(57)【要約】  本発明は、細胞内感染、特に細胞内細菌、真菌、及び原虫感染を治療する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内感染が細胞内細菌、原虫、及び真菌からなる群から選択される、前記細胞内感染の治療又は予防に使用するためのＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項２】
ＧｎＲＨ類似体が、デスレリン、アボレリン、ロイプロリド、トリプトレリン、ブセレリン、フェルチレリン、ルトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ナファレリン、又はそれらの薬学的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の使用のためのＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項３】
請求項１に記載の細胞内感染の治療又は予防に使用するための性ホルモンと組み合わせた、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項４】
ＧｎＲＨ類似体が、デスレリン、アボレリン、ロイプロリド、トリプトレリン、ブセレリン、フェルチレリン、ルトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ナファレリン、又はそれら薬学的に許容される塩から選択される、請求項３に記載の使用のための性ホルモンと組み合わせた、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項５】
性ホルモンが、エストラジオールもしくはエストラジオールの半合成エステル、又は合成もしくは半合成のエストロゲン類似体から選択される、女性対象において請求項３に記載の使用のための性ホルモンと組み合わせた、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項６】
性ホルモンがテストステロン又はテストステロン類似体から選択される、男性において請求項３に記載の使用のための前記性ホルモンと組み合わせた、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項７】
細胞内感染が、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ならびにエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）から選択される、請求項１もしくは２に記載の使用のためのＧｎＲＨもしくはＧｎＲＨ類似体、又は請求項３〜６のいずれか一項に記載の使用のための性ホルモンと組み合わせたＧｎＲＨもしくはＧｎＲＨ。
【請求項８】
ヒト又は動物の対象における細胞内感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、前記対象に有効量のＧｎＲＨもしくはＧｎＲＨ又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項９】
対象に性ホルモンを投与することをさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
性ホルモンの投与が、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の魅力的効果を補償する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ヒト又は動物の対象が、１ヶ月以上、特に半年以上又は１年以上、さらにはそれ以上の治療期間にわたってＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体で治療される、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
経口、筋肉内、皮下、舌下、又は鼻腔内投与を含む、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
細胞内感染が、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ならびにエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）から選択される、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
治療される対象が成人男性であり、性ホルモンがテストステロン又はテストステロン類似体である、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
治療される対象が成人女性であり、性ホルモンがエストロゲン、好ましくはエストラジオールもしくはエストラジオールの半合成エステル、又は合成もしくは半合成エストロゲン類似体である、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
プロゲストゲンの投与をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
単一のパッケージ中に、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体を含む第１の組成物；１つ又はいくつかの天然、半合成、又は合成の性ホルモンを含む第２の組成物を含む、医薬品キット。
【請求項１８】
ゲスターゲンを含む第３の組成物を含む、請求項１７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体、及び場合により１つ以上の天然、半合成、又は合成の性ホルモンの投与を使用して、例えば細菌、真菌、及び原虫による細胞内感染を治療する新規な方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
細胞内細菌、真菌、及び原虫感染は、それらが無症状で現れるため、又はあまりに症状が軽度であるために感染した個人が医療援助を求める傾向がないため、健康な個人では診断されないことがよくある。そのように、細胞内感染は、潜在的に持続し得るか、又は疾患状態に進行し得る。正常なＴ細胞機能を妨害する状態は、通常、潜伏感染から疾患の進行をもたらし、結核菌（Ｍｔｂ）のような細胞内感染は、ＨＩＶ感染がＡＩＤＳに進行した患者における一般的な死因である。したがって、細胞内感染を治療する方法及び手段についても当技術分野において大きな必要性が存在する。
【０００３】
Ｍｔｂのような細胞内病原体は、持続感染を引き起こす単球及びマクロファージの細胞内区画内に隠れる能力を有する。Ｍｔｂは、肺のＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞によって認識され、適切な反応が開始されるが、系は、滅菌免疫を作り出すことができない（ＭａｃＭｉｃｋｉｎｇ  ２０１２）。宿主による免疫認識を回避するために、Ｍｔｂは、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞のＭＨＣクラスＩＩポケットに存在するＭｔｂペプチドの認識を阻害する一連の機構を発達させた。Ｔｏｌｌ様受容体２は、Ｍｔｂによって阻害されることが実証されており、それは次にＩＦＮ−γ誘導性のＭＨＣクラスＩＩ発現を阻害する（Ｎｏｓｓ  ２００１）。加えて、データは、おそらく不変鎖関連機構によって、Ｍｔｂがファゴソームプロセシング及び成熟を阻害する能力を有することを示唆している（Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａ  ２００１）。したがって、Ｍｔｂ由来のＭＨＣクラスＩＩペプチドの通常の抗原プロセシング、ローディング、及び提示は、Ｍｔｂ産生免疫回避因子のために損なわれる。
【０００４】
