(57)【要約】  本発明は、移植または生体外実験を目的として、ヒトまたは動物の少なくとも１つの組織を保存および輸送するためのデバイスおよび方法に関する。本発明は、移植または生体外実験まで、このような組織を特定の保存培地に保存するために利用され、特に、ヒトまたは動物の角膜試料、例えば、角膜移植片を保存するために利用される。  ヒトまたは動物の少なくとも１つの組織を保存するためのこのデバイスは、少なくとも１つのチャンバ（１）を含み、  前記チャンバは、液体保存培地中に、組織を受け入れ、保存するのに適し、少なくとも１つの前記チャンバ内で、培地を連続的に入れ替えるための手段（４ａおよび４ｂ）を含む。  本発明によれば、前記デバイスは、前記培地の外側で前記培地と接触する少なくとも１つの前記チャンバ内で、緩衝ガスを連続的に循環させることにより、前記培地のｐＨを含む少なくとも１つの物理化学的パラメータを調整するための手段（６ａおよび６ｂ、７ａ）を、さらに含む。
2020506718.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植または生体外実験を目的として、ヒトまたは動物の少なくとも１つの組織、例えば角膜試料を保存するためのデバイス（１’、１”）であって、
前記デバイスが、少なくとも１つのチャンバ（１）を含み、
前記チャンバ（１）が、液体保存培地中に、少なくとも１つの前記組織を受け入れて保存するのに適し、少なくとも１つの前記チャンバ（１）内で、前記培地を連続的に入れ替えるための手段（４ａおよび４ｂ、５ａおよび５ｂ）を含み、
前記デバイスが、前記培地の外側で前記培地と接触するように、少なくとも１つの前記チャンバ内で、緩衝ガスを連続的に循環させることによって、前記培地のｐＨを含む前記培地の少なくとも１つの物理化学的パラメータを調整するための手段（６ａおよび６ｂ、７ａおよび７ｂ）をさらに含むことを特徴とする、デバイス。
【請求項２】
少なくとも１つの前記チャンバ（１）が、
基部から延在する周側壁（２ｂ）によって連続する基部（２ａ）を有する容器（２）であって、好ましくは実質的に半球状の内面（２ｃ）を有する容器（２）、および
前記側壁上に取り付けられた少なくとも部分的に半透明または透明のカバー（３）であって、好ましくは１回のみ開くように設計され、オペレータに既に開かれたことがあることを知らせるための手段（３ｂ）を備えるカバー（３）
を有し、
前記調整するための手段（６ａおよび６ｂ、７ａおよび７ｂ）が、二酸化炭素などの前記緩衝ガスを、少なくとも１つの前記チャンバ内外に送達および排出するための送達および排出開口部（６ａおよび６ｂ）を含み、
前記緩衝ガスが、前記培地上で、少なくとも１つの前記チャンバに送達され、かつ前記チャンバから排出されるように、前記送達および排出開口部が、前記カバーに隣接する前記側壁の上側ゾーンに形成されている、請求項１に記載のデバイス（１’、１”）。
【請求項３】
前記調整するための手段（６ａおよび６ｂ、７ａおよび７ｂ）が、
前記送達および排出開口部（６ａおよび６ｂ）とそれぞれ連絡し、かつ前記デバイスが備える例えばポンプを含む循環ユニット（１４）を介して、少なくとも１つの前記チャンバ（１）内で、加圧下で連続的に、前記緩衝ガスを循環させることができる、前記緩衝ガスのための流体カップリング（７ａおよび７ｂ）、
少なくとも１つの前記チャンバの内部と連絡し、かつｐＨセンサ（８）を含む、少なくとも１つの前記物理化学的パラメータのための少なくとも１つのセンサ、
任意選択で、例えば前記培地中で任意の細菌を検出することができる機能を有する、微生物学的センサ、および
任意選択で、少なくとも１つの前記チャンバ内で、前記少なくとも１つの組織を保存するため、および／または当該組織の再生を加速するための、治療用流体または非治療用流体を導入するための前記側壁における少なくとも１つの孔
をさらに含む、請求項２に記載のデバイス（１’、１”）。
【請求項４】
前記培地を入れ替えるための前記手段（４ａおよび４ｂ、５ａおよび５ｂ）が、導入される未使用の前記培地を含む前記デバイスの第１のリザーバ（２４ｂ）から少なくとも１つの前記チャンバ（１）へ前記培地を導入すること、および少なくとも１つの前記チャンバ（１）から１度除去された使用済の前記培地を含む前記デバイスの第２のリザーバ（２５ｂ）へ前記培地を導入することができる導入および除去開口部（４ａおよび４ｂ）を含み、
前記導入および除去開口部が、前記容器（２）において形成され、２つの前記培地のための流体カップリング（５ａおよび５ｂ）とそれぞれ連絡し、
前記培地のための前記流体カップリングが、前記循環ユニット（１４）を介して、少なくとも１つの前記チャンバ内で、加圧下で連続的に、前記培地を循環させることができる、請求項３に記載のデバイス（１’、１”）。
【請求項５】
前記デバイスが、少なくとも１つの前記チャンバ（１）内の前記培地の温度を、−２０℃〜５０℃の少なくとも１つの所定値に調整するためのユニット（１０）をさらに含み、
前記調整するためのユニットが、少なくとも１つの前記チャンバの外側に、前記基部（２ａ）に対して取り付けられ、好ましくはコネクタ（１２および１３）および少なくとも１つの前記チャンバの内側と連絡する温度センサを備えるペルチェモジュール（１１）を含む、請求項２〜４のいずれか１項に記載のデバイス（１’、１”）。
【請求項６】
前記デバイスが、可搬式単一ハウジング（２１）をさらに有し、
前記可搬式単一ハウジング（２１）が、
