(57)【要約】  表現型的に同定されたナイーブ、幹細胞記憶、中枢記憶Ｔ細胞、適応ＮＫ細胞、およびＩ型ＮＫＴ細胞のより高い割合またはより高い絶対数を産生する化合物が同定される。改善された効力を有する養子細胞療法のためのＴ、ＮＫ、およびＮＫＴ細胞を含む免疫細胞を調節するための組成物および方法が提供される。【選択図】図１Ａ
2020513243.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫細胞の集団または亜集団、および表１に記載の化合物からなる群から選択される１つ以上の調節剤を含む組成物。
【請求項２】
前記１つ以上の調節剤が、
（ａ）養子細胞療法のための免疫細胞の治療的可能性を改善する；
（ｂ）免疫細胞の細胞増殖、維持、および／または分化特性を改善する；
（ｃ）免疫細胞の細胞増殖、細胞毒性、持続性、サイトカイン応答および分泌、および／または細胞想起応答を改善する；および／または
（ｄ）所望の免疫細胞亜集団の数または比率を増加させる、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
増加した数または比率を有する前記所望の免疫細胞亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞；
（ｂ）Ｉ型ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）適応ＮＫ細胞を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記免疫細胞の集団または亜集団が、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、および／またはＮＫ細胞を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記免疫細胞の集団または亜集団が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離されるかまたはそれらに含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記免疫細胞の集団または亜集団が、
（ａ）健康な対象；または
（ｂ）自己免疫障害、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症または固形腫瘍を有する対象から単離される、請求庫１に記載の組成物。
【請求項７】
前記免疫細胞の集団または亜集団が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換を含む；
（ｂ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外因性核酸を含む；
（ｃ）幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞から分化している；および／または
（ｄ）非造血系の非多能性細胞からトランス分化している、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記幹細胞が人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記前駆細胞が多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換を含む；
（ｂ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むタンパク質をコードする外因性核酸を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
ペプチド、抗体、抗体断片、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、小ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、単核血球、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分または置換因子、および目的の１つ以上のポリ核酸を含むベクターからなる群から選択される１つ以上の添加剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物はＢＣＲ-ＡＢＬチロシンキナーゼ阻害剤、およびＣＡＲ-Ｔ細胞を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記Ｂｃｒ-Ａｂｌ阻害剤が、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、ＰＤ１７３９５５、およびそれらの類似体または誘導体の少なくとも１つを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
Ｂｃｒ-Ａｂｌ阻害剤はＤＣＣ-２０３６を含む、請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
表１に記載の化合物からなる群から選択される１つ以上の調節剤を含む、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物であって、当該１つ以上の調節剤は免疫細胞のエクスビボ調節を介して１つ以上のその亜集団の治療的可能性を改善する、前記組成物。
【請求項１６】
前記薬剤が
（ａ）細胞の増殖、維持および／または分化を調節する；
（ｂ）インビボでの細胞増殖、細胞毒性、サイトカイン応答および分泌、想起、および／または持続性を改善する；
（ｃ）細胞生存率を向上させる；および／または
（ｄ）１つ以上の所望の細胞亜集団の比率、前記免疫細胞、またはその１つ以上の亜集団の比率を増加させる、
請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
増加した比率を有する前記１つ以上の所望の細胞亜集団が、
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞；
（ｂ）Ｉ型ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）適応ＮＫ細胞を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
表１の薬剤の塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体およびプロドラッグからなる群から選択される誘導体または類似体をさらに含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、
（ａ）群Ｉ、ならびに群ＩＩ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および／または群Ｖから選択される１つ以上の調節剤；
（ｂ）群ＩＩ、ならびに群Ｉ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および／または群Ｖから選択される１つ以上の調節剤；
（ｃ）群ＩＩＩ、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＶ、および／または群Ｖから選択される１つ以上の調節剤；
（ｄ）群ＩＶ、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩ、および／または群Ｖから選択される１つ以上の調節剤；または
（ｅ）群Ｖ、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩ、および／または群ＩＶから選択される１つ以上の調節剤から選択される少なくとも１つの薬剤を含む、請求項に１５記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２-ＤＧからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤と表１に記載の化合物からなる群から選択される１つ以上の追加の薬剤を含む組合せを含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２-ＤＧからなる群から選択される２つ以上の薬剤の組み合わせを含み、当該組み合わせは相乗的である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２２】
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ、Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物が、群ＩＩから選択される少なくとも１つの薬剤、および群Ｖから選択される１つ以上の調節剤を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物は  Ｂｃｒ-Ａｂｌ阻害剤を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２５】
前記Ｂｃｒ-Ａｂｌ阻害剤が、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、ＰＤ１７３９５５、およびそれらの類似体または誘導体の少なくとも１つを含む、請求庫２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物がＤＣＣ-２０３６を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
表１に列挙された化合物からなる群から選択される１つ以上の調節剤を含む組成物で調節された免疫細胞の単離された集団を含む組成物であって、調節された細胞集団は、非調節集団と比較して養子細胞療法のための改善された治療的可能性をもつ免疫細胞を含む、前記組成物。
【請求項２８】
前記調節された集団が、１つ以上の調節剤による調節をしていない集団と比較して、
（ａ）  免疫細胞の細胞増殖、維持、分化、および／または脱分化特性の改善；
（ｂ）  免疫細胞の細胞増殖、細胞毒性、持続性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、および／または想起の改善；または
（ｃ）  免疫細胞の１つ以上の所望の亜集団の数または比率の増加を有する免疫細胞を含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
増加した数または比率を有する前記免疫細胞の１つ以上の所望の亜集団が
（ａ）ナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞；
（ｂ）Ｉ型ＮＫＴ細胞；または
（ｃ）適応ＮＫ細胞を含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
免疫細胞の前記単離された集団が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
免疫細胞の前記単離された集団が、
（ａ）健康な対象；または
（ｂ）自己免疫障害、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症または固形腫瘍を有する対象から得られる、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３２】
免疫細胞の前記単離された集団が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む；
（ｂ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外因性核酸を含む；
（ｃ）幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞からインビトロで分化する；または
（ｄ）非造血系統の非多能性細胞からインビトロでトランス分化する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３３】
前記幹細胞が人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記前駆細胞が多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項３２記載の組成物。
【請求項３５】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む；または
（ｂ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６の過剰発現をコードする外因性核酸を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
免疫細胞の前記単離された集団はＢｃｒ-Ａｂｌ阻害剤を含む組成物を用いてエクスビボで調節されたＴ細胞を含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３７】
前記Ｂｃｒ-Ａｂｌ阻害剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５、ならびにそれらの類似体または誘導体の少なくとも一方を含む、請求項２７に記載の組成物、。
【請求項３８】
前記組成物がＤＣＣ-２０３６を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記単離された免疫細胞集団がＣＡＲ-Ｔ細胞を含む、請求項３６に記載の組成物。
【請求項４０】
前記単離された免疫細胞集団が、ＤＣＣ-２０３６またはその類似体もしくは誘導体を含む組成物で調節していないＴ細胞と比較して、
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、およびＣＤ６２Ｌの少なくとも１つにおける遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ-１およびＴｉｍ-３の少なくとも１つにおける遺伝子発現の減少；
（ｃ）中枢記憶Ｔ細胞亜集団の増加；
（ｄ）エフェクターＴ細胞亜集団の減少；
（ｅ）増殖と生存率の改善；および
（ｆ）腫瘍クリアランスおよび持続性能力の改善
のうちの少なくとも１つを有するＴ細胞を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】
前記Ｔ細胞がＣＡＲ-Ｔ細胞である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
調節していないＴ細胞と比較して、
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、およびＣＤ６２Ｌの少なくとも１つにおける遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ-１およびＴｉｍ-３の少なくとも１つにおける遺伝子発現の減少。
（ｃ）中枢記憶Ｔ細胞亜集団の増加；および
（ｄ）エフェクターＴ細胞亜集団の減少
のうちの少なくとも１つを有する単離されたＴ細胞集団を含む組成物。
【請求項４３】
単離されたＴ細胞集団がＣＡＲ-Ｔ細胞を含む、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
前記単離されたＴ細胞集団が、
改善された増殖と生存率；および／または
腫瘍クリアランスおよび持続性における改善された能力を有する、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４５】
免疫細胞の集団を調節する方法であって、
免疫細胞の集団をエクスビボで表１に記載の化合物からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む十分な量の組成物と、非調節細胞と比較して養子細胞療法のための改善された治療的可能性を有する調節された免疫細胞の集団または亜集団を得るのに十分な時間接触させることを含む、前記方法。
【請求項４６】
前記調節された集団が、表１の１つ以上の調節剤と接触していない集団と比較して、
（ａ）増殖、細胞毒性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞想起応答、および／または持続性の改善；
（ｂ）細胞の増殖、維持、分化、および／または脱分化の改善；または
（ｃ）前記免疫細胞の１つ以上の所望の亜集団の数または比率の増加を有する免疫細胞を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
エクスビボで表１の１つ以上の調節剤と接触させた免疫細胞の前記１つ以上の所望  の亜集団を単離することを更に含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記免疫細胞集団が、
（ａ）Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞；
（ｂ）ナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞；
（ｃ）Ｉ型ＮＫＴ細胞；または
（ｄ）適応ＮＫ細胞を含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記免疫細胞集団が、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離されるか、またはそれらに含まれる、請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
前記免疫細胞集団が、
（ａ）健康な対象；または
（ｂ）自己免疫障害、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染症または固形腫瘍を有する対象から単離される、請求項４５に記載の方法。
【請求項５１】
前記免疫細胞集団が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む；
（ｂ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外因性核酸を含む；
（ｃ）幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞から分化している；または
（ｄ）非造血系統の非多能性細胞からトランス分化する、請求項４５に記載の方法。
【請求項５２】
前記幹細胞が人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記前駆細胞が、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、またはＮＫＴ前駆細胞である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞が、
（ａ）ゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む；または
（ｂ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外因性核酸を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
前記免疫細胞を接触させるための組成物が、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５、ならびにそれらの類似体または誘導体の少なくとも１つを含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項５６】
前記免疫細胞を接触させるための組成物がＤＣＣ-２０３６を含む、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
前記免疫細胞がＴ細胞を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記免疫細胞が、ＤＣＣ-２０３６を含む組成物、またはその類似体もしくは誘導体で調節していないＴ細胞と比較して
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、およびＣＤ６２Ｌの少なくとも１つにおける遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ-１およびＴｉｍ-３の少なくとも１つにおける遺伝子発現の減少；
（ｃ）中枢記憶Ｔ細胞亜集団の増加；
（ｄ）エフェクターＴ細胞亜集団の減少；
（ｅ）増殖と生存率の改善；および
（ｆ）腫瘍クリアランスおよび持続性における能力の改善
の少なくとも１つを有するＴ細胞を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記Ｔ細胞がＣＡＲ-Ｔ細胞である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
請求項４５〜５９のいずれか一項に記載の細胞療法のための治療用組成物を製造する方法。
【請求項６１】
請求項４５〜５９のいずれか１項に記載の方法により製造された調節された免疫細胞および薬剤的に許容できる媒体を含む医薬組成物。
【請求項６２】
養子細胞療法に適した対象に組成物を導入することによる、６１の医薬組成物の治療的使用であって、当該細胞療法は自己由来または同種異系であり、当該対象は自己免疫障害、血液悪性腫瘍、固形腫瘍、癌、またはＨＩＶ、ＲＳＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、アデノウイルス、もしくはＢＫポリオーマウイルスに関連する感染症を有する、前記使用。
【請求項６３】
細胞療法用の治療用組成物を製造するための混合物の使用であって、当該混合物が、
（ａ）単離された免疫細胞集団、および
（ｂ）Ｂｃｒ-Ａｂｌ阻害剤を含み、
当該ＢＣＲ-ＡＢＬ阻害剤は（ａ）の細胞を調節することが可能である、前記使用。
【請求項６４】
前記ＢＣＲ-ＡＢＬ阻害剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５、ならびにそれらの類似体または誘導体の少なくとも１つを含む、請求項６３に記載の使用。
【請求項６５】
前記混合物がＤＣＣ-２０３６を含む、請求項６３記載の使用。
【請求項６６】
免疫細胞の前記単離された集団がＴ細胞を含む、請求項６３に記載の使用。
【請求項６７】
調節されると、前記単離された免疫細胞集団が、調節していないＴ細胞と比較して、
（ａ）ＣＤ２７、ＣＣＲ７、およびＣＤ６２Ｌの少なくとも１つにおける遺伝子発現の増加；
（ｂ）ＰＤ-１およびＴｉｍ-３の少なくとも１つにおける遺伝子発現の減少；
（ｃ）中枢記憶Ｔ細胞亜集団の増加；
（ｄ）エフェクターＴ細胞亜集団の減少；
（ｅ）増殖と生存率の改善、および
（ｆ）腫瘍クリアランスおよび持続性における能力の改善
のうちの少なくとも１つを有するＴ細胞を含む、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
前記Ｔ細胞がＣＡＲ-Ｔ細胞である、請求項６６および６７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年１２月５日に出願された米国仮特許出願シリアル番号６２／４３０，２６３号の優先権を主張し、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、養子免疫細胞療法の分野に関するものである。より具体的には、本開示は、養子細胞療法に適した免疫細胞を調節するための小分子の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
養子免疫療法は、一般に、癌、腫瘍、または感染症を有する患者に免疫細胞の投与を含み、それによって投与された免疫細胞は、患者に治療上の利益を提供する。一般的に言えば、免疫療法に適した免疫細胞には、Ｂ細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ（ナチュラルキラーＴ）細胞、および造血幹細胞または前駆細胞が含まれるがこれらに限定されない。患者における完全で永続的な疾患反応を媒介することは、これらの細胞ベースの免疫療法の中心的な目標である。
【０００４】
養子Ｔ細胞療法の有効性の背後にある、ＣＡＲ-Ｔ細胞、ＴＣＲ-Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）、および腫瘍浸潤性Ｔ細胞（ＴＩＬ）を含むこれらに限定されない生物学的メカニズムの考察は、いくつかの背景において、癌の治療における最適な成功のために克服される必要があるかもしれない導入されたＴ細胞ならびに宿主および腫瘍細胞によってもたらされる特定の阻害障壁に関連する特定の属性の重要性を強調する。Ｔ細胞因子のうち、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の結合力、増殖能および生存能、腫瘍部位への移動、および腫瘍内でのエフェクター機能の持続能力は、例えば、ある特定の相関研究からの情報に基づくと、悪性細胞の根絶を引き起こすためのいくつかの状況において重要であり得る。他の複雑な層を追加すると、特定の望ましい属性が認識される一方で、これらの属性に影響を与える経路または要因が完全には明らかにならない可能性があり、このことが、場合によっては特定の治療的使用に対する所望の量および質を有した細胞の取得能を制限するかもしれない。
【０００５】
当技術分野では、改善された治療効果を有する免疫細胞サブセットが必要とされている。量および質の両方において所望のＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞サブセットを増強することができる製造方法は、それらの治療的有効性の有意な増強を提供し得る。そのような必要性に取り組み、そして免疫細胞療法の分野において他の関連する利点を提供する方法および組成物が提供される。
【発明の概要】
【０００６】
一例としてＣＡＲ-Ｔ細胞療法を使用すると、治療組成物は、ＣＡＲ-Ｔの効力および持続性、腫瘍への移動、免疫抑制性腫瘍微小環境、腫瘍の不均一性および患者の安全性に関連するものなどの１つ以上の問題に直面し得る。治療的使用のための特定のＴ細胞サブセットの選択およびＣＡＲのさらなる操作は、腫瘍標的化、ＣＡＲ効力および標的内／腫瘍外の安全性問題を改善するために使用され得る。
【０００７】
追加の方法、例えば、エフェクター細胞の治療効果を増強すること、および／または投与後に操作されたエフェクター細胞の持続性および／または遊走を改善することができるものもまた必要とされる。例えば、所望の免疫細胞サブセットを維持および拡大するために有用な組成物および方法だけでなく、拡大中の細胞分化を減少させるために有用なもの、ならびに、より分化していない表現型の細胞（または操作された細胞）、および／または、例えば様々な養子免疫療法の状況において１つ以上の治療結果を増大し持続させる、および／または改善するより大きな能力を有するような１つ以上の所望の免疫細胞サブセットを含有する、または濃縮した細胞、あるいは、操作された細胞若しくは治療用細胞が濃縮された細胞を有した、または濃縮した治療用組成物を生成するのに有用なものの需要がある。提供される実施形態の中には、そのような必要性に対処するものがある。
【０００８】
ＮＫ細胞に基づく療法の文脈において、さらなる方法および組成物が必要とされる。ナチュラルキラー細胞は、一般的に、比較的短命であり、刺激への二次曝露に応答して最小の変化を示す、すなわち限られた標的記憶応答を示すことを特徴とする自然免疫細胞として分類される。しかしながら、活性化および抑制性ＮＫ細胞受容体の両方が、自己寛容性および持続性ＮＫ細胞活性などにおいて重要な役割を果たすことがある。状況によっては、ＮＫ細胞はすぐに周囲の環境に適応し、抗原特異的な免疫学的記憶を構築することができ、これは同様の抗原への二次曝露に応答するための基本である。例えば、適応ＮＫ細胞または記憶ＮＫ細胞と呼ばれてもよいＮＫ細胞の亜集団は、より長い寿命であり、そして初期露光エラー! ブックマークが定義されていません。２０１３）。そのような特性を有する細胞について富化された組成物を強化または提供することは、標準的なＮＫ細胞と比較して、より有効な細胞療法戦略をもたらし得る。インビボで耐久性のある抗原特異的認識を媒介する適応／記憶ＮＫ細胞を拡大および維持することは、ＮＫ細胞に基づく養子免疫療法を改善するための鍵となるだろう。提供される実施形態の中には、そのような必要性に対処するものがある。
【０００９】
さらに、Ｔ細胞およびＮＫ細胞と同様に、先天的および適応的免疫系の両方において役割を果たす、より有効なＮＫＴ細胞、細胞療法を改善する調節の標的となり得る一種のＣＤ１ｄ拘束性Ｔ細胞を単離するための改良がなされ得ると考えられる。
【００１０】
いくつかの実施形態における本発明は、養子免疫療法に対するそれらの治療的可能性を改善するために免疫細胞の１つ以上の集団または亜集団を調節するための組成物および方法を提供する。本発明の実施形態の目的は、例えば、より良い免疫療法的結果をもたらすと期待される以下の性質、すなわち遊走、ホーミング、細胞毒性、維持、拡大、持続性、寿命および所望の分化状態のうちの少なくとも１つにおいて改善を示す細胞の亜集団の数または比率を増加させることによって治療用免疫細胞の増殖、持続性、細胞毒性、および／または細胞想起／記憶を改善するための単独または組み合わせの１種以上の化合物を提供することである。
【００１１】
