(57)【要約】  本発明の態様および実施形態は、例えばアルツハイマー病およびパーキンソン病などの神経障害の治療に関する。特に、ある実施形態は、これら２つの神経障害の治療に使用するためのＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドに関する。また、本発明に含まれるのは、とりわけ、このような障害ならびに他の主題を治療する方法と共に、ＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドを含む医薬組成物である。【選択図】図１
2020504713.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｙ１−Ｙ２−Ｒ２  （Ｉ）（配列番号１）
（式中、Ｘａａ２４はＡｓｎおよびＣｙｓから選択され；
Ｙ１は、存在しないか、または少なくとも８個のアミノ酸分子を含む伸長物から選択され；
Ｙ２は、
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号２）；
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）
Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号４）；および
Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号５）から選択され、
Ｒ２は、−ＮＨ２または−ＯＨから選択される）、
によって表されるＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドもしくはその誘導体、または前記ペプチドもしくは前記誘導体の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｙ２がＬｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＬｙｓまたはＬｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
Ｙ２がＡｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＴｙｒまたはＬｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒである、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
Ｙ１が少なくとも１０個のアミノ酸を含む伸長物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５】
Ｙ１が、
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号６）；
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（配列番号７）；
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（配列番号８）；
Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号９）；
Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号１０）；
から選択されるか
存在しない、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項６】
Ｙ１が
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ；
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ；および
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ
から選択される、請求項５に記載のペプチド。
【請求項７】
アミノ酸配列
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）
を含む、請求項１に記載のペプチド。
【請求項８】
前記アミノ酸配列：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）
から本質的になる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項９】
アミノ酸配列：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）
を含む、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１０】
前記アミノ酸配列：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）
から本質的になる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１１】
アミノ酸に共有結合している親水性部分を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１２】
Ｙ１が、少なくとも１０個のアミノ酸または少なくとも１１個のアミノ酸を含む伸長物である場合、（ｉ）２４位のアミノ酸、または（ｉｉ）３９位もしくは４０位のアミノ酸に共有結合している親水性部分を含む、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】
Ｘａａ３９またはＸａａ４０がＣｙｓであり、前記ペプチドがＣｙｓ（３９）またはＣｙｓ（４０）に共有結合した親水性部分を含むか、またはＸａａ２４がＣｙｓであり、かつ前記ペプチドがＣｙｓ（２４）と共有結合している親水性部分を含む、請求項１２に記載のペプチド。
【請求項１４】
前記親水性部分が水溶性ポリマーであり、任意により前記水溶性ポリマーがポリエチレングリコール部分であり、かつ任意により約２０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコール部分である、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１５】
前記ペプチドが親油性置換基とコンジュゲートしている、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１６】
前記親油性置換基がアシル基を含み、任意により脂肪酸分子であり、さらに、任意により、前記脂肪酸分子が、Ｃ−８オクタノイル基、Ｃ−１０デカノイル基、Ｃ−１２ラウロイル基、Ｃ−１４ミリストイル基、Ｃ−１６パルミトイル基、Ｃ−１８ステアロイル基、およびＣ−２０アシル基から選択される、請求項１５に記載のペプチド。
【請求項１７】
前記親油性置換基が、前記ペプチドの前記カルボキシル末端でアミノ酸に接着している、請求項１５または１６に記載のペプチド。
【請求項１８】
前記親油性置換基をアミノ酸残基にコンジュゲートするスペーサーを含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１９】
前記スペーサーは、天然または非天然アミノ酸由来の残基であり、前記スペーサーは、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、ε−Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇａｂａ、Ａｉｂ、β−アミノヘキソニル、７−アミノヘプタノイル、８−アミノオクタノイル、９−アミノノナノイル、１０−アミノデカノイル、または８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルの残基を含む、請求項１８に記載のペプチド。
【請求項２０】
前記スペーサーがγ−Ｇｌｕであるか、または前記スペーサーがジペプチドであり、任意により前記スペーサーが２個の負に電荷したアミノ酸を含み、さらに任意により、前記スペーサーがγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである、請求項１９に記載のペプチド。
【請求項２１】
神経障害の治療および／または予防に使用するためのものである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項２２】
前記ペプチドは、患者のある領域におけるβ−アミロイドタンパク質プラークの沈着によって引き起こされるか、またはそれに関連する神経障害の前記治療における使用のためのものである、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２３】
ａ）シナプス伝達の長期増強の機能障害、または
ｂ）炎症
によって引き起こされるか、もしくはそれに関連する神経障害の前記治療および／もしくは予防に使用するためのものである、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２４】
認知機能に影響を及ぼす神経障害、例えば認知症、脳卒中、統合失調症および／または双極性障害の前記治療および／または予防に使用するためのものであって、任意により、前記障害は脳卒中に関連する脳虚血である、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２５】
心的外傷後ストレス障害、てんかん、トゥレット症候群、および幻覚から選択される障害；ならびに注意力、計算力、記憶力、判断力、洞察力、学習力および推論力から任意により選択される、機能不全の認知プロセスの前記治療および／または予防に使用するためのものである、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２６】
神経変性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、末梢神経障害、ハンチントン病およびクロイツフェルト−ヤコブ病の前記治療および／または予防に使用するためのものである、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２７】
臨床期または前臨床期アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、および臨床期または前臨床期アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）から選択される神経障害の前記治療および／または予防に使用するためのものである、請求項２１に記載のペプチド。
【請求項２８】
臨床期アルツハイマー病の治療および／または予防に使用するためのペプチドであって、
（ａ）ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）；または
（ｂ）ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）
の配列からなる、ペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の態様および実施形態は、例えばアルツハイマー病およびパーキンソン病などの神経障害の治療に関する。特に、ある実施形態は、これら２つの神経障害の治療に使用するためのＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドに関する。また、本発明に含まれるのは、とりわけ、このような障害ならびに他の主題を治療する方法と共に、ＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドを含む医薬組成物である。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、現在のところ治療法がない慢性神経変性障害である。現在処方されている医薬品は、一時的に症状のいくつかを緩和するのみである。この疾患の主な特徴は、見当識障害、記憶喪失、脳内のニューロンおよびシナプスの喪失、脳内のβ−アミロイドタンパク質の蓄積（アミロイドプラーク）、および高リン酸化タウタンパク質の細胞内凝集（もつれ）である（ＬａＦｅｒｌａおよびＯｄｄｏ、２００５年；Ｂｌｅｎｎｏｗら、２００６年）。
【０００３】
パーキンソン病（ＰＤ）も慢性の神経変性疾患であり、現在のところ遅延性の薬物療法のみ利用可能である。主な特徴は、振戦、硬直、および運動能力の喪失、基底脳（黒質）内のニューロンの変性および神経伝達物質、ドーパミンの放出の喪失である（Ｓｈｅｎ、２０１０年）。
【０００４】
２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）はＡＤおよびＰＤの危険因子として特定されており（Ｈｏｌｓｃｈｅｒ、２０１４）、これはインスリンシグナル伝達障害がＡＤの発症を開始または加速する要因となり得ることを示唆している。疫学的研究により、Ｔ２ＤＭと、後期においてＡＤまたは他の神経変性障害を発症するリスクとの間に明確な相関関係が見出された（Ｌｕｃｈｓｉｎｇｅｒら、２００４年；Ｒｉｓｔｏｗ、２００４年；Ｏｈａｒａら、２０１１年）。脳内のインスリンシグナル伝達が、ＡＤ患者において減感されることもまた示された。最近の研究では、ＡＤ患者の脳では、不活性化リン酸化インスリン受容体およびＩＲＳ−１セカンドメッセンジャーのレベルが増加していることを実証した。これは双方ともインスリンの脱感作を示すものである（Ｍｏｌｏｎｅｙら、２０１０年；Ｂｏｍｆｉｍら、２０１２年；Ｔａｌｂｏｔら、２０１２年）。ＰＤでは、インスリンシグナル伝達も損なわれ、疾患の進行と関連していることが見出された（Ｍｏｒｒｉｓら、２０１１年；Ｃｅｒｅｄａら、２０１２年）。
【０００５】
グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）は、内因性の３０個のアミノ酸ペプチドのインクレチンホルモンである（ＢａｇｇｉｏおよびＤｒｕｃｋｅｒ、２００７年）。ＧＬＰ−１受容体の刺激により、幹細胞の増殖を活性化することによって膵臓におけるβ細胞の増殖を増強し、Ｔ２ＤＭ患者においてグルコース依存性インスリン分泌を容易にし、血糖を低下させる（ＬｏｖｓｈｉｎおよびＤｒｕｃｋｅｒ、２００９年）。糖尿病の治療薬として３つのＧＬＰ−１アナログ、エキセンジン−４（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）、Ｂｙｄｕｒｅｏｎ（登録商標））、リキシセナチド（Ｌｙｘｕｍｉａ（登録商標））、およびリラグルチド（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））が現在市販されている（ＣａｍｐｂｅｌｌおよびＤｒｕｃｋｅｒ、２０１３年；ＥｌｋｉｎｓｏｎおよびＫｅａｔｉｎｇ、２０１３年）。
【０００６】
胃抑制ポリペプチドとしても知られるグルコース依存性インスリン分泌促進ペプチド（ＧＩＰ）は、ＧＬＰ−１と同様に、膵島を活性化してインスリン分泌を増強し、食後高血糖の減少を助ける４２−アミノ酸インクレチンホルモンである（Ｇａｕｌｔら、２００３年）。ＧＩＰは、成長ホルモン放出因子も含む神経調節ポリペプチドのセクレチン／グルカゴンファミリーのメンバーである。ＧＩＰは、膵臓のα細胞、内分泌細胞、また脳内のニューロンにおいても発現する（Ｎｙｂｅｒｇら、２００７年；ＣａｍｐｂｅｌｌおよびＤｒｕｃｋｅｒ、２０１３年）。ＧＩＰはまた、その成長ホルモン特性を記録しながら、膵臓β細胞の成長、分化、増殖および細胞生存を促進することが示されている（Ｇａｕｌｔら、２００３年）。したがって、Ｔ２ＤＭ治療のための治療手段としてＧＩＰを開発する研究が進行中である（Ｉｒｗｉｎら、２００６年）。現在のところ、Ｔ２ＤＭの治療に認可されているＧＩＰアナログはない。
【０００７】
２つ以上の受容体を標的とするデュアルアゴニストペプチドが、Ｔ２ＤＭの治療のために検討されている。いくつかのＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドが、Ｔ２Ｄの治療のために現在開発されている。しかしながら、現在Ｔ２ＤＭを治療するための使用が認可されているＧＩＰ／ＧＬＰ−１デュアル受容体アゴニストはない。
【０００８】
ＧＬＰ−１およびＧＩＰの神経特性の近年の研究では、これらのペプチドがアルツハイマー病（ＡＤ）のいくつかのマウスモデルおよびパーキンソン病（ＰＤ）の動物モデルにおいても、神経変性の特徴を防ぐ役割を果たし得ることを示した。
【０００９】