エンドソームリソソーム経路は、病原体を取り込んで、それらを１２〜１５アミノ酸長のペプチドにプロセシングし、ＨＬＡ−ＤＭによる不変鎖ペプチドＣＬＩＰの除去後、ペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩポケットにローディングされるように設計されている。抗原ローディング後に、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の特異的Ｔ細胞受容体の提示のために、細胞表面へのＭＨＣクラスＩＩ−ペプチド複合体の輸送が続く（Ｒｏｃｈｅ  ２０１５）。最近、Ｍｔｂ発現タンパク質ＥｓｘＨは、輸送に必要なエンドソーム選別複合体（ＥＳＣＲＴ）機構を直接阻害することが報告されている（Ｐｏｒｔａｌ−Ｃｅｌｈａｙ  ２０１６）。ＥｓｘＨは、抗原提示単球及びマクロファージがＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞を活性化する能力を阻害する。無傷のＥＳＣＲＴ機構は、Ｔ細胞の抗原プロセシング、提示、及び活性化に必要であると思われるので、ＥｓｘＨは、ＭＨＣクラスＩＩ経路に介入することによってＭｔｂが誘導する免疫回避を説明するリンクである。
【０００５】
ＭＨＣクラスＩＩ提示の重要性は、原発性免疫不全症（ＰＩＤ）を伴う患者でも実証されている。ＩＦＮＧＲ、ＩＬ−１２を伴うＩＦＮ−γ回路に欠陥を有するＰＩＤ患者は、ＴＢＣ及び非定型マイコバクテリア感染の獲得が増加している。ＭＨＣクラスＩＩ発現は、ＩＦＮ−γ発現に依存しかつ調節されるので、ＩＦＮ−γ回路における欠損は、さらにＭＨＣクラスＩＩ発現の減少及びＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の不十分な活性化をもたらす。
【０００６】
トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）のような原虫は、必須の細胞内寄生生物として細胞内に隠れることによって免疫認識を回避するための機構を発達させた。この機構は、ＭＨＣクラスＩＩ発現の妨害を伴い、そのため、特異的ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞について提示されるトキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）の量を減少させる。詳細な機構は、ＩＦＮ−γ誘導性のＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害するトキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）によって発現される可溶性タンパク質に依存している（Ｌｅｒｏｕｘ  ２０１５）。
【０００７】
さらに、異なる真菌感染がＭＨＣクラスＩＩ発現に依存することが実証されている。クリプトコッカスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｏｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）は、ＨＩＶを含む免疫不全患者の生命を脅かす脳感染を引き起こす可能性がある。クリプトコッカスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｏｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）のマウスモデルでの研究により、ミクログリア細胞の活性化及びそれらのＭＨＣクラスＩＩの上方制御は、ＩＦＮ−ガンマ依存的に生存に重要であることが実証されている（Ｚｈｏｕ  ２００７）。
【０００８】
したがって、Ｍｔｂ及び他の細胞内細菌、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）などの原虫、又はクリプトコックスによって例示される真菌によって誘発される免疫回避機構を克服するために、単球、マクロファージ、ミクログリア、又は他の感染細胞の細胞表面でのＭＨＣクラスＩＩ及びＭＨＣクラスＩの発現増加は、免疫認識及び病原体の除去に有益である可能性が高い。
【０００９】
発明概論
ＧｎＲＨ  Ｉ（ゴナドトロピン放出ホルモン又はＬＨＲＨとしても既知）は、構造ｐｙｒｏＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２を有するデカペプチドである。それは、翻訳後に修飾されてアミノ末端にピログルタミン酸及びカルボキシル末端にカルボキサミドを有する最終ペプチドを形成する９２アミノ酸プロペプチドとして産生される。それは、下垂体前葉からのＦＳＨ及びＬＨの放出の原因であることは長い間既知であり、通常は拍動的に視床下部から放出される。超生理学的レベルのＧｎＲＨ  Ｉは、すぐにＦＳＨ及びＬＨ分泌の増加を誘発し、その後すぐにＦＳＨ及びＬＨ分泌の阻害が続く。これは、高レベルのＧｎＲＨ  Ｉが下垂体前葉のＩ型ＧｎＲＨ受容体に対して阻害効果を有するという事実によるものである。したがって、高い非生理学的レベルでのＧｎＲＨ  Ｉの連続投与は、薬理学的去勢を誘発する（Ｆｉｎｋ  １９９８）。ホルモン感受性癌などの治療分野で使用するために、多数のＧｎＲＨ  Ｉアゴニスト及びアンタゴニストが合成されてきた。最初に、ＧｎＲＨ  Ｉの塩が治療的に使用された（例えば、ゴナドレリン塩酸塩及びゴナドレリンジアセタート四水和物）。さらなる薬物の発見及び開発により、ブセレリン、トリプトレリン、ナファレリン、ヒストレリン、及びロイプロレリンを含む多種多様な薬剤の臨床使用がもたらされ、これらはそれぞれ、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体の半減期の延長及びスーパーアゴニズムなどのゴナドレリンを超える改善を有する。
【００１０】
ＧｎＲＨ  Ｉは、ホルモン作用を示すだけでなく、免疫系を刺激し得ることが報告されている（Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ａｎｄ  Ａｎｓａｒｉ  ２００４）。ＭｃＣｌｅａｎ  ａｎｄ  ＭｃＣｌｕｇｇａｇｅ（ＭｃＣｌｅａｎ  ａｎｄ  ＭｃＣｌｕｇｇａｇｅ  ２００３）は、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体アゴニストによる術前治療後に子宮平滑筋腫に小さな成熟リンパ球が大量に浸潤しているのを観察した。Ｂａｒｄｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ（Ｂａｒｄｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ  ２００４）も同じ観察結果を示し、免疫細胞上のＧｎＲＨ  Ｉの遊走に対する刺激作用を示唆している。遡及的分析（Ｋｅｒｒ−Ｌａｙｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９８）におけるＨＩＶ感染女性の子宮摘出標本における慢性形質細胞性子宮内膜炎、及びＨＩＶ感染男性における高レベルのＦＳＨ及びＬＨ（ハイパーゴナドトロピン）に関する報告がなされている（Ａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ  １９９９及びＢｒｏｃｋｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２０００）。ＡＩＤＳ様リンパ球プロファイルを示す糖尿病を起こしやすいＢＢラットにＧｎＲＨ  Ｉを投与することにより、ＣＤ４  Ｔリンパ球数が増加した（Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９９）。
【００１１】
国際公開第２００９／１４５６９０Ａ１号は、ＨＩＶに感染したＣＤ４Ｔ細胞がＨＩＶコード化タンパク質ＮｅｆによりＭＨＣクラスＩを下方制御し、その結果、認識を回避するという概念で、ＧｎＲＨがＴ細胞上のＭＨＣクラスＩを活性化し上方制御することを教示する。
【００１２】
