(57)【要約】  本発明は、化学式（Ｉ）の誘導体に関し、2020529451.tif 000043  (I)  式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｘ、及びｍは明細書に記載のとおりである。これらの化合物は、特にＳＴＡＴ３阻害剤として治療活性を有するので、がんなどの増殖性疾患又は病態の処置に有用である。これらの化合物を製造する方法、該方法において使用される新規中間体、これらを含む医薬組成物、及び治療におけるその使用は、本発明のさらなる態様を構成する。【選択図】なし
2020529451.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（Ｉ）の化合物、又は、その互変異性体若しくは薬学的に許容される塩であって、
【化１】
2020529451.tif 000035
(I)
式中、Ｘは酸素、硫黄、ＮＲ１１、又はＣＨ２であり、Ｒ１１はＨ又はアルキルであり、
Ｒ１は、アリール基、アラルキル基、ヘテロアリール基、又はヘテロアリールアルキル基であり、それらのすべてが、アルコキシカルボニル基、アリール基、アラルキル基、アリールアルコキシ基、ヘテロシクリル基、ヘテロシクロアルキル（heterocyloalkyl）基、又はヘテロシクロアルコキシ基から選ばれる１つ以上の基によって置換され、それらの置換基の任意のものが置換されていてもよく、
Ｒ２は式ＣＯＲ６の基であり、Ｒ６は水素又はＯＲ７基であり、Ｒ７は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アミノ、アルキルアミノ、又はジアルキルアミノであり、
Ｒ３は、水素、ハロ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、又は置換されていてもよい複素環式基であり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−４アルキル、又はＣＦ３基であり、
Ｒ５は、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ニトロ、シアノ、チオール、トリフルオロメチルから独立的に選ばれる置換基であり、
ｍは０、１、２、又は３である、
化合物、又は、その互変異性体若しくは薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｘは硫黄である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１は、それらの任意のものが１つ以上のアルキル基によって置換されていてもよい、アリール基、アラルキル基、アリールアルコキシ基、ヘテロシクリル基、ヘテロシクロアルキル（heterocyloalkyl）基、又はヘテロシクロアルコキシ基によって置換される、アリール基、アラルキル基、ヘテロアリール基、又はヘテロアリールアルキル基である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１は下位式（ｉ）の基であって、
【化２】
2020529451.tif 000036
式中、＊はアタッチメント点であり、
ｎは０又は１〜６の整数であり、
Ｒ８はアリール基又はヘテロアリール基であり、
Ｙは、結合、カルボニル基、又は、酸素、窒素、若しくは硫黄などのヘテロ原子、若しくはカルボニル基が挿入されていてもよい、１〜６個の原子のアルキレンスペーサ基であり、
Ｒ９はアリール基又は複素環式基であり、そのいずれもアルキル基によって置換されていてもよい、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
ｎは０又は１である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ８はフェニル基である、請求項４又は５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｙは、結合、Ｃ１−４アルキレン基、又はＣ１−４アルキルオキシ基である、請求項４〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ９は非芳香族複素環式基である、請求項４〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２はＣＯＯＲ７基であり、Ｒ７はＣ１−３アルキル基である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
ｍは０又は１である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ３は下位式（ｉｉ）の基であって、
【化３】
2020529451.tif 000037
(ii)
式中、＊はアタッチメント点であり、Ｚ１は−ＣＨ＝又は−Ｎ＝であり、Ｙ１は、結合、カルボニル基、又は、酸素、窒素、若しくは硫黄などのヘテロ原子、若しくはカルボニル基が挿入されていてもよい、１〜４個の炭素原子のアルキレン鎖であり、Ｒ１０は、置換されていてもよい複素環式基である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１０はモルフォリノ、ピペリジニル、ピペラジニル、又はＮ−アルキルピペラジニルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ４は水素又はメチルである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
表１の化合物１〜４０より選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物を調製する方法であって、
（ａ）Ｘ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びｍが請求項１に記載のとおりである化学式（ＩＩ）の化合物を、
【化４】
2020529451.tif 000038
(II)
Ｒ１が請求項１に記載のとおりである化学式（ＩＩＩ）の化合物
R1-NH2  (III)
と反応させること、及び任意的にＲ３基を異なる基に変換すること、又は、
（ｂ）Ｒ１、Ｒ３、及びＸが請求項１に記載のとおりであるとともに、Ｘ１が脱離基である、化学式（ＸＩ）の化合物を、
【化５】
2020529451.tif 000039
(XI)
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、及びｍが請求項１に記載のとおりである化学式（ＶＩＩ）の化合物
【化６】
2020529451.tif 000040
(VII)
と反応させること、及び任意的にＲ３基を異なる基に変換すること、又は、
（ｃ）Ｒ３が水素、ハロ、若しくはニトロ以外である化学式（Ｉ）の化合物を調製するため、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、及びｍが請求項１に記載のとおりであるとともにＱが脱離基、特にハロ（特にブロモ）若しくはトリフレートなどの鈴木脱離基である化学式（Ｘ）の化合物を、
【化７】
2020529451.tif 000041
(X)
Ｒ３が上述のとおりであるが水素、ハロ、若しくはニトロ以外である化学式（Ｖ）の化合物
R3-B(OH)2  (V)
と反応させること、並びに、
その後、化学式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を回収することを含む、方法。
【請求項１６】
前記化学式（ＩＩ）の化合物は、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、及びｍが上述のとおりであるとともにＱが脱離基、特にハロ（特にブロモ）又はトリフレートなどの鈴木脱離基である化学式（ＩＶ）の化合物を、
【化８】
2020529451.tif 000042
(IV)
Ｒ３が請求項１に記載のとおりであるが水素、ハロ、又はニトロ以外である化学式（Ｖ）のボロン酸
R3-B(OH)2  (V)
と反応させることによって調製される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１５に記載の化学式（ＩＩ）若しくは化学式（Ｘ）の化合物、又は請求項１６に記載の化学式（ＩＶ）の化合物。
【請求項１８】
治療に使用するための、請求項１に記載の化学式（Ｉ）の化合物、請求項１６に記載の化学式（ＩＶ）の化合物、又は請求項１５に記載の化学式（Ｘ）の化合物。
【請求項１９】
薬学的に許容される担体と組み合わせた請求項１に記載の化学式（Ｉ）の化合物、請求項１６に記載の化学式（ＩＶ）の化合物、又は請求項１５に記載の化学式（Ｘ）の化合物を含む医薬組成物。
【請求項２０】
化学式（Ｉ）の化合物を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ＳＴＡＴ３を阻害することで疾患又は病態を処置する方法であって、処置を必要とする患者に、有効量である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化学式（Ｉ）の化合物、若しくは請求項１８に記載の化合物、又は請求項１９若しくは２０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２２】
前記疾患は増殖性疾患である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記増殖性疾患はがんである、請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんなどの増殖性疾患又は病態の処置に使用される、特にＳＴＡＴ３阻害剤として治療活性を有する新規の化合物、並びにこの化合物を製造する方法、これを含む医薬組成物、及び治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発癌転写因子は、その阻害が腫瘍細胞の「リプログラミング」をし、アポトーシス又は悪性表現型からの分化を導き得ることから、抗がん治療におけるますます重要なターゲットとなっている。
【０００３】
ＳＴＡＴ（シグナル伝達兼転写活性化因子）タンパク質、特にＳＴＡＴ３、及び概ねＳＴＡＴ５も、増殖性疾患の処置及び特にがん治療の有望な分子ターゲットとして注目されている。ＳＴＡＴ３は、分化、炎症、増殖、及び腫瘍細胞浸潤を制御する遺伝子の転写を誘導し、その過剰発現が多くの腫瘍タイプで関連付けられている。
【０００４】
乳房、前立腺、並びに頭部及び頸部の腫瘍から多発性骨髄腫及び血液癌まで多様な悪性病変においてＳＴＡＴ３が恒常的に活性であることを数多くのインビボ研究が示していることから、これは新規がん治療の注目される分子ターゲットである。がん細胞はＳＴＡＴ３の活性化に依存することがあるものの、非がん細胞はその機能の喪失にかなり耐性があり、正常なシグナル伝達における重複性を反映していると考えらえる。このように、ＳＴＡＴ３阻害剤は高い治療的可能性を有する。
【０００５】
さらに、ターゲット治療への抵抗性が、その多くもまたＳＴＡＴに収束する他のシグナル経路の活性化から起こることがある。これは、これらのタンパク質の阻害が抵抗性を未然に防ぎ得るということを示唆するものである。ＳＴＡＴ３シグナル経路は、レセプターの二量体化及び活性化をもたらす成長因子又はサイトカインによって刺激される。レセプターテイルのリン酸化により、ＪＡＫキナーゼによってＴｙｒ７０５位（Ｃ末端近傍）においてリン酸化される未リン酸化ＳＴＡＴ３（uSTAT3）を動員するドッキング部位をつくり出す。そして、リン酸化ＳＴＡＴ３（pSTAT3）タンパク質は解放され、一方の単量体のＳＨ２ドメインの、他方のｐＴｙｒ含有ＰＹＬＫＴＫ配列への相互結合によってホモ二量体を形成する。そして、この二量体ＳＴＡＴ３：ＳＴＡＴ３複合体は核に移行し、核においてそのＤＮＡコンセンサス配列に結合して、がん細胞の生存及び増殖に重要な多くの遺伝子の転写を調節する。
【０００６】
治療活性を有するＳＴＡＴ３及び特にＳＴＡＴ３：ＳＴＡＴ３二量体化の低分子阻害剤が求められている。種々のピロリジン−又はピペリジン−スルホニル−トリル誘導体はＩＬ−６阻害剤として以前に試験されており（G. Zinzalla etal., Bioorg & Med Chem Lett., (2010), 20, 23, 7029-2031）、本明細書においてＲＨ−０６として示される化学式（Ａ）の化合物は、
【化１】
2020529451.tif 000003
新規の低分子阻害剤であるとして特定された。ＩＬ−６刺激後、該化合物がＳＴＡＴ３のリン酸化を選択的に阻害し、ＳＴＡＴ３ヌル細胞と比較してＳＴＡＴ３依存性細胞において選択的に細胞増殖抑制性であるということを、その執筆者らは報告した。出願人は、ＲＨ−０６が実際にＳＴＡＴ３二量体化を阻害することを見い出した（未記載の結果）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
出願人は、新規の一連の強力なＳＴＡＴ３阻害剤を設計し製造した。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明において、化学式（Ｉ）の化合物、又はその互変異性体若しくは薬学的に許容される塩が提供され、
【化２】
2020529451.tif 000004
式中、Ｘは酸素、硫黄、ＮＲ１１、又はＣＨ２であり、Ｒ１１はＨ又はアルキルであり、
Ｒ１は、アリール基、アラルキル基、ヘテロアリール基、又はヘテロアリールアルキル基であり、これらのすべてが、任意のものが置換されていてもよいアルコキシカルボニル基、アリール基、アラルキル基、アリールアルコキシ基、ヘテロシクリル基、ヘテロシクロアルキル（heterocyloalkyl）基、又はヘテロシクロアルコキシ基から選ばれる１つ以上の基によって置換され、
Ｒ２は、式ＣＯＲ６の基であり、Ｒ６は水素又はＯＲ７基であり、Ｒ７は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アミノ、アルキルアミノ、又はジアルキルアミノであり、
Ｒ３は、水素、ハロ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、又は置換されていてもよい複素環式基であり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−４アルキル、又はＣＦ３基であり、
Ｒ５は置換基であり、Ｒ５のそれぞれは、独立的に、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルキル（メチル又はエチルなど）、Ｃ１−４アルコキシ（メトキシなど）、ハロ、アミノ、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ニトロ、シアノ、チオール、トリフルオロメチルから選ばれ、
ｍは０、１、２、又は３である。
【０００９】
化学式（Ｉ）の化合物は、新規の一連のＳＴＡＴ３：ＳＴＡＴ３二量体化低分子阻害剤を表し、該阻害剤はこのシグナル経路を下方調節可能な強力かつ選択的な薬剤として作用する。この化合物は、ＳＴＡＴ３が関連するとされる病態の処置における、特にがんなどの増殖性疾患の処置における治療用途を有する。
【００１０】
理論に縛られるものではないが、化学式（Ｉ）の化合物がＳＴＡＴ３のＳＨ２ドメインのヘキサペプチドポケットと相互作用することでＳＴＡＴ３二量体化を阻害すると考えられる。これは、インシリコのモデル研究で確認されている。
【００１１】
本明細書において使用するとき、「アルキル」という用語は、特に記載のない限り、例えば１〜６個の炭素原子、特に１〜４個の炭素原子など、１〜１０個の炭素原子を適切に含む、直線状又は分岐状であってもよい炭素原子の飽和鎖を指す。「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、特に記載のない限り、例えば２〜６個の炭素原子、特に２〜４個の炭素原子など、２〜１０個の炭素原子を適切に含む、直線状又は分岐状であってもよい炭素原子の不飽和鎖を指す。「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキル基を指し、アルキルは上述のとおりである。「シクロアルキル」という用語は、１つ以上の環状構造を形成する環式アルキル基を指す。
【００１２】
「複素環式基」という用語は、その少なくとも１つが酸素、硫黄、又は窒素から選ばれるヘテロ原子である３〜２０個の原子を含む飽和又は不飽和の環状構造を指す。環は、実質的に芳香族あってもよく、又は、縮合環の場合に、芳香環及び非芳香環の双方を含んでもよい。環は、単環であってもよく、又は縮合二環式系若しくは縮合三環式系を含む。複素環式基の特定の例は、４〜７個の環原子、特に５〜６個の環原子を含む単環を含む。好適に、複素環は、特に窒素又は酸素から選ばれてもよい１又は２個のヘテロ原子を含む。飽和であるそうした基の例は、ピロリジン基、テトラヒドロフラン基、イミダゾリジニル基、ピラゾリジニル基、オキサゾリジニル基、イソオキサゾリジニル基、チアゾリジニル基、イソチアゾリジニル基、ピペラジニル基、テトラヒドロピラニル基、モルフォリニル基、チオモルフォリニル基、又はジオキサニル基を含む。不飽和及び特に芳香族の複素環式基は、「ヘテロアリール」の定義において以下に例示される。
【００１３】
「ヘテロアリール」という用語は、特に５〜２０個の原子の芳香族複素環式基を指す。特定の例は、ピロリル、フリル、チオフェニル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ジチアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピラニル、チオピラニル、ジアジニル（diazinyl）、オキサジニル（oxazinyl）、チアジニル（thiazinyl）、ジオキシニル（dioxinyl）、トリアジニル（triazinyl）、又はテトラジニル（tetrazinyl）などの、上述のような少なくとも１つのヘテロ原子を含む５員又は６員の芳香環である。
【００１４】
「アリール」基という用語は、芳香族炭素環式基を指す。これは、フェニル又はナフチルなど１つ以上の縮合環を含み得る。
【００１５】
「アラルキル」という用語は、ベンジルなどアリール置換基を有するアルキル基を指す。
【００１６】
「ハロ」という用語は、フルオロ基、クロロ基、ブロモ基、又はヨード基を指す。
【００１７】
本明細書において使用するとき、「薬学的に許容される塩」という用語は、非毒性の生理学的に許容される塩を指す。特定の例は、ナトリウム塩、リチウム塩、若しくはカリウム塩などのアルカリ金属塩、アルミニウム塩、カルシウム塩、若しくはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、又はアンモニウム塩を含む。
【００１８】
特定の実施形態において、Ｒ１は、それらの任意のものが置換されていてもよい、アリール基、アラルキル基、アリールアルコキシ基、ヘテロシクリル基、ヘテロシクロアルキル（heterocyloalkyl）基、又はヘテロシクロアルコキシ基によって置換される、アリール基、アラルキル基、ヘテロアリール基、又はヘテロアリールアルキル基である。アリール基、アラルキル基、アリールアルコキシ基、ヘテロシクリル基、ヘテロシクロアルキル基、又はヘテロシクロアルコキシ基の適切な任意の置換基は、メチルを含むＣ１−４アルキル基などの１つ以上のアルキル基である。
【００１９】
特定の実施形態において、Ｘ基はＳ又はＯであり、特にＳである。
【００２０】
ＸがＮＲ１１基であるとき、Ｒ１１は、適宜水素又はメチル若しくはエチルなどのＣ１−４アルキルである。
【００２１】
特定の実施形態において、Ｒ１は下位式（ｉ）の基であり、
【化３】
2020529451.tif 000005
式中、＊はアタッチメント点であり、
ｎは０又は１〜６の整数であり、
Ｒ８はアリール基又はヘテロアリール基であり、
Ｙは、結合、カルボニル基、又は、酸素、窒素、若しくは硫黄などのヘテロ原子、若しくはカルボニル基が挿入されていてもよい、１〜６個の原子のアルキレンスペーサ基であり、
Ｒ９はアリール基又は複素環式基であり、そのいずれもアルキル基によって置換されていてもよい。
【００２２】
特定の実施形態において、ｎは、０、１、又は２であり、０又は１などである。
【００２３】
特定の実施形態において、Ｒ８はフェニル基などのアリール基である。
【００２４】
好適に、Ｙは、結合、メチレン基若しくはエチレン基などのＣ１−４アルキレン基、又は、エチレンオキシなどのアルキレンオキシ基である。
【００２５】
特定の実施形態において、Ｒ９は、非芳香族複素環式基、特にモルフォリニル基、ピペリジル基、ピペラジニル基、又はＮ−メチルピペラジニル基である。
【００２６】
特定の実施形態において、下位式（ｉ）の基は下位式（ｉａ）の基であり、
【化４】
2020529451.tif 000006