好ましくはポリマーから製造される断熱ブロック（１５）を取り外し可能な方法で受け入れるための第１の凹部（２２）であって、前記断熱ブロックは、前記容器（２）が好ましくは金属である前記チャンバ（１）を受け入る、第１の凹部（２２）、
前記チャンバ内で、少なくとも１つの前記保存培地および前記緩衝ガスを循環させるための循環ユニット（１４）であって、好ましくはポンプを含む循環ユニット（１４）、
前記デバイスを機能させるための蓄電器（２３）であって、好ましくはバッテリを含む蓄電器（２３）、
前記チャンバへ導入される未使用の前記培地を含む第１のリザーバ（２４ｂ）を取り外し可能な方法で受け入れるための第２の凹部（２４ａ）、
前記チャンバから除去された使用済の前記培地を含む第２のリザーバ（２５ｂ）を取り外し可能な方法で受け入れるための第３の凹部（２５ａ）、
メモリーカード（２６ａ）を有するマイクロコントローラ（２６）であって、前記マイクロコントローラは、少なくとも１つの前記物理化学的パラメータ、前記培地の温度、ならびに任意選択で微生物学的パラメータの測定値および調整可能値を含む少なくとも１つの前記組織の保存状態を、特に前記デバイスの輸送中において、追跡可能にし、かつ前記メモリーカードは、前記培地および少なくとも１つの前記組織および／または前記組織のドナーについてのデータを保持する、マイクロコントローラ（２６）、
前記保存状態を表示するための手段（２７）であって、好ましくはタッチスクリーンを含む手段（２７）、および
オペレータと連絡するための連絡手段（２８）であって、前記マイクロコントローラと結合され、前記オペレータが前記保存状態にアクセスし、前記培地のｐＨを調整するために、例えば、前記緩衝ガスの流量および／または圧力を変更することで、前記保存状態を変更することを可能とする、例えばアンテナを含む連絡手段（２８）
を含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載のデバイス（１’）。
【請求項７】
前記デバイスが、複数の前記組織を同時に保存および品質管理することに適しており、
前記デバイスが、
複数の前記チャンバ（１）を、円形または直線状の配置で受け入れるように構成されるプレート（２９）であって、前記チャンバ（１）は、前記保存培地中に浸漬された前記組織を含むようにそれぞれ適合され、前記培地の温度および前記物理化学的パラメータが同じであるようにまたは異なるように個別に調整される、プレート（２９）
各前記チャンバに結合される少なくとも１つの前記第１のリザーバ（２４ｂ）および少なくとも１つの第２のリザーバ（２５ｂ）のためのレセプタクル（３３）、および
前記プレートに対して可動的に取り付けられる、例えば前記組織中の生細胞を数えるための顕微鏡を含む、分析手段
を含む、請求項４または５に記載のデバイス（１”）。
【請求項８】
前記プレート（２９）が、前記チャンバ（１）を受け入れるための表面（２９ａ）を有し、
前記表面（２９ａ）が、対称軸（Ｘ）を有する円環状であり、かつ前記チャンバのための一連の凹部（３０ａおよび３０ｂ）を有し、
前記凹部が、前記円形の配置に沿って分布し、前記緩衝ガスのための前記流体カップリング（７ａおよび７ｂ）ならびに前記培地のための前記流体カップリング（５ａおよび５ｂ）、前記ｐＨセンサ（８）、および前記温度センサと連結するように適合され、
前記分析手段が、前記対称軸を中心とする可動支持体（３０）上に回転するように取り付けられ、例えば、前記チャンバに対して定義された角度位置に前記分析手段を位置させるための刻み目（３１）を備える前記プレートの下に取り付けられ、
前記刻み目（３１）が、例えば、一連の前記凹部の放射状のペアに沿って配置される、請求項７に記載のデバイス（１”）。
【請求項９】
移植または生体外実験を目的として、ヒトまたは動物の少なくとも１つの組織、例えば角膜試料を保存する方法であって、
前記方法が、前記チャンバ内で前記培地が連続的に入れ替えられ、少なくとも１つのチャンバ（１）内の保存培地の流体浴中に、少なくとも１つの前記組織を配置することを含み、
前記方法が、前記培地の、そのｐＨを含む少なくとも１つの物理化学的パラメータを調整するため、好ましくは、前記培地の温度を、−２０℃と５０℃との間の少なくとも１つの所定の値に調整するために、前記培地の外側で前記培地と接触する少なくとも１つの前記チャンバにおいて、二酸化炭素などの緩衝ガスを連続的に循環させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項１０】
前記緩衝ガスが、調整可能な流量および分圧で循環され、
好ましくは前記角膜の保存のために、緩衝ガスとしての二酸化炭素のモル分率が２％〜１０％、例えば４％〜６％である、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、移植または生体外実験を目的として、ヒトまたは動物の少なくとも１つの組織を保存および輸送するためのデバイスおよび方法に関する。本発明は非限定的な例として、移植または生体外実験まで、このような組織を特定の保存培地に保存すること、特に、ヒトまたは動物の角膜試料、例えば、角膜移植片を保存するために利用される。
【０００２】
現在、角膜移植片は、主に以下の２つの方法で保管されている：
凍結保存（主に北米で使用される処置、通常＋４℃）：特定の培養培地中で短期間（最大１０日間）角膜移植片を保存する。
