(57)【要約】本明細書では、診断、治療、及び／または研究用途のために、腫瘍微小環境内の機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を検出及び／または標的化するための組成物及び方法を提供する。詳細には、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３などの本明細書に記載される細胞表面受容体の発現、または、Ｔ細胞の表面に差次的に発現されるマーカーのような、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現に関連した更なるマーカーの発現を介して検出及び／または標的化される。
2020505342.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんを有する対象を治療する方法であって、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を特異的に標的化する薬剤を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記対象が、固形腫瘍がんに罹患している、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記腫瘍が、Ｔ細胞浸潤を許容するが、免疫治療には耐性を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記腫瘍環境が、機能不全の抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を抗４−１ＢＢ剤及び／または抗ＬＡＧ−３剤と接触させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗４−１ＢＢ剤及び／または抗ＬＡＧ−３剤が、抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
更なる治療剤の共投与を更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記更なる治療剤が、化学治療薬または免疫治療剤である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記更なる治療剤が、細胞治療、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）治療、サイトカイン治療、及びアジュバント治療からなるリストから選択される免疫治療剤である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫治療剤が、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体及び／または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体からなるリストから選択されるｍＡｂ治療である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記免疫治療剤が、樹状細胞治療及びＴ細胞治療からなるリストから選択される細胞治療である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記更なる治療剤が、表２に記載の受容体の１つを標的とする、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記更なる治療剤が、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、ＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ及び／またはＳｅｍａ７ａを標的とする、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を、表２に記載の受容体の１つを標的とする治療剤と接触させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記治療剤が、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、ＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ及び／またはＳｅｍａ７ａを標的とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記治療剤が、抗Ｎｒｎ１抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記治療剤が、抗Ｓｅｍａ７ａ抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記治療剤が、抗ＣＲＴＡＭ抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）抗４−１ＢＢ剤、抗ＬＡＧ−３剤、抗Ｎｒｎ１剤、抗Ｓｅｍａ７ａ剤、及び抗ＣＲＴＡＭ剤のうちの１つ以上と、（ｂ）免疫治療剤と、を含む組成物であって、対象に治療目的で投与されるように配合された、組成物。
【請求項２０】
前記抗４−１ＢＢ剤、抗ＬＡＧ−３剤、抗Ｎｒｎ１剤、抗Ｓｅｍａ７ａ剤、及び／または抗ＣＲＴＡＭ剤が、抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
（ａ）細胞集団からのＣＤ８＋Ｔ細胞を試験して、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞がＬＡＧ−３及び４−１ＢＢを同時発現しているかどうかを判定することと、（ｂ）抗Ｎｒｎ１剤、抗Ｓｅｍａ７ａ剤、及び抗ＣＲＴＡＭ剤を投与することと、を含む、方法。
【請求項２２】
前記抗Ｎｒｎ１剤、抗Ｓｅｍａ７ａ剤、及び／または抗ＣＲＴＡＭ剤が、抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記試験を行うことが、インビトロで行われる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記細胞を、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の同時発現について試験することにより機能不全のＴ細胞を特定する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本発明は、２０１７年１月１７日出願の米国特許仮出願第６２／４４７，１９９号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願の全容を参照によって援用するものである。
【０００２】
［政府支援の声明］
本発明は、アメリカ国立衛生研究所により授与された助成番号第Ｒ０１ＣＡ１６１００５号の政府支援によって成されたものである。アメリカ合衆国政府は本発明に対して一定の権利を有するものである。
【０００３】
本明細書では、診断、治療、及び／または研究用途のために、腫瘍微小環境内の機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を検出及び／または標的化するための組成物及び方法を提供する。詳細には、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３などの本明細書に記載される細胞表面受容体の発現、または、Ｔ細胞の表面に差次的に発現されるマーカーのような、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現に関連した更なるマーカーの発現を介して検出及び／または標的化される。
【背景技術】
【０００４】
免疫系は、がんから宿主を防御するうえで重要な役割を担っている（Ｖｅｓｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；その全容を参照により援用する）。腫瘍の自然免疫による感知は、発がんに寄与する変異及びエピジェネティック変化から誘導される腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の提示を介して適応Ｔ細胞応答を生じる（Ｇａｊｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；その全容を参照により援用する）。自然にプライミングされたＣＤ８＋Ｔ細胞は、マウス腫瘍モデルにおいて（Ｈａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；その全容を参照により援用する）、また、進行がんの患者の一部において（Ｈａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；その全容を参照により援用する）、腫瘍部位にホーミングする。これらの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）は、腫瘍抗原を認識する能力を有し、予後の改善された活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞による浸潤と免疫治療に対する応答との間の相関に基づけば、がん患者における腫瘍制御に寄与するものと考えられる（Ｆｒｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｔｕｍｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；その全容を参照により援用する）。しかしながら、更なる操作を行わなければ、この内因性の抗腫瘍応答は、確立された腫瘍の完全な拒絶を媒介するには通常は充分ではない（Ｇａｊｅｗｓｋｉ，２００７ｂ；Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２；Ｂａｉｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；Ｇａｊｅｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｌａｒｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。過去数年間にわたって蓄積されてきたデータは、自然の抗腫瘍Ｔ細胞応答を伴う腫瘍が応答のエフェクター段階を破壊する免疫阻害経路の高い発現を有していることを示している。これらの免疫阻害経路としては、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用（Ｐａｒｄｏｌｌ，２０１２；その全容を参照により援用する）、ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋調節性Ｔ  Ｔｒｅｇ）細胞の動員（Ｇａｊｅｗｓｋｉ，２００７ａ；その全容を参照により援用する）、及びインドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）による代謝調節不全（Ｓｐｒａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；その全容を参照により援用する）が挙げられる。しかしながら、これらの外因性の免疫阻害因子の影響を受けないよう、腫瘍抗原に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞が腫瘍から単離される場合であっても、これらのＣＤ８＋Ｔ細胞はエクスビボで変化した機能特性をなおも示す（Ｈａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；Ｂａｉｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；その全容を参照により援用する）。
【０００５】
ＰＤ−１の発現は、腫瘍特異的な疲弊Ｔ細胞を特定することが記載されている（Ａｈｍａｄｚａｄｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｆｏｕｒｃａｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｇｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；その全容を参照により援用する）。しかしながら、慢性型感染症との関連においてＰＤ−１を発現するＴ細胞は、エフェクター機能を依然保持することができる（Ｗｈｅｒｒｙ  ａｎｄ  Ｋｕｒａｃｈｉ，  ２０１５；その全容を参照により援用する）ことから、ＰＤ−１はＴ細胞疲弊の誘導に必要ではない（Ｏｄｏｒｉｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；その全容を参照により援用する）。ＰＤ−１以外に、ＣＤ２２３（ＬＡＧ−３）、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２（ＴＩＭ−３）、及び細胞毒性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）を含むいくつかの更なる共阻害受容体が機能不全Ｔ細胞でやはり発現しており、より多くの阻害性受容体の発現は、低下したサイトカイン分泌（詳細には、ＩＦＮ−ｇ及びＴＮＦ−ａ）及び増殖能（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９；その全容を参照により援用する）との相関が示されている。これらの受容体の発現は、ウイルス及びがんモデルで観察されているが、同じ集団での共阻害性及び共刺激性受容体の完全な分析は、腫瘍条件では行われていない。
【発明の概要】
【０００６】
本明細書では、診断、治療、及び／または研究用途のために、腫瘍微小環境内の機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を検出及び／または標的化するための組成物及び方法を提供する。詳細には、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３などの本明細書に記載される細胞表面受容体の発現、または、Ｔ細胞の表面に差次的に発現されるマーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ、及びＳｅｍａ７ａ）のような、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現に関連した更なるマーカーの発現を介して検出及び／または標的化される。
【０００７】
いくつかの実施形態では、本明細書において、がんを有する対象を治療する方法であって、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を特異的に標的化する薬剤を投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は、固形腫瘍がんに罹患している。いくつかの実施形態では、腫瘍は、Ｔ細胞浸潤を許容するが、免疫治療には耐性を有する。いくつかの実施形態では、腫瘍環境は、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を抗４−１ＢＢ剤及び／または抗ＬＡＧ−３剤と接触させる。いくつかの実施形態では、抗４−１ＢＢ剤及び／または抗ＬＡＧ−３剤は、抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である。いくつかの実施形態では、方法は、更なる治療剤の共投与を更に含む。いくつかの実施形態では、更なる治療剤は、化学治療薬または免疫治療剤である。いくつかの実施形態では、更なる治療剤は、細胞治療、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）治療、サイトカイン治療、及びアジュバント治療からなるリストから選択される免疫治療剤である。いくつかの実施形態では、免疫治療剤は、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体及び／または抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体からなるリストから選択されるｍＡｂ治療である。いくつかの実施形態では、免疫治療剤は、樹状細胞治療及びＴ細胞治療からなるリストから選択される細胞治療である。いくつかの実施形態では、更なる治療剤は、表２に記載の受容体の１つを標的とする。いくつかの実施形態では、更なる治療剤は、Ｔ細胞の表面に発現されるマーカー／受容体を標的とする。いくつかの実施形態では、更なる治療剤は、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭまたはＳｅｍａ７ａを標的とする。いくつかの実施形態では、更なる治療剤は、Ｎｒｎ１、Ｓｅｍａ７ａ、またはＣＲＴＡＭである。
【０００８】
いくつかの実施形態では、本明細書において、がんを有する対象を治療する方法であって、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を特異的に標的化する治療剤を投与することを含む方法であって、前記薬剤が表２に記載の受容体の１つを標的とするものである、方法が提供される。いくつかの実施形態では、治療剤は、Ｔ細胞の表面に発現されるマーカー／受容体を標的とする。いくつかの実施形態では、治療剤は、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭまたはＳｅｍａ７ａを標的とする。いくつかの実施形態では、治療剤は、Ｎｒｎ１、Ｓｅｍａ７ａ、またはＣＲＴＡＭである。いくつかの実施形態では、治療剤は、標的マーカー／受容体に結合する抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である。いくつかの実施形態では、治療剤は、抗Ｎｒｎ抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である。いくつかの実施形態では、治療剤は、抗Ｓｅｍａ７ａ抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である。いくつかの実施形態では、治療剤は、抗ＣＲＴＡＭ抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本明細書において、（ａ）抗４−１ＢＢ剤、抗ＬＡＧ−３剤、抗Ｎｒｎ１剤、抗Ｓｅｍａ７ａ剤、及び抗ＣＲＴＡＭ剤のうちの１つ以上と、（ｂ）免疫治療剤と、を含む組成物であって、対象に治療目的で投与されるように配合された、組成物が提供される。いくつかの実施形態では、抗４−１ＢＢ剤、抗ＬＡＧ−３剤、抗Ｎｒｎ１剤、抗Ｓｅｍａ７ａ剤、及び／または抗ＣＲＴＡＭ剤は、抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本明細書において、（ａ）ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａのうちの１つを標的とするか、かつ／またはこれに結合する薬剤と、（ｂ）免疫治療剤と、を含む組成物であって、対象に治療目的で投与されるように配合された、組成物が提供される。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本明細書において、（ａ）細胞集団からのＣＤ８＋Ｔ細胞を試験して、ＣＤ８＋Ｔ細胞がＬＡＧ−３及び４−１ＢＢを同時発現しているかどうかを判定することと、（ｂ）ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａのうちの１つを標的とするか、かつ／またはこれに結合する１種類以上の薬剤を投与することと、を含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、薬剤は、抗Ｎｒｎ１剤、抗Ｓｅｍａ７ａ剤、及び／または抗ＣＲＴＡＭ剤である。いくつかの実施形態では、抗Ｎｒｎ１剤、抗Ｓｅｍａ７ａ剤、及び／または抗ＣＲＴＡＭ剤は、抗体、抗体フラグメント、または抗体模倣分子である。いくつかの実施形態では、試験を行うことは、インビトロで行われる。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本明細書において、前記細胞を、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の同時発現について試験することにより機能不全のＴ細胞を特定する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書において、前記細胞を表２のマーカー／受容体（例えば、Ｔ細胞表面マーカー／受容体（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、ＴＭＥＭ１２６Ａ）の１つ以上の発現について試験することにより機能不全のＴ細胞を特定する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の同時発現は、進行性腫瘍に見られるＣＤ８＋ＴＩＬコンパートメントの相当の部分を特定する。（Ａ）皮下腫瘍接種後７、１４、及び２１日目の腫瘍保有マウスから得たＢ１６．ＳＩＹ腫瘍及び脾臓及びＴｄＬＮ由来のＣＤ８＋Ｔ細胞上の４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現の代表的分析。（Ｂ〜Ｄ）組成物の縦モードの概略、ｎ＝５；各時点につき４〜５回の独立した実験、（Ｃ）絶対細胞数、ｎ＝５；各時点につき７〜９回の独立した実験、及び（Ｄ）ＣＤ８＋４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３  ＴＩＬ亜集団の細胞密度、ｎ＝５；各時点につき２〜５回の独立した実験。絶対細胞数は、フローサイトメトリーにより完全な腫瘍試料を取得することにより測定した。（Ｅ）Ｋｉ６７＋であるＣＤ８＋４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３  ＴＩＬ亜集団の割合のＤ１４の概略。ｎ＝３〜５；２回の独立した実験。（Ｆ）ＢｒｄＵパルスの２４時間後のＣＤ８＋４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３  ＴＩＬ亜集団における１３日目のＢｒｄｕＤ取り込みの概略。ｎ＝５；３回の独立した実験。（Ｇ〜Ｉ）他の腫瘍モデルにおける４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３集団の代表的なフロープロット（Ｇ及びＨ）ならびに概略（Ｉ）。マウスに２ｘ１０６個のＣ１４９８．ＳＩＹ、ＭＣ３８．ＳＩＹ、ＥＬ４．ＳＩＹ、Ｂ１６親腫瘍、ＭＣ５７．ＳＩＹ、または１９６９．ＳＩＹを皮下に接種し、腫瘍接種後１４日目に４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現について分析した。ｎ＝３〜５；各時点につき２〜５回の独立した実験。（Ｊ）マウスの両脇腹に２ｘ１０６個のＭＣ５７．ＳＩＹまたはＢ１６．ＳＩＹを示した時点で接種し、各マウスからの腫瘍をプールし、ＣＤ８＋ＴＩＬコンパートメントにおける４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の同時発現について分析した。ｎ＝３〜５；各時点につき２回の独立した実験。エラーバーはすべて±ＳＥＭを示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１ボンフェローニ事後検定をともなう二元配置ＡＮＯＶＡを縦モード実験（Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｈ）で用い、クラスカル−ウォリス（ノンパラメトリック）検定を１つの時点での分析（Ｅ及びＦ）で用いた。
【図２】Ｅｇｒ２及びＥｇｒ２転写ネットワークの構成要素が４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋ＴＩＬで濃縮される。（Ａ）Ｅｇｒ２ＥＧＦＰ発現の代表的なフロープロット及び概略。Ｅｇｒ２ＥＧＦＰマウスの皮下に２ｘ１０６個のＢ１６．ＳＩＹ腫瘍を接種した。腫瘍、ＴｄＬＮ、及び脾臓からのＣＤ８＋Ｔ細胞を７日目及び１４日目にＥｇｒ２ＥＧＦＰの発現について分析した。ｎ＝４〜５；２回の独立した実験。（Ｂ）Ｅｇｒ２標的遺伝子の発現（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１３）。１４日目の腫瘍保有マウスから得たＣＤ８＋ＴＩＬを、Ｅｇｒ２ＥＧＦＰの発現量が高いかまたは低いかに基づいて分取し、ｑＲＴ−ＰＣＲによりＥｇｒ２標的の発現について直接分析した。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝３；２回の独立した実験。（Ｃ）７日目及び１４日目のＣＤ８＋Ｅｇｒ２ＧＦＰｈｉ及びＥｇｒ２ＧＦＰｌｏＴＩＬ内の４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３亜集団の代表的なフロープロット及び概略。ｎ＝４〜５。各時点につき２回の独立した実験。（Ｄ）４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋及び４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−亜集団におけるＥｇｒ２標的の発現。亜集団を分別し、ｑＲＴ−ＰＣＲにより標的の発現について直接分析した。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝４；２回の独立した実験。（Ｅ）Ｅｇｒ２ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ×ｐＬＣＫＣｒｅＥＲＴ２ｘＹＦＰ−Ｒｏｓａ２６マウスに５回用量のタモキシフェンを強制摂食により投与し、３日後に２ｘ１０６個のＢ１６．ＳＩＹ細胞を接種する。ＹＦＰ＋またはＹＦＰ−ＣＤ８＋ＴＩＬを分取し、Ｅｇｒ２転写産物について直接、更にインビトロ刺激後に分析した。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝３；２回の独立した実験。（Ｆ）７日目及び１４日目のＹＦＰ＋またはＹＦＰ−ＣＤ８＋ＴＩＬ内の４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３同時発現の代表的なフロープロット及び概略。ｎ＝３；２回の独立した実験。（Ｇ）Ｅｇｒ２ＧＦＰマウスから単離した７日目のＣＤ８＋ＴＩＬからのＥｇｒ２ＧＦＰｈｉ及びＥｇｒ２ＧＦＰｌｏにおけるＥｇｒ３及びＨｉｆ１αの発現。ｎ＝５；２回の独立した実験。エラーバーは±ＳＥＭを示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１ボンフェローニ事後検定をともなう二元配置ＡＮＯＶＡを縦モード実験で用い（Ａ及びＣ）、マン−ホイットニー検定を（Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ及びＧ）において有意性を計算するために用いた。
【図３】４−１ＢＢとＬＡＧ−３の同時発現は、進行性腫瘍において腫瘍抗原特異的ＴＩＬを特定する。（Ａ）脾臓から単離された異なる４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３亜集団及びＣＤ８＋Ｔ細胞からの代表的なＣＤＲ３βの分布。枠で囲んだ領域は、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団における主要なピークを表す。（Ｂ）ゆがみの尺度として、各Ｖβスペクトル型について同じマウス内の各ＴＩＬ亜集団とＣＤ８＋Ｔ細胞脾臓集団との間のハミング距離（ＨＤ）を計算した。コントロールとして、マウス間のＣＤ８＋脾臓細胞集団からのＨＤ（グレーのバー）を計算した。ｎ＝３；１回の独立した実験。（Ｃ〜Ｄ）Ｂ１６．ＳＩＹ及びＭＣ３８．ＳＩＹまたは（Ｄ）ＭＣ５７．ＳＩＹ及び１９６９．ＳＩＹ腫瘍接種後１４日目のＨ−２Ｋｂ／ＳＩＹ＋及びＨ−２Ｋｂ／ＳＩＹ−ＣＤ８＋ＴＩＬ内の４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３亜集団の代表的なフロー分析。ｎ＝３〜４；３〜５回の独立した実験。（Ｅ）腫瘍接種後１４日目のＢ１６．ＳＩＹ、ＭＣ３８．ＳＩＹ、ＭＣ５７．ＳＩＹ、及び１９６９．ＳＩＹ腫瘍を比較する、４−１ＢＢとＬＡＧ−３を同時発現するＨ−２Ｋｂ／ＳＩＹ＋及びＨ−２Ｋｂ／ＳＩＹ−ＣＤ８＋ＴＩＬの組成の概略。ｎ＝５；３〜４回の独立した実験。（Ｆ〜Ｈ）腫瘍接種後７日目に、ＣＤ４５．１コンジェニック腫瘍保有宿主に尾部静脈から１ｘ１０６個のＰ１４／ＣＤ４５．２及び２Ｃ／ＣＤ４５．１／２Ｔｇ  Ｔ細胞を養子移入し、２Ｃ、Ｐ１４、及び宿主ＣＤ８＋ＴＩＬにおける（Ｆ）腫瘍内で回収された細胞の総数、（Ｇ及びＨ）４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現のプロファイルについて分析した。ｎ＝５；２回の独立した実験。エラーバーはすべて±ＳＥＭを示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１クラスカル−ウォリス （ノンパラメトリック）検定を（Ｂ）スペクトル型分析及び（Ｅ及びＦ）Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＹ分析で用いた。ボンフェローニ事後検定をともなう二元配置ＡＮＯＶＡを（Ｈ）２Ｃ、宿主、及びＰ１４組成分析に用いた。
