(57)【要約】  ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体および抗体断片が開示される。ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体および抗体断片を含む組成物ならびにその使用の方法もまた、本明細書に提供される。
2020511950.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、
前記重鎖ＣＤＲ１が、配列番号４４〜５２、５４〜５５、５７〜５８のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号４４〜５２、５４〜５５、５７〜５８のうち１つに示されるアミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号５９〜７０のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号５９〜７０のうち１つに示されるアミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号７１〜８６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号７１〜８６のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
単離された抗体またはその抗原結合性断片が、軽鎖ＣＤＲ１、２および３をさらに含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１が、配列番号１〜１７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１〜１７のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２が、配列番号１８〜２６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１８〜２６のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号２７〜４３のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号２７〜４３のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、アミノ酸配列：
（ｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号５９）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号７１）；
（ｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＳＧＨＳＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号７２）；
（ｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＳＧＨＮＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号７３）；
（ｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＧＡＬＹＹＦＤＮＷ（配列番号７４）；
（ｖ）それぞれ、ＧＹＭＦＴＴＹＧ（配列番号４５）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；
（ｖｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；
（ｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号４６）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；
（ｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＴＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７６）；
（ｉｘ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号４７）、ＩＳＹＤＧＮＮ（配列番号６１）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＹＷ（配列番号７７）；
（ｘ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号４７）、ＩＳＹＤＧＮＤ（配列番号６２）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＣＷ（配列番号７８）；
（ｘｉ）それぞれ、ＧＦＳＦＳＤＹＧ（配列番号４８）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号６３）およびＣＧＰＳＤＹＷＹＦＤＶＷ（配列番号７９）；
（ｘｉｉ）それぞれ、ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号４９）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号６３）およびＣＡＲＤＹＦＹＧＮＮＹＧＦＰＹＷ（配列番号８０）；
（ｘｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号５０）、ＩＹＰＧＮＩＮＳ（配列番号６４）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；
（ｘｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＳＹＹ（配列番号５１）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号６５）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；
（ｘｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号５２）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号６５）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；
（ｘｖｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＮＹＤ（配列番号５４）、ＩＷＴＧＧＮＴ（配列番号６６）およびＣＶＲＥＧＦＲＱＧＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号８２）；
（ｘｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号５５）、ＩＤＴＫＮＧＧＴ（配列番号６７）およびＣＡＳＧＧＲＧＹＷ（配列番号８３）；
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号４６）、ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号６８）およびＣＴＲＮＹＹＲＰＹＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号８４）；
（ｘｉｘ）それぞれ、ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号５７）、ＩＮＰＹＮＤＮＴ（配列番号６９）およびＣＡＲＥＧＮＹＹＧＡＳＰＷＦＡＹＷ（配列番号８５）；および
（ｘｘ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＨＹＧ（配列番号５８）、ＩＮＴＳＴＧＥＴ（配列番号７０）およびＣＡＲＹＹＹＧＳＳＲＷＲＤＹＷＦＡＹＷ（配列番号８６）からなる相補性決定領域ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ）アミノ酸配列：
（ｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号５９）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号７１）；
（ｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＳＧＨＳＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号７２）；
（ｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＳＧＨＮＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号７３）；
（ｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＧＡＬＹＹＦＤＮＷ（配列番号７４）；
（ｖ）それぞれ、ＧＹＭＦＴＴＹＧ（配列番号４５）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；
（ｖｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；
（ｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号４６）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；
（ｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＴＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７６）；
（ｉｘ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号４７）、ＩＳＹＤＧＮＮ（配列番号６１）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＹＷ（配列番号７７）；
（ｘ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号４７）、ＩＳＹＤＧＮＤ（配列番号６２）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＣＷ（配列番号７８）；
（ｘｉ）それぞれ、ＧＦＳＦＳＤＹＧ（配列番号４８）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号６３）およびＣＧＰＳＤＹＷＹＦＤＶＷ（配列番号７９）；
（ｘｉｉ）それぞれ、ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号４９）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号６３）およびＣＡＲＤＹＦＹＧＮＮＹＧＦＰＹＷ（配列番号８０）；
（ｘｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号５０）、ＩＹＰＧＮＩＮＳ（配列番号６４）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；
（ｘｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＳＹＹ（配列番号５１）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号６５）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；
（ｘｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号５２）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号６５）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；
（ｘｖｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＮＹＤ（配列番号５４）、ＩＷＴＧＧＮＴ（配列番号６６）およびＣＶＲＥＧＦＲＱＧＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号８２）；
（ｘｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号５５）、ＩＤＴＫＮＧＧＴ（配列番号６７）およびＣＡＳＧＧＲＧＹＷ（配列番号８３）；
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号４６）、ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号６８）およびＣＴＲＮＹＹＲＰＹＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号８４）；
（ｘｉｘ）それぞれ、ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号５７）、ＩＮＰＹＮＤＮＴ（配列番号６９）およびＣＡＲＥＧＮＹＹＧＡＳＰＷＦＡＹＷ（配列番号８５）；および
（ｘｘ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＨＹＧ（配列番号５８）、ＩＮＴＳＴＧＥＴ（配列番号７０）およびＣＡＲＹＹＹＧＳＳＲＷＲＤＹＷＦＡＹＷ（配列番号８６）からなる相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに
ｂ）アミノ酸配列：
（ｘｘｉ）それぞれ、ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号１）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＳＩＰＰＴＦ（配列番号２７）；
（ｘｘｉｉ）それぞれ、ＱＳＬＦＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号２）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＳＳＰＰＴＦ（配列番号２８）；
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＩＮＹ（配列番号３）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＤＰＰＬＴＦ（配列番号２９）；
（ｘｘｉｖ）それぞれ、ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号１）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＨＨＹＤＰＰＬＴＦ（配列番号３０）；
（ｘｘｖ）それぞれ、ＱＮＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号４）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＮＴＰＰＴＦ（配列番号３１）；
（ｘｘｖｉ）それぞれ、ＱＳＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号５）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＳＰＰＰＴＦ（配列番号３２）；
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、ＱＳＬＬＩＳＳＮＱＮＮＹ（配列番号６）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＳＴＰＰＴＦ（配列番号３３）；
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、ＱＤＩＳＮＹ（配列番号７）、ＹＴＳ（配列番号１９）およびＣＱＱＧＨＴＬＰＹＴＦ（配列番号３４）；
（ｘｘｉｘ）それぞれ、ＱＤＩＳＮＹ（配列番号７）、ＹＴＳ（配列番号１９）およびＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦ（配列番号３５）；
（ｘｘｘ）それぞれ、ＱＮＶＧＴＮ（配列番号８）、ＳＴＳ（配列番号２０）およびＣＱＱＹＮＳＹＰＦＴＦ（配列番号３６）；
（ｘｘｘｉ）それぞれ、ＱＴＩＧＴＷ（配列番号９）、ＡＡＴ（配列番号２１）およびＣＱＱＬＹＳＴＰＬＴＦ（配列番号３７）；
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、ＱＮＩＲＴＡ（配列番号１０）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；
（ｘｘｘｉｉｉ）それぞれ、ＱＮＶＲＴＡ（配列番号１１）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；
（ｘｘｘｉｖ）それぞれ、ＬＮＶＲＴＡ（配列番号１２）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；
（ｘｘｘｖ）それぞれ、ＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号１３）、ＷＡＳ（配列番号２３）およびＣＱＱＹＹＳＹＲＴＦ（配列番号３９）；
（ｘｘｘｖｉ）それぞれ、ＱＮＶＹＴＴ（配列番号１４）、ＳＡＳ（配列番号２４）およびＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦ（配列番号４０）；
（ｘｘｘｖｉｉ）それぞれ、ＥＮＩＹＳＹ（配列番号１５）、ＤＡＫ（配列番号２５）およびＣＱＨＨＹＧＦＰＹＴＦ（配列番号４１）；
（ｘｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、ＥＴＶＤＴＹＧＮＲＦ（配列番号１６）、ＲＡＳ（配列番号２６）およびＣＱＱＳＮＥＤＰＦＴＦ（配列番号４２）；および
（ｘｘｘｉｘ）それぞれ、ＱＤＶＳＮＡ（配列番号１７）、ＳＡＳ（配列番号２４）およびＣＰＱＨＹＳＴＬＣＴＦ（配列番号４３）からなるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[請求項Ｘ]
ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、
前記重鎖ＣＤＲ１が、配列番号４４、４６、４９〜５２、５４、１１２、１５３、１９０〜２１４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号４４、４６、４９〜５２、５４、１１２、１５３、１９０〜２１４のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号６０、６３、６４、６５、１１９、１２３、２１５〜２３７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号６０、６３、６４、６５、１１９、１２３、２１５〜２３８のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号８１、８２、２３９〜２７２のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号８１、８２、２３９〜２７２のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合性断片。
[請求項  ]
単離された抗体またはその抗原結合性断片が、
軽鎖ＣＤＲ１、２および３をさらに含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１が、配列番号７、８、１０、１１、１３、１５、５６、８７、８８、９４、１３４〜１５６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号７、８、１０、１１、１３、１５、５６、８７、８８、９４、１３４〜１５６のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２が、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、９５、９９、１５７〜１６３のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、９５、９９、１５７〜１６３のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号３８、３９、４０、１００、１０８、１６４〜１８９のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号３８、３９、４０、１００、１０８、１６４〜１８９のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含む、
請求項Ｘに記載の単離された抗体。
【請求項５】
ＬＩＬＲＢ３活性のアンタゴニストである、請求項１から４のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項に記載の抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子。
【請求項７】
請求項６に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項８】
請求項７に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】
原核細胞または真核細胞である、請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項１０】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片を産生するための方法であって、
（ａ）請求項８に記載の宿主細胞による前記ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片の発現に適切な条件下で、前記宿主細胞を培養するステップ；および
（ｂ）前記ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片を回収するステップ
を含む、方法。
【請求項１１】
前記宿主細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１から５のいずれか一項に記載の抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む組成物。
【請求項１３】
化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化されている、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の、請求項１から５のいずれか一項に記載のＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１７】
化学療法剤または鎮痛薬を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、
前記重鎖ＣＤＲ１が、配列番号５０、５２、５３、５５および１０９〜１１４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号５０、５２、５３、５５および１０９〜１１４のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号６５および１１５〜１２３のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号６５および１１５〜１２３のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号８１、１２４〜１３１のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号８１、１２４〜１３１のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
単離された抗体またはその抗原結合性断片が、軽鎖ＣＤＲ１、２および３をさらに含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１が、配列番号１０、１１、８７〜９４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１０、１１、８７〜９４のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２が、配列番号１９、２２、２３、９５〜９９のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１９、２２、２３、９５〜９９のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号３８、１００〜１０８のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号３８、１００〜１０８のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含む
請求項１８に記載の単離された抗体。
【請求項２０】
ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、アミノ酸配列：
（ｘｌ）それぞれ、ＧＦＴＦＴＧＹＷ（配列番号１０９）、ＩＬＰＶＳＧＩＴ（配列番号１１５）およびＣＡＲＲＧＳＰＹＦＤＹＷ（配列番号１２４）；
（ｘｌｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＮＴＦＤＭＧ（配列番号１１０）、ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号１１６）およびＣＧＲＫＰＧＧＹＧＮＹＶＬ（配列番号１２５）；
（ｘｌｉｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号１１１）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号１１７）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２６）；
（ｘｌｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号５５）、ＬＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号１１８）およびＣＡＲＧＳＧＮＳＦＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２７）；
（ｘｌｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号５０）、ＩＹＰＧＮＶＮＳ（配列番号１１９）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；
（ｘｌｖ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号１１２）、ＩＳＹＤＧＳＮ（配列番号１２０）およびＣＴＳＩＹＧＲＦＶＹＷ（配列番号１２８）；
（ｘｌｖｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号１１１）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号１１７）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２６）；
（ｘｌｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＦＷ（配列番号１１３）、ＩＨＰＮＳＧＳＴ（配列番号１２１）およびＣＡＲＮＳＧＤＹＬＶＹＦＤＳＷ（配列番号１２９）、
（ｘｌｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号１１４）、ＩＮＰＳＴＧＤＴ（配列番号１２２）およびＣＡＲＧＡＴＶＶＤＹＰＦＤＹＷ（配列番号１３０）、または
（ｘｌｉｘ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号５３）、ＩＨＰＮＧＧＳＴ（配列番号１２３）およびＣＴＲＧＬＴＧＬＦＡＹＷ配列番号１３１）からなる相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２１】
ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
ｃ）アミノ酸配列：
ｘｌ）それぞれ、ＧＦＴＦＴＧＹＷ（配列番号１０９）、ＩＬＰＶＳＧＩＴ（配列番号１１５）およびＣＡＲＲＧＳＰＹＦＤＹＷ（配列番号１２４）；
（ｘｌｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＮＴＦＤＭＧ（配列番号１１０）、ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号１１６）およびＣＧＲＫＰＧＧＹＧＮＹＶＬ（配列番号１２５）；
（ｘｌｉｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号１１１）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号１１７）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２６）；
（ｘｌｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号５５）、ＬＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号１１８）およびＣＡＲＧＳＧＮＳＦＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２７）；
（ｘｌｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号５０）、ＩＹＰＧＮＶＮＳ（配列番号１１９）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；
（ｘｌｖ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号１１２）、ＩＳＹＤＧＳＮ（配列番号１２０）およびＣＴＳＩＹＧＲＦＶＹＷ（配列番号１２８）；
（ｘｌｖｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号１１）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号１１７）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２６）；
（ｘｌｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＦＷ（配列番号１１３）、ＩＨＰＮＳＧＳＴ（配列番号１２１）およびＣＡＲＮＳＧＤＹＬＶＹＦＤＳＷ（配列番号１２９）、
（ｘｌｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号１１４）、ＩＮＰＳＴＧＤＴ（配列番号１２２）およびＣＡＲＧＡＴＶＶＤＹＰＦＤＹＷ（配列番号１３０）、または
（ｘｌｉｘ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号５３）、ＩＨＰＮＧＧＳＴ（配列番号１２３）およびＣＴＲＧＬＴＧＬＦＡＹＷ配列番号１３１）からなる相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびに
ｄ）アミノ酸配列：
（ｌ）それぞれ、ＳＳＶＳＳＳＹ（配列番号８７）、ＧＴＳ（配列番号９５）およびＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦ（配列番号１００）；
（ｌｉ）それぞれ、ＳＳＶＳＹ（配列番号８８）、ＤＴＳ（配列番号９６）およびＣＦＱＧＳＧＹＰＦＴＦ（配列番号１０１）；
（ｌｉｉ）それぞれ、ＱＳＶＬＹＳＳＤＱＫＮＹ（配列番号８９）、ＷＡＳ（配列番号２３）およびＣＨＱＹＬＳＨＴＦ（配列番号１０２）；
（ｌｉｉｉ）それぞれ、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９０）、ＷＡＳ（配列番号２３）およびＣＱＱＬＹＫＬＰＲＴＦ（配列番号１０３）；
（ｌｉｖ）それぞれ；
（ｌｖ）それぞれ、ＱＮＩＲＴＡ（配列番号１０）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；
（ｌｖｉ）それぞれ、ＳＳＶＮＹ（配列番号９２）、ＹＴＳ（配列番号１９）およびＣＱＱＦＳＳＳＰＹＴＦ（配列番号１０５）；
（ｌｖｉｉ）それぞれ、ＱＮＶＲＴＡ（配列番号１１）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；
（ｌｖｉｉｉ）それぞれ、ＳＳＶＳＹ（配列番号８８）、ＤＴＳ（配列番号９６）およびＣＱＱＷＲＳＹＱＬＴＦ（配列番号１０６）；
（ｌｖｉｘ）それぞれ、ＱＮＩＮＶＷ（配列番号９３）、ＫＡＳ（配列番号９８）およびＣＱＱＧＱＳＹＰＬＴＦ（配列番号１０７））；および
（ｌｖｘ）それぞれ、ＱＤＩＮＳＹ（配列番号９４）、ＲＡＮ（配列番号９９）およびＣＬＱＹＤＥＦＬＬＴＦ（配列番号１０８）からなるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２２】
ＬＩＬＲＢ３活性のアゴニストである、請求項１８から２１のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項２３】
請求項１８から２２のいずれか一項に記載の抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子。
【請求項２４】
請求項２２に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２５】
請求項２４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２６】
原核細胞または真核細胞である、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片を産生するための方法であって、
（ａ）請求項２６に記載の宿主細胞による前記ＬＩＬＲＢ３結合タンパク質の発現に適切な条件下で、前記宿主細胞を培養するステップ；および
（ｂ）前記ＬＩＬＲＢ３結合タンパク質を回収するステップ
を含む、方法。
【請求項２８】
前記宿主細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１８から２２のいずれか一項に記載の抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む組成物。
【請求項３０】
化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化されている、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
哺乳動物において炎症促進性免疫応答を減少させる方法であって、治療有効量の、請求項１から２１のいずれか一項に記載のＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項３４】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤のうち１種または複数を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記哺乳動物が、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
哺乳動物において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の、請求項１から２１のいずれか一項に記載のＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項３７】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤のうち１種または複数を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記哺乳動物が、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記哺乳動物が、臓器または組織移植のために選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、
前記重鎖ＣＤＲ１が、配列番号４４、４６、４９〜５２、５４、１１２、１５３、１９０〜２１４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号４４、４６、４９〜５２、５４、１１２、１５３、１９０〜２１４のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号６０、６３、６４、６５、１１９、１２３、２１５〜２３７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号６０、６３、６４、６５、１１９、１２３、２１５〜２３８のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号８１、８２、２３９〜２７２のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号８１、８２、２３９〜２７２のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４１】
単離された抗体またはその抗原結合性断片が、軽鎖ＣＤＲ１、２および３をさらに含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１が、配列番号７、８、１０、１１、１３、１５、５６、８７、８８、９４、１３４〜１５６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号７、８、１０、１１、１３、１５、５６、８７、８８、９４、１３４〜１５６のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２が、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、９５、９９、１５７〜１６３のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、９５、９９、１５７〜１６３のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号３８、３９、４０、１００、１０８、１６４〜１８９のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号３８、３９、４０、１００、１０８、１６４〜１８９のうち１つに示される前記アミノ酸配列を含む、
請求項５に記載の単離された抗体。
【請求項４２】
請求項４０または４１に記載の抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子。
【請求項４３】
請求項４２に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項４４】
請求項４３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４５】
原核細胞または真核細胞である、請求項４４に記載の宿主細胞。
【請求項４６】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片を産生するための方法であって、
（ａ）請求項４４に記載の宿主細胞による前記ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片の発現に適切な条件下で、前記宿主細胞を培養するステップ；および
（ｂ）前記ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片を回収するステップ
を含む、方法。
【請求項４７】
前記宿主細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項４０または４１に記載の抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む組成物。
【請求項４９】
化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５１】
静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化されている、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５２】
哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の、請求項４０または４１に記載のＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項５３】
化学療法剤または鎮痛薬を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦支援の研究または開発
本発明は、米国立衛生研究所によって授与された助成金番号ＣＡ１０９３２２およびＣＡ１２７４８３の下で政府支援を得て行われたものである。政府は、本発明において特定の権利を有する。
【０００２】
本発明は一般に、白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体（ＬＩＬＲ）Ｂ３（ＬＩＬＲＢ３）をモジュレートするため（「抗ＬＬＩＲＢ３抗体」）および骨髄細胞においてＭ１またはＭ２の機能的表現型のいずれかの獲得を誘導するようにＬＬＩＲＢ３シグナル伝達をモジュレートするために結合する抗体またはその抗原結合性断片、抗ＬＬＩＲＢ３抗体を含む組成物、ならびにそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体（ＬＩＬＲ）は、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）としても公知であり、白血球受容体複合体内でコードされる阻害性および刺激性細胞表面受容体のファミリーであり、骨髄およびリンパの両方の系列の免疫細胞型によって発現される。ＩＬＴは、自然免疫系および獲得免疫系の両方に影響を与え、免疫細胞活性に対するＬＩＬＲシグナル伝達の広範な影響を実証している。阻害性受容体（ＬＩＬＲＢ）の阻害活性は、活性化受容体との共クロスリンクの際に生じる。
【０００４】
骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、マウスにおいて、Ｇｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃ＋単球性（Ｍ）細胞およびＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋顆粒球性（Ｇ）細胞を含んだ、免疫抑制機能を有する骨髄前駆体である（Gabrilovich et al., Cancer Res. 67:425, 2007；Huang et al., Cancer Res. 66:1123-1131, 2006）。ヒトＭＤＳＣは、ＣＤ３３＋ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋、ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４低ＣＤ３３＋またはＬｉｎ−ＨＬＡ−ＤＲ低−ＣＤ３３＋骨髄細胞として特徴付けられる（Chen et. al., Clin. Cancer Res., 21(18):4073-2742, 2015；Ostrand-Rosenberg et al., J. Immunol. 182:4499-4506, 2009；Raychaudhuri et al., Neuro. Oncol. 13:591-599, 2011）。近年、ＭＤＳＣは、感染、悪性腫瘍、移植および他の免疫障害における免疫応答の調節において、重要な役割を果たすことが見出されている（例えば、Yin et al., J. Immunol. 185:5828-5834, 2010）。
【０００５】
ＭＤＳＣは、Ｍ１系列およびＭ２系列の細胞（ｉＮＯＳ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−ｇＲ、ＭＨＣクラスＩおよびＣＣＲ７を発現するＭ１細胞、ならびにアルギナーゼ、ＩＬ−１０、ＣＤ３６、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、ＰＤ−Ｌ１、ＤＣ−ＳＩＧＮおよびＣＣＲ２を発現するＭ２細胞）へと分化および極性化され得る。Ｍ２細胞は、Ｔ細胞の共培養においておよびｉｎ  ｖｉｖｏで、それらのＭ１様対応物と比較して、Ｔｅｆｆの活性化および増殖を抑制する増強された能力を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ２細胞はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方において、Ｍ１表現型を有する細胞よりも、Ｔｒｅｇの拡大増殖（expansion）においてより高い潜在力を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ２細胞は、Ｔｅｆｆの活性化および増殖を抑制し、Ｔｒｅｇの拡大増殖を促進するので、Ｍ２細胞は、炎症促進性免疫応答における減少が望まれる自己免疫疾患を処置するために使用できる。
【０００６】
Ｍ１細胞は、直接的腫瘍死滅を増加させ、フリーラジカル、デスリガンド、ＨＬＡ−ＤＲおよび免疫賦活性サイトカイン−ＴＮＦａの増大を介して抗腫瘍免疫の発達を促進し（例えば、Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011を参照のこと）、従って、Ｍ１細胞は、炎症促進性免疫応答の増加が望まれるがんまたは他の障害を処置するために使用できる。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体Ｂ３（「ＬＩＬＲＢ３」）に結合する抗体およびその抗原結合性断片、例えば、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片を特徴付ける。これらの抗体は、２つのクラスにグループ分けできる：第１のクラス（クラスＩ）は、がんの処置における使用のためのＬＩＬＲＢ３アンタゴニスト抗体およびその抗原結合性断片を含み；第２のクラス（クラスＩＩ）は、免疫抑制における処置における使用のためのＬＩＬＲＢ３アゴニスト抗体およびその抗原結合性断片を含む。
【０００８】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号４４〜５２、５４〜５５、５７〜５８のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号４４〜５２、５４〜５５、５７〜５８のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号５９〜７０のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号５９〜７０のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号７１〜８６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号７１〜８６のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０００９】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号１〜１７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１〜１７のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８〜２６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１８〜２６のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２７〜４３のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号２７〜４３のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１０】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、アミノ酸配列：（ｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号５９）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号７１）；（ｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号５９）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号７１）；（ｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＳＧＨＳＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号７２）；（ｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＳＧＨＮＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号７３）；（ｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＧＡＬＹＹＦＤＮＷ（配列番号７４）；（ｖ）それぞれ、ＧＹＭＦＴＴＹＧ（配列番号４５）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；（ｖｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；（ｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号４６）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；（ｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＴＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７６）；（ｉｘ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号４７）、ＩＳＹＤＧＮＮ（配列番号６１）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＹＷ（配列番号７７）；（ｘ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号４７）、ＩＳＹＤＧＮＤ（配列番号６２）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＣＷ（配列番号７８）；（ｘｉ）それぞれ、ＧＦＳＦＳＤＹＧ（配列番号４８）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号６３）およびＣＧＰＳＤＹＷＹＦＤＶＷ（配列番号７９）；（ｘｉｉ）それぞれ、ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号４９）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号６３）およびＣＡＲＤＹＦＹＧＮＮＹＧＦＰＹＷ（配列番号８０）；（ｘｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号５０）、ＩＹＰＧＮＩＮＳ（配列番号６４）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；（ｘｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＳＹＹ（配列番号５１）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号６５）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；（ｘｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号５２）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号６５）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；（ｘｖｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＮＹＤ（配列番号５４）、ＩＷＴＧＧＮＴ（配列番号６６）およびＣＶＲＥＧＦＲＱＧＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号８２）；（ｘｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