(57)【要約】  本発明は、ＣＲＩＳＰＲ内因性タンパク質のノックアウトまたはノックイン戦略および単一ヌクレオチドの修正または変更を提供する戦略に関連する問題を回避するようにインビボで遺伝子発現を調節する手段を提供する。本発明は、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質を産生する目的の内因性発現タンパク質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列とインフレームでヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）をコードするヌクレオチドをゲノムに挿入することを含む。これにより、ヘテロ二官能性化合物を使用して、ｄＴＡＧおよび融合内因性タンパク質の標的化タンパク質分解が可能になる。
2020513789.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘテロ二官能性化合物によって結合され得るヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードするゲノム的に組み込まれた核酸配列
を含む形質転換細胞であって；
前記ｄＴＡＧがＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、Ｓｒｃ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαまたはＲＥＴに由来するアミノ酸配列を含み；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列が、内因性タンパク質をコードする遺伝子の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれており；
内因性タンパク質をコードする前記遺伝子の発現が内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をもたらし；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をユビキチンリガーゼに近接させるようにユビキチンリガーゼに結合することができ；
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
形質転換細胞。
【請求項２】
ヒト細胞である、請求項１に記載の形質転換細胞。
【請求項３】
前記ヒト細胞が肝細胞である、請求項２に記載の形質転換細胞。
【請求項４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、非内因性タンパク質由来のアミノ酸配列を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３〜６３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＥＧＦＲ由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項７】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３のアミノ酸配列である、請求項６に記載の形質転換細胞。
【請求項８】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５４のアミノ酸配列である、請求項６に記載の形質転換細胞。
【請求項９】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５５のアミノ酸配列である、請求項６に記載の形質転換細胞。
【請求項１０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５６のアミノ酸配列である、請求項６に記載の形質転換細胞。
【請求項１１】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＣＲ−ＡＢＬ由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項１２】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５７のアミノ酸配列である、請求項１１に記載の形質転換細胞。
【請求項１３】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５８のアミノ酸配列である、請求項１１に記載の形質転換細胞。
【請求項１４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＡＬＫ由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項１５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５９のアミノ酸配列である、請求項１４に記載の形質転換細胞。
【請求項１６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＪＡＫ２由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項１７】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６０のアミノ酸配列である、請求項１６に記載の形質転換細胞。
【請求項１８】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＲＡＦ由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項１９】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６１のアミノ酸配列である、請求項１８に記載の形質転換細胞。
【請求項２０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、Ｓｒｃ由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項２１】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６２のアミノ酸配列である、請求項２０に記載の形質転換細胞。
【請求項２２】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６３のアミノ酸配列である、請求項２０に記載の形質転換細胞。
【請求項２３】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＬＫＫＲ２由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項２４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＰＤＧＦＲα由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項２５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＲＥＴ由来のアミノ酸配列である、請求項１から４のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項２６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードする前記核酸配列が、機能獲得型変異、増幅または発現増加、単遺伝性疾患、プロテオパシーまたはこれらの組み合わせの結果である疾患に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームで挿入される、請求項１から２５のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項２７】
ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸配列をさらに含む、請求項１から２６のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項２８】
前記ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、ＣａｓＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｐｆ１から選択される、請求項２７に記載の形質転換細胞。
【請求項２９】
前記核酸が配列番号５２のアミノ酸配列で構成されるＣａｓ９エンドヌクレアーゼをコードする、請求項２８に記載の形質転換細胞。
【請求項３０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、前記内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない、請求項１から２９のいずれか一項に記載の形質転換細胞。
【請求項３１】
対象の遺伝子発現を調節する方法であって、
有効量のヘテロ二官能性化合物を前記対象に投与するステップを含み；
前記対象が、ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）をコードする核酸配列で形質転換された１つまたは複数の形質転換細胞を有し；
前記ｄＴＡＧが、ＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、Ｓｒｃ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαまたはＲＥＴに由来するアミノ酸配列を含み；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列が、疾患に関連する内因性タンパク質の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれ；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がもたらされ；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をユビキチンリガーゼに近接させるようにユビキチンリガーゼに結合し、
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
方法。
【請求項３２】
前記細胞がヒト細胞である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ヒト細胞が肝細胞である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、非内因性タンパク質由来のアミノ酸配列を含む、請求項３１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３〜６３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＥＧＦＲ由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３のアミノ酸配列である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５４のアミノ酸配列である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５５のアミノ酸配列である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５６のアミノ酸配列である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＣＲ−ＡＢＬ由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５７のアミノ酸配列である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５８のアミノ酸配列である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＡＬＫ由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５９のアミノ酸配列である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＪＡＫ２由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６０のアミノ酸配列である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＲＡＦ由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６１のアミノ酸配列である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、Ｓｒｃ由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６２のアミノ酸配列である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６３のアミノ酸配列である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＬＫＫＲ２由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＰＤＧＦＲα由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＲＥＴ由来のアミノ酸配列である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードする前記核酸配列が、機能獲得型変異、増幅または発現増加、単遺伝性疾患、プロテオパシーまたはこれらの組み合わせの結果である疾患に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームで挿入される、請求項３１から５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸配列をさらに含む、請求項３１から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、ＣａｓＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｐｆ１から選択される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記核酸が配列番号５２のアミノ酸配列で構成されるＣａｓ９エンドヌクレアーゼをコードする、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、前記内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない、請求項３１から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
対象の遺伝子過剰発現を減少させる方法であって、
有効量のヘテロ二官能性化合物を前記対象に投与するステップを含み；
前記対象が、ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）をコードする核酸配列で形質転換された１つまたは複数の形質転換細胞を有し；
前記ｄＴＡＧが、ＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、Ｓｒｃ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαまたはＲＥＴに由来するアミノ酸配列を含み；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列が、タンパク質の過剰発現による疾患に関連する内因性タンパク質の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれ；
前記ｄＴＡＧをコードする前記核酸配列のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がもたらされ；
前記ヘテロ二官能性化合物が、ａ）前記ｄＴＡＧを通して前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質、およびｂ）前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をユビキチンリガーゼに近接させるようにユビキチンリガーゼに結合し、
前記内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される、
方法。
【請求項６２】
前記細胞がヒト細胞である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ヒト細胞が肝細胞である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、非内因性タンパク質由来のアミノ酸配列を含む、請求項６１から６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３〜６３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＥＧＦＲ由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５３のアミノ酸配列である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５４のアミノ酸配列である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５５のアミノ酸配列である、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５６のアミノ酸配列である、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＣＲ−ＡＢＬ由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５７のアミノ酸配列である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５８のアミノ酸配列である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＡＬＫ由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号５９のアミノ酸配列である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＪＡＫ２由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６０のアミノ酸配列である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＢＲＡＦ由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６１のアミノ酸配列である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、Ｓｒｃ由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６２のアミノ酸配列である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、配列番号６３のアミノ酸配列である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＬＫＫＲ２由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＰＤＧＦＲα由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、ＲＥＴ由来のアミノ酸配列である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質をコードする前記核酸配列が、機能獲得型変異、増幅または発現増加、単遺伝性疾患、プロテオパシーまたはこれらの組み合わせの結果である疾患に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームで挿入される、請求項６１から８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする核酸配列をさらに含む、請求項３１から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼが、Ｃａｓ１、ＣａｓＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆ１、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｐｆ１から選択される、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記核酸が配列番号５２のアミノ酸配列で構成されるＣａｓ９エンドヌクレアーゼをコードする、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質が、前記内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない、請求項６１から８９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年２月８日に出願された米国仮特許出願第６２／４５６，６５４号、および２０１７年２月９日に出願された米国特許仮出願第６２／４５７，１２７号の利益を主張する。これらの出願全体が、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
参照による援用
【０００２】
２０１８年１月２６日に作成された、サイズが２８７キロバイトの「１６０１０−０２５ＷＯ１＿ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称のテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み組み込まれる。
【０００３】
本発明は、標的化タンパク質分解を使用して内因性発現タンパク質を調節するための方法、化合物および組成物を記載する。
【背景技術】
【０００４】
目的の遺伝子またはタンパク質の機能を調べるために遺伝子発現を操作する多くのツールが開発されてきた。例えば、ＲＮＡ干渉およびアンチセンスデオキシオリゴヌクレオチドなどの技術は、ＲＮＡおよびＤＮＡレベルでタンパク質発現を破壊するために一般的に使用されている。相同組換えまたは機能喪失型変異は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）またはクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ  ｓｈｏｒｔ  ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ  ｒｅｐｅａｔ）（ＣＲＩＳＰＲ）−Ｃａｓ９を用いた部位特異的二本鎖切断を用いて達成することができる（Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｋ．およびＡｌｐｅｒ，Ｈ．Ｓ．、「Ｔｈｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ｅｄｉｔｉｎｇ  ｔｏｏｌｂｏｘ：ａ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｏｆ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｆｏｒ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ」  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３０Ｃ、（２０１４）：８７〜９４；およびＧｒａｈａｍら、Ｇｅｎ  Ｂｉｏｌ、（２０１５）：１６：２６０）。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムは、特定の突然変異を目的の遺伝子に組み込むことによって内因性遺伝子発現を調節するために使用されてきた（例えば、Ｌｏら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２０１３年；１９５（２）：３３１〜３４８；Ｙｕら、Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ、２０１４年；３：２７１〜２８０；Ｐａｒｋら、ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ、２０１３年；９（４）：ｅ９５１０１；Ｌａｃｋｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２０１５年；１７（６）：１〜７；米国特許第８７７１９４５号明細書および同第９２２８２０８号明細書；国際公開第２０１４／２０４７２９号パンフレット；および米国特許出願公開第２０１４／０２７３２３５号明細書参照）。
【０００５】
例えば、ヒト肝細胞を有するキメラ肝臓ヒト化マウスでヒトＰＣＳＫ９遺伝子を突然変異させるために、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムが使用された（Ｗａｎｇ，Ｘ．ら「ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ．」  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，ａｎｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、（２０１６））。ＰＣＳＫ９は首尾よく突然変異され、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムはインビボでヒト障害を治療する方法として有用であると提案されてきた。しかしながら、永久的なゲノム改変の長期的な影響は知られておらず、ゲノム編集の不完全な精度、ウイルス送達されたＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９の継続的な活性、および生物学的代償機序が存在し得る成人における直接修正の影響に対する懸念が存在する（Ｋｏｒｍａｎｎら、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｆｔｅｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｍＲＮＡ  ｉｎ  ｍｉｃｅ」Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２９、（２０１１）：１５４〜１５７；Ｃｈｏら、「Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ  ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ｎｉｃｋａｓｅｓ．」Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．、２４、（２０１４）：１３２〜１４１）。さらに、たとえ不完全であっても、発現されたタンパク質が細胞機能に必須である場合、ＣＲＩＳＰＲノックアウト戦略は望ましくない場合がある。
【０００６】
誘導性分解システムを用いてインビトロで遺伝子発現を調節する努力がなされてきた。例えば、植物におけるオーキシン誘導性分解（ＡＩＤ）システムは、酵母および培養脊椎動物細胞での制御されたタンパク質枯渇を可能にした。このシステムは、植物ホルモンオーキシンに応答して植物成長および形態形成の多様な側面を調節する植物特異的Ｆボックスタンパク質、ＴＩＲ１の発現に依存している。ＴＩＲ１はＳｋｐ１−Ｃｕｌｌｉｎ−Ｆ−ｂｏｘ  Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の基質認識成分であり、オーキシンの存在下でのみ基質を認識し、これらをプロテアソームによる分解の標的とする。このシステムが操作され、線虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓ）ならびにヒトＨＣＴ１１６細胞において条件付きオーキシン依存性タンパク質枯渇を可能にすることが示されている（例えば、Ｚｈａｎｇら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２０１５；１４２：４３７４〜４３８４およびＮａｔｓｕｍｅら、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０１６；１５：２１０〜２１８参照）。しかしながら、このアプローチはオーキシンの毒性のためにインビボ調節システムとしては実用的ではない。
【０００７】
遺伝子発現を可逆的に制御するための代替的アプローチは、リガンド依存性不安定化ドメインおよびＳｈｉｅｌｄ−１リガンドの使用であり、これは目的のタグ付きタンパク質の可逆的安定化および不安定化を用量依存的に可能にする（例えば、Ｒａｋｈｉｔら、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１４；２１：１２３８〜１２５２参照）。不安定化ドメインを目的の遺伝子に融合させると、プロテアソームによって分解される融合タンパク質の発現がもたらされる。Ｓｈｉｅｌｄ−１は、不安定化ドメインに特異的に結合し、タンパク質分解を不活性化する。しかしながら、このシステムはまた、分解を回避するために細胞質中にＳｉｅｌｄ−１が存在することが要求されるため、インビボ調節戦略としては実行可能ではない。このようなアプローチは、タンパク質安定性を維持するためにＳｈｉｅｌｄ−１の一定投与を必要とするであろう。
【０００８】
したがって、プロテオパシー（ｐｒｏｔｅｏｐａｔｈｙ）などの障害に罹患している対象において改善された治療様式を提供しながら、インビボでの内因性遺伝子発現の可逆的制御を可能にする改善されたシステムに対する未だ対処されていないニーズがある。
【０００９】
したがって、ＣＲＩＳＰＲ内因性タンパク質のノックアウトまたはノックイン戦略に関連する問題を回避するようにインビボで遺伝子発現を調節するための方法、化合物および組成物を提供することが本発明の目的である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第８７７１９４５号明細書
【特許文献２】米国特許第９２２８２０８号明細書
【特許文献３】国際公開第２０１４／２０４７２９号パンフレット
【特許文献４】米国特許出願公開第２０１４／０２７３２３５号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｃｈｅｎｇ，Ｊ．Ｋ．およびＡｌｐｅｒ，Ｈ．Ｓ．、「Ｔｈｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ｅｄｉｔｉｎｇ  ｔｏｏｌｂｏｘ：ａ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｏｆ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｆｏｒ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ」  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３０Ｃ、（２０１４）：８７〜９４
【非特許文献２】Ｇｒａｈａｍら、Ｇｅｎ  Ｂｉｏｌ、（２０１５）：１６：２６０
【非特許文献３】Ｌｏら、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２０１３年；１９５（２）：３３１〜３４８
【非特許文献４】Ｙｕら、Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｏｐｅｎ、２０１４年；３：２７１〜２８０
【非特許文献５】Ｐａｒｋら、ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ、２０１３年；９（４）：ｅ９５１０１
【非特許文献６】Ｌａｃｋｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、２０１５年；１７（６）：１〜７
【非特許文献７】Ｗａｎｇ，Ｘ．ら「ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ＰＣＳＫ９  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ．」Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，ａｎｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、（２０１６）
【非特許文献８】Ｋｏｒｍａｎｎら、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｆｔｅｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｍＲＮＡ  ｉｎ  ｍｉｃｅ」Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２９、（２０１１）：１５４〜１５７
【非特許文献９】Ｃｈｏら、「Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ＲＮＡ−ｇｕｉｄｅｄ  ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ｎｉｃｋａｓｅｓ．」Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．、２４、（２０１４）：１３２〜１４１
【非特許文献１０】Ｚｈａｎｇら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２０１５；１４２：４３７４〜４３８４
【非特許文献１１】Ｎａｔｓｕｍｅら、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０１６；１５：２１０〜２１８
【非特許文献１２】Ｒａｋｈｉｔら、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１４；２１：１２３８〜１２５２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、ＣＲＩＳＰＲ内因性タンパク質のノックアウトまたはノックイン戦略および単一ヌクレオチドの修正または変更を提供する戦略に関連する問題を回避するようにインビボで遺伝子発現を調節する手段を提供する。本発明は、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質を産生する目的の内因性発現タンパク質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列とインフレームでヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）をコードするヌクレオチドをゲノムに挿入することを含む。これにより、制御された調整可能な様式でヘテロ二官能性化合物を使用して、ｄＴＡＧおよび融合内因性タンパク質の標的化タンパク質分解が可能になる。
【００１３】
ヘテロ二官能性化合物は、本明細書で企図されるように、ユビキチンリガーゼ結合部分を通してユビキチンリガーゼに結合し、また以下により詳細に定義されるようにインビボでそのｄＴＡＧ標的化リガンドを通してｄＴＡＧに結合する化合物である。ヘテロ二官能性化合物は、Ｅ３ユビキチンリガーゼへの動員およびその後のユビキチン化を介して、融合内因性タンパク質のプロテアソーム媒介分解を誘導することができる。これらの薬物様分子は、タンパク質レベルに対する可逆的で、用量反応性で、調整可能な、一時的制御の可能性を提供する。
【００１４】
不可逆的変化を目的の遺伝子に組み込むＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９ゲノム編集と比較して、ｄＴＡＧと内因性発現タンパク質を標的化するためのヘテロ二官能性化合物の使用は、目的の内因性発現タンパク質の可逆的制御を可能にする。したがって、ヘテロ二官能性化合物をタンパク質発現のレオスタットとして使用して、ヘテロ二官能性化合物の滴定時に内因性タンパク質発現をオンおよびオフにする能力を与えることができる。さらに、内因性タンパク質の遺伝子に対して５’または３’でインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸配列をゲノム的かつ安定的に組み込むことによって、遺伝子を恒久的に編集することに関連する負の下流結果などのＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９に関連する副作用を回避することができる。
【００１５】
本発明は、ゲノム工学を分解の小分子活性化／調節と組み合わせることによって、疾患を媒介する内因性タンパク質の分解を制御するための機序を提供する。本明細書に記載される方法および組成物は、タンパク質が関与し得る機能の獲得、毒性蓄積、過剰発現、または下流酵素過程による疾患に関連する内因性タンパク質を標的化するのに特に有用である。この技術の用途には、それだけに限らないが、１）病理学が１つまたは複数の機能獲得型変異の結果である場合のタンパク質の標的化分解、２）病理学が増幅または発現増加の関数である場合のタンパク質の標的化分解、３）単遺伝性疾患の徴候であるタンパク質の標的化分解、４）遺伝的素因が長期間にわたって、またしばしば代替的生物学的代償機序がもはや十分ではなくなった後で現れる場合、例えば、それだけに限らないが、例えば、高コレステロール血症およびタンパク質症のタンパク質の標的化分解が含まれる。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって、一実施形態では、少なくとも
（ｉ）対象、典型的にはヒトの関連細胞を、ｄＴＡＧをコードする核酸配列で形質転換し、核酸配列が、疾患のメディエータとして作用している内因性タンパク質の核酸配列とゲノム的にインフレームで組み込まれ、ｄＴＡＧをコードする核酸のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドまたは融合タンパク質がもたらされる、ステップと；
（ｉｉ）必要に応じて、ａ）挿入されたｄＴＡＧおよびｂ）ユビキチンリガーゼに結合するヘテロ二官能性化合物を、ｄＴＡＧ（したがって内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質）をユビキチンリガーゼに近接させるように、対象に投与して、結果として内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解されるステップと
を含む方法が提供される。
【００１７】
一実施形態では、対象の細胞がインビボで形質転換される。一実施形態では、対象の細胞がエキソビボで形質転換され、対象に戻し投与される。一実施形態では、対象の細胞が肝細胞である。
【００１８】
一実施形態では、
必要に応じて、二官能性化合物を対象に投与し、対象がｄＴＡＧをコードする核酸配列で形質転換された１つまたは複数の細胞を有し、核酸配列が、疾患のメディエータとして作用している内因性タンパク質の核酸配列と５’または３’配向でゲノム的にインフレームで組み込まれ、ｄＴＡＧをコードする核酸のゲノム配列への挿入によって、タンパク質の発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドまたは融合タンパク質がもたらされ；ヘテロ二官能性化合物が、ａ）挿入されたｄＴＡＧおよびｂ）ユビキチンリガーゼに、ｄＴＡＧ（したがって内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質）をユビキチンリガーゼに近接させるように結合し、結果として内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解されるステップ
を含む方法が提供される。
【００１９】
本明細書で企図されるように、目的のタンパク質をコードする核酸に対して５’または３’でインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸の標的化挿入を通して、目的のｄＴＡＧハイブリッドの内因性タンパク質をコードする合成遺伝子がインビボで誘導される。これは、ｄＴＡＧに結合することができるヘテロ二官能性化合物での処理時にプロテアソーム媒介分解を受けやすいインフレーム遺伝子融合をもたらす。主な実施形態では、ｄＴＡＧが、内因性発現タンパク質の機能を実質的に妨害しない。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ヘテロ二官能性化合物の選択性を可能にし、ヘテロ二官能性化合物の投与時のオフターゲット効果を最小化する非内因性ペプチドである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、例えば「バンプ（ｂｕｍｐ）」戦略（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、「Ｒｅｄｅｓｉｇｎｉｎｇ  ａｎ  ＦＫＢＰ−ｌｉｇａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｔｏ  ｇｅｎｅｒａｔｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｉｍｅｒｉｚｅｒｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｖｅｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ」、ＰＮＡＳ  ９５（１９９８）：１０４３７〜１０４４２参照）を通して改変された内因性タンパク質に由来するアミノ酸配列であり、結果としてヘテロ二官能性化合物が、ｄＴＡＧの改変アミノ酸配列にのみまたはこれに優先的に結合し、対応する内因性発現タンパク質には結合しない。
【００２０】
目的のタンパク質をコードするゲノム配列に対して５’または３’でインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸配列の標的化挿入を通した内因性タンパク質のインビトロ対立遺伝子特異的制御の方法であって、ｄＴＡＧをコードする核酸のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドまたは融合タンパク質がもたらされ、内因性タンパク質−ｄＴＡＧが、ａ）挿入されたｄＴＡＧおよびｂ）ユビキチンリガーゼに結合するヘテロ二官能性化合物によって、ｄＴＡＧ（したがって内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質）をユビキチンリガーゼに近接させるように分解され得、結果として内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解される方法も本明細書で企図される。本明細書に記載される方法を使用して、目的の内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸を挿入することによって、得られるタンパク質の発現を、ｄＴＡＧに結合することができるヘテロ二官能性化合物の導入を通して厳密に制御して、内因性タンパク質の分解をもたらすことができる。重要なことに、ヘテロ二官能性化合物を使用することによって、内因性タンパク質の発現を可逆的に制御することができ、細胞に対するタンパク質発現の効果の試験が可能になる。
【００２１】
したがって、この様式で内因性タンパク質の発現を調節することによって、タンパク質発現を調節することの下流の効果を、多種多様なタンパク質および細胞型にわたって、ならびに種々の生理学的条件において試験することができる。細胞内のヘテロ二官能性化合物濃度を滴定することができるので、細胞内のタンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質濃度を微調整することができ、細胞内のタンパク質存在量の条件付き変更および要求に応じて細胞内の表現型を変更する能力が可能になる。一実施形態では、細胞内のタンパク質発現減衰を評価する方法であって、目的のタンパク質をコードするゲノム配列に対して５’または３’でインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸配列を挿入し、ｄＴＡＧをコードする核酸のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドまたは融合タンパク質がもたらされ、内因性タンパク質−ｄＴＡＧが、ａ）挿入されたｄＴＡＧおよびｂ）ユビキチンリガーゼに結合するヘテロ二官能性化合物によって、ｄＴＡＧ（したがって内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質）をユビキチンリガーゼに近接させるように分解され得、結果として内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解されるステップを含む方法が本明細書で提供される。一実施形態では、ヘテロ二官能性化合物が、細胞内のタンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質の濃度が部分的に低下するように、細胞に投与される。一実施形態では、ヘテロ二官能性化合物が、細胞内の内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質の濃度が完全に低下するように、細胞に投与される。
【００２２】
一実施形態では、疾患または障害に関連するタンパク質標的を特定する方法であって、目的のタンパク質をコードするゲノム配列に対して５’または３’でインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸配列を挿入し、ｄＴＡＧをコードする核酸のゲノム配列への挿入によって、発現時に内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドまたは融合タンパク質がもたらされ、内因性タンパク質−ｄＴＡＧが、ａ）挿入されたｄＴＡＧおよびｂ）ユビキチンリガーゼに結合するヘテロ二官能性化合物によって、ｄＴＡＧ（したがって内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質）をユビキチンリガーゼに近接させるように分解され得、結果として内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がユビキチン化され、次いで、プロテアソームによって分解されるステップと、細胞の障害または疾患状態に対するタンパク質分解の効果を測定するステップとを含む方法が本明細書で提供される。本明細に記載される方法を使用して、目的の内因性タンパク質をコードする遺伝子とインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸を挿入することによって、種々のタンパク質の下方制御を調べ、特定の疾患状態に関連する障害を治療するための潜在的標的を特定することができる。さらに、本方法を利用して、疾患状態に関連しているとして標的化される可能性のあるタンパク質を検証することができる。
【００２３】
特定の実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、内因性プロテインキナーゼに由来するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、内因性プロテインキナーゼアミノ酸配列が、キナーゼを不活性にする突然変異を含む。一実施形態では、プロテインキナーゼの突然変異が、保存されたキナーゼ触媒三つ組アミノ酸配列内で起こる。一実施形態では、保存キナーゼ触媒三つ組アミノ酸配列がＴＶＳである。一実施形態では、保存キナーゼ触媒三つ組アミノ酸配列がＨＲＤである。一実施形態では、保存キナーゼ触媒三つ組アミノ酸配列がＤＦＧである。一実施形態では、保存キナーゼ触媒三つ組アミノ酸配列がＴＲＤである。参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｏｒｎｅｖら、「Ｓｕｒｆａｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ａｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｉｎａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ａ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ」、ＰＮＡＳ  ２００６；１０３（４７）：１７７８３〜１７７８８を参照されたい。一実施形態では、触媒三つ組アミノ酸の少なくとも１つがアラニンに置換されている。一実施形態では、触媒三つ組アミノ酸の少なくとも１つがグリシンに置換されている。一実施形態では、ヘテロ二官能性化合物が、変異プロテインキナーゼ配列に選択的に結合することができる対立遺伝子特異的リガンドを含む。一実施形態では、変異キナーゼが、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｓｋｏｓｋｉら、「Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｕｐｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｄｒｕｇ−ｅｎｚｙｍｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ」、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｐｈｒｓ．２０１５．１０．０２１および／または参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｓｋｏｓｋｉら、「Ａ  ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１５）、ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｐｈｒｓ．２０１５．０７．１０に記載される通りである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アナログ感受性キナーゼであるキナーゼに由来する。一実施形態では、変異キナーゼが、参照により本明細書に組み込まれる、Ｚｈａｎｇら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｇｕｉｄｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｄｅｓｉｇｎ  ｅｘｐａｎｄｓ  ｔｈｅ  ｓｃｏｐｅ  ｏｆ  ａｎａｌｏｇ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２０１３：８（９）；１９３１〜１９３８に記載される通りである。代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、それだけに限らないが、ＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２、ＢＲＡＦ、ＬＲＲＫ２、ＰＤＧＦＲαおよびＲＥＴから選択されるタンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、タンパク質が１つまたは複数の突然変異を含む。��実施形態では、１つまたは複数の突然変異がタンパク質を不活性にする。
【００２４】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、それだけに限らないが、Ｓｒｃ、Ｓｒｃ、Ｐｋｄ１、Ｋｉｔ、Ｊａｋ２、Ａｂｌ、Ｍｅｋ１、ＨＩＶインテグラーゼおよびＨＩＶ逆転写酵素から選択されるタンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。
【００２５】
特定の実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、それだけには限定されないが、ＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）、ブロモドメイン含有タンパク質４（ＢＲＤ４）、ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＲＥＢＢＰ）または転写活性化因子ＢＲＧ１（ＳＭＡＲＣＡ４）などの内因性発現タンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、例えばホルモン受容体、例えばエストロゲン受容体タンパク質、アンドロゲン受容体タンパク質、レチノイドｘ受容体（ＲＸＲ）タンパク質または細菌ＤＨＦＲを含むジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）を含み得る。他の実施形態では、ｄＴＡＧが、例えば、細菌デハロゲナーゼ由来のアミノ酸配列を含み得る。他の実施形態では、ｄＴＡＧが、７，８−ジヒドロ−８−オキソグアニントリホスファターゼ、ＡＦＡＤ、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質、アポリポタンパク質、ＡＳＨ１Ｌ、ＡＴＡＤ２、バキュロウイルスＩＡＰ反復含有タンパク質２、ＢＡＺ１Ａ、ＢＡＺ１Ｂ、ＢＡＺ２Ａ、ＢＡＺ２Ｂ、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、ＢＲＤ１、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤ５、ＢＲＤ６、ＢＲＤ７、ＢＲＤ８、ＢＲＤ９、ＢＲＤ１０、ＢＲＤＴ、ＢＲＰＦ１、ＢＲＰＦ３、ＢＲＷＤ３、ＣＤ２０９、ＣＥＣＲ２、ＣＲＥＢＢＰ、Ｅ３リガーゼＸＩＡＰ、ＥＰ３００、ＦＡＬＺ、脂肪細胞由来脂肪酸結合タンパク質４（ＦＡＢＰ４）、ＧＣＮ５Ｌ２、ＧＴＰａｓｅ  ｋ−ＲＡＳ、ＨＤＡＣ６、造血プロスタグランジンＤシンターゼ、ＫＩＡＡ１２４０、ラクトグルタチオンリアーゼ、ＬＯＣ９３３４９、Ｍｃｌ−１、ＭＬＬ、ＰＡ２ＧＡ、ＰＢ１、ＰＣＡＦ、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼＮＩＭＡ相互作用１、ＰＨＩＰ、ポリ−ＡＤＰ−リボースポリメラーゼ１４、ポリ−ＡＤＰ−リボースポリメラーゼ１５、ＰＲＫＣＢＰ１、プロサポシン、プロスタグランジンＥシンターゼ、杆体ロドプシン感受性ｃＧＭＰ３’，’５−環状ホスホジエステラーゼサブユニットδ、Ｓ１００−Ａ７、ＳＭＡＲＣＡ２、ＳＭＡＲＣＡ４、ＳＰ１００、ＳＰ１１０、ＳＰ１４０、Ｓｒｃ、Ｓｕｍｏ−コンジュゲート酵素ＵＢＣ９、スーパーオキシドジスムターゼ、ＴＡＦ１、ＴＡＦ１Ｌ、タンキラーゼ１、タンキラーゼ２、ＴＩＦ１ａ、ＴＲＩＭ２８、ＴＲＩＭ３３、ＴＲＩＭ６６、ＷＤＲ９、ＺＭＹＮＤ１１またはＭＬＬ４に由来するアミノ酸配列を含み得る。なおさらなる実施形態では、ｄＴＡＧが、例えば、ＭＤＭ２由来のアミノ酸配列を含み得る。
【００２６】
特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４またはＢＲＤＴに由来する。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変または変異ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４またはＢＲＤＴタンパク質である。一定の実施形態では、ＢＲＤ２の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸９７位のトリプトファン（Ｗ）の突然変異、アミノ酸１０３位のバリン（Ｖ）の突然変異、アミノ酸１１０位のロイシン（Ｌ）の突然変異、アミノ酸３７０位のＷの突然変異、アミノ酸３７６位のＶの突然変異、またはアミノ酸３８１位のＬの突然変異を含む。
【００２７】
一定の実施形態では、ＢＲＤ３の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸５７位のＷの突然変異、アミノ酸６３位のＶの突然変異、アミノ酸７０位のＬの突然変異、アミノ酸３３２位のＷの突然変異、アミノ酸３３８位のＶの突然変異、またはアミノ酸３４５位のＬの突然変異を含む。一定の実施形態では、ＢＲＤ４の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸８１位のＷの突然変異、アミノ酸８７位のＶの突然変異、アミノ酸９４位のＬの突然変異、アミノ酸３７４位のＷの突然変異、アミノ酸３８０位のＶの突然変異、またはアミノ酸３８７位のＬの突然変異を含む。一定の実施形態では、ＢＲＤＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸５０位のＷの突然変異、アミノ酸５６位のＶの突然変異、アミノ酸６３位のＬの突然変異、アミノ酸２９３位のＷの突然変異、アミノ酸２９９位のＶの突然変異、またはアミノ酸３０６位のＬの突然変異を含む。
【００２８】
特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２に由来する。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変または変異サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２である。一定の実施形態では、改変または変異サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２が、ＦＫＢＰ１２リガンドのための拡大された結合ポケットを作り出す１つまたは複数の突然変異を含む。一定の実施形態では、１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸３６位のフェニルアラニン（Ｆ）のバリン（Ｖ）への突然変異（Ｆ３６Ｖ）（本明細書では互換的にＦＫＢＰ＊またはＦＫＢＰ１２＊と呼ぶ）を含む。
【００２９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１〜４４のいずれかのアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号４のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号７のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号８のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号９のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１０のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１４のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１５のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１６のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１７のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１８のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１９のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２０のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２４のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２５のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２６のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２７のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２８のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２９のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３０のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３４のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３５のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３６のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３７のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３８のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３９のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号４０のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号４１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号４２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号４３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号４４のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、そのフラグメントが、ヘテロ二官能性化合物によって結合される必要がある最小アミノ酸配列を指す。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来する。特定の実施形態では、そのフラグメントが、ヘテロ二官能性化合物によって結合される必要がある最小アミノ酸配列を指す。
【００３０】
特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄＦＫＢＰ−１〜ｄＦＫＢＰ−５のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄＦＫＢＰ−６〜ｄＦＫＢＰ−１３のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄＢＥＴ１〜ｄＢＥＴ１８のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄブロモ１〜ｄブロモ３４のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号９のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄハロ１〜ｄハロ２のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。
【００３１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、本明細書に記載される任意のアミノ酸配列またはその断片に由来し、ｄＴＡＧが、本明細書に記載されるｄＴＡＧに結合することができるｄＴＡＧ標的化リガンドを含む対応するヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。一実施形態では、ｄＴＡＧが、図２９、図３０、図３１、図３２および図３３に記載されるヘテロ二官能性化合物、または本明細書に記載される他の任意のヘテロ二官能性化合物によって結合され得るアミノ酸配列である。一実施形態では、ｄＴＡＧが、表Ｔに記載されるｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得るアミノ酸配列である。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄＦＫＢＰ−１〜ｄＦＫＢＰ−５のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄＦＫＢＰ−６〜ｄＦＫＢＰ−１３のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄＢＥＴ１〜ｄＢＥＴ１８のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄブロモ１〜ｄブロモ３４のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号９のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、ｄハロ１〜ｄハロ２のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＣＲＥＢＢＰに由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＣＲＥＢＢＰ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、ＳＭＡＲＣＡ４、ＰＢ１またはＳＭＡＲＣＡ２に由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＳＭＡＲＣＡ４／ＰＢ１／ＳＭＡＲＣＡ２  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、ＴＲＩＭ２４またはＢＲＰＦ１に由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＴＲＩＭ２４／ＢＲＰＦ１  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、グルココルチコイド受容体に由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるグルココルチコイドｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、エストロゲンまたはアンドロゲン受容体に由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるエストロゲン／アンドロゲン受容体ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＤＯＴ１Ｌに由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＤＯＴ１Ｌ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＲａｓに由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＲａｓ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＲａｓＧ１２Ｃに由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＲａｓＧ１２Ｃ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＨＥＲ３に由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＨＥＲ３  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＢｃｌ−２またはＢｃｌ−ＸＬに由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＢｃｌ−２／Ｂｃｌ−ＸＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＨＤＡＣに由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＨＤＡＣ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＰＰＡＲに由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＰＰＡＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。特定の実施形態では、ｄＴＡＧがＤＨＦＲに由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｔから選択されるＤＨＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。
【００３２】
一態様では、本発明の合成遺伝子が、遺伝性障害に関与する目的の遺伝子を含む。非限定的な例として、例えばα−１アンチトリプシン（Ａ１ＡＴ）をコードする変異遺伝子を、細胞へのインフレーム挿入でｄＴＡＧの標的とし、内因性Ａ１ＡＴ−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質のｄＴＡＧを標的化するヘテロ二官能性化合物によって分解され得るハイブリッドタンパク質をコードする合成遺伝子を作製することができる。Ａ１ＡＴ−ｄＴＡＧハイブリッドを作製することによって、変異Ａ１ＡＴの機能を、ヘテロ二官能性化合物投与によって調節または調整して、Ａ１ＡＴ過剰発現の効果を減少させながら、細胞がＡ１ＡＴ内因性タンパク質のある機能を維持できるようにすることができる。標的化され得るタンパク質の他の非限定的な例としては、β−カテニン（ＣＴＮＮＢ１）、アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、アポリポタンパク質ａ（アポ（ａ））、第ＶＩＩ因子、第ＸＩ因子、アンチトロンビンＩＩＩ（ＳＥＲＰＩＮＣ１）、ホスファチジルイノシトールグリカンクラスＡ（ＰＩＧ−Ａ）、Ｃ５、α−１アンチトリプシン（ＳＥＲＰＩＮＡ１）、ヘプシジン調節（ＴＭＰＲＳＳ６）、（δ−アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ−１）、アシルＣａＡ：ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−３４ａ、プレカリクレイン（ＫＬＫＢ１）、結合組織成長因子（ＣＣＮ２）、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）、グルココルチコイド受容体（ＧＣＣＲ）、プロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰ−１Ｂ）、ｃ−Ｒａｆキナーゼ（ＲＡＦ１）、線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）、血管接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）、最晩期抗原−４（ＶＬＡ−４）、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）、成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）、筋強直性ジストロフィープロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）、細胞核酸結合タンパク質（ＣＮＢＰまたはＺＮＦ９）、クラステリン（ＣＬＵ）、真核生物翻訳開始因子４Ｅ（ｅＩＦ−４ｅ）、ＭＤＭ２、ＭＤＭ４、熱ショックタンパク質２７（ＨＳＰ２７）、シグナル伝達兼転写活性化因子３タンパク質（ＳＴＡＴ３）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、キネシン紡錘体タンパク質（ＫＩＦ１１）、Ｂ型肝炎ゲノム、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、Ａｔｏｎａｌホモログ１（ＡＴＯＨ１）、血管内皮増殖因子受容体１（ＦＬＴ１）、網膜分離症１（ＲＳ１）、網膜色素上皮特異的６５ｋＤａタンパク質（ＲＰＥ６５）、Ｒａｂエスコートタンパク質１（ＣＨＭ）、およびナトリウムチャネル、電位開口型、Ｘ型、αサブユニット（ＰＮ３またはＳＣＮ１０Ａ）が挙げられる。遺伝性障害には、それだけに限らないが、ホモ接合性家族性高コレステロール血症、ＡＧＳ１−ＡＧＳ７、ＰＲＡＡＳ／ＣＡＮＤＬＥ、ＳＡＶＩ、ＩＳＧ１５  ｄｅｆ．、ＳＰＥＮＣＤＩ、血球貪食性リンパ組織球症、ＮＬＲＣ４−ＭＡＳ、ＣＡＭＰＳ、ＤＡＤＡ２、ＰＬＡＩＤ、チロシン血症Ｉ型、ＢＳＥＰ欠乏症、ＭＲＤ３遺伝子欠損、糖原病ＩＶ型、Ｉ型、クリグラー・ナジャー症候群、オルニチントランスカルバミラーゼ欠乏症、原発性高シュウ酸尿症、ウィルソン病、嚢胞性線維症、ＦＩＣ１欠乏症、シトルリン血症、シスチン症、プロピオン酸血症（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃａｄｅｍｉａ）、ＡＤＡ−ＳＣＩＤ、Ｘ連鎖型ＳＣＩＤ、リポタンパク質リパーゼ欠乏症、レーバー先天黒内障、および副腎白質ジストロフィーが含まれる。
【００３３】
本発明の内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドのｄＴＡＧに結合し、ユビキチン化を通して分解を誘導することができるヘテロ二官能性化合物の使用もまた本明細書で企図される。ｄＴＡＧに対するヘテロ二官能性化合物を対象に投与することによって、標的タンパク質の発現の結果として疾患または障害を患っている対象において内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドを調整することができる。本発明に使用するためのヘテロ二官能性化合物は、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドの分解を通して内因性タンパク質の生物学的機能を無効にすることができる小分子アンタゴニストである。これらは、例えばセレブロンＥ３ユビキチンリガーゼ複合体の機能を乗っ取る誘導体化フタルイミドとの化学的コンジュゲーションを介して迅速なリガンド依存性標的タンパク質分解を提供する。このアプローチを使用して、本発明の内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドを、高い特異性および効率で急速に分解することができる。
【００３４】
本発明に使用され得るヘテロ二官能性化合物は、以下により詳細に記載されるように、様々な長さおよび／または官能性のリンカーを通してｄＴＡＧ標的化リガンドに共有結合される小分子Ｅ３リガーゼリガンドを含むものを含む。ヘテロ二官能性化合物は、例えばユビキチン化およびその後のプロテアソーム分解のために内因性ｄＴＡＧハイブリッドにセレブロン（ＣＲＢＮ）含有リガーゼまたはフォン・ヒッペル・リンドウ腫瘍抑制因子（ＶＨＬ）を結合することによって、ｄＴＡＧに結合し、Ｅ３リガーゼを動員することができる。
【００３５】
さらに、本出願の二官能性分子を介したタンパク質分解の化学戦略と遺伝子療法の有効性を組み合わせることによって、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドのユビキチン化およびプロテアソーム分解を迅速にオンおよびオフにすることによって、内因性発現タンパク質の活性、したがって副作用を正確に、一時的に制御することができる。
【００３６】
本発明で有用なヘテロ二官能性化合物の例を以下でさらに例示する。
【００３７】
一態様では、ゲノム核酸配列が、発現すると、ｄＴＡＧがヘテロ二官能性化合物によって結合され得る内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をもたらす、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子をコードする。このような遺伝子改変を有する細胞および動物（特に、非ヒト動物を含む）は、本発明の一部である。
【００３８】
特定の実施形態では、ゲノム核酸配列が、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子をコードし、ｄＴＡＧが配列番号１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧがｄＦＫＢＰ−１〜ｄＦＫＢＰ−５のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ゲノム核酸配列が、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子をコードし、ｄＴＡＧが配列番号２のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧがｄＦＫＢＰ−６〜ｄＦＫＢＰ−１３のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ゲノム核酸配列が、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子をコードし、ｄＴＡＧが配列番号３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧがｄＢＥＴ１〜ｄＢＥＴ１８のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ゲノム核酸配列が、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子をコードし、ｄＴＡＧが配列番号３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧがｄブロモ１〜ｄブロモ３４のいずれかから選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ゲノム核酸配列が、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子をコードし、ｄＴＡＧが配列番号９のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧがｄハロ１およびｄハロ２から選択されるヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。
【００３９】
一態様では、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子によってコードされるアミノ酸であって、ｄＴＡＧが二官能性化合物によって結合され得る内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質であるアミノ酸が提供される。
【００４０】
一態様では、発現すると、ｄＴＡＧがヘテロ二官能性化合物によって結合され得る内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をもたらす、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子をコードするゲノム核酸配列を含む形質転換細胞が本明細書で提供される。
【００４１】
一態様では、発現すると、ｄＴＡＧがヘテロ二官能性化合物によって結合され得る内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をもたらす、ｄＴＡＧをコードする核酸の５’または３’インフレーム挿入を有する目的の内因性遺伝子を含む合成遺伝子を発現する細胞が本明細書で提供される。
【００４２】
特定の態様では、発現すると、ｄＴＡＧがヘテロ二官能性化合物によって結合され得る内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をもたらす、ｄＴＡＧをコードする核酸配列をインフレームでゲノム的に挿入し、ｄＴＡＧに結合することができるヘテロ二官能性化合物を対象に投与し、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドを分解することによって、内因性タンパク質の活性を調節する方法が提供される。
【００４３】
特定の態様では、発現すると、ｄＴＡＧがヘテロ二官能性化合物によって結合され得る内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質をもたらす、ｄＴＡＧをコードする核酸配列をインフレームでゲノム的に挿入し、ｄＴＡＧに結合することができるヘテロ二官能性化合物を投与し、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドを分解することによって、内因性タンパク質の活性が調節され、タンパク質の分解が疾患状態の変化をもたらす、疾患状態に関連する内因性タンパク質を特定する方法が提供される。
【００４４】
一実施形態では、配列番号５２をコードする核酸と、ｄＴＡＧをコードする核酸とを含む形質転換細胞が本明細書で提供される。一実施形態では、配列番号５２をコードする核酸と、配列番号１〜４４から選択されるアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来するｄＴＡＧをコードする核酸とを含む形質転換細胞が本明細書で提供される。
【００４５】
一実施形態では、配列番号５２をコードする第１の核酸と、ｄＴＡＧをコードする第２の核酸とが本明細書で提供される。一実施形態では、配列番号５２をコードする第１の核酸と、配列番号１〜４４から選択されるアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来するｄＴＡＧをコードする第２の核酸とが本明細書で提供される。
【００４６】
本発明の他の態様は、本発明の合成遺伝子をコードするポリヌクレオチド配列、プラスミドおよびベクター、ならびに本発明の合成遺伝子を発現する宿主細胞を含む。
【００４７】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＥＧＦＲ由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＥＧＦＲタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＥＧＦＲの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸８５８位のアルギニン（Ｒ）によるロイシン（Ｌ）の置換、エキソン１９におけるアミノ酸配列ＬＲＥＡの欠失、エキソン１９におけるアミノ酸ＶＡＩＫＥＬの挿入、アミノ酸７１９位のアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）またはセリン（Ｓ）によるグリシン（Ｇ）の置換、アミノ酸８６１位のアラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）またはセリン（Ｓ）によるロイシン（Ｌ）の置換、アミノ酸７６５位のアラニン（Ａ）によるバリン（Ｖ）の置換、アミノ酸７８３位のアラニン（Ａ）によるトレオニン（Ｔ）の置換、アミノ酸７８４位のプロリン（Ｐ）によるセリン（Ｓ）の置換、アミノ酸７９０  Ｍ位のメチオニン（Ｍ）によるトレオニン（Ｔ）の置換、アミノ酸８５４位のアラニン（Ａ）によるトレオニン（Ｔ）の置換、アミノ酸７６１位のチロシン（Ｙ）によるアスパラギン酸（Ｄ）の置換、アミノ酸７４７位のセリン（Ｓ）によるロイシン（Ｌ）の置換、アミノ酸７９７位のセリン（Ｓ）またはグリシン（Ｇ）によるシステイン（Ｃ）の置換を含む。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５３に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５４に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。一実施形態では、配列番号５４が、１６３位にロイシンを有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５５に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。一実施形態では、配列番号５５が、１６３位にロイシンを有する。一実施形態では、配列番号５５が、９５位にトレオニンを有する。一実施形態では、配列番号５５が、１６３位にロイシンおよび９５位にトレオニンを有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５６に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。一実施形態では、配列番号５６が、１６３位にロイシンを有する。一実施形態では、配列番号５６が、９５位にトレオニンを有する。一実施形態では、配列番号５６が、１６３位にロイシンおよび９５位にトレオニンを有する。
【００４８】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＢＣＲ−ＡＢＬ由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＢＣＲ−ＡＢＬタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＢＣＲ−ＡＢＬの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸３１５位にイソロイシン（Ｉ）によるチロシン（Ｔ）の置換を含む。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５７に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５８に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。
【００４９】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＡＬＫ由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＡＬＫタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＡＬＫの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸１１９６位にメチオニンによるロイシン（Ｌ）の置換を含む。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５９に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。
【００５０】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＪＡＫ２由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＪＡＫ２タンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＪＡＫ２の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６１７位のフェニルアラニン（Ｆ）によるバリン（Ｖ）の置換を含む。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６０に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。
【００５１】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＢＲＡＦ由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＢＲＡＦタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＢＲＡＦの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６００位にグルタミン酸（Ｅ）によるバリン（Ｖ）の置換を含む。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６１に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。
【００５２】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、それだけに限らないが、ＥＧＦＲ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＡＬＫ、ＪＡＫ２およびＢＲＡＦから選択されるタンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、タンパク質が１つまたは複数の突然変異を含む。一実施形態では、１つまたは複数の突然変異がタンパク質を不活性にする。
【００５３】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、Ｓｒｃ由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異Ｓｒｃタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、Ｓｒｃの１つまたは複数の突然変異または改変が、アミノ酸３４１位にグリシン（Ｇ）またはアラニン（Ａ）によるトレオニン（Ｔ）の置換を含む。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６２に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６３に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。
【００５４】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＬＫＫＲ２由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＬＫＫＲ２タンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＬＫＫＲ２の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸１４４１にシステイン（Ｃ）によるアルギニン（Ｒ）の置換、アミノ酸２０１９にセリン（Ｓ）によるグリシン（Ｇ）の置換、アミノ酸２０２０にトレオニン（Ｔ）によるイソロイシン（Ｉ）の置換を含む。
【００５５】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＰＤＧＦＲα由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＰＤＧＦＲαタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＰＤＧＦＲαの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６７４にイソロイシン（Ｉ）によるトレオニン（Ｔ）の置換を含む。
【００５６】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＲＥＴ由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＲＥＴタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６９１にセリン（Ｓ）によるグリシン（Ｇ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸７４９にトレオニン（Ｔ）によるアルギニン（Ｒ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸７６２にグルタミン（Ｑ）によるグルタミン酸（Ｅ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸７９１のフェニルアラニン（Ｆ）によるチロシン（Ｙ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸８０４にメチオニン（Ｍ）によるバリン（Ｖ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸９１８にトレオニン（Ｔ）によるメチオニン（Ｍ）の置換を含む。
【００５７】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、それだけに限らないが、Ｋｉｔ、Ｊａｋ３、Ａｂｌ、Ｍｅｋ１、ＨＩＶ逆転写酵素およびＨＩＶインテグラーゼから選択されるタンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。
【００５８】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＬＫＫＲ２由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＬＫＫＲ２タンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＬＫＫＲ２の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸１４４１にシステイン（Ｃ）によるアルギニン（Ｒ）の置換、アミノ酸２０１９にセリン（Ｓ）によるグリシン（Ｇ）の置換、アミノ酸２０２０にトレオニン（Ｔ）によるイソロイシン（Ｉ）の置換を含む。
【００５９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＬＲＲＫ２タンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｑ５Ｓ００７（ＬＲＫＫ２＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１３２８〜１５１１に由来する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１３２８〜１５１１に由来し、アミノ酸１４４１がシステインである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１３２８〜１５１１に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１３２８〜１５１１に由来し、アミノ酸１４４１がシステインであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１８７９〜２１３８に由来する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、アミノ酸２０１９がセリンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、アミノ酸２０２０がトレオニンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ２またはＵ３のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、アミノ酸２０１９がセリンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ２のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ５Ｓ００７のアミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、アミノ酸２０２０がトレオニンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ３のリガンドから選択される。
【００６０】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＰＤＧＦＲα由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＰＤＧＦＲαタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＰＤＧＦＲαの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６７４１にイソロイシン（Ｉ）によるトレオニン（Ｔ）の置換を含む。
【００６１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＰＤＧＦＲαタンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ０９６１９（ＰＤＧＦＲ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０９６１９のアミノ酸６００〜６９２に由来する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０９６１９のアミノ酸６００〜６９２に由来し、アミノ酸６６０がアラニンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０９６１９のアミノ酸６００〜６９２に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｖ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０９６１９のアミノ酸６００〜６９２に由来し、アミノ酸６６０がアラニンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｖ１のリガンドから選択される。
【００６２】
代替実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、ＲＥＴ由来のアミノ酸配列である。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＲＥＴタンパク質またはそのフラグメントである。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６９１にセリン（Ｓ）によるグリシン（Ｇ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６９１にトレオニン（Ｔ）によるアルギニン（Ｒ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６９１にグルタミン（Ｑ）によるグルタミン酸（Ｅ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６９１のフェニルアラニン（Ｆ）によるチロシン（Ｙ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６９１にメチオニン（Ｍ）によるバリン（Ｖ）の置換を含む。一定の実施形態では、ＲＥＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸６９１にトレオニン（Ｔ）によるメチオニン（Ｍ）の置換を含む。
【００６３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＰＤＧＦＲαタンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ０７９４９（ＲＥＴ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、アミノ酸９４０がイソロイシンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、アミノ酸９４０がイソロイシンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ２のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ３のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ４のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ５のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ６のリガンドから選択される。
【００６４】
特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５３のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｐ１から選択されるＥＧＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５４のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｐ２から選択されるＥＧＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５５のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｐ３から選択されるＥＧＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５６のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｐから選択されるＥＧＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５７のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｑ１から選択されるＢＣＲ−ＡＢＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５８のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｑ１から選択されるＢＣＲ−ＡＢＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号５９のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｒ１から選択されるＡＬＫ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６０のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｓ１から選択されるＪＡＫ２  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６１のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来し、ｄＴＡＧが、表Ｔ−Ｔ１から選択されるＢＲＡＦ  ｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物によって結合され得る。
【００６５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉｔＰｒｏ−Ｑ５Ｓ００７）のＬＲＲＫ２アミノ酸１３２８〜１５１１に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｑ５Ｓ００７）のＬＲＲＫ２アミノ酸１３２８〜１５１１に由来し、アミノ酸１４４１がシステインであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｑ５Ｓ００７）のＬＲＲＫ２アミノ酸１８７９〜２１３８に由来する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｑ５Ｓ００７）のＬＲＲＫ２アミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、アミノ酸２０１９がセリンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｑ５Ｓ００７）のアミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、アミノ酸２０２０がトレオニンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｑ５Ｓ００７）のＬＲＲＫ２アミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ２またはＵ３のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｑ５Ｓ００７）のＬＲＲＫ２アミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、アミノ酸２０１９がセリンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ２のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｑ５Ｓ００７）のＬＲＲＫ２アミノ酸１８７９〜２１３８に由来し、アミノ酸２０２０がトレオニンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｕ３のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｐ０９６１９）のＰＤＧＦＲアミノ酸６００〜６９２に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｖ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、（ＵｎｉＰｒｏｔ−Ｐ０９６１９）のＰＤＧＦＲアミノ酸６００〜６９２に由来し、アミノ酸６７４がイソロイシンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｖ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＲＥＴアミノ酸７２４〜１０１６（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０７９４９）に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ１〜Ｗ６のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＲＥＴアミノ酸７２４〜１０１６（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０７９４９）に由来し、アミノ酸６９１がセリンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＲＥＴアミノ酸７２４〜１０１６（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０７９４９）に由来し、アミノ酸７４９がトレオニンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ２のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＲＥＴアミノ酸７２４〜１０１６（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０７９４９）に由来し、アミノ酸７６２がグルタミンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ３のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＲＥＴアミノ酸７２４〜１０１６（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０７９４９）に由来し、アミノ酸７９１がフェニルアラニンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ４のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＲＥＴアミノ酸７２４〜１０１６（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０７９４９）に由来し、アミノ酸８０４がメチオニンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ５のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＲＥＴアミノ酸７２４〜１０１６（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０７９４９）に由来し、アミノ酸９１８がトレオニンであり、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−Ｗ６のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＪＡＫ２に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−ＪＪＪ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ａｂｌに由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−ＫＫＫ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＭＥＫ１に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−ＬＬＬ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＫＩＴに由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−ＭＭＭ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＨＩＶ逆転写酵素に由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−ＮＮＮ１のリガンドから選択される。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＨＩＶインテグラーゼに由来し、ヘテロ二官能性化合物のｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｔ−ＯＯＯ１のリガンドから選択される。
【００６６】
特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、Ｋｉｔ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、Ｓｒｃ、Ｌｙｎ、Ｈｃｋ、ＲＥＴ、ｃ−Ｍｅｔ、ＴｒｋＢ、Ｆｌｔ３、Ａｘｌ、Ｔｉｅ２、ＡＬＫ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩｎｓＲ、ＲＯＳ１、ＭＳＴ１Ｒ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｌｃｋ、Ｙｅｓ、Ｆｙｎ、ＨＥＲ２−乳がん、ＰＮＥＴ、ＲＣＣ、ＲＡＭＬ、ＳＥＧＡ、ＢＴＫ、ＦＧＦＲ１／２／３／４、ＤＤＲ１、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＣＤＫ４、ＣＤＫ６、Ｆｍｓ、Ｉｔｋ、Ｔ３１５Ｉ、Ｅｐｈ２Ａ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３  ＣＤＫ８、ＣＳＦ−１Ｒ、ＦＫＢＰ１２／ｍＴＯＲ、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、Ｂｒｋ、ＥｐｈＲ、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆから選択されるタンパク質に由来し、ヘテロ二官能性化合物が、表Ｚから選択されるｄＴＡＧ標的化リガンドを含む。
【００６７】
上記のアミノ酸配列またはそのフラグメントに結合することができるヘテロ二官能性化合物は、表Ｔに記載されるｄＴＡＧ標的化リガンドを使用して生成することができる。一実施形態では、上記のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来するｄＴＡＧをコードする核酸配列を、目的の内因性タンパク質をコードする遺伝子にゲノム的に挿入し、これが発現すると、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がもたらされ、表Ｔに記載されるｄＴＡＧ標的化リガンドを含むヘテロ二官能性化合物を対象に投与することによって分解される。一実施形態では、上記のアミノ酸配列またはそのフラグメントに由来するｄＴＡＧをコードする核酸配列が、目的の内因性タンパク質をコードする遺伝子にゲノム的に挿入され、これが発現すると、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質がもたらされ、ｄＴＡＧに結合することができる対応するヘテロ二官能性化合物、例えば図２９、図３０、図３１、図３２および図３３に記載されるヘテロ二官能性化合物、または本明細書に記載される他の任意のヘテロ二官能性化合物を対象に投与することによって分解される。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】ｄＴＡＧ融合タンパク質の選択的分解のための「バンプ−ホール」アプローチを表す概略図である。例えば、ｄＴＡＧ融合体は、アミノ酸突然変異（Ｆ３６Ｖ）を介して「ホール」を形成する空洞で操作されたＦＫ５０６およびラパマイシン結合タンパク質ＦＫＢＰ１２のバージョンであり得る。次いで、この変異ＦＫＢＰ１２（「バンプされた」ＦＫＢＰ、別名ＦＫＢＰ＊またはＦＫＢＰ１２＊（配列番号２））を、ＦＫＢＰ１２結合ドメイン中の合成「バンプ」、リンカーおよびセレブロン標的化ドメインを有するヘテロ二官能性化合物によって選択的に標的化することができる。このヘテロ二官能性化合物は、天然ＦＫＢＰ１２を標的としないので、ヒト細胞に天然に存在するタグの野生型変異体に対する選択性を提供する。
【図２】ｄＴＡＧをコードする核酸配列の、ＰＣＳＫ９をコードする内因性遺伝子のゲノム遺伝子座へのゲノム組み込みを表す概略図である。相同組換え後、得られた挿入により、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）タンパク質とインフレームのＮ末端ｄＴＡＧを含む発現産物が得られ、よってｄＴＡＧ配列を標的化するヘテロ二官能性化合物によって分解され得るプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）−ｄＴＡＧハイブリッドが得られる。
【図３】ｄＴＡＧをコードする核酸配列の、β−カテニン（ＣＴＮＮＢ１）をコードする内因性遺伝子のゲノム遺伝子座へのゲノム組み込みを表す概略図である。相同組換え後、得られた挿入により、β−カテニン（ＣＴＮＮＢ１）タンパク質とインフレームのＮ末端ｄＴＡＧを含む発現産物が得られ、よってｄＴＡＧ配列を標的化するヘテロ二官能性化合物によって分解され得るβ−カテニン（ＣＴＮＮＢ１）−ｄＴＡＧハイブリッドが得られる。
【図４】本発明に記載されるヘテロ二官能性化合物で処理した細胞の免疫ブロットである。ＨＡタグ付きＦＫＢＰ１２ＷＴまたはＦＫＢＰ＊のいずれかを発現する２９３ＦＴ細胞（ＣＲＢＮ−ＷＴまたはＣＲＢＮ−／−）を、指示される濃度のｄＦＫＢＰ７で４時間処理した。ＦＫＢＰＷＴではなくＦＫＢＰ＊のＣＲＢＮ依存性分解により、変異ＦＫＢＰ＊に対するｄＦＫＢＰ７の選択的活性が確認される。
【図５】図５Ａおよび図５Ｂは、Ｎｌｕｃに融合したＦＫＢＰ＊を発現する細胞におけるｄＦＫＢＰヘテロ二官能性化合物のパネルの活性を測定するグラフである。ＦＫＢＰ＊の分解は、指示濃度のｄＦＫＢＰで４時間処理した野生型（図７Ａ）またはＣＲＢＮ−／−（図７Ｂ）２９３ＦＴ細胞における同じマルチシストロン性（ｍｕｌｔｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ）転写産物からのＮＡＮＯｌｕｃとホタルルシフェラーゼのシグナル比（Ｎｌｕｃ／Ｆｌｕｃ）として測定される。シグナル比の低下は、ＦＫＢＰ＊（Ｎｌｕｃ）分解を示す。
【図６】本発明に記載されるヘテロ二官能性化合物で処理した細胞の免疫ブロットである。ＦＫＢＰ１２ＷＴまたはＦＫＢＰ＊のいずれかを発現する同質遺伝子型２９３ＦＴ細胞（ＣＲＢＮ−ＷＴまたはＣＲＢＮ−／−）を、１００ｎＭのｄＦＫＢＰ７またはｄＦＫＢＰ１３のいずれかで４時間処理した。ＦＫＢＰ１２ＷＴでも内因性ＦＫＢＰ１２でもなくＦＫＢＰ＊のＣＲＢＮ依存性分解により、変異ＦＫＢＰ＊に対するｄＦＫＢＰ７およびｄＦＫＢＰ１３の選択性が確認される。
【図７】本発明に記載されるヘテロ二官能性化合物で処理した細胞の免疫ブロットである。ＨＡタグ付きＦＫＢＰ＊を発現する同質遺伝子的２９３ＦＴ細胞（ＣＲＢＮ−ＷＴまたはＣＲＢＮ−／−）を、指示される用量のｄＦＫＢＰ１３で４時間処理した。これらのデータは、ｄＦＫＢＰ１３によるＨＡタグ付きＦＫＢＰ＊の用量およびＣＲＢＮ依存性の分解を裏付けている。
【図８】本発明に記載されるヘテロ二官能性化合物で処理した細胞の免疫ブロットである。ＨＡタグ付きＦＫＢＰ＊を発現する２９３ＦＴ細胞（ＣＲＢＮ−ＷＴ）を１００ｎＭ  ｄＦＫＢＰ１３で指示される時間処理した。細胞を収穫し、タンパク質溶解物を免疫ブロットして、ｄＦＫＢＰ１３によって誘導されるＨＡタグ付きＦＫＢＰ＊分解の反応速度論を測定した。
【図９】本発明に記載されるヘテロ二官能性化合物で処理した細胞の免疫ブロットである。ＦＫＢＰ＊を発現する２９３ＦＴ細胞（ＣＲＢＮ−ＷＴ）を、ｄＦＫＢＰ１３で４時間処理する２時間前に、１μＭのカルフィルゾミブ（プロテアソーム阻害剤）、０．５μＭのＭＬＮ４９２４（ＮＥＤＤ化阻害剤）および１０μＭのレナリドマイド（ＣＲＢＮ結合リガンド）で前処理した。ｄＦＫＢＰ１３によるＨＡタグ付きＦＫＢＰ＊の分解が、プロテアソーム阻害剤カルフィルゾミブによって救済され、プロテアソーム機能の要件が確立された。ＮＡＥ１阻害剤ＭＬＮ４９２４による前処理は、進行性Ｅ３リガーゼ活性のためにＮＥＤＤ化を必要とするカリンベースのユビキチンリガーゼについて予想されるように、ＣＲＬ活性への依存を確立するＨＡタグ付きＦＫＢＰ＊を救済した。過剰のレナリドマイドによる前処理は、ｄＦＫＢＰ１３依存性ＦＫＢＰ＊分解を廃止し、分解に対するＣＲＢＮ関与の必要性を確認した。
【図１０】図１０Ａおよび図１０Ｂは、本発明に記載されるヘテロ二官能性化合物で処理した細胞の免疫ブロットである。ＨＡタグ付き変異ＦＫＢＰ＊に融合した指示されるタンパク質を発現するＭＶ４；１１白血病細胞の免疫ブロット。細胞を指示濃度のＦＫＢＰ＊選択的ヘテロ二官能性化合物、ｄＦＫＢＰ７またはｄＦＫＢＰ１３で１６時間処理し、融合タンパク質の存在量をウエスタン免疫ブロット分析によって測定した。
【図１１】Ｎ末端またはＣ末端でＦＫＢＰ＊に融合したＫＲＡＳＧ１２Ｖ対立遺伝子を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の免疫ブロットである。細胞を５００ｎＭ  ｄＦＫＢＰ７で指示される時間処理した。細胞を収穫し、免疫ブロットして、ＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ１２Ｖの分解およびＫＲＡＳシグナル伝達の下流代用物（例えば、ｐＭＥＫおよびｐＡＫＴ）を測定した。データは、Ｎ末端ＦＫＢＰ＊融合体が活性であり、ｄＦＫＢＰ７の投与により分解されることを示唆している。
【図１２】１μＭの指示されるｄＦＫＢＰヘテロ二官能性化合物で２４時間処理したＫＲＡＳＧ１２ＶのＮ末端に融合したＦＫＢＰ＊を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の免疫ブロットである。細胞を収穫し、免疫ブロットして、ＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ１２Ｖの分解およびＫＲＡＳシグナル伝達の下流代用物（例えば、ｐＭＥＫおよびｐＡＫＴ）を測定した。データは、ｄＦＫＢＰ９、ｄＦＫＢＰ１２およびｄＦＫＢＰ１３がＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ１２Ｖの強力な分解および下流シグナル伝達の阻害を誘導することを示唆している。
【図１３】指示される濃度のｄＦＫＢＰ１３で２４時間処理したＫＲＡＳＧ１２ＶのＮ末端に融合したＦＫＢＰ＊を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の免疫ブロットである。細胞を収穫し、免疫ブロットして、ＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ１２Ｖの分解およびＫＲＡＳシグナル伝達の下流代用物（例えば、ｐＭＥＫおよびｐＡＫＴ）を測定した。データは、ｄＦＫＢＰ１３がＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ１２Ｖの強力な分解を誘導し、ＩＣ５０＞１００ｎＭで下流シグナル伝達を強力に阻害することを示唆している。
【図１４】１μＭのｄＦＫＢＰ１３で指示された時間処理したＫＲＡＳＧ１２ＶのＮ末端に融合したＦＫＢＰ＊を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の免疫ブロットである。細胞を収穫し、免疫ブロットして、ＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ１２Ｖの分解およびＫＲＡＳシグナル伝達の下流代用物（例えば、ｐＭＥＫおよびｐＡＫＴ）を測定した。データは、ｄＦＫＢＰ１３が、処理後１時間という早さでＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ１２Ｖの強力な分解および下流シグナル伝達の阻害を誘導することを示唆している。
【図１５】ｄＦＫＢＰ１３で４時間処理する２時間前に、１μＭのカルフィルゾミブ（プロテアソーム阻害剤）、０．５μＭのＭＬＮ４９２４（ＮＥＤＤ化阻害剤）および１０μＭのレナリドマイド（ＣＲＢＮ結合リガンド）で前処理したｄＴＡＧ−ＫＲＡＳＧ１２Ｖを発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の免疫ブロットである。
【図１６】１μＭのｄＦＫＢＰ１３で２４時間処理したＷＴまたは変異型のアミノ酸グリシン１２（Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２ＤおよびＧ１２Ｖ）のいずれかのＫＲＡＳ対立遺伝子を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の免疫ブロットである。
