(57)【要約】  ＩＬ−１５、及びＩＬ−１５とＩＬ−１５受容体アルファとの複合体に特異的に結合する組換え抗体が提供される。該抗体は、免疫細胞の増殖を阻害し、セリアック病を含む、ＩＬ−１５が調節不全である任意の自己免疫性または炎症性の疾患または状態の治療において使用することができる。
2020501583.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
可変重鎖及び可変軽鎖を含む抗体であって、前記抗体がヒトＩＬ−１５のＱ１０８残基を含むエピトープに特異的に結合し、前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している、前記抗体。
【請求項２】
前記抗体が、表面プラズモン共鳴により決定された１．８×１０−９Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を含む前記エピトープに対する親和性を有する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記エピトープが、ヒトＩＬ−１５のＳ７及びＮ１１２残基をさらに含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記解離定数（ＫＤ）が、１×１０−９Ｍ未満である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１と、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む抗体であって、前記抗体が、ヒトＩＬ−１５に特異的に結合し、前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している、前記抗体。
【請求項６】
前記抗体が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体が、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項５または６に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＦＲ３と、を含む、請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項７または８に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項９または１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体が、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項７または８に記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体が、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項５または６に記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体が、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項５、６、１４、及び１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記重鎖ＦＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項５または６に記載の抗体。
【請求項１８】
前記重鎖ＦＲ３が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体が、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項５または６に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項５または１９に記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体が、配列番号４５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１９または２０に記載の抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項５または６に記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項２２に記載の抗体。
【請求項２４】
前記抗体が、配列番号４５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項２２または２３に記載の抗体。
【請求項２５】
前記抗体が、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号５１９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項５または６に記載の抗体。
【請求項２６】
前記抗体が、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項２５に記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体が、配列番号４６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項２６に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＦＲ３と、を含む、請求項５または１７に記載の抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、請求項２８に記載の抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項２９に記載の抗体。
【請求項３１】
配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体であって、前記抗体が、ヒトＩＬ−１５に特異的に結合し、前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している、前記抗体。
【請求項３２】
前記抗体が、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む、請求項３１に記載の抗体。
【請求項３３】
ヒトＩＬ−１５に特異的に結合する抗体であって、前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成し、前記抗体が、
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｆ）配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｇ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｈ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｉ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｊ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｋ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｌ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｍ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；
（ｎ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（ｏ）配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む、前記抗体。
【請求項３４】
前記抗体が、ＩｇＧ定常ドメインを含む、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３５】
前記抗体が、ＩｇＧ４定常ドメインを含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３６】
前記ＩｇＧ４定常ドメインが、配列番号４９、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号５０、及び配列番号５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の抗体。
【請求項３７】
前記抗体が、ＩｇＧ１定常ドメインを含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３８】
前記ＩｇＧ１定常ドメインが、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載の抗体。
【請求項３９】
前記抗体が、ＩｇＧ２定常ドメインを含む、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４０】
前記ＩｇＧ２定常ドメインが、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、及び配列番号４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４１】
前記抗体が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖を、ＮＫ細胞増殖アッセイにおいて、約０．１ｐＭ〜約９００ｐＭのＩＣ５０にて阻害する、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４２】
前記抗体が、ＮＫ細胞の増殖を、ＮＫ細胞増殖アッセイにおいて、約１ｐＭ〜約６０ｐＭのＩＣ５０にて阻害する、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４３】
前記抗体が、ＮＫ細胞の増殖を、ＮＫ細胞増殖アッセイにおいて、約５ｐＭ〜約３５ｐＭのＩＣ５０にて阻害する、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４４】
前記抗体が、ＩＬ−１５を中和することができる、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４５】
前記抗体が、循環ＮＫ細胞を減少させることができる、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４６】
前記抗体が、ヒトＩＬ−１５のＱ１０８残基を含むエピトープに結合する、請求項５〜４５のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４７】
前記エピトープが、ヒトＩＬ−１５のＳ７及びＮ１１２残基をさらに含む、請求項４６に記載の抗体。
【請求項４８】
前記抗体が、表面プラズモン共鳴により決定された約１．８×１０−９Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を含む、または前記解離定数（ＫＤ）が１×１０−９Ｍ未満である、ヒトＩＬ−１５に対する親和性を有する、請求項５〜４６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４９】
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成しているＩＬ−１５に結合する抗体であって、前記重鎖可変領域が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項５０】
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成しているＩＬ−１５に結合する抗体であって、前記軽鎖可変領域が、配列番号５のアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項５１】
前記重鎖可変領域が配列番号４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項５０または５１に記載の抗体。
【請求項５２】
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項４９〜５１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５３】
配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域をさらに含む、請求項４９〜５１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５４】
配列番号４９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域をさらに含む請求項４９〜５１のいずれか１項に記載の抗体であって、前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記抗体。
【請求項５５】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な担体または賦形剤とを含む組成物。
【請求項５６】
ＩＬ−１５に結合する抗体を対象に投与することを含む、セリアック病の治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法であって、前記ＩＬ−１５がＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している、前記方法。
【請求項５７】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、セリアック病の治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法。
【請求項５８】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、グルテン過敏症、グルテンアレルギー、またはセリアック病を有する前記対象において小腸の粘膜を修復する方法。
【請求項５９】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、グルテン過敏症、グルテンアレルギー、またはセリアック病を有する前記対象において平均絨毛高さ対陰窩深さ（Ｖ／Ｃ）比を増加させる方法。
【請求項６０】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、グルテン過敏症、グルテンアレルギー、またはセリアック病を有する前記対象において小腸の絨毛高さを増加させる方法。
【請求項６１】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、抗グリアジン抗体を減少させることを必要とする対象において前記減少させることを行うための方法。
【請求項６２】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を前記対象に投与することを含む、グルテン誘発性小腸粘膜傷害を修復する方法。
【請求項６３】
前記対象が、グルテン過敏症、グルテンアレルギー、またはセリアック病を有する、請求項６１または６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記セリアック病が、難治性である、請求項５６〜５９または６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
請求項１から５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、グルテン過敏症またはグルテンアレルギーを有し、グルテン曝露の１つ以上の症状の抑制を必要とする前記対象において前記抑制を行う方法。
【請求項６６】
前記１つ以上の症状が、筋肉痛、身体痛、関節痛、疲労、鼓腸、ガス、吐き気、けいれん、便秘、下痢、皮膚発疹、頭痛、片頭痛、うつ病、不安、脳霧、及び過敏性の１つ以上を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記対象がグルテン含有食を摂取する、請求項５６〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、関節リウマチの治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法。
【請求項６９】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、乾癬の治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法。
【請求項７０】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、炎症性腸疾患の治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法。
【請求項７１】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、１型糖尿病の治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法。
【請求項７２】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、円形脱毛症の治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法。
【請求項７３】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病の治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法。
【請求項７４】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、自己免疫疾患の治療を必要とする前記対象において前記治療を行う方法。
【請求項７５】
前記自己免疫疾患が、ＩＬ−１５が調節不全である自己免疫疾患である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象に投与することを含む、炎症性疾患または炎症状態の治療または抑制を必要とする対象において前記抑制を行う方法。
【請求項７７】
前記炎症性疾患または炎症状態が、ＩＬ−１５が調節不全である炎症性疾患または炎症状態である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記抗体が、薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む組成物中にある、請求項５６〜７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
セリアック病、難治性セリアック病、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、１型糖尿病、円形脱毛症、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、自己免疫疾患、ＩＬ−１５が調節不全である自己免疫疾患、炎症性疾患もしくは炎症状態、またはＩＬ−１５が調節不全である炎症性疾患もしくは炎症状態の治療にて使用するための請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８０】
グルテン曝露の１つ以上の症状の治療または抑制において使用するための、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８１】
セリアック病、難治性セリアック病、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、１型糖尿病、円形脱毛症、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、自己免疫疾患、ＩＬ−１５が調節不全である自己免疫疾患、炎症性疾患もしくは炎症状態、またはＩＬ−１５が調節不全である炎症性疾患もしくは炎症状態を治療する医薬の製造のための、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項８２】
グルテン曝露の症状を治療または抑制する医薬の製造のための、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体の使用。
【請求項８３】
前記症状が、筋肉痛、身体痛、関節痛、疲労、鼓腸、ガス、吐き気、けいれん、便秘、下痢、皮膚発疹、頭痛、片頭痛、うつ病、不安、脳霧、及び過敏性の１つ以上を含む、請求項８２に記載の使用。
【請求項８４】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象から単離した組織試料と接触させて、ＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成した抗体−ＩＬ−１５を形成することと、前記組織試料中の前記複合体を検出することとを含む、対象から単離した組織試料中のＩＬ−１５を検出するｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項８５】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を対象から単離した組織試料と接触させて、前記抗体とＩＬ−１５及びＩＬ−１５受容体アルファとの抗体−抗原複合体を形成することと、前記組織試料中の前記抗体−抗原複合体を検出することとを含む、対象から単離した組織試料中のＩＬ−１５及びＩＬ−１５受容体アルファの複合体を検出するｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法。
【請求項８６】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体を発現する形質転換細胞。
【請求項８７】
前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項８６に記載の形質転換細胞。
【請求項８８】
前記哺乳動物細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項８７に記載の形質転換細胞。
【請求項８９】
請求項８６〜８８のいずれか１項に記載の細胞を培養することを含む、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体の作製方法。
【請求項９０】
配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体可変重鎖をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項９１】
前記核酸配列が配列番号４のアミノ酸配列を含む抗体可変重鎖をコードする、請求項９０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９２】
前記ポリヌクレオチドが配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする第２の核酸配列をさらに含む、請求項９０または９１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９３】
前記第２の核酸配列が配列番号５のアミノ酸配列を含む抗体可変軽鎖をコードする、請求項９２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９４】
配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体可変軽鎖をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項９５】
