(57)【要約】  本明細書は、高麗人参の実多糖体を有効成分として含む免疫増強用組成物に関する。前記組成物は、天然物由来の成分を用い、ＩＬ−６、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−αなどのサイトカインの発現を増加させることができる。また、前記組成物は、高麗人参の実多糖体の特有の成分と構造により優れた免疫増強効果を示すことができる。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
高麗人参の実多糖体を有効成分として含む免疫増強用組成物。
【請求項２】
前記高麗人参の実多糖体は、アラビノーズ、ガラクトース、ガラクツロン酸及びグルクロン酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ガラクツロン酸及びグルクロン酸を、前記高麗人参の実多糖体の総質量に対して、０．１質量％〜２５質量％の範囲で含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記高麗人参の実多糖体は、β−グルコシルヤリブ試薬（β−ｇｌｕｃｏｓｙｌ  Ｙａｒｉｖ  ｒｅａｇｅｎｔ）処理の際に標準アラビーノ−β−３,６−ガラクタン（ａｒａｂｉｎｏ−β−３,６−ｇａｌａｃｔａｎ）を１００％としたとき、４０％以上の反応を示す、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記高麗人参の実多糖体は、高麗人参の実のエタノール不可溶分画中の水溶性成分由来のものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記高麗人参の実多糖体は、インターロイキン−６（ＩＬ−６）の発現を増加させる、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記高麗人参の実多糖体は、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）の発現を増加させる、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記高麗人参の実多糖体は、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の発現を増加させる、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
当該組成物は健康機能食品用である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
当該組成物は薬学組成物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
当該組成物は化粧料組成物である、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、高麗人参の実多糖体を含む免疫増強用組成物に関して記述する。
【背景技術】
【０００２】
身体の免疫機能が低下すると、各種の感染または疾病に対して脆弱になりやすい。大食細胞（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ／マクロファージ）は細菌や異物を貪食、除去する過程で種々のサイトカインを分泌して免疫現象を調節し、抗原に対する免疫作用の中枢的な役割をする細胞であって、抗原提示とリンパ球の非特異的免疫作用に関係し、腫瘍細胞に対しては直接的な傷害活性を示す。また、ＴＬＲ（ｔｏｏｌ  ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）に反応する物質（ＬＰＳ或いは天然物）は、大食細胞を活性化してＴ細胞とＢ細胞の増殖、食菌作用、微生物感染に対する防御などの二次免疫反応を調節することができるＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−αのようなサイトカインを産生すると知られている。
【０００３】
ＩＬ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦ−αは大食細胞によって誘導される代表的なサイトカインであって、細菌感染による炎症反応において中枢的な役割をし、炎症病巣でその量が増加すると知られている。ＩＬ−６はＩＬ−１と協同的に作用してＴ細胞とＢ細胞の分化に関与することが報告されており、ＴＮＦ−αは抗ウイルス性作用があって、様々な生体反応にも重要な役割をすると知られている。また、ＩＬ−１２はＮＫ  ｃｅｌｌの活性化及びＴｈ１  ｔｙｐｅの免疫反応を誘導するサイトカインであって、細胞性外来物質に対する反応性を高める作用をすると知られている。
【０００４】
このような免疫増強に効果のある天然由来成分に関する要求が存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】韓国登録特許第１０−１４８７５４２号公報
【特許文献２】韓国公開特許第１０−２０１３−０１０００８９号公報
【特許文献３】中国特許出願公開第１０１８１０３２３号明細書
