(57)【要約】  本発明は、ＦＨＩＴの活性を増強する薬剤、例えばエンザスタウリンを用いて肺高血圧症及び肺気腫を治療又は予防するための方法を提供する。ＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベルを用い、且つＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２における突然変異について調べることにより、治療対象の患者を選択する又は治療の有効性を監視するための方法が含まれる。本発明は、エンザスタウリンにより、動物モデル系において誘導される肺高血圧症を予防し、回復に向かわせる証拠、並びにそれがＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２の上方制御により作用するという証拠に基づく。【選択図】図８М
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
予防及び／又は治療を必要とする対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための方法において、
１）脆弱性ヒスチジン三連構造（Ｆｒａｇｉｌｅ  Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  Ｔｒｉａｄ）（ＦＨＩＴ）のレベル及び／若しくは活性を提供若しくは増強する薬剤；及び／又は
２）エンザスタウリン、
を前記対象に有効量で投与するステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、対象における肺気腫を予防するために用いられることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、対象における肺気腫を治療するために用いられることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、対象における肺高血圧症を予防するために用いられることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法において、対象における肺高血圧症を治療するために用いられることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項４又は５に記載の方法において、前記肺高血圧症が、ＷＨＯグループＩの肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）；ＷＨＯグループＩの肺静脈閉塞症（ＰＶＯＤ）若しくは肺毛細管腫症（ＰＣＨ）；ＷＨＯグループＩの新生児の持続性肺高血圧症；ＷＨＯグループＩＩの左心疾患に続発する肺高血圧症；ＷＨＯグループＩＩＩの肺疾患若しくは慢性低酸素に起因する肺高血圧症、ＷＨＯグループＩＶの慢性動脈閉塞症；又はＷＨＯグループＶの不明瞭な若しくは多因子機構を有する肺高血圧症に属することを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法において、前記対象が、右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）上昇、右室肥大、心線維症、肺血管リモデリング、例えば、血管欠損、血管筋性化（ｍｕｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）及び／又は新生内膜形成、又は肺気腫を有することを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項６に記載の方法において、前記肺高血圧症が、肺高血圧症（ＰＨ）、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）又は肺気腫であることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか１項に記載の方法において、前記肺高血圧症又は肺気腫が、対象において自発的に発生する（例えば特発性ＰＨ）ことを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項１乃至８の何れか１項に記載の方法において、前記肺高血圧症又は肺気腫が、対象の遺伝的背景に基づいて発生する（例えば家族性ＰＨ）ことを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１乃至８の何れか１項に記載の方法において、前記肺高血圧症又は肺気腫が、別の疾患又は障害に起因又は関連して、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に続発して発生することを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の方法において、ＦＨＩＴ、又はその機能断片の生成をもたらす薬剤が有効量で対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法において、前記薬剤が、前記対象において、ＦＨＩＴ、又はその機能断片を生成するように設計されるポリヌクレオチドを含むことを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法において、前記ポリヌクレオチドが、ＦＨＩＴ、又はその機能断片をコードするＤＮＡ分子であることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法において、前記ポリヌクレオチドが、ＦＨＩＴ、又はその機能断片をコードするＲＮＡ分子であることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１２に記載の方法において、前記薬剤が、ＦＨＩＴ、又はその機能断片を含むポリペプチドを含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の方法において、薬剤、例えば、ｍｉＲＮＡ１７−５、マイクロＲＮＡ２４ａ、マイクロＲＮＡ模倣体若しくはマイクロＲＮＡアンタゴミルなどのマイクロＲＮＡ、又はＦＨＩＴ、又はその機能断片のレベルを増加させる、デシタビンなどの脱メチル化剤が、有効量で対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法において、前記薬剤、例えばエンザスタウリンが、前記対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片をコードするＤＮＡ分子の発現を増強することを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１７に記載の方法において、前記薬剤が、前記対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片をコードするＲＮＡ分子の翻訳を増強することを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１７に記載の方法において、前記薬剤が、前記対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片の安定性を増強することを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法において、前記薬剤が、活性化されたＧαｑ又はＧαｑの活性化及びＧβγ複合体との解離をもたらす、Ｇｑ共役受容体に結合する作動薬を含むことを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法において、前記薬剤が、前記対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片の分解を遮断又は低減することを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法において、前記薬剤が、前記対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片のリン酸化、例えば、ＦＨＩＴのＴｙｒ１１４部位でのＳｒｃ媒介性リン酸化を遮断又は低減することを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の方法において、ＦＨＩＴの活性を増強する薬剤が、有効量で対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項１乃至１１の何れか１項に記載の方法において、エンザスタウリンが、有効量で対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法において、対象における肺気腫を予防するため、エンザスタウリンが有効量で前記対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２５に記載の方法において、対象における肺気腫を治療するため、エンザスタウリンが有効量で前記対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の方法において、対象における肺高血圧症を予防するため、エンザスタウリンが有効量で前記対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２５に記載の方法において、対象における肺高血圧症を治療するため、エンザスタウリンが有効量で前記対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項１乃至２９の何れか１項に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象におけるＦＨＩＴ及び／又は骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ型（ＢＭＰＲ２）を上方制御することを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項３０に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、前記対象におけるＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をマイクロＲＮＡ、例えばｍｉＲ１７−５及び／又はｍｉＲ２７ａを介して上方制御することを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項３０又は３１に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、前記対象におけるＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２を上方制御することを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項３０乃至３２の何れか１項に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンの対象におけるＦＨＩＴの上方制御と独立して、ＢＭＰＲ２を上方制御することを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項１乃至３３の何れか１項に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象におけるＰＫＣ阻害と独立して、肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療することを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項１乃至３４の何れか１項に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象における右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）、ＲＶ肥大、心線維症及び／又は血管リモデリングを改善することにより、肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療することを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項１乃至３５の何れか１項に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象におけるＲＶＳＰ上昇、ＲＶＨ増加、血管希薄化、遠位血管の筋性化及び／又は新生内膜形成を予防又は低減することにより、肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療することを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項１乃至３６の何れか１項に記載の方法において、有効量の薬剤及び／又はエンザスタウリンが、末期ＰＨを有する又は有することが疑われる対象に投与されることを特徴とする方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法において、前記末期ＰＨが、肺血管閉塞、ＲＶＳＰ上昇、例えばＲＶＳＰ＞１００ｍｍＨｇ、平均ＰＡＰ及び／又はＰＶＲの増加、右心不全、ＲＶＨ増加、ＲＶ機能の低下及びＲＶ拡大、並びに／又は間質性線維症の増加によって特徴づけられることを特徴とする方法。
【請求項３９】
請求項３７又は３８に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンによる前記治療により、全肺におけるＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２の発現が増強され、肺血管閉塞が低減されるか若しくは回復に向かい、且つ／又は小血管及び大血管の筋性化、ＲＶＨ、ＲＶ線維症、ＲＶ拡大及びＲＶＳＰ、平均ＰＡＰ、ＰＶＲの少なくとも１つが減少し、並びにＲＶ機能が増強されることを特徴とする方法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法において、前記治療対象において、前記肺動脈平均圧（ＰＡＰｍ）及び前記肺血管抵抗（ＰＶＲ）が減少し、且つ前記心拍出量（ＣＯ）が増加することを特徴とする方法。
【請求項４１】
請求項１乃至４０の何れか１項に記載の方法において、前記対象が、低レベルのＢＭＰＲ２を有する若しくは有することが疑われる、又はＢＭＰＲ２突然変異を有する若しくは有することが疑われることを特徴とする方法。
【請求項４２】
請求項４１に記載の方法において、前記対象が、肺高血圧症及び／又は肺気腫を有しない対象のＢＭＰＲ２レベル以下のＢＭＰＲ２レベルを有することを特徴とする方法。
【請求項４３】
請求項４１に記載の方法において、前記対象が、ＢＭＰＲ２遺伝子における点突然変異、付加及び／又は欠失、例えば、ＢＭＰＲ２のリガンド結合、キナーゼ及び／又はテイル領域における点突然変異を有することを特徴とする方法。
【請求項４４】
請求項１乃至４３の何れか１項に記載の方法において、前記対象が、低レベルのＦＨＩＴを有する若しくは有することが疑われる、又はＦＨＩＴ突然変異を有する若しくは有することが疑われることを特徴とする方法。
【請求項４５】
請求項４４に記載の方法において、前記対象が、肺高血圧症及び／又は肺気腫を有しない対象のＦＨＩＴレベル以下のＦＨＩＴレベルを有することを特徴とする方法。
【請求項４６】
請求項４４に記載の方法において、前記対象が、ＦＨＩＴ遺伝子における点突然変異、付加及び／若しくは欠失、及び／又はＦＨＩＴ遺伝子の異常なメチル化状態を有することを特徴とする方法。
【請求項４７】
請求項１乃至４６の何れか１項に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、約５ｍｇ／日〜約１，０００ｍｇ／日の範囲の用量で投与されることを特徴とする方法。
【請求項４８】
請求項１乃至４７の何れか１項に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、インビボレベルを得るための用量、例えば、約２０ナノモル／Ｌ〜約６，０００ナノモル／Ｌの範囲の血清又は血漿濃度で投与されることを特徴とする方法。
【請求項４９】
請求項１乃至４８の何れか１項に記載の方法において、薬学的に許容できる担体又は賦形剤を対象に投与することをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項５０】
請求項１乃至４９の何れか１項に記載の方法において、対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための第２の予防薬又は治療薬を有効量で投与することをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項５１】
請求項５０に記載の方法において、肺高血圧症を予防及び／又は治療するための前記第２の予防薬又は治療薬が、血管作用物質、プロスタグランジン、エンドセリン受容体拮抗剤、ホスホジエステラーゼ５型阻害剤又は可溶性グアニル酸シクラーゼのアクチベーターであることを特徴とする方法。
【請求項５２】
請求項５０又は５１に記載の方法において、肺気腫を予防及び／又は治療するための前記第２の予防薬又は治療薬が、気管支拡張薬、ステロイド薬又は抗生物質であることを特徴とする方法。
【請求項５３】
請求項１乃至５２の何れか１項に記載の方法において、前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、経口、経鼻、吸入、非経口、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、皮内、局所、又は直腸経路を介して投与されることを特徴とする方法。
【請求項５４】
請求項１乃至５３の何れか１項に記載の方法において、有効量の前記薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象に投与されることで、前記対象の全身性血圧を低減することを特徴とする方法。
【請求項５５】
請求項１乃至５４の何れか１項に記載の方法において、前記治療により、前記対象において、平均ＰＡＰ肺動脈圧（ＰＡＰｍ）が２０ｍｍＨｇ未満に低下し、ＰＶＲが３ＷＵ未満に低下し、且つ／又はＰＡＷＰ（肺動脈楔入圧）が１５超に上昇することを特徴とする方法。
【請求項５６】
請求項１乃至５５の何れか１項に記載の方法において、前記対象が哺乳動物であることを特徴とする方法。
【請求項５７】
請求項５６に記載の方法において、前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする方法。
【請求項５８】
請求項５６に記載の方法において、前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物であることを特徴とする方法。
【請求項５９】
対象における脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）のレベル及び／若しくは活性を提供若しくは増強する薬剤及び／又はエンザスタウリンの、前記対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための薬剤の製造における有効量での使用。
【請求項６０】
１）対象における脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）のレベル及び／若しくは活性を提供若しくは増強する薬剤及び／又はエンザスタウリン；並びに
２）肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための第２の予防薬又は治療薬
を含むことを特徴とする組み合わせ。
【請求項６１】
有効量の請求項６０に記載の組み合わせ、及び薬学的に許容できる担体又は賦形剤を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項６２】
予防及び／又は治療を必要とする対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための方法において、有効量の請求項６０に記載の組み合わせ又は請求項６１に記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項６３】
対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を評価するための方法において、
ａ）対象からサンプルを準備するステップと；
ｂ）前記対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を評価するため、前記サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性を評価するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項６４】
請求項６３に記載の方法において、前記サンプルが、血液、血清、血漿、若しくは体液サンプル、又はそれらの任意の組み合わせであることを特徴とする方法。
【請求項６５】
請求項６３又は６４に記載の方法において、前記対象が哺乳動物であることを特徴とする方法。
【請求項６６】
請求項６５に記載の方法において、前記哺乳動物が、非ヒト哺乳動物、例えば、ペット、家畜、コンパニオン動物又は実験動物であることを特徴とする方法。
【請求項６７】
請求項６５に記載の方法において、前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする方法。
【請求項６８】
請求項６３乃至６７の何れか１項に記載の方法において、ある閾値又は参照値を有するとｂ）で評価されたＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性、例えば正常血圧を有する同等の対象からのＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性と、前記対象が肺高血圧症及び／又は肺気腫を有する又はそれらを有するというより高いリスクを有することを示す前記閾値又は参照値よりも低いとｂ）で評価されたＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性とを比較するステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項６９】
請求項６３乃至６８の何れか１項に記載の方法において、サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をコードするポリヌクレオチドのレベルが評価されることを特徴とする方法。
【請求項７０】
請求項６９に記載の方法において、前記ポリヌクレオチドが、ＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をコードするＤＮＡ分子であることを特徴とする方法。
【請求項７１】
請求項６９に記載の方法において、前記ポリヌクレオチドが、ＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をコードするＲＮＡ分子であることを特徴とする方法。
【請求項７２】
請求項６３乃至７１の何れか１項に記載の方法において、サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をコードするポリヌクレオチドのレベルが、前記ポリヌクレオチドを増幅すること、ライゲートすること、ハイブリダイズすること、及び／又は配列決定することを含む手順を用いて評価されることを特徴とする方法。
【請求項７３】