配列番号５のアミノ酸配列を含む抗体可変軽鎖をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項９６】
請求項５〜５４のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項９７】
配列番号５１７の核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項９８】
配列番号５１８の核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項９９】
請求項９０〜９８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１００】
請求項９９に記載のベクターによってトランスフェクトされた細胞。
【請求項１０１】
請求項１〜５４のいずれか１項に記載の抗体の可変重鎖をコードする核酸を含むポリヌクレオチド、及び前記抗体の可変軽鎖をコードする核酸を含むポリヌクレオチドを含む細胞。
【請求項１０２】
前記可変重鎖をコードする前記核酸及び前記可変軽鎖をコードする前記核酸が、同じベクター上にある、請求項１０１に記載の細胞。
【請求項１０３】
前記可変重鎖をコードする前記核酸及び前記可変軽鎖をコードする前記核酸が、異なるベクターである、請求項１０２に記載の細胞。
【請求項１０４】
前記細胞が哺乳動物タンパク質発現細胞である、請求項１００〜１０３のいずれか１項に記載の細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表の参照
本出願は２０１７年１２月１８日に作成された２１５，５２３バイトのサイズの２８７３．２７３ＰＣ０１＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｅｘｔと名付けられた配列表を含む。該配列表は、参考として組み込まれる。
【０００２】
本開示は一般に、組換え抗体産生の分野に関する。より詳細には、本開示は、非複合型であるか、またはＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成しているかにかかわらず、ヒトＩＬ−１５に特異的に結合する組換え抗体に関する。
【背景技術】
【０００３】
特許、公開された特許出願、技術論文、配列受託番号、及び他の参考文献を含む様々な参考文献が、本明細書を通じて引用される。そのような各参考文献は、あらゆる目的のためにその全体が本明細書に参考として組み込まれる。
【０００４】
サイトカインインターロイキン１５（ＩＬ−１５）は、単球、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、ケラチノサイト、線維芽細胞、及び神経細胞を含む多数の細胞型及び組織によって分泌されるＩＬ−２スーパーファミリーのメンバーである。ＩＬ−１５は、ＩＬ−２受容体ベータ鎖（ＣＤ１２２）及び共通ガンマ鎖（ガンマ−Ｃ、ＣＤ１３２）からなる複合体に結合し、それらを介してシグナル伝達する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでは、ＩＬ−１５はＩＬ−２といくつかの生物学的活性を共有する。ｉｎ  ｖｉｖｏでは、ＩＬ−１５対ＩＬ−２の特異性は、ＩＬ−１５Ｒα／ＩＬ−２Ｒβγヘテロ三量体高親和性受容体複合体を完成させる独特のプライベートα鎖受容体（ＩＬ−１５Ｒα）によって提供される。
【０００５】
ＩＬ−１５は関節リウマチ患者由来の滑膜組織から単離され、腫瘍壊死因子−α、ＩＬ−１βのような炎症性サイトカイン及びケモカインを誘導することが報告されている（Ｗａｌｄｍａｎ  ＴＡ（２００４）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：１７４−１７７）。ヒト乾癬の異種移植マウスモデルにおけるＩＬ−１５活性の遮断は、乾癬の消散をもたらした（Ｖｉｌｌａｄｓｅｎ  ＬＳ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：１５７１−８０）。Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病、γΔ／ΔＴ細胞性リンパ腫の患者においては、ＩＬ−１５複合体のレベルの増加が報告されている（Ｃｈｅｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｌｏｏｄ．１１９：１３７−１４３）。
ＩＬ−１５欠損マウスを使用して、研究者らはまた、ＩＬ−１５シグナル伝達経路の阻害が、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ；多発性硬化症のモデル）、大腸炎、炎症性腸疾患、乾癬、及び関節炎などのいくつかの免疫媒介状態において予防または治療効果をもたらすことができることを示した。
【０００６】
マウスモデルでは、腸上皮細胞におけるＩＬ−１５の過剰発現は、セリアック病様腸症を引き起こす。ヒトでは、ＩＬ−１５発現の上方制御は、セリアック病の特徴である。ＩＬ−１５は、健常対照者及びグルテンフリー食治療を受けたセリアック病患者と比較して、活動性の未処置のセリアック病患者の固有層及び腸上皮の両方において過剰発現しており、腸内のＩＬ−１５レベルは粘膜損傷の程度と相関する（Ａｂａｄｉｅ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２６０：２２１−２３４）。
【０００７】
ＤＩＳＣ０２８０は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで反対の作用機序を有する強力な抗ＩＬ−１５抗体である（Ｆｉｎｃｈ  ＤＫ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１６２：４８０−４９０）。不都合なことに、可溶性ＩＬ−１５受容体αによるトランス提示と同様に、ＤＩＳＣ０２８０は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＤＩＳＣ０２８０によるＩＬ−１５のトランス提示を可能にするＩＬ−１５上のＩＬ−１５受容体α結合部位に結合することが見出された。したがって、ＤＩＳＣ０２８０は、ｉｎ  ｖｉｖｏでＩＬ−１５のアゴニストとして作用する。
【０００８】
２つの抗ＩＬ−１５抗体は、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合と競合することなくＩＬ−１５の活性を中和することができると説明されてきた。完全ヒトモノクローナル抗ＩＬ−１５抗体、ＡＭＧ  ７１４（Ａｍｇｅｎ）は、活動性関節リウマチ患者における第Ｉ〜ＩＩ相の用量漸増試験において疾患活動性の改善を示した（Ｂａｓｌｕｎｄ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５２：２６８６−２６９２）。ｈｕＢ−Ｅ２９と命名されたヒト化抗体はまた、ＩＬ−１５のＩＬ−１５Ｒαへの結合と競合することなく、マウスモデルにおいてｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでＩＬ−１５活性を遮断することも説明されてきた（ＷＯ１６／００１２７５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＷＯ１６／００１２７５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
セリアック病の治療のための新たな治療法を検査する臨床試験は、それらの評価項目として以下のものが挙げられる：ａ）Ｖ／Ｃ比によって測定されるグルテン誘発性小腸粘膜障害の軽減。Ｖ／Ｃは、腸生検試料から採取した陰窩の深さに対する小腸絨毛の長さの形態計測的尺度である。（ｂ）組織学的切片における上皮細胞間リンパ球（ＩＥＬ）の計数により測定されるグルテン誘発性小腸粘膜炎症の軽減。（ｃ）抗グリアジン抗体及びトランスグルタミナーゼに対する自己抗体などのグルテン誘発性血清抗体の軽減。前述の評価項目によって測定されるようなセリアック病の治療に有効性が示される治療薬は現在存在しない。本開示は、セリアック病のアカゲザルモデルにおいて測定される際に、グルテン誘発性小腸粘膜傷害を軽減し（Ｖ／Ｃ比の改善）、グルテン誘発性小腸粘膜炎症を軽減し（ＩＥＬ数の減少）、かつグルテン誘発性血清抗体を軽減（抗グリアジン抗体の減少）する抗体を特徴とする。本開示の抗体は、ＩＬ−１５が関与するセリアック病及び他の炎症性疾患を有する患者のための新たな治療法を提示する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
第１の態様では、本開示は、可変重鎖及び可変軽鎖を含む抗体を特徴とし、この抗体は、ヒトＩＬ−１５（例えば、該ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成している）のＧｌｎ１０８残基を含むエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＩＬ−１５は、配列番号５１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ヒトＩＬ−１５（例えば、該ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成している）のＳｅｒ７及びＡｓｎ１１２残基をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、抗体は、好ましくは、表面プラズモン共鳴により決定された約１．８×１０−９Ｍ未満のＫＤを含むエピトープに対する親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＫＤは、約１．０×１０−９Ｍ未満であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、好ましくは、表面プラズモン共鳴により決定された約２×１０−１０Ｍ未満のＫＤを含むエピトープに対する親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＫＤは、表面プラズモン共鳴により決定された約１．６×１０−１０Ｍ〜約１．８×１０−１０Ｍであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、例えばＮＫ−９２細胞の増殖を、ＮＫ細胞増殖アッセイにおいて、約０．１ｐＭ〜約９００ｐＭを含む、約９００ｐＭ未満のＩＣ５０にて阻害し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞の増殖を、ＮＫ細胞増殖アッセイにおいて、約１ｐＭ〜約６０ｐＭのＩＣ５０にて阻害し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞の増殖を、ＮＫ細胞増殖アッセイにおいて、約５ｐＭ〜約３５ｐＭのＩＣ５０にて阻害し得る。抗体は、ＮＫ細胞の増殖を、ＮＫ細胞増殖アッセイにおいて、約５ｐＭ〜約２５ｐＭのＩＣ５０にて阻害し得る。抗体は、ＩＬ−１５を中和することができる場合がある。抗体は、循環ＮＫ細胞を減少させることができる場合がある。
【００１２】
別の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５に特異的に結合し、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１と、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１と、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３とを含む抗体を特徴とする。ヒトＩＬ−１５は、ＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成し得る。抗体は、ＩＬ−１５アンタゴニストである。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００１３】
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７、２０、２５、２８、及び２９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２５、２８、及び２９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１及び配列番号３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る、及び／または配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２５、２８、及び２９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＦＲ３を含み得る。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００１４】
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２５、２８、及び２９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１及び配列番号３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２５または２６、２８、及び２９または３１のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る、及び／または配列番号４５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２５、２８、及び２９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２７、２８、及び３０のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る、及び／または配列番号４５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２５、２８、及び２９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み得、配列番号２９のＸａａ５はＰｈｅ（例えば、配列番号５１９）である。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２７、２８、及び５１９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る、及び／または配列番号４６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００１７】
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２５、２８、及び２９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、ならびに所望により配列番号１２または１３のアミノ酸配列を含むＨＦＲ３を含む抗体）は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含み得る。いくつかの実施形態では、（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２６、２８、及び３０のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む抗体）抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖ＦＲ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２６、２８、及び３０のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、ならびに所望により配列番号１２または１３のアミノ酸配列を含むＨＦＲ３を含む抗体）は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７または１８、２０、２６、２８、及び３０のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、ならびに所望により配列番号１２または１３のアミノ酸配列を含むＨＦＲ３を含む抗体または配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む抗体）は、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る、及び／または配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１７、２０、２５、２８、及び２９のアミノ酸配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、ならびに所望により配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＦＲ３を含む抗体）は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＦＲ３を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、それぞれ配列番号１６、１９、２０、２７、２８、及び３１のアミノ酸配列を含む、ＨＣＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＦＲ３を含む抗体）は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る、及び／または配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００１９】
別の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を特徴とする。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００２０】
別の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体を特徴とする。このような抗体をコードするポリヌクレオチドが、さらに提供される。
【００２１】
抗体ＶＨのコンセンサス配列は配列番号１であり、配列番号４及び配列番号４５４のＶＨ配列を包含する。抗体ＶＬのコンセンサス配列は配列番号２であり、配列番号５、配列番号８、配列番号４５５、配列番号４５７、及び配列番号４５９のＶＬ配列を包含する。抗体Ｌ鎖のコンセンサス配列は配列番号３であり、配列番号６、配列番号９、配列番号４５６、配列番号４５８、及び配列番号４６０のＬ鎖配列を包含する。抗体ＶＨ  ＦＲ３のコンセンサス配列は配列番号１２であり、配列番号１３及び配列番号１４のＶＨ  ＦＲ３配列を包含する。抗体ＶＨ  ＣＤＲ１のコンセンサス配列は配列番号１７であり、配列番号１８及び配列番号１９のＶＨ配列を包含する。抗体ＶＬ  ＣＤＲ１のコンセンサス配列は配列番号２５であり、配列番号２６及び配列番号２７のＶＨ配列を包含する。抗体ＶＬ  ＣＤＲ３のコンセンサス配列は配列番号２９であり、配列番号３０及び配列番号３１及び配列番号５１９のＶＨ配列を包含する。
【００２２】
前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する任意の抗体は、ＩｇＧ定常ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインは、ＩｇＧ１定常ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１定常ドメインは、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８または配列番号３９を含み得る。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインは、ＩｇＧ２定常ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２定常ドメインは、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、または配列番号４３を含み得る。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインは、ＩｇＧ４定常ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ４定常ドメインは、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０または配列番号５１を含み得る。
【００２３】
前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する任意の抗体は、担体または賦形剤を有する組成物として配合され得る。担体は、薬学的に許容可能な担体を含み得る。
【００２４】
いくつかの実施形態では、セリアック病を治療する方法は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する抗体をそれを必要とする対象に投与することを含む。ＩＬ−１５抗体の投与は、対象の小腸の粘膜を修復することができる。ＩＬ−１５抗体の投与は、対象の平均絨毛高さ対陰窩深さ（Ｖ／Ｃ）比を増加させることができる。ＩＬ−１５抗体の投与は、対象の小腸の絨毛高さを増加させることができる。ＩＬ−１５抗体の投与は、対象の抗グリアジン抗体を減少させることができる。ＩＬ−１５抗体の投与は、対象のグルテン誘発性小腸粘膜傷害を修復することができる。
【００２５】
前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する任意の抗体は、それを必要とする対象へと治療レジメンの一部として投与され得る。したがって、別の態様では、本開示は、それを必要とする対象をＩＬ−１５抗体で治療するための方法を特徴とする。対象は、好ましくはヒトである。抗体は、ＩＬ−１５が調節不全である（特にＩＬ−１５が上方制御されている）任意の自己免疫性または炎症性の疾患または状態を治療するための治療レジメンの一部として投与され得る。
【００２６】
いくつかの詳細な実施形態では、方法は、セリアック病を治療するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、グルテン過敏症、グルテンアレルギー、またはセリアック病を有する対象において小腸粘膜を修復する方法は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、グルテン過敏症、グルテンアレルギー、またはセリアック病を有する対象において平均絨毛高さ対陰窩深さ（Ｖ／Ｃ）比を増加させる方法は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、グルテン過敏症、グルテンアレルギー、またはセリアック病を有する対象において小腸の絨毛高さを増加させる方法は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、それを必要とする対象において抗グリアジン抗体を減少させるための方法は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、グルテン誘発性小腸粘膜傷害を修復する方法は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、対象は、グルテン過敏症、グルテンアレルギー、またはセリアック病を有する。いくつかの実施形態では、方法は、難治性セリアック病を治療するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態���は、方法は、関節リウマチを治療するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、方法は、乾癬を治療するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、方法は、炎症性腸疾患を治療するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、方法は、１型糖尿病を治療するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、方法は、円形脱毛症を治療するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、方法は、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病を治療するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。いくつかの実施形態では、方法は、グルテン曝露、例えば、グルテン過敏症またはアレルギーを有する患者におけるグルテン曝露の症状を治療または抑制するためのものであり得、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示される任意の抗体を対象に投与することを含む（抗体は組成物中にあってもよく、それは薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含んでもよい）。グルテン曝露の１つ以上の症状は、筋肉痛、身体痛、関節痛、疲労、鼓腸、ガス、吐き気、けいれん、便秘、下痢、皮膚発疹、頭痛、片頭痛、うつ病、不安、脳霧、及び／または過敏性の１つ以上を含み得る。Ｂｉｅｓｉｅｋｉｅｒｓｋｉ  ＪＲ（２０１５）Ｕｎｉｔｅ��  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｊ．３：１６０−１６５を参照のこと。
