(57)【要約】  キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスを開示する。腫瘍溶解性アデノウイルスは、複製可能であり得る。キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＭＥＭ４０であり得る。少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド、例えば、ＭＥＭ４０で武装した複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスを、がんに罹患している患者に投与するステップを含む方法をさらに開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノウイルスゲノムの非必須領域内に挿入された異種核酸を含有する複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルス
を含み、前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、組成物。
【請求項２】
複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、Ｅ３遺伝子領域の一部または全部の欠失を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む核酸が、Ｅ３欠失遺伝子領域に挿入されている、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む核酸が、天然のＥ３遺伝子と逆方向に挿入されている、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
ＣＤ４０アゴニストが、少なくとも１つのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
少なくとも１つのＣＤ４０Ｌが、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＭＥＭ４０である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択されるリガンドと少なくとも９０％の同一性を有する、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
ＣＤ４０アゴニストに作動可能に連結している転写制御エレメントが、転写プロモーターである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
転写プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、ヒト５型アデノウイルスである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、Ｄｅｌｔａ２４アデノウイルスまたはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤアデノウイルスである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
アデノウイルスゲノムの非必須領域内に挿入された異種核酸を含有する複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスを、がんに罹患している患者に投与するステップ
を含み、前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、方法。
【請求項１６】
複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、Ｅ３遺伝子領域の一部または全部の欠失を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む核酸が、Ｅ３欠失遺伝子領域に挿入されている、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む核酸が、天然のＥ３遺伝子と逆方向に挿入されている、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、Ｄｅｌｔａ２４アデノウイルスまたはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤアデノウイルスである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＤ４０アゴニストが、少なくとも１つのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
少なくとも１つのＣＤ４０Ｌが、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＭＥＭ４０である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択されるリガンドと少なくとも９０％の同一性を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
ＣＤ４０アゴニストに作動可能に連結している転写制御エレメントが、転写プロモーターである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２６】
転写プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
腫瘍溶解性アデノウイルスが、薬学的に許容される担体を含む組成物として投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２８】
患者が、原発性または転移性のがんから選択されるがんを有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２９】
患者が、脳がんまたは膀胱がんを有する、請求項１５に記載の方法。
【請求項３０】
腫瘍溶解性アデノウイルスが、腫瘍内、静脈内、腹腔内、気管内、筋肉内、頭蓋内、内視鏡的、病巣内、経皮的、皮下、局所的に、または直接注射もしくは灌流により投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項３１】
腫瘍溶解性アデノウイルスが、１回または複数回投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項３２】
複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、１０６〜１０１３プラーク形成単位（ｐｆｕ）の用量で投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
少なくとも１つの追加の治療薬を投与するステップ
をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項３４】
少なくとも１つの追加の治療薬が、化学療法、免疫療法、外科手術、放射線療法、ウイルス療法、または生物学的療法である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
少なくとも１つの追加の治療薬が、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスの投与前に患者に投与される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
少なくとも１つの追加の治療薬が、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスの投与と同時に患者に投与される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
少なくとも１つの追加の治療薬が、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスの投与後に患者に投与される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
患者がヒトである、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年１２月２１日出願の米国仮特許出願第６２／４３７，４７４号明細書、及び２０１７年１１月９日出願の米国仮特許出願第６２／５８４，００８号明細書の優先権を主張し、これらはともに参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は概して、ウイルス学、免疫学、及び医学の分野に関する。より詳細には、がん治療のための腫瘍溶解性アデノウイルスベクターの組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
腫瘍溶解性ウイルスは、二重の作用機序：１）直接的腫瘍溶解に至る、腫瘍細胞における選択的ウイルス複製による腫瘍細胞の殺傷と、２）破壊された腫瘍細胞から抗原を放出することによる全身性抗腫瘍免疫の誘導とを有する、がん治療薬の一クラスである。天然及び遺伝子改変ウイルスはともに開発の途上にある。米国ＦＤＡは、２０１５年に初めての腫瘍溶解性ウイルスである、タリモジーン・ラハーパレプベック（ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）（ＩＭＬＹＧＩＣ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．製、サウザンドオークス、ＣＡ）、すなわちＫｏｈｌｈａｐｐら、２０１６年  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈにより報告されている、黒色腫の局所治療のための、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）をコードする遺伝子改変ヘルペスウイルスを認可した。しかし、黒色腫は、多くの型のうちの１つにすぎない。また、ＧＭ−ＣＳＦは、がん治療における使用について研究中の多くの化合物のうちの１つにすぎない。さらに、ヘルペスウイルスは、その腫瘍溶解特性に関して研究中の多くのウイルスのうちの１つにすぎない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第９５／２７０７１号
【特許文献２】国際公開第第９６／３３２８０号
【特許文献３】米国特許第５９２５５６５号明細書
【特許文献４】米国特許第６２１０９４６号明細書
【特許文献５】米国特許第６２８４７４２号明細書
【特許文献６】米国特許第６３１２６９９号明細書
【特許文献７】米国特許第６５５５３６８号明細書
【特許文献８】米国特許第６６４９３９６号明細書
【特許文献９】米国特許第６８１５２００号明細書
【特許文献１０】米国特許第６８２４７７１号明細書
【特許文献１１】米国特許第６８４１５４０号明細書
【特許文献１２】米国特許第６９５５８０８号明細書
【特許文献１３】米国特許第７０４５３４８号明細書
【特許文献１４】米国特許第７２２３５９３号明細書
【特許文献１５】米国特許第７２９７５４２号明細書
【特許文献１６】米国特許第７４９５０９０号明細書
【特許文献１７】米国特許第７９２８２１３号明細書
【特許文献１８】米国特許第８１６８１６８号明細書
【特許文献１９】米国特許第８９９２４５８号明細書
【特許文献２０】米国特許第９０６１０５５号明細書
【特許文献２１】米国特許第５９３５８１９号明細書
