(57)【要約】  本発明は、動物又はヒトの患者又は細胞に投与したときにＧｎＲＨ受容体を活性化することができる免疫刺激ペプチド（イムノヘリン）を提供する。これらのイムノヘリンは、細胞内細菌、真菌、及び原虫感染の治療に有用性を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2020505378.tif 000044
又はその薬学的に許容される塩であって、式中、
【化２】
2020505378.tif 000045
式中、Ｒ５＝Ｍｅ、Ｅｔ、ＣＨ２ＣＦ３、ｉＰｒ、ｎＰｒ、ｎＢｕ、ｉＢｕ、ｓＢｕ、ｔＢｕ、シクロプロピルＣＨ２ＣＯＮＨ２又はＮＨＣＯＮＨ２であり、
ただし、本発明は、以下の化合物を含まない、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【表１−１】
2020505378.tif 000046
【表１−２】
2020505378.tif 000047
【表１−３】
2020505378.tif 000048
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの少なくとも１つが、下記のリストに従ってＩＩ型から選択され、ＩＩ型から選択されないＲ１、Ｒ３、及びＲ４のものが下記のリストに従ってＩ型から選択される、請求項１に記載の化合物。
【表２】
2020505378.tif 000049
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの少なくとも２つ又は３つが、下記のリストに従ってＩＩ型から選択される、請求項２に記載の化合物。
【表３】
2020505378.tif 000050
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、下記のリストに従ってＩ型から選択され、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの２つが、下記のリストに従ってＩＩ型から選択される、請求項２に記載の化合物。
【表４】
2020505378.tif 000051
【請求項５】
Ｒ５＝Ｅｔ又はＣＨ２ＣＯＮＨ２である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ５＝Ｍｅ、ｉＰｒ、ｎＰｒ、ｎＢｕ、ｉＢｕ、ｓＢｕ、又はｔＢｕである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物が、以下から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物：
【表５−１】
2020505378.tif 000052
【表５−２】
2020505378.tif 000053
【表５−３】
2020505378.tif 000054
【表５−４】
2020505378.tif 000055
【表５−５】
2020505378.tif 000056
【表５−６】
2020505378.tif 000057
【表５−７】
2020505378.tif 000058
【表５−８】
2020505378.tif 000059
【表５−９】
2020505378.tif 000060
【表５−１０】
2020505378.tif 000061
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項９】
医薬品に使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染の治療に使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染の治療に使用するための、請求項１に記載のＰ１〜Ｐ２１から選択される化合物。
【請求項１２】
結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）から選択される、細胞内感染の治療に使用するための請求項１０又は１１に記載の化合物。
【請求項１３】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とするヒト又は動物の対象に請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１４】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とするヒト又は動物の対象に請求項１に記載のＰ１〜Ｐ２１から選択される化合物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１５】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とするヒト又は動物の対象に天然、半合成、又は合成の性ホルモンと組み合わせて、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１６】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とするヒト又は動物の対象に天然、半合成、又は合成の性ホルモンと組み合わせて、請求項１に記載のＰ１〜Ｐ２１から選択される化合物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１７】
細胞内細菌又は原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とする男性又は動物対象に天然、半合成、又は合成のエストロゲンと組み合わせて、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の治療的有効量を投与することを含み、かつ必要に応じて天然、半合成、又は合成のプロゲストゲンをさらに投与することを含む、方法。
【請求項１８】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とするヒト又は動物の対象に天然、半合成、又は合成のエストロゲンと組み合わせて、請求項１に記載のＰ１〜Ｐ２１から選択される化合物の治療有効量を投与することを含み、かつ必要に応じて天然、半合成、又は合成のプロゲストゲンをさらに投与することを含む、方法。
【請求項１９】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とする男性又は動物対象に天然、半合成、又は合成のテストステロンと組み合わせて、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
細胞内細菌、真菌、又は原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法であって、それを必要とするヒト又は動物の対象に天然、半合成、又は合成のテストステロンと組み合わせて、請求項１に記載のＰ１〜Ｐ２１から選択される化合物の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２１】
細胞内感染が、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）から選択される、請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イムノヘリンと名付けられた、免疫系を刺激することができる一連の新規ペプチドを提供する。本発明はまた、白血球上のＧｎＲＨ受容体を刺激することができる新規ペプチドを提供する。本発明は、新規化合物それ自体、及び医学における、特に細胞内感染の治療における使用のための化合物に関する。イムノヘリンはまた、ワクチン接種における免疫調節アジュバントとしても使用され得る。新規なＧｎＲＨ受容体刺激イムノヘリンは、治療的に望ましくない内分泌作用を最小限に抑えながら、免疫系の調節作用を最大限にする。本発明はまた、医薬品に使用するための改善された特性を有する本発明のイムノヘリンを調製するための方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
細胞内細菌、真菌、及び原虫感染は、それらが無症状で現れるため、又はあまりに症状が軽度であるために感染した個人が医療援助を求める傾向がないため、健康な個人では診断されないことがよくある。そのように、細胞内感染は、潜在的に持続し得るか、又は疾患状態に進行し得る。正常なＴ細胞機能を妨害する状態は、通常、潜伏感染から疾患の進行をもたらし、結核菌（Ｍｔｂ）のような細胞内感染は、ＨＩＶ感染がＡＩＤＳに進行した患者における一般的な死因である。したがって、感染を治療する方法及び手段についても当技術分野において大きな必要性が存在する。
【０００３】
Ｍｔｂのような細胞内病原体は、持続感染を引き起こす単球及びマクロファージの細胞内区画内に隠れる能力を有する。Ｍｔｂは、肺のＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞によって認識され、適切な反応が開始されるが、系は、滅菌免疫を作り出すことができない（ＭａｃＭｉｃｋｉｎｇ  ２０１２）。宿主による免疫認識を回避するために、Ｍｔｂは、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞のＭＨＣクラスＩＩポケットに存在するＭｔｂペプチドの認識を阻害する一連の機構を発達させた。Ｔｏｌｌ様受容体２は、Ｍｔｂによって阻害されることが実証されており、それは次にＩＦＮ−γ誘導性のＭＨＣクラスＩＩ発現を阻害する（Ｎｏｓｓ  ２００１）。加えて、データは、おそらく不変鎖関連機構によって、Ｍｔｂがファゴソームプロセシング及び成熟を阻害する能力を有することを示唆している（Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａ  ２００１）。したがって、Ｍｔｂ由来のＭＨＣクラスＩＩペプチドの通常の抗原プロセシング、ローディング、及び提示は、Ｍｔｂ産生免疫回避因子のために損なわれる。
【０００４】
エンドソームリソソーム経路は、病原体を取り込んで、それらを１２〜１５アミノ酸長のペプチドにプロセシングし、ＨＬＡ−ＤＭによる不変鎖ペプチドＣＬＩＰの除去後、ペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩポケットにローディングされるように設計されている。抗原ローディング後に、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の特異的Ｔ細胞受容体の提示のために、細胞表面へのＭＨＣクラスＩＩ−ペプチド複合体の輸送が続く（Ｒｏｃｈｅ  ２０１５）。最近、Ｍｔｂ発現タンパク質ＥｓｘＨは、輸送に必要なエンドソーム選別複合体（ＥＳＣＲＴ）機構を直接阻害することが報告されている（Ｐｏｒｔａｌ−Ｃｅｌｈａｙ  ２０１６）。ＥｓｘＨは、抗原提示単球及びマクロファージがＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞を活性化する能力を阻害する。無傷のＥＳＣＲＴ機構は、Ｔ細胞の抗原プロセシング、提示、及び活性化に必要であると思われるので、ＥｓｘＨは、ＭＨＣクラスＩＩ経路に介入することによってＭｔｂが誘導する免疫回避を説明するリンクである。