【図１７】１μＭのｄＦＫＢＰ１３で２４時間処理したＷＴまたは変異ＫＲＡＳ対立遺伝子（Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１ＬおよびＱ６１Ｒ）のいずれかを発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞の免疫ブロットである。
【図１８】図１８Ａ、図１８Ｂ、図１８Ｃおよび図１８Ｄは、対照ＮＩＨ３Ｔ３細胞またはｄＦＫＢＰ１３のＤＭＳＯで２４時間処理したＫＲＡＳＧ１２ＶのＮ末端に融合したＦＫＢＰ＊を発現するＮＩＨ３Ｔ３の位相差像のパネルである。位相差像は、ＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ  １２ＶのｄＦＫＢＰ１３依存性分解で誘導される形態学的変化を強調している。
【図１９】図１９Ａ、図１９Ｂ、図１９Ｃおよび図１９Ｄは、ＦＫＢＰ＊−ＫＲＡＳＧ１２Ｖを発現するＮＩＨ３Ｔ３のＮＩＨ３Ｔ３対照細胞の増殖に対するｄＦＫＢＰ１３の効果を測定する増殖グラフである。細胞を、７２時間ｄＦＫＢＰの場合には指示される濃度で処理し、細胞数をＡＴＰｌｉｔｅアッセイを用いて測定した。ＡＴＰｌｉｔｅ  １ステップルミネセンス測定法は、ＡＴＰと添加ルシフェラーゼおよびＤ−ルシフェリンの反応によって引き起こされる光の生成に基づいて細胞における細胞増殖および細胞毒性を測定する。シグナルの減少は細胞数の減少を示す。
【図２０】標的化ｄＴＡＧ−ＫＲＡＳＧ１２Ｖ分解を誘導するためにｄＦＫＢＰ７およびｄＦＫＢＰ１３で４８時間処理したｄＴＡＧ−ＫＲＡＳＧ１２Ｖを発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞を示す棒グラフである。固定細胞をヨウ化プロピジウムで染色し、細胞周期分析を行った。
【図２１】図２１Ａ、図２１Ｂ、図２１Ｃ、図２１Ｄ、図２１Ｅ、図２１Ｆ、図２１Ｇ、図２１Ｈおよび図２１Ｉは、本発明に使用するためのデグロン部分（式中、Ｒはリンカーに対する結合点であり、Ｘは本明細書で定義される通りである）の例を提供する。
【図２２】本発明に使用するためのデグロン部分（式中、Ｒはリンカーに対する結合点であり、Ｘは本明細書で定義される通りである）の追加の例を提供する。
【図２３】本発明に使用するためのデグロン部分（式中、Ｒはリンカーに対する結合点であり、Ｘは本明細書で定義される通りである）の追加の例を提供する。
【図２４】本発明に使用するためのリンカー部分の例を提供する。
【図２５】本発明に使用するためのリンカー部分の追加の例を提供する。
【図２６】本発明に使用するためのヘテロ脂肪族リンカー部分の例を提供する。
【図２７】本発明に使用するための芳香族リンカー部分の例を提供する。
【図２８】図２８Ａ、図２８Ｂ、図２８Ｃ、図２８Ｄ、図２８Ｅ、図２８Ｆおよび図２８Ｇは、本発明に使用するためのｄＴＡＧ標的化リガンド（式中、Ｒはリンカーが結合する点である）を提供する。
【図２９】図２９Ａ、図２９Ｂ、図２９Ｃ、図２９Ｄ、図２９Ｅ、図２９Ｆ、図２９Ｇおよび図２９Ｈは、本発明に使用するための具体的なヘテロ二官能性化合物を提供する。
【図３０】図３０Ａ、図３０Ｂ、図３０Ｃ、図３０Ｄ、図３０Ｅ、図３０Ｆ、図３０Ｇ、図３０Ｈ、図３０Ｉ、図３０Ｊ、図３０Ｋ、図３０Ｌ、図３０Ｍ、図３０Ｎ、図３０Ｏおよび図３０Ｐは、本発明に使用するための具体的なヘテロ二官能性化合物（式中、上記構造中のＸはＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩから選択されるハロゲンである）を提供する。
【図３１】図３１Ａ、図３１Ｂ、図３１Ｃ、図３１Ｄ、図３１Ｅ、図３１Ｆ、図３１Ｇ、図３１Ｈ、図３１Ｉおよび図３１Ｊは本発明に使用するための具体的なヘテロ二官能性化合物を提供する。
【図３２】図３２Ａ、図３２Ｂ、図３２Ｃ、図３２Ｄ、図３２Ｅ、図３２Ｆ、図３２Ｇ、図３２Ｈ、図３２Ｉ、図３２Ｊ、図３２Ｋ、図３２Ｌ、図３２Ｍ、図３２Ｎ、図３２Ｏ、図３２Ｐ、図３２Ｑ、図３２Ｒ、図３２Ｓ、図３２Ｔ、図３２Ｕ、図３２Ｖ、図３２Ｗ、図３２Ｘ、図３２Ｙ、図３２Ｚ、図３２ＡＡ、図３２ＢＢ、図３２ＣＣ、図３２ＤＤおよび図３２ＥＥは、ＲＡＲ１およびＲＡＲ２が本明細書に記載されている、本発明に使用するための具体的なヘテロ二官能性化合物を提供する。
【図３３】図３３Ａ、図３３Ｂ、図３３Ｃ、図３３Ｄ、図３３Ｅ、図３３Ｆ、図３３Ｇ、図３３Ｈ、図３３Ｉ、図３３Ｊ、図３３Ｋ、図３３Ｌ、図３３Ｍ、図３３Ｎ、図３３Ｏ、図３３Ｐ、図３３Ｑ、図３３Ｒ、図３３Ｓ、図３３Ｔ、図３３Ｕ、図３３Ｖおよび図３３Ｗは、本発明に使用するためのさらなるヘテロ二官能性化合物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
本明細書に開示される方法の実施、ならびに組成物の調製および使用は、特に明記しない限り、当業者の技能の範囲内であるような分子生物学、生化学、クロマチン構造および分析、計算化学、細胞培養、組換えＤＮＡならびに関連分野の慣用的な技術を使用する。これらの技術は文献に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９８９および第３版、２００１；Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、１９８７および周期的更新；シリーズＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、サンディエゴ；Ｗｏｌｆｆｅ、ＣＨＲＯＭＡＴＩＮ  ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ  ＡＮＤ  ＦＵＮＣＴＩＯＮ、第３版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、サンディエゴ、１９９８；ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ、第３０４巻、「Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ」（Ｐ．Ｍ．ＷａｓｓａｒｍａｎおよびＡ．Ｐ．Ｗｏｌｆｆｅ編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、サンディエゴ、１９９９；およびＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、第１１９巻、「Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（Ｐ．Ｂ．Ｂｅｃｋｅｒ編）  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、１９９９年を参照されたい。
【００７０】
ここでは、タンパク質分解を促進するための高度に選択的で可逆的な方法を提供するために遺伝子とタンパク質両方の破壊を利用する方法を記載する。この方法論は、正確な、一時的な、小分子制御標的検証、ならびに目的のタンパク質分解の細胞効果およびインビボ効果の探索にとって価値がある。
【００７１】
この方法では、相同組換え（ＨＲ）標的化ベクターに存在するｄＴＡＧのための発現カセットを挿入（ノックイン）するために、目的の標的遺伝子の領域を、ガイドＲＮＡおよびＣａｓ９によって標的化する。ＨＲ標的化ベクターは、目的の標的化遺伝子座を囲むゲノムＤＮＡに相同な発現カセットの５’末端および３’末端に相同アームを含む。目的の標的遺伝子とインフレームでｄＴＡＧを融合させることによって、発現時に得られる融合タンパク質が、生体不活性（ｂｉｏｉｎｅｒｔ）小分子ヘテロ二官能性化合物での処理時にプロテアソーム媒介分解を受けやすくなる。
【００７２】
哺乳動物細胞におけるゲノム編集は、ヒト疾患の治療および修正に大きな可能性を提供する。短い一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を使用することによって、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを目的のゲノム位置に向けさせることができ、それによってＤＮＡ二本鎖切断が誘導される。これらの切断は、遺伝子を不活性化する挿入または欠失（インデル）を生成するために活用することができる非相同末端結合によって修復される。インビボゲノム編集は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レンチウイルス、粒子、流体力学的注入もしくは電気穿孔媒介方法、またはこれらの組み合わせによるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９送達によって達成することができ（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｕｍａｒら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１２、（２００１）：１８９３〜１９０５；Ｗｕら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１８、（２０１０）：８０〜８６；Ｒａｎら、Ｎａｔｕｒｅ５２０、（２０１５）：１８６〜１９１；Ｓｗｉｅｃｈら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３３、（２０１５）：１０２〜１０５；Ｚｕｒｉｓら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３３、（２０１５）：７３〜８０；Ｋａｕｆｆｍａｎら、Ｎａｎｏ．Ｌｅｔｔ．１５、（２０１５）：７３００〜７３０６；Ｄｉｎｇら、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．１１５、（２０１４）：４８８〜４９２；Ｍａｒｅｓｃｈら、Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．７、（２０１６）：１０７７０；Ｋｈｏｒｓａｎｄｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１５、（２００８）：２２５〜２３０；Ｙｉｎら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．１５、（２０１４）：５４１〜５５５；Ｙｉｎら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３４、（２０１６）：３２８〜３３３；およびＸｕｅら、Ｎａｔｕｒｅ５１４、（２０１４）：３８０〜３８４参照）、体細胞ゲノム編集が肺、肝臓、脳および膵臓などのマウス器官に適用されている（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｘｕｅら、Ｎａｔｕｒｅ５１４、（２０１４）：３８０〜３８４；Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒｉｖｅｒａら、Ｎａｔｕｒｅ５１６、（２０１４）：４２８〜４３１；Ｐｌａｔｔら、Ｃｅｌｌ１５９、（２０１４）：４４０〜４５５；Ｙｉｎら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２、（２０１４）：５５１〜５５３；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら、Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．６、（２０１５）：７３９１；Ｃｈｉｏｕら、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．２９、（２０１５）：１５７６〜１５８５；およびＭａｚｕｒら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２１、（２０１５）：１１６３〜１１７１参照）。しかしながら、永久的なゲノム改変の長期的な影響は知られておらず、ゲノム編集の不完全な精度および生物学的代償機序が存在し得る成人における直接修正の影響に対する懸念が存在する（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｆｕら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１（９）、（２０１３）：８２２〜８２６、およびＣｈｏら、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．２４、（２０１４）：１３２〜１４１参照）。
【００７３】
ここで本発明者らは、内因性遺伝子座から産生され、リガンド依存性、可逆性、および用量反応性の様式で容易に分解されるノックイン融合タンパク質を産生するためのインビボゲノム工学に基づく広範な治療用途のための戦略を記載する。融合タンパク質は、二価または多価のヘテロ二官能性化合物によって標的化されるｄＴＡＧを含む。ヘテロ二官能性化合物は、ｄＴＡＧに結合し、Ｅ３リガーゼ、例えばセレブロン含有ＣＲＬ４Ａ  Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を動員する能力を有する。この動員は、融合タンパク質のユビキチン化（ｄＴＡＧドメイン上または同族タンパク質上のいずれか）およびその後のＵＰＰを介した分解を誘導する。このアプローチを通して、目的のタンパク質についての新規のリガンドの発見を必要とすることなく、目的のタンパク質を、高い特異性および高い特異性で迅速なユビキチン媒介分解の標的とすることができる。インビボ使用のための小分子とゲノム工学の組み合わせ使用に照らして。
【００７４】
それだけに限らないが、ブロモドメイン、例えばＢＲＤ４の第１のブロモドメイン；ホルモン受容体、例えばＥＲ、ＡＲ、ＲＸＲ；ＦＫＢＰ１２；ＤＨＦＲ、特に細菌ＤＨＦＲ、およびヘテロ二官能性化合物に変換することができるリガンドが結合することができる他の一般的に使用されるタンパク質融合タグを含む種々のｄＴＡＧを使用することができる。場合によっては、プロテインキナーゼのＡＴＰ結合部位を選択的に標的化するために開発されたものに概念的に関連する「バンプ−ホール」戦略を活用するｄＴＡＧを使用することに利点があるだろう。このような場合、ｄＴＡＧ融合体は、アミノ酸突然変異（Ｆ３６Ｖ）を介して「ホール」を形成する空洞で操作されたＦＫ５０６およびラパマイシン結合タンパク質ＦＫＢＰ１２のバージョンである。次いで、この変異ＦＫＢＰ１２（「バンプされた」ＦＫＢＰ、別名ＦＫＢＰ＊（配列番号２））を、ＦＫＢＰ１２結合ドメイン中の合成「バンプ」、リンカーおよびセレブロン標的化ドメイン（例えば、ＩＭＩＤ誘導体）を有するヘテロ二官能性化合物（または同様の分子）によって標的化する。この分子は、天然ＦＫＢＰ１２を標的としないので、ヒト細胞に天然に存在するタグの野生型変異体に対するヘテロ二官能性化合物の選択性を提供する。例示される「バンプ−ホール」戦略を表す例証を図１に提供する。
【００７５】
本明細書に記載される本発明は、ゲノム工学を分解の小分子活性化／調節と組み合わせることによって、疾患に関連する内因性タンパク質の分解を制御するための機序を提供する。この技術の用途には、それだけに限らないが、１）病理学が１つまたは複数の機能獲得型変異の関数である場合のタンパク質の標的化分解、２）病理学が増幅または発現増加の関数である場合のタンパク質の標的化分解、３）単遺伝性疾患の徴候であるタンパク質の標的化分解、４）遺伝的素因が長期間にわたって、またしばしば代替的生物学的代償機序がもはや十分ではなくなった後で現れる場合、例えば、高コレステロール血症、タンパク質症のタンパク質の標的化分解が含まれる。
【００７６】
定義
「核酸」、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、直鎖状または環状の立体構造、および一本鎖または二本鎖のいずれかの形態のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドポリマーを指す。本開示の目的のために、これらの用語はポリマーの長さに関して限定するものとして解釈されるべきではない。この用語は、天然ヌクレオチドの既知の類似体、ならびに塩基、糖および／またはリン酸部分（例えば、ホスホロチオエート骨格）が修飾されているヌクレオチドを包含することができる。一般に、特定のヌクレオチドの類似体は同じ塩基対形成特異性を有する、すなわち、Ａの類似体はＴと塩基対形成するだろう。
【００７７】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換的に使用される。この用語はまた、１個または複数のアミノ酸が対応する天然アミノ酸の化学的類似体または改変誘導体であるアミノ酸ポリマーにも適用される。
【００７８】
「結合」とは、巨大分子間（例えば、タンパク質と核酸間）または巨大分子と小分子間（例えば、タンパク質と薬物間）の配列特異的な非共有結合性相互作用を指す。相互作用が全体として配列特異的である限り、結合相互作用の全ての成分が配列特異的である必要はない（例えば、ＤＮＡ骨格中のリン酸残基との接触）。
【００７９】
「組換え」とは、２つのポリヌクレオチド間の遺伝情報の交換の過程を指す。本開示の目的のために、「相同組換え」（ＨＲ）は、例えば相同指向修復機序を介した細胞内の二本鎖切断の修復中に起こるこのような交換の特殊な形態を指す。この過程は、ヌクレオチド配列相同性を必要とし、「標的」分子（すなわち、二本鎖切断を経験したもの）の鋳型修復に「ドナー」分子を使用し、ドナーから標的への遺伝情報の伝達をもたらす。
【００８０】
本明細書に記載される１つまたは複数の標的化ヌクレアーゼは、所定の部位で標的配列（例えば、細胞クロマチン）内に二本鎖切断を作り出すので、ｄＴＡＧをコードし、切断領域中のヌクレオチド配列との相同性を有する「ドナー」ポリヌクレオチドを細胞に導入することができる。二本鎖切断の存在はドナー配列の組込みを容易にすることが示されている。ドナー配列を物理的に組み込んでもよく、その結果、ドナーにおけるようにヌクレオチド配列の全部または一部が細胞クロマチンに導入される。したがって、細胞クロマチン中の第１の配列を、ドナーポリヌクレオチド中に存在する配列に改変および変換することができる。
【００８１】
細胞クロマチンの目的の領域における配列の標的化組換えおよび／または置換および／または改変のための一定の方法では、ｄＴＡＧをコードする外因性「ドナー」ヌクレオチド配列との相同組換えによって染色体配列を改変する。このような相同組換えは、切断領域に相同な配列が存在する場合、細胞クロマチン中の二本鎖切断の存在によって刺激される。
【００８２】
本明細書に記載される方法のいずれにおいても、外因性ヌクレオチド配列（「ドナー配列」または「導入遺伝子」）は、目的の領域のゲノム配列と相同であるが同一ではない配列を含むことができ、それによって相同組換えを刺激して、同一でない配列、すなわちｄＴＡＧをコードする核酸配列を目的の領域に挿入することができる。したがって、目的の領域の配列と相同なドナー配列の部分は、置き換えられるゲノム配列と約８０〜９９％（またはその間の任意の整数）の配列同一性を示す。他の実施形態では、例えば、１００を超える連続塩基対のドナー配列とゲノム配列との間のようにただ１個のヌクレオチドのみが異なる場合、ドナー配列とゲノム配列との間の相同性が９９％より高い。ドナー配列の非相同部分は、目的の領域に存在しない核酸配列、例えばｄＴＡＧをコードする配列を含み、結果として新しい配列が目的の領域に導入される。これらの例では、非相同配列に、一般に、５０〜１，０００塩基対（もしくはそれらの間の任意の整数値）、または目的の領域の配列と相同もしくは同一の１，０００超の任意の数の塩基対の配列が隣接する。他の実施形態では、ドナー配列が、第１の配列と非相同であり、非相同組換え機序によってゲノムに挿入される。
【００８３】
「切断」とは、ＤＮＡ分子の共有結合骨格の破壊を指す。切断は、それだけに限らないが、ホスホジエステル結合の酵素的または化学的加水分解を含む種々の方法によって開始され得る。一本鎖切断と二本鎖切断の両方が可能であり、二本鎖切断は、２つの異なる一本鎖切断事象の結果として起こり得る。ＤＮＡ切断は平滑末端または付着末端のいずれかの生成をもたらし得る。一定の実施形態では、融合ポリペプチドが標的二本鎖ＤＮＡ切断に使用される。
【００８４】
「クロマチン」は、細胞ゲノムを含む核タンパク質構造である。細胞クロマチンは、核酸、主にＤＮＡ、ならびにヒストンおよび非ヒストン染色体タンパク質を含むタンパク質を含む。真核細胞クロマチンの大部分はヌクレオソームの形態で存在し、ヌクレオソームコアは、ヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３およびＨ４をそれぞれ２個含む八量体と会合した約１５０塩基対のＤＮＡを含み、リンカーＤＮＡ（生物に応じて可変長である）がヌクレオソームコア間に伸びている。ヒストンＨ１の分子は一般にリンカーＤＮＡと会合している。本開示の目的のために、「クロマチン」という用語は、原核生物と真核生物の両方の全ての種類の細胞核タンパク質を包含することを意味する。細胞クロマチンは、染色体クロマチンとエピソームクロマチンの両方を含む。
【００８５】
「外因性」分子は、細胞内に通常は存在しない分子、例えば一定のｄＴＡＧであるが、１つまたは複数の遺伝学的方法、生化学的方法または他の方法によって細胞に導入することができる。外因性分子は、例えば、合成内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドを含み得る。
【００８６】
「内因性」タンパク質は、特定の環境条件下で特定の発生段階で特定の細胞に通常存在するものである。例えば、内因性タンパク質は、例えば、転写因子もしくは酵素、または他の任意の種類の天然に発現されるタンパク質であり得る。
【００８７】
「融合」または「ハイブリッド」タンパク質は、２つ以上のポリペプチドが、好ましくは共有結合的に結合しているタンパク質である。融合タンパク質の例には、例えば、内因性タンパク質とｄＴＡＧとの間の融合が含まれる。
【００８８】
本開示の目的のための「遺伝子」は、遺伝子産物をコードするＤＮＡ領域、ならびに調節配列がコード配列および／または転写配列に隣接しているかどうかにかかわらず、遺伝子産物の産生を調節する全てのＤＮＡ領域を含む。したがって、遺伝子には、必ずしもこれらに限定されないが、プロモーター配列、ターミネーター、リボソーム結合部位および配列内リボソーム進入部位などの翻訳調節配列、エンハンサー、サイレンサー、インスレーター、バウンダリーエレメント、複製起点、マトリックス付着部位および遺伝子座制御領域が含まれる。
【００８９】
「遺伝子発現」とは、遺伝子に含まれる情報を遺伝子産物に変換することを指す。遺伝子産物は、遺伝子の直接転写産物（例えば、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、構造ＲＮＡもしくは他の任意の型のＲＮＡ）またはｍＲＮＡの翻訳によって産生されるタンパク質であり得る。遺伝子産物には、キャッピング、ポリアデニル化、メチル化および編集などの過程によって修飾されたＲＮＡ、ならびに、例えばメチル化、アセチル化、リン酸化、ユビキチン化、ＡＤＰリボシル化、ミリスチル化およびグリコシル化によって修飾されたタンパク質も含まれる。
【００９０】
タンパク質発現の「調節」とは、タンパク質の活性の変化を指す。発現の調節には、それだけに限らないが、タンパク質活性の低下またはタンパク質活性の上昇が含まれる。例えば、本明細書で企図されるように、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドをヘテロ二官能性化合物に曝露し、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドの分解が生じると、内因性タンパク質の活性が調節され得る。したがって、タンパク質不活性化は部分的または完全であり得る。
【００９１】
「ベクター」は遺伝子配列を標的細胞に移入することができる。典型的には、「ベクター構築物」、「発現ベクター」および「遺伝子導入ベクター」は、目的の遺伝子の発現を指示することができ、遺伝子配列を標的細胞に導入することができる任意の核酸構築物を意味する。したがって、この用語はクローニングおよび発現ビヒクル、ならびに組み込みベクターを含む。
【００９２】
「対象」および「患者」という用語は互換的に使用され、ヒト患者および非ヒト霊長類などの哺乳動物、ならびにウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギおよび他の動物などの実験動物を指す。したがって、本明細書で使用される「対象」または「患者」という用語は、障害を有する任意の患者または対象（例えば、哺乳動物）を意味する。
【００９３】
Ａ．ヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）
本発明は、内因性遺伝子座から産生され、リガンド依存性、可逆性、および用量反応性の様式で容易に分解されるノックイン融合タンパク質を作製する方法を提供する。具体的には、ｄＴＡＧをコードする核酸を目的の標的遺伝子とインフレームで挿入し、発現時に、得られる融合タンパク質は、二価または多価のヘテロ二官能性化合物によって標的化されるｄＴＡＧを含む。ヘテロ二官能性化合物は、標的タンパク質に結合し、Ｅ３リガーゼ、例えばセレブロン含有ＣＲＬ４Ａ  Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を動員する能力を有する。この動員は、融合タンパク質のユビキチン化（ｄＴＡＧ上または同族タンパク質上のいずれか）およびその後のユビキチンプロテアソーム経路（ＵＰＰ）を介した分解を誘導する。このアプローチを通して、目的のタンパク質についての新規のリガンドの発見を必要とすることなく、ＰＯＩを、高い特異性で迅速なユビキチン媒介分解の標的とすることができる。
【００９４】
合成遺伝子のヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質は、ヘテロ二官能性化合物が結合することができる任意のアミノ酸配列であり、ヘテロ二官能性化合物と接触すると、発現される内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質のユビキチン化および分解をもたらす。好ましくは、ｄＴＡＧは内因性発現タンパク質の機能を妨害すべきでない。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ヘテロ二官能性化合物の選択性をもたらし、ヘテロ二官能性化合物の投与時のオフターゲット効果の回避を可能にする非内因性ペプチドである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ヘテロ二官能性化合物が改変アミノ酸配列のみに結合し、内因性発現タンパク質に結合しないように改変された、内因性タンパク質またはそのフラグメントに由来するアミノ酸配列である。一実施形態では、ｄＴＡＧが、内因性発現タンパク質または内因性発現タンパク質のフラグメントである。ヘテロ二官能性化合物に使用するためにリガンドによって結合され得る任意のアミノ酸配列ドメインを、本明細書で企図されるようにｄＴＡＧとして使用することができる。一定の実施形態では、特定のヘテロ二官能性化合物によって結合され得る最小アミノ酸配列がｄＴＡＧとして利用されることが好ましい。
【００９５】
特定の実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、それだけには限定されないが、ＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）、ブロモドメイン含有タンパク質４（ＢＲＤ４）、ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＲＥＢＢＰ）および転写活性化因子ＢＲＧ１（ＳＭＡＲＣＡ４）、またはこれらの変異体などの内因性発現タンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。本明細書で企図されるように、「変異体」は、変異体が元の配列と同じ機能を実質的に保持する限り、この場合はヘテロ二官能性化合物のためのリガンドを提供している限り、１個または数個〜複数個のアミノ酸の置換、欠失または付加を含む任意の変異体を意味する。他の実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、例えばホルモン受容体、例えばエストロゲン受容体タンパク質、アンドロゲン受容体タンパク質、レチノイドｘ受容体（ＲＸＲ）タンパク質、および細菌ＤＨＦＲを含むジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、細菌デヒドロゲナーゼ、ならびに変異体を含み得る。
【００９６】
ｄＴＡＧのいくつかの実施形態は、それだけに限らないが、Ｈｓｐ９０阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質を標的化する化合物、サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２を標的化する化合物、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、およびアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）を標的化する化合物に由来するものであり得る。
【００９７】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、キナーゼ、ＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質、サイトゾルシグナル伝達タンパク質（例えば、ＦＫＢＰ１２）、核タンパク質、ヒストンデアセチラーゼ、リジンメチルトランスフェラーゼ、血管新生を調節するタンパク質、免疫応答を調節するタンパク質、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）、エストロゲン受容体、アンドロゲン受容体、グルココルチコイド受容体、または転写因子（例えば、ＳＭＡＲＣＡ４、ＳＭＡＲＣＡ２、ＴＲＩＭ２４）に由来する。
【００９８】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、キナーゼ、例えば、それだけに限らないが、チロシンキナーゼ（例えば、ＡＡＴＫ、ＡＢＬ、ＡＢＬ２、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＢＬＫ、ＢＭＸ、ＢＴＫ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＫ、ＤＤＲ１、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ６、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＦＥＲ、ＦＥＳ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＲ、ＦＬＴ１、ＦＬＴ３、ＦＬＴ４、ＦＲＫ、ＦＹＮ、ＧＳＧ２、ＨＣＫ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬＫ、ＩＮＳＲ、ＩＮＳＲＲ、ＩＲＡＫ４、ＩＴＫ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＫＤＲ、ＫＩＴ、ＫＳＲ１、ＬＣＫ、ＬＭＴＫ２、ＬＭＴＫ３、ＬＴＫ、ＬＹＮ、ＭＡＴＫ、ＭＥＲＴＫ、ＭＥＴ、ＭＬＴＫ、ＭＳＴ１Ｒ、ＭＵＳＫ、ＮＰＲ１、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、ＮＴＲＫ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＬＫ４、ＰＴＫ２、ＰＴＫ２Ｂ、ＰＴＫ６、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＯＳ１、ＲＹＫ、ＳＧＫ４９３、ＳＲＣ、ＳＲＭＳ、ＳＴＹＫ１、ＳＹＫ、ＴＥＣ、ＴＥＫ、ＴＥＸ１４、ＴＩＥ１、ＴＮＫ１、ＴＮＫ２、ＴＮＮＩ３Ｋ、ＴＸＫ、ＴＹＫ２、ＴＹＲＯ３、ＹＥＳ１またはＺＡＰ７０）、セリン／トレオニンキナーゼ（例えば、カゼインキナーゼ２、プロテインキナーゼＡ、プロテインキナーゼＢ、プロテインキナーゼＣ、Ｒａｆキナーゼ、ＣａＭキナーゼ、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＡＬＫ１、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、ＡＬＫ４、Ａｕｒｏｒａ  Ａ、Ａｕｒｏｒａ  Ｂ、Ａｕｒｏｒａ  Ｃ、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、ＣＬＫ１、ＣＬＫ２、ＣＬＫ３、ＤＡＰＫ１、ＤＡＰＫ２、ＤＡＰＫ３、ＤＭＰＫ、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＥＲＫ５、ＧＣＫ、ＧＳＫ３、ＨＩＰＫ、ＫＨＳ１、ＬＫＢ１、ＬＯＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ２、ＭＡＰＫＡＰＫ、ＭＮＫ１、ＭＳＳＫ１、ＭＳＴ１、ＭＳＴ２、ＭＳＴ４、ＮＤＲ、ＮＥＫ２、ＮＥＫ３、ＮＥＫ６、ＮＥＫ７、ＮＥＫ９、ＮＥＫ１１、ＰＡＫ１、ＰＡＫ２、ＰＡＫ３、ＰＡＫ４、ＰＡＫ５、ＰＡＫ６、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＬＫ１、ＲＩＰ２、ＲＩＰ５、ＲＳＫ１、ＲＳＫ２、ＳＧＫ２、ＳＧＫ３、ＳＩＫ１、ＳＴＫ３３、ＴＡＯ１、ＴＡＯ２、ＴＧＦ−β、ＴＬＫ２、ＴＳＳＫ１、ＴＳＳＫ２、ＵＬＫ１またはＵＬＫ２）、サイクリン依存性キナーゼ（例えば、Ｃｄｋ１〜Ｃｄｋ１１）、およびロイシンリッチリピートキナーゼ（例えば、ＬＲＲＫ２）に由来する。
【００９９】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質、例えば、それだけに限らないが、ＡＳＨ１Ｌ、ＡＴＡＤ２、ＢＡＺ１Ａ、ＢＡＺ１Ｂ、ＢＡＺ２Ａ、ＢＡＺ２Ｂ、ＢＲＤ１、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤ５、ＢＲＤ６、ＢＲＤ７、ＢＲＤ８、ＢＲＤ９、ＢＲＤ１０、ＢＲＤＴ、ＢＲＰＦ１、ＢＲＰＦ３、ＢＲＷＤ３、ＣＥＣＲ２、ＣＲＥＢＢＰ、ＥＰ３００、ＦＡＬＺ、ＧＣＮ５Ｌ２、ＫＩＡＡ１２４０、ＬＯＣ９３３４９、ＭＬＬ、ＰＢ１、ＰＣＡＦ、ＰＨＩＰ、ＰＲＫＣＢＰ１、ＳＭＡＲＣＡ２、ＳＭＡＲＣＡ４、ＳＰ１００、ＳＰ１１０、ＳＰ１４０、ＴＡＦ１、ＴＡＦ１Ｌ、ＴＩＦ１ａ、ＴＲＩＭ２８、ＴＲＩＭ３３、ＴＲＩＭ６６、ＷＤＲ９、ＺＭＹＮＤ１１およびＭＬＬ４に由来する。一定の実施形態では、ＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質がＢＲＤ４である。
【０１００】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、それだけに限らないが、７，８−ジヒドロ−８−オキソグアニントリホスファターゼ、ＡＦＡＤ、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質、アポリポタンパク質、バキュロウイルスＩＡＰリピート含有タンパク質２、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｅ３リガーゼＸＩＡＰ、脂肪細胞由来脂肪酸結合タンパク質４（ＦＡＢＰ４）、ＧＴＰａｓｅ  ｋ−ＲＡＳ、ＨＤＡＣ６、造血プロスタグランジンＤシンターゼ、ラクトグルタチオンリアーゼ、Ｍｃｌ−１、ＰＡ２ＧＡ、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼＮＩＭＡ−相互作用１、ポリ−ＡＤＰ−リボースポリメラーゼ１４、ポリ−ＡＤＰ−リボースポリメラーゼ１５、プロサポシン、プロスタグランジンＥシンターゼ、杆体ロドプシン感受性ｃＧＭＰ３’，’５−サイクリックホスホジエステラーゼサブユニットδ、Ｓ１００−Ａ７、Ｓｒｃ、Ｓｕｍｏ−コンジュゲート酵素ＵＢＣ９、スーパーオキシドジスムターゼ、タンキラーゼ１またはタンキラーゼ２に由来する。
【０１０１】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、それだけに限らないが、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、アンテナペディアホメオドメインタンパク質、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＣＡＡＴ増強結合タンパク質、ヒストン、ポリコーム群タンパク質、高移動度タンパク質、テロメア結合タンパク質、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、肝細胞核因子、Ｍａｄ２、ＮＦ−κＢ、核内受容体コアクチベーター、ＣＲＥＢ結合タンパク質、ｐ５５、ｐ１０７、ｐ１３０、Ｒｂタンパク質、ｐ５３、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、ｃ−ｍｄｍ２、ｃ−ｍｙｃおよびｃ−ｒｅｌを含む核タンパク質に由来する。
【０１０２】
特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ２（（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ  Ｂａｓｅ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ）−Ｐ２５４４０（ＢＲＤ２＿ＨＵＭＡＮ））、ＢＲＤ３（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１５０５９（ＢＲＤ３＿ＨＵＭＡＮ））、ＢＲＤ４（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｏ６０８８５（ＢＲＤ４＿ＨＵＭＡＮ））、またはＢＲＤＴ（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ５８Ｆ２１（ＢＲＤＴ＿ＨＵＭＡＮ））に由来するアミノ酸配列を有する（共に参照により本明細書に組み込まれる、Ｂａｕｄら、「Ａ  ｂｕｍｐ−ａｎｄ−ｈｏｌｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｅｎｇｉｎｅｅｒ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＢＥＴ  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｒｏｂｅｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ３４６（６２０９）（２０１４）：６３８〜６４１；およびＢａｕｄら、「Ｎｅｗ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｒｏｕｔｅｓ  ｔｏ  Ｔｒｉａｚｏｌｏ−ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓｃｏｐｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｕｍｐ−ａｎｄ−Ｈｏｌｅ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｂｒｏｍｏ  ａｎｄ  Ｅｘｔｒａ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ（ＢＥＴ）  Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」、ＪＭＣ  ５９（２０１６）：１４９２〜１５００参照）。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変もしくは変異ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４またはＢＲＤＴタンパク質である（共に参照により本明細書に組み込まれる、Ｂａｕｄら、「Ａ  ｂｕｍｐ−ａｎｄ−ｈｏｌｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｅｎｇｉｎｅｅｒ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＢＥＴ  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｒｏｂｅｓ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ３４６（６２０９）（２０１４）：６３８〜６４１；およびＢａｕｄら、「Ｎｅｗ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｒｏｕｔｅｓ  ｔｏ  Ｔｒｉａｚｏｌｏ−ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓｃｏｐｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｕｍｐ−ａｎｄ−Ｈｏｌｅ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｂｒｏｍｏ  ａｎｄ  Ｅｘｔｒａ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ（ＢＥＴ）  Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」、ＪＭＣ５９（２０１６）：１４９２〜１５００参照）。一定の実施形態では、ＢＲＤ２の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸９７位のトリプトファン（Ｗ）の突然変異、アミノ酸１０３位のバリン（Ｖ）の突然変異、アミノ酸１１０位のロイシン（Ｌ）の突然変異、アミノ酸３７０位のＷの突然変異、アミノ酸３７６位のＶの突然変異、またはアミノ酸３８１位のＬの突然変異を含む。一定の実施形態では、ＢＲＤ３の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸５７位のＷの突然変異、アミノ酸６３位のＶの突然変異、アミノ酸７０位のＬの突然変異、アミノ酸３３２位のＷの突然変異、アミノ酸３３８位のＶの突然変異、またはアミノ酸３４５位のＬの突然変異を含む。一定の実施形態では、ＢＲＤ４の１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸８１位のＷの突然変異、アミノ酸８７位のＶの突然変異、アミノ酸９４位のＬの突然変異、アミノ酸３７４位のＷの突然変異、アミノ酸３８０位のＶの突然変異、またはアミノ酸３８７位のＬの突然変異を含む。一定の実施形態では、ＢＲＤＴの１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸５０位のＷの突然変異、アミノ酸５６位のＶの突然変異、アミノ酸６３位のＬの突然変異、アミノ酸２９３位のＷの突然変異、アミノ酸２９９位のＶの突然変異、またはアミノ酸３０６位のＬの突然変異を含む。
【０１０３】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、キナーゼ阻害剤、ＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質阻害剤、サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２リガンド、ＨＤＡＣ阻害剤、リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、およびアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）阻害剤に由来する。
【０１０４】
特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２に由来する。一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、改変または変異サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２である。一定の実施形態では、改変または変異サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２が、ＦＫＢＰ１２リガンドのための拡大された結合ポケットを作り出す１つまたは複数の突然変異を含む。一定の実施形態では、１つまたは複数の突然変異が、アミノ酸３６位のフェニルアラニン（Ｆ）のバリン（Ｖ）への突然変異（Ｆ３６Ｖ）（メチオニン開始コドンなしでカウントされる）（本明細書では互換的にＦＫＢＰ＊またはＦＫＢＰ１２と呼ぶ）を含む（Ｃｌａｃｋｓｏｎら、「Ｒｅｄｅｓｉｇｎｉｎｇ  ａｎ  ＦＫＢＰ−ｌｉｇａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｔｏ  ｇｅｎｅｒａｔｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｉｍｅｒｉｚｅｒｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｖｅｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ」、ＰＮＡＳ  ９５（１９９８）：１０４３７〜１０４４２参照）（参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１０５】
特定の実施形態では、ｄＴＡＧが、ＦＫＢＰ１２タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ６２９４２（ＦＫＢ１Ａ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１）ＧＶＱＶＥＴＩＳＰ  ＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧ  ＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭ  ＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳ  ＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭ  ＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷ  ＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧ  ＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤ  ＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧ  ＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦ  ＤＶＥＬＬＫＬＥに由来する。
【０１０６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列（配列番号２）ＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷ  ＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥを有する、アミノ酸３６位の（メチオニンなしでカウント）のフェニルアラニン（Ｆ）のバリン（Ｖ）への突然変異（Ｆ３６Ｖ）（ＦＫＢＰ＊）を有するＦＫＢＰ１２由来アミノ酸配列である。
【０１０７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ４タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｏ６０８８５（ＢＲＤ４＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３）
ＭＳＡＥＳＧＰＧＴＲＬＲＮＬＰＶＭＧＤＧＬＥＴＳＱＭＳＴＴＱＡＱＡＱＰＱＰＡＮＡＡＳＴＮＰＰＰＰＥＴＳＮＰＮＫＰＫＲＱＴＮＱＬＱＹＬＬＲＶＶＬＫＴＬＷＫＨＱＦＡＷＰＦＱＱＰＶＤＡＶＫＬＮＬＰＤＹＹＫＩＩＫＴＰＭＤＭＧＴＩＫＫＲＬＥＮＮＹＹＷＮＡＱＥＣＩＱＤＦＮＴＭＦＴＮＣＹＩＹＮＫＰＧＤＤＩＶＬＭＡＥＡＬＥＫＬＦＬＱＫＩＮＥＬＰＴＥＥＴＥＩＭＩＶＱＡＫＧＲＧＲＧＲＫＥＴＧＴＡＫＰＧＶＳＴＶＰＮＴＴＱＡＳＴＰＰＱＴＱＴＰＱＰＮＰＰＰＶＱＡＴＰＨＰＦＰＡＶＴＰＤＬＩＶＱＴＰＶＭＴＶＶＰＰＱＰＬＱＴＰＰＰＶＰＰＱＰＱＰＰＰＡＰＡＰＱＰＶＱＳＨＰＰＩＩＡＡＴＰＱＰＶＫＴＫＫＧＶＫＲＫＡＤＴＴＴＰＴＴＩＤＰＩＨＥＰＰＳＬＰＰＥＰＫＴＴＫＬＧＱＲＲＥＳＳＲＰＶＫＰＰＫＫＤＶＰＤＳＱＱＨＰＡＰＥＫＳＳＫＶＳＥＱＬＫＣＣＳＧＩＬＫＥＭＦＡＫＫＨＡＡＹＡＷＰＦＹＫＰＶＤＶＥＡＬＧＬＨＤＹＣＤＩＩＫＨＰＭＤＭＳＴＩＫＳＫＬＥＡＲＥＹＲＤＡＱＥＦＧＡＤＶＲＬＭＦＳＮＣＹＫＹＮＰＰＤＨＥＶＶＡＭＡＲＫＬＱＤＶＦＥＭＲＦＡＫＭＰＤＥＰＥＥＰＶＶＡＶＳＳＰＡＶＰＰＰＴＫＶＶＡＰＰＳＳＳＤＳＳＳＤＳＳＳＤＳＤＳＳＴＤＤＳＥＥＥＲＡＱＲＬＡＥＬＱＥＱＬＫＡＶＨＥＱＬＡＡＬＳＱＰＱＱＮＫＰＫＫＫＥＫＤＫＫＥＫＫＫＥＫＨＫＲＫＥＥＶＥＥＮＫＫＳＫＡＫＥＰＰＰＫＫＴＫＫＮＮＳＳＮＳＮＶＳＫＫＥＰＡＰＭＫＳＫＰＰＰＴＹＥＳＥＥＥＤＫＣＫＰＭＳＹＥＥＫＲＱＬＳＬＤＩＮＫＬＰＧＥＫＬＧＲＶＶＨＩＩＱＳＲＥＰＳＬＫＮＳＮＰＤＥＩＥＩＤＦＥＴＬＫＰＳＴＬＲＥＬＥＲＹＶＴＳＣＬＲＫＫＲＫＰＱＡＥＫＶＤＶＩＡＧＳＳＫＭＫＧＦＳＳＳＥＳＥＳＳＳＥＳＳＳＳＤＳＥＤＳＥＴＥＭＡＰＫＳＫＫＫＧＨＰＧＲＥＱＫＫＨＨＨＨＨＨＱＱＭＱＱＡＰＡＰＶＰＱＱＰＰＰＰＰＱＱＰＰＰＰＰＰＰＱＱＱＱＱＰＰＰＰＰＰＰＰＳＭＰＱＱＡＡＰＡＭＫＳＳＰＰＰＦＩＡＴＱＶＰＶＬＥＰＱＬＰＧＳＶＦＤＰＩＧＨＦＴＱＰＩＬＨＬＰＱＰＥＬＰＰＨＬＰＱＰＰＥＨＳＴＰＰＨＬＮＱＨＡＶＶＳＰＰＡＬＨＮＡＬＰＱＱＰＳＲＰＳＮＲＡＡＡＬＰＰＫＰＡＲＰＰＡＶＳＰＡＬＴＱＴＰＬＬＰＱＰＰＭＡＱＰＰＱＶＬＬＥＤＥＥＰＰＡＰＰＬＴＳＭＱＭＱＬＹＬＱＱＬＱＫＶＱＰＰＴＰＬＬＰＳＶＫＶＱＳＱＰＰＰＰＬＰＰＰＰＨＰＳＶＱＱＱＬＱＱＱＰＰＰＰＰＰＰＱＰＱＰＰＰＱＱＱＨＱＰＰＰＲＰＶＨＬＱＰＭＱＦＳＴＨＩＱＱＰＰＰＰＱＧＱＱＰＰＨＰＰＰＧＱＱＰＰＰＰＱＰＡＫＰＱＱＶＩＱＨＨＨＳＰＲＨＨＫＳＤＰＹＳＴＧＨＬＲＥＡＰＳＰＬＭＩＨＳＰＱＭＳＱＦＱＳＬＴＨＱＳＰＰＱＱＮＶＱＰＫＫＱＥＬＲＡＡＳＶＶＱＰＱＰＬＶＶＶＫＥＥＫＩＨＳＰＩＩＲＳＥＰＦＳＰＳＬＲＰＥＰＰＫＨＰＥＳＩＫＡＰＶＨＬＰＱＲＰＥＭＫＰＶＤＶＧＲＰＶＩＲＰＰＥＱＮＡＰＰＰＧＡＰＤＫＤＫＱＫＱＥＰＫＴＰＶＡＰＫＫＤＬＫＩＫＮＭＧＳＷＡＳＬＶＱＫＨＰＴＴＰＳＳＴＡＫＳＳＳＤＳＦＥＱＦＲＲＡＡＲＥＫＥＥＲＥＫＡＬＫＡＱＡＥＨＡＥＫＥＫＥＲＬＲＱＥＲＭＲＳＲＥＤＥＤＡＬＥＱＡＲＲＡＨＥＥＡＲＲＲＱＥＱＱＱＱＱＲＱＥＱＱＱＱＱＱＱＱＡＡＡＶＡＡＡＡＴＰＱＡＱＳＳＱＰＱＳＭＬＤＱＱＲＥＬＡＲＫＲＥＱＥＲＲＲＲＥＡＭＡＡＴＩＤＭＮＦＱＳＤＬＬＳＩＦＥＥＮＬＦ
に由来する。
【０１０８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号３のアミノ酸７５〜１４７に由来する。
【０１０９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＡＳＨ１Ｌタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＮＲ４８（ＡＳＨ１Ｌ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＮＲ４８のアミノ酸２４６３〜２５３３に由来する。
【０１１０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＡＴＡＤ２タンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ６ＰＬ１８（ＡＴＡＤ２＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ６ＰＬ１８のアミノ酸１００１〜１０７１に由来する。
【０１１１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＡＺ１Ａタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＮＲＬ２（ＢＡＺ１Ａ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＮＲＬ２のアミノ酸１４４６〜１５１６に由来する。
【０１１２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＡＺ１Ｂタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＵＩＧ０（ＢＡＺ１Ｂ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＵＩＧ０のアミノ酸１３５６〜１４２６に由来する。
【０１１３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＡＺ２Ａタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＵＩＦ９（ＢＡＺ２Ａ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＵＩＦ９のアミノ酸１８１０〜１８８０に由来する。
【０１１４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＡＺ２Ｂタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＵＩＦ８（ＢＡＺ２Ｂ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＵＩＦ８のアミノ酸２０７７〜２１４７に由来する。
【０１１５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ１タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｏ９５６９６（ＢＲＤ１＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｏ９５６９６のアミノ酸５７９〜６４９に由来する。
【０１１６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ２タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ２５４４０（ＢＲＤ２＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１３）
ＭＬＱＮＶＴＰＨＮＫＬＰＧＥＧＮＡＧＬＬＧＬＧＰＥＡＡＡＰＧＫＲＩＲＫＰＳＬＬＹＥＧＦＥＳＰＴＭＡＳＶＰＡＬＱＬＴＰＡＮＰＰＰＰＥＶＳＮＰＫＫＰＧＲＶＴＮＱＬＱＹＬＨＫＶＶＭＫＡＬＷＫＨＱＦＡＷＰＦＲＱＰＶＤＡＶＫＬＧＬＰＤＹＨＫＩＩＫＱＰＭＤＭＧＴＩＫＲＲＬＥＮＮＹＹＷＡＡＳＥＣＭＱＤＦＮＴＭＦＴＮＣＹＩＹＮＫＰＴＤＤＩＶＬＭＡＱＴＬＥＫＩＦＬＱＫＶＡＳＭＰＱＥＥＱＥＬＶＶＴＩＰＫＮＳＨＫＫＧＡＫＬＡＡＬＱＧＳＶＴＳＡＨＱＶＰＡＶＳＳＶＳＨＴＡＬＹＴＰＰＰＥＩＰＴＴＶＬＮＩＰＨＰＳＶＩＳＳＰＬＬＫＳＬＨＳＡＧＰＰＬＬＡＶＴＡＡＰＰＡＱＰＬＡＫＫＫＧＶＫＲＫＡＤＴＴＴＰＴＰＴＡＩＬＡＰＧＳＰＡＳＰＰＧＳＬＥＰＫＡＡＲＬＰＰＭＲＲＥＳＧＲＰＩＫＰＰＲＫＤＬＰＤＳＱＱＱＨＱＳＳＫＫＧＫＬＳＥＱＬＫＨＣＮＧＩＬＫＥＬＬＳＫＫＨＡＡＹＡＷＰＦＹＫＰＶＤＡＳＡＬＧＬＨＤＹＨＤＩＩＫＨＰＭＤＬＳＴＶＫＲＫＭＥＮＲＤＹＲＤＡＱＥＦＡＡＤＶＲＬＭＦＳＮＣＹＫＹＮＰＰＤＨＤＶＶＡＭＡＲＫＬＱＤＶＦＥＦＲＹＡＫＭＰＤＥＰＬＥＰＧＰＬＰＶＳＴＡＭＰＰＧＬＡＫＳＳＳＥＳＳＳＥＥＳＳＳＥＳＳＳＥＥＥＥＥＥＤＥＥＤＥＥＥＥＥＳＥＳＳＤＳＥＥＥＲＡＨＲＬＡＥＬＱＥＱＬＲＡＶＨＥＱＬＡＡＬＳＱＧＰＩＳＫＰＫＲＫＲＥＫＫＥＫＫＫＫＲＫＡＥＫＨＲＧＲＡＧＡＤＥＤＤＫＧＰＲＡＰＲＰＰＱＰＫＫＳＫＫＡＳＧＳＧＧＧＳＡＡＬＧＰＳＧＦＧＰＳＧＧＳＧＴＫＬＰＫＫＡＴＫＴＡＰＰＡＬＰＴＧＹＤＳＥＥＥＥＥＳＲＰＭＳＹＤＥＫＲＱＬＳＬＤＩＮＫＬＰＧＥＫＬＧＲＶＶＨＩＩＱＡＲＥＰＳＬＲＤＳＮＰＥＥＩＥＩＤＦＥＴＬＫＰＳＴＬＲＥＬＥＲＹＶＬＳＣＬＲＫＫＰＲＫＰＹＴＩＫＫＰＶＧＫＴＫＥＥＬＡＬＥＫＫＲＥＬＥＫＲＬＱＤＶＳＧＱＬＮＳＴＫＫＰＰＫＫＡＮＥＫＴＥＳＳＳＡＱＱＶＡＶＳＲＬＳＡＳＳＳＳＳＤＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＤＴＳＤＳＤＳＧ
に由来する。
【０１１７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１３のアミノ酸９１〜１６３または３６４〜４３６に由来する。
【０１１８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ３タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１５０５９（ＢＲＤ３＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１４）
ＭＳＴＡＴＴＶＡＰＡＧＩＰＡＴＰＧＰＶＮＰＰＰＰＥＶＳＮＰＳＫＰＧＲＫＴＮＱＬＱＹＭＱＮＶＶＶＫＴＬＷＫＨＱＦＡＷＰＦＹＱＰＶＤＡＩＫＬＮＬＰＤＹＨＫＩＩＫＮＰＭＤＭＧＴＩＫＫＲＬＥＮＮＹＹＷＳＡＳＥＣＭＱＤＦＮＴＭＦＴＮＣＹＩＹＮＫＰＴＤＤＩＶＬＭＡＱＡＬＥＫＩＦＬＱＫＶＡＱＭＰＱＥＥＶＥＬＬＰＰＡＰＫＧＫＧＲＫＰＡＡＧＡＱＳＡＧＴＱＱＶＡＡＶＳＳＶＳＰＡＴＰＦＱＳＶＰＰＴＶＳＱＴＰＶＩＡＡＴＰＶＰＴＩＴＡＮＶＴＳＶＰＶＰＰＡＡＡＰＰＰＰＡＴＰＩＶＰＶＶＰＰＴＰＰＶＶＫＫＫＧＶＫＲＫＡＤＴＴＴＰＴＴＳＡＩＴＡＳＲＳＥＳＰＰＰＬＳＤＰＫＱＡＫＶＶＡＲＲＥＳＧＧＲＰＩＫＰＰＫＫＤＬＥＤＧＥＶＰＱＨＡＧＫＫＧＫＬＳＥＨＬＲＹＣＤＳＩＬＲＥＭＬＳＫＫＨＡＡＹＡＷＰＦＹＫＰＶＤＡＥＡＬＥＬＨＤＹＨＤＩＩＫＨＰＭＤＬＳＴＶＫＲＫＭＤＧＲＥＹＰＤＡＱＧＦＡＡＤＶＲＬＭＦＳＮＣＹＫＹＮＰＰＤＨＥＶＶＡＭＡＲＫＬＱＤＶＦＥＭＲＦＡＫＭＰＤＥＰＶＥＡＰＡＬＰＡＰＡＡＰＭＶＳＫＧＡＥＳＳＲＳＳＥＥＳＳＳＤＳＧＳＳＤＳＥＥＥＲＡＴＲＬＡＥＬＱＥＱＬＫＡＶＨＥＱＬＡＡＬＳＱＡＰＶＮＫＰＫＫＫＫＥＫＫＥＫＥＫＫＫＫＤＫＥＫＥＫＥＫＨＫＶＫＡＥＥＥＫＫＡＫＶＡＰＰＡＫＱＡＱＱＫＫＡＰＡＫＫＡＮＳＴＴＴＡＧＲＱＬＫＫＧＧＫＱＡＳＡＳＹＤＳＥＥＥＥＥＧＬＰＭＳＹＤＥＫＲＱＬＳＬＤＩＮＲＬＰＧＥＫＬＧＲＶＶＨＩＩＱＳＲＥＰＳＬＲＤＳＮＰＤＥＩＥＩＤＦＥＴＬＫＰＴＴＬＲＥＬＥＲＹＶＫＳＣＬＱＫＫＱＲＫＰＦＳＡＳＧＫＫＱＡＡＫＳＫＥＥＬＡＱＥＫＫＫＥＬＥＫＲＬＱＤＶＳＧＱＬＳＳＳＫＫＰＡＲＫＥＫＰＧＳＡＰＳＧＧＰＳＲＬＳＳＳＳＳＳＥＳＧＳＳＳＳＳＧＳＳＳＤＳＳＤＳＥ
に由来する。
【０１１９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１４のアミノ酸５１〜１２３または３２６〜３９８に由来する。
【０１２０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ７タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＮＰＩ１（ＢＲＤ７＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＮＰ１１のアミノ酸１４８〜２１８に由来する。
【０１２１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ８タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９Ｈ０Ｅ９（ＢＲＤ８＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９Ｈ０Ｅ９のアミノ酸７２４〜７９４または１１２０〜１１９０に由来する。
【０１２２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤ９タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９Ｈ８Ｍ２（ＢＲＤ９＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９Ｈ８Ｍ２のアミノ酸１５３〜２２３に由来する。
【０１２３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＤＴタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ５８Ｆ２１（ＢＲＤＴ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１５）
ＭＳＬＰＳＲＱＴＡＩＩＶＮＰＰＰＰＥＹＩＮＴＫＫＮＧＲＬＴＮＱＬＱＹＬＱＫＶＶＬＫＤＬＷＫＨＳＦＳＷＰＦＱＲＰＶＤＡＶＫＬＱＬＰＤＹＹＴＩＩＫＮＰＭＤＬＮＴＩＫＫＲＬＥＮＫＹＹＡＫＡＳＥＣＩＥＤＦＮＴＭＦＳＮＣＹＬＹＮＫＰＧＤＤＩＶＬＭＡＱＡＬＥＫＬＦＭＱＫＬＳＱＭＰＱＥＥＱＶＶＧＶＫＥＲＩＫＫＧＴＱＱＮＩＡＶＳＳＡＫＥＫＳＳＰＳＡＴＥＫＶＦＫＱＱＥＩＰＳＶＦＰＫＴＳＩＳＰＬＮＶＶＱＧＡＳＶＮＳＳＳＱＴＡＡＱＶＴＫＧＶＫＲＫＡＤＴＴＴＰＡＴＳＡＶＫＡＳＳＥＦＳＰＴＦＴＥＫＳＶＡＬＰＰＩＫＥＮＭＰＫＮＶＬＰＤＳＱＱＱＹＮＶＶＫＴＶＫＶＴＥＱＬＲＨＣＳＥＩＬＫＥＭＬＡＫＫＨＦＳＹＡＷＰＦＹＮＰＶＤＶＮＡＬＧＬＨＮＹＹＤＶＶＫＮＰＭＤＬＧＴＩＫＥＫＭＤＮＱＥＹＫＤＡＹＫＦＡＡＤＶＲＬＭＦＭＮＣＹＫＹＮＰＰＤＨＥＶＶＴＭＡＲＭＬＱＤＶＦＥＴＨＦＳＫＩＰＩＥＰＶＥＳＭＰＬＣＹＩＫＴＤＩＴＥＴＴＧＲＥＮＴＮＥＡＳＳＥＧＮＳＳＤＤＳＥＤＥＲＶＫＲＬＡＫＬＱＥＱＬＫＡＶＨＱＱＬＱＶＬＳＱＶＰＦＲＫＬＮＫＫＫＥＫＳＫＫＥＫＫＫＥＫＶＮＮＳＮＥＮＰＲＫＭＣＥＱＭＲＬＫＥＫＳＫＲＮＱＰＫＫＲＫＱＱＦＩＧＬＫＳＥＤＥＤＮＡＫＰＭＮＹＤＥＫＲＱＬＳＬＮＩＮＫＬＰＧＤＫＬＧＲＶＶＨＩＩＱＳＲＥＰＳＬＳＮＳＮＰＤＥＩＥＩＤＦＥＴＬＫＡＳＴＬＲＥＬＥＫＹＶＳＡＣＬＲＫＲＰＬＫＰＰＡＫＫＩＭＭＳＫＥＥＬＨＳＱＫＫＱＥＬＥＫＲＬＬＤＶＮＮＱＬＮＳＲＫＲＱＴＫＳＤＫＴＱＰＳＫＡＶＥＮＶＳＲＬＳＥＳＳＳＳＳＳＳＳＳＥＳＥＳＳＳＳＤＬＳＳＳＤＳＳＤＳＥＳＥＭＦＰＫＦＴＥＶＫＰＮＤＳＰＳＫＥＮＶＫＫＭＫＮＥＣＩＰＰＥＧＲＴＧＶＴＱＩＧＹＣＶＱＤＴＴＳＡＮＴＴＬＶＨＱＴＴＰＳＨＶＭＰＰＮＨＨＱＬＡＦＮＹＱＥＬＥＨＬＱＴＶＫＮＩＳＰＬＱＩＬＰＰＳＧＤＳＥＱＬＳＮＧＩＴＶＭＨＰＳＧＤＳＤＴＴＭＬＥＳＥＣＱＡＰＶＱＫＤＩＫＩＫＮＡＤＳＷＫＳＬＧＫＰＶＫＰＳＧＶＭＫＳＳＤＥＬＦＮＱＦＲＫＡＡＩＥＫＥＶＫＡＲＴＱＥＬＩＲＫＨＬＥＱＮＴＫＥＬＫＡＳＱＥＮＱＲＤＬＧＮＧＬＴＶＥＳＦＳＮＫＩＱＮＫＣＳＧＥＥＱＫＥＨＱＱＳＳＥＡＱＤＫＳＫＬＷＬＬＫＤＲＤＬＡＲＱＫＥＱＥＲＲＲＲＥＡＭＶＧＴＩＤＭＴＬＱＳＤＩＭＴＭＦＥＮＮＦＤ
に由来する。
【０１２４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号１５のアミノ酸４４〜１１６または２８７〜３５９に由来する。
【０１２５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＰＦ１タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ５５２０１（ＢＲＰＦ１＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ５５２０１のアミノ酸６４５〜７１５に由来する。
【０１２６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＰＦ３タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＵＬＤ４（ＢＲＰＦ３＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＵＬＤ４のアミノ酸６０６〜６７６に由来する。
【０１２７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＲＷＤ３タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ６ＲＩ４５（ＢＲＷＤ３＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ６ＲＩ４５のアミノ酸１１５８〜１２２８または１３１７〜１４１２に由来する。
【０１２８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＣＥＣＲ２タンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＢＸＦ３（ＣＥＣＲ２＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＢＸＦ３のアミノ酸４５１〜５２１に由来する。
【０１２９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＣＲＥＢＢＰタンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９２７９３（ＣＢＰ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９２７９３のアミノ酸１１０３〜１１７５に由来する。
【０１３０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＥＰ３００タンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ０９４７２（ＥＰ３００＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ０９４７２のアミノ酸１０６７〜１１３９に由来する。
【０１３１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＦＡＬＺタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１２８３０（ＢＰＴＦ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ１２８３０のアミノ酸２９４４〜３０１４に由来する。
【０１３２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＧＣＮ５Ｌ２タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９２８３０（ＫＡＴ２Ａ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９２８３０のアミノ酸７４５〜８１５に由来する。
【０１３３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＫＩＡＡ１２４０タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＵＬＩ０（ＡＴＤ２Ｂ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＵＬＩ０のアミノ酸９７５〜１０４５に由来する。
【０１３４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＬＯＣ９３３４９タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１３３４２（ＳＰ１４０＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ１３３４２のアミノ酸７９６〜８２９に由来する。
【０１３５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＭＬＬタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ０３１６４（ＫＭＴ２Ａ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ０３１６４のアミノ酸１７０３〜１７４８に由来する。
【０１３６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＰＢ１タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ８６Ｕ８６（ＰＢ１＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ８６Ｕ８６のアミノ酸６３〜１３４、２００〜２７０、４００〜４７０、５３８〜６０８、６７６〜７４６または７９２〜８６２に由来する。
【０１３７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＰＣＡＦタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９２８３１（ＫＡＴ２Ｂ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９２８３１のアミノ酸７４０〜８１０に由来する。
【０１３８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＰＨＩＰタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ８ＷＷＱ０（ＰＨＩＰ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ８ＷＷＱ０のアミノ酸１１７６〜１２４６または１３３３〜１４０３に由来する。
【０１３９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＰＲＫＣＢＰ１タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＵＬＵ４（ＰＫＣＢ１＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＵＬＵ４のアミノ酸１６５〜２３５に由来する。
【０１４０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＳＭＡＲＣＡ２タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ５１５３１（ＳＭＣＡ２＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ５１５３１のアミノ酸１４１９〜１４８９に由来する。
【０１４１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＳＭＡＲＣＡ４タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ５１５３２（ＳＭＣＡ４＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ５１５３２のアミノ酸１４７７〜１５４７に由来する。
【０１４２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＳＰ１００タンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ２３４９７（ＳＰ１００＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ２３４９７のアミノ酸７６１〜８７６に由来する。
【０１４３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＳＰ１１０タンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＨＢ５８（ＳＰ１１０＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＨＢ５８のアミノ酸５８１〜６７６に由来する。
【０１４４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＳＰ１４０タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１３３４２（ＳＰ１４０＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ１３３４２のアミノ酸７９６〜８２９に由来する。
【０１４５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＴＡＦ１タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ２１６７５（ＴＡＦ１＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ２１６７５のアミノ酸１３９７〜１４６７または１５２０〜１５９０に由来する。
【０１４６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＴＡＦ１Ｌタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ８ＩＺＸ４（ＴＡＦ１Ｌ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ８ＩＺＸ４のアミノ酸１４１６〜１４８６または１５３９〜１６０９に由来する。
【０１４７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＴＩＦ１Ａタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｏ１５１６４（ＴＩＦ１Ａ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｏ１５１６４のアミノ酸９３２〜９８７に由来する。
【０１４８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＴＲＩＭ２８タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１３２６３（ＴＩＦ１Ｂ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ１３２６３のアミノ酸６９７〜８０１に由来する。
【０１４９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＴＲＩＭ３３タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＵＰＮ９（ＴＲＩ３３＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＵＰＮ９のアミノ酸９７４〜１０４６に由来する。
【０１５０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＴＲＩＭ６６タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｏ１５０１６（ＴＲＩ６６＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｏ１５０１６のアミノ酸１０５６〜１１２８に由来する。
【０１５１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＷＤＲ９タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＮＳＩ６（ＢＲＷＤ１＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＮＳＩ６のアミノ酸１１７７〜１２４７または１３３０〜１４００に由来する。
【０１５２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＺＭＹＮＤ１１タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１５３２６（ＺＭＹ１１＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ１５３２６のアミノ酸１６８〜２３８に由来する。
【０１５３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＭＬＬ４タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＵＭＮ６（ＫＭＴ２Ｂ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｑ９ＵＭＮ６のアミノ酸１３９５〜１５０９に由来する。
【０１５４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、エストロゲン受容体、ヒト（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０３３７２−１）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号４）
ＭＴＭＴＬＨＴＫＡＳＧＭＡＬＬＨＱＩＱＧＮＥＬＥＰＬＮＲＰＱＬＫＩＰＬＥＲＰＬＧＥＶＹＬＤＳＳＫＰＡＶＹＮＹＰＥＧＡＡＹＥＦＮＡＡＡＡＡＮＡＱＶＹＧＱＴＧＬＰＹＧＰＧＳＥＡＡＡＦＧＳＮＧＬＧＧＦＰＰＬＮＳＶＳＰＳＰＬＭＬＬＨＰＰＰＱＬＳＰＦＬＱＰＨＧＱＱＶＰＹＹＬＥＮＥＰＳＧＹＴＶＲＥＡＧＰＰＡＦＹＲＰＮＳＤＮＲＲＱＧＧＲＥＲＬＡＳＴＮＤＫＧＳＭＡＭＥＳＡＫＥＴＲＹＣＡＶＣＮＤＹＡＳＧＹＨＹＧＶＷＳＣＥＧＣＫＡＦＦＫＲＳＩＱＧＨＮＤＹＭＣＰＡＴＮＱＣＴＩＤＫＮＲＲＫＳＣＱＡＣＲＬＲＫＣＹＥＶＧＭＭＫＧＧＩＲＫＤＲＲＧＧＲＭＬＫＨＫＲＱＲＤＤＧＥＧＲＧＥＶＧＳＡＧＤＭＲＡＡＮＬＷＰＳＰＬＭＩＫＲＳＫＫＮＳＬＡＬＳＬＴＡＤＱＭＶＳＡＬＬＤＡＥＰＰＩＬＹＳＥＹＤＰＴＲＰＦＳＥＡＳＭＭＧＬＬＴＮＬＡＤＲＥＬＶＨＭＩＮＷＡＫＲＶＰＧＦＶＤＬＴＬＨＤＱＶＨＬＬＥＣＡＷＬＥＩＬＭＩＧＬＶＷＲＳＭＥＨＰＧＫＬＬＦＡＰＮＬＬＬＤＲＮＱＧＫＣＶＥＧＭＶＥＩＦＤＭＬＬＡＴＳＳＲＦＲＭＭＮＬＱＧＥＥＦＶＣＬＫＳＩＩＬＬＮＳＧＶＹＴＦＬＳＳＴＬＫＳＬＥＥＫＤＨＩＨＲＶＬＤＫＩＴＤＴＬＩＨＬＭＡＫＡＧＬＴＬＱＱＱＨＱＲＬＡＱＬＬＬＩＬＳＨＩＲＨＭＳＮＫＧＭＥＨＬＹＳＭＫＣＫＮＶＶＰＬＹＤＬＬＬＥＭＬＤＡＨＲＬＨＡＰＴＳＲＧＧＡＳＶＥＥＴＤＱＳＨＬＡＴＡＧＳＴＳＳＨＳＬＱＫＹＹＩＴＧＥＡＥＧＦＰＡＴＶ
に由来する。
【０１５５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、エストロゲン受容体リガンド結合ドメインまたはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号５）
ＳＬＡＬＳＬＴＡＤＱＭＶＳＡＬＬＤＡＥＰＰＩＬＹＳＥＹＤＰＴＲＰＦＳＥＡＳＭＭＧＬＬＴＮＬＡＤＲＥＬＶＨＭＩＮＷＡＫＲＶＰＧＦＶＤＬＴＬＨＤＱＶＨＬＬＥＣＡＷＬＥＩＬＭＩＧＬＶＷＲＳＭＥＨＰＧＫＬＬＦＡＰＮＬＬＬＤＲＮＱＧＫＣＶＥＧＭＶＥＩＦＤＭＬＬＡＴＳＳＲＦＲＭＭＮＬＱＧＥＥＦＶＣＬＫＳＩＩＬＬＮＳＧＶＹＴＦＬＳＳＴＬＫＳＬＥＥＫＤＨＩＨＲＶＬＤＫＩＴＤＴＬＩＨＬＭＡＫＡＧＬＴＬＱＱＱＨＱＲＬＡＱＬＬＬＩＬＳＨＩＲＨＭＳＮＫＧＭＥＨＬＹＳＭＫＣＫＮＶＶＰＬＹＤＬＬＬＥＭＬＤＡＨＲＬ
に由来する。
【０１５６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アンドロゲン受容体、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１０２７５（ＡＮＤＲ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号６）
ＭＥＶＱＬＧＬＧＲＶＹＰＲＰＰＳＫＴＹＲＧＡＦＱＮＬＦＱＳＶＲＥＶＩＱＮＰＧＰＲＨＰＥＡＡＳＡＡＰＰＧＡＳＬＬＬＬＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＱＥＴＳＰＲＱＱＱＱＱＱＧＥＤＧＳＰＱＡＨＲＲＧＰＴＧＹＬＶＬＤＥＥＱＱＰＳＱＰＱＳＡＬＥＣＨＰＥＲＧＣＶＰＥＰＧＡＡＶＡＡＳＫＧＬＰＱＱＬＰＡＰＰＤＥＤＤＳＡＡＰＳＴＬＳＬＬＧＰＴＦＰＧＬＳＳＣＳＡＤＬＫＤＩＬＳＥＡＳＴＭＱＬＬＱＱＱＱＱＥＡＶＳＥＧＳＳＳＧＲＡＲＥＡＳＧＡＰＴＳＳＫＤＮＹＬＧＧＴＳＴＩＳＤＮＡＫＥＬＣＫＡＶＳＶＳＭＧＬＧＶＥＡＬＥＨＬＳＰＧＥＱＬＲＧＤＣＭＹＡＰＬＬＧＶＰＰＡＶＲＰＴＰＣＡＰＬＡＥＣＫＧＳＬＬＤＤＳＡＧＫＳＴＥＤＴＡＥＹＳＰＦＫＧＧＹＴＫＧＬＥＧＥＳＬＧＣＳＧＳＡＡＡＧＳＳＧＴＬＥＬＰＳＴＬＳＬＹＫＳＧＡＬＤＥＡＡＡＹＱＳＲＤＹＹＮＦＰＬＡＬＡＧＰＰＰＰＰＰＰＰＨＰＨＡＲＩＫＬＥＮＰＬＤＹＧＳＡＷＡＡＡＡＡＱＣＲＹＧＤＬＡＳＬＨＧＡＧＡＡＧＰＧＳＧＳＰＳＡＡＡＳＳＳＷＨＴＬＦＴＡＥＥＧＱＬＹＧＰＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＥＡＧＡＶＡＰＹＧＹＴＲＰＰＱＧＬＡＧＱＥＳＤＦＴＡＰＤＶＷＹＰＧＧＭＶＳＲＶＰＹＰＳＰＴＣＶＫＳＥＭＧＰＷＭＤＳＹＳＧＰＹＧＤＭＲＬＥＴＡＲＤＨＶＬＰＩＤＹＹＦＰＰＱＫＴＣＬＩＣＧＤＥＡＳＧＣＨＹＧＡＬＴＣＧＳＣＫＶＦＦＫＲＡＡＥＧＫＱＫＹＬＣＡＳＲＮＤＣＴＩＤＫＦＲＲＫＮＣＰＳＣＲＬＲＫＣＹＥＡＧＭＴＬＧＡＲＫＬＫＫＬＧＮＬＫＬＱＥＥＧＥＡＳＳＴＴＳＰＴＥＥＴＴＱＫＬＴＶＳＨＩＥＧＹＥＣＱＰＩＦＬＮＶＬＥＡＩＥＰＧＶＶＣＡＧＨＤＮＮＱＰＤＳＦＡＡＬＬＳＳＬＮＥＬＧＥＲＱＬＶＨＶＶＫＷＡＫＡＬＰＧＦＲＮＬＨＶＤＤＱＭＡＶＩＱＹＳＷＭＧＬＭＶＦＡＭＧＷＲＳＦＴＮＶＮＳＲＭＬＹＦＡＰＤＬＶＦＮＥＹＲＭＨＫＳＲＭＹＳＱＣＶＲＭＲＨＬＳＱＥＦＧＷＬＱＩＴＰＱＥＦＬＣＭＫＡＬＬＬＦＳＩＩＰＶＤＧＬＫＮＱＫＦＦＤＥＬＲＭＮＹＩＫＥＬＤＲＩＩＡＣＫＲＫＮＰＴＳＣＳＲＲＦＹＱＬＴＫＬＬＤＳＶＱＰＩＡＲＥＬＨＱＦＴＦＤＬＬＩＫＳＨＭＶＳＶＤＦＰＥＭＭＡＥＩＩＳＶＱＶＰＫＩＬＳＧＫＶＫＰＩＹＦＨＴＱ
に由来する。
【０１５７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アンドロゲン受容体リガンド結合ドメインまたはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１０）
ＤＮＮＱＰＤＳＦＡＡＬＬＳＳＬＮＥＬＧＥＲＱＬＶＨＶＶＫＷＡＫＡＬＰＧＦＲＮＬＨＶＤＤＱＭＡＶＩＱＹＳＷＭＧＬＭＶＦＡＭＧＷＲＳＦＴＮＶＮＳＲＭＬＹＦＡＰＤＬＶＦＮＥＹＲＭＨＫＳＲＭＹＳＱＣＶＲＭＲＨＬＳＱＥＦＧＷＬＱＩＴＰＱＥＦＬＣＭＫＡＬＬＬＦＳＩＩＰＶＤＧＬＫＮＱＫＦＦＤＥＬＲＭＮＹＩＫＥＬＤＲＩＩＡＣＫＲＫＮＰＴＳＣＳＲＲＦＹＱＬＴＫＬＬＤＳＶＱＰＩＡＲＥＬＨＱＦＴＦＤＬＬＩＫＳＨＭＶＳＶＤＦＰＥＭＭＡＥＩＩＳＶＱＶＰＫＩＬＳＧＫＶＫＰＩＹＦＨＴ
に由来する。
【０１５８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、レチノイン酸受容体、（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１９７９３）（ＲＸＲＡ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号７）
ＭＤＴＫＨＦＬＰＬＤＦＳＴＱＶＮＳＳＬＴＳＰＴＧＲＧＳＭＡＡＰＳＬＨＰＳＬＧＰＧＩＧＳＰＧＱＬＨＳＰＩＳＴＬＳＳＰＩＮＧＭＧＰＰＦＳＶＩＳＳＰＭＧＰＨＳＭＳＶＰＴＴＰＴＬＧＦＳＴＧＳＰＱＬＳＳＰＭＮＰＶＳＳＳＥＤＩＫＰＰＬＧＬＮＧＶＬＫＶＰＡＨＰＳＧＮＭＡＳＦＴＫＨＩＣＡＩＣＧＤＲＳＳＧＫＨＹＧＶＹＳＣＥＧＣＫＧＦＦＫＲＴＶＲＫＤＬＴＹＴＣＲＤＮＫＤＣＬＩＤＫＲＱＲＮＲＣＱＹＣＲＹＱＫＣＬＡＭＧＭＫＲＥＡＶＱＥＥＲＱＲＧＫＤＲＮＥＮＥＶＥＳＴＳＳＡＮＥＤＭＰＶＥＲＩＬＥＡＥＬＡＶＥＰＫＴＥＴＹＶＥＡＮＭＧＬＮＰＳＳＰＮＤＰＶＴＮＩＣＱＡＡＤＫＱＬＦＴＬＶＥＷＡＫＲＩＰＨＦＳＥＬＰＬＤＤＱＶＩＬＬＲＡＧＷＮＥＬＬＩＡＳＦＳＨＲＳＩＡＶＫＤＧＩＬＬＡＴＧＬＨＶＨＲＮＳＡＨＳＡＧＶＧＡＩＦＤＲＶＬＴＥＬＶＳＫＭＲＤＭＱＭＤＫＴＥＬＧＣＬＲＡＩＶＬＦＮＰＤＳＫＧＬＳＮＰＡＥＶＥＡＬＲＥＫＶＹＡＳＬＥＡＹＣＫＨＫＹＰＥＱＰＧＲＦＡＫＬＬＬＲＬＰＡＬＲＳＩＧＬＫＣＬＥＨＬＦＦＦＫＬＩＧＤＴＰＩＤＴＦＬＭＥＭＬＥＡＰＨＱＭＴ
に由来する。
【０１５９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、レチノイン酸受容体リガンド結合ドメインまたはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１１）
ＳＡＮＥＤＭＰＶＥＲＩＬＥＡＥＬＡＶＥＰＫＴＥＴＹＶＥＡＮＭＧＬＮＰＳＳＰＮＤＰＶＴＮＩＣＱＡＡＤＫＱＬＦＴＬＶＥＷＡＫＲＩＰＨＦＳＥＬＰＬＤＤＱＶＩＬＬＲＡＧＷＮＥＬＬＩＡＳＦＳＨＲＳＩＡＶＫＤＧＩＬＬＡＴＧＬＨＶＨＲＮＳＡＨＳＡＧＶＧＡＩＦＤＲＶＬＴＥＬＶＳＫＭＲＤＭＱＭＤＫＴＥＬＧＣＬＲＡＩＶＬＦＮＰＤＳＫＧＬＳＮＰＡＥＶＥＡＬＲＥＫＶＹＡＳＬＥＡＹＣＫＨＫＹＰＥＱＰＧＲＦＡＫＬＬＬＲＬＰＡＬＲＳＩＧＬＫＣＬＥＨＬＦＦＦＫＬＩＧＤＴＰＩＤＴＦＬＭＥＭＬＥＡＰＨＱＭＴ
に由来する。
【０１６０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＤＨＦＲ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ７９ＤＱ２（Ｑ７９ＤＱ２＿ＥＣＯＬＸ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号８）
ＭＮＳＥＳＶＲＩＹＬＶＡＡＭＧＡＮＲＶＩＧＮＧＰＮＩＰＷＫＩＰＧＥＱＫＩＦＲＲＬＴＥＧＫＶＶＶＭＧＲＫＴＦＥＳＩＧＫＰＬＰＮＲＨＴＬＶＩＳＲＱＡＮＹＲＡＴＧＣＶＶＶＳＴＬＳＨＡＩＡＬＡＳＥＬＧＮＥＬＹＶＡＧＧＡＥＩＹＴＬＡＬＰＨＡＨＧＶＦＬＳＥＶＨＱＴＦＥＧＤＡＦＦＰＭＬＮＥＴＥＦＥＬＶＳＴＥＴＩＱＡＶＩＰＹＴＨＳＶＹＡＲＲＮＧ
に由来する。
【０１６１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、細菌性デハロゲナーゼまたはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号９）
ＭＡＥＩＧＴＧＦＰＦＤＰＨＹＶＥＶＬＧＥＲＭＨＹＶＤＶＧＰＲＤＧＴＰＶＬＦＬＨＧＮＰＴＳＳＹＶＷＲＮＩＩＰＨＶＡＰＴＨＲＣＩＡＰＤＬＩＧＭＧＫＳＤＫＰＤＬＧＹＦＦＤＤＨＶＲＦＭＤＡＦＩＥＡＬＧＬＥＥＶＶＬＶＩＨＤＷＧＳＡＬＧＦＨＷＡＫＲＮＰＥＲＶＫＧＩＡＦＭＥＦＩＲＰＩＰＴＷＤＥＷＰＥＦＡＲＥＴＦＱＡＦＲＴＴＤＶＧＲＫＬＩＩＤＱＮＶＦＩＥＧＴＬＰＭＧＶＶＲＰＬＴＥＶＥＭＤＨＹＲＥＰＦＬＮＰＶＤＲＥＰＬＷＲＦＰＮＥＬＰＩＡＧＥＰＡＮＩＶＡＬＶＥＥＹＭＤＷＬＨＱＳＰＶＰＫＬＬＦＷＧＴＰＧＶＬＩＰＰＡＥＡＡＲＬＡＫＳＬＰＮＣＫＡＶＤＩＧＰＧＬＮＬＬＱＥＤＮＰＤＬＩＧＳＥＩＡＲＷＬＳＴＬＥＩＳＧ
に由来する。
【０１６２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＭＤＭ２のＮ末端またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１２）
ＭＣＮＴＮＭＳＶＰＴＤＧＡＶＴＴＳＱＩＰＡＳＥＱＥＴＬＶＲＰＫＰＬＬＬＫＬＬＫＳＶＧＡＱＫＤＴＹＴＭＫＥＶＬＦＹＬＧＱＹＩＭＴＫＲＬＹＤＥＫＱＱＨＩＶＹＣＳＮＤＬＬＧＤＬＦＧＶＰＳＦＳＶＫＥＨＲＫＩＹＴＭＩＹＲＮＬＶＶＶ
に由来する。
【０１６３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アポトーシス調節因子Ｂｃｌ−ｘＬタンパク質、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ０７８１７（Ｂ２ＣＬ１＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１６）
ＭＳＱＳＮＲＥＬＶＶＤＦＬＳＹＫＬＳＱＫＧＹＳＷＳＱＦＳＤＶＥＥＮＲＴＥＡＰＥＧＴＥＳＥＭＥＴＰＳＡＩＮＧＮＰＳＷＨＬＡＤＳＰＡＶＮＧＡＴＧＨＳＳＳＬＤＡＲＥＶＩＰＭＡＡＶＫＱＡＬＲＥＡＧＤＥＦＥＬＲＹＲＲＡＦＳＤＬＴＳＱＬＨＩＴＰＧＴＡＹＱＳＦＥＱＶＶＮＥＬＦＲＤＧＶＮＷＧＲＩＶＡＦＦＳＦＧＧＡＬＣＶＥＳＶＤＫＥＭＱＶＬＶＳＲＩＡＡＷＭＡＴＹＬＮＤＨＬＥＰＷＩＱＥＮＧＧＷＤＴＦＶＥＬＹＧＮＮＡＡＡＥＳＲＫＧＱＥＲＦＮＲＷＦＬＴＧＭＴＶＡＧＶＶＬＬＧＳＬＦＳＲＫ
に由来する。
【０１６４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＣＤ２０９抗原、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｑ９ＮＮＸ６（ＣＤ２０９＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１７）
ＭＳＤＳＫＥＰＲＬＱＱＬＧＬＬＥＥＥＱＬＲＧＬＧＦＲＱＴＲＧＹＫＳＬＡＧＣＬＧＨＧＰＬＶＬＱＬＬＳＦＴＬＬＡＧＬＬＶＱＶＳＫＶＰＳＳＩＳＱＥＱＳＲＱＤＡＩＹＱＮＬＴＱＬＫＡＡＶＧＥＬＳＥＫＳＫＬＱＥＩＹＱＥＬＴＱＬＫＡＡＶＧＥＬＰＥＫＳＫＬＱＥＩＹＱＥＬＴＲＬＫＡＡＶＧＥＬＰＥＫＳＫＬＱＥＩＹＱＥＬＴＷＬＫＡＡＶＧＥＬＰＥＫＳＫＭＱＥＩＹＱＥＬＴＲＬＫＡＡＶＧＥＬＰＥＫＳＫＱＱＥＩＹＱＥＬＴＲＬＫＡＡＶＧＥＬＰＥＫＳＫＱＱＥＩＹＱＥＬＴＲＬＫＡＡＶＧＥＬＰＥＫＳＫＱＱＥＩＹＱＥＬＴＱＬＫＡＡＶＥＲＬＣＨＰＣＰＷＥＷＴＦＦＱＧＮＣＹＦＭＳＮＳＱＲＮＷＨＤＳＩＴＡＣＫＥＶＧＡＱＬＶＶＩＫＳＡＥＥＱＮＦＬＱＬＱＳＳＲＳＮＲＦＴＷＭＧＬＳＤＬＮＱＥＧＴＷＱＷＶＤＧＳＰＬＬＰＳＦＫＱＹＷＮＲＧＥＰＮＮＶＧＥＥＤＣＡＥＦＳＧＮＧＷＮＤＤＫＣＮＬＡＫＦＷＩＣＫＫＳＡＡＳＣＳＲＤＥＥＱＦＬＳＰＡＰＡＴＰＮＰＰＰＡ
に由来する。
【０１６５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｅ３リガーゼＸＩＡＰ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ９８１７０（ＸＩＡＰ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１８）
ＭＴＦＮＳＦＥＧＳＫＴＣＶＰＡＤＩＮＫＥＥＥＦＶＥＥＦＮＲＬＫＴＦＡＮＦＰＳＧＳＰＶＳＡＳＴＬＡＲＡＧＦＬＹＴＧＥＧＤＴＶＲＣＦＳＣＨＡＡＶＤＲＷＱＹＧＤＳＡＶＧＲＨＲＫＶＳＰＮＣＲＦＩＮＧＦＹＬＥＮＳＡＴＱＳＴＮＳＧＩＱＮＧＱＹＫＶＥＮＹＬＧＳＲＤＨＦＡＬＤＲＰＳＥＴＨＡＤＹＬＬＲＴＧＱＶＶＤＩＳＤＴＩＹＰＲＮＰＡＭＹＳＥＥＡＲＬＫＳＦＱＮＷＰＤＹＡＨＬＴＰＲＥＬＡＳＡＧＬＹＹＴＧＩＧＤＱＶＱＣＦＣＣＧＧＫＬＫＮＷＥＰＣＤＲＡＷＳＥＨＲＲＨＦＰＮＣＦＦＶＬＧＲＮＬＮＩＲＳＥＳＤＡＶＳＳＤＲＮＦＰＮＳＴＮＬＰＲＮＰＳＭＡＤＹＥＡＲＩＦＴＦＧＴＷＩＹＳＶＮＫＥＱＬＡＲＡＧＦＹＡＬＧＥＧＤＫＶＫＣＦＨＣＧＧＧＬＴＤＷＫＰＳＥＤＰＷＥＱＨＡＫＷＹＰＧＣＫＹＬＬＥＱＫＧＱＥＹＩＮＮＩＨＬＴＨＳＬＥＥＣＬＶＲＴＴＥＫＴＰＳＬＴＲＲＩＤＤＴＩＦＱＮＰＭＶＱＥＡＩＲＭＧＦＳＦＫＤＩＫＫＩＭＥＥＫＩＱＩＳＧＳＮＹＫＳＬＥＶＬＶＡＤＬＶＮＡＱＫＤＳＭＱＤＥＳＳＱＴＳＬＱＫＥＩＳＴＥＥＱＬＲＲＬＱＥＥＫＬＣＫＩＣＭＤＲＮＩＡＩＶＦＶＰＣＧＨＬＶＴＣＫＱＣＡＥＡＶＤＫＣＰＭＣＹＴＶＩＴＦＫＱＫＩＦＭＳ
に由来する。
【０１６６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、バキュロウイルスＩＡＰリピート含有タンパク質２、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１３４９０（ＢＩＲＣ２＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号１９）
ＭＨＫＴＡＳＱＲＬＦＰＧＰＳＹＱＮＩＫＳＩＭＥＤＳＴＩＬＳＤＷＴＮＳＮＫＱＫＭＫＹＤＦＳＣＥＬＹＲＭＳＴＹＳＴＦＰＡＧＶＰＶＳＥＲＳＬＡＲＡＧＦＹＹＴＧＶＮＤＫＶＫＣＦＣＣＧＬＭＬＤＮＷＫＬＧＤＳＰＩＱＫＨＫＱＬＹＰＳＣＳＦＩＱＮＬＶＳＡＳＬＧＳＴＳＫＮＴＳＰＭＲＮＳＦＡＨＳＬＳＰＴＬＥＨＳＳＬＦＳＧＳＹＳＳＬＳＰＮＰＬＮＳＲＡＶＥＤＩＳＳＳＲＴＮＰＹＳＹＡＭＳＴＥＥＡＲＦＬＴＹＨＭＷＰＬＴＦＬＳＰＳＥＬＡＲＡＧＦＹＹＩＧＰＧＤＲＶＡＣＦＡＣＧＧＫＬＳＮＷＥＰＫＤＤＡＭＳＥＨＲＲＨＦＰＮＣＰＦＬＥＮＳＬＥＴＬＲＦＳＩＳＮＬＳＭＱＴＨＡＡＲＭＲＴＦＭＹＷＰＳＳＶＰＶＱＰＥＱＬＡＳＡＧＦＹＹＶＧＲＮＤＤＶＫＣＦＣＣＤＧＧＬＲＣＷＥＳＧＤＤＰＷＶＥＨＡＫＷＦＰＲＣＥＦＬＩＲＭＫＧＱＥＦＶＤＥＩＱＧＲＹＰＨＬＬＥＱＬＬＳＴＳＤＴＴＧＥＥＮＡＤＰＰＩＩＨＦＧＰＧＥＳＳＳＥＤＡＶＭＭＮＴＰＶＶＫＳＡＬＥＭＧＦＮＲＤＬＶＫＱＴＶＱＳＫＩＬＴＴＧＥＮＹＫＴＶＮＤＩＶＳＡＬＬＮＡＥＤＥＫＲＥＥＥＫＥＫＱＡＥＥＭＡＳＤＤＬＳＬＩＲＫＮＲＭＡＬＦＱＱＬＴＣＶＬＰＩＬＤＮＬＬＫＡＮＶＩＮＫＱＥＨＤＩＩＫＱＫＴＱＩＰＬＱＡＲＥＬＩＤＴＩＬＶＫＧＮＡＡＡＮＩＦＫＮＣＬＫＥＩＤＳＴＬＹＫＮＬＦＶＤＫＮＭＫＹＩＰＴＥＤＶＳＧＬＳＬＥＥＱＬＲＲＬＱＥＥＲＴＣＫＶＣＭＤＫＥＶＳＶＶＦＩＰＣＧＨＬＶＶＣＱＥＣＡＰＳＬＲＫＣＰＩＣＲＧＩＩＫＧＴＶＲＴＦＬＳ
に由来する。
【０１６７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、造血プロスタグランジンＤシンターゼ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｏ６０７６０（ＨＰＧＤＳ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２０）
ＭＰＮＹＫＬＴＹＦＮＭＲＧＲＡＥＩＩＲＹＩＦＡＹＬＤＩＱＹＥＤＨＲＩＥＱＡＤＷＰＥＩＫＳＴＬＰＦＧＫＩＰＩＬＥＶＤＧＬＴＬＨＱＳＬＡＩＡＲＹＬＴＫＮＴＤＬＡＧＮＴＥＭＥＱＣＨＶＤＡＩＶＤＴＬＤＤＦＭＳＣＦＰＷＡＥＫＫＱＤＶＫＥＱＭＦＮＥＬＬＴＹＮＡＰＨＬＭＱＤＬＤＴＹＬＧＧＲＥＷＬＩＧＮＳＶＴＷＡＤＦＹＷＥＩＣＳＴＴＬＬＶＦＫＰＤＬＬＤＮＨＰＲＬＶＴＬＲＫＫＶＱＡＩＰＡＶＡＮＷＩＫＲＲＰＱＴＫＬ
に由来する。
【０１６８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＧＴＰａｓｅ  ｋ−ＲＡＳ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０１１１６（ＲＡＳＫ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２１）
ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴＩＱＬＩＱＮＨＦＶＤＥＹＤＰＴＩＥＤＳＹＲＫＱＶＶＩＤＧＥＴＣＬＬＤＩＬＤＴＡＧＱＥＥＹＳＡＭＲＤＱＹＭＲＴＧＥＧＦＬＣＶＦＡＩＮＮＴＫＳＦＥＤＩＨＨＹＲＥＱＩＫＲＶＫＤＳＥＤＶＰＭＶＬＶＧＮＫＣＤＬＰＳＲＴＶＤＴＫＱＡＱＤＬＡＲＳＹＧＩＰＦＩＥＴＳＡＫＴＲＱＲＶＥＤＡＦＹＴＬＶＲＥＩＲＱＹＲＬＫＫＩＳＫＥＥＫＴＰＧＣＶＫＩＫＫＣＩＩＭ
に由来する。
【０１６９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐｏｌｙ−ＡＤＰ−リボースポリメラーゼ１５、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ４６０Ｎ３（ＰＡＲ１５＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２２）
ＭＡＡＰＧＰＬＰＡＡＡＬＳＰＧＡＰＴＰＲＥＬＭＨＧＶＡＧＶＴＳＲＡＧＲＤＲＥＡＧＳＶＬＰＡＧＮＲＧＡＲＫＡＳＲＲＳＳＳＲＳＭＳＲＤＮＫＦＳＫＫＤＣＬＳＩＲＮＶＶＡＳＩＱＴＫＥＧＬＮＬＫＬＩＳＧＤＶＬＹＩＷＡＤＶＩＶＮＳＶＰＭＮＬＱＬＧＧＧＰＬＳＲＡＦＬＱＫＡＧＰＭＬＱＫＥＬＤＤＲＲＲＥＴＥＥＫＶＧＮＩＦＭＴＳＧＣＮＬＤＣＫＡＶＬＨＡＶＡＰＹＷＮＮＧＡＥＴＳＷＱＩＭＡＮＩＩＫＫＣＬＴＴＶＥＶＬＳＦＳＳＩＴＦＰＭＩＧＴＧＳＬＱＦＰＫＡＶＦＡＫＬＩＬＳＥＶＦＥＹＳＳＳＴＲＰＩＴＳＰＬＱＥＶＨＦＬＶＹＴＮＤＤＥＧＣＱＡＦＬＤＥＦＴＮＷＳＲＩＮＰＮＫＡＲＩＰＭＡＧＤＴＱＧＶＶＧＴＶＳＫＰＣＦＴＡＹＥＭＫＩＧＡＩＴＦＱＶＡＴＧＤＩＡＴＥＱＶＤＶＩＶＮＳＴＡＲＴＦＮＲＫＳＧＶＳＲＡＩＬＥＧＡＧＱＡＶＥＳＥＣＡＶＬＡＡＱＰＨＲＤＦＩＩＴＰＧＧＣＬＫＣＫＩＩＩＨＶＰＧＧＫＤＶＲＫＴＶＴＳＶＬＥＥＣＥＱＲＫＹＴＳＶＳＬＰＡＩＧＴＧＮＡＧＫＮＰＩＴＶＡＤＮＩＩＤＡＩＶＤＦＳＳＱＨＳＴＰＳＬＫＴＶＫＶＶＩＦＱＰＥＬＬＮＩＦＹＤＳＭＫＫＲＤＬＳＡＳＬＮＦＱＳＴＦＳＭＴＴＣＮＬＰＥＨＷＴＤＭＮＨＱＬＦＣＭＶＱＬＥＰＧＱＳＥＹＮＴＩＫＤＫＦＴＲＴＣＳＳＹＡＩＥＫＩＥＲＩＱＮＡＦＬＷＱＳＹＱＶＫＫＲＱＭＤＩＫＮＤＨＫＮＮＥＲＬＬＦＨＧＴＤＡＤＳＶＰＹＶＮＱＨＧＦＮＲＳＣＡＧＫＮＡＶＳＹＧＫＧＴＹＦＡＶＤＡＳＹＳＡＫＤＴＹＳＫＰＤＳＮＧＲＫＨＭＹＶＶＲＶＬＴＧＶＦＴＫＧＲＡＧＬＶＴＰＰＰＫＮＰＨＮＰＴＤＬＦＤＳＶＴＮＮＴＲＳＰＫＬＦＶＶＦＦＤＮＱＡＹＰＥＹＬＩＴＦＴＡ
に由来する。
【０１７０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐｏｌｙ−ＡＤＰ−リボースポリメラーゼ１４、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ４６０Ｎ５（ＰＡＲ１４＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２３）
ＭＡＶＰＧＳＦＰＬＬＶＥＧＳＷＧＰＤＰＰＫＮＬＮＴＫＬＱＭＹＦＱＳＰＫＲＳＧＧＧＥＣＥＶＲＱＤＰＲＳＰＳＲＦＬＶＦＦＹＰＥＤＶＲＱＫＶＬＥＲＫＮＨＥＬＶＷＱＧＫＧＴＦＫＬＴＶＱＬＰＡＴＰＤＥＩＤＨＶＦＥＥＥＬＬＴＫＥＳＫＴＫＥＤＶＫＥＰＤＶＳＥＥＬＤＴＫＬＰＬＤＧＧＬＤＫＭＥＤＩＰＥＥＣＥＮＩＳＳＬＶＡＦＥＮＬＫＡＮＶＴＤＩＭＬＩＬＬＶＥＮＩＳＧＬＳＮＤＤＦＱＶＥＩＩＲＤＦＤＶＡＶＶＴＦＱＫＨＩＤＴＩＲＦＶＤＤＣＴＫＨＨＳＩＫＱＬＱＬＳＰＲＬＬＥＶＴＮＴＩＲＶＥＮＬＰＰＧＡＤＤＹＳＬＫＬＦＦＥＮＰＹＮＧＧＧＲＶＡＮＶＥＹＦＰＥＥＳＳＡＬＩＥＦＦＤＲＫＶＬＤＴＩＭＡＴＫＬＤＦＮＫＭＰＬＳＶＦＰＹＹＡＳＬＧＴＡＬＹＧＫＥＫＰＬＩＫＬＰＡＰＦＥＥＳＬＤＬＰＬＷＫＦＬＱＫＫＮＨＬＩＥＥＩＮＤＥＭＲＲＣＨＣＥＬＴＷＳＱＬＳＧＫＶＴＩＲＰＡＡＴＬＶＮＥＧＲＰＲＩＫＴＷＱＡＤＴＳＴＴＬＳＳＩＲＳＫＹＫＶＮＰＩＫＶＤＰＴＭＷＤＴＩＫＮＤＶＫＤＤＲＩＬＩＥＦＤＴＬＫＥＭＶＩＬＡＧＫＳＥＤＶＱＳＩＥＶＱＶＲＥＬＩＥＳＴＴＱＫＩＫＲＥＥＱＳＬＫＥＫＭＩＩＳＰＧＲＹＦＬＬＣＨＳＳＬＬＤＨＬＬＴＥＣＰＥＩＥＩＣＹＤＲＶＴＱＨＬＣＬＫＧＰＳＡＤＶＹＫＡＫＣＥＩＱＥＫＶＹＴＭＡＱＫＮＩＱＶＳＰＥＩＦＱＦＬＱＱＶＮＷＫＥＦＳＫＣＬＦＩＡＱＫＩＬＡＬＹＥＬＥＧＴＴＶＬＬＴＳＣＳＳＥＡＬＬＥＡＥＫＱＭＬＳＡＬＮＹＫＲＩＥＶＥＮＫＥＶＬＨＧＫＫＷＫＧＬＴＨＮＬＬＫＫＱＮＳＳＰＮＴＶＩＩＮＥＬＴＳＥＴＴＡＥＶＩＩＴＧＣＶＫＥＶＮＥＴＹＫＬＬＦＮＦＶＥＱＮＭＫＩＥＲＬＶＥＶＫＰＳＬＶＩＤＹＬＫＴＥＫＫＬＦＷＰＫＩＫＫＶＮＶＱＶＳＦＮＰＥＮＫＱＫＧＩＬＬＴＧＳＫＴＥＶＬＫＡＶＤＩＶＫＱＶＷＤＳＶＣＶＫＳＶＨＴＤＫＰＧＡＫＱＦＦＱＤＫＡＲＦＹＱＳＥＩＫＲＬＦＧＣＹＩＥＬＱＥＮＥＶＭＫＥＧＧＳＰＡＧＱＫＣＦＳＲＴＶＬＡＰＧＶＶＬＩＶＱＱＧＤＬＡＲＬＰＶＤＶＶＶＮＡＳＮＥＤＬＫＨＹＧＧＬＡＡＡＬＳＫＡＡＧＰＥＬＱＡＤＣＤＱＩＶＫＲＥＧＲＬＬＰＧＮＡＴＩＳＫＡＧＫＬＰＹＨＨＶＩＨＡＶＧＰＲＷＳＧＹＥＡＰＲＣＶＹＬＬＲＲＡＶＱＬＳＬＣＬＡＥＫＹＫＹＲＳＩＡＩＰＡＩＳＳＧＶＦＧＦＰＬＧＲＣＶＥＴＩＶＳＡＩＫＥＮＦＱＦＫＫＤＧＨＣＬＫＥＩＹＬＶＤＶＳＥＫＴＶＥＡＦＡＥＡＶＫＴＶＦＫＡＴＬＰＤＴＡＡＰＰＧＬＰＰＡＡＡＧＰＧＫＴＳＷＥＫＧＳＬＶＳＰＧＧＬＱＭＬＬＶＫＥＧＶＱＮＡＫＴＤＶＶＶＮＳＶＰＬＤＬＶＬＳＲＧＰＬＳＫＳＬＬＥＫＡＧＰＥＬＱＥＥＬＤＴＶＧＱＧＶＡＶＳＭＧＴＶＬＫＴＳＳＷＮＬＤＣＲＹＶＬＨＶＶＡＰＥＷＲＮＧＳＴＳＳＬＫＩＭＥＤＩＩＲＥＣＭＥＩＴＥＳＬＳＬＫＳＩＡＦＰＡＩＧＴＧＮＬＧＦＰＫＮＩＦＡＥＬＩＩＳＥＶＦＫＦＳＳＫＮＱＬＫＴＬＱＥＶＨＦＬＬＨＰＳＤＨＥＮＩＱＡＦＳＤＥＦＡＲＲＡＮＧＮＬＶＳＤＫＩＰＫＡＫＤＴＱＧＦＹＧＴＶＳＳＰＤＳＧＶＹＥＭＫＩＧＳＩＩＦＱＶＡＳＧＤＩＴＫＥＥＡＤＶＩＶＮＳＴＳＮＳＦＮＬＫＡＧＶＳＫＡＩＬＥＣＡＧＱＮＶＥＲＥＣＳＱＱＡＱＱＲＫＮＤＹＩＩＴＧＧＧＦＬＲＣＫＮＩＩＨＶＩＧＧＮＤＶＫＳＳＶＳＳＶＬＱＥＣＥＫＫＮＹＳＳＩＣＬＰＡＩＧＴＧＮＡＫＱＨＰＤＫＶＡＥＡＩＩＤＡＩＥＤＦＶＱＫＧＳＡＱＳＶＫＫＶＫＶＶＩＦＬＰＱＶＬＤＶＦＹＡＮＭＫＫＲＥＧＴＱＬＳＳＱＱＳＶＭＳＫＬＡＳＦＬＧＦＳＫＱＳＰＱＫＫＮＨＬＶＬＥＫＫＴＥＳＡＴＦＲＶＣＧＥＮＶＴＣＶＥＹＡＩＳＷＬＱＤＬＩＥＫＥＱＣＰＹＴＳＥＤＥＣＩＫＤＦＤＥＫＥＹＱＥＬＮＥＬＱＫＫＬＮＩＮＩＳＬＤＨＫＲＰＬＩＫＶＬＧＩＳＲＤＶＭＱＡＲＤＥＩＥＡＭＩＫＲＶＲＬＡＫＥＱＥＳＲＡＤＣＩＳＥＦＩＥＷＱＹＮＤＮＮＴＳＨＣＦＮＫＭＴＮＬＫＬＥＤＡＲＲＥＫＫＫＴＶＤＶＫＩＮＨＲＨＹＴＶＮＬＮＴＹＴＡＴＤＴＫＧＨＳＬＳＶＱＲＬＴＫＳＫＶＤＩＰＡＨＷＳＤＭＫＱＱＮＦＣＶＶＥＬＬＰＳＤＰＥＹＮＴＶＡＳＫＦＮＱＴＣＳＨＦＲＩＥＫＩＥＲＩＱＮＰＤＬＷＮＳＹＱＡＫＫＫＴＭＤＡＫＮＧＱＴＭＮＥＫＱＬＦＨＧＴＤＡＧＳＶＰＨＶＮＲＮＧＦＮＲＳＹＡＧＫＮＡＶＡＹＧＫＧＴＹＦＡＶＮＡＮＹＳＡＮＤＴＹＳＲＰＤＡＮＧＲＫＨＶＹＹＶＲＶＬＴＧＩＹＴＨＧＮＨＳＬＩＶＰＰＳＫＮＰＱＮＰＴＤＬＹＤＴＶＴＤＮＶＨＨＰＳＬＦＶＡＦＹＤＹＱＡＹＰＥＹＬＩＴＦＲＫ
に由来する。
【０１７１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、スーパーオキシドジスムターゼ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ００４４１（ＳＯＤＣ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２４）
ＭＡＴＫＡＶＣＶＬＫＧＤＧＰＶＱＧＩＩＮＦＥＱＫＥＳＮＧＰＶＫＶＷＧＳＩＫＧＬＴＥＧＬＨＧＦＨＶＨＥＦＧＤＮＴＡＧＣＴＳＡＧＰＨＦＮＰＬＳＲＫＨＧＧＰＫＤＥＥＲＨＶＧＤＬＧＮＶＴＡＤＫＤＧＶＡＤＶＳＩＥＤＳＶＩＳＬＳＧＤＨＣＩＩＧＲＴＬＶＶＨＥＫＡＤＤＬＧＫＧＧＮＥＥＳＴＫＴＧＮＡＧＳＲＬＡＣＧＶＩＧＩＡＱ
に由来する。
【０１７２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、桿体ロドプシン感受性ｃＧＭＰ  ３’，５’−環状ホスホジエステラーゼサブユニットδ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｏ４３９２４（ＰＤＥ６Ｄ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２５）
ＭＳＡＫＤＥＲＡＲＥＩＬＲＧＦＫＬＮＷＭＮＬＲＤＡＥＴＧＫＩＬＷＱＧＴＥＤＬＳＶＰＧＶＥＨＥＡＲＶＰＫＫＩＬＫＣＫＡＶＳＲＥＬＮＦＳＳＴＥＱＭＥＫＦＲＬＥＱＫＶＹＦＫＧＱＣＬＥＥＷＦＦＥＦＧＦＶＩＰＮＳＴＮＴＷＱＳＬＩＥＡＡＰＥＳＱＭＭＰＡＳＶＬＴＧＮＶＩＩＥＴＫＦＦＤＤＤＬＬＶＳＴＳＲＶＲＬＦＹＶ
に由来する。
【０１７３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、誘導骨髄性白血病細胞分化タンパク質Ｍｃｌ−１、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ０７８２０（ＭＣＬ１＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２６）
ＭＦＧＬＫＲＮＡＶＩＧＬＮＬＹＣＧＧＡＧＬＧＡＧＳＧＧＡＴＲＰＧＧＲＬＬＡＴＥＫＥＡＳＡＲＲＥＩＧＧＧＥＡＧＡＶＩＧＧＳＡＧＡＳＰＰＳＴＬＴＰＤＳＲＲＶＡＲＰＰＰＩＧＡＥＶＰＤＶＴＡＴＰＡＲＬＬＦＦＡＰＴＲＲＡＡＰＬＥＥＭＥＡＰＡＡＤＡＩＭＳＰＥＥＥＬＤＧＹＥＰＥＰＬＧＫＲＰＡＶＬＰＬＬＥＬＶＧＥＳＧＮＮＴＳＴＤＧＳＬＰＳＴＰＰＰＡＥＥＥＥＤＥＬＹＲＱＳＬＥＩＩＳＲＹＬＲＥＱＡＴＧＡＫＤＴＫＰＭＧＲＳＧＡＴＳＲＫＡＬＥＴＬＲＲＶＧＤＧＶＱＲＮＨＥＴＡＦＱＧＭＬＲＫＬＤＩＫＮＥＤＤＶＫＳＬＳＲＶＭＩＨＶＦＳＤＧＶＴＮＷＧＲＩＶＴＬＩＳＦＧＡＦＶＡＫＨＬＫＴＩＮＱＥＳＣＩＥＰＬＡＥＳＩＴＤＶＬＶＲＴＫＲＤＷＬＶＫＱＲＧＷＤＧＦＶＥＦＦＨＶＥＤＬＥＧＧＩＲＮＶＬＬＡＦＡＧＶＡＧＶＧＡＧＬＡＹＬＩＲ
に由来する。
【０１７４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アポトーシス調節因子Ｂｃｌ−２、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ０７８２０（ＢＣＬ２＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２７）
ＭＡＨＡＧＲＴＧＹＤＮＲＥＩＶＭＫＹＩＨＹＫＬＳＱＲＧＹＥＷＤＡＧＤＶＧＡＡＰＰＧＡＡＰＡＰＧＩＦＳＳＱＰＧＨＴＰＨＰＡＡＳＲＤＰＶＡＲＴＳＰＬＱＴＰＡＡＰＧＡＡＡＧＰＡＬＳＰＶＰＰＶＶＨＬＴＬＲＱＡＧＤＤＦＳＲＲＹＲＲＤＦＡＥＭＳＳＱＬＨＬＴＰＦＴＡＲＧＲＦＡＴＶＶＥＥＬＦＲＤＧＶＮＷＧＲＩＶＡＦＦＥＦＧＧＶＭＣＶＥＳＶＮＲＥＭＳＰＬＶＤＮＩＡＬＷＭＴＥＹＬＮＲＨＬＨＴＷＩＱＤＮＧＧＷＤＡＦＶＥＬＹＧＰＳＭＲＰＬＦＤＦＳＷＬＳＬＫＴＬＬＳＬＡＬＶＧＡＣＩＴＬＧＡＹＬＧＨＫ
に由来する。
【０１７５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ペプチジル−プロリルシス−トランスイソメラーゼＮＩＭＡ相互作用１、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ１３５２６（ＰＩＮ１＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２８）
ＭＡＤＥＥＫＬＰＰＧＷＥＫＲＭＳＲＳＳＧＲＶＹＹＦＮＨＩＴＮＡＳＱＷＥＲＰＳＧＮＳＳＳＧＧＫＮＧＱＧＥＰＡＲＶＲＣＳＨＬＬＶＫＨＳＱＳＲＲＰＳＳＷＲＱＥＫＩＴＲＴＫＥＥＡＬＥＬＩＮＧＹＩＱＫＩＫＳＧＥＥＤＦＥＳＬＡＳＱＦＳＤＣＳＳＡＫＡＲＧＤＬＧＡＦＳＲＧＱＭＱＫＰＦＥＤＡＳＦＡＬＲＴＧＥＭＳＧＰＶＦＴＤＳＧＩＨＩＩＬＲＴＥ
に由来する。
【０１７６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、タンキラーゼ１、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｏ９５２７１（ＴＮＫＳ１＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号２９）
ＭＡＡＳＲＲＳＱＨＨＨＨＨＨＱＱＱＬＱＰＡＰＧＡＳＡＰＰＰＰＰＰＰＰＬＳＰＧＬＡＰＧＴＴＰＡＳＰＴＡＳＧＬＡＰＦＡＳＰＲＨＧＬＡＬＰＥＧＤＧＳＲＤＰＰＤＲＰＲＳＰＤＰＶＤＧＴＳＣＣＳＴＴＳＴＩＣＴＶＡＡＡＰＶＶＰＡＶＳＴＳＳＡＡＧＶＡＰＮＰＡＧＳＧＳＮＮＳＰＳＳＳＳＳＰＴＳＳＳＳＳＳＰＳＳＰＧＳＳＬＡＥＳＰＥＡＡＧＶＳＳＴＡＰＬＧＰＧＡＡＧＰＧＴＧＶＰＡＶＳＧＡＬＲＥＬＬＥＡＣＲＮＧＤＶＳＲＶＫＲＬＶＤＡＡＮＶＮＡＫＤＭＡＧＲＫＳＳＰＬＨＦＡＡＧＦＧＲＫＤＶＶＥＨＬＬＱＭＧＡＮＶＨＡＲＤＤＧＧＬＩＰＬＨＮＡＣＳＦＧＨＡＥＶＶＳＬＬＬＣＱＧＡＤＰＮＡＲＤＮＷＮＹＴＰＬＨＥＡＡＩＫＧＫＩＤＶＣＩＶＬＬＱＨＧＡＤＰＮＩＲＮＴＤＧＫＳＡＬＤＬＡＤＰＳＡＫＡＶＬＴＧＥＹＫＫＤＥＬＬＥＡＡＲＳＧＮＥＥＫＬＭＡＬＬＴＰＬＮＶＮＣＨＡＳＤＧＲＫＳＴＰＬＨＬＡＡＧＹＮＲＶＲＩＶＱＬＬＬＱＨＧＡＤＶＨＡＫＤＫＧＧＬＶＰＬＨＮＡＣＳＹＧＨＹＥＶＴＥＬＬＬＫＨＧＡＣＶＮＡＭＤＬＷＱＦＴＰＬＨＥＡＡＳＫＮＲＶＥＶＣＳＬＬＬＳＨＧＡＤＰＴＬＶＮＣＨＧＫＳＡＶＤＭＡＰＴＰＥＬＲＥＲＬＴＹＥＦＫＧＨＳＬＬＱＡＡＲＥＡＤＬＡＫＶＫＫＴＬＡＬＥＩＩＮＦＫＱＰＱＳＨＥＴＡＬＨＣＡＶＡＳＬＨＰＫＲＫＱＶＴＥＬＬＬＲＫＧＡＮＶＮＥＫＮＫＤＦＭＴＰＬＨＶＡＡＥＲＡＨＮＤＶＭＥＶＬＨＫＨＧＡＫＭＮＡＬＤＴＬＧＱＴＡＬＨＲＡＡＬＡＧＨＬＱＴＣＲＬＬＬＳＹＧＳＤＰＳＩＩＳＬＱＧＦＴＡＡＱＭＧＮＥＡＶＱＱＩＬＳＥＳＴＰＩＲＴＳＤＶＤＹＲＬＬＥＡＳＫＡＧＤＬＥＴＶＫＱＬＣＳＳＱＮＶＮＣＲＤＬＥＧＲＨＳＴＰＬＨＦＡＡＧＹＮＲＶＳＶＶＥＹＬＬＨＨＧＡＤＶＨＡＫＤＫＧＧＬＶＰＬＨＮＡＣＳＹＧＨＹＥＶＡＥＬＬＶＲＨＧＡＳＶＮＶＡＤＬＷＫＦＴＰＬＨＥＡＡＡＫＧＫＹＥＩＣＫＬＬＬＫＨＧＡＤＰＴＫＫＮＲＤＧＮＴＰＬＤＬＶＫＥＧＤＴＤＩＱＤＬＬＲＧＤＡＡＬＬＤＡＡＫＫＧＣＬＡＲＶＱＫＬＣＴＰＥＮＩＮＣＲＤＴＱＧＲＮＳＴＰＬＨＬＡＡＧＹＮＮＬＥＶＡＥＹＬＬＥＨＧＡＤＶＮＡＱＤＫＧＧＬＩＰＬＨＮＡＡＳＹＧＨＶＤＩＡＡＬＬＩＫＹＮＴＣＶＮＡＴＤＫＷＡＦＴＰＬＨＥＡＡＱＫＧＲＴＱＬＣＡＬＬＬＡＨＧＡＤＰＴＭＫＮＱＥＧＱＴＰＬＤＬＡＴＡＤＤＩＲＡＬＬＩＤＡＭＰＰＥＡＬＰＴＣＦＫＰＱＡＴＶＶＳＡＳＬＩＳＰＡＳＴＰＳＣＬＳＡＡＳＳＩＤＮＬＴＧＰＬＡＥＬＡＶＧＧＡＳＮＡＧＤＧＡＡＧＴＥＲＫＥＧＥＶＡＧＬＤＭＮＩＳＱＦＬＫＳＬＧＬＥＨＬＲＤＩＦＥＴＥＱＩＴＬＤＶＬＡＤＭＧＨＥＥＬＫＥＩＧＩＮＡＹＧＨＲＨＫＬＩＫＧＶＥＲＬＬＧＧＱＱＧＴＮＰＹＬＴＦＨＣＶＮＱＧＴＩＬＬＤＬＡＰＥＤＫＥＹＱＳＶＥＥＥＭＱＳＴＩＲＥＨＲＤＧＧＮＡＧＧＩＦＮＲＹＮＶＩＲＩＱＫＶＶＮＫＫＬＲＥＲＦＣＨＲＱＫＥＶＳＥＥＮＨＮＨＨＮＥＲＭＬＦＨＧＳＰＦＩＮＡＩＩＨＫＧＦＤＥＲＨＡＹＩＧＧＭＦＧＡＧＩＹＦＡＥＮＳＳＫＳＮＱＹＶＹＧＩＧＧＧＴＧＣＰＴＨＫＤＲＳＣＹＩＣＨＲＱＭＬＦＣＲＶＴＬＧＫＳＦＬＱＦＳＴＭＫＭＡＨＡＰＰＧＨＨＳＶＩＧＲＰＳＶＮＧＬＡＹＡＥＹＶＩＹＲＧＥＱＡＹＰＥＹＬＩＴＹＱＩＭＫＰＥＡＰＳＱＴＡＴＡＡＥＱＫＴ
に由来する。
【０１７７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、タンキラーゼ２、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｏ９Ｈ２Ｋ２（ＴＮＫＳ２＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３０）
ＭＳＧＲＲＣＡＧＧＧＡＡＣＡＳＡＡＡＥＡＶＥＰＡＡＲＥＬＦＥＡＣＲＮＧＤＶＥＲＶＫＲＬＶＴＰＥＫＶＮＳＲＤＴＡＧＲＫＳＴＰＬＨＦＡＡＧＦＧＲＫＤＶＶＥＹＬＬＱＮＧＡＮＶＱＡＲＤＤＧＧＬＩＰＬＨＮＡＣＳＦＧＨＡＥＶＶＮＬＬＬＲＨＧＡＤＰＮＡＲＤＮＷＮＹＴＰＬＨＥＡＡＩＫＧＫＩＤＶＣＩＶＬＬＱＨＧＡＥＰＴＩＲＮＴＤＧＲＴＡＬＤＬＡＤＰＳＡＫＡＶＬＴＧＥＹＫＫＤＥＬＬＥＳＡＲＳＧＮＥＥＫＭＭＡＬＬＴＰＬＮＶＮＣＨＡＳＤＧＲＫＳＴＰＬＨＬＡＡＧＹＮＲＶＫＩＶＱＬＬＬＱＨＧＡＤＶＨＡＫＤＫＧＤＬＶＰＬＨＮＡＣＳＹＧＨＹＥＶＴＥＬＬＶＫＨＧＡＣＶＮＡＭＤＬＷＱＦＴＰＬＨＥＡＡＳＫＮＲＶＥＶＣＳＬＬＬＳＹＧＡＤＰＴＬＬＮＣＨＮＫＳＡＩＤＬＡＰＴＰＱＬＫＥＲＬＡＹＥＦＫＧＨＳＬＬＱＡＡＲＥＡＤＶＴＲＩＫＫＨＬＳＬＥＭＶＮＦＫＨＰＱＴＨＥＴＡＬＨＣＡＡＡＳＰＹＰＫＲＫＱＩＣＥＬＬＬＲＫＧＡＮＩＮＥＫＴＫＥＦＬＴＰＬＨＶＡＳＥＫＡＨＮＤＶＶＥＶＶＶＫＨＥＡＫＶＮＡＬＤＮＬＧＱＴＳＬＨＲＡＡＹＣＧＨＬＱＴＣＲＬＬＬＳＹＧＣＤＰＮＩＩＳＬＱＧＦＴＡＬＱＭＧＮＥＮＶＱＱＬＬＱＥＧＩＳＬＧＮＳＥＡＤＲＱＬＬＥＡＡＫＡＧＤＶＥＴＶＫＫＬＣＴＶＱＳＶＮＣＲＤＩＥＧＲＱＳＴＰＬＨＦＡＡＧＹＮＲＶＳＶＶＥＹＬＬＱＨＧＡＤＶＨＡＫＤＫＧＧＬＶＰＬＨＮＡＣＳＹＧＨＹＥＶＡＥＬＬＶＫＨＧＡＶＶＮＶＡＤＬＷＫＦＴＰＬＨＥＡＡＡＫＧＫＹＥＩＣＫＬＬＬＱＨＧＡＤＰＴＫＫＮＲＤＧＮＴＰＬＤＬＶＫＤＧＤＴＤＩＱＤＬＬＲＧＤＡＡＬＬＤＡＡＫＫＧＣＬＡＲＶＫＫＬＳＳＰＤＮＶＮＣＲＤＴＱＧＲＨＳＴＰＬＨＬＡＡＧＹＮＮＬＥＶＡＥＹＬＬＱＨＧＡＤＶＮＡＱＤＫＧＧＬＩＰＬＨＮＡＡＳＹＧＨＶＤＶＡＡＬＬＩＫＹＮＡＣＶＮＡＴＤＫＷＡＦＴＰＬＨＥＡＡＱＫＧＲＴＱＬＣＡＬＬＬＡＨＧＡＤＰＴＬＫＮＱＥＧＱＴＰＬＤＬＶＳＡＤＤＶＳＡＬＬＴＡＡＭＰＰＳＡＬＰＳＣＹＫＰＱＶＬＮＧＶＲＳＰＧＡＴＡＤＡＬＳＳＧＰＳＳＰＳＳＬＳＡＡＳＳＬＤＮＬＳＧＳＦＳＥＬＳＳＶＶＳＳＳＧＴＥＧＡＳＳＬＥＫＫＥＶＰＧＶＤＦＳＩＴＱＦＶＲＮＬＧＬＥＨＬＭＤＩＦＥＲＥＱＩＴＬＤＶＬＶＥＭＧＨＫＥＬＫＥＩＧＩＮＡＹＧＨＲＨＫＬＩＫＧＶＥＲＬＩＳＧＱＱＧＬＮＰＹＬＴＬＮＴＳＧＳＧＴＩＬＩＤＬＳＰＤＤＫＥＦＱＳＶＥＥＥＭＱＳＴＶＲＥＨＲＤＧＧＨＡＧＧＩＦＮＲＹＮＩＬＫＩＱＫＶＣＮＫＫＬＷＥＲＹＴＨＲＲＫＥＶＳＥＥＮＨＮＨＡＮＥＲＭＬＦＨＧＳＰＦＶＮＡＩＩＨＫＧＦＤＥＲＨＡＹＩＧＧＭＦＧＡＧＩＹＦＡＥＮＳＳＫＳＮＱＹＶＹＧＩＧＧＧＴＧＣＰＶＨＫＤＲＳＣＹＩＣＨＲＱＬＬＦＣＲＶＴＬＧＫＳＦＬＱＦＳＡＭＫＭＡＨＳＰＰＧＨＨＳＶＴＧＲＰＳＶＮＧＬＡＬＡＥＹＶＩＹＲＧＥＱＡＹＰＥＹＬＩＴＹＱＩＭＲＰＥＧＭＶＤＧ
に由来する。
【０１７８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、７，８−ジヒドロ−８−オキソグアニントリホスファターゼ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ３６６３９（８ＯＤＰ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３１）
ＭＹＷＳＮＱＩＴＲＲＬＧＥＲＶＱＧＦＭＳＧＩＳＰＱＱＭＧＥＰＥＧＳＷＳＧＫＮＰＧＴＭＧＡＳＲＬＹＴＬＶＬＶＬＱＰＱＲＶＬＬＧＭＫＫＲＧＦＧＡＧＲＷＮＧＦＧＧＫＶＱＥＧＥＴＩＥＤＧＡＲＲＥＬＱＥＥＳＧＬＴＶＤＡＬＨＫＶＧＱＩＶＦＥＦＶＧＥＰＥＬＭＤＶＨＶＦＣＴＤＳＩＱＧＴＰＶＥＳＤＥＭＲＰＣＷＦＱＬＤＱＩＰＦＫＤＭＷＰＤＤＳＹＷＦＰＬＬＬＱＫＫＫＦＨＧＹＦＫＦＱＧＱＤＴＩＬＤＹＴＬＲＥＶＤＴＶ
に由来する。
【０１７９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、癌原遺伝子チロシンプロテインキナーゼＳｒｃ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１２９３１（ＳＲＣ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３２）
ＭＧＳＮＫＳＫＰＫＤＡＳＱＲＲＲＳＬＥＰＡＥＮＶＨＧＡＧＧＧＡＦＰＡＳＱＴＰＳＫＰＡＳＡＤＧＨＲＧＰＳＡＡＦＡＰＡＡＡＥＰＫＬＦＧＧＦＮＳＳＤＴＶＴＳＰＱＲＡＧＰＬＡＧＧＶＴＴＦＶＡＬＹＤＹＥＳＲＴＥＴＤＬＳＦＫＫＧＥＲＬＱＩＶＮＮＴＥＧＤＷＷＬＡＨＳＬＳＴＧＱＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＳＤＳＩＱＡＥＥＷＹＦＧＫＩＴＲＲＥＳＥＲＬＬＬＮＡＥＮＰＲＧＴＦＬＶＲＥＳＥＴＴＫＧＡＹＣＬＳＶＳＤＦＤＮＡＫＧＬＮＶＫＨＹＫＩＲＫＬＤＳＧＧＦＹＩＴＳＲＴＱＦＮＳＬＱＱＬＶＡＹＹＳＫＨＡＤＧＬＣＨＲＬＴＴＶＣＰＴＳＫＰＱＴＱＧＬＡＫＤＡＷＥＩＰＲＥＳＬＲＬＥＶＫＬＧＱＧＣＦＧＥＶＷＭＧＴＷＮＧＴＴＲＶＡＩＫＴＬＫＰＧＴＭＳＰＥＡＦＬＱＥＡＱＶＭＫＫＬＲＨＥＫＬＶＱＬＹＡＶＶＳＥＥＰＩＹＩＶＴＥＹＭＳＫＧＳＬＬＤＦＬＫＧＥＴＧＫＹＬＲＬＰＱＬＶＤＭＡＡＱＩＡＳＧＭＡＹＶＥＲＭＮＹＶＨＲＤＬＲＡＡＮＩＬＶＧＥＮＬＶＣＫＶＡＤＦＧＬＡＲＬＩＥＤＮＥＹＴＡＲＱＧＡＫＦＰＩＫＷＴＡＰＥＡＡＬＹＧＲＦＴＩＫＳＤＶＷＳＦＧＩＬＬＴＥＬＴＴＫＧＲＶＰＹＰＧＭＶＮＲＥＶＬＤＱＶＥＲＧＹＲＭＰＣＰＰＥＣＰＥＳＬＨＤＬＭＣＱＣＷＲＫＥＰＥＥＲＰＴＦＥＹＬＱＡＦＬＥＤＹＦＴＳＴＥＰＱＹＱＰＧＥＮＬ
に由来する。
【０１８０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸３４１位にグリシン（Ｇ）またはアラニン（Ａ）によるトレオニン（Ｔ）の置換を含む。一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６２に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。
【０１８１】
ＬＲＬＥＶＫＬＧＱＧＣＦＧＥＶＷＭＧＴＷＮＧＴＴＲＶＡＩＫＴＬＫＰＧＴＭＳＰＥＡＦＬＱＥＡＱＶＭＫＫＬＲＨＥＫＬＶＱＬＹＡＶＶＳＥＥＰＩＹＩＶＴＥＹＧＳＫＧＳＬＬＤＦＬＫＧＥＴＧＫＹＬＲＬＰＱＬＶＤＭＡＡＱＩＡＳＧＭＡＹＶＥＲＭＮＹＶＨＲＤＬＲＡＡＮＩＬＶＧＥＮＬＶＣＫＶＡＤＦＧＬＡＲＬＩＥＤＮＥＹＴＡＲＱＧＡＫＦＰＩＫＷＴＡＰＥＡＡＬＹＧＲＦＴＩＫＳＤＶＷＳＦＧＩＬＬＴＥＬＴＴＫＧＲＶＰＹＰＧＭＶＮＲＥＶＬＤＱＶＥＲＧＹＲＭＰＣＰＰＥＣＰＥＳＬＨＤＬＭＣＱＣＷＲＫＥＰＥＥＲＰＴＦＥＹＬＱＡＦＬＥＤＹＦ。
【０１８２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、配列番号６３に由来するアミノ酸配列、またはそのフラグメントである。
【０１８３】
ＬＲＬＥＶＫＬＧＱＧＣＦＧＥＶＷＭＧＴＷＮＧＴＴＲＶＡＩＫＴＬＫＰＧＴＭＳＰＥＡＦＬＱＥＡＱＶＭＫＫＬＲＨＥＫＬＶＱＬＹＡＶＶＳＥＥＰＩＹＩＶＴＥＹＡＳＫＧＳＬＬＤＦＬＫＧＥＴＧＫＹＬＲＬＰＱＬＶＤＭＡＡＱＩＡＳＧＭＡＹＶＥＲＭＮＹＶＨＲＤＬＲＡＡＮＩＬＶＧＥＮＬＶＣＫＶＡＤＦＧＬＡＲＬＩＥＤＮＥＹＴＡＲＱＧＡＫＦＰＩＫＷＴＡＰＥＡＡＬＹＧＲＦＴＩＫＳＤＶＷＳＦＧＩＬＬＴＥＬＴＴＫＧＲＶＰＹＰＧＭＶＮＲＥＶＬＤＱＶＥＲＧＹＲＭＰＣＰＰＥＣＰＥＳＬＨＤＬＭＣＱＣＷＲＫＥＰＥＥＲＰＴＦＥＹＬＱＡＦＬＥＤＹＦ。
【０１８４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、プロスタグランジンＥシンターゼ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｏ１４６８４（ＰＴＧＥＳ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３３）
ＭＰＡＨＳＬＶＭＳＳＰＡＬＰＡＦＬＬＣＳＴＬＬＶＩＫＭＹＶＶＡＩＩＴＧＱＶＲＬＲＫＫＡＦＡＮＰＥＤＡＬＲＨＧＧＰＱＹＣＲＳＤＰＤＶＥＲＣＬＲＡＨＲＮＤＭＥＴＩＹＰＦＬＦＬＧＦＶＹＳＦＬＧＰＮＰＦＶＡＷＭＨＦＬＶＦＬＶＧＲＶＡＨＴＶＡＹＬＧＫＬＲＡＰＩＲＳＶＴＹＴＬＡＱＬＰＣＡＳＭＡＬＱＩＬＷＥＡＡＲＨＬ
に由来する。
【０１８５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アラキドン酸５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ２０２９２（ＡＬ５ＡＰ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３４）
ＭＤＱＥＴＶＧＮＶＶＬＬＡＩＶＴＬＩＳＶＶＱＮＧＦＦＡＨＫＶＥＨＥＳＲＴＱＮＧＲＳＦＱＲＴＧＴＬＡＦＥＲＶＹＴＡＮＱＮＣＶＤＡＹＰＴＦＬＡＶＬＷＳＡＧＬＬＣＳＱＶＰＡＡＦＡＧＬＭＹＬＦＶＲＱＫＹＦＶＧＹＬＧＥＲＴＱＳＴＰＧＹＩＦＧＫＲＩＩＬＦＬＦＬＭＳＶＡＧＩＦＮＹＹＬＩＦＦＦＧＳＤＦＥＮＹＩＫＴＩＳＴＴＩＳＰＬＬＬＩＰ
に由来する。
【０１８６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、脂肪細胞由来の脂肪酸結合タンパク質、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１５０９０（ＦＡＢＰ４＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３５）
ＭＣＤＡＦＶＧＴＷＫＬＶＳＳＥＮＦＤＤＹＭＫＥＶＧＶＧＦＡＴＲＫＶＡＧＭＡＫＰＮＭＩＩＳＶＮＧＤＶＩＴＩＫＳＥＳＴＦＫＮＴＥＩＳＦＩＬＧＱＥＦＤＥＶＴＡＤＤＲＫＶＫＳＴＩＴＬＤＧＧＶＬＶＨＶＱＫＷＤＧＫＳＴＴＩＫＲＫＲＥＤＤＫＬＶＶＥＣＶＭＫＧＶＴＳＴＲＶＹＥＲＡ
に由来する。
【０１８７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＰＨ相互作用タンパク質、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ８ＷＷＱ０（ＰＨＩＰ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書中に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３６）
ＭＳＣＥＲＫＧＬＳＥＬＲＳＥＬＹＦＬＩＡＲＦＬＥＤＧＰＣＱＱＡＡＱＶＬＩＲＥＶＡＥＫＥＬＬＰＲＲＴＤＷＴＧＫＥＨＰＲＴＹＱＮＬＶＫＹＹＲＨＬＡＰＤＨＬＬＱＩＣＨＲＬＧＰＬＬＥＱＥＩＰＱＳＶＰＧＶＱＴＬＬＧＡＧＲＱＳＬＬＲＴＮＫＳＣＫＨＶＶＷＫＧＳＡＬＡＡＬＨＣＧＲＰＰＥＳＰＶＮＹＧＳＰＰＳＩＡＤＴＬＦＳＲＫＬＮＧＫＹＲＬＥＲＬＶＰＴＡＶＹＱＨＭＫＭＨＫＲＩＬＧＨＬＳＳＶＹＣＶＴＦＤＲＴＧＲＲＩＦＴＧＳＤＤＣＬＶＫＩＷＡＴＤＤＧＲＬＬＡＴＬＲＧＨＡＡＥＩＳＤＭＡＶＮＹＥＮＴＭＩＡＡＧＳＣＤＫＭＩＲＶＷＣＬＲＴＣＡＰＬＡＶＬＱＧＨＳＡＳＩＴＳＬＱＦＳＰＬＣＳＧＳＫＲＹＬＳＳＴＧＡＤＧＴＩＣＦＷＬＷＤＡＧＴＬＫＩＮＰＲＰＡＫＦＴＥＲＰＲＰＧＶＱＭＩＣＳＳＦＳＡＧＧＭＦＬＡＴＧＳＴＤＨＩＩＲＶＹＦＦＧＳＧＱＰＥＫＩＳＥＬＥＦＨＴＤＫＶＤＳＩＱＦＳＮＴＳＮＲＦＶＳＧＳＲＤＧＴＡＲＩＷＱＦＫＲＲＥＷＫＳＩＬＬＤＭＡＴＲＰＡＧＱＮＬＱＧＩＥＤＫＩＴＫＭＫＶＴＭＶＡＷＤＲＨＤＮＴＶＩＴＡＶＮＮＭＴＬＫＶＷＮＳＹＴＧＱＬＩＨＶＬＭＧＨＥＤＥＶＦＶＬＥＰＨＰＦＤＰＲＶＬＦＳＡＧＨＤＧＮＶＩＶＷＤＬＡＲＧＶＫＩＲＳＹＦＮＭＩＥＧＱＧＨＧＡＶＦＤＣＫＣＳＰＤＧＱＨＦＡＣＴＤＳＨＧＨＬＬＩＦＧＦＧＳＳＳＫＹＤＫＩＡＤＱＭＦＦＨＳＤＹＲＰＬＩＲＤＡＮＮＦＶＬＤＥＱＴＱＱＡＰＨＬＭＰＰＰＦＬＶＤＶＤＧＮＰＨＰＳＲＹＱＲＬＶＰＧＲＥＮＣＲＥＥＱＬＩＰＱＭＧＶＴＳＳＧＬＮＱＶＬＳＱＱＡＮＱＥＩＳＰＬＤＳＭＩＱＲＬＱＱＥＱＤＬＲＲＳＧＥＡＶＩＳＮＴＳＲＬＳＲＧＳＩＳＳＴＳＥＶＨＳＰＰＮＶＧＬＲＲＳＧＱＩＥＧＶＲＱＭＨＳＮＡＰＲＳＥＩＡＴＥＲＤＬＶＡＷＳＲＲＶＶＶＰＥＬＳＡＧＶＡＳＲＱＥＥＷＲＴＡＫＧＥＥＥＩＫＴＹＲＳＥＥＫＲＫＨＬＴＶＰＫＥＮＫＩＰＴＶＳＫＮＨＡＨＥＨＦＬＤＬＧＥＳＫＫＱＱＴＮＱＨＮＹＲＴＲＳＡＬＥＥＴＰＲＰＳＥＥＩＥＮＧＳＳＳＳＤＥＧＥＶＶＡＶＳＧＧＴＳＥＥＥＥＲＡＷＨＳＤＧＳＳＳＤＹＳＳＤＹＳＤＷＴＡＤＡＧＩＮＬＱＰＰＫＫＶＰＫＮＫＴＫＫＡＥＳＳＳＤＥＥＥＥＳＥＫＱＫＱＫＱＩＫＫＥＫＫＫＶＮＥＥＫＤＧＰＩＳＰＫＫＫＫＰＫＥＲＫＱＫＲＬＡＶＧＥＬＴＥＮＧＬＴＬＥＥＷＬＰＳＴＷＩＴＤＴＩＰＲＲＣＰＦＶＰＱＭＧＤＥＶＹＹＦＲＱＧＨＥＡＹＶＥＭＡＲＫＮＫＩＹＳＩＮＰＫＫＱＰＷＨＫＭＥＬＲＥＱＥＬＭＫＩＶＧＩＫＹＥＶＧＬＰＴＬＣＣＬＫＬＡＦＬＤＰＤＴＧＫＬＴＧＧＳＦＴＭＫＹＨＤＭＰＤＶＩＤＦＬＶＬＲＱＱＦＤＤＡＫＹＲＲＷＮＩＧＤＲＦＲＳＶＩＤＤＡＷＷＦＧＴＩＥＳＱＥＰＬＱＬＥＹＰＤＳＬＦＱＣＹＮＶＣＷＤＮＧＤＴＥＫＭＳＰＷＤＭＥＬＩＰＮＮＡＶＦＰＥＥＬＧＴＳＶＰＬＴＤＧＥＣＲＳＬＩＹＫＰＬＤＧＥＷＧＴＮＰＲＤＥＥＣＥＲＩＶＡＧＩＮＱＬＭＴＬＤＩＡＳＡＦＶＡＰＶＤＬＱＡＹＰＭＹＣＴＶＶＡＹＰＴＤＬＳＴＩＫＱＲＬＥＮＲＦＹＲＲＶＳＳＬＭＷＥＶＲＹＩＥＨＮＴＲＴＦＮＥＰＧＳＰＩＶＫＳＡＫＦＶＴＤＬＬＬＨＦＩＫＤＱＴＣＹＮＩＩＰＬＹＮＳＭＫＫＫＶＬＳＤＳＥＤＥＥＫＤＡＤＶＰＧＴＳＴＲＫＲＫＤＨＱＰＲＲＲＬＲＮＲＡＱＳＹＤＩＱＡＷＫＫＱＣＥＥＬＬＮＬＩＦＱＣＥＤＳＥＰＦＲＱＰＶＤＬＬＥＹＰＤＹＲＤＩＩＤＴＰＭＤＦＡＴＶＲＥＴＬＥＡＧＮＹＥＳＰＭＥＬＣＫＤＶＲＬＩＦＳＮＳＫＡＹＴＰＳＫＲＳＲＩＹＳＭＳＬＲＬＳＡＦＦＥＥＨＩＳＳＶＬＳＤＹＫＳＡＬＲＦＨＫＲＮＴＩＴＫＲＲＫＫＲＮＲＳＳＳＶＳＳＳＡＡＳＳＰＥＲＫＫＲＩＬＫＰＱＬＫＳＥＳＳＴＳＡＦＳＴＰＴＲＳＩＰＰＲＨＮＡＡＱＩＮＧＫＴＥＳＳＳＶＶＲＴＲＳＮＲＶＶＶＤＰＶＶＴＥＱＰＳＴＳＳＡＡＫＴＦＩＴＫＡＮＡＳＡＩＰＧＫＴＩＬＥＮＳＶＫＨＳＫＡＬＮＴＬＳＳＰＧＱＳＳＦＳＨＧＴＲＮＮＳＡＫＥＮＭＥＫＥＫＰＶＫＲＫＭＫＳＳＶＬＰＫＡＳＴＬＳＫＳＳＡＶＩＥＱＧＤＣＫＮＮＡＬＶＰＧＴＩＱＶＮＧＨＧＧＱＰＳＫＬＶＫＲＧＰＧＲＫＰＫＶＥＶＮＴＮＳＧＥＩＩＨＫＫＲＧＲＫＰＫＫＬＱＹＡＫＰＥＤＬＥＱＮＮＶＨＰＩＲＤＥＶＬＰＳＳＴＣＮＦＬＳＥＴＮＮＶＫＥＤＬＬＱＫＫＮＲＧＧＲＫＰＫＲＫＭＫＴＱＫＬＤＡＤＬＬＶＰＡＳＶＫＶＬＲＲＳＮＲＫＫＩＤＤＰＩＤＥＥＥＥＦＥＥＬＫＧＳＥＰＨＭＲＴＲＮＱＧＲＲＴＡＦＹＮＥＤＤＳＥＥＥＱＲＱＬＬＦＥＤＴＳＬＴＦＧＴＳＳＲＧＲＶＲＫＬＴＥＫＡＫＡＮＬＩＧＷ