【特許文献２２】米国特許出願公開第２００３／０１３８４０５号明細書
【特許文献２３】米国特許出願公開第２００６／０１４７４２０号明細書
【特許文献２４】米国特許出願公開第２００９／０１７５８３０号明細書
【特許文献２５】米国特許出願公開第２０１３／００３５５７４号明細書
【特許文献２６】米国特許出願公開第２０１３／００３５６６０号明細書
【特許文献２７】米国特許出願公開第２０１４／０３７７２２１号明細書
【特許文献２８】米国特許出願公開第２０１４／０３７７２９４号明細書
【特許文献２９】米国特許出願公開第２０１５／０３０６１６０号明細書
【特許文献３０】米国特許出願公開第２０１６／０１４３９６７号明細書
【特許文献３１】米国特許出願公開第２０１６／０２８９６４５号明細書
【特許文献３２】米国特許出願公開第２０１３／００３５５６０号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ａｕｒｅｌｉａｎ  ２０１６年  Ｏｎｃｏ．  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｔｈｅｒ．９：２６２７〜２６３７
【非特許文献２】Ｆｕｅｙｏら、２０００年  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９：２〜１２
【非特許文献３】Ｇｒａｈａｍら、１９９１年  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ７：１０９〜１２８
【非特許文献４】Ｈｅｒｍａｎら、２００４年  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８５（１）：２５〜４０
【非特許文献５】Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、２００９年  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ３２（７）：６８９〜７０２
【非特許文献６】Ｋｏｈｌｈａｐｐら、２０１６年  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ２２（５）：１０４８〜１０５４
【非特許文献７】Ｌａｗｌｅｒら、２０１７年  ＪＡＭＡ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ３（６）：８４１〜８４９
【非特許文献８】Ｍａｃｅｊａｋら、１９９１年  Ｎａｔｕｒｅ３５３：９０〜９３
【非特許文献９】Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉら、１９９７年  Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１５：５４２〜５４６
【非特許文献１０】Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒら、１９８８年  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ８（３）：１１０３〜１１１２
【非特許文献１１】Ｒａｃｈｅｒら、１９９５年  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｔｅｃｈ９：１６９
【非特許文献１２】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；２１版（２００５年５月１日）
【非特許文献１３】Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  （ＵＳＰ  ４０  −  ＮＦ  ３５  ａｎｄ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）
【非特許文献１４】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ１９８５年（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イーストン、Ｐａ．米国）
【非特許文献１５】Ｒｏｉｚｍａｎ１９９６年  ＰＮＡＳ９３：１１３０７〜１１３１２
【非特許文献１６】Ｒｕｓｓｅｌｌら、２０１４年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ３０（７）：６５８〜６７０
【非特許文献１７】Ｓｉｎｇｈら、２０１７年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ８（１４４７）：１〜１０
【非特許文献１８】Ｓｕｚｕｋｉら、２００２年  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．８（１１）：３３４８〜５９
【非特許文献１９】Ｔｏｌｌｅｆｓｏｎら、１９９６年  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ２２０：１５２〜１６２
【非特許文献２０】ｖａｎ  Ｋｏｏｔｅｎら、２０００年  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ６７：２〜１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、がん治療のための腫瘍溶解性ウイルスベクターが必要とされ続けている。
【０００７】
背景の節において検討した主題はすべて、先行技術では必ずしもなく、単に背景の節におけるその検討の結果としての先行技術であると想定されるべきではない。そのため、背景の節で検討した先行技術における、またはこのような主題と関連した、いかなる課題の認識も、先行技術であると明示的に述べない限り先行技術として扱うべきではない。代わりに、背景の節におけるいかなる主題の検討も、特定の課題に対する発明者の方法の一部として扱うべきであり、その課題自体もまた、進歩性を有し得る。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
以下では、本開示のいくつかの態様の基本認識を提供するために本開示の簡略化した概要を示す。本概要は、本開示の徹底的な概説ではない。これは、本開示の鍵または重要な因子を明らかにすること、または本開示の範囲を正確に説明することを意図していない。この唯一の目的は、後に考察する、より詳細な説明の前置として簡略化した形態のいくつかの概念を示すことである。
【０００９】
いくつかの実施形態では、本開示は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性アデノウイルスに関する。腫瘍溶解性アデノウイルスは、複製可能であり得る。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性アデノウイルスを含む組成物を、腫瘍に罹患している患者に投与するステップを含む方法に関する。
【００１１】
いずれの実施形態においても、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＩＳＦ３０〜ＩＳＦ４１から選択され得、ＭＥＭ４０（ＩＳＦ３５）は、そのメンバーである。ＭＥＭ４０（ＩＳＦ３５）を含む、ＩＳＦ３０〜ＩＳＦ４１から選択されるキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする導入遺伝子は、非腫瘍溶解性で非複製のアデノウイルス内に、これまでに挿入されている。しかし、このような導入遺伝子を操作して、腫瘍溶解性及び／または複製可能なアデノウイルスに導入されたことはなかった。
【００１２】
本概要を提供して簡略化した形態における特定の概念を紹介し、この概念により詳細な説明において以下詳細にさらに記載する。他に明示的に述べる場合を除いて、本概要は、主張する主題の鍵または本質的な特徴を明らかにすることを意図しておらず、主張する主題の範囲を限定することをも意図していない。
【００１３】
１つまたは複数の実施形態の詳細を以下の記載において説明する。一例示的実施形態と関連して指示または記載する特徴は、他の実施形態の特徴と組合せ得る。したがって、本明細書に記載の任意の種々の実施形態は、組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。実施形態の態様は、修飾して、必要に応じて本明細書において特定する種々の特許、出願及び公開の概念を利用して、またさらなる実施形態を提供することができる。他の特徴、対象及び利点は、本記載、図面、及び特許請求の範囲から明らかとなろう。
【００１４】
本開示は、次の添付の図とともに用いる以下の記載を参照することにより理解され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ＭＥＭ４０を発現する新規の複製可能なアデノウイルスであるＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０（ＤＮＸ−ＭＥＭ４０）の構築を模式的に表す図である。
【図２】ＭＥＭ４０を発現する新規の複製可能なアデノウイルスであるＤｅｌｔａ−２４−ＭＥＭ４０の構築を模式的に表す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本開示の種々の例示的実施形態を以下に記載する。明確さのために、実際の履行の特徴のすべてを本明細書において記載はしない。もちろん、このような任意の実際の実施形態の開発において、多数の履行時特有の判断がなされて、開発者特有の目標、例えば、それぞれの履行ごとに変化する、システム関連及びビジネス関連の制約を有するコンプライアンスを達成しなければならないことが理解されよう。さらに、このような開発努力は、複雑かつ時間を要し得るが、それにもかかわらず、本開示の利点を有する当業者が取り組むべきルーティンであることが理解されよう。
【００１７】
添付の図を参照して、これより本主題を記載する。種々の構造は、説明のみを目的とし、当業者に周知の本開示の詳細を曖昧としないように、図面において模式的に表す。それにもかかわらず、添付の図面を包含して、本開示の例示的実施例を記載及び説明する。本明細書において使用する語句は、関連分野の当業者による語句の理解と一致した意味を有すると理解及び解釈されるべきである。用語または句の特別な定義、すなわち、当業者に理解される通常の及び慣習的意味と異なる定義を、本明細書の用語または句と一致して使用することにより暗示することは意図していない。用語または句が、特別な意味、すなわち、当業者に理解されるもの以外の意味を有することを意図する限りにおいて、このような特別な定義を定義的な方法で本明細書において明示的に説明し、この方法により用語または句の特別な定義を直接かつ明解に提供する。
【００１８】
本明細書において開示する主題は、種々の修飾及び代替形態を受け入れる余地があるが、その特定の実施形態は、図面において例示目的で示しており、本明細書において詳細に記載する。ただし、特定の実施形態の本明細書の記載が、開示する特定の形態に本開示を限定することを意図しないが、反対に、添付の特許請求の範囲により定義する本開示の趣旨及び範囲に属する、すべての修飾、等価物、及び代替物を包含することを意図することが理解されるべきである。
【００１９】
がんの概説
「がん」は、体内における細胞の制御不能な増殖を特徴とする疾患の大きなファミリーを指す。がんの代表的形態としては、カルシノーマ、サルコーマ、骨髄腫、白血病、リンパ腫、及び上記の混合型が挙げられる。さらなる例としては、以下により詳細に検討するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２０】