【０００５】
ＭＨＣクラスＩＩ提示の重要性は、原発性免疫不全症（ＰＩＤ）を伴う患者でも実証されている。ＩＦＮＧＲ、ＩＬ−１２を伴うＩＦＮ−γ回路に欠陥を有するＰＩＤ患者は、ＴＢＣ及び非定型マイコバクテリア感染の獲得が増加している。ＭＨＣクラスＩＩ発現は、ＩＦＮ−γ発現に依存しかつ調節されるので、ＩＦＮ−γ回路における欠損は、さらにＭＨＣクラスＩＩ発現の減少及びＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞の不十分な活性化をもたらす。
【０００６】
トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）のような原虫は、必須の細胞内寄生生物として細胞内に隠れることによって免疫認識を回避するための機構を発達させた。この機構は、ＭＨＣクラスＩＩ発現の妨害を伴い、そのため、特異的ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞について提示されるトキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）の量を減少させる。詳細な機構は、ＩＦＮ−γ誘導性のＭＨＣクラスＩＩの発現を阻害するトキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）によって発現される可溶性タンパク質に依存している（Ｌｅｒｏｕｘ  ２０１５）。
【０００７】
さらに、異なる真菌感染がＭＨＣクラスＩＩ発現に依存することが実証されている。クリプトコッカスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｏｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）は、ＨＩＶを含む免疫不全患者の生命を脅かす脳感染を引き起こす可能性がある。クリプトコッカスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｏｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）のマウスモデルでの研究により、ミクログリア細胞の活性化及びそれらのＭＨＣクラスＩＩの上方制御は、ＩＦＮ−ガンマ依存的に生存に重要であることが実証されている（Ｚｈｏｕ  ２００７）。
【０００８】
したがって、Ｍｔｂ及び他の細胞内細菌、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）などの原虫、又はクリプトコックス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｕｓ）によって例示される真菌によって誘発される免疫回避機構を克服するために、単球、マクロファージ、ミクログリア、又は他の感染細胞の細胞表面でのＭＨＣクラスＩＩ及びＭＨＣクラスＩの発現増加は、免疫認識及び病原体の除去に有益である可能性が高い。
【０００９】
発明概論
ＧｎＲＨ  Ｉ（ゴナドトロピン放出ホルモン又はＬＨＲＨとしても既知）は、構造ｐｙｒｏＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２を有するデカペプチドである。それは、翻訳後に修飾されてアミノ末端にピログルタミン酸及びカルボキシル末端にカルボキサミドを有する最終ペプチドを形成する９２アミノ酸プロペプチドとして産生される。それは、下垂体前葉からのＦＳＨ及びＬＨの放出の原因であることは長い間既知であり、通常は拍動的に視床下部から放出される。超生理学的レベルのＧｎＲＨ  Ｉは、すぐにＦＳＨ及びＬＨ分泌の増加を誘発し、その後すぐにＦＳＨ及びＬＨ分泌の阻害が続く。これは、高レベルのＧｎＲＨ  Ｉが下垂体前葉のＩ型ＧｎＲＨ受容体に対して阻害効果を有するという事実によるものである。したがって、高い非生理学的レベルでのＧｎＲＨ  Ｉの連続投与は、薬理学的去勢を誘発する（Ｆｉｎｋ  １９９８）。ホルモン感受性癌などの治療分野で使用するために、多数のＧｎＲＨ  Ｉアゴニスト及びアンタゴニストが合成されてきた。最初に、ＧｎＲＨ  Ｉの塩が治療的に使用された（例えば、ゴナドレリン塩酸塩及びゴナドレリンジアセタート四水和物）。さらなる薬物の発見及び開発により、ブセレリン、トリプトレリン、ナファレリン、ヒストレリン、及びロイプロレリンを含む多種多様な薬剤の臨床使用がもたらされ、これらはそれぞれ、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体の半減期の延長及びスーパーアゴニズムなどのゴナドレリンを超える改善を有する。
【００１０】
ＧｎＲＨ  Ｉは、ホルモン作用を示すだけでなく、免疫系を刺激し得ることが報告されている（Ｊａｃｏｂｓｏｎ  ａｎｄ  Ａｎｓａｒｉ  ２００４）。ＭｃＣｌｅａｎ  ａｎｄ  ＭｃＣｌｕｇｇａｇｅ（ＭｃＣｌｅａｎ  ａｎｄ  ＭｃＣｌｕｇｇａｇｅ  ２００３）は、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体アゴニストによる術前治療後に子宮平滑筋腫に小さな成熟リンパ球が大量に浸潤しているのを観察した。Ｂａｒｄｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ（Ｂａｒｄｓｌｅｙ  １９９８）も同じ観察を行い、免疫細胞上のＧｎＲＨ  Ｉの遊走に対する刺激作用を示唆している。遡及的分析（Ｋｅｒｒ−Ｌａｙｔｏｎ  １９９８）におけるＨＩＶ感染女性の子宮摘出標本における慢性形質細胞性子宮内膜炎、及びＨＩＶ感染男性における高レベルのＦＳＨ及びＬＨ（ハイパーゴナドトロピン）に関する報告がなされている（Ａｒｖｅｒ  １９９９及びＢｒｏｃｋｍｅｙｅｒ  ２０００）。ＡＩＤＳ様リンパ球プロファイルを示す糖尿病を起こしやすいＢＢラットにＧｎＲＨ  Ｉを投与することにより、ＣＤ４  Ｔリンパ球数が増加した（Ｊａｃｏｂｓｏｎ  １９９９）。
【００１１】
国際公開第２００９／１４５６９０Ａ１号は、ＨＩＶ感染ＣＤ４Ｔ細胞がＨＩＶコード化タンパク質ＮｅｆによりＭＨＣクラスＩを下方制御し、その結果認識を回避するという概念で、ＧｎＲＨがＴ細胞上のＭＨＣクラスＩを活性化し上方制御することを教示している（Ｌｕｂｂｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７
【００１２】
ヒトには、異なる遺伝子によってコードされているＧｎＲＨペプチドの２つの変異体、ＧｎＲＨ  Ｉ及びＧｎＲＨ  ＩＩが存在する。ＧｎＲＨ  ＩＩの構造は、ｐｙｒｏＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２である（下線を引いたＧｎＲＨ  Ｉとの違い）。ＧｎＲＨ  ＩＩは、主に脳の外で産生される視床下部以外の形態であり、ＧｎＲＨシステムの非内分泌的側面に関与することが示唆されている（Ｗｈｉｔｅ  １９９８）。驚くべきことに、本発明者らは、Ｔ細胞上のＭＨＣクラスＩ発現に対するＧｎＲＨ  ＩＩ刺激の効果を見出し、ＧｎＲＨ  ＩＩがこれらの細胞を直接活性化することを実証した（図１）。
【００１３】
他の哺乳動物とは異なり、１つの従来のヒトＧｎＲＨ受容体、すなわちＩ型ＧｎＲＨ受容体のみが記載されている。ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体相同体は、ヒトの染色体１ｑ１２遺伝子上に存在するが、フレームシフト及び終止コドンを含有し、機能的に発現されないと考えられている（Ｍｏｒｇａｎ  ２００３）。驚くべきことに、本発明者らの発見は、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体が、ＭＨＣクラスＩ発現の増加によりＧｎＲＨ刺激に応答するので、実際にＴ細胞上に発現されることを示唆している（図１）。これらの機能的発見は、本発明者らがＩＩ型ＧｎＲＨ受容体ｍＲＮＡの発現を実証することができたｑＰＣＲ分析によって裏付けられた。さらに、ナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞上でのＩＩ型ＧｎＲＨ受容体の相対的発現レベルは、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体の発現レベルと比較して高かった（図４）。したがって、本発明者らは、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体の発現が、機能的にＧｎＲＨ刺激に応答してＴ細胞上に発現される優性受容体であることを同定した。
【００１４】
本発明者らはまた、ＧｎＲＨ  Ｉ類似体がＴ細胞を活性化してＭＨＣクラスＩ発現をもたらし得ることを発見した。ＧｎＲＨ  Ｉ類似体ブセレリンをＨＩＶの治療薬として使用した最近の臨床試験では、ＧｎＲＨ  Ｉの内分泌作用を最小限に抑えるために、ＨＩＶ感染男性に性ホルモン置換が提供された。これらの作用は、ＧｎＲＨ  Ｉが下垂体Ｉ型ＧｎＲＨ受容体に結合することによって媒介され、テストステロン産生の減少、その後インポテンツの減少をもたらす。その内分泌作用に加えて、ＧｎＲＨ  Ｉが交差シグナルを出し、高去勢レベルのＧｎＲＨ類似体が使用される場合、Ｔ細胞上のＩＩ型ＧｎＲＨ受容体に結合することによって免疫系を刺激する可能性が非常に高い。興味深いことに、乳癌細胞で発現される受容体へのＧｎＲＨ  Ｉ結合は、低い結合親和性（Ｋｄ、１．６−３．０ｘ１０（−６）Ｍ）を示すのに対して、ＧｎＲＨ  Ｉの中枢性下垂体結合は、１０００倍高い親和性（Ｋｄ、４．８Ｘ１０（−９）Ｍ）を示す（Ｅｉｄｎｅ  １９８７）。
【００１５】
ＧｎＲＨ  Ｉ及びＧｎＲＨ  ＩＩペプチドの結合親和性の違いは、下垂体細胞でのＧｎＲＨ  Ｉ結合に特化したＩ型ＧｎＲＨ受容体の発現を反映しているが、末梢細胞は、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体の発現を支配し、したがって低親和性及びＧｎＲＨ  Ｉ結合の「オフターゲット」効果を支配する。したがって、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体がＴ細胞上の優勢な受容体であるという本発明者らの予想外の発見は、新規であり、ＧｎＲＨ  Ｉ及びＧｎＲＨ  ＩＩの受容体生理学を説明し得る。したがって、ＨＩＶの治療においてＧｎＲＨ  ＩＩ様ペプチドを使用することによって、内分泌効果を最小限にし、免疫刺激効果を単離して増強させるべきである。
【発明の概要】
【００１６】
