(57)【要約】  2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸として公知のSTAT3阻害剤および2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオールから調製される塩が開示される。該塩は水に可溶であり、そして長期の期間安定である。該塩を含有する医薬組成物および乳癌などの癌を予防および治療するために該塩を投与する方法がさらに提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2020513022.tif 000011
の化合物。
【請求項２】
結晶性である請求項１の化合物。
【請求項３】
少なくとも85%純粋である請求項１または２の化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項の化合物および薬学的に許容可能な担体を含有する医薬組成物。
【請求項５】
薬学的に受容可能な担体が水を含む請求項４の医薬組成物。
【請求項６】
0℃未満の温度である請求項４または５の医薬組成物。
【請求項７】
約7のpHを有する請求項４〜６のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項８】
透明溶液である請求項４〜７のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項９】
経口処方物である請求項４〜８のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項１０】
癌の予防に使用するための請求項４〜９のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項１１】
癌の治療に使用するための請求項４〜９のいずれか１項の医薬組成物。
【請求項１２】
癌が、同じタイプの正常組織と比較して増加したSTAT3活性および/または増加したKi67発現を有する請求項１０または１１の使用するための医薬組成物。
【請求項１３】
癌が、白血病、多発性骨髄腫、膵臓癌、頭頚部癌、肝臓癌、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、および前立腺癌から選ばれる請求項１０〜１２のいずれか１項の使用するための医薬組成物。
【請求項１４】
癌が膵臓癌、肝臓癌、または乳癌である請求項１３の使用するための医薬組成物。
【請求項１５】
癌が乳癌である請求項１４の使用するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年４月５日出願の米国特許仮出願62/481,960の利益を主張し、全ての目的についてその全体が参考として援用される。
連邦支援の研究または開発に関する陳述
本発明は、プロジェクト番号110775.05.015.04 (A)のもと、国立衛生研究所、国立がん研究所による政府の支援でなされた。政府は、本発明においてある一定の権利を有する。
発明の背景
化合物2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸(2-ヒドロキシ-4-(2-(トシルオキシ)アセトアミド)安息香酸としても知られる):
【０００２】
【化１】
2020513022.tif 000002
【０００３】
は、当該分野において口語的にNSC-74859およびS3I-201として知られており、そしてシグナル伝達物質の強力な阻害剤および転写3(STAT3)DNA-結合活性活性化剤(インビトロで86 ± 33 μMのIC50)である。特に、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸は、活性化STAT3を発現する腫瘍細胞におけるアポトーシスを誘起する。結果として、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸は、種々の癌の治療において効果的であると示されている。しかし、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸は、水およびエタノールに難溶性であり、従って2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸の実用的な投与は容易に実行可能ではない。
【０００４】
従って、改善された投与および薬効で癌を治療する方法を提供するために、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸を活性剤として含む改善された処方物の満たされていない要求が残る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の簡単な要旨
本発明は、水に容易に可溶であり安定な医薬組成物を提供する2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸の新規な塩を提供する。特に、本発明は、式：
【０００６】
【化２】
2020513022.tif 000003
【０００７】
（本明細書中、「化合物１」と指定される）の化合物を提供する。
【０００８】
本発明はさらに、化合物１および薬学的に許容可能な担体を含有する医薬組成物を提供する。
【０００９】
化合物１を含有する医薬組成物で癌を予防および治療することを含む、癌治療方法もまた提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、LiOH(図1A)、NaOH(図1B)、K2CO3(図1C)のいずれかの存在下での2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸、または水中での2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオール(図1D)の安定性を説明する一連の高速液体クロマトグラフィー(HPLC)クロマトグラムである。データを生成するために使用した条件下、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸は8.6分で溶出する。
【図２】図2は、トシレート基の喪失による2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸の分解を説明する反応スキームである。
【図３】図3は、本発明の実施態様における化合物１の合成を説明する化学スキームである。
【図４】図4は、治療２週間後にコントロール（投与なし）と比較した、化合物１の水溶液の、種々の用量(体重500 mg/kg(BW)/日、250 mg/kg BW/日、または125 mg/kg BW/日)での雌マウス乳癌ウイルス(MMTV)/ニューマウス(neu mice)の正常乳腺におけるKi67発現を阻害する能力を示す棒グラフである。
【図５】図5は、治療２週間後にコントロール（投与なし）と比較した、化合物１の水溶液の、種々の用量(500 mg/kg(BW)/日、250 mg/kg BW/日、または125 mg/kg BW/日)での雌MMTV/ニューマウスの正常乳腺におけるSTAT3発現を阻害する能力を示す棒グラフである。
【図６】図6は、化学的予防研究の間の、雌MMTV/ニューマウスの経時（日齢）での体重増加（グラム）に対する種々の用量の化合物１の効果を実証するグラフである。化合物１は、マウスに５０日齢から研究の終了(4か月の治療)まで投与された。投与用量は、投与薬物なしのコントロール(◆)に対し、500 mg/kg BW/日(●)、250 mg/kg BW/日(■)、および125 mg/kg BW/日(▲)であった。
【図７】図7は、経時（日）での雌MMTV/ニューマウスのジメチルベンズアントラセン(DMBA)誘導乳癌の出現に対する種々の用量の化合物１の効果を実証するグラフである。化合物１は、マウスに５０日齢から研究の終了(4か月の治療)まで投与された。投与用量は、投与薬物なしのコントロール(◆)に対し、500 mg/kg BW/日(●)、250 mg/kg BW/日(■)、および125 mg/kg BW/日(▲)であった。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