アデノウイルスの概説
「アデノウイルス」（Ａｄ）は、ヒトに感染する大型（約３６ｋｂ）のＤＮＡウイルスであるが、広宿主域をも示すウイルスである。物理的には、アデノウイルスは、二本鎖で直鎖状のＤＮＡゲノムを含有する正二十面体ウイルスである。約５０血清型のヒトアデノウイルスがあり、分子的、免疫学的、及び機能的基準に基づいて６つのファミリーに分けられる。成人期までに、すべてのヒトは、より一般的な血清型のアデノウイルスに実質的に感染しており、その主な影響としては、感冒様症状である。宿主細胞のアデノウイルス感染により、アデノウイルスＤＮＡがエピソームに保持され、これにより組み込むベクターに関連した潜在的遺伝毒性が減少する。さらに、アデノウイルスは、構造的に安定であり、大規模な増幅後にゲノム再編成が検出されていない。アデノウイルスは、その細胞周期段階に関係なく、ほとんどの上皮細胞に感染することができる。これまでのところ、アデノウイルス感染は、ヒトにおける急性呼吸器疾患のような軽度の疾患のみに関連していると考えられる。
【００２１】
アデノウイルスの感染環は、２つのステップ：アデノウイルスゲノムの複製の開始に先行し、調整タンパク質及びウイルスＤＮＡの複製ならびに転写に必要とされるタンパク質の産生を可能とする初期段階と、構造タンパク質の合成につながる後期段階とにより生じる。初期遺伝子は、Ｅ１〜Ｅ４と名付けられた（「Ｅ」は「初期」を表す）、アデノウイルスゲノムに散在する４つの領域に分布する。初期領域は、少なくとも６つの転写単位を含み、そのそれぞれは、それ自体のプロモーターを有する。初期遺伝子の発現は、それ自体で制御されており、いくつかの遺伝子は、他より先に発現する。３つの領域、Ｅ１、Ｅ２、及びＥ４は、ウイルスの複製に必須である。したがって、アデノウイルスが、このような機能のうちの１つについて欠損している場合、このタンパク質をトランスに供給しなければならず、さもなければウイルスは複製することができない。
【００２２】
Ｅ１初期領域は、アデノウイルスゲノムの５’末端に位置し、２つのウイルス転写単位、Ｅ１Ａ及びＥ１Ｂを含有する。この領域は、ウイルス感染環のかなり初期に関与するタンパク質をコードし、他のアデノウイルス遺伝子のほとんどすべての発現に必須である。特に、Ｅ１Ａ転写単位は、Ｅ１Ｂ、Ｅ２Ａ、Ｅ２Ｂ、Ｅ３ならびにＥ４領域及び後期遺伝子のプロモーターからの転写を含む、他のウイルス遺伝子の転写をトランス活性化するタンパク質をコードする。
【００２３】
アデノウイルスは、細胞表面受容体を介して許容宿主細胞に侵入し、次いで内在化する。複製周期の第１のステップに必要とされる特定のウイルスタンパク質と関連するウイルスＤＮＡは、感染細胞の核に侵入し、そこで転写が開始される。アデノウイルスＤＮＡの複製は、感染細胞の核において生じ、細胞の複製を必要としない。新規のウイルス粒子またはビリオンは、会合した後、感染細胞から放出され、他の許容細胞に感染することができる。
【００２４】
アデノウイルスは、魅力的な送達システムである。本開示の実施形態は、１細胞当たり１×１０５ウイルス粒子の最大収率を有する製造プロセスを利用することができる。プロセスは、タンパク質、血清、及び多様な予防的かつ治療的ワクチン製剤に適するものとする動物由来の成分を含まない、または本質的に含まなくてもよい。
【００２５】
アデノウイルスが変異しており、それによってアデノウイルスが条件的に複製的（特定の条件下で複製可能）である場合、ヘルパー細胞は、ウイルス複製に必要とされ得る。必要とされる場合、ヘルパー細胞株は、ヒト胚性腎細胞、筋細胞、造血細胞または他のヒト胚性間葉系もしくは上皮細胞のようなヒト細胞に由来し得る。あるいは、ヘルパー細胞は、ヒトアデノウイルスに許容的な他の哺乳動物種の細胞に由来し得る。このような細胞は、例えば、ベロ細胞または他のサル胚性間葉系もしくは上皮細胞を含む。特定の態様では、ヘルパー細胞株は、２９３である。宿主及びヘルパー細胞を培養する種々の方法は、当該技術分野において見出すことができ、例えば、（Ｒａｃｈｅｒ，  Ａ．Ｊ．、Ｆｏｏｋｓ，  Ａ．Ｒ．及びＧｒｉｆｆｉｔｈｓ，  Ｊ．Ｂ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｔｅｃｈ（１９９５年）９：１６９）がある。
【００２６】
アデノウイルスは、種々の方法を使用して単離することができる。ほとんどの場合、Ａｄゲノムのトランスフェクション後、アデノウイルスプラークをアガロースの表面を覆う細胞から単離し、ウイルス粒子を増殖させて分析する。プロトコルの詳細については、当業者は（Ｇｒａｈａｍ，  Ｆ．Ｌ．、及びＰｒｅｖｅｃ，  Ｌ．（１９９１年）、アデノウイルスベクターの操作について、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ７、１０９〜１２８）を参照する。
【００２７】
アデノウイルスベクター生成の代替技術は、細菌人工染色体（ＢＡＣ）システム、相補的アデノウイルス配列を含有する２つのプラスミドを利用したｒｅｃＡ＋細菌株におけるｉｎ  ｖｉｖｏ細菌組換え、及び酵母人工染色体（ＹＡＣ）システムの利用を含む（ＰＣＴ国際特許出願公開第９５／２７０７１号及び第９６／３３２８０号、これらは参照により本明細書に組み込まれる）。
【００２８】
本開示における使用に適したアデノウイルスベクターの代表例としては、米国特許出願公開第２００９／０１７５８３０号明細書、第２０１４／０３７７２２１号明細書、第２０１４／０３７７２９４号明細書、第２０１５／０３０６１６０号明細書、第２０１６／０２８９６４５号明細書、ならびに第２０１６／０１４３９６７号明細書、及び米国特許第６，２１０，９４６号明細書、第６，２８４，７４２号明細書、第６，３１２，６９９号明細書、第６，５５５，３６８号明細書、第６，６４９，３９６号明細書、第６，８１５，２００号明細書、第６，８２４，７７１号明細書、第６，８４１，５４０号明細書、第６，９５５，８０８号明細書、第７，０４５，３４８号明細書、第７，２９７，５４２号明細書、第８，１６８，１６８号明細書ならびに第９，０６１，０５５号明細書に記載されているものが挙げられ、このすべては、その全体を参照により組み込まれる。
【００２９】
腫瘍溶解性ウイルスの概説
アデノウイルスを含む、抗がん剤として開発中の多様な腫瘍溶解性ウイルス型が存在する（Ｒｕｓｓｅｌｌら、２０１４年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＬａｗｌｅｒら、２０１７年  ＪＡＭＡ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙを参照）。
【００３０】
治療用腫瘍溶解性アデノウイルスの所望の治療活性についての選択または設計において、細胞表面タンパク質の自然トロピズムを介した、またはがん細胞を直接的に標的とするようにアデノウイルスを操作することによる感染に対するがん細胞の選択的ターゲティング；がん細胞における選択的複製；ウイルス病原性の減弱；溶解活性の増強；アデノウイルスの急速な排出を導くことができる抗ウイルス免疫応答の修飾；及びサイトカイン、免疫アゴニスト、または免疫チェックポイント遮断物質を組み込むアデノウイルスの遺伝子改変による全身性抗腫瘍免疫の修飾を含む、複数の生物学的特性が考えられ得る。
【００３１】
複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスベクターは、多様な細胞及び腫瘍型への感染性、非非分裂細胞への感染、ゲノム組込みが不要であること、高力価、導入遺伝子を保有する能力、ｉｎ  ｖｉｔｒｏならびにｉｎ  ｖｉｖｏ安定性、及び高レベルの導入遺伝子の発現を含む、それを治療の適用に理想的なものとするいくつかの特性を有する。アデノウイルス発現ベクターは、（ａ）構築物のパッケージングを助け、（ｂ）そこにクローン化された組換え遺伝子構築物を最終的に発現させるのに十分なアデノウイルス配列を含有する構築物を含む。
【００３２】
腫瘍溶解性アデノウイルスの生物学的特性を調節すると、がん治療に対する作用において有益または有害であり得る様々な免疫相互作用に影響し得る。相互作用は、特定の腫瘍、疾患の部位ならびに程度、免疫抑制腫瘍微小環境、腫瘍溶解性ウイルスプラットフォーム、用量、時間、及び送達条件と患者個人の反応に依存する（Ａｕｒｅｌｉａｎ  Ｌ．「Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｓ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｒｅｍａｉｎｉｎｇ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ」Ｏｎｃｏ．  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｔｈｅｒ．２０１６年；９：２６２７〜２６３７を一般的に参照）。例えば、アデノウイルスＥ３遺伝子の存在は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで条件的に複製するアデノウイルスの腫瘍溶解能を高めると報告されている（Ｓｕｚｕｋｉ  Ｋ、Ａｌｅｍａｎｙ  Ｒ、Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｍ、及びＣｕｒｉｅｌ  ＤＴ「Ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  Ｅ３  ｒｅｇｉｏｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｔｈｅ  ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｃｙ  ｏｆ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ」Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００２年１１月；８（１１）：３３４８〜５９を参照）。特に、Ｅ３−１１．６ｋＤａアデノウイルスデスタンパク質（Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  Ｄｅａｔｈ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＡＤＰ）は、効率的な細胞死に必要とされていると考えられる（Ｔｏｌｌｅｆｓｏｎ  Ａ、Ｒｙｅｒｓｅ  Ｊ、及びＳｃａｒｉａ  Ａら、「Ｔｈｅ  Ｅ３−１１．６−ｋＤａ  Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  Ｄｅａｔｈ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＡＤＰ）  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ：  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｄｐ  ｍｕｔａｎｔｓ」Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１９９６年；２２０：１５２〜１６２を参照）。しかし、がん治療に対する免疫療法アプローチでは、抗がん免疫応答を最適に誘導するために、免疫調節タンパク質を十分に発現させることにより急速な細胞死のバランスを保つことが重要であり得る。本開示は、このような腫瘍溶解性アデノウイルスを提供する。
【００３３】