本発明の一態様は、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物を提供し、その組成物は表１に列挙される化合物、すなわちドルソモルフィン；ヘプテリジン酸；１-ピロリジンカルボジチオ酸、アンモニウム塩；２-デオキシグルコース（２-ＤＧ）；ＧＳＫ３β阻害剤；Ｒｈｏキナーゼ阻害剤；ＭＥＫ阻害剤；ＰＤＫ１アゴニスト；ＴＧＦβ阻害剤；６-メルカプトプリン；ＡＣ-９３２５３ヨウ化物；チラトリコール；ＰＩ-１０３；；フルベストラント；タプシガルギン；ＳＵ４３１２；テルミサルタン；シクロスポリンＡ；１、３、５-トリス（４-ヒドロキシフェニル）-４-プロピル-１Ｈ-ピラゾール；ＢＡＹ６１-３６０６；プロトポルフィリンＩＸ二ナトリウム；ラパマイシン；ＨＳ１７３；ＬＹ２９４００２；ピクチリシブ；ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）；５-アザシチジン；フルダラビン；ロスコビチン、（Ｓ）-異性体；ＰＡＣ-１；８-キノリノール、５，７-ジクロロ-；ニトロフラントイン；８-キノリノール、５-クロロ-７-ヨード-；２-ナフタセンカルボキサミド、７-クロロ-４-（ジメチルアミノ）-１，４，４ａ、５，５ａ、６，１１，１２ａ-オクタフ；ニフロキサジド；トスフロキサシン塩酸塩；セルトラリン；ジエチレントリアミン五酢酸、ペンタナトリウム；塩化エドロフォニウム；ＢＩＸ０１２９４；テルフェナジン；ｄｍＰＧＥ２からなる群から選択される１種以上の調節剤を含む。表１に列挙した化合物からなる群から選択される１つ以上の調節剤は、免疫細胞と接触すると、免疫細胞またはその１つ以上の亜集団の治療的可能性を改善する。いくつかの実施形態では、免疫細胞の調節はエクスビボである。いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、表１の化合物、またはそれらの塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、およびプロドラッグの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、表１に列挙される１つ以上の調節剤は、細胞増殖、維持および／または分化を調節し、それによって免疫細胞またはその１つ以上の亜集団の増殖、細胞毒性、サイトカイン応答および分泌、細胞想起応答、および／または持続性を改善する。一の実施形態では、表１に列挙された一つ以上の調節剤は、エクスビボおよびインビボの両方で免疫細胞またはその１つ以上の亜集団の細胞生存率を向上させる。一実施形態では、表１に列挙されている１つ以上の調節剤は、免疫細胞の１つ以上の所望の細胞亜集団の数または比率を増加させる。いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、調節剤はＤＣＣ-２０３６を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞を含むがこれらに限定されない免疫細胞の集団または亜集団の治療効果を改善するための本明細書中の１つ以上の選択された薬剤を提供する。いくつかの実施形態では、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の調節剤による処理を受けた免疫細胞はＴ細胞を含み、したがって、１つ以上の所望の細胞亜集団は増加した数または相対比を有するが、ナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中心記憶Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、薬剤を用いた治療に供される免疫細胞はＮＫＴ細胞を含み、したがって、１つ以上の所望の細胞亜集団は増加した数または相対比を有するがＩ型ＮＫＴ細胞を含む。いくつかの他の実施形態では、薬剤を用いた治療に供される免疫細胞はＮＫ細胞を含み、１つ以上の所望の細胞亜集団は増加した数または相対比を有するが適応ＮＫ細胞を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、表１に列挙された化合物からなる群から選択される１つ以上の調節剤を含む組成物は、表１の薬剤の塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体、およびプロドラッグからなる群から選択されたそれらの誘導体、類似体、又は薬剤的に許容できる塩を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、調節剤はＤＣＣ-２０３６を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態では、免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群Ｉから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群ＩＩ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および／または群Ｖから選択される１つ以上の調節剤を含む
【００１６】
群Ｉは、ドルソモルフィン、ヘプテリジン酸、１-ピロリジンカルボジチオ酸、および２-ＤＧを含む。理論に限定されることなく、群Ｉの薬剤は、他の潜在的な役割の中でもとりわけ、細胞代謝および栄養素感知に影響を与える。
【００１７】
群ＩＩは、ＧＳＫ３β阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、６-メルカプトプリン  ＡＣ-９３２５３ヨウ化物、チラトリコール、ＰＩ-１０３、フルベストラント、タプシガルギン、ＳＵ  ４３１２、Ｕ０１２６、テルミサルタン、シクロスポリンＡ、１，３，５-トリス（４-ヒドロキシフェニル）-４-プロピル-１Ｈ-ピラゾール、ＢＡＹ  ６１-３６０６、プロトポルフィリンＩＸ二ナトリウム、ラパマイシン、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、およびＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）を含む。理論に限定されることなく、他の潜在的な役割の中でも特に、群ＩＩの薬剤は、様々な機能的経路におけるシグナル伝達に影響を与える。
【００１８】
群ＩＩＩは、５-アザシチジン、フルダラビン、ロスコビチン、およびＰＡＣ-１を含む。理論に限定されることなく、他の潜在的な役割の中でも、群ＩＩＩの薬剤は細胞増殖およびアポトーシスに影響を与える。
【００１９】
群ＩＶは、５，７-ジクロロ-８-キノリノール、２-ナフタセンカルボキサミド、７-クロロ-４-（ジメチルアミノ）-１，４，４ａ、５，５ａ、６，１１，１２ａ-オクタフ、ニフロキサジド、およびトスフロキサシン塩酸塩を含む。理論に限定されることなく、他の潜在的な役割の中でも、群ＩＶの薬剤は感染プロセスに関連する細胞特性に影響を与える可能性がある。
【００２０】
群Ｖは、セルトラリン、ジエチレントリアミン五酢酸、エドロホニウムクロリド、ＢＩＸ０１２９４、テルフェナジン、およびｄｍＰＧＥ  ２を含む。理論に限定されないが、他の潜在的な役割の中でも、群Ｖの薬剤は一般に、拡大、維持、細胞分化、および増殖、細胞毒性、細胞想起応答、および／または持続性に関する他の細胞特性に影響を及ぼす。
【００２１】
いくつかの他の実施形態において、免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＩから選択される少なくとも１つの薬剤と、群Ｉ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および／または群Ｖから選択される１つ以上の調節剤とを含む
【００２２】
さらに他の実施形態では、免疫細胞の治療的可能性を向上させるための組成物は、群ＩＩＩから選択される少なくとも１つの薬剤と、群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＶ、および／または群Ｖから選択される１つ以上の調節剤とを含む。
【００２３】
さらに他の実施形態では、免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＶから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩ、および／または群Ｖから選択される１つ以上の調節剤を含む
【００２４】
さらに他の実施形態では、免疫細胞の治療的可能性を向上させるための組成物は、群Ｖから選択される少なくとも１つの薬剤と、群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩ、および／または群ＩＶから選択される１つ以上の調節剤とを含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、調節剤はＤＣＣ-２０３６を含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２-ＤＧからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤と、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５のうちの少なくとも１つを含む、表１に記載の化合物からなる群から選択される１つ以上の追加の薬剤を含む組み合わせを含む。いくつかの特定の実施形態において、組成物は、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２-ＤＧからなる群から選択される２つ以上の薬剤の相乗的組み合わせを含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、表１に列挙される化合物からなる群から選択される１つ以上の調節剤を含む組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ、Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒をさらに含む。
【００２７】
本発明の別の態様は、免疫細胞の集団または亜集団、および表１に列挙されている化合物からなる群から選択される１つ以上の調節剤を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、調節剤はＤＣＣ-２０３６を含む。いくつかの実施形態において、免疫細胞の集団または亜集団は、そのような非接触の免疫細胞と比較して養子細胞療法のための免疫細胞の治療的可能性を改善するために、１つ以上の前記調節剤と接触される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、同じ処置をしていない免疫細胞と比較して、細胞増殖、維持、分化、および／または生存率を改善するために、１つ以上の調節剤と接触される。さらにいくつかの他の実施形態では、免疫細胞を１つ以上の前記調節剤と接触させて、同じ処置をしていない免疫細胞と比較して細胞増殖、細胞毒性、持続性、および／または想起を改善させる。
【００２８】
いくつかの実施形態では、１つ以上の前記調節剤と接触させた免疫細胞は、同じ処置をしていない免疫細胞と比較して、免疫細胞の所望の亜集団の数または相対比が増加する。いくつかの態様において、免疫細胞はＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞を含む。一実施形態では、組成物はＴ細胞の集団を含み、したがって薬剤と接触した後の免疫細胞の所望の亜集団がナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、組成物はＮＫＴ細胞の集団を含み、したがって薬剤と接触した後の免疫細胞の所望の亜集団がＩ型ＮＫＴ細胞を含む。さらにいくつかの他の実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞の集団を含み、したがって薬剤と接触した後の免疫細胞の所望の亜集団が適応ＮＫ細胞を含む。他の実施形態では、適応ＮＫ細胞は、ＣＤ５７＋含と、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ-２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、低ＣＤ４５ＲＡのうちの少なくとも１つを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、組成物の免疫細胞の集団または亜集団は、対象の末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍から単離されるかまたはそれらに含まれる。対象は健康であり得、自己免疫障害、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染または固形腫瘍を有し得るか、または以前に遺伝子改変免疫細胞を投与されたことがあり得る。いくつかの実施形態において、対象は、ＣＭＶ血清反応陽性であり得る。いくつかの他の実施形態では、調節のために単離された免疫細胞は、遺伝子改変されている（遺伝子改変されているか、または再配列、突然変異、遺伝子インプリンティングおよび／または後成的改変から自然に誘導されている）。いくつかの実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝的に改変された様式を含む。いくつかの実施形態では、単離された免疫細胞集団はゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６もしくはその変異体の過剰発現をコードする外因性核酸を含む。そのように、遺伝子改変免疫細胞は、開示されているような本組成物および方法を用いてエクスビボ調節のために単離される。いくつかの実施形態では、調節後、被験体から単離された遺伝子改変免疫細胞を同じドナーまたは異なる患者に投与することができる。
【００３０】
さらに別の実施形態では、免疫細胞はインビトロで幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞から分化する。またはインビトロで造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換される。いくつかの実施形態では、組成物の免疫細胞はゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換（置換またはインデル）を含む。いくつかの実施形態では、組成物の免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外因性核酸を含む。いくつかの実施形態では、被験体の組織から単離された免疫細胞は遺伝子操作されており、そしてＴＣＲまたはＣＡＲを含み得る。いくつかの態様において、組織または対象から単離された免疫細胞はＣＡＲ-Ｔ細胞である。
【００３１】
さらにいくつかの他の実施形態では、組成物の免疫細胞はインビトロで幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞から分化する。一実施形態では、幹細胞は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である。一の実施形態では、前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、又はＮＫＴ前駆細胞である。いくつかの実施形態では、幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞はゲノム操作されており、挿入、欠失、もしくは核酸置換を含むか、または少なくとも１つの遺伝子改変様式を含む。特定の一実施形態では、幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６の過剰発現をコードする外因性核酸を含む。いくつかの他の実施形態では、組成物の免疫細胞は、造血系または非造血系の非多能性細胞からインビトロでトランス分化する。いくつかの実施形態において、調節後の免疫細胞の所望の亜集団は、少なくとも１つの遺伝的に改変された様式を有する免疫細胞を含む。いくつかの実施形態において、遺伝子組み換え様式は以下、安全スイッチタンパク質、ターゲティング様式、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬学的活性タンパク質およびペプチド、薬剤標的候補者；または免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、生存率、自己複製、持続性、免疫反応制御および調節、および／または生存を促進するタンパク質のうちから少なくとも１つを含む。いくつかの他の実施形態では、遺伝的に改変された様式は、（ｉ）染色体６ｐ２１領域におけるＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および任意のＨＬＡ遺伝子の欠失または発現低下、および（ｉｉ）ＨＬＡ-Ｅ、ＨＬＡ-Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または二重もしくは多重特異的または普遍的なエンゲージャーとの結合のための表面誘発受容体の発現の導入または増加のうちの１つ以上を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、免疫細胞および１つ以上の前記調節剤を含む組成物は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、小ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血球、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分または置換因子、目的の１つ以上のポリ核酸を含むベクター；抗体または抗体断片；および化学療法剤、放射性部分または免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１つ以上の付加的な薬剤または他の添加剤／薬剤をさらに含む。これらの実施形態のいくつかにおいて、抗体または抗体断片はウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、抗体または抗体断片は腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、追加の添加剤は、化学療法剤、放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）のうちの１つ以上を含む。化学療法剤は、細胞毒性抗腫瘍薬を指し、すなわち、新生細胞を優先的に死滅させる、または急速に増殖する細胞の細胞周期を破壊する、または幹癌細胞を根絶することが見い出される、そして新生細胞の増殖を防止または抑制するために治療的に用いられる化学薬品である。化学療法剤はまた、抗腫瘍薬または細胞毒性薬または薬剤とも呼ばれ、そして当該分野において周知である。
【００３３】
特定の一実施形態では、組成物は、免疫細胞の集団もしくは亜集団と、（ｉ）表１の化合物またはそれらの塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体およびプロドラッグの少なくとも１つ、または（ｉｉ）ＧＳＫ３β阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、およびラパマイシンのうちの少なくとも１つを含む１つ以上の調節剤との混合物を含み、ここで免疫細胞はＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、調節剤はＤＣＣ-２０３６を含む。
【００３４】
別の実施形態では、免疫細胞の集団または亜集団と１つ以上の前記調節剤との混合物を含む組成物は、ペプチド、抗体、抗体断片、サイトカイン、マイトジェン、増殖因子、小ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、単核血球、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分または置換因子、目的の１つ以上のポリ核酸を含むベクター、化学療法剤または放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１つ以上の添加剤をさらに含む。さらに別の実施形態では、免疫細胞の集団または亜集団と１つ以上の前記調節剤との混合物を含む組成物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ、Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノールおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの有機溶媒も含む一実施形態では、組成物中の免疫細胞の集団または亜集団はＴ細胞を含む。いくつかの態様において、細胞集団中のＴ細胞はＣＡＲ-Ｔ細胞を含む。
【００３５】
いくつかの局面において、表１に列挙される化合物からなる群より選択される１つ以上の調節剤を含む組成物と接触した調節された免疫細胞の集団を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、調節された免疫細胞は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５を含む１つ以上の調節剤と接触されている。いくつかの態様において、調節された免疫細胞はＤＣＣ-２０３６と接触されている。いくつかの実施形態では、提供される組成物は、Ｔ、ＮＫ、およびＮＫＴ細胞を含むがこれらに限定されない、調節された免疫細胞の集団または亜集団を有する治療用組成物である。いくつかの実施形態では、治療用組成物は調節剤を実質的に含まない緩衝液で洗浄することができる。
【００３６】
いくつかの実施形態において、調節された細胞集団は、調節されていない細胞集団と比較して養子細胞療法のための改善された治療的可能性を有する免疫細胞を含む。いくつかの実施形態では、単離された免疫細胞集団は、１つ以上の調節剤による処理を受けない免疫細胞と比較して、細胞増殖、維持、分化、脱分化、および／または生存率が向上している。いくつかの態様において、単離された免疫細胞集団は、１つ以上の調節剤による処理をしていない免疫細胞と比較して、そしてそうでなければ、１つ以上の調節剤などを含まないが類似した条件下でインキュベートまたは処理された、いくつかの態様において、細胞増殖、細胞毒性、サイトカイン応答および分泌、細胞想起応答、ならびに持続性を改善している。いくつかの他の実施形態では、単離された免疫細胞集団は、同じ処理をしていない免疫細胞と比較して、免疫細胞の１つ以上の所望の亜集団の数または相対比が増加している。
【００３７】
いくつかの実施形態では、表１に記載の化合物からなる群から選択される１種以上の前記調節剤で処理された単離された免疫細胞集団はＴ細胞を含み、したがって免疫細胞の取得された１つ以上の所望の亜集団がナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤で処理された免疫細胞の単離された集団は、ＮＫＴ細胞を含み、したがって得られた免疫細胞の１つ以上の望ましい亜集団はＩ型ＮＫＴ細胞を含む。さらにいくつかの他の実施形態において、１つ以上の調節剤で処理された免疫細胞の単離された集団は、ＮＫ細胞を含み、したがって免疫細胞の１つ以上の所望の亜集団は適応ＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態において、調節された免疫細胞は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブを含む１つ以上の調節剤と接触されている（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５を含む１つ以上の調節剤と接触されている。いくつかの態様において、調節された免疫細胞はＤＣＣ-２０３６と接触されている。
【００３８】
提供される組成物のいくつかの実施形態では、単離された免疫細胞集団は、対象の末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、または腫瘍から単離されてもよい。対象は健康であり得、自己免疫障害、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染または固形腫瘍を有し得るか、または以前に遺伝子改変免疫細胞を投与されたことがあり得る。いくつかの実施形態において、対象は、ＣＭＶ血清反応陽性であり得る。いくつかの他の実施形態では、調節のために単離された免疫細胞は、遺伝子改変されている（遺伝子改変されているか、または再配列、突然変異、遺伝子インプリンティングおよび／または後成的改変から自然に誘導されている）。いくつかの実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝的に改変された様式を含む。いくつかの実施形態では、単離された免疫細胞集団はゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの特定の実施形態において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６もしくはその変異体の過剰発現をコードする外因性核酸を含む。そのように、遺伝子改変免疫細胞は、開示されているような本組成物および方法を用いてエクスビボ調節のために単離される。いくつかの実施形態では、調節後、被験体から単離された遺伝子改変免疫細胞を同じドナーまたは異なる患者に投与することができる。いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団は、薬剤による治療の前に単離されてもよい。いくつかの実施形態では、単離された免疫細胞集団はゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの特定の態様において、免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外因性核酸を含む。
【００３９】
提供される組成物のいくつかの実施形態において、単離された免疫細胞集団は、幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞から分化させることができる。いくつかの実施形態では、単離された免疫細胞集団は、薬剤による治療の前または最中に幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞から分化させることができる。いくつかの実施形態では、幹細胞は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）である。いくつかの実施形態では、前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、又はＮＫＴ前駆細胞である。いくつかのさらなる実施形態では、幹細胞、造血幹細胞または前駆細胞、前駆体、調節のための誘導免疫細胞、または調節された誘導免疫細胞は、例えば挿入、欠失、および／または核酸置換を含むようにゲノム工学的に操作される。特定の一実施形態では、幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６の過剰発現をコードする外因性核酸を含む。
【００４０】
提供される組成物のいくつかの他の実施形態において、単離された免疫細胞集団は、造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換されてもよい。いくつかの実施形態では、単離された免疫細胞集団は、薬剤による治療の前またはその間に、造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換されてもよい。
【００４１】
本発明の一態様は、養子療法のために免疫細胞の集団を調節する方法を提供し、この方法は、一般に、表１の薬剤に接触していない非調節免疫細胞と比較して養子細胞療法のための改善された治療的可能性を有する調節免疫細胞集団を得るため、免疫細胞の集団を表１に記載の１つ以上の調節剤を含む組成物の十分な量と接触させて集団を得ることを含む。いくつかの実施形態において、養子療法のための調節された免疫細胞は自己由来である。いくつかの実施形態において、養子療法のための調節された免疫細胞は同種異系である。いくつかの実施形態において、調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、調節剤はＤＣＣ-２０３６を含む。
【００４２】
本方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞の集団を１つ以上の調節剤と接触させることは、表１の１つ以上の前記調節剤による処置をしていない免疫細胞と比較して、増殖、細胞傷害性、サイトカイン応答、サイトカイン放出、細胞想起応答、および／または持続性を改善する；および／または細胞増殖、維持、分化、脱分化、および／または生存率を改善する。本方法のいくつかの実施形態において、免疫細胞の集団を表１の１つ以上の前記調節剤と接触させることは、同じ１つ以上の調整剤による処置をしていない免疫細胞と比較して、免疫細胞の１つ以上の所望の亜集団の数または比率を増加させる。いくつかの実施形態において、上記の方法は、表１の１つ以上の前記調節剤と接触させた免疫細胞の１つ以上の所望の亜集団を単離することをさらに含む。いくつかの実施形態において、調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、調節剤はＤＣＣ-２０３６を含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、上記方法は、処理された免疫細胞の集団もしくは亜集団、または処理された免疫細胞の単離された１つ以上の所望の亜集団、またはその治療用組成物を細胞療法を必要とする対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、対象は自己免疫障害、血液悪性腫瘍、充実性腫瘍、または感染症を患っている。いくつかの実施形態では、対象は化学療法または放射線療法を受けた、受けている、または化学療法または放射線療法で治療される。
【００４４】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団はＴ細胞、ＮＫＴ細胞、またはＮＫ細胞を含む。本方法の一実施形態では、免疫細胞の集団はＴ細胞を含み、治療後の１つ以上の所望の亜集団はナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞を含む。この方法の一実施形態では、免疫細胞の集団はＮＫＴ細胞を含み、治療後の１つ以上の所望の亜集団はＩ型ＮＫＴ細胞を含む。この方法の一実施形態では、免疫細胞の集団はＮＫ細胞を含み、治療後の１つ以上の所望の亜集団は適応ＮＫ細胞を含む。
【００４５】
