(57)【要約】本発明は、中枢神経系障害及び状態を処置または予防するための細菌株を含む組成物を提供する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
中枢神経系障害または状態を処置もしくは予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物。
【請求項２】
中枢神経系障害または状態が、微生物叢−腸−脳軸によって介在される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
神経発達障害または精神神経状態を処置もしくは予防する方法における使用のための、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；慢性疼痛；運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群；及び髄膜炎；からなる群から選択される障害または状態を処置もしくは予防する方法における使用のための、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
自閉症を低減または予防する方法における使用のための、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
常同、反復、強迫、または不安行動を予防、低減、もしくは軽減する、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
強迫神経症を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減、もしくは軽減する、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
大うつ病性障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
急性大うつ病エピソード及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）を処置または予防する、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生を予防、低減、もしくは軽減する、請求項１０または１１に記載の組成物。
【請求項１３】
不安障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
不安障害が、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び／または選択的無言症である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
神経認知障害が、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；及びウェルニッケ・コルサコフ症候群；である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
微生物叢−腸−脳軸を調節する方法における使用のための、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
細菌株が、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
細菌株が、配列番号１または２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
細菌株が、配列番号２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％もしくは９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有するか、または
配列番号２によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
経口投与用である、請求項１〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
１または２以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
細菌株が、凍結乾燥されている、請求項１〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
細菌株が、生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である、請求項１〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの単一株を含む、請求項１〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
微生物コンソーシアムの一部としてＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌株を含む、請求項１〜２５のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
請求項１〜１０及び１３〜１７のいずれかに記載の使用のための、請求項１〜２６のいずれかに記載の組成物を含む食品。
【請求項２８】
請求項１〜１０及び１３〜１７のいずれかに記載の使用のための、請求項１〜２６のいずれかに記載の組成物を含むワクチン組成物。
【請求項２９】
中枢神経系障害または状態を処置もしくは予防する方法であって、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を、前記組成物を必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項３０】
請求項１〜２６のいずれかに記載の使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株、またはその派生物の細胞。
【請求項３１】
請求項３０に記載の使用のための、請求項３０に記載の細胞を含む組成物。
【請求項３２】
薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、請求項３１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、哺乳動物の消化管から単離された細菌株を含む組成物、及び疾患の処置におけるかかる組成物の使用の分野にある。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの腸は、子宮内では無菌と考えられているが、出生直後に様々な母体及び環境微生物に曝される。その後、微生物の定着及び遷移の動的期間が生じ、これは、分娩様式、環境、食事及び宿主遺伝子型などの因子によって影響され、これらの因子の全てが、特に若年期において、腸内微生物叢の組成に影響を及ぼす。その後、微生物叢は安定して成人様になる［１］。ヒト腸内微生物叢は、２つの主要な細菌分類：Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ及びＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ；に本質的に属する５００〜１０００を超える種々のファイロタイプを含有する［２］。ヒト腸の細菌定着から生じる成功裏の共生関係は、広範な代謝的、構造的、保護的及び他の有益な機能を生じさせてきた。定着した腸の代謝活性の向上は、さもなければ難消化性の食事成分が副生成物の放出と共に分解されて宿主に重要な栄養源をもたらすということを確実にする。同様に、腸内微生物叢の免疫学的重要性は、よく認識されており、共生細菌の導入後に機能的に再構成される損なわれた免疫系を有する無菌動物において実証されている［３〜５］。
【０００３】
ヒト微生物叢の大きさ及び複雑さの発見は、現在進行中の多くの健康及び疾患の概念の評価を結果として生じている。確実には、微生物叢組成の劇的な変化は、胃腸障害、例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）において記録されてきた［６〜９］。より最近では、ヒト脳疾患において病態生理的役割を果し得る腸内微生物叢における変化に関しての当該分野での関心が高まっている［１０］。前臨床的及び臨床的証拠により、脳の発達と微生物叢との間の関連が強く示唆されている［１１］。
【０００４】
複数の神経分泌及び内分泌シグナル伝達系を含めた、脳と腸内微生物叢との間の双方向のシグナル伝達を実証している前臨床的文献が増えている。実際、微生物叢におけるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種のレベルの増加は、脳障害と関連しており［１２］、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ及びＦｉｒｍｉｃｕｔｅｓ  ｐｈｙｌａの不均衡もまた、脳の発達障害に関与している［１３］。Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ及びＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属のもの、ならびにＡｌｃａｌｉｇｅｎａｃｅａｅ科のものを含めた、腸内の共生生物のレベルの変化が、免疫介在性の中枢神経系（ＣＮＳ）障害に関与しているという示唆は、患者と健常者との間の微生物叢の変化の欠失を示唆している研究によって疑問視されている［１４］。このことは、現在のところ、微生物叢とヒト脳疾患との間の関連性の実際の効果があまり特徴付けられていないということを示している。したがって、より直接的な分析的研究は、ＣＮＳ障害に対する微生物叢の変化の治療的影響を同定することが必要とされている。
【０００５】
ある特定の細菌株が動物の腸において有し得る潜在的なプラス効果の認識において、種々の株が、種々の疾患の処置における使用のために提案されてきた（例えば、［１４〜１７］を参照されたい）。また、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ株を含めたある特定の株が、腸に直接関連しない種々の炎症性疾患及び自己免疫疾患を処置する際の使用のために提案されてきた（レビューには［１８］及び［１９］を参照されたい）。また、広範なプロバイオティクスが、感情的挙動を調節する際の腸内微生物叢の役割を決定するために動物モデルにおいて調査されており、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓは、有益な効果を示す主な属であり、不安及び反復行動を低減し、社会的相互作用を増加させる［２０］〜［２２］。しかし、種々の疾患と種々の細菌株との間の関係、ならびに、特定の細菌株の、全身レベルでの腸に対しての、及びいずれか特定のタイプの疾患に対しての正確な効果は、特に中枢神経系疾患について、あまり特徴付けられていない。
【０００６】
微生物叢−腸−脳軸が自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）ならびに他の神経発達障害及び精神神経障害において影響されることを示唆する証拠が増えている。動物モデルにより、微生物叢がＡＳＤにどのように関与し得るかについてのかなりの見識が付与されている。さらに、前臨床的研究は、有益な生存生物学的製剤の投与を通して腸内微生物叢を標的とすることが、母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデルならびに黒及び褐色のＢＲａｃｈｙｕｒｉｃ（ＢＴＢＲ）マウスを含めた動物モデルにおいて自閉症関連行動を改善する際に効能を示すことを実証している。ＢＴＢＲマウスは、社交性の欠失、反復行動及び不安の増加などの多数のＡＳＤ関連行動を示す、遺伝子組み換えされた同系交配マウス株である。さらに、これらのマウスはまた、腸内微生物叢の組成の変化に併せて胃腸機能障害も示す。結果として、ＡＳＤにおける微生物叢−腸−脳軸の役割を調査する適切な動物モデルを表している。
【０００７】
参照文献［２３］は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ及び／またはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓから選択される細菌種を含む組成物を投与することによって神経発達障害を処置する可能な方法を考察しているが、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓのみに関するデータを提供している。参照文献［２４］は、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｖｕｌｇａｔｕｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓに限定したデータを用いてＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓの同様の使用を考察している。
【０００８】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属内の表現型的及び遺伝子的に異なる細菌種である。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍはまた、系統発生的にも遠い。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ株が、顕性病原性に関連する形質を示す一方で、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、公知の顕性病原性形質を実質的に欠いている種である［２５］。
【０００９】
したがって、中枢神経系障害を処置する新規の方法が当該分野において必要とされている。腸細菌を使用した新規の治療を開発することができるように特徴付けられる腸細菌の潜在的効果も必要とされている。
【発明の概要】
【００１０】
本発明者らは、中枢神経系障害を処置及び予防するための新規の治療を開発した。特に、本発明者らは、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置及び予防するための新規の治療を開発した。特に、本発明者らは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株が、微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患及び状態を処置及び予防するのに有効であり得るということを確認した。実施例において記載されているように、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍを含む組成物の経口投与は、自閉症スペクトラム障害のマウスモデルにおいて微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する症状を低減し得る。
【００１１】
そのため、第１実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。特定の実施形態において、中枢神経系障害または状態は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される。さらなる実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。本発明者らは、この種からの細菌株による処置が、中枢神経系障害、特に微生物叢−腸−脳軸によって介在される障害のマウスモデルにおいて、臨床的利益を提供することができるということを確認した。本発明者らは、この種からの細菌株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ／あるいは対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得るということを確認した。
【００１２】
特定の実施形態において、本発明は：自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及び／または慢性疼痛；からなる群から選択される疾患または状態を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。微生物叢−腸−脳軸に対する及び微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患に対する、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種由来の細菌株について示される効果は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される他の疾患及び状態、例えば、上記において列挙されているものに関する治療的利益を提供し得る。他の実施形態において、本発明は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患及び状態に関連する共存疾患、例えば、上記において列挙されているものを処置する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。特定の好ましい実施形態において、本発明は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患及び状態に関連する胃腸共存疾患、例えば、上記において列挙されているものを処置する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。自閉症スペクトラム障害の症状のアセスメントのためにこの用途で使用されるマウスモデル実験は、上記において列挙されているものを含めた他の中枢神経系障害の症状のアセスメントに適用可能であることが当該分野において公知である［２６〜２７］。
【００１３】
特定の好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害、例えば、自閉症を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。本発明者らは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置が、自閉症スペクトラム障害のマウスモデルにおいて症状の重篤度を低減し得、常同、反復、強迫及び不安行動を予防または低減し得るということを確認した。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の処置における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍを使用する組成物は、自閉症スペクトラム障害を処置するのに特に有効であり得る。好ましい実施形態において、本発明は、特に、自閉症スペクトラム障害の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する際の使用のための組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の行動上の症状の処置における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の胃腸症状の処置における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害の行動上の症状及び胃腸症状の処置における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ／あるいは、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、自閉症スペクトラム障害の神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。
【００１４】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、強迫神経症（ＯＣＤ）を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、本発明は、ＯＣＤの処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する際の使用のための組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ／あるいは、対象の共生代謝産物及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、ＯＣＤの神経病理学に関係している。
【００１５】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、大うつ病性障害（ＭＤＤ）を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、うつ病のマウスモデルにおいて臨床的利益を提供し得る。好ましい実施形態において、本発明は、うつ病の処置における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍを使用する組成物は、うつ病を処置するのに特に有効であり得る。好ましい実施形態において、本発明は、うつ病の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する際の使用のための組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、ＭＤＤの神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。
【００１６】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、不安障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、この用途の例において、不安のマウスモデルにおいて疾患の発生及び疾患の重篤度を低減する。好ましい実施形態において、本発明は、不安障害の処置における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍを使用する組成物は、不安障害を処置するのに特に有効であり得る。好ましい実施形態において、本発明は、不安の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する際の使用のための組成物を提供する。
【００１７】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、ストレス障害、例えば、心的外傷後ストレス障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物は、ストレス障害のマウスモデルにおいてストレスを低減し得る。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、ストレス障害の神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。
【００１８】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害、例えば、統合失調症を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物は、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害のマウスモデルにおいて陽性及び陰性症状を改善し得る。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害の神経病理学に関係している。
【００１９】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、双極性障害を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物は、双極性障害のマウスモデルにおいて躁病及び／またはうつ病の事象を低減し得る。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、双極性障害の神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。
【００２０】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、神経認知障害、例えば、アルツハイマー病を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物は、神経認知障害のマウスモデルにおいて認知及び行動の機能を改善し得る。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、神経認知障害の神経病理学に関係している。
【００２１】
さらに好ましい実施形態において、本発明は、パーキンソン病を処置または予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物は、パーキンソン病のマウスモデルにおいて運動及び認知機能を改善し得る。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、中枢、自律及び腸神経系におけるシグナル伝達を調節し得；ＨＰＡ軸経路の活性を調節し得；神経内分泌及び／または神経免疫経路を調節し得；かつ、対象の共生代謝産物、炎症マーカー及び／または胃腸透過性のレベルを調節し得、これらの全てが、パーキンソン病の神経病理学に関係している。ある特定の実施形態において、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株による処置は、オキシトシン及び／またはバソプレシンホルモンのレベルを調節し得る。
【００２２】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸によって介在される疾患または状態の処置または予防において微生物叢−腸−脳軸を調節する方法における使用のためのものである。特に、本発明の組成物は、自閉症スペクトラム障害；強迫神経症；大うつ病性障害；不安障害；ストレス障害；統合失調症スペクトラム障害；双極性障害；神経認知障害及びパーキンソン病の処置または予防において微生物叢−腸−脳軸を調節する際に使用され得る。
【００２３】
本発明の好ましい実施形態において、組成物における細菌株は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍのものである。近縁の株、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する細菌株が使用されてもよい。好ましくは、細菌株は、配列番号１または２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号２に対するものである。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号２によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００２４】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、経口投与用である。本発明の株の経口投与は、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在されるものを処置するのに有効であり得る。また、経口投与は、患者及び施術者にとって便利であり、腸への送達及び／または腸への部分もしくは全体定着を可能にする。
【００２５】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、１または２以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。
【００２６】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌株を含む。凍結乾燥は、細菌の送達を可能にする安定な組成物を調製するのに有効かつ便利な技術である。
【００２７】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記に記載されている組成物を含む食品を提供する。
【００２８】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記に記載されている組成物を含むワクチン組成物を提供する。
【００２９】
さらに、本発明は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害によって介在される疾患または状態を処置または予防する方法であって、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を投与することを含む上記方法を提供する。
【００３０】
上記発明の開発において、本発明者らは、治療に特に有用である細菌株を確認及び特徴付けした。本発明のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株は、本明細書に記載されている疾患、例えば、自閉症スペクトラム障害を処置するのに有効であることが示される。そのため、別の態様において、本発明は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株、またはその派生物（derivative）の細胞を提供する。本発明はまた、かかる細胞、またはかかる細胞の生物学的に純粋な培養物を含む組成物も提供する。本発明はまた、特に本明細書に記載されている疾患の治療における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株、またはその派生物の細胞も提供する。
【００３１】
特に好ましい実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害、または好ましくは自閉症を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、特に、自閉症の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株を含む組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】ＭＲＸ０１０による処置は、ＭＩＡマウスモデルにおいて埋め込まれる大理石の数を減少させた。対照群に対して＃ｐ＜０．０１。ビヒクル群に対して＊＊ｐ＜０．０１。推測的な比較によって明らかにされているように、ビヒクル群に対して＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図２】社会的伝達の食べ物の嗜好に対するビヒクルまたはＭＲＸ０１０のいずれかによる処置の効果。
【図３】強制水泳試験でのマウスの不動時間に対するビヒクルまたはＭＲＸ０１０のいずれかによる処置の効果。
【図４】ＭＩＡマウスにおける腸透過性に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図５】腸運動に対するＭＲＸ０１０による慢性処置の効果。対照群に対して＃＃ｐ＜０．０１。
【図６】ＢＴＢＲマウスにおける食べ物の嗜好の社会的伝達に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図７】社会的相互作用試験におけるＢＴＢＲマウスの社会的行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図８】大理石埋め込み試験におけるＢＴＢＲマウスの常同行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図９】ＢＴＢＲマウスにおける高架式十字迷路での不安様行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図１０】ＢＴＢＲマウスにおけるオープンフィールドアリーナでの自発運動及び不安様行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図１１】強制水泳試験でのＢＴＢＲマウスの不動時間に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図１２】ＢＴＢＲマウスにおいて尿への嗅覚行為に費やした時間に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。水ビヒクル群に対して＃＃ｐ＜０．０１。
【図１３】ＢＴＢＲマウスにおける腸運動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図１４】ＢＴＢＲマウスにおける選択的解剖学的マーカーに対するＭＲＸ０１０による処置の効果。ビヒクル群に対して＊ｐ＜０．０５。
【図１５】セルフグルーミング試験でのＭＩＡマウスにおける常同／不安様行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。対照に対して＃ｐ＝０．０１７。ビヒクルは、リン酸緩衝生理食塩水である。
【図１６】高架式十字迷路でのＭＩＡマウスにおける不安様行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。Ａ−開放アーム；Ｂ−閉鎖アーム。ビヒクルは、リン酸緩衝生理食塩水である。
【図１７】オープンフィールドアリーナでのＭＩＡマウスにおける不安様行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。ビヒクルは、リン酸緩衝生理食塩水である。
【図１８】雌の尿への嗅覚行為試験でのＭＩＡマウスにおける社会的行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。ビヒクルは、リン酸緩衝生理食塩水である。
【図１９】３チャンバー試験でのＭＩＡマウスにおける社会的行動に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。Ａ−対象対マウス。＊ｐ＜０．００１対マウス。Ｂ−ファミリアーマウス対新規マウス。＊ｐ＝０．００５対対照；＃ｐ＝０．００１対ファミリアーマウス。ＭＲＸ０１０は、新規マウスとの交流の増加をもたらし、そのため、社会的行動が改善された。ビヒクルは、リン酸緩衝生理食塩水である。
【図２０】新規対象認識試験でのＭＩＡマウスにおける認知能力に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。ビヒクルは、リン酸緩衝生理食塩水である。
【図２１】回腸における透過性及び遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水；ＩＤＯ−１：インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ−１；ＴＪＰ１：タイトジャンクションタンパク質１；ＴＰＨ１：トリプトファン水酸化酵素１。
【図２２】結腸における透過性及び遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水；ＩＤＯ−１：インドールアミン−ピロール２，３−ジオキシゲナーゼ−１；ＴＪＰ１：タイトジャンクションタンパク質１；ＴＰＨ１：トリプトファン水酸化酵素１。
【図２３】盲腸内容物におけるＳＣＦＡ発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。ビヒクルは、リン酸緩衝生理食塩水である。
【図２４】抗原チャレンジに応答する脾細胞サイトカイン産生に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水；ＬＰＳ：リポ多糖体；ＣｏｎＡ：コンカナバリンＡ；ＩＬ：インターロイキン；ＴＮＦα：腫瘍壊死因子α；ＣＸＣＬ１：ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１；ＩＦＮγ：インターフェロン−γ。＊ｔ（８）＝２．５４、ｐ＝０．０３５対ＰＢＳ対照。
【図２５】必須アミノ酸の血漿中濃度（すなわち、生合成及び異化）に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。＊ｔ（９）＝２．７３３、ｐ＝０．０２３対ＰＢＳ。
【図２６】脳におけるモノアミン変化に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。５−ＨＩＡＡ：５−ヒドロキシ−インドール−酢酸；５−ＨＴ：５−ヒドロキシ−トリプタミン（セロトニン）。
【図２７】神経伝達物質受容体の海馬遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図２８】神経伝達物質受容体の扁桃体遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。＊ｔ（１１）＝２．７３７、ｐ＝０．０１９対ＰＢＳ。
【図２９】神経伝達物質受容体の前頭葉前部皮質（ＰＦＣ）遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図３０】炎症マーカーの海馬遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図３１】炎症マーカーの扁桃体遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図３２】炎症マーカーのＰＦＣ遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図３３】内分泌マーカーの海馬遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【図３４】内分泌マーカーの扁桃体遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。＊ｔ（１１）＝０２．９４３、ｐ＝０．０１３。
【図３５】内分泌マーカーのＰＦＣ遺伝子発現に対するＭＲＸ０１０による処置の効果。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
細菌株
本発明の組成物は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む。実施例は、この種の細菌が、微生物叢-腸−脳軸によって介在される自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害を処置または予防するのに有用であることを実証している。自閉症スペクトラム障害の症状のアセスメントのためにこの用途で使用されるマウスモデル実験は、上記において列挙されているものを含めた他の中枢神経系障害の症状のアセスメントに適用可能であることが当該分野において公知である。
【００３４】
本発明は、治療における使用のための、例えば、中枢神経系障害または状態、特に、微生物叢-腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を処置または予防する際の使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍを含み、いずれの他の細菌種も含有しない。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの単一株を含み、いずれの他の細菌株または種も含有しない。