他の哺乳動物とは異なり、１つの従来のヒトＧｎＲＨ受容体、すなわちＩ型ＧｎＲＨ受容体のみが記載されている。ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体相同体は、ヒトの染色体１ｑ１２遺伝子上に存在するが、フレームシフト及び終止コドンを含有し、機能的に発現されないと考えられている（Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００３）。驚くべきことに、本発明者らの発見は、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体が、ＭＨＣクラスＩ発現の増加によりＧｎＲＨ刺激に応答するので、実際にＴ細胞上に発現されることを示唆している（図１）。これらの機能的発見は、本発明者らがＩＩ型ＧｎＲＨ受容体ｍＲＮＡの発現を実証することができたｑＰＣＲ分析によって裏付けられた。さらに、ナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞上でのＩＩ型ＧｎＲＨ受容体の相対的発現レベルは、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体の発現レベルと比較して高かった（図３）。したがって、本発明者らは、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体の発現が、機能的にＧｎＲＨ刺激に応答してＴ細胞上に発現される優性受容体であることを同定した。
【発明の概要】
【００１３】
本発明者らはまた、ＧｎＲＨ  Ｉ類似体がＴ細胞を活性化してＭＨＣクラスＩ発現をもたらし得ることを発見した。ＧｎＲＨ  Ｉ類似体ブセレリンをＨＩＶの治療薬として使用した最近の臨床試験では、ＧｎＲＨ  Ｉの内分泌作用を最小限に抑えるために、ＨＩＶ感染男性に性ホルモン置換が提供された。これらの作用は、ＧｎＲＨ  Ｉが下垂体Ｉ型ＧｎＲＨ受容体に結合することによって媒介され、テストステロン産生の減少、その後インポテンツの減少をもたらす。その内分泌作用に加えて、ＧｎＲＨ  Ｉが交差シグナルを出し、高去勢レベルのＧｎＲＨ類似体が使用される場合、Ｔ細胞上のＩＩ型ＧｎＲＨ受容体に結合することによって免疫系を刺激する可能性が非常に高い。興味深いことに、乳癌細胞で発現される受容体へのＧｎＲＨ  Ｉ結合は、低い結合親和性（Ｋｄ、１．６−３．０ｘ１０（−６）Ｍ）を示すのに対して、ＧｎＲＨ  Ｉの中枢性下垂体結合は、１０００倍高い親和性（Ｋｄ、４．８Ｘ１０（−９）Ｍ）を示す（Ｅｉｄｎｅ  ｅｔ  ａｌ．１９８７）。
【００１４】
ＧｎＲＨ  Ｉ及びＧｎＲＨ  ＩＩペプチドの結合親和性の違いは、下垂体細胞でのＧｎＲＨ  Ｉ結合に特化したＩ型ＧｎＲＨ受容体の発現を反映しているが、末梢細胞は、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体の発現を支配し、したがって低親和性及びＧｎＲＨ  Ｉ結合の「オフターゲット」効果を支配する。したがって、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体がＴ細胞上の優勢な受容体であるという本発明者らの予想外の発見は、新規であり、ＧｎＲＨ  Ｉ及びＧｎＲＨ  ＩＩの受容体生理学を説明し得る。ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体は、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体の活性化により、有効量で投与された場合に去勢効果を示す可能性がある。したがって、本化合物は、ＧｎＲＨ  ＩＩ様ペプチドの内分泌作用に対抗するために、１つ以上の天然、半合成、又は合成性ホルモン、例えば、患者のホルモンの状態によって応じて、テストステロン又はエストロゲンと組み合わせて投与され得る。成人男性において、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、テストステロン又は対応するホルモン作用を有する物質である。成人女性において、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、特にプロゲストゲンと組み合わせたエストラジオール又は対応するホルモン効果を有する薬剤である。後者は、女性の子宮内膜癌の発生を回避し、膣出血を回避するために添加される。しかしながら、子宮摘出女性は、プロゲストゲンの添加による恩恵を受けない。
【００１５】
ウイルスペプチドは、サイトゾル中に出現し、プロテオソームを標的とし、続いて消化されたＨＩＶペプチドがＭＨＣクラスＩペプチド中に添加され、続いて提示のために細胞表面へ輸送される小胞体へのプロセシング及び輸送（ＴＡＰ１及びＴＡＰ２）が続く（Ｌｕｂｂｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【００１６】
国際公開第２００９／１４５６９０Ａ１号の教示及び既知の技術とは対照的に、細胞内細菌は、エンドソームリソソーム経路、Ｔ細胞などの正常細胞におけるＭＨＣクラスＩには通常アクセスできない経路の居住者である。しかしながら、本発明において、本発明者らは、ＧｎＲＨがＣＤ１４＋単球のような抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＭＨＣクラスＩを上方制御することができることを初めて実証した（図２）。ＡＰＣは、交差提示の特有の能力を有し、すなわち、それらは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化のために、エンドソームリソソーム経路からＭＨＣクラスＩポケット内に抗原を提示することができる。この発見は、驚くべきことであり、ＡＰＣのエンドソームリソソーム経路に存在し、隠れるＭ結核のような細胞内細菌を示唆する。したがって、結核感染者をＧｎＲＨで治療すると、ＡＰＣを活性化し刺激して交差提示経路によるＭＨＣクラスＩ上方制御が開始され、ＣＤ８＋Ｔ細胞による結核ペプチドの認識及び感染ＡＰＣＳの排除がもたらされる。
【００１７】
一態様では、本発明は、１つ以上のＧｎＲＨ類似体を使用することによって細胞内細菌、原虫、及び真菌による感染などの細胞内感染を治療する方法を提供する。治療される細胞内細菌としては、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、及びサルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）が挙げられる。細胞内原虫としては、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、及びリーシュマニアが挙げられる。細胞内真菌としては、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）が挙げられる。
【００１８】
本発明の化合物は、改善されたＭＨＣ  ＩＩ及び／又はＭＨＣ  Ｉ抗原提示を誘導すると考えられそれらを細胞内細菌、真菌、及び原虫感染の治療に有用にする。本発明は、非生理学的量のＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の投与、及び好ましくは性ホルモンの投与も含む、細胞内感染を治療するための方法をさらに提供する。
【００１９】
ＧｎＲＨ類似体は、当技術分野において既知である。ＧｎＲＨ類似体は、ヒトを含む動物に投与したときに下垂体前葉の受容体に対するＧｎＲＨの作用を模倣する薬剤である。単一の低生理学的用量又は時間的に間隔を置いた単一の低生理学的用量でのＧｎＲＨ類似体の投与は、下垂体前葉の受容体を刺激し、それによって受容体アゴニストとして作用するが、単位時間あたりの高い非生理学的用量でのＧｎＲＨ類似体の連続投与は、下垂体前葉の受容体の最初の刺激後、ＦＳＨ及びＬＨの分泌を阻害し、それによって受容体アンタゴニストとして作用する。
【００２０】
