(57)【要約】本開示は、ドナーに由来する生物学的試料、特にアフェレーシス試料からの細胞を極低温で保管することを含む方法に関し、ここで、これらの細胞は、少なくとも１つのステップを含む段階的な凍結プロファイルを使用する制御された速度で凍結装置で凍結され、ここで上記試料および／またはチャンバは、１分あたり１℃を超える速度で冷却され、そしてここで上記細胞は、Ｔ細胞を含むかＴ細胞について濃縮され得る。さらなる態様は、例えば、細胞が上記ドナーから得られる時点、保管時間、極低温凍結の前または後保管施設へ細胞を輸送すること、上記細胞を分類するためのコードまたは識別子で印を付けられている試料容器、上記極低温で凍結された細胞から生成された操作Ｔ細胞を含む治療有効量の組成物をそれを必要とする対象に投与すること、および疾患、特にがんに対する上記ドナーの処置に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であって、
前記細胞が、前記ドナーが疾患または状態であると診断された後、またはそれを有するかもしくはそれを有する疑いがあるとみなされた後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の１つまたは複数の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られ、
前記細胞が、前記試料および／またはチャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用して、制御された速度の凍結装置において、凍結される、方法。
【請求項２】
ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であって、前記細胞が、前記ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされた後、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られている、方法。
【請求項３】
ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であって、前記細胞が、前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されていないか、またはそれを有することが判明していないか、またはそれを有することが疑われていない時点で、前記ドナーから得られており、
前記細胞が、前記試料および／またはチャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用して、制御された速度の凍結装置において、凍結される、方法。
【請求項４】
−  ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
−  前記極低温で凍結させた細胞を、ある期間保管することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られるかまたは得られたものであり、
前記保管の期間中に、前記ドナーが、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【請求項５】
−  ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
−  前記極低温で凍結させた細胞を、ある期間保管することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られるかまたは得られたものであり、
前記細胞が、以下を上回るかもしくは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、もしくは４０年間、または前記ドナーが前記細胞を必要とするまで、極低温で保管される、方法。
【請求項６】
−  ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、
−  前記極低温で凍結させた細胞から生成された操作Ｔ細胞を含む、治療有効量の組成物を、それを必要とする対象に投与することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られるかまたは得られたものであり、
前記凍結と投与との間に、前記ドナーが、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【請求項７】
−  ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させ、それによって、極低温で凍結させた細胞組成物を生成することと、
−  前記極低温で凍結させた細胞組成物の細胞を操作して、操作Ｔ細胞を含む組成物を生成することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから得られるかまたは得られたものであり、
前記凍結と操作との間に、前記ドナーが、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【請求項８】
治療有効量の操作Ｔ細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、処置の方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記対象が疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記対象が前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記対象が疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記対象が前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記対象から得られるかまたは得られたものであり、
前記細胞が、前記対象から得られるかもしくは得られた後、かつ前記操作Ｔ細胞の前記投与の前に、前記対象が、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【請求項９】
操作細胞の組成物を産生するための方法であって、
−  極低温で保管した細胞を得て、必要に応じて解凍することと、
−  前記極低温で保管した細胞に、組換え受容体を導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む操作組成物を生成することと
を含む方法であって、
前記細胞が、（ｉ）前記ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）前記ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または前記処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ前記ドナーが前記疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、前記ドナーから採取した後に、極低温で保管され、
極低温保管の後および前記極低温で保管した細胞を得る前に、前記ドナーが、前記疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【請求項１０】
前記生物学的試料が、アフェレーシス試料であるかまたはそれに由来し、必要に応じて白血球アフェレーシス試料であるかまたはそれに由来し、かつ／または前記試料が、白血球および／またはリンパ球を含有し、かつ／または前記試料中の前記細胞または血液細胞が、白血球から本質的になるか、または前記試料中の前記細胞のうちの少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％、または前記試料中の前記血液細胞のうちの少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％が、白血球である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞集団および／またはＴ細胞集団および／またはＴ細胞サブセットの、免疫親和性に基づくおよび／または標的特異的な選択および／または濃縮のステップに供されていない、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞および／またはＴ細胞集団の、免疫親和性に基づくおよび／または標的特異的な選択および／または濃縮ステップに供されており、必要に応じて、前記極低温保管の前に、前記選択または濃縮を行うことをさらに含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記選択ステップおよび／または濃縮が、免疫親和性に基づく選択を含む、および／または陽性選択もしくは陰性選択を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記選択ステップおよび／または濃縮が、ＣＤ４＋細胞もしくはそのサブセットおよび／またはＣＤ８＋細胞もしくはそのサブセットの濃縮および／または単離を含み、前記ＣＤ４＋細胞またはそのサブセットの濃縮または単離が、前記ＣＤ８＋細胞またはそのサブセットの前記選択および／または単離とは別個にまたはそれと組み合わせてのいずれかで行われ、
必要に応じて、前記ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／または前記ＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、請求項１２〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記細胞が、Ｔ細胞を含むか、またはＴ細胞が濃縮されている、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物を含むか、またはそれらが濃縮されており、前記ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／または前記ＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞を極低温で保管する前に、前記細胞を、極低温保存媒体と合わせることをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記極低温保存媒体が、約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および血清タンパク質、必要に応じて、ヒト血清アルブミン、必要に応じて、約４％のヒト血清アルブミンを含む、ならびに／または凍結溶液および／もしくは前記最終濃度の生物学的試料が、約１体積％〜約２０体積％、約３体積％〜約９体積％、もしくは約６体積％〜約９体積％のＤＭＳＯを含む、および／もしくは約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％のＤＭＳＯを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記極低温保管が、１分間につき１℃または約１℃の速度で、必要に応じて、温度が−８０℃または約−８０℃に達するまで、温度を低下させることを含む、請求項２または４〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記細胞が、液体窒素の気相に入れた容器において極低温で保管され、前記容器が、必要に応じて、バッグまたはバイアルである、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記細胞が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、極低温で保管される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記細胞が、ある期間保管され、前記期間の後、前記組成物中の生存細胞もしくは生存Ｔ細胞またはそれらのサブタイプもしくはサブセットの割合が、約２４％〜約１００％であるか、または少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、もしくは９０％である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記疾患が、がん、炎症性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または感染性疾患もしくは状態である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記がんが、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞性白血病、急性リンパ球性白血病、ｎｕｌｌ型急性リンパ芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、または急性骨髄性白血病である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記がんが、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、およびサイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）のうちの少なくとも１つを発現する細胞を含む、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記処置が、化学療法、放射線照射、外科手術、細胞療法である、および／またはデバルキング処置である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記処置が、以下の処置：シクロホスファミド、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、ムスチン、ビンクリスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ダカルバジン、エトポシド、シスプラチン、エピルビシン、カペシタビン、フォリン酸、オキサリプラチン、小分子阻害剤、免疫細胞、ナチュラルキラー細胞、リンホカイン活性化キラー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、樹状細胞、４０００ｃＧｙ照射、自家幹細胞救援、幹細胞移植、骨髄移植、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法、チサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル、シタラビン、高用量シタラビン、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、イダルビシン、クラドリビン、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイド、コルチコステロイド、プレドニゾン、デキサメタゾン、アルキル化剤、クロラムブシル、ベンダムスチン、イホスファミド、白金薬物、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、プリン類似体、フルダラビン、ペントスタチン、クラドリビン、抗代謝薬、ゲムシタビン、メトトレキサート、プララトレキサート、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プロテアソーム阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ロミデプシン、ベリノスタット、キナーゼ阻害剤、イブルチニブ、イデラリシブ、抗体、抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、イブリツモマブチウキセタン、抗ＣＤ５２抗体、アレムツズマブ、抗ＣＤ３０抗体、ブレンツキシマブ、ベドチン、インターフェロン、免疫調節剤、サリドマイド、ＣＨＯＰ、ＣＨＯＰ＋Ｒ（もしくはＲ−ＣＨＯＰ）、ＣＶＰ、ＥＰＯＣＨ、ＥＰＯＣＨ＋Ｒ、ＤＨＡＰ、ＤＨＡＰ＋Ｒ（もしくはＲ−ＤＨＡＰ）、ベネトクラックス、メチルプレドニゾロン、またはブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤（ＢＴＫｉ）のうちの１つまたは複数を、単独または組合せで含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ドナーまたは対象が、ヒトである、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
極低温保管の前に、前記細胞を、必要に応じて、１つまたは複数の表現型マーカーについて、前記細胞の表面発現を評価することによって、分析することをさらに含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞の極低温保管および／または解凍の後に、組換えまたは外因性分子を発現するように前記細胞を操作することをさらに含み、これが、必要に応じて、組換えタンパク質、必要に応じて、組換え受容体であり、これが、必要に応じて、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ受容体、および／またはキメラ抗原受容体であるか、またはそれらを含む、請求項１〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記組換え分子が、前記疾患または状態と関連する細胞によって発現されるか、またはそれによって特異的に発現される抗原を、特異的に認識するか、またはそれに特異的に結合する組換え受容体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ドナーもしくは対象から収集されたとき、および／または前記アフェレーシス試料中の合計の、前記細胞の数が、以下の数もしくはおよそ以下の数であるか、または以下の数もしくはおよそ以下の数を上回らない、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法：５００×１０６個、１０００×１０６個、２０００×１０６個、３０００×１０６個、４０００×１０６個、もしくは５０００×１０６個、またはそれよりも多くの合計細胞もしくは合計有核細胞。
【請求項３４】
前記試料を極低温で保管する前に、前記試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが濃縮されており、必要に応じて、前記ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／または前記ＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、ならびに／または前記試料が、バルクＴ細胞が濃縮されている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記試料を極低温で保管する前に、前記試料を極低温媒体において製剤化することをさらに含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記細胞を、極低温で凍結する前または凍結した後のいずれかで、保管施設に輸送することをさらに含む、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記保管施設が、中央または共通のリポジトリの保管施設である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記試料が、低温環境において、前記保管施設に輸送される、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
輸送した後、かつ前記細胞を極低温で保管する前に、前記試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、請求項３６〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが濃縮されており、必要に応じて、前記ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／または前記ＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、ならびに／またはバルクＴ細胞を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
輸送した後、かつ前記細胞を極低温で保管する前に、前記試料および／または前記Ｔ細胞を、極低温媒体において製剤化することをさらに含む、請求項４０または請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記試料が、処理、極低温保存、および／または保管の間、前記細胞を分類するために、１つまたは複数のコードまたは識別子で印を付けた容器に入れられる、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記１つまたは複数のコードまたは識別子が、文字識別子、バーコード、ＱＲコード（登録商標）、ＲＦＩＤ、またはトランスポンダを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記１つまたは複数のコードまたは識別子が、前記ドナー、前記試料、前記バイアル、前記容器、前記疾患、および／または前記保管施設のうちの１つまたは複数の識別に対応するか、またはそれを示す、請求項４４または請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記１つまたは複数のコードまたは識別子が、患者識別のブレスレットまたは病院もしくは医療施設もしくは収集施設のシステムもしくは書類に出現するコードに対応する、請求項４４〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
処置の方法であって、
請求項１〜４７のいずれか１項に記載の方法によって、極低温で保管された細胞を得て、必要に応じて解凍することであって、前記得ることの前に、前記細胞が、少なくとも１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間の期間、極低温で保管されていることと、
組換え受容体を、前記刺激した組成物に導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む操作組成物を生成することと、
前記細胞を対象に投与することと
を含む、方法。
【請求項４９】
前記処置が、前記操作Ｔ細胞または前記極低温で凍結した組成物の細胞を含まない、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願情報
本出願は、２０１７年３月１４日に出願された米国仮特許出願番号第６２／４７１，３４３号に基づく優先権を主張しており、その全体の内容は、参考として本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００２】
概要
細胞療法は、治療目的を達成するために、細胞をレシピエントに投与する技法である。任意の所与のレシピエントについて、投与される細胞は、別の人物を起源とするものであってもよく、またはレシピエント自身を起源とするものであってもよい。後者の事例は、自家細胞療法と称される場合があり、すなわち、細胞が収集されたレシピエントへと細胞を戻して投与することである。自家細胞療法の利点としては、細胞を収集したドナーが、レシピエントであるため、レシピエントの身体が、投与された細胞を拒絶する可能性が低減されることを挙げることができる。
【０００３】
細胞療法に関して、細胞をいつどのようにしてドナーから収集するか、ならびに収集後および投与前に細胞をどのように処置するかにより、治療法の有効性および利用可能性、たとえば、必要となった場合に細胞をどれほど迅速にレシピエントに投与することができるかが、影響を受け得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
これらの目的で、細胞および細胞組成物の極低温保管、ならびに／またはそれらの操作および／もしくは対象、たとえば、レシピエントへの投与のための方法、システム、および組成物、ならびに製品が、提供される。一部の態様では、これらの実施形態の利点には、とりわけ、細胞療法の利用可能性、有効性、および／または他の側面を強化することがある。方法は、さらに、または代替として、ドナーから収集された細胞を使用する他の医療プロセスまたは研究プロセスに、利益をもたらし得る。
【０００５】
一部の態様では、本開示は、細胞の極低温保管、処理、操作、および投与の方法、ならびに患者が細胞療法を必要とする前に収集され、将来的な使用のための極低温保存されたアフェレーシスが関与する、関連する物品、組成物、およびシステムに関する。
【０００６】
一部の態様では、本開示の細胞および組成物、ならびに製品は、たとえば、ドナーおよび／または別のレシピエントなどにおいて、疾患または状態の後続の治療的処置に使用することができるものである。一部の実施形態では、方法は、ドナーの血液に由来する細胞を極低温で保管することを伴う。極低温で保管した細胞は、一部の実施形態では、次いで、疾患または状態を処置するための細胞療法に使用され得る。
【０００７】
一部の実施形態では、細胞は、ドナーが疾患または状態であると診断された後、かつドナーが以下の：疾患もしくは状態の任意の初回処置、疾患もしくは状態の処置のための任意の標的化処置もしくはそれを対象とする任意の処置、または放射線照射および／もしくは化学療法以外の任意の処置のうちの１つまたは複数を受ける前に、収集される。一部の実施形態では、細胞は、疾患の初回処置の後の疾患の１回目の再発の後、かつドナーまたは対象が疾患の後続の処置を受ける前に、収集される。初回および／または後続の処置は、ある特定の実施形態によると、細胞療法以外の治療法であり得る。一部の実施形態では、収集された細胞は、初回および／または後続の処置の後に、細胞療法において使用され得る。
【０００８】
一部の実施形態では、細胞は、疾患の第２の処置過程の後の疾患の２回目の再発の後、かつドナーまたは対象が疾患の後続の処置を受ける前に、収集される。一部の実施形態では、患者は、たとえば、ある特定のリスク因子を評価することによって、第２の処置過程の後に、再発する可能性が高いと識別される。一部の実施形態では、リスク因子は、疾患の種類および／または遺伝学、たとえば、ダブルヒットリンパ腫、原発性難治性がん、または活性化Ｂ細胞リンパ腫に基づく。一部の実施形態では、リスク因子は、臨床症状、たとえば、第１の処置過程の後の早期再発、または処置後の予後の悪さを示すその他のもの（たとえば、ＩＰＩが２を上回る）に基づく。
【０００９】
一部の実施形態では、細胞は、ドナーまたは対象が疾患と診断される前に収集される。一部の態様では、ドナーまたは対象は、疾患を発症するリスクがあると判定され得るか、または疾患を発症するリスクがあるとみなされることも疾患と診断されることもないが、寿命の後期に細胞療法が必要となった場合のために細胞を貯蔵もしくは保管することを選択する可能性がある。一部の実施形態では、ドナーまたは対象は、遺伝子の変異、遺伝子の異常、遺伝子の破壊、家族の病歴、タンパク質の異常（たとえば、タンパク質産生および／もしくはプロセシングの欠如）、ならびに疾患を発症するリスクを増加させ得る生活スタイルの選択などの因子に基づいて、疾患を発症するリスクがあるとみなされ得る。一部の実施形態では、細胞は、予防として収集される。
【００１０】
一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、または４８時間、保管もしくは貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１週間、２週間、３週間、または４週間、保管または貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、長期保管または長期貯蔵される。一部の態様では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、４０年間、またはそれを上回る期間、保管される。
【００１１】
本開示はまた、一部の態様では、アフェレーシス試料を処理する方法にも関する。一部の実施形態では、方法は、ドナーから取得されたアフェレーシス試料を、低温環境で、保管施設に輸送すること、および保管施設において、アフェレーシス試料を極低温で保管することを伴う。一部の実施形態では、輸送する前に、試料は、たとえば、Ｔ細胞、たとえば、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を選択することによって、処理される。一部の実施形態では、そのような処理は、試料を輸送した後、かつ試料を極低温で保管する前に、行われる。一部の実施形態では、処理は、極低温での保管後、試料を解凍した後に行われる。
【００１２】
一部の実施形態では、記載される実施形態による方法の利点としては、細胞療法の効率性および／または有効性の改善が挙げられる。ドナー、したがってドナーの細胞が、疾患の広範囲な処置を受けていない段階、および／または疾患もしくは状態もしくはその診断が行われる前の段階で、ドナーが細胞を保管することを可能にすることにより、そのような細胞は、１回の処置または複数回の処置の後に採取された細胞と比較して、細胞療法における使用について、ある特定の利点を有し得る。たとえば、１回または複数回の処置の前に採取した細胞は、複数回の処置を受けた後の細胞よりも、より健康であり得る、より高いレベルのある特定の細胞活性を示し得る、より急速に成長し得る、および／または遺伝子操作に対してより受容性があり得る。本明細書に記載される実施形態による利点の別の例としては、利便性を挙げることができる。たとえば、細胞が細胞療法に必要とされる前にドナーの細胞を収集し、必要に応じて処理し、保管することによって、細胞は、レシピエントが、後の時点でそれらを必要とした場合および必要としたときに、容易に利用することができるであろう。これにより、アフェレーシスラボの能力が増加し得、技師に提供されるアフェレーシス収集プロセスのスケジュール決定の柔軟性がより大きくなる。
【００１３】
一部の実施形態では、細胞および／または組成物および／または製品、たとえば、細胞を含有する容器（たとえば、細胞バイアルまたはバッグ）には、たとえば、処理、極低温保存、および／または保管、たとえば、長期保管の際の細胞および試料の分類のために、１つまたは複数のコードまたは他の識別子で印が付けられる。一部の実施形態では、システムおよび物品には、それぞれが、極低温保存された細胞組成物、たとえば、提供される方法の実施形態に従って生成されたものを含む、複数の容器が含まれ、ここで、複数の容器のそれぞれは、異なるドナーから得られた極低温保存試料を含有する。一部の実施形態では、容器には、ドナー、試料、組成物、バイアル、容器、状態、疾患、収集施設、病院、および／またはレシピエントのうちの１つまたは複数の識別に対応するかまたはそれを示す、１つまたは複数の識別子、たとえば、バーコード、無線周波数識別（ＲＦＩＤ）タグ、または他の識別子で、印が付けられる。一部の態様では、容器に含まれるかまたは容器に貼付される追加の情報には、アフェレーシス収集および／もしくは極低温保存の日付、ならびに／または消費期限、ならびに／または貯蔵所もしくは保管施設内の場所に関する情報が含まれる。一部の実施形態では、コードは、患者識別のブレスレットまたは病院または医療施設もしくは収集施設のシステムもしくは書類、たとえば、ドナーもしくは関連施設に出現するコードに対応する。
【００１４】
好適なコード付けまたは印付けの方法またはシステムとしては、光、電子、または磁気を用いて読み取ることができる、印刷、磁気、または電子形態のタグを使用してコードすること、たとえば、バーコード、ＱＲコード（登録商標）、ＲＦＩＤ、またはトランスポンダ、たとえば、光活性化マイクロトランスポンダ、固有の３０ビットの読取り専用識別コードを保管し、光放出リーダデバイスで電力供給し、取り出すと、無線周波数シグナルとしてコードを放出する、低コストのシリコンデバイスが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、処理の構成要素（試料収集チューブ、細胞精製の構成要素、細胞の培養および増大の構成要素など）は、すべてが、施設の構成要素レジストリに事前に登録され、このレジストリには、処理ワークフローにおけるそれぞれの構成要素の機能および意図される使用段階が、構成要素の固有の識別子コードに対して記録される。一部の実施形態では、トランスポンダが使用され、一部の態様では、トランスポンダは、読み取ることができる固有の試料識別をコードするための任意の方法または物品を指す。
【００１５】
一部の実施形態では、方法の様々な段階、たとえば、それぞれの段階、たとえば、処理ワークフローおよび／またはレシピエントへの投与の前もしくは投与の時点で、１つまたは複数の識別子コードは、レコード、たとえば、中央データベース内の固有の患者特異的レコードに読み取られる、かつ／あるいは試料および／もしくは試料が由来する患者または試料を投与しようとする患者の識別ならびに／または試料および／またはその収集もしくは処理に関する他の情報を確認するため、ならびに／または正しい保管過程を確認するために使用される。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
詳細な説明
以下の詳細な説明および例は、本開示のある特定の実施形態を例示する。当業者であれば、本開示の多数の変化形および修正形が存在し、本開示の範囲内に含まれることを認識するであろう。したがって、ある特定の実施形態の説明は、制限として解釈されるものではない。
【００１７】
本明細書において使用されるとき、「極低温で保管する」または「極低温保管」という用語は、一般に、試料、たとえば、細胞を含有する試料を、−２１０℃〜−８０℃の温度で保管することであり、細胞をそのような保管期間の後に解凍することができ、解凍時または解凍後に、試料中の細胞の少なくとも一部分または大部分が、生存可能なままであるおよび／またはその生物学的機能の少なくとも一部分を保持するような条件下で、保管することを指す。一態様では、細胞試料は、試料中の細胞の少なくともある特定の割合、たとえば、以下の割合、またはおよそ以下の割合、または以下を上回る割合が、生存可能なままとなる、ならびに／またはアポトーシスマーカーもしくはその指標、たとえば、切断されたカスパーゼおよび／もしくはアネキシンＶ染色について陰性のままとなるように、解凍することができる：２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％。
【００１８】
本明細書において使用されるとき、極低温で凍結させるという用語は、試料、たとえば、細胞を含有する試料の温度を、−２１０〜−８０℃の温度まで低下させることを意味する。
【００１９】
一部の実施形態では、細胞を含有する試料の文脈で本明細書において使用される、濃縮するまたは濃縮という用語は、１種類または複数種類の細胞が、より高濃度で得られるように、その１種類または複数種類の細胞を、試料から分離、選択、または精製することを意味する。「濃縮する」という用語は、必ずしも、絶対またはほぼ絶対の細胞純度を達成することを含むわけではないが、一部の実施形態では、それを含み得る。
【００２０】
本明細書において使用されるとき、対象またはドナーは、哺乳動物、たとえば、ヒトまたは他の動物であり、典型的には、ヒトである。一部の実施形態では、細胞、細胞集団、または組成物が投与される対象、たとえば、患者は、哺乳動物であり、典型的には、霊長類、たとえば、ヒトである。一部の実施形態では、霊長類は、サルまたは類人猿である。対象は、雄性であっても雌性であってもよく、幼児、少年期、青年期、成人、および／または老人期の対象を含め、任意の好適な年齢であり得る。一部の実施形態では、対象は、非霊長類の哺乳動物、たとえば、げっ歯動物である。
【００２１】
一部の実施形態では、「凍結溶液」という用語は、細胞を含有する試料、たとえば、アフェレーシス試料と合わせたときに、試料または細胞の冷却、極低温での凍結、および／または極低温での保管のプロセスの間、細胞の１つまたは複数の生物学的機能を保存するのを補助する、溶液を意味する。一部の実施形態では、凍結溶液および極低温媒体という用語は、互換可能である。
【００２２】
一部の実施形態では、「極低温後に修飾すること」または「極低温後の修飾」という用語は、細胞を含有する極低温で保管された試料の文脈で本明細書において使用されるとき、細胞を解凍した後に試料に適用されるプロセスを意味する。
【００２３】
一部の実施形態では、「再発」という用語は、本明細書において使用されるとき、一般に、改善期間の後に、疾患の兆候または症状が戻ることを意味する。
【００２４】
アフェレーシスは、一般に、ドナーまたは対象の血液を収集するプロセスを指す。このプロセスには、ドナーの血液から細胞を収集するプロセスが含まれ得る。白血球アフェレーシスは、ドナーの血液から白血球を収集するそのようなプロセスを指して使用される。一部の実施形態では、提供される実施形態および組成物は、たとえば、アフェレーシスによる、ドナーからの血液試料の収集に関し、一部の実施形態では、方法および組成物は、組成物、たとえば、細胞療法の組成物を、レシピエントに投与することに関する。一部の実施形態では、ドナーおよびレシピエントは、同じ個体である。一部の実施形態では、ドナーに由来する細胞は、異なる対象であるレシピエントに投与される。
【００２５】
一部の実施形態では、方法は、ドナーの血液に由来する細胞を極低温で保管することを伴う。一部の実施形態では、極低温で保管された細胞は、続いて、疾患を処置するためにレシピエントに投与される。たとえば、米国特許出願公開第２０１６／０１５８３５９号および同第２０１６／０２０６６５６号およびＰＣＴ国際出願第２０１６／０６４９２９号および同第２０１６／０３３５７０号に記載されているように、細胞は、細胞療法処置、たとえば、Ｔ細胞療法の一部として、使用され得、これらの文献は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【００２６】
一部の実施形態では、ドナーは、対象、たとえば、収集した細胞を後で受ける人物、すなわち、レシピエントである。そのような実施形態では、この治療法は、自家細胞療法と称される。本明細書において考察されるように、自家細胞療法の利点としては、細胞を収集したドナーが、レシピエントであるため、レシピエントの身体が、投与された細胞を拒絶する可能性が低減されることを挙げることができる。一部の実施形態では、ドナーおよびレシピエントは、異なる人物である。そのような実施形態では、治療法は、同種細胞療法と称され得る。同種療法の利点としては、細胞試料全体での均一性および一貫性を挙げることができる。他の利点としては、一部の態様では、たとえば、レシピエントに由来する細胞が利用可能でない可能性がある時点で、ドナーの細胞が利用可能であるという状況において、たとえば、レシピエントがそのような細胞を提供することができないおよび／またはアフェレーシスを受けることができない状況、たとえば、レシピエントの具合が悪すぎる場合に、自家細胞療法と比較して、細胞の利用可能性が高いことを挙げることができる。
【００２７】
一部の実施形態では、細胞は、アフェレーシス、たとえば、多数の公知のアフェレーシス技法のうちのいずれかによって、収集される。例示的なアフェレーシス収集方法としては、医療従事者によって行われる一般的に許容される慣例方法を使用して、ドナーから採血することが挙げられる。医療従事者は、たとえば、ドナーの身体における部位、典型的には、腕を選択し、その部位を滅菌し、静脈穿刺を行い、血液を保存するのに好適な容器、たとえば、抗凝血剤を含有する滅菌血液バッグに、採血することができる。たとえば、医療従事者は、Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（「ＷＨＯ」）、ＷＨＯ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｄｒａｗｉｎｇ  ｂｌｏｏｄ：  ｂｅｓｔ  ｐｒａｃｔｉｃｅｓ  ｉｎ  ｐｈｌｅｂｏｔｏｍｙ（２０１０年）に記載されている慣例方法を行うことができる。従事者は、以下に記載されるように、ドナーにおいて疾患を診断する従事者であってもよく、またはそうでなくてもよい。血液の収集の後に、血液の成分、たとえば、血漿および様々な血液細胞を、遠心分離を用いて分離してもよい。
【００２８】
一部の実施形態では、細胞は、ドナーが疾患と診断された後、かつドナーが疾患の任意の処置を受ける前、および／またはドナーが標的化された処置、たとえば、疾患もしくは状態と関連する抗原もしくは他のリガンドを特異的に認識するかもしくはそれに特異的に結合する処置を受ける前に、収集される。一部の実施形態では、細胞は、ドナーが疾患または状態と診断される前の時点で、収集される。そのような実施形態の利点としては、ドナーが疾患の処置を受けた後に収集される細胞と比較して、細胞の生存性、活性、および遺伝子操作に対する受容性の改善を挙げることができる。一部の実施形態では、細胞は、疾患の初回処置の後の疾患の１回目の再発の後、かつドナーが疾患の後続の処置を受ける前に、ドナーから収集される。そのような実施形態の利点としては、ドナーが疾患の２回またはそれを上回る処置を受けた後に収集される細胞と比較して、細胞の生存性、活性、および遺伝子操作に対する受容性の改善を挙げることができる。他の実施形態では、細胞は、疾患の２回目の再発の後、かつドナーが疾患の後続の処置を受ける前に、ドナーから収集される。
【００２９】
ドナーおよび／もしくはレシピエントの、ならびに／または本明細書におけるドナーおよび／もしくはレシピエントが有するかもしくは有することが疑われる、ならびに／または組換え受容体によって標的とされる、疾患、状態、および障害には、固形腫瘍を含む腫瘍、造血系悪性腫瘍、ならびに黒色腫があり、局所的腫瘍および転移腫瘍が含まれる。疾患、状態、および障害にはまた、感染性疾患、たとえば、ウイルスまたは他の病原体、たとえば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ＣＭＶ、ＨＰＶによる感染、および寄生虫性疾患がある。疾患、状態、および障害にはまた、自己免疫性疾患および炎症性疾患がある。一部の実施形態では、疾患または状態は、腫瘍、がん、悪性腫瘍、新生物、または他の増殖性疾患もしくは障害である。そのような疾患としては、白血病、リンパ腫、たとえば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、難治性濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、結腸がん、肺がん、肝臓がん、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、皮膚がん、黒色腫、骨がん、および脳のがん、卵巣がん、上皮がん、腎細胞癌、膵臓腺癌、ホジキンリンパ腫、子宮頸癌、結腸直腸がん、膠芽腫、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、髄芽細胞腫、骨肉腫、滑膜肉腫、および／または中皮腫が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、疾患または状態は、ＤＬＢＣＬ、特定できないもの（ＮＯＳ、濾胞性リンパ腫に由来する形質転換ＤＬＢＣＬを含む）、ＤＬＢＣＬ組織学を有するＭＹＣおよびＢＣＬ２ならびに／またはＢＣＬ６再配列を伴う高悪性度Ｂ細胞リンパ腫である。
【００３０】
一部の実施形態では、対象は、ｉｗＣＬＬのガイドラインに基づく処置の兆候を有するＣＬＬ、および臨床的に測定可能な疾患、または生検によって実証されるＳＬＬであるＳＬＬを呈する。一部の態様では、対象は、ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤（ＢＴＫｉ）処置を受け、それが失敗したか、ＢＴＫｉ療法に不適格であるとみなされている。
【００３１】
一部の実施形態では、ＣＬＬまたはＳＬＬ、および高リスクの特徴、たとえば、複合染色体異常（３つまたはそれを上回る染色体異常）、１７ｐ欠失、ＴＰ５３変異、または未変異の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩＧＨＶ）を有する対象は、ＢＴＫｉを含め、これまでの治療法の少なくとも２回の過程が失敗している。一部の実施形態では、ＣＬＬまたはＳＬＬ、および標準的なリスクの特徴を有する対象は、ＢＴＫｉを含め、これまでの治療法の少なくとも３回の過程が失敗している。一部の実施形態では、ＢＴＫｉ不耐性であり、少なくとも６カ月間のＢＴＫｉ療法を受けていないか、またはＢＴＫｉに不適格である、ＣＬＬまたはＳＬＬを有する対象は、非ＢＴＫｉ療法の少なくとも１回（高リスク）または２回（標準的なリスク）の過程が失敗している。
【００３２】
一部の実施形態では、対象は、１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操作細胞免疫療法に適格でない。一部の実施形態では、対象は、まだ１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操作細胞免疫療法に適格でないが、適格となるリスクがあるかまたは適格となり得る。一部の実施形態では、対象は、以前の治療法の１回もしくは複数回の過程に対する、または自己ＨＳＣＴ後の、予測応答もしくは実際の応答に起因して、１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操作細胞免疫療法に適格でない。一部の実施形態では、対象は、以前の治療法の１回または複数回の過程（たとえば、以前の治療法の２回もしくはそれを上回る、３回もしくはそれを上回る、または４回もしくはそれを上回る過程）、または自己ＨＳＣＴ後に、再発していない、および／またはこれらに対して不応性でない場合、１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操作細胞免疫療法に適格でない。一部の実施形態では、対象は、高リスクの染色体異常の不在に起因して、１つまたは複数の臨床試験および／または承認された操作細胞免疫療法に適格でない。
【００３３】
一部の態様では、対象は、多数の転移および／または広範囲に拡がった転移の局在化を有する。一部の態様では、対象における腫瘍負荷は、低く、対象は、転移をほとんど有さない。一部の実施形態では、投薬のサイズまたはタイミングは、対象における初期疾患負荷によって判定される。たとえば、一部の態様では、対象は、初回用量では、比較的低い数の細胞が投与され得るが、より低い疾患負荷の状況では、用量はより高くなり得る。
【００３４】
一部の実施形態では、疾患または状態は、感染性疾患または状態、たとえば、ウイルス、レトロウイルス、細菌、および原虫の感染、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス、ＢＫポリオーマウイルスなどであるが、これらに限定されない。
【００３５】
一部の実施形態では、疾患または状態は、自己免疫性または炎症性の疾患または状態、たとえば、関節炎、たとえば、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、Ｉ型糖尿病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性腸疾患、乾癬、強皮症、自己免疫性甲状腺疾患、グレーブス病、クローン病、多発性硬化症、喘息、免疫不全、および／または移植と関連する疾患もしくは状態である。
【００３６】