インクレチンと同様にインスリンは、脳内で成長因子様の特性を有するのみでなく、シナプス活性の調節も行う（Ｈｏｌｓｃｈｅｒ、２０１４年）。シナプスは、ニューロン間の接触であり、脳内の記憶形成および情報処理にとって重要である。ＧＬＰ−１または長期持続性ＧＬＰ−１アナログの脳への直接注射は、記憶形成に関与する脳領域である海馬におけるシナプス伝達の長期増強（ＬＴＰ）を著しく増強した。ＬＴＰは、記憶形成の細胞相関と考えられている（ＢｌｉｓｓおよびＣｏｌｌｉｎｇｒｉｄｇｅ、１９９３年）。ＧＬＰ−１アナログのリラグルチドは、ラットの脳内でＬＴＰを上方制御することが示されている（ＭｃＣｌｅａｎら、２０１０年）。
【００１０】
さらに、ＧＬＰ−１アナログにより、β−アミロイドフラグメントによって誘発されるＬＴＰの障害を防ぐことができた（ＧａｕｌｔおよびＨｏｌｓｃｈｅｒ、２００８ａ；ＭｃＣｌｅａｎら、２０１１年；Ｇｅｎｇｌｅｒら、２０１２年；Ｈａｎら、２０１３年）。アミロイドタンパク質によるこのＬＴＰの障害が、アミロイドによって引き起こされる記憶喪失のメカニズムであり得る（Ｃｌｅａｒｙら、２００５年）。ＡＤのＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデルにおいてリラグルチドの試験を行う研究では、この薬物が、記憶形成およびシナプス可塑性の障害、総シナプス数の減少を防ぐことができ、歯状回における幹細胞増殖および神経新生を正常化し、炎症応答を軽減し、さらに皮質中のアミロイドプラーク量、および脳中の総アミロイドレベルを減少できることを示した（ＭｃＣｌｅａｎら、２０１１年）。別の研究では、リラグルチドは、非常に老齢のトランスジェニックマウスにおいても保護的作用および再生的作用を有し、疾患進行の進行段階でも記憶が改善され得、プラーク量がある程度減少し得ることを実証している（ＭｃＣｌｅａｎおよびＨｏｌｓｃｈｅｒ、２０１４年）。
【００１１】
動物モデルにおけるこれらの知見に基づいて、アルツハイマー病患者における予備的臨床試験を行った。その知見は、ＧＬＰ−１アナログリラグルチドが疾患による脳活動の変性およびエネルギー利用を保護することであった。これは、薬物が脳に入り、ニューロンが活動的かつ機能的に保たれながら、アルツハイマー病の有害な影響からニューロンを保護することを実証している（Ｇｅｊｌら、２０１６年）。ＡＤ患者におけるリラグルチドの第ＩＩ相臨床試験が開始された（ＮＣＴ０１８４３０７５）。
【００１２】
さらに、１つの先行技術研究では、ＰＤの６−ヒドロキシドーパミンモデルにおけるＧＬＰ−１受容体アゴニストエキセンジン−４の作用を調査した。病変が誘発された後、ラットをエキセンジン−４で処置したところ、運動活性の保護が観察された。組織学的分析は、エキセンジン−４が黒質におけるチロシンヒドロキシラーゼの数および小胞モノアミントランスポーター２陽性ニューロンの数を両方とも有意に増加させることを示した（Ｂｅｒｔｉｌｓｓｏｎら、２００８年）。第２の研究では、ＰＤの２つのげっ歯類モデル、６−ヒドロキシドーパミン（６−ＯＨＤＡ）およびリポ多糖（ＬＰＳ）を用いて、エキセンジン−４の作用を試験した。運動制御は、薬物群ではるかに改善され、ドーパミンの線条体組織濃度は著しく高かった。加えて、エキセンジン−４は、線条体における細胞外ＤＡの喪失を逆転させた（Ｈａｒｋａｖｙｉら、２００８年）。パーキンソン病のＭＰＴＰマウスモデルでＧＬＰ−１受容体アゴニストのリラグルチドおよびリキシセナチドを試験すると、両方の薬物が運動障害、脳内の慢性炎症、および毒素ＭＰＴＰによって誘発されるドーパミン作動性ニューロンの喪失の防止に良好な効果を示すことがわかった（Ｌｉｕら、２０１５年）。
【００１３】
これらの研究に基づいて、ＰＤ患者におけるエキセンジン−４の臨床試験を開始した。この研究は、いくつかの運動評価および認知試験において、患者が改善し、その改善は１２ヶ月間薬物を中止した後であっても維持されたことを報告した（Ａｖｉｌｅｓ−Ｏｌｍｏｓら、２０１３年；Ａｖｉｌｅｓ−Ｏｌｍｏｓら、２０１４年）。薬物リラグルチドを試験するパーキンソン病患者における第ＩＩ相臨床試験を開始した（ＮＣＴ０２９５３６６５）。
【００１４】
ＧＩＰまたはＧＩＰアナログがＡＤに影響を与えるかを判断するための研究も行われてきた。β−アミロイドフラグメントが脳内のシナプス伝達で誘発するＬＴＰ障害をＧＩＰアナログにより防ぐことができることが見出された（ＧａｕｌｔおよびＨｏｌｓｃｈｅｒ、２００８ｂ）。ＧＩＰ受容体欠失マウス系統では、ＬＴＰも損なわれ、対パルス促進が減少した。これはシナプス小胞の放出が減少していることを示している（Ｆａｉｖｒｅら、２０１１年）。長期持続性ＧＩＰアナログＤ−Ａｌａ２−ＧＩＰはまた、ＡＤのＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデルにおいて神経保護作用を有した。１２ヶ月齢のマウスでは、海馬のＣＡ１領域におけるシナプス可塑性および空間記憶の形成は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスでは損なわれていたが、Ｄ−Ａｌａ２−ＧＩＰ処置したＡＰＰ／ＰＳ１マウスでは損なわれていなかった。加えて、アミロイドプラーク量ははるかに減少し、ＡＤの主な特徴を減少させることにおいて印象的な作用を示した（ＦａｉｖｒｅおよびＨｏｌｓｃｈｅｒ、２０１３ｂ）。
【００１５】
１９ヶ月齢のＡＤマウスでは、この薬物により、シナプスの喪失などのＡＤ症状のいくつかをなお逆転させることができた（ＦａｉｖｒｅおよびＨｏｌｓｃｈｅｒ、２０１３ａ）。縦断的研究では、脳内の酸化ストレスおよび炎症反応は、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいてはるかに減少した（ＤｕｆｆｙおよびＨｏｌｓｃｈｅｒ、２０１３年）。これは、これらのアナログがＡＤにおいて神経保護的特性を有し、かつβ−アミロイドの有害な作用からシナプスを保護することを示唆する。
【００１６】
パーキンソン病のＭＰＴＰマウスモデルにおいて、ＧＩＰアナログＤ−Ａｌａ２−ＧＩＰは保護的であり、運動活性の障害、ドーパミン作動性ニューロンの喪失、シナプスの喪失、およびＭＰＴＰによって誘発される慢性炎症反応を防止した（Ｌｉら、２０１５年）。このマウスモデルにおいて新規二重ＧＬＰ−１／ＧＩＰデュアルアゴニストを試験したとき、これらが良好な保護作用を示すことが見出された（Ｊｉら、２０１５年）。しかし、その特定の分子は、ＧＬＰ−１アナログほど効果的ではなかった。
【００１７】
例えば神経変性疾患、アルツハイマー病およびパーキンソン病などの神経障害のための治療法は、依然として特定する必要がある。
【００１８】
本発明のある実施形態の目的は、従来技術に関連する問題を少なくとも部分的に軽減することである。
【００１９】
本発明のある実施形態の目的は、例えばアルツハイマー病および／またはパーキンソン病などの神経変性疾患の治療および／または防止に使用するための治療用ペプチドを提供することである。
【００２０】
本発明のある実施形態の目的は、ＧＬＰ−１モノアゴニストリラグルチドのクラスで最良のものと比較して、優れた有効性を有する新規ＧＩＰ／ＧＬＰ−１デュアルアゴニストペプチドをアルツハイマー病またはパーキンソン病の治療および／または防止に使用するために提供することである。
【００２１】
本発明のある実施形態の目的は、ＧＩＰモノアゴニストと比較して優れた特性を有するＧＩＰ／ＧＬＰ−１デュアルアゴニストペプチドを提供することである。優れた特性の例としては、例えば、β−アミロイドプラーク量のより大きい減少および／または運動技能障害の減少が挙げられる。
【００２２】
本発明のある実施形態の目的は、例えばアルツハイマー病および／またはパーキンソン病などの神経変性障害の治療および／または防止に使用するための新規ＧＩＰ／ＧＬＰ−１デュアルアゴニストペプチドを提供することである。
【発明の概要】
【００２３】
本発明の一態様では、神経障害の治療および／または予防に使用するためのＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、一般式１：
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｙ１−Ｙ２−Ｒ２  （Ｉ）（配列番号１）
（式中、Ｘａａ２４はＡｓｎおよびＣｙｓから選択され；
Ｙ１は、存在しないか、または少なくとも８個のアミノ酸分子を含む伸長物から選択され；
Ｙ２は、
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号２）；
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）
Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号４）；および
Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号５）から選択され、および
Ｒ２は、−ＮＨ２または−ＯＨから選択される）によって表されるコアゴニストペプチド、
もしくは誘導体、またはペプチドもしくはその誘導体の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が提供される。
【００２４】
ある実施形態では、Ｙ２は、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＬｙｓまたはＬｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓである。
【００２５】
ある実施形態では、Ｙ２は、Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＴｙｒまたはＬｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒである。
【００２６】
ある実施形態では、Ｘａａ２４は、Ｃｙｓである。ある実施形態では、Ｘａａ２４は、Ａｓｎである。
【００２７】
ある実施形態では、Ｙ１は、少なくとも１０個のアミノ酸、例えば少なくとも１１個のアミノ酸を含む伸長物である。
【００２８】
ある実施形態では、Ｙ１は、
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号６）；
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（配列番号７）；
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（配列番号８）；
Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号９）；
Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号１０）から選択されるか、
存在しない。
【００２９】
適切には、Ｙ１は、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号６）である。ある実施形態では、Ｙ１は、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（配列番号８）である。代替的実施形態では、Ｙ１は、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（配列番号７）である。
【００３０】
ある実施形態では、ペプチドは、アミノ酸に共有結合している親水性部分を含む。ある実施形態では、ペプチドは、２４位のアミノ酸に共有結合している親水性部分を含む。
【００３１】
ある実施形態では、Ｙ１が少なくとも１０個のアミノ酸または少なくとも１１個のアミノ酸を含む伸長物である場合、ペプチドは３９位または４０位のアミノ酸に共有結合している親水性部分を含む。
【００３２】
ある実施形態では、Ｘａａ３９またはＸａａ４０はＣｙｓであり、ペプチドはＣｙｓ（３９）またはＣｙｓ（４０）に共有結合している親水性部分を含む。
【００３３】
ある実施態様では、Ｘａａ２４は、Ｃｙｓであり、ペプチドは、Ｃｙｓ（２４）に共有結合している親水性部分を含む。
【００３４】
ある実施形態では、親水性部分は水溶性ポリマーである。
【００３５】
ある実施形態では、水溶性ポリマーはポリエチレングリコール部分であり、任意により、約２０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコール部分である。ある実施形態では、ペプチドは親油性置換基とコンジュゲートしている。
【００３６】
ある実施形態では、親油性置換基は、８〜２４個の炭素（Ｃ）原子を有する炭化水素鎖を含む。ある実施形態では、親油性置換基はアシル基を含む。
【００３７】
ある実施形態では、親油性置換基は脂肪酸分子である。適切には、脂肪酸分子は、Ｃ−８オクタノイル基、Ｃ−１０デカノイル基、Ｃ−１２ラウロイル基、Ｃ−１４ミリストイル基、Ｃ−１６パルミトイル基、Ｃ−１８ステアロイル基、およびＣ−２０アシル基から選択される。
【００３８】
ある実施形態では、親油性置換基は、ペプチドのカルボキシル末端でアミノ酸に接着している。ある実施形態では、親油性置換基は、４０位のアミノ酸に接着している。適切には、親油性置換基は、ペプチドのアミノ酸の側鎖に共有結合している。
【００３９】
ある実施形態では、ペプチドは、親油性置換基をアミノ酸残基にコンジュゲートするスペーサーを含む。適切には、スペーサーは、天然または非天然アミノ酸由来の残基であり、スペーサーは、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、ε−Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇａｂａ、Ａｉｂ、β−アミノヘキソニル、７−アミノヘプタノイル、８−アミノオクタノイル、９−アミノノナノイル、１０−アミノデカノイル、または８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルの残基を含む。
【００４０】
ある実施形態では、スペーサーはγ−Ｇｌｕである。ある実施形態では、スペーサーはジペプチドであり、任意により、スペーサーは、２個の負に電荷したアミノ酸を含み、さらに任意により、スペーサーはγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである。
【００４１】
ある実施形態では、ペプチドは、１つ以上の保存的置換をさらに含む。
【００４２】
ある実施形態では、ペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【００４３】
ある実施形態では、ペプチドは本質的に以下のアミノ酸配列からなる：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【００４４】
ある実施形態では、ペプチドは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【００４５】
適切には、ペプチドは本質的に以下のアミノ酸配列からなる：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【００４６】
本発明のさらなる態様では、神経障害の治療および／または予防に使用するための、本明細書に記載のペプチドを提供する。
【００４７】
本発明のさらなる態様では、患者のある領域におけるβ−アミロイドタンパク質プラークの沈着によって引き起こされるか、またはそれに関連する神経障害の治療における使用のための本明細書に記載のペプチドが提供される。ある実施形態では、β−アミロイドプラークの沈着は、患者の脳内にある。
【００４８】
本発明のさらなる態様では、シナプス伝達の長期増強の機能不全によって引き起こされるか、またはそれに関連する神経障害の治療および／もしくは予防における使用のための本明細書に記載のペプチドが提供される。
【００４９】
本発明のさらなる態様では、炎症によって引き起こされるか、または炎症に関連する神経障害の治療および／もしくは予防における使用のための本明細書に記載のペプチドが提供される。
【００５０】
本発明のさらなる態様では、運動障害に関連する神経障害の治療における使用のための本明細書に記載のペプチドが提供される。
【００５１】
本発明のさらなる態様では、認知機能に影響を及ぼす神経障害、例えば認知症、脳卒中、統合失調症および／または双極性障害の治療および／または予防に使用するための本明細書に記載のペプチドが提供される。
【００５２】
ある実施形態では、障害は脳卒中に関連する脳虚血である。
【００５３】
ある実施形態では、ペプチドは、心的外傷後ストレス障害、てんかん、トゥレット症候群、および幻覚から選択される障害；ならびに注意力、計算力、記憶力、判断力、洞察力、学習力および推論力から任意により選択される、機能不全の認知プロセスの治療および／または予防に使用するためのものである。
【００５４】
ある実施形態では、ペプチドは、神経変性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、末梢神経障害、ハンチントン病およびクロイツフェルト−ヤコブ病の治療および／または予防に使用するためのものである。
