(57)【要約】  ＣＤ１６６に特異的に結合する活性化可能抗体およびＣＤ１６６に特異的に結合する結合型活性化可能抗体を提供する。また、様々な治療、診断および予防の適応症において、これらの活性化可能抗体を作製する方法および使用する方法も提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において癌を治療する、癌の症状を緩和する、または癌の進行を遅延させる方法であって、前記方法は、それを必要とする対象に、剤に結合されている治療有効量の活性化可能抗体（ＡＡ）を投与することを含み、前記ＡＡが、
（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、
（ｂ）前記ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に前記哺乳動物ＣＤ１６６への前記ＡＢの前記結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、
（ｃ）前記ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含む、方法。
【請求項２】
前記癌が、乳癌、去勢耐性前立腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌、または非小細胞肺癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
対象においてＣＤ１６６を発現する細胞の成長、増殖、または転移を阻害するか、または低減させる方法であって、前記方法は、それを必要とする対象に、剤に結合されている治療有効量の活性化可能抗体（ＡＡ）を投与することを含み、前記ＡＡが、
（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、
（ｂ）前記ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、前記ＡＡが切断されていない状態にある場合に前記哺乳動物ＣＤ１６６への前記ＡＢの前記結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、
（ｃ）前記ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含む、方法。
【請求項４】
前記対象が、乳癌、去勢耐性前立腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌、または非小細胞肺癌に罹患している、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞が、乳房細胞、前立腺細胞、子宮内膜細胞、卵巣細胞、頭頸部扁平上皮細胞、胆管細胞、または肺細胞である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記剤が、メイタンシノイドまたはその誘導体である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記剤が、ＤＭ４である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＤＭ４が、リンカーを介して前記ＡＡに結合される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記リンカーが、ＳＰＢＤ部分を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＡＢが、前記ＣＭに連結している、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＭＭが、切断されていない状態の前記ＡＡが、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を含むように前記ＣＭに連結される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＡＡが、前記ＭＭと前記ＣＭとの間に連結ペプチドを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＡＡが、前記ＣＭとＡＢとの間に連結ペプチドを含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
連結ペプチドが、配列番号４７９のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＡＡが、前記ＣＭと前記ＡＢとの間に連結ペプチドを含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
連結ペプチドが、１５のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＡＡが、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、前記切断されていない状態の前記ＡＡは、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢまたはＡＢ−ＬＰ２−ＣＭ−ＬＰ１−ＭＭのようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を有する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記軽鎖が、そのＮ末端でスペーサーに連結している、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記スペーサーが、配列番号３０５のアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＭＭおよび前記ＣＭが、前記軽鎖に連結されている、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＭＭが、前記ＣＭに連結され、これにより、切断されていない状態の前記ＡＡが、スペーサー−ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−軽鎖のようにその軽鎖上のＮ末端からＣ末端への構造的配置を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記スペーサーが配列番号３０５のアミノ酸配列を含み、ＬＰ１が配列番号４７９のアミノ酸配列を含み、ＬＰ２がアミノ酸配列ＧＧＳを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＡＡの前記軽鎖が、配列番号３１４の配列を含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＡＡの前記軽鎖が、配列番号２４６の配列を含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記対象が、少なくとも１８歳である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象のＥＣＯＧパフォーマンスステータスが０〜１である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象が、活動性転移癌の組織学的に確認された診断を有する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象が、局所的に進行した切除不能固形腫瘍の組織学的に確認された診断を有する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象が、投与時に少なくとも３ヶ月の平均余命を有する、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が、乳癌を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記乳癌が、ＥＲ＋である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
以前に抗ホルモン療法を受けており、かつ疾患の進行を経験している、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象が、トリプルネガティブ乳癌を有し、少なくとも２つの前治療ラインを受けている、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記対象が、去勢耐性前立腺癌を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記対象が、少なくとも１つの前治療を受けている、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記対象が、胆管癌を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記対象が、ゲムシタビン含有レジメンの少なくとも１つの前のラインで奏功していない、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記対象が、子宮内膜癌を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象が、子宮外または進行疾患のための少なくとも１つの白金含有レジメンを受けている、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記対象が、上皮性卵巣癌を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記対象が、白金耐性癌を有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記対象が、白金不応性卵巣癌を有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記対象が、ＢＲＣＡ突然変異を有し、ＰＡＲＰ阻害剤に対して不応性であるか、さもなければ不適格である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記対象が、非ＢＲＣＡ突然変異を有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記対象が、頭頸部小細胞癌（ＨＮＳＣＣ）を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記対象が、少なくとも１つの白金含有レジメンを受けている、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記対象が、少なくとも１つのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤を受けている、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記対象が、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記対象が、少なくとも１つの白金含有レジメンを受けている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記対象が、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤を受けている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記対象が、少なくとも１つのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤を受けている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
前記対象が、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇの用量で、剤に結合されているＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記用量が、約０．２５ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記用量が、約０．５ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記用量が、約１ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記用量が、約２ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記用量が、約４ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
前記用量が、約５ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５９】
前記用量が、約６ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６０】
前記用量が、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６１】
前記用量が、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６２】
前記用量が、約１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６３】
前記用量が、約２ｍｇ／ｋｇ〜４ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６４】
前記用量が、約４ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６５】
前記用量が、約５ｍｇ／ｋｇ〜６ｍｇ／ｋｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項６６】
前記対象が、約１０ｍｇ〜約２００ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記対象が、約２５ｍｇ〜約５００ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記対象が、約１０ｍｇ〜約２５ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記対象が、約２０ｍｇ〜約５０ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記対象が、約３０ｍｇ〜約７５ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記対象が、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記対象が、約５０ｍｇ〜約１２５ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記対象が、約６０ｍｇ〜約１５０ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記対象が、約８０ｍｇ〜約２００ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記対象が、約１００ｍｇ〜約２５０ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記対象が、約１２０ｍｇ〜約３００ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記対象が、約１４０ｍｇ〜約３５０ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記対象が、約１６０ｍｇ〜約４００ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記対象が、約１８０ｍｇ〜約４５０ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記対象が、約２００ｍｇ〜約５００ｍｇの固定用量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記対象が、剤に結合されている前記ＡＡを静脈内投与される、請求項１〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記対象が、剤に結合されている前記ＡＡを２１日毎に静脈内投与される、請求項１〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記対象が、実際の体重に基づく投薬量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項５２〜６５、８１、および８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記対象が、調整された理想体重に基づく投薬量で剤に結合している前記ＡＡを投与される、請求項請求項５２〜６５、８１、および８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
対象において癌を治療する、癌の症状を緩和する、または癌の進行を遅延させる際に使用するための、剤に結合された活性化可能抗体（ＡＡ）であって、前記ＡＡは、
（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、
（ｂ）前記ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、前記ＡＡが切断されていない状態にある場合に前記哺乳動物ＣＤ１６６への前記ＡＢの前記結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、
（ｃ）前記ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含み、
それを必要とする対象に治療的有効量で投与するためのものである、ＡＡ。
【請求項８６】
対象における癌の治療のためにＣＤ１６６を発現する細胞の成長、増殖、または転移を阻害するか、または低減させる際に使用するための、剤に結合した活性化可能抗体（ＡＡ）であって、前記ＡＡは、
（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む前記ＡＢと、
（ｂ）前記ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、前記ＡＡが切断されていない状態にある場合に前記哺乳動物ＣＤ１６６への前記ＡＢの前記結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、
（ｃ）前記ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含み、
それを必要とする対象に治療的有効量で投与するためのものである、ＡＡ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１７年８月３０日出願の米国仮出願第６２／５５２，３４５号、２０１７年８月３１日出願の米国仮出願第６２／５５３，０９８号、および２０１７年９月６日出願の米国仮出願第６２／５５４，９１９号の利益を主張し、それぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列リストの参照
ファイル名「ＣＹＴＭ０５４００４ＷＯ＿３０ＡＵＧ２０１８＿ＦＩＮＡＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」として、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介してコンピューター読み取り可能な形式（ＣＦＲ）で３７  ＣＦＲ§１．８２１に従って電子的に同時に提出されている「配列リスト」は、参照により本明細書に組み込まれる。配列リストの電子コピーは、２０１８年８月３０日に作成され、このテキストファイルのサイズは４９キロバイトである。
【０００３】
本発明は、一般に、癌の治療のために抗ＣＤ１６６結合型活性化可能抗体を投与するための特定の投与レジメンに関する。
【背景技術】
【０００４】
抗体ベースの治療法は、癌などいくつかの疾患の効果的な治療法であることが証明されているが、場合によっては、幅広い標的発現による毒性により治療効果が制限される。さらに、抗体ベースの治療では、投与後の循環からの急速なクリアランスなど、他の制限を呈する。
【０００５】
小分子治療の領域では、活性化学成分のプロドラッグを提供するために、戦略が開発されている。こうしたプロドラッグは、比較的不活性である（または著しく活性が低い）形態で投与される。投与されると、プロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて代謝されて、活性化合物になる。こうしたプロドラッグ戦略は、その意図された標的に対する薬物の選択性を高め、有害作用を低減させるためにもたらされ得る。
【０００６】
したがって、小分子プロドラッグの望ましい特徴を模倣する抗体の抗体ベースの治療の分野では引き続き必要とされる。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の一態様では、本明細書で提供されるのは、対象において癌を治療する、癌の症状を緩和する、または癌の進行を遅延させる方法であって、本方法は、それを必要とする対象に、剤に結合されている治療有効量の活性化可能抗体（ＡＡ）を投与することを含み、ＡＡは、（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は配列番号３１４の配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は配列番号２４６の配列を含む。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、去勢耐性前立腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌、または非小細胞肺癌である。
【０００８】
本発明の関連する態様において、本明細書で提供されるのは、対象においてＣＤ１６６を発現する細胞の成長、増殖、または転移を阻害するか、または低減させる方法であって、本方法は、それを必要とする対象に、剤に結合されている治療有効量の活性化可能抗体（ＡＡ）を投与することを含み、ＡＡは、（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は配列番号３１４の配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は配列番号２４６の配列を含む。
【０００９】
本発明のさらなる関連する態様では、本明細書で提供されるのは、対象において癌を治療する、癌の症状を緩和する、または癌の進行を遅延させる際に使用するための、剤に結合された活性化可能抗体（ＡＡ）であり、ＡＡは、（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は配列番号３１４の配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は配列番号２４６の配列を含む。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、去勢耐性前立腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌、または非小細胞肺癌である。ＡＡは、治療有効量で対象に投与するためのものである。
【００１０】
本発明のさらに関連する態様では、本明細書で提供されるのは、対象における癌の治療のためにＣＤ１６６を発現する細胞の成長、増殖、または転移を阻害するか、または低減させる際に使用するための、剤に結合した活性化可能抗体（ＡＡ）であり、ＡＡは、（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は配列番号３１４の配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は配列番号２４６の配列を含む。ＡＡは、それを必要とする対象に治療的有効量で投与するためのものである。
【００１１】
いくつかの実施形態では、対象は、乳癌、去勢耐性前立腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌、または非小細胞肺癌に罹患している。いくつかの実施形態では、細胞は、乳房細胞、前立腺細胞、子宮内膜細胞、卵巣細胞、頭頸部扁平上皮細胞、胆管細胞、または肺細胞である。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＡＡに結合した剤は、メイタンシノイドまたはその誘導体である。例えば、ＡＡに結合した剤は、ＤＭ４である。いくつかの実施形態では、ＤＭ４はリンカーを介してＡＡに結合している。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＳＰＢＤ（Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート）部分を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＡＢは、例えば連結ペプチドを介してＣＭに連結される。いくつかの実施形態では、ＭＭは、切断されていない状態のＡＡが、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を含むようにＣＭに連結される。いくつかの実施形態では、ＡＡは、ＭＭとＣＭとの間に連結ペプチドを含む。例えば、連結ペプチドは、配列番号４７９のアミノ酸配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＡＡは、ＣＭとＡＢとの間に連結ペプチドを含む。例えば、連結ペプチドは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡは、ＣＭとＡＢとの間に連結ペプチドを含む。例えば、連結ペプチドは、ＧＧＳのアミノ酸配列を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＡＡは、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、切断されていない状態にあるＡＡは、ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢまたはＡＢ−ＬＰ２−ＣＭ−ＬＰ１−ＭＭのようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を有する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、軽鎖は、そのＮ末端でスペーサーに連結されている。いくつかの実施形態では、スペーサーは、配列番号３０５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭおよびＣＭは軽鎖に連結されている。いくつかの実施形態では、ＭＭは、切断されていない状態のＡＡがスペーサー−ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−軽鎖のようにその軽鎖上のＮ末端からＣ末端への構造的配置を含むようにＣＭに連結される。いくつかの実施形態では、スペーサーは、配列番号３０５のアミノ酸配列を含み、ＬＰ１は、配列番号４７９のアミノ酸配列を含み、ＬＰ２は配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、そのＮ末端でスペーサーに連結されている。いくつかの実施形態では、スペーサーは、配列番号３０５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭおよびＣＭは軽鎖に連結されている。いくつかの実施形態では、ＭＭは、切断されていない状態のＡＡがスペーサー−ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−軽鎖のようにその軽鎖上のＮ末端からＣ末端への構造的配置を含むようにＣＭに連結される。いくつかの実施形態では、スペーサーは、配列番号３０５のアミノ酸配列を含み、ＬＰ１は、配列番号４７９のアミノ酸配列を含み、ＬＰ２はＧＧＳのアミノ酸配列を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、対象は少なくとも１８歳である。いくつかの実施形態では、対象は、ＥＣＯＧパフォーマンスステータス０〜１を有する。いくつかの実施形態では、対象は、組織学的に確認された活動性転移癌の診断を有する。いくつかの実施形態では、対象は、局所的に進行した切除不能固形腫瘍の組織学的に確認された診断を有する。いくつかの実施形態では、対象は、投与時に３ヶ月を超える平均余命を有する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、対象は乳癌を有する。いくつかの実施形態では、乳癌はＥＲ＋である。いくつかの実施形態では、対象は、以前に抗ホルモン療法を受けており、疾患の進行を経験している。別の実施形態では、対象はトリプルネガティブ乳癌を有し、少なくとも２つの前治療ラインを受けている。
【００１８】
いくつかの実施形態では、対象は去勢耐性前立腺癌を有し、いくつかの実施形態では、対象は少なくとも１つの事前治療を受けている。
【００１９】
いくつかの実施形態では、対象は胆管癌を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ゲムシタビン含有レジメンの少なくとも１つの前のラインで奏功しなかった。
【００２０】
いくつかの実施形態では、対象は、子宮内膜癌を有する。いくつかの実施形態では、対象は、子宮外または進行疾患のための少なくとも１つの白金含有レジメンを受けている。
【００２１】
いくつかの実施形態では、対象は、上皮性卵巣癌を有する。いくつかの実施形態では、対象は、白金耐性癌を有する。いくつかの実施形態では、対象は、白金不応性卵巣癌を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ＢＲＣＡ突然変異を有し、ＰＡＲＰ阻害剤に対して不応性である。他の実施形態では、対象は、非ＢＲＣＡ突然変異を有する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、対象は、頭頸部小細胞癌（ＨＮＳＣＣ）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、複数の白金含有レジメンを受けている。いくつかの実施形態では、対象は、２つ以上のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤を受けている。
【００２３】
いくつかの実施形態では、対象は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有し、いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つの白金含有レジメンを受けている。いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤を受けている。いくつかの実施形態において、対象は、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤を受けている。
【００２４】
いくつかの実施形態では、対象には、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇの用量で剤に結合されているＡＡが投与される。例えば、投与量は約０．２５ｍｇ／ｋｇである。投与量は約０．５ｍｇ／ｋｇである。投与量は約１ｍｇ／ｋｇである。投与量は約２ｍｇ／ｋｇである。投与量は約４ｍｇ／ｋｇである。投与量は約５ｍｇ／ｋｇである。投与量は約６ｍｇ／ｋｇである。
【００２５】
いくつかの実施形態では、対象には、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇの用量で剤に結合されているＡＡが投与される。例えば、投与量は約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、投与量は約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、投与量は約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、投与量は約２ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇ、投与量は約４ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、投与量は約５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇである。
【００２６】
いくつかの実施形態では、対象には、約１０ｍｇ〜約２００ｍｇの固定用量または約２５ｍｇ〜約５００ｍｇの固定用量で、剤に結合されているＡＡが投与される。例えば、投与される固定用量は、約１０ｍｇ〜約２５ｍｇである。投与される固定用量は、約２０ｍｇ〜約５０ｍｇである。投与される固定用量は、約３０ｍｇ〜約７５ｍｇである。投与される固定用量は、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇである。投与される固定用量は、約５０ｍｇ〜約１２５ｍｇである。投与される固定用量は、約６０ｍｇ〜約１５０ｍｇである。投与される固定用量は、約８０ｍｇ〜約２００ｍｇである。投与される固定用量は、約１００ｍｇ〜約２５０ｍｇである。投与される固定用量は、約１２０ｍｇ〜約３００ｍｇである。投与される固定用量は、約１４０ｍｇ〜約３５０ｍｇである。投与される固定用量は、約１６０ｍｇ〜約４００ｍｇである。投与される固定用量は、約１８０ｍｇ〜約４５０ｍｇである。投与される固定用量は、約２００ｍｇ〜約５００ｍｇである。
【００２７】
いくつかの実施形態では、対象には、静脈内で剤に結合されているＡＡが投与される。いくつかの実施形態では、対象には、２１日毎に静脈内で剤に結合されているＡＡが投与される。
【００２８】
いくつかの実施形態では、対象には、実際の体重に基づく投薬量で、剤に結合されているＡＡが投与される。いくつかの実施形態では、対象は、調整された理想体重に基づく投薬量で剤に結合されているＡＡが投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】腫瘍特異的プロテアーゼが存在する腫瘍微小環境において優先的に活性化される活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートを示す図である。
【図２】免疫組織化学（ＩＨＣ）によるヒト腫瘍試料でのＣＤ１６６の発現を示す図である。
【図３】ＴＮＢＣのマウス腫瘍モデルにおける活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートおよび抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートの抗腫瘍活性を示す図である。免疫組織化学（ＩＨＣ）により、ＣＤ１６６発現も示されている（ＡＡＤＣ＝活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲート；ＡＤＣ＝抗ＣＤ１６６薬物コンジュゲート）。
【図４】非小細胞肺癌のマウス腫瘍モデルにおける活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートおよび抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートの抗腫瘍活性を示す図である。ＩＨＣにより、ＣＤ１６６発現も示されている。
【図５】卵巣癌のマウス患者由来異種移植（ＰＤＸ）モデルにおける、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートおよび抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートの抗腫瘍活性を示す図である。ＩＨＣにより、ＣＤ１６６発現も示されている。
【図６】活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートのパートＡおよびパートＢ臨床試験デザインを示す図である。
【図７Ａ】腫瘍における活性化可能抗ＣＤ１６６抗体の優先的な活性化を示す図である。
【図７Ｂ】腫瘍における活性化可能抗ＣＤ１６６抗体の優先的な活性化を示す図である。
【図８Ａ】マトリプターゼ（ＭＴ−ＳＰ１）またはＭＭＰ１４によって部分的に活性化されている、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートの完全型および活性型が分離していることを示す図である。
【図８Ｂ】マトリプターゼ（ＭＴ−ＳＰ１）またはＭＭＰ１４によって部分的に活性化されている、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートの完全型および活性型が分離していることを示す図である。
【図９Ａ】ヒト対象における活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲート投与後の経時的な様々な分析物の血清レベルの例示的な薬物動態データを示す図である。
【図９Ｂ】ヒト対象における活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲート投与後の経時的な様々な分析物の血清レベルの例示的な薬物動態データを示す図である。
【図９Ｃ】ヒト対象における活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲート投与後の経時的な様々な分析物の血清レベルの例示的な薬物動態データを示す図である。
【図９Ｄ】ヒト対象における活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲート投与後の経時的な様々な分析物の血清レベルの例示的な薬物動態データを示す図である。
【図９Ｅ】ヒト対象における活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲート投与後の経時的な様々な分析物の血清レベルの例示的な薬物動態データを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明は、活性化白血球細胞接着分子（ＡＬＣＡＭ）としても公知であるＣＤ１６６に特異的に結合する活性化可能モノクローナル抗体を提供する。いくつかの実施形態では、活性化可能モノクローナル抗体は、ＣＤ１６６を含む細胞によって取り込まれる。ＣＤ１６６は、スカベンジャー受容体システインリッチ（ＳＲＣＲ）タンパク質スーパーファミリー（ＳＲＣＲＳＦ）に属する細胞表面受容体であるＣＤ６に結合する細胞接着分子である。ＣＤ１６６は、細胞間相互作用、細胞−基質間相互作用、細胞接着、細胞移動、Ｔ細胞の活性化および増殖に関連することが公知である。ＣＤ１６６の異常発現および／または活性ならびにＣＤ１６６関連シグナル伝達は、癌、炎症、および自己免疫などの多くの疾患および障害の病因に関係している。例えば、ＣＤ１６６は、例えば前立腺癌、乳癌、ＮＳＣＬＣおよび／またはＳＣＬＣなどの肺癌、口腔咽頭癌、子宮頸癌、およびＨＮＳＣＣなどの頭頸部癌など、様々な種類の癌で高発現している。
【００３１】
本開示は、異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連する疾患または障害の症状を治療する、予防する、その進行を遅延させる、改善するおよび／または緩和する方法に有用な活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を提供する。例えば、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、癌の症状または他の新生物病態を治療する、予防する、その進行を遅延させる、改善するおよび／または緩和する方法で使用される。
【００３２】
本開示は、ＣＤ１６６を発現している細胞に関連する疾患または障害の症状を治療する、予防する、その進行を遅延させる、改善するおよび／または緩和する方法に有用な活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連している。いくつかの実施形態では、細胞は正常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連している。例えば、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、癌の症状または他の新生物病態を治療する、予防する、その進行を遅延させる、改善するおよび／または緩和する方法で使用される。
【００３３】
本開示は、疾患細胞がＣＤ１６６を発現する疾患または障害の症状を治療する、予防する、その進行を遅延させる、改善するおよび／または緩和する方法に有用な活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を提供する。いくつかの実施形態では、疾患細胞は異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連している。いくつかの実施形態では、疾患細胞は正常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連している。例えば、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、癌の症状または他の新生物病態を治療する、予防する、その進行を遅延させる、改善するおよび／または緩和する方法で使用される。
【００３４】
活性化可能抗ＣＤ１６６抗体としては、マスキング部分（ＭＭ）に連結されているＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が挙げられ、ＭＭが連結することにより、抗体またはその抗原結合断片がＣＤ１６６に結合する能力を低下させるようになる。ＭＭは、プロテアーゼの基質（切断可能部分、ＣＭ）、例えば、対象の治療部位においてＣＤ１６６と共局在するプロテアーゼを含む配列を介して抗体／抗原結合断片に連結される。
【００３５】
定義
特に定義されない限り、本開示に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。「ａ」エンティティまたは「ａｎ」エンティティという用語は、そのエンティティの１つ以上を指す。例えば、化合物は、１つ以上の化合物を指す。したがって、「ａ」、「ａｎ」、「１つ以上」、および「少なくとも１つの」という用語は同義的に使用され得る。さらに、文脈で特に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載の細胞および組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴまたはポリヌクレオチドの化学およびハイブリダイゼーションに関連して利用される命名法、および技術は、当技術分野で周知であり、一般的に使用されるものである。組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養および形質転換（エレクトロポレーション、リポフェクションなど）には標準的な手法が用いられる。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様に従って、または当技術分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施される。前述の技術および手順は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、本明細書全体を通して引用され、かつ論じられている様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されているとおりに実施される。Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照されたい。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、および医薬品化学（ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）に関連して利用される命名法、ならびにこれらの実験室の手順および技術は、当技術分野で周知であり一般的に使用されるものである。標準的な手法は、化学合成、化学分析、医薬品の調製、配合、送達、および対象の治療に使用される。
【００３６】
本開示に従って利用される場合、以下の用語は、特に明記しない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００３７】
本明細書で使用する「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的な活性部分、例えば、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の抗原結合部分、すなわち、抗原に特異的に結合する（抗原に対して免疫反応する）抗原結合部位を含む分子を指す。「特異的に結合する」または「免疫反応する」または「免疫特異的に結合する」とは、抗体が所望の抗原の１つ以上の抗原決定基と反応し、他のポリペプチドと反応しないか、またははるかに低い親和性（Ｋｄ＞１０−６）で結合することを意味する。抗体としては、これらに限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ドメイン抗体、単鎖、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、およびＦａｂ発現ライブラリーが挙げられる。
【００３８】
基本的な抗体構造単位は、四量体を含むことが公知である。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対で構成され、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を画定する。一般に、ヒトから得られた抗体分子は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤのクラスのいずれかに関連し、これらは、分子内に存在する重鎖の性質によって互いに異なる。特定のクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２などのサブクラスも有する。さらに、ヒトでは、軽鎖はカッパ鎖またはラムダ鎖であり得る。
【００３９】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、固有の軽鎖遺伝子産物および固有の重鎖遺伝子産物からなる、１つの分子種のみの抗体分子を含む抗体分子の集団を指す。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、集団のすべての分子において同一である。ＭＡｂは、それに対する固有の結合親和性により特徴付けられる抗原の特定のエピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含む。
【００４０】
「抗原結合部位」または「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）および軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。「超可変領域」と称される重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの高度に異なる拡張部は、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として公知である、より保存された隣接拡張部間に挿入される。したがって、用語「ＦＲ」は、免疫グロブリンの超可変領域間に、およびそれに隣接して自然に見られるアミノ酸配列を指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、抗原結合表面を形成するために３次元空間で互いに対して配置される。抗原結合表面は、結合された抗原の三次元表面に相補的であり、重鎖および軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と称される。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年および１９９１年））、またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７年）、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９年）の定義に従う。
【００４１】
本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖ、またはＴ細胞受容体に特異的に結合することができるあらゆるタンパク質決定基を含む。「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合することができるあらゆるタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基で構成され、通常、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する。例えば、抗体は、ポリペプチドのＮ末端ペプチドまたはＣ末端ペプチドに対して生じさせ得る。解離定数が１μｍ以下の場合、抗体は抗原に特異的に結合すると言われている。いくつかの実施形態では、１００ｎＭ以下、およびいくつかの実施形態では、１０ｎＭ以下である。
【００４２】
