(57)【要約】  本発明は、がん免疫療法に関連する免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）を治療するためのＣＤ２４タンパク質に関する。本明細書では、ＣＤ２４タンパク質を、それを必要とする対象に投与することにより、がん免疫療法に関連する免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）を治療、緩和、最小化、または予防する方法が提供される。ｉｒＡＥは、下痢もしくは別の胃腸障害、赤芽球癆、小球性貧血、ループス、自己免疫性腎炎、自己免疫性肝炎、肺炎、心筋炎、心膜炎、内分泌障害、アジソン病、性腺機能低下症、シェーグレン症候群、またはＩ型糖尿病であり得る。ＣＤ２４タンパク質は、成熟ヒトＣＤ２４またはそのバリアントを含み得る。
2020520985.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象のがん療法に関連する免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療における使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２】
前記がん療法が、抗ＣＴＬＡ４抗体である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３】
前記抗ＣＴＬＡ４抗体が、イピリムマブである、請求項２に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項４】
前記抗ＣＴＬＡ４抗体が、別の療法と組み合わせて投与される、請求項２に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項５】
がん療法が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項６】
前記抗ＰＤ−１抗体が、別の療法と組み合わせて投与される、請求項５に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項７】
がん療法が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項８】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、別の療法と組み合わせて投与される、請求項７に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項９】
前記がん療法が、キメラ抗原受容体Ｔ細胞である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１０】
前記がん療法が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１１】
前記がん療法が、活性化ナチュラルキラー細胞である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１２】
前記がん療法が、放射線療法である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１３】
前記がん療法が、化学療法である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１４】
前記がん療法が、がん細胞標的化抗体を含む、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１５】
前記ＣＤ２４タンパク質が、成熟ヒトＣＤ２４またはそのバリアントを含む、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１６】
前記成熟ヒトＣＤ２４が、配列番号１または２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜１５のいずれかに記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１７】
前記ＣＤ２４タンパク質が、タンパク質タグをさらに含み、前記タンパク質タグが、前記ＣＤ２４タンパク質のＮ末端またはＣ末端で融合している、請求項１〜１６のいずれかに記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１８】
前記タンパク質タグが、哺乳動物免疫グロブリン（Ｉｇ）タンパク質の一部を含む、請求項１７に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項１９】
前記Ｉｇ部分が、ヒトＩｇタンパク質のＦｃ領域である、請求項１８に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２０】
前記Ｆｃ領域が、前記ヒトＩｇタンパク質のヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み、前記Ｉｇが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＡからなる群から選択される、請求項１９に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２１】
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＭのヒンジ領域ならびにＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインを含む、請求項１８に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２２】
前記ＣＤ２４タンパク質の配列が、配列番号６、１１、または１２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２３】
前記ＣＤ２４タンパク質が、真核生物タンパク質発現系を使用して産生される、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２４】
前記発現系が、チャイニーズハムスター卵巣細胞株に含まれるベクターまたは複製欠損レトロウイルスベクターを含む、請求項２３に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２５】
前記複製欠損レトロウイルスベクターが、真核細胞のゲノムに安定して組み込まれている、請求項２４に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２６】
前記ｉｒＡＥが、下痢または別の胃腸障害である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２７】
前記ｉｒＡＥが、赤芽球癆である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２８】
前記ｉｒＡＥが、小球性貧血である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項２９】
前記ｉｒＡＥが、ループスである、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３０】
前記ｉｒＡＥが、自己免疫性腎炎である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３１】
前記ｉｒＡＥが、自己免疫性肝炎である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３２】
前記ｉｒＡＥが、肺炎である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３３】
前記ｉｒＡＥが、心筋炎および心膜炎などの心疾患である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３４】
前記ｉｒＡＥが、内分泌障害である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３５】
前記ｉｒＡＥが、アジソン病である、請求項１に記載のＣＤ２４タンパク質。
【請求項３６】
前記ｉｒＡＥが、性腺機能低下症である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３７】
前記ｉｒＡＥが、シェーグレン症候群である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３８】
前記ｉｒＡＥが、Ｉ型糖尿病である、請求項１に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項３９】
前記ＣＤ２４タンパク質が、可溶性である、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【請求項４０】
前記ＣＤ２４タンパク質が、グリコシル化されている、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の使用のためのＣＤ２４タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がん免疫療法に関連する免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）を治療するためのＣＤ２４タンパク質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
実験モデル系および患者において、免疫系は、がんを認識および排除する能力を有する。その結果、がん免疫療法は、がん療法の最も有望な分野の１つとして浮上している。能動がん免疫療法としては、自然免疫応答を増幅する薬剤（ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＣＴＬＡ−４に対する抗体を含む）、腫瘍微小環境を調節する小分子、または、エクスビボ刺激腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、もしくは遺伝子組み換えＴ細胞（キメラ抗原受容体［ＣＡＲ］およびＴ細胞受容体［ＴＣＲ］修飾Ｔ細胞）を使用した養子細胞移植（ＡＣＴ）が挙げられる。代替的に、腫瘍を直接標的とする他のがん免疫療法は、間接的に免疫系の活性化を引き起こすことができる（固形がんの場合は抗Ｈｅｒ−２抗体、Ｂ細胞悪性腫瘍の場合は抗ＣＤ２０抗体、または神経芽細胞腫の場合は抗ＧＭ２抗体などのがん標的化抗体を含む）。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＣＴＬＡ−４に対する抗体、ならびに腫瘍標的化抗体は、固形腫瘍および血液腫瘍の治療に大きな利点を示している。ＣＡＲ  Ｔ細胞などの養子細胞免疫療法は、白血病などの血液腫瘍に対して印象的な効果を示しているが、現在までに固形腫瘍に対する効果は限定的である。ＣＡＲ−Ｔ免疫療法は、血液悪性腫瘍を標的としてきたが、遺伝子改変ＴＣＲを使用するＴ細胞免疫療法は、さらに固形腫瘍を標的としてきた。
【０００３】
腫瘍は、高度に寛容原性で免疫抑制性の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を生成することにより、免疫除去を回避する。したがって、免疫腫瘍学の重要な目標は、これらのメカニズムを排除して免疫系による腫瘍細胞の腫瘍浸潤、活性化、および破壊を可能にするために、腫瘍が採用するさまざまな耐性メカニズムを理解することである。しかしながら、治療上の期待にもかかわらず、免疫療法の全身送達は自己寛容を侵す可能性もある。これにより、さまざまな臓器系で軽度から重度の炎症反応が起こり、場合によっては、一般に免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）と称される生命を脅かす自己免疫が生じる。免疫療法のアプローチがより多くのがんの適応症に拡大し、より効果的な組み合わせになるにつれて、これらの次世代のがん免疫療法にとって非特異的なｉｒＡＥを制御することが重要な目標となる。
【０００４】
ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＴＬＡ−４に対する抗体による治療は、前臨床モデルで抗腫瘍免疫を強化するための強力なツールであることが示されている。ＣＴＬＡ４に対する抗体を用いた単独療法は、さまざまな起源の移植可能な腫瘍の拒絶を促進した。有望な前臨床腫瘍モデル研究に基づいて、ＣＴＬＡ４に対する抗体の臨床的可能性がさまざまなヒトの悪性腫瘍で調査された。抗ＣＴＬＡ４（米国特許第６，９８４，７２０号に開示され、ヤーボイとして販売されているイピリムマブ）は、黒色腫の治療における有効性を実証しているが、ＣＴＬＡ４の治療および標的化は自己免疫様の毒性と関連している。抗ＰＤ−１および抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、臨床反応が非常に高く、ｉｒＡＥが非常に低いことを示している。しかしながら、がん患者の約１５〜２０％で依然として深刻な自己免疫有害事象が発生している。さらに、イピリムマブやトレメリムマブなどの抗ＣＴＬＡ４  ｍＡｂは、優れた治療効果を持つ抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体との併用療法で使用される。しかし、改善された治療効果は、グレード３およびグレード４の臓器毒性のさらに高い割合に関連している。胃腸管、皮膚、腎臓、膵臓、肝臓、中枢および末梢神経系を含む複数の身体部位にわたってｉｒＡＥの例が報告されている。ｉｒＡＥの発生率および重症度は、患者全体の応答とチェックポイント遮断に対する生存率と相関しており、抗腫瘍応答と自己免疫応答の両方が抗チェックポイント免疫療法に感受性であることを示唆している。そのようなｉｒＡＥは、標的腫瘍関連抗原が、非悪性組織に発現しているときに、宿主組織に対する抗原特異性攻撃により生じる、「自己免疫毒性」、またはいわゆる「標的上腫瘍外毒性（ｏｎ  ｔａｒｇｅｔ、ｏｆｆ−ｔｕｍｏｒ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ）」として広く分類することができる。自己免疫毒性は、ＭＡＧＥ−Ａ３を標的とする遺伝子組み換えＴ細胞の注入後に致命的な毒性をもたらした。
【０００５】