温蔵臓器培養保存（ヨーロッパのほとんどの角膜バンクで使用される方法、通常３１℃〜３７℃）：角膜移植片は摘出された時点から角膜バンクによって受け取られる時点までサンプリング培地に最初に浸漬されることによって長期間（約５週間）保存される。そして、角膜移植片はサンプリング培地と同じ性質の保存培地へと直ちに移されるが、保存培地では、角膜移植片は最大３０日間保存される。移植の２日前に、その保存により生じる浮腫を減少させることで、その後の外科的処置をより容易にするために、角膜移植片は、いわゆる「デタージェセンス(deturgescence)」培地中に置かれる。
【０００３】
保存方法にかかわらず、角膜移植片は、検死時の摘出に続いて、通常、ガラスまたはプラスチック製のバイアル内の栄養液中に浸漬される。ｍｍ２当たりの生内皮細胞の数が、移植中の角膜移植片の使用の状態を左右するので、角膜の内皮の質は、これらの細胞の２回の計数によって評価される。前記２回の計数は、角膜の受け入れ時およびデタージェセンス培地への浸漬時に行われる。これらの計数は、種々の角膜を操作する工程、例えば、シャーレへの移動、トリパンブルーでの染色、洗浄、および生細胞を顕微鏡によって数えた後、角膜をバイアルに戻すこと、を必要とする。しかし、これらの操作は、角膜の外部汚染および内皮への損傷のリスクがある。
【０００４】
多数の角膜を同時に保存するために、保存温度に維持されたインキュベータ内に置かれた、保存培地を含むバイアル内で、角膜を別々に管理することが知られている。このようにして保存された角膜の品質管理を進めるには、オペレータは特に、顕微鏡検査、生細胞の計数、および培地の色の確認を、各角膜に対して別々に行うために、インキュベータからバイアルを１つずつ取り出さなければならない。この結果、かなりの時間が失われ、品質管理全体のコストが高くなり、さらに、角膜を操作することによる角膜の劣化のリスクが少なからず存在する。
【０００５】
国際公開第２０１４／１４０４３４  Ａ１号は、角膜サンプルを保存するためのデバイスを開示しており、このデバイスは、主として、分析のために保存液の注入及び回収を伴う、角膜試料を調整可能な圧力で受け入れて封入するための手段と、半球形状の角膜を圧平するための手段と、デバイスに物質を注入するための手段とを備え、デバイスを開くことなく角膜試料の質を視覚的又は器具に基づいて評価することができる。前記文献の意図された目的は、保存液の物理化学的パラメータとは無関係に、デバイス内に２つのチャンバ、すなわち内皮チャンバおよび上皮チャンバを画定することによって、入れ替えられた保存液と角膜の２つの面とが接触できるようにすることである。そのいずれの物理化学的パラメータも連続的に調整されないため、当該デバイスは、保存液の深刻な劣化の可能性があるという欠点を有し、品質管理の間にこの劣化が検出されると、修正することは困難である。
【０００６】
角膜移植片を含むバイアルは、実際には移植片の保存状態を評価することなく、一般的に周囲温度で輸送される。このことは、特に保存培地のｐＨを含む、角膜移植片の保存のための最適条件が考慮されないので、その生物学的品質の劣化のリスクを増大させる。
【０００７】
したがって、角膜などの組織を保存するための従来技術のデバイスおよび方法の主な欠点は、組織を含むバイアルの開封および組織の品質管理のための連続操作、および必要とされる他の培地への移動（前述の温蔵保存方法の場合）において存在するだけでなく、培地の保存条件の継続的な順守においても存在する。
【０００８】
本発明の目的は、移植または生体外実験を目的として、ヒトまたは動物の少なくとも１つの組織、例えば角膜試料を保存するためのデバイスを提供することであり、前記デバイスは少なくとも１つのチャンバを含み、前記チャンバは、液体保存培地中に、少なくとも１つの前記組織を受け入れ、保存するのに適し、少なくとも１つの前記チャンバ内で、前記培地を連続的に入れ替えるための手段を含む。前記デバイスは、前述の欠点を克服する。
【０００９】
この目的を達するために、本発明によるデバイスは、前記培地の外側で前記培地と接触するように、少なくとも１つの前記チャンバ内で、緩衝ガスを連続的に循環させることによって、前記培地のｐＨを含む前記培地の少なくとも１つの物理化学的パラメータを調整するための手段をさらに含むデバイスである。
【００１０】
「緩衝ガス」は、本明細書では一般的に、ガスが緩衝溶液、すなわち、実質的に一定のｐＨを有する溶液に変化することによって、保存培地を緩衝処理することができるガスとして理解される。
【００１１】
保存培地のｐＨを連続的に調整することは、本発明に係るデバイスを特徴付けるものであり、これは、特に、この角膜移植片の場合（すなわち、その移植まで）、５週間までの期間、最適な条件下で、その栄養培地中に、組織または各組織（例えば、角膜移植片）を保存することを可能にすると言えるだろう。
【００１２】
また、この調整におけるｐＨの連続的な測定が、組織または各組織が浸漬されている培地の細菌汚染をいつでも検出することを可能にすると言えるだろう。
【００１３】
本発明の別の態様によれば、少なくとも１つの前記チャンバは、
基部から延在する周側壁によって連続する基部を有する容器であって、好ましくは実質的に半球状の内面を有する容器、および
前記側壁上に取り付けられた少なくとも部分的に透明のカバーであって、好ましくは１回のみ開くように設計され、オペレータに既に開かれたことがあることを知らせるための手段を備えるカバー
を有することができ、
前記調整するための手段は、二酸化炭素などの前記緩衝ガスを、少なくとも１つの前記チャンバ内外に送達および排出するための送達および排出開口部を含むことができ、
