖｉｉ）Ｆ２−０７−ＢＳＡ（＃７）、（ｖｉｉｉ）Ｆ２−０８−ＢＳＡ（＃８）、（ｉｘ）Ｆ２−０９−ＢＳＡ（＃９）、（ｘ）Ｆ２−１０−ＢＳＡ（＃１０）、（ｘｉ）Ｆ２−１１−ＢＳＡ（＃１１）、（ｘｉｉ）Ｆ２−１２−ＢＳＡ（＃１２）、及び（ｘｉｉｉ）Ｆ２−１３−ＢＳＡ（＃１３）。図３ＢはマウスＩｇＧ１アイソタイプを有する３−２抗体に対する結果を示す。正確なＯ．Ｄ．値は各棒上に表示される。
【図３Ｃ】次の１３個の相異なるＦＡＭ１９Ａ５エピトープＦ２断片突然変異ペプチドに対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体３−２及び１−２８の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す：（ｉ）Ｆ２−０１−ＢＳＡ（＃１）、（ｉｉ）Ｆ２−０２−ＢＳＡ（＃２）、（ｉｉｉ）Ｆ２−０３−ＢＳＡ（＃３）、（ｉｖ）Ｆ２−０４−ＢＳＡ（＃４）、（ｖ）Ｆ２−０５−ＢＳＡ（＃５）、（ｖｉ）Ｆ２−０６−ＢＳＡ（＃６）、（ｖｉｉ）Ｆ２−０７−ＢＳＡ（＃７）、（ｖｉｉｉ）Ｆ２−０８−ＢＳＡ（＃８）、（ｉｘ）Ｆ２−０９−ＢＳＡ（＃９）、（ｘ）Ｆ２−１０−ＢＳＡ（＃１０）、（ｘｉ）Ｆ２−１１−ＢＳＡ（＃１１）、（ｘｉｉ）Ｆ２−１２−ＢＳＡ（＃１２）、及び（ｘｉｉｉ）Ｆ２−１３−ＢＳＡ（＃１３）。図３Ｃは１−２８抗体に対する結果を示す。正確なＯ．Ｄ．値は各棒上に表示される。
【図４】ＦＡＭ１９Ａファミリの相異なるメンバー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１−５）のアミノ酸整列を示す。メンバーの中で最大のアミノ酸多様性を有する領域をボックスで表示し、ＥＰ１〜ＥＰ８で示す。ＩｇＧ抗体（“ＩｇＧのみ”）は対照群として提示される。ｙ軸はＯ．Ｄ．値を提供する。
【図５】ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ１〜Ｍ８に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１−６５、１−２８、２−１３、及び３−２の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。各抗体に対して、８個の棒は突然変異Ｍ１〜Ｍ８に相当する（左側から右側へ）。
【図６Ａ】相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体間の交差競合を評価するために使用された２部位サンドイッチＥＬＩＳＡ分析の図解を示す。
【図６Ｂ】６個の相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、すなわち１−６５、Ｐ２−Ａ０３、Ｐ２−Ｆ１１、１３Ｂ４、２−１３、及び３−２に対する交差競合分析の結果を示す。用語“Ｓ／Ｎ”は信号対ノイズの比を意味し、これは次のように測定される：［１０ｎｇ／ｍＬ抗原のＯ．Ｄ．］／［０ｎｇ／ｍＬ抗原のＯ．Ｄ．］。灰色ボックスは交差競合を示す（すなわち、２以下のＳ／Ｎ比）。
【図７Ａ】ＦＡＭ１９Ａ５に対するいくつかの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。次の抗体に対する結果が表示される：１−６５、１３Ｂ４、１３Ｆ７、１−２８、２−１３、３−２、Ｐ１−Ａ０３、Ｐ１−Ａ０８、Ｐ１−Ｄ０３、Ｐ１−Ｆ０２、Ｐ１−Ｇ０９、Ｐ２−Ａ０１、Ｐ２−Ａ０３、Ｐ２−Ｃ１２、Ｐ２−Ｆ０７、及びＰ２−Ｆ１１（左側から右側へ）。図７Ａは抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の多様な濃度に対する結果を棒グラフで示したものである。
【図７Ｂ】ＦＡＭ１９Ａ５に対するいくつかの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。次の抗体に対する結果が表示される：１−６５、１３Ｂ４、１３Ｆ７、１−２８、２−１３、３−２、Ｐ１−Ａ０３、Ｐ１−Ａ０８、Ｐ１−Ｄ０３、Ｐ１−Ｆ０２、Ｐ１−Ｇ０９、Ｐ２−Ａ０１、Ｐ２−Ａ０３、Ｐ２−Ｃ１２、Ｐ２−Ｆ０７、及びＰ２−Ｆ１１（左側から右側へ）。図７Ｂは相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＫｄ（ｎＭ）を表示する。
【図８】胆管結紮（ＢＤＬ）によって誘発された肝線維症を有するラット（ｎ＝５）（“疾患モデル”）の血清中のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準を元気なラット（“正常”）（ｎ＝３）と比較したものを示す。ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準は正常対照群の動物で観察された水準に対して倍数変化で表示される。“＊”は正常対照群動物と比較して統計的に有意な差（ｐ＜０．００５）を示す。
【図９】３ｍｇ／ｋｇブレオマイシンの気管内注射によって誘発された特発性肺線維症を有するラット（ｎ＝５）（“疾患モデル”）の血清中のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準を元気なラット（“正常”）（ｎ＝５）と比較したものを示す。ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の水準は正常対照群動物で観察された水準に比べて倍数変化で表示される。“＊”は正常対照群動物と比較して統計的に有意な差（ｐ＜０．００５）を示す。