【特許文献４】韓国公開特許第１０−２００９−００３２５０１号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Yingyu Wang et al., “Extraction, characterization of a Ginseng fruits polysaccharide and its immune modulating activities in rats with Lewis lung carcinoma”, Carbohydrate Polymers, 2015, vol.127, pp.215-221
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
一側面において、本発明が解決しようとする課題は免疫増強効果に優れる組成物を提供することである。
【０００８】
他の側面において、本発明が解決しようとする課題は、ＩＬ−６、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−αの発現を増加させる組成物を提供することである。
【０００９】
また他の側面において、本発明が解決しようとする課題は、免疫増強効果に優れる天然由来成分を含む組成物を提供することである。
【００１０】
また他の側面において、本発明が解決しようとする課題は、天然由来成分であって毒性や副作用が少ないかない組成物を提供することである。
【００１１】
また他の側面において、本発明が解決しようとする課題は、免疫増強による健康補助役割ができる組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
一観点において、本発明は、高麗人参の実多糖体を有効成分として含む免疫増強用組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
一側面において、本発明は、免疫増強効果に優れる組成物を提供することができる。
【００１４】
他の側面において、本発明は、ＩＬ−６、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−αの発現を増加させる組成物を提供することができる。
【００１５】
また他の側面において、本発明は、免疫増強効果に優れる天然由来成分を含む組成物を提供することができる。
【００１６】
また他の側面において、本発明は、免疫増強による健康補助役割ができる組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】β−グルコシルヤリブ試薬によってアラビノガラクタンを検出する反応を模式的に示した図である。
【図２】高麗人参の実水溶性物質の分画を示したグラフである。
【図３】高麗人参の実多糖体のクロマトグラフィー結果を示したグラフである。
【図４】標準物質、高麗人参の実多糖体及び紅参根多糖体のβ−グルコシルヤリブ試薬処理による沈殿環を示した写真である。
【図５】標準物質、高麗人参の実多糖体及び紅参根多糖体のβ−グルコシルヤリブ試薬処理による沈殿環面積を比較して示したグラフである。
【図６】試料の大食細胞におけるＩＬ−６生成能を示したグラフである。
【図７】試料の大食細胞におけるＩＬ−１２生成能を示したグラフである。
【図８】試料の大食細胞におけるＴＮＦ−α生成能を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、添付の図面を参照して、本出願の実施例をより詳細に説明することにする。なお、本出願に開示された技術はここで説明される実施例に限定されるものではなく、他の形態に具体化することもできる。ここで紹介される実施例は、単に開示された内容が徹底且つ完全なものになるように、また当業者に本出願の思想を十分に伝えられるようにするために提供されるものである。図面では各構成要素を明確に表現するために構成要素の幅や厚さなどの大きさをやや拡大して示した。また、説明の便宜上、構成要素の一部のみを図示したりもしており、当業者であれば構成要素の残りの部分についても容易に把握できるはずである。さらに、当該分野における通常の知識を有する者であれば本出願の技術的思想を逸脱しない範囲内で本出願の思想を多様な他の形態に具現できるはずである。
【００１９】
本発明の一実施例によると、高麗人参の実多糖体を有効成分として含む免疫増強用組成物を提供することができる。高麗人参の実多糖体は、特定の成分及び構造によって免疫機能調節効果を奏し、具体的にサイトカインを活性させる効果に優れる。これにより、本発明の実施例に係る組成物は、顕著に優れた免疫増強効果を奏することができる。
【００２０】
高麗人参の実多糖体は、高麗人参（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｃ.ａ.  Ｍｅｙｅｒ）の地上部のうち実の部位に由来した多糖成分であってよい。一例において、前記高麗人参の実は、高麗人参の実の果肉、果皮、または果肉及び果皮の両方を含む部位であってよい。
【００２１】