５７種のヒトアデノウイルス血清型（ＨＡｄＶ−１〜５７）のうちの任意のメンバーは、本開示による免疫細胞刺激性受容体アゴニストをコードする異種核酸を組み込み得る。ヒトＡｄ５は、遺伝学的及び生化学的に特徴が十分に明らかである（ＧｅｎＢａｎｋ  Ｍ７３２６０；ＡＣ０００００８）。したがって、特定の実施形態では、腫瘍溶解性アデノウイルスは、複製可能なＡｄ５血清型またはＡｄ５の成分を含むハイブリッド血清型である。アデノウイルスは、野生型株であり得るが、遺伝子改変して、例えば、腫瘍細胞において複製するウイルスの能力に影響することなく正常な静止細胞内で複製するウイルスの能力を減弱させることにより、腫瘍選択性を増強し得る。本開示により包含する複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスの非限定的な例としては、Ｄｅｌｔａ−２４、Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ、ＩＣＯＶＩＲ−５、ＩＣＯＶＩＲ−７、ＯＮＹＸ−０１５、ＣｏｌｏＡｄ１、Ｈ１０１及びＡＤ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦが挙げられる。Ｏｎｙｘ−０１５は、ウイルス血清型Ａｄ２とＡｄ５のハイブリッドであり、Ｅ１Ｂ−５５Ｋ及びＥ３Ｂ領域が欠失しており、がん選択性を増強している。Ｈ１０１は、Ｏｎｙｘ−０１５の修飾したバージョンである。ＩＣＯＶＩＲ−５及びＩＣＯＶＩＲ−７は、Ｅ１ＡのＲｂ結合部位の欠失及びＥ１ＡプロモーターのＥ２Ｆプロモーターによる置換を含む。ＣｏｌｏＡｄ１は、キメラＡｄｄ１１ｐ／Ａｄ３血清型である。ＡＤ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ（ＣＧＴＧ−１０２）は、ＧＭ−ＣＳＦをコードする５／３カプシド修飾したアデノウイルスの血清型である（Ａｄ５カプシドタンパク質ノブが、血清型３由来のノブドメインで置換されている）。
【００３４】
腫瘍内に注入された腫瘍溶解性アデノウイルスは、細胞死及び新たなアデノウイルス子孫の放出を誘導し、この子孫は、隣接する細胞に感染することにより、停止されなければ腫瘍の完全な破壊に導き得る治療の波を引き起こす。Ｄｅｌｔａ−２４の顕著な抗腫瘍作用は、細胞培養系及び悪性神経膠腫異種移植モデルにおいて示されている。Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤは、第Ｉ相臨床試験において抗腫瘍作用を示しており、現在、追加臨床試験の対象である。腫瘍細胞の溶解は、Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ腫瘍溶解性アデノウイルスに提唱される主な抗がん機序であるが、再発性神経膠腫を有する患者における第Ｉ相臨床試験によるデータ及び他の知見は、アデノウイルスが抗腫瘍免疫応答の誘因となることにより、直接的腫瘍溶解作用が増強され得ることを示す。
【００３５】
本開示のいくつかの実施形態では、１つまたは複数の異種配列は、アデノウイルスの非必須領域内に組み込むことができる。本開示の特定の実施形態では、１つまたは複数の異種配列は、Ｅ３領域の全部または部分の代わりに組み込むことができる。代表例としては、サイトカイン、ケモカイン及びチェックポイント阻害物質が挙げられる。いくつかの実施形態では、異種配列は、ＯＸ４０アゴニスト（例えば、ＯＸ４０Ｌ）、ＧＩＴＲＬ、抗ＰＤ−１、及び／または抗ＣＴＬＡ−４をコードする。別の実施形態では、異種核酸配列は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ及び／またはＢＴＬＡからなる群から選択される免疫チェックポイントタンパク質の阻害物質をコードする。さらに別の実施形態では、異種核酸配列は、ＣＤ２８、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、グルココルチコイド誘導ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ヘルペスウイルス侵入メディエーターＡ（ＨＶＥＭ）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳまたはＣＤ２７８）、ＣＤ２７、ＣＤ４０及び／またはＣＤ２２６からなる群から選択される免疫共刺激受容体のアゴニストをコードする。代表例は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０６６９２０明細書及び２０１６年５月２７日出願の米国仮特許出願第６２／３４２４８２号明細書により詳細に開示されており、ともにその全体を参照により組み込まれる。
【００３６】
ＤＮＸ−２４０１
いくつかの実施形態では、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスは、Ｄｅｌｔａ−２４またはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ（ＤＮＸ−２４０１）である。Ｄｅｌｔａ−２４は、米国特許出願公開第２００３０１３８４０５号明細書及び第２００６０１４７４２０号明細書に記載されており、このそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる。Ｄｅｌｔａ−２４アデノウイルスは、アデノウイルス５型（Ａｄ−５）に由来し、コードされるＥ１Ａタンパク質のアミノ酸１２２〜１２９と対応する、Ｒｂタンパク質に結合する原因となる領域（ヌクレオチド９２３〜９４６）を包含する、Ｅ１Ａ遺伝子のＣＲ２部分内に２４塩基対の欠失を含有する（Ｆｕｅｙｏ  Ｊら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９：２〜１２（２０００年））。Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤは、ＲＧＤ−４Ｃ配列（αｖβ３及びαｖβ５インテグリンに強力に結合する）のノブファイバータンパク質のＨＩループ内への挿入をさらに含む（Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ  Ｒ．ら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、１５：５４２〜５４６（１９９７年））。Ｅ１Ａ欠失により、がん細胞に対するウイルスの選択性が高まる；ＲＧＤ−４Ｃ配列により、神経膠腫に対する、及びアデノウイルス受容体を低レベルで発現する他のいくつかの腫瘍に対するウイルスの感染性が高まる。
【００３７】
ＣＤ４０アゴニストの概説
理論に拘束されるわけではないが、がん免疫療法の成功は、ＣＤ８＋Ｔ細胞が直接的な腫瘍の殺傷及び患者の生存に強力に関連するため、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞免疫の増強に依存し得る。したがって、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を促進する治療様式は、がん免疫療法薬の開発における目標である。ＣＤ４０受容体は、腫瘍壊死因子受容体ファミリーのメンバーであり、Ｂ細胞、専門的抗原提示細胞、及び非免疫細胞ならびに腫瘍により発現する（ｖａｎ  Ｋｏｏｔｅｎら、２０００年  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）。腫瘍特異的Ｔ細胞応答を活性化するには、抗原提示細胞上のＣＤ４０受容体を活性化することが必要とされる。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ４０とＣＤ１５４の相互作用を介して樹状細胞（ＤＣ）をライセンス化することによりＣＤ８＋Ｔ細胞のプライミングを増強する。さらに、ＣＤ４０とＣＤ１５４の相互作用により、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が早期に減少することを防ぐ。したがって、ＣＤ１５４によるＣＤ４０の活性化は、病原体及び腫瘍に対して有効な抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞免疫を誘導するのに必要なステップである（Ｓｉｎｇｈら、２０１７年  Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ）。この点で、抗体またはＣＤ４０同族リガンド（ＣＤ４０Ｌ）タンパク質のようなＣＤ４０アゴニスト療法は、がん免疫療法において有望な戦略であると考えられる。
【００３８】
ＩＳＦ３５の概説
ＩＳＦ３５（本明細書において「ＭＥＭ４０」とも呼ばれ得る）は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドであり、これはヒトＣＤ４０Ｌと９２％相同のアミノ酸配列を有する。参照により本明細書において組み込まれる、米国特許第７，４９５，０９０号明細書を参照されたい。（「ＣＤ４０リガンド」及び「ＣＤ４０Ｌ」は、本明細書において互換的に使用し得、「ＣＤ１５４」とも呼ばれ得る。）詳細には、この分子の細胞内、膜内、及び近位の細胞外ドメインをそれぞれ含有する領域であるドメインＩ、ＩＩ及びＩＩＩは、完全にヒト化されている。この分子のＣＤ４０結合タンパク質を含有するドメインＩＶでは、細胞における最適なＣＤ４０リガンドの発現に必要なマウスドメインのみが保持される。ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）は、この分子の３’末端で完全にヒト化され、この場合、ヒトに投与すると、抗体結合によりマウスＣＤ１５４（ＣＤ４０リガンド）の活性が中和される。ＭＥＭ４０に加えて、様々なキメラＣＤ４０リガンド構築物（ＩＳＦ３０〜ＩＳＦ４１）があり、ＭＥＭ４０は、ほとんどの前臨床的及び臨床的経験を有するパネルにおいて特異的なキメラＣＤ４０リガンドである。
【００３９】
例示的実施例
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性アデノウイルスに関する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスに関する。特定の実施形態では、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスは、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド導入遺伝子を組み込むように遺伝子改変されていてもよい。
【００４１】
いくつかの実施形態では、本開示は、転写制御エレメントに作動可能に連結しているＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスに関する。
【００４２】
さらに他の実施形態では、本開示は、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドと、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ□）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２）、ケモカイン（例えば、ＲＡＮＴＥＳ）、マクロファージ炎症タンパク質（例えば、ＭＩＰ−３）、チェックポイント阻害物質（例えば、抗ＰＤ−１、抗ＣＤＴＡ４及び抗ＰＤ−Ｌ１）、または別の免疫調節タンパク質（例えば、ＯＸ４０リガンド）のような１つまたは複数の追加の免疫調節性または治療遺伝子の両方を含む複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスに関する。