一部の実施形態では、疾患または状態は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、たとえば、移植、たとえば、同種器官移植ならびに／または骨髄および／もしくは造血幹細胞移植を受けているかまたは受けた対象におけるＧＶＨＤである。天然の単離したＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞、たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで増大させたＴｒｅｇ細胞の付加により、一部の状況では、移植片対宿主病を遅延および／または予防することができる。一部の実施形態では、提供されるＴｒｅｇ組成物および方法は、ＧＶＨＤのリスクまたはその症状もしくは兆候を予防および／または減少させる。一部の実施形態では、疾患または状態は、心臓、肝臓、角膜、腎臓、肺、膵臓、または他の器官の移植片など、器官移植片拒絶またはそのリスクである。
【００３７】
一部の実施形態では、自己免疫性疾患または炎症性疾患は、慢性および／または急性炎症性疾患である。一部の態様では、疾患または障害は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、多発性筋炎、多発性硬化症（ＭＳ）、糖尿病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、Ｉ型真性糖尿病もしくは自己免疫性膵島炎、自己免疫性甲状腺炎、自己免疫性ブドウ膜炎もしくは網膜ブドウ膜炎、自己免疫性精巣炎、自己免疫性卵巣炎、乾癬、白斑、自己免疫性前立腺炎、任意の望ましくない免疫応答または他の炎症性もしくは自己免疫性疾患もしくは状態、たとえば、望ましくない免疫応答および／もしくはウイルスに誘導される免疫病理を特徴とする状態であるか、またはこれらを含む。一部の態様では、抗原、たとえば、Ｔ細胞および／または組換え受容体が特異的に結合する抗原は、自己抗原（ｓｅｌｆ  ａｎｔｉｇｅｎ）または自己抗原（ａｕｔｏ−ａｎｔｉｇｅｎ）、たとえば、正常なまたは非罹患組織に発現されるヒト抗原である。一部の態様では、抗原は、がんに発現される抗原でもなく、対象においてがんに発現もされない。一部の態様では、対象は、がんを有することが判明していない、および／またはがんを有することが疑われていない。
【００３８】
一部の実施形態では、細胞、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、または他の組換え受容体によって認識される抗原は、自己抗原または自己抗原と交差反応する抗原、たとえば、自己免疫性疾患の病態生理学における病原性抗原であるか、またはそれを含む。一部の実施形態、たとえば、疾患または状態が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である場合には、抗原は、罹患した結腸または回腸に発現されるものである。一部の実施形態、たとえば、ＲＡの状況では、抗原またはリガンドは、コラーゲンのエピトープまたは関節に存在する抗原である。一部の実施形態、たとえば、Ｉ型真性糖尿病または自己免疫性膵島炎の処置または予防については、抗原は、膵臓β細胞抗原である。一部の実施形態、たとえば、ＭＳについては、抗原は、ミエリン塩基性タンパク質抗原、ＭＯＧ−１、ＭＯＧ−２、または別の神経細胞抗原である。一部の実施形態、たとえば、疾患または状態が自己免疫性甲状腺炎である場合には、抗原またはリガンドは、甲状腺抗原である。一部の実施形態、たとえば、疾患または状態が自己免疫性胃炎である場合には、抗原は、胃抗原である。一部の実施形態、たとえば、自己免疫性ブドウ膜炎または網膜ブドウ膜炎の処置については、抗原は、Ｓ抗原または別のブドウ膜もしくは網膜抗原である。一部の実施形態、たとえば、疾患または状態が精巣炎である場合には、抗原は、精巣抗原である。一部の実施形態、たとえば、自己免疫性卵巣炎を処置または予防する場合には、抗原は、卵巣抗原である。一部の実施形態、たとえば、乾癬の処置または予防については、抗原は、ケラチノサイト抗原または別の真皮もしくは上皮抗原である。一部の実施形態、たとえば、白斑の処置または予防については、抗原は、メラノサイト抗原である。一部の実施形態、たとえば、自己免疫性前立腺炎の処置または予防については、抗原は、前立腺抗原である。一部の実施形態では、抗原は、望ましくない免疫応答の部位に存在するエフェクターＴ細胞に発現する活性化抗原を含み得る。
【００３９】
一部の実施形態では、抗原は、シトルリン化ビメンチンである。
【００４０】
一部の実施形態、たとえば、疾患または状態が、組織または器官の拒絶であるかまたはそれを含む場合には、抗原は、移植された組織のハプロタイプを有するＭＨＣ分子またはその部分を含み得る。
【００４１】
一部の実施形態では、疾患または障害と関連する抗原は、ＧＰＲＣ５Ｄ、神経膠腫関連抗原、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、ＢＣＭ）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦＲ、ＢＲ３）、膜貫通型活性化因子およびＣＡＭＬ相互作用因子（ＴＡＣＩ）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５、ＦｃＲＨ５）、オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲ１、Ｈｅｒ２、Ｌｌ−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体（ｆｅｔａｌ  ａｃｅｔｈｙｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、サイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体によって発現される分子である。
【００４２】
一部の実施形態では、疾患は、がんである。たとえば、米国特許出願公開第２０１６／０１５８３５９号および同第２０１６／０２０６６５６号、ならびにＰＣＴ特許出願公開第２０１６／０６４９２９号に記載されているように、細胞は、がん療法の処置、たとえば、Ｔ細胞療法の一部として使用され得、これらの文献は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【００４３】
がんは、たとえば、良性または悪性であり得る。がんには、たとえば、原発性がんまたは転移性がんが含まれ得る。一部の実施形態では、がんは、任意のステージ、たとえば、ステージＴＸ、ステージＴ０、ステージＴ１、ステージＴ１ａ、ステージＴ１ｂ、ステージＴ２、ステージＴ２ａ、ステージＴ２ｂ、ステージＴ３、ステージＴ３ａ、ステージＴ３ｂ、ステージＴ４、ステージＴ４ａ、ステージＴ４ｂ、ステージＮＸ、ステージＮ０、ステージＮ１、ステージＮ１ａ、ステージＮ１ｂ、ステージＮ２、ステージＮ２ａ、ステージＮ２ｂ、ステージＮ２ｃ、ステージＮ３、ステージＭＸ、ステージＭ０、ステージＭ１、ステージＭ１ａ、ステージＭ１ｂ、ステージＭ１ｃ、ステージＭ２、ステージＭ３、ステージＭ３Ｖ、ステージＭ４、ステージＭ４Ｅ、ステージＭ５、ステージＭ６、またはステージＭ７のものであり得る。
【００４４】
一部の実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、カポジ肉腫、星状細胞腫、基底細胞癌、胆管がん、膀胱がん、ユーイング肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、脳のがん、乳がん、気管支がん、バーキットリンパ腫、カルチノイドがん、心臓がん（ｃａｒｄｉａｃ  ｃａｎｃｅｒ）、非定型奇形腫様もしくは横紋筋肉腫様腫瘍、胚芽腫、胚細胞腫瘍、原発性中枢神経系リンパ腫、子宮頸がん、胆管癌、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性新生物、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、卵管がん、胆嚢がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、膠芽腫、卵巣胚細胞腫瘍、精巣がん、妊娠性絨毛性疾患、有毛細胞性白血病、頭頸部がん、肝細胞がん、ホジキンリンパ腫、眼内黒色腫、膵島細胞腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、腎臓がん、肺がん（非小細胞および小細胞）、悪性線維性組織球腫、メルケル細胞癌、中皮腫、正中線管癌（ｍｉｄｌｉｎｅ  ｔｒａｃｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、口腔がん、多発性内分泌新生物、菌状息肉腫、骨髄異形成性もしくは骨髄増殖性新生物、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性新生物、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭腫、傍神経節腫、副鼻腔がんおよび鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、形質細胞腫、多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、腹膜がん、前立腺がん、直腸がん、網膜芽細胞腫、唾液腺がん、横紋筋肉腫、セザリー症候群、小腸がん、小リンパ球性白血病、扁平上皮細胞癌、扁平上皮頸部がん、精巣がん、咽喉がん、鼻咽頭がん、口腔咽頭がん、下咽頭がん、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺がん、尿道がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、またはウィルムス腫瘍である。
【００４５】
一部の実施形態では、がんは、慢性リンパ球性白血病、小リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞性白血病、急性リンパ球性白血病、ｎｕｌｌ型急性リンパ芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、または急性骨髄性白血病である。
【００４６】
一部の実施形態では、がんは、オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、サイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体によって発現される分子のうちの少なくとも１つまたは複数を発現する細胞を含む。一部の実施形態では、がんは、ＣＤ１９を発現する細胞を含む。一部の実施形態では、がんは、ＢＣＭＡを発現する細胞を含む。
【００４７】
一部の実施形態では、疾患は、医療従事者（たとえば、国、州（ｓｔａｔｅ）、州（ｐｒｏｖｉｎｃｅ）、郡、地方自治体、または町区における医療規制当局による免許を得た人物）によって診断され、この人物が、ドナーを検査し、ドナーにおいて構造または機能の障害を観察することによってドナーにおける疾患の存在を確認する。医療従事者としては、たとえば、医師、たとえば、血液学者、免疫学者、腫瘍学者、または実地看護師を挙げることができる。
【００４８】
一部の実施形態では、診断は、ドナーによる自己診断を除外する、および／または遺伝子試験サービスによる診断を除外する。
【００４９】
一部の実施形態では、初回処置および後続の処置は、それぞれ、互いに独立して、がん療法、たとえば、化学療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン療法、および／または外科手術を含み得る。化学療法には、たとえば、シクロホスファミド、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、ムスチン、ビンクリスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ダカルバジン、エトポシド、シスプラチン、エピルビシン、カペシタビン、フォリン酸、オキサリプラチン、および他の少分子キナーゼ阻害剤のうちの少なくとも１つを投与することが含まれ得る。免疫療法には、たとえば、抗体および免疫細胞、たとえば、ナチュラルキラー細胞、リンホカイン活性化キラー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、および樹状細胞のうちの少なくとも１つを投与することが含まれ得る。一部の実施形態では、処置（初回または後続のいずれか）には、放射線療法（たとえば、４０００ｃＧｙ照射）、自家幹細胞救援（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｃｕｅ）、幹細胞移植、骨髄移植、および造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）のうちのいずれかまたはすべてが含まれ得る。一部の実施形態では、処置には、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法が含まれ得る。一部の実施形態では、処置には、チサゲンレクロイセル（Ｋｙｍｒｉａｈ）が含まれ得る。一部の実施形態では、処置には、アキシカブタゲンシロロイセル（Ｙｅｓｃａｒｔａ）が含まれ得る。一部の実施形態では、初回および／または後続の治療法には、シタラビン（ａｒａ−Ｃ、高用量シタラビンを含む）、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、イダルビシン、またはクラドリビン（ロイスタチン、２−ＣｄＡ）のうちのいずれかまたはすべてが、単独または組合せで、含まれ得る。一部の実施形態では、初回および／または後続の治療法には、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイド、ならびにコルチコステロイド、たとえば、プレドニゾンおよびデキサメタゾンのうちのいずれかまたはすべてが含まれ得る。一部の実施形態では、初回および／または後続の治療法には、アルキル化剤、たとえば、シクロホスファミド、クロラムブシル、ベンダムスチン、およびイホスファミド；白金薬物、たとえば、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチン；プリン類似体、たとえば、フルダラビン、ペントスタチン、およびクラドリビン、シタラビン；抗代謝薬、たとえば、ゲムシタビン、メトトレキサート、およびプララトレキサート；ならびに他の薬剤、たとえば、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、エトポシド、およびブレオマイシンのうちのいずれかまたはすべてが含まれ得る。一部の実施形態では、初回および／または後続の治療法には、プロテアソーム阻害剤、たとえば、ボルテゾミブ；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、たとえば、ロミデプシンおよびベリノスタット；キナーゼ阻害剤、たとえば、イブルチニブおよびイデラリシブのうちのいずれかまたはすべてが含まれ得る。一部の実施形態では、初回および／または後続の治療法には、ＣＤ２０を標的とする抗体、たとえば、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、およびイブリツモマブチウキセ���ン；ＣＤ５２を標的とする抗体、たとえば、アレムツズマブ；ＣＤ３０を標的とする抗体、たとえば、ブレンツキシマブベドチン；インターフェロン；ならびに免疫調節剤、たとえば、サリドマイドおよびレナリドマイドが含まれ得る。一部の実施形態では、初回および／または後続の治療法は、組合せ療法、たとえば、ＣＨＯＰ、ＣＨＯＰ＋Ｒ（またはＲ−ＣＨＯＰ）、ＣＶＰ、ＥＰＯＣＨ、ＥＰＯＣＨ＋Ｒ、ＤＨＡＰ、およびＤＨＡＰ＋Ｒ（またはＲ−ＤＨＡＰ）であってもよい。ＣＨＯＰには、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾンの薬物が含まれる。Ｒ−ＣＨＯＰ（またはＣＨＯＰ＋Ｒ）は、リツキシマブでの処置をさらに含む。ＣＶＰには、シクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾンが含まれる。ＣＶＰはまた、リツキシマブとの組合せで投与してもよい。ＥＰＯＣＨには、エトポシド、プレドニゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、およびドキソルビシンの薬物が含まれる。ＥＰＯＣＨ−Ｒは、リツキシマブでの処置をさらに含む。ＤＨＡＰは、デキサメタゾン、高用量シタラビン、およびシスプラチンの薬物を含む。ＤＨＡＰ＋Ｒ（またはＲ−ＤＨＡＰ）は、リツキシマブでの処置をさらに含む。本明細書に記載される方法に従って使用することができるさらなる組合せレジメンには、ベンダムスチンに加えてリツキシマブ（ＢＲ）；リツキシマブ、シクロホスファミド、エトポシド、プロカルバジン、およびプレドニゾン（Ｒ−ＣＥＰＰ）；リツキシマブ、シクロホスファミド、エピルビシン、およびプレドニゾン（Ｒ−ＣＥＯＰ）；リツキシマブ、ゲムシタビン、シスプラチン、およびデキサメタゾン（Ｒ−ＧＤＰ）；リツキシマブおよびレナリドマイドのうちのいずれか１つまたは複数が含まれる。本明細書に記載される方法に従って使用することができるさらなる抗がん療法には、クロラムブシル、ベンダムスチン、シクロホスファミド、フルダラビン、オファツムマブ、オビヌツズマブ、リツキシマブ、イデラリシブ、ベネトクラックス、レナリドマイド、およびメチルプレドニゾロンのうちのいずれか１つもしくは複数、または組合せが含まれる。
【００５０】
一部の実施形態では、ドナーは、疾患の初回処置および改善の期間の後に、１回目の再発に入る場合がある。一部の実施形態では、改善の期間は、疾患の兆候および症状の完全な不在によって示される。一部の実施形態では、改善の期間の間、疾患の兆候および症状は、緩和または低減されるが、完全に不在ではない。一部の実施形態では、疾患の兆候および症状の完全な不在、または兆候および症状の緩和もしくは低減は、初回処置の結果である。
【００５１】
一部の実施形態では、ドナーは、疾患の、１回または複数回のこれまでの処置、および１回または複数回の改善の期間の後に、２回目の再発に入る場合がある。一部の実施形態では、改善の期間は、疾患の兆候および症状の完全な不在によって示される。一部の実施形態では、改善の期間の間、疾患の兆候および症状は、緩和または低減されるが、完全に不在ではない。一部の実施形態では、疾患の兆候および症状の完全な不在、または兆候および症状の緩和もしくは低減は、これまでの処置の結果である。
【００５２】
一部の実施形態では、再発は、医療従事者によって診断され、この人物が、ドナーを検査し、ドナーにおける疾患の兆候および症状の戻りを確認する。一部の実施形態では、医療従事者は、国、州（ｓｔａｔｅ）、州（ｐｒｏｖｉｎｃｅ）、郡、地方自治体、または町区における医療規制当局による免許を有する人物である。医療従事者としては、たとえば、医師、たとえば、血液学者、免疫学者、もしくは腫瘍学者、または実地看護師を挙げることができる。疾患を診断する医療従事者および再発を診断する医療従事者は、同じ人物であってもよく、またはそうでなくてもよい。
【００５３】
一部の実施形態では、ドナーの血液に由来する細胞は、アフェレーシスまたは白血球アフェレーシスによって得られる。一部の実施形態では、ドナーから収集されたとき、および／またはアフェレーシス試料中の合計の、細胞の数は、以下の数もしくはおよそ以下の数であるか、または以下の数もしくはおよそ以下の数を上回らない：５００×１０６個、１０００×１０６個、２０００×１０６個、３０００×１０６個、４０００×１０６個、もしくは５０００×１０６個、またはそれよりも多くの合計細胞もしくは合計有核細胞。一部の実施形態では、対象に投与する際の試料は、ドナーの体重１キログラム当たり１０５個〜１０６個もしくは約１０５個〜約１０６個の細胞もしくはＴ細胞もしくは操作細胞、および／または５×１０６個もしくは１０×１０６個または約５×１０６個もしくは約１０×１０６個の合計細胞もしくはＴ細胞もしくは操作細胞もしくはそのサブセットを含有する。一部の実施形態では、ドナーから収集されたときの血液の体積は、ドナーの体重１キログラムに対して、０．５〜５ミリリットルである。
【００５４】
一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞および／またはその集団を含む、および／またはそれらの存在が濃縮されている。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を、別個または組合せのいずれかで、含む。Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のサブタイプおよび部分集団には、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞、およびそれらのサブタイプ、たとえば、ステムセントラルメモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、または最終分化型エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然および適応性調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、たとえば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、アルファ／ベータＴ細胞、ならびにデルタ／ガンマＴ細胞がある。一部の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。一部の実施形態では、細胞は、単球または顆粒球、たとえば、骨髄細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細胞、好酸球、および／または好塩基球である。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、バルクＴ細胞、たとえば、ＣＤ３発現、ＣＤ４もしくはＣＤ８発現、または血液細胞上に見出される非Ｔ細胞マーカーの陰性に基づいて選択されるものを含むか、またはそれらである。
【００５５】
一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、たとえば、ＣＤ８＋Ｔ細胞（たとえば、ＣＤ８＋ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、もしくはエフェクターメモリーＴ細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、幹細胞メモリーＴ細胞、リンパ球前駆細胞、造血幹細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、または樹状細胞であるか、またはこれらを含む。一部の実施形態では、細胞は、単球または顆粒球、たとえば、骨髄細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細胞、好酸球、および／または好塩基球である。ある実施形態では、細胞は、人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞またはｉＰＳ細胞に由来する細胞、たとえば、対象から生成され、１つまたは複数の標的遺伝子を改変する（たとえば、標的遺伝子における変異を誘導する）かまたはその発現を操作するように操作され、たとえば、Ｔ細胞、たとえば、ＣＤ８＋Ｔ細胞（たとえば、ＣＤ８＋ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、またはエフェクターメモリーＴ細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、リンパ球前駆細胞、または造血幹細胞に分化した、ｉＰＳ細胞である。
【００５６】
一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞または他の細胞型の１つまたは複数のサブセット、たとえば、全Ｔ細胞集団、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、およびその部分集団、たとえば、機能、活性化状態、成熟度、分化能、増大、再循環、局在化、および／または持続能力、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の器官もしくはコンパートメントにおける存在、マーカーもしくはサイトカイン分泌プロファイル、ならびに／または分化の度合いによって定義されるものを含む。
【００５７】
一部の実施形態では、Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のサブタイプおよび部分集団には、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞、およびそれらのサブタイプ、たとえば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）、または最終分化型エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然および適応性調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、たとえば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、アルファ／ベータＴ細胞、ならびにデルタ／ガンマＴ細胞がある。一部の実施形態では、細胞は、ドナーから収集された後、さらなる処理なしに、極低温で凍結される、および／または極低温で保管される。一部の実施形態では、細胞は、極低温で凍結および／または保管される前に、１回または複数回、濃縮される。一部の実施形態では、細胞は、極低温で保管された後に、１回または複数回、濃縮される。一部の事例では、極低温で凍結および／または保管する前に細胞に濃縮もさらなる処理も行わないことにより、コストの低減および／または時間の節約の利点が得られる。一部の事例では、極低温で凍結および／または保管する前に細胞に濃縮もさらなる処理も行わないことにより、さらに、細胞の濃縮および／または処理を行うことができる施設へのアクセスを有さないドナーに対して、より広範な収集施設の選択肢が可能となり得る。濃縮は、たとえば、ＰＣＴ出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載される通りであってもよく、これは、その全体が本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、細胞は、極低温で凍結および／または保管する前に、処理される。
【００５８】
特定の実施形態では、細胞は、たとえば、例として、血漿および血小板を除去するための洗浄ステップの後に、凍結される。一部の実施形態では、細胞は、細胞、たとえば、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲを発現する、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を製造および／または生成することと関連するステップうちのいずれかよりも前、それに続いて、および／またはその最中に、凍結される。ある特定の実施形態では、そのようなステップには、細胞のサブセット、たとえば、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の選択および／もしくは単離、細胞、たとえば、Ｔ細胞もしくはそのサブセットの刺激および／もしくは増大、または細胞のトランスフェクションもしくは形質導入を含むがこれらに限定されない、操作細胞の生成と関連する任意のステップが含まれ得る。一部の実施形態では、細胞は、細胞の選択および／もしくは単離、細胞の刺激および／もしくは増大、または細胞のトランスフェクションもしくは形質導入の前に、対象から収集されたアフェレーシス試料の細胞である。
【００５９】
細胞処理方法
【００６０】
一部の実施形態では、対象から収集された細胞を、洗浄して、たとえば、血漿画分を除去し、細胞を、後続の処理ステップに適した緩衝液または媒体に入れる。一部の実施形態では、細胞を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。一部の実施形態では、洗浄溶液は、カルシウムおよび／もしくはマグネシウム、ならびに／または多数もしくはすべての二価カチオンを含まない。一部の態様では、洗浄ステップは、半自動化された「フロースルー」遠心分離（たとえば、Ｃｏｂｅ  ２９９１  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、Ｂａｘｔｅｒ）を製造業者の説明に従って使用して、達成される。一部の態様では、洗浄ステップは、遠心分離チャンバ、たとえば、Ａ−２００／ＦおよびＡ−２００遠心分離チャンバを含め、Ｓｅｐａｘ（登録商標）およびＳｅｐａｘ（登録商標）２システムで使用するためのものを含む、Ｂｉｏｓａｆｅ  ＳＡによって製造および販売されているものにおいて、製造業者の説明書に従って、行われる。一部の態様では、洗浄ステップは、製造業者の説明に従って接線流濾過（ＴＦＦ）によって、達成される。一部の実施形態では、細胞は、洗浄後に、たとえば、Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋不含ＰＢＳなど、様々な生体適合性緩衝液中に再懸濁される。ある特定の実施形態では、血液細胞試料の成分が除去され、細胞が、直接、培養媒体中に再懸濁される。
【００６１】
一部の実施形態では、方法には、密度に基づく細胞分離方法、たとえば、赤血球を溶解し、ＰｅｒｃｏｌｌまたはＦｉｃｏｌｌ勾配を通じた遠心分離による、末梢血からの白血球の調製が含まれる。
【００６２】
一部の実施形態では、単離方法には、細胞における、１つまたは複数の特定の分子、たとえば、表面マーカー、たとえば、表面タンパク質、細胞内マーカー、または核酸の発現または存在に基づく、異なる細胞型の分離が含まれる。一部の実施形態では、そのようなマーカーに基づく任意の公知の分離方法を、使用することができる。一部の実施形態では、分離は、親和性または免疫親和性に基づく分離である。たとえば、一部の態様では、単離には、細胞の、１つまたは複数のマーカー、典型的には細胞表面マーカーの発現または発現レベルに基づいて、たとえば、そのようなマーカーに特異的に結合する抗体または結合パートナーとのインキュベーション、一般的にはそれに続く洗浄ステップおよび抗体または結合パートナーに結合した細胞の、抗体または結合パートナーに結合していない細胞からの分離による、細胞および細胞集団の分離が含まれる。
【００６３】
そのような分離ステップは、試薬に結合した細胞が、さらなる使用のために保持される、陽性選択、および／または抗体もしくは結合パートナーに結合していない細胞が保持される、陰性選択に基づき得る。一部の例では、両方の画分が、さらなる使用のために保持される。一部の態様では、不均一集団において細胞型を特異的に特定する抗体が利用可能でなく、その結果、分離は、所望される集団以外の細胞が発現するマーカーに基づいて行われるのが最もよくなるという場合には、陰性選択が、特に有用であり得る。
【００６４】
分離は、必ずしも、特定の細胞集団または特定のマーカーを発現する細胞の１００％の濃縮または除去をもたらすものではない。一部の実施形態では、濃縮した集団は、集団のうちの少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％を含む。たとえば、特定の種類の細胞、たとえば、マーカーを発現するものの陽性選択または濃縮は、そのような細胞の数または割合を増加させることを指すが、必ずしも、そのマーカーを発現しない細胞の完全な不在をもたらすわけではない。同様に、特定の種類の細胞、たとえば、マーカーを発現するものの陰性選択、除去、または枯渇は、そのような細胞の数または割合の減少を指すが、必ずしも、すべてのそのような細胞の完全な除去をもたらすわけではない。
【００６５】
一部の例では、複数回の分離ステップが行われ、ここで、１つのステップから陽性選択または陰性選択された画分が、別の分離ステップ、たとえば、後続の陽性選択または陰性選択に供される。一部の例では、たとえば、細胞を、それぞれが陰性選択の標的とされるマーカーに特異的な複数の抗体または結合パートナーとともにインキュベートすることによって、単回の分離ステップにより、複数のマーカーを発現する細胞を同時に枯渇させることができる。同様に、細胞を、様々な細胞型に発現される複数の抗体または結合パートナーとともにインキュベートすることによって、複数の細胞型を、同時に陽性選択することができる。
【００６６】
たとえば、一部の態様では、Ｔ細胞の特定の部分集団、たとえば、１つまたは複数の表面マーカーが陽性であるかまたはそれらを高いレベルで発現する細胞、たとえば、ＣＤ２８＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ１２７＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、および／またはＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞が、陽性選択または陰性選択の技法によって単離される。
【００６７】
たとえば、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８コンジュゲート磁性ビーズ（たとえば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ−４５０  ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｅｘｐａｎｄｅｒ）を使用して、陽性選択することができる。
【００６８】
一部の実施形態では、単離は、陽性選択による特定の細胞集団の濃縮、または陰性選択による特定の細胞集団の枯渇によって、行われる。一部の実施形態では、陽性選択または陰性選択は、細胞を、それぞれ、陽性選択または陰性選択される細胞に発現される（マーカー＋）かまたは比較的高いレベルで発現される（マーカー高）１つまたは複数の表面マーカーに特異的に結合する、１つまたは複数の抗体または他の結合剤とともにインキュベートすることによって、達成される。
【００６９】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、非Ｔ細胞、たとえば、Ｂ細胞、単球、または他の白血球に発現されるマーカー、たとえば、ＣＤ１４の陰性選択によって、ＰＢＭＣ試料から分離される。一部の態様では、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋の選択ステップを使用して、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞およびＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を分離させる。そのようなＣＤ４＋およびＣＤ８＋集団は、１つまたは複数のナイーブ、メモリー、および／またはエフェクターＴ細胞部分集団に発現されるかまたは比較的高い程度で発現されるマーカーの陽性選択または陰性選択によって、部分集団にさらに分類することができる。
【００７０】
一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、さらに、たとえば、それぞれの部分集団と関連する表面抗原に基づく陽性選択または陰性選択によって、ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリー、および／またはステムセントラルメモリー細胞の濃縮または枯渇が行われる。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、有効性を増加させるため、たとえば、長期生存、増大、および／または投与後の生着を改善するために、行われ、これは、一部の態様では、そのような部分集団において特にロバストである。Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ．、１巻：７２〜８２頁、Ｗａｎｇら（２０１２年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９〜７０１頁を参照されたい。一部の実施形態では、ＴＣＭを濃縮したＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞を組み合わせることにより、有効性が、さらに強化される。
【００７１】
いくつかの実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ６２Ｌ−の両方のサブセットに存在する。ＰＢＭＣは、たとえば、抗ＣＤ８抗体および抗ＣＤ６２Ｌ抗体を使用して、ＣＤ６２Ｌ−ＣＤ８＋および／またはＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋の画分を濃縮または枯渇させることができる。
【００７２】
一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、および／またはＣＤ１２７の陽性または高い表面発現に基づき、一部の態様では、これは、ＣＤ４５ＲＡおよび／またはグランザイムＢを発現するかまたは高度に発現する細胞の陰性選択に基づく。一部の態様では、ＴＣＭ細胞が濃縮されたＣＤ８＋集団の単離は、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ４５ＲＡを発現する細胞の枯渇、およびＣＤ６２Ｌを発現する細胞の陽性選択または濃縮によって、行われる。一態様では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の濃縮は、ＣＤ４の発現に基づいて選択された陰性の細胞画分で開始して行われ、これが、ＣＤ１４およびＣＤ４５ＲＡの発現に基づく陰性選択、ならびにＣＤ６２Ｌに基づく陽性選択に供される。そのような選択は、一部の態様では、同時に行われ、他の態様では、いずれかの順序で順に行われる。一部の態様では、ＣＤ８＋細胞集団または部分集団の調製に使用される同じＣＤ４発現に基づく選択ステップは、ＣＤ４に基づく分離から得られた陽性画分および陰性画分の両方が、保持され、方法の後続のステップにおいて、必要に応じて１つまたは複数のさらなる陽性選択または陰性選択のステップの後に、使用されるように、ＣＤ４＋細胞集団または部分集団を生成するためにも使用される。
【００７３】
特定の例では、ＰＢＭＣの試料または他の白血球試料を、ＣＤ４＋細胞の選択に供し、ここで、陰性画分および陽性画分の両方が保持される。陰性画分は、次いで、ＣＤ１４およびＣＤ４５ＲＡまたはＲＯＲ１の発現に基づく陰性選択、ならびにセントラルメモリーＴ細胞の特徴であるマーカー、たとえば、ＣＤ６２ＬまたはＣＣＲ７に基づく陽性選択に供され、ここで、陽性選択および陰性選択は、いずれかの順序で行われる。
【００７４】
ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を特定することによって、ナイーブ、セントラルメモリー、およびエフェクター細胞に分類される。ＣＤ４＋リンパ球は、標準的な方法によって得ることができる。一部の実施形態では、ナイーブＣＤ４＋Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。一部の実施形態では、セントラルメモリーＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ＋およびＣＤ４５ＲＯ＋である。一部の実施形態では、エフェクターＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ−およびＣＤ４５ＲＯ−である。
【００７５】
１つの例では、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的に、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。一部の実施形態では、抗体または結合パートナーは、陽性選択および／または陰性選択による細胞の分離を可能にするために、固体支持体または基質、たとえば、磁性ビーズまたは常磁性ビーズに結合されている。たとえば、一部の実施形態では、細胞および細胞集団は、免疫磁気（たとえば、親和性磁気）分離技法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５８巻：Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、２巻：Ｃｅｌｌ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ、１７〜２５頁：Ｓ．  Ａ．  Ｂｒｏｏｋｓ  ａｎｄ  Ｕ．  Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ編（著作権）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪにおいて考察されている）を使用して、分離または単離される。
【００７６】
一部の態様では、２つまたはそれを上回る選択ステップが、順次行われ得る。たとえば、分離しようとする細胞の試料または組成物は、ＣＤ８＋細胞の選択に供され、ここで、陰性画分および陽性画分の両方が、保持される。ＣＤ８陰性画分を、さらに、ＣＤ４＋細胞の選択に供してもよい。一部の態様では、分離しようとする細胞の試料または組成物は、ＣＤ４＋細胞の選択に供され、ここで、陰性画分および陽性画分の両方が保持され、ＣＤ４陰性画分は、ＣＤ８＋細胞の選択に供され得る。細胞選択のための例示的な方法は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１５／１５７３８４号および／または同第２０１５／１６４６７５号に記載されており、これらは、参照によりその全体が組み込まれ、そのすべてまたは一部分が、本明細書に記載される方法と併せて使用され得る。
【００７７】
一部の態様では、分離しようとする細胞の試料または組成物は、小さな磁化可能または磁気応答性の材料、たとえば、磁気応答性粒子またはマイクロ粒子、たとえば、常磁性ビーズ（たとえば、ＤｙｎａｌｂｅａｄｓまたはＭＡＣＳビーズなど）とともに、インキュベートされる。磁気応答性材料、たとえば、粒子は、一般に、分離することが所望される、たとえば、陰性選択または陽性選択することが所望される細胞、複数の細胞、または細胞集団に存在する分子、たとえば、表面マーカーに特異的に結合する結合パートナー、たとえば、抗体に、直接的または間接的に結合されている。
【００７８】
一部の実施形態では、磁性粒子またはビーズは、特定の結合メンバー、たとえば、抗体または他の結合パートナーに結合された、磁気応答性材料を含む。磁気分離方法において使用される周知の磁気応答性材料が、多数存在する。好適な磁性粒子としては、Ｍｏｌｄａｙ、米国特許第４，４５２，７７３号および欧州特許明細書第４５２３４２号Ｂに記載されているものが挙げられ、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。コロイドサイズ粒子、たとえば、Ｏｗｅｎの米国特許第４，７９５，６９８号およびＬｉｂｅｒｔｉらの米国特許第５，２００，０８４号に記載されているものは、他の例であり、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７９】
インキュベーションは、一般に、抗体もしくは結合パートナー、またはそのような抗体または結合パートナーに特異的に結合する磁性粒子またはビーズに結合した分子、たとえば、二次抗体もしくは他の試薬が、試料内の細胞に存在する場合に細胞表面分子に特異的に結合する条件下において、行われる。
【００８０】
一部の態様では、試料は、磁場に置かれ、磁気応答性または磁化可能粒子が結合した細胞が、磁石に引き寄せられ、未標識細胞から分離される。陽性選択については、磁石に引き寄せられた細胞が保持され、陰性選択については、引き寄せられていない細胞（未標識細胞）が保持される。一部の態様では、陽性選択および陰性選択の組合せが、同じ選択ステップの間に行われ、ここで、陽性画分および陰性画分が保持され、さらに処理されるか、またはさらなる分離ステップに供される。
【００８１】
ある特定の実施形態では、磁気応答性粒子は、一次抗体または他の結合パートナー、二次抗体、レクチン、酵素、またはストレプトアビジンでコーティングされる。ある特定の実施形態では、磁性粒子は、１つまたは複数のマーカーに特異的な一次抗体のコーティングを介して、細胞に結合する。ある特定の実施形態では、ビーズというよりは細胞が、一次抗体または結合パートナーで標識され、次いで、細胞型特異的な二次抗体または他の結合パートナー（たとえば、ストレプトアビジン）でコーティングされた磁性粒子が、添加される。ある特定の実施形態では、ストレプトアビジンでコーティングされた磁性粒子は、ビオチン化一次または二次抗体とともに使用される。
【００８２】
一部の実施形態では、磁気応答性粒子は、続いて、インキュベート、培養、および／または操作しようとする細胞に結合したままであり、一部の態様では、粒子は、患者への投与のために細胞に結合したままである。一部の実施形態では、磁化可能または磁気応答性粒子は、細胞から除去される。磁化可能粒子を細胞から除去するための方法は、公知であり、たとえば、競合する非標識抗体、切断可能なリンカーにコンジュゲートした磁化可能粒子または抗体などの使用が挙げられる。一部の実施形態では、磁化可能粒子は、生体分解性である。
【００８３】
一部の実施形態では、親和性に基づく選択は、磁気活性化細胞分類（ＭＡＣＳ）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）によるものである。磁気活性化細胞分類（ＭＡＣＳ）システムは、磁化した粒子が結合している細胞の高純度での選択が可能である。ある特定の実施形態では、ＭＡＣＳは、非標的種および標的種が、外部磁場の適用後に、順に溶出される形態で、動作する。すなわち、磁化した粒子に結合した細胞は、その場所に保持されるが、未結合の種は、溶出される。次いで、この第１の溶出ステップが完了した後に、磁場に捕捉された種および溶出が防止された種が溶出され、回収され得るような何らかの様式で、これらの種は、解放される。ある特定の実施形態では、非標的細胞は、標識され、不均一な細胞集団から枯渇される。
【００８４】
ある特定の実施形態では、単離または分離は、方法のなかの単離、細胞の調製、分離、処理、インキュベーション、培養、および／または製剤化のステップのうちの１つまたは複数を行うシステム、デバイス、または装置を使用して、行われる。一部の態様では、システムは、これらのステップのそれぞれを、たとえば、エラー、ユーザの取扱い、および／または汚染を最小限に抑えるために、閉鎖または滅菌の環境において行うために使用される。１つの例では、システムは、ＰＣＴ特許出願公開第２００９／０７２００３号、または米国特許出願公開第２０１１／０００３３８０号Ａ１に記載されているシステムであり、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。一部の態様では、ＰＣＴ特許出願公開第２０１６／０７３６０２号または米国特許出願公開第２０１６／０１２２７８２号に記載されているシステム、デバイス、装置、および／または方法を使用して、アフェレーシスもしくは白血球アフェレーシス産物、またはそれらに由来する試料が処理される、ならびに／あるいはこれらを使用して、単離または選択が行われ、これらの文献の内容は、参照によりその全体が組み込まれる。一部の実施形態では、単離または分離は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載されている方法に従って行われ、この内容は、参照によりその全体が組み込まれる。
【００８５】
一部の実施形態では、システムまたは装置は、単離、処理、操作、および製剤化のステップのうちの１つまたは複数、たとえば、すべてを、統合もしくは内蔵型システムにおいて、および／または自動化もしくはプログラム可能な様式で、行う。一部の態様では、システムまたは装置は、システムまたは装置と通信状態にあり、ユーザが、処理、単離、操作、および製剤化のステップの様々な側面をプログラム、制御、その結果を評価、および／または調整するのを可能にする、コンピュータおよび／またはコンピュータプログラムを含む。