【図４】４−１ＢＢとＬＡＧ−３の同時発現（ただしＰＤ−１は同時発現しない）は、ＩＬ−２が低下した機能不全ＣＤ８＋ＴＩＬを定義する。（Ａ及びＢ）１４日目のＢ１６．ＳＩＹ腫瘍保有マウスから分取した細胞を抗ＣＤ３ε及び抗ＣＤ２８で１２時間刺激し、（Ａ）ｑＲＴ−ＰＣＲによりＩＬ−２転写産物について、また、（Ｂ）ＥＬＩＳＡによりＩＬ−２タンパク質について分析した。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝４〜５；３回の独立した実験。（Ｃ）１４日目のＢ１６．ＳＩＹ腫瘍保有Ｅｇｒ２ＧＦＰマウスからＥｇｒ２ＧＦＰｈｉ及びＥｇｒ２ＧＦＰｌｏＴＩＬを分取し、インビトロで１２時間刺激し、ｑＲＴ−ＰＣＲによりＩＬ−２転写産物について分析した。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝５；２回の独立した実験。（Ｄ）腫瘍接種後７日目に１ｘ１０６個の２Ｃ／ＣＤ４５．１／２Ｔｇ  Ｔ細胞をマウスにトランスフェクトし、７日後に腫瘍から分取した宿主４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋Ｔ細胞及び腫瘍またはＴｄＬＮから分取した２Ｃ  Ｔ細胞をインビトロで刺激し、ｑＲＴ−ＰＣＲによりＩＬ−２転写産物の発現について分析した。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝３；２回の独立した実験。（Ｅ及びＦ）４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３  ＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団上のＰＤ−１発現の代表的なフロー分析、及び（Ｆ）１４及び２１日目のＣＤ８＋ＴＩＬコンパートメント中の４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋ＰＤ−１＋亜集団の組成の概略。ｎ＝５；３回の独立した実験。（Ｇ）４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−ＰＤ−１＋及びＬＡＧ−３＋４−１ＢＢ＋ＣＤ８＋ＴＩＬを１４日目の腫瘍保有マウスから分取し、インビトロで刺激し、ｑＲＴ−ＰＣＲによりＩＬ−２転写産物の発現について分析した。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝３；２回の独立した実験。エラーバーはすべて±ＳＥＭを示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．００１  クラスカル−ウォリス（ノンパラメトリック）検定を多重比較の分析に用い（Ａ、Ｂ、及びＤ）、マン−ホイットニー検定をペアワイズ比較に用いた（Ｃ及びＧ）。
【図５Ａ】（５Ａ〜５Ｅ）機能不全ＣＤ８＋ＴＩＬは、ＩＦＮ−γ産生、細胞溶解能を維持し、Ｔｒｅｇ動員ケモカインを産生する（図５Ａ）ＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団のサイトカイン産生能の縦モード分析。ＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団を分取し、抗ＣＤ３ε及び抗ＣＤ２８で１０〜１２時間刺激し、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αの濃度を測定した。濃度は細胞数に対して正規化した。７及び１４日目に各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝４〜５；２回の独立した実験。
【図５Ｂ】エクスビボで直接分析した４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３亜集団におけるＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、及びＧｚｍｂ転写産物レベル。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝３〜５；３回の独立した実験。
【図５Ｃ】エクスビボで直接分析したＩＦＮ−γ産生の代表的なフロープロット及び概略。要約すると、２ｍｇ／ｍＬのＧｏｌｇｉＰｌｕｇを含む１００μｌのＰＢＳを腫瘍接種後１４日目に腫瘍内に注射した。８時間後にＴＩＬを単離した。すべての工程は、１ｍｇ／ｍＬのＧｏｌｇｉＳｔｏｐを含む培地を含む氷上で固定まで行った。ｎ＝５；２回の独立した実験。
【図５Ｄ】示される時点にＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団を分取し、５０，０００個のＰ８１５標的細胞を１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３εとともにプレートした。溶解された標的細胞をヨウ化プロピジウム及び／または生／死細胞固定可能生存率測定色素（ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ  ｆｉｘａｂｌｅ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｄｙｅ）についてポジティブ染色することによって測定した。ＣＴＬを加えずにプレートしたＰ８１５標的細胞をネガティブコントロールとして用いた（黒いバー）。プライミングしたＯＴＩ細胞をポジティブコントロールとして用いた。両脇腹に２個の腫瘍を有する１０匹のマウスから得た腫瘍をプールして充分な量のＣＤ８＋ＴＩＬを得た。データは、３つの独立した実験を表したものである。
【図５Ｅ】ｑＲＴ−ＰＣＲによりエクスビボで直接分析した４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３亜集団におけるＣｃｌ１及びＣｃｌ２２転写物レベル。ｎ＝４；２回の独立した実験。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１クラスカル−ウォリス（ノンパラメトリック）検定をサイトカイン／ケモカインの分析に用い（Ａ〜Ｃ、Ｅ）、ボンフェローニ事後検定をともなう二元配置ＡＮＯＶＡを細胞毒性アッセイに用いた（Ｄ）。
【図６Ａ】（６Ａ〜６Ｄ）機能不全ＣＤ８＋ＴＩＬは、広範な共阻害性及び共刺激性受容体を発現する。
【図６Ｂ】４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３  ＣＤ８＋ＴＩＬサブセットの細胞表面受容体の遺伝子発現プロファイル。４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−集団に対して４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団の１．５倍の増大を示したプローブセットを示してある。縦列は、ｌｏｇ２変換したシグナル強度を示す。
【図６Ｃ】選択されたアップレギュレートされた細胞表面受容体の縦モード実験。フロープロットは、１４日目のＣＤ８＋ＴＩＬサブセットを表す。ｎ＝５；各時点について２〜５回の独立した実験。
【図６Ｄ】腫瘍接種１４日目の４−１ＢＢ／ＬＡＧ−３亜集団間のＫＬＧＲ−１及びＩＬ−７Ｒαの代表的なフロープロット及び概略。ｎ＝５；２回の独立した実験。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１ボンフェローニ事後検定をともなう二元配置ＡＮＯＶＡをすべての分析に用いた。
【図７】（Ａ〜Ｇ）抗４−１ＢＢ及び抗ＬＡＧ−３は、腫瘍の外殖を制御し、ＴＩＬ機能を回復するうえで相乗的に作用する。（Ａ）腫瘍過剰増生（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ)をｍｍ２単位で測定した。矢印は、マウスが抗体治療を受けた日を示す。示される時点における統計的有意性は、抗４−１ＢＢ＋抗ＬＡＧ−３処置との比較によるものである。ｎ＝５；２回の独立した実験。（Ｂ）１４日目のＨ−２Ｋｂ／ＳＩＹ＋ＣＤ８＋ＴＩＬの組成。７、１０、１３、及び１６日目にマウスに抗体の用量（各１００μｇ）を投与した。ｎ＝５；２回の独立した実験。（Ｃ〜Ｆ）腫瘍接種後１４日目のＦＴＹ７２０を用いない場合（Ｃ及びＤ）、及び用いた（Ｅ及びＦ）場合のＨ−２Ｋｂ／ＳＩＹ＋ＣＤ８＋ＴＩＬにおけるＮＲＰ１／２Ｂ４ （Ｃ及びＥ）及びＫＬＲＧ−１／ＩＬ−７Ｒα（Ｄ及びＦ）の発現の代表的なフロープロット及び概略。マウスに（Ａ及びＢ）と同様に抗体処置を投与し、ＦＴＹ７２０を処置の１日前から開始して強制摂食により２５μｇ／マウスの用量を投与し、分析を行う日（６日目から１３日目）まで１日１回の投与を継続した。ｎ＝５；２回の独立した実験。（Ｇ）処置後のＩＬ−２産生。処置を行った、または処置を行わない１４日目のＢ１６．ＳＩＹ腫瘍保有マウスから分取した細胞をインビトロで１２時間刺激し、ｑＲＴ−ＰＣＲによりＩＬ−２転写産物について分析した。タンパク質濃度は、ビーズを用いたＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘイムノアッセイにより測定し、細胞数に対して正規化した。各マウスごとに両脇腹の２個の腫瘍をプールした。ｎ＝２〜３；２回の独立した実験。ボンフェローニ事後検定をともなう二元配置ＡＮＯＶＡをすべての分析に用いた。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１
【図８】図３Ｂの分析に用いたスペクトル型グラフ。
【図９】ＦＴＹ７２０投与後１４日目のＣＤ３＋Ｔ細胞。
【図１０Ａ】（１０Ａ〜１０Ｂ）遺伝子発現プロファイルの交差実験比較の統計的分析。（図１０Ａ）各ペアワイズ比較のランク−ランクハイパージオメトリックプロット。
【図１０Ｂ】各データセット間の発現値のペアワイズ相関。ロー(ρ)は、スピアマン順位相関係数である。
【図１１】（Ａ〜Ｅ）Ｎｒｎ１、ＣＲＴＡＭ及びＳｅｍａ７ａは、抗腫瘍免疫の調節因子である。（Ａ）腫瘍増殖をｍｍ２単位で測定した。Ｎｒｎ１−／−またはＳｅｍａ７ａ−／−及び同腹のコントロールマウスの皮下に２ｘ１０６個のＢ１６．ＳＩＹ細胞を移植した。（Ｂ）脾臓、ＴｄＬＮ及び腫瘍のＴ細胞サブセットにおけるＮｒｎ１の遺伝子発現分析。（Ｃ）７日目のＷＴ、Ｎｒｎ１−／−、または（Ｄ）ＣＲＴＡＭ−／−２Ｃ  Ｔ細胞のＩＦＮ−γ産生の代表的なフロープロット及び概略。要約すると、腫瘍接種と同日に１ｘ１０６個のＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔで標識した２Ｃ  Ｔ細胞を尾部静脈注射によりマウスに移入した。７日目に全ＴｄＬＮ懸濁液をＳＩＹペプチドで１２時間再刺激し、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ希釈度及びＩＦＮ−γ産生について分析した。（Ｅ）１ｘ１０６個のＮｒｎ１−／−２Ｃ  Ｔ細胞を投与したマウスは、同じ数のＷＴ  ２Ｃ  Ｔ細胞を投与したマウスと比較して完全な腫瘍制御性を示す可能性がより高い。Ｔ細胞の養子移入を（Ｃ）と同様にして行った。
【図１２】例示的な実験プロトコール及びデータ。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
［定義］
本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料を、本発明に記載される各実施形態の実施または試験において用いることができるが、いくつかの好ましい方法、組成物、装置、及び材料を本明細書に記載する。しかしながら、本材料及び方法を記載するのに先立って、本発明は、本明細書に記載される特定の分子、組成物、方法論、またはプロトコールは、通常の実験及び最適化にしたがって変わりうることから、これらに限定されない点は理解されるべきである。本説明文で使用される用語は、特定の形態または実施形態のみを説明することを目的としたものであり、本明細書に記載される実施形態の範囲を限定することを目的としたものではない点も理解されるべきである。
【００１５】
別段の定義がなされないかぎり、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものとする。しかしながら、矛盾が生じる場合、定義を含む本明細書が優先するものとする。したがって、本明細書に記載される実施形態との関連では、以下の定義が適用される。
【００１６】
本明細書において、また付属の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈によってそうでない旨が明確に示されないかぎり、複数の指示対象が含まれる。したがって、例えば「ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ」と言う場合には、１以上の抗体及び当業者には周知のその均等物のことを指す、といった具合である。
【００１７】
本明細書で使用するところの「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」なる用語及びその言語学的な変化形は、更なる特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などの存在を除外することなく、記載される特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などを示す。これに対して、「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」なる用語及びその言語学的な変化形は、記載される特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などを示し、なおかつあらゆる記載されていない特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などは、通常伴う不純物を例外として除外する。「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」なる語句は、記載される特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）など、及び、組成物、系、または方法の基本的性質に実質的に影響しない任意の更なる特徴（複数可）、要素（複数可）、方法の工程（複数可）などを示す。本明細書の多くの実施形態は、開放した「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」なる言葉を用いて説明される。かかる実施形態は、複数の閉鎖した「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」及び／または「〜から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」実施形態を包含し、これらの実施形態はまた、かかる言葉を用いて特許請求または説明される場合もある。
【００１８】
本明細書で使用するところの「対象」なる用語は、ヒト及び非ヒト動物（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、家禽、魚類、甲殻類など）を含むがこれらに限定されない任意の動物を広く指す。本明細書で使用するところの「患者」なる用語は、一般的に治療される疾患または状態（例えば、がん、固形腫瘍がん、など）対象のことを指す。
【００１９】
本明細書で使用するところの「免疫応答」とは、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞、好中球など）、及び、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、またはがん性もしくは他の異常細胞の選択的標的化、これらへの結合、これらへの傷害、これらの破壊、及び／または対象からの除去をもたらす、これらの細胞のいずれかまたは肝臓によって産生される可溶性巨大分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用のことを指す。
【００２０】
本明細書で使用するところの「免疫調節剤」とは、免疫応答を調節する物質、薬剤、シグナル伝達経路、またはその構成成分のことを指す。免疫応答を「調節する」、「改変する」、または「調整する」とは、免疫系の細胞またはかかる細胞の活性のあらゆる変化のことを指す。そのような調節には、異なる細胞型の数の増大もしくは減少、これらの細胞の活性の増大もしくは減少、または免疫系内で生じうる他のあらゆる変化によって示されうる免疫系の刺激または抑制が含まれる。阻害性及び刺激性の免疫調節物質の両方が特定されており、それらのうちの一部のものはがんの微小環境において増強された機能を有しうる。
【００２１】
本明細書で使用するところの「免疫治療」とは、免疫応答を誘導する、増強する、抑制する、または他の形で改変することを含む方法による疾患または状態の治療もしくは予防のことを指す。
【００２２】
本明細書で使用するところの「免疫応答を増強する」とは、対象における既存の免疫応答の有効性または効力を高めることを意味する。この有効性及び効力の増大は、例えば、内因性の宿主免疫応答を抑制する機構を制圧することによって、または内因性の宿主免疫応答を増強する機構を刺激することによって実現することができる。
【００２３】
本明細書で使用するところの「抗体」なる用語は、特に指定されない限り（例えば、「全抗体」、「抗体フラグメント」など）、抗体分子全体またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２）のことを指す。抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体などであってよい。
【００２４】
天然抗体は、通常は四量体構造を有している。四量体は通常、それぞれが１本の軽鎖（特定の実施形態では約２５ｋＤａ）と１本の重鎖（特定の実施形態では約５０〜７０ｋＤａ）とを有する２本の同じポリペプチド鎖のペアを含む。天然の抗体では、重鎖は、可変領域ＶＨと、３個の定常領域ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３とを有している。ＶＨドメインは、重鎖のアミノ末端にあり、ＣＨ３ドメインはカルボキシ末端にある。天然の抗体では、軽鎖は、可変領域ＶＬと、定常領域ＣＬとを有している。軽鎖の可変領域は軽鎖のアミノ末端にある。天然の抗体では、各軽鎖／重鎖のペアの可変領域は、一般的に抗原結合部位を形成している。定常領域は、一般的にはエフェクター機能を担っている。
【００２５】
天然の抗体では、可変領域は、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）が、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる３つの超可変領域によって連結された同じ一般的構造を通常は呈する。各ペアの２本の鎖のＣＤＲは通常はフレームワーク領域によって整列されており、これにより特定のエピトープとの結合が可能となっている。軽鎖及び重鎖の可変領域はいずれも、Ｎ末端からＣ末端にかけて、一般的にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で構成されている。重鎖のＣＤＲがＨ１、Ｈ２、及びＨ３と呼ばれるのに対して、軽鎖のＣＤＲは、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３と呼ばれる。一般的には、ＣＤＲ３が抗原結合部位内の分子多様性の最大の要因である。例えば、Ｈ３は、特定の場合では、アミノ酸２個と短いか、または２６個よりも長い場合がある。各ドメインのアミノ酸の指定は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，ｖｏｌｓ．１−３，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；またはＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）に一般的にしたがっている。本願では、「ＣＤＲ」なる用語は、特に断らない限りは、軽鎖または重鎖からのＣＤＲのことを指す。
【００２６】
本明細書で使用するところの「重鎖」なる用語は、単独で、または軽鎖との組み合わせで抗原特異性を与えるのに充分な重鎖可変領域を含むポリペプチドのことを指す。
【００２７】
本明細書で使用するところの「軽鎖」なる用語は、単独で、または重鎖との組み合わせで抗原特異性を与えるのに充分な軽鎖可変領域を含むポリペプチドのことを指す。
【００２８】
本明細書で使用する場合、抗体または他の実体が、ある抗原またはエピトープを「特異的に認識する」またはこれらに「特異的に結合する」場合、抗体または他の実体は、タンパク質及び／または巨大分子の複雑な混合物中の抗原を選択的に認識し、その抗原またはエピトープを提示していない他の実体よりも大幅に高い親和性でその抗原またはエピトープに結合する。これに関して、「大幅に高い親和性」とは、所望のアッセイまたは測定装置を使用して実体から区別される抗原またはエピトープの検出を可能とするうえで充分に高い親和性を意味する。一般的には、これは、少なくとも１０７Ｍ−１（例えば、＞１０７Ｍ−１、＞１０８Ｍ−１、＞１０９Ｍ−１、＞１０１０Ｍ−１、＞１０１１Ｍ−１、＞１０１２Ｍ−１、＞１０１３Ｍ−１など）の結合定数（Ｋａ）を有する結合親和性を意味する。特定のそのような実施形態では、抗体は、異なる抗原がその特定のエピトープを含む限り、異なる抗原に結合することが可能である。特定の場合では、例えば、異なる種からの相同タンパク質は、同じエピトープを含みうる。
【００２９】
本明細書で使用するところの「抗４−１ＢＢ抗体」または「４−１ＢＢ抗体」なる用語は、４−１ＢＢによって提示される抗原及び／またはエピトープを特異的に認識する抗体のことを指す。同様に、「抗ＬＡＧ−３抗体」及び「ＬＡＧ−３抗体」なる用語は、ＬＡＧ−３によって提示される抗原及び／またはエピトープを特異的に認識する抗体のことを指し、「抗Ｎｒｎ１抗体」及び「Ｎｒｎ１抗体」なる用語は、Ｎｒｎ１によって提示される抗原及び／またはエピトープを特異的に認識する抗体のことを指し、「抗ＣＲＴＡＭ抗体」及び「ＣＲＴＡＭ抗体」なる用語は、ＣＲＴＡＭによって提示される抗原及び／またはエピトープを特異的に認識する抗体のことを指し、「抗Ｓｅｍａ７ａ抗体」及び「Ｓｅｍａ７ａ抗体」なる用語は、Ｓｅｍａ７ａによって提示される抗原及び／またはエピトープを特異的に認識する抗体のことを指す。他の分子的実体上のエピトープを認識する抗体は、同様のスキーム（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−Ｌ１など）にしたがって呼称することができる。
【００３０】
本明細書で使用するところの「モノクローナル抗体」なる用語は、同じエピトープに特異的に結合する抗体の実質的に均質な集団の一員のことである。特定の実施形態では、モノクローナル抗体はハイブリドーマによって分泌される。特定のそのような実施形態では、ハイブリドーマは、当業者には周知の特定の方法にしたがって作製される（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９９を参照；その全容を参照により援用する）。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ法を用いて作製される（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。特定の実施形態では、モノクローナル抗体とは、ファージディスプレイライブラリから単離された抗体フラグメントのことを指す（Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７を参照；その全容を参照により援用する）。「モノクローナル」なる修飾語は、抗体の実質的に均質な集団から得られた抗体の特性を示し、抗体の作製方法を特定の方法に限定するものではない。他の様々なモノクローナル抗体の作製方法については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）を参照；その全容を参照により援用する）。
【００３１】
本明細書で使用するところの「抗体フラグメント」なる用語は、抗原結合領域または可変領域の少なくとも一部を含む、完全長抗体の一部のことを指す。抗体フラグメントとしては、これらに限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、二重特異性抗体、及び、完全抗体の可変領域の少なくとも一部を保持する他の抗体フラグメントが挙げられる（例えば、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４を参照；その全容を参照により援用する）。特定の実施形態では、抗体フラグメントは、組換えＤＮＡ法、または化学的ポリペプチド合成によって作製された完全抗体の酵素的または化学的切断（例えば、抗体のパパイン消化及びペプシン消化）によって作製される。
【００３２】
例えば、「Ｆａｂ」フラグメントは、１本の軽鎖と、１本の重鎖のＣＨ１及び可変領域とからなる。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することはできない。「Ｆａｂ」フラグメントは、１本の軽鎖と、ＣＨ１とＣＨ２ドメインの間に延びる更なる定常領域を含む１本の重鎖とで構成される。Ｆａｂ’フラグメントの２本の重鎖の間には鎖間のジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成することができる。
【００３３】
「Ｆｖ」フラグメントは、重鎖及び軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域は含まない。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦＶ）は、柔軟なリンカーによって連結されて抗原結合領域を有する１本のポリペプチド鎖を形成する重鎖と軽鎖の可変領域からなる。例示的な一本鎖抗体は、その全容を参照により本明細書に援用するところの国際公開第ＷＯ８８／０１６４９号、ならびに米国特許第４，９４６，７７８及び同第５，２６０，２０３号に詳細に記載されている。特定の場合では、１個の可変領域（例えば、重鎖可変領域または軽鎖可変領域）が抗原を認識して結合する能力を有することができる。
【００３４】
他の抗体フラグメントも当業者には理解されよう。
【００３５】
本明細書で使用するところの「キメラ抗体」なる用語は、少なくとも２つの異なる由来源からの構成成分からなる抗体のことを指す。特定の実施形態では、キメラ抗体は、第１の種に由来する抗体の一部が別の分子、例えば第２の種に由来する抗体の一部に融合されたものからなる。特定のそのような実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト動物に由来する抗体の一部がヒトに由来する抗体の一部に融合されたものからなる。特定のそのような実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト動物に由来する抗体の可変領域の全体または一部がヒトに由来する抗体の定常領域に融合されたものである。
【００３６】
「ヒト化」抗体とは、ヒト抗体に（アミノ酸配列において）より近く一致するように改変された非ヒト抗体のことを指す。したがって、ヒト化抗体はキメラ抗体の一種である。特定の実施形態では、非ヒト抗体の可変領域の抗原結合残基の外側のアミノ酸残基が改変される。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）の全体または一部を、所望の抗原結合特異性を有する、非ヒト抗体などの別の抗体からのＣＤＲの全体または一部に置き換えることによって構築される。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ＣＤＲの全体またはほぼ全体が非ヒト抗体のＣＤＲに対応し、フレームワーク領域（ＦＲ）の全体またはほぼ全体がヒト抗体のＦＲに対応している可変領域を含む。特定のそのような実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト抗体の定常領域（Ｆｃ）を更に含む。
【００３７】
「ヒト抗体」なる用語は、ヒト抗体配列を含むが非ヒト動物からの抗体配列は含まないモノクローナル抗体のことを指す。特定の実施形態では、ヒト抗体は、天然抗体には見られない合成配列を含むことができる。この用語は、抗体が作製される方法によって限定されない。例えば、異なる実施形態において、ヒト抗体は、トランスジェニックマウスにより、ファージディスプレイにより、ヒトＢリンパ球により、または組換え法によって作製することができる。
【００３８】
本明細書で使用するところの「天然抗体」なる用語は、抗体の重鎖及び軽鎖が多細胞生物の免疫系によって作られ、対合した抗体のことを指す。例えば、抗体で免疫された最初の動物から単離された抗体産生細胞によって産生される抗体は天然抗体である。天然抗体は、自然に対合した重鎖と軽鎖とを有する。本明細書で使用するところの「天然ヒト抗体」なる用語は、抗体の重鎖及び軽鎖がヒト対象の免疫系によって作られ、対合した抗体のことを指す。
【００３９】
天然ヒト軽鎖は、一般的にκ及びλ軽鎖として分類される。天然ヒト重鎖は、一般的にμ、δ、γ、α、またはεとして分類され、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。ＩｇＧは、これらに限定されるものではないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むサブクラスを有する。ＩｇＭは、これらに限定されるものではないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むサブクラスを有する。ＩｇＡは、これらに限定されるものではないがＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含むサブクラスを有する。天然のヒト軽鎖及び重鎖内では、可変領域と定常領域とは、一般的に約１２個以上のアミノ酸からなる「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖は約１０個以上のアミノ酸からなる「Ｄ」領域も含んでいる（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８９）Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．）を参照；その全容を参照により援用する）。
【００４０】
「中和抗体」または「〜を中和する抗体」なる用語は、その抗体が特異的に結合するエピトープを含むポリペプチドの少なくとも１つの活性を低減する抗体のことを指す。特定の実施形態では、中和抗体は、インビトロ及び／またはインビボで活性を低減する。いくつかの実施形態では、中和抗体は、エピトープを含むポリペプチドを中和することにより、細胞がエピトープを提示する能力を阻害する。
【００４１】
本明細書で使用するところの「糖鎖改変された」（ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）なる用語は、天然に生じるまたは組換えタンパク質、ポリペプチド、またはそれらのフラグメントのグリコシル化パターンのあらゆる操作を含む。
【００４２】
「抗原結合部位」なる用語は、抗原に特異的に結合することが可能な抗体の部分のことを指す。特定の実施形態では、抗原結合部位は、１つ以上の抗体可変領域によって与えられる。
【００４３】
「エピトープ」なる用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞もしくはＢ細胞受容体に特異的に結合することが可能な任意のポリペプチド決定因子のことを指す。特定の実施形態では、エピトープは、抗体が特異的に結合する抗原の領域である。特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基を含みうる。特定の実施形態では、エピトープは、特定の三次元的構造特性（例えば、「コンフォメーショナル」エピトープ）及び／または特定の電荷特性を有することができる。
【００４４】