【００４３】
腫瘍溶解性アデノウイルスのゲノム領域は、所望の治療特性を付与する複数の目的により改変し得る。治療特性の非限定的な例としては、ウイルス複製及び伝播の増強、腫瘍溶解性の増強、腫瘍細胞の正常細胞に対する選択的標的化、免疫活性化の増強、及びアデノウイルスの宿主免疫系からの保護が挙げられ得る。上記の目的のため、ウイルス領域は、除去（完全または部分的欠失）、非機能化、修飾して機能を減弱、または他の配列により置換し得る。
【００４４】
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫による腫瘍細胞の破壊と、ウイルスの腫瘍溶解作用（ｖｉｒａｌｙｔｉｃ）による腫瘍細胞の破壊の両方のための能力が向上したアデノウイルスを提供する。
【００４５】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性アデノウイルスを含む組成物を、腫瘍に罹患している患者に投与するステップを含む方法に関する。
【００４６】
任意の腫瘍溶解性アデノウイルス株をキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド導入遺伝子を組み込むための起点として使用し得る。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性アデノウイルスは、複製可能なヒト５型アデノウイルスである。
【００４７】
キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド導入遺伝子を組み込む腫瘍溶解性アデノウイルスの遺伝子改変は、当業者に既知の技術を使用して実施し得る。腫瘍溶解性アデノウイルスは、必要な調整エレメント（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターまたは代替プロモーター、ポリアデニル化ドメイン）を有するキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド導入遺伝子を含有して、感染細胞におけるキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド遺伝子の転写及びキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドポリペプチドの発現を可能とすることができる。
【００４８】
いくつかの実施形態では、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）、及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択され得る。
【００４９】
ＩＳＦ３０、ＩＳＦ３２、ＩＳＦ３４、ＩＳＦ３６、ＩＳＦ３８及びＩＳＦ４０のポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列は、米国特許第７，９２８，２１３号明細書に開示されており、これによって参照により本明細書に組み込まれる。ＩＳＦ３１、ＩＳＦ３３、ＩＳＦ３５、ＩＳＦ３７、ＩＳＦ３９及びＩＳＦ４１のポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列は、米国特許第７，４９５，０９０号明細書に開示されており、これによって参照により本明細書に組み込まれる。
【００５０】
特定の実施形態では、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルス内に組み込むキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）であり得る。
【００５１】
異種キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、腫瘍溶解性アデノウイルスにおける任意の非必須な位置に挿入され得る。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性アデノウイルスは、複製可能のままである。特定の実施形態では、異種キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド核酸は、複製可能なアデノウイルスの骨格鎖のＥ３領域に挿入する。Ｅ３領域は、ウイルスの複製に必須ではない。複製可能なアデノウイルスは、完全または部分的なＥ３の欠失を含むことができる。関連する態様では、完全なＥ３領域は、複製可能なアデノウイルスの骨格鎖から欠失しており、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド核酸は、完全なＥ３の欠失を含有する位置に挿入する。
【００５２】
腫瘍溶解性アデノウイルスは、遺伝子改変して、がん細胞における選択的複製；ウイルス病原性の減弱；溶解活性の増強；アデノウイルスの急速な排出を導く抗ウイルス免疫応答の修飾；及びウイルスによる全身性抗腫瘍免疫の修飾を含む、がん治療における使用のための１つまたは複数の特性をさらに向上し得る。
【００５３】
特定の実施形態では、本開示は、部分的または完全に欠失したＥ３領域の代わりに挿入されたキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド核酸を含む、Ｄｅｌｔａ−２４またはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤアデノウイルスであって、この異種核酸が、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド導入遺伝子をコードする配列を含む、Ｄｅｌｔａ−２４またはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤアデノウイルスを提供する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、本開示は、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスを含む組成物を、腫瘍に罹患している患者に投与するステップを含む方法に関する。特定の実施形態では、腫瘍溶解性アデノウイルス及び少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、上記のものであり得る。
【００５５】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性アデノウイルスは、Ｄｅｌｔａ−２４−ＭＥＭ４０複製可能アデノウイルスであり得る。
【００５６】
別の実施形態では、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性アデノウイルスは、Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０複製可能アデノウイルスであり得る。
【００５７】
選択した複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルス及びキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド（複数可）に関係なく、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスは、アデノウイルスを腫瘍内注射により投与することによって、がん治療に使用し得る。しかし、静脈内、腹腔内、気管内、筋肉内、頭蓋内、内視鏡的、病巣内、経皮的、皮下、局所的、または直接的注射もしくは灌流による経路を含む、他の送達経路がまた考えられる。
【００５８】
理論に拘束されるわけではないが、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスは、二重の作用機序：１）がん細胞における腫瘍溶解性アデノウイルスの選択的ウイルス複製による腫瘍細胞の殺傷と、２）ウイルス免疫誘導とＣＤ４０リガンド免疫活性化の両方により生じる全身性抗腫瘍免疫の誘導とを有し得る。
【００５９】
調整エレメント
本開示においてに有用なベクターに含まれる発現カセットは、タンパク質をコードする配列に作動可能に連結している転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグナル、及び転写終結／ポリアデニル化配列を（５’から３’の方向に）含有する。真核細胞においてタンパク質をコードする遺伝子の転写を制御するプロモーター及びエンハンサーは、複数の遺伝的エレメントからなる。細胞機構は、各エレメントにより伝達される調整情報を集めて統合し、種々の遺伝子が、明確でしばしば複雑な転写調整のパターンを発達させることを可能とする。本開示に関連して使用するプロモーターは、恒常的で誘導性、かつ組織特異的プロモーターを含む。
【００６０】
プロモーター／エンハンサー
キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド核酸発現は、哺乳動物細胞、好ましくはヒト腫瘍細胞において機能的なプロモーターの制御下に置かれ得る。キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド核酸発現は、非アデノウイルスプロモーターの制御下に置かれ得る。一実施形態では、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドの発現を方向づけるプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。
【００６１】
本明細書において提供する発現構築物は、プログラミング遺伝子の発現を促進するプロモーターを含む。プロモーターは、ＲＮＡ合成の開始部位を配置するように機能する配列を一般に含む。この最良の例は、ＴＡＴＡボックスであるが、哺乳動物の末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーター及びＳＶ４０後期遺伝子のプロモーターのような、ＴＡＴＡボックスを欠くいくつかのプロモーターにおいては、開始部位それ自体の上流に存在する個別のエレメントは、開始部位を固定するのに役立つ。追加のプロモーターエレメントは、転写開始の頻度を調整する。これらは典型的には、開始部位の３０〜１１０ｂｐ上流の領域にあるが、プロモーターは、開始部位の下流にも機能エレメントを含有することが示されている。コードする配列をプロモーター「の制御下」に導くために、あるものは、転写リーディングフレームの転写開始部位の５’末端を選択したプロモーターの「下流」（すなわち、３’末端）に配置する。「上流」プロモーターは、ＤＮＡの転写を刺激し、コードされるＲＮＡの発現を促進する。
【００６２】
プロモーターエレメント間の間隔は、柔軟であることが多く、したがって、エレメントが逆位であるか、または互いに連動して移動した場合、プロモーター機能が保存される。ｔｋプロモーターでは、プロモーターエレメント間の間隔は、活性が減少し始める前に５０ｂｐ離れて広がり得る。個別のエレメントは、プロモーターに応じて、協同的または独立的に機能して転写を活性化し得ると考えられる。プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調整配列を指す、「エンハンサー」と組み合わせて使用し得るか、または使用し得ない。
【００６３】