【００８６】
一部の態様では、分離および／または他のステップは、たとえば、閉鎖および滅菌システムにおける臨床規模レベルでの細胞の自動化された分離のために、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｉｃ）を使用して、行われる。構成要素には、統合マイクロコンピュータ、磁気分離ユニット、蠕動ポンプ、および様々なピンチバルブが含まれ得る。統合コンピュータは、一部の態様では、機器のすべての構成要素を制御し、標準的な順序で反復される手順を行うように、システムに指示する。磁気分離ユニットは、一部の態様では、可動性永久磁石および選択カラムのホルダを含む。蠕動ポンプは、チュービングセット全体の流速を制御し、ピンチバルブとともに、システムを流れる緩衝液の流動の制御および細胞の継続的な懸濁を確実にする。
【００８７】
ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステムは、一部の態様では、滅菌の非発熱性溶液で供給される、抗体にカップリングされた磁化可能粒子を使用する。一部の実施形態では、細胞を磁性粒子で標識した後、細胞を、洗浄して、過剰な粒子を除去する。細胞調製バッグを、次いで、チュービングセットに接続し、これが、緩衝液を含有するバッグおよび細胞収集バッグに接続される。チュービングセットは、前カラムおよび分離カラムを含む、事前にアセンブルされた滅菌チュービングからなり、単回使用に限られる。分離プログラムの開始後に、システムは、自動的に、細胞試料を分離カラムに適用する。標識された細胞が、カラム内に保持され、一方で、未標識細胞は、一連の洗浄ステップによって除去される。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法で使用するための細胞集団は、未標識であり、カラムに保持されない。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法で使用するための細胞集団は、標識されており、カラムに保持される。一部の実施形態では、本明細書に記載される方法で使用するための細胞集団は、磁場を除去した後にカラムから溶出され、細胞収集バッグ内に収集される。
【００８８】
ある特定の実施形態では、分離および／または他のステップは、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して行われる。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムは、一部の態様では、自動化された細胞の洗浄および遠心分離による分画を可能にする細胞処理ユニティ（ｕｎｉｔｙ）が装備されている。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムにはまた、搭載されたカメラおよび画像認識ソフトウェアも含まれ得、これは、肉眼で見える源細胞産物の層を認識することによって、最適な細胞分画のエンドポイントを判定する。たとえば、末梢血は、赤血球、白血球、および血漿の層に自動的に分離され得る。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ  Ｐｒｏｄｉｇｙシステムにはまた、細胞培養プロトコール、たとえば、細胞の分化および増大、抗原の負荷、および長期細胞培養などを達成する、一体型細胞培養チャンバも含まれ得る。入力ポートは、媒体の滅菌除去および補充を可能にすることができ、細胞は、組み込まれた顕微鏡を使用して監視することができる。たとえば、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら（２０１２年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６５１〜６６０頁、Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ．、１巻：７２〜８２頁、およびＷａｎｇら（２０１２年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９〜７０１頁を参照されたい。
【００８９】
一部の実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、複数の細胞表面マーカーに関して染色した細胞を、流体流に流す、フローサイトメトリーを介して収集および濃縮（または枯渇）される。一部の実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、分取規模の（ＦＡＣＳ）分類を介して収集および濃縮（または枯渇）される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップをＦＡＣＳに基づく検出システムと組み合わせて使用することによって、収集および濃縮（または枯渇）される。たとえば、国際公開第２０１０／０３３１４０号、Ｃｈｏら（２０１０年）、Ｌａｂ  Ｃｈｉｐ、１０巻、１５６７〜１５７３頁、およびＧｏｄｉｎら（２００８年）、Ｊ  Ｂｉｏｐｈｏｔｏｎ．、１巻（５号）：３５５〜３７６頁を参照されたい。いずれの事例においても、細胞は、複数のマーカーで標識することができ、十分に定義されたＴ細胞サブセットを高純度で単離することが可能である。
【００９０】
一部の実施形態では、抗体または結合パートナーは、陽性選択および／または陰性選択のための分離を促進するために、１つまたは複数の検出可能なマーカーで標識される。たとえば、分離は、蛍光標識した抗体への結合に基づくものであってもよい。一部の例では、１つまたは複数の細胞表面マーカーに特異的な抗体または他の結合パートナーの結合に基づく細胞の分離は、流体流において、たとえば、分取規模の（ＦＡＣＳ）を含む蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）、および／またはたとえばフローサイトメトリー検出システムと組み合わせた微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップによって、行われる。そのような方法は、複数のマーカーに基づく陽性選択および陰性選択を同時に可能にする。
【００９１】
一部の実施形態では、調製方法には、単離、インキュベーション、および／または操作の前または後のいずれかで、細胞を凍結、たとえば、極低温保存するためのステップが含まれる。一部の実施形態では、凍結およびそれに続く解凍のステップにより、細胞集団における顆粒球、およびある程度の単球が、除去される。一部の実施形態では、細胞は、たとえば、血漿および血小板を除去するための洗浄ステップの後に、凍結溶液中に懸濁される。様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれかを、一部の態様では、使用することができる。１つの例には、およそ２０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）およびおよそ８％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含有するＰＢＳ、または他の好適な細胞凍結媒体を使用することが含まれる。一部の態様では、溶液は、次いで、ＤＭＳＯおよびＨＳＡの最終濃度が、それぞれ、１０％および４％となるように、媒体で１：１希釈される。細胞は、次いで、１分間につき１℃の速度で、−８０℃に凍結され、液体窒素保管タンクの気相で保管される。
【００９２】
様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれかを、一部の態様では、使用することができる。一部の実施形態では、細胞試料は、極低温保護剤を含有する極低温保存またはガラス化媒体または溶液を含有し得る。好適な極低温保護剤としては、ＤＭＳＯ、グリセロール、グリコール、プロピレングリコール、エチレングリコール、プロパンジオール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、１，２−プロパンジオール（ＰＲＯＨ）、またはこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一部の例では、極低温保存溶液は、ポリビニルピロリジオン、ヒドロキシエチルデンプン、多糖類、単糖類、アルギン酸塩、トレハロース、ラフモース（ｒａｆｆｍｏｓｅ）、デキストラン、ヒト血清アルブミン、Ｆｉｃｏｌｌ、リポタンパク質、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルデンプン、自家血漿、またはこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない、１つまたは複数の非細胞透過性極低温保存剤を含有し得る。一部の実施形態では、細胞は、約１体積％〜約２０体積％、約３体積％〜約９体積％、または約６体積％〜約９体積％の最終濃度の極低温保護剤を有する凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、凍結溶液中の極低温保護剤の最終濃度は、約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％である。
【００９３】
特定の実施形態では、細胞は、約１体積％〜約２０体積％、約３体積％〜約９体積％、または約６体積％〜約９体積％の最終濃度のＤＭＳＯを有する凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、凍結溶液中のＤＭＳＯの最終濃度は、約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％である。
【００９４】
一部の実施形態では、組成物は、極低温保存に好適な１つまたは複数のバッグに封入される（たとえば、ＣｒｙｏＭａｃｓ（登録商標）Ｆｒｅｅｚｉｎｇ  Ｂａｇｓ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）。一部の実施形態では、組成物は、極低温保存に好適な１つまたは複数のバイアルに封入される（たとえば、ＣｅｌｌＳｅａｌ（登録商標）Ｖｉａｌｓ、Ｃｏｏｋ  Ｒｅｇｅｎｔｅｃ）。
【００９５】
一部の実施形態では、提供される方法は、極低温保存ステップの前または後のいずれかに、培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ）、インキュベーション、培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）、および／または遺伝子操作のステップを含む。一部の実施形態では、少なくとも遺伝子操作ステップが、極低温保存ステップの後に行われる。たとえば、一部の実施形態では、極低温保存された細胞集団をインキュベートおよび／または操作するための方法が、提供される。
【００９６】
したがって、一部の実施形態では、細胞集団は、培養開始組成物中でインキュベートされる。インキュベーションおよび／または操作は、培養容器、たとえば、ユニット、チャンバ、ウェル、カラム、チューブ、チュービングセット、バルブ、バイアル、培養皿、バッグ、または細胞を培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）または培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｅ）するための他の容器において行われ得る。
【００９７】
一部の実施形態では、細胞は、遺伝子操作の前またはそれとともに、インキュベートおよび／または培養される。インキュベーションステップには、培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）すること、培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ）すること、刺激すること、活性化すること、および／または増やすことが含まれ得る。一部の実施形態では、組成物または細胞は、刺激条件または刺激性薬剤の存在下において、インキュベートされる。そのような条件には、集団中の細胞の増殖、増大、活性化、および／または生存を誘導し、抗原曝露を模倣し、および／または遺伝子操作、たとえば、組換え抗原受容体の導入のために細胞を予備刺激するように、設計されるものが含まれる。
【００９８】
条件には、特定の媒体、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、作用物質、たとえば、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および／または刺激因子、たとえば、サイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、ならびに細胞を活性化するように設計された任意の他の作用物質のうちの１つまたは複数が含まれ得る。一部の態様では、細胞は、１つまたは複数のサイトカインの存在下においてインキュベートされ、一部の実施形態では、サイトカインカクテル、たとえば、ＰＣＴ特許出願公開第２０１５／１５７３８４号に記載されるものを利用することができ、これは、参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、細胞は、形質導入の前、同時、または後に、１つまたは複数のサイトカインおよび／またはサイトカインカクテルとともにインキュベートされる。
【００９９】
一部の実施形態では、刺激条件または刺激剤には、ＴＣＲ複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる、１つまたは複数の作用物質、たとえば、リガンドが含まれる。一部の態様では、作用物質は、Ｔ細胞におけるＴＣＲ／ＣＤ３細胞内シグナル伝達カスケードを作動させるかまたは開始する。そのような作用物質としては、抗体、たとえば、ＴＣＲに特異的なもの、たとえば、抗ＣＤ３を挙げることができる。一部の実施形態では、刺激条件には、共刺激性受容体を刺激することができる、１つまたは複数の作用物質、たとえば、リガンド、たとえば、抗ＣＤ２８が含まれる。一部の実施形態では、そのような作用物質および／またはリガンドは、固体支持体、たとえば、ビーズ、および／または１つもしくは複数のサイトカインに結合していてもよい。必要に応じて、増大方法は、さらに、抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体を、培養媒体に（たとえば、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で）添加するステップを含み得る。一部の実施形態では、刺激剤は、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、および／またはＩＬ−７を含む。一部の態様では、ＩＬ−２の濃度は、少なくとも約１０単位／ｍＬである。
【０１００】
一部の態様では、インキュベーションは、Ｒｉｄｄｅｌｌらへの米国特許第６，０４０，１７７号、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら（２０１２年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６５１〜６６０頁；Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ．、１巻：７２〜８２頁；および／またはＷａｎｇら（２０１２年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９〜７０１頁に記載されているものなどの技法に従って行われる。一部の態様では、インキュベーションは、ＰＣＴ特許出願公開第２０１６／０７３６０２号または米国公開第２０１６／０１２２７８２号に記載されているシステム、デバイス、装置、および／または方法を使用して行われ、これらの内容は、参照によりその全体が組み込まれる。一部の実施形態では、インキュベーションおよび／または培養は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載されている方法に従って行われ、この内容は、参照によりその全体が組み込まれる。
【０１０１】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、培養開始組成物に、フィーダー細胞、たとえば、非分裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を添加し（たとえば、結果として得られる細胞集団が、増大させようとする初期集団中のＴリンパ球それぞれに対して少なくとも約５個、１０個、２０個、もしくは４０個、またはそれを上回るＰＢＭＣフィーダー細胞を含有するように）、培養物をインキュベートすること（たとえば、Ｔ細胞の数を増大させるのに十分な時間）によって、増大される。一部の態様では、非分裂フィーダー細胞は、ガンマ照射ＰＢＭＣフィーダー細胞を含み得る。一部の実施形態では、ＰＢＭＣに、約３０００〜３６００ラドの範囲でガンマ線を照射して、細胞分裂を防止する。一部の態様では、フィーダー細胞は、Ｔ細胞集団の添加前に、培養媒体に添加される。
【０１０２】
一部の実施形態では、刺激条件としては、ヒトＴリンパ球の成長に好適な温度、たとえば、少なくとも摂氏約２５度、一般に、少なくとも約３０度、および一般に、摂氏３７度または約３７度が挙げられる。必要に応じて、インキュベーションは、フィーダー細胞として非分裂ＥＢＶ形質転換リンパ芽球様細胞（ＬＣＬ）を添加することをさらに含み得る。ＬＣＬには、約６０００〜１０，０００ラドの範囲でガンマ線を照射してもよい。ＬＣＬフィーダー細胞は、一部の態様では、任意の好適な量、たとえば、ＬＣＬフィーダー細胞の初期Ｔリンパ球に対する比が少なくとも約１０：１で、提供される。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、抗原特異的Ｔ細胞、たとえば、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞は、ナイーブまたは抗原特異的Ｔリンパ球を抗原で刺激することによって得られる。たとえば、サイトメガロウイルス抗原に対する抗原特異的Ｔ細胞株またはクローンは、Ｔ細胞を、感染した対象から単離し、細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて同じ抗原で刺激することによって、生成することができる。
【０１０４】
一部の実施形態では、細胞は、極低温で凍結および／または保管される前に、濃縮される。細胞を極低温で凍結および／または保管する前に細胞を濃縮する利点には、時間の節約が含まれ得る。たとえば、レシピエントが、細胞置換え療法の一部として細胞を必要としたときに、細胞を、極低温保管から解凍し、さらなる操作なしにレシピエントに投与することができる。一部の実施形態では、方法は、１種または複数種の細胞の濃縮を含む。一部の実施形態では、濃縮される細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞が、濃縮される。一部の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞が、濃縮される。一部の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方が、濃縮される。一部の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、別個のプロセスで濃縮される。一部の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、単一のプロセスで濃縮される。ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の濃縮は、たとえば、ＰＣＴ出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載される通りであってもよく、これは、その全体が本細書に組み込まれる。
【０１０５】
一部の実施形態では、細胞は、極低温で保管される前に、分析される。一部の実施形態では、細胞は、細胞の活性を測定するために分析され得る。一部の実施形態では、活性は、細胞の生物学的機能である。一部の実施形態では、活性は、Ｂ細胞の形質細胞および／もしくはメモリーＢ細胞への成熟、細胞傷害性Ｔ細胞および／もしくはマクロファージの活性化などを含む、免疫学的プロセスを補助する細胞の能力である。一部の実施形態では、活性は、受容体、受容体様分子、抗体、または抗体様分子を使用して、特定のリガンドまたは抗原に結合する、細胞の能力である。一部の実施形態では、活性は、ウイルスに感染した細胞および腫瘍細胞を認識し、それを破壊する、細胞の能力である。一部の実施形態では、細胞は、細胞の活性に関連するかまたはそれに影響を及ぼす、細胞の別の生物学的機能を測定するために、分析される。
【０１０６】
細胞の選択および／または処理のステップはまた、たとえば、国際公開第２０１７２１４２０７号に記載される通りであってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、および／または同第２０１６０７３６０２号に記載される通りであってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０７】
極低温での凍結方法
【０１０８】
一部の実施形態では、細胞は、たとえば、特定の細胞密度、たとえば、公知または制御された細胞密度で、凍結される。ある特定の実施形態では、凍結プロセスの間の細胞密度は、凍結プロセスの間に生じるおよび／またはそれに起因して生じる、細胞の死および／または細胞の損傷に影響を及ぼし得る。
【０１０９】
たとえば、特定の実施形態では、細胞密度は、平衡、たとえば、凍結プロセスの間の周囲との浸透平衡に影響を及ぼす。一部の実施形態では、この平衡は、脱水である、脱水を含む、および／または脱水をもたらす。ある特定の実施形態では、脱水は、凍結溶液、たとえば、ＤＭＳＯおよび／またはＤＭＳＯ含有溶液との接触、組合せ、および／またはインキュベーションにより生じる細胞の脱水であるか、またはそれを含む。特定の実施形態では、脱水は、たとえば、細胞に曝露される有効液状水分濃度を低減することによって、細胞外空間における氷結晶の核形成および成長により生じる脱水であるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、細胞は、異なる細胞密度、たとえば、高いかまたは低い細胞密度で凍結される細胞よりも、ゆっくりおよび／または低速な脱水をもたらす細胞密度で、凍結される。一部の実施形態では、細胞は、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度、たとえば、より高いかまたは低い細胞密度で凍結される細胞よりも、およそ以下の値、少なくとも以下の値、または以下の値だけ遅い脱水をもたらす細胞密度で、凍結される：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、または１００倍。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、細胞は、それぞれ、両端の値を含め、１×１０６個の細胞／ｍＬ〜１×１０８個の細胞／ｍＬもしくは約１×１０６個の細胞／ｍＬ〜約１×１０８個の細胞／ｍＬ、約１×１０６個の細胞／ｍＬ〜約２×１０７個の細胞／ｍＬ、約１×１０７個の細胞／ｍＬ〜約５×１０７個の細胞／ｍＬ、または約１×１０７個の細胞／ｍＬ〜５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、それぞれの値を含め、約１×１０６個の細胞／ｍＬ、約２×１０６個の細胞／ｍＬ、約５×１０６個の細胞／ｍＬ、約１×１０７個の細胞／ｍＬ、約１．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約３×１０７個の細胞／ｍＬ、約３．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約４×１０７個の細胞／ｍＬ、約４．５×１０７個の細胞／ｍＬ、または約５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、両端の値を含め、約１．５×１０７個の細胞／ｍＬ〜約６×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、少なくとも約１×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、両端の値を含め、約５×１０６個の細胞／ｍＬ〜約１５０×１０６個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも約１．５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。一部の実施形態では、細胞は、生存細胞である。一部の実施形態では、細胞密度は、Ｔ細胞の直径によって判定される。
【０１１１】
一部の実施形態では、細胞は、１つまたは複数の容器において、凍結される。ある特定の実施形態では、容器は、凍結容器および／または極低温保護容器である。極低温凍結に好適な容器としては、バイアル、バッグ、たとえばプラスチックバッグ、およびケーン（ｃａｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、細胞、たとえば、同じ細胞組成物、たとえば、ＣＡＲを発現する細胞を含有する細胞組成物中の細胞は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個の容器において、凍結される。たとえば、一部の実施形態では、細胞および／または細胞の組成物は、たとえば、溶液、凍結溶液、および／または極低温保護剤などに、容器に好適な体積よりも大きい体積で懸濁され、そのため、体積は、２つまたはそれを上回る容器に入れられる。一部の実施形態では、体積は、以下の値であるか、およそ以下の値であるか、または以下の値を下回る：１００ｍＬ、５０ｍＬ、２５ｍＬ、２０ｍＬ、１５ｍＬ、１０ｍＬ、５ｍＬ、または５ｍＬを下回る。細胞は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個のバイアルにおいて凍結される。特定の実施形態では、同じ体積の細胞が、それぞれのバイアルに入れられる。一部の実施形態では、バイアルは、同一のバイアル、たとえば、同じ製造業者、モデル、および／または製造ロットのバイアルである。特定の実施形態では、体積は、以下の値であるか、およそ以下の値であるか、または以下の値を上回る：１０ｍＬ、１５ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、４０ｍＬ、５０ｍＬ、６０ｍＬ、７０ｍＬ、８０ｍＬ、９０ｍＬ、１００ｍＬ、１２０ｍＬ、１５０ｍＬ、２００ｍＬ、または２００ｍＬを上回る。細胞は、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個のバッグにおいて凍結される。特定の実施形態では、同じ体積の細胞が、それぞれのバッグに入れられる。一部の実施形態では、バッグは、同一のバッグ、たとえば、同じ製造業者、モデル、および／または製造ロットのバッグである。
【０１１２】
一部の実施形態では、容器は、バイアルである。ある特定の実施形態では、容器は、以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値の充填容積を有するバイアルである：０．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、１０ｍＬ、１１ｍＬ、１２ｍＬ、１３ｍＬ、１４ｍＬ、１５ｍＬ、１６ｍＬ、１７ｍＬ、１８ｍＬ、１９ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、または５０ｍＬ。一部の実施形態では、バイアルは、それぞれ、両端の値を含め、１ｍＬ〜１２０ｍＬ、１ｍＬ〜２０ｍＬ、１ｍＬ〜５ｍＬ、１ｍＬ〜１０ｍＬ、１ｍＬ〜４０ｍＬ、または２０ｍＬ〜４０ｍＬの充填容積を有する。一部の実施形態では、バイアルは、凍結用バイアル、極低温保護バイアル、および／または極低温バイアルである。好適なバイアルは、公知であり、ＣｅｌｌＳｅａｌ（登録商標）Ｖｉａｌｓ（Ｃｏｏｋ  Ｒｅｇｅｎｔｅｃ）、ならびに米国特許第８，９３６，９０５号、同第９，５６５，８５４号、および同第８，７０９，７９７号に記載されているバイアルが挙げられるがこれらに限定されず、これらの文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１３】
特定の実施形態では、容器は、バッグである。ある特定の実施形態では、容器は、以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値の充填容積を有するバッグである：０．５ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、１０ｍＬ、１１ｍＬ、１２ｍＬ、１３ｍＬ、１４ｍＬ、１５ｍＬ、１６ｍＬ、１７ｍＬ、１８ｍＬ、１９ｍＬ、２０ｍＬ、２５ｍＬ、３０ｍＬ、３５ｍＬ、４０ｍＬ、４５ｍＬ、または５０ｍＬ。一部の実施形態では、バッグは、それぞれ、両端の値を含め、１ｍＬ〜１２０ｍＬ、１ｍＬ〜２０ｍＬ、１ｍＬ〜５ｍＬ、１ｍＬ〜４０ｍＬ、２０ｍＬ〜４０ｍＬ、１ｍＬ〜７０ｍＬ、または５０ｍＬ〜７０ｍＬの充填容積を有する。一部の実施形態では、バッグには、以下の値、およそ以下の値、または以下の値を下回る体積が、充填される：１００ｍＬ、７５ｍＬ、７０ｍＬ、５０ｍＬ、２５ｍＬ、２０ｍＬ、または１０ｍＬ。好適なバッグは、公知であり、ＣｒｙｏＭａｃｓ（登録商標）Ｆｒｅｅｚｉｎｇ  Ｂａｇｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）が挙げられるが、これに限定されない。ある特定の実施形態では、体積は、室温での体積である。一部の実施形態では、体積は、両端の値を含め、３７℃〜４℃、１６℃〜２７℃での体積であるか、または以下の温度、およそ以下の温度、もしくは少なくとも以下の温度での体積である：１６℃、１７℃、１８℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、もしくは３７℃。一部の実施形態では、体積は、２５℃での体積である。
【０１１４】
一部の実施形態では、両端の値を含め、１ｍＬ〜２０ｍＬの体積の媒体または溶液、たとえば、凍結溶液中の細胞は、１つまたは複数のバイアルにおいて、凍結される。一部の実施形態では、１つまたは複数のバイアルは、両端の値を含め、１ｍＬ〜５ｍＬの充填容積を有する。ある特定の実施形態では、両端の値を含め、２０ｍＬ〜１２０ｍＬの体積の媒体または溶液、たとえば、凍結溶液中の細胞は、１つまたは複数のバッグにおいて、凍結される。特定の実施形態では、１つまたは複数のバッグは、両端の値を含め、２０ｍＬ〜４０ｍＬの充填容積を有する。一部の実施形態では、１２０ｍＬまたはそれを上回る体積の媒体または溶液、たとえば、凍結溶液中の細胞は、１つまたは複数のバッグにおいて、凍結される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のバッグは、両端の値を含め、５０ｍＬ〜７０ｍＬの充填容積を有する。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、細胞は、容器、たとえば、バッグまたはバイアルに入れられた溶液、たとえば、凍結溶液において、表面積対体積の比で、凍結される。特定の実施形態では、表面積対体積の比は、それぞれ、両端の値を含め、以下の値であるかまたはおよそ以下の値である：０．１ｃｍ−１〜１００ｃｍ−１、１ｃｍ−１〜５０ｃｍ−１、１ｃｍ−１〜２０ｃｍ−１、１ｃｍ−１〜１０ｃｍ−１、２ｃｍ−１〜１０ｃｍ−１、３ｃｍ−１〜７ｃｍ−１、または３ｃｍ−１〜６ｃｍ−１。特定の実施形態では、表面積対体積の比は、３ｃｍ−１〜６ｃｍ−１または約３ｃｍ−１〜約６ｃｍ−１である。一部の実施形態では、表面積対体積の比は、以下の値であるか、およそ以下の値であるか、または少なくとも以下の値である：３ｃｍ−１、４ｃｍ−１、５ｃｍ−１、６ｃｍ−１、または７ｃｍ−１。
【０１１６】
一部の実施形態では、細胞は、１分間につき１℃または約１℃の速度で、−８０℃に凍結される。一部の実施形態では、細胞は、制御された速度の凍結装置を使用して、１分間につき１℃または約１℃の速度で、能動的および／または効果的に冷却される。一部の実施形態では、細胞は、制御された速度の凍結装置を用いて凍結させることができる。一部の態様では、制御された速度の凍結装置は、プログラムされた冷却プロファイル、たとえば、複数の冷却および／または加熱速度を有するプロファイルで、細胞を凍結させるために使用される。そのような凍結プロファイルは、たとえば、細胞内での氷の形成を低減させるために、核形成、たとえば、氷の形成を制御するようにプログラムすることができる。一部の実施形態では、急速冷却プロファイルを開始するように選択される温度および終了温度は、容器の種類および凍結される体積に関連する。一部の実施形態では、体積が小さすぎるか、または容器が高すぎる表面積対体積の比を有する場合、試料は、温度の低下に対して高速で応答しすぎて、凍結するのが急速すぎるため、細胞内での氷の形成のリスクがある。他の実施形態では、体積が大きすぎるか、または容器の直径が低すぎる表面積対体積の比を有する場合、試料は、温度の低下に対して応答せず、凍結が起こるのが遅すぎて、試料はプロファイルの後半で核形成が制御されないリスクがあり、溶液は、氷結晶が形成される前に、極低温保存剤、たとえば、ＤＭＳＯへの長時間の曝露による損傷が生じる。
【０１１７】
一部の実施形態では、細胞は、以下のプロファイルを使用して、凍結される：４．０℃での保持ステップ、続いて、試料が−６℃の温度に達するまで、１分間につき１．２℃の冷却ステップ。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが−６５℃に達するまで、１分間につき２５℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが−３０℃に達するまで、１分間につき１５℃の速度で加熱される。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが−４０℃に達するまで、１分間につき１℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが−９０℃に達するまで、１分間につき１℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで、制御された速度の凍結装置から取り出すまで、−９０℃で保持される。
【０１１８】
一部の実施形態では、細胞は、以下のプロファイルを使用して、凍結される：４．０℃での保持ステップ、続いて、試料が−６℃の温度に達するまで、１分間につき１．２℃の冷却ステップ。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが−６５℃に達するまで、１分間につき２５℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが−３０℃に達するまで、１分間につき１５℃の速度で加熱される。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが−４０℃に達するまで、１分間につき１℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで、試料を含有するチャンバが−９０℃に達するまで、１分間につき１０℃の速度で冷却される。一部の態様では、試料は、次いで、制御された速度の凍結装置から取り出すまで、−９０℃で保持される。
【０１１９】
一部の実施形態では、細胞は、極低温で凍結および／または保管される前に、−８０℃を上回る温度から０℃の温度に冷却される。たとえば、細胞は、−２０℃、または−８０℃を上回るかもしくは−２０℃を下回る温度に、冷却され得る。
【０１２０】
一部の実施形態では、細胞は、極低温で保管される前に、−２１０℃〜−８０℃の温度に、極低温で凍結される。たとえば、細胞は、−２１０℃、または−１９６℃、または−８０℃に、極低温で凍結され得る。
【０１２１】
一部の実施形態では、細胞は、１分間につき０．１℃〜５℃の速度で、冷却および／または極低温で凍結される。一部の実施形態では、細胞は、１分間につき０．２℃〜４℃の速度で、冷却および／または極低温で凍結される。一部の実施形態では、細胞は、１分間につき０．５℃〜３℃の速度で、冷却および／または極低温で凍結される。一部の実施形態では、細胞は、１分間につき０．５℃〜２℃の速度で、冷却および／または極低温で凍結される。一部の実施形態では、細胞は、１分間につき１℃の速度で、冷却および／または極低温で凍結される。たとえば、細胞を、上述の速度で冷却および／または極低温で凍結させる方法としては、細胞を、中の温度をそのような速度で低下させるプログラム可能な冷蔵庫に入れることが挙げられる。それを行う別の方法としては、細胞のバイアルを容器に入れ、そこで、バイアルを、イソプロピルアルコールで包囲し、容器を、低温環境または極低温で凍結される環境に置くことが挙げられる。一部の実施形態では、細胞は、段階的なアプローチを使用して細胞が凍結される場合の温度よりも低い温度において、保管される。たとえば、一部の実施形態では、保管は、−８０℃を下回る温度、たとえば、−１００、−１１０、−１２０、−１３０、−１４０、−１５０、−１６０℃を下回る温度、またはそれよりも低い温度において、行われる。一部の態様では、そのような保管は、細胞または細胞の生物学的活性を、より多くの程度および／またはより長い期間、維持することをもたらす。
【０１２２】
一部の実施形態では、冷却または極低温で凍結させる前に、細胞は、細胞が存在する試料中のある特定の成分を除去するために、洗浄される。たとえば、細胞は、血漿および／または血小板を除去するために、洗浄され得る。細胞は、たとえば、ＰＣＴ出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載されているように洗浄され得、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１２３】
一部の実施形態では、細胞は、冷却、極低温での凍結、および／または極低温での保管の前に、凍結溶液と合わされる。一部の実施形態では、凍結溶液は、冷却、極低温での凍結、または極低温保管の後、および細胞を解凍した後に、凍結溶液なしで冷却、極低温で凍結、または極低温で保管した細胞と比較して、細胞の１つまたは複数の生物学的機能のより優れた保持をもたらす。
【０１２４】
一部の実施形態では、凍結溶液は、０．１体積％〜５０体積％のＤＭＳＯ、および０．１重量％〜２０重量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、凍結溶液は、０．５体積％〜４０体積％のＤＭＳＯ、および０．２重量％〜１５重量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、凍結溶液は、１体積％〜３０体積％のＤＭＳＯ、および０．５重量％〜１０重量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、凍結溶液は、１体積％〜２０体積％のＤＭＳＯ、および２重量％〜７．５重量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、凍結溶液は、５体積％〜２０体積％のＤＭＳＯ、および１重量％〜５重量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、凍結溶液は、１０体積％のＤＭＳＯ、または７もしくは７．５もしくは８体積％もしくはおよそこれらの割合のＤＭＳＯ、ならびに４重量％のＨＳＡを含む。一部の実施形態では、上述の濃度は、凍結溶液を細胞と合わせる前のＤＭＳＯおよびＨＳＡの濃度である。一部の実施形態では、上述の濃度は、凍結溶液を細胞と合わせた後のＤＭＳＯおよびＨＳＡの濃度である。
【０１２５】
一部の実施形態では、細胞は、−２１０℃〜−８０℃の温度において、極低温で保管される。一部の実施形態では、細胞は、−２１０℃〜−１９６℃の温度において、極低温で保管される。一部の実施形態では、細胞は、−１９６℃〜−８０℃の温度において、極低温で保管される。一部の実施形態では、細胞は、液体窒素保管タンクの気相において、極低温で保管される。
【０１２６】
一部の実施形態では、細胞は、１日〜１２年間の期間、極低温で保管される。たとえば、細胞は、細胞療法において使用するための生存性を失う前、かつレシピエントの処置が必要となるまでの期間、保管され得る。レシピエントの処置が必要となるまで、細胞をそのように保管することにより、ある特定の実施形態では、本開示の方法により、レシピエントが細胞療法のために細胞を必要とした場合に、細胞が容易に利用可能となるという利点が提供される。一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、または４８時間、保管もしくは貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１週間、２週間、３週間、または４週間、保管または貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、「長期保管」または「長期貯蔵」される。一部の態様では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、４０年間、またはそれを上回る期間、保管される。
【０１２７】
一部の実施形態では、保管期間の後に、細胞は、解凍される。一部の実施形態では、細胞は、細胞の生物学的機能の少なくとも一部分を回復させるように、細胞の温度を、０℃または０℃よりも高くに上昇させることによって、解凍される。一部の実施形態では、細胞は、細胞の生物学的機能の少なくとも一部分を回復させるように、細胞の温度を、３７℃に上昇させることによって、解凍される。ある特定の実施形態によると、解凍することは、細胞を、容器に入れ、３７℃の水浴に、６０〜９０秒間入れることを含む。
【０１２８】
一部の実施形態では、細胞は、解凍される。特定の実施形態では、細胞は、急速に、たとえば、細胞を過熱することも細胞を３７℃を上回るなどの高温に曝露することもなく、可能な限り急速に、解凍される。一部の実施形態では、急速な解凍により、細胞が高濃度の極低温保護剤および／またはＤＭＳＯに曝露されるのが低減および／または予防される。特定の実施形態では、解凍が起こる速度は、容器、たとえば、中で細胞が凍結および解凍されるバイアルおよび／またはバッグの性質に影響を受け得る。
【０１２９】
特定の実施形態では、細胞は、以下の温度、およそ以下の温度、または以下を下回る温度において、解凍される：３７℃、３５℃、３２℃、３０℃、２９℃、２８℃、２７℃、２６℃、２５℃、２４℃、２３℃、２２℃、２１℃、２０℃、もしくは１５℃、またはそれぞれ両端の値を含め、１５℃〜３０℃、２３℃〜２８℃、もしくは２４℃〜２６℃。
【０１３０】
一部の実施形態では、細胞は、熱ブロック、乾燥解凍装置、または水浴で、解凍される。ある特定の実施形態では、細胞は、熱ブロックでも、乾燥解凍装置でも、水浴でも解凍されない。一部の実施形態では、細胞は、室温で解凍される。
【０１３１】
一部の実施形態では、容器壁の厚さは、細胞解凍の速度に影響を及ぼし、たとえば、例として、厚い壁を有する容器内の細胞は、より薄い壁を有する容器内よりもゆっくりと解凍され得る。一部の実施形態では、表面積対体積の比が低い容器は、解凍の速度がゆっくりおよび／または不均一であり得る。一部の実施形態では、極低温凍結された細胞は、表面積対体積の比が以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値である容器において、急速に解凍される：１ｃｍ−１、２ｃｍ−１、３ｃｍ−１、４ｃｍ−１、５ｃｍ−１、６ｃｍ−１、または７ｃｍ−１、８ｃｍ−１、９ｃｍ−１、または１０ｃｍ−１。特定の実施形態では、細胞は、以下の時間以内、およそ以下の時間以内、または以下を下回る時間以内に、解凍される：１２０分間、９０分間、６０分間、４５分間、３０分間、２５分間、２０分間、１５分間、または１０分間。一部の実施形態では、細胞は、それぞれ、両端の値を含め、１０分間〜６０分間、１５分間〜４５分間、または１５分間〜２５分間、解凍される。特定の実施形態では、細胞は、２０分以内、約２０分以内、または２０分間を下回る時間以内に、解凍される。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、解凍された細胞は、投与の前に、または任意の後続の操作および／もしくは処理ステップの前に、静置、たとえば、インキュベートまたは培養される。一部の実施形態では、細胞は、低いおよび／もしくは検出不可能な量の極低温保護剤下において、または極低温保護剤、たとえばＤＭＳＯの非存在下において、静置される。特定の実施形態では、解凍された細胞は、洗浄ステップの後または直後に、たとえば、極低温保護剤および／またはＤＭＳＯを除去するために、静置される。一部の実施形態では、静置は、３７℃または約３７℃での培養および／またはインキュベーションであるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、静置は、任意の処理または操作ステップで使用されるおよび／またはそれと関連する、任意の試薬、たとえば、刺激性試薬、ビーズ試薬、または組換えサイトカインの非存在下において、行われる。一部の実施形態では、細胞は、以下の時間、およそ以下の時間、または少なくとも以下の時間、静置される：５分間、１０分間、１５分間、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１２時間、１８時間、または２４時間。ある特定の実施形態では、細胞は、２時間、約２時間、または少なくとも２時間、静置される。
【０１３３】
一部の実施形態では、保管期間の後、生存細胞の割合は、２４％〜１００％である。生存細胞の割合は、たとえば、例として、Ｓｃｈｕｌｚら、Ｔｏｗａｒｄｓ  ａ  ｘｅｎｏ−ｆｒｅｅ  ａｎｄ  ｆｕｌｌｙ  ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ｍｅｄｉｕｍ  ｆｏｒ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ，  ｒｅｃｏｖｅｒｙ，  ａｎｄ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ  ｏｆ  ＰＢＭＣ  ｄｕｒｉｎｇ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｔｏｒａｇｅ、３８２巻、Ｊ．  Ｉｍｍｕ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２４、２６頁に記載されている、トリパンブルー色素排除技法を使用して、判定することができ、この文献は、ＶｉＣｅｌｌ（商標）細胞生存性分析装置（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｋｒｅｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してトリパンブルー排除を行うことを開示している。トリパンブルー色素排除技法下では、たとえば、死細胞は、青色に見え、したがって、生存細胞と区別することができる。生存細胞の割合はまた、たとえば、フローサイトメーターまたは別の技法もしくは機器を使用することによって、判定することができる。
【０１３４】
試料または細胞の冷却、極低温での凍結、および／または極低温での保管のプロセスの間、細胞の１つまたは複数の生物学的機能は、保存される。凍結溶液の使用により、これらの生物学的機能を保存するのが補助される。細胞を解凍すると、これらの生物学的機能は、回復される。生存性に加えて、上述の生物学的機能、他の生物学的機能には、細胞の複製能力、遺伝子修飾に対する受容性、ならびにＢ細胞の形質細胞および／もしくはメモリーＢ細胞への成熟、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞および／もしくはマクロファージの活性化などを含め、免疫学的プロセスを補助する能力が含まれ得る。