式中、ｎ及びＹは上述のとおりであり、ＺはＣＨ２、Ｏ、又はＮＲ１０基であり、Ｒ１０は水素又はメチルである。
【００２７】
下位式（ｉａ）の基の特定の例は、２−モルフォリノエトキシフェニルである。他の特定の例は、ピペリジン−１−イルメチル−ベンジルである。
【００２８】
特定の実施形態において、Ｒ２はカルボン酸エステル基である。特に、Ｒ２はＣＯＯＲ７基であり、Ｒ７はＣ１−３アルキル基、特にメチルである。
【００２９】
特定の実施形態において、ｍは０又は１、特に０である。
【００３０】
置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、又は置換されていてもよい複素環式基のＲ３の適切な任意の置換基は、１つ以上のアルキル基によって置換されていてもよいニトリル又は複素環式基を含む。
【００３１】
特定の実施形態において、Ｒ３は下位式（ｉｉ）の基であり、
【化５】
2020529451.tif 000007
(ii)
式中、＊はアタッチメント点であり、Ｚ１は−ＣＨ＝又は−Ｎ＝であり、Ｙ１は、結合、カルボニル基、又は、酸素、窒素、若しくは硫黄などのヘテロ原子、若しくはカルボニル基が挿入されていてもよい、１〜４個の炭素原子のアルキレン鎖であり、Ｒ１０は、置換されていてもよい複素環式基、特に、モルフォリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、又はｎ−メチルピペラジニルなどのＮ−アルキルピペラジニルなどの非芳香族複素環式基である。
【００３２】
特定の実施形態において、置換基Ｙ１−Ｒ１０は、アリール又はヘテロアリール環のパラ位に位置する。
【００３３】
他の実施形態において、置換基Ｙ１−Ｒ１０は、アリール又はヘテロアリール環のメタ位に位置する。
【００３４】
特定の実施形態において、Ｚ１は−ＣＨ＝である。
【００３５】
他の実施形態において、Ｚ１は−Ｎ＝である。
【００３６】
下位式（ｉｉ）の基の特定の例は、下位式（ｉｉａ）の化合物であり、
【化６】
2020529451.tif 000008
(iia)
式中、Ｚ１は上述のとおり、特に−ＣＨ＝又はＮであり、Ｒ１２は、−ＣＨ２、ＮＨ、又はＮ−メチルであり、＊はアタッチメント点である。
【００３７】
下位式（ｉｉ）又は（ｉｉａ）の基の特定の例は、４−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イル又は４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イルを含む。
【００３８】
他の特定の例は、（ピペリジン−１−イル）フェニルである。他の実施形態において、Ｒ３はブロモなどのハロ基である。
【００３９】
特定の実施形態において、Ｒ４は水素又はメチル、特にメチルである。
【００４０】
化学式（Ｉ）の化合物の例は、以下の表１に示される。
【表１】
2020529451.tif 000009
2020529451.tif 000010
2020529451.tif 000011
2020529451.tif 000012
2020529451.tif 000013
2020529451.tif 000014
2020529451.tif 000015
2020529451.tif 000016
2020529451.tif 000017
【００４１】
化学式（Ｉ）の化合物は、本技術分野において理解されるような従来の方法を使用して調製することができる。本発明の特定の実施形態において、化学式（Ｉ）の化合物は、Ｘ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びｍが上述のとおりである化学式（ＩＩ）の化合物を、
【化７】
2020529451.tif 000018
(II)
Ｒ１が上述のとおりである化学式（ＩＩＩ）の化合物
R1-NH2  (III)
と反応させることで適切に調製される。反応は、０〜５０℃の範囲の温度で、及び簡便に周囲温度で、ジメチルホルムアミド（DMF）などの有機溶媒において適切に行われる。反応は、ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）及びジイソプロピルカルボジイミド（DIC）又はジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）などのカップリング剤の存在下において行うことができる。反応は、化合式（Ｉ）の化合物又はその塩の適切な収率を得るため、例えば１２〜２４時間の長時間行うことができる。必要であれば、Ｒ３基は、例えば以下に示すような異なる基に変更することができる。
【００４２】
Ｒ３が水素、ハロ、又はニトロ以外である化学式（ＩＩ）の化合物は、本技術分野において理解されるようなＣ−Ｃ結合形成反応を使用して調製することができる。本発明の特定の実施形態において、化学式（ＩＩ）の化合物は、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、及びｍが上述のとおりであるとともにＱが脱離基、特にハロ（特にブロモ）又はトリフレートなどの鈴木脱離基である、化学式（ＩＶ）の化合物を、
【化８】
2020529451.tif 000019
(IV)
Ｒ３が上述のとおりである化学式（Ｖ）のボロン酸
R3-B(OH)2  (V)
と反応させることで形成される。反応が行われる条件は、適宜、鈴木カップリング反応において従来より使用されるものである。例えば、反応は、過剰な炭酸カリウムなどのカーボネート及びＰｄ（ＰＰｈ３）などのパラジウム触媒の存在下で、トルエン又はベンゼンなどの有機溶媒において行われる。反応は、２０〜１００℃の範囲の温度で、及び簡便にマイクロ波条件下で、行うことができる。
【００４３】
化学式（ＩＶ）の化合物は、Ｘ及びＱが上述のとおりであるとともにＸ１がクロロ、フルオロなどのハロ基、又はメシレート若しくはトシレートなどの脱離基である化学式（ＶＩ）の化合物を、
【化９】
2020529451.tif 000020
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、及びｍが上述のとおりである化学式（ＶＩＩ）の化合物
【化１０】
2020529451.tif 000021
(VII)
と反応させることで適切に調製される。反応は、４−ジメチルアミノピリジン（DMAP）などの求核触媒の存在下で、例えばメタノールであるアルキルアルコールなどの有機溶媒において適切になされる。０〜５０℃の温度及び簡便に周囲温度が用いられる。
【００４４】
化学式（ＶＩ）の化合物は、Ｘ及びＱが上述のとおりである化学式（ＶＩＩＩ）の化合物を、
【化１１】
2020529451.tif 000022
Ｘ１が上述のとおりである化学式（ＩＸ）の化合物
X1SO3H  (IX)
と反応させることで調製することができる。反応は、上昇温度において、及び簡便に溶媒の還流温度において、例えばメタノールであるアルキルアルコールなどの有機溶媒において行われる。
【００４５】
化学式（Ｉ）の化合物を調製する他の方法において、Ｒ１、Ｒ３、Ｘ、及びＸ１が上述のとおりである化学式（ＸＩ）の化合物を、
【化１２】
2020529451.tif 000023
(XI)
上述のような化学式（ＶＩＩ）の化合物と反応させる。適切な反応条件は、化学式（ＶＩ）及び（ＶＩＩ）の化合物から化学式（ＩＶ）の化合物を製造するために使用されるものと類似する。また、Ｒ３基は、必要であれば、異なるそうした基に変更することができる。
【００４６】
あるいは、Ｒ３が水素、ハロ、又はニトロ以外である化学式（Ｉ）の化合物を製造するため、Ｘ、Ｑ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、及びｍが上述のとおりである化学式（Ｘ）の化合物を
【化１３】
2020529451.tif 000024
(X)
上述のような化学式（Ｖ）の化合物と反応させる。適切な反応条件は、化学式（ＩＶ）及び（Ｖ）の化合物から化学式（ＩＩ）の化合物を製造するために使用されるものと類似する。
【００４７】
Ｑがブロモなどのハロである化学式（Ｘ）の化合物は、化学式（Ｉ）の化合物であるので、修飾を必要としないことがある。しかしながら、特定の実施形態において、Ｒ３がハロである化学式（Ｉ）の化合物は、Ｒ３が上述の下位式（ｉｉ）の基などの異なる基である化学式（Ｉ）の化合物に変換される。特に、Ｒ３がハロである化学式（Ｉ）の化合物の、Ｒ３が異なるそうした基である化学式（Ｉ）の化合物への変換は、上述のように、例えば化学式（Ｖ）のボロン酸で鈴木カップリング反応によってなすことができる。化学式（Ｘ）の化合物は、上述のような化学式（ＩＶ）の化合物を上述のような化学式（ＩＩＩ）の化合物と反応させることで適切に調製される。適切な反応条件は、化学式（ＩＩ）の化合物を化学式（ＩＩＩ）の化合物と反応させることについて上述されるものと類似する。あるいは、これは、Ｒ１、Ｑ、Ｘ、及びＸ１が上述のとおりである化学式（ＸＩＩ）の化合物を、
【化１４】
2020529451.tif 000025
(XII)
上述のような化学式（ＶＩＩ）の化合物と反応させることで調製することができる。
【００４８】
化学式（ＩＩ）、（ＩＶ）、及び（Ｘ）の化合物は新規の化合物であり、ゆえに本発明のさらなる態様を構成する。これらは、それ自体でＳＴＡＴ３阻害活性を有し得、特に、化学式（ＩＶ）及び（Ｘ）の化合物、並びに、これらを含む医薬組成物、並びに、該化合物を使用してヒト又は動物における増殖性疾患又は病態を処置する方法を含む治療におけるそれらの使用が、本発明のさらなる態様を構成する。
【００４９】
化学式（ＩＩＩ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＸＩ）、又は（ＸＩＩ）の化合物は既知の化合物である、又は従来法によって既知の化合物から調製可能である。
【００５０】
本発明の化合物は、ＳＴＡＴ３を阻害するために使用することができるので、例えばがんなどの増殖性疾患又は病態の処置において、治療に有用である。
【００５１】
治療における使用について、化合物は、適宜医薬組成物の形態である。
【００５２】
したがって、さらなる態様において、薬学的に許容される担体と組み合わせた化学式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物が提供される。
【００５３】
本明細書に使用するとき、「医薬組成物」又は「薬学的に許容される担体」という用語は、以下にさらに説明するように組成物が非ヒト動物を処置するために使用されるとき、それぞれ獣医学用組成物及び獣医学的に許容される担体を含む。
【００５４】
適切な医薬組成物は、固体剤形又は液体剤形である。医薬組成物は、非経口、経口、又は局所の投与などの任意の簡便な経路による投与、又は吸入若しくは吹送法による投与のために構成することができる。薬学的に許容される担体は、生理学的に許容可能であるとともに有効成分に適合する希釈剤又は賦形剤を含むことができる。
【００５５】
非経口用組成物は、例えば皮下又は静脈内の注射のために調製される。非経口用組成物は、液剤又は懸濁剤とすることができる、又は、注射の前に液体内の溶解又は懸濁に適する固体剤形とすることができる。適切な希釈剤及び賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、又はグリセロールなど、及びそれらの組合せである。さらに、望まれるなら、組成物は、湿潤剤又は乳化剤、安定化剤又はｐＨ緩衝剤などの少量の補助物質を含むことができる。
【００５６】
経口用製剤は、固体剤形又は液体剤形とされ、液剤、シロップ剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性製剤、又は散剤とすることができる。経口用製剤は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの通常使用される賦形剤を含む。
【００５７】
局所用製剤は、一般に坐剤又は鼻腔内エアロゾルの剤形をとることができる。坐剤について、従来の結合剤及び賦形剤は、例えばポリアルキレングリコール又はトリグリセリドを含むことができ、そうした坐剤は化学式（Ｉ）の化合物を含む混合物から成形することができる。
【００５８】
よりさらなる態様において、本発明は、ＳＴＡＴ３を阻害することで疾患又は病態を処置する方法を提供し、該方法は処置を必要とする患者に、有効量の化学式（Ｉ）の化合物、又は化学式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を投与することを含む。
【００５９】
投与される化学式（Ｉ）の化合物の量は、通常の臨床診療に従って変化するものであり、通常の臨床診療に従って、使用される試薬の特性、患者の大きさ及び健康状態、処置される病態の特性などの要因に対応する。典型的には、化学式（Ｉ）の化合物の１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、例えば２ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇなどの範囲における投与量が、適切な作用を生じると考えられる。
【００６０】
患者は、ヒト、並びに例えばマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ラクダ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、及びサルやチンパンジーを含むがこれらに限定されない非ヒト霊長類を含む非ヒト動物を含む、任意の動物とすることができる。特定の実施形態において、処置される患者はヒトである。
【００６１】
特に、ＳＴＡＴ３の阻害が有利であり、ゆえに本発明の方法を使用する処置の影響を受けやすい疾患は、増殖性疾患である。
【００６２】
増殖性病態の例は、新生物及び腫瘍（例えば組織球腫、神経膠腫、星細胞腫、骨腫）、がん（例えば乳がん、膵がん、前立腺がん、頭部腫瘍及び頸部腫瘍、子宮頸がん、結腸がん、肺がん、胃がん、腎がん、膀胱がん、腸がん、小細胞肺がん、消化器がん、卵巣がん、精巣がん、肝がん、脳がん、肉腫、骨肉腫、カポジ肉腫、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、及び白血病などの血液がん）、乾癬、骨疾患、線維増殖性障害（例えば結合組織のもの）、並びにアテローム性動脈硬化を含むがこれらに限定されない良性細胞増殖、前悪性細胞増殖、及び悪性細胞増殖を含むがこれらに限定されない。
【００６３】
特定の実施形態において、増殖性疾患はがんである。そうしたがんの例は、乳がん、膵がん、前立腺がん、頭部腫瘍及び頸部腫瘍、子宮頸がん、結腸がん、肺がん、胃がん、腎がん、膀胱がん、腸がん、多発性骨髄腫、及び白血病などの血液がんを含むことができる。
【００６４】
よりさらなる態様において、本発明は、増殖性疾患の処置に使用される化学式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００６５】
特定の実施形態において、増殖性疾患はトリプルネガティブがんなどの乳がんである。
【００６６】
他の実施形態において増殖性疾患は白血病である。
【００６７】
出願人は、選択的でより強力なＳＴＡＴ３ＳＨ２ドメインターゲティング阻害剤が、ＳＨ２ドメインと相互作用することが以前に示されている複数の小ファーマコフォアを組み合わせることで達成され得るという中心的仮説に基づいて、種々の化合物を開発した。様々な構造的足場に属するとともにインシリコの方法を使用して設計された種々の化合物は、正常に合成され、分光学的技術を使用して特性づけられ、その後無細胞アッセイ及び細胞アッセイの双方で評価された。本発明の化合物は、有意に大きいＳＴＡＴ３二量体化阻害及びＭＤＡ  ＭＢ  ２３１ＳＴＡＴ３依存性細胞株における有意な細胞毒性を示した。
【００６８】
本発明の特定の化合物は、ＳＴＡＴ３依存性遺伝子の下方調節におけるＳＴＡＴ３二量体化阻害の作用を理解するためＲＴ−ＰＣＲによって評価された。これらの化合物は、ＳＴＡＴ３自体、またＳＴＡＴ３依存性遺伝子Ｂｃｌ−２、サイクリンＤ１、及びファスシンの著しい下方調節を誘発したが、ＳＴＡＴ１を下方調節しなかった。これらの結果は、薬剤の存在下におけるＳＴＡＴ３依存性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の生存度の低下とＳＴＡＴ３依存性遺伝子の下方調節との間の関係の可能性を示唆するものである。ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨの下方調節は観察されなかった。
【００６９】
また、本発明の化合物は、ＭＤＡ  ＭＢ２３１腫瘍を保持する免疫無防備状態のマウスにおいて予備的なインビボ有効性アッセイで評価し、有意な腫瘍増殖阻害特性を有することが分かった。
【００７０】
この明細書の詳細な説明及び特許請求の範囲において、「含む」及び「含有」という用語、並びに例えば「含むこと」及び「含む」などのその用語の変形は、「含むが限定されない」ということを意味し、他の成分、構成物、又はステップを除外するものではない。さらに、文脈において要求されない限り単数形は複数形を含み、特に不定冠詞が使用される場合、文脈において要求されない限り、明細書は単数形と同じく複数形も考慮するとして理解される必要がある。
【００７１】
本発明の各態様の好ましい特徴は、他の態様のいずれかに関して記載されるようなものであってもよい。本願の範囲内にて、前述の段落、特許請求の範囲、並びに／又は以下の詳細な説明及び図面に述べられる種々の態様、実施形態、実施例、及び他の態様、特にその個々の特徴は、独立的に又は任意の組合せにおいてなされ得るということが明らかに意図される。すなわち、すべての実施形態及び／又は任意の実施形態の特徴は、そうした特徴が矛盾しない限り、任意の方法で、及び／又は任意の組合せで組み合わせられる。
【００７２】
ここで、本発明の１つ以上の実施形態を添付の図面に関して一例のみとして記載する。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】図１は、ＳＴＡＴ３依存性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株におけるＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ３依存性遺伝子の発現における本発明の化合物の作用を示す一連のＲＴ−ＰＣＲゲルを示す（レーン１、未処置細胞；レーン２、８時間の５００μｇ／ｍｌのＬＰＳ；レーン３、８時間の５００μｇ／ｍｌのＬＰＳ、８時間の２５μＭ  １）。
【図２】図２は、一般的毒性のマーカーとしてのマウスの体重における本発明の化合物の作用を示す。
【図３】図３は、未処置のコントロールマウスと比較したリガンド６．６での腫瘍保持マウスの処置における作用を示す。垂直の破線で示すように、投薬を１、３、及び５日目に行った。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
［実施例１］
［［表１の化合物２０の合成］］
以下の反応スキームを使用して化合物２０を調製した。
【化１５】
2020529451.tif 000026
【００７５】
ステップ１  （ｂ）（メチル４（メチルアミノ）ベンゾエート）の合成
０℃及びＮ２の存在下において無水メタノール（0.136 mmol）内のかく拌した４−メチルアミノ安息香酸溶液（ａ）（1.0 g, 6.62 mmol,1 eq.）に塩化チオニル（0.72 mL, 9.92mmol, 1.50 eq.）を添加した。氷浴で５分後、反応混合物を３時間還流した。溶液を、０℃においてＮａＨＣＯ３でクエンチし、エチルアセテートで抽出した（酸1mmolあたり10mL）。有機層をかん水で洗浄して、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、生成物（ｂ）をカラムクロマトグラフィー（溶出剤DCM）によって８５％収率の白色固体として精製した。
【００７６】
FT-IR (Neat): ν (cm-1) = 3389, 2946, 2359, 1684, 1596,1436, 1273, 1169, 833, 770; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δppm 7.85 - 7.91 (m, 2H), 6.52 - 6.59 (m, 2H), 4.19 (br. s, 1H), 3.86 (s, 3H),2.89 (s, 3H) ; 13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ 167.67,153.18, 131.80, 131.80, 118.56, 111.39, 111.39, 51.79, 30.45; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C9H11NO2 =165.0790, found =165.0715.