発明の詳細な説明
本発明は、式
【００１２】
【化３】
2020513022.tif 000004
【００１３】
の化合物を提供する。
【００１４】
化合物１は、驚くべきことに水に非常に可溶性であることが発見され、そして改善された安定性を有する透明な処方物を提供することができる2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸の2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオールとの塩である。
【００１５】
米国特許7,960,434は、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸の塩を広範に記載している。しかし、米国特許7,960,434は、2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオールから塩を調製することを開示も示唆もしていない。
【００１６】
化合物１は、アモルファス、結晶性または半結晶性であり得る。本明細書中で使用される用語「結晶性」は、秩序構造を有する物質を言い、そして鋭い融点を有し、そして融点まで温度上昇下で固体のままであり、この時点で低粘度液体が形成される。用語「アモルファス」は、ランダム構造（例えば、繰り返し配置を有しない）を有する物質を言い、一方、「半結晶性」は、結晶性部分およびアモルファス部分の両方の組み合わせを有する物質を言う。ある実施態様において、化合物１は結晶性である。
【００１７】
治療方法において高度に効果的であるために、化合物１はできる限り純粋な形態で使用されるべきである。精製技術は、当該分野で公知であり、例えば、結晶化、抽出、濾過、クロマトグラフィー、蒸留、および昇華を含む。化合物１の純度は、例えば、融点を測定することによって試験され得る。典型的には、化合物１は、少なくとも85%純粋(例えば、少なくとも90%純粋、少なくとも92%純粋、少なくとも95%純粋、少なくとも96%純粋、少なくとも97%純粋、少なくとも98%純粋、または少なくとも99%純粋)である。本発明のある局面において、化合物１は少なくとも98%純粋である。
【００１８】
基本の化合物2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸は、市販で購入可能であるか、またはルーチンの化学手順を用いて調製され得る。例えば、米国特許7,960,434（この開示は参考として援用される）のスキーム１に記載の合成を参照。
【００１９】
2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオールは、市販入手可能であり、そして例えば、TRIZMATMまたはトリス塩基(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)として知られている。
【００２０】
本明細書中に記載の方法は、化合物１を医薬組成物の形態で投与することを含む。特に、医薬組成物は、有効量の化合物１および薬学的に許容可能な担体を含有する。本明細書中に記載の薬学的に受容可能な賦形剤、例えば、ビヒクル、アジュバント、担体、または希釈剤は、当業者に周知であり、そして容易に入手可能である。典型的には、薬学的に受容可能な担体は、活性化合物に対して化学的に不活性であるもの、および使用条件下で有害な副作用または毒性を有しないものである。
【００２１】
医薬組成物は、経口、舌下、経皮、皮下、局所、上皮または皮膚粘膜を介した吸収、静脈内、鼻腔内、動脈内、筋肉内、腫瘍内、腫瘍周辺、腹腔内、クモ膜下、直腸、膣内、またはエアロゾル処方物として投与され得る。いくつかの局面において、医薬組成物は経口または静脈内投与される。好ましくは、医薬組成物は経口処方物である。
【００２２】
いずれかの実施態様に従って、化合物１はその必要がある被検体に経口投与され得る。経口投与に適した処方物は、(a)液体溶液、例えば、水、生理食塩水、またはオレンジジュースなどの希釈剤に溶解した有効量の化合物、そしてシクロデキストリン(例えば、α-、β-、またはγ-シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン)またはポリエチレングリコール(例えば、PEG400)などの添加材を含み得る;(b)カプセル、小袋、錠剤、ドロップ、およびトローチ、それぞれ所定量の活性成分を固体または顆粒として含む;(c)粉剤;(d)適切な液体中の懸濁剤;および(e)適切な乳化剤およびゲルからなり得る。
【００２３】
液体処方物は、薬学的に受容可能な界面活性剤、懸濁化剤、または乳化剤を添加したまたは添加していないのいずれかの水およびアルコール（例えば、エタノール、ベンジルアルコール、およびポリエチレンアルコール）などの希釈剤を含み得る。いくつかの実施態様において、薬学的に受容可能な担体は、エタノール、水、またはエタノールと水との組み合わせを含む。好ましくは、薬学的に受容可能な担体は水を含む。ある局面において、医薬組成物は透明溶液(例えば、透明水溶液)である。
【００２４】
カプセル形態は、例えば、界面活性剤、潤滑剤、および不活性充填剤（ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、およびコーンスターチなど）を含む通常のハードまたはソフトシェルゼラチンタイプであり得る。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、じゃがいもでんぷん、アルギン酸、微結晶性セルロース、アカシア、ゼラチン、グアーガム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、および他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存料、香味剤、および薬理学的に適合可能な担体の1種以上を含み得る。ドロップ形態は、香味料、通常はスクロースおよびアカシアまたはトラガカント中の活性成分を含み得、ならびにトローチは、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤中の活性成分を含み、乳化剤、ゲルなどは、活性成分に加えて当該分野で公知の担体を含む。
【００２５】
非経口投与に適した処方物は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、および処方物を意図する受益者の血液と等張にする溶質を含み得る、水性および非水性の、等張の滅菌注射溶液、および懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および保存料を含み得る、水性および非水性の滅菌懸濁液を含む。化合物１は、薬学的に許容可能な界面活性剤(例えば、石鹸または洗浄剤)、懸濁化剤(例えば、ペクチン、カーボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはカルボキシメチルセルロース)、または乳化剤および他の薬学的アジュバントを添加したまたは添加していない、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連する糖溶液、アルコール(例えば、エタノール、イソプロパノール、またはヘキサデシルアルコール)、グリコール(例えば、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール)、グリセロールケタール(例えば、2,2-ジメチル-1,3-ジオキソラン-4-メタノール)、エーテル(例えば、ポリ(エチレングリコール)400)、オイル、脂肪酸、脂肪酸エステルまたはグリセリド、またはアセチル化脂肪酸グリセリドを含む滅菌液体または液体混合物などの薬学的担体中、生理学的に受容可能な希釈剤中で投与され得る。
【００２６】