プロモーターは、核酸配列と自然に結合しており、コードする領域及び／またはエクソンの上流に位置する５’末端非コード配列を単離することにより得られ得る。このようなプロモーターは、「内在性」のものであると言及され得る。同様に、エンハンサーは、核酸配列と自然に結合しており、その配列の下流または上流に位置し得る。あるいは、コードする核酸領域を組換えまたは異種プロモーターの制御下に置くことにより特定の利点を得る。この組換えまたは異種プロモーターは、その自然環境において核酸配列と通常、結合しないプロモーターを指す。組換えまたは異種エンハンサーはまた、その自然環境において核酸配列と通常、結合しないエンハンサーを指す。このようなプロモーターまたはエンハンサーは、他の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、及び他の任意のアデノウイルス、または原核もしくは真核細胞から単離したプロモーターまたはエンハンサー、及び「自然発生」でない、すなわち、種々の転写調整領域の種々のエレメント、及び／または発現を変える変異を含有するプロモーターまたはエンハンサーを含み得る。
【００６４】
発現用に選択した細胞小器官、細胞型、組織、器官、または生物のＤＮＡ領域の発現を効果的に方向づけるプロモーター及び／またはエンハンサーを利用することは重要であり得る。分子生物学の当業者は、タンパク質発現用のプロモーター、エンハンサー、及び細胞型の組合せの使用を一般に理解している。利用するプロモーターは、恒常的、組織特異的、誘導性、及び／または適切な条件下で有用であり、誘導したＤＮＡ領域の高レベルの発現を方向づけ、これにより組換えタンパク質及び／またはペプチドの大規模生産において好都合となり得る。プロモーターは、異種性または内在性であり得る。
【００６５】
プロモーターの非限定的な例としては、ＳＶ４０初期または後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター；及び真核細胞プロモーターのような、初期または後期ウイルスプロモーターが挙げられる。
【００６６】
開始シグナル及び関連する発現
特定の開始シグナルはまた、コードする配列の効率的な翻訳のために本開示において提供する発現構築物において使用し得る。このようなシグナルは、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接配列を含む。ＡＴＧ開始コドンを含む外因性の翻訳制御シグナルを用意する必要があり得る。当業者は、必要なシグナルを用意することが容易に可能である。開始コドンが、所望のコードする配列のリーディングフレームとともに「インフレーム」であって、全挿入物の翻訳を確実としなければならないことが十分に知られている。外因性の翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然または合成のいずれかであってもよい。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメントを含むことにより増強し得る。
【００６７】
特定の実施形態では、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）エレメントの使用は、多重遺伝子、またはポリシストロン性のメッセージを生成するために使用する。ＩＲＥＳエレメントは、５’末端メチル化キャップに依存した翻訳のリボソームスキャニングモデルをバイパスし、内部部位で翻訳を開始することができる（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒら、１９８８年  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）。ピコルナウイルスファミリーの２つのメンバー（ポリオ及び脳心筋炎ウイルス）由来のＩＲＥＳエレメント（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒら、１９８８年  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ならびに哺乳動物メッセージ由来のＩＲＥＳ（Ｍａｃｅｊａｋら、１９９１年  Ｎａｔｕｒｅ）が報告されている。ＩＲＥＳエレメントは、異種オープンリーディングフレームに結合することができる。複数のオープンリーディングフレームをともに転写し、ＩＲＥＳによりそれぞれ分離して、ポリシストロン性メッセージを生成することができる。ＩＲＥＳエレメントは、各オープンリーディングフレームをリボソームに到達可能として効率的な翻訳を可能とする。複数の遺伝子は、単一のプロモーター／エンハンサーを使用して効率的に発現し、単一のメッセージを転写することができる（それぞれを参照により本明細書において組み込まれる、米国特許第５，９２５，５６５号明細書及び第５，９３５，８１９号明細書を参照）。
【００６８】
ウイルス改変の方法
言及する種々の遺伝子は、遺伝子欠失（複数可）、置換（複数可）、または挿入（複数可）を含む、当分野において周知のいくつかの技術により機能的に不活性とし得る。同様に、ＭＥＭ４０を含む免疫調節遺伝子は、当業者に周知の方法によりウイルスゲノム内に挿入し得る。このような種類のアデノウイルスの改変は、相同組換え法によりなされ得る。例えば、アデノウイルスゲノムＤＮＡは、相同アデノウイルス配列と隣接した変異配列を含むプラスミドベクターとともにトランスフェクトして、親アデノウイルスゲノムＤＮＡ領域の新規変異配列領域とのＤＮＡ組換え及び置換を生じ得る。
【００６９】
キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスの例示的構築を図１〜２に示す。
【００７０】
図１は、ＭＥＭ４０を発現する複製可能なアデノウイルスであるＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０（ＤＮＸ−ＭＥＭ４０）の構築を模式的に表す。ＤＮＸ−ＭＥＭ４０を示す。簡潔には、２４ヌクレオチドの配列をＥ１領域から欠失させた。さらに、Ｅ３領域を欠失させた。ＲＧＤペプチド、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣをコードする２７ヌクレオチド配列をまた、アデノウイルスのファイバー配列のＨ１ノブドメインに挿入した。最後に、ＣＭＶプロモーターの上流及びウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナルの下流に隣接するＭＥＭ４０  ｃＤＮＡを含むＭＥＭ４０発現カセットを、欠失したＥ３領域内に挿入した。
【００７１】
図２は、ＭＥＭ４０を発現する複製可能なアデノウイルスであるＤｅｌｔａ−２４−ＭＥＭ４０の構築を模式的に表す。Ｄｅｌｔａ−２４−ＭＥＭ４０を示す。構築は、ＲＧＤペプチドをコードするヌクレオチド配列を挿入しない野生型アデノウイルスファイバーを使用することを除いてＤＮＸ−ＭＥＭ４０（図１）と類似している。
【００７２】
治療有用性についてアデノウイルスをスクリーニングする方法
本開示の腫瘍溶解性アデノウイルス、またはその変異体もしくは誘導体は、腫瘍細胞における、その溶解能の試験により、その治療有用性について評価することができる。腫瘍細胞は、患者生検由来または外科的に切除した一次腫瘍細胞を含み得る。あるいは、腫瘍細胞は、腫瘍細胞株を含み得る。本開示のアデノウイルスの細胞溶解活性は、アデノウイルスの段階希釈物に細胞を感染させて細胞溶解能（例えばＩＣ５０）を測定することにより腫瘍細胞株においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで判定することができる。細胞溶解活性を判定するための特定の方法は、ＭＴＳ、ＭＴＴ及びＡＴＰ比色測定法を含み得るが、これらに限定されない。
【００７３】
本開示の腫瘍溶解性アデノウイルスの、治療効果を引き起こす治療薬の量と毒性を引き起こす量との比較である治療指数は、腫瘍細胞株におけるアデノウイルスの細胞溶解能の効力を、比較する正常細胞における細胞溶解能と比較することにより算出し得る。
【００７４】
本開示の腫瘍溶解性アデノウイルスは、腫瘍細胞及び／または正常細胞に感染し、腫瘍溶解性アデノウイルスによりコードされた機能的キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドポリペプチドを発現する、その能力を評価することにより、治療有用性について、さらに評価することができる。感染した細胞の細胞表面上に発現したキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドは、ヒトまたはマウスＣＤ４０抗体結合領域を特異的に認識する抗体を使用して、フローサイトメトリーにより評価することができる。キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドの機能的活性はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏバイオアッセイを使用して調べることができ、この場合、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする腫瘍溶解性アデノウイルスに感染した腫瘍または正常細胞は、下流でルシフェラーゼ応答エレメントと融合したＣＤ４０受容体を安定に発現するエフェクター細胞と混合して、誘導されたルシフェラーゼの発現を測定する。
【００７５】
本開示の腫瘍溶解性アデノウイルスは、同系または異種腫瘍マウスモデルの天然由来もしくは移植した腫瘍を含むマウスにおいて、腫瘍細胞の増殖を標的化するその能力、及び腫瘍形成または腫瘍細胞量を減少させる能力について、さらに評価することができる。腫瘍サイズにより測定する腫瘍量、腫瘍の再負荷からの免疫防御、及び動物生存率は、治療有用性及び動物腫瘍モデルについての万全の評価基準である。
【００７６】
医薬組成物
上述のように、（本明細書に記載の）アデノウイルスを、１つまたは複数の薬学的に許容される、希釈剤、担体または賦形剤とともに含む医薬組成物を提供する。本開示のいくつかの実施形態では、アデノウイルスは、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスである。さらなる実施形態では、アデノウイルスは、Ｄｅｌｔａ−２４−ＭＥＭ４０またはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０である。
【００７７】
本開示の特定の実施形態では、本明細書において提供する組成物は、薬学的許容濃度の、緩衝剤、塩、保存剤、ならびに他の適合する希釈剤または担体を含有することができる。薬学的に許容される希釈剤の比率及び識別情報は、生理学的に適合するように選択され、特定の実施形態では、アデノウイルスの生存率が維持される。特定の医薬組成物は、適したｐＨに緩衝し、生理液と等張である。
【００７８】
本明細書において提供する医薬組成物は、多様な方法により調製して患者への投与に適した組成物を生成することができ、したがって、有効量の活性物質を、薬学的に許容される溶媒と混合して混合物とする。適した溶媒は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イーストン、Ｐａ．米国１９８５年）に記載されている。
【００７９】
ウイルスの溶液は、生理学的に適した緩衝液で調製し得る。代表的な緩衝剤は、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カルシウム、及び他の種々の酸ならびに塩を含む。いくつかの態様では、２つ以上の緩衝剤の混合物を使用する。緩衝剤またはその混合物は、総組成物の約０．００１重量％〜約１０重量％の量で存在してもよい。