請求項７２に記載の方法において、前記ポリヌクレオチドが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、転写媒介増幅（ＴＭＡ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）、プライマー伸長、ローリングサークル増幅（ＲＣＡ）、自己持続配列複製（３ＳＲ）、及びループ介在等温増幅（ＬＡＭＰ）からなる群から選択される手順を用いて増幅されることを特徴とする方法。
【請求項７４】
請求項７２に記載の方法において、前記配列決定が、マクサム・ギルバート配列決定、鎖終結方法、ショットガン配列決定、架橋ＰＣＲ、単一分子リアルタイム配列決定、イオン半導体（ｉｏｎ  ｔｏｒｒｅｎｔ配列決定）、合成による配列決定、ライゲーションによる配列決定（ＳＯＬｉＤ配列決定）、鎖終結（サンガー配列決定）、大規模並列シグネチャー配列決定（ＭＰＳＳ）、ポロニー配列決定、４５４パイロシーケンシング、Ｉｌｌｕｍｉｎａ（Ｓｏｌｅｘａ）配列決定、ＤＮＡナノボール配列決定、ヘリスコープ単一分子配列決定、単一分子リアルタイム（ＳＭＲＴ）配列決定、ナノポアＤＮＡ配列決定、トンネル電流ＤＮＡ配列決定、ハイブリダイゼーションによる配列決定、質量分析を用いた配列決定、マイクロ流体サンガー配列決定、顕微鏡に基づく技術、ＲＮＡＰ配列決定、及びインビトロウイルスハイスループット配列決定からなる群から選択される形式を用いて実施されることを特徴とする方法。
【請求項７５】
請求項６３乃至７４の何れか１項に記載の方法において、サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２を含むポリペプチドのレベルが評価されることを特徴とする方法。
【請求項７６】
請求項７５に記載の方法において、サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２を含むポリペプチドの前記レベルが、免疫測定法を用いて評価されることを特徴とする方法。
【請求項７７】
請求項７６に記載の方法において、前記免疫測定法が、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロット、免疫沈降、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫染色、ラテックス凝集、間接赤血球凝集アッセイ（ＩＨＡ）、補体結合、間接免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）、ネフェロメトリー、フローサイトメトリーアッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、化学発光アッセイ、側方流動免疫測定法、ｕ−キャプチャーアッセイ（ｕ−ｃａｐｔｕｒｅａｓｓａｙ）、阻害アッセイ、及び結合活性アッセイからなる群から選択されることを特徴とする方法。
【請求項７８】
請求項６３乃至７７の何れか１項に記載の方法において、対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫の診断、予後、層別化、リスク評価、又は治療監視のために用いられることを特徴とする方法。
【請求項７９】
請求項６３乃至７８の何れか１項に記載の方法において、少なくとも５０％の感度を有することを特徴とする方法。
【請求項８０】
請求項６３乃至７９の何れか１項に記載の方法において、少なくとも５０％の特異性を有することを特徴とする方法。
【請求項８１】
請求項６３乃至８０の何れか１項に記載の方法において、前記対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫の前記評価に基づき、前記対象を治療する又は前記対象の治療を変更するステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項８２】
請求項８１に記載の方法において、前記ヒト患者における肺高血圧症及び／又は肺気腫の前記評価に基づき、前記ヒト患者を治療する又は前記ヒト患者の治療を変更するステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項８３】
哺乳動物における肺高血圧症及び肺気腫を減少させる方法において、脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を有効量で肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップを含み、ここで前記投与用量が、１０００ｍｇ／日未満であり、且つ前記哺乳動物の血圧を低下させるのに十分である、方法。
【請求項８４】
低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．前記哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．前記血液サンプル中のＦＨＩＴのレベルを測定するステップと；
ｃ．前記サンプルが低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項８５】
低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．前記哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．前記組織サンプル中のＦＨＩＴのレベルを測定するステップと；
ｃ．前記サンプルが低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項８６】
低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．前記哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．前記血液サンプル中のＢＭＰＲ２のレベルを測定するステップと；
ｃ．前記サンプルが低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項８７】
低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．前記哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．前記組織サンプル中のＢＭＰＲ２のレベルを測定するステップと；
ｃ．前記サンプルが低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項８８】
ＢＭＰＲ２の突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．前記哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．前記組織サンプルをＢＭＰＲ２の突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＢＭＰＲ２の突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項８９】
ＢＭＰＲ２の突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．前記哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．前記血液サンプルをＢＭＰＲ２の突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＢＭＰＲ２の突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項９０】
ＦＨＩＴの突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．前記哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．前記組織サンプルをＦＨＩＴの突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＦＨＩＴの突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項９１】
ＦＨＩＴの突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．前記哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．前記血液サンプルをＦＨＩＴの突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＦＨＩＴの突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する前記哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項９２】
請求項１乃至４３の何れか１項に記載の方法において、肺高血圧症又は肺気腫が、ＰＫＣ阻害に依存しないが、代わりとして前記新規なシグナル伝達分子ＦＨＩＴを通じて予防される又は回復に向けられることを特徴とする方法。
【請求項９３】
肺高血圧症又は肺気腫を治療するためのＦＨＩＴ増加剤の使用。
【請求項９４】
請求項９３に記載の肺高血圧症又は肺気腫を治療するための使用において、前記ＦＨＩＴ増加剤がエンザスタウリンであることを特徴とする使用。
【請求項９５】
請求項９３に記載の肺高血圧症を治療するための使用において、前記ＦＨＩＴ増加剤がエンザスタウリンであることを特徴とする使用。
【請求項９６】
請求項９３に記載の肺気腫を治療するための使用において、前記ＦＨＩＴ増加剤がエンザスタウリンであることを特徴とする使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年５月１９日に出願された米国仮特許出願第６２／５０８８８１号明細書に対する優先権の利益を主張し、その内容はその全体が参照により本明細書中に援用される。
【０００２】
政府の権利
本発明は、国立心肺血液研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）によって授与された契約Ｋ０８ＨＬ１０７４５０−０１及びＲ０１ＨＬ１２８７３４−０１Ａ１、並びに国立アレルギー・感染症研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ）によって授与された契約１Ｕ１９ＡＩ１０９６６２、Ｕ１９ＡＩ０５７２２９、及びＵ５４Ｉ１１７９２５の下、政府支援でなされた。政府は、本発明における特定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、様々な個体の応答、例えば、肺高血圧症を含む特定の状態を治療するための治療薬の選択及び使用に対する有効性又は有害作用などを予測するための、１つ以上のゲノムバイオマーカー並びにそれに関連する診断方法、装置、試薬、システム、及びキットを適用する、薬理ゲノミクスの分野に関する。それは、エンザスタウリン及び脆弱性ヒスチジン三連構造（Ｆｒａｇｉｌｅ  Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  Ｔｒｉａｄ）（ＦＨＩＴ）を増強又は誘導する他の薬剤の、ＦＨＩＴが欠損した状態を治療するための使用に関する。特に、それは、エンザスタウリン及び他のＦＨＩＴ増加剤を用いての、肺高血圧症、肺気腫、及びＦＨＩＴの減少若しくは不足に関連した他の状態の治療に関連して有用なバイオマーカーに関する。これらのＦＨＩＴ増加剤は、肺高血圧症、例えば（限定はされないが）、肺高血圧症（ＰＨ）、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び肺気腫といったＷＨＯ分類によって包含される疾患に見出される、右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）上昇、右室肥大、心線維症、肺血管リモデリング（即ち血管欠損及び血管筋性化（ｍｕｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ））又は肺気腫を呈する疾患を治療するのに有用である。
【背景技術】
【０００４】
肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）は、最終的に右側心不全及び寿命の大幅な短縮に至る、進行性の閉塞性肺脈管障害（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）によって特徴づけられる壊滅的疾患である。骨形態形成受容体ＩＩ型（ＢＭＰＲ２）遺伝子における突然変異は、家族性ＰＡＨ（ＦＰＡＨ）患者の約７５％に存在し（１）、これはＢＭＰＲ２が該疾患の病態形成に明らかに関与している。ＢＭＰＲ２の突然変異及びＢＭＰＲ２の発現低下が多くの特発性ＰＡＨ（ＩＰＡＨ）及びＦＰＡＨ患者において報告されたが（２〜４）、臨床的ＰＡＨ表現型を発現するのはＢＭＰＲ２突然変異キャリアの意外にも比較的少ない割合（約２０％）にすぎず、さらなる環境若しくは遺伝要因又は「第２のヒット」が、ＢＭＰＲ２シグナル伝達が決定的閾値未満に減少すること、又はＰＡＨ病態形成に関連したＢＭＰＲ２非依存性経路を標的化することの何れかにより、疾患発生に関与することが示唆される。
【０００５】
現行のＰＡＨ治療は、大部分の認可されたＰＡＨ薬が主に血管拡張薬又は潜在的なＲＶ安定剤として機能し（５）、肺脈管障害の進行が未検査のままになることから不適切である。ＰＡＨ、及び肺気腫を含む肺高血圧症を治療するための新しい治療方法が必要とされる。本発明は、理論によって拘束されない限り、ＦＨＩＴのレベルを上昇させることによって機能すると考えられる改善された方法を提供する。ＢＭＰＲ２シグナル伝達を治療標的にすることは、ＢＭＰＲ２の変異性状態に依存せずにＰＡＨを改善するための興味深い方法と考えられる（６〜９）。というのは、ＢＭＰＲ２シグナル伝達を増強するとして再提起された薬剤ＦＫ５０６を用いると有効であることが示されているからである（１０〜１２）。したがって、我々の目標は、ＦＰＡＨ及びＩＰＡＨ患者におけるＢＭＰＲ２シグナル伝達又は発現を増強するためのＢＭＰＲ２モディファイヤー遺伝子及びＦＨＩＴの発現又は活性の低下を用いたその他を同定し、薬学的に標的にすることであった。
【０００６】
本明細書に提供されるデータは、ＢＭＰＲ２シグナル伝達を調節する遺伝子の系統的なハイスループットｓｉＲＮＡスクリーン（ＨＴＳ）を、公的に利用可能なＰＡＨ  ＲＮＡ発現の新規なマルチコホート及び多重組織分析手法と組み合わせている。ｓｉＲＮＡスクリーンでは、ＩＤ１発現による評価として、ノックダウンされるときにＢＭＰＲ２シグナル伝達を減少させるＢＭＰＲ２活性化遺伝子が同定された。これら遺伝子と公的に利用可能なＰＡＨ遺伝子発現データセットにおける一貫して下方制御される遺伝子との交差検証により、ＢＭＰＲ２モディファイヤー遺伝子がＰＡＨにおいて臨床的に関連することが示された。その結果によると、これら遺伝子の上方制御によると、肺高血圧症及び類似の障害を有する対象における臨床成績が改善されることが示され、また脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）が、ＰＡＨにおける有望なモディファイヤー遺伝子であり、且つＦＨＩＴ発現の減少が、インビトロ及びインビボで減少したＢＭＰＲ２シグナル伝達及び内皮細胞（ＥＣ）機能障害に関連したことが示される。
【０００７】
ＦＨＩＴは、複製ストレスとそれに伴う欠失を最も受けやすいヒト共通の脆弱部位である、ＦＲＡ３Ｂ遺伝子座と重複する、染色体３上に位置するヒスチジン三連構造ファミリーのメンバーである（１３）。腫瘍サプレッサー遺伝子ＦＨＩＴは、発癌物質又はストレッサー、例えばタバコ煙及びＵＶ照射への曝露後、容易に失われる（１４、１５）。ＦＨＩＴは、肺において高度に発現され（１６）、一般に肺がん及び他の悪性腫瘍において失われる（１７、１８）。さらに、ＦＨＩＴは、潜在的にはそれをＰＡＨ内皮及び平滑筋細胞（ＰＡＳＭＣ）において認められる異常な増殖性表現型に関連づける様々な細胞型におけるアポトーシス及び増殖に関与する（１９、２０）。ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２の発現は、リンパ腫再発を予防するための第ＩＩＩ相臨床試験にて試験された安全で且つ十分な耐容性がある薬剤エンザスタウリンによって上方制御された（２１）。意外にも、エンザスタウリンによるＦＨＩＴの増強により、実験的ＰＨの進行が予防され、回復に向かったことが本明細書中に示されている。これは、ＦＨＩＴがＰＨの病態形成において機構的に重要であり、且つエンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤がＰＡＨ及び類似のＦＨＩＴ欠損状態の臨床的治療において有用となることを示す（（２２）要約）。
【０００８】
以下の概要は、主張される主題の範囲を限定するように用いられることは意図されない。主張される主題の他の特徴、詳細、有用性、及び利点は、添付の図面及び添付の特許請求の範囲において開示される態様を含む詳細な説明から明らかになるであろう。
【発明の概要】
【０００９】
本発明の一実施形態は、ＰＨの病状の予測用のバイオマーカーとしてのＦＨＩＴの使用を含む。本発明の別の実施形態は、肺高血圧症又はその症状の発生についてのリスク因子を有する哺乳類における予防的な又は寛解させる治療戦略としての、ＰＫＣ阻害に依存しない、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン、又はＦＨＩＴ増加剤としての機能に起因した他のＦＨＩＴ増加剤の使用を含む。本発明の別の実施形態は、ＦＨＩＴレベルを上昇させるためにＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を用いる、肺高血圧症の症状を呈する哺乳動物における肺高血圧症を低減する方法を含む。特定の実施形態では、該方法は、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺動脈高血圧症を有する哺乳動物に、血圧を低下させ且つＦＨＩＴレベルを上昇させるのに十分な用量で投与することを含む。場合によっては、哺乳動物は、マウス、ラット又はヒトであってもよい。特定の症例では、哺乳動物は、ＢＭＰＲ２遺伝子の１つの対立遺伝子のノックアウトによって引き起こされる遺伝性の肺動脈高血圧症（例えばＦＰＡＨ）を有する。特定の症例では、肺高血圧症は、ＦＨＩＴ遺伝子の両対立遺伝子でのホモ接合性ノックアウトによって引き起こされた。特定の症例では、肺高血圧症は、例えば、Ｓｕｇｅｎ５４１６の投与及び慢性低酸素への曝露後に実験的肺高血圧症を誘導することによる、ＦＨＩＴの誘導によって引き起こされた。特定の症例では、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤は、右室サイズ及び右室収縮期圧における減少を達成するのに十分な用量で経口的に投与されてもよい。
【００１０】
一態様では、本発明は、予防及び／又は治療を必要とする対象において肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための方法において、
１）脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）のレベル及び／若しくは活性を提供若しくは増強する薬剤；及び／又は
２）エンザスタウリン
を前記対象に有効量で投与するステップを含むことを特徴とする方法を提供する。この態様は、治療におけるエンザスタウリンの使用、特に肺高血圧症又は肺気腫を治療するためのエンザスタウリンの使用を含む。それはまた、薬剤、特に肺高血圧症又は肺気腫を治療するための薬剤の製造におけるエンザスタウリンの使用を含む。
【００１１】
別の態様では、本発明は、
１）対象における脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）のレベル及び／若しくは活性を提供若しくは増強する薬剤及び／又はエンザスタウリン；並びに
２）肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための第２の予防薬又は治療薬
を含む、治療的有用性を有する組み合わせを提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、有効量のエンザスタウリン、又は上記のようなエンザスタウリンを含む組み合わせ、及び薬学的に許容できる担体又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。この態様は、好ましくは薬学的に許容できる担体又は賦形剤を含む、薬剤の製造における、ＦＨＩＴの活性を増強する薬剤、例えばエンザスタウリンの使用を含む。それは、ＦＨＩＴの活性を増強する薬剤、例えばエンザスタウリンを含む組み合わせ、及び少なくとも１つの薬学的に許容できる担体又は賦形剤の治療における使用をさらに提供し、ここで治療における使用は、肺高血圧症又は肺気腫、例えば、ＦＰＡＨ、ＰＡＨ、及び／又はｉＰＡＨなど、本明細書に記載のこれら状態の形態などを治療するための使用である。
【００１３】
別の態様では、本発明は、予防及び／又は治療を必要とする対象において肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための方法において、有効量のエンザスタウリン、又は上記のようなエンザスタウリンを含む組み合わせ、上記のようなエンザスタウリンを含む組み合わせを含む、エンザスタウリンを有効量で含む医薬組成物を、前記対象に投与するステップを含むことを特徴とする方法を提供する。
【００１４】
さらに別の態様では、本発明は、対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を評価するための方法において、
ａ）対象からサンプルを準備するステップと；
ｂ）前記対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を評価するため、前記サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性を評価するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００１５】
さらに別の態様では、本発明は、エンザスタウリン又はエンザスタウリンを含む組成物による治療に対する、肺高血圧症を有する対象を選択するための方法において、
ａ）対象からサンプルを準備するステップと；
ｂ）前記対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を治療するためのエンザスタウリンの適合性を評価するため、前記サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性を評価するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。対象は、ＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベルが低い（例えば、正常レベルを少なくとも５０％下回る、又は少なくとも８０％下回る）又は検出不能である場合、エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤による治療に適すると思われる。
【００１６】
さらに別の態様では、本発明は、哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、有効量の脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与することを含み、ここで投与用量が、１０００ｍｇ／日を下回り、且つ前記哺乳動物の血圧を低下させるのに十分である、方法を提供する。
【００１７】