【００３５】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、対（ｄｉｐｌｏｃｏｃｃｉ）または短鎖において生じる場合が多いＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属におけるグラム陽性のα−溶血性または非溶血性細菌である。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍのタイプの株は、ＡＴＣＣ１９４３４＝ＣＣＵＧ５４２＝ＣＩＰ１０３０１４＝ＣＦＢＰ４２４８＝ＤＳＭ２０４７７＝ＨＡＭＢＩ１７１０＝ＪＣＭ５８０４＝ＪＣＭ８７２７＝ＬＭＧ１１４２３＝ＮＢＲＣ１００４８６＝ＮＢＲＣ１００４８５＝ＮＣＩＭＢ１１５０８（以前はＮＣＤＯ９４２）＝ＮＣＴＣ７１７１である［２８］。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株ＬＭＧ１１４２３の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列のＧｅｎＢａｎｋ受託番号は、ＡＪ３０１８３０である（配列番号１として本明細書に開示されている）。この例示的なＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株は、［２８］に記載されている。
【００３６】
本発明における使用のための他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株には：Ｒ１３［２９］、ＣＦＲ３００３［３０］、ＡＬ４１［３１］、ＤＳＭ１０６６３ＮＣＩＭＢ１０４１５［３２］、ＮＣＩＭＢ１０４１５Ｅ１７０７［３３］、ＮＭ１１３及びＮＭ２１３［３４］が含まれる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、これらの株のうちの１つ、またはその派生物もしくはバイオタイプを含む。本発明における使用のためのＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍのさらなる例は、ＤＯ株である。この細菌のゲノム配列は、染色体及び３つのプラスミドからなる。染色体の配列は、配列番号３として本明細書に開示されており、３つのプラスミドの配列は、配列番号：４、５及び６として本明細書に開示されている。ゲノム配列は、ショットガン配列全体を使用して得られ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿０１７９６０．１を使用して利用可能である。
【００３７】
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌を実施例において試験した。当該細菌は、本明細書において株ＭＲＸ０１０と称される。用語「ＭＲＸ０１０」、「ＭＲｘ００１０」、「Ｍｒｘ０１０」及び「Ｍｒｘ００１０」は、本明細書において互換可能に使用される。試験したＭＲＸ０１０株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列は、配列番号２において付与されている。株ＭＲＸ０１０を、「Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ」として２０１５年１１月１６日に４Ｄ  Ｐｈａｒｍａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌｔｄ．（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２５  ２ＺＳ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）によって国際寄託当局ＮＣＩＭＢ，Ｌｔｄ．（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＡＢ２１  ９ＹＡ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）に寄託し、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７が割り当てられた。
【００３８】
実施例において試験されている株と近縁の細菌株もまた、自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効であると期待される。ある特定の実施形態において、本発明において使用される細菌株は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号１または２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。好ましくは、配列同一性は、配列番号２に対するものである。好ましくは、本発明において使用される細菌株は、配列番号２によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００３９】
受託番号４２４８７として寄託されている細菌のバイオタイプである細菌株もまた、自閉症スペクトラム障害及び中枢神経系障害及び状態、特に 微生物叢-腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに効果的であることが期待されている。バイオタイプは、同じまたは非常に類似する生理的及び生化学的特徴を有する近縁の株である。
【００４０】
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌のバイオタイプであり、本発明での使用に好適である株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌の他のヌクレオチド配列をシークエンスすることによって同定されてよい。例えば、実質的に全ゲノムがシークエンスされてよく、本発明で使用するバイオタイプ株は、その全ゲノムの少なくとも８０％にわたって（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％もしくは９９％にわたって、またはその全ゲノムにわたって）少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有していてよい。例えば、いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、そのゲノムの少なくとも９８％にわたって少なくとも９８％の配列同一性、またはそのゲノムの９９％にわたって少なくとも９９％の配列同一性を有する。バイオタイプ株を同定するのに使用される他の好適な配列は、ｈｓｐ６０または反復配列、例えば、ＢＯＸ、ＥＲＩＣ、（ＧＴＧ）５、もしくはＲＥＰまたは［３５］を含んでいてよい。バイオタイプ株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有していてよい。いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株ＭＲＸ０１０の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有しており、配列番号２少なくとも９９％同一である（例えば、少なくとも９９．５％または少なくとも９９．９％同一である）１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列を含む。いくつかの実施形態において、バイオタイプ株は、ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株ＭＲＸ０１０の対応する配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％の配列同一性を有する配列を有し、配列番号２の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する。
【００４１】
代替的には、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明での使用に好適である株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７の寄託物、ならびに制限断片分析及び／またはＰＣＲ分析を使用することによって、例えば、蛍光増幅断片長多型分析（ＦＡＦＬＰ）及び反復ＤＮＡ要素（ｒｅｐ）−ＰＣＲ指紋検査、またはタンパク質プロファイリング、または部分１６Ｓもしくは２３ｓ  ｒＤＮＡシークエンシングを使用することによって同定されてよい。好ましい実施形態において、かかる技術は、他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株を同定するのに使用されてよい。
【００４２】
ある特定の実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌のバイオタイプでありかつ本発明での使用に好適である株は、増幅リボソームＤＮＡ制限分析（ＡＲＤＲＡ）によって分析されるとき、例えば、Ｓａｕ３ＡＩ制限酵素（例示的な方法及びガイダンスについては、例えば［３６］を参照されたい）を使用するとき、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌と同じパターンを付与する株である。代替的には、バイオタイプ株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌と同じ炭水化物発酵パターンを有する株として同定される。
【００４３】
いくつかの実施形態において、本発明において使用される細菌株は：
（ｉ）アルギニンジヒドロラーゼ、β−グルコシダーゼ、マンノース発酵、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、アルギニンアリールアミダーゼ、フェニルアラニンアリールアミダーゼ、ロイシンアリールアミダーゼ、ピログルタミン酸アリールアミダーゼ、チロシンアリールアミダーゼ、グリシンアリールアミダーゼ、ヒスチジンアリールアミダーゼ及びセリンアリールアミダーゼのうちの少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくはこれらの全て）に陽性であり；ならびに／または
（ｉｉ）Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼの中間体であり、
好ましくは、炭水化物、アミノ酸及び硝酸塩代謝のアッセイ、ならびに任意選択的にはアルカリホスファターゼ活性のアッセイによって決定され、より好ましくは、（好ましくはｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘからのＲａｐｉｄ  ＩＤ  ３２Ａ系を使用した）Ｒａｐｉｄ  ＩＤ  ３２Ａ分析によって決定される。
【００４４】
本発明の組成物及び方法において有用である他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株、例えば、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌のバイオタイプは、実施例において記載されているアッセイを含め、いずれの適切な方法またはストラテジーを使用して同定されてもよい。例えば、本発明で使用される株は、嫌気性ＹＣＦＡにおいて培養し、及び／または当該細菌を自閉症スペクトラム障害マウスモデルに投与し、次いでサイトカインレベルを評価することによって同定されてよい。特に、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている細菌と同様の成長パターン、代謝型及び／または表面抗原を有する細菌株は、本発明において有用であり得る。有用な株は、ＮＣＩＭＢ４２４８７株に匹敵する免疫調節活性を有する。特に、バイオタイプ株は、実施例において示されている効果に匹敵する、自閉症スペクトラム障害モデルに対する効果を引き出し、これは、実施例において記載されている培養及び投与プロトコルを使用することによって同定されてよい。
【００４５】
本発明の特に好ましい株は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株である。これは、実施例において試験されて、疾患を処置するのに効果的であることが示される例示的なＭＲＸ０１０株である。そのため、本発明は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株またはその派生物の細胞、例えば単離細胞を提供する。本発明はまた、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株、またはその派生物の細胞を含む組成物も提供する。本発明はまた、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株の生物学的に純粋な培養物も提供する。本発明はまた、本明細書に記載されている疾患の治療における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株、またはその派生物の細胞も提供する。受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株の派生物は、娘株（後代）、またはオリジナルから培養された（サブクローニングされた）株であってよい。
【００４６】
本発明の株の派生物は、生物活性を取り除くことなく、例えば、遺伝子レベルで修飾されてよい。特に、本発明の派生株は、治療的に活性である。派生株は、オリジナルのＮＣＩＭＢ４２４８７株と匹敵する免疫調節活性を有する。特に、派生株は、実施例において示されている効果と匹敵する、自閉症スペクトラム障害モデルに対しての効果を引き出し、これは、実施例において記載されている培養及び投与プロトコルを使用することによって同定されてよい。ＮＣＩＭＢ４２４８７株の派生物は、概して、ＮＣＩＭＢ４２４８７株のバイオタイプである。
【００４７】
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するいずれの細胞も包含し、かかる細胞は本発明によって包含される。そのため、いくつかの実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株の細胞への言及は、ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＭＲＸ０１０株のみを称し、ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されていない細菌株を称さない。いくつかの実施形態において、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株の細胞への言及は、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株と同じ安全及び治療効能特性を有するが、ＮＣＩＭＢ４２４８７で寄託されている株ではない細胞を称する。
【００４８】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号３と配列同一性を有する染色体を有する。いくつかの実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号３の少なくとも６０％にわたって（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％にわたって）配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性）を有する染色体を有する。例えば、本発明における使用のための細菌株は、配列番号３の７０％にわたって配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号３の８０％にわたって配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号３の９０％にわたって配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号３の１００％にわたって配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号３の７０％にわたって配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号３の８０％にわたって配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号３の９０％にわたって配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号３の１００％にわたって配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性、または配列番号３の７０％にわたって配列番号３と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号３の８０％にわたって配列番号３と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号３の９０％にわたって配列番号３と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号３の９５％にわたって少なくとも９８％の同一性、または配列番号３の１００％にわたって配列番号３と少なくとも９８％の配列同一性、または配列番号３の９０％にわたって配列番号３と少なくとも９９．５％の配列同一性、または配列番号３の９５％にわたって少なくとも９９．５％の同一性、または配列番号３の９８％にわたって少なくとも９９．５％の同一性、または配列番号３の１００％にわたって配列番号３と少なくとも９９．５％の配列同一性を有する染色体を有していてよい。
【００４９】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号３と配列同一性を有する染色体、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号１または２と配列同一性を有する１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列、好ましくは、配列番号２と少なくとも９９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列、より好ましくは配列番号２の１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列を含むものを有する。
【００５０】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号３と配列同一性を有する染色体を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
【００５１】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、例えば上記に記載されているように、配列番号３と配列同一性を有する染色体、及び、例えば上記に記載されているように、配列番号１または２と配列同一性を有する１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
【００５２】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、配列番号２によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列（例えば、配列番号２の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を含む）、及び配列番号３の少なくとも９０％にわたって配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有する染色体を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
【００５３】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍであり、配列番号２によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列（例えば、配列番号２の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を含む）、及び配列番号３の少なくとも９８％にわたって（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％にわたって）配列番号３と少なくとも９８％の配列同一性（例えば、少なくとも９９％または少なくとも９９．５％の配列同一性）を有する染色体を有し、中枢神経系障害及び状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害及び状態を処置または予防するのに有効である。
【００５４】
好ましい実施形態において、本発明の組成物における細菌株は生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。
【００５５】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、種々の抗生物質に感受性を示す［２５］。例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、アモキシリン、アンピシリン、アルベカシン及びジベカシン、アズロシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、セフトビプロール、クラリスロマイシン、ドリペネム、エリスロマイシン、フシジン酸、ゲンタマイシン、グレパフロキサシン、イミペネム、ジョサマイシン、メロペネム、メズロシリン、ピペラシリン、リファンピシン、リファキシミン、ロキタマイシン、ロザラミシン、ロキシスロマイシン、スピラマイシン、ストレプトマイシン、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、テリスロマイシン、チカルシリン、チカルシリン／クラブラン酸塩、トスフロキサシン、トリメトプリムならびにバージニアマイシンに感受性であるが、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、これらの抗生物質の全てへの耐性が実証されている［３７］。対照的に、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、キヌプリスチン−ダルホプリスチンに感受性であるが、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、均一に耐性である［２５］［３７］。特に、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓよりもβ−ラクタム抗生物質に感受性でなく、また、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓと比較して、アンピシリン及びバンコマイシンに対して増加した耐性も示す［２５］。
【００５６】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、概して、胃腸管の共生生物とされる。対照的に、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、恐らくは生き残り戦略における重要な差に起因して、最も一般的に遭遇する病原性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種である［２５］。実際、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、より程度が大きい内因性の病原性、例えば、増加した細胞溶解素産生、フェロモン応答性のプラスミド移行（及び凝集物質の付随する産生）、細胞外スーパーオキシド産生、ならびに特有の表面タンパク質を与える形質を示す。そのため、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍと比較して多数の異なるタンパク質を発現し、これらのタンパク質は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓの増加した病原性に関連する。Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ細胞溶解素は、特有の、大規模に修飾された細菌毒素であり、これは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍによっては発現されない。さらに、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、多数の宿主寄生体相互作用遺伝子（例えば、Ｅｓｐ）を発現し、これは、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍによっては発現されない。また、全てのＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ株が、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍにおいては観察されない形質である、実質的な細胞外スーパーオキシドを生じる。
【００５７】
厳密な発酵槽とされているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍとは異なり、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、外因性ヘミンを使用してシトクロムを合成するため、適切でない部位でのコロニー形成に関連する、好気性条件下での成長の利点を有する［２５］。さらに、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは、Ｌ−アラビノースから酸を発生させ得るが、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは発生させることができない。対照的に、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、Ｌ−グリセロールから酸を発生させ得るが、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍは発生させることができない。さらに、これらの２つの細菌種は、異なるレベルのβ−ガラクトシダーゼ及びアルギニンジヒドロラーゼを有し、デンプンを加水分解して、メリビオース、Ｌ−ラムノース、Ｄ−ソルビトール及びスクロースから酸を生成する異なる能力を実証している［３７］。そのため、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ及びＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓは、著しく表現型的に異なるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種である。
【００５８】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、アモキシリン、アンピシリン、アルベカシン及びジベカシン、アズロシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、セフトビプロール、クラリスロマイシン、ドリペネム、エリスロマイシン、フシジン酸、ゲンタマイシン、グレパフロキサシン、イミペネム、ジョサマイシン、メロペネム、メズロシリン、ピペラシリン、リファンピシン、リファキシミン、ロキタマイシン、ロザラミシン、ロキシスロマイシン、スピラマイシン、ストレプトマイシン、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、テリスロマイシン、チカルシリン、チカルシリン／クラブラン酸塩、トスフロキサシン、トリメトプリムならびにバージニアマイシンの１または２以上に耐性である。ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、キヌプリスチン−ダルホプリスチンに感受性である。
【００５９】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、β−ラクタム抗生物質に耐性である。ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、バンコマイシンに耐性である。ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、アンピシリンに耐性である。
【００６０】
ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、厳密な発酵槽である。ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、Ｌ−アラビノースから酸を発生させ得る。ある特定の実施形態において、本発明における使用のための細菌株は、グリセロールから酸を発生させることができない。
【００６１】
治療的使用
微生物叢−腸−脳軸の調節
腸と脳との間の連通（微生物叢−腸−脳軸）は、双方向の神経液性連通系を介して起こる。最近の証拠により、腸に住む微生物叢が、脳の発達を調節し得、また、微生物叢−腸−脳軸を介して行動的表現型を生じさせ得ることが示されている。実際、多数のレビューが、中枢神経系の機能を維持する際の微生物叢−腸−脳軸の役割を示唆し、また、中枢神経系障害及び状態の発生の際の微生物叢−腸−脳軸の機能障害を暗示している［１０］，［１３］，［１４］，［３８］。
【００６２】
腸と脳との間の双方向の連通（すなわち、腸−脳軸）には、視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）軸を含めた中枢神経系、神経内分泌及び神経免疫系、腸神経系（ＥＮＳ）及び迷走神経を含めた、自律神経系（ＡＮＳ）の交感神経及び副交感神経部門、ならびに腸内微生物叢が含まれる。
【００６３】
実施例において実証されているように、本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸を調節し、ＣＮＳ障害に関連する行動上の症状を低減することができる。したがって、本発明の組成物は、中枢神経系（ＣＮＳ）の障害、特に、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する障害及び状態を処置または予防するのに有用であり得る。
【００６４】
本発明の組成物はまた、神経発達障害及び／または精神神経状態を処置または予防するのにも有用であり得る。神経発達疾患及び精神神経状態は、多くの場合、微生物叢−腸−脳軸に関連する。本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害によって介在される神経発達疾患及び／または精神神経状態を処置または予防するのに有用であり得る。さらに好ましい実施形態において、本発明の組成物は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する際の使用のためのものである。
【００６５】
特定の実施形態において、本発明の組成物は：自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及び／または慢性疼痛；からなる群から選択される疾患または状態を処置または予防するのに有用であり得る。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。
【００６６】
本発明の組成物は、慢性疾患を処置または予防する、他の治療（例えば、抗精神病薬及び／もしくは抗うつ薬による処置）に応答しなかった患者において疾患を処置または予防する、ならびに／あるいは微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する組織損傷及び症状を処置または予防するのに特に有用であり得る。
【００６７】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＣＮＳを調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、自律神経系（ＡＮＳ）を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、腸神経系（ＥＮＳ）を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、視床下部−下垂体−副腎（ＨＰＡ）軸を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経内分泌経路を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経免疫経路を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＣＮＳ、ＡＮＳ、ＥＮＳ、ＨＰＡ軸ならびに／または神経内分泌及び神経免疫経路を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象の共生代謝産物のレベル及び／または胃腸透過性を調節する。
【００６８】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、神経系によって調節される。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経系におけるシグナル伝達を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、中枢神経系のシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、感覚神経におけるシグナル伝達を調節する。他の実施形態において、本発明の組成物は、運動神経におけるシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＮＳにおけるシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、ＡＮＳは、副交感神経系である。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、迷走神経のシグナル伝達を調節する。他の実施形態において、ＡＮＳは、交感神経系である。他の実施形態において、本発明の組成物は、腸神経系におけるシグナル伝達を調節する。ある特定の実施形態において、ＡＮＳ及びＥＮＳ神経のシグナル伝達は、胃腸管の管腔内容物に直接応答する。他の実施形態において、ＡＮＳ及びＥＮＳ神経のシグナル伝達は、管腔細菌によって産生される神経化学物質に間接的に応答する。他の実施形態において、ＡＮＳ及びＥＮＳ神経のシグナル伝達は、管腔細菌または腸内分泌細胞によって産生される神経化学物質に応答する。ある特定の好ましい実施形態において、ＥＮＳの神経は、ＣＮＳの機能に影響する迷走神経求心性を活性化する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、クロム親和性細胞の活性を調節する。
【００６９】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、動物モデルにおける恐怖条件付けを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、恐怖及び／もしくは不安の発生を調節し、ならびに／または、恐怖及び／もしくは不安が対象において消滅するようになる程度まで調節するのに使用され得る。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、動物モデルにおいてストレス−誘発の異常高熱の程度を調節するのに使用され得る。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるストレス及び／または不安を調節する。
【００７０】
自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）
自閉症スペクトラム障害は、社会的相互作用、コミュニケーション、ならびに異常に制限された反復行動及び関心における早発性の困難を特徴とする一連の不均一な神経発達状態である。症状は、幼少期から認められ得るが、ＡＳＤは、多くの場合、普通クラスの教育を開始するより有能な子供において診断され得る。自閉症は、原発型のＡＳＤを表す。
【００７１】
歴史的に、自閉症は、３つの中核領域：社会的相互作用の低下、異常なコミュニケーション、ならびに制限されかつ反復する行動及び関心；に基づいて診断されてきた。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（ＩＣＤ−１０Ｒ、ＷＨＯ  １９９３）及びＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ（ＤＳＭ−ＩＶ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、２０００）において、自閉症は、他に特定のない限り、４つの可能性のある診断的サブタイプ：アスペルガー症候群、小児自閉症／自閉症、非定型自閉症、及びＰＤＤを有する広汎性発達障害（ＰＤＤ）の総称下に入る。ＤＭＳ−５において、これらの診断的サブタイプは、合わされて、単一の自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）カテゴリーとなり、機能障害の３つの中核領域の以前の使用は、２つの主な領域、すなわち、感覚の統合失調を含めた、社会的コミュニケーション及び相互作用、ならびに反復行動に低減された。
【００７２】
ＡＳＤは、各人に様々な異なる様式で影響して、非常に穏やかなものから重度のものまで及び得るため、「スペクトラム障害」である。影響された個人の機能は、言語能力、知能程度、共存疾患、症状の構成、及びサービスへのアクセスに応じて実質的に変動する。認知機能、学習、注意及び感覚処理が通常低下する。
【００７３】
ＤＳＭ−ＩＶには、自閉症の診断には、社会的相互作用における質的な機能障害の、最低２つの尺度、コミュニケーションにおける質的な機能障害のうちの１つの症状、ならびに、制限されかつ反復する行動のうちの１つの症状を含めた少なくとも６つの症状の存在を必要とすることが記述されている。ＤＭＳ−５は、ＡＳＤの診断を２つの症状領域：（ｉ）社会的相互作用及び社会的コミュニケーションの欠損；ならびに（ｉｉ）行動、関心または活動の制限された反復パターン；に再定義している。
【００７４】
併発する医学的状態は、ＡＳＤにおいて高度に蔓延している。併発には、不安及びうつ病、発作、注意欠陥、攻撃的行動、睡眠障害、胃腸障害、てんかん、精神遅滞、知的障害ならびに摂取困難が含まれる。