【０１３５】
一部の実施形態では、記載される細胞および組成物、たとえば、特定の濃度または細胞密度の細胞組成物、極低温保護剤の存在下において凍結されたもの、および／または特定の体積もしくは表面積対体積の比で容器に充填されたもののうちのいずれかを含む、凍結された細胞の特徴としては、解凍した後、代替的な手段によって凍結された細胞よりも、改善された、増加した、および／もしくはより高速な増大；改善された、増加した、および／もしくは強化された細胞生存、ならびに低減された細胞死、たとえば、壊死、プログラム細胞死、および／もしくはアポトーシスの事象；改善された、強化された、および／もしくは増加した活性、たとえば、細胞溶解活性；ならびに／または低減された老化もしくは休止の事象が挙げられる。
【０１３６】
特定の実施形態では、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対体積の比で、凍結され、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、凍結、極低温凍結、および／または極低温保存の間、および／またはそれによって生じる、細胞死、たとえば、壊死および／またはアポトーシスが、低減されている。特定の実施形態では、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対体積の比で、凍結され、凍結、極低温凍結、および／または極低温保存後４８時間以内、たとえば、凍結した細胞の解凍後の、遅延細胞死の低減、たとえば、壊死、プログラム細胞死、またはアポトーシスによって死滅する細胞の量の低減を有する。ある特定の実施形態では、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、少なくとも以下の値またはおよそ以下の値だけ少ない細胞が、凍結および／または極低温保存の間および／またはその結果として、死滅する：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９９％。ある特定の実施形態では、提供される細胞密度および／または表面積対体積の比で凍結させた細胞のうちの４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、１％未満、０．１％未満、または０．０１％未満が、凍結、極低温凍結、および／または極低温保存の間またはその結果として、死滅する。
【０１３７】
一部の実施形態では、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対体積の比で凍結され、同じかまたは類似の条件下において異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、凍結、極低温凍結、および／または極低温保存に起因するおよび／またはその結果として生じる老化または休止の事象が、低減されている。特定の実施形態では、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、少なくとも以下の値またはおよそ以下の値だけ少ない細胞が、老化および／または休止した細胞である：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９９％。ある特定の実施形態では、細胞は、提供される細胞密度および／または表面積対体積の比で凍結され、細胞のうちの４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、１％未満、０．１％未満、または０．０１％未満が、凍結、極低温凍結、および／または極低温保存の結果として、老化および／または休止した状態となる。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対体積の比で、凍結、たとえば、極低温凍結され、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度および／または表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、細胞が解凍された後に、たとえば、本明細書に記載される刺激性試薬とのインキュベーションなどによる刺激条件下において、改善された、より高速な、および／またはより急速な、増大を有する。特定の実施形態では、細胞は、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞と比較して、以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値だけ高速および／またはより急速な速度で、増大する：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍。たとえば、一部の実施形態では、解凍された細胞は、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積の比で凍結させた細胞を解凍したものよりも、以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値だけ短い時間で、閾値の増大、たとえば、所定の細胞数、密度、または係数、たとえば、２倍の増大に達する：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％。
【０１３９】
一部の実施形態では、細胞は、その細胞密度で凍結、たとえば、極低温凍結され、同じかまたは類似の条件下において、異なる細胞密度、たとえば、より高いかまたはより低い密度で凍結させた細胞と比較して、細胞を解凍した後に、改善された、増加した、および／またはより高い、細胞溶解活性、たとえば、本明細書に記載される細胞溶解活性を測定するための任意のアッセイによって測定されるものなどを有する。特定の実施形態では、細胞溶解活性は、同じかまたは類似の条件下において、異なる密度で凍結させた細胞と比較して、以下の値、およそ以下の値、または少なくとも以下の値増加する：５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍。
【０１４０】
細胞の修飾
【０１４１】
一部の実施形態では、細胞は、たとえば、新しい、強化された、改変された、増加した、または減少した活性のうちの１つまたは複数を細胞に付与するように、修飾され得る。一部の実施形態では、細胞は、収集の後、かつ極低温での凍結および／または保管の前に、修飾される。一部の実施形態では、細胞は、極低温保管後の解凍の後に、修飾される。例示的な細胞修飾方法は、ＰＣＴ出願公開第２０１６／０３３５７０号および同第２０１６／１１５５５９号に記載されており、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例示的な細胞修飾方法はまた、国際公開第２０１７２１４２０７号および／または同第２０１６０７３６０２号にも記載されており、これらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４２】
一部の実施形態では、活性は、細胞の生物学的機能、たとえば、例として、Ｂ細胞の形質細胞および／もしくはメモリーＢ細胞への成熟、細胞傷害性Ｔ細胞および／もしくはマクロファージの活性化などを含む、免疫学的プロセスを補助する細胞の能力である。一部の実施形態では、活性は、受容体、受容体様分子、抗体、または抗体様分子を使用して、特定のリガンドまたは抗原に結合する、細胞の能力である。一部の実施形態では、活性は、ウイルスに感染した細胞および腫瘍細胞を認識し、それを破壊する、細胞の能力である。
【０１４３】
細胞の遺伝子修飾
【０１４４】
一部の実施形態では、細胞の修飾には、細胞を遺伝子修飾することが含まれる。たとえば、遺伝子修飾は、ＰＣＴ出願公開第２０１６／０３３５７０号および同第２０１６／１１５５５９号に記載されている通りであってもよく、これらは、その全体が本明細書に組み込まれる。例示的な遺伝子修飾方法はまた、国際公開第２０１７２１４２０７号および／または同第２０１６０７３６０２号にも記載されており、これらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４５】
一部の実施形態では、遺伝子修飾には、細胞が、タンパク質を認識する一本鎖可変断片（「ｓｃＦｖ」）を含むキメラ分子を発現することを可能にする様式で、細胞を遺伝子修飾することが含まれる。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、特定のタンパク質に結合する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、特定のタンパク質に結合する抗体の一部分に由来する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖが細胞によって発現されると、細胞は、がん細胞を認識し、細胞自身を活性化することができる。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲＩ、ｔＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＬＩ−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＢＣＭＡ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、サイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体によって発現される分子のうちの少なくとも１つに結合する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ１９に結合する。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＢＣＭＡに結合する。
【０１４６】
ＣＡＲ
【０１４７】
一部の実施形態では、遺伝子修飾には、１つまたは複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように、細胞を遺伝子修飾することが含まれる。ＣＡＲを含め、例示的な抗原受容体、およびそのような受容体を操作し、細胞に導入するための方法としては、たとえば、ＰＣＴ特許出願公開第２０００／１４２５７号、同第２０１３／１２６７２６号、同第２０１２／１２９５１４号、同第２０１４／０３１６８７号、同第２０１３／１６６３２１号、同第２０１３／０７１１５４号、同第２０１３／１２３０６１号、米国特許出願公開第２００２／１３１９６０号、同第２０１３／２８７７４８号、同第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３号、および同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許第２５３７４１６号に記載されているもの、ならびに／またはＳａｄｅｌａｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．、３巻（４号）：３８８〜３９８頁（２０１３年）；Ｄａｖｉｌａら、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、８巻（４号）：ｅ６１３３８頁（２０１３年）；Ｔｕｒｔｌｅら、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻（５号）：６３３〜３９頁（２０１２年）；Ｗｕら、Ｃａｎｃｅｒ、１８巻（２号）：１６０〜７５頁（２０１２年）に記載されているものが挙げられる。一部の態様では、抗原受容体としては、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているＣＡＲ、およびＰＣＴ特許出願公開第２０１４／０５５６６８号Ａ１に記載されているものが挙げられる。ＣＡＲの例としては、前述の刊行物、たとえば、国際公開第２０１４／０３１６８７号、米国特許第８，３３９，６４５号、同第７，４４６，１７９号、米国公開第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第７，４４６，１９０号、同第８，３８９，２８２号、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１０巻、２６７〜２７６頁（２０１３年）；Ｗａｎｇら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９〜７０１頁（２０１２年）；ならびにＢｒｅｎｔｊｅｎｓら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．、５巻（１７７頁）（２０１３年）のいずれかに開示されているＣＡＲが挙げられる。国際公開第２０１４／０３１６８７号、米国特許第８，３３９，６４５号、同第７，４４６，１７９号、米国公開第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第７，４４６，１９０号、および同第８，３８９，２８２号もまた、参照されたい。キメラ受容体、たとえば、ＣＡＲは、一般に、細胞外抗原結合性ドメイン、たとえば、抗体分子の一部分、一般に、抗体の重鎖可変（ＶＨ）領域および／または軽鎖可変（ＶＬ）領域、たとえば、ｓｃＦｖ抗体断片を含む。一部の実施形態では、キメラ受容体は、抗体分子に由来しない細胞外抗原結合性ドメイン、たとえば、リガンドまたは他の結合性部分を含む。
【０１４８】
一部の実施形態では、受容体によって標的とされる抗原は、ポリペプチドである。一部の実施形態では、それは、炭水化物または他の分子である。一部の実施形態では、抗原は、正常であるかまたは標的とされない細胞または組織と比較して、疾患または状態の細胞、たとえば、腫瘍細胞または病原性細胞に、選択的に発現されるかまたは過剰発現される。他の実施形態では、抗原は、正常細胞に発現される、および／または操作細胞に発現される。
【０１４９】
受容体によって標的とされる抗原としては、一部の実施形態では、オーファンチロシンキナーゼ受容体ＲＯＲＩ、ｔＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＬＩ−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、サイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）、ならびに／またはビオチン化分子、ならびに／またはＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、もしくは他の病原体によって発現される分子が挙げられる。
【０１５０】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、病原体特異的抗原に結合する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ウイルス抗原（たとえば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶなど）、細菌抗原、および／または寄生虫抗原に特異的である。
【０１５１】
一部の実施形態では、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲの抗体部分は、さらに、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分、たとえば、ヒンジ領域、たとえば、ＩｇＧ４ヒンジ領域、ならびに／またはＣＨ１／ＣＬおよび／もしくはＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、定常領域または部分は、ヒトＩｇＧ、たとえば、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１のものである。一部の態様では、定常領域の部分は、抗原認識要素、たとえば、ｓｃＦｖと、膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域としての機能を果たす。スペーサーは、スペーサーの非存在下と比較して、抗原結合後の細胞の応答性の増加をもたらす長さのものであり得る。例示的なスペーサー、たとえば、ヒンジ領域としては、国際特許出願公開第２０１４／０３１６８７号に記載されているものが挙げられる。一部の例では、スペーサーは、１２個もしくは約１２個のアミノ酸の長さであるか、または１２個を上回らないアミノ酸の長さである。例示的なスペーサーとしては、少なくとも約１０〜２２９個のアミノ酸、約１０〜２００個のアミノ酸、約１０〜１７５個のアミノ酸、約１０〜１５０個のアミノ酸、約１０〜１２５個のアミノ酸、約１０〜１００個のアミノ酸、約１０〜７５個のアミノ酸、約１０〜５０個のアミノ酸、約１０〜４０個のアミノ酸、約１０〜３０個のアミノ酸、約１０〜２０個のアミノ酸、または約１０〜１５個のアミノ酸を有するものが挙げられ、列挙された範囲のうちのいずれかの両端の間の任意の整数が含まれる。一部の実施形態では、スペーサー領域は、約１２個もしくはそれを下回るアミノ酸、約１１９個もしくはそれを下回るアミノ酸、または約２２９個もしくはそれを下回るアミノ酸を有する。例示的なスペーサーとしては、ＩｇＧ４ヒンジ単独、ＩｇＧ４ヒンジがＣＨ２およびＣＨ３ドメインに連結されたもの、またはＩｇＧ４ヒンジがＣＨ３ドメインに連結されたものが挙げられる。例示的なスペーサーとしては、Ｈｕｄｅｃｅｋら、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９巻：３１５３頁（２０１３年）、国際特許出願公開第２０１４０３１６８７号、米国特許第８，８２２，６４７号、または米国特許出願公開第２０１４／０２７１６３５号に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５２】
一部の実施形態では、定常領域または部分は、ヒトＩｇＧ、たとえば、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１のものである。一部の実施形態では、スペーサーは、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰを有する。一部の実施形態では、定常領域または部分は、ＩｇＤのものである。
【０１５３】
抗原認識ドメインは、一般に、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達要素、たとえば、ＣＡＲの場合には、抗原受容体複合体、たとえば、ＴＣＲ複合体を通じた活性化を模倣する、および／または別の細胞表面受容体を介してシグナル伝達する、シグナル伝達要素に、連結される。したがって、一部の実施形態では、抗原結合性要素（たとえば、抗体）は、１つまたは複数の膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに連結される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞外ドメインに融合されている。一実施形態では、受容体、たとえば、ＣＡＲにおけるドメインのうちの１つと天然に会合している膜貫通ドメインが、使用される。一部の事例では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるために、そのようなドメインが同じかまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合することを回避するように、選択されるか、アミノ酸置換によって修飾される。
【０１５４】
膜貫通ドメインは、一部の実施形態では、天然の供給源または合成の供給源のいずれかに由来する。供給源が天然である場合、ドメインは、一部の態様では、任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域としては、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４に由来するものが挙げられる（すなわち、少なくとも、これらの膜貫通領域を含む）。あるいは、膜貫通ドメインは、一部の実施形態では、合成である。一部の態様では、合成の膜貫通ドメインは、主として、疎水性残基、たとえば、ロイシンおよびバリンを含む。一部の態様では、フェニルアラニン、トリプトファン、およびバリンのトリプレットが、合成の膜貫通ドメインのそれぞれの末端に見出されるであろう。一部の実施形態では、連結は、リンカー、スペーサー、および／または膜貫通ドメインによるものである。
【０１５５】
細胞内シグナル伝達ドメインには、天然の抗原受容体によるシグナル、共刺激性受容体と組み合わせたそのような受容体によるシグナル、および／または共刺激性受容体単独によるシグナルを模倣するかまたはそれらに近似するものがある。一部の実施形態では、短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカー、たとえば、長さが２〜１０個のアミノ酸のリンカー、たとえば、グリシンおよびセリンを含有するもの、たとえば、グリシン−セリンダブレットが、存在し、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインとの間の連結を形成している。
【０１５６】
受容体、たとえば、ＣＡＲは、一般に、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達要素を含む。一部の実施形態では、受容体は、Ｔ細胞活性化および細胞傷害性を媒介する、ＴＣＲ複合体、たとえば、ＴＣＲ  ＣＤ３鎖の細胞内構成要素、たとえば、ＣＤ３ゼータ鎖を含む。したがって、一部の態様では、抗原結合性部分は、１つまたは複数の細胞シグナル伝達モジュールに連結される。一部の実施形態では、細胞シグナル伝達モジュールは、ＣＤ３膜貫通ドメイン、ＣＤ３細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または他のＣＤ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、受容体、たとえば、ＣＡＲは、さらに、１つまたは複数の追加の分子の一部分、たとえば、Ｆｃ受容体γ、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、またはＣＤ１６を含む。たとえば、一部の態様では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体は、ＣＤ３−ゼータ（ＣＤ３−ζ）またはＦｃ受容体γと、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２５、またはＣＤ１６との間のキメラ分子を含む。
【０１５７】
一部の実施形態では、ＣＡＲまたは他のキメラ受容体のライゲーション時に、受容体の細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞、たとえば、ＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞の正常なエフェクター機能または応答のうちの少なくとも１つを活性化する。たとえば、一部の状況では、ＣＡＲは、Ｔ細胞の機能、たとえば、細胞溶解活性またはＴヘルパー活性、たとえば、サイトカインもしくは他の因子の分泌を誘導する。一部の実施形態では、抗原受容体要素または共刺激性分子の細胞内シグナル伝達ドメインの短縮された部分は、たとえば、エフェクター機能シグナルを伝達する場合、インタクトな免疫刺激性鎖の代わりに使用される。一部の実施形態では、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列を含み、一部の態様ではまた、天然の状況において、そのような受容体と一緒に、抗原受容体の結合後にシグナル伝達を開始するように作用する共受容体のものも含む。
【０１５８】
天然のＴＣＲの状況では、完全な活性化は、一般に、ＴＣＲを通じたシグナル伝達だけでなく、共刺激性シグナルも必要とする。したがって、一部の実施形態では、完全な活性化を促進するために、二次的なまたは共刺激性のシグナルを生成するための構成要素もまた、ＣＡＲに含まれる。他の実施形態では、ＣＡＲは、共刺激性シグナルを生成するための構成要素を含まない。一部の態様では、さらなるＣＡＲが、同じ細胞において発現され、二次的なまたは共刺激性のシグナルを生成するための構成要素を提供する。
【０１５９】
Ｔ細胞活性化は、一部の態様では、以下の２つのクラスの細胞質シグナル伝達配列によって媒介されると説明される：ＴＣＲを通じて抗原依存性の一次活性化を開始するもの（一次細胞質シグナル伝達配列）、および抗原非依存的様式で、二次的なまたは共刺激性のシグナルを提供するように作用するもの（二次細胞質シグナル伝達配列）。一部の態様では、ＣＡＲは、そのようなシグナル伝達要素のうちの一方または両方を含む。
【０１６０】
一部の態様では、ＣＡＲは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する、一次細胞質シグナル伝達配列を含む。刺激性様式で作用する一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭとして公知のシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ゼータ鎖、ＦｃＲガンマ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンに由来するものが挙げられる。一部の実施形態では、ＣＡＲにおける細胞質シグナル伝達分子は、ＣＤ３ゼータに由来する、細胞質シグナル伝達ドメイン、その一部分、または配列を含む。
【０１６１】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、共刺激性受容体、たとえば、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、およびＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインおよび／または膜貫通部分を含む。一部の態様では、同じＣＡＲに、活性化構成要素および共刺激性構成要素の両方が含まれる。
【０１６２】
一部の実施形態では、活性化ドメインは、１つのＣＡＲに含まれ、共刺激性構成要素は、別の抗原を認識する別のＣＡＲによって提供される。一部の実施形態では、ＣＡＲには、活性化または刺激性ＣＡＲ、共刺激性ＣＡＲが含まれるが、いずれも、同じ細胞に発現される（国際公開第２０１４／０５５６６８号を参照されたい）。一部の態様では、細胞は、１つまたは複数の刺激性もしくは活性化ＣＡＲならびに／または共刺激性ＣＡＲを含む。一部の実施形態では、細胞は、阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖら、Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５巻（２１５号）（２０１３年）を参照されたい）、たとえば、疾患または状態と関連するものおよび／またはそれに特異的なものではない抗原を認識し、それによって、疾患を標的とするＣＡＲを通じて送達される活性化シグナルが、阻害性ＣＡＲがそのリガンドに結合することによって減少または阻害されて、たとえば、標的外作用が低減される、ＣＡＲをさらに含む。
【０１６３】
ある特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３（たとえば、ＣＤ３−ゼータ）細胞内ドメインに連結された、ＣＤ２８膜貫通およびシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内ドメインに連結された、キメラＣＤ２８およびＣＤ１３７（４−１ＢＢ、ＴＮＦＲＳＦ９）共刺激性ドメインを含む。
【０１６４】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数の、たとえば、２つまたはそれを上回る、共刺激性ドメインおよび活性化ドメイン、たとえば、一次活性化ドメインを、細胞質部分に含む。例示的なＣＡＲには、ＣＤ３−ゼータ、ＣＤ２８、および４−１ＢＢの細胞内構成要素が含まれる。
【０１６５】
一部の実施形態では、ＣＡＲまたは他の抗原受容体は、さらに、マーカー、たとえば、細胞表面マーカーを含み、このマーカーは、受容体、たとえば、細胞表面受容体の短縮バージョン、たとえば、短縮型ＥＧＦＲ（ｔＥＧＦＲ）を発現する細胞の形質導入または操作を確認するために使用することができる。一部の態様では、マーカーとしては、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２、ＣＤ３４、ＮＧＦＲ、または上皮成長因子受容体（たとえば、ｔＥＧＦＲ）のすべてまたは一部（たとえば、短縮形態）が挙げられる。一部の実施形態では、マーカーをコードする核酸は、リンカー配列、たとえば、切断可能なリンカー配列、たとえば、Ｔ２Ａをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されている。たとえば、マーカー、および必要に応じてリンカーの配列は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１４０３１６８７号に開示されているように、任意のものであってもよく、これは、参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、マーカーは、ＰＣＴ特許出願公開第２０１１／０５６８９４号に記載されている通りであってもよく、この内容は、その全体が組み込まれる。たとえば、マーカーは、必要に応じて、リンカー配列、たとえば、Ｔ２Ａ切断可能なリンカー配列に連結された、短縮型ＥＧＦＲ（ｔＥＧＦＲ）であり得る。
【０１６６】
一部の実施形態では、マーカーは、Ｔ細胞に天然に見出されない、またはＴ細胞の表面に天然に見出されない、分子、たとえば、細胞表面タンパク質、またはその一部分である。一部の実施形態では、分子は、非自己分子、たとえば、非自己タンパク質、すなわち、細胞が養子移入される宿主の免疫系によって「自己」として認識されないものである。
【０１６７】
一部の実施形態では、マーカーは、治療的機能を果たさず、および／または遺伝子操作のため、たとえば、操作が成功した細胞を選択するためのマーカーとして使用すること以外の作用をもたらさない。他の実施形態では、マーカーは、治療用分子、または別の形で何らかの所望される作用を発揮する分子、たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏで遭遇する細胞のリガンド、たとえば、養子移入およびリガンドとの遭遇の際に細胞の応答を強化および／もしくは低下させる共刺激性もしくは免疫チェックポイント分子であってもよい。
【０１６８】
一部の事例では、ＣＡＲは、第１世代、第２世代、および／または第３世代のＣＡＲと称される。一部の態様では、第１世代のＣＡＲは、単に、抗原結合時にＣＤ３鎖に誘導されるシグナルを提供するものであり、一部の態様では、第２世代のＣＡＲは、そのようなシグナルおよび共刺激性シグナルを提供するもの、たとえば、共刺激性受容体、たとえば、ＣＤ２８またはＣＤ１３７に由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含むものであり、一部の態様では、第３世代のＣＡＲは、異なる共刺激性受容体の複数の共刺激性ドメインを含むものである。
【０１６９】
一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、抗体または抗体断片を含む細胞外部分を含む。一部の態様では、キメラ抗原受容体は、抗体または断片を含む細胞外部分、ならびに細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、抗体または断片は、ｓｃＦｖを含み、細胞内ドメインは、ＩＴＡＭを含む。一部の態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３−ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖のゼータ鎖のシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを連結する膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通部分を含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞共刺激性分子の細胞内ドメインを含む。細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインは、直接的または間接的に連結され得る。一部の実施形態では、細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインは、スペーサー、たとえば、本明細書に記載される任意のものによって、連結される。一部の実施形態では、受容体は、膜貫通ドメインが由来する分子の細胞外部分、たとえば、ＣＤ２８細胞外部分を含む。一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞共刺激性分子またはその機能性バリアントに由来する細胞内ドメインを、たとえば、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインの間に、含む。一部の態様では、Ｔ細胞共刺激性分子は、ＣＤ２８または４１ＢＢである。
【０１７０】
たとえば、一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体、たとえば、抗体断片、ＣＤ２８の膜貫通部分またはその機能性バリアントであるかまたはそれを含む膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ２８のシグナル伝達部分またはその機能性バリアントおよびＣＤ３ゼータのシグナル伝達部分またはその機能性バリアントを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体、たとえば、抗体断片、ＣＤ２８の膜貫通部分またはその機能性バリアントであるかまたはそれを含む膜貫通ドメイン、ならびに４−１ＢＢのシグナル伝達部分またはその機能性バリアントおよびＣＤ３ゼータのシグナル伝達部分またはその機能性バリアントを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部のそのような実施形態では、受容体は、さらに、Ｉｇ分子、たとえば、ヒトＩｇ分子の一部分、たとえば、Ｉｇヒンジ、たとえば、ＩｇＧ４ヒンジを含むスペーサー、たとえば、ヒンジのみのスペーサーを含む。
【０１７１】
一部の実施形態では、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメイン（たとえば、受託番号Ｐ０１７４７．１）またはそのバリアントであるか、またはそれを含む。
【０１７２】
一部の実施形態では、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達要素は、ヒトＣＤ２８の細胞内共刺激性シグナル伝達ドメインまたはその機能性バリアントもしくは一部分、たとえば、天然のＣＤ２８タンパク質の１８６位〜１８７位に、ＬＬからＧＧの置換を有するドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、４−１ＢＢの細胞内共刺激性シグナル伝達ドメイン（たとえば、受託番号Ｑ０７０１１．１）またはその機能性バリアントもしくは一部分を含む。
【０１７３】
一部の実施形態では、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３ゼータ刺激性シグナル伝達ドメイン、またはその機能性バリアント、たとえば、ヒトＣＤ３ζ（受託番号Ｐ２０９６３．２）のアイソフォーム３の１１２  ＡＡ細胞質ドメイン、または米国特許第７，４４６，１９０号もしくは米国特許第８，９１１，９９３号に記載されているＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む。
【０１７４】
一部の態様では、スペーサーは、ＩｇＧのヒンジ領域のみ、たとえば、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１のヒンジのみを含む。他の実施形態では、スペーサーは、必要に応じてＣＨ２ドメインおよび／またはＣＨ３ドメインに連結された、Ｉｇヒンジ、たとえば、ＩｇＧ４由来のヒンジであるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインに連結された、Ｉｇヒンジ、たとえば、ＩｇＧ４ヒンジである。一部の実施形態では、スペーサーは、ＣＨ３ドメインのみに連結された、Ｉｇヒンジ、たとえば、ＩｇＧ４ヒンジである。一部の実施形態では、スペーサーは、グリシン−セリンリッチ配列または他の可動性リンカー、たとえば、公知の可動性リンカーであるか、またはそれを含む。
【０１７５】
たとえば、一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体、たとえば、ｓｃＦｖを含む、抗体断片、スペーサー、たとえば、免疫グロブリン分子の一部分、たとえば、重鎖分子のヒンジ領域および／または１つもしくは複数の定常領域を含むスペーサー、たとえば、Ｉｇヒンジを含むスペーサー、ＣＤ２８由来の膜貫通ドメインのすべてまたは一部分を含む膜貫通ドメイン、ＣＤ２８由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、抗体または断片、たとえば、ｓｃＦｖ、スペーサー、たとえば、Ｉｇヒンジを含むスペーサーのうちの任意のもの、ＣＤ２８由来の膜貫通ドメイン、４−１ＢＢ由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ゼータ由来のシグナル伝達ドメインを含む。
【０１７６】
一部の実施形態では、そのようなＣＡＲ構築物をコードする核酸分子は、さらに、Ｔ２Ａリボソームスキップエレメントおよび／またはｔＥＧＦＲ配列をコードする配列を、たとえば、ＣＡＲをコードする配列の下流に含む。一部の実施形態では、抗原受容体（たとえば、ＣＡＲ）を発現するＴ細胞はまた、短縮型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）を非免疫原性選択エピトープとして発現するように生成することができ（たとえば、同じ構築物から２つのタンパク質を発現するように、Ｔ２Ａリボソームスイッチによって分離されたＣＡＲおよびＥＧＦＲｔをコードする構築物を導入することによって）、これを、次いで、そのような細胞を検出するためのマーカーとして使用することができる（たとえば、米国特許第８，８０２，３７４号を参照されたい）。
【０１７７】
対象に投与された細胞によって発現される組換え受容体、たとえば、ＣＡＲは、一般に、処置されている疾患もしくは状態またはその細胞に発現される、それらと関連する、および／またはそれらに特異的である分子を認識するか、またはそれに特異的に結合する。分子、たとえば、抗原に特異的に結合すると、受容体は、一般に、免疫刺激性シグナル、たとえば、ＩＴＡＭにより伝達されるシグナルを、細胞に送達し、それによって、疾患または状態を標的とする免疫応答を促進する。たとえば、一部の実施形態では、細胞は、疾患もしくは状態の細胞もしくは組織によって発現されるかまたは疾患もしくは状態と関連する抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する。
【０１７８】
ＴＣＲ
【０１７９】
一部の実施形態では、遺伝子修飾には、標的ポリペプチドのペプチドエピトープまたはＴ細胞エピトープ、たとえば、腫瘍、ウイルス、または自己免疫タンパク質の抗原を認識する、１つまたは複数のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはその抗原結合性部分を発現するように、細胞を遺伝子修飾することが含まれる。
【０１８０】
一部の実施形態では、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」は、可変α鎖およびβ鎖（それぞれ、ＴＣＲαおよびＴＣＲβとして公知である）または可変γ鎖およびδ鎖（それぞれ、ＴＣＲγおよびＴＣＲδとして公知である）、またはその抗原結合性部分を含む、分子であり、これは、ＭＨＣ分子に結合したペプチドに特異的に結合することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、αβ形態である。典型的には、αβ形態およびγδ形態で存在するＴＣＲは、一般に、構造が類似しているが、それらを発現するＴ細胞は、異なる解剖学的位置または機能を有し得る。ＴＣＲは、細胞の表面上に見出すことができるか、または可溶性形態で見出すことができる。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面上に見出され、ここで、ＴＣＲは、一般に、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原を認識することを担う。
【０１８１】
別途言及されない限り、「ＴＣＲ」という用語は、完全ＴＣＲ、ならびにその抗原結合性部分または抗原結合性断片を包含すると理解されるものとする。一部の実施形態では、ＴＣＲは、インタクトまたは全長ＴＣＲであり、αβ形態またはγδ形態のＴＣＲを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲは、全長ＴＣＲよりも短いが、ＭＨＣ分子に結合した特定のペプチドに結合する、たとえば、ＭＨＣ−ペプチド複合体に結合する、抗原結合性部分である。一部の事例では、ＴＣＲの抗原結合性部分または断片は、全長またはインタクトなＴＣＲの構造ドメインの一部分のみしか含まない場合があるが、依然として、完全ＴＣＲが結合する、ペプチドエピトープ、たとえば、ＭＨＣ−ペプチド複合体に結合することができる。一部の事例では、抗原結合性部分は、ＴＣＲの可変ドメイン、たとえば、ＴＣＲの可変α鎖および可変β鎖を含み、これは、特定のＭＨＣ−ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分である。一般に、ＴＣＲの可変鎖は、ペプチド、ＭＨＣ、および／またはＭＨＣ−ペプチド複合体の認識に関与する相補性決定領域を含む。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＴＣＲの可変ドメインは、超可変性ループ、または相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、これらは、一般に、抗原認識ならびに結合能力および特異性への主要な寄与因子である。一部の実施形態では、ＴＣＲのＣＤＲまたはその組合せにより、所与のＴＣＲ分子の抗原結合性部位のすべてまたは実質的にすべてが形成される。ＴＣＲ鎖の可変領域内の様々なＣＤＲは、一般に、フレームワーク領域（ＦＲ）によって分離されており、この領域は、一般に、ＣＤＲと比較して、ＴＣＲ分子間で低い変動性を呈する（たとえば、Ｊｏｒｅｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．、８７巻：９１３８頁、１９９０年、Ｃｈｏｔｈｉａら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、７巻：３７４５頁、１９８８年を参照されたく、また、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．  Ｃｏｍｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７巻：５５頁、２００３年も参照されたい）。一部の実施形態では、ＣＤＲ３は、抗原結合もしくは特異性を担う主要なＣＤＲであるか、または所与のＴＣＲ可変領域における３つのＣＤＲのなかで、抗原認識および／もしくはペプチド−ＭＨＣ複合体のプロセシングされたペプチド部分との相互作用に最も重要なものである。一部の状況では、アルファ鎖のＣＤＲ１は、ある特定の抗原性ペプチドのＮ末端部分と相互作用し得る。一部の状況では、ベータ鎖のＣＤＲ１は、ペプチドのＣ末端部分と相互作用し得る。一部の状況では、ＣＤＲ２は、ＭＨＣ−ペプチド複合体のＭＨＣ部分との相互作用またはその認識に最も強力に寄与するか、またはそれを担う主要なＣＤＲである。一部の実施形態では、β鎖の可変領域は、さらに、超可変領域（ＣＤＲ４またはＨＶＲ４）を含み得、この領域は、一般に、スーパー抗原結合には関与するが、抗原認識には関与しない（Ｋｏｔｂ（１９９５年）、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、８巻：４１１〜４２６頁）。
【０１８３】
一部の実施形態では、ＴＣＲはまた、定常ドメイン、膜貫通ドメイン、および／または短い細胞質側尾部を含み得る（たとえば、Ｊａｎｅｗａｙら、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：  Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ、第３版、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ｐ．４：３３頁、１９９７年を参照されたい）。一部の態様では、ＴＣＲのそれぞれの鎖は、１つのＮ末端側免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、およびＣ末端側の短い細胞質側尾部を有し得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、シグナル伝達を媒介することに関与する、ＣＤ３複合体の不変タンパク質と会合している。
【０１８４】
一部の実施形態では、ＴＣＲ鎖は、１つまたは複数の定常ドメインを含む。たとえば、所与のＴＣＲ鎖（たとえば、α鎖またはβ鎖）の細胞外部分は、２つの免疫グロブリン様ドメイン、たとえば、可変ドメイン（たとえば、ＶαまたはＶβ、典型的には、Ｋａｂａｔの番号付けに基づいて、アミノ酸１〜１１６（Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ  Ｄｅｐｔ．  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、１９９１年、第５版））および細胞膜に隣接する定常ドメイン（たとえば、α鎖定常ドメインもしくはＣα、典型的には、Ｋａｂａｔの番号付けに基づいて鎖の１１７位〜２５９位、またはβ鎖定常ドメインもしくはＣβ、典型的にはＫａｂａｔに基づいて鎖の１１７位〜２９５位）を含み得る。たとえば、一部の事例では、２つの鎖によって形成されるＴＣＲの細胞外部分は、２つの膜近傍定常ドメイン、および２つの膜遠位可変ドメインを含み、これらの可変ドメインは、それぞれがＣＤＲを含む。ＴＣＲの定常ドメインは、短い接続配列を含み得、そこで、システイン残基がジスルフィド結合を形成し、それによってＴＣＲの２つの鎖が連結される。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲが、定常ドメインに２つのジスルフィド結合を含むように、α鎖およびβ鎖のそれぞれにさらなるシステイン残基を有してもよい。
【０１８５】