に由来する。
【０１８８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＳＵＭＯコンジュゲート酵素ＵＢＣ９、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ６３２７９（ＵＢＣ９＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３７）
ＭＳＧＩＡＬＳＲＬＡＱＥＲＫＡＷＲＫＤＨＰＦＧＦＶＡＶＰＴＫＮＰＤＧＴＭＮＬＭＮＷＥＣＡＩＰＧＫＫＧＴＰＷＥＧＧＬＦＫＬＲＭＬＦＫＤＤＹＰＳＳＰＰＫＣＫＦＥＰＰＬＦＨＰＮＶＹＰＳＧＴＶＣＬＳＩＬＥＥＤＫＤＷＲＰＡＩＴＩＫＱＩＬＬＧＩＱＥＬＬＮＥＰＮＩＱＤＰＡＱＡＥＡＹＴＩＹＣＱＮＲＶＥＹＥＫＲＶＲＡＱＡＫＫＦＡＰＳ
に由来する。
【０１８９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、タンパク質Ｓ１００−Ａ７、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ３１１５１（Ｓ１０Ａ７＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３８）
ＭＳＮＴＱＡＥＲＳＩＩＧＭＩＤＭＦＨＫＹＴＲＲＤＤＫＩＥＫＰＳＬＬＴＭＭＫＥＮＦＰＮＦＬＳＡＣＤＫＫＧＴＮＹＬＡＤＶＦＥＫＫＤＫＮＥＤＫＫＩＤＦＳＥＦＬＳＬＬＧＤＩＡＴＤＹＨＫＱＳＨＧＡＡＰＣＳＧＧＳＱ
に由来する。
【０１９０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ホスホリパーゼＡ２、膜結合型、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１４５５５（ＰＡ２ＧＡ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号３９）
ＭＫＴＬＬＬＬＡＶＩＭＩＦＧＬＬＱＡＨＧＮＬＶＮＦＨＲＭＩＫＬＴＴＧＫＥＡＡＬＳＹＧＦＹＧＣＨＣＧＶＧＧＲＧＳＰＫＤＡＴＤＲＣＣＶＴＨＤＣＣＹＫＲＬＥＫＲＧＣＧＴＫＦＬＳＹＫＦＳＮＳＧＳＲＩＴＣＡＫＱＤＳＣＲＳＱＬＣＥＣＤＫＡＡＡＴＣＦＡＲＮＫＴＴＹＮＫＫＹＱＹＹＳＮＫＨＣＲＧＳＴＰＲＣ
に由来する。
【０１９１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ヒストンデアセチラーゼ６、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｑ９ＵＢＮ７（ＨＤＡＣ６＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号４０）
ＭＴＳＴＧＱＤＳＴＴＴＲＱＲＲＳＲＱＮＰＱＳＰＰＱＤＳＳＶＴＳＫＲＮＩＫＫＧＡＶＰＲＳＩＰＮＬＡＥＶＫＫＫＧＫＭＫＫＬＧＱＡＭＥＥＤＬＩＶＧＬＱＧＭＤＬＮＬＥＡＥＡＬＡＧＴＧＬＶＬＤＥＱＬＮＥＦＨＣＬＷＤＤＳＦＰＥＧＰＥＲＬＨＡＩＫＥＱＬＩＱＥＧＬＬＤＲＣＶＳＦＱＡＲＦＡＥＫＥＥＬＭＬＶＨＳＬＥＹＩＤＬＭＥＴＴＱＹＭＮＥＧＥＬＲＶＬＡＤＴＹＤＳＶＹＬＨＰＮＳＹＳＣＡＣＬＡＳＧＳＶＬＲＬＶＤＡＶＬＧＡＥＩＲＮＧＭＡＩＩＲＰＰＧＨＨＡＱＨＳＬＭＤＧＹＣＭＦＮＨＶＡＶＡＡＲＹＡＱＱＫＨＲＩＲＲＶＬＩＶＤＷＤＶＨＨＧＱＧＴＱＦＴＦＤＱＤＰＳＶＬＹＦＳＩＨＲＹＥＱＧＲＦＷＰＨＬＫＡＳＮＷＳＴＴＧＦＧＱＧＱＧＹＴＩＮＶＰＷＮＱＶＧＭＲＤＡＤＹＩＡＡＦＬＨＶＬＬＰＶＡＬＥＦＱＰＱＬＶＬＶＡＡＧＦＤＡＬＱＧＤＰＫＧＥＭＡＡＴＰＡＧＦＡＱＬＴＨＬＬＭＧＬＡＧＧＫＬＩＬＳＬＥＧＧＹＮＬＲＡＬＡＥＧＶＳＡＳＬＨＴＬＬＧＤＰＣＰＭＬＥＳＰＧＡＰＣＲＳＡＱＡＳＶＳＣＡＬＥＡＬＥＰＦＷＥＶＬＶＲＳＴＥＴＶＥＲＤＮＭＥＥＤＮＶＥＥＳＥＥＥＧＰＷＥＰＰＶＬＰＩＬＴＷＰＶＬＱＳＲＴＧＬＶＹＤＱＮＭＭＮＨＣＮＬＷＤＳＨＨＰＥＶＰＱＲＩＬＲＩＭＣＲＬＥＥＬＧＬＡＧＲＣＬＴＬＴＰＲＰＡＴＥＡＥＬＬＴＣＨＳＡＥＹＶＧＨＬＲＡＴＥＫＭＫＴＲＥＬＨＲＥＳＳＮＦＤＳＩＹＩＣＰＳＴＦＡＣＡＱＬＡＴＧＡＡＣＲＬＶＥＡＶＬＳＧＥＶＬＮＧＡＡＶＶＲＰＰＧＨＨＡＥＱＤＡＡＣＧＦＣＦＦＮＳＶＡＶＡＡＲＨＡＱＴＩＳＧＨＡＬＲＩＬＩＶＤＷＤＶＨＨＧＮＧＴＱＨＭＦＥＤＤＰＳＶＬＹＶＳＬＨＲＹＤＨＧＴＦＦＰＭＧＤＥＧＡＳＳＱＩＧＲＡＡＧＴＧＦＴＶＮＶＡＷＮＧＰＲＭＧＤＡＤＹＬＡＡＷＨＲＬＶＬＰＩＡＹＥＦＮＰＥＬＶＬＶＳＡＧＦＤＡＡＲＧＤＰＬＧＧＣＱＶＳＰＥＧＹＡＨＬＴＨＬＬＭＧＬＡＳＧＲＩＩＬＩＬＥＧＧＹＮＬＴＳＩＳＥＳＭＡＡＣＴＲＳＬＬＧＤＰＰＰＬＬＴＬＰＲＰＰＬＳＧＡＬＡＳＩＴＥＴＩＱＶＨＲＲＹＷＲＳＬＲＶＭＫＶＥＤＲＥＧＰＳＳＳＫＬＶＴＫＫＡＰＱＰＡＫＰＲＬＡＥＲＭＴＴＲＥＫＫＶＬＥＡＧＭＧＫＶＴＳＡＳＦＧＥＥＳＴＰＧＱＴＮＳＥＴＡＶＶＡＬＴＱＤＱＰＳＥＡＡＴＧＧＡＴＬＡＱＴＩＳＥＡＡＩＧＧＡＭＬＧＱＴＴＳＥＥＡＶＧＧＡＴＰＤＱＴＴＳＥＥＴＶＧＧＡＩＬＤＱＴＴＳＥＤＡＶＧＧＡＴＬＧＱＴＴＳＥＥＡＶＧＧＡＴＬＡＱＴＴＳＥＡＡＭＥＧＡＴＬＤＱＴＴＳＥＥＡＰＧＧＴＥＬＩＱＴＰＬＡＳＳＴＤＨＱＴＰＰＴＳＰＶＱＧＴＴＰＱＩＳＰＳＴＬＩＧＳＬＲＴＬＥＬＧＳＥＳＱＧＡＳＥＳＱＡＰＧＥＥＮＬＬＧＥＡＡＧＧＱＤＭＡＤＳＭＬＭＱＧＳＲＧＬＴＤＱＡＩＦＹＡＶＴＰＬＰＷＣＰＨＬＶＡＶＣＰＩＰＡＡＧＬＤＶＴＱＰＣＧＤＣＧＴＩＱＥＮＷＶＣＬＳＣＹＱＶＹＣＧＲＹＩＮＧＨＭＬＱＨＨＧＮＳＧＨＰＬＶＬＳＹＩＤＬＳＡＷＣＹＹＣＱＡＹＶＨＨＱＡＬＬＤＶＫＮＩＡＨＱＮＫＦＧＥＤＭＰＨＰＨ
に由来する。
【０１９２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、プロサポシン、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ０７６０２（ＳＡＰ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号４１）
ＭＹＡＬＦＬＬＡＳＬＬＧＡＡＬＡＧＰＶＬＧＬＫＥＣＴＲＧＳＡＶＷＣＱＮＶＫＴＡＳＤＣＧＡＶＫＨＣＬＱＴＶＷＮＫＰＴＶＫＳＬＰＣＤＩＣＫＤＶＶＴＡＡＧＤＭＬＫＤＮＡＴＥＥＥＩＬＶＹＬＥＫＴＣＤＷＬＰＫＰＮＭＳＡＳＣＫＥＩＶＤＳＹＬＰＶＩＬＤＩＩＫＧＥＭＳＲＰＧＥＶＣＳＡＬＮＬＣＥＳＬＱＫＨＬＡＥＬＮＨＱＫＱＬＥＳＮＫＩＰＥＬＤＭＴＥＶＶＡＰＦＭＡＮＩＰＬＬＬＹＰＱＤＧＰＲＳＫＰＱＰＫＤＮＧＤＶＣＱＤＣＩＱＭＶＴＤＩＱＴＡＶＲＴＮＳＴＦＶＱＡＬＶＥＨＶＫＥＥＣＤＲＬＧＰＧＭＡＤＩＣＫＮＹＩＳＱＹＳＥＩＡＩＱＭＭＭＨＭＱＰＫＥＩＣＡＬＶＧＦＣＤＥＶＫＥＭＰＭＱＴＬＶＰＡＫＶＡＳＫＮＶＩＰＡＬＥＬＶＥＰＩＫＫＨＥＶＰＡＫＳＤＶＹＣＥＶＣＥＦＬＶＫＥＶＴＫＬＩＤＮＮＫＴＥＫＥＩＬＤＡＦＤＫＭＣＳＫＬＰＫＳＬＳＥＥＣＱＥＶＶＤＴＹＧＳＳＩＬＳＩＬＬＥＥＶＳＰＥＬＶＣＳＭＬＨＬＣＳＧＴＲＬＰＡＬＴＶＨＶＴＱＰＫＤＧＧＦＣＥＶＣＫＫＬＶＧＹＬＤＲＮＬＥＫＮＳＴＫＱＥＩＬＡＡＬＥＫＧＣＳＦＬＰＤＰＹＱＫＱＣＤＱＦＶＡＥＹＥＰＶＬＩＥＩＬＶＥＶＭＤＰＳＦＶＣＬＫＩＧＡＣＰＳＡＨＫＰＬＬＧＴＥＫＣＩＷＧＰＳＹＷＣＱＮＴＥＴＡＡＱＣＮＡＶＥＨＣＫＲＨＶＷＮ
に由来する。
【０１９３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アポリポタンパク質α、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ０８５１９（ＡＰＯＡ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号４２）
ＭＥＨＫＥＶＶＬＬＬＬＬＦＬＫＳＡＡＰＥＱＳＨＶＶＱＤＣＹＨＧＤＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＱＨＮＲＴＴＥＮＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＡＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＧＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＶＴＰＶＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＥＹＹＰＮＡＧＬＩＭＮＹＣＲＮＰＤＰＶＡＡＰＹＣＹＴＲＤＰＳＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＤＡＥＧＴＡＶＡＰＰＴＩＴＰＩＰＳＬＥＡＰＳＥＱＡＰＴＥＱＲＰＧＶＱＥＣＹＨＧＮＧＱＳＹＱＧＴＹＦＩＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＳＨＳＲＴＰＡＹＹＰＮＡＧＬＩＫＮＹＣＲＮＰＤＰＶＡＡＰＷＣＹＴＴＤＰＳＶＲＷＥＹＣＮＬＴＲＣＳＤＡＥＷＴＡＦＶＰＰＮＶＩＬＡＰＳＬＥＡＦＦＥＱＡＬＴＥＥＴＰＧＶＱＤＣＹＹＨＹＧＱＳＹＲＧＴＹＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＡＷＳＳＭＴＰＨＱＨＳＲＴＰＥＮＹＰＮＡＧＬＴＲＮＹＣＲＮＰＤＡＥＩＲＰＷＣＹＴＭＤＰＳＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＬＶＴＥＳＳＶＬＡＴＬＴＶＶＰＤＰＳＴＥＡＳＳＥＥＡＰＴＥＱＳＰＧＶＱＤＣＹＨＧＤＧＱＳＹＲＧＳＦＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＳＷＳＳＭＴＰＨＷＨＱＲＴＴＥＹＹＰＮＧＧＬＴＲＮＹＣＲＮＰＤＡＥＩＳＰＷＣＹＴＭＤＰＮＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＰＶＴＥＳＳＶＬＡＴＳＴＡＶＳＥＱＡＰＴＥＱＳＰＴＶＱＤＣＹＨＧＤＧＱＳＹＲＧＳＦＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＳＷＳＳＭＴＰＨＷＨＱＲＴＴＥＹＹＰＮＧＧＬＴＲＮＹＣＲＮＰＤＡＥＩＲＰＷＣＹＴＭＤＰＳＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＰＶＭＥＳＴＬＬＴＴＰＴＶＶＰＶＰＳＴＥＬＰＳＥＥＡＰＴＥＮＳＴＧＶＱＤＣＹＲＧＤＧＱＳＹＲＧＴＬＳＴＴＩＴＧＲＴＣＱＳＷＳＳＭＴＰＨＷＨＲＲＩＰＬＹＹＰＮＡＧＬＴＲＮＹＣＲＮＰＤＡＥＩＲＰＷＣＹＴＭＤＰＳＶＲＷＥＹＣＮＬＴＲＣＰＶＴＥＳＳＶＬＴＴＰＴＶＡＰＶＰＳＴＥＡＰＳＥＱＡＰＰＥＫＳＰＶＶＱＤＣＹＨＧＤＧＲＳＹＲＧＩＳＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＳＷＳＳＭＩＰＨＷＨＱＲＴＰＥＮＹＰＮＡＧＬＴＥＮＹＣＲＮＰＤＳＧＫＱＰＷＣＹＴＴＤＰＣＶＲＷＥＹＣＮＬＴＱＣＳＥＴＥＳＧＶＬＥＴＰＴＶＶＰＶＰＳＭＥＡＨＳＥＡＡＰＴＥＱＴＰＶＶＲＱＣＹＨＧＮＧＱＳＹＲＧＴＦＳＴＴＶＴＧＲＴＣＱＳＷＳＳＭＴＰＨＲＨＱＲＴＰＥＮＹＰＮＤＧＬＴＭＮＹＣＲＮＰＤＡＤＴＧＰＷＣＦＴＭＤＰＳＩＲＷＥＹＣＮＬＴＲＣＳＤＴＥＧＴＶＶＡＰＰＴＶＩＱＶＰＳＬＧＰＰＳＥＱＤＣＭＦＧＮＧＫＧＹＲＧＫＫＡＴＴＶＴＧＴＰＣＱＥＷＡＡＱＥＰＨＲＨＳＴＦＩＰＧＴＮＫＷＡＧＬＥＫＮＹＣＲＮＰＤＧＤＩＮＧＰＷＣＹＴＭＮＰＲＫＬＦＤＹＣＤＩＰＬＣＡＳＳＳＦＤＣＧＫＰＱＶＥＰＫＫＣＰＧＳＩＶＧＧＣＶＡＨＰＨＳＷＰＷＱＶＳＬＲＴＲＦＧＫＨＦＣＧＧＴＬＩＳＰＥＷＶＬＴＡＡＨＣＬＫＫＳＳＲＰＳＳＹＫＶＩＬＧＡＨＱＥＶＮＬＥＳＨＶＱＥＩＥＶＳＲＬＦＬＥＰＴＱＡＤＩＡＬＬＫＬＳＲＰＡＶＩＴＤＫＶＭＰＡＣＬＰＳＰＤＹＭＶＴＡＲＴＥＣＹＩＴＧＷＧＥＴＱＧＴＦＧＴＧＬＬＫＥＡＱＬＬＶＩＥＮＥＶＣＮＨＹＫＹＩＣＡＥＨＬＡＲＧＴＤＳＣＱＧＤＳＧＧＰＬＶＣＦＥＫＤＫＹＩＬＱＧＶＴＳＷＧＬＧＣＡＲＰＮＫＰＧＶＹＡＲＶＳＲＦＶＴＷＩＥＧＭＭＲＮＮ
に由来する。
【０１９４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ラクトグルタチオンリアーゼ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｑ０４７６０（ＬＧＵＬ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号４３）
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に由来する。
【０１９５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、タンパク質アファジン、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ５５１９６（ＡＦＡＤ＿ＨＵＭＡＮ）（参照により本明細書に組み込まれる）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号４４）
ＭＳＡＧＧＲＤＥＥＲＲＫＬＡＤＩＩＨＨＷＮＡＮＲＬＤＬＦＥＩＳＱＰＴＥＤＬＥＦＨＧＶＭＲＦＹＦＱＤＫＡＡＧＮＦＡＴＫＣＩＲＶＳＳＴＡＴＴＱＤＶＩＥＴＬＡＥＫＦＲＰＤＭＲＭＬＳＳＰＫＹＳＬＹＥＶＨＶＳＧＥＲＲＬＤＩＤＥＫＰＬＶＶＱＬＮＷＮＫＤＤＲＥＧＲＦＶＬＫＮＥＮＤＡＩＰＰＫＫＡＱＳＮＧＰＥＫＱＥＫＥＧＶＩＱＮＦＫＲＴＬＳＫＫＥＫＫＥＫＫＫＲＥＫＥＡＬＲＱＡＳＤＫＤＤＲＰＦＱＧＥＤＶＥＮＳＲＬＡＡＥＶＹＫＤＭＰＥＴＳＦＴＲＴＩＳＮＰＥＶＶＭＫＲＲＲＱＱＫＬＥＫＲＭＱＥＦＲＳＳＤＧＲＰＤＳＧＧＴＬＲＩＹＡＤＳＬＫＰＮＩＰＹＫＴＩＬＬＳＴＴＤＰＡＤＦＡＶＡＥＡＬＥＫＹＧＬＥＫＥＮＰＫＤＹＣＩＡＲＶＭＬＰＰＧＡＱＨＳＤＥＫＧＡＫＥＩＩＬＤＤＤＥＣＰＬＱＩＦＲＥＷＰＳＤＫＧＩＬＶＦＱＬＫＲＲＰＰＤＨＩＰＫＫＴＫＫＨＬＥＧＫＴＰＫＧＫＥＲＡＤＧＳＧＹＧＳＴＬＰＰＥＫＬＰＹＬＶＥＬＳＰＧＲＲＮＨＦＡＹＹＮＹＨＴＹＥＤＧＳＤＳＲＤＫＰＫＬＹＲＬＱＬＳＶＴＥＶＧＴＥＫＬＤＤＮＳＩＱＬＦＧＰＧＩＱＰＨＨＣＤＬＴＮＭＤＧＶＶＴＶＴＰＲＳＭＤＡＥＴＹＶＥＧＱＲＩＳＥＴＴＭＬＱＳＧＭＫＶＱＦＧＡＳＨＶＦＫＦＶＤＰＳＱＤＨＡＬＡＫＲＳＶＤＧＧＬＭＶＫＧＰＲＨＫＰＧＩＶＱＥＴＴＦＤＬＧＧＤＩＨＳＧＴＡＬＰＴＳＫＳＴＴＲＬＤＳＤＲＶＳＳＡＳＳＴＡＥＲＧＭＶＫＰＭＩＲＶＥＱＱＰＤＹＲＲＱＥＳＲＴＱＤＡＳＧＰＥＬＩＬＰＡＳＩＥＦＲＥＳＳＥＤＳＦＬＳＡＩＩＮＹＴＮＳＳＴＶＨＦＫＬＳＰＴＹＶＬＹＭＡＣＲＹＶＬＳＮＱＹＲＰＤＩＳＰＴＥＲＴＨＫＶＩＡＶＶＮＫＭＶＳＭＭＥＧＶＩＱＫＱＫＮＩＡＧＡＬＡＦＷＭＡＮＡＳＥＬＬＮＦＩＫＱＤＲＤＬＳＲＩＴＬＤＡＱＤＶＬＡＨＬＶＱＭＡＦＫＹＬＶＨＣＬＱＳＥＬＮＮＹＭＰＡＦＬＤＤＰＥＥＮＳＬＱＲＰＫＩＤＤＶＬＨＴＬＴＧＡＭＳＬＬＲＲＣＲＶＮＡＡＬＴＩＱＬＦＳＱＬＦＨＦＩＮＭＷＬＦＮＲＬＶＴＤＰＤＳＧＬＣＳＨＹＷＧＡＩＩＲＱＱＬＧＨＩＥＡＷＡＥＫＱＧＬＥＬＡＡＤＣＨＬＳＲＩＶＱＡＴＴＬＬＴＭＤＫＹＡＰＤＤＩＰＮＩＮＳＴＣＦＫＬＮＳＬＱＬＱＡＬＬＱＮＹＨＣＡＰＤＥＰＦＩＰＴＤＬＩＥＮＶＶＴＶＡＥＮＴＡＤＥＬＡＲＳＤＧＲＥＶＱＬＥＥＤＰＤＬＱＬＰＦＬＬＰＥＤＧＹＳＣＤＶＶＲＮＩＰＮＧＬＱＥＦＬＤＰＬＣＱＲＧＦＣＲＬＩＰＨＴＲＳＰＧＴＷＴＩＹＦＥＧＡＤＹＥＳＨＬＬＲＥＮＴＥＬＡＱＰＬＲＫＥＰＥＩＩＴＶＴＬＫＫＱＮＧＭＧＬＳＩＶＡＡＫＧＡＧＱＤＫＬＧＩＹＶＫＳＶＶＫＧＧＡＡＤＶＤＧＲＬＡＡＧＤＱＬＬＳＶＤＧＲＳＬＶＧＬＳＱＥＲＡＡＥＬＭＴＲＴＳＳＶＶＴＬＥＶＡＫＱＧＡＩＹＨＧＬＡＴＬＬＮＱＰＳＰＭＭＱＲＩＳＤＲＲＧＳＧＫＰＲＰＫＳＥＧＦＥＬＹＮＮＳＴＱＮＧＳＰＥＳＰＱＬＰＷＡＥＹＳＥＰＫＫＬＰＧＤＤＲＬＭＫＮＲＡＤＨＲＳＳＰＮＶＡＮＱＰＰＳＰＧＧＫＳＡＹＡＳＧＴＴＡＫＩＴＳＶＳＴＧＮＬＣＴＥＥＱＴＰＰＰＲＰＥＡＹＰＩＰＴＱＴＹＴＲＥＹＦＴＦＰＡＳＫＳＱＤＲＭＡＰＰＱＮＱＷＰＮＹＥＥＫＰＨＭＨＴＤＳＮＨＳＳＩＡＩＱＲＶＴＲＳＱＥＥＬＲＥＤＫＡＹＱＬＥＲＨＲＩＥＡＡＭＤＲＫＳＤＳＤＭＷＩＮＱＳＳＳＬＤＳＳＴＳＳＱＥＨＬＮＨＳＳＫＳＶＴＰＡＳＴＬＴＫＳＧＰＧＲＷＫＴＰＡＡＩＰＡＴＰＶＡＶＳＱＰＩＲＴＤＬＰＰＰＰＰＰＰＰＶＨＹＡＧＤＦＤＧＭＳＭＤＬＰＬＰＰＰＰＳＡＮＱＩＧＬＰＳＡＱＶＡＡＡＥＲＲＫＲＥＥＨＱＲＷＹＥＫＥＫＡＲＬＥＥＥＲＥＲＫＲＲＥＱＥＲＫＬＧＱＭＲＴＱＳＬＮＰＡＰＦＳＰＬＴＡＱＱＭＫＰＥＫＰＳＴＬＱＲＰＱＥＴＶＩＲＥＬＱＰＱＱＱＰＲＴＩＥＲＲＤＬＱＹＩＴＶＳＫＥＥＬＳＳＧＤＳＬＳＰＤＰＷＫＲＤＡＫＥＫＬＥＫＱＱＱＭＨＩＶＤＭＬＳＫＥＩＱＥＬＱＳＫＰＤＲＳＡＥＥＳＤＲＬＲＫＬＭＬＥＷＱＦＱＫＲＬＱＥＳＫＱＫＤＥＤＤＥＥＥＥＤＤＤＶＤＴＭＬＩＭＱＲＬＥＡＥＲＲＡＲＬＱＤＥＥＲＲＲＱＱＱＬＥＥＭＲＫＲＥＡＥＤＲＡＲＱＥＥＥＲＲＲＱＥＥＥＲＴＫＲＤＡＥＥＫＲＲＱＥＥＧＹＹＳＲＬＥＡＥＲＲＲＱＨＤＥＡＡＲＲＬＬＥＰＥＡＰＧＬＣＲＰＰＬＰＲＤＹＥＰＰＳＰＳＰＡＰＧＡＰＰＰＰＰＱＲＮＡＳＹＬＫＴＱＶＬＳＰＤＳＬＦＴＡＫＦＶＡＹＮＥＥＥＥＥＥＤＣＳＬＡＧＰＮＳＹＰＧＳＴＧＡＡＶＧＡＨＤＡＣＲＤＡＫＥＫＲＳＫＳＱＤＡＤＳＰＧＳＳＧＡＰＥＮＬＴＦＫＥＲＱＲＬＦＳＱＧＱＤＶＳＮＫＶＫＡＳＲＫＬＴＥＬＥＮＥＬＮＴＫ
に由来する。
【０１９６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、参照により本明細書に組み込まれる上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  Ｐ００５３３（ＥＧＦＲ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号５３）：（Ｌ８５８Ｒ）
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に由来する、を含む、またはである。
【０１９７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号５４）：（Ｔ７９０Ｍ）
ＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＭＱＬＭＰＦＧＣＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＲＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧ
に由来する、を含む、またはである。一実施形態では、配列番号５４が、１６３位にロイシンを有する。
【０１９８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号５５）：（Ｃ７９７Ｓ）
ＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＭＱＬＭＰＦＧＳＬＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＲＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧ
に由来する、を含む、またはである。一実施形態では、配列番号５５が、１６３位にロイシンを有する。一実施形態では、配列番号５５が、９５位にトレオニンを有する。一実施形態では、配列番号５５が、１６３位にロイシンおよび９５位にトレオニンを有する。
【０１９９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号５６）：（Ｃ７９０Ｇ）
ＧＥＡＰＮＱＡＬＬＲＩＬＫＥＴＥＦＫＫＩＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＬＷＩＰＥＧＥＫＶＫＩＰＶＡＩＫＥＬＲＥＡＴＳＰＫＡＮＫＥＩＬＤＥＡＹＶＭＡＳＶＤＮＰＨＶＣＲＬＬＧＩＣＬＴＳＴＶＱＬＩＭＱＬＭＰＦＧＣＧＬＤＹＶＲＥＨＫＤＮＩＧＳＱＹＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＮＹＬＥＤＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＴＰＱＨＶＫＩＴＤＦＧＲＡＫＬＬＧＡＥＥＫＥＹＨＡＥＧＧＫＶＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＬＨＲＩＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＳＫＰＹＤＧＩＰＡＳＥＩＳＳＩＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＩＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＲＥＬＩＩＥＦＳＫＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＥＲＭＨＬＰＳＰＴＤＳＮＦＹＲＡＬＭＤＥＥＤＭＤＤＶＶＤＡＤＥＹＬＩＰＱＱＧ
に由来する、を含む、またはである。一実施形態では、配列番号５６が、１６３位にロイシンを有する。一実施形態では、配列番号５６が、９５位にトレオニンを有する。一実施形態では、配列番号５６が、１６３位にロイシンおよび９５位にトレオニンを有する。
【０２００】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、上皮成長因子受容体（ＢＣＲ−ＡＢＬ）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号５７）：（Ｔ３１５Ｉ）
ＳＰＮＹＤＫＷＥＭＥＲＴＤＩＴＭＫＨＫＬＧＧＧＱＹＧＥＶＹＥＧＶＷＫＫＹＳＬＴＶＡＶＫＴＬＫＥＤＴＭＥＶＥＥＦＬＫＥＡＡＶＭＫＥＩＫＨＰＮＬＶＱＬＬＧＶＣＴＲＥＰＰＦＹＩＩＩＥＦＭＴＹＧＮＬＬＤＹＬＲＥＣＮＲＱＥＶＮＡＶＶＬＬＹＭＡＴＱＩＳＳＡＭＥＹＬＥＫＫＮＦＩＨＲＤＬＡＡＲＮＣＬＶＧＥＮＨＬＶＫＶＡＤＦＧＬＳＲＬＭＴＧＤＴＹＴＡＨＡＧＡＫＦＰＩＫＷＴＡＰＥＳＬＡＹＮＫＦＳＩＫＳＤＶＷＡＦＧＶＬＬＷＥＩＡＴＹＧＭＳＰＹＰＧＩＤＬＳＱＶＹＥＬＬＥＫＤＹＲＭＥＲＰＥＧＣＰＥＫＶＹＥＬＭＲＡＣＷＱＷＮＰＳＤＲＰＳＦＡＥＩＨＱＡＦＥＴＭＦＱＥＳ
に由来する、を含む、またはである。一実施形態では、配列番号５７が、８７位にトレオニンを有する。
【０２０１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＢＣＲ−ＡＢＬ（ＢＣＲ−ＡＢＬ）またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号５８）
ＳＰＮＹＤＫＷＥＭＥＲＴＤＩＴＭＫＨＫＬＧＧＧＱＹＧＥＶＹＥＧＶＷＫＫＹＳＬＴＶＡＶＫＴＬＫＥＤＴＭＥＶＥＥＦＬＫＥＡＡＶＭＫＥＩＫＨＰＮＬＶＱＬＬＧＶＣＴＲＥＰＰＦＹＩＩＴＥＦＭＴＹＧＮＬＬＤＹＬＲＥＣＮＲＱＥＶＮＡＶＶＬＬＹＭＡＴＱＩＳＳＡＭＥＹＬＥＫＫＮＦＩＨＲＤＬＡＡＲＮＣＬＶＧＥＮＨＬＶＫＶＡＤＦＧＬＳＲＬＭＴＧＤＴＹＴＡＨＡＧＡＫＦＰＩＫＷＴＡＰＥＳＬＡＹＮＫＦＳＩＫＳＤＶＷＡＦＧＶＬＬＷＥＩＡＴＹＧＭＳＰＹＰＧＩＤＬＳＱＶＹＥＬＬＥＫＤＹＲＭＥＲＰＥＧＣＰＥＫＶＹＥＬＭＲＡＣＷＱＷＮＰＳＤＲＰＳＦＡＥＩＨＱＡＦＥＴＭＦＱＥＳ
に由来する、を含む、またはである。
【０２０２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、参照により本明細書に組み込まれるＡＬＫ（ＡＬＫ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  Ｑ９ＵＭ７３（ＡＬＫ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号５９）（Ｌ１１９６Ｍ）：
ＥＬＱＳＰＥＹＫＬＳＫＬＲＴＳＴＩＭＴＤＹＮＰＮＹＣＦＡＧＫＴＳＳＩＳＤＬＫＥＶＰＲＫＮＩＴＬＩＲＧＬＧＨＧＡＦＧＥＶＹＥＧＱＶＳＧＭＰＮＤＰＳＰＬＱＶＡＶＫＴＬＰＥＶＣＳＥＱＤＥＬＤＦＬＭＥＡＬＩＩＳＫＦＮＨＱＮＩＶＲＣＩＧＶＳＬＱＳＬＰＲＦＩＭＬＥＬＭＡＧＧＤＬＫＳＦＬＲＥＴＲＰＲＰＳＱＰＳＳＬＡＭＬＤＬＬＨＶＡＲＤＩＡＣＧＣＱＹＬＥＥＮＨＦＩＨＲＤＩＡＡＲＮＣＬＬＴＣＰＧＰＧＲＶＡＫＩＧＤＦＧＭＡＲＤＩＹＲＡＧＹＹＲＫＧＧＣＡＭＬＰＶＫＷＭＰＰＥＡＦＭＥＧＩＦＴＳＫＴＤＴＷＳＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＹＭＰＹＰＳＫＳＮＱＥＶＬＥＦＶＴＳＧＧＲＭＤＰＰＫＮＣＰＧＰＶＹＲＩＭＴＱＣＷＱＨＱＰＥＤＲＰＮＦＡＩＩＬＥＲＩＥＹＣＴＱＤＰＤＶＩＮＴＡＬＰＩＥＹＧＰＬＶＥＥＥＥＫ
に由来する、を含む、またはである。一実施形態では、配列番号５９が、１３６位にロイシンを有する。
【０２０３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、参照により本明細書に組み込まれるＪＡＫ２（ＪＡＫ２、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  Ｏ６０６７４（ＪＡＫ２＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号６０）（Ｖ６１７Ｆ）：
ＶＦＨＫＩＲＮＥＤＬＩＦＮＥＳＬＧＱＧＴＦＴＫＩＦＫＧＶＲＲＥＶＧＤＹＧＱＬＨＥＴＥＶＬＬＫＶＬＤＫＡＨＲＮＹＳＥＳＦＦＥＡＡＳＭＭＳＫＬＳＨＫＨＬＶＬＮＹＧＶＣＦＣＧＤＥＮＩＬＶＱＥＦＶＫＦＧＳＬＤＴＹＬＫＫＮＫＮＣＩＮＩＬＷＫＬＥＶＡＫＱＬＡＷＡＭＨＦＬＥＥＮＴＬＩＨＧＮＶＣＡＫＮＩＬＬＩＲＥＥＤＲＫＴＧＮＰＰＦＩＫＬＳＤＰＧＩＳＩＴＶＬＰＫＤＩＬＱＥＲＩＰＷＶＰＰＥＣＩＥＮＰＫＮＬＮＬＡＴＤＫＷＳＦＧＴＴＬＷＥＩＣＳＧＧＤＫＰＬＳＡＬＤＳＱＲＫＬＱＦＹＥＤＲＨＱＬＰＡＰＫＡＡＥＬＡＮＬＩＮＮＣＭＤＹＥＰＤＨＲＰＳＦＲＡＩＩＲＤＬＮＳＬＦＴＰＤ
に由来する、を含む、またはである。一実施形態では、配列番号６０が、８２位にバリンを有する。
【０２０４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、参照により本明細書に組み込まれるＢＲＡＦ（ＢＲＡＦ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  Ｐ１５０５６（ＢＲＡＦ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アミノ酸配列：（配列番号６１）（Ｖ６００Ｅ）：
ＤＷＥＩＰＤＧＱＩＴＶＧＱＲＩＧＳＧＳＦＧＴＶＹＫＧＫＷＨＧＤＶＡＶＫＭＬＮＶＴＡＰＴＰＱＱＬＱＡＦＫＮＥＶＧＶＬＲＫＴＲＨＶＮＩＬＬＦＭＧＹＳＴＡＰＱＬＡＩＶＴＱＷＣＥＧＳＳＬＹＨＨＬＨＡＳＥＴＫＦＥＭＫＫＬＩＤＩＡＲＱＴＡＲＧＭＤＹＬＨＡＫＳＩＩＨＲＤＬＫＳＮＮＩＦＬＨＥＤＮＴＶＫＩＧＤＦＧＬＡＴＥＫＳＲＷＳＧＳＨＱＦＥＱＬＳＧＳＩＬＷＭＡＰＥＶＩＲＭＱＤＳＮＰＹＳＦＱＳＤＶＹＡＦＧＩＶＬＹＥＬＭＴＧＱＬＰＹＳＮＩＮＮＲＤＱＩＩＥＭＶＧＲＧＳＬＳＰＤＬＳＫＶＲＳＮＣＰＫＲＭＫＲＬＭＡＥＣＬＫＫＫＲＤＥＲＰＳＦＰＲＩＬＡＥＩＥＥＬＡＲＥ
に由来する、を含む、またはである。一実施形態では、配列番号６１が、１５２位にバリンを有する。一実施形態では、配列番号６１が、１５３位にチロシンを有する。一実施形態では、配列番号６１が、１５２位にバリンを有する。一実施形態では、配列番号６１が、１５３位にリジンを有する。一実施形態では、配列番号６１が、１５２位にバリンおよび１５３位にリジンを有する。
【０２０５】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＬＲＲＫ２タンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｑ５Ｓ００７（ＬＲＲＫ２＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＬＲＲＫ２アミノ酸１３２８〜１５１１に由来する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＬＲＲＫ２アミノ酸１３２８〜１５１１に由来し、アミノ酸１４４１がシステインである。
【０２０６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＰＤＧＦＲαタンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ０９６１９（ＰＤＧＦＲ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０９６１９のアミノ酸６００〜６９２に由来する。一実施態様では、ｄＴＡＧがＰ０９６１９のアミノ酸６００〜６９２に由来し、アミノ酸６７４がイソロイシンである。
【０２０７】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＲＥＴタンパク質（参照により本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＿Ｐ０７９４９（ＲＥＴ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来する。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、アミノ酸６９１がセリンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、アミノ酸７４９がトレオニンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、アミノ酸７６２がグルタミンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、アミノ酸７９１がフェニルアラニンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、アミノ酸８０４がメチオニンである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、Ｐ０７９４９のアミノ酸７２４〜１０１６に由来し、アミノ酸９１８がトレオニンである。
【０２０８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＪＡＫ３タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ５２３３３（ＪＡＫ３＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。
【０２０９】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＡＢＬタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ００５１９（ＡＢＬ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。
【０２１０】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＭＥＫ１タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ０２７５０（ＭＰ２Ｋ１＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。
【０２１１】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＫＩＴタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１０７２１（ＫＩＴ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。
【０２１２】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＫＩＴタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ１０７２１（ＫＩＴ＿ＨＵＭＡＮ））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。
【０２１３】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＨＩＶ逆転写酵素タンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０４５８５（ＰＯＬ＿ＨＶ１Ｈ２））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。
【０２１４】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、ＨＩＶインテグラーゼタンパク質（参照により本明細書中に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ７６３５３（Ｑ７６３５３＿９ＨＩＶ１））またはその変異体に由来するアミノ酸配列を有する。
【０２１５】
Ｂ．目的のタンパク質
本明細書で企図されるように、ｄＴＡＧ戦略は、目的のタンパク質をコードする核酸配列と５’または３’インフレームでｄＴＡＧ核酸配列をゲノム挿入することによって、インビボで、または場合によってはエキソビボもしくはインビトロで、安定的に発現される内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドを産生するために利用することができる。インフレームｄＴＡＧ核酸配列の挿入後、細胞は内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドを発現し、ｄＴＡＧに結合することができるヘテロ二官能性化合物の投与を通して内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドの活性の調節が可能になり、したがって内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドが分解される。一実施形態では、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドの活性が低下する。
【０２１６】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧをコードする核酸が、障害に関与するタンパク質をコードする遺伝子とインフレームでゲノム的に挿入され得る。ｄＴＡＧ挿入の標的とされ得る障害に関与する特定の遺伝子の非限定的な例としては、非限定的な例として、α−１アンチトリプシン（Ａ１ＡＴ）、アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）、カテニン（ＣＴＮＮＢ１）、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、アポリポタンパク質ａ（アポ（ａ））、第ＶＩＩ因子、第ＸＩ因子、アンチトロンビンＩＩＩ（ＳＥＲＰＩＮＣ１）、ホスファチジルイノシトールグリカンクラスＡ（ＰＩＧ−Ａ）、Ｃ５、α−１アンチトリプシン（ＳＥＲＰＩＮＡ１）、ヘプシジン調節（ＴＭＰＲＳＳ６）、（δ−アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ−１）、アシルＣａＡ：ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−３４ａ、プレカリクレイン（ＫＬＫＢ１）、結合組織成長因子（ＣＣＮ２）、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）、グルココルチコイド受容体（ＧＣＣＲ）、プロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰ−１Ｂ）、ｃ−Ｒａｆキナーゼ（ＲＡＦ１）、線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）、血管接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）、最晩期抗原−４（ＶＬＡ−４）、トランスサイレチン（ＴＴＲ）、生存運動ニューロン２（ＳＭＮ２）、成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）、筋強直性ジストロフィープロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）、細胞核酸結合タンパク質（ＣＮＢＰまたはＺＮＦ９）、クラステリン（ＣＬＵ）、真核生物翻訳開始因子４Ｅ（ｅＩＦ−４ｅ）、ＭＤＭ２、ＭＤＭ４、熱ショックタンパク質２７（ＨＳＰ２７）、シグナル伝達兼転写活性化因子３タンパク質（ＳＴＡＴ３）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、キネシン紡錘体タンパク質（ＫＩＦ１１）、Ｂ型肝炎ゲノム、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、Ａｔｏｎａｌホモログ１（ＡＴＯＨ１）、血管内皮増殖因子受容体１（ＦＬＴ１）、網膜分離症１（ＲＳ１）、網膜色素上皮特異的６５ｋＤａタンパク質（ＲＰＥ６５）、Ｒａｂエスコートタンパク質１（ＣＨＭ）、およびナトリウムチャネル、電位開口型、Ｘ型、αサブユニット（ＰＮ３またはＳＣＮ１０Ａ）が挙げられる。ｄＴＡＧ挿入によって標的化され得るさらなる目的のタンパク質には、機能獲得型変異に関連するタンパク質、例えば、がんを引き起こすタンパク質が含まれる。
【０２１７】
特定の実施形態では、標的化のための目的のタンパク質が、ａｐｏＢ−１００、ＡＮＧＰＴＬ３、ＰＣＳＫ９、ＡＰＯＣ３、ＣＲＰ、ＡｐｏＡ、第ＸＩ因子、第ＶＩＩ因子、アンチトロンビンＩＩＩ、ホスファチジルイノシトールグリカンクラスＡ（ＰＩＧ−Ａ）、補体のＣ５成分、α−１−アンチトリプシン（Ａ１ＡＴ）、ＴＭＰＲＳＳ６、ＡＬＡＳ−１、ＤＧＡＴ−２、ＫＬＢ１、ＣＣＮ２、ＩＣＡＭ、グルカゴン受容体、グルココルチコイド受容体、ＰＴＰ−１Ｂ、ＦＧＦＲ４、ＶＣＡＭ−１、ＶＬＡ−４、ＧＣＣＲ、ＴＴＲ、ＳＭＮ１、ＧＨＲ、ＤＭＰＫまたはＮＡＶ１．８である。
【０２１８】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、プロテオパシーに関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子に５’または３’インフレームでゲノム的に組み込まれる。一実施形態では、ｄＴＡＧが、アルツハイマー病（アミロイドβペプチド（Ａβ）；τタンパク質）、脳β−アミロイド血管症（アミロイドβペプチド（Ａβ））、緑内障における網膜神経節細胞変性（アミロイドβペプチド（Ａβ））、プリオン病（プリオンタンパク質）、パーキンソン病および他のシヌクレイノパチー（α−シヌクレイン）、タウオパチー（微小管関連タンパク質τ（τタンパク質））、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（Ｕｂｉ＋、Ｔａｕ−）（ＴＤＰ−４３）、ＦＴＬＤ−ＦＵＳ（Ｆｕｓｅｄ  ｉｎ  ｓａｒｃｏｍａ（ＦＵＳ）タンパク質）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）（スーパーオキシドジスムターゼ、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳ）、ハンチントン病および他の三塩基反復障害（タンデムグルタミン伸長を有するタンパク質）、家族性英国型認知症（ＡＢｒｉ）、家族性デンマーク型認知症（Ａｄａｎ）、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（アイスランド型）（ＨＣＨＷＡ−Ｉ）（シスタチンＣ）、ＣＡＤＡＳＩＬ（Ｎｏｔｃｈ３）、アレクサンダー病（グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ））、セイピノパシー（Ｓｅｉｐｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）（セイピン）、家族性アミロイドニューロパチー、老人性全身性アミロイドーシス（トランスサイレチン）、セルピノパシー（Ｓｅｒｐｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）（セルピン）、ＡＬ（軽鎖）アミロイドーシス（原発性全身性アミロイドーシス）（モノクローナル免疫グロブリン軽鎖）、ＡＨ（重鎖）アミロイドーシス（免疫グロブリン重鎖）、ＡＡ（続発性）アミロイドーシス（アミロイドＡタンパク質）、ＩＩ型糖尿病（膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ；アミリン）、大動脈中膜アミロイドーシス（メジン（Ｍｅｄｉｎ）（ラクトアドヘドリン））、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス（アポリポタンパク質ＡＩ）、ＡｐｏＡＩＩアミロイドーシス（アポリポタンパク質ＡＩＩ）、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス（アポリポタンパク質ＡＩＶ）、フィンランド型家族性アミロイドーシス（ＦＡＦ）（ゲルゾリン）、リゾチームアミロイドーシス（リゾチーム）、フィブリノーゲンアミロイドーシス（フィブリノーゲン）、透析アミロイドーシス（β２ミクログロブリン）、封入体筋炎／ミオパチー（アミロイドβペプチド（Ａβ））、白内障（クリスタリン）、ロドプシン突然変異を伴う網膜色素変性症（ロドプシン）、甲状腺髄様癌（カルシトニン）、心房性アミロイドーシス（心房性ナトリウム利尿因子）、下垂体プロラクチノーマ（プロラクチン）、遺伝性格子状角膜ジストロフィー（ケラトエピセリン）、皮膚苔癬アミロイドーシス（ケラチン）、マロリー小体（ケラチン中間径フィラメントタンパク質）、角膜ラクトフェリンアミロイドーシス（ラクトフェリン）、肺胞蛋白症（サーファクタントタンパク質Ｃ（ＳＰ−Ｃ））、歯原性（ピンドボルグ）腫瘍アミロイド（歯原性エナメル芽細胞関連タンパク質）、精嚢アミロイド（セメノゲリン（Ｓｅｍｅｎｏｇｅｌｉｎ）Ｉ）、嚢胞性線維症（嚢胞性線維症膜貫通調節因子（ＣＦＴＲ）タンパク質）、鎌状赤血球症（ヘモグロビン）、および重���疾患ミオパチー（ＣＩＭ）（ミオシンユビキチン化の過タンパク分解状態）から選択される障害に関連する内因性タンパク質をコードする遺伝子に５’または３’インフレームでゲノム的に組み込まれる。
【０２１９】
本明細書で企図されるように、目的の特定のタンパク質とインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸をゲノム的に挿入することによって、タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドに結合するｄＴＡＧに特異的なヘテロ二官能性化合物を投与することによって、目的のタンパク質の調節を達成し、その分解をもたらすことができる。このようにして目的の特定のタンパク質を調節することができるので、このような戦略を使用して、細胞内で一定の閾値レベルを超えるタンパク質の発現が病的状態をもたらす障害を治療することができる。この技術の他の用途には、それだけに限らないが、１）病理学が１つまたは複数の機能獲得型変異の関数である場合のタンパク質の標的化分解、２）病理学が増幅または発現増加の関数である場合のタンパク質の標的化分解、３）単遺伝性疾患の徴候であるタンパク質の標的化分解、４）遺伝的素因が長期間にわたって、またしばしば代替的生物学的代償機序がもはや十分ではなくなった後で現れる場合、例えば、それだけに限らないが、高コレステロール血症およびタンパク質症のタンパク質の標的化分解が含まれる。
【０２２０】
内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドの制御された分解によって、タンパク質発現または活性反応速度論の好ましい変化が、それを必要とする対象の障害の予防および／または治療をもたらし得る。
【０２２１】
現在企図されている方法によって治療することができる代表的な疾患および障害は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、「疾患の治療の予防のための方法および組成物」と題された米国特許出願第２０１５０３２９８７５号明細書に記載されている。
【０２２２】
一定の実施形態では、標的タンパク質が脂質代謝に関与している。例えば、高コレステロール血症は、冠動脈疾患のリスクを増加させることが知られている、血中の非常に高レベルのコレステロールを特徴とする状態である。家族性高コレステロール血症、高脂血症および家族性カイロミクロン血症は、異常な遺伝子が観察される総体症状を引き起こす家族に受け継がれる遺伝的状態である。ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）、アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）およびプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）をコードする遺伝子の突然変異がこれらの疾患に関与している。ＬＤＬＲは、細胞への内部移行のために血漿からＬＤＬを除去するのに役立つ。ＬＤＬＲはクラスリン被覆ピットに局在する膜貫通タンパク質であり、そこでＡｐｏＢ−１００（ＡＰＯＢの長い遺伝子産物）およびアポＥリッチリポタンパク質と複合体を形成する。この複合体のエンドサイトーシス後、これはエンドソームに移動し、そこでリソソームによる最終的な分解のためにリポタンパク質が複合体から放出される。その後、ＬＤＬＲが細胞表面にリサイクルされ得る。
【０２２３】
「家族性欠陥アポリポ蛋白Ｂ」（ＦＤＢ）と呼ばれる欠陥型ａｐｏＢ−１００の患者はＡＰＯＢにＲ３５００Ｑ突然変異を頻繁に保有しているため、ＬＤＬのＬＤＬＲへの結合能力が低下し、血漿クリアランスが低下し、したがって血漿中の脂肪酸レベルが上昇する（Ｉｎｎｅｒａｒｉｔｙら、（１９８７）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８４：６９１９）。ＦＤＢは一般的に常染色体優性状態として認識されており、欧州家系の約１：７００人に発生する（ＧｉｎｓｂｕｒｇおよびＷｉｌｌａｒｄ（２０１２）Ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１巻および第２巻．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ロンドン．５０７頁）。したがって、ａｐｏＢ−１００での突然変異についてヘテロ接合性であるＦＤＢ患者では、肝細胞中の対立遺伝子にインフレームでｄＴＡＧを挿入し、ヘテロ二官能性化合物を投与し、ａｐｏ−１００欠陥タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドの遺伝子産物を得ることによる、欠陥ａｐｏＢ−１００対立遺伝子の特異的分解が、疾患の修正を引き起こす可能性がある。
【０２２４】
同様に、ＡＮＧＰＴＬ３のレベル上昇を引き起こすアンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）過剰発現突然変異は、対象の高脂血症を引き起こし得る。ＡＮＧＰＴＬ３は、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）および内皮リパーゼ（ＥＬ）の二重阻害剤としても作用し、げっ歯類において血漿トリグリセリドおよびＨＤＬコレステロールを増加させる。ＡＮＧＰＴＬ３は肝臓で主に発現され、分泌され、通常はトリグリセリド、ＬＤＬコレステロールおよびＨＤＬコレステロールの血漿レベルを上昇させるように作用し、肝臓に直接作用して肝細胞リポタンパク質の分泌およびクリアランスを調節する（Ｍｕｓｕｎｕｒｕら、（２０１０）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６３：２３  ２２２０頁）。したがって、本発明の方法を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、タンパク質の標的化分解を通してＡＮＧＰＴＬ３過剰発現に関連した高脂血症を治療することができる。
【０２２５】
ＰＣＳＫ９はコレステロール恒常性において主要な調節的役割を果たすタンパク質をコードする別の遺伝子である。ＰＣＳＫ９は、ＬＤＬＲの上皮成長因子様リピートＡ（ＥＧＦ−Ａ）ドメインに結合し、ＬＤＬＲ分解を誘導する。ＰＣＳＫ９における常染色体優性の毒性機能獲得型変異（例えば、Ｓ１２７Ｒ、Ｐ２１６Ｌ、Ｄ３７４ＹおよびＮ１５７Ｋ）が記載されており、対応する血漿ＬＤＬコレステロールの増加をもたらすＬＤＬＲ分解速度の増加の結果として高脂血症および家族性高コレステロール血症（ＦＨ）に関連する（Ａｂｉｆａｄｅｌら（２００３）Ｎａｔ  Ｇｅｎ  ３４（２）：１５４）。さらに、血漿ＬＤＬコレステロール量の関連する実質的な減少を伴う肝ＬＤＬＲレベルの増加を引き起こす機能喪失型ＰＣＳＫ９変異（例えば、Ｙ１４２Ｘ、Ｃ６７９ＸおよびＲ４６Ｌ）が特定されており、冠動脈性心臓病の発生率の８８％の減少をもたらす（Ｃｏｈｅｎら、（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５４（１２）：１２６４）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＰＣＳＫ９タンパク質の標的化分解を通して高脂血症および／またはＦＨを治療または予防することができる。
【０２２６】
家族性カイロミクロン血症症候群またはＦＣＳは、極めて高レベルの血漿トリグリセリドを特徴とし、腹痛、肝臓および脾臓の肥大ならびに再発性急性膵炎などのいくつかの健康問題をもたらす。さらに、ＦＣＳを有さない高いトリグリセリドレベルを持つ対象が存在するが、トリグリセリド上昇のために、同様の健康問題を有する。ＡＰＯＣ３遺伝子によってコードされるアポリポタンパク質Ｃ３またはａｐｏ−ＣＩＩＩは、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、ＬＤＬ、ＨＤＬおよびカイロミクロンの成分であり、通常、リポタンパク質リパーゼおよび肝性リパーゼを阻害することによって脂肪分解を阻害する。ａｐｏ−ＣＩＩＩは、トリグリセリドリッチ粒子の肝臓への取り込みを阻害し、高脂血症の患者で上昇する可能性があり（Ｂｏｂｉｋ、（２００８）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１８：７０２）、独立した心血管疾患の危険因子である。マウスでＡＰＯＣ３遺伝子をノックアウトすると、正常と比較して血漿トリグリセリドレベルが低下した動物が得られる（Ｍａｅｄａら（１９９４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６９（３８）：２３６１０）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、ＡＰＯＣ３タンパク質の標的化分解によって脂質代謝障害（例えば、家族性高コレステロール血症、高脂血症および家族性カイロミクロン血症）を有する対象を予防または治療することができる。
【０２２７】
他の実施形態では、１つまたは複数の標的タンパク質が心血管疾患および冠動脈疾患などの血管疾患に関与している。上に論じられる脂質代謝障害と同様に、冠動脈疾患も特定の遺伝子によって引き起こされ得る。例えば、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、炎症性疾患に関連している肝臓で産生されるタンパク質である。これは、死細胞または死にかけている細胞の表面で発現されるホスホコリンに結合する急性期タンパク質であり、その役割は補体系を活性化して細胞を除去するのを助けることである。慢性炎症性疾患では、ＣＲＰレベル上昇が、全体的な慢性炎症状態に寄与し、これを増幅することによって疾患症状を悪化させ得る。さらに、ラットモデルでは、ＣＲＰが心筋梗塞および脳梗塞のサイズを増加させることが示されており、これはヒト患者に移すと、心臓発作後のより悪い予後を予測し得る。ＣＲＰの阻害剤をこれらのラットモデルに導入すると、梗塞サイズおよび心機能不全が減少する（Ｐｅｐｙｓら（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  ４４０（２７）：１２１７）。したがって、ＣＲＰの阻害は、炎症性疾患と冠動脈疾患の両方において有益となり得る。本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、ＣＲＰタンパク質の標的化分解によってＣＲＰ発現の調節を引き起こすことができる。
【０２２８】
血漿リポタンパク質（Ｌｐ（ａ））は、アポリポタンパク質（ａ）（ａｐｏ（ａ））を含む低密度リポタンパク質粒子であり、またアテローム性動脈硬化症を含む心血管疾患の独立危険因子でもある。Ａｐｏ（ａ）は、ジスルフィド結合によって連結されたａｐｏＢ−１００を通してＬＤＬの表面と接触しており、高Ａｐｏ（ａ）レベルと関連する遺伝的多型が、過剰な率の心筋梗塞と関連していることが報告されている（Ｃｈａｓｍａｎら（２００９）Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ２０３（２）：３７１）。血漿中のＬｐ（ａ）濃度は個体間で濃度が広く異なり、これらの濃度差は遺伝的に決定されるように思われる。ａｐｏ（ａ）遺伝子は、いくつかのプラスミノーゲンクリングル４様リピートを含み、これらのクリングルリピートの数は、Ｌｐ（ａ）の血漿濃度に反比例する。ａｐｏ（ａ）に対する免疫応答を高め、Ｌｐ（ａ）の抗体媒介クリアランスを引き起こすように設計されたＤＮＡワクチンアプローチは、マウスにおけるＬｐ（ａ）のアテローム性動脈硬化促進性（ｐｒｏａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ）活性の減少を実証した（Ｋｙｕｔｏｋｕら（２０１３）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ３  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ１６００）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、ＡｐｏＡタンパク質の標的化分解によって、ＡｐｏＡタンパク質の発現を低下させ、Ｌｐ（ａ）の血漿濃度を低下させることができる。
【０２２９】
しばしば栓友病と呼ばれる凝固障害は、血管疾患に派生効果を有し得る。哺乳動物の凝固を調節する生化学的事象の複雑なネットワークは、５つの補因子（組織因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、トロンボモジュリンおよび表面膜タンパク質）と相互作用して、血餅の主成分であるフィブリンを生成する５つのプロテアーゼ（第ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸおよびＸ因子ならびにＣタンパク質）を含む。強力な内因性凝血原と血栓抵抗力との間には微妙なバランスが存在しており、それによって血液の流動性が確保され、損傷が発生した場合に血餅を誘発するこれらの因子の準備が維持される。第ＸＩ因子と第ＶＩＩ因子の両方の高い血漿活性は、凝固亢進および血栓性疾患（冠動脈梗塞、脳卒中、深部静脈血栓症、肺塞栓症）および患者予後不良と関連している。重度の第ＸＩ因子欠乏症を有する人々は虚血性脳傷害および脳卒中から保護されることが実証されている（Ｓａｌｏｍａｎら（２００８）Ｂｌｏｏｄ  １１１：４１１３）。同時に、高レベルのＦＸＩが患者の高い脳卒中発生率と関連することが示されている（Ｙａｎｇら、（２００６）Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈ  １２６：４１１）。同様に、高い第ＶＩＩ因子レベルも冠動脈疾患に関連しているが、これは第ＶＩＩ因子をどのように測定するかおよびタンパク質のどの形態を分析するかなどの他の考慮事項によって複雑化される（Ｃｈａｎら、（２００８）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１８：２２８６）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、第ＸＩ因子および／または第ＶＩＩ因子の標的化分解によって、疾患に関連する凝固因子（例えば、第ＶＩＩ因子および第ＸＩ因子）の選択的分解を通して高血栓性疾患を有する対象を予防または治療することができる。
【０２３０】
上記のように、凝固カスケードのバランスが非常に重要である。したがって、凝固因子の重要性に加えて、これらの因子の阻害剤もまた重要である。血友病患者は、凝固カスケードの１つまたは複数の成分が不足しており、結果として凝固能力が低下している。このカスケードの最後のステップの１つでは、トロンビンがフィブリノーゲンに作用して血餅の主成分であるフィブリンを生成する。カスケードは活性トロンビンの産生に次第に至ってこれが起こることを可能にする。系のバランスを保つために、アンチトロンビン（ＳＥＲＰＩＮＣ１遺伝子によってコードされるアンチトロンビンＩＩＩとしても知られる）はトロンビンに作用してその作用を阻害する。多くの血友病患者では、因子の欠乏が絶対的なものではなく、ある程度の凝固が起こる。したがって、アンチトロンビンの分解に基づくアプローチは、上流因子が限られている場合、潜在的にどの因子が欠乏しているかにかかわらず、凝固カスケードが十分な凝固を生じることを可能にし得るだろう。これは、血友病Ａ患者由来の血液を用いて実証されている（Ｄｉ  Ｍｉｃｃｏら（２０００）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３月１０日；３９１（１〜２）：１〜９参照）。本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、アンチトロンビンＩＩＩタンパク質の標的化分解によって、血友病Ａおよび血友病Ｂなどの血友病患者を治療することができる。
【０２３１】
１つまたは複数の標的タンパク質が血液障害（血液学的状態）にも関与し得る。補体系は、複数の血液学的状態において極めて重要な役割を果たす。発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）は、ＰＩＧ−Ａ遺伝子欠損によって引き起こされる溶血性疾患である（Ｂｒｏｄｓｋｙ（２００８）Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ  ２２（２）：６５参照）。ＰＩＧ−Ａ遺伝子産物ホスファチジルイノシトールグリカンクラスＡは、ＧＰＩアンカータンパク質の合成の最初のステップに必要である。ＰＩＧ−ＡはＸ染色体上に見られ、ＰＩＧ−Ａ中の突然変異は補体による溶血に対して感受性のある赤血球をもたらす。特に、これらの変異細胞は、ＧＰＩアンカータンパク質ＣＤ５５およびＣＤ５９を欠いている。ＣＤ５９は補体関連膜侵襲複合体（またはＭＡＣ）と直接相互作用して、孔の集合における重要な段階であるＣ９の凝集を遮断することによって溶解孔形成を防止する。ＣＤ５５はＣ３転換酵素の破壊を促進するように機能するので、ＣＤ５５の非存在下では、Ｃ３転換酵素がさらに多くなり、より多くのＭＡＣ形成をもたらす。したがって、これらのタンパク質の両方が欠如していると、変異赤血球の溶解が増加する。ＰＮＨ患者の場合、血栓症の増加による合併症が最大の懸念である（Ｂｒｏｄｓｋｙ（２００８）Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ  ２２（２）：６５）。ＰＮＨ患者の４０％が進行中の血栓症を患っており、これは脳卒中および急性心血管疾患を引き起こし得る。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、ホスファチジルイノシトールグリカンクラスＡ（ＰＩＧ  Ａ）の標的化分解によって、対象のＰＨＮを治療および／または予防することができる。
【０２３２】
補体のＣ５成分の阻害は、ＰＮＨと非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）の両方の治療として承認されており、Ｃ５が重要な治療標的であることを確認している。ａＨＵＳに関連する赤血球の溶血は、細胞が補体系（自然免疫の一部）の調節不全に起因する代替経路により破壊の標的とされると起こる。通常、破壊的Ｃ３ｂＢｂ複合体は侵入細胞（例えば、細菌）の表面上に形成され、補体系の代替経路の一部としてその破壊を促進する。Ｃ３ｂＢｂ複合体は別のＣ３ｂと結合してＣ３ｂＢｂＣ３ｂ複合体を形成することができ、次いで、これがＣ５転換酵素として作用する。Ｃ５転換酵素はＣ５をＣ５ａおよびＣ５ｂに切断し、Ｃ５ｂはＣ６、Ｃ７、Ｃ８およびＣ９を動員してＭＡＣを形成する。補体調節タンパク質（例えば、ＣＤ３５、ＣＤ４６、ＣＤ５５およびＣＤ５９）のセットは、体自身の細胞に位置して、これらのタンパク質の活性を阻害し、したがってこれらを保護する。しかしながら、これらの調節タンパク質の不均衡があると、Ｃ３ｂＢｂ複合体が不適切に形成する可能性がある（ｄｅ  Ｊｏｒｇｅら、（２０１１）Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ２２：１３７）。この症候群は、赤血球の早期破壊に加えて、糸球体濾過装置の損傷および目詰まりの結果として腎臓病も引き起こし得る。Ｃ５陰性マウスは、補体調節タンパク質突然変異を有するマウスと交配すると保護されることが示された（ａＨＵＳ（ｄｅ  Ｊｏｒｇｅ、同上）および補体調節不全に関連する他の疾患における標的としてのＣ５の概念を検証するために使用されたデータ）。Ｃ５ｂ特異的モノクローナル抗体エクリズマブは、ａＨＵＳ（ＧｒｕｐｐｏおよびＲｏｔｈｅｒ、（２００９）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３６０；５  ５４４頁）および他の補体媒介疾患（例えば、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ））（Ｈｉｌｌｍｅｎら、（２０１３）Ｂｒ．Ｊ  Ｈａｅｍ  １６２：６２））の治療に首尾よく使用されている。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、Ｃ５の標的化分解によって、Ｃ５の発現を調節し、補体調節不全に関連する疾患を予防または治療することができる。
【０２３３】
α−１−アンチトリプシン（Ａ１ＡＴ）欠乏症は、欧州祖先の１５００〜３０００人に約１人で発生するが、アジア子孫の人ではまれである。α−１−アンチトリプシンタンパク質は、ＳＥＲＰＩＮＡ１遺伝子によってコードされ、好中球エラスターゼ、トリプシンおよびプロテイナーゼ−３（ＰＲ−３）を含む炎症細胞によって放出されるプロテアーゼの活性から細胞を保護するのに役立つプロテアーゼ阻害剤である。欠乏症は、変異対立遺伝子からの発現低下または阻害活性の低い変異Ａ１ＡＴタンパク質の発現が組織損傷をもたらす好中球エラスターゼ阻害の慢性的欠如をもたらすヘテロ接合性個体において、変異ＳＥＲＰＩＮＡ１遺伝子によって引き起こされる常染色体共優性または劣性障害である。最も一般的なＳＥＲＰＩＮＡ１突然変異は、患者の肝細胞の小胞体内でタンパク質に規則的なポリマーを形成させるＧｌｕ３４２Ｌｙｓ置換（Ｚ対立遺伝子とも呼ばれる）を含む。これらの包含は、最終的に肝移植によってのみ治療することができる肝硬変を引き起こす（Ｙｕｓａら（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ  ４７８  ３９１頁）。肝細胞内での重合は血漿Ａ１ＡＴレベルの激しい低下をもたらし、この炎症性疾患のリスク増加をもたらす。さらに、Ａ１ＡＴ欠乏症は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺気腫および慢性気管支炎を含む肺疾患と関連しており（Ｔｕｄｅｒら（２０１０）Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｏｃ  ７（６）：３８１頁）、１型および２型糖尿病、急性心筋梗塞、関節リウマチ、炎症性腸疾患、嚢胞性繊維症、移植拒絶反応、移植片対宿主病および多発性硬化症を含む他の疾患の進行の阻害へのはるかに広い到達を潜在的に有し得る（Ｌｅｗｉｓ（２０１２）Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  １８  （１）９５７頁）。集団研究は、これらの疾患を避けるためにおよそ０．５ｍｇ／ｍＬ（非炎症性状態における正常な血漿レベルはおよそ０．９〜１．７５ｍｇ／ＭＬである）の最小ＡＴＡ１血漿閾値を示唆しており、現在の療法は主に気管支拡張薬などの使用を通して症状を減らすように作用するが、Ａ１ＡＴ（Ｚｅｍａｉｒａ（登録商標））の毎週の注入の使用もまた、血漿Ａ１ＡＴの深刻な欠如が実証されている気腫患者のための選択肢である。Ａ１ＡＴに関連する重度の肺疾患もまた最終的には移植によって治療される。Ａ１ＡＴ欠乏症の治療のための臨床試験は、ほんの数例を挙げると、濃縮Ａ１ＡＴタンパク質の送達、ＩＭ注射によるＡ１ＡＴ遺伝子を含むＡＡＶ構築物の使用、およびＨＩＶにおけるＡ１ＡＴの使用を含む種々のアプローチを含む。したがって、本発明の組成物および方法を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、α−１−アンチトリプシンタンパク質の標的化分解によってＡ１ＡＴ欠乏症に関連する疾患を治療または予防し、それによって肝硬変をもたらし得る肝凝集物を排除することができる。
【０２３４】
目的の別の肝臓標的には、体内の鉄含量の調節に関与しているあらゆるタンパク質が含まれる。鉄はヘモグロビン産生に必須であるが、過剰になると活性酸素種の産生をもたらし得る。輸血に依存している患者（例えば、ある種の血友病、異常ヘモグロビン症）では、二次性鉄過剰症が一般的である。鉄調節ホルモンヘプシジン、ならびにその受容体および鉄チャネルフェロポーチンは、その細胞内取り込みを促進することによって鉄の食物吸収、貯蔵、および組織分布を制御する。ヘプシジンの調節は転写レベルで行われ、血漿中の鉄濃度に感受性であり、ここではヘプシジン発現増加がより低い血漿鉄濃度をもたらす。ヘモジュベリンとして知られる受容体を含む一連の受容体−リガンド相互作用を通して、ヘプシジン遺伝子はＳＭＡＤ転写因子によって上方制御される。同様に、鉄関連ヘプシジンの下方制御は、ヘモジュベリンを切断し、ヘプシジンの上方制御を妨げるＴＭＰＲＳＳ６として知られるプロテアーゼによって制御される（Ｇａｎｚ（２０１１）Ｂｌｏｏｄ  １１７：４４２５）。ＴＭＲＳＳ６  ｍＲＮＡを標的化する抑制性ＲＮＡの使用によるＴＭＰＳＳ６発現の下方制御は、マウスモデルにおいて鉄過剰症の減少を引き起こすことが示されている（Ｓｃｈｍｉｄｔら（２０１３）Ｂｌｏｏｄ  １２１：１２００）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略の使用を通して、分解のためにＴＭＰＲＳＳ６を標的化することができる。
【０２３５】
体内の鉄利用経路に関連する他の症状はポルフィリン症である。これらの障害は、ヘム合成に関与する酵素のいくつかの欠損から生じる。急性間欠性ポルフィリン症（ＡＩＰ）は常染色体優性障害であり、２番目に一般的なポルフィリン症であり、１００，０００人に約５〜１０人の発生率である。ＡＩＰは、ヒドロキシメチルビランシンターゼ（ＨＭＢシンターゼ（ＨＭＢＳ）、ポルフォビリノーゲン−デアミナーゼとも呼ばれる）の欠乏によって引き起こされ、ＨＭＢＳ遺伝子の突然変異は、ミスセンス変異および点突然変異を含み、非常に不均一である（Ｓｏｌｉｓら（１９９９）Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ５：６６４）。生命を脅かす可能性のあるＡＩＰ発作は、消化器系、神経精神系、心血管系および神経系の症状を呈し得る。発作はいくつかの引き金があり、数日間持続し、しばしば入院を必要とし、ある種の薬物、感染症、カロリー制限、喫煙、アルコールおよび月経周期に関連するホルモン変動を含むいくつかの一見無関係な因子によって突然引き起こされ得る（Ｙａｓｕｄａら（２０１０）Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １８（１）：１７）。ＨＭＢシンターゼはヘム合成経路の一部であり、ここではグリシンとスクシニル−ＣｏＡがδ−アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ−１）によって結合されてアミノレブリン酸を生成し、次いで、アミノレブリン酸デヒドラターゼ（ＡＬＡＤ）によって作用されてホスホビリノーゲンを生成する。ホスホビリノーゲンは、ＨＭＢシンターゼによってヒドロキシメチルビランに変換される。経路はそこから続き、最終的にはヘムを生成する（Ａｊｉｏｋａら（２００６）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １７６２：７２３）。引き金とは無関係に、全ての攻撃は酵素δ−アミノレブリン酸シンターゼ１（ＡＬＡＳ−１）の上昇をもたらす。この酵素は、肝臓ヘム合成経路の最初の酵素であり、誘導されると、ＨＭＢシンターゼの欠乏が律速になり、アミノレブリン酸およびホスホビリノーゲン前駆体が蓄積する（Ｙａｓｕｄａ、同上）。ＡＩＰ患者の肝移植は発作を止めることができ、肝臓を標的化することが治療上有益となり得ることを示している。さらに、マウスが正常なＨＭＢシンターゼレベルの３０％しか有さないＡＩＰのマウスモデルにおいて、ＨＭＢシンターゼをコードする導入遺伝子ＨＭＢＳの挿入によって、マウスにフェノバルビタールを与えるとアミノレブリン酸およびホスホビリノーゲン蓄積の減少がもたらされた（Ｙａｓｕｄａ、同上）。ＡＬＡＳ−１の阻害のために設計された二本鎖ＲＮＡもまた、マウスＡＩＰモデルにおいてインビボでのＡＬＡＳ−１発現を低下させ、フェノバルビタール処置に応答してホスホビリノーゲン蓄積を減少させることが示されている（米国特許出願公開第２０１３０２８１５１１号明細書参照）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＡＬＡＳ−１の標的化分解によってＡＩＰを予防および治療することができる。
【０２３６】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、世界で最も一般的な肝疾患の形態であり、西洋人集団では１５〜３０％の有病率であり、肝臓内のトリグリセリド蓄積によって引き起こされる。しかしながら、有病率は、過体重集団では５８％および肥満集団では９８％に増加する。非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、肝損傷が発生したより進行した形態のＮＡＦＬＤであり、肝不全、門脈圧亢進、肝細胞癌および肝硬変をもたらし得る（ＳｃｈｗｅｎｇｅｒおよびＡｌｌａｒｄ（２０１４）Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｎｅｎ  ２０（７）：１７１２）。ＮＡＬＦＤで観察される肝臓トリグリセリド蓄積は、しばしば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームの一部として、肝臓インスリン抵抗性と強く関連していることを示唆するように思われる（Ｃｈｏｉら（２０１７、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８２（３１）：２２６７８））。アシル−ＣａＡ：ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）は、ｓｎ−１，２ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）と長鎖アシルＣｏＡの結合を促進することによって、トリグリセリド合成の最終段階を触媒する。ＤＧＡＴには、ＤＧＡＴ−１とＤＧＡＴ−２の２つの主要アイソフォームが存在する。ＤＧＡＴ−１は主に小腸で発現され、ＤＧＡＴ−２は主に肝臓での発現を示し、その発現はインスリン反応性である。食餌誘発性ＮＡＬＦＤを有するラットにおけるアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用したＤＧＡＴ−１またはＤＧＡＴ−２の発現のノックダウンは、ＤＧＡＴ−２ノックダウンで肝脂肪を有意に改善したが、ＤＧＡＴ−１ノックダウンではしなかった（Ｃｈｏｉ、同上）。したがって、本発明の材料および方法を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＤＧＡＴ−２の標的化分解によって、ＮＡＳＨおよびＮＡＬＦＤを治療するためにＤＧＡＴ−２の発現を変化させ、肝インスリン抵抗性を低下させることができる。
【０２３７】
さらなる血管標的は、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）に関与するものを含む。ＨＡＥは常染色体優性疾患で、５０，０００人に１人が発症し、Ｃ１阻害剤のレベルが低下した結果である。患者は身体のあらゆる部分で腫脹の再発エピソードを経験し、中咽頭、喉頭または腹部に局在する腫脹が罹患率および死亡の最高リスクを有する（ＴｓｅおよびＺｕｒａｗ、（２０１３）Ｃｌｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｊ  ｏｆ  Ｍｅｄ  ８０（５）：２９７参照）。この疾患は、ブラジキニンの過剰産生の結果としての組織への血漿の溢出から生じる。その機序は、活性血漿カリクレイン（より多くの第ＸＩＩ因子を活性化する）を放出する、活性化第ＸＩＩ因子によるプレカリクレイン（ＰＫＫとしても知られる）の切断を伴うように思われる。次いで、血漿カリクレインがキニノーゲンを切断し、ブラジキニンを放出する。次いで、ブラジキニンは内皮細胞上のＢ２ブラジキニン受容体に結合し、内皮の透過性を増加させる。通常、Ｃ１阻害剤（ＳＥＲＰＩＮＧ１によってコードされる）は、血漿カリクレインおよび第ＸＩＩ因子の活性化を阻害することによってブラジキニン産生を制御する。ＨＡＥは、存在するＣ１阻害剤の量および種類で区別されるＩ型とＩＩ型、ならびに第ＸＩＩ因子のＴｈｒ３０９Ｌｙｓ突然変異に関連するＩＩＩ型の３つの型で起こる（Ｐｒｉｅｔｏら（２００９）Ａｌｌｅｒｇｙ  ６４（２）：２８４）。Ｉ型ＨＡＥは低レベルのＣ１阻害剤を有し、これは作られる少量のＣ１阻害剤タンパク質の発現が乏しく破壊された結果であるように思われる。１型はＨＡＥ患者のおよそ８５％を占める。ＩＩ型患者は正常レベルのＣ１阻害剤を有するが、Ｃ１阻害剤タンパク質が突然変異のために無効である（ＴｓｅおよびＺｕｒａｗ、同上）。ＳＥＲＰＩＮＧ１の２５０を超える突然変異が特徴付けられており、これらが小型および大型の挿入および欠失ならびに重複を含むＩ型ＨＡＥをもたらす（Ｒｉｊａｖｅｃら（２０１３）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８（２）：ｅ５６７１２）。ＨＡＥの遺伝学的基礎におけるこの高い変動性のために、本発明の方法および組成物を使用して、ＨＡＥの出現において下流のプレーヤーを標的化することによって、ＨＡＥを予防または治療することができる。例えば、プレカリクレイン（肝細胞で発現されるＫＬＫＢ１）を標的化してプレカリクレイン（略してＰＫＫ）発現を低下させると、ＨＡＥを引き起こしている上流の突然変異の種類にかかわらずブラジキニン産生が減少し、血漿溢出の減少がもたらされ得る。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＫＬＫＢ１の標的化分解によって、ＫＬＫＢ１の発現を減少させてＨＡＥを予防または治療することができる。
【０２３８】
１つまたは複数の標的は線維性疾患にも関与し得る。種々の器官の線維性疾患は臓器不全の主因であり、別の根本的な疾患に対する反応として、または罹患個体における線維症の素因の結果として起こり得る。線維症の顕著な特徴は、コラーゲンおよび関連糖タンパク質などの細胞外マトリックス化合物の不適切な沈着である。ＴＧＦ−βが線維化過程で主要な役割を果たし、線維芽細胞が細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質を合成するのを誘導し、またＥＣＭ分解活性を有するタンパク質の発現を阻害する（Ｌｅａｓｋ（２０１１）Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎ  Ｓｉｇｎａｌ  ５：１２５）。ＣＮＮタンパク質（いわゆる最初の３つの膜タンパク質、すなわちＣＹＲ６１（システインリッチ６１／ＣＣＮ１）、ＣＴＧＦ（結合組織成長因子／ＣＣＮ２）およびＮＯＶ（過剰発現腎芽細胞腫／ＣＣＮ３）が記載されているので）として知られるＥＣＭ調節タンパク質のクラスがある。これらのタンパク質は、細胞接着、遊走、アポトーシス、生存および遺伝子発現を含む種々の細胞機能を調節する。ＴＧＦ−βは、ＴＧＦ−βと共因子として相乗的に作用し、周皮細胞活性化、線維症に必須であると思われる過程に関与していると思われるＣＣＮ２発現を強力に上方制御する（Ｌｅａｓｋ同上）。ＣＣＮ２は、肺組織を含む線維性組織で過剰発現され、全身性硬化症（強皮症）の患者の血漿中にも見られる。また、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の使用を通したＣＣＮ２発現のノックダウンは、化学誘発性肝線維症、尿管閉塞誘発性腎線維症、皮膚創傷における線維性瘢痕、および部分的腎摘出後の腎臓間質性線維化を減少させた（ＪｕｎおよびＬａｕ（２０１３）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．１０（１２）：９４５〜９６３）。その線維化促進性の役割に加えて、ＣＣＮ２はがん、特に転移において重要であり得る。これは血管新生を誘導することによって腫瘍増殖を促進する可能性があり、乳がん細胞中の高レベルのＣＣＮ２は骨転移能のマーカーである（ＪｕｎおよびＬａｕ、同上）。モノクローナル抗体または抑制性ＲＮＡなどのＣＣＮ２調節化合物の使用を通して、線維症、がん、心血管疾患および網膜症の種々のモデルでＣＣＮ２発現をノックダウンする実験モデルが、いくつかのこれらの疾患の臨床的進行の影響を示している。（ＪｕｎおよびＬａｕ同上）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＣＣＮ２の標的化分解によってＣＣＮ２の発現を減少させることによって、線維症、がん、血管疾患および網膜症を予防または治療することができる。
【０２３９】
他の実施形態では、１つまたは複数の標的が自己免疫疾患に関与している。クラスとしての自己免疫疾患は一般的であり、米国だけで２３００万人超が罹患している。多くの様々なレベルの重症度および予後を有するいくつかの異なる種類が存在する。一般に、これらは自分自身の体に対する免疫応答をもたらす種々の自己抗原に対する自己抗体の産生を特徴とする。腸の自己免疫疾患は、潰瘍性大腸炎および炎症性／過敏性腸疾患（例えば、クローン病）などの状態を引き起こし得る。細胞表面糖タンパク質細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ−１）は内皮細胞上で発現され、炎症状態で上方制御され、組織への移動中に白血球に対する結合タンパク質として働く。特定のＩＣＡＭ−１対立遺伝子が、クローン病（例えば、Ｋ４６９Ｅ対立遺伝子、エキソン６）または潰瘍性大腸炎（例えば、Ｇ２４１Ｒ、エキソン４）と関連していることが分かっており、これらの疾患に見られる慢性炎症誘発に優先的に関与し得る（Ｂｒａｕｎら（２００１）Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０１（３）：３５７〜６０）。血管疾患および糖尿病疾患のマウスモデルにおけるＩＣＡＭのノックアウトが、この治療アプローチの有用性を実証している（それぞれ、Ｂｏｕｒｄｉｌｌｏｎら（２０００）Ａｔｈｅｒ  Ｔｈｒｏｍ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏ  ２０：２６３０およびＯｋａｄａら（２００３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５２：２５８６参照）。したがって、本発明の方法および組成物を、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＩＣＡＭの標的化分解によって、炎症性疾患におけるＩＣＡＭ発現を一般的に減少させるために使用することができる。
【０２４０】
自己免疫疾患として最近認識されている別の一般的な疾患は糖尿病である。グルカゴン、膵島のα細胞によって放出されるペプチドホルモンは、肝臓のグルコース産生を調節することにおいて重要な役割を果たし、顕著な高血糖性効果を有する。さらに、グルカゴンは、糖新生に必要な複数の酵素、特に、糖新生における律速段階であるピルビン酸をホスホエノールピルビン酸に変換するための酵素系を活性化する。以下の所見に基づいて、高グルカゴン血症が糖尿病の発病の原因因子であることが提案されている：１）動物からヒト研究までの糖尿病性高血糖は、相対的または絶対的高グルカゴン血症を一貫して伴う；２）ソマトスタチンの注入は、内因性グルカゴン放出を阻害し、これが今度はアロキサンまたはジアゾキシドによって誘発された糖尿病のイヌの血糖値を低下させる；および３）慢性グルカゴン注入は、ヒトで肝インスリン抵抗性をもたらす（Ｌｉａｎｇら（２００４）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５３（２）：４１０参照）。グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ遺伝子によってコードされる）は主に肝臓で発現され、グルカゴン受容体を標的化するアンチセンスＲＮＡで糖尿病（ｄｂ／ｄｂ）マウスを処置すると、血清グルコースレベル、トリグリセリドおよび脂肪酸が対照と比較して有意に減少する（Ｌｉａｎｇら、同上）。同様に、グルココルチコイド（ＧＣ）は、肝臓糖新生を増加させ、肝臓グルコース排出の調節において重要な役割を果たす。ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、標的化アンチセンスＲＮＡの使用を通したグルココルチコイド受容体（ＧＣＣＲ）発現の減少は、摂食時および絶食時グルコースレベルの約４０％の低下および血漿トリグリセリドの約５０％の減少を引き起こした（Ｗａｔｔｓら（２００５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５４（６）：１８４６参照）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によってグルカゴン受容体および／またはグルココルチコイド受容体の発現を減少させることによって、グルカゴン受容体および／またはグルココルチコイド受容体の標的化を通して糖尿病を予防または治療することができる。
【０２４１】
２型インスリン抵抗性糖尿病における別の潜在的な標的は、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ−１Ｂ）である。インスリン抵抗性は、グルコース取り込みおよび組織内での利用に関して、細胞がインスリンに反応する能力の低下として定義される。インスリンシグナル伝達を調節する最も重要なホスファターゼの１つは、直接的脱リン酸化によってインスリン受容体およびインスリン受容体基質１を阻害するＰＴＰ−１Ｂである。ＰＴＰ−１Ｂ−／−（両対立遺伝子で突然変異している）であるマウスは、インスリンに対して過敏であり、高脂肪食での体重増加に対して抵抗性である（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｒｕｉｚら（２０１４）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ９（２）：ｅ９０３４４参照）。したがって、この標的は糖尿病治療と肥満の両方に有用となり得る。この酵素に特異的な阻害性小分子を開発することは高度に保存された活性部位ポケットのために問題があるが、ＰＴＰ−１Ｂに向けられたアンチセンスオリゴヌクレオチドは肝臓および脂肪組織でＰＴＰ−１Ｂ  ｍＲＮＡ発現を約５０％減少させ、高血糖の、インスリン抵抗性のｏｂ／ｏｂマウスおよびｄｂ／ｄｂマウスでグルコース低下効果をもたらすことが示された、非ヒト霊長類で繰り返された実験（Ｓｗａｒｂｒｉｃｋら、（２００９）Ｅｎｄｏｃｒｉｎ  １５０：１６７０参照）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＰＴＰ−１Ｂの標的化分解によって、ＰＴＰ−１Ｂを標的化し、インスリン感受性を高めることができる。
【０２４２】
糖尿病型インスリン抵抗性糖尿病を発症する高い危険因子は肥満である。世界中で、１０億人超の人々が過体重（肥満度指数（ＢＭＩ）≧２５ｋｇ／ｍ２）であると推定されており、これらのうち３億人超が肥満（ＢＭＩ≧３０ｋｇ／ｍ２）であると考えられ、肥満が今日の公衆衛生に対する最大の脅威の１つであることを意味している（ＬａｇｅｒｒｏｓおよびＲｏｓｓｎｅｒ（２０１３）Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ６（１）：７７）。肥満は、インスリン抵抗性ＩＩ型糖尿病、脂質異常症、高血圧および心血管疾患などの併存症と大いに関連している。肥満の治療は、典型的には食事および運動の修正から始まるが、多くの場合カロリー消費量の減少、身体によるエネルギー消費量の平行的な交絡した減少が観察される（Ｙｕら、（２０１３）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８（７）：ｅ６６９２３）。線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）は、マウス肥満モデルにおいて抗肥満効果を有することが示されている。ＦＧＦＲ４は主に肝臓で発現され、それとそのリガンドＦＧＦ１９（ヒトにおいて）は胆汁酸代謝を調節する。ＦＧＦＲ４／ＦＧＦ１９はコレステロール７α−ヒドロキシラーゼの発現およびその活性を調節する。さらに、ＦＧＦＲ４およびＦＧＦ１９は脂質、炭水化物またはエネルギー代謝に関与しているようである。肝ＦＧＦＲ４発現は絶食によって減少し、インスリンによって増加する。ＦＧＦＲ４ヌルマウスはまた、様々な栄養状態に応じて、野生型マウスと比較した脂質プロファイルの変化を示す。肥満マウスをＦＧＦ１９で処置すると、代謝率が上昇し、脂肪症、脂肪肝、インスリン感受性および血漿脂質レベルが改善され、またグリコーゲン合成を増加させながら肝臓の脂肪酸合成および糖新生が阻害された。肥満マウスにおけるＦＧＦＲ４のアンチセンス減少はまた、明白な毒性なしに、体重および脂肪症の減少、インスリン感受性および脂肪肝の改善、ならびに血漿ＦＧＦ１５（ＦＧＦ１９のマウス等価物）レベル上昇をもたらす（Ｙｕら、同上）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的分解によってＦＧＦＲ４の発現を減少させることによって、肥満を治療することができる。
【０２４３】
多発性硬化症（ＭＳ）は、炎症、脱髄および軸索破壊を特徴とする、中枢神経系の慢性の、身体障害性の自己免疫疾患である。再発性ＭＳ（患者の８５〜９５％に発生する）に伴う再燃は、活性化リンパ球の脳内への侵入に関連すると考えられている。現在利用可能な治療法は、再発率を約３０％しか抑制できない。炎症反応は血管系の内皮上の血管接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）の発現を誘導し、リンパ球のＶＣＡＭ−１への接着は、活性化細胞が脳へ通過することを可能にする必要な工程である。リンパ球によるＶＣＡＭ−１接着は、活性化リンパ球の表面上の最晩期抗原−４（ＶＬＡ−４、α４β１インテグリンとしても知られる）の結合によって媒介される（Ｗｏｌｆら（２０１３）ＰＬｏｓ  Ｏｎｅ  ８（３）：ｅ５８４３８）。この相互作用の破壊が、抗ＶＬＡ−４特異的抗体および小分子アンタゴニストの治療的使用の背後にある考えであった（Ｗｏｌｆら、同上）。したがって、本発明の材料および方法を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によってＶＣＡＭ−１またはＶＬＡ−４発現を標的化することができる。
【０２４４】
目的の別の疾患は、クッシング病／症候群（ＣＳ）である。この疾患では、患者が、副腎による発現増加のためにグルココルチコイドの血清レベルが上昇している。ＣＳは、発生率が年間１．８〜２．４人患者／百万の珍しい状態である。内因性ＣＳの最も一般的な原因はＡＣＴＨ産生下垂体腺腫であり、ＣＳ患者の約７０％に見られる。コルチゾール産生副腎腺腫および異所性ＡＣＴＨ産生腫瘍はあまり一般的ではなく、それぞれ症例の約１０〜１５％を占める。下垂体由来ＣＳ患者に対する第一選択治療は、経蝶形骨洞下垂体手術（ＴＳＳ）およびコルチゾール産生副腎腺腫に対する片側副腎摘出術である。片側副腎摘出術はコルチゾール産生副腎腺腫のほぼ全ての患者で治癒的であり、永久的な副腎機能不全はまれである。逆に、下垂体機能低下はＴＳＳ後に一般的であり、１３〜８１％の範囲である（ＲａｇｎａｒｓｓｏｎおよびＪｏｈａｎｎｓｓｏｎ（２０１３）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ  １６９：１３９参照）。しかしながら、一部の患者では、外科的切除が成功せず、したがって薬理学的治療が必要とされる。１つのアプローチは、例えば、ミフェプリストン（ＲＵ４８６としても知られる）、ＧＣＣＲアンタゴニストを使用して、グルココルチコイド受容体（ＧＣＣＲ）を標的化することによって高コルチゾール血症の活性を阻害することである（ＪｏｈａｎｓｓｅｎおよびＡｌｌｏｌｉｏ（２００７）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ  １５７：５６１参照）。しかしながら、ＲＵ  ４８６は他にもいくつかの活性がある（最も注目に値するのは、妊娠中の患者における中絶の誘発である）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によって発現を減少させることによってＧＣＣＲを標的化することができる。
【０２４５】
トランスサイレチンアミロイドーシス（ＴＴＲＡ）は、誤って折り畳まれ凝集したタンパク質（アミロイド）に関連すると疑われるいくつかの変性疾患のうちの１つである。トランスサイレチン（ＴＴＲ）は、ホロレチナール結合タンパク質を輸送するのに役立つ、肝臓で産生され、血流に分泌される四量体である。しかしながら、立体配座が変化すると、これはアミロイド形成的になる。部分的アンフォールディングは、最終的にクロスβシートアミロイド構造の前に、大部分が非構造化球形凝集体に効率的に誤って組み立てられる拡張立体配座の疎水性残基のストレッチを露出させる（Ｊｏｈｎｓｏｎら、（２０１２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４２１（２−３）：１８３参照）。ＴＴＲＡは、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）および家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）を含む散発性と常染色体優性遺伝型の両方の患者に発生し得る。これらの遺伝型は通常、より早期に発症し、ＴＴＲ遺伝子で記載されている１００を超える点突然変異に関連している。一般的に、突然変異がより不安定なタンパク質であるほど、それはいくらかの量のアミロイド病理を持っている可能性が高い。形成されたアミロイドは、ＦＡＣでは心臓組織またはＦＡＰでは末梢神経および中枢神経組織の選択的破壊を引き起こす。抑制性ＲＮＡ戦略などの、これらの疾患を治療するためのいくつかの新しい治療戦略は、ＴＴＲの量を減少させてタンパク質の凝集能を低下させようとすることに重点を置いている（Ｊｏｈｎｓｏｎら、同上）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によって、一般にＴＴＲタンパク質の病理学的形態の量を減少させるおよび／またはＴＴＲ濃度を低下させる目的でＴＴＲを標的化することができる。
【０２４６】
筋疾患も本発明の方法を使用してアプローチすることができる。脊髄性筋萎縮症は、「運動神経細胞生存」（ＳＭＮ）タンパク質をコードするＳＭＮ１遺伝子の突然変異によって引き起こされる常染色体劣性疾患であり、一般的な筋消耗および運動障害を特徴とする。ＳＭＮタンパク質は、スプライソソーム機構の構成要素の組み立てに関与しており、ＳＭＮ１遺伝子のいくつかの欠損は、成熟ｍＲＮＡのエキソン７を特異的に排除させるスプライシング欠陥と関連している。これらの欠損は、脊髄運動ニューロンにおいて特に一般的であり、脊髄性筋萎縮症を引き起こし得る。ＳＭＮ１欠損の重症度は、ＳＭＮ２として知られるＳＭＮ１のパラログによって修正することができる。ＳＭＮ２遺伝子配列は、エキソン７および８におけるわずかな一塩基多型ならびにイントロン配列におけるいくつかの他のものにおいてのみＳＭＮ１と異なる。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によって、一般にＳＭＮ１タンパク質の病理学的形態の量を減少させるおよび／またはＳＭＮ１濃度を低下させる目的でＳＭＮ１を標的化することができる。
【０２４７】
成長ホルモン（ＧＨ）分泌の調節不全は、約４０歳で初めて明らかになる、先端巨大症、不均衡性骨格、組織および器官成長障害として知られている状態につながり得る（ＲｏｂｅｒｔｓおよびＫａｔｚｎｅｌｓｏｎ（２００６）ＵＳ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ：７１）。これは、年間およそ５症例／百万人の発生率で起こり、診断は、ＧＨ分泌の調節不全およびＩＧＦ１レベル上昇の決定を必要とする。経口グルコース負荷後２時間の間にＧＨ分泌を抑制できないことが、先端巨大症の診断に一般的に使用されている。ＧＨ分泌の正常な調節は下垂体によって行われる。視床下部ＧＨ放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、グレリンおよびソマトスタチンは、下垂体前葉成長ホルモン分泌細胞によるＧＨ産生を調節する。ＧＨ受容体またはＧＨＲをコードする遺伝子は広く発現されており、ＧＨ分子がＧＨＲ二量体と相互作用すると、シグナルがＪＡＫ２依存性および非依存性の細胞内シグナル伝達経路を介して進む（Ｍｅｌｍｅｄ（２００９）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１９（１１）：３１８９参照）。循環ＧＨはインスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）の肝分泌を刺激する。先端巨大症は、良性下垂体腫瘍がＧＨ分泌の増加、ひいてはＩＧＦ−１分泌の増加を引き起こすと起こる。先端巨大症に結びついている１つのＧＨＲ突然変異は、タンパク質の２２個のアミノ酸の欠失を引き起こすエキソン３のインフレーム欠失を有する。ｄ３−ＧＨＲとして知られるこの突然変異受容体は、ＧＨ応答性の増強をもたらす。現在の治療法は、しばしば下垂体腫瘍の外科的切除を通した、ＧＨおよびＩＧＦ−１レベルの正常化に焦点を当てている。ＩＧＦ−１の分泌はＧＨによって誘導されるので、ＧＨＲの標的化は本発明の方法および組成物にとって魅力的な標的である。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によって発現を減少させることによってＧＨＲを標的化することができる。
【０２４８】
筋消耗に関連する別の疾患は筋緊張性ジストロフィーであり、これは筋消耗、白内障、心臓伝導障害、内分泌変化、多臓器損傷および筋強直症（自発収縮後の長期筋収縮）を特徴とする慢性疾患である。筋緊張性ジストロフィーは、１００，０００人当たり約１３人の発生率で起こり、疾患には、１型筋緊張性ジストロフィー（Ｓｔｅｉｎｅｒｔ病、ＭＭＤ１またはＤＭ１とも呼ばれ、最も一般的である）および２型筋緊張性ジストロフィー（ＭＭＤ２またはＤＭ２）の２種類の型が存在する。共に、２つの遺伝子（１型についてはＤＭＰＫ遺伝子（筋強直性ジストロフィープロテインキナーゼをコードする）のＣＴＧ、および２型についてはＺＮＦ９遺伝子（細胞核酸結合タンパク質をコードする）のＣＣＴＧ）の３’非コード領域の異常な伸長によって引き起こされる遺伝性常染色体優性疾患であり、ＤＭ１が成人の筋ジストロフィーの最も一般的な形態である。これらの突然変異は、ＲＮＡ封入体または病巣における突然変異転写産物の有毒な核内蓄積をもたらす（Ｃａｉｌｌｅｔ−Ｂｏｕｄｉｎら、（２０１４）Ｆｒｏｎｔ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ｄｏｉ：１０．３３８９参照）。１型患者は、５０超のＣＴＧコピー数を有し、無症候性から重症に及ぶ様々な表現型を有する。ＤＭ１筋芽細胞の増殖速度に影響を及ぼさないが、それらの分化を回復させるインビトロでの変異ＤＭＰＫ転写産物の特異的破壊を引き起こすためにアンチセンスＲＮＡ技術が使用されてきた（Ｆｕｒｌｉｎｇら、（２００３）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １０：７９５）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によって、筋強直性ジストロフィープロテインキナーゼまたは細胞核酸結合タンパク質を標的化することができる。
【０２４９】
慢性疼痛は、重大な関連罹患率および個人の生活の質への影響を有する、その生涯のある時点で８０００万人のアメリカ人が罹患している主な健康問題である。慢性疼痛は、がん、感染性疾患、自己免疫関連症候群および外科手術を含む種々の炎症性および神経損傷事象から生じ得る。電位開口型ナトリウムチャネル（ＶＧＳＣ）はニューロンの興奮性を調節するのに基本的であり、これらのチャネルの過剰発現は慢性疼痛を支える異常な自然発火パターンを生じ得る。神経系には少なくとも９つの異なるＶＧＳＣサブタイプがあり、各サブタイプをテトロドトキシン感受性またはテトロドトキシン耐性のいずれかとして機能的に分類することができる。Ｎａｖ１．３、Ｎａｖ１．７、Ｎａｖ１．８およびＮａｖ１．９を含む神経ナトリウムチャネルサブタイプは、侵害受容情報の処理に関与している。ＶＧＳＣ  Ｎａｖ１．８は一次求心性ニューロンに制限された分布を有するテトロドトキシン耐性ナトリウムチャネルであり、Ｎａｖ１．８含有求心路の大部分は侵害受容シグナルを脊髄の疼痛処理領域に伝達する。炎症または神経損傷後のＮａｖ１．８（ＰＮ３によってコードされる）の発現、輸送および再分布の変化が、求心性神経の感作および疼痛の発生に大きく寄与していると考えられている（ＳｃｈｕｅｌｅｒｔおよびＭｃＤｏｕｇａｌｌ（２０１２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ  １４：Ｒ５参照）。骨関節炎のげっ歯類モデルは、脊髄のシナプス結合を伴う、末梢神経上のＮａｖ１．８チャンネルの阻害が侵害受容感覚処理の有望な治療法であり、より顕著でより長持ちする鎮痛を達成するために有用となり得ることを実証した。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によって、ＮＡＶ１．８の局所的発現を減少させることによって慢性疼痛を治療することができる。
【０２５０】
がんもまた本明細書に記載されるように標的化され得る。がんは、細胞増殖調節の欠如によって結び付けられるいくつかの特定の疾患を説明するために使用される一般的な用語である。無数の異なる細胞型を含む非常に多くの形態があるので、がんに関与する多数の特定の遺伝子標的もある。例えば、ＣＬＵ遺伝子によってコードされるクラステリンタンパク質（アポリポタンパク質Ｊとしても知られる）は、一次ポリペプチドＣＬＵ遺伝子産物の２本鎖へのタンパク質分解的切断後に集合したヘテロ二量体タンパク質である。近年、分泌高度グリコシル化型（ｓＣＬＵ）と核型（ｎＣＬＵ）の２つの型のクラステリンが存在することが分かっており、ｎＣＬＵは、最初に細胞質で見られる前核型（ｐｎＣＬＵ）として合成される。２つのＣＬＵ型の違いは、ＣＬＵメッセージの選択的スプライシングとメッセージ翻訳中の開始ＡＴＧの選択に関係している。ｓＣＬＵの翻訳は全長ＣＬＵ  ｍＲＮＡ中の最初のＡＵＧを利用したが、ｐｎＣＬＵの翻訳は全長ｍＲＮＡからの転写されたリーダー部分およびエキソン１のスプライス依存的除去に続く第２のインフレームＡＵＧから開始される。ｓＣＬＵ型は細胞生存を促進するように思われるが、ｎＣＬＵ型はアポトーシスに関連している。ｓＣＬＵ型のタンパク質の過剰発現は、前立腺、皮膚、膵臓、乳房、肺および結腸の腫瘍、ならびに食道扁平上皮癌および神経芽細胞腫を含む多くの腫瘍型で見出されている。さらに、いくつかのがん型が高悪性度型および転移型に進行すると、ｓＣＬＵレベルが上昇する（Ｓｈａｎｎａｎら（２００６）Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆ  １３：１２）。標準治療と組み合わせてｓＣＬＵ発現サイレンシングを引き起こすように設計された特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の使用が、乳がんおよび前立腺がんの第Ｉ相試験で行われており、ＡＳＯと標準治療薬の両方を受けた患者においてのみアポトーシスの増加が観察されている（Ｓｈａｎｎａｎ同上）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、標的化分解によって、ｓＣＬＵ発現の増加を特徴とするがんを治療することができる。
【０２５１】
発癌性の役割があると思われる別のタンパク質は、真核細胞翻訳開始因子４Ｅ（ｅＩＦ−４Ｅ）である。ｅＩＦ３−４Ｅは真核ｍＲＮＡのＭ７ＧｐｐｐＮキャップ（Ｎは任意のヌクレオチド）に結合し、ｅＩＦ−４Ｆ複合体形成の律速メンバーである。ｅＩＦ−４Ｅは通常、ｅＩＦ−４Ｆ複合体のｅＩＦ−４Ｇと複合体を形成し、正常な生理学的条件下では、ｅＩＦ−４Ｅの利用可能性が、ｅＩＦ−４ＧからｅＩＦ−４Ｅを隔離するよう作用する４Ｅ−ＢＰとして知られる阻害タンパク質のファミリーの結合によって負に調節される。ｅＩＦ−４Ｅは通常低レベルで発現されるため、ｍＲＮＡは翻訳されるために利用可能なｅＩＦ−４Ｅについて競合する。短い、構造化されていない５’ＵＴＲを有するｍＲＮＡが、ｅＩＦ−４Ｆ複合体に見られる巻き戻し活性への依存性が低いため、翻訳に関してより競合的であると考えられる。そのため、高度に構造的なｍＲＮＡは、翻訳のためにｅＩＦ−４Ｅ結合により依存しているので、ｅＩＦ３−４Ｅが過剰発現されると、これらのｍＲＮＡがより容易に翻訳される。サイクリンＤ１、ＶＥＧＦ、ｃ−ｍｙｃ、ＦＧＦ２、ヘパラナーゼ、ＯＤＣおよびＭＭＰ９などの増殖促進遺伝子産物は、これらの複雑な５’ＵＴＲを有する（Ｍａｍａｎｅら、（２００４）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２３：３１７２、Ｆｉｓｃｈｅｒ（２００９）Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ  ８（１６）：２５３５）。さらに、ｅＩＦ−４Ｅは、核膜孔複合体の修飾において役割を果たし、これらの同じｍＲＮＡの細胞質への移行を増加させ得る（Ｃｕｌｊｉｋｏｖｉｃ−Ｋｒａｌｊａｃｉｃら（２０１２）Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２  ２０７頁）。ｅＩＦ−４Ｅは発癌性細胞の形質転換に関与しており、急性骨髄性白血病、結腸がん、乳がん、膀胱がん、肺がん、前立腺がん、消化管がん、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫および神経芽細胞腫を含むいくつかのがん型で過剰発現しており、レベル上昇は疾患悪性度増加に関連する。ｅＩＦ−４Ｅの標的化は、４Ｅ−ＢＰおよびそれに由来するペプチドの過剰発現、ｅＩＦ−４Ｅ：ｅＩＦＧ相互作用を防止するための小分子阻害剤の開発、およびｅＩＦ−４Ｅに特異的なアンチセンスオリゴ（ＡＳＯ）を含むいくつかの異なるアプローチによって試みられている（Ｊｉａら、（２０１２）Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ００、第００号：１〜２９）。ＡＳＯ投与は、インビトロでの腫瘍細胞における、およびインビボでのマウスモデルの異種移植片腫瘍におけるｅＩＦ−４Ｅ発現のノックダウンを実証した。ｅＩＦ−４Ｅの発現レベルが、化学療法剤に対する化学感受性を高め、がん細胞アポトーシスを増加させ、腫瘍増殖を抑制しながら、全体的なタンパク質翻訳の減少および明白な毒性なしにこれらのマウスモデルで８０％低下した（Ｊｉａ同上）。したがって、本発明の方法および組成物を種々のがんの治療または予防に使用することができる。ｅＩＦ−４Ｆの発現を、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、分解によって調節することができる。
【０２５２】
その受容体ＶＥＧＦＲを介して作用する血管内皮受容体（ＶＥＧＦ）は、正常な発達において、またがんにおける病理学的血管新生の発達においても役割を果たす。ヒトでは、５つの異なるＶＥＧＦファミリーメンバーが存在する：ＶＥＧＦ−Ａ（ＶＥＧＦとしても知られる）；胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｄ。ＶＥＧＦ−Ａはまた、３つの一般的なサブタイプ：ＶＥＧＦ−１２１、ＶＥＧＦ−１６５およびＶＥＧＦ−１８９を有する。種々のＶＥＧＦは血管新生で異なる役割を果たし、ＶＥＧＦ−Ａは主に正常な血管新生ならびにまた腫瘍増殖および転移に関与し、ＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｄは正常なリンパ管新生および悪性リンパ節転移に関与する。さらに、ＶＥＧＦ−Ａサブタイプはまたホルモン応答性腫瘍において特異的な増殖促進活性を有し得る。この知見に基づいて、ＶＥＧＦ−ＶＥＧＦＲ相互作用を直接または相互作用によって活性化されるシグナル伝達経路を抑制するいくつかの抗体および小分子キナーゼ阻害剤。しかしながら、これらの治療薬はしばしば顕著で潜在的に厄介な副作用プロファイルを有するので、特異性を高めた阻害剤を開発するための活発な研究が行われている（Ｓｈｉｂｕｙａ、（２０１４）Ｂｉｏｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  １１（１）：１〜９）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、分解によって、特定のＶＥＧＦタンパク質を標的化することによって、対象のがんを予防または治療することができる。
【０２５３】
いくつかのがんで役割を果たす別のタンパク質は、ＫＩＦ１１遺伝子によってコードされるキネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）である。現在使用されている最も成功している抗がん療法は微小管を標的としており、これらの薬剤は乳がん、肺がん、卵巣がん、膀胱がんおよび頭頸部がんの治療に使用されている。微小管は有糸分裂紡錘体の一部であり、したがってそれらを標的とすることは急速に分裂しているがん細胞を阻害することに成功しているが、微小管は細胞骨格の一部でもあるので、これらの薬剤による治療はまた重篤な副作用と関連する。キネシン、特にキネシンスピンドルタンパク質は、紡錘体繊維に結合し、細胞分裂における染色体分離中に紡錘体繊維を引き離すように働くモータータンパク質である。したがって、ＫＳＰ特異的抗有糸分裂剤を使用してＫＳＰを標的化することは、分裂細胞のみを標的化し、副作用がより少なくなり得る。ＫＳＰを枯渇させる薬剤は、有糸分裂において細胞周期停止を選択的に導き、長期間後にアポトーシスを導く。ＫＳＰは分裂組織にも豊富であり、乳房、結腸、肺、卵巣および子宮の腫瘍において高度に発現される（ＳａｒｌｉおよびＧｉａｎｎｉｓ、（２００８）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １４：７５８３）。さらに、肝臓併発を有するがん患者で、ＫＳＰおよびＶＥＧＦを同時に標的化するＲＮＡ干渉を使用した臨床試験が進行中である（Ｔａｂｅｒｎｅｒｏら、（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ３：４０６）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）の標的化分解によって、がんを治療または予防することができる。
【０２５４】
熱ショックタンパク質２７（ＨＳＰ２７、熱ショックタンパク質β−１またはＨＳＰＢ１としても知られる）は、がんに関与している別のタンパク質である。ＨＳＰＢ１遺伝子によってコードされるＨＳＰ２７は、損傷タンパク質の適切なリフォールディングを容易にする小型シャペロニンとして熱ショックに応答して最初に特徴付けられた熱ショックタンパク質である。しかしながら、進行中の研究によって、これが酸化ストレスおよび化学的ストレスなどの細胞ストレス条件への応答にも関与し、抗アポトーシス活性を有するように思われ、熱ショックおよび他のストレス条件の間にアクチン細胞骨格動態を調節することができることが明らかになった（Ｖｉｄｙａｓａｇａｒら（２０１２）Ｆｉｂｒｏｇｅｎ  Ｔｉｓ  Ｒｅｐ  ５（７））。さらに、研究によって、ＨＳＰ２７が血管新生乳がん細胞で上方制御され、インビボでのＨＳＰ２７の抑制が長期の腫瘍休眠をもたらすことが明らかにされているので、ＨＳＰ２７の抑制はがんの長期休眠において役割を果たす可能性がある（Ｓｔｒａｕｍｅら（２０１２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０９（２２）：８６９９〜８７０４）。腫瘍細胞における熱ショックタンパク質の発現増加は、ｐ５３機能の喪失およびｃ−ｍｙｃなどの癌原遺伝子の上方制御に関連している。ＨＳＰ２７の抗アポトーシス活性は腫瘍細胞を保護し、乳がんおよび白血病で化学療法耐性に関連することも示されている（Ｖｉｄｙｓａｇａｒ、同上）。したがって、ＨＳＰ２７はがん療法のための適切な標的であり得、タンパク質の阻害剤をそれらの活性を増強するための公知の化学療法と組み合わせて使用することができる。ＨＳＰ２７阻害剤ケルセチンは、薬剤単独と比較して、伝統的な化学療法剤と組み合わせると、インビボで腫瘍量を有意に減少させることが示されている。さらに、ＨＳＰ２７抑制性ＡＳＯは、肺がん、卵巣がん、乳がんおよび膵臓がんにおける臨床試験で現在評価されている（Ｖｉｄｙａｓａｇａｒ、同上）。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＨＳＰ２７の標的化分解を通してＨＳＰ２７発現を阻害することによってがんを治療することができる。
【０２５５】
いくつかのキナーゼは、それらがしばしば細胞増殖の重要な調節因子であるので、抗がん療法の研究の標的となってきた。しかしながら、シグナル伝達経路の下流では、変異キナーゼの効果が、ＳＴＡＴ３遺伝子によってコードされるシグナル伝達兼転写活性化因子３タンパク質、すなわちＳｔａｔ３の上方制御でしばしば見られる。さらに、Ｂ型肝炎とＣ型肝炎の両方がＳｔａｔ３を活性化し、共に肝がんの発症と関連しているようである。したがって、ＨｅｐＢおよびＨｅｐＣウイルスはＳｔａｔ３シグナル伝達経路を破壊し、肝細胞形質転換を促進すると考えられる（Ｌｉら、（２００６）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １２（２３）：７１４０）。
【０２５６】
ＲＡＳタンパク質は、細胞分化、増殖および生存において役割を果たすタンパク質のファミリーである。異常なＲＡＳシグナル伝達が全がんのおよそ３０％において役割を果たすことが分かっているので、ＲＡＳタンパク質ファミリーの種々のメンバーが、がんに関与しているとされている。ＫＲＡＳタンパク質（Ｖ−Ｋｉ−ｒａｓ２  Ｋｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルス癌遺伝子ホモログとしても知られる）は、正常組織シグナル伝達において必須の機能を果たすＧＴＰａｓｅである。ＫＲＡＳ遺伝子における頻繁な点突然変異はタンパク質を構成的に活性にするので、ＫＲＡＳは魅力的ながん標的である。したがって、ＫＲＡＳはがん療法のための適切な標的であり得、ＫＲＡＳタンパク質の機能を標的化する小分子が、それらの活性を増強するための公知の化学療法との組み合わせを含む治療上の利点のために使用され得る。一実施形態では、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、ＫＲＡＳの標的化分解を通してＫＲＡＳ発現を調節することによってがんを治療することができる。
【０２５７】
全ての種々のＳｔａｔタンパク質が、サイトカインおよび成長因子受容体からのシグナル伝達を主に媒介する転写因子である。例えば、ＩＬ６およびＩＬ１１は、それらのそれぞれの受容体サブユニットに結合し、Ｓｔａｔ３活性化を誘引する膜貫通受容体であるｇｐ１３０のホモ二量体化を誘引する。成長因子受容体のリン酸化を介した活性化の後、Ｓｔａｔ３タンパク質は二量体化して核内へ通過し、配列特異的にＤＮＡに結合し、細胞増殖に関与する多くの遺伝子を上方制御する。種々の型の腫瘍細胞がしばしばＳｔａｔ３の過剰発現をもたらすキナーゼ突然変異を有するので、Ｓｔａｔ３発現の減少は、それぞれの特定の変異キナーゼに関係なく、複数の起源のがんにおいて有益となる可能性がある（Ｊａｒｎｉｃｋｉら（２０１０）Ｃｅｌｌ  Ｄｉｖ  ５：１４）。Ｓｔａｔ３はいくつかの機序で悪性腫瘍に寄与している。これは、生存促進性／抗アポトーシス性Ｂｃｌ２タンパク質を上方制御することによってアポトーシスを阻害し、主にサイクリンＢ１、ｃｄｃ２、ｃ−ｍｙｃ、ＶＥＧＦ、Ｈ１Ｆ１αおよびサイクリンＤ１の発現を刺激することによって、ならびに細胞周期阻害剤ｐ２１の抑制を通して増殖を促進する。Ｓｔａｔ３はまた、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９を含む細胞外マトリックス分解メタロプロテイナーゼの誘導を通して腫瘍転移を促進する。正常な生理学的状態では、Ｓｔａｔ３機能は転写阻害剤Ｓｏｃｓ３によって阻害され、これは通常、細胞内の成長バランスを維持するためにＳｔａｔ３によって誘導される。しかしながら、悪性細胞では、Ｓｔａｔ３過剰発現がＳｏｃｓ３阻害を克服することができる。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、Ｓｔａｔ３の標的化分解によって、Ｓｔａｔ３機能を阻害し、がんを予防または治療することができる。
【０２５８】
前立腺がん（ＰＣａ）は、アンドロゲン依存性疾患であり、米国における主な死亡原因の１つであり、男性におけるがんによる主な死亡原因である。前立腺がん症例の最大４２％に遺伝的関連があることを示唆するいくつかの研究が行われているが（ＭａｚａｒｉｓおよびＴｓｉｏｔｒａｓ（２０１３）Ｎｅｐｈｒｏ  Ｕｒｏｌ  Ｍｏｎ  ５（３）：７９２〜８００）、いくつかの遺伝様式の型が観察されており（例えば、Ｘ連鎖、常染色体優性、常染色体劣性）、ＰＣａの遺伝につながる唯一の遺伝子も遺伝子突然変異も存在しないことを示唆している。このがんは、成長および進行に対するアンドロゲン受容体の活性に依存している（Ｍａｈｍｏｕｄら（２０１３）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８（１０）：ｅ７８４７９）。典型的には、ＰＣａは、かなり保存的なアプローチを使用して治療することができる進行が遅い疾患であり得るが、症例の約２５〜３０％で、がんが患者の死をもたらす侵攻性のものであり得る。転移性疾患の場合、患者の７０〜８０％が最初にアンドロゲン除去療法に反応するが、後期では、腫瘍がホルモン抵抗性になり、より侵攻性になり、予後が悪化する（ＭａｚａｒｉｓおよびＴｓｉｏｔｒａｓ同上）。ホルモン抵抗性ＰＣａは循環アンドロゲンに依存せず、むしろＡＲ増幅、成長因子の調節解除およびＡＲ補助因子の同時増幅のような機序を通したアンドロゲン受容体（ＡＲ、ＡＲ遺伝子によってコードされる）の不適切な活性化によって駆動される。さらに、ＡＲリガンド結合ドメインの突然変異は、ＡＲを非常に低い循環アンドロゲンレベルに対して過敏性にする、またはエストロゲン、プロゲスチン、アドレニルステロイドおよび抗アンドロゲンなどのリガンドの拡張セットに対して感受性にすることができる。ＡＲリガンド結合ドメインでこれらの種類の突然変異を受けた腫瘍細胞は、ＡＲの活性に対するがんの依存にもかかわらず、もはや抗アンドロゲン療法に対して感受性ではなくなり得る。通常、ＡＲは細胞質に存在し、その活性化を防ぐために熱ショックタンパク質が結合している。アンドロゲンに曝されると、受容体が二量体化して細胞核内に移動し、いくつかの成長関連遺伝子の発現を促進することができる。したがって、本発明の方法および組成物を使用して、本明細書に記載されるｄＴＡＧ挿入戦略を使用して、アンドロゲン受容体の分解を標的化することによって全ての段階でＰＣａを治療することができる。
【０２５９】
Ｃ．ｄＴＡＧのゲノムインフレーム挿入
上記のように、本発明の方法は、目的の内因性タンパク質を発現する遺伝子とインフレームでｄＴＡＧをゲノム挿入することに基づく。本明細書で企図されるように、ｄＴＡＧをコードする核酸配列の５’または３’インフレーム挿入は、得られた核酸配列の発現時に、特異的ヘテロ二官能性化合物の投与による分解の標的となり得る内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質を生じる。
【０２６０】
ｄＴＡＧをコードする核酸配列のインフレーム挿入は、任意の公知の有効なゲノム編集プロセスによって実施または達成することができる。一態様では、本発明はＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムを利用して、内因性遺伝子座から産生され、リガンド依存性、可逆性、および用量反応性の様式で容易に分解されるノックイン内因性タンパク質−ｄＴＡＧ融合タンパク質を産生する。一定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ内核形成（ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ）後の相同組換え中に目的のタンパク質のゲノム遺伝子座に挿入される「ドナー」配列として働くｄＴＡＧ核酸配列と共に、相同組換え（ＨＲ）ドナー配列中に存在するｄＴＡＧのための発現カセットを挿入するために、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムが使用される。ＨＲ標的化ベクターは、目的の標的化遺伝子座を囲むゲノムＤＮＡに相同な発現カセットの５’末端および３’末端に相同アームを含む。目的の標的遺伝子とインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸配列を融合することによって、得られる融合タンパク質は、ヘテロ二官能性化合物によって標的化されるｄＴＡＧを含む。
【０２６１】
本発明は、目的の標的遺伝子とインフレームでの外因性ｄＴＡＧ配列（「ドナー配列」または「ドナー」または「導入遺伝子」とも呼ばれる）の挿入を提供し、得られた融合タンパク質は、ヘテロ二官能性化合物によって標的化されるｄＴＡＧを含む。ドナー配列はそれが配置されているゲノム配列と同一である必要はないことが容易に明らかであろう。ドナー配列は、目的の位置での効率的なＨＲを可能にするために２つの相同性領域が隣接した非相同配列を含むことができる。さらに、ドナー配列は、細胞クロマチン中の目的の領域に相同ではない配列を含むベクター分子を含むことができる。ドナー分子は、細胞クロマチンと相同性のあるいくつかの不連続領域を含むことができる。例えば、通常は目的の領域に存在しない配列、例えば本発明のｄＴＡＧの標的化挿入のために、前記配列がドナー核酸分子中に存在し、目的の領域の配列と相同性の領域が隣接することができる。あるいは、ドナー分子が、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）機序を介して切断された標的遺伝子座に組み込まれてもよい。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１１／０２０７２２１号明細書および米国特許出願公開第２０１３／０３２６６４５号明細書を参照されたい。
【０２６２】
挿入するためのドナーｄＴＡＧコード配列は、一本鎖および／または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡであり得、線状または環状形態で細胞に導入され得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１０／００４７８０５号明細書、米国特許出願公開第２０１１／０２８１３６１号明細書および同第２０１１／０２０７２２１号明細書を参照されたい。ドナー配列は、環状または線状形態で細胞に導入され得る。線状形態で導入される場合、ドナー配列の末端を、当業者に公知の方法によって（例えば、エキソヌクレアーゼ分解から）保護することができる。例えば、１個または複数のジデオキシヌクレオチド残基を線状分子の３’末端に付加する、および／または自己相補的オリゴヌクレオチドを一方もしくは両方の末端に連結する。例えば、Ｃｈａｎｇら  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４、（１９８７）：４９５９〜４９６３およびＮｅｈｌｓら  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７２、（１９９６）：８８６〜８８９を参照されたい。外因性ポリヌクレオチドを分解から保護するためのさらなる方法には、それだけに限らないが、１個または複数の末端アミノ基の付加および修飾ヌクレオチド間結合、例えばホスホロチオエート、ホスホロアミデートおよびＯ−メチルリボースまたはデオキシリボース残基の使用が含まれる。
【０２６３】
ｄＴＡＧをコードするドナーポリヌクレオチドは、例えばＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ配列、複製起点、プロモーターおよび抗生物質耐性をコードする遺伝子などの追加の配列を有するベクター分子の一部として細胞に導入することができる。さらに、ドナーポリヌクレオチドは、裸の核酸として、リポソームもしくはポロキサマーなどの薬剤と複合体化した核酸として導入することができる、またはウイルス（例えば、アデノウイルス、ＡＡＶ、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、レンチウイルスおよびインテグラーゼ欠損レンチウイルス（ＩＤＬＶ））によって送達することができる。
【０２６４】