非経口処方物に使用され得るオイルは、石油、動物、植物、または合成オイルを含む。オイルの具体例は、ピーナッツ、大豆、ゴマ、綿実、コーン、オリーブ、ワセリン、および鉱油を含む。非経口処方物における使用に適した脂肪酸は、オレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸を含む。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルは、適切な脂肪酸エステルの例である。非経口処方物における使用に適した石鹸は、脂肪酸アルカリ金属塩、アンモニウム塩、およびトリエタノールアミン塩を含み、そして適切な洗浄剤は、(a)例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハライドおよびアルキルピリジニウムハライドなどのカチオン性洗浄剤、(b)例えば、アルキル、アリール、およびオレフィンスルホネート、アルキル、オレフィン、エーテル、およびモノグリセリドサルフェート、およびスルホスクシネートなどのアニオン性洗浄剤、(c)例えば、脂肪酸アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミド、およびポリオキシエチレン-ポリプロピレンコポリマーなどの非イオン性洗浄剤、(d)例えば、アルキル-ベータ-アミノプロピオネート、および2-アルキル-イミダゾリン４級アンモニウム塩などの両性洗浄剤、および(3)それらの混合物を含む。
【００２７】
非経口処方物は、典型的には、溶液中約0.5〜約25重量%の化合物１を含む。適切な保存料および緩衝剤は、このような処方物において使用され得る。注射部位での刺激を最小限にするまたは除去するために、このような組成物は、約12〜約17の親水性-親油性バランス(HLB)を有する１種以上の非イオン性界面活性剤を含み得る。このような処方物中の界面活性剤の量は、約5〜約15重量%の範囲である。適切な界面活性剤は、ソルビタンモノオレエートなどのポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびプロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合によって形成されるエチレンオキシドと疎水性塩基との高分子量付加物を含む。非経口処方物は、アンプルおよびバイアルなどの単回投与または多回投与密封容器中に存在し得、そして使用直前に注射用滅菌液体担体(例えば、水)の添加のみを必要とする凍結乾燥（凍結乾燥）条件で保存され得る。即時注射溶液および懸濁液は、前述の種類の滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調製され得る。
【００２８】
注射可能組成物用の効果的な薬学的担体についての要件は、当業者に周知である。Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Co., Philadelphia, Pa., Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982)、およびASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)を参照。
【００２９】
局所適用される組成物は、一般的に液体(例えば、マウスウォッシュ)、クリーム、ペースト、ローション、およびゲルの形態である。局所投与は、口腔、口腔上皮、口蓋、歯肉、および鼻粘膜を含む口腔粘膜への適用を含む。担体は液体、固体または半固体であり得る。実施態様において、組成物はマウスウォッシュなどの水溶液である。あるいは、組成物は、種々の成分についての分散液、乳化液、ゲル、ローションまたはクリームビヒクルであり得る。１つの実施態様において、第１のビヒクルは、水または実質的に中性であるかまたは実質的に中性にされた生体適合性溶媒である。液体ビヒクルは、所望のpH、コンシステンシー、および粘度を得るための当該分野で公知の種々の乳化剤または分散剤を有する、抗刺激性の緩衝剤、アルコール、グリセリン、および鉱油などの他の物質を含み得る。組成物は、粉末または顆粒などの固体として製造され得ることが可能である。固体は、直接適用され得るかまたは使用前に水または生体適合性溶媒中に溶解され、実質的に中性(例えば、約pH 7)であるかまたは実質的に中性にされ、そして次いで標的部位に適用され得る溶液を形成し得る。本発明の実施態様において、皮膚への局所適用のためのビヒクルは、水、緩衝化溶液、種々のアルコール、グリセリンなどのグリコール、脂肪酸、鉱油などの液体物質、ホスホグリセリド、コラーゲン、ゼラチン、およびシリコーンベースの物質を含み得る。
【００３０】
実施態様において、担体および存在する任意の他の賦形剤を含む医薬組成物(例えば、水溶液)中の化合物１の溶解度は、少なくとも5 mg/mL、少なくとも10 mg/mL、少なくとも20 mg/mL、少なくとも30 mg/mL、少なくとも40 mg/mL、または少なくとも50 mg/mLである。特に、溶解度は、約40 mg/mL、約45 mg/mL、約50 mg/mL、約55 mg/mL、約60 mg/mL、または約65 mg/mLである。
【００３１】
化合物１を含有する水溶液などの化合物１を含有する医薬組成物は、典型的には、少なくとも1時間(例えば、少なくとも2時間、少なくとも3時間、少なくとも4時間、少なくとも5時間、少なくとも6時間、少なくとも12時間、少なくとも18時間、少なくとも24時間、少なくとも36時間、少なくとも2日、少なくとも2.5日、少なくとも3日、少なくとも3.5日、少なくとも4日、少なくとも4.5日、少なくとも5日、少なくとも5.5日、少なくとも6日、少なくとも6.5日、または少なくとも7日(1週間))安定(例えば、室温および/または室温より低い温度で)である。
【００３２】
長期安定性の増加を助けるために、医薬組成物は、所望であれば、室温よりも低い温度で保存され得、20℃以下、15℃以下、12℃以下、10℃以下、8℃以下、5℃以下、2℃以下、または0℃以下で組成物を保存することを含む。温度の下限は、例えば、-40℃以上、-30℃以上、-20℃以上、-10℃以上、または0℃以上であり得る。前述の終点のいずれか２つを使用して閉じた範囲を定義することができ、または単独で使用して開いた範囲を定義することができる。本発明のある局面において、医薬組成物は担体として水を含有する透明溶液である。好ましくは、このような組成物は、室温より低い温度(例えば、-30℃〜0℃、約0℃、または約-20℃)で保存される。
【００３３】
医薬組成物は、所望の処方物および/または治療のために任意の適切なpHを有し得る。典型的には、医薬組成物は約6-8(例えば、6.0〜8.0の間、6.5〜7.5の間、6.6〜7.4の間、および6.7〜7.3の間)のpHなどの約7のpHを有する。
【００３４】
本発明に従って被検体(例えば、ヒトなどの哺乳動物)に投与される用量は、所望の応答に影響を与えるのに十分であるべきである。当業者は、投薬量が被検体の年齢、状態または病状、疾患体質、遺伝子異常、および体重を含む種々の因子に依存することを認識する。用量のサイズはまた、投与の経路、時期および頻度ならびに化合物１の投与に伴うかもしれない任意の有害な副作用の存在、性質、および程度、および所望の効果によって決定される。種々の状態または病状が複数回投与を含む長期の治療を要求し得ることは、当業者によって認識される。
【００３５】
本発明の方法は、有効量の化合物１を投与することを含む。「有効量」は、個体において意味のある利益、例えば、腫瘍細胞毒性(例えば、増殖の阻害、細胞増殖の減少、癌細胞の生存の阻害、アポトーシスの誘導、増殖の減少、腫瘍(例えば、固体腫瘍)のサイズおよび/または質量の減少)の少なくとも１つの局面の促進、または特定の癌に関連する他の関連する病状の治療、治癒、予防、発症の遅延、危険の減少、中断、または改善を示すのに十分な量を意味する。被検体において観察される意味のある利益は、任意の適切な程度(10%以上、20%以上、30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、または95%以上)であり得る。いくつかの局面において、癌の1つ以上の症候が、化合物１の投与後に予防され、減少され、遅延され、中断され、および/または除去され、それによって癌を少なくともある程度まで有効に予防および/または治療する。特定の実施態様において、被検体へ化合物１を投与すると、癌細胞増殖が予防され、癌細胞の出現が遅延され、癌細胞の数が減少し、および/または癌細胞が縮小しおよび/または殺される。
【００３６】