これらの発見に基づいて、本発明者らは、免疫刺激効果を最適化し、ホルモン系に対する効果を最小限にするために、イムノヘリンと呼ばれるＧｎＲＨ  ＩＩ様ペプチドを作製した。これらのイムノヘリンは、細胞内感染のような感染因子を除去する免疫応答を導くことができるＭＨＣクラスＩを刺激すること、及びＨＩＶ又は癌を治療又は同時治療することにおいて用途を有する。したがって、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体への強力な結合を有するが、好ましくはＩ型ＧｎＲＨ受容体へのより弱い結合を有し、匹敵する又はより強いＭＨＣクラスＩ応答をもたらすが、ホルモンの刺激又は抑制に対するより弱い「オフターゲット」効果をもたらす、いくつかのＧｎＲＨ  ＩＩ様ペプチドが開示されている。本発明のＧｎＲＨ  ＩＩ様ペプチドが、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体にも結合して活性化し、それによって内分泌シグナル伝達を刺激する場合、それによって、本発明の化合物は、ＧｎＲＨ  ＩＩ様ペプチドの内分泌作用に対抗するために、１つ以上の天然、半合成、又は合成の性ホルモン、例えば、患者のホルモンの状態に応じてテストステロン又はエストロゲンと一緒に投与され得る。成人男性において、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、テストステロン又は対応するホルモン作用を有する物質である。成人女性において、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、特にプロゲストゲンと組み合わせたエストラジオール又は対応するホルモン効果を有する薬剤である。後者は、女性の子宮内膜癌の発生を回避し、膣出血を回避するために添加される。しかしながら、子宮摘出女性は、プロゲストゲンの添加による恩恵を受けない。
【００１７】
ウイルスペプチドは、サイトゾル中に出現し、プロテオソームを標的とし、続いて消化されたＨＩＶペプチドがＭＨＣクラスＩペプチド中に添加され、続いて提示のために細胞表面へ輸送される小胞体へのプロセシング及び輸送（ＴＡＰ１及びＴＡＰ２）が続く。
【００１８】
国際公開第２００９／１４５６９０Ａ１号の教示及び既知の技術とは対照的に、細胞内細菌は、エンドソームリソソーム経路、Ｔ細胞などの正常細胞におけるＭＨＣクラスＩには通常アクセスできない経路の居住者である。しかしながら、本発明において、本発明者らは、ＧｎＲＨがＣＤ１４＋単球のような抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＭＨＣクラスＩを上方制御することができることを初めて実証した（図２）。ＡＰＣは、交差提示の特有の能力を有し、すなわち、それらは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化のために、エンドソームリソソーム経路からＭＨＣクラスＩポケット内に抗原を提示することができる。この発見は、驚くべきことであり、ＡＰＣのエンドソームリソソーム経路に存在し、隠れるＭ結核のような細胞内細菌を示唆する。したがって、結核感染者をＧｎＲＨで治療すると、ＡＰＣを活性化し刺激して交差提示経路によるＭＨＣクラスＩ上方制御が開始され、ＣＤ８＋Ｔ細胞による結核ペプチドの認識及び感染ＡＰＣＳの排除がもたらされる。
【００１９】
本発明はまた、１つ以上のＧｎＲＨ類似体の使用による細菌、原虫、及び真菌による感染などの細胞内感染を治療するための方法も提供する。治療される細胞内細菌としては、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、及びサルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）が挙げられる。細胞内原虫としては、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、及びリーシュマニアが挙げられる。細胞内真菌としては、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）が挙げられる。
【００２０】
本発明は、ヒトＧｎＲＨ  ＩＩのペプチドベースの類似体を提供する。
【００２１】
本発明の化合物は、改善されたＭＨＣ  ＩＩ及び／又はＭＨＣ  Ｉ抗原提示を誘導すると考えられ、それらを細胞内細菌、真菌、及び原虫感染の治療に有用にする。本発明は、非生理学的量のＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の投与、及び好ましくは性ホルモンの投与も含む、細胞内感染を治療するための方法をさらに提供する。
【００２２】
したがって、本発明の一態様では、式（Ｉ）：
【化１】
2020505378.tif 000002
のペプチド又はその薬学的に許容される塩が提供され、式中、
【化２】
2020505378.tif 000003
Ｒ５＝Ｍｅ、Ｅｔ、ＣＨ２ＣＦ３、ｉＰｒ、ｎＰｒ、ｎＢｕ、ｉＢｕ、ｓＢｕ、ｔＢｕ、シクロプロピル、ＣＨ２ＣＯＮＨ２、又はＮＨＣＯＮＨ２である。
【００２３】
本発明の化合物に関する式Ｉはまた、以下のように表すことができる：
ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−Ｐｒｏ−Ｘ、
式中：
ＡＡ１は、Ｈｉｓ及びＴｙｒから選択され、
ＡＡ２は、ｄ−Ｓｅｒ（ＯｔＢｕ）、ｄ−Ｔｒｐ、ｄ−Ｎａｌ、ｄ−Ｂｈｉ、及びｄ−Ｌｅｕから選択され、
ＡＡ３は、Ｌｅｕ及びＴｒｐから選択され、
ＡＡ４は、Ａｒｇ及びＴｙｒから選択され、
Ｘは、−ＮＨＭｅ、−ＮＨＥｔ、−ＮＨＣＨ２ＣＦ３、−ＮＨｉＰｒ、−ＮＨｎＰｒ、−ＮＨｎＢｕ、−ＮＨｉＢｕ、−ＮＨｓＢｕ、−ＮＨｔＢｕ、−ＮＨシクロプロピル、−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯＮＨ２、及びＮＨＣＨ２ＣＯＮＨ２から選択される。
【００２４】
本発明は、以下の式（Ｉ）の化合物を含まない：
【表１−１】
2020505378.tif 000004
【表１−２】
2020505378.tif 000005
【表１−３】
2020505378.tif 000006
【００２５】
以下のように表される式（Ｉ）の化合物が宣言される：
ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−Ｐｒｏ−Ｘ、式中、ＡＡ１は、Ｈｉｓであり、ＡＡ３は、Ｔｒｐであり、ＡＡ４は、Ｔｙｒであり、ＡＡ２は、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−ｔＢｕ−Ｓｅｒ、及びＤ−Ｔｒｐから選択され、Ｘは、−ＮＨＥｔ又はＮＨ−ＮＨ−ＣＯＮＨ２である。
【００２６】
本発明から除外される化合物Ｐ１〜Ｐ１５はまた、以下のように表すこともできる：
2020505378.tif 000007
【００２７】
本発明の化合物の興味深い選択は、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩である：
【表２】
2020505378.tif 000008
式中、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの少なくとも１つは、ＩＩ型から選択され、ＩＩ型から選択されないＲ１、Ｒ３、及びＲ４のそれらは、Ｉ型から選択され、
式中、
【化３】
2020505378.tif 000009
であり、
式中、Ｒ５＝Ｍｅ、Ｅｔ、ＣＨ２ＣＦ３、ｉＰｒ、ｎＰｒ、ｎＢｕ、ｉＢｕ、ｓＢｕ、ｔＢｕ、シクロプロピル、又はＣＨ２ＣＯＮＨ２である
【００２８】
化合物の選択は、以下のように表すこともできる：
ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−Ｐｒｏ−Ｘ、
式中、ＡＡ１、ＡＡ２、ＡＡ３、ＡＡ４、及びＸは上で定義した通りであり、ＡＡ１、ＡＡ３、及びＡＡ４のうちの少なくとも１つは、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、及びＴｙｒから選択され；残りのＡＡ１、ＡＡ３、及びＡＡ４は、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇから、かつ上で特定された化合物Ｐ１〜Ｐ１５及び請求項１で放棄されたそれらの他の化合物を除いて選択される。
【００２９】
実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの２つ又は３つは、上記のリストに従ってＩＩ型から選択され、残りのＲ１、Ｒ３、及びＲ４はＩ型から選択される。
【００３０】
実施形態では、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つは、上記のリストに従ってＩ型から選択され、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの２つは、上記のリストに従ってＩＩ型から選択される。
上記で特定された化合物Ｐ１〜Ｐ２１を除く。
【００３１】
本発明による特定の化合物としては、以下が挙げられる：
【表３−１】
2020505378.tif 000010
【表３−２】
2020505378.tif 000011
【表３−３】
2020505378.tif 000012
【表３−４】
2020505378.tif 000013
【表３−５】
2020505378.tif 000014
【表３−６】
2020505378.tif 000015
【表３−７】
2020505378.tif 000016
【表３−８】
2020505378.tif 000017
【表３−９】
2020505378.tif 000018
【表３−１０】
2020505378.tif 000019
【表３−１１】
2020505378.tif 000020
【表３−１２】
2020505378.tif 000021
【００３２】
特に興味深いのは、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体に対するｉ）刺激作用又はｉｉ）親和性を主に有するＧｎＲＨ  ＩＩ類似体である化合物である。したがって、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体に結合又はそれを活性化しない化合物が好ましく、望ましくない治療反応がもたらされる。内分泌作用に対抗するために、Ｉ型ＧｎＲＨ受容体に結合又はそれを活性化し、それによって内分泌シグナル伝達を刺激するＧｎＲＨ  ＩＩ類似体を性ホルモンと一緒に投与することが企図される。
【００３３】
本発明はまた、細胞内細菌、原虫、及び真菌による感染などの細胞内感染を治療するための方法を提供する。
【００３４】
本発明の化合物は、改善されたＭＨＣ  ＩＩ及びＭＨＣ  Ｉ抗原提示を誘導すると考えられ、それらを細胞内細菌、真菌、及び原虫感染の治療に有用にする。本発明は、非生理学的量のＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の投与を含む、細胞内感染を治療するための方法をさらに提供する。
【００３５】
本発明のＧｎＲＨ類似体がＩ型ＧｎＲＨ受容体と相互作用する場合、ＧｎＲＨ類似体は、当技術分野において既知である。