本明細書で使用される「特異的結合」、「免疫学的結合」、および「免疫学的結合特性」という用語は、免疫グロブリン分子と免疫グロブリンが特異的である抗原との間に生じるタイプの非共有相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）で表すことができ、Ｋｄが小さいほど親和性が高いことを示す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該分野で周知の方法を使用して定量化され得る。こうした方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体の形成および解離の速度を測定することを伴う。これらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を与える幾何学的パラメーターによって異なる。したがって、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）および「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）は両方とも、濃度、ならびに会合および解離の実際の速度を計算することによって決定され得る（Ｎａｔｕｒｅ  ３６１：１８６−８７（１９９３年）を参照されたい）。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比率は、親和性に関係のないすべてのパラメーターを解除することができ、また、解離定数Ｋｄと等しい（一般に、Ｄａｖｉｅｓら（１９９０年）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ５９：４３９−４７３を参照されたい）。本開示の抗体は、放射性リガンド結合アッセイまたは当業者に公知である同様のアッセイなどのアッセイによって測定した場合、結合定数（Ｋｄ）が１μＭ以下、いくつかの実施形態では１００ｎＭ以下、いくつかの実施形態では１０ｎＭ以下、いくつかの実施形態では１００ｐＭ以下〜約１ｐＭである場合、標的に特異的に結合すると言われている。
【００４３】
本明細書で使用される「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム、ｃＤＮＡ、または合成起源のポリヌクレオチド、またはそれらのいくつかの組み合わせを意味するものとする。その起源により「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）「単離されたポリヌクレオチド」が自然界で見られるポリヌクレオチドのすべてまたは一部と関連していないか、（２）自然界では連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されているか、または（３）自然界では、より大きい配列の一部としては発生しない。本開示によるポリヌクレオチドは、本明細書に示される重鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子、および本明細書に示される軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子を含む。
【００４４】
本明細書で言及される「単離されたタンパク質」という用語は、ｃＤＮＡ、組換えＲＮＡ、または合成起源またはそれらのいくつかの組み合わせのタンパク質を意味し、その起源または誘導源により、「単離されたタンパク質」は、（１）自然界に見られるタンパク質には関連していないか、（２）同じ供給源の他のタンパク質を含まない、例えばマウスタンパク質を含まないか、（３）異なる種からの細胞によって発現されるか、または（４）自然界で発生しない。
【００４５】
「ポリペプチド」という用語は、本明細書では、ポリペプチド配列の天然のタンパク質、断片、または類似体を指す総称として使用される。したがって、天然のタンパク質断片および類似体は、ポリペプチド属の種である。本開示によるポリペプチドは、本明細書に示される重鎖免疫グロブリン分子、および本明細書に示される軽鎖免疫グロブリン分子、ならびに重鎖免疫グロブリン分子と軽鎖免疫グロブリン分子、例えばカッパ軽鎖免疫グロブリン分子およびその逆を含む組み合わせによって形成される抗体分子、ならびにそれらの断片および類似体を含む。
【００４６】
本明細書において物体に適用される「天然に存在する」という用語は、物体を自然界で見出すことができることを指す。例えば、自然界の供給源から単離することができ、かつ実験室においてヒトによって意図的に修飾されていないかその他の生物（ウイルスなど）内に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然に存在している。
【００４７】
本明細書で使用される「作動可能に連結された」という用語は、そのように説明された構成要素の位置を指し、それらを意図された様式で機能させることができる関係にあることを指す。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列に適合する条件下で達成されるように連結される。
【００４８】
本明細書で使用される「制御配列」という用語は、それらがライゲートされるコード配列の発現およびプロセシングを行うのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。こうした制御配列の性質は、原核生物内の宿主生物によって異なり、こうした制御配列としては、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、および真核生物内の転写終結配列が挙げられ、一般にこうした制御配列としては、プロモーターおよび転写終結配列が挙げられる。「制御配列」という用語は、少なくとも、その存在が発現およびプロセッシングに必須であるすべての成分を含むことを意図しており、その存在が有益である追加の成分、例えばリーダー配列および融合パートナー配列も含むことができる。本明細書で言及される「ポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチド、リボヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチド、またはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾された型を意味する。この用語には、一本鎖および二本鎖の形態のＤＮＡを含む。
【００４９】
本明細書で言及されるオリゴヌクレオチドという用語は、天然に存在するヌクレオチド、および天然に存在するオリゴヌクレオチドの連結および天然に存在しないオリゴヌクレオチドの連結によって共に連結されている修飾型ヌクレオチドが挙げられる。オリゴヌクレオチドは、一般に、２００塩基以下の長さを含むポリヌクレオチドサブセットである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、長さが１０〜６０塩基であり、いくつかの実施形態では、長さが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０〜４０塩基である。オリゴヌクレオチドは通常、例えばプローブ用に一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば遺伝子変異体の構築に使用するために二本鎖であってもよい。本開示のオリゴヌクレオチドは、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。
【００５０】
本明細書で言及される「天然に存在するヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。本明細書で言及される「修飾型ヌクレオチド」という用語は、修飾または置換された糖基などを有するヌクレオチドを含む。本明細書で言及される用語「オリゴヌクレオチド連結」としては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレルロエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート、ホスホロンミデートなどのオリゴヌクレオチド連結が挙げられる。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６年）、Ｓｔｅｃら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４年）、Ｓｔｅｉｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８年）、Ｚｏｎら、Ａｎｔｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１年）；ＺｏｎらＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、８７〜１０８頁（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１年））；Ｓｔｅｃら米国特許第５，１５１，５１０号、Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０年）を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、必要に応じて、検出のための標識を含み得る。
【００５１】
本明細書で使用する場合、２０個の従来のアミノ酸およびそれらの略語は従来の用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｅｎ、編、Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ（１９９１年））を参照されたい。２０個の従来のアミノ酸、α−、α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、および他の従来のものではないアミノ酸などの非天然アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）も、本開示のポリペプチドの好適な成分であり得る。従来のものではないアミノ酸の例として、以下が挙げられる：４ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、s−Ｎ−メチルアルギニン、および他の類似のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）。本明細書で使用されるポリペプチド表記では、標準の使用法および慣例に従って、左手方向がアミノ末端方向であり、右手方向がカルボキシ末端方向である。
【００５２】
同様に、特に明記しない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左端は５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左方向は５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写産物の５’方向から３’方向への付加は、転写方向配列と称され、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写産物の５’から５’末端にあるＤＮＡ鎖の配列領域は、「上流配列」と称され、ＲＮＡと同じ配列を有し、ＲＮＡ転写産物の３’から３’末端にあるＤＮＡ鎖の配列領域は、「下流配列」と称される。
【００５３】
ポリペプチドに適用される場合、「実質的に同一である」という用語は、２つのペプチド配列が、デフォルトのギャップウェイトを使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどにより最適に整列された場合、少なくとも８０％の配列同一性、いくつかの実施形態では、少なくとも９０％の配列同一性、いくつかの実施形態では、少なくとも９５％の配列同一性、いくつかの実施形態では、少なくとも９９％の配列同一性を共有していることを意味する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
【００５５】
本明細書で論じられるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列のわずかな変化は、本開示に包含されるものと考え、アミノ酸配列の変化は、少なくとも７５％、いくつかの実施形態では少なくとも８０％、９０％、９５％、およびいくつかの実施形態では９９％を維持することを条件とする。特に、保存的アミノ酸置換が考えられる。保存的置換とは、側鎖に関連するアミノ酸のファミリー内で行われる置換である。遺伝的にコードされたアミノ酸は、一般的に次のファミリーに分類される：（１）酸性アミノ酸はアスパラギン酸、グルタミン酸である、（２）塩基性アミノ酸はリジン、アルギニン、ヒスチジンである、（３）非極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンである、および（４）非荷電極性アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸塩、グルタミン、グルタミン酸塩、ヒスチジン、リジン、セリン、およびトレオニンが挙げられる。疎水性アミノ酸としては、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン、およびバリンが挙げられる。アミノ酸の他のファミリーとしては、（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリンおよびスレオニン、（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギンおよびグルタミン、（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ならびに（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンが挙げられる。例えば、イソロイシンまたはバリンによるロイシン、グルタミン酸塩によるアスパラギン酸塩、セリンによるトレオニンの単離された置換、または構造的に関連したアミノ酸によるアミノ酸の同様の置換は、特に置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を伴わない場合、得られる分子の結合または特性に大きな影響を有さないと予測することが合理的である。アミノ酸の変化が機能性ペプチドをもたらすかどうかは、ポリペプチド誘導体の比活性をアッセイすることにより容易に判断され得る。アッセイは、本明細書において詳細に記載している。抗体または免疫グロブリン分子の断片または類似体は、当業者によって容易に調製され得る。断片または類似体の好適なアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界付近に生じる。構造的ドメインおよび機能的ドメインは、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸配列データを公開配列データベースまたは独自の配列データベースと比較することにより同定され得る。いくつかの実施形態では、コンピューター化された比較方法を使用して、既知の構造および／または機能の他のタンパク質において生じる配列モチーフまたは予測されるタンパク質コンフォメーションドメインを同定する。既知の三次元構造に折り畳まれるタンパク質配列を同定する方法は、公知である。Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５３：１６４（１９９１年）。したがって、前述の例は、当業者が、本開示に従って構造的ドメインおよび機能的ドメインを画定するた���に使用できる配列モチーフおよび構造コンフォメーションを認識できることを実証している。
【００５６】
好適なアミノ酸置換は、以下のものである：（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させること、（２）酸化に対する感受性を低下させること、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させること、（４）結合親和性を変化させること、および（５）こうした類似体の他の物理化学的特性または機能的特性を付与するか、または変更すること。類似体としては、天然に存在するペプチド配列以外の配列の様々なムテインを挙げることができる。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）は、天然に存在する配列（例えば、分子間接触を形成するドメイン（複数可）外のポリペプチドの部分）で行われ得る。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変化させてはならない（例えば、置換アミノ酸は、親配列に生じるらせんを破壊する傾向のないものとするか、または親配列を特徴とする他のタイプの二次構造を破損させる傾向がないものとする）。技術的に認められたポリペプチドの二次および三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、編、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４年））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，編、Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１）年）；およびＴｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３５４：１０５（１９９１年）に記載されている。
【００５７】
本明細書で使用される用語「ポリペプチド断片」は、例えば、完全長のｃＤＮＡ配列から推定される天然に存在する配列内において、アミノ末端および／またはカルボキシ末端の欠失、かつ／または１つ以上の内部欠失を有するが、残りのアミノ酸配列が対応する位置と同一であるポリペプチドを指す。断片は、典型的には少なくとも５、６、８または１０アミノ酸長であり、いくつかの実施形態では少なくとも１４アミノ酸長であり、いくつかの実施形態では少なくとも２０アミノ酸長であり、通常少なくとも５０アミノ酸長であり、いくつかの実施形態では、少なくとも７０アミノ酸長である。本明細書で使用される用語「類似体」は、推定されるアミノ酸配列の一部分に対する実質的な同一性を有し、かつ好適な結合条件下で標的に対する特異的結合を有する少なくとも２５個のアミノ酸のセグメントから構成されるポリペプチドを指す。典型的には、ポリペプチド類似体は、天然に存在する配列に関して保存的アミノ酸置換（または付加または欠失）を含む。類似体は、典型的には少なくとも２０アミノ酸長であり、いくつかの実施形態では少なくとも５０アミノ酸長以上であり、多くの場合、完全長の天然に存在するポリペプチドと同じ長さであり得る。
【００５８】
用語「剤」は、本明細書では、化学化合物、化学化合物の混合物、生体巨大分子、または生体材料からの抽出物を示すために使用される。
【００５９】
本明細書で使用する「標識」または「標識された」という用語は、例えば放射標識されたアミノ酸の取り込みまたはマークされたアビジンにより検出できるビオチニル部分のポリペプチドへの付着による検出可能なマーカー（例えば、光学的方法または熱量測定法によって検出できる蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）が取り込まれていることを指す。特定の状況では、標識またはマーカーも治療用となり得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法が当技術分野において公知であり、使用することができる。ポリペプチドの標識の例として、これらに限定されないが、放射性同位元素または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）挙げられる。いくつかの実施形態では、標識は、潜在的な立体障害を減少させるために、様々な長さのスペーサーアームによって付着される。本明細書で使用される用語「医薬剤または薬物」は、対象に適切に投与されたときに所望の治療効果を誘導することができる化学化合物または組成物を指す。
【００６０】
本明細書の他の化学用語は、Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５年））に例示される当技術分野における従来の用法に従って使用される。
【００６１】
本明細書で使用される「実質的に純粋な」は、対象種が存在している優勢な種であることを意味し（すなわち、モル基準で、組成物中の他の個々のいかなる種よりも豊富である）、いくつかの実施形態では、実質的に精製された画分は、存在するすべての巨大分子種の少なくとも約５０パーセント（モル基準）が対象種である組成物である。
【００６２】
一般に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在するすべての巨大分子種の約８０パーセント超、いくつかの実施形態では約８５％、９０％、９５％、および９９％超を含む。いくつかの実施形態では、対象種は、本質的に均一になり、組成物が本質的に単一の高分子種からなるまで（従来の検出方法では、組成物中に汚染種が検出され得ない）精製する。
【００６３】
用語対象、ヒトおよび獣医学の対象。  
【００６４】
活性化可能抗体（ＡＡ）
本開示は、哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）を含むＡＡを提供する。
【００６５】
いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ１６６は、ヒトＣＤ１６６およびカニクイザルＣＤ１６６からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、ＡＢは、１ｎＭ未満の解離定数でヒトＣＤ１６６またはカニクイザルＣＤ１６６に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ１６６は、ヒトＣＤ１６６である。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ１６６は、カニクイザルＣＤ１６６である。いくつかの実施形態では、ＡＢは以下の特徴のうちの１つ以上を有する：（ａ）ＡＢはヒトＣＤ１６６に特異的に結合する。（ｂ）ＡＢは、ヒトＣＤ１６６およびカニクイザルＣＤ１６６に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＢは以下の特徴のうちの１つ以上を有する：（ａ）ＡＢは、ヒトＣＤ１６６およびカニクイザルＣＤ１６６に特異的に結合する。（ｂ）ＡＢは、哺乳動物ＣＤ６の哺乳動物ＣＤ１６６への結合を阻害する。（ｃ）ＡＢは、ヒトＣＤ６のヒトＣＤ１６６への結合を阻害する。および（ｄ）ＡＢは、カニクイザルＣＤ６のカニクイザルＣＤ１６６への結合を阻害する。
【００６６】
いくつかの実施形態では、ＡＢは、天然のリガンドまたは受容体の、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、および／または１０００ｎＭ以下のＥＣ５０で哺乳動物ＣＤ１６６に結合する能力をブロックする。いくつかの実施形態では、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ６の、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、および／または１０００ｎＭ以下のＥＣ５０で哺乳動物ＣＤ１６６に結合する能力をブロックする。いくつかの実施形態では、ＣＤ１６６の天然のリガンドまたは受容体はＣＤ６である。
【００６７】
いくつかの実施形態では、ＡＢは、５ｎＭ〜１０００ｎＭ、５ｎＭ〜５００ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜５０ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１０００ｎＭ、１０ｎＭ〜５００ｎＭ、１０ｎＭ〜１００ｎＭ、１０ｎＭ〜５０ｎＭ、５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、５０ｎＭ〜５００ｎＭ、５０ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０００ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、１５０ｎＭ〜４００ｎＭ、２００ｎＭ〜３００ｎＭ、５００ｎＭ〜１０００ｎＭのＥＣ５０で哺乳動物ＣＤ１６６に結合する天然リガンドの能力をブロックする。いくつかの実施形態では、ＡＢは、５ｎＭ〜１０００ｎＭ、５ｎＭ〜５００ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜５０ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１０００ｎＭ、１０ｎＭ〜５００ｎＭ、１０ｎＭ〜１００ｎＭ、１０ｎＭ〜５０ｎＭ、１５ｎＭ〜７５ｎＭ、３０ｎＭ〜８０ｎＭ、４０ｎＭ〜１５０ｎＭ、５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、５０ｎＭ〜５００ｎＭ、５０ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０００ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、１５０ｎＭ〜４００ｎＭ、２００ｎＭ〜３００ｎＭ、５００ｎＭ〜１０００ｎＭのＥＣ５０で哺乳動物ＣＤ６が哺乳動物ＣＤ１６６に結合する能力をブロックする。いくつかの実施形態では、ＣＤ１６６の天然のリガンドまたは受容体はＣＤ６である。
【００６８】
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢは、哺乳動物ＣＤ１６６を発現する細胞の成長、増殖、および／または転移を阻害するか、または低減させる。いかなる理論によっても拘束されるものではないが、本開示のＡＢは、ＣＤ１６６に特異的に結合し、哺乳動物ＣＤ１６６に対する天然のリガンドまたは受容体の結合を阻害、遮断、および／または予防することにより、哺乳動物ＣＤ１６６を発現する細胞の成長、増殖、および／または転移を阻害または低減し得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物ＣＤ１６６の天然のリガンドまたは受容体は、哺乳動物ＣＤ６である。
【００６９】
ＡＡの抗体またはその抗原結合断片は、マスキング部分（ＭＭ）に連結される。ＭＭが連結することにより、抗体またはその抗原結合断片のＣＤ１６６と結合する能力を低下させるようになる。いくつかの実施形態では、ＭＭは、プロテアーゼ、例えば、疾患組織内で活性であるプロテアーゼおよび／または対象の治療部位でＣＤ１６６と共局在するプロテアーゼの基質を含む配列を介して連結される。本明細書で提供される活性化可能抗ＣＤ１６６抗体（本明細書では、抗ＣＤ１６６  ＡＡまたはＣＤ１６６活性化可能抗体とも同義的に称される）は、循環において安定であり、治療法および／または診断の意図された部位で活性化されるが、正常な、例えば、健康な組織または治療および／もしくは診断の標的ではない他の組織ではなく、活性化されたときに、対応する非改変抗体（本明細書では親抗体とも呼ばれる）に少なくとも匹敵するＣＤ１６６への結合を呈する。
【００７０】
本開示は、ＡＡ内で使用するための、哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）を提供する。いくつかの実施形態では、抗体としては、ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１６６に結合する抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、単一ドメイン重鎖抗体、または単一ドメイン軽鎖抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１６６に結合するこうした抗体またはその抗原結合断片は、マウス、他のげっ歯類、キメラ、ヒト化または完全ヒトモノクローナル抗体である。
【００７１】
したがって、本明細書で提供されるのは、（１）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）と、ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害するＭＭと、ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであるＣＭと、を含む活性化可能抗体（ＡＡ）である。
【００７２】
本開示のＡＡ中の抗体（ＡＢ）は、例えば哺乳動物ＣＤ１６６および／またはヒトＣＤ１６６などのＣＤ１６６標的に特異的に結合する。
【００７３】
いくつかの実施形態では、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ１６６への結合について、約１００ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ１６６への結合について、約１０ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ１６６への結合について、約５ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ１６６への結合について、約１ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ１６６への結合について、約０．５ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ１６６への結合について、約０．１ｎＭ以下の解離定数を有する。いくつかの実施形態では、ＡＢは、哺乳動物ＣＤ１６６への結合について、０．０１ｎＭ〜１００ｎＭ、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．０１ｎＭ〜５ｎＭ、０．０１ｎＭ〜１ｎＭ、０．０１〜０．５ｎＭ、０．０１ｎｍ〜０．１ｎＭ、０．０１ｎｍ〜０．０５ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１００ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１０ｎＭ、０．０５ｎＭ〜５ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１ｎＭ、０．０５〜０．５ｎＭ、０．０５ｎｍ〜０．１ｎＭ、０．１ｎＭ〜１００ｎＭ、０．１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．１ｎＭ〜５ｎＭ、０．１ｎＭ〜１ｎＭ、０．１〜０．５ｎＭ、０．５ｎＭ〜１００ｎＭ、０．５ｎＭ〜１０ｎＭ、０．５ｎＭ〜５ｎＭ、０．５ｎＭ〜１ｎＭ、１ｎＭ〜１００ｎＭ、１ｎＭ〜１０ｎＭ、１ｎＭ〜５ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、または１０ｎＭ〜１００ｎＭの解離定数を有する。
【００７４】
いくつかの実施形態では、切断されていない状態のＡＡは、１ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、１５０ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、７５０ｎＭ以下、１０００ｎＭ以下、および１２２／または２０００ｎＭ以下の解離定数で哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する。
【００７５】
いくつかの実施形態では、切断されていない状態のＡＡは、１ｎＭ以上、５ｎＭ以上、１０ｎＭ以上、１５ｎＭ以上、２０ｎＭ以上、２５ｎＭ以上、５０ｎＭ以上、１００ｎＭ以上、１５０ｎＭ以上、２５０ｎＭ以上、５００ｎＭ以上、７５０ｎＭ以上、１０００ｎＭ以上、および１２２／または２０００ｎＭ以上の解離定数で哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する。
【００７６】
いくつかの実施形態では、切断されていない状態のＡＡは、１ｎＭ〜２０００ｎＭ、１ｎＭ〜１０００ｎＭ、１ｎＭ〜７５０ｎＭ、１ｎＭ〜５００ｎＭ、１ｎＭ〜２５０ｎＭ、１ｎＭ〜１５０ｎＭ、１ｎＭ〜１００ｎＭ、１ｎＭ〜５０ｎＭ、１ｎＭ〜２５ｎＭ、１ｎＭ〜１５ｎＭ、１ｎＭ〜１０ｎＭ、１ｎＭ〜５ｎＭ、５ｎＭ〜２０００ｎＭ、５ｎＭ〜１０００ｎＭ、５ｎＭ〜７５０ｎＭ、５ｎＭ〜５００ｎＭ、５ｎＭ〜２５０ｎＭ、５ｎＭ〜１５０ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜５０ｎＭ、５ｎＭ〜２５ｎＭ、５ｎＭ〜１５ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜２０００ｎＭ、１０ｎＭ〜１０００ｎＭ、１０ｎＭ〜７５０ｎＭ、１０ｎＭ〜５００ｎＭ、１０ｎＭ〜２５０ｎＭ、１０ｎＭ〜１５０ｎＭ、１０ｎＭ〜１００ｎＭ、１０ｎＭ〜５０ｎＭ、１０ｎＭ〜２５ｎＭ、１０ｎＭ〜１５ｎＭ、１５ｎＭ〜２０００ｎＭ、１５ｎＭ〜１０００ｎＭ、１５ｎＭ〜７５０ｎＭ、１５ｎＭ〜５００ｎＭ、１５ｎＭ〜２５０ｎＭ、１５ｎＭ〜１５０ｎＭ、１５ｎＭ〜１００ｎＭ、１５ｎＭ〜５０ｎＭ、１５ｎＭ〜２５ｎＭ、２５ｎＭ〜２０００ｎＭ、２５ｎＭ〜１０００ｎＭ、２５ｎＭ〜７５０ｎＭ、２５ｎＭ〜５００ｎＭ、２５ｎＭ〜２５０ｎＭ、２５ｎＭ〜１５０ｎＭ、２５ｎＭ〜１００ｎＭ、２５ｎＭ〜５０ｎＭ、５０ｎＭ〜２０００ｎＭ、５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、５０ｎＭ〜７５０ｎＭ、５０ｎＭ〜５００ｎＭ、５０ｎＭ〜２５０ｎＭ、５０ｎＭ〜１５０ｎＭ、５０ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜２０００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０００ｎＭ、１００ｎＭ〜７５０ｎＭ、１００ｎＭ〜５００ｎＭ、１００ｎＭ〜２５０ｎＭ、１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、１５０ｎＭ〜２０００ｎＭ、１５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、１５０ｎＭ〜７５０ｎＭ、１５０ｎＭ〜５００ｎＭ、１５０ｎＭ〜２５０ｎＭ、２５０ｎＭ〜２０００ｎＭ、２５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、２５０ｎＭ〜７５０ｎＭ、２５０ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜２０００ｎＭ、５００ｎＭ〜１０００ｎＭ、５００ｎＭ〜７５０ｎＭ、５００ｎＭ〜５００ｎＭ、５００ｎＭ〜２５０ｎＭ、５００ｎＭ〜１５０ｎＭ、５００ｎＭ〜１００ｎＭ、５００ｎＭ〜５０ｎＭ、７５０ｎＭ〜２０００ｎＭ、７５０ｎＭ〜１０００ｎＭ、または１０００ｎＭ〜２０００ｎＭの範囲の解離定数で哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する。
【００７７】
いくつかの実施形態では、活性化状態のＡＡは、解離定数が０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、または１０ｎＭ以下の哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する。
【００７８】
いくつかの実施形態では、活性化状態のＡＡは、解離定数が０．０１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、または１０ｎＭ以上の哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する。
【００７９】
いくつかの実施形態では、活性化状態のＡＡは、０．０１ｎＭ〜１００ｎＭ、０．０１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．０１ｎＭ〜５ｎＭ、０．０１ｎＭ〜１ｎＭ、０．０１〜０．５ｎＭ、０．０１ｎｍ〜０．１ｎＭ、０．０１ｎｍ〜０．０５ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１００ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１０ｎＭ、０．０５ｎＭ〜５ｎＭ、０．０５ｎＭ〜１ｎＭ、０．０５〜０．５ｎＭ、０．０５ｎｍ〜０．１ｎＭ、０．１ｎＭ〜１００ｎＭ、０．１ｎＭ〜１０ｎＭ、０．１ｎＭ〜５ｎＭ、０．１ｎＭ〜１ｎＭ、０．１〜０．５ｎＭ、０．５ｎＭ〜１００ｎＭ、０．５ｎＭ〜１０ｎＭ、０．５ｎＭ〜５ｎＭ、０．５ｎＭ〜１ｎＭ、１ｎＭ〜１００ｎＭ、１ｎＭ〜１０ｎＭ、１ｎＭ〜５ｎＭ、５ｎＭ〜１００ｎＭ、５ｎＭ〜１０ｎＭ、または１０ｎＭ〜１００ｎＭの範囲の解離定数で哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する。
【００８０】
本発明の例示的な活性化可能抗ＣＤ１６６抗体としては、例えば、下記に示す重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列を含むかまたはこれらに由来する重鎖および軽鎖を含む活性化可能抗体（ＡＡ）が挙げられる：
【表１】
2020532509.tif 000003
【００８１】
いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、対応する抗体の半減期よりも長く、例えば、ＡＡのｐＫは対応する抗体のｐＫよりも長い。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、対応する抗体の半減期とほぼ同じである。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１５日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１２日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１１日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１０日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも９日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも８日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも７日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも６日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも５日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも４日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも３日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも２日である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも２４時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも２０時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１８時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１６時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１４時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１２時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも１０時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも８時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも６時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも４時間である。いくつかの実施形態では、ＡＡの血清半減期は、生物に投与された場合、少なくとも３時間である。
【００８２】
例示的活性化可能抗体
例示的な実施形態では、本開示のＡＡは、以下の配列のいずれか１つ以上を含む：
【表２】
2020532509.tif 000004
2020532509.tif 000005
【００８３】
例示的実施形態では、ＡＡは、（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含む。
【００８４】
例示的実施形態では、ＡＡは、（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢを含み、かつ、ｓｐｄｂリンカーを介してＤＭ４に結合している（この例示的な結合型ＡＡは、本明細書では「スペーサー−７６１４．６−３００１−ＨｃＣＤ１６６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４」と呼ばれ、「組み合わせ５５」とも呼ばれる）。リンカー毒素ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート−Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−メイタンシンとしても公知である。
【００８５】
別の例示的実施形態では、ＡＡは、（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号３１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢを含み、かつ、さらにｓｐｄｂリンカーを介してＤＭ４に結合している。この例示的な結合型ＡＡは、本明細書では「７６１４．６−３００１−ＨｃＣＤ１６６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４」と呼ばれ、「組み合わせ６０」とも呼ばれる）。
【００８６】
マスキング部分（ＭＭ）
本明細書に記載の活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、抗体治療、特にｉｎ  ｖｉｖｏで少なくともある程度毒性であることが知られている抗体治療の制限を克服する。標的を介した毒性は、治療用抗体の開発にとって大きな制限となる。本明細書で提供される活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、従来の治療用抗体による正常組織の標的の阻害に関連する毒性に対処するように設計されている。これらの活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、疾患部位でタンパク質分解的に活性化されるまでマスキングされたままである。親治療用抗体としての抗ＣＤ１６６抗体から始めて、本発明の活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、プロテアーゼ基質（ＣＭ）を組み込んだリンカーを介して抗体を阻害マスク（マスキング部分ＭＭ）に連結することにより改変させた。
【００８７】
したがって、本明細書で提供される活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、マスキング部分（ＭＭ）を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、抗ＣＤ１６６抗体に連結しているか、別の方法で抗ＣＤ１６６抗体に付着しているアミノ酸配列であり、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体構築物内に位置付けられ、これにより、ＭＭが、ＣＤ１６６に特異的に結合する抗ＣＤ１６６抗体の能力を低下させるようになる。好適なマスキング部分は、様々な既知の技術のいずれかを使用して特定される。例えば、ペプチドマスキング部分は、ＤａｕｇｈｅｒｔｙらによるＰＣＴ公開番号ＷＯ２００９／０２５８４６号に記載されている方法（本内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を使用して特定される。
【００８８】
いくつかの実施形態では、ＣＤ１６６の存在下で、ＭＭは、例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ２０１０／０８１１７３号（その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のアッセイなど、標的置換アッセイを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏでアッセイした場合に、ＣＭが切断される場合と比較して、ＣＭが切断されていないときに、ＡＢのＣＤ１６６への結合能力を少なくとも９０％低下させる。
【００８９】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、約２〜４０アミノ酸長のポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＭＭは、最大約４０アミノ酸長のポリペプチドである。
【００９０】
いくつかの実施形態では、ＭＭポリペプチド配列はＣＤ１６６の配列とは異なる。いくつかの実施形態では、ＭＭポリペプチド配列は、ＡＢの任意の天然の結合パートナーと５０％以下の同一性である。いくつかの実施形態では、ＭＭポリペプチド配列はＣＤ１６６の配列とは異なり、ＡＢの任意の天然の結合パートナーとの同一性は、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、または１０％以下である。
【００９１】
１つの例示的実施形態では、本明細書において提供されるＡＡは、ＭＭを含み、そのアミノ酸配列は以下のとおりである：
【表３】
2020532509.tif 000006
【００９２】
ＡＢをＭＭで修飾し、標的の存在下にある場合、ＭＭで修飾されていないＡＢの特異的結合または親ＡＢの標的への特異的結合と比較して、ＡＢの標的への特異的結合は減少または阻害される。
【００９３】
標的に対するＭＭにより修飾されたＡＢのＫｄは、標的に対するＭＭにより修飾されていないＡＢまたは親ＡＢのＫｄの少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００、もしくはそれ以上、または５〜１０、１０〜１００、１０〜１，０００、１０〜１０，０００、１０〜１００，０００、１０〜１，０００，０００、１０〜１０，０００，０００、２５〜５０、５０〜２５０、１００〜１，０００、１００〜１０，０００、１００〜１００，０００、１００〜１，０００，０００、１００〜１０，０００，０００、５００〜２，５００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜１００，０００、１，０００〜１，０００，０００、１０００〜１０，０００，０００、２，５００〜５，０００、５，０００〜５０，０００、１０，０００〜１００，０００、１０，０００〜１，０００，０００、１０，０００〜１０，０００，０００、５０，０００〜５，０００，０００、１００，０００〜１，０００，０００、もしくは１００，０００〜１０，０００，０００倍以上である。逆に、ＭＭにより修飾されたＡＢの標的に対する結合親和性は、ＭＭにより修飾されていないＡＢまたは親ＡＢの標的に対する結合親和性よりも少なくとも２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００もしくはそれ以上、または５〜１０、１０〜１００、１０〜１，０００、１０〜１０，０００、１０〜１００，０００、１０〜１，０００，０００、１０〜１０，０００，０００、２５〜５０、５０〜２５０、１００〜１，０００、１００〜１０，０００、１００〜１００，０００、１００〜１，０００，０００、１００〜１０，０００，０００、５００〜２，５００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜１００，０００、１，０００〜１，０００，０００、１０００〜１０，０００，０００、２，５００〜５，０００、５，０００〜５０，０００、１０，０００〜１００，０００、１０，０００〜１，０００，０００、１０，０００〜１０，０００，０００、５０，０００〜５，０００，０００、１００，０００〜１，０００，０００、もしくは１００，０００〜１０，０００，０００倍低い。
【００９４】
いくつかの実施形態では、ＭＭがＡＢに連結することにより、ＣＤ１６６に結合するＡＢの能力が低下し、これにより、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されているときのＡＢの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されていないときのＡＢのＫｄよりも少なくとも２倍大きいものとなる。
【００９５】
いくつかの実施形態では、ＭＭがＡＢに連結することにより、ＣＤ１６６を結合するＡＢの能力が低下し、これにより、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されているときのＡＢの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されていないときのＡＢのＫｄよりも少なくとも５倍大きいものとなる。