有効量は、被検体における所望の生物学的効果および治療されるべき状態に依存して変化し得る。この点に関し、化合物１の任意の適切な用量が、治療されるべき癌のタイプに従って被検体(例えば、ヒト)に投与され得る。「有効量」を決定するのに考慮される種々の一般的な検討事項は、当業者に公知であり、そして例えば、Gilman et al., eds., Goodman And Gilman’s: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8th ed., Pergamon Press, 1990;およびRemington’s Pharmaceutical Sciences, 17th Ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990（これらはそれぞれ本明細書中に参考として援用される）に記載されている。化合物１の用量は、望ましくは哺乳動物の体重１キログラム(kg)当たり約0.1 mg(mg/kg)(例えば、約0.5 mg/kg、約0.75 mg/kg、約、約1 mg/kg、約2 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約20 mg/kg、約30 mg/kg、約40 mg/kg、約50 mg/kg、約60 mg/kg、約75 mg/kg、約90 mg/kg、約100 mg/kg、約125 mg/kg、約150 mg/kg、約175 mg/kg、約200 mg/kg、約225 mg/kg、約250 mg/kg、約275 mg/kg、約300 mg/kg、約325 mg/kg、約350 mg/kg、約375 mg/kg、約400 mg/kg)〜約800 mg/kg(例えば、約425 mg/kg、約450 mg/kg、約475 mg/kg、約500 mg/kg、約525 mg/kg、約550 mg/kg、約575 mg/kg、約600 mg/kg、約625 mg/kg、約650 mg/kg、約675 mg/kg、約700 mg/kg、約725 mg/kg、約750 mg/kg、または約775 mg/kg)の範囲である。前述の終点のいずれか２つを使用して閉じた範囲を定義することができ、または単独で使用して開いた範囲を定義することができる。例えば、化合物１の用量は、望ましくは約100 mg/kg/日〜約600 mg/kg/日、約125 mg/kg/日〜約500 mg/kg/日、約200 mg/kg/日〜約550 mg/kg/日、約250 mg/kg/日〜約500 mg/kg/日、約250 mg/kg/日、または約500 mg/kg/日の範囲である。
【００３７】
構成的STAT3活性は、多くのタイプの癌および糖尿病性腎症、２型糖尿病における骨格筋インスリン耐性、子宮内膜症、うつ病、喘息、大腸炎、腎線維症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス(SLE)、アルツハイマー病、ハンチントン病、および自閉症などの他の疾患についてのマーカーである。例えば、Gkouveris et al., Journal of Cancer Therapy, 2015; 6: 709-726, WO 2012/159107、およびWO 2010/062681を参照。癌性細胞に関し、異常STAT3は腫瘍細胞浸潤および転移を促進すると考えられている、例えば、Yue et al., Expert Opinion Investig Drugs, 2009; 18(1): 45-56を参照。従って、本発明のいくつかの局面において、化合物１は、癌細胞などの細胞においてSTAT3 活性を阻害しおよび/または減少させる。
【００３８】
STAT3の阻害は、典型的にはSTAT3リン酸化/活性化の阻止、DNA結合の阻害、またはSTAT3ダイマー形成の阻害による癌の実行可能な治療として、当該分野において記載されている。STAT3活性の抑制は、癌細胞においてアポトーシスを誘導することが示されている。例えば、Gkouveris et al., Journal of Cancer Therapy, 2015; 6: 709-726を参照。従って、化合物１は、癌の治療方法の一部としてそれが必要な被検体に投与され得る。特に、本発明は、有効量の化合物１を被検体に投与することを含む、被検体における癌（例えば、乳癌）の予防方法を提供する。このような方法において、典型的には、特に特定の癌の危険がある被検体において、癌の出現の遅延があるかまたは癌細胞は形成しない。さらに、有効量の化合物１被検体に投与することを含む、被検体における癌（例えば、乳癌）の治療方法が提供される。このような方法において、癌細胞は殺され、縮小され、阻害され、および/または数が減少される。
【００３９】
治療または予防されるべき癌のタイプは、特に限定されないが、ある局面において、癌は、同じタイプの正常組織に対して増大したSTAT3活性および/または増大したKi67発現を有するとして特徴付けられる。例えば、Garcia et al., Cell Growth Differ, 1997; 8(12): 1267-1276; Watson et al., Br J Cancer, 1995; 71(4): 840-844; Huang et al., Gynecol Oncol, 2000; 79(1): 67-73; Dhir et al., Prostate, 2002; 51(4): 241-246; Mora et al., Cancer Res, 2002; 62(22): 6659-6666; Corvinus et al., Neoplasia, 2005; 7(6): 545-555; Guo et al., Am J Transl Res, 2009; 1(3): 283-290; Schaefer et al., Oncogene, 2002; 21(13): 2058-2065;およびWei et al., Oncogene, 2003; 22(3): 319-329を参照。例えば、STAT3は、全ての乳癌の40%超において、特にトリプルネガティブ乳癌において構成的に活性であり、エストロゲン受容体(ER)、プロゲステロン受容体(PR)、およびヒト上皮成長因子受容体2(HER2/Neu)の発現を欠く(Banerjee et al., Int J Cancer, 2016; 138(11): 2570-2578)。活性化STAT3はまた、エストロゲン生合成および続くER-陽性乳房上皮細胞の増殖を誘導することが示されており(Ishii et al., Cancer Res, 2008; 68(3): 852-860)、そして腫瘍再発促進幹細胞様乳癌細胞の維持および非癌幹細胞集団の乳癌幹細胞様細胞への変換に役割を果たすと考えられる(Marotta et al., J Clin Invest, 2011; 121(7): 2723-2735)。従って、本願のSTAT3阻害剤は、STAT3阻害剤が多発乳癌亜型を潜在的に防止し得るという点で、FDA-認可乳癌予防剤タモキシフェンおよびラロキシフェンに対して特有の利点を提供する。さらに、STAT3阻害剤としての化合物１が選択的エストロゲン受容体モジュレーター(SERMs)タモキシフェンおよびラロキシフェンとは異なる作用機序を有するので、このような阻害剤はまた、これらの薬物に対して発現した耐性を有するER-陽性乳癌に対して特に有用であり得る。
【００４０】