ＣＡＲ−Ｔなどの遺伝子操作されたＴ細胞療法は、その使用を制限するｉｒＡＥとも関連しているが、ここでは有害事象はより一般的にサイトカイン関連毒性である。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、インビボでＴ細胞の増殖を引き起こし、これは、サイトカインの毒性レベルでの放出、すなわち、サイトカインストームまたはサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）とさまざまに称される全身性炎症反応を引き起こし得る。注入反応は、抗体およびＦｃ融合タンパク質治療薬でもよく見られ、軽度の吐き気および発熱から生命を脅かす多臓器不全に至るまでの範囲の症状に関連している。ＣＡＲ  Ｔ細胞毒性を経験しているすべての患者には積極的な支持療法が必要であり、低血圧への早期介入と同時感染の治療が不可欠である。しかしながら、薬理学的管理は、ＣＡＲ  Ｔ細胞の抗悪性腫瘍活性を無効にする免疫抑制療法のリスクにより複雑であり、予防的免疫抑制が使用されない主な理由である。トシリズマブによるインターロイキン６受容体遮断は、ＣＲＳの主要な薬物療法であり続けるが、投与の適応症は治療施設によって異なる。
【０００６】
ＣＲＳは、悪性細胞の急速な溶解に関連する他の形態のがん療法でも発生し、急性アナフィラキシーまたは腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）と呼ばれる現象を引き起こす。細胞溶解は、危険（損傷）関連分子パターン（ＤＡＭＰ）と呼ばれる細胞内成分の放出を引き起こす可能性があるため、適切に制御されない場合、炎症を引き起こし、自己免疫疾患の病期を定める可能性がある。しかしながら、従来の免疫抑制剤は、すべての形態の療法が直接的または間接的に抗がん免疫応答を必要とすると考えられているため、がん療法の有害事象に対して問題がある場合がある。
【０００７】
したがって、がん免疫を維持しながらｉｒＡＥを治療するための大きな医学的な必要性が満たされていない。
【発明の概要】
【０００８】
本明細書では、ＣＤ２４タンパク質を、それを必要とする対象に投与することにより、がん免疫療法に関連する免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）を治療、緩和、最小化、または予防する方法が提供される。ｉｒＡＥは、下痢もしくは別の胃腸障害、赤芽球癆、小球性貧血、ループス、自己免疫性腎炎、自己免疫性肝炎、肺炎、心筋炎、心膜炎、内分泌障害、アジソン病、性腺機能低下症、シェーグレン症候群、またはＩ型糖尿病であり得る。ＣＤ２４タンパク質は、成熟ヒトＣＤ２４またはそのバリアントを含み得る。成熟ヒトＣＤ２４の配列は、配列番号１または２に記載のアミノ酸配列を含んでもよい。ＣＤ２４タンパク質は、ヒトＣＤ２４の細胞外ドメインのいずれかまたはすべてを含み得る。ＣＤ２４タンパク質の配列は、タンパク質を発現する細胞からの分泌を可能にするために、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有するシグナル配列を含んでもよい。シグナルペプチド配列は、他の膜貫通タンパク質または分泌タンパク質に見られるもの、または当該技術分野で既知である既存のシグナルペプチドから改変されたものであってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、可溶性であってよく、および／またはグリコシル化されていてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣細胞株に含まれるベクターまたは複製欠損レトロウイルスベクターを含み得る真核生物タンパク質発現系を使用して産生され得る。複製欠損レトロウイルスベクターは、真核細胞のゲノムに安定して組み込まれ得る。
【０００９】
ＣＤ２４タンパク質は、ＣＤ２４タンパク質のＮ末端またはＣ末端で融合され得るタンパク質タグを含み得る。タンパク質は、哺乳動物免疫グロブリン（Ｉｇ）の一部を含んでもよく、これは、ヒトＩｇタンパク質のＦｃ領域であってもよい。ヒトＩｇタンパク質は、ヒトＩｇタンパク質のヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含んでもよく、ヒトＩｇタンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＡであってもよい。Ｆｃ領域は、ＩｇＭのヒンジ領域ならびにＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインも含み得る。ＣＤ２４タンパク質は、配列番号５、６、８、９、１１、または１２に示されるアミノ酸配列を含み得る。
【００１０】
がん免疫療法は、抗ＣＴＬＡ４抗体であり得、これは、イピリムマブであり得る。抗ＣＴＬＡ４抗体は、別の療法と組み合わせて投与してもよい。がん療法はまた、別の療法と組み合わせて投与され得る抗ＰＤ−１抗体であってもよい。がん療法はまた、別の療法と組み合わせて投与され得る抗ＰＤ−Ｌ１抗体であってもよい。がん療法はまた、キメラ抗原Ｔ細胞、Ｔ細胞受容体改変Ｔ細胞、または活性化ナチュラルキラー細胞であってもよい。がん療法は、放射線療法、化学療法、またはがん細胞を標的とする抗体を含むがん療法でもあり得る。
【００１１】
本明細書には、同種異系造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の後に、活性化ナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞を受け取る可能性、受け取った可能性、または受け取っている可能性のある対象において、ＣＤ２４タンパク質を、それを必要とする対象に投与することによる、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を治療、軽減、または予防する方法も記載されている。
【００１２】
本明細書にさらに記載されるのは、ＣＤ２４を、それを必要とする対象に投与することによる、がん療法中の大規模な腫瘍崩壊に関連するｉｒＡＥの予防または治療の方法である。がん療法は、放射線療法、化学療法、またはがん細胞の直接的な死滅を引き起こす抗がん抗体であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１Ａ】全長ＣＤ２４融合タンパク質であるＣＤ２４Ｆｃ（本明細書ではＣＤ２４Ｉｇとも称される）（配列番号５）のアミノ酸組成を示す。下線が付された２６個のアミノ酸はＣＤ２４のシグナルペプチド（配列番号４）であり、タンパク質を発現する細胞からの分泌中に切断され、したがってタンパク質の加工バージョン（配列番号６）から失われる。配列の太字部分は、融合タンパク質で使用される成熟ＣＤ２４タンパク質の細胞外ドメインである（配列番号２）。成熟ＣＤ２４タンパク質に通常存在する最後のアミノ酸（ＡまたはＶ）は、免疫原性を避けるために構築物から削除されている。下線が付されておらず、太字でない文字は、ヒンジ領域ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメインを含むＩｇＧ１  Ｆｃの配列である（配列番号７）。
【図１Ｂ】ＣＤ２４ＶＦｃの配列（配列番号８）を示し、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）は、配列番号１のバリン多型バリアントである。
【図１Ｃ】ＣＤ２４ＡＦｃの配列（配列番号９）を示し、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）は配列番号１のアラニン多型バリアントである。図１Ｂおよび１Ｃの融合タンパク質のさまざまな部分は、図１Ａのようにマークされ、バリアントのバリン／アラニンアミノ酸には二重下線が付されている。
【図２】マウス（配列番号３）とヒト（配列番号２）の成熟ＣＤ２４タンパク質間のアミノ酸配列の変化を示す。起こり得るＯグリコシル化部位は太字にされ、Ｎグリコシル化部位には下線が付されている。
【図３】ＣＤ２４ＩｇＧ１（ＣＤ２４Ｆｃ）の薬物動態のＷｉｎＮｏｎｌｉｎコンパートメントモデリング分析。開いた円は、３匹のマウスの平均を表し、線は、予測された薬物動態曲線である。図３Ａ  １ｍｇのＣＤ２４ＩｇＧ１のｉ．ｖ．注射。図３Ｂ  １ｍｇのＣＤ２４ＩｇＧ１（ＣＤ２４Ｆｃ）のｓ．ｃ．注射。図３Ｃ曲線下面積（ＡＵＣ）、半減期、および最大血中濃度で測定した、血中の抗体の総量の比較。全体的に、ｓ．ｃ．注射のＡＵＣとＣｍａｘはｉ．ｖ．注射の約８０％であるが、違いは統計的に有意ではない。
【図４】ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）相互作用は、ＰＡＭＰとＤＡＭＰとを区別する。  図４Ａ：ＰＡＭＰに対する宿主の応答は、ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）相互作用の影響を受けなかった。  図４Ｂ：ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ（１０）の相互作用は、おそらくＳｉｇｌｅｃ  Ｇ／１０関連ＳＨＰ−１を介して、ＤＡＭＰに対する宿主の応答を抑制する。
【図５Ａ】図５：ＣＤ２４  ＦｃはＳｉｇｌｅｃ  １０とＨＭＧＢ１に結合し、ヒトＳｉｇｌｅｃ  １０のマウス相同体であるＳｉｇｌｅｃ  Ｇを活性化する。    図５Ａ：ＣＤ２４−Ｆｃ−Ｓｉｇｌｅｃ  １０相互作用の親和性測定。
【図５Ｂ】ＣＤ２４−Ｆｃは、カチオン依存的にＨＭＧＢ−１と特異的に相互作用する。カチオンキレート剤ＥＤＴＡの存在下または非存在下で、ＣＤ２４−Ｆｃを０．１ｍＭのＣａＣｌ２およびＭｇＣｌ２中のＨＭＧＢ１とともにインキュベートした。ＣＤ２４ＦｃはプロテインＧビーズでプルダウンされ、ＨＭＧＢ１、ＣＤ２４Ｆｃ、または対照のＦｃの量はウエスタンブロットによって決定される。
【図５Ｃ】ＣＤ２４−Ｆｃは、チロシンのリン酸化を誘導することでマウスＳｉｇｌｅｃ  Ｇを活性化し（中央パネル）、ＳＨＰ−１と結合する（上パネル）。Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇの量は、下パネルに示される。ＣＤ２４−／−脾臓細胞を１μｇ／ｍｌのＣＤ２４−Ｆｃ、対照Ｆｃまたはビヒクル（ＰＢＳ）対照で３０分間刺激した。次に、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇを免疫沈降し、抗ホスホチロシンまたは抗ＳＨＰ−１でプローブした。
【図６Ａ】ＣＤ２４Ｆｃは、抗ＣＤ３活性化ヒトＴ細胞によるＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γの産生を阻害する。ヒトＰＢＭＬをＣＤ２４Ｆｃの存在下または非存在下で抗ＣＤ３によって４日間刺激し、細胞培養の上清中に放出されたＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの量をＥＬＩＳＡにより測定した。表示されているデータは、３回の平均である。エラーバー、ＳＥＭ。
【図６Ｂ】ＣＤ２４Ｆｃは、抗ＣＤ３活性化ヒトＴ細胞によるＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γの産生を阻害する。ヒトＰＢＭＬをＣＤ２４Ｆｃの存在下または非存在下で抗ＣＤ３によって４日間刺激し、細胞培養の上清中に放出されたＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの量をＥＬＩＳＡにより測定した。表示されているデータは、３回の平均である。エラーバー、ＳＥＭ。
【図７】ＣＤ２４は、ヒトマクロファージによる炎症性サイトカイン産生を阻害する。    図７Ａ：ＣＤ２４のＳｈＲＮＡサイレンシングにより、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、およびＩＬ−６が自発的に産生される。ＴＨＰ１細胞は、スクランブルされた、または２つの独立したＣＤ２４  ｓｈＲＮＡ分子をコードするレンチウイルスベクターで形質導入された。形質導入された細胞は、ＰＭＡ（１５ｎｇ／ｍｌ）とともに４日間培養することにより、マクロファージに分化した。ＰＭＡおよび非接着細胞を洗い流した後、サイトカインビーズアレイによる炎症性サイトカインの測定のために、細胞をさらに２４時間培養した。    図７Ｂ：ＣＤ２４Ｆｃまたは対照ＩｇＧ  Ｆｃの所定の濃度が最後の２４時間でマクロファージに添加されたことを除いて、図７Ａと同様である。図４Ａに示すデータは、３つの独立した実験からの平均とＳ．Ｄ．であり、図４Ｂのデータは、少なくとも３つの独立した実験を表す。
【図８】ＣＤ２４ＦｃとＣｓＡの治療効果のカプラン・マイヤー生存分析、２つの独立した実験の要約データ。
【図９】対象におけるＰＫ評価可能集団の治療による平均血漿ＣＤ２４Ｆｃ濃度（±ＳＤ）のプロットを示す。ＰＫ＝薬物動態；ＳＤ＝標準偏差。
【図１０】ＰＫ評価可能集団のＣＤ２４Ｆｃ  Ｃｍａｘ対用量の用量比例プロットを示す。
【図１１】ＰＫ評価可能集団のＣＤ２４Ｆｃ  ＡＵＣ０−４２ｄ対用量の用量比例プロットを示す。
【図１２】ＰＫ評価可能集団のＣＤ２４Ｆｃ  ＡＵＣ０−ｉｎｆ対用量の用量比例プロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明者らは、驚くべきことに、ＣＤ２４の可溶性形態が免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療に非常に効果的であることを発見した。効果は、ＤＡＭＰを介して媒介され得る。パターン認識は、それぞれＰＡＭＰおよびＤＡＭＰと呼ばれる病原体関連および組織損傷関連分子パターンの両方によって引き起こされる炎症反応に関与している。本発明者らは、最近の研究により、ＤＡＭＰに対する悪化した宿主応答が炎症性および自己免疫疾患の病因に関与している可能性があることを実証した。ＤＡＭＰは、炎症性サイトカインの産生および自己免疫疾患を促進することが判明しており、動物モデルにおいて、ＨＭＧＢ１およびＨＳＰ９０などのＤＡＭＰの阻害剤は、関節リウマチ（ＲＡ）を改善することが判明した（４−６）。ＴＬＲ、ＲＡＧＥ−Ｒ、ＤＮＧＲ（Ｃｌｅｃ９Ａによりコードされる）、およびＭｉｎｃｌｅは、さまざまなＤＡＭＰによって開始される炎症の媒介に関与する受容体であることが示されている（２、７−１４）。
【００１５】
本発明者らの最近の研究は、ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ相互作用がＤＡＭＰに対する先天性免疫をＰＡＭＰから区別することを実証した（１５、１６）。Ｓｉｇｌｅｃタンパク質は、さまざまなシアル酸含有構造を認識する膜結合免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである。ほとんどのＳｉｇｌｅｃｓには、ＳＨＰ−１、−２、およびＣｂｌ−ｂと結合して炎症反応の重要な調節因子を制御する細胞内免疫チロシン抑制モチーフ（ＩＴＩＭ）がある。本発明者らは、Ｓｉｇｌｅｃ、すなわちマウスでのＳｉｇｌｅｃ  Ｇ、およびヒトでのＳｉｇｌｅｃ１０に対する最初の天然リガンドとしてＣＤ２４を報告した（１５）。Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇはシアル酸化ＣＤ２４と相互作用して、ＳＨＰ−１／２シグナル伝達のメカニズムを介して、ＨＭＧＢ１などのＤＡＭＰに対するＴＬＲを介した宿主の応答を抑制する（１５）。