本発明は、よく特徴付けられている挿入戦略、例えばＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ９システムを利用する。一般に、「ＣＲＩＳＰＲシステム」は、Ｃａｓ遺伝子をコードする配列、ｔｒａｃｒ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ）配列（例えば、ｔｒａｃｒＲＮＡまたは活性部分ｔｒａｃｒＲＮＡ）、ｔｒａｃｒメイト配列（内因性ＣＲＩＳＰＲシステムの文脈で「直接反復」およびｔｒａｃｒＲＮＡプロセシング部分直接反復を包含する）、ガイド配列（内因性ＣＲＩＳＰＲシステムの文脈で「スペーサー」とも呼ばれる）ならびに／あるいはＣＲＩＳＰＲ遺伝子座からの他の配列および転写産物を含む、ＣＲＩＳＰＲ関連（「Ｃａｓ」）遺伝子の発現またはその活性の指示に関与する転写産物および他のエレメントを総称する。（例えば、いずれも参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｕａｎ，Ｊ．ら「“Ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  ｋｎｏｃｋｉｎ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｈ１１  ｌｏｃｕｓ  ｉｎ  ｐｉｇｓ．」  Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．５、（２０１５）：１４２５３；およびＰａｒｋ  Ａ、Ｗｏｎ  ＳＴ、Ｐｅｎｔｅｃｏｓｔ  Ｍ、Ｂａｒｔｋｏｗｓｋｉ  ＷおよびＬｅｅ  Ｂ「ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９  Ａｌｌｏｗｓ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｋｎｏｃｋ−Ｉｎ  ｏｆ  ａ  Ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｄｏｍａｉｎ−Ｔａｇｇｅｄ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ，Ａｌｌｏｗｉｎｇ  Ｒａｐｉｄ  Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ．」  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ９（４）、（２０１４）：ｅ９５１０１参照）。
【０２６５】
Ｃａｓヌクレアーゼは周知の分子である。例えば、Ｃａｓ−９ヌクレアーゼ遺伝子によってコードされるタンパク質配列は、受託番号Ｑ９９ＺＷ２−（配列番号５２）でＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースに見いだすことができる：
ＭＤＫＫＹＳＩＧＬＤＩＧＴＮＳＶＧＷＡＶＩＴＤＥＹＫＶＰＳＫＫＦＫＶＬＧＮＴＤＲＨＳＩＫＫＮＬＩＧＡＬＬＦＤＳＧＥＴＡＥＡＴＲＬＫＲＴＡＲＲＲＹＴＲＲＫＮＲＩＣＹＬＱＥＩＦＳＮＥＭＡＫＶＤＤＳＦＦＨＲＬＥＥＳＦＬＶＥＥＤＫＫＨＥＲＨＰＩＦＧＮＩＶＤＥＶＡＹＨＥＫＹＰＴＩＹＨＬＲＫＫＬＶＤＳＴＤＫＡＤＬＲＬＩＹＬＡＬＡＨＭＩＫＦＲＧＨＦＬＩＥＧＤＬＮＰＤＮＳＤＶＤＫＬＦＩＱＬＶＱＴＹＮＱＬＦＥＥＮＰＩＮＡＳＧＶＤＡＫＡＩＬＳＡＲＬＳＫＳＲＲＬＥＮＬＩＡＱＬＰＧＥＫＫＮＧＬＦＧＮＬＩＡＬＳＬＧＬＴＰＮＦＫＳＮＦＤＬＡＥＤＡＫＬＱＬＳＫＤＴＹＤＤＤＬＤＮＬＬＡＱＩＧＤＱＹＡＤＬＦＬＡＡＫＮＬＳＤＡＩＬＬＳＤＩＬＲＶＮＴＥＩＴＫＡＰＬＳＡＳＭＩＫＲＹＤＥＨＨＱＤＬＴＬＬＫＡＬＶＲＱＱＬＰＥＫＹＫＥＩＦＦＤＱＳＫＮＧＹＡＧＹＩＤＧＧＡＳＱＥＥＦＹＫＦＩＫＰＩＬＥＫＭＤＧＴＥＥＬＬＶＫＬＮＲＥＤＬＬＲＫＱＲＴＦＤＮＧＳＩＰＨＱＩＨＬＧＥＬＨＡＩＬＲＲＱＥＤＦＹＰＦＬＫＤＮＲＥＫＩＥＫＩＬＴＦＲＩＰＹＹＶＧＰＬＡＲＧＮＳＲＦＡＷＭＴＲＫＳＥＥＴＩＴＰＷＮＦＥＥＶＶＤＫＧＡＳＡＱＳＦＩＥＲＭＴＮＦＤＫＮＬＰＮＥＫＶＬＰＫＨＳＬＬＹＥＹＦＴＶＹＮＥＬＴＫＶＫＹＶＴＥＧＭＲＫＰＡＦＬＳＧＥＱＫＫＡＩＶＤＬＬＦＫＴＮＲＫＶＴＶＫＱＬＫＥＤＹＦＫＫＩＥＣＦＤＳＶＥＩＳＧＶＥＤＲＦＮＡＳＬＧＴＹＨＤＬＬＫＩＩＫＤＫＤＦＬＤＮＥＥＮＥＤＩＬＥＤＩＶＬＴＬＴＬＦＥＤＲＥＭＩＥＥＲＬＫＴＹＡＨＬＦＤＤＫＶＭＫＱＬＫＲＲＲＹＴＧＷＧＲＬＳＲＫＬＩＮＧＩＲＤＫＱＳＧＫＴＩＬＤＦＬＫＳＤＧＦＡＮＲＮＦＭＱＬＩＨＤＤＳＬＴＦＫＥＤＩＱＫＡＱＶＳＧＱＧＤＳＬＨＥＨＩＡＮＬＡＧＳＰＡＩＫＫＧＩＬＱＴＶＫＶＶＤＥＬＶＫＶＭＧＲＨＫＰＥＮＩＶＩＥＭＡＲＥＮＱＴＴＱＫＧＱＫＮＳＲＥＲＭＫＲＩＥＥＧＩＫＥＬＧＳＱＩＬＫＥＨＰＶＥＮＴＱＬＱＮＥＫＬＹＬＹＹＬＱＮＧＲＤＭＹＶＤＱＥＬＤＩＮＲＬＳＤＹＤＶＤＨＩＶＰＱＳＦＬＫＤＤＳＩＤＮＫＶＬＴＲＳＤＫＮＲＧＫＳＤＮＶＰＳＥＥＶＶＫＫＭＫＮＹＷＲＱＬＬＮＡＫＬＩＴＱＲＫＦＤＮＬＴＫＡＥＲＧＧＬＳＥＬＤＫＡＧＦＩＫＲＱＬＶＥＴＲＱＩＴＫＨＶＡＱＩＬＤＳＲＭＮＴＫＹＤＥＮＤＫＬＩＲＥＶＫＶＩＴＬＫＳＫＬＶＳＤＦＲＫＤＦＱＦＹＫＶＲＥＩＮＮＹＨＨＡＨＤＡＹＬＮＡＶＶＧＴＡＬＩＫＫＹＰＫＬＥＳＥＦＶＹＧＤＹＫＶＹＤＶＲＫＭＩＡＫＳＥＱＥＩＧＫＡＴＡＫＹＦＦＹＳＮＩＭＮＦＦＫＴＥＩＴＬＡＮＧＥＩＲＫＲＰＬＩＥＴＮＧＥＴＧＥＩＶＷＤＫＧＲＤＦＡＴＶＲＫＶＬＳＭＰＱＶＮＩＶＫＫＴＥＶＱＴＧＧＦＳＫＥＳＩＬＰＫＲＮＳＤＫＬＩＡＲＫＫＤＷＤＰＫＫＹＧＧＦＤＳＰＴＶＡＹＳＶＬＶＶＡＫＶＥＫＧＫＳＫＫＬＫＳＶＫＥＬＬＧＩＴＩＭＥＲＳＳＦＥＫＮＰＩＤＦＬＥＡＫＧＹＫＥＶＫＫＤＬＩＩＫＬＰＫＹＳＬＦＥＬＥＮＧＲＫＲＭＬＡＳＡＧＥＬＱＫＧＮＥＬＡＬＰＳＫＹＶＮＦＬＹＬＡＳＨＹＥＫＬＫＧＳＰＥＤＮＥＱＫＱＬＦＶＥＱＨＫＨＹＬＤＥＩＩＥＱＩＳＥＦＳＫＲＶＩＬＡＤＡＮＬＤＫＶＬＳＡＹＮＫＨＲＤＫＰＩＲＥＱＡＥＮＩＩＨＬＦＴＬＴＮＬＧＡＰＡＡＦＫＹＦＤＴＴＩＤＲＫＲＹＴＳＴＫＥＶＬＤＡＴＬＩＨＱＳＩＴＧＬＹＥＴＲＩＤＬＳＱＬＧＧＤ。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／ＣａｓヌクレアーゼまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ系が、ＤＮＡに配列特異的に結合する非コードＲＮＡ分子（ガイド）ＲＮＡ、およびヌクレアーゼ機能性（例えば、２つのヌクレアーゼドメイン）を有するＣａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９）を含む。目的のタンパク質のゲノム遺伝子座へのインフレーム挿入のためのｄＴＡＧをコードするドナーヌクレオチドがさらに含まれる。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムの１つまたは複数の要素が、Ｉ型、ＩＩ型またはＩＩＩ型のＣＲＩＳＰＲシステムに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムの１つまたは複数の要素が、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）などの内因性ＣＲＩＳＰＲシステムを含む特定の生物に由来する。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、ＣａｓヌクレアーゼおよびｇＲＮＡ（標的配列に特異的なｃｒＲＮＡと固定ｔｒａｃｒＲＮＡの融合体を含む）、およびｄＴＡＧをコードするドナー配列を細胞に導入する。一般に、ｇＲＮＡの５’末端の標的部位は、相補的塩基対形成を使用してＣａｓヌクレアーゼを標的部位、例えば遺伝子に標的化する。いくつかの実施形態では、標的部位が、典型的にはＮＧＧまたはＮＡＧなどのプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列のすぐ５’側の位置に基づいて選択される。これに関して、ガイドＲＮＡの最初の２０ヌクレオチドを標的ＤＮＡ配列に対応するように改変することによって、ｇＲＮＡを所望の配列に標的化する。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムが、標的部位でＤＳＢを誘導し、引き続いて、本明細書で論じられるように、ｄＴＡＧをコードするドナー配列を目的のタンパク質のゲノム遺伝子座に相同組換えする。他の実施形態では、「ニッカーゼ」と見なされるＣａｓ９変異体を使用して、標的部位で一本鎖に切れ目を入れる。いくつかの態様では、ニックの導入時に、同時に、５’オーバーハングが導入されるように、異なるｇＲＮＡ標的化配列ペアによってそれぞれ指示される、ペアニッカーゼを使用して、例えば、特異性を改善する。
【０２７０】
一般に、ＣＲＩＳＰＲシステムは、標的配列の部位でのＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進する要素を特徴とする。典型的には、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成の文脈において、「標的配列」とは、一般に、この配列に対する相補性を有するようにガイド配列が設計される配列を指し、ここでは標的配列とガイド配列との間のハイブリダイゼーションがＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進し、ｄＴＡＧをコードするドナー配列の挿入が行われるべきである。ハイブリダイゼーションを引き起こし、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進するのに十分な相補性があるならば、完全な相補性は必ずしも必要ではない。
【０２７１】
典型的には、内因性ＣＲＩＳＰＲシステムの文脈において、ＣＲＩＳＰＲ複合体（標的配列にハイブリダイズし、１つまたは複数のＣａｓタンパク質と複合体化したガイド配列を含む）の形成は、標的配列内のまたは標的配列近くの（例えば、そこから１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０またはそれ以上の塩基対以内の）一方または両方の鎖の切断をもたらす。理論によって拘束されることを望むものではないが、野生型ｔｒａｃｒ配列の全部または一部（例えば、約２０、２６、３２、４５、４８、５４、６３、６７、８５またはそれ以上を超える野生型ｔｒａｃｒ配列のヌクレオチド）を含み得るまたはからなり得る、ｔｒａｃｒ配列も、例えばｔｒａｃｒ配列の少なくとも一部に沿って、ガイド配列に作動可能に連結したｔｒａｃｒメイト配列の全部または一部とのハイブリダイゼーションによって、ＣＲＩＳＰＲ複合体の一部を形成し得る。いくつかの実施形態では、ｔｒａｃｒ配列が、ハイブリダイズし、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成に関与するのに十分なｔｒａｃｒメイト配列との相補性を有する。
【０２７２】
標的配列と同様に、いくつかの実施形態では、完全な相補性が必ずしも必要ではない。いくつかの実施形態では、ｔｒａｃｒ配列が、最適に整列すると、ｔｒａｃｒメイト配列の長さに沿って少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％の配列相補性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムの要素の発現が１つまたは複数の標的部位でのＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を指示するように、ＣＲＩＳＰＲシステムの１つまたは複数の要素の発現を駆動する１つまたは複数のベクターを細胞に導入する。例えば、Ｃａｓ酵素、ｔｒａｃｒメイト配列に連結したガイド配列、およびｔｒａｃｒ配列をそれぞれ、別々のベクター上の別々の調節エレメントに作動可能に連結することができるだろう。あるいは、同じまたは異なる調節エレメントから発現される２つ以上のエレメントを単一のベクターに組み合わせてもよく、１つまたは複数の追加のベクターが第１のベクターに含まれないＣＲＩＳＰＲシステムの任意の成分を提供する。いくつかの実施形態では、単一のベクターに組み合わされるＣＲＩＳＰＲシステム要素を、任意の適切な配向で、例えば１つの要素が第２の要素に対して５’（第２の要素の「上流」）または第２の要素に対して３’（第２の要素の「下流」）に位置するように配置することができる。１つの要素のコード配列が、第２の要素のコード配列の同じまたは反対の鎖上に位置してもよく、同じまたは反対の方向に配向してもよい。いくつかの実施形態では、単一のプロモーターが、ＣＲＩＳＰＲ酵素およびガイド配列、ｔｒａｃｒメイト配列（場合によりガイド配列と作動可能に連結している）および１つまたは複数のイントロン配列内に（例えば、それぞれ異なるイントロンに、２つ以上が少なくとも１つのイントロンに、または全部が単一のイントロンに）埋め込まれたｔｒａｃｒ配列の１つまたは複数をコードする転写産物の発現を駆動する。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ酵素、ガイド配列、ｔｒａｃｒメイト配列およびｔｒａｃｒ配列が、同じプロモーターに作動可能に連結しており、そこから発現される。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、ベクターが、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼをコードする酵素コード配列に作動可能に連結された調節エレメントを含む。いくつかの実施形態では、ベクターが、Ｃａｓタンパク質などのＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に連結された調節エレメントを含む。Ｃａｓタンパク質の非限定的な例としては、Ｃａｓｌ、Ｃａｓ  ＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（ＣｓｎｌおよびＣｓｘｌ２としても知られる）、ＣａｓｌＯ、Ｃｓｙｌ、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅｌ、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃｌ、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒｌ、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂｌ、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘｌ７、Ｃｓｘｌ４、ＣｓｘｌＯ、Ｃｓｘｌ６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘｌ、Ｃｓｘｌ５、Ｃｓｆｌ、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、Ｃｐｆ１、これらのホモログ、またはこれらの改変変異体が挙げられる（参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／２００３３４号パンフレット参照）。これらの酵素は公知であり、例えば、化膿性連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９タンパク質のアミノ酸配列は、受託番号Ｑ９９ＺＷ２（参照により本明細書に組み込まれる）でＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースに見いだすことができる。
【０２７４】
Ｃａｓタンパク質は一般に少なくとも１つのＲＮＡ認識または結合ドメインを含む。このようなドメインはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ、以下により詳細に記載される）と相互作用することができる。Ｃａｓタンパク質はまた、ヌクレアーゼドメイン、例えばエンドヌクレアーゼドメイン（例えばＤＮａｓｅまたはＲＮａｓｅドメイン）、ＤＮＡ結合ドメイン、ヘリカーゼドメイン、タンパク質−タンパク質相互作用ドメイン、二量体化ドメイン、および他のドメインを含むことができる。ヌクレアーゼドメインは、核酸切断に対して触媒活性を有する。切断は、核酸分子の共有結合の切断を含む。切断は平滑末端または付着末端を生じさせることができ、これは一本鎖または二本鎖であり得る。
【０２７５】
Ｃａｓタンパク質の例としては、Ｃａｓｌ、Ｃａｓ  ＩＢ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ５ｅ（ＣａｓＤ）、Ｃａｓ６、Ｃａｓ６ｅ、Ｃａｓ６ｆ、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８ａｌ、Ｃａｓ８ａ２、Ｃａｓ８ｂ、Ｃａｓ８ｃ、Ｃａｓ９（ＣｓｎｌまたはＣｓｘｌ２）、ＣａｓｌＯ、ＣａｓｌＯｄ、ＣａｓＦ、ＣａｓＧ、ＣａｓＨ、Ｃｓｙｌ、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅｌ（ＣａｓＡ）、Ｃｓｅ２（ＣａｓＢ）、Ｃｓｅ３（ＣａｓＥ）、Ｃｓｅ４（ＣａｓＣ）、Ｃｓｃｌ、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒｌ、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂｌ、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘｌ７、Ｃｓｘｌ４、ＣｓｘｌＯ、Ｃｓｘｌ６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘｌ、Ｃｓｘｌ５、Ｃｓｆｌ、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４およびＣｕｌ９６６、ならびにこれらのホモログまたは改変変異体が挙げられる（参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１５／２００３３４号パンフレット参照）。
【０２７６】
所望の認識部位へのニックまたは二本鎖切断を誘導する任意のＣａｓタンパク質を、本明細書に開示される方法および組成物に使用することができる。
【０２７７】
一般に、ガイド配列は、標的配列とハイブリダイズし、標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指示するのに十分な標的ポリヌクレオチド配列との相補性を有する任意のポリヌクレオチド配列である。いくつかの実施形態では、適切なアラインメントアルゴリズムを使用して最適に配列すると、ガイド配列とその対応する標的配列との間の相補性の程度が、約５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％、９９％またはそれ以上を超える。
【０２７８】
最適なアラインメントは、配列を整列させるための任意の適切なアルゴリズムを使用して決定することができ、その非限定的な例としては、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム、Ｂｕｒｒｏｗｓ−Ｗｈｅｅｌｅｒ変換に基づくアルゴリズム（例えば、Ｂｕｒｒｏｗｓ  Ｗｈｅｅｌｅｒ  Ａｌｉｇｎｅｒ）、ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｘ、ＢＬＡＴ、Ｎｏｖｏａｌｉｇｎ（Ｎｏｖｏｃｒａｆｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＥＬＡＮＤ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ、カリフォルニア州サンディエゴ））、ＳＯＡＰ（ｓｏａｐ．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｏｒｇ．ｃｎで入手可能）、およびＭａｑ（ｍａｑ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔで入手可能）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ガイド配列が約５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、７５またはそれ以上を超えるヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ガイド配列が、約７５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１２またはそれ未満のヌクレオチド長である。ガイド配列が標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指示する能力は、任意の適切なアッセイによって評価され得る。例えば、試験されるガイド配列を含むＣＲＩＳＰＲ複合体を形成するのに十分なＣＲＩＳＰＲシステムの構成要素を、例えばＣＲＩＳＰＲ配列の成分をコードするベクターでのトランスフェクション、引き続いて標的配列内の優先切断の評価、例えば本明細書に記載されるＳｕｒｖｅｙｏｒアッセイによって、対応する標的配列を有する細胞に提供することができる。同様に、標的ポリヌクレオチド配列の切断を、標的配列、試験されるガイド配列および試験ガイド配列とは異なる対照ガイド配列を含むＣＲＩＳＰＲ複合体の構成要素を提供し、試験ガイド配列反応と対照ガイド配列反応との間で標的配列での結合または切断の速度を比較することによって、試験管内で評価することができる。
【０２７９】
ガイド配列は、任意の標的配列を標的化するように選択され得る。いくつかの実施形態では、標的配列が、細胞のゲノム内の配列、特に、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドの操作を通して制御された分解を標的化する目的のタンパク質である。代表的な標的配列には、インフレーム配向でｄＴＡＧドナー核酸の挿入を提供する標的ゲノムに特有のものが含まれる。いくつかの実施形態では、ガイド配列が、ガイド配列内の二次構造の程度を低下させるように選択される。二次構造は、任意の適切なポリヌクレオチドフォールディングアルゴリズムによって決定され得る。
【０２８０】
一般に、ｔｒａｃｒメイト配列は、以下の１つまたは複数を促進するのに十分なｔｒａｃｒ配列との相補性を有する任意の配列を含む：（１）対応するｔｒａｃｒ配列を含む細胞中のｔｒａｃｒメイト配列が隣接するガイド配列の切除；および（２）標的配列でのＣＲＩＳＰＲ複合体の形成（ＣＲＩＳＰＲ複合体はｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズしたｔｒａｃｒメイト配列を含む）。一般に、相補性の程度は、２つの配列のうちの短い方の長さに沿った、ｔｒａｃｒメイト配列とｔｒａｃｒ配列の最適アラインメントに対するものである。
【０２８１】
本明細書で企図されるように、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムを使用して、真核生物、例えばヒト細胞に、目的のタンパク質をコードするゲノム配列とインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸配列を挿入する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＣＲＩＳＰＲ複合体が目的の標的化タンパク質のゲノム配列に結合して、ゲノム配列の切断をもたらすことを可能にするステップを含み、ＣＲＩＳＰＲ複合体は、前記標的ポリヌクレオチド内の標的配列とハイブリダイズしたガイド配列と複合体化したＣＲＩＳＰＲ酵素を含み、前記ガイド配列はｔｒａｃｒメイト配列と結合しており、今度はこれがｔｒａｃｒ配列にハイブリダイズする。
【０２８２】
いくつかの態様では、本方法は、ｄＴＡＧをコードする核酸を導入することによって真核細胞におけるポリヌクレオチドの発現を改変することを含む。
【０２８３】
いくつかの態様では、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムのポリペプチドおよびドナー配列が細胞に投与または導入される。核酸は、典型的にはウイルス発現ベクターなどの発現ベクターの形態で投与される。いくつかの態様では、発現ベクターがレトロウイルス発現ベクター、アデノウイルス発現ベクター、ＤＮＡプラスミド発現ベクターまたはＡＡＶ発現ベクターである。いくつかの態様では、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムおよびドナー配列をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドが細胞に送達される。いくつかの態様では、送達が２つ以上のベクターの送達による。
【０２８４】
本明細書に記載される核酸配列を細胞に送達する方法は、例えば、その全ての開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，５８６，５２６号明細書；同第６，４５３，２４２号明細書；同第６，５０３，７１７号明細書；同第６，５３４，２６１号明細書；同第６，５９９，６９２号明細書；同第６，６０７，８８２号明細書；同第６，６８９，５５８号明細書；同第６，８２４，９７８号明細書；同第６，９３３，１１３号明細書；同第６，９７９，５３９号明細書；同第７，０１３，２１９号明細書；および同第７，１６３，８２４号明細書に記載されている。
【０２８５】
本明細書に記載される種々のポリヌクレオチドはまた、本明細書に記載される組成物の１つまたは複数をコードする配列を含むベクターを使用して送達され得る。それだけに限らないが、プラスミドベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター；ヘルペスウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクター等を含む任意のベクター系が使用され得る。全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，５３４，２６１号明細書；同第６，６０７，８８２号明細書；同第６，８２４，９７８号明細書；同第６，９３３，１１３号明細書；同第６，９７９，５３９号明細書；同第７，０１３，２１９号明細書；および同第７１６３８２４号明細書も参照されたい。
【０２８６】
核酸の非ウイルス送達の方法には、リポフェクション、ヌクレオフェクション、マイクロインジェクション、微粒子銃、ビロソーム、リポソーム、イムノリポソーム、ポリカチオンまたは脂質：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、およびＤＮＡの薬剤増強取り込みが含まれる。リポフェクションは、例えば、米国特許第５，０４９，３８６号明細書、同第４，９４６，７８７号明細書；および同第４，８９７，３５５号明細書に記載されており、リポフェクション試薬は市販されている（例えば、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（商標）およびＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））。ポリヌクレオチドの効率的な受容体認識リポフェクションに適したカチオン性および中性脂質には、Ｆｅｉｇｎｅｒ、国際公開第１９９１／１７４２４号パンフレットおよび国際公開第１９９１／１６０２４号パンフレットのものが含まれる。送達は、細胞（例えば、インビトロもしくはエキソビボ投与）または標的組織（例えば、インビボ投与）に対するものであり得る。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、送達が、核酸を送達するためのＲＮＡまたはＤＮＡウイルスに基づく系の使用を介する。いくつかの態様におけるウイルスベクターは、患者に直接投与することができる（インビボ）、またはこれらをインビトロもしくはエキソビボで使用して細胞を処理し、次いで、患者に投与することができる。いくつかの実施形態におけるウイルスに基づく系は、遺伝子導入のためのレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴および単純ヘルペスウイルスベクターを含む。レトロウイルスの向性は、外来エンベロープタンパク質を組み込み、標的細胞の潜在的標的集団を拡大することによって変更され得る。レンチウイルスベクターは、非分裂細胞に形質導入または感染することができ、典型的には高いウイルス力価を生じることができるレトロウイルスベクターである。レトロウイルス遺伝子導入システムの選択は標的組織に依存する。レトロウイルスベクターは、最大６〜１０ｋｂの外来配列に対するパッケージング能力を有するシス作用性の長い末端反復配列で構成される。最小シス作用性ＬＴＲはベクターの複製およびパッケージングに十分であり、そのためこれを使用して治療用遺伝子を標的細胞に組み込んで、永久的な導入遺伝子発現を提供する。広く使用されているレトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、およびこれらの組み合わせに基づくものが含まれる（例えば、ＢｕｃｈｓｃｈｅｒらＪ．Ｖｉｒｏｌ．６６、（１９９２）：２７３１〜２７３９；Ｊｏｈａｎｎら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６（１９９２）：１６３５〜１６４０；Ｓｏｍｍｅｒｆｅｌｔら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１７６、（１９９０）：５８〜６９；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３、（１９８９）：２３７４〜２３７８；Ｍｉｌｌｅｒら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５、（１９９１）：２２２０〜２２２４、およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５７００参照）。
【０２８８】
一過性発現が好ましい用途では、アデノウイルスに基づく系を使用することができる。アデノウイルスに基づくベクターは、多くの細胞型において非常に高い形質導入効率が可能であり、細胞分裂を必要としない。このようなベクターを用いて、高力価および高レベルの発現が得られている。このベクターは比較的単純な系で大量に作製することができる。アデノ随伴ウイルス（「ＡＡＶ」）ベクターはまた、例えば核酸およびペプチドのインビトロ産生において、ならびにインビボおよびエキソビボでの遺伝子治療手順のために、標的核酸で細胞を形質導入するために使用される（例えば、Ｗｅｓｔら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １６０、（１９８７）：３８〜４７；米国特許第４，７９７，３６８号明細書；国際公開第１９９３／２４６４１号パンフレット；Ｋｏｔｉｎ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ５、（１９９４）：７９３〜８０１；Ｍｕｚｙｃｚｋａ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４、（１９９４）：１３５１参照）。組換えＡＡＶベクターの構築は、米国特許第５，１７３，４１４号明細書；Ｔｒａｔｓｃｈｉｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５、（１９８５）：３２５１〜３２６０；Ｔｒａｔｓｃｈｉｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．４、（１９８４）：２０７２〜２０８１；Ｈｅｒｍｏｎａｔ＆Ｍｕｚｙｃｚｋａ、ＰＮＡＳ８１、（１９８４）：６４６６〜６４７０；およびＳａｍｕｌｓｋｉら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３、（１９８９）：３８２２〜３８２８を含むいくつかの刊行物に記載されている。
【０２８９】
少なくとも６つのウイルスベクターアプローチが臨床試験における遺伝子導入に現在利用可能であり、これらは形質導入剤を生成するためにヘルパー細胞株に挿入された遺伝子による欠陥ベクターの相補性を含むアプローチを利用する。
【０２９０】
ｐＬＡＳＮおよびＭＦＧ−Ｓは、臨床試験で使用されているレトロウイルスベクターの例である（Ｄｕｎｂａｒら、Ｂｌｏｏｄ８５、（１９９５）：３０４８〜３０５；Ｋｏｈｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１、（１９９５）：１０１７〜１０２３；Ｍａｌｅｃｈら、ＰＮＡＳ  ９４（２２）、（１９９７）：１２１３３〜１２１３８）。ＰＡ３１７／ｐＬＡＳＮは、遺伝子治療試験で使用された最初の治療用ベクターであった。（Ｂｌａｅｓｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０、（１９９５）：４７５〜４８０）。ＭＦＧ−Ｓパッケージベクターについて、５０％以上の形質導入効率が観察されている。（Ｅｌｌｅｍら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４４（１）、（１９９７）：１０〜２０；およびＤｒａｎｏｆｆら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１（１９９７）：１１１〜１１２）。
【０２９１】
本明細書に記載されるポリヌクレオチドの導入に適したベクターには、非組み込み型レンチウイルスベクター（ＩＤＬＶ）も含まれる。例えば、ＮａｌｄｉｎｉらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３、（１９９６）：１１３８２〜１１３８８；Ｄｕｌｌら  Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２、（１９９８）：８４６３〜８４７１；Ｚｕｆｆｅｒｙら  Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２、（１９９８）：９８７３〜９８８０；ＦｏｌｌｅｎｚｉらＮａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ２５、（２０００）：２１７〜２２２；および米国特許出願公開第２００９／０１１７６１７号明細書を参照されたい。
【０２９２】
組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）を使用して本明細書に記載される組成物を送達することもできる。全てのベクターは、導入遺伝子発現カセットに隣接するＡＡＶ逆位末端反復配列のみを保持するプラスミドに由来する。効率的な遺伝子導入および安定した導入遺伝子送達がこのベクター系の重要な特徴である。（Ｗａｇｎｅｒら、Ｌａｎｃｅｔ３５１、（１９９８）：９１１７  １７０２〜３、およびＫｅａｒｎｓら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．９、（１９９６）：７４８〜５５）。ＡＡＶ１、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９およびＡＡＶｒｈ１０、偽型ＡＡＶ、例えばＡＡＶ２／８、ＡＡＶ２／５およびＡＡＶ２／６ならびにこれらの全ての変異体を含む他のＡＡＶ血清型もまた本発明によって使用することができる。
【０２９３】
複製欠損組換えアデノウイルスベクター（Ａｄ）は、高力価で産生され得、いくつかの異なる細胞型に容易に感染し得る。ほとんどのアデノウイルスベクターが、導入遺伝子がＡｄ  Ｅ１ａ、Ｅ１ｂおよび／またはＥ３遺伝子を置き換えるように操作され；その後、複製欠損ベクターが、欠失した遺伝子機能をトランスに供給するヒト２９３細胞中で増殖される。Ａｄベクターは、肝臓、腎臓および筋肉に見られるものなどの非分裂分化細胞を含む、インビボで複数の種類の組織を形質導入することができる。従来のＡｄベクターは大きな運搬能力を有する。臨床試験におけるＡｄベクターの使用の例は、筋肉内注射による抗腫瘍免疫化のためのポリヌクレオチド療法を含んでいた（Ｓｔｅｒｍａｎら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ７、（１９９８）：１０８３〜１０８９）。臨床試験における遺伝子導入のためのアデノウイルスベクターの使用のさらなる例としては、Ｒｏｓｅｎｅｃｋｅｒら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ２４（１）、（１９９６）：５〜１０；Ｓｔｅｒｍａｎら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．９（７）、（１９９８）：１０８３〜１０８９；Ｗｅｌｓｈら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２、（１９９５）：２０５〜２１８；Ａｌｖａｒｅｚら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．５、（１９９７）：５９７〜６１３；Ｔｏｐｆら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．５、（１９９８）：５０７〜５１３；Ｓｔｅｒｍａｎら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ７、（１９９８）：１０８３〜１０８９が挙げられる。
【０２９４】
パッケージング細胞を使用して、宿主細胞に感染することができるウイルス粒子を形成する。このような細胞には、アデノウイルスをパッケージングする２９３細胞、およびレトロウイルスをパッケージングするψ２細胞またはＰＡ３１７細胞が含まれる。遺伝子治療に使用されるウイルスベクターは通常、核酸ベクターをウイルス粒子にパッケージングするプロデューサー細胞株によって作製される。ベクターは、典型的には、パッケージングおよびその後の宿主への組込み（該当する場合）に必要とされる最小のウイルス配列を含み、他のウイルス配列は発現されるタンパク質をコードする発現カセットによって置き換えられる。欠けているウイルス機能は、パッケージング細胞株によってトランスに供給される。例えば、遺伝子治療に使用されるＡＡＶベクターは、典型的にはパッケージングおよび宿主ゲノムへの組込みに必要とされるＡＡＶゲノム由来の逆位末端反復（ＩＴＲ）配列のみを有する。ウイルスＤＮＡは、他のＡＡＶ遺伝子、すなわちｒｅｐおよびｃａｐをコードするが、ＩＴＲ配列を欠くヘルパープラスミドを含む細胞株にパッケージングされる。また、細胞株をヘルパーとしてのアデノウイルスに感染させる。ヘルパーウイルスは、ＡＡＶベクターの複製およびヘルパープラスミドからのＡＡＶ遺伝子の発現を促進する。ヘルパープラスミドは、ＩＴＲ配列の欠如のために有意な量でパッケージングされない。アデノウイルスによる汚染は、例えば、アデノウイルスがＡＡＶよりも感受性である熱処理によって減少させることができる。
【０２９５】
ベクターを、特定の組織型に対して高度の特異性で送達することができる。したがって、ウイルスの外面上にウイルスコートタンパク質との融合タンパク質としてリガンドを発現させることによって、ウイルスベクターを所与の細胞型に対する特異性を有するように改変することができる。リガンドは、目的の細胞型に存在することが知られている受容体に対して親和性を有するように選択される。例えば、Ｈａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９２、（１９９５）：９７４７〜９７５１は、モロニーマウス白血病ウイルスを、ｇｐ７０に融合したヒトヘレグリンを発現するように改変することができ、組換えウイルスが、ヒト上皮成長因子受容体を発現する一定のヒト乳がん細胞に感染することを報告した。この原理を、標的細胞が受容体を発現し、ウイルスが細胞表面受容体に対するリガンドを含む融合タンパク質を発現する他のウイルス−標的細胞対に拡大することができる。例えば、繊維状ファージを、事実上任意の選択された細胞受容体に対して特異的結合親和性を有する抗体フラグメント（例えば、ＦＡＢまたはＦｖ）を提示するように操作することができる。上記の説明は主としてウイルスベクターに適用されるが、同じ原理を非ウイルスベクターに適用することができる。このようなベクターを、特定の標的細胞による取り込みを促進する特異的取り込み配列を含むように操作することができる。
【０２９６】
ベクターを、以下に記載されるように、典型的には全身投与（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄腔内、気管内、皮下もしくは頭蓋内注入）または局所施用による個々の対象への投与によってインビボで送達することができる。あるいは、ベクターを、個々の患者から外植された細胞（例えば、リンパ球、骨髄穿刺液、組織生検）または万能ドナー造血幹細胞などの細胞にエキソビボで送達し、引き続いて通常はベクターを組み込んだ細胞についての選択後に、細胞を患者に再移植することができる。
【０２９７】
ヌクレアーゼおよび／またはドナー構築物を含有するベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、リポソーム等）を、インビボでの細胞の形質導入のために生物に直接投与することもできる。あるいは、裸のＤＮＡを投与することができる。投与は、それだけに限らないが、注射、注入、局所施用および電気穿孔を含む、血液または組織細胞と最終的に接触するように分子を導入するために通常使用される経路のいずれかによるものである。このような核酸を投与する適切な方法が利用可能であり、当業者に周知であり、２つ以上の経路を使用して特定の組成物を投与することができるが、通常は特定の経路が別の経路よりも迅速かつ有効な反応を提供し得る。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓシステムのポリペプチドが、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの細胞への導入の結果として、細胞内でインサイツで合成される。いくつかの態様では、ＣＲＩＳＰ−Ｃａｓシステムのポリペプチドが細胞外で産生され、次いで、そこに導入され得る。ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓポリヌクレオチド構築物を動物細胞に導入する方法は公知であり、これには、非限定的な例として、本明細書に記載される、ポリヌクレオチド構築物が細胞のゲノムに組み込まれる安定な形質転換方法、ポリヌクレオチド構築物が細胞のゲノムに組み込まれない一過性形質転換方法、およびウイルス媒介方法が含まれる。好ましくは、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓポリヌクレオチドが一過的に発現され、細胞のゲノムに組み込まれない。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓポリヌクレオチドを、例えば、組換えウイルスベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス）、リポソームなどによって細胞に導入することができる。例えば、いくつかの態様では、一過性形質転換方法には、マイクロインジェクション、電気穿孔または微粒子銃が含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓポリヌクレオチドを、細胞内で発現されることを考慮して、ベクター、より具体的にはプラスミドまたはウイルスに含めることができる。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、非ＣＲＩＳＰＲ−ＣＡＳウイルスおよび非ウイルス系遺伝子導入方法を使用して、哺乳動物細胞または標的組織中の目的のタンパク質のゲノム遺伝子座にインフレームでｄＴＡＧをコードする核酸を挿入することができる。このような方法を使用して、ＺＦＰ、ＺＦＮ、ＴＡＬＥおよび／またはＴＡＬＥＮシステムの成分をコードする核酸を、培養中の細胞または目的のタンパク質のゲノム遺伝子座へのインフレーム挿入のためのｄＴＡＧをコードするドナー配列を含む宿主生物に投与することができる。
【０３００】
非ウイルスベクター送達系には、ＤＮＡプラスミド、ＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるベクターの転写産物）、裸の核酸、およびリポソームなどの送達ビヒクルと複合体化した核酸が含まれる。ウイルスベクター送達システムには、細胞への送達後にエピソームゲノムまたは組み込まれたゲノムのいずれかを有するＤＮＡおよびＲＮＡウイルスが含まれる。遺伝子治療手順の概説については、Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６、（１９９２）：８０８〜８１３；Ｎａｂｅｌ＆Ｆｅｉｇｎｅｒ、ＴＩＢＴＥＣＨ  １１、（１９９３）：２１１〜２１７；Ｍｉｔａｎｉ＆Ｃａｓｋｅｙ、ＴＩＢＴＥＣＨ  １１、（１９９３）：１６２〜１６６；Ｄｉｌｌｏｎ．ＴＩＢＴＥＣＨ１１、（１９９３）：１６７〜１７３；Ｍｉｌｌｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ３５７、（１９９２）：４５５〜４６０；Ｖａｎ  Ｂｒｕｎｔ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６（１０）、（１９８８）：１１４９〜１１５４；Ｖｉｇｎｅ、Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ８、（１９９５）：３５〜３６；Ｋｒｅｍｅｒ＆Ｐｅｒｒｉｃａｕｄｅｔ、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ５１（１）、（１９９５）：３１〜４４；およびＹｕら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ１、（１９９４）：１３〜２６を参照されたい。
【０３０１】
免疫脂質（ｉｍｍｕｎｏｌｉｐｉｄ）複合体などの標的化リポソームを含む脂質：核酸複合体の調製は、当業者に周知である（例えば、Ｃｒｙｓｔａｌ、Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０、（１９９５）：４０４〜４１０；Ｂｌａｅｓｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２、（１９９５）：２９１〜２９７；Ｂｅｈｒら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．５、（１９９４）：３８２〜３８９；Ｒｅｍｙら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．５、（１９９４）：６４７〜６５４；Ｇａｏら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ２、（１９９５）：７１０〜７２２；Ａｈｍａｄら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２、（１９９２）：４８１７〜４８２０；ならびに米国特許第４，１８６，１８３号明細書、同第４，２１７，３４４号明細書、同第４，２３５，８７１号明細書、同第４，２６１，９７５号明細書、同第４，４８５，０５４号明細書、同第４，５０１，７２８号明細書、同第４，７７４，０８５号明細書、同第４，８３７，０２８号明細書および同第４，９４６，７８７号明細書参照）。
【０３０２】
さらなる送達方法には、送達されるべき核酸のＥｎＧｅｎｅＩＣ送達媒体（ＥＤＶ）へのパッケージングの使用が含まれる。これらのＥＤＶは二重特異性抗体を使用して標的組織に特異的に送達され、抗体の一方のアームが標的組織に対する特異性を有し、他方がＥＤＶに対する特異性を有する。抗体がＥＤＶを標的細胞表面に運び、次いで、エンドサイトーシスによってＥＤＶが細胞に取り込まれる。いったん細胞内に入ると、内容物が放出される（ＭａｃＤｉａｒｍｉｄらＮａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２７（７）、（２００９）：６４３参照）。
【０３０３】
Ｄ．ヘテロ二官能性化合物
本出願は、（ｉ）ユビキチンリガーゼに結合する部分と、（ｉｉ）ユビキチン化およびプロテアソーム分解を意図した内因性タンパク質に融合しているｄＴＡＧに結合する標的化部分とを有するヘテロ二官能性化合物の使用を含む。一実施形態では、ヘテロ二官能性化合物が、対応する内因性タンパク質に対する選択性を有するように突然変異しているｄＴＡＧに結合する（すなわち、ｄＴＡＧ標的化リガンドがｄＴＡＧに結合するが、天然には有意には結合しない（また、いくつかの実施形態では、宿主によって発現される突然変異体にも変異体タンパク質にも有意には結合しない））。
【０３０４】
ユビキチンプロテアソーム経路（ＵＰＰ）を利用してタンパク質を選択的に標的化および分解する戦略は、タンパク質機能の翻訳後制御に使用されてきた。ヘテロ二官能性化合物は、標的タンパク質結合リガンドおよびＥ３ユビキチンリガーゼリガンドで構成される。ヘテロ二官能性化合物は、Ｅ３ユビキチンリガーゼへの動員およびその後のユビキチン化を介して、選択されたタンパク質のプロテアソーム媒介分解を誘導することができる。これらの薬物様分子は、タンパク質レベルに対する可逆的で、用量反応性で、調整可能な、一時的制御の可能性を提供する。このような化合物の初期の説明は、Ｄｅｓｈａｌｅｓらによって２０００年９月に出願され、２００６年５月に付与された「キメラ医薬を標的化するタンパク質分解（Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）」と題された米国特許第７，０４１，２９８号明細書に提供された。「ＰＲＯＴＡＣＳ：タンパク質をユビキチン化および分解のためにＳｋｐ１−カリンＦボックス複合体に標的化するキメラ分子（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｈａｔ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｋｐ１−Ｃｕｌｌｉｎ  Ｆ  Ｂｏｘ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  ｆｏｒ  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）」と題された、Ｓａｋａｍｏｔｏらによる刊行物（ＰＮＡＳ  ９８（１５）（２００１）：８５５４〜８５５９）は、Ｆボックスタンパク質β−ＴＲＣＰに結合することができるペプチドに結合したＭＡＰ−ＡＰ−２の小分子結合剤からなるヘテロ二官能性化合物を記載しており、その開示が米国特許第７，０４１，２９８号明細書でも提供されている。「ユビキチン化および分解のためにがん促進タンパク質を標的化するためのＰＲＯＴＡＣＳの開発（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ＰＲＯＴＡＣＳ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｃａｎｃｅｒ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）」と題された、Ｓａｋａｍｏｔｏらによる刊行物（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ２（２００３）：１３５０〜１３５８）は、ＭＡＰ−ＡＰ−２を分解する代わりに、エストロゲンおよびアンドロゲン受容体を分解する類似のヘテロ二官能性化合物（ＰＲＯＴＡＣ２）を記載している。「タンパク質レベルの化学的遺伝的制御：選択的インビボ標的化分解（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌｅｖｅｌｓ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）」と題された、Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈらによる刊行物（ＪＡＣＳ  １２６（２００４）：３７４８〜３７５４）は、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ１２）を標的化する類似のヘテロ二官能性化合物（ＰＲＯＴＡＣ３）を記載しており、ＰＲＯＴＡＣ２とＰＲＯＴＡＣ３の両方が緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）イメージングでそれぞれの標的にヒットすることを示している。「細胞内タンパク質分解を制御するための化学的アプローチ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ��ｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）」と題された、Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈらによる刊行物（ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ  ６（２００５）４０〜４６）は、その技術を使用して、当時の当分野の状況を記載した。「小分子によって誘導される標的化細胞内タンパク質分解：ケミカルプロテオミクスへの道（Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ：Ｅｎ  Ｒｏｕｔｅ  ｔｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ）」と題された、Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈらによる刊行物（ＢＭＣＬ  １８（２２）（２００８）：５９０４〜５９０８）は、アンドロゲン受容体およびユビキチンＥ３リガーゼを同時に結合することによって、アンドロゲン受容体をインビボで分解するＰＥＧによって結合された２つの小分子からなるヘテロ二官能性化合物を記載している。「タンパク質分解を促進するのに有用な化合物および同化合物を使用する方法（Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓａｍｅ）」と題された、Ｃｒｅｗｓらの国際公開第２０１３／１７０１４７号パンフレットは、リンカーに共有結合したタンパク質分解部分を含む化合物を記載しており、化合物のＣｌｏｇＰは１．５以上である。Ｂｕｃｋｌｅｙらによる前記刊行物（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５３（２０１４）：２３１２〜２３３０）の概説は、「ユビキチンプロテアソーム系の調節を通した細胞内タンパク質レベルの小分子制御（Ｓｍａｌｌ−Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｉｎｔｒａｃｅｕｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌｅｖｅｌｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  Ｓｙｓｔｅｍ）」と題されている。「タンパク質分解のイミド系モジュレーターおよび関連する使用方法（Ｉｍｉｄｅ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｕｓｅ）」と題された、Ａｒｖｉｎａｓ  Ｉｎｃ．に譲渡された国際公開第２０１５／１６０８４５号パンフレットは、Ｅ３リガーゼタンパク質としてセレブロンを利用するためのサリドマイドによるデグロン技術の使用を記載している。「ＢＤＲ４を効率的に標的化するためのＥ３ユビキチンリガーゼセレブロンのハイジャック（Ｈｉｊａｃｋｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｅ３  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  Ｌｉｇａｓｅ  Ｃｅｒｅｂｌｏｎ  ｔｏ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ  Ｔａｒｇｅｔ  ＢＤＲ４）」と題された、Ｊ．Ｌｕらによる後の刊行物（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌ．２２（６）（２０１５）：７５５〜７６３）も同様に、ＢＤＲ４を分解するのに有用なサリドマイド系化合物を記載している。この技術を記載しているさらなる刊行物には、Ｂｏｎｄｅｓｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１１（２０１５）：６１１〜６１７）、Ｇｕｓｔａｆｓｏｎら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５４（２０１５）：９６５９〜９６６２）、Ｂｕｃｋｌｅｙら（ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏ．１０（２０１５）：１８３１〜１��３７）、「タンパク質分解のイミド系モジュレーターおよび関連する使用方法（Ｉｍｉｄｅ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｕｓｅ）」と題された、Ａｒｖｉｎａｓ  Ｉｎｃ．に譲渡された米国特許出願公開第２０１６／００５８８７２号明細書、「エストロゲン関連受容体α系ＰＲＯＴＡＣ化合物および関連する使用方法（Ｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｌｐｈａ  Ｂａｓｅｄ  ＰＲＯＴＡＣ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｕｓｅ）」と題されたＡｒｖｉｎａｓ  Ｉｎｃ．に譲渡された米国特許出願公開第２０１６／００４５６０７号明細書、「Ｅ３ユビキチンリガーゼによる標的化タンパク質および他のポリペプチドの増強された分解のための化合物および方法（Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ＆Ｏｔｈｅｒ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｂｙ  ａｎ  Ｅ３  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  Ｌｉｇａｓｅ）」と題されたエール大学、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅおよびケンブリッジ大学のケンブリッジエンタープライズリミテッドに譲渡された米国特許出願公開第２０１４／０３５６３２２号明細書、Ｌａｉら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５５（２０１６）：８０７〜８１０）、Ｔｏｕｒｅら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５５（２０１６）：１９６６〜１９７３）および「二官能性分子を通して標的化タンパク質分解を誘導する方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  Ｉｎｄｕｃｅ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）」と題されたＤａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに譲渡された米国特許出願公開第２０１６／０１７６９１６号明細書が含まれる。
【０３０５】
標的化タンパク質分解技術の他の記載には、Ｅ３ユビキチンリガーゼを利用して分解レチノイン酸結合タンパク質にするペプチドに結合した小分子を記載する、「メチルベスタチン−リガンドハイブリッド分子を用いたタンパク質ノックダウン：細胞レチノイン酸結合タンパク質のユビキチン化媒介分解の誘導剤の設計および合成（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ  Ｕｓｉｎｇ  Ｍｅｔｈｙｌ  Ｂｅｓｔａｔｉｎ−Ｌｉｇａｎｄ  Ｈｙｂｒｉｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｃｅｒｓ  ｏｆ  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｒｅｔｉｎｏｉｃ  Ａｃｉｄ−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」と題された、Ｉｔｏｈら（ＪＡＣＳ  １３２（１６）（２０１０）：５８２０〜５８２６）、およびサリドマイドベースの標的化タンパク質分解技術を記載している、「インビボ標的タンパク質分解のための戦略としてのフタルイミドコンジュゲーション（Ｐｈｔｈａｌｉｍｉｄｅ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｓ  ａ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）」と題された、Ｗｉｎｔｅｒら（Ｓｃｉｅｎｃｅ３４８（２０１５）：１３７６〜１３８１）が含まれる。
【０３０６】
本発明に有用なヘテロ二官能性化合物は、ｄＴＡＧに結合して分解を誘導することができる任意のヘテロ二官能性化合物であり得る。ヘテロ二官能性化合物は、当技術分野で一般的に知られている。例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，０４１，２９８号明細書；Ｓａｋａｍｏｔｏら（ＰＮＡＳ、２００１、９８（１５）：８５５４〜８５５９）；Ｓａｋａｍｏｔｏら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２（２００３）１３５０〜１３５８）；Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈら（ＪＡＣＳ１２６（２００４）：３７４８〜３７５４）；Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈら（ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ  ６（２００５）：４０〜４６）；Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈら（ＢＭＣＬ１８（２２）（２００８）：５９０４〜５９０８）；国際公開第２０１３／１７０１４７号パンフレット；Ｂｕｃｋｌｅｙら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５３（２０１４）：２３１２〜２３３０）；国際公開第２０１５／１６０８４５号パンフレット；Ｌｕら（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌ．２２（６）（２０１５）：７５５〜７６３）；Ｂｏｎｄｅｓｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １１（２０１５）：６１１〜６１７）；Ｇｕｓｔａｆｓｏｎら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５４（２０１５）：９６５９〜９６６２）；Ｂｕｃｋｌｅｙら（ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏ．１０（２０１５）：１８３１〜１８３７）；「タンパク質分解のイミド系モジュレーターおよび関連する使用方法（Ｉｍｉｄｅ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｕｓｅ）」と題された、Ａｒｖｉｎａｓ  Ｉｎｃ．に譲渡された米国特許出願公開第２０１６／００５８８７２号明細書、「エストロゲン関連受容体α系ＰＲＯＴＡＣ化合物および関連する使用方法」と題されたＡｒｖｉｎａｓ  Ｉｎｃ．に譲渡された米国特許出願公開第２０１６／００４５６０７号明細書、「Ｅ３ユビキチンリガーゼによる標的化タンパク質および他のポリペプチドの増強された分解のための化合物および方法（Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ＆Ｏｔｈｅｒ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｂｙ  ａｎ  Ｅ３  Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  Ｌｉｇａｓｅ）」と題されたエール大学、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅおよびケンブリッジ大学のケンブリッジエンタープライズリミテッドに譲渡された米国特許出願公開第２０１４／０３５６３２２号明細書、「二官能性分子を通して標的化タンパク質分解を誘導する方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  Ｉｎｄｕｃｅ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）」と題されたＤａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｉｎｃ．に譲渡された米国特許出願公開第２０１６／０１７６９１６号明細書、Ｌａｉら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５５（２０１６）：８０７〜８１０）；Ｔｏｕｒｅら（Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．５５（２０１６）：１９６６〜１９７３）；Ｉｔｏｈら（ＪＡＣＳ１３２（１６）（２０１０）：５８２０〜５８２６）；およびＷｉｎｔｅｒら（Ｓｃｉｅｎｃｅ３４８（２０１５）：１３７６〜１３８１）を参照されたい。
【０３０７】
一般に、本出願に使用するのに適したヘテロ二官能性化合物は、一般構造：
デグロン−リンカー−ｄＴＡＧ標的化リガンド
（式中、リンカーは、デグロンおよびｄＴＡＧ標的化リガンドに共有結合しており、デグロンは、Ｅ３ユビキチンリガーゼ（例えば、セレブロン）などのユビキチンリガーゼに結合することができる化合物であり、ｄＴＡＧ標的化リガンドは、内因性タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質上のｄＴＡＧに結合することができる）
を有する。
【０３０８】
一定の実施形態では、本出願は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物：
【０３０９】
【化１】
2020513789.tif 000003
【０３１０】
【化２】
2020513789.tif 000004
（式中、
リンカーは、ｄＴＡＧ標的化リガンドおよびＹに共有結合する基であり；
ｄＴＡＧ標的化リガンドは、ｄＴＡＧ標的に結合する、またはｄＴＡＧ標的によって結合されて、タグ付けが起こることを可能にすることができる）
を利用する。
【０３１１】
一定の実施形態では、本出願は、式（Ｉ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、立体異性体、もしくは薬学的に許容される塩
（式中、
リンカー（Ｌ）は、ｄＴＡＧ標的化リガンドおよびＹに共有結合する基であり；
ｄＴＡＧ標的化リガンドは、ｄＴＡＧに結合することができるまたは結合し；
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ５、ｍおよびｎはそれぞれ本明細書で定義される通りである）
を提供する。
【０３１２】
一定の実施形態では、本出願は、式（ＩＩ）の化合物、またはそのエナンチオマー、ジアステレオマー、立体異性体、もしくは薬学的に許容される塩
（式中、
リンカーは、ｄＴＡＧ標的化リガンドおよびＹに共有結合する基であり；
ｄＴＡＧ標的化リガンドは、ｄＴＡＧに結合することができるまたは結合し；
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ５、ｍおよびｎはそれぞれ本明細書で定義される通りである）
を提供する。
【０３１３】
一定の実施形態では、本発明は、式ＩＩＩ、式ＩＶ、式Ｖ、式ＶＩ、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩおよび式ＩＸの化合物：
【０３１４】
【化３】
2020513789.tif 000005
【０３１５】
【化４】
2020513789.tif 000006
【０３１６】
【化５】
2020513789.tif 000007
【０３１７】
【化６】
2020513789.tif 000008
【０３１８】
【化７】
2020513789.tif 000009
【０３１９】
【化８】
2020513789.tif 000010
【０３２０】
【化９】
2020513789.tif 000011
（式中、
リンカー（Ｌ）は、ｄＴＡＧ標的化リガンドおよびＺ２に共有結合する基であり；
ｄＴＡＧ標的化リガンドは、標的ｄＴＡＧに結合することができる、または標的ｄＴＡＧが結合することができ；
Ｚ２は、結合、アルキル、−Ｏ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ６Ｃ（Ｏ）、−ＮＨまたは−ＮＲ６であり；
Ｒ６は、Ｈ、アルキル、−Ｃ（Ｏ）アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｈであり；
Ｘ３は、Ｏ、ＳおよびＣＨ２から独立に選択され；
Ｗ２は、ＣＨ２、ＣＨＲ、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ２、ＮＨおよびＮ−アルキルの群から独立に選択され；
Ｙ２は、ＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｎ−アリール、Ｎ−ヘタリール、Ｎ−シクロアルキル、Ｎ−ヘテロシクリル、ＯおよびＳの群から独立に選択され；
ＧおよびＧ’は、Ｈ、アルキル、ＯＨ、場合によりＲ’で置換されたＣＨ２−ヘテロシクリル、および場合によりＲ’で置換されたベンジルの群から独立に選択され；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３およびＱ４は、ＣＨ、Ｎ、ＣＲ’およびＮ−オキシドから独立に選択され、
Ａ２は、アルキル、シクロアルキル、ＣｌおよびＦの群から独立に選択され；
Ｒ７は、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＲ’Ｒ”−、−ＣＲ’ＮＲ’Ｒ”−、−アリール、−ヘタリール、−アルキル、−シクロアルキル、−ヘテロシクリル、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｒ”、−Ｐ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｒ”、−ＯＰ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＲ’ＳＯ２ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＮＲ’ＣＯＲ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）ＮＲ’Ｒ”、−Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｎ−ＣＮ）Ｒ”、−ＮＲ’Ｃ（＝Ｃ−ＮＯ２）ＮＲ’Ｒ”、−ＳＯ２ＮＲ’ＣＯＲ”、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｒ’、−Ｃ（Ｃ＝Ｎ−ＯＲ’）Ｒ”、−ＣＲ’＝ＣＲ’Ｒ”、−ＣＣＲ’、−Ｓ（Ｃ＝Ｏ）（Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）Ｒ”、−ＳＦ５および−ＯＣＦ３から選択され
Ｒ’およびＲ’’は、結合、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルから独立に選択される）
を使用する。
【０３２１】
本発明に使用するためのｄＴＡＧ標的化リガンドの非限定的な例としては、
【０３２２】
【化１０】
2020513789.tif 000012
【０３２３】
【化１１】
2020513789.tif 000013
【０３２４】
【化１２】
2020513789.tif 000014
および
【０３２５】
【化１３】
2020513789.tif 000015
が挙げられる。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、変異内因性標的または非内因性標的を標的化する。
【０３２７】
デグロン
デグロンは、プロテアソーム分解のために、リンカーおよびｄＴＡＧ標的化リガンドを通してｄＴＡＧをユビキチンリガーゼに連結する化合物部分である。一定の実施形態では、デグロンがユビキチンリガーゼに結合することができる、または結合する化合物である。さらなる実施形態では、デグロンがＥ３ユビキチンリガーゼに結合することができる、または結合する化合物である。さらなる実施形態では、デグロンがセレブロンに結合することができる、または結合する化合物である。さらなる実施形態では、デグロンがサリドマイドまたはその誘導体もしくは類似体である。
【０３２８】
一定の実施形態では、デグロンが、式Ｄ、式Ｄ０もしくは式Ｄ’：
【０３２９】
【化１４】
2020513789.tif 000016
【０３３０】
【化１５】
2020513789.tif 000017
または
【０３３１】
【化１６】
2020513789.tif 000018
またはそのエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは立体異性体の部分（式中、
【０３３２】
【化１７】
2020513789.tif 000019
は
【０３３３】
【化１８】
2020513789.tif 000020
または
【０３３４】
【化１９】
2020513789.tif 000021
であり；
Ｙは、結合、（ＣＨ２）１〜６、（ＣＨ２）０〜６−Ｏ、（ＣＨ２）０〜６−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’、（ＣＨ２）０〜６−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）、（ＣＨ２）０〜６−ＮＨまたは（ＣＨ２）０〜６−ＮＲ２であり；
ＸはＣ（Ｏ）またはＣ（Ｒ３）２であり；
Ｘ１−Ｘ２はＣ（Ｒ３）＝ＮまたはＣ（Ｒ３）２−Ｃ（Ｒ３）２であり；
各Ｒ１は独立に、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ１〜Ｃ６アルコキシであり；
Ｒ２はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたはＣ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ２’はＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
各Ｒ３は独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
各Ｒ３’は独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり；
各Ｒ４は独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルである；あるいは２つのＲ４が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ（Ｏ）、Ｃ３〜Ｃ６炭素環、またはＮおよびＯから選択される１個もしくは２個のヘテロ原子を含む４、５もしくは６員複素環を形成し；
Ｒ５はＨ、重水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＦまたはＣｌであり；
ｍは０、１、２または３であり；
ｎは０、１または２である）
であり、
化合物が
【０３３５】
【化２０】
2020513789.tif 000022
を介して別の部分（例えば、化合物またはリンカー）に共有結合している。
【０３３６】
一定の実施形態では、デグロンが、
【０３３７】
【化２１】
2020513789.tif 000023
が
【０３３８】
【化２２】
2020513789.tif 000024
である、式Ｄの部分である。
【０３３９】
一定の実施形態では、デグロンが、
【０３４０】
【化２３】
2020513789.tif 000025
が
【０３４１】
【化２４】
2020513789.tif 000026
である、式Ｄの部分である。
【０３４２】
一定の実施形態では、デグロンが、ＸがＣ（Ｏ）である、式Ｄの部分である。
【０３４３】
一定の実施形態では、デグロンが、ＸがＣ（Ｒ３）２であり；各Ｒ３がＨである、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、ＸがＣ（Ｒ３）２であり；Ｒ３の一方がＨであり、他方がメチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。一定の実施形態では、ＸがＣ（Ｒ３）２であり；各Ｒ３がメチル、エチルおよびプロピルから独立に選択される。
【０３４４】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｘ１−Ｘ２がＣ（Ｒ３）＝Ｎである、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｘ１−Ｘ２がＣＨ＝Ｎである。一定の実施形態では、Ｘ１−Ｘ２がＣ（Ｒ３）＝Ｎであり；Ｒ３がメチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。一定の実施形態では、Ｘ１−Ｘ２がＣ（ＣＨ３）＝Ｎである。
【０３４５】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｘ１−Ｘ２がＣ（Ｒ３）２−Ｃ（Ｒ３）２であり；各Ｒ３がＨである、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｘ１−Ｘ２がＣ（Ｒ３）２−Ｃ（Ｒ３）２であり；Ｒ３の１つがＨであり、他の３つのＲ３が独立に、メチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。一定の実施形態では、Ｘ１−Ｘ２がＣ（Ｒ３）２−Ｃ（Ｒ３）２であり；Ｒ３の２つがＨであり、他の２つのＲ３が独立に、メチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。一定の実施形態では、Ｘ１−Ｘ２がＣ（Ｒ３）２−Ｃ（Ｒ３）２であり；Ｒ３の３つがＨであり、残りのＲ３がメチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【０３４６】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｙが結合である、式Ｄの部分である。
【０３４７】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｙが（ＣＨ２）１、（ＣＨ２）２、（ＣＨ２）３、（ＣＨ２）４、（ＣＨ２）５または（ＣＨ２）６である、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｙが（ＣＨ２）１、（ＣＨ２）２または（ＣＨ２）３である。一定の実施形態では、Ｙが（ＣＨ２）１または（ＣＨ２）２である。
【０３４８】
特定の実施形態では、デグロンが、ＹがＯ、ＣＨ２−Ｏ、（ＣＨ２）２−Ｏ、（ＣＨ２）３−Ｏ、（ＣＨ２）４−Ｏ、（ＣＨ２）５−Ｏまたは（ＣＨ２）６−Ｏである、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、ＹがＯ、ＣＨ２−Ｏ、（ＣＨ２）２−Ｏまたは（ＣＨ２）３−Ｏである。一定の実施形態では、ＹがＯまたはＣＨ２−Ｏである。一定の実施形態では、ＹがＯである。
【０３４９】
一定の実施形態では、デグロンが、ＹがＣ（Ｏ）ＮＲ２’、ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’、（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’、（ＣＨ２）３−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’、（ＣＨ２）４−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’、（ＣＨ２）５−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’または（ＣＨ２）６−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’である、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、ＹがＣ（Ｏ）ＮＲ２’、ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’、（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’または（ＣＨ２）３−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’である。一定の実施形態では、ＹがＣ（Ｏ）ＮＲ２’またはＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２’である。一定の実施形態では、ＹがＣ（Ｏ）ＮＲ２’である。
【０３５０】
一定の実施形態では、デグロンが、ＹがＮＲ２’Ｃ（Ｏ）、ＣＨ２−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）、（ＣＨ２）２−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）、（ＣＨ２）３−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）、（ＣＨ２）４−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）、（ＣＨ２）５−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）または（ＣＨ２）６−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）である、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、ＹがＮＲ２’Ｃ（Ｏ）、ＣＨ２−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）、（ＣＨ２）２−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）または（ＣＨ２）３−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）である、  一定の実施形態では、ＹがＮＲ２’Ｃ（Ｏ）またはＣＨ２−ＮＲ２’Ｃ（Ｏ）である。一定の実施形態では、ＹがＮＲ２’Ｃ（Ｏ）である。
【０３５１】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ２’がＨである、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ２’がメチル、エチル、プロピル、ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ｉ−ペンチルおよびヘキシルから選択される、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｒ２’が、メチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【０３５２】
一定の実施形態では、デグロンが、ＹがＮＨ、ＣＨ２−ＮＨ、（ＣＨ２）２−ＮＨ、（ＣＨ２）３−ＮＨ、（ＣＨ２）４−ＮＨ、（ＣＨ２）５−ＮＨまたは（ＣＨ２）６−ＮＨである、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、ＹがＮＨ、ＣＨ２−ＮＨ、（ＣＨ２）２−ＮＨまたは（ＣＨ２）３−ＮＨである。一定の実施形態では、ＹがＮＨまたはＣＨ２−ＮＨである。一定の実施形態では、ＹはＮＨである。
【０３５３】
一定の実施形態では、デグロンが、ＹがＮＲ２、ＣＨ２−ＮＲ２、（ＣＨ２）２−ＮＲ２、（ＣＨ２）３−ＮＲ２、（ＣＨ２）４−ＮＲ２、（ＣＨ２）５−ＮＲ２または（ＣＨ２）６−ＮＲ２である、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、ＹがＮＲ２、ＣＨ２−ＮＲ２、（ＣＨ２）２−ＮＲ２または（ＣＨ２）３−ＮＲ２である。一定の実施形態では、ＹがＮＲ２またはＣＨ２−ＮＲ２である。一定の実施形態では、ＹがＮＲ２である。
【０３５４】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ２がメチル、エチル、プロピル、ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ｉ−ペンチルおよびヘキシルから選択される、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｒ２が、メチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【０３５５】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ２がＣ（Ｏ）−メチル、Ｃ（Ｏ）−エチル、Ｃ（Ｏ）−プロピル、Ｃ（Ｏ）−ブチル、Ｃ（Ｏ）−ｉ−ブチル、Ｃ（Ｏ）−ｔ−ブチル、Ｃ（Ｏ）−ペンチル、Ｃ（Ｏ）−ｉ−ペンチルおよびＣ（Ｏ）−ヘキシルから選択される、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｒ２が、Ｃ（Ｏ）−メチル、Ｃ（Ｏ）−エチルおよびＣ（Ｏ）−プロピルから選択されるＣ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ３アルキルである。
【０３５６】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ２がＣ（Ｏ）−シクロプロピル、Ｃ（Ｏ）−シクロブチル、Ｃ（Ｏ）−シクロペンチルおよびＣ（Ｏ）−シクロヘキシルから選択される、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｒ２がＣ（Ｏ）−シクロプロピルである。
【０３５７】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ３がＨである、式Ｄの部分である。
【０３５８】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ３がメチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｒ３がメチルである。
【０３５９】
一定の実施形態では、デグロンが、ｎが０である、式Ｄの部分である。
【０３６０】
一定の実施形態では、デグロンが、ｎが１である、式Ｄの部分である。
【０３６１】
一定の実施形態では、デグロンが、ｎが２である、式Ｄの部分である。
【０３６２】
一定の実施形態では、デグロンが、各Ｒ３’が独立に、メチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである、式Ｄの部分である。
【０３６３】
一定の実施形態では、デグロンが、ｍが０である、式Ｄの部分である。
【０３６４】
一定の実施形態では、デグロンが、ｍが１である、式Ｄの部分である。
【０３６５】
一定の実施形態では、デグロンが、ｍが２である、式Ｄの部分である。
【０３６６】
一定の実施形態では、デグロンが、ｍが３である、式Ｄの部分である。
【０３６７】
一定の実施形態では、デグロンが、各Ｒ１がハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩ）、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ｉ−ペンチルおよびヘキシル）、およびＣ１〜Ｃ６アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｔ−ブトキシおよびペントキシ）から独立に選択される、式Ｄの部分である。さらなる実施形態では、デグロンが、各Ｒ１がＦ、Ｃｌ、ＯＨ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、メトキシおよびエトキシから独立に選択される、式Ｄの部分である。
【０３６８】
一定の実施形態では、デグロンが、各Ｒ４がＨである、式Ｄの部分である。
【０３６９】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ４の一方がＨであり、他方のＲ４がメチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである、式Ｄの部分である。
【０３７０】
一定の実施形態では、デグロンが、各Ｒ４が独立に、メチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである、式Ｄの部分である。
【０３７１】
一定の実施形態では、デグロンが、２つのＲ４が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ（Ｏ）を形成する、式Ｄの部分である。
【０３７２】
一定の実施形態では、デグロンが、２つのＲ４が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルを形成する、式Ｄの部分である。
【０３７３】
一定の実施形態では、デグロンが、２つのＲ４が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、オキセタン、アゼチジン、テトラヒドロフラン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジンおよびモルホリンから選択される４、５または６員複素環を形成する、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、２つのＲ４が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、オキセタンを形成する。
【０３７４】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ５がＨ、重水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルである、式Ｄの部分である。さらなる実施形態では、Ｒ５が（Ｓ）または（Ｒ）配置である。さらなる実施形態では、Ｒ５が（Ｓ）配置である。一定の実施形態では、デグロンが、化合物が（Ｓ）−Ｒ５と（Ｒ）−Ｒ５のラセミ混合物を含む、式Ｄの部分である。
【０３７５】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ５がＨである、式Ｄの部分である。
【０３７６】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ５が重水素である、式Ｄの部分である。
【０３７７】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ５がメチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｒ５がメチルである。
【０３７８】
一定の実施形態では、デグロンが、Ｒ５がＦまたはＣｌである、式Ｄの部分である。さらなる実施形態では、Ｒ５が（Ｓ）または（Ｒ）配置である。さらなる実施形態では、Ｒ５が（Ｒ）配置である。一定の実施形態では、デグロンが、化合物が（Ｓ）−Ｒ５と（Ｒ）−Ｒ５のラセミ混合物を含む、式Ｄの部分である。一定の実施形態では、Ｒ５がＦである。
【０３７９】
一定の実施形態では、デグロンが、ＸがＨ、重水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはハロゲンであり；Ｒがリンカーの結合点である、図２１の構造から選択される。
【０３８０】
一定の実施形態では、デグロンが図２２の構造から選択される。
【０３８１】
一定の実施形態では、デグロンが図２３の構造から選択される。
【０３８２】
リンカー
リンカーは、ｄＴＡＧ標的化リガンドとデグロンを連結する結合または化学基である。一定の実施形態では、リンカーが炭素鎖である。一定の実施形態では、炭素鎖が、場合によりＮ、ＯおよびＳから選択される１個、２個、３個またはそれ以上のヘテロ原子を含む。一定の実施形態では、炭素鎖が飽和鎖炭素原子のみを含む。一定の実施形態では、炭素鎖が、場合により２個以上の不飽和鎖炭素原子（例えば、
【０３８３】
【化２５】
2020513789.tif 000027
または
【０３８４】
【化２６】
2020513789.tif 000028
）
を含む。一定の実施形態では、炭素鎖中の１個または複数の鎖炭素原子が、場合により１個または複数の置換基（例えば、オキソ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、ＣＮ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、ヘテロシクリル、フェニルおよびヘテロアリール）で置換されている。
【０３８５】
一定の実施形態では、リンカーが少なくとも５個の鎖原子（例えば、Ｃ、Ｏ、ＮおよびＳ）を含む。一定の実施形態では、リンカーが２０個未満の鎖原子（例えば、Ｃ、Ｏ、ＮおよびＳ）を含む。一定の実施形態では、リンカーが５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９個の鎖原子（例えば、Ｃ、Ｏ、ＮおよびＳ）を含む。一定の実施形態では、リンカーが５、７、９、１１、１３、１５、１７または１９個の鎖原子（例えば、Ｃ、Ｏ、ＮおよびＳ）を含む。一定の実施形態では、リンカーが５、７、９または１１個の鎖原子（例えば、Ｃ、Ｏ、ＮおよびＳ）を含む。一定の実施形態では、リンカーが６、８、１０、１２、１４、１６または１８個の鎖原子（例えば、Ｃ、Ｏ、ＮおよびＳ）を含む。一定の実施形態では、リンカーが６、８、１０または１２個の鎖原子（例えば、Ｃ、Ｏ、ＮおよびＳ）を含む。
【０３８６】
一定の実施形態では、リンカーが、場合によりかさ高くない置換基（例えば、オキソ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２およびＣＮ）で置換された炭素鎖である。一定の実施形態では、かさ高くない置換が、デグロンに近接する鎖炭素原子上に位置する（すなわち、炭素原子が、デグロンが結合している炭素原子からリンカー中少なくとも３、４または５個の鎖原子によって分離されている）。
【０３８７】
一定の実施形態では、リンカーが式Ｌ０：
【０３８８】
【化２７】
2020513789.tif 000029
またはそのエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは立体異性体（式中、
ｐ１は０〜１２から選択される整数であり；
ｐ２は０〜１２から選択される整数であり；
ｐ３は１〜６から選択される整数であり；
各Ｗは独立に、存在しない、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ５であり；
Ｚは存在しない、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨまたはＮＲ５であり；
各Ｒ５は独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｑは存在しないまたは−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である）
のものであり、
リンカーがＱの隣の
【０３８９】
【化２８】
2020513789.tif 000030
でデグロンに共有結合しており、Ｚの隣の
【０３９０】
【化２９】
2020513789.tif 000031
でｄＴＡＧ標的化リガンドに共有結合しており、リンカー中の鎖原子の総数が２０未満である。
【０３９１】
一定の実施形態では、リンカー−ｄＴＡＧ標的化リガンド（ＴＬ）が、式Ｌ１またはＬ２：
【０３９２】
【化３０】
2020513789.tif 000032
【０３９３】
【化３１】
2020513789.tif 000033
またはそのエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは立体異性体（式中、
ｐ１は０〜１２から選択される整数であり；
ｐ２は０〜１２から選択される整数であり；
ｐ３は１〜６から選択される整数であり；
各Ｗは独立に、存在しない、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ５であり；
Ｚは存在しない、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨまたはＮＲ５であり；
各Ｒ５は独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり；
ＴＬはｄＴＡＧ標的化リガンドである）
の構造を有し、
リンカーが
【０３９４】
【化３２】
2020513789.tif 000034
でデグロンに共有結合している。
【０３９５】
一定の実施形態では、ｐ１が０〜１０から選択される整数である。
【０３９６】
一定の実施形態では、ｐ１が２〜１０から選択される整数である。
【０３９７】
一定の実施形態では、ｐ１が１、２、３、４、５および６から選択される。
【０３９８】
一定の実施形態では、ｐ１が１、３および５から選択される。
【０３９９】
一定の実施形態では、ｐ１が１、２および３から選択される。
【０４００】
一定の実施形態では、ｐ１が３である。
【０４０１】
一定の実施形態では、ｐ２が０〜１０から選択される整数である。
【０４０２】
一定の実施形態では、ｐ２が０、１、２、３、４、５および６から選択される。
【０４０３】
一定の実施形態では、ｐ２が０および１から選択される整数である。
【０４０４】
一定の実施形態では、ｐ３が１〜５から選択される整数である。
【０４０５】
一定の実施形態では、ｐ３が２、３、４および５から選択される。
【０４０６】
一定の実施形態では、ｐ３が１、２および３から選択される。
【０４０７】
一定の実施形態では、ｐ３が２および３から選択される。
【０４０８】
一定の実施形態では、少なくとも１つのＷがＣＨ２である。
【０４０９】
一定の実施形態では、少なくとも１つのＷがＯである。
【０４１０】
一定の実施形態では、少なくとも１つのＷがＳである。
【０４１１】
一定の実施形態では、少なくとも１つのＷがＮＨである。
【０４１２】
一定の実施形態では、少なくとも１つのＷがＮＲ５であり；Ｒ５がメチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【０４１３】
一定の実施形態では、ＷがＯである。
【０４１４】
一定の実施形態では、Ｚが存在しない。
【０４１５】
一定の実施形態では、ＺがＣＨ２である。
【０４１６】
一定の実施形態では、ＺがＯである。
【０４１７】
一定の実施形態では、ＺがＮＨである。
【０４１８】
一定の実施形態では、ＺがＮＲ５であり；Ｒ５がメチル、エチルおよびプロピルから選択されるＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【０４１９】
一定の実施形態では、Ｚがリンカーに結合しているｄＴＡＧ標的化リガンドの一部である、すなわち、ＺがｄＴＡＧ標的化リガンドの官能基とリンカーの反応から形成される。
【０４２０】
一定の実施形態では、ＷがＣＨ２であり、ＺがＣＨ２である。
【０４２１】
一定の実施形態では、ＷがＯであり、ＺがＣＨ２である。
【０４２２】
一定の実施形態では、ＷがＣＨ２であり、ＺがＯである。
【０４２３】
一定の実施形態では、ＷがＯであり、ＺがＯである。
【０４２４】
一定の実施形態では、リンカー−ｄＴＡＧ標的化リガンドが、表Ｌから選択される構造を有する：
表Ｌ
【０４２５】
【化３３】
2020513789.tif 000035
【０４２６】
【化３４】
2020513789.tif 000036
【０４２７】
【化３５】
2020513789.tif 000037
【０４２８】
【化３６】
2020513789.tif 000038
【０４２９】
【化３７】
2020513789.tif 000039
【０４３０】
【化３８】
2020513789.tif 000040
または
【０４３１】
【化３９】
2020513789.tif 000041
（式中、Ｚ、ＴＬおよびｐ１はそれぞれ上記の通りである）。
【０４３２】
本明細書に記載されるデグロンのいずれか１つが、本明細書に記載されるリンカーのいずれか１つに共有結合することができる。
【０４３３】
一定の実施形態では、本出願は、以下の構造を有するデグロン−リンカー（ＤＬ）を含む：
【０４３４】
【化４０】
2020513789.tif 000042
【０４３５】
【化４１】
2020513789.tif 000043
【０４３６】
【化４２】
2020513789.tif 000044
【０４３７】
【化４３】
2020513789.tif 000045
【０４３８】
【化４４】
2020513789.tif 000046
【０４３９】
【化４５】
2020513789.tif 000047
（式中、変数の各々は、式Ｄ０および式Ｌ０で上記の通りであり、ｄＴＡＧ標的化リガンドは、Ｚの隣の
【０４４０】
【化４６】
2020513789.tif 000048
でＤＬに共有結合している）。
【０４４１】
一定の実施形態では、本出願は、以下の構造を有するデグロン−リンカー（ＤＬ）を含む：
【０４４２】
【化４７】
2020513789.tif 000049
【０４４３】
【化４８】
2020513789.tif 000050
または
【０４４４】
【化４９】
2020513789.tif 000051
（式中、変数の各々は、式Ｄおよび式Ｌ０で上記の通りであり、ｄＴＡＧ標的化リガンドは、Ｚの隣の
【０４４５】
【化５０】
2020513789.tif 000052
でＤＬに共有結合している）。
【０４４６】
本出願のいくつかの実施形態は、以下の構造を有する二官能性化合物：
【０４４７】
【化５１】
2020513789.tif 000053
【０４４８】
【化５２】
2020513789.tif 000054
【０４４９】
【化５３】
2020513789.tif 000055
もしくは
【０４５０】
【化５４】
2020513789.tif 000056
またはそのエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは立体異性体（式中、変数の各々は、式Ｄおよび式Ｌ０で上記の通りであり、ｄＴＡＧ標的化リガンドは、本明細書中以下に記載される）
に関する。
【０４５１】
本出願のさらなる実施形態は、以下の構造を有する二官能性化合物：
【０４５２】
【化５５】
2020513789.tif 000057
【０４５３】
【化５６】
2020513789.tif 000058
もしくは
【０４５４】
【化５７】
2020513789.tif 000059
またはそのエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは立体異性体（式中、変数の各々は、式Ｄおよび式Ｌ０で上記の通りであり、ｄＴＡＧ標的化リガンドは、本明細書中以下に記載される）
に関する。
【０４５５】
本出願の一定の実施形態は、以下の構造の１つを有する二官能性化合物に関する：
【０４５６】
【化５８】
2020513789.tif 000060
【０４５７】
【化５９】
2020513789.tif 000061
【０４５８】
【化６０】
2020513789.tif 000062
【０４５９】
【化６１】
2020513789.tif 000063
【０４６０】
【化６２】
2020513789.tif 000064
【０４６１】
【化６３】
2020513789.tif 000065
または
【０４６２】
【化６４】
2020513789.tif 000066
【０４６３】
一定の実施形態では、リンカーが、約１個〜約１２個のエチレングリコール単位、１個〜約１０個のエチレングリコール単位、約２個〜約６個のエチレングリコール単位、約２個〜５個のエチレングリコール単位、約２個〜４個のエチレングリコール単位に及ぶサイズのポリエチレングリコール基であり得る。
【０４６４】
一定の実施形態では、リンカーが、リンカーの結合位置に関して、ｄＴＡＧ標的化リガンドのＳＡＲ（構造活性相関）およびＸ線結晶学に基づいて設計および最適化される。
【０４６５】
一定の実施形態では、最適なリンカー長および組成が標的によって異なり、その標的に結合した元のｄＴＡＧ標的化リガンドのＸ線構造に基づいて推定することができる。リンカー長および組成を、代謝安定性ならびに薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）パラメータを調節するように改変することもできる。
【０４６６】
ｄＴＡＧ標的化リガンドが複数の標的に結合する一定の実施形態では、リンカー長を変えることによって選択性を達成することができ、ここではリガンドが異なる結合ポケット、例えば他のものより深いまたは浅い結合ポケットでその標的のいくつかに結合する。
【０４６７】
さらなる実施形態では、本発明に使用するためのヘテロ二官能性化合物が化学リンカー（Ｌ）を含む。一定の実施形態では、リンカー基Ｌが、Ａの１つまたは複数の共有結合構造単位（例えば、−Ａ１．．．Ａｑ−）（式中、Ａ１は、デグロン、ｄＴＡＧ標的化リガンドまたはこれらの組み合わせの少なくとも１つに結合した基である）を含む基である。一定の実施形態では、Ａ１が、デグロン、ｄＴＡＧ標的化リガンドまたはこれらの組み合わせを別のデグロン、標的化リガンドまたはこれらの組み合わせに直接的に連結する。他の実施形態では、Ａ１が、デグロン、ｄＴＡＧ標的化リガンドまたはこれらの組み合わせを、Ａｑを通して別のデグロン、ｄＴＡＧ標的化リガンドまたはこれらの組み合わせに間接的に連結する。
【０４６８】
一定の実施形態では、Ａ１〜Ａｑが、それぞれ独立に、結合、ＣＲＬ１ＲＬ２、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲＬ３、ＳＯ２ＮＲＬ３、ＳＯＮＲＬ３、ＣＯＮＲＬ３、ＮＲＬ３ＣＯＮＲＬ４、ＮＲＬ３ＳＯ２ＮＲＬ４、ＣＯ、ＣＲＬ１＝ＣＲＬ２、Ｃ≡Ｃ、ＳｉＲＬ１ＲＬ２、Ｐ（Ｏ）ＲＬ１、Ｐ（Ｏ）ＯＲＬ１、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＮＣＮ）ＮＲＬ４、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＮＣＮ）、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＣＮＯ２）ＮＲＬ４、場合により０〜６個のＲＬ１および／またはＲＬ２基で置換されたＣ３〜１１シクロアルキル、場合により０〜６個のＲＬ１および／またはＲＬ２基で置換されたＣ３〜１１ヘテロシクリル、場合により０〜６個のＲＬ１および／またはＲＬ２基で置換されたアリール、場合により０〜６個のＲＬ１および／またはＲＬ２基で置換されたヘテロアリール（ＲＬ１および／またはＲＬ２は、それぞれ独立に、他のＡ基と結合して、０〜４個のＲＬ５基でさらに置換されていてもよいシクロアルキルおよび／またはヘテロシクリル部分を形成することができる）（式中、
（ＲＬ１、ＲＬ２、ＲＬ３、ＲＬ４およびＲＬ５は、それぞれ独立に、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜８アルキル、ＯＣ１〜８アルキル、ＳＣ１〜８アルキル、ＮＨＣ１〜８アルキル、Ｎ（Ｃ１〜８アルキル）２、Ｃ３〜１１シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜１１ヘテロシクリル、ＯＣ１〜８シクロアルキル、ＳＣ１〜８シクロアルキル、ＮＨＣ１〜８シクロアルキル、Ｎ（Ｃ１〜８シクロアルキル）２、Ｎ（Ｃ１〜８シクロアルキル）（Ｃ１〜８アルキル）、ＯＨ、ＮＨ２、ＳＨ、ＳＯ２Ｃ１〜８アルキル、Ｐ（Ｏ）（ＯＣ１〜８アルキル）（Ｃ１〜８アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＣ１〜８アルキル）２、ＣＣ−Ｃ１〜８アルキル、ＣＣＨ、ＣＨ＝ＣＨ（Ｃ１〜８アルキル）、Ｃ（Ｃ１〜８アルキル）＝ＣＨ（Ｃ１〜８アルキル）、Ｃ（Ｃ１〜８アルキル）＝Ｃ（Ｃ１〜８アルキル）２、Ｓｉ（ＯＨ）３、Ｓｉ（Ｃ１〜８アルキル）３、Ｓｉ（ＯＨ）（Ｃ１〜８アルキル）２、ＣＯＣ１〜８アルキル、ＣＯ２Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＮＯ２、ＳＦ５、ＳＯ２ＮＨＣ１〜８アルキル、ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜８アルキル）２、ＳＯＮＨＣ１〜８アルキル、ＳＯＮ（Ｃ１〜８アルキル）２、ＣＯＮＨＣ１〜８アルキル、ＣＯＮ（Ｃ１〜８アルキル）２、Ｎ（Ｃ１〜８アルキル）ＣＯＮＨ（Ｃ１〜８アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜８アルキル）ＣＯＮ（Ｃ１〜８アルキル）２、ＮＨＣＯＮＨ（Ｃ１〜８アルキル）、ＮＨＣＯＮ（Ｃ１〜８アルキル）２、ＮＨＣＯＮＨ２、Ｎ（Ｃ１〜８アルキル）ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜８アルキル）、Ｎ（Ｃ１〜８アルキル）ＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜８アルキル）２、ＮＨＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜８アルキル）、ＮＨＳＯ２Ｎ（Ｃ１〜８アルキル）２、ＮＨＳＯ２ＮＨ２である）
である。
【０４６９】
一定の実施形態では、ｑが０以上の整数である。一定の実施形態では、ｑが１以上の整数である。
【０４７０】
一定の実施形態では、例えば、ｑが２より大きい場合、Ａｑがデグロンに接続されている基であり、Ａ１とＡｑがＡの構造単位（このようなＡの構造単位の数：ｑ−２）を介して接続されている。
【０４７１】
一定の実施形態では、例えば、ｑが２である場合、ＡｑがＡ１およびデグロン部分に接続されている基である。
【０４７２】
一定の実施形態では、例えば、ｑが１である場合、リンカー基Ｌの構造が−Ａ１−であり、Ａ１がデグロン部分およびｄＴＡＧ標的化リガンド部分に接続されている基である。
【０４７３】
さらなる実施形態では、ｑが１〜１００、１〜９０、１〜８０、１〜７０、１〜６０、１〜５０、１〜４０、１〜３０、１〜２０または１〜１０の整数である。
【０４７４】
一定の実施形態では、リンカー（Ｌ）が図２４の構造から選択される。
【０４７５】
他の実施形態では、リンカー（Ｌ）が、
【０４７６】
【化６５】
2020513789.tif 000067
が
【０４７７】
【化６６】
2020513789.tif 000068
または
【０４７８】
【化６７】
2020513789.tif 000069
を表す、図２５の構造から選択される。
【０４７９】
さらなる実施形態では、リンカー基が、１〜約１００個のエチレングリコール単位、約１〜約５０個のエチレングリコール単位、１〜約２５個のエチレングリコール単位、約１〜１０個のエチレングリコール単位、１〜約８個のエチレングリコール単位および１〜６個のエチレングリコール単位、２〜４個のエチレングリコール単位を有する場合により置換された（ポリ）エチレングリコール、または場合により置換されたＯ、Ｎ、Ｓ、ＰもしくはＳｉ原子が散在する場合により置換されたアルキル基である。一定の実施形態では、リンカーが、アリール、フェニル、ベンジル、アルキル、アルキレンまたは複素環基で置換されている。一定の実施形態では、リンカーが非対称または対称であり得る。
【０４８０】
本明細書に記載される化合物の実施形態のいずれにおいても、リンカー基が本明細書に記載される任意の適切な部分であり得る。一実施形態では、リンカーが、約１個〜約１２個のエチレングリコール単位、１個〜約１０個のエチレングリコール単位、約２個〜約６個のエチレングリコール単位、約２個〜５個のエチレングリコール単位、約２個〜４個のエチレングリコール単位に及ぶサイズの置換または非置換ポリエチレングリコール基である。
【０４８１】
デグロン基およびｄＴＡＧ標的化リガンド基は、リンカーの化学的性質に対して適切かつ安定である任意の基を通してリンカー基に共有結合していてよいが、リンカーは、好ましくはアミド、エステル、チオエステル、ケト基、カルバメート（ウレタン）、炭素またはエーテル（これらの基の各々がデグロン基およびｄＴＡＧ標的化リガンド基上のどこに挿入されていてもよい）を通してデグロン基およびｄＴＡＧ標的化リガンド基に独立に共有結合して、ユビキチンリガーゼ上のデグロン基と標的ｄＴＡＧ上のｄＴＡＧ標的化リガンド基の最大結合をもたらす。（デグロン基がユビキチンリガーゼを標的化する一定の態様では、分解のための標的タンパク質がユビキチンリガーゼ自体であり得ることに留意されたい）。リンカーは、デグロンおよび／またはｄＴＡＧ標的化リガンド基上の場合により置換されたアルキル、アルキレン、アルケンまたはアルキン基、アリール基または複素環式基に結合していてもよい。
【０４８２】
一定の実施形態では、「Ｌ」が４〜２４個の直鎖原子を有する直鎖であり得、図２６の構造のように、直鎖中の炭素原子が、酸素、窒素、アミド、フッ化炭素等で置換されていてもよい。
【０４８３】
一定の実施形態では、「Ｌ」が非直鎖であり得、脂肪族または芳香族またはヘテロ芳香族環式部分であり得、「Ｌ」のいくつかの例としては、それだけに限らないが、図２７の構造（式中、ＸおよびＹは、結合、ＣＲＬ１ＲＬ２、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲＬ３、ＳＯ２ＮＲＬ３、ＳＯＮＲＬ３、ＣＯＮＲＬ３、ＮＲＬ３ＣＯＮＲＬ４、ＮＲＬ３ＳＯ２ＮＲＬ４、ＣＯ、ＣＲＬ１＝ＣＲＬ２、Ｃ≡Ｃ、ＳｉＲＬ１ＲＬ２、Ｐ（Ｏ）ＲＬ１、Ｐ（Ｏ）ＯＲＬ１、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＮＣＮ）ＮＲＬ４、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＮＣＮ）、ＮＲＬ３Ｃ（＝ＣＮＯ２）ＮＲＬ４、場合により０〜６個のＲＬ１および／またはＲＬ２基で置換されたＣ３〜１１シクロアルキル、場合により０〜６個のＲＬ１および／またはＲＬ２基で置換されたＣ３〜１１ヘテロシクリル、場合により０〜６個のＲＬ１および／またはＲＬ２基で置換されたアリール、場合により０〜６個のＲＬ１および／またはＲＬ２基で置換されたヘテロアリール（ＲＬ１またはＲＬ２は、それぞれ独立に、他のＡ基と結合して、０〜４個のＲＬ５基でさらに置換されていてもよいシクロアルキルおよび／またはヘテロシクリル部分を形成することができる）から独立に選択される）が挙げられる。
【０４８４】
ｄＴＡＧ標的化リガンド
ｄＴＡＧ標的化リガンド（ＴＬ）は、ｄＴＡＧに結合することができる、またはユビキチンによるタグ付けが起こることを可能にするｄＴＡＧ標的が結合することができる。
本明細書で企図されるように、本発明のゲノムは、細胞質内に位置するヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質（ｄＴＡＧ）を含む。ゲノムのヘテロ二官能性化合物標的化タンパク質は、ヘテロ二官能性化合物が結合することができる任意のアミノ酸配列であり、ヘテロ二官能性化合物と接触すると、タンパク質−ｄＴＡＧハイブリッドタンパク質の分解をもたらす。好ましくは、ｄＴＡＧはＣＡＲの機能を妨害すべきでない。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ヘテロ二官能性化合物の選択性をもたらし、ヘテロ二官能性化合物の投与時のオフターゲット効果の回避を可能にする非内因性ペプチドである。一実施形態では、ｄＴＡＧが、ヘテロ二官能性化合物が改変アミノ酸配列のみに結合し、内因性発現タンパク質に結合しないように改変された、内因性タンパク質に由来するアミノ酸配列である。一実施形態では、ｄＴＡＧが内因性発現タンパク質である。ヘテロ二官能性化合物に使用するためにリガンドによって結合され得る任意のアミノ酸配列ドメインを、本明細書で企図されるようにｄＴＡＧとして使用することができる。
【０４８５】
特定の実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、それだけには限定されないが、ＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）、ブロモドメイン含有タンパク質４（ＢＲＤ４）、ＣＲＥＢ結合タンパク質（ＣＲＥＢＢＰ）および転写活性化因子ＢＲＧ１（ＳＭＡＲＣＡ４）、またはその変異体などの内因性発現タンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。本明細書で企図されるように、「変異体」は、変異体が元の配列と同じ機能を実質的に保持する限り、この場合はヘテロ二官能性化合物のためのリガンド結合を提供している限り、１個または数個〜複数個のアミノ酸の置換、欠失または付加などの任意の変異体を意味する。他の実施形態では、本発明に使用するためのｄＴＡＧが、例えばホルモン受容体、例えばエストロゲン受容体タンパク質、アンドロゲン受容体タンパク質、レチノイドｘ受容体（ＲＸＲ）タンパク質、および細菌ＤＨＦＲを含むジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）、細菌デヒドロゲナーゼ、ならびに変異体を含み得る。
【０４８６】
一実施形態では、ｄＴＡＧが、本明細書で特定されるタンパク質のいずれかの一部である。例えば、ｄＴＡＧは、ＢＲＤ４のＢＤ１ドメインまたはＢＲＤ４のＢＤ２ドメインであり得る。一実施形態では、親ｄＴＡＧを標的とすると本明細書中で特定された標的化リガンドが、代わりに部分を標的化するために使用される。一実施形態では、表Ｔ中のＢＲＤ４標的化リガンドを使用して、ＢＤ１  ｄＴＡＧを標的化することができる。別の実施形態では、表Ｔ中のＢＲＤ４標的化リガンドを使用して、ＢＤ２  ｄＴＡＧを標的化することができる。
【０４８７】
本出願のいくつかの実施形態は、それだけに限らないが、Ｈｓｐ９０阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＭＤＭ２阻害剤、ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質を標的化する化合物、サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２を標的化する化合物、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、およびアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）を標的化する化合物に由来するものを含む、ｄＴＡＧを標的化するＴＬを含む。
【０４８８】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、キナーゼ、ＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質、サイトゾルシグナル伝達タンパク質（例えば、ＦＫＢＰ１２）、核タンパク質、ヒストンデアセチラーゼ、リジンメチルトランスフェラーゼ、血管新生を調節するタンパク質、免疫応答を調節するタンパク質、アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）、エストロゲン受容体、アンドロゲン受容体、グルココルチコイド受容体、または転写因子（例えば、ＳＭＡＲＣＡ４、ＳＭＡＲＣＡ２、ＴＲＩＭ２４）に由来するｄＴＡＧに結合することができるまたは結合する化合物である。
【０４８９】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、それだけに限らないが、チロシンキナーゼ（例えば、ＡＡＴＫ、ＡＢＬ、ＡＢＬ２、ＡＬＫ、ＡＸＬ、ＢＬＫ、ＢＭＸ、ＢＴＫ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＫ、ＤＤＲ１、ＤＤＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ６、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＦＥＲ、ＦＥＳ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＲ、ＦＬＴ１、ＦＬＴ３、ＦＬＴ４、ＦＲＫ、ＦＹＮ、ＧＳＧ２、ＨＣＫ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬＫ、ＩＮＳＲ、ＩＮＳＲＲ、ＩＲＡＫ４、ＩＴＫ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＫＤＲ、ＫＩＴ、ＫＳＲ１、ＬＣＫ、ＬＭＴＫ２、ＬＭＴＫ３、ＬＴＫ、ＬＹＮ、ＭＡＴＫ、ＭＥＲＴＫ、ＭＥＴ、ＭＬＴＫ、ＭＳＴ１Ｒ、ＭＵＳＫ、ＮＰＲ１、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、ＮＴＲＫ３、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＬＫ４、ＰＴＫ２、ＰＴＫ２Ｂ、ＰＴＫ６、ＰＴＫ７、ＲＥＴ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＯＳ１、ＲＹＫ、ＳＧＫ４９３、ＳＲＣ、ＳＲＭＳ、ＳＴＹＫ１、ＳＹＫ、ＴＥＣ、ＴＥＫ、ＴＥＸ１４、ＴＩＥ１、ＴＮＫ１、ＴＮＫ２、ＴＮＮＩ３Ｋ、ＴＸＫ、ＴＹＫ２、ＴＹＲＯ３、ＹＥＳ１またはＺＡＰ７０）、セリン／トレオニンキナーゼ（例えば、カゼインキナーゼ２、プロテインキナーゼＡ、プロテインキナーゼＢ、プロテインキナーゼＣ、Ｒａｆキナーゼ、ＣａＭキナーゼ、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＡＬＫ１、ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、ＡＬＫ４、Ａｕｒｏｒａ  Ａ、Ａｕｒｏｒａ  Ｂ、Ａｕｒｏｒａ  Ｃ、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２、ＣＬＫ１、ＣＬＫ２、ＣＬＫ３、ＤＡＰＫ１、ＤＡＰＫ２、ＤＡＰＫ３、ＤＭＰＫ、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＥＲＫ５、ＧＣＫ、ＧＳＫ３、ＨＩＰＫ、ＫＨＳ１、ＬＫＢ１、ＬＯＫ、ＭＡＰＫＡＰＫ２、ＭＡＰＫＡＰＫ、ＭＮＫ１、ＭＳＳＫ１、ＭＳＴ１、ＭＳＴ２、ＭＳＴ４、ＮＤＲ、ＮＥＫ２、ＮＥＫ３、ＮＥＫ６、ＮＥＫ７、ＮＥＫ９、ＮＥＫ１１、ＰＡＫ１、ＰＡＫ２、ＰＡＫ３、ＰＡＫ４、ＰＡＫ５、ＰＡＫ６、ＰＩＭ１、ＰＩＭ２、ＰＬＫ１、ＲＩＰ２、ＲＩＰ５、ＲＳＫ１、ＲＳＫ２、ＳＧＫ２、ＳＧＫ３、ＳＩＫ１、ＳＴＫ３３、ＴＡＯ１、ＴＡＯ２、ＴＧＦ−β、ＴＬＫ２、ＴＳＳＫ１、ＴＳＳＫ２、ＵＬＫ１またはＵＬＫ２）、サイクリン依存性キナーゼ（例えば、Ｃｄｋ１〜Ｃｄｋ１１）、およびロイシンリッチリピートキナーゼ（例えば、ＬＲＲＫ２）を含む、ｄＴＡＧ標的化リガンドが結合することができるまたは結合するキナーゼに由来する。
【０４９０】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、それだけに限らないが、ＡＳＨ１Ｌ、ＡＴＡＤ２、ＢＡＺ１Ａ、ＢＡＺ１Ｂ、ＢＡＺ２Ａ、ＢＡＺ２Ｂ、ＢＲＤ１、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤ５、ＢＲＤ６、ＢＲＤ７、ＢＲＤ８、ＢＲＤ９、ＢＲＤ１０、ＢＲＤＴ、ＢＲＰＦ１、ＢＲＰＦ３、ＢＲＷＤ３、ＣＥＣＲ２、ＣＲＥＢＢＰ、ＥＰ３００、ＦＡＬＺ、ＧＣＮ５Ｌ２、ＫＩＡＡ１２４０、ＬＯＣ９３３４９、ＭＬＬ、ＰＢ１、ＰＣＡＦ、ＰＨＩＰ、ＰＲＫＣＢＰ１、ＳＭＡＲＣＡ２、ＳＭＡＲＣＡ４、ＳＰ１００、ＳＰ１１０、ＳＰ１４０、ＴＡＦ１、ＴＡＦ１Ｌ、ＴＩＦ１ａ、ＴＲＩＭ２８、ＴＲＩＭ３３、ＴＲＩＭ６６、ＷＤＲ９、ＺＭＹＮＤ１１およびＭＬＬ４を含む、ｄＴＡＧ標的化リガンドが結合することができるまたは結合するＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質に由来する。一定の実施形態では、ＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質がＢＲＤ４である。