前記高麗人参の実多糖体は、高麗人参の実をエタノールを用いて抽出した後、エタノールに溶解していない抽出不可溶成分から得ることができる。例えば、前記エタノール抽出不可溶成分を水を用いて抽出して水溶性成分のみを選り出すことができ、この水溶性成分に含まれている高麗人参の実多糖体を有効成分として用いていてよい。例えば、前記水溶性成分を濃縮し、エタノールで沈澱させた後、低分子量成分を除去して、高麗人参の実多糖体を得ることができる。
【００２２】
例えば、種を取り除いた高麗人参の実を５０〜１００％エタノールを用いて抽出した後、抽出不可溶成分を３〜１０倍体積の水で加温抽出して水溶性抽出物を得る。水溶性抽出物を固形分が１０〜５０質量％になるように濃縮し、これに２〜５倍体積のエタノールを用いて沈澱させた後、分画分子量（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｗｅｉｇｈｔ  Ｃｕｔ  ｏｆｆ）１０,０００〜３０,０００で分離して低分子量成分を除去して高麗人参の実多糖体を得ることができる。前記低分子量成分の除去は、限外ろ過膜を用いた限外ろ過などのろ過、透析、２〜１０倍体積の５０〜１００％エタノールによる１〜１０回の繰り返しの溶解処理などによって行ってよい。一例において、前記低分子量成分の除去後に乾燥を行ってよい。前記乾燥は、凍結、熱風、噴霧または真空処理などによって行ってよい。
【００２３】
一例において、前記高麗人参の実の水溶性成分を水抽出する前に酵素処理をさらに含んでいてよい。前記酵素は、食品に用いられる酵素であれば制限されずに使用可能であるが、例えば、アミラーゼ、プロテアーゼ、ペクチナーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、β−グルカナーゼ、又はプルラナーゼのうちから選ばれていてよい。前記酵素処理によって組成物の免疫活性を高めることができる。前記酵素処理は、例えば、４０〜６０℃で１０〜６０分間酵素と反応させていてよい。
【００２４】
前記高麗人参の実多糖体は、アラビノーズ、ガラクトース、ガラクツロン酸、及びグルクロン酸を含んでいてよい。
【００２５】
一例において、前記多糖体の総質量に対して、ガラクツロン酸及びグルクロン酸を合計含量で０．１質量％以上、０．２質量％以上、０．３質量％以上、０．４質量％以上、０．５質量％以上、０．６質量％以上、０．７質量％以上、０．８質量％以上、０．９質量％以上、１質量％以上、２質量％以上、３質量％以上、４質量％以上、５質量％以上、６質量％以上、７質量％以上、８質量％以上、９質量％以上、または１０質量％以上であり、且つ２５質量％以下、２４質量％以下、２３質量％以下、２２質量％以下、２１質量％以下、２０質量％以下、１９質量％以下、１８質量％以下、１７質量％以下、１６質量％以下、１５質量％以下、１４質量％以下、１３質量％以下、１２質量％以下、１１質量％以下、１０質量％以下、９質量％以下、８質量％以下、７質量％以下、６質量％以下、５質量％以下、または４質量％以下で含んでいてよい。例えば、前記含量は、０．１質量％〜２５質量％、または０．５質量％〜２０質量％の範囲であってよい。
【００２６】
前記ガラクツロン酸は、多糖体の総質量に対して、０．１質量％以上、０．２質量％以上、０．３質量％以上、０．４質量％以上、０．５質量％以上、０．６質量％以上、０．７質量％以上、０．８質量％以上、０．９質量％以上、１質量％以上、２質量％以上、３質量％以上、４質量％以上、５質量％以上、６質量％以上、７質量％以上、８質量％以上、９質量％以上、または１０質量％以上であり、且つ２０質量％以下、１９質量％以下、１８質量％以下、１７質量％以下、１６質量％以下、１５質量％以下、１４質量％以下、１３質量％以下、１２質量％以下、１１質量％以下、１０質量％以下、９質量％以下、８質量％以下、７質量％以下、６質量％以下、５質量％以下、または４質量％以下で含んでいてよい。前記含量は、例えば、０．１質量％〜２０質量％、０．１質量％〜１５質量％、１質量％〜５質量％、５質量％〜１５質量％、または０．５質量％〜５質量％の範囲であってよい。
【００２７】
前記グルクロン酸は、多糖体の総質量に対して、０．１質量％以上、０．２質量％以上、０．３質量％以上、０．４質量％以上、０．５質量％以上、０．６質量％以上、０．７質量％以上、０．８質量％以上、０．９質量％以上、１質量％以上、２質量％以上、３質量％以上、４質量％以上、５質量％以上、６質量％以上、または７質量％以上であり、且つ１０質量％以下、９質量％以下、８質量％以下、７質量％以下、６質量％以下、５質量％以下、または４質量％以下で含んでいてよい。前記含量は、例えば、０．１質量％〜１０質量％、０．５質量％〜５質量％、または０．１質量％〜５質量％の範囲であってよい。
【００２８】
一例において、前記アラビノーズは、多糖体の総質量に対して、２質量％〜３０質量％の範囲で含まれていてよい。
【００２９】
一例において、前記ガラクトースは、多糖体の総質量に対して、５質量％〜５０質量％の範囲で含まれていてよい。
【００３０】