本発明に従って使用するための既知の類似体としては、デスレリン、アボレリン、ロイプロリド、トリプトレリン、ブセレリン、フェルチレリン、ルトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、及びナファレリンが挙げられる。
【００２１】
ＦＳＨ及びＬＨ分泌の阻害は、薬理学的去勢を誘発する。これに関連して、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の非生理学的用量は、それぞれＧｎＲＨ又はＧｎＲＨの非生理学的血漿レベル、特に去勢血漿レベルをもたらす用量である。これに関連して、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の非生理学的血漿レベルは、通常存在するＧｎＲＨのレベルの範囲に含まれないレベル、又はＧｎＲＨ類似体の場合には、健康な人におけるＧｎＲＨの正常な生理学的効果の範囲による生理学的効果に関して含まれないレベルである。
【００２２】
より具体的には、これに関連して、ＧｎＲＨの非生理学的血漿レベルは、ＧｎＲＨの正常な生理学的血漿レベルに関して、増加したレベル、特に１週間以上又は１ヶ月以上などの長期間にわたって増加したレベルである。また、より具体的には、ＧｎＲＨ類似体の非生理学的血漿レベルは、健康な人における正常な生理学的作用範囲ＧｎＲＨによる生理学的作用に関しては含まれないＧｎＲＨ類似体の血漿レベルの増加であり、特に１週間以上又は１ヶ月以上の長期間にわたってのものではない。それらの薬学的に許容される塩を含む本発明のＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の任意の有用な投与形態、特に静脈内、筋肉内、皮下、舌下、及び鼻腔内投与が本発明に含まれる。特に好ましいのは、デポー及び徐放又は持続放出組成物である。
【００２３】
望ましくない去勢又は去勢に関連する副作用を回避するために、本発明によれば、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体は、ＧｎＲＨ  ＩＩ様ペプチドの内分泌作用に対抗するために、１つ以上の天然、半合成、又は合成の性ホルモン、例えば、患者のホルモン状態に応じてテストステロン又はエストロゲンと組み合わせて投与され得る。成人男性において、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、テストステロン又は対応するホルモン作用を有する物質である。成人女性において、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、特にプロゲストゲンと組み合わせたエストラジオール又は対応するホルモン効果を有する薬剤である。後者は、女性の子宮内膜癌の発生を回避し、膣出血を回避するために添加される。しかしながら、子宮摘出女性は、プロゲストゲンの添加による恩恵を受けない。
【００２４】
１つ以上の天然、半合成、又は合成の性ホルモンの併用投与は、ｉ）同時であり得、ｉ）ＧｎＲＨ類似体を性ホルモンより早く投与することができ、又はｉｉｉ）ＧｎＲＨ類似体を性ホルモンより後に投与することができる。さらに、使用される投与形態に依存して、ＧｎＲＨ類似体及び／又はホルモンは、例えば鼻スプレーを介した性ホルモンの投与の場合のように、複数回投与され得、投与は、典型的には１週間以上の間１日１回以上である。
【００２５】
併用投与は、例えば、無投与期間によって中断された１つ以上の期間にわたって延長してもよく、又は投与は、連続的であり得る。好ましい投与期間は、１〜２週間、特に１０〜１４日間である。本発明の化合物がＧｎＲＨ  Ｉを活性化することによって内分泌作用を有する場合、前記化合物の投与は、１つ以上の天然、半合成、又は合成の性ホルモンの投与期間と、例えば５０パーセント超、好ましくは８５パーセント超、さらにより好ましくは９０又は９５パーセント超重複する。併用投与は、性欲減退、ほてり、発汗増加、及び心拍数増加などの深刻な内分泌副作用から人を保護することを可能にする。成人男性において、本発明の化合物の内分泌作用に対抗するために投与される天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、テストステロン又は対応するホルモン作用を有する薬剤、特にテストステロンのホルモン効果を模倣する合成又は半合成剤である。好ましい薬剤は、メチルテストステロン及びスタノゾロールを含む。成人女性において、本発明の化合物の内分泌作用に対抗するために投与される天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、エストラジオール又はエストラジオールの半合成エステル又は別の合成もしくは半合成エストロゲン類似体などのエストロゲンである。好ましいエストロゲン類似体は、共役エストロゲン、エチニルエストラジオール、及びメストラノール、ならびにジネストロール及びジエチルスチルベストロールなどの非ステロイド系エストロゲンを含む。女性において、前記エストロゲン又はエストロゲン類似体投与は、一態様において、プロゲストゲン、特にプロゲステロン、プロゲステロン誘導体又は類似体、例えばヒドロキシプロゲステロンカプロアート、メドロキシプロゲステロンアセタート、ノエチステロンアセタート、メゲストロールアセタート、メドロゲストン、及びノルゲストレルの投与と併用されるのが好ましい。併用投与は、好ましくは５０パーセント超、好ましくは８５パーセント超、さらにより好ましくは９０又は９５パーセント超重複する。プロゲストゲンは、エストロゲン、エストラジオールもしくはエストリオールの半合成エステル、又は合成もしくは半合成エストロゲン類似体と組み合わせて、連続的に又は約１〜３ヶ月の間隔で約１０〜１４日の期間にわたって投与されることが好ましい。
【００２６】
好ましくは、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、ＧｎＲＨ類似体と、場合により薬学的に許容される担体と組み合わせて投与される。
本発明の化合物は、細胞内細菌、真菌、原虫感染、例えば、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、及びサルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の治療、ならびに細胞内の原虫感染、そのようなトキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、及びリーシュマニアの治療、ならびにこれらの感染が単独で、又はウイルス性病原体もしくはウイルス性疾患と関連して、あるいは一次又は二次免疫不全の他の原因と関連して起こる場合、細胞内真菌感染、例えば、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）の治療に使用するべきであると考えられる。一次免疫不全の原因としては、遺伝性遺伝的欠損症及び体細胞変異が挙げられるが、二次免疫不全は、上記のようなウイルス感染、又は糖尿病もしくは栄養失調などの遺伝性もしくは非遺伝性の状態、又は免疫抑制剤、薬物乱用、もしくは他の環境要因によって引き起こされ得る。
【００２７】
さらに、本明細書に開示される本発明の化合物は、ウイルス性疾患、障害、状態、及び症状の共治療として、例えば、ＨＩＶ、アデノウイルス、アルファウイルス、アルボウイルス、ボルナ病、ブニヤウイルス、カリシウイルス、コンジローマアクチナータ（Ｃｏｎｄｙｌｏｍａ  Ａｃｕｍｉｎａｔａ）、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、サイトメガロウイルス、デング熱ウイルス、伝染性膿瘡（Ｃｏｎｔａｇｅｏｕｓ  Ｅｃｔｈｙｍａ）、エプスタイン−バーウイルス、伝染性紅斑、ハンタウイルス、ウイルス性出血熱、ウイルス性肝炎、単純ヘルペスウイルス、帯状疱疹ウイルス、感染性単核球症、インフルエンザ、ラッサ熱ウイルス、麻疹、流行性耳下腺炎、伝染性軟体動物、パラミクソウイルス、瀉血熱、ポリオーマウイルス、リフトバレー熱、風疹、風疹、遅延性疾患のウイルス、天然痘、亜急性硬化性全脳炎、腫瘍ウイルス感染、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、狂犬病ウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルスなどのウイルス剤又はウイルス性疾患に感染した患者における治療において使用され得る。