【００９６】
いくつかの実施形態では、ＭＭがＡＢに連結することにより、ＣＤ１６６を結合するＡＢの能力が低下し、これにより、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されているときのＡＢの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されていないときのＡＢのＫｄよりも少なくとも１０倍大きいものとなる。
【００９７】
いくつかの実施形態では、ＭＭがＡＢに連結することにより、ＣＤ１６６を結合するＡＢの能力が低下し、これにより、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されているときのＡＢの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されていないときのＡＢのＫｄよりも少なくとも２０倍大きいものとなる。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ＭＭがＡＢに連結することにより、ＣＤ１６６を結合するＡＢの能力が低下し、これにより、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されているときのＡＢの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されていないときのＡＢのＫｄよりも少なくとも４０倍大きいものとなる。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ＭＭがＡＢに連結することにより、ＣＤ１６６を結合するＡＢの能力が低下し、これにより、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されているときのＡＢの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されていないときのＡＢのＫｄよりも少なくとも１００倍大きいものとなる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ＭＭがＡＢに連結することにより、ＣＤ１６６を結合するＡＢの能力が低下し、これにより、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されているときのＡＢの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されていないときのＡＢのＫｄよりも少なくとも１０００倍大きいものとなる。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、ＭＭがＡＢに連結することにより、ＣＤ１６６を結合するＡＢの能力が低下し、これにより、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されているときのＡＢの解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ１６６に向かってＭＭに連結されていないときのＡＢのＫｄよりも少なくとも１０，０００倍大きいものとなる。
【０１０２】
ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は一般に、標的に対するＡＢのＫｄよりも大きくなる。ＡＢに対するＭＭのＫｄは、標的に対するＡＢのＫｄより少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、１００，０００、１，０００，０００、またはさらには１０，０００，０００倍大きくあり得る。逆に、ＡＢに対するＭＭの結合親和性は、一般に、標的に対するＡＢの結合親和性よりも低くなる。ＡＢに対するＭＭの結合親和性は、標的に対するＡＢの結合親和性より少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、１００，０００、１，０００，０００、またはさらには１０，０００，０００倍低くあり得る。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、標的に対するＡＢのＫｄにほぼ等しい。いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、標的に対するＡＢの解離定数以下である。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、標的に対するＡＢの解離定数よりも小さい。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、標的に対するＡＢの解離定数よりも大きい。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合のＫｄ以下である、ＡＢへの結合のＫｄを有する。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合のＫｄよりも小さい、ＡＢへの結合のＫｄを有する。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合のＫｄにほぼ等しいＡＢへの結合のＫｄを有する。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合のＫｄ以上である、ＡＢへの結合のＫｄを有する。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合のＫｄよりも大きい、ＡＢへの結合のＫｄを有する。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ＡＢに対するＭＭの解離定数（Ｋｄ）は、ＡＢの標的への結合のＫｄの２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、２５０倍、５００倍、１，０００倍、２，５００倍、５，０００倍、１０，０００倍、５０，０００倍、１００，０００倍、５００，０００倍、１，０００，０００倍、５，０００，０００倍、１０，０００，０００倍、５０，０００，０００倍、もしくはそれ以上を超えることはないか、または１〜５倍、５〜１０倍、１０〜１００倍、１０〜１，０００倍、１０〜１０，０００倍、１０〜１００，０００倍、１０〜１，０００，０００倍、１０〜１０，０００，０００倍、２５〜５０倍、５０〜２５０倍、１００〜１，０００倍、１００〜１０，０００倍、１００〜１００，０００倍、１００〜１，０００，０００倍、１００〜１０，０００，０００倍、２５〜５００倍、５００〜２，５００倍、１，０００〜１０，０００倍、１，０００〜１００，０００倍、１，０００〜１，０００，０００倍、１０００〜１０，０００，０００倍、２，５００〜５，０００倍、５，０００〜５０，０００倍、１０，０００〜１００，０００倍、１０，０００〜１，０００，０００倍、１０，０００〜１０，０００，０００倍、５０，０００〜５，０００，０００倍、１００，０００〜１，０００，０００倍、または１００，０００〜１０，０００，０００倍である。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合のＫｄの１〜５倍、２〜５倍、２〜１０倍、５〜１０倍、５〜２０倍、５〜５０倍、５〜１００倍、１０〜１００倍、１０〜１，０００倍、２０〜１００倍、２０〜１０００倍、または１００〜１，０００倍のＡＢへの結合のＫｄを有する。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性よりも低い、ＡＢへの結合の親和性を有する。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性以下の、ＡＢへの結合の親和性を有する。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性にほぼ等しい、ＡＢへの結合の親和性を有する。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性以上のＡＢへの結合の親和性を有する。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性よりも大きいＡＢへの結合の親和性を有する。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性よりも２、３、４、５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、または１，０００低いＡＢへの結合の親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性よりも１〜５倍、２〜５倍、２〜１０倍、５〜１０倍、５〜２０倍、５〜２５倍、５〜５０倍、５〜１００倍、１０〜１００倍、１０〜１，０００倍、２０〜１００倍、２０〜１０００倍、２５〜２５０倍、５０〜５００倍、または１００〜１，０００倍低いＡＢへの結合の親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの標的への結合の親和性よりも２〜２０倍低いＡＢへの結合の親和性を有する。いくつかの実施形態では、共有結合によりＡＢに連結せず、ＡＢと等モル濃度であるＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害することはない。
【０１１８】
ＡＢをＭＭで修飾し、標的の存在下にある場合、ＭＭで修飾されていないＡＢの特異的結合または親ＡＢの標的への特異的結合と比較して、ＡＢの標的への特異的結合は減少または阻害される。ＭＭで修飾されていないＡＢの結合または標的への親ＡＢの結合と比較すると、ＭＭで修飾された場合の標的を結合するＡＢの能力は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで測定した場合、少なくとも２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、もしくは９６時間、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、６０日、９０日、１２０日、１５０日、もしくは１８０日、または、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、または１２ヶ月、またはそれ以上、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、さらに１００％低下させ得る。
【０１１９】
ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害する。ＭＭは、ＡＢの抗原結合ドメインに結合し、ＡＢの標的への結合を阻害する。ＭＭは、ＡＢの標的への結合を立体的に阻害できる。ＭＭは、ＡＢの標的への結合をアロステリックにより阻害できる。これらの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで測定した場合、少なくとも２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、もしくは９６時間、または５日、１０日、１５日、３０日、４５日、６０日、９０日、１２０日、１５０日、もしくは１８０日、または１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月以上の間、ＭＭで修飾されていないＡＢ、親ＡＢ、またはＭＭに連結していないＡＢの標的への結合と比較した場合、ＡＢがＭＭによって修飾されるか、ＭＭに連結し、標的の存在下である場合、ＡＢは、標的に結合しないか、または実質的に結合しないか、または０．００１％、０．０１％、０．１％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、または５０％以下のＡＢの標的への結合であるかである。
【０１２０】
ＡＢがＭＭに連結されるか、またはＭＭによって修飾されるとき、ＭＭの「マスク」により、ＡＢの標的への特異的結合を低減するか、またはさもなければ阻害する。ＡＢがＭＭに連結されるか、またはＭＭにより修飾された場合、こうした連結または修飾は、ＡＢがその標的に特異的に結合する能力を低下させるか、または阻害する構造変化を引き起こし得る。
【０１２１】
ＭＭに連結するか、またはＭＭにより修飾されたＡＢは、次式で表すことができる（アミノ（Ｎ）末端領域からカルボキシル（Ｃ）末端領域の順：    
（ＭＭ）−（ＡＢ）
（ＡＢ）−（ＭＭ）
（ＭＭ）−Ｌ−（ＡＢ）
（ＡＢ）−Ｌ−（ＭＭ）
式中、ＭＭはマスキング部分であり、ＡＢは抗体またはその抗体断片であり、Ｌはリンカーである。多くの実施形態では、１つ以上のリンカー、例えば、柔軟なリンカーを組成物に挿入して、柔軟性を提供することが望ましい場合がある。
【０１２２】
特定の実施形態では、ＭＭは、ＡＢの天然の結合パートナーではない。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの任意の天然の結合パートナーと相同性を全く含まないか、または実質的に含まない。いくつかの実施形態では、ＭＭは、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％以下、ＡＢの任意の天然の結合パートナーと類似している。いくつかの実施形態では、ＭＭは、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または８０％以下、ＡＢの任意の天然の結合パートナーと同一である。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの任意の天然の結合パートナーとの同一性は、２５％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの任意の天然の結合パートナーとの同一性は、５０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの任意の天然の結合パートナーとの同一性は、２０％以下である。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＡＢの任意の天然の結合パートナーとの同一性は、１０％以下である。  
【０１２３】
切断可能部分（ＣＭ）
本明細書で提供される活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、切断可能部分（ＣＭ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、プロテアーゼ、通常は細胞外プロテアーゼの基質であるアミノ酸配列を含む。好適な基質は、様々な既知の技術のいずれかを使用して特定され得る。例えば、ペプチド基質は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙらによる米国特許第７，６６６，８１７号、Ｓｔａｇｌｉａｎｏらによる米国特許第８，５６３，２６９号、また、Ｌａ  ＰｏｒｔｅらによるＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１４／０２６１３６号（その各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている方法を使用して同定される。（また、Ｂｏｕｌｗａｒｅら、「Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅａｓｅｓ  ｔｈａｔ  ｅｘｈｉｂｉｔ  ｒａｐｉｄ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ」Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．１０６．３（２０１０年）：３３９−４６も参照されたい）。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、ＣＭを切断するプロテアーゼは、疾患組織において活性があり、例えば上方制御されているか、さもなければ制御されておらず、ＡＡがプロテアーゼにさらされるときに、プロテアーゼはＡＡ中のＣＭを切断する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、組織内でＣＤ１６６と共局在し、ＡＡがプロテアーゼにさらされるときに、プロテアーゼはＡＡ中のＣＭを切断する。図１は、腫瘍特異的プロテアーゼが存在する腫瘍微小環境において優先的に活性化される活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートを示している。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、ＡＡは、ＭＭによって修飾されるＡＢを含み、１つ以上の切断可能部分（ＣＭ）も含む。こうしたＡＡは、ＡＢの標的に対して活性化可能／切り替え可能な結合を呈する。ＡＡは、一般に、マスキング部分（ＭＭ）によって修飾されているか、またはマスキング部分（ＭＭ）に連結されている抗体または抗体断片（ＡＢ）、および修飾可能または切断可能部分（ＣＭ）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも１つのプロテアーゼの基質として機能するアミノ酸配列を含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、ＣＭは、最大１５アミノ酸長のポリペプチドである。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、ＣＭは、少なくとも１つのマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の基質である第１の切断可能部分（ＣＭ１）、および少なくとも１つのセリンプロテアーゼ（ＳＰ）の基質である第２の切断可能部分（ＣＭ２）を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＣＭ１−ＣＭ２基質のＣＭ１基質配列およびＣＭ２基質配列のそれぞれは、独立して、最大１５アミノ酸長のポリペプチドである。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、ＣＭは、以下のアミノ酸配列で表されるＣＭ１−ＣＭ２基質である：
【表４】
2020532509.tif 000007
【０１２９】
ＡＡのエレメントは、切断された（または比較的活性な）状態では、標的の存在下で、ＡＢが標的に結合し、ＡＡが切断されていない（または比較的非活性である）状態では、標的の存在下で、標的へのＡＢの特異的結合が減少または阻害されるようにＭＭおよびＣＭが位置付けられるように配置される。ＡＢの標的への特異的結合は、ＭＭによるＡＢの標的への特異的結合能力が阻害されるか、またはマスキングされることにより減少し得る。
【０１３０】
標的に対してＭＭおよびＣＭにより修飾されたＡＢのＫｄは、標的に対してＭＭおよびＣＭにより修飾されていないＡＢのＫｄまたは親ＡＢのＫｄの少なくとも５倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、２５０倍、５００倍、１，０００倍、２，５００倍、５，０００倍、１０，０００倍、５０，０００倍、１００，０００倍、５００，０００倍、１，０００，０００倍、５，０００，０００倍、１０，０００，０００倍、５０，０００，０００倍もしくはそれ以上、または５〜１０倍、１０〜１００倍、１０〜１，０００倍、１０〜１０，０００倍、１０〜１００，０００倍、１０〜１，０００，０００倍、１０〜１０，０００，０００倍、２５〜５０倍、５０〜２５０倍、１００〜１，０００倍、１００〜１０，０００倍、１００〜１００，０００倍、１００〜１，０００，０００倍、１００〜１０，０００，０００倍、２５〜５００倍、５００〜２，５００倍、１，０００〜１０，０００倍、１，０００〜１００，０００倍、１，０００〜１，０００，０００倍、１０００〜１０，０００，０００倍、２，５００〜５，０００倍、５，０００〜５０，０００倍、１０，０００〜１００，０００倍、１０，０００〜１，０００，０００倍、１０，０００〜１０，０００，０００倍、５０，０００〜５，０００，０００倍、１００，０００〜１，０００，０００倍、または１００，０００〜１０，０００，０００倍である。逆に、標的に対するＭＭおよびＣＭにより修飾されたＡＢの結合親和性は、標的に対するＭＭおよびＣＭにより修飾されていないＡＢまたは親ＡＢの結合親和性の少なくとも５倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、２５０倍、５００倍、１，０００倍、２，５００倍、５，０００倍、１０，０００倍、５０，０００倍、１００，０００倍、５００，０００倍、１，０００，０００倍、５，０００，０００倍、１０，０００，０００倍、５０，０００，０００、もしくはそれ以上、または５〜１０倍、１０〜１００倍、１０〜１，０００倍、１０〜１０，０００倍、１０〜１００，０００倍、１０〜１，０００，０００倍、１０〜１０，０００，０００倍、２５〜５０倍、５０〜２５０倍、１００〜１，０００倍、１００〜１０，０００倍、１００〜１００，０００倍、１００〜１，０００，０００倍、１００〜１０，０００，０００倍、２５〜５００倍、５００〜２，５００倍、１，０００〜１０，０００倍、１，０００〜１００，０００倍、１，０００〜１，０００，０００倍、１０００〜１０，０００，０００倍、２，５００〜５，０００倍、５，０００〜５０，０００倍、１０，０００〜１００，０００倍、１０，０００〜１，０００，０００倍、１０，０００〜１０，０００，０００倍、５０，０００〜５，０００，０００倍、１００，０００〜１，０００，０００倍、もしくは１００，０００〜１０，０００，０００倍低い。
【０１３１】
ＡＢがＭＭおよびＣＭにより修飾され、標的の存在下にあるが、修飾剤（例えば、少なくとも１つのプロテアーゼ）の存在下にない場合、ＭＭおよびＣＭにより修飾されていないＡＢの特異的結合、または標的への親ＡＢの特異的結合と比較して、ＡＢのその標的への特異的結合が減少されるか、または阻害される。親ＡＢの結合、またはＭＭおよびＣＭにより修飾されていないＡＢのその標的への結合と比較したとき、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで測定した場合、ＭＭおよびＣＭにより修飾されたときのＡＢの標的結合能力は、少なくとも２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、２８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、または９６時間、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、６０日、９０日、１２０日、１５０日、もしくは１８０日間、または１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、もしくは１２ヶ月、もしくはそれ以上の間、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、およびさらには１００％低下し得る。
【０１３２】
本明細書で使用される「切断状態」という用語は、少なくとも１つのプロテアーゼによるＣＭの修飾後のＡＡの状態を指す。本明細書で使用される「切断されていない状態」という用語は、プロテアーゼによるＣＭの切断がない場合のＡＡの状態を指す。上述のように、「活性化可能抗体」という用語は、本明細書では、その非切断（ネイティブ）状態とその切断状態との両方のＡＡを指すために使用する。いくつかの実施形態では、プロテアーゼによりＣＭが切断されることにより、切断されたＡＡがＭＭを有さない場合もあり、これにより、少なくともＭＭの放出がもたらされることは当業者には明らかであろう（例えば、ＭＭが、共有結合（例えば、システイン残基間のジスルフィド結合）によりＡＡに結合しない場合）。
【０１３３】
活性化可能または切り替え可能とは、ＡＡが阻害されているか、マスキングされているか、または切断されていない状態（すなわち、第１のコンフォメーション）にある場合に、ＡＡが、標的に対する第１の結合レベルを呈すること、および阻害されていない、マスキングされていない、かつ／または切断された状態（すなわち、第２のコンフォメーション）状態にある場合に、標的に対する第２の結合レベルを呈することを意味する。このとき、標的に対する第２の結合レベルは第１の結合レベルより大きい。一般に、ＡＡのＡＢに対する標的の接近は、ＣＭを切断することができる切断剤、すなわちプロテアーゼの存在下では、こうした切断剤の非存在下の場合よりも大きい。したがって、ＡＡが切断されていない状態にある場合は、ＡＢでは、標的の結合が阻害され、標的の結合からマスキングされ得（すなわち、第１のコンフォメーションは、ＡＢが標的に結合できないようなものである）、切断されている状態にある場合は、ＡＢでは、標的結合が阻害されていないか、またはマスキングされていない。
【０１３４】
ＡＡのＣＭおよびＡＢは、ＡＢが所定の標的の結合部分を表し、ＣＭがプロテアーゼの基質を表すように選択される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼは、対象の治療部位または診断部位において標的と共局在する。本明細書で使用される共局在化とは、同じ場所にあるか、比較的近くにあることを指す。いくつかの実施形態では、プロテアーゼはＣＭを切断し、これにより、切断部位の近くに位置する標的に結合する活性化抗体が生じる。本明細書に開示のＡＡでは、例えば、ＣＭ内のある部位を切断することができるプロテアーゼ、すなわちプロテアーゼが、治療部位または診断部位の標的含有組織において、非治療部位の組織（例えば、健康な組織）より比較的高いレベルで存在する特定の用途が見出される。いくつかの実施形態では、本開示のＣＭはまた、１つ以上の他のプロテアーゼによって切断される。いくつかの実施形態では、標的と共局在するのは１つ以上の他のプロテアーゼであり、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＭの切断を担う。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、ＡＢがマスキングされていないか、さもなければ標的への結合が阻害されていない場合に、さもなければ非治療部位でのＡＢの結合から生じ得る毒性および／または有害な副作用の低減がＡＡによりもたらされる。
【０１３６】
一般に、ＡＡは、目的のＡＢを選択し、ＡＡの残りの部分を構築することにより設計され得る。これにより、コンフォメーション上の制約がある場合には、ＭＭにより、ＡＢのマスキングまたはＡＢの標的への結合の低減がもたらされる。この機能的特徴をもたらすために、構造設計基準が考慮され得る。
【０１３７】
阻害されたコンフォメーションと阻害されていないコンフォメーションにおける標的結合の望ましいダイナミックレンジの切り替え可能な表現型を呈するＡＡが提供される。ダイナミックレンジとは、一般に、（ａ）第１の条件セットでのパラメーターの最大検出レベル対（ｂ）第２の条件セットでのパラメーターの最小検出値の比率を指す。例えば、活性化可能抗体の文脈において、ダイナミックレンジとは、（ａ）ＡＡのＣＭを切断できる少なくとも１つのプロテアーゼの存在下で、ＡＡに結合する標的タンパク質の最大検出レベルと（ｂ）プロテアーゼの非存在下でＡＡに結合する標的タンパク質の最小検出レベルとの比率を指す。ＡＡのダイナミックレンジは、ＡＡ切断剤（例えば、酵素）処理の解離定数に対するＡＡ切断剤処理の解離定数の比として計算することができる。活性化可能抗体のダイナミックレンジが大きいほど、活性化可能抗体の切り替え可能な表現型が向上する。比較的高いダイナミックレンジ値（例えば、１より大きい）を有するＡＡは、ＡＡによる標的タンパク質の結合が、ＡＡのＣＭを切断できる切断剤（例えば、酵素）の存在下では、切断剤の非存在下よりも広い範囲で（例えば、優勢的に）起こるように、より望ましい切り替え表現型を呈する。
【０１３８】
ＣＭは、約０．００１〜１５００ｘ１０４Ｍ−１Ｓ−１、または少なくとも０．００１、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２．５、５、７．５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、１０００、１２５０、または１５００ｘ１０４Ｍ−１Ｓ−１の速度で少なくとも１つのプロテアーゼにより特異的に切断される。いくつかの実施形態では、ＣＭは約１００，０００Ｍ−１Ｓ−１の速度で特異的に切断される。いくつかの実施形態では、ＣＭは、約１ｘ１０Ｅ２〜約１ｘ１０Ｅ６のＭ−１Ｓ−１（すなわち、約１ｘ１０２から約１ｘ１０６のＭ−１Ｓ−１）の速度で特異的に切断される。
【０１３９】
酵素による特異的切断の場合、酵素とＣＭとの間で接触が生じる。ＭＭおよびＣＭに連結したＡＢを含むＡＡが標的および十分な酵素活性の存在下にある場合、ＣＭを切断することができる。十分な酵素活性とは、ＣＭと接触して切断を行う酵素の能力を指す。酵素は、ＣＭの近くにあり得るが、他の細胞因子のためまたは酵素のタンパク質修飾のために切断できないことが容易に想起され得る。  
【０１４０】
活性化可能抗体の構造的配置
本開示のＡＡは、様々な構造構成で提供され得る。ＡＡの例示的な式を以下に示す。活性化可能抗体内で、ＡＢ、ＭＭ、およびＣＭのＮ末端からＣ末端への順序を逆にすることができることが特に企図される。また、例えばＣＭがＭＭ内に含まれるように、ＣＭおよびＭＭがアミノ酸配列で重複し得ることも特に想定されている。
【０１４１】
例えば、ＡＡは、次の式で表すことができる（アミノ（Ｎ）末端領域からカルボキシル（Ｃ）末端領域の順：
（ＭＭ）−（ＣＭ）−（ＡＢ）
（ＡＢ）−（ＣＭ）−（ＭＭ）  
ここでは、ＭＭはマスキング部分、ＣＭは切断可能部分、ＡＢは抗体またはその断片である。ＭＭおよびＣＭは、上記の式では別個の成分として示されているが、本明細書に開示されるすべての例示的な実施形態（式を含む）において、ＭＭおよびＣＭのアミノ酸配列は、例えば、ＣＭが、ＭＭ内に完全にまたは部分的に含まれるように、重複し得ることが想定されることに留意されたい。さらに、上記の式は、ＡＡエレメントのＮ末端またはＣ末端に位置付けられ得る追加のアミノ酸配列を提供する。
【０１４２】
多くの実施形態では、ＭＭ−ＣＭ接合、ＣＭ−ＡＢ接合、またはその両方のうちの１つ以上において、柔軟性を付与するために、ＡＡ構築物に１つ以上のリンカー、例えば柔軟なリンカーを挿入することが望ましい場合がある。例えば、ＡＢ、ＭＭおよび／またはＣＭは、所望の柔軟性をもたらすために、十分な数の残基（例えば、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、特にＧｌｙおよびＳｅｒ、特にＧｌｙ）を含まなくてもよい。このため、こうしたＡＡ構築物の切り替え可能な表現型は、柔軟なリンカーを提供するために１つ以上のアミノ酸を導入することにより利益が得られ得る。加えて、以下に記載されるように、ＡＡがコンフォメーション上制約された構築物として提供される場合、柔軟なリンカーを作動可能に挿入することで、切断されていない活性化可能抗体における環状構造の形成および維持が容易になり得る。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、ＡＡは、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、切断されていない状態にあるＡＡは、以下のようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を有する：ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢまたはＡＢ−ＬＰ２−ＣＭ−ＬＰ１−ＭＭ。いくつかの実施形態では、２つの連結ペプチドは互いに同一である必要はない。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、ＬＰ１またはＬＰ２のうちの少なくとも一方は、（ＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１）および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２）（ｎは少なくとも１つの整数である）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、ＬＰ１またはＬＰ２のうちの少なくとも一方は、ＧＧＳＧ（配列番号３）、ＧＧＳＧＧ（配列番号４）、ＧＳＧＳＧ（配列番号５）、ＧＳＧＧＧ（配列番号６）、ＧＧＧＳＧ（配列番号７）、およびＧＳＳＳＧ（配列番号８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、ＬＰ１は、アミノ酸配列ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号９）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号１０）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１２）、ＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１３）、またはＧＳＳＧＧＳＧＧＳＧＳ（配列番号１４）を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、ＬＰ２は、アミノ酸配列ＧＳＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＳ（配列番号１５）、ＧＳＳＧＴ（配列番号１６）、またはＧＳＳＧ（配列番号１７）を含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、ＡＢは、ＣＤ１６６に結合するための解離定数が約１００ｎＭ以下である。
【０１４９】
例えば、特定の実施形態では、ＡＡは、次式のうちの１つを含む（以下の式は、ＮからＣ末端方向またはＣからＮ末端方向のいずれかのアミノ酸配列を表す）：
（ＭＭ）−ＬＰ１−（ＣＭ）−（ＡＢ）
（ＭＭ）−（ＣＭ）−ＬＰ２−（ＡＢ）
（ＭＭ）−ＬＰ１−（ＣＭ）−ＬＰ２−（ＡＢ）
式中、ＭＭ、ＣＭ、およびＡＢは上記で定義したとおりである。式中、ＬＰ１およびＬＰ２はそれぞれ独立に、かつ任意により存在または非存在であり、少なくとも１つの柔軟なアミノ酸（例えばＧｌｙ）を含む同じまたは異なる柔軟なリンカーである。さらに、上記の式は、ＡＡエレメントのＮ末端またはＣ末端に位置付けられ得る追加のアミノ酸配列を提供する。例としては、これらに限定されないが、標的化部分（例えば、標的組織に存在する細胞の受容体に対するリガンド）および血清半減期延長部分（例えば、免疫グロブリンなどの血清タンパク質に結合するポリペプチド（例えば、ＩｇＧ）または血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ））が挙げられる。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、活性化された抗体が、活性化された状態または切断された状態で、プロテアーゼがＣＭを切断した後にＬＰ２および／またはＣＭ配列の少なくとも一部分を含む軽鎖アミノ酸配列を含むように、ＡＡはプロテアーゼにさらされ、かつプロテアーゼによって切断される。
【０１５１】
本明細書に記載の組成物での使用に好適であるリンカーは、一般に、標的に対するＡＢの結合の阻害を容易にするために修飾ＡＢまたはＡＡの柔軟性を提供するものである。こうしたリンカーは、一般に柔軟なリンカーと称される。好適なリンカーは、容易に選択でき、かつ例えば、１アミノ酸（Ｇｌｙなど）〜２０アミノ酸、２アミノ酸〜１５アミノ酸、３アミノ酸〜１２アミノ酸、４アミノ酸〜１０アミノ酸、５アミノ酸〜９アミノ酸、６アミノ酸〜８アミノ酸、または７アミノ酸〜８アミノ酸など好適な異なる長さのいずれであってもよく、また、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸長であり得る。
【０１５２】
例示的な柔軟なリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１）および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２）が挙げられ、式中、ｎは少なくとも１つの整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、および当技術分野で公知である他の柔軟なリンカーが挙げられる。グリシンおよびグリシン−セリンポリマーは比較的構造化されていないため、成分間の中性のつなぎとして機能し得る。グリシンは、アラニンよりもはるかに多くのｐｈｉ−ｐｓｉスペースにアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限が少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ、Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２（１９９２年）を参照されたい）。例示的な柔軟なリンカーとしては、これらに限定されないが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号３）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号４）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号５）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号６）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号７）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号８）などが挙げられる。当業者であれば、ＡＡの設計では、すべてがまたは部分的に柔軟なリンカーを含むことができ、これにより、リンカーが、柔軟なリンカーと、柔軟性の低い構造が付与されて、所望のＡＡ構造となる１つ以上の部分を含み得るようになることを認識するであろう。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、ＡＡは、シグナルペプチドも含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドはスペーサーを介してＡＡに結合する。いくつかの実施形態では、スペーサーは、シグナルペプチドの非存在下でＡＡに結合する。いくつかの実施形態では、スペーサーは、活性化可能抗体のＭＭに直接連結される。いくつかの実施形態では、スペーサーは、スペーサーＭＭ−ＣＭ−ＡＢのＮ末端からＣ末端への構造的配置でＡＡのＭＭに直接接合される。ＡＡのＭＭのＮ末端に直接接合されたスペーサーの例としては、ＱＧＱＳＧＱ（配列番号８８）が挙げられる。ＡＡのＭＭのＮ末端に直接接合したスペーサーの他の例としては、ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号３０５）、ＱＧＱＳＧ（配列番号３０６）、ＱＧＱＳ（配列番号３０７）、ＱＧＱ、ＱＧ、およびＱが挙げられる。ＡＡのＭＭのＮ末端に直接結合したスペーサーの他の例としては、ＧＱＳＧＱＧ（配列番号３５９）、ＱＳＧＱＧ（配列番号３６０）、ＳＧＱＧ（配列番号３６１）、ＧＱＧ、およびＧが挙げられる。いくつかの実施形態では、いずれのスペーサーもＭＭのＮ末端に接合していない。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧＱ（配列番号８８）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧＱＧ（配列番号３０５）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳＧ（配列番号３０６）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱＳ（配列番号３０７）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧＱを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＧを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸残基Ｑを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＧＱＳＧＱＧ（配列番号３５９）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＱＳＧＱＧ（配列番号３６０）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＳＧＱＧ（配列番号３６１）を含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列ＧＱＧを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、少なくともアミノ酸配列Ｇを含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは存在しない。
【０１５４】
結合された活性化可能抗体
本明細書で提供されるＡＡ組成物および方法では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体の活性（例えば、マスキング、活性化または結合活性）を損なうことなく、ＡＢ中の１つ以上のシステイン残基（例えばシステイン、リジン）への１つ以上の剤の付着が可能になる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物および方法では、ＭＭ内の１つ以上のジスルフィド結合を減少させるか、さもなければ妨害することなく、１つ以上の剤がＡＢ中の１つ以上のシステイン残基に付着できるようになる。本明細書で提供される組成物および方法は、１つ以上の剤、例えば、様々な治療剤、診断剤、および／または予防剤のいずれかに結合される活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を生成する。例えば、いくつかの実施形態では、この剤（複数可）のいずれもが、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体のＭＭに結合されていない。本明細書で提供される組成物および方法では、ＭＭが、切断されていない状態のＡＡのＡＢを効果的にかつ効率よくマスキングする能力を保持している結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体が産生される。本明細書で提供される組成物および方法では、ＣＭを切断できるプロテアーゼの存在下でＡＡが依然として活性化されている、すなわち切断されている、結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体が産生される。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡには、活性化可能抗体に結合した剤も含む。いくつかの実施形態では、結合された剤は、抗炎症剤および／または抗新生物剤などの治療剤である。こうした実施形態では、剤は、活性化可能抗体の炭水化物部分に結合される。例えば、いくつかの実施形態では、炭水化物部分は、活性化可能抗体内の抗体または抗原結合断片の抗原結合領域の外側に配置される。いくつかの実施形態では、剤は、活性化可能抗体内の抗体または抗原結合断片のスルフヒドリル基に結合される。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、剤は、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片）、または放射性同位体（すなわち、ラジオコンジュゲート）などの細胞毒性剤である。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、剤は、例えば標識または他のマーカーなどの検出可能な部分である。例えば、剤は、放射標識アミノ酸、マークされたアビジンによって検出可能な１つ以上のビオチニル部分（例えば、蛍光マーカーを含むストレプトアビジンまたは光学的方法もしくは熱量測定法によって検出可能な酵素活性）、１つ以上の放射性同位体もしくは放射性核種、１つ以上の蛍光標識、１つ以上の酵素標識、および／または１つ以上の化学発光剤であるか、またはこれらを含む。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は、スペーサー分子によって付着している。
【０１５８】
本開示はまた、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片）、または放射性同位体（すなわち、ラジオコンジュゲート）などの細胞傷害剤に結合した抗体を含むイムノコンジュゲートにも関する。好適な細胞毒性剤としては、例えば、ドラスタチンおよびその誘導体（例えば、オーリスタチンＥ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＤ、ＤＭＡＦ、ＤＭＡＥ）が挙げられる。例えば、剤はモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、剤は、表１に列挙されている群から選択される剤である。いくつかの実施形態では、剤は、ドラスタチンである。いくつかの実施形態では、剤は、オーリスタチンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、オーリスタチンＥまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態では、剤は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、剤は、メイタンシノイドまたはメイタンシノイド誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、ＤＭ１またはＤＭ４である。いくつかの実施形態では、剤は、デュオカルマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、カリケアマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、ピロロベンゾジアゼピンである。例示的な実施形態では、剤は、ＤＭ４である。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、剤は、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリンリンカーまたはマレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリンリンカーを使用してＡＢに連結する。いくつかの実施形態では、剤は、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリンリンカーを使用してＡＢに連結する。いくつかの実施形態では、剤は、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリンリンカーを使用してＡＢに連結する。いくつかの実施形態では、剤は、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用してＡＢに連結されたモノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）であり、このリンカーペイロード構築物は、本明細書では「ｖｃ−ＭＭＡＤ」と称される。いくつかの実施形態では、剤は、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用してＡＢに連結されたモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、このリンカーペイロード構築物は本明細書では「ｖｃ−ＭＭＡＥ」と称される。いくつかの実施形態では、剤は、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリンリンカーを使用してＡＢに連結する。いくつかの実施形態では、剤は、マレイミドビス−ＰＥＧ−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを使用してＡＢに連結されたモノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）であり、このリンカーペイロード構築物は、本明細書では「ＰＥＧ２−ｖｃ−ＭＭＡＤ」と称される。ｖｃ−ＭＭＡＤ、ｖｃ−ＭＭＡＥ、およびＰＥＧ２−ｖｃ−ＭＭＡＤの構造を以下に示す：
ｖｃ−ＭＭＡＤ：
【化１】
2020532509.tif 000008
ｖｃ−ＭＭＡＥ：
【化２】
2020532509.tif 000009
ＰＥＧ２−ｖｃ−ＭＭＡＤ。
【化３】
2020532509.tif 000010
【０１６０】
例示的な実施形態では、剤はリジンを介してＡＡに結合している。例示的な実施形態では、ＳＰＤＢ−ＤＭ４は、ＡＡ上のリジンのイプシロン−アミノ基、例えば、リジンのイプシロン−アミノ基を介して活性化可能抗体に付着される。
【０１６１】
例示的な実施形態では、剤はＤＭ４であり、リンカーＤＭは以下のとおりである：
【化４】
2020532509.tif 000011
【０１６２】