【００５５】
適切には、神経障害は、多発性硬化症である。
【００５６】
ある実施形態では、ペプチドは、臨床期または前臨床期アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、および臨床期または前臨床期アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）から選択される神経障害の治療および／または予防に使用するためのものである。
【００５７】
適切には、ペプチドは臨床期アルツハイマー病の治療および／または予防に使用するためのものである。
【００５８】
本発明のさらなる態様では、パーキンソン病の治療および／または予防に使用するための本明細書に記載のペプチドを提供する。
【００５９】
また、本明細書に記載の神経障害を治療および／または防止する方法であって、薬学的有効量の本明細書に記載のＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドを、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。
【００６０】
本発明のさらなる態様では、ＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドもしくはその誘導体、またはそのペプチドもしくはその誘導体の薬学的に許容される塩もしくはそれらの溶媒和物であって、
一般式Ｉ：
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｙ１−Ｙ２−Ｒ２  （Ｉ）（配列番号１）
（式中、Ｘａａ２４はＡｓｎおよびＣｙｓから選択され；
Ｙ１は、存在しないか、または少なくとも８個のアミノ酸分子を含む伸長物から選択され；
Ｙ２は、
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号２）；
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）
Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号４）；および
Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号５）から選択され、
Ｒ２は、−ＮＨ２または−ＯＨから選択される）で表されるＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドもしくはその誘導体、またはそのペプチドもしくはその誘導体の薬学的に許容される塩もしくはそれらの溶媒和物を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、神経障害を治療および／または防止する方法が提供される。
【００６１】
適切には、ペプチドは本明細書に記載のとおりである。
【００６２】
ある実施形態では、神経障害は、心的外傷後ストレス障害、てんかん、トゥレット症候群、および幻覚から選択され、機能不全の認知プロセスは、注意力、計算力、記憶力、判断力、洞察力、学習力および推論力から任意により選択される。
【００６３】
ある実施形態では、神経障害は神経変性障害である。適切には、神経変性障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、末梢神経障害、およびクロイツフェルト−ヤコブ病から選択される。
【００６４】
ある実施形態では、神経障害は、臨床期または前臨床期アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、および臨床期または前臨床期アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）から選択される神経障害である。適切には、神経障害は、臨床期アルツハイマー病である。
【００６５】
本発明のさらなる態様では、臨床期アルツハイマー病の治療および／または予防に使用するための、以下の配列からなるペプチドが提供される：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【００６６】
本発明のさらなる態様では、臨床期アルツハイマー病の治療および／または予防に使用するための、以下の配列からなるペプチドが提供される：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【００６７】
一実施形態では、ペプチドは、以下のアミノ酸配列を含むか、これらからなる：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【００６８】
このペプチドは、本明細書では「ＤＡ４」と称され、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有する。
【００６９】
一実施形態では、ペプチドは、以下のアミノ酸配列を含むか、これらからなる：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【００７０】
このペプチドは、本明細書では「ＤＡ５」と称され、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する。
【００７１】
血液脳関門を通過する能力は、神経変性障害の治療に有用性を有し得る。理論に縛られることなく、本発明のある実施形態のペプチドは、血液脳関門を通過することができると考えられる。さらに、ある実施形態のペプチドは、既知のＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドと比較して、速い速度で血液脳関門を通過する。
【００７２】
血液脳関門を通過するペプチドの伝達には多くの困難があり得ることに留意されたい。血液脳関門を通過する接近性を増強するための複数の異なるメカニズムが考えられてきたが、そのうちの１つはペプチド配列の修飾である。しかし、複数のペプチド修飾が血液脳関門を通過するのを潜在的に助けることが知られているが、それらのインビボ挙動は予測するのが困難である。ペプチドまたはタンパク質分子へのそれらの添加は無効であり得るか、または例えばタンパク質分解プロセス、不正確なペプチドフォールディングパターンおよび／もしくはペプチドの受容体結合特性の変化によるペプチドもしくはタンパク質の不活性化をもたらし得る。
【００７３】
適切には、ペプチドは、アルツハイマー病またはパーキンソン病の治療および／または防止に使用されるためのものである。
【００７４】
また、本明細書に記載のＧＩＰ／ＧＬＰ−１受容体コアゴニストペプチドおよび本明細書に記載の神経障害の治療および／または予防に使用するための薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も本明細書に提供される。本開示においてさらに提供されるのは、このような医薬組成物を含むキットである。
【００７５】
一例としてのみ、添付の図面を参照しながら、本発明の実施形態のさらなる詳細を以下に提供する。
【００７６】
本明細書で使用されるとき、略語「ＤＡ４」は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列からなるＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストを指す。
【００７７】
本明細書で使用されるとき、略語「ＤＡ５」は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなるＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストを指す。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】トランスジェニックマウス（アルツハイマー病モデル）の皮質におけるβ−アミロイドプラーク量の免疫組織化学的測定を示す図である。すべてのペプチドにおいて、プラーク量が減少した。本発明の実施形態のコアゴニストペプチド（ＤＡ４およびＤＡ５）は両方とも、単一のＧＩＰまたはＧＬＰ−１アナログより優れており、β−アミロイド免疫組織化学による定量化、および大脳皮質の断面におけるβ−アミロイドの陽性面積率（％）の決定では、ＤＡ４およびＤＡ５を投与することにより、β−アミロイドプラーク量が減少する。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝６／群。
【図２】トランスジェニックマウスの皮質におけるシナプス密度の免疫組織化学的測定によって定量化した場合、ＤＡ４およびＤＡ５ペプチドが、トランスジェニックマウス（アルツハイマー病モデル）の皮質において、シナプスの喪失から保護することを示すグラフである。すべてのペプチドが、シナプス喪失から保護した。本発明の実施形態のコアゴニストペプチドは両方とも、単一のＧＩＰまたはＧＬＰ−１アナログより優れていた。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝６／群。
【図３】ＤＡ４およびＤＡ５ペプチドが、ドーパミンレベルを低下させるＭＰＴＰによって誘発される運動技能の障害からマウスを保護することを示すグラフである。ロータロッド運動技能試験を下記のように実施した。各動物の持久時間を記録し、平均を計算した。事後ボンフェローニ検定による一元配置ＡＮＯＶＡを用いてデータを分析した。本発明の実施形態のコアゴニストペプチドは両方とも、単一のＧＩＰまたはＧＬＰ−１アナログより優れていた。対照＝ＭＰＴＰを含まない野生型マウス。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝６／群。
【図４】黒質緻密部中のドーパミンを合成する酵素ＴＨのＭＰＴＰによる減少を示す図である。ＤＡ４およびＤＡ５が両方とも、単一のＧＩＰおよびＧＬＰ−１アナログよりも速い速度でドーパミン作動性ニューロンを保護した。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝６／群。
【図５】ＤＡ５ペプチドが、ＡＰＰ／ＰＳ１および野生型マウスの歩行運動および探索的能力に影響を及ぼさないことを示す図である。生理食塩水／ＤＡ５処置マウスの自発的行動を測定するためにオープンフィールド試験を実施した。統計分析（ｐ＝＞０．０５）では、整理食塩水／ＤＡ５群の間にいかなる差異も示さなかった（ａ、ｂ）。
【図６】ＤＡ５ペプチド処置時のＹ字型迷路試験におけるＡＰＰ／ＰＳ１マウスの改善された空間作業記憶を示す図である。ＡＰＰ／ＰＳ１マウスのマウスにおける右交替率は有意に減少した。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝８〜１４／群。
【図７】ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて観察された空間記憶障害が、ＤＡ５ペプチド処置によって改善され得ることを示す図である。下記のように、古典的モリス水迷路を実施し、マウスの空間記憶をプローブ試験によって査定した。（図７ａ、７ｂ）各動物の訓練期間における逃避潜時を記録し、その平均を計算した。（図７ｃ、７ｄ）プローブ試験は、ＤＡ５処置ＡＰＰ／ＰＳ１マウスがＡＰＰ／ＰＳ１−生理食塩水マウスよりも大きな範囲で逃避経路を想起したことを示した。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝８〜１４／群。
【図８】ＤＡ５ペプチドがＡＰＰ／ＰＳ１マウスを認知の柔軟性の低下から保護し、再学習する能力を回復させることを示す図である。逆モリス水迷路試験を下記のように実施した（図８ａ、図８ｂ）。各動物の逃避潜時を長期間の訓練期間において記録し、その平均を計算した（図８ｃ、８ｄ）。プローブ試験は、ＤＡ５処置ＡＰＰ／ＰＳ１マウスがＡＰＰ／ＰＳ１−生理食塩水マウスよりも大きな程度で逃避経路の変化を想起したことを示した。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝８〜１４／群。
【図９】ＤＡ５ペプチドがＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいてシナプス強度を維持していることを示す図である（図９ａ）。ＤＡ５による前処置を受けたマウスは、ＡＰＰ／ＰＳ１トランスジェニックマウスにおいて観察されるＬ−ＬＴＰの低下を逆転させることができた（図９ｂ）。さらに、ＤＡ５処置ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、ニューロン刺激後に高レベルのＬ−ＬＴＰを維持した。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝６／群。
【図１０】ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて、ＤＡ５が神経原線維変化を減少させることを示すグラフである。ｐ−タウタンパク質の免疫蛍光染色の定量化は、ＡＰＰ／ＰＳ１−生理食塩水と比較して、ＡＰＰ／ＰＳ１ＤＡ５処置マウスにおいて、神経原線維変化の減少を示した。＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１。Ｎ＝４／群。
【図１１】ＡＤマウスにおいて、ＤＡ５が認知行動を保護し、かつ病理学的変化を改善できることを示すウエスタンブロットおよびグラフを示す図である。ＤＡ５を用いたＡＰＰ／ＰＳ１マウスの処置は、Ｐ１３／ＡＫＴシグナル伝達を上方制御することによってＧＳＫβの過剰な活性化を防ぐ（ａ〜ｇ）。＊＝ｐ＜０．０５、Ｎ＝６／群。
【図１２】本明細書に記載のペプチドのアミノ酸配列を詳述する図である。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
本発明の実施形態の実施は、他に示さない限り、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技術および免疫学の従来の技術を使用し、それらは当業者の技術の範囲内である。
【００８０】
最も一般的な分子生物学、微生物学組換えＤＮＡ技術および免疫学的技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２００１年）Ｃｏｌｄ  Ｈａｒｂｏｒ−Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．またはＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９０年）Ｊｏｈｎ  ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．に見出すことができる。他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学的用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，第２版、２００２年、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第３版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；およびｔｈｅ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
【００８１】
本開示は、ＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドの使用に関する。天然のヒトＧＬＰ−１ペプチドおよびＧＩＰペプチド配列は、当該分野で公知である。本明細書で使用される用語「ＧＬＰ−１」または「ｈＧＬＰ−１」は、その配列が本明細書に配列番号１３として含まれる、ヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１（７−３７））を指す。
【００８２】
配列番号１３の配列を有するペプチドは、「天然の」ＧＬＰ−１とも称され得る。
【００８３】
ホモサピエンスＧＬＰ−１（７−３７）の配列は：
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶ  ＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫ  ＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ  Ｇ−ＯＨ（配列番号１３）である。
【００８４】
本明細書で使用される用語「ＧＩＰ」または「ｈＧＩＰ」は、その配列が本明細書中で配列番号１４として含まれるヒト胃抑制ペプチド（グルコース依存性インスリン分泌促進ペプチドとしても公知である）を指す。配列番号１４の配列を有するペプチドは、「天然」ＧＩＰとも称され得る：