号５５）、ＩＤＴＫＮＧＧＴ（配列番号６７）およびＣＡＳＧＧＲＧＹＷ（配列番号８３）；（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号４６）、ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号６８）およびＣＴＲＮＹＹＲＰＹＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号８４）；（ｘｉｘ）それぞれ、ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号５７）、ＩＮＰＹＮＤＮＴ（配列番号６９）およびＣＡＲＥＧＮＹＹＧＡＳＰＷＦＡＹＷ（配列番号８５）；および（ｘｘ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＨＹＧ（配列番号５８）、ＩＮＴＳＴＧＥＴ（配列番号７０）およびＣＡＲＹＹＹＧＳＳＲＷＲＤＹＷＦＡＹＷ（配列番号８６）からなる相補性決定領域ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１１】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、アミノ酸配列：（ｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号５９）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号７１）；（ｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＳＧＨＳＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号７２）；（ｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＳＧＨＮＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号７３）；（ｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＧＡＬＹＹＦＤＮＷ（配列番号７４）；（ｖ）それぞれ、ＧＹＭＦＴＴＹＧ（配列番号４５）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；（ｖｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；（ｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号４６）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７５）；（ｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号４４）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号６０）およびＣＴＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号７６）；（ｉｘ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号４７）、ＩＳＹＤＧＮＮ（配列番号６１）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＹＷ（配列番号７７）；（ｘ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号４７）、ＩＳＹＤＧＮＤ（配列番号６２）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＣＷ（配列番号７８）；（ｘｉ）それぞれ、ＧＦＳＦＳＤＹＧ（配列番号４８）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号６３）およびＣＧＰＳＤＹＷＹＦＤＶＷ（配列番号７９）；（ｘｉｉ）それぞれ、ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号４９）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号６３）およびＣＡＲＤＹＦＹＧＮＮＹＧＦＰＹＷ（配列番号８０）；（ｘｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号５０）、ＩＹＰＧＮＩＮＳ（配列番号６４）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；（ｘｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＳＹＹ（配列番号５１）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号６５）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；（ｘｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号５２）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号６５）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；（ｘｖｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＮＹＤ（配列番号５４）、ＩＷＴＧＧＮＴ（配列番号６６）およびＣＶＲＥＧＦＲＱＧＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号８２）；（ｘｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号５５）、ＩＤＴＫＮＧＧＴ（配列番号６７）およびＣＡＳＧＧＲＧＹＷ（配列番号８３）；（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号４６）、ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号６８）およびＣＴＲＮＹＹＲＰＹＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号８４）；（ｘｉｘ）それぞれ、ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号５７）、ＩＮＰＹＮＤＮＴ（配列番号６９）およびＣＡＲＥＧＮＹＹＧＡＳＰＷＦＡＹＷ（配列番号８５）；および（ｘｘ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＨＹＧ（配列番号５８）、ＩＮＴＳＴＧＥＴ（配列番号７０）およびＣＡＲＹＹＹＧＳＳＲＷＲＤＹＷＦＡＹＷ（配列番号８６）からなる相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびにアミノ酸配列：（ｘｘｉ）それぞれ、ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号１）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＳＩＰＰＴＦ（配列番号２７）；（ｘｘｉｉ）それぞれ、ＱＳＬＦＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号２）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＳＳＰＰＴＦ（配列番号２８）；（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＩＮＹ（配列番号３）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＤＰＰＬＴＦ（配列番号２９）；（ｘｘｉｖ）それぞれ、ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号１）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＨＨＹＤＰＰＬＴＦ（配列番号３０）；（ｘｘｖ）それぞれ、ＱＮＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号４）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＮＴＰＰＴＦ（配列番号３１）；（ｘｘｖｉ）それぞれ、ＱＳＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号５）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＳＰＰＰＴＦ（配列番号３２）；（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、ＱＳＬＬＩＳＳＮＱＮＮＹ（配列番号６）、ＦＡＳ（配列番号１８）およびＣＱＱＨＹＳＴＰＰＴＦ（配列番号３３）；（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、ＱＤＩＳＮＹ（配列番号７）、ＹＴＳ（配列番号１９）およびＣＱＱＧＨＴＬＰＹＴＦ（配列番号３４）；（ｘｘｉｘ）それぞれ、ＱＤＩＳＮＹ（配列番号７）、ＹＴＳ（配列番号１９）およびＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦ（配列番号３５）；（ｘｘｘ）それぞれ、ＱＮＶＧＴＮ（配列番号８）、ＳＴＳ（配列番号２０）およびＣＱＱＹＮＳＹＰＦＴＦ（配列番号３６）；（ｘｘｘｉ）それぞれ、ＱＴＩＧＴＷ（配列番号９）、ＡＡＴ（配列番号２１）およびＣＱＱＬＹＳＴＰＬＴＦ（配列番号３７）；（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、ＱＮＩＲＴＡ（配列番号１０）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；（ｘｘｘｉｉｉ）それぞれ、ＱＮＶＲＴＡ（配列番号１１）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；（ｘｘｘｉｖ）それぞれ、ＬＮＶＲＴＡ（配列番号１２）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；（ｘｘｘｖ）それぞれ、ＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号１３）、ＷＡＳ（配列番号２３）およびＣＱＱＹＹＳＹＲＴＦ（配列番号３９）；（ｘｘｘｖｉ）それぞれ、ＱＮＶＹＴＴ（配列番号１４）、ＳＡＳ（配列番号２４）およびＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦ（配列番号４０）；（ｘｘｘｖｉｉ）それぞれ、ＥＮＩＹＳＹ（配列番号１５）、ＤＡＫ（配列番号２５）およびＣＱＨＨＹＧＦＰＹＴＦ（配列番号４１）；（ｘｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、ＥＴＶＤＴＹＧＮＲＦ（配列番号１６）、ＲＡＳ（配列番号２６）およびＣＱＱＳＮＥＤＰＦＴＦ（配列番号４２）、および（ｘｘｘｉｘ）それぞれ、ＱＤＶＳＮＡ（配列番号１７）、ＳＡＳ（配列番号２４）およびＣＰＱＨＹＳＴＬＣＴＦ（配列番号４３）からなるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１２】
一部の態様では、単離された抗体または抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ３活性のアンタゴニストである。
【００１３】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号５０、５２、５３、５５および１０９〜１１４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号５０、５２、５３、５５および１０９〜１１４のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号６５および１１５〜１２３のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号６５および１１５〜１２３のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号８１、１２４〜１３１のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号８１、１２４〜１３１のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１４】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号１〜１７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号１０、１１、８７〜９４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１０、１１、８７〜９４のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１９、２２、２３、９５〜９９のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１９、２２、２３、９５〜９９のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号３８、１００〜１０８のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号３８、１００〜１０８のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１５】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、アミノ酸配列：（ｘｌ）それぞれ、ＧＦＴＦＴＧＹＷ（配列番号１０９）、ＩＬＰＶＳＧＩＴ（配列番号１１５）およびＣＡＲＲＧＳＰＹＦＤＹＷ（配列番号１２４）；（ｘｌｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＮＴＦＤＭＧ（配列番号１１０）、ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号１１６）およびＣＧＲＫＰＧＧＹＧＮＹＶＬ（配列番号１２５）；（ｘｌｉｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号１１１）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号１１７）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２６）；（ｘｌｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号５５）、ＬＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号１１８）およびＣＡＲＧＳＧＮＳＦＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２７）；（ｘｌｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号５０）、ＩＹＰＧＮＶＮＳ（配列番号１１９）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；（ｘｌｖ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号１１２）、ＩＳＹＤＧＳＮ（配列番号１２０）およびＣＴＳＩＹＧＲＦＶＹＷ（配列番号１２８）；（ｘｌｖｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号１１１）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号１１７）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２６）；（ｘｌｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＦＷ（配列番号１１３）、ＩＨＰＮＳＧＳＴ（配列番号１２１）およびＣＡＲＮＳＧＤＹＬＶＹＦＤＳＷ（配列番号１２９）、（ｘｌｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号１１４）、ＩＮＰＳＴＧＤＴ（配列番号１２２）およびＣＡＲＧＡＴＶＶＤＹＰＦＤＹＷ（配列番号１３０）、または（ｘｌｉｘ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号５３）、ＩＨＰＮＧＧＳＴ（配列番号１２３）およびＣＴＲＧＬＴＧＬＦＡＹＷ配列番号１３１）からなる相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１６】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、アミノ酸配列：（ｘｌ）それぞれ、ＧＦＴＦＴＧＹＷ（配列番号１０９）、ＩＬＰＶＳＧＩＴ（配列番号１１５）およびＣＡＲＲＧＳＰＹＦＤＹＷ（配列番号１２４）；（ｘｌｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＮＴＦＤＭＧ（配列番号１１０）、ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号１１６）およびＣＧＲＫＰＧＧＹＧＮＹＶＬ（配列番号１２５）；（ｘｌｉｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号１１１）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号１１７）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２６）；（ｘｌｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号５５）、ＬＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号１１８）およびＣＡＲＧＳＧＮＳＦＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２７）；（ｘｌｉｖ）それぞれ、ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号５０）、ＩＹＰＧＮＶＮＳ（配列番号１１９）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号８１）；（ｘｌｖ）それぞれ、ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号１１２）、ＩＳＹＤＧＳＮ（配列番号１２０）およびＣＴＳＩＹＧＲＦＶＹＷ（配列番号１２８）；（ｘｌｖｉ）それぞれ、ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号１１１）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号１１７）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号１２６）；（ｘｌｖｉｉ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＮＦＷ（配列番号１１３）、ＩＨＰＮＳＧＳＴ（配列番号１２１）およびＣＡＲＮＳＧＤＹＬＶＹＦＤＳＷ（配列番号１２９）、（ｘｌｖｉｉｉ）それぞれ、ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号１１４）、ＩＮＰＳＴＧＤＴ（配列番号１２２）およびＣＡＲＧＡＴＶＶＤＹＰＦＤＹＷ（配列番号１３０）、または（ｘｌｉｘ）それぞれ、ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号５３）、ＩＨＰＮＧＧＳＴ（配列番号１２３）およびＣＴＲＧＬＴＧＬＦＡＹＷ配列番号１３１）からなる相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域；ならびにアミノ酸配列：（ｌ）それぞれ、ＳＳＶＳＳＳＹ（配列番号８７）、ＧＴＳ（配列番号９５）およびＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦ（配列番号１００）；（ｌｉ）それぞれ、ＳＳＶＳＹ（配列番号８８）、ＤＴＳ（配列番号９６）およびＣＦＱＧＳＧＹＰＦＴＦ（配列番号１０１）；（ｌｉｉ）それぞれ、ＱＳＶＬＹＳＳＤＱＫＮＹ（配列番号８９）、ＷＡＳ（配列番号２３）およびＣＨＱＹＬＳＨＴＦ（配列番号１０２）；（ｌｉｉｉ）それぞれ、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号９０）、ＷＡＳ（配列番号２３）およびＣＱＱＬＹＫＬＰＲＴＦ（配列番号１０３）；（ｌｖ）それぞれ、ＱＮＩＲＴＡ（配列番号１０）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；（ｌｖｉ）それぞれ、ＳＳＶＮＹ（配列番号９２）、ＹＴＳ（配列番号１９）およびＣＱＱＦＳＳＳＰＹＴＦ（配列番号１０５）；（ｌｖｉｉ）それぞれ、ＱＮＶＲＴＡ（配列番号１１）、ＬＡＳ（配列番号２２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３８）；（ｌｖｉｉｉ）それぞれ、ＳＳＶＳＹ（配列番号８８）、ＤＴＳ（配列番号９６）およびＣＱＱＷＲＳＹＱＬＴＦ（配列番号１０６）；（ｌｖｉｘ）それぞれ、ＱＮＩＮＶＷ（配列番号９３）、ＫＡＳ（配列番号９８）およびＣＱＱＧＱＳＹＰＬＴＦ（配列番号１０７））；および（ｌｖｘ）それぞれ、ＱＤＩＮＳＹ（配列番号９４）、ＲＡＮ（配列番号９９）およびＣＬＱＹＤＥＦＬＬＴＦ（配列番号１０８）からなるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１７】
一部の態様では、単離された抗体または抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ３活性のアゴニストである。
【００１８】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号４４、４６、４９〜５２、５４、１１２、１５３、１９０〜２１４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号４４、４６、４９〜５２、５４、１１２、１５３、１９０〜２１４のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、配列番号６０、６３、６４、６５、１１９、１２３、２１５〜２３７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号６０、６３、６４、６５、１１９、１２３、２１５〜２３７のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号８１、８２、２３９〜２７２のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号８１、８２、２３９〜２７２のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１９】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号７、８、１０、１１、１３、１５、５６、８７、８８、９４、１３４〜１５６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号７、８、１０、１１、１３、１５、５６、８７、８８、９４、１３４〜１５６のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、９５、９９、１５７〜１６３のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２６、９５、９９、１５７〜１６３のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号３８、３９、４０、１００、１０８、１６４〜１８９のうち１つに示されるアミノ酸配列、または２つ以下のアミノ酸位置において置換を有する配列番号３８、３９、４０、１００、１０８、１６４〜１８９のうち１つに示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２０】
一部の態様では、本開示は、本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子を提供する。本開示は、本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を含むベクターもまた提供する。本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を含むベクターを含む、原核細胞または真核細胞が含まれる宿主細胞もまた、本明細書に提供される。
【００２１】
一部の態様では、本開示は、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片を産生するための方法であって、（ａ）請求項８に記載の宿主細胞によるＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片の発現に適切な条件下で、この宿主細胞を培養するステップ；および（ｂ）ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片を回収するステップを含む、方法を提供する。
【００２２】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む組成物が、本明細書に開示される。一部の態様では、組成物は、化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む。一部の態様では、組成物は、骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤（mobilizing agent）、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む。
【００２３】
本開示の組成物は、例えば、静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化され得る。
【００２４】