【００７５】
実施例において、本発明の組成物が、自閉症スペクトラム障害の動物モデルにおいて疾患の発生及び疾患の重篤度の低減を達成すること、ならびに、そのため、自閉症スペクトラム障害の処置または予防において有用であり得ることが実証されている。
【００７６】
ＡＳＤは、環境因子によって部分的に誘発される中枢神経系障害である。そのため、微生物叢−腸−脳軸の機能障害は、ＡＳＤの発症及び持続の原因となり得る。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、自閉症スペクトラム障害を処置または予防する際の使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、自閉症を処置または予防する際の使用のためのものである。いくつかの実施形態において、自閉症は、広汎性発達障害（ＰＤＤ）である。別の実施形態において、ＰＤＤは、他に特定のない限り、アスペルガー症候群、小児自閉症／自閉症、非定型自閉症及び／またはＰＤＤである。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、他に特定のない限り、自閉症スペクトラム障害、自閉症、広汎性発達障害；アスペルガー症候群；小児自閉症／自閉症、非定型自閉症及び／またはＰＤＤを処置または予防する際の使用のためのものである。
【００７７】
本発明の組成物は、対象の微生物叢−腸−脳軸を調節するのに有用であり得る。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、小児において及び／または成人において、ＡＳＤの危険性があると確認された、または出生前もしくは早期の発症段階でＡＳＤと診断された患者におけるＡＳＤを予防する際の使用のためのものである。本発明の組成物は、ＡＳＤの発症を予防するのに有用であり得る。
【００７８】
本発明の組成物は、ＡＳＤを管理または軽減するのに有用であり得る。ＡＳＤの処置または予防とは、例えば、症状の重篤度の軽減、または患者にとって問題である憎悪の頻度もしくは誘因の範囲の低減を称してよい。
【００７９】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤの少なくとも１つの中核症状を予防、低減または軽減する。
【００８０】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＤＭＳ−５において分類されたＡＳＤの２つの症状領域のうち少なくとも１つを予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、社会的相互作用及び／または社会的コミュニケーションの欠損を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、行動、関心または活動の制限的反復パターンを予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、社会的相互作用、社会的コミュニケーションの欠損、及び／または行動、関心もしくは活動の制限的反復パターンを予防、低減または軽減する。
【００８１】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、反復行動、常同行動、強迫行動、習慣的行動、同一行動及び制限された行動を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象における、社会意識、社会情報処理、社会的コミュニケーションの能力、社会不安／回避、ならびに自閉症の先入観及び形質を改善する。
【００８２】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤの中核症状に関連するさらなる症状を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象における興奮性（攻撃、意図的な自傷及びかんしゃくを含む）、興奮、号泣、無気力、社会的離脱、常同行為、過活動、不服従、適切でない会話、不安、うつ病、ならびに／または制限を超えたもしくは制限下での行動を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象における認知機能、学習、注意及び／または感覚処理を改善する。
【００８３】
他の実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象における二次的な効果指標を改善する。いくつかの実施形態において、二次的な効果指標には、対象のさらなる症状及び／または機能評価尺度、行動尺度、ならびに様々な指標が含まれる。
【００８４】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象の中核症状のアセスメントのための診断及び／または症状尺度の陽性変化を引き起こす。いくつかの実施形態において、診断及び／または症状尺度は、自閉症診断面接−改訂版（ＡＳＩ−Ｒ）である。いくつかの実施形態において、診断または症状尺度は、自閉症診断観察スケジュール汎用版（ＡＤＯＳ−Ｇ）、現在はＡＤＯＳ−２である。他の実施形態において、診断または症状尺度は、自閉症診断面接−改訂版（ＡＤＩ−Ｒ）である。他の実施形態において、診断または症状尺度は、ソーシャルコミュニケーション障害診断面接（ＤＩＳＣＯ）である。さらに他の実施形態において、診断または症状尺度は、小児自閉症評定尺度（ＣＡＲＳ及びＣＡＲＳ２）である。
【００８５】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤの有効性エンドポイントの包括的指標の陽性変化を引き起こす。ある特定の実施形態において、包括的指標には、限定されないが、異常行動チェックリスト（ＡＢＣ）、児童行動チェックリスト（ＣＢＣＬ）、Ｖｉｎｅｌａｎｄ−ＩＩ適応行動尺度（ＶＡＢＳ）、対人応答性尺度（ＳＲＳ）、及び／または反復行動尺度−改訂版（ＲＢＳ−Ｒ）が含まれる。
【００８６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象の全般的機能において陽性結果を示す。
【００８７】
さらなる尺度は、当業者に公知である。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、当業者に公知である診断及び/または症状尺度の結果を改善する。
【００８８】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤの共存疾患の発生を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、不安及びうつ病、発作、注意欠陥、攻撃的行動、睡眠障害、胃腸障害（過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を含む）、てんかん、精神遅滞、知的障害ならびに／または摂取困難の発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸共存疾患、例えば、腹痛、下痢及び鼓腸を予防、低減または軽減する。
【００８９】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、自閉症との類似点を有して臨床的に提示され得るある特定の精神及び行動障害の症状を予防、低減または軽減する。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、注意欠陥障害（ＡＤＨＤ）；感情／不安障害；愛着障害；反抗的行為障害（ＯＤＤ）；強迫神経症（ＯＣＤ）、及び／または統合失調症（認知機能障害）を含めた精神病を予防、低減または軽減する。
【００９０】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを処置するための別の治療と併用されるときにＡＳＤを予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、抗精神病、抗不安及び抗うつ薬が含まれる。かかる薬物には、リスペリドン（Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ（登録商標））；オランザピン（Ｚｙｐｒｅｘａ（登録商標））；フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））；セルトラリン（Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標））；フルボキサミン（Ｌｕｖｏｘ（登録商標））；クロミプラミン（Ａｎａｆｒａｎｉｌ（登録商標））；ハロペリドール（Ｈａｌｄｏｌ（登録商標））；チオリダジン；フルフェナジン；クロルプロマジン；ジプラシドン（Ｇｅｏｇｏｎ（登録商標））；カルバマゼピン（Ｔｅｇｒｅｔｏｌ（登録商標））；ラモトリギン（Ｌａｍｉｃｔａｌ（登録商標））；トピラマート（Ｔｏｐｏｍａｘ（登録商標））；バルプロ酸（Ｄｅｐａｋｏｔｅ（登録商標））；メチルフェニデート（Ｒｉｔａｌｉｎ（登録商標））；ジアゼパム（Ｖａｌｉｕｍ（登録商標））及びロラゼパム（Ａｔｉｖａｎ（登録商標））が含まれる。
【００９１】
強迫神経症（ＯＣＤ）
ＯＣＤは、不安障害に属する不均一な慢性及び無力化障害である。ＤＳＭ−ＩＶ定義によると、ＯＣＤの本質的な特徴は、重度かつ時間がかかる（１日１時間超）反復性の強迫観念及び／または衝動強迫であり（基準Ａ）、あるいは、著しい苦悩を引き起こす、または、対象の通常の日常、職業的機能、通常の社会的活動もしくは関係をかなり妨げる（基準Ｃ）。障害の過程におけるあるポイントとして、当人は、強迫観念または衝動強迫が過剰であるまたは気まぐれであることを認識している（基準Ｂ）。
【００９２】
強迫観念は、煩わしいかつ適切でないものとして経験され、また、著しい不安または苦悩を引き起こす、反復性かつ持続性の思考、衝動または想像として定義される。かかる思考、衝動または想像は、現実の問題についての単なる過度の心労ではなく、患者によって自身の心の産物（例えば、汚染の恐怖、対称強迫観念）として認識されている。当人は、ある他の思考または行為によって強迫観念を無視、抑制または中和しようとする。
【００９３】
衝動強迫は、当人が、強迫観念に反応して、または堅く適用されなければならない規則に従って、せざるを得ないと感じている反復行動（例えば、手洗い、秩序化、溜め込み、チェック）または精神的行為（例えば、祈り、数を数えること、無言での単語の反復）として定義される。
【００９４】
ＯＣＤは、多くの場合、大うつ病性障害、他の不安障害（全般性不安障害、社会不安障害、パニック障害）、薬物乱用ならびに摂食障害（拒食症及び過食症）を含めた他の精神疾患の共存症の比率と関連する。
【００９５】
ＯＣＤは、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるＯＣＤを処置または予防する際の使用のためのものである。
【００９６】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＯＣＤの本質的な症状特徴を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における反復性の強迫観念及び／または衝動強迫を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、強迫観念は、煩わしいかつ適切でないものとして経験され、また、著しい不安または苦悩を引き起こす、反復性または持続性の思考、衝動または想像である。ある特定の実施形態において、衝動強迫は、対象が、強迫観念に反応して、または堅く適用されなければならない規則に従って、せざるを得ないと感じている反復行動である。
【００９７】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｙ−ＢＯＣＳ及び／またはＮＩＭＨ−ＯＣ診断及び／または症状尺度に従って対象におけるＯＣＤの症状を改善する。いくつかの実施形態において、Ｙ−ＢＯＣＳ尺度は、一次エンドポイントの改善をモニタリングするのに使用される。いくつかの実施形態において、ＮＩＭＨ−ＯＣ尺度は、二次的パラメータの改善をモニタリングするのに使用される。
【００９８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＡＳＤを有する対象の全般的な社会的機能（関係、仕事など）において陽性結果を示す。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、シーハン障害尺度である。
【００９９】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＯＣＤの少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ＯＣＤの共存疾患には、大うつ病性障害、他の不安障害（全般性不安障害、社会不安障害、パニック障害）、薬物乱用ならびに摂食障害（拒食症及び過食症）ジル・ドゥ・ラ・トゥレット症候群、ＡＤＨＤ（注意−欠陥／多活性障害）及び発達障害が含まれる。
【０１００】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＯＣＤを処置するための別の治療と併用されるときにＯＣＤを予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、セロトニン及びドーパミン再取り込み阻害薬；クロミプラミン及び抗精神病薬が含まれる。
【０１０１】
大うつ病性障害（ＭＤＤ）
ＭＤＤは、実質的な心理社会的機能障害及び高度の個々の精神的緊張、ならびに過剰な罹患率及び死亡率（自殺の危険性が考慮されるべきである）と関連する。大うつ病性障害という用語は、臨床的うつ病、大うつ病、単極性うつ病、単極性障害、反復性うつ病及び単にうつ病を包含する。大うつ病性障害という用語は、気分障害；気分変調；慢性うつ病；季節性情動障害及び境界性パーソナリティ障害をカバーする。
【０１０２】
ＤＭＳ−５基準によると、ＭＤＤ症状には、２週間を超えての日常生活活動での、憂うつな気分、または関心もしくは喜びの損失；ならびに社会的、職業的及び教育的機能の低下が含まれる。具体的な症状、以下の９つのうち少なくとも５つが、ほぼ毎日見られる：ほぼ終日、憂うつまたは怒りっぽい気分；毎日の大部分で、大部分の活動における関心または喜びの減少；有意な体重変化または食欲の変化；睡眠の変化（不眠症または過眠症）；活動の変化（精神運動性激越または遅延）；疲労またはエネルギー損失；罪悪感または無価値（無価値の感覚または過度もしくは適切でない罪悪感）；集中の低下（思考もしくは集中する能力の低下、またはさらなる優柔不断；及び自殺傾向（死もしくは自殺の思考、または対象が自殺計画を有している）。また、ＭＤＤは、非合理的な心配；不愉快な心配による先入観；トラブル緩和及び／または緊張感を含めた不安症状に関連する。ＭＤＤエピソードは、穏やか、中程度、または重度であり得る。
【０１０３】
ＭＤＤエピソードは、多くの場合、他の精神疾患、またはパーキンソン病、アルツハイマー病、脳血管障害、がん及び慢性疼痛症候群のような身体疾患との共存疾患に関連する。ＭＤＤは、全般性不安障害；不安障害；物質使用障害；心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）；パーソナリティ障害；疼痛；ストレス；過敏性腸症候群；不眠症；頭痛及び対人関係の問題を含めた共存疾患としての広範囲の他の精神障害と頻繁に関連する。
【０１０４】
大うつ病性障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるＭＤＤを処置または予防する際の使用のためのものである。
【０１０５】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、急性大うつ病エピソードの処置もしくは予防及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）の際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生を予防、低減または軽減する。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているＤＭＳ−５基準によって分類されているＭＤＤの症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における憂うつな気分を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における大部分の活動における関心または喜びの減少を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、２週間の期間以内のＭＤＤの症状の発生を低減する。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従ってＭＤＤの症状を改善する。症状改善を評価するためのかかる尺度には、ハミルトンうつ病評価尺度（ＨＡＭＤ）及びＭｏｎｔｇｏｍｅｒｙ  Ａｓｂｅｒｇうつ病評価尺度が含まれる。また、Ｚｕｎｇ自己評価うつ病尺度（ＳＤＳ）及びＺｕｎｇ自己評価不安尺度（ＳＡＳ）もまた、好適な症状改善尺度である。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＭＤＤを有する対象の全般的な社会的及び職業的機能において陽性結果を示す。
【０１０９】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、処置耐性ＭＤＤを処置または予防する際の使用のためのものである。
【０１１０】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＭＤＤの少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ＭＤＤの共存疾患には、全般性不安障害；不安障害；物質使用障害；心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）；パーソナリティ障害；疼痛；ストレス；ＩＢＳ；不眠症；頭痛及び対人関係の問題が含まれる。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＭＤＤを処置するための別の治療と併用されるときにＭＤＤを予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、抗うつ薬、増強ストラテジー（例えば、組み合わせ療法、リチウム及び他の気分安定剤、甲状腺ホルモンならびに非定型抗精神病薬）またはさらには第二世代抗精神病薬が含まれる。
【０１１２】
不安障害
不安障害は、不安及び恐怖の感覚によって特徴付けられる精神障害の一群である。全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び選択的無言症を含めた多くの不安障害がある。
【０１１３】
ＧＡＤは、６基準においてＤＭＳ−５に従って診断される。第１基準は、６ヶ月を超えての過度の不安または心配であり、当該不安または心配が多くの活動に関して大抵の場合に存在する。第２基準は、対象が第１基準の症状を管理できないことである。第３基準は、以下：情動不安；疲れやすい；集中の問題；興奮性；筋肉の緊張及び睡眠による問題；のうちの少なくとも３つ（子供においては１つ）が起こることである。最後の３基準は、症状が、かなりの社会的、職業的及び機能的障害を結果として生じる；症状が投薬、薬物、または他の身体的健康問題に起因しない；ならびに、症状が、別の精神的問題、例えばパニック障害に、より一致していない；ということである。全ての他の不安障害は、ＧＡＤの鑑別診断としてみなされ得る。
【０１１４】
ＧＡＤは、うつ病；物質使用障害；ストレス；ＩＢＳ；不眠症；頭痛；疼痛；心臓事象；対人関係の問題及びＡＤＨＤを含む共存疾患としての広範囲の他の精神障害に頻繁に関連する。
【０１１５】
不安障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における不安障害を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、不安障害は、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び選択的無言症である。
【０１１６】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているＤＭＳ−５基準によって分類されている、対象におけるＧＡＤの症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。ＤＭＳ−５によると、同じ症状が、他の不安障害に関連している。そのため、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における不安障害の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象の不安または心配を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、６ヶ月の期間内で症状の発生を低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、情動不安；疲労；集中の損失；興奮性；筋肉の緊張；及び／または睡眠による問題を予防、低減または軽減する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、不安障害に関連する社会的、職業的及び機能的障害を予防、低減または軽減する。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従って不安障害の症状を改善する。ある特定の実施形態において、症状改善を評価するための尺度には、ハミルトン不安評価尺度（ＨＡＭ−Ａ）が含まれる。いくつかの実施形態において、ＨＡＭ−Ａ合計尺度は、一次エンドポイントを評価するのに使用される。他の実施形態において、ＨＡＭ−Ａ心的不安因子は、二次エンドポイントとして有用であり得る。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、不安障害を有する対象の全般的な社会的、職業的及び機能的障害において陽性結果を示す。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、シーハン障害尺度である。
【０１１９】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＤ及び不安障害の少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ＧＡＤの共存疾患には、うつ病；物質使用障害；ストレス；ＩＢＳ；不眠症；頭痛；疼痛；心臓事象；対人関係の問題及びＡＤＨＤが含まれる。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、不安障害を処置するための別の治療と併用されるときに不安障害を予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ベンラファキシン、デュロキセチン、エスシタロプラム及びパロキセチン）；ベンゾジアゼピン類（アルプラゾラム、ロラゼパム及びクロナゼパム）；プレガバリン（Ｌｙｒｉｃａ（登録商標））及びガバペンチン（Ｎｅｕｒｏｎｔｉｎ（登録商標））；セロトニン受容体部分アゴニスト（ブスピロン及びタンドスピロン）；非定型セロトニン作動性抗うつ薬（例えば、イミプラミン及びクロミプラミン）；モノアミン酸化酵素阻害薬（ＭＡＯＩ）（例えば、モクロベミド及びフェネルジン）；ヒドロキシジン；プロプラノロール；クロニジン；グアンファシン及びプラゾシンが含まれる。
【０１２１】
心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）
ＰＴＳＤは、重度の無力化障害であり、その本質的な特徴は、この障害の憎悪因子としての衝撃的な出来事の包含である。
【０１２２】
ＰＴＳＤの症状は、ＤＭＳ−Ｖ基準に従って４つの主な集団にグループ化される：（ｉ）侵入：例として、悪夢、衝撃的な出来事の望ましくない思考、フラッシュバック、及び感情的苦悩または生理的反応による衝撃的な思い出させるものへの反応が挙げられる；（ｉｉ）回避：例として、場所、会話、または他の思い出させるものを含めた衝撃的な思い出の誘因の回避が挙げられる；（ｉｉｉ）認知及び気分の陰性変化：例として、衝撃的な出来事についての自身または他人の歪められた非難、自身または世界についての否定的信念、持続性の否定的感情（例えば、恐怖、罪悪感、恥）、疎外された感情、及び抑制された情動（例えば、肯定的感情を経験できない）が挙げられる；（ｉｖ）覚醒及び反応の変化：例として、立腹、無謀または自己破壊的行動、睡眠障害、集中力欠如、驚愕反応の増加、及び過覚醒が挙げられる。
【０１２３】
衝撃的な出来事の４週以内に解消する症状は、急性ストレス障害の基準を満たす。ＤＳＭは、急性（３ヶ月未満の症状持続期間）及び慢性ＰＴＳＤ（３ヶ月を超える症状持続期間）間で区別される。症状がストレス要因の後６ヶ月を超えて開始すると、障害は遅発性ＰＴＳＤとして定義される。
【０１２４】
ＰＴＳＤは、大うつ病性障害及び物質使用障害との高度の共存疾患を持つ。
【０１２５】
ＰＴＳＤは、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるＰＴＳＤを処置または予防する際の使用のためのものである。同様の病因によると、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ストレス障害を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、急性ストレス障害を処置する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、急性及び／または慢性ＰＴＳＤを処置する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、遅発性ＰＴＳＤを処置する。
【０１２６】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているＤＭＳ−５基準によって分類されている、対象におけるＰＴＳＤ（またはストレス障害）の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象における煩わしい思考を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象における回避行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象における認知及び気分の陰性変化を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象における覚醒及び反応の変化を予防する。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従ってＰＴＳＤの症状及びストレス障害を改善する。ある特定の実施形態において、症状改善を評価するための尺度は、臨床診断面接ＰＴＳＤ（ＣＡＰＳ）尺度である。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤを有する対象の全般的な社会的、職業的及び機能的障害、ならびにストレス障害において陽性結果を示す。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、シーハン障害尺度である。
【０１２９】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤ及びストレス障害の少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ＰＴＳＤ及びストレス障害の共存疾患には、ＭＤＤ、物質使用障害；ストレス及び不安が含まれる。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤ及びストレス障害を処置するための別の治療と併用されるときにＰＴＳＤ及びストレス障害を予防、低減または軽減するのに特に有効である。かかる治療には、セロトニン作動薬、三環系抗うつ薬、気分安定剤、アドレナリン阻害薬、抗精神病薬、ベンゾジアゼピン類、セルトラリン（Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標））、フルオキセチン（Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））及び／またはパロキセチン（Ｐａｘｉｌ（登録商標））が含まれる。
【０１３１】
統合失調症スペクトラム及び精神病性障害
これらの疾患は、対象が、明確に考える、良好な判断をする、感情的に対応する、効果的にコミュニケーションを図る、現実を理解する、及び相応に振る舞う能力に影響する。精神病性疾患には、統合失調症（以下に列挙されている症状）；統合失調性感情障害（対象が、統合失調症、及び、うつ病または双極性障害などの気分障害の両方の症状を有している）；統合失調症様障害（統合失調症の症状を示すが、症状が、１〜６ヶ月の間のより短期間で継続する）；短い精神病性障害（対象が、多くの場合、非常にストレスフルな事象、例えば、家族の死亡への応答において、突然の短期間の精神病的行動を示す（回復が通常１ヶ月未満である））；妄想性障害（妄想が少なくとも１ヶ月にわたって続く）；共有精神病性障害；物質誘導性精神病性障害；別の医学的状態に起因する精神病性障害；パラフレニー（人々が高齢になったとき、統合失調症に類似する症状を示し、熟年において開始される）が含まれる。最も周知されている精神病性障害は統合失調症であり、精神病性障害の大部分が統合失調症と類似する症状を示す。
【０１３２】
統合失調症は、不均一な過程及び症状プロファイルによる重度の精神疾患である。統合失調症は、いわゆる陽性及び陰性症状により臨床的に見つかる。陽性症状には、妄想、幻覚、解体した会話、及び解体したまたは緊張病性行動が含まれる。陰性症状には、感情の平坦化、思考及び会話の堪能さ及び生産性ならびに目標指向行動の開始の制限が含まれる。陽性症状は、正常な機能の過剰または歪みを反映するようである一方で、陰性症状は、正常な機能の減少または損失を反映するようである。また、認知障害（作業記憶、情報処理、注意／警戒、学習、論理的思考及び社会的認知の欠陥）が一般的である。認知障害は、概して、現状の抗精神病処置によって不十分な改善を示す。統合失調症患者はまた、気分症状にも悩まされる。これらの主症状の他にも、統合失調症は、他の精神科的症状、例えば、躁及びうつ症状、不安または強迫症状、薬物乱用及び依存、ならびにパーソナリティ障害による共存疾患と関連する。
【０１３３】
ＤＭＳ−５によると、統合失調症の診断について、対象は、以下の症状：妄想；幻覚；解体した会話；解体したまたは緊張病性行動及び陰性症状；のうち少なくとも２つを有さなければならない。症状のうちの少なくとも１つは、妄想、幻覚または解体した会話の存在でなければならない。連続的な撹乱兆候が、少なくとも６ヶ月間持続されなければならず、この間、対象は、社会的または職業的低下の問題が有意な時間量にわたって起こりつつも、少なくとも１ヶ月の活発な症状を経験しなければならない。
【０１３４】
統合失調症スペクトラム及び精神病性障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。そのため、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における統合失調症スペクトラム及び／または精神病性障害を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、統合失調症スペクトラム及び精神病性障害は、統合失調症；統合失調性感情障害；統合失調症様障害；短い精神病性障害；妄想性障害；共有精神病性障害；物質誘発性精神病性障害；別の医学的状態に起因する精神病性障害及びパラフレニーから選択される。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、統合失調症は、妄想型、解体型、緊張型、未分化型及び残遺統合失調症から選択される。
【０１３５】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているＤＭＳ−５基準によって分類されている、対象における統合失調症の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。これらの実施形態は、他の統合失調症スペクトラム及び精神病性障害の症状の予防、低減または軽減に適用される。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症の陰性症状を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症の陽性症状を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症の陰性及び陽性症状を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症を有する対象における妄想、幻覚、解体した会話、及び解体したまたは緊張病性行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症を有する対象における感情の平坦化、思考及び会話の堪能さ及び生産性ならびに目標指向行動の開始の制限を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症を有する対象における認知欠陥及び／または気分障害を予防、低減または軽減する。
【０１３６】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、６ヶ月の期間内での対象における統合失調症の陽性及び／または陰性症状の発生を低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害を有する対象における社会的及び／または職業的機能を改善する。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従って統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害の症状を改善する。ある特定の実施形態において、症状改善を評価するための尺度は、陽性及び陰性症状尺度（ＰＡＮＳＳ）ならびに簡易精神病症状評価尺度（ＢＰＲＳ）である。ある特定の実施形態において、陰性症状のアセスメントのための尺度（ＳＡＮＳ）が使用される。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害を有する対象の全般的な社会的及び職業的機能障害において陽性結果を示す。
【０１３９】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害の少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、共存疾患は、躁及びうつ症状、不安または強迫症状、薬物乱用及び依存、ならびにパーソナリティ障害としてのものである。
【０１４０】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、難治性統合失調症の処置耐性を処置または予防する際の使用のためのものである。
【０１４１】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＰＴＳＤ及びストレス障害を処置するための別の治療と併用されるときに統合失調症スペクトラムまたは精神病性障害を予防、低減または軽減するのに特に有効である。ある特定の実施形態において、かかる治療には、クロルプロマジン、フルフェナジン、ハロペリドール及び／またはパーフェナジンを含めた第一世代抗精神病薬が含まれる。ある特定の実施形態において、かかる治療には、アリピプラゾール（Ａｂｉｌｉｆｙ（登録商標））；アセナピン（Ｓａｐｈｒｉｓ（登録商標））；ブレクスピプラゾール（Ｒｅｘｕｌｔｉ（登録商標））；カリプラジン（Ｖｒａｙｌａｒ（登録商標））；クロザピン（Ｃｌｏｚａｒｉｌ（登録商標））；イロペリドン（Ｆａｎａｐｔ（登録商標））；ルラシドン（Ｌａｔｕｄａ（登録商標））；オランザピン（Ｚｙｐｒｅｘａ（登録商標））；パリペリドン（Ｉｎｖｅｇａ）；クエチアピン（Ｓｅｒｏｑｕｅｌ（登録商標））；リスペリドン（Ｒｉｓｐｅｒｄａｌ（登録商標））；ジプラシドン（Ｇｅｏｄｏｎ（登録商標））を含めた第二世代治療が含まれる。
【０１４２】
双極性障害
双極性障害は、概して、慢性疾患である。躁病は、双極性障害の主症状である。具体的な持続期間ならびに躁及びうつエピソードのパターンに基づいていくつかのタイプの双極性障害がある。ＤＭＳ−５において、区別は、Ｉ型双極性障害、ＩＩ型双極性障害、気分循環性障害、急速交代型双極性障害及び双極性障害ＮＯＳの間でなされる。
【０１４３】
ＤＳＭによると、躁病は、異常に持続的に上昇する、誇大なまたは怒りっぽい気分の区別できる期間である。エピソードは、１週間継続しなければならず、気分は、以下の症状：高い自尊心；低減した睡眠欲求；会話速度の増加；発想の迅速な跳躍；気が散りやすい；目標または活動への関心の増加；精神運動性激越；高い危険性を伴う活動の追求の増加；のうちの少なくとも３つを有さなければならない。
【０１４４】
Ｉ型双極性障害は、１または２以上の躁病または混合（躁病及びうつ病）エピソードならびに少なくとも１つの大うつ病性エピソード（ＭＤＤエピソードの症状についての上記を参照されたい）を含む。ＩＩ型双極性障害は、少なくとも１つの軽躁病エピソードが伴う１または２以上の大うつ病エピソードを有する。躁病または混合エピソードは存在しない。軽躁病は、より軽い躁病である。上記の症状は、かなりの社会的、職業的及び機能的障害の原因となる。気分循環症は、軽躁病の期間に併せて低いレベルのうつ病を変化させることを特徴とする。上記の症状は、診断がなされ得る前に成人において少なくとも２年、または小児において１年間存在しなければならない。成人及び小児における症状のない期間は、それぞれ、もはや２ヶ月または１ヶ月を超えては継続しない。急速交代型双極性障害は、双極性障害の重度の形態である。これは、人が１年以内に大うつ病、躁病、軽躁病、または混合状態のうちの少なくとも４つのエピソードを有するときに起こる。他に指定がない（ＮＯＳ）双極性障害は、他のタイプに明確に適合しない双極性症状に分類される。ＮＯＳは複数の双極性症状が存在するが他のサブタイプのいずれについてもレベルを満たすのに十分でないときに診断される。
【０１４５】
双極性障害は、以下の共存疾患：ＡＤＨＤ；不安障害；物質障害；肥満及びメタボリックシンドロームに関連する。
【０１４６】