ＧｎＲＨ類似体は、ヒトを含む動物に投与したときに下垂体前葉の受容体に対するＧｎＲＨの作用を模倣する薬剤である。単一の低生理学的用量又は時間的に間隔を置いた単一の低生理学的用量でのＧｎＲＨ類似体の投与は、下垂体前葉の受容体を刺激し、それによって受容体アゴニストとして作用するが、単位時間あたりの高い非生理学的用量でのＧｎＲＨ類似体の連続投与は、下垂体前葉の受容体の最初の刺激後、ＦＳＨ及びＬＨの分泌を阻害し、それによって受容体アンタゴニストとして作用する。
【００３６】
ＦＳＨ及びＬＨ分泌の阻害は、薬理学的去勢を誘発する。これに関連して、非生理学的用量のＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体は、それぞれ非生理学的血漿レベルのＧｎＲＨ又はＧｎＲＨをもたらす用量であり、これは去勢血漿レベルをもたらし得る。これに関連して、ＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の非生理学的血漿レベルは、通常存在するＧｎＲＨのレベルの範囲に含まれないレベル、又はＧｎＲＨ類似体の場合には、健康な人におけるＧｎＲＨの正常な生理学的効果の範囲による生理学的効果に関して含まれないレベルである。
【００３７】
より具体的には、ＧｎＲＨの非生理学的血漿レベルは、ＧｎＲＨの正常な生理学的血漿レベルに関して、増加したレベル、特に１週間以上又は１ヶ月以上など長期間にわたって増加したレベルである。また、より具体的には、ＧｎＲＨ類似体の非生理学的血漿レベルは、健康な人における正常な生理学的作用範囲ＧｎＲＨによる生理学的作用に関しては含まれないＧｎＲＨ類似体の血漿レベルの増加であり、特に１週間以上又は１ヶ月以上の長期間にわたってのものではない。それらの薬学的に許容される塩を含む本発明のＧｎＲＨ又はＧｎＲＨ類似体の任意の有用な投与形態、特に静脈内、筋肉内、皮下、舌下、及び鼻腔内投与が本発明に含まれる。特に好ましいのは、デポー及び徐放又は持続放出組成物である。
【００３８】
本発明の化合物がＩ型ＧｎＲＨ受容体と相互作用し、望ましくない効果が得られ得る場合、そのような化合物は、ＧｎＲＨ  ＩＩ様ペプチドの内分泌作用に対抗するために、１つ以上の天然、半合成、又は合成の性ホルモン、例えば、患者のホルモンの状態に応じてテストステロン又はエストロゲンと組み合わせて投与され得る。成人男性において、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、テストステロン又は対応するホルモン作用を有する物質である。成人女性において、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、特にプロゲストゲンと組み合わせたエストラジオール又は対応するホルモン効果を有する薬剤である。後者は、女性の子宮内膜癌の発生を回避し、膣出血を回避するために添加される。しかしながら、子宮摘出女性は、プロゲストゲンの添加による恩恵を受けない。
【００３９】
１つ以上の天然、半合成、又は合成の性ホルモンの併用投与は、ｉ）同時であり得、ｉ）ＧｎＲＨ類似体を性ホルモンより早く投与することができ、又はｉｉｉ）ＧｎＲＨ類似体を性ホルモンより後に投与することができる。さらに、使用される投与形態に依存して、ＧｎＲＨ類似体及び／又はホルモンは、例えば鼻スプレーを介した性ホルモンの投与の場合のように、複数回投与され得、投与は、典型的には１週間以上の間１日１回以上である。
【００４０】
併用投与は、例えば、無投与期間によって中断された１つ以上の期間にわたって延長してもよく、又は投与は、連続的であり得る。好ましい投与期間は、１〜２週間、特に１０〜１４日間である。本発明の化合物がＧｎＲＨ  Ｉを活性化することによって内分泌作用を有する場合、前記化合物の投与は、１つ以上の天然、半合成、又は合成の性ホルモンの投与期間と、例えば５０パーセント超、好ましくは８５パーセント超、さらにより好ましくは９０又は９５パーセント超重複する。併用投与は、性欲減退、ほてり、発汗増加、及び心拍数増加などの深刻な内分泌副作用から人を保護することを可能にする。成人男性において、本発明の化合物の内分泌作用に対抗するために投与される天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、テストステロン又は対応するホルモン作用を有する薬剤、特にテストステロンのホルモン効果を模倣する合成又は半合成剤である。好ましい薬剤は、メチルテストステロン及びスタノゾロールを含む。成人女性において、本発明の化合物の内分泌作用に対抗するために投与される天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、エストラジオール又はエストラジオールの半合成エステル又は別の合成もしくは半合成エストロゲン類似体などのエストロゲンである。好ましいエストロゲン類似体は、共役エストロゲン、エチニルエストラジオール、及びメストラノール、ならびにジネストロール及びジエチルスチルベストロールなどの非ステロイド系エストロゲンを含む。女性において、前記エストロゲン又はエストロゲン類似体投与は、一態様において、プロゲストゲン、特にプロゲステロン、プロゲステロン誘導体又は類似体、例えばヒドロキシプロゲステロンカプロアート、メドロキシプロゲステロンアセタート、ノエチステロンアセタート、メゲストロールアセタート、メドロゲストン、及びノルゲストレルの投与と組み合わせて併用されるのが好ましい。併用投与は、好ましくは５０パーセント超、好ましくは８５パーセント超、さらにより好ましくは９０又は９５パーセント超重複する。プロゲストゲンは、エストロゲン、エストラジオールもしくはエストリオールの半合成エステル、又は合成もしくは半合成エストロゲン類似体と組み合わせて、連続的に又は約１〜３ヶ月の間隔で約１０〜１４日の期間にわたって投与されることが好ましい。
【００４１】
必要ならば、天然、半合成、又は合成の性ホルモンは、本発明のＩ型ＧｎＲＨ受容体活性化化合物と、また場合により薬学的に許容される担体と組み合わせて投与される。
【００４２】
一般的な化学法
当業者は、本発明の化合物が既知の様式、種々の方法で調製され得ることを認識する。下記の経路は、式（Ｉ）の化合物の合成に用いることができるいくつかの方法の単なる例示である。
【００４３】
一般に、本発明の化合物を調製するための合成方法は、２つの方法：液相合成及び固相合成に分けることができる。液相ペプチド合成は、液相中で一緒に反応する試薬を伴う。この方法の欠点は、生成物の分離及び精製が困難であることを含む。固相ペプチド合成は、より一般的であり、便利な単離及び精製及び自動化への適用性を含む多数の利点を有する（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９７６）。様々なペプチドの合成を可能にするために多くのペプチド合成樹脂が開発されてきた。これらには、クロロメチル及び２−クロロチトリルポリスチレン樹脂が含まれる。短鎖ペプチドを合成するための方法を開示している特許の例としては、米国特許第５，６０２，２３１号、欧州特許第０５１８６５５号、及び米国特許第６，８７９，２８９号が挙げられる。
【００４４】
本発明の化合物が、例えば、ブセレリンのようにＣ末端第二級アミドを用いて調製される場合、次いで化合物を調製する１つの方法は、以下の通りであり、下記のスキームＩに示される。ペプチドは、固体支持体上に組み立てることができ、典型的には２−クロロトリチルポリスチレン樹脂が使用されるが、他のものは、当業者に明らかである。第１のアミノ酸がロードされ、次いで脱保護されて反応性アミン基が現れ、次いでそれが次のアミノ酸に結合するのに使用される。これは、今度は脱保護及びカップリングすることができる。複数回の伸長の後、所望のペプチド配列が得られる。次いで、ペプチドは、ＴＦＡ又は類似の試薬の作用によって樹脂から開裂される。ｔｅｒｔ−ブチル側鎖が最終化合物において必要とされるとき、これが完全に開裂しないように反応時間を十分に低く保つことが重要であることに留意されたい。いくらかのｔｅｒｔ−ブチルは、開裂するが、これは、精製において除去することができる。最後に、二級アミドは、Ｃ末端の脱保護ペプチドを選択された一級アミンとカップリングさせることによって調製される。カップリング反応は、典型的にはＨＢＴＵ及びＤＩＰＥＡを利用するが、当業者は、アミド結合形成を達成するために組み合わせて使用することができる他の活性化剤及び塩基を同定することができる。
【化４】
2020505378.tif 000022
スキームＩ
【００４５】
本発明の化合物が、例えば、トリプトレリンのようにＣ末端第一級アミドを用いて調製される場合、次いで化合物を調製する１つの方法は、以下の通りであり、以下のスキームＩＩに示される。ペプチドは、固体支持体上に組み立てることができ、典型的にはラメッジ樹脂が使用されるが、他のものは、当業者に明らかであろう。第１のアミノ酸がロードされ、次いで脱保護されて反応性アミン基が現れ、次いでそれが次のアミノ酸に結合するのに使用される。これは、今度は脱保護及びカップリングすることができる。複数回の伸長の後、所望のペプチド配列が得られる。次いで、ペプチドは、ＴＦＡ又は類似の試薬の作用によって樹脂から開裂される。カップリング反応は、典型的にはＨＢＴＵ及びＤＩＰＥＡを利用するが、当業者は、アミド結合形成を達成するために組み合わせて使用することができる他の活性化剤及び塩基を同定することができる。
【化５】
2020505378.tif 000023
スキームＩＩ
【００４６】
式（Ｉ）の化合物は、上記の方法を組み合わせることによって、また当業者に既知の他の方法によって作製され得る。
【００４７】
本発明の化合物の一般的な用途
本明細書に記載の化合物は、医学、医学研究、又はそのような用途のための組成物の製造に使用することができる。さらに、本発明はまた、医学、医学研究、又はそのような用途のための組成物の製造における使用のための本明細書に記載の化合物Ｐ１〜Ｐ２１に関する。したがって、以下において「本発明の化合物」という用語が医療用途又は医薬組成物に関連して使用される場合、これらの化合物がそのような用途について知られていない限り、その用語は、化合物Ｐ１〜Ｐ２１も含むことが意図される。
【００４８】
さらに、化合物は、ＩＩ型ＧｎＲＨ受容体と比較してＩ型ＧｎＲＨ受容体への結合の減少を含む、細胞内感染及び関連疾患の治療のための改善された性質を示すと考えられる。
【００４９】
本発明の化合物は、細胞内細菌、真菌、原虫感染、例えば、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、及びサルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の治療、ならびにこれらの感染が単独で、又はウイルス性病原体もしくはウイルス性疾患と関連して、あるいは一次又は二次免疫不全の他の原因と関連して起こる場合、細胞内の原虫感染、例えば、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、及びリーシュマニア、ならびに細胞内真菌感染、例えば、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）の治療に使用するべきであると考えられる。一次免疫不全の原因としては、遺伝性遺伝的欠損症及び体細胞変異が挙げられるが、二次免疫不全は、上記のようなウイルス感染、又は糖尿病もしくは栄養失調などの遺伝性もしくは非遺伝性の状態、又は免疫抑制剤、薬物乱用、もしくは他の環境要因によって引き起こされ得る。