前記緩衝ガスが、前記培地上で、の少なくとも１つの前記チャンバに送達され、かつ前記チャンバから排出されるように、前記送達および排出開口部が、前記カバーに隣接する前記側壁の上側ゾーンに形成される。
【００１４】
実質的に半球状の内面を有するこの容器は、培地の性質の均一性の欠如、および鋭い縁部または角度による組織または各組織の劣化の可能性を最小限にすることを可能にすると言えるだろう。
【００１５】
また、前記カバーが透明であるという性質は、培地の透明性を介して、組織または各組織の生細胞を計数するための視覚的測定を可能にすると言えるだろう。
【００１６】
さらに、本発明に係るデバイスのチャンバまたは各チャンバは、有利には１回のみ開くことができ、オペレータ（例えば、外科医、外科医の助手、または続く移植または生体外実験のために組織を必要とする任意の他の人）に開かれたことがあることを知らせるための手段は、例えば、最初に、カバー、または容器の側壁に堅固に接続された引き裂きタブを備えると言えるだろう。
【００１７】
本発明の別の態様によれば、前記調整するための手段は、
前記送達および排出開口部とそれぞれ連絡し、かつ前記デバイスが備える例えばポンプを含む循環ユニットを介して、少なくとも１つの前記チャンバ内で、加圧下で連続的に、前記緩衝ガスを循環させることができる、前記緩衝ガスのための流体カップリング（例えば、ルアー型）、
少なくとも１つの前記チャンバの内部と連絡し、かつｐＨセンサを含む、少なくとも１つの前記物理化学的パラメータのための少なくとも１つのセンサ、
任意選択で、例えば前記培地中で任意の細菌を検出することができる機能を有する、微生物学的センサ、および
任意選択で、少なくとも１つの前記チャンバ内で、前記少なくとも１つの組織を保存するため、および／または当該組織の再生を加速するための治療用流体（例えば、予防効果または治療効果を有する薬剤の種類）または非治療用流体を導入するための、前記側壁における少なくとも１つの孔
をさらに含むことができる。
【００１８】
デバイスが含む循環ユニットは、有利には圧電マイクロポンプを含むことができ、前記圧電マイクロポンプの圧力は、例えば、０〜７ｍｌ／分の流速に対して、例えば、０〜６００ｍｂａｒ（すなわち、６００００Ｐａ）の間で変化することができると言えるだろう。
【００１９】
本発明の別の態様によれば、前記培地を入れ替えるための前記手段は、導入される未使用の前記培地を含む前記デバイスの第１のリザーバから少なくとも１つの前記チャンバへ前記培地を導入すること、および少なくとも１つの前記チャンバから１度除去された使用済の前記培地を含む前記デバイスの第２のリザーバへ前記培地を導入することができる導入および除去開口部を含むことができ、
前記導入および除去開口部が、前記容器において形成され、２つの前記培地のための流体カップリング（例えば、ルアー型）とそれぞれ連絡し、
前記培地のための前記流体カップリングが、前記循環ユニットを介して、少なくとも１つの前記チャンバ内で、加圧下で連続的に、前記培地を循環させることができる。
【００２０】
したがって、本発明に係るデバイスは、緩衝ガスのための２つの流体カップリングを介して、入れ替えられた培地を緩衝処理することを可能にする、チャンバ内での緩衝ガスの連続的な循環に続き、これらの２つの流体カップリングによって、保存培地を自動的かつ連続的に入れ替えることを可能にすると言えるだろう。
【００２１】
本発明の別の好ましい特徴によれば、前記デバイスは、少なくとも１つの前記チャンバ内の前記培地の温度を、−２０℃〜５０℃の少なくとも１つの所定値に調整するためのユニットをさらに含むことができ、
前記調整するためのユニットが、少なくとも１つの前記チャンバの外側に、前記基部に対して取り付けられ、好ましくはコネクタおよび少なくとも１つの前記チャンバの内側と連絡する温度センサを備えたペルチェモジュールを含む。
【００２２】
この温度の測定は、有利には熱電対または別の温度センサによって実施される。
【００２３】
角膜試料の例に関しては、チャンバまたは各チャンバ内が０℃〜３７℃である場合、角膜試料の長期保存（５週間まで）を有利に達成することができるだろう。
【００２４】
本発明の別の態様によれば、前記デバイスが、可搬式単一ハウジングをさらに有することができ、
前記可搬式単一ハウジングが、
好ましくはポリマー（例えば、ポリテトラフルオロエチレン）から製造される断熱ブロックを取り外し可能な方法で受け入れるための第１の凹部であって、前記断熱ブロックは、前記容器が好ましくは金属（例えば、チタン製）である前記チャンバを受け入る、第１の凹部、
前記チャンバ内で、少なくとも１つの前記保存培地および前記緩衝ガスを循環させるための循環ユニットであって、好ましくはポンプ（再使用するために、無菌条件下で滅菌することができる）を含む循環ユニット、
前記デバイスを機能させるための蓄電器であって、好ましくはバッテリ（例えば、７２時間の充電を可能にする）を含む蓄電器、
前記チャンバへ導入される未使用の前記培地を含む第１のリザーバを取り外し可能な方法で受け入れるための第２の凹部、
前記チャンバから除去された使用済の前記培地を含む第２のリザーバを取り外し可能な方法で受け入れるための第３の凹部、