双極性障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。そのため、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における双極性障害を処置または予防する際の使用のためのものである。ある特定の実施形態において、双極性障害は、Ｉ型双極性障害である。ある特定の実施形態において、双極性障害は、ＩＩ型双極性障害である。ある特定の実施形態において、双極性障害は、気分循環性障害である。ある特定の実施形態において、双極性障害は、急速交代型双極性障害である。ある特定の実施形態において、双極性障害は、双極性障害ＮＯＳである。
【０１４７】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における双極性障害の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における躁病エピソードの発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、異常に持続的に上昇する、誇大なまたは怒りっぽい気分の発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、以下の症状：高い自尊心；低減した睡眠欲求；会話速度の増加；発想の迅速な跳躍；気が散りやすい；目標または活動への関心の増加；精神運動性激越；高い危険性を伴う活動の追求の増加；のうちの１または２以上を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における１または２以上の躁病または混合エピソードの発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における少なくとも１つの大うつ病性エピソードの発生を低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１つの軽躁病エピソードを伴う少なくとも１つの大うつ病性エピソードの発生を予防、低減または軽減する。
【０１４８】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害の急性期を処置する及び／またはさらなるエピソードの発生を予防する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害を有する対象における躁病／うつ病エピソードの急性期を処置し、また、さらなる躁病／うつ病エピソードの発生を予防する。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従って双極性障害の症状を改善する。ある特定の実施形態において、躁病エピソードの症状改善を評価するための尺度は、躁状態評価尺度及びヤング躁病評価尺度である。ある特定の実施形態において、尺度は、ベック・ラファエルソン躁病尺度（ＢＲＭＡＳ）である。ある特定の実施形態において、躁病からうつ病へのエピソードの切り替えの症状改善を評価するための尺度には、ハミルトンうつ病評価尺度、モンゴメリ・アスベルグ評価尺度、及びベック・ラファエルソンうつ病尺度が含まれる。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害を有する対象の全般的な社会的、職業的及び機能的障害において陽性結果を示す。
【０１５１】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害の少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、共存疾患は、ＡＤＨＤ、不安障害、物質障害、肥満及びメタボリックシンドロームから選択される。
【０１５２】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、リチウム及びジバルプロエクスに非応答性の躁うつ病の疾患及び双極性障害を処置または予防する際の使用のためのものである。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、双極性障害を処置するための別の治療と併用されるときに双極性障害を予防、低減または軽減する際に特に有効である。ある特定の実施形態において、かかる治療には、炭酸リチウム、抗けいれん薬（バルプロエート、ジバルプロエクス、カルバマゼピン及びラモトリギンを含む）ならびに抗精神病薬（アリピプラゾール、オランザピン、クエチアピン及びリスペリドンを含む）が含まれる。
【０１５４】
神経認知障害及びアルツハイマー病
ＤＳＭ−５において、認知症という用語は、大神経認知障害及び軽度神経認知障害という用語によって置き換えられた。神経認知障害は、不均一な精神疾患分類である。最も一般的な神経認知障害は、アルツハイマー病であり、続いて、血管性認知症またはこれら２つの混合形態である。他の神経変性障害形態（例えば、レビー小体病、前頭側頭認知症、パーキンソン認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、及びウェルニッケ・コルサコフ症候群）は、認知症に付随して起こる。
【０１５５】
ＤＳＭ−５下での認知症についての症状の基準は、学習及び記憶；言語；実行機能；複合注意；知覚−運動ならびに社会的認知から選択される１または２以上の認知領域における以前の性能レベルからの有意な認知低下の証拠である。認知障害は、毎日の活動における自立を妨げなければならない。また、認知障害は、せん妄に関連して排他的に起こるのではなく、また、別の精神障害（例えばＭＤＤまたは統合失調症）によってより説明されるものでもない。
【０１５６】
一次症状に加えて、神経認知障害を有する対象は、興奮、攻撃、うつ病、不安、無気力、精神病及び睡眠覚醒サイクルの乱れを含めた行動及び精神科的症状を示す。
【０１５７】
神経認知障害は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。そのため、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における神経認知障害を処置または予防する際の使用のためのものである。好ましい実施形態において、神経認知障害は、アルツハイマー病である。他の実施形態において、神経認知障害は、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；及びウェルニッケ・コルサコフ症候群から選択される。
【０１５８】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における神経認知障害の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における認知低下の発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、学習及び記憶；言語；実行機能；複合注意；知覚−運動ならびに社会的認知から選択される１または２以上の認知領域において神経認知障害を有する対象の性能レベルを改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、興奮、攻撃、うつ病、不安、無気力、精神病及び睡眠覚醒サイクルの乱れから選択される神経認知障害に関連する１または２以上の行動及び精神科的症状の発生を予防、低減または軽減する。
【０１５９】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、前臨床段階での疑わしい病原性機序における介在によって症候性疾患を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、症状の進行の遅延または阻止によって疾患の修飾を改善する。いくつかの実施形態において、症状の進行の遅延または阻止は、原因となっている神経病理学的プロセスの遅延における証拠と相関する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、認知の向上及び機能改善を含めて、神経認知障害の症状を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、認知症（ＢＰＳＤ）の行動及び精神科的症状を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、神経認知障害を有する対象が毎日の活動に取り組む能力を改善する。
【０１６０】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における認知及び機能の両方を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における認知エンドポイントを改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における機能的エンドポイントを改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における認知及び機能的エンドポイントを改善する。なおさらに好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アルツハイマー病を有する対象における臨床応答全体（全般的エンドポイント）を改善する。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断検査に従って神経認知障害の症状を改善する。ある特定の実施形態において、アルツハイマー病（及び他の神経認知障害）の症状改善を評価するための試験は、客観的認知、日常生活動作、変化の包括的評価、健康関連ＱＯＬ試験、ならびに神経認知障害の行動及び精神科的症状を評価する試験から選択される。
【０１６２】
ある特定の実施形態において、症状改善のアセスメントに関する客観的認知試験は、アルツハイマー病評価尺度−認知サブスケール（ＡＤＡＳ−ｃｏｇ）及び伝統的なＡＤＡＳ尺度を使用する。ある特定の実施形態において、認知の症状改善は、アルツハイマー病において使用される神経心理学検査バッテリー（ＮＴＢ）を使用して評価される。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、変化の包括的評価試験は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を使用する。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、臨床医の面接に基づく変化の印象プラス（ＣＩＢＩＣ−ｐｌｕｓ）である。いくつかの実施形態において、全般的尺度は、アルツハイマー病共同研究ユニット−変化に対する臨床医の包括的印象（ＡＤＣＳ−ＣＧＩＣ）である。
【０１６４】
ある特定の実施形態において、健康関連ＱＯＬの評価基準は、アルツハイマー病関連ＱＯＬ（ＡＤＲＱＬ）及びＱＯＬ−アルツハイマー病（ＱＯＬ−ＡＤ）である。
【０１６５】
ある特定の実施形態において、神経認知障害の行動及び精神科的症状を評価する試験は、アルツハイマー病評価尺度における行動病理学（ＢＥＨＡＶＥ−ＡＤ）；認知症に関する行動評価尺度（ＢＲＳＤ）；Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ（ＮＰＩ）；及びコーエン・マンスフィールドａｇｉｔａｔｉｏｎ評価票（ＣＭＡＩ）から選択される。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経認知障害を処置するための別の治療と併用されるときに神経認知障害を予防、低減または軽減するのに特に有効である。ある特定の実施形態において、かかる治療には、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬、例えば、ドネペジル（Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標））、ガランタミン（Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標））及びリバスチグミン（Ｅｘｅｌｏｎ（登録商標））、ならびにメマンチンが含まれる。
【０１６７】
パーキンソン病
パーキンソン病は、不均一な神経細胞集団（ドーパミン−産生細胞）の変性によって神経病理学的に特徴付けられる一般的な神経変性疾患である。パーキンソン病の臨床的診断は、動作緩慢、ならびに以下の中核症状：静止振戦；筋肉の硬直及び姿勢反射障害の少なくとも１つを必要とする。病気の進行の際に存在し得または発生し得る他の兆候及び症状は、自律神経障害（唾液分泌過多症、脂漏症、便秘、尿意の混乱、性機能、起立性低血圧、起立性低血圧）、睡眠障害及び嗅覚または温度覚の混乱である。うつ病症状及び認知機能障害共存疾患は、多くのパーキンソン病患者、ならびにレビー小体関連の神経認知障害において発症する。
【０１６８】
パーキンソン病は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に起因して発症または持続し得る精神疾患である。そのため、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるパーキンソン病を処置または予防する際の使用のためのものである。
【０１６９】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるパーキンソン病の症状の１または２以上を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるパーキンソン病の１または２以上の中核症状を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における動作緩慢を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における静止振戦；筋肉の硬直及び／または姿勢反射障害を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、自律神経障害（唾液分泌過多症、脂漏症、便秘、尿意の混乱、性機能、起立性低血圧、起立性低血圧）、睡眠障害及び嗅覚または温度覚の混乱から選択されるパーキンソン病の進行に関連する１または２以上の症状を予防、低減または軽減する。
【０１７０】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病と合併しているうつ病症状を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、言語記憶及び／または実行機能を改善する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、注意、作業記憶、言語の堪能さ及び／または不安を改善する。
【０１７１】
他の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病と合併している認知機能障害を予防、低減または軽減する。
【０１７２】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病の進行を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、後の運動合併症を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、後の運動症状の変動を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ニューロン脱落を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）の症状を改善する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、実行機能、注意及び／または作業記憶の損失を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ドーパミン作動性神経伝達を改善する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ドーパミン作動性神経伝達の損失を予防、低減または軽減する。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断尺度に従ってパーキンソン病の症状を改善する。ある特定の実施形態において、パーキンソン病における運動機能の症状改善を評価するための試験は、パーキンソン病統一スケールである。特に、ＵＰＤＲＳ  ＩＩは、日常生活動作を考慮しており、ＵＰＤＲＳ  ＩＩＩは、運動検査を考慮している。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、症状または診断検査及び／または尺度に従ってＰＤＤに関連する症状を改善する。ある特定の実施形態において、試験または尺度は、ホプキンス言語学習試験−改訂版（ＨＶＬＴ−Ｒ）；デリスカプラン実行機能システム（Ｄ−ＫＥＦＳ）色単語緩衝試験；ハミルトンうつ病評価尺度（ＨＡＭ−Ｄ１７；うつ病）；ハミルトン不安評価尺度（ＨＡＭ−Ａ；不安）及びパーキンソン病統一スケール（ＵＰＤＲＳ；ＰＤ症状の重篤度）から選択される。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、精神及び神経学的障害を評価するための臨床全般印象−全般改善（ＣＧＩ−Ｉ）尺度を改善する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、パーキンソン病を有する対象の全般的な社会的及び職業的機能障害において陽性結果を示す。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、神経認知障害を処置するための別の治療と併用されるときに神経認知障害を予防、低減または軽減する際に特に有効である。ある特定の実施形態において、かかる治療には、ドーパミンアゴニスト（Ｌ−Ｄｏｐａ＋を含む）；モノアミン酸化酵素阻害薬、カテコールアミン−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ阻害薬；抗コリン薬及びグルタミン酸調節剤が含まれる。
【０１７７】
他の中枢神経系障害
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢−腸−脳軸の機能障害に関連する中枢神経系障害を処置または予防する際の使用のためのものである。上記実施形態に加えて、本発明の組成物は、精神病；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）及び／または慢性疼痛を処置または予防する際の使用のためのものである。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。
【０１７８】
神経化学因子、神経ペプチド及び神経伝達物質ならびに微生物叢−腸−脳軸
上記で概説しているように、微生物叢−腸−脳軸は、多数の異なる生理系によって調節される。微生物叢−腸−脳軸は、多数のシグナル伝達分子によって調節される。これらのシグナル伝達分子のレベルの変化は、結果として、中枢神経系の発達及び／または機能性の欠陥を生じさせる。実際、このセクションにおいて開示されている多くの分子は、微生物叢−腸−脳軸の機能性及び中枢神経系障害または状態の病因に関与している（［１０］、［１４］、［３８］、［３９］）。本発明者らによって実施された実験は、行動変化が、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの投与によって誘発され得ることを示している。この効果は、シグナル伝達分子、特にこのセクションにおいて列挙されているもののレベルに対する効果によって介在され得る。これらの変化は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍに関連する治療的利益の原因となり得る。したがって、本明細書に開示されている中枢神経系障害及び状態が同様の根本的な生化学的及び生理的病因（すなわち、微生物叢−腸−脳軸を介して）を示すという事実に起因して、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの同様の治療的利益もまたこれらの障害及び状態に関して達成され得る。
【０１７９】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、神経化学因子、神経ペプチド及び神経伝達物質のレベルによって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、神経化学因子、神経ペプチド及び神経伝達物質のレベルを調節する。したがって、ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＣＮＳ生化学を直接変化させる。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、モノアミンのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、モノアミンは、セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ））、ドーパミン、ノルエピネフリン及び／またはエピネフリンである。ある特定の実施形態において、モノアミンは、カテコールアミンである。ある特定の実施形態において、カテコールアミンは、ドーパミン、ノルエピネフリン及びエピネフリンである。ある特定の実施形態において、モノアミンは、トリプタミンである。ある特定の実施形態において、トリプタミンは、セロトニン及びメラトニンである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、アセチルコリンのレベルを調節する。
【０１８０】
ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンのレベルを調節する。オキシトシンは、感情的、社会的、認知及び神経内分泌生理学ならびに自己調節能に関連する。特に、オキシトシン放出は、抗不安；前向きな気分；母体行動、つがいの絆；性的行動；社会的記憶；嗅覚記憶；食欲抑制効果；ストレスへのＨＰＡ軸応答の減衰；誕生及び乳児の間の自己励起、ならびに他の生理的及び心理的プロセスが関与している。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンのレベルを増加させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンのレベルを減少させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンシグナル伝達を増加または減少させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシン受容体のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、神経、筋肉及び胃腸細胞に入るまたは該細胞から出るカルシウムイオン束を調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、オキシトシンのレベルを調節することによって、微生物叢−腸−脳軸に関連する神経発達及び精神神経障害及び疾患を処置及び予防する。
【０１８１】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、脳モノアミン及びその代謝産物のレベルを調節する。好ましい実施形態において、モノアミンは、セロトニンである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、セロトニン作動性及び／またはトリプトファン代謝のキヌレニン経路を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、セロトニン代謝産物、例えば、５−ヒドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ドーパミン代謝産物、例えば、ホモバニリン酸（ＨＶＡ）のレベルを調節する。これらの神経伝達物質及び神経化学因子の調節は、ストレス、うつ病及び不安関連障害を処置するのに有用である。
【０１８２】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）のレベルによって調節される。したがって、好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＢＡのレベルを調節する。ＧＡＢＡは、神経興奮性を低減する抑制性神経伝達物質である。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＢＡのレベルを増加させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＢＡのレベルを減少させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＧＡＢＡ性神経伝達を変化させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、中枢神経系の異なる領域におけるＧＡＢＡ転写のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、共生生物由来のＧＡＢＡは、血液脳関門を渡り、神経伝達に直接影響する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、海馬、扁桃体及び／または青斑核におけるＧＡＢＡの低減を引き起こす。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、皮質領域におけるＧＡＢＡの増加を引き起こす。
【０１８３】
神経活性分子、例えば、セロトニン、メラトニン、ＧＡＢＡ、ヒスタミン及びアセチルコリンのレベルは、中枢神経系疾患、例えば、認知症、アルツハイマー病及びハンチントン病の病態生理と連結している。
【０１８４】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、ヒスタミンのレベルによって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ヒスタミンのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、ヒスタミンは、免疫調節効果を有する。ある特定の実施形態において、ヒスタミンレベルは、内腔から体循環への細菌の転移を可能にする。そのため、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管透過性及び／または関門機能を変化させる。ある特定の他の実施形態において、ヒスタミンは、中心のプロセスと関係している神経伝達物質として作用する。
【０１８５】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、ＨＰＡ軸によって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＨＰＡ活性を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＨＰＡストレス反応を減衰する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＨＰＡ活性に関連する炎症反応を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、糖質コルチコイドのレベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、コルチコステロン及びアドレナリンのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、副腎皮質刺激ホルモン放出因子及び／またはバソプレシンのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、バソプレシン及び／または他の脳下垂体もしくは抗利尿ホルモンのレベルを調節する。ＨＰＡ軸活性の変化は、不安及びストレス障害に関連する。
【０１８６】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、免疫反応ならびに炎症性因子及びマーカーの変化によって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、免疫反応を調節し得る。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、循環する神経免疫シグナル伝達分子の全身レベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、前炎症性サイトカイン産生及び炎症を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、炎症状態を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、脾細胞増殖反応を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｃ−反応性タンパク質；ＩＬ−１ファミリーサイトカイン；ＩＬ−１β；ＩＬ−２；ＩＬ−４；ＩＬ−６；ＩＬ−８；ＩＬ−１０；ＩＬ−１２ｐ４０；ＩＬ−１７；ＩＬ−１７Ａ；ＩＬ−２１；ＩＬ−２３；ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γ；の全身及び／または血漿中濃度を調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、抗炎症性サイトカイン、例えば、ＩＬ−１０のレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＬ−１０のレベルを増加させる。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＴＮＦ−αのレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＦＮ−γのレベルを調節する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ＩＦＮ−γ：ＩＬ−１０比を調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＩＦＮ−γ：ＩＬ−１０比を減少させる。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、前炎症性サイトカインＴＮＦ−α及びＩＦＮ−γのレベルを減少させる。サイトカインの循環レベルの増加は、うつ病、不安、統合失調症及びＡＳＤを含めた種々の精神神経障害に密接に関連する。炎症状態の変化の証拠は、障害、例えば、統合失調症、大うつ病性障害及び双極性障害において強調されている。
【０１８７】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、耐性媒介樹状細胞のレベルを調節し、また、前及び抗炎症性サイトカイン反応を相互に調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ミエロペルオキシダーゼ（炎症及び酸化のマーカー）の全身レベルを減少させる。免疫系及び炎症反応の治療調節剤は、自閉症スペクトラム障害及び気分障害を処置するのに有用である。
【０１８８】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、感染またはワクチン接種への免疫反応を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、感染またはワクチン接種に反応する炎症のレベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、妊娠中の感染またはワクチン接種に反応する母体免疫活性化を調節する。したがって、本発明の組成物は、子孫における中枢神経系障害を処置または予防するために妊娠中に投与され得る。
【０１８９】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、共生代謝産物のレベルによって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢代謝産物の全身レベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、ＳＣＦＡのレベルが増加または減少する。いくつかの実施形態において、ＳＣＦＡは、酪酸（ＢＡ）（またはブチレート）である。いくつかの実施形態において、ＳＣＦＡは、プロピオン酸（ＰＰＡ）である。いくつかの実施形態において、ＳＣＦＡは、酢酸である。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＳＣＦＡが血液脳関門を渡る能力を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、多糖Ａ（ＰＳＡ）のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、強力な前炎症性エンドトキシンリポ多糖体（ＬＰＳ）のレベルを調節する。ＬＰＳは、生理的脳活動を変化させかつ神経ペプチド合成を調節する炎症性サイトカインの産生を引き起こす。ＬＰＳは、ＣＮＳの調節に重要な影響を及ぼし、感情の制御に当てられる領域（例えば、扁桃体）の活動を増加させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、トリプトファン及び／またはその代謝産物のレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、４−エチルフェニルサルフェート（４ＥＰＳ；ＡＳＤ関連行動異常に関連する尿毒性毒素）のレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における４−エチルフェニルサルフェートのレベルを減少させる。管腔内の腸刺激によって引き起こされる神経シグナル伝達経路の刺激によって発生するシグナルは、疼痛知覚、免疫反応調節、感情コントロール及び他の恒常性維持機能を含めた脳活動を強く調節する。したがって、これらの因子のレベルを調節することができる組成物は、ＣＮＳ障害を処置または予防するための広範な治療的適用を有する。
【０１９０】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、胃腸透過性レベルによって調節される。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管上皮の完全性を変化させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管の透過性を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、関門機能、及び胃腸管の完全性を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管の運動性を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、共生代謝産物及び炎症性シグナル伝達分子の、胃腸管内腔から血流への転移を調節する。
【０１９１】
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、胃腸管における微生物叢組成によって調節される。したがって、ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管の微生物叢組成を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、微生物叢腸内毒素症及び関連する毒性代謝産物増加（例えば、ＬＰＳ）を予防する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管におけるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍのレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、胃腸管におけるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍのレベルを低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉのレベルを低減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、有害な嫌気性細菌の増殖及びこれらの細菌によって産生される神経毒の産生を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ及び／またはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの微生物叢レベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ、Ｒｕｍｉｎｏｃｃｕｃｓ属及び／またはＡｌｃａｌｉｇｅｎａｃｅａｅ科の微生物叢レベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ及び／またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉのレベルを増加する。
【０１９２】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、抗生物質の大量使用による微生物叢の組成の異常調節を予防する。ある特定の好ましい実施形態において、本発明の組成物は、妊娠中の抗生物質の投与の際に機能的な母体微生物叢組成を維持する。したがって、本発明の組成物は、子孫における中枢神経系障害を処置または予防するために妊娠中に投与され得る。
【０１９３】
微生物叢の調節は、不安、うつ病、自閉症スペクトラム障害、強迫神経症及び記憶力（空間及び非空間記憶を含む）を含めた精神疾患関連行動、ならびに、パーキンソン病を含めた他のＣＮＳ関連障害を改善する際に有効であることが示されている。ある特定の研究は、プロバイオティクスは、心理的ストレス、身体化、うつ病及び怒り−敵対心を低減し得ることを示唆している。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓのレベルは、うつ病に関連しており、胃腸不快感に関連する疼痛シグナル伝達に関与している。
【０１９４】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されている中枢神経系障害に関連する行動上の症状の少なくとも１つを予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における臨床応答全体を改善する。
【０１９５】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における常同、反復行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、異常に制限的な行動及び／または関心の発生を予防、低減または軽減する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象における反復性の強迫観念及び／または衝動強迫を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における社会的行動の欠損を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における回避行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるコミュニケーション行動の欠損を予防、低減または軽減する。