【００５０】
さらに、本明細書に開示される本発明の化合物は、ウイルス性疾患、障害、状態、及び症状の共治療として、例えば、ＨＩＶ、アデノウイルス、アルファウイルス、アルボウイルス、ボルナ病、ブニヤウイルス、カリシウイルス、コンジローマアクチナータ（Ｃｏｎｄｙｌｏｍａ  Ａｃｕｍｉｎａｔａ）、コロナウイルス、コクサッキーウイルス、サイトメガロウイルス、デング熱ウイルス、伝染性膿瘡（Ｃｏｎｔａｇｅｏｕｓ  Ｅｃｔｈｙｍａ）、エプスタイン−バーウイルス、伝染性紅斑、ハンタウイルス、ウイルス性出血熱、ウイルス性肝炎、単純ヘルペスウイルス、帯状疱疹ウイルス、感染性単核球症、インフルエンザ、ラッサ熱ウイルス、麻疹、流行性耳下腺炎、伝染性軟体動物、パラミクソウイルス、瀉血熱、ポリオーマウイルス、リフトバレー熱、風疹、風疹、遅延性疾患のウイルス、天然痘、亜急性硬化性全脳炎、腫瘍ウイルス感染、西ナイルウイルス、黄熱病ウイルス、狂犬病ウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルスなどのウイルス剤又はウイルス性疾患に感染した患者における治療において使用され得る。
【００５１】
さらに、化合物は、癌の治療又は共治療における使用に好適であると考えられる。特に、副腎癌、肛門癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳／ＣＮＳ腫瘍、乳癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭及び下咽頭癌、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜トーマ、横紋筋肉腫、唾液腺癌、基底扁平上皮癌、メラノーマ、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンストロームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍。
【００５２】
したがって、本発明の化合物の有利な特性は、以下のうちの１つ以上を含み得る：
−Ｉ型ＧｎＲＨ受容体と比較したＩＩ型ＧｎＲＨ受容体への結合の改善
−ＭＨＣクラスＩ刺激の改善
−ＭＨＣクラスＩＩ刺激の改善
−免疫調節の改善
−抗原提示細胞の活性化の改善
−Ｔ細胞応答の改善
−抗ウイルス活性の改善
−抗癌作用の改善
−ＭＨＣ  ＩＩ抗原提示の改善
−ＭＨＣ  Ｉ抗原提示の改善
【００５３】
本発明の化合物を含む医薬組成物
本発明はまた、本発明の化合物を１つ以上の薬学的に許容される希釈剤又は担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。本章は、主に新規ＧｎＲＨ類似体の製剤化を対象とする。新規化合物が、望ましくなく、去勢又は類似の効果を引き起こすＩ型ＧｎＲＨ受容体に対する効果を有する場合、性ホルモンを含有する組成物は、当分野で既知であり、同時投与され得る。
【００５４】
本発明の化合物又はその製剤は、例えば任意の従来の経路によって投与され得るが、非限定的に、非経口的に、経口的に、局所的に、又は粘膜（頬側、舌下、経皮、膣、直腸、鼻、眼などを含む）を介して、医療装置（例えばステント）を介して、吸入によって投与され得る。治療は、単回投与又はある期間にわたる複数回投与からなり得る。
【００５５】
治療は、治療される特定の疾患ならびに治療される患者の体重及び年齢に応じて、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回などの投与によるものであり得る。治療はまた、例えば、点滴を介した注入による静脈内投与などの持続投与によるものであり得る。
【００５６】
本発明の化合物をそのまま投与することは可能であるが、それを医薬製剤として１つ以上の許容される担体と一緒に存在させることが好ましい。担体は、本発明の化合物と適合性であり、そのレシピエントに有害ではないという意味で「許容される」ものでなければならない。好適な担体の例は、以下により詳細に記載される。
【００５７】
製剤は、単位剤形を含む好適な剤形で都合よく提示されてもよく、薬学の分野で周知の方法のいずれかによって調製されてもよい。そのような方法は、活性成分（本発明の化合物）を１つ以上の補助成分を構成する担体と一緒にする工程を含む。一般に、製剤は、活性成分を液体担体もしくは微粉化した固体担体又はその両方と均一かつ密接に一緒にして、次いで、必要に応じて生成物を成形することによって調製される。
【００５８】
本発明の化合物は、通常、経口又は非経口経路による通常の任意の投与経路により、活性成分を含む医薬製剤の形態で、場合により薬学的に許容される剤形の、無毒の有機又は無機の酸又は塩基の付加塩の形態で投与され得る。障害及び治療される患者、ならびに投与経路に応じて、組成物は、様々な用量及び／又は頻度で投与され得る。
【００５９】
医薬組成物は、製造及び貯蔵の条件下で安定でなければならない；したがって、必要に応じて細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護されるべきである。液剤、分散剤、乳剤、及び懸濁剤などの液体製剤の場合、担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、植物油、ならびにそれらの好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。
【００６０】
例えば、本発明の化合物は、香味剤もしくは着色剤を含有し得る錠剤、カプセル剤、フィルム剤、胚珠剤、エリキシル剤、液剤、乳剤、又は懸濁剤の形態で経口、口腔内、又は舌下投与され得る。
【００６１】
経口投与に好適な本発明による製剤は、カプセル剤、カシェ剤、又は錠剤などの個別の単位として提供されてもよく、それぞれが所定量の活性成分；を例えば、錠剤もしくはカプセル剤の形態で、複数のユニットとして：粉末もしくは顆粒として；水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として；又は水中油型液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして；含有する。活性成分はまた、巨丸剤、舐剤、又はペースト剤として提供されてもよい。
【００６２】
経口投与に好適な本発明の化合物の溶液又は懸濁液は、水、アルコール、ポリオールなどを含む１つ以上の溶媒、ならびにｐＨ調整剤、安定剤、界面活性剤、可溶化剤、分散剤、防腐剤、香料などの１つ以上の賦形剤も含有し得る。具体例としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、分散剤、例えば、ポリソルベート８０、界面活性剤、及び可溶化剤、例えば、ポリエチレングリコール、Ｐｈｏｓａｌ  ５０  ＰＧ（ホスファチジルコリン、大豆脂肪酸、エタノール、モノ／ジグリセリド、プロピレングリコール、及びアスコルビルパルミタートからなる）を含む。本発明による製剤はまた、エマルジョンの形態であってもよく、式（Ｉ）による化合物は、水中油型エマルジョン又は油中水型エマルジョンなどのエマルジョン中に存在してもよい。油は、天然油もしくは合成油、又は任意の油様物質、例えば、大豆油もしくはベニバナ油又はそれらの組み合わせなどであり得る。
【００６３】
錠剤は、微結晶セルロース、ラクトース（例えばラクトース一水和物又はラクトース無水物（ａｎｙｈｙｄｒｏｕｓ））、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、二塩基性リン酸カルシウム及びグリシン、ブチル化ヒドロキシトルエン（Ｅ３２１）、クロスポビドン、ヒプロメロースなどの賦形剤、デンプン（好ましくは、トウモロコシ、ポテト、又はタピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、及び特定の複雑なシリカートなどの崩壊剤、ならびにポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、マクロゴール８０００、スクロース、ゼラチン、及びアラビアゴムなどの造粒結合剤を含有し得る。さらに、マグネシウムステアラート、ステアリン酸、グリセリルベヘナート、及びタルクなどの滑沢剤が含まれてもよい。
【００６４】
錠剤は、場合により１つ以上の副成分と共に圧縮又は成型することにより作製され得る。圧縮錠剤は、場合により結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えばデンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤、又は分散剤と混合された粉末もしくは顆粒などの自由流動形態の活性成分を好適な機械で圧縮することによって調製され得る。成型錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を好適な機械で成型することによって作製され得る。錠剤は、場合により被覆又は刻み目を入れてもよく、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを様々な割合で使用してその中の活性成分を徐放又は制御放出するように処方して所望の放出プロファイルを提供してもよい。
【００６５】
同様の種類の固体組成物もゼラチンカプセルの充填剤として用いられ得る。これに関して好ましい賦形剤としては、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、又は高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。水性懸濁液及び／又はエリキシル剤の場合、本発明の化合物は、様々な甘味剤もしくは香味剤、色素、又は染料と、乳化剤及び／又は懸濁剤と、ならびに水、エタノール、プロピレングリコール、及びグリセリン、ならびにそれらの組み合わせなどの希釈剤と組み合わせ得る。
【００６６】
口内への局所投与に好適な製剤としては、活性成分を風味付きで、通常スクロース及びアカシア又はトラガカントを含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアラビアゴムなどの不活性基剤中に活性成分を含むトローチ；ならびに活性成分を好適な液体担体中に含む洗口剤が挙げられる。
【００６７】