前記一般的方法のいくつかの実施形態において、調節のための免疫細胞は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織または腫瘍から単離されるかまたはそれらに含まれる。いくつかの実施形態では、調節用の免疫細胞は健康な対象；自己免疫障害、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染または固形腫瘍を有する対象；以前に遺伝子改変免疫細胞を投与された対象；またはＣＭＶ血清反応陽性の対象から単離される。いくつかの他の実施形態では、調節のために単離された免疫細胞は、遺伝子改変されている（遺伝子改変されているか、または再配列、突然変異、遺伝子インプリンティングおよび／または後成的改変から自然に誘導されている）。いくつかの実施形態において、調節のための単離された免疫細胞は、少なくとも１つの遺伝的に改変された様式、）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６もしくはその変異体の過剰発現を含む。そのように、いくつかの態様において、ゲノム改変免疫細胞は、開示の本組成物および方法を用いてエクスビボ調節のために単離される。いくつかの実施形態では、調節後、対象から単離されたゲノム改変免疫細胞は、同じドナーまたは異なる患者に投与され得る。
【００４６】
いくつかの実施形態において、調節のための免疫細胞は、インビトロで幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞から分化する。いくつかの実施形態において、調節のための免疫細胞は、インビトロで造血系または非造血系の非多能性細胞から分化転換される。いくつかの実施形態において、前記幹細胞は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）または胚性幹細胞（ＥＳＣ）を含む。いくつかの実施形態では、前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ前駆細胞、又はＮＫＴ前駆細胞である。さらにいくつかの他の実施形態では、幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞はゲノム操作されており、挿入、欠失、または核酸置換を含み、かつ／または少なくとも１つの遺伝子改変様式を含む。それ自体、それに由来する調節された免疫細胞の所望の亜集団は、少なくとも１つの遺伝的に改変された様式を有する免疫細胞を含む。
【００４７】
いくつかの実施形態において、前記遺伝子組み換え様式は、以下、すなわち安全スイッチタンパク質、ターゲティング様式、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬学的活性タンパク質およびペプチド、薬剤標的候補者；または免疫細胞の生着、輸送、ホーミング、生存率、自己複製、持続性、免疫反応制御および調節、および／または生存を促進するタンパク質のうちから少なくとも１つを含む。いくつかの他の実施形態では、遺伝的に改変された様式は、染色体６ｐ２１領域におけるＢ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および任意のＨＬＡ遺伝子の１つ以上の欠失または発現低下を含む。いくつかの他の実施形態では、遺伝的に改変された様式は、ＨＬＡ-Ｅ、ＨＬＡ-Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または二重もしくは多重特異的または普遍的なエンゲージャーとの結合のための表面誘発受容体の発現の導入または増加のうちの１つ以上を含む。
【００４８】
免疫細胞を調節する方法のいくつかの実施形態において、前記「十分な時間」または「十分な時間の長さ」は、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、２時間である。１時間、０．５時間、０．１時間以上、またはその間の任意の長さである。したがって、前記十分な時間の長さは、例えば、少なくとも１５、１３、１１、９、７、５、３、１、０．５、または０．１時間以上である。方法のいくつかの他の実施形態では、前記十分な時間の長さは、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間以上、またはその間の任意の長さの時間である。そのように、前記十分な時間の長さは、例えば、３０、４２、５４、６６、７８、または９０時間以上である。
【００４９】
前記方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、調節中および／または調節後に、フィーダーを含まない環境にある。フィーダーを含まない条件は、フィーダー細胞を含まない、およびフィーダー馴化培地を含まない、を含む。前記方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、調節中に、フィーダー細胞と共培養される。
【００５０】
いくつかの実施形態では、対象は養子細胞移入の候補者となりうる。いくつかの実施形態では、対象は骨髄または幹細胞移植の候補者であり得る。いくつかの実施形態では、対象は以前に骨髄または幹細胞移植を受けている。いくつかの実施形態では、対象は、骨髄切除または非骨髄破壊化学療法または放射線療法を受けている。
【００５１】
本発明の態様は、免疫細胞の集団を調節するための上記の方法のいずれかによる細胞療法のための治療用組成物を製造する方法を提供する。
【００５２】
本発明の態様は、細胞療法のための調節された免疫細胞を含む治療用組成物を製造するための上記の免疫細胞調節方法の使用を提供する。いくつかの実施形態において、調節された免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および／またはＮＫＴ細胞を含む。いくつかの実施形態では、調節されたＮＫ細胞は適応ＮＫ細胞を含む。本発明のさらなる態様は、本明細書に提供される方法によって作製された選択的に増殖したＮＫ細胞を含む調節された免疫細胞の集団を提供する。
【００５３】
いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に開示される方法および組成物を用いて得られた調節細胞と治療上許容される媒体とを含む治療組成物を提供する。治療用組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、小ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血球、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分または置換因子、目的の１つ以上のポリ核酸を含むベクター，抗体，化学療法剤または放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）からなる群から選択される１つ以上の追加の添加剤をさらに含む。
【００５４】
いくつかの実施形態において、養子細胞療法を必要とする対象に治療上十分な量の上記治療用組成物を投与することによって対象を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞療法は自己由来である。いくつかの他の実施形態では、細胞療法は同種異系である。いくつかの実施形態では、治療を必要とする対象は、自己免疫障害、血液悪性腫瘍、固形腫瘍、癌、またはＨＩＶ、ＲＳＶ、ＥＢＶ、ＣＭＶ、アデノウイルスもしくはＢＫポリオーマウイルスに関連する感染症を有する。いくつかの実施形態では、調節された免疫細胞を使用して対象を治療する方法は、抗体、化学療法薬、または放射性治療と組み合わせて前記治療用組成物を投与することによって行われ、ここでは抗体、化学療法剤、または放射線治療は治療用組成物の投与前、投与と同時または投与後である。
【００５５】
この使用の様々な目的および利点は、例示および例として本発明の特定の実施形態として記載されている添付の図面と併せて、以下の説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１Ａ】図１は、（Ａ）生存ＣＤ８＋細胞集団および（Ｂ）生存ＣＤ４＋細胞集団におけるＣＣＲ７とＣＤ６２Ｌ共発現細胞パーセンテージのＺスコアおよびＣＣＲ７とＣＤ６２二重陽性Ｔ細胞絶対数のＺスコアのグラフ表示である。
【図１Ｂ】同上。
【００５７】
【図２】図２は、研究に用いた様々なＣＡＲ構築物を示す。
【００５８】
【図３−１】図３は、ＤＣＣ-２０３６は、（Ａ）ＣＡＲ-Ｔ細胞の生存性維持；（Ｂ）ＣＡＲ-Ｔ細胞の拡大強化が可能であることを示す。ＤＣＣ-２０３６がビヒクルと比較してＣＡＲ-Ｔ細胞の細胞拡大を改善することを示すために連続再刺激アッセイを行った。（Ｃ）照射された標的細胞を用いた４ラウンドの連続殺傷アッセイのラウンドごとの相対増殖；（Ｄ）連続殺傷アッセイの４ラウンド全体を通したＣＡＲ-Ｔ細胞数の総増殖。
【図３−２】同上。
【００５９】
【図４】図４は、化合物処理後のＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型の特徴付けを示す。Ａ：ＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋表面発現を有するＴ細胞サブセット。Ｂ：Ｔｃｍ表現型を反映するＣＤ２７発現レベル。
【００６０】
【図５】図５は、Ｔ細胞分化に関連する遺伝子発現を示し、ＣＤ６２ＬおよびＣＣＲ７を含むいくつかのＴｃｍ関連遺伝子は、ＤＣＣ-２０３６（ＦＴ-６１３１４）処理後に発現が増加した。
【００６１】
【図６】図６は、ＣＡＲ-Ｔ細胞生成中にＤＭＳＯ、ＴＷＳ１１９、ＤＣＣ-２０３６で処理したＣＤ８  ＣＡＲ-Ｔ細胞中での発現の消耗マーカー、ＴＩＭ-３（Ａ）およびＰＤ-１（Ｂ）を示す。
【００６２】
【図７】図７は、ＤＣＣ-２０３６で処理したＣＡＲ-Ｔ細胞の改善されたインビボ有効性を示す。ＤＣＣ-２０３６で処理したＣＡＲ-Ｔ細胞は大多数のマウスから腫瘍を除去することができたが、形質導入されていないＴ細胞、またはＤＭＳＯもしくはＴＷＳ１１９で処理したＣＡＲ-Ｔ細胞は最小の腫瘍制御を示した。
【００６３】
【図８】図８は、（Ａ）ＤＭＳＯ、Ｂ）ＴＷＳ１１９、（Ｃ）ＤＣＣ-２０３６で処理したＣＡＲ-Ｔ細胞のインビボでの腫瘍クリアランスおよび持続性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６４】
Ｔ細胞療法のインビボ有効性は、処理過程または供給原料に入るＴ細胞の開始集団、ならびに利用されるエクスビボ増殖および活性化方法の両方に依存する製造プロセスによって強く影響され得る。投与されたＴ細胞の分化状態は、インビボ持続性および抗腫瘍活性に著しく影響を及ぼし得る。ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌマーカーの発現を特徴とするＴヘルパー（ＣＤ４＋Ｔ細胞）および細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）、具体的にはナイーブ（Ｔｎ）、幹細胞記憶（Ｔｓｃｍ）および中枢記憶（Ｔｃｍ）Ｔ細胞は、マウスモデル（Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒら２０１５）および非ヒト霊長類モデル（Ｂｅｒｇｅｒら、２００８）で優れた抗腫瘍活性を媒介する。
【００６５】
製造工程の間、治療用細胞（または細胞集団）は典型的には活性化され、場合により形質導入されるかまたはそうでなければ組換え受容体を発現するように操作され、そして増殖される。この過程は一般に細胞の分化を促進し、より分化した状態の細胞の割合の増加をもたらす-Ｔ細胞の場合、より分化した細胞は表現型的にエフェクター記憶またはエフェクターＴ細胞として特徴付けられる。一旦患者に注入されると、これらのより分化した細胞は、より分化していない状態の細胞と比較して、増殖能力がより低く、長い寿命または持続した集団として存続する可能性がより低い。
【００６６】
さらに、患者の体内に入る細胞の最終的な状態、具体的には細胞サブタイプは、製造プロセスによって大部分定義され得るので、そのプロセスの重要性を誇張することはできない。細胞の培養および増殖中に所望の分化状態および／または適応免疫細胞特性を有する細胞亜集団を優先的に維持または増殖させることは、細胞に基づく治療の有効性を高めるのに極めて有益であり得る。
【００６７】
改善された細胞製造プロセスは、投与時間の短縮、細胞の均一性の増加、または所望の投与量に達する患者の割合の増加など、複数の潜在的な利点を有する。加えて、持続性の増加および毒性の減少などの製造プロセス中の細胞に対する機能的改善もまた、細胞治療の改善をもたらし得る。
【００６８】
養子免疫療法のための改善された治療能力を有する細胞の集団または亜集団を得るために免疫細胞を調節する組成物および方法が本明細書に提供される。改善された治療的可能性を有する調節された免疫細胞を含む組成物もまた提供される。疾患および状態を治療するための改善された治療能力を有する調節された免疫細胞を使用する方法もまた提供される。いくつかの実施形態では、改善された治療的可能性を有する免疫細胞は、以下、すなわち増殖、生存力、持続性、細胞毒性および／または細胞想起／記憶の向上のうちの少なくとも１つ、または少なくとも２つもしくは少なくとも３つ以上を示す。治療用細胞組成物におけるように、上記の性質のうちの少なくとも１つを示す細胞の数または相対比を増加させるかまたは亜集団を濃縮することによって免疫細胞治療能力を向上させるための方法および組成物も提供される。
【００６９】
定義
【００７０】
本明細書で他に定義されない限り、本出願に関して使用される科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって別段の要求がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【００７１】
本発明は、本明細書に記載された特定の方法論、プロトコル、および試薬などに限定されず、したがって変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、特許請求の範囲によってのみ定義される本発明の範囲を限定することを意図していない。
【００７２】
本明細書で使用するとき、冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、冠詞の文法上の目的語の１つ以上を指す。例として、Ｔ細胞は、１つのＴ細胞または２つ以上のＴ細胞を意味する。
【００７３】
本明細書で使用されるとき、用語「Ｔリンパ球」および「Ｔ細胞」は互換的に使用され、胸腺における成熟を完了し、そして免疫系において、体内での特定の外来抗原の同定、ならびに他の免疫細胞の活性化および失活を含む様々な役割を有する主要タイプの白血球を指す。Ｔ細胞は、培養Ｔ細胞、例えば初代Ｔ細胞、または培養Ｔ細胞株からのＴ細胞、例えばＪｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１など、または哺乳動物から得られるＴ細胞などの任意のＴ細胞であり得る。Ｔ細胞はＣＤ３＋細胞であり得る。Ｔ細胞は、任意の種類のＴ細胞であり得、そして任意の発達段階のものでもよく、限定されないが、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞毒性Ｔ細胞）、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、末梢血白血球（ＰＢＬ）の中にあるＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）の中にあるＴ細胞、記憶Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）を含む。さらなるタイプのヘルパーＴ細胞には、Ｔｈ３、Ｔｈ１７、Ｔｈ９、またはＴｆｈ細胞などの細胞が含まれる。さらなるタイプの記憶Ｔ細胞には、中枢記憶Ｔ細胞（Ｔｃｍ細胞）、エフェクター記憶Ｔ細胞（Ｔｅｍ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞）などの細胞が含まれる。Ｔ細胞はまた、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変されたＴ細胞などの遺伝子操作されたＴ細胞を指すこともできる。Ｔ細胞は幹細胞または前駆細胞から分化することもできる。
【００７４】
本明細書中で使用される場合、用語「ナイーブＴ細胞」またはＴｎは、活性化Ｔ細胞または記憶Ｔ細胞とは異なり、末梢内でそれらの同種抗原に遭遇していない成熟Ｔ細胞を指す。ナイーブＴ細胞は通常、Ｌ-セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）の表面発現、活性化マーカーＣＤ２５、ＣＤ４４またはＣＤ６９の不在、および記憶ＣＤ４５ＲＯアイソフォームの不在を特徴とする。それらはまた、サブユニットＩＬ-７受容体α、ＣＤ１２７、および共通γ鎖、ＣＤ１３２からなる機能的ＩＬ-７受容体を発現する。ナイーブ状態では、Ｔ細胞は静止状態で分裂していないと考えられ、恒常的な生存メカニズムのために共通のガンマ鎖サイトカインＩＬ-７とＩＬ-１５が必要である。
【００７５】
本明細書中で使用される場合、用語「中枢記憶Ｔ細胞」またはＴｃｍは、ＣＤ４５ＲＯおよびＣＤ２５を発現するがＣＤ４５ＲＡを発現しないＴ細胞のサブ群または亜集団をいう。Ｔｃｍはまた、ＣＤ６２Ｌ、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ７を含む二次リンパ器官への輸送に関連する遺伝子も発現し、これらの遺伝子産物の発現を失うエフェクター記憶Ｔ細胞、またはＴｅｍとは異なる。
【００７６】
本明細書中で使用される場合、用語「幹記憶Ｔ細胞」または「幹細胞記憶Ｔ細胞」またはＴｓｃｍは、Ｔｃｍ、ＴｅｍおよびＴｅｆｆ（エフェクターＴ細胞）を自己再生および生成することができるＴ細胞のサブ群または亜集団を指す。Ｔｓｃｍは、Ｔｎと同様の発現パターンを有するが、Ｔｎとは異なり、ＣＤ９５も発現する。
【００７７】
本明細書で使用されるとき、用語「ＮＫ細胞」または「ナチュラルキラー細胞」は、ＣＤ５６またはＣＤ１６の発現およびＴ細胞受容体（ＣＤ３）の非存在によって定義される末梢血リンパ球のサブセットを指す。
【００７８】
本明細書中で使用される場合、用語「適応ＮＫ細胞」および「記憶ＮＫ細胞」は交換可能であり、表現型的にＣＤ３-  およびＣＤ５６＋を発現し、そしてＮＫＧ２ＣおよびＣＤ５７の少なくとも１つ、および任意にＣＤ１６を有するが、以下、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、ＦｃｅＲγ、および低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ-２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡのうちの１つまたは複数を欠くＮＫ細胞のサブセットをいう。いくつかの態様において、ＣＤ５６＋  ＮＫ細胞の単離された亜集団はＮＫＧ２ＣおよびＣＤ５７の発現を含む。いくつかの他の実施形態において、ＣＤ５６＋  ＮＫ細胞の単離された亜集団は、ＣＤ５７、ＣＤ１６、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ５７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＣＲリガンド、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４０、ＮＫｐ４６、活性化および抑制ＫＩＲ、ＮＫＧ２Ａおよび／またはＤＮＡＭ-１の発現を含む。ＣＤ５６＋は弱い発現または強い表現であってもよい。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、用語「ＮＫＴ細胞」または「ナチュラルキラーＴ細胞」は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＣＤ１ｄ拘束性Ｔ細胞を指す。従来の主要組織適合性（ＭＨＣ）分子によって提示されるペプチド抗原を検出する従来のＴ細胞とは異なり、ＮＫＴ細胞は、非古典的ＭＨＣ分子であるＣＤ１ｄによって提示される脂質抗原を認識する。２種類のＮＫＴ細胞が認識されている。不変又はＩ  型  ＮＫＴ細胞の種類は非常に限られたＴＣＲレパートリー-β鎖（ヒトではＶβ１１）の制限スペクトルと関連付けられている    正規のα-鎖（ヒトではＶα２４-Ｊα１８）を発現する。非古典的又は非不変的ＩＩ型  ＮＫＴ細胞とも呼ばれるＮＫＴ細胞の第二集団はより異種ＴＣＲαβ利用を表示する。Ｉ型ＮＫＴ細胞は免疫療法に適していると考えられる。適応又は不変（Ｉ型）ＮＫＴ細胞は、以下のマーカー，ＴＣＲ  Ｖａ２４-Ｊａ１８、ＶＢ１１、ＣＤ１ｄ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ａＧａｌＣｅｒ、ＣＤ１６１及びＣＤ５６のうちの少なくとも１つ以上の発現を同定することができる。
【００８０】
本明細書中で使用される場合、用語「単離された」などは、その元の環境から分離された細胞、または細胞の集団を指し、すなわち単離された細胞の環境は、「分離されていない」標準細胞が存在する環境で見出されるような少なくとも１つの成分を実質的に含まない。この用語は、それがその天然の環境において見いだされるとき、例えば、組織または生検サンプルから単離されるときに、いくつかまたはすべての成分から除去された細胞を含む。この用語はまた、細胞が非自然発生環境で見出される、例えば細胞培養物または細胞懸濁液から単離されるように、少なくとも１つの、いくつかのまたはすべての成分から除去される細胞も含む。したがって、単離された細胞は、それが天然に見られるように、またはそれが非天然環境において増殖、貯蔵または生存するにつれて、他の物質、細胞または細胞集団を含む少なくとも１つの成分から部分的または完全に分離される。単離された細胞の具体例には、部分的に純粋な細胞組成物、実質的に純粋な細胞組成物および天然に存在しない培地中で培養された細胞が含まれる。単離された細胞は、所望の細胞またはその集団を環境中の他の物質または細胞から分離して得られる場合、あるいは環境から１つ以上の他の細胞集団または亜集団を除去することから得られる場合がある。
【００８１】
本明細書で使用されるとき、用語「精製する」などは、純度を高めることを指す。例えば、純度は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％に高めることができる。
【００８２】
本明細書で使用されるとき、用語「集団」は、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞に関して使用されるとき、それぞれ２つ以上のＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞を含む細胞の群をいう。例としてＴ細胞を使用すると、単離された、または濃縮されたＴ細胞集団は、１種類のＴ細胞のみを含んでもよく、または２種類以上のＴ細胞の混合物を含んでもよい。単離されたＴ細胞集団は、１種類のＴ細胞の同種集団または２種類以上のＴ細胞の不均一集団であり得る。単離されたＴ細胞集団はまた、Ｔ細胞および少なくともＴ細胞以外の細胞、例えばＢ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞などを有する不均一集団であり得る。不均一集団は０．０１％〜約１００％のＴ細胞を有することができる。したがって、単離されたＴ細胞集団は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または９９％のＴ細胞を有することができる。単離されたＴ細胞集団は、本明細書に開示されるものを含むがこれらに限定されない、１つ以上の、またはすべての異なるタイプのＴ細胞を含むことができる。２種類以上のＴ細胞を含む単離されたＴ細胞集団において、各種類のＴ細胞の相対比は０．０１％から９９．９９％の範囲であり得る。単離された集団はまた、Ｔ細胞のクローン集団であり得、その集団のすべてのＴ細胞は単一のＴ細胞のクローンである。
【００８３】
Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞の単離された集団は、ヒト末梢血または臍帯血などの天然の供給源から得ることができる。組織または細胞混合物から細胞を解離させて様々な細胞型を分離する様々な方法が当技術分野において開発されている。いくつかの場合において、これらの操作は比較的均質な細胞集団をもたらす。Ｔ細胞は、本明細書中に記載されるようなソーティングまたは選択プロセスによって、または当該分野で公知の他の方法によって単離され得る。単離された集団におけるＴ細胞の割合は、天然供給源におけるＴ細胞の割合より少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％高くてもよい。単離されたＴ細胞集団は、Ｔ細胞全般、または１つもしくは複数の特定の種類のＴ細胞に対するものであり得る。
【００８４】
本明細書中で使用される用語「亜集団」は、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞に関して使用される場合、自然界で見られるそれぞれ全ての種類より少ない種類のＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞を含む集団をいう。
【００８５】
本明細書中で使用される場合、用語「多能性」とは、身体または体細胞のすべての系統（すなわち、胚本体）を形成する細胞の能力をいう。例えば、胚性幹細胞は、３つの胚葉、外胚葉、中胚葉、および内胚葉のそれぞれから細胞を形成することができる一種の多能性幹細胞である。多能性は、完全な生物を生み出すことができない不完全または部分的な多能性細胞（例えば、エピブラスト幹細胞またはＥｐｉＳＣ）から、完全な生命体（例えば、胚性幹細胞）を生み出すことができるより原始的でより多能性の細胞までの範囲の発達能力の連続体である。
【００８６】
本明細書中で使用される場合、用語「人工多能性幹細胞」または「ｉＰＳＣ」とは、３つの胚葉または皮層、すなわち中胚葉、内胚葉、および外胚葉のすべての組織に分化し得る細胞に誘導または変化（すなわち再プログラム化）された分化成人細胞から産生される幹細胞をいう。
【００８７】
本明細書で使用されるとき、用語「胚性幹細胞」は、胚性胚盤胞の内部細胞塊の天然に存在する多能性幹細胞を指す。胚性幹細胞は多能性であり、発生中に３つの一次胚葉：外胚葉、内胚葉および中胚葉の全ての派生物を生じる。それらは、胚体外膜または胎盤には寄与せず、全能性ではない。
【００８８】
本明細書中で使用される場合、用語「前駆細胞」とは、より大きな発生能を有する細胞、すなわち、それが分化によってできる細胞と比較してより原始的（例えば、発生経路または進行に沿った初期段階にある）である細胞表現型を意味する。多くの場合、前駆細胞は有意なまたは非常に高い増殖能力を有する。前駆細胞は、発生経路および細胞が発生し分化する環境に応じて、より低い発生能を有する複数の異なる細胞、すなわち分化細胞型、または単一の分化細胞型を生じ得る。
【００８９】
本明細書中で使用される場合、用語「再プログラミング」または「脱分化」または「細胞効力の増大」または「発生能の増大」は、細胞の効力を増大させるかまたは細胞をより分化していない状態に分化させる方法を指す。例えば、増加した細胞効力を有する細胞は、非再プログラム化状態の同じ細胞と比較して、より発達上の柔軟性を有する（すなわち、より多くの細胞型に分化することができる）。言い換えれば、再プログラム化細胞は、非再プログラム化状態の同じ細胞よりも分化度の低い状態にある。
【００９０】
本明細書で使用される、用語「分化」は、未分化（「非抑制（ｕｎｃｏｍｍｉｔｔｅｄ））または低未分化細胞が、例えば血液細胞または筋細胞のような特殊化した細胞の特性を獲得する過程である。分化細胞または分化誘導細胞は、細胞の系統内でより特殊化された（「抑制された」）位置を占める細胞である。分化過程に適用される場合、用語「抑制（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄ）」は、通常の状況下でそれが特定の細胞型または細胞型のサブセットに分化し続ける点まで分化経路において進行した細胞を指し、通常の状況下では、異なる細胞型に分化することも、分化度の低い細胞型に戻ることもできない。
【００９１】
本明細書中で使用される場合、用語「コードする」とは、規定されたヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または規定されたアミノ酸配列およびそれらから生じる生物学的特性のいずれかを有する生物学的過程における高分子および巨大分子の合成のための鋳型として機能する、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性をいう。従って、仮にその遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生物系においてタンパク質を産生する場合、遺伝子はタンパク質をコードする。そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、通常は配列表に提供されているコード鎖、および遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される非コード鎖の両方とも、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物を  コードすると称される。
【００９２】
本明細書中で使用される場合、用語「外因性」は、言及された分子または言及された活性が宿主細胞に導入されるか、または宿主細胞に対して非天然であることを意味することを意図する。分子は、例えば、宿主染色体への組込みなどによる宿主遺伝物質へのコード核酸の導入によって、またはプラスミドなどの非染色体遺伝物質として導入され得る。したがって、コード核酸の発現に関して使用される用語は、発現可能な形態のコード核酸の細胞への導入を指す。「内因性」という用語は、宿主細胞に存在する言及された分子または活性を指す。同様に、コード核酸の発現に関して使用される場合のこの用語は、細胞内に含まれ外因的に導入されていないコード核酸の発現を指す。
【００９３】