【０４９１】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧが、それだけに限らないが、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、アンテナペディアホメオドメインタンパク質、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＣＡＡＴ増強結合タンパク質、ヒストン、ポリコーム群タンパク質、高移動度タンパク質、テロメア結合タンパク質、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、肝細胞核因子、Ｍａｄ２、ＮＦκＢ、核内受容体コアクチベーター、ＣＲＥＢ結合タンパク質、ｐ５５、ｐ１０７、ｐ１３０、Ｒｂタンパク質、ｐ５３、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、ｃ−ｍｄｍ２、ｃ−ｍｙｃおよびｃ−ｒｅｌを含む、ｄＴＡＧ標的化リガンドが結合することができるまたは結合する核タンパク質に由来する。
【０４９２】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、キナーゼ阻害剤、ＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質阻害剤、サイトゾルシグナル伝達タンパク質ＦＫＢＰ１２リガンド、ＨＤＡＣ阻害剤、リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、免疫抑制化合物、およびアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）阻害剤から選択される。
【０４９３】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、ＳＥＲＭ（選択的エストロゲン受容体モジュレーター）またはＳＥＲＤ（選択的エストロゲン受容体分解剤）である。ＳＥＲＭおよびＳＥＲＤの非限定的な例は、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａに譲渡された国際公開第２０１４／１９１７２６号パンフレット、Ｏｌｅｍａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓに譲渡された国際公開第２０１３／０９０９２１号パンフレット、国際公開第２０１４／２０３１２９号パンフレット、国際公開第２０１４／２０３１３２号パンフレットおよび米国特許出願公開第２０１３／０１７８４４５号明細書、ならびに米国特許第９０７８８７１号明細書、同第８８５３４２３号明細書および同第８７０３８１０号明細書、ならびにＳｅｒａｇｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓに譲渡された米国特許出願公開第２０１５／０００５２８６号明細書、国際公開第２０１４／２０５１３６号パンフレットおよび国際公開第２０１４／２０５１３８号パンフレットに提供されている。
【０４９４】
さらなるｄＴＡＧ標的化リガンドには、例えば、内因性タンパク質に結合する（標的ｄＴＡＧに結合する）任意の部分が含まれる。例示的なｄＴＡＧ標的化リガンドには、とりわけ小分子ｄＴＡＧ標的化リガンド：Ｈｓｐ９０阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＨＤＭ２およびＭＤＭ２阻害剤、ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質を標的化する化合物、ＨＤＡＣ阻害剤、ヒトリジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、核ホルモン受容体化合物、免疫抑制化合物およびアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）を標的化する化合物が含まれる。このような小分子標的ｄＴＡＧ結合部分はまた、これらの組成物の薬学的に許容される塩、エナンチオマー、溶媒和物および多形、ならびに目的のｄＴＡＧを標的化し得る他の小分子を含む。
【０４９５】
いくつかの実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  Ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  Ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＳＵＭＯ  Ｅ２  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｕｂｃ９」Ｈｅｗｉｔｔ，Ｗ．Ｍ．ら（２０１６）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．５５：５７０３〜５７０７に記載されるものを含む、Ｕｂｃ９  ＳＵＭＯ  Ｅ２リガーゼ５Ｆ６Ｄ標的化リガンドである。
【０４９６】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔａｎｋｙｒａｓｅ  １  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ＰＪ３４  ａｎｄ  ＸＡＶ９３９．」Ｋｉｒｂｙ，Ｃ．Ａ．、Ｃｈｅｕｎｇ，Ａ．、Ｆａｚａｌ，Ａ．、Ｓｈｕｌｔｚ，Ｍ．Ｄ．、Ｓｔａｍｓ，Ｔ、（２０１２）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．，Ｓｅｃｔ．Ｆ  ６８：１１５〜１１８；および「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  ［１，２，４］Ｔｒｉａｚｏｌ−３−ｙｌａｍｉｎｅｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ  Ｉｓｏｓｔｅｒｅｓ  ｔｈａｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｔａｎｋｙｒａｓｅｓ．」Ｓｈｕｌｔｚ，Ｍ．Ｄ．ら（２０１３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５６：７０４９〜７０５９に記載されるものを含む、Ｔａｎｋ１標的化リガンドである。
【０４９７】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｗ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＳＨ２  Ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｐｐ６０Ｓｒｃ  Ａｒｅ  Ｉｄｅｎｔｉｃａｌ  ｔｏ  Ｔｈｏｓｅ  ｆｏｒ  Ｈｉｇｈ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  Ｆｕｌｌ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」Ｇｕｄｒｕｎ  Ｌａｎｇｅら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３、４６、５１８４〜５１９５に記載されるものを含む、ｐｐ６０  Ｓｒｃ標的化リガンドのＳＨ２ドメインである。
【０４９８】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｔｈｅ  Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓａｐｏｓｉｎ  Ｂ  Ｂｉｎｄｓ  Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ．」Ｈｕｔａ，Ｂ．Ｐ．ら、（２０１６）Ｃｈｅｍｍｅｄｃｈｅｍ  １１：２７７に記載されるものを含む、Ｓｅｃ７ドメイン標的化リガンドである。
【０４９９】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｔｈｅ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｉｍｍｕｎｅ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ＵＬ１４１  ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｉｇ−ｆｏｌｄ  ｖｅｒｓａｔｉｌｉｔｙ  ｆｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ」Ｉ．ＮｅｍｃｏｖｉｃｏｖａおよびＤ．Ｍ．Ｚａｊｏｎｃ  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．（２０１４）．Ｄ７０、８５１〜８６２に記載されるものを含む、サポシン−Ｂ標的化リガント゛である。
【０５００】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「２ＷＯＳ  ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ  ＯＦ  ＨＵＭＡＮ  Ｓ１００Ａ７  ＩＮ  ＣＯＭＰＬＥＸ  ＷＩＴＨ  ２，６  ＡＮＳ」ＤＯＩ：１０．２２１０／ｐｄｂ２ｗｏｓ／ｐｄｂ；および「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｉｔｅｓ  ｏｎ  Ｓ１００Ａ７，ａ  Ｐａｒｔｉｃｉｐａｎｔ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｐａｔｈｗａｙｓ．」Ｌｅｏｎ，Ｒ．、Ｍｕｒｒａｙら（２００９）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４８：１０５９１〜１０６００に記載されるものを含む、タンパク質Ｓ１００−Ａ７  ２ＯＷＳ標的化リガンドである。
【０５０１】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎｏｎ−ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２」Ｓｃｈｅｖｉｔｚ，Ｒ．Ｗ．ら、Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１９９５、２、４５８〜４６５に記載されるものを含む、ホスホリパーゼＡ２標的化リガンドである。
【０５０２】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ａ  Ｐｏｉｓｅｄ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｅｎａｂｌｅｓ  Ｒａｐｉｄ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  Ｙｉｅｌｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｆｉｒｓｔ  Ｒｅｐｏｒｔｅｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ＰＨＩＰ（２），ａｎ  Ａｔｙｐｉｃａｌ  Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ」Ｋｒｏｊｅｒ，Ｔ．ら  Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２０１６、７、２３２２〜２３３０に記載されるものを含む、ＰＨＩＰ標的化リガント゛である。
【０５０３】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｌｏｗ−Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−Ｗｅｉｇｈｔ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ＡＦ６  ＰＤＺ  Ｄｏｍａｉｎ」Ｍａｎｇｅｓｈ  Ｊｏｓｈｉら  Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００６、４５、３７９０〜３７９５に記載されるものを含む、ＰＤＺ標的化リガンドである。
【０５０４】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  Ｌａｃｋ  ｏｆ  ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｅ）  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ−１３／Ｚｉｎｃ  Ｆｉｎｇｅｒ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ．」Ｋａｒｌｂｅｒｇ，Ｔ．ら、（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９０：７３３６〜７３４４に記載されるものを含む、ＰＡＲＰ１５標的化リガンドである。
【０５０５】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ  ｖｉａ  Ｄｏｃｋｉｎｇ−Ｂａｓｅｄ  Ｖｉｒｔｕａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．」Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，Ｃ．Ｄ．ら、（２０１２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５５：７７０６〜７７１８．；「Ｆａｍｉｌｙ−ｗｉｄｅ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＰＡＲＰ  ａｎｄ  ｔａｎｋｙｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．」Ｗａｈｌｂｅｒｇ，Ｅ．ら（２０１２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３０：２８３〜２８８．；「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ＡＤＰ−Ｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ  ｖｉａ  Ｄｏｃｋｉｎｇ−Ｂａｓｅｄ  Ｖｉｒｔｕａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．」Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，Ｃ．Ｄ．ら（２０１２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５５：７７０６〜７７１８に記載されるものを含む、ＰＡＲＰ１４標的化リガンドである。
【０５０６】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「ＭＴＨ１  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｅｒａｄｉｃａｔｅｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ｓａｎｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄＮＴＰ  ｐｏｏｌ」Ｈｅｌｇｅ  Ｇａｄら  Ｎａｔｕｒｅ、２０１４、５０８、２１５〜２２１に記載されるものを含む、ＭＴＨ１標的化リガンドである。
【０５０７】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｍＰＧＥＳ−１  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  Ｆｏｒｍ  ａ  Ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｒａｔｉｏｎａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ａｎｄ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．」Ｌｕｚ，Ｊ．Ｇ．ら（２０１５）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５８：４７２７〜４７３７に記載されるものを含む、ｍＰＧＥＳ−１標的化リガンドである。
【０５０８】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−ｂｏｕｎｄ  ｈｕｍａｎ  ５−ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ．」Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ａ．Ｄ．、ＭｃＫｅｅｖｅｒ，Ｂ．Ｍ．、Ｘｕ，Ｓ．、Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ，Ｄ．、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｄ．Ｋ．、Ｙａｍｉｎ，Ｔ．Ｔ．、Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｒ．Ｈ．、Ｃｈｕ，Ｌ．、Ｕｊｊａｉｎｗａｌｌａ，Ｆ．、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｂ．Ｒ．、Ｅｖａｎｓ，Ｊ．Ｆ．、Ｂｅｃｋｅｒ，Ｊ．Ｗ．（２００７）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１７：５１０〜５１２に記載されるものを含む、ＦＬＡＰ−５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質標的化リガンドである。
【０５０９】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「Ａ  Ｒｅａｌ−Ｗｏｒｌｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｓｉｇｎ．」Ｋｕｈｎ，Ｂ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１６、５９、４０８７〜４１０２に記載されるものを含む、ＦＡ結合タンパク質標的化リガンドである。
【０５１０】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、それだけに限らないが、「ＡＢＴ−１９９，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＣＬ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ａｃｈｉｅｖｅｓ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｈｉｌｅ  ｓｐａｒｉｎｇ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ．」Ｓｏｕｅｒｓ，Ａ．Ｊ．ら（２０１３）ＮＡＴ．ＭＥＤ．（Ｎ．Ｙ．）１９：２０２〜２０８に記載されるものを含む、ＢＣＬ２標的化リガンドである。
【０５１１】
別の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドがＥＧＦＲ標的化リガンドである。一実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ）、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ）、アファチニブ（Ｇｉｌｏｔｒｉｆ）、ロシレチニブ（ＣＯ−１６８６）、オシメルチニブ（Ｔａｇｒｉｓｓｏ）、オルムチニブ（Ｏｌｉｔａ）、ナコチニブ（ＡＳＰ８２７３）、ナザルチニブ（ＥＧＦ８１６）、ＰＦ−０６７４７７７５（Ｐｆｉｚｅｒ）、イコチニブ（ＢＰＩ−２００９）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２；ＰＢ２７２）；アビチニブ（ＡＣ００１０）、ＥＡＩ０４５、タルロキソチニブ（ｔａｒｌｏｘｏｔｉｎｉｂ）（ＴＨ−４０００；ＰＲ−６１０）、ＰＦ−０６４５９９８８（Ｐｆｉｚｅｒ）、テセバチニブ（ＸＬ６４７；ＥＸＥＬ−７６４７；ＫＤ−０１９）、トランスチニブ、ＷＺ−３１４６、ＷＺ８０４０、ＣＮＸ−２００６およびダコミチニブ（ＰＦ−００２９９８０４；Ｐｆｉｚｅｒ）から選択される。リンカーを、ＥＧＦＲへの標的化リガンドの結合を妨げない任意の位置でこれらの標的化リガンド上に配置することができる。リンカー結合位置の非限定的な例を以下の表Ｔで提供する。一実施形態では、ＥＧＦＲ標的化リガンドが、ＥＧＦＲのＬ８５８Ｒ突然変異体に結合する。別の実施形態では、ＥＧＦＲ標的化リガンドが、ＥＧＦＲのＴ７９０Ｍ突然変異体に結合する。別の実施形態では、ＥＧＦＲ標的化リガンドが、ＥＧＦＲのＣ７９７ＧまたはＣ７９７Ｓ突然変異体に結合する。一実施形態では、ＥＧＦＲ標的化リガンドが、エルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ネラチニブおよびダコミチニブから選択され、ＥＧＦＲのＬ８５８Ｒ突然変異体に結合する。別の実施形態では、ＥＧＦＲ標的化リガンドが、オシメルチニブ、ロシレチニブ、オルムチニブ、ナコチニブ、ナザルチニブ、ＰＦ−０６７４７７７５、イコチニブ、ネラチニブ、アビチニブ、タルロキソチニブ、ＰＦ−０６４５９９８、テセバチニブ、トランスチニブ、ＷＺ−３１４６、ＷＺ８０４０およびＣＮＸ−２００６から選択され、ＥＧＦＲのＴ７９０Ｍ突然変異体に結合する。別の実施形態では、ＥＧＦＲ標的化リガンドがＥＡＩ０４５であり、ＥＧＦＲのＣ７９７ＧまたはＣ７９７Ｓ突然変異体に結合する。
【０５１２】
ｄＴＡＧ標的化リガンド基に結合し、ユビキチンリガーゼに作用するまたはユビキチンリガーゼによって分解され得る任意のタンパク質が、本発明による標的タンパク質である。一般に、ｄＴＡＧとして使用するための内因性標的タンパク質には、例えば、構造タンパク質、受容体、酵素、細胞表面タンパク質、触媒活性、アロマターゼ活性、運動活性、ヘリカーゼ活性、代謝過程（同化作用および異化作用）、抗酸化活性、タンパク質分解、生合成、キナーゼ活性を有するタンパク質、オキシドレダクターゼ活性、トランスフェラーゼ活性、ヒドロラーゼ活性、リアーゼ活性、イソメラーゼ活性、リガーゼ活性、酵素調節活性、シグナルトランスデューサ活性、構造分子活性、結合活性（タンパク質、脂質、炭水化物）、受容体活性、細胞運動性、膜融合、細胞間情報伝達、生物学的過程の制御、発生、細胞分化、刺激反応、行動タンパク質、細胞接着タンパク質、細胞死に関与するタンパク質、輸送に関与するタンパク質（タンパク質輸送体活性、核輸送、イオン輸送体活性、チャネル輸送体活性、担体活性、パーミアーゼ活性、分泌活性、電子輸送体活性を含む）、病原性、シャペロン調節活性、核酸結合活性、転写調節活性、細胞外組織化および生合成活性、翻訳調節活性に関与するタンパク質を含む、細胞の統合機能に関連するタンパク質が含まれ得る。
【０５１３】
より具体的には、ヒト治療用のいくつかの薬物標的は、タンパク質標的またはｄＴＡＧ標的化リガンドを結合させて、本発明による化合物に組み込むことができるｄＴＡＧ標的を表す。これらには、例えばＢ７．１およびＢ７、ＴＩＮＦＲ１ｍ、ＴＮＦＲ２、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ、ＢｃｌＩＢａｘおよびアポトーシス経路の他のパートナー、Ｃ５ａ受容体、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ、ＰＤＥ  Ｖホスホジエステラーゼ型、ＰＤＥ  ＩＶホスホジエステラーゼ４型、ＰＤＥ  Ｉ、ＰＤＥ  ＩＩ、ＰＤＥ  ＩＩＩ、スクアレンシクラーゼ阻害剤、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、一酸化窒素（ＮＯ）シンターゼ、シクロオキシゲナーゼ１、シクロオキシゲナーゼ２、５ＨＴ受容体、ドーパミン受容体、Ｇタンパク質、すなわち、Ｇｑ、ヒスタミン受容体、５−リポキシゲナーゼ、トリプターゼセリンプロテアーゼ、チミジル酸シンターゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ＧＡＰＤＨトリパノソーマ、グリコーゲンホスホリラーゼ、炭酸脱水酵素、ケモカイン受容体、ＪＡＷ  ＳＴＡＴ、ＲＸＲなど、ＨＩＶ  １プロテアーゼ、ＨＩＶ  １インテグラーゼ、インフルエンザ、ノイラミニダーゼ、Ｂ型肝炎逆転写酵素、ナトリウムチャネル、多剤耐性（ＭＤＲ）、プロテインＰ糖タンパク質（およびＭＲＰ）、チロシンキナーゼ、ＣＤ２３、ＣＤ１２４、チロシンキナーゼｐ５６  ｌｃｋ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−１受容体、ＴＮＦ−αＲ、ＩＣＡＭ１、Ｃａｔ＋チャネル、ＶＣＡＭ、ＶＬＡ−４インテグリン、セレクチン、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ、ニューオキニン（ｎｅｗｏｋｉｎｉｎ）および受容体、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ、ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ、ＲａｓｌＲａｆｌＭＥＷＥＲＫ経路、インターロイキン−１変換酵素、カスパーゼ、ＨＣＶ、ＮＳ３プロテアーゼ、ＨＣＶ  ＮＳ３  ＲＮＡヘリカーゼ、グリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ、ライノウイルス３Ｃプロテアーゼ、単純ヘルペスウイルス−１（ＨＳＶ−Ｉ）、プロテアーゼ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロテアーゼ、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ、サイクリン依存性キナーゼ、血管内皮増殖因子、オキシトシン受容体、ミクロソーム移動タンパク質阻害剤、胆汁酸輸送阻害剤、５αレダクターゼ阻害剤、アンジオテンシン１１、グリシン受容体、ノルアドレナリン再取り込み受容体、エンドセリン受容体、ニューロペプチドＹおよび受容体、エストロゲン受容体、アンドロゲン受容体、アデノシン受容体、アデノシンキナーゼおよびＡＭＰデアミナーゼ、プリン作動性受容体（Ｐ２Ｙ１、Ｐ２Ｙ２、Ｐ２Ｙ４、Ｐ２Ｙ６、Ｐ２Ｘ１−７）、ファルネシルトランスフェラーゼ、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ、ＮＧＦの受容体であるＴｒｋＡ、βアミロイド、チロシンキナーゼＦｌｋ−ＩＩＫＤＲ、ビトロネクチン受容体、インテグリン受容体、Ｈｅｒ−２１  ｎｅｕ、テロメラーゼ阻害、サイトゾルホスホリパーゼＡ２およびＥＧＦ受容体チロシンキナーゼを含む、多数の多遺伝子性疾患で機能を回復するために使用され得るタンパク質が含まれる。ｄＴＡＧとして有用なさらなるタンパク質標的には、例えば、エクジソン２０−モノオキシゲナーゼ、ＧＡＢＡ作動性塩素チャネルのイオンチャ���ル、アセチルコリンエステラーゼ、電位感受性ナトリウムチャネルタンパク質、カルシウム放出チャネル、および塩素チャネルが含まれる。ｄＴＡＧとして使用するためのなおさらなる標的タンパク質には、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ、アデニルコハク酸シンテターゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼおよびエノールピルビルシキミ酸ホスフェートシンターゼが含まれる。
【０５１４】
一実施形態では、ｄＴＡＧおよびｄＴＡＧ標的化リガンド対が、リガンドのライブラリーをスクリーニングすることによって選択される。このようなスクリーニングは、「Ｋｉｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  Ｒｅｖｅａｌｓ  Ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｔｏ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｍｕｔａｎｔ  Ｋｉｎａｓｅｓ」Ｄｕｏｎｇ−Ｌｙら；Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  １４、７７２〜７８１  ２０１６年２月２日に例示されている。
【０５１５】
ハロアルカンデハロゲナーゼ酵素は、ｄＴＡＧとして使用することができる本発明による具体的な化合物の別の標的である。クロロアルカンペプチド結合部分（Ｃ１〜Ｃ１２、しばしば約Ｃ２〜Ｃ１０アルキルハロ基）を含む本発明による化合物を使用して、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１１年１２月６日に出願され、２０１２年６月１４日に国際公開第２０１２／０７８５５９号パンフレットとして公開されたＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６３４０１に記載される融合タンパク質または関連する診断用タンパク質に使用されるハロアルカンデハロゲナーゼ酵素を阻害および／または分解することができる。
【０５１６】
ｄＴＡＧ標的化リガンドの非限定的な例を以下の表Ｔに示し、これはｄＴＡＧとして有用なタンパク質またはアミノ酸配列を標的化することができるｄＴＡＧ標的化リガンドを表す。
表Ｔ：
【０５１７】
Ａ．ＢＲＤ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＢＲＤ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５１８】
【化６８】
2020513789.tif 000070
【０５１９】
【化６９】
2020513789.tif 000071
および
【０５２０】
【化７０】
2020513789.tif 000072
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点であり；
Ｒ’はメチルまたはエチルである）。
【０５２１】
Ｂ．ＣＲＥＢＢＰ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＣＲＥＢＢＰ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５２２】
【化７１】
2020513789.tif 000073
【０５２３】
【化７２】
2020513789.tif 000074
【０５２４】
【化７３】
2020513789.tif 000075
および
【０５２５】
【化７４】
2020513789.tif 000076
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点であり；
ＡはＮまたはＣＨであり；
ｍは０、１、２、３、４、５、６、７または８である）。
【０５２６】
Ｃ．ＳＭＡＲＣＡ４、ＰＢ１および／またはＳＭＡＲＣＡ２  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＳＭＡＲＣＡ４、ＰＢ１および／またはＳＭＡＲＣＡ２  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５２７】
【化７５】
2020513789.tif 000077
【０５２８】
【化７６】
2020513789.tif 000078
および
【０５２９】
【化７７】
2020513789.tif 000079
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点であり；
ＡはＮまたはＣＨであり；
ｍは０、１、２、３、４、５、６、７または８である）。
【０５３０】
Ｄ．ＴＲＩＭ２４および／またはＢＲＰＦ１  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＴＲＩＭ２４および／またはＢＲＰＦ１  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５３１】
【化７８】
2020513789.tif 000080
【０５３２】
【化７９】
2020513789.tif 000081
【０５３３】
【化８０】
2020513789.tif 000082
および
【０５３４】
【化８１】
2020513789.tif 000083
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点であり；
ｍは０、１、２、３、４、５、６、７または８である）。
【０５３５】
Ｅ．グルココルチコイド受容体ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるグルココルチコイドｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５３６】
【化８２】
2020513789.tif 000084
【０５３７】
【化８３】
2020513789.tif 000085
【０５３８】
【化８４】
2020513789.tif 000086
および
【０５３９】
【化８５】
2020513789.tif 000087
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０５４０】
Ｆ．エストロゲンおよび／またはアンドロゲン受容体ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるエストロゲンおよび／またはアンドロゲンｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５４１】
【化８６】
2020513789.tif 000088
【０５４２】
【化８７】
2020513789.tif 000089
【０５４３】
【化８８】
2020513789.tif 000090
【０５４４】
【化８９】
2020513789.tif 000091
および
【０５４５】
【化９０】
2020513789.tif 000092
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０５４６】
Ｇ．ＤＯＴ１Ｌ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＤＯＴ１Ｌ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５４７】
【化９１】
2020513789.tif 000093
【０５４８】
【化９２】
2020513789.tif 000094
および
【０５４９】
【化９３】
2020513789.tif 000095
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点であり；
ＡはＮまたはＣＨであり；
ｍは０、１、２、３、４、５、６、７または８である）。
【０５５０】
Ｈ．Ｒａｓ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＲａｓ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５５１】
【化９４】
2020513789.tif 000096
【０５５２】
【化９５】
2020513789.tif 000097
および
【０５５３】
【化９６】
2020513789.tif 000098
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０５５４】
Ｉ．ＲａｓＧ１２Ｃ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＲａｓＧ１２Ｃ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５５５】
【化９７】
2020513789.tif 000099
【０５５６】
【化９８】
2020513789.tif 000100
【０５５７】
【化９９】
2020513789.tif 000101
【０５５８】
【化１００】
2020513789.tif 000102
【０５５９】
【化１０１】
2020513789.tif 000103
【０５６０】
【化１０２】
2020513789.tif 000104
および
【０５６１】
【化１０３】
2020513789.tif 000105
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０５６２】
Ｊ．Ｈｅｒ３  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨｅｒ３  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５６３】
【化１０４】
2020513789.tif 000106
および
【０５６４】
【化１０５】
2020513789.tif 000107
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点であり；
Ｒ’は
【０５６５】
【化１０６】
2020513789.tif 000108
または
【０５６６】
【化１０７】
2020513789.tif 000109
である）。
【０５６７】
Ｋ．Ｂｃｌ−２またはＢｃｌ−ＸＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＢｃｌ−２またはＢｃｌ−ＸＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５６８】
【化１０８】
2020513789.tif 000110
および
【０５６９】
【化１０９】
2020513789.tif 000111
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０５７０】
Ｌ．ＨＤＡＣ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＤＡＣ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５７１】
【化１１０】
2020513789.tif 000112
および
【０５７２】
【化１１１】
2020513789.tif 000113
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０５７３】
Ｍ．ＰＰＡＲ−γ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＰＰＡＲ−γ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５７４】
【化１１２】
2020513789.tif 000114
【０５７５】
【化１１３】
2020513789.tif 000115
および
【０５７６】
【化１１４】
2020513789.tif 000116
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０５７７】
Ｎ．ＲＸＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＲＸＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５７８】
【化１１５】
2020513789.tif 000117
【０５７９】
【化１１６】
2020513789.tif 000118
【０５８０】
【化１１７】
2020513789.tif 000119
【０５８１】
【化１１８】
2020513789.tif 000120
【０５８２】
【化１１９】
2020513789.tif 000121
【０５８３】
【化１２０】
2020513789.tif 000122
【０５８４】
【化１２１】
2020513789.tif 000123
【０５８５】
【化１２２】
2020513789.tif 000124
【０５８６】
【化１２３】
2020513789.tif 000125
【０５８７】
【化１２４】
2020513789.tif 000126
【０５８８】
【化１２５】
2020513789.tif 000127
【０５８９】
【化１２６】
2020513789.tif 000128
および
【０５９０】
【化１２７】
2020513789.tif 000129
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０５９１】
Ｏ．ＤＨＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＤＨＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０５９２】
【化１２８】
2020513789.tif 000130
【０５９３】
【化１２９】
2020513789.tif 000131
【０５９４】
【化１３０】
2020513789.tif 000132
【０５９５】
【化１３１】
2020513789.tif 000133
【０５９６】
【化１３２】
2020513789.tif 000134
【０５９７】
【化１３３】
2020513789.tif 000135
【０５９８】
【化１３４】
2020513789.tif 000136
および
【０５９９】
【化１３５】
2020513789.tif 000137
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０６００】
Ｐ．ＥＧＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＥＧＦＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．エルロチニブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ネラチニブおよびダコミチニブを含む、Ｌ８５８Ｒ変異ＥＧＦＲを標的化する標的化リガンド。
【０６０１】
【化１３６】
2020513789.tif 000138
【０６０２】
【化１３７】
2020513789.tif 000139
【０６０３】
【化１３８】
2020513789.tif 000140
【０６０４】
【化１３９】
2020513789.tif 000141
【０６０５】
【化１４０】
2020513789.tif 000142
【０６０６】
【化１４１】
2020513789.tif 000143
【０６０７】
【化１４２】
2020513789.tif 000144
【０６０８】
【化１４３】
2020513789.tif 000145
【０６０９】
【化１４４】
2020513789.tif 000146
【０６１０】
【化１４５】
2020513789.tif 000147
【０６１１】
【化１４６】
2020513789.tif 000148
【０６１２】
【化１４７】
2020513789.tif 000149
【０６１３】
【化１４８】
2020513789.tif 000150
【０６１４】
【化１４９】
2020513789.tif 000151
【０６１５】
【化１５０】
2020513789.tif 000152
【０６１６】
【化１５１】
2020513789.tif 000153
【０６１７】
【化１５２】
2020513789.tif 000154
【０６１８】
【化１５３】
2020513789.tif 000155
【０６１９】
【化１５４】
2020513789.tif 000156
【０６２０】
【化１５５】
2020513789.tif 000157
【０６２１】
【化１５６】
2020513789.tif 000158
【０６２２】
【化１５７】
2020513789.tif 000159
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０６２３】
２．オシメルチニブ、ロシレチニブ、オルムチニブ、ナコチニブ、ナザルチニブ、ＰＦ−０６７４７７７５、イコチニブ、ネラチニブ、アビチニブ、タルロキソチニブ、ＰＦ−０６４５９９８、テセバチニブ、トランスチニブ、ＷＺ−３１４６、ＷＺ８０４０およびＣＮＸ−２００６を含む、Ｔ７９０Ｍ変異ＥＧＦＲを標的化する標的化リガンド：
【０６２４】
【化１５８】
2020513789.tif 000160
【０６２５】
【化１５９】
2020513789.tif 000161
【０６２６】
【化１６０】
2020513789.tif 000162
【０６２７】
【化１６１】
2020513789.tif 000163
【０６２８】
【化１６２】
2020513789.tif 000164
【０６２９】
【化１６３】
2020513789.tif 000165
【０６３０】
【化１６４】
2020513789.tif 000166
【０６３１】
【化１６５】
2020513789.tif 000167
【０６３２】
【化１６６】
2020513789.tif 000168
【０６３３】
【化１６７】
2020513789.tif 000169
【０６３４】
【化１６８】
2020513789.tif 000170
【０６３５】
【化１６９】
2020513789.tif 000171
【０６３６】
【化１７０】
2020513789.tif 000172
【０６３７】
【化１７１】
2020513789.tif 000173
【０６３８】
【化１７２】
2020513789.tif 000174
【０６３９】
【化１７３】
2020513789.tif 000175
【０６４０】
【化１７４】
2020513789.tif 000176
【０６４１】
【化１７５】
2020513789.tif 000177
【０６４２】
【化１７６】
2020513789.tif 000178
【０６４３】
【化１７７】
2020513789.tif 000179
【０６４４】
【化１７８】
2020513789.tif 000180
【０６４５】
【化１７９】
2020513789.tif 000181
【０６４６】
【化１８０】
2020513789.tif 000182
【０６４７】
【化１８１】
2020513789.tif 000183
【０６４８】
【化１８２】
2020513789.tif 000184
【０６４９】
【化１８３】
2020513789.tif 000185
【０６５０】
【化１８４】
2020513789.tif 000186
【０６５１】
【化１８５】
2020513789.tif 000187
【０６５２】
【化１８６】
2020513789.tif 000188
【０６５３】
【化１８７】
2020513789.tif 000189
【０６５４】
【化１８８】
2020513789.tif 000190
【０６５５】
【化１８９】
2020513789.tif 000191
【０６５６】
【化１９０】
2020513789.tif 000192
【０６５７】
【化１９１】
2020513789.tif 000193
【０６５８】
【化１９２】
2020513789.tif 000194
【０６５９】
【化１９３】
2020513789.tif 000195
【０６６０】
【化１９４】
2020513789.tif 000196
【０６６１】
【化１９５】
2020513789.tif 000197
【０６６２】
【化１９６】
2020513789.tif 000198
【０６６３】
【化１９７】
2020513789.tif 000199
【０６６４】
【化１９８】
2020513789.tif 000200
【０６６５】
【化１９９】
2020513789.tif 000201
【０６６６】
【化２００】
2020513789.tif 000202
【０６６７】
【化２０１】
2020513789.tif 000203
【０６６８】
【化２０２】
2020513789.tif 000204
【０６６９】
【化２０３】
2020513789.tif 000205
【０６７０】
【化２０４】
2020513789.tif 000206
【０６７１】
【化２０５】
2020513789.tif 000207
【０６７２】
【化２０６】
2020513789.tif 000208
【０６７３】
【化２０７】
2020513789.tif 000209
【０６７４】
【化２０８】
2020513789.tif 000210
【０６７５】
【化２０９】
2020513789.tif 000211
【０６７６】
【化２１０】
2020513789.tif 000212
【０６７７】
【化２１１】
2020513789.tif 000213
【０６７８】
【化２１２】
2020513789.tif 000214
【０６７９】
【化２１３】
2020513789.tif 000215
【０６８０】
【化２１４】
2020513789.tif 000216
【０６８１】
【化２１５】
2020513789.tif 000217
【０６８２】
【化２１６】
2020513789.tif 000218
【０６８３】
【化２１７】
2020513789.tif 000219
【０６８４】
【化２１８】
2020513789.tif 000220
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０６８５】
３．ＥＡＩ０４５を含むＣ７９７Ｓ変異ＥＧＦＲを標的化する標的化リガンド：
【０６８６】
【化２１９】
2020513789.tif 000221
【０６８７】
【化２２０】
2020513789.tif 000222
【０６８８】
【化２２１】
2020513789.tif 000223
【０６８９】
【化２２２】
2020513789.tif 000224
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０６９０】
Ｑ．ＢＣＲ−ＡＢＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＢＣＲ−ＡＢＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ニロチニブおよびダサチニブを含む、Ｔ３１５Ｉ変異ＢＣＲ−ＡＢＬ（ＰＤＢ番号３ＣＳ９）を標的化する標的化リガンド：
【０６９１】
【化２２３】
2020513789.tif 000225
【０６９２】
【化２２４】
2020513789.tif 000226
【０６９３】
【化２２５】
2020513789.tif 000227
【０６９４】
【化２２６】
2020513789.tif 000228
【０６９５】
【化２２７】
2020513789.tif 000229
【０６９６】
【化２２８】
2020513789.tif 000230
【０６９７】
【化２２９】
2020513789.tif 000231
【０６９８】
【化２３０】
2020513789.tif 000232
【０６９９】
【化２３１】
2020513789.tif 000233
【０７００】
【化２３２】
2020513789.tif 000234
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７０１】
２．ニロチニブ、ダサチニブ、ポナチニブおよびボスチニブを含む、ＢＣＲ−ＡＢＬを標的化する標的化リガンド：
【０７０２】
【化２３３】
2020513789.tif 000235
【０７０３】
【化２３４】
2020513789.tif 000236
【０７０４】
【化２３５】
2020513789.tif 000237
【０７０５】
【化２３６】
2020513789.tif 000238
【０７０６】
【化２３７】
2020513789.tif 000239
【０７０７】
【化２３８】
2020513789.tif 000240
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７０８】
Ｒ．ＡＬＫ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＡＬＫ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．セリチニブを含むＬ１１９６Ｍ変異ＡＬＫ（ＰＤＢ番号４ＭＫＣ）を標的化する標的化リガンド：
【０７０９】
【化２３９】
2020513789.tif 000241
【０７１０】
【化２４０】
2020513789.tif 000242
【０７１１】
【化２４１】
2020513789.tif 000243
【０７１２】
【化２４２】
2020513789.tif 000244
【０７１３】
【化２４３】
2020513789.tif 000245
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７１４】
Ｓ．ＪＡＫ２  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＪＡＫ２  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ルキソリチニブを含む、Ｖ６１７Ｆ変異ＪＡＫ２を標的化する標的化リガンド：
【０７１５】
【化２４４】
2020513789.tif 000246
【０７１６】
【化２４５】
2020513789.tif 000247
【０７１７】
【化２４６】
2020513789.tif 000248
【０７１８】
【化２４７】
2020513789.tif 000249
【０７１９】
【化２４８】
2020513789.tif 000250
【０７２０】
【化２４９】
2020513789.tif 000251
【０７２１】
【化２５０】
2020513789.tif 000252
【０７２２】
【化２５１】
2020513789.tif 000253
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７２３】
Ｔ．ＢＲＡＦ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＢＲＡＦ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ベムラフェニブを含むＶ６００Ｅ変異ＢＲＡＦ（ＰＢＤ番号３ＯＧ７）を標的化する標的化リガンド：
【０７２４】
【化２５２】
2020513789.tif 000254
【０７２５】
【化２５３】
2020513789.tif 000255
【０７２６】
【化２５４】
2020513789.tif 000256
【０７２７】
【化２５５】
2020513789.tif 000257
【０７２８】
【化２５６】
2020513789.tif 000258
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７２９】
２．ダブラフェニブを含む、ＢＲＡＦを標的化する標的化リガンド：
【０７３０】
【化２５７】
2020513789.tif 000259
【０７３１】
【化２５８】
2020513789.tif 000260
【０７３２】
【化２５９】
2020513789.tif 000261
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７３３】
Ｕ．ＬＲＲＫ２  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＬＲＲＫ２  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．
【０７３４】
【化２６０】
2020513789.tif 000262
【０７３５】
【化２６１】
2020513789.tif 000263
【０７３６】
【化２６２】
2020513789.tif 000264
【０７３７】
【化２６３】
2020513789.tif 000265
【０７３８】
【化２６４】
2020513789.tif 000266
【０７３９】
【化２６５】
2020513789.tif 000267
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）
を含む、Ｒ１４４１Ｃ変異ＬＲＲＫ２を標的化する標的化リガンド。
【０７４０】
２．
【０７４１】
【化２６６】
2020513789.tif 000268
【０７４２】
【化２６７】
2020513789.tif 000269
【０７４３】
【化２６８】
2020513789.tif 000270
【０７４４】
【化２６９】
2020513789.tif 000271
【０７４５】
【化２７０】
2020513789.tif 000272
【０７４６】
【化２７１】
2020513789.tif 000273
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）
を含む、Ｇ２０１９Ｓ変異ＬＲＲＫ２を標的化する標的化リガンド。
【０７４７】
３．
【０７４８】
【化２７２】
2020513789.tif 000274
【０７４９】
【化２７３】
2020513789.tif 000275
【０７５０】
【化２７４】
2020513789.tif 000276
【０７５１】
【化２７５】
2020513789.tif 000277
【０７５２】
【化２７６】
2020513789.tif 000278
【０７５３】
【化２７７】
2020513789.tif 000279
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）
を含む、Ｉ２０２０Ｔ変異ＬＲＲＫ２を標的化する標的化リガンド。
【０７５４】
Ｖ．ＰＤＧＦＲα  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＰＤＧＦＲα  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ＡＧ−１４７８、ＣＨＥＭＢＬ９４４３１、ドビチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、Ｊａｎｅｘ１、パゾパニブ、ＰＤ１５３０３５、ソラフェニブ、スニチニブ、ＷＨＩ−Ｐ１８０を含む、Ｔ６７４Ｉ変異ＰＤＧＦＲαを標的化する標的化リガンド：
【０７５５】
【化２７８】
2020513789.tif 000280
【０７５６】
【化２７９】
2020513789.tif 000281
【０７５７】
【化２８０】
2020513789.tif 000282
【０７５８】
【化２８１】
2020513789.tif 000283
【０７５９】
【化２８２】
2020513789.tif 000284
【０７６０】
【化２８３】
2020513789.tif 000285
【０７６１】
【化２８４】
2020513789.tif 000286
【０７６２】
【化２８５】
2020513789.tif 000287
【０７６３】
【化２８６】
2020513789.tif 000288
【０７６４】
【化２８７】
2020513789.tif 000289
【０７６５】
【化２８８】
2020513789.tif 000290
【０７６６】
【化２８９】
2020513789.tif 000291
【０７６７】
【化２９０】
2020513789.tif 000292
【０７６８】
【化２９１】
2020513789.tif 000293
【０７６９】
【化２９２】
2020513789.tif 000294
【０７７０】
【化２９３】
2020513789.tif 000295
【０７７１】
【化２９４】
2020513789.tif 000296
【０７７２】
【化２９５】
2020513789.tif 000297
【０７７３】
【化２９６】
2020513789.tif 000298
【０７７４】
【化２９７】
2020513789.tif 000299
【０７７５】
【化２９８】
2020513789.tif 000300
【０７７６】
【化２９９】
2020513789.tif 000301
【０７７７】
【化３００】
2020513789.tif 000302
【０７７８】
【化３０１】
2020513789.tif 000303
【０７７９】
【化３０２】
2020513789.tif 000304
【０７８０】
【化３０３】
2020513789.tif 000305
【０７８１】
【化３０４】
2020513789.tif 000306
【０７８２】
【化３０５】
2020513789.tif 000307
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７８３】
Ｗ．ＲＥＴ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＲＥＴ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．トザセルチブを含む、Ｇ６９１Ｓ変異ＲＥＴを標的化する標的化リガンド
【０７８４】
【化３０６】
2020513789.tif 000308
【０７８５】
【化３０７】
2020513789.tif 000309
【０７８６】
【化３０８】
2020513789.tif 000310
【０７８７】
【化３０９】
2020513789.tif 000311
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７８８】
２．トザセルチブを含む、Ｒ７４９Ｔ変異ＲＥＴを標的化する標的化リガンド
【０７８９】
【化３１０】
2020513789.tif 000312
【０７９０】
【化３１１】
2020513789.tif 000313
【０７９１】
【化３１２】
2020513789.tif 000314
【０７９２】
【化３１３】
2020513789.tif 000315
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７９３】
３．トザセルチブを含む、Ｅ７６２Ｑ変異ＲＥＴを標的化する標的化リガンド
【０７９４】
【化３１４】
2020513789.tif 000316
【０７９５】
【化３１５】
2020513789.tif 000317
【０７９６】
【化３１６】
2020513789.tif 000318
【０７９７】
【化３１７】
2020513789.tif 000319
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０７９８】
４．トザセルチブを含む、Ｙ７９１Ｆ変異ＲＥＴを標的化する標的化リガンド
【０７９９】
【化３１８】
2020513789.tif 000320
【０８００】
【化３１９】
2020513789.tif 000321
【０８０１】
【化３２０】
2020513789.tif 000322
【０８０２】
【化３２１】
2020513789.tif 000323
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０８０３】
５．トザセルチブを含むＶ８０４Ｍ変異ＲＥＴを標的化とする標的化リガンド
【０８０４】
【化３２２】
2020513789.tif 000324
【０８０５】
【化３２３】
2020513789.tif 000325
【０８０６】
【化３２４】
2020513789.tif 000326
【０８０７】
【化３２５】
2020513789.tif 000327
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０８０８】
６．トザセルチブを含む、Ｍ９１８Ｔ変異ＲＥＴを標的化する標的化リガンド
【０８０９】
【化３２６】
2020513789.tif 000328
【０８１０】
【化３２７】
2020513789.tif 000329
【０８１１】
【化３２８】
2020513789.tif 000330
【０８１２】
【化３２９】
2020513789.tif 000331
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０８１３】
Ｘ．熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用される熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ＹＫＢ（Ｎ−［４−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｃ］ピリジン−２−イル）−９Ｈ−フルオレン−９−イル］−スクシンアミド）を含む、Ｖａｌｌｅｅら、「Ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  Ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｔ  Ｓｈｏｃｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ９０（ＨＳＰ９０）  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｐａｒｔ  Ｉ：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  Ｉｍｉｄａｚｏ［４，５−Ｃ］Ｐｙｒｉｄｉｎｅｓ  ａｓ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＨＳＰ９０  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ（２０１１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５４：７２０６で特定されるＨＳＰ９０阻害剤：
【０８１４】
【化３３０】
2020513789.tif 000332
リンカー基Ｌまたは−（Ｌデグロン）基が、例えば、末端アミド基を介して結合している場合、誘導体化されている；
２．ＨＳＰ９０阻害剤ｐ５４（改変）（８−［（２，４−ジメチルフェニル）スルファニル］−３］ペンタ−４−イン−１−イル−３Ｈ−プリン−６−アミン）：
【０８１５】
【化３３１】
2020513789.tif 000333
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、末端アセチレン基を介して結合している場合、誘導体化されている；
３．構造：
【０８１６】
【化３３２】
2020513789.tif 000334
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、アミド基を介して（アミンまたはアミン上のアルキル基に）結合している場合、誘導体化されている
を有する、化合物２ＧＪ（５−［２，４−ジヒドロキシ−５−（１−メチルエチル）フェニル］−ｎ−エチル−４−［４−（モルホリン−４−イルメチル）フェニル］イソオキサゾール−３−カルボキサミド）を含む、Ｂｒｏｕｇｈら、「４，５−Ｄｉａｒｙｌｉｓｏｘａｚｏｌｅ  ＨＳＰ９０  Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ」、Ｊ．ＭＥＤ．ＣＨＥＭ．第５１巻、１９６頁（２００８）で特定されるＨＳＰ９０阻害剤（改変）；
４．構造：
【０８１７】
【化３３３】
2020513789.tif 000335
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）が、例えば、ブチル基を介して結合している場合、誘導体化されている
を有する、ＨＳＰ９０阻害剤ＰＵ３を含む、Ｗｒｉｇｈｔら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ  ｉｎ  Ｐｕｒｉｎｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ＨＳＰ９０  Ｉｓｏｆｏｒｍｓ、Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２００４年６月；１１（６）：７７５〜８５で特定されるＨＳＰ９０阻害剤（改変）；および
【０８１８】
５．ＨＳＰ９０阻害剤ゲルダナマイシン（（４Ｅ，６Ｚ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｅ，１２Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１６Ｒ）−１３−ヒドロキシ−８，１４，１９−トリメトキシ−４，１０，１２，１６−テトラメチル−３，２０，２２−トリオキソ−２−アザビシクロ［１６．３．１］（誘導体化）またはその誘導体のいずれか（例えば、１７−アルキルアミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン（「１７−ＡＡＧ」）または１７−（２−ジメチルアミノエチル）アミノ−１７−デスメトキシゲルダナマイシン（「１７−ＤＭＡＧ」））（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、アミド基を介して結合している場合、誘導体化されている）。
【０８１９】
Ｙ．キナーゼおよびホスファターゼｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるキナーゼおよびホスファターゼｄＴＡＧ標的化リガンドとしては、それだけに限らないが、以下が挙げられる：
１．エルロチニブ誘導体チロシンキナーゼ阻害剤：
【０８２０】
【化３３４】
2020513789.tif 000336
（式中、Ｒは、例えばエーテル基を介して結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である）；
２．キナーゼ阻害剤スニチニブ（誘導体化）：
【０８２１】
【化３３５】
2020513789.tif 000337
Ｒが、例えば、ピロール部分に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である場合、誘導体化されている；
３．キナーゼ阻害剤ソラフェニブ（誘導体化）：
【０８２２】
【化３３６】
2020513789.tif 000338
Ｒが、例えば、アミド部分に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である場合、誘導体化されている；
４．キナーゼ阻害剤デサチニブ（誘導体化）：
【０８２３】
【化３３７】
2020513789.tif 000339
Ｒが、例えば、ピリミジンに結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）である場合、誘導体化されている；
５．キナーゼ阻害剤ラパチニブ（誘導体化）：
【０８２４】
【化３３８】
2020513789.tif 000340
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、スルホニルメチル基の末端メチルを介して結合している場合、誘導体化されている；
６．キナーゼ阻害剤Ｕ０９−ＣＸ−５２７９（誘導体化）：
【０８２５】
【化３３９】
2020513789.tif 000341
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、アミン（アニリン）、カルボン酸またはシクロプロピル基に対してαのアミン、またはシクロプロピル基に結合している場合、誘導体化されている；
７．構造：
【０８２６】
【化３４０】
2020513789.tif 000342
ＹＩＸ（１−エチル−３−（２−｛［３−（１−メチルエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル］スルファニル｝ベンジル）尿素、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、ｉ−プロピル基を介して結合している場合、誘導体化されている；
【０８２７】
【化３４１】
2020513789.tif 000343
ＹＩＷ
１−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−３−（２−｛［３−（１−メチルエチル）［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−６−イル］スルファニル｝ベンジル）尿素
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、好ましくはｉ−プロピル基またはｔ−ブチル基のいずれかを介して結合している場合、誘導体化されている
を有する、キナーゼ阻害剤Ｙ１ＷおよびＹ１Ｘ（誘導体化）を含む、Ｍｉｌｌａｎら、Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｉｎｈａｌｅｄ  Ｐ３８  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｊ．ＭＥＤ．ＣＨＥＭ．第５４巻、７７９７頁（２０１１）で特定されるキナーゼ阻害剤；
８．構造：
【０８２８】
【化３４２】
2020513789.tif 000344
６ＴＰ
４−アミノ−２−［４−（ｔｅｒｔ−ブチルスルファモイル）フェニル］−Ｎ−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドチエノピリジン１９
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、アミド部分に結合した末端メチル基を介して結合している場合、誘導体化されている；
【０８２９】
【化３４３】
2020513789.tif 000345
０ＴＰ
４−アミノ−Ｎ−メチル−２−［４−（モルホリン−４−イル）フェニル］チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボキサミドチエノピリジン８
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、アミド部分に結合した末端メチル基を介して結合している場合、誘導体化されている
を有する、化合物６ＴＰおよび０ＴＰ（誘導体化）を含む、Ｓｃｈｅｎｋｅｌら、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈｌｙ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｔｈｉｅｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ  Ｊａｎｕｓ  Ｋｉｎａｓｅ  ２  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０１１、５４（２４）、８４４０〜８４５０頁で特定されるキナーゼ阻害剤；
９．構造：
【０８３０】
【化３４４】
2020513789.tif 000346
０７Ｕ
２−メチル−Ｎ〜１〜−［３−（ピリジン−４−イル）−２，６−ナフチリジン−１−イル］プロパン−１，２−ジアミン
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、第二級アミンまたは末端アミノ基を介して結合している場合、誘導体化されている
を有する、キナーゼ阻害剤０７Ｕを含む、Ｖａｎ  Ｅｉｓら、「２，６−Ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｎｅｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｉｓｏｚｙｍｅｓ」、Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１１年１２月１５日；２１（２４）：７３６７〜７２で特定されるキナーゼ阻害剤；
１０．構造
【０８３１】
【化３４５】
2020513789.tif 000347
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、末端ヒドロキシル基のいずれかを介して結合している場合、誘導体化されている
を有する、キナーゼ阻害剤ＹＣＦを含む、Ｌｏｕｎｔｏｓら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｋｉｎａｓｅ  ２（Ｃｈｋ２），ａ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｊ．ＳＴＲＵＣＴ．ＢＩＯＬ．第１７６巻、２９２頁（２０１１）で特定されるキナーゼ阻害剤；
１１．構造：
【０８３２】
【化３４６】
2020513789.tif 000348
ＸＫ９
Ｎ−｛４−［（１Ｅ）−Ｎ−（Ｎ−ヒドロキシカルバムイミドイル）エタンヒドラゾノイル］フェニル｝−７−ニトロ−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド
【０８３３】
【化３４７】
2020513789.tif 000349
ＮＸＰ
Ｎ−｛４−［（１Ｅ）−Ｎ−カルバムイミドイルエタンヒドラゾノイル］フェニル｝−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、末端ヒドロキシル基（ＸＫ９）またはヒドラゾン基（ＮＸＰ）を介して結合している場合、誘導体化されている
を有する、キナーゼ阻害剤ＸＫ９およびＮＸＰ（誘導体化）を含む、Ｌｏｕｎｔｏｓら、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｋｉｎａｓｅ  ２（Ｃｈｋ２），ａ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｊ．ＳＴＲＵＣＴ．ＢＩＯＬ．第１７６巻、２９２頁（２０１１）で特定されるキナーゼ阻害剤；
１２．キナーゼ阻害剤アファチニブ（誘導体化）（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［［（３Ｓ）−テトラヒドロ−３−フラニル］オキシ］−６−キナゾリニル）−４（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、脂肪族アミン基を介して結合している場合、誘導体化されている）；
１３．キナーゼ阻害剤フォスタマチニブ（誘導体化）（［６−（｛５−フルオロ−２−［（３，４，５−トリメトキシフェニル）アミノ］ピリミジン−４−イル｝アミノ）−２，２−ジメチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロ−４Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］−１，４−オキサジン−４−イル］メチル二ナトリウムホスフェート六水和物）（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、メトキシ基を介して結合している場合、誘導体化されている）；
１４．キナーゼ阻害剤ゲフィチニブ（誘導体化）（Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリン−４−イルプロポキシ）キナゾリン−４−アミン）：
【０８３４】
【化３４８】
2020513789.tif 000350
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、メトキシまたはエーテル基を介して結合している場合、誘導体化されている；
１５．キナーゼ阻害剤レンバチニブ（誘導体化）（４−［３−クロロ−４−（シクロプロピルカルバモイルアミノ）フェノキシ］−７−メトキシ−キノリン−６−カルボキサミド）（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、シクロプロピル基を介して結合している場合、誘導体化されている）；
１６．キナーゼ阻害剤バンデタニブ（誘導体化）（Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キナゾリン−４−アミン）（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、メトキシまたはヒドロキシル基を介して結合している場合、誘導体化されている）；
１７．キナーゼ阻害剤ベムラフェニブ（誘導体化）（プロパン−１−スルホン酸｛３−［５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル］−２，４−ジフルオロフェニル｝アミド）、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、スルホニルプロピル基を介して結合している場合、誘導体化されている；
１８．キナーゼ阻害剤グリベック（誘導体化）：
【０８３５】
【化３４９】
2020513789.tif 000351
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基としてのＲが、例えば、アミド基を介してまたはアニリンアミン基を介して結合している場合、誘導体化されている；
１９．キナーゼ阻害剤パゾパニブ（誘導体化）（ＶＥＧＦＲ３阻害剤）：
【０８３６】
【化３５０】
2020513789.tif 000352
Ｒが、例えば、フェニル部分に、またはアニリンアミン基を介して、結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である場合、誘導体化されている；
２０．キナーゼ阻害剤ＡＴ−９２８３（誘導体化）オーロラキナーゼ阻害剤
【０８３７】
【化３５１】
2020513789.tif 000353
（式中、Ｒは、例えば、フェニル部分に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である）；
２１．キナーゼ阻害剤ＴＡＥ６８４（誘導体化）ＡＬＫ阻害剤
【０８３８】
【化３５２】
2020513789.tif 000354
（式中、Ｒは、例えば、フェニル部分に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である）；
２２．キナーゼ阻害剤ニロタニブ（誘導体化）Ａｂｌ阻害剤：
【０８３９】
【化３５３】
2020513789.tif 000355
Ｒが、例えば、フェニル部分またはアニリンアミン基に結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である場合、誘導体化されている；
２３．キナーゼ阻害剤ＮＶＰ−ＢＳＫ８０５（誘導体化）ＪＡＫ２阻害剤
【０８４０】
【化３５４】
2020513789.tif 000356
Ｒが、例えば、フェニル部分またはジアゾール基に結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である場合、誘導体化されている；
２４．キナーゼ阻害剤クリゾチニブ誘導体化Ａｌｋ阻害剤
【０８４１】
【化３５５】
2020513789.tif 000357
Ｒが、例えば、フェニル部分またはジアゾール基に結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である場合、誘導体化されている；
２５．キナーゼ阻害剤ＪＮＪ  ＦＭＳ（誘導体化）阻害剤
【０８４２】
【化３５６】
2020513789.tif 000358
Ｒが、例えば、フェニル部分に結合しているリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である場合、誘導体化されている；
２６．キナーゼ阻害剤フォレチニブ（誘導体化）Ｍｅｔ阻害剤
【０８４３】
【化３５７】
2020513789.tif 000359
Ｒが、例えば、フェニル部分またはキノリン部分上のヒドロキシルもしくはエーテル基に結合したリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基である場合、誘導体化されている；
２７．アロステリックタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤ＰＴＰ１Ｂ（誘導体化）：
【０８４４】
【化３５８】
2020513789.tif 000360
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、示されるようにＲで結合している場合、誘導体化されている；
２８．チロシンホスファターゼのＳＨＰ−２ドメインの阻害剤（誘導体化）：
【０８４５】
【化３５９】
2020513789.tif 000361
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、Ｒで結合している場合、誘導体化されている；
２９．ＢＲＡＦ（ＢＲＡＦＶ６００Ｅ）／ＭＥＫ阻害剤（誘導体化）：
【０８４６】
【化３６０】
2020513789.tif 000362
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、Ｒで結合している場合、誘導体化されている；
３０．チロシンキナーゼＡＢＬの阻害剤（誘導体化）
【０８４７】
【化３６１】
2020513789.tif 000363
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、Ｒで結合している場合、誘導体化されている；
３１．キナーゼ阻害剤ＯＳＩ−０２７（誘導体化）ｍＴＯＲＣ１／２阻害剤
【０８４８】
【化３６２】
2020513789.tif 000364
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、Ｒで結合している場合、誘導体化されている；
３２．キナーゼ阻害剤ＯＳＩ−９３０（誘導体化）ｃ−Ｋｉｔ／ＫＤＲ阻害剤
【０８４９】
【化３６３】
2020513789.tif 000365
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、Ｒで結合している場合、誘導体化されている；および
３３．キナーゼ阻害剤ＯＳＩ−９０６（誘導体化）ＩＧＦ１Ｒ／ＩＲ阻害剤
【０８５０】
【化３６４】
2020513789.tif 000366
リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、Ｒで結合している場合、誘導体化されている。
【０８５１】
ここで、第Ｉ〜ＸＶＩＩ節に記載される実施形態のいずれにおいても、「Ｒ」は、ピペラジン部分上のリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合のための部位を示す。
【０８５２】
Ｚ．ＨＤＭ２および／またはＭＤＭ２  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＤＭ２および／またはＭＤＭ２  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．以下に記載される化合物ニュートリン−３、ニュートリン−２およびニュートリン−１（誘導体化）ならびにそのすべての誘導体および類似体を含む（またはさらに）、Ｖａｓｓｉｌｅｖら、Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐ５３  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｙ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｆ  ＭＤＭ２，  ＳＣＩＥＮＣＥ  第３０３巻、８４４〜８４８頁（２００４）およびＳｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈら、Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ：Ｅｎ  ｒｏｕｔｅ  ｔｏ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１８（２００８）５９０４〜５９０８で特定されるＨＤＭ２／ＭＤＭ２阻害剤：
【０８５３】
【化３６５】
2020513789.tif 000367
（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、メトキシ基でまたはヒドロキシル基として結合している場合、誘導体化されている）；
【０８５４】
【化３６６】
2020513789.tif 000368
（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、メトキシ基またはヒドロキシル基で結合している場合、誘導体化されている）；
【０８５５】
【化３６７】
2020513789.tif 000369
（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、メトキシ基を介してまたはヒドロキシル基として結合している場合、誘導体化されている）；および
２．トランス−４−ヨード−４’−ボラニル−カルコン
【０８５６】
【化３６８】
2020513789.tif 000370
（リンカー基Ｌまたはリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、ヒドロキシ基を介して結合している場合、誘導体化されている）。
【０８５７】
ＡＡ．ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質ｄＴＡＧ標的化リガンド：
一定の実施形態では、「ｄＴＡＧ標的化リガンド」が、ブロモ末端および末端外（ＢＥＴ）タンパク質ＢＲＤ２、ＢＲＤ３およびＢＲＤ４に結合するリガンドであり得る。ヒトＢＥＴブロモドメイン含有タンパク質を標的化する化合物には、それだけに限らないが、以下に記載される標的に関連する化合物が含まれる（式中、「Ｒ」または「リンカー」は、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基結合の部位を示す）、例えば：
１．ＪＱ１、Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓら  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＥＴ  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１０）：
【０８５８】
【化３６９】
2020513789.tif 000371
【０８５９】
【化３７０】
2020513789.tif 000372
【０８６０】
【化３７１】
2020513789.tif 000373
【０８６１】
【化３７２】
2020513789.tif 000374
【０８６２】
【化３７３】
2020513789.tif 000375
【０８６３】
【化３７４】
2020513789.tif 000376
【０８６４】
【化３７５】
2020513789.tif 000377
【０８６５】
【化３７６】
2020513789.tif 000378
２．Ｉ−ＢＥＴ、Ｎｉｃｏｄｅｍｅら  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｍｉｍｉｃ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１０）．Ｃｈｕｎｇら  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＢＥＴ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓ．Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．（２０１１）：
【０８６６】
【化３７７】
2020513789.tif 000379
【０８６７】
【化３７８】
2020513789.tif 000380
３．Ｈｅｗｉｎｇｓら  ３，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌｉｓｏｘａｚｏｌｅｓ  Ａｃｔ  ａｓ  Ａｃｅｔｙｌ−ｌｙｓｉｎｅ  Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  Ｌｉｇａｎｄｓ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１１）５４  ６７６１〜６７７０に記載される化合物。
【０８６８】
【化３７９】
2020513789.tif 000381
【０８６９】
【化３８０】
2020513789.tif 000382
４．Ｉ−ＢＥＴ１５１、Ｄａｗｓｏｎら  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＥＴ  Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｔｏ  Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ａｓ  ａｎ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ＭＬＬ−ｆｕｓｉｏｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１１）：
【０８７０】
【化３８１】
2020513789.tif 000383
【０８７１】
【化３８２】
2020513789.tif 000384
５．カルバゾール型（米国特許出願公開第２０１５／０２５６７００号明細書）
【０８７２】
【化３８３】
2020513789.tif 000385
【０８７３】
【化３８４】
2020513789.tif 000386
６．ピロロピリドン型（米国特許出願公開第２０１５／０１４８３４２号明細書）
【０８７４】
【化３８５】
2020513789.tif 000387
【０８７５】
【化３８６】
2020513789.tif 000388
７．テトラヒドロキノリン型（国際公開第２０１５／０７４０６４号パンフレット）
【０８７６】
【化３８７】
2020513789.tif 000389
８．トリアゾロピラジン型（国際公開第２０１５／０６７７７０号パンフレット）
【０８７７】
【化３８８】
2020513789.tif 000390
【０８７８】
【化３８９】
2020513789.tif 000391
９．ピリドン型（国際公開第２０１５／０２２３３２号パンフレット）
【０８７９】
【化３９０】
2020513789.tif 000392
１０．キナゾリノン型（国際公開第２０１５／０１５３１８号パンフレット）
【０８８０】
【化３９１】
2020513789.tif 000393
１１．ジヒドロピリドピラジノン型（国際公開第２０１５／０１１０８４号パンフレット）
【０８８１】
【化３９２】
2020513789.tif 000394
（ＲまたはＬまたはリンカーは、各例で、例えばリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す）。
【０８８２】
ＢＢ．ＨＤＡＣ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＤＡＣ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．Ｆｉｎｎｉｎ，Ｍ．Ｓ．ら  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  Ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  Ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＴＳＡ  ａｎｄ  ＳＡＨＡ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０、１８８〜１９３（１９９９）．
【０８８３】
【化３９３】
2020513789.tif 000395
（「Ｒ」が、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）；および
２．ＰＣＴ国際公開第０２２２５７７号パンフレット（「脱アセチル化阻害剤」）の式（Ｉ）によって定義される化合物（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、ヒドロキシル基を介して結合している場合、誘導体化されている）；
ＣＣ．ヒトリジンメチルトランスフェラーゼｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるヒトリジンメチルトランスフェラーゼｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．Ｃｈａｎｇら  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  Ｇ９ａ−Ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌｙｓｉｎｅ  Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ＢＩＸ−１２９４．Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．（２００９）１６（３）３１２．
【０８８４】
【化３９４】
2020513789.tif 000396
【０８８５】
【化３９５】
2020513789.tif 000397
（「Ｒ」が、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）；
２．Ｌｉｕ，Ｆ．ら  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ２，４−Ｄｉａｍｉｎｏ−７−ａｍｉｎｏａｌｋｏｘｙｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅ  ａｓ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  Ｇ９ａ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００９）５２（２４）７９５０．
【０８８６】
【化３９６】
2020513789.tif 000398
（「Ｒ」が、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の潜在的結合部位を示す場合、誘導体化されている）；
３．アザシチジン（誘導体化）（４−アミノ−１−（３−Ｄ−リボフラノシル−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン）（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、ヒドロキシ基またはアミノ基を介して結合している場合、誘導体化されている）；および
４．デシタビン（誘導体化）（４−アミノ−１−（２−デオキシ−ｂ−Ｄ−エリトロ−ペントフラノシル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン）（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、ヒドロキシ基またはアミノ基のいずれかを介して結合している場合、誘導体化されている）。
【０８８７】
ＤＤ．官能性によって組織化されたｄＴＡＧ標的化リガンド
血管新生阻害剤：
血管新生阻害剤には、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．Ｓａｋａｍｏｔｏら  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｒｏｔａｃｓ  ｔｏ  ｔａｒｇｅｔ  ｃａｎｃｅｒ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２００３年１２月；２（１２）：１３５０〜８に記載される１つまたは複数の構造およびリンカーとの結合を有する、ＧＡ−１（誘導体化）ならびにその誘導体および類似体；
２．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｇｏｎｚａｌｅｚら、Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００８）２７、７２０１〜７２１１に一般的に記載されるように、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基に結合し得るエストラジオール（誘導体化）；
３．Ｓａｋａｍｏｔｏら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｒｏｔａｃｓ  ｔｏ  ｔａｒｇｅｔ  ｃａｎｃｅｒ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２００３年１２月；２（１２）：１３５０〜８に一般的に記載される１つまたは複数の構造およびリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基との結合を有する、それだけに限らないが、ＤＨＴならびにその誘導体および類似体を含む、エストラジオール、テストステロン（誘導体化）および関連誘導体；および
４．Ｓａｋａｍｏｔｏら、Ｐｒｏｔａｃｓ：ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｈａｔ  ｔａｒｇｅｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｋｐ１−Ｃｕｌｌｉｎ−Ｆ  ｂｏｘ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｆｏｒ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００１年７月１７日；９８（１５）：８５５４〜９および米国特許第７，２０８，１５７号明細書に一般的に記載されるように、１つまたは複数の構造およびリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基との結合を有する、オバリシン、フマギリン（誘導体化）ならびにその誘導体および類似体。
【０８８８】
免疫抑制化合物：
免疫抑制化合物には、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌｅｖｅｌｓ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ、Ｊ．ＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ．２００４、１２６、３７４８〜３７５４に一般的に記載されるように、１つまたは複数の構造およびリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基との結合を有する、ＡＰ２１９９８（誘導体化）；
２．グルココルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロンおよびメチルプレドニゾロン）（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えば、ヒドロキシルのいずれかに結合している場合、誘導体化されている）およびベクロメタゾンジプロピオン酸エステル（リンカー基または−（Ｌ−デグロン）が、例えば、プロピオネートに結合している場合、誘導体化されている）；
３．メトトレキサート（リンカー基または−（Ｌ−デグロン）基が、例えば末端ヒドロキシルのいずれかに結合することができる場合は誘導体化されている）；
４．シクロスポリン（リンカー基または−（Ｌ−デグロン）基が、例えばブチル基のいずれかで結合することができる場合は誘導体化されている）；
５．タクロリムス（ＦＫ−５０６）およびラパマイシン（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えばメトキシ基の１つで結合することができる場合は誘導体化されている）；
６．アクチノマイシン（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基が、例えばイソプロピル基の１つで結合することができる場合は誘導体化されている）。
【０８８９】
ＥＥ．アリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＡＨＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．アピゲニン（Ｌｅｅら、Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｒｙｌ  Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｙ  ｔｈｅ  ＰＲＯＴＡＣ  Ａｐｐｒｏａｃｈ：Ａ  Ｕｓｅｆｕｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｔｏｏｌ、Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏ  Ｃｈｅｍ  第８巻、第１７号、２０５８〜２０６２頁、２００７年１１月２３日に一般的に例示されるように、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基に結合するように誘導体化されている）；および
２．Ｂｏｉｔａｎｏら、Ａｒｙｌ  Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  Ｐｒｏｍｏｔｅ  ｔｈｅ  Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １０  ２０１０年９月：第３２９巻  第５９９７号  １３４５〜１３４８頁に記載されるように、（リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−ＤＥＧＲＯＮ）が結合しているように誘導体化されている）ＳＲ１およびＬＧＣ００６。
【０８９０】
ＦＦ．ＲＡＦ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＲＡＦ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０８９１】
【化３９７】
2020513789.tif 000399
ＰＬＸ４０３２
（「Ｒ」が、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基結合の部位を示す場合、誘導体化されている）。
【０８９２】
ＧＧ．ＦＫＢＰ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＦＫＢＰ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０８９３】
【化３９８】
2020513789.tif 000400
（「Ｒ」が、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基結合の部位を示す場合、誘導体化されている）。
【０８９４】
ＨＨ．アンドロゲン受容体（ＡＲ）ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＡＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．アンドロゲン受容体のＲＵ５９０６３リガンド（誘導体化）
【０８９５】
【化３９９】
2020513789.tif 000401
（「Ｒ」が、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。
【０８９６】
２．アンドロゲン受容体のＳＡＲＭリガンド（誘導体化）
【０８９７】
【化４００】
2020513789.tif 000402
（「Ｒ」が、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。
【０８９８】
３．アンドロゲン受容体リガンドＤＨＴ（誘導体化）
【０８９９】
【化４０１】
2020513789.tif 000403
（「Ｒ」が、例えば、リンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。
【０９００】
４．ＭＤＶ３１００リガンド（誘導体化）
【０９０１】
【化４０２】
2020513789.tif 000404
５．ＡＲＮ−５０９リガンド（誘導体化）
【０９０２】
【化４０３】
2020513789.tif 000405
６．ヘキサヒドロベンゾイソオキサゾール
【０９０３】
【化４０４】
2020513789.tif 000406
７．テトラメチルシクロブタン
【０９０４】
【化４０５】
2020513789.tif 000407
ＩＩ．エストロゲン受容体（ＥＲ）ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＥＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．エストロゲン受容体リガンド
【０９０５】
【化４０６】
2020513789.tif 000408
（「Ｒ」がリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。
【０９０６】
ＪＪ．甲状腺ホルモン受容体（ＴＲ）ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＴＲ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．甲状腺ホルモン受容体リガンド（誘導体化）
【０９０７】
【化４０７】
2020513789.tif 000409
（「Ｒ」がリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示し、ＭＯＭＯがメトキシメトキシ基を示す場合、誘導体化されている）。
【０９０８】
ＫＫ．ＨＩＶプロテアーゼｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＩＶプロテアーゼｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ＨＩＶプロテアーゼの阻害剤（誘導体化）
【０９０９】
【化４０８】
2020513789.tif 000410
（「Ｒ」がリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０、５３、５２１〜５３８を参照されたい。
【０９１０】
２．ＨＩＶプロテアーゼの阻害剤
【０９１１】
【化４０９】
2020513789.tif 000411
（「Ｒ」がリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の潜在的結合部位を示す場合、誘導体化されている）。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０、５３、５２１〜５３８を参照されたい。
【０９１２】
ＬＬ．ＨＩＶインテグラーゼｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＩＶインテグラーゼｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ＨＩＶインテグラーゼの阻害剤（誘導体化）
【０９１３】
【化４１０】
2020513789.tif 000412
（「Ｒ」がリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０、５３、６４６６を参照されたい。
【０９１４】
２．ＨＩＶインテグラーゼの阻害剤（誘導体化）
【０９１５】
【化４１１】
2020513789.tif 000413
３．ＨＩＶインテグラーゼの阻害剤（誘導体化）
【０９１６】
【化４１２】
2020513789.tif 000414
（「Ｒ」がリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０、５３、６４６６を参照されたい。
【０９１７】
ＭＭ．ＨＣＶプロテアーゼｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＣＶプロテアーゼｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ＨＣＶプロテアーゼの阻害剤（誘導体化）
【０９１８】
【化４１３】
2020513789.tif 000415
（「Ｒ」がリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。
【０９１９】
ＮＮ．アシル−タンパク質チオエステラーゼ−１および−２（ＡＰＴ１およびＡＰＴ２）ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるアシル−タンパク質チオエステラーゼ−１および−２（ＡＰＴ１およびＡＰＴ２）ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ＡＰＴ１およびＡＰＴ２の阻害剤（誘導体化）
【０９２０】
【化４１４】
2020513789.tif 000416
（「Ｒ」がリンカー基Ｌまたは−（Ｌ−デグロン）基の結合部位を示す場合、誘導体化されている）。Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１１、５０、９８３８〜９８４２参照（式中、本明細書中に別途記載されるように、リンカーがデグロン基をｄＴＡＧ標的化リガンド基に結合するように、Ｌは本明細書中に別途記載されるリンカー基であり、前記デグロン基は本明細書中に別途記載される通りである）。
【０９２１】
ＯＯ．ＢＣＬ２  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＢＣＬ２  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９２２】
【化４１５】
2020513789.tif 000417
【０９２３】
【化４１６】
2020513789.tif 000418
【０９２４】
【化４１７】
2020513789.tif 000419
【０９２５】
【化４１８】
2020513789.tif 000420
および
【０９２６】
【化４１９】
2020513789.tif 000421
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９２７】
ＰＰ．ＢＣＬ−ＸＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＢＣＬ−ＸＬ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９２８】
【化４２０】
2020513789.tif 000422
【０９２９】
【化４２１】
2020513789.tif 000423
【０９３０】
【化４２２】
2020513789.tif 000424
【０９３１】
【化４２３】
2020513789.tif 000425
【０９３２】
【化４２４】
2020513789.tif 000426
【０９３３】
【化４２５】
2020513789.tif 000427
【０９３４】
【化４２６】
2020513789.tif 000428
【０９３５】
【化４２７】
2020513789.tif 000429
【０９３６】
【化４２８】
2020513789.tif 000430
【０９３７】
【化４２９】
2020513789.tif 000431
【０９３８】
【化４３０】
2020513789.tif 000432
【０９３９】
【化４３１】
2020513789.tif 000433
【０９４０】
【化４３２】
2020513789.tif 000434
【０９４１】
【化４３３】
2020513789.tif 000435
【０９４２】
【化４３４】
2020513789.tif 000436
【０９４３】
【化４３５】
2020513789.tif 000437
【０９４４】
【化４３６】
2020513789.tif 000438
【０９４５】
【化４３７】
2020513789.tif 000439
【０９４６】
【化４３８】
2020513789.tif 000440
【０９４７】
【化４３９】
2020513789.tif 000441
および
【０９４８】
【化４４０】
2020513789.tif 000442
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９４９】
ＱＱ．ＦＡ結合タンパク質ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＦＡ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９５０】
【化４４１】
2020513789.tif 000443
【０９５１】
【化４４２】
2020513789.tif 000444
および
【０９５２】
【化４４３】
2020513789.tif 000445
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９５３】
ＲＲ．ＦＬＡＰ−５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＦＬＡＰ−５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９５４】
【化４４４】
2020513789.tif 000446
および
【０９５５】
【化４４５】
2020513789.tif 000447
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９５６】
ＳＳ．ＨＤＡＣ６  ＺｎフィンガードメインｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＤＡＣ６  ＺｎフィンガードメインｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９５７】
【化４４６】
2020513789.tif 000448
および
【０９５８】
【化４４７】
2020513789.tif 000449
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９５９】
ＴＴ．クリングルドメインＶ  ４ＢＶＶ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるクリングルドメインＶ  ４ＢＶＶ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９６０】
【化４４８】
2020513789.tif 000450
【０９６１】
【化４４９】
2020513789.tif 000451
【０９６２】
【化４５０】
2020513789.tif 000452
【０９６３】
【化４５１】
2020513789.tif 000453
および
【０９６４】
【化４５２】
2020513789.tif 000454
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９６５】
ＵＵ．ラクトイルグルタチオンリアーゼｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるラクトイルグルタチオンリアーゼｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９６６】
【化４５３】
2020513789.tif 000455
【０９６７】
【化４５４】
2020513789.tif 000456
および
【０９６８】
【化４５５】
2020513789.tif 000457
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９６９】
ＶＶ．ｍＰＧＥＳ−１  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるｍＰＧＥＳ−１  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９７０】
【化４５６】
2020513789.tif 000458
【０９７１】
【化４５７】
2020513789.tif 000459
【０９７２】
【化４５８】
2020513789.tif 000460
【０９７３】
【化４５９】
2020513789.tif 000461
および
【０９７４】
【化４６０】
2020513789.tif 000462
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９７５】
ＷＷ．ＭＴＨ１  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＭＴＨ１  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９７６】
【化４６１】
2020513789.tif 000463
【０９７７】
【化４６２】
2020513789.tif 000464
【０９７８】
【化４６３】
2020513789.tif 000465
【０９７９】
【化４６４】
2020513789.tif 000466
および
【０９８０】
【化４６５】
2020513789.tif 000467
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９８１】
ＸＸ．ＰＡＲＰ１４  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＰＡＲＰ１４  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９８２】
【化４６６】
2020513789.tif 000468
【０９８３】
【化４６７】
2020513789.tif 000469
【０９８４】
【化４６８】
2020513789.tif 000470
【０９８５】
【化４６９】
2020513789.tif 000471
【０９８６】
【化４７０】
2020513789.tif 000472
【０９８７】
【化４７１】
2020513789.tif 000473
および
【０９８８】
【化４７２】
2020513789.tif 000474
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９８９】
ＹＹ．ＰＡＲＰ１５  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＰＡＲＰ１５  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９９０】
【化４７３】
2020513789.tif 000475
【０９９１】
【化４７４】
2020513789.tif 000476