【００１６】
ヒトＣＤ２４は、ＣＤ２４遺伝子の２４０塩基対のオープンリーディングフレームによってコードされる小さなＧＰＩアンカー分子である（２８）。８０個のアミノ酸のうち、最初の２６個がシグナルペプチドを構成し、最後の２３個がＧＰＩテールの接着を可能にする切断のシグナルとして機能する。結果として、成熟したヒトＣＤ２４分子は、３１個のみのアミノ酸を有する。３１個のアミノ酸のうちの１つは、ヒト集団の中で多型である。オープンリーディングフレームのヌクレオチド１７０でのＣからＴへの遷移は、アラニン（ａ）のバリン（ｖ）による置換をもたらす。この残基は、切断部位のＮ末端側すぐに位置し、置換は非保存的であるため、これらの２つの対立遺伝子は、細胞表面で異なる効率で発現する可能性がある。実際に、ｃＤＮＡを用いたトランスフェクション研究により、ＣＤ２４ｖ対立遺伝子が、細胞表面でより効率的に発現することが示された（２８）。これと一致して、ＣＤ２４ｖ／ｖＰＢＬは、特にＴ細胞でより高いレベルのＣＤ２４を発現した。
【００１７】
本発明者らは、ＣＤ２４が、組織または臓器の損傷の結果として放出される細胞ＤＡＭＰに対する宿主応答を負に調節し、少なくとも２つの重複するメカニズムがこの活性を説明できることを実証した。第一に、ＣＤ２４はＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＨＭＧＢ１、およびヌクレオリンを含むいくつかのＤＡＭＰに結合し、これらのＤＡＭＰに対する宿主の応答を抑制する。これを行うには、ＣＤ２４が炎症性刺激を捕捉して、その受容体であるＴＬＲまたはＲＡＧＥとの相互作用を防ぐ可能性があると推定される。第二に、肝臓壊死のアセトアミノフェン誘発マウスモデルを使用し、炎症を確実にすることで、本発明者らは、その受容体であるＳｉｇｌｅｃ  Ｇとの相互作用により、ＣＤ２４が組織損傷に対する宿主応答に対して強力な負の調節を提供することを実証した。この活動を達成するために、ＣＤ２４は、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇに結合し、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇに関連するＳＨＰ１が負の調節を引き起こすシグナル伝達を刺激する可能性がある。両方のメカニズムは、いずれかの遺伝子の標的変異を持つマウスがはるかに強い炎症反応を起こすように協調して作用する可能性がある。実際、ＣＤ２４−／−またはＳｉｇｌｅｃ  Ｇ−／−マウスの骨髄から培養したＤＣは、ＨＭＧＢ１、ＨＳＰ７０、またはＨＳＰ９０のいずれかで刺激すると、より高いレベルの炎症性サイトカインを産生した。本発明者らの知る限り、ＣＤ２４は、ＤＡＭＰによって引き起こされる炎症を遮断できる唯一の阻害性ＤＡＭＰ受容体であり、組織損傷に対する宿主炎症応答を特異的に標的とする薬物は、現在利用可能ではない。さらに、本発明者らは、ＲＡ、ＭＳ、およびＧｖＨＤのマウスモデルを使用して、外因性可溶性ＣＤ２４タンパク質がＤＡＭＰ介在性自己免疫疾患を緩和する能力を実証した。
【００１８】
１．定義。
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図していない。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるとき、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という単数形は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。
【００１９】
本明細書における数値範囲への言及に関して、それらの間に介在する各数値は、同程度の精度で明示的に想定される。例えば、６〜９の範囲に関して、６と９に加えて数字７と８が想定され、６．０〜７．０の範囲に関して、数字６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、および７．０が明示的に想定されている。
【００２０】
「ペプチド」または「ポリペプチド」は、アミノ酸の連結された配列であり、天然、合成、または修飾、または天然と合成の組み合わせであり得る。
【００２１】
「実質的に同一」は、第１および第２のアミノ酸配列が１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、または３００個のアミノ酸の領域にわたって、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であることを意味する。
【００２２】
「治療」または「治療すること」は、疾患から動物を守ることを指す場合、疾患を予防、抑制、抑制、または完全に排除することを意味する。疾患を予防することは、疾患の発症前に本発明の組成物を動物に投与することを含む。疾患を抑制することは、疾患の誘発後であるがその臨床的出現の前に、本発明の組成物を動物に投与することを含む。疾患を抑制することは、疾患の臨床的出現後に本発明の組成物を動物に投与することを含む。
【００２３】
「バリアント」は、アミノ酸の挿入、欠失、または保存的置換によりアミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持しているペプチドまたはポリペプチドを意味し得る。「生物学的活性」の代表的な例には、ｔｏｌｌ様受容体に結合する能力および特定の抗体が結合する能力が含まれる。バリアントはまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を持つ参照タンパク質と実質的に同一のアミノ酸配列を持つタンパク質を意味してもよい。アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を類似の性質（例えば、親水性、荷電領域の程度および分布）の異なるアミノ酸で置き換えることは、典型的に軽微な変化を伴うものとして当該技術分野で認識されている。これらの軽微な変化は、当該技術分野で理解されているように、部分的に、アミノ酸のハイドロパシー指数を考慮することにより特定することができる。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２（１９８２）．アミノ酸のハイドロパシーインデックスは、その疎水性と電荷の考慮に基づいている。当該技術分野において、同様のハイドロパシー指数のアミノ酸は、置換され得、タンパク質機能を依然として保持できることが既知である。一態様では、±２のハイドロパシー指数を有するアミノ酸が置換される。アミノ酸の親水性は、生物学的機能を保持するタンパク質をもたらす置換を明らかにするためにも使用できる。ペプチドの文脈におけるアミノ酸の親水性の考察により、抗原性および免疫原性とよく相関すると報告されている有用な尺度である、そのペプチドの最大局所平均親水性の計算が可能になる。参照により本明細書に完全に組み込まれる米国特許第４，５５４，１０１号。同様の親水性値を有するアミノ酸の置換は、当該分野で理解されているように、生物学的活性、例えば免疫原性を保持するペプチドをもたらし得る。互いの±２以内の親水性値を有するアミノ酸で置換を行ってもよい。アミノ酸の疎水性指数と親水性値の両方は、そのアミノ酸の特定の側鎖の影響を受ける。その観察と一致して、生物学的機能と両立するアミノ酸置換は、疎水性、親水性、電荷、サイズ、および他の特性によって明らかにされるように、アミノ酸、特にそれらのアミノ酸の側鎖の相対的類似性に依存すると理解される。
【００２４】
２．ＣＤ２４
成熟ＣＤ２４またはそのバリアントを含み得るＣＤ２４タンパク質が本明細書で提供される。成熟ＣＤ２４は、ＣＤ２４の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対応する。成熟ＣＤ２４は、ヒトまたは別の哺乳動物に由来し得る。上述のように、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質は３１アミノ酸長で、Ｃ末端に可変のアラニン（Ａ）またはバリン（Ｖ）残基を有する：
ＳＥＴＴＴＧＴＳＳＮＳＳＱＳＴＳＮＳＧＬＡＰＮＰＴＮＡＴＴＫ（Ｖ／Ａ）（配列番号１）
【００２５】
Ｃ末端のバリンまたはアラニンは免疫原性である可能性があり、ＣＤ２４タンパク質から除外される可能性があり、これはその免疫原性を低下させる可能性がある。したがって、ＣＤ２４タンパク質は、Ｃ末端アミノ酸を欠くヒトＣＤ２４のアミノ酸配列を含む場合がある。
ＳＥＴＴＴＧＴＳＳＮＳＳＱＳＴＳＮＳＧＬＡＰＮＰＴＮＡＴＴＫ（配列番号２）
【００２６】
マウスおよびヒト由来の成熟ＣＤ２４タンパク質のアミノ酸配列にはかなりの配列変異があるが、ヒトＣＤ２４Ｆｃはマウスで活性があることが示されているため、機能的に同等である。ヒトＣＤ２４  ＥＣＤのアミノ酸配列は、マウスタンパク質とのいくらかの配列保存性を示している（３９％の同一性、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３３９７６）。しかしながら、ＣＤ２４  ＥＣＤの長さは種によって異なり２７〜３１アミノ酸長であり、Ｓｉｇｌｅｃ  １０／Ｇなどのその受容体の一部への結合が糖タンパク質のシアル酸および／またはガラクトース糖によって媒介されるため、同一性パーセントが高くないことは驚くことではない。ヒトＳｉｇｌｅｃ−１０（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ３１０２３３）とそのマウス相同体Ｓｉｇｌｅｃ−Ｇ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿７６６４８８）の受容体タンパク質の細胞外ドメイン間のアミノ酸配列同一性は６３％である（図２）。主にＣ末端およびグリコシル化部位の豊富さでのマウスとヒトのＣＤ２４との間の配列保存の結果、特にそれらの変異がＣ末端の保存された残基に影響を与えない場合、またはマウスまたはヒトのＣＤ２４のいずれかのグリコシル化部位に影響を与えない場合、ＣＤ２４タンパク質を使用する際に、成熟ＣＤ２４タンパク質のかなりの変異が許容される可能性がある。したがって、ＣＤ２４タンパク質は、成熟マウスＣＤ２４のアミノ酸配列を含んでもよい：
ＮＱＴＳＶＡＰＦＰＧＮＱＮＩＳＡＳＰＮＰＴＮＡＴＴＲＧ（配列番号３）
【００２７】
ヒトＣＤ２４  ＥＣＤのアミノ酸配列は、マウスよりもカニクイザルのタンパク質でより多くの配列保存を示している（５２％の同一性、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｉ７ＧＫＫ１）。繰り返すが、これらの種におけるＥＣＤの長さは２９〜３１アミノ酸にすぎないため、同一性パーセントが高くないこと、およびその受容体への結合における糖残基の役割を考えると、これは驚くことではない。カニクイザルＳｉｇｌｅｃ−１０受容体のアミノ酸配列は決定されていないが、ヒトとアカゲザルのＳｉｇｌｅｃ−１０（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＸＰ＿００１１１６３５２）タンパク質との間のアミノ酸配列の同一性は、８９％である。したがって、ＣＤ２４タンパク質は、成熟したカニクイザル（またはアカゲザル）のＣＤ２４のアミノ酸配列も含む場合がある。
ＴＶＴＴＳＡＰＬＳＳＮＳＰＱＮＴＳＴＴＰＮＰＡＮＴＴＴＫＡ（配列番号１０）
【００２８】
ＣＤ２４タンパク質は可溶性であってよい。ＣＤ２４タンパク質は、タンパク質を発現する細胞からの分泌を可能にするために、Ｎ末端シグナルペプチドをさらに含み得る。シグナルペプチド配列は、アミノ酸配列ＭＧＲＡＭＶＡＲＬＧＬＧＬＬＬＬＡＬＬＬＰＴＱＩＹＳ（配列番号４）を含んでもよい。代替的に、シグナル配列は、他の膜貫通タンパク質または分泌タンパク質に見られるもののいずれか、または当該技術分野で既知である既存のシグナルペプチドから改変されたものであってもよい。
【００２９】
ａ．融合
ＣＤ２４タンパク質は、そのＮ末端またはＣ末端で、ヒトまたはマウスまたは別の種に由来し得る哺乳動物Ｉｇタンパク質の一部を含み得るタンパク質タグに融合され得る。この部分は、Ｉｇタンパク質のＦｃ領域を含み得る。Ｆｃ領域は、Ｉｇタンパク質のヒンジ領域、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインの少なくとも１つを含み得る。Ｉｇタンパク質は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＡであり得、Ｆｃ領域は、Ｉｇのヒンジ領域、ならびにＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み得る。Ｆｃ領域は、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）アイソタイプ（配列番号７）を含み得る。Ｉｇタンパク質はＩｇＭであってもよく、Ｆｃ領域はＩｇＭのヒンジ領域、ならびにＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインを含んでもよい。タンパク質タグは、タンパク質の精製を支援する親和性タグ、および／または機能性タンパク質の溶解度と回収率を高める溶解度増強タグであってもよい。タンパク質タグは、ＣＤ２４タンパク質の価数を高めることもある。タンパク質タグには、ＧＳＴ、Ｈｉｓ、ＦＬＡＧ、Ｍｙｃ、ＭＢＰ、ＮｕｓＡ、チオレドキシン（ＴＲＸ）、低分子ユビキチン様修飾因子（ＳＵＭＯ）、ユビキチン（Ｕｂ）、アルブミン、またはラクダ科動物Ｉｇも含まれ得る。融合タンパク質を作製し、融合タンパク質を精製する方法は、当該技術分野で周知である。
【００３０】
前臨床研究に基づいて、実施例で特定された融合タンパク質ＣＤ２４Ｆｃの構築のために、ＧＰＩシグナル切断部位の前に最終的な多型アミノ酸を欠く３０アミノ酸の天然ＣＤ２４分子の切断型（すなわち、配列番号２を有する成熟タンパク質ＣＤ２４）が使用されている。成熟ヒトＣＤ２４配列は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン（配列番号７）に融合している。完全長のＣＤ２４Ｆｃ融合タンパク質は配列番号５（図１）で提供され、細胞から分泌される（すなわち、切断されるシグナル配列を欠く）ＣＤ２４Ｆｃ融合タンパク質の処理されたバージョンは配列番号６に提供される。ＩｇＧ１  Ｆｃに融合した成熟ＣＤ２４（すなわち、配列番号１を有する成熟ＣＤ２４タンパク質）の処理された多型バリアントは、配列番号１１または１２を含み得る。