前記高麗人参の実多糖体は、アラビノガラクタン（ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎ）構造を高い割合で含んでおり、優れた免疫活性を奏することができる。アラビノガラクタン構造の検出の際は、β−グルコシルヤリブ試薬（β−ｇｌｕｃｏｓｙｌ  Ｙａｒｉｖ  ｒｅａｇｅｎｔ）を用いていてよい。β−グルコシルヤリブ試薬は、１,３,５−ｔｒｉ−（β−グルコピラノシル−オキシフェニルアゾ）−２,４,６−トリヒドロキシベンゼン（４−１,３,５−ｔｒｉ−（４−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｚｏ）−２,４,６−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅ）であって、アラビノガラクタンのうちのＩＩ型のアラビノ−β−３,６−ガラクタン（ａｒａｂｉｎｏ−ββ−３,６−ｇａｌａｃｔａｎ）と特異的に反応して赤色沈澱を形成する。β−グルコシルヤリブ試薬を処理して生成される赤色沈殿環の面積とアラビノガラクタン構造の含有濃度は濃度依存的に比例する。前記高麗人参の実多糖体は、同一濃度の標準アラビーノ−β−３,６−ガラクタン（ａｒａｂｉｎｏ−β−３,６−ｇａｌａｃｔａｎ）で生成される沈殿環の大きさを１００％としたとき、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、または８０％以上であり、且つ９０％以下、８０％以下、７０％以下、または６０％以下の大きさの沈殿環面積を示していてよい。例えば、前記沈殿環面積は５０％〜９０％、５０％〜８０％の範囲であってよい。
【００３１】
前記高麗人参の実多糖体の質量平均分子量は、１０ｋＤａ以上であってよい。前記高麗人参の実多糖体は、分子量７０ｋＤａ〜８０ｋＤａの範囲で主ピーク（ｐｅａｋ）を有していてよい。前記高麗人参の実多糖体は、免疫機能に関するサイトカインを活性化する効果に顕著に優れている。例えば、大食細胞においてＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−αなどの発現を増加させ、優れた免疫増強効果を奏することができる。
【００３２】
本発明の実施例に係る組成物は、前記有効成分を含む多様な形態の食品添加剤または機能性食品として提供されていてよい。前記有効成分を含む発酵乳、チーズ、ヨーグルト、ジュース、生菌製剤、及び健康食品などとして加工されていてよく、その他、多様な食品添加剤の形態で用いられていてよい。
【００３３】
本発明の実施例に係る組成物は健康食品用組成物であってよい。
【００３４】
本発明の実施例に係る健康食品用組成物は、前記有効成分を、組成物の総質量に対して、０．０００１質量％〜９９質量％、例えば、０．０１質量％〜６０質量％の範囲で含んでいてよいが、これに制限されない。
【００３５】
具体例において、前記健康食品用組成物は、丸剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、キャラメル剤またはドリンク剤などで剤形化することができる。他の具体例において、液剤、粉末、顆粒、錠剤またはティーバッグなどの形態で加工されていてもよい。
【００３６】
前記組成物は、単純飲用、注射投与、スプレー方式またはスクイーズ方式などの様々な方法で投与されていてよい。
【００３７】
前記組成物は、本発明の主効果を損なわない範囲内で主効果に相乗効果を与え得る他の成分などを含有していてよい。例えば、物性改善のために、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤、保湿剤、粘増剤、無機塩類、乳化剤、及び合成高分子物質などの添加剤をさらに含んでいてよい。その他にも、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、及び海草エキスなどの補助成分をさらに含んでいてよい。前記成分は、剤形または使用目的に応じて当業者が適宜選定して配合していてよく、その添加量は、本発明の目的及び効果を損なわない範囲内で選択されていてよい。例えば、前記成分の添加量は、組成物の全体質量を基準に、０．０１質量％〜５質量％、例えば、０．０１質量％〜３質量％の範囲であってよいが、これに制限されない。
【００３８】
一実施例において、前記組成物は化粧料組成物であってよい。
【００３９】
本発明の実施例に係る化粧料組成物は、前記有効成分を、組成物の総質量に対して、０．０００１質量％〜９９質量％、例えば、０．０１質量％〜６０質量％の範囲で含んでいてよいが、これに制限されない。
【００４０】
本発明の実施例に係る化粧料組成物は、化粧品学または皮膚科学的に許容可能な媒質または基剤を含んで剤形化されていてよい。該化粧料組成物は、局所適用に適合したあらゆる剤形にて提供されていてよく、例えば、懸濁液、マイクロエマルジョン、マイクロカプセル、微細顆粒球またはイオン型（リポソーム）及び非イオン型の小胞性分散剤の形態、またはクリーム、スキン、ローション、パウダー、軟膏、スプレー、またはコンシーラースティックの形態が挙げられる。また、泡沫（ｆｏａｍ）の形態または圧縮された推進剤をさらに含有したエアロゾル組成物の形態で用いられていてもよい。これらの組成物は、当該分野における通常的な方法に従って製造されていてよい。
【００４１】