本明細書中で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」とは、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドまたはそれらの類似体のいずれかの、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態をいう。ポリヌクレオチドの配列は４つのヌクレオチド塩基、すなわちアデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）からなり、ポリヌクレオチドがＲＮＡである場合はチミンがウラシル（Ｕ）となる。ポリヌクレオチドは、遺伝子または遺伝子フラグメント（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴまたはＳＡＧＥタグ）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブおよびプライマーを含めてもよい。ポリヌクレオチドはまた、二本鎖および一本鎖分子の両方を指す。
【００９４】
本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は交換可能に使用され、そしてペプチド結合によって共有結合したアミノ酸残基を有する分子をいう。ポリペプチドは少なくとも２つのアミノ酸を含まなければならず、そしてポリペプチドの最大アミノ酸数に制限はない。本明細書中で使用される場合、この用語は、当技術分野で一般に例えばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも呼ばれる短鎖と、当技術分野で一般にポリペプチドまたはタンパク質と呼ばれる長鎖の両方を指す。「ポリペプチド」は、例えば、とりわけ、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質を含む。ポリペプチドは、天然ポリペプチド、組換えポリペプチド、合成ポリペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「エクスビボ」という用語は、好ましくは自然条件の最小限の変更で、生物外の人工環境内の生体組織内または生体組織上で行われる実験または測定など、生物外で起こる活動を指す。「エクスビボ」手順は、生物から採取され、通常無菌条件下で、典型的には数時間または最大で約２４時間、ただし状況に応じて最大２日〜２８日を含め、実験装置で培養される生細胞または組織を伴う。そのような組織または細胞はまた、収集および凍結され得、そして後にインビトロ  、エクスビボ、またはインビボのいずれかでさらなる実験のために解凍され得る。数日間より長く生細胞または組織を使用し続ける組織培養実験または手順は、典型的には「インビトロ」であると見なされるが、特定の実施形態では、この用語はエクスビボと互換的に使用され得る。一方、「インビボ」活性は生物、例えばマウスにおいて起こり、そのような活性は細胞生着、細胞ホーミング、細胞の自己複製、および細胞の拡大を含み得る。
【００９６】
本明細書中で使用される場合、用語「インビトロ」とは、試験管、培養皿、または生物の外部の他の場所で行われるかまたはは起こる活性をいう。
【００９７】
本明細書中で使用される場合、用語「薬剤」、「調節剤」、および「モジュレーター」は、本明細書中で互換的に使用され、遺伝子発現プロファイルまたは免疫細胞の生物学的特性を改変し得る化合物または分子をいう。薬剤は、単一の化合物もしくは分子、または複数の化合物もしくは分子の組み合わせであり得る。例示的な薬剤としては、例えばプロスタグランジン経路を刺激することができる化合物、例えばプロスタグランジン経路アゴニスト、グルココルチコイドまたはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００９８】
本明細書で使用される「接触する」、「治療する」、または「調節する」という用語は、免疫細胞に対して行われる作用に関して使用される場合は互換的に使用され、本明細書に開示されている１つ以上の薬剤で免疫細胞を培養し、インキュベートし、または曝露することを意味する。
【００９９】
本明細書中で使用される場合、「非接触」または「未処理」細胞は、処理されていない細胞、例えば、対照剤またはビヒクル剤以外の薬剤と培養、接触、またはインキュベートされていない細胞である。ＤＭＳＯなどの制御剤と接触した細胞、または他の媒体と接触した細胞は、非接触細胞の例である。
【０１００】
本明細書で使用されるとき、「フィーダー細胞」または「フィーダー」は、フィーダー細胞が第二の細胞型の支持のための刺激、成長因子および栄養素を提供するため、第２の種類の細胞が増殖、拡大または分化することができる環境を提供するために第２の種類の細胞と共培養される１種類の細胞を表す用語である。フィーダー細胞は場合によりそれらが支持している細胞とは異なる種に由来する。例えば、幹細胞を含む特定の種類のヒト細胞は、マウス胚性線維芽細胞、または不死化マウス胚性線維芽細胞の初代培養によって支持され得る。別の例において、末梢血由来細胞または形質転換白血病細胞は、ナチュラルキラー細胞の増殖および成熟を支持する。支持細胞が増殖するのを防ぐために、照射またはマイトマイシンなどの抗有糸分裂剤での処理によって他の細胞と共培養すると、フィーダー細胞は通常不活性化され得る。フィーダー細胞は、内皮細胞、間質細胞（例えば、上皮細胞または線維芽細胞）、および白血病細胞を含み得る。上記を限定することなく、１つの特定のフィーダー細胞型は、ヒト皮膚線維芽細胞などのヒトフィーダーであり得る。別のフィーダー細胞型は、マウス胚性線維芽細胞（ＭＥＦ）であり得る。一般に、多能性を維持し、特定の系統への分化を誘導し、増殖能力を増強し、そしてエフェクター細胞のような特殊化した細胞型への成熟を促進するために、様々なフィーダー細胞を一部使用することができる。
【０１０１】
本明細書中で使用される場合、「フィーダーフリー」（ＦＦ）環境とは、本質的にフィーダー細胞または間質細胞を含まない、および／またはフィーダー細胞の培養によって前もって調整されていない培養条件、細胞培養または培地などの環境をいう。「予備馴化」培地とは、フィーダー細胞が少なくとも１日などの期間にわたって培地内で培養された後に収穫された培地を指す。前調整培地は、培地中で培養されたフィーダー細胞によって分泌される増殖因子およびサイトカインを含む、多くのメディエーター物質を含有する。いくつかの実施形態では、フィーダーフリー環境は、フィーダー細胞または間質細胞の両方を含まず、そしてまたフィーダー細胞の培養によって前処理されない。
【０１０２】
本明細書中で使用される場合、用語「類似体」とは、構造および機能において他の化学物質と類似し、１つの単一の元素もしくは基、または、同じ化学的足場を保持し、親の化学物質と同様に機能する場合は２つ以上の基（例えば２、３または４基）によって構造的に異なる化学分子をいう。そのような修飾は当業者にとって日常的であり、例えば、酸のエステルまたはアミドのような追加のまたは置換された化学部分、アルコールまたはチオールのためのベンジル基、およびアミン用のｔｅｒｔ-ブトキシカルボニル基のような保護基を含む。アルキル置換（例えば、メチル、ジメチル、エチルなど）などのアルキル側鎖への修飾、ハロゲン付加、側鎖の飽和または不飽和のレベルの修飾、および置換フェニルとフェノキシなどの修飾基の付加も含まれる。類似体はまた、ビオチンまたはアビジン部分などのコンジュゲート、西洋ワサビペルオキシダーゼなどの酵素、および放射性標識、生物発光、化学発光、または蛍光部分を含み得る。また、モイエティ（ｍｏｉｅｔｙ）は、インビボまたはエクスビボで半減期を増加させるために、または他の望ましい特性のうち、それらの細胞浸透性を増加させるように、本明細書にそれらの薬物動態学的特性を変更するために記載された薬剤に添加することができる。プロドラッグも含まれ、それは医薬品の多数の望ましい品質（例えば、溶解度、バイオアベイラビリティ、製造など）を向上させることが知られている。
【０１０３】
本明細書中で使用される場合、用語「増加する」は、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、細胞においてより大きな生理学的応答（すなわち下流効果）を生じるまたは引き起こす作用物質の能力をいう。例えば、単離されたＴ細胞集団によるインターロイキン２またはＴＮＦの産生の増加をいう。増加は、特定の細胞シグナル伝達経路を介するシグナル伝達の増加の結果としての遺伝子発現の増加であり得る。「増加した」量は典型的には統計的に有意な量であり、ビヒクル（薬剤の不在）または対照組成物によって生じる応答と比較して１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍以上（例：５００、１０００倍）（１以上、例えば１．５、１．６、１．７、１．８などのすべての整数および小数点を含む）の増加を含み得る。
【０１０４】
本明細書中で使用される場合、用語「減少する」とは、ビヒクルまたは対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、細胞においてより低い生理学的応答（すなわち下流効果）を生じるまたは引き起こす作用物質の能力をいう。減少は、遺伝子発現の減少、細胞シグナル伝達の減少、または細胞増殖の減少であり得る。「減少した」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、ビヒクル（薬剤の不在）または対照組成物によって生じる応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍以上（例、５００、１０００倍）（１以上、例えば１、５、１、６、１．７、１．８などのすべての整数および小数点を含む）の減少を含み得る。
【０１０５】
本明細書で使用されるとき、用語「相乗効果」または「相乗的」は、組み合わせの中の２つ以上の実体が互いの効果を打ち消すか中和するときに使用される「拮抗的」、および組み合わせに含まれる２つ以上の実体が、個々の効果の合計にほぼ等しい効果を生み出すときに使用される「加法的」と比較して、２つ以上の実体の共同作業がそれらの個々の効果の合計よりも大きい効果を生み出すような、増強された効果に関する２つ以上の実体の組み合わせを指す。
【０１０６】
本明細書中で使用される場合、用語「実質的に含まない」とは、細胞集団または培地などの組成物を記載するために使用される場合、例えば、特定の物質が９５％フリー、９６％フリー、９７％フリー、９８％フリー、９９％フリー、または従来の手段で測定して検出不能であるなど、任意の起源の特定物質を含まないことをいう。特定の物質または組成物の成分が存在しないことを指す場合、「存在しない」という用語にも同様の意味が適用され得る。
【０１０７】
本明細書で使用されるとき、用語「約」または「およそ」は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量または長さに対して、最大で１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％変化する数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量または長さを指す。数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量または長さの範囲は、基準の数量、レベル、値、数、頻度、割合、寸法、サイズ、量、重量、または長さの±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、または±１％であり得る。
【０１０８】
本明細書で使用されるとき、用語「被験体」は哺乳動物を指す。対象は、ヒトまたはヒト以外の哺乳動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、マウス、ラット、ウサギ、またはそれらのトランスジェニック種であり得る。
【０１０９】
本明細書で使用される治療用組成物または方法を必要とする対象に関連して使用される場合、用語「治療する（ｔｒｅａｔ）」「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」および「治療される（ｔｒｅａｔｅｄ）は、限定されるものではないが、疾患の１つ以上の徴候または症状の改善または排除または回復または予防の達成を含む、所望の薬理学的および／または生理学的効果を意味する。効果は、予防的であり得、および／または疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に防止することを含み得、そして／または症状の改善もしくは排除を達成する、あるいは疾患および／または疾患に起因する有害作用に対して部分的もしくは完全な治癒を提供することに関して治療的であり得える。用語「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を含み、いくつかの実施形態では、（ａ）疾患にかかりやすいが、まだ罹っていると診断されていない対象における疾患の発生の予防すること、（ｂ）疾患を抑制すること、またはその発症を停止すること、（ｃ）疾患を軽減する、または疾患の退行を誘導すること、または完全にまたは部分的に疾患の症状を排除すること、（ｄ）造血系を再構成するなど、個体を疾患前の状態に回復させることを含む。
【０１１０】
本明細書中で使用される場合、「遺伝子改変」とは、遺伝子編集をいい、（１）天然の再配列、突然変異、遺伝子インプリンティングおよび／またはエピジェネティック改変に由来する改変、または（２）細胞のゲノムにおける挿入、欠失または置換による遺伝子操作によって得られる改変を含み得る。本明細書で使用される場合、遺伝子改変はまた、ドナー特異的、疾患特異的、または治療反応特異的、または治療反応特異的である供給源特異的免疫細胞の１つ以上の保持可能な治療属性を含み得る。
【０１１１】
本明細書中で使用される場合、用語「遺伝的刷り込み」とは、起源細胞における優先的治療特性に寄与する遺伝的または後成的情報をいう。特に選択されたドナー、疾患または治療の文脈から得られる起源細胞の局面において、優先的治療属性に寄与する遺伝的刷り込みは、根底にある分子事象が同定されているかどうかにかかわらず、保持可能な表現型、すなわち優先的治療属性を明示する任意の文脈特異的遺伝子またはエピジェネティック修飾を含み得る。ドナー特異的、疾患特異的、または治療反応特異的な供給源細胞は、ｉＰＳＣおよびｉＰＳＣ由来の造血系統細胞において保持可能な遺伝的刷り込みを含み得る。そのような遺伝的刷り込みには、限定はされないが、例えばウイルス特異的Ｔ細胞またはインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞由来の単一特異的ＴＣＲ；追跡可能な所望の遺伝的多型、例えば、選択されたドナーにおける高親和性ＣＤ１６受容体をコードする点突然変異についてホモ接合性；所定のＨＬＡ要件、すなわち共通のハプロタイプを示す選択されたＨＬＡ適合ドナー細胞が含まれる。本明細書中で使用される場合、優先的な治療特性には、誘導細胞の生着、輸送、ホーミング、生存率、自己複製、持続性、免疫応答の調節および調節、生存、ならびに細胞毒性の改善が含まれる。優先的治療特性はまた、抗原標的化受容体発現；ＨＬＡの提示またはその欠如、腫瘍微小環境の免疫抑制作用に対する抵抗性；傍観者的免疫細胞の誘導および所望の免疫調節；腫瘍外効果の減少を伴う標的特異性の改善；化学療法などの治療に対する耐性に関連している。
【０１１２】
本明細書で使用される、用語「安全スイッチタンパク質」は、潜在的な毒性または細胞治療のそうでなければ悪影響を防止するために設計人工タンパク質を指す。いくつかの例では、安全スイッチタンパク質発現は、そのゲノムに安全スイッチのタンパク質をコードする遺伝子が恒久的に組み込まれている移植操作された細胞の安全上の懸念に対処するために条件付きで制御されている。この条件付き調節は可変的であり得、そして小分子媒介翻訳後活性化および組織特異的および／または時間的転写調節による制御を含み得る。安全スイッチは、アポトーシスの誘導、タンパク質合成またはＤＮＡ複製の阻害、増殖停止、転写および転写後の遺伝子調節および／または抗体媒介枯渇を媒介し得る。いくつかの例では、安全スイッチタンパク質は外因性分子、例えばプロドラッグによって活性化され、活性化されると治療用細胞のアポトーシスおよび／または細胞死を誘発する。安全スイッチタンパク質の例としては、例えばカスパーゼ９（またはカスパーゼ３または７）、チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、Ｂ細胞ＣＤ２０、修飾されたＥＧＦＲ、およびそれらの任意の組合せなどの自殺遺伝子が含まれるが、これらに限定されない。この戦略では、有害事象の際に投与されるプロドラッグが自殺遺伝子産物によって活性化され、形質導入細胞を死滅させる。
【０１１３】
本明細書で使用される「治療上十分な量」は、その意味の中に、所望の治療効果を提供するために言及している特定の治療的および／または医薬組成物の十分なおよび／または有効量を含む。正確な量は、患者の一般的な健康状態、患者の年齢、ならびに病状の段階および重症度などの要因に応じて、被験体ごとに異なり得る。特定の実施形態では、治療上十分な量は、治療される対象の疾患または状態に関連する少なくとも１つの症状を改善、軽減、および／または改善するのに十分かつ／または有効である。
【０１１４】
本明細書で使用される「十分な量」は、特定の転帰または結果を達成するのに十分な、本明細書で提供される薬剤または組成物の量を指す。
【０１１５】
細胞に基づく養子免疫療法の有効性を改善するための調節剤
いくつかの実施形態における本発明は、養子細胞に基づく治療に適した調節免疫細胞などの免疫細胞、例えば治療的可能性など１つ以上の特性を改善するのに十分な量の１つ以上の調節剤を含む組成物を提供する。いくつかの態様では、改善された治療的可能性を有する免疫細胞は、１つ以上の調節剤を含まない、同様の条件下などの条件下で産生または維持される細胞と比較して、増殖、持続性、細胞毒性、および／または細胞想起／記憶の改善を提示した。いくつかの実施形態では、調節剤を含む作用物質または組成物を用いて免疫細胞を調節することによって、得られる免疫細胞は、少なくとも１つの属性の改善などの１つ以上のそのような改善を含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの属性を含むが、これらに限定されない、および／または少なくとも１つ以上を含む表現型の歪み（例えば、ＴｅｆｆやＴｅｍからＴｎは、Ｔｃｍ、および／またはＴｓｃｍおよび／またはスキュー表現型を１つ以上の他のＴ細胞亜集団と比較してナイーブＴ細胞、中枢記憶Ｔ細胞および／または幹中枢記憶Ｔ細胞の相対数の増加）：細胞拡大の増加、細胞生存率の増加；および／または腫瘍クリアランスおよび持続性における能力の向上が含まれる。いくつかの実施形態では、養子細胞に基づく治療に適したものなどの免疫細胞は、それらのそれぞれの標的によって分類された１つ以上のクラスの調節剤と接触、処理、または調節される。いくつかの実施形態では、細胞は、組成物または調節剤または薬剤の存在下で行われるプロセスによって少なくとも１つ以上の工程で操作される。提供された各クラスの調節剤について、いくつかの非限定的で例示的な化合物を表１に列挙する。
【０１１６】
本明細書において互換的に用いられる場合、「モジュレーター」または「調節剤」は、特定の標的（タンパク質またはコードポリヌクレオチドなど）の発現または活性を調節する能力を有する阻害剤または活性化剤を指すのに用いられる。「モジュレーター」または「調節剤」は、阻害剤および活性化剤、例えばリガンド、アゴニスト、アンタゴニストを含む。本明細書で使用される調節剤またはモジュレーターは、合成または自然発生にかかわらず、有機化合物（例えば、小さな化学分子）、ポリペプチド（例えば、ペプチドまたは抗体）、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、二本鎖、一本鎖、オリゴヌクレオチド、アンチセンスＲＮＡ、低分子阻害性ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、リボザイムなど）、オリゴ糖、または脂質；またはそれらの同様に機能する（例えば、同じ標的に対する阻害または活性化）ホモログ、模倣体、誘導体、類似体または塩であり得る。
【０１１７】
阻害剤は、例えば記載されている標的タンパク質または他の標的の発現を減少または排除する；または、標的タンパク質の刺激またはプロテアーゼ阻害活性を部分的もしくは全体的に遮断する；または標的タンパク質、例えばアンタゴニストの活性を低下させる、防止する、活性化を遅らせる、不活性化する、脱感作する、または下方制御することができる薬剤である。活性化剤は、例えば記載された標的タンパク質の発現を誘導もしくは活性化し、またはプロテアーゼインヒビター活性の刺激、増加、活性化、促進化、増強化、または記載の標的タンパク質、例えばアゴニストの活性を感作または上方制御し得る。阻害剤および活性化剤についてのアッセイは、例えば、記載の標的タンパク質を発現する細胞に推定モジュレーター剤を適用し、次いで記載の標的タンパク質の発現および／または活性に対する機能的効果および効果の程度を決定することを含む。一般に、対照試料（モジュレーターで未処理またはビヒクル単独で処理）には１００％の比活性値が割り当てられている。記載の標的タンパク質の阻害は、対照に対する活性値が約９０％、場合により８０％、７０％、６０％、５０％、２５％、１０％、５％または１％以下であるときに達成される。記載の標的タンパク質の活性化は、対照に対する活性値が１１０％、場合により１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、または１０００〜３０００％以上であるときに達成される。
【０１１８】
免疫細胞の治療的可能性を改善するためには、一般に、免疫細胞の質の一定の改善が含まれる。本明細書で提供されるいくつかの実施形態の調節剤による処理は、例えば特定の疾患の下、または特定の疾患に対する応答において、例えば、細胞の表現型の歪み、拡大、維持、分化、脱分化、生存、増殖、細胞毒性、持続性、および／または細胞想起／記憶の少なくとも１つを調節する、またはこれらの少なくとも１つの可能性を調節することによって治療免疫細胞の特定の生物学的特性を高め、それによって免疫細胞の治療的可能性を改善することが示されている。Ｔ細胞集団において、例えば、ナイーブ、幹細胞記憶、または中枢記憶Ｔ細胞への表現型の歪みが、ナイーブ、幹細胞記憶、または中枢記憶Ｔ細胞亜集団の数または相対比の増加、および／または、維持、拡大、分化、および／またはそれらの脱分化を調節することによるエフェクター記憶またはエフェクターＴ細胞亜集団の数または相対比の減少をもたらすことは、改善されたインビボ養子治療能力のためのＴ細胞のより良い品質を示す。一実施形態において、ナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞の数または割合は、表に列挙される少なくとも１つの化合物を含む１つ以上の調節剤を用いた治療によりＴ細胞集団において増加する。一実施形態では、表現型の歪み、またはナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞の数もしくは割合の増加は、薬剤処理後の表面マーカーの発現増加によって示される。一実施形態では、表現型の歪み、またはナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞の数もしくは割合の増加は、薬剤処理後のエフェクター細胞よりもむしろナイーブまたは記憶Ｔ細胞に関連するサイトカインプロファイルによって示される。
【０１１９】
いくつかの他の実施形態において、表１中の少なくとも１つの化合物は、細胞の殺傷能力を向上させることによってＴ細胞の治療的可能性を向上させる。さらに他の実施形態では、表１中の少なくとも１つの化合物は、細胞の生存および増殖を増大させることによってＴ細胞の治療的可能性を改善する。さらに他の実施形態において、表１中の少なくとも１つの化合物は、細胞の持続性および腫瘍クリアランスにおける能力を増強することによってＴ細胞の治療的可能性を改善する。いくつかの実施形態において、調節剤は、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、およびＰＤ１７３９５５の少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態において、調節剤はＤＣＣ-２０３６を含む。
【０１２０】
同様に、ＮＫ細胞集団において、例えば、その維持、サブタイプの歪み、増殖、分化、および／または脱分化による適応ＮＫ細胞の数または相対比の増加は、インビボ養子治療的可能性の改善のためのＮＫ細胞のより良い品質を示す。ＮＫＴ細胞集団に関して、例えば、その維持、サブタイプスイッチング、増殖、分化、および／または脱分化によるＩ型ＮＫＴ細胞の数または相対比の増加は、インビボ養子治療的可能性の改善のためのＮＫＴ細胞のより良い品質を示す。
【０１２１】
表１においてそれぞれの標的によって分類／同定されたクラスの調節剤は、養子療法のための免疫細胞の治療的可能性を改善するそれらの可能性に基づいて発見された。理論に制限されることなく、それらは、細胞代謝、栄養素感知、増殖、アポトーシス、シグナル伝達、サイトカイン産生、感染過程に関する特性、および／または細胞機能の他の局面を調節することによって治療用免疫細胞を調節および改善する。
【０１２２】
養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞は、表１に含まれる１以上の調節剤と接触させられる。薬剤下での処理は、細胞増殖、維持、分化特性の調節、および／または増殖、細胞傷害性、持続性、および／または細胞想起／記憶の増大、次いでの処理される細胞の治療的可能性の増大などによって細胞の生物学手特性を改変することができる。例えば、処理は、治療的免疫細胞の生存率をエクスビボおよびインビボで向上を図ることができる。さらに、処理は、処理された細胞集団の異なる亜集団の比率を変え得る。例えば、一実施形態では、ナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞の数および割合は、表１から選択される１種以上の薬剤を用いたエクスビボ処理時に単離されたＴ細胞集団においてビヒクルと比較して増加する。別の実施形態では、表１から選択される１以上の薬剤を用いたＮＫ細胞集団のエクスビボ治療時に、集団中の適応ＮＫ細胞の数および割合が増加する。
【０１２３】
表１-養子細胞療法における免疫細胞調節剤
【表１−１】
2020513243.tif 000003
【表１−２】
2020513243.tif 000004
【表１−３】
2020513243.tif 000005
【０１２４】
理論に制限されることなく、表１の薬剤は、細胞代謝、栄養感知、増殖、アポトーシス、シグナル伝達、感染プロセスに関する特性、および／または細胞機能の他の局面の調整を介して細胞の増殖、代謝、および／または細胞分化を調節することによって養子療法のための免疫細胞の治療的可能性を改善する。当業者によって理解されるように、本発明の範囲はまた、表１に列挙された薬剤の塩、エステル、エーテル、溶媒和物、水和物、立体異性体またはプロドラッグを含むがこれらに限定されない類似体または誘導体を含む。例えば、表１の薬剤、ｄｍＰＧＥ２（１６，１６-ジメチルプロスタグランジンＥ２、１６，１６-ジメチルＰＧＥ２）の類似体および誘導体の例示的な例としては、これらに限定されないが、ＰＧＥ２、１６，１６-ジメチルＰＧＥ２Ｐ-（Ｐ-アセトアミドベンズアミド）フェニルエステル、１１-デオキシ-１６，１６-ジメチルＰＧＥ２、９-デオキシ-９-メチレン-１６，１６-ジメチルＰＧＥ２、９-デオキシ-９-メチレンＰＧＥ２、９-ケトフルプロステノール、５-トランスＰＧＥ２、１７-フェニル-オメガ-トリノルＰＧＥ２、ＰＧＥ２セリノールアミド、ＰＧＥ２メチルエステル、１６-フェニルテトラノルＰＧＥ２、１５（Ｓ）-１５-メチルＰＧＥ２、１５（Ｒ）-１５-メチルＰＧＥ２、８-イソ-１５-ケトＰＧＥ２、８-イソＰＧＥ２イソプロピルエステル、８-イソ１６シクロヘキシルテトラノルＰＧＥ２、２０-ヒドロキシＰＧＥ２、２０-エチルＰＧＥ２、１１-デオキシＰＧＥｉ、ノクロプロスト、スルプロストン、ブタプロスト、１５-ケトＰＧＥ２、および１９（Ｒ）ヒドロキシＰＧＥ２が含まれる。９-位でハロゲン置換されているＰＧＥ２と類似の構造を有するＰＧ類似体または誘導体（例えば、その開示全体が参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２００１／１２５９６参照）、ならびにその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００６／０２４７２１４号明細書に記載されているもののような２-デカルボキシ-２-ホスフィニコプロスタグランジン誘導体も含まれる。
【０１２５】
本明細書で企図される組成物での使用に適したＧＳＫ-３β（グリコーゲンシンターゼキナーゼ３ベータ）阻害剤には、これらに限定されないが、ケンパウロン、１-アザケンパウロン、ＣＨＩＲ９９０２１，ＣＨＩＲ９８０１４，ＡＲ-Ａ０１４４１８，ＣＴ９９０２１，ＣＴ２００２６，ＳＢ２１６７６３，ＡＲ-Ａ０１４４１８、リチウム、ＴＤＺＤ-８、ＢＩＯ、ＢＩＯ-アセトキシム、（５-メチル-１Ｈ-ピラゾール-３-イル）-（２-フェニルキナゾリン-４-イル）アミン、ピリドカルバゾール-シクロペンタジエニルルテニウム錯体、ＴＤＺＤ-８４-ベンジル-２-メチル-１、２、４-チアジアゾリジン-３，５-ジオン、２-チオ（３-ヨードベンジル）-５-（１-ピリジル）-［１、３、４］-オキサジアゾール、ＯＴＤＺＴ、α-４-ジブロモア-セトフェノン、ＡＲ-ＡＯ１４４-１８、３-（１-（３-ヒドロキシプロピル）-１Ｈ-ピロロ［２，３-ｂ］ピリジン-３-イル］-４-ピラジン-２-イル-ピロール-２，５-ジオン；ＴＷＳ１１９、Ｌ８０３Ｈ-ＫＥＡＰＰＡＰＰＱＳｐＰ-ＮＨ２またはそのミリストイル化形態；２-クロロ-１-（４，５-ジブロモ-チオフェン-２-イル）-エタノン；ＧＦ１０９９２０３Ｘ；ＲＯ３１８２２０；ＴＤＺＤ-８；ＴＩＢＰＯおよびＯＴＤＺＴが含まれる。一実施形態において、ＧＳＫ-３β阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１、ＢＩＯ、ＴＷＳ１１９、またはケンパウロンである。一実施形態において、ＧＳＫ-３β阻害剤はＴＷＳ１１９である。別の実施形態において、ＧＳＫ-３β阻害剤はＣＨＩＲ９９０２１である。さらに別の実施形態では、ＧＳＫ-３β阻害剤はＢＩＯである。
【０１２６】