一部の実施形態では、ＴＣＲ鎖は、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、正に荷電している。一部の事例では、ＴＣＲ鎖は、細胞質側尾部を含む。一部の事例では、この構造により、ＴＣＲは、ＣＤ３およびそのサブユニットなど、他の分子と会合することが可能である。たとえば、膜貫通領域を有する定常ドメインを含むＴＣＲは、タンパク質を細胞膜に固定し、ＣＤ３シグナル伝達装置または複合体の不変サブユニットと会合することができる。ＣＤ３シグナル伝達サブユニット（たとえば、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、ＣＤ３ε鎖、およびＣＤ３ζ鎖）の細胞内尾部は、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能力に関与する１つまたは複数の免疫受容体活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭを含む。
【０１８６】
一部の実施形態では、ＴＣＲは、αおよびβ（または必要に応じてγおよびδ）の２つの鎖のヘテロ二量体であってもよく、または一本鎖ＴＣＲ構築物であってもよい。一部の実施形態では、ＴＣＲは、たとえば、１つまたは複数のジスルフィド結合によって連結された、２つの別個の鎖（α鎖およびβ鎖またはγ鎖およびδ鎖）を含む、ヘテロ二量体である。
【０１８７】
一部の実施形態では、ＴＣＲは、公知のＴＣＲ配列、たとえば、Ｖα、β鎖の配列から生成することができ、これらの鎖の実質的に全長のコード配列は、容易に入手可能である。Ｖ鎖配列を含め、全長ＴＣＲ配列を、細胞源から得るための方法は、周知である。一部の実施形態では、ＴＣＲをコードする核酸は、様々な源から、たとえば、所与の１つまたは複数の細胞内にある、もしくは所与の１つまたは複数の細胞から単離されたＴＣＲをコードする核酸のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、または公的に入手可能なＴＣＲ  ＤＮＡ配列の合成によって、得ることができる。
【０１８８】
一部の実施形態では、ＴＣＲは、生物学的源から、たとえば、細胞から、たとえば、Ｔ細胞（たとえば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマ、または他の公的に入手可能な源から、得られる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏで単離された細胞から得ることができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、胸腺選択されたＴＣＲである。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ネオエピトープ制限ＴＣＲである。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであってもよい。一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、ＴＣＲの配列の知識から合成で生成することができる。
【０１８９】
一部の実施形態では、ＴＣＲは、候補ＴＣＲライブラリーを、標的ポリペプチド抗原またはその標的Ｔ細胞エピトープに対してスクリーニングすることにより特定または選択されたＴＣＲから生成される。ＴＣＲライブラリーは、ＰＢＭＣ、脾臓、または他のリンパ系器官に存在する細胞を含め、対象から単離したＴ細胞からのＶαおよびＶβのレパートリーの増幅によって生成することができる。一部の事例では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）から増幅することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲライブラリーは、ＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋細胞から生成することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、正常または健常な対象のＴ細胞源から、すなわち、正常なＴＣＲライブラリーから増幅することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、罹患した対象のＴ細胞源から、すなわち、罹患ＴＣＲライブラリーから増幅することができる。一部の実施形態では、たとえば、ヒトから得られた試料、たとえば、Ｔ細胞におけるＲＴ−ＰＣＲによって、ＶαおよびＶβの遺伝子レパートリーを増幅するために、縮重プライマーが使用される。一部の実施形態では、ｓｃＴｖライブラリーを、ナイーブＶαおよびＶβライブラリーからアセンブルしてもよく、ここで、増幅された産物は、リンカーによって分離されるようにクローニングまたはアセンブルされる。対象および細胞の源に応じて、ライブラリーは、ＨＬＡアレル特異的となり得る。あるいは、一部の実施形態では、ＴＣＲライブラリーは、親または足場ＴＣＲ分子の変異生成または多様化によって、生成することができる。一部の態様では、ＴＣＲは、たとえば、α鎖またはβ鎖の変異生成などによって、指向型進化に供される。一部の態様では、ＴＣＲのＣＤＲ内の特定の残基が、改変される。一部の実施形態では、選択されたＴＣＲは、親和性成熟によって修飾され得る。一部の実施形態では、抗原特異的Ｔ細胞は、たとえば、ペプチドに対するＣＴＬ活性を評価するスクリーニングによって、選択され得る。一部の態様では、ＴＣＲ、たとえば、抗原特異的Ｔ細胞に存在するものは、結合活性、たとえば、抗原に対する特定の親和性または結合力などによって、選択され得る。
【０１９０】
一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、修飾または操作が行われたものである。一部の実施形態では、指向型進化方法は、改変された特性を有する、たとえば、特定のＭＨＣ−ペプチド複合体に対して高い親和性を有する、ＴＣＲを生成するために使用される。一部の実施形態では、指向型進化は、酵母ディスプレイ（Ｈｏｌｌｅｒら（２００３年）、Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、４巻、５５〜６２頁；Ｈｏｌｌｅｒら（２０００年）、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ、９７巻、５３８７〜９２頁）、ファージディスプレイ（Ｌｉら（２００５年）、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２３巻、３４９〜５４頁）、またはＴ細胞ディスプレイ（Ｃｈｅｒｖｉｎら（２００８年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、３３９巻、１７５〜８４頁）を含むがこれらに限定されない、ディスプレイ方法によって達成される。一部の実施形態では、ディスプレイアプローチは、公知の親または参照ＴＣＲの操作または修飾を伴う。たとえば、一部の事例では、野生型ＴＣＲが、変異生成されたＴＣＲを産生するための鋳型として使用され得、ここで、ＣＤＲの１つまたは複数の残基が変異され、所望される改変された特性、たとえば、所望される標的抗原に対する高い親和性を有する変異体が、選択される。
【０１９１】
一部の実施形態では、目的のＴＣＲを産生または生成する際に使用される標的ポリペプチドのペプチドは、当業者に公知であるか、または当業者によって容易に特定することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲまたは抗原結合性部分の生成に使用するのに好適なペプチドは、目的の標的ポリペプチド、たとえば、以下に記載される標的ポリペプチドにおけるＨＬＡ制限モチーフの存在に基づいて判定することができる。一部の実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２０１結合モチーフ、プロテアソームおよび免疫プロテアソームの切断部位、ならびにペプチドは、当業者に公知のコンピュータ予測モデルを使用して特定される。一部の実施形態では、ＭＨＣクラスＩ結合部位の予測に関して、そのようなモデルとしては、ＰｒｏＰｒｅｄ１（ＳｉｎｇｈおよびＲａｇｈａｖａ（２００１年）、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、１７巻（１２号）：１２３６〜１２３７頁）、およびＳＹＦＰＥＩＴＨＩ（Ｓｃｈｕｌｅｒら（２００７年）、Ｉｍｍｕｎｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、４０９巻（１号）：７５〜９３頁、２００７年を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、ＭＨＣ制限エピトープは、ＨＬＡ−Ａ０２０１であり、これは、全コーカソイド人類のおよそ３９〜４６％に発現され、したがって、ＴＣＲまたは他のＭＨＣ−ペプチド結合性分子の調製に使用するのに好適なＭＨＣ抗原の選択肢を表す。
【０１９２】
一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、組換えで産生された天然のタンパク質またはその変異形態であり得、ここで、１つまたは複数の特性、たとえば、結合特性が、改変されている。一部の実施形態では、ＴＣＲは、様々な動物種、たとえば、ヒト、マウス、ラット、または他の哺乳動物のうちの１つに由来し得る。ＴＣＲは、細胞結合型または可溶性形態であり得る。一部の実施形態では、提供される方法の目的では、ＴＣＲは、細胞の表面に発現される細胞結合型の形態である。
【０１９３】
一部の実施形態では、ＴＣＲは、全長ＴＣＲである。一部の実施形態では、ＴＣＲは、抗原結合性部分である。一部の実施形態では、ＴＣＲは、二量体ＴＣＲ（ｄＴＣＲ）である。一部の実施形態では、ＴＣＲは、一本鎖ＴＣＲ（ｓｃ−ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、ｄＴＣＲまたはｓｃＴＣＲは、国際公開第０３／０２０７６３号、同第０４／０３３６８５号、同第２０１１／０４４１８６号に記載されている構造を有し、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９４】
一部の実施形態では、ＴＣＲは、膜貫通配列に対応する配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲは、細胞質配列に対応する配列を含む。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤ３とＴＣＲ複合体を形成することができる。一部の実施形態では、ｄＴＣＲまたはｓｃＴＣＲを含め、ＴＣＲのいずれも、Ｔ細胞の表面に活性なＴＣＲをもたらす、シグナル伝達ドメインに連結され得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、細胞の表面上に発現される。
【０１９５】
一部の実施形態では、ｄＴＣＲは、ＴＣＲα鎖の可変領域配列に対応する配列が、ＴＣＲα鎖の定常領域の細胞外配列に対応する配列のＮ末端に融合された、第１のポリペプチドと、ＴＣＲβ鎖の可変領域配列に対応する配列が、ＴＣＲβ鎖の定常領域の細胞外配列に対応する配列のＮ末端に融合された、第２のポリペプチドと、を含み、第１および第２のポリペプチドは、ジスルフィド結合によって連結されている。一部の実施形態では、結合は、天然の二量体αβ  ＴＣＲに存在する天然の鎖間ジスルフィド結合に対応し得る。一部の実施形態では、鎖間ジスルフィド結合は、天然のＴＣＲには存在しない。たとえば、一部の実施形態では、１つまたは複数のシステインが、ｄＴＣＲポリペプチド対の定常領域細胞外配列に組み込まれ得る。一部の事例では、天然および非天然の両方のジスルフィド結合が、所望され得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、膜に固定するために、膜貫通配列を含む。
【０１９６】
一部の実施形態では、ｄＴＣＲは、可変αドメイン、定常αドメイン、および定常αドメインのＣ末端に結合した第１の二量体化モチーフを含むＴＣＲα鎖、ならびに可変βドメイン、定常βドメイン、および定常βドメインのＣ末端に結合した第１の二量体化モチーフを含むＴＣＲβ鎖を含み、ここで、第１および第２の二量体化モチーフは、容易に相互作用して、第１の二量体化モチーフ内のアミノ酸と、第２の二量体化モチーフ内のアミノ酸との間で共有結合を形成し、ＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ鎖同士を連結する。
【０１９７】
一部の実施形態では、ＴＣＲは、ｓｃＴＣＲである。典型的には、ｓｃＴＣＲは、当業者に公知の方法を使用して生成することができ、たとえば、Ｓｏｏ  Ｈｏｏ，  Ｗ．  Ｆ．ら、ＰＮＡＳ  （ＵＳＡ）、８９巻、４７５９頁（１９９２年）；Ｗｕｌｆｉｎｇ，  Ｃ．およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，  Ａ．、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２４２巻、６５５頁（１９９４年）；Ｋｕｒｕｃｚ，  Ｉ．ら、ＰＮＡＳ  （ＵＳＡ）、９０巻、３８３０頁（１９９３年）；ＰＣＴ出願公開第９６／１３５９３号、同第９６／１８１０５号、同第９９／６０１２０号、同第９９／１８１２９号、同第０３／０２０７６３号、同第２０１１／０４４１８６号、およびＳｃｈｌｕｅｔｅｒ，  Ｃ．  Ｊ．ら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２５６巻、８５９頁（１９９６年）を参照されたい。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ＴＣＲ鎖の会合を促進するために、導入された非天然の鎖間ジスルフィド結合を含む（たとえば、ＰＣＴ出願公開第０３／０２０７６３号を参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、そのＣ末端に融合された異種ロイシンジッパーにより、鎖の会合が促進される、非ジスルフィド結合の短縮型ＴＣＲである（たとえば、ＰＣＴ出願公開第９９／６０１２０号を参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ペプチドリンカーを介してＴＣＲβ可変ドメインに共有結合した、ＴＣＲα可変ドメインを含む（たとえば、ＰＣＴ出願公開第９９／１８１２９号を参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１９８】
一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ＴＣＲα鎖可変領域に対応するアミノ酸配列によって構築される第１のセグメント、ＴＣＲβ鎖定常ドメイン細胞外配列に対応するアミノ酸配列のＮ末端に融合されたＴＣＲβ鎖可変領域配列に対応するアミノ酸配列によって構築される第２のセグメント、および第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末端に連結するリンカー配列を含む。
【０１９９】
一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、α鎖細胞外定常ドメイン配列のＮ末端に融合されたα鎖可変領域配列によって構築される第１のセグメント、ならびにβ鎖細胞外定常配列のＮ末端および膜貫通配列に融合されたβ鎖可変領域配列によって構築される第２のセグメント、ならびに必要に応じて、第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末端に連結するリンカー配列を含む。
【０２００】
一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、β鎖細胞外定常ドメイン配列のＮ末端に融合されたＴＣＲβ鎖可変領域配列によって構築される第１のセグメント、ならびにα鎖細胞外定常配列のＮ末端および膜貫通配列に融合されたα鎖可変領域配列によって構築される第２のセグメント、ならびに必要に応じて、第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末端に連結するリンカー配列を含む。
【０２０１】
一部の実施形態では、第１および第２のＴＣＲセグメントを連結するｓｃＴＣＲのリンカーは、ＴＣＲ結合特異性を保持しながら、単一のポリペプチド鎖を形成することができる、任意のリンカーであり得る。一部の実施形態では、リンカー配列は、たとえば、式−Ｐ−ＡＡ−Ｐ−を有し得、ここで、Ｐは、プロリンであり、ＡＡは、アミノ酸配列を表し、アミノ酸は、グリシンおよび／またはセリンである。一部の実施形態では、第１および第２のセグメントは、それらの可変領域配列が、そのような結合のための配向となるように、対合される。したがって、一部の事例では、リンカーは、第１のセグメントのＣ末端と第２のセグメントのＮ末端との間の距離、または逆も同様である距離に及ぶのに十分であるが、ｓｃＴＣＲの標的リガンドへの結合を遮断または低減するほど長くはない、長さを有する。一部の実施形態では、リンカーは、１０個〜４５個もしくは約１０個〜約４５個のアミノ酸、たとえば、１０個〜３０個のアミノ酸、または２６個〜４１個のアミノ酸残基、たとえば、２９個、３０個、３１個、または３２個のアミノ酸を含み得る。一部の実施形態では、リンカーは、式−ＰＧＧＧ−（ＳＧＧＧＧ）５−Ｐ−を有し、ここで、Ｐは、プロリンであり、Ｇは、グリシンであり、Ｓは、セリンである。一部の実施形態では、リンカーは、配列ＧＳＡＤＤＡＫＫＤＡＡＫＫＤＧＫＳを有する。
【０２０２】
一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、α鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基を、β鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基に連結させる、共有結合のジスルフィド結合を含む。一部の実施形態では、天然のＴＣＲにおける鎖間ジスルフィド結合は、存在しない。たとえば、一部の実施形態では、１つまたは複数のシステインが、ｓｃＴＣＲポリペプチドの第１および第２のセグメントの定常領域細胞外配列に組み込まれ得る。一部の事例では、天然および非天然の両方のジスルフィド結合が、所望され得る。
【０２０３】
導入された鎖間ジスルフィド結合を含むｄＴＣＲまたはｓｃＴＣＲの一部の実施形態では、天然のジスルフィド結合は、存在しない。一部の実施形態では、天然の鎖間ジスルフィド結合を形成している天然のシステインのうちの１つまたは複数は、別の残基、たとえば、セリンまたはアラニンに置換されている。一部の実施形態では、導入されたジスルフィド結合は、第１および第２のセグメントにおける非システイン残基を、システインに変異させることによって、形成され得る。ＴＣＲの例示的な非天然のジスルフィド結合は、ＰＣＴ出願公開第２００６／０００８３０号に記載されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０４】
一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性断片は、標的抗原に対して、１０−５Ｍ〜１０−１２Ｍまたは約１０−５Ｍ〜約１０−１２Ｍならびにその中に含まれるすべての個々の値および範囲の平衡結合定数で、親和性を呈する。一部の実施形態では、標的抗原は、ＭＨＣ−ペプチド複合体またはリガンドである。
【０２０５】
一部の実施形態では、ＴＣＲ、たとえば、α鎖およびβ鎖をコードする１つまたは複数の核酸は、ＰＣＲまたは他の好適な手段によって増幅させ、１つまたは複数の好適な発現ベクターにクローニングすることができる。発現ベクターは、任意の好適な組換え発現ベクターであり得、任意の好適な宿主に形質転換またはトランスフェクションを行うために使用することができる。好適なベクターとしては、増やす、および増大させること、または発現させること、またはその両方のために設計されたもの、たとえば、プラスミドおよびウイルスが挙げられる。
【０２０６】
一部の実施形態では、ベクターは、ｐＵＣ系列（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ系列（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、ＬａＪｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）、ｐＥＴ系列（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）、ｐＧＥＸ系列（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、またはｐＥＸ系列（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．）のベクターであり得る。一部の事例では、バクテリオファージベクター、たとえば、λＧ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、λＥＭＢＬ４、およびλＮＭ１１４９もまた、使用することができる。一部の実施形態では、植物発現ベクターを使用することができ、これには、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１、およびｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が含まれる。一部の実施形態では、動物発現ベクターとしては、ｐＥＵＫ−Ｃｌ、ｐＭＡＭ、ｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。一部の実施形態では、ウイルスベクター、たとえば、レトロウイルスベクターが使用される。
【０２０７】
一部の実施形態では、組換え発現ベクターは、標準的な組換えＤＮＡ技法を使用して、調製することができる。一部の実施形態では、ベクターは、調節配列、たとえば、転写および翻訳開始および終結コドンを含み得るが、これらは、適宜、ベクターを導入しようとする宿主の種類（たとえば、細菌、真菌、植物、または動物）に特異的であり、ベクターがＤＮＡに基づくかＲＮＡに基づくかが考慮される。一部の実施形態では、ベクターは、ＴＣＲまたは抗原結合性部分（または他のＭＨＣ−ペプチド結合性分子）をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結された、非天然のプロモーターを含み得る。一部の実施形態では、プロモーターは、非ウイルスプロモーターまたはウイルスプロモーター、たとえば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター、およびマウス幹細胞ウイルスの長い末端反復に見出されるプロモーターであり得る。当業者に公知の他のプロモーターもまた、企図される。
【０２０８】
一部の実施形態では、ＴＣＲをコードするベクターを生成するために、α鎖およびβ鎖が、目的のＴＣＲを発現するＴ細胞クローンから単離した全ｃＤＮＡからＰＣＲ増幅され、発現ベクターにクローニングされる。一部の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、同じベクターにクローニングされる。一部の実施形態では、α鎖およびβ鎖は、異なるベクターにクローニングされる。一部の実施形態では、生成されたα鎖およびβ鎖は、レトロウイルスベクター、たとえば、レンチウイルスベクターに組み込まれる。
【０２０９】
多重標的化
【０２１０】
一部の実施形態では、遺伝子修飾には、それぞれが、同じかまたは異なる抗原を認識し、一部の実施形態では、それぞれが、異なる細胞内シグナル伝達要素を含む、２つまたはそれを上回る遺伝子操作された受容体を細胞上に発現するように、細胞を遺伝子修飾することが含まれる。そのような多重標的化戦略は、たとえば、ＰＣＴ特許出願公開第２０１４／０５５６６８号Ａ１およびＦｅｄｏｒｏｖら、Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５巻（２１５頁）（２０１３年）に記載されている。
【０２１１】
たとえば、一部の実施形態では、細胞は、一般に、第１の受容体によって認識される抗原、たとえば、第１の抗原に特異的に結合したときに、細胞に活性化シグナルを誘導することができる、第１の遺伝子操作された抗原受容体（たとえば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）を発現する受容体を含む。一部の実施形態では、細胞は、一般に、第２の受容体によって認識される第２の抗原に特異的に結合したときに、免疫細胞に共刺激性シグナルを誘導することができる、第２の遺伝子操作された抗原受容体（たとえば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）、たとえば、キメラ共刺激性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、第１の抗原および第２の抗原は、同じである。一部の実施形態では、第１の抗原および第２の抗原は、異なる。
【０２１２】
一部の実施形態では、第１および／または第２の遺伝子操作された抗原受容体（たとえば、ＣＡＲまたはＴＣＲ）は、細胞に活性化シグナルを誘導することができる。一部の実施形態では、受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様モチーフを含む、細胞内シグナル伝達要素を含む。一部の実施形態では、第１の受容体によって誘導される活性化は、ＩＴＡＭリン酸化および／もしくはＩＴＡＭにより媒介されるシグナル伝達カスケードの開始、免疫シナプスの形成および／もしくは結合した受容体の近傍の分子（たとえば、ＣＤ４またはＣＤ８など）のクラスタリング、１つまたは複数の転写因子、たとえば、ＮＦ−κＢおよび／もしくはＡＰ−１の活性化、ならびに／またはサイトカインなどの因子の遺伝子発現、増殖、および／もしくは生存の誘導など、免疫応答の開始をもたらすシグナル伝達または細胞におけるタンパク質発現の変化を含む。
【０２１３】
一部の実施形態では、第１および／または第２の受容体は、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＯＸ４０、および／またはＩＣＯＳなどの共刺激性受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、第１および第２の受容体は、異なる共刺激性受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、第１の受容体が、ＣＤ２８共刺激性シグナル伝達領域を含み、第２の受容体が、４−１ＢＢ共刺激性シグナル伝達領域を含むか、または逆も同様である。
【０２１４】
一部の実施形態では、第１および／または第２の受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様モチーフを含む細胞内シグナル伝達ドメイン、および共刺激性受容体の細胞内シグナル伝達ドメインの両方を含む。
【０２１５】
一部の実施形態では、第１の受容体は、ＩＴＡＭまたはＩＴＡＭ様モチーフを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第２の受容体は、共刺激性受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。同じ細胞において誘導される活性化シグナルと組み合わせた共刺激性シグナルは、免疫応答、たとえば、強力かつ持続的な免疫応答、たとえば、遺伝子発現の増加、サイトカインおよび他の因子の分泌、ならびに細胞殺滅などのＴ細胞により媒介されるエフェクター機能をもたらすものである。
【０２１６】
一部の実施形態では、第１の受容体単独のライゲーションも、第２の受容体単独のライゲーションも、強力な免疫応答を誘導しない。一部の態様では、１つの受容体のみがライゲーションされる場合、細胞は、抗原に耐性もしくは非応答性となるか、または阻害されるようになる、ならびに／あるいは増殖するようにも、因子を分泌するようにも、エフェクター機能を実行するようにも誘導されない。一部のそのような実施形態では、しかしながら、複数の受容体がライゲーションされる場合、たとえば、第１および第２の抗原を発現する細胞の遭遇時に、たとえば、１つまたは複数のサイトカインの分泌、増殖、持続、および／または標的細胞の細胞傷害性殺滅などの免疫エフェクター機能の実行によって示される、所望される応答、たとえば、完全な免疫活性化または刺激が達成される。
【０２１７】
一部の実施形態では、２つの受容体は、それぞれ、細胞に、活性化シグナルおよび阻害性シグナルを誘導し、結果として、受容体のうちの一方がその抗原に結合することにより、細胞が活性化されるか、または応答が誘導されるが、第２の阻害性受容体がその抗原に結合することにより、その応答を抑制または低下させるシグナルが誘導されることになる。例は、活性化ＣＡＲおよび阻害性ＣＡＲまたはｉＣＡＲの組合せである。たとえば、活性化ＣＡＲが、疾患または状態に発現されるが正常細胞にも発現される抗原に結合し、阻害性受容体が、正常細胞に発現されるが疾患または状態の細胞には発現されない別の抗原に結合するような戦略を、使用することができる。
【０２１８】
一部の実施形態では、多重標的化戦略は、特定の疾患または状態と関連する抗原が、非罹患細胞に発現される、および／または一過的（たとえば、遺伝子操作と関連する刺激の際に）もしくは恒久的に操作細胞自体に発現される場合に、利用される。そのような事例では、２つの別個および個々の特定の抗原受容体のライゲーションを必要とすることによって、特異性、選択性、および／または有効性が、改善され得る。
【０２１９】
一部の実施形態では、複数の抗原、たとえば、第１および第２の抗原は、標的とされる細胞、組織、または疾患もしくは状態、たとえば、がん細胞に、発現される。一部の態様では、細胞、組織、疾患、または状態は、多発性骨髄腫または多発性骨髄腫細胞である。一部の実施形態では、複数の抗原のうちの１つまたは複数はまた、一般に、細胞療法で標的とすることが所望されない細胞、たとえば、正常もしくは非罹患の細胞もしくは組織、および／または操作細胞自体に発現される。そのような実施形態では、細胞の応答を達成するために複数の受容体のライゲーションを必要とすることにより、特異性および／または有効性が達成される。
【０２２０】
一部の実施形態では、細胞の修飾は、収集後かつ極低温で凍結および／または保管する前に、細胞の分析に基づいて行われる。細胞は、極低温保管の前および／または後に、分析に基づいて修飾してもよい。一部の実施形態では、細胞の修飾は、極低温保管後の解凍の後に、細胞の分析に基づいて行われる。一部の実施形態では、分析は、ＣＤ４＋細胞のＣＤ８＋細胞に対する比を判定することを含む。一部の実施形態では、極低温後の修飾の条件、たとえば、細胞をインキュベートするための時間、細胞をインキュベートするための温度、細胞刺激物質の使用および濃度、ならびに細胞を遺伝子修飾するためのステップは、分析に基づいて選択され得るか、またはＣＤ４＋細胞のＣＤ８＋細胞に対する比に基づいて選択され得る。
【０２２１】
細胞を操作するためのベクター
【０２２２】
組換え受容体および／またはＴＣＲをコードするポリヌクレオチド（核酸分子）は、そのような受容体を発現するように細胞を遺伝子操作するためのベクターに含まれ得る。一部の実施形態では、ベクターまたは構築物は、ポリペプチドまたは受容体の発現を作動させるために、それらをコードするヌクレオチドに作動可能に連結された１つまたは複数のプロモーターを含む。一部の実施形態では、プロモーターは、１つまたは１つを上回る核酸分子に作動可能に連結されている。一部の事例では、ベクターは、ウイルスベクター、たとえば、レトロウイルスベクター、たとえば、レンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである。一部の実施形態では、組換え受容体をコードするポリヌクレオチド、たとえば、ベクターは、たとえば、レトロウイルス形質導入、トランスフェクション、または形質転換によって、培養された細胞を含む組成物に導入される。
【０２２３】
遺伝子操作された構成要素、たとえば、組換え受容体、たとえば、ＣＡＲまたはＴＣＲの導入のための様々な方法は、周知であり、提供される方法および組成物で使用することができる。例示的な方法としては、ウイルスベクター、たとえば、レトロウイルスまたはレンチウイルス、非ウイルスベクターまたはトランスポゾン、たとえば、スリーピングビューティートランスポゾンシステムによるものを含む、ポリペプチドまたは受容体をコードする核酸の移入のためのものが挙げられる。遺伝子移入の方法としては、形質導入、エレクトロポレーション、または細胞内への遺伝子の移入をもたらす他の方法を挙げることができる。
【０２２４】
一部の実施形態では、遺伝子移入は、たとえば、サイトカインまたは活性化マーカーの発現によって測定されるように、まず、細胞を、たとえば増殖、生存、および／または活性化の応答を誘導する刺激と合わせることなどによって、細胞を刺激すること、続いて、活性化された細胞の形質導入、ならびに培養における臨床適用に十分な数への増大によって、達成される。
【０２２５】
一部の状況では、刺激因子（たとえば、リンホカインまたはサイトカイン）、たとえば、対象における毒性と関連する因子の過剰発現が、潜在的に対象において望ましくない予後または有効性の低下をもたらし得る可能性に対して防御することが、望ましい場合がある。したがって、一部の状況では、操作細胞は、たとえば、養子免疫療法での投与の際に、細胞をｉｎ  ｖｉｖｏでの陰性選択を受けやすくさせる、遺伝子セグメントを含む。たとえば、一部の態様では、細胞は、細胞を投与する患者のｉｎ  ｖｉｖｏ条件の変化の結果として、細胞が排除され得るように、操作される。陰性選択可能な表現型は、投与される薬剤、たとえば、化合物に対する選択性を付与する遺伝子の挿入により生じ得る。陰性選択可能な遺伝子としては、ガンシクロビル感受性を付与する単純ヘルペスウイルスＩ型チミジンキナーゼ（ＨＳＶ−Ｉ  ＴＫ）遺伝子（Ｗｉｇｌｅｒら、Ｃｅｌｌ  １１巻、：２２３頁、１９７７年）、細胞内ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｐｈｏｓｐｈｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）（ＨＰＲＴ）遺伝子、細胞内アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＡＰＲＴ）遺伝子、細菌シトシンデアミナーゼ（Ｍｕｌｌｅｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．、８９巻：３３頁（１９９２年））などが挙げられる。
【０２２６】
一部の実施形態では、組換え核酸は、組換え感染性ウイルス粒子、たとえば、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）などに由来するベクターを使用して、細胞に移入される。一部の実施形態では、組換え核酸は、組換えレンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクター、たとえば、ガンマレトロウイルスベクターを使用して、Ｔ細胞に移入される（たとえば、Ｋｏｓｔｅら（２０１４年）、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、２０１４年４月３日、ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｇｔ．２０１４．２５；Ｃａｒｌｅｎｓら（２０００年）、Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ、２８巻（１０号）：１１３７〜４６頁；Ａｌｏｎｓｏ−Ｃａｍｉｎｏら（２０１３年）、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ、２巻、ｅ９３頁；Ｐａｒｋら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２０１１年１１月２９日（１１巻）：５５０〜５５７頁を参照されたい）。
【０２２７】
一部の実施形態では、レトロウイルスベクター、たとえば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、骨髄増殖性肉腫ウイルス（ＭＰＳＶ）、マウス胚性幹細胞ウイルス（ＭＥＳＶ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来するレトロウイルスベクターは、長い末端反復配列（ＬＴＲ）を有する。ほとんどのレトロウイルスベクターは、マウスレトロウイルスに由来する。一部の実施形態では、レトロウイルスとしては、任意の鳥類または哺乳動物の細胞源に由来するものが挙げられる。レトロウイルスは、典型的に、広宿主性である、すなわち、レトロウイルスは、ヒトを含む複数の種の宿主細胞に感染することができる。一実施形態では、発現させようとする遺伝子が、レトロウイルスｇａｇ、ｐｏｌ、および／またはｅｎｖ配列に置き換わる。いくつかの例示的なレトロウイルス系が、説明されている（たとえば、米国特許第５，２１９，７４０号、同第６，２０７，４５３号、同第５，２１９，７４０号、ＭｉｌｌｅｒおよびＲｏｓｍａｎ（１９８９年）、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、７巻：９８０〜９９０頁；Ｍｉｌｌｅｒ，  Ａ．  Ｄ．（１９９０年）、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１巻：５〜１４頁；Ｓｃａｒｐａら（１９９１年）、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１８０巻：８４９〜８５２頁；Ｂｕｒｎｓら（１９９３年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：８０３３〜８０３７頁；ならびにＢｏｒｉｓ−ＬａｗｒｉｅおよびＴｅｍｉｎ（１９９３年）、Ｃｕｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｄｅｖｅｌｏｐ．、３巻：１０２〜１０９頁）。
【０２２８】
レンチウイルス形質導入の方法は、公知である。例示的な方法は、たとえば、Ｗａｎｇら（２０１２年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９〜７０１頁；Ｃｏｏｐｅｒら（２００３年）、Ｂｌｏｏｄ．、１０１巻：１６３７〜１６４４頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（２００９年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．、５０６巻：９７〜１１４頁；およびＣａｖａｌｉｅｒｉら（２００３年）、Ｂｌｏｏｄ．、１０２巻（２号）：４９７〜５０５頁に記載されている。
【０２２９】
一部の実施形態では、組換え核酸は、エレクトロポレーションによって、Ｔ細胞に移入される（たとえば、Ｃｈｉｃａｙｂａｍら（２０１３年）、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、８巻（３号）：ｅ６０２９８頁およびＶａｎ  Ｔｅｄｅｌｏｏら（２０００年）、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、７巻（１６号）：１４３１〜１４３７頁を参照されたい）。一部の実施形態では、組換え核酸は、トランスポジション（ｔｒａｎｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）によって、Ｔ細胞に移入される（たとえば、Ｍａｎｕｒｉら（２０１０年）、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ、２１巻（４号）：４２７〜４３７頁；Ｓｈａｒｍａら（２０１３年）、Ｍｏｌｅｃ  Ｔｈｅｒ  Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ、２巻、ｅ７４頁；およびＨｕａｎｇら（２００９年）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ、５０６巻：１１５〜１２６頁を参照されたい）。遺伝子材料を免疫細胞に導入し、そこで発現させる他の方法としては、リン酸カルシウムトランスフェクション（たとえば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．に記載されている）、プロトプラスト融合、カチオン性リポソーム媒介トランスフェクション；タングステン粒子により促進される微粒子衝撃（ｔｕｎｇｓｔｅｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅ−ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３４６巻：７７６〜７７７頁（１９９０年））；およびストロンチウムリン酸ＤＮＡ共沈降（Ｂｒａｓｈら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、７巻：２０３１〜２０３４頁（１９８７年））が挙げられる。一部の態様では、洗浄ステップは、遠心分離チャンバ、たとえば、Ａ−２００／ＦおよびＡ−２００遠心分離チャンバを含め、Ｓｅｐａｘ（登録商標）およびＳｅｐａｘ（登録商標）２システムで使用するためのものを含む、Ｂｉｏｓａｆｅ  ＳＡによって製造および販売されているものにおいて、製造業者の説明書に従って、行われる。
【０２３０】
組換え産物をコードする核酸の移入のための他のアプローチおよびベクターは、たとえば、ＰＣＴ特許出願公開第２０１４０５５６６８号および米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているものであり、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２３１】
一部の実施形態では、細胞、たとえば、Ｔ細胞には、増大の間または後のいずれかで、たとえば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）がトランスフェクトされ得る。所望されるポリペプチドまたは受容体の遺伝子の導入のためのこのトランスフェクションは、たとえば、任意の好適なレトロウイルスベクターを用いて実行することができる。遺伝子修飾された細胞集団は、次いで、初回刺激（たとえば、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激）から解放され、続いて、第２の種類の刺激（たとえば、ｄｅ  ｎｏｖｏで導入した受容体を介して）で刺激され得る。この第２の種類の刺激には、ペプチド／ＭＨＣ分子、遺伝子導入受容体の同種（架橋）リガンド（たとえば、ＣＡＲの天然のリガンド）、または新しい受容体のフレームワーク内に直接的に結合する（たとえば、受容体内の定常領域を認識することによって）任意のリガンド（たとえば、抗体）の形態での抗原性刺激が含まれ得る。たとえば、Ｃｈｅａｄｌｅら、「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．、２０１２年；９０７巻：６４５〜６６頁またはＢａｒｒｅｔｔら、Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第６５巻：３３３〜３４７頁（２０１４年）を参照されたい。
【０２３２】
さらなる核酸、たとえば、導入のための遺伝子には、治療法の有効性を、たとえば、移入される細胞の生存性および／もしくは機能を促進することによって改善するもの；細胞の選択および／もしくは評価のため、たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏでの生存もしくは局在化を評価するための遺伝子マーカーを提供する遺伝子；ならびにＬｕｐｔｏｎ  Ｓ．  Ｄ．ら、Ｍｏｌ．  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、１１巻：６頁（１９９１年）；およびＲｉｄｄｅｌｌら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、３巻：３１９〜３３８頁（１９９２年）に記載されているように、たとえば、細胞をｉｎ  ｖｉｖｏでの陰性選択を受けやすくすることによって、安全性を改善するための遺伝子がある。ドミナント陽性選択可能なマーカーを陰性選択可能なマーカーと融合することによって導出される二官能性の選択可能な融合遺伝子の使用について記載している、ＬｕｐｔｏｎらによるＰＣＴ／ＵＳ第９１／０８４４２号およびＰＣＴ／ＵＳ第９４／０５６０１号の刊行物もまた参照されたい。たとえば、Ｒｉｄｄｅｌｌら、米国特許第６，０４０，１７７号のカラム１４〜１７を参照されたい。
【０２３３】
一部の実施形態では、細胞は、遺伝子操作の前またはそれとともに、インキュベートおよび／または培養される。インキュベーションステップには、培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）すること、培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ）すること、刺激すること、活性化すること、および／または増やすことが含まれ得る。インキュベーションおよび／または操作は、培養容器、たとえば、ユニット、チャンバ、ウェル、カラム、チューブ、チュービングセット、バルブ、バイアル、培養皿、バッグ、または細胞を培養（ｃｕｌｔｕｒｅ）または培養（ｃｕｌｔｉｖａｔｅ）するための他の容器において行われ得る。一部の実施形態では、組成物または細胞は、刺激条件または刺激性薬剤の存在下において、インキュベートされる。そのような条件には、集団中の細胞の増殖、増大、活性化、および／または生存を誘導し、抗原曝露を模倣し、および／または遺伝子操作、たとえば、組換え抗原受容体の導入のために細胞を予備刺激するように、設計されるものが含まれる。一部の実施形態では、インキュベーションステップのうちの１つまたは複数は、ロッキングバイオリアクター、たとえば、ＷＡＶＥ（商標）Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）またはＢＩＯＳＴＡＴ（登録商標）ＲＭ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用して、実行され得る。一部の実施形態では、インキュベーションステップのうちの１つまたは複数は、静式バイオリアクターまたはインキュベーションチャンバを使用して、実行され得る。特定の実施形態では、１つまたは複数のインキュベーションステップにロッキングバイオリアクターを使用する場合には、抗せん断剤、たとえば、ポロキサマーが、組成物に添加され得る。
【０２３４】
条件には、特定の媒体、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、作用物質、たとえば、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および／または刺激因子、たとえば、サイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、ならびに細胞を活性化するように設計された任意の他の作用物質のうちの１つまたは複数が含まれ得る。一部の態様では、細胞は、１つまたは複数のサイトカインの存在下においてインキュベートされ、一部の実施形態では、サイトカインカクテル、たとえば、ＰＣＴ特許出願公開第２０１５／１５７３８４号に記載されるものを利用することができ、これは、参照により組み込まれる。一部の実施形態では、細胞は、形質導入の前、同時、または後に、１つまたは複数のサイトカインおよび／またはサイトカインカクテルとともにインキュベートされる。
【０２３５】