また、本発明の実施例に係る化粧料組成物は、粉体、脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤、ゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤（ｆｏａｍｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、芳香剤、界面活性剤、水、イオン型または非イオン型乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、親水性もしくは親油性活性剤、脂質小嚢または化粧品に通常用いられる任意の他の成分などの化粧品学または皮膚科学分野において通常用いられる補助剤を含有してよい。前記補助剤は、化粧品学または皮膚科学分野において一般に用いられる量で取り込まれる。本発明の実施例に係る化粧料組成物は、皮膚改善効果を増加させるために皮膚吸収促進物質をさらに含有していてよい。
【００４２】
本発明の一実施例において、前記組成物は薬学組成物であってよい。
【００４３】
本明細書に係る薬学組成物は、経口または非経口の様々な剤形であってよい。製剤化する場合には、通常用いる充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調剤される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、軟質または硬質カプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤は、一つ以上の化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、単純な賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどといった潤滑剤も用いられる。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく用いられる単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に、様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれていてよい。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが用いられていてよい。坐剤の基剤としては、ウィテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが用いられていてよい。
【００４４】
本明細書に係る組成物の薬学的投与形態は、それらの薬学的に許容可能な塩の形態で用いられていてもよく、また、単独で、または他の薬学的活性化合物との結合だけでなく適切な集合で用いられていてよい。前記塩としては、薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フッ化水素酸、臭化水素酸、ギ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などを用いていてよい。
【００４５】
本明細書に係る組成物は、目的とするところに応じて、非経口投与または経口投与してよく、一日に体重１ｋｇあたり０．１〜５００ｍｇ、好ましくは１〜１００ｍｇの量で投与されるように、１回ないし数回に分けて投与していてよい。特定の患者に対する投与用量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率、疾患の重症度などに応じて変化されていてよい。
【００４６】
本明細書に係る薬学組成物は、それぞれ通常の方法に従って、散剤、顆粒剤、錠剤、軟質または硬質カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形、軟膏、クリームなどの皮膚外用剤、坐剤、注射剤、及び滅菌注射溶液などをはじめ、薬剤学的製剤に適合した任意の形態で剤形化して用いられていてよい。
【００４７】
本発明の他の実施例によれば、高麗人参の実多糖体を、免疫増強を必要とする対象に投与することを含む免疫増強方法を提供することができる。高麗人参の実多糖体に関しては、上述した本発明の一実施例に係る免疫増強用組成物で記載したそれと同一であるため、説明を省略する。
【００４８】
本発明のまた他の実施例によれば、高麗人参の実多糖体の免疫増強用組成物の製造のための用途を提供することができる。高麗人参の実多糖体及び免疫増強用組成物に関しては、上述した本発明の一実施例に係る免疫増強用組成物で記載したそれらと同一であるため、説明を省略する。
【００４９】
以下、実施例を挙げて本発明についてより具体的に説明する。なお、これらの実施例は、単に本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されると解釈されないことは当業界において通常の知識を有する者にとって自明であろう。
【００５０】
［製造例１］高麗人参の実多糖体の製造