【００２７】
前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する任意の抗体は、医薬の製造に使用され得る。そのような抗体はいずれも、ＩＬ−１５が調節不全である任意の自己免疫疾性または炎症性の疾患または状態を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、セリアック病を治療するため、またはセリアック病を治療するための医薬の製造に使用され得る。抗体は、難治性セリアック病を治療するため、または難治性セリアック病を治療するための医薬の製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、関節リウマチを治療するため、または関節リウマチを治療するための医薬の製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、乾癬を治療するため、または乾癬を治療するための医薬の製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、炎症性腸疾患を治療するため、または炎症性腸疾患を治療するための医薬の製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、１型糖尿病を治療するため、または１型糖尿病を治療するための医薬の製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、円形脱毛症を治療するため、または円形脱毛症を治療するための医薬の製造に使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病を治療するため、またはＴ細胞大顆粒リンパ球性白血病を治療するための医薬の製造に使用され得る。
【００２８】
前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する任意の抗体は、対象から単離された組織試料中のＩＬ−１５（場合によりＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成している）を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法において使用され得、該方法は、抗体を対象から単離した組織試料と接触させて、抗体−ＩＬ−１５複合体（場合によりさらにＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成したもの）を形成することと、該組織試料中の該複合体を検出することとを含む。前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５に結合する任意の抗体は、対象から単離された組織試料中のＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成しているＩＬ−１５を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法において使用され得、該方法は、抗体を対象から単離した組織試料と接触させて、抗体とＩＬ−１５及びＩＬ−１５受容体α複合体との抗体−抗原複合体を形成することと、該組織試料中の抗体−抗原複合体を検出することとを含む。
【００２９】
別の態様では、本開示は、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する任意の抗体を発現する形質転換細胞をさらに特徴とする。いくつかの実施形態では、形質転換細胞は、哺乳動物細胞であり得る。いくつかの実施形態では、形質転換細胞は、チャイニーズハムスター卵巣細胞であり得る。
【００３０】
別の態様では、本開示は、前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する任意の抗体をコードするポリヌクレオチドをさらに特徴とする。いくつかの実施形態では、抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５１７の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５１８の核酸配列を含む。これらのポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。これらのポリヌクレオチドまたはベクターを含む細胞もまた提供される。前述の段落のいずれかのものを含む、本明細書に記載または例示されるＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する抗体の可変重鎖をコードする核酸及び前記抗体の可変軽鎖をコードする核酸を含むポリヌクレオチドを含む細胞もまた提供される。可変重鎖をコードする核酸及び可変軽鎖をコードする核酸は、同じベクター上または異なるベクター上にあり得る。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】ＩＬ−１５受容体アルファとのヒトＩＬ−１５複合体、または非複合型ＩＬ−１５Ｒαに対する抗ＩＬ−１５抗体の結合を示す。非複合型組換えヒトＩＬ−１５Ｒα、またはＩＬ−１５受容体アルファとの組換えＩＬ−１５複合体への代表的なハイブリドーマ上清の結合を、細胞ＥＬＩＳＡ（ｃＥＬＩＳＡ）及びＥＬＩＳＡによって測定した。結果は、相対蛍光単位で表される。
【図２Ａ】図２Ａ及び２Ｂは、抗ＩＬ−１５抗体によるＩＬ−１５媒介性ＣＴＬＬ−２増殖の用量反応阻害を示す。図２Ａは、２０００、２００、及び２０ｐＭに希釈した代表的な抗ＩＬ−１５抗体によるＩＬ−１５媒介性ＣＴＬＬ−２増殖の阻害を示し、図２Ｂは７２時間の全用量反応における阻害を示す。結果は、相対発光単位として表される。
【図２Ｂ】図２Ａ及び２Ｂは、抗ＩＬ−１５抗体によるＩＬ−１５媒介性ＣＴＬＬ−２増殖の用量反応阻害を示す。図２Ａは、２０００、２００、及び２０ｐＭに希釈した代表的な抗ＩＬ−１５抗体によるＩＬ−１５媒介性ＣＴＬＬ−２増殖の阻害を示し、図２Ｂは７２時間の全用量反応における阻害を示す。結果は、相対発光単位として表される。
【図３】代表的な抗ＩＬ−１５抗体、ＡＭＧ７１４、またはアイソタイプ対照（抗ＫＬＨ  Ｃ３  ＩｇＧ１）によるＩＬ−１５媒介性ＮＫ−９２増殖の阻害を示す。読み取りは７２時間目に行われ、相対発光単位として表される。結果は、平均±誤差３反復として表される。
【図４】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図５】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図６】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図７】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図８】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図９】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１０】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１１】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１２】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１３】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１４】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１５】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１６】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１７】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１８】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図１９】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２０】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２１】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２２】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２３】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２４】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２５】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２６】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２７】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２８】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図２９】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図３０】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図３１】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図３２】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図３３】親抗体である抗体４と比較した、抗体捕捉レベル、シングルポイント親和性測定値、及び配列変化を詳述する抗ＩＬ−１５変異体のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）プロファイルを示す。
【図３４Ａ】図３４Ａ、図３４Ｂ、及び図３４Ｃは、抗ＩＬ−１５抗体の変異体を示し、親抗体である抗体４と比較したそれらの重鎖及び軽鎖のアミノ酸置換を詳述している。
【図３４Ｂ】図３４Ａ、図３４Ｂ、及び図３４Ｃは、抗ＩＬ−１５抗体の変異体を示し、親抗体である抗体４と比較したそれらの重鎖及び軽鎖のアミノ酸置換を詳述している。
【図３４Ｃ】図３４Ａ、図３４Ｂ、及び図３４Ｃは、抗ＩＬ−１５抗体の変異体を示し、親抗体である抗体４と比較したそれらの重鎖及び軽鎖のアミノ酸置換を詳述している。
【図３５】親抗体、抗体４、及び他の抗ＩＬ−１５抗体と比較した、ＩＬ−１５媒介性ＮＫ−９２増殖の阻害が改善された抗体４の変異体を示す。読み取りは７２時間後に行われ、相対発光単位として表される。
【図３６】ＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成したＩＬ−１５への抗体４の変異体及びＡＭＧ７１４の結合キネティクスを示す。結合キネティクスは、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）システムで表面プラズモン共鳴を用いて測定した。抗体４の変異体は、ＡＭＧ７１４よりも高い親和性でＩＬ−１５複合体に結合した。
【図３７】ＮＫ−９２細胞ベースアッセイにおける抗ＩＬ−１５抗体の比較を示す。４８時間にわたる抗ＩＬ−１５抗体による２５ｐＭのＩＬ−１５複合体媒介性ＮＫ−９２増殖の阻害は、相対発光単位として表される。抗体７０変異体は、互いに類似した効力を有し、ＡＭＧ−７１４よりも低いＩＣ−５０値を有する。
【図３８】部位特異的変異誘発によってＩＬ−１５上の表面露出残基がアラニンに変換され、ＥＸＰＩ２９３（登録商標）Ｆ細胞においてヒトＩＬ−１５Ｒαと共発現されたことを示す。精製ＩＬ−１５変異体への抗ＩＬ−１５抗体の結合は、ＢＩＣＡＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）システムで表面プラズモン共鳴を用いて評価した。急速な解離またはより速い解離速度によって特徴付けられるように、ＡＭＧ７１４は、Ｅ９８Ａ、Ｑ１０１Ａ、Ｈ１０５Ａ、またはＱ１０８Ａへの結合を著しく減少させるか、または全く結合させなかった。会合速度の低下及び急速な解離によって特徴付けられるように、抗体７０ａはＱ１０８Ａへの結合が低かった。
【図３９−１】図３９Ａ及び図３９Ｂは、抗体７０ａ．ＦＡｂ／ＩＬ−１５複合体及び四次ＩＬ−１５受容体複合体の結晶構造を示す。（図３９Ａ）ヒトＩＬ−１５を結合する抗体７０ａ．ＦＡｂの可変領域の漫画図の正面図及び側面図である。（図３９Ｂ）機能性ＩＬ−１５複合体の四次構造である。ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、及びＩＬ−２Ｒγに結合したヒトＩＬ−１５の漫画図である（ｐｄｂコード、４ＧＳ７）。抗体７０ａ．ＦＡｂは、ＩＬ−２Ｒβ及びＩＬ−２ＲγへのＩＬ−１５の結合を妨げる。抗体７０ａ  ＦＡｂは、ＩＬ−１５Ｒαより遠位のＩＬ−１５に結合し、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体に結合することができる。
【図３９−２】図３９Ｃ、図３９Ｄ、及び図３９Ｅは、抗体７０ａ、ＩＬ−２Ｒγ、及びＩＬ−２Ｒβと相互作用するＩＬ−１５の重要な結合残基を示す。水素結合を介してそれぞれのパートナータンパク質と接触するＩＬ−１５残基のみが図示され、番号付けされている。（図３９Ｃ）抗体７０ａ  ＦＡｂとの相互作用のためにＩＬ−１５によって使用される残基（図３９Ｄ）Ｑ１０８、Ｎ１１２を含む、ＩＬ−２Ｒγとの水素結合を媒介する選択されたＩＬ−１５残基である。（図３９Ｅ）ＩＬ−１５残基であるＳ７は、ＩＬ−２Ｒβと水素結合を形成する。
【図３９−３】図３９Ｆ、図３９Ｇ、及び図３９Ｈは、抗体７０ａを伴うヒトＩＬ−１５の結晶構造を示す。（図３９Ｆ）ヒトＩＬ−１５に結合する抗体ＦＡｂを示す漫画図である。（図３９Ｇ）ＣＤＲＨ２中にＹ５２／５４／５６を含む三重チロシンモチーフは、ヒトＩＬ−１５を伴う抗体の重要な結合決定基である。（図３９Ｈ）ヒトＩＬ−１５との相互作用を媒介する抗体７０ａのＹＹＹモチーフのクローズアップ図である。このモチーフは、ＩＬ−１５のヘリックス４の周りの疎水性残基を覆って保護し、溶媒和を防ぐ。この相互作用に関与する残基のＩＬ−１５及びＣＤＲＨ２の側鎖は、それぞれ白い棒及び黒い棒で示される。
【図４０】抗体７０変異体のヒトＩＬ−１５への結合を示す。抗ＩＬ−１５  ｍＡｂによる細胞外及び細胞内ＩＬ−１５結合をヒト単球サブセット：古典的単球、中間型単球、及び非古典的単球で評価した。抗ＫＬＨ  Ｃ３  ＩｇＧ１アイソタイプ対照が分析に含まれた（塗りつぶし）。代表的なドナーＡのデータが示されている。
【図４１】例示的な抗ＩＬ−１５抗体によるマウスにおけるＩＬ−１５活性の阻害を示す。提示された結果は、ビヒクル対照またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体、続いて例示的な抗ＩＬ−１５抗体または抗ＫＬＨ  Ｃ３  ＩｇＧ１アイソタイプ対照を注射したマウスの脾臓における循環ＮＫ細胞の計数である。結果は、群あたり８匹の動物の平均±標準偏差として表される。
【図４２】例示的な抗ＩＬ−１５抗体によるカニクイザルにおける循環中央ＮＫ細胞数の阻害を示す。１０ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇで試験した例示的な抗ＩＬ−１５抗体を注射したカニクイザルの循環中央ＮＫ細胞の計数である。循環中央ＮＫ細胞数を、ＮＫ細胞マーカーＣＤ１５９ａ（ＮＫＧ２Ａ）及びＣＤ１６の発現によって定量した。結果は各サルについての個々の時点として表され、実線は１群あたりの中央ＮＫ細胞数を示す（ｎ＝４）。
【図４３Ａ】図４３Ａ、図４３Ｂ、及び図４３Ｃは、様々なＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の組み合わせを示す。
【図４３Ｂ】図４３Ａ、図４３Ｂ、及び図４３Ｃは、様々なＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の組み合わせを示す。
【図４３Ｃ】図４３Ａ、図４３Ｂ、及び図４３Ｃは、様々なＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の組み合わせを示す。
【図４４Ａ】図４４Ａ、図４４Ｂ、及び図４４Ｃは、様々なＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ２の組み合わせを示す。
【図４４Ｂ】図４４Ａ、図４４Ｂ、及び図４４Ｃは、様々なＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ２の組み合わせを示す。
【図４４Ｃ】図４４Ａ、図４４Ｂ、及び図４４Ｃは、様々なＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ２の組み合わせを示す。
【図４５Ａ】アカゲザルセリアック病モデルの試験デザインを示し、２つの群における段階、評価項目、及び抗ＩＬ−１５抗体による処置を示す。
【図４５Ｂ】小腸の絨毛高さと陰窩深さとの間の比（Ｖ／Ｃ）によって測定される、抗ＩＬ１５処置によるグルテン誘発性小腸粘膜傷害の軽減を示す。６ヶ月のＧＤ食、群１のアカゲザルにおける３５日間の抗ＩＬ１５処置（ＴＤ３５）、及び群２のアカゲザルにおける６１日間の処置（ＴＤ６１）に対応する時点で２つの群のアカゲザルから採取した空腸楔状生検を用いてＶ／Ｃ比を決定した。
【図４５Ｃ】組織学的切片における上皮細胞間リンパ球（ＩＥＬ）の計数によって測定した抗ＩＬ−１５処置によるグルテン誘発性小腸粘膜炎症の軽減を示す。時点は、６ヶ月間のＧＤ食、３ヶ月間のＧＦＤ食、群１のアカゲザルにおける抗ＩＬ１５処置後３５日間（ＴＤ３５）、及び群２のアカゲザルにおける６１日間の処置（ＴＤ６１）を反映する。青い破線は健常対照者のベースラインを示す。
【図４５Ｄ】抗ＩＬ−１５処置によるグルテン誘発性血清抗体（抗グリアジン抗体）の軽減を示す。ＡＧＡは抗グリアジン抗体であり、ＴＧ２は抗トランスグルタミナーゼ２自己抗体である。時点間の距離は、２週間隔に相当する。陰性ベースラインレベルは破線で示されている。抗ＩＬ１５処置の開始は矢印で示されている。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
開示の態様に関する様々な用語は、本明細書及び特許請求の範囲を通して使用される。かかる用語は、他に指示がない限り、当該技術分野において通常の意味を有するものとする。他の特別に定義された用語は、本明細書で提供される定義と一致するように解釈されるものとする。
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別段明確に記載されない限り、複数形の言及を含む。
【００３３】
用語「対象」及び「患者」は、互換的に使用され、任意の動物を含む。コンパニオン哺乳動物（例えば、ネコ、イヌ）、家畜哺乳動物（例えば、ブタ、ウマ、ウシ）、げっ歯類（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット）、及び非ヒト霊長類を含む哺乳動物が好ましい。ヒトが、非常に好ましい。
【００３４】
本明細書で使用される場合、「ＩＬ−１５複合体」は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）との間の相互作用を指す。
【００３５】
抗体−抗原相互作用の文脈における「特異性」は、必ずしも絶対的な名称ではないが、抗原に対する抗体の選択性の程度を意味する相対用語を構成することがある。抗原に対する抗体の特異性は、抗体の可変領域によって、そして通常は抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）によって左右される。
【００３６】
本開示は、遊離（非複合型）ヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）、及びＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒα）に結合したＩＬ−１５（ＩＬ−１５複合体）に特異的に結合する組換え産生抗体を提供する。抗体はそれらの抗原に高い親和性で結合し、免疫細胞のＩＬ−１５媒介性増殖を大幅に減少させる。抗体は、ＩＬ−１５をアンタゴナイズする。
【００３７】
好ましい態様では、抗体は、少なくとも１０８位のグルタミンを含むヒトＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）上のエピトープに結合する。エピトープは、ヒトＩＬ−１５の７位のセリン及び１１２位のアスパラギン（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）のうちの１つ以上をさらに含み得る。
【００３８】
所与の抗体／抗原相互作用に対するエピトープは、様々な実験的エピトープマッピング法を用いて解明することができる。実験的方法には、突然変異誘発（アラニンスキャニングを含む）、Ｘ線結晶構造解析、及び当技術分野において周知の様々な他の方法が含まれる。
【００３９】
抗原と抗体との間の相互作用に対するエピトープは、抗原−抗体相互作用において存在する原子接触を定義する空間座標を含み得る。エピトープは、抗原と抗体との間の原子接触を定義する空間座標によって特性決定することができる。エピトープは、特定の基準によって、例えば原子（例えば、非水素原子）間の距離によって定義されるアミノ酸残基によって特性決定することができる。
【００４０】
抗体、例えばＦＡｂフラグメントとその抗原間の複合体の空間座標によって定義されるＸ線由来の結晶構造の文脈において、エピトープという用語は、原子対間の水媒介性水素結合；２．５〜３．５Åのヘテロ原子の水素結合；または芳香環内の供与体／受容体原子に対応する水素結合、を有することを特徴とするＩＬ−１５残基を含む。あるいは、所与のＩＬ−１５アミノ酸残基は、それが原子対間の疎水性相互作用またはファンデルワールス相互作用に関与する場合、エピトープの一部であると見なされる。
【００４１】