局所投与に適した医薬組成物は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、粉末剤、溶液、ペースト剤、ゲル剤、含浸包帯剤、スプレー剤、エアゾール剤又はオイル剤、経皮装置、散粉剤などとして処方され得る。これらの組成物は、活性剤を含有する従来の方法で調製され得る。したがって、それらはまた、保存剤、薬物浸透を助けるための溶媒、クリーム又は軟膏中の皮膚軟化剤、及びローションのためのエタノール又はオレイルアルコールなどの適合する従来の担体及び添加剤を含んでもよい。そのような担体は、組成物の最大約１％〜最大約９８％として存在してもよい。より通常には、それらは、組成物の最大約８０％を形成する。ほんの一例として、クリーム又は軟膏は、所望の粘稠度を有するクリーム又は軟膏を製造するのに十分な量で、約５〜１０重量％の化合物を含有する十分な量の親水性材料及び水を混合することによって調製される。
【００６８】
経皮投与に適した医薬組成物は、レシピエントの表皮と長期間密接に接触したままでいることを意図した個別のパッチとして提示され得る。例えば、活性剤は、イオン導入法によってパッチから送達され得る。
【００６９】
外部組織、例えば口及び皮膚への適用のためには、組成物は、局所用軟膏又はクリームとして適用されるのが好ましい。軟膏剤に製剤化される場合、活性剤は、パラフィン系軟膏基剤又は水混和性軟膏基剤と共に用いられ得る。
【００７０】
あるいは、活性剤は、水中油型クリーム基剤又は油中水型基剤を用いてクリーム剤に製剤化され得る。
【００７１】
非経口投与の場合、液体単位剤形は、活性成分及び滅菌ビヒクル、例えば、これらに限定されないが、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、及び植物油を用いて調製され、水が好ましい。使用されるビヒクル及び濃度に応じて、活性成分は、コロイド状、懸濁状、又はビヒクル中に溶解させることができる。溶液を調製する際には、活性成分を注射用水に溶解し、好適なバイアル又はアンプルに充填して密封する前に濾過滅菌することができる。
【００７２】
有利には、局所麻酔薬、防腐剤、及び緩衝剤などの薬剤をビヒクルに溶解することができる。安定性を高めるために、組成物をバイアルに充填した後に凍結し、水を真空下で除去することができる。次いで、乾燥凍結乾燥粉末をバイアル中に密封し、使用の前に液体を再構成するために付随の注射用水バイアルを供給し得る。
【００７３】
注射用途に好適な本発明の医薬組成物は、無菌水溶液又は分散液を含む。さらに、組成物は、そのような滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末の形態であり得る。全ての場合において、最終注射形態は、無菌でなければならず、容易な注射可能性のために効果的に流動性でなければならない。
【００７４】
非経口懸濁液は、活性成分が溶解される代わりにビヒクルに懸濁され、滅菌が濾過によって達成され得ないことを除いて、溶液と実質的に同じ様式で調製される。無菌ビヒクルに懸濁する前に、活性成分をエチレンオキシドに曝露することによって滅菌することができる。有利には、活性成分の均一な分布を容易にするために界面活性剤又は湿潤剤が組成物中に含まれる。
【００７５】
特に上述した成分に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤の種類を考慮して当技術分野で従来の他の薬剤、例えば経口投与に好適な香味剤を含み得ることを理解されたい。当業者は、好適な製剤を選択する方法及びそれを調製する方法を知っている（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８Ｅｄ又はそれ以降を参照のこと）。当業者はまた、好適な投与経路及び投与量を選択する方法を知っている。
【００７６】
当業者であれば、本発明の化合物の個々の投与量の最適な量及び間隔は、治療される状態の性質及び程度、投与形態、投与経路及び投与部位、ならびに治療されている特定の対象の年齢及び状態によって決定されることを認識し、医師が最終的に使用されるべき適切な投与量を決定することを認識する。この投与量は、必要に応じて何度も繰り返され得る。副作用が発生した場合、通常の臨床診療に従って、投与量及び／又は投与頻度を変更又は低減することができる。
【００７７】
医薬組成物はまた、一方の部分がＧｎＲＨ類似体を含有し、他方の部分が性ホルモンを含有する２部構成の組成物でもあり得る。２つの部分は、例えば２層錠剤として組み合わせてもよく、又はそれらは、例えばカプセル中のペレットとして存在してもよい。ＧｎＲＨ類似体を含有する既知の組成物及び性ホルモンを含有する既知の組成物もまた本発明の方法において使用され得る。
【００７８】
文脈上別段の要求がない限り、本明細書で言及される全ての％値は、％ｗ／ｗである。
【００７９】
配列表
配列表は、ＷＩＰＯ規格ＳＴ．２５に従って調製される。配列表において、化合物１〜６３及びＰ１〜Ｐ２１の非天然アミノ酸は、以下のように対応する天然アミノ酸として表される：
【表４】
2020505378.tif 000024
【００８０】
配列表において、エントリー１〜６３は、化合物１〜６３に対応し、エントリー６４〜７８は、化合物Ｐ１〜Ｐ１５に対応する。エントリー７９及び８０は、野生型ＧｎＲＨ  Ｉ及びＧｎＲＨ  ＩＩに対応する。エントリー８１〜８４は、プライマーに対応する。エントリー８５〜８９は、化合物６４〜６８に対応する。エントリー９０〜９５は、化合物Ｐ１６〜Ｐ２１に対応する。しかしながら、それらが配列表に記載されている、すなわち上記の非天然アミノ酸を含まない、配列番号１〜７８及び８５〜８９の配列は、特許請求されていないが、ＥＰＣのＲ．３０（１）の要件を満たすためにのみ含まれる。
【００８１】
配列表からのフリーテキストの繰り返し
ＷＩＰＯ規格ＳＴ．２５の段落３６を遵守するために、配列表の数値識別子＜２２３＞の下に含まれるフリーテキストは、ここで説明の主要部分において繰り返される：
【表５】
2020505378.tif 000025
【００８２】
定義
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、冠詞の文法上の目的語の１つ又は２つ以上（すなわち少なくとも１つ）を指すために本明細書で使用される。例として、「類似体」は、１つの類似体又は複数の類似体を意味する。
【００８３】
本明細書で使用される場合、用語「イムノヘリン」及び「本発明の化合物」は、交換可能に使用され、式（Ｉ）の化合物を指す。
【００８４】
本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機又は有機の酸又は塩基から形成される従来の塩、ならびに四級アンモニウム酸付加塩を含む。好適な酸塩のより具体的な例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ギ酸、乳酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、パルモック酸、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸ヒドロキシナフトエ酸、ヨウ化水素酸、リンゴ酸、ステアリン酸（Ｓｔｅｒｏｉｃ）、タンニン酸などが挙げられる。シュウ酸などの他の酸は、それ自体は薬学的に許容されないが、本発明の化合物及びそれらの薬学的に許容される塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に有用であり得る。好適な塩基性塩のより具体的な例としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、及びプロカインの塩が挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】漸増濃度のＧｎＲＨ  ＩＩを用いたＴ細胞の刺激後のＭＨＣクラスＩの発現を示す図である。健康なドナーからのＰＢＭＣをＧｎＲＨ  ＩＩ及びＩＬ−２で７２時間刺激した。データ点は、フローサイトメトリーで測定されたＣＤ４＋Ｔ細胞（青色の三角）又はＣＤ８＋Ｔ細胞（黒色の四角）上のＭＣＨクラスＩ発現の平均蛍光強度を表す。
【図２】漸増濃度のＧｎＲＨ  Ｉ類似体（赤色）及びＧｎＲＨ  ＩＩ（黒色）でＴ細胞を刺激した後のＭＨＣクラスＩの発現を示す図である。健康なドナーからのＰＢＭＣをＧｎＲＨ  Ｉ類似体又はＧｎＲＨ  ＩＩ及びＩＬ−２で７２時間刺激した。データ点は、フローサイトメトリーで測定されたＣＤ４＋Ｔ細胞（Ａ）又はＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｂ）上のＭＣＨクラスＩ発現の平均蛍光強度を表す。
【図３】漸増濃度のＧｎＲＨ  Ｉ類似体（赤色）及びＧｎＲＨ  ＩＩ（黒色）でＣＤ４＋ＣＤ１４＋単球を刺激した後のＭＨＣクラスＩの発現を示す図である。健康なドナーからのＣＤ１４＋単球ＰＢＭＣを、ＧｎＲＨ  Ｉ類似体又はＧｎＲＨ  ＩＩ及びＩＬ−２で７２時間刺激した。データ点は、フローサイトメトリーで測定されたＣＤ４＋ＣＤ１４＋単球上のＭＣＨクラスＩ発現の平均蛍光強度を表す。
【図４】定量的リアルタイムＰＣＲで分析したヒトＴ細胞におけるＧｎＲＨ受容体発現を示す図である。棒は、選別されたナイーブＴ細胞（白色の棒）又はメモリーＴ細胞（灰色の棒）におけるＲＮＡポリメラーゼＩＩ発現に対して正規化されたＧｎＲＨＲ  Ｉ又はＧｎＲＨＲ  ＩＩ  ｍＲＮＡの比を表す。ＭＣＦ−７乳癌細胞株（黒色の棒）を陽性対照として使用した。
【図５】予想データ：感染マウスの肺中のマイコバクテリアの数は、テストステロンの存在下又は非存在下で本発明の化合物によって抑制される。コロニー形成単位（ＣＦＵ）は、細菌プレート上で感染マウスからの肺組織の溶解物を増殖させ、コロニーを数えることによって評価される。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
実験的
一般的な生物学的方法
ＧｎＲＨ受容体に対する本発明の化合物の優先的効果は、以下に記載される方法のうちの１つ以上を使用して試験され得る：
【００８７】
Ｉ．Ｔ細胞におけるＧｎＲＨ受容体の発現
ヒトナイーブＴ細胞及びメモリーＴ細胞を蛍光表面マーカー抗体ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、及びＣＤ４で標識し、フローサイトメトリーで分類した。全ＲＮＡをＲｎａｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ）で抽出し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｓｅｌｅｃｔ  ｃＤＮＡ合成キット（Ｂｉｏｒａｄ）で逆転写した。鋳型ｃＤＮＡをＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ）で増幅し、ＣＦＸ９６  ＰＣＲ（Ｂｉｏｒａｄ）で泳動した。Ｉ型ＧｎＲＨ受容体とＩＩ型ＧｎＲＨ受容体ｍＲＮＡとの比は、選別されたナイーブＴ細胞又はメモリーＴ細胞におけるＲＮＡポリメラーゼＩＩ発現に対して正規化された。ＭＣＦ−７乳癌細胞株を陽性対照として使用した。
【００８８】
プライマー配列：
Ｉ型  ＧｎＲＨ受容体
ｆｗｄ  ５’−ｔｇｃ  ｃｔｃ  ｔｔｃ  ａｔｃ  ａｔｃ  ｃｃｔ  ｃｔ−３’
ｒｅｖ  ５’−ｇｃａ  ａａｔ  ｇｃａ  ａｃｃ  ｇｔｃ  ａｔｔ  ｔｔ−３’