【００３１】
ｂ．産生
ＣＤ２４タンパク質は、高度にグリコシル化されている可能性があり、免疫細胞の共刺激や損傷関連分子パターン分子（ＤＡＭＰ）との相互作用など、ＣＤ２４の機能に関与している可能性がある。ＣＤ２４タンパク質は、真核生物発現系を使用して調製され得る。発現系は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞におけるベクターからの発現を伴う場合がある。系はまた、真核細胞に感染するために使用され得る複製欠損レトロウイルスベクターなどのウイルスベクターであり得る。ＣＤ２４タンパク質は、細胞ゲノムに組み込まれたベクターまたはベクターの一部からＣＤ２４タンパク質を発現する安定な細胞株から産生されてもよい。安定した細胞株は、組み込まれた複製欠損レトロウイルスベクターからＣＤ２４タンパク質を発現し得る。発現系は、ＧＰＥｘ（商標）であり得る。
【００３２】
ｃ．医薬組成物
ＣＤ２４タンパク質は、薬学的に許容される量のＣＤ２４タンパク質を含み得る医薬組成物に含まれてもよい。医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含んでもよい。医薬組成物は、ＣＤ２４タンパク質を長期間にわたって安定に保つことができる溶媒を含んでもよい。溶媒は、−２０℃（−１５〜−２５℃）で少なくとも６６か月間ＣＤ２４タンパク質を安定に保つことができるＰＢＳであってよい。溶媒は、別の薬物と組み合わせてＣＤ２４タンパク質を収容し得る。
【００３３】
医薬組成物は、注射または持続注入を含むがこれらに限定されない非経口投与のために製剤化することができる。注射のための製剤は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルションの形態であり得、懸濁剤、安定剤、および分散剤を含むがこれらに限定されない製剤用の剤を含み得る。組成物はまた、滅菌のパイロジェンフリー水を含むがこれに限定されない適切なビヒクルで再構成するための粉末形態で提供されてもよい。
【００３４】
医薬組成物は、移植または筋肉内注射により投与され得るデボー製剤として処方されてもよい。組成物は、適切なポリマー材料または疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルションとして）、イオン交換樹脂、または難溶性誘導体（例えば、難溶性塩として）とともに製剤化され得る。皮下注射のための製剤は、ループスおよびその関連症状および合併症のような適応症に特に適切であり得る。
【００３５】
ｄ．投与量
ＣＤ２４タンパク質の用量は、許容される毒性と臨床効果を有する用量を決定するための臨床試験を通じて最終的に決定され得る。初期臨床用量は、げっ歯類および非ヒト霊長類の薬物動態および毒性研究を通じて推定できる。ＣＤ２４タンパク質の用量は、所望の効果および投与経路に応じて、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇであり得、１〜５００ｍｇ／ｋｇであり得る。ＣＤ２４タンパク質は、静脈内注入または皮下、壁内（すなわち、腔または臓器の壁内）、または腹腔内注射によって投与でき、用量は、対象がヒトの場合、１０〜１０００ｍｇ、１０〜５００ｍｇ、１０〜２４０ｍｇ、１０〜１２０ｍｇ、または１０、３０、６０、１２０、または２４０ｍｇとなり得る。
【００３６】
３．治療方法
ａ．免疫関連有害事象
ＣＤ２４タンパク質を、それを必要とする対象に投与することにより、ｉｒＡＥを緩和、軽減、最小化、または治療する方法が本明細書で提供される。ｉｒＡＥはがん療法に関連し得、対象はがん患者であり得る。がん療法は、がん免疫療法であり得る。ＣＤ２４タンパク質は、がん療法に関連するｉｒＡＥを有するか、またはｉｒＡＥを発症するリスクのある対象に投与することができる。がん療法が開始される前、またはｉｒＡＥの臨床徴候が現れる前に、ＣＤ２４タンパク質を予防的に使用してｉｒＡＥを予防することができる。がん療法が開始され、臨床症状が診断された後、ｉｒＡＥを治療するためにＣＤ２４タンパク質を治療的に投与することもできる。ｉｒＡＥは、下痢もしくは別の胃腸障害、赤芽球癆、小球性貧血、ループス、自己免疫性腎炎、自己免疫性肝炎、肺炎、心筋炎、心膜炎、内分泌障害、アジソン病、性腺機能低下症、シェーグレン症候群、またはＩ型糖尿病であり得る。
【００３７】
がん治療は能動免疫療法であり得る。能動免疫療法の例には、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＴＮＦ、別のＴＮＦ受容体ファミリーメンバーに対する抗体、抗ＬＡＧ３、抗ＴＩＭ３、および腫瘍の微小環境を調節する小分子または高分子の阻害剤が含まれる。特に、がん療法は抗ＣＴＬＡ４免疫療法であってもよく、ＣＤ２４タンパク質は、抗ＣＴＬＡ４免疫療法と組み合わせて、またはその背景で対象に投与されてもよい。抗ＣＴＬＡ４抗体の例には、イピリムマブ（ヤーボイ）およびトレミリムマブが含まれる。
【００３８】
別の実施形態では、がん療法は抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１免疫療法であり得、これは抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり得る。抗ＰＤ−１抗体の例には、ニボルマブ（オプジーボ）−Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）およびペンブロリズマブ（キートルーダ、ＭＫ−３４７５、Ｍｅｒｃｋ）が含まれる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例には、アテゾリズマブ（テセントリク、Ｒｏｃｈｅ）、アベルマブ（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡおよびＰｆｉｚｅｒ）およびデュルバルマブ（インフィンジ、Ａｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａ）が含まれる。
【００３９】
さらに別の実施形態では、がん療法は、抗ＣＴＬＡ−４および抗ＰＤ−１モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を含む併用療法であり得る。抗ＣＴＬＡ−４と抗ＰＤ−１の併用療法は、最も強力で耐久性のあるがん免疫療法として浮上している。しかしながら、併用療法に伴う自己免疫の有害作用は非常に深刻であり、黒色腫患者の５０％以上がグレード３および４の臓器毒性を発症する。したがって、がん免疫療法の主な課題は、治療効果に影響を与えることなく併用療法の副作用をいかに減らすかということである。併用療法の２つの構成要素のうち、抗ＣＴＬＡ−４  ｍＡｂはかなり多くの免疫療法関連有害作用（ｉｒＡＥ）を示す。
【００４０】
がん療法は、エクスビボで刺激された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）または遺伝子操作されたＴ細胞（キメラ抗原受容体［ＣＡＲ］またはＴ細胞受容体［ＴＣＲ］改変Ｔ細胞）を使用する養子細胞移植（ＡＣＴ）であり得る。特に、正常細胞およびがん細胞の急速な死を引き起こすことにより、ＣＡＲ−Ｔ細胞などのがん療法は、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）の放出を引き起こし、その結果、広範な臓器機能不全をもたらす可能性のあるサイトカイン放出症候群を引き起こす可能性がある。したがって、ＣＤ２４タンパク質を使用して、ＤＡＭＰの影響を軽減または中和し、結果として生じるサイトカインストームを緩和、最小化、または治療することができる。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、非腫瘍細胞および組織にも発現する腫瘍関連抗原を標的とする場合、正常細胞を損傷する可能性がある。ＣＡＲ−Ｔ療法は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞性急性リンパ芽球性白血病、成人骨髄性白血病（ＡＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、および多発性骨髄腫（ＭＭ）などの血液腫瘍の治療に使用できる。ＣＡＲ−Ｔ療法の例には、Ｂ細胞表面抗原ＣＤ１９（ＪＣＡＲ０１７およびＪＣＡＲ０１４［Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ］など）、ＣＴＬ０１９（ｔｉｓａｇｅｎｌｅｃｌｅｕｃｅｌ−Ｔ［Ｎｏｖａｒｔｉｓ］およびＫＴＥ−Ｃ１９［ａｘｉｃａｂｔａｇｅｎｅ  ｃｉｌｏｌｅｕｃｅｌ、Ｋｉｔｅ  Ｐｈａｒｍａ］）、ならびにＣＤ２２（ＪＣＡＲ０１４［Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ］）を標的化するものが含まれる。ＣＡＲ−Ｔ療法の他の例には、Ｌ１−ＣＡＭ（ＪＣＡＲ０２３［Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ］）、ＲＯＲ−１（ＪＣＡＲ０２４  ［Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ］）、およびＭＵＣ１６（ＪＣＡＲ０２０［Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ］）を標的化するものが含まれる。ＴＣＲ改変Ｔ細胞の標的の例には、ＫＩＴＥ−７１８（Ｋｉｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）などのＭＡＧＥ−Ａ３、ＪＴＣＲ０１６（Ｊｕｎｏ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）などのウィルムス腫瘍抗原１（ＷＴ−１）、およびＮＹ−ＥＳＯ−１を標的化するものが含まれる。
【００４１】
がん療法は、放射線照射および化学療法など、がん細胞の急速な殺傷を伴うものであり得る。結果として生じる腫瘍崩壊は、炎症カスケードを開始するＤＡＭＰの放出をもたらす可能性がある。そのような適応症は、ＣＤ２４タンパク質による予防的治療に特に適している可能性がある。
【００４２】
ｂ．移植片対宿主病
本明細書では、同種異系造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）の後に、活性化ナチュラルキラー（ａＮＫ）細胞を受け取ったか、または受け取っている可能性のある対象において、ＣＤ２４タンパク質を、それを必要とする対象に投与することによる、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を軽減または治療する方法も記載されている。ＮＫ細胞は生着を促進し、同種異系ＨＳＣＴ後の移植片対白血病を媒介することができるが、ＨＳＣＴ後に自然に再構成するＮＫ細胞によって媒介される移植片対白血病の効力は限定的である。前臨床研究は、ＮＫ細胞の活性化が受容体発現の活性化を上方制御し、殺傷能力を増強することを実証している（Ｓｈａｈ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５）。次いで、これは、超高リスクの固形腫瘍を有する小児および若年成人におけるＨＬＡ適合、Ｔ細胞除去非骨髄破壊性末梢血幹細胞移植後のドナー由来活性化ＮＫ細胞（ａＮＫ−ＤＬＩ）の養子移入を研究する臨床試験で試験された。ａＮＫ−ＤＬＩは強力な殺傷能力を示し、高レベルの活性化受容体発現を示した。しかしながら、移植レシピエント９人中５人がａＮＫ−ＤＬＩ後の急性移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を経験し、３人の対象でグレード４のＧＶＨＤが観察された。ＧＶＨＤは、一致した血縁関係のないドナーと一致した兄弟ドナーのレシピエントでより一般的であり、より高いドナーＣＤ３キメリズムと関連していた。Ｔ細胞の用量がこの環境でＧＶＨＤに必要な閾値を下回っていることを考えると、おそらく基礎となるＴ細胞のアロ反応性を増強することにより、ａＮＫ−ＤＬＩが観察される急性ＧＶＨＤに寄与すると結論付けられた。
【００４３】
ｃ．投与
医薬組成物の投与経路は非経口であってもよい。非経口投与には、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、髄腔内、関節内、および直接注射が含まれるが、これらに限定されない。医薬組成物は、ヒト患者、ネコ、イヌ、または大型動物に投与されてもよい。組成物は、１日に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２回投与されてもよい。
【００４４】
ｄ．併用治療
ＣＤ２４タンパク質は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）をさらに軽減、緩和、または治療するために、別の薬剤と組み合わせて使用できる。サイトカイン放出症候群は、インターロイキン（ＩＬ）−６およびＩＦＮ−γを含むいくつかのサイトカインの循環レベルの上昇に関連している。したがって、他の薬剤は、トシリズマブ（Ａｃｔｅｍｒａ）、抗ＩＬ−６受容体抗体、またはコルチコステロイドを含むまたは含まない別のサイトカイン標的化剤であり、免疫抑制に使用でき、特にＣＡＲ−Ｔを投与された患者において症候群を逆転させるために使用できる。ＣＲＳ管理に使用される他の薬剤は、シルツキシマブ（抗ＩＬ−６、シルバント）、エタネルセプト（ＴＮＦα阻害剤、エンブレル）、インフリキシマブ（抗ＴＮＦα、レミケード）、またはアナキンラ（インターロイキン１受容体アンタゴニスト、キネレット）であり得る。ＣＤ２４タンパク質は、損傷組織から放出され炎症カスケードを開始するＤＡＭＰの効果を標的にして軽減するために使用できるが、併用療法はエフェクターサイトカイン分子を標的として、それによりＣＲＳを軽減、軽減、または治療するための補完的な２方向のアプローチを提供する。
【００４５】
ＣＤ２４タンパク質は、他の治療と同時にまたはメトロノーム的に投与され得る。本明細書で使用される「同時の」または「同時に」という用語は、ＣＤ２４タンパク質および他の治療が、互いに、４８時間以内、好ましくは２４時間以内、より好ましくは１２時間以内、さらにより好ましくは６時間以内、最も好ましくは３時間以内に投与されることを意味する。本明細書で使用される「メトロノーム的に」という用語は、他の治療とは異なる時点で、反復投与と比較して特定の頻度で薬剤を投与することを意味する。
【００４６】