さらに別の態様では、本発明は、低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
血液サンプル中のＦＨＩＴのレベルを測定するステップと；
サンプルが低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００１８】
さらに別の態様では、本発明は、低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプル中のＦＨＩＴのレベルを測定するステップと；
ｃ．サンプルが低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００１９】
さらに別の態様では、本発明は、低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．血液サンプル中のＢＭＰＲ２のレベルを測定するステップと；
ｃ．サンプルが低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００２０】
さらに別の態様では、本発明は、低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプル中のＢＭＰＲ２のレベルを測定するステップと；
ｃ．サンプルが低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００２１】
さらに別の態様では、本発明は、ＢＭＰＲ２の突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプルをＢＭＰＲ２の突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＢＭＰＲ２の突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００２２】
さらに別の態様では、本発明は、ＢＭＰＲ２の突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．血液サンプルをＢＭＰＲ２の突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＢＭＰＲ２の突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００２３】
さらに別の態様では、本発明は、ＦＨＩＴの突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプルをＦＨＩＴの突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＦＨＩＴの突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００２４】
さらに別の態様では、本発明は、ＦＨＩＴの突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．血液サンプルをＦＨＩＴの突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＦＨＩＴの突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法を提供する。
【００２５】
先行する実施形態の何れかにおいて、治療は、ＦＨＩＴのレベル又は活性を増強する活性を有するビスインドリルマレイミド又はその類似体若しくは誘導体を薬学的有効量で、それを必要とする対象に投与することを含みうる。一実施形態では、ビスインドリルマレイミド又は類似体若しくは誘導体は、エンザスタウリン又はその類似体若しくは誘導体であり、特にビスインドリルマレイミドは、エンザスタウリンの中性化合物又は薬学的に許容できる塩として投与可能であるエンザスタウリンである。
【００２６】
本発明のさらなる態様及び具体的な実施形態は、本明細書中で説明され、可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】図１Ａは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｂ】図１Ｂは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｃ】図１Ｃは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｄ】図１Ｄは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｅ】図１Ｅは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｆ】図１Ｆは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｇ】図１Ｇは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｈ】図１Ｈは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｉ】図１Ｉは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｊ】図１Ｊは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１Ｋ】図１Ｋは、雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図２Ａ】図２Ａは、雌ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図２Ｂ】図２Ｂは、雌ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図２Ｃ】図２Ｃは、雌ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図２Ｄ】図２Ｄは、雌ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図２Ｅ】図２Ｅは、雌ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図２Ｆ】図２Ｆは、雌ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図３Ａ】図３Ａは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図３Ｂ】図３Ｂは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図３Ｃ】図３Ｃは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図３Ｄ】図３Ｄは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図３Ｅ】図３Ｅは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図３Ｆ】図３Ｆは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図４Ａ】図４Ａは、エンザスタウリンは、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットにおいて、血管閉塞、肺気腫、心線維症を回復に向かわせ、心拍出量を改善する。
【図４Ｂ】図４Ｂは、エンザスタウリンは、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットにおいて、血管閉塞、肺気腫、心線維症を回復に向かわせ、心拍出量を改善する。
【図４Ｃ】図４Ｃは、エンザスタウリンは、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットにおいて、血管閉塞、肺気腫、心線維症を回復に向かわせ、心拍出量を改善する。
【図４Ｄ】図４Ｄは、エンザスタウリンは、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットにおいて、血管閉塞、肺気腫、心線維症を回復に向かわせ、心拍出量を改善する。
【図４Ｅ】図４Ｅは、エンザスタウリンは、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットにおいて、血管閉塞、肺気腫、心線維症を回復に向かわせ、心拍出量を改善する。
【図４Ｆ】図４Ｆは、エンザスタウリンは、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットにおいて、血管閉塞、肺気腫、心線維症を回復に向かわせ、心拍出量を改善する。
【図５】図５は、エンザスタウリンは、肺高血圧症を回復に向かわせるため、ＦＨＩＴを必要とするが、ＰＫＣを必要としない。
【図６Ａ】図６Ａは、ｓｉＲＮＡハイスループットスクリーン及びＰＡＨメタ分析によるＢＭＰＲ２調節遺伝子の同定。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ｓｉＲＮＡハイスループットスクリーン及びＰＡＨメタ分析によるＢＭＰＲ２調節遺伝子の同定。
【図６Ｃ】図６Ｃは、ｓｉＲＮＡハイスループットスクリーン及びＰＡＨメタ分析によるＢＭＰＲ２調節遺伝子の同定。
【図７Ａ】図７Ａは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図７Ｂ】図７Ｂは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図７Ｃ】図７Ｃは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図７Ｄ】図７Ｄは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図７Ｅ】図７Ｅは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図７Ｆ】図７Ｆは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図７Ｇ】図７Ｇは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図７Ｈ】図７Ｈは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図７Ｉ】図７Ｉは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱は、ＢＭＰＲ２の発現低下と相関する。
【図８Ａ】図８Ａは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｂ】図８Ｂは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｃ】図８Ｃは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｄ】図８Ｄは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｅ】図８Ｅは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｆ】図８Ｆは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｇ】図８Ｇは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｈ】図８Ｈは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｉ】図８Ｉは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｊ】図８Ｊは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｋ】図８Ｋは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｌ】図８Ｌは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図８Ｍ】図８Ｍは、ｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡの発現及びマイクロＲＮＡのプロファイリング。
【図９Ａ】図９Ａは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｂ】図９Ｂは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｃ】図９Ｃは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｄ】図９Ｄは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｅ】図９Ｅは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｆ】図９Ｆは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｇ】図９Ｇは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｈ】図９Ｈは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｉ】図９Ｉは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図９Ｊ】図９Ｊは、エンザスタウリンは、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流のシグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増加させ、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせる。
【図１０Ａ】図１０Ａは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１０Ｅ】図１０Ｅは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１０Ｆ】図１０Ｆは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１０Ｇ】図１０Ｇは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１０Ｈ】図１０Ｈは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１０Ｉ】図１０Ｉは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＨを発生する。
【図１１Ａ】図１１Ａは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｄ】図１１Ｄは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｅ】図１１Ｅは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｆ】図１１Ｆは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｇ】図１１Ｇは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｈ】図１１Ｈは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｉ】図１１Ｉは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｊ】図１１Ｊは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１１Ｋ】図１１Ｋは、エンザスタウリンは、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせる。
【図１２】図１２は、３週間の慢性低酸素及び４週間の再酸素負荷に対する酸素正常状態下のＣ５７ＢＬ／６対照と比べてのＦｈｉｔ−／−マウスにおけるＦＨＩＴタンパク質の発現。
【図１３Ａ】図１３Ａは、エンザスタウリン処置の３週間後に酸素正常状態とＳｕｇｅｎ／低酸素状態とを比較した、スプラーグドーリーラット肺におけるＰＫＣ及びｐ−ＰＫＣタンパク質の発現。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、エンザスタウリン処置の３週間後に酸素正常状態とＳｕｇｅｎ／低酸素状態とを比較した、スプラーグドーリーラット肺におけるＰＫＣ及びｐ−ＰＫＣタンパク質の発現。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、エンザスタウリン処置の３週間後に酸素正常状態とＳｕｇｅｎ／低酸素状態とを比較した、スプラーグドーリーラット肺におけるＰＫＣ及びｐ−ＰＫＣタンパク質の発現。
【図１３Ｄ】図１３Ｄは、エンザスタウリン処置の３週間後に酸素正常状態とＳｕｇｅｎ／低酸素状態とを比較した、スプラーグドーリーラット肺におけるＰＫＣ及びｐ−ＰＫＣタンパク質の発現。
【図１４Ａ】図１４Ａは、エンザスタウリンによる２４時間処置により、ＦＨＩＴがｓｉＲＮＡによって減少したＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の発現が増強される。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、エンザスタウリンによる２４時間処置により、ＦＨＩＴがｓｉＲＮＡによって減少したＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の発現が増強される。
【図１４Ｃ】図１４Ｃは、エンザスタウリンによる２４時間処置により、ＦＨＩＴがｓｉＲＮＡによって減少したＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の発現が増強される。
【図１５Ａ】図１５Ａは、エンザスタウリン以外の薬学的ＰＫＣ阻害剤によるＰＫＣの阻害により、ＢＭＰＲ２のシグナル伝達及びＦＨＩＴの発現が増強されない。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、エンザスタウリン以外の薬学的ＰＫＣ阻害剤によるＰＫＣの阻害により、ＢＭＰＲ２のシグナル伝達及びＦＨＩＴの発現が増強されない。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、エンザスタウリン以外の薬学的ＰＫＣ阻害剤によるＰＫＣの阻害により、ＢＭＰＲ２のシグナル伝達及びＦＨＩＴの発現が増強されない。
【図１５Ｄ】図１５Ｄは、エンザスタウリン以外の薬学的ＰＫＣ阻害剤によるＰＫＣの阻害により、ＢＭＰＲ２のシグナル伝達及びＦＨＩＴの発現が増強されない。
【図１５Ｅ】図１５Ｅは、エンザスタウリン以外の薬学的ＰＫＣ阻害剤によるＰＫＣの阻害により、ＢＭＰＲ２のシグナル伝達及びＦＨＩＴの発現が増強されない。
【図１５Ｆ】図１５Ｆは、エンザスタウリン以外の薬学的ＰＫＣ阻害剤によるＰＫＣの阻害により、ＢＭＰＲ２のシグナル伝達及びＦＨＩＴの発現が増強されない。
【図１６】図１６は、ＰＫＣβ阻害剤Ｌｙ３３３５３１でなく、エンザスタウリンにより、ＰＡＥＣ内でのカスパーゼ３／７媒介性アポトーシスが低下する。
【図１７Ａ】図１７Ａは、（ＢＭＰＲ２突然変異を有しない）ＩＰＡＨ患者からの代表的な免疫組織化学スライド。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、（ＢＭＰＲ２突然変異を有しない）ＩＰＡＨ患者からの代表的な免疫組織化学スライド。
【図１８Ａ】図１８Ａは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１８Ｃ】図１８Ｃは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１８Ｄ】図１８Ｄは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１８Ｅ】図１８Ｅは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１８Ｆ】図１８Ｆは、Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素への慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生する。
【図１９Ａ】図１９Ａは、健常対照に対するＦＰＡＨ及びキャリアにおけるＢＭＰＲ２の発現における性別差。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは、健常対照に対するＦＰＡＨ及びキャリアにおけるＢＭＰＲ２の発現における性別差。
【図１９Ｃ】図１９Ｃは、健常対照に対するＦＰＡＨ及びキャリアにおけるＢＭＰＲ２の発現における性別差。
【図１９Ｄ】図１９Ｄは、健常対照に対するＦＰＡＨ及びキャリアにおけるＢＭＰＲ２の発現における性別差。
【図１９Ｅ】図１９Ｅは、健常対照に対するＦＰＡＨ及びキャリアにおけるＢＭＰＲ２の発現における性別差。
【図１９Ｆ】図１９Ｆは、健常対照に対するＦＰＡＨ及びキャリアにおけるＢＭＰＲ２の発現における性別差。
【図１９Ｇ】図１９Ｇは、健常対照に対するＦＰＡＨ及びキャリアにおけるＢＭＰＲ２の発現における性別差。
【図１９Ｈ】図１９Ｈは、健常対照に対するＦＰＡＨ及びキャリアにおけるＢＭＰＲ２の発現における性別差。
【図２０Ａ】図２０Ａは、エンザスタウリンによる２４時間処置により、ＦＨＩＴがｓｉＲＮＡによって減少したＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の発現が増強される。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは、エンザスタウリンによる２４時間処置により、ＦＨＩＴがｓｉＲＮＡによって減少したＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の発現が増強される。
【図２０Ｃ】図２０Ｃは、エンザスタウリンによる２４時間処置により、ＦＨＩＴがｓｉＲＮＡによって減少したＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の発現が増強される。
【図２１Ａ】図２１Ａは、ＦＨＩＴノックダウンによるＰＡＥＣ内でのＢＭＰＲ２及びＩＤ１の減少は、部分的にｍｉＲ１７−５依存性である。
【図２１Ｂ】図２１Ｂは、ＦＨＩＴノックダウンによるＰＡＥＣ内でのＢＭＰＲ２及びＩＤ１の減少は、部分的にｍｉＲ１７−５依存性である。
【図２１Ｃ】図２１Ｃは、ＦＨＩＴノックダウンによるＰＡＥＣ内でのＢＭＰＲ２及びＩＤ１の減少は、部分的にｍｉＲ１７−５依存性である。
【図２１Ｄ】図２１Ｄは、ＦＨＩＴノックダウンによるＰＡＥＣ内でのＢＭＰＲ２及びＩＤ１の減少は、部分的にｍｉＲ１７−５依存性である。
【図２２】図２２は、ＷＴ及びＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素処置後、ＲＶ線維症を発生しない。
【図２３Ａ】図２３Ａは、エンザスタウリンは、低酸素下のＦＨＩＴ−／−マウスにおいて、ＲＶＳＰ上昇から保護し、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１  ｍＲＮＡを上方制御する。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは、エンザスタウリンは、低酸素下のＦＨＩＴ−／−マウスにおいて、ＲＶＳＰ上昇から保護し、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１  ｍＲＮＡを上方制御する。