【００２８】
さらに、化合物は、癌の共治療における使用に好適であると考えられる。特に、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ腫瘍、乳癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭及び下咽頭癌、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜トーマ、横紋筋肉腫、唾液腺癌、基底扁平上皮癌、メラノーマ、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストロームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍。
【００２９】
したがって、本発明の化合物の有利な特性は、以下のうちの１つ以上を含み得る：
−ＭＨＣクラスＩ刺激の改善
−ＭＨＣクラスＩＩ刺激の改善
−免疫調節の改善
−抗原提示細胞の活性化の改善
−Ｔ細胞応答の改善
−ＭＨＣ  ＩＩ抗原提示の改善
−ＭＨＣ  Ｉ抗原提示の改善
【００３０】
以下のリストに、既知のＧｎＲＨ類似体の例を示す：
【表１】
2020505377.tif 000002
【００３１】
本発明の化合物を含む医薬組成物
本発明はまた、ＧｎＲＨ化合物と１つ以上の薬学的に許容される希釈剤又は担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００３２】
組成物はまた、ＧｎＲＨ化合物と性ホルモンの両方を含有し得るが、通常、２つの種類の原薬の投与計画は、異なり、したがって、キットの形態の組成物は、２成分を含むキットなどのより関連性が高いものになり得、第１の成分が、１つ以上のＧｎＲＨ含有組成物であり、第２の成分が、１つ以上の性ホルモン含有組成物である。キットに含有された個々の組成物は、同じ種類のものでも異なる種類のものでもよい。したがって、ＧｎＲＨの組成物は、非経口又は経口組成物の形態であり得、性ホルモンの組成物は、非経口、鼻、又は経口組成物の形態であり得る。
【００３３】
既知のＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体ならびに性ホルモンについての特定の組成物の種類は、当技術分野において既知である。
【００３４】
化合物又はその製剤は、例えば任意の従来の経路によって投与され得るが、非限定的に、非経口的に、経口的に、局所的に、又は粘膜（頬側、舌下、経皮、膣、直腸、鼻、眼などを含む）を介して、医療装置（例えばステント）を介して、吸入によって投与され得る。治療は、単回投与又はある期間にわたる複数回投与からなり得る。
【００３５】
ＧｎＲＨを用いた治療は、治療される特定の疾患ならびに治療される患者の体重及び年齢に応じて、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回などの投与によるものであり得る。治療はまた、例えば、点滴を介した注入による静脈内投与などの持続投与によるものであり得る。
【００３６】
本発明の化合物をそのまま投与することは可能であるが、それを医薬製剤として１つ以上の許容される担体と一緒に存在させることが好ましい。担体は、本発明の化合物と適合性であり、そのレシピエントに有害ではないという意味で「許容される」ものでなければならない。好適な担体の例は、以下により詳細に記載される。
【００３７】
製剤は、単位剤形を含む好適な剤形で都合よく提示されてもよく、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製されてもよい。そのような方法は、活性成分（本発明の化合物）を１つ以上の補助成分を構成する担体と一緒にする工程を含む。一般に、製剤は、活性成分を液体担体もしくは微粉化した固体担体又はその両方と均一かつ密接に一緒にして、次いで、必要に応じて生成物を成形することによって調製される。
【００３８】
本発明の化合物は、通常、経口又は非経口経路による通常の任意の投与経路により、活性成分を含む医薬製剤の形態で、場合により薬学的に許容される剤形の、無毒の有機又は無機の酸又は塩基の付加塩の形態で投与され得る。障害及び治療される患者、ならびに投与経路に応じて、組成物は、様々な用量及び／又は頻度で投与され得る。
【００３９】
医薬組成物は、製造及び貯蔵の条件下で安定でなければならない；したがって、必要に応じて細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されるべきである。液剤、分散剤、乳剤、及び懸濁剤などの液体製剤の場合、担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、植物油、ならびにそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。
【００４０】
例えば、本発明の化合物は、香味剤もしくは着色剤を含有し得る錠剤、カプセル剤、フィルム剤、胚珠剤、エリキシル剤、液剤、乳剤、又は懸濁剤の形態で経口、口腔内、又は舌下投与され得る。
【００４１】
経口投与に好適な本発明による製剤は、カプセル剤、カシェ剤、又は錠剤などの個別の単位として提供されてもよく、それぞれが所定量の活性成分；を例えば、錠剤もしくはカプセル剤の形態で、複数のユニットとして：粉末もしくは顆粒として；水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として；又は水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして；含有する。活性成分はまた、巨丸剤、舐剤、又はペースト剤として提供されてもよい。
【００４２】
経口投与に好適な本発明の化合物の溶液又は懸濁液は、水、アルコール、ポリオールなどを含む１つ以上の溶媒、ならびにｐＨ調整剤、安定剤、界面活性剤、可溶化剤、分散剤、防腐剤、香料などの１つ以上の賦形剤も含有し得る。具体例としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、分散剤、例えば、ポリソルベート８０、界面活性剤、及び可溶化剤、例えば、ポリエチレングリコール、Ｐｈｏｓａｌ  ５０  ＰＧ（ホスファチジルコリン、大豆脂肪酸、エタノール、モノ／ジグリセリド、プロピレングリコール、及びアスコルビルパルミタートからなる）を含む。本発明による製剤はまた、エマルジョンの形態であってもよく、式（Ｉ）による化合物は、水中油型エマルジョン又は油中水型エマルジョンなどのエマルジョン中に存在してもよい。油は、天然油もしくは合成油、又は任意の油様物質、例えば、大豆油もしくはベニバナ油又はそれらの組み合わせなどであり得る。
【００４３】
錠剤は、微結晶セルロース、ラクトース（例えばラクトース一水和物又はラクトース無水物）、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム及びグリシン、ブチル化ヒドロキシトルエン（Ｅ３２１）、クロスポビドン、ヒプロメロースなどの賦形剤、デンプン（好ましくは、トウモロコシ、ポテト、又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、及び特定の複雑なシリカートなどの崩壊剤、ならびにポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、マクロゴール８０００、スクロース、ゼラチン、及びアラビアゴムなどの造粒結合剤を含有し得る。さらに、マグネシウムステアラート、ステアリン酸、グリセリルベヘナート、及びタルクなどの滑沢剤が含まれてもよい。
【００４４】