一部の実施形態では、刺激条件または刺激剤には、ＴＣＲ複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる、１つまたは複数の作用物質、たとえば、リガンドが含まれる。一部の態様では、作用物質は、Ｔ細胞におけるＴＣＲ／ＣＤ３細胞内シグナル伝達カスケードを作動させるかまたは開始する。そのような作用物質としては、抗体、たとえば、ＴＣＲ構成要素に特異的なもの、たとえば、抗ＣＤ３を挙げることができる。一部の実施形態では、刺激条件には、共刺激性受容体を刺激することができる、１つまたは複数の作用物質、たとえば、リガンド、たとえば、抗ＣＤ２８が含まれる。一部の実施形態では、そのような作用物質および／またはリガンドは、固体支持体、たとえば、ビーズ、および／または１つもしくは複数のサイトカインに結合していてもよい。必要に応じて、増大方法は、さらに、抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体を、培養媒体に（たとえば、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で）添加するステップを含み得る。一部の実施形態では、刺激剤としては、ＩＬ−２、および／またはＩＬ−１５、たとえば、少なくとも約１０単位／ｍＬの濃度のＩＬ−２が挙げられる。
【０２３６】
一部の態様では、インキュベーションは、Ｒｉｄｄｅｌｌらへの米国特許第６，０４０，１７７号、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら（２０１２年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６５１〜６６０頁；Ｔｅｒａｋｕｒａら（２０１２年）、Ｂｌｏｏｄ．、１巻：７２〜８２頁；および／またはＷａｎｇら（２０１２年）、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３５巻（９号）：６８９〜７０１頁に記載されているものなどの技法に従って行われる。一部の態様では、形質導入は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１６／０７３６０２号または米国公開第２０１６／０１２２７８２号に記載されているシステム、デバイス、装置、および／または方法を使用して行われ、これらの内容は、参照によりその全体が組み込まれる。一部の実施形態では、形質導入は、ＰＣＴ特許出願公開第２０１５／１６４６７５号に記載されている方法に従って行われ、この内容は、参照によりその全体が組み込まれる。
【０２３７】
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、培養開始組成物に、フィーダー細胞、たとえば、非分裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を添加し（たとえば、結果として得られる細胞集団が、増大させようとする初期集団中のＴリンパ球それぞれに対して少なくとも約５個、１０個、２０個、もしくは４０個、またはそれを上回るＰＢＭＣフィーダー細胞を含有するように）、培養物をインキュベートすること（たとえば、Ｔ細胞の数を増大させるのに十分な時間）によって、増大される。一部の態様では、非分裂フィーダー細胞は、ガンマ照射ＰＢＭＣフィーダー細胞を含み得る。一部の実施形態では、ＰＢＭＣに、約３０００〜３６００ラドの範囲でガンマ線を照射して、細胞分裂を防止する。一部の態様では、フィーダー細胞は、Ｔ細胞集団の添加前に、培養媒体に添加される。
【０２３８】
一部の実施形態では、刺激条件としては、ヒトＴリンパ球の成長に好適な温度、たとえば、少なくとも摂氏約２５度、一般に、少なくとも約３０度、および一般に、摂氏３７度または約３７度が挙げられる。必要に応じて、インキュベーションは、フィーダー細胞として非分裂ＥＢＶ形質転換リンパ芽球様細胞（ＬＣＬ）を添加することをさらに含み得る。ＬＣＬには、約６０００〜１０，０００ラドの範囲でガンマ線を照射してもよい。ＬＣＬフィーダー細胞は、一部の態様では、任意の好適な量、たとえば、ＬＣＬフィーダー細胞の初期Ｔリンパ球に対する比が少なくとも約１０：１で、提供される。
【０２３９】
試料を処理するための方法
【０２４０】
一部の実施形態では、方法は、アフェレーシス試料を処理するための方法であって、（ａ）ドナーから取得されたアフェレーシス試料を、低温環境で、保管施設に輸送すること、および（ｂ）保管施設において、アフェレーシス試料を極低温で保管することを含む、方法を含む。方法は、ある特定の実施形態によると、複数のアフェレーシス試料を処理することであって、（ａ）それぞれが同じかまたは異なるドナーから取得され、同じかまたは異なる時点のいずれかで輸送された、複数のアフェレーシス試料を、低温環境で、保管施設に輸送すること、および（ｂ）保管施設において、アフェレーシス試料のそれぞれを極低温で保管することを含む、処理することをさらに含み得る。
【０２４１】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料は、上述の実施形態に従ってドナーから収集された血液である。
【０２４２】
一部の実施形態では、低温輸送環境の温度は、−８０℃よりも高い温度から０℃である。一部の実施形態では、低温輸送環境の温度は、−８０℃よりも高い温度から−２０℃である。一部の実施形態では、低温輸送環境の温度は、−２０℃〜０℃である。
【０２４３】
一部の実施形態では、ドナーのアフェレーシス試料が収集される施設および保管施設は、互いに提携しているが、これは、すべての実施形態で必要とされるわけではない。一部の実施形態では、施設は、ドナーまたは別の実体が、収集施設においてアフェレーシス試料を収集し、保管施設においてアフェレーシス試料を保管するよう選択することにより、互いに提携される。一部の実施形態では、収集施設および保管施設は、同じ物理的位置を共有していてもよい。一部の実施形態では、収集施設および保管施設は、異なる位置、たとえば、異なる国または異なる州に位置していてもよい。
【０２４４】
一部の実施形態では、保管施設は、中央または共通のリポジトリの保管施設であり、ここで、異なる収集施設で得られた様々な患者のアフェレーシス試料が、保管される。一部の実施形態では、中央または共通のリポジトリの保管施設は、アフェレーシス試料を、１つまたは複数の製造施設に送る前に、これらの試料を極低温で保管する。一部の実施形態では、中央または共通のリポジトリの施設ならびに製造施設は、互いに提携している。一部の実施形態では、中央または共通のリポジトリの施設ならびに製造施設は、互いに提携していない。一部の実施形態では、ドナーから得られた試料のすべてが、中央または共通のリポジトリの施設から、製造施設へと送られる。他の実施形態では、ドナーから得られた試料の一部は、製造施設へと送られ、他の試料は、中央または共通のリポジトリの施設で保持される。一部の実施形態では、ドナーから得られた試料のすべてが、中央または共通のリポジトリの施設から、同じ製造施設へと送られる。他の実施形態では、ドナーから得られた試料の一部は、中央または共通のリポジトリの施設から、１つの製造施設へと送られ、ドナーから得られた他の試料は、別の製造施設へと送られる。
【０２４５】
一部の実施形態では、１種または複数種の細胞が、輸送する前に、アフェレーシス試料から濃縮および／または単離される。別の事例では、細胞は、輸送の後に、アフェレーシス試料から濃縮および／または単離され得る。たとえば、細胞は、上述の実施形態に従って、濃縮および／または単離され得る。
【０２４６】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮および／もしくは単離された細胞は、輸送される前に、分析される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮および／もしくは単離された細胞は、輸送された後かつ極低温で保管される前に、分析される。アフェレーシス試料または濃縮および／もしくは単離された細胞は、上述の実施形態に従って、分析され得る。
【０２４７】
一部の実施形態では、アフェレーシス、または濃縮および／もしくは単離された細胞集団、または操作Ｔ細胞集団もしくは組成物の、一部分または複数の部分は、アフェレーシス、または濃縮および／もしくは単離された細胞集団、または操作されたＴ細胞集団もしくは組成物の極低温凍結の前に、取り出される。一部の実施形態では、取り出された一部分または複数の部分は、たとえば、アフェレーシス、または濃縮および／もしくは単離された細胞集団、または操作Ｔ細胞集団もしくは組成物の極低温凍結の前または後を含め、任意の時点で、分析される。
【０２４８】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送される前に、凍結溶液と合わされる。一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送された後かつ極低温で保管される前に、凍結溶液と合わされる。凍結溶液は、上述の実施形態における凍結溶液と同じであってもよい。
【０２４９】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料は、極低温で凍結させようとする凍結溶液と合わせる前または後に、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個の容器に分割される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料は、輸送される前に、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個の容器に分割される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料は、輸送された後に、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個の容器に分割される。一部の実施形態では、分割されたアフェレーシスを含む任意の数の別個の容器は、輸送される前または輸送された後に、極低温で凍結される。
【０２５０】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、または１０個を上回る別個の容器に分割され、これらは、保管施設において、極低温で保管される。一部の実施形態では、保管施設は、中央または共通のリポジトリの保管施設である。一部の実施形態では、保管施設は、分割されたアフェレーシスを含む任意の数の別個の容器を、１つまたは複数の製造施設に送る。
【０２５１】
一部の実施形態では、中にアフェレーシス試料が極低温で保管されている１つまたは複数の容器は、極低温保管から取り出され、一方で、残りの容器は、極低温保管で保持される。一部の実施形態では、極低温保管から取り出された１つまたは複数の容器内の細胞は、解凍される。一部の実施形態では、解凍された細胞は、操作される。一部の実施形態では、解凍された細胞は、ＣＡＲ分子を発現するように操作される。一部の実施形態では、中にアフェレーシス試料が極低温で保管されている１つまたは複数の後続の容器が、極低温保管から取り出され、一方で、残りの容器は、極低温保管で保持される。一部の実施形態では、極低温保管から取り出された１つまたは複数の後続の容器内の細胞は、解凍される。一部の実施形態では、解凍された細胞は、操作される。一部の実施形態では、解凍された細胞は、以前に解凍された細胞と類似または異なるＣＡＲ分子を発現する細胞を産生するように、操作される。一部の実施形態では、中にアフェレーシス試料が極低温で保管されている容器は、異なる長さの時間の間、極低温保管で保持される。
【０２５２】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送される前に、−８０℃を上回る温度から０℃の温度に冷却される。アフェレーシス試料または細胞は、上述の実施形態に従った様式で、冷却され得る。一部の実施形態では、細胞の冷却の前に、細胞は、上述の実施形態に従った様式で、洗浄される。
【０２５３】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送される前に、−２１０℃〜−８０℃の温度に、極低温で凍結される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、輸送された後に、極低温で凍結される。アフェレーシス試料または細胞は、上述の実施形態に従った様式で、極低温で凍結され得る。一部の実施形態では、細胞の極低温凍結の前に、細胞は、上述の実施形態に従った様式で、洗浄される。
【０２５４】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、−２１０℃〜−８０℃の温度において、極低温で保管される。たとえば、アフェレーシス試料または細胞は、上述の実施形態に従った様式で、たとえば、液体窒素保管タンクの気相において、たとえば、１日間〜１２年間の保管期間の間、極低温で保管され得る。一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、または４８時間、保管もしくは貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１週間、２週間、３週間、または４週間、保管または貯蔵される。一部の実施形態では、細胞は、長期保管または長期貯蔵される。一部の態様では、細胞は、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、４０年間、またはそれを上回る期間、保管される。
【０２５５】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料または細胞は、−２１０℃〜−８０℃の温度において、極低温で保管される。一部の実施形態では、細胞が保管される温度は、約−１００℃、または−９５℃、または−９０℃、または−８５℃、または−８０℃、または−７５℃、または−７０℃、または−６５℃、または−６０℃を上回らない。
【０２５６】
一部の実施形態では、保管期間の後に、アフェレーシス試料または細胞は、解凍される。たとえば、アフェレーシス試料または細胞は、上述の実施形態に従った様式で、解凍され得る。また、ある特定の実施形態によると、保管期間の後、生存細胞の割合は、２４％〜１００％である。生存細胞の割合は、たとえば、上述の実施形態に従って、判定することができる。
【０２５７】
一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮された細胞は、収集の後かつ輸送の前に、分析される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮された細胞は、輸送の後かつ極低温保管の前に、分析される。一部の実施形態では、アフェレーシス試料または濃縮された細胞は、保管期間の後に、分析される。一部の実施形態では、分析の後に、アフェレーシス試料または細胞は、修飾され得る。一部の実施形態では、修飾は、輸送する前に生じる。一部の実施形態では、修飾は、輸送した後かつ極低温で保管する前に、生じる。一部の実施形態では、修飾は、極低温で保管した後に、生じる。そのような実施形態では、修飾は、「極低温後の修飾」と称される。アフェレーシス試料または細胞の分析および／または修飾は、上述の実施形態に従って行われ得る。
【０２５８】
組成物および製剤
【０２５９】
細胞を含む組成物もまた、提供され、これには、医薬組成物および製剤、たとえば、所与の用量またはその画分での投与のための細胞数を含む単位用量形態の組成物が含まれる。医薬組成物および製剤は、一般に、１つまたは複数の必要に応じた薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも１つの追加の治療剤を含む。
【０２６０】
「医薬製剤」という用語は、中に含まれる活性成分の生物学的活性が有効となるのを許容するような形態にあり、製剤が投与されるであろう対象にとって、許容できないほどに毒性である追加の成分を含まない、調製物を指す。
【０２６１】
「薬学的に許容される担体」とは、対象にとって非毒性である、医薬製剤中の活性成分以外の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または保存剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６２】
一部の態様では、担体の選択は、部分的に、特定の細胞および／または投与の方法によって決定される。したがって、様々な好適な製剤が存在する。たとえば、医薬組成物は、保存剤を含有し得る。好適な保存剤としては、たとえば、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、および塩化ベンザルコニウムを挙げることができる。一部の態様では、２つまたはそれを上回る保存剤の混合物が、使用される。保存剤またはその混合物は、典型的に、全組成物の重量を基準として、約０．０００１％〜約２％の量で存在する。担体は、たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，  Ａ．編（１９８０年）によって説明されている。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量および濃度で、レシピエントにとって非毒性であり、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない：緩衝剤、たとえば、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む、抗酸化剤；保存剤（たとえば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、たとえば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基よりも少ない）ポリペプチド；タンパク質、たとえば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、たとえば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、たとえば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシン；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、たとえば、ＥＤＴＡ；糖類、たとえば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール；塩形成対イオン、たとえば、ナトリウム；金属錯体（たとえば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、たとえば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）。
【０２６３】
一部の態様では、緩衝剤が、組成物に含まれる。好適な緩衝剤としては、たとえば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、ならびに様々な他の酸および塩が挙げられる。一部の態様では、２つまたはそれを上回る緩衝剤の混合物が、使用される。緩衝剤またはその混合物は、典型的に、全組成物の重量を基準として、約０．００１％〜約４％の量で存在する。投与可能な医薬組成物を調製するための方法は、公知である。例示的な方法は、たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、第２１版（２００５年５月１日）により詳細に記載されている。
【０２６４】
製剤には、水溶液が含まれ得る。製剤または組成物はまた、細胞を用いて処置されている特定の適応症、疾患、または状態にとって有用な１つを上回る活性成分、好ましくは、細胞に相補的な活性を有するものを含有してもよく、ここで、それぞれの活性は、互いに悪影響を及ぼさない。そのような活性成分は、意図される目的に有効な量での組合せで存在することが、好適である。したがって、一部の実施形態では、医薬組成物は、他の薬学的に活性な薬剤または薬物、たとえば、化学療法剤、たとえば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、および／またはビンクリスチンをさらに含む。
【０２６５】
一部の実施形態では、組成物は、疾患もしくは状態の負荷を低減するのに有効な量、ならびに／または対象にＣＲＳもしくは重篤なＣＲＳをもたらさない、および／もしくは本明細書に記載される方法の他の結果のいずれにも影響を及ぼさない量で、細胞を含む。
【０２６６】
医薬組成物は、一部の実施形態では、疾患または状態を処置または予防するのに有効な量、たとえば、治療有効量または予防的有効量で、細胞を含有する。治療的または予防的な有効性は、一部の実施形態では、処置される対象の周期的な評価によって監視される。所望される投薬量は、細胞の単回ボーラス投与によって、細胞の複数回ボーラス投与によって、または細胞の連続的な注入投与によって、送達することができる。
【０２６７】
細胞および組成物は、標準的な投与技法、製剤、および／またはデバイスを使用して、投与することができる。細胞の投与は、自家であっても異種であってもよい。たとえば、免疫応答性細胞または前駆体を、１人の対象から得て、それを同じ対象または適合性のある別の対象に投与することができる。末梢血由来の免疫応答性細胞またはそれらの子孫（たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏに由来する）は、カテーテル投与を含む、局所注射、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与によって、投与することができる。治療用組成物（たとえば、遺伝子修飾された免疫応答性細胞を含有する医薬組成物）を投与する場合、それは、一般に、単位投薬量の注射用形態（溶液、懸濁液、エマルジョン）で製剤化されることになる。
【０２６８】
製剤には、経口、静脈内、腹腔内、皮下、肺内、経皮、筋肉内、鼻内、頬内、舌下、または坐剤での投与のためのものが含まれる。一部の実施形態では、細胞集団は、非経口で投与される。「非経口」という用語には、本明細書において使用されるとき、静脈内、筋肉内、皮下、直腸内、膣内、および腹腔内の投与が含まれる。一部の実施形態では、細胞は、静脈内、腹腔内、または皮下の注射による末梢全身送達を使用して、対象に投与される。
【０２６９】
組成物は、一部の実施形態では、滅菌液体調製物、たとえば、等張水溶液、懸濁液、エマルジョン、分散液、または粘性組成物として提供され、これらは、一部の態様では、選択されたｐＨに緩衝され得る。液体調製物は、通常、ゲル、他の粘性組成物、および固体組成物よりも、調製が容易である。加えて、液体組成物は、特に注射によって、投与するのがいくらかより便利である。粘性組成物は、一方で、特定の組織とのより長い接触期間をもたらすように、適切な粘度範囲内で製剤化することができる。液体または粘性の組成物は、たとえば、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、およびこれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る、担体を含み得る。
【０２７０】
滅菌注射用溶液は、細胞を、溶媒に、たとえば、好適な担体、希釈剤、または賦形剤、たとえば、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどとの混合物として、組み込むことによって、調製することができる。組成物は、所望される投与経路および調製物に応じて、補助物質、たとえば、湿潤剤、分散剤、もしくは乳化剤（たとえば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化もしくは増粘添加剤、保存剤、香味剤、および／または着色剤を含有し得る。好適な調製物を調製するために、一部の態様では、標準的な文書が参照され得る。
【０２７１】
抗菌保存剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝剤を含む、組成物の安定性および滅菌性を強化する様々な添加剤を、添加することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、およびソルビン酸によって確実にすることができる。注射用医薬品形態の長期吸収は、吸収を遅延する薬剤、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によって、もたらすことができる。
【０２７２】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの投与に使用しようとする製剤は、一般に、滅菌である。滅菌性は、たとえば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に達成することができる。
【０２７３】
一部の実施形態では、治療用Ｔ細胞組成物は、１ｍｌ当たり約１０００万個の細胞〜１ｍｌ当たり約７０００万個の細胞、または１ｍＬ当たり約１０００万個の生存細胞〜１ｍＬ当たり約７０００万個の生存細胞を含む。一部の実施形態では、治療用Ｔ細胞組成物は、１ｍｌ当たり約１５００万個の細胞または生存細胞〜１ｍｌ当たり約６０００万個の細胞または生存細胞を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞組成物は、１ｍｌ当たり１０００万個を上回る細胞または生存細胞を含む。一部の実施形態では、治療用Ｔ細胞組成物は、１ｍｌ当たり１５００万個を上回る細胞または１５００万個を上回る細胞を含む。
【０２７４】
一部の実施形態では、本出願は、治療用Ｔ細胞組成物を含む容器を含む、製品を提供する。一部の実施形態では、製品は、容器が、標的単位数の治療用Ｔ細胞組成物を含むことを示す情報をさらに含む。一部の実施形態では、製品は、複数の容器を含み、ここで、容器のそれぞれは、標的単位数のＴ細胞組成物を含む単位用量を含む。一部の実施形態では、容器は、１ｍＬ当たり約１０００万個の細胞もしくは生存細胞〜１ｍＬ当たり約７０００万個の細胞もしくは生存細胞、１ｍＬ当たり約１５００万個の細胞もしくは生存細胞〜約６０００万個の細胞もしくは生存細胞、１ｍＬ当たり１０００万個を上回る細胞もしくは生存細胞、１ｍＬ当たり１５００万個を上回る細胞もしくは生存細胞、またはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、組成物は、極低温保護剤をさらに含む、および／または製品は、対象に投与する前に組成物を解凍するための説明書をさらに含む。
【０２７５】
一部の実施形態では、細胞は、たとえば、血漿および血小板を除去するための洗浄ステップの後に、凍結溶液中に懸濁される。様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれかを、一部の態様では、使用することができる。１つの例には、２０％のＤＭＳＯおよび８％のＨＳＡを含有するＰＢＳ、または他の好適な細胞凍結媒体を使用することが含まれる。これは、次いで、ＤＭＳＯおよびＨＳＡの最終濃度が、それぞれ、１０％および４％となるように、媒体で１：１希釈される。
【０２７６】
様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれかを、一部の態様では、使用することができる。一部の実施形態では、細胞試料は、極低温保護剤を含有する極低温保存またはガラス化媒体または溶液を含有し得る。好適な極低温保護剤としては、ＤＭＳＯ、グリセロール、グリコール、プロピレングリコール、エチレングリコール、プロパンジオール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、１，２−プロパンジオール（ＰＲＯＨ）、またはこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。一部の例では、極低温保存溶液は、ポリビニルピロリジオン、ヒドロキシエチルデンプン、多糖類、単糖類、アルギン酸塩、トレハロース、ラフモース、デキストラン、ヒト血清アルブミン、Ｆｉｃｏｌｌ、リポタンパク質、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルデンプン、自家血漿、またはこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない、１つまたは複数の非細胞透過性極低温保存剤を含有し得る。一部の実施形態では、細胞は、約１体積％〜約２０体積％、約３体積％〜約９体積％、または約６体積％〜約９体積％の最終濃度の極低温保護剤を有する凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、凍結溶液中の極低温保護剤の最終濃度は、約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％である。
【０２７７】
一部の実施形態では、極低温保護剤は、ＤＭＳＯである。特定の実施形態では、細胞は、約１体積％〜約２０体積％、約３体積％〜約９体積％、または約６体積％〜約９体積％の最終濃度のＤＭＳＯを有する凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、凍結溶液中のＤＭＳＯの最終濃度は、約３体積％、約４％体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％である。
【０２７８】
ある特定の実施形態では、細胞は、約１×１０６個の細胞／ｍｌ〜約１×１０８個の細胞／ｍＬ、約１×１０６個の細胞／ｍＬ〜約２×１０７個の細胞／ｍＬ、約１×１０７個の細胞／ｍＬ〜約５×１０７個の細胞／ｍＬ、または約１×１０７個の細胞／ｍＬ〜５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、約１×１０６個の細胞／ｍＬ、約２×１０６個の細胞／ｍＬ、約５×１０６個の細胞／ｍＬ、約１×１０７個の細胞／ｍＬ、約１．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約３×１０７個の細胞／ｍＬ、約３．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約４×１０７個の細胞／ｍＬ、約４．５×１０７個の細胞／ｍＬ、または約５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、約１．５×１０７個の細胞／ｍＬ〜約６×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、約５×１０６個の細胞／ｍＬ〜約１５０×１０６個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、少なくとも約１×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも約１．５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。一部の実施形態では、細胞は、生存細胞である。
【０２７９】
特定の実施形態では、細胞は、それぞれ、両端の値を含め、０．１×１０６個の細胞／ｍＬ〜５，０００×１０６個の細胞／ｍＬもしくは約０．１×１０６個の細胞／ｍＬ〜約５，０００×１０６個の細胞／ｍＬ、１×１０６個の細胞／ｍＬ〜５００×１０６個の細胞／ｍＬもしくは約１×１０６個の細胞／ｍＬ〜約５００×１０６個の細胞／ｍＬ、５×１０６個の細胞／ｍＬ〜１５０×１０６個の細胞／ｍＬもしくは約５×１０６個の細胞／ｍＬ〜約１５０×１０６個の細胞／ｍＬ、１０×１０６個の細胞／ｍＬ〜７０×１０６個の細胞／ｍＬもしくは約１０×１０６個の細胞／ｍＬ〜約７０×１０６個の細胞／ｍＬ、または１５×１０６個の細胞／ｍＬ〜６０×１０６個の細胞／ｍＬもしくは約１５×１０６個の細胞／ｍＬ〜約６０×１０６個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、それぞれ、両端の値を含め、約１×１０６個の細胞／ｍＬ〜約１×１０８個の細胞／ｍＬ、約１×１０６個の細胞／ｍＬ〜約２×１０７個の細胞／ｍＬ、約１×１０７個の細胞／ｍＬ〜約５×１０７個の細胞／ｍＬ、または約１×１０７個の細胞／ｍＬ〜５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、約１×１０６個の細胞／ｍＬ、約２×１０６個の細胞／ｍＬ、約５×１０６個の細胞／ｍＬ、約１×１０７個の細胞／ｍＬ、約１．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約２．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約３×１０７個の細胞／ｍＬ、約３．５×１０７個の細胞／ｍＬ、約４×１０７個の細胞／ｍＬ、約４．５×１０７個の細胞／ｍＬ、または約５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、両端の値を含め、約１．５×１０７個の細胞／ｍＬ〜約６×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。ある特定の実施形態では、細胞は、少なくとも約１×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。特定の実施形態では、細胞は、少なくとも約１．５×１０７個の細胞／ｍＬの密度で、凍結溶液中に懸濁される。一部の実施形態では、細胞は、生存細胞である。
【０２８０】
一部の実施形態では、極低温保存媒体への移入には、たとえば、媒体を除去するための試料、たとえば、細胞および／もしくは操作細胞組成物の洗浄、ならびに／または後続の凍結のための適切な極低温保存緩衝液もしくは媒体における細胞の置換えを伴い得る１つまたは複数の処理ステップが付随する。ある特定の実施形態では、極低温保存媒体への移入は、閉鎖および滅菌システムにおいて臨床規模レベルで完全に自動化されている。ある特定の実施形態では、極低温保存媒体への移入は、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して行った。
【０２８１】
一部の実施形態では、細胞は、細胞を処理および／または操作するための前記方法の前、最中、または後のいずれかで、凍結、たとえば、極低温保存される。一部の実施形態では、凍結およびそれに続く解凍のステップにより、細胞集団における顆粒球、およびある程度の単球が、除去される。細胞は、１分間につき１℃の速度で、−８０℃に凍結され、液体窒素保管タンクの気相で保管され得る。一部の実施形態では、組成物は、極低温保存に好適なバッグに封入される（たとえば、ＣｒｙｏＭａｃｓ（登録商標）Ｆｒｅｅｚｉｎｇ  Ｂａｇｓ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）。一部の実施形態では、組成物は、極低温保存に好適なバイアルに封入される（たとえば、ＣｅｌｌＳｅａｌ（登録商標）Ｖｉａｌｓ、Ｃｏｏｋ  Ｒｅｇｅｎｔｅｃ）。
【０２８２】
好適な容器としては、たとえば、ボトル、バイアル、シリンジ、および可撓性バッグ、たとえば、注入バッグが挙げられる。特定の実施形態では、容器は、バッグ、たとえば、可撓性バッグ、たとえば、対象への細胞の注入に好適なもの、たとえば、可撓性プラスチックもしくはＰＶＣバッグ、および／またはＩＶ溶液バッグである。バッグは、一部の実施形態では、細胞および組成物の滅菌溶液および送達を提供することができるように、封止可能である、および／または滅菌することができる。一部の実施形態では、容器、たとえば、バッグは、以下の値もしくはおよそ以下の値、または少なくとも以下の値もしくは少なくともおよそ以下の値の容量を有する：１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、または１０００ｍＬの容量、たとえば、それぞれ、両端の値を含め、１０もしくは約１０〜１００もしくは約１００ｍＬ、または１０もしくは約１０〜５００もしくは約５００ｍＬの容量。一部の実施形態では、容器、たとえば、バッグは、様々な温度、たとえば、低温、たとえば、以下の温度もしくはおよそ以下の温度を下回るか、または以下の温度もしくはおよそ以下の温度：−２０℃、−８０℃、−１２０℃、１３５℃、および／または極低温保存に好適な温度、ならびに／または他の温度、たとえば、例として、対象の場所または処置の場所、たとえば、ベッドのそばで、処置の直前に解凍するのを許容するために、細胞の解凍に好適な温度および体温、たとえば、３７℃もしくは約３７℃のうちの１つまたは複数において、安定な材料である、および／もしくはそのような材料から作製される、ならびに／または細胞の安定な保管および／もしくは維持を提供する。
【０２８３】
容器は、ガラスまたはプラスチックなど、様々な材料から形成することができる。一部の実施形態では、容器は、たとえば、チュービングの接続または１つもしくは複数のチューブへのカニューレ挿入のため、たとえば、静脈内もしくは他の注入のため、ならびに／または他の容器、たとえば、細胞培養および／もしくは保管バッグまたは他の容器へおよびこれらからの移入を目的とする接続のための、１つまたは複数のポート、たとえば、滅菌アクセスポートを有する。例示的な容器としては、注入バッグ、静脈内溶液バッグ、および注射用ニードルによる穿刺可能なストッパを有するものを含むバイアルが挙げられる。
【０２８４】
本発明は、本発明の個々の態様の１つの例示を意図している本明細書において開示される実施形態によって範囲が限定されるものではなく、機能的に同等であるものはすべて、本発明の範囲内に含まれる。本発明のモデルおよび方法に対する様々な修正形は、本明細書に記載されるものに加えて、前述の説明および教示から、当業者には明らかであり、同様に、本発明の範囲内に含まれることが意図される。そのような修正形または他の実施形態は、本発明の真の範囲および趣旨から逸脱することなく、実施することができる。
【０２８５】
刺激性試薬
【０２８６】
一部の実施形態では、濃縮された細胞の組成物を、刺激条件下においてインキュベートすることは、濃縮された細胞の組成物を、Ｔ細胞を活性化および／または増大させることができる刺激性試薬とともにインキュベートすることおよび／またはそれと接触させることであるか、またはそれを含む。一部の実施形態では、刺激性試薬は、細胞において１つまたは複数のシグナルを刺激および／または活性化することができる。一部の実施形態では、１つまたは複数のシグナルは、受容体によって媒介される。特定の実施形態では、１つまたは複数のシグナルは、シグナル伝達および／または二次メッセンジャー、たとえば、ｃＡＭＰおよび／もしくは細胞内カルシウムのレベルもしくは量における変化、１つまたは複数の細胞内タンパク質の量、細胞内局在化、確認、リン酸化、ユビキチン化、および／または短縮の変化、ならびに／または細胞活性、たとえば、転写、翻訳、タンパク質分解、細胞形質学、活性化状態、および／もしくは細胞分裂における変化であるか、またはこれらと関連している。特定の実施形態では、刺激性試薬は、ＴＣＲ複合体の１つもしくは複数の構成要素の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または１つもしくは複数の共刺激性分子の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化する、および／または活性化することができる。
【０２８７】
ある特定の実施形態では、刺激性試薬は、細胞、たとえば、Ｔ細胞を活性化および／または増大させることができる、１つまたは複数の作用物質、たとえば、生体分子にコンジュゲートまたは連結された粒子、たとえば、ビーズを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、ビーズに結合される。一部の実施形態では、ビーズは、生体適合性である、すなわち、生物学的使用に好適である材料から構成される。一部の実施形態では、ビーズは、培養された細胞、たとえば、培養されたＴ細胞に対して、非毒性である。一部の実施形態では、ビーズは、作用物質と細胞との間の相互作用を許容する様式で、作用物質に結合することができる、任意の粒子であり得る。
【０２８８】
一部の実施形態では、刺激性試薬は、ビーズ、たとえば、ビーズの表面に結合しているか、またはそうでなければ付着している、細胞、たとえば、Ｔ細胞を活性化および／または増大させることができる、１つまたは複数の作用物質を含有する。ある特定の実施形態では、ビーズは、非細胞粒子である。特定の実施形態では、ビーズとしては、コロイド粒子、マイクロスフェア、ナノ粒子、磁性ビーズなどを挙げることができる。一部の実施形態では、ビーズは、アガロースビーズである。ある特定の実施形態では、ビーズは、セファロースビーズである。
【０２８９】
特定の実施形態では、刺激性試薬は、単分散性のビーズを含有する。ある特定の実施形態では、単分散性であるビーズは、直径の標準偏差が互いに５％未満であるサイズ分散を含む。
【０２９０】
一部の実施形態では、ビーズは、１つまたは複数の作用物質、たとえば、ビーズの表面にカップリング、コンジュゲート、または連結（直接的もしくは間接的）された作用物質を含む。一部の実施形態では、本明細書において企図される作用物質としては、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質（たとえば、酵素）、抗原、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、炭水化物、脂質、レクチン、または所望される標的に対する親和性を有する任意の他の生体分子を挙げることができるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、所望される標的は、Ｔ細胞受容体および／またはＴ細胞受容体の構成要素である。ある特定の実施形態では、所望される標的は、ＣＤ３である。ある特定の実施形態では、所望される標的は、Ｔ細胞共刺激性分子、たとえば、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１−ＢＢ）、ＯＸ４０、またはＩＣＯＳである。１つまたは複数の作用物質は、当該技術分野において公知であり利用可能である様々な方法によって、ビーズに直接的または間接的に結合することができる。結合は、共有結合、非共有結合、静電、または疎水性のものであり得、たとえば、化学的手段、機械的手段、または酵素的手段を含む、様々な結合手段によって、達成され得る。一部の実施形態では、生体分子（たとえば、ビオチン化抗ＣＤ３抗体）は、ビーズに直接的に結合している別の生体分子（たとえば、抗ビオチン抗体）を介して、ビーズに間接的に結合され得る。
【０２９１】
一部の実施形態では、刺激性試薬は、ビーズ、および細胞の表面上の巨大分子と直接的に相互作用する１つまたは複数の作用物質を含有する。ある特定の実施形態では、ビーズ（たとえば、常磁性ビーズ）は、細胞上の１つまたは複数の巨大分子（たとえば、１つまたは複数の細胞表面タンパク質）に特異的な１つまたは複数の作用物質（たとえば、抗体）を介して、細胞と相互作用する。ある特定の実施形態では、ビーズ（たとえば、常磁性ビーズ）は、本明細書に記載される第１の作用物質、たとえば、一次抗体（たとえば、抗ビオチン抗体）または他の生体分子で標識され、次いで、第２の作用物質、たとえば、二次抗体（たとえば、ビオチン化抗ＣＤ３抗体）または他の第２の生体分子（たとえば、ストレプトアビジン）が添加され、それによって、二次抗体または他の第２の生体分子は、粒子上のそのような一次抗体または他の生体分子に特異的に結合する。
【０２９２】
一部の実施形態では、刺激性試薬は、ビーズ（たとえば、常磁性ビーズ）に結合しており、細胞（たとえば、Ｔ細胞）上の以下の巨大分子のうちの１つまたは複数に特異的に結合する、１つまたは複数の作用物質（たとえば、抗体）を含有する：ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３１、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ１２７、ＭＨＣＩ、ＭＨＣＩＩ、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１、ＯＸ４０、ＣＤ２７Ｌ（ＣＤ７０）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＣＤ３０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−１２Ｒ、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ；ＩＦＮ−ガンマＲ、ＴＮＦ−アルファＲ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−１０Ｒ、ＣＤ１８／ＣＤｌ  ｌａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ６２Ｌ（Ｌ−セレクチン）、ＣＤ２９／ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ−４）、ノッチリガンド（たとえば、デルタ様１／４、Ｊａｇｇｅｄ  １／２など）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、およびＣＸＣＲ３、またはこれらの断片（これらの巨大分子もしくはその断片に対応するリガンドを含む）。一部の実施形態では、ビーズに結合した作用物質（たとえば、抗体）は、細胞（たとえば、Ｔ細胞）上の以下の巨大分子のうちの１つまたは複数に特異的に結合する：ＣＤ２８、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、ＣＤ１２７、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、および／またはＣＤ４５ＲＯ。
【０２９３】
一部の実施形態では、ビーズに結合される作用物質のうちの１つまたは複数は、抗体である。抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体、ダイアボディ、および一本鎖分子、ならびに抗体断片（たとえば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を挙げることができる。一部の実施形態では、刺激性試薬は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２断片である。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ定常領域を含め、任意のアイソタイプの定常領域が、本明細書において企図される抗体に使用され得ること、ならびにそのような定常領域が、任意のヒトまたは動物種（たとえば、マウス種）から得ることができることが、理解される。一部の実施形態では、作用物質は、Ｔ細胞受容体の１つまたは複数の構成要素に結合する、および／またはそれを認識する、抗体である。特定の実施形態では、作用物質は、抗ＣＤ３抗体である。ある特定の実施形態では、作用物質は、共受容体に結合する、および／またはそれを認識する、抗体である。一部の実施形態では、共刺激性試薬は、抗ＣＤ２８抗体を含む。一部の実施形態では、ビーズは、約０．００１μｍを上回る、約０．０１μｍを上回る、約０．１μｍを上回る、約１．０μｍを上回る、約１０μｍを上回る、約５０μｍを上回る、約１００μｍを上回る、または約１０００μｍを上回る、かつ約１５００μｍを上回らない、直径を有する。一部の実施形態では、ビーズは、約１．０μｍ〜約５００μｍ、約１．０μｍ〜約１５０μｍ、約１．０μｍ〜約３０μｍ、約１．０μｍ〜約１０μｍ、約１．０μｍ〜約５．０μｍ、約２．０μｍ〜約５．０μｍ、または約３．０μｍ〜約５．０μｍの直径を有する。一部の実施形態では、ビーズは、約３μｍ〜約５μｍの直径を有する。一部の実施形態では、ビーズは、少なくとも以下の値、または少なくともおよそ以下の値、またはおよそ以下の値の直径を有する：０．００１μｍ、０．０１μｍ、０．１μｍ、０．５μｍ、１．０μｍ、１．５μｍ、２．０μｍ、２．５μｍ、３．０μｍ、３．５μｍ、４．０μｍ、４．５μｍ、５．０μｍ、５．５μｍ、６．０μｍ、６．５μｍ、７．０μｍ、７．５μｍ、８．０μｍ、８．５μｍ、９．０μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１２μｍ、１４μｍ、１６μｍ、１８μｍ、または２０μｍ。ある特定の実施形態では、ビーズは、４．５μｍまたは約４．５μｍの直径を有する。ある特定の実施形態では、ビーズは、２．８μｍまたは約２．８μｍの直径を有する。