【００７７】
ステップ２  （ｄ）（５−ブロモ−４−（クロロスルホニル）チオフェン−２−カルボン酸）の合成
−５℃及びＮ２の存在下において、激しくかく拌した５−メチル−２−チオフェン（thiophine）カルボン酸溶液（ｃ）(1g, 4.83 mmol, 1eq.)に、クロロスルホン酸（3.86 mL, 57.96mmol, 12 eq.）を液滴で添加した。溶液を室温で４０時間かく拌し、そこに２５０ｇの氷をゆっくりと加えることでクエンチした。生成物（ｄ）を沈殿させ、ろ過によって採取し、８５％収率の白色固体としてＣａＣｌ２上で一晩乾燥させた。
【００７８】
FT-IR (Neat): ν (cm-1) =3091, 2361, 1686, 1522, 1373,1253, 1177, 1013, 874, 750; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δppm 9.02 (s, 1H, COOH), 8.22 (s, 1H, H3); 13C-NMR (100MHz, CDCl3): δ 160.5 (COOH), 142.5, 134.0, 133.6, 127.7; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C5H2BrClO4S2 = 303.8266,found = 305.8256.
【００７９】
ステップ３  （ｅ）（５−ブロモ−４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）チオフェン−２−カルボン酸）の合成
ＭｅＯＨにおいて室温及びＮ２の存在下において、かく拌した（ｂ）溶液（500 mg, 1.64mmol, 1 eq.）に、ＤＭＡＰ（99.96 mg, 1818.19μmol, 0.5 eq.）を添加した。３０分後、（ｄ）（810.93 mg, 4.91mmol, 3 eq.）を添加した。溶液を室温で５時間かく拌させた。飽和かん水を添加して反応をクエンチし、混合物をＤＣＭ（X3）で抽出した。有機相を無水ＭｇＳＯ４によって乾燥させ、生成物（ｅ）を溶出剤としてのＤＣＭでカラムクロマトグラフィーによって白色固体として単離した。（収率80%）ＮＭＲ及び質量分析によって生成物の構造を明らかにした。ＨＭＢＣ及びＮＯＥＳＹを含むＮＭＲによって単一の位置異性体の存在が確認された。
【００８０】
FT-IR (Neat): ν (cm-1) =1705, 1604, 1408, 1277, 1175,1059, 879, 772, 700; 1H-NMR (400 MHz, Methanol-d): δ ppm 7.96- 8.00 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.36 - 7.40 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.36 (s, 3H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 164.63, 159.75, 156.79, 140.83, 139.48, 134.76,131.74, 131.56, 127.57, 121.89, 117.23, 115.48, 56.72, 27.26; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C14H12BrNO6S2 =432.9289, found = 432.9381.
【００８１】
ステップ４  （ｆ）（４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸）の合成
化合物（ｅ）（50 mg, 115.13μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3 mL）とともにマイクロ波バイアルに入れた。１−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］ピペリジン（39.68 mg,138.16μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（47.74 mg, 345.40 μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（13.30 mg, 11.51μmol, 0.1 eq.）をＮ２の存在下で添加し、マイクロ波照射のもと１００℃で２０分間インキュベートした。溶液を水でクエンチした。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを２／３にし、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物（ｆ）をカラムクロマトグラフィー（１％メタノールを含むEt2O）によって６０％収率の黄色固体として精製した。
【００８２】
FT-IR (Neat): ν (cm-1) = 2935, 2360, 1714, 1603, 1439, 1279, 1114, 885, 773, 698; 1H-NMR(400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 7.86 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.8 Hz,2H), 7.23 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.76 (d,J = 8.8 hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.19 - 3.24 (m, 4H), 3.05 (s, 3H), 1.64 -1.72 (m, 6H); 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d): δ 163.89,162.23, 150.66, 143.52, 142.11, 135.50, 134.19, 131.23, 130.67, 128.59, 128.34,126.00, 119.84, 119.01, 113.60 (2C), 110.96, 110.61, 61.10 (2C), 52.94, 28.99,25.81, 25.08, 22.41; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C25H26N2O6S2= 514.1232, found  =  514.1296.
【００８３】
ステップ５  表１の化合物２０（メチル４−（（５−（（１−ベンジル−１Ｈ−インドール−５−イル）カルバモイル）−Ｎ−メチル−２−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
化合物（ｆ）（20 mg, 38.86 μmol, 1 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。１−ベンジル−１Ｈ−インドール−５−イルアミン（10.37 mg, 46.64μmol, 1.2 eq.）、ＥＤＣハイドロクロライド（14.90mg, 77.73μmol, 2 eq.）、及びＤＭＡＰ（11.87 mg, 97.16μmol, 2.5 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１．５時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物（２０）をカラムクロマトグラフィー（溶出剤ヘキサン：エチルアセテート）によって６０％収率の黄色固体として精製した。
【００８４】
FT-IR (Neat): ν (cm-1) =2356, 1738, 1540, 1361, 1217, 796,628; 1H NMR (400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 8.23 (s, 1H), 7.93 (s, 1H),7.82 - 7.87(m, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.37 (s, 2H), 7.32 - 7.35 (m, 2H), 7.30 (d, J= 7.07 Hz, 3H), 7.20 (d, J = 7.07 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.84 Hz,2H), 6.82 (d, J = 8.84 Hz, 2H), 6.57 (d, J = 3.03 Hz, 1H), 5.54(s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.55 (q, J = 7.07 Hz, 4H), 3.16 (s, 3H), 1.67 -1.81 (m, 6H);  13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 167.97, 156.94,147.41, 147.02, 144.67, 139.71, 139.46, 137.87, 136.19, 132.10, 131.63, 130.37(2C), 129.70 (2C), 128.82, 128.27, 125.34, 124.21, 123.17, 122.35, 120.57,120.49, 119.65, 118.42, 114.41 (2C), 112.59 (2C), 107.85, 106.43, 104.12,67.87, 61.57, 56.59, 55.78, 37.15, 25.57, 23.26, 20.02; HRMS-ESI (m/z): calcd.for C40H38N4O5S2 =718.2284, found = 718.2367.
【００８５】
［実施例２］
［［表１の化合物２１〜４０の合成］］
以下の反応スキームを使用して化合物２１〜４０を調製した。
【化１６】
2020529451.tif 000027
実施例１に記載される作業を使用して、主要な中間体（ｅ）を大量に合成した。全部で６．５ｇ（ｅ）を合成し、インシリコ研究によって選択した１９アミンフラグメントとカップリングさせた。
【００８６】
実施例２（ａ）−化合物２１（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（184.79 mg, 425.51μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。４−（ピペリジン−１−イル）アニリン（50 mg, 283.67μmol, 1 eq.）、ＥＤＣＩ（108.76 mg,567.35, 2 eq.）、及びＤＭＡＰ（86.64 mg, 709.19μmol, 2.5 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１．５時間後、反応を終了させた。反応混合物をＳＣＸ−２カートリッジに通過させて（5.0 gm）、カートリッジをＤＣＭ（3x）及びＤＭＦ（3x）で２回洗浄して、最後にＭｅＯＨ（2x）で洗浄した。生成化合物２１を、ＭｅＯＨにおける５．０ｍｌの２ＭのＮＨ３を使用してカートリッジから放出し、減圧中で濃縮して茶色固体を得た（収率40%）。
【００８７】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3368, 2918, 2849, 1709, 1644, 1602, 1536, 1431, 1419, 1344, 1325, 1278, 1128;1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.00 - 8.03 (m, 2H), 7.42(d, J = 8.84 Hz, 3H), 7.31 (d, J = 8.59 Hz, 2H), 6.90 - 6.93 (m,2H), 3.92 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 3.13 - 3.17 (m, 4H), 1.68 - 1.75 (m, 6H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 166.13, 163.16, 145.79, 144.67, 142.86, 138.70,133.68, 130.59, 129.18, 126.08, 122.03, 121.64 (2C), 121.24, 116.78, 115.62,115.20, 114.73, 52.31 (2C), 50.69, 30.92, 25.74, 24.22 (2C); HRMS-ESI (m/z):calcd. for C25H26BrN3O5S2= 591.0497, found = 591.0570.
【００８８】
実施例２（ｂ）−化合物２２（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（３−モルフォリノフェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（146.20 mg, 336.64μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。３−モルフォリノアニリン（40 mg, 224.43μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（60.65 mg, 448.86μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（60.82 μL, 392.75μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせてＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物２２をカラムクロマトグラフィー（溶出剤ヘキサン：エーテル  １：１）によって８３％収率の白色固体として精製した。
【００８９】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3337, 2968, 2872, 1723, 1658, 1606, 1548, 1497, 1430, 1361, 1272, 1249, 1167,1146, 1129; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.41 (s,1H),  7.99 - 8.02 (m, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.39 - 7.41 (m, 1H), 7.30 - 7.33(m, 2H), 7.24 (t, J = 8.18 Hz, 1H), 7.00 (dd, J = 7.93, 1.38 Hz,1H), 6.71 (dd, J = 8.18, 2.14 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.86 (d, J =4.78 Hz, 4H), 3.38 (s, 3H), 3.16 - 3.20 (m, 4H); 13C-NMR (100 MHz,CDCl3): δ 171.19, 160.57, 155.42, 144.63, 143.63, 138.13, 136.56,134.05, 130.76, 130.56 (2C), 129.10, 126.01, 123.64, 114.29 (2C), 112.17,109.54, 66.81, 66.63, 52.32, 49.04, 42.26, 23.43; HRMS-ESI (m/z): calcd.for C24H24BrN3O6S2 =593.0290, found = 593.0361.
【００９０】
実施例２ｃ−化合物２３（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（モルフォリノメチル）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（169.41 mg, 390.10μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。４−（モルフォリノメチル）アニリン（50 mg, 260.07μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（70.28 mg, 520.14μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（71.26 μL, 455.12μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。２時間後、反応を終了させた。反応混合物をＳＣＸ−２カートリッジに通過させて（吸着剤量は生成物量の１０倍である必要がある）（5.0 gm）、カートリッジをＤＣＭ（3x）及びＤＭＦ（3x）で２回洗浄して、最後にＭｅＯＨ（2x）で洗浄した。生成物２３を、少量の不純物とともに、ＭｅＯＨにおける５．０ｍｌの２ＭのＮＨ３を使用してカートリッジから放出し、減圧中で濃縮した。不純物を取り除くため、シリカゲル及び溶出剤としてＤＣＭ：エチルアセテート  ４：１を使用してカラムクロマトグラフィーによって固体を精製した。生成物２３を８６％収率の黄色固体として得た。
【００９１】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3610, 3365, 2889, 1716, 1634, 1600, 1546, 1410, 1337, 1321, 1277, 1230, 1184,1146; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.98 - 8.02 (m, 2H),7.49 -7.56 (m, 3H), 7.27 - 7.35 (m, 4H), 3.91 (s, 3H), 3.67 - 3.73 (m, 4H),3.48 (s, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.41 - 2.46 (m, 4H); 13C-NMR (100 MHz,CDCl3): δ 166.11, 157.70, 144.59, 141.09, 136.62, 135.88, 134.89,131.18, 130.60, 129.89, 129.23, 127.84, 126.08, 122.51, 120.46, 120.30, 111.57,111.02, 67.00 (2C), 62.83, 53.58 (2C), 52.34, 30.92; HRMS-ESI (m/z): calcd.for C25H26BrN3O6S2 =607.0446, found = 607.0520.
【００９２】
実施例２ｄ−化合物２４（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−モルフォリノベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（169.41 mg, 390.10μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。（４−モルフォリノフェニル）メタンアミン（50 mg, 260.07μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（70.28 mg, 520.14μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（70.47 μL, 455.12μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物２４をカラムクロマトグラフィー（溶出剤ヘキサン：エーテル  １：１）によって９８％収率の白色固体として精製した。
【００９３】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3378, 2919,1546, 1375, 1276, 1253, 1192, 1168, 1125, 715, 702, 635, 606, 571;1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.98 - 8.01 (m, 2H), 7.28- 7.31 (m, 3H), 7.22 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.81 Hz,2H), 6.27 (t, J = 5.54 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 5.54 Hz, 2H), 3.92(s, 3H), 3.85 - 3.89 (m, 4H), 3.36 (s, 3H), 3.14 - 3.18 (m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 165.55, 158.15, 149.80, 144.69, 140.34, 137.85,130.57, 129.26, 128.78, 127.75, 126.48, 126.04, 122.81, 120.50, 118.46, 115.86,113.18, 112.60, 66.82 (2C), 53.58 (2C), 49.19, 44.78, 29.50; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C25H26BrN3O6S2= 607.0552, found = 607.0518.
【００９４】
実施例２ｅ−化合物２９（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（117.22 mg, 269.93μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（40 mg, 179.95μmol, 1 eq.）、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（68.99 mg, 359.90μmol, 2 eq.）、及びＤＭＡＰ（54.96 mg, 449.87μmol, 2.5 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。生成物２９を、シリカゲル及び溶出剤としてエチルアセテート及びメタノール（３％以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって精製した。生成物２９を５５％収率の白色固体として得た。
【００９５】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3337, 2968, 1695, 1652, 1612, 1515, 1457, 1436, 1412, 1376, 1325, 1228, 1168;1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.98 - 8.03 (m, 2H), 7.79(s, 1H), 7.43 - 7.50 (m, 3H), 7.28 - 7.34 (m, 2H), 6.91 (d, J = 9.09 Hz,2H), 4.09 - 4.15 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.72 - 3.77 (m, 4H), 3.39 (s, 3H), 2.81(t, J = 5.68 Hz, 2H), 2.55 - 2.62 (m, 4H);  13C-NMR (100MHz, CDCl3): δ 166.13, 160.73, 153.99, 139.37, 138.70, 136.69,135.07, 130.60, 129.97, 129.20, 126.97, 126.08, 122.30 (2C), 115.19 (2C),111.45, 110.22, 66.90 (2C), 66.12, 57.63, 54.10 (2C), 52.34, 38.44; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C26H28BrN3O7S2  637.0552, found = 637.0623.