【０９９２】
【化４７５】
2020513789.tif 000477
および
【０９９３】
【化４７６】
2020513789.tif 000478
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【０９９４】
ＺＺ．ＰＤＺドメインｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＰＤＺドメインｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【０９９５】
【化４７７】
2020513789.tif 000479
【０９９６】
【化４７８】
2020513789.tif 000480
【０９９７】
【化４７９】
2020513789.tif 000481
および
【０９９８】
【化４８０】
2020513789.tif 000482
（式中、
ＲおよびＲ’は１つまたは複数のリンカーが結合している点である）。
【０９９９】
ＡＡＡ．ＰＨＩＰ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＰＨＩＰ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【１０００】
【化４８１】
2020513789.tif 000483
【１００１】
【化４８２】
2020513789.tif 000484
および
【１００２】
【化４８３】
2020513789.tif 000485
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１００３】
ＢＢＢ．ホスホリパーゼＡ２ドメインｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるホスホリパーゼＡ２ドメインｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【１００４】
【化４８４】
2020513789.tif 000486
【１００５】
【化４８５】
2020513789.tif 000487
および
【１００６】
【化４８６】
2020513789.tif 000488
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１００７】
ＣＣＣ．タンパク質Ｓ１００−Ａ７  ２ＷＯＳ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるタンパク質Ｓ１００−Ａ７  ２ＷＯＳ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【１００８】
【化４８７】
2020513789.tif 000489
【１００９】
【化４８８】
2020513789.tif 000490
【１０１０】
【化４８９】
2020513789.tif 000491
【１０１１】
【化４９０】
2020513789.tif 000492
および
【１０１２】
【化４９１】
2020513789.tif 000493
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１０１３】
ＤＤＤ．サポシンＢ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書中で使用されるサポシンＢ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【１０１４】
【化４９２】
2020513789.tif 000494
【１０１５】
【化４９３】
2020513789.tif 000495
【１０１６】
【化４９４】
2020513789.tif 000496
【１０１７】
【化４９５】
2020513789.tif 000497
【１０１８】
【化４９６】
2020513789.tif 000498
【１０１９】
【化４９７】
2020513789.tif 000499
【１０２０】
【化４９８】
2020513789.tif 000500
【１０２１】
【化４９９】
2020513789.tif 000501
【１０２２】
【化５００】
2020513789.tif 000502
および
【１０２３】
【化５０１】
2020513789.tif 000503
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１０２４】
ＥＥＥ．Ｓｅｃ７  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＳｅｃ７  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【１０２５】
【化５０２】
2020513789.tif 000504
【１０２６】
【化５０３】
2020513789.tif 000505
【１０２７】
【化５０４】
2020513789.tif 000506
【１０２８】
【化５０５】
2020513789.tif 000507
【１０２９】
【化５０６】
2020513789.tif 000508
【１０３０】
【化５０７】
2020513789.tif 000509
【１０３１】
【化５０８】
2020513789.tif 000510
【１０３２】
【化５０９】
2020513789.tif 000511
【１０３３】
【化５１０】
2020513789.tif 000512
【１０３４】
【化５１１】
2020513789.tif 000513
【１０３５】
【化５１２】
2020513789.tif 000514
【１０３６】
【化５１３】
2020513789.tif 000515
【１０３７】
【化５１４】
2020513789.tif 000516
【１０３８】
【化５１５】
2020513789.tif 000517
および
【１０３９】
【化５１６】
2020513789.tif 000518
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１０４０】
ＦＦＦ．ｐｐ６０  ＳｒｃのＳＨ２ドメインｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるｐｐ６０  ＳｒｃのＳＨ２ドメインｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【１０４１】
【化５１７】
2020513789.tif 000519
【１０４２】
【化５１８】
2020513789.tif 000520
【１０４３】
【化５１９】
2020513789.tif 000521
【１０４４】
【化５２０】
2020513789.tif 000522
【１０４５】
【化５２１】
2020513789.tif 000523
【１０４６】
【化５２２】
2020513789.tif 000524
【１０４７】
【化５２３】
2020513789.tif 000525
【１０４８】
【化５２４】
2020513789.tif 000526
および
【１０４９】
【化５２５】
2020513789.tif 000527
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１０５０】
ＧＧＧ．Ｔａｎｋ１  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＴａｎｋ１  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【１０５１】
【化５２６】
2020513789.tif 000528
【１０５２】
【化５２７】
2020513789.tif 000529
【１０５３】
【化５２８】
2020513789.tif 000530
【１０５４】
【化５２９】
2020513789.tif 000531
【１０５５】
【化５３０】
2020513789.tif 000532
【１０５６】
【化５３１】
2020513789.tif 000533
および
【１０５７】
【化５３２】
2020513789.tif 000534
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１０５８】
ＨＨＨ．Ｕｂｃ９  ＳＵＭＯ  Ｅ２リガーゼＳＦ６Ｄ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＵｂｃ９  ＳＵＭＯ  Ｅ２リガーゼＳＦ６Ｄ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
【１０５９】
【化５３３】
2020513789.tif 000535
【１０６０】
【化５３４】
2020513789.tif 000536
【１０６１】
【化５３５】
2020513789.tif 000537
および
【１０６２】
【化５３６】
2020513789.tif 000538
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１０６３】
ＩＩＩ．Ｓｒｃ（ｃ−Ｓｒｃ）ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＳｒｃ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．ＡＰ２３４６４を含むＳｒｃ標的化リガンド：
【１０６４】
【化５３７】
2020513789.tif 000539
【１０６５】
【化５３８】
2020513789.tif 000540
【１０６６】
【化５３９】
2020513789.tif 000541
【１０６７】
【化５４０】
2020513789.tif 000542
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１０６８】
２．
【１０６９】
【化５４１】
2020513789.tif 000543
【１０７０】
【化５４２】
2020513789.tif 000544
【１０７１】
【化５４３】
2020513789.tif 000545
【１０７２】
【化５４４】
2020513789.tif 000546
【１０７３】
【化５４５】
2020513789.tif 000547
【１０７４】
【化５４６】
2020513789.tif 000548
【１０７５】
【化５４７】
2020513789.tif 000549
【１０７６】
【化５４８】
2020513789.tif 000550
【１０７７】
【化５４９】
2020513789.tif 000551
【１０７８】
【化５５０】
2020513789.tif 000552
【１０７９】
【化５５１】
2020513789.tif 000553
【１０８０】
【化５５２】
2020513789.tif 000554
【１０８１】
【化５５３】
2020513789.tif 000555
【１０８２】
【化５５４】
2020513789.tif 000556
【１０８３】
【化５５５】
2020513789.tif 000557
【１０８４】
【化５５６】
2020513789.tif 000558
【１０８５】
【化５５７】
2020513789.tif 000559
【１０８６】
【化５５８】
2020513789.tif 000560
【１０８７】
【化５５９】
2020513789.tif 000561
【１０８８】
【化５６０】
2020513789.tif 000562
【１０８９】
【化５６１】
2020513789.tif 000563
【１０９０】
【化５６２】
2020513789.tif 000564
【１０９１】
【化５６３】
2020513789.tif 000565
【１０９２】
【化５６４】
2020513789.tif 000566
【１０９３】
【化５６５】
2020513789.tif 000567
【１０９４】
【化５６６】
2020513789.tif 000568
【１０９５】
【化５６７】
2020513789.tif 000569
【１０９６】
【化５６８】
2020513789.tif 000570
【１０９７】
【化５６９】
2020513789.tif 000571
【１０９８】
【化５７０】
2020513789.tif 000572
【１０９９】
【化５７１】
2020513789.tif 000573
【１１００】
【化５７２】
2020513789.tif 000574
【１１０１】
【化５７３】
2020513789.tif 000575
【１１０２】
【化５７４】
2020513789.tif 000576
【１１０３】
【化５７５】
2020513789.tif 000577
【１１０４】
【化５７６】
2020513789.tif 000578
【１１０５】
【化５７７】
2020513789.tif 000579
【１１０６】
【化５７８】
2020513789.tif 000580
【１１０７】
【化５７９】
2020513789.tif 000581
【１１０８】
【化５８０】
2020513789.tif 000582
【１１０９】
【化５８１】
2020513789.tif 000583
【１１１０】
【化５８２】
2020513789.tif 000584
【１１１１】
【化５８３】
2020513789.tif 000585
【１１１２】
【化５８４】
2020513789.tif 000586
【１１１３】
【化５８５】
2020513789.tif 000587
【１１１４】
【化５８６】
2020513789.tif 000588
【１１１５】
【化５８７】
2020513789.tif 000589
【１１１６】
【化５８８】
2020513789.tif 000590
【１１１７】
【化５８９】
2020513789.tif 000591
【１１１８】
【化５９０】
2020513789.tif 000592
【１１１９】
【化５９１】
2020513789.tif 000593
【１１２０】
【化５９２】
2020513789.tif 000594
【１１２１】
【化５９３】
2020513789.tif 000595
【１１２２】
【化５９４】
2020513789.tif 000596
【１１２３】
【化５９５】
2020513789.tif 000597
【１１２４】
【化５９６】
2020513789.tif 000598
【１１２５】
【化５９７】
2020513789.tif 000599
【１１２６】
【化５９８】
2020513789.tif 000600
【１１２７】
【化５９９】
2020513789.tif 000601
【１１２８】
【化６００】
2020513789.tif 000602
【１１２９】
【化６０１】
2020513789.tif 000603
【１１３０】
【化６０２】
2020513789.tif 000604
【１１３１】
【化６０３】
2020513789.tif 000605
【１１３２】
【化６０４】
2020513789.tif 000606
【１１３３】
【化６０５】
2020513789.tif 000607
【１１３４】
【化６０６】
2020513789.tif 000608
【１１３５】
【化６０７】
2020513789.tif 000609
【１１３６】
【化６０８】
2020513789.tif 000610
【１１３７】
【化６０９】
2020513789.tif 000611
【１１３８】
【化６１０】
2020513789.tif 000612
【１１３９】
【化６１１】
2020513789.tif 000613
【１１４０】
【化６１２】
2020513789.tif 000614
【１１４１】
【化６１３】
2020513789.tif 000615
【１１４２】
【化６１４】
2020513789.tif 000616
【１１４３】
【化６１５】
2020513789.tif 000617
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）
を含む、Ｓｒｃ−ＡＳ１および／またはＳｒｃ  ＡＳ２標的化リガンド。
【１１４４】
ＪＪＪ．ＪＡＫ３  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＪＡＫ３  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．トファシチニブを含む、ＪＡＫ３を標的化する標的化リガンド：
【１１４５】
【化６１６】
2020513789.tif 000618
【１１４６】
【化６１７】
2020513789.tif 000619
【１１４７】
【化６１８】
2020513789.tif 000620
【１１４８】
【化６１９】
2020513789.tif 000621
【１１４９】
【化６２０】
2020513789.tif 000622
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１１５０】
ＫＫＫ．Ａｂｌ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＡｂｌ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．トファシチニブおよびポナチニブを含む、Ａｂｌを標的化する標的化リガンド：
【１１５１】
【化６２１】
2020513789.tif 000623
【１１５２】
【化６２２】
2020513789.tif 000624
【１１５３】
【化６２３】
2020513789.tif 000625
【１１５４】
【化６２４】
2020513789.tif 000626
【１１５５】
【化６２５】
2020513789.tif 000627
【１１５６】
【化６２６】
2020513789.tif 000628
【１１５７】
【化６２７】
2020513789.tif 000629
【１１５８】
【化６２８】
2020513789.tif 000630
【１１５９】
【化６２９】
2020513789.tif 000631
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１１６０】
ＬＬＬ．ＭＥＫ１  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＭＥＫ１  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．  ＰＤ３１８０８８、トラメチニブおよびＧ−５７３を含む、ＭＥＫ１を標的化する標的化リガンド：
【１１６１】
【化６３０】
2020513789.tif 000632
【１１６２】
【化６３１】
2020513789.tif 000633
【１１６３】
【化６３２】
2020513789.tif 000634
【１１６４】
【化６３３】
2020513789.tif 000635
【１１６５】
【化６３４】
2020513789.tif 000636
【１１６６】
【化６３５】
2020513789.tif 000637
【１１６７】
【化６３６】
2020513789.tif 000638
【１１６８】
【化６３７】
2020513789.tif 000639
【１１６９】
【化６３８】
2020513789.tif 000640
【１１７０】
【化６３９】
2020513789.tif 000641
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１１７１】
ＭＭＭ．ＫＩＴ  ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＫＩＴ  ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．レゴラフェニブを含む、ＫＩＴを標的化する標的化リガンド：
【１１７２】
【化６４０】
2020513789.tif 000642
【１１７３】
【化６４１】
2020513789.tif 000643
【１１７４】
【化６４２】
2020513789.tif 000644
【１１７５】
【化６４３】
2020513789.tif 000645
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１１７６】
ＮＮＮ．ＨＩＶ逆転写酵素ｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＩＶ逆転写酵素ｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．エファビレンツ、テノホビル、エムトリシタビン、リトナビル、ラルテグラビルおよびアタザナビルを含む、ＨＩＶ逆転写酵素を標的化する標的化リガンド：
【１１７７】
【化６４４】
2020513789.tif 000646
【１１７８】
【化６４５】
2020513789.tif 000647
【１１７９】
【化６４６】
2020513789.tif 000648
【１１８０】
【化６４７】
2020513789.tif 000649
【１１８１】
【化６４８】
2020513789.tif 000650
【１１８２】
【化６４９】
2020513789.tif 000651
【１１８３】
【化６５０】
2020513789.tif 000652
【１１８４】
【化６５１】
2020513789.tif 000653
【１１８５】
【化６５２】
2020513789.tif 000654
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１１８６】
ＯＯＯ．ＨＩＶプロテアーゼｄＴＡＧ標的化リガンド：
本明細書で使用されるＨＩＶプロテアーゼｄＴＡＧ標的化リガンドには、それだけに限らないが、以下が含まれる：
１．リトナビル、ラルテグラビルおよびアタザナビルを含む、ＨＩＶプロテアーゼを標的化する標的化リガンド：
【１１８７】
【化６５３】
2020513789.tif 000655
【１１８８】
【化６５４】
2020513789.tif 000656
【１１８９】
【化６５５】
2020513789.tif 000657
【１１９０】
【化６５６】
2020513789.tif 000658
【１１９１】
【化６５７】
2020513789.tif 000659
【１１９２】
【化６５８】
2020513789.tif 000660
【１１９３】
【化６５９】
2020513789.tif 000661
【１１９４】
【化６６０】
2020513789.tif 000662
【１１９５】
【化６６１】
2020513789.tif 000663
（式中、
Ｒはリンカーが結合している点である）。
【１１９６】
一実施形態では、表Ｔの上記のｄＴＡＧ標的化リガンドのいずれかを使用して、本明細書に記載される任意のｄＴＡＧを標的化する。
【１１９７】
多くのｄＴａｇ標的化リガンドは、２つ以上のｄＴＡＧに結合することができ、例えば、アファチニブは、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２およびＥｒｂＢ４タンパク質に結合する。これにより、表Ｚに例示されるように多くのタンパク質の二重攻撃が可能になる。一実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが表Ｚの「ｄＴＡＧ標的化リガンド」列から選択され、ｄＴＡＧが対応する「ｄＴＡＧ」行から選択される。
【１１９８】
表Ｚ．ｄＴＡＧ標的化リガンドと対応するｄＴＡＧ
【１１９９】
【表１Ｚ−１】
2020513789.tif 000664
【１２００】
【表１Ｚ−２】
2020513789.tif 000665
【１２０１】
【表１Ｚ−３】
2020513789.tif 000666
【１２０２】
【表１Ｚ−４】
2020513789.tif 000667
【１２０３】
【表１Ｚ−５】
2020513789.tif 000668
【１２０４】
【表１Ｚ−６】
2020513789.tif 000669
【１２０５】
【表１Ｚ−７】
2020513789.tif 000670
【１２０６】
【表１Ｚ−８】
2020513789.tif 000671
【１２０７】
【表１Ｚ−９】
2020513789.tif 000672
【１２０８】
【表１Ｚ−１０】
2020513789.tif 000673
【１２０９】
【表１Ｚ−１１】
2020513789.tif 000674
【１２１０】
【表１Ｚ−１２】
2020513789.tif 000675
【１２１１】
【表１Ｚ−１３】
2020513789.tif 000676
【１２１２】
【表１Ｚ−１４】
2020513789.tif 000677
【１２１３】
【表１Ｚ−１５】
2020513789.tif 000678
【１２１４】
【表１Ｚ−１６】
2020513789.tif 000679
【１２１５】
【表１Ｚ−１７】
2020513789.tif 000680
【１２１６】
【表１Ｚ−１８】
2020513789.tif 000681
【１２１７】
特定の実施形態では、本出願は、表１に示されるｄＴＡＧ標的化リガンドを含む化合物を含む。
【１２１８】
表１．ｄＴＡＧ標的化リガンド１〜６
【１２１９】
【表１−１】
2020513789.tif 000682
【１２２０】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが式ＴＬ−Ｉの化合物：
【１２２１】
【化６６２】
2020513789.tif 000683
またはその薬学的に許容される塩（式中、
【１２２２】
【化６６３】
2020513789.tif 000684
は
【１２２３】
【化６６４】
2020513789.tif 000685
または
【１２２４】
【化６６５】
2020513789.tif 000686
であり；
Ａ１はＳまたはＣ＝Ｃであり；
Ａ２はＮＲａ５またはＯであり；
ｎｎ１は０、１または２であり；
各Ｒａ１は独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、（ＣＨ２）０〜３−ＣＮ、（ＣＨ２）０〜３−ハロゲン、（ＣＨ２）０〜３−ＯＨ、（ＣＨ２）０〜３−Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、Ｃ（Ｏ）ＮＲａ５Ｌ、ＯＬ、ＮＲａ５ＬまたはＬであり；
Ｒａ２はＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）０〜３−ヘテロシクリル、（ＣＨ２）０〜３−フェニルまたはＬであり、ヘテロシクリルは、１個の飽和５員または６員環ならびに１〜２個のＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を含み、場合によりＣ１〜Ｃ３アルキル、ＬまたはＣ（Ｏ）Ｌで置換されており、フェニルは場合によりＣ１〜Ｃ３アルキル、ＣＮ、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシまたはＬで置換されており；
ｎｎ２は０、１、２または３であり；
各Ｒａ３は独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、（ＣＨ２）０〜３−ＣＮ、（ＣＨ２）０〜３−ハロゲン、ＬまたはＣ（Ｏ）ＮＲａ５Ｌであり；
Ｒａ４はＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒａ５はＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｌはリンカーである）
であり、
ただし、式ＴＬ−Ｉの化合物がただ１個のＬで置換されている。
【１２２５】
一定の実施形態では、
【１２２６】
【化６６６】
2020513789.tif 000687
が
【１２２７】
【化６６７】
2020513789.tif 000688
である。
【１２２８】
一定の実施形態では、
【１２２９】
【化６６８】
2020513789.tif 000689
が
【１２３０】
【化６６９】
2020513789.tif 000690
である。
【１２３１】
一定の実施形態では、Ａ１がＳである。
【１２３２】
一定の実施形態では、Ａ１がＣ＝Ｃである。
【１２３３】
一定の実施形態では、Ａ２がＮＲａ５である。さらなる実施形態では、Ｒａ５がＨである。他の実施形態では、Ｒａ５がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。さらなる実施形態では、Ｒａ５がメチルである。
【１２３４】
一定の実施形態では、Ａ２がＯである。
【１２３５】
一定の実施形態では、ｎｎ１が０である。
【１２３６】
一定の実施形態では、ｎｎ１が１である。
【１２３７】
一定の実施形態では、ｎｎ１が２である。
【１２３８】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ１がメチルである。さらなる実施形態では、２個のＲａ１がメチルである。
【１２３９】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ１が、ＣＮ、（ＣＨ２）−ＣＮ、（ＣＨ２）２−ＣＮまたは（ＣＨ２）３−ＣＮである。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ１が（ＣＨ２）−ＣＮである。
【１２４０】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ１が、ハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）、（ＣＨ２）−ハロゲン、（ＣＨ２）２−ハロゲンまたは（ＣＨ２）３−ハロゲンである。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ１が、Ｃｌ、（ＣＨ２）−Ｃｌ、（ＣＨ２）２−Ｃｌまたは（ＣＨ２）３−Ｃｌである。
【１２４１】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ１が、ＯＨ、（ＣＨ２）−ＯＨ、（ＣＨ２）２−ＯＨまたは（ＣＨ２）３−ＯＨである。
【１２４２】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ１が、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシもしくはプロポキシ）、（ＣＨ２）−Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、（ＣＨ２）２−Ｃ１〜Ｃ３アルコキシまたは（ＣＨ２）３−Ｃ１〜Ｃ３アルコキシである。一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ１がメトキシである。
【１２４３】
一定の実施形態では、１個のＲａ１がＣ（Ｏ）ＮＲａ５Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒａ５がＨである。他の実施形態では、Ｒａ５がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。
【１２４４】
一定の実施形態では、１個のＲａ１がＯＬである。
【１２４５】
一定の実施形態では、１個のＲａ１がＮＲａ５Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒａ５がＨである。他の実施形態では、Ｒａ５がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。他の実施形態では、Ｒａ５がメチルである。
【１２４６】
一定の実施形態では、１個のＲａ１がＬである。
【１２４７】
一定の実施形態では、Ｒａ２がＨである。
【１２４８】
一定の実施形態では、Ｒａ２が直鎖Ｃ１〜Ｃ６または分岐Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチルもしくはヘキシル）である。さらなる実施形態では、Ｒａ２がメチル、エチルまたはｔ−ブチルである。
【１２４９】
一定の実施態様では、Ｒａ２が、ヘテロシクリル、（ＣＨ２）−ヘテロシクリル、（ＣＨ２）２−ヘテロシクリルまたは（ＣＨ２）３−ヘテロシクリルである。さらなる実施形態では、Ｒａ２が（ＣＨ２）３−ヘテロシクリルである。さらなる実施形態では、ヘテロシクリルが、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ヘキサヒドロピリミジニル、モルホリニルおよびチオモルホリニルから選択される。さらなる実施形態では、ヘテロシクリルがピペラジニルである。
【１２５０】
一定の実施形態では、ヘテロシクリルが、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）で置換されている。
【１２５１】
一定の実施形態では、ヘテロシクリルがＣ（Ｏ）Ｌで置換されている。
【１２５２】
一定の実施形態では、ヘテロシクリルがＬで置換されている。
【１２５３】
一定の実施形態では、Ｒａ２が、フェニル、（ＣＨ２）−フェニル、（ＣＨ２）２−フェニルまたは（ＣＨ２）３−フェニルである。さらなる実施形態では、Ｒａ２がフェニルである。
【１２５４】
一定の実施形態では、フェニルが、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）で置換されている。一定の実施形態では、フェニルがＣＮで置換されている。一定の実施形態では、フェニルがハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）で置換されている。一定の実施形態では、フェニルがＯＨで置換されている。一定の実施形態では、フェニルがＣ１〜Ｃ３アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシまたはプロポキシ）で置換されている。
【１２５５】
一定の実施形態では、フェニルがＬで置換されている。
【１２５６】
一定の実施形態では、Ｒａ２がＬである。
【１２５７】
一定の実施形態では、ｎｎ２が０である。
【１２５８】
一定の実施形態では、ｎｎ２が１である。
【１２５９】
一定の実施形態では、ｎｎ２が２である。
【１２６０】
一定の実施形態では、ｎｎ２が３である。
【１２６１】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ３が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ３がメチルである。
【１２６２】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ３が、ＣＮ、（ＣＨ２）−ＣＮ、（ＣＨ２）２−ＣＮまたは（ＣＨ２）３−ＣＮである。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ３がＣＮである。
【１２６３】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ３が、ハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）、（ＣＨ２）−ハロゲン、（ＣＨ２）２−ハロゲンまたは（ＣＨ２）３−ハロゲンである。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ３が、Ｃｌ、（ＣＨ２）−Ｃｌ、（ＣＨ２）２−Ｃｌまたは（ＣＨ２）３−Ｃｌである。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ３がＣｌである。
【１２６４】
一定の実施形態では、１個のＲａ３がＬである。
【１２６５】
一定の実施形態では、１個のＲａ３がＣ（Ｏ）ＮＲａ５Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒａ５がＨである。他の実施形態では、Ｒａ５がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。
【１２６６】
一定の実施形態では、Ｒａ４が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。さらなる実施形態では、Ｒａ４がメチルである。
【１２６７】
特定の実施態様では、Ｒａ５がＨである。
【１２６８】
一定の実施形態では、Ｒａ５が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。さらなる実施形態では、Ｒａ５がメチルである。
【１２６９】
一定の実施形態では、
【１２７０】
【化６７０】
2020513789.tif 000691
が
【１２７１】
【化６７１】
2020513789.tif 000692
であり、Ａ１がＳである。
【１２７２】
一定の実施形態では、
【１２７３】
【化６７２】
2020513789.tif 000693
が
【１２７４】
【化６７３】
2020513789.tif 000694
であり、Ａ１がＣ＝Ｃである。
【１２７５】
一定の実施形態では、
【１２７６】
【化６７４】
2020513789.tif 000695
が
【１２７７】
【化６７５】
2020513789.tif 000696
であり、Ａ１がＣ＝Ｃである。
【１２７８】
一定の実施形態では、Ａ２がＮＨであり、Ｒａ２が（ＣＨ２）０〜３−ヘテロシクリルである。さらなる実施形態では、Ｒａ２が（ＣＨ２）３−ヘテロシクリルである。さらなる実施形態では、ヘテロシクリルがピペラジニルである。さらなる実施形態では、ヘテロシクリルがＣ１〜Ｃ３アルキル、ＬまたはＣ（Ｏ）Ｌで置換されている。
【１２７９】
一定の実施形態では、Ａ２がＮＨであり、Ｒａ２が（ＣＨ２）０〜３−フェニルである。さらなる実施形態では、Ｒａ２がフェニルである。さらなる実施形態では、フェニルがＯＨまたはＬで置換されている。
【１２８０】
一定の実施形態では、Ａ２がＮＨであり、Ｒａ２がＬである。
【１２８１】
一定の実施形態では、Ａ２がＮＨであり、Ｒａ２がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。さらなる実施形態では、Ｒａ２がＣ１〜Ｃ４アルキルである。
【１２８２】
一定の実施形態では、Ａ２がＯであり、Ｒａ２がＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルである。さらなる実施形態では、Ｒａ２がＣ１〜Ｃ４アルキルである。
【１２８３】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、式ＴＬ−Ｉ１の化合物：
【１２８４】
【化６７６】
2020513789.tif 000697
またはその薬学的に許容される塩（式中、Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２はそれぞれ式ＴＬ−Ｉで上に定義される通りである）である。
【１２８５】
Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２の各々は、式ＴＬ−Ｉで上記の部分から選択され得る。Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２のあるものについて定義される部分の各々を、式ＴＬ−Ｉで上記のＡ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２の他について定義される部分のいずれかと組み合わせることができる。
【１２８６】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、式ＴＬ−Ｉ１ａ〜ＴＬ−Ｉ１ｄの化合物：
【１２８７】
【化６７７】
2020513789.tif 000698
【１２８８】
【化６７８】
2020513789.tif 000699
【１２８９】
【化６７９】
2020513789.tif 000700
もしくは
【１２９０】
【化６８０】
2020513789.tif 000701
またはその薬学的に許容される塩（式中、
各Ｒａ６は独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、（ＣＨ２）０〜３−ＣＮ、（ＣＨ２）０〜３−ハロゲン、（ＣＨ２）０〜３−ＯＨまたは（ＣＨ２）０〜３−Ｃ１〜Ｃ３アルコキシであり；
Ｒａ７は（ＣＨ２）０〜３−ヘテロシクリル、（ＣＨ２）０〜３−フェニルまたはＬであり、ヘテロシクリルは、１個の飽和５員または６員環ならびに１〜２個のＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を含み、ＬまたはＣ（Ｏ）Ｌで置換されており、フェニルはＬで置換されており；
Ｒａ８はＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）０〜３−ヘテロシクリルまたは（ＣＨ２）０〜３−フェニルであり、ヘテロシクリルは、１個の飽和５員または６員環ならびに１〜２個のＮ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子を含み、場合によりＣ１〜Ｃ３アルキルで置換されており、フェニルは場合によりＣ１〜Ｃ３アルキル、ＣＮ、ハロゲン、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ３アルコキシで置換されており；
Ｒａ１０はＣ１〜Ｃ３アルキル、（ＣＨ２）０〜３−ＣＮまたは（ＣＨ２）０〜３−ハロゲンであり；
Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびＬはそれぞれ、式ＴＬ−Ｉで上に定義される通りである）
である。
【１２９１】
一定の実施形態では、ｎｎ１が０である。
【１２９２】
一定の実施形態では、ｎｎ１が１である。
【１２９３】
一定の実施形態では、ｎｎ１が２である。
【１２９４】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ６が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ６がメチルである。さらなる実施形態では、２個のＲａ６がメチルである。
【１２９５】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ６が、ＣＮ、（ＣＨ２）−ＣＮ、（ＣＨ２）２−ＣＮまたは（ＣＨ２）３−ＣＮである。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ６が（ＣＨ２）−ＣＮである。
【１２９６】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ６が、ハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）、（ＣＨ２）−ハロゲン、（ＣＨ２）２−ハロゲンまたは（ＣＨ２）３−ハロゲンである。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲａ６が、Ｃｌ、（ＣＨ２）−Ｃｌ、（ＣＨ２）２−Ｃｌまたは（ＣＨ２）３−Ｃｌである。
【１２９７】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ６が、ＯＨ、（ＣＨ２）−ＯＨ、（ＣＨ２）２−ＯＨまたは（ＣＨ２）３−ＯＨである。
【１２９８】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ６が、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシもしくはプロポキシ）、（ＣＨ２）−Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、（ＣＨ２）２−Ｃ１〜Ｃ３アルコキシまたは（ＣＨ２）３−Ｃ１〜Ｃ３アルコキシである。一定の実施形態では、少なくとも１個のＲａ６がメトキシである。
【１２９９】
一定の実施態様では、Ｒａ７が、ヘテロシクリル、（ＣＨ２）−ヘテロシクリル、（ＣＨ２）２−ヘテロシクリルまたは（ＣＨ２）３−ヘテロシクリルである。さらなる実施形態では、Ｒａ７が（ＣＨ２）３−ヘテロシクリルである。さらなる実施形態では、ヘテロシクリルが、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ヘキサヒドロピリミジニル、モルホリニルおよびチオモルホリニルから選択される。さらなる実施形態では、ヘテロシクリルがピペラジニルである。
【１３００】
一定の実施形態では、ヘテロシクリルがＣ（Ｏ）Ｌで置換されている。
【１３０１】
一定の実施形態では、ヘテロシクリルがＬで置換されている。
【１３０２】
一定の実施形態では、Ｒａ７が、フェニル、（ＣＨ２）−フェニル、（ＣＨ２）２−フェニルまたは（ＣＨ２）３−フェニルである。さらなる実施形態では、Ｒａ７がフェニルである。
【１３０３】
一定の実施形態では、Ｒａ７がＬである。
【１３０４】
一定の実施形態では、Ｒａ８がＨである。
【１３０５】
一定の実施形態では、Ｒａ８が直鎖Ｃ１〜Ｃ６または分岐Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチルもしくはヘキシル）である。さらなる実施形態では、Ｒａ８がメチル、エチルまたはｔ−ブチルである。
【１３０６】
一定の実施態様では、Ｒａ８が、ヘテロシクリル、（ＣＨ２）−ヘテロシクリル、（ＣＨ２）２−ヘテロシクリルまたは（ＣＨ２）３−ヘテロシクリルである。さらなる実施形態では、Ｒａ８が（ＣＨ２）３−ヘテロシクリルである。さらなる実施形態では、ヘテロシクリルが、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ヘキサヒドロピリミジニル、モルホリニルおよびチオモルホリニルから選択される。さらなる実施形態では、ヘテロシクリルがピペラジニルである。
【１３０７】
一定の実施形態では、ヘテロシクリルが、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）で置換されている。
【１３０８】
一定の実施形態では、Ｒａ８が、フェニル、（ＣＨ２）−フェニル、（ＣＨ２）２−フェニルまたは（ＣＨ２）３−フェニルである。さらなる実施形態では、Ｒａ８がフェニルである。
【１３０９】
一定の実施形態では、フェニルが、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）で置換されている。一定の実施形態では、フェニルがＣＮで置換されている。一定の実施形態では、フェニルがハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）で置換されている。一定の実施形態では、フェニルがＯＨで置換されている。一定の実施形態では、フェニルがＣ１〜Ｃ３アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシまたはプロポキシ）で置換されている。
【１３１０】
一定の実施形態では、Ｒａ１０が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。
【１３１１】
一定の実施形態では、Ｒａ１０が、ＣＮ、（ＣＨ２）−ＣＮ、（ＣＨ２）２−ＣＮまたは（ＣＨ２）３−ＣＮである。
【１３１２】
一定の実施形態では、Ｒａ１０が、ハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）、（ＣＨ２）−ハロゲン、（ＣＨ２）２−ハロゲンまたは（ＣＨ２）３−ハロゲンである。さらなる実施形態では、Ｒａ１０が、Ｃｌ、（ＣＨ２）−Ｃｌ、（ＣＨ２）２−Ｃｌまたは（ＣＨ２）３−Ｃｌである。さらなる実施形態では、Ｒａ１０がＣｌである。
【１３１３】
Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５およびｎｎ１の各々は、式ＴＬ−Ｉで上記の部分から選択され得る。Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８、Ｒａ１０およびｎｎ１のあるものについて定義される部分の各々を、式ＴＬ−Ｉで上記のＡ２、Ｒａ４、Ｒａ５、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８、Ｒａ１０およびｎｎ１の他について定義される部分のいずれかと組み合わせることができる。
【１３１４】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、式ＴＬ−Ｉ２の化合物：
【１３１５】
【化６８１】
2020513789.tif 000702
またはその薬学的に許容される塩（式中、Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２はそれぞれ式ＴＬ−Ｉで上に定義される通りである）である。
【１３１６】
Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２の各々は、式ＴＬ−Ｉで上記の部分から選択され得る。Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２のあるものについて定義される部分の各々を、式ＴＬ−Ｉで上記のＡ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２の他について定義される部分のいずれかと組み合わせることができる。
【１３１７】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、式ＴＬ−Ｉ２ａ〜ＴＬ−Ｉ２ｃの化合物：
【１３１８】
【化６８２】
2020513789.tif 000703
【１３１９】
【化６８３】
2020513789.tif 000704
または
【１３２０】
【化６８４】
2020513789.tif 000705
またはその薬学的に許容される塩（式中、Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびＬはそれぞれ、式ＴＬ−Ｉで上に定義される通りであり、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８およびＲａ１０はそれぞれ、式ＴＬ−Ｉ１ａ〜ＴＬ−Ｉ１ｄで上に定義される通りである）である。
【１３２１】
Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５およびｎｎ１の各々は、式ＴＬ−Ｉで上記の部分から選択され得、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８およびＲａ１０の各々は、式ＴＬ−Ｉ１ａ〜ＴＬ−Ｉ１ｄで上記の部分から選択され得る。Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８、Ｒａ１０およびｎｎ１のあるものについて定義される部分の各々を、式ＴＬ−ＩおよびＴＬ−Ｉ１ａ〜ＴＬ−Ｉ１ｄで上記のＡ２、Ｒａ４、Ｒａ５、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８、Ｒａ１０およびｎｎ１の他について定義される部分のいずれかと組み合わせることができる。
【１３２２】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、式ＴＬ−Ｉ３の化合物：
【１３２３】
【化６８５】
2020513789.tif 000706
またはその薬学的に許容される塩である。
【１３２４】
Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２はそれぞれ、式ＴＬ−Ｉで上に定義される通りである。Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２の各々は、式ＴＬ−Ｉで上記の部分から選択され得る。Ａ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２のあるものについて定義される部分の各々を、式ＴＬ−Ｉで上記のＡ２、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびｎｎ２の他について定義される部分のいずれかと組み合わせることができる。
【１３２５】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、式ＴＬ−Ｉ３ａ〜ＴＬ−Ｉ３ｃの化合物：
【１３２６】
【化６８６】
2020513789.tif 000707
【１３２７】
【化６８７】
2020513789.tif 000708
もしくは
【１３２８】
【化６８８】
2020513789.tif 000709
またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒａ９はＣ（Ｏ）ＮＲａ５Ｌ、ＯＬ、ＮＲａ５ＬまたはＬであり；
Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５、ｎｎ１およびＬはそれぞれ、式ＴＬ−Ｉで上に定義される通りであり；
Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８およびＲａ１０はそれぞれ、式ＴＬ−Ｉ１ａ〜ＴＬ−Ｉ１ｄで上に定義される通りである）である。
【１３２９】
一定の実施形態では、Ｒａ９がＣ（Ｏ）ＮＲａ５Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒａ５がＨである。他の実施形態では、Ｒａ５がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。
【１３３０】
一定の実施形態では、Ｒａ９がＯＬである。
【１３３１】
一定の実施形態では、Ｒａ９がＮＲａ５Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒａ５がＨである。他の実施形態では、Ｒａ５がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。他の実施形態では、Ｒａ５がメチルである。
【１３３２】
一定の実施形態では、Ｒａ９がＬである。
【１３３３】
Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５およびｎｎ１の各々は、式ＴＬ−Ｉで上記の部分から選択され得、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８およびＲａ１０の各々は、式ＴＬ−Ｉ１ａ〜ＴＬ−Ｉ１ｄで上記の部分から選択され得る。Ａ２、Ｒａ４、Ｒａ５、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８、Ｒａ９、Ｒａ１０およびｎｎ１のあるものについて定義される部分の各々を、上ならびに式ＴＬ−ＩおよびＴＬ−Ｉ１ａ〜ＴＬ−Ｉ１ｄに記載されるＡ２、Ｒａ４、Ｒａ５、Ｒａ６、Ｒａ７、Ｒａ８、Ｒａ９、Ｒａ１０およびｎｎ１の他について定義される部分のいずれかと組み合わせることができる。
【１３３４】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、式ＴＬ−ＶＩの化合物：
【１３３５】
【化６８９】
2020513789.tif 000710
またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒｆ１はＣ（Ｏ）ＮＲｆ２Ｌ、ＯＬ、ＮＲｆ２ＬまたはＬであり；
Ｒｆ２は独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｌはリンカーである）
である。
【１３３６】
一定の実施形態では、Ｒｆ１がＣ（Ｏ）ＮＲｆ２Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｆ２がＨである。他の実施形態では、Ｒｆ２がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。
【１３３７】
一定の実施形態では、Ｒｆ１がＯＬである。
【１３３８】
一定の実施形態では、Ｒｆ１がＮＲｅ４Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｆ２がＨである。他の実施形態では、Ｒｆ２がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。他の実施形態では、Ｒｆ２がメチルである。
【１３３９】
一定の実施形態では、Ｒｆ１がＬである。
【１３４０】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、式ＴＬ−ＶＩＩの化合物：
【１３４１】
【化６９０】
2020513789.tif 000711
またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｔ７はＣＨ２またはＣＨ２ＣＨ２であり；
Ｒｇ１はＣ（Ｏ）Ｒｇ５または（ＣＨ２）１〜３Ｒｇ６であり；
ｎｎ１０は０、１、２または３であり；
ｎｎ１１は０、１、２または３であり；
各Ｒｇ２は独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、ＣＮまたはハロゲンであり；
Ｒｇ３は、Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌ、ＯＬ、ＮＲｇ４Ｌ、Ｌ、Ｏ−（ＣＨ２）１〜３−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４ＬまたはＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）１〜３−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌであり；
Ｒｇ４はＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒｇ５はＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒｇ６は、場合によりＣ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、ＣＮまたはハロゲンで置換されたフェニルであり；
Ｌはリンカーである）
である。
【１３４２】
一定の実施形態では、Ｔ７がＣＨ２である。
【１３４３】
一定の実施形態では、Ｔ７がＣＨ２ＣＨ２である。
【１３４４】
一定の実施形態では、Ｒｇ１がＣ（Ｏ）Ｒｇ５である。
【１３４５】
一定の実施形態では、Ｒｇ１が（ＣＨ２）−Ｒｇ６、（ＣＨ２）２−Ｒｇ６または（ＣＨ２）３−Ｒｇ６である。
【１３４６】
一定の実施形態では、Ｒｇ５が直鎖Ｃ１〜Ｃ６または分岐Ｃ３〜Ｃ６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチルもしくはヘキシル）である。
【１３４７】
一定の実施形態では、Ｒｇ６が非置換フェニルである。
【１３４８】
一定の実施形態では、Ｒｇ６が、１個、２個、３個またはそれ以上のＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシまたはプロポキシ）、ＣＮおよびハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）から独立に選択される置換基で置換されたフェニルである。
【１３４９】
一定の実施形態では、ｎｎ１０が０である。
【１３５０】
一定の実施形態では、ｎｎ１０が１である。
【１３５１】
一定の実施形態では、ｎｎ１０が２である。
【１３５２】
一定の実施形態では、ｎｎ１０が３である。
【１３５３】
一定の実施形態では、ｎｎ１１が０である。
【１３５４】
一定の実施形態では、ｎｎ１１が１である。
【１３５５】
一定の実施形態では、ｎｎ１１が２である。
【１３５６】
一定の実施形態では、ｎｎ１１が３である。
【１３５７】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲｇ２が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲｇ２がメチルである。
【１３５８】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲｇ２が、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシまたはプロポキシ）である。さらなる実施形態では、少なくとも１個のＲｇ２がメトキシである。
【１３５９】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲｇ２がＣＮである。
【１３６０】
一定の実施形態では、少なくとも１個のＲｇ２がハロゲン（例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ）である。
【１３６１】
一定の実施形態では、Ｒｇ３がＣ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｇ４がＨである。他の実施形態では、Ｒｇ４がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。
【１３６２】
一定の実施形態では、Ｒｇ３がＯＬである。
【１３６３】
一定の実施形態では、Ｒｇ３がＮＲｇ４Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｇ４がＨである。他の実施形態では、Ｒｇ４がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。他の実施形態では、Ｒｇ４がメチルである。
【１３６４】
一定の実施形態では、Ｒｇ３がＬである。
【１３６５】
一定の実施形態では、Ｒｇ３が、Ｏ−（ＣＨ２）−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌ、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４ＬまたはＯ−（ＣＨ２）３−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｇ３がＯ−（ＣＨ２）−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｇ４がＨである。他の実施形態では、Ｒｇ４がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。
【１３６６】
一定の実施形態では、Ｒｇ３が、ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌ、ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４ＬまたはＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）３−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｇ３が、ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌ、ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｇ３が、ＮＨＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＮＲｇ４Ｌである。さらなる実施形態では、Ｒｇ４がＨである。他の実施形態では、Ｒｇ４がＣ１〜Ｃ３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルまたはｉ−プロピル）である。
【１３６７】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドが、図２８の構造から選択され、Ｒが、リンカーが結合している点である。
【１３６８】
一定の実施形態では、ｄＴＡＧ標的化リガンドまたは標的が、リンカーを収容することができる機能的位置を有する強力で選択的なリガンドを開発する存在（既知のｄＴＡＧ結合部分）および能力に基づいて選択される。いくつかの実施形態は、化合物選択性または標的ＩＤの尺度としてのプロテオミクスと組み合わせた分解から利益を得ることができる、選択性が低いｄＴＡＧ標的化リガンドに関する。
【１３６９】
本出願のいくつかの実施形態は、ＣＡＲの３０％〜１００％の分解または喪失に関する。一定の実施形態は、ＣＡＲの５０〜１００％の損失に関する。他の実施形態は、ＣＡＲの７５〜９５％の損失に関する。
【１３７０】
本発明に使用するためのヘテロ二官能性化合物の非限定的な例としては、図２９、図３０、図３１および図３２のものが挙げられる。
【１３７１】
図２９は、本発明に使用するための具体的なヘテロ二官能性化合物を提供する。
【１３７２】
図３０は、本発明に使用するための具体的なヘテロ二官能性化合物を提供し、上記構造中のＸは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩから選択されるハロゲンである。
【１３７３】
図３１は、本発明に使用するための特定のヘテロ二官能性化合物を提供する。
【１３７４】
図３２は、本発明に使用するためのヘテロ二官能性化合物
（式中、
ＲＡＲ１は
【１３７５】
【化６９１】
2020513789.tif 000712
【１３７６】
【化６９２】
2020513789.tif 000713
および
【１３７７】
【化６９３】
2020513789.tif 000714
から選択され；
ＲＡＲ２は
【１３７８】
【化６９４】
2020513789.tif 000715
【１３７９】
【化６９５】
2020513789.tif 000716
および
【１３８０】
【化６９６】
2020513789.tif 000717
から選択される）
を提供する。
【１３８１】
本発明に使用するためのさらなる化合物は、図３３の構造を含む。
【１３８２】
前記ヘテロ二官能性化合物のいくつかは、１つまたは複数の不斉中心を含み、したがって種々の異性体形態、例えば立体異性体および／またはジアステレオマーで存在することができる。したがって、化合物およびその医薬組成物は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは幾何異性体の形態であり得る、または立体異性体の混合物の形態であり得る。一定の実施形態では、本出願の化合物がエナンチオピュアな化合物である。一定の他の実施形態では、立体異性体またはジアステレオマーの混合物が提供される。
【１３８３】
さらに、本明細書に記載される一定のヘテロ二官能性化合物は、特に指示しない限り、Ｚ異性体またはＥ異性体のいずれかとして存在することができる１つまたは複数の二重結合を有し得る。本出願はさらに、他の異性体を実質的に含まない個々の異性体としての化合物、あるいは種々の異性体の混合物、例えば立体異性体のラセミ混合物としての化合物を包含する。上記化合物自体に加えて、本出願はまた、これらのヘテロ二官能性化合物の薬学的に許容される誘導体、および１種または複数の本出願の化合物と１種または複数の薬学的に許容される賦形剤または添加剤とを含む組成物を包含する。
【１３８４】
本出願のヘテロ二官能性化合物は、異なる条件下で化合物を結晶化することによって調製することができ、本出願の一部を形成する化合物の多形の１つまたは組み合わせとして存在することができる。例えば、再結晶化のために様々な溶媒もしくは様々な溶媒混合物を使用して；様々な温度で結晶化を行うことによって；または結晶化中、非常に速い冷却から非常に遅い冷却に及ぶ種々の冷却モードを使用することによって、様々な多形を特定および／または調製することができる。化合物を加熱または融解し、引き続いて徐冷または急冷することによって多形を得ることもできる。固体プローブＮＭＲ分光法、ＩＲ分光法、示差走査熱量測定、粉末Ｘ線回折図および／または他の技術によって、多形の存在を決定することができる。したがって、本出願は、ヘテロ二官能性化合物、それらの誘導体、それらの互変異性体、それらの立体異性体、それらの多形、それらの薬学的に許容される塩、それらの薬学的に許容される溶媒和物およびこれらを含有する薬学的に許容される組成物を包含する。
ヘテロ二官能性化合物の一般的合成
【１３８５】
本明細書に記載されるヘテロ二官能性化合物は、当業者に知られている方法によって調製することができる。非限定的な一例では、開示されるヘテロ二官能性化合物を、以下のスキームによって調製することができる。
【１３８６】
【化６９７】
2020513789.tif 000718
【１３８７】
【化６９８】
2020513789.tif 000719
スキーム１に示されるように、本発明に使用するためのヘテロ二官能性化合物は、デグロンとリンカーを化学的に組み合わせ、引き続いて後にｄＴＡＧ標的化リガンドを添加することによって調製することができる。同様に、スキーム２で、本発明に使用するためのヘテロ二官能性化合物は、最初にｄＴＡＧ標的化リガンドとリンカーを化学的に組み合わせ、引き続いて後にデグロンを添加することによって調製される。上記および以下のスキームに示されるように、本発明に使用するためのヘテロ二官能性化合物は、種々の方法および化学反応で当業者によって容易に合成され得る。
【１３８８】
【化６９９】
2020513789.tif 000720
スキーム３：ステップ１で、求核性デグロンがリンカー上の脱離基を置換してデグロンリンカーフラグメントを生成する。ステップ２で、保護基を当技術分野で公知の方法によって除去して、リンカー上の求核部位を解放する。ステップ３で、求核性デグロンリンカーフラグメントが、ｄＴＡＧ標的化リガンド上の脱離基を置換して、本発明に使用するための化合物を形成する。代替実施形態では、ステップ１および／またはステップ２が、求核攻撃の代わりにカップリング反応によって達成される。
【１３８９】
【化７００】
2020513789.tif 000721
スキーム４：ステップ１で、求核性ｄＴＡＧ標的化リガンドがリンカー上の脱離基を置換してｄＴＡＧ標的化リガンドリンカーフラグメントを生成する。ステップ２で、保護基を当技術分野で公知の方法によって除去して、リンカー上の求核部位を解放する。ステップ３で、求核性ｄＴＡＧ標的化リガンドリンカーフラグメントが、デグロン上の脱離基を置換して、本発明に使用するための化合物を形成する。代替実施形態では、ステップ１および／またはステップ２が、求核攻撃の代わりにカップリング反応によって達成される。
【１３９０】
【化７０１】
2020513789.tif 000722
【１３９１】
【化７０２】
2020513789.tif 000723
【１３９２】
スキーム５およびスキーム６：ステップ１で、求核性デグロンがリンカー上の脱離基を置換してデグロンリンカーフラグメントを生成する。ステップ２で、保護基を当技術分野で公知の方法によって除去して、リンカー上の求核部位を解放する。ステップ３で、求核性デグロンリンカーフラグメントが、ｄＴＡＧ標的化リガンド上の脱離基を置換して、式Ｉまたは式ＩＩの化合物を形成する。代替実施形態では、ステップ１および／またはステップ２が、求核攻撃の代わりにカップリング反応によって達成される。
【１３９３】
【化７０３】
2020513789.tif 000724
ａ）ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カルバメートまたはその類似体（例えば、ｎ＝１〜２０）（１）またはその類似体（例えば、ｎ＝１〜２０）を、クロロアセチルクロリドと適切な条件下で反応させて、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−クロロアセトアミド）エチル）カルバメートまたはその類似体（例えば、ｎ＝１〜２０）（２）を生成する；
ｂ）ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−クロロアセトアミド）エチル）カルバメートまたはその類似体（２）をジメチル３−ヒドロキシフタレートと適切な条件下で反応させて、ジメチル３−（２−（（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エチル）アミノ）−２−オキソエトキシ）フタレートまたはその類似体（３）を得る；
ｃ）ジメチル３−（２−（（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エチル）アミノ）−２−オキソエトキシ）フタレートまたはその類似体（３）を強塩基と反応させ、引き続いて３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩と反応させて、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）エチル）カルバメートまたはその類似体（４）を生成する；
ｄ）化合物（４）を脱保護して、ジアミノエチル−アセチル−Ｏ−サリドマイドトリフルオロ酢酸塩またはその類似体（５）を得る；
ｅ）化合物（５）をｄＴＡＧ標的化リガンドの酸誘導体（化合物（６））と適切な条件下で反応させて、二官能性化合物（７）を得る。
【１３９４】
一定の実施形態では、上記の方法が液相で行われる。一定の他の実施形態では、上記の方法が固相で行われる。一定の実施形態では、合成方法が、ハイスループット技術またはコンビナトリアルケミストリーにおいて一般的に使用される技術に適している。
【１３９５】
ヘテロ二官能性化合物の代表的な合成
特に指示しない限り、出発材料は市販されている、または当技術分野に合理的に精通している人なら誰でも実験室合成を介して容易に入手可能である。以下に一般的に記載されるのは、一般的にならびに本明細書のサブクラスおよび種に記載される化合物を合成するための手順および一般的手引きである。
【１３９６】
合成実施例１’：ＩＭｉＤ誘導体およびデグロンの合成
【１３９７】
【化７０４】
2020513789.tif 000725
一般的手順Ｉ：ＩＭｉＤ縮合
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−ヒドロキシイソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−１）
２０ｍＬガラスバイアル中で、酢酸（１０．２ｍＬ、０．３Ｍ）中３−ヒドロキシフタル酸無水物（５００ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ、１当量）、酢酸カリウム（９２７ｍｇ、９．４４ｍｍｏｌ、３．１当量）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（５５２ｍｇ、３．３５ｍｍｏｌ、１．１当量）の混合物を一晩９０℃に加熱した。黒色反応混合物を室温に冷却し、水で２０ｍＬに希釈し、その後氷上で３０分間冷却した。得られたスラリーを５０ｍＬファルコンチューブに移し、これを３５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を廃棄し、黒色固体をメタノールを含む２５０ｍＬ  ＲＢＦに移し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９：１））によって精製すると、標記化合物が白色固体（６１９ｍｇ、７４％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．０７（ｓ，１Ｈ）、７．６５（ｄｄ，Ｊ＝８．４，６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．３１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９４−２．８２（ｍ，１Ｈ）、２．６４−２．４３（ｍ，２Ｈ）、２．０８−１．９７（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１１Ｎ２Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２７５．０７、実測値２７５．２６。
【１３９８】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−ニトロイソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−１０）
３−ニトロフタル酸無水物（３００ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ、１当量）、酢酸カリウム（４７３ｍｇ、４．８２ｍｍｏｌ、３．１当量）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（２８１ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ、１．１当量）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９：１））による精製後、標記化合物が淡黄色固体（２８０ｍｇ、５９％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１７（ｓ，１Ｈ）、８．３５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、８．２４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．１４−８．１０（ｍ，１Ｈ）、５．２０（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．９３−２．８４（ｍ，１Ｈ）、２．６４−２．４５（ｍ，２Ｈ）、２．１１−２．０４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１０Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３０４．０６、実測値３０４．１９。
【１３９９】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−ニトロイソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−２）
４−ニトロフタル酸無水物（３００ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４７３ｍｇ、４．８２ｍｍｏｌ）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（２８１ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（３０：１））による精製後、標記化合物が白色固体（４０９ｍｇ、８７％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１８（ｓ，１Ｈ）、８．６８（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、８．５６（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ）、８．１９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．２４（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９０（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．２，１３．９，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．６９−２．４８（ｍ，２Ｈ）、２．１４−２．０５（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１０Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３０４．０６、実測値３０４．１９。
【１４００】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１、３−ジオン（Ｄ−６）
フタル酸無水物（１５５ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３１８ｍｇ、３．２４ｍｍｏｌ）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（１８９ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１５：１））による精製後、標記化合物が白色固体（２３５ｍｇ、８７％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１３（ｓ，１Ｈ）、８．００−７．７６（ｍ，４Ｈ）、５．１６（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．８９（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．８，１３．７，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６５−２．４２（ｍ，２Ｈ）、２．１２−１．９９（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１１Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２５９．０７、実測値２５９．２３。
【１４０１】
２−（２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−７）
フタル酸無水物（９０ｍｇ、０．６０８ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１８５ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）および３−アミノピロリジン−２，５−ジオン塩酸塩（１０１ｍｇ、０．６６８ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１４：１））による精製後、標記化合物が白色固体（９５ｍｇ、６４％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ９Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２４５．０６、実測値２４５．２６。
【１４０２】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−５−カルボン酸（Ｄ−１３）
１，２，４−ベンゼントリカルボン酸無水物（２００ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３１７ｍｇ、３．２３ｍｍｏｌ）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（１８８ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９：１））による精製後、標記化合物が白色固体（１７８ｍｇ、５７％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１１Ｎ２Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３０３．０６、実測値３０３．２４。
【１４０３】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−１４）
３−フルオロフタル酸無水物（２００ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３６６ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（２１８ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（５０：１））による精製後、標記化合物が白色固体（２８８ｍｇ、８６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１５（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，７．３，４．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．８２−７．７１（ｍ，２Ｈ）、５．１７（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９０（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．１，１３．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６５−２．４７（ｍ，２Ｈ）、２．１０−２．０４（ｍ，１Ｈ）、ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１０ＦＮ２Ｏ４についての計算値［Ｍ＋Ｈ］＋２７７．０６、実測値２７７．２５。
【１４０４】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−メチルイソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−１９）
３−メチルフタル酸無水物（１５０ｍｇ、０．９２５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２８１ｍｇ、２．８７ｍｍｏｌ）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（１６７ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１５：１））による精製後、標記化合物が白色固体（１６８ｍｇ、６７％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１３Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２７３．０９、実測値２７３．２４。
【１４０５】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−２４）
４−フルオロフタル酸無水物（２００ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３６６ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（２１８ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１５：１））による精製後、標記化合物が白色固体（２５４ｍｇ、７６％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１０ＦＮ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２７７．０６、実測値２７７．２４。
【１４０６】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−４−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−４３）
フタル酸無水物（６０ｍｇ、０．３１１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（９５ｍｇ、０．９６３ｍｍｏｌ）および４−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（５６ｍｇ、０．３４２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順Ｉに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９：１））による精製後、標記化合物が白色固体（４０ｍｇ、４３％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１１Ｎ２Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２５９．０７、実測値２５９．１８。
【１４０７】
【化７０５】
2020513789.tif 000726
一般的手順ＩＩ：芳香族ニトロ基の還元
４−アミノ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−４）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−ニトロイソインドリン−１，３−ジオン（１７３ｍｇ、０．８５４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１２．８ｍｇ、０．０８５４ｍｍｏｌ、１０ｍｏｌ％）およびフッ化カリウム（６６ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ、２当量）のＴＨＦ：水（８：１）（５．７ｍＬ、０．１Ｍ）中溶液を室温で撹拌した。トリエチルシラン（３６５μＬ、３．４１ｍｍｏｌ、４当量）をゆっくり添加し、得られた黒色溶液を室温で１時間撹拌した。反応混合物をｃｅｌｉｔｅパッドを通して濾過し、これを酢酸エチルで過剰に洗浄した。濾液を真空中で濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（７：１））によって精製すると、標記化合物が黄色粉末（７２ｍｇ、４６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．０８（ｓ，１Ｈ）、７．４７（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．０６−６．９５（ｍ，１Ｈ）、６．５９−６．４４（ｍ，１Ｈ）、５．０４（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９３−２．８２（ｍ，１Ｈ）、２．６４−２．４５（ｍ，２Ｈ）、２．０５−１．９８（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１１Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２７４．０８、実測値２７４．２３。
【１４０８】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−ニトロイソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−８）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−ニトロイソインドリン−１，３−ジオン（１００ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（７．４ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）、フッ化カリウム（３８ｍｇ、０．６６０ｍｍｏｌ）およびトリエチルシラン（２１１μＬ、１．３２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（９：１））による精製後、標記化合物が黄色固体（３３ｍｇ、３７％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．０５（ｓ，１Ｈ）、７．５２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．９４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．５５（ｓ，２Ｈ）、５．０１（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．８６（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．９，１３．９，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．６８−２．４３（ｍ，２Ｈ）、２．０３−１．９３（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１２Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２７４．０８、実測値２７４．５９。
【１４０９】
４−アミノ−２−（１−ベンジル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−１２）
２−（１−ベンジル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−ニトロイソインドリン−１，３−ジオン（４８ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（２．７ｍｇ、０．０１２２ｍｍｏｌ）、フッ化カリウム（１４ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）およびトリエチルシラン（７８μＬ、０．４８８ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）による精製後、標記化合物が黄色固体（７ｍｇ、１６％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ１８Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３６４．１３、実測値３６４．３４。
【１４１０】
３−（５−アミノ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Ｄ−１７）
３−（２−メチル−５−ニトロ−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（２１ｍｇ、０．０６６４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１．５ｍｇ、０．００６６ｍｍｏｌ）、フッ化カリウム（７．７ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）およびトリエチルシラン（４２μＬ、０．２６６ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩに従うと、分取ＨＰＬＣによる精製後、標記化合物が白色固体（７ｍｇ、３７％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１５Ｎ４Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２８７．１１、実測値２８７．３０。
【１４１１】
３−（７−アミノ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Ｄ−４１）
３−（７−ニトロ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（１１ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（０．９ｍｇ、０．００３８ｍｍｏｌ）、フッ化カリウム（４．４ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）およびトリエチルシラン（２４μＬ、０．１５２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色固体（２ｍｇ、２１％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１４Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２６０．１０、実測値２６０．５２。
【１４１２】
【化７０６】
2020513789.tif 000727
一般的手順ＩＩＩ：アニリンのアシル化
Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−５−イル）アセトアミド（Ｄ−５）
４ｍＬガラスバイアル中で、ＴＨＦ（１．８ｍＬ、０．１Ｍ）中、５−アミノ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ、１当量）および塩化アセチル（２６μＬ、０．２２０ｍｍｏｌ、２当量）の混合物を一晩加熱還流した。反応混合物を濾過し、濾過ケークをＥｔ２Ｏで洗浄すると、標記化合物が白色固体（２７ｍｇ、４７％）として得られ、これをさらに精製することなく使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１１（ｓ，１Ｈ）、１０．６３（ｓ，１Ｈ）、８．２４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．９１−７．８３（ｍ，２Ｈ）、５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．０，１３．８，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６３−２．４６（ｍ，２Ｈ）、２．１３（ｓ，３Ｈ）、２．０９−２．００（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１４Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１６．０９、実測値３１６．２３。
【１４１３】
Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アセトアミド（Ｄ−３）
４−アミノ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（５０ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）および塩化アセチル（２６μＬ、０．３６６ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩＩに従うと、標記化合物が白色固体（１０ｍｇ、１７％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１４（ｓ，１Ｈ）、９．７３（ｓ，１Ｈ）、８．４４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．６２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．１４（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９０（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．１，１３．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６６−２．４５（ｍ，２Ｈ）、２．１９（ｓ，３Ｈ）、２．１４−２．００（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１４Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１６．０９、実測値３１６．２７。
【１４１４】
２−クロロ−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−５−イル）アセトアミド（Ｄ−３２）
５−アミノ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（１０ｍｇ、０．０３６６ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロリド（６μＬ、０．０７３２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩＩに従うと、標記化合物が白色固体（７．１ｍｇ、５５％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１３ＣｌＮ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３５０．０５、実測値３５０．２３。
【１４１５】
２−クロロ−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）アセトアミド（Ｄ−３４）
３−（４−アミノ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（２０ｍｇ、０．０７７１ｍｍｏｌ）およびクロロアセチルクロリド（１２μＬ、０．１５４ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩＩに従うと、標記化合物が白色固体（１４．９ｍｇ、５６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．０２（ｓ，１Ｈ）、１０．２０（ｓ，１Ｈ）、７．８１（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．６５−７．４７（ｍ，２Ｈ）、５．１６（ｄｄ，Ｊ＝１３．３，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．４５−４．３４（ｍ，２Ｈ）、４．３３（ｓ，２Ｈ）、３．００−２．８５（ｍ，１Ｈ）、２．６８−２．５６（ｍ，１Ｈ）、２．４１−２．２８（ｍ，１Ｈ）、２．０９−１．９７（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１５ＣｌＮ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３３６．０７、実測値３３６．３１。
【１４１６】
Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）アクリルアミド（Ｄ−３５）
３−（４−アミノ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（２０ｍｇ、０．０７７１ｍｍｏｌ）および塩化アクリロイル（１３μＬ、０．１５４ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩＩに従うと、標記化合物が白色固体（１８ｍｇ、７６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１５．７７（ｓ，１Ｈ）、１４．８１（ｓ，１Ｈ）、１２．６５（ｄｄ，Ｊ＝７．４，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、１２．３７−１２．１８（ｍ，２Ｈ）、１１．２８（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１０．２Ｈｚ，１Ｈ）、１１．０６（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、１０．５７（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、９．９１（ｄｄ，Ｊ＝１３．３，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、９．２４−９．０５（ｍ，２Ｈ）、７．６７（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．２，１３．７，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．３６（ｄｔ，Ｊ＝１７．３，３．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２０−７．０３（ｍ，１Ｈ）、６．８３−６．７２（ｍ，１Ｈ）、ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１６Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１４．１１、実測値３１４．２４。
【１４１７】
Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−５−イル）アクリルアミド（Ｄ−３６）
５−アミノ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（１０ｍｇ、０．０３６６ｍｍｏｌ）および塩化アクリロイル（６μＬ、０．０７３２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩＩに従うと、標記化合物が白色固体（８．８ｍｇ、７３％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１２（ｓ，１Ｈ）、１０．８３（ｓ，１Ｈ）、８．３３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．９９（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．４８（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１０．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．３６（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．８８（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．９５−２．８４（ｍ，１Ｈ）、２．６７−２．４６（ｍ，２Ｈ）、２．０９−２．０１（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１４Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３２８．０９、実測値３２８．２３。
【１４１８】
Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）アセトアミド（Ｄ−３７）
３−（４−アミノ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（２０ｍｇ、０．０７７１ｍｍｏｌ）および塩化アセチル（１１μＬ、０．１５４ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩＩに従うと、標記化合物が白色固体（１７ｍｇ、７１％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１６Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３０２．１１、実測値３０１．９９。
【１４１９】
Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）シクロプロパンカルボキサミド（Ｄ−３８）
３−（４−アミノ−１−オキソイソインドリン−２−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（２０ｍｇ、０．０７７１ｍｍｏｌ）およびシクロプロパンカルボニルクロリド（１４μＬ、０．１５４ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＩＩに従うと、標記化合物が白色固体（１９ｍｇ、７５％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．０１（ｓ，１Ｈ）、１０．０６（ｓ，１Ｈ）、７．８４（ｄｄ，Ｊ＝７．２，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．６６−７．３８（ｍ，２Ｈ）、５．１４（ｄｄ，Ｊ＝１３．３，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．５２−４．３０（ｍ，２Ｈ）、２．９２（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．３，１３．６，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６４−２．５４（ｍ，１Ｈ）、２．４５−２．２７（ｍ，１Ｈ）、２．０８−１．９５（ｍ，１Ｈ）、１．９３−１．８３（ｍ，１Ｈ）、０．９０−０．７５（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ１８Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３２８．１３、実測値３２８．００。
【１４２０】
【化７０７】
2020513789.tif 000728
一般的手順ＩＶ：キナゾリノン縮合
３−（２−メチル−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Ｄ−９）
２０ｍＬガラスバイアル中で、ピリジン（１．０μＬ、０．７Ｍ）中、アントラニル酸（１００ｍｇ、０．７２９ｍｍｏｌ、１当量）、酢酸（４２μＬ、０．７２９ｍｍｏｌ、１当量）およびＰ（ＯＰｈ）３（４７９μＬ、１．８２ｍｍｏｌ、２．５当量）を９０℃に加熱した。４時間後、反応混合物を室温に冷却し、３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（１４４ｍｇ、０．８７５ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。反応混合物を１．５時間９０℃に再加熱し、その後これを室温で一晩撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）および水（１５ｍＬ）に溶解した。有機層を食塩水（２×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％ＭｅＯＨ）によって精製すると、標記化合物が白色固体（７９ｍｇ、４０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．０３（ｓ，１Ｈ）、８．０３（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．８２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５，７．１，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．６２（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝８．１，７．１，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．２７（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，５．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．９２−２．７８（ｍ，１Ｈ）、２．７３−２．５６（ｍ，５Ｈ）、２．２６−２．０６（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１４Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２７２．１０、実測値２７２．３３。
【１４２１】
３−（２−メチル−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピロリジン−２，５−ジオン（Ｄ−１１）
アントラニル酸（２００ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）、酢酸（８４μＬ、１．４６ｍｍｏｌ）、Ｐ（ＯＰｈ）３（９５９μＬ、３．６５ｍｍｏｌ）および３−アミノピロリジン−２，５−ジオン塩酸塩（２６３ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＶに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（１５：１））による精製後、標記化合物が白色固体（２５ｍｇ、７％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１２Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２５８．０９、実測値２５８．２２。
【１４２２】
３−（５−フルオロ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Ｄ−６６）
６−フルオロアントラニル酸（１００ｍｇ、０．６４５ｍｍｏｌ）、酢酸（３７μＬ、０．６４４ｍｍｏｌ）、Ｐ（ＯＰｈ）３（４２４μＬ、１．６１ｍｍｏｌ）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（１２７ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＶに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が白色固体（７０ｍｇ、３８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．０３（ｓ，１Ｈ）、７．８４−７．７６（ｍ，１Ｈ）、７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．２５（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．１，８．２，１．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．２４（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，５．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．９０−２．７５（ｍ，１Ｈ）、２．６２（ｓ，３Ｈ）、２．６１−２．５６（ｍ，２Ｈ）、２．２０−２．１２（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１３ＦＮ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値２９０．０９、実測値２９０．２７。
【１４２３】
３−（２−メチル−５−ニトロ−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Ｄ−６７）
６−ニトロアントラニル酸（１００ｍｇ、０．５４９ｍｍｏｌ）、酢酸（３１μＬ、０．５４９ｍｍｏｌ）、Ｐ（ＯＰｈ）３（３６１μＬ、１．３７ｍｍｏｌ）および３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸塩（１０８ｍｇ、０．６５９ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＩＶに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が白色固体（２９ｍｇ、１７％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１３Ｎ４Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１７．０９、実測値３１７．５８。
【１４２４】
【化７０８】
2020513789.tif 000729
一般的手順Ｖ：アミドカップリング
Ｎ−ベンジル−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−５−カルボキサミド（Ｄ−１５）
４ｍＬガラスバイアル中で、ＤＭＦ（３３１μＬ、０．１Ｍ）中２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−５−カルボン酸（１０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＡＴＵ（１３ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、１当量）、ＤＩＰＥＡ（１７μＬ、０．０９９ｍｍｏｌ、３当量）およびベンジルアミン（４μＬ、０．０３６ｍｍｏｌ、１．１当量）を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＭｅＯＨで４ｍＬに希釈し、濾過し、次いで、分取ＨＰＬＣによって精製すると、標記化合物が白色固体（６ｍｇ、４６％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ１８Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３９２．１２、実測値３９２．３３。
【１４２５】
【化７０９】
2020513789.tif 000730
一般的手順ＶＩ：求核芳香族置換
４−（ベンジルアミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−１６）
４ｍＬガラスバイアル中で、ＮＭＰ（３６２μＬ、０．１Ｍ）中２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（１０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ、１当量）、ベンジルアミン（４．４μＬ、０．０４０ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＤＩＰＥＡ（１３μＬ、０．０７２ｍｍｏｌ、２当量）を一晩９０℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解した。有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）（１５ｍＬ）、水（１５ｍＬ）および食塩水（３×１５ｍＬ）で洗浄し、その後、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製すると、標記化合物が黄色フィルム（５ｍｇ、３８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．１０（ｓ，１Ｈ）、７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．４０−７．２５（ｍ，５Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８４（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．７１（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．９３（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．５１（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）、２．９３−２．６６（ｍ，３Ｈ）、２．２１−２．０７（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ１８Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３６４．１３、実測値３６４．３１。
【１４２６】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（イソプロピルアミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−１８）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）、イソプロピルアミン（１０μＬ、０．１１９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２１μＬ、０．１１９ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（１１ｍｇ、３２％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１８Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１６．１３、実測値３１６．６５。
【１４２７】
４−（ジエチルアミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−２１）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）、ジエチルアミン（１１μＬ、０．１３０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３２μＬ、０．１８１ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（２８ｍｇ、９７％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ２０Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３３０．１４、実測値３３０．６２。
【１４２８】
５−（ベンジルアミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−２５）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）、ベンジルアミン（１３μＬ、０．１１９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３８μＬ、０．２１７ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（６ｍｇ、１５％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ１８Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３６４．１３、実測値３６４．３４。
【１４２９】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−（イソプロピルアミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−２６）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）、イソプロピルアミン（１１μＬ、０．１３０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３８μＬ、０．２１７ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（６ｍｇ、１７％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．００（ｓ，１Ｈ）、７．５３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．８７（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．８６（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．３０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．８６−２．５８（ｍ，３Ｈ）、２．１２−２．０１（ｍ，１Ｈ）、１．２６−１．１５（ｍ，６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１８Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１６．１３、実測値３１６．３０。