本願方法で治療可能な癌の例は、頭頚部、眼、皮膚、口、咽喉、食堂、胸、骨、肺、結腸、S状結腸、直腸、胃、前立腺、乳、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、脳、腸、心臓、または副腎の癌を含む。より特定すると、眼は、固体腫瘍、肉腫、癌腫、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、 胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮性腫瘍、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、カポジ肉腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫(menangioma)、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫、血液由来腫瘍(blood-borne tumor)、急性リンパ性白血病、B細胞急性リンパ芽球性白血病、T細胞性急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性単芽球性白血病、急性赤白血病性白血病(acute erythroleukemic leukemia)、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ球性白血病(acutenonlymphocyctic leukemia)、急性未分化白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、または多発性骨髄腫を含む。例えば、Harrison’s Principles of Internal Medicine, Eugene Braunwald et al., eds., pp. 491 762 (15th ed. 2001)を参照。いくつかの局面において、癌は固体腫瘍である。
【００４１】
実施態様に従って、治療および/または予防すべき癌は、白血病、多発性骨髄腫、膵臓癌、腎臓癌、脳腫瘍、頭頚部癌、肝臓癌、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、および前立腺癌から選ばれる。別の実施態様において、癌は、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、大腸癌、腎臓癌、脳腫瘍、または前立腺癌である。さらに別の実施態様において、癌は、膵臓癌、肝臓癌、または乳癌である、好ましくは、治療および/または予防すべき癌は乳癌である。
【００４２】
治療すべき被検体は、治療が必要であり、そして癌を有するか、癌の危険があるか、および/または癌を有する疑いがあるかのいずれかである。被検体は、年齢、遺伝性素因(例えば、癌の家族歴および/または遺伝的スクリーニング検定の結果)、放射線への曝露、煙への曝露、粒子の吸入、突然変異原の消費、および/またはダイエットを含む種々の因子に基づいて癌の危険があり得る。特定の癌と診断された少なくとも１人の一親等血縁者(すなわち、親、兄弟姉妹、および/または子供)を有する個人は、個人がその癌の平均よりも高い危険を有することを示唆し得る。特定の癌と診断された２人の一親等血縁者は、危険がさらに増加する。個人は、自己検診、臨床検査、マンモグラム、パパニコロー検査、超音波、デジタル式乳房トモシンセシス、生検、磁気共鳴映像法(MRI)、x-線、結腸内視鏡検査、血液検査、尿検査、直腸検査、および低線量コンピューター断層撮影(LDCT)によって、種々のタイプの癌についてスクリーニングおよび/または診断され得る。特定の例において、１型乳癌(BRCA1)遺伝子および/またはHER2遺伝子における変異および/または１種以上の公知の癌バイオマーカー(例えば、Ki67、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、前立腺特異的抗原(PSA)、CA-125)の高い発現を有することが見い出された被検体は、典型的には、癌(例えば、乳癌、前立腺癌、卵巣癌)の危険があるまたは癌を有する疑いがある個人として認識される。特定の例において、被検体は、細胞増殖速度(例えば、増殖しそして分裂して新たな癌細胞を形成する腫瘍内の癌細胞の割合)についてスクリーニングされ得る。Ki67のレベルが測定され得、そしてKi67の百分率が高くなると、癌細胞はより速く増殖する。被検体の血液、組織、尿、または血液髄(blood marrow)のサンプルにおいて試験され得る他の可能な腫瘍マーカーは、例えば、AFP、ALK遺伝子再構成、B-細胞免疫グロブリン遺伝子再構成、B2M(ベータ2-ミクログロブリン)、BCR-ABL、CA 15-3、Ca-19-9、カルシトニン、CEA(癌胎児性抗原)、クロモグラニンA(CgA)、DCP(des-ガンマ-カルボキシ、プロトロンビン)、EGFR変異、フィブリン、フィブリノゲン、ガストリン、hCG(ヒト絨毛性ゴナドトロピン)、JAK2変異、KRAS変異、LD(乳酸脱水素酵素)、モノクローナル免疫グロブリン、SMRP(可溶性メソテリン関連ペプチド)、T-細胞受容体遺伝子再構成、サイログロブリン、21-遺伝子特性、および70-遺伝子特性を含む。
【００４３】
特定の癌の個々の危険を評価するためのスクリーニングのガイドラインは、癌に依存して変化する。例えば、乳癌スクリーニングは、(i)平均の危険を有すると考えられる45歳よりも年上である個人、および(ii)平均よりも高い危険を有すると考えられる個人(例えば、乳癌を有する少なくとも１人の親、兄弟姉妹、または子供を有し、BRCA1、BRCA2、HER2、および/またはCHEK2遺伝子変異、および/または10歳と30歳との間の胸部照射歴について陽性を試験する)について、少なくとも毎年、特に30歳まで試験することが推奨される。大腸癌スクリーニングは、50歳よりも年上である平均の危険を有する個人に推奨されるが、試験は、一親等血縁者が大腸ポリープまたは大腸癌を有していた場合、個人が炎症性腸疾患(例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎)を有している場合、および/または個人が家族性大腸腺腫症(FAP)または遺伝性非ポリポーシス大腸癌(リンチ症候群)などの遺伝的症候群を有する場合、より高い危険を有すると評価された個人についてより早期であり得る。個人は、個人が喫煙歴を有する、現在喫煙している、または過去15年以内に止め、そして55歳と80歳との間である場合、肺癌の危険があり得る。男性の個人は、個人がアフリカ系アメリカ人であり、60歳までに前立腺癌と診断された一親等血縁者を有し、および/または75歳までに前立腺癌で死亡した一親等血縁者を有していた場合、前立腺癌の危険があり得る。
【００４４】
本明細書に記載の方法のある実施態様において、化合物１は１種以上(例えば、2、3、またはそれ以上)の追加の抗癌剤(例えば、化学療法剤)および/または放射線療法と共投与され得る。用語「共投与される」または「共投与」は、同時または逐次投与を言う。化合物は、別の化合物の投与前に、投与と同時に、または投与後に投与され得る。
【００４５】
抗癌剤の例は、白金化合物(例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン)、アルキル化剤(例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、クロラムブシル、ナイトロジェンマスタード、チオテパ、メルファラン、ブスルファン、プロカルバジン、ストレプトゾシン、テモゾロマイド、ダカルバジン、ベンダムスチン)、抗腫瘍抗生物質(例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、マイトマイシンC、プリカマイシン、ダクチノマイシン)、タキサン(例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル)、代謝拮抗物質(例えば、5-フルオロウラシル、シタラビン、プレメトレキセド、チオグアニン、フロクスウリジン、カペシタビン、およびメトトレキサート)、ヌクレオシドアナログ(例えば、フルダラビン、クロファラビン、クラドリビン、ペントスタチン、ネララビン)、トポイソメラーゼ阻害剤(例えば、トポテカンおよびイリノテカン)、低メチル化剤(例えば、アザシチジンおよびデシタビン)、プロテオソーム阻害剤(例えば、ボルテゾミブ)、エピポドフィロトキシン(例えば、エトポシドおよびテニポシド)、DNA合成阻害剤(例えば、ヒドロキシ尿素)、ビンカアルカロイド(例えば、ビンクリスチン(vincristine)、ビンデシン、ビノレルビン、およびビンブラスチン)、チロシンキナーゼ阻害剤(例えば、イマチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ)、モノクローナル抗体(例えば、リツキシマブ、セツキシマブ、パニツムマブ(panitumumab)、トシツモマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ オゾガマイシン、ベバシズマブ)、ニトロソ尿素(例えば、カルムスチン、フォテムスチン、およびロムスチン)、酵素(例えば、L-アスパラギナーゼ)、生物剤(例えば、インターフェロンおよびインターロイキン)、ヘキサメチルメラミン、ミトタン、血管形成阻害剤(例えば、サリドマイド、レナリドミド)、ステロイド(例えば、プレドニゾン、デキサメタゾン、およびプレドニソロン)、ホルモン剤(例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、ロイプロリド、ビカルタミド(bicalutamide)、グラニセトロン、フルタミド)、アロマターゼ阻害剤(例えば、レトロゾールおよびアナストロゾール)、三酸化ヒ素、トレチノイン、非選択的シクロオキシゲナーゼ阻害剤(例えば、非ステロイド性抗炎症剤、サリチレート、アスピリン、ピロキシカム、イブプロフェン、インドメタシン、ナプロシン、ジクロフェナク、トルメチン、ケトプロフェン、ナブメトン、オキサプロジン)、選択的シクロオキシゲナーゼ-2(COX-2)阻害剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの好ましい実施態様において、医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体、化合物１、およびタモキシフェン、ラロキシフェンのいずれか、またはタモキシフェンおよびラロキシフェンの両方を含有する。
【００４６】
本発明の目的のために、用語「被検体」は、典型的には、哺乳動物を対象とする。哺乳動物は、マウスなどのネズミ目、およびウサギなどのウサギ目(order Logomorpha)を含むがこれらに限定されない。いくつかの局面において、哺乳動物は、ネコ科(ネコ)およびイヌ科(イヌ)を含むネコ目、ウシ亜科(ウシ)およびイノシシ科(Swines)(ブタ)を含む偶蹄目またはウマ科(Equines)(ウマ)を含む奇蹄目(order Perssodactyla)からである。いくつかの局面において、哺乳動物は、サル目、セボイド目、またはシモイド目(サル)または真猿亜目(ヒトおよび類人猿)である。本発明の実施態様において、治療されるべき被検体は、ヒトである。被検体は、雄性または雌性であり得、そして本発明のいくつかの局面において、被検体は雌性である。
【実施例】
【００４７】
以下の実施例は、本発明をさらに説明するが、もちろん、いかようにもその範囲を限定するとは解釈されるべきではない。
実施例1
この実施例は、種々の塩基存在下での2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸の安定性を実証する。
【００４８】
液体クロマトグラフィー-質量分析(LC-MS)研究を行い、 ここで、LiOH、NaOH、K2CO3、NaHCO3,および2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオール(TRIZMATM, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)を含む種々の塩基の1.1モル当量を量り取り、水に溶解し、そして2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸に加えた。得られた混合物を溶解性および安定性の両方について試験し、結果をUVおよび質量分析検出を有する高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で分析した。
【００４９】
試験した全ての塩基について、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸は良好な水溶解性を示したが、全ての塩が安定であったとは限らなかった(図1A-1D)。質量スペクトルデータにおいて分かるように、初期の分解物はトシレート基の損失であった(図2)。分解は、水酸化ナトリウムのようなより強塩基においてより一層顕著であった。より弱くかつより嵩高い塩基であるTRIZMATMは、優れた溶解性(pH 7の水中約60 mg/mLの溶解度)を提供し、そして生成物は初期の分析(水中、室温で〜8時間まで)の間安定のままであったことを決定した。
【００５０】
実施例2
この実施例は、本発明の実施態様における化合物１の合成を実証する。
【００５１】
2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸(1.52 g, GLG-Pharma, Jupiter, FL, lot AL650-78-4)を11 mLのイソプロパノールおよび18 mLのテトラヒドロフラン(THF)に溶解した。別の容器中、506 mgの2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオール(TRIZMATM, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Lot SLBK9274V)を1.0 mLの蒸留水に溶解した。２つの混合物を合わせ、30分間混合し、0.2 μmナイロン膜フィルターを通して濾過し、次いで加熱下で真空蒸留した。蒸留を、体積の約半分、例えば、約15 mLが残るまで続けた。イソプロパノール(15 mL)を加え、そして蒸留を、体積の約半分が残るまで続け、そしてすぐに15 mLの酢酸エチルを加え、そして三元混合物の蒸留を続けた。蒸留物の半分を除去すると、酢酸エチルの添加をさらに２回繰り返し、最終の蒸留は体積を〜5 mLまで減少させ、透明なオイルを得た。次に、5 mLのイソプロパノールを加えて透明な溶液を得;次いで25 mLの酢酸エチルを滴下し、白色固体の沈殿を生じた。固体生成物をろ取し、そして濾過ケーキを10 mLの酢酸エチルで洗浄した。単離した生成物を真空下で乾燥し、1.4 g(69%収率)の吸湿性物質を得た。
【００５２】
高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を、内部紫外線(UV)検出器を備えたLC-2010CHT液体クロマトグラフ(Shimadzu, Columbia, MD)を用いて行った。検出は261 nmであった。質量分析を、Shimadzu-LCに連結したAPI-4000TMトリプル四重極質量分析計(Sciex, Framingham, MA)で行った。結果を得、そしてANALYSTTMソフトウェアバージョン1.5.1データシステム(Sciex, Framingham, MA)で処理した。HPLC単離を、XSELECTTM HSS T3 C18, 75 × 3.0 mm, 3.5 μmカラム(Waters Corporation, Milford, MA)を用いてカラム温度40℃で行った。移動相は、(A)水中0.1%ギ酸(LC-MSグレード、Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)および(B)アセトニトリル中0.1%ギ酸(LC-MSグレード、Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)からなった。HPLC溶出プログラムは、以下の勾配傾斜からなった−30% Bで5分、20分にわたって90% Bまで直線傾斜、90% Bで5分保持。これを、次の注入前に30% Bの5分の再平衡期間で、0.5 ml/分で合計30分にわたって行った。サンプルを0.5 mg/mLの濃度で5 μLの注入体積で注入した。直線性を0.5、0.25、0.1および0.05 mg/mLの濃度で標準校正曲線によって確立した;r2 = 0.9997。質量分析計のパラメーターは、表１に示す通りであった。
【００５３】
【表１】
2020513022.tif 000005
【００５４】