【００９６】
実施例２ｆ−化合物２６−（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（ピペリジン−１−イル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（102.70 mg, 236.49μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）メタンアミン（30 mg, 157.66μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（42.61 mg, 315.32μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（42.72 μL, 275.90μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。反応混合物をＳＣＸ−２カートリッジに通過させて（5.0 gm）、カートリッジをＤＣＭ（3x）及びＤＭＦ（3x）で２回洗浄して、最後にＭｅＯＨ（2x）で洗浄した。化合物２６を、少量の不純物とともに、ＭｅＯＨにおける５．０ｍｌの２ＭのＮＨ３を使用してカートリッジから放出し、減圧中で濃縮した。不純物を取り除くため、シリカゲル及び溶出剤としてエーテルを使用してカラムクロマトグラフィーによって固体を精製した。生成物２６を９５％収率の白色固体として得た。
【００９７】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3374, 2946, 2919, 1694, 1650, 1602, 1546, 1513, 1457, 1444, 1387, 1371, 1323,1283, 1235, 1191; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.00 (d,J = 8.8 hz, 2H), 7.28 - 7.32 (m, 3H), 7.19 (d, J = 8.8 hz, 2H),6.91 (d, J = 8.6 hz, 2H), 6.16 (t, J = 5.16 Hz, OH), 4.46 (d, J= 5.54 Hz, 2H), 3.35 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.14 - 3.19 (m, 4H), 1.65 - 1.75(m, 4H), 1.59 - 1.62 (m, 2H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ166.49, 159.52, 152.26, 144.99, 140.75, 136.77, 130.86, 129.45, 129.36, 127.75,127.24, 126.33, 122.03 (2C), 116.77 (2C), 113.81, 112.57, 52.62 (2C), 50.69,44.18, 31.04, 26.00, 24.56, 23.80; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C26H28BrN3O5S2= 605.0654, found = 605.0727.
【００９８】
実施例２ｇ−化合物２７  １（メチル４−（５−ブロモ−４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）チオフェン−２−カルボキシアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（550 mg, 1.27mmol, 3 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。メチル４−アミノベンゾエート（70.57 mg, 422.15μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（114.09 mg, 844.31μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（114.40 μL, 738.77μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。８日後、反応を終了させた。反応混合物を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。生成物２７をカラムクロマトグラフィー（溶出剤ヘキサン：エーテル  １：１）によって７０％収率の茶色固体として精製した。
【００９９】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3363, 2946, 1716, 1671, 1600, 1532, 1510, 1449, 1415, 1404, 1343, 1319, 1248,1153; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.89 (s, 1H), 8.01- 8.04 (m, 2H), 7.84 (d, J = 8.81 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.47 (s, 1H),7.32 - 7.35(m, 2H), 7.28 (d, J = 2.01 Hz, 1H), 7.12 (dd, J =8.69, 2.14 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.41 (s, 3H) ; 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 172.47, 172.04, 162.66, 144.98, 143.31, 139.36,137.69, 135.52, 131.73, 130.01, 128.46, 128.26, 127.84, 126.16, 124.94, 119.94,119.09, 115.23, 113.58, 55.27, 52.56, 33.09; HRMS-ESI (m/z): calcd. forC22H19BrN2O7S2 =565.9817, found = 565.0281.
【０１００】
実施例２ｈ−化合物２８（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（３−（ピペリジン−１−イル）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（184.79mg, 425.51μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。３−（ピペリジン−１−イル）アニリン（50 mg, 283.67μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（76.66 mg, 567.35μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（76.87 μL, 496.43μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。反応混合物を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。不純物を取り除くため、シリカゲル及び溶出剤としてヘキサン：エーテル  ８：２を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物２８を９５％収率の茶色固体として得た。
【０１０１】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2937, 2849, 1715, 1669, 1605, 1543, 1496, 1404, 1363, 1352, 1325, 1310, 1275,1253, 1208, 1177, 1112; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm8.40 (s, OH), 7.83 - 7.90 (m, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.13 - 7.20 (m,2H), 7.04 - 7.13 (m, 1H), 6.87 - 6.93 (m, 1H), 6.63 (dd, J = 8.31,2.01Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.02 - 3.09 (m, 4H), 1.53 - 1.62 (m,4H), 1.43 - 1.51 (m, 2H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ166.43, 158.22, 152.98, 144.79, 141.85, 138.06, 136.44, 130.80 (2C), 129.66,129.28, 126.25, 122.67, 113.37 (2C), 111.24 (2C), 108.58, 52.61 (2C), 50.50,38.57, 25.93 (2C), 24.50; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C25H26BrN3O5S2= 591.0497, found = 591.0574.
【０１０２】
実施例２ｉ−化合物２５−（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（137.83 mg, 317.38μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）−メタンアミン（50 mg, 211.59μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（57.18 mg, 423.17μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（57.34 μL, 370.28μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を完了させ、反応混合物を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてＤＣＭ：エチルアセテート  ８：２を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物２５を９７％収率の茶色固体として得た。
【０１０３】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3285, 2949, 1722, 1647, 1601, 1578, 1553, 1514, 1470, 1437, 1367, 1306, 1275,1253, 1147, 1111; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.94 (d,J = 8.56 Hz, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.23 (d, J = 8.56 Hz, 2H), 7.20(d, J = 8.81 Hz, 2H), 6.90 (br. s., 1H), 6.83 (d, J = 8.56 Hz,2H), 4.45 (d, J = 5.54 Hz, 2H), 4.07 (t, J = 5.67Hz, 2H), 3.89(s, 3 H), 3.67 - 3.72 (m, 4H), 3.30 (s, 3H), 2.77 (t, J = 5.79 Hz, 2H),2.52 - 2.57 (m, 4H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ 166.17,159.52, 158.34, 144.63, 140.68, 136.27, 130.52, 129.69, 129.42, 129.00, 127.67,125.99, 121.86, 121.76, 114.84 (2C), 113.8 (2C), 66.89 (2C), 65.77, 57.60,  54.06 (2C), 52.37, 43.55, 38.31; HRMS-ESI (m/z): calcd. forC27H30BrN3O7S2 =651.0707, found = 651.0782.
【０１０４】
実施例２ｊ−化合物３０（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（６−モルフォリノピリジン−３−イル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（145.39 mg, 334.79μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。６−モルフォリノピリジン−３−アミン（40 mg, 223.19μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（60.32 mg, 446.38μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（60.48 μL, 390.58μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてヘキサン：エーテル  ８：２を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物３０を９５％収率の黄色固体として得た。
【０１０５】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3337, 2968, 1720, 1655, 1612, 1566, 1360, 1324, 1277, 1244, 1168, 1129, 1117;1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.29 (br. s., 1H), 7.99 -8.03 (m, 2H), 7.70 - 7.73 (m, 1H), 7.35 - 7.47 (m, 2H), 7.31 - 7.33 (m, 1H),7.29 - 7.31 (m, 1H), 6.66 (d, J = 9.32 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.82 -3.85 (m, 4H), 3.47 - 3.52 (m, 4H), 3.38 (s, 3H); 13C-NMR (100 MHz,CDCl3): δ 164.08, 159.47, 155.03, 150.12, 144.54, 142.45, 137.49,135.06, 130.58, 128.16, 127.44, 125.88, 122.76, 121.92, 114.36, 112.61, 104.05,66.67 (2C), 52.37, 42.41 (2C), 30.51; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C23H23BrN4O6S2= 594.0242, found = 594.0322.
【０１０６】
実施例２ｋ−化合物３１（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（モルフォリノメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（157.89 mg, 363.58μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。（４−（モルフォリノメチル）フェニル）メタンアミン（50 mg, 242.38μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（65.50 mg, 484.77μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（66.41 μL, 424.17μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤１００％エチルアセテートを使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物３１を７２％収率の白色固体として得た。
【０１０７】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3297, 2183, 1718, 1657, 1555, 1436, 1409, 1361, 1347, 1276, 1184, 1146, 1102;1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.98 - 8.02 (m, 2H), 7.31- 7.34 (m, 3H), 7.29 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.29 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.35(t, J = 5.54 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 5.54 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H),3.68 - 3.72 (m, 4H), 3.49 (s, 2H), 3.36 (s, 3H), 2.40 - 2.47 (m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 166.12, 159.45, 144.57, 140.42, 137.54, 136.32,136.12, 130.50 (2C), 129.62 (2C), 129.03, 127.98 (2C), 127.57, 126.00 (2C),121.91, 66.89 (2C), 62.96, 53.51 (2C), 52.33, 43.83, 38.32; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C26H28BrN3O6S2= 621.0603, found = 621.0676.
【０１０８】
実施例２ｌ−化合物３２（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（222.11 mg, 511.45μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。（４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル）メタンアミン（70 mg, 340.97μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（92.14 mg, 681.93μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（93.43 μL, 596.69μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温及びＮ２の存在下で添加した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤エチルアセテート及びメタノール（2%以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物３２を５１％収率の茶色固体として得た。
【０１０９】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2941, 2797, 1720, 1634, 1548, 1514, 1451, 1435, 1290, 1275, 1174, 1142, 1112;1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.98 (d, J = 9.1Hz, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.25 - 7.30 (m, 2H), 7.21 (d, J = 8.6 Hz, 2H),6.89 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.40 (t, J = 4.78 Hz, NH), 4.46 (d, J= 5.54 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.18 - 3.24 (m, 4H), 2.55 - 2.62(m, 4H), 2.36 (s, 3H) ; 13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ166.20, 159.32, 151.02, 144.67, 140.53, 136.40, 130.56, 129.23, 129.05, 127.84,127.52, 127.33, 126.03 (2C), 116.11 (2C), 115.83 (2C), 55.01 (2C), 52.35 (2C),48.87, 46.12, 43.76, 30.36; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C26H29BrN4O5S2= 621.0763, found = 621.0828.
【０１１０】
実施例２ｍ−化合物３３（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（478.24 mg, 1.10mmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。（４−（ピペリジン−１−イルメチル）フェニル）メタンアミン（150 mg, 734.15μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（198.41 mg, 1.47mmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（201.17 μL, 1.28mmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温及びＮ２の存在下で添加した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。粗混合物をＳＣＸ−２カートリッジに通過させて（5.0 gm）、カートリッジをＤＣＭ（3x）及びＤＭＦ（3x）で２回洗浄して、最後にＭｅＯＨ（2x）で洗浄した。純粋な生成物３３を、ＭｅＯＨにおける５．０ｍｌの２ＭのＮＨ３を使用してカートリッジから放出し、収率９０％の茶色固体として減圧中で濃縮した。
【０１１１】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2937, 2797, 1717, 1606, 1546, 1509, 1435, 1407, 1363, 1322, 1281, 1185, 1112;1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.96 - 8.01 (m, 2H), 7.54(s, 1H), 7.49 (t, J = 5.79 Hz, 1H), 7.24 - 7.32 (m, 6H), 4.53 (d, J= 5.79 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.46 (s, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.38 (br. s., 4H),1.54 - 1.62 (m, 4H), 1.42 - 1.48 (m, 2H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3):δ 166.15, 159.56, 144.59, 140.56, 137.17, 136.77, 136.21, 131.44, 130.47,129.80, 129.21, 128.92, 127.86 (2C), 126.45, 125.94, 121.78, 103.19, 63.10,54.24, 52.77, 52.30, 38.27, 31.93, 25.50, 24.03, 23.39; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C27H30BrN3O5S2= 619.0810, found = 619.0881.
【０１１２】
実施例２ｎ−化合物３４（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（（５−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）メチル）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（140.00 mg, 322.38μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。４−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルメチル）フェニルアミン（51 mg, 214.92μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（58.08 mg, 429.84μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（58.24 μL, 376.11μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてヘキサン：エチルアセテート  ２：８を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物３４を４８％収率の白色固体として得た。
【０１１３】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2920, 2852, 1716, 1644, 1604, 1572, 1552, 1537, 1513, 1503, 1435, 1416, 1370,1360, 1331, 1310, 1244, 1143; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δppm 9.56 (br. s., NH), 7.91 (s, 1H), 7.31 - 7.39 (m, 2H), 7.21 - 7.28 (m, 4H),7.11 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 8.31 Hz, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.34 (s, 3H) ; 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 167.87, 166.32, 145.73, 144.77, 144.42, 139.09,138.87, 136.55, 134.40, 132.81, 132.47, 132.09, 130.90, 130.55, 129.00, 128.85,125.90, 123.87, 122.46, 121.77, 120.87, 115.52, 113.87, 108.03, 105.36, 60.49,38.23, 29.77, 25.90; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C29H25BrN4O5S2= 652.0450, found = 652.0523.
【０１１４】
実施例２ｏ−化合物３５（メチル４−（（５−（（２−ベンジル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−５−イル）カルバモイル）−２−ブロモ−Ｎ−メチルチオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（150.00 mg, 345.40 μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。２−ベンジル−１ｈ−ベンズイミダゾール−５−アミン（51.41 mg, 230.27μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（62.23 mg, 460.54μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（62.50 μL, 402.97μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてヘキサン：エチルアセテート  ３：７を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物３５を７６％収率の黄色固体として得た。
【０１１５】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2920, 2850, 1715, 1698, 1693, 1655, 1603, 1561, 1555, 1535, 1492, 1453, 1433,1412, 1327, 1297, 1157; 1H-NMR (400 MHz, DMSO): δ ppm 12.27 - 12.32(m, NH), 10.48 (d, J = 14.86 Hz, NH), 8.21 - 8.24 (m, 1H), 7.94-7.98 (m,2H), 7.93 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.81 Hz, 1H), 7.43 - 7.46 (m, 2H), 7.39(d, J = 1.01 Hz, 1H), 7.32 - 7.33 (m, 4H), 7.21 - 7.27 (m, 1H), 4.16 (s,2H), 3.84 (s, 3H), 3.34 (s, 3H); ); 13C-NMR (100 MHz, DMSO): δ168.12, 160.41, 146.88, 144.40, 143.11, 143.06, 138.55, 138.41, 136.73, 134.72,134.27, 133.17, 131.80, 130.48 (2C), 130.19 (2C) 128.39, 127.68, 123.89,123.56, 118.15, 112.91 (2C), 107.28, 53.13, 39.12, 36.50; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C28H23BrN4O5S2= 638.0293, found = 638.0355.
【０１１６】
実施例２ｐ−化合物３６（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（１−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（225.00 mg, 518.10μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。５−アミノ１−ｎ−メチルインドール（50.50 mg, 345.40μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（93.35 mg, 690.81μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（93.60 μL, 604.46μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてヘキサン：エチルアセテート  ７：３を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物３６を７０％収率の白色固体として得た。
【０１１７】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2920, 2850, 2519, 1736, 1719, 1703, 1646, 1605, 1580, 1576, 1524, 1514, 1494,1453, 1435, 1364, 1336, 1291, 1248, 1190; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ ppm 8.03 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.64 (br. s., 1H), 7.45(br. s., 1H), 7.29 - 7.39 (m, 4H), 7.09 (d, J = 3.02 Hz, 1H), 6.48 (d, J= 3.02 Hz, 1H), 3.90 - 3.94 (m, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.41 (s, 3H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 168.48, 159.42, 145.18, 140.83, 138.10, 132.15(2C), 131.86, 130.57, 130.40, 128.47, 128.03, 123.93, 123.41, 118.24, 117.45,117.16, 110.34, 106.93, 102.57, 56.49, 36.50, 31.99; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C23H20BrN3O5S2= 561.0028, found =561.0094.
【０１１８】
実施例２ｑ−化合物３７（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（４−（ピロリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（170.00 mg, 391.46 μmol, 1.5eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。４−ピロリジン−１−イルメチル−ベンジルアミン（49.66 mg, 260.97μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（70.53 mg, 521.94μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（70.72 μL, 456.70μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。粗混合物をＳＣＸ−２カートリッジに通過させて（5.0 gm）、カートリッジをＤＣＭ（3x）及びＤＭＦ（3x）で２回洗浄して、最後にＭｅＯＨ（2x）で洗浄した。純粋な生成物３７を、ＭｅＯＨにおける５．０ｍｌの２ＭのＮＨ３を使用してカートリッジから放出し、収率８９％の茶色固体として減圧中で濃縮した。
【０１１９】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2957, 2789, 1719, 1698, 1655, 1650, 1632, 1605, 1578, 1561, 1537, 1511, 1503,1460, 1435, 1408, 1359, 1323, 1179; 1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d):δ ppm 7.98 (d, J = 9.06 Hz, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.35 - 7.44 (m, 3H), 7.27- 7.35 (m, 3H), 4.47 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.71 (s, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.61 -2.67 (m, 4H), 1.82 - 1.87 (m, 4H); 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d):δ 168.21, 162.19, 146.98, 142.38, 139.59 (2C), 138.42, 138.03, 131.96, 131.40,130.94, 130.58, 129.39 (2C), 127.81, 125.66, 123.70, 105.05, 61.33, 55.38,53.82, 53.37, 44.75, 39.27, 24.60, 24.11; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C26H28BrN3O5S2= 605.0654, found = 605.0714.