【図２３Ｃ】図２３Ｃは、エンザスタウリンは、低酸素下のＦＨＩＴ−／−マウスにおいて、ＲＶＳＰ上昇から保護し、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１  ｍＲＮＡを上方制御する。
【図２４Ａ】図２４Ａは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図２４Ｃ】図２４Ｃは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図２４Ｄ】図２４Ｄは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図２４Ｅ】図２４Ｅは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図２４Ｆ】図２４Ｆは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図２４Ｇ】図２４Ｇは、エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。
【図２５Ａ】図２５Ａは、ＦＫ５０６及びエンザスタウリンは、低酸素下の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１に対してさらなる効果を有するが、ＦＨＩＴ  ｍＲＮＡに対しては有さず、ＲＶＳＰにおける上昇から保護する。
【図２５Ｂ】図２５Ｂは、ＦＫ５０６及びエンザスタウリンは、低酸素下の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１に対してさらなる効果を有するが、ＦＨＩＴ  ｍＲＮＡに対しては有さず、ＲＶＳＰにおける上昇から保護する。
【図２５Ｃ】図２５Ｃは、ＦＫ５０６及びエンザスタウリンは、低酸素下の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１に対してさらなる効果を有するが、ＦＨＩＴ  ｍＲＮＡに対しては有さず、ＲＶＳＰにおける上昇から保護する。
【図２５Ｄ】図２５Ｄは、ＦＫ５０６及びエンザスタウリンは、低酸素下の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１に対してさらなる効果を有するが、ＦＨＩＴ  ｍＲＮＡに対しては有さず、ＲＶＳＰにおける上昇から保護する。
【図２６】図２６は、エンザスタウリン処置の３週間後に酸素正常状態とＳｕｇｅｎ／低酸素状態とを比較した、スプラーグドーリーラット肺における代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
主張される主題の１つ以上の実施形態の詳細な説明が、主張される主題の原則を図示する添付図とともに以下に提供される。主張される主題は、かかる実施形態に関連して記述されるが、何れかの特定の実施形態に限定されない。主張される主題が様々な形態で具体化されてもよく、且つ極めて多数の変更、修飾及び均等物を包含することは理解されるべきである。したがって、本明細書で開示される具体的詳細は、限定するものとしてではなく、むしろ特許請求の範囲における基盤、及び主張される主題を実質的に任意の適切に詳細化されたシステム、構造、又は様式で利用するように当業者を教示するための代表的基盤として解釈されるべきである。本開示の徹底的理解を提供するため、極めて多数の具体的詳細が以下の説明中に示される。これらの詳細は、例示を目的として提供され、主張される主題は、これらの具体的詳細の一部又は全部を伴わない特許請求の範囲に従って実施されてもよい。主張される主題の範囲から逸脱することなく、他の実施形態を用いることができ、且つ構造的変化を設けることができることは理解されるべきである。個別の実施形態の１つ以上において記述される様々な特徴及び機能性が、それらが記述される特定の実施形態に対するそれらの適応性に限定されないことは理解されるべきである。それらは代わりに、単独で又はいくつかの組み合わせにて、本開示の他の実施形態の１つ以上に、かかる実施形態が記載されるか否かにかかわらず、またかかる特徴が記載された実施形態の一部として提示されるか否かにかかわらず適用されうる。明確さを目的として、当該技術分野で公知である技術項目は、主張される主題が詳述されていないことに関係し、主張される主題が不明瞭であることが不必要でない。
【００２９】
本願中で参照されるすべての出版物は、あたかも各個別の出版物が参照により個別に援用された場合と同程度まで、あらゆる目的でそれら全体が参照により援用される。
【００３０】
すべての見出しは、読者の利便性が意図されており、見出しに続くテキストの意味を限定するように、そのように規定されない限り、用いられるべきではない。
【００３１】
本開示全体を通じて、主張される主題の様々な態様は、範囲形式で提示される。範囲形式での記述が、あくまで便宜性や簡潔性を意図するものであり、主張される主題の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきでないことは理解されるべきである。したがって、範囲の記述は、すべての考えられる部分範囲及びその範囲内の個別の数値を具体的に開示していると考えられるべきである。例えば、種々の値が提供される場合、各介在値、その範囲の上限と下限との間及びその記述された範囲内の任意の他の記述された値又は介在値が主張される主題の中に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、より小さい範囲内に独立して含めてもよく、主張される主題中にさらに包含され、記述された範囲内の任意の具体的に除外された限界値に従う。記述された範囲が限界の一方又は両方を含む場合、それらに含まれる限界の何れか又は双方とも除外する範囲もまた、主張される主題中に含まれる。これは、範囲の幅と無関係に適用される。例えば、１〜６などの範囲の記述は、具体的に開示される部分範囲、例えば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６など、並びにその範囲内の各数値、例えば、１、２、３、４、５、及び６を有すると考えられるべきである。
【００３２】
本明細書に記載の方法は、以下：右室収縮期圧上昇、右室肥大、以前の非筋性化血管での肺血管新規筋性化及びそれら周縁における増強、肺血管欠損、肺血管新生内膜形成の増強、肺血管媒体肥厚の増強の何れかを有する患者における肺高血圧症を治療することを目的とする。
【００３３】
本発明は、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を用いての肺動脈高血圧症の治療と併せて、ＦＨＩＴを生物学的マーカーとして用いる方法に関する。本発明は、家族性及び特発性肺動脈高血圧症におけるＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を用いての肺動脈高血圧症の治療に関する。本発明はまた、肺動脈高血圧症で認められる血管閉塞性表現型、肺血管欠損、右室収縮期圧上昇、肺気腫、心線維症及び右室肥大を寛解するための、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の単独使用、又は以前に処方された薬物との併用に関する。
【００３４】
脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）は、ヒスチジン三連ファミリーのメンバーであり、且つ潜在的にはそれをＰＡＨ内皮及び平滑筋細胞において認められる異常な増殖性表現型に関連づける、様々な細胞型におけるアポトーシス及び増殖に関与する（Ａｃｃｏｒｎｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｔｏｌｅｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。ＦＨＩＴは、Ｓｒｃキナーゼによるその脱リン酸化後に分解されると考えられる（Ｐｅｋａｒｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１０１（１１）：３７７５−３７７９）。
【００３５】
ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリンは、３−（１−メチル−ＩＨ−インドール−３−イル）−４−［１−［１−（ピリジン−２−イルメチル）ピペリジン−４−イル］−１Ｈ−インドール−３−イル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンの化学名を有し、米国特許第５，６６８，１５２号明細書に開示されており、ここではタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）の阻害剤として記述されている。それ故、エンザスタウリンの生物学的機能は、ＰＫＣによるタンパク質リン酸化のその阻害から生じることが報告されている。その主な標的は、ＰＫＣβ活性化の阻害過程にあるが、それは細胞増殖及び細胞生存経路に関与するさらなるタンパク質をさらに阻害する（Ｇｅｓｃｈｅｒ，１９９８，Ｇｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，３１：７２１−７２８；Ｊａｒｖｉｓ，Ｇｒａｎｔ，１９９９，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ，１７：２２７−２４０；Ｐａｒｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，８２：２６３−２６７）。ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤は、様々な細胞型において、細胞成長・増殖を抑制し、且つアポトーシスを誘導する。
【００３６】
第ＩＩ相試験では、エンザスタウリンは、試験の持続期間における６か月間、耐容性を示した（Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ２０１３  １１９（５）：１０２３−１０３２）。報告された副作用は、発疹、腹部膨満、低ナトリウム血症、ＤＶＴ及び低血圧を含んだ。この薬剤で達成される高い耐容性、最小毒性及び低量及び副作用の重症度に起因し、肺高血圧症に対する治療及びリスクのある、例えばＢＭＰＲ２の陽性突然変異状態の個体における家族性肺高血圧症の発生の予防としてのその使用がここで示唆される。肺高血圧症の疾患回復のエンザスタウリンによる達成は前例がなく、それ故、エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤は、肺高血圧症に対する治療方法として有用と考えられる。
【００３７】
ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤は、単独で、又はＰＡＨを含むＰＨを治療若しくは予防する他の活性化合物と組み合わせて投与されてもよい。他の活性化合物は、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤と異なる時点で又は同時に投与されてもよく、また特定の実施形態では、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤及び他の活性化合物は、同じ製剤中に、又は同じキット内の別々の製剤として存在してもよい。ＰＨを治療する例示的な他の活性化合物として、例えば、プロスタサイクリン類似体、エンドセリン受容体拮抗剤、ホスホジエステラーゼ−５阻害剤、高用量のカルシウムチャネルブロッカー、抗凝固剤、利尿薬又は抗増殖性薬剤が挙げられる。特定の症例では、他の活性化合物は、例えば、Ｉｓｏｒｄｉｌ（二硝酸イソソルビド）、Ｒｅｖａｔｉｏ（シルデナフィル）、Ｔｒａｃｌｅｅｒ（ボセンタン）、Ｌｅｔａｉｒｉｓ（アンブリセンタン）、Ｆｌｏｌａｎ（エポプロステノール）、Ａｄｃｉｒｃａ（タダラフィル）、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（トレプロスチニル）Ｖｅｎｔａｖｉｓ（イロプロスト）、Ｔｙｖａｓｏ（トレプロスチニル）、Ｄｉｌａｔｒａｔｅ−ＳＲ（二硝酸イソソルビド）、Ｉｓｏｒｄｉｌ  Ｔｉｔｒａｄｏｓｅ（二硝酸イソソルビド）、ＩｓｏＤｉｔｒａｔｅ（二硝酸イソソルビド）又はＩｓｏｃｈｒｏｎ（二硝酸イソソルビド）であってもよい。
【００３８】
Ａ．一般的技術
本発明の実施では、特に指示がない限り、当業者の範囲内である、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の通常の技術が用いられることになる。かかる技術は、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７、及び定期的更新）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）などの文献において十分に説明される。
【００３９】
Ｂ．定義
特に定義されない限り、本明細書で用いられるすべての科学技術用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されている場合と同じ意味を有する。本明細書で参照されるすべての特許、出願、公開された出願及び他の出版物は、それら全体が参照により援用される。このセクション内で示される定義が、参照により本明細書中に援用される、特許、出願、公開された出願及び他の出版物の中で示される定義に反する、又はそうでなければ矛盾する場合、このセクションで示される定義が参照により本明細書中に援用される定義よりも優先される。
【００４０】
本明細書で用いられるとき、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、特に指示がない限り、複数の参照対象を含む。例えば、「１つの（ａ）」二重体は、１つ以上の二量体を含む。
【００４１】
用語「バイオマーカー」又は「マーカー」は、本明細書で用いられるとき、一般に、分子（遺伝子を含む）、タンパク質、炭水化物構造、又は糖脂質を指し、哺乳動物組織若しくは細胞の内部若しくは表面での、又は分泌されるその発現は、公知の方法（又は本明細書で開示される方法）により検出可能であり、治療計画に対する哺乳動物細胞若しくは組織の感受性として予測的であるか、又は予測する（又は予測を補助する）、またいくつかの実施形態では治療計画に対する個体の応答性を予測する（又は予測を補助する）ため、使用可能である。
【００４２】
本明細書で用いられるとき、「薬理ゲノミクスバイオマーカー」は、対象における特定の臨床薬物応答又は感受性と相関する目的のバイオマーカーである（例えば、ＭｃＬｅｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（１９９９）３５：１６５０−１６５２を参照）。それは、生化学バイオマーカー、又は臨床徴候若しくは症状であってもよい。薬理ゲノミクスマーカーの存在又は量は、対象の、薬剤の投与に先立つ特定の薬剤又は薬剤のクラスに対する予測される応答に関する。対象における１つ以上の薬理ゲノミクスマーカーの存在又は量を評価することにより、対象にとって最適である、又はより大きな奏功度を有することが予測される薬物療法が選択されてもよい。例えば、対象における特定の腫瘍マーカーにおけるＤＮＡ、ＲＮＡ、又はタンパク質の存在又は量に基づき、対象において存在する可能性が高い特定腫瘍の治療にとって最適化された薬剤又は治療経過が選択されてもよい。同様に、特定の配列突然変異又は多型の存在又は不在は、薬物応答と相関してもよい。したがって、薬理ゲノミクスバイオマーカーの使用は、治療を施す必要を伴わないような各対象にとって最適な治療の適用を可能にする。
【００４３】
本明細書で用いられるとき、用語「多型遺伝子座」は、２つ以上の代替ヌクレオチド配列が個体の集団からの核酸サンプル中に有意な数で認められる場合の核酸中の領域を指す。多型遺伝子座は、例えば、２つ以上のヌクレオチドのヌクレオチド配列、挿入されたヌクレオチド若しくはヌクレオチド配列、欠失されたヌクレオチド若しくはヌクレオチド配列、又はマイクロサテライトであってもよい。２つ以上のヌクレオチド長である多型遺伝子座は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５以上、２０以上、３０以上、５０以上、７５以上、１００以上、５００以上、又は約１０００ヌクレオチド長であってもよく、ここでヌクレオチド配列の全部又は一部は該領域内で異なる。多型遺伝子座は、１ヌクレオチド長であることが多く、本明細書中で「一塩基多型」又は「ＳＮＰ」と称される。いくつかの実施形態では、高密度遺伝子型決定は、ＳＮＰを用いることにより実施されてもよい。いくつかの実施形態では、約１，０００〜５，０００，０００又はそれ以上のＳＮＰが用いられてもよい。いくつかの実施形態では、高密度遺伝子型決定は、アレイに基づいてもよい。いくつかの実施形態では、高密度遺伝子型決定は、配列決定、例えばハイスループット配列決定を用いることにより、実施されてもよい。
【００４４】
多型遺伝子座に２、３、又は４つの代替ヌクレオチド配列が存在する場合、各ヌクレオチド配列は、「多型変異体」又は「核酸変異体」と称される。例えば、２つの多型変異体が存在する場合、集団からの少数のサンプル中に代表的な多型変異体は、時として「マイナー対立遺伝子」と称され、より優位な意味で代表的な多型変異体は、時として「メジャー対立遺伝子」と称される。多数の生物が各染色体（例えばヒト）のコピーを有し、２つのメジャー対立遺伝子又は２つのマイナー対立遺伝子を有する個体は、多型に関して「ホモ接合性」であると称されることが多く、１つのメジャー対立遺伝子及び１つのマイナー対立遺伝子を有する個体は通常、多型に関して「ヘテロ接合性」であると称される。一方の対立遺伝子に関してホモ接合性である個体は、時として、もう一方の対立遺伝子に関してヘテロ接合性又はホモ接合性である個体と比べて異なる表現型の素因になる。
【００４５】
一塩基多型は、遺伝子のコード配列内、遺伝子の非コード領域内、又は遺伝子間領域（遺伝子間の領域）内に含まれてもよい。コード配列内のＳＮＰは、遺伝暗号の縮重に起因し、生成されるタンパク質のアミノ酸配列を必ずしも改変しない。
【００４６】
コード領域内のＳＮＰは、同義及び非同義ＳＮＰという２つのタイプがある。同義ＳＮＰは、タンパク質配列に影響しない一方で、非同義ＳＮＰは、タンパク質のアミノ酸配列を改変する。非同義ＳＮＰは、ミスセンス及びナンセンスという２つのタイプがある。
【００４７】
タンパク質コード領域内に含まれないＳＮＰは、さらに、遺伝子スプライシング、転写因子結合、メッセンジャーＲＮＡ分解、又は非コードＲＮＡの配列に影響してもよい。ＳＮＰのこのタイプによって影響される遺伝子発現は、ｅＳＮＰ（発現ＳＮＰ）と称され、該遺伝子から上流又は下流で存在してもよい。
【００４８】
１つ以上の薬理ゲノミクスバイオマーカーを同定する遺伝的分析では、関連表現型において異なる値を有する個体からのサンプルは、対立形質及び／又は遺伝子型の同定がなされることが多い。用語「対立形質」は、本明細書で用いられるとき、症例及び対照からのプールされたＤＮＡサンプル中、並びに／又は各個別対象からの別々のＤＮＡサンプル中の多型変異体における対立遺伝子頻度を決定するためのプロセスを指す。各群からのＤＮＡの遺伝子型を同定することにより、各群中の各遺伝子座における対立遺伝子頻度が算出される。次に、これらの対立遺伝子頻度は互いに比較される。いくつかの実施形態では、ＤＮＡサンプルは、全ゲノムＳＮＰアレイ、例えばＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，Ｃａｌｉｆ．）及び／又はＩｌｌｕｍｉｎａ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）によって作製されたもの、例えばＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ５００Ｋアレイを用いて遺伝子型同定がなされる。Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘアレイに加えて、Ｉｌｌｕｍｉｎａチップ及びＳｅｑｕｅｎｏｍ  ＭａｓｓＡｒｒａｙもまた使用可能である。任意の好適な遺伝子型を要求するアルゴリズムが用いられてもよい。いくつかの実施形態では、遺伝子型の要求は、Ｍａｈａｌａｎｏｂｉｓ  Ｄｉｓｔａｎｃｅ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒを伴うＲｏｂｕｓｔ  Ｌｉｎｅａｒモデル（ＲＬＭＭ）アルゴリズム、Ｂａｙｅｓｉａｎステップを伴うＲＬＭＭ（ＢＲＬＭＭ）アルゴリズム、Ａｘｉｏｍ（商標）ＧＴ１アルゴリズム、完全マッチプローブを用いるＢＲＬＭＭ（ＢＲＬＭＭ−Ｐ）アルゴリズム、又はＢｉｒｄｓｅｅｄアルゴリズムを用いて作成される（Ｒａｂｂｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（２００６）２２：７−１２；Ｋｏｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ（２００８）４０：１２５３−６０）。
【００４９】
遺伝子型又は多型変異体は、本明細書で用いられるとき、一緒に遺伝される傾向がある、ＤＮＡバリエーションのセット、又は多型を指す、「ハプロタイプ」の観点で表されてもよい。ハプロタイプは、対立遺伝子の組み合わせ又は同じ染色体上に見出されるＳＮＰのセットを指しうる。例えば、２つのＳＮＰは、各ＳＮＰ位置がシトシンバリエーション及びアデニンバリエーションを含む場合の遺伝子内に存在してもよい。ある集団内の特定の個体は、１つの対立遺伝子（ヘテロ接合性）又はシトシンを各ＳＮＰ位置に伴う遺伝子を有する２つの対立遺伝子（ホモ接合性）を保有してもよい。遺伝子内の各ＳＮＰに対応する２つのシトシンがこれら個体内の一方又は両方の対立遺伝子上で一緒に移動するとき、個体は、遺伝子における２つのＳＮＰに関連してシトシン／シトシンハプロタイプを有するとして特徴づけることができる。
【００５０】
時として、多型変異体は、データベース内で報告され、ここで該変異体は集団の有意な部分中に表れるか否かは判定されていない。これらの報告された多型変異体のサブセットは、集団の統計学的に有意な部分中に表れず、それらの一部は、配列決定エラーであり且つ／又は生物学的に関連しない。したがって、報告された多型変異体が統計学的に有意であるか、又は生物学的に関連するかは、該変異体の存在が個体の集団内で検出され、且つ該変異体の頻度が決定されるまで、未知であることが多い。多型変異体は、集団の１％以上、時として集団の５％以上、１０％以上、１５％以上、又は２０％以上、また多くは集団の２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、又は５０％以上に表れる場合、統計学的に有意である（また任意選択的には生物学的に関連することが多い）。しかし、特定の遺伝的疾患及び／又は希少疾患においては、変異体は、集団の非常に小さい百分率を表してもよいが、依然として生物学的に関連する。
【００５１】
用語「サンプル」は、本明細書で用いられるとき、例えば物理的、生化学的、化学的及び／又は生理学的特徴に基づいて特徴づけ及び／又は同定がなされるべき細胞及び／又は他の分子実体を有する目的の対象から入手される又はそれに由来する組成物を指す。例えば、語句「臨床サンプル」又は「疾患サンプル」及びそのバリエーションは、特徴づけられるべき細胞及び／又は分子実体を有することが予想されることになるか又は知られる目的の対象から得られる任意のサンプルを指す。
【００５２】