【１４３０】
５−（ジエチルアミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−２７）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）、ジエチルアミン（１４μＬ、０．１３０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３８μＬ、０．２１７ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（６ｍｇ、３１％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．０８（ｓ，１Ｈ）、７．５７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．９８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．７２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．９０−４．８０（ｍ，１Ｈ）、３．４０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ）、２．８９−２．６１（ｍ，３Ｈ）、２．１１−２．０１（ｍ，１Ｈ）、１．１６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ２０Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３３０．１４、実測値３３０．６９。
【１４３１】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−（（フラン−２−イルメチル）アミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−２８）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（５０ｍｇ、０．１８１ｍｍｏｌ）、フルフリルアミン（１８μＬ、０．１９９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６３μＬ、０．３６２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（８ｍｇ、１３％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ１６Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３５４．１１、実測値３５４．２５。
【１４３２】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エチル）カルバメート（Ｄ−２９）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（５０ｍｇ、０．１８１ｍｍｏｌ）、１−Ｂｏｃ−エチレンジアミン（３２ｍｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６３μＬ、０．３６２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（３１ｍｇ、４１％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０８（ｂｓ，１Ｈ）、７．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．９８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．３９（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．９６−４．８７（ｍ，１Ｈ）、４．８３（ｂｓ，１Ｈ）、３．５０−３．４１（ｍ，２Ｈ）、３．４１−３．３５（ｍ，２Ｈ）、２．９２−２．６６（ｍ，３Ｈ）、２．１６−２．０９（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ２５Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値４１７．１８、実測値４１７．５８。
【１４３３】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−５−イル）アミノ）エチル）カルバメート（Ｄ−３０）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−５−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（５０ｍｇ、０．１８１ｍｍｏｌ）、１−Ｂｏｃ−エチレンジアミン（３２ｍｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６３μＬ、０．３６２ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（２２ｍｇ、２９％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ２５Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値４１７．１８、実測値４１７．３２。
【１４３４】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（（フラン−２−イルメチル）アミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−３１）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（１９．５ｍｇ、０．０７０６ｍｍｏｌ）、フルフリルアミン（７μＬ、０．０７８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２５μＬ、０．１４１ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜２．５％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（１９ｍｇ、７６％）として得られた。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ１６Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３５４．１１、実測値３５４．２７。
【１４３５】
３−（５−（ベンジルアミノ）−２−メチル−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Ｄ−３９）
反応混合物を９０℃の代わりに１７０℃に加熱したことを除いて、３−（５−フルオロ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（３０ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）、ベンジルアミン（１３μＬ、０．１１４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３６μＬ、０．２０７ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が白色固体（１５ｍｇ、３８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．７３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）、８．３９（ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９−７．１９（ｍ，５Ｈ）、６．７７（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．４１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．６７（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，５．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．４３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）、３．０３−２．７９（ｍ，２Ｈ）、２．７２−２．６１（ｍ，１Ｈ）、２．６０（ｓ，３Ｈ）、２．１５−２．０７（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２１Ｎ４Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３７７．１６、実測値３７７．０２。
【１４３６】
３−（５−（イソプロピルアミノ）−２−メチル−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（Ｄ−４０）
反応混合物を９０℃の代わりに１７０℃に加熱したことを除いて、３−（５−フルオロ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−３（４Ｈ）−イル）ピペリジン−２，６−ジオン（３０ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）、イソプロピルアミン（１０μＬ、０．１１４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３６μＬ、０．２０７ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が白色固体（５ｍｇ、１５％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．３１（ｓ，１Ｈ）、８．２１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０−７．３７（ｍ，１Ｈ）、６．７０（ｄｄ，Ｊ＝７．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．４７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．６５（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，５．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．６９−３．５６（ｍ，１Ｈ）、３．０３−２．８０（ｍ，３Ｈ）、２．５８（ｓ，３Ｈ）、２．１４−２．０３（ｍ，１Ｈ）、１．２７（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，３Ｈ）、１．２６（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ２１Ｎ４Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３２９．１６、実測値３２９．９７。
【１４３７】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−６８）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）、アミノエタノール（７μＬ、０．１１９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３８μＬ、０．２１７ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（６ｍｇ、１８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．２６（ｓ，１Ｈ）、７．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．９５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．５０（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．９７−４．８５（ｍ，１Ｈ）、３．９４−３．７９（ｍ，２Ｈ）、３．４７（ｑ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．０３−２．６８（ｍ，３Ｈ）、２．１９−２．０４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１６Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１８．１１、実測値３１８．２２。
【１４３８】
４−（シクロプロピルアミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ４７）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（２０ｍｇ、０．０７２４ｍｍｏｌ）、シクロプロピルアミン（６μＬ、０．０８０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２５μＬ、０．１４１ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（１６ｍｇ、７０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．０５（ｓ，１Ｈ）、７．５３（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３３−７．２１（ｍ，１Ｈ）、７．１５（ｄｄ，Ｊ＝７．１，０．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．４４（ｂｓ，１Ｈ）、４．９５−４．８５（ｍ，１Ｈ）、２．９８−２．６６（ｍ，３Ｈ）、２．６２−２．５０（ｍ，１Ｈ）、２．１９−２．０６（ｍ，１Ｈ）、０．９２−０．７８（ｍ，２Ｈ）、０．６７−０．５６（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１６Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１４．１１、実測値３１４．５４。
【１４３９】
４−（（２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル）アミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−４８）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（２０ｍｇ、０．０７２４ｍｍｏｌ）、トリプタミン（１３ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２５μＬ、０．１４４ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（１０ｍｇ、３３％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．１４（ｓ，１Ｈ）、８．１１（ｓ，１Ｈ）、７．６５−７．５５（ｍ，１Ｈ）、７．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．６，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３７（ｄｔ，Ｊ＝８．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，７．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．１６−７．０４（ｍ，３Ｈ）、６．８８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．３４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．８９（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．５９（ｔｄ，Ｊ＝６．８，５．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．１９−３．０３（ｍ，２Ｈ）、２．９３−２．６４（ｍ，３Ｈ）、２．１４−２．０４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２３Ｈ２１Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値４１７．１６、実測値４１７．２６。
【１４４０】
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（（４−ヒドロキシフェネチル）アミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−４９）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（２０ｍｇ、０．０７２４ｍｍｏｌ）、チラミン（１１ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２５μＬ、０．１４４ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（１５ｍｇ、５４％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．２０（ｓ，１Ｈ）、７．５１（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．１７−７．０８（ｍ，２Ｈ）、６．９０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．８５−６．７２（ｍ，２Ｈ）、４．９５−４．９０（ｍ，１Ｈ）、３．５２−３．４６（ｍ，２Ｈ）、２．９７−２．８７（ｍ，２Ｈ）、２．８６−２．７２（ｍ，２Ｈ）、２．２１−２．０９（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２１Ｈ２０Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３９４．１４、実測値３９４．２５。
【１４４１】
４−（（２−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）エチル）アミノ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−５０）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（２０ｍｇ、０．０７２４ｍｍｏｌ）、ヒスタミン（１５ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２５μＬ、０．１４４ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が黄色フィルム（５ｍｇ、１９％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．１９（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．０７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６−６．８３（ｍ，２Ｈ）、６．３９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．９７−４．７９（ｍ，１Ｈ）、３．５９（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）、２．９５（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．９２−２．６２（ｍ，２Ｈ）、２．１６−２．０４（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ１８Ｎ５Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３６８．１４、実測値３６８．４７。
【１４４２】
【化７１０】
2020513789.tif 000731
一般的手順ＶＩＩ：第一級アミンのアシル化
Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）メチル）シクロプロパンカルボキサミド（Ｄ−２２）
４ｍＬガラスバイアル中で、ＭｅＣＮ（２５０μＬ、０．３５Ｍ）中４−（アミノメチル）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（２５ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ、１当量）およびＤＩＰＥＡ（３０μＬ、０．１７４ｍｍｏｌ、２当量）を０℃に冷却した。シクロプロパンカルボニルクロリド（８．７μＬ、０．０９６ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。生成物を濾過によって単離すると、標記化合物が白色固体（４．８ｍｇ、１５％）として得られ、これをさらに精製することなく使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ１８Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３５６．１２、実測値３５６．３２。
【１４４３】
Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）メチル）アセトアミド（Ｄ−２３）
４−（アミノメチル）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（２５ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３０μＬ、０．１７４ｍｍｏｌ）および塩化アセチル（７μＬ、０．０９６ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩＩに従うと、標記化合物が白色固体（４．５ｍｇ、１６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１３（ｓ，１Ｈ）、８．４７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．８８−７．７６（ｍ，２Ｈ）、７．７０（ｄｔ，Ｊ＝７．３，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．１５（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．６９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．９０（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．８，１３．８，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６４−２．４４（ｍ，２Ｈ）、２．１５−２．０１（ｍ，１Ｈ）、１．９２（ｓ，３Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１６Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３３０．１１、実測値３３０．０５。
【１４４４】
【化７１１】
2020513789.tif 000732
２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エタン−１−アミニウム２，２，２−トリフルオロアセテート（Ｄ−３３）
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エチル）カルバメート（２０５ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（２．２５ｍＬ）中攪拌溶液にトリフルオロ酢酸（０．２５０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌し、その後揮発性物質を真空中で除去した。標記化合物が黄色固体（２２６ｍｇ、＞９５％）として得られ、これをさらに精製することなく使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．６４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．２７−７．０５（ｍ，２Ｈ）、５．１０（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．７０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．５０−３．４２（ｍ，２Ｈ）、３．２２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．９３−２．８５（ｍ，１Ｈ）、２．８０−２．６９（ｍ，２Ｈ）、２．１７−２．１０（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１７Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１７．１２、実測値３１７．５３。
【１４４５】
【化７１２】
2020513789.tif 000733
一般的手順ＶＩＩＩ：フェノールアルキル化
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（（４−（モルホリノメチル）ベンジル）オキシ）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−４５）
４ｍＬガラスバイアル中で、ＤＭＦ（３６５μＬ、０．３Ｍ）中２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−ヒドロキシイソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ、１当量）およびＫ２ＣＯ３（１５ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ、１当量）を室温で撹拌した。ＤＭＦ（２００μＬ）中４−（４−（ブロモメチル）ベンジル）モルホリン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、反応混合物を室温で４日間撹拌した。反応混合物を水（１５ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解し、有機層を食塩水（３×１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製すると、標記化合物が白色固体（２０ｍｇ、４０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１０（ｓ，１Ｈ）、７．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０−７．４２（ｍ，３Ｈ）、７．３５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）、５．３５（ｓ，２Ｈ）、５．０９（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．６４−３．５１（ｍ，４Ｈ）、３．４６（ｓ，２Ｈ）、２．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．０，１４．１，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６３−２．４７（ｍ，２Ｈ）、２．３８−２．３１（ｍ，４Ｈ）、２．０７−１．９９（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ２６Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値４６４．１８、実測値４６４．００。
【１４４６】
４−（ベンジルオキシ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−４６）
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−ヒドロキシイソインドリン−１，３−ジオン（３０ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１５ｍｇ、０．１０９ｍｍｏｌ）および臭化ベンジル（８μＬ、０１０９ｍｍｏｌ）を使用して一般的手順ＶＩＩＩに従うと、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）による精製後、標記化合物が白色固体（８ｍｇ、２０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１０（ｓ，１Ｈ）、７．８３（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３−７．５０（ｍ，２Ｈ）、７．４７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５−７．３９（ｍ，２Ｈ）、７．３８−７．３２（ｍ，１Ｈ）、５．３８（ｓ，２Ｈ）、５．０９（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．９，１３．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．６４−２．４６（ｍ，２Ｈ）、２．０７−１．９９（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ１７Ｎ２Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３６５．１１、実測値３６５．２１。
【１４４７】
【化７１３】
2020513789.tif 000734
２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エチル４−メチルベンゼン−スルホネート（Ｄ−４４）
４ｍＬガラスバイアル中で、ＣＨ２Ｃｌ２（２００μＬ）中２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−（（２−ヒドロキシエチル）アミノ）イソインドリン−１，３−ジオン（７ｍｇ、０．０２２１ｍｍｏｌ、１当量）およびＥｔ３Ｎ（３μＬ、０．０３３ｍｍｏｌ、１．５当量）を室温で撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２（１００μＬ）中塩化トシル（６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製すると、標記化合物が白色固体（４ｍｇ、４０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１３（ｓ，１Ｈ）、７．６４−７．５９（ｍ，２Ｈ）、７．４６（ｄｄ，Ｊ＝８．６，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．３３−７．２７（ｍ，２Ｈ）、７．０４−６．９３（ｍ，２Ｈ）、６．５８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．０９（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．１５（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．６５−３．５２（ｍ，２Ｈ）、２．９７−２．８３（ｍ，１Ｈ）、２．６７−２．４６（ｍ，２Ｈ）、２．２７（ｓ，３Ｈ）、２．１２−２．０２（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２２Ｈ２２Ｎ３Ｏ７Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値４７２．１２、実測値４７２．３９。
【１４４８】
（Ｒ）−４−ヒドロキシ−２−（３−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−５２）
ヒドロキシイソベンゾフラン−１，３−ジオン（１４７．０８ｍｇ、０．８９６ｍｍｏｌ、１当量）を（Ｒ）−３−アミノ−３−メチルピペリジン−２，６−ジオン塩酸（１２７．３２ｍｇ、０．８９６ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ピリジン（３．５８４ｍｌ、０．２５Ｍ）を混合物に添加し、これを１１０℃で１７時間撹拌した。混合物をメタノールで希釈し、減圧下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、２４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ２５分勾配）によって精製すると、白色油（１１０．９ｍｇ、収率４２．６３％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．９５（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２７−７．１４（ｍ，２Ｈ）、２．７３−２．６３（ｍ，１Ｈ）、２．５７−２．５１（ｍ，１Ｈ）、２．０４−１．９７（ｍ，１Ｈ）、１．８６（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ２８９（Ｍ＋Ｈ）。
【１４４９】
（Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−（３−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−５３）
４−ヒドロキシイソベンゾフラン−１，３−ジオン（１４８．９９ｍｇ、０．９０７ｍｍｏｌ、１当量）を（Ｓ）−３−アミノ−３−メチルピペリジン−２，６−ジオン塩酸（１２８．９７ｍｇ、０．９０７ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ピリジン（３．６２８ｍｌ、０．２５Ｍ）を混合物に添加し、これを１１０℃で１７時間撹拌した。混合物をメタノールで希釈し、減圧下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、２４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ２５分勾配）によって精製すると、白色油（１５０ｍｇ、収率５７．４％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．９５（ｓ，１Ｈ）、７．６２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２７−７．１６（ｍ，２Ｈ）、２．７５−２．６２（ｍ，１Ｈ）、２．５５（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，４．３Ｈｚ，１Ｈ）、２．０５−１．９６（ｍ，１Ｈ）、１．８６（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ２８９（Ｍ＋Ｈ）。
【１４５０】
（Ｓ）−２−（（２−（３−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）酢酸（Ｄ−５５）
ＴＦＡ（０．６３ｍｌ、０．１Ｍ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ）−２−（（２−（３−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセテート（２５．４ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ、１当量）に添加し、混合物を５０℃で１時間撹拌した。次いで、混合物をメタノールで希釈し、減圧下で濃縮すると、白色粉末（２０．５ｍｇ、収率９３．９％）が得られ、これをさらに精製することなく進めた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８１−７．７５（ｍ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．４３−７．３７（ｍ，３Ｈ）、５．０９（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、４．６３（ｄｄ，Ｊ＝９．１，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．６６−３．５５（ｍ，３０Ｈ）、３．５１−３．４１（ｍ，５Ｈ）、２．９０−２．８３（ｍ，１Ｈ）、２．７９−２．７１（ｍ，２Ｈ）、２．６９（ｓ，３Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．１４（ｄｄｔ，Ｊ＝１０．５，５．５，３．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．６９（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ３４７（Ｍ＋Ｈ）。
【１４５１】
（Ｒ）−２−（（２−（３−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）酢酸（Ｄ−５４）
ＴＦＡ（１．７８ｍｌ、０．１Ｍ）を、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ）−２−（（２−（３−メチル−２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセテート（７１．３ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ、１当量）に添加し、混合物を５０℃で１時間撹拌した。次いで、混合物をメタノールで希釈し、減圧下で濃縮すると、白色粉末（４７．２ｍｇ、収率７６．６３％）が得られ、これをさらに精製することなく進めた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５，７．３，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４６−７．４２（ｍ，１Ｈ）、７．３０（ｄｄ，Ｊ＝８．６，４．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．９４（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）、２．８１−２．５６（ｍ，２Ｈ）、２．２４−２．０７（ｍ，１Ｈ）、２．００（ｓ，２Ｈ）、０．９０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ  ３４７（Ｍ＋Ｈ）。
【１４５２】
４，７−ジクロロ−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオン（Ｄ−５１）
４，７−ジクロロイソベンゾフラン−１，３−ジオン（４３４．６ｍｇ、２．００２ｍｍｏｌ、１当量）を、３−アミノピペリジン−２，６−ジオン塩酸（３６２．６ｍｇ、２．２０３ｍｍｏｌ、１．１当量）に添加した。次いで、酢酸カリウム（６０９．０７ｍｇ、６．２０６ｍｍｏｌ、３．１当量）および酢酸（６．６７ｍｌ、０．３Ｍ）を混合物に添加し、これを９０℃で１８時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、脱イオン水で希釈し、５分間遠心分離した。沈殿をメタノールで希釈し、減圧下で濃縮した。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ２５分勾配）によって精製すると、白色粉末（１６０．４ｍｇ、収率２４．５％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１５（ｓ，１Ｈ）、７．９１（ｓ，２Ｈ）、５．１７（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．２，１３．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６８−２．５４（ｍ，１Ｈ）、２．０５（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．５，５．４，２．７Ｈｚ，１Ｈ）。ＬＣＭＳ  ３２８（Ｍ＋Ｈ）。
【１４５３】
合成実施例１：ｄＢＥＴ１の合成
【１４５４】
【化７１４】
2020513789.tif 000735
（１）ＪＱ酸の合成
ＪＱ１（１．０ｇ、２．１９ｍｍｏｌ、１当量）を室温でギ酸（１１ｍＬ、０．２Ｍ）に溶解し、７５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮すると、黄色固体（０．９９ｇ、定量的収率）が得られ、これをさらに精製することなく使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．５０−７．３６（ｍ，４Ｈ）、４．５９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．５１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、２．７０（ｓ，３Ｈ）、２．４５（ｓ，３Ｈ）、１．７１（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ４０１．３３（Ｍ＋Ｈ）。
【１４５５】
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートを、以前に公開された手順（Ｆｉｓｃｈｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ５１２（２０１４）：４９）に従って合成した。
【１４５６】
（２）ｄＢＥＴ１の合成
ＪＱ酸（１１．３ｍｇ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）およびＮ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテート（１４．５ｍｇ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）を室温でＤＭＦ（０．２８ｍＬ、０．１Ｍ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１４．７μＬ、０．０８４３ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１０．７ｍｇ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を１９時間撹拌した。次いで、混合物を分取ＨＰＬＣによって精製すると、ｄＢＥＴ１が黄色固体（１５．９０ｍｇ、０．０２０２ｍｍｏｌ、７２％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７７（ｄｄ，Ｊ＝８．３，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７−７．３７（ｍ，５Ｈ）、５．０７（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．７４（ｓ，２Ｈ）、４．６９（ｄｄ，Ｊ＝８．７，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．４３−３．３２（ｍ，３Ｈ）、３．２９−３．２５（ｍ，２Ｈ）、２．８７−２．６２（ｍ，７Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．１３−２．０４（ｍ，１Ｈ）、１．７２−１．５８（ｍ，７Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．４１、１７２．３３、１７１．２７、１７１．２５、１６９．８７、１６８．２２、１６７．７６、１６６．７３、１６６．７０、１５６．２６、１３８．４０、１３８．２３、１３７．４４、１３４．８３、１３３．９２、１３３．４０、１３２．３０、１３２．２８、１３１．９７、１３１．５０、１２９．８７、１２１．８５、１１９．３１、１１８．００、６９．５３、５４．９０、５０．５４、４０．０９、３９．８３、３８．４０、３２．１２、２７．７４、２７．６５、２３．６１、１４．４２、１２．９７、１１．５７。ＬＣＭＳ  ７８５．４４（Ｍ＋Ｈ）。
【１４５７】
合成実施例２：ｄＢＥＴ４の合成
【１４５８】
【化７１５】
2020513789.tif 000736
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．４３８ｍＬ、０．０４３８ｍｍｏｌ、１．２当量）を、室温で（Ｒ）−ＪＱ酸（ＪＱ酸と同様の方法で（Ｒ）−ＪＱ１から調製）（１４．６３ｍｇ、０．０３６５ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１９．１μＬ、０．１０９５ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１５．３ｍｇ、０．０４０２ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、混合物を２４時間撹拌し、次いで、ＭｅＯＨで希釈し、減圧下で濃縮した。粗物質を分取ＨＰＬＣによって精製すると、黄色固体（２０．６４ｍｇ、０．０２６３ｍｍｏｌ、７２％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７−７．３９（ｍ，５Ｈ）、５．１１−５．０６（ｍ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，２Ｈ）、４．６８（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．４７−３．３１（ｍ，５Ｈ）、２．８３−２．６５（ｍ，７Ｈ）、２．４４（ｓ，３Ｈ）、２．１３−２．０６（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｓ，３Ｈ）、１．６７−１．６０（ｍ，４Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．４３、１７２．４０、１７１．２９、１６９．９２、１６８．２４、１６７．８２、１６６．７１、１５６．３１、１５３．１４、１３８．３８、１３８．２４、１３７．５４、１３４．８８、１３３．８６、１３３．４４、１３２．２９、１３２．００、１３１．４９、１２９．８８、１２２．４６、１２１．９０、１１９．３８、１１８．０２、６９．５９、５４．９６、５０．５５、４０．０９、３９．８４、３８．４５、３２．１４、２７．７５、２７．６５、２３．６２、１４．４１、１２．９６、１１．５６。ＭＳ  ７８５．４８（Ｍ＋Ｈ）。
【１４５９】
合成実施例３：ｄＢＥＴ３の合成
【１４６０】
【化７１６】
2020513789.tif 000737
Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．４７５ｍＬ、０．０４７５ｍｍｏｌ、１．２当量）を、室温でＪＱ酸（１５．８６ｍｇ、０．０３９６ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（２０．７μＬ、０．１１８８ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１６．５ｍｇ、０．０４３５ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、混合物を２４時間撹拌し、次いで、分取ＨＰＬＣによって精製すると、黄色固体（２２．１４ｍｇ、０．０２９２ｍｍｏｌ、７４％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８２−７．７５（ｍ，１Ｈ）、７．５２−７．３２（ｍ，６Ｈ）、５．０４（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．６６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．５８−３．３５（ｍ，６Ｈ）、２．７８−２．５８（ｍ，６Ｈ）、２．４８−２．４１（ｍ，３Ｈ）、２．１１−２．０２（ｍ，１Ｈ）、１．７０（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．３８、１７１．２６、１７１．１９、１７０．２６、１６８．８６、１６８．２１、１６７．７６、１６６．７２、１５６．２７、１５３．１４、１３８．４４、１３８．３６、１３８．１９、１３４．８７、１３３．７１、１３２．３１、１３１．５７、１３１．５１、１２９．９０、１２９．８６、１２１．８１、１１９．３６、１１７．９５、６９．４８、５４．８３、５０．５２、４０．０９、３９．７６、３８．３０、３２．０９、２３．６３、１４．４０、１１．６１。ＬＣＭＳ  ７５７．４１（Ｍ＋Ｈ）。
【１４６１】
合成実施例４：ｄＢＥＴ５の合成
【１４６２】
【化７１７】
2020513789.tif 000738
Ｎ−（６−アミノヘキシル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．２４７ｍＬ、０．０２４７ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（９．９ｍｇ、０．０２４７ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１２．９μＬ、０．０７４１ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（９．４ｍｇ、０．０２４７ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２１時間撹拌し、次いで、ＭｅＯＨで希釈し、減圧下で濃縮した。粗物質を分取ＨＰＬＣによって精製すると、黄色固体（１３．５６ｍｇ、０．０１６７ｍｍｏｌ、６７％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８２−７．７８（ｍ，１Ｈ）、７．５３（ｄｄ，Ｊ＝７．３，２．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９−７．３７（ｍ，５Ｈ）、５．１０（ｄｔ，Ｊ＝１２．４，５．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、４．７０（ｄｄ，Ｊ＝８．７，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．４２−３．３３（ｍ，２Ｈ）、３．２５（ｄｔ，Ｊ＝１２．３，６．０Ｈｚ，３Ｈ）、２．８７−２．６７（ｍ，７Ｈ）、２．４８−２．４２（ｍ，３Ｈ）、２．１４−２．０９（ｍ，１Ｈ）、１．６９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ）、１．５８（ｓ，４Ｈ）、１．４２（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ、４Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．５１、１７１．３１、１７１．２６、１６９．８２、１６８．２７、１６８．２６、１６７．７５、１５６．２６、１５０．４６、１３８．２０、１３４．９２、１３３．９２、１３３．４７、１３２．３４、１３２．０１、１３１．５２、１２９．８８、１２１．６９、１１９．３４、１１７．９５、１１１．４２、６９．３９、５４．９７、５０．５６、４０．３９、４０．００、３８．４０、３２．１５、３０．４６、３０．１６、２７．５８、２７．４８、２３．６４、１４．４１、１２．９６、１１．５５。ＬＣＭＳ  ８１３．３８。
【１４６３】
合成実施例５：ｄＢＥＴ６の合成
【１４６４】
【化７１８】
2020513789.tif 000739
Ｎ−（８−アミノオクチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．１９１ｍＬ、０．０１９１ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（７．６６ｍｇ、０．０１９１ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０μＬ、０．０５７４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．３ｍｇ、０．０１９１ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２２時間撹拌し、ＭｅＯＨで希釈し、減圧下で濃縮した。粗物質を分取ＨＰＬＣによって精製すると、クリーム色固体が得られた。（８．５３ｍｇ、０．０１０１ｍｍｏｌ、５３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９−７．３６（ｍ，５Ｈ）、５．１０（ｄｔ，Ｊ＝１２．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，２Ｈ）、４．６９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．４２（ｄｄ，Ｊ＝１５．０，８．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．３０−３．１８（ｍ，４Ｈ）、２．９０−２．６４（ｍ，７Ｈ）、２．４５（ｓ，３Ｈ）、２．１３（ｄｔｔ，Ｊ＝１０．８，５．２，２．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．７１（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，３Ｈ）、１．５６（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，４Ｈ）、１．３３（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，８Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．５０、１７２．３８、１７１．３０、１６９．８１、１６８．２８、１６７．７４、１６６．６４、１５６．２５、１３８．３８、１３８．２０、１３７．５５、１３４．９２、１３３．８８、１３３．４２、１３２．２７、１３２．０２、１３１．５０、１２９．８５、１２１．６６、１１９．３０、１１７．９５、６９．３７、５５．０１、５０．５８、４０．５１、４０．１２、３８．４４、３２．１８、３０．４６、３０．３３、３０．２７、３０．２１、２７．９１、２７．８１、２３．６３、１４．４２、１２．９６、１１．５５。ＬＣＭＳ  ８４１．６４（Ｍ＋Ｈ）。
【１４６５】
合成実施例６：ｄＢＥＴ９の合成
【１４６６】
【化７１９】
2020513789.tif 000740
Ｎ−（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．３２１ｍＬ、０．０３２１ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（１２．８７ｍｇ、０．０３２１ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１６．８μＬ、０．０９６３ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１２．２ｍｇ、０．０３２１ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２４時間撹拌し、ＭｅＯＨで希釈し、減圧下で濃縮した。粗物質を分取ＨＰＬＣによって精製すると、黄色油が得られた。（１６．１１ｍｇ、０．０１７６ｍｍｏｌ、５５％）。
【１４６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９−７．３６（ｍ，５Ｈ）、５．１０（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８−４．６７（ｍ，３Ｈ）、３．６４−３．５２（ｍ，１１Ｈ）、３．４８−３．３２（ｍ，６Ｈ）、２．９４−２．６４（ｍ，７Ｈ）、２．５２−２．４３（ｍ，３Ｈ）、２．１８−２．０８（ｍ，１Ｈ）、１．８１（ｐ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，４Ｈ）、１．７３−１．６７（ｍ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ９１８．４５（Ｍ＋Ｈ）。
【１４６８】
合成実施例７：ｄＢＥＴ１７の合成
【１４６９】
【化７２０】
2020513789.tif 000741
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．２８１ｍＬ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−２−（４−（４−シアノフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）酢酸（１１ｍｇ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１４．７μＬ、０．０８４３ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１０．７ｍｇ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２４時間撹拌し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）による精製によって、白色固体（１４．１２ｍｇ、０．０１８２ｍｍｏｌ、６５％）が得られた。
【１４７０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８２−７．７２（ｍ，３Ｈ）、７．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．４４−７．４０（ｍ，１Ｈ）、５．１１−５．０５（ｍ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ），４．６６（ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．４８−３．３２（ｍ，４Ｈ）、３．３０−３．２３（ｍ，１Ｈ）、２．８７−２．６１（ｍ，７Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．１０（ｄｔ，Ｊ＝１０．７，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．７０−１．５９（ｍ，７Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．４２、１７２．６５、１７１．２７、１６９．９２、１６８．２５、１６７．８０、１６５．８８、１５６．３１、１４３．５５、１３８．２４、１３４．８８、１３３．９２、１３３．５０、１３３．３９、１３１．７２、１３１．４６、１３０．５５、１２１．９３、１１９．３９、１１９．２１、１１８．０２、１１５．１７、６９．５９、５５．５０、５０．５５、４０．１０、３９．８３、３８．８６、３２．１１、２７．７８、２７．６７、２３．６２、１４．４１、１２．９１、１１．６４。ＬＣＭＳ  ７７６．３９（Ｍ＋Ｈ）。
【１４７１】
合成実施例８：ｄＢＥＴ１５の合成
【１４７２】
【化７２１】
2020513789.tif 000742
Ｎ−（６−アミノヘキシル）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−５−カルボキサミドトリフルオロアセテート（１３．２９ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ、１当量）およびＪＱ酸（１０．３ｍｇ、０．０２５８ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（０．２６ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（１３．５μＬ、０．０７７５ｍｍｏｌ、３当量）、引き続いてＨＡＴＵ（９．８ｍｇ、０．０２５８ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で撹拌した。２４時間後、この物質をＤＣＭで希釈し、カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）、引き続いて分取ＨＰＬＣによって精製すると、薄黄色固体（１１．４４ｍｇ、０．０１４６ｍｍｏｌ、５７％）が得られた。
【１４７３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．２９−８．２３（ｍ，２Ｈ）、７．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．１，４．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０−７．３４（ｍ，４Ｈ）、５．１７−５．１１（ｍ，１Ｈ）、４．７５−４．６９（ｍ，１Ｈ）、３．５３−３．３２（ｍ，６Ｈ）、３．２５（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，６．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．９０−２．６７（ｍ，６Ｈ）、２．４９−２．３８（ｍ，３Ｈ）、２．１８−２．１０（ｍ，１Ｈ）、１．６４（ｄ，Ｊ＝２２．４Ｈｚ，６Ｈ）、１．４７（ｓ，４Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．４８、１７１．１７、１６８．０５、１６８．０３、１６７．９９、１６７．７０、１６６．６３、１４１．８１、１３８．４０、１３７．４７、１３５．０９、１３４．７７、１３４．７４、１３３．９６、１３３．９４、１３３．３８、１３２．２４、１３２．０５、１３１．４４、１２９．８５、１２４．５７、１２３．１２、１２３．０９、５４．９８、５０．７８、４０．８８、４０．０８、３８．３７、３２．１３、３０．４０、３０．２３、２７．３４、２７．２６、２３．５８、１４．４０、１２．９６、１１．５４。ＬＣＭＳ  ７８３．４３（Ｍ＋Ｈ）。
【１４７４】
合成実施例９：ｄＢＥＴ２の合成
【１４７５】
【化７２２】
2020513789.tif 000743
（１）（Ｒ）−エチル４−（（８−シクロペンチル−７−エチル−５−メチル−６−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン−２−イル）アミノ）−３−メトキシベンゾエートの合成
【１４７６】
【化７２３】
2020513789.tif 000744
（Ｒ）−２−クロロ−８−シクロペンチル−７−エチル−５−メチル−７，８−ジヒドロプテリジン−６（５Ｈ）−オン（４４．２ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１当量）、エチル４−アミノ−３−メトキシベンゾエート（３５．１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、１．２当量）、Ｐｄ２ｄｂａ３（６．９ｍｇ、０．００７５ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）、ＸＰｈｏｓ（１０．７ｍｇ、０．０２２５ｍｍｏｌ、１５ｍｏｌ％）および炭酸カリウム（８２．９ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ、４当量）をｔＢｕＯＨ（１．５ｍＬ、０．１Ｍ）に溶解し、１００℃に加熱した。２１時間後、混合物を室温に冷却し、ｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＤＣＭで洗浄し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、１８分間勾配で０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製によって、黄色油（５２．３ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ、７７％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ８．５７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．６９（ｔｄ，Ｊ＝６．２，２．９Ｈｚ，２Ｈ）、７．５４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．５２（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．３７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．２３（ｄｄ，Ｊ＝７．９，３．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．９７（ｓ，３Ｈ）、３．３３（ｓ，３Ｈ）、２．２０−２．１２（ｍ，１Ｈ）、２．０３−１．９７（ｍ，１Ｈ）、１．８６（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．９，７．６，３．６Ｈｚ，４Ｈ）、１．７８−１．６５（ｍ，４Ｈ）、１．４０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）、０．８８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ４５４．３２（Ｍ＋Ｈ）。
【１４７７】
（２）（Ｒ）−４−（（８−シクロペンチル−７−エチル−５−メチル−６−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン−２−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸の合成
【１４７８】
【化７２４】
2020513789.tif 000745
（Ｒ）−エチル４−（（８−シクロペンチル−７−エチル−５−メチル−６−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン−２−イル）アミノ）−３−メトキシベンゾエート（７３．８ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ、１当量）およびＬｉＯＨ（１１．７ｍｇ、０．４８９ｍｍｏｌ、３当量）をＭｅＯＨ（０．８２ｍＬ）、ＴＨＦ（１．６３ｍＬ）および水（０．８２ｍＬ）に溶解した。２０時間後、さらに水０．８２ｍＬを添加し、混合物をさらに２４時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製すると、クリーム色固体（５３ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、７６％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．６７（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．６４−７．５９（ｍ，２Ｈ）、４．３８（ｄｄ，Ｊ＝７．０，３．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．３６−４．２９（ｍ，１Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、３．３０（ｓ，３Ｈ）、２．１３−１．９８（ｍ，２Ｈ）、１．９５−１．８７（ｍ，２Ｈ）、１．８７−１．７６（ｍ，２Ｈ）、１．７３−１．５７（ｍ，４Ｈ）、０．８６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１６８．６７、１６３．７２、１５３．５９、１５０．７４、１５０．６０、１３０．９５、１２７．８８、１２５．９７、１２３．１４、１２１．６８、１１６．７５、１１２．３５、６１．７６、６１．６６、５６．３１、２９．４０、２９．００、２８．６８、２８．２１、２３．５７、２３．４１、８．６９。ＬＣＭＳ  ４２６．４５（Ｍ＋Ｈ）。
【１４７９】
（３）ｄＢＥＴ２の合成
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．１８３ｍＬ、０．０１８３ｍｍｏｌ、１．２当量）を、室温で（Ｒ）−４−（（８−シクロペンチル−７−エチル−５−メチル−６−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン−２−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（６．４８ｍｇ、０．０１５２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（７．９μＬ、０．０４５６ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（６．４ｍｇ、０．０１６８ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、混合物を２３時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製すると、黄色固体（９．４４ｍｇ、０．０１０２ｍｍｏｌ、６７％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８４−７．７７（ｍ，２Ｈ）、７．５８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５３−７．４６（ｍ，２Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．１１−５．０５（ｍ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、４．４８（ｄｄ，Ｊ＝６．５，３．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．３３−４．２４（ｍ，１Ｈ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）、３．４９−３．３５（ｍ，４Ｈ）、２．９７（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，３Ｈ）、２．８９−２．６５（ｍ，５Ｈ）、２．１７−１．９９（ｍ，４Ｈ）、１．８９（ｄｄ，Ｊ＝１４．５，７．３Ｈｚ，２Ｈ）、１．６９−１．５４（ｍ，６Ｈ）、１．３６（ｄｔ，Ｊ＝７．６，３．９Ｈｚ，１Ｈ）、０．８５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７６．５２、１７４．４８、１７３．０５、１７１．３４、１６９．９９、１６８．９１、１６８．２５、１６７．８０、１６４．５８、１５６．３４、１５４．４８、１５３．１０、１５０．６３、１３８．２２、１３４．８９、１３３．９６、１２９．５３、１２３．９３、１２１．８７、１２０．７８、１１９．３６、１１７．９９、１１１．５４、６９．５５、６３．２９、６３．１０、５６．６８、５０．５５、４０．７１、３９．８６、３２．１５、２９．４３、２９．２６、２８．７３、２８．６３、２７．８１、２７．７７、２４．２５、２３．６３、８．４７。ＬＣＭＳ  ８１０．５８（Ｍ＋Ｈ）。
【１４８０】
合成実施例１０：ｄＢＥＴ７の合成
【１４８１】
【化７２５】
2020513789.tif 000746
Ｎ−（６−アミノヘキシル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．１８６ｍＬ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｒ）−４−（（８−シクロペンチル−７−エチル−５−メチル−６−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン−２−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（７．９ｍｇ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．７μＬ、０．０５５７ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．１ｍｇ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を１９時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望のトリフルオロ酢酸塩が黄色固体（１３．６２ｍｇ、０．０１４３ｍｍｏｌ、７７％）として得られた。
【１４８２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８０（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、７．６１−７．５７（ｍ，２Ｈ）、７．５５−７．４９（ｍ，２Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，２Ｈ）、４．４８（ｄｄ，Ｊ＝６．５，３．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．３３−４．２４（ｍ，１Ｈ）、３．９７（ｓ，３Ｈ）、３．４０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．３４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）、３．３０（ｓ，３Ｈ）、２．９８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．８９−２．８２（ｍ，１Ｈ）、２．７９−２．６３（ｍ，３Ｈ）、２．１７−２．００（ｍ，４Ｈ）、１．９１（ｄｔ，Ｊ＝１４．４，７．１Ｈｚ，３Ｈ）、１．６１（ｄｔ，Ｊ＝１３．４，６．６Ｈｚ，７Ｈ）、１．４７−１．４１（ｍ，３Ｈ）、０．８６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．５４、１７１．３７、１６９．８４、１６８．８４、１６８．２７、１６７．７４、１６４．５９、１５６．２６、１５４．４７、１５３．１８、１５０．６９、１３８．１９、１３４．９１、１３４．０５、１２９．４７、１２４．７８、１２４．０１、１２１．６５、１２０．７７、１１９．２９、１１７．９２、１１７．８６、１１１．５５、６９．３４、６３．３１、６３．１３、５６．６７、５０．５３、４０．９７、３９．９６、３２．１６、３０．４２、３０．１９、２９．４２、２９．２６、２８．７２、２８．６２、２７．６５、２７．４６、２４．２６、２３．６５、８．４７。ＬＣＭＳ  ８３８．６０（Ｍ＋Ｈ）。
【１４８３】
合成実施例１１：ｄＢＥＴ８の合成
【１４８４】
【化７２６】
2020513789.tif 000747
Ｎ−（８−アミノオクチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．１８６ｍＬ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｒ）−４−（（８−シクロペンチル−７−エチル−５−メチル−６−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン−２−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（７．９ｍｇ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．７μＬ、０．０５５７ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．１ｍｇ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を１６時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望のトリフルオロ酢酸塩が灰白色固体（７．１５ｍｇ、０．００７２９６ｍｍｏｌ、３９％）として得られた。
【１４８５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ７．８３−７．７７（ｍ，２Ｈ）、７．６１−７．５６（ｍ，２Ｈ）、７．５５−７．５０（ｍ，２Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，２Ｈ）、４．４９（ｄｄ，Ｊ＝６．６，３．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．３３−４．２４（ｍ，１Ｈ）、３．９７（ｓ，３Ｈ）、３．３９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．３４−３．３２（ｍ，２Ｈ）、３．３０（ｓ，３Ｈ）、３．０１−２．８３（ｍ，２Ｈ）、２．８２−２．６５（ｍ，３Ｈ）、２．１７−２．０１（ｍ，４Ｈ）、１．９１（ｄｔ，Ｊ＝１４．２，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、１．６８−１．５４（ｍ，７Ｈ）、１．３７（ｓ，７Ｈ）、０．８６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．５２、１７１．３５、１６９．８１、１６８．８５、１６８．２８、１６７．７４、１６４．５８、１５６．２７、１５４．４７、１５３．８９、１５０．６４、１３８．１９、１３４．９３、１３４．１８、１２９．５２、１２９．４１、１２４．９１、１２３．８３、１２１．６７、１２０．７６、１１９．３１、１１７．９５、１１７．８９、１１１．５７、６９．３７、６３．３７、６３．１７、５６．６７、５０．５８、４１．１２、４０．１２、３２．１９、３０．４３、３０．２８、３０．２２、３０．１９、２９．４０、２９．２５、２８．７１、２８．６２、２７．９４、２７．７５、２４．２９、２３．６５、８．４６。ＬＣＭＳ  ８６６．５６（Ｍ＋Ｈ）。
【１４８６】
合成実施例１２：ｄＢＥＴ１０の合成
【１４８７】
【化７２７】
2020513789.tif 000748
Ｎ−（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．１７２ｍＬ、０．０１７２ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｒ）−４−（（８−シクロペンチル−７−エチル−５−メチル−６−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロプテリジン−２−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（７．３ｍｇ、０．０１７２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．０μＬ、０．０５１５ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（６．５ｍｇ、０．０１７２ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２３時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望のトリフルオロ酢酸塩が灰白色油（１０．７ｍｇ、０．０１０１ｍｍｏｌ、５９％）として得られた。
【１４８８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．７５（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６−７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．４９−７．４４（ｍ，２Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．０８（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．６９（ｓ，２Ｈ）、４．４４（ｄｄ，Ｊ＝６．７，３．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．３０−４．２１（ｍ，１Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）、３．５９−３．４２（ｍ，１２Ｈ）、３．３５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ）、３．２５（ｓ，３Ｈ）、２．９５−２．６４（ｍ，５Ｈ）、２．１３−１．９５（ｍ，４Ｈ）、１．９１−１．７１（ｍ，７Ｈ）、１．６５−１．４８（ｍ，４Ｈ）、０．８１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．５０、１７１．３５、１６９．８３、１６８．７７、１６８．２５、１６７．６８、１６４．５７、１５６．２６、１５４．４７、１５３．０５、１５０．５９、１３８．１９、１３４．９２、１３３．８９、１２９．５３、１２４．５７、１２３．９８、１２１．７２、１２０．７５、１１９．２６、１１７．９５、１１７．８６、１１１．５４、７１．５１、７１．４６、７１．２８、７１．２０、７０．１８、６９．６５、６９．４１、６３．２７、６３．０７、５６．７１、５０．５７、３８．８４、３７．５９、３２．１７、３０．４１、３０．３２、２９．４６、２９．２６、２８．７３、２８．６４、２４．２７、２３．６５、８．４９。ＬＣＭＳ  ９４２．６２（Ｍ＋Ｈ）。
【１４８９】
合成実施例１３：ｄＢＥＴ１６の合成
【１４９０】
【化７２８】
2020513789.tif 000749
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．４０２ｍＬ、０．０４０２ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｒ）−４−（（４−シクロペンチル−１，３−ジメチル−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−６−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（１６．５５ｍｇ、０．０４０２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（２１μＬ、０．１２０６ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１５．３ｍｇ、０．０４０２ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２１時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣ、引き続いてカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２ｇ  ＮＨ２−シリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２０分勾配）によって精製してＨＰＬＣを得ると、褐色固体（１０．６３ｍｇ、０．０１３４ｍｍｏｌ、３３％）が得られた。
【１４９１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．２２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７３−７．６８（ｍ，１Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、７．４６−７．３９（ｍ，２Ｈ）、６．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．９７−５．８７（ｍ，１Ｈ）、５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、３．９８（ｓ，３Ｈ）、３．６１（ｓ，２Ｈ）、３．４４−３．３６（ｍ，４Ｈ）、２．９２（ｓ，１Ｈ）、２．７８（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．７，８．２，４．５Ｈｚ，２Ｈ）、２．３６−２．２６（ｍ，２Ｈ）、２．１０−１．９０（ｍ，５Ｈ）、１．７６−１．６２（ｍ，６Ｈ）、１．３１（ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７９５．３８（Ｍ＋Ｈ）。
【１４９２】
合成実施例１４：ｄＢＥＴ１１の合成
【１４９３】
【化７２９】
2020513789.tif 000750
（１）エチル４−（（５，１１−ジメチル−６−オキソ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）アミノ）−３−メトキシベンゾエートの合成
２−クロロ−５，１１−ジメチル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ジアゼピン−６（１１Ｈ）−オン（８２．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、１当量）、エチル４−アミノ−３−メトキシベンゾエート（７０．３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１．２当量）、Ｐｄ２ｄｂａ３（１３．７ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）、ＸＰｈｏｓ（２１．５ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、１５ｍｏｌ％）および炭酸カリウム（１６６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、４当量）をｔＢｕＯＨ（３．０ｍＬ）に溶解し、１００℃に加熱した。１７時間後、混合物を室温に冷却し、ｃｅｌｉｔｅを通して濾過した。混合物をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２ｇシリカカラム、０〜１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１９分勾配）によって精製すると、灰白色固体（６４．３ｍｇ、０．１４８ｍｍｏｌ、４９％）が得られた。
【１４９４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、５０％ｃｄ３ｏｄ／ｃｄｃｌ３）δ８．５１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．１７（ｓ，１Ｈ）、７．７３（ｄｄｄ，Ｊ＝１８．７，８．１，１．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．５２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４６−７．４１（ｍ，１Ｈ）、７．１５−７．１０（ｍ，２Ｈ）、４．３４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，４Ｈ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）、３．４７（ｓ，３Ｈ）、３．４３（ｓ，３Ｈ）、１．３８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、５０％ｃｄ３ｏｄ／ｃｄｃｌ３）δ１６９．２８、１６７．３９、１６４．２９、１５５．６４、１５１．７５、１４９．７３、１４７．４５、１４６．２２、１３３．８８、１３３．１８、１３２．３７、１２６．４４、１２４．２９、１２３．７０、１２３．３６、１２２．２６、１２０．５８、１１８．０５、１１６．８３、１１０．８２、６１．３４、５６．２０、３８．６２、３６．２５、１４．５１。ＬＣＭＳ  ４３４．３３（Ｍ＋Ｈ）。
【１４９５】
（２）４−（（５，１１−ジメチル−６−オキソ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸の合成
エチル４−（（５，１１−ジメチル−６−オキソ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）アミノ）−３−メトキシベンゾエート（１０８．９ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ、１当量）およびＬｉＯＨ（１８ｍｇ）をＴＨＦ（２．５ｍＬ）および水（１．２５ｍＬ）に溶解した。２４時間後、ＭｅＯＨ（０．６３ｍＬ）を添加して溶解度を改善し、さらに２４時間撹拌した後、ＭｅＯＨで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、淡黄色固体（４１．３１ｍｇ）が得られた。
【１４９６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．５１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、８．２２（ｓ，１Ｈ）、７．７３（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８，８．１，１．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．５７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９−７．４４（ｍ，１Ｈ）、７．１９−７．１１（ｍ，２Ｈ）、３．９７（ｓ，３Ｈ）、３．４８（ｓ，３Ｈ）、３．４５（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ４０６．３２（Ｍ＋Ｈ）。
【１４９７】
（３）ｄＢＥＴ１１の合成
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．１９０ｍＬ、０．０１９０ｍｍｏｌ  １当量）を、室温で４−（（５，１１−ジメチル−６−オキソ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（７．７１ｍｇ、０．０１９０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．９μＬ、０．０５７１ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．２ｍｇ、０．０１９０ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２２時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製してＨＰＬＣを得ると、所望のトリフルオロ酢酸塩がクリーム色固体（６．７２ｍｇ、０．００７４４ｍｍｏｌ、３９％）として得られた。
【１４９８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．４６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、８．２１（ｓ，１Ｈ）、７．７９−７．７３（ｍ，２Ｈ）、７．５２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０−７．４３（ｍ，３Ｈ）、７．３３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．１５（ｄｄ，Ｊ＝７．７，５．９Ｈｚ，２Ｈ）、４．９８（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．６９（ｓ，２Ｈ）、３．９７（ｓ，３Ｈ）、３．４９（ｓ，３Ｈ）、３．４６−３．３４（ｍ，７Ｈ）、２．８１−２．６７（ｍ，３Ｈ）、２．１３−２．０８（ｍ，１Ｈ）、１．６９（ｄｔ，Ｊ＝６．６，３．５Ｈｚ，４Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７３．４０、１７０．１０、１６９．６８、１６９．００、１６８．８５、１６７．６０、１６７．１５、１６４．７７、１５６．０１、１５５．４２、１５１．８３、１５０．０３、１４８．２１、１３７．８２、１３４．１２、１３３．４８、１３２．５８、１３２．５２、１２８．１１、１２６．７２、１２４．５４、１２２．３３、１２１．０６、１２０．６３、１１８．７７、１１８．３８、１１７．９４、１１７．６２、１０９．６７、６８．９０、５６．３３、４９．９６、４０．１６、３９．４８、３８．７２、３６．３４、３１．８２、２７．２４、２３．１６。ＬＣＭＳ  ７９０．４８（Ｍ＋Ｈ）。
【１４９９】
合成実施例１５：ｄＢＥＴ１２の合成
【１５００】
【化７３０】
2020513789.tif 000751
Ｎ−（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．１８６ｍＬ、０．０１８６ｍｍｏｌ  １当量）を、室温で４−（（５，１１−ジメチル−６−オキソ−６，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ジアゼピン−２−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（７．５３ｍｇ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．７μＬ、０．０５５７ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．１ｍｇ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２２時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製してＨＰＬＣを得ると、所望のトリフルオロ酢酸塩がクリーム色固体（７．５０ｍｇ、０．００７２４ｍｍｏｌ、３９％）として得られた。
【１５０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．４６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、８．２１（ｓ，１Ｈ）、７．７３（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，７．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５０−７．４２（ｍ，３Ｈ）、７．２８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．１５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）、５．０１（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，５．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．６８（ｓ，２Ｈ）、３．９７（ｓ，３Ｈ）、３．６７−３．５８（ｍ，７Ｈ）、３．５８−３．４３（ｍ，１０Ｈ）、３．３９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．３５（ｓ，２Ｈ）、２．９７（ｓ，１Ｈ）、２．８４−２．７０（ｍ，３Ｈ）、２．１６−２．０７（ｍ，１Ｈ）、１．９３−１．７６（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ９２２．５７（Ｍ＋Ｈ）。
【１５０２】
合成実施例１６：ｄＢＥＴ１３の合成
【１５０３】
【化７３１】
2020513789.tif 000752
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．５０１ｍＬ、０．０５０１ｍｍｏｌ  １当量）を、室温で２−（（２−（４−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）アミノ）酢酸（ＭｃＫｅｏｗｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ、２０１４、５７、９０１９のように合成）（１８．２２ｍｇ、０．０５０１ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（２６．３μＬ、０．１５０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１９．０ｍｇ、０．０５０１ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２１時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製してＨＰＬＣを得ると、所望のトリフルオロ酢酸塩が暗黄色油（２９．６６ｍｇ、０．０３４４ｍｍｏｌ、６９％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ９．０９（ｓ，１Ｈ）、８．６５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．１４−８．０６（ｍ，２Ｈ）、７．９４−７．８８（ｍ，１Ｈ）、７．８０−７．７４（ｍ，１Ｈ）、７．５９−７．４７（ｍ，３Ｈ）、７．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，４．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．１１−５．０６（ｍ，１Ｈ）、４．７２（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．９０（ｓ，２Ｈ）、３．２５−３．２２（ｍ，１Ｈ）、３．１２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９６（ｓ，２Ｈ）、２．８９−２．７９（ｍ，１Ｈ）、２．７６−２．６２（ｍ，２Ｈ）、２．４８−２．４２（ｍ，３Ｈ）、２．２９（ｓ，３Ｈ）、２．１０（ｄｄｑ，Ｊ＝１０．２，５．３，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．４９−１．４５（ｍ，２Ｈ）、１．３７（ｄｄ，Ｊ＝６．７，３．６Ｈｚ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．４５、１７１．９８、１７１．３５、１６９．８８、１６８．１７、１６７．８５、１６７．４０、１５９．８８、１５６．２８、１４１．８２、１３８．２６、１３５．８５、１３４．８２、１３３．０９、１３２．０６、１３０．７５、１２９．６７、１２２．０７、１２１．９４、１１９．３０、１１８．９８、１１８．０６、１１７．２４、６９．５６、５０．５６、４０．０５、３９．７３、３２．１３、２７．５３、２３．６２、１８．７１、１７．２８、１１．６４、１０．８５。ＬＣＭＳ  ７４８．４９（Ｍ＋Ｈ）。
【１５０４】
合成実施例１７：ｄＢＥＴ１４の合成
【１５０５】
【化７３２】
2020513789.tif 000753
Ｎ−（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．５１０ｍＬ、０．０５１０ｍｍｏｌ  １当量）を、室温で２−（（２−（４−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）フェニル）イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−３−イル）アミノ）酢酸（ＭｃＫｅｏｗｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ、２０１４、５７、９０１９のように合成）（１８．５２ｍｇ、０．０５１０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（２６．６μＬ、０．１５３ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１９．４ｍｇ、０．０５１０ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２２時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製してＨＰＬＣを得ると、所望のトリフルオロ酢酸塩が暗黄色油（３２．６３ｍｇ、０．０３２８ｍｍｏｌ、６４％）として得られた。
【１５０６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ９．０９（ｓ，１Ｈ）、８．６６（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．１７−８．０８（ｍ，２Ｈ）、７．９２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０−７．４７（ｍ，３Ｈ）、７．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．０９（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７１（ｓ，２Ｈ）、３．９１（ｓ，２Ｈ）、３．６２−３．４６（ｍ，１０Ｈ）、３．３８（ｄｔ，Ｊ＝１６．０，６．４Ｈｚ，３Ｈ）、３．１８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．９７（ｓ，１Ｈ）、２．８９−２．８１（ｍ，１Ｈ）、２．７８−２．６６（ｍ，２Ｈ）、２．４７（ｓ，３Ｈ）、２．３１（ｓ，３Ｈ）、２．１６−２．０８（ｍ，１Ｈ）、１．７９（ｄｔ，Ｊ＝１２．８，６．５Ｈｚ，２Ｈ）、１．６４（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．４８、１７１．８８、１７１．３４、１６９．８０、１６８．２２、１６７．６９、１６７．４２、１５９．８７、１５６．２４、１４１．８７、１３８．２１、１３５．８９、１３４．８８、１３３．１３、１３２．０４、１３０．７６、１２９．６７、１２２．０８、１２１．６９、１１９．２０、１１７．９４、１１７．２３、７１．４４、７１．２２、７１．１０、６９．９２、６９．６２、６９．３８、５０．５７、４９．６４、３８．１１、３７．５５、３２．１６、３０．３０、３０．２０、２３．６３、１１．６７、１０．８８。ＬＣＭＳ  ８８０．４６（Ｍ＋Ｈ）。
【１５０７】
合成実施例１８：ｄＢＥＴ１８の合成
【１５０８】
【化７３３】
2020513789.tif 000754
（１）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセトアミド）プロピル）ピペラジン−１−カルボキシレートの合成
ＪＱ酸（１７６．６ｍｇ、０．４４１ｍｍｏｌ、１当量）を室温でＤＭＦ（４．４ｍＬ）に溶解した。ＨＡＴＵ（１７６ｍｇ、０．４６３ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加し、引き続いてＤＩＰＥＡ（０．２３ｍＬ）、１．３２ｍｍｏｌ、３当量）を添加した。１０分後、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−アミノプロピル）ピペラジン−１−カルボキシレート（１１８ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ、１．１当量）をＤＭＦ（０．４４ｍＬ）中溶液として添加した。２４時間後、混合物を半飽和重炭酸ナトリウムで希釈し、ＤＣＭで２回およびＥｔＯＡｃで１回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、２４ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２３分勾配）による精製によって、黄色油（３２５．５ｍｇ、定量的収率）が得られた。
【１５０９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．６７（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１−７．２８（ｍ，４Ｈ）、４．５８（ｄｄ，Ｊ＝７．５，５．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．５２−３．２３（ｍ，８Ｈ）、２．６３（ｓ，９Ｈ）、２．３７（ｓ，３Ｈ）、１．８０−１．６９（ｍ，２Ｈ）、１．６４（ｓ，３Ｈ）、１．４２（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ３）δ１７１．４１、１６４．３５、１５５．６２、１５４．４５、１５０．２０、１３６．９２、１３６．６４、１３２．１９、１３１．１４、１３０．９８、１３０．４２、１２９．９８、１２８．８０、８０．２４、５６．１１、５４．３２、５２．７０、３８．９６、３７．８５、２８．４２、２５．１７、１４．４３、１３．１６、１１．８２。ＬＣＭＳ  ６２６．３６（Ｍ＋Ｈ）。
【１５１０】
（２）（Ｓ）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（３−（ピペラジン−１−イル）プロピル）アセトアミドの合成
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセトアミド）プロピル）ピペラジン−１−カルボキシレート（３２５．５ｍｇ）をＤＣＭ（５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）に溶解した。ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ溶液（１ｍＬ）を添加し、混合物を１６時間撹拌し、次いで、窒素流下で濃縮すると、黄色固体（２３１．８ｍｇ）が得られ、これをさらに精製することなく使用した。
【１５１１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．６４−７．５３（ｍ，４Ｈ）、５．０５（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．８１−３．６６（ｍ，６Ｈ）、３．６２−３．３３（ｍ，９Ｈ）、３．３０（ｐ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．９４（ｓ，３Ｈ）、２．５１（ｓ，３Ｈ）、２．０９（ｄｑ，Ｊ＝１１．８，６．１Ｈｚ，２Ｈ）、１．７２（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７１．７８、１６９．３８、１５５．８３、１５４．０３、１５２．１４、１４０．５５、１３６．３３、１３４．５８、１３４．５３、１３３．３３、１３２．７３、１３０．８９、１３０．３８、５６．０７、５３．５４、４１．９６、３７．２２、３６．２３、２５．１１、１４．４８、１３．１４、１１．６８。ＬＣＭＳ  ５２６．２９（Ｍ＋Ｈ）。
【１５１２】
（３）（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（６−（４−（３−（２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセトアミド）プロピル）ピペラジン−１−イル）−６−オキソヘキシル）カルバメートの合成
（Ｓ）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）−Ｎ−（３−（ピペラジン−１−イル）プロピル）アセトアミド（６２．１ｍｇ）および６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（２４．０ｍｇ、０．１０３７ｍｍｏｌ、１等量）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（７２．２μＬ、０．４１４７ｍｍｏｌ、４当量）、引き続いてＨＡＴＵ（３９．４ｍｇ、０．１０３７ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２５時間撹拌した。混合物を半飽和重炭酸ナトリウムで希釈し、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、１５分勾配）による精製によって、黄色油（７１．７５ｍｇ、０．０９７０ｍｍｏｌ、９４％）が得られた。
【１５１３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．６１（ｓ，１Ｈ）、７．４３−７．２８（ｍ，４Ｈ）、４．６３（ｓ，１Ｈ）、４．６１−４．５６（ｍ，１Ｈ）、３．８２−３．２１（ｍ，１０Ｈ）、３．１１−３．０１（ｍ，２Ｈ）、２．６１（ｄ，Ｊ＝２４．３Ｈｚ，９Ｈ）、２．３８（ｓ，３Ｈ）、２．２８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．７３（ｄｑ，Ｊ＝１３．８，７．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．６３−１．５５（ｍ，２Ｈ）、１．５３−１．２４（ｍ，１４Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄｃｌ３）δ１７１．６３、１７１．１１、１６４．３４、１５６．１７、１５５．６６、１５０．２１、１３６．９６、１３６．７２、１３２．２５、１３１．１４、１３１．０１、１３０．４７、１３０．００、１２８．８５、７９．１１、５６．４２、５４．４６、５３．０６、５２．８２、４５．０４、４１．０２、４０．４７、３９．２９、３８．３３、３３．００、２９．９０、２８．５４、２６．６０、２５．２９、２４．８６、１４．４７、１３．２０、１１．８６。ＬＣＭＳ  ７３９．３７（Ｍ＋Ｈ）。
【１５１４】
（４）（Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（６−アミノヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）プロピル）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセトアミドの合成
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル（６−（４−（３−（２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセトアミド）プロピル）ピペラジン−１−イル）−６−オキソヘキシル）カルバメート（７１．７５ｍｇ、０．０９７０ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（２ｍＬ）およびＭｅＯＨ（０．２ｍＬ）に溶解した。ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ溶液（０．４９ｍＬ）を添加し、混合物を２時間撹拌し、次いで、窒素流、引き続いて真空下で濃縮すると、黄色泡（５９．８ｍｇ、０．０８４０ｍｍｏｌ、８７％）が得られた。
【１５１５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．６８−７．５３（ｍ，４Ｈ）、５．０４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．６６（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．２３（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．６３−３．３４（ｍ，７Ｈ）、３．２９−３．００（ｍ，５Ｈ）、２．９５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，５Ｈ）、２．５１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，５Ｈ）、２．０８（ｓ，２Ｈ）、１．７７−１．６２（ｍ，７Ｈ）、１．４５（ｄｔ，Ｊ＝１５．３，８．６Ｈｚ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７３．７７、１７１．８４、１６９．３５、１５５．８５、１５３．９９、１４０．５６、１３６．４０、１３４．５８、１３３．３５、１３２．７０、１３０．３９、５５．８３、５３．５７、５２．９２、５２．７０、４３．５７、４０．５５、３９．６７、３７．３３、３６．２５、３３．１７、２８．２６、２６．９４、２５．３３、２５．２６、１４．４９、１３．１５、１１．６５。ＬＣＭＳ  ６３９．３５（Ｍ＋Ｈ）。
【１５１６】
（５）ｄＢＥＴ１８の合成
（Ｓ）−Ｎ−（３−（４−（６−アミノヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）プロピル）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）アセトアミド二塩酸塩（２０．０ｍｇ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）および２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）酢酸（９．３２ｍｇ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（０．２８１ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（１９．６μＬ、０．１１２４ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、引き続いてＨＡＴＵ（１０．７ｍｇ、０．０２８１ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。２４時間後、混合物をＭｅＯＨで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望のトリフルオロ酢酸塩が得られた。
【１５１７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８３−７．７９（ｍ，１Ｈ）、７．５４（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｑ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，５Ｈ）、５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、４．６８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．５９−３．３２（ｍ，８Ｈ）、３．２８−３．１８（ｍ，４Ｈ）、２．８７（ｄｄｄ，Ｊ）＝１９．０，１４．７，５．３Ｈｚ，２Ｈ）、２．８０−２．６５（ｍ，６Ｈ）、２．４４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，５Ｈ）、２．３３−２．２５（ｍ，１Ｈ）、２．１４（ｄｄ，Ｊ＝９．８，４．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．０６−１．８９（ｍ，３Ｈ）、１．７０（ｓ，３Ｈ）、１．６１（ｄｑ，Ｊ＝１４．４，７．３，６．９Ｈｚ，４Ｈ）、１．４５−１．３７（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ１７４．５２、１７３．９７、１７３．６９、１７１．４４、１６９．８８、１６８．２６、１６７．８３、１６６．７２、１５６．３６、１３８．２８、１３７．８４、１３４．８９、１３３．５２、１３２．１２、１３１．８３、１３１．３８、１２９．８９、１２１．８７、１１９．３２、１１８．０１、６９．５２、５５．６４、５５．０３、５２．７９、５０．５８、４３．６９、３９．７７、３８．５７、３６．８９、３３．４７、３２．１６、２９．９３、２７．３４、２５．７６、２５．４５、２３．６３、１４．３９、１２．９４、１１．６６。ＬＣＭＳ  ９５３．４３（Ｍ＋Ｈ）。
【１５１８】
合成実施例１９：ｄＢＥＴ１９の合成
【１５１９】
【化７３４】
2020513789.tif 000755
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２３５μＬ、０．０２３５ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−２−（４−（４−クロロフェニル）−２−（シアノメチル）−３，９−ジメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−６−イル）酢酸（１０ｍｇ、０．０２３５ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１２．３μＬ、０．０７０４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．９ｍｇ、０．０２３５ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を１８．５時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（１２．９６ｍｇ、０．０１６０ｍｍｏｌ、６８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５−７．３７（ｍ，６Ｈ）、５．１４−５．０６（ｍ，１Ｈ）、４．７７（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２Ｈ）、４．６４（ｄｄ，Ｊ＝８．０，５．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．４５−３．３２（ｍ，５Ｈ）、３．２９−３．２１（ｍ，２Ｈ）、２．８３−２．６６（ｍ，６Ｈ）、２．５８（ｓ，３Ｈ）、２．１４−２．０６（ｍ，１Ｈ）、１．７１−１．５７（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８１０．３０、Ｍ＋Ｈ）。
【１５２０】
合成実施例２０：ｄＢＥＴ２０の合成
【１５２１】
【化７３５】
2020513789.tif 000756
３−（（２−（（４−（４−（４−アミノブタノイル）ピペラジン−１−イル）フェニル）アミノ）−５−メチルピリミジン−４−イル）アミノ）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）ベンゼンスルホンアミドトリフルオロアセテート（７．４１ｍｇ、０．０１０７ｍｍｏｌ、１当量）および２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）酢酸（３．６ｍｇ、０．０１０７ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＤＭＦ（２１４μＬ、０．０５Ｍ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（５．６μＬ、０．０３２１ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（４．１ｍｇ、０．０１０７ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。２２．５時間後、混合物をＭｅＯＨで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望の生成物が褐色残渣（６．２７  ｍｇ、０．００７０１ｍｍｏｌ、６５％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．０６（ｓ，１Ｈ）、７．８４−７．７５（ｍ，３Ｈ）、７．６５（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．２５−７．２０（ｍ，２Ｈ）、６．９９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８（ｓ，２Ｈ）、３．７９−３．６６（ｍ，４Ｈ）、３．４０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．２４−３．１３（ｍ，４Ｈ）、２．８２−２．６８（ｍ，３Ｈ）、２．５２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．２４−２．１９（ｍ，３Ｈ）、２．１２（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、１．９２（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，６．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．１８（ｓ，９Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８９５．６３（Ｍ＋Ｈ）。
【１５２２】
合成実施例２１：ｄＢＥＴ２１の合成
【１５２３】
【化７３６】
2020513789.tif 000757
４−（（１０−アミノデシル）オキシ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオントリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２３２μＬ、０．０２３２ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（９．３ｍｇ、０．０２３２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１２．１μＬ、０．０６９６ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．８ｍｇ、０．０２３２ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を１８時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。分取ＨＰＬＣ、引き続いてカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が灰白色残渣（１．８４ｍｇ、０．００２３５ｍｍｏｌ、１０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７７−７．７３（ｍ，１Ｈ）、７．５０−７．３３（ｍ，６Ｈ）、５．０９（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．６２（ｓ，１Ｈ）、４．２１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．３６（ｓ，２Ｈ）、２．８７−２．６７（ｍ，６Ｈ）、２．４４（ｓ，３Ｈ）、１．８８−１．８２（ｍ，２Ｈ）、１．７０（ｓ，３Ｈ）、１．５８（ｓ，４Ｈ）、１．２９（ｓ，８Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７８４．５１（Ｍ＋Ｈ）。