メモリーカードを有するマイクロコントローラであって、前記マイクロコントローラは、少なくとも１つの前記物理化学的パラメータ、前記培地の温度、ならびに任意選択で微生物学的パラメータの測定値および調整可能値を含む少なくとも１つの前記組織の保存状態を、特に前記デバイスの輸送中において、追跡可能にし、かつ前記メモリーカードは、前記培地および少なくとも１つの前記組織および／または前記組織のドナーについてのデータを保持する、マイクロコントローラ、
前記保存状態を表示するための手段であって、好ましくはタッチスクリーンを含む手段、および
オペレータと連絡するための連絡手段であって、前記マイクロコントローラと結合され、前記オペレータが前記保存状態にアクセスし、前記培地のｐＨを調整するために、例えば、前記緩衝ガスの流量および／または圧力を変更することで、前記保存状態を変更することを可能とする、例えばＧＳＭ（登録商標）、Ｗｉ−Ｆｉ、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ（登録商標）、またはＺｉｇｂｅｅ型のアンテナを含む連絡手段
を含む。
【００２５】
オペレータ（すなわち、外科医または他の人）はまず、カバーによって、組織の保存培地に浸漬された試料である組織を含む容器を閉じ、次いで、単一保存チャンバをストッパで密封し、その後、熱損を低減するために、前記単一保存チャンバを前記ブロック内に挿入するだろう。次に、「ジャック」コネクタを介して、輸送ハウジングに、チャンバおよびブロックからなる複合体を接合することによって前記複合体が挿入され、このハウジング内での輸送中、前記チャンバには、保存培地および緩衝ガスが連続的に供給される。
【００２６】
また、使用済の培地を含む第２のリザーバは、その輸送中であっても、組織の無菌性における品質管理に必要な微生物学的分析および生化学的分析を実施することを可能にすると言えるだろう。
【００２７】
さらに、前記メモリーカードは、有利には前記輸送されるチャンバに含まれる前記保存培地に関する物理化学的パラメータのすべてを含むことができると言えるだろう。そして、このマイクロコントローラおよびこれらの連絡手段を含む電子システムは、前記物理化学的パラメータのすべてまたはいくつかを、例えば、前記チャンバ内で循環される緩衝ガスにおいて、リアルタイムで、遠隔的に検査し、修正することを可能にするだろう。
【００２８】
したがって、本発明によるデバイスがその輸送のために有することができる可搬式単一ハウジングは、以下の利点を有する：
輸送中、培地および組織の温度が−２０℃〜５０℃に維持された状態で、その保存培地中に浸漬された組織を含む単一保存チャンバの輸送（角膜の場合、最大約７２時間）を介して、摘出された場所とそれに対応する組織バンク（例えば、角膜のための）との間、および当該バンクと移植を行う場所との間を、最適な保存条件下で、移植される組織（例えば、角膜移植片）を輸送することができること、
このハウジングが、温度、ｐＨ、および保存培地の色を含む関連するパラメータを、例えばタッチスクリーン上に表示し、このハウジングはまた、輸送条件（例えば、チャンバの温度、チャンバ内を循環する保存培地の流量および／または圧力、チャンバ内を循環する緩衝ガスの流量および／または圧力）に対する設定を変更することを可能にすること、および
このハウジングが、チャンバの輸送中に収集されたデータを、マイクロコントローラカード上に記録し、前記マイクロコントローラカードが、前記チャンバに関連する前述のパラメータのすべてを保存し、前記連絡手段を介してそれらをオペレータに送信するのに十分なメモリを有すること。
【００２９】
本発明のさらなる態様によれば、前記デバイスは、複数の前記組織を同時に保存および品質管理することに適しており、
前記デバイスが、
複数の前記チャンバを、円形または直線状の配置で受け入れるように構成されるプレートであって、前記保存培地中に浸漬された前記組織を保持するようにそれぞれ適合され、前記培地の温度および前記物理化学的パラメータが同じであるようにまたは異なるように個別に調整される、プレート
各前記チャンバに結合される少なくとも１つの前記第１のリザーバおよび少なくとも１つの第２のリザーバのためのレセプタクル、および
前記プレートに対して可動的に取り付けられる、例えば前記組織中の生細胞を数えるための顕微鏡を含む、分析手段（前記分析手段は、任意の他の測定装置を含むことができる）
を含む。
【００３０】
組織に関連するバンク（例えば、角膜組織バンク）に受け入れられると、角膜移植片などの組織を含む各単一保存チャンバが、この目的のためにデバイスのプレート上に備えられた位置に供給され（すなわち、細胞の成長に必要な、保存培地および緩衝ガス回路ならびに温度制御ユニットに、チャンバを連絡させるために、その基部壁上の接続配置を介して接続され）、こうして、マルチ組織インキュベータを形成する。
【００３１】
有利には、前記プレートは、前記チャンバを受け入れるための表面を有することができ、
前記表面が、対称軸を有する円環状であり、かつ前記チャンバのための連続する凹部を有し、
前記凹部が、前記円形の配置に沿って分布し、前記緩衝ガスのための前記流体カップリングならびに前記培地のための前記流体カップリング、前記ｐＨセンサ、および前記温度センサと連結するように適合され、
前記顕微鏡などの前記分析手段が、前記対称軸を中心とする可動支持体（３０）上に回転するように取り付けられることができ、例えば、前記チャンバに対して定義された角度位置に前記分析手段を位置させるための刻み目（３１）を備える前記プレートの下に取り付けられることができ、
前記刻み目（３１）が、例えば、一連の前記凹部の放射状のペアに沿って配置される。
【００３２】