錠剤は、場合により１つ以上の副成分と共に圧縮又は成型することにより作製され得る。圧縮錠剤は、場合により結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えばデンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤、又は分散剤と混合された粉末もしくは顆粒などの自由流動形態の活性成分を好適な機械で圧縮することによって調製され得る。成型錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を好適な機械で成型することによって作製され得る。錠剤は、場合により被覆又は刻み目を入れてもよく、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを様々な割合で使用してその中の活性成分を徐放又は制御放出するように処方して所望の放出プロファイルを提供してもよい。
【００４５】
同様の種類の固体組成物もゼラチンカプセルの充填剤として用いられ得る。これに関して好ましい賦形剤としては、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、又は高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。水性懸濁液及び／又はエリキシル剤の場合、本発明の化合物は、様々な甘味剤もしくは香味剤、色素、又は染料と、乳化剤及び／又は懸濁剤と、ならびに水、エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリン、ならびにそれらの組み合わせなどの希釈剤と組み合わせ得る。
【００４６】
口内への局所投与に好適な製剤としては、活性成分を風味付きで、通常スクロース及びアカシア又はトラガカントを含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアラビアゴムなどの不活性基剤中に活性成分を含むトローチ；ならびに活性成分を好適な液体担体中に含む洗口剤が挙げられる。
【００４７】
局所投与に適した医薬組成物は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、粉末剤、溶液、ペースト剤、ゲル剤、含浸包帯剤、スプレー剤、エアゾール剤又はオイル剤、経皮装置、散粉剤などとして処方され得る。これらの組成物は、活性剤を含有する従来の方法で調製され得る。したがって、それらはまた、保存剤、薬物浸透を助けるための溶媒、クリーム又は軟膏中の皮膚軟化剤、及びローションのためのエタノール又はオレイルアルコールなどの適合する従来の担体及び添加剤を含んでもよい。そのような担体は、組成物の最大約１％〜最大約９８％として存在してもよい。より通常には、それらは、組成物の最大約８０％を形成する。ほんの一例として、クリーム又は軟膏は、所望の粘稠度を有するクリーム又は軟膏を製造するのに十分な量で、約５〜１０重量％の化合物を含有する十分な量の親水性材料及び水を混合することによって調製される。
【００４８】
経皮投与に適した医薬組成物は、レシピエントの表皮と長期間密接に接触したままでいることを意図した個別のパッチとして提示され得る。例えば、活性剤は、イオン導入法によってパッチから送達され得る。
【００４９】
外部組織、例えば口及び皮膚への適用のためには、組成物は、局所用軟膏又はクリームとして適用されるのが好ましい。軟膏剤に製剤化される場合、活性剤は、パラフィン系軟膏基剤又は水混和性軟膏基剤と共に用いられ得る。
【００５０】
あるいは、活性剤は、水中油型クリーム基剤又は油中水型基剤を用いてクリーム剤に製剤化され得る。
【００５１】
非経口投与の場合、液体単位剤形は、活性成分及び滅菌ビヒクル、例えば、これらに限定されないが、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、及び植物油を用いて調製され、水が好ましい。使用されるビヒクル及び濃度に応じて、活性成分は、コロイド状、懸濁状、又はビヒクル中に溶解させることができる。溶液を調製する際には、活性成分を注射用水に溶解し、好適なバイアル又はアンプルに充填して密封する前に濾過滅菌することができる。
【００５２】
有利には、局所麻酔薬、防腐剤、及び緩衝剤などの薬剤をビヒクルに溶解することができる。安定性を高めるために、組成物をバイアルに充填した後に凍結し、水を真空下で除去することができる。次いで、乾燥凍結乾燥粉末をバイアル中に密封し、使用の前に液体を再構成するために付随の注射用水バイアルを供給し得る。
【００５３】
注射用途に好適な本発明の医薬組成物は、無菌水溶液又は分散液を含む。さらに、組成物は、そのような滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末の形態であり得る。全ての場合において、最終注射形態は、無菌でなければならず、容易な注射可能性のために効果的に流動性でなければならない。
【００５４】
非経口懸濁液は、活性成分が溶解される代わりにビヒクルに懸濁され、滅菌が濾過によって達成され得ないことを除いて、溶液と実質的に同じ様式で調製される。無菌ビヒクルに懸濁する前に、活性成分をエチレンオキシドに曝露することによって滅菌することができる。有利には、活性成分の均一な分布を容易にするために界面活性剤又は湿潤剤が組成物中に含まれる。
【００５５】
特に上述した成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤の種類を考慮して当技術分野で従来の他の薬剤、例えば経口投与に好適な香味剤を含み得ることを理解されたい。当業者は、好適な製剤を選択する方法及びそれを調製する方法を知っている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８Ｅｄ又はそれ以降を参照のこと）。当業者はまた、好適な投与経路及び投与量を選択する方法を知っている。
【００５６】
当業者であれば、本発明の化合物の個々の投与量の最適な量及び間隔は、治療される状態の性質及び程度、投与形態、投与経路及び投与部位、ならびに治療されている特定の対象の年齢及び状態によって決定されることを認識し、医師が最終的に使用されるべき適切な投与量を決定することを認識する。この投与量は、必要に応じて何度も繰り返され得る。副作用が発生した場合、通常の臨床診療に従って、投与量及び／又は投与頻度を変更又は低減することができる。
【００５７】
医薬組成物はまた、一方の部分がＧｎＲＨ類似体を含有し、他方の部分が性ホルモンを含有する２部構成の組成物でもあり得る。２つの部分は、例えば２層錠剤として組み合わせてもよく、又はそれらは、例えばカプセル中のペレットとして存在してもよい。ＧｎＲＨ類似体を含有する既知の組成物及び性ホルモンを含有する既知の組成物もまた本発明の方法において使用され得る。
【００５８】
文脈上別段の要求がない限り、本明細書で言及される全ての％値は、％ｗ／ｗである。
【００５９】
配列表
配列表は、ＷＩＰＯ規格ＳＴ．２５に従って調製される。配列表において、化合物１〜１０の非天然アミノ酸は、以下のように対応する天然アミノ酸として表される：
【表２】
2020505377.tif 000003
【００６０】
配列表において、エントリー１〜１０は、本明細書中の表中にＰ１〜Ｐ１０として記載されている既知の化合物に対応する。しかしながら、それらが配列表に記載されている、すなわち上記の非天然アミノ酸を含まない配列番号１〜１６の配列は、特許請求されていないが、ＥＰＣのＲ．３０（１）の要件を満たすためにのみ含まれる。
【００６１】
配列表からのフリーテキストの繰り返し
ＷＩＰＯ規格ＳＴ．２５の段落３６を遵守するために、配列表の数値識別子＜２２３＞の下に含まれるフリーテキストは、ここで説明の主要部分において繰り返される：
【表３】
2020505377.tif 000004
【００６２】
定義
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、冠詞の文法上の目的語の１つ又は２つ以上（すなわち少なくとも１つ）を指すために本明細書で使用される。例として、「類似体」は、１つの類似体又は複数の類似体を意味する。