本明細書で企図される組成物における使用に適したＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤には、ＰＤ０３２５９０１、ＰＤ９８０５９、ＵＯ１２６、ＳＬ３２７、ＡＲＲＹ-１６２、ＰＤ１８４１６１、ＰＤ１８４３５２、スニチニブ、ソラフェニブ、バンデタニブ、パゾパニブ、アキシチニブ、ＧＳＫ１２０２１２、ＡＲＲＹ-４３８１６２、ＲＯ５１２６７６６、ＸＬ５１８、ＡＺＤ８３３０、ＲＤＥＡＩ１９、ＡＺＤ６２４４、ＦＲ１８０２０４、ＰＴＫ７８７、６-（４-ブロモ-２-クロロ-フェニルアミノ）-７-フルオロ-３-メチル-３Ｈ-ベンゾイミダゾール-ｅ-５-カルボン酸（２、３-ジヒドロキシ-プロポキシ）-アミド；６-（４-ブロモ-２-クロロ-フェニルアミノ）-７-フルオロ-３-（テトラヒドロ-ピラン-２-イル-エチル）-３Ｈ-ベンゾイミダゾール-５-カルボン酸（２-ヒドロキシ-エトキシ）-アミド、１-［６-（４-ブロモ-２-クロロ-フェニルアミノ）-７-フルオロ-３-メチル-３Ｈ-ベンゾイミダゾール-５-イル］-２-ヒドロキシ-エタノン、６-（４-ブロモ-２-クロロ-フェニルアミノ）-７-フルオロ-３-メチル-３Ｈ-ベンゾイミダゾール-ｅ-５-カルボン酸（２-ヒドロキシ-１，１-ジメチル-エトキシ）-アミド、６-（４-ブロモ-２-クロロ-フェニルアミノ）-７-フルオロ-３-（テトラヒドロフラン-２-イル-エチル）-３Ｈ-ベンゾイミダゾール-５-カルボン酸（２-ヒドロキシ-エトキシ）-アミド、６-（４-ブロモ-２-フルオロ-フェニルアミノ）-７-フルオロ-３-メチル-３Ｈ-ベンゾイミダゾール-ｅ-５-カルボン酸（２-ヒドロキシ-エトキシ）-アミド、６-（２，４-ジクロロ-フェニルアミノ）-７-フルオロ-３-メチル-３Ｈ-ベンゾイミダゾール-５-カルボン酸（２-ヒドロキシ-エトキシ）-アミド、６-（４-ブロモ-２-クロロ-フェニルアミノ）-７-フルオロ-３-メチル-３Ｈ-ベンゾイミダゾール-ｅ-５-カルボン酸（２-ヒドロキシ-エトキシ）-アミド、２-［（２-フルオロ-４-ヨードフェニル）アミノ］-Ｎ-（２-ヒドロキシエトキシ）-１，５-ジメチル-６-オキソ-１，６-ジヒドロピリジン-３-カルボキサミド、以後ＭＥＫ阻害剤２と称す；および４-（４-ブロモ-２-フルオロフェニルアミノ）-Ｎ-（２-ヒドロキシエトキシ）-１，５-ジメチル-６-オキソ-１，６-ジヒドロピリダジン-３-カルボキサミドまたはそれらの薬剤的に許容できる塩が含まれる。さらなる例示的なＭＥＫ／ＥＲＫ阻害剤としては、国際公開特許出願ＷＯ９９／０１４２６、ＷＯ０２／０６２１３、ＷＯ０３／０７７９１４、ＷＯ０５／０５１３０１およびＷＯ２００７／０４４０８４に開示されている化合物が挙げられる。一実施形態において、ＭＥＫ阻害剤はＰＤ０３２５９０１である。他の実施形態では、ＭＥＫ阻害剤はＵ０１２６である。
【０１２７】
本明細書で企図される組成物での使用に適したＲＯＣＫ（Ｒｈｏ関連キナーゼ）阻害剤としては、チアゾビビン、Ｙ２７６３２、ファスジル、ＡＲ１２２-８６、Ｙ２７６３２Ｈ-１１５２、Ｙ-３０１４１、Ｗｆ-５３６、ＨＡ-１０７７、ヒドロキシル-ＨＡ-１０７７、ＧＳＫ２６９９６２Ａ、ＳＢ-７７２０７７-Ｂ、Ｎ-（４-ピリジル）-Ｎ’-（２，４，６-トリクロロフェニル）尿素、３-（４-ピリジル）-１Ｈ-インドール、（Ｒ）-（＋）-トランス-Ｎ-（４-ピリジル）-４-（１-アミノエチル）-シクロヘキサンカルボキサミド、および米国特許第８，０４４，２０１号に開示されているＲＯＣＫ阻害剤（その全体が参照により本明細書に組み入れられる）が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、ＲＯＣＫ阻害剤は、チアゾビビン、Ｙ２７６３２、またはピリンテグリンである。一実施形態では、ＲＯＣＫ阻害剤はチアゾビビンである。
【０１２８】
本明細書で企図される組成物での使用に適したＴＧＦβ受容体／ＡＬＫ５阻害剤には、ＳＢ４３１５４２；Ａ-８３-０１（３-（６-メチル-２-ピリジニル）-Ｎ-フェニル-４-（４-キノリニル）-１Ｈ-ピラゾール-１-カルボチオアミド；２-（３-（６-メチルピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-４-イル）-１，５-ナフチリジン、Ｗｎｔ３ａ／ＢＩＯ、ＧＷ７８８３８８（-４-［３-（ピリジン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール-４-イル］ピリジン-２-イル｝-Ｎ-（テトラヒドロ-２Ｈ-ピラン-４-イル）ベンズアミド）、ＳＭ１６、ＩＮ-１１３０（３-（（５-（６-メチルピリジン-２-イル）-４-（キノキサリン-６-イル）-１Ｈ-イミダゾール-２-イル）メチル）ベンズアミド）、ＧＷ６６０４（２-フェニル-４-（３-ピリジン-２-イル-１Ｈ-ピラゾール-４-イル）ピリジン）、ＳＢ-５０５１２４（２-（５-ベンゾ［１、３］ジオキソール-５-イル-２-ｔｅｒｔ-ブチル-３Ｈ-イミダゾール-４-イル）-６-メチルピリジン塩酸塩；ＳＵ５４１６；２-（５-ベンゾ［１，３］ジオキソール）-５-イル-２-ｔｅｒｔ-ブチル-３Ｈ-イミダゾール-４-イル）-６-メチルピリジン塩酸塩（ＳＢ-５０５１２４）；レデリムバム（ＣＡＴ-１５２）；メテリムマブ（ＣＡＴ-１９２）；ＧＣ-１００８；ＩＤ１１；ＡＰ-１２００９；ＡＰ-１１０１４；ＬＹ５５０４１０；ＬＹ５８０２７６；ＬＹ３６４９４７；ＬＹ２１０９７６１；ＳＤ-２０８；ＳＭ１６；ＮＰＣ-３０３４５；Ｋｉ２６８９４；ＳＢ-２０３５８０；ＳＤ-０９３；グリベック；３，５、７、２’、４’-ペンタヒドロキシフラボン（モリン）；アクチビン-Ｍ１０８Ａ；Ｐ１４４；可溶性ＴＢＲ２-Ｆｃ；およびピリミジン誘導体（例えば、Ｓｔｉｅｆｌら、ＷＯ２００８／００６５３に列挙されているものを参照（その全体が参照により本明細書に組み入れられる））が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、「ＡＬＫ５阻害剤」は非特異的キナーゼ阻害剤を包含することを意図しないが、「ＡＬＫ５阻害剤」はＡＬＫ５に加えてＡＬＫ４および／またはＡＬＫ７を阻害する阻害剤、例えばＳＢ-４３１５４２を包含すると理解されるべきである。（例えば、Ｉｎｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ。６２（１）：６５〜７４（２００２を参照）。さらに、ＴＧＦβ／アクチビン経路の阻害はＡＬＫ５を阻害するのと同様の効果を有すると考えられる。したがって、ＴＧＦβ／アクチビン経路の任意の阻害剤（例えば上流または下流）を、本明細書の各段落に記載のＡＬＫ５阻害剤と組み合わせて、またはその代わりに使用することができる。例示的なＴＧＦβ／アクチビン経路阻害剤には、限定されないが、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＳＭＡＤ２／３リン酸化の阻害剤、ＳＭＡＤ２／３とＳＭＡＤ４の相互作用の阻害剤、ならびにＳＭＡＤ６とＳＭＡＤ７の活性化剤／アゴニストが含まれる。さらに、以下に記載される分類は単に編成目的のためであり、当業者は化合物が経路内の１つ以上の点に影響を及ぼし得、従って化合物が２つ以上の定義されたカテゴリで機能し得ることを知っている。一実施形態において、ＴＧＦβ受容体阻害剤はＳＢ４３１５４２を含む。
【０１２９】
ＰＤＫ１または３’-ホスホイノシチド依存性キナーゼ-１は、ＡＫＴ／ＰＫＢおよびＰＫＣ、Ｓ６Ｋ、ＳＧＫを含む他の多くのＡＧＣキナーゼの活性化に関連するマスターキナーゼである。ＰＤＫ１の重要な役割は、インスリンシグナル伝達を含むいくつかの成長因子およびホルモンによって活性化されるシグナル伝達経路にある。例示的なＰＤＫ１アゴニストは、スフィンゴシンを含む（Ｋｉｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２７５：１８１０８〜１８１１３、２０００）。ＰＤＫ１の例示的なアロステリック活性化剤としては、ＰＳ４８（（Ｚ）-５-（４-クロロフェニル）-３-フェニルペンタ-２-エン酸）、ＰＳ０８（（Ｚ）-５-（４-ブロモ-２-フルオロフェニル）-３-が挙げられる。フェニルペンタ-２-エン酸）、１-（２-（３-（４-クロロフェニル）-３-オキソ-１-フェニルプロピルチオ）酢酸；３，５-ジフェニルペンタ-２-エン酸、例えば化合物１２Ｚ（２-）（３-（４-クロロフェニル）-３-オキソ-１-フェニルプロピルチオ）酢酸、（Ｚ）-５-（ナフタレン-２-イル）-３-フェニルペンタ-２-エン酸）、および化合物１３Ｚ（（Ｚ）  ）-５-（１Ｈ-インドール-３-イル）-３-フェニルペンタ-２-エン酸）。一実施形態では、ＰＤＫ１アゴニストはＰＳ４８を含む。
【０１３０】
ＢＣＲ-ＡＢＬチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）は酵素ＢＣＲ-ＡＢＬチロシンキナーゼを阻害する。本明細書で企図される組成物で使用するのに適したＢＣＲ-ＡＢＬチロシンキナーゼ阻害剤には、ＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）、イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ニロチニブ（ＡＭＮ１０７）、ダサチニブ（ＢＭＳ-３４５８２５）、ボスチニブ（ＳＫＩ-６０６）、ポナチニブ（ＡＰ-２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ-４０６）、ＰＤ１７３９５５が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、Ｂｃｒ-Ａｂｌチロシンキナーゼ阻害剤はＤＣＣ-２０３６を含む。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。一実施形態では、免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、表１から選択される薬剤の少なくとも２、３、４、５、もしくは６、または任意の数の組み合わせを含む。
【０１３２】
一実施形態では、表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物はさらに有機溶媒を含む。特定の実施形態では、有機溶媒は酢酸メチルを実質的に含まない。特定の実施形態において、有機溶媒は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ、Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルアセトアミド、エタノール、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、有機溶媒はＤＭＳＯである。いくつかの実施形態では、有機溶媒はエタノールである。いくつかの他の実施形態では、有機溶媒はＤＭＳＯとエタノールの混合物である。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群Ｉ：ドルソモルフィン、ヘプテリジン酸、１-ピロリジンカルボジチオ酸、および２-ＤＧから選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に限定されることなく、他の潜在的な役割の中でも、群Ｉの薬剤は細胞代謝および栄養素感知に影響を及ぼし得る。
【０１３４】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＩ：ＧＳＫ３β阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、６-メルカプトプリン、ＡＣ-９３２５３ヨウ化物、チラトリコール、ＰＩ-１０３、フルベストラント、タプシガルギン、ＳＵ４３１２、Ｕ０１２６、テルミサルタン、シクロスポリンＡ、１，３，５-トリス（４-ヒドロキシフェニル）-４-プロピル-１Ｈ-ピラゾール、ＢＡＹ６１-３６０６、プロトポルフィリンＩＸ二ナトリウム、ラパマイシン（ｍＴＯＲ阻害剤）、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、およびＤＣＣ-２０３６（レバスチニブ）から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に限定されることなく、他の潜在的な役割の中でも、群ＩＩの薬剤は、様々な機能的経路におけるシグナル伝達に影響を及ぼし得る。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＩＩ：：５-アザシチジン、フルダラビン、ロスコビチン、およびＰＡＣ-１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に限定されることなく、他の潜在的な役割の中でも、群ＩＩＩの薬剤は細胞増殖およびアポトーシスに影響を及ぼし得る。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＶ：５，７-ジクロロ-８-キノリノール、２-ナフタセンカルボキサミド、７-クロロ-４-（ジメチルアミノ）-１，４，４ａ、５，５ａ、６，１１，１２ａ-オクタフ、ニフロキサジド、およびトスフロキサシン塩酸塩から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に限定されることなく、他の潜在的な役割の中でも、群ＩＶの薬剤は感染プロセスに関連する細胞特性に影響を与える可能性がある。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群Ｖ：セルトラリン、ジエチレントリアミン五醋酸、エドロホニウムクロリド、ＢＩＸ０１２９４、テルフェナジン、およびｄｍＰＧＥ２から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。理論に限定されないが、他の潜在的な役割の中でも、群Ｖの薬剤は、一般に、拡大、維持、細胞分化、およびインビボ増殖、細胞毒性、細胞想起応答、および／または持続性に関する他の細胞特性に影響を及ぼし得る。
【０１３８】
さらに他の実施形態では、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群Ｉから選択される少なくとも１つの薬剤と、群ＩＩ、群ＩＩＩ、群ＩＶ、および群Ｖから選択される少なくとも１つ以上の調節剤を含む。
【０１３９】
いくつかの他の実施形態では、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＩから選択される少なくとも１つの物質と、群Ｉ、群ＩＩＩ、群ＩＶおよびまたは群Ｖから選択される少なくとも１つ以上の調節剤を含む。
【０１４０】
さらに他の実施形態では、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＩＩから選択される少なくとも１つの薬剤と、群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＶおよび群Ｖから選択される少なくとも１つ以上の調節剤を含む。
【０１４１】
さらに他の実施形態では、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＶから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩおよび群Ｖから選択される少なくとも１つ以上の調節剤を含む。
【０１４２】
さらに他の実施形態では、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、群ＩＶから選択される少なくとも１つの薬剤、ならびに群Ｉ、群ＩＩ、群ＩＩＩおよび群ＩＶから選択される少なくとも１つ以上の調節剤を含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の治療的可能性を改善するための組成物は、ＧＳＫ３β阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、およびＢＣＲ-ＡＢＬチロシンキナーゼ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、組成物は表１から選択される２つ以上の薬剤の組み合わせを含み、薬剤は組み合わせにおいて相加効果を有する。定義されたように、「添加剤」は、組み合わせ中の２つ以上の薬剤がそれらの個々の効果の合計にほぼ等しい効果を生み出すときを指す。いくつかの実施形態では、組み合わせ中の１つ以上の薬剤は同じ群：群Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、またはＶからである。いくつかの実施形態では、組み合わせ中の１つ以上の薬剤は異なる群からである。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、組成物は表１から選択される２つ以上の薬剤の相乗的組み合わせを含む。定義されるように、「相乗効果」は、それらの個々の効果の合計よりも大きい効果を生み出すために２つ以上の薬剤を一緒に作用させることなどの強化された効果である。一実施形態において、相乗的組み合わせを含む組成物は、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２-ＤＧからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。一実施形態では、組成物は、ＴＷＳ１１９、ＨＳ１７３、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、および２-ＤＧからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤と、表１に記載の化合物の群から選択される１つ以上の追加の薬剤とを含む組み合わせを含む。一実施形態において、ＴＷＳ１１９を含む組成物は表１から選択される２つ以上の追加の薬剤をさらに含む。一実施形態では、ＨＳ１７３を含む組成物は表１から選択された２つ以上の追加の薬剤をさらに含む。一実施形態において、ＬＹ２９４００２を含む組成物は表１から選択される２つ以上の追加の薬剤をさらに含む。一実施形態において、ピクチリシブを含む組成物は、表１から選択される２つ以上の追加の薬剤をさらに含む。一実施形態において、２-ＤＧを含む組成物は表１から選択される２つ以上の追加の薬剤をさらに含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、表１に列挙される化合物からなる群から選択される１つ以上の調節剤を含む組成物は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、小ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血球、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分もしくは置換因子、および／または目的の１つ以上のポリ核酸を含むベクターからなる群から選択される１つ以上の追加的な添加剤を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、サイトカインおよび成長因子は、以下のサイトカインまたは成長因子：上皮成長因子（ＥＧＦ）、酸性線維芽細胞成長因子（ａＦＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ-１）、インスリン様増殖因子２（ＩＧＦ-２）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦ-β）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）トランスフェリン、さまざまなインターロイキン（ＩＬ-１からＩＬ-１８など）、さまざまなコロニー刺激因子（顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ-ＣＳＦ）など）、各種インターフェロン（ＩＦＮ-γなど）、幹細胞因子（ＳＣＦ）およびエリスロポエチン（Ｅｐｏ）の１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、サイトカインは、少なくともインターロイキン-２（ＩＬ-２）、インターロイキン７（ＩＬ-７）、インターロイキン-１２（ＩＬ-１２）、インターロイキン-１５、インターロイキン１８（ＩＬ-１８）、インターロイキン２１（ＩＬ-２１）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、組成物の成長因子は線維芽細胞成長因子を含む。これらのサイトカインは、例えばＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ミネソタ州ミネアポリス）から商業的に入手することができ、そして天然または組換えのいずれかであり得る。特定の実施形態では、成長因子およびサイトカインは、本明細書で企図されている濃度で添加され得る。特定の実施形態では、成長因子およびサイトカインは、経験的に、または確立されたサイトカイン技術によって導かれるように決定される濃度で添加され得る。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、組成物の添加剤としてのマイトジェンはコンカナバリンＡを含む。いくつかの他の実施形態では、組成物のフィーダー細胞は遺伝的に修飾されている。いくつかの実施形態では、組成物のフィーダー細胞は、単核血球、胸腺上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、白血病細胞Ｋ５６２、Ｒａｊｉ細胞、またはそれらのフィーダー細胞成分もしくはそれらの置換因子のうちの１つ以上を含む。
【０１４９】
いくつかの態様において、組成物の小ＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、およびアンチセンス核酸のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの他の実施形態では、組成物の小ＲＮＡは、ｍｉＲ-３６２〜５ｐ、ｍｉＲ-４８３〜３ｐ、ｍｉＲ-２１０およびｍｉＲ-５９８のうちの１つ以上を含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、目的の１つ以上のポリ核酸を含む組成物のベクターは、組み込み型または非組み込み型である。いくつかの実施形態において、目的の１つ以上のポリ核酸を含む組成物のベクターは、アデノウイルスベクター、プラスミドベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、センダイウイルスベクターおよびエピソーマルベクターの骨格をさらに含む。いくつかの実施形態において、動物細胞における発現のためのプラスミドベクターとしては、例えば、ｐＡ１-１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが挙げられる。いくつかの態様において、ベクターに含まれる１つ以上のポリ核酸は、１つ以上のタンパク質またはポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリ核酸は、デルタ様１（ＤＬＬ１）、デルタ様３（ＤＬＬ３）、デルタ様４（ＤＬＬ４）、Ｊａｇｇｅｄ１（Ｊａｇ１）、またはＪａｇｇｅｄ２をコードする。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリ核酸はＪａｇｇｅｄ  １をコードする。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、組成物は少なくとも１つの治療薬をさらに含む。一実施形態では、治療薬は抗体または抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体、ヒト化モノクローナル抗体、キメラ抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片はウイルス抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、組成物の抗体としては、抗ＣＤ２０（レチキシマブ、ベルツズマブ、オファツムマブ、ウブリツキシマブ、オカラツズマブ、オビヌツズマブ）、抗Ｈｅｒ２（トラスツズマブ）、抗ＣＤ５２（アレムツズマブ）、抗ＥＧＦＲ（セツキシマブ）、および抗ＣＤ３８（ダラツムマブ）、ならびにそれらのヒト化およびＦｃ修飾変異体が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、抗ＣＤ１９、ＣＤ２０、およびＣＤ３３抗原などの腫瘍細胞抗原を標的とする抗体のＦａｂ領域を、免疫細胞の表面タンパク質を認識する別のＦａｂ領域と組み合わせて融合する、二重および三重特異性抗体の設計は細胞を刺激し、続いて腫瘍細胞を殺す。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、組成物への追加の添加剤は、化学療法剤、放射性部分、および免疫調節薬（ＩＭｉＤ）のうちの１つ以上を含む。サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドマイドなどの免疫調節薬は、ＮＫ細胞とＴ細胞の両方を刺激する。化学療法剤は、細胞傷害性抗悪性腫瘍剤を指し、すなわち新生細胞を優先的に殺すかまたは急速に増殖する細胞の細胞周期を破壊するか、または幹癌細胞を根絶することが見出され、そして新生細胞の増殖を予防または低減するために治療的に用いられる。化学療法剤はまた、抗新生物剤または細胞毒性剤または薬剤とも呼ばれ、そして当該分野において周知である。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、化学療法剤は、アントラサイクリン、アルキル化剤、アルキルスルホネート、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、抗生物質、代謝拮抗物質、葉酸類似体、プリン類似体を含む。ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、白金含有剤、インターフェロン、およびインターロイキンを含む。例示的な化学療法剤は、これらに限定されないが、薬（シクロホスファミド、メクロレタミン、メファリン、クロラムブシル、ヘマメチルメラミン、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン）、代謝拮抗剤（メトトレキサート、フルオロウラシル、フロキシウリジン、シタラビン、６-メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン）、エピポドフィロトキシン（エトポシド、エトポシドオルトキノン、およびテニポシド）、抗生物質（ダウノルビシン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ビサントレン、アクチノマイシンＤ、プリカマイシン、プロマイシン、およびグラミシジンＤ）、パクリタキセル、コルヒチン、シトカラシンＢ、エメチン、マイタンシン、タンシン、およびアムサクリンが挙げられる。追加の薬剤は、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、アルトレタミン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、イリノテカン（ＣＰＴ-１１）、アレムツザマブ（ａｌｅｍｔｕｚａｍａｂ）、アルトレタミン、アナストロゾール、Ｌ-アスパラギナーゼ、アザシチジン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、セツキシマブ、クラドリビン、クロフラビン、シタラビン、ダカルバジン、デニロイキン・ディフティトックス、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドロモスタノロン、エピルビシン、エルロチニブ、エストラムスチン、エトポシド、エチニルエストラジオール、エキセメスタン、フロキシウリジン、５-フルオロウラシル、フルダラビン、フルタミド、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロンアルファ（２ａ、２ｂ）、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、メクロレタミン、メゲストロール、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌｉｎ）、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ナンドロロン、ノフェツモマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペメトレキセド、ペガデマーゼ、ペガパラガス、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポリフェプロサン、ポルフィマー、プロカルバジン、キナクリン、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン（ｔｏｐｅｔｅｃａｎ）、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシルマスタ��ド、バルルビシン、ビノレルビン、ゾレドロネートが挙げられる。
【０１５４】
追加の適切な治療薬は、化学療法薬または放射線療法薬として承認され、そして当技術分野において公知であるものを含む、ヒトでの使用が承認されているものである。そのような薬剤は、多数の標準的な内科医および腫瘍医の参考文献（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｎｉｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ-Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｙ．，１９９５）または米国国立がん研究所ウェブサイ（ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ｄｒｕｇｌｉｓｔｆｒａｒｎｅ．ｈｔｍ）のいずれによっても参照することができ、両方とも随時更新される。
【０１５５】
ＩＩ．調節のための免疫細胞および調節された免疫細胞