【図１０】肝線維症、例えば肝硬変が確認されたヒト患者（患者＃１−１０）と元気な個体（正常＃１−３）の血清中のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質水準の倍数変化を示す。各棒グラフ上に提示された具体的な値は元気な個体の血清から検出されたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の平均濃度に対する倍数変化を示す。
【図１１】対照群抗体（“ＮＨＩ”）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（“１−６５”、“３−２”、及び“１−２８”）で治療された心筋梗塞誘発動物での左心室組職のＨ＆Ｅ（ヘマトキシリン及びエオシン）染色を比較したものを示す。元気な動物（すなわち、非心筋梗塞誘発、“ナイーブ”）が追加対照群として使われた。
【図１２Ａ】心筋梗塞誘発動物の左心室組職でのコラーゲン蓄積を比較したものを示す。心筋梗塞誘発動物は、対照群抗体（“ＮＨＩ”）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（“１−６５”、“３−２”、及び”１−２８”）のいずれか一つが投与された。元気な動物（すなわち、非心筋梗塞誘発、“ナイーブ”）が追加対照群として使われた。図１２Ａはマッソントリクローム染色を使ったコラーゲン蓄積を示す。
【図１２Ｂ】心筋梗塞誘発動物の左心室組職でのコラーゲン蓄積を比較したものを示す。心筋梗塞誘発動物は、対照群抗体（“ＮＨＩ”）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（“１−６５”、“３−２”、及び”１−２８”）のいずれか一つが投与された。元気な動物（すなわち、非心筋梗塞誘発、“ナイーブ”）が追加対照群として使われた。図１２Ｂは全体左心室領域に対する線維性領域の比率でコラーゲン蓄積（すなわち、線維性領域）を示す。データは平均±Ｓ．Ｄ．で表示される（ｎ＝グループ当たり５〜８）。棒上の“＊＊＊／＊＊”は“ナイーブ”グループ（元気な動物）と比較して統計的に有意な差を示す（それぞれｐ＜０．００１、ｐ＜０．０５）。棒上の“＃”は”ＮＨＩ“グループ（心筋梗塞誘発＋対照群抗体）と比較して統計的に有意な差を示す（ｐ＜０．０５）。
【図１３】３人の相異なる肝癌患者の肝生検でのＦＡＭ１９Ａ５タンパク質発現の免疫組職化学分析を示す。図示のように、各患者は多様な程度の線維症を有する：（ｉ）段階＃０（左側カラム）、（ｉｉ）段階＃２（中間カラム）、及び（ｉｉｉ）段階＃４（右側カラム）。下側列は上側列でボックスで表示された領域をより大きく拡大したものである。矢印はＦＡＭ１９Ａ５−陽性の肝星細胞の例を表示する。
【図１４Ａ】動物の体重（ｇ）を時間の関数として示す（接種後経過週）。動物の一部はＨｅｐ３Ｂ細胞のみ接種され、正常ヒト兔疫グロブリン（円、グループ：“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＮＨＩ”、ｎ＝３）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（閉ボックス、グループ：“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”、ｎ＝３）のいずれか一つで治療された。他の動物はＨｅｐ３Ｂ細胞とヒトの肝星細胞（ＨＨＳｔｅＣ）の両者が接種され、正常ヒト兔疫グロブリン（ダイヤモンド、グループ：“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＮＨＩ”、ｎ＝３）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（開ボックス、グループ：“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”、ｎ＝３）のいずれか一つで治療された。データは平均±Ｓ．Ｄ．で表示される。
【図１４Ｂ】相異なるグループの動物で観察された平均腫瘍体積を時間の関数として示す（接種後経過週）。図示したグループは図１４Ａで説明したものと同一である。腫瘍体積は次の式によって計算された：０．５×長さ×幅２＝腫瘍体積（ｍｍ３）。データは平均±Ｓ．Ｄ．で表示される。
【図１４Ｃ】接種後４２日目に図１４Ａで説明した動物から分離された腫瘍の写真撮影イメージを示す。図１４Ｃで、（ｉ）左上側は“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＮＨＩ”グループ（ｎ＝２）からの腫瘍；（ｉｉ）右上側は“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＮＨＩ”グループ（ｎ＝２）からの腫瘍；（ｉｉｉ）左下側は“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”グループ（ｎ＝３）からの腫瘍；（ｉｖ）右下側は“Ｈｅｐ３Ｂ＋ＨＨＳｔｅＣ＋ＦＡＭ１９Ａ５  Ａｂ”グループ（ｎ＝３）からの腫瘍である。
【図１４Ｄ】接種後４２日目に図１４Ａで説明した動物から分離された腫瘍の重量（ｇ）を示す。図１４Ｄは相異なるグループから分離された腫瘍の平均重量（ｇ）を示す。
