(57)【要約】  本願は、認知症（例えば、血管性認知症、レビー小体型認知症、アルツハイマー病に起因する認知症、パーキンソン病に起因する認知症、前頭側頭型認知症、及びヒトにおける正常圧水頭症に起因する認知症、及びコンパニオン動物における認知機能障害症候群）、脳震盪、及び外傷性脳損傷を含む認知欠損障害を治療又はそうでなければ改善するための、ヒト又は動物への血漿、その画分、又はその混合物の投与に関する。特定の実施形態において、本発明は、ヒト又はコンパニオン動物対象の認知欠損障害を治療する方法を含み、当該方法は、以下：前記対象に１つ以上の認知機能テストを実施し、認知欠損障害を罹患している対象を特定すること； 及び前記対象に治療有効量の動物血漿組成物を投与すること；を含み、ここで、前記投与は、前記１つ以上の認知機能テストにおける前記対象の結果の改善を与える。【選択図】図１１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の治療に使用するための動物血漿、その画分、又はその混合物であって、ここで、前記動物血漿、その画分、又はその混合物は、経口投与される、動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項２】
前記認知欠損障害が、認知障害、脳震盪、及び外傷性脳損傷からなる群から選択される、請求項１に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項３】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の認知障害の治療に使用するための請求項１〜２の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項４】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の老年認知症の治療に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項５】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物のアルツハイマー病の治療に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項６】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の血管性認知症の治療に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項７】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物のパーキンソン病に起因する認知症の治療に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項８】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の脳震盪の治療に使用するための請求項１〜２の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項９】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）の治療に使用するための請求項１〜２の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１０】
前記テストが、以下：
セブンミニットスクリーン、ＩＱＣＯＤＥの短い形式、短縮メンタルテスト、ボウルズ−ラングレーテクノロジー／アシュフォードメモリーテスト、ケンブリッジ認知検査、１０ポイントのサンダーランドスケールを使用してスコア付けされたＣＤＴ、記憶欠損スクリーン、メンタル変容テスト、ミニコグ、ミニメンタルステータス検査、ショート及びスウィートスクリーニング装置、メンタルステータスのショートテスト、６項目認知欠損テスト、一般専門家の認知評価、ローランドユニバーサル認知症評価尺度、時間及び変更テスト、遅延場所合わせテスト、遅延場所非合わせテスト、遅延サンプル合わせテスト、遅延サンプル非合わせテスト、ＩｍＰＡＣＴテスト、標準化された脳震盪評価ツール及び脳震盪の標準化された評価、
からなる群から選択されたテストであることを特徴とする、請求項１〜９の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１１】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の運動活性増加の治療に使用するための請求項１〜１０の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１２】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の短期記憶の改善に使用するための請求項１〜１０の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１３】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の長期記憶の改善に使用するための請求項１〜１０の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１４】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の認知機能の低下の治療に使用するための請求項１〜１０の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１５】
食物中で投与されることを特徴とする、請求項１〜１４の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１６】
用量が、１日当たり５ｍｇ〜１００ｇの間であることを特徴とする、請求項１〜１５の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１７】
用量が、１日当たり治療されるヒト又は動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ〜１ｇの間であることを特徴とする、請求項１〜１６の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１８】
乾燥形態であることを特徴とする、請求項１〜１７の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項１９】
液体形態であることを特徴とする、請求項１〜１７の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項２０】
ペースト形態であることを特徴とする、請求項１〜１７の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項２１】
前記動物血漿、その画分、又はその混合物が、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、及びトリによって形成された動物の群に由来することを特徴とする、請求項１〜２０の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項２２】
少なくとも１５重量％のＩｇＧを含む血漿の画分又はその混合物であることを特徴とする、請求項１〜２１の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項２３】
４重量％以下のＩｇＡを含む血漿の画分又はその混合物であることを特徴とする、請求項１〜２２の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項２４】
前記コンパニオン動物が、イヌ、ネコ又はウマの群からの動物であることを特徴とする、請求項１〜２３の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項２５】
ヒトの治療に使用することを特徴とする、請求項１〜２３の何れか１項に記載の動物血漿、その画分、又はその混合物。
【請求項２６】
ヒト又はコンパニオン動物の認知欠損障害を治療する方法であって、前記方法が、以下：
ａ  前記対象に1つ以上の認知機能テストを実施し、認知欠損障害を患っている対象を特定する工程； 及び
ｂ  前記対象に治療有効量の動物血漿組成物を投与する工程；
の工程を含み、ここで、前記投与は、前記1つ以上の認知機能テストにおける前記対象の結果の改善をもたらす、方法。
【請求項２７】
前記動物血漿組成物が、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ及びトリ類の動物からなる群から選択される１つ以上の動物の動物血漿に由来する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記動物血漿組成物が、１日当たり５ｍｇ〜１００ｇの用量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記動物血漿組成物が、１日当たり５０ｍｇ〜５０ｇの用量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記動物血漿組成物が、１日当たり１００ｍｇ〜１０ｇの用量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記動物血漿組成物が、１日当たり５００ｍｇ〜５ｇの用量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記動物血漿組成物が、１日当たり治療される動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ〜１ｇの用量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記動物血漿組成物が、１日当たり治療される動物の体重１ｋｇ当たり１０〜５００ｍｇの用量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
前記動物血漿組成物が、１日当たり治療される動物の体重１ｋｇ当たり１５〜２００ｍｇの用量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
前記動物血漿組成物が、１日当たり治療される動物の体重１ｋｇ当たり２５〜１００ｍｇの用量で投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３６】
前記動物血漿組成物が、少なくとも３か月間投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３７】
前記動物血漿組成物が、少なくとも６か月間投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３８】
前記動物血漿組成物が、少なくとも９か月間投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３９】
前記動物血漿組成物が、少なくとも１２か月間投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項４０】
前記認知欠損障害が、認知障害、脳震盪、及び外傷性脳損傷からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項４１】
前記認知欠損障害が、脳震盪である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４２】
前記認知欠損障害が、外傷性脳損傷である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４３】
前記認知欠損障害が、認知障害である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４４】
前記認知欠損障害が、アルツハイマー病に起因する認知症である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４５】
前記認知欠損障害が、パーキンソン病に起因する認知症である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４６】
前記認知欠損障害が、血管性認知症である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４７】
前記対象が、イヌ、ネコ、又はウマからなる群から選択されるコンパニオン動物である、請求項２６に記載の方法。
【請求項４８】
前記対象がヒトである、請求項２６に記載の方法。
【請求項４９】
前記動物血漿組成物が、医薬的に許容されるエアロゾルとして投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項５０】
前記医薬的に許容されるエアロゾルが、ネブライザーを介して投与される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記動物血漿組成物が、経口投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項５２】
前記動物血漿組成物が、食物中で投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記１つ以上の認知欠損テストにおける前記対象の結果の改善が、短期記憶の改善を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項５４】
前記１つ以上の認知欠損テストにおける前記対象の結果の改善が、長期記憶の改善を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項５５】
前記動物血漿組成物が、７０〜９０重量％のタンパク質を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項５６】
前記動物血漿組成物が、以下：
ｉ．  約１．０〜６．０重量％、約１．４〜５．６重量％、約２．０〜３．５重量％、約２．５〜３．０重量％、約２．７〜２．９重量％、又は約２．８重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｊ．  約１．０〜５．５重量％、約１．３〜５．２重量％、約１．８〜３．３重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．５〜２．７重量％、又は約２．６重量％のトランスフェリン；
ｋ．  約０．１〜１．０重量％、約０．１８〜０．７６重量％、約０．２〜０．５５重量％、約０．３〜０．４５重量％、約０．３６〜０．４０重量％、又は約０．３８重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｌ．  約０．１〜２．０重量％、約０．４〜１．６重量％、約０．５〜１．２重量％、約０．７〜０．９重量％、又は約０．８重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｍ．  約５〜３０重量％、約７〜２８重量％、約１０〜２０重量％、約１２〜１６重量％、又は約１４重量％のＩｇＧ；
ｎ．  約１．０〜６．０重量％、約１．２５〜５．０重量％、約１．５〜３．２５重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．３〜２．７重量％、又は約２．５重量％のＩｇＡ；
ｏ．  約０．５〜５．０重量％、約０．６〜４．０重量％、約０．７５〜３．０重量％、約１．０〜２．０重量％、約１．３〜１．７重量％、又は約１．５重量％のＩｇＭ； 及び
ｐ．  約２５〜８０重量％、約３０〜７０重量％、約３５〜６０重量％、約４０〜５０重量％、約４２〜４８重量％、又は約４５重量％のアルブミン、
を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記動物血漿組成物が、以下：
ｉ．  ２．０〜３．５重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｊ．  ２．０〜３．０重量％のトランスフェリン；
ｋ．  ０．３〜０．４５重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｌ．  ０．５〜１．２重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｍ．  １０〜２０重量％のＩｇＧ；
ｎ．  １．５〜３．２５重量％のＩｇＡ；
ｇ．  ０．７５〜３．０重量％のＩｇＭ； 及び
ｈ．  ４０〜５０重量％のアルブミン
を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記動物血漿組成物が、９０〜９５重量％のタンパク質を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項５９】
前記動物血漿組成物が、以下：
ｉ．  約１．０〜９．０重量％、約２．０〜８．０重量％、約３．０〜６．０重量％、約３．５〜５．０重量％、約３．７〜４．３重量％、又は約４．０重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｊ．  約２〜１８重量％、約３〜１５重量％、約３．５〜１２重量％、約４〜１０重量％、約５〜９重量％、約６〜８重量％、又は約７重量％のトランスフェリン；
ｋ．  約０．１〜１．０重量％、約０．２〜０．８重量％、約０．２５〜０．６重量％、約０．３〜０．５重量％、約０．３８〜０．４２重量％、又は約０．４重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｌ．  約０．１〜２．０重量％、約０．３５〜１．５重量％、約０．４〜１．３重量％、約０．５〜１．１重量％、約０．６〜０．８重量％、又は約０．７重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｍ．  約２５〜７５重量％、約３０〜７５重量％、約３５〜７０重量％、約４０〜６５重量％、約４５〜６２重量％、約５０〜６０重量％、又は約５５重量％のＩｇＧ；
ｎ．  約１．０〜６．０重量％、約１．２５〜５．０重量％、約１．５〜３．２５重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．３〜２．７重量％、又は約２．５重量％のＩｇＡ；
ｏ．  約２．５〜１０重量％、約３〜９重量％、約３．２５〜８重量％、約３．５〜７重量％、約４〜６重量％、約４．５〜５．５重量％、又は約５重量％のＩｇＭ； 及び
ｐ．  約２．５〜２５重量％、約５〜２０重量％、約７〜１５重量％、約８〜１２重量％、約９〜１１重量％、又は約１０重量％のアルブミン、
を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記血漿組成物が、以下：
ｉ．  ３．０〜６．０重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｊ．  ４〜１０重量％のトランスフェリン；