【０１９６】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における認知及び気分の陰性変化を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における不安関連行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるストレス関連行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象におけるうつ病関連行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における攻撃的行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、異常に持続的に上昇する、誇大なまたは怒りっぽい気分の発生を予防、低減または軽減する。
【０１９７】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における煩わしい思考を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における覚醒及び反応の変化を予防する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における妄想、幻覚、解体した会話、及び解体したまたは緊張病性行動を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における感情の平坦化、思考及び会話の堪能さ及び生産性ならびに目標指向行動の開始の制限を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、以下の症状：高い自尊心；低減した睡眠欲求；会話速度の増加；発想の迅速な跳躍；気が散りやすい；目標または活動への関心の増加；精神運動性激越；高い危険性を伴う活動の追求の増加；のうちの１または２以上を予防、低減または軽減する。
【０１９８】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における空間及び／または非空間記憶欠損を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における認知及び機能の両方を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における自発運動を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における動作緩慢を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における静止振戦；筋肉の硬直及び／または姿勢反射障害を予防、低減または軽減する。
【０１９９】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に開示されているＣＮＳ障害に関連する少なくとも１つの共存疾患を予防、低減または軽減する。
【０２００】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されているＣＮＳ障害に関する症状及び／または診断尺度のうちの少なくとも１つにおける対象のスコアを改善する。ある特定の他の実施形態において、症状及び／または診断尺度は、全体的な健康に関するアンケート（ＧＨＱ）；うつ病不安及びストレス尺度（ＤＡＳＳ）；改訂版Ｌｅｉｄｅｎ抑うつ感受性尺度（ＬＥＩＤＳ−ｒ）；陽性及び陰性症状尺度（ＰＡＮＳＳ）；状態−特性不安尺度（ＳＴＡＩ）；発達行動チェックリスト（ＤＢＣ）；ベックうつ病調査票（ＢＤＩ）；ベック不安調査票（ＢＡＩ）；ホプキンス症状チェックリスト（ＨＳＣＬ−９０）；病院不安及びうつ尺度（ＨＡＤＳ）；知覚されたストレス尺度（ＰＳＳ）；コーピングチェックリスト（ＣＣＬ）（日常生活のストレスに対抗するのにも使用される）；ならびに気分状態のアンケートに基づくプロファイル（ＰＯＭＳ）から選択される。
【０２０１】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、当業者に公知であるＣＮＳ障害の他の動物モデルにおける治療効能を評価するとき、症状及び／または診断尺度を改善し得る。例に開示されている行動アッセイに加えて、本発明の組成物は、相互の社会的相互作用；嗅覚によるコミュニケーション；超音波発声；運動性常同行動（例えば、周回及び垂直跳躍）、反復行動、例えば、セルフグルーミング及びディフィング（ｄｉｆｆｉｎｇ）；ならびに空間作業における忍耐力を改善し得る。
【０２０２】
また、本発明の組成物は、ＣＮＳ障害の他の動物モデルにおけるＣＮＳ障害を処置及び／または予防する際に有用である。他のマウスモデルには、同系交配マウス株（ＢＡＬＢ／ｃＪ及びＣ５８／Ｊを含む）ならびに遺伝子組み換えされたマウス株（ＮＥＵＲＥＸＩＮ１、ＮＥＵＲＯＬＩＧＩＮ３、ＮＥＵＲＯＬＩＧＩＮ４、ＳＨＡＮＫ２、ＳＨＡＮＫ３、ＣＮＴＮＡＰ２、Ｔｓｃ１／２及びＦｍｒ１遺伝子変異マウス株を含む）も含まれる。
【０２０３】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、対象の社会的行動を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、対象における社会的新規性の認識を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ファミリアー及び新規対象物間、ならびにファミリアー及び新規対象間で区別する能力を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、他の対象を認識する能力を改善する。
【０２０４】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、アミノ酸の血漿中濃度を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、アミノ酸の生合成または異化を調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、プロリンの血漿中濃度を調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、プロリンの血漿中濃度を低減する。プロリンの上昇は、前頭葉前部皮質におけるドーパミンの増加によって脳機能に負に影響することが知られている［４０］。また、プロリンは、海馬におけるグルタミン酸神経伝達、及び脳におけるいずれかでの神経伝達を調節する神経伝達物質であるとされている。したがって、プロリンは、ＣＮＳ障害及び精神疾患、特に精神病に関与している。好ましい実施形態において、プロリンの血漿中濃度の低減は、ＣＮＳ障害、特に、ＡＤＨＤ、ＯＣＤ、気分障害、自閉症スペクトラム障害、精神病及び統合失調症を処置または予防する。
【０２０５】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、２２ｑ１１．２欠失症候群（２２ｑ１１ＤＳ）に関連する精神疾患、例えば、統合失調症及び双極性障害の症状を予防、低減または軽減する［４０］。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、２２ｑ１１ＤＳを有する対象における社会的行動及び社会的認知の問題を改善する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、２２ｑ１１ＤＳ対象における関連する認知及び行動の成果を調節する。好ましい実施形態において、これらの成果の調節は、プロリンの血漿中濃度の低減の結果である。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、プロリンヒドロゲナーゼの活性を調節する。
【０２０６】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＮＭＤＡ受容体及び／またはそのサブユニットのレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＮＭＤＡ受容体２Ｂのレベルを調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＮＭＤＡ受容体２Ｂのレベルを増加させる。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＮＭＤＡ受容体２Ｂのレベルを減少させる。ＮＭＤＡ受容体の異常調節は、ＣＮＳ障害、特にＡＳＤ及び統合失調症に関連している。ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストは、ＡＳＤを処置する際に有効であり得ることが示唆されている［４１］。また、ＮＭＤＡ受容体機能の抑制は、ＡＳＤのバルプロ酸誘導モデルにおける社会的欠損を改善しかつ反復行動を低減することが実証されている［４２］。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＮＭＤＡ受容体２Ｂの機能低下を引き起こす。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＮＭＤＡ受容体２Ｂの機能亢進を引き起こす。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＮＭＤＡ受容体２Ｂ活性の調節の結果としての、ＣＮＳ障害、例えば、ＡＳＤまたは統合失調症の症状を予防、低減または軽減する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＣＮＳ障害を有する対象におけるＮＭＤＡ受容体活性を抑制しかつ社会的欠損及び常同行動を低減する。
【０２０７】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ＢＤＮＦのレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＢＤＮＦのレベルを低減する。ある特定の実施形態において、ＢＤＮＦの低減は、扁桃体に局在化されている。ＡＳＤ集団のメタ分析は、対照と比較してＡＳＤ対象においてより高いレベルのＢＤＮＦが検出されることを示している［４３］。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ＢＤＮＦのレベルの低減の結果としての、ＣＮＳ障害、特にＡＳＤの症状を予防、低減または軽減する。ＢＤＮＦの変化したレベルは、多数の神経発達障害、ならびに精神病及び統合失調症に関連している。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、神経発達障害及び精神障害の症状を予防、低減または軽減するためにＢＤＮＦのレベルを調節する。
【０２０８】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、抗原チャレンジに応答して産生される炎症マーカーのレベルを調節する。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、ウイルス抗原チャレンジに応答するＩＬ−１βのレベルを増加させる。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、先天性免疫反応を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、適応免疫反応を調節する。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、炎症反応を調節する。
【０２０９】
投与の形態
好ましくは、本発明の組成物は、本発明の細菌株による腸への送達及び／または腸への部分もしくは全体定着を可能にするために胃腸管に投与されるべきである。概して、本発明の組成物は、経口で投与されるが、これらは、経直腸的に、鼻腔内に、または頬側もしくは舌下経路を介して投与されてよい。
【０２１０】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、フォームとして、スプレーまたはゲルとして投与されてよい。
【０２１１】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、坐薬、例えば肛門坐薬として、例えば、カカオ脂（ココアバター）、合成硬質脂肪（例えば、坐剤用基材、ウィテップゾール）、グリセロ−ゼラチン、ポリエチレングリコール、または石鹸グリセリン組成物の形態で投与されてよい。
【０２１２】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、チューブ、例えば、鼻腔栄養チューブ、経口胃チューブ、胃チューブ、経空腸チューブ（Ｊチューブ）、経皮的内視鏡下胃瘻造設術（ＰＥＧ）、またはポート、例えば胃、空腸及び他の好適なアクセスポートへのアクセスを付与する胸壁ポートを介して胃腸管に投与される。
【０２１３】
本発明の組成物は、一度で投与されてよく、または処置レジメンの部分として逐次的に投与されてよい。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、連日投与されるべきである。
【０２１４】
本発明のある特定の実施形態において、本発明による処置は、患者の腸内微生物叢のアセスメントによって達成される。処置は、本発明の株の送達及び／またはそれによる部分的もしくは全体的定着が達成されず、その結果、効能が観察されないことになるとき、繰り返されてよく、あるいは、処置は、送達及び／または部分的もしくは全体的定着が成功裏でありかつ効能が観察されるときに中止されてよい。
【０２１５】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、妊娠した動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトに、その子宮内の胎児及び／または生まれた後の小児において発症する炎症性または自己免疫疾患を予防するために投与されてよい。
【０２１６】
本発明の組成物は、中枢神経系障害もしくは状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害もしくは状態を有すると診断されている、または中枢神経系障害もしくは状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害もしくは状態の危険性があると確認されている患者に投与され得る。上記組成物はまた、健康な患者における、中枢神経系障害または状態、特に微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態の発症を予防するための予防対策として投与されてもよい。
【０２１７】
本発明の組成物は、異常な腸内微生物叢を有すると同定されている患者に投与されてよい。例えば、患者は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍによる定着が低減されているか、または該定着がないかであり得る。
【０２１８】
本発明の組成物は、食品、例えば栄養補助食品として投与されてよい。
【０２１９】
概して、本発明の組成物は、ヒトの処置のためのものであるが、単胃哺乳動物、例えば、家禽、ブタ、ネコ、イヌ、ウマまたはウサギを含めた動物を処置するのに使用されてよい。本発明の組成物は、動物の成長及びパフォーマンスを向上させるのに有用である場合がある。動物に投与されるとき、経口胃管栄養法が使用されてよい。
【０２２０】
組成物
概して、本発明の組成物は、細菌を含む。本発明の好ましい実施形態において、組成物は、凍結乾燥形態で調合される。例えば、本発明の組成物は、本発明の細菌株を含む顆粒またはゼラチンカプセル、例えば、硬質ゼラチンカプセルを含んでいてよい。
【０２２１】
好ましくは、本発明の組成物は、凍結乾燥されている細菌を含む。細菌の凍結乾燥は、確立された手順であり、関連のガイダンスは、例えば、参照文献［４４］、［］及び［４６］において入手可能である。
【０２２２】
代替的には、本発明の組成物は、生きている、活性な細菌培養物を含んでいてよい。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、不活性化されていない、例えば、熱不活性化されていない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、殺傷されていない、例えば、熱殺傷されていない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、弱毒化されていない、例えば、熱弱毒化されていない。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、殺傷されていない、不活性化されていない及び／または弱毒化されていない。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、生きている。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、生存している。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物における細菌株は生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、組成物は、生きている細菌株と殺傷されている細菌株との混合物を含む。
【０２２５】
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、腸への細菌株の送達を可能にするようにカプセル化されている。カプセル化は、目標箇所に送達するまで、例えばｐＨの変化によって引き起こされる場合がある化学的または物理的刺激、例えば圧力、酵素活性または物理的崩壊による破断を通しての劣化から組成物を保護する。いずれの適切なカプセル化方法が使用されてもよい。例示的なカプセル化技術として、多孔質マトリクス内への取り込み、固体担体表面への付着または吸着、凝集によるまたは架橋剤を用いた自己会合、及び微多孔膜またはマイクロカプセルの後の機械的拘束が挙げられる。本発明の組成物を調製するのに有用であり得るカプセル化についてのガイダンスは、例えば、参照文献［４７］及び［４８］において入手可能である。
【０２２６】
組成物は、経口で投与されてよく、錠剤、カプセルまたは粉末の形態であってよい。カプセル化された製品が好ましい、なぜなら、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍが嫌気性生物であるからである。他の成分（例えばビタミンＣなど）が、生体内での送達及び／または部分的もしくは全体的定着ならびに生存を改善するように脱酸素剤及びプレバイオティック基質として含まれていてよい。代替的には、本発明のプロバイオティック組成物は、食品もしくは栄養製品、例えばミルクもしくはホエイベースの発酵乳製品として、または医薬製品として経口で投与されてよい。
【０２２７】
組成物は、プロバイオティックとして調合されてよい。
【０２２８】
本発明の組成物は、治療有効量の本発明の細菌株を含む。治療有効量の細菌株は、患者への有益な効果を発揮するのに十分である。治療有効量の細菌株は、患者の腸への送達及び／または部分的もしくは全体的定着を結果として生じさせるのに十分であり得る。
【０２２９】
例えばヒト成人への細菌の好適な１日量は、約１×１０３〜約１×１０１１個のコロニー形成単位（ＣＦＵ）；例えば、約１×１０７〜約１×１０１０ＣＦＵ；別の例において、約１×１０６〜約１×１０１０ＣＦＵであってよい。
【０２３０】
ある特定の実施形態において、組成物は、組成物の重量に対して約１×１０６〜約１×１０１１ＣＦＵ／ｇ；例えば約１×１０８〜約１×１０１０ＣＦＵ／ｇの量で細菌株を含有する。用量は、例えば、１ｇ、３ｇ、５ｇ及び１０ｇであってよい。
【０２３１】
典型的には、プロバイオティック、例えば本発明の組成物は、少なくとも１の好適なプレバイオティック化合物と任意選択的に組み合わされる。プレバイオティック化合物は、通常、上部消化管において分解または吸収されない、非消化性炭水化物、例えば、オリゴ−もしくは多糖、または糖アルコールである。公知のプレバイオティクスとして、市販品、例えば、インスリン及びトランスガラクト−オリゴ糖が挙げられる。
【０２３２】
ある特定の実施形態において、本発明のプロバイオティック組成物は、組成物の合計重量に対して約１〜約３０重量％（例えば、５〜２０重量％）の量でプレバイオティック化合物を含む。炭水化物は：フラクト−オリゴ糖（またはＦＯＳ）、短鎖フラクト−オリゴ糖、インスリン、イソマルト−オリゴ糖、ペクチン、キシロ−オリゴ糖（またはＸＯＳ）、キトサン−オリゴ糖（またはＣＯＳ）、β−グルカン、アラビアガム変性及び耐性デンプン、ポリデキストロース、Ｄ−タガトース、アカシアファイバ、イナゴマメ、オート麦、ならびにシトラスファイバ；からなる群から選択されてよい。一態様において、プレバイオティクスは短鎖フラクト−オリゴ糖（簡潔のために、以下本明細書においてＦＯＳｓ−ｃ．ｃと示す）であり；該ＦＯＳｓ−ｃ．ｃ．は、テンサイ糖の転換によって一般に得られ、３のグルコース分子が結合しているサッカロース分子を含んでいる消化性炭水化物ではない。
【０２３３】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、中枢神経系障害を処置または予防する別の治療化合物と併用される。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、中枢神経伝達物質及び神経ペプチドを調節する栄養補助食品と共に投与される。好ましい実施形態において、栄養補助食品は、栄養ビタミンを含むまたはこれからなる。ある特定の実施形態において、ビタミンは、ビタミンＢ６、マグネシウム、ジメチルグリシン（ビタミンＢ１６）及びビタミンＣである。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、別のプロバイオティクスと組み合わせて投与される。ある特定の好ましい実施形態において、プロバイオティクスは、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｓｕｉｓ  ｏｖａを含むまたはこれからなる。
【０２３４】
本発明の組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含んでいてよい。かかる好適な賦形剤の例は、参照文献［４９］において見出され得る。治療的使用のための許容される担体または希釈剤は、薬剤分野において周知されており、例えば参照文献［５０］において記載されている。好適な担体の例として、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが挙げられる。好適な希釈剤の例として、エタノール、グリセロール及び水が挙げられる。医薬担体、賦形剤または希釈剤の選択は、意図する投与経路及び標準の薬務に関して選択され得る。医薬組成物は、上記担体、賦形剤または希釈剤として、またはこれに加えて、いずれの好適な結合剤（複数可）、潤滑剤（複数可）、懸濁剤（複数可）、コーティング剤（複数可）、可溶化剤（複数可）を含んでいてもよい。好適な結合剤の例として、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えばグルコース、無水ラクトース、自由流動ラクトース、β−ラクトース、コーンシロップ、天然及び合成ガム、例えばアカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースならびにポリエチレングリコールが挙げられる。好適な潤滑剤の例として、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。防腐剤、安定剤、染料、及びさらなる香味剤が医薬組成物において付与されていてよい。防腐剤の例として、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが挙げられる。酸化予防剤及び懸濁剤が使用されてもよい。
【０２３５】
本発明の組成物は、食品として調合されてよい。例えば、食品は、例えば栄養補助食品において、本発明の治療効果に加えて、栄養的利益を付与してよい。同様に、食品は、本発明の組成物の風味を向上するように、または組成物を、医薬組成物よりもむしろ、一般食料とより類似することによって、消費するのにより魅力的であるようにするように調合されてよい。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、ミルクベースの製品として調合される。用語「ミルクベースの製品」は、変動する脂肪分を有する、いずれの液体または半固体のミルク−またはホエイベースの製品も意味する。ミルクベースの製品は、例えば、ウシのミルク、ヤギのミルク、ヒツジのミルク、スキムミルク、ホールミルク、いずれの処理もしていない粉ミルク及びホエイからの還元ミルク、または加工品、例えばヨーグルト、凝固したミルク、カード、酸乳、酸全乳、バターミルク及び他の酸乳製品であり得る。別の重要な群として、ミルク飲料、例えばホエイ飲料、発酵乳、コンデンスミルク、乳幼児ミルク；フレーバーミルク、アイスクリーム；ミルク含有食品、例えば、スイーツが挙げられる。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の１以上の細菌株を含み、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の、別の種からの細菌を含む。そのため、いくつかの実施形態において、本発明は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の１以上の細菌株を含む組成物であって、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の、別の種からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の１以上の細菌株を含み、いずれの他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の、別のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種からの細菌を含む。そのため、いくつかの実施形態において、本発明は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の１以上の細菌株を含む組成物であって、いずれの他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種からの細菌も含有せず、または、治療における使用のための、ほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の、別のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
【０２３８】
ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、単一の細菌株または種を含有し、いずれの他の細菌株または種も含有しない。かかる組成物は、ほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の他の細菌株または種を含んでいてよい。かかる組成物は、他の種の生物を実質的に含まない培養物であってよい。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、本発明は、単一のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物であって、いずれの他の種からの細菌も含有せず、または、ほんの僅少なまたは生物学的に関連のない量の、治療における使用のための別の株からの細菌を含む、上記組成物を提供する。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１を超える細菌株を含む。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの１を超える株（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０または４５を超える株）を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの５０未満の株（例えば、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４または３未満の株）を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、同種内からの１〜４０、１〜３０、１〜２０、１〜１９、１〜１８、１〜１５、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、１〜２、２〜５０、２〜４０、２〜３０、２〜２０、２〜１５、２〜１０、２〜５、６〜３０、６〜１５、１６〜２５、または３１〜５０株を含み、任意選択的に、いずれの他の種からの細菌も含有しない。本発明は、上記のいずれの組み合わせも含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、組成物は、微生物コンソーシアム（consortium）を含む。例えば、いくつかの実施形態において、組成物は、微生物コンソーシアムの部分としてＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌株を含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌株は、腸において生体内で共生的に生きることができる、他の属からの１または２以上（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０、１５または２０）の他の細菌株において存在する。例えば、いくつかの実施形態において、組成物は、異なる属からの細菌株と組み合わせたＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの細菌株を含む。いくつかの実施形態において、微生物コンソーシアムは、単一の生物、例えば、ヒトの糞便サンプルから得られた２または３以上の細菌株を含む。いくつかの実施形態において、微生物コンソーシアムは、本来は一緒には見られない。例えば、いくつかの実施形態において、微生物コンソーシアムは、少なくとも２の異なる生物の糞便サンプルから得られた細菌株を含む。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物は、同種、例えば、２の異なるヒトからのものである。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物は、ヒト乳児及びヒト成人である。いくつかの実施形態において、該２の異なる生物は、ヒト及び非ヒト哺乳動物である。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、株ＭＲＸ０１０と同じ安全及び治療効能特性を有するが、ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＭＲＸ０１０ではない、またはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍでもない細菌株をさらに含む。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の細菌株を含まない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓを含まず、及び／またはＢａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓを含まない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物によって処置されるＣＮＳ障害は、双極性障害ではない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物によって処置される患者は、真菌感染症を有さない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物によって処置される患者は、カンジダ症に罹患していない。いくつかの実施形態において、本発明の組成物によって処置される患者は、真菌感染症を有すると診断されていない、及び／またはカンジダ症に罹患していると診断されていない。好ましいかかる実施形態において、本発明の組成物によって処置される患者は、真菌感染症を有すると診断されていない、及び／またはカンジダ症に罹患していると診断されていない。
【０２４４】
本発明の組成物が１を超える細菌株、種または属を含むいくつかの実施形態において、個々の細菌株、種または属は、別々、同時または逐次投与用であってよい。例えば、組成物は、１を超える細菌株、種もしくは属の全てを含んでいてよく、または細菌株、種もしくは属は、別々に貯蔵されてよく、また、別々に、同時にもしくは逐次的に投与されてよい。いくつかの実施形態において、１を超える細菌株、種または属は、別々に貯蔵されているが、使用前に一緒に混合される。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、本発明において使用される細菌株は、ヒト成人の糞便から得られる。本発明の組成物が１を超える細菌株を含むいくつかの実施形態において、細菌株の全てがヒト成人の糞便から得られ、または、他の細菌株が存在するとき、ほんの僅少な量で存在する。細菌は、ヒト成人の糞便から得られ本発明の組成物において使用された後に培養されてよい。
【０２４６】
上記のように、いくつかの実施形態において、１または２以上のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌株は、本発明の組成物において唯一の治療的活性剤（複数可）である。いくつかの実施形態において、組成物における細菌株（複数可）は、本発明の組成物において唯一の治療的活性剤（複数可）である。
【０２４７】
本発明による使用のための組成物は、販売承認を必要としてもしなくてもよい。
【０２４８】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記細菌株が凍結乾燥されている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、上記細菌株が噴霧乾燥されている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生きている、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生存している、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、腸に部分的または全体的に定着することが可能である、上記医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、細菌株が、凍結乾燥または噴霧乾燥されており、また、生存しており、かつ腸に部分的または全体的に定着することが可能である、上記医薬組成物を提供する。
【０２４９】
いくつかの場合において、凍結乾燥または噴霧乾燥されている細菌株は、投与前に再構成される。いくつかの場合において、再構成は、本明細書に記載されている希釈剤の使用による。
【０２５０】
本発明の組成物は、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体を含んでいてよい。
【０２５１】
ある特定の実施形態において、本発明は、本発明において使用される細菌株と；薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤とを含む医薬組成物であって；細菌株が、それを必要とする対象に投与されるとき、障害を処置するのに十分な量であり、当該障害が：自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及び／または慢性疼痛；運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎；からなる群から選択される、上記医薬組成物を提供する。
【０２５２】
ある特定の実施形態において、本発明は：本発明において使用されている細菌株；及び薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤；を含む医薬組成物であって、細菌株が、中枢神経系障害または状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を処置または予防するのに十分な量である、上記医薬組成物を提供する。好ましい実施形態において、上記疾患または状態は：自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及び／または慢性疼痛；からなる群から選択される。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群及び／または髄膜炎を処置または予防するのに有用であり得る。
【０２５３】
ある特定の実施形態において、本発明は、上記医薬組成物であって、細菌株の量が、組成物の重量に対してグラム当たり約１×１０３〜約１×１０１１個のコロニー形成単位である、上記医薬組成物を提供する。
【０２５４】
ある特定の実施形態において、本発明は、１ｇ、３ｇ、５ｇまたは１０ｇの用量で投与される、上記医薬組成物を提供する。
【０２５５】
ある特定の実施形態において、本発明は、経口、直腸、皮下、鼻、頬側、及び舌下からなる群から選択される方法によって投与される、上記医薬組成物を提供する。
【０２５６】
ある特定の実施形態において、本発明は、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール及びソルビトールからなる群から選択される担体を含む上記医薬組成物を提供する。
【０２５７】
ある特定の実施形態において、本発明は、エタノール、グリセロール及び水からなる群から選択される希釈剤を含む上記医薬組成物を提供する。
【０２５８】
ある特定の実施形態において、本発明は、デンプン、ゼラチン、グルコース、無水ラクトース、自由流動ラクトース、β−ラクトース、コーンシロップ、アカシア、トラガカント、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム及び塩化ナトリウムからなる群から選択される賦形剤を含む、上記医薬組成物を提供する。
【０２５９】