【図１５Ａ】外傷性脳損傷後の反応性神経膠症に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図１５Ａは相異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物の脳組職の損傷された領域の代表的な免疫組職化学イメージを提供する：（ｉ）１−６５（２／４）（第１列）；（ｉｉ）１−２８（第２列）；（ｉｉｉ）２−１３（第３列）；及び（ｉｖ）３−２（第４列）。脳組職切片はＧＦＡＰ（グリア細胞繊維性酸性タンパク質、緑色）及びネスチン（赤色）で染色された。これらは脳損傷後の反応性星状膠細胞で誘発されると知られている。点線（白色）はＴＢＩに露出された後の病巣境界を表示する。
【図１５Ｂ】外傷性脳損傷後の反応性神経膠症に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図１５Ｂは１−６５、１−２８、２−１３、及び３−２抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物のＴＢＩ病巣の中心からＧＦＡＰ−及び／又はネスチン−陽性星状膠細胞の平均距離を提供する。
【図１６Ａ】抗体投与スケジュール及び膠芽腫癌細胞をマウスに頭蓋内注射することを描いた図解を提供する。
【図１６Ｂ】組職サンプルの透明性を評価するＣＬＡＲＩＴＹを使って膠芽細胞腫動物モデルで抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。ヒトＩｇＧ対照群抗体（左側）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（右側）のいずれか一つで治療された動物から収去された脳の不透明な腫瘍領域は点線で表示される。
【図１７Ａ】ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を使って膠芽細胞腫動物モデルの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。図１７Ａは対照群ヒトＩｇＧ抗体（上側列）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（下側列）のいずれか一つで治療された動物からの脳組職切片の４個の代表的なＨ＆Ｅ染色イメージを提供する。膠芽細胞腫はこのイメージの暗領域に相当する。
【図１７Ｂ】ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を使って膠芽細胞腫動物モデルの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。図１７Ｂは対照群のパーセントとしてデータを提供することにより図１７Ａに提示されたデータを定量する。黒色棒は（ヒトＩｇＧ抗体で治療された）対照群に相当する。灰色棒は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療されたグループに相当する。ｘ軸の数字は図１７Ａに示した代表イメージに相当する。
【図１８Ａ】Ｈｏｅｃｈｓｔ核染色を使って膠芽細胞腫動物モデルの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。図１８Ａは対照群ヒトＩｇＧ抗体（上側列）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（下側列）で治療された動物から４個の代表的な脳組職切片のイメージを示す。各イメージで、薄い灰色領域は腫瘍に相当する。
【図１８Ｂ】Ｈｏｅｃｈｓｔ核染色を使って膠芽細胞腫動物モデルの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。図１８Ｂは図１８Ａの４個の代表的な脳組職切片で測定された腫瘍内の細胞数（Ｈｏｅｓｃｈｓｔ陽性染色）（“スポット数”）及び腫瘍体積（“体積”）に対する数値を示した表を提供する。
【図１８Ｃ】Ｈｏｅｃｈｓｔ核染色を使って膠芽細胞腫動物モデルの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。図１８Ｃ（細胞数）は図１８Ｂに提示されたデータをグラフで示したものである。図１８Ｃで、データは対照群動物で観察された相応する値の％として表示される。ｘ軸の数字は図１８Ａの代表脳組職切片に相当する。黒色棒は対照群ヒトＩｇＧ抗体で治療された動物に相当する。灰色棒は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物に相当する。
【図１８Ｄ】Ｈｏｅｃｈｓｔ核染色を使って膠芽細胞腫動物モデルの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の坑癌効果を評価したものを示す。１８Ｄ（腫瘍体積）は図１８Ｂに提示されたデータをグラフで示したものである。図１８Ｄで、データは対照群動物で観察された相応する値の％として表示される。ｘ軸の数字は図１８Ａの代表脳組職切片に相当する。黒色棒は対照群ヒトＩｇＧ抗体で治療された動物に相当する。灰色棒は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物に相当する。
【図１９Ａ】膠芽細胞腫マウスモデルの血管正常化に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図１９Ａは対照群ヒトＩｇＧ抗体（左側イメージ）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（右側イメージ）で治療された動物から分離された脳の類似領域内でのＣＤ３１発現（血管マーカー）の免疫組職化学分析を提供する。図１９Ａで、白色点線は膠芽細胞腫の外部境界を表示する。