用語「組織又は細胞サンプル」は、対象又は患者の組織から得られる類似する細胞の収集物を指す。組織又は細胞サンプルの供給源は、新鮮な、凍結及び／若しくは保存された臓器又は組織サンプル又は生検又は吸引物に由来する固形組織；血液又は任意の血液成分；脳脊髄液、羊水、腹水又は間質液などの体液；対象の妊娠期又は発生期の任意の時点からの細胞であってもよい。組織サンプルはまた、初代若しくは培養細胞又は細胞株であってもよい。任意選択的には、組織又は細胞サンプルは、疾患組織／臓器から得られる。組織サンプルは、保存剤、抗凝固剤、緩衝液、固定液、栄養剤、抗生物質などの天然組織と天然には混合されない化合物を含有してもよい。
【００５３】
本明細書中の生体サンプルは、血漿、血清、全血、又は乾燥血液スポットサンプルでありうる。「プラズマ」又は「血漿」は、本明細書で用いられるとき、細胞外液（細胞外部のすべての体液）の血管内液部分を指す。それは、大部分が水であり、溶解されたタンパク質、グルコース、凝固因子、無機イオン、ホルモン及び二酸化炭素を含有する（プラズマは排泄生成物の輸送用の主な媒体である）。血漿は、抗凝固剤を含有する新鮮な血液のチューブを遠心機内で血球がチューブの底に落ちるまで回転させることにより調製される。次に、血漿は排出されるか又は抜かれる。「血清」は、フィブリノーゲン又は他の凝固因子を有しない血漿（即ち全血から血球と凝固因子の双方を引いたもの）である。
【００５４】
「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、本明細書で互換可能に用いられるとき、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド若しくは塩基、及び／又はそれらの類似体、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼによりポリマー中に組み込み可能な任意の基質でありうる。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体を含んでもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーの構築の前又は後に設けられてもよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、重合後、例えば標識成分との共役により、さらに修飾されてもよい。修飾の他のタイプとして、例えば、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドの１つ以上と類似体との置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電結合を有するもの（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロアミダート、カルバメートなど）及び荷電結合を有するもの（例えば、ホスホロチオエート、ジチオリン酸など）、例えばタンパク質など（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リジンなど）の懸垂部分を有するもの、介入物を有するもの（例えば、アクリジン、ソラレンなど）、キレート剤を有するもの（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）、アルキル化剤を有するもの、修飾結合を有するもの（例えば、αアノマー核酸など）、並びにポリヌクレオチドの非修飾形態が挙げられる。さらに、通常は糖中に存在するヒドロキシル基の何れかが、例えば、ホスホン酸塩基、リン酸塩基で置換され、標準保護基によって保護され、若しくは追加的なヌクレオチドに対する追加的結合を調製するように活性化されてもよく、又は固体支持体にコンジュゲートされてもよい。５’及び３’末端ＯＨは、リン酸化され、又は１〜２０炭素原子のアミン若しくは有機キャッピング基部分で置換されてもよい。他のヒドロキシルはまた、標準保護基に誘導体化されうる。ポリヌクレオチドはまた、一般に当該技術分野で公知であるリボース又はデオキシリボース糖の類似形態、例えば、２’−Ｏ−メチル−２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−若しくは２’−アジド−リボース、炭素環糖類似体、αアノマー糖、エピマー糖、例えば、アラビノース、キシロース若しくはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体及び脱塩基ヌクレオシド類似体、例えばメチルリボシドなどを有しうる。１つ以上のリン酸ジエステル結合は、代替的な連結基で置換されてもよい。これらの代替的な連結基として、限定はされないが、リン酸が、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、「（Ｏ）ＮＲ２（「アミダート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（「ホルムアセタール」）（ここで各Ｒ又はＲ’は、独立して、Ｈ又は、任意選択的にはエーテル（−−Ｏ−−）結合を有する置換若しくは非置換アルキル（１〜２０Ｃ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル又はアラルジルである）で置換される場合の実施形態が挙げら��る。ポリヌクレオチド中のすべての結合が同一である必要はない。前記は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書中で参照されるすべてのポリヌクレオチドに適用される。
【００５５】
「オリゴヌクレオチド」は、本明細書で用いられるとき、短い、一般に一本鎖の、必然的ではないが一般に約２００ヌクレオチド長より短い、一般には合成のポリヌクレオチドを一般に指す。用語「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」は、相互に排他的でない。ポリヌクレオチドについて上述されることは、オリゴヌクレオチドに等しく且つ完全に適用可能である。
【００５６】
「増幅」は、本明細書で用いられるとき、一般に所望される配列の複数のコピーを生成する過程を指す。「複数のコピー」は、少なくとも２コピーを意味する。「コピー」は、鋳型配列に対する完全な配列相補性又は同一性を必ずしも意味しない。例えば、コピーは、デオキシイノシンなどのヌクレオチド類似体、意図的な配列改変（鋳型に対してハイブリダイズ可能であるが相補的でない配列を含むプライマーを通じて導入された配列改変など）、及び／又は増幅中に生じる配列エラーを含みうる。
【００５７】
用語「アレイ」又は「マイクロアレイ」は、本明細書で用いられるとき、基板上の、規則正しく配列されたハイブリダイズ可能なアレイ要素、例えばポリヌクレオチドプローブ（例えばオリゴヌクレオチド）、ビーズ、又は結合試薬（例えば抗体）を指す。基板は、固体基板、例えばガラス又はシリカスライド、光ファイバー結合因子、又は半固体基板、例えばニトロセルロース膜でありうる。ヌクレオチド配列は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はそれらの任意の並べ替えでありうる。
【００５８】
本明細書で用いられるとき、用語「表現型」は、個体間で比較可能な形質、例えば状態の存在又は不在、個体間の外見における視覚的に観察可能な差異、代謝変動、生理学的変動、生体分子の機能における変動などを指す。表現型は、定性的又は定量的でありうる。表現型の例が、治療、例えば薬剤に対する応答性である。
【００５９】
「応答性」は、限定はされないが、（１）疾患進行の緩徐化及び完全停止を含むある程度までの阻害；（２）疾患エピソード及び／若しくは症状における減少；（３）病変サイズの減少；（４）疾患細胞の隣接する末梢臓器及び／若しくは組織への浸潤の阻害（即ち、減少、緩徐化又は完全停止）；（５）疾患伝播の阻害（即ち、減少、緩徐化又は完全停止）；（６）１つ以上の障害に関連する症状のある程度までの軽減；（７）治療後の疾患フリーの提示の長さにおける増加；（８）治療後の所与時点での死亡率低下；及び／又は（９）治療後の有害作用の欠如を含む、患者にとっての利益を示す任意のエンドポイントを用いて評価可能である。応答性はまた、患者に対する副作用及び／又は毒性を示す任意のエンドポイントを用いて評価可能である。
【００６０】
「治療する」又は「治療」又は「軽減」は、標的となる病的状態若しくは障害を治療しない、又は状態の再発を予防しない場合に対象が緩徐化（緩和）するような治療的処置を指す。対象が、治療量の治療薬を受けてから、特定疾患の１つ以上の徴候及び症状の観察可能及び／若しくは測定可能な減少又はそれらの不在を示す場合、対象は十分に「治療」されている。例えば、がん細胞の数における有意な減少又はがん細胞の不在；腫瘍サイズの減少；腫瘍転移の阻害（即ち、ある程度までの緩徐化及び好ましくは停止）；腫瘍増殖のある程度までの阻害；特定のがんに関連する症状の１つ以上の寛解及び／又は軽減の長さにおけるある程度までの増加；罹患率及び死亡率の低下、及び生活の質上の課題における改善が挙げられる。疾患の徴候又は症状の減少はまた、患者による感覚であってもよい。治療は、がんのあらゆる徴候の消失と定義される完全寛解、又は腫瘍のサイズが好ましくは５０パーセント超、より好ましくは７５％減少する場合の部分寛解を達成しうる。患者はまた、患者が安定疾患を経験する場合、治療されたと考えられる。いくつかの実施形態では、治療薬による治療は、患者が治療後３か月、好ましくは治療後６か月、より好ましくは１年、さらにより好ましくは２年以上にわたり疾患フリーである状態をもたらすように有効である。疾患における十分な治療及び改善を評価するためのこれらのパラメータは、適切な当業者としての医師にとって馴染みがある通常の手順により容易に測定可能である。
【００６１】
用語「予測」又は「予後」は、患者が薬剤又は薬剤セットに対して有利又は不利の何れかで応答する可能性を指すように本明細書で用いられる。一実施形態では、予測は、それら応答の程度に関する。一実施形態では、予測は、患者が治療、例えば特定の治療薬による治療後、並びに疾患再発を伴わない特定の期間、生存又は改善するか否か及び／又はその確率に関する。本発明の予測方法は、任意の特定患者に対する最適な治療様式を選択することによって治療決定を下すのに、臨床的に用いることができる。本発明の予測方法は、ある患者が治療計画、例えば所与の治療計画、例えば、所与の治療薬又は組み合わせの投与、外科的介入、ステロイド治療などに対して有利に応答する可能性が高いか否かを予測するのに貴重なツールである。
【００６２】
本明細書で用いられるとき、用語「特異的に結合する」は、特異的結合対の結合特異性を指す。抗体による特定の標的の他の潜在的標的の存在下での認識は、かかる結合の１つの特徴である。特異的結合は、２つの異なる分子であって、分子の一方が第２の分子に化学的又は物理的手段を通じて特異的に結合する場合を含む。該２つの分子は、それらの相互の結合が、該２つの分子がそれらの結合パートナーと類似的特徴を有する他のアッセイ成分とを区別可能であるような程度であるという意味で関連している。結合成分対のメンバーは、リガンドと受容体（抗リガンド）、特異的結合対（ＳＢＰ）メンバー及びＳＢＰパートナーなどと称される。分子はまた、分子の凝集体におけるＳＢＰメンバー；例えば第２の抗体の免疫複合体に対して産生される抗体であってもよく、その対応する抗原は、免疫複合体におけるＳＢＰメンバーであると考えられてもよい。
【００６３】
本明細書で用いられるとき、用語「相同体」は、天然に存在する核酸（即ち、「プロトタイプ」又は「野生型」核酸）と、天然に存在する核酸に対するわずかな修飾分だけ異なるが、天然に存在する形態の基本的なヌクレオチド構造を維持する核酸を指すように用いられる。かかる変化として、限定はされないが、１個若しくは数個のヌクレオチドにおける変化、例えば欠失（例えば核酸の切断バージョン）挿入及び／又は置換などが挙げられる。相同体は、天然に存在する核酸と比べて、増強、低減、又は実質的に類似した特性を有しうる。相同体は、天然に存在する核酸に対して、相補的でありうる、又は一致しうる。相同体は、限定はされないが、組換えＤＮＡ技術、化学合成などを含む、核酸の生成における当該技術分野で公知の技術を用いて生成されうる。
【００６４】
本明細書で用いられるとき、「相補的である」又は「一致した」は、２つの核酸配列が少なくとも５０％の配列同一性を有することを意味する。好ましくは、２つの核酸配列は、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有する。「相補的である又は一致した」はまた、２つの核酸配列が、低、中の及び／又は高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズ可能であることを意味する。
【００６５】
本明細書で用いられるとき、「実質的に相補的である又は実質的に一致した」は、２つの核酸配列が少なくとも９０％の配列同一性を有することを意味する。好ましくは、２つの核酸配列は、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の配列同一性を有する。或いは、「実質的に相補的である又は実質的に一致した」は、２つの核酸配列が高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズ可能であることを意味する。
【００６６】
一般に、ハイブリッドの安定性は、イオン濃度と温度の関数である。典型的には、ハイブリダイゼーション反応は、より低いストリンジェンシーの条件下で実施され、その後、変化するがより高いストリンジェンシーで洗浄された。中ストリンジェントハイブリダイゼーションは、プローブなどの核酸分子が相補的な核酸分子に結合することを可能にする条件を指す。ハイブリダイズされた核酸分子は、一般に、少なくとも６０％の同一性、例えば少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、若しくは９５％の同一性の何れかを有する。中ストリンジェント条件は、４２℃で５０％ホルムアミド、５×デンハート溶液、５×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳにおけるハイブリダイゼーションと、その後の４２℃で０．２×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳにおける洗浄に等価な条件である。高ストリンジェンシー条件は、例えば、４２℃で５０％ホルムアミド、５×デンハート溶液、５×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳにおけるハイブリダイゼーションと、その後の６５℃で０．１×ＳＳＰＥ、及び０．１％ＳＤＳにおける洗浄により提供されうる。
【００６７】
低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、２２℃で１０％ホルムアミド、５×デンハート溶液、６×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳにおけるハイブリダイゼーションと、その後の３７℃で１×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳにおける洗浄に等価な条件を指す。デンハート溶液は、１％フィコール、１％ポリビニルピロリドン、及び１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する。２０×ＳＳＰＥ（塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、エチレンジアミド四酢酸（ＥＤＴＡ））は、３Ｍ塩化ナトリウム、０．２Ｍリン酸ナトリウム、及び０．０２５Ｍ（ＥＤＴＡ）を含有する。他の好適な中ストリンジェンシー及び高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション緩衝液及び条件は、当業者に周知である。
【００６８】
本明細書で用いられるとき、用語「アウトプット」は、コンピュータアルゴリズムから生成される値又はスコアを指す。アウトプットは、コンピュータアルゴリズムへのインプットとして本明細書で開示されるバイオマーカーを用いるアッセイ結果に基づいて生成されてもよい。「アウトプット」は、定量的又は定性的の何れかでありえ、コンパニオン診断検査における治療に対する対象の考えられる応答性を判定するために使用可能である。
【００６９】
本明細書に記載の本発明の態様及び実施形態が、態様及び実施形態「からなる」及び／又は「から本質的になる」ことを含むことは理解される。
【００７０】
本発明の他の目的、利点及び特徴は、添付の図面と併せて解釈される以下の明細書から明白となる。
【００７１】
Ｃ．列挙される実施形態
以下の列挙される実施形態は、本発明のいくつかの態様を代表する。
【００７２】
第１の実施形態では、（１）本発明は、予防及び／又は治療を必要とする対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための方法において、
ａ）脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）のレベル及び／若しくは活性を提供若しくは増強する薬剤；及び／又は
ｂ）エンザスタウリン
を有効量で前記対象に投与するステップを含むことを特徴とする方法を提供する。
２．対象における肺気腫を予防するために用いられる、実施形態１の方法。
３．対象における肺気腫を治療するために用いられる、実施形態１の方法。
４．対象における肺高血圧症を予防するために用いられる、実施形態１の方法。
５．対象における肺高血圧症を治療するために用いられる、実施形態１の方法。
６．肺高血圧症が、ＷＨＯグループＩの肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）；ＷＨＯグループＩ’の肺静脈閉塞症（ＰＶＯＤ）若しくは肺毛細管腫症（ＰＣＨ）；ＷＨＯグループＩの新生児の持続性肺高血圧症；ＷＨＯグループＩＩの左心疾患に続発する肺高血圧症；ＷＨＯグループＩＩＩの肺疾患若しくは慢性低酸素に起因する肺高血圧症、ＷＨＯグループＩＶの慢性動脈閉塞症；又はＷＨＯグループＶの不明瞭な若しくは多因子機構を有する肺高血圧症に属する、実施形態４又は５の方法。
７．対象が、右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）上昇、右室肥大、心線維症、肺血管リモデリング、例えば、血管欠損、血管筋性化及び／又は新生内膜形成、又は肺気腫を有する、実施形態６の方法。
８．肺高血圧症が、肺高血圧症（ＰＨ）、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）又は肺気腫である、実施形態６の方法。
９．肺高血圧症又は肺気腫が、対象において自発的に発生する（例えば特発性ＰＨ）、実施形態１〜８の何れか１つの方法。
１０．肺高血圧症又は肺気腫が、対象の遺伝的背景に基づいて発生する（例えば家族性ＰＨ）、実施形態１〜８の何れか１つの方法。
１１．肺高血圧症又は肺気腫が、別の疾患又は障害に起因又は関連して、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に続発して発生する、実施形態１〜８の何れか１つの方法。
１２．ＦＨＩＴ、又はその機能断片の生成をもたらす薬剤が、有効量で対象に投与される、実施形態１〜１１の何れか１つの方法。
１３．薬剤が、対象において、ＦＨＩＴ、又はその機能断片を生成するように設計されるポリヌクレオチドを含む、実施形態１２の方法。
１４．ポリヌクレオチドが、ＦＨＩＴ、又はその機能断片をコードするＤＮＡ分子である、実施形態１３の方法。
１５．ポリヌクレオチドが、ＦＨＩＴ、又はその機能断片をコードするＲＮＡ分子である、実施形態１３の方法。
１６．薬剤が、ＦＨＩＴ、又はその機能断片を含むポリペプチドを含む、実施形態１２の方法。
１７．薬剤、例えば、ｍｉＲＮＡ１７−５、マイクロＲＮＡ２４ａ、マイクロＲＮＡ模倣体若しくはマイクロＲＮＡアンタゴミルなどのマイクロＲＮＡ、又はＦＨＩＴ、若しくはその機能断片のレベルを増加させる、デシタビンなどの脱メチル化剤が、有効量で対象に投与される、実施形態１〜１１の何れか１つの方法。
１８．薬剤、例えばエンザスタウリンが、対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片をコードするＤＮＡ分子の発現を増強する、実施形態１７の方法。
１９．薬剤が、対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片をコードするＲＮＡ分子の翻訳を増強する、実施形態１７の方法。
２０．薬剤が、対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片の安定性を増強する、実施形態１７の方法。
２１．薬剤が、活性化されたＧαｑ又はＧαｑの活性化及びＧβγ複合体との解離をもたらす、Ｇｑ共役受容体に結合する作動薬を含む、実施形態２０の方法［Ｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，１１（１）：５９，Ａｕｇｕｓｔ  ２０１３を参照］。
２２．薬剤が、対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片の分解を遮断又は低減する、実施形態２１の方法。
２３．薬剤が、対象におけるＦＨＩＴ、又はその機能断片のリン酸化、例えば、ＦＨＩＴのＴｙｒ１１４部位でのＳｒｃ媒介性リン酸化を遮断又は低減する、実施形態２２の方法。
２４．ＦＨＩＴの活性を増強する薬剤が、有効量で対象に投与される、実施形態１〜１１の何れか１つの方法。
２５．エンザスタウリンが、有効量で対象に投与される、実施形態１〜１１の何れか１つの方法。
２６．対象における肺気腫を予防するため、エンザスタウリンが有効量で対象に投与される、実施形態２５の方法。
２７．対象における肺気腫を治療するため、エンザスタウリンが有効量で対象に投与される、実施形態２５の方法。
２８．対象における肺高血圧症を予防するため、エンザスタウリンが有効量で対象に投与される、実施形態２５の方法。
２９．対象における肺高血圧症を治療するため、エンザスタウリンが有効量で対象に投与される、実施形態２５の方法。
３０．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象におけるＦＨＩＴ及び／又は骨形態形成タンパク質受容体ＩＩ型（ＢＭＰＲ２）を上方制御する、実施形態１〜２９の何れか１つの方法。
３１．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象におけるＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をマイクロＲＮＡ、例えばｍｉＲ１７−５及び／又はｍｉＲ２７ａを介して上方制御する、実施形態３０の方法。
３２．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象におけるＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２を上方制御する、実施形態３０又は３１の方法。
３３．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、該薬剤及び／又はエンザスタウリンの対象におけるＦＨＩＴの上方制御と独立して、ＢＭＰＲ２を上方制御する、実施形態３０〜３２の何れか１つの方法。
３４．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象におけるＰＫＣ阻害と独立して、肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療する、実施形態１〜３３の何れか１つの方法。
３５．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象における右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）、ＲＶ肥大、心線維症及び／又は血管リモデリングを改善することにより、肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療する、実施形態１〜３４の何れか１つの方法。