本開示は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）ペイロードに連結されているＡＡを含む結合型ＡＡも提供する。ここで、ＡＡは、標的、切断されていない状態のＡＡのＡＢの標的への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、およびＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）に特異的に結合する抗体または抗体結合断片（ＡＢ）を含み、ＣＭは、少なくとも１つのＭＭＰプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤ−結合型ＡＡは、剤をＡＢに付着させるためのいくつかの方法のいずれかを用いて結合することができる：（ａ）ＡＢの炭水化物部分への付着、または（ｂ）ＡＢのスルフヒドリル基への付着、または（ｃ）ＡＢのアミノ基への付着、または（ｄ）ＡＢのカルボキシレート基への付着。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介してＡＢに結合される。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介してＡＢ内のシステインに結合される。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介してＡＢ内のリジンに結合される。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、リンカーを介して、本明細書に開示される残基などのＡＢの別の残基に結合される。いくつかの実施形態では、リンカーはチオール含有リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは切断可能リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは切断不能リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、表６および表７に示されるリンカーからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＡおよびＭＭＡＤペイロードは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリンリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、ＡＡおよびＭＭＡＤペイロードは、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリンリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、ＡＡおよびＭＭＡＤペイロードは、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、ＡＡおよびＭＭＡＤペイロードは、マレイミドＰＥＧ−バリン−シトルリン−パラ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、ＭＭＡＤペイロードは、本明細書で開示される部分的還元および結合技術を用いてＡＢに結合される。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、本開示のリンカーのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）成分は、２つのエチレングリコールモノマー、３つのエチレングリコールモノマー、４つのエチレングリコールモノマー、５つのエチレングリコールモノマー、６つのエチレングリコールモノマー、７つのエチレングリコールモノマー、８つのエチレングリコールモノマー、９つのエチレングリコールモノマー、または少なくとも１０のエチレングリコールモノマーから形成される。本開示のいくつかの実施形態では、ＰＥＧ成分は分岐ポリマーである。本開示のいくつかの実施形態では、ＰＥＧ成分は非分岐ポリマーである。いくつかの実施形態では、ＰＥＧポリマー成分は、アミノ基またはその誘導体、カルボキシル基またはその誘導体、またはアミノ基またはその誘導体とカルボキシル基またはその誘導体の両方で官能化される。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、本開示のリンカーのＰＥＧ成分は、アミノテトラエチレングリコールカルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、本開示のリンカーのＰＥＧ成分は、アミノトリエチレングリコールカルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、本開示のリンカーのＰＥＧ成分は、アミノジエチレングリコールカルボキシル基またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、アミノ誘導体は、アミノ基と、アミノ基が結合しているカルボキシル基との間のアミド結合の形成である。いくつかの実施形態では、カルボキシル誘導体は、カルボキシル基と、カルボキシル基が結合しているアミノ基との間のアミド結合の形成である。いくつかの実施形態では、カルボキシル誘導体は、カルボキシル基と、カルボキシル基が結合しているヒドロキシル基との間のエステル結合の形成である。
【０１６７】
使用可能な酵素活性毒素およびその断片としては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファサルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ダイアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンが挙げられる。ラジオコンジュゲート抗体の産生には、様々な放射性核種が利用可能である。例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、および１８６Ｒｅが挙げられる。
【０１６８】
Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジピン酸ジメチルＨＣＬなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒド(ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ)など）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアナート（トリエン２，６−ジイソシアナートなど）、およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）など様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して、抗体と細胞毒性剤のコンジュゲートを作製する。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７年）に記載のとおり作製され得る。炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への結合のための例示的なキレート剤である（ＷＯ９４／１１０２６号を参照されたい）。
【０１６９】
表１は、本明細書に記載の開示で使用できる例示的な医薬剤のいくつかを列挙しているが、決して網羅的なリストであることを意味するものではない。
【表５】
2020532509.tif 000012
2020532509.tif 000013
2020532509.tif 000014
【０１７０】
当業者であれば、多種多様な可能な部分を本開示により生じる抗体に結合できることを認識するであろう（例えば、「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ」、Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ、Ｊｒ（編）、Ｃａｒｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９年）（その全内容は参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤の１つ以上の等量に結合される。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤の１当量に結合される。いくつかの実施形態では、ＡＡは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１０を超える当量の剤に結合される。いくつかの実施形態では、ＡＡは、同種の等量の数の結合された剤を有するＡＡの混合物の一部分である。いくつかの実施形態では、ＡＡは、異種の等量の数の結合された剤を有するＡＡの混合物の一部分である。いくつかの実施形態では、ＡＡの混合物は、各ＡＡに結合した剤の平均数が、０〜１、１〜２、２〜３、３〜４、４〜５、５〜６、６〜７、７〜８、８〜９、９〜１０、および１０以上であるようなものである。いくつかの実施形態では、ＡＡの混合物は、各ＡＡに結合された剤の平均数が１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上であるようなものである。いくつかの実施形態では、各ＡＡに結合した剤の平均数が３〜４であるようなＡＡの混合物が存在する。いくつかの実施形態では、各ＡＡに結合した剤の平均数が３．４〜３．８であるようなＡＡの混合物が存在する。いくつかの実施形態では、各ＡＡに結合した剤の平均数が３．４〜３．６であるようなＡＡの混合物が存在する。いくつかの実施形態では、リジンおよび／またはシステイン残基の数が活性化可能抗体の元のアミノ酸配列に対して増加または減少するように、ＡＡは１つ以上の部位特異的アミノ酸配列修飾を含み、このため、いくつかの実施形態では、それに対応させて、活性化可能抗体に結合され得る剤の数を増加もしくは減少させ、またはいくつかの実施形態では、部位特異的様式でＡＡへの剤の結合が制限されるようにする。いくつかの実施形態では、修飾されたＡＡは、部位特異的な様式で１つ以上の非天然アミノ酸により修飾され、このため、いくつかの実施形態では、剤の結合が非天然アミノ酸の部位のみに制限される。
【０１７２】
結合型活性化可能抗体を生成するための組成物および方法
活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、（結合型ＡＡを産生するための）剤に対する少なくとも１つの結合点を有する。いくつかの実施形態では、考えられるすべての結合点が使用されるわけではない。いくつかの実施形態では、いくつかの自然な接触点は、剤との結合に使用できなくなるように改変されるか、または除去される。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合点は、リジンのイプシロンアミノ基などの窒素原子である。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、１つ以上の結合点は、ジスルフィド結合に関与する硫黄原子である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合点は、鎖間ジスルフィド結合に関与する硫黄原子である。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合点は、鎖間スルフィド結合に関与する硫黄原子であるが、鎖内ジスルフィド結合に関与する硫黄原子ではない。いくつかの実施形態では、１つ以上の結合点は、システインの硫黄原子または硫黄原子を含む他のアミノ酸残基である。こうした残基は、抗体構造中に自然に存在し得るか、または部位特異的変異誘発、化学変換、もしくは非天然アミノ酸の誤取り込みにより抗体に取り込まれ得る。
【０１７４】
ＡＢ内に１つ以上の鎖間ジスルフィド結合およびＭＭ内に１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を有する活性化可能抗ＣＤ１６６抗体のコンジュゲートを調製する方法も提供され、遊離チオールと反応する薬物が提供される。この方法は、一般に、例えばＴＣＥＰなどの還元剤でＡＡ内の鎖間ジスルフィド結合を部分的に還元することを含み、かつ遊離チオールと反応する薬物を、部分的に還元された活性化可能抗体に結合させることを含む。本明細書で使用する場合、部分的還元という用語は、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体が還元剤と接触し、すべてのジスルフィド結合よりも少ない、例えば、すべての可能な結合部位よりも少ないが還元される状況を指す。いくつかの実施形態では、すべての可能な結合部位の９９％未満、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％または５％未満が還元される。
【０１７５】
さらに他の実施形態では、例えば、薬物などの剤を活性化可能抗ＣＤ１６６抗体に還元し、結合し、その結果、剤の配置の選択性が付与される方法が提供される。この方法は一般に、ＡＡのマスキング部分または他のＡＢ以外の部分の任意の結合部位が還元されないように還元剤により活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を部分的に還元すること、およびＡＢ中の鎖間チオールに剤を結合することを含む。結合部位（複数可）は、剤の所望の配置を可能にして、結合が所望の部位で生じ得るように選択する。還元剤は、例えば、ＴＣＥＰである。例えば、還元剤と活性化可能抗体の比、インキュベーションの長さ、インキュベーション中の温度、還元反応溶液のｐＨなどの還元反応条件は、ＭＭが切断されていない状態のＡＡのＡＢを効果的かつ効率的にマスキングする能力を保持している結合型ＡＡを産生する条件を特定することによって決定される。還元剤と活性化可能抗ＣＤ１６６抗体との比は、活性化可能抗体によって異なる。いくつかの実施形態では、還元剤と活性化可能抗ＣＤ１６６抗体との比は、約２０：１〜１：１、約１０：１〜１：１、約９：１〜１：１、約８：１〜１：１、約７：１〜１：１、約６：１〜１：１、約５：１〜１：１、約４：１〜１：１、約３：１〜１：１、約２：１〜１：１、約２０：１〜１：１．５、約１０：１〜１：１．５、約９：１〜１：１．５、約８：１〜１：１．５、約７：１〜１：１．５、約６：１〜１：１．５、約５：１〜１：１．５、約４：１〜１：１．５、約３：１〜１：１．５、約２：１〜１：１．５、約１．５：１〜１：１．５、または約１：１〜１：１．５の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約５：１〜１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約５：１〜１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約４：１〜１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約４：１〜１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約８：１〜約１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約２．５：１〜１：１の範囲である。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体のＡＢ中の鎖間ジスルフィド結合を還元し、剤、例えば薬物などのチオール含有剤を、結果として生じる鎖間チオールに結合し、ＡＢ上に剤（複数可）を選択的に配置する方法が提供される。この方法は一般に、ＡＢを還元剤により部分的に還元して、活性化可能抗体においてすべての可能な鎖間チオールを形成することなく、少なくとも２つの鎖間チオールを形成すること、および部分的に還元されたＡＢの鎖間チオールに剤を結合させることを含む。例えば、ＡＡのＡＢは、望ましい比の還元剤対活性化抗体で、約３７℃で約１時間部分的に還元される。いくつかの実施形態では、還元剤とＡＡとの比は、約２０：１〜１：１、約１０：１〜１：１、約９：１〜１：１、約８：１〜１：１、約７：１〜１：１、約６：１〜１：１、約５：１〜１：１、約４：１〜１：１、約３：１〜１：１、約２：１〜１：１、約２０：１〜１：１．５、約１０：１〜１：１．５、約９：１〜１：１．５、約８：１〜１：１．５、約７：１〜１：１．５、約６：１〜１：１．５、約５：１〜１：１．５、約４：１〜１：１．５、約３：１〜１：１．５、約２：１〜１：１．５、約１．５：１〜１：１．５、または約１：１〜１：１．５の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約５：１〜１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約５：１〜１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約４：１〜１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約４：１〜１．５：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約８：１〜約１：１の範囲である。いくつかの実施形態では、比は、約２．５：１〜１：１の範囲である。
【０１７７】
チオール含有試薬は、例えば、システインまたはＮ−アセチルシステインであり得る。還元剤は、例えば、ＴＣＥＰであり得る。いくつかの実施形態では、還元されたＡＡは、例えば、カラムクロマトグラフィー、透析、またはダイアフィルトレーションを使用して、結合の前に精製され得る。あるいは、部分的な還元の後、結合の前に、還元された抗体は精製されない。
【０１７８】
本発明はまた、活性化可能抗体内のいかなる鎖内ジスルフィド結合も妨害することなく、ＡＡ内の少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合が還元剤により還元されている、部分的に還元された活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を提供し、ここで、ＡＡは、ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）、切断されていない状態のＡＡのＡＢのＣＤ１６６標的への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、および、ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであるＣＭを含む。いくつかの実施形態では、ＭＭはＣＭを介してＡＢに連結される。いくつかの実施形態では、ＡＡの１つ以上の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されることはない。いくつかの実施形態では、ＡＡ内のＭＭの１つ以上の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されることはない。いくつかの実施形態では、切断されていない状態のＡＡは、以下のようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を有する：ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭ。いくつかの実施形態では、還元剤はＴＣＥＰである。
【０１７９】
本開示はまた、活性化可能抗体中のいかなる鎖内ジスルフィド結合も妨害することなく、
ＡＡ中の少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合が還元剤で還元されている部分還元ＡＡを提供し、ＡＡは、標的に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）、例えばＣＤ１６６、切断されていない状態でのＡＡのＡＢの標的への結合を阻害するマスキング部分（ＭＭ）、およびＡＢに連結された切断可能な部分（ＣＭ）を含み、ＣＭは、少なくとも１つのプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＭＭはＣＭを介してＡＢに連結される。いくつかの実施形態では、ＡＡの１つ以上の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されることはない。いくつかの実施形態では、ＡＡ内のＭＭの１つ以上の鎖内ジスルフィド結合は、還元剤によって妨害されることはない。いくつかの実施形態では、切断されていない状態のＡＡは、以下のようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を有する：ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭ。いくつかの実施形態では、還元剤はＴＣＥＰである。
【０１８０】
さらに他の実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体をリジンおよび／またはシステイン残基の定義された数および位置で提供することにより、薬物などの剤を還元させて、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体に結合させて、その結果、剤の配置に選択性をもたらす方法。いくつかの実施形態では、リジンおよび／またはシステイン残基の定義された数は、親抗体または活性化可能抗体のアミノ酸配列における対応する残基の数より多いかまたは少ない。いくつかの実施形態では、定義された数のリジンおよび／またはシステイン残基は、抗ＣＤ１６６抗体または活性化可能抗ＣＤ１６６抗体に結合することができる定義された数の剤同等物をもたらし得る。いくつかの実施形態では、定義された数のリジンおよび／またはシステイン残基は、部位特異的な方法で抗ＣＤ１６６抗体または活性化可能抗ＣＤ１６６抗体に結合され得る定義された数の剤同等物をもたらし得る。いくつかの実施形態では、改変Ａは部位特異的な方法で１つ以上の非天然アミノ酸により改変され、したがっていくつかの実施形態では、剤の結合が非天然アミノ酸の部位のみに制限される。いくつかの実施形態では、定義された数および位置のリジンおよび／またはシステイン残基を有する抗ＣＤ１６６抗体または活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、ＡＡのマスキング部分または他の非ＡＢ部分でのいかなる結合部位も還元されないように、本明細書で論じられる還元剤で部分的に還元され得、それによりこの剤がＡＢ中の鎖間チオールに結合され得る。
【０１８１】
連結は、抗体と他の部分がそれぞれの活性を保持している限り、２つの分子を結合するあらゆる化学反応によって達成され得る。この連結としては、共有結合、親和性結合、インターカレーション、座標結合、錯体形成など、多くの化学的メカニズムを挙げることができる。しかし、いくつかの実施形態では、結合は共有結合による結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合、または外部架橋分子の取り込みのいずれかによって達成され得る。多くの二価または多価の連結剤は、本開示の抗体などのタンパク質分子を他の分子に連結するのに有用である。例えば、代表的なカップリング剤としては、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン、およびヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物を挙げることができる。このリストは、当技術分野で公知である様々なクラスのカップリング剤を網羅することを意図するものではなく、より一般的なカップリング剤の例示である（Ｋｉｌｌｅｎ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ、Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５−２５４９（１９８４）年；Ｊａｎｓｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６２：１８５−２１６（１９８２年）；およびＶｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７年）を参照されたい）。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物および方法に加えて、結合型ＡＡは、ＡＡ配列に挿入されるかまたは別の方法で含まれる改変アミノ酸配列を介して部位特異的結合のために改変され得る。これらの改変アミノ酸配列は、結合型活性化可能抗体内のコンジュゲート剤の制御された配置および／または投薬量を可能にするように設計される。例えば、ＡＡは、軽鎖および重鎖の位置にシステイン置換を含むように操作して、反応性チオール基をもたらし、タンパク質の折り畳みおよびアセンブリに悪影響を与えることがないか、または抗原結合を変化させることのないようにすることができる。いくつかの実施形態では、ＡＡは、結合のための好適な部位を提供するために、ＡＡ内に１つ以上の非天然アミノ酸残基を含むか、または別の方法で導入するように操作することができる。いくつかの実施形態では、ＡＡは、ＡＡ配列内に酵素的に活性化可能なペプチド配列を含むか、または別の方法で導入するように操作することができる。
【０１８３】
好適なリンカーは文献に記載されている（例えば、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４４：２０１−２０８（１９８４年）（（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用について記載）を参照されたい）。また、オリゴペプチドリンカーを介して抗体に連結されたハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用について記載している米国特許第５，０３０，７１９号も参照されたい。いくつかの実施形態では、好適なリンカーとしては、（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−プリジル−ジチオ）−トルエン）（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３−（２−ピリジルジチオ）−プロピアンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．カタログ＃２１６５−Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣに結合しているスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，カタログ番号２４５１０）が挙げられる。追加のリンカーとしては、これらに限定されないが、ＳＭＣＣ（（スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）、スルホ−ＳＭＣＣ（スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート）、またはスルホ−ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート）が挙げられる。
【０１８４】
上記のリンカーは、異なる属性を有する成分を含むため、異なる物理化学的特性を有するコンジュゲートが得られる。例えば、アルキルカルボキシレートのスルホ−ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシレートのスルホ−ＮＨＳエステルよりも安定している。ＮＨＳエステル含有リンカーは、スルホＮＨＳエステルよりも溶解性が低い。さらに、リンカーＳＭＰＴには立体障害のあるジスルフィド結合が含まれており、安定性が向上したコンジュゲートが形成され得る。ジスルフィド連結は一般に、ジスルフィド連結がｉｎ  ｖｉｔｒｏでは切断されるため、他の連結よりも安定性が低く、その結果利用可能なコンジュゲートが少なくなる。スルホＮＨＳは、特に、カルボジイミドのカップリングの安定性を高めることができる。カルボジイミドのカップリング（ＥＤＣなど）は、スルホＮＨＳと組み合わせて使用したときに、カルボジイミドカップリング反応単独である場合よりも加水分解に対して耐性の高いエステルを形成する。例示的実施形態では、リンカーは、ＳＰＤＢである。別の例示的実施形態では、リンカーＳＰＤＢ剤は、ＤＭ４である。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、リンカーは切断可能である。いくつかの実施形態では、リンカーは切断不能である。いくつかの実施形態では、２つ以上のリンカーが存在する。２つ以上のリンカーはすべて同じである、すなわち切断可能か、もしくは切断不能であるか、または２つ以上のリンカーは異なる、すなわち少なくとも１つが切断可能であり、少なくとも１つが切断不能である。
【０１８６】
本開示では、剤をＡＢに付着させるためのいくつかの方法を利用する：（ａ）ＡＢの炭水化物部分への付着、または（ｂ）ＡＢのスルフヒドリル基への付着、または（ｃ）ＡＢのアミノ基への付着、または（ｄ）ＡＢのカルボキシレート基への付着。本開示によれば、ＡＢは、少なくとも２つの反応基を有する中間リンカーを介して剤に共有結合により付着させることができ、１つはＡＢと反応し、もう１つは剤と反応する。任意の適合性有機化合物を含み得るリンカーは、ＡＢ（または剤）との反応がＡＢの反応性および選択性に悪影響を与えないように選択され得る。さらに、リンカーが剤に付着されても、剤の活性が破壊されない場合もある。酸化抗体または酸化抗体断片との反応に好適であるリンカーには、一級アミン基、二級アミン基、ヒドラジン基、ヒドラジド基、ヒドロキシルアミン基、フェニルヒドラジン基、セミカルバジド基およびチオセミカルバジド基からなる群から選択されるアミンを含むものが含まれる。こうした反応性官能基は、リンカーの構造の一部として存在し得、またはこうした基を含まないリンカーの好適な化学修飾により導入され得る。
【０１８７】
本開示によれば、還元されたＡＢへの付着に好適であるリンカーとしては、還元抗体または断片のスルフヒドリル基と反応することができる特定の反応基を有するものが挙げられる。こうした反応基には、これらに限定されないが、反応性ハロアルキル基（例えば、ハロアセチル基など）、ｐ−メルクリベンゾエート基、およびマイケル型付加反応が可能な基（例えば、マレイミドおよびＭｉｔｒａ  ａｎｄ  Ｌａｗｔｏｎ、１９７９年、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０１：３０９７−３１１０によって記載された型の基が挙げられる）が挙げられる。
【０１８８】
本開示によれば、酸化Ａｂまたは還元Ａｂのいずれにも付着しない好適なリンカーとしては、Ａｂ内の非改変リジン残基に存在する一級アミノ基と反応できる特定の官能基を有するものが挙げられる。こうした反応基としては、これらに限定されないが、ＮＨＳカルボン酸または炭酸エステル、スルホＮＨＳカルボン酸または炭酸エステル、４−ニトロフェニルカルボン酸または炭酸エステル、ペンタフルオロフェニルカルボン酸または炭酸エステル、アシルイミダゾール、イソシアネート、およびイソチオシアネートが挙げられる。
【０１８９】
本開示によれば、酸化Ａｂまたは還元Ａｂのいずれにも付着しない好適なリンカーとしては、好適な試薬により活性化されている、Ａｂ内のアスパラギン酸またはグルタミン酸残基に存在するカルボン酸基と反応できる特定の官能基を有するリンカーが挙げられる。好適な活性化試薬としては、追加されたＮＨＳまたはスルホ−ＮＨＳの有無にかかわらず、ＥＤＣ、およびカルボキサミド形成に利用される他の脱水剤が挙げられる。これらの場合、好適なリンカーに存在する官能基としては、一級および二級アミン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、およびヒドラジドが挙げられる。
【０１９０】
リンカーがＡＢに付着する前または後に、剤をリンカーに付着させ得る。特定の用途では、リンカーが、関連する剤を含まないＡＢ−リンカー中間体を最初に生成することが望ましい場合もある。そして、特定の用途に応じて、特定の剤をリンカーに共有結合により付着させ得る。いくつかの実施形態では、ＡＢは、最初にＭＭ、ＣＭおよび関連するリンカーに付着され、次に結合の目的のためにリンカーに付着される。
【０１９１】
分岐リンカー：特定の実施形態では、剤を付着するための複数の部位を有する分岐リンカーが利用される。複数部位リンカーの場合、ＡＢへの単一の共有結合による付着により、複数の部位で剤を結合できるＡＢリンカー中間体が得られる。これらの部位は、アルデヒド基またはスルフヒドリル基、または剤が付着できるあらゆる化学部位であり得る。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、ＡＢの複数の部位に単一部位リンカーを付着させることにより、より高い比活性（またはＡＢに対する剤のより高い比）を達成することができる。この複数の部位は、２つの方法のいずれかによってＡＢに導入され得る。第１の方法では、同じＡＢ内に複数のアルデヒド基および／またはスルフヒドリル基を生成させ得る。第２の方法では、ＡＢのアルデヒドまたはスルフヒドリルに、その後リンカーへ付着させるための複数の官能部位を有する「分岐リンカー」を付着させ得る。分岐リンカーまたは複数部位リンカーの官能部位は、アルデヒド基もしくはスルフヒドリル基であってもよく、またはリンカーが付着し得るあらゆる化学部位であり得る。これら２つのアプローチを組み合わせること、すなわちＡＢの複数の部位で複数の部位リンカーを付着させることにより、さらに高い比活性が得られ得る。
【０１９３】
切断可能リンカー：これらに限定されないが、ｕ−プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、トリプシン、プラスミン、またはタンパク質分解活性を有する別の酵素など、補体系の酵素による切断を受けやすいペプチドリンカーは、本開示の一実施形態で使用され得る。本開示の一方法によれば、補体による切断を受けやすいリンカーを介して剤が付着される。抗体は、補体を活性化できるクラスから選択される。したがって、抗体−剤コンジュゲートは、補体カスケードを活性化し、標的部位で剤を放出する。本開示の別の方法によれば、剤は、ｕ−プラスミノーゲン活性化因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、プラスミン、またはトリプシンなどのタンパク質分解活性を有する酵素による切断を受けやすいリンカーを介して接着される。これらの切断可能リンカーは、例えば非限定的な例として、表１に示される細胞外毒素のいずれかを含む細胞外毒素を含む結合型ＡＡにおいて有用である。
【０１９４】
切断可能リンカー配列の非限定的な例を表２に示す。
【表６】
2020532509.tif 000015
【０１９５】
加えて、剤は、ＡＢへのジスルフィド結合（例えば、システイン分子上でのジスルフィド結合）を介して接着され得る。多くの腫瘍は、自然に高レベルのグルタチオン（還元剤）を放出するため、これによりジスルフィド結合が還元され、その後の送達部位において剤の放出がもたらされる。いくつかの実施形態では、ＣＭを修飾する還元剤は、結合された活性化可能抗体のリンカーも修飾する。
【０１９６】
スペーサーおよび切断可能エレメント：いくつかの実施形態では、剤と活性化可能抗体のＡＢとの間隔を最適化するような方法でリンカーを構築することが必要な場合がある。これは、一般的構造のリンカーを使用することによって達成され得る：
Ｗ‐（ＣＨ２）ｎ−Ｑ
式中、
Ｗは、−−ＮＨ−−ＣＨ２−−または−−ＣＨ２−−のいずれかであり、
Ｑは、アミノ酸、ペプチドであり、
ｎは、０〜２０の整数である。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、リンカーは、スペーサーエレメントおよび切断可能エレメントを含み得る。スペーサーエレメントは、切断可能エレメントが切断を担う酵素により接近しやすいように、切断可能エレメントをＡＢのコアから離して位置付けるのに役立つ。上記の特定の分岐リンカーは、スペーサーエレメントとして機能し得る。
【０１９８】
この議論を通じて、リンカーの剤への付着（またはスペーサーエレメントの切断可能エレメントへの付着、または切断可能エレメントの剤への付着）は、特定の付着様式または反応様式である必要はないことを理解されたい。好適な安定性および生物学的適合性の生成物をもたらすいかなる反応もすべて許容される。
【０１９９】
血清補体およびリンカーの選択：本開示の一方法によれば、剤の放出が望まれる場合、補体を活性化できるクラスの抗体であるＡＢが使用される。得られたコンジュゲートは、抗原に結合する能力および補体カスケードを活性化する能力の両方を保持する。したがって、本開示のこの実施形態によれば、剤は、切断可能リンカーまたは切断可能エレメントの一端に結合され、リンカー基の他端は、ＡＢの特定の部位に付着される。例えば、剤がヒドロキシ基またはアミノ基を有する場合には、ペプチド、アミノ酸または他の好適に選択されたリンカーのカルボキシ末端に、それぞれエステル結合またはアミド結合を介して付着させ得る。例えば、こうした剤は、カルボジイミド反応を介してリンカーペプチドに付着させ得る。剤がリンカーへの付着に干渉する官能基を含んでいる場合、これらの干渉官能基は、付着前に遮断され得、生成物コンジュゲートまたは中間体が作製されると遮断が解除され得る。次いで、リンカーの反対側またはアミノ末端が、直接使用されるか、または補体を活性化させ得るＡＢへ結合させるためにさらに修飾した後に使用される。
【０２００】
リンカー（またはリンカーのスペーサーエレメント）は、任意の所望の長さであり得、その一端は、活性化可能抗体のＡＢの特定部位に共有結合により付着され得る。リンカーまたはスペーサーエレメントの他端は、アミノ酸またはペプチドリンカーに付着させ得る。
【０２０１】
したがって、これらのコンジュゲートが補体の存在下で抗原に結合すると、剤をリンカーに付着させるアミドまたはエステル結合が切断され、その結果、活性型の剤が放出される。これらのコンジュゲートは、対象に投与されると、標的部位において剤の送達および放出を達成し、表１に記載されているとおり（これらに限定されないが）、特に医薬剤、抗生物質、代謝拮抗剤、抗増殖剤などのｉｎ  ｖｉｖｏ送達に特に有効である。
【０２０２】
補体活性化を有さない放出用リンカー：標的化送達のさらに別の用途では、補体カスケードの活性化が最終的に標的細胞を溶解するため、補体活性化を有さない剤の放出が望ましい。したがって、このアプローチは、標的細胞を死滅させることなく剤の送達および放出を達成する必要がある場合に有用である。これは、ホルモン、酵素、コルチコステロイド、神経伝達物質、遺伝子または酵素などの細胞メディエーターの標的細胞への送達が望まれる場合の目標である。これらのコンジュゲートは、血清プロテアーゼによる切断を軽度に受けやすいリンカーを介して補体を活性化できないＡＢに剤を付着させることにより調製され得る。このコンジュゲートが個体に投与されると、抗原抗体複合体が急速に形成されるのに対し、剤の切断はゆっくりと生じ、その結果、標的部位において化合物が放出される。
【０２０３】
生化学的架橋剤：いくつかの実施形態では、特定の生化学的架橋剤を使用して、ＡＡを１つ以上の治療剤に結合させ得る。架橋試薬は、２つの異なる分子の官能基を結び付ける分子架橋を形成する。２つの異なるタンパク質を段階的様式で連結するには、ヘテロ二官能性架橋剤を使用して、望ましくないホモポリマーが形成されないようにし得る。
【０２０４】
リソソームプロテアーゼにより切断可能なペプチジルリンカー、例えばＶａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ａｌａまたは他のジペプチドも有用である。さらに、リソソームの低ｐＨ環境において切断可能な酸に不安定であるリンカー、例えば、ビス−シアリルエーテルが使用され得る。他の好適なリンカーとしては、カテプシンに不安定である基質、特に酸性ｐＨで最適な機能を示す基質が挙げられる。
【０２０５】
例示的なヘテロ二官能性架橋剤は、表３で参照される。
【表７】
2020532509.tif 000016
【０２０６】
切断不能リンカーまたは直接的付着：本開示のいくつかの実施形態では、コンジュゲートは、剤が標的に送達されるが放出されないように設計され得る。これは、剤を直接、または切断不能リンカーを介してＡＢに付着させることにより達成され得る。
【０２０７】
これらの切断不能リンカーとしては、アミノ酸、ペプチド、Ｄ−アミノ酸、または本明細書に記載の方法によりＡＢへの付着にその後利用できる官能基を含むように修飾され得る他の有機化合物を挙げることができる。こうした有機リンカーの一般式は、
Ｗ−（ＣＨ２）ｎ−Ｑであり、
式中、
Ｗは、−−ＮＨ−−ＣＨ２−−または−−ＣＨ２−−のいずれかであり、
Ｑは、アミノ酸、ペプチドであり、
ｎは、０〜２０の整数である。
【０２０８】
切断不能コンジュゲート：いくつかの実施形態では、化合物は、補体を活性化しないＡＢに付着させ得る。補体を活性化ができないＡＢを使用する場合、この付着は、活性化された補体による切断を受けやすいリンカーを用いて、または活性化された補体による切断を受けにくいリンカーを使用して達成され得る。
【０２０９】
本明細書に開示される抗体は、免疫リポソームとしても配合され得る。抗体を含むリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５年）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０年）；および米国特許第４，４８５，０４５および同第４，５４４，５４５号に記載のものなど、当該分野で公知の方法により調製される。循環時間が延長されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０２１０】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生成され得る。リポソームは、定義された孔径のフィルターを通して押し出され、所望の直径のリポソームが得られる。本開示の抗体のＦａｂ’断片は、Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７：２８６−２８８（１９８２年）に記載されているリポソームにジスルフィド交換反応により結合され得る。
【０２１１】
多重特異性活性化可能抗体
いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合された活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、単一特異性である。
【０２１２】
本開示は、多重特異性抗ＣＤ１６６活性化可能抗体も提供する。したがって、いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合された活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、例えば非限定的な例として、二重特異性または三機能性などの多重特異性である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合された活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、プロ二重特異性Ｔ細胞エンガージャー（ＢＩＴＥ）分子の一部として配合される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合された活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、プロキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞または他の操作された受容体の一部として配合される。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、ＡＡまたはその抗原結合断片は、多重特異性ＡＡまたはその抗原結合断片に組み込まれ、多重特異性ＡＡの少なくとも１つのアームが標的に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＡＡまたはその抗原結合断片は、二重特異性抗体またはその抗原結合断片に組み込まれ、二重特異性ＡＡの少なくとも１つのアームはＣＤ１６６に特異的に結合する。
【０２１４】
本明細書で提供される多重特異性ＡＡは、ＣＤ１６６および少なくとも１つ以上の異なる抗原またはエピトープを認識し、かつ、多重特異性抗体の少なくとも１つの抗原またはエピトープ結合ドメインに連結されている少なくとも１つのマスキング部分（ＭＭ）であって、これによりＭＭが連結することにより、抗原またはエピトープ結合ドメインがその標的に結合する能力を低下させるようになるＭＭを含む、多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＭＭは、少なくとも１つのプロテアーゼの基質として機能する切断可能部分（ＣＭ）を介して多重特異性抗体の抗原結合ドメインまたはエピトープ結合ドメインに連結される。本明細書で提供される活性化可能な多重特異性抗体は、循環において安定であり、意図された治療部位および／または診断部位で活性化されるが、正常な、すなわち健康な組織では活性化されず、活性化された場合には、対応する未修飾の多重特異性抗体に少なくとも匹敵する標的への結合を呈する。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、免疫エフェクター細胞に係合するように設計されており、本明細書では、免疫エフェクター細胞係合多重特異性活性化可能抗体とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、白血球に係合するように設計されており、本明細書では、白血球係合多重特異性活性化可能抗体とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、Ｔ細胞に係合するように設計されており、本明細書では、Ｔ細胞係合多重特異性活性化可能抗体とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、骨髄性単核細胞、マクロファージ、および／または別の免疫エフェクター細胞などの白血球の表面抗原に係合する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は白血球である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、骨髄単核細胞などの単核細胞である。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、複数の標的および／または複数のエピトープと結合するか、またはさもなければ相互作用するように設計されており、本明細書では、多抗原標的活性化可能抗体とも呼ばれる。本明細書で使用される場合、用語「標的」および「抗原」は同義的に使用される。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本開示の免疫エフェクター細胞係合多重特異性ＡＡとしては、ＣＤ１６６に結合する標的化抗体またはその抗原結合断片、および免疫エフェクター細胞係合抗体またはその抗原結合部分が挙げられ、標的化抗体またはその抗原結合断片および／または免疫エフェクター細胞係合抗体またはその抗原結合部分のうちの少なくとも１つがマスキングされている。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞係合抗体またはその抗原結合断片としては、第１の免疫エフェクター細胞係合標的に結合する第１の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ１）が挙げられ、ＡＢ１は、マスキング部分（ＭＭ１）に付着し、ＭＭ１が連結することにより、第１の標的に結合するＡＢ１の能力を低下するようになる。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合断片としては、ＣＤ１６６に結合する第２の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはその断片が挙げられ、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に付着し、ＭＭ２が連結することにより、ＣＤ１６６に結合するＡＢ２の能力を低下するようになる。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞係合抗体またはその抗原結合断片としては、第１の免疫エフェクター細胞係合標的に結合する第１の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ１）が挙げられ、ＡＢ１は、マスキング部分（ＭＭ１）に付着し、ＭＭ１が連結することにより、第１の標的に結合するＡＢ１の能力が低下するようになり、標的化抗体またはその抗原結合断片としては、ＣＤ１６６に結合する第２の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはその断片が挙げられ、ＡＢ２は、マスキング部分（ＭＭ２）に付着し、ＭＭ２が連結することにより、ＣＤ１６６に結合するＡＢ２の能力が低下するようになる。いくつかの実施形態では、非免疫エフェクター細胞係合抗体は、癌標的化抗体である。いくつかの実施形態では、非免疫細胞エフェクター抗体はＩｇＧである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞係合抗体は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１６６標的化抗体（例えば、非免疫細胞エフェクター抗体）はＩｇＧであり、免疫エフェクター細胞係合抗体はｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は白血球である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は骨髄単核細胞である。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本開示のＴ細胞係合多重特異性ＡＡとしては、ＣＤ１６６標的化抗体またはその抗原結合断片、およびＴ細胞係合抗体またはその抗原結合部分が挙げられ、ＣＤ１６６標的化抗体またはその抗原結合断片および／またはＴ細胞係合抗体またはその抗原結合部分のうちの少なくとも１つがマスキングされている。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞係合抗体またはその抗原結合断片としては、第１のＴ細胞係合標的に結合する第１の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ１）が挙げられ、ＡＢ１は、マスキング部分（ＭＭ１）に付着し、ＭＭ１が連結することにより、第１の標的に結合するＡＢ１の能力を低下するようになる。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合断片としては、ＣＤ１６６に結合する第２の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはその断片が挙げられ、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に付着して、ＭＭ２が連結することにより、ＣＤ１６６に結合するＡＢ２の能力を低下するようになる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞係合抗体またはその抗原結合断片としては、第１のＴ細胞係合標的に結合する第１の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ１）が挙げられ、ＡＢ１は、マスキング部分（ＭＭ１）に付着し、ＭＭ１が連結することにより、第１の標的に結合するＡＢ１の能力が低下するようになり、標的化抗体またはその抗原結合断片としては、ＣＤ１６６に結合する第２の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはその断片が挙げられ、ＡＢ２は、マスキング部分（ＭＭ２）に付着し、ＭＭ２が連結することにより、ＣＤ１６６に結合するＡＢ２の能力が低下するようになる。