【０２９４】
一部の実施形態では、ビーズは、０．００１ｇ／ｃｍ３を上回る、０．０１ｇ／ｃｍ３を上回る、０．０５ｇ／ｃｍ３を上回る、０．１ｇ／ｃｍ３を上回る、０．５ｇ／ｃｍ３を上回る、０．６ｇ／ｃｍ３を上回る、０．７ｇ／ｃｍ３を上回る、０．８ｇ／ｃｍ３を上回る、０．９ｇ／ｃｍ３を上回る、１ｇ／ｃｍ３を上回る、１．１ｇ／ｃｍ３を上回る、１．２ｇ／ｃｍ３を上回る、１．３ｇ／ｃｍ３を上回る、１．４ｇ／ｃｍ３を上回る、１．５ｇ／ｃｍ３を上回る、２ｇ／ｃｍ３を上回る、３ｇ／ｃｍ３を上回る、４ｇ／ｃｍ３を上回る、または５ｇ／ｃｍ３を上回る密度を有する。一部の実施形態では、ビーズは、約０．００１ｇ／ｃｍ３〜約１００ｇ／ｃｍ３、約０．０１ｇ／ｃｍ３〜約５０ｇ／ｃｍ３、約０．１ｇ／ｃｍ３〜約１０ｇ／ｃｍ３、約０．１ｇ／ｃｍ３〜約．５ｇ／ｃｍ３、約０．５ｇ／ｃｍ３〜約１ｇ／ｃｍ３、約０．５ｇ／ｃｍ３〜約１．５ｇ／ｃｍ３、約１ｇ／ｃｍ３〜約１．５ｇ／ｃｍ３、約１ｇ／ｃｍ３〜約２ｇ／ｃｍ３、または約１ｇ／ｃｍ３〜約５ｇ／ｃｍ３の密度を有する。一部の実施形態では、ビーズは、約０．５ｇ／ｃｍ３、約０．５ｇ／ｃｍ３、約０．６ｇ／ｃｍ３、約０．７ｇ／ｃｍ３、約０．８ｇ／ｃｍ３、約０．９ｇ／ｃｍ３、約１．０ｇ／ｃｍ３、約１．１ｇ／ｃｍ３、約１．２ｇ／ｃｍ３、約１．３ｇ／ｃｍ３、約１．４ｇ／ｃｍ３、約１．５ｇ／ｃｍ３、約１．６ｇ／ｃｍ３、約１．７ｇ／ｃｍ３、約１．８ｇ／ｃｍ３、約１．９ｇ／ｃｍ３、または約２．０ｇ／ｃｍ３の密度を有する。ある特定の実施形態では、ビーズは、約１．６ｇ／ｃｍ３の密度を有する。特定の実施形態では、ビーズまたは粒子は、約１．５ｇ／ｃｍ３の密度を有する。ある特定の実施形態では、粒子は、約１．３ｇ／ｃｍ３の密度を有する。
【０２９５】
ある特定の実施形態では、複数のビーズが、一様な密度を有する。ある特定の実施形態では、一様な密度は、平均ビーズ密度の１０％未満、５％未満、または１％未満の密度標準偏差を含む。
【０２９６】
一部の実施形態では、ビーズは、粒子１グラム当たり約０．００１ｍ２（ｍ２／ｇ）〜約１，０００ｍ２／ｇ、約．０１０ｍ２／ｇ〜約１００ｍ２／ｇ、約０．１ｍ２／ｇ〜約１０ｍ２／ｇ、約０．１ｍ２／ｇ〜約１ｍ２／ｇ、約１ｍ２／ｇ〜約１０ｍ２／ｇ、約１０ｍ２／ｇ〜約１００ｍ２／ｇ、約０．５ｍ２／ｇ〜約２０ｍ２／ｇ、約０．５ｍ２／ｇ〜約５ｍ２／ｇ、または約１ｍ２／ｇ〜約４ｍ２／ｇの表面積を有する。一部の実施形態では、粒子またはビーズは、約１ｍ２／ｇ〜約４ｍ２／ｇの表面積を有する。
【０２９７】
一部の実施形態では、ビーズは、ビーズの表面またはその近傍に、作用物質にカップリング、連結、またはコンジュゲートすることができる少なくとも１つの材料を含む。一部の実施形態では、ビーズは、表面官能化されている、すなわち、結合分子、たとえば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドと共有結合を形成することができる官能基を含む。特定の実施形態では、ビーズは、表面に露出したカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基、トシル基、エポキシ基、および／またはクロロメチル基を含む。特定の実施形態では、ビーズは、表面に露出したアガロースおよび／またはセファロースを含む。ある特定の実施形態では、ビーズの表面は、結合分子に結合または付着することができる結合型刺激性試薬を含む。特定の実施形態では、生体分子は、ポリペプチドである。一部の実施形態では、ビーズは、表面に露出したプロテインＡ、プロテインＧ、またはビオチンを含む。
【０２９８】
一部の実施形態では、ビーズは、磁場で反応する。一部の実施形態では、ビーズは、磁性ビーズである。一部の実施形態では、磁性ビーズは、常磁性である。特定の実施形態では、磁性ビーズは、超常磁性である。ある特定の実施形態では、ビーズは、磁場に曝露されない限り、いずれの磁気特性も示さない。
【０２９９】
特定の実施形態では、ビーズは、磁性コア、常磁性コア、または超常磁性コアを含む。一部の実施形態では、磁性コアは、金属を含有する。一部の実施形態では、金属は、鉄、ニッケル、銅、コバルト、ガドリニウム、マンガン、タンタル、亜鉛、ジルコニウム、またはこれらの任意の組合せであり得るが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、磁性コアは、金属酸化物（たとえば、酸化鉄）、フェライト（たとえば、マンガンフェライト、コバルトフェライト、ニッケルフェライトなど）、ヘマタイト、ならびに金属合金（たとえば、ＣｏＴａＺｎ）を含む。一部の実施形態では、磁性コアは、フェライト、金属、金属合金、酸化鉄、または二酸化クロムのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、磁性コアは、元素鉄またはその化合物を含む。一部の実施形態では、磁性コアは、マグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）、マグへマイト（γＦｅ２Ｏ３）、またはグレイジャイト（Ｆｅ３Ｓ４）のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、内部コアは、酸化鉄（たとえば、Ｆｅ３Ｏ４）を含む。
【０３００】
ある特定の実施形態では、ビーズは、表面官能化コート（ｃｏａｔ）またはコーティング（ｃｏａｔｉｎｇ）によって被覆された磁性コア、常磁性コア、および／または超常磁性コアを含有する。一部の実施形態では、コートは、ポリマー、多糖類、シリカ、脂肪酸、タンパク質、炭素、アガロース、セファロース、またはこれらの組合せが含まれ得るがこれらに限定されない材料を含有し得る。一部の実施形態では、ポリマーは、ポリエチレングリコール、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリグルタルアルデヒド、ポリウレタン、ポリスチレン、またはポリビニルアルコールであり得る。ある特定の実施形態では、外側のコートまたはコーティングは、ポリスチレンを含む。特定の実施形態では、外側のコーティングは、表面官能化されている。
【０３０１】
一部の実施形態では、刺激性試薬は、金属酸化物コア（たとえば、酸化鉄コア）およびコートを含有するビーズを含み、ここで、金属酸化物コアは、少なくとも１つの多糖類（たとえば、デキストラン）を含み、コートは、少なくとも１つの多糖類（たとえば、アミノデキストラン）、少なくとも１つのポリマー（たとえば、ポリウレタン）、およびシリカを含む。一部の実施形態では、金属酸化物コアは、コロイド状酸化鉄コアである。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、抗体またはその抗原結合性断片を含む。特定の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を含む。一部の実施形態では、刺激性試薬は、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、および抗ビオチン抗体を含む。一部の実施形態では、刺激性試薬は、抗ビオチン抗体を含む。一部の実施形態では、ビーズは、約３μｍ〜約１０μｍの直径を有する。一部の実施形態では、ビーズは、約３μｍ〜約５μｍの直径を有する。ある特定の実施形態では、ビーズは、約３．５μｍの直径を有する。
【０３０２】
一部の実施形態では、刺激性試薬は、金属酸化物コア（たとえば、酸化鉄内部コア）およびコート（たとえば、保護コート）を含むビーズに結合した、１つまたは複数の作用物質を含み、ここで、コートは、ポリスチレンを含む。ある特定の実施形態では、ビーズは、常磁性（たとえば、超常磁性）鉄コア、たとえば、マグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）および／またはマグへマイト（γＦｅ２Ｏ３）ｃを含むコア、ならびにポリスチレンコートまたはコーティングを含む、単分散性の常磁性（たとえば、超常磁性）ビーズである。一部の実施形態では、ビーズは、非多孔性である。一部の実施形態では、ビーズは、１つまたは複数の作用物質が付着する、官能化された表面を含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、表面で、ビーズに共有結合する。一部の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の作用物質は、抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体、ならびに標識された抗体（たとえば、ビオチン化抗体）、たとえば、標識された抗ＣＤ３抗体または抗ＣＤ２８抗体に結合することができる抗体またはその抗原断片を含む。ある特定の実施形態では、ビーズは、約１．５ｇ／ｃｍ３の密度および約１ｍ２／ｇ〜約４ｍ２／ｇの表面積を有する。特定の実施形態では、ビーズは、約４．５μｍの直径および約１．５ｇ／ｃｍ３の密度を有する、単分散性の超常磁性ビーズである。一部の実施形態では、ビーズは、約２．８μｍの平均直径および約１．３ｇ／ｃｍ３の密度を有する、単分散性の超常磁性ビーズである。
【０３０３】
一部の実施形態では、濃縮されたＴ細胞の組成物は、ビーズの細胞に対する比が以下の比またはおよそ以下の比で、刺激性試薬とともにインキュベートされる：３：１、２．５：１、２：１、１．５：１、１．２５：１、１．２：１、１．１：１、１：１、０．９：１、０．８：１、０．７５：１、０．６７：１、０．５：１、０．３：１、または０．２：１。特定の実施形態では、ビーズの細胞に対する比は、２．５：１〜０．２：１、２：１〜０．５：１、１．５：１〜０．７５：１、１．２５：１〜０．８：１、１．１：１〜０．９：１である。特定の実施形態では、刺激性試薬の細胞に対する比は、約１：１であるか、または１：１である。
【０３０４】
細胞からの刺激性試薬の除去
【０３０５】
ある特定の実施形態では、刺激性試薬は、細胞から除去および／または分離される。理論に束縛されることを望むものではないが、特定の実施形態では、刺激性試薬と細胞との間の結合および／または会合が、一部の状況では、インキュベーションの間に、経時的に低減され得ることが企図される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の作用物質が、刺激性試薬と細胞との間の結合および／または会合を低減するために、添加され得る。特定の実施形態では、細胞培養条件、たとえば、媒体の温度またはｐＨの変化により、刺激性試薬と細胞との間の結合および／または会合が低減され得る。したがって、一部の実施形態では、刺激性試薬は、同様に、たとえば、インキュベーション、細胞培養システム、および／または溶液から細胞を取り出すことなしに、細胞とは別個に、インキュベーション、細胞培養システム、および／または溶液から除去することができる。
【０３０６】
刺激性試薬（たとえば、ビーズ粒子または磁化可能粒子などの粒子であるか、またはそれを含む、刺激性試薬）を細胞から除去するための方法は、公知である。一部の実施形態では、たとえば、刺激性試薬の一次抗体に結合し、細胞上のその抗原に対するそれの親和性を改変させ、それによって、緩徐な脱離を可能にする、競合抗体、たとえば、非標識抗体の使用が、使用され得る。一部の事例では、脱離後に、競合抗体は、粒子（たとえば、ビーズ粒子）と会合したままであり得るが、未反応の抗体は、洗い流すかまたは洗い流してもよく、細胞は、単離、選択、濃縮、および／または活性化抗体が含まれない。例示的なそのような試薬は、ＤＥＴＡＣａＢＥＡＤである（Ｆｒｉｅｄｌら、１９９５年；Ｅｎｔｓｃｈｌａｄｅｎら、１９９７年）。一部の実施形態では、粒子（たとえば、ビーズ粒子）は、切断可能なリンカー（たとえば、ＤＮＡリンカー）の存在下において除去することができ、それによって、粒子が結合した抗体が、リンカーにコンジュゲートされる（たとえば、ＣＥＬＬｅｃｔｉｏｎ、Ｄｙｎａｌ）。一部の事例では、リンカー領域は、単離後に、たとえば、ＤＮａｓｅまたは他の剥離緩衝剤の添加によって、粒子（たとえば、ビーズ粒子）を細胞から除去するための切断可能な部位を提供する。一部の実施形態では、他の酵素的方法もまた、細胞からの粒子（たとえば、ビーズ粒子）の剥離に利用することができる。一部の実施形態では、粒子（たとえば、ビーズ粒子または磁化可能粒子）は、生体分解性である。
【０３０７】
一部の実施形態では、刺激性試薬は、磁性、常磁性、および／もしくは超常磁性である、かつ／または磁性、常磁性、および／もしくは超常磁性であるビーズを含み、刺激性試薬は、細胞を磁場に曝露することによって、細胞から除去することができる。磁場を生成するための磁石を含む好適な機器の例としては、ＤｙｎａＭａｇ  ＣＴＳ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）、Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ（Ｔａｋａｒａ）、およびＥａｓｙＳｅｐＭａｇｎｅｔ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が挙げられる。
【０３０８】
特定の実施形態では、刺激性試薬は、本明細書に提供される方法によって産生される操作細胞を採取、収集、および／または製剤化する前に、細胞から除去または分離される。一部の実施形態では、刺激性試薬は、細胞に操作、たとえば、形質導入またはトランスフェクトを行う前に、細胞から除去および／または分離される。特定の実施形態では、刺激性試薬は、細胞を操作するステップの後に、細胞から除去および／または分離される。ある特定の実施形態では、刺激性試薬は、細胞の培養の前、たとえば、増殖および／または増大を促進する条件下における、操作、たとえば、トランスフェクトまたは形質導入を行った細胞の培養の前に、除去される。
【実施例】
【０３０９】
目的の細胞集団の選択または単離の前に、アフェレーシスを極低温保存することの効果を評価するために、アフェレーシス試料を、操作Ｔ細胞を産生するように設計されたプロセスの様々なステップから、取得した。試料を、様々な時点で、細胞生存性、細胞数収率、細胞表現型、および細胞活性に関して、評価した。これらの研究は、アフェレーシス材料の極低温保存が、（１）関連するＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の表現型比率に影響を及ぼしたかどうか、（２）解凍後の関連するＴ細胞集団を分類および選択する能力に影響を及ぼしたかどうか、ならびに／または（３）細胞の健康状態および／もしくは機能性に影響を及ぼしたかどうかを判定するように、設計した。
【０３１０】
以下の例では、アフェレーシスは、ドナーから収集されたアフェレーシスを指す。極低温保存したアフェレーシスは、収集後ではあるが、試料内の目的の任意の細胞集団の選択の前に、アフェレーシス試料の極低温保存により得られた細胞産物を指す。静置したアフェレーシスは、極低温保存したアフェレーシスを解凍した後に、任意のさらなる処理ステップの前に所定の時間静置させたステップにより得られた細胞産物を指す。極低温保存し選択した材料は、目的の細胞（これらの例では、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞）を単離した後に、それらに、単離後の極低温保存ステップを受けさせたステップにより得られた細胞産物を指す。
【０３１１】
（実施例１）
抗ＣＤ１９  ＣＡＲを発現するＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞の治療用組成物を生成するためのプロセス
【０３１２】
それぞれ、同じ抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する操作ＣＤ４＋Ｔ細胞および操作ＣＤ８＋Ｔ細胞を、本明細書に概説されるようなプロセスによって、産生させた。以下の実施例２に記載されるように、細胞は、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞の別個の組成物を、ヒト白血球アフェレーシス試料から単離したＰＢＭＣから選択し、極低温凍結させるプロセスによって、産生させた。選択したＣＤ４＋組成物およびＣＤ８＋組成物を、続いて、解凍させ、別個に、刺激、形質導入、および増大のステップを受けさせた。第２の例示的なプロセスには、選択ステップの前に、追加の極低温保存ステップが含まれた。
【０３１３】
単離したＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞を、別個に、ビーズの細胞に対する比が１：１で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が結合した常磁性ポリスチレンコーティングビーズの存在下において、刺激した。細胞を、ＩＬ−２、ＩＬ−１５、およびＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）を含有する媒体において、刺激した。ＣＤ４＋細胞の媒体は、ＩＬ−７もまた含んでいた。
【０３１４】
ビーズの導入の後に、ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞に、同じ抗ＣＤ１９  ＣＡＲをコードするレンチウイルスベクターを別個に形質導入した。ＣＡＲは、マウス抗体に由来する抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、免疫グロブリンスペーサー、ＣＤ２８に由来する膜貫通ドメイン、４−１ＢＢに由来する共刺激性領域、およびＣＤ３−ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインを含んでいた。
【０３１５】
形質導入の後に、ビーズを、磁場への曝露によって、細胞組成物から除去した。ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞を、次いで、バイオリアクター（Ｘｕｒｉ  Ｗ２５  Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ）による継続的な混合および酸素移動を伴う増大のために、別個に培養した。ポロキサマーを、媒体に添加した。いずれの細胞組成物も、ＩＬ−２およびＩＬ−１５の存在下において培養した。ＣＤ４＋細胞の媒体は、ＩＬ−７もまた含んでいた。ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞は、それぞれ、採取の前に、所望される細胞数および／または濃度まで、培養した。閾値に達した１日後に、それぞれの組成物から細胞を別個に採取し、製剤化し、極低温凍結させた。
【０３１６】
段階的な凍結プロファイルを利用する制御された速度の凍結装置を、以下の実施例に記載される極低温保存ステップに使用した。
【０３１７】
（実施例２）
研究の設計
【０３１８】
２人の健常なドナー（すなわち、ドナー１およびドナー２）を、この研究に使用し、初回入手アフェレーシス（ＡＰＨ）材料を、それぞれのドナーについて、５つの異なるアームに分割した。入手アフェレーシス量の５分の１（対照アームまたはアーム５および１０）を、洗浄し、単離ステップに供して、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を単離し、この時点で、選択した細胞を、２週間極低温保存した。それぞれのドナーに由来する残りのアフェレーシスを、４つの試料に分割した後、極低温保存した（アーム１〜４およびアーム６〜９）。それぞれの極低温保存した試料を、解凍し、洗浄し、３７℃で２時間静置した後に選択したか、または解凍および洗浄の直後に選択ステップに供したかのいずれかであった。アームの半数は、選択後に凍結させ、もう半数は、直接、活性化へと進めた。
【０３１９】
アーム１、２、６、および７の試料は、２週間極低温保存した後に、細胞を解凍してＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の単離を行い、細胞活性化方法に供した。アーム１および６には、追加のステップである、解凍した後に細胞を、任意のさらなる処理の前にインキュベーターにおいて２時間静置させる静置ステップが、含まれた。アーム３、４、８、および９の試料は、２〜４日間極低温保存した後に、解凍してＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の選択を受けさせ、その時点で、選択した集団を、１週間極低温保存した後に、細胞を解凍し、続いて、刺激に供した。アーム３および８には、追加のステップである解凍した後に細胞を、任意のさらなる処理の前にインキュベーターにおいて２時間静置させる静置ステップが、含まれた。
【０３２０】
細胞に、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を単離する選択ステップを含む様々な処理ステップを行った。この選択ステップにおいて、それぞれのアームを、部分アーム（すなわち、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の部分アーム）に分割し、この時点で、選択した細胞を、残りの処理ステップへと進めた。表１は、それぞれのアームが受けた極低温保存ステップを含む研究設計を示す。
【０３２１】
【表１】
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【０３２２】
（実施例３）
アフェレーシス材料の極低温保存は、細胞の表現型に、意味がある影響を及ぼさない
【０３２３】
凍結が異なる表現型の細胞の分布に対して与える影響を評価するために、アフェレーシス試料の極低温保存前および極低温保存後に、フロー分析を行った。Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ−Ｔ細胞、単球、樹状細胞、およびメモリーＴ細胞の表現型の分布を評価するために、特注のフローパネルを開発した。結果により、異なる表現型の細胞の分布は、極低温保存前の試料と極低温保存後の試料で、同等であったことが示唆される。
【０３２４】
極低温保存したアフェレーシス試料および新しいアフェレーシス試料の両方を、フローサイトメトリーを使用して、細胞表面上のＣＤ４分子およびＣＤ８分子の存在について、分析した。このアッセイの結果は、表面のＣＤ４分子およびＣＤ８分子のレベルが、極低温保存によって影響を受けないことを示した。また、これらの結果により、アフェレーシスの極低温保存は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の割合が、両方のドナーについて、極低温凍結前および極低温凍結後で、同程度であったため、試料中のこれらの細胞の相対的な比率に影響を及ぼさなかったことが示唆される。
【０３２５】
（実施例４）
ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の単離に対する極低温保存の影響
【０３２６】
さらに、アフェレーシスを極低温保存することが、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の処理に影響を及ぼすかどうかを評価するために、生存性アッセイを、目的の細胞の選択に至る様々なステップにおいて、行った。細胞生存性を、極低温保存後の静置期間なしで選択ステップの前に極低温保存に供した細胞（アーム２、４、７、および９）、極低温保存後の静置期間ありで選択ステップの前に極低温保存に供した細胞（アーム１、３、６、および８）、ならびに単離ステップの後に極低温保存に供した細胞（アーム５および１０、または対照アーム）について、プロセスの様々なステップにおいて、評価した。具体的には、アフェレーシスを収集した後、アフェレーシスを極低温保存用に製剤化した後、アフェレーシスを所定の期間極低温保存し、解凍および希釈を行った後、解凍し希釈したアフェレーシスを洗浄した後、洗浄したアフェレーシスをインキュベーターにおいて２時間静置させた後、抗体をコーティングしたビーズを試料に添加した後、ならびにＣＤ８＋Ｔ細胞および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した後に、生存性を評価した。すべてのアームにわたる細胞生存性の値は、それぞれの処理ステップにおいて、対照アームの細胞生存性の値と同程度であった。
【０３２７】
全有核細胞数（ＴＮＣ）もまた、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の単離に至る様々なステップの間に、すべての試料について、判定した。細胞喪失は、大部分が、製剤化ステップ中に生じることが見出された。単離後の細胞数の値を、単離前の細胞数の値に対して正規化することによって得られた細胞収率比は、極低温保存したアフェレーシス試料における細胞喪失は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の集団の単離前に生じていたこと、ならびに単離プロセス内でのステップごとの細胞収率は、影響を受けなかったことを示した。しかしながら、この実験において、選択した細胞に対応する最終的なＴＮＣの値は、それぞれのドナーについて、それぞれの細胞型の、一部の極低温保存したアフェレーシスのアームと対照アームとの間で、おそらくは単離前に生じる細胞喪失に起因して、わずかに異なることが見出された。しかしながら、１人のドナーのＣＤ４＋Ｔ細胞の収率は、極低温保存したアフェレーシスと対照アームとの間で、同程度であることが見出された。
【０３２８】
（実施例５）
単離ステップおよび凍結ステップの後の細胞の表現型および生存性の評価
【０３２９】
単離ステップの後に、極低温保存ステップを要した細胞（アーム３、４、５、８、９、および１０）を、極低温保存し、次いで、さらなる分析のために解凍した。アーム３、４、８、および９の細胞は、１．５〜２週間、極低温で保管した後、さらなる分析および処理のために解凍した。アーム５および１０（または対照アーム）の細胞は、２週間、極低温で保管した後、さらなる分析および処理のために解凍した。この時点で、それぞれのドナーのすべてのアームから得られたすべての単離Ｔ細胞集団について、任意の細胞活性化ステップの前に、アッセイを行った。ＴＭＥＭアッセイにより、それぞれのドナーの異なるアームから選択した細胞集団にわたって、様々なＴ細胞マーカーの存在を評価した。細胞表現型分布（選択したマーカーの検出に基づく）は、それぞれのドナーについて、それぞれの細胞型の、極低温保存したアフェレーシスのアームと対照のアームとの間で、大きな差はなかった。単離後の凍結ステップを受けなかったアームの細胞は、ナイーブ様細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋／ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋／ＣＤ２８＋）への傾向が強く、最終エフェクター細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７−）は少なかった。ＣＤ６２Ｌは、単離後の凍結ステップに供した試料では、わずかに低減された。
【０３３０】
細胞生存性を、細胞活性化の前に、それぞれのドナーに由来するそれぞれの細胞型のすべてのアームについて評価した。細胞生存性は、それぞれのドナーに由来するそれぞれの細胞型の、極低温保存したアフェレーシスのアームと対照アームとの間で、大きな差はなかった。加えて、単離後の凍結ステップの作用を評価するために、単離後の凍結ステップの後に得られた細胞数を、単離直後、凍結前に得られた細胞数に対して正規化することによって、細胞収率比を得た。細胞収率比は、極低温保存したアフェレーシスのアームと、対照アームとの間で、同様であった。
【０３３１】
カスパーゼ３のレベルは、アーム全体で、低いことが見出された（５％未満または約５％）。
【０３３２】
（実施例６）
活性化、形質導入、および増大の間の細胞生存性および細胞収率の評価
【０３３３】
既に考察したように、単離ステップの後に、単離後の凍結ステップを受ける必要のある研究アームは、所定の時間、極低温で保管した後に、解凍し、続けて活性化、形質導入、および増大のステップを行った。細胞生存性およびＴＮＣの値は、極低温保存した材料を解凍した後、解凍した材料を、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体が結合した常磁性ポリスチレンコーティングビーズの存在下において刺激した後、活性化した細胞が形質導入を受けた後、ビーズを細胞から除去した後、ならびに細胞を２または３日間増大させた後に、判定した。細胞生存性は、それぞれのドナーについて、それぞれの細胞型の、極低温保存したアフェレーシスのアームと対照アームとの間で、同程度であることが見出された。刺激ステップにおいて、極低温保存したアフェレーシスのアームの細胞生存性の値は、対応する対照アームの値と比較して、２０％未満の差を示した。このパーセント差は、すべての他のステップでは、１０％よりも低かった。加えて、これらのステップのそれぞれにおいて得られたＴＮＣの値は、極低温保存したアフェレーシスのアームと、それらの対応する対照アームとの間で、同等であった。さらに、それぞれのステップにおいて計算した増大倍数もまた、極低温保存したアフェレーシスのアームと、それらの対応する対照アームとの間で、同等であることが見出された。
【０３３４】
これらの結果により、この実験において、静置も単離直後のさらなる極低温保存ステップもなしの極低温保存したアフェレーシス試料、および静置ステップはあるが、単離直後のさらなる極低温保存ステップはなしの極低温保存したアフェレーシス試料が、それらの対応する対照アームと比較して、類似かまたは高い最終細胞収率を有することが示された。
【０３３５】
（実施例７）
極低温保存した組成物の製剤化の間の細胞生存性、細胞収率、および細胞活性の評価
【０３３６】
増大ステップの後に得られたそれぞれのアームからの細胞を、極低温保存媒体において製剤化し、凍結させた。試料を、次いで、さらなる分析のために解凍した。細胞生存性および細胞収率の値を、このステップの時点で、研究のすべてのアームにおける細胞について、判定した。平均の生存性および細胞数収率は、このステップの時点で、極低温保存したアフェレーシスのアームと、それらの対応する対照アームとの間で、同等であった。
【０３３７】
さらに、すべてのアームについて、細胞表現型分布を評価するために、アッセイを行った。細胞表現型は、極低温保存したアフェレーシスのアームと、それらの対応する対照アームとの間で、統計学的に同等であることが見出された。単離後の凍結ステップを受けなかったアームは、ＣＤ４５ＲＡ＋／ＣＣＲ７＋細胞およびＣＤ２７＋／ＣＤ２８＋細胞をより高い割合で含み、ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＣＲ７−細胞は少ない傾向にあった。加えて、この実験において、カスパーゼ３のレベルは、ＣＤ８＋Ｔ細胞のアームでは、ＣＤ４＋Ｔ細胞のアームと比較して、わずかに高いことが見出され、単離後の凍結ステップを含んでいたアームは、このステップを含んでいなかったアームよりも高いカスパーゼレベルを示した。
【０３３８】
インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）分泌を使用して、処理後のＴ細胞機能性を評価した。それぞれのアームからのＴ細胞を、ＩＦＮγを産生するように刺激した。刺激後に、上清を収集し、上清中に分泌されたＩＦＮγを測定した。すべての実験条件について、値は、それらの対応する対照の値と一致しており、最終的な細胞産物の細胞活性が、初期の極低温保存ステップによって影響を受けなかったことが示された。
【０３３９】
さらに、産生されたＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞溶解活性を評価するために、細胞溶解アッセイも行った。細胞溶解活性を、様々なエフェクター細胞：標的細胞の比で測定して、ＥＣ５０（標的細胞の５０％を殺滅するのに必要な比率）を判定した。極低温保存したアフェレーシスのアームの、それらの対応する対照アームと比較した、細胞溶解ＥＣ５０の差異倍数は、２倍未満の差異であることが見出され、異なるアーム条件が、結果として得られる細胞の細胞溶解ＥＣ５０に、意味がある変化を及ぼすことはなかったことが示唆された。
例示的な実施形態
【０３４０】
１．ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であって、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断された後であり、かつドナーが以下の：疾患もしくは状態の任意の初回処置、疾患もしくは状態の処置のための任意の標的化処置もしくはそれを対象とする任意の処置、または放射線照射および／もしくは化学療法以外の任意の処置のうちの１つまたは複数を受ける前である時点、（ｉｉ）ドナーにおける、疾患もしくは状態の初回処置の後の疾患もしくは状態の１回目の再発の後であり、かつドナーが疾患もしくは状態の再発後の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されていないか、または疾患もしくは状態を有することが判明していないか、または疾患もしくは状態を有することが疑われていない時点において、ドナーから得られている、方法。
【０３４１】
２．生物学的試料が、ドナーの血液試料であるか、またはそれに由来する、実施形態１に記載の方法。
【０３４２】
３．細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞集団および／またはＴ細胞集団および／またはＴ細胞サブセットの選択ステップに供されていない、および／またはそれが濃縮されていない、実施形態１または実施形態２に記載の方法。
【０３４３】
４．細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞および／またはＴ細胞集団の選択ステップおよび／または濃縮に供されており、必要に応じて、前記極低温保管の前に、生物学的試料から細胞集団を選択または濃縮することをさらに含む、実施形態１または実施形態２に記載の方法。
【０３４４】
５．選択ステップおよび／または濃縮が、免疫親和性に基づく選択を含む、および／または陽性選択もしくは陰性選択を含む、実施形態４に記載の方法。
【０３４５】
６．選択ステップおよび／または濃縮が、ＣＤ４＋細胞もしくはそのサブセットおよび／またはＣＤ８＋細胞もしくはそのサブセットの濃縮および／または単離を含み、ＣＤ４＋細胞またはそのサブセットの濃縮または単離が、ＣＤ８＋細胞またはそのサブセットの選択および／または単離とは別個にまたはそれと組み合わせてのいずれかで行われ、必要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、実施形態２〜５のいずれかに記載の方法。
【０３４６】
７．細胞が、Ｔ細胞を含むか、またはＴ細胞が濃縮されている、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０３４７】
８．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物を含むか、またはそれらが濃縮されており、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、実施形態７に記載の方法。
【０３４８】
９．細胞を極低温で保管する前に、細胞を、０℃よりも低いかまたは０℃に等しい温度に冷却することをさらに含む、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の方法。
【０３４９】
１０．細胞を保管する前および／または冷却する前に、細胞を、凍結溶液と合わせることをさらに含む、実施形態８に記載の方法。
【０３５０】
１１．凍結溶液が、約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および血清タンパク質、必要に応じて、ヒト血清アルブミン、必要に応じて、約４％のヒト血清アルブミンを含む、ならびに／または凍結溶液、および／もしくは細胞が極低温保存および保管される最終濃度の組成物が、約１体積％〜約２０体積％、約３体積％〜約９体積％、もしくは約６体積％〜約９体積％のＤＭＳＯを含む、および／または約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、もしくは約１０体積％のＤＭＳＯを含む、実施形態１０に記載の方法。
【０３５１】
１２．細胞を冷却することが、１分間につき１℃または約１℃の速度で、必要に応じて、温度が−８０℃または約−８０℃に達するまで、温度を低下させることを含む、実施形態９〜１１のいずれか１つに記載の方法。
【０３５２】
１３．細胞が、液体窒素の気相に入れた容器において極低温で保管され、容器が、必要に応じて、極低温保存に好適なバッグまたはバイアルである、実施形態１〜１１のいずれか１つに記載の方法。
【０３５３】
１４．細胞が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、極低温で保管される、実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【０３５４】
１５．細胞が、ある期間保管され、期間の後、組成物中の生存細胞もしくは生存Ｔ細胞またはそれらのサブタイプもしくはサブセットの割合が、約２４％〜約１００％であるか、または少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、もしくは９０％である、実施形態１〜１４のいずれかに記載の方法。
【０３５５】
１６．疾患が、がん、炎症性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または感染性疾患もしくは状態である、実施形態１〜１５のいずれか１つに記載の方法。
【０３５６】
１７．がんが、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞性白血病、急性リンパ球性白血病、ｎｕｌｌ型急性リンパ芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、または急性骨髄性白血病である、実施形態１６に記載の方法。
【０３５７】
１８．がんが、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、およびサイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）のうちの少なくとも１つを発現する細胞を含む、実施形態１６または１７に記載の方法。
【０３５８】
１９．初回処置または後続の処置が、化学療法、放射線照射、および／もしくは外科手術である、ならびに／またはデバルキング処置である、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の方法。
【０３５９】
２０．初回処置または後続の処置が、化学療法の組合せであるか、またはそれを含む、実施形態１９に記載の方法。
【０３６０】
２１．ドナーが、ヒトである、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の方法。
【０３６１】
２２．極低温保管の前に、細胞を、必要に応じて、１つまたは複数の表現型マーカーについて、細胞の表面発現を評価することによって、分析することをさらに含む、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の方法。
【０３６２】
２３．極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の方法。
【０３６３】
２４．細胞の活性を増加させるために、極低温後修飾を行うことをさらに含む、実施形態２３に記載の方法。
【０３６４】
２５．極低温後修飾が、極低温保管の前に細胞を分析することに基づく、実施形態２４に記載の方法。
【０３６５】
２６．細胞の極低温保管および／または解凍の後に、組換えまたは外因性分子を発現するように細胞を操作することをさらに含み、これが、必要に応じて、組換えタンパク質、必要に応じて、組換え受容体であり、これが、必要に応じて、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ受容体、および／またはキメラ抗原受容体であるか、またはそれらを含む、実施形態２３〜２５のいずれかに記載の方法。
【０３６６】
２７．組換え分子が、疾患または状態によって発現されるか、それらによって特異的に発現されるか、またはそれらと関連する抗原を特異的に認識するか、またはそれに特異的に結合する組換え受容体である、実施形態２６に記載の方法。
【０３６７】
２８．ドナーから収集されたとき、および／またはアフェレーシス試料中の合計の、細胞の数が、以下の数もしくはおよそ以下の数であるか、または以下の数もしくはおよそ以下の数を上回らない、実施形態１〜２６のいずれか１つに記載の方法：５００×１０６個、１０００×１０６個、２０００×１０６個、３０００×１０６個、４０００×１０６個、もしくは５０００×１０６個、またはそれよりも多くの合計細胞もしくは合計有核細胞。
【０３６８】
２９．アフェレーシス試料を処理するための方法であって、（ａ）ドナーから得られたアフェレーシス試料を、低温環境で、保管施設に輸送すること、および（ｂ）必要に応じて保管施設において、アフェレーシス試料を極低温で保管することを含む、方法。
【０３６９】
３０．試料を輸送する前および／または試料を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、実施形態２９に記載の方法。
【０３７０】
３１．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが濃縮されており、必要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、ならびに／または試料が、バルクＴ細胞が濃縮されている、実施形態３０に記載の方法。
【０３７１】
３２．輸送する前に、アフェレーシス試料を分析することをさらに含む、実施形態２９〜３１のいずれか１つに記載の方法。
【０３７２】
３３．輸送する前に、アフェレーシス試料に凍結溶液を添加することをさらに含む、実施形態２９〜３２のいずれか１つに記載の方法。
【０３７３】
３４．輸送する前に、アフェレーシス試料に凍結溶液を添加することをさらに含み、凍結溶液が、輸送する前にアフェレーシス試料を分析することに基づいて選択される、実施形態３２に記載の方法。
【０３７４】
３５．輸送する前に、アフェレーシス試料を極低温で凍結させることをさらに含む、実施形態２９〜３４のいずれか１つに記載の方法。
【０３７５】
３６．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、実施形態３５に記載の方法。
【０３７６】
３７．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが濃縮されており、必要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、ならびに／またはバルクＴ細胞を含む、実施形態３６に記載の方法。
【０３７７】
３８．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料またはＴ細胞を分析することをさらに含む、実施形態３６〜３７のいずれか１つに記載の方法。
【０３７８】
３９．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料またはＴ細胞に、凍結溶液を添加することをさらに含む、実施形態３６〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０３７９】
４０．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料またはＴ細胞に、凍結溶液を添加することをさらに含み、凍結溶液が、必要に応じて、輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、アフェレーシス試料またはＴ細胞を分析することに基づいて選択される、実施形態３８に記載の方法。
【０３８０】
４１．極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、実施形態２９〜４０のいずれか１つに記載の方法。
【０３８１】
４２．解凍の後に、細胞を分析することをさらに含む、実施形態４１に記載の方法。
【０３８２】
４３．解凍の後の分析に基づいて、細胞のさらなる修飾のための条件を選択することをさらに含む、実施形態４２に記載の方法。
【０３８３】
４４．処置の方法であって、必要に応じて対象に由来するＴ細胞を含む、極低温で凍結された細胞の試料を得て、必要に応じて解凍することであって、前記得ることの前に、細胞が、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月間、または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０年間の期間、極低温で凍結されていることと、組換え抗原受容体を発現するように、細胞を修飾することと、細胞を対象に投与することとを含む、方法。
【０３８４】
４５．試料が、実施形態１〜４３のいずれかに記載の方法に従って凍結および／または保管されている、実施形態４４に記載の方法。
さらなる例示的な実施形態Ｉ
【０３８５】
１．操作細胞の組成物を産生するための方法であって、（ａ）（ｉ）ＴＣＲ複合体の１つもしくは複数の構成要素の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび／または１つもしくは複数の共刺激性分子の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激性試薬、ならびに（ｉｉ）１つまたは複数のサイトカインの存在を含む刺激条件下において、ＣＤ４＋初代ヒトＴ細胞が濃縮されたＴ細胞を含むインプット組成物をインキュベートし、それによって、刺激された組成物を生成することと、（ｂ）組換え受容体を、刺激された組成物に導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む、操作組成物を生成することとを含み、インプット組成物が、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月間、または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０年間の期間、極低温で保管されている試料であるか、またはそれに由来する、方法。
【０３８６】
２．刺激性試薬が、ＴＣＲ複合体のメンバーに特異的に結合し、必要に応じてＣＤ３に特異的に結合する一次作用物質を含む、実施形態１に記載の方法。
【０３８７】
３．刺激性試薬が、Ｔ細胞共刺激性分子に特異的に結合する二次作用物質をさらに含み、必要に応じて、共刺激性分子が、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１−ＢＢ）、ＯＸ４０、またはＩＣＯＳから選択される、実施形態２に記載の方法。
【０３８８】
４．一次および／または二次作用物質が、抗体を含み、必要に応じて、刺激性試薬が、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体またはそれらの抗原結合性断片とのインキュベーションを含む、実施形態２または実施形態３に記載の方法。
【０３８９】
５．一次作用物質および／または二次作用物質が、固体支持体の表面上に存在する、実施形態２〜４のいずれか１つに記載の方法。
【０３９０】
６．固体支持体が、ビーズであるか、またはビーズを含む、実施形態５に記載の方法。
【０３９１】
７．ビーズが、３．５μｍを上回るかまたは約３．５μｍを上回るが、約９μｍを上回らない、または約８μｍを上回らない、または約７μｍを上回らない、または約６μｍを上回らない、または約５μｍを上回らない直径を含む、実施形態６に記載の方法。
【０３９２】
８．ビーズが、４．５μｍまたは約４．５μｍの直径を含む、実施形態６または実施形態７に記載の方法。
【０３９３】