ｋ．  ０．２５〜０．６重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｌ．  ０．４〜１．３重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｍ．  ４０〜６５重量％のＩｇＧ；
ｎ．  １．５〜３．２５重量％のＩｇＡ；
ｏ．  ３．５〜７重量％のＩｇＭ； 及び
ｐ．  ７〜１５重量％のアルブミン、
を含む請求項５９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願との相互参照：
本出願は、２０１７年５月１８日に出願されたスペイン特許出願第Ｐ２０１７３０７０５号に対する優先権を主張し、これは本願のあらゆる目的のためにその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
技術分野：
本出願は、認知症（例えば、血管性認知症、レビー小体型認知症［ＤＬＢ］、アルツハイマー病に起因する認知症［ＡＤＤ］、パーキンソン病に起因する認知症［ＰＤＤ］、前頭側頭型認知症、及びヒトにおける正常圧水頭症に起因する認知症［ＮＤＨＤ］、及びコンパニオン動物における認知機能障害症候群（ＣＤＳ））、脳振盪、及び外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を含む認知欠損障害を治療又はそうでなければ改善するためのヒト又は動物への血漿、その画分又はそれらの混合物の投与に関する。
【背景技術】
【０００３】
技術的現状
全血は、細胞外マトリックスに漂っている様々な種類の細胞を含む。細胞材料が全血から除去された場合（例えば、抗凝固剤の存在下で全血を遠心分離することにより）、残りの液体（すなわち、全血の細胞外マトリックス）は、血漿部分である。血漿は、主に水と溶解したタンパク質で構成されており、その大部分は、アルブミン、グロブリン、及びフィブリノーゲンである。様々なタンパク質画分及び／又は成分は、当業者に周知で一般的に実施されている方法を用いて血漿から精製され得る。そのような方法の１つは、本明細書で噴霧乾燥血漿（ＳＤＰ）と称される血漿タンパク質の乾燥組成物を産生するために動物の血液から分離された血漿の噴霧乾燥を含む。噴霧乾燥血漿は、主にアルブミンとグロブリンから構成されており、他のタンパク質又はペプチドは、少量である。本明細書で用いる場合、特に明記しない限り、「血漿」、「血漿タンパク質」、及び「ＳＤＰ」という用語は、血漿及び／又は何れかのタンパク質画分及び／又はさらにそれらから精製され得る成分を包含する。
【０００４】
いくつかの査読済みの調査研究は、ＳＤＰ等の血漿タンパク質を与えられた動物の免疫応答、免疫及び腸機能に有益な影響を証明している。例えば、病原性細菌、ウイルス、又は原生生物による攻撃又は自然感染を含む研究では、ＳＤＰ補充食餌等の血漿タンパク質を含む食餌を与えられた様々な種（ヒト、ブタ、子牛、家禽、エビ）の死亡率の低下及び／又は健康指標の改善が報告されている（Torrallardona et al., 2010; Petschow et al., 2014; Gisbert et al., 2015）。噴霧乾燥血漿は、グロブリンタンパク質を含むが、腸管腔内の抗原の中和は、血漿タンパク質を与えられた動物で認められた改善を完全に説明しきれない。近年のいくつかの研究では、ＳＤＰを補充した食餌を与えられた動物の粘膜組織における免疫応答が変化したとも報告されている（Moreto and Perez-Bosque, 2009; Peace et al., 2011; Gao et al., 2010; Maijo et al., 2011, 2012）。さらに、ＤＤＰの補充は離乳後の飼育用豚飼料で一般的であり、公表された研究は、離乳時に豚の飼料にＳＤＰを追加すると飼料摂取量、成長率が増加し、飼料効率が向上することを示している（Coffey and Cromwell, 2001; Van Dijk et al., 2001; Torrallardona, 2010）。
【０００５】
現在、認知症、脳振盪、及び外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を含む、多くの認知欠損障害が、ヒト及び動物で蔓延している（Brodaty et al., 2006; Kiraly and Kiraly, 2007; Shively et al., 2012; Xiong et al., 2013; WHO, 2016; Heckler et al., 2014）。
【０００６】
認知症は、認知機能の長期的かつ、短い間隔で漸減をもたらす脳疾患のカテゴリーを指す。認知症がより重症になると、被験者の日常的な行動に影響を与える程度まで思考能力及び記憶力に影響を与える可能性がある。認知症は、血管性認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、アルツハイマー病に起因する認知症（ＡＤＤ）、パーキンソン病に起因する認知症（ＰＤＤ）、前頭側頭型認知症、正常圧水頭症に起因する認知症（ＮＤＨＤ）、及び認知機能障害症候群（ＣＤＳ）を含む多くの疾患又は障害に起因する可能性がある。これらの原因となる疾患／障害はそれぞれ異なるが、結果として生じる認知症は類似する。
【０００７】
多発脳梗塞性認知症とも称される血管性認知症は、アルツハイマー病に次いで、高齢者の認知症の２番目に多い原因である。血管性認知症は、脳の領域への血流の減少による脳の神経細胞への酸素及び／又は栄養素の不足から事実上生じる。血流の減少は一般に、一連の比較的軽度な脳卒中を引き起こす可能性のある血管の閉塞又は狭窄に起因する。
【０００８】
アルツハイマー病は、ヒトの認知症の最も一般的な原因であり、その発生率は、上昇しており、６５歳以上の人口の約１０％及び８５歳以上の人口の４０％が罹患している。この疾患は、現在、不可逆的な疾患とされる。アルツハイマー病の発症に関わるが、それだけでは十分でないと思われる開始因子は、Aβペプチド（長さ４２アミノ酸）からなるアミロイド凝集体の蓄積である。現在、これらのアミロイド沈着物は、障害の認知症状が始まる１０年前までに存在する可能性があるという証拠が明らかにされている。疾患の発病の第２段階は、微小管結合タンパク質タウ（ｔａｕ）の過剰なリン酸化形態から形成される神経細胞内の神経原線維タングルの形成である。通常、ＡＤの前には、軽度の認知欠損と呼ばれる症状があり、これは、他の認知及び機能的活動の維持する軽度の記憶喪失を特徴とする。
【０００９】
イヌ及びネコ等のコンパニオン動物における認知機能障害症候群（ＣＤＳ）は、高齢動物の認知機能の低下を特徴とする変化である。この進行性神経障害の特徴は、ＡＤと同様の特徴を有する。動物の学習及び記憶の特定の態様を評価するために、いくつかの認知テストが開発されており、これらは、ＣＤＳの検出、識別、及び診断に用いられ得る。これらのテストを使用し、７歳の若いイヌで学習と記憶の低下の発症が実証されているが、ＣＤＳの臨床例は、１１歳以上のイヌでは、ほとんど検出されない。高齢の動物は、記憶並びに行動の変化を必要とする活動において、学習障害及びパフォーマンスの低下を示す場合がある。
【００１０】
脳振盪は、軽度の外傷性脳損傷とも称され、頭部の軽度の外傷によって一時的に脳機能が損なわれる頭部損傷である。脳損傷は、多くの場合、スポーツ傷害、自動車事故、転倒等による頭部への打撃の結果として生じるが、直接的な影響無しに加速／減速力から生じることもある。脳震盪は、様々な身体的、認知的、及び／又は感情的な病状を引き起こす可能性があり、これは非常に軽度から比較的重度まで様々である。脳震盪の付随し得る症状は、記憶喪失、頭痛、めまい、嘔吐、吐き気、運動協調性の欠如、平衡感覚の喪失、光感受性、霧視、耳鳴り、錯乱／方向感覚の喪失、集中力／注意力の欠如、記憶喪失、思考散乱性言語、行動変化、睡眠障害、及び怒りっぽい等の行動変化を含む。症状は、通常数週間続くが、長期間続く可能性がある。脳震盪の現在の治療は、通常、身体的及び認知的休息及び症状の監視を伴う。
【００１１】
外傷性脳損傷（ＴＢＩ）は、急速な加速／減速、衝撃、爆風、又は発射体による貫通等の外力に起因する脳損傷である。ＴＢＩを患っている患者の脳機能は、一時的又は永続的に損なわれているが、脳への物理的外傷は、明らかな場合とそうでない場合がある。ＴＢＩは、グラスゴー・コーマ・スケール（Ｇｌａｓｇｏｗ Ｃｏｍａ Ｓｃａｌｅ）（いくつかの要因に基づいて意識レベルを測定する）、心的外傷後健忘の期間、及び／又は記憶喪失の期間等の多くの要因に基づいて、軽度、中程度又は重度の重症度レベルによって分類され得る。ＴＢＩの重症度は、脳腫脹の重症度及び病巣及び／又はびまん性脳傷害の存在及び位置等の物理的又は病理悪的特徴によっても分類され得る。ＴＢＩの症状は、ＴＢＩの重症度及び脳の損傷の種類及び位置によって異なる。一般的な症状は、記憶の喪失（数秒〜２４時間超続くこともある）、頭痛、めまい、嘔吐、吐き気、運動協調性の欠如、平衡感覚の喪失、光感受性、霧視、耳鳴り、錯乱／方向感覚の喪失、集中力／注意力の欠如、記憶喪失、思考散乱性言語、行動変化、睡眠障害、瞳孔の拡張、失語症、構音障害、不明瞭発語、手足の弱さ／麻痺、痙攣、及び怒りっぽい等の行動変化を含む。中程度〜重度のＴＢＩの長期的症状は、社会的判断の欠如、失感情症、注意欠陥、認知処理速度の低下を含む。中程度〜重度のＴＢＩの長期的治療は、一般に、家庭及び社会で独立機能を改善すること、ＴＢＩの影響を有する個人が長期的な障害に順応することを助けることに焦点を当てる。
【００１２】
神経膠細胞は、ＣＮＳの約半分の体積を占める。星状細胞、乏突起膠細胞、ミクログリア細胞、及び上衣細胞が、見ることが可能な細胞である。星状細胞は、神経伝達物質の分泌及び血液脳関門の維持等、脳内で多くの活発的な役割を果たすと考えられている。ミクログリア細胞は、食細胞として機能し、神経系の正常な発達中に形成された細胞片を除去し、微生物を貪食し、損傷した組織を除去する。ミクログリアは、脳のβアミロイドペプチド（Aβ）クリアランスの主要な部位であり、神経のホメオスタシス及びシナプス可塑性において重要な役割を果たす。
【００１３】
認知症、脳震盪、及びＴＢＩ等の認知欠損障害の早期検出／診断は、症状の最終的な重症度の軽減、回復時間の短縮、及び／又は特定の症状の発症の遅延又は予防に役立つ。例えば、早期に診断された場合、利用可能な医薬品での治療は、認知症の進行を遅らせ、老人ホームへの斡旋を遅らせることでコストが削減される可能性がある。例えば、Brodaty et al., 2006. Am J Geriatr Psychiatry 14:5, May 2006を参照。
【００１４】
対象としてヒトの認知症を検出、特定、又は診断するための多くの機器が存在する。適切な診断機器は、当業者に周知であり、現在、以下を含む：
１．セブンミニットスクリーン（Ｓｅｖｅｎ−ｍｉｎｕｔｅ ｓｃｒｅｅｎ）（７−ミニットスクリーン）
２．ＩＱＣＯＤＥの短い形式（Ｓｈｏｒｔ ＩＱＣＯＤＥ）
３．短縮メンタルテスト（ＡＭＴ）
４．ボウルズ−ラングレーテクノロジー／アシュフォードメモリーテスト（Ｂｏｗｌｅｓ−Ｌａｎｇｌｅｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ/Ａｓｈｆｏｒｄ Ｍｅｍｏｒｙ Ｔｅｓｔ）（ＢＬＴ／Ａｓｈ）
５．ケンブリッジ認知検査（ＣＡＭＣＯＧ）
６．１０ポイントのサンダーランドスケールを使用してスコア付けされたＣＤＴ
７．記憶欠損スクリーン（ＭＩＳ）
８．メンタル変容テスト（Ｍｅｎｔａｌ Ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ）（ＭＡＴ）
９．ミニコグ（Ｍｉｎｉ−Ｃｏｇ）
１０．ミニメンタルステータス検査（ＭＭＳＥ）
１１．ショート及びスウィートスクリーニング装置（Ｓｈｏｒｔ ａｎｄ Ｓｗｅｅｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）（ＳＡＳＳＩ）
１２．メンタルステータスのショートテスト（ＳＴＭＳ）
１３．６項目認知欠損テスト（ショートブレステスト及びショートオリエンテーションメモリコンセントレーションテスト（Ｔｈｅ Ｓｈｏｒｔ Ｂｌｅｓｓｅｄ Ｔｅｓｔ ａｎｄ Ｔｈｅ Ｓｈｏｒｔ Ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ−Ｍｅｍｏｒｙ−Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ）とも呼ばれる； ６ＣＩＴ）
１４．一般専門家の認知評価（Ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ）（ＧＰＣＯＧ）
１５．ローランドユニバーサル認知症評価尺度（ＲＵＤＡＳ４１）（Ｔｈｅ Ｒｏｗｌａｎｄ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｄｅｍｅｎｔｉａ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｓｃａｌｅ）
１６．時間及び変更テスト（Ｔｉｍｅ ａｎｄ Ｃｈａｎｇｅ Ｔｅｓｔ）（Ｔ＆Ｃ４２）
Bene and Sepulveda, 2014; Brodaty et al., 2006; Heckler et al., 2014。
【００１５】
これらのテスト又は機器の１つ以上を使用して対象を評価することにより、認知症に起因する対象の認知欠損の可能性が分析され得る。
【００１６】
ヒトの同様の認知欠損障害と同じように、コンパニオン動物でのＣＤＳの早期検出により、変性のプロセスの初期段階での介入が可能になり、治療の機会が増える。動物の学習と記憶の特定の態様を評価するために、いくつかの認知テストが開発されており、これらは、ＣＤＳの検出、識別、及び診断に使用され得る。適切な診断器具は、当業者に周知である。例えば、イヌの場合、適切な認知評価テストは、報酬及び対象物アプローチ学習、対象物差別学習、及び反復学習の１つ以上の分析が含まれる。これらのタイプの学習、及びそれらに関連する短期記憶は、遅延場所合わせ（ｄｅｌａｙｅｄ ｍａｔｃｈｅｄ ｔｏ ｐｏｓｉｔｉｏｎ）（ＤＭＰ）、遅延場所非合わせ（ｄｅｌａｙｅｄ ｎｏｎ−ｍａｔｃｈｅｄ ｔｏ ｐｏｓｉｔｉｏｎ）（ＤＮＭＰ）、遅延サンプル合わせ（ｄｅｌａｙｅｄ ｍａｔｃｈｅｄ ｔｏ ｓａｍｐｌｅ）（ＤＭＳ）、及び遅延サンプル非合わせ（ｄｅｌａｙｅｄ ｎｏ−ｍａｔｃｈｅｄ ｔｏ ｓａｍｐｌｅ）（ＤＮＭＳ）等を使用して評価され得、これらは全て周知であり、当業者によって日常的に使用されている。これらのテストの１つ以上で対象動物のパフォーマンスを評価することにより、対象の動物の潜在的な認知欠損を分析することができる。
【００１７】
これらのそれぞれは、報酬（例えば、小さな食べ物）、対象物、並びにテスト準備中に実験者、報酬及び対象物をイヌが目視することを避けるためのキャンバスカーテンを備えたフレーム（視覚的な合図を避けるため）の位置を決めるための３つのウェルを備えたベースを含む装置（動物がテストに反応すると予想される場合、滑車システムによって上昇する）を使用して評価され得る。嗅覚による手掛かりを避けるために、ウェルと対象物に食べ物を塗り付け、装置をイヌから少し離れた位置において、対象物に集中させる。また、対象物は、聴覚的な合図を避けるために静かに配置される。テスト中の報酬が配置される場所に応じて、異なるタイプの学習を通じて学習する対象の能力が分析され得る。報酬アプローチ学習を評価するために、報酬は、側面のウェルの１つに配置されるが、両側でも模倣され、報酬がある側面へのみの動物のアプローチは正しい応答と見なされる。
【００１８】
対象物アプローチ学習を評価するために、対象物が、食物の上に置かれ（カーテンを使用して視覚的に接触することはない）、対象物の側面のみへの動物のアプローチは正しい応答と見なされる。対象物識別学習を評価するために、２つの異なる対象物（異なる色及び／又は形状の対象物）が、ランダムに配置され、動物は、提示された対象物の１つだけに近づいて報酬を得るように学習する必要がある。反転学習を評価するために、対象物識別学習を繰り返すが、識別学習における以前の非報酬対象物は、食物に関連付けられており、動物は新しい報酬対象物アプローチを学ぶ必要がある。
【００１９】
遅延タイプのテストのそれぞれについて、試行は、動物の学習能力をテストするための遅延で区切られた２つのプレゼンテーションからなり、その学習された知識を一定期間保持する。例えば、イヌに対して実行されるＤＭＰテストにおいて、報酬は片側の対象物の下に置かれ得る（視覚的な接触なし）。イヌが報酬を獲得した後、カーテンが配置され、１０秒の遅延が開始される。この遅延の後、２つの同一対象物が、イヌの前に置かれ、イヌは以前に報酬を与えられた位置で報酬が見つかることを予測する。ＤＮＭＰテストにおいて、２回目のプレゼンテーションでは、イヌは、代わりに、以前に報酬を与えられていない場所で報酬が見つかることを予測する。ＤＭＳテストにおいて、報酬は、中央のウェルのサンプル対象物の下に置かれる（視覚的な接触無し）。イヌは報酬を得た後、対象物が、動物の視野の外にある１０秒の遅延が開始され、元の対象物と新しい対象物の両方が、横方向のランダムな位置に表示され、イヌは元の対象物の下に食べ物が配置されていることを予測する。ＤＮＭＳテストにおいて、２回目のプレゼンテーションでは、イヌは、代わりに、新しい対象物の下で報酬が見つかることを予測する。
【００２０】
同様に、脳震盪を検出、識別又は診断するための多数の周知の診断機器が存在し、当業者は、適切な機器を容易に選択することができる。例えば、ＩｍＰＡＣＴテストは、現在、スポーツ関連の脳震盪の処置用に特別に設計された広く用いられている診断テストである。ＩｍＰＡＣＴは、言語、視覚、作業記憶等の認知機能； 視覚処理速度； 反応時間； 及び認知効率を測定する。脳震盪の特定に現在用いられている他の診断方法は、標準化された脳震盪評価ツール（ＳＣＡＴ１又はＳＣＡＴ２）、臨床検査、バランステスト、脳震盪グレード分けスケール、コンピュータ化された神経認知テスト、脳震盪の標準化された評価（ＳＡＣ）を含む。これらのテストの１つ以上を使用して対象を評価することにより、対象の潜在的な認知欠損が、分析され得る。
【００２１】
当該技術分野において、認知欠損障害の改善された治療が依然として必要とされる。
【００２２】
本明細書で引用される全ての刊行物は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２３】
【非特許文献１】Bene ER, Sepulveda AM. 2014. Clinical test instrument development to identify and track recovery from concussion. Semin. Speech Lang. 35:173-185
【非特許文献２】Brodaty H, Low L-F, Gibson L, Burns K. 2006. What is the best dementia screening instrument for general practitioners to use?. Am J Geriatr Psychiatry 14(5):391-400
【非特許文献３】Coffey RD, Cromwell GL. 2001. Use of spray-dried animal plasma in diets for weanling pigs. Pig News Info. 22:39N-48N.