エピトープはまた、他のアミノ酸による置換が抗体と抗原との間の相互作用の特徴を変える（例えばアラニンスキャニングを使用して）アミノ酸残基をより一般的に含むことができる。アラニンスキャニング突然変異誘発実験は、ＩＬ−１５ポリペプチドの様々な残基がアラニンで置き換えられている変異体ＩＬ−１５を使用して実施することができる。抗体の変異体ＩＬ−１５への結合を評価することによって、抗体結合に対する特定のＩＬ−１５残基の重要性を評価することができる。しかしながら、非極性側鎖の埋没が抗原と抗体の結合中に起こり、抗原に対する側鎖のパッキングをもたらす場合、この位置でのアラニン変異は結合に大きな影響を与えない可能性がある。アラニン変異は抗体による結合の低下をもたらすかもしれないが、これは、残基が接触していることを意味するのではなく、むしろアラニンの導入によってＩＬ−１５の局所的三次元構造が乱され得ることを意味する。Ｘ線結晶構造解析などによる複合体のさらなる構造分析は、抗体と抗原との間の接触残基を評価するために必要となり得る。
【００４２】
抗ＩＬ−１５抗体は、好ましくは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞などの増殖免疫細胞を阻害、減少、または防止することができる。いくつかの態様では、抗ＩＬ−１５抗体は、ＮＫ増殖アッセイにおいて約９００ｐＭ未満のＩＣ５０で増殖を阻害する。いくつかの態様では、抗ＩＬ−１５抗体は、ＮＫ増殖アッセイにおいて０ｐＭ超かつ約９００ｐＭ未満のＩＣ５０で増殖を阻害する。抗ＩＬ−１５抗体は、ＮＫ増殖アッセイにおいて約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＩＣ５０で増殖を阻害し得る。抗ＩＬ−１５抗体は、ＮＫ増殖アッセイにおいて約１ｐＭ〜約２５０ｐＭのＩＣ５０で増殖を阻害し得る。抗ＩＬ−１５抗体は、ＮＫ増殖アッセイにおいて約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＩＣ５０で増殖を阻害し得る。抗ＩＬ−１５抗体は、ＮＫ増殖アッセイにおいて約１ｐＭ〜約１５０ｐＭのＩＣ５０で増殖を阻害し得る。抗ＩＬ−１５抗体は、ＮＫ増殖アッセイにおいて約１ｐＭ〜約１００ｐＭのＩＣ５０で増殖を阻害し得る。抗ＩＬ−１５抗体は、好ましくは、ＮＫ増殖アッセイにおいて約１ｐＭ〜約６０ｐＭのＩＣ５０で増殖を阻害する。抗ＩＬ−１５抗体は、好ましくは、ＮＫ増殖アッセイにおいて約５ｐＭ〜約３５ｐＭのＩＣ５０で増殖を阻害する。抗ＩＬ−１５抗体は、好ましくは、ＮＫ増殖アッセイにおいて約５ｐＭ〜約３０ｐＭのＩＣ５０で増殖を阻害する。
【００４３】
好適なＮＫ増殖アッセイの一部として、ＣＴＬＬ−２細胞などの細胞を培養し、好適な濃度のＩＬ−１５とＩＬ−１５受容体アルファとの複合体を用いて増殖を誘導してもよい。したがって、ＣＴＬＬ−２増殖アッセイは、増殖阻害に関する抗体のＩＣ５０を測定するために使用され得る。本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体を細胞培養液に添加し、次いで、細胞を４８時間を含む好適な期間インキュベートし、その後、細胞生存率アッセイによる方法を含む、抗体の存在による増殖または増殖の阻害について評価する。
【００４４】
本明細書に記載または例示されるように、ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられたアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７及び１９９１（本明細書ではＫａｂａｔ番号付けシステムとも呼ばれる）にしたがってもよい。加えて、ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられたアミノ酸位置は、強化Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ｍｄｅｘ．ｈｔｍｌ）にしたがってもよい。
【００４５】
Ｋａｂａｔの番号付けシステムにしたがって、ＶＨ  ＦＲ及びＣＤＲは、以下のように配置され得る：残基１〜３０（ＦＲ１）、３１〜３５（ＣＤＲ１）、３６〜４９（ＦＲ２）、５０〜６５（ＣＤＲ２）、６６〜９４（ＦＲ３）、９５〜１０２（ＣＤＲ３）及び１０３〜１１３（ＦＲ４）、ならびにＶＬ  ＦＲ及びＣＤＲは、以下のように配置される：残基１〜２３（ＦＲ１）、２４〜３４（ＣＤＲ１）、３５〜４９（ＦＲ２）、５０〜５６（ＣＤＲ２）、５７〜８８（ＦＲ３）、８９〜９７（ＣＤＲ３）及び９８〜１０７（ＦＲ４）。場合によっては、可変領域は長さが増加することがあり得、Ｋａｂａｔ番号付けシステムにしたがって、いくつかのアミノ酸は数字とそれに続く文字によって示され得る。本明細書は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによって定義されるＦＲ及びＣＤＲに限定されず、標準番号付けシステムまたはＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８３；及び／またはＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−４８のもの；Ｈｏｎｎｅｇｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７−７０の番号付けシステム；またはＧｉｕｄｉｃｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：２０６−１１で説明されるＩＭＧＴシステムを含む全ての番号付けシステムを含む。好ましい態様では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムにしたがって定義される。
【００４６】
いくつかの特定の態様では、本明細書に記載の任意の重鎖ＣＤＲ２サブドメインに関しては、Ｋａｂａｔ番号付けシステムにしたがって、５つのＣ末端アミノ酸が抗原結合に直接関与しない場合があり、したがって、抗原結合に実質的に悪影響を及ぼすことなく、これら５つのＣ末端アミノ酸のうちの任意の１つ以上を別の天然に存在するアミノ酸で置換することができることが理解されよう。いくつかの態様では、本明細書に記載の任意の軽鎖ＣＤＲ１サブドメインに関しては、Ｋａｂａｔ番号付けシステムにしたがって、４つのＮ末端アミノ酸は抗原結合に直接関与しない場合があり、したがって、抗原結合に実質的に悪影響を及ぼすことなく、これら４つのアミノ酸のうちの任意の１つ以上を別の天然に存在するアミノ酸で置換することができることが理解されよう。例えば、Ｐａｄｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３−１３９によって記載されているように、重鎖ＣＤＲ２の５つのＣ末端アミノ酸及び／または軽鎖ＣＤＲ１の４つのＮ末端アミノ酸は、抗原結合に関与しない場合がある。いくつかの態様では、重鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ１の両方が、抗原結合に直接関与しない。
【００４７】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２を含み、いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２を含む。抗体は、配列番号１２、配列番号１３、または配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＦＲ３を含み得る。抗体は、軽鎖可変領域または軽鎖をさらに含み得る。軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号５、配列番号８、配列番号４５５、配列番号４５７、または配列番号４５９のアミノ酸配列を含み得る。軽鎖可変領域は、配列番号５０３、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０９、または配列番号５１０のアミノ酸配列を含み得る。軽鎖は、配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号４５６、配列番号４５８、または配列番号４６０のアミノ酸配列を含み得る。
【００４８】
重鎖可変領域ＣＤＲ１は、配列番号４５３または配列番号５２〜配列番号１３５のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。重鎖可変領域ＣＤＲ２は、配列番号１３６〜配列番号２２６のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。重鎖可変領域ＣＤＲ３は、配列番号２２７〜配列番号２７２のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインの好適な組み合わせは、図４３Ａ〜４３Ｃに示す。このような重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３ドメインを含む抗体、または図４３Ａ〜４３Ｃに示す重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインの組み合わせを含む抗体は、軽鎖可変領域または軽鎖をさらに含み得る。軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号５、配列番号８、配列番号４５５、配列番号４５７、または配列番号４５９のアミノ酸配列を含み得る。軽鎖可変領域は、配列番号５０３、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０９、または配列番号５１０のアミノ酸配列を含み得る。軽鎖は、配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号４５６、配列番号４５８、または配列番号４６０のアミノ酸配列を含み得る。
【００４９】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１を含み、そしていくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含み、そしていくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。抗体は、重鎖可変領域をさらに含み得る。重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、または配列番号４５４のアミノ酸配列を含み得る。
【００５０】
軽鎖可変領域ＣＤＲ１は、配列番号２７３〜配列番号３２９のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。軽鎖可変領域ＣＤＲ２は、配列番号３３０〜配列番号３９０のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。軽鎖可変領域ＣＤＲ３は、配列番号３９１〜配列番号４５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含み得る。軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインの好適な組み合わせは、図４４Ａ〜４４Ｃに示す。このような軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３ドメインを含む抗体、または図４４Ａ〜４４Ｃに示す軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインの組み合わせを含む抗体は、重鎖可変領域をさらに含み得る。重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、または配列番号４５４のアミノ酸配列を含み得る。
【００５１】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。抗体は、配列番号１２、配列番号１３、または配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＦＲ３をさらに含み得る。
【００５２】
いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。抗体は、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＦＲ３をさらに含み得る。
【００５３】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。抗体は、配列番号１２、配列番号１３、または配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＦＲ３をさらに含み得る。
【００５４】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。抗体は、配列番号１２または配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＦＲ３をさらに含み得る。
【００５５】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。抗体は、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＦＲ３をさらに含み得る。
【００５６】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。抗体は、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＦＲ３をさらに含み得る。
【００５７】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３（配列番号２９のＸａａ５はＦである（配列番号５１９））を含む。抗体は、配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域ＦＲ３をさらに含み得る。
【００５８】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域または軽鎖を含む。軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号５、配列番号８、配列番号４５５、配列番号４５７、または配列番号４５９のアミノ酸配列を含み得る。軽鎖可変領域は、配列番号５０３、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０９、または配列番号５１０のアミノ酸配列を含み得る。軽鎖は、配列番号６、配列番号９、配列番号４５６、配列番号４５８、または配列番号４６０のアミノ酸配列を含み得る。
【００５９】
抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し得、そして以下の表に示されるアミノ酸配列を含むサブドメインを含む重鎖可変領域を含むか、またはさらに含む：
【表１】
2020501583.tif 000003
【００６０】
抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し得、そして以下の表に示されるアミノ酸配列を含むサブドメインを含む軽鎖可変領域を含むか、またはさらに含む：
【表２】
2020501583.tif 000004
【００６１】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。抗体は、軽鎖可変領域または軽鎖をさらに含み得る。軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号５、配列番号８、配列番号４５４、配列番号４５７、または配列番号４５９のアミノ酸配列を含み得る。軽鎖可変領域は、配列番号５０３、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０９、または配列番号５１０のアミノ酸配列を含み得る。軽鎖は、配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号４５６、配列番号４５８、または配列番号４６０のアミノ酸配列を含み得る。
【００６２】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号４５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号５０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号５０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号５０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号５０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号５０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号５１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。抗体は、重鎖可変領域をさらに含み得る。重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、または配列番号４５４のアミノ酸配列を含み得る。
【００６３】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号４５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号４５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの好ましい態様では、抗体は、配列番号４６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。抗体は、重鎖可変領域をさらに含み得る。重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号４、配列番号７、または配列番号４５４のアミノ酸配列を含み得る。
【００６４】
抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。このような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域対を含む抗体は、好ましくは、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合する。
【００６５】
抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号４５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号５１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み得る。このような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域対を含む抗体は、好ましくは、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合する。
【００６６】
抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。このような重鎖可変領域及び軽鎖対を含む抗体は、好ましくは、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合する。
【００６７】
抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４５８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４６０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。抗体は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み得る。このような重鎖可変領域及び軽鎖対を含む抗体は、好ましくは、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合する。
【００６８】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号４６１、配列番号４６２、配列番号４６３、配列番号４６４、配列番号４６５、配列番号４６６、配列番号４６７、配列番号４６８、配列番号４６９、配列番号４７０、配列番号４７１、配列番号４７２、配列番号４７３、配列番号４７４、配列番号４７５、配列番号４７６、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４８１、配列番号４８２、配列番号４８３、配列番号４８４、配列番号４８５、配列番号４８６、配列番号４８７、配列番号４８８、配列番号４８９、または配列番号４９０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域または軽鎖を含む。いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号４６１、配列番号４６２、配列番号４６３、配列番号４６４、配列番号４６５、配列番号４６６、配列番号４６７、配列番号４６８、配列番号４６９、配列番号４７０、配列番号４７１、配列番号４７２、配列番号４７３、配列番号４７４、配列番号４７５、配列番号４７６、配列番号４７７、配列番号４７８、配列番号４７９、配列番号４８０、配列番号４８１、配列番号４８２、配列番号４８３、配列番号４８４、配列番号４８５、配列番号４８６、配列番号４８７、配列番号４８８、配列番号４８９、または配列番号４９０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域または軽鎖を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４９１、配列番号４９２、配列番号４９３、配列番号４９４、配列番号４９５、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、または配列番号４９９のいずれか１つであり得る。いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号４９１、配列番号４９２、配列番号４９３、配列番号４９４、配列番号４９５、配列番号４９６、配列番号４９７、配列番号４９８、または配列番号４９９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び重鎖可変領域を含む。このような重鎖可変領域及び軽鎖対を含む抗体は、好ましくは、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合する。
【００６９】
いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号７、配列番号４５４、及び配列番号４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに軽鎖可変領域または軽鎖を含む。いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号７、配列番号４５４、及び配列番号４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに軽鎖可変領域または軽鎖を含み、軽鎖可変領域は、配列番号５、配列番号８、配列番号４５５、配列番号４５７、配列番号４５９、配列番号５０３、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０９、または配列番号５１０のいずれか１つであり得る。いくつかの態様では、抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し、配列番号５、配列番号８、配列番号４５５、配列番号４５７、配列番号４５９、配列番号５０３、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０９、または配列番号５１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び重鎖可変領域を含む。
【００７０】
抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し得、そして以下の表に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬまたは軽鎖対を含む：
【表３】
2020501583.tif 000005
【００７１】
抗体は、ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に特異的に結合し得、そして以下の表に示されるアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬまたは軽鎖対を含む：
【表４】
2020501583.tif 000006
【００７２】
本明細書に記載または例示される任意の抗体はＩＬ−１５（好ましくはヒトＩＬ−１５である）に結合する。抗体は、非複合型ＩＬ−１５、またはＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒ−アルファまたはＩＬ−１５Ｒα）と複合体を形成している際のＩＬ−１５（ＩＬ−１５複合体）に結合し得る。いくつかの態様では、ヒトＩＬ−１５は、配列番号５１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ−１５Ｒ−アルファは、ＡＶＩ及びＨｉｓタグを含まない、配列番号５１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＩＬ−１５Ｒ−アルファは、配列番号５２０のアミノ酸配列を含む。
【００７３】
抗体は、約１×１０−２Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を有するＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に対する親和性を持ち得る。いくつかの実施形態では、ＫＤは約１×１０−３Ｍ未満である。他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−４Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、ＫＤは約１×１０−５Ｍ未満である。さらに他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−６Ｍ未満である。他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−７Ｍ未満である。他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−８Ｍ未満である。他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−９Ｍ未満である。他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−１０Ｍ未満である。さらに他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−１１Ｍ未満である。いくつかの実施形態では、ＫＤは約１×１０−１２Ｍ未満である。他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−１３Ｍ未満である。他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−１４Ｍ未満である。さらに他の実施形態では、ＫＤは約１×１０−１５Ｍ未満である。いくつかの態様では、ＫＤは約１．８×１０−９Ｍ未満である。いくつかの態様では、ＫＤは約１．２×１０−１０Ｍ〜約２×１０−１０Ｍである。いくつかの態様では、ＫＤは約１．３×１０−１０Ｍ〜約１．９×１０−１０Ｍである。いくつかの態様では、ＫＤは約１．３３×１０−１０Ｍ〜約１．９３×１０−１０Ｍである。いくつかの態様では、ＫＤは約１．６×１０−１０Ｍ〜約１．８×１０−１０Ｍである。いくつかの態様では、ＫＤは約１．７×１０−１０Ｍである。親和性値は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析などの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）またはＯＣＴＥＴ（登録商標）Ｒｅｄ  ９６（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ）Ｄｉｐ−ａｎｄ−Ｒｅａｄシステムを用いた分析を含む標準的手法により得られるものを指す。好ましい実施形態では、解離定数はＳＰＲによって決定される。
【００７４】
一般的なＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＳＰＲ分析では、抗体をセンサーチップ表面に固定し、好適な濃度のＩＬ−１５またはＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成したＩＬ−１５を表面に通過させる。屈折率の変化を検出し、ソフトウェアを使用して分析用のセンサーグラムを作成する。固定化抗体とＩＬ−１５またはＩＬ−１５複合体との間の相互作用は、約１〜約２分を含む、任意の好適な期間にわたって実施することができる。相互作用の温度は、約２５℃を含む任意の好適な温度であり得る。
【００７５】
ＩＬ−１５（例えば、ＩＬ−１５Ｒαと複合体を形成したヒトＩＬ−１５）に結合する抗体は、モノクローナル抗体であり得る。好ましくは、抗体は、重鎖及び軽鎖を含む完全長の抗体である。いくつかの態様では、抗体は、完全長親抗体分子（例えば、ＩＬ−１５に対する）の、抗原結合特異性を保持する、かつ好ましくは親和性もまた実質的に保持する抗体の誘導体またはフラグメントまたは部分を含む。例えば、誘導体は単一の可変領域（重鎖または軽鎖可変領域のいずれか）を含み得る。好適な抗体誘導体及びフラグメントの他の例としては、限定するものではないが、ポリエピトープ特異性を有する抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ＦＡｂ、Ｆ（Ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆａｂｃ、及びＦｖ分子、一本鎖（Ｓｃ）抗体、一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）、個々の抗体軽鎖、個々の抗体重鎖、抗体鎖と他の分子間の融合体、重鎖モノマーまたは二量体、軽鎖モノマーまたは二量体、１つの重鎖と１つの軽鎖からなる二量体、及び他の多量体が挙げられる。一本鎖Ｆｖ抗体は、多価であってよい。抗体誘導体、フラグメント、及び／または部分は、組換え産生され得、原核生物または真核生物の任意の細胞型によって発現され得る。
【００７６】
完全長抗体では、各重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略する）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略する）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬからなる。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分化することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順にて並ぶ３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。典型的には、抗体の抗原結合特性は、ＣＤＲ配列に対する変化よりもＦＲ配列に対する変化により妨害される可能性が低い。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。
【００７７】
抗ＩＬ−１５抗体は、好ましくは完全ヒト型である。完全ヒト抗体は、全分子がヒトであるか、またはそうでなければヒト起源のものであるか、または抗体のヒト形態と同一のアミノ酸配列を含むものである。完全ヒト抗体は、例えば、抗体の可変領域をコードするヒト遺伝子が組換え発現される場合、ヒトＶ遺伝子ライブラリーから得られるものを含む。完全ヒト抗体は、他の生物において発現され得る（例えば、マウス及びｘｅｎｏｍｏｕｓｅ技術）か、またはヒト抗体をコードする遺伝子によって形質転換された他の生物由来の細胞において発現され得る。完全ヒト抗体は、ＷＯ０８／１５１０８１にしたがって、ＯＭＮＩＲＡＴ（登録商標）ラットシステム（ＯＭＴ，Ｉｎｃ．）において発現され得る。それにもかかわらず、完全ヒト抗体は、天然に存在するヒト配列によってコードされないアミノ酸残基、例えばランダムまたは部位特異的変異によって導入される変異を含み得る。
【００７８】
いくつかの態様では、抗ＩＬ−１５抗体は、非免疫グロブリン由来のタンパク質フレームワークを含み得る。例えば、抗原結合のために選択されたＣＤＲを作製するためにランダム化した２つのループを有する４ヘリックスバンドルタンパク質シトクロムｂ５６２について記載している（Ｋｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：６５５２−６５５６）を参照してもよい。
【００７９】
抗ＩＬ−１５抗体は、抗体活性、循環半減期、または保存／貯蔵安定性に影響を及ぼし得る翻訳後修飾または部分を含み得る。例えば、抗体は、メチル化、アセチル化、グリコシル化、硫酸化、リン酸化、カルボキシル化、及び／またはアミド化されていてもよく、または当技術分野で周知の他の好適な部分を含んでいてもよい。部分は、循環中の免疫グロブリン分子上に一般に見出だされるか、または原核生物及び真核生物発現系を含む組換え発現系によって抗体に付加される、任意の化学基または基の組み合わせを含む。
【００８０】
本開示によって企図される側鎖修飾の例としては、アルデヒドとの反応による還元的アルキル化、それに続くＮａＢＨ４による還元などによるアミノ基の修飾；メチルアセトイミデートによるアミジン化；無水酢酸によるアシル化；シアネートによるアミノ基のカルバモイル化；２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるアミノ基のトリニトロベンジル化；無水コハク酸及び無水テトラヒドロフタル酸によるアミノ基のアシル化；ならびにピリドキサール−５−ホスフェートによるリジンのピリドキシル化、それに続くＮａＢＨ４による還元、が挙げられる。
【００８１】
アルギニン残基のグアニジン基は、２，３−ブタンジオン、フェニルグリオキサール、及びグリオキサールなどの試薬との複素環式縮合生成物の形成によって修飾され得る。カルボキシル基は、Ｏ−アシルイソ尿素形成を介したカルボジイミド活性化とそれに続くその後の誘導体化（例えば対応するアミドへの）によって修飾され得る。スルフヒドリル基は、ヨード酢酸またはヨードアセトアミドによるカルボキシメチル化；システイン酸への過ギ酸酸化；他のチオール化合物との混合ジスルフィドの形成；マレイミド、無水マレイン酸、または他の置換マレイミドとの反応；４−クロロ水銀ベンゾエート、４−クロロ水銀フェニルスルホン酸、塩化フェニル水銀、２−クロロ水銀−４−ニトロフェノール、及び他の水銀を用いた水銀誘導体の形成；アルカリ性ｐＨでのシアネートによるカルバモイル化などの方法によって修飾され得る。トリプトファン残基は、例えば、Ｎ−ブロモスクシンイミドによる酸化、または２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジルブロミドもしくはスルフェニルハライドによるインドール環のアルキル化によって修飾され得る。他方、チロシン残基は、テトラニトロメタンによってニトロ化し、３−ニトロチロシン誘導体を形成することにより変化し得る。ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾は、ヨード酢酸誘導体を用いたアルキル化またはジエチルピロカーボネートを用いたＮ−カルベトキシル化（ｃａｒｂｅｔｈｏｘｙｌａｔｉｏｎ）によって達成し得る。
【００８２】
抗ＩＬ−１５抗体は、血清半減期及び生体内分布を調節する改変を含み得、これには限定されるものではないが、異化からＩｇＧを保護する上で重要な役割を果たす受容体である新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との抗体の相互作用を調節する改変が含まれ、高い血清抗体濃度を維持する。血清半減期調節改変は、米国特許第７，０８３，７８４号に記載されているように、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（ＥＵ番号付けシステムによる番号付け（Ｅｄｅｌｍａｎ，ＧＭ  ｅｔ  ａｌ．（１９６９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ  ６３：７８−８５））の三重置換を含む、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃ領域で起こり得る。他の置換は、２５０位及び４２８位（例えば、米国特許第７，２１７，７９７号を参照のこと）、ならびに３０７位、３８０位、及び４３４位（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／０４２０７２号を参照のこと）で起こり得る。Ｆｃ受容体への結合、及びこれらの受容体によって媒介されるその後の機能（ＦｃＲｎ結合及び血清半減期を含む）を調節する定常ドメインアミノ酸置換の例は、米国特許出願公開第２００９／０１４２３４０号、第２００９／００６８１７５号、及び第２００９／００９２５９９号に記載されている。どのクラスの抗体でも、不均一性を低減するために重鎖Ｃ末端リジンを省略または除去することができる（ΔＫ）。ヒトＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ（ＥＵ番号付け）の置換は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体Ｆａｂアームの交換を安定化することができ（Ｌａｂｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：８；７６７−７７３）、この置換は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ及び／またはΔＫ改変と同時に存在し得る。
【００８３】
抗ＩＬ−１５抗体は、好ましくはヒト定常ドメインを含む。重鎖定常ドメインは、好ましくはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４定常ドメインである。軽鎖定常ドメインは、好ましくはヒトラムダ定常ドメインである。
【００８４】
抗ＩＬ−１５抗体と共に使用され得るヒト重鎖ＩｇＧ１定常領域は、ヒトＩｇＧ１（配列番号３２）、ヒトＩｇＧ１（ΔＫ）（配列番号３３）、ヒトＩｇＧ１  ２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ（配列番号３４）、ヒトＩｇＧ１  ２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ（ΔＫ）（配列番号３５）、ヒトＩｇＧ１  Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ（配列番号３６）、ヒトＩｇＧ１  Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ（ΔＫ）（配列番号３７）ヒトＩｇＧ１  Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ（配列番号３８）、及びヒトＩｇＧ１  Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ（ΔＫ）（配列番号３９）の中から選択され得る。抗ＩＬ−１５抗体と共に使用され得るヒト重鎖ＩｇＧ２定常領域は、ヒトＩｇＧ２（配列番号４０）、ヒトＩｇＧ２（ΔＫ）（配列番号４１）、ヒトＩｇＧ２  Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ（配列番号４２）、及びヒトＩｇＧ（ΔＫ）（配列番号４３）の中から選択され得る。抗ＩＬ−１５抗体と共に使用され得るヒト重鎖ＩｇＧ４定常領域は、ヒトＩｇＧ４（配列番号４４）、ヒトＩｇＧ４（ΔＫ）（配列番号４５）、ヒトＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ（配列番号４６）、ヒトＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ（ΔＫ）（配列番号４７）、ヒトＩｇＧ４  ２２８Ｐ／２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ（配列番号４８）、ヒトＩｇＧ４  ２２８Ｐ／２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ（ΔＫ）（配列番号４９）、ヒトＩｇＧ４  ２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ（配列番号５０）、及びヒトＩｇＧ４  ２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ（ΔＫ）（配列番号５１）の中から選択され得る。
【００８５】
抗ＩＬ−１５抗体は、任意の化学的部分または生体分子部分に標識、結合、またはコンジュゲートし得る。標識抗体は、治療的、診断的、または基礎的な研究用途に用途を見出すことができる。このような標識／コンジュゲートは、蛍光色素、電気化学発光プローブ、量子ドット、放射性標識、酵素、蛍光タンパク質、及び発光タンパク質のように検出可能であり得るか、またはビオチンもしくはＰＥＧを含み得る。
【００８６】
抗体は、タンパク質分解的切断を防止するため、または活性もしくは安定性を増強するため、既知の保護基／ブロック基によって誘導体化されてもよい。
【００８７】
抗ＩＬ−１５抗体、それらのドメイン（例えば、ＶＨ及びＶＬドメイン）、及びそれらのサブドメイン（例えば、ＦＲ及びＣＤＲ）をコードするポリヌクレオチド配列は、本開示において特徴とされる。ポリヌクレオチドとしては、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡとＤＮＡのハイブリッド、及びＲＮＡ、ＤＮＡ、またはこれらのハイブリッドの一本鎖、二本鎖または三本鎖のストランドが挙げられるが、これらに限定されない。相補的核酸配列もまた本開示の範囲内である。
【００８８】
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号４、または配列番号７のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードする第１の核酸配列を含む。ポリヌクレオチドは、配列番号２、配列番号５、または配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする第２の核酸配列をさらに含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号３、配列番号６、または配列番号９のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖をコードする第２の核酸配列をさらに含み得る。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４定常領域のいずれかなどの抗体重鎖定常領域をコードする第３の核酸配列をさらに含み得る。
【００８９】
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号７、または配列番号４５４のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードする第１の核酸配列を含む。ポリヌクレオチドは、配列番号５、配列番号８、配列番号４５５、配列番号４５７、配列番号４５９、配列番号５０３、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０９、または配列番号５１０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする第２の核酸配列をさらに含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号６、配列番号９、配列番号４５６、配列番号４５８、または配列番号４６０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖をコードする第２の核酸配列をさらに含み得る。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４定常領域のいずれかなどの抗体重鎖定常領域をコードする第３の核酸配列をさらに含み得る。
【００９０】
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号２、配列番号５、または配列番号８のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする第１の核酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号３、配列番号６、または配列番号９のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖をコードする第１の核酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号５１７の核酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号５１８の核酸配列を含む。
【００９１】
いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号５、配列番号８、配列番号４５５、配列番号４５７、配列番号４５９、配列番号５０３、配列番号５０５、配列番号５０６、配列番号５０７、配列番号５０９、または配列番号５１０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする第１の核酸配列を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、配列番号６、配列番号９、配列番号４５６、配列番号４５８、または配列番号４６０のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖をコードする第１の核酸配列を含む。
【００９２】
任意のそのようなポリヌクレオチドは、ベクター内に含まれ得る。したがって、ポリヌクレオチドを含むベクターは本開示の一部として提供される。ベクターは発現ベクターであり得る。目的のポリペプチドをコードする配列を含む組換え発現ベクターは、このようにして提供される。発現ベクターは、これらに限定されないが、調節配列、選択マーカー、精製タグ、またはポリアデニル化シグナルなどの１つ以上の追加の配列を含み得る。このような調節要素は、転写プロモーター、エンハンサー、ｍＲＮＡリボソーム結合部位、または転写及び翻訳の終結を制御する配列を含み得る。
【００９３】
発現ベクター、特に哺乳動物発現ベクターは、複製起点、発現されるべき遺伝子に連結された好適なプロモーター及びエンハンサー、他の５’もしくは３’隣接非転写配列、５’もしくは３’非翻訳配列（必要なリボソーム結合部位など）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、または転写終結配列などの１つ以上の非転写エレメントを含み得る。特定の宿主において複製する能力を付与する複製起点もまた組み込まれ得る。
【００９４】
ベクターを用いて、任意の、当業者に周知の多様な宿主細胞、好ましくは抗体を発現することができる宿主細胞を形質転換することができる。ベクターは、プラスミド、ファージミド、コスミド、バクミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、及びバキュロウイルス、ならびに他の細菌、真核生物、酵母、及びウイルスベクターを含むがこれらに限定されない。好適な宿主細胞には、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、または既知もしくは産生された任意の真核生物の安定細胞株が含まれるが、これらに限定されず、バクテリア、酵母、及び昆虫細胞もまた含まれる。