【０１２０】
実施例２ｒ−化合物３８（メチル４−（（２−ブロモ−Ｎ−メチル−５−（（３−（２−メチルチアゾール−４−イル）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（170.00 mg, 391.46μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。３−２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル−アニリン（49.66 mg, 260.97μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（70.53 mg, 521.94μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（70.72 μL, 456.70μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジエチルエーテルを使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物３８を５８％収率の黄色固体として得た。
【０１２１】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2956, 2920, 1719, 1698, 1693, 1650, 1644, 1632, 1608, 1537, 1511, 1434, 1409,1361, 1326, 1278, 1142; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm9.16 (s, NH), 8.13 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.56 Hz, 2H), 7.86 (s, 1H),7.67 (d, J = 8.06 Hz, 2H), 7.28 - 7.41 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 3.38 (s,3H), 2.75 (s, 3H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ 166.14,166.05, 157.73, 154.15, 144.55, 140.97, 137.33, 136.55, 135.43, 133.42, 130.58,129.61, 129.14, 126.04, 125.50, 122.98, 119.81, 118.12, 113.11 (2C), 109.17,52.33, 38.39, 30.28; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C24H20BrN3O5S3= 604.9748, found = 604.9825.
【０１２２】
実施例２ｓ−化合物３９（メチル４−（（５−（（４−（４−（ベンゾフラン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）フェニル）カルバモイル）−２−ブロモ−Ｎ−メチルチオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（100.00 mg, 237.27μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。（４−（４−アミノフェニル）ピペラジン−１−イル）（ベンゾフラン−２−イル）メタノン（49.34 mg, 153.51μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（41.49 mg, 307.03μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（41.60 μL, 268.65μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温及びＮ２の存在下で添加した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジエチルエーテルを使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１９を４１％収率の黄色固体として得た。
【０１２３】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2968, 2930, 2874, 2451, 1650, 1639, 1599, 1572, 1544, 1446, 1409, 1352, 1318,1306, 1280, 1231, 1215, 1155; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δppm 8.98 (s, NH), 7.99 - 8.03 (m, 2H), 7.83 (s, 1H), 7.66-7.69 (m, 1H), 7.53 -7.59 (m, 3H), 7.40-7.45 (m, 1H), 7.32 - 7.37 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 6.98-7.01(m, 1H), 6.94 (d, J = 9.06 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.79-3.81 (m, 4H),3.39 (s, 3H), 3.24 - 3.29 (m, 4H) ; 13C-NMR (100 MHz, DMSO): δ165.57, 161.10, 158.84, 157.27, 156.76, 153.91, 153.14, 148.15, 144.60, 141.64,130.01, 128.78, 128.09, 126.66, 126.56, 126.10, 123.72, 123.53, 122.45 (2C),121.45, 120.36, 116.06 (2C), 111.78 (2C), 111.00, 78.41, 76.66, 64.97, 54.31,52.24, 23.26; HRMS-ESI (m/z): calcd.for C33H29BrN4O7S2 =736.0661, found = 736.0753.
【０１２４】
実施例２ｔ−化合物４０（メチル４−（（５−（（１−ベンジル−１Ｈ−インドール−５−イル）カルバモイル）−２−ブロモ−Ｎ−メチルチオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物（ｅ）（65 mg, 149.67μmol, 1 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた（1 mmolあたり約1.5mL）。１−ベンジル−１Ｈ−インドール−５−イルアミン（39.92 mg, 179.61μmol, 1.2 eq.）、ＥＤＣハイドロクロライド（57.38mg, 299.34μmol,2 eq.）、及びＤＭＡＰ（45.71 mg, 374.18μmol, 2.5 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１．５時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物４０をカラムクロマトグラフィー（溶出剤ヘキサン：ＤＣＭ  １：１）によって７０％収率の白色固体として精製した。
【０１２５】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)=2919, 2361, 1717, 1542, 1484, 1281, 1185, 795, 703, 696; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.03 (d, J = 8.59 Hz, 2H), 7.90 (br.s., 1H), 7.63 (br. s., 1H), 7.44 (br. s., 1H), 7.35 (br. s., 1H), 7.33 (br. s.,1H), 7.31 (s, 1H), 7.29 (d, J = 2.53 Hz, 2H), 7.24 (s, 1H), 7.17 (d, J= 3.03 Hz, 1H), 7.08 - 7.12 (m, 2H), 6.55 (d, J = 3.03 Hz, 1H), 5.33 (s,2H), 3.91 (s, 3H), 3.40 (s, 3H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3):δ 163.57, 160.56, 142.20, 140.87, 139.93, 139.85, 137.02, 132.76, 131.24,129.55, 129.49, 128.48, 128.36, 127.38, 127.26, 125.96, 124.93, 123.70, 123.20,122.79, 122.16, 116.83, 115.11, 110.50, 107.73, 102.23, 60.98, 60.36, 30.43; HRMS-ESI(m/z): calcd. for C29H24BrN3O5S2=  637.0341, found = 637.0281.
【０１２６】
［実施例３］
［［表１の化合物１〜８の合成］］
以下のスキームを使用して化合物１〜８を生成した。
【化１７】
2020529451.tif 000028
【０１２７】
実施例３ａ−化合物１（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（４−モルフォリノフェニル）−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
化合物３３（40 mg, 64.46 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（7 mL）とともに丸底フラスコに入れた。（４−モルフォリノフェニル）ボロン酸（16.01 mg, 77.35μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（26.72 mg, 193.37μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（7.45 mg, 6.45μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で２時間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチし、水層をＤＣＭ(x 3)で抽出した。あわせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物１をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール、3%以下を使用する）によって８０％収率の黄色固体として精製した。
【０１２８】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2923, 2850, 1736, 1711, 1698, 1693, 1655, 1643, 1632, 1604, 1561, 1546, 1537,1508, 1503, 1441, 1346, 1330, 1263, 1225, 1178; 1H-NMR (400 MHz,CDCl3): δ ppm 7.78 - 7.83 (m, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.34 - 7.37 (m,2H), 7.29 - 7.32 (m, 4H), 7.00 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 6.70 - 6.75 (m,2H), 6.58 (br. s., NH), 4.58 (d, J = 5.54 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.84 -3.88 (m, 4H), 3.65 (s, 2H), 3.16 - 3.21 (m, 4H),  3.01 (s, 3H), 2.55 (br.s., 4H), 1.64 - 1.71 (m, 4H), 1.47 (br. s., 2H) ; 13C-NMR (100 MHz,CDCl3): δ 165.80, 160.50, 152.90, 152.07, 149.96, 147.97, 144.96,142.00, 140.86, 136.50, 131.23, 130.40, 130.08, 129.35, 128.13, 127.94, 126.85,124.36 (2C), 120.90, 117.18, 115.26, 114.88, 114.08, 68.70, 66.68 (2C), 61.14,53.79 (2C), 48.05 (2C), 37.60, 29.73, 24.94, 23.70, 23.29; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C37H42N4O6S2= 702.2546, found = 702.2611.
【０１２９】
実施例３ｂ−化合物２（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
化合物３３（40 mg, 64.46 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3.5 mL）とともに丸底フラスコに入れた。１−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）ピペリジン（22.21 mg, 77.35μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（26.72 mg, 193.37μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（7.45 mg, 6.45μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で１時間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチし、水層をＤＣＭ(x 3)で抽出した。あわせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物２をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：ジエチルエーテル、１：１を使用する）によって７０％収率の黄色固体として精製した。
【０１３０】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2925, 2854, 1736, 1720, 1698, 1693, 1655, 1650, 1638, 1631, 1604, 1572, 1561,1537, 1519, 1509, 1461, 1440, 1346, 1247, 1231, 1178; 1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ ppm 7.78 - 7.84 (m, 2H), 7.61 (s, 1H), 7.32 - 7.34(m, 2H), 7.28 - 7.31 (m, 4H), 6.98 - 7.01 (m, 2H), 6.72 - 6.78 (m, 2H), 6.26(br. s., NH), 4.58 (d, J = 5.54 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.50 (s, 2H),3.20 - 3.26 (m, 4H), 2.99 (s, 3H), 2.37 - 2.43 (m, 4H), 1.61 - 1.73 (m, 8H),1.55 - 1.61 (m, 4H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ 166.25,160.00, 152.64, 146.38, 144.01, 138.36, 137.51, 135.99 (2C), 131.84, 131.15,130.09 (2C), 129.79, 129.42, 127.91, 127.45, 125.51, 125.23, 124.22, 114.41(2C), 114.18 (2C), 63.31, 54.38, 54.13, 52.12, 51.52, 49.13, 43.96, 37.52,32.03, 30.31, 29.69, 25.80, 25.48, 24.27; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C36H44N4O5S2= 700.2753, found = 700.2815.
【０１３１】
実施例３ｃ−表１の化合物３−メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イル）−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
化合物３３（40 mg, 64.46 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3.5 mL）とともに丸底フラスコに入れた。１−メチル−４−（５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イル）ピペラジン（23.45 mg, 77.35μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（26.72 mg, 193.37μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（7.45 mg, 6.45μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で１．５時間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチし、水層をＤＣＭ(x 3)で抽出した。あわせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物３をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール、3%以下を使用する）によって６５％収率の黄色固体として精製した。
【０１３２】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2936, 2845, 2798, 1736, 1719, 1712, 1698, 1693,1678, 1655, 1650, 1632, 1621,1597, 1572, 1561, 1546, 1537, 1519, 1511, 1438, 1413, 1357, 1317, 1238, 1174 ; 1H-NMR(400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 8.01 - 8.03 (m, 1H), 7.96 - 8.00 (m, 1H),7.78 - 7.84 (m, 2H), 7.43 - 7.48 (m, 1H), 7.35 - 7.39 (m, 4H), 7.15 (d, J= 8.56 Hz, 2H), 6.56 - 6.62 (m, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.64 (s, 2H),3.58 - 3.63 (m, 4H), 3.15 (s, 3H), 2.57 (d, J = 4.53 Hz, 8H), 2.39 (s,3H), 1.61 - 1.70 (m, 4H), 1.52 (d, J = 4.78 Hz, 2H); 13C-NMR(100 MHz, METHANOL-d): δ 167.67, 162.61, 160.26, 151.17, 149.59, 146.51,140.38, 139.56, 138.57, 133.81, 133.76, 131.42, 131.31, 131.04, 131.01, 129.56,129.26, 128.76, 126.19 (2C), 117.12 (2C), 106.88, 63.93, 55.65 (2C), 55.10(2C), 52.77, 46.19, 45.49, 44.28, 37.96, 29.57, 26.12 (2C), 24.80; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C37H44N6O6S2= 716.2815, found = 716.2883.
【０１３３】
実施例３ｄ−化合物４（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（４−（モルフォリン−４−カルボニル）フェニル）−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
化合物３３（40 mg, 64.46 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3.5 mL）とともに丸底フラスコに入れた。（４−（モルフォリン−４−カルボニル）フェニル）ボロン酸（18.18 mg, 77.35μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（26.72 mg, 193.37μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（7.45 mg, 6.45μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で３時間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチし、水層をＤＣＭ(x 3)で抽出した。あわせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物４をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（4%以下）を使用する）によって７２％収率の黄色固体として精製した。
【０１３４】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2930, 2854, 1712, 1698, 1693, 1655, 1639, 1606, 1572, 1561, 1537, 1513, 1503,1461, 1432, 1359, 1228, 1261, 1177; 1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d):δ ppm 7.73 - 7.78 (m, 2H), 7.58 (d, J = 1.51 Hz, 1H), 7.25 - 7.29 (m,2H), 7.23 - 7.25 (m, 4H), 7.20 - 7.23 (m, 2H), 6.93 - 6.98 (m, 2H), 6.58 (br.s., NH), 4.50 (d, J = 5.54 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.67 (d, J =12.34 Hz, 4H), 3.56 (d, J = 9.06 Hz, 4H), 3.46 (s, 2H), 2.97 (s, 3H),2.36 (br. s., 4H), 1.50 - 1.57 (m, 4H), 1.38 (d, J = 5.04 Hz, 2H); 13C-NMR(100 MHz, METHANOL-d): δ 171.49, 167.26, 162.43, 152.17, 146.97, 146.35,140.16, 139.03, 137.42, 137.03, 134.32, 133.57, 131.78, 131.31, 131.20, 131.15,130.49, 129.94, 129.62, 128.70, 127.68 (2C), 126.58, 110.64, 109.12, 67.78,64.22, 62.38, 55.24 (2C), 52.81, 44.34 (2C), 38.23, 30.69, 26.36, 25.04, 22.21;HRMS-ESI (m/z): calcd. for C38H42N4O7S2= 730.2495, found = 730.2558.
【０１３５】
実施例３ｅ−化合物５（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−４−イル）−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
化合物３３（40 mg, 64.46 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3.5 mL）とともに丸底フラスコに入れた。（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−４−イル）ボロン酸（17.10 mg, 77.35μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（26.72 mg, 193.37μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（7.45 mg, 6.45μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で３時間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチし、水層をＤＣＭ(x 3)で抽出した。あわせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物５をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてエチルアセテート：メタノール（3%以下）を使用する）によって７１％収率の茶色固体として精製した。
【０１３６】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2923, 2851, 1741, 1736, 1720, 1698, 1693, 1678, 1656, 1650, 1632, 1620, 1598,1972, 1562, 1537, 1519, 1503, 1492, 1462, 1445, 1390, 1357, 1324, 1274, 1177; 1H-NMR(400 MHz, METHANOL-d): δ ppm  8.05 (s, 1H), 7.97 (dd, J =5.16, 0.63 Hz, 1H), 7.79 - 7.83 (m, 2H), 7.33 (s, 4H), 7.11 - 7.15 (m, 2H),6.77 (s, 1H), 6.56 (dd, J = 5.16, 1.38 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 3.92 (s,3H), 3.51 (s, 2H),  3.44 - 3.49 (m, 4H), 3.14 (s, 3H), 2.51 (t, J =5.04 Hz, 4H), 2.40 - 2.47 (m, 4H) , 2.35 (s, 3H), 1.57 - 1.63 (m, 4H), 1.44 -1.50 (m, 2 H); 13C-NMR (100 MHz, Methanol-d ): δ 167.10,160.00, 148.51, 146.45, 140.31, 138.98, 135.22, 131.29 (2C), 131.24, 131.10(2C), 129.69 (2C), 128.70 (2C), 126.29 (2C), 115.27 (2C), 109.86, 64.27, 62.30,56.07, 55.61, 55.24 (2C), 46.20, 45.68, 44.33, 38.09, 29.56, 26.39 (2C), 25.09;LCMS-ESI (m/z): calcd. for C37H44N6O5S2= 716.28, found = 717.3 (M+H+)
【０１３７】
実施例３ｆ−化合物６（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（２−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−４−イル）−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
化合物３３（40 mg, 64.46 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3.5 mL）とともに丸底フラスコに入れた。１−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イル）ピペラジン（22.37 mg, 77.35μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（26.72 mg, 193.37μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（7.45 mg, 6.45μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で２時間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチし、水層をＤＣＭ(x 3)で抽出した。あわせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物６をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（5.5%以下）を使用する）によって７３％収率の黄色固体として精製した。
【０１３８】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2930, 2850, 1710, 1636, 1607, 1540, 1448, 1356, 1326, 1275, 1179, 1143, 1103;1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 8.06 (s, 1H), 7.98 - 8.00(m, 1H), 7.81 - 7.855 (m, 3H), 7.36 (s, 4H), 7.14 - 7.18 (m, 2H), 6.76 - 6.79(m, 1H), 6.57 (dd, J = 5.29, 1.26 Hz, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.94 (s, 3H),3.61 (s, 2H), 3.46 - 3.51 (m, 4 H), 3.17 (s, 3H), 2.95 - 3.00 (m, 4H), 2.54(br. s., 4H), 1.60 - 1.68 (m, 4H), 1.47 - 1.54 (m, 2H); 13C-NMR (100MHz, CDCl3): δ 167.14, 159.97, 150.53, 146.37, 139.52, 135.11,131.57 (3C), 131.23, 131.09 (3C), 129.69, 128.86 (2C), 126.33 (2C), 109.93,103.95, 101.70, 75.02, 63.77, 62.34, 55.00 (2C), 45.95, 45.78, 44.30, 38.15,37.21, 25.99 (2C), 24.69; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C36H42N6O5S2= 702.2658, found = 702.2726.