【非特許文献４】Gao YY, Jiang ZY, Lin YC, Zheng CT, Zhou GL, Chen F. 2010. Effects of spray-dried animal plasma on serous and intestinal redox status and cytokines of neonatal pigs. J. Anim. Sci. doi:10.2527/jas.2010-2967.
【非特許文献５】Gisbert E, Skalli A, Campbell J, Solovyev MM, Rodriguez C, Dias J, Polo J. 2015. Spray-dried plasma promotes growth, modulates the activity of antioxidant defenses, and enhances the immune status of gilthead sea bream (Sparus aurata) fingerlings. J. Anim. Sci. 93:278-286. doi:10.2527/jas2014-7491
【非特許文献６】Heckler MCT, Tranquilim MV, Svicero DJ, Barbosa L, Amorim RM. 2014. Clinical feasibility of cognitive testing in dogs (Canis lupus familiaris). J. Vet. Behavior 9:6-12
【非特許文献７】Kiraly MA and Kiraly SJ. 2007 Traumatic brain injury and delayed sequelae: a review - traumatic brain injury and mild traumatic brain injury (concussion) are precursors to later-onset brain disorders, including early-onset dementia. TheScientificWorldJOURNAL 7, 1768-1776. DOI 10.1100/tsw.2007.269.
【非特許文献８】Maijo M, Miro L, Polo J, Campbell J, Russell L, Crenshaw J, Weaver E, Moreto M, Perez-Bosque A. 2011. Dietary plasma proteins attenuate the innate immunity response in a mouse model of acute lung injury. Br J. Nutr. doi:10.1017/S0007114511003655.
【非特許文献９】Maijo M, Miro L, Polo J, Campbell J, Russell L, Crenshaw J, Weaver E, Moreto M, Perez-Bosque A. 2012. Dietary plasma proteins modulate the adaptive immune response in mice with acute lung inflammation. J Nutr. 142: 264-70.
【非特許文献１０】Moreto M, Perez-Bosque A. 2009. Dietary plasma proteins, the intestinal immune system, and the barrier functions of the intestinal mucosa. J. Anim. Sci. 87:E92-E100.
【非特許文献１１】Peace RM, Campbell J, Polo J, Crenshaw J, Russell L, Moeser A. 2011. Spray-dried porcine plasma influences intestinal barrier function, inflammation and diarrhea in weaned pigs. J. Nutr. 141:1312-1317.
【非特許文献１２】Petschow BW, Burnett B, Shaw AL, Weaver EM, Klein GL. 2014. Serum-derived bovine immunoglobulin/protein isolate: postulated mechanism of action for management of enteropathy. Clin Exp Gastroenterol 7:181-190 [PMID: 24904221 doi: 10.2147/CEG.S62823].
【非特許文献１３】Shively S, Scher AI, Perl DP, Diaz-Arrastia R. 2012. Dementia resulting from traumatic brain injury: what is the pathology? Arch. Neurol. 69(10):1245-1251. doi:10.1001/archneurol.2011.3747.
【非特許文献１４】Torrallardona D. 2010. Spray-dried animal plasma as an alternative to antibiotics in weanling pigs: a review. Asian-Aust. J. Anim. Sci. 32:131-148.
【非特許文献１５】Van Dijk AJ, Everts H, Nabuurs MJA, Margry RJCF, Beynen AC. 2001. Growth performance of weanling pigs fed spray-dried animal plasma: a review. Livest. Prod. Sci. 68:263-274.
【非特許文献１６】WHO (World Health Organization). Fact sheet 2016. http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs362/en/ Accessed 24 April 2017.
【非特許文献１７】Xiong Y, Mahmood A, Chopp M. 2013. Animal models of traumatic brain injury. Nature reviews Neuroscience.14(2):128-142. doi:10.1038/nrn3407.
【発明の概要】
【００２４】
発明の概要：
一態様において、本出願は、ヒト又はコンパニオン動物対象の認知欠損障害を治療する方法に関し、前記方法は、以下の：
ａ  前記対象に1つ以上の認知機能テストを実施し、認知欠損障害を患っている対象を特定する工程； 及び
ｂ  前記対象に治療有効量の動物血漿組成物を投与する工程；
を含み、ここで、前記投与は、前記1つ以上の認知機能テストにおける前記対象の結果の改善をもたらす。
【００２５】
他の態様において、本出願は、ヒト又はコンパニオン動物対象の認知欠損障害を治療する方法に関し、前記方法は、以下の：
ａ  前記対象に1つ以上の認知機能テストを実施し、認知欠損障害を患っている対象を特定する工程； 及び
ｂ  前記対象に治療有効量の動物血漿組成物を投与する工程；
を含み、ここで、前記動物血漿組成物は、経口投与され、及び前記投与は、前記1つ以上の認知機能障害テストにおける前記対象の結果の改善をもたらす。
【００２６】
特定の実施形態において、動物血漿組成物は、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、及びトリ類の動物からなる群から選択される1つ以上の動物からの動物血漿に由来する。
【００２７】
特定の実施形態において、動物血漿組成物は、１日当たり５ｍｇ〜１００ｇの用量で投与される。さらなる実施形態において、動物血漿組成物は、１日当たり５０ｍｇ〜５０ｇの用量で投与される。さらなる実施形態において、動物血漿組成物は、１日当たり１００ｍｇ〜１０ｇの用量で投与される。さらなる実施形態において、動物血漿組成物は、１日当たり５００ｍｇ〜５ｇの用量で投与される。
【００２８】
特定の実施形態において、動物血漿組成物は、１日当たり治療される動物の体重１ｋｇあたり１０ｍｇ〜１ｇの用量で投与される。さらなる実施形態において、動物血漿組成物は、１日当たり治療される動物の体重１ｋｇあたり１０ｍｇ〜５００ｍｇの用量で投与される。さらなる実施形態において、動物血漿組成物は、１日当たり治療される動物の体重１ｋｇあたり１５ｍｇ〜２００ｍｇの用量で投与される。さらなる実施形態において、動物血漿組成物は、１日当たり治療される動物の体重１ｋｇあたり２５ｍｇ〜１００ｍｇの用量で投与される。
【００２９】
特定の実施形態において、動物血漿組成物は、少なくとも３か月間投与される。他の実施形態において、動物血漿組成物は、少なくとも６か月間投与される。さらなる実施形態において、動物血漿組成物は、少なくとも９か月間投与される。追加の実施形態において、動物血漿組成物は、少なくとも１２か月間投与される。
【００３０】
特定の実施形態において、認知欠損障害は、認知症障害、脳震盪、及び外傷性脳損傷からなる群から選択される。特定の実施形態において、認知欠損障害は、脳震盪である。他の実施形態において、認知障害は、外傷性脳損傷である。さらなる実施形態において、認知欠損障害は、認知症障害である。追加の実施形態において、認知欠損障害は、アルツハイマー病に起因する認知症である。さらなる実施形態において、認知欠損障害は、パーキンソン病に起因する認知症である。さらなる実施形態において、認知欠損障害は、血管性認知症である。
【００３１】
特定の実施形態において、対象は、イヌ、ネコ、又はウマからなる群から選択されるコンパニオン動物であり、他の実施形態において、対象は、ヒトである。
【００３２】
特定の実施形態において、動物血漿組成物は、医薬的に許容されるエアロゾルとして投与される。他の実施形態において、医薬的に許容されるエアロゾルは、ネブライザーを介して投与される。さらなる実施形態において、動物血漿組成物は、経口投与される。追加の実施形態において、動物血漿組成物は、食物中で投与される。
【００３３】
食物中での投与を含む経口投与は、例えば、静脈内又は皮下等の注射による投与を超える特定の予期しない結果をもたらす。タンパク質を含む化合物が経口投与されると、対象の消化系に遭遇するが、これは一般的に、例えば、タンパク質をペプチド断片、ジペプチド、トリペプチド、又は単一のアミノ酸（又はこれらの小さなペプチドのいくつかの組み合わせ）等のより小さなペプチドに分解することにより、接種した製品を分解すると予想される。従って、注射可能な経路（例えば、静脈内又は皮下）を介して効果的に投与できる抗体又は治療用タンパク質製品等の治療用製品は、対象の消化器系での治療用製品の分解のために経口で効果的に投与できないことが多い。しかし、本発明者達は、本明細書に記載のタンパク質製品が、効果的かつ、治療的に経口送達できることを予想外に発見した。
【００３４】
特定の実施形態において、前記の１つ以上の認知欠損テストにおける前記被験者の結果の改善は、短期記憶の改善を含む。他の実施形態において、前記１つ以上の認知欠損テストにおける前記被験者の結果の改善は、長期記憶の改善も含む。
【００３５】
特定の実施形態において、動物血漿組成物は、７０〜９０重量％のタンパク質を含む。特定の実施形態において、動物血漿組成物は、以下を含む：
ａ．  約１．０〜６．０重量％、約１．４〜５．６重量％、約２．０〜３．５重量％、約２．５〜３．０重量％、約２．７〜２．９重量％、又は約２．８重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｂ．  約１．０〜５．５重量％、約１．３〜５．２重量％、約１．８〜３．３重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．５〜２．７重量％、又は約２．６重量％のトランスフェリン；
ｃ．  約０．１〜１．０重量％、約０．１８〜０．７６重量％、約０．２〜０．５５重量％、約０．３〜０．４５重量％、約０．３６〜０．４０重量％、又は約０．３８重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｄ．  約０．１〜２．０重量％、約０．４〜１．６重量％、約０．５〜１．２重量％、約０．７〜０．９重量％、又は約０．８重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｅ．  約５〜３０重量％、約７〜２８重量％、約１０〜２０重量％、約１２〜１６重量％、又は約１４重量％のＩｇＧ；
ｆ．  約１．０〜６．０重量％、約１．２５〜５．０重量％、約１．５〜３．２５重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．３〜２．７重量％、又は約２．５重量％のＩｇＡ；
ｇ．  約０．５〜５．０重量％、約０．６〜４．０重量％、約０．７５〜３．０重量％、約１．０〜２．０重量％、約１．３〜１．７重量％、又は約１．５重量％のＩｇＭ； 及び
ｈ．  約２５〜８０重量％、約３０〜７０重量％、約３５〜６０重量％、約４０〜５０重量％、約４２〜４８重量％、又は約４５重量％のアルブミン。
【００３６】
他の特定の実施形態において、動物血漿組成物は、以下を含む：
ａ．  ２．０〜３．５重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｂ．  ２．０〜３．０重量％のトランスフェリン；
ｃ．  ０．３〜０．４５重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｄ．  ０．５〜１．２重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｅ．  １０〜２０重量％のＩｇＧ；
ｆ．  １．５〜３．２５重量％のＩｇＡ；
ｇ．  ０．７５〜３．０重量％のＩｇＭ； 及び
ｈ．  ４０〜５０重量％のアルブミン。
【００３７】
特定の実施形態において、動物血漿組成物は、９０〜９５重量％のタンパク質を含む。特定の実施形態において、動物血漿組成物は、以下を含む：
ａ．  約１．０〜９．０重量％、約２．０〜８．０重量％、約３．０〜６．０重量％、約３．５〜５．０重量％、約３．７〜４．３重量％、又は約４．０重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｂ．  約２〜１８重量％、約３〜１５重量％、約３．５〜１２重量％、約４〜１０重量％、約５〜９重量％、約６〜８重量％、又は約７重量％のトランスフェリン；
ｃ．  約０．１〜１．０重量％、約０．２〜０．８重量％、約０．２５〜０．６重量％、約０．３〜０．５重量％、約０．３８〜０．４２重量％、又は約０．４重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｄ．  約０．１〜２．０重量％、約０．３５〜１．５重量％、約０．４〜１．３重量％、約０．５〜１．１重量％、約０．６〜０．８重量％、又は約０．７重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｅ．  約２５〜７５重量％、約３０〜７５重量％、約３５〜７０重量％、約４０〜６５重量％、約４５〜６２重量％、約５０〜６０重量％、又は約５５重量％のＩｇＧ；
ｆ．  約１．０〜６．０重量％、約１．２５〜５．０重量％、約１．５〜３．２５重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．３〜２．７重量％、又は約２．５重量％のＩｇＡ；
ｇ．  約２．５〜１０重量％、約３〜９重量％、約３．２５〜８重量％、約３．５〜７重量％、約４〜６重量％、約４．５〜５．５重量％、又は約５重量％のＩｇＭ； 及び
ｈ．  約２．５〜２５重量％、約５〜２０重量％、約７〜１５重量％、約８〜１２重量％、約９〜１１重量％、又は約１０重量％のアルブミン。
【００３８】
他の特定の実施形態において、動物血漿組成物は、以下を含む：
ａ．  ３．０〜６．０重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｂ．  ４〜１０重量％のトランスフェリン；
ｃ．  ０．２５〜０．６重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｄ．  ０．４〜１．３重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｅ．  ４０〜６５重量％のＩｇＧ；
ｆ．  １．５〜３．２５重量％のＩｇＡ；
ｇ．  ３．５〜７重量％のＩｇＭ； 及び
ｈ．  ７〜１５重量％のアルブミン。
【００３９】
他の態様において、本出願は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の治療に使用するための動物血漿、その画分、又はその混合物に関する。好ましくは、前記動物血漿、その画分、又はその混合物は、経口投与される。
【００４０】
特定の実施形態において、認知欠損障害は、認知症障害、脳震盪、及び外傷性脳損傷からなる群から選択される。
【００４１】