一部の態様では、本開示は、対象においてがんを処置するための方法であって、治療有効量の本明細書に記載されるＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与するステップを含む、方法を提供する。一部の態様では、本方法は、化学療法剤または鎮痛薬を哺乳動物に投与するステップをさらに含む。
【００２５】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２６】
上記態様のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１５０ｐＭ〜約１００ｎＭの見かけの一価親和性を有する。
【００２７】
上記態様の全てのある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、Ｆｖ、Ｆｄ、ダイアボディ（diabody）、ｓｃＦｖまたはｓｃ（Ｆｖ）２である。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆａｂである。
【００２８】
本明細書で使用する場合、用語「１つまたは複数の」は、少なくとも１つの、より適切には、１、２、３、４、５、１０、２０、５０、１００、５００などの、「１つまたは複数の」が言及する項目を含む。
【００２９】
他に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。方法および材料は、本発明における使用のために本明細書に記載される；当該分野で公知の他の適切な方法および材料もまた使用され得る。材料、方法および例は、例示に過ぎず、限定を意図しない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリーおよび他の参考文献は、その全体が参照によって組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。
【００３０】
本発明の他の特色および利点は、以下の詳細な説明および図面、ならびに特許請求の範囲から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１−１】図１Ａ〜１Ｃは、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）による刺激後２４時間にわたる、抗ＬＩＬＲＢ３ハイブリドーマ上清もしくは精製された抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照とのインキュベーション後の、健康なドナーから得たヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）由来のＴＮＦ−αの産生を示すグラフである。抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂを、ＴＮＦアルファ放出を抑制するクローンから、ＴＮＦアルファ分泌を増強するクローンの順でランキングした。ＴＮＦ−αのレベルを、ＥＬＩＳＡによって決定した。図１からのＴＮＦ−αの産生に基づくクローンランキングが示される。図１ＡからのＴＮＦアルファレベルにおける全体的差異が図１Ｂに示され、ＴＮＦアルファ放出における相対的変化倍数が図１Ｃに示される。
【図１−２】図１−１と同様である。
【図１−３】図１−１と同様である。
【図２−１】図２Ａ〜２Ｂは、２４時間にわたる抗ＬＩＬＲＢ３ハイブリドーマ上清もしくは精製された抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による処理とその後の６時間にわたるＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）による刺激の後の、健康なドナーから得たＰＢＭＣからのＩＬ−１０の産生を示すグラフである。上清を収集し、ＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩＬ−１０濃度における全体的差異が図２Ａに示され、相対的変化倍数が図２Ｂに示される。図２Ａおよび図２Ｂの各々について、クローンは、図１Ａに示されるクローンランキングに従って順序付けられる。
【図２−２】図２−１と同様である。
【図２−３】図２Ｃは、アンタゴニスト抗体（ＣＴＡＤ＿１２Ｆ９）またはアゴニスト抗体（ＣＴＡＤ＿１Ｂ９）の処理下のヒトＣＤ３３＋ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋ＭＤＳＣ集団（下パネル）およびＭ１／Ｍ２マーカー（上パネル）についてのフローサイトメトリー分析である。単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）を、健康なドナーから選別されたＣＤ３３＋骨髄細胞から、Ｍ−ＣＳＦ  ５０ｎｇ／ｍｌの存在下で５日間分化させた。次いで、ＭＤＭを、インターフェロンガンマ（５０ｎｇ／ｍｌ、Ｍ１極性化条件）＋アンタゴニスト抗ＬＩＬＲＢ３  Ａｂおよびアゴニスト抗ＬＩＬＲＢ３  Ａｂ（５ｕｇ／ｍｌ）と共に２日間培養した。試験細胞を、サイトメトリー分析のために採取した。
【図３−１】図３Ａは、抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂ上清または精製されたｍＡｂ（５μｇ／ｍｌ）の存在下での低用量（０．３μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）による健康なドナー由来のＰＢＭＣの刺激後の、ＯＫＴ３媒介性Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）を示すグラフである。３日間の処理後、Ｔ細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積った。チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。図１からのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）における相対的変化倍数が図３Ａに示される。
【図３−２】図３Ｂは、２４時間にわたる抗ＬＩＬＲＢ３ハイブリドーマ上清もしくは精製された抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による処理とその後の６時間にわたるＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）による刺激の後の、健康なドナー由来のヒトＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ産生を示すグラフである。上清を収集し、ＩＦＮ−γ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。
【図３−３】図３Ｃは、ＣＦＳＥで標識し、ＩｇＧアイソタイプ対照または示されたＬＩＬＲＢ３抗体（５μｇ／ｍｌ）の存在下で、照射された（３０Ｇｙ）無関係のドナーＰＢＭＣ（刺激側）で刺激した、培養精製ヒトＴ細胞（応答側）からのフローサイトメトリーデータのセットである。応答側／刺激側の比率は、１／３である。５日間の共培養後、生存ＣＤ４  Ｔ細胞（上パネル）およびＣＤ８  Ｔ細胞（下パネル）を、フローサイトメトリーによって分析した。代表的なフロープロットを、ＣＦＳＥ希釈、および分裂した細胞のパーセントとして示した。
【図４−１】図４Ａは、４日間にわたる抗ＬＩＬＲＢ３抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による処理後のヒト骨髄性白血病細胞（Ｕ９３７）増殖（ＣＰＭ）を示すグラフである。Ｕ９３７細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積った。細胞を、培養の最後の８時間にわたって［３Ｈ］−チミジンでパルスした。対照Ｉｇに対する相対的変化倍数が図４Ａに示される。
【図４−２】図４Ｂ〜４Ｃは、４日間にわたる抗ＬＩＬＲＢ３抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による処理後のヒト骨髄性白血病細胞（ＨＬ−６０）増殖（ＣＰＭ）を示すグラフである。ＨＬ６０細胞を、３日間にわたってＩＮＦ−γで事前処理し、その後、抗体（抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはアイソタイプ対照）で２〜５日間さらに処理した。ＨＬ６０細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって測定した。細胞を、培養の最後の８時間にわたって［３Ｈ］−チミジンでパルスした。生データが図４Ｂに示され、細胞増殖（ＣＰＭ）における相対的変化倍数が図４Ｃに示される。
【図４−３】図４−２と同様である。
【図５】ＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１乳がん細胞の遊走／浸潤活性を示すグラフである。（Ａ）トランスウェル（transwell）浸潤アッセイを実施して、ＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１の遊走／浸潤活性を評価した。３×１０５個の細胞を、抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂまたは対照Ｉｇ（５μｇ／ｍｌ）の存在下で上チャンバー中に播種した。２４時間後、トランスウェルメンブレンを、クリスタルバイオレットで染色し、１視野当たりの細胞を計数した。下パネルに、遊走した細胞を示す写真が示される（２０×）。（Ｂ）活性化されたＲｈｏＡの発現を、種々の抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂで処理したＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１細胞間で比較した。
【図６】Ｕ９３７細胞の腫瘍成長が、異種移植モデルにおいてアンタゴニストクローンによって抑制されたことを示すグラフである。ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、２×１０６個のＵ９３７細胞を皮下移植した。（Ａ）腫瘍サイズが３〜５ｍｍ２に達したところで、抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂ、クローンＣＴＡＤ＿８Ｈ１０（丸と線）または対照ＩｇＧ１（菱形と線）（１５０マイクログラム／マウス、３日毎）を、Ｉ．Ｖ．注射を介して注入した。（Ｂ）別のクローン−抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂ、クローンＰ＿６Ｈ３（丸と線）または対照ＩｇＧ１（菱形と線）（１５０マイクログラム／マウス、３日毎）の抗腫瘍効果が示される。
【図７】ヒトＰＢＭＣ増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ３の共刺激効果を示すグラフである。健康なドナー由来の１×１０５個の総ＰＢＭＣを、３日間にわたって、１ｕｇ／ｍｌ  ａ−ＰＤ−１、１ｕｇ／ｍｌ  ４−１ＢＢＬ、１００ｎｇ／ｍｌ  ＯＸ４０Ｌまたは１ｕｇ／ｍｌ  ＧＩＴＲＬの存在下で低用量の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、０．３マイクログラム／ｍｌ）＋抗ＬＩＬＲＢ３  Ａｂ（５マイクログラム／ｍｌ）で刺激した。３日間の処理後、Ｔ細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積った。チミジンを、培養の最後の１８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）に対するＣＴＡＤ＿３Ｇ７（７Ａ）およびＰ＿２Ｇ１１（７Ｂ）の効果が示される。
【図８】ＬＬＲＩＢ３アンタゴニストおよびアゴニストを同定するための基準を示すフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体および抗原結合性断片を特徴付ける。
【００３３】
本開示は、本明細書に記載される抗体およびその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドもまた提供する。さらに、本開示は、がんの処置において抗ＬＩＬＲＢ３抗体およびその抗原結合性断片を使用する方法ならびに／または炎症促進性免疫応答を刺激する方法に関する。
【００３４】
本明細書および特許請求の範囲の明確な理解を提供するために、以下の定義を下に提供する。
【００３５】
定義
実施形態が言語「含む」を用いて本明細書に記載される場合には、「〜からなる」および／または「〜から本質的になる」の語で記載される他の同様の実施形態もまた提供されることが理解される。
【００３６】
用語「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、標的、例えば、タンパク質（例えば、ＬＩＬＲ３、そのサブユニット、または受容体複合体）、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または上述の組合せを認識し、それに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。典型的な抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（ＨＣ）鎖および２つの軽（ＬＣ）鎖を含む。各重鎖は、「重鎖可変領域」または「重鎖可変ドメイン」（本明細書でＶＨと略される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、「軽鎖可変領域」または「軽鎖可変ドメイン」（本明細書でＶＬと略される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣ１から構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へとさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬ領域は、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ＦａｃｂおよびＦｖ断片）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ（minibody）（例えば、ｓｃ（Ｆｖ）２、ダイアボディ）、多特異性抗体、例えば、少なくとも２つのインタクトな抗体から生成された二重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、および抗体が所望の生物学的活性を示す限り、抗原認識部位を含む任意の他の改変された免疫グロブリン分子を包含する。従って、用語「抗体」は、抗体全体およびその任意の抗原結合性断片または単鎖を含む。抗体は、裸であってもよく、または他の分子、例えば、毒素、放射性同位体、低分子薬物、ポリペプチドなどにコンジュゲートされてもよい。
【００３７】
用語「単離された抗体」とは、同定され、その天然の環境の構成成分から分離および／または回収された抗体を指す。その天然の環境の混入成分は、抗体についての診断的または治療的使用を妨害する物質であり、これには、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。一部の実施形態では、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定した場合に、９９重量％よりも多くを含めて９５重量％よりも多くの抗体まで、（２）スピニングカップシークエネーター（spinning cup sequenator）の使用によってＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルー、または好ましくは銀染色を使用した還元条件もしくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで、精製される。抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないので、単離された抗体には、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体が含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１回の精製ステップによって分離される。
【００３８】
用語「ヒト化」免疫グロブリンとは、ヒトフレームワーク領域、および非ヒト（通常はマウスまたはラット）免疫グロブリン由来の１つまたは複数のＣＤＲを含む免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。定常領域は存在しなくてもよいが、存在する場合には、ヒト免疫グロブリン定常領域に対して実質的に同一、即ち、少なくとも約８５〜９０％、好ましくは約９５％またはそれよりも高く同一でなければならない。従って、おそらくはＣＤＲを除く、ヒト化免疫グロブリンの全ての部分が、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する一部に対して実質的に同一である。「ヒト化抗体」は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。例えば、キメラ抗体の可変領域全体が非ヒトであるので、ヒト化抗体は、上で定義したように、典型的なキメラ抗体は包含しない。
【００３９】
用語「抗原結合性断片」とは、インタクトな抗体の一部分を指し、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって果たされ得ることが、当該分野で公知である。抗原結合抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、ＦｄおよびＦｖ断片、直鎖状抗体、単鎖抗体、ならびに抗体断片から形成された多特異性抗体が含まれるがこれらに限定されない。一部の例では、抗体断片は、インタクトな抗体または抗体全体のタンパク質分解性消化によって調製され得る。例えば、抗体断片は、抗体全体を、パパイン、ペプシンまたはプラスミンなどの酵素で処理することによって得ることができる。抗体全体のパパイン消化は、Ｆ（ａｂ）２またはＦａｂ断片を生じ；抗体全体のペプシン消化は、Ｆ（ａｂ’）２またはＦａｂ’を生じ；抗体全体のプラスミン消化は、Ｆａｃｂ断片を生じる。
【００４０】
用語「Ｆａｂ」とは、酵素パパインによる免疫グロブリン（典型的にはＩｇＧ）の消化によって得られる断片と本質的に等価な抗体断片を指す。Ｆａｂ断片の重鎖セグメントは、Ｆｄ小片である。そのような断片は、インタクトな抗体の断片化によって酵素的もしくは化学的に産生され得、部分的抗体配列をコードする遺伝子から組換え産生され得、または全体的にもしくは部分的に合成により産生され得る。用語「Ｆ（ａｂ’）２」とは、ｐＨ４．０〜４．５での酵素ペプシンによる免疫グロブリン（典型的にはＩｇＧ）の消化によって得られる断片と本質的に等価な抗体断片を指す。そのような断片は、インタクトな抗体の断片化によって酵素的もしくは化学的に産生され得、部分的抗体配列をコードする遺伝子から組換え産生され得、または全体的にもしくは部分的に合成により産生され得る。用語「Ｆｖ」とは、非共有結合的相互作用によって一緒にされた１つのＮＨおよび１つのＮドメインからなる抗体断片を指す。
【００４１】
本明細書で使用する場合、用語「ｓｃＦｖ」または「ｓｃＦｖ分子」は、１つの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）またはその一部分および１つの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）またはその一部分からなる結合分子であって、各可変ドメイン（またはその一部分）が同じまたは異なる抗体に由来する、結合分子を含む。単鎖Ｆｖ分子は、好ましくは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に挟み込まれたｓｃＦｖリンカーを含む。例示的なｓｃＦｖ分子は、当該分野で公知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号明細書；Ho et al, Gene, 77:51 (1989)；Bird et al., Science, 242:423 (1988)；Pantoliano et al, Biochemistry, 30: 101 17 (1991)；Milenic et al, Cancer Research, 51 :6363 (1991)；Takkinen et al, Protein Engineering, 4:837 (1991)に記載されている。用語「ｓｃＦｖリンカー」とは、本明細書で使用する場合、ｓｃＦｖのＶＬドメインとＶＨドメインとの間に挟み込まれた部分を指す。ｓｃＦｖリンカーは、好ましくは、ｓｃＦｖ分子を抗原結合コンフォメーションで維持する。一実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、ｓｃＦｖリンカーペプチドを含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーペプチドは、Ｇｌｙ−Ｓｅｒペプチドリンカーを含むまたはそれからなる。他の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、ジスルフィド結合を含む。
【００４２】
用語「ＬＩＬＲＢ３抗体」、「抗ＬＩＬＲＢ３抗体」、「抗ＬＩＬＲＢ３」、「ＬＩＬＲＢ３に結合する抗体」およびそれらの任意の文法的バリエーションは、抗体がＬＩＬＲＢ３を標的化する際に治療剤または診断試薬として有用であるのに十分な親和性で、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合することが可能な抗体を指す。無関係の非ＬＩＬＲＢ３タンパク質への本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ３抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）（分析物として組換えＬＩＬＲＢ３を使用し、リガンドとして抗体を使用する、逆もまた可）、または当該分野で公知の他の結合アッセイによって測定した場合に、ＬＩＬＲＢ３へのその抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＬＩＬＲＢ３に結合する抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜５０ｎＭ、＜１０ｎＭまたは＜１ｎＭの解離定数（ＫＤ）を有する。
【００４３】
２つのポリペプチド（またはポリヌクレオチド）配列間で「％同一」という用語は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要がある付加または欠失（即ち、ギャップ）を考慮に入れた、比較ウインドウにわたって、それらの配列によって共有される同一なマッチした位置の数を指す。マッチした位置は、同一なヌクレオチドまたはアミノ酸が標的配列および参照配列の両方中に存在する、任意の位置である。標的配列中に存在するギャップは、ヌクレオチドでもアミノ酸でもないので、ギャップは数に入れない。同様に、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸が計数されるのであって、参照配列由来のヌクレオチドまたはアミノ酸が計数されるわけではないので、参照配列中に存在するギャップは数に入れない。配列同一性の百分率は、同一なアミノ酸残基または核酸塩基が両方の配列中に存在する位置の数を決定してマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を、比較のウインドウ中の位置の総数によって除算し、結果に１００を乗算して配列同一性の百分率を得ることによって計算される。２つの配列間での配列の比較およびパーセント配列同一性の決定は、オンライン使用およびダウンロードの両方で容易に入手可能なソフトウェアを使用して達成され得る。適切なソフトウェアプログラムは、種々の供給源から入手可能であり、タンパク質配列およびヌクレオチド配列の両方のアラインメントのためのものである。パーセント配列同一性を決定するための１つの適切なプログラムは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＢＬＡＳＴウェブサイト（blast.ncbi.nlm.nih.gov）から入手可能なＢＬＡＳＴスイートのプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。ｂ１２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮアルゴリズムまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列間での比較を実施する。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。他の適切なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳスイートのバイオインフォマティクスプログラムの一部であり、www.ebi.ac.uk/Tools/psaにおいてＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）からも入手可能なＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、ＷａｔｅｒまたはＭａｔｃｈｅｒである。ある特定の実施形態では、第２の配列アミノ酸に対する第１のアミノ酸配列の百分率同一性「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、ここで、Ｙは、第１の配列および第２の配列のアラインメントにおいて同一なマッチとスコアをつけたアミノ酸残基の数（目視検査または特定の配列アラインメントプログラムによってアラインした場合）であり、Ｚは、第２の配列中の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第２の配列に対する第１の配列のパーセント同一性は、第１の配列に対する第２の配列のパーセント同一性よりも高くなる。当業者は、パーセント配列同一性の計算のための配列アラインメントの生成が、一次配列データによって排他的に行われるバイナリ配列−配列比較に限定されないことを理解するであろう。配列アラインメントは、複数の配列アラインメ��トから導出され得る。複数の配列アラインメントを生成するための１つの適切なプログラムは、www.clustal.orgから入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である（ＣｌｕｓｔａｌＸは、Ｗｉｎｄｏｗｓ環境に移植されたＣｌｕｓｔａｌＷ２プログラムのバージョンである）。別の適切なプログラムは、www.drive5.com/muscleから入手可能なＭＵＳＣＬＥである。あるいは、ＣｌｕｓｔａｌＷ２およびＭＵＳＣＬＥは、例えばＥＢＩから入手可能である。