あるエピトープは、別のエピトープと、両方のエピトープに特定の抗体が特異的に結合する場合に「同じもの」として定義される。特定の実施形態では、異なるアミノ酸の一次配列を有するポリペプチドが同じものであるエピトープを構成しうる。特定の実施形態では、同じものであるエピトープは、異なるアミノ酸の一次配列を有することができる。異なる抗体は、そのエピトープに対する特異的結合において競合する場合に同じエピトープに結合すると言われる。
【００４５】
「保存的」アミノ酸置換とは、ポリペプチド中のあるアミノ酸の、大きさまたは電荷などの同様の性質を有する別のアミノ酸への置換のことを指す。特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換を有するポリペプチドは、非置換ポリペプチドの少なくとも１つの活性を維持する。保存的アミノ酸置換は、生物学的システムによる合成によるのではなく、化学的ペプチド合成によって一般的に組み込まれる、天然に存在しないアミノ酸残基を含むことができる。かかるアミノ酸残基としては、これらに限定されるものではないが、ペプチド模倣体、及びアミノ酸残基の他の逆転または反転された形態が挙げられる。天然に存在する残基は、共通の側鎖の性質、例えば、疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅ；中性で親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、及びＧｌｎ；酸性：Ａｓｐ及びＧｌｕ；塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＡｒｇ；側鎖の向きに影響する残基：Ｇｌｙ及びＰｒｏ；ならびに芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＰｈｅに基づいて複数のクラスに分類することができる。非保存的置換が、これらのクラスのうちの１つのメンバーの、別のクラスからのメンバーへの置換を含みうるのに対して、保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーの、同じクラスの別のメンバーへの置換を含みうる。
【００４６】
本明細書で使用するところの「配列同一性」なる用語は、２個のポリマー配列（例えば、ペプチド、ポリペプチド、核酸など）がモノマーサブユニットの同じ配列組成を有する程度のことを指す。本明細書で使用するところの「配列類似性」なる用語は、２個のポリマー配列（例えば、ペプチド、ポリペプチド、核酸など）が類似したポリマー配列を有する程度のことを指す。例えば、類似したアミノ酸とは、同じ生物物理的特性を共有し、複数のファミリーに分類することができる（上記を参照）ものである。「配列同一率（％）」（または「配列類似率（％）」）は、（１）２個の最適にアラインされた配列を、比較ウインドウ（例えば、長い方の配列の長さ、短い方の配列の長さ、特定のウインドウなど）にわたって比較し、（２）同じ（または類似した）モノマーを含む（例えば、同じアミノ酸が両方の配列に存在する、類似したアミノ酸が両方の配列に存在する）位置の数を決定して一致する位置の数を得て、（３）一致した位置の数を、比較ウインドウ（例えば、長い方の配列の長さ、短い方の配列の長さ、特定のウインドウなど）内の位置の総数で割り、（４）結果に１００を掛けて、配列同一率（％）または配列類似率（％）を得る、ことによって計算される。例えば、ペプチドＡとペプチドＢがいずれもアミノ酸２０個の長さであり、１つの位置を除くすべての位置で同じアミノ酸を有する場合、ペプチドＡとペプチドＢとは９５％の配列同一率を有する。非同一位置のアミノ酸が同じ生物物理的特性（例えば、どちらも酸性である）を共有している場合、ペプチドＡとペプチドＢとは１００％の配列類似率を有することになる。別の例として、ペプチドＣがアミノ酸２０個の長さであり、ペプチドＤがアミノ酸１５個の長さであり、ペプチドＤの１５個のアミノ酸のうちの１４個がペプチドＣの部分のものと同一である場合、ペプチドＣとペプチドＤとは、ペプチドＣの最適比較ウインドウに対して９３．３％の配列同一率を有する。本明細書で「配列同一率（％）」（または「配列類似率（％）」）を計算する目的では、アラインされた配列中のすべてのギャップはその位置におけるミスマッチとして扱われる。
【００４７】
「有効用量」または「有効量」なる用語は、患者の症状の軽減につながる、または所望の生物学的転帰につながる薬剤、例えば抗体の量のことを指す。特定の実施形態では、有効用量または有効量は、疾患または状態の症状を治療または軽減するうえで充分である。
【００４８】
本明細書で使用するところの「投与」及び「投与する」なる用語は、対象、またはインビボ、インビトロ、もしくはエクスビボの細胞、組織、及び臓器に、薬物、プロドラッグ、もしくは他の薬剤、または治療薬を与える行為のことを指す。人体への例示的な投与経路は、脳のくも膜下腔、または脊髄（髄腔内）、目（眼内）、口（経口）、皮膚（局所または経皮）、鼻（経鼻）、肺（吸入）、口腔粘膜（口腔内）、耳、直腸、膣、注射により（例えば、静脈内、皮下、腫瘍内、腹腔内など）、などを介したものとすることができる。
【００４９】
「治療」なる用語は、特に断らない限りは治療的及び予防的／防止的措置を含む。治療を要する者としては、これらに限定されるものではないが、特定の状態を既に有している個人ばかりでなく、特定の状態または疾患を得るリスクを有する個人（例えば、年齢、性別、生活様式などに基づき、遺伝的またはエピジェネティックな素因を有する個人）が挙げられる。「治療する」なる用語は、治療的及び／または予防的／防止的目的で対象に薬剤を投与することを指す。
【００５０】
「治療薬」とは、治療的及び／または予防的／防止的効果をもたらすためにインビボで投与することができる薬剤のことを指す。
【００５１】
「治療抗体」とは、治療的及び／または予防的／防止的目的効果をもたらすためにインビボで投与することができる抗体のことを指す。
【００５２】
本明細書で使用するところの「共投与」及び「共投与する」なる用語は、少なくとも２種類の薬剤（複数可）または治療の対象への投与のことを指す。いくつかの実施形態では、２種類以上の薬剤または治療の共投与は、同時である。他の実施形態では、第１の薬剤／治療は、第２の薬剤／治療の前に投与される。当業者であれば、各種の薬剤または治療の配合及び／または投与経路は異なりうる点は理解されよう。共投与に適した用量は、当業者によって容易に決定することができる。いくつかの実施形態では、薬剤または治療が共投与される場合、それぞれの薬剤または治療はそれらの単独の投与に適した用量よりも低い用量で投与される。したがって、共投与は、薬剤または治療の共投与が、潜在的に有害な（例えば毒性のある）薬剤（複数可）の必要用量を低めるような実施形態において、及び／または２種類以上の薬剤の共投与が、他の薬剤の共投与によって、薬剤のうちの１つの有益な作用に対する対象の感作を生じるような場合に特に望ましい。
【００５３】
本明細書で使用するところの「医薬組成物」なる用語は、組成物を、インビトロ、インビボ、またはエクスビボでの診断的または治療的使用に特に適したものとする、活性剤（例えば結合剤）と不活性または活性の担体との組み合わせのことを指す。
【００５４】
本明細書で使用するところの「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」なる用語は、対象に投与される場合に有害反応、例えば、毒性、アレルギー性、または免疫学的反応を実質的に生じない組成物のことを指す。
【００５５】
本明細書で使用するところの「薬学的に許容される担体」とは、これらに限定されるものではないが、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルション（例えば、油／水または水／油エマルション）、及び各種の湿潤剤、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、ラウリル硫酸ナトリウム、等張剤及び吸収遅延剤、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）、などを含む、標準的な医薬担体のいずれかを指す。組成物は、安定化剤及び防腐剤を更に含むことができる。担体、安定化剤、及びアジュバントの例については、例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５）（その全容を参照により援用する）を参照されたい。
【００５６】
本明細書で使用するところの「診断的」または「診断検査」とは、対象の病態または状態の検出、特定、または特性評価を含む。例えば、疾患もしくは状態の特性評価を行うことによって、疾患もしくは状態を有する対象が特定の治療に応答する確率を求める、疾患もしくは状態を有する対象の予後（または可能性の高いその進行もしくは退縮）を判定する、疾患もしくは状態を有する対象に対する治療の効果を判定する、または将来的な治療方針を決定することができる。
【００５７】
本明細書では、診断、治療、及び／または研究用途のために、腫瘍微小環境内の機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を検出及び／または標的化するための組成物及び方法を提供する。詳細には、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３などの本明細書に記載される細胞表面受容体の発現、または、Ｔ細胞の表面に差次的に発現されるマーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ、及びＳｅｍａ７ａ）のような、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現に関連した更なるマーカーの発現を介して検出及び／または標的化される。
【００５８】
本明細書の実施形態の進展において行われた実験によって、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能不全に関連する、及び／またはそれを引き起こすマーカー／受容体が特定された。いくつかの実施形態では、マーカー／受容体は、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞で過剰発現される。そのような実施形態では、こうしたマーカーのレベル（例えば閾値よりも高い）を検出することは、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能不全を検出するための診断法を与える。更に、そのような実施形態では、こうしたマーカー／受容体を標的化する（例えば、阻害する（例えば、その発現及び／または活性を））ことは、治療法を与える。他の実施形態では、マーカー／受容体は、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞で過小発現される。そのような実施形態では、かかるマーカーのレベル（例えば閾値よりも低い）を検出することは、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能不全を検出するための診断法を与える。更に、そのような実施形態では、こうしたマーカー／受容体を標的化する（（例えば、その発現及び／または活性を）例えば、増強する）ことは、治療法を与える。
【００５９】
転写因子Ｅｇｒ２は、インビトロで操作されたＣＤ４＋Ｔ細胞クローンにおけるアネルギー状態の重要な調節因子である（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；２０１２；その全容を参照により援用する）。Ｅｇｒ２は、いくつかのインビボモデル系においてＴ細胞活性化の負の調節に関与していることも示されている（Ｓｕｍｉｔｏｍｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；その全容を参照により援用する）。Ｅｇｒ２は、ＴＣＲ媒介Ｒａｓ経路の活性化を鈍らせるように作用するＤＧＫａ及び−ｚのアップレギュレーションに寄与している（Ｚｈａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６；その全容を参照により援用する）。アネルギー化された細胞の遺伝子発現のプロファイルをＥｇｒ２のＣｈＩＰ−Ｓｅｑ分析とともに比較することにより、複数の更なるＥｇｒ２誘導遺伝子標的が特定されている（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；その全容を参照により援用する）。これらの遺伝子標的としては、細胞表面タンパク質をコードする４−１ＢＢ（Ｔｎｆｒｓｆ９またはＣＤ１３７）、Ｌａｇ３、Ｎｒｎ１、Ｓｅｍａ７ａ、Ｃｒｔａｍ、及びＲａｎｋｌが挙げられる。
【００６０】
４−１ＢＢは、ＴＣＲ結合後に一過性に発現される共刺激分子である。ＬＡＧ３（リンパ球活性化遺伝子３またはＣＤ２２３）はＣＤ４ホモログであり、阻害性受容体として機能する。４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現は、ＴＣＲ結合後に調節され、分化の全体を通じて持続する。ヒトでは、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３は、ヒトメラノーマ腫由来のＣＤ８＋ＴＩＬ上で発現する（Ｇｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｂａｉｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；その全容を参照により援用する）。マウス及びヒトの両方において、いずれかの分子が単独で、活性化Ｔ細胞の集団で発現される。しかしながら、同時発現はより限定的であり、循環Ｔ細胞で見られることは稀である。これらのマーカーを同時発現しているＣＤ８＋ＴＩＬの機能は知られていない。
【００６１】
本明細書の実施形態の進展において、マウス腫瘍モデルを用いて４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３を発現するＣＤ８＋ＴＩＬの詳細な特性を調べるための実験を行った。４−１ＢＢとＬＡＧ−３の同時発現は、Ｅｇｒ２標的遺伝子の発現が高められた腫瘍抗原特異的機能不全ＣＤ８＋ＴＩＬを特定するのに充分であることが見出された。これらのＣＤ８＋ＴＩＬは、インビトロ刺激後にＩＬ−２を産生しなかったが、ＩＦＮ−ｇ及びＴｒｅｇ動員ケモカインは産生し、エクスビボで標的細胞を溶解し、これらの細胞が完全に機能的に不活性ではないことを示した。抗ＬＡＧ−３／抗４−１ＢＢによるコンビナトリアル処理によってこの集団の機能は回復し、ＫＬＲＧ−１ｈｉエフェクター細胞のインサイチューでの獲得が促進された。更なる遺伝子発現プロファイリングによって、このＴ細胞のサブセットの完全な表現型が与えられ、阻害性受容体及び共刺激受容体の広範なパネルの発現が示された（例えば、表２の受容体（例えば、Ｎｒｎ１、Ｓｅｍａ７ａ、ＣＲＴＡＭなど））。Ｔ細胞の表面上に発現される、このプロファイリングによって特定された阻害性受容体及び共刺激受容体としては、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａが挙げられる。したがって、これらのアプローチにより、変化した機能特性を有する、腫瘍微小環境内に特異的に生じる腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の特性評価が可能となった。いくつかの実施形態では、この集団は、所望の機能性を回復し、腫瘍の退縮を促進する免疫治療的アプローチの標的である。いくつかの実施形態では、本明細書で特定される受容体／マーカー（例えば、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３、表２の受容体／マーカー（例えば、表面マーカー／受容体（例えばＮｒｎ１、Ｓｅｍａ７ａ、ＣＲＴＡＭなど）など）など）は、所望の免疫応答性を回復し、腫瘍の退縮を促進し、かつ／またはがんの治療を行うための標的とされる（例えば、免疫治療的アプローチによる）。
【００６２】
本明細書の実施形態の進展において行われた実験は、インビボでの腫瘍内の機能不全Ｔ細胞を理解するうえでのこれらのマーカーの応用性を評価するためにＥｇｒ２標的の知見を適用している。実際、これらのデータは、ＬＡＧ−３と４−１ＢＢとの同時発現が、腫瘍微小環境内の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の大部分を特定するうえで充分であることを証明するものである。これらのマーカーの同時発現は、腫瘍を有するマウスの末梢リンパ系器官内では認められず、腫瘍コンテキストに固有の性質が４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現を誘導することを示すものである。更に、ＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの発現の獲得は、効果的な拒絶を起こした腫瘍内では観察されず、この表現型の獲得が不完全な抗原排除の条件下で生じることを示すものである。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるがん治療法は、１種類以上の抗４−１ＢＢ及び／または抗ＬＡＧ−３剤（例えば、抗体、抗体フラグメント、抗体模倣分子（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ、アプタマー、ナノボディなど）など）の投与（または１種類以上の更なる治療法／治療薬との共投与）を含む。いくつかの実施形態では、抗４−１ＢＢ及び／または抗ＬＡＧ−３剤は、がん細胞、腫瘍（複数可）、及び／または腫瘍微小環境を、更なる治療法／治療薬（例えば免疫治療薬）による治療が有効となるように、またはそのような治療に感受性を示すようにするために投与される。本明細書に記載される実施形態で使用できる抗４−１ＢＢ及び／または抗ＬＡＧ−３剤は、それらの作用機序によって限定されない。薬剤は、小分子、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉなど）、抗体、抗体フラグメントなどであってよい。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるがん治療法は、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能不全と負の相関を有する本明細書で特定されるマーカー／受容体の活性または発現を増強することを含む。
【００６５】
本明細書の実施形態の進展において行われた実験によって、機能不全ＣＤ８＋ＴＩＬで差次的に発現される受容体／マーカーが特定された（表２を参照）。そのスクリーンで特定された所望の標的を試験することによって、少なくともニューリチン１（Ｎｒｎ１）、細胞毒性及び調節性Ｔ細胞分子（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｔ−ｃｅｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）（ＣＲＴＡＭ）、及びセマフォリン７Ａ（Ｓｅｍａ７ａ）が抗腫瘍免疫の調節因子であることが示され、Ｎｒｎ１及びＣＲＴＡＭの遮断は腫瘍面積の増大と相関を示し、Ｓｅｍａ７ａの遮断は腫瘍面積の減少と相関を示した。
【００６６】
特定の実施形態では、本明細書に記載されるがん治療法は、表２の１つ以上の受容体／マーカー（ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、Ｎｒｎ１、ＣＲＴＡＭ、Ｓｅｍａ７ａなど）を標的とする薬剤（例えば、抗体、抗体フラグメント、抗体模倣分子（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ、アプタマー、ナノボディなど）など）の投与（または１つ以上の更なる治療法／治療薬との共投与）を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、がん細胞、腫瘍（複数可）、及び／または腫瘍微小環境を、更なる治療法／治療薬（例えば免疫治療薬）による治療が作用しやすくなるように、またはそのような治療に対する感受性を有するようにするために投与される。本明細書に記載される実施形態で使用される表２の１つ以上の受容体／マーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、Ｎｒｎ１、ＣＲＴＡＭ、Ｓｅｍａ７ａなど）はそれらの作用機序によって限定されない。薬剤は、小分子、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉなど）、抗体、抗体フラグメントなどであってよい。いくつかの実施形態では、Ｎｒｎ１のアンタゴニストが投与される。いくつかの実施形態では、ＣＲＴＡＭのアンタゴニストが投与される。いくつかの実施形態では、Ｓｅｍａ７ａのアゴニストが投与される。
【００６７】
いくつかの実施形態では、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３、及び／または表２の１つ以上の受容体／マーカー（例えばＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ、Ｓｅｍａ７ａなど）を標的とする抗体、抗体フラグメント、抗体模倣分子（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ、アプタマー、ナノボディなど）、またはそれらのフラグメントが提供される。かかる薬剤は、裸の状態で標的結合（例えば標的を中和する）によりそれらの効果を示してもよく、または機能性部分（例えば、薬物、毒素、エフェクター部分など）と複合体化されてもよい。
【００６８】
いくつかの実施形態では、対象は、（ｉ）４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３、及び／または表２の１つ以上の受容体／マーカー（例えばＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ、Ｓｅｍａ７ａなど）を標的とする１つ以上の薬剤（例えば、抗体、抗体フラグメント、抗体模倣分子（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ、アプタマー、ナノボディなど）など）、及び（ｉｉ）１つ以上の更なるがん治療法によって治療される。かかる治療法としては、化学療法、免疫治療、放射線治療、外科手術などが挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される受容体／マーカーは、がんを治療するための１つ以上の更なる薬剤と共投与される。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物及び方法での使用に適した例示的な抗がん剤としては、これらに限定されるものではないが、１）例えば、微小管阻害剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、及びビンデシンなど）、微小管安定化剤（パクリタキセル（タキソール）、及びドセタキセルなど）、及び、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド（ＶＰ−１６）、及びテニポシド（ＶＭ−２６）など）などのトポイソメラーゼ阻害剤を含むクロマチン機能阻害剤、ならびにトポイロメラーゼＩを標的とする薬剤（例えば、カンプトテシン及びイシリノテカン（ｉｓｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）（ＣＰＴ−１１）など）を含む、アルカロイド；２）ナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、及びブスルファン（ミレラン）など）、ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、ロムスチン、及びセムスチンなど）、及び他のアルキル化剤（例えば、ダカルバジン、ヒドロキシメチルメラミン、チオテパ、及びマイトマイシンなど）を含む、共有結合性ＤＮＡ結合剤（アルキル化剤）；３）核酸阻害剤（例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）など）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（ダウノマイシン、及びセルビジン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、及びイダルビシン（イダマイシン）など）、アントラセンジオン（例えば、ミトザントロンなどのアントラサイクリン類似体）、ブレオマイシン（ブレノキサン）など、ならびにプリカマイシン（ミトラマイシン）などを含む、非共有結合性ＤＮＡ結合剤（抗腫瘍抗生物質）；４）葉酸代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、フォレックス（Ｆｏｌｅｘ）、及びメキセート（Ｍｅｘａｔｅ）など）、プリン代謝拮抗剤（例えば、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ、プリントール）、６−チオグアニン（６−ＴＧ）、アザチオプリン、アシクロビル、ガンシクロビル、クロロデオキシアデノシン、２−クロロデオキシアデノシン（ＣｄＡ）、及び２’−デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）など）、ピリミジンアンタゴニスト（例えば、フルオロピリミジン（例えば、５−フルオロウラシル（アドルシル）、５−フルオロデオキシウリジン（ＦｄＵｒｄ）（フロクスウリジン））など）、及びシトシンアラビノシド（例えば、シトサール（ａｒａ−Ｃ）及びフルダラビンなど）を含む、代謝拮抗剤；５）Ｌ−アスパラギナーゼ、及びヒドロキシ尿素などを含む酵素類；６）糖質コルチコイド、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェンなど）、非ステロイド系抗アンドロゲン剤（例えば、フルタミドなど）、及びアロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール（アリミデックス）など）を含むホルモン剤；７）白金化合物（例えば、シスプラチン及びカルボプラチンなど）；８）モノクローナル抗体（例えば、抗がん剤、毒素、及び／または放射性核種などと複合体化されたもの；中和抗体；など）；９）生物学的応答改変剤（例えば、インターフェロン類（例えば、ＩＦＮ−αなど）及びインターロイキン類（例えば、ＩＬ−２など）など）；１０）養子免疫治療；１１）造血成長因子；１２）腫瘍細胞分化を誘導する薬剤（例えば、オールト���ンスレチノイン酸など）；１３）遺伝子治療技術；１４）アンチセンス治療技術；１５）腫瘍ワクチン；１６）腫瘍転移に対する治療（例えば、バチミスタット（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）など）；１７） 血管新生阻害剤；１８）プロテオソーム阻害剤（例えば、ＶＥＬＣＡＤＥ）；１９）アセチル化及び／またはメチル化の阻害剤（例えば、ＨＤＡＣ阻害剤）；２０）ＮＦκＢの調節因子；２１）細胞周期調節の阻害剤（例えば、ＣＤＫ阻害剤）；ならびに２２）ｐ５３タンパク質機能の調節因子が挙げられる。
【００７０】
いくつかの実施形態では、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３、及び／または表２の１つ以上の受容体／マーカー（例えば、Ｎｒｎ１、Ｓｅｍａ７ａ、ＣＲＴＡＭなど）を標的とする薬剤は、がん細胞、腫瘍、腫瘍微小環境などの免疫浸潤を制圧するために投与される。いくつかの実施形態では、１つ以上の更なるがん免疫治療が、治療された細胞／腫瘍の免疫応答性を利用するために用いられる（例えば、同時または順次に）。適当な免疫治療としては、これらに限定されるものではないが、細胞に基づく治療（例えば、樹状細胞またはＴ細胞治療など）、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）治療（例えば、裸のｍＡｂ、複合体化ｍＡｂ）、サイトカイン治療（例えば、インターフェロン、インターロイキンなど）、アジュバント治療（例えば、ポリサッカリドＫ）などが挙げられる。
【００７１】
いくつかの実施形態では、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３、及び／または表２の１つ以上の受容体／マーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ、Ｓｅｍａ７ａなど）を標的とする薬剤は、１つ以上のがん細胞または腫瘍のマーカーもしくは成分を標的とする薬剤（例えば、小分子、ペプチド、抗体、抗体フラグメントなど）と共投与される。いくつかの実施形態では、このような共投与は、がん細胞、腫瘍、及び／または腫瘍微小環境を、更なる薬剤による治療に対する感受性を有するように、及び／またはかかる治療が作用しやすくする。