特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の認知症障害の治療に用いられる。特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の老年認知症の治療に用いられる。他の特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物のアルツハイマー病の治療に用いられる。さらなる特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の血管性認知症の治療に用いられる。さらなる特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物のパーキンソン病に起因する認知症の治療に用いられる。さらなる特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の脳震盪の治療に用いられる。さらなる特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）の治療に用いられる。
【００４２】
特定の実施形態において、テストは、以下からなる群から選択される：
セブンミニットスクリーン、ＩＱＣＯＤＥの短い形式、短縮メンタルテスト、ボウルズ−ラングレーテクノロジー／アシュフォードメモリーテスト、ケンブリッジ認知検査、１０ポイントのサンダーランドスケールを使用してスコア付けされたＣＤＴ、記憶欠損スクリーン、メンタル変容テスト、ミニコグ、ミニメンタルステータス検査、ショート及びスウィートスクリーニング装置、メンタルステータスのショートテスト、６項目認知欠損テスト、一般専門家の認知評価、ローランドユニバーサル認知症評価尺度、時間及び変更テスト、遅延場所合わせテスト、遅延場所非合わせテスト、遅延サンプル合わせテスト、遅延サンプル非合わせテスト、ＩｍＰＡＣＴテスト、標準化された脳震盪評価ツール及び脳震盪の標準化された評価。
【００４３】
特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の運動活性増加の治療に用いられる。他の特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の短期記憶の改善に用いられる。さらに特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の長期記憶の改善に用いられる。さらなる実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、利用可能なテストにより認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の認知機能の低下の治療に用いられる。
【００４４】
特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、医薬的に許容されるエアロゾルで投与される。他の特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、ネブライザーを介して投与される。さらなる特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、食物中で投与される。
【００４５】
特定の実施形態において、用量は、１日当たり５ｍｇ〜１００ｇである。他の特定の実施形態において、用量は、１日当たり治療されるヒト又は動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ〜１ｇである。
【００４６】
特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、乾燥形態である。他の特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、液体形態である。さらなる特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、ペースト形態である。
【００４７】
特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、及びトリによって形成された動物の群に由来する。
【００４８】
特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、少なくとも１５重量％のＩｇＧを含む血漿の画分又はその混合物である。他の特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、４重量％以下のＩｇＡを含む血漿の画分又はその混合物である。
【００４９】
特定の実施形態において、コンパニオン動物は、イヌ、ネコ又はウマの群からの動物である。他の特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、ヒトの治療に使用するためのものである。
【００５０】
特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、採取時に様々な年齢の動物から採取することが可能である。血漿又は血漿画分は多くの場合、「市場年齢」の動物から採取され、これは、動物が適切に屠殺される年齢であることを意味し、若い年齢の動物に限らない。例えば、生後６〜８か月の豚及び数齢の雌豚からも血液を採取することが可能である。他の例において、数歳のウシからウシの血液を採取することが可能である。本明細書で提供される実施例は、経口投与された場合、何れかの年齢の動物から採取された血漿、その画分、又はその混合物が、認知機能を改善する明確な効果を有することを示す。本明細書で提供される実施例及び実施形態は、若い動物からのみ得られる血漿、その画分、又はその混合物に限定されない。
【００５１】
他の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、ある種のタイプから得られ、異なる種のタイプに投与され得る。例えば、ウシ血漿をマウスに投与してもよい。本発明者達は、ある種から得られた血漿、その画分、又はその混合物を関連の無い異なる種に投与でき、本明細書で提供される実施例に示すような認知機能の改善に明確な効果をもたらすという予想外かつ、驚くべきことを発見した。
【００５２】
特定の実施形態において、動物血漿、その画分、又はその混合物は、目的の特定の標的に対して免疫化されておらず、過免疫として評されていない動物から得られる。代わりに、動物血漿、その画分、又はその混合物は、ナイーブ（ｎａｉｖｅ）及び／又は正常な免疫状態（刺激された免疫状態ではない）の動物から採取される。
【００５３】
本出願に開示されるように、血漿、その画分、又はその混合物を経口投与することは、本発明者達によって、驚くべきかつ、予想外に認知機能を改善するということが見出された。当業者は、少なくとも血漿、その画分、又はその混合の消化により組成物が劇的に変化するという理由で、経口投与が効果的であることを予想しないと考える。タンパク質を含む化合物を経口投与すると、対象の消化器系に遭遇し、これは、例えばタンパク質をペプチド断片、ジペプチド、トリペプチド、又は単一のアミノ酸（又はこれらの小さなペプチドのいくつかの組み合わせ）等のより小さなペプチドに分解することにより、接種した製品を分解すると予想される。タンパク質を含む化合物を経口投与すると、対象の消化器系に遭遇し、これは、例えばタンパク質をペプチド断片、ジペプチド、トリペプチド、又は単一のアミノ酸（又はこれらの小さなペプチドのいくつかの組み合わせ）等のより小さなペプチドに分解することにより、接種した製品を分解すると予想される。このため、注射経路（例えば、静脈内又は皮下）を介して効果的に投与できる抗体又は治療用タンパク質製品等の治療用製品は、対象の消化器系での治療用製品の分解のために経口で効果的に投与できない場合が多い。しかし、本発明者達は、本明細書に記載されるタンパク質産物が、効果的かつ、治療的に経口送達できることを予想外に見出した。
【００５４】
本発明の他の利点及び特徴を、本発明の好ましい非限定的な実施形態について添付の図面を参照して説明される以下の説明から理解することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は、ＳＤＰ補充の有無にかかわらない、コントロール（ＳＡＭＲ１）及び実験マウス（ＳＡＭＰ８）の体重変化を示す。
【図２】図２は、コントロール及び実験マウスの食物摂取量を示す。結果は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝２０〜３０匹のマウス）として表される。
【図３】図３は、運動活性のデンドログラムを示す。
【図４】図４は、認知機能の研究に使用される実験デザイン及び群を示す。
【図５】図５は、ＮＯＲテスト迷路の画像を示す。
【図６】図６は、コントロール及び実験マウスの食物摂取量を示す。結果は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝３４〜４０匹のマウス）として表される。
【図７】図７は、ＳＤＰ補給の有無にかかわらない、ＳＡＭＰ８マウスの体重変化を示す。結果は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝９〜１９匹のマウス）として表される。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。
【図８】図８は、実験群の踏査の嗜好を示す。結果は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０〜１３匹のマウス）として表される。
【図９】図９は、取得試験の５分での踏査インデックスを示す。結果は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０〜１３匹のマウス）として表される。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。
【図１０】図１０は、短期記憶保持を評価した最初の保持試験における各実験グループの区別インデックスを示す。結果は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０〜１３匹のマウス）として表される。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。
【図１１】図１１は、長期記憶保持を評価した２回目の保持試験における各実験グループの区別インデックスを示す。結果は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０〜１３匹のマウス）として表される。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。
【図１２】図１２は、最初の保持試験（ｎ＝１０〜１３匹のマウス）の各実験群において十分な短期記憶を保有及び欠如すると決定されたマウスの割合を示す。
【図１３】図１３は、２回目の保持試験（ｎ＝１０〜１３匹のマウス）の各実験群において十分な短期記憶を保有及び欠如すると決定されたマウスの割合を示す。
【図１４】図１４は、２か月、６か月のコントロール、及び６か月のＳＤＰ群のマウスの皮質（パネルＡ）及び海馬（パネルＢ）におけるシナプトフィジンの発現を示す。結果は、平均±ＳＥＭ（ｎ＝６〜８匹のマウス）として表される。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．０１。
【図１５】図１５は、脳組織におけるシナプトフィシスの発現（リアルタイムＰＣＲ）及び存在量（ウェスタンブロット）を示す。
【図１６】図１６は、脳組織におけるＰＳＤ−９５の発現（リアルタイムＰＣＲ）及び存在量（ウェスタンブロット）を示す。
【図１７】図１７は、脳細胞におけるＧＦＡＰの存在量（免疫組織化学）を示す。
【図１８】図１８は、脳細胞におけるＩＢＡ１の存在量（免疫組織化学）を示す。
【図１９】図１９は、脳組織における総タウの発現（リアルタイムＰＣＲ）及び存在量（ウェスタンブロット）を示す。
【図２０】図２０は、脳組織におけるｐ−タウの発現（リアルタイムＰＣＲ）及び存在量（ウェスタンブロット）を示す。
【図２１】図２１は、脳組織におけるｓＡＰＰ−βの発現（リアルタイムＰＣＲ）及び存在量（ウェスタンブロット）を示す。
【図２２】図２２は、脳組織におけるｓＡＰＰ−αの発現（リアルタイムＰＣＲ）及び存在量（ウェスタンブロット）を示す。
【図２３】図２３は、脳組織におけるＢＡＣＥ１の発現（リアルタイムＰＣＲ）を示す。
【図２４】図２４は、脳組織におけるＡＤＡＭ１０の発現（リアルタイムＰＣＲ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
発明の詳細な説明
実施形態は、提示された理論的な態様無しで実施され得る。さらに、実施形態は、いかなる理論にも拘束されないという理解と共に、理論的態様が提示される。
【００５７】
特に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての用語（技術用語及び科学用語を含む）は、当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。さらに、一般的に使用される辞書で定義されている用語等の用語は、関連技術の内容における意味と一致する意味を持つと解釈されるべきであり、本明細書で明示的にそのように提示されない限り、理想化された又は過度に形式的な意味で解釈されないことがさらに理解されるだろう。
【００５８】
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図していない。本明細書で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈でそうでないことを明確に示さない限り、複数形も含むことを意図している。従って、例えば、「ある用量（ａ ｄｏｓｅ）」又は「その用量（ｔｈｅ ｄｏｓｅ）」への言及には、複数の用量も含まれる。さらに、本明細書で用いられる「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、成分又は工程の非網羅的なリストを示すことを意図しており、従って、所与の組成物又は方法は、列挙された成分又は工程を含み、具体的にリストされていない追加の成分又は工程を含み得ることを示す。一例として、「ＳＢＩを含む」コア重量はまた、香味料、着色料等の追加の成分を含み得る。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、リストされた成分又は工程から「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」及びからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）実施形態を包含することも意図される。同様に、用語「から本質的になる」は、列挙された成分又は工程「からなる」実施形態を包含することも意図される。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」、又はその変形が、詳細な説明及び／又は特許請求の範囲で使用される限り、そのような用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様の様式で包括的であることを意図する。
【００５９】
本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書で特に明記されない限り、その範囲内にある個々の値を個別に参照する簡略な方法として機能することのみを意図しており、個々の値は、本明細書にここに列挙されているかのように明細書に組み込まれる。本明細書で提供されるありとあらゆる例又は例示的な言葉（例えば、「例えば（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、単に本発明をよりよく説明することを意図しており、特に言及されない限り、本発明の範囲を限定するものでは無い。本明細書中での言語は、請求されていない成分が本発明の実施に不可欠であることを示すと解釈されるべきではない。
【００６０】
用語「約（ａｂｏｕｔ）」又は「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内を意味し、値がどのように測定又は決定されるか、すなわち、測定システムの制限に一部依存する。例えば、「約」は、当該技術分野の慣行により、１以内又は１を超える標準偏差を意味し得る。あるいは、「約」は、参照値の±１０％の範囲を意味する。他の実施形態において、用語「約」は、数字が所定の数字と９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％未満しか異ならないことを示す。
【００６１】
血漿タンパク質組成物：
本出願は、認知欠損に対するＳＤＰ等の血漿タンパク質組成物の投与の効果に関する。本発明における有用な血漿タンパク質組成物は、何れかの適切な動物源から得られ得る。好ましくは、動物血漿、その画分、又はその混合物は、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ及びトリによって形成された動物の群に由来する。
【００６２】
様々なタンパク質画分及び／又は成分は、当業者に周知で一般的に実施されている方法を使用して血漿から精製され得る。例えば、グロブリン濃縮物は、噴霧乾燥、凍結乾燥、又はその他の乾燥方法によって取得され得る。１つの好ましい方法は、本明細書で噴霧乾燥血漿（ＳＤＰ）と称される血漿タンパク質の乾燥組成物産生するための動物の血液から分離された血漿の噴霧乾燥を含む。噴霧乾燥血漿は、主にアルブミンとグロブリンから構成されており、他のタンパク質及びペプチドは少量である。本明細書で使用する場合、特に明記しない限り、用語「血漿」、「血漿タンパク質」、及び「ＳＤＰ」は、互換的に使用され得、血漿及び／又は何れかのタンパク質画分及び／又はそれからさらに精製され得る成分を包含する。
【００６３】