ＣＤ２４タンパク質は、別の治療の前の、約１２０時間、１１８時間、１１６時間、１１４時間、１１２時間、１１０時間、１０８時間、１０６時間、１０４時間、１０２時間、１００時間、９８時間、９６時間、９４時間、９２時間、９０時間、８８時間、８６時間、８４時間、８２時間、８０時間、７８時間、７６時間、７４時間、７２時間、７０時間、６８時間、６６時間、６４時間、６２時間、６０時間、５８時間、５６時間、５４時間、５２時間、５０時間、４８時間、４６時間、４４時間、４２時間、４０時間、３８時間、３６時間、３４時間、３２時間、３０時間、２８時間、２６時間、２４時間、２２時間、２０時間、１８時間、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間、５５分、５０分、４５分、４０分、３５分、３０分、２５分、２０分、１５分、１０分、９分、８分、７分、６分、５分、４分、３分、２分、および１分を含む任意の時点で投与することができる。ＣＤ２４タンパク質は、ＣＤ２４タンパク質による第２の治療の前の、約１２０時間、１１８時間、１１６時間、１１４時間、１１２時間、１１０時間、１０８時間、１０６時間、１０４時間、１０２時間、１００時間、９８時間、９６時間、９４時間、９２時間、９０時間、８８時間、８６時間、８４時間、８２時間、８０時間、７８時間、７６時間、７４時間、７２時間、７０時間、６８時間、６６時間、６４時間、６２時間、６０時間、５８時間、５６時間、５４時間、５２時間、５０時間、４８時間、４６時間、４４時間、４２時間、４０時間、３８時間、３６時間、３４時間、３２時間、３０時間、２８時間、２６時間、２４時間、２２時間、２０時間、１８時間、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間、５５分、５０分、４５分、４０分、３５分、３０分、２５分、２０分、１５分、１０分、９分、８分、７分、６分、５分、４分、３分、２分、および１分を含む任意の時点で投与することができる。
【００４７】
ＣＤ２４タンパク質は、別の治療の後の、約１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、２６時間、２８時間、３０時間、３２時間、３４時間、３６時間、３８時間、４０時間、４２時間、４４時間、４６時間、４８時間、５０時間、５２時間、５４時間、５６時間、５８時間、６０時間、６２時間、６４時間、６６時間、６８時間、７０時間、７２時間、７４時間、７６時間、７８時間、８０時間、８２時間、８４時間、８６時間、８８時間、９０時間、９２時間、９４時間、９６時間、９８時間、１００時間、１０２時間、１０４時間、１０６時間、１０８時間、１１０時間、１１２時間、１１４時間、１１６時間、１１８時間、１２０時間を含む任意の時点で投与することができる。ＣＤ２４タンパク質は、その前のＣＤ２４の治療の後の前の、約１２０時間、１１８時間、１１６時間、１１４時間、１１２時間、１１０時間、１０８時間、１０６時間、１０４時間、１０２時間、１００時間、９８時間、９６時間、９４時間、９２時間、９０時間、８８時間、８６時間、８４時間、８２時間、８０時間、７８時間、７６時間、７４時間、７２時間、７０時間、６８時間、６６時間、６４時間、６２時間、６０時間、５８時間、５６時間、５４時間、５２時間、５０時間、４８時間、４６時間、４４時間、４２時間、４０時間、３８時間、３６時間、３４時間、３２時間、３０時間、２８時間、２６時間、２４時間、２２時間、２０時間、１８時間、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間、５５分、５０分、４５分、４０分、３５分、３０分、２５分、２０分、１５分、１０分、９分、８分、７分、６分、５分、４分、３分、２分、および１分を含む任意の時点で投与することができる。
【実施例】
【００４８】
実施例１
マウスにおけるＣＤ２４薬物動態
１ｍｇのＣＤ２４Ｆｃ（ＣＤ２４Ｆｃ）をナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスに注入し、各時点で３匹のマウスにおいて、異なる時点（５分、１時間、４時間、２４時間、４８時間、７日、１４日、２１日）で血液試料を採取した。血清を１：１００に希釈し、ＣＤ２４Ｆｃのレベルを、捕捉抗体としての精製抗ヒトＣＤ２４（３．３μｇ／ｍｌ）、および検出抗体としてのペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（５μｇ／ｍｌ）を使用するサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して検出した。図３Ａに示すように。ＣＤ２４Ｆｃの減衰曲線は、タンパク質の典型的な二相減衰を明らかにした。最初の体内分布段階の半減期は１２．４時間であった。第２の相は、中央コンパートメントからの１次消去のモデルに従う。第２の相の半減期は９．５４日で、これはインビボの抗体の半減期に類似する。これらのデータは、融合タンパク質が血流中で非常に安定していることを示唆している。融合タンパク質を皮下注射した別の研究では、９．５２日のほぼ同一の半減期が観察された（図３Ｂ）。さらに重要なことに、ＣＤ２４Ｆｃが血中のピークレベルに達するには約４８時間かかったが、ＡＵＣで測定した血中の融合タンパク質の総量は、どちらの注射経路でもほぼ同じであった。したがって、治療の観点から、注射の異なる経路が薬物の治療効果に影響を与えるべきではない。この観察により、霊長類の毒性および臨床試験の実験計画が大幅に簡素化された。
【００４９】
実施例２
組織損傷に対する宿主の応答におけるＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  １０相互作用
２０年近く前、Ｍａｔｚｉｎｇｅｒは、一般に危険理論と呼ばれるものを提案した。本質的に、彼女は、免疫系が宿主の危険を感知すると、活性化すると主張した。当時、危険の性質は明確に定義されていなかったが、壊死は、危険関連分子パターンについてＤＡＭＰと呼ばれるＨＭＧＢ１および熱ショックタンパク質などの細胞内成分の放出に関連していると判断された。ＤＡＭＰは、炎症性サイトカインの産生および自己免疫疾患を促進することがわかっている。動物モデルでは、ＨＭＧＢ１およびＨＳＰ９０の阻害剤がＲＡを改善することがわかった。ＤＡＭＰの関与により、ＲＡ療法について、ＤＡＭＰへの宿主の応答に対する負の調節が検討され得るという見通しが立てられた。
【００５０】
アセトアミノフェン誘発肝臓壊死を使用し、炎症を確実にすることで、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇとの相互作用により、ＣＤ２４が組織損傷に対する宿主応答に対して強力な負の調節を提供することが観察された。ＣＤ２４は、ＧＰＩアンカー分子であり、造血細胞およびその他の組織幹細胞で広く発現している。多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ＲＡ、巨細胞性関節炎を含む、ヒトのさまざまな自己免疫疾患の遺伝子解析により、ＣＤ２４多型と自己免疫疾患のリスクとの間に有意な関連性が示された。Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇは、シアル酸含有構造を認識する能力によって定義されるＩ−レクチンファミリーのメンバーである。Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇは、ＣＤ２４上のシアル酸含有構造を認識し、樹状細胞による炎症性サイトカインの産生を負に調節する。ＣＤ２４と相互作用する能力の点では、ヒトＳｉｇｌｅｃ  １０およびマウスＳｉｇｌｅｃ  Ｇは、機能的に同等である。しかしながら、マウスとヒトの相同体との間に１対１の相関関係があるかどうかは不明確である。メカニズムは依然として完全には解明されていないが、ＳｉｇｌｅｃＧに関連するＳＨＰ１が負の調節に関与している可能性がある。Ｓｃｉｅｎｃｅで最近報告されたこれらのデータは、ＣＤ２４−Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇ／１０相互作用が、ＤＡＭＰからの病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の識別に重要な役割を果たし得る新しいモデルをもたらす（図４）。
【００５１】
少なくとも２つの重複するメカニズムにより、ＣＤ２４の機能を説明することができる。第一に、さまざまなＤＡＭＰに結合することにより、ＣＤ２４は、炎症性刺激を捕捉して、ＴＬＲまたはＲＡＧＥとの相互作用を予防することができる。この概念は、ＣＤ２４がＨＳＰ７０、９０、ＨＭＧＢ１、およびヌクレオリンを含むいくつかのＤＡＭＰ分子に結合しているという観察によって裏付けられている。第二に、おそらくＤＡＭＰに結合した後、ＣＤ２４は、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇによるシグナル伝達を刺激する可能性がある。両方のメカニズムは、いずれかの遺伝子の標的変異を持つマウスがはるかに強い炎症反応を起こすように協調して作用する可能性がある。実際に、ＣＤ２４−／−またはＳｉｇｌｅｃ  Ｇ−／−マウスの骨髄から培養したＤＣは、ＨＭＧＢ１、ＨＳＰ７０、またはＨＳＰ９０のいずれかで刺激すると、より高いレベルの炎症性サイトカインを産生した。対照的に、ＬＰＳおよびＰｏｌｙＩ：ＣなどのＰＡＭＰへの応答には効果が見られなかった。これらのデータは、自然免疫系が病原体と組織損傷を区別するメカニズムを提供するだけでなく、ＣＤ２４とＳｉｇｌｅｃ  Ｇが組織損傷に関連する疾患の潜在的な治療標的であることを示唆している。
【００５２】
実施例３
ＣＤ２４、およびＧｖＨＤの予防
ＣＤ２４Ｆｃは、ＨＭＧＢ１、Ｓｉｇｌｅｃ  １０と相互作用し、Ｓｉｇｌｅｃ  ＧとＳＨＰ−１との間の結合を誘導する。
ＣＤ２４ＦｃとＳｉｇｌｅｃ  １０との間の相互作用を測定するために、ＣＤ２４ＦｃをＣＨＩＰに固定し、Ｂｉａｃｏｒｅを使用して異なる濃度のＳｉｇｌｅｃ−１０Ｆｃの結合を測定した。図５Ａに示すように、ＣＤ２４Ｆｃは、１．６×１０−７ＭのＫｄでＳｉｇｌｅｃ  １０と結合する。これは、対照Ｆｃよりも１００倍高い親和性である。ＣＤ２４ＦｃとＨＭＧＢ１との間の相互作用は、ＣＤ２４Ｆｃ結合プロテインＧビーズを使用したプルダウン実験に続いて、抗ＩｇＧまたは抗ＨＭＧＢ１のいずれかを使用したウエスタンブロットによって確認された。これらのデータは、ＦｃではなくＣＤ２４ＦｃがＨＭＧＢ１に結合すること、およびこの結合がカチオン依存性であることを示している（図５Ｂ）。ＣＤ２４ＦｃがヒトＳｉｇｌｅｃ  １０のマウス対応物であるＳｉｇｌｅｃ  Ｇのアゴニストであるかどうかを判定するために、ＣＤ２４−／−脾臓細胞をＣＤ２４Ｆｃ、対照Ｆｃ、またはビヒクル（ＰＢＳ）対照で３０分間刺激した。次に、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇを免疫沈降し、抗ホスホチロシンまたは抗ＳＨＰ−１でプローブした。図５Ｃに示すように、ＣＤ２４Ｆｃは、Ｓｉｇｌｅｃ  Ｇの実質的なリン酸化と、適応免疫と自然免疫の両方の阻害剤として周知であるＳＨＰ−１の結合を誘導した。
【００５３】
ＣＤ２４Ｆｃのインビトロ有効性試験。
ヒトＴ細胞による炎症性サイトカインの産生に対するＣＤ２４Ｆｃの影響を研究するために、ヒトＰＢＭＬの成熟Ｔ細胞は、異なる濃度のＣＤ２４ＦｃまたはヒトＩｇＧ１  Ｆｃの存在下でＴ細胞受容体の一般的に使用されるアゴニストである抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）によって活性化された。４日後、上清を収集し、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの産生を酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）で測定して、活性化を確認した。図６の結果は、２つの異なる製造ロットからのＣＤ２４Ｆｃが、対照ＩｇＧ  Ｆｃ対照と比較して、活性化ヒトＰＢＭＬからのＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α産生を有意に減少させたことを実証した。さらに、ＣＤ２４Ｆｃを追加すると、サイトカイン産生が用量依存的に抑制された。したがって、ＣＤ２４Ｆｃは、インビトロで抗ＣＤ３誘導のヒトＰＢＭＬ活性化を阻害できる。この研究は、ＣＤ２４Ｆｃの作用機序がＴ細胞活性化の阻害による可能性があることを示しただけでなく、薬物の効力と安定性試験のための信頼できるバイオアッセイを確立した。
【００５４】
ＣＤ２４Ｆｃがヒト細胞株の炎症性サイトカインの産生を調節するかどうかを判定するために、まずＲＮＡｉを使用してヒト急性単球性白血病ＴＨＰ１細胞株のＣＤ２４をサイレンシングし、次いでＰＭＡで処理することでマクロファージへの分化を誘導した。図７Ａに示されるように、ＣＤ２４サイレンシングはＴＮＦα、ＩＬ−１β、およびＩＬ−６の産生を実質的に増加させた。これらのデータは、炎症性サイトカインの産生の制御における内因性ヒトＣＤ２４の重要な役割を示している。重要なことに、ＣＤ２４Ｆｃは、ＣＤ２４サイレンシング細胞株（図７Ｂ）において、ＴＮＦα、ならびにＩＬ−１βおよびＩＬ−６の阻害を回復した。これらのデータは、ヒト細胞の炎症反応におけるＣＤ２４の関連性を示すだけでなく、ＣＤ２４Ｆｃの生物活性を評価するための簡単なアッセイを提供する。
【００５５】
まとめると、これらのデータは、ＣＤ２４Ｆｃが適応刺激と自然刺激によって引き起こされるサイトカイン産生を阻害できることを示している。しかしながら、この薬物は自然のエフェクターによるサイトカイン産生の減少にはるかに効果的であるため、その予防機能の主なメカニズムは移植の初期段階で組織損傷によって引き起こされる炎症を予防することだと考えている。
【００５６】
ヒト化マウスＧｖＨＤモデルにおけるＣｓＡとＣＤ２４Ｆｃとの間の治療効果の比較。
ＧｖＨＤは、同種異系ＢＭ移植の主要な合併症として既知である。しかしながら、すべてのヒト化動物モデルでのＧｖＨＤ誘導は、大量のヒトＰＢＭＣの移植に依存している。これらのヒト化動物モデルの一部は、ヒトに見られる全身ＧｖＨＤを達成できなかった。したがって、新生ＮＯＤ／ＳＣＩＤＩＬ２ｒγヌル（ＮＳＧ）マウスの５０万個のヒトＢＭ細胞を使用して、ヒト化全身ＧｖＨＤ動物モデルが開発された。結果は、マウスが１００％浸透度の異種ＧｖＨＤを発症し、すべてのマウスが移植後１４日という早い時期に高いヒトキメラ現象を示したことを示し、これは、７日後にほぼ２倍に大幅に増加した（データ示さず）。総死亡率は、使用するドナーに応じて、移植後１〜２か月以内に１００％である（データ示さず）。さらに、ヒトＴ細胞は、肺、肝臓、皮膚、および腸を含む複数の標的器官に浸潤している。本発明者らの知る限りでは、これはヒト急性ＧＶＨＤの発病機序の最良のモデルであるが、疾患の重症度および急速な発症のために治療上より困難である。