【００６３】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機又は有機の酸又は塩基から形成される従来の塩、ならびに四級アンモニウム酸付加塩を含む。好適な酸塩のより具体的な例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ギ酸、乳酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、パルモック酸、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸ヒドロキシナフトエ酸、ヨウ化水素酸、リンゴ酸、ステアリン酸（Ｓｔｅｒｏｉｃ）、タンニン酸などが挙げられる。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容されないが、本発明の化合物及びそれらの薬学的に許容される塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に有用であり得る。好適な塩基性塩のより具体的な例としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、及びプロカインの塩が挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】漸増濃度のＧｎＲＨ  Ｉ類似体（赤色）及びＧｎＲＨ  ＩＩ（黒色）でＴ細胞を刺激した後のＭＨＣクラスＩの発現を示す図である。健康なドナーからのＰＢＭＣをＧｎＲＨ  Ｉ類似体又はＧｎＲＨ  ＩＩ及びＩＬ−２で７２時間刺激した。データ点は、フローサイトメトリーで測定されたＣＤ４＋Ｔ細胞（Ａ）又はＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｂ）上のＭＣＨクラスＩ発現の平均蛍光強度を表す。
【図２】漸増濃度のＧｎＲＨ  Ｉ類似体（赤色）及びＧｎＲＨ  ＩＩ（黒色）でＣＤ４＋ＣＤ１４＋単球を刺激した後のＭＨＣクラスＩの発現を示す図である。健康なドナーからのＣＤ１４＋単球ＰＢＭＣを、ＧｎＲＨ  Ｉ類似体又はＧｎＲＨ  ＩＩ及びＩＬ−２で７２時間刺激した。データ点は、フローサイトメトリーで測定されたＣＤ４＋ＣＤ１４＋単球上のＭＣＨクラスＩ発現の平均蛍光強度を表す。
【図３】定量的リアルタイムＰＣＲで分析したヒトＴ細胞におけるＧｎＲＨ受容体発現を示す図である。棒は、選別されたナイーブＴ細胞（白色の棒）又はメモリーＴ細胞（灰色の棒）におけるＲＮＡポリメラーゼＩＩ発現に対して標準化されたＩ型又はＩＩ型ＧｎＲＨ受容体ｍＲＮＡの比を表す。ＭＣＦ−７乳癌細胞株（黒色の棒）を陽性対照として使用した。
【図４】予想データ：感染マウスの肺におけるマイコバクテリアの数は、テストステロンの存在下又は非存在下でＧｎＲＨ関連化合物によって抑制される。コロニー形成単位（ＣＦＵ）は、細菌プレート上で感染マウスからの肺組織の溶解物を増殖させ、コロニーを数えることによって評価される。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
実験的
一般的な生物学的方法
ＧｎＲＨ受容体に対する本発明の化合物の優先的効果は、以下に記載される方法のうちの１つ以上を使用して試験され得る：
【００６６】
Ｉ．Ｔ細胞におけるＧｎＲＨ受容体の発現
ヒトナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞を蛍光表面マーカー抗体ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、及びＣＤ４で標識し、フローサイトメトリーで分類した。全ＲＮＡをＲｎｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）で抽出し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｓｅｌｅｃｔ  ｃＤＮＡ合成キット（Ｂｉｏｒａｄ）で逆転写する。鋳型ｃＤＮＡをＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）で増幅し、ＣＦＸ９６  ＰＣＲ（Ｂｉｏｒａｄ）で泳動した。Ｉ型ＧｎＲＨ受容体とＩＩ型ＧｎＲＨ受容体ｍＲＮＡとの比は、選別されたナイーブＴ細胞又はメモリーＴ細胞におけるＲＮＡポリメラーゼＩＩ発現に対して正規化された。ＭＣＦ−７乳癌細胞株を陽性対照として使用した。
【００６７】
プライマー配列：
Ｉ型  ＧｎＲＨ受容体
ｆｗｄ  ５’−ｔｇｃ  ｃｔｃ  ｔｔｃ  ａｔｃ  ａｔｃ  ｃｃｔ  ｃｔ−３’
ｒｅｖ  ５’−ｇｃａ  ａａｔ  ｇｃａ  ａｃｃ  ｇｔｃ  ａｔｔ  ｔｔ−３’
ＩＩ型  ＧｎＲＨ受容体
ｆｗｄ  ５’−ａｃｔ  ｇｔｔ  ｃａａ  ｔｇｇ  ｃｔｇ  ｇｃｔ  ｇｔ−３’
ｒｅｖ  ５’−ｇｃｃ  ｃｃｃ  ａｇａ  ａｇｔ  ｔｔｃ  ｃｔｔ  ａｃ−３’
【００６８】
Ｉ．ＧｎＲＨ  Ｉ対ＧｎＲＨ  ＩＩアッセイ
トランスフェクションによってＩ型又はＩＩ型ＧｎＲＨ受容体を発現するように作製した細胞に対して化合物を試験した。細胞を標識ＧｎＲＨ化合物に曝露し、洗浄した後、細胞上の標識を測定することによって評価した。標識を直接的に（放射性同位体標識もしくは蛍光標識）又は間接的に（ビオチン標識ペプチド）測定した。
【００６９】
ＧｎＲＨ化合物によって誘導されるシグナル伝達をそれぞれＩ型  ＧｎＲＨ及びＩＩ型  ＧｎＲＨ受容体を発現する細胞株において測定した。ＧｎＲＨ化合物を、競合アッセイを使用して、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体及びＩＩ型ＧｎＲＨ受容体に対するそれぞれの親和性について調べた。それらの効力を確立するＥＤ５０値を評価するために、フローサイトメーターを使用するか又は生細胞画像化顕微鏡法のいずれかを使用してＦｌｕｏ−４−Ｄｉｒｅｃｔで標識した細胞を使用してカルシウム流動を測定した。シグナル伝達はまた、ｐ−ＥＲＫ又はｐ−ＪＮＫに対する抗体を使用したウエスタンブロッティングによっても研究した。
【００７０】
ＬＨ及びＦＳＨの産生に対する細胞活性化の効果を評価し、それを免疫関連機能の刺激と比較するために、化合物の効果を下垂体細胞及びＩＩ型ＧｎＲＨ又はＩ型ＧｎＲＨ受容体のいずれかを発現する免疫細胞について調べた。
【００７１】
Ｉ．細胞特異的表面マーカーならびにＭＨＣクラスＩＩ及びＭＨＣクラスＩの発現
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール−ハイパック密度遠心分離を用いて健康なドナーから精製した。細胞を、１０％ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬアンピシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、３７℃、５％ＣＯ２中で２４〜７２時間培養した。細胞を本発明による化合物で刺激し、フローサイトメトリーを用いて細胞特異的表面マーカー及びＭＨＣクラスＩＩ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎからのモノクローナル抗体）の発現について分析した。
【００７２】
インビトロアッセイにおいてそれらの免疫調節特性について本発明による化合物のセットを試験し、単球上でＭＨＣクラスＩＩ発現を誘導するそれらの能力を評価する。最初に、共培養で既知のＧｎＲＨ類似体を使用し、単球を刺激した。ＭＦＩにおける背景からのＭＨＣクラス発現のわずかな増加が見られ得る。対照的に、本発明による化合物を使用すると、本発明者らは、ＭＨＣクラスＩＩ及びクラスＩの細胞表面発現のより大きな発現を検出し得、したがってエンドソーム及びリソソーム経路からのＭＨＣクラスＩＩ及びクラスＩペプチドの代謝回転及び提示の増加が可能になる。この発見は、細胞内病原体由来のペプチドの提示を強化し、ＣＤ４＋ＴヘルパーならびにＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化、増殖を促進し、滅菌免疫を誘導する。