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ−ＯＨ（配列番号１４）。
【００８５】
本明細書で使用されるとき、いかなるさらなる指定もない場合の「ＧＩＰ」または「ＧＬＰ−１」への一般的な言及は、それぞれ、天然ＧＩＰまたは天然ＧＬＰ−１を意味することを意図している。
【００８６】
本明細書で使用されるとき、用語「ペプチド」は、３個以上のアミノ酸、典型的には５０個未満のアミノ酸の配列を包含し、アミノ酸は、天然に存在するかまたは天然に存在しないアミノ酸である。天然に存在しないアミノ酸は、インビボで天然には存在しないが、それにもかかわらず、本明細書に記載のペプチド構造に組み込むことができるアミノ酸を指す。
【００８７】
本明細書で使用されるとき、用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、ポリマーの長さに関係なく、アミノ酸のポリマーを指すために同義的に使用される用語である。典型的には、ポリペプチドおよびタンパク質は、「ペプチド」よりも長いポリマー長を有する。
【００８８】
本明細書で使用されるとき、アミノ酸「修飾」とは、アミノ酸の置換、付加または欠失を指し、ヒトタンパク質において一般的に見られる２０個のアミノ酸、ならびに非定型であるか、または天然に存在しないアミノ酸のいずれかによる置換または付加が挙げられる。本出願を通して、番号による特定のアミノ酸位置（例えば、２８位）への言及はすべて、本発明の実施形態のＧＩＰ／ＧＬＰ−１デュアルアゴニスト中のその番号の位置におけるアミノ酸を指す。
【００８９】
本明細書を通して、天然に存在するアミノ酸についての慣用の一文字および三文字コード、ならびに例えばＡｉｂ（α−アミノイソ酪酸）などの他のアミノ酸について一般に認められている三文字コードが使用される。
【００９０】
したがって、本発明の一態様では、神経障害の治療および／または予防に使用するための、ＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドもしくはその誘導体、またはペプチドもしくはその誘導体の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物が提供される。適切には、コアゴニストペプチドは、ＧＩＰパーセンテージ効力の約１０倍以内のＧＬＰ−１パーセンテージ効力を有する。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、用語「アゴニスト」とは、当該受容体の種類を活性化する物質（リガンド）を指す。本明細書で使用される「デュアルアゴニスト」および「コアゴニスト」という用語は同義的であり、２つの受容体の種類を活性化する物質（リガンド）を指す。適切には、本明細書に記載のＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドは、ＧＬＰ−１ＲおよびＧＩＰＲの両方でバランスのとれた活性を有する。一実施形態では、コアゴニストペプチドは、ヒトＧＩＰ受容体におけるＥＣ５０の約１０倍以内のヒトＧＬＰ−１受容体でのＥＣ５０を有する。インビトロアッセイにおける活性は、ペプチドの活性の尺度として使用され得る。
【００９２】
適切には、本明細書に記載のペプチドは、例えば国際公開第９８／１１１２５号に記載されているように、固相または液相ペプチド合成によって合成される。適切には、ペプチドは、Ｆｉｎａｎら、（Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．５  ２０９ｒａ１５１（２０１３年）ｐ１〜１６）に記載されているとおり合成されてもよい。
【００９３】
本開示のペプチドは、本明細書に記載の神経障害の治療および／または防止に使用するための保存または投与用に調製された医薬組成物として配合され得る。このような組成物は、典型的には、治療上有効量のＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドを適切な形態で、薬学的に許容される担体中に含む。
【００９４】
本明細書に記載のＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドの治療有効量は、投与経路、治療される哺乳動物の種類、および考慮中の特定の哺乳動物の身体的特徴に依存する。これらの要因およびこの量を決定することに対するそれらの関係は、医学分野の熟練した開業医であれば、熟知している。この量および投与方法は、最適な有効性を達成するように調整することができ、体重、食事、併用薬などの要因、および医療分野の当業者に周知の他の要因などに依存し得る。本開示のペプチドは、ヒトの治療に特に有用であり得る。
【００９５】
有効投薬量および治療プロトコルは、実験動物において低用量で開始し、次いで作用を監視しながら投薬量を増やし、同様に投薬レジメンを体系的に変更することによる従来の手段によって決定することができる。ある対象にとって最適な投薬量を決定するときには、臨床医によって多数の要因が考慮され得る。このような考察は、当業者に知られている。
【００９６】
用語「薬学的に許容される担体」は、任意の標準的な薬学的担体を含む。治療的使用のための薬学的に許容される担体は製薬分野において周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｄｉｔ．１９８５年）に記載されている。例えば、わずかに酸性であるｐＨまたは生理学的ｐＨの滅菌食塩水およびリン酸緩衝食塩水を使用し得る。ｐＨ緩衝剤は、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、トリス／ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、重炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、または酢酸塩、またはそれらの混合物であり得る。この用語はさらに、ヒトなどの動物における使用のために米国薬局方に挙げられている任意の剤を包含する。
【００９７】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の実施形態のＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドのうちのいずれか１つの塩を指す。塩としては、酸付加塩および塩基性塩などの薬学的に許容される塩が挙げられる。酸付加塩の例としては、塩酸塩の塩、クエン酸塩の塩および酢酸塩の塩が挙げられる。塩基性塩の例としては、カチオンがナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属、カルシウムなどのアルカリ土類金属、およびアンモニウムイオン＋Ｎ（Ｒ３）３（Ｒ４）（式中、Ｒ３およびＲ４は独立して、任意により置換されたＣ１〜６−アルキル、任意により置換されたＣ２〜６−アルケニル、任意により置換されたアリール、または任意により置換されたヘテロアリールを示す）から選択される塩が挙げられる。薬学的に許容される塩の他の例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」第１７版、（編）Ａｌｆｏｎｏｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｍａｒｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８５年および最新版、および「Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」に記載されている。
【００９８】
本開示の文脈における用語「溶媒和物」は、溶質（例えば、本開示によるペプチドまたはその薬学的に許容される塩）と溶媒との間に形成された、定義されている化学量論的複合体を指す。これに関連して、溶媒は、例えば、水、エタノールまたは別の薬学的に許容される、典型的には、これらに限定されないが、酢酸または乳酸などの小分子有機種であり得る。当該溶媒が水であるとき、こうした溶媒和物は、通常水和物と呼ばれる。
【００９９】
「治療」は、有益なまたは望ましい臨床結果を得るためのアプローチである。本開示の目的のために、有益なまたは望ましい臨床結果としては、これらに限定されるものではないが、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患状態の安定化（すなわち悪化していない）、疾患の進行の遅延もしくは減速、疾患状態の改善もしくは緩和、および寛解（部分寛解もしくは完全寛解）が挙げられ、これらは検出可能であるか、または検出不可能である。「治療」はまた、治療を受けていない場合の予想生存期間と比較して、生存期間が延長することを意味し得る。「治療」とは、障害の発症を防止すること、または疾患の病状を変化させることを意図して行われる介入である。したがって、「治療」とは、ある実施形態では、治療的治療および予防的または防止的手段の両方を指す。治療を必要としている場合、すでに障害を有している場合のみでなく、障害が防止されるべき場合も含む。治療とは、治療がない場合と比較して、病状または症状の増加を抑制するか、または低減させることを意味し、必ずしも関連する状態の完全な停止を意味するものではない。
【０１００】
神経障害の治療に使用するための医薬組成物は、単位剤形であり得る。このような形態では、組成物は適切な量の活性成分を含有する単位用量に分けられる。単位剤形は、包装された調製物であってもよく、包装は別々の量の調製物を含み、例えば、包装された錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の粉末剤である。単位剤形はまた、カプセル剤、カシェ剤、もしくは錠剤自体であり得るか、または適切な数のこれらの任意の包装形態であり得る。この組成物は、例えばペンの形態などの単回投与注射形態で提供されてもよい。ある実施形態では、包装された形態は、使用のための指示書を有するラベルまたは添付書類を含む。組成物は、任意の好適な投与経路および投与手段用に配合され得る。薬学的に許容される担体または希釈剤としては、経口、直腸、経鼻、局所（口腔および舌下など）、膣内または非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内および経皮など）投与に好適である配合物に用いられるものが挙げられる。配合物は、便利には単位剤形で提供されてもよく、また薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製されてもよい。
【０１０１】
本明細書で使用されるとき、ペプチドの「有効」量または「治療上有効量」とは、所望の作用をもたらすために十分な量であり、かつ無毒である、ペプチドを指す。「有効」とされる量は、個体の年齢および全身状態、投与様式などに応じて、対象ごとに異なる。あらゆる個体の場合における適切な「有効」量は、日常的な実験を用いて当業者によって決定され得る。
【０１０２】
用語「患者」、「対象」および「個体」は、同義的に使用され得、また、ヒトまたは非ヒト哺乳動物のいずれかを指す。適切には、対象はヒトである。
【０１０３】
本明細書に記載のペプチドは、神経障害、例えば神経変性障害を治療および／または防止するために使用され得る。一実施形態では、ペプチドは、アルツハイマー病の治療および／または防止に使用するためのものである。アルツハイマー病（ＡＤ）は、特に連合新皮質（ａｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ  ｎｅｏｃｏｒｔｅｘ）および海馬において皮質ニューロンの喪失をもたらす神経変性障害であり、次に認知機能のゆるやかであり、かつ進行性の喪失をもたらし、最終的に認知症および死をもたらす。この疾患の主な特徴は、細胞外老化または神経炎性「プラーク」としての凝集βアミロイドペプチド、および細胞内神経原線維「もつれ」（ＮＦＴ）としての過リン酸化タウタンパク質などの折畳み不全タンパク質が凝集し、沈着していることである。
【０１０４】
遺伝的には、ＡＤは２つの形態：（１）早発型家族性ＡＤ（＜６０歳）および（２）遅発型散発性ＡＤ（＞６０歳）に分けられる。まれに、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、プレセニリン１（ＰＳＥＮ１）、およびプレセニリン２（ＰＳＥＮ２）遺伝子の突然変異の原因となる疾患が、早発型家族性ＡＤを引き起こし、ＡＰＯＥ（対立遺伝子４）が遅発型ＡＤの唯一の最も重要な危険因子であることが知られている。
【０１０５】
アルツハイマー病は、個体ごとに異なって発症するが、多くの共通の症状がある。初期症状は、多くの場合、「年齢に関連した」懸念、またはストレスの兆候であると誤って考えられる。初期段階では、最も共通している症状は、最近の出来事を思い出すのが困難であることである。ＡＤが疑われる場合、診断は、通常、挙動および思考能力を評価する試験により確認され、多くの場合、利用可能であれば脳スキャンを行うが、確定診断には脳組織の検査が必要である。
【０１０６】
疾患が進行するにつれて、症状としては、混乱、過敏性、攻撃性、気分のむら、言語の問題、および長期的な記憶喪失を挙げることができる。罹患者は、衰退すると、多くの場合、家族および社会から引き離される。徐々に身体機能が失われ、最終的には死に至る。疾患は個体によって異なるので、それが個体にどのように影響するかを予測することは困難である。ＡＤは、完全に明らかになるまでに未知のかつ可変の期間発症し、何年もの間診断されずに進行する場合もある。平均して、診断後の平均余命は約７年である。診断後１４年以上生存している個体は、３％未満である。
【０１０７】
一実施形態では、コアゴニストペプチドは、アルツハイマー病の治療に使用するためのものである。ペプチドは、対象におけるアルツハイマー病の進行を減速および／または停止させるために使用され得る。ペプチドは、前臨床期アルツハイマー病に罹患している対象の臨床期アルツハイマー病への進行を減速および／または防止するために使用するためのものであってもよい。
【０１０８】
一実施形態では、コアゴニストペプチドは、パーキンソン病の治療および／または防止に使用するためのものである。パーキンソン病は、進行性ニューロン、特に黒質のドーパミン作動性ニューロンの喪失を特徴とする神経変性障害であり、振戦、硬直、動きの遅さ、および姿勢の不安定性などの運動障害をもたらす。一実施形態では、ペプチドは、パーキンソン病に関連する運動障害を軽減および／または防止するために使用される。
【０１０９】
さらに、学習障害および記憶障害に関連する、非定型パーキンソン症候群およびパーキンソン病のサブクラスの数が増えている。典型的な例は、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、および多系統萎縮症（ＭＳＡ）である。ペプチドは、パーキンソン病に罹患している対象における学習過程もしくは学習障害の回復もしくは改善および／または記憶喪失もしくは記憶障害の防止もしくは回復もしくは改善に使用するためのものであり得る。
【０１１０】
本明細書の説明および特許請求の範囲を通して、「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」および「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」という用語およびそれらの変形は、「含むがこれらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」ことを意味し、他の部分、添加剤、成分、整数、またはステップを排除すること（および排除しないこと）を意図するものではない。本明細書の説明および特許請求の範囲を通して、文脈上別段の要求がない限り、単数形は複数形を包含する。特に、不定冠詞が使用されている場合、本明細書は、文脈上別段の要求がない限り、単数形ならびに複数形も企図することが理解されるべきである。
【０１１１】
本発明の特定の態様、実施形態または実施例に関連して説明された特徴、整数、特性または群は、それらに不適合でない限り、本明細書に記載された他のいかなる態様、実施形態または実施例にも適用可能であることが理解されるべきである。本明細書に開示されているすべての特徴（添付の請求項、要約および図面を含む）、ならびに／またはそのように開示されている任意の方法もしくはプロセスのすべてのステップは、特徴および／またはステップの少なくともいくつかが相互に排他的である組み合わせを除いて、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本発明は、本明細書に開示されている任意の実施形態の任意の詳細に限定されるものではない。本発明は、本明細書に開示された（任意の添付の請求項、要約および図面を含む）特徴の任意の新規のもの、または新規の組合せ、またはこのように開示された任意の方法もしくはプロセスのステップの任意の新規のものもしくは任意の新規の組合せに及ぶ。