本発明は、表１から選択される１つ以上の調節剤とインビトロまたはエクスビボで接触させた免疫細胞の単離集団または亜集団を含む組成物を提供する。一実施形態において、免疫細胞の単離された集団または亜集団は、免疫細胞の治療的可能性を向上させるのに十分な量で表１から選択される１つ以上の調節剤とエクスビボで接触されている。いくつかの実施形態では、処理された免疫細胞は細胞に基づく養子療法に用いられる。本発明はさらに、免疫細胞の集団または亜集団、および表１に列挙された薬剤から選択される１つ以上の調節剤を提供し、ここで１つ以上の前記薬剤を用いた単離免疫細胞の集団または亜集団の接触による処理が治療養子療法のための免疫細胞の治療的可能性を改善する。当該処理は、免疫細胞の生物学的特性を改変して、細胞増殖、細胞毒性、持続性を改善し、そして／または細胞療法の再発率を低下させることができる。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、表１から選択される少なくとも１つの化合物、およびそれらの誘導体または類似体を含む。いくつかの態様において、調節された免疫細胞の集団はＴ細胞を含む。いくつかの態様において、調節された免疫細胞の集団はＮＫ細胞を含む。いくつかの態様において、調節された免疫細胞の集団はＮＫＴ細胞を含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、１つ以上の調節剤と接触させたＴ細胞の集団または亜集団は、同じ処置をしていないＴ細胞と比較して、ナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞記憶Ｔ細胞（Ｔｓｃｍ）、および／または中枢記憶Ｔ細胞（Ｔｃｍ）の数および相対比の増加、および／または細胞増殖、細胞毒性、細胞想起応答、および／または持続性の改善を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｎ、Ｔｓｃｍ、および／またはＴｃｍの数は、表１から選択された１つ以上の調節剤を用いた同じ処置をしていない細胞集団のＴｎ、Ｔｓｃｍ、および／またはＴｃｍの数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上増加するか、または少なくとも２、３、４、５、１０、１５、もしくは２０倍以上増加する。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、表１から選択される１つ以上の前記調節剤と接触と接触させたＮＫ細胞の集団または亜集団は、同じ処置をしていないＮＫ細胞と比較して、適応（または記憶）ＮＫ細胞の数または相対比の増加、および／または細胞増殖、細胞毒性、細胞想起応答、および／または持続性の改善を含む。いくつかの実施形態では、適応ＮＫ細胞の数は、同じ処置をしていない細胞集団中の適応ＮＫ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上増加するか、または少なくとも２、３、４、５、１０、１５、または２０倍以上増加する。一実施形態では、１つ以上の前記薬剤と接触させたＮＫ細胞の集団または亜集団は、数または相対比が増加した適応ＮＫ細胞を含む。１つの実施形態では、適応ＮＫ細胞はＣＤ３-およびＣＤ５６＋、ならびにＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ-２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡの少なくとも１つによって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、適応ＮＫ細胞はＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ-２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡのうちの少なくとも２つである。例えば、適応ＮＫ細胞はＣＤ５７＋およびＮＫＧ２Ｃ＋であり得る。いくつかの実施形態では、適応ＮＫ細胞はＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ-２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡのうちの少なくとも３つである。例えば、適応型ＮＫ細胞は、ＳＹＫ-、ＦｃεＲγ-、およびＥＡＴ-２-であり得る。一の実施形態では、１つ以上の前記薬剤と接触させたＮＫ細胞の集団または亜集団は、ＧＳＫ３阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＲＯＣＫ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＰＤＫ１アゴニスト、および／またはラパマイシンとさらに接触される。一実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤は、ＣＨＩＲ９９０２１、ＢＩＯ、ＴＷＳ１１９、またはケンパウロンである。一実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤はＴＷＳ１１９である。別の実施形態において、ＧＳＫ３阻害剤はＣＨＩＲ９９０２１である。さらに別の実施形態では、ＧＳＫ３阻害剤はＢＩＯである。
【０１５９】
いくつかの他の実施形態では、１つ以上の調節剤と接触させたＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、表１から選択される１つ以上の前記調節剤で処置をしていないＮＫＴ細胞の単離集団または亜集団と比較して、ＩＩ型に対するＩ型ＮＫＴの数または相対比の増加、および／または細胞増殖、細胞毒性、細胞想起応答の改善、および／または持続性の改善が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｉ型ＮＫＴ細胞の数は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の数は、表１から選択される１つ以上の前記調節剤で処置をしていない１型ＮＫＴ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上増加するか、または少なくとも５、１０、１５、または２０倍以上増加する。
【０１６０】
いくつかの非限定的な実施形態において、調節された免疫細胞集団のナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞記憶Ｔ細胞（Ｔｓｃｍ）、中枢記憶Ｔ細胞（Ｔｃｍ）、適応ＮＫ細胞、および／またはＩ型ＮＫＴ細胞の数または相対比の増加は、これらの細胞サブタイプの維持と拡大の増加、および／または、より成熟した細胞サブタイプから所望の分化状態における細胞サブタイプへの細胞脱分化／再プログラミングの増加、および／または一方からもう一方への表現型の歪みに起因する。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、免疫細胞の集団を表１に含まれる１種以上の前記調節剤と接触させた後、調節細胞集団のナイーブＴ細胞（Ｔｎ）、幹細胞記憶Ｔ細胞（Ｔｓｃｍ）、中枢記憶Ｔ細胞（Ｔｃｍ）の数は未処理免疫細胞集団と比較して増加する。ここでＴｎ、ＴｓｃｍおよびＴｃｍは、ＣＣＲ７および／またはＣＤ６２Ｌの共発現によって特徴付けられる。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団を表１に含まれる１つ以上の前記調節剤と接触させた後、調節細胞集団中の適応ＮＫ細胞の数は未処理免疫細胞集団と比較して増加する。ここで適応ＮＫ細胞はＣＤ３-、ＣＤ５６＋、ＣＤ１６＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、およびＣＤ５７＋によって特徴付けられる。いくつかの他の実施形態では、適応ＮＫ細胞はＣＤ３-およびＣＤ５６＋、ならびにＣＤ５７＋、ＮＫＧ２Ｃ＋、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ-２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤ１、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡのうちの少なくとも１つ、２つ、または３つによって特徴付けられる。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団を表１に含まれる１つ以上の前記調節剤と接触させた後、調節細胞集団中のＩ型ＮＫＴ細胞の数は未処理免疫細胞集団と比較して増加する。ここで１型ＮＫＴ細胞は、表面抗原ＣＤ３＋、ＣＤ５６＋、ＴＣＲ  Ｖα２４＋、および／またはＴＣＲ  Ｖβ１１＋によって特徴付けられる。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される調節剤による処理のためのＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物から単離することができる。そのような非ヒト哺乳動物の例には、ウサギ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、およびそれらのトランスジェニック種が含まれるがこれらに限定されない。
【０１６５】
調節のためのＴ細胞の集団または亜集団は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、および感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含むがこれらに限定されない多くの供給源から入手または単離することができる。骨髄は大腿骨、腸骨稜、股関節、肋骨、胸骨、その他の骨から採取できる。さらに、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１などの当技術分野で利用可能なＴ細胞株も使用することができる。
【０１６６】
調節のためのＮＫ細胞の集団または亜集団は、末梢血、臍帯血、および腫瘍を含むがこれらに限定されない多数の供給源から得ることができ、または濃縮することができる。
【０１６７】
調節のための完全に成熟したＮＫＴ細胞は、骨髄、リンパ節組織および臍帯血、胸腺組織において潜在的に見出される成熟ＮＫＴ細胞のより小さな集団を用いて、末梢血から得ることができ、または濃縮することができる。
【０１６８】
本発明の特定の実施形態では、調節のためのＴ、ＮＫ、および／またはＮＫＴ細胞を含む免疫細胞の単離または濃縮された集団もしくは亜集団は、当業者に公知の任意の数の技術、例えばＦｉｃｏｌｌ（商標）分離を用いて血液単位から得ることができる。一実施形態では、個体の循環血液由来のＴ細胞、ＮＫ細胞またはＮＫＴ細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含む細胞を含む。一実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、その後の処理工程のために細胞を適切な緩衝液または培地に入れることができる。本発明の一実施形態では、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。代替の実施形態では、洗浄液はカルシウムを欠き、マグネシウムを欠くことがあり、または全部ではないとしても多くの二価カチオンを欠くことがある。当業者には容易に理解されるように、洗浄工程は、製造元の指示に従って、半自動「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ  ２９９１細胞プロセッサ、Ｂａｘｔｅｒ  ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓａｖｅｒ  ５）を使用よるような当業者に公知の方法によって達成することができる。洗浄後、細胞は、例えば、Ｃａを含まない、Ｍｇを含まないＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ  Ａ、または緩衝液を含むもしくは含まない他の食塩水などの様々な生体適合性緩衝液に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁することができる。
【０１６９】
別の実施形態では、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞を含む免疫細胞の集団、または調節のためのそれらの亜集団は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配または向流遠心遠心洗浄選別によって、赤血球を溶解し、単球を除去することによって末梢血リンパ球から単離または濃縮される。
【０１７０】
一実施形態では、調節のためのＴ細胞の特定の亜集団は、例えばＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、および／またはＣＤ１２２抗体を使用する陽性または陰性選択技術によってさらに単離または濃縮することができる。例えば、一実施形態では、Ｔ細胞の単離または濃縮された集団または亜集団は、所望のＴ細胞を濃縮するための十分な期間にわたる抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）結合ビーズとのインキュベーションにより増殖および活性化される。一実施形態では、期間は約３０分である。さらなる実施形態では、期間は３０分から７２時間以上、およびその間のすべての整数値の範囲である。さらなる実施形態では、期間は少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ましい実施形態では、期間は１０から７２時間である。好ましい一実施形態では、インキュベーション期間は３〜６日間である。白血病患者からＴ細胞を分離するためには、２４時間といった長いインキュベーション時間を使用すると、細胞収量が増加する可能性がある。腫瘍組織または免疫障害を持つ個体からの腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の単離など、他の細胞型と比較してＴ細胞がほとんどないあらゆる状況において、より長いインキュベーション時間を用いてＴ細胞を単離することができる。さらに、より長いインキュベーション時間の使用はＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率を高めることができる。したがって、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を単純に短くするかまたは長くすることによって、および／または（本明細書でさらに記載したように）Ｔ細胞に対するビーズの比率を増加または減少させることによってＴ細胞の特定の集団または亜集団を培養開始時またはプロセス中の他の時点でさらにまたはそれに対して選択できる。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３抗体および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることによって、Ｔ細胞の特定の集団または亜集団を培養開始時または他の所望の時点で優先的または非選択的に選択できる。当業者は、複数ラウンドの選択も本発明の文脈において使用できることを認識するであろう。特定の実施形態では、選択手順を実行し、活性化および拡大プロセスにおいて「選択されていない」細胞を使用することが望ましい場合がある。「選択されていない」細胞もまた、さらなる選択ラウンドにかけることができる。
【０１７１】
ネガティブ選択による調節のためのＴ、ＮＫ、ＮＫＴ細胞含む免疫細胞の集団またはそれらの亜集団の単離または濃縮は、ネガティブ選択された細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせを用いて達成され得る。一つの方法は、細胞選別および／または陰性磁気免疫接着または蛍光活性化選択細胞選別による選別であり、これは陰性選別された細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する。例えば、ネガティブ選択によってＣＤ３＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、およびＨＬＡ-ＤＲに対する抗体を含む。特定の実施形態では、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞を富化するか、またはそれを確実に選択することが望ましい場合がある。あるいは、特定の実施形態において、Ｔ調節細胞は、抗ＣＤ２５コンジュゲートビーズまたは他の同様の選択方法によって枯渇される。いくつかの実施形態では、免疫療法のための所望のＴ細胞亜集団は、ＣＣＲ７およびＣＤ６２ＬによってＴ細胞を含む調節された免疫細胞から濃縮または選択される。あるいは、関心のある細胞は、サイズの違い、密度、粒状度、変形性、抵抗または静電容量を含む物理的パラメータに従って選択されてもよい。
【０１７２】
一の実施形態では、調節のために適応ＮＫ細胞を含む免疫細胞の集団はＣＤ１６、ＮＫＧ２ＣおよびＣＤ５７の陽性発現を含むような識別子を用いて、表現型ＣＤ３-およびＣＤ５６＋方にＮＫ細胞を含む調節された免疫細胞内で選択することによって濃縮される。さらに、適応亜集団のネガティブ選択は、ＮＫＧ２Ｃおよび／またはＣＤ５７の発現の欠如、ならびにさらに以下、低ＰＬＺＦ、低ＳＹＫ、低ＦｃεＲγ、低ＥＡＴ２、低ＴＩＧＩＴ、低ＰＤＩ、低ＣＤ７、低ＣＤ１６１、高ＬＩＬＲＢ１、高ＣＤ４５ＲＯ、および低ＣＤ４５ＲＡのうちの１つ以上の発現の欠如に基づくことができる。
【０１７３】
一実施形態では、調節のためのＮＫＴ細胞の集団または亜集団は、不変のＴＣＲ□鎖を表現型的に発現するもの、具体的には以下のマーカー：ＣＤ３＋、ＣＤ５６＋、ＴＣＲＶα２４＋、および／またはＴＣＲＶβ１１＋の組み合わせのものをＮＫ細胞の集団内で選択することによって濃縮される。代替的に、ＮＫＴ細胞は、不変ＴＣＲ□鎖の発現と組み合わせた表現型の組み合わせに基づいて選択することができる。
【０１７４】
対象からの血液試料またはアフェレーシス生成物は、本明細書に記載の免疫細胞が単離される前の期間に収集することができる。それ自体、調節されるべき細胞の供給源は、任意の多数の適切な時点で収集され得、そして、例えば本明細書に記載したそのような細胞療法から利益を得るであろう任意の数の疾患または状態のための細胞ベース免疫療法で後半に使用する単離し凍結したＴ細胞、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞などの所望の細胞であり得る。一実施形態では、血液サンプルまたはアフェレーシス産物は、一般に健康な対象から収集される。特定の実施形態では、血液またはアフェレーシス産物は、疾患を発症する危険性があるがまだ疾患を発症していない一般に健康な対象から収集され、目的の細胞は後の使用のために単離され凍結される。他の実施形態では、血液試料またはアフェレーシス製品は、特定の疾患（例えば癌）を有する対象から採取される。さらに別の実施形態では、血液サンプルまたはアフェレーシス産物は、遺伝子改変免疫細胞（遺伝子操作された、または再配列、突然変異、遺伝子インプリンティングおよび／またはエピジェネティック改変から天然に誘導された）を以前に投与した被験体から採取される。特定の実施形態では、Ｔ、ＮＫ、ＮＫＴまたは他の免疫細胞を増殖させ、凍結させ、そして後に処理および使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のように特定の疾患の診断の直後であるが任意の治療の前に、患者から試料を採取する。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）血清反応陽性を示す被験体から単離される。さらなる実施形態において、細胞は、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤などの薬剤による治療、化学療法、放射線療法、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸塩、およびＦＫ５０６、抗体などの免疫抑制薬、あるいはＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、チトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８などの他の免疫破壊剤、ならびに照射を含むこれらに限定されない任意の数の関連治療法の前に対象からの血液またはアフェレーシス産物から単離される。さらなる実施形態では、細胞は、骨髄または幹細胞移植、フルダラビンのような化学療法剤、外照射（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、またはＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰＡＴＨなどの抗体を使用したＴ細胞除去療法と併用（例えば、併用前、同時、併用後）して後で使用するために単離し凍結される。別の実施形態では、細胞は、ＣＤ２０と反応する薬剤（例えば、リツキサン）のようなＢ細胞除去療法後の治療で後に使用するために単離され、凍結され得る。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞、および／またはその亜集団を含む調節のための免疫細胞はゲノム工学的に操作され、これは挿入、欠失、または核酸置換を含み得る。修飾免疫細胞は、サイトカイン導入遺伝子、沈黙抑制性受容体、または過剰発現活性化受容体、または免疫細胞を再標的化するためのＣＡＲを発現し得る。いくつかの実施形態では、対象もしくはドナーから調節のために単離される免疫細胞集団、または対象／ドナーの末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、腫瘍から単離されるかまたはそれらに含まれる免疫細胞集団は遺伝子操作することができる。いくつかの実施形態では、単離された免疫細胞集団およびそれから得られた調節免疫細胞はゲノム操作されており、挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの実施形態において、調節のための免疫細胞およびそれから得られる調節された免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６もしくはその変異体の過剰発現をコードする外因性核酸を含む。
【０１７６】
一実施形態では、調節のためのゲノム操作された免疫細胞およびそれから得られる調節された免疫細胞は、安全スイッチタンパク質、ターゲティング様式、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬学的活性タンパク質、ペプチド、薬物標的候補；または生着、輸送、ホーミング、生存率、自己複製、持続、免疫応答の調節および調節、および／または免疫細胞の生存を促進するタンパク質のうちの１つ以上を含む遺伝子組み換え様式を１つ以上含む。いくつかの他の実施形態では、遺伝子組み換え様式には、（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、Ｔａｐａｓｉｎ、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰの１つ以上の欠失または発現低下、および染色体６ｐ２１領域のあらゆるＨＬＡ遺伝子の欠失または発現低下；（ｉｉ）ＨＬＡ-Ｅ、ＨＬＡ-Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、または二重もしくは多重特異的または普遍的なエンゲージャーとの結合のための表面誘発受容体の発現の導入もしくは発現増加の１つ以上が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＮＫＴ細胞は、調節のため、またはそれから調節されるために、外因性核酸を含む。いくつかの実施形態において、外因性核酸は、細胞の直接ゲノム編集を介して免疫細胞に導入される。いくつかの他の実施形態では、外因性核酸は、分化によって免疫細胞を生じさせる、ゲノム操作された造血幹細胞もしくは前駆細胞またはｉＰＳＣからの免疫細胞の保持によって免疫細胞に導入される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のための外因性核酸は、ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）、ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、三特異的Ｔ細胞エンゲージャー、多重特異的Ｔ細胞エンゲージャー、または複数の免疫細胞型に適合するユニバーサルエンゲージャーをコードすることができ。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞に対する外因性核酸は、ＴＣＲ、ＣＡＲ、ＣＤ１６またはそれらの変異体、ＮＹ-ＥＳＯ、λ二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢｉＫＥ）、三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴｒｉＫＥ）、多重特異性キラー細胞エンゲージャー、または複数の免疫細胞型に適合したユニバーサルエンゲージャーをコードすることができる。いくつかの実施形態では、ＮＫＴ細胞に対する外因性核酸は改変型ＴＣＲまたはＣＡＲであり得る。いくつかの態様において、外因性核酸ＣＡＲ１９をコードする。いくつかの実施形態では、ＣＤ１６変異体は、高親和性ＣＤ１６（ＨＡＣＤ１６）、切断不可能なＣＤ１６、および高親和性切断不可能なＣＤ１６（ｈｎＣＤ１６）を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、調節のための免疫細胞の集団または亜集団は、インビトロで幹細胞または前駆細胞から分化する。いくつかの実施形態において、Ｔ、ＮＫ又はＮＫＴ細胞の単離された集団または亜集団は、幹細胞、造血幹細胞または前駆細胞（ＨＳＣ）または前駆細胞から分化することができる。前駆細胞は、ＣＤ３４＋造血内皮細胞、多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞、又はＮＫＴ細胞前駆体であってもよい。幹細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）および胚性幹細胞（ＥＳＣ）などの多能性幹細胞であり得る。ｉＰＳＣは、天然に存在しない再プログラムされた多能性細胞である。一旦、対象の細胞が多能性状態に再プログラムされると、その後細胞はＴ、ＮＫ、またはＮＫＴ細胞などの所望の細胞型またはサブタイプにプログラム化または分化され得る。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、造血表現型を呈することを前提に誘導することができるｉＰＳＣは、中胚葉幹細胞から完全分化Ｔ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞までの範囲にわたり、多段階分化プラットフォームによってＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞に分化される。（例えば、米国特許出願第６２／１０７，５１７号および同第６２／２５１，０１６号を参照（これらの開示は、その全体が本明細書中に援用される））。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、またはＴ、ＮＫまたはＮＫＴ細胞分化のための前駆体はゲノム工学的に操作され、これは挿入、欠失、または核酸置換を含み得る。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、ゲノム操作されたｉＰＳＣ、ＨＳＣまたは造血前駆細胞は、安全スイッチタンパク質、標的化様式、受容体、シグナル伝達分子、転写因子、薬学的活性タンパク質およびペプチド、薬物標的候補；あるいはｉＰＳＣ、ＨＳＣ、前駆細胞、またはそれらの由来細胞の生着、輸送、ホーミング、生存率、自己複製、持続、免疫応答の調節および調節、および／または生存を促進するタンパク質のうちの１つ以上を含む。いくつかの他の実施形態では、遺伝子組み換え様式には、（ｉ）Ｂ２Ｍ、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＲＦＸＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、またはＲＦＸＡＰ、および染色体６ｐ２１領域のあらゆるＨＬＡ遺伝子の欠失または発現低下、（ｉｉ）ＨＬＡ-Ｅ、ＨＬＡ-Ｇ、ＨＡＣＤ１６、ｈｎＣＤ１６、４１ＢＢＬ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４７、ＣＤ１１３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、Ｆｃ受容体、二重もしくは多重特異的または普遍的なエンゲージャー、ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）、またはＣＡＲ（キメラ抗原受容体）との結合のための表面誘発受容体の発現の導入もしくは発現増加の１つ以上が含まれる。いくつかの態様において、ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、またはＴ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のための前駆体は、改変型ＨＬＡクラスＩおよび／またはＩＩを含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、または改変型ＨＬＡクラスＩおよび／もしくはＩＩによるＴ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のための前駆体は、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ-Ｅ／Ｇ、ＰＤＬ１、Ａ２ＡＲ、ＣＤ４７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＡＰ１、ＴＡＰ２、タパシン、ＮＬＲＣ５、ＰＤ１、ＲＦＫＡＮＫ、ＣＩＩＴＡ、ＲＦＸ５、およびＲＦＸＡＰの少なくとも１つのヌルまたは低発現のものを含む。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、またはＴ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のための前駆体は外因性核酸を有する。いくつかの実施形態では、外因性核酸は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）、三重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、多重特異性Ｔ細胞エンゲージャー、ＣＤ１６またはその変異体、ＮＹ-ＥＳＯ、二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢｉＫＥ）、三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴｒｉＫＥ）、多重特異性キラー細胞エンゲージャー、または複数の免疫細胞型と適合する普遍的エンゲージャーをコードする。いくつかの態様において、外因性核酸は、ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、またはＴ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のための前駆体においてｈｎＣＤ１６をコードする。いくつかの態様において、外因性核酸は、ｉＰＳＣ、ＨＳＣ、またはＴ、ＮＫもしくはＮＫＴ細胞分化のための前駆体においてＣＡＲ１９をコードする。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団または亜集団は、インビトロで非造血運命の非多能性細胞から造血系統細胞へトランス分化し、または一次造血細胞型の非多能性細胞から別の造血細胞型へトランス分化されるが、この分化転換はＴ、ＮＫ、又はＮＫＴ前駆細胞またはＴ、ＮＫ、またはＮＫＴ細胞などの免疫細胞の完全に分化した特定のタイプにすることができる。（米国特許第９３７６６６４及びＵＳ出願１５／０７２７６９を参照（その開示内容全体が本明細書に組み込まれる））。いくつかの実施形態において、非造血運命の非多能性細胞は、皮膚線維芽細胞、脂肪組織由来細胞およびヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）などの体細胞である。トランス分化に有用な体細胞は、不死化体細胞であり得る。