【０２１８】
免疫エフェクター細胞係合多重特異性活性化可能抗体のいくつかの実施形態では、１つの抗原はＣＤ１６６であり、別の抗原は典型的には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、骨髄単核細胞、マクロファージ、および／または他の免疫エフェクター細胞の表面に存在する刺激性または阻害性受容体であり、これらに限定されないが、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ５６、ＣＤ１３７、ＣＴＬＡ−４、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ４０、ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡが挙げられる。いくつかの実施形態では、抗原は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の表面に存在する刺激性受容体である。こうした刺激性受容体の例としては、これらに限定されないが、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−１ＢＢとも称される）、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＮＫＧ２Ｄ、およびＯＸ４０が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗原は、Ｔ細胞の表面に存在する阻害性受容体である。こうした阻害性受容体の例としては、これらに限定されないが、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、およびＮＫ発現ＫＩＲが挙げられる。Ｔ細胞表面抗原に特異性を付与する抗体ドメインは、Ｔ細胞受容体、ＮＫ細胞受容体、マクロファージ受容体、および／またはこれらに限定されないが、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７Ｈ３、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、またはＴＮＦＳＦ９などの他の免疫エフェクター細胞受容体に結合するリガンドまたはリガンドドメインによって置換されてもよい。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞係合多重特異性ＡＡとしては、抗ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε、本明細書ではＣＤ３εＴ細胞およびＣＤ３とも称する）ｓｃＦｖおよび標的化抗体またはその抗原結合断片が挙げられ、抗ＣＤ３εｓｃＦｖおよび／または標的化抗体またはその抗原結合部分のうちの少なくとも１つがマスキングされている。いくつかの実施形態では、ＣＤ３εｓｃＦｖとしては、ＣＤ３εに結合する第１の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ１）が挙げられ、ＡＢ１は、マスキング部分（ＭＭ１）に付着し、ＭＭ１が連結することにより、ＣＤ３εに結合するＡＢ１の能力を低下するようになる。いくつかの実施形態では、標的化抗体またはその抗原結合断片としては、ＣＤ１６６に結合する第２の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはその断片が挙げられ、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に付着し、ＭＭ２が連結することにより、ＣＤ１６６に結合するＡＢ２の能力を低下するようになる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ε  ｓｃＦｖとしては、ＣＤ３εに結合する第１の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ１）が挙げられ、ＡＢ１はマスキング部分（ＭＭ１）に付着し、ＭＭ１が連結することにより、ＣＤ３εに結合するＡＢ１の能力が低下するようになり、標的化抗体またはその抗原結合断片としては、ＣＤ１６６に結合する第２の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ２）を含む第２の抗体またはその断片が挙げられ、ＡＢ２はマスキング部分（ＭＭ２）に付着し、ＭＭ２が連結することにより、ＣＤ１６６に結合するＡＢ２の能力が低下するようになる。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、多抗原標的化抗体および／または多抗原標的化ＡＡは、少なくとも、第１の標的および／または第１のエピトープに結合する第１の抗体またはその抗原結合断片、ならびに第２の標的および／または第２のエピトープに結合する第２の抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、多抗原標的化抗体および／または多抗原標的化ＡＡは、２つ以上の異なる標的に結合する。いくつかの実施形態では、多抗原標的化抗体および／または多抗原標的化ＡＡは、同じ標的上の２つ以上の異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、多抗原標的化抗体および／または多抗原標的化ＡＡは、同じ標的上の２つ以上の異なる標的および２つ以上の異なるエピトープの組み合わせに結合する。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、ＩｇＧを含む多重特異性ＡＡは、マスキングされているＩｇＧ可変ドメインを有する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖを含む多重特異性ＡＡは、マスキングされているｓｃＦｖドメインを有する。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの両方を有し、ＩｇＧ可変ドメインのうちの少なくとも１つは、マスキング部分に連結されている。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの両方を有し、ｓｃＦｖドメインのうちの少なくとも１つは、マスキング部分に連結されている。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの両方を有し、ＩｇＧ可変ドメインのうちの少なくとも１つは、マスキング部分に連結され、ｓｃＦｖドメインのうちの少なくとも１つは、マスキング部分に連結されている。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの両方を有し、ＩｇＧ可変ドメインおよびｓｃＦｖドメインの各々は、それ自身のマスキング部分に連結されている。いくつかの実施形態では、多特異性ＡＡの１つの抗体ドメインは、標的抗原に対する特異性を有し、別の抗体ドメインは、Ｔ細胞表面抗原に対する特異性を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡの１つの抗体ドメインは、標的抗原に対して特異性を有し、別の抗体ドメインは、別の標的抗原に対して特異性を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡの１つの抗体ドメインは、標的抗原のあるエピトープに対して特異性を有し、別の抗体ドメインは、標的抗原の別のエピトープに対して特異性を有する。
【０２２２】
多重特異性活性化可能抗体では、ｓｃＦｖは、ＩｇＧ活性化可能抗体の重鎖のカルボキシル末端、ＩｇＧ活性化可能抗体の軽鎖のカルボキシル末端、またはＩｇＧ活性化可能抗体の重鎖および軽鎖の両方のカルボキシル末端に融合させ得る。多重特異性活性化可能抗体では、ｓｃＦｖは、ＩｇＧ活性化可能抗体の重鎖のアミノ末端、ＩｇＧ活性化可能抗体の軽鎖のアミノ末端、またはＩｇＧ活性化可能抗体の重鎖および軽鎖の両方のアミノ末端に融合させ得る。多重特異性活性化可能抗体では、ｓｃＦｖは、ＩｇＧ活性化可能抗体の１つ以上のカルボキシル末端および１つ以上のアミノ末端の任意の組み合わせに融合させ得る。いくつかの実施形態では、切断可能部分（ＣＭ）に連結されているマスキング部分（ＭＭ）は、ＩｇＧの抗原結合ドメインに付着し、そのドメインをマスキングする。いくつかの実施形態では、切断可能部分（ＣＭ）に連結されているマスキング部分（ＭＭ）は、少なくとも１つのｓｃＦｖの抗原結合ドメインに付着し、そのドメインをマスキングする。いくつかの実施形態では、切断可能部分（ＣＭ）に連結されているマスキング部分（ＭＭ）は、ＩｇＧの抗原結合ドメインに付着して、そのドメインをマスキングし、切断可能部分（ＣＭ）に連結されているマスキング部分（ＭＭ）は、少なくとも１つのｓｃＦｖの抗原結合ドメインに付着して、そのドメインをマスキングする。
【０２２３】
本開示は、これらに限定するものではないが、以下の多重特異性ＡＡ構造体の例を提供する：（ＶＬ−ＣＬ）２：（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２；（ＶＬ−ＣＬ）２：（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２；（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ−ＣＬ）２：（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊）２；（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ−ＣＬ）２：（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊）２；（ＶＬ−ＣＬ）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ−ＣＬ）２：（ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ−ＣＬ）２：（ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＬ−ＣＬ）２：（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＬ−ＣＬ）２：（ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊）２：（ＭＭ−Ｌ１−ＣＭ−Ｌ２−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２；または（ＶＬ−ＣＬ−Ｌ４−ＶＬ＊−Ｌ３−ＶＨ＊−Ｌ２−ＣＭ−Ｌ１−ＭＭ）２：（ＶＨ＊−Ｌ３−ＶＬ＊−Ｌ４−ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３）２。ＶＬおよびＶＨは、ＩｇＧに含まれる第１の特異性の軽可変ドメインおよび重可変ドメインを表す。ＶＬ＊およびＶＨ＊は、ｓｃＦｖに含まれる第２の特異性の可変ドメインを表す。Ｌ１は、マスキング部分（ＭＭ）とＣＭ（ＣＭ）とを接続するリンカーペプチドである。Ｌ２は、ＣＭ（ＣＭ）と抗体を接続するリンカーペプチドである。Ｌ３は、ｓｃＦｖの可変ドメインを接続するリンカーペプチドである。Ｌ４は、第１の特異性の抗体を第２の特異性の抗体に接続するリンカーペプチドである。ＣＬは、軽鎖定常ドメインである。ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３は、重鎖定常ドメインである。第１および第２の特異性は、任意の抗原またはエピトープに対するものであり得る。
【０２２４】
Ｔ細胞係合多特異性活性化可能抗体のいくつかの実施形態では、１つの抗原は、ＣＤ１６６であり、別の抗原は、典型的には、通常、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、骨髄単核細胞、マクロファージ、および／または他の免疫エフェクター細胞の表面に存在する刺激性（本明細書では活性化とも呼ばれる）または阻害性受容体であり、これらに限定されないが、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ５６、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９とも称される）、ＣＴＬＡ−４、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ４０、ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡが挙げられる。Ｔ細胞表面抗原に特異性を付与する抗体ドメインは、Ｔ細胞受容体、ＮＫ細胞受容体、マクロファージ受容体、および／または他の免疫エフェクター細胞受容体に結合するリガンドまたはリガンドドメインによって置換されてもよい。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、標的化抗体は、本明細書に開示の抗ＣＤ１６６抗体である。いくつかの実施形態では、標的化抗体は、活性化可能抗体の形態であり得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｐｒｏ−ｓｃＦｖの形態であり得る（例えば、ＷＯ２００９／０２５８４６号、ＷＯ２０１０／０８１１７３号を参照されたい）。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはＣＤ３εへの結合に特異的であり、ＣＤ３εに結合する抗体またはその断片、例えばＣＨ２５２７、ＦＮ１８、Ｈ２Ｃ、ＯＫＴ３、２Ｃ１１、ＵＣＨＴ１、またはＶ９を含むか、またはそれらに由来する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＴＬＡ−４（本明細書ではＣＴＬＡおよびＣＴＬＡ４とも称される）の結合に特異的である。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４  ｓｃＦｖとしては、次のアミノ酸配列が挙げられる：
【表８】
2020532509.tif 000017
【０２２８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４  ｓｃＦｖは、配列番号１１７のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３eｓｃＦｖとしては、次のアミノ酸配列が挙げられる：
【表９】
2020532509.tif 000018
【０２３０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３  εｓｃＦｖは、配列番号１１８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上同一であるアミノ酸配列を含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、１つ以上のＴ細胞、１つ以上のＮＫ細胞、および／または１つ以上のマクロファージの結合に特異的である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｂ７−Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ５６、ＣＤ１３７、ＣＴＬＡ−４、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ４０、ＰＤ−１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡからなる群から選択される標的の結合に特異的である。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡには、ＡＢに結合した剤も含む。いくつかの実施形態では、剤は治療剤である。いくつかの実施形態では、剤は抗腫瘍剤である。いくつかの実施形態では、剤は、毒素またはその断片である。いくつかの実施形態では、剤は、リンカーを介して多重特異性ＡＡに結合する。いくつかの実施形態では、剤は、切断可能リンカーを介してＡＢに結合する。いくつかの実施形態では、リンカーは切断不能リンカーである。いくつかの実施形態では、剤は微小管阻害剤である。いくつかの実施形態では、剤は、ＤＮＡアルキル化剤またはＤＮＡ挿入剤などの核酸損傷剤、または他のＤＮＡ損傷剤である。いくつかの実施形態では、リンカーは切断可能リンカーである。いくつかの実施形態では、剤は、表１に列挙されている群から選択される剤である。いくつかの実施形態では、剤は、ドラスタチンである。いくつかの実施形態では、剤は、オーリスタチンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、オーリスタチンＥまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。いくつかの実施形態では、剤は、モノメチルオーリスタチンＤ（ＭＭＡＤ）である。いくつかの実施形態では、剤は、メイタンシノイドまたはメイタンシノイド誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、ＤＭ１またはＤＭ４である。いくつかの実施形態では、剤は、デュオカルマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、カリケアマイシンまたはその誘導体である。いくつかの実施形態では、剤は、ピロロベンゾジアゼピンである。いくつかの実施形態では、剤は、ピロロベンゾジアゼピン二量体である。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、検出可能な部分も含む。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は診断剤である。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、天然で１つ以上のジスルフィド結合を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、操作して、１つ以上のジスルフィド結合を含むようにすることができる。
【０２３５】
本開示はまた、本明細書に記載の多重特異性ＡＡをコードする単離された核酸分子、ならびにこれらの単離された核酸配列を含むベクターを提供する。本開示は、活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で細胞を培養することにより多重特異性ＡＡを産生する方法を提供し、細胞はこうした核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、こうしたベクターを含む。
【０２３６】
本開示はまた、（ａ）多重特異性活性化可能の発現をもたらす条件下で、多重特異性ＡＡをコードする核酸構築物を含む細胞を培養すること、および（ｂ）多重特異性活性化可能抗体を回収すること、により、本開示の多重特異性ＡＡを製造する方法を提供する。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭとしては、本明細書で開示されるＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭのいずれかを含む。
【０２３７】
本開示は、第１の標的または第１のエピトープに特異的に結合する少なくとも第１の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ１）および第２の標的または第２のエピトープに結合する第２の抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ２）を含み、少なくともＡＢ１は、マスキング部分（ＭＭ１）に連結させるか、またはさもなければ付着させ、これにより、ＭＭ１が連結することにより、標的に結合するＡＢ１の能力を低下するようになる、多重特異性ＡＡおよび／または多重特異性ＡＡ組成物も提供する。いくつかの実施形態では、ＭＭ１は、プロテアーゼ、例えば、対象において治療部位または診断部位でＡＢ１の標的と共局在するプロテアーゼの基質を含む第１の切断可能部分（ＣＭ１）配列を介してＡＢ１に連結される。本明細書で提供される多重特異性ＡＡは、循環において安定であり、意図された治療部位および／または診断部位で活性化されるが、正常な、すなわち健康な組織では活性化されず、活性化されたときには、対応する未修飾の多重特異性抗体に少なくとも匹敵するＡＢ１の標的への結合を呈する。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭとしては、本明細書で開示されるＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭのいずれかを含む。
【０２３８】
本開示はまた、標的に特異的に結合する少なくとも第１の抗体または抗体断片（ＡＢ１）および第２の抗体または抗体断片（ＡＢ２）を含む多重特異性ＡＡを含む組成物および方法を提供し、ここでは、多重特異性ＡＡ中の少なくとも第１のＡＢは、ＡＢ１がその標的に結合する能力を低下させるマスキング部分（ＭＭ１）に連結されている。いくつかの実施形態では、各ＡＢは、各標的に対するその対応するＡＢの能力を低下させるＭＭに連結される。例えば、二重特異性ＡＡの実施形態では、ＡＢ１は、その標的に結合するＡＢ１の能力を低下させる第１のマスキング部分（ＭＭ１）に連結され、ＡＢ２は、その標的に結合するＡＢ２の能力を低下させる第２マスキング部分（ＭＭ２）に連結される。いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは３つ以上のＡＢ領域を含む；こうした実施形態では、多重特異性活性化可能抗体の各ＡＢについて、ＡＢ１は、その標的に結合するＡＢ１の能力を低下させる第１のマスキング部分（ＭＭ１）に連結され、ＡＢ２は、その標的に結合するＡＢ２の能力を低下させる第２マスキング部分（ＭＭ２）に連結され、ＡＢ３は、その標的に結合するＡＢ３の能力を低下させる第３マスキング部分（ＭＭ３）に連結される。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭとしては、本明細書で開示されるＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭのいずれかを含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、プロテアーゼの基質である少なくとも１つの切断可能部分（ＣＭ）をさらに含み、ＣＭにより、ＭＭがＡＢに連結する。例えば、いくつかの実施形態では、多重特異性ＡＡは、標的に特異的に結合する少なくとも第１の抗体または抗体断片（ＡＢ１）と、第２の抗体または抗体断片（ＡＢ２）とを含み、多重特異性ＡＡ中の少なくとも第１のＡＢは、第１の切断可能部分（ＣＭ１）を介して、その標的に結合するＡＢ１の能力を低下させるマスキング部分（ＭＭ１）に連結される。いくつかの二重特異性ＡＡの実施形態では、ＡＢ１は、ＣＭ１を介してＭＭ１に連結され、ＡＢ２は、第２の切断可能部分（ＣＭ２）を介して、標的に結合するＡＢ２の能力を低下させる第２のマスキング部分（ＭＭ２）に連結される。これらの実施形態のいくつかでは、多重特異性ＡＡは、３つ以上のＡＢ領域で構成されている。いくつかの実施形態では、多重特異性活性化可能抗体の各ＡＢについて、ＡＢ１は、ＣＭ１を介してＭＭ１に連結され、ＡＢ２は、ＣＭ２を介してＭＭ２に連結され、ＡＢ３は、第３の切断可能部分（ＣＭ３）を介して、その標的に結合するＡＢ３の能力を低下させる第３のマスキング部分（ＭＭ３）に連結される。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭとしては、本明細書で開示されるＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭのいずれかを含む。
【０２４０】
非結合性立体部分を有する活性化可能抗体または非結合性立体部分の結合パートナー
本開示は、非結合性立体部分（ＮＢ）または非結合性立体部分の結合パートナー（ＢＰ）を含むＡＡも提供し、ＢＰは、ＮＢを活性化可能抗体に動員するか、またはさもなければ引き付ける。本明細書で提供されるＡＡとしては、例えば、非結合性立体部分（ＮＢ）、切断可能リンカー（ＣＬ）、および標的に結合する抗体または抗体断片（ＡＢ）を含むＡＡ、非結合性立体部分（ＢＰ）の結合パートナー、ＣＬ、およびＡＢを含むＡＡ、ならびにＮＢが動員されているＢＰ、ＣＬ、および標的に結合するＡＢを含むＡＡが挙げられる。ＮＢが、ＡＡのＣＬおよびＡＢに共有結合により連結されているか、またはＮＢが、ＡＡのＣＬおよびＡＢに共有結合により連結されているＢＰとの相互作用によって会合されているＡＡは、本明細書では「ＮＢ含有活性化可能抗体」と称する。活性化可能または切替え可能とは、ＡＡが阻害されているか、マスキングされているか、または切断されていない状態（すなわち、第１のコンフォメーション）にあるときに標的に対する第１の結合レベル、およびＡＡが阻害されていないか、マスキングされていないかつ／または切断されている状態にあるときに標的に対する第２の結合レベル（すなわち、第２のコンフォメーション、すなわち活性化抗体）をＡＡが呈することを意味し、ここで、第２の標的結合レベルは、第１の標的結合レベルよりも大きい。ＡＡ組成物は、従来の抗体治療薬と比較して、生物学的利用能の増加およびより好ましい生体内分布を呈し得る。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、ＡＢがマスクされていないか、さもなければ非治療部位および／または非診断部位への結合を阻害されていない場合、ＡＡが、こうした部位での結合から生じる可能性のある毒性および／または有害な副作用の低減をもたらす。
【０２４２】
非結合性立体部分（ＮＢ）を含む抗ＣＤ１６６ＡＡは、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ２０１３／１９２５４６号（その内容が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載された方法を使用して作製することができる。
【０２４３】
活性化可能抗体の産生
本開示はまた、ポリペプチドの発現をもたらす条件下で細胞を培養することにより、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体ポリペプチドを産生する方法を提供する。この方法では、細胞は、本明細書に記載の抗体および／またはＡＡをコードする単離核酸分子、および／またはこれらの単離核酸配列を含むベクターを含む。本開示は、抗体および／または活性化可能抗体の発現をもたらす条件下で細胞を培養することにより、抗体および／またはＡＡを産生する方法を提供する。この方法では、細胞は、本明細書に記載の抗体および／またはＡＡをコードする単離核酸分子、および／またはこれらの単離核酸配列を含むベクターを含む。
【０２４４】
本発明はまた、（ａ）活性化可能抗体の発現をもたらす条件下でＡＡをコードする核酸構築物を含む細胞を培養することであって、ＡＡが、マスキング部分（ＭＭ）、切断可能部分（ＣＭ）、およびＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）を含み、（ｉ）ＣＭがプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、（ｉｉ）ＣＭがＡＡに配置され、ＡＡが切断されていない状態の場合、ＭＭがＣＤ１６６へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断された状態である場合、ＭＭが、ＣＤ１６６へのＡＢの特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはない、培養することと、（ｂ）活性化可能抗体を回収することと、により、活性化状態でＣＤ１６６に結合するＡＡを製造する方法を提供する。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭとしては、本明細書で開示されるＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭのいずれかを含む。
【０２４５】
以下の例示的なヌクレオチド配列は、本明細書で提供されるＡＡおよび結合型ＡＡを作製および使用するために使用するために提供される。また、以下に提供されるヌクレオチド配列と少なくとも９０％、９５％、またはさらには９９％相同であるヌクレオチド配列が提供される。
【表１０】
2020532509.tif 000019
2020532509.tif 000020
【０２４６】
活性化可能抗体の治療的使用、および結合型活性化可能抗体
本開示は、ＣＤ１６６に結合するＡＡ、特にＣＤ１６６および／またはＣＤ１６６媒介シグナル伝達の少なくとも１つの生物学的活性を結合して中和するか、さもなければ阻害するＡＡを使用して、対象におけるＣＤ１６６の異常発現および／または活性に関連する症状の発症または進行を治療する、予防するおよび／または遅延させる、またはその症状を緩和する方法を提供する。
【０２４７】
本開示はまた、ＣＤ１６６に結合するＡＡ、特にＣＤ１６６を発現または異常発現している細胞の少なくとも１つの生物活性を結合、標的化、中和、殺傷、またはさもなければ阻害するＡＡを使用して、対象において、ＣＤ１６６を発現しているまたはＣＤ１６６を異常発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および／または活性に関連する症状の発症または進行を治療する、予防する、および／または遅延させる、またはその症状を緩和する方法を提供する。
【０２４８】
本開示はまた、ＣＤ１６６に結合するＡＡ、特にＣＤ１６６を発現している細胞の少なくとも１つの生物活性を結合、標的化、中和、殺傷、またはさもなければ阻害するＡＡを使用して、対象においてＣＤ１６６を発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および／または活性に関連する症状の発症または進行を治療する、予防する、および／または遅延させる、またはその症状を緩和する方法を提供する。
【０２４９】
本開示はまた、ＣＤ１６６に結合するＡＡ、特にＣＤ１６６を異常発現している細胞の少なくとも１つの生物活性を結合、標的化、中和、殺傷、またはさもなければ阻害するＡＡを使用して、対象において、ＣＤ１６６を異常発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および／または活性に関連する症状の発症または進行を治療する、予防する、および／または遅延させる、またはその症状を緩和する方法を提供する。
【０２５０】
本開示はまた、本明細書に記載の治療有効量の抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を、それを必要とする対象に投与することにより、対象において、癌の進行を予防する、遅延させる、またはその症状を治療する、緩和する、またはさもなければ癌を改善する方法を提供する。
【０２５１】
本開示はまた、対象において、ＣＤ１６６に結合するＡＡ、特に、ＣＤ１６６の異常発現および／または活性に関連する症状の発症または進行を治療すること、予防すること、および／または遅延させること、またはその症状を緩和することに使用するための、ＣＤ１６６および／またはＣＤ１６６シグナル伝達の少なくとも１つの生物学的活性を結合および中和またはさもなければ阻害するＡＡを提供する。
【０２５２】
本開示はまた、対象において、ＣＤ１６６を発現しているかまたは異常発現している細胞の存在、成長、増殖、転移、および／または活性に関連する症状の発症または進行を治療する、予防する、および／または遅延させる、またはその症状を緩和する際に使用するためにＣＤ１６６に結合するＡＡ、特にＣＤ１６６を発現しているかまたは異常発現している細胞の少なくとも１つの生物活性を結合、標的化、中和、殺傷、またはさもなければ阻害するＡＡを提供する。
【０２５３】
本開示はまた、対象において、癌の進行を予防する、遅延させる、その症状を治療する、緩和する、またはさもなければ癌を改善する際に使用するための、本明細書に記載の抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を提供する。ここでは、抗体は治療有効量で投与するためのものである。
【０２５４】
非限定的な例として、本開示のＡＡは、上皮または扁平上皮癌、カルチノイド、および／または神経内分泌癌の発症または進行を治療する、予防するおよび／または遅延させるために使用することができる。癌の例としては、これらに限定されないが、腺癌、胆道癌、膀胱癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌、Ｈｅｒ２陰性の乳癌、エストロゲン受容体陽性の乳癌）、カルチノイド癌、子宮頸癌、胆管癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、神経膠腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、白血病、肝癌、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ、ＳＣＬＣ）、リンパ腫、黒色腫、口腔咽頭癌（ｏｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、卵巣癌、膵癌、前立腺癌（例えば、転移性去勢耐性前立腺癌）、腎癌、皮膚癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、および尿路上皮癌が挙げられる。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、癌は、任意の上皮癌または扁平上皮癌である。いくつかの実施形態では、癌は、前立腺癌、乳癌、肺癌、子宮頸癌、中咽頭癌、および／または頭頸部癌である。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、癌は、膀胱癌、骨癌、乳癌、カルチノイド、子宮頸癌、結腸直腸癌、結腸癌、子宮内膜癌、上皮癌、神経膠腫、頭頸部癌、肝癌、肺癌、黒色腫、中咽頭癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、腎癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、泌尿生殖器癌、および／または尿路上皮癌である。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、癌は、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、Ｒａｓ変異結腸直腸癌、まれな上皮癌、中咽頭癌、子宮頸癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、および／または前立腺癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ１６６発現腫瘍に関連している。いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ１６６発現腫瘍によるものである。
【０２５８】
これらの方法およびその使用の実施形態のいずれかにおいて使用される抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体、および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、これらの疾患のあらゆる段階において投与され得る。例えば、こうした抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体、および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、早期から転移まで、あらゆる段階の癌を患っている対象に投与できる。
【０２５９】
例示的な実施形態では、対象は、乳癌、去勢耐性前立腺癌（ＣＰＲＣ）、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）に罹患しているか、罹患している疑いがある。
【０２６０】
本明細書で提供されるように、治療される対象は、ヒト、非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル（例えば、ネコ、イヌ、ウマ）、家畜、作業動物、動物園動物などの哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象はコンパニオンアニマルである。いくつかの実施形態では、対象は獣医の治療を受けている動物である。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、乳癌に罹患している、または罹患している疑いがあり、本開示のＡＡ（例えば、組み合わせ５５または組み合わせ６０など）を受ける対象は、エストロゲン受容体発現（ＥＲ＋）腫瘍を有し、抗ホルモン療法を受けているものとし、かつ本開示のＡＡによる治療を受ける前に疾患の進行を経験している。いくつかの実施形態では、乳癌に罹患している、または罹患している疑いがあり、本開示のＡＡ（例えば、組み合わせ５５または組み合わせ６０など）を受ける対象は、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を有し、本開示のＡＡにより治療される前に２つ以上の前治療ラインを受けている。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、本開示のＡＡ、例えば組み合わせ５５または組み合わせ６０を受ける、去勢耐性前立腺癌に罹患している、または罹患していることが疑われる対象は、本開示のＡＡにより治療される前に１つ以上の前治療を受けている。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、本開示のＡＡ、例えば組み合わせ５５または組み合わせ６０を受ける、胆管癌に罹患している、または罹患していることが疑われる対象は、本開示のＡＡにより治療される前に１つ以上のゲムシタビン含有レジメンの前ラインが奏功していない。
【０２６４】
いくつかの実施形態では、本開示のＡＡ、例えば組み合わせ５５または組み合わせ６０を受ける、子宮内膜癌に罹患している、または罹患していることが疑われる対象は、本開示のＡＡにより治療される前に１つ以上の子宮外または進行性疾患のための白金含有レジメンを受けている。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、本開示のＡＡ、例えば組み合わせ５５または組み合わせ６０を受ける、上皮性卵巣癌に罹患している、または罹患していることが疑われる対象は、非乳癌（ＢＲＣＡ）突然変異（生殖細胞系または体細胞）を有するか、または不明なＢＲＣＡ突然変異状態を有するか、白金耐性または白金不応性の卵巣癌を有するか、のいずれかである。いくつかの実施形態では、本開示のＡＡ、例えば組み合わせ５５または組み合わせ６０を受ける、上皮性卵巣癌に罹患している、または罹患していることが疑われる対象は、ＢＲＣＡ突然変異を有するか、難治性であるか、またはさもなければＰＡＲＰ阻害剤に対して不適格である。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、本開示のＡＡ、例えば組み合わせ５５または組み合わせ６０を受ける、ＨＮＳＣＣに罹患している、または罹患していることが疑われる対象は、本開示のＡＡにより治療される前に、１つ以上の白金含有レジメンおよびＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤（対象の適応症および局所性が承認されている場合）を受けている。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、本開示のＡＡ、例えば組み合わせ５５または組み合わせ６０を受ける、ＮＳＣＬＣに罹患している、または罹患していることが疑われる対象は、本開示のＡＡにより治療される前に、１つ以上の白金含有レジメンを受けている。いくつかの実施形態では、本開示のＡＡ、例えば組み合わせ５５または組み合わせ６０を受ける、ＮＳＣＬＣに罹患している、または罹患していることが疑われる対象は、本開示のＡＡにより治療される前に、チェックポイント阻害剤（対象の適応症および局所性が承認されている場合）を事前に投与されている。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、以下のいずれかを有する対象は、乳癌、去勢耐性前立腺癌（ＣＰＲＣ）、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、ＨＮＳＣＣ、およびＮＳＣＬＣの治療のために本開示のＡＡを受ける資格がない場合がある：活動性または慢性の角膜障害、角膜移植歴、活動性ヘルペス性角膜炎、継続的な治療／モニターを必要とする活動性の眼の状態、臨床的に関連する活動性感染などの重篤な併発症、自己免疫疾患の合併または既往歴、最近の心筋梗塞などの重大な心疾患、多発性硬化症または他の脱髄疾患の既往歴、イートン−ランバート症候群（腫瘍随伴症候群）、過去６ヶ月以内の出血性または虚血性脳卒中の既往歴、またはアルコール性肝疾患、根底にある新生物によって引き起こされる潰瘍性病変を除く、治癒していない創傷（複数可）または潰瘍（複数可）、以前のモノクローナル抗体療法に対する重度のアレルギー反応またはアナフィラキシー反応の既往歴、現在、ワルファリンによる抗凝固療法、または投与前３ヶ月以内に大きい手術（全身麻酔を必要とする）を受けている。
【０２６９】
活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体およびその治療用配合物は、異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連する疾患または障害に罹患しているまたは罹患しやすい対象に投与される。異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連する疾患または障害に罹患しているまたは罹患しやすい対象は、当技術分野で公知の様々な方法のいずれかを使用して特定される。例えば、健康状態を評価するための身体検査、血液、尿、および／または便の分析など、様々な臨床検査および／または実験室検査のいずれかを使用して、癌または他の新生物病態に罹患している対象を特定する。例えば、健康状態を評価するための身体検査および／または体液分析、例えば、血液、尿、および／または便の分析など、様々な臨床検査および／または実験室検査のいずれかを使用して、炎症および／または炎症性障害に罹患している対象を特定する。
【０２７０】
抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連する疾患または障害を患っている対象へ投与することは、様々な実験室または臨床目的のいずれかが達成された場合には、奏功しているものとみなす。例えば、抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連する疾患または障害を患っている対象へ投与することは、その疾患または障害に関連する症状のうちの１つ以上が緩和するか、軽減するか、もしくは阻害されるか、またはさらなる（すなわち悪化した）状態に進行していない場合、奏功しているものとみなす。例えば、抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連する疾患または障害を患っている対象へ投与することは、疾患または障害が寛解に入った場合、またはさらなる（すなわち悪化した）状態に進行していない場合、奏功しているものとみなす。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体およびその治療用配合物を、癌または他の新生物病態に罹患している対象など、疾患または障害に罹患しているか、または罹患しやすい対象に投与する。ここでは、対象の疾患細胞がＣＤ１６６を発現している。いくつかの実施形態では、疾患細胞は異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連している。いくつかの実施形態では、疾患細胞は正常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連している。対象の疾患細胞がＣＤ１６６を発現する疾患または障害に罹患しているかまたは罹患しやすい対象は、当該分野で公知の様々な方法のいずれかを使用して特定される。例えば、健康状態を評価するための身体検査、血液、尿、および／または便の分析など、様々な臨床検査および／または実験室検査のいずれかを使用して、癌または他の新生物病態に罹患している対象を特定する。例えば、健康状態を評価するための身体検査および／または体液分析、例えば、血液、尿、および／または便の分析など、様々な臨床検査および／または実験室検査のいずれかを使用して、炎症および／または炎症性障害に罹患している対象を特定する。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体およびその治療用配合物を、癌または他の新生物病態に罹患している対象など、ＣＤ１６６を発現する細胞またはそのような細胞の存在、成長、増殖、転移、および／または活性に関連する疾患または障害に罹患している、または罹患しやすい対象に投与する。いくつかの実施形態では、細胞は異常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連している。いくつかの実施形態では、細胞は正常なＣＤ１６６の発現および／または活性に関連している。ＣＤ１６６を発現する細胞に関連する疾患または障害に罹患している、または罹患しやすい対象は、当該分野で公知の様々な方法のいずれかを使用して特定される。例えば、健康状態を評価するための身体検査、血液、尿、および／または便の分析など、様々な臨床検査および／または実験室検査のいずれかを使用して、癌または他の新生物病態に罹患している対象を特定する。例えば、健康状態を評価するための身体検査および／または体液分析、例えば、血液、尿、および／または便の分析など、様々な臨床検査および／または実験室検査のいずれかを使用して、炎症および／または炎症性障害に罹患している対象を特定する。
【０２７３】
抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を、ＣＤ１６６を発現している細胞に関連する疾患または障害を患っている対象に投与することは、様々な実験室または臨床目的のいずれかが達成された場合、奏功しているとみなす。例えば、抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を、ＣＤ１６６を発現している細胞に関連する疾患または障害を患っている対象に投与することは、その疾患または障害に関連する症状の１つ以上が緩和する、軽減する、もしくは阻害されるか、またはさらなる（すなわち悪化した）状態に進行していない場合、奏功しているとみなす。抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を、ＣＤ１６６を発現している細胞に関連する疾患または障害を患っている対象に投与することは、その疾患または障害が寛解に入った場合、またはさらなる（すなわち悪化した）状態に進行していない場合、奏功しているものとみなす。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、および／または免疫抑制剤などの１つ以上の追加の剤と組み合わせて、治療中および／または治療後に投与される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤（複数可）は、同時に投与される。例えば、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤（複数可）は、単一の組成物に配合され得るか、または２つ以上の別個の組成物として投与され得る。いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤（複数可）は、順次投与される。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、１つ以上の追加の剤、または追加の剤の組み合わせと併用して使用される。好適な追加の剤としては、例えば癌などの意図された用途のための現在の医薬品および／または外科療法を含む。例えば、抗ＣＤ１６６抗体、結合型抗ＣＤ１６６抗体、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、追加の化学療法剤または抗新生物剤と併用して使用できる。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、追加の剤（複数可）は、ドセタキセル、パクリタキセル、アブラキサン（すなわち、アルブミン結合パクリタキセル）、ドキソルビシン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シスプラチン、イリノテカン、およびゲムシタビンからなる群から選択される化学療法剤などの化学療法剤である。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、追加の剤（複数可）は、チェックポイント阻害剤、キナーゼ阻害剤、腫瘍微小環境での阻害剤を標的とする剤、および／またはＴ細胞またはＮＫアゴニストである。いくつかの実施形態では、追加の剤（複数可）は、単独の、または化学療法剤もしくは抗新生物剤などの別の追加の剤（複数可）と組み合わせた放射線療法である。いくつかの実施形態では、追加の剤（複数可）は、ワクチン、オンコウイルス、および／またはＤＣ活性化剤、例えば非限定的な例として、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストおよび／またはα−ＣＤ４０である。いくつかの実施形態では、追加の剤（複数可）は、ＡＤＣＣを介してまたは毒素への直接結合を介して、腫瘍を殺傷するように設計された腫瘍標的抗体（例えば、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ））である。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３、ＰＤ−１、ＣＤ１６６、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ−３、Ｂ７Ｈ４、およびＶｉｓｔａからなる群から選択される標的の阻害剤である。いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、Ｂ−ＲＡＦｉ、ＭＥＫｉ、およびイブルチニブなどのＢｔｋ阻害剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、キナーゼ阻害剤は、クリゾチニブである。いくつかの実施形態では、腫瘍微小環境阻害剤は、ＩＤＯ阻害剤、α−ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、α−ＣＣＲ４阻害剤、ＴＧＦ−β、骨髄由来サプレッサー細胞、またはＴ調節細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、アゴニストは、Ｏｘ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、およびＨＶＥＭからなる群から選択される。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＣＴＬＡ−４阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＬＡＧ−３阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＰＤ−１阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＣＤ１６６阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＴＩＧＩＴ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＴＩＭ−３阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｂ７Ｈ４阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｖｉｓｔａ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｂ−ＲＡＦｉ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＭＥＫｉ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｂｔｋ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、イブルチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤は、クリゾチニブである。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＩＤＯ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、α−ＣＳＦ１Ｒ阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、α−ＣＣＲ４阻害剤である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＴＧＦ−βである。いくつかの実施形態では、阻害剤は、骨髄由来サプレッサー細胞である。いくつかの実施形態では、阻害剤は、Ｔ調節細胞である。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、アゴニストは、Ｏｘ４０である。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＧＩＴＲである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＣＤ１３７である。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＩＣＯＳである。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＣＤ２７である。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ＨＶＥＭである。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、ＡＡおよび／または結合型ＡＡは、治療中および／または治療後、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、および／または免疫抑制剤などの１つ以上の追加の剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤は、単一の治療用組成物に配合され、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤は、同時に投与される。あるいは、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤は、互いに別個であり、例えば、それぞれが別個の治療用組成物に配合され、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／もしくは結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤は、同時に投与されるか、または活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／もしくは結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤は、治療レジメン中の異なる時間に投与される。例えば、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、追加の剤が投与される前に投与されるか、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、追加の剤が投与された後に投与されるか、または活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤は、交互に投与される。本明細書に記載のとおり、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤は、単回用量または複数回用量で投与される。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤（複数可）は、同時に投与される。例えば、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤（複数可）は、単一の組成物に配合され得るか、または２つ以上の別個の組成物として投与され得る。いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤（複数可）は、順次投与されるか、または活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および追加の剤は、治療レジメン中の異なる時間で投与される。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、治療中および／または治療後、非限定的な例として、化学療法剤、抗炎症剤、および／または免疫抑制剤、例えば、アルキル化剤、抗代謝剤、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞毒性抗生物質、および／または他の核酸損傷剤などの１つ以上の追加の剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、追加の剤は、パクリタキセルなどのタキサン（例えば、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、ゲムシタビンなどの抗代謝剤である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、カルボプラチンまたはシスプラチンなどの白金ベースの化学療法などのアルキル化剤である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、キナーゼ阻害剤、例えばソラフェニブまたはエルロチニブなどの標的化剤である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、別の抗体、例えばモノクローナル抗体（例えばベバシズマブ）、二重特異性抗体、または多重特異性抗体などの標的化剤である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブなどのプロテオソーム阻害剤である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、レノリドミンド（ｌｅｎｏｌｉｄｏｍｉｎｄｅ）またはＩＬ−２などの免疫調節剤である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、放射線である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、当業者によって治療の標準と考えられている剤である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、当業者によって公知である化学療法剤である。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、追加の剤は、別の抗体またはその抗原結合断片、別の結合型抗体またはその抗原結合断片、別のＡＡまたはその抗原結合断片および／または別の結合型ＡＡまたはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、第１の抗体またはその抗原結合断片、第１の結合型抗体またはその抗原結合断片、ＡＡまたはその抗原結合断片、および／または結合型ＡＡまたはその抗原結合断片と同じ標的、例えばＣＤ１６６に対する、別の抗体またはその抗原結合断片、別の結合型抗体またはその抗原結合断片、別のＡＡまたはその抗原結合断片および／または別の結合型ＡＡまたはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、追加の剤は、第１の抗体またはその抗原結合断片、第１の結合型抗体またはその抗原結合断片、ＡＡまたはその抗原結合断片、および／または結合型ＡＡまたはその抗原結合断片とは異なる標的に対する、別の抗体またはその抗原結合断片、別の結合型抗体またはその抗原結合断片、別のＡＡまたはその抗原結合断片および／または別の結合型ＡＡまたはその抗原結合断片である。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、追加の抗体またはその抗原結合断片、結合型抗体またはその抗原結合断片、ＡＡまたはその抗原結合断片、および／または結合型ＡＡまたはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ドメイン抗体、単鎖、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片ト、ｓｃＦｖ、ｓｃＡｂ、ｄＡｂ、単一ドメイン重鎖抗体、または単一ドメイン軽鎖抗体である。いくつかの実施形態では、追加の抗体またはその抗原結合断片、結合型抗体またはその抗原結合断片、ＡＡまたはその抗原結合断片、および／または結合型ＡＡまたはその抗原結合断片は、マウス、他のげっ歯類、キメラ、ヒト化または完全ヒトモノクローナル抗体である。
【０２８６】
本開示による治療エンティティの投与は、好適な担体、賦形剤、および改善された運搬、送達、耐性などをもたらすために配合物に組み込まれる他の剤と共に投与されることが理解されよう。多数の適切な配合物が、すべての医薬品化学者とって公知である処方、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１５版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９７５年））、特に第８７章（Ｂｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒ）において見出されている。これらの配合物としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（リポフェクチン（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型乳剤、カーボワックス乳剤（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカーボワックス含有半固体混合物が挙げられる。配合物中の有効成分が配合によって不活化されておらず、配合物が投与経路に生理学的に適合しており、かつ許容可能であるという条件で、前述の混合物はいずれも本開示による治療および治療法に適切であり得る。Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ」Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０−８（２０００年）、Ｗａｎｇ  Ｗ．「Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１−６０（２０００年）、Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ「Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ．」Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８９（８）：９６７−７８（２０００年）、Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１（１９９８年）および製薬化学者に公知である配合物、賦形剤、および担体に関連する追加情報の引用物も参照されたい。
【０２８７】
非限定的な例として、ＡＡおよび／または結合型ＡＡなどの活性化可能抗ＣＤ１６６抗体などの本開示の治療用配合物は、異常な標的の発現および／または活性に関連する疾患または障害を予防する、治療するまたはさもなければ改善するために使用される。例えば、ＡＡおよび／または結合型活性化可能抗体などの本開示の治療用配合物は、癌または他の新生物病態、炎症、炎症性障害、および／または自己免疫疾患を治療またはさもなければ改善するために使用される。いくつかの実施形態では、癌は、標的が発現している固形腫瘍または血液悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、標的が発現している固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、標的が発現している血液悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、標的は柔組織上（例えば、癌において、多くの場合、器官または組織の機能（複数可）を実行する器官または組織の一部分）に発現する。いくつかの実施形態では、標的は、細胞、組織、または器官で発現する。いくつかの実施形態では、標的は、間質（すなわち、細胞、組織、または器官の結合支持フレームワーク）に発現する。いくつかの実施形態では、標的は、骨芽細胞に発現している。いくつかの実施形態では、標的は、内皮（血管系）に発現している。いくつかの実施形態では、標的は、癌幹細胞に発現している。いくつかの実施形態では、ＡＡが結合する剤は、微小管阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＡＡが結合する剤は、核酸損傷剤である。
【０２８８】
予防、改善または治療の有効性は、例えば異常な標的発現および／または活性などの標的発現および／または活性に関連する疾患または障害を診断または治療するための任意の既知の方法に関連して決定される。対象の生存の延長、またはさもなければ対象における標的発現および／または活性、例えば異常な標的発現および／または活性に関連する疾患または障害の進行の遅延は、ＡＡおよび／または結合型ＡＡが臨床利益をもたらすことを示している。
【０２８９】
ＡＡおよび／または結合型ＡＡは、医薬組成物の形態で投与され得る。こうした組成物の調製に関わる原則および考慮事項、ならびに成分の選択におけるガイダンスが、例えば、以下により提供される；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ第１９版（Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏら編）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．：１９９５年；Ｄｒｕｇ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ、Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ、Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ、Ａｎｄ  Ｔｒｅｎｄｓ、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ，Ｐａ．，１９９４年；およびＰｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｉｎ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第４巻）、１９９１年、Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ。
【０２９０】
抗体断片が使用されるいくつかの実施形態では、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小の断片が選択される。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するようにペプチド分子を設計することができる。こうしたペプチドは、化学的に合成され、かつ／または組換えＤＮＡ技術によって生成され得る（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９−７８９３（１９９３年）を参照されたい）。配合物はまた、治療される特定の適応症に必要な複数の活性化合物（例えば、いくつかの実施形態では、相互に悪影響を及ぼすことのない補完的な活性を有するものなど）を含むことができる。いくつかの実施形態では、または追加として、組成物は、例えば細胞傷害剤、サイトカイン、化学療法剤、または成長阻害剤など、その機能を向上させる剤を含むことができる。こうした分子は、意図する目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
【０２９１】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）またはマクロエマルジョン中で、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル内に捕捉させ得る。
【０２９２】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される配合物は、無菌でなければならない。これは、滅菌ろ過膜を介するろ過により容易に得られる。
【０２９３】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、成形品、例えばフィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートとの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸共重合体、例えばＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体および酢酸リュープロリドから構成される注射可能なミクロスフェア）、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日以上にわたって分子を放出できるが、特定のヒドロゲルでは、タンパク質の放出は、より短い期間である。
【０２９４】
診断用での使用
本発明はまた、様々な診断および／または予防適応症において、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を使用する方法およびキットを提供する。例えば、本発明は、（ｉ）対象または試料を抗ＣＤ１６６活性化可能抗体と接触させることであって、抗ＣＤ１６６ＡＡは、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤によって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および目的の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片（ＡＢ）を含み、切断されていない非活性化状態の抗ＣＤ１６６ＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、（ａ）ＭＭは、ＡＢのＣＤ１６６への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭは、ＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、またＡＢの天然の結合パートナーの修飾型ではなく、また（ｂ）ＡＢが切断されていない非活性化状態にある場合、ＭＭはＡＢのＣＤ１６６への特異的結合に干渉し、ＡＢが切断された活性化状態にある場合、ＭＭは、ＡＢのＣＤ１６６への特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはない、接触させることによって、および（ｉｉ）対象または試料中の活性化抗ＣＤ１６６ＡＡのレベルを測定することであって、対象または試料中において活性化抗ＣＤ１６６ＡＡが検出可能なレベルである場合は、切断剤およびＣＤ１６６が対象または試料中に存在することが示され、対象または試料中において活性化抗ＣＤ１６６ＡＡが検出可能なレベルにない場合は、切断剤、ＣＤ１６６または切断剤とＣＤ１６６の両方が対象または試料中に存在していないことが示される、測定することによって、対象または試料中の切断剤および目的の標的の有無を検出するための方法およびキットを提供する。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、治療用の剤が結合している活性化可能抗ＣＤ１６６抗体である。いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、剤に結合していない。いくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに位置付けられる。いくつかの実施形態では、対象または試料中の活性化可能抗ＣＤ１６６抗体のレベルの測定は、活性化された抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して行うことができ、この試薬には、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０２９６】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体としては、検出可能な標識が挙げられる。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、検出可能な標識としては、イメージング剤、造影剤、酵素、蛍光標識、発色団、色素、１つ以上の金属イオン、またはリガンドベースの標識が挙げられる。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、イメージング剤は、放射性同位元素を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、放射性同位元素は、インジウムまたはテクネチウムである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、造影剤は、ヨウ素、ガドリニウムまたは酸化鉄である。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ−ガラクトシダーゼである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、蛍光標識は、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、修飾赤色蛍光タンパク質（ｍＲＦＰ）、赤色蛍光タンパク質ｔｄｉｍｅｒ２（ＲＦＰ  ｔｄｉｍｅｒ２）、ＨＣＲＥＤ、またはユーロピウム誘導体である。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、発光標識は、Ｎ−メチルアクリジウム誘導体である。これらの方法のいくつかの実施形態では、標識は、Ａｌｅｘ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０またはＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７５０などのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識である。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、リガンドベースの標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたは１つ以上のハプテンである。
【０２９７】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。これらの方法のいくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル（ネコ、イヌ、ウマなど）、家畜、作業動物、動物園動物などの非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は、げっ歯類である。
【０２９８】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、この方法はｉｎ  ｖｉｖｏ方法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、この方法はｉｎ  ｓｉｔｕ方法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、この方法はｅｘ  ｖｉｖｏ方法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、この方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法である。
【０２９９】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ１６６ＡＡ抗体で治療し、その後、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体をその必要のある対象に投与することにより治療することに好適である患者集団を識別するか、またはさもなければ細分するために使用される。例えば、標的（例えば、ＣＤ１６６）およびこれらの方法で試験される抗ＣＤ１６６ＡＡのＣＭ（ＣＭ）中において基質を切断するプロテアーゼの両方が陽性である患者は、こうしたＣＭを含むこうした抗ＣＤ１６６ＡＡにより治療するための好適な候補として特定され、次いで、患者には、試験を行った治療有効量の活性化可能抗ＣＤ１６６抗体および／または結合型活性化可能抗ＣＤ１６６抗体を投与する。同様に、これらの方法を使用して試験が行われたＡＡ中での標的（例えば、ＣＤ１６６）およびＣＭ中の基質を切断するプロテアーゼの一方または両方が陰性である患者は、別の治療形態の好適な候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、こうした患者は、治療に好適である抗ＣＤ１６６ＡＡ（例えば、疾患部位において患者によって切断されるＣＭを含む抗ＣＤ１６６ＡＡ）が特定されるまで、他の抗ＣＤ１６６ＡＡを用いて試験を行ってもよい。いくつかの実施形態では、次に、患者に治療有効量の活性化可能抗ＣＤ１６６抗体が投与され、かつ／または患者の試験結果が陽性であった場合には結合される。好適なＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭとしては、本明細書で開示されるＡＢ、ＭＭ、および／またはＣＭのいずれかを含む。
【０３００】
いくつかの実施形態では、ＡＡおよび／または結合型ＡＡは、検出可能な標識を含む。完全な抗体またはその断片（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ）２）を使用する。プローブまたは抗体に関する「標識された」という用語は、プローブまたは抗体へ検出可能な物質をカップリングすること（すなわち、物理的連結）によるプローブまたは抗体の直接標識、および直接標識された別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を包含することを意図している。間接標識の例としては、蛍光標識二次抗体を使用した一次抗体の検出、および蛍光標識ストレプトアビジンで検出できるようにビオチンを用いたＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。「生体試料」という用語は、対象から単離された組織、細胞、および体液、ならびに対象内に存在する組織、細胞、および体液を含むことを意図している。したがって、「生体試料」という用語の用法に含まれるのは、血液と、血清、血漿、またはリンパ液などの血液の一分画または成分である。すなわち、本開示の検出方法を使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの生体試料中の検体ｍＲＮＡ、タンパク質、またはゲノムＤＮＡを検出することができる。例えば、分析物ｍＲＮＡを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションが挙げられる。検体タンパク質を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術としては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降、免疫化学染色、および免疫蛍光法が挙げられる。検体ゲノムＤＮＡを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ技術としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられる。イムノアッセイを実施するための手順は、例えば「ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」第４２巻、Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（編）Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ，１９９５年；「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ  ａｎｄ  Ｔ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９６年；および「Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ」Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９８５年に記載されている。さらに、分析物タンパク質を検出するためのｉｎ  ｖｉｖｏ技術としては、標識された抗分析物タンパク質抗体を対象に導入することが挙げられる。例えば、抗体は放射性マーカーで標識することができ、対象内でのその放射性マーカーの存在および位置は、標準的なイメージング技術によって検出することができる。
【０３０１】
したがって、本開示のＡＡおよび結合型ＡＡは、様々な診断用配合物および予防用配合物にも有用である。一実施形態では、ＡＡおよび／または結合型ＡＡは、前述の障害のうちの１つ以上を発症するリスクがある対象に投与される。前述の障害のうちの１つ以上に対する対象または器官の素因は、遺伝子型、血清学的または生化学的マーカーを使用して決定することができる。
【０３０２】
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＡおよび／または結合型ＡＡを、前述の障害のうちの１つ以上に関連する臨床適応症と診断されたヒト個体に投与する。診断された時に、ＡＡおよび／または結合型ＡＡを投与して、臨床適応症の影響を緩和させるか、または逆転させる。
【０３０３】
本開示の活性化可能抗体、および／または結合型ＡＡは、対象試料中の標的の検出にも有用であり、したがって診断として有用である。例えば、本開示の抗体および／または活性化可能抗体、ならびにそれらの結合型は、対象試料中での標的レベルを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、例えばＥＬＩＳＡで使用される。
【０３０４】
一実施形態では、本開示のＡＡおよび／または結合型ＡＡは、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル（複数可））上に固定化させる。固定化されたＡＡおよび／または結合型ＡＡは、試験試料中に存在し得る任意の標的に対する捕捉抗体として機能する。固定化させた活性化可能抗体、および／またはその結合型を対象試料と接触させる前に、固体支持体をすすぎ、乳タンパク質またはアルブミンなどのブロッキング剤で処理して、分析物の非特異的吸着を防ぐ。
【０３０５】
その後、抗原を含んでいることが疑われる試験試料、または標準量の抗原を含む溶液でウェルを処理する。こうした試料は、例えば、病理学の診断に役立つと考えられる循環中の抗原のレベルを有することが疑われる対象からの血清試料である。試験試料または標準物を洗い流した後、固体支持体は、検出可能に標識された第２の抗体で処理される。標識された第２の抗体は、検出抗体として機能する。検出可能な標識のレベルが測定され、試験試料中の標的抗原の濃度は、標準試料から作成された標準曲線との比較により決定される。
【０３０６】
本開示のＡＡおよびその結合型を使用して得られた結果に基づいて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断アッセイにおいては、標的抗原の発現レベルに基づいて対象の疾患のステージを決定できることが理解されよう。所定の疾患について、疾患の進行の様々なステージにある、かつ／または疾患の治療的処置での様々な時点にあると診断された対象から血液試料を採取する。進行または治療法の各ステージについて統計的に有意な結果となる試料の集団を使用して、各ステージの特徴と見なされ得る抗原の濃度範囲が指定される。
【０３０７】
ＡＡおよび／または結合型ＡＡはまた、診断および／またはイメージング方法で使用され得る。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法である。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏ方法である。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ｉｎ  ｓｉｔｕ方法である。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ｅｘ  ｖｉｖｏ方法である。例えば、酵素的に切断可能なＣＭを有するＡＡを使用して、ＣＭを切断できる酵素の有無を検出することができる。こうしたＡＡは、診断において使用でき、これには、所定の宿主生物の所定の細胞または組織における活性化抗体（すなわち、活性化可能抗体の切断から生じる抗体）の測定された蓄積による、酵素活性（またはいくつかの実施形態では、還元の可能性が向上した環境、例えば、ジスルフィド結合の還元を提供できる環境など）の（例えば、定性的または定量的）ｉｎ  ｖｉｖｏ検出を含むことができる。活性化抗体のこうした蓄積は、組織が酵素活性を発現する（またはＣＭの性質に応じて還元の可能性が高くなる）のみでなく、活性化抗体が結合する標的を組織が発現することも示す。
【０３０８】
例えば、ＣＭは、腫瘍の部位、生物学的に閉じ込められた部位（例えば、膿瘍、器官など）などでのウイルスまたは細菌感染の部位で見られる少なくとも１つのプロテアーゼの基質となるように選択することができる。ＡＢは、標的抗原に結合するものであり得る。本明細書に開示の方法、または適切な場合、当業者に周知である方法を使用して、検出可能な標識（例えば、蛍光標識または放射性標識または放射性トレーサー）をＡＢまたは抗体および／または活性化可能抗体の他の領域に結合させ得る。好適な検出可能な標識は、上記のスクリーニング方法の文脈で論じており、追加の特定の例を以下に示す。疾患状態のタンパク質またはペプチドに特異的なＡＢを、目的の疾患組織において活性が上昇する少なくとも１つのプロテアーゼと共に使用することにより、ＡＡは、ＣＭ特異的酵素が、検出可能なレベルで存在していないか、または疾患組織でのレベルよりも低いレベルで存在するか、または不活性である（例えば、チモーゲン形態または阻害剤との複合体）組織と比較して、疾患組織への結合率の上昇を呈する。小さいタンパク質およびペプチドは、腎臓ろ過システムによって血液から急速に除去されるため、またＣＭに特異的な酵素が検出可能なレベルでは存在しない（または非疾患組織では低レベルで存在するか、または不活性なコンフォメーションで存在する）ため、疾患組織における活性化抗体の蓄積は、非疾患組織と比較して増大する。
【０３０９】
別の例では、ＡＡは、試料中の切断剤の有無を検出するために使用できる。例えば、ＡＡが酵素による切断を受けやすいＣＭを含む場合、ＡＡは、試料中での酵素の存在を（定性的または定量的に）検出するために使用できる。別の例では、ＡＡが還元剤による切断を受けやすいＣＭを含む場合、ＡＡは、試料中での還元条件の存在を（定性的または定量的に）検出するために使用できる。これらの方法において分析を容易にするために、ＡＡを検出可能に標識することができ、また支持体（例えば、スライドまたはビーズなどの固体支持体）に結合することができる。検出可能な標識は、切断後に放出されないＡＡの一部分に配置することができ、例えば、検出可能な標識は、消光蛍光標識または切断が起こるまで検出できない他の標識であり得る。アッセイは、例えば、固定化され、検出可能に標識されたＡＡを、切断が生じるのに十分な時間、酵素および／または還元剤を含むことが疑われる試料と接触させ、その後、洗浄して、過剰な試料および汚染物質を除去することにより実施できる。次いで、試料中の切断剤（例えば、酵素または還元剤）の有無は、試料との接触前のＡＡの検出可能なシグナルの変化、例えば、試料中の切断剤によるＡＡの切断による、検出可能なシグナルの存在および／またはこのシグナルの増加によって査定される。
【０３１０】
こうした検出方法は、切断されたときに、ＡＡのＡＢに結合することができる標的の有無の検出ももたらすように適合させることができる。したがって、アッセイは、切断剤の有無、および目的の標的の有無を査定するように適合させることができる。切断剤の有無は、上記のＡＡの検出可能な標識の存在および／または増加によって検出することができ、標的の有無は、例えば検出可能に標識された抗標的抗体の使用による標的−ＡＢ複合体の検出により検出することができる。
【０３１１】
ＡＡは、また、例えばプロテアーゼ切断および特定の標的への結合によりＡＡ活性化を検証するためのｉｎ  ｓｉｔｕイメージングにも有用である。Ｉｎ  ｓｉｔｕイメージングは、細胞培養または組織切片などの生体試料におけるタンパク質分解活性および標的の局在化を可能にする技術である。この技術を使用することで、検出可能な標識（蛍光標識など）の存在に基づいて、所定の標的への結合およびタンパク質分解活性の両方を確認できる。
【０３１２】
これらの技術は、疾患部位（腫瘍組織など）または健康な組織に由来するあらゆる凍結細胞または組織に有用である。これらの技術は、新鮮な細胞または組織の試料にも有用である。
【０３１３】
これらの技術では、ＡＡは検出可能な標識で標識される。検出可能な標識は、蛍光色素（例えば、発蛍光団、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識）、近赤外（ＮＩＲ）色素（例えば、Ｑｄｏｔ（登録商標）ｎａｎｏｃｒｙｓｔａｌ）、コロイド金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチンおよびストレプトアビジンなどの増幅試薬、または酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼもしくはアルカリホスファターゼ）であり得る。
【０３１４】
標識されたＡＡと共にインキュベートされた試料中において標識が検出されることにより、試料が標的を含み、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含むことが示される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼの存在は、本明細書に記載されているような広範囲のプロテアーゼ阻害剤を使用することにより、および／またはプロテアーゼに特異的な剤、例えばＡ１１などの抗体（プロテアーゼマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解活性を阻害する）を使用することにより確認することができる。例えば、２０１０年１１月１１日に公開の国際公開番号ＷＯ２０１０／１２９６０９を参照されたい。本明細書に記載されるものなどの広範囲のプロテアーゼ阻害剤を使用する、および／またはより選択的な阻害剤を使用する同じアプローチを使用して、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを特定することができる。いくつかの実施形態では、標的の存在は、その標的に特異的な剤、例えば別の抗体を使用して確認できる。または、検出可能な標識は、標識されていない標的と競合させることができる。いくつかの実施形態では、標識された二次抗体またはより複雑な検出システムによる検出により、標識されていないＡＡを使用できる。
【０３１５】
同様の技術は、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングにも有用であり、ここでは、例えばヒトなどの哺乳動物などの対象で蛍光シグナルが検出されることにより、疾患部位が標的を含み、かつ活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含むことが示される。
【０３１６】
これらの技術は、活性化可能抗体内でのプロテアーゼ特異的ＣＭに基づく様々な細胞、組織、および生物のプロテアーゼ活性の検出、同定、または特徴付けのためのキットおよび／または試薬としても有用である。
【０３１７】
本開示は、様々な診断および／または予防適応症において、ＡＡを使用する方法を提供する。例えば、本開示は、以下により、対象または試料において、切断剤および目的の標的の有無を検出する方法を提供する；（ｉ）対象または試料を活性化可能抗体と接触させることであって、ＡＡは、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）、および目的の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片（ＡＢ）を含み、切断されていない非活性化状態のＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、（ａ）ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、かつＡＢの天然の結合パートナーの修飾型ではなく、（ｂ）切断されていない非活性化状態では、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断された活性化状態では、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはない、接触させることと、（ｉｉ）対象または試料中の活性化されたＡＡのレベルを測定することであって、対象または試料中において活性化ＡＡが検出可能なレベルである場合は、対象または試料中に切断剤および標的が存在していることが示され、対象または試料中において活性化ＡＡが検出可能なレベルにない場合は、切断剤、標的または切断剤および標的の両方が対象または試料中に存在していないこと、および／または十分に存在していないことが示される、測定すること。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに位置付けられる。いくつかの実施形態では、対象または試料中のＡＡのレベルを測定することは、活性化抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達成され、この試薬は検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３１８】
本開示はまた、以下により、対象または試料における切断剤の有無を検出する方法を提供する；（ｉ）目的の標的、例えば標的の存在下で対象または試料をＡＡと接触させることであって、ＡＡは、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えばプロテアーゼにより切断される切断可能部分（ＣＭ）、および目的の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片（ＡＢ）を含み、切断されていない非活性化状態のＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、（ａ）ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、かつＡＢの天然の結合パートナーの修飾型ではなく、（ｂ）切断されていない非活性化状態では、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断された活性化状態では、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはない、接触させることと、（ｉｉ）対象または試料中の活性化されたＡＡのレベルを測定することであって、対象または試料中において活性化ＡＡが検出可能なレベルである場合は、切断剤が対象または試料中に存在することが示されて、対象または試料中において活性化ＡＡが検出可能なレベルにない場合は、切断剤が対象または試料中に存在していないこと、および／または十分に存在していないことが示される、測定すること。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに位置付けられる。いくつかの実施形態では、対象または試料中のＡＡのレベルを測定することは、活性化抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達成され、この試薬は検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３１９】