３６．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象におけるＲＶＳＰ上昇、ＲＶＨ増加、血管希薄化、遠位血管の筋性化及び／又は新生内膜形成を予防又は低減することにより、肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療する、実施形態１〜３５の何れか１つの方法。
３７．有効量の該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、末期ＰＨを有する又は有することが疑われる対象に投与される、実施形態１〜３６の何れか１つの方法。
３８．末期ＰＨが、肺血管閉塞、ＲＶＳＰ上昇、例えばＲＶＳＰ＞１００ｍｍＨｇ、平均ＰＡＰ及び／又はＰＶＲの増加、右心不全、ＲＶＨ増加、ＲＶ機能の低下及びＲＶ拡大、並びに／又は間質性線維症の増加によって特徴づけられる、実施形態３７の方法。
３９．該薬剤及び／又はエンザスタウリンによる治療により、全肺におけるＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２の発現が増強され、肺血管閉塞が低減されるか若しくは回復に向かい、且つ／又は小血管及び大血管の筋性化、ＲＶＨ、ＲＶ線維症、ＲＶ拡大及びＲＶＳＰ、平均ＰＡＰ、ＰＶＲの少なくとも１つが減少し、並びにＲＶ機能が増強される、実施形態３７又は３８の方法。
４０．治療対象において、肺動脈平均圧（ＰＡＰｍ）及び肺血管抵抗（ＰＶＲ）が減少し、且つ心拍出量（ＣＯ）が増加する、実施形態３９の方法。
４１．対象が、低レベルのＢＭＰＲ２を有する若しくは有することが疑われる、又はＢＭＰＲ２突然変異を有する若しくは有することが疑われる、実施形態１〜４０の何れか１つの方法。
４２．対象が、肺高血圧症及び／又は肺気腫を有しない対象のＢＭＰＲ２レベル以下のＢＭＰＲ２レベルを有する、実施形態４１の方法。
４３．対象が、ＢＭＰＲ２遺伝子における点突然変異、付加及び／又は欠失、例えば、ＢＭＰＲ２のリガンド結合、キナーゼ及び／又はテイル領域における点突然変異を有する、実施形態４１の方法。
４４．対象が、低レベルのＦＨＩＴを有する若しくは有することが疑われる、又はＦＨＩＴ突然変異を有する若しくは有することが疑われる、実施形態１〜４３の何れか１つの方法。
４５．対象が、肺高血圧症及び／又は肺気腫を有しない対象のＦＨＩＴレベル以下のＦＨＩＴレベルを有する、実施形態４４の方法。
４６．対象が、ＦＨＩＴ遺伝子における点突然変異、付加及び／若しくは欠失、及び／又はＦＨＩＴ遺伝子の異常なメチル化状態を有する、実施形態４４の方法。
４７．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、約５ｍｇ／日〜約１，０００ｍｇ／日の範囲の用量で投与される、実施形態１〜４６の何れか１つの方法。
４８．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、インビボレベルを得るための用量、例えば、約２０ナノモル／Ｌ〜約６，０００ナノモル／Ｌの範囲の血清又は血漿濃度で投与される、実施形態１〜４７の何れか１つの方法。特定のこれらの実施形態では、インビボレベルは、約２０ナノモル／Ｌ〜約６０００ナノモル／Ｌの血漿濃度である。いくつかのこれらの実施形態では、インビボレベルは、約５００ナノモル／Ｌ〜約２５００ナノモル／Ｌ、又は約１００ナノモル／Ｌ〜約５００ナノモル／Ｌ、又は約２０ナノモル／Ｌ〜約１００ナノモル／Ｌの血漿濃度である。
４９．薬学的に許容できる担体又は賦形剤を対象に投与することをさらに含む、実施形態１〜４８の何れか１つの方法。
５０．対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための第２の予防薬又は治療薬を有効量で投与することをさらに含む、実施形態１〜４９の何れか１つの方法。
５１．肺高血圧症を予防及び／又は治療するための第２の予防薬又は治療薬が、血管作用物質、プロスタグランジン、エンドセリン受容体拮抗剤、ホスホジエステラーゼ５型阻害剤又は可溶性グアニル酸シクラーゼのアクチベーターである、実施形態５０の方法。
５２．肺気腫を予防及び／又は治療するための第２の予防薬又は治療薬が、気管支拡張薬、ステロイド薬又は抗生物質である、実施形態５０又は５１の方法。
５３．該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、経口、経鼻、吸入、非経口、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、皮内、局所、又は直腸経路を介して投与される、実施形態１〜５２の何れか１つの方法。
５４．有効量の該薬剤及び／又はエンザスタウリンが、対象に投与されることで、該対象の全身性血圧を低減する、実施形態１〜５３の何れか１つの方法。
５５．該治療が、治療対象におけるＰＡＨの症候性がある少なくとも１つのパラメータの改善をもたらす、実施形態１〜５４の何れか１つの方法。いくつかの実施形態では、これは、該治療により、対象において、平均ＰＡＰ肺動脈圧（ＰＡＰｍ）が２５ｍｍＨｇ未満、好ましくは２０ｍｍＨｇ未満に低下し、ＰＶＲが３ＷＵ未満に低下し、且つ／又はＰＡＷＰ（肺動脈楔入圧）が１５超に上昇することを意味する。いくつかの実施形態では、ＰＡＨの症候性がある少なくとも１つのパラメータを改善することは、右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）又は肺動脈収縮期圧（ＰＡＳＰ）（心電計を介して測定される、又は双方とも測定される）を測定できるほどに改善することを指す。いくつかの実施形態では、ＰＡＨの症候性がある少なくとも１つのパラメータを改善することは、例えば右心カテーテル法により測定可能である、平均肺動脈圧（ＰＡＰｍ）、肺動脈楔入圧（ＰＡＷＰ）、心拍出量（ＣＯ）、及び／又は肺血管抵抗（ＰＶＲ）を測定できるほどに改善することを指す。かかる一実施形態では、治療前にＰＡＰｍ＞２５ｍｍＨｇを有する対象は、治療後、ＰＡＰｍ＜２５ｍｍＨｇ、好ましくは＜２０ｍｍＨｇを呈する。別の実施形態では、グループ１のＰＡＨを有し、且つ治療前にＰＡＰｍ＞２５、及びＰＶＲ＞３ＷＵ、及びＰＡＷＰ＜１５を呈する対象は、治療後、改善された少なくとも１つのパラメータ、例えば、ＰＡＰｍ＜２５、及び／又はＰＶＲ＞３ＷＵ、及び／又はＰＡＷＰ＞１５を有する。
５６．対象が哺乳動物である、実施形態１〜５５の何れか１つの方法。
５７．哺乳動物がヒトである、実施形態５６の方法。
５８．哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、実施形態５６の方法。
５９．対象における脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）のレベル及び／若しくは活性を提供若しくは増強する薬剤及び／又はエンザスタウリンの、前記対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための薬剤の製造における有効量での使用。
６０．１）対象における脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）のレベル及び／若しくは活性を提供若しくは増強する薬剤及び／又はエンザスタウリン；並びに
２）肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための第２の予防薬又は治療薬
を含む組み合わせ。
いくつかのかかる実施形態では、第２の予防薬又は治療薬は、Ｉｓｏｒｄｉｌ（二硝酸イソソルビド）、Ｒｅｖａｔｉｏ（シルデナフィル）、Ｔｒａｃｌｅｅｒ（ボセンタン）、Ｌｅｔａｉｒｉｓ（アンブリセンタン）、Ｆｌｏｌａｎ（エポプロステノール）、Ａｄｃｉｒｃａ（タダラフィル）、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（トレプロスチニル）Ｖｅｎｔａｖｉｓ（イロプロスト）、Ｔｙｖａｓｏ（トレプロスチニル）、Ｄｉｌａｔｒａｔｅ−ＳＲ（二硝酸イソソルビド）、Ｉｓｏｒｄｉｌ  Ｔｉｔｒａｄｏｓｅ（二硝酸イソソルビド）、ＩｓｏＤｉｔｒａｔｅ（二硝酸イソソルビド）、及びＩｓｏｃｈｒｏｎ（二硝酸イソソルビド）から選択される。典型的には、該組み合わせは、少なくとも１つ、また好ましくは２つ以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む。
６１．有効量の実施形態６０の組み合わせ、及び薬学的に許容できる担体又は賦形剤を含む医薬組成物。
６２．予防及び／又は治療を必要とする対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を予防及び／又は治療するための方法において、有効量の実施形態６０の組み合わせ又は実施形態６１の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含むことを特徴とする方法。
６３．対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を評価するための方法において、
ａ）対象からサンプルを準備するステップと；
ｂ）前記対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫を評価するため、前記サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性を評価するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
６４．該サンプルが、血液、血清、血漿、若しくは体液サンプル、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態６３の方法。
６５．対象が哺乳動物である、実施形態６３又は６４の方法。
６６．哺乳動物が、非ヒト哺乳動物、例えば、ペット、家畜、コンパニオン動物又は実験動物である、実施形態６５の方法。
６７．哺乳動物がヒトである、実施形態６５の方法。
６８．ある閾値又は参照値を有するとｂ）で評価されたＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性、例えば正常血圧を有する同等の対象からのＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性と、前記対象が肺高血圧症及び／又は肺気腫を有する又はそれらを有するというより高いリスクを有することを示す閾値又は参照値よりも低いとｂ）で評価されたＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２のレベル及び／又は活性とを比較することをさらに含む、実施形態６３〜６７の何れか１つの方法。
６９．サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をコードするポリヌクレオチドのレベルが評価される、実施形態６３〜６８の何れか１つの方法。
７０．該ポリヌクレオチドが、ＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をコードするＤＮＡ分子である、実施形態６９の方法。
７１．該ポリヌクレオチドが、ＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をコードするＲＮＡ分子である、実施形態６９の方法。
７２．サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２をコードするポリヌクレオチドのレベルが、前記ポリヌクレオチドを増幅すること、ライゲートすること、ハイブリダイズすること、及び／又は配列決定することを含む手順を用いて評価される、実施形態６３〜７１の何れか１つの方法。
７３．該ポリヌクレオチドが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）、転写媒介増幅（ＴＭＡ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）、プライマー伸長、ローリングサークル増幅（ＲＣＡ）、自己持続配列複製（３ＳＲ）、及びループ介在等温増幅（ＬＡＭＰ）からなる群から選択される手順を用いて増幅される、実施形態７２の方法。
７４．配列決定が、マクサム・ギルバート配列決定、鎖終結方法、ショットガン配列決定、架橋ＰＣＲ、単一分子リアルタイム配列決定、イオン半導体（ｉｏｎ  ｔｏｒｒｅｎｔ配列決定）、合成による配列決定、ライゲーションによる配列決定（ＳＯＬｉＤ配列決定）、鎖終結（サンガー配列決定）、大規模並列シグネチャー配列決定（ＭＰＳＳ）、ポロニー配列決定、４５４パイロシーケンシング、Ｉｌｌｕｍｉｎａ（Ｓｏｌｅｘａ）配列決定、ＤＮＡナノボール配列決定、ヘリスコープ単一分子配列決定、単一分子リアルタイム（ＳＭＲＴ）配列決定、ナノポアＤＮＡ配列決定、トンネル電流ＤＮＡ配列決定、ハイブリダイゼーションによる配列決定、質量分析を用いた配列決定、マイクロ流体サンガー配列決定、顕微鏡に基づく技術、ＲＮＡＰ配列決定、及びインビトロウイルスハイスループット配列決定からなる群から選択される形式を用いて実施される、実施形態７２の方法。
７５．サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２を含むポリペプチドのレベルが評価される、実施形態６３〜７４の何れか１つの方法。
７６．サンプル中のＦＨＩＴ及び／又はＢＭＰＲ２を含むポリペプチドのレベルが、免疫測定法を用いて評価される、実施形態７５の方法。
７７．免疫測定法が、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、免疫ブロット、免疫沈降、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫染色、ラテックス凝集、間接赤血球凝集アッセイ（ＩＨＡ）、補体結合、間接免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）、ネフェロメトリー、フローサイトメトリーアッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、化学発光アッセイ、側方流動免疫測定法、ｕ−キャプチャーアッセイ（ｕ−ｃａｐｔｕｒｅ  ａｓｓａｙ）、阻害アッセイ、及び結合活性アッセイからなる群から選択される、実施形態７６の方法。
７８．対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫の診断、予後、層別化、リスク評価、又は治療監視のために用いられる、実施形態６３〜７７の何れか１つの方法。
７９．少なくとも５０％の感度を有する、実施形態６３〜７８の何れか１つの方法。
８０．少なくとも５０％の特異性を有する、実施形態６３〜７９の何れか１つの方法。
８１．対象における肺高血圧症及び／又は肺気腫の評価に基づき、対象を治療する又は対象の治療を変更することをさらに含む、実施形態６３〜８０の何れか１つの方法。
８２．ヒト患者における肺高血圧症及び／又は肺気腫の評価に基づき、ヒト患者を治療する又はヒト患者の治療を変更することをさらに含む、実施形態８１の方法。
８３．哺乳動物における肺高血圧症及び肺気腫を減少させる方法において、脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を有効量で肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与することを含み、ここで投与用量が、１０００ｍｇ／日未満であり、且つ前記哺乳動物の血圧を低下させるのに十分である、方法。
８４．前記哺乳動物がヒトである、実施形態８３の方法。
８５．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態８３の方法。
８６．前記投与が経口である、実施形態８３の方法。
８７．低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．血液サンプル中のＦＨＩＴのレベルを測定するステップと；
ｃ．該サンプルが低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
８８．前記哺乳動物がヒトである、実施形態８７の方法。
８９．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態８７の方法。
９０．前記投与が経口である、実施形態８７の方法。
９１．低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプル中のＦＨＩＴのレベルを測定するステップと；
ｃ．該サンプルが低い又は検出不能レベルのＦＨＩＴを有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
９２．前記哺乳動物がヒトである、実施形態９１の方法。
９３．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態９１の方法。
９４．前記投与が経口である、実施形態９１の方法。
９５．低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．血液サンプル中のＢＭＰＲ２のレベルを測定するステップと；
ｃ．該サンプルが低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
９６．前記哺乳動物がヒトである、実施形態９５の方法。
９７．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態９５の方法。
９８．前記投与が経口である、実施形態９５の方法。
９９．低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプル中のＢＭＰＲ２のレベルを測定するステップと；
ｃ．該サンプルが低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
１００．前記哺乳動物がヒトである、実施形態９９の方法。
１０１．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態９９の方法。
１０２．前記投与が経口である、実施形態９９の方法。
１０３．低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプル中のＢＭＰＲ２のレベルを測定するステップと；
ｃ．該サンプルが低い又は検出不能レベルのＢＭＰＲ２を有する場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
１０４．前記哺乳動物がヒトである、実施形態１０３の方法。
１０５．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態１０３の方法。
１０６．前記投与が経口である、実施形態１０３の方法。
１０７．ＢＭＰＲ２の突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプルをＢＭＰＲ２の突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＢＭＰＲ２の突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
１０８．前記哺乳動物がヒトである、実施形態１０７の方法。
１０９．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態１０７の方法。
１１０．前記投与が経口である、実施形態１０７の方法。
１１１．ＢＭＰＲ２の突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．血液サンプルをＢＭＰＲ２の突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＢＭＰＲ２の突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
１１２．前記哺乳動物がヒトである、実施形態１１１の方法。
１１３．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態１１１の方法。
１１４．前記投与が経口である、実施形態１１１の方法。
１１５．ＦＨＩＴの突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から組織サンプルを入手するステップと；
ｂ．組織サンプルをＦＨＩＴの突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＦＨＩＴの突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
１１６．前記哺乳動物がヒトである、実施形態１１５の方法。
１１７．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態１１５の方法。
１１８．前記投与が経口である、実施形態１１５の方法。
１１９．ＦＨＩＴの突然変異を有する哺乳動物における肺高血圧症又は肺気腫を減少させる方法において、
ａ．哺乳動物から血液サンプルを入手するステップと；
ｂ．血液サンプルをＦＨＩＴの突然変異について分析するステップと；
ｃ．ＦＨＩＴの突然変異が検出された場合、有効量のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を、肺高血圧症又は肺気腫を有する哺乳動物に投与するステップと、
を含むことを特徴とする方法。
１２０．前記哺乳動物がヒトである、実施形態１１９の方法。
１２１．前記用量が、３５００ナノモル／Ｌ以下の予測されたＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の血清濃度を提供する、実施形態１１９の方法。
１２２．前記投与が経口である、実施形態１１９の方法。
１２３．前記化合物「ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤」が、ＬＹ３１７６１５、Ｄ０４０１４としても知られる、実施形態８３〜１２２の何れか１つの方法。
１２４．肺高血圧症又は肺気腫が、以下：右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）上昇、右室肥大、心線維症、肺血管リモデリング（即ち、血管欠損及び血管筋性化）又は肺気腫の何れか１つを呈する、実施形態８３〜１２２の何れか１つの方法。
１２５．肺高血圧症又は肺気腫が、自発的に発生しうる（特発性ＰＨ）、実施形態８３〜１２２の何れか１つの方法。
１２６．肺高血圧症又は肺気腫が、遺伝的背景に基づいて発生しうる（家族性ＰＨ）、実施形態８３〜１２２の何れか１つの方法。
１２７．肺高血圧症又は肺気腫が、別の疾患に伴い、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に続発して発生しうる、実施形態８３〜１２２の何れか１つの方法。
１２８．ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤が、リスク要素（即ち、ＢＭＰＲ２又はＦＨＩＴについて陽性の突然変異状態）を有する哺乳類に対する予防策として用いられる、実施形態８３〜１２２の何れか１つの方法。
１２９．肺高血圧症又は肺気腫が、ＷＨＯ分類グループＩ（肺動脈高血圧症）、グループＩＩ（肺静脈高血圧症）、グループＩＩＩ（慢性肺疾患に伴う肺高血圧症）、グループＶ（混合型）を指す、実施形態８３〜１２８の何れか１つの方法。
１３０．肺高血圧症又は肺気腫が、ＰＫＣ阻害に依存しないが、代わりとして新規なシグナル伝達分子ＦＨＩＴを通じて予防される又は回復に向けられる、実施形態８３〜１２９の何れか１つの方法。