【０１１２】
読者の注意は、本出願に関連して本明細書と同時またはそれ以前に提出され、かつ本明細書を用いて公衆の閲覧に公開されるすべての論文および文書に向けられ、そのようなすべての論文および文書の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１３】
単位、接頭辞および記号は、それらの国際単位系（Ｓｙｓｔｅｍｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｄ’ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ））に認められた形式で表示する。数値範囲は、その範囲を定義している数を含む。他に示さない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシへの配向で左から右へ書く。本発明の実施形態のペプチド中のすべてのアミノ酸残基は、好ましくはＬ配置である。しかしながら、Ｄ配置アミノ酸もまた存在し得る。
【０１１４】
実施例
分子構造
ペプチド合成
ペプチドは、ＧＬ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｌｔｄ．（Ｓｈａｎｇｈａｉ）により合成された。ペプチドの純度は、逆相ＨＰＬＣによって分析し、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析法を用いて、純度＞９９％として特徴を明らかにした。
【０１１５】
ペプチドは、ウルトラピュア（登録商標）水の入ったポリプロピレンチューブ中で、濃度１ｍｇ／ｍｌまで再構成して、注射に必要な用量を新たに調製できるように、アリコートに分けて凍結した。
【０１１６】
試験対象のペプチド：
１．リラグルチド（ＧＬＰ−１アナログ）−
リラグルチドは、典型的には非経口投与されるペプチド薬である。リラグルチドは、２型糖尿病の治療に承認されている。リラグルチドは、国際公開第９８／０８８７１（Ａ１）号の実施例３７に開示されている。リラグルチドのアミノ酸配列は、配列番号１５に示す。
脂肪酸は、２６位でアミノ酸Ｌｙｓに結合している。３４位のアミノ酸Ｌｙｓは、アミノ酸Ａｒｇで置換されている。
２．ＤＡｌａ２ＧＩＰ−Ｌｙｓ３７−γ−Ｇｌｕ−ＰＡＬ（ＧＩＰアナログ）
ＤＡｌａ２ＧＩＰ−Ｌｙｓ３７−γ−Ｇｌｕ−ＰＡＬの配列は次のとおりである：
Ｙｄ−ＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫ（γ−Ｅ−Ｃ１６）ＮＤＷＫＨＮＩＴＱ。
リラグルチドは、ＧＬＰ−１受容体モノアゴニストであり、ＤＡｌａ２ＧＩＰ−Ｌｙｓ３７−γ−Ｇｌｕ−ＰＡＬは、ＧＩＰ受容体モノアゴニストである。
３．以下のアミノ酸配列を有する、本明細書においてＤＡ４と称されているペプチド：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２
（Ｘ＝アミノ−イソ酪酸）。
ＤＡ４ペプチドは、ＧＬＰ−１／ＧＩＰデュアルアゴニストである。
４．以下のアミノ酸配列を有する、本明細書においてＤＡ５と称されているペプチド：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２
（Ｘ＝アミノ−イソ酪酸）。
ＤＡ５ペプチドは、ＧＬＰ−１／ＧＩＰデュアルアゴニストである。
【０１１７】
実施例１
トランスジェニックアルツハイマー病マウスモデル
動物モデルは、新規薬物の試験を行うために開発されたものである。アルツハイマー病の標準モデルは、ヒトにおいてアルツハイマー病を誘発することが知られているアミロイドの産生のためのヒト突然変異遺伝子を発現するトランスジェニックマウスである。これらのＡＰＰ／ＰＳ１トランスジェニックマウスは、脳内のアミロイドの凝集、記憶喪失およびシナプス喪失などのアルツハイマー病の症状のいくつかを再現する（Ｒａｄｄｅら、２００６年）。
【０１１８】
ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、ヒトにおいてアルツハイマー病を誘発するヒトスウェーデン変異ＡＰＰ（ｈｕｍａｎ  Ｓｗｅｄｉｓｈ  ｍｕｔａｔｅｄ  ＡＰＰ）およびヒト突然変異プレセニリン−１を発現する。
【０１１９】
試験を行ったペプチドの用量は、１０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重であった。ペプチドは、１日１回の腹腔内注射により８週間投与した。対照として、生理食塩注射液を投与した。６匹／群の動物にペプチドまたは生理食塩水対照液を注射した。
【０１２０】
ＡＤマウスにおけるアミロイドプラークおよびシナプス数の脳組織分析
動物（６匹／群）は、３０ｍｌの氷冷ＰＢＳおよび３０ｍｌの氷冷４％パラホルムアルデヒドで経心的に灌流して、脳を後固定した。脳を摘出し、組織を凍結保護するために新鮮な３０％スクロース含有ＰＢＳ溶液に入れ、低温槽上で厚さ４０μｍに切断した。切片は、立体規則に従って選択し、最初の切片は無作為に切り取り、その後５つの切片ごとに切り取った。７〜１３の切片／脳を分析した。
【０１２１】
免疫染色技術を用いて、神経プラーク量（抗β−アミロイドウサギポリクローナル抗体（１：２００、ウサギポリクローナル−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ７１−５８００））およびシナプトフィシン（ポリクローナルウサギ抗シナプトフィジン一次抗体、１：２０００、Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を査定して、皮質におけるシナプスの量を測定した。脳サンプルを最初に９９％ギ酸に７分間暴露し、次いでＴＢＳ中で１０分間３回洗浄した。９９％ギ酸により前処理することで、ホルマリン固定脳サンプル中におけるβ−アミロイドの検出を劇的に増加させることが知られている。次にサンプルは、０．３％Ｈ２Ｏ２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ；カタログ番号：５１６８１３）含有ＴＢＳで３０分間振盪装置でインキュベートして、内因性過酸化物活性を枯渇させ、その後ＴＢＳ中で１０分間３回洗浄した。
【０１２２】
脳組織中において膜の透過性を増加させるために、サンプルを、振盪装置で、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ；カタログ番号：５１６８１３）含有ＴＢＳに１０分間さらした。組織中の非特異的タンパク質親和性結合は、サンプルを、振盪装置で、５％のヤギ血清（Ｇｉｂｃｏ；カタログ番号：１６２１０−０６４）含有ＴＢＳと共に３０分間インキュベートすることによって飽和させた。
【０１２３】
β−アミロイドまたはシナプトフィジンに対する一次抗体を添加し、４℃にて振盪装置で一晩インキュベートした。抗体はポリクローナル抗体であり、ウサギの合成β−アミロイド１−４３ペプチドに対して発育させた。一次抗体を、２％ヤギ血清および１０％トリトンＸ−１００含有ＴＢＳにおいて１〜２５０の最終希釈で使用した。その後、サンプルをＴＢＳで１０分間３回洗浄し、振盪装置において、二次抗体を４℃で９０分間添加した。二次抗体は、ヤギで発育させたビオチン化抗ウサギＩｇＧ（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  Ｋｉｔ、ウサギＩｇＧ；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；カタログ番号：ＰＫ−６１０１）であり、１％ヤギ血清および１０％トリトンＸ−１００含有ＴＢＳにおいて、１〜６０の最終希釈で使用した。
【０１２４】
ＴＢＳ中で１０分間３回洗浄した後、サンプルを、振盪装置で、４℃で９０分間、３％アビジン溶液（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  Ｋｉｔ、ウサギＩｇＧ；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；カタログ番号：ＰＫ−６１０１）および３％ビオチン化西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液（Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  Ｋｉｔ、ウサギＩｇＧ；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；カタログ番号：ＰＫ−６１０１）含有ＴＢＳにおいてインキュベートした。次にサンプルをＴＢＳ中で１０分間３回洗浄し、次いで３％ＳＧブルー溶液（ＳＧブルーペルオキシダーゼキット；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；カタログ番号：ＳＫ−４７００）および３％Ｈ２Ｏ２溶液含有リン酸緩衝食塩水を５分間添加することにより染色し、再びリン酸緩衝食塩水で１０分間３回洗浄した。
【０１２５】
染色を増強するために、サンプルを０．５％ＣｕＳＯ４（ｗ／ｗ）含有ｄｄＨ２Ｏと共に５分間インキュベートした。ｄｄＨ２Ｏ中で１０分間３回洗浄した後、脳スライス片を、一晩乾燥させることができるところで細かいブラシを用いてシラン被覆ガラススライド上に置いた。最後にスライドを水系封入剤（ＶｅｃｔａＭｏｕｎｔＡＱ封入剤；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号：Ｈ−５５０１）を有するカバースリップに置いた（ｃｏｖｅｒ  ｓｌｉｐｐｅｄ）。対照として、１７ヶ月齢の非トランスジェニック同腹仔からの一組のサンプルを、実験サンプルと一緒に処理した。
【０１２６】
顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）下において、無作為化不偏（ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｕｎｂｉａｓｅｄ）解像装置で撮影した切片は、脳切片画像に重ね合わせ、ソフトウェアＩｍａｇｅ  Ｊ（ＮＩＨ、ＵＳＡ）を用いて、Ｍｕｌｔｉ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄプラグインを使用して分析した。事後ボンフェローニ検定による一元配置ＡＮＯＶＡを用いてデータを分析した。
【０１２７】
パーキンソンマウスモデル
マウスにおいてパーキンソン様症状を誘発するための標準的なモデルは、化学物質（ＭＰＴＰ）の注射である（Ｌｉら、２００９）。この化学物質は、ドーパミンを産生する頭脳のニューロンを損なわせるか、または死滅させる。マウスは、運動障害を発症し、脳内のドーパミン作動性ニューロンは、その数および機能が減少する。酵素チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）は、ドーパミンを合成するのに必要とされる。ＴＨの喪失は、ドーパミン産生の喪失を意味する（Ｈａｒｋａｖｙｉら、２００８年）。
【０１２８】
成体雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ドーパミン作動性毒素ＭＰＴＰ（０．１ｍＬのＰＢＳ中２０ｍｇ／ｋｇ、４つの用量のＭＰＴＰ（Ｓｉｇｍａ）を２時間間隔で腹腔内投与した）またはビヒクル（ＰＢＳ）を１日与えた。この処置は、ドーパミン作動性ニューロンに選択的に作用し、マウスにパーキンソン様症状を誘発させる。１つの群は、病変のない対照として、ＭＰＴＰを受けなかった。
【０１２９】
試験を行ったペプチドの用量は、１０ｎｍｏｌ／ｋｇ体重であった。ペプチドは、１日１回の腹腔内注射により２週間投与した。対照として、生理食塩水注射液を投与した。６匹／群の動物にペプチドまたは生理食塩水対照液を注射した。
【０１３０】
ロータロッドモータ制御試験
ロータロッドは、時間とともに加速する回転ポールで構成されている。マウスをロッド上に置き、回転を加速することにより運動技能を試験する。回転が増すにつれて、動物は握りを失い、ロッドの下に配置された緩衝材上に落ちる。マウスに、３週間、連続した２日間の各日に４５分の試行間間隔で３回の試行を行った。各動物の持久時間を記録し、平均を計算した。事後ボンフェローニ検定による一元配置ＡＮＯＶＡを用いてデータを分析した。
【０１３１】
黒質緻密部および線条体におけるＴＨの免疫組織化学
６匹／群の動物を、ドーパミン産生のマーカーであるチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）の発現について分析した。線条体（ブレグマ１１〜１０．２）およびＳＮｐｃ（ブレグマ２４．８０〜２６．０４）からの冠状脳切片（２０μｍ）を、ＴＨを認識する抗体を用いて免疫組織化学により分析した。
【０１３２】
切片を低温槽で切断し、４％パラホルムアルデヒド中で後固定し、ＰＢＳ中で洗浄し、０．３％Ｈ２Ｏ２含有メタノール中で２０分間処置し、再度洗浄した。ＴＨ（１：８００）抗体とのインキュベーションは、０．１％Ｔｗｅｅｎおよび１０％ヤギ血清含有ＰＢＳにおいて、４８℃で一晩行った。切片は、０．１％ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで希釈したビオチン化二次抗体と共に室温で１時間インキュベートした。ＤＡＢ染色は、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  ｋｉｔの説明書（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に従って実施した。各動物について、１つの線条体レベルからの３つの組織切片を染色し、ＴＨ陽性線維神経支配について分析した。全ＳＮを代表するＴＨ細胞数を達成するために、各動物を４および３体軸方向レベル（ブレグマ−４．８０から−６．０４）で分析した。各レベルからの２つの組織切片を、免疫組織化学により定量化した。
【０１３３】
事後ボンフェローニ検定による一元配置ＡＮＯＶＡを用いてデータを分析した。結果は、図１〜４において例解する。
【０１３４】
結論
これらの結果は、アルツハイマー病およびパーキンソン病の動物モデルにおいて、ＧＬＰ−１／ＧＩＰデュアルアゴニストペプチドの両方（ＤＡ４およびＤＡ５）が単一のＧＬＰ−１およびＧＩＰアナログよりも優れた神経保護を示したことを実証したものである。したがって、本実施例のデータは、ペプチドＤＡ４およびＤＡ５が両方とも、例えばアルツハイマー病および／またはパーキンソン病などの神経変性障害の治療および／または防止における使用に好適であると考えられ得ることを実証している。
【０１３５】
実施例２
実施例２の材料および方法は、記載した以外は実施例１と同じである。実施例２で使用する試薬としては、ｐ−ＰＩ３Ｋｐ８５、ＰＩ３Ｋｐ８５、ｐ−Ａｋｔ（ｓｅｒ４７３）、Ａｋｔ、ｐ−ＧＳＫ３β（Ｙ２１６）、およびＧＳＫ３β（Ａｂｃａｍ、Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）に対する抗体のみが挙げられる。ｐ−タウに対する抗体（ＡＴ８）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＵＳＡ）。マウス抗βアクチン、抗ウサギＩｇＧ、抗マウスＩｇＧ、ＣＹ３抗マウスＩｇＧ、ＲＩＰＡライセート、ＢＣＡ  プロテインアッセイキット、ＤＡＰＩ染色液および抗蛍光減衰剤（Ｂｏｓｔｅｒ（Ｗｕｈａｎ、Ｃｈｉｎａ））。
【０１３６】
歩行運動活動および探索挙動を調べるためのオープンフィールド試験
実験前に、動物は実験室で３０分間の順応を行った。オープンフィールドは、中央領域として中央に４つの正方形を画定し、その残りを周辺領域として画定して、１６の同じサイズの正方形に分割した。各マウスは、５分間、中央から装置（４０ｃｍ×４０ｃｍ×４０ｃｍ）に個別に入れ、合計距離、ならびに中央での時間の割合を、Ｓｍａｒｔ  ３．０ソフトウェアシステム（Ｐａｎｌａｂ、Ｓｐａｉｎ）により同時に記録した。各試験の前に、装置を７０％エタノールで洗浄した。
【０１３７】
ＡＤマウスの作業記憶を測定するためのＹ字型迷路試験
空間作業記憶は、Ｙ字型迷路における自発的交替挙動を記録することにより査定した。迷路は、長さ３０ｃｍ、高さ７ｃｍ、幅１５ｃｍの３本のアームで作られ、そのアームは正三角形の中央領域に集合させた。各マウスを中央の三角領域に配置し、８分間のセッション中に迷路を自由に移動させた。全アームへの侵入およびアームの順序は、Ｓｍａｒｔ  ３．０ソフトウェアシステムによって記録した。交替は、重なり合う三組の３つのアームへの連続した侵入として定義した。交替率は、実際の交替数と可能な交替数の比（アーム侵入総数から２を引いた値として定義される）に１００を掛けた値として計算した。
【０１３８】
空間学習および記憶を測定するための古典的モリス水迷路試験および反転モリス水迷路試験