【０１３９】
実施例３ｇ−化合物７（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
化合物３３（40 mg, 64.46 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3.5 mL）とともに丸底フラスコに入れた。（４−メチルピペラジン−１−イル）（４−（４，４，５−トリメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メタノン（25.54 mg, 77.35μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（26.72 mg, 193.37μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（7.45 mg, 6.45μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で３時間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチし、水層をＤＣＭ(x 3)で抽出した。あわせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物７をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてエチルアセテート：メタノール、３％以下、を使用する）によって５５％収率の黄色固体として精製した。
【０１４０】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2922, 2851, 1710, 1635, 1607, 1554, 1489, 1449, 1402, 1383, 1365, 1271, 1177;1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 8.02 (d, J = 0.50Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.31 Hz, 2H), 7.40 (s, 4H), 7.33 (s, 4H), 7.19 (d,J = 8.81 Hz, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.74 (s, 2H), 3.38 - 3.59(m, 4H), 3.18 (s, 3H), 2.67 (br. s., 4H), 2.54 (br. s., 4H), 2.39 (s, 3H), 1.65- 1.73 (m, 4H), 1.52 - 1.59 (m, 2H); 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d):δ 171.53, 167.36, 164.74, 152.34, 149.42, 146.46, 141.33, 140.20, 134.47,133.65, 131.88, 131.81, 131.32, 131.28, 130.87, 130.66, 130.09, 129.04 (2C),129.04, 127.71, 126.69, 122.12, 120.96, 118.91, 62.47, 55.00 (2C), 46.77,46.15, 44.41, 41.93, 38.34, 35.91, 31.21, 29.29, 25.85 (2C), 24.53; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C39H45N5O6S2= 743.2811, found =743.2885.
【０１４１】
実施例３ｈ−化合物８（メチル４−（（２−（４−シアノフェニル）−Ｎ−メチル−５−（（４−（ピペリジン−１−イルメチル）ベンジル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
化合物３３（40 mg, 64.46 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3.5 mL）とともに丸底フラスコに入れた。（４−シアノフェニル）ボロン酸（11.37 mg, 77.35μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（26.72 mg, 193.37μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（7.45 mg, 6.45μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で２時間３０分溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチし、水層をＤＣＭ(x 3)で抽出した。あわせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物８をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてエチルアセテート：メタノール、３％以下、を使用する）によって６７％収率の白色固体として精製した。
【０１４２】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3421, 2931, 1755, 1655, 1605, 1543, 1518, 1501, 1451, 1417, 1356, 1326, 1273,1179, 1144; 1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 8.05 (s, 1H),7.81 - 7.84 (m, 2H), 7.55 - 7.59 (m, 2H), 7.41 - 7.44 (m, 2H) ,  7.39 (s,4 H), 7.16 - 7.20 (m, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.68 (s, 2H) , 3.19 (s,3H), 2.60 (br. s., 4H), 1.43 - 1.48 (m, 6H) ; 13C- NMR (24kHz,MeOD): δ 169.35, 167.21, 150.62, 134.84, 133.62, 132.57, 132.42 (3C), 131.64(2C), 130.82, 129.88 (2C), 128.90 (2C), 126.55,  119.06, 112.71, 110.70,69.13, 54.93, 40.20 (2C), 31.65, 30.16, 25.82, 24.97, 24.05; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C34H34N4O5S2= 642.1971, found = 642.2036
【０１４３】
［実施例４］
［［表１の化合物９〜１６の合成］］
膨大な精製及び分離の段階を省くため、以下の反応スキームを使用して表１の化合物９〜１６を調製した。
【化１８】
2020529451.tif 000029
【０１４４】
実施例４ａ−化合物９（メチル４−（（Ｎ−メチル−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）−２−（４−モルフォリノフェニル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエートの合成
ステップ１  （４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（４−モルフォリノフェニル）チオフェン−２−カルボン酸の合成
実施例１のステップ３に記載のように調製した化合物（ｅ）（100 mg, 230.27μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（7 mL）とともに丸底フラスコに入れた。４−モルフォリノフェニルボロン酸（57.21 mg, 276.32μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（95.47 mg, 690.81μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（26.61 mg, 23.03μmol, 0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で６０分溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチした。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを３に下げ、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、生成物をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：ジエチルエーテル、９０：１０を使用する）によって６２％収率の黄色固体として精製した。
【０１４５】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3387, 2850, 1710, 1602, 1575, 1527, 1436, 1421, 1379, 1356, 1306, 1267, 1245,1205, 1172, 1137, 1111; 1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d): δ ppm7.73 (s, 1H), 7.70 - 7.74 (m, 2H), 7.16 (d, J = 8.8 hz, 2H), 7.04 (d, J= 8.8 hz, 2H), 6.71 (d, J = 8.8 hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.76 - 3.81 (m,4H), 3.09 - 3.14 (m, 4H), 3.03 (s, 3H); 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d):δ 167.84, 167.07, 153.64, 153.41, 146.92, 133.42, 132.76,  132.44, 132.28,131.74, 130.95, 128.50, 125.47, 122.95, 115.79, 115.25, 111.79 (2C), 67.92(2C), 56.06 , 52.70, 49.49, 32.13; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C24H24N2O7S2= 516.1025, found =516.1091.
【０１４６】
ステップ２
ステップ１の生成物（80.00 mg, 154.86μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（22.96 mg, 103.24μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（27.90 mg, 206.49μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（27.98 μL, 180.67μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温及びＮ２の存在下で添加した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール(2%以下)を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物９は７８％収率の黄色固体であった。
【０１４７】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3517, 2850, 1720, 1647, 1603, 1545, 1477, 1438, 1411, 1378, 1338, 1302, 1274,1225, 1182, 1170, 1130; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm7.96 (s, 1H), 7.76 - 7.83 (m, 3H), 7.52 (d, J = 9.06 Hz, 2H), 7.33 (d, J= 8.81 Hz, 2H), 7.00 (d, J = 8.56 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.81 Hz,2H), 6.74 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 4.12 (t, J = 5.67 Hz, 2H), 3.90(s, 3H), 3.85 - 3.89 (m, 4H), 3.73 - 3.77 (m, 4H), 3.17 - 3.22 (m, 4H), 3.01(s, 3H), 2.82 (t, J = 5.67 Hz, 2H), 2.57 - 2.62 (m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 166.19, 158.55, 153.72, 153.33, 152.09, 144.95,137.35, 134.22, 131.96, 131.23, 130.42, 130.11, 129.29, 127.63, 124.35, 123.82,122.08, 120.78, 114.99, 114.03, 113.11, 113.05, 110.39, 111.20, 66.83 (2C),66.63 (2C), 65.94, 57.67, 54.05 (2C), 52.22, 47.97 (2C), 37.52; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C36H40N4O8S2= 720.2288, found = 720.2349.
【０１４８】
実施例４ｂ−化合物１０（メチル４−（（Ｎ−メチル−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）−２−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）チオフェン−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
ステップ１  ４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸の合成
化合物（ｅ）（50 mg, 115.13μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3 mL）とともにマイクロ波バイアルに入れた。１−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］ピペリジン（39.68 mg,138.16μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（47.74 mg, 345.40 μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（13.30 mg, 11.51μmol, 10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、マイクロ波照射のもと１００℃で20分間インキュベートした。溶液を水でクエンチした。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを２／３にし、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ターゲット生成物をカラムクロマトグラフィー（１％メタノールを含むEt2O）によって６０％収率の黄色固体として精製した。
【０１４９】
FT-IR (Neat): ν (cm-1) = 2935, 2360, 1714, 1603, 1439, 1279, 1114, 885, 773, 698; 1H-NMR(400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 7.86 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.8 Hz,2H), 7.23 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.76 (d,J = 8.8 hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.19 - 3.24 (m, 4H), 3.05 (s, 3H), 1.64 -1.72 (m, 6H); 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d): δ 163.89,162.23, 150.66, 143.52, 142.11, 135.50, 134.19, 131.23, 130.67, 128.59, 128.34,126.00, 119.84, 119.01, 113.60 (2C), 110.96, 110.61, 61.10 (2C), 52.94, 28.99,25.81, 25.08, 22.41; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C25H26N2O6S2 =  514.1232, found  =  514.1296. 
【０１５０】
ステップ２
ステップ１の生成物（80.00 mg, 155.46μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（23.04 mg, 103.64μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（28.01 mg, 207.28μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（28.08 μL, 181.37μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温及びＮ２の存在下で添加した。１５時間後、反応を完了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール(2%以下)を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１０を７２％収率のオレンジ色固体として得た。
【０１５１】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2915, 2849, 1736, 1719, 1693, 1686,  1682, 1655, 1651, 1632, 1600, 1573,1537, 1511, 1505,  1466, 1432, 1411, 1329, 1274, 1195; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.00 (br. s., NH), 7.78 - 7.84 (m, 3H), 7.53(d, J = 8.81 Hz, 2H), 7.32 (dd, J = 8.69, 3.15 Hz, 2H), 7.00 (d, J= 8.81 Hz, 2H), 6.87 - 6.93 (m, 2H), 6.76 (dd, J = 8.81, 5.04 Hz, 2H),4.12 (t, J = 5.67 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.72 - 3.77 (m, 4H), 3.23 (d, J= 4.28 Hz, 4H), 3.00 (d, J = 1.76 Hz, 3H), 2.81 (t, J = 5.67 Hz,2H), 2.56 - 2.61 (m, 4H),  1.60 - 1.73 (m, 6H); 13C-NMR (100MHz, CDCl3): δ 166.22, 162.85, 155.94, 152.67, 144.95, 143.07,142.59, 136.70, 131.77, 131.17 (2C), 130.12 (2C), 127.95, 127.56, 124.57,124.28 (2C), 120.13, 119.46, 115.03 (2C), 114.40 (2C), 66.91 (2C), 66.07,61.05, 57.64, 54.09 (2C), 52.13, 49.11, 31.99, 25.47 (2C), 24.27; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C37H42N4O7S2= 718.2495, found = 718.2555.
【０１５２】
実施例４ｃ−化合物１１（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イル）−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
ステップ１  ４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（６−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−３−イル）チオフェン−２−カルボン酸の合成
化合物（ｅ）（100 mg, 230.27μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（7 mL）とともに丸底フラスコに入れた。２−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−５−ボロン酸ピナコール（Pinnacol）エステル（83.78 mg, 276.32μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（95.47 mg, 690.81μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（26.61 mg, 23.03μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で４時間３０分溶液をかく拌した。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを３に下げ、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ターゲット生成物をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール、（5%以下）を使用する）によって７９％収率の茶色固体として精製した。
【０１５３】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3348, 2929, 2850, 1710, 1597, 1546, 1441, 1352, 1278, 1203, 1171, 1138; 1H-NMR(400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 7.91 (dd, J = 6.42, 2.39 Hz, 1H),7.72 - 7.78 (m, 3H), 7.42 (dt, J = 8.81, 2.77 Hz, 1H), 7.10 (dd, J= 8.81, 1.01 Hz, 2H), 6.61 (dd, J = 9.06, 4.28 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H),3.63-3.69 (m, 4H), 3.10 (s, 3H), 2.79-2.85 (m, 4H), 2.56 (d, J = 2.52Hz, 3H) ; 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d): δ 167.11, 163.95,155.44, 149.46, 145.73, 140.60, 137.94, 135.62, 133.71, 131.01, 130.97, 129.39,126.01, 125.56, 118.29, 115.44, 107.09, 62.32, 55.20, 52.81, 45.38, 44.84,37.88, 35.88; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C24H26N4O6S2= 530.1294 found = 530.1361
【０１５４】
ステップ２
ステップ１の生成物（53.71 mg, 101.22μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（15.00 mg, 67.48μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（18.24 mg, 134.96μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（18.29 μL, 118.09μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１６時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（2%以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１１を７０％収率の茶色固体として得た。
【０１５５】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2939, 2845, 1706, 1597, 1545, 1510, 1435, 1389, 1281, 1254, 1231, 1185, 1134;1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.02 - 8.06 (m, 1H), 7.95(s, 1H), 7.81 - 7.87 (m, 2H), 7.48 - 7.53 (m, 1H), 7.05 - 7.09 (m, 2H), 6.73 -6.78 (m, 2H),  6.63 (d, J = 8.56 Hz, 2H), 6.41 - 6.45 (m, 1H), 4.04(t, J = 5.79 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.72 - 3.76 (m, 4H), 3.58 - 3.63 (m,4H), 3.11 (s, 3H), 2.77 (t, J = 5.67 Hz, 2H), 2.57 (t, J = 4.91Hz, 4H), 2.52 (t, J = 4.91 Hz, 4H), 2.37 (s, 3H) ; 13C-NMR(100MHz,CDCl3): δ 165.82, 160.96, 158.71, 158.66, 148.14, 144.48, 144.41,138.65 (2C), 134.89, 132.49, 132.38, 130.51, 129.80, 127.95, 127.59, 124.25(2C), 115.99, 115.45, 115.00, 114.99, 104.79, 66.56 (2C), 66.03, 60.77, 57.46,54.32, 53.71, 52.31, 51.89, 45.78, 44.14 (2C), 37.20;HRMS-ESI (m/z): calcd. for C36H42N6O7S2= 734.2556, found = 734.2633.
【０１５６】
実施例４ｄ−化合物１２（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（４−（モルフォリン−４−カルボニル）フェニル）−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
ステップ１  ４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（４−（モルフォリン−４−カルボニル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸の合成
化合物（ｅ）（100 mg, 230.27μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（7 mL）とともに丸底フラスコに入れた。４−（モルフォリン−４−カルボニル）フェニルボロン酸（64.95 mg, 276.32μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（95.47 mg, 690.81μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（26.61 mg, 23.03μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で３０分間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチした。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを３に下げ、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ターゲット生成物をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：ジエチルエーテル、９０：１０を使用する）によって５９％収率の白色固体として精製した。
【０１５７】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2920, 2857, 1723, 1605, 1578, 1553, 1516, 1467, 1441, 1427, 1362, 1302, 1273,1252, 1216, 1174, 1139; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d): δ ppm 7.87(s, 1H), 7.83 (d, J = 9.1 hz, 2H), 7.27 - 7.33 (m, 4H), 7.16 (d, J= 8.8 hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.55-3.70 (m, 8H), 3.11 (s, 3H) ; 13C-NMR(100 MHz, DMSO-d): δ 168.15, 165.51, 161.63, 145.57, 144.46, 136.46,135.98, 134.80, 132.34, 130.79, 131.03 (2C), 129.75, 127.57, 126.44, 125.25,122.23, 117.52, 115.23, 65.99, 64.72, 52.22, 48.56, 40.06, 32.10; HRMS-ESI (m/z): calcd. For C25H24N2O8S2= 544.0974 found = 544.1038
【０１５８】
ステップ２
ステップ１の生成物（55.12 mg, 101.22μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（15.00 mg, 67.48μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（18.24 mg, 134.96μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（18.29 μL, 118.09μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温及びＮ２の存在下で添加した。１８時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（3%以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１２を８７％収率の黄色固体として得た。
【０１５９】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2950, 2859, 1736, 1719, 1698, 1693, 1677, 1655, 1650, 1638, 1625, 1618, 1604,1573, 1561, 1537, 1510, 1504, 1474, 1461, 1433, 1413, 1358, 1331, 1275, 1173; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.07 (br. s., NH), 7.81 - 7.86 (m, 2H), 7.77(s, 1H), 7.51 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 7.32 - 7.39 (m, 4H), 7.02 - 7.07 (m,2H), 6.88 - 6.93 (m, 2H), 4.12 (t, J = 5.67 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.58- 3.85 (m, 12H), 3.04 (s, 3H), 2.82 (t, J = 5.67 Hz, 2H), 2.57 - 2.63(m, 4H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3):δ 169.23, 166.05, 158.20, 151.07, 144.46, 139.33, 137.51, 136.50, 135.05,132.89, 131.79, 130.42 (2C), 130.25 (2C), 128.38, 126.8 (2C), 124.86 (2C),122.12, 114.98 (2C), 112.77, 112.65, 66.82 (4C), 65.92, 57.58, 54.03 (2C),52.33, 48.54, 47.54, 37.71; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C37H40N4O9S2= 748.2237, found = 748.2295.