現在の施用で用いられる血漿タンパク質は、乾燥及び液体の両方の形態を含む何れかの適切な形態で使用され得る。特定の実施形態において、この施用で用いられる組成物は、独自の成分及び他の賦形剤又は活性化合物との組み合わせの両方として、又は飼料添加物としてさえも、錠剤、カプセル、経口用途アンプル、顆粒状粉末、クリームの形態であり得る。特定の実施形態において、本明細書に記載の血漿タンパク質組成物は、粉末形態で提供又は投与され得、場合によっては、水、食塩水、又はミルク等の適切な液体に懸濁又は溶解される。血漿タンパク質組成物は、適切な液体ビヒクル又は賦形剤及び任意の補助添加剤又は添加剤等の医薬的に許容される担体と組み合わせられ得る。液体ビヒクル及び賦形剤は、従来のものであり、市販されている。それらの実例は、蒸留水、生理食塩水、デキストロースの水性溶液、及び同様のものである。一般に、活性化合物に加えて、本発明の組成物は、医薬的に使用され得る製剤への活性化合物の加工を容易にする適切な賦形剤及び助剤を含み得る。特定の実施形態において、血漿タンパク質はまた、マイクロカプセル化され得、それにより高温、酸化剤、ｐＨ様湿度等からそれらを保護し安定化する可能性がある。
【００６４】
本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１０重量％のＩｇを含む。他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１０重量％〜約８０重量％のＩｇを含む。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１２重量％〜約７５重量％、約１５重量％〜約７０重量％、約１８重量％〜約６５重量％、約２０重量％〜約６０重量％、約２２重量％〜約６５重量％、又は約２５重量％〜約５０重量％のＩｇを含む。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％、１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％、２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、又は８０重量％のＩｇを含む。本発明のさらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％、１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％、２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、又は８０重量％未満のＩｇを含む。
【００６５】
本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１０重量％のＩｇＧを含む。他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１０重量％〜約８０重量％のＩｇＧを含む。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１２重量％〜約７５重量％、約１５重量％〜約７０重量％、約１８重量％〜約６５重量％、約２０重量％〜約６０重量％、約２２重量％〜約６５重量％、又は約２５重量％〜約５０重量％のＩｇＧを含む。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％、１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％、２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、又は８０重量％のＩｇＧを含む。本発明のさらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１０重量％、１１重量％、１２重量％、１３重量％、１４重量％、１５重量％、１６重量％、１７重量％、１８重量％、１９重量％、２０重量％、２１重量％、２２重量％、２３重量％、２４重量％、２５重量％、２６重量％、２７重量％、２８重量％、２９重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、又は８０重量％未満のＩｇＧを含む。
【００６６】
本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１重量％〜１０重量％のＩｇＡを含む。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、又は１０重量％のＩｇＡを含む。本発明のさらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、又は１０重量％のＩｇＡを含む。本発明のさらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、又は１０重量％未満のＩｇＡを含む。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１重量％〜約２重量％、約１重量％〜約３重量％、約１重量％〜約４重量％、約１重量％〜約５重量％、約１重量％〜約６重量％、約１重量％〜約７重量％、約１重量％〜約８重量％、約１重量％〜約９重量％、約２重量％〜約４重量％、約２重量％〜約６重量％、約２重量％〜約８重量％、約５重量％〜約１０重量％、約３重量％〜約６重量％、約３重量％〜約９重量％、又は約８重量％〜約１０重量％のＩｇＡを含む。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１重量％のＩｇＡを含む。特定の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、２重量％以下のＩｇＡを含む。
【００６７】
本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１重量％〜１０重量％のＩｇＭを含む。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、又は１０重量％のＩｇＭを含む。本発明のさらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、又は１０重量％未満のＩｇＭを含む。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、又は１０重量％のＩｇＭを含む。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１重量％〜約２重量％、約１重量％〜約３重量％、約１重量％〜約４重量％、約１重量％〜約５重量％、約１重量％〜約６重量％、約１重量％〜約７重量％、約１重量％〜約８重量％、約１重量％〜約９重量％、約２重量％〜約４重量％、約２重量％〜約６重量％、約２重量％〜約８重量％、約５重量％〜約１０重量％、約３重量％〜約６重量％、約３重量％〜約９重量％、又は約８重量％〜約１０重量％のＩｇＭを含む。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約５重量％のＩｇＭを含む。
【００６８】
本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１５重量％〜約８０重量％のアルブミンを含む。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、又は８０重量％のアルブミンを含む。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、少なくとも約１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４０重量％、４５重量％、５０重量％、５５重量％、６０重量％、６５重量％、７０重量％、７５重量％、又は８０重量％未満のアルブミンを含む。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約２０重量％〜約７５重量％、約３０重量％〜約７０重量％、約３５重量％〜約６５重量％、約４０重量％〜約６０重量％、又は約４５重量％〜約５５重量％のアルブミンを含む。特定の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約４５〜５５重量％のアルブミンを含む。
【００６９】
他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、６５〜９５重量％のタンパク質を含み、さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、７０〜９０重量％のタンパク質を含む。特定の実施形態において、血漿タンパク質組成物のタンパク質成分は、以下を含む：
ａ．  約１．０〜６．０重量％、約１．４〜５．６重量％、約２．０〜３．５重量％、約２．５〜３．０重量％、約２．７〜２．９重量％、又は約２．８重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｂ．  約１．０〜５．５重量％、約１．３〜５．２重量％、約１．８〜３．３重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．５〜２．７重量％、又は約２．６重量％のトランスフェリン；
ｃ．  約０．１〜１．０重量％、約０．１８〜０．７６重量％、約０．２〜０．５５重量％、約０．３〜０．４５重量％、約０．３６〜０．４０重量％、又は約０．３８重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｄ．  約０．１〜２．０重量％、約０．４〜１．６重量％、約０．５〜１．２重量％、約０．７〜０．９重量％、又は約０．８重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｅ．  約５〜３０重量％、約７〜２８重量％、約１０〜２０重量％、約１２〜１６重量％、又は約１４重量％のＩｇＧ；
ｆ．  約１．０〜６．０重量％、約１．２５〜５．０重量％、約１．５〜３．２５重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．３〜２．７重量％、又は約２．５重量％のＩｇＡ；
ｇ．  約０．５〜５．０重量％、約０．６〜４．０重量％、約０．７５〜３．０重量％、約１．０〜２．０重量％、約１．３〜１．７重量％、又は約１．５重量％のＩｇＭ； 及び
ｈ．  約２５〜８０重量％、約３０〜７０重量％、約３５〜６０重量％、約４０〜５０重量％、約４２〜４８重量％、又は約４５重量％のアルブミン。
【００７０】
他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、８０〜１００重量％のタンパク質を含み、さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、９０〜９５重量％のタンパク質を含む。特定の実施形態において、血漿タンパク質組成物のタンパク質成分は、以下を含む：
ａ．  約１．０〜９．０重量％、約２．０〜８．０重量％、約３．０〜６．０重量％、約３．５〜５．０重量％、約３．７〜４．３重量％、又は約４重量％のアルファ−２マクログロブリン；
ｂ．  約２〜１８重量％、約３〜１５重量％、約３．５〜１２重量％、約４〜１０重量％、約５〜９重量％、約６〜８重量％、又は約７重量％のトランスフェリン；
ｃ．  約０．１〜１．０重量％、約０．２〜０．８重量％、約０．２５〜０．６重量％、約０．３〜０．５重量％、約０．３８〜０．４２重量％、又は約０．４重量％のビタミンＤ結合タンパク質；
ｄ．  約０．１〜２．０重量％、約０．３５〜１．５重量％、約０．４〜１．３重量％、約０．５〜１．１重量％、約０．６〜０．８重量％、又は約０．７重量％のアルファ−１−グリコプロテイン；
ｅ．  約２５〜７５重量％、約３０〜７５重量％、約３５〜７０重量％、約４０〜６５重量％、約４５〜６２重量％、約５０〜６０重量％、又は約５５重量％のＩｇＧ；
ｆ．  約１．０〜６．０重量％、約１．２５〜５．０重量％、約１．５〜３．２５重量％、約２．０〜３．０重量％、約２．３〜２．７重量％、又は約２．５重量％のＩｇＡ；
ｇ．  約２．５〜１０重量％、約３〜９重量％、約３．２５〜８重量％、約３．５〜７重量％、約４〜６重量％、約４．５〜５．５重量％、又は約５重量％のＩｇＭ； 及び
ｈ．  約２．５〜２５重量％、約５〜２０重量％、約７〜１５重量％、約８〜１２重量％、約９〜１１重量％、又は約１０重量％のアルブミン。
【００７１】
本発明で使用する組成物は、それ自体が当該技術分野で周知の方法で製造される。例えば、調製物は、従来の混合、造粒、糖衣錠作製、溶解、及び／又は凍結乾燥プロセスによって作製され得る。用いられるプロセスは、最終的に、用いられる成分の物理特性及び最終製品の望ましい形状に依存する。
【００７２】
適切な賦形剤は、特に、例えば、ラクトース又はセルロース、マンニトール又はソルビトール、セルロース調製物等の糖、及び／又は例えば、リン酸三カルシウム又はリン酸水素カルシウム等のリン酸カルシウム、並びにスターチ、ライススターチ、ポテトスターチ、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどの結合剤、及び／又はポリビニルピロリドンである。必要に応じて、上記のスターチ並びにカルボキシメチルスターチ、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウム等のその塩等の崩壊剤が加えられ得る。助剤は、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸又はその塩、例えば、ステアリン酸マグネシウム又はステアリン酸カルシウム及び／又はポリエチレングリコール等の流量調節剤及び潤滑剤である。糖衣錠コアは、必要に応じて胃液に耐性のある適切なコーティングが施され得る。
【００７３】
この目的のために、必要に応じてアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液、及び適切な有機溶媒又は溶媒混合物を含む適切な濃縮糖溶液が使用され得る。胃液に耐性のあるコーティングを製造するために、フタル酸アセチルセルロース又はフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の適切なセルロース調製物の溶液、染料及び顔料を、例えば、化合物の用量の異なる組み合わせを特定するため、又は異なる組み合わせを特徴づけるために、錠剤又は糖衣錠コーティングに加えられ得る。
【００７４】
経口で使用され得る他の医薬調製物は、ゼラチン製押込みばめ式カプセル、並びにゼラチン及びグリセロール又はソルビトール等の可塑剤でできた柔らかい密封カプセルが含まれる。押込みばめ式カプセルは、ラクトース等の充填剤、スターチ等の結合剤、及び／又はタルク又はステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤、及び任意に安定剤と混合され得る顆粒の形態で活性化合物を含むことができる。ソフトカプセルにおいて、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール等の適切な液体に溶解又は懸濁することが好ましい。さらに、安定剤が加えられ得る。従来の担体を用いた投与に加えて、活性成分は、当業者に周知の様々な特殊な送達薬物技術により投与され得る。
【００７５】
投与量、期間、及び対象：
特定の実施形態において、治療される対象は、ヒト及び／又はコンパニオン動物である。特定の実施形態において、コンパニオン動物は、イヌ、ネコ、又はウマの動物からなる群から選択される。
【００７６】
組成物の「投与」は、経口投与、注射、注入、非経口、静脈内、粘膜、舌下、筋肉内、皮内、鼻腔内、腹腔内、動脈内、皮下吸収により、又は他の周知技術と組み合わせた何れかの方法により達成され得る。本発明の一実施形態において、血清由来免疫グロブリン濃縮物は、経口投与される。特定の実施形態において、本発明による動物血漿、その画分、又はその混合物は、医薬的に許容されるエアロゾルで、ネブライザーを介して投与され得るか、又は経口投与される（好ましくは食物中で）、
【００７７】
「治療有効量」は、限定されないが、１つ以上の認知欠損テストにおける対象の結果の改善を提供することに十分な血漿タンパク質組成物の用量であり得る。
【００７８】
対象に投与される投与量及び投与回数（単回又は複数回投与）は、投与経路、患者の状態及び特徴（性別、年齢、体重、健康状態、体格）、症状の程度、同時治療、治療の頻度及び望む効果、及び同様のものを含む様々な要因によって異なる。これらのパラメータは、確立された手順と分析、例えばフェースＩ、ＩＩ、及びＩＩＩ臨床試験によって各システムについて決定され得る。本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、１日１回投与される。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、１日２回投与される。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、１日３回投与される。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、１日４回投与される。本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１週間〜約２５週間で投与される。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１〜４週間、１〜５週間、１〜１０週間、１〜１５週間、１〜２０週間、５〜１０週間、５〜１５週間、５〜２０週間、５〜２５週間、１０〜１５週間、１０〜２０週間、１０〜２５週間、１５〜２０週間、又は１５〜２５週間から投与される。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０か月間投与される。本発明の他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１〜２か月、１〜３か月、１〜４か月、１〜５か月、１〜６か月、１〜７か月、１〜８か月、１〜９か月、１〜１０か月、２〜３か月、２〜４か月、２〜５か月から投与される。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約１週間投与される。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約２週間投与される。さらなる実施形態において、ＳＢＩは、約３週間投与される。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約４週間投与される。さらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約２４週間投与される。