【００８０】
適した処方の選択及び調製のための代表的な方法及び成分は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ；２１版（２００５年５月１日）及びＴｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（ＵＳＰ  ４０  −  ＮＦ  ３５  ａｎｄ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）に記載されている。
【００８１】
種々の実施形態では、組成物は、注射（皮下、静脈内、筋肉内等）により腫瘍部位のような患部に直接、または経口投与により、あるいは経皮投与により投与する。
【００８２】
注射使用に適した医薬組成物の形態は、無菌水溶液または分散液を含み、この場合、用語「無菌」は、アデノウイルスを殺傷したことを暗示する意味ではなく、実際、特定の実施形態では、上述のように、アデノウイルスは、複製可能である。すべての場合において、形態は無菌であるべきであり、シリンジまたはカテーテルにより導入する限りにおいて液体でなければならない。
【００８３】
さらに、医薬組成物は、その保存剤がウイルスの作用に干渉しない限りにおいて保存剤を含有することができる。保存剤の代表例は、例えば、塩化ベンザルコニウム、メチルパラベン、プロピルパラベン及び安息香酸ナトリウムを含み得る。さらなる実施形態では、２つ以上の保存剤の混合物を使用する。保存剤またはその混合物は、総組成物の約０．０００１〜約２重量％の量で存在してもよい。
【００８４】
アデノウイルスまたはアデノウイルスを含む医薬組成物は、投与用に単一のバイアルまたはパッケージとして包装することができる。ウイルスまたは医薬組成物を含有するキットはまた、ウイルスまたは医薬組成物を調製及び投与するための説明書を含むことができる。
【００８５】
治療及び投与の方法
本開示の種々の実施形態では、本明細書に記載のアデノウイルスを、がんを有する患者に投与するステップを含む、がんを治療するための方法をまた提供する。さらなる実施形態では、アデノウイルスは、Ｄｅｌｔａ−２４−ＭＥＭ４０またはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０である。選択した腫瘍溶解性アデノウイルス及びキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンド（複数可）に関係なく、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性アデノウイルスは、ウイルスを腫瘍内注射により投与することによって、がん治療に使用し得る。しかし、静脈内、腹腔内、気管内、筋肉内、頭蓋内、内視鏡的、病巣内、経皮的、皮下、局所的、または直接的注射もしくは灌流による経路を含む、他の送達経路がまた考えられる。
【００８６】
特定の実施形態では、がんは、本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）を利用して治療する。上述のように、本明細書において利用する用語「がん」は、体内における細胞の制御不能な増殖を特徴とする疾患の大きなファミリーを指す。がんの代表的形態としては、カルシノーマ、サルコーマ、骨髄腫、白血病、リンパ腫、及び上記の混合型が挙げられる。さらなる例としては、胆管がん、膀胱がん、神経膠芽腫のような脳がん、乳がん、子宮頸がん、ＣＮＳ腫瘍（神経膠芽腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫及び網膜芽細胞腫等）、結腸直腸がん、子宮内膜がん、白血病ならびにリンパ腫を含む造血細胞がん、肝細胞がん、腎臓がん、喉頭がん、肺がん、黒色腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、扁平上皮癌、及び甲状腺がんが挙げられるが、これらに限定されない。がんは、びまん性（例えば、白血病）であるか、固形腫瘍（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫及び骨肉腫のようなサルコーマ）を含むか、またはこれらのうちのいくつかの組合せ（例えば、固形腫瘍と、播種性またはびまん性がん細胞の両方を有する転移性がん）であり得る。例えば、自家または同種幹細胞移植を受けるのに適格な任意のがん患者が、この療法の候補であると考えられる。
【００８７】
いくつかの実施形態では、投与は、腫瘍に、または以前に腫瘍があった部位（例えば、外科的切除またはアブレーション療法の後）に直接投与することにより達成することができる。投与は、直接注射することにより、または選択期間にわたって輸注することにより行うことができる。腫瘍内への直接注射（腫瘍内注射）は、微細なカテーテルまたはカニューレにより達成することができる。特定の実施形態では、本明細書において提供する医薬組成物は、ＭＲ手技中のガイダンスに従ってマイクロマシン技術（ＭＥＭＳ）により送達することができる。特に、脳内への腫瘍内注射は、Ａｌｃｙｏｎｅ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＡｌｃｙｏｎｅ  ＭＥＭＳ  Ｃａｎｎｕｌａ（ＡＭＣ）のようなカニューレを使用することにより顕著な還流または逆流もなく達成する。装置の代表例は、米国特許第８，９９２，４５８号明細書及び米国特許出願公開第２０１３／００３５６６０号明細書、第２０１３／００３５５７４号明細書及び第２０１３／００３５５６０号明細書に記載されており、これによってその全体がそれぞれ参照により組み込まれる。
【００８８】
対象に投与する場合、本明細書に記載の組成物の有効量は、がんを治療する（例えば、緩和、改善、軽減する、回復、安定化させる、拡散を防ぐ、進行を遅滞もしくは遅延させる、または治癒する）ために提供する。例えば、癌細胞もしくは腫瘍細胞の数を減少させる、または癌細胞もしくは腫瘍細胞を破壊する、またはこのような細胞の成長及び／もしくは増殖を阻害する作用を達成するのに十分な量であり得る。臨床的に有効であるために、本明細書において提供する組成物（複数可）は、治療計画に応じて１回、または複数回投与し得る。
【００８９】
少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする遺伝子を含む腫瘍溶解性アデノウイルスを使用した治療計画は、単回投与または複数回投与を含み得る。複数回投与は、反復スケジュールどおりに、及び／あるいは１つもしくは複数の事前投与の有効性、または１つもしくは複数の事前投与の副作用の１つもしくは複数の指標に応じて実施し得、とりわけそれは、本開示の利点を有する当業者に明らかであろう。
【００９０】
本明細書において提供する組成物は、多様な濃度で提供することができる。例えば、アデノウイルスの投与量は、約１０９プラーク形成単位（「ｐｆｕ」）超、約１０２〜約１０９ｐｆｕ、約１０２〜約１０７ｐｆｕ、約１０３〜約１０６ｐｆｕ、または約１０４〜約１０５ｐｆｕの用量の範囲で提供することができる。
【００９１】
いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性アデノウイルスは、１０６〜１０１３プラーク形成単位（ｐｆｕ）の用量で投与する。
【００９２】
使用する医薬組成物の用量は、治療する特定の症状；症状の重度；年齢、健康状態、サイズならびに体重を含む患者個人のパラメータ；治療期間；併用療法の性質（該当する場合）；特定の投与経路；及び医療関係者の知識及び専門技術に属する他の類似要因に依存し得る。また、用量は産物のアベイラビリティに依存する。
【００９３】
理論に拘束されるわけではないが、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドを含む腫瘍溶解性アデノウイルスは、二重の作用機序：１）がん細胞における腫瘍溶解性アデノウイルスの選択的ウイルス複製による腫瘍細胞の殺傷と、２）ウイルス免疫誘導とＣＤ４０リガンド免疫活性化の両方により生じる全身性抗腫瘍免疫の誘導とを有し得る。
【００９４】
いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。「薬学的に許容される」は、担体が、患者への投与を意図する医薬における使用に適することを意味する。薬学的に許容される担体は、投与経路、特定の腫瘍溶解性アデノウイルス株に必要とされる保存条件、及び本開示の利点を有する当業者に明らかな他の条件に応じて変化し得る。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、生理食塩水であり得る。
【００９５】
いくつかの実施形態では、組成物は、ウイルスが腫瘍細胞へ侵入するためのエンハンサーのようなアジュバント、少なくとも１つのキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする遺伝子の転写を誘導する誘導性分子であって、この誘導性分子により活性化されたプロモーターの制御下に遺伝子を置く、誘導性分子等を構築物においてさらに含み得る。
【００９６】
追加の療法
いくつかの実施形態では、方法は、キメラヒト／マウスＣＤ４０をコードする腫瘍溶解性アデノウイルスによる治療を、１つまたは複数の追加の療法とともに、さらに含み得る。追加の療法は、放射線療法、外科的手術（例えば、乳腺腫瘍摘出術または乳房切除術）、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、生物学的療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述の組合せであり得る。追加の療法は、アジュバントまたはネオアジュバント療法の形態であり得る。
【００９７】
組成物を対象（例えば、ヒト）に投与すると、多様な方法により組成物の生物学的活性を測定することができる。評価することができる代表的なパラメータとしては、例えば、画像診断、及び／または例えば、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、３２（７）：６８９〜７０２（２００９年）及びＨｅｒｍａｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８５（１）：２５〜４０（２００４年）に記載の、例えば細胞毒性試験によるものが挙げられる。特定の実施形態では、本明細書において提供する組成物の生物学的活性はまた、ガンマＩＦＮ、ＩＬ−２及びＴＮＦのような特定のサイトカインの発現及び／または分泌を定量することにより測定することができる。本開示のさらに他の実施形態では、生物学的活性は、腫瘍量または腫瘍負荷の減少のような臨床転帰を定量することにより測定することができる。
【００９８】
１つまたは複数の追加の療法のうちの任意の１つまたはすべては、腫瘍溶解性アデノウイルスの投与の前、同時、または後に実施し得る。
【００９９】
キット製品
キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする腫瘍溶解性アデノウイルスを含む製品またはキットをまた、本明細書において提供する。製品またはキットは、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする腫瘍溶解性アデノウイルスを使用して、個人におけるがんの進行を治療もしくは遅延させるか、またはがんを有する個人の免疫機能を増強するための説明書を含む添付文書をさらに含むことができる。本明細書に記載のキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする任意の腫瘍溶解性アデノウイルス株は、製品またはキットに含まれ得る。適した容器は、例えば、ビン、バイアル、バッグ及びシリンジを含む。容器は、ガラス、プラスチック（ポリ塩化ビニルまたはポリオレフィン等）または金属合金（ステンレス鋼等）のような多様な物質から形成し得る。いくつかの実施形態では、容器は、処方剤を保持し、容器上または容器に付随したラベルは、使用方法を示し得る。製品またはキットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ、及び使用説明書を有する添付文書を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、製品は、別の薬剤（例えば、化学療法剤、及び抗腫瘍剤）のうちの１つまたは複数をさらに含む。１つまたは複数の薬剤に適した容器は、例えば、ビン、バイアル、バッグ及びシリンジを含む。
【実施例１】
【０１００】
ｐＳｈｕｔｔｌＥ３．２−ＭＥＭ４０の構築及び特性評価
ＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ製）を使用し、製造者の説明書に従って、アデノウイルス−ＩＳＦ３５（ロットＮｏ．ＭＥＭ−ＡＤＶ−ＦＰ−００９）のＤＮＡを単離した。サイトメガロウイルスプロモーター、ＭＥＭ４０をコードする配列、及びウシ成長ホルモンポリアデニル化配列を含有するＰＣＲ断片１．８６ｋｂをＰＣＲにより増幅した。単離したＤＮＡを鋳型として使用し、ＢｇｌＩＩ及びＭｆｅＩ制限酵素部位を５’及び３’末端にそれぞれ含有するプライマー対を使用した。得られたＰＣＲ産物をＢｇｌＩＩ及びＭｆｅＩで分解し、ＢａｍＨＩ及びＲｃｏＲＩで分解したｐＳｈｕｔｔｌＥ３．２にライゲートして、ＭＥＭ４０発現カセットをＥ３の部位に反時計方向に挿入した。ＤＨ５細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）をライゲーション反応により形質転換して、ＭＥＭ４０発現カセットを含有するシャトルベクター（ｐＳｈｕｔｔｌＥ３．２−ＭＥＭ４０）を生成した。ｐＳｈｕｔｔｌＥ３．２−ＭＥＭ４０クローンを配列決定して、挿入されたＭＥＭ４０発現カセットの完全性を確認した。
【実施例２】
【０１０１】
Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０の構築
ｐＳｈｕｔｔｌＥ３．２−ＭＥＭ４０をＮａｅＩで分解して、ＭＥＭ４０カセット及びカナマイシン耐性遺伝子を左右隣接領域にともに含有する導入断片を生成して組み換えた。組換えＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０を構築するために、ＢＪ５１３８細胞（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）を導入断片、及びＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤアデノウイルス骨格を含有するプラスミドｐＶＫ５２６と同時形質転換して、ｐＶＫ５２６−ＭＥＭ４０／Ｋａｎを生成した。ＤＨ１０Ｂ細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）を、得られたｐＶＫ５２６−ＭＥＭ４０／Ｋａｎで形質転換して、より濃縮されたプラスミドＤＮＡを単離した。ＤＨ１０Ｂ細胞から単離したｐＶＫ５２６−ＭＥＭ４０／ＫａｎをＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素により分解に供し、その後、１％のアガロースゲル上で分析して、Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０ゲノムの完全性を検証した。次いで、ｐＶＫ５２６−ＭＥＭ４０／ＫａｎをＳｗａＩで分解して、カナマイシン耐性遺伝子を除去し、ライゲーションにより再環状化させてｐＶＫ５２６−ＭＥＭ４０を生成した。
【０１０２】
Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０ウイルスをレスキューするために、ｐＶＫ５２６−ＭＥＭ４０をＰａｃＩで分解し、リポフェクタミン３０００（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）を使用して製造者の説明書に従ってＡ５４９細胞にトランスフェクトした。細胞変性作用が観察された場合、トランスフェクトしたＡ５４９細胞の単層を採取し、細胞溶解物を使用して新たなＡ５４９細胞に感染させ、ウイルスを増殖させた。得られたウイルスについて、Ｅ１Ａ遺伝子における２４ｂｐの欠失、ファイバー遺伝子におけるＲＧＤ挿入、及びＥ３遺伝子部位へのＭＥＭ４０発現カセットの挿入の存在を検証した。
【実施例３】
【０１０３】
Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０の特性評価
Ｄｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０の特性を評価するために、Ａ５４９細胞にＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤ−ＭＥＭ４０を２４時間感染させ、分析してマウスＣＤ１５４に特異的なＰＥで標識した抗体（クローンＮｏ．ＭＲ−１）を用いてフローサイトメトリーによりＭＥＭ４０の細胞表面発現を確認した。さらに、ＣＤ４０  Ｂｉｏａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製）を使用してＭＥＭ４０の生物活性を確認した。
【０１０４】
本開示は、本明細書における技術の利点を有する当業者に明らかな、様々ではあるが等価な方法で修飾され、実行され得る場合、上記に開示する特定の実施形態は、例示のみのものである。例えば、上記のプロセスステップは、異なる順序で実施し得る。さらに、以下の特許請求の範囲に記載する以外の、本明細書において示す、構成または設計の詳細に限定することを意図していない。したがって、上記に開示する特定の実施形態が、改変または修飾され得ることは明らかであり、このようなすべての変化形は、本開示の範囲及び趣旨に属するとみなされる。
【０１０５】
したがって、本明細書において求められる保護は、以下の特許請求の範囲に説明するものである。
【０１０６】
参考文献
以下の参考文献は、本明細書において説明するものに補足する、例示的方法または他の詳細を提供する限りにおいて、参照により本明細書に詳細に組み込まれる。
【図１】
2020504767.tif 000002
【図２】
2020504767.tif 000003
【配列表】
2020504767000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年9月26日(2019.9.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノウイルスゲノムの非必須領域に挿入された異種核酸を含有する複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスを含み、
前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、組成物。
【請求項２】
転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む前記核酸が、Ｅ３遺伝子領域に挿入され、前記Ｅ３遺伝子領域は一部または全部が欠失される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＣＤ４０アゴニストが、少なくとも１つのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１つのＣＤ４０Ｌが、キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
少なくとも１つの前記キメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドが、ＩＳＦ３０（配列番号１）、ＩＳＦ３１（配列番号２）、ＩＳＦ３２（配列番号３）、ＩＳＦ３３（配列番号４）、ＩＳＦ３４（配列番号５）、ＩＳＦ３５（ＭＥＭ４０）（配列番号６）、ＩＳＦ３６（配列番号７）、ＩＳＦ３７（配列番号８）、ＩＳＦ３８（配列番号９）、ＩＳＦ３９（配列番号１０）、ＩＳＦ４０（配列番号１１）及びＩＳＦ４１（配列番号１２）からなる群から選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、ヒト５型アデノウイルスである、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、Ｄｅｌｔａ２４アデノウイルスまたはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤアデノウイルスである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
アデノウイルスゲノムの非必須領域に挿入された異種核酸を含有する複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスを含み、
前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、がんの治療に使用する組成物。
【請求項９】
転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む前記核酸が、Ｅ３遺伝子領域に挿入され、前記Ｅ３遺伝子は一部または全部が欠失される、請求項８に記載のがんの治療に使用する組成物。
【請求項１０】
前記複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、Ｄｅｌｔａ２４アデノウイルスまたはＤｅｌｔａ−２４−ＲＧＤアデノウイルスである、請求項８に記載のがんの治療に使用する組成物。
【請求項１１】
前記ＣＤ４０アゴニストが、少なくとも１つのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である、請求項８に記載のがんの治療に使用する組成物。
【請求項１２】
前記がんが、原発性または転移性のがんから選択される、請求項８に記載のがんの治療に使用する組成物。
【請求項１３】
前記腫瘍溶解性アデノウイルスが、腫瘍内、静脈内、腹腔内、気管内、筋肉内、頭蓋内、内視鏡的、病巣内、経皮的、皮下、局所的に、または直接注射もしくは灌流により投与するように調製される、請求項８に記載のがんの治療に使用する組成物。
【請求項１４】
前記複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスが、１０６〜１０１３プラーク形成単位（ｐｆｕ）の用量で投与するように調製される、請求項８に記載のがんの治療に使用する組成物。
【請求項１５】
アデノウイルスゲノムの非必須領域に挿入された異種核酸を含有する複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスであって、前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０アゴニストをコードする配列を含む、複製可能な腫瘍溶解性アデノウイルスと、
少なくとも１つの追加の治療薬と、を含む、がんの治療に使用する組成物。
【国際調査報告】
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