９．ビーズが、不活性である、実施形態６〜８のいずれか１つに記載の方法。
【０３９４】
１０．ビーズが、ポリスチレン表面であるか、またはそれを含む、実施形態６〜９のいずれか１つに記載の方法。
【０３９５】
１１．ビーズが、磁性または超常磁性である、実施形態６〜１０のいずれか１つに記載の方法。
【０３９６】
１２．ビーズの細胞に対する比が、３未満：１である、実施形態６〜１１のいずれか１つに記載の方法。
【０３９７】
１３．ビーズの細胞に対する比が、２：１または約２：１〜０．５：１である、実施形態６〜１２のいずれか１つに記載の方法。
【０３９８】
１４．ビーズの細胞に対する比が、１：１または約１：１である、実施形態６〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【０３９９】
１５．導入することが、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを形質導入することを含む、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の方法。
【０４００】
１６．ウイルスベクターが、レトロウイルスベクターである、実施形態１５に記載の方法。
【０４０１】
１７．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、実施形態１５または実施形態１６に記載の方法。
【０４０２】
１８．導入することが、形質導入アジュバントの存在下において行われる、実施形態１５〜１７のいずれか１つに記載の方法。
【０４０３】
１９．導入することが、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターをトランスフェクトすることを含む、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の方法。
【０４０４】
２０．ベクターが、トランスポゾン、必要に応じて、スリーピングビューティー（ＳＢ）トランスポゾンまたはピギーバックトランスポゾンである、実施形態１９に記載の方法。
【０４０５】
２１．操作細胞の増殖または増大を促進する条件下において、操作組成物を培養し、それによって、操作Ｔ細胞を含むアウトプット組成物を産生することをさらに含む、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の方法。
【０４０６】
２２．刺激性試薬が、培養する前に、操作組成物から除去される、実施形態２１に記載の方法。
【０４０７】
２３．ビーズを除去することが、操作組成物の細胞を、磁場に曝露することを含む、実施形態２２に記載の方法。
【０４０８】
２４．培養することの少なくとも一部分が、継続的な混合および／または灌流によって行われる、実施形態２１〜２３のいずれか１つに記載の方法。
【０４０９】
２５．操作細胞組成物を産生する方法であって、（ａ）（ｉ）ＴＣＲ複合体の１つもしくは複数の構成要素の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび／または１つもしくは複数の共刺激性分子の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激性試薬、ならびに（ｉｉ）１つまたは複数のサイトカインの存在を含む刺激条件下において、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋初代ヒトＴ細胞のうちの一方または両方が濃縮された、初代Ｔ細胞を含むインプット組成物をインキュベートし、それによって、刺激された組成物を生成することと、（ｂ）組換え受容体を、刺激された組成物に導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む、操作組成物を生成することとを含み、インプット組成物が、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月間、または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０年間の期間、極低温で保管されている試料であるか、またはそれに由来する、方法。
【０４１０】
２６．刺激性試薬が、ＴＣＲ複合体のメンバーに特異的に結合し、必要に応じてＣＤ３に特異的に結合する一次作用物質を含む、実施形態２４または実施形態３５に記載の方法。
【０４１１】
２７．刺激性試薬が、Ｔ細胞共刺激性分子に特異的に結合する二次作用物質をさらに含み、必要に応じて、共刺激性分子が、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１−ＢＢ）、ＯＸ４０、またはＩＣＯＳから選択される、実施形態２６に記載の方法。
【０４１２】
２８．一次および／または二次作用物質が、抗体を含み、必要に応じて、刺激性試薬が、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体またはそれらの抗原結合性断片とのインキュベーションを含む、実施形態２６または実施形態２７に記載の方法。
【０４１３】
２９．一次作用物質および／または二次作用物質が、固体支持体の表面上に存在する、実施形態２６〜２８のいずれか１つに記載の方法。
【０４１４】
３０．固体支持体が、ビーズであるか、またはビーズを含む、実施形態２９に記載の方法。
【０４１５】
３１．ビーズが、３．５μｍを上回るかまたは約３．５μｍを上回るが、約９μｍを上回らない、または約８μｍを上回らない、または約７μｍを上回らない、または約６μｍを上回らない、または約５μｍを上回らない直径を含む、実施形態３０に記載の方法。
【０４１６】
３２．ビーズが、４．５μｍまたは約４．５μｍの直径を含む、実施形態３０または実施形態３１に記載の方法。
【０４１７】
３３．ビーズが、不活性である、実施形態３０〜３２のいずれか１つに記載の方法。
【０４１８】
３４．ビーズが、ポリスチレン表面であるか、またはそれを含む、実施形態３０〜３３のいずれか１つに記載の方法。
【０４１９】
３５．ビーズが、磁性または超常磁性である、実施形態３０〜３４のいずれか１つに記載の方法。
【０４２０】
３６．ビーズの細胞に対する比が、３未満：１である、実施形態３０〜３５のいずれか１つに記載の方法。
【０４２１】
３７．ビーズの細胞に対する比が、２：１または約２：１〜０．５：１である、実施形態３０〜３６のいずれか１つに記載の方法。
【０４２２】
３８．ビーズの細胞に対する比が、１：１または約１：１である、実施形態３０〜３７のいずれか１つに記載の方法。
【０４２３】
３９．導入することが、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むウイルスベクターを形質導入することを含む、実施形態２４〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０４２４】
４０．ウイルスベクターが、レトロウイルスベクターである、実施形態３９に記載の方法。
【０４２５】
４１．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、実施形態３９または実施形態４０に記載の方法。
【０４２６】
４２．導入することが、形質導入アジュバントの存在下において行われる、実施形態２４〜４１のいずれか１つに記載の方法。
【０４２７】
４３．導入することが、刺激された組成物の細胞に、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターをトランスフェクトすることを含む、実施形態２４〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０４２８】
４４．ベクターが、トランスポゾン、必要に応じて、スリーピングビューティー（ＳＢ）トランスポゾンまたはピギーバックトランスポゾンである、実施形態４３に記載の方法。
【０４２９】
４５．操作細胞組成物が、刺激性試薬を含まない、および／または刺激性試薬が、培養の前に組成物から実質的に除去されており、前記刺激性試薬が、ＴＣＲ複合体の１つもしくは複数の構成要素の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインおよび／または１つもしくは複数の共刺激性分子の１つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる試薬を含む、実施形態２４または実施形態２５に記載の方法。
【０４３０】
４６．培養することが、少なくとも、アウトプット組成物が閾値数のＴ細胞を含むまで行われる、実施形態２１〜４５のいずれか１つに記載の方法。
【０４３１】
４７．培養することが、閾値数のＴ細胞が達成された後、少なくとも１日間、継続される、実施形態４６に記載の方法。
【０４３２】
４８．培養に続いて、アウトプット組成物の細胞を収集する、実施形態２１〜４７のいずれか１つに記載の方法。
【０４３３】
４９．アウトプット組成物の細胞を、極低温保存および／または対象への投与のために、必要に応じて薬学的に許容される賦形剤の存在下において、製剤化することをさらに含む、実施形態２１〜４８のいずれかに記載の方法。
【０４３４】
５０．アウトプット組成物の細胞が、極低温保護剤の存在下において製剤化される、実施形態４９に記載の方法。
【０４３５】
５１．極低温保護剤が、ＤＭＳＯを含む、実施形態５０に記載の方法。
【０４３６】
５２．アウトプット組成物の細胞が、容器、必要に応じてバイアルまたはバッグにおいて、製剤化される、実施形態４９〜５１のいずれかに記載の方法。
【０４３７】
５３．インキュベートする前に、生物学的試料からＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することをさらに含む、実施形態１〜３８のいずれか１つに記載の方法。
【０４３８】
５４．単離することが、ＣＤ４および／またはＣＤ８の表面発現に基づいて、必要に応じて陽性選択または陰性選択によって、細胞を選択することを含む、実施形態５３に記載の方法。
【０４３９】
５５．単離することが、免疫親和性に基づく選択を実行することを含む、実施形態５３または実施形態５４に記載の方法。
【０４４０】
５６．生物学的試料が、対象から得られた初代Ｔ細胞を含む、実施形態５３〜５５のいずれか１つに記載の方法。
【０４４１】
５７．対象が、ヒト対象である、実施形態５６に記載の方法。
【０４４２】
５８．生物学的試料が、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料、未分画Ｔ細胞試料、リンパ球試料、白血球試料、アフェレーシス産物、または白血球アフェレーシス産物であるか、またはそれらを含む、実施形態５３〜５５のいずれか１つに記載の方法。
【０４４３】
５９．生物学的試料が、極低温保存されたアフェレーシス産物または極低温保存された白血球アフェレーシス産物であるか、またはそれらを含む、実施形態５３〜５５のいずれか１つに記載の方法。
【０４４４】
６０．組換え受容体が、疾患、障害、または状態の細胞または組織と関連する、それに特異的である、および／またはそこに発現される標的抗原に結合することができる、実施形態１〜５９のいずれか１つに記載の方法。
【０４４５】
６１．疾患、障害、または状態が、感染性疾患もしくは障害、自己免疫性疾患、炎症性疾患、または腫瘍もしくはがんである、実施形態６０に記載の方法。
【０４４６】
６２．標的抗原が、腫瘍抗原である、実施形態６０または実施形態６１に記載の方法。
【０４４７】
６３．標的抗原が、５Ｔ４、８Ｈ９、ａｖｂ６インテグリン、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ９、がん−精巣抗原、炭酸脱水酵素９（ＣＡＩＸ）、ＣＣＬ−１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＥＡ、Ｂ型肝炎表面抗原、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥ７、サイクリン、サイクリンＡ２、ｃ−Ｍｅｔ、二重抗原、ＥＧＦＲ、上皮糖タンパク質２（ＥＰＧ−２）、上皮糖タンパク質４０（ＥＰＧ−４０）、ＥＰＨａ２、エフリンＢ２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ３、ｅｒｂ−Ｂ４、ｅｒｂＢ二量体、ＥＧＦＲ  ｖＩＩＩ、エストロゲン受容体、胎児性ＡｃｈＲ、葉酸受容体アルファ、葉酸結合性タンパク質（ＦＢＰ）、ＦＣＲＬ５、ＦＣＲＨ５、胎児性アセチルコリン受容体、Ｇ２５０／ＣＡＩＸ、ＧＤ２、ＧＤ３、ｇｐ１００、Ｇタンパク質共役型受容体５Ｄ（ＧＰＣＲ５Ｄ）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（受容体チロシンキナーゼｅｒｂＢ２）、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３受容体アルファ２（ＩＬ−１３Ｒａ２）、キナーゼインサートドメイン受容体（ｋｄｒ）、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子（Ｌ１−ＣＡＭ）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＲＴ−１、メソテリン、マウスＣＭＶ、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、Ｏ−アセチル化ＧＤ２（ＯＧＤ２）、癌胎児性抗原、優先的に発現される黒色腫の抗原（ＰＲＡＭＥ）、ＰＳＣＡ、プロゲステロン受容体、サバイビン、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ｔＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦ−Ｒ２、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、病原体特異的抗原、およびユニバーサルタグと関連する抗原の中から選択される、実施形態６０〜６２のいずれか１つに記載の方法。
【０４４８】
６４．組換え受容体が、機能性非ＴＣＲ抗原受容体、またはＴＣＲ、またはその抗原結合性断片であるか、またはそれらを含む、実施形態１〜６３のいずれか１つに記載の方法。
【０４４９】
６５．組換え受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１〜６４のいずれか１つに記載の方法。
【０４５０】
６６．組換え受容体が、抗ＣＤ１９  ＣＡＲである、実施形態１〜６５のいずれか１つに記載の方法。
【０４５１】
６７．キメラ抗原受容体が、抗原結合性ドメインを含む細胞外ドメインを含む、実施形態６５に記載の方法。
【０４５２】
６８．抗原結合性ドメインが、抗体またはその抗体断片であるか、またはそれを含み、断片が、必要に応じて、一本鎖断片である、実施形態６７に記載の方法。
【０４５３】
６９．断片が、可動性リンカーによって接合された抗体可変領域を含む、実施形態６８に記載の方法。
【０４５４】
７０．断片が、ｓｃＦｖを含む、実施形態６８または実施形態６９に記載の方法。
【０４５５】
７１．キメラ抗原受容体が、スペーサーおよび／またはヒンジ領域をさらに含む、実施形態６７〜７０のいずれか１つに記載の方法。
【０４５６】
７２．キメラ抗原受容体が、細胞内シグナル伝達領域を含む、実施形態６７〜７１のいずれかに記載の方法。
【０４５７】
７３．細胞内シグナル伝達領域が、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態７２に記載の方法。
【０４５８】
７４．細胞内シグナル伝達ドメインが、一次シグナル伝達ドメイン、Ｔ細胞において一次活性化シグナルを誘導することができるシグナル伝達ドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）構成要素のシグナル伝達ドメイン、および／または免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含むシグナル伝達ドメインであるか、またはそれらを含む、実施形態７３に記載の方法。
【０４５９】
７５．細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３鎖の細胞内シグナル伝達ドメイン、必要に応じて、ＣＤ３−ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖、またはそのシグナル伝達部分であるか、またはそれを含む、実施形態７４に記載の方法。
【０４６０】
７６．キメラ抗原受容体が、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達領域との間に配置される、膜貫通ドメインをさらに含む、実施形態７２〜７５のいずれか１つに記載の方法。
【０４６１】
７７．細胞内シグナル伝達領域が、共刺激性シグナル伝達領域をさらに含む、実施形態７２〜７６のいずれか１つに記載の方法。
【０４６２】
７８．共刺激性シグナル伝達領域が、Ｔ細胞共刺激性分子の細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む、実施形態７７に記載の方法。
【０４６３】
７９．共刺激性シグナル伝達領域が、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、もしくはＩＣＯＳの細胞内シグナル伝達ドメイン、またはこれらのシグナル伝達部分を含む、実施形態７７または請求項７８に記載の方法。
【０４６４】
８０．共刺激性シグナル伝達領域が、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達領域との間にある、実施形態７７〜７９のいずれか１つに記載の方法。
【０４６５】
８１．閾値数またはそれを上回る数の細胞を含むアウトプット組成物が、方法の反復のうちの８５％を上回るかもしくは約８５％を上回る、９０％を上回るかもしくは約９０％を上回る、または９５％を上回るかもしくは約９５％を上回る割合において産生される、実施形態４６〜４７のいずれか１つに記載の方法。
【０４６６】
８２．実施形態１〜７９のいずれか１つに記載の方法によって産生される操作細胞を含む、組成物。
【０４６７】
８３．薬学的に許容される担体をさらに含む、実施形態８２に記載の組成物。
【０４６８】
８４．極低温保護剤、必要に応じてＤＭＳＯを含む、実施形態８２または実施形態８３に記載の組成物。
【０４６９】
８５．実施形態８０〜８２のいずれかに記載の組成物と、アウトプット組成物を対象に投与するための説明書とを含む製品。
【０４７０】
８６．対象が、疾患または状態を有し、必要に応じて、組換え受容体が、疾患もしくは状態と関連するか、または疾患もしくは状態の細胞上に発現もしくは存在する抗原を特異的に認識するか、またはそれに特異的に結合する、実施形態８５に記載の製品。
【０４７１】
８７．アウトプット組成物が、操作ＣＤ４＋Ｔ細胞の組成物である、実施形態８５または実施形態８６に記載の製品。
【０４７２】
８８．アウトプット組成物が、ＣＤ８＋Ｔ細胞の操作組成物である、実施形態８５または実施形態８６に記載の製品。
【０４７３】
８９．実施形態１〜２５または２６〜８１のいずれか１つに記載の方法によって産生された、操作ＣＤ４＋Ｔ細胞の組成物と、請求項２〜２３、２５、または２６〜８１のいずれかに記載の方法によって産生された、操作ＣＤ８＋Ｔ細胞の組成物と、操作ＣＤ４＋Ｔ細胞および操作ＣＤ８＋Ｔ細胞を対象に投与するための説明書とを含む製品。
【０４７４】
９０．説明書により、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、別個に対象に投与することが指定される、実施形態８９に記載の製品。
【０４７５】
９１．説明書により、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を、所望される比で対象に投与することが指定される、実施形態８９または実施形態９０に記載の製品。
さらなる例示的な実施形態ＩＩ
【０４７６】
１．生物学的試料を保管する方法であって、対象から生物学的試料を得ること、生物学的試料を２つまたはそれを上回る別個の容器に分割すること、生物学的試料を極低温保存すること、極低温保存した生物学的試料を保管することを含む、方法。
【０４７７】
２．対象が、ヒト対象である、実施形態１に記載の方法。
【０４７８】
３．生物学的試料が、アフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物である、実施形態１〜２のいずれか１つに記載の方法。
【０４７９】
４．２つまたはそれを上回る別個の容器が、それぞれ、極低温バッグおよび／または極低温バイアルからなる群から選択される、実施形態１〜３のいずれか１つに記載の方法。
【０４８０】
５．２つまたはそれを上回る別個の容器が、固有の識別子をそこに含む、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の方法。
【０４８１】
６．固有の識別子が、文字情報、ＲＦＩＤタグ、ＱＲコード（登録商標）、および／またはバーコードのうちの任意の１つまたは複数を含む、実施形態５に記載の方法。
【０４８２】
７．固有の識別子情報が、以下のカテゴリー：対象の識別、試料保管の場所、保管および／または取扱いの説明、受領の日付、極低温保存の日付、消費期限、ならびに意図される使用のうちの任意の１つまたは複数に関する情報を含む、実施形態５〜６のいずれか１つに記載の方法。
【０４８３】
８．生物学的試料が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、保管される、実施形態１〜７のいずれか１つに記載の方法。
【０４８４】
９．生物学的試料を保管する方法であって、（ａ）対象から生物学的試料を得ることと、（ｂ）生物学的試料を、１つまたは複数の容器において極低温保存することと、（ｃ）極低温保存した生物学的試料を、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、保管することとを含む、方法。
【０４８５】
１０．対象が、ヒト対象である、実施形態９に記載の方法。
【０４８６】
１１．生物学的試料が、アフェレーシス産物または白血球アフェレーシス産物である、実施形態９〜１０のいずれか１つに記載の方法。
【０４８７】
１２．１つまたは複数の容器が、それぞれ、極低温バッグおよび／または極低温バイアルからなる群から選択される、実施形態９〜１１のいずれか１つに記載の方法。
【０４８８】
１３．１つまたは複数の別個の容器が、固有の識別子をそこに含む、実施形態９〜１２のいずれか１つに記載の方法。
【０４８９】
１４．固有の識別子が、文字情報、ＲＦＩＤタグ、ＱＲコード（登録商標）、および／またはバーコードのうちの任意の１つまたは複数を含む、実施形態１３に記載の方法。
【０４９０】
１５．固有の識別子情報が、以下のカテゴリー：対象の識別、試料保管の場所、保管および／または取扱いの説明、受領の日付、極低温保存の日付、消費期限、ならびに意図される使用のうちの任意の１つまたは複数に関する情報を含む、実施形態１３〜１４のいずれか１つに記載の方法。
【０４９１】
１６．対象に対応する生物学的試料を得る方法であって、（ａ）試料を対象と関連付けている固有の識別子に基づいて、中央施設における極低温保存された試料の位置を特定することと、（ｂ）極低温保存された試料を得ることとを含む、方法。
【０４９２】
１７．生物学的試料が、遺伝子的に対象に適合する、対象の自家産物を産生するのに好適である、および／または対象の細胞を含んでいる、実施形態１６に記載の方法。
さらなる例示的な実施形態ＩＩＩ
【０４９３】
１．ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であって、細胞が、ドナーが疾患または状態であると診断された後、またはそれを有するかもしくはそれを有する疑いがあるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の１つまたは複数の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られ、細胞が、試料および／またはチャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用して、制御された速度の凍結装置において、凍結される、方法。
【０４９４】
２．ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であって、細胞が、ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされた後、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつドナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られている、方法。
【０４９５】
３．ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で保管することを含む方法であって、細胞が、ドナーが疾患もしくは状態であると診断されていないか、またはそれを有することが判明していないか、またはそれを有することが疑われていない時点で、ドナーから得られており、細胞が、試料および／またはチャンバが１分間につき１℃を上回る速度で冷却される少なくとも１つのステップを含む、段階的な凍結プロファイルを使用して、制御された速度の凍結装置において、凍結される、方法。
【０４９６】
４．（ａ）ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、（ｂ）極低温で凍結させた細胞を、ある期間保管することとを含む方法であって、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつドナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られるかまたは得られたものであり、保管の期間中に、ドナーが、疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【０４９７】
５．（ａ）ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、（ｂ）極低温で凍結させた細胞を、ある期間保管することとを含む方法であって、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつドナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られるかまたは得られたものであり、細胞が、以下を上回るかもしくは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、もしくは４０年間、またはドナーが細胞を必要とするまで、極低温で保管される、方法。
【０４９８】
６．（ａ）ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させることと、（ｂ）極低温で凍結させた細胞から生成された操作Ｔ細胞を含む、治療有効量の組成物を、それを必要とする対象に投与することとを含む方法であって、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつドナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られるかまたは得られたものであり、凍結と投与との間に、ドナーが、疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【０４９９】
７．（ａ）ドナーに由来する生物学的試料からの細胞を、極低温で凍結させ、それによって、極低温で凍結させた細胞組成物を生成することと、（ｂ）極低温で凍結させた細胞組成物の細胞を操作して、操作Ｔ細胞を含む組成物を生成することとを含む方法であって、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつドナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから得られるかまたは得られたものであり、凍結と操作との間に、ドナーが、疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【０５００】
８．治療有効量の操作Ｔ細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、処置の方法であって、細胞が、（ｉ）対象が疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつ対象が疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）対象が疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつ対象が疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、対象から得られるかまたは得られたものであり、細胞が、対象から得られるかもしくは得られた後、かつ操作Ｔ細胞の投与の前に、対象が、疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【０５０１】
９．操作細胞の組成物を産生するための方法であって、（ａ）極低温で保管した細胞を得て、必要に応じて解凍することと、（ｂ）極低温で保管した細胞に、組換え受容体を導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む操作組成物を生成することとを含む方法であって、細胞が、（ｉ）ドナーが疾患もしくは状態であると診断されたか、またはそれを有するかもしくはそれを有することが疑われるとみなされた後であり、かつドナーが疾患または状態の処置を受ける前である時点、あるいは（ｉｉ）ドナーが疾患または状態の処置レジメンに不応性であるとみなされたか、または処置レジメンの後に再発を経験した後であり、かつドナーが疾患または状態の後続の処置を受ける前である時点で、ドナーから採取した後に、極低温で保管され、極低温保管の後および極低温で保管した細胞を得る前に、ドナーが、疾患または状態の少なくとも１つの処置を受けるか、または受けた、方法。
【０５０２】
１０．生物学的試料が、アフェレーシス試料であるかまたはそれに由来し、必要に応じて白血球アフェレーシス試料であるかまたはそれに由来し、かつ／または試料が、白血球および／またはリンパ球を含有し、かつ／または試料中の細胞または血液細胞が、白血球から本質的になるか、または試料中の細胞のうちの少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％、または試料中の血液細胞のうちの少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％が、白血球である、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の方法。
【０５０３】
１１．細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞集団および／またはＴ細胞集団および／またはＴ細胞サブセットの、免疫親和性に基づくおよび／または標的特異的な選択および／または濃縮のステップに供されていない、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の方法。
【０５０４】
１２．細胞が、極低温で保管される前に、血液細胞および／またはＴ細胞集団の、免疫親和性に基づくおよび／または標的特異的な選択および／または濃縮ステップに供されており、必要に応じて、前記極低温保管の前に、前記選択または濃縮を行うことをさらに含む、実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の方法。
【０５０５】
１３．選択ステップおよび／または濃縮が、免疫親和性に基づく選択を含む、および／または陽性選択もしくは陰性選択を含む、実施形態１２に記載の方法。
【０５０６】
１４．選択ステップおよび／または濃縮が、ＣＤ４＋細胞もしくはそのサブセットおよび／またはＣＤ８＋細胞もしくはそのサブセットの濃縮および／または単離を含み、ＣＤ４＋細胞またはそのサブセットの濃縮または単離が、ＣＤ８＋細胞またはそのサブセットの選択および／または単離とは別個にまたはそれと組み合わせてのいずれかで行われ、必要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、実施形態１２〜１３のいずれか１つに記載の方法。
【０５０７】
１５．細胞が、Ｔ細胞を含むか、またはＴ細胞が濃縮されている、実施形態１〜１４のいずれか１つに記載の方法。
【０５０８】
１６．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物を含むか、またはそれらが濃縮されており、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、実施形態１５に記載の方法。
【０５０９】
１７．細胞を極低温で保管する前に、細胞を、極低温保存媒体と合わせることをさらに含む、実施形態１〜１６のいずれか１つに記載の方法。
【０５１０】
１８．極低温保存媒体が、約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および血清タンパク質、必要に応じて、ヒト血清アルブミン、必要に応じて、約４％のヒト血清アルブミンを含む、ならびに／または凍結溶液および／もしくは最終濃度の生物学的試料が、約１体積％〜約２０体積％、約３体積％〜約９体積％、もしくは約６体積％〜約９体積％のＤＭＳＯを含む、および／もしくは約３体積％、約４体積％、約５体積％、約５．５体積％、約６体積％、約６．５体積％、約７体積％、約７．５体積％、約８体積％、約８．５体積％、約９体積％、約９．５体積％、または約１０体積％のＤＭＳＯを含む、実施形態１７に記載の方法。
【０５１１】
１９．極低温保管が、１分間につき１℃または約１℃の速度で、必要に応じて、温度が−８０℃または約−８０℃に達するまで、温度を低下させることを含む、実施形態２または４〜１８のいずれか１つに記載の方法。
【０５１２】
２０．細胞が、液体窒素の気相に入れた容器において極低温で保管され、容器が、必要に応じて、バッグまたはバイアルである、実施形態１〜１９のいずれか１つに記載の方法。
【０５１３】
２１．細胞が、以下を上回るかまたは以下に等しい期間：１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間、極低温で保管される、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載の方法。
【０５１４】
２２．細胞が、ある期間保管され、期間の後、組成物中の生存細胞もしくは生存Ｔ細胞またはそれらのサブタイプもしくはサブセットの割合が、約２４％〜約１００％であるか、または少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、もしくは９０％である、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載の方法。
【０５１５】
２３．疾患が、がん、炎症性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または感染性疾患もしくは状態である、実施形態１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
【０５１６】
２４．がんが、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ球性白血病、前リンパ球性白血病、有毛細胞性白血病、急性リンパ球性白血病、ｎｕｌｌ型急性リンパ芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、遅発性Ｂ細胞リンパ腫、または急性骨髄性白血病である、実施形態２３に記載の方法。
【０５１７】
２５．がんが、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、Ｌ１−ＣＡＭ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、メソテリン、ＣＥＡ、およびＢ型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−２、ＥＧＰ−４、ＥＰＨａ２、ＥｒｂＢ２、３、もしくは４、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＩＬ−２２Ｒ−アルファ、ＩＬ−１３Ｒ−アルファ２、ｋｄｒ、カッパ軽鎖、ルイスＹ、Ｌ１−細胞接着分子、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＦＣＲＬ５／ＦＣＲＨ５、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＰＳＣＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、腫瘍胎児性抗原、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦ−Ｒ２、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、前立腺特異的抗原、ＰＳＭＡ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンＢ２、ＣＤ１２３、ＣＳ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＧＤ−２、およびＭＡＧＥ  Ａ３、ＣＥ７、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）、およびサイクリン、たとえば、サイクリンＡ１（ＣＣＮＡ１）のうちの少なくとも１つを発現する細胞を含む、実施形態２３または２４に記載の方法。
【０５１８】
２６．処置が、化学療法、放射線照射、外科手術、細胞療法である、および／またはデバルキング処置である、実施形態１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
【０５１９】
２７．処置が、以下の処置：シクロホスファミド、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、ムスチン、ビンクリスチン、プロカルバジン、プレドニゾロン、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ダカルバジン、エトポシド、シスプラチン、エピルビシン、カペシタビン、フォリン酸、オキサリプラチン、小分子阻害剤、免疫細胞、ナチュラルキラー細胞、リンホカイン活性化キラー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、樹状細胞、４０００ｃＧｙ照射、自家幹細胞救援、幹細胞移植、骨髄移植、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）、ＣＡＲ  Ｔ細胞療法、チサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル、シタラビン、高用量シタラビン、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、イダルビシン、クラドリビン、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、サリドマイド、レナリドマイド、ポマリドマイド、コルチコステロイド、プレドニゾン、デキサメタゾン、アルキル化剤、クロラムブシル、ベンダムスチン、イホスファミド、白金薬物、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、プリン類似体、フルダラビン、ペントスタチン、クラドリビン、抗代謝薬、ゲムシタビン、メトトレキサート、プララトレキサート、ビンクリスチン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プロテアソーム阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ロミデプシン、ベリノスタット、キナーゼ阻害剤、イブルチニブ、イデラリシブ、抗体、抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、イブリツモマブチウキセタン、抗ＣＤ５２抗体、アレムツズマブ、抗ＣＤ３０抗体、ブレンツキシマブ、ベドチン、インターフェロン、免疫調節剤、サリドマイド、ＣＨＯＰ、ＣＨＯＰ＋Ｒ（もしくはＲ−ＣＨＯＰ）、ＣＶＰ、ＥＰＯＣＨ、ＥＰＯＣＨ＋Ｒ、ＤＨＡＰ、ＤＨＡＰ＋Ｒ（もしくはＲ−ＤＨＡＰ）、ベネトクラックス、メチルプレドニゾロン、またはブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤（ＢＴＫｉ）のうちの１つまたは複数を、単独または組合せで含む、実施形態２６に記載の方法。
【０５２０】
２８．ドナーまたは対象が、ヒトである、実施形態１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
【０５２１】
２９．極低温保管の前に、細胞を、必要に応じて、１つまたは複数の表現型マーカーについて、細胞の表面発現を評価することによって、分析することをさらに含む、実施形態１〜２８のいずれか１つに記載の方法。
【０５２２】
３０．極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、実施形態１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
【０５２３】
３１．細胞の極低温保管および／または解凍の後に、組換えまたは外因性分子を発現するように細胞を操作することをさらに含み、これが、必要に応じて、組換えタンパク質、必要に応じて、組換え受容体であり、これが、必要に応じて、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ受容体、および／またはキメラ抗原受容体であるか、またはそれらを含む、実施形態１〜３０のいずれかに記載の方法。
【０５２４】
３２．組換え分子が、疾患または状態と関連する細胞によって発現されるか、またはそれによって特異的に発現される抗原を、特異的に認識するか、またはそれに特異的に結合する組換え受容体である、実施形態３１に記載の方法。
【０５２５】
３３．ドナーもしくは対象から収集されたとき、および／またはアフェレーシス試料中の合計の、細胞の数が、以下の数もしくはおよそ以下の数であるか、または以下の数もしくはおよそ以下の数を上回らない、実施形態１〜３２のいずれか１つに記載の方法：５００×１０６個、１０００×１０６個、２０００×１０６個、３０００×１０６個、４０００×１０６個、もしくは５０００×１０６個、またはそれよりも多くの合計細胞もしくは合計有核細胞。
【０５２６】
３４．試料を極低温で保管する前に、試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、実施形態１〜３３のいずれか１つに記載の方法。
【０５２７】
３５．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが濃縮されており、必要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、ならびに／または試料が、バルクＴ細胞が濃縮されている、実施形態３４に記載の方法。
【０５２８】
３６．試料を極低温で保管する前に、試料を極低温媒体において製剤化することをさらに含む、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の方法。
【０５２９】
３７．細胞を、極低温で凍結する前または凍結した後のいずれかで、保管施設に輸送することをさらに含む、実施形態１〜３６のいずれか１つに記載の方法。
【０５３０】
３８．保管施設が、中央または共通のリポジトリの保管施設である、実施形態３７に記載の方法。
【０５３１】
３９．試料が、低温環境において、保管施設に輸送される、実施形態３７または３８に記載の方法。
【０５３２】
４０．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、試料からＴ細胞を濃縮することをさらに含む、実施形態３６〜３９のいずれか１つに記載の方法。
【０５３３】
４１．Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはそのサブセット、またはこれらの混合物であるか、またはそれらを含むか、またはそれらが濃縮されており、必要に応じて、ＣＤ８＋細胞のサブセットおよび／またはＣＤ４＋細胞のサブセットが、必要に応じて、メモリー細胞、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞、エフェクターメモリー細胞（ＴＥＭ）、ステムセントラルメモリー（ＴＳＣＭ）細胞、エフェクターＴ（ＴＥ）細胞、エフェクターメモリーＲＡ  Ｔ（ＴＥＭＲＡ）細胞、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、および／または調節性Ｔ（ＴＲＥＧ）細胞からなる群から選択される、ならびに／またはバルクＴ細胞を含む、実施形態４０に記載の方法。
【０５３４】
４２．輸送した後、かつ細胞を極低温で保管する前に、試料および／またはＴ細胞を、極低温媒体において製剤化することをさらに含む、実施形態４０または実施形態４１に記載の方法。
【０５３５】
４３．極低温で保管した細胞を解凍することをさらに含む、実施形態１〜４２のいずれか１つに記載の方法。
【０５３６】
４４．試料が、処理、極低温保存、および／または保管の間、細胞を分類するために、１つまたは複数のコードまたは識別子で印を付けた容器に入れられる、実施形態１〜４３のいずれか１つに記載の方法。
【０５３７】
４５．１つまたは複数のコードまたは識別子が、文字識別子、バーコード、ＱＲコード（登録商標）、ＲＦＩＤ、またはトランスポンダを含む、実施形態４４に記載の方法。
【０５３８】
４６．１つまたは複数のコードまたは識別子が、ドナー、試料、バイアル、容器、疾患、および／または保管施設のうちの１つまたは複数の識別に対応するか、またはそれを示す、実施形態４４または実施形態４５に記載の方法。
【０５３９】
４７．１つまたは複数のコードまたは識別子が、患者識別のブレスレットまたは病院もしくは医療施設もしくは収集施設のシステムもしくは書類に出現するコードに対応する、実施形態４４〜４６のいずれか１つに記載の方法。
【０５４０】
４８．処置の方法であって、実施形態１〜４７のいずれか１つに記載の方法によって、極低温で保管された細胞を得て、必要に応じて解凍することであって、前記得ることの前に、細胞が、少なくとも１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、１週間、２週間、３週間、もしくは４週間、１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間、５カ月間、６カ月間、７カ月間、８カ月間、９カ月間、１０カ月間、１１カ月間、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間、１１年間、１２年間、１３年間、１４年間、１５年間、１６年間、１７年間、１８年間、１９年間、２０年間、２５年間、３０年間、３５年間、または４０年間の期間、極低温で保管されていることと、組換え受容体を、刺激した組成物に導入し、それによって、操作Ｔ細胞を含む操作組成物を生成することと、細胞を対象に投与することとを含む、方法。
【０５４１】
４９．処置が、操作Ｔ細胞または極低温で凍結した組成物の細胞を含まない、実施形態１〜４８のいずれか１つに記載の方法。
【国際調査報告】
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