【００９５】
抗体は、ハイブリドーマ細胞によっても産生され得る；ハイブリドーマを産生する方法は、当該分野において周知であり、確立されている。
【００９６】
本開示はまた、抗ＩＬ−１５抗体を含む組成物を提供する。組成物は、本明細書に記載及び／または例示される任意の抗体と、薬学的に許容可能な担体などの許容可能な担体とを含んでもよい。好適な担体は、抗体の生物学的活性を妨害せず、好ましくは該抗体が投与される宿主に対して毒性ではない任意の媒体を含む。担体は水溶液であってよい。組成物は、本明細書に記載及び／または例示される任意の抗体と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含んでもよい。
【００９７】
抗ＩＬ−１５抗体は、ＩＬ−１５が調節不全である自己免疫疾患を含む自己免疫疾患を治療するために使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、ＩＬ−１５が調節不全である炎症性疾患を含む炎症性疾患を治療するために使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、ＩＬ−１５が調節不全である炎症性障害を含む炎症性障害を治療するために使用され得る。いくつかの態様では、抗ＩＬ−１５抗体は、対象においてセリアック病、難治性セリアック病、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、１型糖尿病、円形脱毛症、及びＴ細胞大顆粒リンパ球性白血病などの特定の種類のがんを治療するために使用され得る。したがって、本開示は、治療方法を特徴とする。
【００９８】
いくつかの態様では、治療方法は、自己免疫疾患が対象において治療されるように、ＩＬ−１５が調節不全である自己免疫疾患の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象においてＩＬ−１５が調節不全である自己免疫疾患を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【００９９】
いくつかの態様では、治療方法は、炎症性疾患が対象において治療されるように、ＩＬ−１５が調節不全である炎症性疾患の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象においてＩＬ−１５が調節不全である炎症性疾患を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１００】
いくつかの態様では、治療方法は、炎症性障害が対象において治療されるように、ＩＬ−１５が調節不全である炎症性障害の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象においてＩＬ−１５が調節不全である炎症性障害を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０１】
いくつかの態様では、治療方法は、セリアック病が対象において治療されるように、セリアック病の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含み、該セリアック病は難治性であり得る。難治性セリアック病（ＲＣＤ）は、６〜１２ヵ月の厳格なグルテンフリー食の後、及び他の症状の原因（悪性腫瘍を含む）が除かれた後に、治癒せずに継続的なセリアック病の症状を示す患者を襲う。また、長期のグルテンフリー食が以前は効いていたが、厳格なグルテンフリー食を維持しながらも現在はセリアック病の症状を示している患者にも起こる可能性がある（Ｒｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ＆Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ：１０  ５３７−５４６（２０１６））。抗ＩＬ−１５抗体は、対象においてセリアック病を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０２】
抗ＩＬ−１５抗体は、例えば、グルテンの摂取によって引き起こされるような、グルテン曝露の１つ以上の症状を治療または抑制するために使用され得る。前記１つ以上の症状は、筋肉痛、身体痛、関節痛、疲労、鼓腸、ガス、吐き気、けいれん、便秘、下痢、皮膚発疹、頭痛、片頭痛、うつ病、不安、脳霧、及び過敏性が含まれる。一般に、本方法は、グルテン曝露の１つ以上の症状が対象において抑制または治療されるように、グルテンに曝露されたグルテン過敏症を有する対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象においてグルテン曝露の１つ以上の症状を治療または抑制するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０３】
いくつかの態様では、治療方法は、関節リウマチが対象において治療されるように、関節リウマチの治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象において関節リウマチを治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０４】
いくつかの態様では、治療方法は、乾癬が対象において治療されるように、乾癬の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象において乾癬を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０５】
いくつかの態様では、治療方法は、炎症性腸疾患が対象において治療されるように、炎症性腸疾患の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象において炎症性腸疾患を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０６】
いくつかの態様では、治療方法は、１型糖尿病が対象において治療されるように、１型糖尿病の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象において１型糖尿病を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０７】
いくつかの態様では、治療方法は、円形脱毛症が対象において治療されるように、円形脱毛症の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象において円形脱毛症を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０８】
いくつかの態様では、治療方法は、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病が対象において治療されるように、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病の治療を必要とする対象に、抗ＩＬ−１５抗体またはその組成物を投与することを含む。抗ＩＬ−１５抗体は、対象においてＴ細胞大顆粒リンパ球性白血病を治療するのに有効な量で、好ましくは投与される。有効量は、例えば、対象の必要性または状態にしたがって変化し得る。投与は、医師の指示または管理下にあり得る。
【０１０９】
抗ＩＬ−１５抗体は、医薬の製造に使用され得る。例えば、抗ＩＬ−１５抗体は、セリアック病の治療に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、難治性セリアック病の治療に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、関節リウマチの治療に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、乾癬の治療に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、炎症性腸疾患の治療に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、１型糖尿病の治療に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、円形脱毛症の治療に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病の治療に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。抗ＩＬ−１５抗体は、グルテン曝露、例えばグルテン過敏症またはアレルギーを有する患者におけるグルテン曝露の１つ以上の症状の治療または抑制に使用するための医薬の製造または調製に使用され得る。前記１つ以上の症状は、筋肉痛、身体痛、関節痛、疲労、鼓腸、ガス、吐き気、けいれん、便秘、下痢、皮膚発疹、頭痛、片頭痛、うつ病、不安、脳霧、及び／または過敏性を含み得る。
【０１１０】
抗ＩＬ−１５抗体は、セリアック病の治療に使用するためのものであり得る。抗ＩＬ−１５抗体は、難治性セリアック病の治療に使用するためのものであり得る。抗ＩＬ−１５抗体は、関節リウマチの治療に使用するためのものであり得る。抗ＩＬ−１５抗体は、乾癬の治療に使用するためのものであり得る。抗ＩＬ−１５抗体は、炎症性腸疾患の治療に使用するためのものであり得る。抗ＩＬ−１５抗体は、１型糖尿病の治療に使用するためのものであり得る。抗ＩＬ−１５抗体は、円形脱毛症の治療に使用するためのものであり得る。抗ＩＬ−１５抗体は、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病の治療に使用するためのものであり得る。抗ＩＬ−１５抗体は、グルテン曝露、例えばグルテン過敏症またはアレルギーを有する患者におけるグルテン曝露の１つ以上の症状の治療または抑制に使用するためのものであり得る。前記１つ以上の症状は、筋肉痛、身体痛、関節痛、疲労、鼓腸、ガス、吐き気、けいれん、便秘、下痢、皮膚発疹、頭痛、片頭痛、うつ病、不安、脳霧、及び／または過敏性を含み得る。
【０１１１】
本開示は、任意の抗ＩＬ−１５抗体を含むキットも特徴とし、これらのキットは、とりわけ診断法、基礎研究法、または治療法にて使用するための抗体及び他の薬剤を供給するために使用され得る。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及びセリアック病を治療するための方法において該抗体を使用するための説明書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及び難治性セリアック病を治療するための方法において該抗体を使用するための説明書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及び例えばグルテン過敏症またはアレルギーを有する患者におけるグルテン曝露の１つ以上の症状を治療または抑制する方法において該抗体を使用するための説明書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及び関節リウマチを治療するための方法において該抗体を使用するための説明書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及び乾癬を治療するための方法において該抗体を使用するための説明書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及び炎症性腸疾患を治療するための方法において該抗体を使用するための説明書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及び１型糖尿病を治療するための方法において該抗体を使用するための説明書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及び円形脱毛症を治療するための方法において該抗体を使用するための説明書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体、及びＴ細胞大顆粒リンパ球性白血病を治療するための方法において該抗体を使用するための説明書を含む。
【０１１２】
対象から単離した組織試料中のＩＬ−１５を検出するための方法もまた提供する。一般的に、このような方法は、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体を対象から単離した組織試料と接触させて、ＩＬ−１５受容体アルファとの抗体−ＩＬ−１５複合体を形成することと、該組織試料中の複合体を検出することとを含む。本方法は、対象から組織試料を単離することをさらに含み得る。組織試料は、食道組織、胃組織、小腸組織、大腸組織、及び胃腸管由来の他の組織を含む胃腸組織由来であり得る。抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートさせることができる。抗体は、検出可能な標識で標識されている二次抗体によって検出することができる。このような方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、またはｉｎ  ｓｉｔｕで実施され得る。
【０１１３】
対象から単離された組織試料中のＩＬ−１５とＩＬ−１５受容体アルファとの複合体を検出するための方法もまた提供する。一般的に、このような方法は、本明細書に記載または例示される任意の抗ＩＬ−１５抗体を対象から単離した組織試料と接触させて、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５受容体アルファの複合体に結合した抗ＩＬ−１５抗体の抗体−抗原複合体を形成することと、組織試料中の抗体−抗原複合体を検出することとを含む。本方法は、対象から組織試料を単離することをさらに含み得る。組織試料は、食道組織、胃組織、小腸組織、大腸組織、及び胃腸管由来の他の組織を含む胃腸組織由来であり得る。抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートさせることができる。抗体は、検出可能な標識で標識されている二次抗体によって検出することができる。このような方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、またはｉｎ  ｓｉｔｕで実施され得る。
【０１１４】
以下の実施例は、本開示をより詳細に説明するために提供される。それらは、本開示を例示することを意図しており、限定することを意図しない。実施例では、他に指示がない限り、残基の位置への言及は、本明細書に記載の関連配列中の位置への言及である。
【０１１５】
実施例１  トランスジェニックラットの作製、免疫化、及びハイブリドーマの産生
１．１  ＩＬ−１５タンパク質及びＩＬ−１５Ｒαタンパク質
【０１１６】
ヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）を購入するか（Ｓｉｇｍａ）、またはヒトＩＬ−１５及び可溶性ＩＬ−１５受容体α（ＩＬ−１５Ｒα）をコードするプラスミドを用いて、１：１の比のＮ末端に位置するＨＩＳタグ及びＡＶＩタグ（配列番号５１２）と共に、ヒトインターロイキン１５（ＩＬ−１５）を哺乳動物ＨＥＫ２９３Ｆ発現システムにおいて産生した。
１．２  トランスジェニックラットの作製
【０１１７】
トランスジェニックラットは、ＰＣＴ公開第ＷＯ０８／１５１０８１号に記載されているように作製した。簡単に言えば、メガヌクレアーゼ発現構築物を対象動物のゲノムに組み込んだ。生殖細胞におけるメガヌクレアーゼの発現は、内在性ラット免疫グロブリン遺伝子における二本鎖切断をもたらした。そのようなトランスジェニックラットの交配は、変異／不活性化された内因性ラット免疫グロブリン遺伝子を有する子孫をもたらした。
【０１１８】
トランスジェニックラットは、ラットが完全ヒト可変領域を有する抗体を産生することができるように、人工ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するようにさらに改変される。
１．３  免疫化
【０１１９】
ＩＬ−１５受容体アルファとのＩＬ−１５複合体に対する完全ヒトモノクローナル抗体を作製するため、トランスジェニックラット（上記のように作製）を、ヒトＩＬ−１５をコードするＤＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαをコードするＤＮＡによって免疫した。
【０１２０】
１０匹の動物を免疫し、免疫応答を顎下出血によって得られた血漿試料による免疫の過程にわたってモニターした。血漿をＥＬＩＳＡによって抗体発現についてスクリーニングし、十分な力価の抗ＩＬ−１５抗体を有する動物を融合及びハイブリドーマ作製のために選択した。高力価を有する動物を、屠殺する５日前に組換えヒトＩＬ−１５複合体によって皮下に追加免疫した。
１．４  ＩＬ−１５複合体に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの作製
【０１２１】
ＩＬ−１５受容体アルファとのＩＬ−１５複合体に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを作製するために、免疫した動物の脾細胞及びリンパ節細胞を単離し、不死化細胞株に融合した。リンパ球の単細胞懸濁液を、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３非分泌型マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ−１５８０）に融合した。平底マイクロタイタープレートに細胞を約１×１０５細胞／ｍＬで蒔き、続いて、通常の試薬の他に、１０％胎児クローン血清及び１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ）を含有する選択培地中で２週間インキュベートした。次いで、個々のウェルをＥＬＩＳＡ及びＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）によって高親和性のヒトＩＬ−１５  ＩｇＧ抗体についてスクリーニングした。
【０１２２】
実施例２  ハイブリドーマのスクリーニング
２．１  ＩＬ−１５複合体に結合するが非複合体型ＩＬ−１５受容体αには結合しない抗体を選択するためのＥＬＩＳＡの使用
【０１２３】
マイクロタイタープレートを精製ＩＬ−１５または精製ＩＬ−１５Ｒαまたは精製ＩＬ−１５複合体によってコーティングした。簡潔に言えば、マイクロタイタープレートをＰＢＳ中の精製タンパク質によってコーティングし、その後、ＰＢＳで希釈したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）などの無関係なタンパク質でブロックした。ハイブリドーマ上清の希釈液を各ウェルに添加し、３７℃で１〜２時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０で洗浄し、その後、好適な検出試薬（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ）アルカリホスファターゼにコンジュゲートさせたヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬と共に３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、プレートを好適な基質（例えば、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンＴＭＤ）で現像し、４０５のＯＤで分析した。ＩＬ−１５複合体では陽性反応性を示すがＩＬ−１５Ｒαでは陽性反応性を示さない抗体を産生するハイブリドーマを、さらなる特性化のために選択した。
２．２  ＩＬ−１５複合体に結合するが非複合型ＩＬ−１５受容体αには結合しない抗体を選択する細胞ベースＥＬＩＳＡ（ｃＥＬＩＳＡ）の使用
【０１２４】
上記のように試験した各ハイブリドーマをさらに、細胞ベースの酵素結合免疫吸着法（ｃＥＬＩＳＡ）で試験し、ＩＬ−１５複合体に結合するが非複合型ＩＬ−１５Ｒαには結合しない抗体を選択した。
【０１２５】
ｃＥＬＩＳＡを、以下のように実施した。ＨＥＫ細胞をＩＬ−１５及びＩＬ−１５ＲαをコードするＤＮＡによってトランスフェクトし、これらがＩＬ−１５複合体を発現するようにした。トランスフェクトしたＨＥＫ細胞をＥＬＩＳＡプレート上にコーティングし、ハイブリドーマ上清の希釈液をプレートに適用し、これが細胞の表面上に発現したＩＬ−１５複合体に結合できるようにした。ＩＬ−１５ＲαによってトランスフェクトされたＨＥＫ細胞を用いてアッセイを繰り返し、これらが非複合型ＩＬ−１５Ｒαを発現するようにした。古典的なＥＬＩＳＡに加えてｃＥＬＩＳＡを使用する利点は、天然のタンパク質複合体が抗体をスクリーニングするために使用されることである。
【０１２６】
陽性対照として、抗ヒトＩＬ−１５−フィコエリスリン（ＰＥ）抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，カタログ番号ＩＣ２４７１Ｐ）を用いて、ＩＬ−１５複合体または非複合型ＩＬ−１５Ｒαの細胞表面発現を分析した。ＩＬ−１５複合体では陽性反応性を示すがＩＬ−１５Ｒαでは陽性反応性を示さない抗体を産生するハイブリドーマをさらなる特徴付けのために選択した。
【０１２７】
結果の代表的な選択されたものを図１に示す。抗体４は、非複合型ＩＬ−１５及びＩＬ−１５複合体に結合したが、非複合型ＩＬ１５Ｒαには結合しなかった。抗体１Ａ６は、非複合型ＩＬ−１５、ＩＬ−１５複合体、またはＩＬ−１５Ｒαに結合しなかったので、さらなる特性化のために選択しなかった。抗体１Ｂ３は、非複合型ＩＬ−１５、ＩＬ−１５複合体、及びＩＬ−１５Ｒαに結合した。非複合型ＩＬ−１５Ｒαへの結合は、クローンがＩＬ−１５特異的ではないことを示しているため、有益ではない。
【０１２８】
実施例３  さらなる産生のための候補抗体の同定
３．１  ＣＴＬＬ−２細胞ベースアッセイ
【０１２９】
ＩＬ−１５複合体に結合したがＩＬ−１５αには結合しなかった１５００個のハイブリドーマ試料を、マウスＣＴＬＬ−２細胞ベースのアッセイで試験し、どれがＩＬ−１５の生物学的活性を中和するかを決定した。ＣＴＬＬ−２細胞株は、細胞傷害性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＴＣＣ：ＴＩＢ−２１４）に由来し、ＩＬ−２及びＩＬ−１５の両方に反応する。
【０１３０】
ハイブリドーマ上清（未精製抗体）を、ＣＴＬＬ−２細胞のＩＬ−１５誘導増殖を中和するためのそれらの能力について試験した。
【０１３１】
ＣＴＬＬ−２細胞を、試験前の４時間、ＩＬ−２またはＩＬ−１５を含まない完全培地中でインキュベートした。ＣＴＬＬ−２細胞（５×１０４個／ウェル）を、２００ｐＭでＩＬ−１５受容体αとのＩＬ−１５複合体と共に９６ウェルプレート中でインキュベートし、細胞増殖を誘導した。ハイブリドーマ上清をプレートに添加し、４８時間インキュベートした。次いで、細胞増殖の阻害を製造元の指示にしたがってＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて評価し、ＧＬＯＭＡＸ（登録商標）９６マイクロプレート照度計（Ｐｒｏｍｅｇａ）で読み取った。データは図示せず。
３．２  ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ
【０１３２】
上記の細胞ベースアッセイと並行して、１５００個のハイブリドーマをＩＬ−１５複合体結合活性についても試験し、それらの親和性を測定した。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用した。ＳＰＲスクリーニングは、単一濃度分析物通過アッセイにてＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）４０００バイオセンサー（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して実施した。ＣＭ５シリーズＳ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をマシンにドッキングした。Ｂｉａノーマライズ溶液（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によるノーマライズを使用した。流体力学的処理がドッキングチップにおいて実施され、内部品質管理検査に合格した。