【００７２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び組成物に使用するための薬剤は、これらに限定されるものではないが、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ１、ＥｒｂＢ−１、ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ−２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ−３／ＨＥＲ３、ＥｒｂＢ−４／ＨＥＲ４、ＥＧＦＲリガンドファミリー；インスリン様増殖因子受容体（ＩＧＦＲ）ファミリー、ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、ＩＧＦＲリガンドファミリー（ＩＧＦ−１Ｒ）；血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）ファミリー、ＰＤＧＦＲリガンドファミリー；線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）ファミリー、ＦＧＦＲリガンドファミリー、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）ファミリー、ＶＥＧＦファミリー；ＨＧＦ受容体ファミリー：ＴＲＫ受容体ファミリー；エフリン（ＥＰＨ）受容体ファミリー；ＡＸＬ受容体ファミリー；白血球チロシンキナーゼ（ＬＴＫ）受容体ファミリー；ＴＩＥ受容体ファミリー、アンジオポエチン１、２；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体（ＲＯＲ）受容体ファミリー；ジスコイジンドメイン受容体（ＤＤＲ）ファミリー；ＲＥＴ受容体ファミリー；ＫＬＧ受容体ファミリー；ＲＹＫ受容体ファミリー；ＭｕＳＫ受容体ファミリー；トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ−α）、ＴＧＦ−α受容体；トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）、ＴＧＦ−β受容体；サイトカイン受容体、クラスＩ（ヘマトポエチンファミリー）およびクラスＩＩ（インターフェロン／ＩＬ−１０ファミリー）受容体、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）、デスレセプターファミリー；インターロイキンβ受容体α２鎖（ＩＬ１３Ｒα２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、１Ｌ−６受容体、インターロイキン−４、ＩＬ−４受容体、サイトカイン受容体、クラスＩ（ヘマトポエチンファミリー）及びクラスＩＩ（インターフェロン／ＩＬ−１０ファミリー）受容体、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリー、ＴＮＦ−α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）、デスレセプターファミリー、ＴＲＡＩＬ受容体；がん−精巣（ＣＴ）抗原、系統特異的抗原、分化抗原、α−アクチニン−４、ＡＲＴＣｌ、切断点クラスター領域−Ａｂｅｌｓｏｎ（Ｂｃｒ−ａｂｌ）融合産物、Ｂ−ＲＡＦ、カスパーゼ−５（ＣＡＳＰ−５）、カスパーゼ−８（ＣＡＳＰ−８）、β−カテニン（ＣＴＮＮＢ１）、細胞分裂周期２７（ＣＤＣ２７）、サイクリン依存性キナーゼ４（ＣＤＫ４）、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＯＡ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦＴＵＤ−２、伸長因子２（ＥＬＦ２）、Ｅｔｓ変異体遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ（ＥＴＣ６−ＡＭＬ１）融合タンパク質、フィブロネクチン（ＦＮ）、ＧＰＮＭＢ、低密度脂質受容体／ＧＤＰ−Ｌフコース：β−Ｄガラクトース２−α−Ｌフコシルトランスフェラーゼ（ＬＤＬＲ／ＦＵＴ）融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＭＬＡ−Ａ１１、熱ショックタンパク質７０−２変異（ＨＳＰ７０−２Ｍ）、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＡＲＴ２、メラノーマ偏在性変異１、２、３（ＭＵＭ−１、２、３）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＮＦＹＣ、ＯＧＴ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＲＤＸ５、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ（ＫＲＡＳ２）、Ｎ−ｒａｓ（ＮＲＡＳ）、ＨＲＡＳ、ＲＢＡＦ６００、ＳＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＹＴ−ＳＳＸ１または−ＳＳＸ２融合タンパク質、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＢＡＧＥ、ＢＡＧＥ−１、ＢＡＧＥ−２、３、４、５、ＧＡＧＥ−１、２、３、４、５、６、７、８、ＧｎＴ−Ｖ（異常Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ、ＭＧＡＴ５）、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＫＫ−ＬＣ、ＫＭ−ＨＮ−１、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、メラノーマ上のＣＴＬ認識抗原（ＣＡＭＥＬ）、ＭＡＧＥ−Ａ１（ＭＡＧＥ−１）、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−ＡＳ、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａｌｌ、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ （ＭＬＡＮＡ）、ｇｐ１００、ｇｐ１００／Ｐｍｅ１１７ （Ｓ１ＬＶ）、チロシナーゼ（ＴＹＲ）、ＴＲＰ−１、ＨＡＧＥ、ＮＡ−８８、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＳＡＧＥ、Ｓｐ１７．ＳＳＸ−１、２、３、４、ＴＲＰ２−１ＮＴ２、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、カリクレイン４、マンマグロビン−Ａ、ＯＡ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原、ＴＲＰ−１／、７５、ＴＲＰ−２、アジポフィリン、メラノーマに存在しないインターフェロン誘導性タンパク質２（ＡＩＭ−２）、ＢＩＮＧ−４、ＣＰＳＦ、サイクリンＤ１、上皮細胞接着分子（Ｅｐ−ＣＡＭ）、ＥｐｈＡ３、線維芽細胞増殖因子−５（ＦＧＦ−５）、糖タンパク質２５０（ｇｐ２５０）、腸カルボキシルエステラーゼ（ｉＣＥ）、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｍ−ＣＳＦ、ｍｄｍ−２、ＭＵＣ１、ｐ５３（ＴＰ５３）、ＰＢＦ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＲＡＧＥ−１、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、ＳＯＸ１０、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン（ＢＩＲＣ５）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、テロメラーゼ、ウィルムス腫瘍遺伝子（ＷＴ１）、ＳＹＣＰ１、ＢＲＤＴ、ＳＰＡＮＸ、ＸＡＧＥ、ＡＤＡＭ２、ＰＡＧＥ−５、ＬＩＰ１、ＣＴＡＧＥ−１、ＣＳＡＧＥ、ＭＭＡ１、ＣＡＧＥ、ＢＯＲＩＳ、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＡＦ１５ｑ１４、ＨＣＡ６６Ｉ、ＬＤＨＣ、ＭＯＲＣ、ＳＧＹ−１、ＳＰＯ１１、ＴＰＸ１、ＮＹ−ＳＡＲ−３５、ＦＴＨＬＩ７、ＮＸＦ２ ＴＤＲＤ１、ＴＥＸ１５、ＦＡＴＥ、ＴＰＴＥ、免疫グロブリンイディオタイプ、ベンス・ジョーンズタンパク質、エストロゲン受容体（ＥＲ）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ３、がん抗原７２−４（ＣＡ７２−４）、がん抗原１５−３（ＣＡ１５−３）、がん抗原２７−２９（ＣＡ２７−２９）、がん抗原１２５（ＣＡ１２５）、がん抗原１９−９（ＣＡ１９−９）、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピンン、１−２マイクログロブリン、扁平上皮がん抗原、ニューロン特異的エノラーゼ、熱ショックタンパク質ｇｐ９６、ＧＭ２、サルグラモスチム、ＣＴＬＡ−４、７０７アラニンプロリン（７０７−ＡＰ）、Ｔ細胞によって認識される腺がん抗原４（ＡＲＴ−４）、がん胎児性抗原ペプチド−１（ＣＡＰ−１）、カルシウム活性化塩素チャネル−２（ＣＬＣＡ２）、シクロフィリンＢ（Ｃｙｐ−Ｂ）、ヒト印環細胞腫瘍−２（ＨＳＴ−２）などからなる群から選択されるがんまたは腫瘍細胞のマーカーもしくは成分を標的とするかかつ／またはこれらに結合する。
【００７３】
本明細書に開示される組成物及び方法に取り入れることができる抗体の例としては、これらに限定されるものではないが、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）；ペルツズマブ（抗ＨＥＲ２ｍＡｂ）；セツキシマブ（上皮増殖因子受容体ＥＧＦＲに対するキメラモノクローナル抗体）；パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）；ザルツムマブ（抗ＥＧＦＲｍＡｂ）；ニシツムマブ（抗ＥＧＦＲｍＡｂ）；ＭＤＸ−２１０（ヒト化抗ＨＥＲ−２二重特異性抗体）；ＭＤＸ−２１０（ヒト化抗ＨＥＲ−２二重特異性抗体）；ＭＤＸ−４４７（ヒト化抗ＥＧＦ受容体二重特異性抗体）；リツキシマブ（キメラマウス／ヒト抗ＣＤ２０ｍＡｂ）；オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０ｍＡｂ）；オファツムマブ（抗ＣＤ２０ｍＡｂ）；トシツムマブ−１１３１（抗ＣＤ２０ｍＡｂ）；イブリツモマブ・チウキセタン（抗ＣＤ２０ｍＡｂ）；ベバシズマブ（抗ＶＥＧＦｍＡｂ）；ラムシルマブ（抗ＶＥＧＦＲ２ｍＡｂ）；ラニビズマブ（抗ＶＥＧＦｍＡｂ）；アフリベルセプト（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合されたＶＥＧＦＲ１及びＶＥＧＦＲ２の細胞外ドメイン）；ＡＭＧ３８６（ＩｇＧ１  Ｆｃに融合されたアンジオポエチン−１及び−２結合ペプチド）；ダロツズマブ（抗ＩＧＦ−１ＲｍＡｂ）；ゲムツズマブ・オゾガマイシン（抗ＣＤ３３ｍＡｂ）；アレムツズマブ（抗Ｃａｍｐａｔｈ−１／ＣＤ５２ｍＡｂ）；ブレンツキシマブ・ベドチン（抗ＣＤ３０ｍＡｂ）：カツマキソマブ（上皮細胞接着分子及びＣＤ３を標的とする二重特異性ｍＡｂ）；ナプツモマブ（抗５Ｔ４ｍＡｂ）；ギレンツキシマブ（抗カルボニックアンヒドラーゼｉｘ）；またはファルレツズマブ（抗葉酸受容体）などの抗体が挙げられる。他の例としては、パノレックス（商標）（１７−１Ａ）（マウスモノクローナル抗体）；パノレックス（＠（１７−１Ａ））（キメラマウスモノクローナル抗体）；ＢＥＣ２（抗イディオタイプｍＡｂ、ＧＤエピトープを模倣）（ＢＣＧと併用）；オンコリム（Ｌｙｍ−１モノクローナル抗体）；ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５  Ａｂ、ヒト化１３’１  ＬＹＭ−１（オンコリム）、オバレックス（Ｂ４３．１３、抗イディオタイプマウスｍＡｂ）；腺癌上のＥＧＰ４０（１７−１Ａ）汎癌（ｐａｎｃａｒｃｉｎｏｍａ）抗原に結合する３６２２Ｗ９４ｍＡｂ；ゼナパックス（ＳＭＡＲＴ抗−Ｔａｃ（ＩＬ−２受容体）；ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５Ａｂ、ヒト化Ａｂ、ヒト化）；ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２（汎癌（ｐａｎｃａｒｃｉｎｏｍａ）特異的Ａｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；ＴＮＴ（ヒストン抗原に対するキメラｍＡｂ）；Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ（モノクローナル−ヒト化Ａｂ）；ＧＮＩ−２５０Ｍａｂ；ＥＭＤ−７２０００（キメラ−ＥＧＦアンタゴニスト）；リンフォシド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）（ヒト化ＩＬ．Ｌ．２抗体）；及びＧＤ−２を標的とするＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＩＤＩＯ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ３６４Ａｂ、またはＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡが挙げられる。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本明細書の実施形態で使用される薬剤は、制御性Ｔ細胞、骨髄由来免疫抑制細胞、または樹状細胞の成分に特異的に結合する。別の態様では、標的化部分は、以下の分子、すなわち、ＣＤ４；ＣＤ２５（ＩＬ−２α受容体；ＩＬ−２αＲ）；細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４；ＣＤ１５２）；インターロイキン１０（ＩＬ−１０）；トランスフォーミング増殖因子β受容体（ＴＧＦ−βＲ）；トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）；プログラム細胞死１（ＰＤ−１）；プログラム細胞死１のリガンド（ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２）；核因子κβ受容体活性化因子（ＲＡＮＫ）；核因子κβ受容体活性化因子（ＲＡＮＫ）のリガンド（ＲＡＮＫＬ）；ＬＡＧ−３；糖質コルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体ファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ；ＴＮＦＲＳＦ１８）；またはインターロイキン４受容体（ＩＬ−４Ｒ）のうちの１つに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、薬剤は、標的分子の機能を増大させるアゴニストである。他の実施形態では、薬剤は、標的分子の機能を阻害するアゴニストである。
【００７５】
いくつかの実施形態では、本明細書の実施形態で使用される薬剤は、特定のサイトカイン、サイトカイン受容体、共刺激分子、共阻害分子、または免疫系を調節する免疫調節受容体に結合する。別の態様では、標的化部分は、以下の分子、すなわち、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリー；腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）；腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリー；インターロイキン１２（ＩＬ−１２）；ＩＬ−１２受容体；４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）；４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ；ＣＤ１３７Ｌ）；ＯＸ４０（ＣＤ１３４；ＴＮＲ４）；ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ；ＣＤ４０；ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）；ＣＴＬＡ−４；プログラム細胞死１（ＰＤ−１）；ＰＤ−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１：Ｂ７−Ｈ１）；またはＰＤ−１リガンド２（ＰＤ−Ｌ２；Ｂ７−ＤＣ）；Ｂ７ファミリー；Ｂ７−１（ＣＤ８０）；Ｂ７−２（ＣＤ８６）；Ｂ７−Ｈ３；Ｂ７−Ｈ４；ＧＩＴＲ／ＡＩＴＲ：ＧＩＴＲＬ／ＡＩＴＲＬ；ＢＴＬＡ；ＣＤ７０；ＣＤ２７；ＬＩＧＨＴ；ＨＶＥＭ：Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）（ＴＬＲ１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）のうちの１つに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、薬剤は、標的分子の機能を増大させるアゴニストである。他の実施形態では、薬剤は、標的分子の機能を阻害するアゴニストである。
【００７６】
いくつかの実施形態では、４−１ＢＢ、ＬＡＧ−３、及び／または表２の１つ以上の受容体／マーカー（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ、Ｓｅｍａ７ａなど）を標的とする薬剤は、１つ以上のアジュバントと共投与（例えば、連続的または順次）される。適当なアジュバントとしては、これらに限定されるものではないが、オイルエマルション（例えば、フロイントアジュバント）；サポニン配合物；ウイロソーム及びウイルス様粒子；細菌及び微生物由来物；免疫刺激性オリゴヌクレオチド；ＡＤＰリボシル化毒素及び解毒化誘導体；ミョウバン；ＢＣＧ；鉱物含有組成物（例えば、アルミニウム塩及びカルシウム塩などの鉱物塩、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩など）；生体接着剤及び／または粘液接着剤；微小粒子；リポソーム；ポリオキシエチレンエーテル及びポリオキシエチレンエステル配合物；ポリホスファゼン；ムラミルペプチド；イミダゾキノロン化合物；及び界面活性物質（例えば、リソレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルション、キーホールリンペットヘモシアニン、及びジニトロフェノール）のうちの１つ以上が挙げられる。
【００７７】
アジュバントには、サイトカイン、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロンγ）、マクロファージコロニー刺激因子、及び腫瘍壊死因子などの免疫調節物質も含まれうる。変異型Ｂ７−ＤＣポリペプチド以外に、Ｂ７ファミリーの他のポリペプチドを含む他の共刺激分子を投与することもできる。タンパク質性アジュバントは、完全長のポリペプチドとして、またはその活性フラグメントとして、またはプラスミドＤＮＡのようなＤＮＡの形態で与えることができる。
【００７８】
本明細書に記載される医薬組成物及び免疫治療組成物は、任意の適当な投与経路で投与することができる（例えば、経口投与、非経口投与、粘膜投与、肺投与、静脈内投与など）。かかる投与経路の適当な製剤は、当該技術分野では理解されるものである。
【００７９】
本明細書に記載される組成物及び方法によって治療することが可能ながんの非限定的な例としては、これらに限定されるものではないが、メラノーマ(例えば、転移性悪性メラノーマ)、腎癌(例えば、明細胞癌)、前立腺癌(例えば、ホルモン不応性前立腺癌)、膵臓癌(例えば、腺癌)、乳癌、結腸癌、肺癌(例えば、非小細胞肺癌)、食道癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、肝癌、卵巣癌、子宮頸癌、甲状腺癌、神経膠芽腫、神経膠腫、白血球、リンパ腫、及び他の悪性腫瘍が挙げられる。いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍がんである。
【００８０】
本明細書に記載されるいくつかの実施形態は、これらの実施形態でなければ免疫治療アプローチに応答しない腫瘍の治療に特に有用である。いくつかの実施形態では、本明細書において、Ｔ細胞または抗原提示細胞（例えば樹状細胞（例えばＣＤ１０３＋ＤＣなど）など）に対して非応答性の（または応答性が低い）がんの治療法が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書において、Ｔ細胞浸潤にもよらず、治療に対して非応答性のがんの治療法が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物及び方法は、腫瘍関連抗原に対してＴ細胞が適切にプライミングされないがんの治療に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物及び方法は、樹状細胞の動員（ＣＤ１０３＋ＤＣなど）において機能不全である腫瘍または細胞を含むがんの治療に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物及び方法は、ケモカインＣＣＬ４の産生において機能不全である腫瘍または細胞を含むがんの治療に使用される。
【００８１】
いくつかの実施形態では、本明細書の治療組成物及び方法は、本明細書にその全容を援用するところの国際公開ＷＯ２０１６／１４１３１２号に記載されるものに使用される。
【００８２】
いくつかの実施形態では、対象からの試料（例えば、細胞、組織、細胞の集団、腫瘍、血液、尿、唾液など）を１種類以上のバイオマーカー（例えば、機能不全の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のバイオマーカー）について試験するための方法が提供される。かかるバイオマーカーは、核酸、小分子、タンパク質、ペプチドなどを含んでよく、任意の適当なアッセイ法を用いて検出することができる。いくつかの実施形態では、本明細書において、がん細胞または腫瘍による免疫応答または免疫治療の回避のバイオマーカーを直接的または間接的に検出するＤＮＡ、ＲＮＡ、小分子、及び／またはタンパク質に基づいた診断法が提供される。本発明は、かかる診断目的の組成物、試薬、及びキットも提供する。
【００８３】
いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、核酸（ＲＮＡ）レベルで検出される。例えば、試料中のバイオマーカー核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の存在または量が決定される（例えば、バイオマーカーの発現の存在またはレベルを決定するため）。バイオマーカー核酸（例えば、ＲＮＡ、増幅ｃＤＮＡなど）は、これらに限定されるものではないが、核酸シークエンシング、核酸ハイブリダイゼーション、核酸増幅（例えば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ｑＰＣＲなどによる）、マイクロアレイ、サザン及びノーザンブロッティング、シークエンシングなどを含む当業者には周知の各種の核酸技術を使用して検出／定量することができる。非増幅または増幅核酸はいずれの従来の手段によっても検出することができる。例えば、いくつかの実施形態では、核酸は、検出可能に標識されたプローブとのハイブリダイゼーション及び得られたハイブリッドの測定によって検出される。核酸検出試薬は、標識されても（例えば、蛍光的に）または標識されなくともよく、溶液中で遊離していても、固定（例えば、ビーズ、ウェル、表面、チップなどに）されてもよい。
【００８４】
いくつかの実施形態では、バイオマーカーは、タンパク質レベルで検出される。例えば、試料中のバイオマーカータンパク質の存在または量が決定される（例えば、バイオマーカーの発現の存在またはレベルを決定するため）。いくつかの実施形態では、バイオマーカータンパク質を検出及び／または定量するための試薬が提供される。適当な試薬としては、一次抗体（例えばバイオマーカーに結合する）、二次抗体（例えば一次抗体に結合する)、抗体フラグメント、アプタマーなどが挙げられる。タンパク質検出試薬は、標識しても（例えば蛍光的に）または標識せずともよく、溶液中で遊離していてもまたは固定されてもよい（例えばビーズ、ウェル、表面、チップ上などに）。
【００８５】
いくつかの実施形態では、バイオマーカーの局在化、濃縮、凝縮などをするバイオマーカー捕捉試薬が提供される。例えば、いくつかの実施形態では、バイオマーカーと相互作用するバイオマーカー捕捉試薬が、ユーザーによる巨視的なスケールでの操作を可能とする固体支持体（例えば、ビーズ、表面、樹脂、カラムなど）に結合される。しばしば、固体支持体は、不均質な溶液からバイオマーカーを単離及び精製するための機械的手段の使用を可能とする。例えば、ビーズに結合される場合、例えば物理的運動により不均質な溶液からビーズを除去することによって分離が実現される。ビーズが磁性または常磁性であるような実施形態では、磁場を用いて不均質な溶液からの捕捉試薬（したがって標的）の物理的な分離が実現される。標的を単離するために使用される磁気ビーズについては、例えば、すべての目的でその全容を本明細書に援用するところの欧州特許出願第８７３０９３０８号に記載されているように、当該技術分野において記載されている。
【００８６】
本明細書に記載される診断方法または試験する工程で使用するための組成物は、これらに限定されるものではないが、プローブ、増幅オリゴヌクレオチド、及び抗体を含む。本明細書に記載される実施形態で使用される検出及び／または診断試薬のいずれも、単独で、または他の組成物と組み合わせてキットの形態で提供することができる。キットは、これらに限定されるものではないが、検出試薬、バッファー、コントロール試薬（例えば、組織試料、ポジティブ及びネガティブコントロール試料など）、固体支持体、ラベル、文字及び／またはイラストで示された説明書及び製品情報、阻害剤、標識及び／または検出試薬、パッケージ環境調節剤（例えば氷、乾燥剤など）などを含む、アッセイに必要または充分なありとあらゆる要素を含むことができる。いくつかの実施形態では、ユーザーが残りの要素を供給することが予想される場合には、キットは、必要な要素のサブセットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、２つ以上の別々の容器を含み、各容器が提供される要素のサブセットを収容する。
【００８７】
いくつかの実施形態では、検出アッセイによって生成された生データ（例えば、バイオマーカーの存在、非存在、または発現の量など）を、臨床医用に予測値のデータに変換するためにコンピュータベースの分析プログラムが使用される。いくつかの実施形態では、コンピュータ分析は、様々なデータを、予測的及び／または診断的な単一のスコアまたは値に組み合わせる。臨床医は、任意の適当な手段を用いて予測データにアクセスすることができる。したがって、いくつかの好ましい実施形態では、本発明は、遺伝学または分子生物学のトレーニングを受けていそうにない臨床医が生データを理解する必要がないという更なる利点を提供する。データは、臨床医に対してその最も有用な形態で直接的に提示される。これにより、臨床医は、患者のケアを最適なものとするためにこの情報を直ちに利用することができる。本明細書では、アッセイを実施する研究機関、情報プロバイダー、医療従事者、及び患者から情報を受け取って処理し、それらに情報を送信することが可能なあらゆる方法が考慮される。例えば、本発明のいくつかの実施形態では、患者から試料（例えば、生検、細胞、または血液試料など）が得られ、プロファイリングサービス（例えば、医療機関の臨床検査室、サードパーティの検査サービス、ゲノムプロファイリング業者など）に提出されて、生データが生成される。試料が組織または他の生物学的試料を含む場合、患者は、試料を採取し、プロファイリングセンターに送付するために医療機関を訪れてもよく、あるいは患者が自身で試料を採取してこれを直接プロファイリングセンターに送付してもよい。いくつかの実施形態では、レポートが作成される（例えば、臨床医により、検査機関により、コンピュータまたは他の自動分析シークエンシングなどにより）。レポートは、検査結果、診断、及び／または推奨される治療を含むことができる。
【００８８】
［実験］
［材料及び方法］
［マウス及び腫瘍接種］
６〜８週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６系マウスをＴａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓより購入した。Ｃ５７ＢＬ／６系バックグラウンドのＣＤ４５．１及びＲａｇ２−／−マウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓより入手してシカゴ大学において交配した。２Ｃ／Ｒａｇ２−／−及びＰ１４／Ｒａｇ２−／−マウスについてはこれまでに述べられている（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；その全容を参照により援用する）。ｐＬＣＫ−ＣｒｅＥＲＴ２  ｘ  ＲＯＳＡ−ＹＦＰマウスが作製されており、これについても述べられている（Ｅｖａｒｉｓｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；その全容を参照により援用する）。Ｂ１６．ＳＩＹ．ｄｓＲｅｄ（Ｋｌｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；その全容を参照により援用する）、Ｃ１４９８．ＳＩＹ．ＧＦＰ（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；その全容を参照により援用する）、及びＭＣ５７．ＳＩＹ．ＧＦＰ（Ｓｐｉｏｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；その全容を参照により援用する）腫瘍細胞を、Ｈ２−Ｋｂ−制限モデル抗原ＳＩＹＲＹＹＧＬと同フレームでｄｓＲｅｄまたはＧＦＰのいずれかを発現するように操作した。１９６９．ＳＩＹ．ＧＦＰ細胞株を、ＳＩＹＲＹＹＧＬのｃＤＮＡを発現するｐＬＥＧＦＰプラスミド（Ｓｐｉｏｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；その全容を参照により援用する）を用いて１９６９細胞株（Ｄｉａｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１；その全容を参照により援用する）のレトロウイルストランスダクションにより操作した。実験を行うため、６〜９週齢のマウスに、２ｘ１０６個の腫瘍細胞を左脇腹または左右両方の脇腹の皮下に注入した。すべてのマウスは、アメリカ国立衛生研究所の動物飼育ガイドラインにしたがって維持し、ＩＡＣＵＣにより承認されたプロトコールで実験を行った。
【００８９】
Ｅｇｒ２ＥＧＦＰノックインリポーターマウス用の標的化コンストラクトを作製するため、ｅｇｒ２遺伝子を含む１２．６ｋｂのマウスゲノムのＤＮＡフラグメントをＳａｃＩＩで切り出し、ｐＥａｓｙ−Ｆｌｏｘベクターにチミジンキナーゼ（ＴＫ）選択マーカーに隣接させてクローニングした。ＩＲＥＳ２−ｅＧＦＰ及びＬｏｘＰを隣接させたネオマイシン選択マーカーを、Ｎｈｅｌ部位の翻訳終止コドン（ＴＧＡ）とｅｇｒ２遺伝子のポリアデニル化シグナルとの間に挿入した。１２９匹のマウスからのＥＳ細胞クローンを電気穿孔し、ネオマイシン耐性について選択した。ＥＳ細胞クローンを、ＰＣＲ及び５’及び３’プローブを用いたサザンブロットにより、内因性遺伝子座への相同挿入について確認した。マウスを８世代にわたってＣ５７ＢＬ／６系に戻し交雑した。
【００９０】
［ＴＩＬの単離］
示した時点でマウスから腫瘍を採取した。腫瘍を５０μｍフィルターに通して解離させ、ＰＢＳで洗った。細胞懸濁液の下にＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅの層を置くことによってＴＩＬを更に濃縮した後、４００ｘｇで３０分間、途切れることなく遠心することにより更に濃縮した。バフィー層を単離し、ＰＢＳで２回洗った後、染色した。ＦＡＣＳによって特定の細胞集団を単離するため、示される場合に腫瘍をプールし、細胞層をＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ遠心を２回行って再精製した。２８日目の腫瘍について、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅによる分離後に、製造者の指示にしたがってネガティブビーズセレクション（ＭＡＧＮＩＳＯＲＴ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によってＴ細胞を更に精製した。次いで細胞ＰＢＳで洗い、４℃で１５分間染色した後、完全ＤＭＥＭ（ｃＤＭＥＭ：１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン−ストレプトマイシン、１％ＭＥＭ非必須アミノ酸、５０μＭ  β−ＭＥ、０．０１Ｍ  ＭＯＰＳ）中に再懸濁し、実験のアッセイに応じてＲＬＴ溶解バッファー（ＱＩＡＧＥＮ）またはｃＤＭＥＭ中に分取した。ＲＬＴバッファー中に分取した細胞は、分取が終了した後、直ちにドライアイス上に直接置いた。