【００５７】
２つの実験に使用されたドナーは、異常に急速で重度のＧＶＨＤを引き起こした。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）とＣＤ２４Ｆｃの治療効果を比較するために、ＮＳＧマウスを移植後１週間で、ＣｓＡの１日最大耐量（マウスの年齢に応じて４週間まで０．３〜１ｍｇ／ｋｇ）またはＣＤ２４Ｆｃ（５ｍｇ／ｋｇ）の２−４週用量のいずれかで処理した。図８に示すように、２週目から始まって、ＧＶＨＤ関連死の急速な発症がビヒクル群で観察された。ＣＤ２４Ｆｃはレシピエントマウスの生存期間を大幅に延長したが（Ｐ＝０．０１５）、ＣｓＡは生存期間を大幅に延長できなかった（Ｐ＝０．０９７）。これらのデータは、ＣＤ２４ＦｃがＣｓＡと比較して優れた治療効果があることを示している。
【００５８】
実施例４
ヒトにおけるＣＤ２４薬物動態
この例は、ヒトにおけるＣＤ２４タンパク質の薬物動態の分析を示している。これは、健康な男性および女性の成人対象におけるＣＤ２４Ｆｃの安全性、忍容性、およびＰＫを評価するための、フェーズＩ、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、単回用量漸増試験から得られた。この研究には、それぞれ８人の対象からなる５つのコホートで合計４０人の対象が登録された。各コホートの８人の対象のうち６人に試験薬を投与し、２人の対象にプラセボ（０．９％塩化ナトリウム、生理食塩水）を投与した。第１のコホートには１０ｍｇを投与した。後続のコホートには、３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ、および２４０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃまたは対応するプラセボを投与し、少なくとも３週間おきに投与して、以前の各コホートの安全性と忍容性のデータを確認できるようにした。適切な安全性と忍容性が実証された場合にのみ、対象の新しいコホートへの次の高用量の投与が許可された。
【００５９】
各コホートでは、最初の２人の対象は１日目の治験薬受容者１人とプラセボ受容者１人であった。３人目〜５人目および６人目〜８人目までの対象は、７日目（サブグループ間で最低２４時間離れて）後に投与された。各対象は、同じサブグループで少なくとも１時間離れて投与された。必要に応じて、そのコホートの１番目または２番目のサブグループを含む投与後期間中に発生した可能性のあるいずれかの重大な安全性問題のレビューを待って、残りの対象の投与を遅らせた。後続のコホートは、以前のコホートの少なくとも３週間後に投与された。
【００６０】
スクリーニング期間：
スクリーニング来院（来院１）は、能動的な治療期間の開始の２１日前までに行われた。インフォームドコンセントを提供した後、対象は適格性のスクリーニング手順を受けた。
【００６１】
治療期間：
対象は−１日目（来院２）に臨床薬理学ユニット（ＣＰＵ）に入院し、最低１０時間の一晩の絶食に続いて１日目に無作為化治療期間が開始された。対象は、単回投与としてのＣＤ２４Ｆｃまたはプラセボによる治療にランダムに割り当てられた。対象は４日目の朝まで閉じ込められたままであった。
【００６２】
追跡：
すべての対象は、追跡来院（来院３、来院４、来院５、来院６、および来院７）のために７日目、１４日目、２１日目、２８日目、ならびに４２日目（±１日）にＣＰＵに戻された。来院７は、すべての対象の最終来院であった。
【００６３】
治療期間：各対象の総研究期間は最大６３日であった。単回投与は、１日目に行われた。
【００６４】
対象数：
【００６５】
予定：４０の対象
【００６６】
スクリーニングされた：２２４の対象
【００６７】
ランダム化：４０の対象
【００６８】
完了：３９の対象
【００６９】
中止：１の対象
【００７０】
診断および選択のための主な基準：この研究のための集団は、包括的に１８ｋｇ／ｍ２〜３０ｋｇ／ｍ２の体格指数を有し、包括的に１８〜５５歳の年齢の、健康な男性および女性であった。
【００７１】
治験薬および比較薬の情報：
ＣＤ２４Ｆｃ：ＩＶ注入により投与される１０ｍｇ、３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ、または２４０ｍｇの単回投与。ロット番号：０９ＭＭ−０３６。ＣＤ２４Ｆｃは、ヒトＣＤ２４の成熟配列とヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１Ｆｃ）の結晶化可能領域断片からなる完全にヒト化された融合タンパク質であった。ＣＤ２４Ｆｃは、ＩＶ投与用の無菌、透明、無色、防腐剤を含まない水溶液として供給された。ＣＤ２４Ｆｃは、１０ｍｇ／ｍＬの濃度と７．２のｐＨで、単回投与注射液として製剤化された。各ＣＤ２４Ｆｃバイアルには、１６ｍＬ±０．２ｍＬ中のＣＤ２４Ｆｃに１６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃ、５．３ｍｇの塩化ナトリウム、３２．６ｍｇのリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、および１４０ｍｇのリン酸ナトリウム一塩基性一水和物が含まれていた。ＣＤ２４Ｆｃは、クロロブチルゴムストッパーとアルミニウムフリップオフシール付きの透明なホウケイ酸ガラスバイアルで供給された。
【００７２】
ＩＶ注入により投与されたマッチングプラセボ（０．９％塩化ナトリウム、生理食塩水）；ロット番号：Ｐ２９６８５５、Ｐ３１１８５２、Ｐ３００７１５、Ｐ３１５９５２。
【００７３】
治療意図（ＩＴＴ）集団は、少なくとも１用量の試験薬を投与されたすべての対象で構成されていた。ＩＴＴ集団は、対象情報と安全性評価の主要な分析集団であった。
【００７４】
臨床検査評価（化学、血液学、および尿検査）は、治療および来院ごとに要約された。ベースラインからの変化も要約された。バイタルサイン（血圧、心拍数、呼吸数、および体温）を治療と時点別に要約した。ベースラインからの変化も要約された。すべての身体検査データが列記された。心電図パラメータとベースラインからの変化が要約された。全体的な解釈が列記された。
【００７５】
血漿ＣＤ２４Ｆｃ濃度
図９に示すように、ＣＤ２４Ｆｃの平均血漿濃度は、投与されたＣＤ２４Ｆｃの用量に比例して増加した。１２０ｍｇを除くすべての投与群について、投与後１時間でＣＤ２４Ｆｃの最大平均血漿濃度に達した。１２０ｍｇ群のＣＤ２４Ｆｃの最大平均血漿濃度は、投与後２時間で到達した。４２日目（９８４時間）までに、すべての群のＣＤ２４Ｆｃの平均血漿濃度は、最大平均血漿濃度の２％〜４％に減少した。
【００７６】
表１は、ＰＫ評価可能集団の治療ごとの血漿ＣＤ２４Ｆｃ  ＰＫパラメータを要約する。
【００７７】
【表１−１】
2020520985.tif 000003
【００７８】
【表１−２】
2020520985.tif 000004
【００７９】
血漿ＣＤ２４Ｆｃ用量比例分析
図１０は、ＰＫ評価可能集団のＣＤ２４Ｆｃ  Ｃｍａｘ対用量の用量比例プロットを示す。図１１は、ＰＫ評価可能集団のＣＤ２４Ｆｃ  ＡＵＣ０−４２ｄ対用量の用量比例プロットを示す。図１２は、ＰＫ評価可能集団のＣＤ２４Ｆｃ  ＡＵＣ０−ｉｎｆ対用量の用量比例プロットを示す。表２は、用量比例性の検出力分析を示している。
【００８０】
【表２】
2020520985.tif 000005
【００８１】
Ｃｍａｘ勾配の推定値は１．１７２で、９０％ＣＩは１．１０５〜１．２４０であった。ＡＵＣ０−４２ｄ勾配推定値は１．０８８で、９０％ＣＩは１．０２７〜１．１４８であった。ＡＵＣ０−ｉｎｆ勾配の推定値は１．０８７で、９０％ＣＩは１．０２６〜１．１であった。
【００８２】
薬物動態の結論
血漿ＣＤ２４ＦｃのＣｍａｘおよびＡＵＣは、マウス、サル、およびヒトに投与された用量に比例して増加した。血漿ＣＤ２４Ｆｃは、１．０１〜１．３４時間でＴｍａｘに達した。血漿ＣＤ２４Ｆｃのｔ１／２は、２８０．８３〜３２７．１０時間の範囲であった。
【００８３】
参照文献
１．Ｍｕｎｏｚ  ＬＥ，Ｊａｎｋｏ  Ｃ，Ｓｃｈｕｌｚｅ  Ｃ，Ｓｃｈｏｒｎ  Ｃ，Ｓａｒｔｅｒ  Ｋ，Ｓｃｈｅｔｔ  Ｇ，Ｈｅｒｒｍａｎｎ  Ｍ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−ｔｗｏ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｔｅｐｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｔｉｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ＳＬＥ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ．２０１０；１０（１）：３８−４２．Ｅｐｕｂ  ２０１０／０９／０８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｕｔｒｅｖ．２０１０．０８．０１５．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２０８１７１２７．
２．Ｕｒｂｏｎａｖｉｃｉｕｔｅ  Ｖ，Ｆｕｒｎｒｏｈｒ  ＢＧ，Ｍｅｉｓｔｅｒ  Ｓ，Ｍｕｎｏｚ  Ｌ，Ｈｅｙｄｅｒ  Ｐ，Ｄｅ  Ｍａｒｃｈｉｓ  Ｆ，Ｂｉａｎｃｈｉ  ＭＥ，Ｋｉｒｓｃｈｎｉｎｇ  Ｃ，Ｗａｇｎｅｒ  Ｈ，Ｍａｎｆｒｅｄｉ  ＡＡ，Ｋａｌｄｅｎ  ＪＲ，Ｓｃｈｅｔｔ  Ｇ，Ｒｏｖｅｒｅ−Ｑｕｅｒｉｎｉ  Ｐ，Ｈｅｒｒｍａｎｎ  Ｍ，Ｖｏｌｌ  ＲＥ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｂｙ  ＨＭＧＢ１−ｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ＳＬＥ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２００８；２０５（１３）：３００７−１８．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１９０６４６９８．
３．Ｗｅｎ  Ｚ，Ｘｕ  Ｌ，Ｃｈｅｎ  Ｘ，Ｘｕ  Ｗ，Ｙｉｎ  Ｚ，Ｇａｏ  Ｘ，Ｘｉｏｎｇ  Ｓ．Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ＤＮＡ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ＨＭＧＢ１  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ＴＬＲ２／ｍｉｃｒｏＲＮＡ−１５５  ｐａｔｈｗａｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１３；１９０（１１）：５４１１−２２．Ｅｐｕｂ  ２０１３／０４／２６．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１２０３３０１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２３６１６５７３．
４．Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ  Ｕ，Ｈａｒｒｉｓ  ＨＥ．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＨＭＧＢ１  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．１７９９（１−２）：１４１−８．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２０１２３０７６．
５．Ｏｓｔｂｅｒｇ  Ｔ，Ｋａｗａｎｅ  Ｋ，Ｎａｇａｔａ  Ｓ，Ｙａｎｇ  Ｈ，Ｃｈａｖａｎ  Ｓ，Ｋｌｅｖｅｎｖａｌｌ  Ｌ，Ｂｉａｎｃｈｉ  Ｍ，Ｈａｒｒｉｓ  ＨＥ，Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ  Ｕ，Ｐａｌｍｂｌａｄ  Ｋ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ＨＭＧＢ１  ｉｎ  ａ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｍｏｄｅｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２０１０；６２：２９６３−７２．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２０５３３２８８．
６．Ｒｉｃｅ  ＪＷ，Ｖｅａｌ  ＪＭ，Ｆａｄｄｅｎ  ＲＰ，Ｂａｒａｂａｓｚ  ＡＦ，Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ  ＪＭ，Ｂａｒｔａ  ＴＥ，Ｄｕｂｏｉｓ  ＬＧ，Ｈｕａｎｇ  ＫＨ，Ｍａｂｂｅｔｔ  ＳＲ，Ｓｉｌｉｎｓｋｉ  ＭＡ，Ｓｔｅｅｄ  ＰＭ，Ｈａｌｌ  ＳＥ．Ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｈｓｐ９０  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ａｆｆｅｃｔ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ａｎｄ  ｅｘｈｉｂｉｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２００８；５８（１２）：３７６５−７５．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１９０３５４７４．
７．Ａｈｒｅｎｓ  Ｓ，Ｚｅｌｅｎａｙ  Ｓ，Ｓａｎｃｈｏ  Ｄ，Ｈａｎｃ  Ｐ，Ｋｊａｅｒ  Ｓ，Ｆｅｅｓｔ  Ｃ，Ｆｌｅｔｃｈｅｒ  Ｇ，Ｄｕｒｋｉｎ  Ｃ，Ｐｏｓｔｉｇｏ  Ａ，Ｓｋｅｈｅｌ  Ｍ，Ｂａｔｉｓｔａ  Ｆ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  Ｂ，Ｗａｙ  Ｍ，Ｒｅｉｓ  ｅ  Ｓｏｕｓａ  Ｃ，Ｓｃｈｕｌｚ  Ｏ．Ｆ−ａｃｔｉｎ  ｉｓ  ａｎ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｉｌｙ  ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  ｄａｍａｇｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｔｅｒｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｂｙ  ＤＮＧＲ−１，ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｄｅａｄ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０１２；３６（４）：６３５−４５．Ｅｐｕｂ  ２０１２／０４／１０．ｄｏｉ：Ｓ１０７４−７６１３（１２）００１２６−４［ｐｉｉ］