【００７９】
本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、約５ｍｇ〜約１００ｇの量で対象に毎日投与される。本発明のさらなる実施形態において、対象に毎日投与される血漿タンパク質組成物の量は、約１０ｍｇ〜約９０ｇ、約２０ｍｇ〜約８０ｇ、約５０ｍｇ〜約７０ｇ、約１００ｍｇ〜約６０ｇ、約２５０ｍｇ〜約５０ｇ、約５００ｍｇ〜約５０ｇ、約１ｇ〜約５０ｇ、約５ｇ〜約５０ｇ、又は約１０ｇ〜約４５ｇである。
【００８０】
本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、１日当たり対象の体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇ〜約１ｇの量で投与される。本発明のさらなる実施形態において、対象に毎日投与される血漿タンパク質組成物の量は、１日当たり体重１ｋｇ当たり約２０ｍｇ〜約９００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約３０ｍｇ〜約８００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約４０ｍｇ〜約７５０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約５０ｍｇ〜約７００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約６０ｍｇ〜約６５０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約７０ｍｇ〜約６００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約８０ｍｇ〜約５５０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約９０ｍｇ〜約５００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり約２００ｍｇ〜約４００ｍｇである。
【００８１】
特定の実施形態において、マウス、ラット、イヌ、ブタ等のモデル動物に使用される投与量は、当業者に周知で容易に入手可能な変換係数を使用して、ヒト対象に適切な用量に変換され得る。例えば、以下の文献を参照：“Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Cluinical Trials for Therapeutics in Adult Helthy Volunteers,” U.S. Dept. of Health and Human Services, July 2005.。
【００８２】
本発明の一実施形態において、血漿タンパク質組成物は、対象の１日の総食事摂取量の約０．０５重量％〜約５重量％の量で投与される。本発明のさらなる実施形態において、血漿タンパク質組成物は、対象の１日の総食事摂取量の約０．０５重量％〜約０．１重量％、約０．０５重量％〜約０．２重量％、約０．０５重量％〜約０．５重量％、約０．０５重量％〜約１重量％、約０．０５重量％〜約２重量％、約０．１重量％〜約０．２重量％、約０．１重量％〜約０．５重量％、約０．１重量％〜約１重量％、約０．１重量％〜約２重量％、約０．１重量％〜約５重量％、約０．５重量％〜約１重量％、約０．５重量％〜約２重量％、約０．５重量％〜約５重量％、約１重量％〜約２重量％、約１重量％〜約５重量％、又は約２重量％〜約５重量％の量で投与される。他の実施形態において、血漿タンパク質組成物は、対象の１日の総食事摂取量の約０．０５重量％、０．１重量％、０．２重量％、０．５重量％、１重量％、１．５重量％、２重量％、２．５重量％、３重量％、４重量％、又は５重量％の量で投与される。さらなる実施形態において、投与される血漿タンパク質組成物の量は、対象の１日の総食事摂取量の約０．２重量％である。さらなる実施形態において、投与される血漿タンパク質組成物の量は、対象の１日の総食事摂取量の約０．４重量％である。
【００８３】
特定の組成物及び同様のものを参照して本発明を説明したが、本発明が、そのような実施形態又は機構によって限定されることを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲によって定義されるように、本発明の範囲又は本質から逸脱することなく修正を行うことができることは、当業者に明らかであろう。そのような明白な修正及び変形は全て、添付の特許請求の範囲で定義される本発明の範囲内に含まれることが意図される。特許請求の範囲は、文脈で特に反対を示さない限り、意図された目的を達成するために有効な何れかの順序で請求された成分及び工程を網羅することを意図する。
【実施例】
【００８４】
実施例
認知欠損障害に対する動物血漿タンパク質の投与の効果を研究するために、発明者達は、認知症のＳＡＭＰ８マウスモデルを使用した。ＳＡＭＰ８マウスモデルは、老化傾向のある近交系（ＳＡＭＰ８）及び老化抵抗性の近交系（ＳＡＭＲ１）からなる関連近交系の群であり、これは、遺伝的選択によって正常に開発された。ＳＡＭＰ８及びＳＡＭＲ１に共通する老化の特徴は、それぞれ、老化の加速及び通常の老化である。
【００８５】
そのため、ＳＡＭＰ８マウスは、学習障害及び記憶障害、感情障害（不安様行動及び抑うつ行動の減少）及び付随する概日リズムの変化等の加齢に伴う行動の悪化を示すため、ヒト及び他の動物の認知症のモデルとして使用され得る。ＳＡＭＰ８マウスは、受動的回避反応の獲得及び保持を著しく損ない、マウスが嫌な状況からの脱出することで学習する空間記憶タスクの障害を示す。ＳＡＭＰ８マウスの脳は、ヒトのアルツハイマー病の脳と同様の神経病理学的変化、つまり、β−アミロイドタンパク質の沈着を示す。また、ＳＡＭＰ８マウスは、脳内の様々なサイズの液胞に関連する海綿状変性を有するが、ＳＡＭＲ１マウスの脳では液胞に関しては明らかではなかった。
【００８６】
本発明者達は、ＳＡＭＰ８マウスに与えられた動物血漿タンパク質、その画分、又はその混合物に基づくサプリメントは、ＳＡＭＰ８マウスの夜間の運動活性を低下させ、その結果をコントロールＳＡＭＲ１マウスで示されたパターンに近づけ、認知欠損障害のマーカーを用いてのこれら高齢動物の定位（ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）の改善を示すという予想外の結果を観察した。本発明者達は、若年（２か月）と比較して、高齢（６か月）マウスでは、短期及び長期記憶の両方の変数が悪化することを観察した。老齢マウスは、より低い探索行動と記憶保持を示した。ＳＤＰを４か月間摂取すると、記憶指標に対する加齢の影響が減少し、ＳＤＰが認知機能の進行性の悪化を遅らせる可能性があることを示唆している。使用されるテストである新規対象物認識（ＮＯＲ）テストは、「純粋な」認識記憶テストであり、作業記憶を評価するための有効なタスクである。このテストは、正又は負の強化を含まないため、ＮＯＲは、現在ヒトで用いられている記憶テストに匹敵する。要約すると、本発明者達は、驚くべきことに、血漿タンパク質の投与が、老化に伴う認知機能の悪化を防ぐことを発見した。
【００８７】
実施例１−ＳＡＭＰ８マウスの夜間の運動活性に対する血漿タンパク質投与の効果
材料及び方法：
動物：
マウスの老化促進傾向のある系統（ＳＡＭＰ８）を持ち用いて実験が行われた。生後９か月で、これらの動物は、老化が完全に進んだ。老化耐性系統（ＳＡＭＲ１）のマウスをコントロールとして用いた。マウスを５か月間、従来の飼育小屋（ケージ当たり３〜４匹のマウス）で飼育した（攻撃的な行動を示した場合は例外で、その場合は別々に隔離されて飼育された）。実験期間中、マウスの食物摂取量と体重をモニターした。
【００８８】
食餌（ｄｉｅｔ）：
マウスに最大４か月実験用食餌を与えた。実験食餌の構成は表１に詳述する。食物摂取と体重は、実験期間を通してモニターされた。
【表１】
2020520387.tif 000003
【００８９】
この研究では、マウスの平均体重は３２ｇで、１日の平均食餌摂取量は４．５ｇであった。これにより、１日当たり平均１１．２５ｇ ＳＤＰ／ｋｇ体重の血漿摂取量と規定された。約２０％のＩｇＧである血漿の組成に基づいて、１日の平均ＩｇＧ摂取量は、２．２５ｇ ＩｇＧ／ｋｇ体重であった。
【００９０】
実験デザイン：
動物は、３か月間（６〜９か月齢）実験用食餌を摂取した。生後６か月の動物は、ＳＡＭＲ１（コントロール食餌を与えられたＳＡＭＲ１マウス）、ＳＡＭＰ８（コントロール食餌を与えられたＳＡＭＰ８マウス）、及びＳＡＭＰ８−ＳＤＰ（ＳＤＰが補充された食餌を与えられたＳＡＭＰ８マウス）の３つのグループに分けられた。体重は毎週記録された。９か月齢のときに動物を屠殺し、サンプルを採取した。
【００９１】
異なる系統の効果及び栄養素補充の効果を調べるために、ＳＰＳＳ−２０．０ソフトウェア（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ．，シカゴ，ＩＬ）を使用して、一元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くボンフェローニポストホックテストによってデータを分析した。両方の分析で、差は、Ｐ＜０．０５で有意と見なされた。
【００９２】
運動活性：
・屠殺の５日前、動物は、個別に飼育小屋に入れられた。
・１２〜１２時間の明（ＬＬ）〜暗（ＤＤ）サイクルで５日間、運動活性のパターンを調査した。
【００９３】
行動分析：
・運動活性は、活性メーターで記録された。
・マウスが赤外線ビームを横切る時間が登録された。
・１５分ごとにデータが記録された。
・時間生物学の統合されたパッケージを使用して計算が行われた。
【００９４】
結果：
体重の変化：
２６週目（６か月齢）〜３９週目（９か月齢；Ｐ＜０．０５；図１）までの調査期間中、ＳＡＭＰ８集団の体重は、ＳＡＭＰＲ１マウスよりも約１０％低かった。ＳＤＰの補充は、このパターンを変化させなかった。結果は、平均±ＳＥＭ（２０〜３０匹のマウス）として表される。＊は、ＳＡＭＲ１とＳＡＭＰ８の差を示す、Ｐ＜０．０５。
【００９５】
食餌消費：
摂取期間中、週に３回食餌摂取量を測定した。図２は、１日の平均食餌摂取量をまとめたものである。食餌摂取量は、全ての群で同じであった。
【００９６】
運動活性：
ＳＡＭＰ８系統は、ＳＡＭＲ１系統よりも高い夜間運動活性を示す（図３）。これは、この動物モデルの加齢パターンが、夜間運動活性の増加と関連していることを示す。
【００９７】
コントロールＳＡＭＰ８マウスは、耐性マウス（コントロールＳＡＭＲ１）よりも大きな夜間活性を示しており、両系統間に基礎活性レベルの違いがあることを示している。このＳＡＭＰ８系統の運動活性のより高い増加は、これら動物の記憶力及び学習能力が低下したという事実と関連している可能性があり、従って、これらの動物は、典型的なアルツハイマー病のように、より低い定位を有する可能性があり、これは、耐性ＳＡＭＲ１系統と比較して、この系統のより高い活性を説明することが可能である。
【００９８】
ＤＤ／ＬＬ比の分析により、ＳＤＰを与えられた動物は、コントロールＳＡＭＲ１群とコントロールＳＡＭＰ８群によって観察された値の間の中間パターンを有するという見解を支持する結果を示した。この結果は、ＳＤＰの補充を受けたＳＡＭＰ８マウスが、コントロール食餌を与えられたＳＡＭＰ８マウスと比較して暗黒下での活性を減少させたことを示した。これは、ＳＤＰの補充が、これらの動物の定位と記憶を改善し、認知症に関連する悪影響の減少に役立つことを示す可能性がある。
【００９９】
結論：
予備的な結果ではあるが、運動活性分析の結果は、ＳＤＰ補充が、ＳＡＭＰ８マウスの夜間運動活性を減少させ、コントロールＳＡＭＲ１マウスで示されるパターンに近づけることを示唆している。これは、動物血漿、その画分、又はその混合物の投与が、認知症等の認知症欠損障害の治療に使用できることを示唆している。
【０１００】
実施例２−ＳＡＭＰ８マウスの学習及び記憶機能に対する血漿タンパク質の効果
材料及び方法：
動物：
ＳＡＭＰ８マウスを使用して実験が行われた。マウスは、２か月齢まで、従来の飼育小屋（ケージ当たり３〜４匹）で飼育された（攻撃的な行動を示した場合は例外で、その場合は別々に隔離されて飼育された）。
【０１０１】
食餌：
マウスに最大４か月実験用食餌を与えた。実験用食餌の組成は、実施例１の表１に詳述されている。食物摂取及び体重は、実験期間を通してモニターされた。
【０１０２】
実験デザイン：
この一連の実験において、発明者達は、新規対象物認識（ＮＯＲ）テストを実行することにより、ＳＡＭＰ８マウスの短期及び長期記憶に対する血漿タンパク質の投与の効果を調べることを目的とした。以下の実験群が用いられた（図４）：
・２Ｍ： ２か月齢の若い参照群のマウス。
・４Ｍ−ＣＴＬ： ２か月間コントロール食餌を与えた４か月齢のマウス。
・４Ｍ−ＳＤＰ： ２か月間ＳＤＰ補充食餌を与えた４か月齢のマウス。
・６Ｍ−ＣＴＬ： ４か月間コントロール食餌を与えた６か月齢（老化）のマウス。
・６Ｍ−ＳＤＰ： ４か月間ＳＤＰ補充食餌を与えた６か月齢（老化）のマウス。
【０１０３】
食物摂取及び体重の変化は、生後２か月〜６か月で評価された。加齢の影響及び栄養補助食品の影響を調べるために、データは、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアバージョン６（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ， Ｉｎｃ．， ＵＳＡ）を使用したフィッシャーポストホックテストによって分析された。体重は、二元ＡＮＯＶＡとそれに続く、フィッシャーポストホックテストによって分析された。差はＰ＜０．１で有意差ありとみなされた。
【０１０４】
新規対象物認識テスト（ＮＯＲＴ）：
マウスは、９０°、２本アーム（長さ２５ｃｍ、高さ２０ｃｍ、幅５ｃｍ）の黒い迷路に置かれた（図５）。迷路中央の光強度は、３０ｌｘであった。識別される対象物は、プラスチック製であった。マウス（一度に１匹）を３日間連続で１０分間迷路に個別に置いた。４日目に、動物は、１０分間の取得試験に供され、各アームの端に２つの同一対象物（Ａ＋Ａ又はＢ＋Ｂ）が存在する迷路に置いた。この試行中に、踏査の嗜好（各対象物を探索する時間の割合）及び踏査インデックス（迷路状の対象物／時間の両方を探索する時間として定義される）が測定された。短期間の記憶を評価する１０分間の保持試験が、２時間後に実施された。この試行中に、対象物の１つが、新しい対象物（Ａ＋Ｂ又はＢ＋Ａ）に置き換えられ、マウスの行動がカメラで記録された。新規対象物の踏査に費やした時間（ＴＮ）及び古い対象物の踏査時間（ＴＯ）が測定された。区別指数（ＤＩ）は、（ＴＮ−ＴＯ）（ＴＮ＋ＴＯ）で計算された。ＤＩが０．２以上のマウスは、「記憶力を有する」動物としてみなされた。対象物の好みの偏りを避けるために、対象物Ａ及びＢのバランスを取り、各実験群の動物の半分を最初に対象物Ａを見せ、残りの半分は、最初に対象物Ｂを見てから対象物Ａを見せるようにした。迷路及び対象物は、嗅覚の手がかりを排除するために、各テスト後に９６％エタノールで洗浄された。２４時間後、長期記憶を評価するために２回目の保持試験が実施された。この２回目の試行中に、古い新規対象物が、別の対象物（Ａ＋Ｃ又はＢ＋Ｃ）に置き換えられ、再びマウスの行動がカメラで記録され、ＤＩが計算された。
【０１０５】
結果：
食物摂取量及び体重：
摂取期間中、週に３回食物摂取量が測定された。図６は、マウスが実験食餌を受けた４か月間、毎日の平均食物摂取量の要約である。差はコントロールとＳＤＰ食餌間で観察されなかった。
【０１０６】
ＳＡＭＰ８マウスの体重は、月に１回測定された。２か月齢で、ＳＡＭＰ８マウスの体重はほぼ同じであった。ＳＤＰ食餌を１か月与えた後、ＳＡＭＰ８マウスは、コントロール食餌を与えたマウスより大樹が増加しており（図７）、この差は、実験期間中維持された。
【０１０７】
新規対象物認識テスト（ＮＯＲＴ）：
マウスは、図８に示されるように、取得試行中に同一の対象物の１つに対して何れかの嗜好を示さず、全ての群が約５０％の踏査嗜好を示した。この結果は、迷路のアームの１つを好む群はないことを示す。
【０１０８】
図９は、取得試行の最初の５分間に計算された踏査インデックスを示す。２か月齢のマウスは、３．３±０．４％の迷路で費やした時間対象物を踏査した。認知症モデルのマウスにおいて、このインデックスは、時間と共に減少し、最終的に６か月齢で２．１±０．４％（Ｐ＜０．１）に達し、踏査能力が低下したことを示す。血漿タンパク質組成物の投与は、年齢に関連するこの効果を妨げない。
【０１０９】