あるいは、HPLCを、内部紫外線(UV)検出器を備えたAgilent 1100液体クロマトグラフ(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)を用いて行った。検出は261 nmであった。結果を得、そしてAgilent ChemStationデータシステム(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)で処理した。HPLCをXBridge C18, 150 × 4.6 mm, 3.5 μmカラム(Waters Corporation, Milford, MA)を用いて周囲温度のカラム温度で行った。移動相は、(A)水中0.1%ギ酸(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)および(B)アセトニトリル中0.1%ギ酸(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)からなった。HPLC溶出プログラムは、以下の勾配傾斜からなった−20% Bで5分、20分にわたって90% Bまで直線傾斜、90% Bで5分保持。これを、次の注入前に20% Bの5分の再平衡期間で、0.75 ml/分で合計30分にわたって行った。サンプルを0.5 mg/mLの濃度で5 μLの注入体積で注入した。
【００５５】
実施例3
この実施例は、本発明の実施態様における化合物１の合成を実証する。
【００５６】
2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸(10 mmol)の溶液をTHF/EtOH(1:1)(250 mL)に溶解し、そして得られた溶液を氷浴中で0℃まで冷却した。溶液を冷却すると、2-アミノ-2-(ヒドロキシメチル)-1,3-プロパンジオール(TRIZMATM, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)(10 mmol)を加え、そして混合物を0℃で90分間攪拌した。完了すると、混合物を室温以下に維持するよう注意しながら、溶媒を除去した。得られた残渣をペンタンで粉末化し、そして0℃で2時間高真空下に置き、次いでアルゴンを充填し戻した。得られた白色固体(定量的収率)を使用直前まで冷凍庫(-20℃)で保存した。
【００５７】
実施例4
この実施例は、本発明の実施態様における化合物１を含有する処方物の薬物動態(PK)研究を実証する。
【００５８】
化合物１(750 mg)を10 mLの滅菌水(75 mg/mL)に溶解した。得られた溶液を0.2 μmのシリンジフィルターを通して濾過し、透明な無色溶液を得た。次いでこの溶液を標準に対して実際の濃度についてHPLCにより分析した。濃度を決定すると、溶液を適切に希釈して50 mg/mLの溶液を達成した。処方物は、即時使用または-20℃で保存することによる後の使用に適していた。
【００５９】
比較目的のため、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸のカルボキシメチルセルロース(CMC)中懸濁液を以下のように調製した。CMCの0.5%溶液を、濾過した水を用いて調製した。50 mg/mLの懸濁液を、500 mgの2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸を10 mLの0.5% CMC溶液中に取ることにより調製した。pHを6.0-6.5に調整した。処方物は、即時使用または室温で24時間まで保存することによる後の使用に適していた。
【００６０】
７０匹の雌FVB-Nマウス、8〜9週齢および20〜30gをCharles River Laboratories(Wilmington, MA)から入手した。４８匹に化合物１またはカルボキシメチルセルロース(CMC)と混合した2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸のいずれかの３つの用量レベルのうちの1つを強制経口投与(PO)により投薬し、８匹に化合物１の１つの用量レベルを静脈内(IV)投薬し、そして１匹にプラセボをIVにより投薬した(表2を参照)。２匹のマウス(グループAの1匹およびグループDの1匹)は投薬し損ね、従って追加の２匹のマウスを余分の分から使用し、それらと置き換えた。
【００６１】
【表２】
2020513022.tif 000006
【００６２】
投薬スキームは以下の通り確立したが、実際の投薬量は研究前のマウスの測定体重に基づいた。溶液を投薬前に直接調製した;いずれの未使用の物質も凍結保存した。
・  125 mg/kg用量について、−  0.06 mLは25 gマウスについて125 mg/kgを与える
−  125 mg/kg * 0.025 kgマウス= 3.125 mg; 3.125 mg ÷ 50 mg/mL = 0.06 mL
・  250 mg/kg用量について、−  0.125 mLは25 gマウスについて250 mg/kgを与える
−  250 mg/kg * 0.025 kgマウス= 6.25 mg; 6.25 mg ÷ 50 mg/mL = 0.125 mL
・  500 mg/kg用量について、−  0.25 mLは25 gマウスについて500 mg/kgを与える
−  500 mg/kg * 0.025 kgマウス= 12.5 mg; 12.5 mg ÷ 50 mg/mL = 0.250 mL
【００６３】
マウスを受領の72時間以内および研究１日目に再度体重測定した。マウスを0日目の前に毎日1回、そして少なくとも0日目から始まって投薬後24時間に病的状態および瀕死について毎日２回観察した。グループA-Hのマウスは投薬後の毒性の兆候を示さなかった;投与したいずれの用量でもマウスへの化合物１またはCMC処方物の経口またはIV投与による死亡はなかった。
【００６４】
血液サンプルを、用量投与後の８つの時点で個々のマウスから得た:上記表２に示すように、１匹のマウス/時点/投薬グループを用いて投薬後5、10、15、30、60、90、180、および1440分。動物を放血し、そして集めた血液サンプルを、分析のための血漿を得るための遠心分離前に、少なくとも3分間であるが 30分よりも長くない時間冷却した。各動物をCO2により麻酔し;放血、続いて気胸して死を確認した。全ての血漿サンプルを、逆相分析法を用いてUHPLC-UV-MSにより分析し、化合物１の濃度を決定した。終末相半減期、AUC、バイオアベイラビリティ(F)、CmaxおよびTmaxを含んだPKパラメーターを計算するためのPKデータの無隔壁分析(NCA)を用いた。結果を表３に示す。
【００６５】
【表３】
2020513022.tif 000007
【００６６】
血漿安定性分析について、サンプル調製は、0.1 mLの血漿を取り、これを0.9 mLのアセトニトリルを含む1.5-mLのスナップキャップマイクロ遠心分離チューブ中に体積でピペットで加えたことからなった。チューブを〜1分間ボルテックスし、次いで〜10,000 rpmで〜5分間遠心分離した。上澄みを分析のためにHPLCバイアルに移した。
【００６７】
校正曲線を、0.1 mLのブランク血漿をスナップキャップマイクロ遠心分離チューブ中で化合物１標準と混ぜ;5 ng/mL〜1,000 ng/mLの標準範囲を生成することによって調製した。ピーク面積応答はその範囲にわたって線形であり、5 ng/mL(3:1の信号対雑音)の検出限界(LOD)および20 ng/mLの定量限界(LOQ)を有することが分かった。
【００６８】
クロマトグラフィー単離を、UVおよびMS(Waters XEVOTM G2-XS四重極飛行時間(Q-TOF))検出(Waters Corporation, Milford, MA)を備えたWaters ACQUITYTM超高速液体クロマトグラフィー(UPLC)を用いて行った。10℃に設定されたオートサンプラーを有するACQUITYTM UPLC BEH C18, 1.7 μmカラムを周囲温度で用いた。移動相は、水中0.1%ギ酸(移動相A)およびアセトニトリル中0.1%ギ酸(移動相B)からなり、これを0.5 mL/分で7分間溶出した。90%Aで開始し:10%Bで1分、次いで10%Aまで直線的に増加:4分かけて90%B、1分保持、10:90(A:B)で1分および最後に 90:10(A:B)で1分の再平衡の勾配を用いた。注入体積は5 μLであり;UV検出は261 nmで記録した。質量スペクトルデータは、100-800 amuの範囲にわたってエレクトロスプレー陰イオン化モードで集め、m/z 364でデータ獲得後に生成物イオン抽出を行った。ソースは2 kV(キャピラリー)に設定し、サンプルコーンオフセットは45であり、そしてソースオフセットは80であった。ソース温度は150℃に設定し、そして脱溶媒和ガスおよび温度はそれぞれ800 L/hおよび500℃であった。コアガス流量は20 L/hに設定した。機器を制御し、そしてデータをMASSLYNXTMソフトウェア、バージョン4.1(Waters Corporation, Milford, MA)の下で集めた。