【００４４】
用語「治療剤」とは、疾患または障害の処置において使用される任意の生物学的または化学的薬剤を指す。治療剤には、任意の適切な生物学的に活性な化合物、生物学的に誘導された構成成分、例えば、細胞、ペプチド、抗体およびポリヌクレオチド、ならびに放射化学的治療剤、例えば放射性同位体が含まれる。一部の実施形態では、治療剤は、化学療法剤または鎮痛薬を含む。
【００４５】
用語「処置する（treat）」および「処置すること（treating）」とは、本明細書で使用する場合、増加した細胞死と関連する障害、例えば虚血に関して、動物またはヒトにおける組織および／または細胞損傷の発生における減少を指す。予防は、完全な予防であり得、例えば、対象における組織損傷が全くないことである。予防は、対象における組織損傷の発生が、治療剤なしの場合に発生した組織損傷よりも少なくなるように、部分的なものであってもよい。
【００４６】
用語「予防する（prevent）」、「予防すること（preventing）」および「予防」とは、本明細書で使用する場合、疾患の発生における減少、または対象における疾患もしくはその関連症状を獲得するリスクにおける減少を指すものとする。予防は、完全な予防であり得、例えば、対象における疾患または病的細胞が全くないことである。予防は、対象における疾患または病的細胞の発生が、本発明なしの場合に発生した疾患または病的細胞よりも少なくなるように、部分的なものであってもよい。
【００４７】
ＬＩＬＲＢ３
用語「白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体Ｂ３」または「ＬＩＬＲＢ３」は、哺乳動物（例えば、ヒト）ＬＩＬＲＢ３タンパク質もしくはｍＲＮＡ、または哺乳動物（例えば、ヒト）ＬＩＬＲＢ３タンパク質もしくはｍＲＮＡに由来するＬＩＬＲＢ３タンパク質もしくはｍＲＮＡを意味する。ＬＩＬＲＢ３タンパク質およびｍＲＮＡの非限定的な例は、本明細書に記載されている。ＬＩＬＲＢ３タンパク質およびｍＲＮＡのさらなる例は、当該分野で公知である。
【００４８】
ヒトＬＩＬＲＢ３の２つのアミノ酸多型は、以下に提供される：
（ＡＡＩ０４９９４）
【００４９】
【化１】
2020511950.tif 000003
およびそのバリアント
（ＸＰ＿００６７２３０４６．１）：
【００５０】
【化２】
2020511950.tif 000004
およびそのバリアント。
【００５１】
用語「ＬＩＬＲＢ３アゴニスト」は、ＬＩＬＲＢ３タンパク質に特異的に結合し、哺乳動物細胞においてＬＩＬＲＢ３シグナル伝達経路を活性化する薬剤を意味する。ＬＩＬＲＢ３アゴニストの非限定的な例は、本明細書に記載されている。ＬＩＬＲＢ３シグナル伝達経路の例は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第２０１３／１８１４３８号パンフレットに記載されている。
【００５２】
用語「ＬＩＬＲＢ３アンタゴニスト」は、ＬＩＬＲＢ３タンパク質に特異的に結合し、哺乳動物細胞においてＬＩＬＲＢ３シグナル伝達経路の活性、活性化または機能を減少させる薬剤を意味する。ＬＩＬＲＢ３アンタゴニストの非限定的な例は、本明細書に記載されている。
【００５３】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体
本開示は、ＬＩＬＲＢ３に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片を提供する。抗ＬＩＬＲＢ３アンタゴニスト抗体（マウス）の例は、表１に提供される。
【００５４】
【表１−１】
2020511950.tif 000005
【００５５】
【表１−２】
2020511950.tif 000006
【００５６】
【表１−３】
2020511950.tif 000007
【００５７】
【表１−４】
2020511950.tif 000008
【００５８】
抗ＬＩＬＲＢ３アゴニスト抗体（マウス）の例は、表２に提供される。
【００５９】
【表２−１】
2020511950.tif 000009
【００６０】
【表２−２】
2020511950.tif 000010
【００６１】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体（マウス）のさらなる例は、表３に提供される。
【００６２】
【表３−１】
2020511950.tif 000011
【００６３】
【表３−２】
2020511950.tif 000012
【００６４】
【表３−３】
2020511950.tif 000013
【００６５】
【表３−４】
2020511950.tif 000014
【００６６】
【表３−５】
2020511950.tif 000015
【００６７】
上記表は、Ｋａｂａｔ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）に従うＣＤＲを開示しているが、本開示の抗体は、任意のＣＤＲ定義（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｈｏｔｈｉａ、ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ）に従うＣＤＲを含み得る。異なるＣＤＲ定義に従う抗体のＣＤＲは、例えば、ＡｂＹｓｉｓデータベースを使用することによって決定され得る。
【００６８】
ある特定の実施形態では、これらの抗体またはその抗原結合性断片は、表１および２に開示されたＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは６つ全てを有する（ここで、ＣＤＲは、任意のＣＤＲ定義に従い得る）。
【００６９】
本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片のＶＨおよび／またはＶＬ領域は、定常領域（例えば、野生型ヒトＦｃ領域、または１つもしくは複数の変更を含むＦｃ領域）に連結され得る。一部の実施形態では、抗体は、ヒトカッパ配列に由来する軽鎖定常領域を有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトラムダ配列に由来する軽鎖定常領域を有する。具体的な実施形態では、軽鎖定常領域は、ヒトサブグループカッパ１配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群から選択されるアイソタイプを有する。重鎖定常領域は、野生型ヒトＦｃ領域、または１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むヒトＦｃ領域であり得る。抗体は、免疫グロブリンの２つの重鎖間のジスルフィド結合を安定化する変異、例えば、当該分野で開示された（例えば、Angal et al, Mol. Immunol, 30: 105-08 (1993)）ようなＩｇＧ４のヒンジ領域中の変異を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００５／００３７０００号明細書も参照のこと。重鎖定常領域は、抗体の特性を改変する（例えば、以下のうち１つまたは複数を減少させる：Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、脱アミド、補体への結合、またはメチオニン酸化）置換もまた有し得る。一部の例では、抗体は、米国特許第５，６２４，８２１号明細書および米国特許第５，６４８，２６０号明細書に記載されるものなどの変異を有し得る。一部の実施形態では、抗体は、エフェクター機能を低減または排除するために改変される。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、以下の変異のうち１つまたは複数を有する：Ｓ２２８Ｐ；Ｎ２９７ＱおよびＴ２９９Ａ（Ｋａｂａｔに従う番号付け）。重鎖定常領域は、キメラであり得る、例えば、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４アイソタイプのＩｇＧ抗体のＣＨＩおよびＣＨ２ドメイン、ならびにＩｇＧｌアイソタイプのＩｇＧ抗体由来のＣＨ３ドメインを含み得る（例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０１００１４０号明細書を参照のこと）。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプのＩｇＧ抗体のＣＨＩおよびＣＨ２ドメイン、ならびにＩｇＧｌアイソタイプのＩｇＧ抗体由来のＣＨ３ドメインを含むキメラ定常領域を有し、Ｓ２２８ＰおよびＮ２９７Ｑ変異をさらに含有する（Ｋａｂａｔに従う番号付け）。
【００７０】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体の抗原結合性断片もまた、本開示によって包含される。一部の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合分子は、（ｉ）単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）；（ｉｉ）ダイアボディ；（ｉｉｉ）ｓｃ（Ｆｖ）２；（ｉｖ）抗体のポリペプチド鎖；（ｖ）Ｆ（ａｂ’）２；もしくは（ｖｉ）Ｆ（ａｂ）を含むまたはそれらからなる。一実施形態では、抗原結合性断片はＦａｂ分子である。抗原結合性断片（Ｆａｂ断片）は、抗原に結合する、抗体上の領域である。これは、重鎖および軽鎖の各々の１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメインから構成される。これらのドメインは、パラトープ、即ち、抗原結合部位を形づくる。酵素パパインは、免疫グロブリンモノマーを２つのＦａｂ断片および１つのＦｃ断片へと切断するために使用され得る。組換え方法もまた、Ｆａｂ分子を作製するために使用され得る。別の実施形態では、抗原結合性断片は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ｓｃＦｖは、抗体の重鎖および軽鎖の可変領域から構成される。これは、Ｆａｂ断片の半分のサイズしかないが、親免疫グロブリンの元の特異性をなおも保持する。ＳｃＦｖを作製する方法は、当該分野で周知である（例えば、Ahmad et al, Clinical and Developmental Immunology, vol. 2012, Article ID 980250, 15 pages, 2012. doi: 10.1 155/2012/980250を参照のこと）。
【００７１】
ある特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合分子は、標的化部分であり得る。これらの標的化部分は、目的の薬剤（例えば、治療剤、低分子薬物）を細胞に運搬するのに有用である。
【００７２】
本開示は、例えば、少なくとも１つの異種部分と連結および／またはコンジュゲートおよび／または他の方法で関連した、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合性断片のうち少なくとも１つを含む、「キメラ分子」もまた提供する。ある特定の実施形態では、異種部分は、細胞またはその局所的環境に運搬または送達される薬剤である。そのような薬剤は、例えば、化学療法剤などの治療剤であり得る。本明細書に開示されるキメラ分子は、（ｉ）本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合分子（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）、および（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）の異種部分（例えば、治療的部分、化学療法剤、半減期延長部分）を含み、１つまたは複数のリンカーを任意選択で含む、任意の分子を包含する。一部の実施形態では、キメラ分子は、キメラタンパク質、即ち、その全ての構成成分（異種部分および／またはリンカー）がポリペプチドであるキメラ分子である。他のキメラ分子は、非ポリペプチド異種部分（例えば、ＰＥＧ、脂質、炭水化物、核酸、低分子治療剤、放射性核種、蛍光プローブなど）および／または非ポリペプチドリンカーを含み得る。
【００７３】
一部の実施形態では、キメラ分子は、第２の供給源に由来する第２のアミノ酸配列に共有結合的または非共有結合的に結合した、第１の供給源に由来する第１のアミノ酸配列を含み、この第１および第２の供給源は、同じではない。同じではない第１の供給源および第２の供給源には、２つの異なる生物学的実体、または同じ生物学的実体由来の２つの異なるタンパク質、または１つの生物学的実体および１つの非生物学的実体が含まれ得る。キメラ分子は、例えば、少なくとも２つの異なる生物学的供給源に由来するタンパク質を含み得る。生物学的供給源は、任意の合成により産生されたのではない核酸またはアミノ酸配列（例えば、本明細書にさらに記載されるような、ゲノムまたはｃＤＮＡ配列、プラスミドまたはウイルスベクター、ネイティブビリオン、または上記のいずれかの変異体もしくはアナログ）を含み得る。合成供給源は、化学的に産生されたのであって生物学的系によって産生されたのではない（例えば、アミノ酸配列の固相合成）、タンパク質または核酸配列を含み得る。キメラ分子は、少なくとも２つの異なる合成供給源に由来するタンパク質、または少なくとも１つの生物学的供給源および少なくとも１つの合成供給源に由来するタンパク質もまた含み得る。キメラ分子は、任意の供給源に由来する核酸、または任意の供給源に由来する有機もしくは無機低分子に共有結合的または非共有結合的に連結された、第１の供給源に由来する第１のアミノ酸配列もまた含み得る。キメラ分子は、第１のアミノ酸配列と第２のアミノ酸配列との間、または第１のアミノ酸配列と核酸との間、または第１のアミノ酸配列と有機もしくは無機低分子との間に、リンカー分子もまた含み得る。
【００７４】
本明細書に開示されるキメラ分子の異種部分（単数または複数）は、例えば、予防剤および／または治療剤（例えば、化学療法剤または鎮痛薬）、薬物動態学的（ＰＫ）特性を改善することが可能な分子（例えば、血漿半減期延長部分）、および検出可能な部分（例えば、蛍光分子または放射性核種）を含み得る、それらからなり得る、またはそれらから本質的になり得る。一部の実施形態では、異種部分は、凝固因子（例えば、第ＶＩＩ因子）を含む。一部の実施形態では、異種部分は、そのような異種部分を欠くキメラ分子の物理化学的特性を改変し得る分子を含む。他の実施形態では、キメラ分子中への異種部分の取込みは、その生物学的活性または機能に顕著な影響を与えることなく、１つまたは複数の薬物動態学的特性を改善できる。他の実施形態では、異種部分は、本発明のキメラ分子またはその断片の安定性を増加させる。
【００７５】
一部の実施形態では、異種部分は、少なくとも約１０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２５００、３０００または４０００アミノ酸を含む、それから本質的になる、またはそれからなるポリペプチドである。他の実施形態では、異種部分は、約１００〜約２００アミノ酸、約２００〜約３００アミノ酸、約３００〜約４００アミノ酸、約４００〜約５００アミノ酸、約５００〜約６００アミノ酸、約６００〜約７００アミノ酸、約７００〜約８００アミノ酸、約８００〜約９００アミノ酸または約９００〜約１０００アミノ酸を含む、それから本質的になる、またはそれからなるポリペプチドである。
【００７６】
一部の実施形態では、キメラ分子は、「半減期延長部分」である少なくとも１つの異種部分を含む。半減期延長部分は、例えば、（ｉ）ＸＴＥＮポリペプチド；（ｉｉ）Ｆｃ；（ｉｉｉ）アルブミン、（ｉｖ）アルブミン結合ポリペプチドまたは脂肪酸、（ｖ）ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）、（ｖｉ）ＰＡＳ；（ｖｉｉ）ＨＡＰ；（ｖｉｉｉ）トランスフェリン；（ｉｘ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；（ｘ）ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、（ｘｉ）ポリシアル酸（ＰＳＡ）；（ｘｉｉ）クリアランス受容体、またはクリアランス受容体へのキメラ分子の結合を遮断するその断片；（ｘｉｉｉ）低複雑度ペプチド；（ｘｉｖ）ｖＷＦ；または（ｘｖ）それらの任意の組合せを含み得る。一部の実施形態では、半減期延長部分は、Ｆｃ領域を含む。他の実施形態では、半減期延長部分は、リンカーによって融合された２つのＦｃ領域を含む。例示的な異種部分には、例えば、ＦｃＲｎ結合部分（例えば、完全Ｆｃ領域、またはＦｃＲｎに結合するその部分）、単鎖Ｆｃ領域（ｓｃＦｃ領域、例えば、米国特許出願公開第２００８／０２６０７３８号明細書、ならびに国際公開第２００８／０１２５４３号パンフレットおよび国際公開第２００８／１４３９５４５号パンフレットに記載される）、またはプロセシング可能なｓｃＦｃ領域もまた含まれる。一部の実施形態では、異種部分は、非ポリペプチド部分、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、ポリシアル酸、またはこれらの部分の任意の誘導体、バリアントもしくは組合せのための結合部位を含み得る。
【００７７】
ある特定の実施形態では、本開示のキメラ分子は、そのような異種部分を欠く対応するキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期と比較して、そのキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を増加させる少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つまたは４つ）の半減期延長部分を含む。キメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期は、当業者に公知の任意の方法、例えば、活性アッセイ（発色性アッセイまたは一段階凝固ａＰＴＴアッセイ）、ＥＬＩＳＡなどによって決定できる。一部の実施形態では、１つまたは複数の半減期延長部分の存在は、そのような１つまたは複数の半減期延長部分を欠く対応するキメラ分子の半減期と比較して、そのキメラ分子の半減期を増加させる。半減期延長部分を含むキメラ分子の半減期は、そのような半減期延長部分を欠く対応するキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期よりも、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍または少なくとも約１２倍長い。
【００７８】
一実施形態では、半減期延長部分を含むキメラ分子の半減期は、そのような半減期延長部分を欠く対応するキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期よりも、約１．５倍〜約２０倍、約１．５倍〜約１５倍または約１．５倍〜約１０倍長い。別の実施形態では、半減期延長部分を含むキメラ分子の半減期は、そのような半減期延長部分を欠く対応するキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期と比較して、約２倍〜約１０倍、約２倍〜約９倍、約２倍〜約８倍、約２倍〜約７倍、約２倍〜約６倍、約２倍〜約５倍、約２倍〜約４倍、約２倍〜約３倍、約２．５倍〜約１０倍、約２．５倍〜約９倍、約２．５倍〜約８倍、約２．５倍〜約７倍、約２．５倍〜約６倍、約２．５倍〜約５倍、約２．５倍〜約４倍、約２．５倍〜約３倍、約３倍〜約１０倍、約３倍〜約９倍、約３倍〜約８倍、約３倍〜約７倍、約３倍〜約６倍、約３倍〜約５倍、約３倍〜約４倍、約４倍〜約６倍、約５倍〜約７倍または約６倍〜約８倍延長される。
【００７９】
抗体の特徴付け
本明細書に記載される抗体のＬＩＬＲＢ３結合特性は、任意の標準的な方法、例えば、以下の方法のうち１つまたは複数によって測定され得る：ＯＣＴＥＴ（登録商標）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＥＩＡ（酵素イムノアッセイ）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）および蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）。
【００８０】
目的のタンパク質（抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその機能的断片）と標的（例えば、ＬＩＬＲＢ３）との結合相互作用は、ＯＣＴＥＴ（登録商標）システムを使用して分析され得る。この方法では、ＦｏｒｔｅＢｉｏ社製の機器（例えば、ＯＣＴＥＴ（登録商標）ＱＫｅおよびＱＫ）のいくつかのバリエーションのうち１つが、タンパク質相互作用、結合特異性およびエピトープマッピングを決定するために使用され得る。ＯＣＴＥＴ（登録商標）システムは、カスタムチップに沿って下に向かい次いでセンサーに戻る偏光における変化を測定することによって、リアルタイム結合をモニタリングするための容易な方法を提供する。
【００８１】
目的のタンパク質（抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその機能的断片）と標的（例えば、ＬＩＬＲＢ３）との結合相互作用は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析され得る。ＳＰＲまたはＢｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＢＩＡ）は、いずれの相互作用物も標識することなしに、生体分子特異的（biospecific）な相互作用をリアルタイムで検出する。ＢＩＡチップの結合表面における質量の変化（結合事象を示す）は、表面近傍での光の屈折率の変更（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学的現象）を生じる。屈折性における変化は、生物学的分子間のリアルタイム反応の指標として測定される検出可能なシグナルを生じる。ＳＰＲを使用するための方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０号明細書；Raether (1988) Surface Plasmons Springer Verlag；Sjolander and Urbaniczky (1991) Anal. Chem. 63:2338-2345；Szabo et al. (1995) Curr. Opin. Struct. Biol. 5:699-705、およびＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）によって提供されるオンラインリソースに記載されている。ＳＰＲからの情報は、標的への生体分子の結合についての、平衡解離定数（Ｋｄ）、ならびにＫｏｎおよびＫｏｆｆを含む動力学的パラメーターの正確な定量的尺度を提供するために使用され得る。
【００８２】
エピトープもまた、ＢＩＡＣＯＲＥクロマトグラフィー技術を使用して、ヒトＬＩＬＲＢ３への結合について互いに競合する異なる抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその機能的断片の能力を評価することによって、直接マッピングされ得る（Pharmacia BIAtechnology Handbook, “Epitope Mapping”, Section 6.3.2, (May 1994)；Johne et al. (1993) J. Immunol. Methods, 160:191-198もまた参照のこと）。
【００８３】
酵素イムノアッセイを用いる場合、抗体を含むサンプル、例えば、抗体産生細胞の培養上清、または精製された抗体が、抗原コーティングされたプレートに添加される。アルカリホスファターゼなどの酵素で標識された二次抗体が添加され、プレートがインキュベートされ、洗浄後、ｐ−ニトロフェニルリン酸などの酵素基質が添加され、抗原結合活性を評価するために吸光度が測定される。
【００８４】
抗体を評価するためのさらなる一般的なガイダンス、例えば、ウエスタンブロットおよび免疫沈降アッセイは、Antibodies: A Laboratory Manual, ed. by Harlow and Lane, Cold Spring Harbor press (1988)において見出すことができる。
【００８５】
抗体のアンタゴニスト的およびアゴニスト的生物活性の特徴付けのために、本発明者らは、パイロットスクリーニング戦略として、ＬＰＳ刺激されたＰＢＭＣ（最優先、主に骨髄細胞に標的化）およびＯＫＴ３刺激されたＰＢＭＣ（主にＴ細胞に標的化）を実施した。ＬＬＲＩＢ３アンタゴニストおよびアゴニストを同定するための基準を含むフローチャートを提供する図８に示されるように、アンタゴニストＡｂは、減少した／未変化のＩＬ−１０分泌と、また一方では増加した／未変化のＴ細胞増殖と共に、ＴＮＦａを増加させ得る（ＴＮＦａ＞１．５倍、ＩＬ−１０＜１．１倍）。他方、アゴニストＡｂは、減少した／未変化のＴＮＦａ分泌と、また一方では減少したＴ細胞増殖と一緒に、ＩＬ−１０分泌を増加させ得る（ＩＬ−１０＞１．２倍、ＴＮＦａ＜１．１倍およびＴ細胞増殖＜０．８倍）。ＬＰＳ刺激されたＰＢＭＣおよびＯＫＴ３刺激されたＰＢＭＣに対するＡｂ候補の効果は、表３〜６に示される。Ｔ細胞ベースのアッセイからスクリーニングされたＡｂ候補のアンタゴニストおよびアゴニスト生物活性が、骨髄細胞ベースのアッセイからのものと大部分一致しているが、少数が一致していない場合があることに注目すべきである。さらに、これらのＡｂ候補を、試験ＬＩＬＲＢ３レポーターアッセイ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＨＬＡ−ＤＲ、ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ１４、ＣＤ１６によるＭ１／Ｍ２分化／ヒトＭＤＳＣマーカー（図２Ｃ）、ならびに混合リンパ球反応（図３Ｃ）に供した。アンタゴニストは、Ｍ２分化を減少させ得（下方調節されたＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＰＤ−Ｌ１）、ＨＬＡ−ＤＲを増加させ得、ヒトＭＤＳＣ  ＣＤ３３＋ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋を減少させ得るが、対照的に、アゴニストは、上記パラメーターを対抗調節（counter-regulate）または維持し得る。これらのアッセイは、Ａｂ候補の活性を決定するためまたはその効率／潜在力を比較するために、非常に重要なパラメーターを提供した。
【００８６】
さらなる薬剤
ＭＤＳＣ