【０１８１】
種々の戦略が、細胞において、多能性を誘導する、または効力を増加させる（高橋、Ｋ．、および山中、Ｓ．、セル１２６、６６３-６７６（２００６）高橋ら、Ｃｅｌｌ  １３１、８６１-８７２（。２００７）；Ｙｕら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１８、１９１７〜１９２０（２００７）；Ｚｈｏｕら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ４、３８１〜３８４（２００９）；Ｋｉｍら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ４、４７２〜４７６（２００９）。；Ｙａｍａｎａｋａら、２００９年；Ｓａｈａ、Ｋ．、Ｊａｅｎｉｓｃｈ、Ｒ。、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ５，５８４-５９５（２００９））、および再プログラミングの効率を改善するために追求されている（Ｓｈｉら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ２，５２５）。-５２８（２００８ａ）；Ｓｈｉら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ３、５６８-５７４（２００８ｂ）；Ｈｕａｎｇｆｕら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２６、７９５-７９７（２００８ａ）；Ｈｕａｎｇｆｕら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２６、１２６９-１２７５（２００８ｂ）；Ｓｉｌｖａら、Ｐｌｏｓ  Ｂｉｏ  ６、ｅ２５３。土井：１０．１３７１／ジャーナル。Ｐｂｉｏ００６０２５３（２００８）。Ｌｙｓｓｉｏｔｉｓら、ＰＮＡＳ  １０６、８９１２〜８９１７（２００９）；Ｍ。Ｉｃｈｉｄａら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ５、４９１〜５０３（２００９）；Ｍ。Ｍａｒｅｒｉａｌｉ、Ｎ．、Ｈｏｃｈｅｄｌｉｎｇｅｒ、Ｋ。Ｅｓｔｅｂａｎら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ６、７１〜７９（２０１０）；Ｍ。これらの開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０１８２】
ＩＩＩ．養子療法のための免疫細胞の調節方法
本発明は、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法を提供し、そしてこの方法は表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と免疫細胞を接触させることを含む。
【０１８３】
一実施形態では、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含み、ここで、処理された免疫細胞は同じ組成物に接触していない免疫細胞と比較して、細胞増殖が増加し、１つ以上の所望の細胞亜集団の数または相対比が増加し、増殖、細胞毒性、または細胞想起応答が改善し、そして持続性が改善されている。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含み、ここで、１つ以上の所望の細胞亜集団の維持または増殖が表１の薬剤と接触していない免疫細胞の集団と比較して改善されている。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含み、ここで、所望の分化状態に再プログラム化された集団の数または比率が、表１の薬剤と接触していない免疫細胞の集団と比較して増加する。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、細胞増殖を増大させるのに十分な量で表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と免疫細胞を接触させることを含み、表１の薬剤と接触していない免疫細胞の集団と比較して、１つ以上の所望の免疫細胞亜集団の数または比率が増加し、および／または免疫細胞の増殖、細胞毒性、細胞想起応答および／または持続性が改善する。一実施形態において、免疫細胞治療剤は、約０．１ｎＭ〜約５０μＭである。一実施形態において、免疫細胞治療剤は、約０．１ｎＭ、０．５ｎＭ、１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、１μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、または２５である。μＭ、またはその間の任意の濃度である。一実施形態において、免疫細胞治療のための調節剤は、約０．１ｎＭ〜約５ｎＭ、約１ｎＭ〜約１００ｎＭ、約５０ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約１００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約１μＭ、約５００ｎＭ〜約５μＭ、約３μＭ〜約１０μＭ、約５μＭ〜約１５μＭ、約１２μＭ〜約２０μＭ、または約１８μＭ〜約２５μＭ、またはその間の任意の範囲である。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法は、免疫細胞を、表１から選択される少なくとも１つの前記調節剤を含む組成物と、同じ組成物に接触していない免疫細胞と比較して少なくとも１つの望ましい治療的特質を改善するのに十分な時間接触させることを含む。一実施形態では、免疫細胞を表１の１つ以上の調節剤と少なくとも１０分、３０分、１時間、２時間、５時間、１２時間、１６時間、１８時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１５日、２０日、２５日、３０日、またはその間の任意の長さの期間接触させる。一実施形態において、免疫細胞は、約０．５時間〜約２時間、約１時間〜約１２時間、約１０時間〜約２日、約１日〜約３日、約２日〜約５日、約３日〜約６日、約５日〜約８日、約７日〜約１４日、約１２日〜約２２日、約１４日〜約２５日、約２０日〜約３０日の間、表１の１つ以上の調節剤と接触される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、２時間以上、またはその間の任意の長さの時間にわたって、１つ以上の前記薬剤と接触させられる。そのようなものとして、前記十分な時間の長さは、例えば、１５、１３、１１、９、７、５、３、または１時間以上である。方法のいくつかの他の実施形態では、前記十分な時間の長さは、２４時間、３６時間、４８時間、６０時間、７２時間以上、またはその間の任意の長さの時間である。このように、前記十分な時間は、例えば、３０、４２、５４、６６、７８、９０時間以上である。
【０１８８】
免疫細胞を表１から選択される少なくとも１つの薬剤を含む組成物と接触させることを含む、養子細胞に基づく治療に適した免疫細胞の集団または亜集団を調節する方法はさらに、接触後の免疫細胞から１以上の所望の亜集団を濃縮または分離することを含み、ここで、１以上の所望の亜集団は、ナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、中枢記憶Ｔ細胞、適応ＮＫ細胞、またはＩ型ＮＫＴ細胞を含む。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、調節のための免疫細胞は、ＣＭＶ血清反応陽性であるか、または遺伝子改変免疫細胞を以前に投与されたことがある対象から得られる。いくつかの実施形態では、調節後、対象から得られた遺伝的に修飾された免疫細胞は自己由来または同種異系で投与され得る。いくつかの実施形態では、調節のためのドナー由来免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および／またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする外因性核酸を含む。
【０１９０】
処理される免疫細胞の集団は、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、対象／ドナーの腫瘍、または多能性幹細胞集団から単離またはそれらに含まれてもよい。対象は健康であり得るか、または自己免疫障害、造血器悪性腫瘍、ウイルス感染または固形腫瘍を有し得る。調節のための免疫細胞の集団は、ゲノム操作されてもよく、そして細胞は挿入、欠失、および／または核酸置換を含む。いくつかの特定の実施形態では、ゲノム操作された免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６もしくはその変異体の過剰発現をコードする外因性核酸を含む。
【０１９１】
あるいは、調節のための免疫細胞の集団は、インビトロで幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、または前駆細胞から分化させることができ、造血系または非造血系の非多能性細胞からトランス分化してもよい。いくつかの実施形態では、調節のための免疫細胞が由来する幹細胞、造血幹細胞もしくは前駆細胞、前駆細胞、または非多能性細胞は、挿入、欠失、および／または核酸置換を含むようにゲノム操作されており、それはまたそれから誘導された免疫細胞に含まれる。いくつかの特定の実施形態では、誘導免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、および／またはＣＤ１６もしくはその変異体の過剰発現をコードする外因性核酸を含む。
【０１９２】
ＩＶ．調節された免疫細胞、免疫細胞集団または亜集団の治療的使用
本発明は、細胞ベースの養子療法で使用時に免疫細胞の治療能力を向上させるのに十分な量で表１から選択される１つ以上の調節剤と接触、処理、または調節された免疫細胞の単離集団または亜集団を含む治療組成物を提供する。一実施形態では、接触、処理、または調節された免疫細胞は、同じ薬剤と接触していない免疫細胞と比較して、細胞増殖の増加；所望の細胞亜集団の数または相対比の増加；増殖、細胞毒性または細胞想起応答の改善；および持続性の改善を含むこれらに限定されない、少なくとも１つの望ましい治療的特質を得る。いくつかの実施形態において、１つ以上の調節剤は、表１から選択される少なくとも１つの化合物、またはその誘導体もしくは類似体を含む。一実施形態では、エクスビボで接触させた免疫細胞の単離された集団または亜集団は、数または比率が増加したナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および／または中枢記憶Ｔ細胞を含む。一実施形態では、エクスビボで接触させた免疫細胞の単離された集団または亜集団は、数または比率が増加したＩ型ＮＫＴ細胞を含む。別の実施形態では、エクスビボで接触させた免疫細胞の単離された集団または亜集団は、数または比率が増加した適応ＮＫ細胞を含む。
【０１９３】
本明細書ではまた、開示されている調節された免疫細胞と１つ以上の治療添加剤／薬剤とを含む併用治療組成物も提供されている。併用治療組成物のいくつかの実施形態において、１つ以上の治療添加剤は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、小ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血球、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分またはその置換因子、目的の１つ以上のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤もしくは放射性部分、または免疫調節薬（ＩＭｉＤ）を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、追加の治療薬は抗体または抗体断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体、ヒト化モノクローナル抗体、キメラ抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体または抗体断片はウイルス抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、抗体または抗体断片は腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、腫瘍またはウイルス特異的抗原は、変調された細胞を活性化し、標的細胞をより良く認識し溶解する。いくつかの実施形態では、追加の治療薬としての抗原は、調節されたＮＫ細胞を活性化して抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を利用する。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、標的細胞に結合し、さらにＮＫ細胞および他の細胞型上のＣＤ１６を結合させ、インビボおよびインビトロの両方でＡＤＣＣによって腫瘍細胞を死滅させる。ｍＡｂはまた、ＮＫ細胞阻害を遮断することによってＡＤＣＣを増強し、そしてＮＫ細胞を刺激し得る。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞媒介ＡＤＣＣは、調節されたＮＫ細胞によって発現されたＣＤ１６およびその遺伝子操作された変異体を介する。ＣＤ１６の遺伝子操作された変異体は、非切断性ＣＤ１６、高親和性ＣＤ１６（ｈａＣＤ１６）、および高親和性非切断性ＣＤ１６（ｈｎＣＤ１６）を含むがこれらに限定されない。さらに、抗ＣＤ１９、ＣＤ２０、およびＣＤ３３抗原などの腫瘍細胞抗原を標的とする抗体のＦａｂ領域を、ＮＫ細胞上のＣＤ１６を認識する別のＦａｂ領域と組み合わせて融合する二重および三重特異性抗体の設計はＮＫ細胞の刺激、続いての腫瘍細胞の殺傷をもたらす。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される調節免疫細胞との併用治療に適した抗体は、抗ＣＤ２０（レチキシマブ、ベルツズマブ、オファツムマブ、ウブリツキシマブ、オカラツズマブ、オビヌツズマブ）、抗Ｈｅｒ２（トラスツズマブ）、ＣＤ５２（アレムツズマブ）、抗ＥＧＦＲ（セルトキシマブ）、および抗ＣＤ３８（ダラツムマブ）、ならびにそれらのヒト化およびＦｃ修飾変異体を含むが、これらに限定されない。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、追加の治療薬は、化学療法薬、放射性部分、または免疫調節薬のうちの１つ以上を含む。
【０１９６】
化学療法剤は、細胞傷害性抗悪性腫瘍剤を指し、すなわち新生細胞を優先的に殺すかまたは急速に増殖する細胞の細胞周期を破壊するか、または幹癌細胞を根絶することが見出され、そして新生細胞の増殖を予防または低減するために治療的に用いられる。化学療法剤はまた、抗腫瘍薬または細胞毒性薬または薬剤とも呼ばれ、そして当該分野において周知である。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、アントラサイクリン、アルキル化剤、アルキルスルホネート、アジリジン、エチレンイミン、メチルメラミン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、抗生物質、代謝拮抗物質、葉酸類似体、プリン類似体、ピリミジン類似体、酵素、ポドフィロトキシン、白金含有剤、インターフェロン、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、またはインターロイキンを含む。例示的な化学療法剤としては、シクロホスファミド、メクロレタミン、メファリン、クロラムブシル、ヘマメチルメラミン、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、メトトレキサート、フルオロウラシル、フロキスリジン、シタラビン、シタラビン、６-メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エトポシド、エトポシドオルトキノン、テニポシド、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ビサントレン、アクチノマイシンＤ、プリカマイシン、プロマイシン、グラミシジンＤ、パクリタキセル、コルヒチン、シトカラシンＢ、エメチン、マイタンシン、およびアムサクリンが挙げられるが、これらに限定されない。追加の薬剤は、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、アルトレタミン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、イリノテカン（ＣＰＴ-１１）、アレムツザマブ（ａｌｅｍｔｕｚａｍａｂ）、アルトレタミン、アナストロゾール、Ｌ-アスパラギナーゼ、アザシチジン、ベバシズマブ、ベキサロテン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、セツキシマブ、クラドリビン、クロフラビン、シタラビン、ダカルバジン、デニロイキン・ディフティトックス、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドロモスタノロン、エピルビシン、エルロチニブ、エストラムスチン、エトポシド、エチニルエストラジオール、エキセメスタン、フロキシウリジン、５-フルオロウラシル、フルダラビン、フルタミド、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イブリツモマブ、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロンアルファ（２ａ，２ｂ）、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、メクロレタミン、メゲストロール、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌｉｎ）、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、ナンドロロン、ノフェツモマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペメトレキセド、ペガデマーゼ、ペガパラガス、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポリフェプロサン、��ルフィマー、プロカルバジン、キナクリン、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、トポテカン（ｔｏｐｅｔｅｃａｎ）、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビノレルビン、ゾレドロネートが挙げられる。他の適切な薬剤は、化学療法剤または放射線療法剤として承認され、そして当該分野で公知のものを含む、ヒトでの使用が承認されているものである。そのような薬剤は、多数の標準的な内科医および腫瘍医の参考文献（例えば、グッドマンおよびギルマンのＴｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第９版、ＭｃＧｒａｗ-Ｈｉｌｌ、ＮＹ、１９９５）または米国国立がん研究所のウェブサイト（ｆｄａ。ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｃａｎｃｅｒ／ｄｒｕｇｌｉｓｔｆｒａｒｎｅ．ｈｔｍ））のいずれによっても参照することができ、両方とも随時更新される。サリドマイド、レナリドマイド、およびポマリドマイドなどの免疫調節薬（ＩＭｉＤ）は、ＮＫ細胞とＴ細胞の両方を刺激する。本明細書中に提供されるように、ＩＭｉＤは癌治療のための調節された治療用免疫細胞と共に使用され得る。
【０１９７】
一態様では、調節免疫細胞は、養子細胞療法に適した対象に調節免疫細胞を導入または投与することによって、対象における血液悪性腫瘍、固形癌、前癌状態、自己免疫障害、ウイルス感染を治療、予防または改善するために使用できる。別の態様において、調節された免疫細胞は、そのような治療を必要とする対象に細胞を導入することによって抗腫瘍免疫応答を増強するために使用され得る。
【０１９８】
用語「治療する」、「治療」は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを一般的に意味するために本明細書で使用される。効果は、疾患を完全にまたは部分的に予防することに関して予防的であり得、および／または疾患に対する部分的または完全な治療および／または疾患に起因する有害作用に関して治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物における疾患のあらゆる治療を含み、そして、疾患にかかりやすいが、まだ罹っていると診断されていない場合の対象で発症する疾患を予防すること、疾患を抑制すること、すなわちその発症を阻止すること、または病気を軽減すること、すなわち病気の後退を引き起こすことを含む。治療薬または組成物は、疾患または損傷の発症前、発症中または発症後に投与することができる。治療が患者の望ましくない臨床症状を安定化または軽減する進行中の疾患の治療も特に興味深い。特定の実施形態では、病気、疾患、および／または傷害をもつ治療を必要とする対象は、細胞療法によって少なくとも１つの関連症状において治癒し、快方し、および／または改善し得る。特定の実施形態は、細胞療法を必要とする対象は、これらに限定されないが、骨髄または幹細胞移植の候補者、化学療法または放射線療法を受けたことがある対象、過剰増殖性障害または癌、例えば造血系の過剰増殖性障害または癌有するかまたは有する危険性がある対象、固形腫瘍などの腫瘍を有するかまたは発症する危険性がある対象、ウイルス感染またはウイルス感染症に関連する疾患を有するかまたは有する危険性がある対象を含むことを意図する。
【０１９９】
血液悪性腫瘍の例には、急性および慢性白血病（急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキン病、多発性骨髄腫、および骨髄異形成症候群を含まれるが、これらに限定されない。固形癌としては、脳、前立腺、乳房、肺、結腸、子宮、皮膚、肝臓、骨、膵臓、卵巣、精巣、膀胱、腎臓、頭、首、胃、頸部、直腸、喉頭、食道の癌が挙げられるが、これらに限定されない。様々な自己免疫障害の例としては、円形脱毛症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、皮膚筋炎、糖尿病（１型）、いくつかの形態の若年性特発性関節炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、いくつかの形態の心筋炎、多発性硬化症、天疱瘡／類天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症／全身性硬化症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、いくつかの形態の甲状腺炎、いくつかの形態のブドウ膜炎、白斑、多発性血管炎を伴う肉芽腫症（ウェゲナー）が挙げられるが、これらに限定されない。ウイルス感染症の例としては、これらに限定されない、ＨＩＶ-（ヒト免疫不全ウイルス）、ＨＳＶ-（単純ヘルペスウイルス）、ＫＳＨＶ-（カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス）、ＲＳＶ-（呼吸器合胞体ウイルス）、ＥＢＶ-（エプスタイン-バーウイルス）、ＣＭＶ-（サイトメガロウイルス）、ＶＺＶ（水痘帯状疱疹ウイルス）、アデノウイルス-、レンチウイルス-、ＢＫポリオーマウイルス関連障害が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２００】
開示されている調節された免疫細胞を含む治療用組成物は、他の治療の前、最中、および／または後に対象に投与することができる。したがって、併用療法の方法は、追加の治療薬の使用前、使用中、および／または使用後に調節細胞を投与または調製することを含み得る。上記のように、１つ以上の治療添加剤は、ペプチド、サイトカイン、マイトジェン、成長因子、小ＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、単核血球、フィーダー細胞、フィーダー細胞成分またはそれらの置換因子、目的の１つ以上のポリ核酸を含むベクター、抗体、化学療法剤もしくは放射性部分、または免疫調節薬（ＩＭｉＤ）を含む。調節された免疫細胞の投与は、数時間、数日、さらには数週間で追加の治療薬の投与から時間的に隔てることができる。追加的にまたは代替的に、投与は、抗新生物剤、手術などの非薬物療法などであるがこれらに限定されない他の生物学的に活性な薬剤または様式と組み合わせることができる。
【０２０１】
自己免疫細胞および同種異系免疫細胞の両方を調節し、そして上記のように細胞療法において使用することができる。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、治療組成物中の調節された免疫細胞の数は、少なくとも０．１×１０５個の細胞、少なくとも１×１０５個の細胞、少なくとも５×１０５個の細胞、少なくとも１×１０６個の細胞、少なくとも５×１０６個の細胞、少なくとも１×１０７個の細胞、少なくとも５×１０７個の細胞、少なくとも１×１０８個の細胞、少なくとも５×１０８個の細胞、少なくとも１×１０９個の細胞、または少なくとも５×１０９個の細胞である。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、約０．１×１０５〜約１×１０６個の細胞、約０．５×１０６〜約１×１０７個の細胞、約０．５×１０７〜約１×１０８個の細胞、約０．５×１０８〜約１×１０９個の細胞、約１×１０９〜約５×１０９個の細胞、約０．５×１０９〜約８×１０９個の細胞、またはその間の任意の範囲である。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、約０．５×１０６〜約１×１０６個の細胞、約０．５×１０７〜約１×１０７個の細胞、約０．５×１０８〜約１×１０８個の細胞、約０．５×１０９〜約５×１０９個の細胞、約１×１０９〜約８×１０９個の細胞、またはその間の任意の範囲である。
【０２０５】
いくつかの他の実施形態において、治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、約０．１×１０５〜約０．５×１０６個の細胞、約０．５×１０６〜約０．５×１０７個の細胞、約０．５×１０７〜約０．５×１０８個の細胞、約０．５×１０８〜約０．５×１０９個の細胞、約０．５×１０９〜約８×１０９個の細胞、またはその間の任意の範囲である。
【０２０６】