ＩＩ型  ＧｎＲＨ受容体
ｆｗｄ  ５’−ａｃｔ  ｇｔｔ  ｃａａ  ｔｇｇ  ｃｔｇ  ｇｃｔ  ｇｔ−３’
ｒｅｖ  ５’−ｇｃｃ  ｃｃｃ  ａｇａ  ａｇｔ  ｔｔｃ  ｃｔｔ  ａｃ−３’
【００８９】
Ｉ．ＧｎＲＨ  Ｉ対ＧｎＲＨ  ＩＩアッセイ
トランスフェクションによってＩ型又はＩＩ型ＧｎＲＨ受容体を発現するように作製した細胞に対して化合物を試験した。細胞を標識ＧｎＲＨ化合物に曝露し、洗浄した後、細胞上の標識を測定することによって評価した。標識を直接的に（放射性同位体標識もしくは蛍光標識）又は間接的に（ビオチン標識ペプチド）測定した。
【００９０】
ＧｎＲＨ化合物によって誘導されるシグナル伝達をそれぞれＩ型  ＧｎＲＨ及びＩＩ型  ＧｎＲＨ受容体を発現する細胞株において測定した。ＧｎＲＨ化合物を、競合アッセイを使用して、Ｉ型ＧｎＲＨ及びＩＩ型ＧｎＲＨ受容体に対するそれぞれの親和性について調べた。それらの効力を確立するＥＤ５０値を評価するために、フローサイトメーターを使用するか又は生細胞画像化顕微鏡法のいずれかを使用してＦｌｕｏ−４−Ｄｉｒｅｃｔで標識した細胞を使用してカルシウム流動を測定した。シグナル伝達はまた、ｐ−ＥＲＫ又はｐ−ＪＮＫに対する抗体を使用したウエスタンブロッティングによっても研究した。
【００９１】
ＬＨ及びＦＳＨの産生に対する細胞活性化の効果を評価し、それを免疫関連機能の刺激と比較するために、化合物の効果を下垂体細胞及びＩＩ型ＧｎＲＨ又はＩ型ＧｎＲＨ受容体のいずれかを発現する免疫細胞について調べた。
【００９２】
ＩＩ．細胞特異的表面マーカーならびにＭＨＣクラスＩＩ及びＭＨＣクラスＩの発現
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール−ハイパック密度遠心分離を用いて健康なドナーから精製した。細胞を、１０％ウシ胎児血清、１００μｇ／ｍＬアンピシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中、３７℃、５％ＣＯ２中で２４〜７２時間培養した。細胞を本発明による化合物で刺激し、フローサイトメトリーを用いて細胞特異的表面マーカー及びＭＨＣクラスＩＩ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎからのモノクローナル抗体）の発現について分析した。
【００９３】
インビトロアッセイにおいてそれらの免疫調節特性について本発明による化合物のセットを試験し、単球上でＭＨＣクラスＩＩ発現を誘導するそれらの能力を評価する。最初に、共培養で既知のＧｎＲＨ類似体を使用し、単球を刺激した。ＭＦＩにおける背景からのＭＨＣクラス発現のわずかな増加が見られ得る。対照的に、本発明による化合物を使用すると、本発明者らは、ＭＨＣクラスＩＩの細胞表面発現のより大きな発現を検出し得る。これが観察である場合、本発明者らは、エンドソーム及びリソソーム経路からのＭＨＣクラスＩＩ及びクラスＩペプチドの代謝回転及び提示の増加を可能にする、ＭＨＣクラスＩＩ発現に対する効果を有する化合物を同定し得る。この発見は、細胞内病原体に由来するペプチドの提示を強化し、ＣＤ４＋ヘルパーＴならびにＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞活性化、増殖を促進し、滅菌免疫を誘導する。
【００９４】
材料
特に明記しない限り、以下の例で使用される全ての試薬は、商業的供給源から得られる。
【００９５】
細胞内細菌に対する本発明の化合物の理論例
材料及び方法
雄マウスは、細菌を含有するエアロゾルの吸入によって結核菌に感染させる。感染量は、マウス１匹あたり１００〜１０００細菌である。ＧｎＲＨＩＩ又はＧｎＲＨＩ関連化合物（単独でもしくはテストステロンと一緒に）又はビヒクルは、いずれかの細菌による感染後、１〜２週間の間適切な用量で適切な経路により投与される。マウスを屠殺し、肺を取り出し、ホモジナイズし、結核菌の増殖を支持する培地を含有する細菌皿上にプレーティングする。３〜４週間のインキュベーション後、３７℃の加熱キャビネット内で、マウスの肺の中の細菌の量をプレート上の細菌コロニーを数えることによって定量する。
【００９６】
予想結果
この実験の予想結果は、対照ビヒクル処置マウスと比較して、ＧｎＲＨ化合物で処置されたマウスにおいて、マウスの肺中の結核菌細菌の量が減少することである。本発明者らはまた、この点でＧｎＲＨＩＩ関連化合物がＧｎＲＨＩ関連化合物よりも優れていると予想する。本発明者らは、テストステロンの同時投与がＧｎＲＨ化合物の効果の程度に影響を与えるとは予想しない。
【００９７】
魅力的効果の測定及びその補償
本発明の化合物によって誘発される去勢、ならびにその任意の補償は、関連性ホルモンの循環レベルの測定によって決定することができる。そのような測定を実行する方法は、当業者に既知である。
【００９８】
一般的な合成方法
方法Ａ
【化６】
2020505378.tif 000026
上記の図表に従って、標準Ｆｍｏｃ固相合成を使用してペプチドを調製した。保護アミノ酸（必要であればＦｍｏｃ及びｔＢｕ又はＴｒｔ）を使用し、合成は、２−クロロトリチルポリスチレン樹脂上で実行した。反応は、Ａ、Ｂ、Ｃの順序で行われ、続いて所望のペプチドを構築するためにＢ及びＣが複数回繰り返される。最終アミノ酸（ピログルタマート−注意、反応Ｃは、アミノ酸がＦｍｏｃ保護されていないがこれを行うために使用される）が添加されると、最後の２つの反応−Ｄ及びＥ−がその順序で行われ、本発明の化合物を生成する。
【００９９】
反応Ａ：樹脂をジクロロメタン（樹脂と比較して１０〜２０容量当量）に懸濁し、室温で撹拌した。ジイソプロピルエチルアミン（６当量）の存在下でＦｍｏｃ保護アミノ酸（２当量）を１当量の樹脂に添加した。反応物を室温で０．５〜１時間撹拌した。樹脂を濾取し、ＤＭＦで６回洗浄した後、次の工程に直接使用した。
【０１００】
反応Ｂ：ジメチルホルムアミド中のピペリジン（２０％）（樹脂と比較して５〜１０容量当量）を室温で処理することによりＦｍｏｃ保護基を除去した。反応物を最大１時間撹拌し、樹脂を濾取し、次いで樹脂をＤＭＦで６回洗浄し、次の工程に直接使用した。
【０１０１】
反応Ｃ：Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（４当量）をＤＭＦに溶解し、ＤＩＰＥＡ（２当量）を添加した。室温で１分間撹拌した後、これらを反応Ｂからの樹脂担持アミノ酸（１当量）に添加し、ＨＢＴＵ（１当量）を添加して処理した。反応物を最大１時間撹拌し、次いで樹脂を濾取し、ＤＭＦで６回洗浄し、次の工程に直接使用した。次の工程は、標的配列に応じて反応Ｂ又は反応Ｄのいずれかであった。
【０１０２】
反応Ｄ：保護ペプチドを、ジクロロメタン中３〜５％トリフルオロ酢酸で処理することにより樹脂から開裂させた。樹脂を濾過により除去し、ペプチドを氷冷ジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離により集めることにより得た。固体をさらなるジエチルエーテル中で洗浄し、次いで真空下で乾燥した後、次の工程で使用した。
【０１０３】
反応Ｅ：反応Ｄからのペプチド（１当量）をＤＭＦに溶解することによりＣ末端アミドを形成し、モノアルキルアミン（２０〜５０当量）及びＨＢＴＵ（２〜３当量）を添加し、反応物を室温で最大３時間撹拌した。反応物を水で希釈し、次いで粗ペプチドを以下に詳述するように精製した。
【０１０４】
方法Ｂ
【化７】
2020505378.tif 000027
上記の図表に従って、標準Ｆｍｏｃ固相合成を使用してペプチドを調製した。保護アミノ酸（必要であればＦｍｏｃ及びｔＢｕ又はＴｒｔ）を使用し、Ｒａｍａｇｅ樹脂上で合成を実行した。反応は、Ａ、Ｂ、Ｃの順序で行われ、続いて所望のペプチドを構築するためにＢ及びＣが複数回繰り返される。最終アミノ酸（ピログルタマート−注意、反応Ｃは、アミノ酸がＦｍｏｃ保護されていないがこれを行うために使用される）が添加されると、最後の２つの反応−Ｄ及びＥ−がその順序で行われ、本発明の化合物を生成する。
【０１０５】
反応Ｆ：Ｆｍｏｃ  Ｒａｍａｇｅ樹脂を、２０％ピペリジンを含有するＤＭＦ（樹脂と比較して５〜１０容量当量）に懸濁する。反応物を室温で最大１時間撹拌し、樹脂を濾取し、ＤＭＦで６回洗浄し、次の反応に直接使用した。
【０１０６】
反応Ｇ：Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（５当量）をＤＭＦに溶解し、ＤＩＰＥＡ（２当量）を添加した。室温で１分間撹拌した後、これらを反応Ｆからの樹脂担持アミノ酸（１当量）に添加し、ＨＢＴＵ（１当量）を添加して処理した。反応物を最大１時間撹拌し、次いで樹脂を濾取し、ＤＭＦで６回洗浄し、次の工程に直接使用した。
【０１０７】
反応Ｈ：ジメチルホルムアミド中のピペリジン（２０％）（樹脂と比較して５〜１０容量当量）を室温で処理することによりＦｍｏｃ保護基を除去した。反応物を最大１時間撹拌し、樹脂を濾取し、次いで樹脂をＤＭＦで６回洗浄し、次の工程に直接使用した。
【０１０８】
反応Ｉ：Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（４当量）をＤＭＦに溶解し、ＤＩＰＥＡ（２当量）を添加した。室温で１分間撹拌した後、これらを反応Ｈからの樹脂担持アミノ酸（１当量）に添加し、ＨＢＴＵ（１当量）を添加して処理した。反応物を最大１時間撹拌し、次いで樹脂を濾取し、ＤＭＦで６回洗浄し、次の工程に直接使用した。次の工程は、標的配列に応じて反応Ｈ又は反応Ｊのいずれかであった。
【０１０９】
反応Ｊ：２．５％の水、２．５％のトリイソプロピルシラン、及び５％のジクロロメタンを含む９０％のトリフルオロ酢酸で処理することによってペプチドを樹脂から開裂させた。樹脂を濾過により除去し、ペプチドを氷冷ジエチルエーテルで沈殿させ、遠心分離により集めることにより得た。次いで粗ペプチドを以下に詳述するように精製した。
【０１１０】
精製
粗ペプチドをアセトニトリル／Ｈ２Ｏ（１：１、ｖ／ｖ）に個々に溶解し、水（０．１％ＴＦＡ）−アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）勾配を使用するＣ１８カラムを用いた分取ＨＰＬＣによって精製した。ペプチドの最終純度は、分析用ＨＰＬＣにより確認した。−２０℃で保存する前にペプチドを凍結乾燥した。
【０１１１】
化合物分析−同一性及び純度
分析方法Ａ