【１５２４】
合成実施例２２：ｄＢＥＴ２２の合成
【１５２５】
【化７３７】
2020513789.tif 000758
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２４７μＬ、０．０２４７ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−６−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−３，９−ジメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−カルボン酸（１０．９８ｍｇ、０．０２４７ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１２．９μＬ、０．０７４０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（９．４ｍｇ、０．０２４７ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、混合物を２１時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（９．７９ｍｇ、０．０１１８ｍｍｏｌ、４８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４８−７．３４（ｍ，５Ｈ）、５．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．４，３．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、４．６９（ｔｄ，Ｊ＝７．２，１．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．７６（ｓ，３Ｈ）、３．５５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．４８−３．３３（ｍ，４Ｈ）、２．９３−２．８２（ｍ，１Ｈ）、２．７８−２．６４（ｍ，５Ｈ）、２．１４−２．０７（ｍ，１Ｈ）、１．９６（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，３Ｈ）、１．６６（ｓ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８２９．３９（Ｍ＋Ｈ）。
【１５２６】
合成実施例２３：ｄＢＥＴ２３の合成
【１５２７】
【化７３８】
2020513789.tif 000759
Ｎ−（８−アミノオクチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２２０μＬ、０．０２２０ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−６−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−３，９−ジメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−カルボン酸（９．８７ｍｇ、０．０２２０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１１．５μＬ、０．０６６０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．４ｍｇ、０．０２２０ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、混合物を２１時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（８．８４ｍｇ、０．００９９８ｍｍｏｌ、４５％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０−７．３９（ｍ，５Ｈ）、５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，２Ｈ）、４．６８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、３．７６（ｓ，３Ｈ）、３．５４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．３９−３．３２（ｍ，３Ｈ）、３．２９（ｓ，１Ｈ）、２．９０−２．８３（ｍ，１Ｈ）、２．７９−２．６８（ｍ，５Ｈ）、２．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．９，３．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．９９（ｓ，３Ｈ）、１．６５−１．５３（ｍ，４Ｈ）、１．３６（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，８Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８８５．４７（Ｍ＋Ｈ）。
【１５２８】
合成実施例２４：ｄＢＥＴ２４の合成
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメートの合成
２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）酢酸（２００ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（６．０ｍＬ、０．１Ｍ）に溶解した。ＨＡＴＵ（２２８．９ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ、１当量）、ＤＩＰＥＡ（０．３１５ｍＬ、１．８１ｍｍｏｌ、３当量）およびＮ−Ｂｏｃ−２，２’−（エチレンジオキシ）ジエチルアミン（０．１４３ｍＬ、０．６０２ｍｍｏｌ、１当量）を順次添加した。６時間後、さらなるＨＡＴＵ（１１４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、０．５当量）を添加して反応の完結を確実にした。さらに２４時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水でおよび食塩水で２回洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、１５分勾配）による精製によって、所望の生成物が黄色油（０．２５ｇ、０．４４ｍｍｏｌ、７４％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８２−７．７５（ｍ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、３．６６−３．５８（ｍ，６Ｈ）、３．５３−３．４５（ｍ，４Ｈ）、３．１９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．９５−２．８３（ｍ，１Ｈ）、２．８０−２．６７（ｍ，２Ｈ）、２．１９−２．１２（ｍ，１Ｈ）、１．４１（ｓ，９Ｈ）。ＬＣＭＳ  ５６３．３４（Ｍ＋Ｈ）。
【１５２９】
ステップ２：Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（０．２５ｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１当量）をＴＦＡ（４．５ｍＬ）に溶解し、５０℃に加熱した。３時間後、混合物を室温に冷却し、ＭｅＯＨで希釈し、減圧下で濃縮した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、所望の生成物が黄褐色固体（０．１９７ｇ、０．３４２ｍｍｏｌ、７７％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５−７．５０（ｍ，１Ｈ）、７．４３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８（ｓ，２Ｈ）、３．７４−３．６６（ｍ，６Ｈ）、３．６４（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．１４−３．０８（ｍ，２Ｈ）、２．８９（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．５，１３．９，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．８０−２．６６（ｍ，２Ｈ）、２．１６（ｄｔｄ，Ｊ＝１３．０，５．７，２．７Ｈｚ，１Ｈ）。ＬＣＭＳ  ４６３．３６（Ｍ＋Ｈ）。
【１５３０】
ステップ２：ｄＢＥＴ２４の合成
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．３２４ｍＬ、０．０３２４ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ酸（１３．０ｍｇ、０．３２４ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１６．９μＬ、０．０９７２ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１２．３ｍｇ、０．０３２４ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１８時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が灰白色固体（２０．０ｍｇ、０．０２３６ｍｍｏｌ、７３％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７７−７．７２（ｍ，１Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５−７．３５（ｍ，５Ｈ）、５．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．３，５．４，３．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、４．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．９，５．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．６８−３．６２（ｍ，６Ｈ）、３．５９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．５４−３．４８（ｍ，２Ｈ）、３．４７−３．３５（ｍ，４Ｈ）、２．８４（ｄｄｄ，Ｊ＝１９．４，９．９，４．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．７７−２．６９（ｍ，２Ｈ）、２．６８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，３Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．１２（ｄｔ，Ｊ＝９．８，５．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．６８（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８４５．３９（Ｍ＋Ｈ）。
【１５３１】
合成実施例２５：ｄＢＥＴ２５の合成
【１５３２】
【化７３９】
2020513789.tif 000760
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１８３μＬ、０．０１８３ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−６−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−２，９−ジメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボン酸（８．１６ｍｇ、０．０１８３ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．６μＬ、０．０５５０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．０ｍｇ、０．０１８３ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、混合物を２３時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が黄色固体（４．３９ｍｇ、０．００５２９ｍｍｏｌ、２９％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４３−７．３１（ｍ，４Ｈ）、５．１６−５．１０（ｍ，１Ｈ）、４．７７（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２Ｈ）、４．５６（ｓ，１Ｈ）、３．７４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，３Ｈ）、３．６６−３．６０（ｍ，１Ｈ）、３．５０（ｄｄ，Ｊ＝１６．５，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．３７−３．３２（ｍ，１Ｈ）、３．２８（ｓ，３Ｈ）、２．８５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．７５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．７１（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，３Ｈ）、２．５９（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，３Ｈ）、２．１８−２．１０（ｍ，１Ｈ）、１．３６−１．２４（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８２９．３８（Ｍ＋Ｈ）。
【１５３３】
合成実施例２６：ｄＢＥＴ２６の合成
【１５３４】
【化７４０】
2020513789.tif 000761
Ｎ−（８−アミノオクチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１８６μＬ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−６−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−２，９−ジメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−３−カルボン酸（８．２６ｍｇ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．７μＬ、０．０５５７ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．１ｍｇ、０．０１８６ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、混合物を２３時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物がクリーム色固体（６．３４ｍｇ、０．００７１６ｍｍｏｌ、３８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８３−７．７８（ｍ，１Ｈ）、７．５３（ｄｄ，Ｊ＝７．３，２．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５−７．３８（ｍ，３Ｈ）、７．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．３Ｈｚ，２Ｈ）、５．１６−５．０８（ｍ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、４．５６（ｓ，１Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、３．６６（ｄｄ，Ｊ＝１５．９，８．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．５０（ｄｄ，Ｊ＝１６．９，６．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．３２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，４Ｈ）、２．８４−２．７４（ｍ，３Ｈ）、２．７０（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．６６−２．５４（ｍ，３Ｈ）、２．１４（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．６２−１．２２（ｍ，１２Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８８５．４８（Ｍ＋Ｈ）。
【１５３５】
合成実施例２７：ｄＢＥＴ２７の合成
【１５３６】
【化７４１】
2020513789.tif 000762
４−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオントリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２５７μＬ、０．０２５７ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ酸（１０．３ｍｇ、０．０２５７ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１３．４μＬ、０．０７７１ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（９．８ｍｇ、０．０２５７ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１８時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（１４．５３ｍｇ、０．０１９５ｍｍｏｌ、７６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７５（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５，７．３，１．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７−７．３０（ｍ，６Ｈ）、５．００（ｄｄｄ，Ｊ＝２５．４，１２．２，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．６１（ｔｄ，Ｊ＝９．４，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．３６（ｑ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．９６−３．８９（ｍ，２Ｈ）、３．７４（ｑ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．５３−３．４１（ｍ，３Ｈ）、３．３０−３．２４（ｍ，１Ｈ）、２．７８−２．５３（ｍ，６Ｈ）、２．４１（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，３Ｈ）、２．０９−１．９８（ｍ，１Ｈ）、１．６７（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，３Ｈ）。
【１５３７】
合成実施例２８：ｄＢＥＴ２８の合成
【１５３８】
【化７４２】
2020513789.tif 000763
４−（４−アミノブトキシ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオントリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２０２μＬ、０．０２０２ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ酸（８．１ｍｇ、０．０２０２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１０．６μＬ、０．０６０６ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．７ｍｇ、０．０２０２ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１８．５時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物がクリーム色固体（１０．４６ｍｇ、０．０１４４ｍｍｏｌ、７１％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４３（ｔｄ，Ｊ＝６．５，２．５Ｈｚ，４Ｈ）、７．３４（ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、５．０８−４．９８（ｍ，１Ｈ）、４．６４（ｔｄ，Ｊ＝９．１，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．２６（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．５７−３．３２（ｍ，４Ｈ）、２．８４−２．５９（ｍ，６Ｈ）、２．４５−２．３７（ｍ，３Ｈ）、２．０８−２．０１（ｍ，１Ｈ）、２．００−１．９１（ｍ，２Ｈ）、１．８２（ｄｑ，Ｊ＝１３．８，６．９Ｈｚ，２Ｈ）、１．６８（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７２８．３８（Ｍ＋Ｈ）。
【１５３９】
合成実施例２９：ｄＢＥＴ２９の合成
【１５４０】
【化７４３】
2020513789.tif 000764
４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオンのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２０５μＬ、０．０２０５ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ酸（８．２ｍｇ、０．０２０５ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１０．７μＬ、０．０６１４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．８ｍｇ、０．０２０５ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１９時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（８．０４ｍｇ、０．０１０６ｍｍｏｌ、５２％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７５−７．７１（ｍ，１Ｈ）、７．５１−７．３４（ｍ，６Ｈ）、５．０７（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．１，５．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．６２（ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．２２（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．４４−３．３２（ｍ，２Ｈ）、３．２９−３．２１（ｍ，２Ｈ）、２．８８−２．６５（ｍ，６Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．１３−２．０６（ｍ，１Ｈ）、１．８６（ｄｔ，Ｊ＝１３．９，６．７Ｈｚ，２Ｈ）、１．６８（ｓ，３Ｈ）、１．５９（ｄｑ，Ｊ＝１４．２，７．０Ｈｚ，４Ｈ）、１．５４−１．４５（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７５６．４０（Ｍ＋Ｈ）。
【１５４１】
合成実施例３０：ｄＢＥＴ３０の合成
【１５４２】
【化７４４】
2020513789.tif 000765
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１６３μＬ、０．０１６３ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−３，９−ジメチル−６−（２−（（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−オキソエチル）−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−カルボン酸（９．３１ｍｇ、０．０１６３ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（８．５μＬ、０．０４９０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（６．２ｍｇ、０．０１６３ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、混合物を２３．５時間撹拌し、次いで、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望の生成物が黄色油（１１．４８ｍｇ、０．０１０７ｍｍｏｌ、６６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８２−７．７８（ｍ，１Ｈ）、７．５４−７．３５（ｍ，６Ｈ）、５．０９（ｔｄ，Ｊ＝１２．７，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．７７−４．７０（ｍ，３Ｈ）、３．５６−３．３１（ｍ，１２Ｈ）、３．２３（ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．０Ｈｚ，３Ｈ）、３．０５（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．９３−２．８１（ｍ，５Ｈ）、２．７８−２．６３（ｍ，５Ｈ）、２．１５−２．０５（ｍ，２Ｈ）、１．９６−１．８６（ｍ，４Ｈ）、１．６８（ｓ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ９５４．５５（Ｍ＋Ｈ）。
【１５４３】
合成実施例３１：ｄＢＥＴ３１の合成
【１５４４】
【化７４５】
2020513789.tif 000766
Ｎ−（８−アミノオクチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１５３μＬ、０．０１５３ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−３，９−ジメチル−６−（２−（（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル）アミノ）−２−オキソエチル）−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−カルボン酸（８．７ｍｇ、０．０１５３ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（７．９μＬ、０．０４５８ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（５．８ｍｇ、０．０１５３ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、混合物を２５時間撹拌し、次いで、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望の生成物がナイスブラウン（糞褐色に似ていない、煉瓦に似た種類）油（９．５２ｍｇ、０．００８４７ｍｍｏｌ、５５％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５９−７．４０（ｍ，６Ｈ）、５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，２Ｈ）、４．７１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．５３−３．３４（ｍ，８Ｈ）、３．２９−３．１１（ｍ，６Ｈ）、３．０３−２．６１（ｍ，１３Ｈ）、２．１５（ｓ，１Ｈ）、２．０１−１．８４（ｍ，５Ｈ）、１．５９（ｓ，４Ｈ）、１．３７（ｓ，８Ｈ）。ＬＣＭＳ  １０１０．６２（Ｍ＋Ｈ）。
【１５４５】
合成実施例３２：ｄＢＥＴ３２の合成
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１８０μＬ、０．０１８０ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で４−（４−（４−（（４−（（３−（Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）スルファモイル）フェニル）アミノ）−５−メチルピリミジン−２−イル）アミノ）フェニル）ピペラジン−１−イル）−４−オキソブタン酸（１０．７ｍｇ、０．０１８０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．４μＬ、０．０５３９ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（６．８ｍｇ、０．０１８０ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を１９時間撹拌した。次いで、混合物をメタノールで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望の生成物が褐色油（４．４０ｍｇ、０．００４４９ｍｍｏｌ、２５％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．０８（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８４−７．７６（ｍ，３Ｈ）、７．６３（ｓ，１Ｈ）、７．５７−７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．２２（ｔｄ，Ｊ＝６．７，２．２Ｈｚ，２Ｈ）、７．０３−６．９７（ｍ，２Ｈ）、５．１４（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．７２（ｄｔ，Ｊ＝１０．０，５．２Ｈｚ，４Ｈ）、３．３４−３．３３（ｍ，１Ｈ）、３．２３−３．１２（ｍ，５Ｈ）、２．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．０Ｈｚ，３Ｈ）、２．８０−２．６９（ｍ，４Ｈ）、２．６４（ｄｄ，Ｊ＝７．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．５０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．２２（ｄｄ，Ｊ＝２．４，０．９Ｈｚ，３Ｈ）、２．１７−２．１１（ｍ，１Ｈ）、１．６７−１．５２（ｍ，４Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，９Ｈ）。ＬＣＭＳ  ９８０．６４（Ｍ＋Ｈ）。
【１５４６】
合成実施例３３：ｄＢＥＴ３３の合成
【１５４７】
【化７４６】
2020513789.tif 000767
Ｎ−（８−アミノオクチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１８８μＬ、０．０１８８ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で４−（４−（４−（（４−（（３−（Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）スルファモイル）フェニル）アミノ）−５−メチルピリミジン−２−イル）アミノ）フェニル）ピペラジン−１−イル）−４−オキソブタン酸（１０．８ｍｇ、０．０１８８ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．８μＬ、０．０５６４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．１ｍｇ、０．０１８８ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２３時間撹拌した。次いで、混合物をメタノールで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望の生成物が褐色残渣（７．４１ｍｇ、０．００７１５ｍｍｏｌ、３８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．０６（ｓ，１Ｈ）、７．８０（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．５，７．６，３．２Ｈｚ，３Ｈ）、７．６５（ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．５７−７．５１（ｍ，２Ｈ）、７．４１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．２５（ｔｄ，Ｊ＝６．７，２．９Ｈｚ，２Ｈ）、７．０２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、５．１６−５．０９（ｍ，１Ｈ）、４．７５（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．７６（ｄｑ，Ｊ＝１６．０，５．３Ｈｚ，４Ｈ）、３．２９−３．１２（ｍ，７Ｈ）、３．００−２．６７（ｍ，７Ｈ）、２．５１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．２２（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，３Ｈ）、２．１３（ｄｔｄ，Ｊ＝１０．４，５．７，３．１Ｈｚ，１Ｈ）、１．５９−１．５２（ｍ，２Ｈ）、１．５１−１．４３（ｍ，２Ｈ）、１．３２（ｔ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，８Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，９Ｈ）。ＬＣＭＳ  １０３６．６９（Ｍ＋Ｈ）。
【１５４８】
合成実施例３４：ｄＢＥＴ３４の合成
【１５４９】
【化７４７】
2020513789.tif 000768
Ｎ−（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１７３μＬ、０．０１７３ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で４−（４−（４−（（４−（（３−（Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）スルファモイル）フェニル）アミノ）−５−メチルピリミジン−２−イル）アミノ）フェニル）ピペラジン−１−イル）−４−オキソブタン酸（１０．３ｍｇ、０．０１７３ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（９．０μＬ、０．０５１９ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（６．６ｍｇ、０．０１７３ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２５時間撹拌した。次いで、混合物をメタノールで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望の生成物が褐色残渣（７．９９ｍｇ、０．００７１８ｍｍｏｌ、４２％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．０６（ｓ，１Ｈ）、７．８３−７．７６（ｍ，３Ｈ）、７．６５（ｓ，１Ｈ）、７．５８−７．５０（ｍ，２Ｈ）、７．４３（ｄｄ，Ｊ＝１７．７，８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．２７−７．２１（ｍ，２Ｈ）、７．０２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、５．１３（ｄｔ，Ｊ＝１２．７，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．７３（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，４Ｈ）、３．６３−３．４９（ｍ，１０Ｈ）、３．４１（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．２７−３．１５（ｍ，５Ｈ）、３．０１−２．８１（ｍ，４Ｈ）、２．７９−２．６３（ｍ，５Ｈ）、２．５０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．２２（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，３Ｈ）、２．１７−２．１１（ｍ，１Ｈ）、１．８８−１．７０（ｍ，４Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，９Ｈ）。ＬＣＭＳ  １１１２．７４（Ｍ＋Ｈ）。
【１５５０】
合成実施例３５：ｄＢＥＴ３５の合成
【１５５１】
【化７４８】
2020513789.tif 000769
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）アミノ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１８５μＬ、０．０１８５ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ酸（７．４ｍｇ、０．０１８５ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（９．６μＬ、０．０５５４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．０ｍｇ、０．０１８５ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１７時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（２．７１ｍｇ、０．００３５１ｍｍｏｌ、１９％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．４８−７．３７（ｍ，４Ｈ）、７．３４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．１４（ｄｄ，Ｊ＝７．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．６７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．１４（ｔｄ，Ｊ＝１３．５，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．６６−４．６０（ｍ，１Ｈ）、４．５９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、４．４３−４．３１（ｍ，２Ｈ）、３．８８（ｓ，２Ｈ）、３．２５（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，７．１Ｈｚ，４Ｈ）、２．９４−２．７２（ｍ，３Ｈ）、２．６８（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，３Ｈ）、２．４９−２．４０（ｍ，４Ｈ）、２．２１−２．１２（ｍ，１Ｈ）、１．６８（ｓ，３Ｈ）、１．５３（ｓ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７７０．５１（Ｍ＋Ｈ）。
【１５５２】
合成実施例３６：ｄＢＥＴ３６の合成
【１５５３】
【化７４９】
2020513789.tif 000770
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２２２μＬ、０．０２２２ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ酸（８．９ｍｇ、０．０２２２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１１．６μＬ、０．０６６６ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．４ｍｇ、０．０２２２ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１７．５時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（１２．４２ｍｇ、０．０１５６ｍｍｏｌ、７０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８０−７．７４（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４２（ｑ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，４Ｈ）、５．１１（ｄｔ，Ｊ＝１２．３，４．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．６３（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．１０−４．００（ｍ，２Ｈ）、３．３９（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．９，８．８，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．３０−３．２１（ｍ，５Ｈ）、２．８８−２．７６（ｍ，１Ｈ）、２．７４−２．６５（ｍ，５Ｈ）、２．４４（ｓ，３Ｈ）、２．１５−２．０８（ｍ，１Ｈ）、１．６９（ｓ，３Ｈ）、１．６３−１．５５（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７６９．４９（Ｍ＋Ｈ）。
【１５５４】
合成実施例３７：ｄＢＥＴ３７の合成
【１５５５】
【化７５０】
2020513789.tif 000771
６−アミノ−Ｎ−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）メチル）ヘキサンアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（１９５μＬ、０．０１９５ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ酸（７．８ｍｇ、０．０１９５ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１０．２μＬ、０．０５８４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．４ｍｇ、０．０１９５ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１８時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（１１．８３ｍｇ、０．０１５１ｍｍｏｌ、７７％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７８−７．７４（ｍ，２Ｈ）、７．７１（ｄｄ，Ｊ＝５．３，３．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４２（ｑ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，４Ｈ）、５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．８２（ｓ，２Ｈ）、４．６３（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．４０（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．０，８．８，１．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．３０−３．２１（ｍ，３Ｈ）、２．８６（ｄｄｄ，Ｊ＝１８．４，１４．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、２．７４（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．８，１０．１，２．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．６９（ｓ，３Ｈ）、２．４４（ｓ，３Ｈ）、２．３０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．１３（ｄｔｄ，Ｊ＝１２．９，４．９，２．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．７４−１．６４（ｍ，５Ｈ）、１．５９（ｐ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、１．４６−１．３８（ｍ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７８３．４７（Ｍ＋Ｈ）。
【１５５６】
合成実施例３８：ｄＢＥＴ３８の合成
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（３−（３−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）プロポキシ）プロピル）カルバメートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル（３−（３−アミノプロポキシ）プロピル）カルバメート（１３４．５ｍｇ、０．５７９ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（５．７９ｍｌ、０．０５Ｍ）に溶解し、次いで、２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）酢酸（１９２．３８ｍｇ、０．５７９ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（０．２８ｍｌ、１．７４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１５３．６１ｍｇ、０．５７９ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で１８時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水、次いで食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、黄色油（１５７．１ｍｇ）が得られた。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ２５分勾配）によって精製すると、黄色油（１２１．３ｍｇ、０．２２２ｍｍｏｌ、３８．２７％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，２Ｈ）、３．５３−３．３７（ｍ，６Ｈ）、３．１４−３．０７（ｍ，２Ｈ）、２．９４−２．８８（ｍ，１Ｈ）、２．７９−２．６８（ｍ，２Ｈ）、２．１６（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，６．６，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．８１（ｐ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．７３−１．６５（ｍ，２Ｈ）、１．４０（ｓ，９Ｈ）。ＬＣＭＳ  ５４７．６（Ｍ＋Ｈ）。
【１５５７】
ステップ２：Ｎ−（３−（３−アミノプロポキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソプペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロ酢酸塩の合成
ＴＦＡ（２．２２ｍｌ、０．１Ｍ）をｔｅｒｔ−ブチル（３−（３−（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）プロポキシ）プロピル）カルバメート（１２１．３ｍｇ、０．２２２ｍｍｏｌ、１当量）に添加し、混合物を５０℃で２時間撹拌した。次いで、混合物をＭｅＯＨに溶解し、減圧下で濃縮すると、褐色油（１１４．１ｍｇ）が得られ、これをさらに精製することなく進めた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８１−７．７４（ｍ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、３．５７−３．５２（ｍ，２Ｈ）、３．４８（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ）、３．４０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．０６（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）、２．８７（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．１，１０．１，７．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．７９−２．６５（ｍ，２Ｈ）、２．１５（ｄｔｄ，Ｊ＝１２．８，５．５，２．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．９２（ｄｔ，Ｊ＝１１．７，５．９Ｈｚ，２Ｈ）、１．８１（ｐ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ  ４４７．２（Ｍ＋Ｈ）。
【１５５８】
ステップ３：ｄＢＥＴ３８の合成
【１５５９】
【化７５１】
2020513789.tif 000772
Ｎ−（３−（３−アミノプロポキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．２１５ｍＬ、０．０２１５ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（８．６ｍｇ、０．０２１５ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１１．２μＬ、０．０６４４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．２ｍｇ、０．０２１５ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。１９時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物がクリーム色固体（１０．６ｍｇ、０．０１２７ｍｍｏｌ、５９％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７９−７．７４（ｍ，１Ｈ）、７．５０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．４６−７．３６（ｍ，５Ｈ）、５．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．４，５．５，１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．７３（ｓ，２Ｈ）、４．６２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．７，５．４，１．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．５０（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，４Ｈ）、３．４３（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．４１−３．３２（ｍ，３Ｈ）、３．２９−３．２４（ｍ，１Ｈ）、２．８５（ｄｄｄ，Ｊ＝１８．３，１４．６，４．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．７７−２．６５（ｍ，５Ｈ）、２．４３（ｓ，３Ｈ）、２．１７−２．０９（ｍ，１Ｈ）、１．８０（ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ）、１．６８（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８２９．３２（Ｍ＋Ｈ）。
【１５６０】
合成実施例３９：ｄＢＥＴ３９の合成
【１５６１】
【化７５２】
2020513789.tif 000773
４−（（１０−アミノデシル）オキシ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオントリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．２１２ｍＬ、０．０２１２ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（８．５ｍｇ、０．０２１２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１１．１μＬ、０．０６３６ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．１ｍｇ、０．０２１２ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。１９時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）および分取ＨＰＬＣによる精製によって、所望の生成物（０．３９ｍｇ、０．０００４８ｍｍｏｌ、２．３％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７７−７．７３（ｍ，１Ｈ）、７．５６−７．３１（ｍ，６Ｈ）、５．１１−５．０６（ｍ，１Ｈ）、４．６２（ｄｄ，Ｊ＝９．２，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．５８（ｓ，２Ｈ）、４．２１（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．４２−３．３８（ｍ，１Ｈ）、３．２４−３．２０（ｍ，１Ｈ）、２．９０−２．６８（ｍ，６Ｈ）、２．４５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）、２．１１（ｓ，１Ｈ）、１．８３（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，６．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．７０（ｓ，３Ｈ）、１．６１−１．４９（ｍ，４Ｈ）、１．３２（ｄ，Ｊ＝２３．２Ｈｚ，１０Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８１２．６０（Ｍ＋Ｈ）。
【１５６２】
合成実施例４０：ｄＢＥＴ４０の合成
【１５６３】
【化７５３】
2020513789.tif 000774
４−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）−２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）イソインドリン−１，３−ジオントリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．２４２ｍＬ、０．０２４２ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（９．７ｍｇ、０．０２４２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１２．６μＬ、０．０７２６ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（９．２ｍｇ、０．０２４２ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。２２時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）および分取ＨＰＬＣによる精製によって、所望の生成物が褐色油（４．７４ｍｇ、０．００６０１ｍｍｏｌ、２５％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７７−７．６７（ｍ，１Ｈ）、７．５２−７．３６（ｍ，５Ｈ）、５．０９−５．０３（ｍ，１Ｈ）、４．６４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．４０−４．３２（ｍ，２Ｈ）、３．９７−３．８８（ｍ，２Ｈ）、３．８１−３．７４（ｍ，２Ｈ）、３．６９−３．６０（ｍ，５Ｈ）、３．５５−３．３８（ｍ，４Ｈ）、２．８９−２．５４（ｍ，６Ｈ）、２．４５（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，３Ｈ）、２．１１（ｓ，１Ｈ）、１．７０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７８８．４２（Ｍ＋Ｈ）。
【１５６４】
合成実施例４１：ｄＢＥＴ４１の合成
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）メチル）ベンジル）カルバメートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル（４−（アミノメチル）ベンジル）カルバメート（１８３．１４ｍｇ、０．７５５ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（１５．１ｍｌ、０．０５Ｍ）に溶解し、２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）酢酸（２５０．９０ｍｇ、０．７５５ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（０．３７４ｍｌ、２．２６５ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（２９６．６７ｍｇ、０．７５５ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で２０時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水、次いで食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、淡褐色油が得られた。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、１２ｇシリカカラム、０〜１５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ２５分勾配）によって精製すると、淡褐色油（３７３．１ｍｇ、０．６７８ｍｍｏｌ、８９．８％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１０（ｓ，２Ｈ）、８．４８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．２６−７．０８（ｍ，４Ｈ）、５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．８６（ｓ，２Ｈ）、４．３３（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，２Ｈ）、４．０９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）、２．６５−２．５１（ｍ，３Ｈ）、２．０７−１．９９（ｍ，１Ｈ）、１．３８（ｓ，９Ｈ）。ＬＣＭＳ  ５５１．５（Ｍ＋Ｈ）。
【１５６５】
ステップ２：Ｎ−（４−（アミノメチル）ベンジル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロ酢酸塩の合成
ＴＦＡ（６．７７ｍｌ、０．１Ｍ）をｔｅｒｔ−ブチル（４−（（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミド）メチル）ベンジル）カルバメート（３７３．１ｍｇ、０．６７７ｍｍｏｌ、１当量）に添加し、混合物を５０℃で１．５時間撹拌した。次いで、混合物をＭｅＯＨに溶解し、減圧下で濃縮すると、褐色油（２７０．２９ｍｇ）が得られ、これをさらに精製することなく進めた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１１（ｓ，１Ｈ）、８．５５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．０７（ｓ，３Ｈ）、７．８１（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．４０（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，８．３Ｈｚ，３Ｈ）、７．３１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．８７（ｓ，２Ｈ）、４．３７（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．０１（ｑ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．６６−２．５１（ｍ，３Ｈ）、２．０７−１．９９（ｍ，１Ｈ）。ＬＣＭＳ  ４５１．３（Ｍ＋Ｈ）。
【１５６６】
ステップ３：ｄＢＥＴ４１の合成
【１５６７】
【化７５４】
2020513789.tif 000775
Ｎ−（４−（アミノメチル）ベンジル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（０．２３７ｍＬ、０．０２３７ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（９．５ｍｇ、０．０２３７ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。２３時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物がクリーム色固体（１１．８ｍｇ、０．０１４２ｍｍｏｌ、６０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８０−７．７５（ｍ，１Ｈ）、７．５１（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．３６（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，４Ｈ）、７．３４−７．２８（ｍ，４Ｈ）、５．１０−５．００（ｍ，１Ｈ）、４．８２（ｓ，２Ｈ）、４．６７−４．６４（ｍ，１Ｈ）、４．６１−４．４２（ｍ，４Ｈ）、４．３４（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，１２．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．４９（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．８，９．５，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．８３−２．７５（ｍ，１Ｈ）、２．７３−２．６１（ｍ，５Ｈ）、２．４４−２．３９（ｍ，３Ｈ）、２．０６（ｄｄｑ，Ｊ＝９．８，４．７，２．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．６６（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８３２．９２（Ｍ＋Ｈ）。
【１５６８】
合成実施例４２：ｄＢＥＴ４２の合成
【１５６９】
【化７５５】
2020513789.tif 000776
５−アミノ−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ペンタンアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２２２μＬ、０．０２２２ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ酸（８．９ｍｇ、０．０２２２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１１．６μＬ、０．０６６６ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．４ｍｇ、０．０２２２ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で２４時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が白色固体（１２．２３ｍｇ、０．０１６５ｍｍｏｌ、７４％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７６−７．７１（ｍ，１Ｈ）、７．６６−７．６２（ｍ，１Ｈ）、７．５１（ｔｄ，Ｊ＝７．８，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５−７．３５（ｍ，４Ｈ）、５．１１（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．２，１１．３，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．６３（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，５．７，３．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．４７（ｓ，２Ｈ）、３．４５−３．３２（ｍ，３Ｈ）、３．３０−３．２７（ｍ，１Ｈ）、２．９０−２．８０（ｍ，１Ｈ）、２．７３−２．６３（ｍ，４Ｈ）、２．４９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．４６−２．３８（ｍ，４Ｈ）、２．１１（ｄｄｔｄ、Ｊ＝１２．８，１０．５，５．３，２．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．８４−１．７５（ｍ，２Ｈ）、１．６６（ｄｄ，Ｊ＝１６．２，７．６Ｈｚ，５Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７４１．４６（Ｍ＋Ｈ）。
【１５７０】
合成実施例４３：ｄＢＥＴ４３の合成
【１５７１】
【化７５６】
2020513789.tif 000777
７−アミノ−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）ヘプタンアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２２７μＬ、０．０２２７ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ−酸（９．１ｍｇ、０．０２２７ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１１．９μＬ、０．０６８１ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．６ｍｇ、０．０２２７ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で２５．５時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が灰白色固体（１２．５８ｍｇ、０．０１６４ｍｍｏｌ、７２％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７１（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．６４（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．４６−７．３８（ｍ，４Ｈ）、５．１４（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．３，５．２，２．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．６２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．６，５．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．４９−４．４５（ｍ，２Ｈ）、３．３９（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．９，８．７，１．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．３０−３．２４（ｍ，３Ｈ）、２．９３−２．８３（ｍ，１Ｈ）、２．７９−２．６５（ｍ，４Ｈ）、２．５０−２．４０（ｍ，６Ｈ）、２．１６（ｄｄｑ，Ｊ＝９．９，５．２，２．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．７８−１．７０（ｍ，２Ｈ）、１．６８（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ、３Ｈ）、１．６３−１．５７（ｍ，２Ｈ）、１．５０−１．４２（ｍ，４Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７６９．５５（Ｍ＋Ｈ）。
【１５７２】
合成実施例４４：ｄＢＥＴ４４の合成
【１５７３】
【化７５７】
2020513789.tif 000778
８−アミノ−Ｎ−（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１−オキソイソインドリン−４−イル）オクタンアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２１７μＬ、０．０２１７ｍｍｏｌ、１当量）をＪＱ−酸（８．７ｍｇ、０．０２１７ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１１．３μＬ、０．０６５１ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（８．３ｍｇ、０．０２１７ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で２０．５時間撹拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物がクリーム色固体（１４．２８ｍｇ、０．０１８２ｍｍｏｌ、８４％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７２−７．６８（ｍ，１Ｈ）、７．６４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．４６−７．３９（ｍ，４Ｈ）、５．１４（ｄｔ，Ｊ＝１３．３，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．６２（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．４８−４．４４（ｍ，２Ｈ）、３．４０（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．９，８．８，０．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．２６（ｄｔ，Ｊ＝１３．２，６．９Ｈｚ，３Ｈ）、２．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝１８．７，１３．５，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．７５（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１７．６，７．１，４．５，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６８（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，３Ｈ）、２．４９−２．３９（ｍ，６Ｈ）、２．１７（ｄｄｔ，Ｊ＝９．８，５．３，２．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．７６−１．７０（ｍ，２Ｈ）、１．７０−１．６７（ｍ，３Ｈ）、１．６１−１．５４（ｍ，２Ｈ）、１．４２（ｓ，６Ｈ）。ＬＣＭＳ  ７８３．５３（Ｍ＋Ｈ）。
【１５７４】
合成実施例４５：ｄＢＥＴ４５の合成
【１５７５】
【化７５８】
2020513789.tif 000779
Ｎ−（８−アミノオクチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２６８μＬ、０．０２６８ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｒ）−４−（（４−シクロペンチル−１，３−ジメチル−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−６−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（１１．０ｍｇ、０．０２６８ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１４．０μＬ、０．０８０４ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（１０．２ｍｇ、０．０２６８ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を１８．５時間撹拌した。次いで、混合物をメタノールで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望の生成物が暗褐色固体（１０．４４ｍｇ、０．０１０８ｍｍｏｌ、４０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．８０−７．７５（ｍ，１Ｈ）、７．５５−７．４８（ｍ，１Ｈ）、７．４８−７．３５（ｍ，３Ｈ）、７．２７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．１２（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７２（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．５３（ｓ，１Ｈ）、４．２８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．９８（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，３Ｈ）、３．４８−３．３３（ｍ，４Ｈ）、２．９０−２．８２（ｍ，１Ｈ）、２．８０−２．６９（ｍ，２Ｈ）、２．１８−２．０１（ｍ，４Ｈ）、１．８８−１．５２（ｍ，１０Ｈ）、１．３４（ｄ，Ｊ＝４２．９Ｈｚ，１０Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８５１．６７（Ｍ＋Ｈ）。
【１５７６】
合成実施例４６：ｄＢＥＴ４６の合成
【１５７７】
【化７５９】
2020513789.tif 000780
Ｎ−（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２５６μＬ、０．０２５６ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｒ）−４−（（４−シクロペンチル−１，３−ジメチル−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［２，３−ｂ］ピラジン−６−イル）アミノ）−３−メトキシ安息香酸（１０．５ｍｇ、０．０２５６ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１３．４μＬ、０．０７６７ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（９．７ｍｇ、０．０２５６ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を２０時間撹拌した。次いで、混合物をメタノールで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、所望の生成物が暗褐色固体（１３．６９ｍｇ、０．０１３２ｍｍｏｌ、５１％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ８．２８−８．２４（ｍ，１Ｈ）、７．７４−７．７１（ｍ，１Ｈ）、７．４９（ｄｄ，Ｊ＝７．３，３．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９−７．３４（ｍ，２Ｈ）、７．２８−７．２５（ｍ，１Ｈ）、７．１４−７．１０（ｍ，１Ｈ）、６．３４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．０１−４．９７（ｍ，１Ｈ）、４．６２（ｓ，２Ｈ）、４．２５（ｑ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．９５（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，３Ｈ）、３．６０（ｄｄｄ，Ｊ＝９．０，６．１，１．６Ｈｚ，８Ｈ）、３．５３−３．４６（ｍ，６Ｈ）、３．４０−３．３７（ｍ，２Ｈ）、２．７８（ｔｄ，Ｊ＝１１．１，６．６Ｈｚ，３Ｈ）、２．１６−２．００（ｍ，４Ｈ）、１．８４（ｄｄｔ，Ｊ＝３３．５，１３．０，６．４Ｈｚ，７Ｈ）、１．７５−１．６０（ｍ，６Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ９２７．７４（Ｍ＋Ｈ）。
【１５７８】
合成実施例４７：ｄＢＥＴ５０の合成
【１５７９】
【化７６０】
2020513789.tif 000781
Ｎ−（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２００μＬ、０．０２００ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−６−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−３，９−ジメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−カルボン酸（８．９ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０．５μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、混合物を１７時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物がクリーム色固体（９．３１ｍｇ、０．００９６８ｍｍｏｌ、４８％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８２−７．７８（ｍ，１Ｈ）、７．５２（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９−７．４０（ｍ，５Ｈ）、５．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．５，２．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．７４（ｓ，２Ｈ）、４．６７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．７６（ｓ，３Ｈ）、３．６２−３．５０（ｍ，１４Ｈ）、３．４９−３．４３（ｍ，２Ｈ）、３．４０（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）、２．８７（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．６，１４．０，５．３Ｈｚ，１Ｈ）、２．７９−２．６７（ｍ，５Ｈ）、２．１２（ｄｄｑ，Ｊ＝１０．３，５．４，２．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．００（ｓ，３Ｈ）、１．８６（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）、１．８０（ｐ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣＭＳ  ９６１．６７（Ｍ＋Ｈ）。
【１５８０】
合成実施例４８：ｄＢＥＴ５１の合成
【１５８１】
【化７６１】
2020513789.tif 000782
Ｎ−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２００μＬ、０．０２００ｍｍｏｌ、１当量）を、室温で（Ｓ）−４−（４−クロロフェニル）−６−（２−メトキシ−２−オキソエチル）−３，９−ジメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］［１，４］ジアゼピン−２−カルボン酸（８．９ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０．５μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。次いで、混合物を１７時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が灰白色固体（８．３８ｍｇ、０．００９４２ｍｍｏｌ、４７％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５２（ｄｄ，Ｊ＝７．２，１．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４８−７．３８（ｍ，５Ｈ）、５．０８（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７，５．５，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．７４（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，２Ｈ）、４．６６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．７５（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，３Ｈ）、３．６５（ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，６Ｈ）、３．５９（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．５７−３．４９（ｍ，４Ｈ）、３．４９−３．４０（ｍ，２Ｈ）、２．９３−２．８４（ｍ，１Ｈ）、２．７８−２．６４（ｍ，５Ｈ）、２．１５−２．０９（ｍ，１Ｈ）、２．００（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８８９．５８（Ｍ＋Ｈ）。
【１５８２】
合成実施例４９：ｄＢＥＴ５２の合成
【１５８３】
【化７６２】
2020513789.tif 000783
Ｎ−（２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２００μＬ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（８．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０．５μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。１７．５時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が無色残渣（９．１２ｍｇ、０．０１０２５ｍｍｏｌ、５１％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７７（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７−７．３６（ｍ，５Ｈ）、５．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．０，７．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７６（ｓ，２Ｈ）、４．６２（ｄｄ，Ｊ＝９．１，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．６２（ｄｄｔ，Ｊ＝１７．３，１１．２，６．５Ｈｚ，１２Ｈ）、３．５２−３．４１（ｍ，５Ｈ）、３．２８（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）、２．９０−２．８１（ｍ，１Ｈ）、２．７９−２．６６（ｍ，５Ｈ）、２．４４（ｓ，３Ｈ）、２．１６−２．０９（ｍ，１Ｈ）、１．６９（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ８８９．３８（Ｍ＋Ｈ）。
【１５８４】
合成実施例５０：ｄＢＥＴ５３の合成
【１５８５】
【化７６３】
2020513789.tif 000784
Ｎ−（１４−アミノ−３，６，９，１２−テトラオキサテトラデシル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２００μＬ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（８．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０．５μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。１７．５時間後、さらなるＨＡＴＵ（７．６ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（１０．５μＬを添加し）、混合物をさらに５時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物（３．６６ｍｇ）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．４３−７．３６（ｍ，３Ｈ）、５．０８（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７，５．５，２．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８−４．７４（ｍ，２Ｈ）、４．６２（ｄｄ，Ｊ＝９．１，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．７０−３．５１（ｍ，１６Ｈ）、３．５０−３．４１（ｍ，５Ｈ）、３．２７（ｄｄ，Ｊ＝５．１，２．３Ｈｚ，１Ｈ）、２．８７（ｄｄｔ，Ｊ＝１８．２，９．５，４．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．７８−２．６６（ｍ，５Ｈ）、２．４４（ｓ，３Ｈ）、２．１６−２．０９（ｍ，１Ｈ）、１．６９（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ９３３．４３（Ｍ＋Ｈ）。
【１５８６】
合成実施例５１：ｄＢＥＴ５４の合成
【１５８７】
【化７６４】
2020513789.tif 000785
Ｎ−（１７−アミノ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデシル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２００μＬ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（８．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０．５μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。１６時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物（６．２７ｍｇ、０．００６４１ｍｍｏｌ、３２％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８１−７．７６（ｍ，１Ｈ）、７．５１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７−７．３８（ｍ，５Ｈ）、５．０９（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７７（ｓ，２Ｈ）、４．６２（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６７−３．５５（ｍ，２０Ｈ）、３．４６（ｄｄｄ，Ｊ＝２０．１，１０．２，４．７Ｈｚ，５Ｈ）、３．２８（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）、２．９１−２．８３（ｍ，１Ｈ）、２．７８−２．６８（ｍ，５Ｈ）、２．４４（ｓ，３Ｈ）、２．１６−２．１０（ｍ，１Ｈ）、１．７２−１．６６（ｍ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ９７７．５０（Ｍ＋Ｈ）。
【１５８８】
合成実施例５２：ｄＢＥＴ５５の合成
【１５８９】
【化７６５】
2020513789.tif 000786
Ｎ−（２９−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７−ノナオキサノナコシル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２００μＬ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（８．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０．５μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。１８時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物（１０．５５ｍｇ、０．００９１４ｍｍｏｌ、４６％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４９−７．４１（ｍ，５Ｈ）、５．１３（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．８０（ｓ，２Ｈ）、４．６５（ｄｄ，Ｊ＝９．１，５．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．６８−３．５８（ｍ，３６Ｈ）、３．５３−３．４４（ｍ，５Ｈ）、２．９４−２．８６（ｍ，１Ｈ）、２．８１−２．７０（ｍ，５Ｈ）、２．４６（ｓ，３Ｈ）、２．１９−２．１３（ｍ，１Ｈ）、１．７４−１．６９（ｍ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  １１５３．５９（Ｍ＋Ｈ）。
【１５９０】
合成実施例５３：ｄＢＥＴ５６の合成
【１５９１】
【化７６６】
2020513789.tif 000787
Ｎ−（３５−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサペンタトリアコンチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテートのＤＭＦ中０．１Ｍ溶液（２００μＬ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＪＱ酸（８．０ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０．５μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ、３当量）およびＨＡＴＵ（７．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。２０時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水および食塩水で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ、４ｇシリカカラム、０〜１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、２５分勾配）による精製によって、所望の生成物が油性残渣（９．０３ｍｇ、０．００７２７ｍｍｏｌ、３６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．５３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．５０−７．４０（ｍ，５Ｈ）、５．１１（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８（ｓ，２Ｈ）、４．６８（ｄｄ，Ｊ＝８．６，５．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．６９−３．５６（ｍ，４４Ｈ）、３．５２−３．４３（ｍ，５Ｈ）、３．３４（ｄｄ，Ｊ＝７．９，３．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝１８．０，１４．０，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．７９−２．６８（ｍ，５Ｈ）、２．４６（ｓ，３Ｈ）、２．１７−２．１２（ｍ，１Ｈ）、１．７１（ｓ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  １２４１．６０（Ｍ＋Ｈ）。
【１５９２】
合成実施例５４：ｄＢＥＴ５７の合成
ステップ１：２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオンの合成
【１５９３】
【化７６７】
2020513789.tif 000788
４−フルオロイソベンゾフラン−１，３−ジオン（２００ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ、１当量）のＡｃＯＨ（４．０ｍＬ、０．３Ｍ）中溶液に、２，６−ジオキソピペリジン−３−アミン塩酸塩（２１８ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ、１．１当量）および酢酸カリウム（３６６ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ、３．１当量）を添加した。反応混合物を一晩９０℃に加熱し、その後、これを水で２０ｍＬに希釈し、氷上で３０分間冷却した。得られたスラリーを濾過し、黒色固体をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中２％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．３）によって精製すると、標記化合物が白色固体（２８８ｍｇ、８６％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１１．１５（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，７．３，４．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．８２−７．７１（ｍ，２Ｈ）、５．１７（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９０（ｄｄｄ，Ｊ＝１７．１，１３．９，５．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．６５−２．４７（ｍ，２Ｈ）、２．１０−２．０４（ｍ，１Ｈ）、ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１０ＦＮ２Ｏ４についての計算値［Ｍ＋Ｈ］＋２７７．０６、実測値２７７．２５。
【１５９４】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エチル）カルバメートの合成
【１５９５】
【化７６８】
2020513789.tif 000789
２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−４−フルオロイソインドリン−１，３−ジオン（１７４ｍｇ、０．６３０ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＦ（６．３ｍＬ、０．１Ｍ）中撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（２２０μＬ、１．２６ｍｍｏｌ、２当量）および１−Ｂｏｃ−エチレンジアミン（１１０μＬ、０．６９３ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。反応混合物を一晩９０℃に加熱し、その後、これを室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）に溶解した。有機層を食塩水（３×２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０→１０％ＭｅＯＨ）によって精製すると、標記化合物が黄色固体（２０５ｍｇ、７９％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０８（ｂｓ，１Ｈ）、７．５０（ｄｄ，Ｊ＝８．５，７．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．９８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．３９（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．９６−４．８７（ｍ，１Ｈ）、４．８３（ｂｓ，１Ｈ）、３．５０−３．４１（ｍ，２Ｈ）、３．４１−３．３５（ｍ，２Ｈ）、２．９２−２．６６（ｍ，３Ｈ）、２．１６−２．０９（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２０Ｈ２５Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値４１７．１８、実測値４１７．５８。
【１５９６】
ステップ３：２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エタン−１−アミニウム２，２，２−トリフルオロアセテートの合成
【１５９７】
【化７６９】
2020513789.tif 000790
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エチル）カルバメート（２０５ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ、１当量）のジクロロメタン（２．２５ｍＬ）中攪拌溶液にトリフルオロ酢酸（０．２５０ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で４時間撹拌し、その後揮発性物質を真空中で除去した。標記化合物が黄色固体（２２６ｍｇ、＞９５％）として得られ、これをさらに精製することなく使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．６４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．２７−７．０５（ｍ，２Ｈ）、５．１０（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．７０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．５０−３．４２（ｍ，２Ｈ）、３．２２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．９３−２．８５（ｍ，１Ｈ）、２．８０−２．６９（ｍ，２Ｈ）、２．１７−２．１０（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ１７Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値３１７．１２、実測値３１７．５３。
【１５９８】
ステップ２：ｄＢＥＴ５７の合成
【１５９９】
【化７７０】
2020513789.tif 000791
ＪＱ酸（８．０ｍｇ、０．０２００ｍｍｏｌ、１当量）および２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）アミノ）エタン−１−アミニウム２，２，２−トリフルオロアセテート（８．６ｍｇ、０．０２００ｍｍｏｌ、１当量）を、室温でＤＭＦ（０．２００ｍＬ、０．１Ｍ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１７．４μＬ、０．１００ｍｍｏｌ、５当量）およびＨＡＴＵ（７．５９ｍｇ、０．０２００ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）（１５ｍＬ）、水（１５ｍＬ）および食塩水（３×１５ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中０→１０％ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．３（ＣＨ２Ｃｌ２中１０％ＭｅＯＨ））によって精製すると、標記化合物が明黄色固体（１１．２ｍｇ、８０％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．４９（ｂｓ，０．６Ｈ）、８．３９（ｂｓ，０．４Ｈ）、７．５１−７．４３（ｍ，１Ｈ）、７．３８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．２９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，１．７Ｈｚ，２Ｈ）、７．０７（ｄｄ，Ｊ＝７．１，４．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．６，４．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．４８（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．４０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，０．６Ｈ）、４．９１−４．８２（ｍ，０．４Ｈ）、４．６５−４．６０（ｍ，１Ｈ）、３．６２−３．３８（ｍ，６Ｈ）、２．８７−２．６４（ｍ，３Ｈ）、２．６３（ｓ，３Ｈ）、２．４０（ｓ，６Ｈ）、２．１２−２．０４（ｍ，１Ｈ）、１．６７（ｓ，３Ｈ）、回転異性体；ＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ３４Ｈ３２ＣｌＮ８Ｏ５Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋についての計算値７００．１９、実測値７００．３４。
【１６００】
合成実施例５５：ｄＧＲ１の合成
【１６０１】
【化７７１】
2020513789.tif 000792
合成実施例５６：ｄＧＲ２の合成：
【１６０２】
【化７７２】
2020513789.tif 000793
合成実施例５７：ｄＧＲ３の合成：
【１６０３】
【化７７３】
2020513789.tif 000794
合成実施例５８：ｄＦＫＢＰ−１の合成
【１６０４】
【化７７４】
2020513789.tif 000795
（１）ＳＬＦ−スクシネートの合成
ＳＬＦ（２５ｍｇ、ＭｅＯＡｃ中１０ｍｇ／ｍＬ溶液２．５ｍＬ、０．０４７７ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（０．４８ｍＬ、０．１Ｍ）および無水コハク酸（７．２ｍｇ、０．０７１５ｍｍｏｌ、１．５当量）と合わせ、室温で２４時間撹拌した。低い転換率が観察され、混合物をＮ２流下に置き、ＭｅＯＡｃを除去した。さらなる無水コハク酸７．２ｍｇおよびＤＭＡＰ（５．８ｍｇ、０．０４７７ｍｍｏｌ、１当量）と共に、さらなるＤＭＦ０．４８ｍＬを添加した。次いで、混合物をさらに２４時間撹拌した後、分取ＨＰＬＣによって精製すると、ＳＬＦ−スクシネートが黄色油（２４．０６ｍｇ、０．０３８５ｍｍｏｌ、８１％）として得られた。
【１６０５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．６２（ｄ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．２６（ｔｄ，Ｊ＝７．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．０７−６．９７（ｍ，１Ｈ）、６．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．７４−６．６６（ｍ，２Ｈ）、５．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．１，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．２３（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．８３（ｓ，３Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、３．３９−３．２９（ｍ，４Ｈ）、３．２１（ｔｄ，Ｊ＝１３．２，３．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．６８−２．５０（ｍ，５Ｈ）、２．３７−２．１９（ｍ，２Ｈ）、２．１２−２．０２（ｍ，１Ｈ）、１．７９−１．６１（ｍ，４Ｈ）、１．４９−１．３０（ｍ，２Ｈ）、１．２７−１．０５（ｍ，６Ｈ）、０．８２（ｄｔ，Ｊ＝４１．２，７．５Ｈｚ，３Ｈ）。ＬＣＭＳ  ６２４．７２（Ｍ＋Ｈ）。
【１６０６】
（２）ｄＦＫＢＰ−１の合成
Ｎ−（４−アミノブチル）−２−（（２−（２，６−ジオキソピペリジン−３−イル）−１，３−ジオキソイソインドリン−４−イル）オキシ）アセトアミドトリフルオロアセテート（９．９ｍｇ、０．０１９２ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＦ０．１９２ｍＬ中溶液（０．１Ｍ）として、ＳＬＦスクシネート（１１．９８ｍｇ、０．０１９２ｍｍｏｌ、１当量）に添加した。ＤＩＰＥＡ（１０．０μＬ、０．０５７５ｍｍｏｌ、３当量）を添加し、引き続いてＨＡＴＵ（７．３ｍｇ、０．０１９２ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。混合物を１７時間撹拌し、次いで、ＭｅＯＨで希釈し、分取ＨＰＬＣによって精製すると、ｄＦＫＢＰ−１（７．７ｍｇ、０．００７６３ｍｍｏｌ、４０％）が黄色固体として得られた。
【１６０７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、メタノール−ｄ４）δ７．８１（ｓ，１Ｈ）、７．７７−７．７０（ｍ，１Ｈ）、７．５５−７．４９（ｍ，２Ｈ）、７．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．０，５．３Ｈｚ，２Ｈ）、７．０５−６．９９（ｍ，１Ｈ）、６．７７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．６６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、５．７７−５．７２（ｍ，１Ｈ）、５．２４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．９９（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，５．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．６８−４．５９（ｍ，２Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、３．３２（ｄｔ，Ｊ＝３．３，１．６Ｈｚ，４Ｈ）、３．２６−３．１４（ｍ，３Ｈ）、２．７９（ｄｄ，Ｊ＝１８．９，１０．２Ｈｚ，３Ｈ）、２．６４−２．４８（ｍ，５Ｈ）、２．３４（ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．２２（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．１４−２．０２（ｍ，２Ｈ）、１．７８−１．４９（ｍ，９Ｈ）、１．４３−１．３０（ｍ，２Ｈ）、１．２０−１．０４（ｍ，６Ｈ）、０．９０−０．７６（ｍ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ｃｄ３ｏｄ）δ２０８．５１、１７３．２７、１７２．６４、１７１．６３、１６９．９３、１６９．５１、１６８．０４、１６７．６９、１６７．０９、１６６．７１、１５４．９２、１４９．０５、１４７．４８、１４０．７６、１３８．８９、１３７．４８、１３３．９１、１３３．６７、１２９．３６、１２２．１９、１２０．６１、１２０．５４、１１９．８２、１１８．４１、１１８．１２、１１７．７９、１１２．１２、１１１．７６、６８．５４、５６．１０、５５．９８、５１．６７、４６．９４、４４．５７、３９．３２、３９．０１、３８．２３、３２．６４、３１．５５、３１．４３、２６．６８、２６．６４、２５．０８、２３．５２、２３．２１、２２．８５、２１．２７、８．７６。ＬＣＭＳ  １００９．６６（Ｍ＋Ｈ）。
【１６０８】
合成実施例５９：ｄＦＫＢＰ−２の合成
【１６０９】
【化７７５】
2020513789.tif 000796
（１）ｔｅｒｔ−ブチル（１−クロロ−２−オキソ−７，１０，１３−トリオキサ−３−アザヘキサデカン−１６−イル）カルバメートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）カルバメート（１．０ｇ、３．１２ｍｍｏｌ、１当量）をＴＨＦ（３１ｍＬ、０．１Ｍ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（０．５４３ｍＬ、３．１２ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、溶液を０℃に冷却した。クロロアセチルクロリド（０．２７３ｍＬ、３．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、混合物を室温にゆっくり加温した。２４時間後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、水、次いで食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮すると、黄色油（１．４１６ｇ）が得られ、これをさらに精製することなく進めた。
【１６１０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ７．２４（ｓ，１Ｈ）、５．００（ｓ，１Ｈ）、３．９８−３．８볯袼뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯钼볯蒽뷯蒽뷯貼볯鶼볯鞼볯邼볯醼볯躼볯貼볯躼볯貼볯躼볯ꢼ뷯貼볯邼볯覼胣鎼볯钼볯銈볯躼볯邼볯趽볯銼볯覼胣鎼볯鎼볯銈볯躼볯醼볯趽볯銼볯覼胣鎼볯醼볯銈볯躼볯鞼볯趽볯銼볯覼胣醼볯鞼볯銈볯躼볯邼볯趽볯銼볯覼胣醼볯隼볯袼뷯貼볯鶼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯閼볯鎽볯馼볯覼胣㲂畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯鎼⼼畳㹰볯₣꺼볯늼볯醼볯邼볯ꢼ뷯膀뷯蒽뷯貽볯覼듎볯隼볯躼볯鎼胣醼볯閼볯馼볯膀볯颼볯鞼볯膀볯邼볯钼볯膀볯邼볯钼볯膀볯邼볯鎼볯膀볯邼볯鎼볯膀볯邼볯醼볯膀볯馼볯钼볯膀볯銼볯隼볯膀볯颼볯隼볯膀볯颼볯钼볯膀볯馼볯隼볯膀볯颼볯閼볯膀볯颼볯钼볯芀볯ꎼ볯뎼†볯馼볯躼볯鞼볯궼볯ꢼ볯芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖 袼볯覼苣ꆃ菣ꮃ볯銈볯袼볯貼볯銈苣ꆃ菣ꮃ裢钼볯銼볯銈苣ꪂ苣붂裢鎼볯馼볯醼볯貼볯閼裢蚃菣ꦃ苣궂苣銈볯貼볯馼裢뢂苣뚂菣뎃苣뎂苣뎃裢銼볯銈苣ꮃ볯ꪂ苣랂볯閃苣것菣袃臣袐裦㲐牢ਾ†뷯薽뷯钽裢隃菣ꮃ볯醼裢꾂菣궃裢銼裢ꪂ苣붂裢鞼볯醼볯貼볯鎼裢袃菣ꪂ苣떂裢鎼裢ꊂ苣颃苣떂菣ꮂ菣銈볯隼裢ꒂ菣覼苣ꮃ菣ꆃ菣袃볯醼볯钼볯螽胣鎼볯醼볯趽뷯辽뷯膀볯鎽蟩覼苣궼뷯ꎼ볯袼볯銼뷯겼胣邼볯醼볯覼臣뚺꟨鞁臣芀苣ꆃ菣ꮃ볯銈菣覃菣궂苣閃苣것菣袃볯邼볯鞼볯醼뷯膀볯躼볯鎼뷯趽뷯貽胣醼볯醼뷥辇볯誁苣뎁苧뢅苣랂苣ꂃ볯銼볯颼볯螽胣颼볯閼볯趽뷯辽뷯膀볯躼볯閼뷥辇볯銂럦ꂊ臣龁胣閃菣릂苣ꮁ苩膵蛥뒍駥銂迥誂믤醁胣醼볯芙雩颼볯莄臣ꂊ蛧鞁臣芀럦袐觧銂껥ꦸ臣랆跥鞁胣뒰臣貸蟩鞁胣꾂菣궃菣ꮃ菣ꞁ볯麛胣ꖼ뷯꾼볯莽臣銼鯥붊蟥鞁臣芀郥辂臣龁鳦龩뇥銂ꇧ뢅菣袃菣Ꚃ菣誸臣뺹蟧閁臣膀뿦躁臣膀룦Ꞝ룤ꞁ뿦꺸臣龁胣鞲觧ꪳ苣ꮂ菣ꂃ苣궃菣袃苣ꦃ菣ꎂ菣袼볯뎼볯꾼胣銼볯螽苣ꪃ苣ꮂ菣ꂃ胣邼胣醼볯薼볯薽볯ꢼ볯꒼볯궼†볯銼裥뺋藩覼臣袂臣ꚁ닧붣臣讂臣膀믩늉닦袼볯躼볯颼볯銼뷯膀볯躼볯颼뷯趽뷯貽胣銼苣蚃菣鞃臣辂臣ꎁ臣颼볯薼볯貁뻥覂苣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯銼胣㲑䐯噉ਾ†猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰醼⼼畳㹰볯₨꺼볯늼볯钼볯邼볯ꢼ뷯膀苣궃菣鮃菣ꂃ裢蒽볯캉鞼볯閼볯袼뷯貼볯鶼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯閼볯钽볯ꪼ볯颼볯醼볯骽볯醼볯覼胣鞼볯邼볯袼뷯貼볯鶼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀��躼볯邼볯钽볯ꪼ볯閼볯鎼볯骽볯醼볯覼胣閼볯邼볯袼뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯隼볯鎽볯銼볯覼胣鎼볯颼볯袼뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯颼볯鎽볯鎼볯覼胣鎼볯钼볯袼뷯蒽뷯貼볯鶼볯钼볯馼볯閼볯閼볯銼볯颼볯骽볯颼볯覼胣鎼볯鎼볯袼뷯钽볯ꪼ볯馼볯钼볯隼볯邼볯骽볯钼볯覼胣鎼볯銼볯袼뷯貼볯鶼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯馼볯蒽볯ꪼ볯隼볯邼볯骽볯銼볯覼胣醼볯鞼볯袼뷯貼볯鶼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯鎼볯邽볯ꪼ볯隼볯鎼볯骽볯銼볯覼胣醼볯鎼볯袼뷯膀볯ꢼ볯芀猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰醼볯㲓猯灵ꎼ†볯궼볯袼볯邼볯궼볯骽胣莽뷯莽뷯鎼볯캉醼볯鞼볯隼볯膀볯隼볯躼볯隼胣醼볯閼볯钼볯膀볯閼볯躼볯鎼胣醼볯钼볯钼볯膀볯鎼볯躼볯鞼胣醼볯馼볯隼볯膀볯銼볯躼볯醼胣醼볯鎼볯銼볯膀볯醼볯躼볯隼胣鞼볯躼볯邼胣鞼볯躼볯邼胣鞼볯躼볯鞼胣鞼볯躼볯隼胣隼볯躼볯馼胣隼볯躼볯鞼胣隼볯躼볯閼胣閼볯躼볯鞼胣閼볯躼볯鞼胣鎼볯躼볯颼胣鎼볯躼볯颼胣銼볯躼볯閼胣銼볯躼볯邼胣銼볯躼볯钼胣겼볯궼볯₳閼볯醼볯钼볯袼볯讼볯覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†볯鎼볯꺼裢袼볯銈볯銼裢袼볯銈볯鎼裢ꊂ菣躃菣궃菣궂苣覼苣袃苣랂볯ꢂ菣궂苣覼菣궃菣ꮃ볯銈볯銈볯袼볯銈볯銼볯隼裢뢂苣궂苣钃菣ꪃ苣뎃裢鎼裢ꒂ菣覼裢醼볯鎼裢뢂苣궂苣ꒂ苣ꒂ菣覃菣뎃裢钼裢ꒂ菣覼苣궂苣覼苣뮂菣ꊂ菣覃菣ꪃ菣ꮃ苣궃苣뮂菣벃菣꺁郥邈戼㹲 뢂菣膃菣鎼裢袼볯銼볯銼裢뢂菣膃菣銈볯貼볯邼裢뢂苣궂苣銈볯貼볯貼볯銼볯醼볯銈菣袃菣ꪂ苣떂裢閼볯醼볯銈苣ꊂ苣颃菣ꒂ苣떂菣銈볯醼裢ꒂ菣覼苣궂苣覼菣뾂菣벃菣袼볯躼볯颼볯螽胣銼볯鞼볯趽뷯辽뷯膀볯鎽蟩覼苣ꖼ뷯꾼볯袼볯钼뷯겼胣邼볯銼볯覼臣뚺꟨鞁臣芀볯궼†볯膽볯ꢼ냦뚺뛦袼볯躼볯趽볯膀볯躼볯钼뷯趽뷯貽胣鎼뷥辇볯銂럦ꂊ臣膀럦袐觧銂볯銼駦鎖볯邼蓢ꮁ諥놆臣龁胣ꆬ臣ꞁ胣랷郥ꦉ苣꒮룦ꮁ蛥뒍臣膀볯ꎼ볯₭閼볯趽볯誁苣뎁볯躼볯궼†볯ꎼ뷯₌銼볯趽볯ꞁ룥袇臣龁胣꒱苣蚈鯩鞁胣覜ꧦ꒱苣뒰볯閼뷯겼臣鞴뗦鞁臣芀냦꒱苣袐苣鮁胣꾂菣궃菣ꮃ菣閼볯趽볯ꞁ볯麛諦몇臣龁胣袐苣鮁臣覜ꧦ꒱苣ꮡ藩誃菣ꪃ苣ꂃ룤ꞁ매ꖇ臣鮁胣뺿臩鞁胣莿룧馁苣ꢁ觧ꪳ볯躼볯鎼뷯貁뻥覂苣膀臣貂苣閁苣ꮁ닧붣臣讂臣ꢁ臣辁胩膂臣芀볯ꎼ볯뎼†볯閼볯躼볯钼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†뻥覂苣龁觧ꪳ볯醼볯閼볯螽볯誁苣뎁볯銈苣龃菣钃��ꪃ苣뎃裢銼볯隼裢뢂苣뎃ꇥ뢅ꇥ袼볯躼볯颼볯螽胣銼볯馼볯趽뷯辽뷯膀볯鎽蟩覼苣钃菣뢂菣袼볯醼볯鞼뷯겼胣邼볯銼볯궼볯ꮁ뫦ꎧ臣膀볯鞼駦鎖볯醼볯莄臣ꂊ蛧鞁臣芀럦袐觧銂껥ꦸ臣랆跥鞁胣鮸鳥许臣莿룧馁苣ꢁ胣鞲뷯薽뷯钽裢隃菣ꮃ볯醼裢袼볯銼裢袼볯貼볯銈苣ꪂ苣붂菣骃菣뢂菣銈볯銈苣ꮃ볯銈볯貼볯銈苣ꪂ苣붂苣붂苣뎃菣ꪃ菣銈볯銈苣ꮃ볯ꪂ苣랂볯銈볯銈苣궂苣銈볯貼볯邼볯醼볯銈菣ꪃ苣궂苣銈볯銈苣뚂菣궂苣螃苣뎃裢醼볯銈苣ꮃ볯ꮂ菣邃菣벃菣貁믩늉苣ꦃ菣뢂볯鎼볯醼볯馼볯螽볯ꢁ臣ꚁ뻥覂苣膀臣貂苣閁苣ꮁ닧붣臣讂臣ꢁ臣辁胩膂臣芀볯ꎼ볯뎼†볯鎼볯躼볯鞼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯閼胣㲑䐯噉ਾ†닧钽뷯銽뷯銈菣膃菣袼볯銈볯袼볯銈볯銼볯隼裢뢂苣궂苣钃菣ꪃ苣뎃裢鎼裢ꒂ菣覼裢醼볯鎼裢뢂苣궂苣ꒂ苣ꒂ菣覃菣뎃裢钼裢ꒂ菣覼苣궂苣覼裢銼裢ꪂ苣붂裢鞼볯醼볯貼볯鎼裢袃菣ꪂ苣떂裢鎼裢ꊂ苣颃苣떂菣ꮂ菣銈볯隼裢ꒂ菣覼苣ꮃ菣ꆃ菣袃볯鎼볯醼볯ₕ螽볯銂볯ꚼ볯袼볯邼뷯겼볯ꮁ뫦ꎧ臣膀볯躼볯芙雩閼볯莄臣ꂊ蛧鞁臣芀럦袐觧銂껥ꦸ臣랆跥鞁胣궼뷯꾼볯ꞁ룥袇臣膀룦Ꞝ룤ꞁ뿦꺸臣龁胣ꦉ돨銂裥随볯낼볯ꎼ臣袂臣ꚁ닧붣臣讂臣膀볯銈볯鎼裢袼볯銈볯銼裢袼볯銈苣龃菣鞃菣鶃苣랂볯ꢂ菣궂苣覼苣袃苣랂볯鞃菣钃菣覼裢銼裢袼볯銼裢袼볯貼볯銈苣ꪂ苣붂菣骃菣뢂菣銈볯銈苣ꮃ볯銈볯貼볯銈苣ꪂ苣붂苣붂苣뎃菣ꪃ菣銈볯銈苣ꮃ볯ꪂ苣랂볯ꊂ苣袃苣龃菣袃菣閃菣ꪂ菣ꊂ苣蚃菣袃볯醼볯銼볯鎼볯螽胣醼볯馼볯馼볯趽뷯辽뷯膀볯릂菣莃菣ꮁ苣龁臣ꚁ볯醼볯覼臣鞚뗨늉닦ꢁ臣ꚁ뻥覂苣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯隼胣㲑䐯噉ਾ†猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰醼⼼畳㹰볯₨꺼볯늼볯钼볯邼볯ꢼ뷯膀菣뾂菣벃菣銈뷯钼볯캉鞼볯鞼볯袼뷯蒽볯ꪼ볯颼볯鎼볯鞼볯閼볯骽볯醼볯覼胣鞼볯钼볯袼뷯貼볯鶼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯邼볯蒽볯ꪼ볯颼볯閼볯骽볯醼볯覼胣閼볯醼볯袼뷯蒽볯ꪼ볯醼볯躼볯貼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯閼볯鎽볯銼볯覼胣鎼볯隼볯銈볯躼볯醼볯趽볯醼볯ꢼ볯膀볯躼볯邼볯钽볯ꪼ볯隼볯颼볯骽볯銼볯覼胣鎼볯醼볯袼뷯貼볯鶼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯钼裢銼볯隼볯袼뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯隼볯蒽뷯蒽볯ꪼ볯醼볯躼볯貼볯躼볯貼볯躼볯ꢼ뷯貼볯ꢼ볯膀볯躼볯銼볯邽볯ꪼ볯隼볯醼볯骽볯銼볯覼胣醼볯颼볯銈볯躼볯鞼볯趽볯銼볯覼胣㲂畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮��朮⹯灪㸢볯鎼⼼畳㹰볯₣꺼볯늼볯醼볯邼볯ꢼ뷯膀뷯蒽볯辽뷯覼듎볯鞼볯躼볯鞼胣醼볯馼볯馼볯膀볯隼볯躼볯颼胣醼볯隼볯颼볯膀볯隼볯躼볯邼胣醼볯钼볯颼볯膀볯鎼볯躼볯馼胣醼볯鎼볯钼볯膀볯銼볯躼볯馼胣醼볯鞼볯隼볯膀볯醼볯躼볯颼胣隼볯躼볯隼胣隼볯躼볯颼胣隼볯躼볯邼胣隼볯躼볯鞼胣隼볯躼볯銼胣隼볯躼볯銼胣钼볯躼볯馼胣鎼볯躼볯銼胣鎼볯躼볯钼胣鎼볯躼볯邼胣銼볯躼볯銼胣銼볯躼볯鎼胣銼볯躼볯銼胣겼볯궼볯₳閼볯隼볯钼볯袼볯讼볯覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯鞼胣㲑䐯噉ਾ†볯钼볯蒽볯ꮼ볯낼裢銼臣袐裦㲐牢ਾ†볯銈볯鎼裢袼볯銈볯銼裢袼볯銈苣龃菣鞃菣鶃苣랂볯ꢂ菣궂苣覼苣袃苣랂볯鞃菣钃菣覼裢銼裢袼볯銼裢袼볯貼볯銈苣ꪂ苣붂菣骃菣뢂菣銈볯銈苣ꮃ볯銈볯貼볯銈苣ꪂ苣붂苣붂苣뎃菣ꪃ菣銈볯銈苣ꮃ볯ꪂ苣랂볯ꊂ苣袃苣龃菣袃菣閃菣ꪂ菣ꊂ苣蚃菣袃볯醼볯躼볯趽뷯膀볯躼볯醼볯鎼뷯趽뷯貽胣醼뷥辇볯銂胣꒼볯ꚼ볯躼볯馼볯趽볯궸뫦늶볯邼볯醼볯覼臣鞁臣뎼볯ꚼ裢릂苣랂菣벃菣袼볯銼볯邼볯趽뷯膀볯躼볯醼볯鎼뷯趽뷯貽胣醼뷥辇볯ꮁ럦ꂊ臣龁胣꒼볯낼볯ꆼ볯醼볯躼볯캑겼胣邼볯邼볯颼볯趽뷯辽뷯膀볯鎽蟩覼臣袂臣ꢼ볯뒼볯袼볯躼볯趽뷯膀볯躼볯醼볯鎼뷯趽뷯貽胣醼뷥辇볯銂럦ꂊ臣膀럦袐觧銂볯馼駦鎖鋦貋臣龁胣ꆬ臣ꞁ胣랷郥ꦉ苣궼뷯꾼볯ꞁ룥袇臣膀裥随볯낼볯ꎼ臣袂臣ꚁ닧붣臣讂臣膀뷯ꚼ볯ꊼ볯銈볯袼볯躼볯钼뷯螽胣邼볯邼볯颼볯颼뷯趽뷯貽胣钼볯薼볯貁믩늉닦ꢁ臣ꚁ뻥覂苣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯隼볯颼胣㲑䐯噉ਾ†猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰醼⼼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