ＭＤＳＣは、免疫系の重要な調節因子の１つとして最近認識されている。ＭＤＳＣは、骨髄前駆体、未熟なマクロファージ、未熟な顆粒球および未熟な樹状細胞を含む、骨髄起源の細胞の不均一な集団を示す。ＭＤＳＣは、マウスにおいて、Ｇｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃ＋単球性（Ｍ）細胞およびＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋顆粒球性（Ｇ）細胞へと分化および極性化する（Gabrilovich et al., Cancer Res. 67:425, 2007；Huang et al., Cancer Res. 66:1123-1131, 2006；Movahedi et al., Blood 111:4233-4244, 2008）。ヒトＭＤＳＣは、ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４LowＣＤ３３＋またはＬｉｎ−ＨＬＡ−ＤＲLow−ＣＤ３３＋骨髄細胞として特徴付けられる（Ostrand-Rosenberg et al., J. Immunol. 182:4499-4506, 2009；Raychaudhuri et al., Neurol. Oncol. 13:591-599, 2011）。１型古典的活性化様（Ｍ１）および２型代替的活性化様（Ｍ２）マクロファージの命名法を反映して、ＭＤＳＣは、Ｍ１細胞およびＭ２細胞（ｉＮＯＳ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−ｇＲ、ＭＨＣクラスＩおよびＣＣＲ７を発現するＭ１細胞、ならびにアルギナーゼ、ＩＬ−１０、ＣＤ３６、ＣＤ２０６およびＣＣＲ２を発現するＭ２細胞）へと分化および極性化され得る。腫瘍関連ＭＤＳＣは、腫瘍促進（pro-tumoral）活性および免疫抑制活性を有するＭ２様表現型を優勢に示す。Ｍ２細胞は、ＩＬ−１０、アルギナーゼ、ＩＬ−１０、Ｔｉｅ−２、ＣＤ３６、ＣＤ２０６、ＩＬ−４ＲおよびＣＣＲ２などのいくつかの増強されたシグネチャーマーカーによって、表現型的に特徴付けられる（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ１細胞は、ｉＮＯＳ、ＮＯ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γＲ、ＭＨＣ  ＩおよびＣＣＲ７の発現における上昇を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｇ２細胞は、アルギナーゼ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５およびＭＭＰ−９の発現を上方調節する。対照的に、Ｇ１細胞は、上昇した発現レベルのＴＮＦ−α、ＦａｓおよびＩＣＡＭ−１を示す。
【００８７】
ＭＤＳＣは、複数の機構を介したＴ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージおよび他の免疫細胞との相互連絡を介して免疫抑制を発揮する。ＭＤＳＣが他の免疫細胞とどのようにクロストークするかの詳細は、Bunt et al. (J. Leukoc. Biol. 85:996-1004, 2009)、Ostrand-Rosenberg et al. (Nat. Rev. Immunol. 12:253-268, 2012)およびSinha et al. (J. Immunol. 179:977-983, 2007)に記載されている。Ｔ細胞に関する限り、ＭＤＳＣは、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）の不活性化およびアポトーシスを誘導でき（例えば、Apolloni et al., J. Immunol. 165:6723-6730, 2000を参照のこと）、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を拡大増殖させることができる（例えば、Adeegbe et al., Cell Transplant. 20:941-954, 2011を参照のこと）。ＭＤＳＣによるＴ細胞抑制およびＴｒｅｇ拡大増殖の調節は、細胞接触依存的、ＭＨＣクラスＩＩ依存的、ＮＯ依存的および／またはアルギナーゼ依存的である。Ｍ２細胞は、Ｔ細胞の共培養物において、それらのＭ１様対応物と比較して、Ｔｅｆｆの活性化および増殖を抑制する増強された能力を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ２細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方において、Ｍ１細胞よりも、Ｔｒｅｇの拡大増殖においてより高い潜在力を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｔｒｅｇ細胞におけるＭ２細胞誘導性の増加は、ＩＬ−１０媒介性、ＩＬ−４媒介性およびＩＬ−１３媒介性であり、アルギナーゼ依存的であると思われる（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ１／Ｍ２細胞の機能性と同様に、Ｇ１細胞およびＧ２細胞は、それぞれ、抗腫瘍活性および腫瘍促進活性を有する（Fridlender et al., Cancer Cell 16:183-194, 2009）。
【００８８】
１つの表現型から他の表現型へのＭＤＳＣサブセットの極性化には、機能的変化が伴う。Ｍ２細胞は、主に、アルギナーゼおよび免疫抑制性サイトカインにおける増加が関与する増強された免疫抑制によって、腫瘍成長を加速させる（例えば、Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011を参照のこと）。Ｍ１細胞は、直接的腫瘍死滅を増加させ、フリーラジカル、デスリガンドおよび免疫賦活性サイトカインの増大を介して抗腫瘍免疫の発達を促進する（例えば、Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011を参照のこと）。Ｍ１／Ｍ２極性化のバランスは、疾患および健康に対して顕著な影響を有し得る。
【００８９】
ＭＤＳＣを調製および単離する方法は、当該分野で公知である。例えば、ＭＤＳＣは、本明細書に記載される異なるＭＤＳＣサブセットの特異的タンパク質マーカーのいずれかを認識する抗体を使用する蛍光補助細胞選別を使用して単離され得る。ＭＤＳＣを調製および単離するための例示的な方法は、米国特許出願公開第２００８／０３０５０７９号明細書および国際公開第１１／０８７７９５号パンフレット（その各々が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【００９０】
動員剤
一部の実施形態では、組成物は、１種または複数の動員剤をさらに含有する。動員剤は、哺乳動物の骨髄からのＭＤＳＣの放出を刺激する。動員剤の非限定的な例には、例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、シクロホスファミド、ＡＭＤ３１００、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３−Ｌ）、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−３４、ＴＳＬＰ−１、ＳＣＦ、ＦＫ５６０、Ｓ１００  Ａ８およびＳ１００  Ａ９が含まれる。
【００９１】
一部の実施形態では、本開示は、動員剤ならびに少なくとも１種のＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４および／またはＬＩＬＲＢ５アゴニストを含有する組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物は、動員剤、少なくとも１種のＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４および／またはＬＩＬＲＢ５アゴニスト、ならびに少なくとも１種のＪＮＫ阻害剤を含有する。一部の実施形態では、本開示は、動員剤をさらに含むがＭＤＳＣは含まない組成物を提供する。
【００９２】
ＪＮＫ阻害剤
一部の実施形態では、組成物は、少なくとも１種のＪＮＫ阻害剤をさらに含有する。ＪＮＫ阻害剤の非限定的な例には、例えば、ＢＩ−７８Ｄ３、ＳＰ６００１２５、ＡＥＧ  ３４８２、ＪＩＰ−１、ＳＵ  ３３２７、ＴＣＳ  ＪＮＫ  ５ａおよびＴＣＳ  ＪＮＫ  ６ｏが含まれる。ＪＮＫ阻害剤のさらなる例は、その各々が参照によって本明細書に組み込まれる、国際公開第００／３５９０６号パンフレット、国際公開第００／３５９０９号パンフレット、国際公開第００／３５９２１号パンフレット、国際公開第００／６４８７２号パンフレット、国際公開第０１／１２６０９号パンフレット、国際公開第０１／１２６２１号パンフレット、国際公開第０１／２３３７８号パンフレット、国際公開第０１／２３３７９号パンフレット、国際公開第０１／２３３８２号パンフレット、国際公開第０１／４７９２０号パンフレット、国際公開第０１／９１７４９号パンフレット、国際公開第０２／０４６１７０号パンフレット、国際公開第０２／０６２７９２号パンフレット、国際公開第０２／０８１４７５号パンフレット、国際公開第０２／０８３６４８号パンフレットおよび国際公開第０３／０２４９６７号パンフレットに記載されている。
【００９３】
抗炎症剤
一部の例では、組成物は、１種または複数の抗炎症剤もまた含み得る。抗炎症剤には、例えば、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ、例えば、シクロオキシゲナーゼＩ（ＣＯＸ  Ｉ）阻害剤およびシクロオキシゲナーゼＩＩ（ＣＯＸ−ＩＩ）阻害剤）、免疫選択的抗炎症誘導体（ＩｍＳＡＩＤ）、および生物製剤が含まれる。本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な抗炎症剤のいずれかが、本明細書に記載される組成物中に含まれ得る。
【００９４】
ＮＳＡＩＤの非限定的な例は、サリチル酸塩（例えば、アスピリン、ジフルシナール（diflusinal）およびサルサラート）、プロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン、デクスイブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジンおよびロキソプロフェン）、酢酸誘導体（例えば、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ケトロラク、ジクロフェナクおよびナブメトン）、エノール酸（enolic acid）誘導体（例えば、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカムおよびイソキシカム）、フェナム酸誘導体（例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸およびトルフェナム酸）、スルホンアニリド（sulphonanilide）（例えば、ニメスリド）、リコフェロン（licofelone）およびクロニキシン酸リジン（lysine clonixinate）である。一部の実施形態では、ＮＳＡＩＤは、ＣＯＸ−Ｉ阻害剤またはＣＯＸ−ＩＩ阻害剤である。ＣＯＸ−Ｉ阻害剤の非限定的な例には、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンが含まれる。ＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の非限定的な例には、セレコキシブ、バルデコキシブおよびロフェコキシブが含まれる。
【００９５】
ＩｍＳＡＩＤの非限定的な例には、ＦＥＧ（Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ）、そのＤ−異性体ｆｅＧ、およびＳＧＰ−Ｔペプチドが含まれる。コルチコステロイドの非限定的な例には、ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チキソコルトール（tixocortol pivalate）、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノロン、ハルシノニド、ベタメタゾン、デキサメタゾンおよびフルオコルトロンが含まれる。生物製剤の非限定的な例には、トシリズマブ、セルトリズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、アナキンラ、アバタセプト、エファリズマブ、インフリキシマブ、リツキシマブおよびゴリムマブが含まれる。
【００９６】
免疫抑制剤
本明細書に記載される組成物は、１種または複数の免疫抑制剤もまた含有し得る。免疫抑制剤の非限定的な例には、ミコフェノール酸塩、シクロスポリン（ciclosporin）、シクロスポリン（cyclosporine）、タクロリムス、シロリムスおよびピメクロリムスが含まれる。さらなる免疫抑制剤は、当該分野で公知である。
【００９７】
化学療法剤
一部の実施形態では、組成物は、１種または複数の化学療法剤をさらに含む。化学療法剤の非限定的な例には、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシルおよびメルファラン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロンおよびバルルビシン）、タキサン（例えば、パクリタキセル（paxlitaxel）およびドセタキセル）、エポチロン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えば、ボリノスタットおよびロミデプシン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシドおよびタフルポシド（tafluposide））、キナーゼ阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブおよびビスモデギブ）、ベバシズマブ、セツキシマブ、イピリムマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、パニツムマブ（panitumab）、リツキシマブ、ベムラフェニブ、ハーセプチン、ヌクレオチドアナログ（例えば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、ドキシフルリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、メトトレキサートおよびチオグアニン）、ペプチド抗生物質（例えば、ブレオマイシンおよびアクチノマイシン）、白金ベースの薬剤（例えば、カルボプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチン）、レチノイド（例えば、トレチノイン、アリトレチノインおよびベキサロテン）およびビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）が含まれる。
【００９８】
鎮痛薬
一部の実施形態では、組成物は、１種または複数の鎮痛薬をさらに含有し得る。本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な鎮痛薬のいずれかが、本明細書に記載される組成物中に含まれ得る。鎮痛薬の非限定的な例には、オピオイド薬物（例えば、モルヒネ、アヘン、コデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、ジアモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、ペチジン、ブプレノルフィン、フェンタニル、メサドン、メペリジン、ペンタゾシン、ジピパノン（dipipanone）およびトラマドール）、アセトアミノフェン、ベンラファキシン、フルピルチン、ネホパム、ガバペンチン、プレガバリン、オルフェナドリン、シクロベンザプリン、トラゾドン、クロニジン、デュロキセチンおよびアミトリプチリンが含まれる。
【００９９】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体を産生する方法
本開示の抗ＬＩＬＲＢ３抗体（または抗体もしくはその機能的断片の抗原結合ドメイン）は、細菌または真核細胞において産生され得る。目的のポリペプチドを産生するために、このポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが構築され、発現ベクター中に導入され、次いで、適切な宿主細胞において発現される。標準的な分子生物学の技術が、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収するために使用される。
【０１００】
抗体が細菌細胞（例えば、大腸菌（E. coli））において発現される場合、発現ベクターは、細菌細胞中でのベクターの増幅を可能にする特徴を有するべきである。さらに、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１またはＸＬ１−Ｂｌｕｅなどの大腸菌（E. coli）が宿主として使用される場合、ベクターは、プロモーター、例えば、大腸菌（E. coli）における効率的な発現を可能にできるｌａｃＺプロモーター（Ward et al., 341:544-546 (1989)）、ａｒａＢプロモーター（Better et al., Science, 240:1041-1043 (1988)）またはＴ７プロモーターを有さなければならない。そのようなベクターの例には、例えば、Ｍ１３シリーズのベクター、ｐＵＣシリーズのベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ−５Ｘ−１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ  ｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、およびｐＥＴ（この発現ベクターが使用される場合、宿主は、好ましくは、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が含まれる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含有し得る。大腸菌（E. coli）のペリプラズム中への産生のために、ｐｅｌＢシグナル配列（Lei et al., J. Bacteriol., 169:4379 (1987)）が、抗体分泌のためのシグナル配列として使用され得る。細菌発現のために、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法が、発現ベクターを細菌細胞中に導入するために使用され得る。
【０１０１】
抗体がＣＨＯ、ＣＯＳ、２９３、２９３ＴおよびＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞において発現される場合、発現ベクターは、これらの細胞における発現に必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Mulligan et al., Nature, 277:108 (1979)）、ＭＭＬＶ−ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Mizushima et al., Nucleic Acids Res., 18:5322 (1990)）またはＣＭＶプロモーターを含む。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加えて、組換え発現ベクターは、さらなる配列、例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択可能なマーカー遺伝子を保有し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を促進する（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号明細書、米国特許第４，６３４，６６５号明細書および米国特許第５，１７９，０１７号明細書を参照のこと）。例えば、典型的には、選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択可能なマーカーを有するベクターの例には、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ−ＲＳＶ、ｐＢＫ−ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶおよびｐＯＰ１３が含まれる。
【０１０２】
一実施形態では、抗体は、哺乳動物細胞において産生される。ポリペプチドを発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Kaufman and Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601 621に記載されるようなＤＨＦＲ選択可能なマーカーと共に使用される、Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ヒト胎児由来腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球性細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ならびにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物由来の細胞が含まれる。例えば、細胞は、乳腺上皮細胞である。
【０１０３】
本開示の抗体は、宿主細胞の内側または外側（例えば、培地）から単離され得、実質的に純粋で均一な抗体として精製され得る。ポリペプチドのために一般に使用される単離および精製のための方法が、本明細書に記載される抗体の単離および精製のために使用され得、任意の特定の方法に限定されない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、濾過、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析および再結晶を適切に選択し組み合わせることによって、単離および精製され得る。クロマトグラフィーには、例えば、アフィニティクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィーおよび吸着クロマトグラフィーが含まれる（Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996）。クロマトグラフィーは、液相クロマトグラフィー、例えば、ＨＰＬＣおよびＦＰＬＣを使用して実施され得る。アフィニティクロマトグラフィーに使用されるカラムには、プロテインＡカラムおよびプロテインＧカラムが含まれる。プロテインＡカラムを使用するカラムの例には、Ｈｙｐｅｒ  Ｄ、ＰＯＲＯＳおよびＳｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が含まれる。本開示は、これらの精製方法を使用して高度に精製される抗体もまた含む。
【０１０４】
本開示は、本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合分子をコードする核酸分子または核酸分子のセットもまた提供する。一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗ＬＩＬＲ３抗体またはその抗原結合分子の軽鎖を含むポリペプチド鎖をコードする核酸分子を含む。一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗ＬＩＬＲ３抗体またはその抗原結合分子の重鎖を含むポリペプチド鎖をコードする核酸分子を含む。
【０１０５】
そのような核酸分子もしくは核酸分子のセットまたはそれらの相補体を含むベクターまたはベクターのセット、ならびにベクターを含む宿主細胞もまた提供される。
【０１０６】
本開示は、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３もしくはその抗原結合分子またはキメラ分子を産生するための方法もまた提供し、そのような方法は、本明細書に開示される宿主細胞を培養するステップ、および抗体、その抗原結合分子またはキメラ分子を培養培地から回収するステップを含む。
【０１０７】
種々の方法が、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子を組換え産生するために利用可能である。コードの縮重に起因して、種々の核酸配列がポリペプチドのアミノ酸配列をコードすることが理解されよう。所望のポリヌクレオチドは、ｄｅ  ｎｏｖｏ固相ＤＮＡ合成によって、または以前に調製されたポリヌクレオチドのＰＣＲ変異誘発によって、産生され得る。
【０１０８】
組換え産生のために、ポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）をコードするポリヌクレオチド配列が、適切な発現ビヒクル、即ち、挿入されたコード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含有するベクター、またはＲＮＡウイルスベクターの場合には、複製および翻訳に必要なエレメントを含むベクター中に挿入される。
【０１０９】
ポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）をコードする核酸は、適切なリーディングフレームでベクター中に挿入される。次いで、発現ベクターは、ポリペプチドを発現することになる適切な標的細胞中にトランスフェクトされる。当該分野で公知のトランスフェクション技術には、リン酸カルシウム沈殿（Wigler et al. 1978, Cell 14:725）およびエレクトロポレーション（Neumann et al. 1982, EMBO J. 1 :841）が含まれるがこれらに限定されない。種々の宿主−発現ベクター系が、本明細書に記載されるポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）を真核細胞において発現させるために利用され得る。一実施形態では、真核細胞は、哺乳動物細胞（例えば、２９３細胞、ＰｅｒＣ６、ＣＨＯ、ＢＨＫ、Ｃｏｓ、ＨｅＬａ細胞）を含む動物細胞である。ポリペプチドが真核細胞において発現される場合、ポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）をコードするＤＮＡは、ポリペプチドの分泌を可能にするシグナル配列もまたコードし得る。当業者は、ポリペプチドが翻訳される間に、シグナル配列が細胞によって切断されて、成熟キメラ分子を形成することを理解する。種々のシグナル配列が当該分野で公知であり、当業者はこれに精通している。あるいは、シグナル配列が含まれない場合、ポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）は、細胞を溶解させることによって回収され得る。
【０１１０】
医薬組成物