【００９１】
［フローサイトメトリー及び抗体］
細胞懸濁液をＰＢＳで２回洗った後、ＦＡＣＳバッファー（１０％ＦＢＳ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００１％ＮａＮ３）中で染色した。細胞を氷上で３０分間染色し、１％ＰＦＡ中で固定した。以下の分子に対する抗体を使用した。すなわち、ＣＤ３（１７Ａ２、ＡＸ７００）、２Ｂ４（２Ｂ４、ＦＩＴＣ）、ＣＤ１２７（Ａ７Ｒ３４、ＰＥ）、ＯＸ−４０（ＯＸ−８６、ＰＥ）、４−１ＢＢ（１７Ｂ５、ビオチン、ＡＰＣ）、ＣＤ１６０（７Ｈ１、ＰＥ−Ｃｙ７）、ＬＡＧ−３（Ｃ９Ｂ７Ｗ、ＰｅｒＣＰｅＦｌｕｏｒ７１０）、ＰＤ−１（ＲＭＰ１−３０、ＰＥ−Ｃｙ７）、ＮＲＰ１（３Ｅ１２、ＢＶ４２１）、ＧＩＴＲ（ＤＴＡ−１、ＦＩＴＣ）、ＩＣＯＳ（７Ｅ．１７Ｇ９、ＢＶ４２１）、ＫＬＲＧ−１（２Ｆ１、ｅＦ４５０、ＢＶ６０５）、ＴＩＧＩＴ（１Ｇ９、ＡＰＣ）、ＴＩＭ−３（ＲＭＴ３−２３、ＰＥ）、ＣＤ４（ＲＭ４−５、ＢＶ６０５）、ＣＤ４５．１（Ａ２０、ＦＩＴＣ）、ＣＤ４５．２（１０４、ＰＥ）、ＣＤ８α（５３−６．７、ＢＶ７１１）。Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｙｅ  ５０６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を生細胞／視細胞の区別に用いた。ＳＩＹ特異的Ｔ細胞の染色を、ＳＩＹＲＹＹＧＬペンタマー（ＰＥ）（Ｐｒｏｉｍｍｕｎｅ）を用いて行い、ＳＩＩＮＦＥＫＬペンタマー（ＰＥ）を非特異的コントロールとして用いた。すべてのフローサイトメトリー分析は、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）で行い、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して分析した。
【００９２】
［定量的リアルタイムＰＣＲ］
ＲＮＥａｓｙ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を製造者のプロトコールにしたがって使用して、全ＲＮＡを分取した細胞集団から抽出した。Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を製造者のプロトコールにしたがって使用してｃＤＮＡを合成した。ＩＬ−２（Ｍｍ００４３４２５６＿ｍ１）及び１８Ｓ（Ｈｓ９９９９９９０１＿ｓ１）を除いて、オンラインＰｒｏｂｅＦｉｎｄｅｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ及びＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｐｒｏｂｅ  Ｌｉｂｒａｒｙ（Ｒｏｃｈｅ）によって開発されたプライマー／プローブセット（表１ａ及び１ｂ）を使用して転写レベルを測定した。バッチ効果を最小に抑えるため、可能な場合には、ある遺伝子についてプローブしたすべての試料を、同じ９６ウェルｑＲＴ−ＰＣＲプレートで使用した。すべてのプライマー／プローブセットが、エクソン−エクソン境界にまたがったプライマー、または１つのイントロンにまたがったプライマーを含んでいた。転写産物の発現レベルを１８Ｓの発現に対して正規化した。
【００９３】
【表１】
2020505342.tif 000003
【００９４】
【表２】
2020505342.tif 000004
【００９５】
［インビボ増殖アッセイ］
インビボ増殖をフローサイトメトリー分析の２４時間前にＢｒｄＵパルスにより測定した。腫瘍接種後１２日目に各マウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により０．８ｍｇのＢｒｄＵを投与した。ＴＩＬを単離し、上記に述べたようにして表面染色を行った。表面染色後、Ｆｏｘｐ３染色キット（ＢＤ）を製造者のプロトコールにしたがって使用して細胞を固定及び透過処理してから、１００μＬのＰＢＳ／ＤＮアーゼ溶液（３００μｇ／ｍｌ）と３７℃で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、抗ＢｒｄＵ（ＦＩＴＣ、Ｂｕ２０ａ）と室温で３０分間インキュベートした後、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳに再懸濁した。
【００９６】
［インビトロ刺激アッセイ］
組織培養処理した９６ウェル丸底プレートを、ＤＰＢＳ中、抗ＣＤ３ε（１μｇ／ｍｌ；２Ｃ１１）により、４℃で一晩、３７℃で２時間コーティングした。細胞を冷たいｃＤＭＥＭ培地中に分取し、分取が終了した後、直ちに氷上に置いた。次いで細胞をペレット化し、５０μｌのｃＤＭＥＭに再懸濁し、１０〜１２時間にわたり、１００μｌの最終体積で可溶性の抗ＣＤ２８（２μｇ／ｍｌ；ＰＶ−１）とインキュベートした。刺激後、ＥＬＩＳＡまたはビーズを用いた免疫アッセイ（ＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘ）で用いるために上清を取り出し、細胞をＤＰＢＳで１回洗浄し、１５μｌのＲＮＡｌａｔｅｒ  Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＱＩＡＧＥＮ）または３００μｌのＲＬＴバッファーに再懸濁した。ＲＮＡ単離を行うまで細胞を−８０℃で保存した。
【００９７】
［タンパク質の定量］
タンパク質濃度の測定値を、標準的なＥＬＩＳＡまたはビーズを用いた免疫アッセイ（ＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘ）により求めた。インビトロ刺激より得られた上清に対して製造者のプロトコールにしたがってＥＬＩＳＡを行った（Ｒｅａｄｙ−ＳＥＴ−Ｇｏ  ＥＬＩＳＡ；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。吸光度の値を、Ｅｍａｘマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して４５０ｎｍで得て、ＩＬ−２濃度を標準曲線によって求めた。タンパク質濃度の値を、プレートに播いた分取した細胞の数に対して正規化した。ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘアッセイを製造者のプロトコールにしたがって行った。ＩＬ−２濃度（図４Ｂ）を別々の実験において両方の方法で行って確認したところ、２つの方法の間でＩＬ−２濃度に有意差は認められなかった。
【００９８】
［スペクトル型分析及びシークエンシング］
マウスに２ｘ１０６個のＢ１６．ＳＩＹ．ｄｓＲｅｄ腫瘍細胞を注射した。１４日後、腫瘍を採取し、特定のＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団をＲＬＴバッファー（ＱＩＡＧＥＮ）中に分取し、直ちに凍結した。分取された細胞集団からｃＤＮＡを合成し、ＦＡＭ−Ｃβ１．１プライマーと組み合わせた２１種類の異なるＶβ−５’プライマーを用いてＣＤＲ３領域を増幅した（表１）。３つのＶβ  ＰＣＲ反応は、分析に充分な増幅に達しなかったため、分析から除外した。シークエンシングを行うため、Ｃβ−Ｖβ  ＰＣＲ産物を、ＱＩＡｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ精製キット（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して精製し、シカゴ大学のＧｅｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙにてシークエンシングを行った。Ｃβ−Ｖβ  ＰＣＲ産物をシカゴ大学のＧｅｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｒｅにおいてキャピラリー電気穿孔法により分析し、ＣＤＲ３のピークをＬｉｚ５００ラダーを使用してアラインした。スペクトル型グラフをＧｅｎｅｉｏｕｓＲ９ソフトウェア（Ｋｅａｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）を使用して表示した。各Ｖβスペクトル型について頻度プロファイルを作成するため、各ピークの下の面積をｐｅａｋ  ｓｔｕｄｉｏを用いて測定した(ｆｏｄｏｒｌａｂ．ｕｎｃｃ．ｅｄｕ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ｐｅａｋｓｔｕｄｉｏ)。特定のマウス内の各ＣＤ８＋脾臓及びＴＩＬ集団から得られた各Ｖβスペクトル型間のハミング距離（Ｃｕｒｒｉｅｒ  ａｎｄ  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，２００１；その全容を参照により援用する）を計算した。それぞれの比較からのＨＤ間の有意差を判定するため、マウスからの各ＶβのＨＤを平均化し、多重比較のためのＤｕｎｎ補正をともなう一元配置ＡＮＯＶＡを行った。
【００９９】
［ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞移入実験］
コンジェニックな２Ｃ／Ｒａｇ２−／−／ＣＤ４５．１／２及び／またはＰ１４／Ｒａｇ２−／−／ＣＤ４５．２マウスから得た脾臓及びリンパ節から細胞懸濁液を調製し、製造者のプロトコールにしたがって磁気カラムでＣＤ８＋ネガティブセレクション（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を行ってＴ細胞を精製した。ＴＣＲトランスジェニック（Ｔｇ）Ｔ細胞をＰＢＳで洗浄し、１０ｘ１０６個／ｍｌの濃度で再懸濁し、１ｘ１０６個のＴＣＲ  Ｔｇ細胞を０．１ｍｌの体積中で静脈移入により、ＣＤ４５．１腫瘍保有マウスに養子移入した。示された時間の後、２Ｃ  Ｔ細胞及び対応するＣＤ８＋Ｔ細胞を分取し、上記に述べたようにして刺激した。
【０１００】
［インビトロ細胞傷害性アッセイ］
個々の実験ごとに、１０匹のＣ５７ＢＬ／６系マウスの左右両脇腹に２ｘ１０６個のＢ１６．ＳＩＹ細胞を皮下（ｓ．ｃ．）注射した。１４日目に、２０個の腫瘍すべてをプールし、Ｔｕｍｏｒ  Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を製造者のプロトコールにしたがって使用して解離させた。腫瘍細胞懸濁液をＰＢＳで３〜５回洗浄し、ＴＩＬをＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離により濃縮した。ＴＩＬを染色し、分取して、氷上に直接置いた。ＴＩＬを滴定し、５０，０００個のＰ８１５肥満細胞腫細胞及び１μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３が入った９６ウェルプレートに直接加えた。ポジティブコントロールとして、ＯＴ−Ｉ／Ｒａｇ２−／−マウスからＯＴ−Ｉ細胞を単離し、プレートに結合させた抗ＣＤ３（０．２５μｇ／ｍＬ）、抗ＣＤ２８（２μｇ／ｍＬ）及び１００Ｕ／ｍＬのＩＬ−２で２〜３日間、刺激した。ネガティブコントロールとして、Ｐ８１５細胞を単独で培養するか、またはリンパ球から単離したナイーブなＣＤ８＋Ｔ細胞と培養した。１２時間のインキュベーション後、細胞をＴｈｙ１、ＣＤ４５、ＣＤ８α、Ｆｉｘａｂｌｅ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｄｙｅ４５０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）及び／またはヨウ化プロピジウムについて染色した。
【０１０１】
［遺伝子発現分析］
ＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団の全ＲＮＡを、１０匹のマウスからプールした分取された細胞から製造者のプロトコールにしたがって（ＲＮＥａｓｙ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ：ＱＩＡＧＥＮ）単離した。試料を、シカゴ大学のＧｅｎｏｍｉｃｓ  Ｆａｃｉｌｉｔｙにより、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＭｏｕｓｅＲｅｆ８マイクロアレーチップを使用して分析した。２回の反復実験を行い、結果をＬｏｇ２変換して平均を取った。ＣＤ８＋４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−ＰＤ−１−細胞に対して１．５倍の絶対値（ｌｏｇ２（比）＞１．５）を示したプローブセットを特定し、後の分析に用いた。マイクロアレーデータは、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｍｎｉｂｕｓデーターベース（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｄｓ）でアクセッション番号ＧＳＥ７９９１９で利用可能である。交差実験比較を行うため、ｌｏｇ２−倍率変化の値をＧＥＯ２Ｒオンラインソフトウェアを使用して機能低下ＣＤ８＋ＴＩＬデータセットであるＧＳＥ７９８５８（（ＧＳＭ２１０７３５０、ＧＳＭ２１０７３５１、ＧＳＭ２１０７３２）に対する（ＧＳＭ２１０７３５３、ＧＳＭ２１０７３５３及びＧＳＭ２１０７３５５））及びＣＤ８＋Ｔ細胞を枯渇させたデータセットであるＧＳＥ４１８７０（（ＧＳＭ１０２６７８６、ＧＳＭ１０２６７８７、ＧＳＭ１０２６７８８、ＧＳＭ１０２６７８９）に対する（ＧＳＭ１０２６８１９、ＧＳＭ１０２６８２０、ＧＳＭ１０２６８２１））から抽出した。２倍の差を示したアップレギュレートされた遺伝子を分析に用いた。ＧＥＯ２Ｒから抽出されたデータからの複数の遺伝子名を特定し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ社のデータセットからの遺伝子名と一致させた。ランク−ランクハイパージオメトリックオーバーラップ（ｒａｎｋ−ｒａｎｋ  ｈｙｐｅｒｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｏｖｅｒｌａｐ）（ＲＲＨＯ）分析（Ｐｌａｉｓｉｅｒ  ｅｔ ａｌ．，２０１０；その全容を参照により援用する）をｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｒｕｍｐ．ｕｃｌａ．ｅｄｕ／ｒａｎｋｒａｎｋ／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ及び関連するＢｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージ「ＲＲＨＯ」（Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ  ａｎｄ  Ｓｔｅｉｎ，２０１４；その全容を参照により援用する）で行った。
【０１０２】
［遺伝子オントロジー濃縮分析］
共有されたアップレギュレートされた遺伝子をＣｙｔｏｓｃａｐｅアプリケーションによりＣｌｕｅＧｏソフトウェアの入力としてペアで使用した。生物学的プロセス及び免疫系プロセス遺伝子オントロジーアノテーションの両方を分析に用いた。ボンフェローニ法のステップダウン補正ｐ値＞０．０１である経路のみを経路ノードを生成する際に考慮した。各ノード内でみつかった遺伝子数が最大である非冗長経路を図６Ａの例として用いた。
【０１０３】
［抗体及びＦＴＹ７２０による処置］
マウスを、１００μｇ／マウスの抗４−１ＢＢ（Ｂｉｏ−Ｘ−Ｃｅｌｌ；ＬＯＢ１２．３）抗体及び／または１００μｇ／マウスの抗ＬＡＧ−３（Ｂｉｏ−Ｘ−Ｃｅｌｌ；Ｃ９Ｂ７Ｗ）の腹腔内投与により処置した。腫瘍増殖実験を行うため、マウスを腫瘍接種後の７、１０、１３、及び１６日目に処置した。エクスビボ機能実験を行うため、マウスを７、１０、及び１３日目に処置し、細胞を１４日目に分取した。リンパ節移出を遮断する実験を行うため、２５μｇのＦＴＹ７２０を最初の抗体処置（６日目）の１日前に強制摂食により与え、１４日目のエンドポイントまで毎日継続した。
【０１０４】
［結果］
［４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３は、ＣＤ８＋ＴＩＬの主な集団を特定する］
４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３が機能不全ＣＤ８＋ＴＩＬを特定できるかどうかを判定するため、ＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの発現パターンを、特性がよく知られているメラノーマのＢ１６．ＳＩＹモデルを用いて調べた。腫瘍接種後の７日目に、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団は、全ＣＤ８＋ＴＩＬの１５．８％を構成していた。この集団の頻度は、２１日目までに４４％にまで有意に増大した。４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋（４−Ｌ＋）集団の頻度も７日目から１４日目にやはり増大してＣＤ８＋ＴＩＬコンパートメントの２５％を構成した。これに対して、４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−（４−Ｌ−）集団の頻度は、２１日目までに２．７倍減少した。実験のタイムフレーム内で４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３−ＣＤ８＋ＴＩＬの割合または数に有意な増大は見られなかった（図１Ａ及びＢ）。同様のパターンが、細胞のサブセットの絶対数を分析する際にも見られた（図１Ｃ及びＤ）。これらの表現型の獲得は、膵臓及び腫瘍流入領域リンパ節（ＴｄＬＮ）ではこれらの表現型が観察されなかったことから、腫瘍微小環境に特異的であった（図１Ａ）。これらのデータは、腫瘍微小環境がＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの誘導された同時発現を選択的に指示することを示している。
【０１０５】
腫瘍進行の間における細胞数の選択的増大ならびに４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋及び４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団への比例したシフトは、これらの集団の発現が腫瘍微小環境内で生じていることを示すものである。ＣＤ８＋ＴＩＬを腫瘍接種後の１４日目にＫｉ６７について染色し、フローサイトメトリーにより分析した。４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−ＴＩＬのわずか３２％と比較して４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋細胞の８１％及び４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋細胞の８５％が、Ｋｉ６７＋であった（図１Ｅ）。マウスを１２日目にＢｒｄＵでパルスし、２４時間後にＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団をＢｒｄＵの取り込みについて分析した。実際、４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋及び４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋は、４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−集団と比較してより多くのＢｒｄＵを取り込んでいた（図１Ｆ）。これらのデータは、ＣＤ８＋Ｔ細胞が腫瘍部位に到達すると、ＴＩＬの一部が腫瘍内で増殖すること、及びこれらの増殖するＴＩＬは４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現の増大によって特定されることを示すものである。
【０１０６】
ＬＡＧ−３及び４−１ＢＢのアップレギュレーションが単にＢ１６．ＳＩＹ腫瘍モデルの産物であったのか、あるいは腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞のより一般的な特性であるのかを判定するため、３つの更なる進行性の増殖を示す腫瘍モデルであるＣ１４９８．ＳＩＹ、ＭＣ３８．ＳＩＹ、ＥＬ４．ＳＩＹ、並びにＢ１６Ｆ１０親腫瘍について分析を行った。ＴＩＬを１４日目に４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現について分析した。Ｂ１６．ＳＩＹ腫瘍から単離されたＣＤ８＋ＴＩＬに見られるのと同様の発現のパターンが見られた（図１Ｇ及びＩ）。Ｂ１６Ｆ１０親腫瘍から得られた結果は、ＳＩＹの存在が４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の同時発現をみるために必要ではないことを示すものである。４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬサブセットが進行性の腫瘍でのみ生じたか、または拒絶された腫瘍においても生じたかを判定するため、より免疫原性が高く、自然拒絶される１９６９．ＳＩＹ及びＭＣ５７．ＳＩＹ線維肉腫腫瘍モデルにおけるＴ細胞表現型を分析した。１９６９．ＳＩＹ及びＭＣ５７．ＳＩＹ腫瘍のＣＤ８＋ＴＩＬコンパートメントでは顕著に少ない４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋細胞が見出された（図Ｈ及びＩ）。４−１ＢＢとＬＡＧ−３の同時発現はＢ１６．ＳＩＹ腫瘍において経時的に維持されたが、ＭＣ５７．ＳＩＹ腫瘍では維持されなかった（図１Ｊ）。これらのデータは、ＬＡＧ−３＋４−１ＢＢ＋ＴＩＬ表現型の獲得は、腫瘍微小環境内で選択的に生じ、腫瘍退縮ではなく腫瘍進行の状態でのみ生じることを示している。
［ＣＤ８＋４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬは、Ｅｇｒ２及び複数のＥｇｒ２遺伝子標的を発現する］
Ｅｇｒ２の発現自体もＣＤ８＋ＴＩＬコンパートメント内のＴ細胞の特性であるかどうかを調べるため、本明細書の実施形態の進展において実験を行い、Ｅｇｒ２−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ（Ｅｇｒ２ＧＦＰ）ノックインレポーターマウスを用いた。全ＣＤ８＋ＴＩＬのおよそ１４％が７日目及び１４日目の両方でＧＦＰ＋であった（図２Ａ）。Ｅｇｒ２が正確に報告されていることを確認するため、高レベル及び低レベルのＥＧＦＰを発現しているＣＤ８＋ＴＩＬを分取し、ｑＲＴ−ＰＣＲによってＥｇｒ２及びいくつかのＥｇｒ２標的についてスクリーニングした。Ｅｇｒ２−ＧＦＰｈｉ集団は、より高レベルのＥｇｒ２及びインビトロアネルギーモデルを用いて上記で定義した多くのＥｇｒ２標的遺伝子を発現していた。これらの遺伝子には、Ｔｎｆｒｓｆ９、Ｌａｇ３、Ｎｇｎ、Ｓｅｍａ７ａ、Ｃｒｔａｍ、Ｃｃｌ１及びＮｒｎ１が含まれる（図２Ｂ）。Ｅｇｒ２−ＧＦＰｈｉＣＤ８＋ＴＩＬにおける４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現をフローサイトメトリーにより確認した。Ｅｇｒ２−ＧＦＰｌｏ細胞の大部分は、ＬＡＧ−３及び／または４−１ＢＢを発現していた。Ｅｇｒ２−ＧＦＰｌｏ細胞も１４日目に亜集団で４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現を示した（図２Ｃ）。この結果は、Ｅｇｒ２を発現するＣＤ８＋ＴＩＬはＬＡＧ−３及び／または４−１ＢＢを発現するＴＩＬのサブセットのみを含むか、あるいはＥｇｒ２は一過性に発現され、ＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの誘導後に続いてダウンレギュレートされることを示している。
【０１０７】
インビトロアネルギーＣＤ４＋Ｔ細胞クローンから得たＥｇｒ２標的遺伝子を使用し（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；その全容を参照により援用する）、Ｅｇｒ２誘導転写プログラムを、ｑＲＴ−ＰＣＲによって分取された４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−及び４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋細胞で調べた。調べた４３種類のＥｇｒ２標的遺伝子のうち、１０種類が４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団において検出可能な発現の増大を示したのに対して、同様の遺伝子のサブセットの発現は４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋集団では増大した（図２Ｄ）。まとめると、これらのデータは、Ｅｇｒ２が、ＬＡＧ−３及び／または４−１ＢＢを発現するＣＤ８＋ＴＩＬの亜集団で発現されており、これらのより大きなＴ細胞集団全体で既知のＥｇｒ２標的のサブセットが検出されたことを示すものである。
【０１０８】
次に、Ｅｇｒ２が、インビボでＣＤ８＋ＴＩＬにおけるＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの発現に必要とされるか否かを調べた。この目的で、タモキシフェンの経口投与によってＣＤ８＋Ｔ細胞の一部がＥｇｒ２を欠失し、ＹＦＰを発現するＥｇｒ２ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘ×ｐＬＣＫ−ＣｒｅＥＲＴ２×ＲＯＳＡ−ＹＦＰマウスを用いた（図２Ｅ）。これにより、同じ腫瘍内でＥｇｒ２−充足（ＹＦＰ−）とＥｇｒ２−欠損（ＹＦＰ＋）ＣＤ８＋の両者の比較が可能となる。Ｅｇｒ２が実際にＹＦＰ＋部分から欠失したかを調べるため、ＹＦＰ＋及びＹＦＰ−ＣＤ８＋ＴＩＬを分取し、Ｅｇｒ２転写産物をエクスビボで直接、更にエクスビボ刺激の際に測定した。ＹＦＰ＋のＣＤ８＋ＴＩＬは、ＹＦＰ−のＣＤ８＋ＴＩＬと比較して発現されたＥｇｒ２転写産物は大幅に少なかった（図２Ｅ）。Ｅｇｒ２が４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現に必要であることを調べるため、ＣＤ８＋ＴＩＬを腫瘍接種後の７及び１４日目に分析し、ＹＦＰ＋及びＹＦＰ−集団をタモキシフェンで処置しないマウスと比較した。７日目にＹＦＰ＋部分が発現した４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３は、ＹＦＰ−集団及びＷＴ  ＣＤ８＋ＴＩＬと比較して少なかった。しかしながら、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現に１４日目に有意差は認められなかった（図２Ｆ）。このことは、他の転写調節因子が特により遅い時点においてＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの発現を補償し、それらの発現に寄与することを示している。
【０１０９】
Ｅｇｒ３はＥｇｒ２と重複する機能を有することが示されており（Ｓａｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；その全容を参照により援用する）、ＨＩＦ１αは、４−１ＢＢの発現に寄与することができる（Ｐａｌａｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。これらの転写因子が４−１ＢＢ及び／またはＬＡＧ−３の発現を補償することができるかどうかを調べるため、本発明者らは、４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３を発現したＥｇｒ２ＧＦＰｈｉ及びＥｇｒ２ＧＦＰｌｏＣＤ８＋ＴＩＬを７日目に分取し、ｑＲＴ−ＰＣＲによってＥｇｒ３及びＨＩＦ１αの発現を分析した。実際にＥｇｒ３及びＨＩＦ１αは、Ｅｇｒ２ＧＦＰｈｉ及びＥｇｒ２ＧＦＰｌｏ集団で発現していた。Ｅｇｒ２ＧＦＰｌｏとＥｇｒ２ＧＦＰｈｉ集団との間でＥｇｒ２及びＣＣＬ１の差次的発現が確認され、分別の純度を保証するものである（図２Ｇ）。これらのデータを合わせると、Ｅｇｒ２は、早期の時点での４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の発現のアップレギュレーションに寄与するが、他の転写調節因子はＴ細胞／腫瘍相互作用が進行するにしたがってＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの発現を補償及び誘導することを示している。
【０１１０】
［ＣＤ８＋４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬはオリゴクローナルであり、腫瘍抗原特異性について濃縮されている］