種を取り除いた高麗人参の実を１０倍体積の９０％エタノールで抽出して水溶性成分を沈澱させ上澄液を除去する。沈澱された抽出不可溶成分を２０倍体積の水にて９０℃で、５時間加温抽出する。抽出物を固形分が３０質量％になるように濃縮し、濃縮物の２倍体積の９０％エタノールを加えて沈澱させる。沈澱された水溶性成分の高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）結果を図２に示す。沈殿物を限外ろ過にかけて分画分子量（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｗｅｉｇｈｔ  Ｃｕｔ  ｏｆｆ）２０,０００に分離して低分子量成分を除去し、凍結乾燥して、７０〜８０ｋＤａの分子量を主ピーク（ｐｅａｋ）とする分子量１０ｋＤａ以上の高麗人参の実多糖体を得た。製造された高麗人参の実多糖体の高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）結果は図３に示す。
【００５１】
［製造例２］紅参多糖体の製造
高麗人参の実に代えて紅参根を用いたことを除いては、前記製造例１と同じ方法にて紅参多糖体を製造した。
【００５２】
［試験例１］アラビノガラクタンの検出
アラビーノ−β−３,６−ガラクタンの存在を確認するためのβ−グルコシルヤリブ試薬（β−ｇｌｕｃｏｓｙｌ  Ｙａｒｉｖ  ｒｅａｇｅｎｔ；Ｂｉｏｓｕｐｐｌｉｅｓ、Ｐａｒｋｖｉｌｌｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）との反応性検討は、ＨｏｌｓｔとＣｌａｒｋｅの方法（Ｖａｎ  Ｈｏｌｓｔ  ＧＪ、Ｃｌａｒｋｅ  ＡＥ. Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  −ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｐｌａｎｔ  ｅｘｔｒａｃｔｓ  ｂｙ  ｓｉｎｇｌｅ  ｒａｄｉａｌ  ｇｅｌ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ. Ａｎａｌ. Ｃｈｅｍ. １４８：４４６−４５０（１９８５））によってラジカルゲル拡散法（Ｓｉｎｇｌｅ  ｒａｄｉｃａｌ  ｇｅｌ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）で測定した。
【００５３】
β−グルコシルヤリブ試薬１０μｇ／ｍｌを含有した０．１５Ｍ  ＮａＣｌアガロース平板を調製し、直径２．５ｍｍのウェル（ｗｅｌｌ）を作り、濃度別に希釈した標準物質であるアラビアガム（ｇｕｍ  Ａｒａｂｉｃ）と試料５μｇを含有した溶液をウェル（ｗｅｌｌ）にそれぞれ注入した。前記平板を湿潤状態で１５時間定置して反応させ、生成された赤色の沈殿環を観察してアラビーノ−β−３,６−ガラクタンの存在の有無を確認し、試料とβ−グルコシルヤリブ試薬との反応性は生成されたリ沈殿環の広さを求めて相互比較した。試料としては、図４に示されたように、標準物質６２．５、１２５、２５０、５００及び１０００μｇ／ｍｌ、製造例１及び製造例２の多糖体をそれぞれ１００、５００及び１０００μｇ／ｍｌの濃度で用いた。
【００５４】
生成された赤色のリ沈殿環の面積を測定し、アラビーノ−β−３,６−ガラクタンの相対含量を図５に示した。図５の結果は、標準物質１０００μｇ／ｍｌ濃度処理群に対して各試料１０００μｇ／ｍｌ処理群の面積を比較したものである。
【００５５】
図５の結果から、高麗人参の実多糖体は、紅参多糖体に比べ、２倍以上の高含量でアラビノガラクタン構造を含むことを確認することができる。
【００５６】
［試験例２］大食細胞におけるＩＬ−６生成能の評価
高麗人参の実多糖体の大食細胞におけるＩＬ−６生成能を下記のように測定した。
【００５７】
ＢＡＬＢ／ｃマウスに５％チオグリコール酸塩（ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ）１ｍｌを腹腔注射し、３日後に頚椎脱臼法でマウスを死亡させた後、腹腔にＤＭＥＭ培地１０ｍＬを注入して、腹腔内細胞（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｅｘｕｄａｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ；ＰＥＣ）を収集した。収集したＰＥＣを９６ウェル培養プレートに２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度に調整して分注し、２時間培養して、大食細胞をプレートに付着させた後、培養液で洗浄して、付着されていない細胞を除去した。高麗人参の実の精製画分試料溶液の最終濃度が０．８μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍＬになるように、大食細胞に試料を添加し、７２時間培養した。培養終了後、９００ｒｐｍで５分間遠心分離して細胞培養液上澄液を１５０μｌ回収した後、培養上澄液に誘導分泌されたサイトカインであるＩＬ−６の含量を測定した。その結果を図６に示す。
【００５８】