分析のために、化合物をメタノール：水（９：１、０．１ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、１５０μｌ部分をＨＰＬＣ微量バイアルに入れ、１４０００ｒｐｍで３分間遠心分離した。次いで、試料を、ダイオードアレイを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＤＡＤ）及び質量分析（ＨＰＬＣ−ＭＳ）検出によって調査する。ＨＰＬＣ−ＤＡＤ−ＭＳは、Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ単一四重極質量分析計に連結された四次ポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン、及びダイオードアレイ検出器を備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムを使用して実行した。同じ逆相のＷａｔｅｒｓ  Ｘｓｅｌｅｃｔ  ＣＳＨ  Ｃ１８、２．１ｍｍｘ５０ｍｍ、３．５μｍ粒径カラムを全ての化合物に使用し、Ｗａｔｅｒｓ  ＶａｎＧｕａｒｄ  ＣＳＨ  Ｃ１８、２．１ｍｍｘ５ｍｍ、３．５μｍ粒径ガードカラム及びＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ、０．２μｍインラインカラムフィルターを装着した。カラムを６０℃の温度に維持して１ｍｌ／分の流速で使用した。使用した溶媒は、９５％アセトニトリル中の０．１７％ギ酸、５％水中（溶媒Ｂ）及び１０ｍＭギ酸アンモニウム、水中０．２％ギ酸（溶媒Ａ）であり、以下のような勾配であった：０〜０．２分の５％溶媒Ｂ、０．２〜９．３分の５〜５０％溶媒Ｂ、９．３〜９．５分の５０〜９５％溶媒Ｂ、９．５〜１１分の９５％溶媒Ｂ、１１〜１１．０５分の９５〜５％溶媒Ｂ、及び１１．０５〜１１．５分の５％溶媒Ｂとの再平衡化。窒素を補助ガス及びシースガスとして使用した。供給電圧は、３４００Ｖに設定し、コーン電圧は、５０Ｌ／時のガス流、５５０Ｌ／時の乾燥ガス流速、及び３５０℃の乾燥ガス温度で３１Ｖに設定した。
【０１１２】
化合物分析−溶液中の溶解度及び安定性
分析方法Ｂ
溶解度及び安定性分析のために、化合物をリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ、１０ｍＭ、ｐＨ７．４）に溶解し（０．２ｍｇ／ｍｌ）、室温で２０分間振盪した。Ｔ＝０時間の試料を採取し（８０μｌ）、１４０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、次いで上記のように分析方法Ａによって分析した。バルク試料を３７℃のＴｅｃｈｎｅ  Ｒｏｌｌｅｒ−Ｂｌｏｔ  ＨＢ−３Ｄローリングハイブリダイザーに入れ、Ｔ＝４、２４、及び９６時間の時点で試料（８０μｌ）を採取したときにのみ取り出した。試料を１４０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、次いで上記のようにＨＰＬＣ−ＤＡＤ−ＭＳによって分析した。２８０ｎｍでの曲線下のＵＶ面積を各時点で記録した。
【０１１３】
例
例１−化合物合成
本発明の化合物は、一般的な合成方法に記載の方法に従って作製した。
【表６−１】
2020505378.tif 000028
【表６−２】
2020505378.tif 000029
【表６−３】
2020505378.tif 000030
【表６−４】
2020505378.tif 000031
【表６−５】
2020505378.tif 000032
【表７−１】
2020505378.tif 000033
【表７−２】
2020505378.tif 000034
【０１１４】
例２−溶解度分析
本発明の化合物の溶解度を一般的な方法に記載の通りに試験した。次いで、溶解度を１〜５の等級に従って等級付けし、１が最も溶解性が高く、５が最も溶解性が低い。
【表８−１】
2020505378.tif 000035
【表８−２】
2020505378.tif 000036
【０１１５】
例３−安定性解析
水性媒体（ＰＢＳ  ｐｈ７．４）中の本発明の化合物の安定性を、一般的な方法に記載の通りに試験した。次いで、安定性は、ｔ１／２＞９６分が＋として示され、これよりも低い安定性が−として示される等級に従って等級付けした。
【表９−１】
2020505378.tif 000037
【表９−２】
2020505378.tif 000038
【０１１６】
例４−ＧｎＲＨ  Ｒ刺激
ＧｎＲＨＲを刺激する本発明の化合物の能力は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）を用いたカルシウムアッセイを使用することによって評価した。詳細については一般的な方法を参照のこと。次いで活性を１μＭでの刺激百分率として記録した。
【表１０−１】
2020505378.tif 000039
【表１０−２】
2020505378.tif 000040
【０１１７】
参考文献
2020505378.tif 000041
2020505378.tif 000042
2020505378.tif 000043
引用されたすべての参考文献は本願中に参照により組み入れられ、本願には特許及び特許出願が包含される。組み入れられる範囲は、可能な限り最も広範な範囲である。
【図１】
2020505378.tif 000062
【図２Ａ】
2020505378.tif 000063
【図２Ｂ】
2020505378.tif 000064
【図３】
2020505378.tif 000065
【図４】
2020505378.tif 000066
【図５】
2020505378.tif 000067
【配列表】
2020505378000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月7日(2019.2.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）のＧｎＲＨ類似体又はその薬学的に許容される塩：
【化１】
2020505378.tif 000068
式中、
【化２】
2020505378.tif 000069
であり、
式中、Ｒ５＝Ｍｅ、Ｅｔ、ＣＨ２ＣＦ３、ｉＰｒ、ｎＰｒ、ｎＢｕ、ｉＢｕ、ｓＢｕ、ｔＢｕ、シクロプロピルＣＨ２ＣＯＮＨ２又はＮＨＣＯＮＨ２であり、
ヒト又は動物の対象における細胞内細菌、細胞内真菌、又は細胞内原虫感染の治療に使用するためのもの。
【請求項２】
細胞内感染が、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）から選択される、請求項１に記載の使用のためのＧｎＲＨ類似体。
【請求項３】
式（Ｉ）のＧｎＲＨ類似体であって、
【化３】
2020505378.tif 000070
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５が、請求項１に定義された通りであり、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、下記のリストに従ってＩ型から選択され、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４のうちの２つが、下記のリストに従ってＩＩ型から選択され：
【表１】
2020505378.tif 000071
ただし、化合物が以下：
2020505378.tif 000072
のいずれでもない、式（Ｉ）のＧｎＲＨ類似体。
【請求項４】
Ｒ５＝Ｅｔ又はＣＨ２ＣＯＮＨ２である、請求項３に記載のＧｎＲＨ類似体。
【請求項５】
Ｒ５＝Ｍｅ、ｉＰｒ、ｎＰｒ、ｎＢｕ、ｉＢｕ、ｓＢｕ、又はｔＢｕである、請求項３又は４に記載のＧｎＲＨ類似体。
【請求項６】
医薬品に使用するための、請求項３に記載のＧｎＲＨ類似体。
【請求項７】
請求項３〜５のいずれか一項に記載のＧｎＲＨ類似体及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項８】
それを必要とするヒト又は動物の対象に請求項１に記載のＧｎＲＨ類似体の治療有効量を投与することを含む、細胞内細菌、細胞内真菌、又は細胞内原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法。
【請求項９】
それを必要とするヒト又は動物の対象に天然、半合成、又は合成の性ホルモンと組み合わせて、請求項１に記載のＧｎＲＨ類似体の治療有効量を投与することを含む、細胞内細菌、細胞内真菌、又は細胞内原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法。
【請求項１０】
それを必要とする男性又は動物の対象に天然、半合成、又は合成のエストロゲンと組み合わせて、請求項１に記載のＧｎＲＨ類似体の治療有効量を投与することを含み、かつ場合により天然、半合成、又は合成プロゲストゲンをさらに投与することを含む、細胞内細菌、細胞内真菌、又は細胞内原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法。
【請求項１１】
それを必要とする男性又は動物の対象に天然、半合成、又は合成のテストステロンと組み合わせて、請求項１に記載のＧｎＲＨ類似体の治療有効量を投与することを含む、細胞内細菌、細胞内真菌、又は細胞内原虫感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防する方法。
【請求項１２】
細胞内感染が、結核菌、非定型疾患を引き起こすマイコバクテリア、鳥型結核菌及びＭ．イントラセルレア（マイコバクテリウムアビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）−イントラセルレア複合体、又はＭＡＣとしても既知）、Ｍ．カンサシ、Ｍ．マリナム、Ｍ．フォルトゥイタム、Ｍ．ゴルディナエ、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｍ．ゲニタリウム、Ｍ．ホミニス、ウレアプラズマウレアリチカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）、Ｕ．パルブム、クラミドフィラニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、サルモネラチフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、トキソプラズマゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、熱帯熱マラリア原虫、Ｐ．ビバックス、クルーズトリパノソーマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、ヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クリプトコックスネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、及びエンセファリトゾーンクニクリ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ  ｃｕｎｉｃｕｌｉ）から選択される、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【国際調査報告】
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2020505378.tif 000074
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