無関連の抗原に対して特異的なメモリーＴ細胞がＴＩＬの間でしばしば見られ、インビボでの非特異的なＴ細胞のトラフィッキングが文献に記載されている（Ｈａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６；その全容を参照により援用する）ことから、腫瘍微小環境内のすべてのＴ細胞が腫瘍関連抗原に対して特異的というわけではない。４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬが腫瘍−抗原特異的であるかどうかを調べるために本明細書の実施形態の進展において実験を行った。  ＬＡＧ−３、４−１ＢＢ及びＥｇｒ２は、ＴＣＲ刺激後にアップレギュレートされ、実験によってこの集団が腫瘍微小環境内でインサイチューで増殖することが示された。３つの相補的な方法を用いた。最初に、ＣＤ８＋ＴＩＬを細胞分取によりＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの発現に基づいて単離し、ＴＣＲβスペクトル型分析を行った。４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−ＴＩＬ及びＣＤ８＋脾臓細胞と比較して、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬは、非正規分布を有し、１個または２個の主要なピークを共有していた（図３Ａ）。１個の主要なピークを示すいくつかのＶβの分析により、Ｖβ７が、４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋と４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団との間で共有された１個のＣＤＲ３β配列を含むことが判明し、クローナルな関係が示された（図３Ａ）。ＣＤＲ３βレパートリーのオリゴクローン性を測定するため、３匹の別々のマウスで各ＶβについてＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団と脾臓ＣＤ８＋集団との間のハミング距離（ＨＤ）を計算した（図８）。各スペクトル型を曲線下面積の頻度プロファイルに変換することにより、ハミング距離は頻度の変化を計算して、０が完全に同じ頻度プロファイルを示し、１が完全に不一致のプロファイルを示すものとして、０と１との間の比較の値を報告する。コントロールとして、異なるマウス間の脾臓ＣＤ８＋集団のＨＤを計算した（図３Ｂ、黒い棒線）。脾臓ＣＤ８＋スペクトル型は概ね正規分布であることから、この値は２つの類似した分布間のＨＤを表している。ＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団間のＨＤの分析により、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋及び４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋のＣＤＲ３βの分布は脾臓ＣＤ８＋集団と比較して有意に異なっている（正規分布から遠い）が、４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−のＣＤＲ３βの分布は有意に異ならないことが示された（図３Ｂ）。これらのデータは、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋及び４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋集団が、ＴＩＬのオリゴクローナル的に増殖したサブセットであることを示すものであり、これらの亜集団における抗原特異性を示す。
【０１１１】
第２のアプローチとして、Ｂ１６．ＳＩＹメラノーマ及びＭＣ３８．ＳＩＹ腺癌モデルを用いた。Ｈ−２Ｋｂ制限ＳＩＹエピトープ（ＳＩＹＲＹＹＧＬ）に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を監視した。ＳＩＹＲＹＹＧＬ／Ｋｂペンタマー＋（Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＹ）細胞が、腫瘍接種後１４日目にＢ１６．ＳＩＹ及びＭＣ３８．ＳＩＹ腫瘍内で増殖した数で見出された（図３Ｃ）。Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＹ−集団の３２％に対して、Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＹ＋細胞の約４７％が４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３を発現していた（図３Ｃ及びＥ）。４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋における抗原特異的ＣＤ８＋ＴＩＬのこのような濃縮は、これらのマーカーが腫瘍抗原特異的ＴＩＬを特定することを示すものである。Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＹ−細胞は、相当の数の４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋細胞も含んでおり、これは、ＳＩＹ以外の腫瘍抗原もインビボでＣＤ８＋ＴＩＬのサブセットによってやはり認識されるという知見と一致する（図３Ｃ）。脾臓またはＴｄＬＮのＨ−２Ｋｂ／ＳＩＹ＋細胞は、４−１ＢＢとＬＡＧ−３を同時発現しておらず、この表現型が腫瘍微小環境内で獲得されることを示している。
【０１１２】
これらの特徴を、２つの自然に拒絶される腫瘍モデルにおいて腫瘍−抗原特異的ＣＤ８＋ＴＩＬとの関連で分析した。この目的で、Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＹ特異的ＣＤ８＋ＴＩＬ細胞をＭＣ５７．ＳＩＹ及び１９６９．ＳＩＹ腫瘍から評価した。腫瘍接種後１４日目に、Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＹ特異的ＣＤ８＋ＴＩＬのおよそ５％が４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋部分中に見出された。Ｂ１６．ＳＩＹ腫瘍と同様、ＴｄＬＮまたは脾臓（図示せず）内のＨ−２Ｋｂ／ＳＩＹ特異的ＣＤ８Ｔ細胞で４−１ＢＢとＬＡＧ−３を同時発現したものはなかった（図３Ｄ）。Ｂ１６．ＳＩＹ及びＭＣ３８．ＳＩＹ腫瘍と異なり、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋Ｈ−２Ｋｂ／ＳＩＹ特異的ＣＤ８＋ＴＩＬの有意な濃縮は観察されなかった（図３Ｄ及びＥ）。これらのデータは、腫瘍抗原特異性それ自体は機能不全性を決定するものではなく、これが進行性の腫瘍の微小環境に固有の特徴であることを示している。
【０１１３】
腫瘍−抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋表現型を獲得するかどうかを調べるための第３の方法として、２Ｃ／Ｒａｇ２−／−及びＰ１４／Ｒａｇ２−／−マウスから単離した、コンジェニックにマークされた２Ｃ及びＰ１４トランスジェニック（Ｔｇ）Ｔ細胞を腫瘍保有宿主に移入した。２Ｃ  ＴＣＲが、Ｂ１６．ＳＩＹ腫瘍細胞によって発現されたＳＩＹモデル抗原に対して特異的であるのに対して、Ｐ１４はＬＣＭＶ由来ｇｐ３３−４１エピトープに対して特異的な無関連ＴＣＲであり、どちらのＴＣＲもＨ−２Ｋｂに制限されている。２Ｃ及びＰ１４  Ｔｇ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を腫瘍接種後７日目に尾部静脈から移入した。移入７日後に、腫瘍及びＴｄＬＮを摘出し、移入された集団の表現型プロファイルを分析した。このシステムは、同じ腫瘍微小環境内の規定の抗原特異性を有する２つのＴ細胞集団、及びポリクローナル宿主ＣＤ８＋Ｔ細胞の分析を可能とする。２Ｃ  Ｔ細胞は、Ｐ１４  Ｔ細胞と比較して腫瘍微小環境内でより効率的に動員及び増殖され、全ＣＤ８＋ＴＩＬ集団の大きな部分を含んでいた（図３Ｆ）。２Ｃ  Ｔ細胞のほぼすべてがＬＡＧ−３及び／または４−１ＢＢを発現していたのに対し、これはＰ１４細胞のわずかな割合でしかそうではなかった（図３Ｇ及びＨ）。ＳＩＹ−Ｋｂペンタマー分析と一致して、２Ｃ  Ｔ細胞でのＬＡＧ−３と４−１ＢＢの同時発現は、ＴｄＬＮでは観察されなかった。これらの結果を合わせると、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋表現型は、腫瘍進行の条件下における腫瘍抗原特異的ＴＩＬの特性であることが示される。
【０１１４】
［ＬＡＧ−３及び４−１ＢＢを発現するＣＤ８＋ＴＩＬは、機能不全ＩＬ−２の産生を示すが、ＩＦＮ−γ及びＴｒｅｇ動員ケモカインを産生する］
重要な調節因子としてのＥｇｒ２の特定につながるインビトロＴ細胞アネルギーモデルに基づいて、腫瘍抗原特異的４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋ＴＩＬ集団がＩＬ−２を産生するその能力において機能不全であるかどうかを調べるために本明細書の実施形態の進展において実験を行った。この目的で、各亜集団を分取し、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８ｍＡｂで刺激してｑＲＴ−ＰＣＲ及びＥＬＩＳＡによりＩＬ−２産生を分析した。ほとんどすべてのＣＤ８＋ＴＩＬが活性化された表現型を示したことから、ＣＤ８＋ＣＤ４４＋脾臓細胞をポジティブコントロールとして用いた。実際、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋細胞は、４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−集団と比較してＩＬ−２  ｍＲＮＡの１００倍の低下、及びＩＬ−２タンパク質レベルの４０倍の低下を示した（図４Ａ及び４Ｂ）。第２のアプローチとして、Ｅｇｒ２ｈｉＴＩＬ（大部分が４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋でもある）をＥｇｒ２−ＧＦＰレポーターマウスを用いて調べた。実際、エクスビボで刺激したＥｇｒ２−ＧＦＰｈｉＣＤ８＋ＴＩＬは、Ｅｇｒ２−ＧＦＰｌｏ細胞と比較して低下したＩＬ−２転写産物も示した（図４Ｃ）。最後のアプローチとして、コンジェニックにマークした２Ｃ  Ｔ細胞を腫瘍保有宿主内に静脈注射により養子移入し、腫瘍及びＴｄＬＮから７日後に２Ｃ  Ｔ細胞を回収した。腫瘍から単離された２Ｃ  Ｔ細胞は、ＴｄＬＮから単離された２Ｃ  ＣＤ４４＋Ｔ細胞と比較して、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬと同等のレベルで、ＩＬ−２転写産物の低下した産生能を示した（図４Ｄ）。慢性感染症モデルにおいて、ＰＤ−１の発現が内因的に機能不全の、すなわち「疲弊」ＣＤ８＋Ｔ細胞を特定することが示差されている。ＰＤ−１単独がＩＬ−２の産生能のない細胞を特定するのに充分でありうるかどうかを調べるため、ＬＡＧ−３及び４−１ＢＢを発現していないＣＤ８＋ＴＩＬを単離し、ＰＤ−１＋部分のＩＬ−２の産生能について試験した。ＣＤ８＋ＴＩＬのおよそ１０％が１４及び２１日目に４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋ＰＤ−１＋であった（図４Ｅ及びＦ）。エクスビボでの刺激に際し、この集団は、ＩＬ−２のｍＲＮＡの産生能を、４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−細胞と同等のレベルで維持していた（図４Ｇ）。これらの結果は、ＰＤ−１の発現単独では、腫瘍微小環境内の機能不全ＴＩＬを特定するうえで充分ではないことを示している。
【０１１５】
腫瘍進行の間の機能的変化を更に調べるため、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ及びＴＮＦ−αのタンパク質レベルをＴＣＲ刺激後に試験した。ＣＤ８＋ＴＩＬのサイトカインの産生能の喪失は、慢性ＬＣＭＶモデルにおいて、腫瘍微小環境内への侵入後に開始される（Ｗａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｓｃｈｉｅｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；その全容を参照により援用する） か、または３０日後に進行することが報告されている一時的プロセスであることが示唆されている（Ｗｈｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；その全容を参照により援用する）ことから、サイトカイン産生を７、１４、２１及び２８日目に試験した。４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団が、ＩＬ−２の産生能を７日目と早期に喪失したのに対して、４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３＋集団はＩＬ−２産生能を７日目〜１４日目の間に喪失した（図５Ａ）。４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−集団は、試験したいずれの時点においてもＩＬ−２の産生能を喪失せず（図５Ａ）、この集団が腫瘍抗原特異的ではなく、機能不全状態への分化は抗原依存的なプロセスであるという知見を支持するものである（Ｓｃｈｉｅｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；その全容を参照により援用する）。４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団は、ＩＦＮ−γ産生の経時的なわずかな増加を示した、ネガティブなその対応する集団と比較して７日目以降のすべての時点において増大したＩＦＮ−γを産生した。ＩＦＮ−γの増大は後の時点まで維持されたが、ＴＮＦ−αの産生は２８日目までに失われた（図５Ａ）。
【０１１６】
インビトロ再刺激を行わずに腫瘍内のサイトカイン産生を直接評価するために本明細書の実施形態の進展において実験を行った。これは、インサイチューでどのＴ細胞がＴＣＲ刺激を受けたかをより正確に反映しうるものである。各Ｔ細胞集団を、培養をいっさい行わずにエクスビボで直接分取し、ｍＲＮＡレベルをｑＲＴ−ＰＣＲにより測定した。４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−細胞と比較して、ＩＦＮ−γ及びＧｚｍｂ転写産物の上昇が、ＴＮＦ−αレベルのわずかな低下とともに、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋亜集団で観察された（図５Ｂ）。初代ＴＩＬにおけるＩＦＮ−γの産生を、腫瘍にブレフェルジンＡを注入した後、細胞内サイトカイン染色による分析を行って確認した。ｍＲＮＡの発現と一致して、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団は、顕著により大量のＩＦＮ−γタンパク質を産生した（図５Ｃ）。したがって、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬはＩＬ−２の産生不全にもかかわらず、引き続きＩＦＮ−γを産生したことから、機能性を完全に失ってはいない。この表現型は、インビトロＴ細胞アネルギーモデルと一致している （Ｊｅｎｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７；その全容を参照により援用する）。
【０１１７】
４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団が細胞傷害能を依然保持しているかどうかを試験するため、抗ＣＤ−３を結合させたＰ８１５肥満細胞腫標的細胞を、分取直後の異なるＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団と共培養することにより、再誘導溶解を行った。１４日目の腫瘍から単離した４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋ＴＩＬは、インビトロでプライミングしたＯＴ−Ｉ細胞と同等の有効性で標的細胞を溶解することができた。２１日目の腫瘍から単離した４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬは、プライミングしたＯＴ−Ｉ細胞と比較してより低い程度であったものの、標的細胞を依然溶解することができた（図５Ｄ）。
【０１１８】
腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を腫瘍微小環境に動員するケモカインＣＣＬ２２の供給源となりうる（Ｓｐｒａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；その全容を参照により援用する）。更に、ケモカインＣｃｌ１は、アネルギーＴ細胞におけるＥｇｒ２の標的であり（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；その全容を参照により援用する）、ＣＣＬ１もインビボで腫瘍関連のＴｒｅｇの動員に寄与していることが示唆されている（Ｈｏｅｌｚｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；その全容を参照により援用する）。しかしながら、腫瘍内のすべてのＣＤ８＋Ｔ細胞がこれらのケモカインを産生するのか、あるいはこれらのケモカインはＴ細胞の亜集団のみによって産生されるのかは分かっていない。これを調べるため、ＣＤ８＋ＴＩＬ表現型の亜集団を、ｑＲＴ−ＰＣＲにより、エクスビボで直接Ｃｃｌ１及びＣｃｌ２２のｍＲＮＡ発現について分析した。実際、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬ集団は、ネガティブなその対応する集団、または脾臓のＣＤ８＋ＣＤ４４＋Ｔ細胞と比較して大幅により大量のＣｃｌ１及びＣｃｌ２２を産生した（図４Ｋ）。コントロールとして、異なるケモカインＣｃｌ５の発現は、差次的には発現されないことが見出された。
【０１１９】
これらのデータを合わせると、４−１ＢＢとＬＡＧ−３の同時発現は、ＩＬ−２の産生能は有していないが、ＩＦＮ−γの産生能を有する腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋ＴＩＬが、インビトロで標的細胞を殺滅し、Ｔｒｅｇを動員することが可能なケモカインを分泌することを説明するものであることが示される。ＩＦＮ−γが腫瘍微小環境におけるＰＤ−Ｌ１及びＩＤＯのアップレギュレーションを生じること、及び、ＣＤ８＋ＴＩＬによって産生されたケモカインがＴｒｅｇ動員に寄与する（Ｓｐｒａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；その全容を参照により援用する）ことを考慮すると、これらのデータは、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団が、抗腫瘍免疫の有効性を制限する腫瘍微小環境内の免疫抑制機構のネットワークに寄与していることを示している。
【０１２０】
［遺伝子発現プロファイリングは、ＣＤ８＋４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬが、非常に多くの更なる共刺激性及び共阻害性受容体を発現することを示している］
腫瘍−抗原特異的機能不全ＣＤ８＋ＴＩＬを規定する表面マーカーを所有していることから、この集団の遺伝子発現プロファイルを、機能不全ＣＤ８＋Ｔ細胞の他の公開されているプロファイルと比較してこの機能不全状態にある細胞を調節するかまたはこれらの細胞で差次的に発現される遺伝子を決定するため、本明細書の実施形態の進展において実験を行った。この目的で、マウスＣＴ２６腫瘍モデル（Ｗａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；その全容を参照により援用する）及びＬＣＭＶ「疲弊」ＧＰ３３特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｄｏｅｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；その全容を参照により援用する）を用いた研究から得られた「機能不全」４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋ＴＩＬ、「機能低下」ＣＤ８＋ＴＩＬの転写プロファイルについて交差実験比較を行った。結果を表２に示す。独立して各実験から得られたコントロールと比較して２倍の増大を示す遺伝子のみを検討した。枯渇Ｔ細胞プロファイルと比較して２倍以上の数の遺伝子が機能不全ＴＩＬのデータセットとこれまでに公開されている機能低下ＣＤ８＋ＴＩＬのデータとの間で共有されていることが判明した（図６Ａ）。更に、ランク−ランクハイパージオメトリックオーバーラップ（ｒａｎｋ−ｒａｎｋ  ｈｙｐｅｒｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｏｖｅｒｌａｐ）（ＲＲＨＯ）分析により、ウイルスを用いて誘導された枯渇ＣＤ８＋Ｔ細胞プロファイルと比較して、現在の機能不全ＴＩＬと公開されている機能低下ＣＤ８＋ＴＩＬ遺伝子発現プロファイルとの間でより大きな統計的に有意な重複（図１０Ａ）及びより大きな相関（図１０Ｂ）が示され、慢性的ウイルス感染と比較して、腫瘍から単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞間のより近い分子プログラムを示している。
【０１２１】
【表３】
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【０１２２】
［＊Ｌｏｇ２倍率変化＝ｌｏｇ２（４＋Ｌ＋／４−Ｌ−）］
これら３つの集団間の分子経路を調べるため、遺伝子オントロジーネットワークをノードにグループ化し、各ノード内で最も重要な経路を決定した（図６Ａ）。本発明者らの機能不全Ｔ細胞データセットと公開されている機能低下Ｔ細胞データセットとの間で共有されている遺伝子オントロジー（ＧＯ）タームは、細胞周期遺伝子が濃縮されており、機能不全集団の大部分がＫｉ６７＋であるという観察結果と一致する。機能不全遺伝子セットと疲弊遺伝子セットとの間で共有されているＧＯタームは、細胞殺滅の制御、走化性、インターフェロンγ産生などのエフェクタープログラムを含んでいた。機能低下遺伝子セットと疲弊遺伝子セットとの間で共有されているＧＯタームは、細胞周期経路、リンパ球の負の制御、及びインターフェロンγ産生で構成されていた。これらのデータは、これらの機能不全分化状態では、いくつかの保存された分子プログラムが存在する確率が高いものの、多くの経路は慢性ウイルス感性間で、また腫瘍との関連で差次的に制御されている可能性があることを示している。
【０１２３】
Ｐｄｃｄ１（ＰＤ−１）、Ｈａｖｃｒ２（ＴＩＭ−３）、Ｃｄ２４４（２Ｂ４）、Ｋｌｒｅ１、及びＬａｇ３を含む多くの阻害性受容体がすべてのデータセット間で共有されていたのに対して、共刺激性受容体Ｔｎｆｒｓｆ４（ＯＸ−４０）及びＴｎｆｒｓｆ９（４−１ＢＢ）が、機能不全及び機能低下ＣＤ８＋ＴＩＬデータセットにおいてアップレギュレートされていた。したがって、腫瘍特異的ＣＤ８＋ＴＩＬ上の潜在的マーカー及び治療標的を濃縮するため、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＣＤ８＋ＴＩＬ集団の完全な細胞表面表現型の特性を決定した。異なるＣＤ８＋ＴＩＬ亜集団を比較したところ、以下のいくつかの更なるアップレギュレートされた共刺激性受容体が見出された。すなわち、Ｔｎｆｒｓｆ１８（ＧＩＴＲ）、Ｎｋｇ２ｄ（ＫＬＲＫ１）、及びＣｄ２７。ＣＤ４＋Ｔｒｅｇ機能への関与が示されている（Ｓａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；その全容を参照により援用する）細胞表面受容体タンパク質をコードするＮｒｐ１（ニューロピリン１）の転写産物も高度に発現していた。これらの分子の多くのものの発現は、腫瘍接種後７、１４、及び２１日目にフローサイトメトリーによって確認された（図６Ｃ）。共刺激性分子ＩＣＯＳ及びＣＤ１６０がカットオフ値に近く、遺伝子アレイ内にＩｇ及びＩＴＩＭドメインを有する阻害性受容体Ｔ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）のプローブが存在していなかったことから、この分析を、ＩＣＯＳ及びＣＤ１６０ならびにＴＩＧＩＴを含むように拡張した。更に、最近の報告は、これらの受容体を標的化することががんのマウスモデルにおいて治療効果を有しうることを示している（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；その全容を参照により援用する）。ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、ＣＤ２７及びＮＲＰ１は、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団の大部分で発現しており、その発現は長期にわたり維持された。２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ−４０、及びＧＩＴＲは、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団のより小さな部分を更に分割した。いくつかの阻害性受容体２Ｂ４、ＴＩＭ３及びＣＤ１６０の発現がこの３週間の時間枠にわたって増大したのに対して、共刺激性受容体ＩＣＯＳ及びＯＸ−４０の発現は低下した（図６Ｃ）。
【０１２４】
機能不全ＣＤ８＋ＴＩＬが最終分化した短期エフェクター細胞であるかまたはメモリー様細胞であるかを調べるため、ＫＬＲＧ−１及びＩＬ−７Ｒαの発現（Ｊｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。ＣＤ８＋ＴＩＬの多くはＫＬＲＧ−１の発現について陰性であり、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋集団と４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−集団との間に差は見られなかった。しかしながら、４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬの大部分は、ネガティブなその対応する集団と比較してＩＬ−７受容体（ＩＬ−７Ｒα）を発現していなかった（図６Ｄ）。これらの結果は、一見したところ、腫瘍微小環境で発現される抗原に特異的ではない４−１ＢＢ−ＬＡＧ−３−ＴＩＬはよりメモリー様であるが、同時に腫瘍抗原特異的なＬＡＧ−３＋４−１ＢＢ＋サブセットは最終エフェクター表現型を獲得していないことを示している。
【０１２５】
［ＣＤ８＋４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬにおいて差次的に制御される遺伝子の機能的関連性］
表２の遺伝子アレイの結果は、ＣＤ８＋４−１ＢＢ＋ＬＡＧ−３＋ＴＩＬを特徴付ける遺伝子のリストを与えるものである。このリストには、抗腫瘍免疫の治療標的及び更なるマーカーが含まれている。これらの更なる標的／マーカーの機能的関連性を試験するために本明細書の実施形態の進展において実験を行った（図１１）。データは、アレイがノックアウトマウスを使用して免疫治療の標的を特定したことを示している（例えば、ＰＤ−１、ＴＩＭ−３、ＯＸ−４０ＩＣＯＳ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１８、Ｎｒｎ１、Ｎｒｐ１、ＫＬＲＧ１、ＧＭ１５６、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ６５、ＴＭＥＭ２０５、及びＴＭＥＭ１２６Ａ、ＣＲＴＡＭ、Ｓｅｍａ７ａなど）。実験によって、これらの分子のいずれかを欠失しているノックアウトマウスがインビボで改善された免疫媒介腫瘍制御を示したことから、Ｎｒｎ１及びＣＲＴＡＭが抗腫瘍免疫応答の負の調節因子であることが実証されている。これに対して、Ｓｅｍａ７ａは、この分子を欠失しているノックアウトマウスはインビボで免疫媒介腫瘍制御の低下を示すことから、抗腫瘍免疫応答の正の調節因子である（図１１）。これらの実験は、Ｓｅｍａ７ａシグナル伝達のアゴニストならびにＮｒｎ１及び／またはＣＲＴＡＭのアンタゴニストは、がんの治療の有用な治療薬となるはずであることを示している。
【０１２６】
［４−１ＢＢ及びＬＡＧ−３の標的化は、インビボで抗腫瘍活性を示し、ＣＤ８＋ＴＩＬの機能及び表現型組成を正常化する］  
これらの受容体の標的化が治療的有用性を有しうるかどうかを評価するために本明細書の実施形態の進展において実験を行った。この目的で、アゴニスト性の抗４−１ＢＢ  ｍＡｂを、確立されたＢ１６．ＳＩＹ腫瘍を有するマウスに、単独で、またはブロッキング抗ＬＡＧ−３  ｍＡｂと併用して投与した。より遅い腫瘍成長に反映されるように各抗体処置単独でもある程度の治療効果が見られたものの、併用が特に効果的であった（図７Ａ）。腫瘍微小環境の分析によって、併用治療による改善された腫瘍制御は、ＳＩＹ抗原に特異的なＣＤ８＋ＴＩＬの数の増加をともなうことが示され（図７Ｂ）、抗ＰＤ−１＋抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂでこれまでに報告されている結果（Ｓｐｒａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ｂ；Ｔｗｙｍａｎ−Ｓａｉｎｔ  Ｖｉｃｔｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；その全容を参照により援用する）と一致している。
【０１２７】
次に、抗４−１ＢＢ＋抗ＬＡＧ−３  ｍＡｂの治療効果に、安定状態の機能不全Ｔ細胞を規定する表現型マーカーの喪失が関連しているかどうかを調べた。投与されたＡｂは理論的には細胞表面から標的受容体を調節しうることから、ＬＡＧ−３及び４−１ＢＢの発現についてＴ細胞の再分析を行うことは問題を生じうる懸念があるため、遺伝子発現プロファイリングによって上記に特定された更なる受容体の協調的発現を利用した。バルクのＴＩＬ亜集団の予備分析により、抗ＬＡＧ−３＋抗４−１ＢＢによる処置後にＮＲＰ１及び２Ｂ４の発現の低下が示された（データは示さず）。ペンタマー染色によって特定されたＳＩＹ応答性ＣＤ８＋ＴＩＬ上での２Ｂ４とＮＲＰ１の同時発現について分析した。２Ｂ４とＮＲＰ１との同時発現における２．７倍の低下が抗４−１ＢＢ＋抗ＬＡＧ−３による処置に際して観察され（図７Ｃ）、Ｔ細胞機能不全にともなう表面表現型の喪失を示した。この変化に、エフェクター表現型に向かうシフトがともなうかどうかを調べるため、ＫＬＧＲ−１の発現を調べた。実際、処置後にＳＩＹ応答性ＴＩＬ上でＫＬＧＲ−１の発現の顕著な増大が観察され、ＫＬＧＲ−１ｈｉＩＬ−７ＲＡｌｏ集団では３．７倍の増大が観察された（図７Ｄ）。
【０１２８】
抗ＬＡＧ−３＋抗４−１ＢＢ  ｍＡｂによる処置が腫瘍内に既に存在するＴ細胞の表現型は変化させないが、新たにプライミングされた機能性Ｔ細胞の二次リンパ器官からの動員を支持している可能性を排除するため、リンパ節からのＴ細胞の移出を防止する（Ｈａｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；その全容を参照により援用する）Ｓ１ＰＲ阻害剤ＦＴＹ７２０を用いた。抗ＰＤ−１を用いた免疫治療の有効性はＦＴＹ７２０の存在下で保存され、主要な作用機序としてのＴＩＬの再機能化（Ｓｐｒａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４ａ；その全容を参照により援用する）を支持している。ＦＴＹ７２０の投与を、腫瘍接種後６日目で抗ＬＡＧ−３＋抗４−１ＢＢ処置の開始の２４時間前に開始し、１４日目にＴＩＬ分析を行うまで毎日続けた。同じ時点で分析した末梢血により、循環Ｔ細胞の顕著な減少が示された（図９）。循環Ｔ細胞のこのような喪失にもかかわらず、２Ｂ４及びＮＲＰ１のダウンレギュレーション、及びＫＬＲＧ１ｈｉＩＬ−７ＲΑｌｏ表現型に向かうシフトは保存されていた（図７Ｅ及びＦ）。