【００７３】
細胞内細菌に対するＧｎＲＨＩＩ化合物の理論例
材料及び方法
雄マウスは、細菌を含有するエアロゾルの吸入によって結核菌に感染させる。感染量は、マウス１匹あたり１００〜１０００細菌である。ＧｎＲＨＩＩ又はＧｎＲＨＩ関連化合物（単独でもしくはテストステロンと一緒に）又はビヒクルは、細菌感染後１〜２週間、適切な用量で適切な経路により投与される。マウスを屠殺し、肺を取り出し、ホモジナイズし、結核菌の増殖を補助する培地、例えば、Ｌｏｅｗｅｎｓｔｅｉｎ−Ｊｅｎｓｅｎ培地、Ｄｕｂｏｓ’培地、Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ  ７Ｈ１０、７Ｈ１１、又は７Ｈ９、Ｓｕｌａ’ｓ培地などを含有するバクテリア皿上にプレーティングする。当業者は、好適な培地を選択する方法を知っている。３〜４週間のインキュベーション後、３７℃の加熱キャビネット内で、マウスの肺の中の細菌の量をプレート上の細菌コロニーを数えることによって定量する。当業者は、細菌を定量する他の方法を知っている。
【００７４】
予想結果
この実験の予想結果は、対照ビヒクル処置マウスと比較して、ＧｎＲＨ化合物で処置されたマウスにおいて、マウスの肺中の結核菌細菌の量が減少することである。本発明者らはまた、この点でＧｎＲＨＩＩ関連化合物がＧｎＲＨＩ関連化合物よりも優れていると予想する。本発明者らは、テストステロンの同時投与がＧｎＲＨ化合物の効果の程度に影響を与えるとは予想しない。
【００７５】
魅力的効果の測定及びその補償
本発明の化合物によって誘発される去勢、ならびにその任意の補償は、関連性ホルモンの循環レベルの測定によって決定することができる。そのような測定を実行する方法は、当業者に既知である。
【００７６】
参考文献
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2020505377.tif 000006
引用されたすべての参考文献は本願中に参照により組み入れられ、本願には特許及び特許出願が包含される。組み入れられる範囲は、可能な限り最も広範な範囲である。
【配列表フリーテキスト】
【００７７】
配列表１３  ＜２２３＞Ｉ型ＧｎＲＨ受容体フォワードプライマー
配列表１４  ＜２２３＞Ｉ型ＧｎＲＨ受容体リバースプライマー
配列表１５  ＜２２３＞ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体フォワードプライマー
配列表１６  ＜２２３＞ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体リバースプライマー
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年2月11日(2019.2.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内感染の治療又は予防に使用するための性ホルモンと組み合わせたＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体であって、前記細胞内感染が、細胞内細菌、細胞内原虫、及び細胞内真菌感染からなる群から選択されるもの。
【請求項２】
ＧｎＲＨ類似体が、デスレリン、アボレリン、ロイプロリド、トリプトレリン、ブセレリン、フェルチレリン、ルトレリン、ゴセレリン、ヒストレリン、ナファレリン、又はそれら薬学的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の使用のための性ホルモンと組み合わせた、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項３】
性ホルモンが、エストラジオールもしくはエストラジオールの半合成エステル、又は合成もしくは半合成のエストロゲン類似体から選択される、女性対象において請求項１又は２に記載の使用のための前記性ホルモンと組み合わせた、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項４】
性ホルモンがテストステロン又はテストステロン類似体から選択される、男性において請求項１又は２に記載の使用のための前記性ホルモンと組み合わせた、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項５】
細胞内感染が、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ならびにエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための性ホルモンと組み合わせたＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体。
【請求項６】
ヒト又は動物の対象における細胞内感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、前記対象に有効量のＧｎＲＨもしくはＧｎＲＨ又はその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記細胞内感染が、細胞内細菌、細胞内原虫、及び細胞内真菌感染の群から選択され、前記対象に性ホルモンを投与することをさらに含む、方法。
【請求項７】
性ホルモンの投与が、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の魅力的効果を補償する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ヒト又は動物の対象が、１ヶ月以上、特に半年以上又は１年以上、さらにはそれ以上の治療期間にわたってＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体で治療される、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
経口、筋肉内、皮下、舌下、又は鼻腔内投与を含む、請求項６〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
細胞内感染が、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ならびにエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）から選択される、請求項６〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
治療される対象が成人男性であり、性ホルモンがテストステロン又はテストステロン類似体である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
治療される対象が成人女性であり、性ホルモンがエストロゲン、好ましくはエストラジオールもしくはエストラジオールの半合成エステル、又は合成もしくは半合成エストロゲン類似体である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
プロゲストゲンの投与をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
単一のパッケージ中に、細胞内感染の治療又は予防における使用のためのＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体を含む第１の組成物；１つ又はいくつかの天然、半合成、又は合成の性ホルモンを含む第２の組成物を含む、医薬品キットであって、前記細胞内感染が、細胞内細菌感染、細胞内原虫感染、及び細胞内真菌感染の群から選択される、医薬品キット。
【請求項１５】
ゲスターゲンを含む第３の組成物を含む、請求項１４に記載のキット。
【国際調査報告】
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