【０１６０】
実施例４ｅ−化合物１３（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−４−イル）−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
ステップ１  ４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−４−イル）チオフェン−２−カルボン酸の合成
化合物（ｅ）（100 mg, 230.27 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（7 mL）とともに丸底フラスコに入れた。２−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリジン−５−ボロン酸ピナコールエステル（88.76 mg, 276.32μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（95.47 mg, 690.81μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（26.61 mg, 23.03μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で３時間溶液をかく拌した。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを３に下げ、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ターゲット生成物をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール、２％以下を使用する）によって８０％収率の白色固体として精製した。
【０１６１】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3355.61, 1703.83, 1597.74, 1445.83, 1353.14, 1280.03, 1169.25; 1H-NMR(400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 7.92 (d, J = 5.29 Hz, 1H), 7.72 -7.77 (m, 3H), 7.07 - 7.12 (m, 2H), 6.73 - 6.76 (m, 1H), 6.52 (dd, J =5.16, 1.38 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.62 (br. s., 4H), 3.11 (s, 3H), 3.01 (t, J= 4.66 Hz, 4H), 2.70 (s, 3H) ; 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d):δ 167.35, 167.25, 159.18, 148.36, 146.64, 146.58, 144.88, 142.48, 134.18,132.25, 131.03, 129.56, 129.24 (2C), 116.57, 116.30, 110.30, 62.32, 54.65,52.79, 44.52 (2C), 38.04, 29.79; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C24H26N4O6S2= 530.1294 found = 530.1360.
【０１６２】
ステップ２
ステップ１の生成物（53.71 mg, 101.22μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（15.00 mg, 67.48μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（18.24 mg, 134.96μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（18.29 μL, 118.09μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温及びＮ２の存在下で添加した。６時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（3%以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１３を７０％収率の茶色固体として得た。
【０１６３】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2923, 2850, 1741, 1736, 1719, 1712, 1698, 1693, 1655, 1650, 1644, 1632, 1600,1573, 1561, 1543, 1537, 1509, 1461, 1413, 1357, 1330, 1275, 1246, 1172; 1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.35 (br. s., NH), 8.10 (dd, J =5.16, 2.39 Hz, 1H), 7.97 ( s, 1H), 7.82 (dd, J = 8.69, 4.66 Hz, 2H),7.56 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 8.56 Hz, 2H), 6.90 (d, J= 9.06 Hz, 2H), 6.76 (d, J = 8.31 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 5.29 Hz,1H), 4.14 (t, J = 5.54 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.74 - 3.79 (m, 4H), 3.67(br. s., 4H), 3.07 (s, 3H), 2.85 (t, J = 5.54 Hz, 2H), 2.78 (br. s.,4H), 2.61 - 2.66 (m, 4H), 2.56 (s, 3H) ; 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 167.70, 159.35, 157.32, 150.61, 148.62, 141.67,141.24, 135.29, 132.47, 131.14, 131.10 (2C), 129.80, 126.43 (2C), 123.91 (2C),116.07, 115.85 (2C), 110.09, 73.52, 67.27 (2C), 66.24, 62.36, 62.26, 58.61,54.98, 54.92, 44.91, 44.66, 38.13, 30.77; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C36H42N6O7S2= 734.2556, found = 734.2633.
【０１６４】
実施例４ｆ−化合物１４（メチル４−（（Ｎ−メチル−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）−２−（２−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−４−イル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
ステップ１  ４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（２−（ピペラジン−１−イル）ピリジン−４−イル）チオフェン−２−カルボン酸の合成
化合物（ｅ）（100 mg, 230.27 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（7 mL）とともに丸底フラスコに入れた。１−（４−（４，４，５−トリメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−イル）ピペラジン（79.91 mg, 276.32μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（95.47 mg, 690.81μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（26.61 mg, 23.03μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で２時間３０分溶液をかく拌した。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを３に下げ、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ターゲット生成物をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール、（2%以下）を使用する）によって６５％収率の黄色固体として精製した。
【０１６５】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2955, 2920, 2849, 1712, 1698, 1693, 1658, 1639, 1600, 1555, 1541, 1538, 1519,1503, 1492, 1453, 1420, 1409, 1334, 1307, 1216, 1173; 1H-NMR (400MHz, DMSO-d): δ ppm 7.97 (d, J = 5.04 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 8.56 Hz, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.17 - 7.22 (m, 2H), 6.61 (s, 1H), 6.47 (dd, J= 5.04, 1.26 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.34 - 3.38 (m, 4H), 3.10 (s, 2H), 2.77 -2.81(m, 3H); 13C-NMR (100 MHz, DMSO): δ 165.49, 164.98, 162.06,158.43, 148.49, 146.99, 145.90, 144.97 (2C), 140.52, 131.35, 129.63, 127.25,126.97, 124.53, 113.68, 107.48, 55.80, 54.88, 48.56, 44.95, 44.79, 30.66; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C23H24N4O6S2= 516.1137, found = 516.1202.
【０１６６】
ステップ２
ステップ１の生成物（100.00 mg, 193.58μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（28.69 mg, 129.05 μmol,1 eq.）、ＨＯＢＴ（34.88 mg, 258.10μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（34.97 μL, 225.84μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１７時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（5%以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１４を５５％収率の黄色固体として得た。
【０１６７】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2922, 2850, 1714, 1595, 1541, 1445, 1417, 1356, 1312, 1274, 1175, 1140, 1104;1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d): δ ppm  8.02 (d, J = 5.04 Hz, 1H),7.85 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 7.05 Hz, 1H), 7.54 (s,1H), 7.21 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 6.81 - 6.85 (m, 1H), 6.64 (d, J =5.29 Hz, 1H), 6.18 (dd, J = 6.92, 1.38 Hz, 1H), 5.98 (s, 1H), 3.91 (s,3H), 3.82 - 3.87 (m, 4H), 3.50 - 3.55 (m, 4H), 3.44 - 3.49 (m, 4H), 3.35 (d, J= 0.76 Hz, 2H), 3.15 (s, 3H), 2.98 - 3.02 (m, 4H), 2.16 (m, 4H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 167.20, 163.20, 159.71, 149.60, 148.86, 146.44(2C), 141.36 (2C), 138.94, 134.31, 132.05,  131.31 (2C), 129.94, 129.23,126.46, 126.32, 116.10 (2C), 110.25, 74.12, 68.71 (2C), 66.47, 61.33 (2C),57.99, 54.98 (2C), 45.22, 44.81, 31.34; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C35H40N6O7S2= 720.2400, found = 720.2284.
【０１６８】
実施例４ｇ−化合物１５（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
ステップ１  ４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（４−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸の合成
化合物（ｅ）（100 mg, 230.27 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（7 mL）とともに丸底フラスコに入れた。（４−メチルピペラジン−１−イル）（４−（４，４，５−トリメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メタノン（87.38 mg, 276.32μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（95.47 mg, 690.81μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（26.61 mg, 23.03μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で４時間１５分溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチした。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを３に下げ、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ターゲット生成物をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール、５％以下を使用する）によって８７％収率の白色固体として精製した。
【０１６９】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3135.87, 1709.35, 1603.57, 1506.06, 1399.08, 1353.70, 1278.85, 1173.48,1105.60; 1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 7.82 - 7.85 (m,2H), 7.76 (s, 1 H), 7.33 - 7.35 (m, 2H), 7.29 (d, J = 8.3 hz, 2H), 7.17(d, J = 8.8 hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.57- 3.84 (br. s., 4H), 3.11 (s,3H), 3.01 - 3.09 (m, 4H), 2.71 (s, 3H) ; 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d): δ 171.58, 167.35, 151.24, 146.50, 138.34, 136.15, 135.73, 134.67, 133.56,132.25, 131.82, 131.14 (2C), 129.76, 127.70, 126.49, 126.45, 118.23, 115.55,62.37, 54.39, 52.84, 49.87, 48.15, 44.09, 38.15; HRMS-ESI (m/z): calcd.for C26H27N3O7S2 =557.1290 found = 557.1356.
【０１７０】
ステップ２
ステップ１の生成物（56.44 mg, 101.22μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（15.00 mg, 67.48μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（18.24 mg, 134.96μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（18.29 μL, 118.09μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１５時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（6%以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１５を７３％収率の白色固体として得た。
【０１７１】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2936, 2858, 2797, 1719, 1711, 1698, 1655, 1649, 1632, 1600, 1562, 1544, 1537,1523, 1514, 1503, 1485, 1448, 1358, 1341, 1315, 1299, 1290, 1236, 1227, 1178 ; 1H-NMR(400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 8.24 (s, 1H), 7.87 - 7.91 (m, 2H), 7.63 (d,J = 8.31 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 1.01 Hz, 4H), 7.20 - 7.24 (m, 2H),7.01 (dd, J = 9.06, 1.01 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 3.96(s, 3H), 3.75 - 3.80 (m, 4H), 3.41-3.67 (m, 4H), 3.24 (s, 3H), 2.84 - 2.89 (t, J= 4.0 Hz, 2H), 2.64 - 2.69 (m, 4H), 2.56 (br. s., 4H), 2.41 (s, 3H); 13C-NMR(100 MHz, METHANOL-d): δ 171.53, 167.38, 160.72, 157.60, 152.56, 146.47,141.03, 137.75, 134.52, 133.68, 132.50, 131.88, 131.34, 131.30, 130.79, 130.09,129.76, 127.71, 126.71 (2C), 124.06, 115.97, 114.20, 113.80, 113.01, 67.77(2C), 66.88, 62.48, 58.91 (2C), 55.30 (3C), 52.92, 52.85, 46.16, 38.39; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C38H43N5O8S2= 761.2553, found = 761.2617.
【０１７２】
実施例４ｈ−化合物１６（メチル４−（（２−（４−シアノフェニル）−Ｎ−メチル−５−（（４−（２−モルフォリノエトキシ）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
ステップ１  ５−（４−シアノフェニル）−４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）チオフェン−２−カルボン酸の合成
化合物（ｅ）（100 mg, 230.27 μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（7 mL）とともに丸底フラスコに入れた。（４−シアノフェニル）ボロン酸（33.84 mg, 276.32μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（95.47 mg, 690.81μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（26.61 mg, 23.03μmol, 及び0.10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、ＴＬＣとＬＣ−ＭＳとが反応達成を示す９０℃で１時間溶液をかく拌した。溶液を水でクエンチした。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを３に下げ、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ターゲット生成物をカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン：メタノール、（0.6%以下）を使用する）によって９０％収率の茶色固体として精製した。
【０１７３】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3097, 2920, 1715, 1605, 1566, 1528, 1507, 1439, 1400, 1359, 1278, 1174, 1141;1H-NMR (400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 7.73 - 7.77 (m, 3H), 7.45- 7.50 (m, 2H), 7.29 - 7.34 (m, 2H), 7.09 - 7.13 (m, 2H),  3.90 (s, 3H),3.14 (s, 3H) ; 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d): δ 177.22,174.34, 167.76, 160.10, 151.76, 144.30, 140.07, 133.62, 132.16, 131.45, 131.00,130.51, 127.82, 125.99, 122.00, 116.03, 114.75, 114.28, 70.28, 53.14, 31.08; HRMS-ESI(m/z): calcd. for C21H16N2O6S2= 456.0450 found = 456.0518.
【０１７４】
ステップ２
ステップ１の生成物（93.00 mg, 203.73μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（２−モルフォリノエトキシ）アニリン（30.19 mg, 135.82μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（36.71 mg, 271.64μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（36.81 μL, 237.68μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１６時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（5%以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１６を８２％収率の白色固体として得た。
【０１７５】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 3582, 3095, 2809, 2230, 1706, 1654, 1604, 1512, 1453, 1394, 1364, 1279, 1246;1H-NMR (400 MHz, DMSO): δ ppm 10.46 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.74 -7.79 (m, 2H), 7.66 - 7.71 (m, 2H), 7.61 (d, J = 9.06 Hz, 2H), 7.38 -7.42 (m, 2H), 7.16 - 7.21 (m, 2H), 6.95 - 6.99 (m, 2H), 4.09 (t, J =5.79 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.57 - 3.60 (m, 4H), 3.14 (d, J = 1.51 Hz,3H), 2.70 (t, J = 5.67 Hz, 2H), 2.48 (br. s., 4H); 13C- NMR (24kHz, DMSO): δ 165.48, 157.85, 155.18,151.61, 148.86(2C), 144.17, 140.58, 134.80, 132.74, 131.55, 131.51, 131.12,130.90, 130.06, 129.71, 129.63, 128.03, 125.31 (2C), 122.04 (2C), 114.61 (2C),111.97, 66.12 (2C), 65.48, 60.83, 56.99, 53.59 (2C), 34.21; HRMS-ESI (m/z):calcd. for C33H32N4O7S2= 660.1712, found = 661.1789.
【０１７６】
［実施例５］
［［表１の化合物１７〜１９の合成］］
以下の反応スキームを使用して化合物１７〜１９を調製した。
【化１９】
2020529451.tif 000030
【０１７７】
実施例５ａ−化合物１７（メチル４−（（Ｎ−メチル−５−（（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ベンジル）カルバモイル）−２−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
ステップ１  （ｆ）（４−（Ｎ−（４−（メトキシカルボニル）フェニル）−Ｎ−メチルスルファモイル）−５−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）チオフェン−２−カルボン酸）の合成
化合物（ｅ）（50 mg, 115.13μmol, 1 eq.）を、エタノール、トルエン、及び水（9:3:1）の溶媒混合物（3 mL）とともにマイクロ波バイアルに入れた。１−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］ピペリジン（39.68 mg,138.16μmol, 1.2 eq.）及びＫ２ＣＯ３（47.74 mg, 345.40 μmol, 3 eq.）を溶液に添加した。そして、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（13.30 mg, 11.51μmol, 10 eq.）をＮ２の存在下で添加し、マイクロ波照射のもと１００℃で２０分間インキュベートした。溶液を水でクエンチした。水層のｐＨは１１であり、０．０２５ＮのＨＣｌを溶液に添加してｐＨを２／３にし、そして水層をＤＣＭ（x3）で抽出した。あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ターゲット生成物（ｆ）をカラムクロマトグラフィー（１％メタノールを含むEt2O）によって６０％収率の黄色固体として精製した。
【０１７８】
FT-IR (Neat): ν (cm-1) = 2935, 2360, 1714, 1603, 1439, 1279, 1114, 885, 773, 698; 1H-NMR(400 MHz, METHANOL-d): δ ppm 7.86 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.8 Hz,2H), 7.23 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.76 (d,J = 8.8 hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.19 - 3.24 (m, 4H), 3.05 (s, 3H), 1.64 -1.72 (m, 6H); 13C-NMR (100 MHz, METHANOL-d): δ 163.89,162.23, 150.66, 143.52, 142.11, 135.50, 134.19, 131.23, 130.67, 128.59, 128.34,126.00, 119.84, 119.01, 113.60 (2C), 110.96, 110.61, 61.10 (2C), 52.94, 28.99,25.81, 25.08, 22.41; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C25H26N2O6S2 =  514.1232, found  =  514.1296.
【０１７９】
ステップ２
ステップ１の生成物（ｆ）（190.00 mg, 369.21μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）メタンアミン（50.53 mg, 246.14μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（66.52 mg, 492.28μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（66.70 μL, 430.75μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。５時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジクロロメタン：メタノール（3%以下）を使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１７は８０％収率の黄色固体であった。
【０１８０】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2930, 2849, 1736, 1698, 1693, 1655, 1650, 1632, 1603, 1561, 1537, 1503, 1440,1380, 1349, 1327, 1239, 1177; 1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δppm 7.76 -7.83 (m, 2H), 7.58 - 7.61 (m, 1H), 7.21 - 7.31 (m, 4H), 6.95 - 7.01(m, 2H), 6.91 (d, J = 8.56 Hz, 2H), 6.71 - 6.77 (m, 2H), 6.32 (br. s.,NH), 4.50 (d, J = 5.54 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.17 - 3.26 (m, 8H), 2.98(s, 3H), 2.56 - 2.62 (m, 4H), 2.34 - 2.38 (m, 3H),  1.58 - 1.73 (m, 6H);13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ 166.25, 160.35, 153.25, 152.58(2C), 150.88, 145.07, 136.15, 131.63, 131.11, 130.06 (2C), 129.31, 129.15,128.26, 127.36, 125.91, 124.15, 119.52 (2C), 116.16 (2C), 114.38 (2C), 54.94(2C), 52.12 (2C), 49.13, 48.86, 46.02, 43.67, 37.47, 31.72, 25.46 (2C), 24.25; HRMS-ESI(m/z): calcd. for C37H43N5O5S2 =  701.2706, found = 701.2772.