【０１２９】
ＴＩＬの機能回復を調べるため、ＫＬＲＧ−１ｌｏＩＬ−７ＲΑｌｏ及びＫＬＲＧ−１ｈｉＩＬ−７ＲΑｌｏのＣＤ８＋ＴＩＬ集団を、処置後１４日目にＢ１６．ＳＩＹ腫瘍から分取し、インビトロでの再刺激後にＩＬ−２について分析した。実際、ＫＬＲＧ−１ｌｏＩＬ−７ＲΑｌｏ及びＫＬＲＧ−１ｈｉＩＬ−７ＲΑｌｏ集団は、刺激に際してＩＬ−２の産生能の増大を示した（図７Ｇ）。ＩＬ−２のｍＲＮＡの相対レベルは、２つのＣＤ８＋ＴＩＬ集団及びコントロールのＣＤ８＋ＣＤ４４＋ＴｄＬＮ  Ｔ細胞の間で同等であった。まとめると、これらのデータは、抗４−１ＢＢ／抗ＬＡＧ−３の併用処置は表現型プロファイルの顕著な変化を誘発し、腫瘍微小環境内に既に存在している腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能回復を促進することを示すものである。
【０１３０】
［参考文献］
いくつかのものが上記に引用されている以下の参考文献を、参照により、それらの全容にわたって本明細書に援用する。
【０１３１】
Ａｈｍａｄｚａｄｅｈ，Ｍ．，Ｌ．Ａ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｂ．Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ，Ｊ．Ｒ．Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ，Ｍ．Ｅ．Ｄｕｄｌｅｙ，Ｄ．Ｅ．Ｗｈｉｔｅ，ａｎｄ  Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ．２００９．Ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ｈｉｇｈ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ＰＤ−１  ａｎｄ  ａｒｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ｉｍｐａｉｒｅｄ．Ｂｌｏｏｄ．１１４：１５３７−１５４４．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００８−１２−１９５７９２．
Ｂａｉｔｓｃｈ，Ｌ．，Ａ．Ｌｅｇａｔ，Ｌ．Ｂａｒｂａ，Ｓ．Ａ．Ｆｕｅｒｔｅｓ  Ｍａｒｒａｃｏ，Ｊ．−Ｐ．Ｒｉｖａｌｓ，Ｐ．Ｂａｕｍｇａｅｒｔｎｅｒ，Ｃ．Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ−Ｊｕｃｈｔ，Ｈ．Ｂｏｕｚｏｕｒｅｎｅ，Ｄ．Ｒｉｍｏｌｄｉ，Ｈ．Ｐｉｒｃｈｅｒ，Ｎ．Ｒｕｆｅｒ，Ｍ．Ｍａｔｔｅｒ，Ｏ．Ｍｉｃｈｉｅｌｉｎ，ａｎｄ  Ｄ．Ｅ．Ｓｐｅｉｓｅｒ．２０１２．Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｃｏ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ＣＤ８  Ｔ−ｃｅｌｌｓ  ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ  ｏｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ａｎａｔｏｍｉｃａｌ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ．７：ｅ３０８５２．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００３０８５２．
Ｂａｉｔｓｃｈ，Ｌ．，Ｐ．Ｂａｕｍｇａｅｒｔｎｅｒ，Ｅ．Ｄｅｖｅｖｒｅ，Ｓ．Ｋ．Ｒａｇｈａｖ，Ａ．Ｌｅｇａｔ，Ｌ．Ｂａｒｂａ，Ｓ．Ｗｉｅｃｋｏｗｓｋｉ，Ｈ．Ｂｏｕｚｏｕｒｅｎｅ，Ｂ．Ｄｅｐｌａｎｃｋｅ，Ｐ．Ｒｏｍｅｒｏ，Ｎ．Ｒｕｆｅｒ，ａｎｄ  Ｄ．Ｅ．Ｓｐｅｉｓｅｒ．２０１１．Ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ８−  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ  ｆｒｏｍ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２１：２３５０−２３６０．ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ４６１０２．
Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ，Ｓ．Ｄ．，Ｈ．Ｓｈｉｎ，Ｗ．Ｎ．Ｈａｉｎｉｎｇ，Ｔ．Ｚｏｕ，Ｃ．Ｊ．Ｗｏｒｋｍａｎ，Ａ．Ｐｏｌｌｅｙ，Ｍ．Ｒ．Ｂｅｔｔｓ，Ｇ．Ｊ．Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｄ．Ａ．Ａ．Ｖｉｇｎａｌｉ，ａｎｄ  Ｅ．Ｊ．Ｗｈｅｒｒｙ．２００９．Ｃｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ．１０：２９−３７．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｉ．１６７９．
Ｂｒｏｗｎ，Ｉ．Ｅ．，Ｃ．Ｂｌａｎｋ，Ｊ．Ｋｌｉｎｅ，Ａ．Ｋ．Ｋａｃｈａ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２００６．Ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｓ  ａｎ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｅｒｇｙ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０）．１７７：４５２１−４５２９．
Ｃｌｏｕｔｈｉｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ａ．Ｃ．Ｚｈｏｕ，ａｎｄ  Ｔ．Ｈ．Ｗａｔｔｓ．２０１４．Ａｎｔｉ−ＧＩＴＲ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｃｈｏｒｉｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ  （ＬＣＭＶ），ｔｈｅｒｅｂｙ  ｃｉｒｃｕｍｖｅｎｔｉｎｇ  ＬＣＭＶ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ＧＩＴＲ  ｌｉｇａｎｄ  ｏｎ  ＡＰＣ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９３：５０３３−５０４３．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１４０１００２．
Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ａ．，Ｊ．Ｍ．Ａｎｇｅｌｏｓａｎｔｏ，Ｃ．Ｋａｏ，Ｔ．Ａ．Ｄｏｅｒｉｎｇ，Ｐ．Ｍ．Ｏｄｏｒｉｚｚｉ，Ｂ．Ｅ．Ｂａｒｎｅｔｔ，ａｎｄ  Ｅ．Ｊ．Ｗｈｅｒｒｙ．２０１４．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ＣＤ４（＋）  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．４０：２８９−３０２．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１４．０１．００５．
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ，Ｃ．Ｒ．，Ａ．Ｃｈａｍｐｈｅｋａｒ，Ｍ．Ｖ．Ｔｕｌｌｉｕｓ，Ｂ．Ｊ．Ｄｉｌｌｏｎ，Ａ．Ｚｈｅｎ，Ｊ．Ｒ．ｄｅ  ｌａ  Ｆｕｅｎｔｅ，Ｊ．Ｈｅｒｓｋｏｖｉｔｚ，Ｈ．Ｅｌｓａｅｓｓｅｒ，Ｌ．Ｍ．Ｓｎｅｌｌ，Ｅ．Ｂ．Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｃ．ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ，Ｓ．Ｇ．Ｋｉｔｃｈｅｎ，Ｍ．Ａ．Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ｓ．Ｊ．Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒ，Ｓ．Ｔ．Ｓｍａｌｅ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｂｒｏｏｋｓ．２０１６．Ｔｙｐｅ  Ｉ  ａｎｄ  Ｔｙｐｅ  ＩＩ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｌｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｆａｔｅ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｖｉｒａｌ  Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ．ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．１２：ｅ１００５３５６．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｐａｔ．１００５３５６．
Ｃｕｒｒｉｅｒ，Ｊ．Ｒ．，ａｎｄ  Ｍ．Ａ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ．２００１．Ｓｐｅｃｔｒａｔｙｐｅ／Ｉｍｍｕｎｏｓｃｏｐｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ＴＣＲ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ，ＵＳＡ．９２５４４  ｐｐ．
Ｄｉａｍｏｎｄ，Ｍ．Ｓ．，Ｍ．Ｋｉｎｄｅｒ，Ｈ．Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ，Ｍ．Ｍａｓｈａｙｅｋｈｉ，Ｇ．Ｐ．Ｄｕｎｎ，Ｊ．Ｍ．Ａｒｃｈａｍｂａｕｌｔ，Ｈ．Ｌｅｅ，Ｃ．Ｄ．Ａｒｔｈｕｒ，Ｊ．Ｍ．Ｗｈｉｔｅ，Ｕ．Ｋａｌｉｎｋｅ，Ｋ．Ｍ．Ｍｕｒｐｈｙ，ａｎｄ  Ｒ．Ｄ．Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ．２０１１．Ｔｙｐｅ  Ｉ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｓ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｂｙ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８：１９８９−２００３．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１０１１５８．
Ｄｏｅｒｉｎｇ，Ｔ．Ａ．，Ａ．Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｊ．Ｍ．Ａｎｇｅｌｏｓａｎｔｏ，Ｍ．Ａ．Ｐａｌｅｙ，Ｃ．Ｇ．Ｚｉｅｇｌｅｒ，ａｎｄ  Ｅ．Ｊ．Ｗｈｅｒｒｙ．２０１２．Ｎｅｔｗｏｒｋ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｃｅｎｔｒａｌｌｙ  ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｖｅｒｓｕｓ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．３７：１１３０−１１４４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１２．０８．０２１．
Ｅｖａｒｉｓｔｏ，Ｃ．，Ｓ．Ｓｐｒａｎｇｅｒ，Ｓ．Ｅ．Ｂａｒｎｅｓ，Ｍ．Ｌ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｌ．Ｌ．Ｍｏｌｉｎｅｒｏ，Ｆ．Ｌ．Ｌｏｃｋｅ，Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ，ａｎｄ  Ｍ．−Ｌ．Ａｌｅｇｒｅ．２０１６．Ｃｕｔｔｉｎｇ  Ｅｄｇｅ：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ａｃｔｉｖｅ  ＩＫＫβ  ｉｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｄｒｉｖｅｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９６：２９３３−２９３８．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１５０１１４４．
Ｆａｎ，Ｘ．，Ｓ．Ａ．Ｑｕｅｚａｄａ，Ｍ．Ａ．Ｓｅｐｕｌｖｅｄａ，Ｐ．Ｓｈａｒｍａ，ａｎｄ  Ｊ．Ｐ．Ａｌｌｉｓｏｎ．２０１４．Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＣＯＳ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍａｒｋｅｄｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１１：７１５−７２５．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１３０５９０．
Ｆｏｕｒｃａｄｅ，Ｊ．，Ｚ．Ｓｕｎ，Ｏ．Ｐａｇｌｉａｎｏ，Ｐ．Ｇｕｉｌｌａｕｍｅ，Ｉ．Ｆ．Ｌｕｅｓｃｈｅｒ，Ｃ．Ｓａｎｄｅｒ，Ｊ．Ｍ．Ｋｉｒｋｗｏｏｄ，Ｄ．Ｏｌｉｖｅ，Ｖ．Ｋｕｃｈｒｏｏ，ａｎｄ  Ｈ．Ｍ．Ｚａｒｏｕｒ．２０１２．ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｃａｎ  ｂｅ  ｒｅｎｄｅｒｅｄ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ＢＴＬＡ  ａｎｄ  ＰＤ−１．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７２：８８７−８９６．ｄｏｉ：１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−１１−２６３７．
Ｆｒｉｄｍａｎ，Ｗ．Ｈ．，Ｆ．Ｐａｇｅｓ，Ｃ．Ｓａｕｔｅｓ−Ｆｒｉｄｍａｎ，ａｎｄ  Ｊ．Ｇａｌｏｎ．２０１２．Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｎｔｅｘｔｕｒｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｕｒｓ：ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ．１２：２９８−３０６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｃ３２４５．
Ｆｕｅｒｔｅｓ，Ｍ．Ｂ．，Ａ．Ｋ．Ｋａｃｈａ，Ｊ．Ｋｌｉｎｅ，Ｓ．−Ｒ．Ｗｏｏ，Ｄ．Ｍ．Ｋｒａｎｚ，Ｋ．Ｍ．Ｍｕｒｐｈｙ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２０１１．Ｈｏｓｔ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ＩＦＮ  ｓｉｇｎａｌｓ  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＣＤ８｛ａｌｐｈａ｝＋  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８：２００５−２０１６．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１０１１５９．
Ｇａｊｅｗｓｋｉ，Ｔ．Ｆ．２００７ａ．Ｔｈｅ  ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｕｎｉｖｅｒｓｅ  ｏｆ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２７：１８５−１８７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２００７．０８．００１．
Ｇａｊｅｗｓｋｉ，Ｔ．Ｆ．２００７ｂ．Ｆａｉｌｕｒｅ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｐｈａｓｅ：Ｉｍｍｕｎｅ  Ｂａｒｒｉｅｒｓ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｌｅｖｅｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１３：５２５６−５２６１．ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８−０４３２．ＣＣＲ−０７−０８９２．
Ｇａｊｅｗｓｋｉ，Ｔ．Ｆ．，Ｈ．Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，ａｎｄ  Ｙ．−Ｘ．Ｆｕ．２０１３．Ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：１０１４−１０２２．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｉ．２７０３．
Ｇａｊｅｗｓｋｉ，Ｔ．Ｆ．，Ｙ．Ｍｅｎｇ，Ｃ．Ｂｌａｎｋ，Ｉ．Ｅ．Ｂｒｏｗｎ，Ａ．Ｋ．Ｋａｃｈａ，Ｊ．Ｋｌｉｎｅ，ａｎｄ  Ｈ．Ｈａｒｌｉｎ．２００６．Ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ．１−１５．
Ｇｏｌｄｓｚｍｉｄ，Ｒ．Ｓ．，Ａ．Ｄｚｕｔｓｅｖ，ａｎｄ  Ｇ．Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ．２０１４．Ｈｏｓｔ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ：Ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ  Ｃｏｍｍｏｎａｌｉｔｉｅｓ．Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  ａｎｄ  Ｍｉｃｒｏｂｅ．１５：２９５−３０５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｈｏｍ．２０１４．０２．００３．
Ｇｒｏｓ，Ａ．，Ｐ．Ｆ．Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｘ．Ｙａｏ，Ｙ．Ｆ．Ｌｉ，Ｓ．Ｔｕｒｃｏｔｔｅ，Ｅ．Ｔｒａｎ，Ｊ．Ｒ．Ｗｕｎｄｅｒｌｉｃｈ，Ａ．Ｍｉｘｏｎ，Ｓ．Ｆａｒｉｄ，Ｍ．Ｅ．Ｄｕｄｌｅｙ，Ｋ．−Ｉ．Ｈａｎａｄａ，Ｊ．Ｒ．Ａｌｍｅｉｄａ，Ｓ．Ｄａｒｋｏ，Ｄ．Ｃ．Ｄｏｕｅｋ，Ｊ．Ｃ．Ｙａｎｇ，ａｎｄ  Ｓ．Ａ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ．２０１４．ＰＤ−１  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｔｈｅ  ｐａｔｉｅｎｔ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ８−  ｔｕｍｏｒ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２４：２２４６−２２５９．ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ７３６３９．
Ｈａｌｉｎ，Ｃ．，Ｍ．Ｌ．Ｓｃｉｍｏｎｅ，Ｒ．Ｂｏｎａｓｉｏ，Ｊ．−Ｍ．Ｇａｕｇｕｅｔ，Ｔ．Ｒ．Ｍｅｍｐｅｌ，Ｅ．Ｑｕａｃｋｅｎｂｕｓｈ，Ｒ．Ｌ．Ｐｒｏｉａ，Ｓ．Ｍａｎｄａｌａ，ａｎｄ  Ｕ．Ｈ．ｖｏｎ  Ａｎｄｒｉａｎ．２００５．Ｔｈｅ  Ｓ１Ｐ−ａｎａｌｏｇ  ＦＴＹ７２０  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｈｏｍｉｎｇ  ｖｉａ  ＨＥＶ：Ｔ−ｃｅｌｌ−ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｓ１Ｐ１  ａｍｐｌｉｆｉｅｓ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  Ｐｅｙｅｒ  ｐａｔｃｈｅｓ．Ｂｌｏｏｄ．１０６：１３１４−１３２２．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００４−０９−３６８７．
Ｈａｒｌｉｎ，Ｈ．，Ｔ．Ｖ．Ｋｕｎａ，Ａ．Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｙ．Ｍｅｎｇ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２００６．Ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｅｓｐｉｔｅ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｉｎｆｌｕｘ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ａｓｃｉｔｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５５：１１８５−１１９７．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２６２−００５−０１１８−２．
Ｈａｒｌｉｎ，Ｈ．，Ｙ．Ｍｅｎｇ，Ａ．Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｙ．Ｚｈａ，Ｍ．Ｔｒｅｔｉａｋｏｖａ，Ｃ．Ｓｌｉｎｇｌｕｆｆ，Ｍ．ＭｃＫｅｅ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２００９．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＣＤ８＋  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６９：３０７７−３０８５．ｄｏｉ：１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−０８−２２８１．
Ｈｏｅｌｚｉｎｇｅｒ，Ｄ．Ｂ．，Ｓ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ，Ｎ．Ｍｉｒｚａ，Ａ．Ｌ．Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ，Ｓ．Ｚ．Ｍａｎｒｉｑｕｅ，ａｎｄ  Ｊ．Ｌｕｓｔｇａｒｔｅｎ．２０１０．Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ＣＣＬ１  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｗｉｔｈｏｕｔ  Ａｆｆｅｃｔｉｎｇ  Ｔ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１８４：６８３３−６８４２．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．０９０４０８４．
Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｍ．Ｋ．，Ｄ．Ｍ．Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｊ．Ｍｉｚｕｇｕｃｈｉ，Ｔ．Ｍ．Ｃｈｕｓｅｄ，ａｎｄ  Ｒ．Ｈ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ．１９８７．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｓｔａｔｅ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｈｅｌｐｅｒ  Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｃｌｏｎｅｓ．ＰＮＡＳ．８４：５４０９−５４１３．
Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｌ．Ｃｏｍｐｓ−Ａｇｒａｒ，Ｊ．Ｈａｃｋｎｅｙ，Ｘ．Ｙｕ，Ｍ．Ｈｕｓｅｎｉ，Ｙ．Ｙａｎｇ，Ｓ．Ｐａｒｋ，Ｖ．Ｊａｖｉｎａｌ，Ｈ．Ｃｈｉｕ，Ｂ．Ｉｒｖｉｎｇ，Ｄ．Ｌ．Ｅａｔｏｎ，ａｎｄ  Ｊ．Ｌ．Ｇｒｏｇａｎ．２０１４．Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＴＩＧＩＴ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｎｄ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２６：９２３−９３７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｅｌｌ．２０１４．１０．０１８．
Ｊｏｓｈｉ，Ｎ．Ｓ．，Ｗ．Ｃｕｉ，Ａ．Ｃｈａｎｄｅｌｅ，Ｈ．Ｋ．Ｌｅｅ，Ｄ．Ｒ．Ｕｒｓｏ，Ｊ．Ｈａｇｍａｎ，Ｌ．Ｇａｐｉｎ，ａｎｄ  Ｓ．Ｍ．Ｋａｅｃｈ．２００７．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｄｉｒｅｃｔｓ  Ｍｅｍｏｒｙ  Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ａｎｄ  Ｓｈｏｒｔ−Ｌｉｖｅｄ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ＣＤ８＋  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｆａｔｅｓ  ｖｉａ  ｔｈｅ  Ｇｒａｄｅｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｂｅｔ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２７：２８１−２９５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２００７．０７．０１０．
Ｋａｅｃｈ，Ｓ．Ｍ．，Ｊ．Ｔ．Ｔａｎ，Ｅ．Ｊ．Ｗｈｅｒｒｙ，Ｂ．Ｔ．Ｋｏｎｉｅｃｚｎｙ，Ｃ．Ｄ．Ｓｕｒｈ，ａｎｄ  Ｒ．Ａｈｍｅｄ．２００３．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ７  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｔｈａｔ  ｇｉｖｅ  ｒｉｓｅ  ｔｏ  ｌｏｎｇ−ｌｉｖｅｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：１１９１−１１９８．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｉ１００９．
Ｋｅａｒｓｅ，Ｍ．，Ｒ．Ｍｏｉｒ，Ａ．Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓ．Ｓｔｏｎｅｓ−Ｈａｖａｓ，Ｍ．Ｃｈｅｕｎｇ，Ｓ．Ｓｔｕｒｒｏｃｋ，Ｓ．Ｂｕｘｔｏｎ，Ａ．Ｃｏｏｐｅｒ，Ｓ．Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ，Ｃ．Ｄｕｒａｎ，Ｔ．Ｔｈｉｅｒｅｒ，Ｂ．Ａｓｈｔｏｎ，Ｐ．Ｍｅｉｎｔｊｅｓ，ａｎｄ  Ａ．Ｄｒｕｍｍｏｎｄ．２０１２．Ｇｅｎｅｉｏｕｓ  Ｂａｓｉｃ：ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ａｎｄ  ｅｘｔｅｎｄａｂｌｅ  ｄｅｓｋｔｏｐ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２８：１６４７−１６４９．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｓ１９９．
Ｋｉｍ，Ｊ．−Ｏ．，Ｈ．Ｗ．Ｋｉｍ，Ｋ．−Ｍ．Ｂａｅｋ，ａｎｄ  Ｃ．−Ｙ．Ｋａｎｇ．２００３．ＮＦ−κＢ  ａｎｄ  ＡＰ−１  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＣＤ１３７  （４−１ＢＢ）  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．５４１：１６３−１７０．ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ００１４−５７９３（０３）００３２６−０．
Ｋｌｉｎｅ，Ｊ．，Ｌ．Ｚｈａｎｇ，Ｌ．Ｂａｔｔａｇｌｉａ，Ｋ．Ｓ．Ｃｏｈｅｎ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２０１２．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ１６  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｅｔｔｉｎｇ  ｏｆ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１８８：２６３０−２６４２．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１１００８４５．
Ｋｕｃｈｒｏｏ，Ｖ．Ｋ．，Ａ．Ｃ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，ａｎｄ  Ｃ．Ｐｅｔｒｏｖａｓ．２０１４．Ｃｏｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ＨＩＶ  ａｎｄ  ＡＩＤＳ．９：４３９−４４５．ｄｏｉ：１０．１０９７／ＣＯＨ．００００００００００００００８８．
Ｌａｒｋｉｎ，Ｊ．，Ｆ．Ｓ．Ｈｏｄｉ，ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｗｏｌｃｈｏｋ．２０１５．Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ  ａｎｄ  Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ  ｏｒ  Ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  Ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３７３：１２７０−１２７１．ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭｃ１５０９６６０．