【０１３３】
アミンカップリングキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて抗ラットＦｃフラグメント抗体（Ｂｅｔｈｙｌ  Ａ１１０−１３６Ａ）をＣＭ５センサーチップの表面に固定した。固定化のために抗体をｐＨ４．５の酢酸ナトリウムで５０μｇ／ｍＬの濃度に希釈し、ＨＢＳ−ＥＰ＋緩衝液（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及び１０分間のカップリング時間を用いて、フローセル１〜４上のスポット１、２、４、５上に固定化した。全ての相互作用を２５℃で測定した。これにより、４つのフローセル上の各スポットについて１０，０００〜１２，０００レスポンスユニットの固定化レベルが得られた。細胞を１００ｍＭのリン酸緩衝液を用いて再生した。
【０１３４】
ハイブリドーマ結合評価のため、７０μＬのＨＢＳ−ＥＰ＋ランニング緩衝液を５０μＬのラットハイブリドーマ上清に添加した。以下の方法を使用した：
始動−再生は３０μＬ／分でそれぞれ１０秒間の３サイクル
サンプルラン：
捕捉−スポット１−フローセル１〜４−１３０秒間注入−３０μＬ／分−通常注入−４つのフローセルのそれぞれからスポット１に４つの異なる試料がこのステップで充填される
捕捉−スポット５−フローセル１〜４−１３０秒間注入−３０μＬ／分−通常注入−４つのフローセルのそれぞれからスポット１に４つの異なる試料がこのステップで充填される
試料−全スポット、全フローセル−６０秒間注入、６０秒間オフレート−３０μＬ／分−通常注入−ヒトＩＬ−１５複合体（２０μｇ／ｍＬ；バッチ４９１ｐ９０Ａ）を全フローセル及び全スポットに注入。
再生１−２０秒１００ｍＭリン酸
再生２−１５秒１００ｍＭリン酸
再生３−１０秒１００ｍＭリン酸
各９６ウェルプレート間で別の再生サイクルを始動サイクル毎に実行した。
【０１３５】
分析
ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、キネティクスによる捕捉を分析に使用した。５−４及び１−２のセンサーグラムを分析した。これにより抗体を含まないスポットからＩＬ−１５複合体シグナルが除去された。スポット３は分析には使用しなかった。次いで、各センサーグラムを分析し、複合体への抗体の結合を示さなかったそれらの試料は認めず、ＩＬ−１５受容体アルファとのＩＬ−１５複合体への結合を示すものは承認された。カーブフィッティングを実施し、親和性測定値の表を得た。
３．３  可変領域シーケンシング
【０１３６】
選択された非クローン性ハイブリドーマペレット中の抗体可変領域の分子同一性は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応によって確立された。
【０１３７】
簡潔に言えば、ハイブリドーマペレットを含有する９６ウェルプレートを、ＲＮＡＬＡＴＥＲ（登録商標）（Ｔｈｅｒｍｏ）中で−８０℃で凍結保存した後に解凍した。プレートを１０００×ｇで５分間回転させて、細胞をペレット化し、ＲＮＡＬＡＴＥＲ（登録商標）緩衝液を除去した。ＧＥＮＥＬＵＴＥ（商標）９６ウェル全ＲＮＡ精製キット（Ｓｉｇｍａ＃ＲＴＮ９６０２、ＲＴＮ９６０４）を製造元のプロトコルにしたがって使用して、ハイブリドーマのプレートからＲＮＡを単離した。得られたＲＮＡ試料の濃度及び品質は、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（登録商標）８０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて測定した。オリゴ（ｄＴ）プライマー及びＡｃｃｕＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ａｇｉｌｅｎｔ＃６００１８４）を用いてＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。製造業者のプロトコルにしたがってｃＤＮＡ合成反応を組み立て、ｃＤＮＡ合成を４２℃で３０分間実施した。
【０１３８】
トランスジェニックげっ歯類由来ハイブリドーマのヒト抗体可変領域の増幅は、製造業者の指示にしたがってＰｆｕＵｌｔｒａＩＩ（Ａｇｉｌｅｎｔ）またはＱ５高忠実度ＤＮＡポリメラーゼ（ＮＥＢ）のいずれかを用いてＰＣＲによって実施した。げっ歯類重鎖定常領域ＤＮＡ配列及びヒト重鎖リーダー配列のＤＮＡ配列に特異的なプライマー対を用いて重鎖を増幅した。λ軽鎖可変領域を、ヒトラムダ定常領域ＤＮＡ配列及びヒトラムダ鎖リーダー配列のＤＮＡ配列に特異的なプライマー対を用いて同様に増幅した。
【０１３９】
可変領域の増幅が成功したことは、ｅ−ゲル電気泳動システム（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて少量のＰＣＲ反応物をゲル上で泳動することによって確認した。製造元のプロトコルにしたがってＧＥＮＥＬＵＴＥ（商標）９６ウェルＰＣＲクリーンアップシステム（Ｓｉｇｍａ＃ＰＣＲ９６０４）を使用して、反応のポストＰＣＲクリーンアップを実施した。得られた精製ＤＮＡの濃度をＮａｎｏｄｒｏｐ分光光度計を用いて評価した。重鎖または軽鎖アンプリコンに内部で結合するように設計されたオリゴを使用してＰＣＲフラグメントのサンガーシーケンシングを実施した。得られたＤＮＡ配列は、完全長抗体鎖作製におけるそれらの使用の前に、さらなる分析のためにアミノ酸配列に概念的に翻訳された。独特なアミノ酸配列（完全な配列中に少なくとも１つのアミノ酸変化を有する）を有する抗体可変領域を、完全長のヒト抗体への変換のために選択した。
３．４  抗体産生用プラスミドの作製
【０１４０】
得られた新規なＤＮＡを合成オリゴヌクレオチド（ＧｅｎｅＡｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のアセンブリによって合成する前に、ＧＥＮＥＯＰＴＩＭＩＺＥＲ（登録商標）技術を用いて可変領域配列をＤＮＡ配列に逆翻訳した。合成した重鎖及び軽鎖可変領域配列を、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域（例えばＳｗｉｓｓｐｒｏｔアクセッション番号ＰＯ１８５７）またはヒトラムダ定常領域（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０ＣＧ０５）のいずれかを含有する哺乳動物発現ベクターにサブクローニングして完全長抗体鎖を得た。
３．５  抗体の発現
【０１４１】
抗体重鎖及び軽鎖をコードするプラスミドをＥＸＰＩ２９３（登録商標）細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に同時トランスフェクトすることによって抗体を産生した。トランスフェクションの前日、実験に必要な細胞数を決定した。トランスフェクション２０ｍＬ毎に、３．６×１０７個の細胞が２０ｍＬのＥＸＰＩ２９３（登録商標）発現培地に必要であった。トランスフェクションの前日に、細胞をＴＰＰ５０ｍＬバイオリアクターチューブに０．９×１０６生細胞／ｍＬの密度で播種し、２００ｒｐｍで回転するオービタルシェーカー上で空気中８％ＣＯ２の加湿雰囲気にて３７℃で一晩インキュベートした。トランスフェクションの当日、自動セルカウンターを用いて細胞数及び生存率を測定した。＞９８％の生細胞を含む培養液のみを使用した。トランスフェクション２０ｍＬ毎に、脂質−ＤＮＡ複合体は、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ血清低減培地（カタログ番号３１９８５−０６２）中の１０μｇの重鎖ＤＮＡ及び１０μｇの軽鎖ＤＮＡを全容積１．０ｍＬに希釈することによって調製した。５４μＬのＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２９３試薬をＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ培地で全容積１．０ｍＬに希釈した。両方のバイアルを穏やかに混合し、室温で５分間インキュベートした。インキュベーション後、希釈したＤＮＡを希釈したＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２９３試薬と混合し、ＤＮＡ−ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２９３試薬混合物を、室温でさらに２０分間インキュベートし、ＤＮＡ−ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２９３試薬複合体を形成させた。インキュベーション後、２ｍＬのＤＮＡ−ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２９３試薬複合体を各ＴＰＰ５０ｍＬバイオリアクターチューブに添加した。陰性対照チューブには、ＤＮＡ−ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２９３試薬複合体の代わりに２ｍＬのＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）Ｉ培地を添加した。細胞を２００ｒｐｍで回転するオービタルシェーカー上で空気中８％ＣＯ２の加湿雰囲気にて３７℃でインキュベートした。トランスフェクションから約１６〜１８時間後、１００μＬのＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２９３トランスフェクションエンハンサー１と１．０ｍＬのＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）２９３トランスフェクションエンハンサー２を各チューブに添加した。トランスフェクションから約７２時間後に抗体を回収した。
３．６  抗体の精製
【０１４２】
トランスフェクトしたＥＸＰＩ２９３（登録商標）細胞の培養液を５０ｍＬのファルコンチューブ内で３０００×ｇで２０分間スピンダウンし、上清を、０．２２μｍフィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用して濾過した。Ｇｉｌｓｏｎ  ＡＳＰＥＣ  ＧＸ２７４ロボットを用いてプロテインＡクロマトグラフィーにより抗体含有上清を精製した。簡潔に言えば、１．２ｍＬのＭＡＢＳＥＬＥＣＴ  ＳＵＲＥ（登録商標）プロテインＡ樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を充填したＳＰＥカートリッジ（Ａｇｉｌｅｎｔ，１２１３１０１４）を３カラム容積の１×ＰＢＳで予め平衡化した。１８ｍＬの上清をカラムに流し、続いて４ｍＬの１×ＰＢＳ洗浄をした。各カラムから０．９ｍＬの０．１Ｍクエン酸、ｐＨ２．９を予め溶出させた。精製抗体を２ｍＬの０．１Ｍクエン酸、ｐＨ２．９で溶出した。抗体をＰＤ−１０カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、Ｓоｒｅｎｓｅｎｓ  ＰＢＳ（５９．５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、７．３ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４．２Ｈ２Ｏ、１４５．４ｍＭ  ＮａＣｌ（ｐＨ約５．８））に脱塩した。
３．７  ＣＴＬＬ−２細胞に対する３点希釈
【０１４３】
各精製抗体をＣＴＬＬ２細胞のＩＬ−１５媒介性増殖を阻害するその能力について３つの異なる希釈剤で試験した。
【０１４４】
ＣＴＬＬ−２細胞を、試験前に４時間、ＩＬ−２またはＩＬ−１５を含まない完全培地中でインキュベートした。細胞（５×１０４個／ウェル）を、最大細胞増殖の５０％を誘導する濃度（ＥＣ５０）である２００ｐＭのＩＬ−１５受容体アルファとのＩＬ−１５複合体と共に９６ウェルプレート中でインキュベートした。抗体希釈液をプレートに添加し、４８時間インキュベートした。３つの抗ＩＬ−１５抗体希釈液：２０００ｐＭ、２００ｐＭ及び２０ｐＭを使用した。次いで、細胞増殖の阻害を製造元の指示にしたがって、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて評価し、ＧＬＯＭＡＸ（登録商標）９６マイクロプレート照度計（Ｐｒｏｍｅｇａ）で読み取った。データは、相対発光単位（存在するＡＴＰの定量に基づく培養液中の生細胞数、代謝的に活性な細胞の指標）として表した。
【０１４５】
ＩＬ−１５の生物学的活性を機能的に中和する抗体の能力のこのクルードな用量反応は、さらなる分析のために抗体を選択するために使用された。結果の代表的な選択されたものを図２Ａに示す。抗体４は、ＩＬ−１５活性の非常に強力なアンタゴニストであった。
３．８  ＣＴＬＬ−２細胞に対する全用量反応
【０１４６】
全用量反応曲線を作成する目的で、選択された抗体を上記のＣＴＬＬ−２細胞アッセイの１０点バージョンで実行した。
【０１４７】
結果の代表的な選択されたものを図２Ｂに示す。各抗体の相対的な阻害プロファイルは、ＩＣ５０値（細胞増殖が半分に減少する抗ＩＬ−１５抗体の濃度）を用いて評価した。試験した抗体のうち、最も強力な抗体は抗体４及び抗体１０Ｆであった。
３．９  ＮＫ−９２細胞に対する全用量反応
【０１４８】
ＣＴＬＬ−２細胞アッセイにおける最も強力な抗体を、ＮＫ−９２細胞を用いたさらなる細胞アッセイに供した。細胞株は、ＮＫ悪性非ホジキンリンパ腫（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ−２４０７）に由来する。
【０１４９】
ＮＫ−９２細胞を、試験前に４時間、ＩＬ−２またはＩＬ−１５を含まない完全培地中でインキュベートした。細胞（５×１０４個／ウェル）を、２５ｐＭ（ＥＣ５０）でＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成したＩＬ−１５と共に９６ウェルプレート中でインキュベートし、細胞増殖を誘導した。抗体用量をプレートに添加し、４８時間インキュベートした。次いで、上述のように、細胞増殖の阻害を製造元の指示にしたがって、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて評価し、ＧＬＯＭＡＸ（登録商標）９６マイクロプレート照度計（Ｐｒｏｍｅｇａ）で読み取った。データは、相対発光単位として表した。
【０１５０】
結果の代表的な選択されたものを図３に示す。各抗体の相対的な阻害プロファイルは、ＩＣ５０値を用いて評価した。抗体４は、最も低い阻害ＩＣ５０値（０．１ｎＭ）を有し、ＩＬ−１５駆動型細胞ベース増殖の最も強力なインヒビターとして同定された。
【０１５１】
実施例４  抗体の改変
抗体４は、抗体の生物物理学的特性に良い影響をもたらすこと、及び効力を向上させることを目的として変更された。
４．１  結合に重要なアミノ酸の位置
【０１５２】
ＣＤＲ配列中の各残基を改変し、抗体の効力及び結合特性に対する効果を評価すること（ＣＤＲスキャニング）により、親抗体の変異体を作製した。各ＣＤＲ位置での９つの変異体は、残基をアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トリプトファン（Ｗ）、またはチロシン（Ｙ）に修飾することによって作製した。表１に示されるように、これら９つのアミノ酸はそれらの特性の範囲のために選択され、その結果、全ての機能特性が試験された。
【表５】
2020501583.tif 000007
【０１５３】
これにより、抗体４と１アミノ酸異なる約５２０の抗体４の変異体が選択された。抗体は先に記載されたように作製され、ＣＭ５プロテインＡ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）チップを用いてＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）システムで表面プラズモン共鳴を用いてスクリーニングを実施した。使用したランニングバッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）であり、全ての相互作用は２５℃で測定し、データ収集速度は１０Ｈｚに設定した。本方法を実行する前に、始動サイクルが、チップの両方のフローセルを０．１Ｍのクエン酸（ｐＨ３．０）の２回連続した６０秒間のパルスで洗浄して実施された。
【０１５４】
抗体変異体を共発現するＥＸＰＩ２９３（登録商標）Ｆ細胞の上清を、ＨＢＳ−ＥＰ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）中で１００分の１に希釈し、ヒトＩＬ−１５複合体を同じ緩衝液中で１０μｇ／ｍＬに希釈した。抗体をチップの第２のフローセル上に捕捉させ、結合は、両方のフローセルにわたって３０μＬ／分の流速で３０μＬのヒトＩＬ−１５複合体を注入し、解離時間を１２０秒間とることによって測定した。両方のフローセル上で０．１Ｍクエン酸（ｐＨ３．０）の２回連続した６０秒間のパルスによってサイクル間にチップ表面を再生した。
【０１５５】
分析にはＦＣ２−１のデータを使用した。得られたセンサーグラムは、２つのカスタムレポートポイントを作成することによって分析し、それぞれ、試料注入の５秒後（「初期結合（ｅａｒｌｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」）または解離の終了前５秒（「後期結合（ｌａｔｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」）のいずれかで始まる１秒のウィンドウに対して計算される。解離速度の推定値として、これら２つのレポートポイントの比率（「後期結合」／「初期結合」）に基づいて抗体をランク付けした。相対的な捕捉レベルは生産性の大まかな指標として使用された。ＣＤＲ改変実験の結果を図５〜３４に示す。図５〜３３は、抗体の改善をもたらす単一の改変を示し（灰色の網掛け）、図３４は、改善された抗体をもたらす、試験された単一及び複数の改変についてまとめる。
【０１５６】
これらの実験は、結合及び効力にとって重要であるアミノ酸、ならびに結合または効力の変化なしに置換され得るアミノ酸を同定した。驚くべきことに、重鎖のＣＤＲ２の５４位または５６位のアミノ酸を芳香族アミノ酸ＹまたはＷで置換すると、抗体の効力が増加することがわかった。
【０１５７】
芳香族アミノ酸フェニルアラニン（Ｆ）による重鎖のＣＤＲ２の５４位または５６位のアミノ酸の置換を試験するために、さらなる変異体を作製した。これら２つの変異体はまた、ＮＫ−９２細胞増殖アッセイにおいて効力の増加を示した。
【０１５８】
重鎖のＣＤＲ２の５４位または５６位にあるアミノ酸の両方が、Ｙ、ＷまたはＦのいずれかに改変されている二重変異体を作製した。二重変異体の効力は、セクション３．９に記載のようにＮＫ−９２細胞増殖アッセイにおいて評価した。結果を表２に示す。
表２  ５４−５６二重変異体
【表６】
2020501583.tif 000008
【０１５９】
５４位及び５６位に２個の芳香族アミノ酸を含むことの効果が、中和性よりもむしろ、効力の累積的な改善をもたらすことが見出された。
【０１６０】
抗体１１（５４Ｙ及び５６Ｙを含む）は、抗体４と比較して、ＮＫ−９２細胞増殖アッセイにおいて少なくとも１０倍ＩＣ５０が改善されている（図３５及び表３）。
４．２  潜在的な免疫原性エピトープを減少させるための抗体４の改変
【０１６１】
抗体中の潜在的な免疫原性エピトープを除去するため、この領域中の配列を生殖細胞系抗体配列に戻すためにペプチド配列に置換を行うことができる。重鎖にＩ８２ａＳを置換すると（抗体６３）、生殖細胞系配列が得られ、この領域の予測された免疫原性ペプチドが除去された。表３に示すように、この置換はＮＫ−９２アッセイにおける効力に影響を及ぼさなかった（抗体１１と比較した抗体６３）。
【０１６２】
軽鎖にＮ３０Ｓを置換すると（抗体７３）、生殖細胞系配列が得られ、この領域における予測された免疫原性ペプチドが除去された。表３に示すように、この置換はＮＫ−９２アッセイにおける効力にわずかな影響を与えた（抗体１１と比較した抗体７３）。
【０１６３】
両方の置換が、１つの抗体、抗体６４に組み合わされた場合、抗体１１と比較して効力のわずかな減少が観察された（図３５）。
【表７】
2020501583.tif 000009
４．３  製造性を改善するための抗体６４の改変
【０１６４】
抗体６４及び関連する抗体の可変重鎖及び軽鎖配列のアミノ酸分析は、異性化を受け得るアミノ酸を同定した。これらのアミノ酸への変化は、時間の経過とともに、抗体の安定性を変え得る。軽鎖では、Ｄ９２及びＳ９３は、潜在的なアスパラギン酸異性化部位として同定された。これらの予測された問題の潜在的な影響を減らすため、これらの位置に保存的または半保存的アミノ酸置換を含む抗体６４の変異体を生成した。これらの置換及び得られた変異体の効力に対するそれらの影響を表４に列挙する。図３５は、ＮＫ−９２細胞増殖アッセイにおいて試験した変異体の代表的な選択されたものを示す。
【０１６５】
Ｄ９２を変えることによって製造性を高めるための改変は、効力の喪失をもたらす（抗体１１と比較して抗体６８を参照のこと）Ｓ９３をＬ９３に変えると、驚くべきことに、表３及び図３５に示すように抗体の効力が改善された。
【０１６６】
抗体７０を作製するために抗体４になされた改変の概要を表４に示す。
【表８】
2020501583.tif 000010
【０１６７】
実施例５  抗体７０変異体の受容体親和性及び選択性
抗体７０の定常領域変異体を作製した。抗体７０の重鎖可変領域を、表５に記載のヒトＩｇＧアイソタイプ定常ドメインとインフレームで合成した。
【表９】
2020501583.tif 000011
【０１６８】
ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、及びＩＬ−２Ｒγからなる複合体に結合し、それらを介してシグナル伝達する。抗体を、ＩＬ−１５Ｒα、ならびにＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、及びＩＬ−２１などの共通受容体ＩＬ−２Ｒβ／γを共有するサイトカインと結合するそれらの能力について評価した。抗体７０変異体は、ＩＬ−１５Ｒα、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、及びＩＬ−２１に結合しなかった。
【０１６９】
ＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成したヒトＩＬ−１５への抗体７０変異体の結合を、プロテインＡセンサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）システムで表面プラズモン共鳴を用いて評価した。抗体は、第２のフローセルに１５０〜２００ＲＵのレベルで捕捉された。精製サイトカインをＨＢＳ−ＥＰ＋中で１０μｇ／ｍＬに希釈した。結合は、両方のフローセルにわたって３０μＬ／分の流速で４５μＬの各サイトカインを注入し、解離時間を１８０秒間とることによって測定した。５０ｍＭ水酸化ナトリウムの２回の１０秒間のパルスによってサイクル間にチップ表面を再生した。使用したランニングバッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）であり、全ての相互作用は２５℃で測定し、データ収集速度は１０Ｈｚに設定した。
【０１７０】
表面プラズモン共鳴データの概要は、図３６に示す。親和性は、ＫＤ（抗体とその抗原との間の平衡解離定数）によって測定することができる。抗体７０変異体は、抗体４（平均ＫＤ＝０．６２９ｎＭ）及びＡＭＧ７１４（平均ＫＤ＝１．８４ｎＭ）と比較して、最低のＫＤ値（０．１３３〜０．１９３ｎＭ）を有した。抗体７０の変異体及びＡＭＧ７１４間のＫＤの大きな差は、解離速度（ｋｄ）によって引き起こされる。ＩＬ−１５は、抗体７０変異体からのＩＬ−１５の解離速度よりも１０倍速い速度でＡＭＧ７１４から解離する。ＩＬ−１５に結合すると、抗体７０及びその変異体は、より長い間結合したままであり、したがってＩＬ−１５活性を阻害することにおいて優れている。これを細胞ベースの効力アッセイで試験した。