一実施形態では、治療用組成物中の調節された免疫細胞の数は、部分的または単一の臍帯血中の免疫細胞の数であるか、または少なくとも０．１ｘ１０５個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも０．５ｘ１０５個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも１ｘ１０５個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも５ｘ１０５個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも１０ｘ１０５個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも０．７５ｘ１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも１．２５×１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも１．５×１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも１．７５×１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも２×１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも２．５×１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも３×１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも４×１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも５×１０６個の細胞／ｋｇ体重。少なくとも１０ｘ１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも１５ｘ１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも２０ｘ１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも２５ｘ１０６個の細胞／ｋｇ体重、少なくとも３０ｘ１０６個の細胞／ｋｇ体重、１ｘ１０８個の細胞／ｋｇ体重、５×１０８個の細胞／ｋｇ体重、または体重１×１０９個の細胞／ｋｇ体重、または８×１０９個の細胞／ｋｇ体重である。
【０２０７】
本発明によって提供される調節された免疫細胞は、投与前にエクスビボまたはインビトロで増殖させることなく対象に投与することができる。特定の実施形態では、調節された免疫細胞集団は、調節剤を除去するために洗浄することができる。いくつかの実施形態において、造血系統細胞由来の調節された免疫細胞の単離された集団は、ＴＣＲ、ＣＡＲまたは他のタンパク質を発現するように組換え的に生成され得る。
【０２０８】
患者への投与に適した治療組成物は、１つ以上の薬剤的に許容できる担体（添加剤）および／または希釈剤（例えば薬剤的に許容できる培地、例えば細胞培養培地）、または他の薬剤的に許容できる成分を含み得る。薬剤的に許容できる担体および／または希釈剤は、投与される特定の組成物、ならびに治療用組成物を投与するために使用される特定の方法によって部分的に決定される。したがって、本発明の治療用組成物の多種多様な適切な製剤がある（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７、１９８５を参照（その開示はその全体が参照により本明細書に援用される）。
【０２０９】
特定の実施形態では、調節された細胞の単離された集団を有する治療用細胞組成物はまた、薬剤的に許容できる細胞培養培地、または薬剤的に許容できる担体および／または希釈剤を有する。本明細書に開示されるような調節された免疫細胞の集団を含む治療用組成物は、静脈内、腹腔内、経腸、もしくは気管投与方法または所望の治療目標に影響を及ぼす他の好適な化合物と組み合わせて別々に投与され得る。
【０２１０】
これらの薬剤的に許容できる担体および／または希釈剤は、治療用組成物のｐＨを約３〜約１０に維持するのに十分な量で存在することができる。そのようなものとして、緩衝剤は、全組成物の重量を基準にして約５％程度であり得る。塩化ナトリウムおよび塩化カリウムなどであるがこれらに限定されない電解質も治療用組成物中に含めることができる。一態様では、治療用組成物のｐＨは約４〜約１０の範囲内にある。あるいは、治療用組成物のｐＨは、約５〜約９、約６〜約９、または約６．５〜約８の範囲である。別の実施形態では、治療用組成物は、前記ＰＨ範囲のうちの１つにＰＨを有する緩衝剤を含む。別の実施形態では、治療用組成物は約７のＰＨを有する。あるいは、治療用組成物は、約６．８〜約７．４の範囲のＰＨを有する。さらに別の実施形態では、治療用組成物は約７．４のＰＨを有する。
【０２１１】
本発明はまた、部分的には、本発明の特定の組成物および／または培養物における薬剤的に許容できる細胞培養培地の使用も提供する。そのような組成物はヒト対象への投与に適している。一般的に言えば、本発明の調節された免疫細胞の維持、増殖、および／または健康を支持する任意の培地が医薬用細胞培養培地としての使用に適している。特定の実施形態では、薬剤的に許容できる細胞培養培地は無血清および／またはフィーダーフリー培地である。
【０２１２】
・様々な実施形態において、無血清培地は動物を含まず、そして任意にタンパク質を含まなくてもよい。場合により、培地は生物薬剤学的に許容される組換えタンパク質を含み得る。無動物培地とは、成分が非動物起源に由来する培地を指す。組換えタンパク質は、動物を含まない培地中で天然の動物性タンパク質に取って代わるものであり、栄養素は合成、植物または微生物の供給源から得られる。対照的に、無タンパク質培地は、実質的にタンパク質を含まないと定義される。当業者であれば、上記の媒体の例は例示的なものであり、本発明での使用に適した媒体の処方を限定するものではなく、当業者に公知の利用可能な多くの適切な媒体があることを理解するで  あろう。。
【実施例】
【０２１３】
以下の実施例は例示のために提供され、そして限定のために提供されない。
【０２１４】
実施例１-方法および材料
インビトロＴ細胞培養。新鮮な白血球（ＡｌｌＣｅｌｌｓ、アラメダ、カリフォルニア州）を健康なドナーから入手し、そこからＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞濃縮キット（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、バンクーバー、カナダ）を用いてＴ細胞をネガティブ選択した。新たに単離したＴ細胞を等分して凍結保存した。スクリーニングを開始した日に、Ｔ細胞を解凍し、５％ヒトＡＢ血清、ＩＬ-２、ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ、および追加のサプリメントと共にＸ-Ｖｉｖｏ１５に入れて洗浄した。細胞を、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズと共に５×１０５細胞／ｍｌで平底３８４ウェルプレートに分注した。個々の化合物を各プレートの列３から列２２までの各ウェルに最終濃度１０μＭで添加した。陽性対照および陰性対照をさらなるウェルに加えた。細胞を５％ＣＯ２で３７℃で約６日間インキュベートした。
【０２１５】
フローサイトメトリー培養６日目に、細胞を固定生存可能性マーカーおよびフルオロフォアコンジュゲート抗体：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２７、およびＣＤ１２２（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州サンノゼ、およびＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて染色した。蛍光絶対計数用ビーズ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ、Ｌａｋｅ  Ｆｏｒｅｓｔ、ＩＬ）を取得直前に加えた。データ取得はＢＤ  Ｆｏｒｔｅｓｓａ  Ｘ-２０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、データはＴｒｅｅｓｔａｒソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）およびＳｐｏｔｆｉｒｅ（Ｔｉｂｃｏ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）を用いて分析した。
【０２１６】
表現型および消耗マーカー評価のための大規模培養細胞。ＩＬ-２を補充したＴ細胞培地中の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズを使用して、単離したＣＤ８  Ｔ細胞を０日目に大量に活性化した。１日目に、細胞をＣＡＲ構築物で形質導入し、そして細胞密度を０．５×１０６／ｍｌに調整し、１０６個の細胞を、ビヒクル、ＴＷＳ１１９、またはＤＣＣ-２０３６の存在下で１２ウェルプレートに播種した。４日目に、細胞を６ウェルプレートに移し、そして２ｍｌのＴ細胞培地を各ウェルに添加した。６日目にさらに２ｍｌの培地を各ウェルに加えた。８日目に、表現型マーカー（ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、およびＣＤ２７）および消耗マーカー（ＰＤ-１およびＴｉｍ-３）の表面発現についてＣＡＲ  Ｔ細胞をフローサイトメーターで分析した。
実施例２-免疫細胞調節剤
【０２１７】
データを分析して、表現型的に同定されたナイーブ、幹細胞記憶、または中枢記憶Ｔ細胞のより高い割合またはより高い絶対数を産生する化合物を同定した。これらの細胞は、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌの発現によって特徴付けられる。したがって、これらの識別マーカーの両方を共発現する細胞を評価した。生存ＣＤ４＋集団および生存ＣＤ８＋集団内で、ＣＣＲ７とＣＤ６２Ｌを同時発現する細胞の割合を決定した。所望のＴ細胞サブセットを示す、Ｔ細胞上のＣＤ６２ＬまたはＣＣＲ７のいずれかの発現は、ＣＡＲ-Ｔ細胞療法、および潜在的に他の養子Ｔ細胞療法にとって好ましい機能的特徴を有すると記載されている。ドルソモルフィン、ヘプテリジン酸、ＧＳＫ-３阻害剤ＩＸ、６-メルカプトプリン、ＡＣ-９３２５３ヨウ化物、チラトリコール、ＰＩ-１０３、５-アザシチジン、５，７-ジクロロ-８-キノリノール、ニトロフラントイン、５-クロロ７-ヨード-８-キノリノール、またはジエチレントリアミン五酢酸の処理の下では、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌを共発現する細胞の数または比率は、生存ＣＤ４＋集団および生存ＣＤ８＋集団の両方において増加した（表２）。フルベストラント、タプシガルギン、ＳＵ４３１２、フルダラビン、２-ナフタセンカルボキサミド、７-クロロ-４-（ジメチルアミノ）-１，４，４ａ、５，５ａ、６，１１，１２ａ-オクタフ、ニフロキサジド、エドロホニウムクロリドの処理の下では、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌを同時発現する細胞の数または比率は少なくとも生存可能なＣＤ８＋集団において増加した（表２）。１-ピロリジンカルボジチオ酸、アンモニウム塩、Ｕ０１２６、テルミサルタン、シクロスポリンＡ、１，３，５-トリス（４-ヒドロキシフェニル）-４-プロピル-１Ｈ-ピラゾール、ＢＡＹ  ６１-３６０６、プロトポルフィリンＩＸ二ナトリウム、ラパマイシン、ロスコビチン、ＰＡＣ-１、塩酸トスフロキサシン、ＢＩＸ０１２９４、およびテルフェナジンの処理の下では、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌを共発現する細胞の数または比率は少なくとも生存ＣＤ４＋集団において増加した（表２）。
【０２１８】
さらに、ＧＳＫ３β（グリコーゲンシンターゼキナーゼ３ベータ）阻害剤は、ＣＤ３７-ＣＤ１９-ＣＤ５６＋ＮＫ細胞を保存し、そしてＣＤ５７＋およびＮＫＧ２Ｃ＋発現を含むがこれに限定されない観察に基づいて細胞成熟およびサブタイプスキューに影響を与えることによって適応ＮＫ細胞亜集団を増加させることが示された。
【０２１９】
各試料中の絶対計数ビーズの数に対するこれらのゲートの各々における事象の数を計算し、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋集団内のナイーブ、幹細胞記憶、または中枢記憶Ｔ細胞の絶対数の尺度を定義した。各３８４ウェルプレート内のスクリーニングされた化合物サンプルに対するｚスコアをこれら４つの値のそれぞれについて計算した：１）ＣＤ４＋中のパーセントＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋、２）ＣＤ８＋中のパーセントＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋、３）ＣＤ４＋中のＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋の絶対相対数、および４）ＣＤ８＋中のＣＣＲ７＋ＣＤ６２Ｌ＋の絶対数（図１Ａおよび１Ｂ）。各サンプル内の全細胞の生存率パーセントおよび各サンプル内の細胞の相対絶対数についてもＺスコアを計算した。「Ｚスコア」は、スコアの群における平均に対するスコアの関係の統計的測定値である。Ｚスコア０は、スコアが平均と同じであることを意味する。Ｚスコアも正または負になることがあり、それが平均より上か下か、そして標準偏差の数値によって示される。
【０２２０】
Ｔ細胞増殖または生存率に有害な影響を与える化合物を排除することは、Ｔ細胞製造戦略に適している可能性が最も高い化合物に努力を集中する。一次ヒット化合物は以下の基準により選択された：「生存率パーセント」-１より大きいＺスコア、「絶対細胞数」-１より大きいＺスコア、および４つの値のうちの１つのＺスコアは＋２よりも大きい。３４個の化合物（表２）は、はるかに高いＺスコアを有し、４つの主要値のうちの１つ以上について上記の基準を満たすために選択された。Ｔ細胞を調節するそれらの能力に対してさらに５つの化合物も含まれる（表３）。
表２-養子細胞療法におけるＴ細胞調節のための薬剤
【表２−１】
2020513243.tif 000006
【表２−２】
2020513243.tif 000007
【表２−３】
2020513243.tif 000008
表3-養子細胞療法におけるT細胞調節のための追加の薬剤
【表３】
2020513243.tif 000009
【０２２１】
実施例３-選択された化合物のインビトロトリアージ実験
インビトロ実験は、化合物曝露のための方法を最適化しそしてＴ細胞機能に有害な影響を与える化合物を排除するために行われる。初期テストでは、個々の化合物の最適用量を決定しながら、以前に観察されたナイーブＴ細胞、幹細胞記憶Ｔ細胞、および中枢記憶Ｔ細胞に対する影響が追加のドナーにも反映されているかどうかを評価する。Ｔ細胞に有害な機能的影響を与える可能性のある化合物を同定するために、増殖能力、Ｔｈ１およびＴｈ１７に分極する能力、凍結保存／解凍サイクルによる生存、形質導入効率、ならびにＣＡＲ形質導入Ｔ細胞の殺腫瘍活性についてのインビトロ評価を行う。Ｔ細胞機能に有意な悪影響を及ぼすことなく、増殖中のナイーブ、幹細胞記憶、または中枢記憶Ｔ細胞の比率または数を再現可能に改善する化合物を組み合わせて試験し、相加的または相乗的効果について評価する。これらの評価を通じて、リード候補者または組み合わせがインビボでのさらなる試験のために優先される。
【０２２２】
実施例４-選択された化合物を用いた養子細胞療法のインビボモデル
インビトロスクリーニングの結果を翻訳し、インビトロトリアージ実験を追跡するために、選択された化合物の主要候補を養子細胞療法のインビボモデルに適用する。具体的には、低分子モジュレーションの影響は、生着、殺腫瘍活性、二次殺腫瘍反応、遊走、細胞持続性、および移植片対宿主病に関して養子細胞療法で調べる。診療所での効果的な反応と相関することが判明している、耐久性のある養子細胞療法の特徴である他の情報もまた調べる。
【０２２３】
これらの実験は、ヒト細胞がヒト腫瘍を有する免疫不全ＮＳＧマウスに養子的に移植されるヒト化系、または免疫適格動物が同系腫瘍を担い同系細胞療法で治療される代用マウスモデルのいずれかで行われる。
【０２２４】
代用モデル系またはヒト化モデル系のいずれにおいても、マウスにルシファリン化リンパ腫または他の目的の腫瘍を注射する。その後すぐに、本明細書に開示されるビヒクルまたは調節化合物で前処理されている養子細胞療法が施される。細胞療法および腫瘍の両方の用量は、化合物治療の好ましいまたは有害な効果が観察され得る範囲を可能にするように最適化される。ビヒクルまたは化合物で処理した細胞を投与前に特徴付けし、動物の体重および腫瘍量は、試験期間を通して定期的に測定した。
【０２２５】
インビボで１つ以上の腫瘍関連パラメータを改善することができる化合物は、有効な腫瘍クリアランスに必要な細胞療法用量の減少、末梢血における養子細胞療法の持続性の増加、腫瘍部位への遊走の増強、および／または高い腫瘍線量による攻撃に対する生存率の増加を含むがこれらに限定されない期待効果を有する。
実施例５-ＤＣＣ-２０３６はＴｃｍ表現型に偏る
【０２２６】
ＣＤ２７はＴＲＡ結合ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）受容体ファミリーのメンバーで、４-１ＢＢとＯＸ-４０も含まれる。これらの膜貫通タンパク質はリンパ球機能の調節に関与する。ヒトでは、ほとんどのナイーブ末梢Ｔ細胞（Ｔｎ）がＣＤ２７を発現する。一旦、ナイーブ末梢Ｔ細胞が活性化されると、ＣＤ２７の発現は著しく増加する。しかしながら、Ｔ細胞の末端エフェクター分化は、ＣＤ２７の不可逆的な喪失と関連している（Ｈｉｎｔｚｅｎら、１９９４）。ＣＤ２７の役割のさらなる解明は、それがＴ細胞免疫の発生および長期維持に必要であることを証明した（Ｈｅｎｄｒｉｋｓら、２０００年）。さらに、ＣＣＲ７およびＣＤ６２Ｌマーカーの発現を特徴とするナイーブ（Ｔｎ）、幹細胞記憶（Ｔｓｃｍ）および中枢記憶（Ｔｃｍ）Ｔ細胞は、マウスモデル（Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅら２０１５）と非ヒト霊長類モデル（Ｂｅｒｇｅｒら  ２００８）の両方で優れた抗腫瘍活性を媒介する。
【０２２７】
中枢記憶表現型への歪みに対する化合物処理の効果を決定するために、単離されたＣＤ８  Ｔ細胞を、ＩＬ-２を添加したＴ細胞培地中で抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズを用いて０日目にまとめて活性化した。１日目に、細胞を、図２に示すＣＡＲ構築物１で形質導入し、細胞密度を０．５×１０６個／ｍｌに調整し、１０６個の細胞を、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、ＴＷＳ１１９またはＤＣＣ-２０３６の存在下で１２ウェルプレートに同じ濃度で播種した。４日目に、細胞を６ウェルプレートに移し、２ｍｌの培地を各ウェルに加えた。６日目にさらに２ｍｌの培地を各ウェルに加えた。８日目に、細胞をＣＤ２７の細胞表面発現についてフローサイトメーターで分析した。
【０２２８】
化合物処理Ｔ細胞および対照処理Ｔ細胞におけるＣＤ２７の発現を図４Ｂに示す。ビヒクル処理で観察されたＣＤ２７の発現は、１のＭＦＩ（平均蛍光強度）として定義され、化合物で処理された細胞の相対ＭＦＩが計算された。
【０２２９】
ビヒクルと比較して、ＤＣＣ-２０３６処理はＣＤ６２ＬおよびＣＣＲ７の両方を発現するＣＡＲ-Ｔ細胞の頻度で２．３倍の増加をもたらしたのに対し、ＴＷＳ１１９処理はＣＤ６２ＬおよびＣＣＲ７二重陽性細胞で１．７倍の増加をもたらした（図４Ａ）。ＣＤ６２ＬおよびＣＣＲ７の発現を変化させることに加えて、ＤＣＣ-２０３６はまた、ビヒクルと比較して分化マーカーＣＤ２７の発現において２．２倍の増加を引き起こした（図４Ｂ）。対照的に、ＴＷＳ１１９はＣＤ２７発現に影響を及ぼさなかった。
【０２３０】
実施例６-ＤＣＣ-２０３６処理はＴ細胞消耗マーカー発現を減少させる
「消耗」によるＴ細胞機能不全は、癌や感染症の適切な制御を妨げ得る状態である。Ｔ細胞消耗は、ＰＤ-１およびＴｉｍ-３を含む消耗マーカーと集合的に称され、エフェクター細胞機能の低下および複数の細胞表面タンパク質の発現増加を特徴とする（Ｗｈｅｒｒｙ  ａｎｄ  Ｋｕｒａｃｈｉ  ２０１５）。
【０２３１】
消耗マーカー発現に対するＣＡＲ-Ｔ細胞の化合物処理の効果を決定するために、３人の異なるドナーからの細胞を調製し、そして上記のプロトコルに記載されるように処理した。フローサイトメトリーを用いてＰＤ-１およびＴｉｍ-３の発現を測定した。ＴＷＳ１１９対照はビヒクルと比較してＰＤ-１発現を３．３倍減少させたが、ＤＣＣ-２０３６処理はＰＤ-１表面発現で４．５倍の減少をもたらした（図６Ｂ）。Ｔｉｍ-３発現は、ＴＷＳ１１９で２倍、そしてＤＣＣ-２０３６処理で３．７倍減少した（図６Ａ）。このデータは、ＤＣＣ-２０３６によるＴ細胞の処理が、免疫機能障害に寄与するＴ細胞の消耗を減少させることによって細胞の抗腫瘍能力を増強することを示した。
【０２３２】
実施例７-ＤＣＣ-２０３６で処理したＣＤ８＋Ｔ細胞の遺伝子発現の特徴付け
記憶細胞の歪みにおけるＤＣＣ-２０３６の影響を特徴付けるために、記憶Ｔ細胞において高度に発現されることが以前に知られている重要な遺伝子のパネル（すなわちＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌなど）についての遺伝子発現変化を調べた。５人の異なるドナーからの凍結保存されたＣＤ８＋Ｔ細胞を解凍し、５％ヒトＡＢ血清、ＩＬ-２、ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ、および追加のサプリメントを含むＸ-Ｖｉｖｏ  １５中に洗浄した。細胞を、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズと共に５×１０５細胞／ｍｌで平底３８４ウェルプレートに分注した。細胞を１μＭの最終濃度のＤＣＣ-２０３６、１０μＭのＴＷＳ-１１９で処理するか、またはビヒクル（ＤＭＳＯ）のみの対照処理を受けた。細胞を５％ＣＯ２下、３７℃でおよそ６日間インキュベートした。
【０２３３】
・インキュベーション後、細胞を溶解し、ＲＮＡを単離し、断片化し、ｃＤＮＡを適切なシークエンシングアダプターの存在下で生成し、イルミナの次世代シークエンシング技術（ＮＧＳ）を用いてシークエンシングを行った。ＲＮＡシークエンシング（ＲＮＡ-Ｓｅｑ）は、ヌクレオチド配列情報を取得するだけでなく、所定のサンプルのトランスクリプトームから定量的な遺伝子発現測定を提供するためにＮＧＳの機能を利用する。遺伝子転写物を試料あたりのカウント／百万ｒｅａｄｓ（ＣＰＭ）に正規化し、各遺伝子転写物の相対定量を、対応するビヒクル対照処理試料と比較してそれぞれの処理において決定した。図５は、ＤＣＣ-２０３６処理がＴＷＳ-１１９（既知の中枢記憶歪み制御化合物）と同様またはそれ以上のレベルで発現の増加を誘導した場合のいくつかの重要な記憶Ｔ細胞遺伝子の遺伝子発現の相対的定量化を示す。観察された結果は、ＤＣＣ-２０３６による処理が、中枢記憶Ｔ細胞発現パターンの方への歪みと一致するバルクＣＤ８＋細胞集団における発現変化を促進することを意味する。
表５-ＤＣＣ-２０３６および対照治療下で差次的に発現される関連遺伝子
【表４】
2020513243.tif 000010
【０２３４】
実施例８-大規模培養形式におけるＤＣＣ-２０３６によるＣＡＲ-Ｔ細胞表現型の改善の実証
ＣＤ８  Ｔ細胞に対するＤＣＣ-２０３６の効果を決定するため、およびＤＣＣ-２０３６の拡大の増加がより大きな拡大フォーマットに拡大することを実証するために、ＣＤ８  Ｔ細胞を別々にインビトロで活性化し増殖させた。細胞を活性化の１日後にＣＡＲ-２構築物（図２）で形質導入し、次いで化合物ありまたはなしで２４ウェルＧＲＥＸプレートに蒔いた。活性化後１週間で採取するまで、培地の半分をその後２日毎に交換した。細胞を、化合物またはビヒクルの存在下で６日間活性化および増殖させた。ＤＣＣ-２０３６は、ＣＡＲ-Ｔ細胞生存率（図３Ａ）および増殖（図３Ｂ）を改善することが示された。
【０２３５】
いくつかの文脈で臨床試験における養子細胞療法の成功の可能性を示すことができる有益な臨床パラメータは、治療後の患者における移植細胞の拡大の能力および程度、ならびに／または、例えば、抗原への連続的暴露の文脈における初期拡大後の持続性および継続的な機能性である。操作されたＴ細胞が持続し、そして複数ラウンドの抗原刺激にわたって増殖し続ける能力は、そのような特徴および／またはインビボ機能もしくは臨床反応の可能性を示し得る。各化合物によって処理されたＴ細胞を、抗原への複数回の曝露および抗原からの撤退に亘ってインビトロで標的抗原を発現する腫瘍細胞を死滅させる能力および増殖を含む様々な機能について評価するインビトロ連続殺傷／再刺激アッセイをモデル系として使用した。このようなアッセイは、抗原との反復遭遇後の細胞機能に対する個々の化合物の影響、およびそのような文脈における細胞増殖または持続性を評価するために、化合物ありまたはなしで処理した細胞に対して実施した。
【０２３６】
ＣＤ８  Ｔ細胞をＤＭＳＯ、ＴＷＳ１１９、またはＤＣＣ-２０３６の存在下で活性化し、形質導入し、そして増殖させた。増殖の終わりに、ＣＡＲ-Ｔ細胞を凍結保存した。ＣＡＲ-Ｔ細胞を解凍し、ＣＤ１９（ＣＡＲによって認識される抗原）を発現する照射されたＫ５６２腫瘍細胞と共培養することによって連続再刺激アッセイを行った。各ラウンドの殺傷を開始する前に、ＣＡＲ-Ｔ細胞数がそれぞれＤＭＳＯ、ＴＷＳ１１９、およびＤＣＣ-２０３６処理で生成された培養物から実質的に同じになるように細胞数を調整した。同数の照射ＣＤ１９発現Ｋ５６２標的細胞を異なるＣＡＲ-Ｔ培養物に添加した。
【０２３７】
図３Ｃは、連続再刺激アッセイのラウンド３およびラウンド４において、ＤＣＣ-２０３６で処理したＣＡＲ-Ｔ細胞の細胞数の増加がビヒクル対照よりはるかに高いことを示す。ビヒクル処理細胞は有意に減少した拡大を示し、一方ＴＷＳ１１９処理細胞はビヒクルと比較して中程度の拡大の増加を示す（図３Ｃ）。したがって、ＤＣＣ-２０３６による処理は、複数ラウンドの殺傷／再刺激を通してＣＡＲ-Ｔ細胞の増大した増殖を可能にする。各化合物処理下での４ラウンド全てにわたるＣＡＲ-Ｔ細胞数の総拡大もまた決定され、そしてＤＣＣ-２０３６処理ＣＡＲ-Ｔ細胞はビヒクル対照と比較してはるかに大きい拡大を示す（図３Ｄ）。まとめると、これらのデータは、ＤＣＣ-２０３６処置が、標的腫瘍細胞への反復曝露にもかかわらず、処置されたＣＡＲ-Ｔ細胞の継続的に増加した増殖の望ましい効果を与え得ることを示す。より長期間にわたって示される細胞増殖と共に殺傷能力は、処理されたＣＡＲ-Ｔ生成物の細胞持続性の指標である。
【０２３８】
ＴＷＳ１１９またはＤＣＣ-２０３６を添加すると、活性化後１週間で、ＤＭＳＯと比較してＣＤ８  Ｔ細胞上のＴ細胞消耗マーカーＴｉｍ-３（図６Ａ）およびＰＤ-１（図６Ｂ）の発現が減少することがさらに示された。
【０２３９】
実施例９-低温保存ＤＣＣ-２０３６処理ＣＡＲ-Ｔ細胞の改善されたインビボ有効性
ＤＣＣ-２０３６処置がインビボでの腫瘍クリアランスおよびＣＡＲ-Ｔ細胞の持続性を増大させるかどうかを決定するために、ＣＤ１９  ＣＡＲ-Ｔ細胞およびＮａｌｍ-６-ｌｕｃ腫瘍細胞を用いてＮＳＧマウスにおいて化合物処置ＣＡＲ-Ｔ細胞を評価した。ＮＳＧマウスに、ホタルルシフェラーゼを発現するように操作されたＣＤ１９＋ヒト腫瘍株であるＮａｌｍ-６-ｌｕｃを注射した。ＣＡＲ-Ｔ細胞は、インビトロで別々に活性化され増殖されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞から生成された。細胞を活性化の１日後にＣＡＲ-２構築物（図２）で形質導入し、次いで化合物ありまたはなしで２４ウェルＧＲＥＸプレートに蒔いた。活性化後１週間の採取まで、培地の半分をその後２日毎に交換した。細胞を凍結保存し、次いで使用のために解凍した。ＮＳＧマウスに腫瘍細胞を注入し、１週間後に眼窩後注射を介したＣＡＲ-Ｔ移植を行った。Ｎａｌｍ-６-ｌｕｃ細胞をＩＶ注射した４日後、マウスを動物１匹あたり２．０×１０５個の  ＣＡＲ-Ｔ細胞（１：１のＣＤ４：ＣＤ８）で処置した。腫瘍量を決定するためにマウスを定期的に画像化した。図７および８は、ＤＣＣ-２０３６処置群のマウスが、ＴＷＳ１１９またはＤＭＳＯの存在下で増殖したＣＡＲ-Ｔ細胞を受けたマウスと比較して、腫瘍量が劇的に減少したことを示す。ＴＷＳ１１９またはＤＭＳＯの存在下で増殖したＣＡＲ-Ｔ細胞を受けたマウスは、最小限の腫瘍制御を示した。
【０２４０】
当業者であれば、本明細書に記載の方法、組成物、および製品は例示的な実施形態を代表するものであり、本発明の範囲に対する限定として意図されていないことを容易に理解するであろう。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本明細書に開示された本開示に対して様々な置換および改変がなされ得ることが当業者には容易に明らかであろう。
【０２４１】
本明細書で言及されているすべての特許および刊行物は、本開示が関連する当業者のレベルを示している。すべての特許および刊行物は、あたかも各個々の刊行物が具体的かつ個別に参考として援用されると示されるのと同程度に、参考として本明細書に援用される。
【０２４２】
本明細書に例示的に記載された本開示は、本明細書に具体的に開示されていないいずれかの要素、限定がない場合にも適切に実施され得る。したがって、例えば、本明細書の各例において、「含む」、「から本質的になる」、および「からなる」という用語はいずれも、他の２つの用語のいずれかと置き換えられてもよい。使用されている用語および表現は、説明の用語として使用され、限定のためではなく、そのような用語および表現の使用において、示され、説明された特徴またはその一部の均等物を除外する意図はなく、特許請求の範囲に記載の本開示の範囲内で様々な修正が可能であることを認識されたい。したがって、本開示は好ましい実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示されている概念の修正および変形は当業者によって頻繁に行われ得るものであり、そのような改変および変更は添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内であるとみなされる。
【図１Ａ】
2020513243.tif 000011
【図１Ｂ】
2020513243.tif 000012
【図２】
2020513243.tif 000013
【図３−１】
2020513243.tif 000014
【図３−２】
2020513243.tif 000015
【図４】
2020513243.tif 000016
【図５】
2020513243.tif 000017
【図６】
2020513243.tif 000018
【図７】
2020513243.tif 000019
【図８】
2020513243.tif 000020
【国際調査報告】
2020513243.tif 000021