Ｌｉ，Ｓ．，Ｔ．Ｍｉａｏ，Ｍ．Ｓｅｂａｓｔｉａｎ，Ｐ．Ｂｈｕｌｌａｒ，Ｅ．Ｇｈａｆｆａｒｉ，Ｍ．Ｌｉｕ，Ａ．Ｌ．Ｊ．Ｓｙｍｏｎｄｓ，ａｎｄ  Ｐ．Ｗａｎｇ．２０１２．Ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ  Ｅｇｒ２  ａｎｄ  Ｅｇｒ３  ａｒｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．３７：６８５−６９６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１２．０８．００１．
Ｍａｒｔｉｎｅｚ，Ｇ．Ｊ．，Ｒ．Ｍ．Ｐｅｒｅｉｒａ，Ｔ．Ａｉｊｏ，Ｅ．Ｙ．Ｋｉｍ，Ｆ．Ｍａｒａｎｇｏｎｉ，Ｍ．Ｅ．Ｐｉｐｋｉｎ，Ｓ．Ｔｏｇｈｅｒ，Ｖ．Ｈｅｉｓｓｍｅｙｅｒ，Ｙ．Ｃ．Ｚｈａｎｇ，Ｓ．Ｃｒｏｔｔｙ，Ｅ．Ｄ．Ｌａｍｐｅｒｔｉ，Ｋ．Ｍ．Ａｎｓｅｌ，Ｔ．Ｒ．Ｍｅｍｐｅｌ，Ｈ．Ｌaｈｄｅｓｍaｋｉ，Ｐ．Ｇ．Ｈｏｇａｎ，ａｎｄ  Ａ．Ｒａｏ．２０１５．Ｔｈｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  ＮＦＡＴ  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＣＤ８＋  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．４２：２６５−２７８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１５．０１．００６．
Ｏｄｏｒｉｚｚｉ，Ｐ．Ｍ．，Ｋ．Ｅ．Ｐａｕｋｅｎ，Ｍ．Ａ．Ｐａｌｅｙ，Ａ．Ｓｈａｒｐｅ，ａｎｄ  Ｅ．Ｊ．Ｗｈｅｒｒｙ．２０１５．Ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｂｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ＰＤ−１  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｅｘｈａｕｓｔｅｄ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．４３９：ｊｅｍ．２０１４２２３７−１１３７．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１４２２３７．
Ｐａｌａｚｏｎ，Ａ．，Ｉ．Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｆｏｒｅｒｏ，Ａ．Ｔｅｉｊｅｉｒａ，Ａ．Ｍｏｒａｌｅｓ−Ｋａｓｔｒｅｓａｎａ，Ｃ．Ａｌｆａｒｏ，Ｍ．Ｆ．Ｓａｎｍａｍｅｄ，Ｊ．Ｌ．Ｐｅｒｅｚ−Ｇｒａｃｉａ，Ｉ．Ｐｅｎｕｅｌａｓ，Ｓ．Ｈｅｒｖａｓ−Ｓｔｕｂｂｓ，Ａ．Ｒｏｕｚａｕｔ，Ｍ．Ｏ．ｄｅ  Ｌａｎｄａｚｕｒｉ，Ｍ．Ｊｕｒｅ−Ｋｕｎｋｅｌ，Ｊ．Ａｒａｇｏｎｅｓ，ａｎｄ  Ｉ．Ｍｅｌｅｒｏ．２０１２．Ｔｈｅ  ＨＩＦ−１α  ｈｙｐｏｘｉａ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＣＤ１３７  （４−１ＢＢ）  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．２：６０８−６２３．ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１１−０３１４．
Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．Ｍ．２０１２．Ｔｈｅ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．１−１３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｃ３２３９．
Ｐａｕｋｅｎ，Ｋ．Ｅ．，ａｎｄ  Ｅ．Ｊ．Ｗｈｅｒｒｙ．２０１５．Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３６：２６５−２７６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｔ．２０１５．０２．００８．
Ｐｅａｒｃｅ，Ｅ．Ｌ．，Ｍ．Ｃ．Ｐｏｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｃ．Ｈ．Ｃｈａｎｇ，ａｎｄ  Ｒ．Ｇ．Ｊｏｎｅｓ．２０１３．Ｆｕｅｌｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ：ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．
Ｐｌａｉｓｉｅｒ，Ｓ．Ｂ．，Ｒ．Ｔａｓｃｈｅｒｅａｕ，Ｊ．Ａ．Ｗｏｎｇ，ａｎｄ  Ｔ．Ｇ．Ｇｒａｅｂｅｒ．２０１０．Ｒａｎｋ−ｒａｎｋ  ｈｙｐｅｒｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｏｖｅｒｌａｐ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｏｖｅｒｌａｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｇｅｎｅ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３８：ｅ１６９−ｅ１６９．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｑ６３６．
Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ，Ｊ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｊ．Ｌ．Ｓｔｅｉｎ．２０１４．ＲＲＨＯ：Ｔｅｓｔ  ｏｖｅｒｌａｐ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｒａｎｋ−Ｒａｎｋ  Ｈｙｐｅｒｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｔｅｓｔ．
Ｓａｆｆｏｒｄ，Ｍ．，Ｓ．Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．Ａ．Ｌｕｔｚ，Ａ．Ａｌｌｅｎ，Ｃ．−Ｔ．Ｈｕａｎｇ，Ｊ．Ｋｏｗａｌｓｋｉ，Ａ．Ｂｌａｃｋｆｏｒｄ，Ｍ．Ｒ．Ｈｏｒｔｏｎ，Ｃ．Ｄｒａｋｅ，Ｒ．Ｈ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ，ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｐｏｗｅｌｌ．２００５．Ｅｇｒ−２  ａｎｄ  Ｅｇｒ−３  ａｒｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：４７２−４８０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｉ１１９３．
Ｓａｒｋａｒ，Ｓ．，Ｖ．Ｋａｌｉａ，Ｗ．Ｎ．Ｈａｉｎｉｎｇ，Ｂ．Ｔ．Ｋｏｎｉｅｃｚｎｙ，Ｓ．Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｍ，ａｎｄ  Ｒ．Ａｈｍｅｄ．２００８．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｗｉｔｈ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｍｅｍｏｒｙ  ｆａｔｅｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０５：６２５−６４０．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２００７１６４１．
Ｓａｒｒｉｓ，Ｍ．，Ｋ．Ｇ．Ａｎｄｅｒｓｅｎ，Ｆ．Ｒａｎｄｏｗ，Ｌ．Ｍａｙｒ，ａｎｄ  Ａ．Ｇ．Ｂｅｔｚ．２００８．Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ−１  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｔｈｅｉｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２８：４０２−４１３．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２００８．０１．０１２．
Ｓｃｈｉｅｔｉｎｇｅｒ，Ａ．，ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ．２０１４．Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ａｎｄ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ：ｄｅｆｉｎｉｎｇ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３５：５１−６０．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｔ．２０１３．１０．００１．
Ｓｃｈｉｅｔｉｎｇｅｒ，Ａ．，Ｍ．Ｐｈｉｌｉｐ，Ｖ．Ｅ．Ｋｒｉｓｎａｗａｎ，Ｅ．Ｙ．Ｃｈｉｕ，Ｊ．Ｊ．Ｄｅｌｒｏｗ，Ｒ．Ｓ．Ｂａｓｏｍ，Ｐ．Ｌａｕｅｒ，Ｄ．Ｇ．Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔ，Ｓ．Ｅ．Ｋｎｏｂｌａｕｇｈ，Ｇ．Ｊ．Ｈaｍｍｅｒｌｉｎｇ，Ｔ．Ｄ．Ｓｃｈｅｌｌ，Ｎ．Ｇａｒｂｉ，ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ．２０１６．Ｔｕｍｏｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｉｓ  ａ  Ｄｙｎａｍｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ−Ｄｒｉｖｅｎ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ｉｎｉｔｉａｔｅｄ  Ｅａｒｌｙ  ｄｕｒｉｎｇ  Ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１６．０７．０１１．
Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｈ．２００３．Ｔ  Ｃ  ＥＬＬＡ  ＮＥＲＧＹ＊．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：３０５−３３４．ｄｏｉ：１０．１１４６／ａｎｎｕｒｅｖ．ｉｍｍｕｎｏｌ．２１．１２０６０１．１４１１１０．
Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｈ．，Ｄ．Ｌ．Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｍ．Ｋ．Ｊｅｎｋｉｎｓ，ａｎｄ  Ｈ．Ｑｕｉｌｌ．１９８９．Ｔ−ｃｅｌｌ  ｃｌｏｎａｌ  ａｎｅｒｇｙ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５４  Ｐｔ  ２：６０５−６１０．
Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｐ．，Ａ．Ｍａｒｋｉｅｌ，Ｏ．Ｏｚｉｅｒ，Ｎ．Ｓ．Ｂａｌｉｇａ，Ｊ．Ｔ．Ｗａｎｇ，Ｄ．Ｒａｍａｇｅ，Ｎ．Ａｍｉｎ，Ｂ．Ｓｃｈｗｉｋｏｗｓｋｉ，ａｎｄ  Ｔ．Ｉｄｅｋｅｒ．２００３．Ｃｙｔｏｓｃａｐｅ：ａ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｎｅｔｗｏｒｋｓ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３：２４９８−２５０４．ｄｏｉ：１０．１１０１／ｇｒ．１２３９３０３．
Ｓｎｅｌｌ，Ｌ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｂｒｏｏｋｓ．２０１５．Ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：９１−９８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｏｉ．２０１５．０３．００２．
Ｓｐｉｏｔｔｏ，Ｍ．Ｔ．，Ｐ．Ｙｕ，Ｄ．Ａ．Ｒｏｗｌｅｙ，Ｍ．Ｉ．Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｓ．Ｃ．Ｍｅｒｅｄｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ，Ｙ．−Ｘ．Ｆｕ，ａｎｄ  Ｈ．Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ．２００２．Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  Ｔｕｍｏｒ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ  “Ｉｇｎｏｒａｎｃｅ”  ｔｏ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ  ｖｉａ  Ｃｒｏｓｓｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｓｔｒｏｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１７：７３７−７４７．ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ１０７４−７６１３（０２）００４８０−６．
Ｓｐｒａｎｇｅｒ，Ｓ．，Ｈ．Ｋ．Ｋｏｂｌｉｓｈ，ａｎｄ  Ｂ．Ｈｏｒｔｏｎ．２０１４ａ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｄｏｕｂｌｅｔｓ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４，ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１，ｏｒ  ＩＤＯ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｓ  ｒｅｓｔｏｒｅｄ  ＩＬ−２  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  …．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  …．
Ｓｐｒａｎｇｅｒ，Ｓ．，Ｈ．Ｋ．Ｋｏｂｌｉｓｈ，Ｂ．Ｈｏｒｔｏｎ，Ｐ．Ａ．Ｓｃｈｅｒｌｅ，Ｒ．Ｎｅｗｔｏｎ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２０１４ｂ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｄｏｕｂｌｅｔｓ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４，ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１，ｏｒ  ＩＤＯ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｓ  ｒｅｓｔｏｒｅｄ  ＩＬ−２  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｄｉｒｅｃｔｌｙ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ．２：３．ｄｏｉ：１０．１１８６／２０５１−１４２６−２−３．
Ｓｐｒａｎｇｅｒ，Ｓ．，Ｒ．Ｍ．Ｓｐａａｐｅｎ，Ｙ．Ｚｈａ，Ｊ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｙ．Ｍｅｎｇ，Ｔ．Ｔ．Ｈａ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２０１３．Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ１，ＩＤＯ，ａｎｄ  Ｔｒｅｇｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  Ｉｓ  Ｄｒｉｖｅｎ  ｂｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．５：２００ｒａ１１６−２００ｒａ１１６．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．３００６５０４．
Ｓｕｍｉｔｏｍｏ，Ｓ．，Ｋ．Ｆｕｊｉｏ，Ｔ．Ｏｋａｍｕｒａ，ａｎｄ  Ｋ．Ｙａｍａｍｏｔｏ．２０１３．Ｅｇｒ２  ａｎｄ  Ｅｇｒ３  ａｒｅ  ｔｈｅ  ｕｎｉｑｕｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｊａｋ−ｓｔａｔ．２：ｅ２３９５２．ｄｏｉ：１０．４１６１／ｊｋｓｔ．２３９５２．
Ｔｕｍｅｈ，Ｐ．Ｃ．，Ｃ．Ｌ．Ｈａｒｖｉｅｗ，Ｊ．Ｈ．Ｙｅａｒｌｅｙ，Ｉ．Ｐ．Ｓｈｉｎｔａｋｕ，Ｅ．Ｊ．Ｍ．Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｒｏｂｅｒｔ，Ｂ．Ｃｈｍｉｅｌｏｗｓｋｉ，Ｍ．Ｓｐａｓｉｃ，Ｇ．Ｈｅｎｒｙ，Ｖ．Ｃｉｏｂａｎｕ，Ａ．Ｎ．Ｗｅｓｔ，Ｍ．Ｃａｒｍｏｎａ，Ｃ．Ｋｉｖｏｒｋ，Ｅ．Ｓｅｊａ，Ｇ．Ｃｈｅｒｒｙ，Ａ．Ｊ．Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ，Ｔ．Ｒ．Ｇｒｏｇａｎ，Ｃ．Ｍａｔｅｕｓ，Ｇ．Ｔｏｍａｓｉｃ，Ｊ．Ａ．Ｇｌａｓｐｙ，Ｒ．Ｏ．Ｅｍｅｒｓｏｎ，Ｈ．Ｒｏｂｉｎｓ，Ｒ．Ｈ．Ｐｉｅｒｃｅ，Ｄ．Ａ．Ｅｌａｓｈｏｆｆ，Ｃ．Ｒｏｂｅｒｔ，ａｎｄ  Ａ．Ｒｉｂａｓ．２０１４．ＰＤ−１  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ．５１５：５６８−５７１．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１３９５４．
Ｔｗｙｍａｎ−Ｓａｉｎｔ  Ｖｉｃｔｏｒ，Ｃ．，Ａ．Ｊ．Ｒｅｃｈ，Ａ．Ｍａｉｔｙ，Ｒ．Ｒｅｎｇａｎ，Ｋ．Ｅ．Ｐａｕｋｅｎ，Ｅ．Ｓｔｅｌｅｋａｔｉ，Ｊ．Ｌ．Ｂｅｎｃｉ，Ｂ．Ｘｕ，Ｈ．Ｄａｄａ，Ｐ．Ｍ．Ｏｄｏｒｉｚｚｉ，Ｒ．Ｓ．Ｈｅｒａｔｉ，Ｋ．Ｄ．Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ，Ｄ．Ｐａｔｓｃｈ，Ｒ．Ｋ．Ａｍａｒａｖａｄｉ，Ｌ．Ｍ．Ｓｃｈｕｃｈｔｅｒ，Ｈ．Ｉｓｈｗａｒａｎ，Ｒ．Ｍｉｃｋ，Ｄ．Ａ．Ｐｒｙｍａ，Ｘ．Ｘｕ，Ｍ．Ｄ．Ｆｅｌｄｍａｎ，Ｔ．Ｃ．Ｇａｎｇａｄｈａｒ，Ｓ．Ｍ．Ｈａｈｎ，Ｅ．Ｊ．Ｗｈｅｒｒｙ，Ｒ．Ｈ．Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ，ａｎｄ  Ａ．Ｊ．Ｍｉｎｎ．２０１５．Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｕａｌ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ｎｏｎ−ｒｅｄｕｎｄａｎｔ  ｉｍｍｕｎｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ．５２０：３７３−３７７．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１４２９２．
Ｖｅｓｅｌｙ，Ｍ．Ｄ．，Ｍ．Ｈ．Ｋｅｒｓｈａｗ，Ｒ．Ｄ．Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｓｍｙｔｈ．２０１１．Ｎａｔｕｒａｌ  Ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  Ｃａｎｃｅｒ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２３５−２７１．ｄｏｉ：１０．１１４６／ａｎｎｕｒｅｖ−ｉｍｍｕｎｏｌ−０３１２１０−１０１３２４．
Ｗａｕｇｈ，Ｋ．Ａ．，Ｓ．Ｍ．Ｌｅａｃｈ，Ｂ．Ｌ．Ｍｏｏｒｅ，Ｔ．Ｃ．Ｂｒｕｎｏ，Ｊ．Ｄ．Ｂｕｈｒｍａｎ，ａｎｄ  Ｊ．Ｅ．Ｓｌａｎｓｋｙ．２０１６．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ８＋  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｈｙｐｏｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｂｌｅ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｏｄｅｌ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１９７：１４７７−１４８８．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１６００５８９．
Ｗｈｅｒｒｙ，Ｅ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｍ．Ｋｕｒａｃｈｉ．２０１５．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：４８６−４９９．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ３８６２．
Ｗｈｅｒｒｙ，Ｅ．Ｊ．，Ｓ．−Ｊ．Ｈａ，Ｓ．Ｍ．Ｋａｅｃｈ，Ｗ．Ｎ．Ｈａｉｎｉｎｇ，Ｓ．Ｓａｒｋａｒ，Ｖ．Ｋａｌｉａ，Ｓ．Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｍ，Ｊ．Ｎ．Ｂｌａｔｔｍａｎ，Ｄ．Ｌ．Ｂａｒｂｅｒ，ａｎｄ  Ｒ．Ａｈｍｅｄ．２００７．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｖｉｒａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２７：６７０−６８４．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２００７．０９．００６．
Ｗｕ，Ｘ．，Ｈ．Ｚｈａｎｇ，Ｑ．Ｘｉｎｇ，Ｊ．Ｃｕｉ，Ｊ．Ｌｉ，Ｙ．Ｌｉ，Ｙ．Ｔａｎ，ａｎｄ  Ｓ．Ｗａｎｇ．２０１４．ＰＤ−１（＋）  ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｒｅ  ｅｘｈａｕｓｔｅｄ  ｉｎ  ｔｕｍｏｕｒｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎ  ｄｒａｉｎｉｎｇ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅｓ  ｏｆ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．１１１：１３９１−１３９９．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｂｊｃ．２０１４．４１６．
Ｚａｊａｃ，Ａ．Ｊ．，Ｊ．Ｎ．Ｂｌａｔｔｍａｎ，Ｋ．Ｍｕｒａｌｉ−Ｋｒｉｓｈｎａ，Ｄ．Ｊ．Ｓｏｕｒｄｉｖｅ，Ｍ．Ｓｕｒｅｓｈ，Ｊ．Ｄ．Ａｌｔｍａｎ，ａｎｄ  Ｒ．Ａｈｍｅｄ．１９９８．Ｖｉｒａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｖａｓｉｏｎ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：２２０５−２２１３．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．１８８．１２．２２０５．
Ｚｈａ，Ｙ．，Ｒ．Ｍａｒｋｓ，Ａ．Ｗ．Ｈｏ，Ａ．Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｓ．Ｊａｎａｒｄｈａｎ，Ｉ．Ｂｒｏｗｎ，Ｋ．Ｐｒａｖｅｅｎ，Ｓ．Ｓｔａｎｇ，Ｊ．Ｃ．Ｓｔｏｎｅ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２００６．Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｅｒｇｙ  ｉｓ  ｒｅｖｅｒｓｅｄ  ｂｙ  ａｃｔｉｖｅ  Ｒａｓ  ａｎｄ  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｋｉｎａｓｅ−ａｌｐｈａ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１１６６−１１７３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｉ１３９４．
Ｚｈａｎｇ，Ｌ．，Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ，ａｎｄ  Ｊ．Ｋｌｉｎｅ．２００９．ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｍｏｄｅｌ．Ｂｌｏｏｄ．１１４：１５４５−１５５２．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００９−０３−２０６６７２．
Ｚｈｅｎｇ，Ｙ．，Ｙ．Ｚｈａ，Ｇ．Ｄｒｉｅｓｓｅｎｓ，Ｆ．Ｌｏｃｋｅ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２０１２．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｅａｒｌｙ  ｇｒｏｗｔｈ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｇｅｎｅ  ２  （Ｅｇｒ２）  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｅｒｇｙ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０９：２１５７−２１６３．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１２０３４２．
Ｚｈｅｎｇ，Ｙ．，Ｙ．Ｚｈａ，Ｒ．Ｍ．Ｓｐａａｐｅｎ，Ｒ．Ｍａｔｈｅｗ，Ｋ．Ｂａｒｒ，Ａ．Ｂｅｎｄｅｌａｃ，ａｎｄ  Ｔ．Ｆ．Ｇａｊｅｗｓｋｉ．２０１３．Ｅｇｒ２−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ａｎｄ  ＣｈＩＰ−Ｓｅｑ  ｒｅｖｅａｌ  ｎｏｖｅｌ  ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｅｒｇｙ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５：２８３−２９１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２０１３．０３．００６．
【図１Ａ】
2020505342.tif 000084
【図１Ｂ】
2020505342.tif 000085
【図１Ｃ】
2020505342.tif 000086
【図１Ｄ】
2020505342.tif 000087
【図１Ｅ】
2020505342.tif 000088
【図１Ｆ】
2020505342.tif 000089
【図１Ｇ】
2020505342.tif 000090
【図１Ｈ】
2020505342.tif 000091
【図１Ｉ】
2020505342.tif 000092
【図１Ｊ】
2020505342.tif 000093
【図２Ａ】
2020505342.tif 000094
【図２Ｂ】
2020505342.tif 000095
【図２Ｃ】
2020505342.tif 000096
【図２Ｄ】
2020505342.tif 000097
【図２Ｅ】
2020505342.tif 000098
【図２Ｆ】
2020505342.tif 000099
【図２Ｇ】
2020505342.tif 000100
【図３Ａ】
2020505342.tif 000101
【図３Ｂ】
2020505342.tif 000102
【図３Ｃ】
2020505342.tif 000103
【図３Ｄ】
2020505342.tif 000104
【図３Ｅ】
2020505342.tif 000105
【図３Ｆ】
2020505342.tif 000106
【図３Ｇ】
2020505342.tif 000107
【図３Ｈ】
2020505342.tif 000108
【図４Ａ】
2020505342.tif 000109
【図４Ｂ】
2020505342.tif 000110
【図４Ｃ】
2020505342.tif 000111
【図４Ｄ】
2020505342.tif 000112
【図４Ｅ】
2020505342.tif 000113
【図４Ｆ】
2020505342.tif 000114
【図４Ｇ】
2020505342.tif 000115
【図５Ａ】
2020505342.tif 000116
【図５Ｂ】
2020505342.tif 000117
【図５Ｃ】
2020505342.tif 000118
【図５Ｄ】
2020505342.tif 000119
【図５Ｅ】
2020505342.tif 000120
【図６Ａ−１】
2020505342.tif 000121
【図６Ａ−２】
2020505342.tif 000122
【図６Ｂ−１】
2020505342.tif 000123
【図６Ｂ−２】
2020505342.tif 000124
【図６Ｃ−１】
2020505342.tif 000125
【図６Ｃ−２】
2020505342.tif 000126
【図６Ｃ−３】
2020505342.tif 000127
【図６Ｃ−４】
2020505342.tif 000128
【図６Ｃ−５】
2020505342.tif 000129
【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ−１】
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【図１０Ａ−２】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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