本発明に係るこの特定のデバイスは、特に、以下の機能を提供することによって、複数の角膜移植片を同時に保存し、それらの品質管理をするうえでの問題を解決することを可能にする：
単一保存チャンバの温度が維持され（好ましくは−２０℃〜５０℃）、それぞれ個別的に、これらの単一保存チャンバ内で、自動的かつ連続的に保存溶媒が入れ替えられ（他のチャンバの汚染のリスクを回避するために、各チャンバが、保存培地を循環させるための別個の回路を備える）、同様にしてそれぞれ個別的に、前記チャンバ内で、連続的に前記緩衝ガスが循環される状態で、ｎ個（例えば、ｎは１０〜３０で変化する）の単一保存チャンバを含むことができる前記プレートによっていくつかの組織の保存および品質管理を同時に行う機能、
デバイスの残りの部分の汚染のリスクなしに安全に再使用するために、保存培地を含む前記リザーバおよび循環ユニットの部材（好ましくは前記ポンプを含む）をオートクレーブによって殺菌することを可能にする機能、
コンピュータ上で閲覧可能な、保存される組織の品質管理パラメータ（例えば温度、ｐＨなど）をリアルタイムで記録する機能、および
各チャンバのための前記第１のリザーバが存在することで、この第１のリザーバに適切な物質を注入することによる、将来的な治療を可能にする機能。
【００３３】
本発明に係る方法は、移植または生体外実験を目的として、ヒトまたは動物の少なくとも１つの組織、例えば角膜試料を保存する方法であって、
前記方法が、前記チャンバ内で前記培地が連続的に入れ替えられ、少なくとも１つのチャンバ（１）内の保存培地の流体浴中に、少なくとも１つの前記組織を配置することを含み、
前記方法が、前記培地の、そのｐＨを含む少なくとも１つの物理化学的パラメータを調整するため、好ましくは、前記培地の温度を、−２０℃と５０℃との間の少なくとも１つの所定の値に調整するために、前記培地の外側で前記培地と接触する少なくとも１つの前記チャンバにおいて、二酸化炭素などの緩衝ガスを連続的に循環させることを含む。
【００３４】
有利には、前記緩衝ガスが、調整可能な流量および分圧で循環されることができ、
好ましくは前記角膜の保存のために、緩衝ガスとしての二酸化炭素のモル分率が２％〜１０％、例えば４％〜６％である。
【００３５】
本発明の他の態様、利点、および詳細は、例示的な実施形態の以下の説明を読むことで明確となるだろう。これらの例示的な実施形態は、単なる一例であり、非限定的である。説明は、添付の図面を参照して行われる：
図１は、本発明に係るデバイスに含まれる単一保存チャンバの斜視側面図である。
図２は、図１のチャンバの斜視平面図である。
図３は、図１のチャンバの斜視底面図であり、前記チャンバに備えられる接続配置を示す。
図４は、図１〜図３に係るチャンバを受け入れるのに適した、本発明に係るブロックの斜視側面図である。
図５は、図４に係るブロックに収容された図１〜図３に係るチャンバを組み込む可搬式ハウジングを形成する、本発明に係るデバイスの斜視平面図である。
図６は、図５のデバイスの斜視正面図である。
図７は、図６のデバイスの斜視側面図である。
図８は、ハウジングの外壁が内部部品のいくつかを示すために、ハウジングの外壁が取り除かれている以外は、図７と同様の図である。
図９は、図８のハウジング内にみられ得るマイクロコントローラの一例を示す斜視平面図である。
図１０は、図１〜図３に係る多数のチャンバを受け入れるのに適したマルチ組織インキュベータを形成する、本発明の別の態様に係るデバイスの斜視平面図である。
【００３６】
図１〜３に示される単一保存チャンバ１は、本発明に係る保存デバイス１’、１”の主要な構成要素であり、組織のための特定の液体保存培地の槽に浸漬された角膜などの組織を受け入れることを意図されている。前記単一保存チャンバ１は、以下を含む：
基部２ａから延在する周側壁２ｂによって連続する基部２ａを有する、金属（例えば、チタン）から製造される容器２であって、前記容器２は、実質的に半球状の内面２ｃを有し、前記側壁２ｂは、一般的に中高の外面２ｄを有する（この実施例において、円柱の孤の形状である２つの対向する中高の側面が、互いに、丸みを帯びた接続ゾーンを介して、平坦な側面によって接続されることで定義される）容器２、および
少なくとも部分的に半透明または透明のカバー３（例えば、ガラスまたはサファイヤなどの他の素材でできた窓３ａを含む）であって、前記カバー３は、保持手段３ｂを介してロックするために適合された側壁２ｂの内面２ｃの上部においてロックされ、前記保持手段３ｂは、１回のみ開くことを目的として、既に開かれたことがあることをオペレータに知らせる（例えば、引き裂きタブ（図示せず）を破断することによって）ことができる、カバー３。
【００３７】
この容器２（図２参照）では：
側壁２ｂおよび基部２ａ内において、保存培地のための導入開口部４ａおよび除去開口部４ｂがそれぞれ形成され、前記導入開口部４ａおよび除去開口部４ｂは、例えばルアー型の流体カップリング５ａおよび５ｂとそれぞれ連絡し、前記流体カップリング５ａおよび５ｂは、基部２ａの外面に対して密封状態で取り付けられ、基部２ａを貫通して延びる（図３参照）、
カバー３の保持手段３ｂのすぐ下に位置する側壁２ｂの上側ゾーンにおいて、ＣＯ２などの緩衝ガスをチャンバ１に送達し、チャンバ１から排出するための送達および排出開口部６ａおよび６ｂが形成され、前記送達および排出開口部６ａおよび６ｂは、例えばルアー型の流体カップリング７ａおよび７ｂと同様に結合し、基部２ａの外面に対して密封状態で取り付けられ、基部２ａを貫通して延び（図３参照）、