１３１．薬剤が、技術、例えばＣＲＩＳＰＲを通じた医薬品、化学物質、バイオ改変治療方法及び遺伝子修飾を指す、実施形態８３〜１３０の何れか１つの方法。
１３２．肺高血圧症を治療するためのＦＨＩＴ増加剤の使用。
１３３．ＦＨＩＴ増加剤がエンザスタウリンである、実施形態１３２に従う使用。
【００７３】
本開示の徹底的理解をもたらすため、極めて多数の具体的詳細が下記に示される。これらの詳細は、例示を目的として提供され、主張される主題は、これらの具体的詳細の一部又は全部を伴わずに特許請求の範囲に従って実施されてもよい。主張される主題の範囲から逸脱することなく、他の実施形態を用いることができ、また構造的変化を設けることができることは理解されるべきである。個別の実施形態の１つ以上に記載される様々な特徴及び機能性が、それらの適応性において、それらが記載される特定の実施形態に限定されないことは理解されるべきである。それらは代わりに、単独で又はいくつかの組み合わせにて、本開示の他の実施形態の１つ以上に、かかる実施形態が記載されるか否かにかかわらず、またかかる特徴が記載された実施形態の一部として提示されるか否かにかかわらず適用されうる。明確さを目的として、当該技術分野で公知である技術項目は、主張される主題が詳述されていないことに関係し、主張される主題が不明瞭であることが不必要でない。
【００７４】
本発明は、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を用いた肺動脈高血圧症の治療と併せて、生物学的マーカーとしてＦＨＩＴを用いる方法に関する。本発明は、家族性及び特発性肺動脈高血圧症におけるＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を用いた肺動脈高血圧症の治療に関する。本発明はまた、肺動脈高血圧症において認められる血管閉塞性表現型、肺血管欠損、右室収縮期圧上昇、肺気腫、心線維症及び右室肥大を寛解するための、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の単独使用又は以前に処方された薬物との併用に関する。
【００７５】
本明細書に記載の方法は、以下：右室収縮期圧上昇、右室肥大、以前の非筋性化血管での肺血管新規筋性化及びそれら周縁における増強、肺血管欠損、肺血管新生内膜形成の増強、及び肺血管媒体肥厚の増強の何れかを有する患者における肺高血圧症を治療するために適用可能である。
【００７６】
肺高血圧症に対する治療の有効性又は進歩は、当該技術分野で公知の方法及びパラメータを用いて測定可能である。例えば、ＰＨ状態の間接的尺度としてのＲＶＳＰ及びＰＡＳＰを測定するため、心電図検査が使用可能である。平均ＰＰＡＰ（ＰＡＰｍ）、ＰＡＷＰ、心拍出量及びＰＶＲを測定するため、右心カテーテル法が使用可能である。肺高血圧症は、一般にＰＡＰｍ＞２５ｍｍＨｇと定義される。グループ１のＰＡＨは、時として、ＰＡＰｍ＞２５、ＰＶＲ＞３ＷＵとともにＰＡＷＰ＜１５と定義される。
【００７７】
第ＩＩ相試験では、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリンは、試験の持続期間における６か月間、耐容性を示した（Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  ２０１３  １１９（５）：１０２３−１０３２）。報告された副作用は、発疹、腹部膨満、低ナトリウム血症、ＤＶＴ及び低血圧を含んだ。
【００７８】
この薬剤で達成される高い耐容性、最小毒性及び低量及び副作用の重症度に起因し、肺高血圧症に対する治療及びリスクのある、例えばＢＭＰＲ２の陽性突然変異状態の個体における家族性肺高血圧症の発生の予防としてそれは有用である。肺高血圧症の疾患回復のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリンによる達成は前例がなく、肺高血圧症に対する治療方法としてのその使用がここで示唆される。さらに、エンザスタウリンの有効性は、他のＦＨＩＴ増加剤もまた、かかる治療のために使用可能であることを示す。
【００７９】
ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤は、単独で又はＰＨを治療若しくは予防する他の活性化合物と組み合わせて投与されてもよい。他の活性化合物は、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤と異なる時点で又は同時に投与されてもよく、また特定の実施形態では、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤及び他の活性化合物は、同じ製剤中に、又は同じキット内の別々の製剤として存在してもよい。ＰＨを治療する例示的な他の活性化合物として、例えば、プロスタサイクリン類似体、エンドセリン受容体拮抗剤、ホスホジエステラーゼ−５阻害剤、高用量のカルシウムチャネルブロッカー、抗凝固剤、利尿薬又は抗増殖性薬剤が挙げられる。特定の症例では、他の活性化合物は、例えば、Ｉｓｏｒｄｉｌ（二硝酸イソソルビド）、Ｒｅｖａｔｉｏ（シルデナフィル）、Ｔｒａｃｌｅｅｒ（ボセンタン）、Ｌｅｔａｉｒｉｓ（アンブリセンタン）、Ｆｌｏｌａｎ（エポプロステノール）、Ａｄｃｉｒｃａ（タダラフィル）、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（トレプロスチニル）Ｖｅｎｔａｖｉｓ（イロプロスト）、Ｔｙｖａｓｏ（トレプロスチニル）、Ｄｉｌａｔｒａｔｅ−ＳＲ（二硝酸イソソルビド）、Ｉｓｏｒｄｉｌ  Ｔｉｔｒａｄｏｓｅ（二硝酸イソソルビド）、ＩｓｏＤｉｔｒａｔｅ（二硝酸イソソルビド）又はＩｓｏｃｈｒｏｎ（二硝酸イソソルビド）であってもよい。
【００８０】
ＢＭＰＲ２シグナル伝達は、ＦＰＡＨ患者において冒されていない突然変異キャリアと比べて著しく障害され（２９、４２、４３）、ｉ）ＢＭＰＲ２発現又はシグナル伝達の閾値であって、それ未満でＰＡＨが発生するもの、ｉｉ）ＢＭＰＲ２修飾因子の存在、又はｉｉｉ）ＰＡＨの病態形成に寄与するさらなる経路、が示唆される。
【００８１】
我々は、新規なＢＭＰＲ２モディファイヤー遺伝子として、２２，０００を超える遺伝子の大規模ｓｉＲＮＡ  ＨＴＳにおいてＦＨＩＴ及びＬＣＫを同定した。ＰＡＨにおける臨床的重要性が高いことを確認するため、我々は、すべてのＰＡＨの病因を含むＰＡＨトランスクリプトームデータベースの新規なマルチコホートの多重組織分析において両遺伝子の遺伝子発現を交差検証し、ＦＨＩＴがすべてのデータセット内で一貫して著しく下方制御されることを確認した。ＬＣＫの下方制御がより変動的であったことから、我々は主に、この試験においてＰＡＨにおけるＦＨＩＴの役割を理解することを重視した。ＦＨＩＴは、ＰＡＨ患者における広範な遺伝子発現のための有効な代替物と考えられる、ＰＢＭＣにおいて最も一貫して下方制御された（３５、４２、４４、４５、４６）。我々は、ヒトＰＡＨリンパ球、ＰＡＥＣ及び肺組織の各々におけるＦＨＩＴの発現低下に関する我々の知見を確認した。
【００８２】
我々は、ＦＨＩＴが、ＰＡＨの発生についての多重ヒット理論に合致するＢＭＰＲ２突然変異を有する傾向が高い個体におけるＰＡＨの浸透度の可変性に寄与するモディファイヤー遺伝子であることを提起する。それを支持して、２０％（１）というＰＡＨにおけるＢＭＰＲ２突然変異の低い浸透度は、同様にわずか２０〜４５％の浸透度（４７）を有するＢＲＣＡ１突然変異による乳がんの遺伝的素因に匹敵する。ＦＨＩＴは、孤発性乳がんにおける疾患感作物質（ｄｉｓｅａｓｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ）として役立ち、ここではＢＲＣＡ１及びＦＨＩＴの１つの対立遺伝子欠損がより侵襲性の高い表現型を伴う予後不良をもたらした（４７）。同様に、肺がんにおけるＦＨＩＴ及びｐ５３の同時欠損は、増殖促進経路を調節不全にすることにより、侵襲性肺がんにおける素因となる（４８）。ＦＨＩＴの減少は、必要条件であったが、Ｆｈｉｔ−／−マウスにおけるゲノム不安定性の増加に合致して（５０）、インビトロで発がん性（ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｏｕｓ）表現型を誘導するのに十分ではなかった（４９）。
【００８３】
我々が異なるＰＡＨの病因を通じてＦＨＩＴの発現低下を測定したと仮定すれば、我々はさらに、低いＦＨＩＴレベルがまた、非家族性ＰＡＨ患者において観察された低レベルのＢＭＰＲ２に寄与するかもしれないことを提起する。ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現低下の機構は未知であり、さらなる研究を保証する。ＦＨＩＴのエピジェネティックサイレンシング又はヘテロ接合性欠損が、脆弱部位ＦＲＡ３Ｂ上のその位置が原因で生じることがあり（１３）、ここでは一般に低酸素又は発癌物質、例えばタバコ煙への曝露後に鎖破損が現れる（５１〜５３）。健常成人におけるＦＨＩＴ発現のＦＲＡ３Ｂ部位破損からの非依存性が報告されたにもかかわらず（５４）、突然変異原感受性の増加とそれに付随する可能性があるｐ５３を通じてのＤＮＡ損傷修復系における異常（５５）が、ＰＡＨ患者がＦＨＩＴの減少に至る素因になることがある。或いは、肺がんなどの悪性腫瘍において認められる（５９〜６３）ＦＨＩＴ又はそのプロモーターの過剰メチル化（５６〜５８）もまた、ＰＡＨにおける低いＦＨＩＴの発現を理由づけることがある。
【００８４】
我々は、ＦＨＩＴがＢＭＰＲ２及びＩｄ１の上流制御因子であり、且つ以前にＦＨＩＴの発現を増強することが示された薬剤のエンザスタウリン（６４）が、ＰＡＥＣにおいてＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の発現を増強することを確認した。ＦＨＩＴがＢＭＰＲ２シグナル伝達をいかに調節することがあるかを機構的に理解するため、我々は選択されたＢＭＰＲ２制御性マイクロＲＮＡの発現を評価した。ｍｉＲ１７−５とｍｉＲ１００の双方は、血管細胞（３０、６５）とともに非血管細胞（３０、６５、６６）においてＢＭＰＲ２を標的にする。ＭｉＲ１７−５は、インターロイキン−６／ＳＴＡＴ３媒介性シグナル伝達を介してＢＭＰＲ２を下方制御する（６７）。ＦＨＩＴの発現低下により、エンザスタウリンによって救済される効果として、ｍｉＲ１７−５が増加する。ＦＨＩＴの発現低下により、末期ＰＡＨ患者のＰＢＭＣ内で増加することが示されたｍｉＲＮＡであるｍｉＲ２７ａが増加する（１１）。ＭｉＲ２７ａの阻害は、それがＰＡＥＣの増殖を低減し（３０）、ＢＭＰＲ２／ＰＰＡＲγを介して肺動脈におけるＰＡＳＭＣの増殖を阻止した（６８）とき、有利であると思われる。ｍｉＲ１７−５のように、エンザスタウリンは、ＦＨＩＴの欠損によって誘導されるｍｉＲ２７ａにおける増加を救済することができた。ｍｉＲ１７−５アンタゴミルを阻害することは、ｓｉＦＨＩＴ誘導性のＢＭＰＲ２抑制を救済したが、それ故、類似の手法が近年示している通り、有望な治療戦略を提示するかもしれない（３２、６９）。しかし、単一のマイクロＲＮＡの標的化が、ヒトＰＡＨにおける血管リモデリングの有意な改善を達成するための行き過ぎた還元論的手法を表す可能性が高いという警告がなされている。
【００８５】
Ｆｈｉｔ−／−マウスは、ＰＡＨの肺の特徴である、小動脈の筋性化及び遠位動脈の希薄化、低酸素後のＰＨの悪化、並びに再酸素負荷後の回復不能を発生させる。その点で、Ｆｈｉｔ−／−マウスは、Ｂｍｐｒ２の内皮欠失を有するマウスに酷似している（７０）。実験全体を通じてのＦｈｉｔの発現低下に加えて、Ｆｈｉｔ−／−マウスは、Ｃ５７マウスと比べて、低酸素下でＢＭＰＲ２レベルの低下を発生したが、それは潜在的には低酸素下でのより重篤なＰＨ表現型を理由づけている。ＢＭＰＲ２レベルが４週間の再酸素負荷後に正常化した一方、Ｆｈｉｔ−／−マウスは依然として完全に回復することができず、これはＦｈｉｔ−／−マウスにおけるより重篤な血管損傷／機能障害からのより緩徐な回復又は回復に必要とされるＦＨＩＴの追加的なＢＭＰＲ２に依存しない役割の何れかにより説明することができた。図１２を参照のこと。
【００８６】
ＰＡＨにおける血管機能障害は、肺血管欠損をもたらす内皮損傷及び早期アポトーシス（１２）、その後のアポトーシス抵抗性血管細胞の増殖（７１）によって開始されると考えられる。疾患発症に先立つことがある（７２）、高められたベースラインＤＮＡ損傷及びインビボでの突然変異原感受性（２６、３４、３５）は、ＥＣの脆弱性にさらに寄与する可能性が高い。ＦＨＩＴの欠損は、突然変異原の損傷に対する感作増強をもたらし、それ故、血管損傷におけるリスク因子及び回復不能をもたらすかもしれない。本明細書で示されるように、ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２のレベル低下は、血管機能障害に関連し；アポトーシス、障害された管形成及びＰＡＥＣ内でのＤＮＡ損傷の増加、並びにＰＡＳＭＣの高められた増殖を引き起こし、それは前がん状態下のＦＨＩＴの欠損時での報告されたＤＮＡ損傷の悪化に合致する（７３）。他方でＢＭＰＲ２シグナル伝達を増強する戦略は（エンザスタウリンを用いることによって示される通り）、これらの血管表現型を改善した（７、１２、７４、７５）。
【００８７】
ＦＨＩＴは、肺がん細胞におけるＥＧＦＲ／Ｓｒｃ／ＥＲＫ／Ｓｌｕｇ調節性の内皮間葉移行（ＥｎｄＭＴ）を抑制することが知られている。したがって、ＦＨＩＴレベルの低下は、ＥｎｄＭＴを促進可能であり、低いＦＨＩＴレベルでのＳＭＣの増殖増強と一緒に、我々が観察しているαＳＭＡ陽性細胞の増加、遠位肺血管の内側肥厚及び外膜肥厚を説明することができた（７６〜７８）。Ｆｈｉｔ−／−マウスで認められた血管希薄化は、ＰＡＨ患者における循環ＥＣの数の増加からも明らかなように、遠位動脈におけるＰＡＥＣアポトーシスの増加、細胞間接着における異常、又はＰＡＥＣの血管損傷部位への遊走を原因としてもよい（７９）。
【００８８】
ＢＭＰＲ２欠損ＰＡＨ患者におけるエンザスタウリンの潜在的使用のための概念実証として、我々はまず、Ｂｍｐｒ２＋／−及び野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるエンザスタウリンを検討し、エンザスタウリン（１５ｍｇ／ｋｇ／日）での２週間の処置により、ＲＶＳＰ、ＲＶＨ及び肺生理における変化による測定として、低酸素誘導性のＰＨが減弱されるという証拠を提供した。潜在的な解釈の妥当性（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｒｅｌｅｖａｎｃｅ）として、我々はマウスにおけるＦＫ５０６処置とエンザスタウリン処置との相加的効果を見出した。
【００８９】
次に我々は、重度の新生内膜形成及びＲＶ不全（８０）を含むヒト疾患を最も忠実に再現するため、マウスモデルや、主に内側肥厚に起因して重度のＰＨを発生するモノクロタリンラットモデル（８１）よりも優れる、重度の肺血管リモデリングを発生するＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素／酸素正常状態ラットモデルにおいて、エンザスタウリンの試験を開始した（４１）。幾つかの試験により、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素／酸素正常状態ラットにおける確立されたＰＨの回復化が示されている（６、１２、３２、８２、８３）。我々は、低用量エンザスタウリン（５ｍｇ／ｋｇ／日）が、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素／酸素正常状態に誘導された肺及びＲＶ損傷を、ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２シグナル伝達を増強することにより、強力に回復に向かわせることを見出した。その知見の解釈は、小さいサンプルサイズに基づくが、限定される。エンザスタウリンががんにおけるＰＫＣβ阻害剤として評価される一方（２１）、我々は、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素／酸素正常状態処置ラットのエンザスタウリン処置後の全肺組織において、ＰＫＣ活性化における有意な低下をそのリン酸化による測定として認めなかった（図１３）。我々は、エンザスタウリンがインビトロで低用量（５〜１５ｕＭ）でＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２を増加させ（図１４）、且つエンザスタウリンが、ＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩＤを調節するその能力に関して他の選択的ＰＫＣβ及び汎用的ＰＫＣ阻害剤と異なるとともに、ＰＡＥＣ機能に対して有効である（図１５、図１６）ことを確認した。これは、以前の臨床試験（８４、８５）、インビボ齧歯類試験（８６）及びインビトロでＰＫＣリン酸化における減少を達成するのに必要とされる用量（８７）と比べての、我々のインビボでの相対的低用量のエンザスタウリン処置に起因するかもしれない。したがって、我々は、我々が認めた血管リモデリング及びＦＨＩＴの発現に対するエンザスタウリンの効果が主にＰＫＣ非依存性であることを提起する。エンザスタウリンがＦＨＩＴをいかにして増加させるかは未知であるが；１つの有望な機構が、ＦＨＩＴリン酸化のＳｃｒ媒介性阻害及びその結果的な分解の予防であってもよい（８８、８９）。
【００９０】
本明細書中のデータは、ＢＭＰＲ２モディファイヤー遺伝子としてのＰＡＨの病態形成におけるＦＨＩＴの役割を示し、ＢＭＰＲ２の調節及びＰＡＨ介入における機会への洞察をもたらす。ＦＨＩＴの発現は、ＰＡＨにおいて一貫して下方制御される。ＦＨＩＴレベルの低下により、ＢＭＰＲ２の発現及びシグナル伝達が低減され、インビボでのＦＨＩＴの欠損は、低酸素に応答した実験的ＰＨの悪化をもたらす。ＦＨＩＴの発現は、エンザスタウリンにより容易に増加されうるが、それはＢｍｐｒ２＋／−マウス及びＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素／酸素正常状態ラットにおける実験的ＰＨの予防及び治療において有利であった。したがって、該データは、ＦＨＩＴがＰＡＨにおけるＢＭＰＲ２シグナル伝達構造の新規な潜在的に必須の成分であり、且つＦＨＩＴレベルの低下がＰＡＨの発生の素因になりうることを示す。これらの試験は、ＰＡＨに対する有利な治療としてエンザスタウリンを用いるための有効な方法を示す。
【実施例】
【００９１】
以下の実施例は、当業者に本発明の実施及び使用方法に関する十分な開示及び説明を提供するために示され；本発明者が彼らの発明として見なす範囲を限定することは意図されない。特に指示がない限り、部分は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏単位であり、圧力は大気圧又はその近傍である。
【００９２】
この試験では、エンザスタウリン（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）及びＳＵＧＥＮ５４１６（Ｔｏｃｒｉｓ，Ｂｒｉｓｔｏｌ，ＵＫ）を用いた。
【００９３】
実施例Ｉ．ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６は慢性低酸素に応答して実験的ＰＡＨを発生する
肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）は、肺動脈圧亢進、右室（ＲＶ）肥大及び最終的には右心不全によって特徴づけられる進行性肺疾患である。骨形態形成受容体ＩＩ型（ＢＭＰＲ２）の突然変異又は異常なＢＭＰＲ２シグナル伝達は、多くのＰＡＨ患者において報告されており、疾患の病態形成に関連する。ＢＭＰＲ２シグナル伝達を別用途で用いられた薬剤を用いて調節することは、この壊滅的疾患を治療するための興味深い方法である。ｓｉＲＮＡハイスループットスクリーンにおいて、我々は新規なＢＭＰＲ２調節遺伝子としての脆弱性ヒスチジン三連構造（ＦＨＩＴ）を以前に発見した。我々は、低下されたＦＨＩＴの発現が内皮細胞機能障害に関連し、ＰＡＨ患者のＰＢＭＣ、ＰＡＥＣ、形質転換リンパ球及び肺組織において低下することを示し、低ＦＨＩＴが肺高血圧症及び肺気腫を促進することが示唆された。インビトロでのＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２の発現は、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤によると、上方制御可能である。
【００９４】
ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６とリタメイト野生型（Ｃ５７）マウスを、正常酸素圧（Ｎｘ、２０％Ｏ２）、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、４週間の低酸素回復（Ｒｅｃ、３週間のＨｘ／４週間のＮｘ）期間を設け、７週間のＮｘ対照と比較した。雄マウスについての結果を図１Ａ〜１Ｋに示す。図１Ａでは、右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（雄、Ｃ５７  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｎｘ  Ｒｅｃ  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｈｘ  ｎ＝４）。図１Ｂでは、右室（ＲＶ）肥大をＲＶの左室及び中隔に対する重量比（ＲＶ／ＬＶ＋Ｓ）により判定する（雄、Ｃ５７  ＮＸ  Ｒｅｃ  ｎ＝３、Ｃ５７  Ｈｘ  ｎ＝６、ＦＨＩＴ−／−Ｎｘ  Ｈｘ  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｒｅｃ  ｎ＝４）。図１Ｃは、肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損であり、図１Ｄでは、それらの完全又は部分的な筋性化（％）をＭＯＶＡＴ染色した肺切片において評価した（雄、Ｃ５７  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｎｘ  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｈｘ  Ｒｅｃ  ｎ＝４）。図１Ｅは、代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。矢印は血管位置を示す。図１Ｆは、Ｎｘ  Ｃ５７及びＦＨＩＴ−／−マウス（ｎ＝２）からのアガロース膨張した全葉の代表的な深部組織イメージングである。図１Ｇは、ａＳＭＡ及びａｖＷＦ抗体での肺血管の代表的なＩＦ染色である。図１Ｈは、Ｐアクチンハウスキーピング対照に正規化した、肺組織内でのＦＨＩＴ（図１Ｉ）及びＢＭＰＲ２（図１Ｊ）タンパク質発現の代表的なイムノブロット及び相対濃度測定分析である（雄、Ｃ５７  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｎｘ  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｈｘ  ｎ＝５、ＦＨＩＴ−／−Ｒｅｃ  ｎ＝４）。図１Ｋは、Ｐアクチンハウスキーピング対照に正規化した、肺組織内でのＰＫＣ及びＰｈｏｓｐｈｏ  ＰＫＣタンパク質発現の代表的なイムノブロットである（雄、Ｃ５７  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｎｘ  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｈｘ  ｎ＝５、ＦＨＩＴ−／−Ｒｅｃ  ｎ＝４）。Ｎｘ対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、Ｃ５７対照に対して＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１、二元配置分散分析、ターキーの検定後。