【図１９Ｂ】膠芽細胞腫マウスモデルの血管正常化に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図１９Ｂは図１９Ａの代表領域の拡大図を提供する。
【図２０Ａ】膠芽細胞腫マウスモデルの腫瘍へのマクロファージの浸潤に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図２０Ａは対照群ヒトＩｇＧ抗体（上側イメージ）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（下側イメージ）で治療されたマウスの膠芽細胞腫のＩｂａｌ発現（マクロファージマーカー）の免疫組職化学イメージを提供する。
【図２０Ｂ】膠芽細胞腫マウスモデルの腫瘍へのマクロファージの浸潤に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。図２０Ｂは図２０Ａに示さしたイメージで観察されたマクロファージの体積を比較した結果である。
【図２１】対照群ヒトＩｇＧ抗体（上側列）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（下側列）のいずれか一つで治療されたラット神経膠腫モデルの脳のＭＲＩスキャンイメージを示す。これらのイメージは次のような腫瘍の多様な特性を示す：（ｉ）Ｔ２−形態学的分析；（ｉｉ）Ｒ２−流体含量；（ｉｉｉ）ＣＢＶ−脳血管体積；（ｉｖ）ＥｎｈＲａｔｅ（増強率）及びＩＡＵＣ３０（３０秒での曲線下の初期面積）−組職透過性。このイメージで、腫瘍は黒色点マークで表示される。
【図２２】マウス脳癌モデルで、生存に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の効果を示す。黒色円はヒトＩｇＧ対照群抗体で治療された動物を示す。白色円は抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体で治療された動物を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２ａ】
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【図１２ｂ】
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【図１３】
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【図１４ａ】
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【図１４ｂ】
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【図１４ｃ】
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【図１４ｄ】
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【図１５ａ】
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【図１５ｂ】
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【図１６ａ】
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【図１６ｂ】
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【図１７ａ】
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【図１７ｂ】
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【図１８ａ】
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【図１８ｂ】
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【図１８ｃ】
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【図１８ｄ】
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【図１９ａ】
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【図１９ｂ】
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【図２０ａ】
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【図２０ｂ】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
2020529198000001.app
【国際調査報告】
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2020529198.tif 000054
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