１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１２．０３．００８．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２２４８３８００．
８．Ｙａｍａｓａｋｉ  Ｓ，Ｉｓｈｉｋａｗａ  Ｅ，Ｓａｋｕｍａ  Ｍ，Ｈａｒａ  Ｈ，Ｏｇａｔａ  Ｋ，Ｓａｉｔｏ  Ｔ．Ｍｉｎｃｌｅ  ｉｓ  ａｎ  ＩＴＡＭ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｈａｔ  ｓｅｎｓｅｓ  ｄａｍａｇｅｄ  ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；９（１０）：１１７９−８８．Ｅｐｕｂ  ２００８／０９／０９．ｄｏｉ：ｎｉ．１６５１［ｐｉｉ］
１０．１０３８／ｎｉ．１６５１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１８７７６９０６．
９．Ｃａｖａｓｓａｎｉ  ＫＡ，Ｉｓｈｉｉ  Ｍ，Ｗｅｎ  Ｈ，Ｓｃｈａｌｌｅｒ  ＭＡ，Ｌｉｎｃｏｌｎ  ＰＭ，Ｌｕｋａｃｓ  ＮＷ，Ｈｏｇａｂｏａｍ  ＣＭ，Ｋｕｎｋｅｌ  ＳＬ．ＴＬＲ３  ｉｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｓｅｎｓｏｒ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｃｕｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｅｖｅｎｔｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００８；２０５（１１）：２６０９−２１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１８８３８５４７．
１０．Ｉｖａｎｏｖ  Ｓ，Ｄｒａｇｏｉ  ＡＭ，Ｗａｎｇ  Ｘ，Ｄａｌｌａｃｏｓｔａ  Ｃ，Ｌｏｕｔｅｎ  Ｊ，Ｍｕｓｃｏ  Ｇ，Ｓｉｔｉａ  Ｇ，Ｙａｐ  ＧＳ，Ｗａｎ  Ｙ，Ｂｉｒｏｎ  ＣＡ，Ｂｉａｎｃｈｉ  ＭＥ，Ｗａｎｇ  Ｈ，Ｃｈｕ  ＷＭ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＨＭＧＢ１  ｉｎ  ＴＬＲ９−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ＣｐＧ−ＤＮＡ．Ｂｌｏｏｄ．２００７；１１０（６）：１９７０−８１．Ｅｐｕｂ  ２００７／０６／０６．ｄｏｉ：ｂｌｏｏｄ−２００６−０９−０４４７７６［ｐｉｉ］
１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００６−０９−０４４７７６．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１７５４８５７９；  ＰＭＣＩＤ：１９７６３７４．
１１．Ｓｉｍｓ  ＧＰ，Ｒｏｗｅ  ＤＣ，Ｒｉｅｔｄｉｊｋ  ＳＴ，Ｈｅｒｂｓｔ  Ｒ，Ｃｏｙｌｅ  ＡＪ．ＨＭＧＢ１  ａｎｄ  ＲＡＧＥ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：３６７−８８．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２０１９２８０８．
１２．ｖａｎ  Ｂｅｉｊｎｕｍ  ＪＲ，Ｂｕｕｒｍａｎ  ＷＡ，Ｇｒｉｆｆｉｏｅｎ  ＡＷ．Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅ  ａｎｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （ＴＬＲ）  ａｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  （ＲＡＧＥ）  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｖｉａ  ｈｉｇｈ  ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｇｒｏｕｐ  Ｂ１  （ＨＭＧＢ１）．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．２００８；１１（１）：９１−９．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１８２６４７８７．
１３．Ｗａｒｇｅｒ  Ｔ，Ｈｉｌｆ  Ｎ，Ｒｅｃｈｔｓｔｅｉｎｅｒ  Ｇ，Ｈａｓｅｌｍａｙｅｒ  Ｐ，Ｃａｒｒｉｃｋ  ＤＭ，Ｊｏｎｕｌｅｉｔ  Ｈ，ｖｏｎ  Ｌａｎｄｅｎｂｅｒｇ  Ｐ，Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ  ＨＧ，Ｎｉｃｃｈｉｔｔａ  ＣＶ，Ｒａｄｓａｋ  ＭＰ，Ｓｃｈｉｌｄ  Ｈ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＬＲ２  ａｎｄ  ＴＬＲ４  ｌｉｇａｎｄｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  Ｇｐ９６  ａｍｐｌｉｆｉｅｓ  ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００６；２８１（３２）：２２５４５−５３．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１６７５４６８４．
１４．Ｚｈａｎｇ  Ｑ，Ｒａｏｏｆ  Ｍ，Ｃｈｅｎ  Ｙ，Ｓｕｍｉ  Ｙ，Ｓｕｒｓａｌ  Ｔ，Ｊｕｎｇｅｒ  Ｗ，Ｂｒｏｈｉ  Ｋ，Ｉｔａｇａｋｉ  Ｋ，Ｈａｕｓｅｒ  ＣＪ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＤＡＭＰｓ  ｃａｕｓｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１０；４６４（７２８５）：１０４−７．Ｅｐｕｂ  ２０１０／０３／０６．ｄｏｉ：ｎａｔｕｒｅ０８７８０［ｐｉｉ］
１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０８７８０．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２０２０３６１０；  ＰＭＣＩＤ：２８４３４３７．
１５．Ｃｈｅｎ  ＧＹ，Ｔａｎｇ  Ｊ，Ｚｈｅｎｇ  Ｐ，Ｌｉｕ  Ｙ．ＣＤ２４  ａｎｄ  Ｓｉｇｌｅｃ−１０  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｐｒｅｓｓ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄａｍａｇｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００９；３２３（５９２２）：１７２２−５．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．１１６８９８８．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１９２６４９８３；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ２７６５６８６．
１６．Ｃｈｅｎ  ＧＹ，Ｃｈｅｎ  Ｘ，Ｋｉｎｇ  Ｓ，Ｃａｖａｓｓａｎｉ  ＫＡ，Ｃｈｅｎｇ  Ｊ，Ｚｈｅｎｇ  Ｘ，Ｃａｏ  Ｈ，Ｙｕ  Ｈ，Ｑｕ  Ｊ，Ｆａｎｇ  Ｄ，Ｗｕ  Ｗ，Ｂａｉ  ＸＦ，Ｌｉｕ  ＪＱ，Ｗｏｏｄｉｇａ  ＳＡ，Ｃｈｅｎ  Ｃ，Ｓｕｎ  Ｌ，Ｈｏｇａｂｏａｍ  ＣＭ，Ｋｕｎｋｅｌ  ＳＬ，Ｚｈｅｎｇ  Ｐ，Ｌｉｕ  Ｙ．Ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｓｉａｌｉｄａｓｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＤ２４−ＳｉｇｌｅｃＧ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１；２９（５）：４２８−３５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．１８４６．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２１４７８８７６；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４０９００８０．
１７．Ｃｈｅｎ  Ｗ，Ｈａｎ  Ｃ，Ｘｉｅ  Ｂ，Ｈｕ  Ｘ，Ｙｕ  Ｑ，Ｓｈｉ  Ｌ，Ｗａｎｇ  Ｑ，Ｌｉ  Ｄ，Ｗａｎｇ  Ｊ，Ｚｈｅｎｇ  Ｐ，Ｌｉｕ  Ｙ，Ｃａｏ  Ｘ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｉｇｌｅｃ−Ｇ  ｂｙ  ＲＮＡ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｂｙ  ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ＲＩＧ−Ｉ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ．２０１３；１５２（３）：４６７−７８．Ｅｐｕｂ  ２０１３／０２／０５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１３．０１．０１１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２３３７４３４３．
１８．Ｇｏｒｉｓ  Ａ，Ｍａｒａｎｉａｎ  Ｍ，Ｗａｌｔｏｎ  Ａ，Ｙｅｏ  ＴＷ，Ｂａｎ  Ｍ，Ｇｒａｙ  Ｊ，Ｄｕｂｏｉｓ  Ｂ，Ｃｏｍｐｓｔｏｎ  Ａ，Ｓａｗｃｅｒ  Ｓ．ＣＤ２４  Ａｌａ／Ｖａｌ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００６．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１６６３１２５９．
１９．Ｏｔａｅｇｕｉ  Ｄ，Ｓａｅｎｚ  Ａ，Ｃａｍａｎｏ  Ｐ，Ｂｌａｚｑｕｅｚ  Ｌ，Ｇｏｉｃｏｅｃｈｅａ  Ｍ，Ｒｕｉｚ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ  Ｊ，Ｏｌａｓｋｏａｇａ  Ｊ，Ｅｍｐａｒａｎｚａ  ＪＡ，Ｌｏｐｅｚ  ｄｅ  Ｍｕｎａｉｎ  Ａ．ＣＤ２４  Ｖ／Ｖ  ｉｓ  ａｎ  ａｌｌｅｌｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｐａｎｉｓｈ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  （Ｈｏｕｎｄｍｉｌｌｓ，Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）．２００６；１２（４）：５１１−４．Ｅｐｕｂ  ２００６／０８／１２．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１６９００７６７．
２０．Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｌｉｎ  Ｓ，Ｒａｍｍｏｈａｎ  Ｋ，Ｌｉｕ  Ｚ，Ｌｉｕ  Ｊ，Ｌｉｕ  Ｒ−Ｈ，Ｇｕｉｎｔｈｅｒ  Ｎ，Ｚｈｏｕ  Ｑ，Ｗａｎｇ  Ｔ，Ｚｈｅｎｇ  Ｘ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  ＤＪ，Ｒｏｖｉｎ  ＢＨ，Ｈｅｒｂｅｒｔ  ＬＡ，Ｗｕ  Ｙ，Ｌｙｎｎ  ＤＪ，Ｃｏｏｋｅ  Ｇ，Ｙｕ  ＣＹ，Ｚｈｅｎｇ  Ｐ，Ｌｉｕ  Ｙ．Ａ  ｄｉ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ＣＤ２４  ｃｏｎｆｅｒｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｐｌｏｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２００７；３：ｅ４９．
２１．Ｚｈｏｕ  Ｑ，Ｒａｍｍｏｈａｎ  Ｋ，Ｌｉｎ  Ｓ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｎ，Ｌｉ  Ｏ，Ｌｉｕ  Ｘ，Ｂａｉ  ＸＦ，Ｙｉｎ  Ｌ，Ｓｃａｒｂｅｒｒｙ  Ｂ，Ｄｕ  Ｐ，Ｙｏｕ  Ｍ，Ｇｕａｎ  Ｋ，Ｚｈｅｎｇ  Ｐ，Ｌｉｕ  Ｙ．ＣＤ２４  ｉｓ  ａ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ  ｆｏｒ  ｒｉｓｋ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００３；１００（２５）：１５０４１−６．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．２５３３８６６１００．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１４６５７３６２；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ２９９８９８．