古典的モリス水迷路（ＭＷＭ）試験を用いて、マウスの空間基準記憶を調べた。水迷路は、主にステンレス鋼プールおよび逃避のためにプール内にプラットフォームを備えていた。水迷路の壁には、いくつかのランドマークを固定させた。プールは、２２±２℃の水道水で満たした。第１の段階は、獲得試行段階であり、５日の訓練日（１〜５日目）、および毎日行う４回の試行で構成されていた。プール（直径１２０ｃｍ、高さ５０ｃｍ）を４つの象限に分け、水面下１ｃｍに隠れた逃避プラットフォーム（直径１２ｃｍ）を第１象限の中央に配置した。プールの円周に沿って等間隔に配置された４点は、開始位置として使用し、この位置は、１日４回の試行において無作為に選択した。マウスがプラットフォームに上がるか、または時間が１分に達すると、記録を停止した。逃避潜時は、Ｅｔｈｏｖｉｓｉｏｎ  ３．０ソフトウェアシステム（Ｎｏｌｄｕｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって記録した。第２の段階は、プローブ試行段階であった。獲得作業を終えた翌日（６日目）に、空間記憶を査定するためにプローブ試験を実施した。プラットフォームをプールから取り出し、動物を１分間自由に泳がせた。標的象限（第１象限）における遊泳時間の割合およびプラットフォームを通過する回数を記録した。逆転ＭＷＭ試験を用いて、マウスの再学習能力および認知の柔軟性を観察した。古典的なＭＷＭ試験の後、プラットフォームを反転象限（第３象限）に移動させ、マウスを上記と同様の４日間の獲得試行および１日間のプローブ試行のために水中に入れた。第３の段階は、可視可能なプラットフォーム試験であった。プラットフォームを水面より１ｃｍ上に上げ、マウスを無作為に選択した２つの象限に入れた。標的までの水泳時間を記録した。
【０１３９】
ＡＤマウスにおけるＬ−ＬＴＰのインビボ海馬測定
マウスをウレタン（Ｓｉｇｍａ、ＵＫ、１．５ｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で麻酔し、Ｌ−ＬＴＰを記録するために脳定位固定装置（ＲＷＤ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｃｈｉｎａ）に入れた。頭皮を切り取り、頭蓋骨を露出させ、頭蓋骨の一方の側に小さい穴を開けた（ブレグマの後側２．０ｍｍおよび正中線の外側１．５ｍｍ）。
【０１４０】
一対の平行な刺激／記録電極（Ｓｅｑｕｉｍ、ＷＡ、ＵＳＡ）を海馬のＣＡ１領域のＳｃｈａｆｆｅｒ側枝および放射状層に挿入した。基礎となるシナプス伝達が影響を受けるか観察するために、３０秒間隔および３０分間隔でベースラインｆＥＰＳＰを試験刺激によって誘発し、ｆＥＰＳＰを記録した。その後、５０ｍｓ間隔で２対試験刺激を、対パルス促進（ＰＰＦ）を誘発するためにＨＦＳの前に与えた。第２のｆＥＰＳＰの傾きを第１のｆＥＰＳＰの傾きで割ることによって算出したＰＰＦ比の変化は、シナプス前終末からの神経伝達物質放出の変化と関連していると考えられる。Ｌ−ＬＴＰは、５分間隔で３セットの高周波刺激（ＨＦＳ）により誘発された。ＨＦＳセットは各々が、５ｍｓの刺激間隔（２００Ｈｚ）を有する２０パルスの三連発のトレインを含む。ｆＥＰＳＰは、ＨＦＳ後１８０分間記録した。すべての事象は、生物学的信号処理システム（Ｃｈｅｎｇｄｕ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ、Ｃｈｉｎａ）によって記録した。ＨＦＳ後の各群におけるｆＥＰＳＰの変化率を比較した。
【０１４１】
海馬におけるリン酸化タウタンパク質の免疫染色
インビボでの海馬のＬ−ＬＴＰを記録後、マウスを、腹腔内注射により抱水クロラール（０．００７ミリリットル／ｇ）で麻酔し、組織を脱水のために３０％スクロース溶液に移した後、脳組織を２４時間パラホルムアルデヒドで固定した。脳組織を採取し、−８０℃で凍結し、次いで厚さ３０μｍにスライスし、凍結切片をＰＢＳ中に入れ、正常ヤギ血清（Ｓｏｌａｒｂｉｏ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ）でブロックし、続いて一次抗体、二次抗体、およびＤＡＰＩを添加した。リン酸化タウタンパク質は、共焦点レーザー走査型顕微鏡で観察した。
【０１４２】
ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＧＳＫ３βの海馬レベルを査定するためのウエスタンブロッティング
マウスの海馬を解剖し、組織タンパク質抽出試薬中で均質化し、タンパク質濃度をＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔを用いて測定した。各サンプルから合計５０μｇのタンパク質を使用した。サンプルタンパク質は、１２％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で分離させた。その後、タンパク質をＰＶＤＦ膜に移し、非特異的結合を５％ＢＳＡでブロックした。一次抗体を用いて膜を４℃で一晩インキュベートし、続いて二次抗体を２時間インキュベートした。標的ストリップ（ｐ−ＰＩ３Ｋ、ｔ−ＰＩ３Ｋ、ｐ−ＡＫＴ、ｔ−ＡＫＴ、ｐ−ＧＳＫ３β、およびｔ−ＧＳＫ３β）の光学密度は、ゲル画像処理システムを用いて分析した。
【０１４３】
事後ボンフェローニ検定による一元配置ＡＮＯＶＡを用いてデータを分析した。結果は、図５〜１１に示す。
【０１４４】
結論
この研究に存在する結果は、ＡＰＰ／ＰＳ１トランスジェニックＡＤマウスにおける認知機能および病理学的特徴に対するＧＬＰ−１／ＧＩＰデュアルアゴニストＤＡ５ペプチドの保護作用を確認したものである。ＤＡ５ペプチドの神経保護は、海馬シナプス可塑性およびＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＧＳＫ３βシグナル伝達経路の改善と関連している可能性がある。上記の結果は、ＤＡ５ペプチドが神経変性障害の治療に有用であり得、ＡＤ患者、特にＴ２ＤＭまたは高血糖症の患者に特に有益であり得ることを示唆している。
【０１４５】
本開示はまた、以下の番号が付けられた段落の主題を包含する：
１．
一般式Ｉ：
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｙ１−Ｙ２−Ｒ２  （Ｉ）（配列番号１）
（式中、Ｘａａ２４はＡｓｎおよびＣｙｓから選択され；
Ｙ１は、存在しないか、または少なくとも８個のアミノ酸分子を含む伸長物から選択され；
Ｙ２は、
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号２）；
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）
Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号４）；および
Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号５）から選択され、
Ｒ２は、−ＮＨ２または−ＯＨから選択される）で表されるＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチド、
もしくは誘導体、そのペプチドまたはその誘導体の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
２．Ｙ２がＬｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＬｙｓまたはＬｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓである、段落１に記載のペプチド。
３．Ｙ２が、Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＴｙｒまたはＬｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒである、段落１に記載のペプチド。
４．Ｘａａ２４がＣｙｓである、段落１〜３のいずれか一つに記載のペプチド。
５．Ｘａａ２４がＡｓｎである、段落１〜３のいずれか一つに記載のペプチド。
６．Ｙ１が少なくとも１０個のアミノ酸を含む伸長物である、段落１〜５のいずれか一つに記載のペプチド。
７．Ｙ１が、
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号６）；
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（配列番号７）；
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（配列番号８）；
Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号９）；
Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（配列番号１０）から選択されるか、
存在しない、段落１〜６のいずれか一つに記載のペプチド。
８．Ｙ１がＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒである、段落７に記載のペプチド。
９．Ｙ１がＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓである、段落７に記載のペプチド。
１０．Ｙ１がＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓである、段落７に記載のペプチド。
１１．以下のアミノ酸配列を含む、段落１に記載のペプチド：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
１２．以下のアミノ酸配列から本質的になる、段落１に記載のペプチド：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
１３．以下のアミノ酸配列を含む、段落１に記載のペプチド：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
１４．以下のアミノ酸配列から本質的になる、段落１に記載のペプチド：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
１５．アミノ酸に共有結合している親水性部分を含む、段落１〜１４のいずれか一つに記載のペプチド。
１６．２４位のアミノ酸に共有結合している親水性部分を含む、段落１５に記載のペプチド。
１７．Ｙ１が、少なくとも１０個のアミノ酸または少なくとも１１個のアミノ酸を含む伸長物である場合、３９位または４０位のアミノ酸に共有結合している親水性部分を含む、段落１５に記載のペプチド。
１８．Ｘａａ３９またはＸａａ４０がＣｙｓであり、かつペプチドがＣｙｓ（３９）またはＣｙｓ（４０）に共有結合している親水性部分を含む、段落１７に記載のペプチド。
１９．Ｘａａ２４がＣｙｓであり、かつペプチドがＣｙｓ（２４）と共有結合している親水性部分を含む、段落１５に記載のペプチド。
２０．親水性部分が水溶性ポリマーである、段落１５〜１９のいずれか一つに記載のペプチド。
２１．水溶性ポリマーがポリエチレングリコール部分であり、任意により約２０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコール部分である、段落２０に記載のペプチド。
２２．ペプチドが親油性置換基とコンジュゲートしている、段落１〜２１のいずれか一つに記載のペプチド。
２３．親油性置換基が８〜２４個の炭素（Ｃ）原子を有する炭化水素鎖を含む、段落２２に記載のペプチド。
２４．親油性置換基がアシル基を含む、段落２２または段落２３に記載のペプチド。
２５．親油性置換基が脂肪酸分子である、段落２４に記載のペプチド。
２６．脂肪酸分子が、Ｃ−８オクタノイル基、Ｃ−１０デカノイル基、Ｃ−１２ラウロイル基、Ｃ−１４ミリストイル基、Ｃ−１６パルミトイル基、Ｃ−１８ステアロイル基、およびＣ−２０アシル基から選択される、段落２５に記載のペプチド。
２７．親油性置換基が、ペプチドのカルボキシル末端でアミノ酸に接着している、段落２２〜２６のいずれか一つに記載のペプチド。
２８．親油性置換基が、４０位のアミノ酸に接着している、段落２７に記載のペプチド。
２９．親油性置換基が、ペプチドのアミノ酸の側鎖に共有結合している、段落２２〜２８のいずれか一つに記載のペプチド。
３０．親油性置換基をアミノ酸残基にコンジュゲートするスペーサーを含む、段落２２〜２９のいずれか一つに記載のペプチド。
３１．スペーサーは、天然または非天然アミノ酸由来の残基であり、スペーサーは、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、ε−Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇａｂａ、Ａｉｂ、β−アミノヘキソニル、７−アミノヘプタノイル、８−アミノオクタノイル、９−アミノノナノイル、１０−アミノデカノイル、または８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルの残基を含む、段落３０に記載のペプチド。
３２．スペーサーがγ−Ｇｌｕである、段落３１に記載のペプチド。
３３．スペーサーがジペプチドであり、任意によりスペーサーが２個の負に電荷したアミノ酸を含み、さらに任意により、スペーサーがγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである、段落３１または３２に記載のペプチド。
３４．１つ以上の保存的置換をさらに含む、段落１〜３３のいずれか一つに記載のペプチド。
３５．神経障害の治療および／または予防に使用するためのものである、段落１〜３４のいずれか一つに記載のペプチド。
３６．ペプチドは、患者のある領域におけるβ−アミロイドタンパク質プラークの沈着によって引き起こされるか、またはそれに関連する神経障害の治療における使用のためのものである、段落３５に記載のペプチド。
３７．β−アミロイドプラークの沈着は、患者の脳内にある、段落３６に記載のペプチド。
３８．シナプス伝達の長期増強の機能不全によって引き起こされるか、またはそれに関連する神経障害の治療および／もしくは予防における使用のためのものである、段落３５に記載のペプチド。
３９．炎症によって引き起こされるか、または炎症に関連する神経障害の治療および／もしくは予防における使用のためのものである、段落３５に記載のペプチド。
４０．運動障害に関連する神経障害の治療における使用のためのものである、段落３５に記載のペプチド。
４１．認知機能に影響を及ぼす神経障害、例えば認知症、脳卒中、統合失調症および／または双極性障害の治療および／または予防に使用するためのものである、段落３５に記載のペプチド。
４２．障害は、脳卒中に関連する脳虚血である、段落４１に記載のペプチド。
４３．心的外傷後ストレス障害、てんかん、トゥレット症候群、および幻覚から選択される障害；ならびに注意力、計算力、記憶力、判断力、洞察力、学習力および推論力から任意により選択される、機能不全の認知プロセスの治療および／または予防に使用するためのものである、段落３５に記載のペプチド。
４４．神経変性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、末梢神経障害、ハンチントン病およびクロイツフェルト−ヤコブ病の治療および／または予防に使用するためのものである、段落３５に記載のペプチド。
４５．神経障害が、多発性硬化症である、段落３５に記載のペプチド。
４６．臨床期または前臨床期アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、および臨床期または前臨床期アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）から選択される神経障害の治療および／または予防に使用するためのものである、段落４５に記載のペプチド。
４７．臨床期アルツハイマー病の治療および／または予防に使用するためのものである、段落４６に記載のペプチド。
４８．パーキンソン病の治療および／または予防に使用するためのものである、段落４６に記載のペプチド。
４９．ＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドもしくはその誘導体、またはそのペプチドもしくはその誘導体の薬学的に許容される塩またはそれらの溶媒和物であって、
一般式Ｉ
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｙ１−Ｙ２−Ｒ２
（Ｉ）（配列番号１）
（式中、Ｘａａ２４はＡｓｎおよびＣｙｓから選択され；
Ｙ１は、存在しないか、または少なくとも８個のアミノ酸分子を含む伸長物から選択され；
Ｙ２は、