ある特定の実施形態において、本発明は、防腐剤、酸化防止剤及び安定剤の少なくとも１つをさらに含む、上記医薬組成物を提供する。
【０２６０】
ある特定の実施形態において、本発明は、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルからなる群から選択される防腐剤を含む、上記医薬組成物を提供する。
【０２６１】
ある特定の実施形態において、本発明は、組成物が約４℃または約２５℃で密閉容器に貯蔵されて容器が５０％の相対湿度を有する雰囲気に置かれているとき、コロニー形成単位で測定される細菌株の少なくとも８０％が、少なくとも約１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年または３年の期間の後に残存している、上記医薬組成物を提供する。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されている組成物を含む密閉容器において付与される。いくつかの実施形態において、密閉容器は、サチェまたはボトルである。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に記載されている組成物を含むシリンジにおいて付与される。
【０２６３】
本発明の組成物は、いくつかの実施形態において、医薬製剤として付与されてよい。例えば、組成物は、錠剤またはカプセルとして提供されてよい。いくつかの実施形態において、カプセルは、ゼラチンカプセル（「ｇｅｌ−ｃａｐ」）である。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、経口投与される。経口投与は、嚥下を含んでいてよく、その結果、化合物が、胃腸管に入ることになり、かつ／または頬側、舌側、もしくは舌下投与によって化合物が口から直接血流に入ることになる。
【０２６５】
経口投与に好適な医薬製剤として、固体プラグ、固体微粒子状物、半固体及び液体（多相及び分散系を含む）、例えば錠剤；多−またはナノ−粒子状物を含有する軟質または硬質カプセル、液体（例えば、水溶液）、エマルジョンまたは粉末；ロゼンジ（液体が充填されたものを含む）；咀嚼剤；ゲル；急速分散剤形；フィルム；膣坐剤；スプレー；ならびに頬側／粘膜接着パッチが挙げられる。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、医薬製剤は、腸溶性製剤、すなわち、経口投与による腸への本発明の組成物の送達に好適である胃耐性製剤（例えば、胃のｐＨに耐性）である。腸溶性製剤は、組成物の細菌または別の成分が酸感受性である、例えば、胃条件下で分解しやすいとき、特に有用であり得る。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、腸溶性製剤は、腸溶性コーティングを含む。いくつかの実施形態において、該製剤は、腸溶性コーティングされた剤形である。例えば、該製剤は、腸溶性コーティングされた錠剤または腸溶性コーティングされたカプセルなどであってよい。腸溶性コーティングは、経口送達のための従来の腸溶性コーティング、例えば、錠剤、カプセルなどのための従来のコーティングであってよい。該製剤は、フィルムコーティング、例えば、腸溶性ポリマー、例えば酸不溶性ポリマーの薄膜層を含んでいてよい。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、腸溶性製剤は、本質的に腸溶性であり、例えば、腸溶性コーティングを必要とすることない胃耐性である。そのため、いくつかの実施形態において、該製剤は、腸溶性コーティングを含まない腸溶性製剤である。いくつかの実施形態において、該製剤は、熱ゲル化材料から作製されたカプセルである。いくつかの実施形態において、熱ゲル化材料は、セルロース系材料、例えばメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。いくつかの実施形態において、カプセルは、いずれのフィルム形成ポリマーも含有しないシェルを含む。いくつかの実施形態において、カプセルは、シェルを含み、該シェルは、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含み、いずれのフィルム形成ポリマーも含まない（例えば、［５１］を参照されたい）。いくつかの実施形態において、該製剤は、本質的に腸溶性のカプセル（例えば、Ｃａｐｓｕｇｅｌ製Ｖｃａｐｓ（登録商標））である。
【０２６９】
いくつかの実施形態において、該製剤は、軟質カプセルである。軟質カプセルは、カプセルシェルに存在する軟化剤、例えば、グリセロール、ソルビトール、マルチトール及びポリエチレングリコールなどの添加のおかげで、ある特定の弾性及び柔軟性を有し得るカプセルである。軟質カプセルは、例えば、ゼラチンまたはデンプンベースで製造され得る。ゼラチンベースの軟質カプセルは、種々の供給者から市販されている。例えば経口または経直腸などの投与方法に応じて、軟質カプセルは、種々の形状を有することができ、例えば、円形、楕円形、長方形または魚雷型であり得る。軟質カプセルは、従来のプロセス、例えば、Ｓｃｈｅｒｅｒプロセス、Ａｃｃｏｇｅｌプロセスまたは液滴もしくは発泡プロセスなどによって製造され得る。
【０２７０】
培養方法
本発明における使用のための細菌株は、例えば、参照文献［５２］〜［５４］に詳述されている標準の微生物学的技術を使用して培養され得る。
【０２７１】
培養に使用される固体または液体培地は、ＹＣＦＡ寒天またはＹＣＦＡ培地であってよい。ＹＣＦＡ培地として（１００ｍｌ当たりの近似値）：Ｃａｓｉｔｏｎｅ（１．０ｇ）、酵母エキス（０．２５ｇ）、ＮａＨＣＯ３（０．４ｇ）、システイン（０．１ｇ）、Ｋ２ＨＰＯ４（０．０４５ｇ）、ＫＨ２ＰＯ４（０．０４５ｇ）、ＮａＣｌ（０．０９ｇ）、（ＮＨ４）２ＳＯ４（０．０９ｇ）、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（０．００９ｇ）、ＣａＣｌ２（０．００９ｇ）、レザズリン（０．１ｍｇ）、ヘミン（１ｍｇ）、ビオチン（１μｇ）、コバラミン（１μｇ）、ｐ−アミノ安息香酸（３μｇ）、葉酸（５μｇ）、及びピリドキサミン（１５μｇ）を挙げることができる。
【０２７２】
ワクチン組成物における使用のための細菌株
本発明者らは、本発明の細菌株が、中枢神経系障害または状態、特に微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を処置または予防するのに有用であることを確認した。このことは、本発明の細菌株が、宿主の中枢自律神経及び／または腸神経系；ＨＰＡ経路の活性；神経免疫及び神経内分泌経路；ならびに宿主の胃腸管における共生代謝産物のレベル及び／または宿主の胃腸透過性に及ぼす効果の結果である可能性がある。そのため、本発明の組成物は、ワクチン組成物として投与されるとき、中枢神経系障害または状態、特に、微生物叢−腸−脳軸によって介在される中枢神経系障害または状態を予防するのにも有用であり得る。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、生存している。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。ある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である。他のある特定のかかる実施形態において、本発明の細菌株は、殺傷されていても、不活性化されていても、弱毒化されていてもよい。ある特定のかかる実施形態において、組成物は、ワクチンアジュバントを含んでいてよい。ある特定の実施形態において、組成物は、注射を介して、例えば皮下注射を介しての投与用である。
【０２７３】
総則
本発明の実施は、別途示さない限り、当業者の範囲内の、化学、生化学、分子生物、免疫学及び薬理学の従来の方法を用いる。かかる技術は、文献において完全に説明されている。例えば、参照文献［５５］及び［５６］〜［６２］などを参照されたい。
【０２７４】
用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」は、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」及び「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ（からなる）」を包含し、例えば、組成物がＸを「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」は、Ｘから排他的になってもよく、またはさらなる何か、例えば、Ｘ＋Ｙを含んでいてもよい。
【０２７５】
数値ｘに関係する用語「約」は、任意選択的であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０２７６】
ある特定の実施形態において、用語「調節する」は、増加または活性化することを意味する。代替の実施形態において、用語「調節する」は、減少または抑制することを意味する。
【０２７７】
語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてよい。必要に応じて、語「実質的に」は、本発明の定義から省略されてよい。
【０２７８】
２つのヌクレオチド配列間の百分率の配列同一性への言及は、整列しているとき、ヌクレオチドの百分率が、２つの配列を比較したときに同じであることを意味する。このアラインメント及びパーセント相同性または配列同一性は、当該分野において公知のソフトウエアプログラム、例えば、参照文献［６３］のセクション７．７．１８に記載されているものを使用して決定され得る。好ましいアラインメントは、１２のギャップオープンペナルティ及び２のギャップエクステンションペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスによるアフィンギャップ検索を使用してＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参照文献［６４］に開示されている。
【０２７９】
特に記述されていない限り、多数のステップを含むプロセスまたは方法は、方法の開始及び終了時にさらなるステップを含んでいてよく、またはさらなる介在するステップを含んでいてよい。また、ステップは、適切な場合、代替の順序で、組み合わされ、省略され、または実施されてよい。
【０２８０】
本発明の種々の実施形態は本明細書に記載されている。各実施形態において特定されている特徴は、他の特定されている特徴と組み合わされて、さらなる実施形態を付与してよいことが認識される。特に、好適な、典型的なまたは好ましいとして本明細書において強調されている実施形態は、互いに組み合わされてよい（これらが互いに排他的であるときを除く）。
【実施例】
【０２８１】
本発明を実施するための形態
本研究は、神経発達及び精神疾患に関連する行動特性を示す２の異なるマウスモデルにおいて中枢神経系障害または状態の処置に対する生存生物学的製剤の効果を評価することを試みた。特に、本研究は、（ｉ）母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデルならびに（ｉｉ）黒及び褐色のｂｒａｃｈｙｕｒｉｃ（ＢＴＢＲ）遺伝子組み換え同系交配マウスモデルにおける自閉症関連行動に焦点を当てる。２のマウスモデルにおける不安、うつ病、ならびに行動の認知及び社会的領域にわたっての慢性ＭＲＸ０１０対ビヒクル処置の効果を調査した。
【０２８２】
実施例１−母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデル
ＭＩＡマウスモデルは、子孫において自閉症スペクトラム障害の中核症状を誘発するために、妊娠したマウスにおいて、環境的な免疫チャレンジを使用する。ＭＩＡマウスは、常同行動（グルーミング試験及び大理石埋め込み試験によって示される）ならびに社会的コミュニケーションの欠損（社会的遊び、３−チャンバー社会的相互作用、及び食べ物の嗜好の社会的伝達試験によって示される）を典型的には示す。子孫は、自閉症の３つの中核症状（コミュニケーションの低減；社交性の低下；及び反復または常同行動の増加）を示し、そのため、治療の投与が自閉症スペクトラム障害及び実際には多くの他の神経学的障害に関連する行動的表現型を軽減し得るか否かを決定するために好適なモデルを付与する。動物モデルにおける行動的表現型の変化が、原因となっている生物学的または生理学的機序の理解に関係なく、潜在的に臨床的に関係のある介入を示すことが確立されている（［６５］）。
【０２８３】
実施例１ａ−ＭＩＡマウスモデルに関する材料及び方法
マウス
母体免疫活性化（環境ＡＳＤマウスモデル）プロトコルを、［６６］において先に記載されているように行った。簡潔には、妊娠したＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（ＥＮＶＩＧＯ、ＵＫ）に、［６６］に記載されている方法に従って生理食塩水または２０ｍｇ／ｋｇのポリ（Ｉ：Ｃ）をＥ１２．５において腹腔内注射した。これらのマウスを以下の実験においてＭＩＡマウスとして列挙する。雄性マウスは、８週齢で行動を開始した。該動物を、１２時間暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で温度及び湿度が制御された部屋に入れた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
【０２８４】
株
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＭＲＸ０１０：Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌。
生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
【０２８５】
生存生物学的製剤投与
マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ０１０またはビヒクルによる投薬。これらのマウスを、行動バッテリーの開始の前に、ＭＲＸ０１０またはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって３週間、毎日１回処置した。マウスを、行動バッテリーの間、７週間、毎日１回さらに処置した。ＭＲＸ０１０（１×１０７〜１×１０９ＣＦＵ経口投与）を投与の前にＰＢＳに溶解した。
【０２８６】
投与スケジュール
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
【表１】
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【０２８７】
糞便収集
新たな糞便サンプルを研究の終了まで毎週個々のマウスから収集した。少なくとも２０ｍｇの新たな糞便を微量遠心分離管に置き、直後に氷上に置き、次いで−８０℃で保存した。
【０２８８】
実験設計及び方法
上記で概説している、マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ０１０またはビヒクルによる投薬。行動バッテリーを以下の順序で行った：５週目に大理石埋め込み試験；６週目に食べ物の嗜好の社会的伝達及び８週目に強制水泳試験。カーマインレッドの胃腸運動性アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、７週目及び８週目の間に尾部出血が起こった。最後に、９週目で、マウスを殺処分して脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ  ｖｉｖｏ測定をした。
【０２８９】
ＭＩＡモデルにおける生存生物学的製剤処置の、常同、社会的及びうつ病様行動への影響を、胃腸パラメータ（透過性及び運動性）と併せて、以下の実施例において概説する。
【０２９０】
上記の表において列挙されている群２は、母体免疫活性化マウスを表し、母親を妊娠の間にポリ（Ｉ：Ｃ）によって処置した。これらのマウスは、対照マウス（群１）（この対照では、確実に、ポリ（Ｉ：Ｃ）投与により、母親マウス子孫において予期される行動上の症状が引き起こされた）と比較して自閉症スペクトラム障害に関連する表現型を示すことが予期され得た。自閉症スペクトラム障害の行動上の症状への処置の任意の効果が、群２及び群３の間の差によって確認され得た。
【０２９１】
グラフ設計及び統計的分析
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ  ＳＰＳＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ０１０群を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ  ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
【０２９２】
実施例１ｂ−常同行動のアセスメント−大理石埋め込み試験
論拠
この試験は、反復、強迫及び不安行動について評価する。埋め込まれた大理石の数が多いほど、不安または常同行動が大きいことを示す。実際、薬理学的剤、例えば、抗不安薬によって処置したマウスは、対照マウスと比較して、減少した大理石埋め行動を示す。
【０２９３】
方法
マウスを、標準の齧歯動物用（硬材）寝具（５ｃｍ）及びその頂部に２０個の大理石（壁から２ｃｍ離れかつ２ｃｍ離れて規則的間隔にある５列の大理石）を含む新規のポリプロピレンケージ（３５×２８×１８．５ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）内に個々に置いた。実験を１０００ｌｕｘの光強度下で行った。３０分後、マウスをこれらのケージから除去し、表面の２／３を超えて埋め込まれた大理石の数をスコアリングした。
【０２９４】
結果
対照群とビヒクルＭＩＡ群との間のスチューデントｔ検定分析により、ビヒクルＭＩＡマウスには、対照群と比較して、より多くの大理石が埋め込まれたことを明らかにした（ｔ（１９）＝３．００、Ｐ＝０．００７；図１Ａ）。埋め込まれた大理石の数のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにした［Ｆ（３，４２）＝６．３７、Ｐ＝０．００１］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ試験は、Ｍｒｘ００１０による慢性処置が、埋め込まれる大理石の数を減少させることを明らかにした（ｐ＜０．０１；図１Ａ）。推測的な一対比較は、Ｍｒｘ０１０で処置したＭＩＡマウスには、ＭＩＡビヒクルマウスよりも少ない大理石が埋め込まれたことを明らかにした（ｐ＜０．００１；図１Ｂ）。
【０２９５】
結論
ビヒクルＭＩＡ群は、対照群よりも有意に多くの大理石が埋め込まれたことを示し、これは、ＭＩＡモデルが、マウスにおいて自閉症スペクトラム障害様症状を成功裏に誘発したことを示している。ＭＲＸ０１０による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける反復、強迫及び不安行動を低減する。
【０２９６】
実施例１ｃ−社会的行動のアセスメント−食べ物の嗜好の社会的伝達
論拠
社会的伝達の食べ物の嗜好は、社会的行動を評価するためにマウスにおいて使用される嗅覚記憶の関連試験である。この試験において、オブザーバーマウスは、新規の食餌を最近採ったデモンストレーターマウスと相互作用する。オブザーバーマウスが、デモンストレーターによって採られた食餌と何らかの他の新規の食餌との間での選択肢を提示されるとき、オブザーバーマウスは、デモンストレーターによって採られた食餌をより好むはずである。食餌の嗜好の低減は、社交性の低下を示す。
【０２９７】
方法
この試験を先に記載されているように実施した（［６７］）。簡潔には、試験前の１８時間、マウスは食餌を奪われていたが、水は自由に得られた。食餌の選択肢は、接地されたマウス食によって作製された１％の粉砕シナモンまたは２％粉末ココアのいずれかからなった。デモンストレーターマウスは、各ケージからランダムに選択され、尾部には、後の社会的相互作用の際の同定を可能にするために青色マーカーでマーキングした。デモンストレーターの食餌容器を１時間のサンプリングセッションの前後に秤量した。上記試験に含めるには最低限０．２ｇの食餌の消費が必要であった。デモンストレーターマウスを、ケージメイトとの３０分の相互作用期間の間、それぞれのホームケージに戻した。その後、手掛かりの食餌または新規の食餌の嗜好に関してケージメイトを個々に試験した。容器を各選択肢セッションの直前直後に秤量した。観察したマウスを次いでそれぞれのホームケージに戻し、選択肢セッションを２４時間後に繰り返した。試験マウスは、社会的手掛かりとしてのデモンストレーターマウスのシナモンまたはココアの匂いをかぐはずであり、２つの間の選択肢が与えられたとき同じ食餌を優先的に選択する。
【０２９８】
結果
デモンストレーターの手掛かりの食餌の嗜好のＡＮＯＶＡにより、オブザーバーが、ビヒクルまたはＭＲＸ０１０投与に関係なく、デモンストレーターの相互作用の直後（Ｔ０）（Ｆ（３，３４）＝０．３８、Ｐ＝０．７７；図２Ａ）または２４時間後（Ｆ（３，３４）＝０．８５、Ｐ＝０．４８；図２Ｂ）、食餌の選択肢に曝されたときに有意差がないことを明らかにした。
【０２９９】
結論
ビヒクルＭＩＡ群は、社会的伝達の食べ物の嗜好の低減を示さず（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して食餌の嗜好の変化を示さなかった）、ＭＩＡモデルが社交性の低下の表現型を誘発しないことを示唆した。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用して社交性に対するＭＲＸ０１０による慢性処置の効果を決定することはできない。
【０３００】
実施例１ｄ−うつ病様行動のアセスメント−強制水泳試験
論拠
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、抗うつ活動を評価するために最も広く使用されている実験的パラダイムである（［６８］）。この試験において、マウスに６分間強制して水泳させ、スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。ナイーブ動物は、不動の浮遊姿勢に適応する前に、水泳、上昇及び飛び込みの形態で逃避行動を示すであろう。不動の持続時間は、行動の断念を示している。抗うつ薬は、この試験において、不動で費やした時間を減少させる。
【０３０１】
方法
マウスに、１７ｃｍの深さまで２３〜２５℃の水道水で満たしたガラスシリンダ（２４×２１ｃｍ）において６分間強制して水泳させた。ＦＳＴを天井カメラからテープに録画した。スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。
【０３０２】
結果
スチューデントｔ検定分析は、対照群及びビヒクルＭＩＡ群間の不動時間の有意差を明らかにしなかった（ｔ＝０．８９６８、ｄｆ＝２０；０．３８０５）。不動時間のＡＮＯＶＡは、ＭＲＸ０１０による処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，４２）＝１．８０３；Ｐ＝０．１６２５；図３］。
【０３０３】
結論
ビヒクルＭＩＡ群は、強制水泳試験における不動時間の増加を示さず（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して不動時間の変化を示さなかった）、ＭＩＡモデルはうつ病様症状を増加させなかったことを示唆した。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用してうつ病様行動に対するＭＲＸ０１０による慢性処置の効果を決定することはできない。
【０３０４】
実施例１ｅ−ｉｎ  ｖｉｖｏ腸透過性アッセイ
論拠
ＭＩＡモデルは、腸バリア機能の変化をもたらすことが報告されている。そのため、生物学的製剤による慢性処置が腸透過性に影響するか否かを確定することが重要であった。
【０３０５】
方法
試験マウスを単一のケージに入れ、食餌を一晩除去した。翌日（９ａｍ頃）マウスに、ＦＩＴＣデキストラン（フルオレセイン−イソチオシアネート；ＭＷ：４ｋＤａ、Ｓｉｇｍａ；濃度：ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、６００ｍｇ／動物（ｋｇ）の８０ｍｇ／ｍｌ  ＦＩＴＣ）を経口胃管栄養法によって投与した。ＦＩＴＣ投与の２時間後、尾部血液からの１００μｌの血液サンプルをヘパリンコーティングした毛細管において収集し、琥珀色のエッペンドルフに移し、氷上に置いた。サンプルを３５００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿を吸引し、サンプルを−８０℃において長期保存で保存した。
【０３０６】
希釈されていない血漿を使用してＦＩＴＣ濃度を定量化した。２５μｌのＦＩＴＣを３８４ウェルプレートにおいて２部ピペッティングした（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｂｉｏ  ｏｎｅ）。ＦＩＴＣを４９０ｎｍ〜５２０ｎｍの範囲の間でＶｉｃｔｏｒ分光計によって測定した。標準曲線では、段階希釈のＦＩＴＣをＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で調製した。
【０３０７】
また、９週でマウスを選択した後、回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ  ｖｉｖｏ測定を実施する。
【０３０８】
結果
スチューデントｔ検定分析は、対照群及びＭＩＡビヒクル群間の差を明らかにしなかった（ｔ（２０）＝０．５６、Ｐ＝０．５８；図４）。ＦＩＴＣ濃度のＡＮＯＶＡは、処置の有意な効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３９）＝２．２３、Ｐ＝０．０８］。
【０３０９】
結論
この実験において、ビヒクルＭＩＡ群は、変化した腸透過性を示さなかった（ＭＩＡビヒクルは、対照と比較して透過性の変化を示さなかった）。さらに、ＭＲＸ０１０による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける腸透過性に影響しなかった。
【０３１０】
実施例１ｆ−ｉｎ  ｖｉｖｏ腸運動アッセイ
論拠
ＭＩＡモデルは、腸バリア機能の変化をもたらすことが報告されている。そのため、生物学的製剤による慢性処置が腸運動を変化させるか否かを確定することが重要であった。
【０３１１】
方法
マウスを試験の開始の前に単独で部屋に入れた。マウスに非吸収性着色染料（カーマインレッド）で経口強制飼養した。最初に着色された糞便ボーラスの排泄時間を記録し、腸全体の蠕動運動の指標として使用した。
【０３１２】
結果
スチューデントｔ検定分析により、ビヒクルＭＩＡ群が、対照群（ｔ（１９）＝３．００、Ｐ＝０．００７）と比較したとき増加した腸運動（より少ない時間で検出された赤色ペレット）を示したことを明らかにした。運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３８）＝０．７４、Ｐ＝０．５４；図５］。
【０３１３】
結論
この実験において、ビヒクルＭＩＡ群は、対照と比較して増加した腸運動を示した。ＭＲＸ０１０による慢性処置は、対照と比較して腸運動に影響しなかった。
【０３１４】
ＭＩＡマウスモデルからの結果の考察
ＭＲＸ０１０による慢性処置は、ＭＩＡマウスにおける大理石埋め込み試験において観察された表現型を反転することができた。ＭＲＸ００１０による慢性処置は、埋め込まれた大理石の数を低減することができ、常同様行動の低減を示唆した。全ての群で社会的伝達の食餌試験において有意差が観察されず、このモデルにおける社会的行動での直接観察可能な効果が示唆されなかった。同様に、強制水泳試験においてＭＩＡプロトコルまたは生存生物学的製剤処置の有意な効果が観察されず、このモデルにおけるうつ病様行動での観察可能な効果が示唆されなかった。試験した生存生物学的製剤は、腸運動または透過性に影響しなかった。そのため、ＭＩＡモデルは、常同様、反復及び不安行動を評価するのに有用であることを証明したが、自閉症スペクトラム障害に関連する多数の他の症状を作り出さなかった。にもかかわらず、結果は、ＭＲＸ０１０による慢性処置が、自閉症スペクトラム障害の症状に良い影響を及ぼし得ることを示す。
【０３１５】
実施例２−ＢＴＢＲマウスモデル
ＢＴＢＲマウスモデルは、いずれの遺伝子組み換えもなく、頑強な自閉症様表現型を示す遺伝子組み換え同系交配マウスを使用する。ＢＴＢＲマウスは、（グルーミング試験及び大理石埋め込み試験によって示される）常同行動；社会的コミュニケーションの欠損（３チャンバー社会的相互作用試験、居住者侵入者試験及び食べ物の嗜好の社会的伝達試験によって示される）；認知障害（新規対象認識試験によって示される）；胃腸異常（ＦＩＴＣの増加した腸透過性によって示される）；ならびに血漿における循環オキシトシンレベルの低減を典型的には示す。社会的行動の欠如、反復行動の増加、及び不安に関係する行動の増加がこの株において報告されている［２７］。この頑強な行動的表現型に起因して、ＢＴＢＲマウスは、自閉症関係行動の処置のための新規の治療剤の効能を評価するのに理想的な動物モデルである。生存生物学的製剤によるかかる症状の軽減もまた、他の精神疾患または神経疾患の処置における生物学的製剤の効能を示し得る。
【０３１６】
実施例２ａ−ＢＴＢＲマウスモデルに関する材料及び方法
マウス
雄性ＢＴＢＲマウスを室内で飼育した。該動物を、１２時間暗サイクル（７：００〜１９：００時に点灯）で、温度及び湿度が制御された部屋に入れた。全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
【０３１７】
株
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＭＲＸ０１０：Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌。
【０３１８】
生物学的製剤をグリセロールストックに付与した。微生物成長培地（ＹＣＦＡ）を当該製剤の培養に使用した。生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
【０３１９】
生存生物学的製剤投与
マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ０１０またはビヒクルによる投薬。これらのマウスを、行動バッテリーの開始の前に、ＭＲＸ０１０またはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）によって３週間、毎日１回処置した。マウスを、行動バッテリーの間、毎日１回さらに処置した。ＭＲＸ０１０（１×１０７〜１×１０９ＣＦＵ経口投与）を投与の前にＰＢＳに溶解した。
【０３２０】
投与スケジュール
研究のための処置群を以下に示す。経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
【表２】
2020520928.tif 000004
【０３２１】
糞便収集
新たな糞便サンプルを研究の終了まで毎週個々のマウスから収集した。少なくとも２０ｍｇの新たな糞便を微量遠心分離管に置き、直後に氷上に置き、次いで−８０℃で保存した。
【０３２２】
実験設計及び方法
上記で概説している、マウスが８週齢であったときに開始したＭＲＸ０１０による投薬。最初の投薬は、社交性、不安、常同思考及び認知の試験を包含する行動実験の前に３週間行った。行動バッテリーを以下の順序で行った：４週目に大理石埋め込み試験；５週目に高架式十字迷路；６週目にオープンフィールド試験及び新規対象認識試験、ならびに食べ物の嗜好の社会的伝達試験；７週目で雌の尿への嗅覚行為及び社会的相互作用試験、ならびに９週目で強制水泳試験。カーマインレッドの胃腸運動アッセイ及び胃腸透過性アッセイにより、それぞれ、８週目及び９週目の間に尾部出血が起こった。最後に、１０〜１１週目で、マウスを殺処分して脾細胞刺激ならびに回腸及び結腸におけるＦＩＴＣのｅｘ  ｖｉｖｏ測定をした。
【０３２３】
ＢＴＢＲモデルにおける生存生物学的製剤処置の、常同、社会的及びうつ病様行動への影響を、胃腸パラメータ（透過性及び運動性）と併せて、以下の実施例において概説する。
【０３２４】
上記の表において列挙されている群１は、自閉症スペクトラム障害に関連する表現型を示すことが予期される対照ＢＴＢＲマウスを表している。自閉症スペクトラム障害の行動上の症状への処置の任意の効果が、群１及び群２の間の差によって確認され得た。
【０３２５】
グラフ設計及び統計的分析
全てのグラフをｇｒａｐｈｐａｄプリズムソフトウェア（バージョン５）において生じさせた。データをＩＢＭ  ＳＰＳＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃ２２．０（ＥＥＵＵ）を使用して分析した。データ分布を、コルモゴロフ・スミルノフ正規性検定を使用して分析した。ビヒクル群対ＭＲＸ０１０群を比較するデータを、一元ＡＮＯＶＡ及びＦｉｓｈｅｒの最小有意差（ＬＳＤ）ｐｏｓｔ  ｈｏｃ試験を使用して分析した。ＡＮＯＶＡが処置の有意な効果を明らかにしなかったとき、対照群に対しての推測的な一対比較試験を行った。非正規に分布したデータを、クラスカル・ウォリス及び無パラメータ・マンホイットニーＵ試験によって分析した。Ｐ＜０．０５が統計的有意差の基準であった。
【０３２６】
実施例２ｂ−社会的行動のアセスメント−食べ物の嗜好の社会的伝達
論拠
社会的伝達の食べ物の嗜好は、社会的行動を評価するためにマウスにおいて使用される嗅覚記憶の関連試験である。この試験において、オブザーバーマウスは、新規の食餌を最近採ったデモンストレーターマウスと相互作用する。オブザーバーマウスが、デモンストレーターによって採られた食餌と何らかの他の新規の食餌との間での選択肢を提示されるとき、オブザーバーマウスは、デモンストレーターによって採られた食餌をより好むはずである。食餌の嗜好の低減は、社交性の低下を示す。
【０３２７】
方法
この試験を先に記載されているように実施した（［６７］）。簡潔には、試験前の１８時間、マウスは食餌を奪われていたが、水は自由に得られた。食餌の選択肢は、接地されたマウス食によって作製された１％の粉砕シナモンまたは２％粉末ココアのいずれかからなった。デモンストレーターマウスは、各ケージからランダムに選択され、尾部には、後の社会的相互作用の際の同定を可能にするために青色マーカーでマーキングした。デモンストレーターの食餌容器を１時間のサンプリングセッションの前後に秤量した。上記試験に含めるには最低限０．２ｇの食餌の消費が必要であった。デモンストレーターマウスを、ケージメイトとの３０分の相互作用期間の間、それぞれのホームケージに戻した。その後、手掛かりの食餌または新規の食餌の嗜好に関してケージメイトを個々に試験した。容器を各選択肢セッションの直前直後に秤量した。観察したマウスを次いでそれぞれのホームケージに戻し、選択肢セッションを２４時間後に繰り返した。試験マウスは、社会的手掛かりとしてのデモンストレーターマウスのシナモンまたはココアの匂いをかぐはずであり、２つの間の選択肢が与えられたとき同じ食餌を優先的に選択する。
【０３２８】
結果
デモンストレーターの手掛かりの食餌の嗜好のＡＮＯＶＡにより、オブザーバーが、デモンストレーターの相互作用の直後（Ｔ０）（Ｆ（３，３６）＝１．１２３；Ｐ＝０．３５４；図６Ａ）または２４時間後（Ｆ（３，３８）＝０．１３８；Ｐ＝０．９３６；図６Ｂ）、食餌の選択肢に曝されたときに有意差がないことを明らかにした。
【０３２９】
結論
ＭＲＸ０１０による処置は、社会的伝達の食べ物の嗜好の試験においてＢＴＢＲマウスの社交性に影響しなかった。
【０３３０】
実施例２ｃ−社会的行動のアセスメント−強制的な侵入者試験
論拠
この手順は、齧歯動物間の社会的相互作用行動を評価する。侵入者マウスを居住者マウスのホームケージ内に置くことにより、社会的相互作用及び攻撃的行動を評価することができる。
【０３３１】
方法
各セッションは、侵入者マウスを居住者マウスのホームケージ内に１０分間の期間にわたって置くことからなった。いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。動物が相互作用に費やした時間量を記録した。
【０３３２】
結果
相互作用時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３６）＝１．９０５；Ｐ＝０．１４６２；図７］。
【０３３３】
結論
Ｍｒｘ０１０による処置は、社会的相互作用試験におけるＢＴＢＲマウスの社会的行動に影響しなかった。
【０３３４】
実施例２ｄ−常同行動のアセスメント−大理石埋め込み試験
論拠
この試験は、反復、強迫及び不安行動について評価する。埋め込まれた大理石の数が多いほど、不安または常同行動が大きいことを示す。実際、薬理学的剤、例えば、抗不安薬によって処置したマウスは、対照マウスと比較して、減少した大理石埋め行動を示す。
【０３３５】
方法
マウスを、標準の齧歯動物用（硬材）寝具（５ｃｍ）及びその頂部に２０個の大理石（壁から２ｃｍ離れかつ２ｃｍ離れて規則的間隔にある５列の大理石）を含む新規のポリプロピレンケージ（３５×２８×１８．５ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）内に個々に置いた。実験を１０００ｌｕｘの光強度下で行った。３０分後、マウスをこれらのケージから除去し、表面の２／３を超えて埋め込まれた大理石の数をスコアリングした。
【０３３６】
結果
埋め込まれた大理石の数のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにせず［Ｆ（３，３９）＝０．８３５；Ｐ＝０．４８３；図８］、Ｍｒｘ０１０による処置が、ＢＴＢＲマウスにおける常同行動に影響しなかったことを示唆した。
【０３３７】
結論
ＭＲＸ０１０による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける反復、強迫及び不安行動に影響しなかった。
【０３３８】
実施例２ｅ−不安様行動のアセスメント−高架式十字迷路
論拠
高架式十字迷路（ＥＰＭ）は、齧歯動物における不安様行動を評価するための広く使用されている試験である。ＥＰＭは、一般の不安行動を評価しており、迷路の開放アームにおいてより多くの時間を費やしている不安マウスは少ない。開放アーム活動（持続期間）の増加は、抗不安行動を反映している。
【０３３９】
方法
セットアップは、２つの開放（嫌悪）アーム及び２つの閉鎖（安全）アームを含み、床から１メートル高い灰色のプラスチック十字迷路からなった（５０×５×１５ｃｍ壁）。実験は赤色光下で行った（７ｌｕｘ）。マウスを、開放アームを向いた迷路の中心に置き（閉鎖アーム内への直接侵入を回避するため）、５分の持続時間にわたって活動領域を探索させた。いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。費やした時間の百分率及び各アームでの侵入回数を不安様行動及び自発運動について丁重に測定した。アームへの侵入をアーム内での全四足動物として定義した。
【０３４０】
結果