【０１８１】
実施例５ｂ−化合物１８（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）−５−（（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
実施例５ａのステップ１の生成物（ｆ）（190.00 mg, 369.21μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。４−（ピペリジン−１−イル）アニリン（43.39 mg, 246.14μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（66.52 mg, 492.28μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（66.70 μL, 430.75μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。１４時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジエチルエーテルを使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１８を６０％収率の黄色固体として得た。
【０１８２】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2934, 2849, 1716, 1603, 1576, 1527, 1513, 1440, 1399, 1344, 1275, 1236, 1198,1126, 1103; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d): δ ppm 10.28 (s, 1H),8.29 (s, 1H), 7.75 - 7.77 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 9.32Hz, 2H), 7.16 (d, J = 9.1 Hz, 4H), 6.92 (d, J = 9.06 Hz,2H), 6.75 (d, J = 8.81 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.19 (br. s., 4H), 3.07 -3.12 (m, 4H), 3.06 (s, 3H), 1.55 - 1.65 (m, 12H) ; 13C-NMR(100 MHz, DMSO): δ 165.52, 157.95, 154.47, 152.65, 151.80, 148.45, 144.85,137.71, 137.68, 131.04, 130.69 (2C), 129.60 (2C), 126.76, 124.36 (2C), 121.40(2C), 118.73, 115.92 (2C), 113.81 (2C), 54.89 (4C), 49.79, 48.25, 30.67 (4C),25.24, 24.91; HRMS-ESI (m/z): calcd. for C36H40N4O5S2= 672.2440, found = 672.2512.
【０１８３】
実施例５ｃ−化合物１９（メチル４−（（Ｎ−メチル−２−（４−（ピペリジン−１−イル）フェニル）−５−（（３−（ピペリジン−１−イル）フェニル）カルバモイル）チオフェン）−３−スルホンアミド）ベンゾエート）の合成
実施例５ａのステップ１の生成物（ｆ）（190.00 mg, 369.21μmol, 1.5 eq.）を、溶媒としてのＤＭＦとともにフラスコに入れた。３−（ピペリジン−１−イル）アニリン（43.39 mg, 246.14μmol, 1 eq.）、ＨＯＢＴ（66.52 mg, 492.28μmol, 2 eq.）、及びＤＩＣ（66.70 μL, 430.75μmol, 1.75 eq.）をそれぞれ室温で添加し、Ｎ２の存在下でかく拌した。２１時間後、反応を終了させた。溶液を水でクエンチし、そしてエチルアセテートで抽出した。有機層をあわせて無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧中で濃縮した。シリカゲル及び溶出剤としてジエチルエーテルを使用してカラムクロマトグラフィーによって粗固体を精製した。生成物１９を７０％収率の黄色固体として得た。
【０１８４】
FT-IR (Neat): ν (cm-1)= 2922, 2850, 1719, 1657, 1603, 1537, 1494, 1355, 1276, 1197, 1175, 1140; 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6); δ ppm 10.25 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.72 -7.76 (m, 2H), 7.27 - 7.29 (m, 1H), 7.09 - 7.17 (m, 6H), 6.74 (d, J =9.06 Hz, 2H), 6.69 (dt, J = 7.05, 2.39 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H),3.18 (br. s., 4H), 3.10 - 3.15 (m, 4H), 3.04 (s, 3H), 1.52 - 1.62 (m, 12H); 13C-NMR(100 MHz, CDCl3): δ 165.51, 158.42, 153.05, 151.92, 151.83, 144.83,139.03, 137.49, 137.38, 131.08, 130.71 (2C), 129.60, 129.07, 126.79, 124.39(2C), 118.66 (2C), 113.80 (2C), 107.64, 101.41, 52.11, 49.50 (2C), 48.23 (2C),37.11, 34.37, 25.14 (2C), 24.90 (2C), 23.90 (2C).
【０１８５】
［実施例６］
［［ＳＴＡＴ３二量体化阻害の蛍光偏光アッセイ］］
ＳＨ２ドメインと相互作用することでＳＴＡＴ３二量体化を阻害するその能力を評価するため、化合物にインビトロの蛍光偏光（FP）に基づく一次ＰＰＩ結合スクリーニングを行った。このＦＰアッセイにおいて、「疑似二量体」を形成するため非リン酸化ＳＴＡＴ３単量体（uSTAT3）とサロゲートペプチドＦＡＭ−ｐＹＬＰＱＴＶとを使用した。アッセイは、化合物がｕＳＴＡＴ３からサロゲートペプチドを置換させ、蛍光性リードアウトをもたらすことが予想されるというというコンセプトに基づくものである。
【０１８６】
具体的に、ＦＰアッセイのため、黒色（CORNING（登録商標））９６ウェルプレートを蒸留水で十分に洗浄して、乾燥させた。１００ｎＭのＦＡＭ−ｐＹＬＰＱＴＶ使用溶液を、ｐＨ７．４のＰＢＳバッファーを使用して１０μＭのＦＡＭ−ｐＹＬＰＱＴＶ原液（ＤＭＳＯ内）から調製した。１０μｌのＦＡＭ−ｐＹＬＰＱＴＶを、９０μｌのｐＨ７．４のＰＢＳバッファー内の、各ウェルのタンパク質最終濃度である３５０ｎＭのｕＳＴＡＴ３タンパク質に添加した。サロゲート二量体複合体のＭＰ値を、蛍光性プレートリーダー（Envision,Perkin Elmer, 米国）を使用して測定し、ベースＭＰ値を提供した。そして、阻害剤溶液をウェルに添加して、アッセイプレートを５分間振とう器に置いた。各ウェルのＭＰ値を再度測定した。阻害剤による蛍光標識サロゲートペプチドの置換による蛍光値の変化を観察し、各阻害剤の平均阻害値は以下に記載のように算出可能であった。
各ウェルのベースＭＰ値（X）＝タンパク質及びプローブのＭＰ値（350nm STAT3 + 10 nM FAM-pYLPQTV）−遊離ＦＡＭ−ｐＹＬＰＱＴＶのＭＰ値
各ウェルの阻害剤ＭＰ値（Y）＝タンパク質＋プローブ＋阻害剤のＭＰ値（350nm uSTAT3 + 10 nM FAM-pYLPQTV + 2μL 阻害剤）−２μＬのＤＭＳＯでの遊離ＦＡＭ−ｐＹＬＰＱＴＶのＭＰ値
任意のリガンド／ペプチドによる阻害率％＝(X-Y)/X*100
【０１８７】
比較の目的で、１００μＭのｐＹＬＫＴＫＦにより得られた阻害率％を１００％とし、種々のリガンドにより得られた阻害を１００μＭのｐＹＬＫＴＫＦに対するものとして報告した。
１００μＭのｐＹＬＫＴＫＦにより得られた阻害率％＝A
１００μＭのリガンドにより得られた阻害率％＝B
相対阻害率（%）＝B/A*100
【０１８８】
実験をトリプリケートで行い、ＰＰＩ阻害の測定値として平均値をとった。
ＦＰアッセイの結果を表２に報告する。
【表２】
2020529451.tif 000031
2020529451.tif 000032
この表から見受けられるように、化合物の多くは、インハウスのコントロール化合物ＲＨ−０６、及び天然ヘキサペプチドｐＹＬＫＴＫＦより大きい阻害を示した。
【０１８９】
［実施例７］
［［ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（ＳＴＡＴ３依存性）乳がん細胞株及びＡ４（ＳＴＡＴヌル）がん細胞株を用いるＭＴＴ細胞生存度アッセイ］］
予備的なＦＰアッセイにおける有意なＳＴＡＴ３二量体化阻害活性を観察した後、ターゲットリガンド及び関連フラグメントを、ＳＴＡＴ３依存性腫瘍細胞株（ＭＤＡ  ＭＢ  ２３１、乳がん）及びＳＴＡＴ３ヌルＡ４細胞株において評価するためＭＴＴ細胞毒性アッセイに進ませた。作用メカニズムがＳＴＡＴ３媒介性であれば、化合物がＳＴＡＴ３依存性ＭＤＡ  ＭＢ  ２３１細胞株に対して選択的毒性を示し、ＳＴＡＴ３ヌルのＡ４細胞株において失活するということが予想された。
【０１９０】
各細胞株について、全部で１０，０００細胞を阻害剤添加前に２４時間播種した。適切な培地を使用して５％ＣＯ２加湿雰囲気下で３７℃の通常の細胞培養条件において、細胞を成長させた。細胞カウントを１０５cells/mlに調節し、細胞株に対応してウェル毎に５，０００〜２０，０００細胞を加えた。そして、細胞を２４時間インキュベートし、阻害剤の１μｌ分取分をトリプリケートでウェルに添加した。各化合物に２４時間連続的に暴露させた後、細胞毒性を測定した。吸収度を分光光度法によってλ＝５７０ｎｍで定量化した（Envisionプレートリーダー,PerkinElmer, 米国）。プリズムグラフパッドプリズムソフトウエアパッケージを使用して用量反応分析によってＩＣ５０値を算出した。ＳＨ２ドメイン相互作用低分子ＳＴＡ−２１を、天然のヘキサペプチドｐＹＬＫＴＫＦの代わりにポジティブコントロールとして使用し、これはペプチドが評価した最高濃度（100 μM）においてＭＴＴアッセイで任意の細胞毒性を示さなかったためである。細胞毒性スクリーニングの結果を表３に示す。
表７は、ＳＴＡＴ３依存性ヒトがん細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１及びＳＴＡＴ３ヌル細胞株における化合物への４８時間の暴露後に測定したＩＣ５０値（μM）を示す。
【表３】
2020529451.tif 000033
2020529451.tif 000034
【０１９１】
評価したすべての化合物は、２．７〜８１．３の選択比を伴い、ＳＴＡＴ３ヌルのＡ４細胞株と比較してＳＴＡＴ３依存性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株に対してより大きい細胞毒性を示した。大部分の化合物は、とりわけ、１８．７μＭのＩＣ５０値を有するＳＴＡ−２１よりも活性であった。化合物３、４、及び６は、５２．０８〜８１．３３の選択比を伴う２μＭ未満のＩＣ５０値を有し、これは有意なものであった。
【０１９２】
さらに、大部分の化合物の細胞毒性値は、ＦＰアッセイにおいて観察された阻害率％と良好に相関した。
【０１９３】
［実施例８］
［［ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ３依存性遺伝子の発現における本発明の化合物の作用］］
成熟リガンドのＳＴＡＴ３特異的細胞毒性を調査するため、ＳＴＡＴ３及びいくつかのＳＴＡＴ３ターゲット遺伝子（すなわちbcl-2, サイクリンD1, 及びファスシン）のｍＲＮＡ発現プロファイルを、ＲＴ−ＰＣＲアッセイを使用して対照遺伝子ＧＡＰＤＨと比較した。まず、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を５００μｇ／ｍＬのＬＰＳによって２４時間３７℃で刺激した。この後、化合物を２５μＭで細胞に添加して、さらに８時間３７℃でインキュベートした。最後に、刺激した未処置細胞と刺激した処置細胞との間の遺伝子発現プロファイルにおける変化を測定するため、ＰＣＲを使用した。
【０１９４】
化合物３、４、６、及び１０をＲＴ−ＰＣＲ分析のために選択し、これは、これらの化合物が無細胞ＦＰアッセイにおいて有意な活性（すなわち阻害率５０％を超える）、ＳＴＡＴ３依存性ＭＤＡ  ＭＢ  ２３１細胞株における十分な細胞毒性（すなわち０．９〜２．５９μＭのＩＣ５０）、及びＳＴＡＴ３依存性ＭＤＡ  ＭＢ  ２３１細胞株とＳＴＡＴ３ヌルのＡ４細胞株との間の非常に良好な選択比を有したためである。
【０１９５】
結果を図１に示す。化合物３は、図１Ａに示すようにＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ３依存性遺伝子を著しく下方調節した。化合物が、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨにおける任意の作用を示すことなく、ＢＣＬ−２、サイクリンＤ１、及びファスシン発現を下方調節することを観察結果は示した。処置細胞における３つすべてのＳＴＡＴ３依存性遺伝子の下方調節は、未処置細胞と比較して有意なものであった。これは、ＳＴＡＴ３二量体化阻害と、核において転写因子として作用する利用可能な二量体ＳＴＡＴ３の減少によるＳＴＡＴ３依存性遺伝子の下方調節との関係を示唆する。
【０１９６】
化合物３と同様に、化合物４もまた、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨにおける任意の作用を示すことなく、ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ３依存性遺伝子（図１Ｂ）を著しく下方調節した。作用はＢｃｌ−２及びＳＴＡＴ３においてより有利であった。興味深いことに、サイクリンＤ１及びファスシンに観察される下方調節は、３と比較して比較的小さいものであった。４のようにＳＴＡＴ３特異的であると見られる下方調節は、ＳＴＡＴ１の発現を下方調節しなかった。
【０１９７】
化合物６は、ＳＴＡＴ１とハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨとの双方における任意の作用を示すことなく、ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ３依存性遺伝子を最も顕著に下方調節した（図１Ｃ）。６でＭＤＡ  ＭＢ  ２３１細胞を処置した後、ＳＴＡＴ３、ファスシン、及びサイクリンＤ１の発現はほぼなく、Ｂｃｌ−２は非常に小さく発現した。６で観察されたＳＴＡＴ３依存性遺伝子の下方調節は、その優れたＳＴＡＴ３二量体化阻害、及び高選択比を伴うＳＴＡＴ３依存性細胞株におけるマイクロモル以下のＩＣ５０に合致した。分子動力学シミュレーションもまた、ＳＴＡＴ３−ＳＨ２ドメインの主要な残基との強力な相互作用を示した。生物物理学的及び生物学的な結果間のこの相関は大きく裏付けとなるものであり、この分子のインビボでの異種移植研究を進めることを決めた。
【０１９８】
化合物１０によるＳＴＡＴ３依存性遺伝子の下方調節パターン（図１Ｄ）は化合物４で観察されたものと同等であった。この化合物は、Ｂｃｌ−２に観察される非常に強力な下方調節を伴い、３つすべてのＳＴＡＴ３依存性遺伝子を著しく下方調節した。サイクリンＤ１及びファスシンに観察される下方調節は、未処置の細胞と比較して顕著なものであった。化合物は、処置細胞においてＳＴＡＴ３を有意に下方調節したが、試験した濃度ではＳＴＡＴ１及びハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨの下方調節において任意の作用を示さなかった。
【０１９９】
全体で、ＲＴ−ＰＣＲ実験の結果は、本発明の化合物がハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨにおける任意の作用なくＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ３依存性遺伝子の選択的下方調節を示し得るということを示す。
【０２００】
［実施例９］
［［ヒト腫瘍異種移植研究における化合物６のインビボ評価］］
化合物６は、インシリコにおいてきわめて一貫していること、無細胞ＳＴＡＴ３二量体化阻害性、及びＳＴＡＴ３依存性細胞株に対する選択的細胞毒性を示し、そして、ＲＴ−ＰＣＲアッセイにおいて、ＳＴＡＴ３依存性遺伝子の強力な下方調節を示した。ゆえに、ＭＤＡ  ＭＢ  ２３１腫瘍保持マウスにおける腫瘍体積を減少させる分子の能力を評価するため、マウスにおけるインビボの予備的な有効性研究を行うことを決めた。インビボの腫瘍異種移植研究を、静脈内（IV）投与法を使用してＳＣＩＤ無毛非近交系（SHO）マウスにおいて行った。
【０２０１】
マウスへの移植前にＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞をマトリゲル（Geltrex, Gibco）と混合した。腫瘍を発生させるため、５０％マトリゲル混合物内の５百万細胞を、チャールスリバー（独国）から購入した８週齢のＳＣＩＤ無毛非近交系（SHO）マウスの両側腹に皮下移植した。２週間後、形成腫瘍は５〜６ｍｍの平均径となり、１日目に、マウスに化合物６の２００μＬ液剤を０．５ｍｇ／Ｋｇの用量レベルで尾静脈に注射した。注射を３日目及び５日目に繰り返した。ノギスを使用して２日毎に腫瘍サイズを定期的に測定した。処置マウスの腫瘍サイズをコントロール群のものと比較した（７匹の未処置マウス）。
【０２０２】
化合物は、３回の投薬後、コントロール群と比較して腫瘍体積の有意な減少をもたらした。処置マウスはいずれの毒性の兆候も示さず、マウスを屠殺後、器官の変化も観察されなかった。処置マウスは最大２１日生存し、内務省ライセンスを満たすため選別した時点でさらなる任意の兆候を示さなかった。
【０２０３】
処置マウスの体重を定期的にモニターし、結果を図２に示す。投薬の日を垂直の破線で示す。マウスは、処置後最初にいくらか体重を落としたが、１４日後に体重を回復した。
【０２０４】
腫瘍サイズにおける化合物６の作用は図３に見受けられる。処置腫瘍の体積は、処置期間において小さく且つベースラインに近くに保たれるが、未処置腫瘍の体積は２３日後に２０００μｌまで急激に増加した。興味深いことに、５日目に投薬を停止した後、腫瘍体積における有意な増加は存在しなかった。
【図１Ａ−Ｂ】
2020529451.tif 000044
【図１Ｃ−Ｄ】
2020529451.tif 000045
【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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