試料として、製造例１及び製造例２の多糖体を用い、また、陽性対照群として、ＰＳＫ（ＫｒｅｓｔｉｎＴＭ、ｆｒｏｍ  Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、アメリカ人参（Ｐａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ）の根から製造されたＣＶＴ２００（ＣＯＬＤ−ＦＸ）、Ｂｉｏｂｒａｎ（ａｒａｂｉｎｏｘｙｌａｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）を用い、図６のＮＣは無処理群、ＰＣはＬＰＳ  ５μｇ／ｍｌ処理群である。
【００５９】
図６の結果から、高麗人参の実多糖体は、陽性対照群として用いた試料及び紅参多糖体に比べ、顕著に優れたＩＬ−６生成能を示すことが分かる。
【００６０】
［試験例３］大食細胞におけるＩＬ−１２生成能の評価
高麗人参の実多糖体の大食細胞におけるＩＬ−１２生成能を下記のように測定した。
【００６１】
ＢＡＬＢ／ｃマウスに５％チオグリコール酸塩（ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ）を１ｍｌ腹腔注射し、３日後に頚椎脱臼法でマウスを死亡させた後、腹腔にＤＭＥＭ培地１０ｍＬを注入して、腹腔内細胞（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｅｘｕｄａｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ；ＰＥＣ）を収集した。収集したＰＥＣを９６ウェル培養プレートに２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度に調整して分注し、２時間培養して、大食細胞をプレートに付着させた後、培養液で洗浄して、付着されていない細胞を除去した。大食細胞に高麗人参の実の精製画分試料溶液の最終濃度が０．８μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍＬになるように試料を添加し、７２時間培養した。培養終了後、９００ｒｐｍで５分間遠心分離して、細胞培養液上澄液を１５０μｌ回収した後、培養上澄液に誘導分泌されたサイトカインであるＩＬ−１２の含量を測定した。その結果を図７に示す。
【００６２】
試料として、製造例１及び製造例２の多糖体を用い、また、陽性対照群として、ＰＳＫ（ＫｒｅｓｔｉｎＴＭ、ｆｒｏｍ  Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、アメリカ人参（Ｐａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ）の根から製造されたＣＶＴ２００（ＣＯＬＤ−ＦＸ）、Ｂｉｏｂｒａｎ（ａｒａｂｉｎｏｘｙｌａｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）を用い、図７のＮＣは無処理群、ＰＣはＬＰＳ  ５μｇ／ｍｌ処理群である。
【００６３】
図７の結果から、高麗人参の実多糖体は、陽性対照群として用いた試料及び紅参多糖体に比べ、顕著に優れたＩＬ−１２生成能を示すことが分かる。
【００６４】
［試験例４］大食細胞におけるＴＮＦ−α生成能の評価
高麗人参の実多糖体の大食細胞におけるＴＮＦ−α生成能を下記のように測定した。
【００６５】
ＢＡＬＢ／ｃマウスに５％チオグリコール酸塩（ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ）を１ｍｌ腹腔注射し、３日後に頚椎脱臼法でマウスを死亡させた後、腹腔にＤＭＥＭ培地１０ｍＬを注入して、腹腔内細胞（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｅｘｕｄａｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ；ＰＥＣ）を収集した。収集したＰＥＣを９６ウェル培養プレートに２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度に調整して分注し、２時間培養して、大食細胞をプレートに付着させた後、培養液で洗浄して、付着されていない細胞を除去した。大食細胞に高麗人参の実の精製画分試料溶液の最終濃度が０．８μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍＬになるように試料を添加し、７２時間培養した。培養終了後、９００ｒｐｍで５分間遠心分離して、細胞培養液上澄液を１５０μｌ回収した後、培養上澄液に誘導分泌されたサイトカインであるＴＮＦ−αの含量を測定した。その結果を図８に示す。
【００６６】
試料として、製造例１及び製造例２の多糖体を用い、また、陽性対照群として、ＰＳＫ（ＫｒｅｓｔｉｎＴＭ、ｆｒｏｍ  Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、アメリカ人参（Ｐａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ）の根から製造されたＣＶＴ２００（ＣＯＬＤ−ＦＸ）、Ｂｉｏｂｒａｎ（ａｒａｂｉｎｏｘｙｌａｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）を用い、図８のＮＣは無処理群、ＰＣはＬＰＳ  ５μｇ／ｍｌ処理群である。