閉鎖アームにおいて費やした百分率の時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３９）＝０．５５６；Ｐ＝０．６４７；図９Ａ］。開放アームにおいて費やした百分率の時間のクラスカルワリス非パラメータ分析［カイ二乗：１０．８３１；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．０１３；図９Ｂ］、続いての非パラメータのマンホイットニーのＵ検定によると、ＭＲＸ０１０によって処置したマウスは、ビヒクル群と比較して開放アームにおいてより多くの時間を費やさなかったことが明らかになった。閉鎖アームへの侵入回数のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３９）＝０．５５６；Ｐ＝０．６４７；図９Ｃ］。開放アームへの侵入回数のクラスカルワリス非パラメータ分析［カイ二乗＝１０．３１５；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．０１６；図９Ｄ］、続いての非パラメータのマンホイットニーのＵ検定は、開放アームにおける侵入回数への処置の効果を明らかにしなかった。
【０３４１】
結論
ＭＲＸ０１０による慢性処置は、ＢＴＢＲマウスにおける高架式十字迷路での不安様行動に影響しなかった。
【０３４２】
実施例２ｆ−不安様行動のアセスメント−オープンフィールドアリーナ
論拠
オープンフィールドアリーナを使用して、新規のストレスフルな環境への暴露の応答及び自発運動を評価する。ナイーブマウスは、活動領域の中心よりも少なく暴露されているため、活動領域の壁沿いで大部分の時間を必然的に過ごす。中心で費やした時間の持続期間の増加は、不安様行動の減少を表す。
【０３４３】
方法
マウスを、個々に、オープンフィールドアリーナに置き（４３×３５×２５、Ｌ×ｗ×ｈ）、１０分間探索させた。実験は、６０ｌｕｘの光強度下で行った。Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアを使用して、いくつかの行動パラメータの測定が可能になるように、実験を、天井カメラを使用してテープに録画した。移動した距離を自発運動についてスコアリングした。
【０３４４】
結果
移動した距離のＡＮＯＶＡは、オープンフィールドアリーナにおける自発運動への処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３７）＝１．３２５；Ｐ＝０．２８２、図１０Ａ］。外側ゾーンにおいて費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３７）＝１．５９８；Ｐ＝０．２０８；図１０Ｂ］。内側ゾーンにおいて費やした時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにした［Ｆ（３，３６）＝３．６３６；Ｐ＝０．０２３；図１０Ｃ］。
【０３４５】
結論
Ｍｒｘ０１０による処置は、ＢＴＢＲマウスにおけるオープンフィールドアリーナでの自発運動及び不安様行動に影響しなかった。
【０３４６】
実施例２ｇ−うつ病様行動のアセスメント−強制水泳試験
論拠
強制水泳試験（ＦＳＴ）は、抗うつ活動を評価するために最も広く使用されている実験的パラダイムである。ナイーブ動物は、不動の浮遊姿勢に適応する前に水泳、上昇及び飛び込みの形態で逃避行動を示すであろう。不動の持続時間は、行動の断念を示している。抗うつ薬は、この試験において、不動で費やした時間を減少させる。
【０３４７】
方法
マウスに、１７ｃｍの深さまで２３〜２５℃の水道水で満たしたガラスシリンダ（２４×２１ｃｍ）において６分間強制して水泳させた。ＦＳＴを天井カメラからテープに録画した。スコアリングした行動パラメータは、６分間試験の最後の４分の間は不動である。
【０３４８】
結果
不動時間のＡＮＯＶＡは、ＦＳＴにおけるＢＴＢＲマウスの不動時間への処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３８）＝１．８７９；Ｐ＝０．１５１；図１１］。
【０３４９】
結論
ＭＲＸ０１０による処置は、強制水泳試験でのＢＴＢＲマウスの不動時間に影響しなかった。
【０３５０】
実施例２ｈ−うつ病様行動のアセスメント−雌の尿への嗅覚行為試験
論拠
雌の尿への嗅覚行為試験（ＦＵＳＴ）を使用して齧歯動物における無快感症様行動を評価する。嗅覚行為時間の低減が社会的回避／無快感症を示唆する一方で、増加は、社会的行動／快楽的行動の増加を表す。
【０３５１】
方法
実験マウスを試験の前に１週間、単独で部屋に入れる。試験の際、無菌水に浸漬した綿先端アプリケータをホームケージに置き、マウスを３分間嗅覚行為／調査させる。この３分試験の後、綿先端アプリケータを除去する。４５分後、新しい綿先端アプリケータを（このサイクルの発情期にあるものと同じ株の雌性マウスから収集した）雌の尿に浸漬し、ケージに置く。マウスをさらに３分間これを嗅覚行為／調査させる。水及び尿の嗅覚行為に費やした時間を記録する。
【０３５２】
結果
ビヒクル群では、マンホイットニーのＵ検定は、水の嗅覚行為で費やした時間と比較して尿への嗅覚行為に費やした時間の有意な増加を明らかにした［ｔ＝２．９７６、ｄｆ＝１８；Ｐ＝０．００８１］。水への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のクラスカルワリス非パラメータ分析は、水の群における処置の効果を明らかにしなかった［カイ二乗：６．３５２；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．０９６］。尿への暴露では、嗅覚行為に費やした時間のクラスカルワリス非パラメータ分析は、処置の効果を明らかにしなかった［カイ二乗：３．６３９；ｄｆ＝３；Ｐ＝０．３０３、図１２］。
【０３５３】
結論
ＭＲＸ０１０による処置は、ＢＴＢＲマウスにおいて尿への嗅覚行為に費やした時間に対する効果はなかった。
【０３５４】
実施例２ｉ−ｉｎ  ｖｉｖｏ胃腸運動アッセイ
論拠
この手順を使用してｉｎ  ｖｉｖｏ腸運動を評価する。
【０３５５】
方法
マウスを試験の開始の前に単独で部屋に入れた。マウスに非吸収性着色染料（カーマインレッド）で経口強制飼養した。最初に着色された糞便ボーラスの排泄時間を記録し、腸全体の蠕動運動の指標として使用した。
【０３５６】
結果
運動時間のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにしなかった［Ｆ（３，３９）＝２．０７２；Ｐ＝０．１２１；図１３］。
【０３５７】
結論
ＭＲＸ０１０による処置は、腸運動に影響しなかった。
【０３５８】
実施例２ｊ−器官重量及び結腸長
体重の百分率としての器官重量のＡＮＯＶＡは、副腎［Ｆ（３，３７）＝０．２０８；Ｐ＝０．８９０；図１４Ａ｝、脾臓Ｆ（３，３５）＝０．６２９；Ｐ＝０．６０１；図１４Ｂ］または盲腸［Ｆ（３，３７）＝０．８８３；Ｐ＝０．４６０；図１４Ｃ］について処置の効果を明らかにしなかった。結腸長のＡＮＯＶＡは、処置の効果を明らかにした［Ｆ（３，３７）＝５．６３５；Ｐ＝０．００３；図１４Ｄ］。Ｐｏｓｔ−ｈｏｃ分析により、ＭＲＸ０１０による慢性処置（ビヒクル群に対してｐ＜０．０５）が、ＢＴＢＲマウスにおける結腸長を増加させることを明らかにした。
【０３５９】
ＢＴＢＲマウスモデルからの結果の考察
全体に、ＭＲＸ０１０による処置は、ＢＴＢＲマウスにおける常同行動、社会的行動、不安行動及びうつ病関連行動に関する試験において有意な効果を及ぼさなかった。結腸長を除いて、現研究において評価された生存生物学的製剤は、測定したいくつかの生理的パラメータ（副腎重量、脾臓重量、盲腸重量及びカーマインレッド）に影響しなかった。ＭＲＸ０１０による処置は、ビヒクル処置マウスと比較したときに結腸長を増加させたが、カーマインレッドの試験では腸運動の変化が検出されなかった。
【０３６０】
自閉症スペクトラム障害の処置におけるＭＲＸ０１０についての全体的な結論
ＭＲＸ０１０は、ＭＩＡマウスモデルにおける常同、反復及び不安行動の処置において有効であることが示された。自閉症のマウスモデルにおける行動的及び生物学的表現型を反転する治療が、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。行動的表現型の解明は、自閉症の全ての動物モデルにおいて予期されるということではない。ＢＴＢＲによって示される症状は、測定可能であるいずれかの有益なＭＲＸ０１０効果に十分に重度ではなかった可能性がある。
【０３６１】
自閉症スペクトラム障害の処置の医薬品の臨床開発におけるＥＭＡガイドラインは、疾患の異質性に起因して、単一の化合物によって全ての中核症状に有意な効果を達成することができない場合があること、そのため、少なくとも１つの中核症状において短期間の効能が実証されなければならないことを記述している。ＭＲＸ０１０生存生物学的製剤は、少なくとも１つの中核症状または自閉症スペクトラム障害の有効な処置を示しており、そのため、当該製剤及び関連するＥ．ｆａｃｅｉｕｍ株は、ヒト疾患に対して有効であることが予期される。
【０３６２】
実施例３−安定性試験
本明細書に記載されている少なくとも１つの細菌株を含有する本明細書に記載されている組成物を２５℃または４℃で密閉容器に保存し、当該容器を３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％または９５％の相対湿度を有する雰囲気に置く。１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年または３年後、細菌株の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％が、標準プロトコルによって決定されるコロニー形成単位で測定されるように残存する。
【０３６３】
実施例４−Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける中心及び周辺オキシトシンレベルへのＭＲＸ０１０による亜慢性処置の効果を評価する
細菌株を上記実施例１及び２に概説されているように調製及び投与した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、それぞれ１０〜１２マウスを有する７つの実験処置群において６日間生存生物学的製剤で処置した。その後、視床下部をマウスから切断し、視床下部におけるオキシトシンのレベルを放射免疫測定（ＲＩＡ）によって検出し、また、血漿におけるオキシトシンのレベルをＲＩＡによって検出した。さらに、オキシトシン受容体、インターロイキン及び他の炎症マーカー、ならびにバソプレシンホルモンのレベルをＲＩＡ及び他の分析方法によって検出した。
【０３６４】
実施例５−母体免疫活性化（ＭＩＡ）マウスモデル
実施例５ａ−ＭＩＡマウスモデルに関する材料及び方法
マウス
雌性Ｃ５７／Ｂｌ６マウス（８週齢）及び週齢が一致する雄性マウスをＨａｒｌａｎ  ＵＫから購入した。１週間の馴化後、これらの動物を交尾させた。胎児の１２．５日目に、雌性マウスに、母体免疫系を活性化させるウイルス模倣物ポリ−ＩＣの注射、または生理食塩水ビヒクルの注射のいずれかを投与した。これらの動物からの雄性子孫を３週齢で母親から離した。
【０３６５】
全ての実験を、Ａｎｉｍａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｃｏｒｋによって承認された、欧州指針２０１０／６３／ＥＥＣ、２０１２年のＳ．Ｉ．Ｎｏ５４３の要件に従って行った。
【０３６６】
株
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＭＲＸ０１０：Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌。生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
【０３６７】
生存生物学的製剤投与
投薬では、雄性子孫に、連日経口胃管栄養法でＰＢＳ、またはＰＢＳ中１０９ｃｆｕ／ｍＬに調製した生存生物学的製剤ＭＲＸ０１０を投与した。生存生物学的製剤または対照の連日投与を８週齢（行動バッテリーの開始３週間前）で開始した。投薬は行動パラダイムを通して連日継続した。
【０３６８】
投与スケジュール
経口投与用ビヒクルはＰＢＳである。毎日の経口投与を経口胃管栄養法によって行う。
【０３６９】
実施例５ｂ−常同行動のアセスメント−セルフグルーミング試験
論拠
この試験は、反復、強迫及び不安行動について評価する。グルーミングに費やされた持続期間が長いほど、常同行動が増加すること；または新しい環境への応答における不安のレベルが高いことを示唆している。
【０３７０】
方法
セルフグルーミングを、フィルタートップで覆われた直径６．５ｃｍ×高さ１０ｃｍの透明なガラスビーカーにおいて評価する。実験動物を試験室に持って行き、試験前１時間まで馴化させる。試験の持続期間はおよそ２０分間である。調査者は、試験動物のグルーミングによって費やされた蓄積時間を記録する。試験間でビーカーを完全にきれいにして次に使用する。
【０３７１】
結果
対照群とビヒクルＭＩＡ群との間のスチューデントｔ検定分析は、ビヒクルＭＩＡマウスが、対照群と比較してグルーミングの持続期間の増加を示したことを明らかにした（ｔ（１８）＝２．６２８、Ｐ＝０．０１７；図１５）。ＭＲＸ０１０による処置は、グルーミング行動の増加を減衰させた（ｔ（１８）＝０．７６７、ｐ＝０．４５３）。
【０３７２】
結論
ＭＲＸ０１０は、セルフグルーミング試験においてＭＩＡマウスの常同／新しいもの嫌い（ｎｅｏｐｈｏｂｉｃ）行動を低減させたようであった。
【０３７３】
実施例５ｃ−不安様行動のアセスメント−高架式十字迷路
論拠
高架式十字迷路（ＥＰＭ）は、齧歯動物における不安様行動を評価するための広く使用されている試験である。ＥＰＭは、一般の不安行動を評価しており、迷路の開放アームにおいてより多くの時間を費やしている不安マウスは少ない。開放アームへの侵入時間または回数の増加は、低減された不安の指標である。
【０３７４】
方法
セットアップは、２つの開放（恐怖）アーム及び２つの閉鎖（安全）アームを含み、床から１メートル高い灰色のプラスチック十字迷路からなった（５０×５×１５ｃｍ壁または１ｃｍの壁なし）。実験は赤色光下で行った（約５ｌｕｘ）。マウスを、開放アームを向いた迷路の中心に個々に置き（閉鎖アーム内への直接侵入を回避するため）、５分間自由探索させた。実験を、天井カメラを使用してテープに録画して、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェア（３．１バージョン、Ｎｏｌｄｕｓ，ＴｒａｃｋＳｙｓ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）を使用してさらにパラメータ分析した。費やした時間の百分率、移動した距離及び各アームでの侵入回数を不安行動及び自発運動についてそれぞれ測定した（アームへの侵入をアーム内での全四足動物として定義した）。
【０３７５】
結果
高架式十字迷路においてはＭＩＡマウスにおける不安様行動の有意な増加は観察されなかった。特に、ビヒクルＭＩＡマウスは、閉鎖アームにおいてより多くの時間を示さず（ｔ１８＝２．６２８、ｐ＝０．０１７）、開放アームにおいてより少ない時間を示さなかった（ｔ１８＝２．６２８、ｐ＝０．０１７）（不安様行動の増加を示す）。ＭＲＸ０１０による慢性処置は、閉鎖アーム（ｔ１８＝２．６２８、ｐ＝０．０１７）と比較して開放アーム（ｔ１８＝２．６２８、ｐ＝０．０１７）において持続期間の変化がないため、不安様行動にも観察可能に影響しなかった（図１６Ａ及びＢを参照されたい）。
【０３７６】
結論
ＭＲＸ０１０は、高架式十字迷路においてＭＩＡマウスの不安に影響しないようであった。ビヒクルＭＩＡ群が不安様行動の増加を示さなかったため、ＭＩＡモデルは、不安の増加の表現型を誘発しなかったようである。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用した、高架式十字迷路における不安に対するＭＲＸ０１０による慢性処置の効果を決定することはできない。
【０３７７】
実施例５ｄ−不安様行動のアセスメント−オープンフィールドアリーナ
論拠
オープンフィールドアリーナを使用して、新規のストレスフルな環境への暴露の応答及び自発運動を評価する。ナイーブマウスは、活動領域の中心よりも少なく暴露されているため、活動領域の壁沿いで大部分の時間を必然的に過ごす。マウスは、必然的に、活動領域の側に張り付くことを好むため、中心において過ごす長い時間は、不安様行動の低減の指標である。
【０３７８】
方法
新規のストレスフルな環境への応答及び自発運動を評価するために、マウスを約６０ｌｕｘの光が当てられた開放された活動領域に置き（４０×３２×２３ｃｍ、Ｌ×ｗ×ｈ）、１０分間探索させた。実験を、天井カメラを使用してテープに録画して、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェア（３．１バージョン、Ｎｏｌｄｕｓ，ＴｒａｃｋＳｙｓ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）を使用してさらにパラメータ分析した。移動した距離及び実質上の中心ゾーンでの待機時間（エッジから離れた５０％で定義される）をスコアリングした。
【０３７９】
結果
オープンフィールドアリーナにおけるＭＩＡマウスにおいて不安様行動は変化しなかった。特に、内側ゾーンにおいて費やした時間（不安の増加の指標）は対照と比較して低減しなかった（ｔ（１９）＝３．０６１、ｐ＝０．７６３）。また、ＭＲＸ０１０は、内側ゾーンにおいて費やした時間の持続期間に観察可能に影響しなかった（ｔ（１７）＝０．２５３、ｐ＝０．８０３）（図１７）。
【０３８０】
結論
ＭＲＸ０１０は、オープンフィールドアリーナにおいてＭＩＡマウスの不安に影響しないようであった。ビヒクルＭＩＡ群が不安様行動の増加を示さなかったため、ＭＩＡモデルは、不安の増加の表現型を誘発しなかったようである。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用した、オープンフィールドアリーナにおける不安に対するＭＲＸ０１０による慢性処置の効果を決定することはできない。
【０３８１】
実施例５ｅ−社会的行動のアセスメント−雌の尿への嗅覚行為試験
論拠
雌の尿への嗅覚行為試験（ＦＵＳＴ）を使用して齧歯動物における無快感症様行動を評価する。尿の匂いへの嗅覚行為に費やした時間の増加は、社会的行動の関心の増加を示唆している。
【０３８２】
方法
試験の朝に、２０匹のＣ５７ＢＬ／６Ｊ雌性マウスからの膣スミアを採取し、動物の周期について分析した。発情期のマウスからの尿のみを試験用に収集した。雄性マウスを試験前に静かな薄暗い部屋に移し、ホームケージ内に挿入された空の綿先端アプリケータに馴化させた。１時間後、無菌水に浸漬した綿先端を動物に３分間提示し、嗅覚行為時間を測定した。マウスをそのまま放置した４５分の試行間間隔の後に、発情期の雌性マウスからの６０μｌの新しい尿が注がれた綿先端の提示を３分間実施し、嗅覚行為の持続期間を測定した。
【０３８３】
結果
全ての群のマウスが、水（中立の手掛かりとして）と比較して尿（社会的手掛かりとして）に対してより多くの時間を嗅覚行為に費やした（Ｆ（１，５７）＝９．９７１、ｐ＝０．００３）。ＭＩＡマウスにおけるこの社会的応答の損失はなく（Ｆ（１，３９）＝０．００２、ｐ＝０．９５９）、この動物モデルにおけるＭｒｘ０１０のいずれの観察可能な効果もなかった（Ｆ（１，３６）＝０．３６４、ｐ＝０．５５０）（図１８）。
【０３８４】
結論
ビヒクルＭＩＡ群が、尿への嗅覚行為の有意な低減を示さず、そのため、ＭＩＡモデルは、社会的行動のレベルの低減を誘発しなかった。したがって、ＭＩＡマウスモデルを使用した、雌の尿への嗅覚行為試験における社会的行動に対するＭＲＸ０１０による慢性処置の効果を決定することはできない。
【０３８５】
実施例５ｆ−社会的行動のアセスメント−３チャンバー社会的アプローチタスク（３チャンバー試験）
論拠
３チャンバー社会的相互作用試験（３−ＣＳＩＴ）は、性別一致の同種間での社会的相互作用を評価し、マウスにおける社会的新規性及び社会的嗜好の読み出しを可能にするかなり有効な動物行動学的に関連するモデルである。試験は、マウスに、無生物対象または性別一致の同種マウス間で自由に探索させる。ここで使用されているいくらかの動物モデルは、この社会的パラダイムにおいて欠損を有し；生存生物学的製剤を、これらの欠損を軽減し得るか否かについて調査した。
【０３８６】
方法
社会的試験装置は、矩形の３チャンバーボックスであった。各チャンバーは２０ｃｍＬ×４０ｃｍＷ×２２ｃｍＨであった。各チャンバーへのアクセスを可能にする小さい円形開口（直径５ｃｍ）を有する分割壁を作製した。バー間の鼻接触を可能にするが、闘争反応が防止された、１０ｃｍの底面直径、１３ｃｍの高さ及び１．２ｃｍのバー間隔を有する２つの同一のワイヤカップ様ケージを、相互に対称な位置でそれぞれの側のチャンバー内に置いた。試験は、それぞれ１０分の３期：１）居住、２）マウス対対象３）新規マウス対ファミリアーマウスを有する。実験を、天井カメラを使用してテープに録画して、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎソフトウェア（３．１バージョン、Ｎｏｌｄｕｓ，ＴｒａｃｋＳｙｓ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫ）を使用してさらにパラメータ分析した。第１期では、試験マウスを真ん中のチャンバー内に置き、１０分の馴化セッションで内側に空の小さいワイヤケージを有するボックス全体を探索させた。馴化期間後、試験マウスを短い間隔で試験ボックスから除去する一方で、対象を片側のチャンバーに置き、アンファミリアー（ｕｎｆａｍｉｌｉａｒ）の同種雄性マウス（試験対象との前接触なし）を他の側のチャンバーに置き、両方をワイヤカップ様ケージで包囲した。第２期の間、試験マウスを真ん中のチャンバーに置き、１０分間ボックス全体を探索させた。各チャンバーにおいて対象またはマウスを探索するのに費やす時間量及び各チャンバー内への侵入回数を評価した。左対右側チャンバーでのアンファミリアーマウスの配置を試行間で対称に変更した。侵入を１つのチャンバー内での全四足動物として定義した。第３期の間、対象を新規マウスとして働くアンファミリアーマウスに置き換え、他のチャンバーにおいて、第２期で使用したマウスをここではファミリアーマウスとして働く同マウスのままとした。それぞれの試行後に、全チャンバー及びカップ様ワイヤケージを１０％エタノールできれいにし、乾燥し、数分間換気をして嗅覚合図のバイアスを防止し、確実に適切な消毒をした。先天性のものの側の嗜好の欠失を全活動領域への馴化の最初の１０分間に確認した。対照動物は、必然的に、無生物対象よりも同種マウスに関心を持つ（社交性）。同様に、対照動物は、既に相互作用したものよりも新規のアンファミリアーマウスとの相互作用により多くの時間を費やす。
【０３８７】
結果
無生物対象よりも同種マウスと相互作用により多くの時間を費やす試験動物の明確な嗜好があった（Ｆ（１，４６）＝２６１．１、ｐ＜０．００１）（図１９Ａ）。ＭＩＡマウスはナイーブ対象と同程度まで対象よりも上記マウスと相互作用することを好んだため、ＭＩＡマウスにおいて社交性に対する効果はなかった（Ｆ（１，３２）＝１．９８４、ｐ＝０．１６９）。社交性に対する効果の欠失と合致して、社交性に対するＭＲＸ０１０の観察可能な効果はなかった（Ｆ（１，３２）＝０．１９０５、ｐ＝０．６６５）。社会的新規性（すなわち、ファミリアーまたは新規マウスとの相互作用）についての試験において、新規及びファミリアーマウスを探索するのに費やした時間の間で全体的な差はなかった（Ｆ（１，４８）＝０．２０６、ｐ＝０．６５２）。しかし、ビヒクルＭＩＡマウスは、新規マウスよりもむしろファミリアーマウスとの相互作用を好む傾向があった（Ｆ（２，４８）＝８．８２５、ｐ＝０．００５）（図１９Ｂ）。ＭＲＸ０１０は、ビヒクルＭＩＡ群において観察された社会的行動（社会的新規性または認識）のこの欠損を反転させ（Ｆ（１，３４）＝１３．４４、ｐ＝０．００１）、ファミリアーマウスと比較して新規マウスと相互作用する時間の増加を示した。
【０３８８】
結論
ＭＩＡモデルは、社交性に対する効果（マウスと比較した対象の相互作用）を実証しなかったため、この試験においてＭＲＸ０１０処置の影響についてコメントすることができない。しかし、ＭＩＡモデルは、社会的新規性の相互作用に影響した。重要なことに、ＭＲＸ０１０は、社会的新規性の相互作用の欠損を反転させ、そのため、ＭＲＸ０１０による慢性処置は、３チャンバー試験におけるＭＩＡマウスの社交性を増加させる。
【０３８９】
実施例５ｇ−認知能力のアセスメント−新規対象認識試験
論拠
この試験を使用して、認識記憶を試験し、認知能力を評価する。対照動物は、探索するための時間を有した対象及び新しい対象間を区別する。いくらかの動物モデルは、これらの新規の対象を認識する能力の欠損を有している。生存生物学的製剤を、認知能力におけるこれらの欠損を軽減する能力について調査した。
【０３９０】
方法
マウスを、活動領域のレベルで薄暗い光の６０ｌｕｘ下、灰色のプラスチック矩形ボックス（４０×３２×２３ｃｍ、Ｌ×Ｗ×Ｈ）の真ん中に１０分間置いた。２４時間後、マウスを２つの同じ対象と共にボックスに合計１０分間置いた（習得期）。２４時間後、２つの同じ対象のうち一方を新規の対象と置き換え、マウスを、サンプル対象と対向する壁の中間点でボックスの真ん中に合計１０分間置いた（保持期）。動物を各実験前に３０分間、試験室に慣れさせた。ボックス及び対象をアルコール１０％できれいにし、各試行間でのいずれの手掛かりの匂いも回避した。実験を、天井カメラを使用してテープに録画して、さらにパラメータ分析した。対象との有向接触には、口、鼻もしくは足との任意の接触が含まれ、最小の定義された距離を相互作用としてカウントした。
【０３９１】
結果
試験したいずれの群においてもファミリアー及び新規対象物間で識別されなかった（Ｆ（２，６０）＝０．２７３、ｐ＝０．７６２）。ＭＩＡマウスにおいて認知能力の欠損はなく（Ｆ（１，４０）＝０．０２８、ｐ＝０．８６７）、ファミリアー及び新規の対象間で識別するとき、認知能力に対するＭＲＸ０１０のいずれの観察可能な効果もなかった（Ｆ（１，３８）＝０．２９１、ｐ＝０．５９３）（図２０）。
【０３９２】
結論
ＭＩＡマウスは、認知能力行動における欠陥を示さず、そのため、このモデルは、認知において予期された欠損を誘発しなかった。そのため、新規対象認識試験においてＭＩＡマウスの認知能力に対する慢性ＭＲＸ０１０処置の効果を決定することはできない。
【０３９３】
ＭＩＡマウスモデルからの結果の考察
ＭＲＸ０１０は、ＭＩＡマウスにおけるグルーミング／常同行動の増加を軽減した。社会的新規性／識別に関する３チャンバー試験において、ＭＩＡマウスは、新規マウス及びファミリアーマウス間の区別をせず、社交性及び認識の低下を実証した。しかし、ＭＲＸ０１０による慢性処置は、社会的行動におけるこの欠損を反転させた。
【０３９４】
上記に開示されているデータと一緒にすると（実施例１）、これらのデータは、自閉症の環境動物モデルにおける常同、不安様及び社会的行動の欠損の軽減におけるＭＲＸ０１０の効果を示唆している。
【０３９５】
実施例６−ｅｘ  ｖｉｖｏ前臨床的研究
この前臨床的研究において、腸透過性及び機能、代謝プロファイル（ＳＣＦＡ）、全身の免疫活性化（脾細胞アッセイ）、アミノ酸の血漿中濃度、中枢神経伝達物質の放出、ならびに海馬、扁桃体及び前頭葉前部皮質における炎症、内分泌及び神経伝達物質マーカーに関する遺伝子発現を含めた多数の読み出しに対する生存生物学的製剤ＭＲＸ０１０の６日投与の効果を評価した。
【０３９６】
実施例６ａ−前臨床的研究に関する材料及び方法
マウス
ＢＡＬＢｃ（Ｅｎｖｉｇｏ，ＵＫ）成体雄性マウスを１２時間の明暗サイクル下で群居飼育した；標準の齧歯動物用食餌及び水を自由に得られた。全ての実験を、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｃｏｒｋ  Ａｎｉｍａｌ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによる認証に従った欧州ガイドラインに従って実施した。動物は実験の開始時に８週齢であった。
【０３９７】
株
受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＭＲＸ０１０：Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌。生存生物学的製剤を嫌気性条件で設備において成長させた。
【０３９８】
研究設計及び生存生物学的製剤投与
マウスを動物ユニット内で到着後１週間、保持室に馴化させた。マウスに、６日連続で１５：００から１７：００の間１×１０９ＣＦＵの用量で経口胃管栄養法（２００μＬ用量）で生存生物学的製剤を投与した。７日目に、動物の頭部を切除し、組織を実験用に採取する。
【０３９９】
この投薬レジメでのこの濃度におけるＭＲＸ０１０投与は、全身及び中枢の生理的事象に負の影響を及ぼさなかった。翻訳的視点から、これらのデータは、この生存生物学的製剤が、最小の望ましくない副作用で高い寛容性プロファイルを有し得ることを示唆している。
【０４００】
組織収集
動物を処置及び試験条件に関してランダムに犠牲にした；サンプリングを午前９時と午後２時３０分との間に行った。体幹血液をカリウムＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）チューブにおいて収集し、４０００ｇで１５分間スピンした。血漿を単離し、−８０℃で保存してさらに分析した。脳を迅速に切除し、切断し、各脳領域を乾燥氷上で急速凍結し、−８０℃で保存してさらに分析した。脾臓を除去し、５ｍＬ  ＲＰＭＩ培地（Ｌ−グルタミン及び重炭酸ナトリウムを含む、Ｒ８７５８  Ｓｉｇｍａ＋１０％  ＦＢＳ（Ｆ７５２４、Ｓｉｇｍａ）＋１％  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｐ４３３３、Ｓｉｇｍａ））において収集し、ｅｘ−ｖｉｖｏ免疫刺激について選択した直後に処理した。腸組織（盲腸に最も近い回腸及び結腸の２ｃｍセグメントを切除し、盲腸から最も遠い１ｃｍの組織を使用した）を腸透過性アッセイ用のＵｓｓｉｎｇチャンバーに設置した。さらなる１ｃｍの回腸及び結腸の組織をタイトジャンクション遺伝子発現分析用に採取した。盲腸を除去し、秤量し、−８０℃で保存してＳＣＦＡ分析した。
【０４０１】
腸透過性
マウスを頸椎脱臼によって安楽死させ、遠位回腸及び結腸を除去し、冷蔵Ｋｒｅｂｓ溶液中に置き、腸間膜線に沿って開き、注意深く濯いだ。調製物を、次いで、先に記載されているように（Ｈｙｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｃｏｘ、２００５）３７℃で維持した含酸素（９５％Ｏ２、５％ＣＯ２）Ｋｒｅｂｓ緩衝液を含むＵｓｓｉｎｇチャンバー（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｋｅｎｔ，ＵＫ、露出面積０．１２ｃｍ２）に置いた。４ｋＤａ  ＦＩＴＣ−デキストランを２．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度で粘膜のチャンバーに添加し；２００μＬのサンプルを次の３時間で３０分毎に漿膜のチャンバーから収集した。
【０４０２】
盲腸内容物中の短鎖脂肪酸の分析
盲腸内容物を混合し、ＭｉｌｌｉＱ水でボルテックスし、室温で１０分間インキュベートした。上清を遠心分離（１００００ｇ、５分、４℃）によって得、細菌及び他の固体をペレット化し、０．２μｍで濾過した。これをきれいなＧＣバイアルに移し、２−エチル酪酸（Ｓｉｇｍａ）を内部標準として使用した。ＳＣＦＡの濃度を、ＺＢ−ＦＦＡＰカラム（３０ｍ×０．３２ｍｍ×０．２５ｍｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を装備したＶａｒｉａｎ３５００ＧＣ水素炎イオン化システムを使用して分析した。標準曲線を、アセテート、プロピオネート、イソブチレート、ｎ−ブチレート、イソバレレート及びバレレート（Ｓｉｇｍａ）を含有する異なる濃度の標準混合物によって構築した。ピークをＶａｒｉａｎ  Ｓｔａｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎバージョン６．０ソフトウェアの使用によって積分した。全てのＳＣＦＡデータをμｍｏｌ／ｇとして表す。
【０４０３】
アミノ酸の血漿中濃度
動物を処置及び試験条件に関してランダムに犠牲にした；サンプリングを午前９時と午後２時３０分との間に行った。体幹血液をカリウムＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）チューブにおいて収集し、４０００ｇで１５分間スピンした。血漿を単離し、−８０℃で保存してさらに分析した。血漿を０．２ｍｏｌ／Ｌクエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ２．２で希釈して２５０ｎｍｏｌの各アミノ酸残基を得た。サンプルを内部標準ノルロイシンで希釈して、１２５ｎｍ／ｍＬの最終濃度を得た。アミノ酸を、Ｊｅｏｌ  Ｎａ＋高速カチオン交換カラムを装着したＪｅｏｌ  ＪＬＣ−５００／Ｖアミノ酸分析器（Ｊｅｏｌ  Ｌｔｄ，Ｇａｒｄｅｎ  Ｃｉｔｙ，Ｈｅｒｔｓ，ＵＫ）を使用して定量化した。
【０４０４】
脾臓サイトカインアッセイ
脾臓を、犠牲の後に５ｍＬ  ＲＰＭＩ培地中で直ちに収集し、直ちに培養した。脾臓細胞をＲＰＭＩ培地においてまずホモジナイズした。ホモジネートステップに、細胞を１ｍｌのＲＢＣ溶解緩衝液（１１８１４３８９００１  ＲＯＣＨＥ、Ｓｉｇｍａ）中で５分間インキュベートするＲＢＣ溶解ステップが続いた。１０ｍｌの培地を添加して溶解を停止し、続いて、５分間２００ｇで遠心分離した。これに、細胞に４０ｕｍ濾過器を通過させる最終ステップが続いた。ホモジネートを次いで４０ｕｍ濾過器上で濾過し、２００ｇで５分間遠心分離し、培地において再懸濁した。細胞をカウントし、播種した（４，０００，０００／ｍＬ培地）。２．５時間の順応後、細胞をリポ多糖体（ＬＰＳ−２μｇ／ｍｌ）またはコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ−２．５μｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。刺激後、上清を採取して、Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ  １（マウス）Ｖ−ＰＬＥＸ  Ｋｉｔ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、ＵＳＡ）を使用してＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、インターフェロンγ、ＣＸＣＬ２及びＩＬ６についてサイトカイン放出を評価した。分析をＭＥＳＯ  ＱｕｉｃｋＰｌｅｘ  ＳＱ  １２０、ＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒ  ２４００、ＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００、ＳＥＣＴＯＲ  Ｓ  ６００を使用して実施した。
【０４０５】
モノアミン分析
神経伝達物質濃度を脳幹からのサンプルにおいてＨＰＬＣによって分析した。簡潔には、脳幹組織を、内部標準として４ｎｇ／４０μｌのＮ−メチル５−ＨＴ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＵＫ）を混ぜた５００μｌの冷蔵移動相において超音波処理した。移動相は、０．１Ｍクエン酸、５．６ｍＭオクタン−１−スルホン酸（Ｓｉｇｍａ）、０．１Ｍリン酸二水素ナトリウム、０．０１ｍＭ  ＥＤＴＡ（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ、Ｃｏｒｋ）及び９％（ｖ／ｖ）メタノール（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ）を含有し、４Ｎ水酸化ナトリウム（Ａｌｋｅｍ／Ｒｅａｇｅｃｏｎ）を使用してｐＨ２．８に調整した。ホモジネートを次いで２２，０００×ｇで４℃において１５分間遠心分離し、４０μｌの上清を、ＳＣＬ１０−Ａｖｐシステムコントローラ、ＬＥＣＤ７電気化学検出器（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、ＬＣ−１０ＡＳポンプ、ＣＴＯ−１０Ａオーブン、ＳＩＬ−１０Ａ自己注入器（４０℃で維持されたサンプル冷却器を有する）及びオンラインのＧａｓｔｏｒｒ  Ｄｅｇａｓｓｅｒ（ＩＳＳ，ＵＫ）からなるＨＰＬＣシステム上に注入した。３０℃で維持した逆相カラム（Ｋｉｎｅｔｅｘ  ２．６ｕ  Ｃ１８  １００×４．６ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を分離において用いた（流速０．９ｍｌ／分）。Ａｇ／ＡｇＣｌ参照電極（Ｓｈｉｍｄａｚｕ）と組み合わせたガラス状炭素作用電極を＋０．８Ｖで作動させ、生じたクロマトグラフクロマトグラムを、Ｃｌａｓｓ−ＶＰ  ５ソフトウェア（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を使用して分析した。神経伝達物質は、サンプル分析の間に規則的間隔でランニングする、標準注入物によって求められる特徴的な保持時間によって同定した。分析物対内部標準のピーク高さの比を測定し、標準注入物と比較した。結果を神経伝達物質（ｎｇ）／新たな組織重量（ｇ）として表した。
【０４０６】
中心及び胃腸の遺伝子発現分析
全ＲＮＡを、製造者の推奨に従ってｍｉｒＶａｎａ（商標）ｍｉＲＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット（Ａｍｂｉｏｎ／Ｌｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）及び処理ＤＮａｓｅ（Ｔｕｒｂｏ  ＤＮＡ不含，Ａｍｂｉｏｎ／ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して抽出した。ＲＮＡを、製造者の指示に従ってＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌａｗａｒｅ，ＵＳＡ）を使用して定量化した。ＲＮＡの質を製造者の手順に従ってＡｇｉｌｅｎｔ  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓｔｏｃｋｐｏｒｔ，ＵＫ）を使用して評価し、ＲＮＡ完全性数（ＲＩＮ）を算出した。ＲＩＮ値＞７を有するＲＮＡを後の実験に使用した。ＲＮＡを、製造者の指示に従ってＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡキット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。簡潔には、Ｍｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ逆転写酵素（５０Ｕ／μＬ）（１）（２）（１）（１０）をＲＴマスター混合物の部分として添加し、２５℃で１０分間、３７℃で２時間、８５℃で５分間インキュベートし、４℃で保存した。定量的ＰＣＲを、β−アクチンを内在性対照として使用しつつ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによってマウス特異的標的化遺伝子に設計されたプローブ（６カルボキシフルオレセイン−ＦＡＭ）を使用して実施した。増幅反応には、１μｌ  ｃＤＮＡ、５μｌの２Ｘ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ（Ｒｏｃｈｅ）、９００ｎＭの各プライマーが含まれ、ＲＮａｓｅ不含水の添加によって合計１０μｌとした。全ての反応をＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標）４８０Ｓｙｓｔｅｍにおいて９６ウェルプレートを使用して３重に実施した。熱サイクル条件は、製造者（Ｒｏｃｈｅ）によって推奨されるように５５サイクルのものであった。アンプリコン汚染についてチェックするために、各ランは、使用した各プローブについて３重のテンプレート対照を含まなかった。サイクル閾（Ｃｔ）値を記録した。データを、β−アクチンを使用して正規化し、２−ΔΔＣＴ法を使用して変換し、倍数変化対対照群として提示した。