本開示はまた、対象または試料中の切断剤および標的の有無を検出する方法において使用するためのキットを提供し、本キットは、少なくともマスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えばプロテアーゼによって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および目的の標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片（ＡＢ）を含むＡＡを含み、切断されていない非活性化状態のＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、（ａ）ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、かつＡＢの天然の結合パートナーの修飾型ではなく、（ｂ）切断されていない非活性化状態では、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断された活性化状態では、ＭＭは標的へのＡＢの特異的結合に干渉するか、またはこれらの結合と競合することはなく、（ｉｉ）対象または試料中の活性化されたＡＡのレベルを測定することであって、対象または試料中において活性化ＡＡが検出可能なレベルである場合は、切断剤が対象または試料中に存在していることが示され、対象または試料中において活性化ＡＡが検出可能なレベルにない場合は、切断剤が対象または試料中に存在していないこと、および／または十分に存在していないことが示される。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに位置付けられる。いくつかの実施形態では、対象または試料中のＡＡのレベルを測定することは、活性化抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達成され、この試薬は検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３２０】
本開示はまた、（ｉ）対象または試料を活性化可能抗体と接触させることであって、ＡＡは、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えばプロテアーゼによって切断される切断可能部分（ＣＭ）、標的に特異的に結合する抗原結合ドメイン（ＡＢ）、および検出可能な標識を含み、切断されていない、非活性化状態のＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭは、ＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有さず、またＡＢの天然の結合パートナーの修飾型ではなく、また切断されていない非活性化状態にある場合、ＭＭはＡＢの標的への特異的結合に干渉し、切断された活性化状態にある場合、ＭＭは、ＡＢの標的への特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはなく、検出可能な標識はＣＭの切断後に放出されるＡＡの一部分に位置付けられる、接触させることと、（ｉｉ）対象または試料中の検出可能な標識のレベルを測定することであって、対象または試料中において検出可能な標識が検出可能なレベルである場合は、切断剤が対象または試料中に存在していないこと、および／または十分に存在していないことが示されており、対象または試料中において検出可能な標識が検出可能なレベルにない場合は、切断剤が対象または試料中に存在していることが示される、測定することとによって、対象または試料中の切断剤の有無を検出する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに位置付けられる。いくつかの実施形態では、対象または試料中のＡＡのレベルを測定することは、活性化抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達成され、この試薬は検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３２１】
本開示はまた、対象または試料中の切断剤および標的の有無を検出する方法において使用するためのキットを提供し、本キットは、対象または生体試料と接触する際に使用するための本明細書に記載の少なくともＡＡおよび／または結合型ＡＡ（例えば、治療剤が結合されているＡＡ）、および対象または生体試料中において活性化されたＡＡおよび／または結合型ＡＡのレベルを検出するための手段を含み、対象または生体試料中の活性化されたＡＡが検出可能なレベルである場合は、切断剤および標的が対象または生体試料中に存在していることが示され、対象または生体試料中の活性化されたＡＡが検出可能なレベルでない場合は、切断剤、標的または切断剤および標的の両方が対象または生体試料中に存在していないこと、および／または十分に存在していないことが示され、これにより、標的結合および／またはＡＡのプロテアーゼ切断が、対象または生体試料中では検出できないようになる。
【０３２２】
本開示はまた、（ｉ）標的の存在下で対象または生体試料をＡＡと接触させることと、（ｉｉ）対象または生体試料中の活性化されたＡＡのレベルを測定することであって、対象または生体試料中の活性化されたＡＡが検出可能なレベルである場合は、切断剤が対象または生体試料中に存在していることが示されており、対象または生体試料中の活性化されたＡＡが検出可能なレベルにない場合は、切断剤が、検出可能なレベルで、対象または生体試料中に存在していないこと、かつ／または十分に存在していないことが示されており、これにより、ＡＡのプロテアーゼ切断が対象または生体試料中において検出することができないようになる、測定することとによって、対象または試料中における切断剤の有無を検出する方法を提供する。こうしたＡＡとしては、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えばプロテアーゼによって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片（ＡＢ）が含まれ、切断されていない（すなわち、非活性化である）状態のＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、（ａ）ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有することはない、および（ｂ）切断されていない状態のＡＡのＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断された（すなわち活性化された）状態のＡＡのＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はマスキング部分に付着する。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、プロテアーゼ切断部位のＣＭ  Ｎ末端に付着している。いくつかの実施形態では、ＡＢの単一の抗原結合部位は、マスキングされている。いくつかの実施形態では、本開示の抗体が、少なくとも２つの抗原結合部位を有する場合、少なくとも１つの抗原結合部位がマスキングされ、少なくとも１つの抗原結合部位はマスキングされていない。いくつかの実施形態では、すべての抗原結合部位が、マスキングされている。いくつかの実施形態では、測定ステップは、検出可能な標識を含む二次試薬を使用することを含む。
【０３２３】
本開示はまた、対象または試料中の切断剤および標的の有無を検出する方法において使用するためのキットを提供し、本キットは、対象または生体試料を標的の存在下でＡＡと接触させ、対象または生体試料中の活性化されたＡＡのレベルを測定する際に使用するための本明細書に記載の少なくともＡＡおよび／または結合型ＡＡを含み、対象または生体試料中の活性化されたＡＡが検出可能なレベルである場合は、切断剤が対象または生体試料中に存在していることが示され、対象または生体試料中の活性化されたＡＡが検出可能なレベルにない場合は、切断剤が対象または生体試料中に検出可能なレベルで存在していないこと、および／または十分に存在していないことが示され、これにより、ＡＡのプロテアーゼ切断が対象または生体試料中で検出できないようになる。こうしたＡＡには、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤、例えばプロテアーゼによって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片（ＡＢ）が含まれ、切断されていない（すなわち、非活性化である）状態のＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、（ａ）ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有することはない、および（ｂ）切断されていない状態のＡＡのＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断された（すなわち活性化された）状態のＡＡのＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はマスキング部分に付着する。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、プロテアーゼ切断部位のＣＭ  Ｎ末端に付着している。いくつかの実施形態では、ＡＢの単一の抗原結合部位は、マスキングされている。いくつかの実施形態では、本開示の抗体が、少なくとも２つの抗原結合部位を有する場合、少なくとも１つの抗原結合部位がマスキングされ、少なくとも１つの抗原結合部位はマスキングされていない。いくつかの実施形態では、すべての抗原結合部位が、マスキングされている。いくつかの実施形態では、測定ステップは、検出可能な標識を含む二次試薬を使用することを含む。
【０３２４】
本開示はまた、対象または試料中での切断剤の有無を検出する方法において使用するためのキットを提供し、本キットは、対象または生体試料と接触する際に使用するための本明細書に記載の少なくともＡＡおよび／または結合型ＡＡ、ならびに対象または生体試料中の活性化されたＡＡおよび／または結合型ＡＡのレベルを検出するための手段を含み、ここで、ＡＡは、ＣＭの切断後に放出されるＡＡの一部分に位置付けられている検出可能な標識を含み、対象または生体試料中において活性化されたＡＡが検出可能なレベルである場合は、対象または生体試料中に切断剤が存在していないこと、かつ／または十分に存在していないことが示され、これにより、ＡＡの標的結合および／またはプロテアーゼ切断が、対象または生体試料中では検出できないようになり、対象または生体試料中において活性化されたＡＡが検出可能なレベルでない場合、対象または生体試料中に切断剤が検出可能なレベルで存在していることが示される。
【０３２５】
本開示は、（ｉ）対象または生体試料を活性化可能抗体と接触させることであって、ＡＡは、ＣＭの切断後に放出されるＡＡの一部分に位置付けられる検出可能な標識を含む、接触させることと、（ｉｉ）対象または生体試料中の活性化されたＡＡのレベルを測定することであって、対象または生体試料中において活性化されたＡＡが検出可能なレベルである場合は、切断剤、標的または切断剤および標的の両方が対象または生体試料中に存在していないこと、かつ／または十分に存在していないことが示され、これにより、ＡＡの標的結合および／またはプロテアーゼ切断が、対象または生体試料中では検出できないようになり、対象または生体試料中において活性化されたＡＡの検出可能なレベルが低下している場合は、対象または生体試料中に切断剤および標的が存在していることが示される、測定することとによって、対象または試料中の切断剤および標的の有無を検出する方法を提供する。検出可能な標識のレベルの低下は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、および／または約１００％の低下である。こうしたＡＡには、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤によって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片（ＡＢ）が含まれ、切断されていない（すなわち、非活性化である）状態のＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、（ａ）ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有することはない、および（ｂ）切断されていない状態のＡＡのＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉し、切断された（すなわち活性化された）状態のＡＡのＭＭは、標的へのＡＢの特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに位置付けられる。いくつかの実施形態では、対象または試料中のＡＡのレベルを測定することは、活性化抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達成され、この試薬は検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３２６】
本開示はまた、対象または試料中の切断剤および標的の有無を検出する方法において使用するためのキットを提供し、本キットは、対象または生体試料を接触させること、および対象または生体試料中の活性化されたＡＡおよび／または結合型ＡＡのレベルを検出するための手段において使用するための本明細書に記載の少なくともＡＡおよび／または結合型ＡＡを含み、対象または生体試料中の活性化されたＡＡが検出可能なレベルである場合は、切断剤、標的、または切断剤と標的の両方が対象または生体試料中に存在していないこと、かつ／または十分に存在していないことが示され、これによりＡＡの標的結合および／またはプロテアーゼ切断が、対象または生体試料中では検出できないようになり、対象または生体試料中において活性化されたＡＡの検出可能なレベルが低下している場合は、対象または生体試料中に切断剤および標的が存在していることが示される。検出可能な標識のレベルの低下は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、および／または約１００％の低下である。
【０３２７】
本開示はまた、（ｉ）対象または生体試料を活性化可能抗体と接触させることであって、ＡＡは、ＣＭの切断後に放出されるＡＡの一部分に位置付けられる検出可能な標識を含む、接触させることと、（ｉｉ）対象または生体試料中の検出可能な標識の検出可能なレベルを測定することであって、対象または生体試料中において検出可能な標識が検出可能なレベルである場合は、切断剤が対象または生体試料中に検出可能レベルで存在していないこと、かつ／または十分に存在していないことが示され、これにより、ＡＡのプロテアーゼ切断が、対象または生体試料中では検出できないようになり、対象または生体試料中において検出可能な標識の検出可能なレベルが低下している場合は、対象または生体試料中に切断剤が存在していることが示される、測定することとによって、対象または試料中の切断剤の有無を検出する方法を提供する。検出可能な標識のレベルの低下は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、および／または約１００％の低下である。こうしたＡＡには、マスキング部分（ＭＭ）、切断剤によって切断される切断可能部分（ＣＭ）、および標的に特異的に結合する抗原結合ドメインまたはその断片（ＡＢ）が含まれ、切断されていない（すなわち、非活性化である）状態のＡＡは、ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭのＮ末端からＣ末端への構造的配置を含み、（ａ）ＭＭは、ＡＢの標的への結合を阻害するペプチドであり、ＭＭはＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列を有することはない、および（ｂ）切断されていない状態のＡＡのＭＭは、ＡＢの標的への特異的結合に干渉し、切断された（すなわち活性化された）状態のＡＡのＭＭは、ＡＢの標的への特異的結合に干渉することまたはこれらの結合と競合することはない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに位置付けられる。いくつかの実施形態では、対象または試料中のＡＡのレベルを測定することは、活性化抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達成され、この試薬は検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３２８】
本開示はまた、対象または試料中の目的の切断剤の有無を検出する方法において使用するためのキットを提供し、本キットは、対象または生体試料を接触させる際に使用するために、本明細書に記載の少なくともＡＡおよび／または結合型ＡＡ、および対象または生体試料中の活性化されたＡＡおよび／または結合型ＡＡのレベルを検出するための手段を含み、ＡＡは、ＣＭの切断後に放出されるＡＡの一部分に位置付けられる検出可能な標識を含み、対象または生体試料中において検出可能な標識が検出可能なレベルである場合は、切断剤、標的、または切断剤と標的の両方が対象または生体試料中に存在していないこと、かつ／または十分に存在していないことが示され、これにより、標的結合および／またはＡＡのプロテアーゼ切断が、対象または生体試料中では検出できないようになり、対象または生体試料中の検出可能な標識の検出可能レベルが低下している場合は、切断剤および標的が対象または生体試料中に存在していることが示される。検出可能な標識のレベルの低下は、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、および／または約１００％の低下である。
【０３２９】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＡＡは、検出可能な標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、検出可能な標識としては、イメージング剤、造影剤、酵素、蛍光標識、発色団、色素、１つ以上の金属イオン、またはリガンドベースの標識が挙げられる。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、イメージング剤は、放射性同位元素を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、放射性同位元素は、インジウムまたはテクネチウムである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、造影剤は、ヨウ素、ガドリニウムまたは酸化鉄を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはβ−ガラクトシダーゼを含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、蛍光標識は、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、修飾赤色蛍光タンパク質（ｍＲＦＰ）、赤色蛍光タンパク質ｔｄｉｍｅｒ２（ＲＦＰ  ｔｄｉｍｅｒ２）、ＨＣＲＥＤ、またはユーロピウム誘導体を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、発光標識は、Ｎ−メチルアクリジウム誘導体を含む。これらの方法のいくつかの実施形態では、標識は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６８０またはＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７５０などのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）標識を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、リガンドベースの標識は、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたは１つ以上のハプテンを含む。
【０３３０】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、対象はヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル（ネコ、イヌ、ウマなど）、家畜、作業動物、動物園動物などの非ヒト哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はげっ歯類である。
【０３３１】
これらの方法のいくつかの実施形態では、本方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏ方法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、この方法はｉｎ  ｓｉｔｕ方法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、この方法はｅｘ  ｖｉｖｏ方法である。これらの方法のいくつかの実施形態では、この方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法である。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｓｉｔｕイメージングおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏイメージングは、治療する対象を特定する方法において有用である。例えば、ｉｎ  ｓｉｔｕイメージングでは、ＡＡを使用して対象試料をスクリーニングし、適切な場所、例えば腫瘍部位に適切なプロテアーゼ（複数可）および標的（複数可）を有する対象を特定する。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｓｉｔｕイメージングは、本開示のＡＡによる治療に好適である対象集団を特定するか、さもなければ細分するために使用される。例えば、標的（例えば、標的）および試験が行われたＡＡのＣＭ（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼ（例えば、疾患部位で活性化された抗体が蓄積する）の両方が陽性である対象は、こうしたＣＭを含むこうしたＡＡによる治療にとって好適な候補であると特定される。同様に、標的（例えば、標的）およびこれらの方法を使用して試験が行われたＡＡ中のＣＭの基質を切断するおよびプロテアーゼの一方または両方が陰性である対象は、別の治療形態の好適な候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、第１のＡＡに関して陰性であるこうした対象は、治療にとって好適であるＡＡが特定されるまで、異なるＣＭを含む他のＡＡにより試験され得る（例えば、疾患部位で対象によって切断されるＣＭを含むＡＡ）。いくつかの実施形態では、次いで、対象には、対象が陽性反応を示した治療有効量のＡＡが投与される。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングは、本開示のＡＡによる治療に好適である対象集団を特定するか、さもなければ細分するために使用される。例えば、標的（例えば、標的）および試験が行われたＡＡのＣＭ（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼ（例えば、疾患部位で活性化された抗体が蓄積する）の両方が陽性である対象は、こうしたＣＭを含むこうしたＡＡによる治療にとって好適な候補であると特定される。同様に、陰性である対象は、別の治療形態の好適な候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、第１のＡＡに関して陰性であるこうした対象は、治療にとって好適であるＡＡが特定されるまで、異なるＣＭを含む他のＡＡにより試験され得る（例えば、疾患部位で対象によって切断されるＣＭを含むＡＡ）。いくつかの実施形態では、次いで、対象には、対象が陽性反応を示した治療有効量のＡＡが投与される。
【０３３５】
方法およびキットのいくつかの実施形態では、本方法またはキットは、本開示のＡＡによる治療に好適である対象集団を特定するか、さもなければ細分するために使用される。例えば、標的（例えば標的）およびこれらの方法で試験が行われたＡＡのＣＭ（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼの両方が陽性である対象は、こうしたＣＭを含むこうしたＡＡにより治療するための好適な候補として特定される。同様に、標的（例えば、標的）およびこれらの方法を使用して試験が行われたＡＡ中のＣＭ内の基質を切断するプロテアーゼとの両方が陰性である対象は、別の治療形態の好適な候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、こうした対象は、治療にとって好適であるＡＡが特定されるまで他のＡＡにより試験され得る（例えば、疾患部位で対象によって切断されるＣＭを含むＡＡ）。いくつかの実施形態では、標的（例えば、標的）のいずれかが陰性である対象は、こうしたＣＭを含むこうしたＡＡによる治療にとって好適な候補として特定される。いくつかの実施形態では、標的（例えば、標的）のいずれかが陰性である対象は、こうしたＣＭを含むこうしたＡＡによる治療にとって好適な候補でないとして特定される。いくつかの実施形態では、こうした対象は、治療にとって好適であるＡＡが特定されるまで他のＡＡにより試験され得る（例えば、疾患部位で対象によって切断されるＣＭを含むＡＡ）。いくつかの実施形態では、ＡＡは、治療剤が結合しているＡＡである。いくつかの実施形態では、ＡＡは、剤に結合されていない。いくつかの実施形態では、ＡＡは、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、検出可能な標識はＡＢに位置付けられる。いくつかの実施形態では、対象または試料中のＡＡのレベルを測定することは、活性化抗体に特異的に結合する二次試薬を使用して達成され、この試薬は検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、二次試薬は、検出可能な標識を含む抗体である。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、方法またはキットを使用して、本開示の抗標的ＡＡおよび／または結合型ＡＡ（例えば、治療剤が結合されているＡＡ）による治療に好適である対象集団を特定するか、さもなければ細分し、その後それを必要とする対象にそのＡＡおよび／または結合型ＡＡを投与することにより治療する。例えば、標的（例えば、標的）と、これらの方法で試験が行われたＡＡおよび／または結合型ＡＡのＣＭ（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼの両方が陽性である対象は、こうしたＣＭを含むこうした抗体および／またはこうした結合型ＡＡによる治療にとって好適である候補として特定される。次いで、対象は、試験が行われた治療的有効量のＡＡおよび／または結合型ＡＡを投与される。同様に、標的（例えば、標的）およびこれらの方法を使用して試験が行われたＡＡ中のＣＭの基質を切断するプロテアーゼの一方または両方が陰性である対象は、別の治療形態にとって好適な候補として特定され得る。いくつかの実施形態では、こうした対象は、治療にとって好適である抗体および／または結合型ＡＡが特定されるまで、他の抗体および／または結合型ＡＡにより試験され得る（例えば、疾患部位で対象によって切断されるＣＭを含むＡＡおよび／または結合型ＡＡ）。いくつかの実施形態では、次いで、対象は、対象が陽性反応を示した治療的有効量のＡＡおよび／または結合型ＡＡが投与される。
【０３３７】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＭＭは、約４〜４０アミノ酸の長さを有するペプチドである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＡＡは、リンカーペプチドを含み、リンカーペプチドは、ＭＭとＣＭとの間に位置付けられる。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＡＡは、リンカーペプチドを含み、リンカーペプチドは、ＡＢとＣＭとの間に位置付けられる。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＡＡは、第１のリンカーペプチド（ＬＰ１）および第２のリンカーペプチド（ＬＰ２）を含み、第１のリンカーペプチドは、ＭＭとＣＭとの間に位置付けられ、第２のリンカーペプチドは、ＡＢとＣＭとの間に位置付けられる。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＬＰ１およびＬＰ２の各々は、長さが約１〜２０アミノ酸のペプチドであり、ＬＰ１およびＬＰ２の各々が、同じリンカーである必要はない。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＬＰ１およびＬＰ２の一方または両方は、グリシン−セリンポリマーを含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＬＰ１およびＬＰ２の少なくとも一方は、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１）および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ｎは少なくとも１の整数である。これらの方法およびキットのいくついくつかの実施形態では、ＬＰ１およびＬＰ２のうちの少なくとも一方は、式（ＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは少なくとも１の整数である）を有するアミノ酸配列を含む。これらの方法およびキットのいくついくつかの実施形態では、ＬＰ１およびＬＰ２のうちの少なくとも一方は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む；Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号３）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号４）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号５）、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号６）、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号７）、およびＧｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ（配列番号８）。
【０３３８】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＡＢは、本明細書に提示される交差反応性抗体配列から選択される抗体または抗体断片配列を含む。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＡＢは、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖまたは単鎖抗体（ｓｃＡｂ）を含む。
【０３３９】
これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、切断剤は、対象または試料中に標的と共局在するプロテアーゼであり、ＣＭは、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、ＡＡが、プロテアーゼに曝露するときに、プロテアーゼがＡＡ中のＣＭを切断する。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＣＭは、アミノ酸長が１５以下のポリペプチドである。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＣＭは、ＡＢのＮ末端に連結されている。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＣＭは、ＡＢのＣ末端に連結されている。これらの方法およびキットのいくつかの実施形態では、ＣＭは、ＡＢのＶＬ鎖のＮ末端に連結されている。
【０３４０】
本開示の抗体、結合型抗体、ＡＡおよび結合型ＡＡは、診断および予防配合物中で使用される。一実施形態では、ＡＡは、前述の炎症、炎症性障害、癌、または他の障害のうちの１つ以上を発症するリスクがある対象に投与される。
【０３４１】
前述の障害のうちの１つ以上に対する対象または器官の素因は、遺伝子型、血清学的または生化学的マーカーを使用して決定することができる。
【０３４２】
本開示のいくつかの実施形態では、ＡＡおよび／または結合型ＡＡを、前述の障害のうちの１つ以上に関連する臨床適応症と診断されたヒト個体に投与する。診断された時に、ＡＡおよび／または結合型ＡＡを投与して、臨床適応症の影響を緩和させるか、または逆転させる。
【０３４３】
本開示の抗体、結合型抗体、ＡＡおよび結合型ＡＡは、対象試料中での標的の検出にも有用であり、したがって診断として有用である。例えば、本開示の抗体、結合型抗体、ＡＡおよび結合型ＡＡは、対象試料中の標的レベルを検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、例えばＥＬＩＳＡで使用される。
【０３４４】
一実施形態では、本開示の抗体および／またはＡＡは、固体支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル（複数可））上に固定化される。固定化された抗体および／またはＡＡは、試験試料中に存在し得るあらゆる標的に対する捕捉抗体として機能する。固定化された抗体および／またはＡＡを対象試料と接触させる前に、固体支持体をすすぎ、乳タンパク質またはアルブミンなどのブロッキング剤で処理して、分析物の非特異的吸着を防ぐ。
【０３４５】
その後、抗原を含んでいることが疑われる試験試料、または標準量の抗原を含む溶液でウェルを処理する。こうした試料は、例えば、病理学の診断に役立つと考えられる循環中の抗原のレベルを有することが疑われる対象からの血清試料である。試験試料または標準物を洗い流した後、固体支持体は、検出可能に標識された第２の抗体で処理される。標識された第２の抗体は、検出抗体として機能する。検出可能な標識のレベルが測定され、試験試料中の標的抗原の濃度は、標準試料から作成された標準曲線との比較により決定される。
【０３４６】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断アッセイにおいて本開示の抗体および／またはＡＡを使用して得られた結果に基づいて、標的抗原の発現レベルに基づいて対象の疾患のステージを決定できることが理解されよう。所定の疾患について、疾患の進行の様々なステージにある、かつ／または疾患の治療的処置での様々な時点にあると診断された対象から血液試料を採取する。進行または治療法の各ステージについて統計的に有意な結果となる試料の集団を使用して、各ステージの特徴と見なされ得る抗原の濃度範囲が指定される。
【０３４７】
抗体、結合型抗体、ＡＡおよび結合型ＡＡは、診断および／または画像診断法にも使用できる。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法である。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏ方法である。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ｉｎ  ｓｉｔｕ方法である。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ｅｘ  ｖｉｖｏ方法である。例えば、酵素的に切断可能なＣＭを有するＡＡを使用して、ＣＭを切断できる酵素の有無を検出することができる。こうしたＡＡは、診断において使用でき、これには、所定の宿主生物の所定の細胞または組織における活性化抗体（すなわち、活性化可能抗体の切断から生じる抗体）の測定された蓄積による、酵素活性（またはいくつかの実施形態では、還元の可能性が向上した環境、例えば、ジスルフィド結合の還元を提供できる環境など）の（例えば、定性的または定量的）ｉｎ  ｖｉｖｏ検出を含むことができる。活性化抗体のこうした蓄積は、組織が酵素活性を発現する（またはＣＭの性質に応じて還元の可能性が高くなる）のみでなく、活性化抗体が結合する標的を組織が発現することも示す。
【０３４８】
例えば、ＣＭは、腫瘍の部位、生物学的に閉じ込められた部位（例えば、膿瘍、器官など）などでのウイルスまたは細菌感染の部位で見られるプロテアーゼのプロテアーゼ基質となるように選択することができる。ＡＢは、標的抗原に結合するものであり得る。当業者によく知られている方法を使用して、検出可能な標識（例えば、蛍光標識または放射性標識または放射性トレーサー）をＡＢまたは活性化可能抗体の他の領域に結合させることができる。好適な検出可能な標識は、上記のスクリーニング方法の文脈で論じており、追加の特定の例を以下に示す。疾患状態のタンパク質またはペプチドに特異的なＡＢを、目的の疾患組織中で活性が上昇しているプロテアーゼと共に使用することにより、ＡＡは、ＣＭ特異的酵素が検出可能なレベルで存在していないか、または疾患組織内よりも低いレベルで存在しているか、または不活性である（例えば、チモーゲン形態または阻害剤との複合体）組織と比較して、疾患組織への結合率の増加を呈する。小さいタンパク質およびペプチドは、腎臓ろ過システムによって血液から急速に除去されるため、またＣＭに特異的な酵素が検出可能なレベルでは存在しない（または非疾患組織では低レベルで存在するか、または不活性なコンフォメーションで存在する）ため、疾患組織における活性化抗体の蓄積は、非疾患組織と比較して増大する。
【０３４９】
別の例では、ＡＡは、試料中の切断剤の有無を検出するために使用できる。例えば、ＡＡが酵素による切断を受けやすいＣＭを含む場合、ＡＡは、試料中での酵素の存在を（定性的または定量的に）検出するために使用できる。別の例では、ＡＡが還元剤による切断を受けやすいＣＭを含む場合、ＡＡは、試料中での還元条件の存在を（定性的または定量的に）検出するために使用できる。これらの方法において分析を容易にするために、ＡＡを検出可能に標識し、支持体（例えば、スライドまたはビーズなどの固体支持体）に結合することができる。検出可能な標識は、切断後に放出されないＡＡの一部分に配置することができ、例えば、検出可能な標識は、消光蛍光標識または切断が起こるまで検出できない他の標識であり得る。アッセイは、例えば、固定化され、検出可能に標識されたＡＡを、切断が生じるのに十分な時間、酵素および／または還元剤を含むことが疑われる試料と接触させ、その後、洗浄して、過剰な試料および汚染物質を除去することにより実施できる。次いで、試料中の切断剤（例えば、酵素または還元剤）の有無は、試料との接触前のＡＡの検出可能なシグナルの変化、例えば、試料中の切断剤によるＡＡの切断による、検出可能なシグナルの存在および／またはこのシグナルの増加によって査定される。
【０３５０】
こうした検出方法は、切断されたときに、ＡＡのＡＢに結合することができる標的の有無の検出をもたらすように適合させることができる。したがって、アッセイは、切断剤の有無、および目的の標的の有無を査定するように適合させることができる。切断剤の有無は、上記のＡＡの検出可能な標識の存在および／または増加によって検出することができ、標的の有無は、例えば検出可能に標識された抗標的抗体の使用による標的−ＡＢ複合体の検出により検出することができる。
【０３５１】
ＡＡは、例えば、プロテアーゼの切断により、ＡＡの活性および特定の標的への結合を検証するためにｉｎ  ｓｉｔｕイメージングにおいて有用である。Ｉｎ  ｓｉｔｕイメージングは、細胞培養または組織切片などの生体試料中におけるタンパク質分解活性および標的の局在化が可能になる技術である。この技術を使用することで、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）の存在に基づいて、所定の標的への結合およびタンパク質分解活性の両方を確認できる。
【０３５２】
これらの技術は、疾患部位（例えば、腫瘍組織）または健康組織由来のあらゆる凍結細胞または組織に有用である。これらの技術は、新鮮な細胞または組織の試料にも有用である。
【０３５３】
これらの技術では、ＡＡは検出可能な標識で標識される。検出可能な標識は、蛍光色素（フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、近赤外（ＮＩＲ）色素（例えば、Ｑｄｏｔ（登録商標）ナノ結晶）、コロイド金属、ハプテン、放射性マーカー、ビオチンおよびストレプトアビジンなどの増幅試薬、または酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼもしくはアルカリホスファターゼ）であり得る。
【０３５４】
標識されたＡＡと共にインキュベートされた試料中において標識が検出されることにより、試料が標的を含み、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含むことが示される。いくつかの実施形態では、プロテアーゼの存在は、本明細書に記載されているような広範囲のプロテアーゼ阻害剤を使用することにより、および／またはプロテアーゼに特異的な剤、例えばＡ１１などの抗体（プロテアーゼマトリプターゼに特異的であり、マトリプターゼのタンパク質分解活性を阻害する）を使用することにより確認することができる。例えば、２０１０年１１月１１日に公開の国際公開番号ＷＯ２０１０／１２９６０９を参照されたい。本明細書に記載されるものなどの広範囲のプロテアーゼ阻害剤を使用する、および／またはより選択的な阻害剤を使用する同じアプローチを使用して、活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼまたはプロテアーゼのクラスを特定することができる。いくつかの実施形態では、標的の存在は、その標的に特異的な剤、例えば別の抗体を使用して確認できる。または、検出可能な標識は、標識されていない標的と競合させることができる。いくつかの実施形態では、標識された二次抗体またはより複雑な検出システムによる検出により、標識されていないＡＡを使用できる。
【０３５５】
同様の手法は、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングにも有用であり、ここでは、例えばヒトなどの哺乳動物などの対象で蛍光シグナルが検出されることにより、疾患部位が標的を含み、かつ活性化可能抗体のＣＭに特異的なプロテアーゼを含むことが示される。
【０３５６】
これらの技術は、活性化可能抗体内でのプロテアーゼ特異的ＣＭに基づく様々な細胞、組織、および生物のプロテアーゼ活性の検出、同定、または特徴付けのためのキットおよび／または試薬としても有用である。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｓｉｔｕイメージングおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏイメージングは、治療する対象を特定する方法において有用である。例えば、ｉｎ  ｓｉｔｕイメージングでは、ＡＡを使用して対象試料をスクリーニングし、適切な場所、例えば腫瘍部位に適切なプロテアーゼ（複数可）および標的（複数可）を有する対象を特定する。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｓｉｔｕイメージングは、本開示のＡＡによる治療に好適である対象集団を特定するかまたは別の方法で細分するために使用される。例えば、標的（例えば、標的）および試験が行われたＡＡのＣＭ（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼ（例えば、疾患部位で活性化された抗体が蓄積する）の両方が陽性である対象は、こうしたＣＭを含むこうしたＡＡによる治療にとって好適な候補であると特定される。同様に、標的およびこれらの方法を用いて試験が行われたＡＡのＣＭ中の基質を切断するプロテアーゼの一方または両方が陰性である対象は、別の治療形態にとって好適な候補である（すなわち、試験が行われたＡＡによる治療にとっては好適ではない）と特定される。いくつかの実施形態では、第１のＡＡに関して陰性であるこうした対象は、治療にとって好適であるＡＡが特定されるまで、異なるＣＭを含む他のＡＡにより試験され得る（例えば、疾患部位で対象によって切断されるＣＭを含むＡＡ）。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングは、本開示のＡＡによる治療に好適である対象集団を特定するか、さもなければ細分するために使用される。例えば、標的および試験が行われたＡＡのＣＭ（ＣＭ）中の基質を切断するプロテアーゼ（例えば、疾患部位で活性化された抗体が蓄積する）の両方が陽性である対象は、こうしたＣＭを含むこうしたＡＡによる治療にとって好適な候補であると特定される。同様に、陰性反応を示す対象は、別の治療形態にとって好適な候補（すなわち、試験が行われたＡＡによる治療には好適でない）として特定される。いくつかの実施形態では、第１のＡＡに関して陰性であるこうした対象は、治療にとって好適であるＡＡが特定されるまで、異なるＣＭを含む他のＡＡにより試験され得る（例えば、疾患部位で対象によって切断されるＣＭを含むＡＡ）。
【０３６０】
医薬組成物
本開示のＡＡおよび結合型ＡＡ（本明細書では「活性化合物」とも呼ばれる）、ならびにその誘導体、断片、類縁体および相同体は、投与にとって好適である医薬組成物に組み込むことができる。こうした組成物は、典型的には、ＡＡおよび／または結合型ＡＡおよび薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与に適合する任意のすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むことを企図する。好適な担体は、本分野の標準的な参考テキストであり、参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。こうした担体または希釈剤の好適な例としては、これらに限定されないが、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。リポソームおよび固定油などの非水性ビヒクルも使用され得る。薬学的に活性な物質のためにこうした媒体および剤を使用することは、当該分野において周知である。任意の従来の媒体または剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物におけるその使用が企図される。補助的な活性化合物も組成物に組み込むことができる。
【０３６１】
本開示の医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように配合される。投与経路の例としては、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口（例えば吸入）、経皮（すなわち局所）、経粘膜、および直腸投与が挙げられる。例示的な実施形態では、投与経路は静脈内である。
【０３６２】
非経口、皮内、または皮下投与に使用される溶液または懸濁液としては、以下の成分が挙げられる：注射用水などの滅菌希釈剤、食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤、酢酸塩などの緩衝液、クエン酸塩またはリン酸塩、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性を調整するための剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基により調整できる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回投与バイアルに封入され得る。
【０３６３】
注射用途にとって好適である医薬組成物としては、滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。すべての場合において、組成物は無菌でなければならず、注射が容易にできる程度に流動性であるものとする。製造および保管の条件下で安定している必要があり、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されているものとする。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合は必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用により維持され得る。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。いくつかの実施形態では、等張剤、例えば、糖、多価アルコール（マニトール、ソルビトールなど）、塩化ナトリウムを組成物に含めることが望ましい。注射可能な組成物の長期吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによりもたらされ得る。
【０３６４】