【００６９】
化合物１の血漿安定性を評価するため、物質をマウス血漿中に取り、そして経時で分析した。最初に、サンプルを毎日評価したが、2-ヒドロキシ-4-[[2-[[(4-メチルフェニル)スルホニル]オキシ]アセチル]アミノ]安息香酸は1日後に観察されなかったので、安定性は短かったことが明らかであった。次いで刻々の(hour-by-hour)分析を行い、周囲温度で著しい減少を示した(表4を参照)。最後に、-20℃での血漿安定性研究を行い、これは安定性の増加を示したが、安定性の増加は中程度でしかなかった(表5を参照)。周囲についての時間測定は、日で測定した-20℃についての時間(表5)と比較して、時間(表4)で列挙したことに留意すべきである。
【００７０】
【表４】
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【００７１】
【表５】
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【００７２】
アセトニトリル抽出物中の安定性(サンプル調製後)は良好であり、6日間にわたって分解は少し/なしであった(表6を参照)。従って、サンプルをできるだけ迅速により安定な形態(アセトニトリル)に抽出し、データの変動を最小限にすることが望ましかった。特に、血液サンプルに遠心分離を行って分析のための血漿サンプルを得ると、アセトニトリルへの抽出はできるだけ迅速に行った(例えば、＜1時間)。
【００７３】
【表６】
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【００７４】
実施例5
この実施例は、化合物１が正常乳腺組織におけるKi67発現を阻害することを実証する。
【００７５】
乳管上皮細胞を500 mg/kg、250 mg/kg、または125 mg/mgのいずれかの体重(BW)/日の化合物１と等しかった用量と接触させた。いずれの化合物とも接触させなかった細胞をコントロールとした。Ki67発現を正常導管上皮の免疫組織化学的分析によって評価した。染色した部分をスキャンし、そして自動化画像分析ソフトウェアを用いて定量化した。
【００７６】
結果を図4に示す。治療2週間後、500 mg/kgの体重(BW)/日の化合物１の用量がKi67を83%阻害し、一方、250 mg/kg BW/日の化合物１の用量がKi67を85%阻害したことが観察された。Ki67は乳癌および他の癌の発現のためのバイオマーカーであると考えられるので、特に健康な組織におけるKi67を阻害する能力は、乳癌などの癌を予防する実行可能な経路を表す。
【００７７】
実施例6
この実施例は、化合物１が正常乳腺組織においてSTAT3発現を阻害することを実証する。
【００７８】
乳管上皮細胞を500 mg/kg、250 mg/kg、または125 mg/mgのいずれかの体重(BW)/日の化合物１と等しかった用量と接触させた。いずれの化合物とも接触させなかった細胞をコントロールとした。STAT3発現を正常導管上皮の免疫組織化学的分析によって評価した。染色した部分をスキャンし、そして自動化画像分析ソフトウェアを用いて定量化した。
【００７９】
結果を図5に示す。治療2週間後、500 mg/kg BW/日の化合物１の用量がSTAT3を75%阻害し、250 mg/kg BW/日の化合物１の用量がSTAT3を44%阻害し、そして125 mg/kg BW/日の化合物１の用量がSTAT3を8.8%阻害した。増加したSTAT3活性は乳癌および他の癌の発現のためのバイオマーカーであると考えられるので、特に健康な組織におけるSTAT3を阻害する能力は、乳癌などの癌を予防する実行可能な経路を表す。
【００８０】
実施例7
この実施例は、化合物１がインビボ研究における乳癌の発生を遅らせ得ることを実証する。
【００８１】
５０日齢の雌MMTV/ニューマウスに、化合物１を500、250、および100 mg/kg BW/日の用量で5回/週の強制経口投与をした。ネガティブコントロールグループはビヒクル(精製水)のみを受けた。腫瘍形成を加速するため、マウスにまた、57日齢から始めて4週間、7,12-ジメチルベンズ[a]アントラセン(DMBA)を1回/週で強制的に与えた。研究はDMBA曝露後4か月で停止した。治療期間の間、マウスの体重および触診可能な乳腺腫瘍の外観を、それぞれ週１回および週2回監視した。実験の期間を通じていずれのグループにおいても体重の減少または毒性は観察されなかった(図6)。
【００８２】
化合物１での治療は、ビヒクルのみのコントロールと比較して、乳腺腫瘍の発生、多重度、および重量の用量依存的現象を生じた(図7)。試験した全ての用量で、化合物１は雌マウスにおけるDMBA-誘導乳癌の発生を遅らせることができた。500 mg/kg BW/日の用量は、乳癌の予防において最大の効果を示した。
【００８３】
本出願中で引用される、刊行物、特許出願及び特許を含め、すべての参考文献は、それぞれの参考文献が、あたかも個別的にまた具体的に示されていて、参照によって包含されるかのようにそして全体が本出願に記載されているかのように、本出願の中に参照によって同範囲が包含される。
【００８４】
本発明を記載する文脈において(特に以下の特許請求の範囲の文脈において)用語「a」および「an」ならびに「the」および「少なくとも１つ」および類似の指示対象の使用は、本明細書中に特に指示されない限り、または文脈によって否定されない限り、単数および複数の両方を含むと解釈されるべきである。1つ以上の項目のリストに続く用語「少なくとも１つ」(例えば、「AおよびBの少なくとも１つ」)の使用は、本明細書中に特に指示されない限り、または文脈によって否定されない限り、列挙した項目から選ばれる１つの項目(AまたはB)または列挙した項目の2つ以上の任意の組み合わせ(AおよびB)を意味すると解釈されるべきである。用語「含有する(comprising)」、「有する(having)」、「含む(including)」、および「含む(containing)」は、特に注釈されない限り、無制限の用語(すなわち、「含むが、限定されない」を意味する)として解釈されるべきである。本明細書中値の範囲の記載は、本明細書中に特に指示されない限り、範囲内にある各別個の値を個別に参照する省略方法として役立つことを単に意図し、そして各別個の値は、それが本明細書中に個別に記載されているとして明細書中に組み込まれる。本明細書中に記載の全ての方法は、本明細書中に特に指示されない限り、または文脈によって明確に否定されない限り、任意の適切な順序で行われ得る。本明細書中で提供される任意および全ての実施例、または例示的言語(例えば、「など」)の使用は、本発明をより明らかにすることを単に意図し、そして特にクレームされない限り本発明の範囲に限定を課さない。本明細書中にない言葉は、本発明の実施に必須であると任意のクレームされていない要素を示すと解釈されるべきである。
【００８５】
本出願中には、発明者が知っている発明を実施する上での最善実施態様を含め、本発明の好ましい実施態様が記載されている。これらの好ましい実施態様から変形したものも、前述の記載を読んだ際に当業者には自明になるかもしれない。本発明者らは、このような変形したものも当業者は適宜採用するであろうことを期待しており、本発明が本出願中で具体的に記載した以外の態様でも実施されることを企図している。従って、本発明は、本明細書に添付する特許請求の範囲の中に具体的に記載される発明主題を改良したものや主題の均等物も全て、適用法により許される範囲内で、含む。更に、すべての可能な変形したものの中の上記要素のいかなる組み合わせも、別な様に示されているか或いは前後関係から明確に他の相反する意味に示されていない限り、本発明に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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