２２．Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｅ，Ａｂｅｌｓｏｎ  ＡＫ，Ｓａｂｉｏ  ＪＭ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｇａｙ  ＭＡ，Ｏｒｔｅｇｏ−Ｃｅｎｔｅｎｏ  Ｎ，Ｊｉｍｅｎｅｚ−Ａｌｏｎｓｏ  Ｊ，ｄｅ  Ｒａｍｏｎ  Ｅ，Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒｏｍａｎ  Ｊ，Ｌｏｐｅｚ−Ｎｅｖｏｔ  ＭＡ，Ｇｕｎｎａｒｓｓｏｎ  Ｉ，Ｓｖｅｎｕｎｇｓｓｏｎ  Ｅ，Ｓｔｕｒｆｅｌｔ  Ｇ，Ｔｒｕｅｄｓｓｏｎ  Ｌ，Ｊｏｎｓｅｎ  Ａ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｅｓｃｒｉｂａｎｏ  ＭＦ，Ｗｉｔｔｅ  Ｔ，Ａｌａｒｃｏｎ−Ｒｉｑｕｅｌｍｅ  ＭＥ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｊ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ＣＤ２４  ｇｅｎｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｗｉｔｈ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２００７；５６（９）：３０８０−６．Ｅｐｕｂ  ２００７／０９／０１．ｄｏｉ：１０．１００２／ａｒｔ．２２８７１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１７７６３４３８．
２３．Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｅ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ  Ｂ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｇａｙ  ＭＡ，Ｂａｌｓａ  Ａ，Ｇａｒｃｉａ  Ａ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  Ｌ，Ｐａｓｃｕａｌ−Ｓａｌｃｅｄｏ  Ｄ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｅｓｃｒｉｂａｎｏ  ＭＦ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＤ２４  ｇｅｎｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．２００８；６７（８）：１１９７−８．Ｅｐｕｂ  ２００８／０７／１６．ｄｏｉ：１０．１１３６／ａｒｄ．２００７．０８４４７５．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１８６２１９７３．
２４．Ｒｕｅｄａ  Ｂ，Ｍｉｒａｎｄａ−Ｆｉｌｌｏｙ  ＪＡ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｊ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｇａｙ  ＭＡ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ２４  ｇｅｎｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｗｉｔｈ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｂｉｏｐｓｙ−ｐｒｏｖｅｎ  ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ａｒｔｅｒｉｔｉｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．２００８；３５（５）：８５０−４．Ｅｐｕｂ  ２００８／０４／０３．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１８３８１７８０．
２５．Ｌｅｅ  ＹＨ，Ｂａｅ  ＳＣ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＣＤ２４  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ：Ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  （Ｎｏｉｓｙ−ｌｅ−ｇｒａｎｄ）．２０１５；６１（８）：９７−１０４．Ｅｐｕｂ  ２０１６／０１／０１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２６７１８４３６．
２６．Ｂｏｋｅｒｓ  Ｓ，Ｕｒｂａｔ  Ａ，Ｄａｎｉｅｌ  Ｃ，Ａｍａｎｎ  Ｋ，Ｓｍｉｔｈ  ＫＧ，Ｅｓｐｅｌｉ  Ｍ，Ｎｉｔｓｃｈｋｅ  Ｌ．Ｓｉｇｌｅｃ−Ｇ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｍｏｒｅ  ｓｅｖｅｒｅ  ｃｏｌｌａｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｅａｒｌｉｅｒ  ｏｎｓｅｔ  ｏｆ  ｌｕｐｕｓ−ｌｉｋｅ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｉｎ  ＭＲＬ／ｌｐｒ  ｍｉｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ  ：１９５０）．２０１４；１９２（７）：２９９４−３００２．Ｅｐｕｂ  ２０１４／０３／０７．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１３０３３６７．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２４６０００３３．
２７．Ｗｉｇｒｅｎ  Ｍ，Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｊ，Ｋａｐｌａｎ  ＭＪ．Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ａｎｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ｃｏｍｍｏｎ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１５；２７８（５）：４９４−５０６．Ｅｐｕｂ  ２０１５／０２／２８．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊｏｉｍ．１２３５７．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２５７２０４５２；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ４５５０５７５．
２８．Ｋａｙ  Ｒ，Ｒｏｓｔｅｎ  ＰＭ，Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ  ＲＫ．ＣＤ２４，ａ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，ｉｓ  ａ  ｖｅｒｙ  ｓｈｏｒｔ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ａ  ｇｌｙｃｏｓｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｃｈｏｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ  ：１９５０）．１９９１；１４７（４）：１４１２−６．Ｅｐｕｂ  １９９１／０８／１５．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１８３１２２４．
２９．Ｐｅｒｒｙ  Ｄ，Ｓａｎｇ  Ａ，Ｙｉｎ  Ｙ，Ｚｈｅｎｇ  ＹＹ，Ｍｏｒｅｌ  Ｌ．Ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１１；２０１１：２７１６９４．Ｅｐｕｂ  ２０１１／０３／１６．ｄｏｉ：１０．１１５５／２０１１／２７１６９４．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２１４０３８２５；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３０４２６２８．
３０．Ｇｅ  Ｙ，Ｊｉａｎｇ  Ｃ，Ｓｕｎｇ  ＳＳ，Ｂａｇａｖａｎｔ  Ｈ，Ｄａｉ  Ｃ，Ｗａｎｇ  Ｈ，Ｋａｎｎａｐｅｌｌ  ＣＣ，Ｃａｔｈｒｏ  ＨＰ，Ｇａｓｋｉｎ  Ｆ，Ｆｕ  ＳＭ．Ｃｇｎｚ１  ａｌｌｅｌｅ  ｃｏｎｆｅｒｓ  ｋｉｄｎｅｙ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｄａｍａｇｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｌｕｐｕｓ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０１３；２１０（１１）：２３８７−４０１．Ｅｐｕｂ  ２０１３／１０／０９．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１３０７３１．ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：２４１０１３７９；  ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３８０４９４３．
【図１Ａ】
2020520985.tif 000006
【図１Ｂ】
2020520985.tif 000007
【図１Ｃ】
2020520985.tif 000008
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年1月23日(2020.1.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象のがん療法に関連する免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療における使用のための、ＣＤ２４タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項２】
前記がん療法が、抗ＣＴＬＡ４抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記抗ＣＴＬＡ４抗体が、イピリムマブである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記抗ＣＴＬＡ４抗体が、別の療法と組み合わせて投与される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記がん療法が、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、別の療法と組み合わせて投与される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記がん療法が、キメラ抗原受容体Ｔ細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、活性化ナチュラルキラー細胞、放射線療法、化学療法、およびがん細胞標的化抗体からなる群より選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ＣＤ２４タンパク質が、成熟ヒトＣＤ２４ポリペプチドを含む、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記成熟ヒトＣＤ２４ポリペプチドが、配列番号１または２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ＣＤ２４タンパク質が、哺乳動物免疫グロブリン（Ｉｇ）タンパク質のＦｃ領域をさらに含み、前記Ｆｃ領域が、前記ＣＤ２４タンパク質のＮ末端またはＣ末端で融合している、請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記Ｉｇタンパク質がヒトＩｇタンパク質である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記Ｆｃ領域が、前記ヒトＩｇタンパク質のヒンジ領域ならびにＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み、前記Ｉｇタンパク質が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＡからなる群から選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＭのヒンジ領域ならびにＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメインを含む、請求項１０又は請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記ＣＤ２４タンパク質の配列が、配列番号６、１１、または１２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記ＣＤ２４タンパク質が、真核生物タンパク質発現系を使用して産生される、請求項１〜請求項１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記発現系が、チャイニーズハムスター卵巣細胞株に含まれるベクターまたは複製欠損レトロウイルスベクターを含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記ｉｒＡＥが、胃腸障害；赤芽球癆；小球性貧血；ループス；自己免疫性腎炎；自己免疫性肝炎；肺炎；心疾患；内分泌障害；アジソン病；性腺機能低下症；シェーグレン症候群；およびＩ型糖尿病からなる群より選択される、請求項１〜請求項１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記ＣＤ２４タンパク質が、可溶性である、請求項１〜請求項１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記ＣＤ２４タンパク質が、グリコシル化されている、請求項１〜請求項１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記ＣＤ２４タンパク質の配列が、配列番号６、１１又は１２に記載の配列からなる、請求項１〜請求項１２及び請求項１４〜請求項１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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