基部２ａまたは側壁２ｂの下側ゾーンにおいて、保存培地のｐＨのためのセンサ８（好ましくは電位差マイクロセンサ）が形成され、前記センサ８は、基部２ａに対して貫通するように取り付けられたコネクタ９と連絡し、かつ
チャンバ１内の培地の温度を、−２０℃〜５０℃の間の所定の値に調整するためのユニット１０が形成され、前記調整するためのユニットは、ペルチェモジュール１１を含み（図３参照）、前記モジュールは、基部の外面に取り付けられ、モジュールのための第１のコネクタ１２およびチャンバ１の内部と連絡する温度センサのための第２のコネクタ１３を備える。
【００３８】
ペルチェモジュール１１は、電流の存在下における熱変位の物理的現象である熱電効果を、公知の方法で利用する。図４〜図８および図１０に示す本発明のデバイス１’、１”では、このモジュール１１は電子部品を利用し、前記電子部品は、モジュールに正の電圧を加えることによってモジュールが最高温度を得ることを可能にし、モジュールの端子においてこの電圧を反転することによって最低温度を得ることを可能にする。角膜の保存のための使用例として、ペルチェモジュール１１（Ａｄａｐｔｉｖｅ社製、型番：ＥＴ−０７１−１０−１３−ＲＳ、タイプ：２１．２Ｗ−３．９Ａ−８．８Ｖ−２０×２０ｍｍ）について試験を実施した。このモジュール１１は、フィードバックループを備え、前記フィードバックループは、本発明の文脈において、保存培地の温度を、−２０℃〜５０℃の設定温度に確実に調整するために、熱電対およびマイクロコントローラを含む。
【００３９】
デバイス１’および１”はそれぞれ、流体カップリング５ａ、５ｂおよび７ａ、７ｂならびに開口部４ａ、４ｂおよび６ａ、６ｂを介して、保存培地および緩衝ガスを循環させるための循環ユニット１４（図５〜７参照）をさらに含み、前記循環ユニット１４は好ましくはポンプを含む。特に、保存培地を入れ替えるための圧電ポンプ（Ｂａｒｔｅｌｓ  Ｍｉｋｒｏｔｅｃｈｎｍｉｋ製、Ｍｐ６  Ｍｉｃｒｏｐｕｍｐ、同じ凹部に２つの圧電アクチュエータを有する）について、０〜６００ｍｂａｒ（０〜６００００Ｐａ）の圧力を液体またはガスに加えた状態で、０〜７ｍｌ／分の流量で、試験を実施した（ポンプが機械的である場合、圧力は数バールに達し得ることに留意されたい）。
【００４０】
チャンバ１内を循環する緩衝ガスに関して、チャンバ１の温度制御された湿潤雰囲気中でモル分率５％のＣＯ２、すなわち、７９０ｍｍＨｇ（すなわち、１０１３×１０５Ｐａ）の大気圧に対するＣＯ２の分圧を利用して、角膜保存における、特にＣＯ２について試験された：
ＰＣＯ２＝０．０５×７６０（ｍｍＨｇ）＝３８ｍｍＨｇ（すなわち、約５０６５Ｐａ）。
【００４１】
上記で説明したように、チャンバ１内に含まれる保存培地上で保存培地と接触するように、チャンバ１内で、前記緩衝ガスを連続的に循環させる（すなわち、保存液内で、直接的にガスを循環させることを回避する）ことで、移植時まで（例えば、角膜の場合、最大５週間まであり得る期間）、最適な条件下でその栄養培地内に組織を保存するために、前記培地のｐＨを連続的に調整することができる。さらに、組織が浸漬されている保存培地のｐＨを連続的に測定することによって、前記培地の細菌汚染をいつでも検出することができる。
【００４２】
このように、本発明者によって行われた試験は、５％に等しいＣＯ２のモル分率は、角膜移植片を含む、前述のペルチェモジュール１１  ＥＴ−０７１−１０−１３−ＲＳによって、保存培地の温度が３１℃に調整された、保存培地（製品名：ＣｏｒｎｅａＭａｘ（登録商標）、Ｅｕｒｏｂｉｏ社製）を、実質的に一定の最適ｐＨに維持することを可能にすることを明らかにした（この３１℃への調整は、欧州の角膜バンクにおける実務に特に適しており、例えば、北アメリカの実務に沿った、わずか４℃というはるかに低い温度に調整することも可能であることに留意されたい）。
【００４３】
図４は、断熱ブロック１５（例えば、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）製）の構造を示す。前記断熱ブロックは、ブロックカバー１７（空の開いた位置で表される）を備える直方体のコンテナを実質的に含み、前記ブロックカバー１７は、蝶番１８を介して連結され、前記断熱ブロックは、チャンバ１のカバー３が閉じられ、密封された後、前記ブロック１５に受け入れられるチャンバ１のカバー３にならった、半透明または透明な窓１９を有する。チャンバ１の接続配置２０（図３に示すように、この接続配置２０は、特にカップリング５ａ、５ｂ、７ａ、７ｂおよびコネクタ９、１２〜１３、さらにバッテリならびにメモリーカード（図示せず）を含む）は、コンテナ１６の底面１６ａを貫通する。そのため、前記接続配置２０が、ブロック１５によるチャンバ１の輸送中、組織を保存し、かつ保存状態を記録するために提供されることを可能にする。
【００４４】
本発明の別の態様によれば、保存培地中に浸漬された組織で満たされたチャンバを含むブロック１５は、それ自体が、本発明に係るデバイス１に含まれ得る可搬式単一ハウジング２１に接続される。
【００４５】
図５〜図８に示すように、前記ハウジング２１は、特に、以下のものを含む：
ブロック１５を受け入れる凹部２２であって、前記ブロックには、保存培地および緩衝ガスを循環させ、培地の温度を調整するための単一チャンバ１が収容および接続される、凹部２２、
チャンバ１内で、保存培地および緩衝ガスを循環させるための循環ユニット１４、