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号２）；
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）
Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号４）；および
Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号５）から選択され、
Ｒ２は、−ＮＨ２または−ＯＨから選択される）によって表されるＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチドもしくは誘導体、またはそのペプチドもしくはその誘導体の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、神経障害を治療および／または防止する方法。
５０．ペプチドが、請求項１〜３４のいずれか一項に記載のとおりである、段落４９に記載の方法。
５１．神経障害は、心的外傷後ストレス障害、てんかん、トゥレット症候群、および幻覚から選択され、機能不全の認知プロセスは、注意力、計算力、記憶力、判断力、洞察力、学習力および推論力から任意により選択される、段落４９または段落５０に記載の方法。
５２．神経障害は神経変性障害である、段落４９または段落５０に記載の方法。
５３．神経変性障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、末梢神経障害、およびクロイツフェルト−ヤコブ病から選択される、段落５２に記載の方法。
５４．神経障害が、臨床期または前臨床期アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、および臨床期または前臨床期アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）から選択される神経障害である、段落５３に記載の方法。
５５．神経障害が、臨床期アルツハイマー病である、段落５４に記載の方法。
５６．臨床期アルツハイマー病の治療および／または予防に使用するためのペプチドであって、ペプチドが、以下の配列からなる：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
５７．臨床期アルツハイマー病の治療および／または予防に使用するためのペプチドであって、ペプチドが、以下の配列からなる：
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）。
【０１４６】
参考文献
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Ｂｏｍｆｉｍ  ＴＲ，  Ｆｏｒｎｙ−Ｇｅｒｍａｎｏ  Ｌ，  Ｓａｔｈｌｅｒ  ＬＢ，  Ｂｒｉｔｏ−Ｍｏｒｅｉｒａ  Ｊ，  Ｈｏｕｚｅｌ  ＪＣ，  Ｄｅｃｋｅｒ  Ｈ，  Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＭＡ，  Ｋａｚｉ  Ｈ，  Ｍｅｌｏ  ＨＭ，  ＭｃＣｌｅａｎ  ＰＬ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ，  Ａｒｎｏｌｄ  ＳＥ，  Ｔａｌｂｏｔ  Ｋ，  Ｋｌｅｉｎ  ＷＬ，  Ｍｕｎｏｚ  ＤＰ，  Ｆｅｒｒｅｉｒａ  ＳＴ，  Ｄｅ  Ｆｅｌｉｃｅ  ＦＧ  （２０１２）  Ａｎ  ａｎｔｉ−ｄｉａｂｅｔｅｓ  ａｇｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｂｒａｉｎ  ｆｒｏｍ  ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ａｂｅｔａ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １２２：１３３９−５３．
Ｃａｍｐｂｅｌｌ  ＪＥ，  Ｄｒｕｃｋｅｒ  ＤＪ  （２０１３）  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｉｎｃｒｅｔｉｎ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  １７：８１９−８３７．
Ｃｅｒｅｄａ  Ｅ，  Ｂａｒｉｃｈｅｌｌａ  Ｍ，  Ｃａｓｓａｎｉ  Ｅ，  Ｃａｃｃｉａｌａｎｚａ  Ｒ，  Ｐｅｚｚｏｌｉ  Ｇ  （２０１２）  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｆｅａｔｕｒｅｓ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｈｅｎ  ｏｎｓｅｔ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｃａｍｅ  ｆｉｒｓｔ：  Ａ  ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓｔｕｄｙ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７８：１５０７−１５１１．
Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  Ｍ，  Ｋｎｏｐ  ＦＫ，  Ｈｏｌｓｔ  ＪＪ，  Ｖｉｌｓｂｏｌｌ  Ｔ  （２００９）  Ｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＧＬＰ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ．ＩＤｒｕｇｓ  ：  ｔｈｅ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｄｒｕｇｓ  ｊｏｕｒｎａｌ  １２：５０３−５１３．
Ｃｌｅａｒｙ  ＪＰ，  Ｗａｌｓｈ  ＤＭ，  Ｈｏｆｍｅｉｓｔｅｒ  ＪＪ，  Ｓｈａｎｋａｒ  ＧＭ，  Ｋｕｓｋｏｗｓｋｉ  ＭＡ，  Ｓｅｌｋｏｅ  ＤＪ，  Ａｓｈｅ  ＫＨ  （２００５）  Ｎａｔｕｒａｌ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｄｉｓｒｕｐｔ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ８：７９−８４．
Ｄｕｆｆｙ  ＡＭ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１３）  Ｔｈｅ  ｉｎｃｒｅｔｉｎ  ａｎａｌｏｇｕｅ  Ｄ−Ａｌａ（２）ＧＩＰ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｐｌａｑｕｅ  ｌｏａｄ，  ａｓｔｒｏｇｌｉｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ａｎ  ＡＰＰ／ＰＳ１  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：２９４−３００．
Ｅｌｋｉｎｓｏｎ  Ｓ，  Ｋｅａｔｉｎｇ  ＧＭ  （２０１３）  Ｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ：  ｆｉｒｓｔ  ｇｌｏｂａｌ  ａｐｐｒｏｖａｌ．Ｄｒｕｇｓ  ７３：３８３−３９１．
Ｆａｉｖｒｅ  Ｅ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１３ａ）  Ｄ−Ａｌａ２ＧＩＰ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｐｌａｑｕｅ  ｌｏａｄ  ｉｎ  ａｇｅｄ  ｗｉｌｄ  ｔｙｐｅ  ｍｉｃｅ  ａｎｄ  ｉｎ  ａｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ：  ＪＡＤ  ３５：２６７−２８３．
Ｆａｉｖｒｅ  Ｅ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１３ｂ）  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄ−Ａｌａ２ＧＩＰ  ｏｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ａｎ  ＡＰＰ／ＰＳ１  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＆  ｔｈｅｒａｐｙ  ５：２０−２８．
Ｆａｉｖｒｅ  Ｅ，  Ｇａｕｌｔ  ＶＡ，  Ｔｈｏｒｅｎｓ  Ｂ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１１）  Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ  ａｒｅ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｉｎ  ｌｅａｒｎｉｎｇ，  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ，  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  １０５：１５７４−１５８０．
Ｇａｕｌｔ  Ｖ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２００８ａ）  ＧＬＰ−１  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ＬＴＰ  ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｈｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  ＬＴＰ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５８７：１１２−１１７．
Ｇａｕｌｔ  ＶＡ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２００８ｂ）  Ｐｒｏｔｅａｓｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ＬＴＰ  ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｈｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  ＬＴＰ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  ９９：１５９０−１５９５．
Ｇａｕｌｔ  ＶＡ，  Ｆｌａｔｔ  ＰＲ，  Ｏ’Ｈａｒｔｅ  ＦＰ  （２００３）  Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｂｅｓｉｔｙ−ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３０８：２０７−２１３．
Ｇｅｊｌ  Ｍ，  Ｇｊｅｄｄｅ  Ａ，  Ｅｇｅｆｊｏｒｄ  Ｌ，  Ｍｏｌｌｅｒ  Ａ，  Ｈａｎｓｅｎ  ＳＢ，  Ｖａｎｇ  Ｋ，  Ｒｏｄｅｌｌ  ＡＢ，  Ｂｒａｅｎｄｇａａｒｄ  Ｈ，  Ｇｏｔｔｒｕｐ  Ｈ，  Ｓｃｈａｃｈｔ  Ａ，  Ｍｏｌｌｅｒ  Ｎ，  Ｂｒｏｃｋ  Ｂ，  Ｒｕｎｇｂｙ  Ｊ  （２０１６）  Ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｓｉｘ−Ｍｏｎｔｈ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ＧＬＰ−１  Ａｎａｌｏｇｕｅ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｄｅｃｌｉｎｅ  ｏｆ  Ｂｒａｉｎ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，  Ｐｌａｃｅｂｏ−Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ，  Ｄｏｕｂｌｅ−Ｂｌｉｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  ａｇｉｎｇ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ８：１−１０．
Ｇｅｎｇｌｅｒ  Ｓ，  ＭｃＣｌｅａｎ  Ｐ，  ＭｃＣｕｒｔｉｎ  Ｒ，  Ｇａｕｌｔ  Ｖ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１２）  Ｖａｌ（８）ＧＬＰ−１  ｒｅｓｃｕｅｓ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｄｅｎｓｅ  ｃｏｒｅ  ｐｌａｑｕｅｓ  ｉｎ  ＡＰＰ／ＰＳ１  ｍｉｃｅ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ａｇｉｎｇ  ３３：２６５−２７６．
Ｈａｎ  Ｂ，  Ｈｕ  Ｊ，  Ｓｈｅｎ  Ｊ，  Ｇａｏ  Ｙ，  Ｌｕ  Ｙ，  Ｗａｎｇ  Ｔ  （２０１３）  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｘｙｓａｆｆｌｏｒ  ｙｅｌｌｏｗ  Ａ  ｏｎ  ６−ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７１４：８３−８８．
Ｈａｒｋａｖｙｉ  Ａ，  Ａｂｕｉｒｍｅｉｌｅｈ  Ａ，  Ｌｅｖｅｒ  Ｒ，  Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ  ＡＥ，  Ｂｉｇｇｓ  ＣＳ，  Ｗｈｉｔｔｏｎ  ＰＳ  （２００８）  Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ｋｅｙ  ｄｅｆｉｃｉｔｓ  ｉｎ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ５：１９（１１−１９）．
Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１４）  Ｉｎｓｕｌｉｎ，  ｉｎｃｒｅｔｉｎｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｎｏｖｅｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ４２：５９３−５９９．
Ｈｕｎｔｅｒ  Ｋ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１２）  Ｄｒｕｇｓ  ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ  ｄｉａｂｅｔｅｓ，  ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ，  ｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ  ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＢＭＣ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １３：３３−３８．
Ｉｒｗｉｎ  Ｎ，  Ｏ’Ｈａｒｔｅ  Ｆ  Ｐ，  Ｇａｕｌｔ  ＶＡ，  Ｇｒｅｅｎ  ＢＤ，  Ｇｒｅｅｒ  Ｂ，  Ｈａｒｒｉｏｔｔ  Ｐ，  Ｂａｉｌｅｙ  ＣＪ，  Ｆｌａｔｔ  ＰＲ  （２００６）  ＧＩＰ（Ｌｙｓ（１６）ＰＡＬ）  ａｎｄ  ＧＩＰ（Ｌｙｓ（３７）ＰＡＬ）：  Ｎｏｖｅｌ  Ｌｏｎｇ−Ａｃｔｉｎｇ  Ａｃｙｌａｔｅｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｏｆ  Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｗｉｔｈ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４９：１０４７−１０５４．