最初の保持試験（短期記憶の評価；図１０）では、テストの最初の５分間に６か月齢で区別インデックスが減少し、認知症モデルマウスにおける短期記憶の減少を示した。しかしながら、ＳＤＰ食餌を補充された６か月齢のマウスは、２か月齢のマウスと同じ結果を叔父氏、コントロール食餌を与えた６か月齢のマウスと比較して、区別インデックスが大幅に改善された。同じパターンが、長期記憶に関連する認知症モデルマウスの２回目の保持試験（最初の保持試験から２４時間後）で観察される（図１１）。４か月齢で、長期記憶は、コントロール食餌を与えられた認知症モデルマウスで既に著しく損なわれており、６か月齢のコントロール動物で同様のレベルの障害が観察された。ＳＤＰを補充された認知症モデルマウスは、コントロール動物と有意差を示さないが、４か月で区別インデックスの増加（長期記憶の改善を示唆する）を示した。しかしながら、６か月齢で、ＳＤＰを補充した認知症モデルマウスは、コントロール食餌を与えた６か月齢のＳＡＭＰ８マウスよりも有意に大きく、２か月齢で観察された区別インデックスと同様の区別インデックスの増加を示した。
【０１１０】
図１２には、「記憶力を有する」マウスの割合が示されており、最初の保持試験中、ＤＩが０．２より高いとして理解される。この値は、マウスが古い対象物と比較して新規対象物の踏査に２倍の時間を費やす際に達する。マウスが、２か月齢の場合、集団の約９０％が短期記憶を保持し、６か月齢において、この割合は、コントロールマウスで約４０％に減少した。しかしながら、マウスに血漿タンパク質組成物を投与した場合、４か月齢及び６か月齢の「記憶力を有する」マウスの割合は、若い群で見られる割合と近くなる。
【０１１１】
２回目の保持試験において、２か月齢のマウスの約７０％が、長期記憶を保持した（図１３）。この割合は、年齢と共に減少し、４か月齢のマウスで５６％、６か月齢のマウスで３６％の値をとった。しかしながら、マウスに血漿タンパク質組成物を投与した場合、４か月齢及び６か月齢での「長期記憶を有する」マウスの割合は、若い群で見られる割合と同じか、それよりも優れた割合を示す。
【０１１２】
結論：
新規対象物認識テスト（ＮＯＲＴ）は、認識記憶を評価し、短期及び長期記憶の研究に役立つ。ＮＯＲＴは、「純粋な」認識記憶テストであり、作業記憶を評価する有効なタスクである。このテストは、正又は負の強化を含まず、これにより、ＮＯＲは、アルツハイマー病等の認知症疾患において、現在ヒトで使用されている記憶検査に匹敵する。このテストを使用して、ＳＡＭＰ８認知症モデルにおける若い（２か月）マウスと比較して高齢（６か月）マウスで短期及び長期記憶の変数が悪化することが観察された。高齢のマウスは、より低い踏査行動及び記憶保持を示した。予想外に、血漿タンパク質組成物（例えば、ＳＤＰ）を補充した食餌を４か月間与えると、認知症モデルマウスの記憶の損失の重症度が低下し、これは、認知機能の進行の悪化を遅らせる可能性を示唆する。
【０１１３】
要約すると、血漿タンパク質組成物を補充した食餌の投与は、新規対象物認識テストによって実証されるように、認知症に関連する認知機能の悪化を防止した。
【０１１４】
実施例３−ＳＡＭＰ８マウスの神経機能マーカーであるシナプトフジンの発現に対する血漿タンパク質投与の効果
【０１１５】
目的：
６か月齢ＳＡＭＰ８マウスは、コントロールマウスと比較して、シナプトフィジン−１等の神経機能マーカーの発現の低下を示しており、ＳＡＭＰ８マウスのシナプスの接続数の減少を示唆する。この一連の実験において、発明者達は、４か月間のＳＤＰの補充がシナプトフィジン−１神経機能マーカーの減少を防ぐことができるか否かを判断することを目的としており、その結果は６か月齢のＳＡＭＰ８マウスの神経変性の減少を示唆する。
【０１１６】
材料及び方法：
動物：
実験は、マウスの老化促進傾向のある系統（ＳＡＭＰ８）を使用して再び行われ、この実験にも実施例２由来のマウスが使用された。
【０１１７】
採用された実験群は、次の通りである：
・２Ｍ： ２か月齢の若い参照群のマウス；
・６Ｍ−ＣＴＬ： ４か月間コントロール食餌を与えた６か月齢（老化）のマウス； 及び
・６Ｍ−ＳＤＰ： ４か月間ＳＤＰ補充食餌を与えた６か月齢（老化）のマウス。
【０１１８】
サンプル回収及び均質化：
実施例２の実験の終わりに、マウスをキシラシン／ケタミンで麻酔した。脳を摘出し、皮質と海馬のサンプルをさらなる使用のために−８０℃で急速に凍結した。皮質及び海馬のサンプルは、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ、２００ｍＭ ＰＭＳＦ、１ｍＭ ＤＴＴ及び２％（ｖ／ｖ）阻害剤プロテーゼカクテルを含む溶解緩衝液中、２０，０００ｒｐｍでＰｏｌｙｔｒｏｎ（ＰＲＯ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ， ＵＳＡ）を用いてホモジナイズされた。ホモジネートは、４℃９５５ｇ、２０分間遠心分離された。
【０１１９】
ウェスタンブロットによるタンパク質量の決定：
サンプル（皮質及び海馬由来のタンパク質５０μｇ）を変性し、１０〜１２．５％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥポリアクリルアミドゲルで分離し、ポリフッ化ビニリデン膜に転写した。膜は、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）及び５％スキムミルクを含むＴｒｉｓ緩衝生理食塩水で室温、９０分間インキュベートすることによりブロッキングされ、次いで、マウス抗シナプトフィジン（Ｄａｋｏより入手）（１／３０００希釈）、４℃で一晩インキュベートされた。膜は、ＴＢＳＴで数回洗浄され、抗マウスホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート二次抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ， ＵＳＡ）と共に２時間インキュベートされた。ＴＢＳＴで洗浄した後、タンパク質バンドは、Ｃｌａｒｉｔｙ化学発光検出キット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ， ＵＳＡ）を用いて視覚化された。アッセイは、製造元の指示に従って実施された。検出後、ＩｍａｇｅＬａｂ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用してバンドが定量化された。
【０１２０】
統計分析：
データは、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアバージョン６（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ， Ｉｎｃ．， ＵＳＡ）を使用したフィッシャーポストホックテストによって分析された。タンパク質存在量は、二元ＡＮＯＶＡとそれに続く、フィッシャーポストホックテストによって分析された。差はＰ＜０．１で有意差ありとみなされた。
【０１２１】
結果：
図１４は、神経シナプスに関与するタンパク質であるシナプトフィジンの発現を示す。このタンパク質の存在量は、認知欠損障害のマーカーを有する高齢マウスの皮質及び海馬で減少した（それぞれ、Ｐ＜０．０５及びＰ＝０．０５３；それぞれ、図１４Ａ及び１４Ｂ）。皮質に対する食事の効果が無いが、ＳＤＰは、海馬におけるシナプトフィジンの加齢に伴う現象を防いだことから、ＳＤＰ補充食餌は、脳組織に関して異なる効果を示した（Ｐ＜０．０５）。従って、本発明による動物血漿、その画分、又はその混合物は、高齢動物の海馬におけるシナプトフィジンタンパク質の発現減少の治療に有効である。
【０１２２】
実施例４−ＳＡＭＰ８マウスにおけるミクログリオーシス、アストログリオーシス及びアミロイドプラーク形成に関連するマーカーの発現に対する血漿タンパク質投与の効果
目的：
この一連の実験において、本発明者達は、４か月間のＳＤＰの補充が、老化に関連するミクログリオーシス及びアストログリオーシス、並びにアミロイドプラーク形成に影響を及ぼし得るか否かを決定することを目的とした。
【０１２３】
シナプス形態の変化、シナプスの進行性の喪失、及びグリア（星状細胞及びミクログリア）細胞の活性化は、老化に関連するものを含む特定の認知機能障害に特有の顕著な特徴と考えられる。老化中のニューロンの喪失は、シナプス前タンパク質シナプトフィジン及びシナプス後タンパク質ＰＳＤ−９５の発現を減少させる。従って、脳組織におけるシナプトフィジン及びＰＳＤ−９５の分析により、ニューロンの完全性に関する情報が得られる。
【０１２４】
新たな証拠は、グリアの調節不全が、ＡＤの発症に重大な影響を与える可能性があることを示唆する。反応性アストログリア症は、ＡＤの広く認められた特徴である。さらに、アストログリオーシスの程度は、認知機能低下と相関する（Ｆｒｏｓｔ ａｎｄ Ｌｉ， ２０１７）。ミクログリア細胞は、様々な脳構造の機能の調節及び加齢に伴う精神病理の発症の過程において免疫表現型の変化を直接受けることができる。従って、脳組織におけるＧＦＡＰ及びＩＢＡ１の分析は、老化マウスのミクログリオーシス及びアストログリオーシスに関する情報を提供する。
【０１２５】
βアミロイドプラーク及びタウの過剰リン酸化は、ＡＤの発症に関連する主要なメカニズムと考えられる。脳組織中のタウ、ｐ−タウ及びアミロイド前駆体タンパク質の定量化は、老化マウスの脳組織中のＡＤの主要マーカーに関する情報を提供する。
【０１２６】
材料及び方法：
動物：
再度、バルセロナ大学（ＵＢ）の農学部の動物施設で採取及び生育された老化促進傾向のあるマウス（ＳＡＭＰ８）を使用して、実験を行った。この実施例で使用されるプロトコールは、実験動物の飼育及び使用に関するＣａｔａｌｕｎｙａガイドライン（ＤＡＡＭ：７９３９及び９２７２）に従って、ＵＢの動物実験倫理委員会（ＣＥＥＡ）によって承認された。
【０１２７】
食餌：
マウスは、実験食餌を２か月又は４か月間与えられた。実験食餌の組成は、表２に詳述される。
【表２】
2020520387.tif 000004
【０１２８】
実験デザイン：
マウスは、市販の標準飼料を給餌する２か月齢まで、従来の飼育小屋（ケージ当たり３〜４匹）で飼育された。２か月後、動物に４か月間実験食餌（コントロール又はＳＤＰ）を与えた。この研究の実験デザインは、以下の９〜１１匹／群の３つの群で構成された：
・２Ｍ： ２か月齢の若い参照群のマウス；
・６Ｍ−ＣＴＬ： ４か月間コントロール食餌を与えた６か月齢のマウス； 及び
・６Ｍ−ＳＤＰ： ４か月間ＳＤＰ補充食餌を与えた６か月齢のマウス。
【０１２９】
サンプル回収：
実験の終わりに、マウスをキシラシン／ケタミンで麻酔した。血液は、心臓から直接採取され、失血によって屠殺された。脳を摘出し、さらに使用するために−８０℃で急速に凍結した。
【０１３０】
マウスのかん流
マウスを麻酔し、ＰＢＳで完全に経心臓的にかん流し、血管内に分布した色素を全て除去した。その後、マウスは、４％パラホルムアルデヒドをかん流された。脳を摘出し、半球のサンプルをさらに使用するために−８０℃で急速に凍結した。
【０１３１】
サンプルの均質化：
脳半球のサンプルは、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１％ Ｔｒｉｔｏｎ、１ｍＭ ＰＭＳＦ、１ｍＭ ＤＴＴ及び２％（ｖ／ｖ）阻害剤プロテーゼカクテルを含む溶解緩衝液中、２０，０００ｒｐｍでＰｏｌｙｔｒｏｎ（ＰＲＯ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ， ＵＳＡ）を用いてホモジナイズされた。ホモジネートは、4℃、９５５ｇで20分間遠心分離された。
【０１３２】
免疫組織化学：
かん流脳は、Ｔｉｓｓｕｅ−ＴｅｋＯ．Ｃ．Ｔ．Ｃｏｍｐｏｕｎｄ（Ｍｉｌｅｓ）のドロップに埋め込み、すぐにイソペンタンに沈めた。次に、それらを−８０℃で保存した。脳は、クライオスタットＣＭ３０５０Ｓ（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）で切断された。脳の切片は、１０ｇ／Ｌのウシ血清アルブミン、グリシン２０ｍＭ（両方とも、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）及び１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（Ｖ：Ｖ； Ｆｌｕｋａ， ＵＳＡ）（ＰＢＳ中）を含む溶液で、３０分間室温で透明化された。薄片は、加湿チャンバー内で、１０ｇ／Ｌウシ血清アルブミン、２０ｍＭグリシン及び対応する一次マウスモノクローナル抗体を含む溶液と共に、４℃で一晩インキュベートされた。使用した一次抗体は、Ｉｂａ−１（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ＵＳＡ）、ＧＦＡＰ（Ａｂｃａｍ、 Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）、ＮｅｕＮ及びＣＤ１１ｂ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）であった。切片は、ＰＢＳで洗浄され、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ二次抗体と共に室温で湿度チャンバー内、２時間インキュベートされた。その後、サンプルは、ＰＢＳで洗浄され、核マーカーＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、ＵＳＡ）で室温、２０分間対比染色された。次に、それらは再度ＰＢＳで洗浄され、Ｍｏｗｉｏｌ−４８８（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、ＵＳＡ）にマウントされた。ネガティブコントロールは、一次抗体なしで実施された。サンプルは、共焦点顕微鏡による観察まで４℃で保存された。
【０１３３】
共焦点走査型レーザー顕微鏡及び画像処理：
デジタル蛍光画像は、共焦点走査型レーザー顕微鏡ＳＰＩＩ（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって取得された（画像は示されていない）。各細胞染色の５つの異なる領域を盲検方式で分析し、動物当たり最低２５枚の画像を取得した。Ｆｉｊｉ（Ｓｃｈｉｎｄｅｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１２）を使用して画像が分析された。結果は、総細胞／領域の陽性細胞の割合として表される。
【０１３４】
ウェスタンブロット：
ウェスタンブロットの手順は、以前の研究（Ｐｅｒｅｚ−Ｂｏｓｑｕｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１６）に従って実施された。脳の半球のサンプルは、ホモジナイズされ、ブラッドフォード法（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用してタンパク質濃度が決定された。等量のタンパク質（１００μｇ）が、１０〜１８％のＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離され、ポリフッ化ビニリデン膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）に転写された。膜は、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）及び５％スキムミルクを含むＴｒｉｓ緩衝生理食塩水で室温、９０分間インキュベートすることによりブロッキングされた。その後、膜は、希釈された一次抗体（表３）と共に４℃で一晩インキュベートされた。膜は、洗浄され、ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、 Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、ＭＩ、ＵＳＡ）と共に室温、２時間インキュベートされた。化学発光検出キットＣｌａｒｉｔｙ及びＣｈｅｍｉＤｏｃ ＸＲＳ＋装置（両方とも、Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して、タンパク質バンドを可視化した。検出後、ＩｍａｇｅＪゲルアナライザーソフトウェアを使用して、ハイブリダイゼーションバンドを定量化した。
【０１３５】
【表３】
2020520387.tif 000005
【０１３６】
リアルタイムＰＣＲ：
ＲＮＡ抽出及び逆転写は、以前に報告されているように（Ｐｅｒｅｚ−Ｂｏｓｑｕｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１６）実施された。ＲＮＡの品質と量は、分光測光法により評価された（ＮａｎｏＤｒｏｐ ＮＤ−１０００； ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）。トータルＲＮＡは、ｉＳｃｒｉｐｔ（商標）ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して逆転写された。ＭｉｎｉＯｐｔｉｃｏｎリアルタイムＰＣＲシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ、ＵＳＡ）でリアルタイムＰＣＲが実施された。ＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ＮＹ、ＵＳＡ）は、製造元の指示に従って、以下の遺伝子：β−セクレターゼ（Ｂａｃｅ１、Ｍｍ００４７８６６４＿ｍ１）及びＤｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ及びＭｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ１０（Ａｄａｍ１０、Ｍｍ００５４５７４２＿ｍ１）が使用された。各ＰＣＲの実行には、各サンプル及びネガティブコントロール（逆転写なしのサンプル、ＲＮＡなしのサンプル）の逆転写の重複を含む。標的遺伝子転写産物の定量は、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ１（Ｈｐｒｔ１、Ｍｍ００４４６９６８＿ｍ１）遺伝子発現をリファレンスとして使用し、２−ΔΔＣＴ法（Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ＆Ｌｉｖａｋ、２００８）で実施された。産物のフィデリティー（ｆｉｄｅｌｉｔｙ）は、融解曲線分析によって確認された。