デバイス１’を機能させるための（アクセスハッチ２３によって特定される）電気バッテリ（例えば、７２時間の充電を可能にする）、
チャンバ１に導入される「新鮮な」（すなわち、未使用の）保存培地を含む第１の管状リザーバ２４ｂを受け入れる凹部２４ａ、
チャンバ１から除去された使用済の保存培地を含む第２の管状リザーバ２５ｂを受け入れる凹部２５ａ、
特にデバイス１’の輸送中、組織の保存状態を追跡可能とするための、メモリーカード２６ａを有するマイクロコントローラ２６であって、前記マイクロコントローラ２６は、培地のｐＨおよび温度および任意の微生物学的パラメータの測定値および調整可能値を含む、マイクロコントローラ２６（前記カード２６ａは、培地ならびに任意で組織および／またはそのドナーに関するデータを含む）
保存状態を表示するための、例えばタッチスクリーンなどのスクリーン２７、および
マイクロコントローラ２６を介して、保存条件をオペレータに連絡するための、例えば、ＧＳＭ、Ｗｉ−Ｆｉ、Ｂｌｕｅｔｏｏｔｈ、またはＺｉｇｂｅｅアンテナなどのアンテナ２８であって、前記アンテナ２８は、このオペレータが例えば、デバイス１’によってｐＨ警告が発せられた場合に、培地のｐＨを調整するために、緩衝ガスの流量および／または圧力を変更することによって、それらを修正することができる（緩衝ガスの流量の増加させることで、「すすぎ」により、設定ｐＨを回復させることを可能にする）アンテナ２８。
【００４６】
図９に詳細に示される、マイクロコントローラ２６のメモリーカード２６ａは、例えばＳＳＤメモリ（Ｓｏｌｉｄ  Ｓｔａｔｅ  Ｄｒｉｖｅ、すなわちフラッシュメモリディスク）であり、ＧＳＭおよびＷｉ−Ｆｉ型のモジュール２６ｂに結合することができる。
【００４７】
上記で説明したように、カバーが開口を知らせるための手段（例えば、引き裂きタブ）が存在すること、およびマイクロコントローラ２６のメモリーカード２６ａが組織の保存状態を記録することによって、単一保存チャンバ１を開ける外科医などのオペレータが、上述の通り保存された組織を使用して、計画された移植または生体外実験を進められることを知る。
【００４８】
図１０に示される本発明の別の態様によるデバイス１”は、多数の組織を同時に保存および品質管理することを可能にするマルチ組織インキュベータを形成する。この目的のために、このデバイス１”は、多数の単一保存チャンバ１（チャンバ１が２つのみ示される）を保持するように構成されている。各単一保存チャンバは、それらの保存培地中に浸漬する組織を含み、その温度および特にｐＨは、別個に調整される。この例では、チャンバ１が、円形プレート２９上に取り付けられ、前記プレート２９は、組織中の生細胞を計数するための小型顕微鏡（図示せず）を含む分析手段を備える。前記分析手段は、プレート２９の下に取り付けられ、チャンバ１に対して決定された角度位置に従ってこれらの分析手段を位置させるための刻み目３１を介して、プレート２９に対して回転移動が可能である。
【００４９】
プレート２９は、チャンバ１を受け入れるための表面２９ａを有し、前記表面２９ａは、円環状であり、かつチャンバのための一連の凹部３０ａおよび３０ｂを備え、前記凹部は、円形の配置に沿って、（軸Ｘに対して）放射状にペアとなるように分布する。図１０から分かるように、各凹部３０ａ、３０ｂは、これらの凹部３０ａ、３０ｂに形成されたソケット３２を介して、プレート２９を貫通してチャンバ１の接続配置２０に連結するように適合される。これにより、組織が対応する組織バンクに受け入れられると、組織に必要な保存条件が確実に維持される（特に、保存培地および緩衝ガスのための回路および温度管理ユニット１０を介して）。
【００５０】
図１０ａの例はまた、４つのリザーバ２４ｂおよび２５ｂのための２つの配置位置のペア３４を画定するレセプタクル３３を示す。前記レセプタクル３３は、例えば、共同で回転するために支持体３０に接続される。各配置位置のペア３４は、第１の管状リザーバ２４ｂ（未使用の培地）および第２の管状リザーバ２５ｂ（使用済の培地）を受け入れるように意図され、各配置位置のペア３４は、チャンバ１の各放射状のペアにおける２つのチャンバのうちの１つのためのものである。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】本発明に係るデバイスに含まれる単一保存チャンバの斜視側面図である。
【図２】図１のチャンバの斜視平面図である。
【図３】図１のチャンバの斜視底面図であり、前記チャンバに備えられる接続配置を示す。
【図４】図１〜図３に係るチャンバを受け入れるのに適した、本発明に係るブロックの斜視側面図である。
【図５】図４に係るブロックに収容された図１〜図３に係るチャンバを組み込む可搬式ハウジングを形成する、本発明に係るデバイスの斜視平面図である。
【図６】図５のデバイスの斜視正面図である。
【図７】図６のデバイスの斜視側面図である。
【図８】ハウジングの外壁が内部構成要素のいくつかを示すために、ハウジングの外壁が取り除かれている以外は、図７と同様の図である。
【図９】図８のハウジング内にみられ得るマイクロコントローラの一例を示す斜視平面図である。
【図１０】図１〜図３に係る多数のチャンバを受け入れるのに適したマルチ組織インキュベータを形成する、本発明の別の態様に係るデバイスの斜視平面図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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