【０４０７】
統計的分析
正規分布データを平均±ＳＥＭとして提示し；非パラメータデータセットを四分位範囲でメジアンとして提示する。非対両側ｔ−検定を適用してパラメータデータを分析し、マンホイットニー試験を非パラメータに使用した。スピアマンの順位相関係数を、プールしたデータセットにおいて相関関係分析に用いた。ｐ値＜０．０５を全ての場合において有意であるとみなした。
【０４０８】
実施例６ｂ−前臨床的研究の結果
腸透過性、及び胃腸の遺伝子発現
腸透過性の指標としての、Ｕｓｓｉｎｇチャンバーの、管腔から漿膜側へのＦＩＴＣの通路を使用して、ＭＲＸ０１０が、回腸（図２１Ａ（Ｆ（３，２４）＝０．１０７、ｐ＝０．９６））または結腸（図２２Ａ（Ｆ（３，２７）＝１．１４１、ｐ＝０．３５１））組織透過性に対する観察可能な効果を有さなかったことが決定された。さらに、ＭＲＸ０１０は、回腸または結腸組織における、タイトジャンクションタンパク質（腸バリアの完全性の維持に関与した）ＴＪＰ１（図２１Ｃ（ｔ（１２）＝０．１６、ｐ＝０．８７６）及び図２２Ｄ（ｔ（８）＝０．１１４、ｐ＝０．９１２））またはオクルーディン（図２１Ｂ（ｔ（１１）＝０．７２、ｐ＝０．４８７）及び図２２Ｂ（ｔ（８）＝０．２７２、ｐ＝０．９７２））；酵素ＩＤＯ−１（トリプトファン／キヌニレン経路における第１及び律速の酵素）（図２１Ｄ（ｔ（１２）＝０．３９８、ｐ＝０．６９８）及び図２２Ｃ（ｔ（８）＝０．５１、ｐ＝０．６２３））；あるいはＴＰＨ１（セロトニンの合成の原因となる、酵素トリプトファン水酸化酵素のイソ型）（図２１Ｅ（（ｔ（１２）＝０．１５７、ｐ＝０．８７８）または図２２Ｅ（（ｔ（９）＝０．５３３、ｐ＝０．６１１））のｍＲＮＡ発現に対して有意な効果を有さなかった。
【０４０９】
盲腸内容物におけるＳＣＦＡ発現
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、食事からの消化されない繊維を腸内の細菌によって発酵させるときに生成される。ＭＲＸ０１０の慢性投与は、ビヒクルＰＢＳ投与と比較したとき、短鎖脂肪酸、アセテート（ｔ（１２）＝１．７８７、ｐ＝０．０９９）、プロピオネート（ｔ（１２）＝１．２９、ｐ＝０．２２２）、イソブチレート（ｔ（１１）＝１．１５２、ｐ＝０．１７４）、ブチレート（ｔ（１２）＝０．５７７、ｐ＝０．５７５）、イソバレレート（ｔ（１１）＝１．５８４、ｐ＝０．１４２）またはバレレート（ｔ（１２）＝０．２７、ｐ＝０．２９２）の盲腸の産生物に観察可能な効果を及ぼさなかった（図２３）。
【０４１０】
脾臓サイトカインアッセイ
ｅｘ  ｖｉｖｏ脾細胞アッセイは、細菌模倣物（リポ多糖体）またはウイルス模倣物（コンカナバリンＡ）の攻撃により、脾細胞（脾臓（免疫防御に関与する主な器官）から単離された細胞）を攻撃することを含む。ＭＲＸ０１０は、ＰＢＳ対照と比較してコンカナバリンＡへの応答においてＩＬ−１β発現を増加させ、これは、ウイルス攻撃に応答した炎症の促進的役割を示唆している。しかし、ＭＲＸ０１０は、ＰＢＳ対照の投与と比較したとき、ＬＰＳもしくはコンカナバリンＡ刺激に応答して、前炎症（ＩＦＮγ、ＴＮＦα）もしくは抗炎症（ＩＬ−１０、ＩＬ−６）またはＣＸＣＬ１（免疫反応活性化のマーカー）の脾細胞放出に影響しないようであった（図２４及び以下の表は有意差を概説している）
【表３】
2020520928.tif 000005
【０４１１】
アミノ酸の血漿中濃度
体幹血液を血漿中のアミノ酸分析のために収集し、微生物叢の変化による必須アミノ酸の生合成及び異化の指標を得た。ＭＲＸ０１０は、血漿（ｔ（９）＝２．７３３、ｐ＝０．０２３）におけるプロリンレベルを減少させたが、チロシン（ｔ（１２）＝０．０７８、ｐ＝０．３９）、バリン（ｔ（１２）＝１．１５２、ｐ＝０．２７２）、トレオニン（ｔ（１１）＝０．０７２、ｐ＝０．９４４）、タウリン（ｔ（１２）＝１．０３、ｐ＝０．３２３）、セリン（ｔ（１２）＝１．３３４、ｐ＝０．２０７）、フェニルアラニン（ｔ（１２）＝０．０８６、ｐ＝０．３４３）、メチオニン（ｔ（１１）＝０．５６４、ｐ＝０．５８４）、リジン（ｔ（１２）＝０．４９６、ｐ＝０．６２９）、ロイシン（ｔ（１２）＝０．２８９、ｐ＝０．７７８）、イソロイシン（ｔ（１２）＝０．１６９、ｐ＝０．１０７）、ＨＮ３（ｔ（１２）＝０．０２１、ｐ＝０．９８４）、ヒスチジン（ｔ（１２）＝０．５１６、ｐ＝０．６１５）、グリシン（ｔ（１２）＝０．６０８、ｐ＝０．５５５）、グルタメート（ｔ（１２）＝０．６７４、ｐ＝０．５１３）、システイン酸（ｔ（１１）＝０．３７５、ｐ＝０．７１５）、システイン（ｔ（１２）＝０．７１８、ｐ＝０．４８７）、アスパルテート（ｔ（１２）＝１．００９、ｐ＝０．３１３）、アルギニン（ｔ（１２）＝０．８８３、ｐ＝０．３９５）またはアラニン（ｔ（１２）＝４．５２５、ｐ＝０．１５３）のレベルを変化させないようであった（図２５を参照されたい）。
【０４１２】
脳幹におけるモノアミン変化
ＭＲＸ０１０の慢性投与は、非対両側ｔ−検定によって求められる、ノルアドレナリン（ｔ（１２）＝１．５５１、ｐ＝０．１４７）、ドーパミン（ｔ（１２）＝０．７３１、ｐ＝０．４７９）、セロトニン（ｔ（１２）＝０．１５４、ｐ＝０．１４９）、５−ＨＩＡＡ（５−ヒドロキシ−インドール−酢酸；５−ＨＴの代謝産物）（ｔ（１２）＝１．８５８、ｐ＝０．０８８）、またはセロトニンターンオーバー（５−ＨＩＡＡ：５−ＨＴの比）（ｔ（１２）＝０．２０２、ｐ＝０．８４４）のレベルを変化させないようであった（図２６）。
【０４１３】
中心遺伝子発現
神経伝達物質受容体（セロトニン受容体１ａ（５−ＨＴ１ａ）、ドーパミンＤ１受容体、ＧＡＢＡＢ受容体サブユニットＢ１、ＧＡＢＡＡ受容体、ＮＭＤＡ２Ａ及びＮＭＤＡ２Ｂ受容体）、炎症マーカー（ＩＬ−１β、ＩＬ６、ＣＤ１１ｂ、ＴＮＦα及びＴＬＲ４）、ならびに内分泌マーカー（コルチコステロン放出因子（ＣＲＦ）、コルチコステロン放出因子受容体１及び２（ＣＲＦＲ１、ＣＲＦＲ２）、脳由来のニューロトロフィン因子（ＢＤＮＦ）、バソプレシン受容体、オキシトシン受容体、糖質コルチコイド受容体及び鉱質コルチコイド受容体）についての遺伝子発現を、扁桃体、前頭葉前部皮質及び海馬からの脳組織において分析した。
【０４１４】
ＭＲＸ０１０の慢性投与は、海馬または前頭葉前部皮質における神経伝達物質受容体、炎症マーカーまたは内分泌マーカーのｍＲＮＡ発現への適切な効果を示さなかった（図２７、２９、３０、３２、３３及び３５）。扁桃体、不安、恐怖及び記憶の固定に関連する脳の辺縁領域において、神経伝達物質受容体、ＮＭＤＡ受容体２Ｂ、及び内分泌マーカー、ＢＤＮＦのｍＲＮＡ発現を減少させたが（図２８及び３４）、他の炎症、神経伝達物質または内分泌標的に対する観察可能な効果はなかった（図２８、３１及び３４）。
【０４１５】
ＭＲＸ０１０は、神経伝達物質受容体セロトニン１ａ（５−ＨＴ１ａ）（ｔ（１１）＝０．３８２、ｐ＝０．７１０）、ドーパミンＤ１受容体（ｔ（１０）＝１．９０６、ｐ＝０．０８６）、ＧＡＢＡＢ受容体Ｂ１サブユニット（ｔ（１２）＝０．０２９、ｐ＝０．９７８）、ＧＡＢＡＡ受容体（ｔ（１２）＝０．９２６、ｐ＝０．３７３）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ａ（ｔ（１１）＝１．７５７、ｐ＝０．１０７）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ｂ（ｔ（１０）＝１．５２、ｐ＝０．１５９）の海馬遺伝子発現への適切な効果を示さなかった（図２７）。
【０４１６】
ＭＲＸ０１０は、神経伝達物質受容体ドーパミンＤ１受容体（ｔ（１２）＝０．８０８、ｐ＝０．４３５）、ＧＡＢＡＢ受容体Ｂ１サブユニット（ｔ（１１）＝１．７９３、ｐ＝０．１００）、ＧＡＢＡＡ受容体（ｔ（１１）＝１．３５２、ｐ＝０．２０４）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ａ（ｔ（１２）＝０．４５５、ｐ＝０．６５８）の扁桃体遺伝子発現への適切な効果を示さなかったが、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ｂ（ｔ（１１）＝２．７３７、ｐ＝０．０１９）の発現を減少させた（図２８）。
【０４１７】
ＭＲＸ０１０は、神経伝達物質受容体ドーパミンＤ１受容体（ｔ（１１）＝０．２９５、ｐ＝０．７７３）、ＧＡＢＡＢ受容体Ｂ１サブユニット（ｔ（１１）＝１．０８、ｐ＝０．３０３）、ＧＡＢＡＡ受容体（ｔ（１０）＝０．７８７、ｐ＝０．４５０）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ａ（ｔ（１２）＝０．１０８、ｐ＝３．０１２）、ＮＭＤＡ受容体サブユニット２Ｂ（ｔ（１１）＝１．２１３、ｐ＝０．９０６）のＰＦＣ遺伝子発現への適切な効果を示さなかった（図２９）。
【０４１８】
ＭＲＸ０１０は、炎症マーカーＩＬ−１β（ｔ（１０）＝０．８６３、ｐ＝０．４０８）、ＩＬ−６（ｔ（１１）＝０．９５７、ｐ＝０．３５９）、ＣＤ１１ｂ（ｔ（１２）＝１．０８３、ｐ＝０．３００）、ＴＮＦα（ｔ（９）＝０．５０７、ｐ＝０．６２４）、ＴＬＲ４（ｔ（１２）＝０．０２５、ｐ＝０．９８０）の海馬遺伝子発現への適切な効果を示さなかった（図３０）。
【０４１９】
ＭＲＸ０１０は、炎症マーカーＩＬ−６（ｔ（１１）＝０．９８０、ｐ＝０．９２４）、ＣＤ１１ｂ（ｔ（１２）＝１．４３８、ｐ＝０．１７６）、ＴＬＲ４（ｔ（１１）＝１．０８１、ｐ＝０．３０３）の扁桃体遺伝子発現への適切な効果を示さなかった（図３１）。
【０４２０】
ＭＲＸ０１０は、ＰＦＣにおける、ＴＬＲ４（ｔ（１１）＝０．１３５、ｐ＝０．８９５）、ＩＬ−６（ｔ（１１）＝０．４９２、ｐ＝０．６３３）またはＣＤ１１ｂ（ｔ（１１）＝０．６０８、ｐ＝０．５５５）のｍＲＮＡ発現への適切な効果を示さなかった（図３２）。
【０４２１】
ＭＲＸ０１０は、海馬における、バソプレシン受容体（ｔ（１２）＝０．８４３、ｐ＝０．４１６）、ＣＲＦ（ｔ（１２）＝０．２３９、ｐ＝０．８１５）、ＣＲＦＲ１（ｔ（１２）＝０．１５９、ｐ＝０．１３８）、ＣＲＦＲ２（ｔ（１１）＝１．０１４、ｐ＝０．３３２）、ＢＤＮＦ（ｔ（１２）＝１．１３３、ｐ＝０．２８０）、オキシトシン受容体（ｔ（１２）＝０．０８１、ｐ＝０．３７０）、糖質コルチコイド受容体（ｔ（１２）＝０．７４９、ｐ＝０．４６８）、鉱質コルチコイド受容体（ｔ（１２）＝１．４７３、ｐ＝０．１６６）の内分泌マーカーｍＲＮＡ発現についてｍＲＮＡ発現への適切な効果を示さなかった（図３３）。
【０４２２】
ＭＲＸ０１０は、扁桃体内分泌マーカーＣＲＦＲ１（ｔ（１２）＝０．１６４、ｐ＝０．８２７）、ＣＲＦＲ２（ｔ（１１）＝０．２８８、ｐ＝０．４７７９）、バソプレシン受容体（ｔ（１２）＝０．０１３、ｐ＝０．９９０）、オキシトシン受容体（ｔ（１１）＝０．７８７、ｐ＝０．４８８）、糖質コルチコイド受容体（ｔ（１１）＝０．４４４、ｐ＝０．６６５）、鉱質コルチコイド受容体（ｔ（１０）＝１．０２３、ｐ＝０．３３１）のｍＲＮＡ発現への適切な効果を示さなかったが、ＢＤＮＦ（ｔ（１１）＝２．９４３、ｐ＝０．０１３）についてｍＲＮＡ発現の減少を実証した（図３４）。
【０４２３】
ＭＲＸ０１０は、ＰＦＣ内分泌マーカーＣＲＦＲ１（ｔ（１２）＝０．５３１、ｐ＝０．６０５）、ＣＲＦＲ２（ｔ（１２）＝０．７１、ｐ＝０．４９２）、ＢＤＮＦ（ｔ（１１）＝１．３９１、ｐ＝０．１９２）、オキシトシン受容体（ｔ（１１）＝１．５４５、ｐ＝０．１５１）、糖質コルチコイド受容体（ｔ（１２）＝０．０４４、ｐ＝０．９６５）、鉱質コルチコイド受容体（ｔ（１１）＝０．３８１、ｐ＝０．７１０）のｍＲＮＡ発現への適切な効果を示さなかった（図３５）。
【０４２４】
実施例６ｃ−前臨床的研究の考察
腸透過性及び機能、代謝プロファイル（ＳＣＦＡ）、全身の免疫活性化（脾細胞アッセイ）、アミノ酸の血漿中濃度、中枢神経伝達物質の放出、ならびに海馬、扁桃体及び前頭葉前部皮質における炎症、内分泌及び神経伝達物質マーカーに関する遺伝子発現を含めた多数の読み出しに対する生存生物学的製剤ＭＲＸ０１０の慢性投与の効果を、この前臨床的研究において評価した。
【０４２５】
ＭＲＸ０１０は、回腸または結腸透過性に対して観察可能な効果を示さず、バリアの完全性の維持と関連するタイトジャンクションタンパク質の発現も示さなかった。ＭＲＸ０１０による慢性処置が透過性を変化させないという所見は、これが、腸透過性及び完全性に負に影響しないことを示唆している。ＭＲＸ０１０はまた、ＩＤＯ−１もＴＰＨ１も変化させず、セロトニン産生も、腸におけるトリプトファン／キヌニレン経路も変化させないことを示唆している。
【０４２６】
ＭＲＸ０１０投与は、盲腸のＳＣＦＡ産生においていずれの観察可能な効果も生じなかった。このことは、ＭＲＸ０１０の慢性レジメが、発酵、または食事からの消化されない繊維の発酵の原因となる細菌を変化させなかったことを示唆している。
【０４２７】
ＭＲＸ０１０は、ウイルス模倣物（コンカナバリンＡ）チャレンジに応答して、脾細胞における前炎症性サイトカインＩＬ−１βの発現を増加させた。ＭＲＸ０１０は、ＬＰＳまたはコンカナバリンＡに応答した、研究されたサイトカインの範囲に対してのさらなる観察可能な効果を有さなかった。このことは、ＭＲＸ０１０投与が、先天性周辺免疫反応への重大な影響を示すと思われないことを実証している。
【０４２８】
アミノ酸の血漿中濃度は、ＭＲＸ０１０の慢性投与後に大きくは変化しなかった。新たに合成され得ず、食事において直接または食事の分解によって供給されなければならない９つの必須アミノ酸がある。これらには、バリン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、リジン、及びヒスチジンが含まれる。６つの他のアミノ酸は、ヒトの食事において条件付きで必須とみなされ、これらの合成が、特別な病態生理的条件下、例えば、幼児における低体重児、または重度の異化作用の苦悩にある個体において限定され得ることを意味している。これらの６のアミノ酸には、アルギニン、システイン、グリシン、グルタミン、プロリン、及びチロシンが含まれる。５つのアミノ酸は、ヒトにおいては不可欠ではなく、これらのアミノ酸が、体内において十分量で合成され得ることを意味している。これらの５つは、アラニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸及びセリンである。
【０４２９】
しかし、プロリンのレベルは、ＭＲＸ０１０投与後に減少しており、この細菌が、食事からの重要なアミノ酸の代謝において役割を果たし得ることを示唆している。
【０４３０】
脳幹における神経伝達物質レベルは、慢性ＭＲＸ０１０投与後に同じく変化せず、この生存生物学的製剤が、脳幹のレベルでモノアミンレベルによって支配される行動に負に影響しないことを示唆した。
【０４３１】
最後に、炎症、内分泌及び神経伝達物質受容体についての中心遺伝子発現は、大部分が、慢性ＭＲＸ０１０投与後に変化しなかった。扁桃体におけるＮＭＤＡ受容体２Ｂ及びＢＤＮＦ  ｍＲＮＡ発現のみが増加したが、海馬または前頭葉前部皮質の変化はなかった。多くの他の結果と一緒にしたこれらのデータにより、この投薬レジメでのこの濃度におけるＭＲＸ０１０投与は、全身及び中枢の生理的事象に負の影響を及ぼさないことが確認される。翻訳の視点から、これらのデータは、この生存生物学的製剤が、最小の望ましくない副作用で高い寛容性プロファイルを有し得ることを示唆している。
【０４３２】
配列
配列番号１（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ  １６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子、株ＬＭＧ１１４２３−ＡＪ３０１８３０）
2020520928.tif 000006
【０４３３】
配列番号２（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株ＭＲＸ０１０のコンセンサス１６Ｓ  ｒＲＮＡ配列）
2020520928.tif 000007
【０４３４】
配列番号３（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株ＤＯの染色体配列）−電子配列表を参照されたい。
【０４３５】
配列番号４（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株ＤＯのプラスミド１配列）−電子配列表を参照されたい。
【０４３６】
配列番号５（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株ＤＯのプラスミド２配列）−電子配列表を参照されたい。
【０４３７】
配列番号６（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株ＤＯのプラスミド３配列）−電子配列表を参照されたい。
【０４３８】
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［４４］  Ｍｉｙａｍｏｔｏ−Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．  （２００８）  Ｊ．  Ｇｅｎ．  Ａｐｐｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，  ５４，  ９−２４．
［４５］  Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  ｅｄ．  ｂｙ  Ｄａｙ  ａｎｄ  ＭｃＬｅｌｌａｎ，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ．
［４６］  Ｌｅｓｌｉｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ａｐｐｌ．  Ｅｎｖｉｒｏｎ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ６１，  ３５９２−３５９７．
［４７］  Ｍｉｔｒｏｐｏｕｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｍｅｔａｂ．  （２０１３）  ７１６８６１．
［４８］  Ｋａｉｌａｓａｐａｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｃｕｒｒ  Ｉｓｓｕｅｓ  Ｉｎｔｅｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ３（２）：３９−４８．
［４９］  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  （１９９４），  Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ａ  Ｗａｄｅ  ａｎｄ  ＰＪ  Ｗｅｌｌｅｒ
［５０］  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．  （Ａ．  Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｉｔ．  １９８５）
［５１］  ＵＳ  ２０１６／００６７１８８
［５２］  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａ，  Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  （２０１０）  Ｒｏｎａｌｄ  Ａｔｌａｓ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ．
［５３］  Ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  （１９９６）  Ｊｅｎｎｉｅ  Ｃ．  Ｈｕｎｔｅｒ−Ｃｅｖｅｒａ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ
［５４］  Ｓｔｒｏｂｅｌ  （２００９）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ５８１：２４７−６１．
［５５］  Ｇｅｎｎａｒｏ  （２０００）  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ．  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  ＩＳＢＮ：  ０６８３３０６４７２．
［５６］  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：  Ａｎ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ，  （Ｒｅａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  １９９８，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）．
［５７］  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  （Ｓ．  Ｃｏｌｏｗｉｃｋ  ａｎｄ  Ｎ．  Ｋａｐｌａｎ，  ｅｄｓ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．）
［５８］  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌｓ．  Ｉ−ＩＶ  （Ｄ．Ｍ．  Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，  ｅｄｓ，  １９８６，  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）
［５９］  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）．
［６０］  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  （Ｂｉｒｄｉ，  Ｋ．Ｓ．  ｅｄ．，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９７）
［６１］  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ）  （２００２）  Ｓｈｏｒｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ，  ５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）．
［６２］  ＰＣＲ  （Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｓｅｒｉｅｓ），  ２ｎｄ  ｅｄ．  （Ｎｅｗｔｏｎ  ＆  Ｇｒａｈａｍ  ｅｄｓ．，  １９９７，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ）
［６３］  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｆ．Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，  １９８７）  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ３０
［６４］  Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ  （１９８１）  Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．  ２：  ４８２−４８９．
［６５］  Ｃｒａｗｌｅｙ  （２０１２）  Ｄｉａｌｏｇｕｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  １４：  ２９３−３０５．
［６６］  Ｈｓｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１３）  Ｃｅｌｌ  １５５（７）：  １４５１−１４６３．
［６７］  Ｄｅｓｂｏｎｎｅｔ，  Ｃｌａｒｋｅ  ｅｔ  ａｌ．  （２０１５）  Ｂｒａｉｎ，  Ｂｅｈａｖｉｏｒ，  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４８：  １６５−１７３
［６８］  Ｃｒｙａｎ  ａｎｄ  Ｍｏｍｂｅｒｅａｕ  （２００４）  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ９：  ３２６−５７．
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５−１】
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【図２５−２】
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【図２５−３】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年3月23日(2020.3.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精神神経状態又は神経認知障害を処置もしくは予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物。
【請求項２】
精神神経状態又は神経認知障害が、微生物叢−腸−脳軸によって介在される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害（ＭＤＤ）；うつ病；季節性情動障害；不安障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；及びハンチントン病；からなる群から選択される障害または状態を処置もしくは予防する方法における使用のための、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
自閉症を低減または予防する方法における使用のための、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
常同、反復、強迫、または不安行動の予防、低減、もしくは軽減における使用のための、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
強迫神経症を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
反復、強迫及び／または不安行動の予防、低減、もしくは軽減における使用のための、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
大うつ病性障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
急性大うつ病エピソードの処置もしくは予防及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）における使用のための、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生の予防、低減、もしくは軽減における使用のための、請求項９または１０に記載の組成物。
【請求項１２】
不安障害を処置または予防する方法における使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
不安障害が、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び／または選択的無言症である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
神経認知障害が、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；及びウェルニッケ・コルサコフ症候群；である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
微生物叢−腸−脳軸を調節する方法における使用のための、請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
細菌株が、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
細菌株が、配列番号１または２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
細菌株が、配列番号２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％もしくは９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有するか、または
配列番号２によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
経口投与用である、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
１または２以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
細菌株が、凍結乾燥されている、請求項１〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
細菌株が、生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの単一株を含む、請求項１〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
微生物コンソーシアムの一部としてＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌株を含む、請求項１〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
食品である、請求項１〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
ワクチンである、請求項１〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む、精神神経状態又は神経認知障害の処置剤もしくは予防剤。
【請求項２８】
請求項１〜２４のいずれかに記載の使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株、またはその派生物の細胞。
【請求項２９】
請求項２８に記載の使用のための、請求項２８に記載の細胞を含む組成物。
【請求項３０】
薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、請求項２９に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
特に好ましい実施形態において、本発明は、中枢神経系障害または状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、神経発達障害または精神神経状態を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、自閉症スペクトラム障害、または好ましくは自閉症を処置または予防する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株を含む組成物を提供する。特に好ましい実施形態において、本発明は、特に、自閉症の処置において、常同、反復、強迫または不安行動を低減する方法における使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されている株を含む組成物を提供する。
すなわち本発明は以下に関する。
〔１〕中枢神経系障害または状態を処置もしくは予防する方法における使用のための、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物。
〔２〕中枢神経系障害または状態が、微生物叢−腸−脳軸によって介在される、上記〔１〕に記載の組成物。
〔３〕神経発達障害または精神神経状態を処置もしくは予防する方法における使用のための、上記〔１〕または〔２〕に記載の組成物。
〔４〕自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）；小児発達障害；強迫神経症（ＯＣＤ）；大うつ病性障害；うつ病；季節性情動障害；不安障害；慢性疲労症候群（筋痛性脳脊髄炎）；ストレス障害；心的外傷後ストレス障害；統合失調症スペクトラム障害；統合失調症；双極性障害；精神病；気分障害；認知症；アルツハイマー病；パーキンソン病；慢性疼痛；運動ニューロン疾患；ハンチントン病；ギラン−バレー症候群；及び髄膜炎；からなる群から選択される障害または状態を処置もしくは予防する方法における使用のための、上記〔１〕または〔２〕に記載の組成物。
〔５〕自閉症スペクトラム障害を処置または予防する方法における使用のための、上記〔１〕に記載の組成物。
〔６〕自閉症を低減または予防する方法における使用のための、上記〔５〕に記載の組成物。
〔７〕常同、反復、強迫、または不安行動を予防、低減、もしくは軽減する、上記〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載の組成物。
〔８〕強迫神経症を処置または予防する方法における使用のための、上記〔１〕に記載の組成物。
〔９〕反復、強迫及び／または不安行動を予防、低減、もしくは軽減する、上記〔８〕に記載の組成物。
〔１０〕大うつ病性障害を処置または予防する方法における使用のための、上記〔１〕に記載の組成物。
〔１１〕急性大うつ病エピソード及び／または新しいエピソードの予防（再発予防）を処置または予防する、上記〔１０〕に記載の組成物。
〔１２〕穏やかな、中程度のまたは重度のＭＤＤエピソードの発生を予防、低減、もしくは軽減する、上記〔１０〕または〔１１〕に記載の組成物。
〔１３〕不安障害を処置または予防する方法における使用のための、上記〔１〕に記載の組成物。
〔１４〕不安障害が、全般性不安障害（ＧＡＤ）；特定恐怖症；社会不安障害；分離不安障害；広場恐怖症；パニック障害及び／または選択的無言症である、上記〔１３〕に記載の組成物。
〔１５〕神経認知障害を処置または予防する方法における使用のための、上記〔１〕に記載の組成物。
〔１６〕神経認知障害が、血管性認知症；アルツハイマー病及び血管性認知症の混合形態；レビー小体病；前頭側頭認知症；パーキンソン認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病；ハンチントン病；及びウェルニッケ・コルサコフ症候群；である、上記〔１５〕に記載の組成物。
〔１７〕微生物叢−腸−脳軸を調節する方法における使用のための、上記〔１〕〜〔１６〕のいずれかに記載の組成物。
〔１８〕細菌株が、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの細菌株の１６ｓ  ｒＲＮＡ配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、上記〔１〕〜〔１７〕のいずれかに記載の組成物。
〔１９〕細菌株が、配列番号１または２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％または９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、上記〔１〕〜〔１８〕のいずれかに記載の組成物。
〔２０〕細菌株が、配列番号２と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％もしくは９９．９％同一である１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有するか、または
配列番号２によって表される１６ｓ  ｒＲＮＡ配列を有する、上記〔１９〕に記載の組成物。
〔２１〕経口投与用である、上記〔１〕〜〔２０〕のいずれかに記載の組成物。
〔２２〕１または２以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、上記〔１〕〜〔２１〕のいずれかに記載の組成物。
〔２３〕細菌株が、凍結乾燥されている、上記〔１〕〜〔２２〕のいずれかに記載の組成物。
〔２４〕細菌株が、生存しており、腸に部分的または全体的に定着することが可能である、上記〔１〕〜〔２３〕のいずれかに記載の組成物。
〔２５〕Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍの単一株を含む、上記〔１〕〜〔２４〕のいずれかに記載の組成物。
〔２６〕微生物コンソーシアムの一部としてＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ細菌株を含む、上記〔１〕〜〔２５〕のいずれかに記載の組成物。
〔２７〕上記〔１〕〜〔１０〕及び〔１３〕〜〔１７〕のいずれかに記載の使用のための、上記〔１〕〜〔２６〕のいずれかに記載の組成物を含む食品。
〔２８〕上記〔１〕〜〔１０〕及び〔１３〕〜〔１７〕のいずれかに記載の使用のための、上記〔１〕〜〔２６〕のいずれかに記載の組成物を含むワクチン組成物。
〔２９〕中枢神経系障害または状態を処置もしくは予防する方法であって、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ種の細菌株を含む組成物を、前記組成物を必要とする患者に投与することを含む、前記方法。
〔３０〕上記〔１〕〜〔２６〕のいずれかに記載の使用のための、受託番号ＮＣＩＭＢ４２４８７として寄託されているＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ株、またはその派生物の細胞。
〔３１〕上記〔３０〕に記載の使用のための、上記〔３０〕に記載の細胞を含む組成物。
〔３２〕薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、上記〔３１〕に記載の組成物。
【国際調査報告】
2020520928.tif 000045
2020520928.tif 000046
2020520928.tif 000047