【００６７】
図８の結果から、高麗人参の実多糖体は、陽性対照群として用いた試料及び紅参多糖体に比べ、顕著に優れたＴＮＦ−α生成能を示すことが分かる。
【００６８】
［剤形例１］錠剤
製造例１の多糖体１００ｍｇ、ラクトース４００ｍｇ、とうもろこし澱粉４００ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常の錠剤の製造方法に従い打錠して錠剤を製造した。
【００６９】
［剤形例２］カプセル剤
製造例１の多糖体１００ｍｇ、ラクトース４００ｍｇ、とうもろこし澱粉４００ｍｇ及びステアリン酸マグネシウム２ｍｇを混合した後、通常のカプセル剤の製造方法に従いゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００７０】
［剤形例３］顆粒剤
製造例１の多糖体５０ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇ及び澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層造粒機を用いて顆粒に成形した後、分包に充填した。
【００７１】
［剤形例４］ドリンク剤
本発明に係る製造例１の多糖体５０ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇ、及び液状オリゴ糖２５ｇを混合した後、精製水３００ｍｌを加えて、各瓶に２００ｍｌずつ充填する。瓶に充填した後、１３０℃で４〜５秒間殺菌してドリンク剤を製造した。
【００７２】
［剤形例５］注射剤
下記の表に表された組成にて通常の方法に従い注射剤を製造した。
【００７３】
【表１】
2020506683.tif 000003
【図１】
2020506683.tif 000004
【図２】
2020506683.tif 000005
【図３】
2020506683.tif 000006
【図４】
2020506683.tif 000007
【図５】
2020506683.tif 000008
【図６】
2020506683.tif 000009
【図７】
2020506683.tif 000010
【図８】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年7月29日(2019.7.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高麗人参の実多糖体を有効成分として含む免疫増強用組成物。
【請求項２】
前記高麗人参の実多糖体は、アラビノーズ、ガラクトース、ガラクツロン酸及びグルクロン酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ガラクツロン酸及びグルクロン酸を、前記高麗人参の実多糖体の総質量に対して、０．１質量％〜２５質量％の範囲で含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記高麗人参の実多糖体は、β−グルコシルヤリブ試薬（β−ｇｌｕｃｏｓｙｌ  Ｙａｒｉｖ  ｒｅａｇｅｎｔ）処理の際に標準アラビーノ−β−３,６−ガラクタン（ａｒａｂｉｎｏ−β−３,６−ｇａｌａｃｔａｎ）を１００％としたとき、４０％以上の反応を示す、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記高麗人参の実多糖体は、高麗人参の実のエタノール不可溶分画中の水溶性成分由来のものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記高麗人参の実多糖体は、インターロイキン−６（ＩＬ−６）の発現を増加させる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記高麗人参の実多糖体は、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）の発現を増加させる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記高麗人参の実多糖体は、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の発現を増加させる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
当該組成物は健康機能食品用である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
当該組成物は薬学組成物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
当該組成物は化粧料組成物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【国際調査報告】
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