【０１３７】
統計分析：
結果は、平均±平均の標準偏差（ＳＥＭ）として表される。加齢と栄養補助食品の影響を研究するために、データは、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続いてＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアバージョン６（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ， Ｉｎｃ．， ＵＳＡ）を使用したフィッシャーポストホックテストによって分析された。テストの差は、Ｐ＜０．０５の場合に、統計的に有意と見なされた。０．０５〜０．１の間のＰ値は、有意な傾向を確立すると考えられた（Ｃｕｒｒａｎ−Ｅｖｅｒｅｔｔ＆Ｂｅｎｏｓ、２００４）
【０１３８】
結果：
図１５は、ニューロンのシナプス前小胞における主要な内在性膜糖タンパク質であるシナプトフィジンの脳組織における発現及び存在量を示す。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝６〜７匹のマウス）。図１５Ａは、リアルタイムＰＣＲの結果を示す。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。図１５Ｂは、シナプトフィジン及びβ−アクチン（コントロール）のウェスタンブロットの代表的な画像を示す。老化したマウスでは、シナプトフィジンの量が減少し、ＳＤＰの補充により、高齢マウスでは神経の完全性が維持される。
【０１３９】
図１６は、シナプス後密度の分子組織化おいて重要な役割を果たすＰＳＤ−９５の脳組織における発現及び存在量を示す。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝６〜７匹のマウス）。図１６Ａは、リアルタイムＰＣＲの結果を示す。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。図１６Ｂは、ＰＳＤ−９５及びβアクチン（コントロール）のウェスタンブロットの代表的な画像を示す。ＰＳＤ−９５の存在量は、老化マウスで減少し、ＳＤＰの補充は、高齢マウスで神経の完全性を維持する。
【０１４０】
図１７は、成熟星状細胞の主要な中間径フィラメントタンパク質であり、発達中の星状細胞の細胞骨格の重要な成分であるグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）の脳組織における存在量を示す。脳組織中のＧＦＡＰ陽性細胞（Ｂ）の存在量は、かん流脳組織の免疫組織化学により決定された。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝３〜４匹のマウス）。結果は、総細胞／領域の割合として表される。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。老化マウスは、より多くのＧＦＡＰ＋細胞を有し、ＳＤＰ補充は、認知欠損障害のマーカーで高齢マウスのアストログリオーシスを減衰させる。
【０１４１】
図１８は、ミクログリア／マクロファージ特異的なカルシウム結合タンパク質であり、アクチン束化活性を有し、活性化されたミクログリアの膜のラフリングと食作用に関与するイオン化されたカルシウム結合アダプター分子１（ＩＢＡ１）の脳組織における存在量を示す。脳組織中のＩＢＡ１陽性細胞の存在量は、かん流脳組織の免疫化学により決定された。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝３〜４匹のマウス）。結果は、総細胞／領域の割合として表される。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。老化マウスは、ミクログリアの活性化を示し、ＳＤＰ補充は、それを妨げた。
【０１４２】
図１９は、微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）であり、ＣＮＳのニューロンに豊富に存在する総タウの脳組織における発現及び存在量を示す。いくつかの研究は、タウタンパク質がＡＤ患者において観察される神経変性に重要な役割を果たすことを示す。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝６〜７匹のマウス）。図１９Ａは、リアルタイムＰＣＲの結果を示す。図１９Ｂは、総タウ及びβアクチン（コントロール）のウェスタンブロットの代表的な画像を示す。図２０は、脳組織におけるタウの過剰なリン酸化の発現及び存在量を示し、これは、軸索輸送の調節における正常な神経機能を混乱させ、神経原線維変化の蓄積及び可溶性タウ及びｐ−タウの有毒種の蓄積をもたらし、認知機能低下とも関連する。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝６〜７匹のマウス）。図２０Ａは、リアルタイムＰＣＲの結果を示す。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。図２０Ｂは、ｐ−タウ及び総タウのウェスタンブロットの代表的な画像を示す。高齢ＳＡＭＰ８マウスは、認知障害に関連するリン酸化が他のタウ（ｐ−タウ）の存在量の増加を示した。ＳＤＰの補充により、加齢におけるｐ−タウ形成が減少した。
【０１４３】
図２１及び２２は、ｓＡＰＰ−β及びｓＡＰＰ−αの脳組織における発現及び存在量を示す。Ａβ４２は、高い凝集能力を有するβアミロイドタンパク質であり、従って、ＡＤ患者で観察されるニューロン変性の原因となる脳組織における老人性凝集体及びプラークを形成する。このペプチドは、βセクレターゼによるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の切断によって発生する。老化ＳＡＭＰ８マウスは、ＡＰＰ産生の増加を示す。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝４〜５匹のマウス）。図２１Ａ及び２２Ａは、それぞれ、ｓＡＰＰ−β及びｓＡＰＰ−αに関するリアルタイムＰＣＲの結果を示す。図２１Ｂ及び２２Ｂは、βアクチン（コントロール）及びｓＡＰＰ−β及びｓＡＰＰ−αのウェスタンブロットの代表的な画像を示す。ｓＡＰＰ−βの存在量は、老化マウスで増加した。ＳＤＰの補充によりこのタンパク質の蓄積が妨げられた。この観察結果は、このサプリメントが神経保護活性を有することを示唆する。
【０１４４】
図２３は、ＡＤの病院において重要な初期の役割を有すると広く考えられているβアミロイド（Ａβ４２）ペプチドの産生に関与するβセクレターゼであるＢＡＣＥ１の脳組織における発現を示す。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝６〜７匹のマウス）。リアルタイムＰＣＲの結果を示す。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。ＢＡＣＥ１の発現は、加齢の影響を受けず、ＳＤＰは、その発現を減少させた。
【０１４５】
図２４は、ＡＤ患者の海馬ニューロンで増加した量として見出されたタンパク質であるＡＤＡＭ１０の脳組織での発現を示す。結果は、平均±ＳＥＭとして表される（ｎ＝６〜７匹のマウス）。リアルタイムＰＣＲの結果を示す。共通の文字を有する平均は相違する、Ｐ＜０．１。ＡＤＡＭ１０の発現は、加齢中に増加し、ＳＤＰは、この年齢依存性の変化を妨げた。
【０１４６】
結論：
老化は、神経機能障害の減少によって特徴付けられる。ＳＤＰは、加齢に伴うシナプス前及びシナプス後の接続の喪失を防ぐために、ニューロンの完全性を維持する。高齢ＳＡＭＰ８マウスの中枢神経系において、ミクログリア及びアストログリオーシスが活性化される。ＳＤＰの補充により、ミクログリア及びアストログリアの活性化が妨げられた。高齢ＳＡＭＰ８マウスは、リン酸化型のタウ（ｐ−タウ）の増加及びｓＡＰＰ−βの形成を示した。両方のタンパク質は、認知障害に関連する。ＳＤＰの補充は、ＳＡＭＰ８マウスの加齢中にｐ−タウ及びｓＡＰＰ−βを減少させた。
【０１４７】
ＳＤＰは、認知欠損障害のマーカーを用いて、高齢動物の認知機能を改善する神経保護特性を有する。
【０１４８】
実施例５（予測的な）−血漿タンパク質／画分を摂取している個体における軽度の外傷性脳損傷後の認知障害の重症度の減少
ＴＢＩエピソードの１〜２か月前に血漿又は血漿画分を摂取すると、ＴＢＩに起因する神経学的及び生理学的変化の重症度が改善される。ＴＢＩから生じる神経学的及び生理学的変化の重症度は、測定値の絶対的変化の大きさ、及び／又は治癒に必要な時間及びＴＢＩから生じる神経学的及び生理学的変化のその後の改善の両方が含まれる。ＴＢＩの動物モデルの例は、液体パーカッション傷害（ｆｌｕｉｄ ｐｅｒｃｕｓｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）、皮質衝撃傷害（ｃｏｒｔｉｃａｌ ｉｍｐａｃｔ ｉｎｊｕｒｙ）、落錘衝撃加速傷害（ｗｅｉｇｈｔ ｄｒｏｐ−ｉｍｐａｃｔ ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ）、爆傷（ｂｌａｓｔ ｉｎｊｕｒｙ）を含む（Xiong Y, Mahmood A, Chopp M. Animal models of traumatic brain injury. Nature reviews Neuroscience. 2013;14(2):128-142. doi:10.1038/nrn3407）。運動機能、覚醒、探索行動、短期及び長期記憶機能の回復等の神経学的プロセスは、血漿タンパク質を摂取している対象において改善されるだろう。改善される生理学的パラメータには、血液脳関門の完全性、腫脹、頭蓋内圧、脳損傷の特定の生化学マーカーの変化の減少を含む。
【０１４９】
特定の組成物及び方法、有効性の理論、及び同様のものを参照して本発明を説明したが、本発明がそのような例示的な実施形態又は機構によって限定されることを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲によって定義されるように、本発明の範囲又は本質から逸脱することなく変更を行うことができることは、当業者には明らかであろう。そのような明白な変更及び変形は全て、添付の特許請求の範囲で定義される本発明の範囲内に含まれることが意図される。特許請求の範囲は、文脈が特に反対を示さない限り、意図された目的を達成するために有効な任意の順序で請求の範囲の要素及び工程を網羅することを意図する。
【図１】
2020520387.tif 000006
【図２】
2020520387.tif 000007
【図３】
2020520387.tif 000008
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
2020520387.tif 000023
【図１９】
2020520387.tif 000024
【図２０】
2020520387.tif 000025
【図２１】
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【図２２】
2020520387.tif 000027
【図２３】
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【図２４】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年1月16日(2020.1.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
利用可能なテストによって老年認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、パーキンソン病に起因する認知症、脳震盪、及び外傷性脳損傷からなる群から選択される認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の治療に使用するための動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物であって、ここで、前記動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物が、経口投与される、動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項２】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）の治療に使用するための請求項１に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項３】
前記テストが、以下：
セブンミニットスクリーン、ＩＱＣＯＤＥの短い形式、短縮メンタルテスト、ボウルズ−ラングレーテクノロジー／アシュフォードメモリーテスト、ケンブリッジ認知検査、１０ポイントのサンダーランドスケールを使用してスコア付けされたＣＤＴ、記憶欠損スクリーン、メンタル変容テスト、ミニコグ、ミニメンタルステータス検査、ショート及びスウィートスクリーニング装置、メンタルステータスのショートテスト、６項目認知欠損テスト、一般専門家の認知評価、ローランドユニバーサル認知症評価尺度、時間及び変更テスト、遅延場所合わせテスト、遅延場所非合わせテスト、遅延サンプル合わせテスト、遅延サンプル非合わせテスト、ＩｍＰＡＣＴテスト、標準化された脳震盪評価ツール及び脳震盪の標準化された評価、
からなる群から選択されたテストであることを特徴とする、請求項１又は２の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項４】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の運動活性増加の治療に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項５】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の短期記憶の改善に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項６】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の長期記憶の改善に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項７】
利用可能なテストによって認知欠損障害を有すると診断されたヒト又はコンパニオン動物の認知機能の低下の治療に使用するための請求項１〜３の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項８】
食物中で投与されることを特徴とする、請求項１〜７の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項９】
用量が、１日当たり５ｍｇ〜１００ｇの間であることを特徴とする、請求項１〜８の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項１０】
用量が、１日当たり治療されるヒト又は動物の体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ〜１ｇの間であることを特徴とする、請求項１〜９の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項１１】
乾燥形態であることを特徴とする、請求項１〜１０の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項１２】
液体形態であることを特徴とする、請求項１〜１０の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項１３】
ペースト形態であることを特徴とする、請求項１〜１０の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項１４】
前記動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物が、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、及びトリによって形成された動物の群に由来することを特徴とする、請求項１〜１３の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項１５】
前記コンパニオン動物が、イヌ、ネコ又はウマの群からの動物であることを特徴とする、請求項１〜１４の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【請求項１６】
ヒトの治療に使用することを特徴とする、請求項１〜１４の何れか１項に記載の動物血漿、血清由来免疫グロブリン濃縮物、又はその混合物。
【国際調査報告】
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