Ｊｉ  Ｃ，  Ｘｕｅ  ＧＦ，  Ｌｉｊｕｎ  Ｃ，  Ｆｅｎｇ  Ｐ，  Ｌｉ  Ｄ，  Ｌｉ  Ｌ，  Ｌｉ  Ｇ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１５）  Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｄｕａｌ  ＧＬＰ−１  ａｎｄ  ＧＩＰ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｉｓ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＭＰＴＰ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＢＮＤＦ．Ｂｒａｉｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  １６３４：１−１１．
ＬａＦｅｒｌａ  ＦＭ，  Ｏｄｄｏ  Ｓ  （２００５）  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：  Ａｂｅｔａ，  ｔａｕ  ａｎｄ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  １１：１７０−１７６．
Ｌｉ  Ｙ，  Ｌｉｕ  Ｗ，  Ｌｉ  Ｌ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１５）  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ＧＩＰ  ａｎａｌｏｇｕｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＭＰＴＰ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １０１：２５５−２６３．
Ｌｉ  Ｙ，  Ｐｅｒｒｙ  Ｔ，  Ｋｉｎｄｙ  ＭＳ，  Ｈａｒｖｅｙ  ＢＫ，  Ｔｗｅｅｄｉｅ  Ｄ，  Ｈｏｌｌｏｗａｙ  ＨＷ，  Ｐｏｗｅｒｓ  Ｋ，  Ｓｈｅｎ  Ｈ，  Ｅｇａｎ  ＪＭ，  Ｓａｍｂａｍｕｒｔｉ  Ｋ，  Ｂｒｏｓｓｉ  Ａ，  Ｌａｈｉｒｉ  ＤＫ，  Ｍａｔｔｓｏｎ  ＭＰ，  Ｈｏｆｆｅｒ  ＢＪ，  Ｗａｎｇ  Ｙ，  Ｇｒｅｉｇ  ＮＨ  （２００９）  ＧＬＰ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｐｒｅｓｅｒｖｅｓ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ａｎｄ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｒｏｄｅｎｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｓｔｒｏｋｅ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  １０６：１２８５−１２９０．
Ｌｉｕ  Ｌ，  Ｖｅｎｋａｔｒａｍａｎ  ＳＳ，  Ｙａｎｇ  ＹＹ，  Ｇｕｏ  Ｋ，  Ｌｕ  Ｊ，  Ｈｅ  Ｂ，  Ｍｏｏｃｈｈａｌａ  Ｓ，  Ｋａｎ  Ｌ  （２００８）  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｍｉｃｅｌｌｅｓ  ａｎｃｈｏｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ＴＡＴ  ｆｏｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ．Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ９０：６１７−６２３．
Ｌｉｕ  Ｗ，  Ｊａｌｅｗａ  Ｊ，  Ｓｈａｒｍａ  Ｍ，  Ｌｉ  Ｇ，  Ｌｉ  Ｌ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１５）  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＭＰＴＰ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３０３：４２−５０．
Ｌｏｖｓｈｉｎ  ＪＡ，  Ｄｒｕｃｋｅｒ  ＤＪ  （２００９）  Ｉｎｃｒｅｔｉｎ−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ５：２６２−２６９．
Ｌｕｃｈｓｉｎｇｅｒ  ＪＡ，  Ｔａｎｇ  ＭＸ，  Ｓｈｅａ  Ｓ，  Ｍａｙｅｕｘ  Ｒ  （２００４）  Ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉａ  ａｎｄ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ６３：１１８７−１１９２．
ＭｃＣｌｅａｎ  Ｐ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１４）  Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ  ｃａｎ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ，  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｌｏｓｓ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅ  ｐｌａｑｕｅ  ｌｏａｄ  ｉｎ  ａｇｅｄ  ＡＰＰ／ＰＳ１  ｍｉｃｅ，  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ‘ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  ７６：５７−６７．
ＭｃＣｌｅａｎ  Ｐ，  Ｐａｒｔｈｓａｒａｔｈｙ  Ｖ，  Ｆａｉｖｒｅ  Ｅ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１１）  Ｔｈｅ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｄｒｕｇ  Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ：  ｔｈｅ  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３１：６５８７−６５９４．
ＭｃＣｌｅａｎ  ＰＬ，  Ｇａｕｌｔ  ＶＡ，  Ｈａｒｒｉｏｔｔ  Ｐ，  Ｈｏｌｓｃｈｅｒ  Ｃ  （２０１０）  Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ：  Ａ  ｌｉｎｋ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ６３０：１５８−１６２．
Ｍｏｌｏｎｅｙ  ＡＭ，  Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＲＪ，  Ｔｉｍｍｏｎｓ  Ｓ，  Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  Ｒ，  Ｒａｖｉｄ  Ｒ，  Ｏ’Ｎｅｉｌｌ  Ｃ  （２０１０）  Ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ＩＧＦ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ＩＲＳ−１／２  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎｄｉｃａｔｅ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＩＧＦ−１  ａｎｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ａｇｉｎｇ  ３１：２２４−２４３．
Ｍｏｒｒｉｓ  ＪＫ，  Ｂｏｍｈｏｆｆ  ＧＬ，  Ｇｏｒｒｅｓ  ＢＫ，  Ｄａｖｉｓ  ＶＡ，  Ｋｉｍ  Ｊ，  Ｌｅｅ  ＰＰ，  Ｂｒｏｏｋｓ  ＷＭ，  Ｇｅｒｈａｒｄｔ  ＧＡ，  Ｇｅｉｇｅｒ  ＰＣ，  Ｓｔａｎｆｏｒｄ  ＪＡ  （２０１１）  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｍｐａｉｒｓ  ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２３１：１７１−１８０．
Ｎｙｂｅｒｇ  Ｊ，  Ｊａｃｏｂｓｓｏｎ  Ｃ，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＭＦ，  Ｅｒｉｋｓｓｏｎ  ＰＳ  （２００７）  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ８５：２０９９−２１１９．
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【図１】
2020504713.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年10月2日(2018.10.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
Ｔｙｒ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｉｂ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｘａａ２４−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｙ１−Ｙ２−Ｒ２  （Ｉ）（配列番号１）
（式中、Ｘａａ２４はＡｓｎであり；
Ｙ１はＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（配列番号７）であり；
Ｙ２は、
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ（配列番号３）；および
Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ（配列番号４）から選択され；
Ｒ２は−ＮＨ２である）
によって表される、ＧＩＰ／ＧＬＰ−１コアゴニストペプチド、もしくは誘導体、または前記ペプチドもしくは前記誘導体の薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）
のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）
のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
アミノ酸に共有結合している親水性部分を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項５】
（ｉ）２４位のアミノ酸、または（ｉｉ）３９位もしくは４０位のアミノ酸に共有結合している親水性部分を含む、請求項４に記載のペプチド。
【請求項６】
前記親水性部分が水溶性ポリマーであり、任意により前記水溶性ポリマーがポリエチレングリコール部分であり、かつ任意により約２０，０００ダルトン〜約６０，０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコール部分である、請求項４〜５のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項７】
前記ペプチドが親油性置換基とコンジュゲートしている、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項８】
前記親油性置換基がアシル基を含み、任意により脂肪酸分子であり、さらに、任意により、前記脂肪酸分子が、Ｃ−８オクタノイル基、Ｃ−１０デカノイル基、Ｃ−１２ラウロイル基、Ｃ−１４ミリストイル基、Ｃ−１６パルミトイル基、Ｃ−１８ステアロイル基、およびＣ−２０アシル基から選択される、請求項７に記載のペプチド。
【請求項９】
前記親油性置換基が、前記ペプチドの前記カルボキシル末端でアミノ酸に接着している、請求項７または８に記載のペプチド。
【請求項１０】
前記親油性置換基をアミノ酸残基にコンジュゲートするスペーサーを含む、請求項７〜９のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記スペーサーは、天然または非天然アミノ酸由来の残基であり、前記スペーサーは、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、ε−Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇａｂａ、Ａｉｂ、β−アミノヘキソニル、７−アミノヘプタノイル、８−アミノオクタノイル、９−アミノノナノイル、１０−アミノデカノイル、または８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイルの残基を含む、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記スペーサーがγ−Ｇｌｕであり、前記スペーサーがジペプチドであるか、または任意により前記スペーサーが２個の負に電荷したアミノ酸を含み、さらに任意により、前記スペーサーがγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕである、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】
神経障害の治療および／または予防に使用するためのものである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項１４】
前記ペプチドは、患者のある領域におけるβ−アミロイドタンパク質プラークの沈着によって引き起こされるか、またはそれに関連する神経障害の前記治療における使用のためのものである、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項１５】
ａ）シナプス伝達の長期増強の機能障害、または
ｂ）炎症
によって引き起こされるか、もしくはそれに関連する神経障害の前記治療および／もしくは予防に使用するためのものである、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項１６】
認知機能に影響を及ぼす神経障害、例えば認知症、脳卒中、統合失調症および／または双極性障害の前記治療および／または予防に使用するためのものであって、任意により、前記障害は脳卒中に関連する脳虚血である、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項１７】
心的外傷後ストレス障害、てんかん、トゥレット症候群、および幻覚から選択される障害；ならびに注意力、計算力、記憶力、判断力、洞察力、学習力および推論力から任意により選択される、機能不全の認知プロセスの前記治療および／または予防に使用するためのものである、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項１８】
神経変性障害、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、末梢神経障害、ハンチントン病およびクロイツフェルト−ヤコブ病の前記治療および／または予防に使用するためのものである、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項１９】
臨床期または前臨床期アルツハイマー病、前駆期アルツハイマー病、および臨床期または前臨床期アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）から選択される神経障害の前記治療および／または予防に使用するためのものである、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項２０】
臨床期アルツハイマー病の治療および／または予防に使用するためのペプチドであって、
（ａ）ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−ＮＨ２（配列番号１１）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）；または
（ｂ）ＹＸＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＹＬＤＫＱＡＡＸＥＦＶＮＷＬＬＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ−ＮＨ２（配列番号１２）
（式中、Ｘ＝アミノイソ酪酸）
の配列からなる、ペプチド。
【国際調査報告】
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