本開示は、以下のうち１つまたは複数：（ｉ）本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体またはその抗原結合分子；（ｉｉ）本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ３抗体もしくは抗原結合分子をコードする核酸分子または核酸分子のセット；または（ｉｉｉ）本明細書に開示されるベクターもしくはベクターのセット、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物もまた提供する。
【０１１１】
本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片は、例えば、本明細書に記載される障害を処置するために、対象への投与のための医薬組成物として製剤化され得る。典型的には、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合性の任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含み得る（例えば、Berge, S.M., et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19を参照のこと）。
【０１１２】
医薬製剤は、十分に確立された技術であり、例えば、Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472)；Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Ed., Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1999) (ISBN: 0683305727)；およびKibbe (ed.), Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3rd ed. (2000) (ISBN: 091733096X)にさらに記載されている。
【０１１３】
医薬組成物は、種々の形態であり得る。これらには、例えば、液体、半固体および固体の剤形、例えば、液体溶液剤（例えば、注射可能な液剤および注入可能な液剤）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム剤および坐剤が含まれる。好ましい形態は、意図した投与様式および治療適用に依存し得る。典型的には、本明細書に記載される薬剤のための組成物は、注射可能な液剤または注入可能な液剤の形態である。
【０１１４】
一実施形態では、本明細書に記載される抗体は、賦形剤材料、例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム（sodium dibasic phosphate）七水和物、リン酸一水素ナトリウム（sodium monobasic phosphate）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−８０および安定剤を用いて製剤化される。抗体は、例えば、適切な濃度で緩衝溶液中に提供され得、２〜８℃で貯蔵され得る。一部の他の実施形態では、組成物のｐＨは、約５．５から７．５の間（例えば、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５）である。
【０１１５】
医薬組成物は、製剤化される際の抗体の凝集を低減させる薬剤もまた含み得る。凝集低減剤の例には、メチオニン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グリシンおよびグルタミン酸からなる群から選択される１種または複数のアミノ酸が含まれる。これらのアミノ酸は、約０．５ｍＭ〜約１４５ｍＭ（例えば、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２５ｍＭ、５０ｍＭ、１００ｍＭ）の濃度になるように、製剤に添加され得る。医薬組成物は、糖（例えば、スクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトールまたはキシリトール）および／または浸透圧改変剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトールまたはソルビトール）および／または界面活性剤（例えば、ポリソルベート−２０またはポリソルベート−８０）もまた含み得る。
【０１１６】
組成物は、液剤、マイクロエマルジョン剤、分散剤、リポソーム剤、または高濃度での安定な貯蔵に適切な他の秩序立った構造として製剤化され得る。無菌の注射可能な溶液は、必要量の本明細書に記載される薬剤を、上に列挙された成分のうち１つまたはそれらの組合せと共に適切な溶媒中に取込み、その後必要に応じて濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散剤は、本明細書に記載される薬剤を、基本的分散媒および上に列挙されたものからの必要な他の成分を含有する無菌のビヒクル中に組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な液剤の調製のための無菌の散剤の場合、調製の好ましい方法は、以前に無菌濾過されたその溶液から、本明細書に記載される薬剤＋任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥およびフリーズドライである。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射可能な組成物の延長された吸収は、ステアリン酸塩およびゼラチンなどの、吸収を遅延させる薬剤を組成物中に含めることによってもたらされ得る。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、抗体は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤など、迅速な放出に対して化合物を保護する担体を用いて調製され得る。生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸が使用され得る。そのような製剤の調製のための多くの方法は、特許されているまたは一般に公知である。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1978)を参照のこと。
【０１１８】
一実施形態では、医薬製剤は、薬学的に許容される担体を用いて製剤化された、約０．００５ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ（例えば、０．００５ｍｇ／ｍｌ、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１７５ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍＬ、３５０ｍｇ／ｍＬ、４００ｍｇ／ｍＬ、４５０ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬ）の濃度の抗体を含む。一部の実施形態では、抗体は、無菌の蒸留水またはリン酸緩衝食塩水中で製剤化される。医薬製剤のｐＨは、５．５〜７．５の間（例えば、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．３、７．４、７．５）であり得る。
【０１１９】
医薬組成物は、「治療有効量」の本明細書に記載される薬剤を含み得る。そのような有効量は、投与される薬剤の効果、または２種以上の薬剤が使用される場合には薬剤の効果の組合せに基づいて、決定され得る。薬剤の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答、例えば、少なくとも１つの障害パラメーターの寛解または障害の少なくとも１つの症状の寛解を惹起する化合物の能力などの因子に従っても変動し得る。治療有効量は、治療的に有益な効果が組成物の任意の毒性または有害効果を凌ぐ任意の量である。
【０１２０】
投与
本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片、またはそれをコードする核酸は、対象、例えば、それを必要とする対象、例えば、ヒトまたは動物対象に、種々の方法によって投与され得る。多くの適用について、投与経路は、静脈内注射または非経口、注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、または筋肉内注射、腫瘍内（ＩＴ）のうち１つである。他の様式の非経口投与もまた使用され得る。そのような様式の例には、動脈内、くも膜下腔内、関節内（intracapsular）、眼窩内、心臓内、真皮内、経気管、表皮下、関節内（intraarticular）、嚢下、くも膜下、脊髄内、ならびに硬膜外および胸骨内注射が含まれる。
【０１２１】
一実施形態では、本発明の抗体の投与経路は、非経口である。本明細書で使用する場合、非経口という用語は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸または腟投与を含む。静脈内形態の非経口投与が好ましい。これらの形態の全ての投与が本発明の範囲内であることが明確に企図されるが、投与のための一形態は、注射のため、特に静脈内または動脈内注射または点滴のための溶剤である。通常、注射に適切な医薬組成物は、緩衝液剤（例えば、酢酸、リン酸またはクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意選択で安定剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含み得る。しかし、本明細書の教示と適合する他の方法では、ポリペプチドは、有害な細胞集団の部位に直接送達され得、それにより、罹患組織の治療剤への曝露を増加させる。
【０１２２】
非経口投与のための調製物には、無菌の水性または非水性の溶液、懸濁液およびエマルジョンが含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体には、食塩水および緩衝媒体が含まれる、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液が含まれる。薬学的に許容される担体には、０．０１〜０．１Ｍ、好ましくは０．０５Ｍのリン酸緩衝液または０．８％食塩水が含まれるがこれらに限定されない。他の一般的な非経口ビヒクルには、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、または不揮発油が含まれる。静脈内ビヒクルには、流体および栄養素補充剤、電解質補充剤、例えば、リンゲルデキストロースに基づくものなどが含まれる。防腐剤および他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガスなどもまた存在し得る。
【０１２３】
より詳細には、注射可能な使用に適切な医薬組成物は、無菌の水性溶液（水溶性の場合）または分散物、および無菌の注射可能な溶液または分散物の即時調製のための無菌の粉末を含む。そのような場合には、組成物は、無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流動性であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、好ましくは、細菌および真菌などの微生物の混入作用に対して保全される。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。
【０１２４】
微生物の作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射可能な組成物の延長された吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの、吸収を遅延させる薬剤を組成物中に含めることによってもたらされ得る。
【０１２５】
いずれの場合にも、無菌の注射可能な溶液は、必要量の活性化合物（例えば、それ自体または他の活性な薬剤と組み合わせたポリペプチド）を、本明細書に列挙された成分のうち１つまたはそれらの組合せと共に適切な溶媒中に取込み、その後必要に応じて濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散物は、活性化合物を、基本的分散媒および上に列挙されたものからの必要な他の成分を含有する無菌のビヒクル中に組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌の粉末の場合、調製の好ましい方法は、以前に無菌濾過されたその溶液から、活性成分＋任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥およびフリーズドライである。注射のための調製物は、当該分野で公知の方法に従って、加工され、アンプル、バッグ、ビン、シリンジまたはバイアルなどの容器中に充填され、無菌条件下で密封される。さらに、調製物は、キットの形態で包装および販売され得る。そのような製品は、好ましくは、関連する組成物が凝固障害に罹患している対象または凝固障害の素因がある対象を処置するために有用であることを示すラベルまたは添付文書を有する。
【０１２６】
状態の処置のための本開示の組成物の有効用量は、投与の手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬、および処置が予防的であるか治療的であるかを含む多くの異なる因子に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物もまた処置することができる。処置投薬量は、安全性および有効性を最適化するために、当業者に公知の慣用的な方法を使用して用量設定され得る。
【０１２７】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片の投与経路および／または投与様式はまた、例えば、対象をモニタリングすることによって、個々の症例のためにテーラーメイドされ得る。
【０１２８】
抗体またはその断片は、固定の用量として、またはｍｇ／ｋｇ用量で、投与され得る。用量は、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片に対する抗体の産生を低減または回避するためにも選択され得る。投薬レジメンは、所望の応答、例えば、治療的応答または組合せの治療効果を提供するために調整される。一般に、抗体またはその断片（および任意選択で第２の薬剤）の用量が、生体利用可能な量の薬剤を対象に提供するために使用され得る。例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が投与され得る。他の用量もまた使用され得る。ある特定の実施形態では、抗体またはその断片による処置を必要とする対象には、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の用量の抗体またはその断片が投与される。一部の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片による処置を必要とする対象には、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ  １０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの用量の抗体またはその断片が投与される。具体的な実施形態では、抗体またはその断片は、１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与される。別の実施形態では、抗体またはその断片は、４ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの間の用量で静脈内投与される。
【０１２９】
組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍｌまたは約１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍｌまたは約５０〜２５０ｍｇ／ｍＬまたは約１００〜１５０ｍｇ／ｍｌまたは約１００〜２５０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその断片を含み得る。
【０１３０】
投薬単位形態または「固定の用量」とは、本明細書で使用する場合、処置される対象にとっての単位投薬量として適した物理的に別個の単位を指す；各単位は、必要な薬学的担体と関連して、および任意選択で他の薬剤と関連して、所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の抗体またはその断片を含有する。単一または複数の投薬量が与えられ得る。あるいは、またはさらに、抗体またはその断片は、持続注入を介して投与され得る。
【０１３１】
抗体またはその断片の用量は、例えば、１日に１回もしくは２回、または１週間に約１〜４回、または好ましくは毎週、隔週（２週間毎）、３週間毎、毎月、例えば、約１〜１２週間の間、好ましくは２〜８週間の間、より好ましくは約３〜７週間の間、さらにより好ましくは約４、５もしくは６週間にわたって、例えば、少なくとも２用量、３用量、５用量、１０用量もしくはそれよりも多くの用量を包含するのに十分な期間（処置過程）にわたって定期的な間隔で、投与され得る。対象を効果的に処置するために必要な投薬量およびタイミングに影響し得る因子には、例えば、疾患または障害の段階または重症度、製剤、送達経路、以前の処置、対象の総体的な健康および／または年齢、ならびに存在する他の疾患が含まれる。さらに、治療有効量の化合物による対象の処置は、単一の処置を含み得、または好ましくは、一連の処置を含み得る。
【０１３２】
対象が本明細書に記載される障害を発症するリスクがある場合、抗体またはその断片は、例えば、予防手段として、障害の完全な発生前に投与され得る。そのような予防的処置の持続時間は、単一の投薬量の抗体もしくはその断片であり得、または処置は継続し得る（例えば、複数の投薬量）。例えば、障害のリスクがある対象または障害の素因を有する対象は、障害の発生または劇症化を予防するために、数日間、数週間、数カ月間またはさらには数年間にわたって抗体またはその断片で処置され得る。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、抗体またはその断片は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬ（例えば、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１７５ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２２５ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、２７５ｍｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍＬ、３２５ｍｇ／ｍＬ、３５０ｍｇ／ｍＬ、４００ｍｇ／ｍＬ、４５０ｍｇ／ｍＬ）の濃度で皮下投与される。一実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片は、５０ｍｇ／ｍＬの濃度で皮下投与される。別の実施形態では、抗体またはその断片は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬの濃度で静脈内投与される。一実施形態では、抗体またはその断片は、５０ｍｇ／ｍＬの濃度で静脈内投与される。
【０１３４】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片は、所望により、単独で、または本明細書に記載されるがんもしくは免疫学的障害を処置するために有用な他の治療剤と組み合わせて（即ち、共投与または逐次投与によって）、それを必要とする患者に投与され得る。そのような治療剤は、性質が化学物質または生物製剤であり得る。用語「生物製剤」または「生物学的薬剤」とは、治療薬としての使用が意図される、生きた生物および／またはそれらの産物から作製される任意の薬学的に活性な薬剤を指す。一実施形態では、さらなる治療的タンパク質が、本発明の医薬組成物中に含まれる。
【０１３５】
上記範囲の中間の用量もまた、本発明の範囲内であることが意図される。対象には、そのような用量が毎日、１日おきに、毎週、または実験的分析によって決定される任意の他のスケジュールに従って投与され得る。例示的な処置は、延長された期間にわたる、例えば、少なくとも６カ月間の、複数の投薬量での投与を可能にする。一部の方法では、２つ以上のポリペプチドが同時に投与され得、この場合、投与される各ポリペプチドの投薬量は、示された範囲内に入る。
【０１３６】
本発明のポリペプチドは、複数回投与され得る。単一の投薬量間の間隔は、１日、１週間、１カ月または１年であり得る。間隔は、患者における改変されたポリペプチドまたは抗原の血中レベルを測定することによって示される場合、不規則であってもよい。あるいは、ポリペプチドは、徐放性製剤として投与され得、この場合、あまり頻繁な投与は要求されない。投薬量および頻度は、患者におけるポリペプチドの半減期に依存して変動する。
【０１３７】
投与の投薬量および頻度は、その処置が予防的であるか治療的であるかに依存して変動し得る。予防的適用では、本発明のポリペプチドまたはそれらのカクテルを含む組成物は、患者の耐性を増強するためまたは疾患の影響を最小化するために、まだ疾患状態にはない患者に投与される。そのような量は、「予防有効用量」と定義される。比較的低い投薬量が、長期間にわたって比較的低頻度の間隔で投与される。一部の患者は、残りの人生にわたって処置を受け続ける。
【０１３８】
使用の方法
本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、疾患または状態を有する対象を処置する方法において有用であり得る。疾患または状態には、がんが含まれ得るがこれに限定されない。
【０１３９】
例えば、本発明は、抗ＬＩＬＲＢ３活性を有するアンタゴニストまたはアゴニストを含む抗ＬＩＬＲＢ３の使用を含む。本発明は、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を対象に投与するステップを含み、ヒトおよび獣医学の両方での治療的使用を企図する。説明的な獣医学対象には、哺乳動物対象、例えば、家畜および飼育動物が含まれる。
【０１４０】
哺乳動物において炎症促進性免疫応答を刺激する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を哺乳動物に投与するステップを含む、方法が、本明細書に提供される。
【０１４１】
一部の実施形態では、哺乳動物における炎症促進性免疫応答における増加は、（例えば、処置前の哺乳動物における１種もしくは複数の炎症促進性タンパク質のレベルおよび／または哺乳動物におけるエフェクターＴ細胞のレベルと比較した、あるいは健康な対照哺乳動物中に存在する１種もしくは複数の炎症促進性タンパク質のレベルおよび／またはエフェクターＴ細胞のレベルと比較した）哺乳動物における１種もしくは複数の炎症促進性タンパク質のレベルにおける増加（例えば、Ｃ反応性タンパク質、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１７およびマトリックスメタロプロテアーゼのうち１種または複数における増加）または哺乳動物におけるエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）の数における増加として検出され得る。
【０１４２】
哺乳動物において処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。
【０１４３】
一部の実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、がん（例えば、本明細書に記載される種々の型のがんのいずれか）を有すると以前に診断されている。がんの非限定的な例には、膀胱がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、肺がん、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、甲状腺がん、胆管がん、骨がん、脳がん（brain cancer）、子宮頚がん、心腫瘍、食道がん、眼がん、胆嚢がん、胃がん、頭頚部がん、心臓がん、肝臓がん、喉頭がん、白血病、口唇がんおよび口腔（oral cavity）がん、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、口腔（mouth）がん、鼻腔がんおよび副鼻腔がん、鼻咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、卵巣がん、陰茎がん、下垂体腫瘍、網膜芽細胞腫、肉腫、皮膚がん、精巣がん、咽喉がん、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、腟がんならびに外陰部がんが含まれる。がんを有する哺乳動物は、以下の症状のうち１つまたは複数を提示し得る：疲労、皮膚の下に感じられるしこりまたは肥厚、体重変化、皮膚変化（例えば、皮膚の黄変、黒ずみもしくは発赤、治癒しないヒリヒリ感、または既存の黒子における変化）、排便習慣または排尿習慣における変化、持続性の咳嗽、嚥下困難、嗄声、食後の持続性の消化不良または不快感、持続性の説明できない筋肉または関節の疼痛、および説明できない持続性の発熱または寝汗。哺乳動物が経験する特定の症状は、がんの特定の型に依存する。哺乳動物は、哺乳動物におけるがんの１つまたは複数の症状（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知のがんの症状のいずれか）の観察に基づいて、がんを有すると診断され得る。哺乳動物はまた、画像化（例えば、核磁気共鳴画像法、コンピュータ断層撮影および／またはＸ線）および／または組織生検結果に基づいて、がんを有すると診断され得る。哺乳動物はまた、分子診断試験を使用することに基づいて（例えば、前立腺特異的抗原、または乳がん易罹患性２タンパク質、乳がん易罹患性１タンパク質もしくは腫瘍サプレッサータンパク質（例えば、ｐ５３）における変異の検出に基づいて）、がんを有すると診断され得る。がんを有すると哺乳動物を診断するためのさらなる方法は、当該分野で公知である。がんの処置の有効性は、哺乳動物におけるがんの症状（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知のがんの症状のいずれか）の数における減少ならびに／または哺乳動物におけるがんの１つもしくは複数の症状（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の症状のいずれか）の頻度および／もしくは重症度における減少によって、検出され得る。哺乳動物におけるがんの有効な処置は、哺乳動物における腫瘍の成長の速度における（例えば、処置の投与前の哺乳動物における腫瘍成長の速度と比較した、または処置を投与されていないもしくは異なる処置を投与された同じ型のがんを有する対照哺乳動物と比較した）減少によっても見積ることができる。哺乳動物におけるがんの有効な処置は、哺乳動物におけるがんの寛解の長さにおける（例えば、処置を投与されていないまたは異なる処置を投与された同じ型のがんを有する対照哺乳動物と比較した）増加によっても観察され得る。