滅菌注射液は、必要な量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した成分の１つまたは組み合わせと共に適切な溶媒に組み込み、続いてろ過滅菌することにより調製できる。一般に、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒および上記に列挙したものからの必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことにより調製される。無菌の注射可能な溶液を調製するための無菌粉末の場合、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、その活性成分の粉末および以前に滅菌ろ過した溶液から任意の追加の所望の成分がもたらされる。
【０３６５】
経口組成物は一般に、不活性希釈剤または食用担体を含む。それらはゼラチンカプセルに封入するか、圧縮して錠剤にすることができる。活性化合物は、経口治療投与の目的のために、賦形剤と共に組み込まれ得、かつ錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用され得る。口腔用組成物は、うがい薬として使用するために液体担体を使用して調製することもでき、この場合、液体担体中の化合物は経口により適用され、素早く回され、吐出または嚥下される。薬学的に適合する結合剤、および／またはアジュバント材料を組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチなどは、以下の成分のいずれか、または同様の性質の化合物を含むことができる：微結晶セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチンなどのバインダー、デンプンまたは乳糖などの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル、またはコーンスターチなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムまたはステロットなどの潤滑剤、コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤、ショ糖またはサッカリンなどの甘味料、または、ペパーミント、サリチル酸メチル、オレンジ風味などの着香剤。
【０３６６】
吸入による投与の場合、化合物は、好適な噴射剤、例えば二酸化炭素などのガスを含む加圧容器またはディスペンサーからのエアロゾルスプレー、またはネブライザーの形態で送達される。
【０３６７】
全身投与は、経粘膜または経皮手段によるものでもあり得る。経粘膜または経皮投与の場合、浸透するバリアに適した浸透剤が配合物中に使用される。こうした浸透剤は一般に当技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用により達成され得る。経皮投与の場合、活性化合物は、当技術分野で一般的に公知である軟膏、膏薬、ゲル、またはクリームに配合される。
【０３６８】
化合物は、坐剤（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を含む）または直腸送達用の保持浣腸剤の形態でも調製され得る。
【０３６９】
一実施形態では、活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系などの徐放性配合物など、身体からの急速な排出から化合物を保護する担体と共に調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸などの生分解性である生体適合性ポリマーが使用され得る。こうした配合物を調製するための方法は、当業者には明らかであろう。材料は、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体により感染細胞を標的とするリポソームを含む）も、薬学的に許容される担体として使用できる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載の、当業者に公知である方法に従って調製され得る。
【０３７０】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、単位剤形で経口または非経口組成物を配合することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形形態は、治療される対象の単位投薬量として適している物理的に別個の単位を指す。各単位は、必要とされる医薬担体に関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含む。本開示の単位剤形形態の仕様は、活性化合物の固有の特性および得られる特定の治療効果、ならびに個体の治療のためにこうした活性化合物を混合する技術に固有の制限によって決定され、かつそれらに直接依存する。
【０３７１】
医薬組成物は、投与のための指示書と共に容器、パック、またはディスペンサーに含めることができる。
【０３７２】
用量
本明細書で提供されるように、対象は、約１ｎｇ／ｋｇ〜１００ｇ／ｋｇのいずれかの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。例示的実施形態では、対象は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。一実施形態では、対象は、約０．２５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約０．５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約２ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約３ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約６ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約０．７５ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１．５ｍｇ／ｋｇ〜約２．５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約２ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約３．５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約３ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約３．５ｍｇ／ｋｇ〜約４．５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約４ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約４．５ｍｇ／ｋｇ〜約５．５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１０ｍｇ〜約２００ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約２５ｍｇ〜約５００ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１０ｍｇ〜約２５ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約２０ｍｇ〜約５０ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約３０ｍｇ〜約７５ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約６０ｍｇ〜約１５０ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約８０ｍｇ〜約２００ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１００ｍｇ〜約２５０ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１２０ｍｇ〜約３００ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１４０ｍｇ〜約３５０ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１６０ｍｇ〜約４００ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約１８０ｍｇ〜約４５０ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。別の実施形態では、対象は、約２００ｍｇ〜約５００ｍｇの固定用量で、ＡＡまたは結合型ＡＡが投与される。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、対象は、対象の体重に基づいて、結合型ＡＡが投与される。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、対象は、結合型ＡＡが投与され、その投薬量（ｍｇ／ｋｇで測定した場合）は、対象の実際の体重に基づく。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、対象は、結合型ＡＡが投与され、その投薬量（ｍｇ／ｋｇで測定した場合）は、対象の調整された理想体重（ＡＩＢＷ）に基づく。いくつかの実施形態では、調整された理想体重は、特定の対象の実際の体重と、対象に対応する男性および女性対象の所定の理想体重（ＩＢＷ）との差に基づいて計算される。いくつかの実施形態では、特定の対象の理想体重は、対象の身長に基づく。いくつかの実施形態では、特定の男性対象の理想体重（ＩＢＷ）（単位キログラム）は、ＩＢＷ＝０．９ｘ（高さ（ｃｍ））‐８８として決定される。特定の女性対象のＩＢＷ（単位キログラム）は、ＩＢＷ＝０．９ｘ（高さ（ｃｍ））‐９２として決定される。いくつかの実施形態では、特定の対象の調整された理想体重（ＡＩＢＷ）（単位キログラム）は、ＡＩＢＷ＝ＩＢＷ＋０．４ｘ（実際の体重‐ＩＢＷ）により求められ、ＩＢＷは、所定の身長と性別に基づく。いくつかの実施形態では、男性対象および女性対象は、ヒト対象である。いくつかの実施形態では、ヒト対象のＡＩＢＷは、約４０ｋｇ〜約１００ｋｇである。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、対象は、毎日、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、７日毎、８日毎、９日毎、１０日毎、１１日毎、１２日毎、１３日毎、１４日毎、１５日毎、１６日毎、１７日毎、１８日毎、１９日毎、２０日毎、２１日毎、またはさらには３０日毎にＡＡまたは結合型ＡＡが静脈内投与される。いくつかの実施形態では、ＡＡおよび／または剤が有効である限り、対象は、ＡＡまたは結合型ＡＡが静脈内投与される。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、対象は、ＡＡまたは結合型ＡＡが１日１回投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ＡＡまたは結合型ＡＡが１日に複数回、例えば、４時間毎、６時間毎、４〜６時間毎、８時間毎、または１２時間毎などに投与される。
【０３７８】
本発明は、以下の実施例でさらに説明される。これらは、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。
【０３７９】
実施例
実施例１：ＣＤ１６６に結合する結合型活性化可能抗体の産生および試験
以下に示される実施例で使用されるＡＡは、本明細書で提供され、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１６／１７９２８５に開示されている方法を使用して生成し、かつ特徴を明らかにした。
【０３８０】
活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲート（ＡＡＤＣ）（図１に示されている）は、ヒト異種移植腫瘍を有するマウスモデルで抗腫瘍活性を示し、前臨床試験で十分に許容されている（Ｗｅａｖｅｒら、ＡＡＣＲ−ＮＣＩ−ＥＯＴＲＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ２０１５）。ＣＤ１６６は、図２、表４、および表５に示すように、多くの癌および健康な組織で広く発現している。
【表１１】
2020532509.tif 000021
【表１２】
2020532509.tif 000022
【０３８１】
図３〜６は、ヒト異種移植腫瘍のマウスモデルにおいて、本発明のＣＤ１６６  ＡＡ薬物コンジュゲートが、予測されるヒト用量以下の用量で完全かつ持続的な応答をもたらしたことを示している。
【０３８２】
実施例２：高いＣＤ−１６６発現腫瘍を有する対象における活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートの安全性を判定するためのオープン標識多施設用量漸増試験
本試験では、高いＣＤ１６６発現腫瘍（乳癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、胆管癌）の単剤療法として投与される活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートの安全性の一次エンドポイント、最大耐量（ＭＴＤ）、推奨フェーズ２用量（ＲＰ２Ｄ）、用量制限毒性、および予備的な抗腫瘍活性を評価する。
【０３８３】
二次エンドポイントは次のとおりである：（１）固形癌効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）バージョン１．１または該当する腫瘍固有の基準の応答評価に従って客観的な応答率の測定、（２）応答までの時間、（３）応答期間、（４）無増悪生存期間、（５）全生存期間、（６）ＡＡＤＣの薬物動態プロファイル（完全なＡＡＤＣ、合計ＡＡＤＣ、合計ＡＡＤＣ結合型ＤＭ４、遊離ＤＭ４、およびＳ−メチルＤＭ４の分析を含む）、および（７）抗薬物抗体形成の発生率。
【０３８４】
追加のエンドポイントとしては、（１）治療前および治療を受けている間の腫瘍検体におけるＣＤ１６６発現および有糸分裂マーカー（Ｋｉ−６７など）などのＡＡＤＣの臨床活性に関連する予測バイオマーカーを特定すること、および（２）治療中の腫瘍生検試料中および末梢血中それぞれでのプロテアーゼ活性およびＡＤＣＣの活性化を特徴付けることが挙げられる。
【０３８５】
この実施例で示す試験は、抗ＣＤ１６６  ＡＡＤＣのオープン標識多施設用量漸増概念実証フェーズ１／２試験であり、ここで、抗ＣＤ１６６  ＡＡＤＣは、本明細書で組み合わせ５５と呼ばれる抗ＣＤ１６６活性化可能抗体のＤＭ４結合型活性化可能抗体を含み、これは、配列番号４８０の重鎖配列および配列番号２４６の軽鎖配列を含む。
【０３８６】
本試験には、乳癌、去勢耐性前立腺癌（ＣＰＲＣ）、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の対象を含む。対象は、活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートにより、２１日毎に静脈内で治療され、本試験は次の２つのパート、パートＡとパートＢで進行する。研究デザインも図６に示す。
【０３８７】
パートＡ（用量漸増）（ｎ＜５０）では、投与された抗ＣＤ１６６  ＡＤＣＣの加速用量滴定後に、従来の３＋３設計を行う。３＋３設計は次のように記載されている：３名の対象については、最初の用量の抗ＣＤ１６６  ＡＡＤＣで治療が行われ、副作用が記録される。毒性が観察されない場合、用量を増加し、さらに３名の対象に治療を行う。３名中１名の対象が毒性を呈する場合には、最初の用量に３名の追加対象を登録する。２〜３名の対象が毒性を示す場合には、その用量は最大耐量として示される（ｈｔｔｐｓ：  ／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｍｃ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ＰＭＣ２６８４５５２／に記載）。この試験は、ＭＴＤを決定するために行い、ＲＰ２Ｄを決定するためにＭＴＤで治療を受けた改変毒性発現確率間隔２（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎｔｅｒｖａｌ２、（ｍＴＰＩ−２）−デザインコホートで終了する。
【０３８８】
この試験のパートＢ（用量拡大）は、７つの癌腫においてＲＰ２Ｄで投与された抗ＣＤ１６６  ＡＡＤＣの用量拡大段階の試験である（それぞれ最大１４名の対象、ｎ＜９８）。
【０３８９】
対象は進行するまで治療が行われる。治療期間は約６ヶ月で、３〜６ヶ月毎、またはさらに１〜２年、または対象が生存している限り、フォローアップ接触を有する。
【０３９０】
用量漸増コホートおよび用量拡大コホートの両方で、最大１５０人の対象が本試験に登録されている。対象の主要な適格基準を表６に示す。
【表１３】
2020532509.tif 000023
【０３９１】
用量漸増コホートおよび用量拡大コホートの両方で、最大１５０人の対象が本試験に登録されている。有害事象および併用投薬は、抗ＣＤ１６６ＡＡＤＣサイクル１の１日目、８日目、１５日目に査定され、その後、治療終了時に、その後の各治療サイクルの初日に評価される。眼症状およびＥＣＯＧパフォーマンススコアの査定は、スクリーニング、各治療サイクルの初日、および治療終了時に実施される。スクリーニング時および本試験の特定の時点で、すべての対象に対して完全な眼科検査が実施される。視力または他の眼症状の治療上の緊急変化が報告されている対象は、他のすべてのサイクルにおいて注入前に、臨床的に示されているように、繰り返し検査を受ける。血液学および血清化学については、治療のための来院時に毎回評価を行う。パートＡに参加している対象のアーカイブ組織または新鮮な生検試料がベースラインで提供される。パートＢでは、治療前および治療中の生検および末梢血試料の収集（活性化可能な抗体の完全性を決定するための一部）は、各腫瘍種１名以上、少なくとも７名の対象に必須である。場合によっては、各腫瘍種の１名以上の対象からの生検が収集され、例えば、各腫瘍種について２名、３名、４名、５名、６名、７名またはそれ以上の対象からの生検が収集される。薬物動態、薬力学、およびバイオマーカー分析用の血液試料は、事前に指定されている時点で得る。抗ＣＤ１６６  ＡＡＤＣの最初の投与から８週間毎に、腫瘍反応査定のための画像診断が実施される。治験投薬の最後の投与後、最初の１年間は、対象は３ヶ月毎に評価され、その後６ヶ月毎または死亡するまで評価される。
【０３９２】
薬物活性化可能抗ＣＤ１６６抗体薬物コンジュゲートの活性化および活性を評価するためのいくつかの追加の方法を表７および図７Ａ、７Ｂに示す。
【表１４】
2020532509.tif 000024
【０３９３】
実施例３  生体試料中における活性化された抗ＣＤ１６６活性化可能抗体および完全抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の定量化
この実施例は、７６１４．６−３００１−ＨｕＣＤ１６６を投与されたマウスの血漿および異種移植腫瘍試料中で活性化されている、および完全な抗ＣＤ１６６活性化可能抗体７６１４．６−３００１−ＨｕＣＤ１６６を検出する能力について記載する。
【０３９４】
本明細書で提示されている試験では、本明細書において７６１４．６−３００１−ＨｕＣＤ１６６と呼ばれる（ＨｕＣＤ１６６−７６１４．６−３００１とも呼ばれる）抗ＣＤ１６６活性化可能抗体を使用した。この抗体は、配列番号４８０の重鎖配列および配列番号２４６の軽鎖配列を含む。
【０３９５】
活性化された、および完全な抗ＣＤ１６６活性化可能抗体７６１４．６−３００１−ＨｕＣＤ１６６の定量化は、抗ヒトＩｇＧ抗体を使用してＷｅｓシステムによって査定した（抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｑｕａｌｅｘ  Ｃａｔａｌｏｇ  ＃Ａ１１０ＵＫ）。ヌードマウスに、マトリゲル（商標）と１：１で混合した無血清培地中の５ｘ１０ｅ６Ｈ２９２細胞を皮下移植した。２００〜５００ｍｍ２Ｈ２９２異種移植片を保持するマウスに、５ｍｐｋの抗ＣＤ１６６活性化可能抗体７６１４．６−３００１−ＨｕＣＤ１６６を投与した。処置の１日後、腫瘍および血漿（ヘパリン）を収集し、分析前に−８０℃で保存した。腫瘍ホモジネートは、バロサイクラー（Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｈａｌｔ（商標）プロテアーゼ阻害剤シングルユースカクテルキット（カタログ番号７８４３０）を追加して、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＩＰ溶解緩衝液（カタログ番号８７７８８）中で調製した。ＨＡＬＴプロテアーゼ阻害剤／ＥＤＴＡを含むＩＰ溶解緩衝液中のタンパク質溶解物１ｍｇ／ｍＬおよびＰＢＳで２０分の１に希釈した血漿試料を、本明細書に記載のＷｅｓシステムにより分析した。図７Ａおよび図７Ｂは、血漿（図７Ａ）と比較して腫瘍（図７Ｂ）における優先的活性化を示している。。
【０３９６】
実施例４  生体試料中の活性化された完全な抗ＣＤ１６６結合型活性化可能抗体の定量化
この実施例は、ＳＰＤＢリンカーを介してメイタンシノイド毒素ＤＭ４に結合した、活性化された完全な抗ＣＤ１６６活性化可能抗体を検出する能力について記載する（組み合わせ５５）。
【０３９７】
この実施例では、本明細書で組み合わせ５５と呼ばれる抗ＣＤ１６６活性化可能抗体のＤＭ４結合型活性化可能抗体を使用しており、これは、配列番号４８０の重鎖配列およびｓｐｄｂリンカーを介してＤＭ４に結合した配列番号２４６の軽鎖配列を含む。
【０３９８】
抗ＣＤ１６６結合型活性化可能抗体は、３７℃で２時間、８０ｕｇ／ｍｌのマトリプターゼ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号３９４６−ＳＥ）または８０ｕｇ／ｍｌのＭＭＰ１４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号９１８−ＭＰ）のいずれかで活性化し、完全な結合型活性化可能抗体と混合した。次に、混合物を、抗ヒトＩｇＧを使用して上記のＷｅｓシステムで分析した（Ｈ＆Ｌ）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｑｕａｌｅｘカタログ番号Ａ１１０ＵＫ）。図８Ａおよび図８Ｂは、マトリプターゼ活性化（図８Ａ）またはＭＭＰ１４活性化（図８Ｂ）結合型活性化可能抗体を完全な結合型活性化可能抗体から分離する能力を示す。
【０３９９】
本発明をその詳細な説明と共に記載しているが、上記説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示するものであり、限定するものではないことが意図される。他の態様、利点、および変形は、以下の範囲内である。
【０４００】
実施例５  抗ＣＤ１６６活性化可能抗体による治療後の対象における部分応答のエビデンス
この実施例は、ＳＰＤＢリンカー（組み合わせ５５）を介してメイタンシノイド毒素ＤＭ４に結合した完全抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の投与が、対象において部分的応答をもたらすことを実証している。
【０４０１】
この実施例では、対象は頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を呈し、最初のスクリーニングでは標的病変のみを呈し、非標的病変は呈していない。この対象では、試験中に、いかなる新しい腫瘍の発現も観察されなかった。対象は、３週間毎に、ＳＰＤＢリンカー（組み合わせ５５）を介してメイタンシノイド毒素ＤＭ４に結合した５ｍｇ／ｋｇの完全抗ＣＤ１６６活性化可能抗体により治療された。結合型活性化可能抗体の投与された投薬量は、対象の調整された理想体重に基づくものであった。
【０４０２】
対象は、初期スクリーニング（４１ｍｍ）からサイクル３の来院（２８ｍｍ）（すなわち、最初の投与後９週間）までに、−３１．７％の腫瘍負荷の変化を経験した。サイクル６の来院（すなわち、最初の投与後１８週間）時、対象の腫瘍負荷は（３１．５ｍｍ）であった。したがって、対象は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１分類に基づく最初のスクリーニング以降、部分的応答を経験した。
【０４０３】
実施例６  治療後のヒト対象における合計の完全な抗ＣＤ１６６活性化可能抗体および代謝産物の薬物動態
この実施例は、ヒト対象への投与後、ＳＰＤＢリンカー（組み合わせ５５）を介してメイタンシノイド毒素ＤＭ４に結合した合計の完全抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の薬物動態を実証している。
【０４０４】
上記の治験の用量漸増セグメントでは、この試験は、結合型抗ＣＤ１６６活性化可能抗体（組み合わせ５５）の０．２５ｍｇ／ｋｇ〜４．０ｍｇ／ｋｇの用量（対象の調整された理想体重に基づく）を受けた対象の薬物動態（ＰＫ）およびＡＤＡを査定するように設計された。ＰＫ試験の場合、複数の分析を使用して、以下の血清レベルを決定した；（１）結合型ＤＭ４の存在下および非存在下の両方での完全な活性化可能性ＣＤ１６６抗体、（２）結合型ＤＭ４の存在下および非存在下の両方での合計（すなわち、完全なものと切断されたものとの両方）抗ＣＤ１６６活性化可能抗体、（３）ＤＭ４が結合している抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の合計（すなわち、完全なものと切断されたものとの両方）、（４）遊離ＤＭ４、および（５）Ｓ−メチルＤＭ４、細胞毒性ＤＭ４代謝産物。
【０４０５】
本試験は、完全な結合型抗ＣＤ１６６活性化可能抗体（組み合わせ５５）の投与を受けたヒト対象から採取された血液試料を分析することにより実施した。サイクル１（すなわち、第１ラウンドの薬物の投与）では、本試験は、注入前、注入終了時、および対象の来院中の２日目、３日目、４日目、８日目、および１５日目に評価対象から血液試料を採取するように設計した。本試験は、その後のサイクル２、４、６、８、およびその後８サイクル毎に、各サイクルで注入前に血液試料を採取するように設計された。サイクル３では、本試験は、注入前、注入終了時、および対象の来院中の８日目および１５日目に血液試料を採取するように設計された。本試験は、対象の来院中の治験終了時に最終血液試料を採取するように設計された。
【０４０６】
図９Ａ〜９Ｅに示すように、指示された投薬量の組み合わせ５５を投与後のＰＫ分析の例示的な結果が示されている。各グラフで、点線は各アッセイの定量化レベル（ＬＬＯＱ）の下限を示し、この線より下の点には値ＬＬＯＱ／２が割り当てられている。図９Ａのグラフは、ヒト対象に対して、指示された投薬量（ＡＩＢＷに基づいて）の組み合わせ５５を投与後、非結合であるか、またはＤＭ４に結合された完全な（すなわち、切断されていない）抗ＣＤ１６６活性化抗体の経時的血清濃度を示している。図９Ｂのグラフは、ヒト対象に対して、指示された投薬量（ＡＩＢＷに基づく）で組み合わせ５５を投与後、ＤＭ４に結合した抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の合計（すなわち、切断されているものと切断されていないもの）の経時的血清濃度を示している。図９Ｃのグラフでは、ヒト対象に対する、指示された投薬量（ＡＩＢＷに基づく）で組み合わせ５５を投与後、遊離ＤＭ４の経時的血清濃度を示している。図９Ｄのグラフは、ヒト対象に対する、指示された投薬量（ＡＩＢＷに基づく）で組み合わせ５５を投与後、Ｓ−メチルＤＭ４（ＤＭ４−Ｍｅ）の経時的血清濃度を示している。図９Ｅのグラフは、ヒト対象に対する、指示された投薬量（ＡＩＢＷに基づく）で組み合わせ５５を投与後、結合されていないか、またはＤＭ４に結合した抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の合計（すなわち、切断されているものと切断されていないもの）の経時的血清濃度を示している。
【０４０７】
例示的なＰＫデータは、抗ＣＤ１６６活性化可能抗体が完全な形態で主に血清中に循環していることを示している。遊離ＤＭ４およびＤＭ４−Ｍｅは両方とも、抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の合計の１．９ｍｏｌ％未満として循環した。完全な抗ＣＤ１６６活性化可能抗体ｔ１／２の中央値は３．７１〜８．５７日であった。複数回投与したときに、完全な抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の最小血漿濃度（Ｃｍｉｎ）の累積比（用量３：用量１）が１．３４を超えることはなく、用量による傾向はなかった。
【０４０８】
例示的なデータは、用量１  ＡＵＣ０−ｔａｕ（投与間隔終了まで評価される曲線下面積）およびＣｍａｘ（最大血漿濃度）に関する完全な抗ＣＤ１６６活性化可能抗体対その合計の比もほぼ一貫していると考えられることも示している。結合型抗ＣＤ１６６活性化可能抗体の単回投与後の完全な抗ＣＤ１６６活性化可能抗体およびこれらの抗体の合計の曝露は、一般に、ＡＵＣ０−ｔａｕおよびＣｍａｘによって測定される用量の増加と共に増加した。
【０４０９】
例示的な実施形態
本発明は、以下の例示的な列挙された実施形態を参照することにより定義され得る。
【０４１０】
実施形態１
対象において癌を治療する、癌の症状を緩和する、または癌の進行を遅延させる方法であって、本方法は、それを必要とする対象に、剤に結合されている治療有効量の活性化可能抗体（ＡＡ）を投与することを含み、ＡＡは、
（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、
（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、
（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含み、
かつ／または異なる記述では、
対象において癌を治療する、癌の症状を緩和する、または癌の進行を遅延させる際に使用するための、剤に結合された活性化可能抗体（ＡＡ）であり、ＡＡは、
（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、
（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、
（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含み、ＡＡは、それを必要とする対象に治療的有効量で投与するためのものである、方法。
【０４１１】
実施形態２
癌が、乳癌、去勢耐性前立腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌、または非小細胞肺癌である、実施形態１に記載の方法または使用。
【０４１２】
実施形態３
対象においてＣＤ１６６を発現する細胞の成長、増殖、または転移を阻害するか、または低減させる方法であって、本方法は、それを必要とする対象に、剤に結合されている治療有効量の活性化可能抗体（ＡＡ）を投与することを含み、ＡＡは、
（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、
（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、
（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、
かつ／または異なる記述では、
例えば対象における癌の治療のために、ＣＤ１６６を発現する細胞の成長、増殖、または転移を阻害するか、または低減させるのに使用する剤に結合した活性化可能抗体（ＡＡ）であって、ＡＡは、
（ａ）哺乳動物ＣＤ１６６に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）であって、配列番号４８０のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２４０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むＡＢと、
（ｂ）ＡＢに連結されたマスキング部分（ＭＭ）であって、ＡＡが切断されていない状態にある場合に哺乳動物ＣＤ１６６へのＡＢの結合を阻害し、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＭＭと、
（ｃ）ＡＢに連結された切断可能部分（ＣＭ）であって、プロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＭと、を含み、
ＡＡは、それを必要とする対象に治療的有効量で投与するためのものである、方法。
【０４１３】
実施形態４
対象が、乳癌、去勢耐性前立腺癌、胆管癌、子宮内膜癌、上皮性卵巣癌、頭頸部扁平上皮癌、または非小細胞肺癌に罹患している、実施形態３に記載の方法または使用。
【０４１４】
実施形態５
細胞は、乳房細胞、前立腺細胞、子宮内膜細胞、卵巣細胞、頭頸部扁平上皮細胞、胆管細胞、または肺細胞である、実施形態３に記載の方法。
【０４１５】
実施形態６
剤が、メイタンシノイドまたはその誘導体である、実施形態１〜５のいずれか一つに記載の方法。
【０４１６】
実施形態７
剤がＤＭ４である、実施形態１〜６のいずれか一つに記載の方法。
【０４１７】
実施形態８
ＤＭ４がリンカーを介してＡＡに結合される、実施形態１〜７のいずれか一つに記載の方法。
【０４１８】
実施形態９
リンカーが、ＳＰＢＤ部分を含む、実施形態８に記載の方法または使用。
【０４１９】
実施形態１０
ＡＢがＣＭに連結される、実施形態１〜９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４２０】
実施形態１１
ＭＭは、切断されていない状態のＡＡが以下のようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を含むようにＣＭに連結される、実施形態１〜１０のいずれか一つに記載の方法または使用：ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭ。
【０４２１】
実施形態１２
ＡＡが、ＭＭとＣＭとの間に連結ペプチドを含む、実施形態１〜１１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４２２】
実施形態１３
ＡＡが、ＣＭとＡＢとの間に連結ペプチドを含む、実施形態１〜１２のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４２３】
実施形態１４
連結ペプチドが、配列番号４７９のアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載の方法または使用。
【０４２４】
実施形態１５
ＡＡが、ＣＭとＡＢとの間に連結ペプチドを含む、実施形態１〜１４のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４２５】
実施形態１６
連結ペプチドが、１５のアミノ酸配列を含む、実施形態１５に記載の方法または使用。
【０４２６】
実施形態１７
ＡＡが、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を含み、切断されていない状態にあるＡＡは、以下のようにＮ末端からＣ末端への構造的配置を有する、実施形態１〜１６のいずれか一つに記載の方法または使用：ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−ＡＢまたはＡＢ−ＬＰ２−ＣＭ−ＬＰ１−ＭＭ。
【０４２７】
実施形態１８
軽鎖が、そのＮ末端でスペーサーに連結している、実施形態１〜１７のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４２８】
実施形態１９
スペーサーは、配列番号３０５のアミノ酸配列を含む、実施形態１８に記載の方法または使用。
【０４２９】
実施形態２０
ＭＭおよびＣＭが軽鎖に連結されている、実施形態１〜１９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４３０】
実施形態２１
ＭＭがＣＭに連結され、これにより、切断されていない状態のＡＡが、スペーサー−ＭＭ−ＬＰ１−ＣＭ−ＬＰ２−軽鎖のようにその軽鎖上のＮ末端からＣ末端への構造的配置を含む、実施形態２０に記載の方法または使用。
【０４３１】
実施形態２２
スペーサーが配列番号３０５のアミノ酸配列を含み、ＬＰ１が配列番号４７９のアミノ酸配列を含み、ＬＰ２がアミノ酸配列ＧＧＳを含む、実施形態２１に記載の方法または使用。
【０４３２】
実施形態２３
ＡＡの軽鎖が、配列番号３１４の配列を含む、実施形態１〜２２のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４３３】
実施形態２４
ＡＡの軽鎖が、配列番号２４６の配列を含む、実施形態１〜２３のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４３４】
実施形態２５
対象が、少なくとも１８歳である、実施形態１〜２４のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４３５】
実施形態２６
対象のＥＣＯＧパフォーマンスステータスが０〜１である、実施形態１〜２５のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４３６】
実施形態２７
対象が活動性転移癌の組織学的に確認された診断を有する、実施形態１〜２６のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４３７】
実施形態２８
対象が、局所的に進行した切除不能固形腫瘍の組織学的に確認された診断を有する、実施形態１〜２６のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４３８】
実施形態２９
対象が、投与時または使用時に少なくとも３ヶ月の平均余命を有する、実施形態１〜２８のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４３９】
実施形態３０
対象が乳癌を有する、実施形態１〜２９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４４０】
実施形態３１
乳癌がＥＲ＋である、実施形態３０に記載の方法または使用。
【０４４１】
実施形態３２
以前に抗ホルモン療法を受けており、かつ疾患の進行を経験している、実施形態３０または３１に記載の方法または使用。
【０４４２】
実施形態３３
対象がトリプルネガティブ乳癌を有し、少なくとも２つの前治療ラインを受けている、実施形態３０に記載の方法または使用。
【０４４３】
実施形態３４
対象が去勢耐性前立腺癌を有する、実施形態１〜２９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４４４】
実施形態３５
対象が少なくとも１つの前治療を受けている、実施形態３４に記載の方法または使用。
【０４４５】
実施形態３６
対象が胆管癌を有する、実施形態１〜２９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４４６】
実施形態３７
対象が、ゲムシタビン含有レジメンの少なくとも１つの前のラインで奏功していない、実施形態３６に記載の方法または使用。
【０４４７】
実施形態３８
対象が子宮内膜癌を有する、実施形態１〜２９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４４８】
実施形態３９
対象が子宮外または進行疾患のための少なくとも１つの白金含有レジメンを受けている、実施形態３８に記載の方法または使用。
【０４４９】
実施形態４０
対象が上皮性卵巣癌を有する、実施形態１〜２９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４５０】
実施形態４１
対象が白金耐性癌を有する、実施形態４０に記載の方法または使用。
【０４５１】
実施形態４２
対象が白金不応性卵巣癌を有する、実施形態４０に記載の方法または使用。
【０４５２】
実施形態４３
対象がＢＲＣＡ突然変異を有し、ＰＡＲＰ阻害剤に対して不応性であるか、さもなければ不適格である、実施形態４０に記載の方法または使用。
【０４５３】
実施形態４４
対象が非ＢＲＣＡ突然変異を有する、実施形態４０に記載の方法または使用。
【０４５４】
実施形態４５
対象が頭頸部小細胞癌（ＨＮＳＣＣ）を有する、実施形態１〜２９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４５５】
実施形態４６
対象が少なくとも１つの白金含有レジメンを受けている、実施形態４５に記載の方法または使用。
【０４５６】
実施形態４７
対象が少なくとも１つのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤を受けている、実施形態４５に記載の方法または使用。
【０４５７】
実施形態４８
対象が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する、実施形態１〜２９のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４５８】
実施形態４９
対象が少なくとも１つの白金含有レジメンを受けている、実施形態４８に記載の方法または使用。
【０４５９】
実施形態５０
対象が、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤を受けている、実施形態４８に記載の方法または使用。
【０４６０】
実施形態５１
対象が少なくとも１つのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤を受けている、実施形態４８に記載の方法または使用。
【０４６１】
実施形態５２
ＡＡが約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜約６ｍｇ／ｋｇの用量で、剤に結合されている、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４６２】
実施形態５３
用量が約０．２５ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４６３】
実施形態５４
用量が約０．５ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４６４】
実施形態５５
用量が、約１ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４６５】
実施形態５６
用量が、約２ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４６６】
実施形態５７
用量が、約４ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の使用または方法。
【０４６７】
実施形態５８
用量が、約５ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４６８】
実施形態５９
用量が、約６ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４６９】
実施形態６０
用量が、約０．２５ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４７０】
実施形態６１
用量が約０．５ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４７１】
実施形態６２
用量が、約１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４７２】
実施形態６３
用量が、約２ｍｇ／ｋｇ〜約４ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４７３】
実施形態６４
用量が、約４ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の使用または方法。
【０４７４】
実施形態６５
用量が、約５ｍｇ／ｋｇ〜６ｍｇ／ｋｇである、実施形態５２に記載の方法または使用。
【０４７５】
実施形態６６
ＡＡが、約１０ｍｇ〜約２００ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４７６】
実施形態６７
ＡＡが、約２５ｍｇ〜約５００ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４７７】
実施形態６８
ＡＡが、約１０ｍｇ〜約２５ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４７８】
実施形態６９
ＡＡが、約２０ｍｇ〜約５０ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４７９】
実施形態７０
ＡＡが、約３０ｍｇ〜約７５ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８０】
実施形態７１
ＡＡが、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８１】
実施形態７２
ＡＡが、約５０ｍｇ〜約１２５ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８２】
実施形態７３
ＡＡが、約６０ｍｇ〜約１５０ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８３】
実施形態７４
ＡＡが、約８０ｍｇ〜約２００ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８４】
実施形態７５
ＡＡが、約１００ｍｇ〜約２５０ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８５】
実施形態７６
ＡＡが、約１２０ｍｇ〜約３００ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８６】
実施形態７７
ＡＡが、約１４０ｍｇ〜約３５０ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８７】
実施形態７８
ＡＡが、約１６０ｍｇ〜約４００ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８８】
実施形態７９
ＡＡが、約１８０ｍｇ〜約４５０ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４８９】
実施形態８０
ＡＡが、約２００ｍｇ〜約５００ｍｇの固定用量で剤に結合している、実施形態１〜５１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４９０】
実施形態８１
対象に対して、剤に結合されているＡＡが静脈内に投与されるか、またはＡＡが静脈内使用のために配合される、実施形態１〜８０のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４９１】
実施形態８２
対象に、剤に結合されているＡＡが２１日毎に静脈内投与されるか、または２１日毎に使用するために配合される、実施形態１〜８１のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４９２】
実施形態８３
ＡＡが、実際の体重に基づく投薬量で剤に結合している、実施形態５２〜６５、８１、および８２のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４９３】
実施形態８４
ＡＡが、調整された理想体重に基づく投薬量で剤に結合している、実施形態５２〜６５、８１、および８２のいずれか一つに記載の方法または使用。
【０４９４】
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と共に記載しているが、上記説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示するものであり、限定するものではないことが意図される。他の態様、利点、および変形は、以下の範囲内である。
【図１】
2020532509.tif 000025
【図２】
2020532509.tif 000026
【図３】
2020532509.tif 000027
【図４】
2020532509.tif 000028
【図５】
2020532509.tif 000029
【図６】
2020532509.tif 000030
【図７Ａ】
2020532509.tif 000031
【図７Ｂ】
2020532509.tif 000032
【図８Ａ】
2020532509.tif 000033
【図８Ｂ】
2020532509.tif 000034
【図９Ａ】
2020532509.tif 000035
【図９Ｂ】
2020532509.tif 000036
【図９Ｃ】
2020532509.tif 000037
【図９Ｄ】
2020532509.tif 000038
【図９Ｅ】
2020532509.tif 000039
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月27日(2020.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020532509000001.app
【国際調査報告】
2020532509.tif 000040
2020532509.tif 000041
2020532509.tif 000042
2020532509.tif 000043