【０１７１】
実施例３に記載のような細胞増殖を誘導するために、２５ｐＭ（ＥＣ５０）でＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成したＩＬ−１５を用いたＮＫ−９２増殖アッセイにおいて、抗体７０変異体及びＡＭＧ７１４の効力を評価した。図３７及び表６は、抗体７０変異体のＩＣ５０が、ＡＭＧ７１４のＩＣ５０よりも８３〜９８倍低かったことを示す。したがって、抗体７０は、細胞ベースの効力アッセイにおいてＩＬ−１５活性を阻害することにおいて優れていた。
【表１０】
2020501583.tif 000012
【０１７２】
抗体７０Ｆを用いたその後の研究は、４３０ｐＭのＫＤを有するエピトープに対する平均親和性をもたらした。概して、これらの結果は、抗体７０変異体がＡＭＧ７１４と比較してヒトＩＬ−１５に対して改善された結合能力、親和性、及び効力を有することを示唆している。
【０１７３】
実施例６  抗体７０のエピトープマッピング
エピトープマッピングは、アラニンスキャニング実験を用いて実施した。ＩＬ−１５Ｒαの結合に関与していなかったＩＬ−１５上の有望な露出残基を決定するためにモデリング分析を実施した。次いで、これらの理論的に露出した残基のそれぞれがアラニンで置換されたＩＬ−１５構築物を設計した。これらの変異体のリストを表７に列挙した。
【表１１Ａ】
2020501583.tif 000013
【表１１Ｂ】
2020501583.tif 000014
【０１７４】
次いで、これらの構築物をＩＬ−１５Ｒαと共発現させ、発現培養液の上清をタンパク質発現及び抗体７０ａへの結合についてＳＰＲを用いて試験した。
【０１７５】
使用したランニングバッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）であった。全ての相互作用を２５℃で測定し、データ収集速度は１０Ｈｚに設定した。分析にはＦＣ２−１のデータを使用した。得られたセンサーグラムは、２つのカスタムレポートポイントを作成することによって分析し、それぞれ、試料注入の１０秒後（「初期結合」）または解離の終了前１０秒（「後期結合」）のいずれかで始まる５秒のウィンドウに対して計算される。これらの値を未トランスフェクト対照の値から差し引いて、相対的解離速度を最初に推定し、これら２つのカスタムレポートポイントの比（「後期結合」／「初期結合」）を得た。次いで、得られた値をＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成した野生型ヒトＩＬ−１５について計算された値の一部として得た（データ示さず）。
【０１７６】
上清スクリーニングからの結果を確認するには、ＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成した野生型ヒトＩＬ−１５と比較してより速い解離速度を示した試料を精製し、ＳＰＲにより再試験した。プロテインＡセンサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、抗体７０ａを第２のフローセルに捕捉し、１５０〜２００ＲＵの捕捉レベルを得た。精製したＩＬ−１５アラニンスキャン構築物をＨＢＳ−ＥＰ＋中で１０μｇ／ｍＬに希釈し、その後、２倍希釈系列を作製した。結合は、両方のフローセルにわたって３０μＬ／分の流速で４５μＬの各希釈液を注入し、解離時間を６００秒間とることによって測定した。５０ｍＭ水酸化ナトリウムの１０秒間のパルスによってサイクル間にチップ表面を再生した。使用したランニングバッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）であり、全ての相互作用を２５℃で測定し、データ収集速度は１０Ｈｚに設定した。分析にはＦｃ２−１のデータを使用し、生成されたセンサーグラムを、１：１ラングミュア方程式（局所Ｒｍａｘフィッティングを用いて）を用いてフィッティングし、ＫＤを決定した。試験した抗ＩＬ−１５抗体への結合の低下を示した、ＩＬ−１５Ｒαと共発現した全てのＩＬ−１５アラニン変異体についてのデータを図３８に示す。抗体７０ａは、Ｑ１０８Ａ置換を有する変異型ＩＬ−１５への結合が低かった。ＡＭＧ７１４は、以下のアミノ酸置換：Ｅ９８Ａ、Ｑ１０１Ａ、Ｈ１０５Ａ及びＱ１０８Ａを有する変異型ＩＬ−１５と結合しないか、または結合が著しく低下している。これらの結果は、これら４つのアミノ酸の変異が、ＩＬ−１５受容体アルファとのＩＬ−１５複合体へのＡＭＧ７１４の結合を妨げていることを示しており、Ｑ１０８の変異のみが、ＩＬ−１５受容体αと複合体を形成したＩＬ−１５に対する抗体７０ａの結合を妨げている。図３８の結果は、試験されたＩＬ−１５中の残基に関して、ＩＬ−１５に対する抗体の高い親和性を考慮すると、ＡＭＧ７１４抗体の結合は残基の変化により低下するが、抗体７０ａの結合は変化により低下しなかった；ＩＬ−１５におけるＱ１０８の変化のみが抗体７０ａによる結合の低下をもたらしたことを示す。
【０１７７】
両方の抗体（抗体７０ａ及びＡＭＧ７１４）がＩＬ−１５のＱ１０８Ａ変異体に対して結合性が低いか、または全くないことを考慮して、Ｑ１０８Ａ変異体が正しく折り畳まれていることを示す同等の親和性でＱ１０８及び野生型ＩＬ−１５複合体を結合する別の抗ＩＬ−１５抗体を用いて抗体７０ａに対してさらなるスクリーニングを実施した。アラニンスキャニングは、変異した際に、抗体のＩＬ−１５への結合を妨げ得る残基を同定する。ＩＬ−１５と接触する正確な残基を決定し、それにより抗体７０ａ結合エピトープを決定するために、抗体７０ａとヒトＩＬ−１５との相互作用が、Ｘ線結晶構造解析によって特性決定された。
【０１７８】
結晶化実験の準備として、組換えヒトＩＬ−１５を細菌から発現させ、精製した。抗体７０ａＦａｂ（ここで、ＦＡｂは抗原結合性フラグメントである）は、抗体ヒンジのパパイン媒介性切断によって生成され、これは抗体ＦＡｂをＦｃから分離する。ＦＡｂを標準的なプロテインＡクロマトグラフィー法により精製し、ＩＬ−１５と複合体を形成させた。ＦＡｂ：ＩＬ−１５をサイズ排除クロマトグラフィーにより精製し、スパースマトリックス結晶化スクリーンを使用して結晶化スクリーニング用に準備した。回折データ収集に使用した最終結晶は、１０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２００００、２０％ＰＥＧ  ５００モノメチルエーテル（ＭＭＥ）、３０ｍＭ  ＣａＣｌ２、３０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１００ｍＭの不特定イミダゾール／カコジル酸ナトリウム／ＭＥＳ（酸）／ビス−トリス緩衝液混合物、ｐＨ６．５中で形成した。ダイヤモンドシンクロトロン施設のビームラインｉ０４で２．２５Åまでの回折データを収集した。モデル構築のためのテンプレートとして、ヒトＩＬ−１５及びＦＡｂ分子の公開されている構造を用いて分子置換により構造を解明した。実験データに対して構造を繰り返し精密化し、Ｒ／Ｒフリー値を２３．６／２８．９とした。構造は、抗体７０ａの可変領域がヒトＩＬ−１５のＩＬ−２Ｒγ及びＩＬ−２Ｒβ結合部位に結合することを示し、これにより、これらの受容体単位とＩＬ−１５との相互作用をブロックする（図３９Ａ及び３９Ｂ）。このことは、ＩＬ−１５側鎖とＦＡｂの側鎖との相互作用を観察し、これらをＩＬ−２Ｒγ及びＩＬ−２Ｒβと相互作用するＩＬ−１５側鎖と比較し、両方の相互作用に共通する側鎖または残基を探すことによって、さらに実証される。
【０１７９】
表８は、ＩＬ−１５側鎖と抗体７０ａのＦＡｂフラグメントの側鎖との間の相互作用を列挙する。ＩＬ−１５と接触する抗体７０ａＦＡｂの側鎖は、抗体７０ａ及び関連する抗体のパラトープを形成する。表に示されている説明は以下のものと対応する：「疎水性相互作用」−原子対間のファンデルワールス相互作用；「水媒介」−原子対間の水媒介性水素結合；「水素結合」−２．５〜３．５Åのヘテロ原子の水素結合；「Ｈ−π水素結合」−芳香族内の供与体／受容体原子に対応する水素結合
【表１２Ａ】
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【表１２Ｂ】
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【０１８０】
四次ＩＬ−１５受容体複合体（ｐｄｂコード４ＧＳ７）のＸ線構造について同様の分析を実施した。表９は、ＩＬ−１５側鎖とＩＬ−２Ｒγ及びＩＬ−２Ｒβの側鎖との間に生じる水素結合に基づいて、ＩＬ−１５複合体のＩＬ−２Ｒγ及びＩＬ−２Ｒβへの結合に重要なＩＬ−１５残基を示す。
【表１３】
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【０１８１】
抗体７０とヒトＩＬ−１５との相互作用により形成される溶媒接触表面積は２２７０．９Å２である。この値は、Ｓｔｒａｋｅ  ａｎｄ  Ｒｕｐｌｅｙ（１９７３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７９：３５１−７１の方法を用いてＰＹＭＯＬで算出された。
【０１８２】
抗体７０ａＦＡｂとＩＬ−１５との側鎖相互作用ならびにＩＬ−２Ｒベータ及びガンマ鎖とＩＬ−１５との側鎖相互作用の比較により、いくつかの共通の残基が同定される。Ｓ７（Ｓｅｒ７）はＩＬ−２Ｒβと水素結合を形成し、Ｑ１０８（Ｇｌｎ１０８）及びＮ１１２（Ａｓｎ１１２）はＩＬ−２Ｒγと水素結合を形成する（図３９Ｃ〜３９Ｅ）。これらの３つの残基はまた、抗体７０ａＦＡｂが結合して水素結合を形成するＩＬ−１５上のエピトープを形成し、これにより、ＩＬ−１５とＩＬ−２Ｒβ及びＩＬ−２Ｒγとの相互作用を妨げる。
【０１８３】
抗体７０ａの親和性及び効力の成熟の間に発見された、ＣＤＲＨ２中のＹ５２／５４／５６を含むトリプルチロシンモチーフは、ヒトＩＬ−１５との抗体の重要な結合決定基である。結晶構造を調べると（図３９Ｆ〜３９Ｈ）、このモチーフはＩＬ−１５のヘリックス４の周りの疎水性残基を覆って保護し、溶媒和を防ぎ、構造を安定化していることを理解できる。
【０１８４】
実施例７
初代ヒト細胞上のＩＬ−１５に結合する変異体のフローサイトメトリー検出
【０１８５】
抗体をさらに特性決定するために、初代ヒト細胞上のＩＬ−１５に結合するそれらの能力を試験した。Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ，Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）を用いて、軟膜からヒト末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離、精製し、フローサイトメトリー分析によりリード抗体の結合を評価した。
【０１８６】
９６ウェルポリプロピレンプレート（Ｓｉｇｍａ／Ｃｏｒｎｉｎｇ）に１ウェルあたり１×１０６個の生存ＰＢＭＣを最初に播種し、４℃で２０分間、Ｚｏｍｂｉｅ  Ｖｉｏｌｅｔ色素（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中に希釈したＴｒｕＳｔａｉｎ  ＦｃＸ  Ｆｃブロック（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて室温で１０分間さらに染色した。表面染色の場合、ＰＢＭＣを１０μｇ／ｍＬの試験抗体またはアイソタイプ対照抗体（表１０に列挙）で染色し、４℃で２０分間インキュベートした。免疫染色後、次いで、試料を製造元の指示にしたがってＢＤ  ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で固定し、分析するまで４℃で保存した。細胞内染色の場合、染色の前にＰＢＭＣをＢＤ  ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で固定した。試料をＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて分析した。
【０１８７】
分析から細胞凝集体を除去するために最初のダブレット識別（ｄｏｕｂｌｅｔ  ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ）を全ての細胞事象に対して実施した。生存色素を用いて死細胞を排除した後、生細胞を選択した。白血球の初期ゲーティングは細胞を以下に分離した：ＣＤ３−ＣＤ８−細胞、ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＣＤ３＋ＣＤ８−（推定上ＣＤ４＋）Ｔ細胞。ＣＤ３−集団のさらなる分析は、細胞をＣＤ１９＋Ｂ細胞とＣＤ１９−細胞集団とに分離した。後者の集団はまた、ＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋及びＣＤ５６ｂｒｉＣＤ１６ｄｉｍ／−ＮＫ細胞を選択するためにさらにゲートをかけられた。さらに、ＣＤ１４とＣＤ１６の発現レベルに基づいて、単球（ＨｉＳＳＣ集団）は、続いて３つの主要な単球サブセット：古典的（ＣＤ１４＋ＣＤ１６−）、中間型（ＣＤ１４ｉｎｔＣＤ１６ｉｎｔ）、及び非古典的（ＣＤ１４ｄｉｍＣＤ１６＋）に細分された。
【０１８８】
ＦＬＯＷＪＯ（登録商標）分析ソフトウェアＶ．１０を用いてデータ分析を行った。
【表１４】
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【０１８９】
抗体７０変異体の代表的な結合が単球上にあることを図４０に示す。抗体７０変異体の中程度の結合が、全ての単球サブセット（古典的、中間型及び非古典的）の細胞表面上に検出された。より高い結合レベルが、全ての単球サブセットにおける細胞内結合において報告された。結合検出レベルにおけるわずかな差が、両方の抗体７０変異体の間に見出された。Ｔ  ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞、ならびにＮＫ細胞の全てのサブセットの表面上には結合が検出されなかったか、または低かった（データ示さず）。これらの結果は、抗体７０変異体が初代細胞上のヒトＩＬ−１５に結合することができたことを示している。
【０１９０】
実施例８  動物モデルにおける抗ＩＬ−１５抗体の有効性
８．１  ヒトＩＬ−１５及びＩＬ−１５受容体アルファと複合体を形成したＩＬ−１５のｉｎ  ｖｉｖｏ中和
【０１９１】
この研究は、組換えヒトＩＬ−１５またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体がＣ５７ＢＬ／６マウスにおいてＮＫ細胞及びＮＫＴ細胞増殖を誘導できる程度、及び本発明の例示的な抗体がそのような誘導を中和できる程度を決定するために行われた。
【０１９２】
８匹のオスＣ５７Ｂｌ／６マウスの群に単回用量の抗体７０ｆ（１０、３、１、０．３または０．１ｍｇ／ｋｇ）またはアイソタイプ対照（１０ｍｇ／ｋｇ）を１日目に腹腔内投与した（最初のサイトカイン注射の１時間前に）。ＮＫ１．１＋細胞を、１日目から３日目までの３日間、毎日、組換えＩＬ−１５複合体（ＩＬ−１５ＲαはＦｃキメラである）を腹腔内注射（１．５μｇ／マウス）することにより誘導した。４日目に、マウスの脾臓を採取した。細胞懸濁液を各マウスの全脾臓から調製し、自動セルカウンターで計数した。全脾細胞の％に基づいてフローサイトメトリーにより細胞懸濁液からＮＫ１．１＋数を評価した。フィコエリスリン−コンジュゲート抗マウスＮＫ−１．１（ＢＤ５５３１６５）を使用した。５０，０００イベント／試料をサイトメーターで取得した。
【０１９３】
図４１に示すように、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体の注射は、マウス脾臓においてＮＫ１．１＋細胞蓄積を誘導した。この蓄積は、０．３ｍｇ／ｋｇの抗体７０ｆでの処置によって著しく抑制され得るが、ヒトアイソタイプ対照抗体ではそうではない。
８．２  非ヒト霊長類の循環ＮＫ細胞数に対する抗ＩＬ−１５抗体の効果
【０１９４】
抗ＩＬ−１５抗体の投与は、カニクイザルにおける循環ＮＫ細胞数を減少させることがすでに示されている（Ｌｅｂｒｅｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：５５５１−５５５８）。抗体７０をさらに特性決定するために、循環ＮＫ細胞に対するＩＬ−１５活性の拮抗作用の結果をｉｎ  ｖｉｖｏで試験した。４匹の雄のカニクイザルの群に、１もしくは１０ｍｇ／ｋｇの抗体７０ｆまたは１０ｍｇ／ｋｇの抗体７０ｂを単回静脈内注射した。循環するＮＫ細胞数は、投与前及び試験の２、５、８、１５、３０、４５、６０、７５、９０、１０２、１２０及び１５０日目の全血試料のフローサイトメトリー分析によって測定した、ＮＫ細胞マーカーＣＤ１５９ａ（ＮＫＧ２Ａ）の発現によって定量した。
【０１９５】
各サルの個々のタイムポイント及び中央値（実線）の末梢血ＮＫ細胞数を図４２に示す。１もしくは１０ｍｇ／ｋｇの抗体７０ｆまたは１０ｍｇ／ｋｇの抗体７０ｂの投与は、試験の７日目から投与前の循環ＮＫ細胞数を下回る著しい減少をもたらし、これは大多数の動物において試験１２０日目まで持続した。
８．３  非ヒト霊長類のセリアック病のアカゲザルモデルにおける抗ＩＬ−１５抗体の効果
【０１９６】
「グルテン過敏性腸症」と名付けられた慢性下痢性疾患は、グルテン含有飼料を給餌された飼育アカゲザルのサブセットにおいて説明されてきた。グルテン含有食を摂取すると、グルテン過敏性アカゲザルは、腸組織トランスグルタミナーゼ自己抗体、抗グリアジン血清抗体の存在、栄養素の吸収の減少、生体異物代謝の減少、絨毛萎縮、腸内微生物叢の多様性の減少、慢性下痢、体重減少、がん素因、及び免疫遺伝学的（ＭＨＣ  ＩＩ結合性）会合を含むセリアック病の徴候及び症状を示した（Ｂｅｔｈｕｎｅ  ＭＴ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ．３（２）：ｅ１６１４）。グルテンフリー食は、これらの臨床的、組織学的、及び血清学的特徴を逆転させたが、食事性グルテンの再摂取が急速な再発を引き起こした。興味深いことに、グルテン過敏性アカゲザルの生検は、空腸組織においてＩＬ−１５の過剰発現を示した（Ｓｅｓｔａｋ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ．８（７）：４０１）。
【０１９７】
本発明の抗ＩＬ−１５抗体がグルテン誘発症状を抑制する能力を、グルテン過敏性腸症を患うアカゲザルにおいて試験した。グルテンフリー（ＧＦＤ）及びグルテン含有（ＧＤ）食を６匹全てのグルテン過敏性アカゲザルに投与して免疫学的寛解及び再発の段階をそれぞれ誘導し、Ｓｅｓｔａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；２０１６に記載されているような抗グリアジン（ＡＧＡ）及び抗トランスグルタミナーゼ２（ＴＧ２）陽性及び陰性血漿抗体反応によって特性決定した。ＡＧＡ／ＴＧ２抗体再発を誘導した後、抗体７０ｆを、３匹の動物に２８日間（群１）、及び３匹の動物に９０日間（群２）、１０ｍｇ／ｋｇ（ＢＷ）の用量で毎週静脈内（ｉ．ｖ．）投与し、一方、アカゲザルは依然としてグルテン含有食を給餌された。試験の段階で腸生検を実施し、絨毛の高さと陰窩深さの比、及び上皮細胞間リンパ球（ＩＥＬ）数を測定した。トランスグルタミナーゼ−２に対する自己抗体及び抗グリアジン抗体の存在を血清試料から測定した。試験デザインを図４５Ａに示す。
【０１９８】
ＡＧＡ及びＴＧ２血漿（ＩｇＧ）抗体、小腸の絨毛高さ対陰窩深さの形態計測評価、すなわちＶ／Ｃ比を含むＧＳ腸症の評価は、以前に確立されたプロトコルＳｅｓｔａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５；２０１６にしたがって行った。免疫学的再発（ＧＤ）及び寛解（ＧＦＤ）、ならびに抗ＩＬ−１５抗体処置期間の開始及び終了に対応する時点で小腸生検を採取した。Ｓｅｓｔａｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６に記載されているように、生検を採取し、上皮細胞間リンパ球（ＩＥＬ）数を得るために処理した。
【０１９９】
結果：
抗ＩＬ−１５抗体処置の前、最中、及び後にグルテン過敏性アカゲザルから採取した空腸生検組織の評価により、小腸組織構造の形態学的評価、すなわち絨毛の高さ対陰窩深さ（Ｖ／Ｃ）比における腸症の改善が明らかとなった。グルテン食では、両群のアカゲザルは、絨毛の高さ、陰窩深さの組織構造が著しく喪失した（図４５Ｂ）。全ての処置動物がそれらの小腸の絨毛高さの増加（すなわち、健康で年齢が一致した対照と比較して同程度のＶ／Ｃ比（図４５Ｂ））を示したので、Ｖ／Ｃ比は、抗ＩＬ１５抗体処置で著しく改善され（ｐ＜０．０００１）、両群のセリアックアカゲザルに有益であった。
【０２００】
グルテン過敏性アカゲザルにおける抗ＩＬ−１５抗体処置の有効性を評価するため、小腸ＩＥＬの数を、ＧＤ食（６ヶ月）、ＧＦＤ（３ヶ月）、及びＧＤ中に抗ＩＬ−１５抗体処置（３５日及び６１日）を代表する時点で採取した生検試料間で比較した（図４５Ｃ）。動物がＧＤ中であった早期時点で採取したＩＥＬ数と比較して、両方の抗ＩＬ１５抗体処置群は著しく低いＩＥＬ数であった（ｐ＜０．０００１）。グルテン含有食が給餌されているにもかかわらず、群１の処置後３５日目（ＴＤ３５）及び群２のアカゲザルのＴＤ６１に、抗ＩＬ１５抗体処置を測定したところ、３ヶ月目のＧＦＤに関連するものよりもＩＥＬが大幅に減少した（ｐ＜０．０００１）（図４５Ｃ）。
【０２０１】
処置の前に、５／６匹の動物において、抗グリアジン抗体のレベルはグルテンへの曝露時に増加し、グルテンフリー食で減少し（動物１ＢはＡＧＡ応答なし）、このことは該動物がグルテン過敏性であることを示した（図４５Ｄ）。抗ＩＬ−１５処置は、驚くべきことに、これらの動物が依然としてＧＤに曝露されていても、処置前に高いＡＧＡレベルを有していた５／５匹の動物において抗グリアジン（ＡＧＡ）抗体を減少させた。
【０２０２】
要約すると、抗ＩＬ−１５抗体処置は、セリアック病のアカゲザルモデルで測定される際に、グルテン誘発性小腸粘膜傷害を軽減し（Ｖ／Ｃ比の改善）、グルテン誘発性小腸粘膜炎症を軽減し（ＩＥＬ数の減少）、かつグルテン誘発性血清抗体を軽減した（抗グリアジン抗体の減少）。
【０２０３】
本開示は、上記で説明及び例示された実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲の範囲内で変更及び修正が可能である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３４Ｃ】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９−１】
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【図３９−２】
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【図３９−３】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３Ａ】
2020501583.tif 000066
【図４３Ｂ】
2020501583.tif 000067
【図４３Ｃ】
2020501583.tif 000068
【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
2020501583.tif 000070
【図４４Ｃ】
2020501583.tif 000071
【図４５Ａ】
2020501583.tif 000072
【図４５Ｂ】
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【図４５Ｃ】
2020501583.tif 000074
【図４５Ｄ】
2020501583.tif 000075
【配列表】
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【国際調査報告】
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2020501583.tif 000077
2020501583.tif 000078
2020501583.tif 000079
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