【０１４４】
哺乳動物は、雌性でも雄性でもよく、成体でも若年（例えば、乳児）でもよい。哺乳動物は、化学療法剤および／もしくは鎮痛薬で以前に処置されていてもよく、ならびに／または化学療法剤および／もしくは鎮痛薬に良好に応答しなかったものであってもよい。哺乳動物は、非転移性がんを有し得る。一部の実施形態では、哺乳動物は、転移性がんを有し得る。哺乳動物が成体である場合、この哺乳動物は、例えば、１８〜２０歳の間、または少なくとも約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５歳、または少なくとも１００歳もしくは約１００歳であり得る。
【０１４５】
哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を哺乳動物に投与するステップを含む、方法もまた提供される。
【０１４６】
治療のためのデバイスおよびキット
本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を含む医薬組成物は、医療用デバイスを用いて投与され得る。携帯性、室温貯蔵、ならびに、例えば、医療施設および他の医療設備から離れた現場で訓練を受けていない対象または救急隊員によって緊急事態において使用できるような使用の容易さなどの特色を有するデバイスが設計され得る。デバイスは、例えば、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を含む薬学的調製物を貯蔵するための１つまたは複数のハウジングを含み得、かつ１つまたは複数の単位用量の抗体またはその断片を送達するために構成され得る。デバイスはさらに、抗ＬＩＬＲＢ３抗体もしくはその断片もまた含む単一の医薬組成物として、または２つの別々の医薬組成物として、化学療法剤などの第２の薬剤を投与するために構成され得る。
【０１４７】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片は、キット中で提供され得る。一実施形態では、キットは、（ａ）本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を含む組成物を含有する容器、および任意選択で（ｂ）情報資料を含む。情報資料は、本明細書に記載される方法および／または治療的利益のための薬剤の使用に関する、記述的、指導的、販売上のまたは他の資料であり得る。
【０１４８】
ある実施形態では、キットは、本明細書に記載される障害を処置するための第２の薬剤もまた含む。例えば、キットは、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を含む組成物を含有する第１の容器、および第２の薬剤を含む第２の容器を含む。
【０１４９】
キットの情報資料は、その形態が限定されない。一実施形態では、情報資料は、化合物の生産、化合物の分子量、濃度、有効期限についての情報、バッチまたは生産場所情報などを含み得る。一実施形態では、情報資料は、本明細書に記載される疾患を有しているまたはその疾患のリスクがある対象を処置するために、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片を、例えば、適切な用量、剤形または投与様式（例えば、本明細書に記載される用量、剤形または投与様式）で投与する方法に関する。情報は、種々の形式で提供され得、これには、印刷されたテキスト、コンピュータ可読資料、映像記録もしくは音声記録、または例えばインターネット上の実質的な資料へのリンクもしくはアドレスを提供する情報が含まれる。
【０１５０】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片に加えて、キット中の組成物は、他の成分、例えば、溶媒もしくは緩衝剤、安定剤、または防腐剤を含み得る。抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片は、任意の形態、例えば、液体、乾燥もしくは凍結乾燥形態で、好ましくは実質的に純粋および／または無菌で、提供され得る。薬剤が液体溶液中で提供される場合、この液体溶液は、好ましくは、水性溶液である。ある特定の実施形態では、液体溶液中の抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ（例えば、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬおよび２００ｍｇ／ｍＬ）の濃度である。抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片が凍結乾燥産物として提供される場合、この抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片は、約７５ｍｇ／バイアル〜約２００ｍｇ／バイアル（例えば、１００ｍｇ／バイアル、１０８．５ｍｇ／バイアル、１２５ｍｇ／バイアル、１５０ｍｇ／バイアル）である。凍結乾燥粉末は一般に、適切な溶媒の添加によって再構成される。溶媒、例えば、無菌の水または緩衝液（例えば、ＰＢＳ）が、任意選択でキット中に提供され得る。
【０１５１】
キットは、薬剤を含む組成物（単数または複数）のための１つまたは複数の容器を含み得る。一部の実施形態では、キットは、組成物および情報資料のための別々の容器、仕切りまたは区画を含有する。例えば、組成物は、ビン、バイアルまたはシリンジ中に含まれ得、情報資料は、プラスチックスリーブまたはパケット中に含まれ得る。他の実施形態では、キットの別々の要素が、単一の分割されていない容器内に含有される。例えば、組成物は、情報資料がラベルの形態で張り付けられたビン、バイアルまたはシリンジ中に含有される。一部の実施形態では、キットは、薬剤の１つまたは複数の単位剤形（例えば、本明細書に記載される剤形）を各々が含有する複数（例えば、パック）の個々の容器を含む。容器は、組合せ単位投薬量、例えば、抗ＬＩＬＲＢ３抗体またはその断片および第２の薬剤の両方を、例えば所望の比率で含む単位を含み得る。例えば、キットは、例えば、単一の組合せ単位用量を各々が含有する、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、ブリスターパックまたは医療用デバイスを含む。キットの容器は、気密性、防水性（例えば、湿気または蒸発における変化に対して不透過性）および／または遮光性であり得る。
【０１５２】
キットは、任意選択で、組成物の投与に適切なデバイス、例えば、シリンジまたは他の適切な送達デバイスを含む。デバイスは、１種もしくは両方の薬剤が事前に充填されて提供され得、または空であるが充填に適切であり得る。
【実施例】
【０１５３】
本発明は、特許請求の範囲に記載される発明の範囲を限定しない以下の実施例にさらに記載される。
【０１５４】
抗体精製
クローン性ハイブリドーマ細胞を、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ａ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養し、その後、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ−ＳＦＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して無血清条件に適応させた。ハイブリドーマ細胞を、５０ｍＬのＨｙｂｒｉｄｏｍａ  ＳＦＭ中で２週間、または培地が使い果たされるまで拡大増殖させた。抗体含有上清を遠心分離によって採取し、その後、無菌で０．２２ミクロンで濾過した。抗体を、１００ｋＤａの公称分子量限界を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心分離フィルター濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濃縮した。次いで、濃縮された抗体を、製造業者の指示書に従ってＮａｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ／Ｇ  Ｓｐｉｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して精製した。精製された抗体を、Ｚｅｂａ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して脱塩した。
【０１５５】
ハイブリドーマＩｇＬおよびＩｇＨ鎖の配列決定
ハイブリドーマクローンから、Ｔｒｉｚｏｌ抽出を使用してＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡを、製造業者の指示書に従ってＯｎｅＳｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、精製されたＲＮＡから合成した。Ｉｇ重鎖および軽鎖のＰＣＲを、縮重プライマーを使用して実施した。増幅されたＰＣＲ産物を引き続いて配列決定し（ＧｅｎｅＷｉｚ）、Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＳｙｓｔｅｍのＩＭＧＴ／Ｖ−ＱＵＥＳＴを使用して検証した。
【０１５６】
ハイブリドーマの配列
マウスカッパおよび重鎖Ｉｇ遺伝子に隣接する縮重プライマーを使用して、重鎖および軽鎖遺伝子ならびに相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列を、示されたクローンについて決定した。初期継代ハイブリドーマから単離された総ＲＮＡを、ＲＴ−ＰＣＲを使用してｃＤＮＡに変換し、その後重鎖および軽鎖遺伝子をＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ産物を、Ｓａｎｇｅｒ配列決定によって配列決定し、その後、データベースからの公知の対立遺伝子フレームワークに対してＩｇ−ＢＬＡＳＴ比較した。生産的抗体配列は、最も近縁のアラインしたマウス対立遺伝子およびＣＤＲ１〜３を示す表３に列挙される。
【０１５７】
低用量ＬＰＳ刺激の存在下で、抗ＬＩＬＲＢ３アンタゴニストは、総末梢血単核球（ＰＢＭＣ）からのＴＮＦアルファ分泌を促進するが、抗ＬＩＬＲＢ３アゴニストは、ＩＬ−１０分泌を促進する。本発明者らは、炎症条件下で総ＰＢＭＣを用いて、生物学的機能についていくつかのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）をスクリーニングした。アンタゴニスト性の機能的特徴を有するｍＡｂは、低用量のＬＰＳ刺激下で総ＰＢＭＣからのＴＮＦアルファ産生をさらに促進できるが、ＩＬ−１０分泌には影響しない。他方、アゴニストクローンは、ＩＬ−１０産生を増加させることができる（図１）。ＴＮＦアルファ分泌を誘導できるこれらのクローンを、アンタゴニストとみなしたが、ＩＬ−１０を誘導するクローンはアゴニストとみなす。
【０１５８】
[実施例１]
抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、ＴＮＦアルファ分泌をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートする。
健康なドナー由来の総ＰＢＭＣを、抗ＬＩＬＲＢ３ハイブリドーマ上清または精製された抗体（５マイクログラム／ｍｌ）で２４時間処理し、その後ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で６時間刺激した。上清を収集し、ＴＮＦアルファ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。アイソタイプ処理を対照として使用した。抗ＬＩＬＲＢ  ｍＡｂを、ＴＮＦアルファ放出を抑制するクローンから、ＴＮＦアルファ分泌を増強するクローンの順でランキングした。図１ＡからのＴＮＦ−αの産生に基づくクローンランキング。図１ＡからのＴＮＦアルファレベルにおける全体的差異は、図１Ｂ中に（即ち、バックグラウンドのＴＮＦ−αを差し引いて）示され、ＴＮＦアルファ放出における相対的変化倍数は、図１Ｃに示される。
【０１５９】
[実施例２]
抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、ＩＬ−１０産生をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートする。
健康なドナー由来の総ＰＢＭＣを、抗ＬＩＬＲＢ３ハイブリドーマ上清または精製された抗体（５マイクログラム／ｍｌ）で２４時間処理し、その後ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で６時間刺激した。上清を収集し、ＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。アイソタイプ処理を対照として使用した。ＩＬ−１０濃度における全体的差異は、対照サンプルによって決定されるバックグラウンドのＩＬ−１０産生を差し引いて図２Ａに示され、相対的変化倍数は図２Ｂに示される。図２Ａおよび図２Ｂの各々について、クローンは、図１Ａに示されるクローンランキングに従って順序付けられる。
【０１６０】
Ｍ１／Ｍ２分化に対する抗ＬＩＬＲＢ３の影響。
ＣＤ３３＋骨髄細胞を、健康なＰＢＭＣから選別し、Ｍ−ＣＳＦ  ５０ｎｇ／ｍｌによって単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）として５日間分化させた。次いで、ＭＤＭを、インターフェロンガンマ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下Ｍ１極性化条件下で２日間、アンタゴニスト活性を有する抗ＬＩＬＲＢ３  Ａｂおよびアゴニスト活性を有する抗ＬＩＬＲＢ３  Ａｂ（５ｕｇ／ｍｌ）で処理した。Ｍ１／Ｍ２分化に関与するいくつかの表面マーカー（ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＰＤ−Ｌ１、ＨＬＡ−ＤＲ）およびヒトＣＤ３３＋ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋ＭＤＳＣ集団が（図２Ｃ）に示される。
【０１６１】
[実施例３]
抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮガンマ分泌をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートする。
健康なドナー由来のＰＢＭＣを、抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂ上清または精製されたｍＡｂ（５マイクログラム／ｍｌ）の存在下で、低用量（０．３マイクログラム／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で刺激した。３日間の処理後、Ｔ細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積った。チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。図１からのＴＮＦアルファランキングに基づくクローン順序が示される。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）における相対的変化倍数は図３Ａに示される。
【０１６２】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、ＩＦＮガンマ放出をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートする。
健康なドナー由来の総ＰＢＭＣを、抗ＬＩＬＲＢ３ハイブリドーマ上清または精製された抗体（５マイクログラム／ｍｌ）で２４時間処理し、その後ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で６時間刺激した。上清を収集し、ＩＦＮガンマ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した（図３Ｂ）。アイソタイプ処理を対照として使用した。
【０１６３】
抗ＬＩＬＲＢ３抗体は、同種Ｔ細胞増殖をｉｎ  ｖｉｔｒｏで阻害した。
精製されたヒトＴ細胞（応答側）を、ＣＦＳＥで標識し、ＩｇＧアイソタイプ対照または示されたＬＩＬＲＢ３抗体（５マイクログラム／ｍｌ）の存在下で、照射された（３０Ｇｙ）無関係のドナーＰＢＭＣ（刺激側）で刺激した。応答側／刺激側の比率は、１／３である。５日間の共培養後、生存ＣＤ４  Ｔ細胞（上パネル）およびＣＤ８  Ｔ細胞（下パネル）を、フローサイトメトリーによって分析した。代表的なフロープロットを、ＣＦＳＥ希釈、および分裂した細胞のパーセントとして示した。
【０１６４】
ＯＫＴ３媒介性のＴ細胞増殖およびＩＦＮガンマ分泌は、アンタゴニストクローンによって増大されたが、アゴニストクローンは、増殖およびＩＮＦガンマ産生を抑制し、または異なる健康なドナーに対して影響を与えない（図３Ａおよび３Ｂ）。混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の抗体媒介性の抑制が示された（図３Ｃ）。
【０１６５】
[実施例４]
白血病細胞の増殖は、抗ＬＩＬＲＢ３によって抑制された。
本発明者らは、骨髄性白血病細胞の増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂの効果をさらに試験した。図４に示されるように、Ｕ９３７およびＨＬ６０細胞の増殖活性は、アンタゴニストクローンによって阻害された。
【０１６６】
ＬＩＬＲＢ３ｈｉ  Ｕ９３７白血病細胞を、対照ＩｇまたはｍＡｂ（５マイクログラム）で４日間処理した。Ｕ９３７細胞の増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積った。細胞を、培養の最後の８時間にわたって［３Ｈ］−チミジンでパルスした。対照Ｉｇに対する相対的変化倍数が（図４Ａ）に示される。
【０１６７】
ＨＬ６０細胞を、３日間にわたってＩＮＦガンマで事前処理し、その後、対照ＩｇまたはｍＡｂ（５マイクログラム／ｍｌ）で２〜５日間さらに処理した。ＨＬ６０細胞の増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって測定した。細胞を、培養の最後の８時間にわたって［３Ｈ］−チミジンでパルスした。生データが（図４Ｂ）に示され、細胞増殖（ＣＰＭ）における相対的変化倍数が（図４Ｃ）に示される。
【０１６８】
[実施例５]
ＬＩＬＲＢ３アンタゴニストは、ＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１乳がん細胞の遊走能を阻害する。
ＬＩＬＲＢ３＋乳がん細胞は、増加した浸潤能および活性化されたＲｈｏＡを示し、この集団がより高い遊走および浸潤活性を有する可能性があることを示した。トランスウェル浸潤アッセイの結果（図５Ａ）から、ＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１細胞のトランス遊走は、５マイクログラム／ｍｌ濃度のアンタゴニストクローン８Ｈ１０およびアゴニストクローン８Ｄ５によって実質的に阻害されたが、他のクローンによっては阻害されなかった。さらに、活性化されたＲｈｏＡもまた、アンタゴニストクローン８Ｈ１０処理したＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１乳がん細胞において減少した。対照的に、１２Ｃ５、６Ｆ３および１２Ｂ１クローンは、ＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１のＲｈｏＡ活性化に対してほとんど影響を有さなかった（図５Ｂ）。このデータは、ＬＩＲＢ３の遮断が、ＬＩＬＲＢ３＋がん細胞集団の増生（outgrowth）、浸潤および転移を阻害し得るという本発明者らの仮説を支持している。
【０１６９】
トランスウェル浸潤アッセイを実施して、ＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１の遊走／浸潤活性を評価した。３×１０５個の細胞を、抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂまたは対照Ｉｇ（５マイクログラム／ｍｌ）の存在下で上チャンバー中に播種した。２４時間後、トランスウェルメンブレンを、クリスタルバイオレットで染色し、１視野当たりの細胞を計数した。下パネルに、遊走した細胞を示す写真が示される（２０×）（図５、パネルＡ）。活性化されたＲｈｏＡの発現を、種々の抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂで処理したＬＩＬＲＢ３＋ＭＤＡＭＢ２３１細胞間で比較した（図５、パネルＢ）。
【０１７０】
ＬＩＬＲＢ３アンタゴニストは、骨髄性白血病の成長をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害する。
本発明者らは、異種移植マウスモデルにおいて、Ｕ９３７白血病細胞に対する抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂの抗腫瘍効果をさらに評価した。本発明者らは、抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂ（クローン８Ｈ１０、操作されたＩｇＧ１）の抗腫瘍効果を試験し、アンタゴニストクローン８Ｈ１０が、Ｕ９３７細胞に対してもｉｎ  ｖｉｖｏで強い抗腫瘍効果を発揮したことを見出した（図６）。これらのデータは、ＬＩＬＲＢ３アンタゴニスト抗体が腫瘍成長を阻害できることを示唆している。
【０１７１】
ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに、２×１０６個のＵ９３７細胞を皮下移植した。腫瘍サイズが３〜５ｍｍ２に達したところで、抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂ、クローン８Ｈ１０（丸と線）または対照ＩｇＧ１（菱形と線）（１５０マイクログラム／マウス、３日毎）を、Ｉ．Ｖ．注射を介して注入した。腫瘍サイズを見積り、提示した。
【０１７２】
[実施例６]
ヒトＰＢＭＣ増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ３の共刺激効果
健康なドナー由来の１×１０５個の総ＰＢＭＣを、３日間にわたって、抗ＬＩＬＲＢ３  ｍＡｂ上清または精製されたｍＡｂ（５マイクログラム／ｍｌ）、１ｕｇ／ｍｌ  ａ−ＰＤ−１、１ｕｇ／ｍｌ  ４−１ＢＢＬ、１００ｎｇ／ｍｌ  ＯＸ４０Ｌまたは１ｕｇ／ｍｌ  ＧＩＴＲＬの存在下で低用量（０．３マイクログラム／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で刺激した。３Ｈ−チミジン取込みアッセイを実施した。３日間の処理後、Ｔ細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積った。チミジンを、培養の最後の１８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）に対するＣＴＡＤ＿３Ｇ７（図７（Ａ））およびＰ＿２Ｇ１１（図７（Ｂ））の効果が図７に示される。
【０１７３】
実施例１〜６の生データは、表４〜７に提供される。
【０１７４】
表７は、選択された抗ＬＩＬＲＢ３抗体（マウス）について、最も近縁のアラインしたマウス対立遺伝子およびＣＤＲ１〜３を示す。
【０１７５】
【表４−１】
2020511950.tif 000016
【０１７６】
【表４−２】
2020511950.tif 000017
【０１７７】
【表４−３】
2020511950.tif 000018
【０１７８】
【表５−１】
2020511950.tif 000019
【０１７９】
【表５−２】
2020511950.tif 000020
【０１８０】
【表５−３】
2020511950.tif 000021
【０１８１】
【表６−１】
2020511950.tif 000022
【０１８２】
【表６−２】
2020511950.tif 000023
【０１８３】
【表６−３】
2020511950.tif 000024
【０１８４】
【表７−１】
2020511950.tif 000025
【０１８５】
【表７−２】
2020511950.tif 000026
【０１８６】
【表７−３】
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【０１８７】
【表８−１】
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【０１８８】
【表８−２】
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【０１８９】
【表８−３】
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【０１９０】
【表８−４】
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【０１９１】
【表８−５】
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【０１９２】
【表８−６】
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【０１９３】
【表８−７】
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【０１９４】
【表８−８】
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【０１９５】
【表８−９】
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【０１９６】
【表８−１０】
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【０１９７】
【表８−１１】
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【０１９８】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と併せて記載されてきたが、上述の説明は例示を意図し、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲を限定しないことが理解される。他の態様、利点および改変は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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