【００９５】
雌マウスにおける結果を図２Ａ〜２Ｆに示す。ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６とリタメイト野生型（Ｃ５７）マウスを、正常酸素圧（Ｎｘ、２０％Ｏ２）、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、４週間の低酸素回復（Ｒｅｃ、３週間のＨｘ／４週間のＮｘ）期間を設け、７週間のＮｘ対照と比較した。図２Ａでは、右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（雌）。図２Ｂでは、右室（ＲＶ）肥大を、ＲＶの左室及び中隔に対する重量比（ＲＶ／ＬＶ＋Ｓ）により示す（雌）。図２Ｃは、肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損であり、図２Ｄでは、それらの完全又は部分的な筋性化（％）をＭＯＶＡＴ染色した肺切片において評価した（雌）。図２Ｅは、血管欠損を表す代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。矢印は血管位置を示す。図２Ｆは、血管構造を表す代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。矢印は血管位置を示す。Ｎｘ対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、Ｃ５７対照に対して＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１、二元配置分散分析、ターキーの検定後。
【００９６】
雄及び雌ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスが、低酸素に対する慢性曝露後、実験的ＰＡＨを発生した。つまり、ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６とリタメイト野生型（Ｃ５７）マウスを、正常酸素圧（Ｎｘ、２０％Ｏ２）、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、４週間の低酸素回復（Ｒｅｃ、３週間のＨｘ／４週間のＮｘ）期間を設け、７週間のＮｘ対照と比較した。右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）は、肺動脈カテーテル法により測定し、雄において低酸素に応答して増加し（図１Ａ）、雌において既にベースラインであること（図２Ａ）が見出された。両群において、酸素正常状態への回復時、上昇したＲＶＳＰレベルが維持された。同様に、右室（ＲＶ）肥大が、雄における低酸素状態（図１Ｂ）及び雌における酸素正常状態と低酸素状態の双方（図２Ｂ）で、ＲＶの左室及び中隔に対する重量比（ＲＶ／ＬＶ＋Ｓ）の増加により示された。両方の場合に、酸素正常状態への回復時、増加したＲＶ／ＬＶ＋Ｓ比が維持された。
【００９７】
肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損の増加（図１Ｃ、２Ｃ、２Ｅ）並びにそれらの完全又は部分的な筋性化（％）（図１Ｄ、１Ｆ〜Ｇ、２Ｄ、２Ｆ）が、すべての試験条件全体を通じて見出された。
【００９８】
ＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２、ＰＫＣ及びリン酸化ＰＫＣのタンパク質レベルについて試験するためのウエスタンブロットにより、ＦＨＩＴ−／−動物におけるＦＨＩＴレベルの低下と同時に、低酸素下でのＢＭＰＲ２レベルの低下が確認された。しかし、総ＰＫＣレベルにおける変化又はＰＫＣのリン酸化の不在が検出され、ＦＨＩＴがＰＫＣ又はＰＫＣのリン酸化を調節しないことが示唆された。
【００９９】
この実験は、ＦＨＩＴが肺高血圧症及び肺気腫の発生における重要な分子であり、且つその効果がＰＫＣレベル及びＰＫＣのリン酸化状態に依存しないことを示す。
【０１００】
実施例ＩＩ．エンザスタウリンはＣ５７ＢＬ／６及びＢＭＰＲ２＋／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する
大部分の家族性ＰＡＨ患者は、ＢＭＰＲ２突然変異を有する。しかし、ＢＭＰＲ２突然変異の存在は、専らＰＡＨの発生の素因となるが、単独ではそれを引き起こすことがなく、該疾患の発症に寄与する第２の要素が存在してもよいことが示唆される。ＦＨＩＴがストレス要因、例えば低酸素やタバコ煙に応答して容易に失われる場合、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＭＰＲ２欠損（ＢＭＰＲ２＋／−）Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性のＰＡＨの発生が、ＦＨＩＴ増加剤としてのＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンの使用により予防される可能性があることが提起される。
【０１０１】
ＢＭＰＲ２＋／−マウス及びＣ５７対照を慢性低酸素に３週間曝露し、ＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤を５ｍｇ／ｋｇで浸透圧ポンプにより毎日投与した。右心室（ＲＶ）収縮期圧を右頸静脈カテーテル法により測定し、ＲＶ肥大をＲＶの左室＋中隔に対する重量比により評価した。肺血管の血管欠損及び筋性化をＭＯＶＡＴペンタクローム染色により可視化した。この実験においては、雄野生型及びＢＭＰＲ２＋／−Ｃ５７ＢＬ／６（Ｃ５７）マウスを、正常酸素圧（Ｎｘ、２０％Ｏ２）及び低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、Ａｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプモデル２００６による５ｍｇ／ｋｇのエンザスタウリンの毎日投与の存在下又は不在下で処置した。データを図３Ａ〜３Ｆに提示する。図３Ａでは、右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｎｘ対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、一元配置分散分析、シダックの検定後）。図３Ｂでは、右室（ＲＶ）肥大がＲＶの左室及び中隔に対する重量比により示す（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、媒体対照に対して＃ｐ＜０．０５、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図３Ｃは、肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損であり、図３Ｄでは、それらの完全又は部分的な筋性化（％）をＭＯＶＡＴ染色した肺切片において評価した（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｃ５７対照に対して＊ｐ＜０．０５、媒体対照に対して＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図３Ｅは、血管欠損を表す代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。矢印は血管位置を示す。図３Ｆは、血管構造を表す代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。矢印は血管位置を示す。
【０１０２】
ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンは、化合物の記述されたＫｉよりもはるかに高い高用量で、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。つまり、雄野生型及びＢＭＰＲ２＋／−Ｃ５７ＢＬ／６（Ｃ５７）マウスを、正常酸素圧（Ｎｘ、２０％Ｏ２）及び低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、Ａｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプモデル２００６による５ｍｇ／ｋｇのＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンの毎日投与の存在下又は不在下で処置した。ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンは、低酸素媒体対照と比べて、上昇した右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）レベルの部分的低下を誘導し（図３Ａ）、右室（ＲＶ）肥大における実質的減少が、ＲＶの左室及び中隔に対する重量比によって示すように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスと低酸素下で収容したＢＭＰＲ２＋／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスの双方において認められた（図３Ｂ）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスとＢＭＰＲ２＋／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスの双方において、肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損が、それらの完全又は部分的な筋性化（図３Ｄ、３Ｆ）と同様、ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンによる処置により有意に寛解された（図３Ｃ、３Ｅ）。
【０１０３】
ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンは、高用量で血管欠損の予防及び血管筋性化の抑止を通じて肺高血圧症の発生を予防する。ＢＭＰＲ２のレベルが低下したマウスでは、ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリン処置は、低酸素に応答した肺高血圧症の発生を予防するための有効な戦略であった。治療効果を得るのに必要とされる高用量は、多くの異なる分子標的の非特異的標的化が高用量でなされることに起因すると考えられる。
【０１０４】
実施例ＩＩＩ．エンザスタウリンはＳｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットにおいて実験的ＰＡＨを回復に向かわせる
Ｓｕｇｅｎ５４１６のラットへの投与とその後の慢性低酸素へのそれらの曝露の結果、不可逆的な肺血管リモデリング及び右心室収縮期圧の上昇、並びにＲＶ肥大がもたらされる。したがって、このモデルは、インビボでの実験的肺高血圧症及び肺気腫の評価用に選択されたモデルである。
【０１０５】
雄Ｓａｓｃｏスプラーグドーリーラットにおいて、２０ｍｇ／ｋｇ体重のＳＵ５４１６の皮下注射により実験的ＰＡＨを誘導した。動物は、５ｍｇ／ｋｇ体重のＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤又は媒体対照の経口経管栄養による毎日投与を経ながら、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、次いで酸素正常状態下（Ｎｘ、２０％Ｏ２）で５週の期間を設けた。心エコーを実施し、ＲＶ肥大及び駆出分画の発生について評価した。右心室（ＲＶ）収縮期圧を右頸静脈カテーテル法により測定し、ＲＶ肥大をＲＶの左室＋中隔に対する重量比により評価した。肺血管の血管欠損及び筋性化をＭＯＶＡＴペンタクローム染色により可視化した。データを図４Ａ〜４Ｆに提示する。図４Ａでは、右心室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｎｘ対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、一元配置分散分析、シダックの検定後）。図４Ｂでは、右室（ＲＶ）肥大を、ＲＶの左室及び中隔に対する重量比により示す（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、媒体対照に対して＃ｐ＜０．０５、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図４Ｃは、肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損であり、図４Ｄでは、それらの完全又は部分的な筋性化（％）を、ＭＯＶＡＴ染色した肺切片において評価した（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｃ５７対照に対して＊ｐ＜０．０５、媒体対照に対して＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図４Ｅでは、左室駆出分画は、３週間のエンザスタウリンによる処置の前と後での心臓の構造及び機能の心エコー評価を通じて算出した。図４Ｆは、代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。
【０１０６】
エンザスタウリンは、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットにおいて、血管閉塞、心線維症を回復に向かわせ、心拍出量を改善する。つまり、雄Ｓａｓｃｏスプラーグドーリーラットにおいて、２０ｍｇ／ｋｇ体重のＳＵ５４１６の皮下注射により実験的ＰＡＨを誘導した。動物は、５ｍｇ／ｋｇ体重のＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリン又は媒体対照の経口経管栄養による毎日投与を経ながら、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、次いで酸素正常状態下（Ｎｘ、２０％Ｏ２）で５週の期間を設けた。右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）（図４Ａ）及び右室肥大（図４Ｂ）は、実験的肺動脈高血圧症を有するＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリン処置ラットにおいて、実験的ＰＡＨを有する媒体処置対照よりも低かった。
【０１０７】
肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損（図４Ｃ）並びにそれらの完全又は部分的なリモデリングが、ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンにより実質的且つ有意に回復に向かった（図４Ｄ、４Ｆ）。これは、ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンによる処置後の心エコーによって算出したＬＶＥＦ（％）の改善に合致した一方で、実験的肺高血圧症及び肺気腫を有する媒体処置対照における心機能は大幅に劣化した。
【０１０８】
ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンにより、Ｓｕｇｅｎ５４１６／低酸素ラットモデルにおける内皮リモデリング及び実験的ＰＡＨが回復に向かい、哺乳類におけるＰＨに対する強力な治療戦略としてのその使用が示唆された。治療効果を得るのに必要とされる高用量は、多くの異なる分子標的の非特異的標的化が高用量でなされることに起因すると考えられる。
【０１０９】
実施例ＩＶ．ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンは、肺高血圧症を回復に向かわせるのにＦＨＩＴを必要とするが、ＰＫＣを必要としない
ＧＡＰＤＨに正規化したＦＨＩＴのｍＲＮＡ発現を、１５μＭのＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンの存在下又は不在下で２４時間インキュベートした、ｓｉＦＨＩＴ又は非特異的対照（Ｎｔｓｉ）プールの４つのｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＰＡＥＣにおいて評価した。ＦＨＩＴホモ接合性（−／−）及び野生型Ｃ５７マウスは、酸素正常状態又は慢性低酸素に３週間曝露しており、それは３週間の慢性低酸素への曝露、及び５ｍｇ／ｋｇのＦＨＩＴ増加剤エンザスタウリン又は他のＦＨＩＴ増加剤の浸透圧ポンプを介した毎日投与の存在下又は不在下である。実験的ＰＡＨは、右頸静脈カテーテル法を通じた右心室（ＲＶ）収縮期圧測定に基づいて評価することになり、ＲＶ肥大は、ＲＶの左室＋中隔に対する重量比により評価した。肺血管の血管欠損及び筋性化は、ＭＯＶＡＴペンタクローム染色又はαＳＭＡ及びαｖＷＦ抗体によるＩＦ染色により可視化することになる。
【０１１０】
結果を図５に示す。Ａ．１５μＭのＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンの存在下又は不在下で２４時間インキュベートした、ｓｉＦＨＩＴ又は非特異的対照（Ｎｔｓｉ）プールの４つのｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＰＡＥＣにおける、ＧＡＰＤＨに正規化したＦＨＩＴの相対的ｍＲＮＡ発現（ｑＰＣＲ、Ａｍａｘａヌクレオフェクション、ｔ＝４８時間、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差）。Ｂ．ＦＨＩＴとＰＫＣとの間の記述された関係の独創性経路分析。Ｃ．ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６  ＦＨＩＴ−／−マウスにおける肺高血圧症の発生から保護することがなく、ＦＨＩＴレベルを上昇させない一方で、ＰＫＣレベルを有効に下方制御する。
【０１１１】
ＦＨＩＴが欠損したＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ  ｍＲＮＡの発現は、ＦＨＩＴ増強化学物質エンザスタウリンが、ＦＨＩＴの発現を強力に増強するものの、一旦ｍＲＮＡがｓｉＲＮＡにより抑制されると、ＰＡＥＣ  ＦＨＩＴレベルに影響を与えることができないことを示した（図５Ａ）。
【０１１２】
独創性経路分析ツールを用いた公知のタンパク質相互作用の経路分析により、ＦＨＩＴがＰＫＣと相互作用すると考えられないが、ＰＫＣと独立に、別々のシグナル伝達経路に関与することが示された。
【０１１３】
ＦＨＩＴは、失われると、壊滅的な肺高血圧症表現型の発生をもたらす、決定的な高血圧抑制遺伝子である。したがって、ＦＨＩＴの発現を増強する化学物質又は作用剤、例えばエンザスタウリンは、哺乳類における肺高血圧症及び肺気腫の予防及び治療において有効な治療戦略を提供することが期待される。
【０１１４】
実施例Ｖ．ハイスループット（ＨＴＳ）ｓｉＲＮＡスクリーン
２５０ｐｍのＢＭＰ４の存在下又は不在下で処置したＣ２Ｃ１２マウス筋芽細胞腫細胞株におけるＩｄ１−ＢＲＥルシフェラーゼレポーターアッセイを用いた＞２２，０００遺伝子のハイスループットｓｉＲＮＡスクリーンを、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒにて以前に記載されたように実施した（１２）。つまり、Ｃ２Ｃ１２筋芽細胞腫細胞は、レポーター細胞株としてルシフェラーゼに連結されたＢＲＥ−Ｉｄ１を安定にトランスフェクトし（Ｅ１）、７２×３８４ウェルのｓｉＲＮＡプレート上でスクリーニングした。トランスフェクション条件は、刺激としてＢＭＰ４、対照としてｓｉＢＭＰＲ２及びｓｉＴｏｘ、トランスフェクション試薬としてＤｈａｒｍａＦｅｃｔ３及びｓｉＲＮＡにおける至適濃度（２５ｎＭ）及び細胞数／ウェル（１５００）を用いて最適化した。標的遺伝子は、Ｉｄ１発現をｓｉＢＭＰＲ２と同等の≦６０％に減少させた一方で、≧７０％の一般的な細胞生存度を維持し、細胞死応答遺伝子を排除した。得られた５７９の遺伝子の内、非特異的遺伝子、例えば、偽遺伝子、ＲＮＡポリメラーゼサブユニット、ＲＮＡスプライシング、輸送因子及びリボソーム単位を二次スクリーニング手法にて排除し、９６の遺伝子を得て、それらを標的特異的なｓｉＲＮＡプールにより検証した。ヒットをＩｄ１発現における≦６０％の減少と規定するとともに、より厳密な細胞生存度基準を少なくとも２つの個別ｓｉＲＮＡで≧８０％と規定した。これにより、７４の遺伝子候補が得られ、それらを下記に検討する新規なメタ分析手法を用いて交差検証した。その過程及び結果を図６にまとめる。
【０１１５】
動物モデル。Ｆｈｉｔホモ接合性（−／−）マウスを、Ｋａｙ  Ｆ．Ｈｕｅｂｎｅｒ（オハイオ大学（Ｏｈｉｏ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ））から入手した。Ｂｍｐｒ２＋／−マウスは、Ｍａｒｌｅｎｅ  Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ（スタンフォード大学（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ））から贈呈を受けた。成体野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウス、Ｂｍｐｒ２＋／−又はＦｈｉｔ−／−マウス（８〜１０週齢）を慢性低酸素下（１０％Ｏ２）で３週間収容し、次いで酸素正常状態下（２１％Ｏ２）で４週間の回復期間を設けた。Ｂｍｐｒ２＋／−及びＦｈｉｔ−／−マウスとリタメイトを、試験の持続時間にわたり、ミニ浸透圧ポンプ投与として、一日量のエンザスタウリン（１５及び５ｍｇ／ｋｇ／日）又は媒体で処置した。成体スプラーグドーリーラット（８週齢、１８０〜２２０ｇ）において、実験的ＰＨの発生が、以前に記載された通り（１２）、ＶＥＧＦＲ−２阻害剤ＳＵＧＥＮ５４１６（２０ｍｇ／ｋｇ体重）の皮下投与、次いで慢性低酸素（１０％Ｏ２）への３週間と酸素正常状態（２１％Ｏ２）への５週間の曝露を通じて誘導された。ＳｕＨｘラットとリタメイトは、経口経管栄養を通じた投与として、一日量のエンザスタウリン（５ｍｇ／ｋｇ体重）又は媒体で３週間処置した。右心室（ＲＶ）収縮期圧を、右頸静脈カテーテル法を通じて測定し、ＲＶ肥大（ＲＶＨ）を、ＲＶの左室及び中隔（ＬＶ＋Ｓ）に対する重量比により評価した。
【０１１６】
すべての動物実験は、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより認可された。ヒト組織又は誘導された初代細胞を含む実験は、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ及びＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｖｅ  Ｐａｎｅｌ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｕｂｊｅｃｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈにより認可された。
【０１１７】
ヒトＰＡＨ患者からの細胞の単離。ＩＰＡＨ及びＦＰＡＨ患者の肺移植時のＰＡＥＣは、以前に記載された通り（１２）、ＣＤ３１−ＡＢプルダウンビーズを用いて消化された全肺組織から入手した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、フィコールパック密度勾配遠心分離を通じて、陰性ＢＭＰＲ２突然変異状態のＰＡＨ患者又は健常ボランティアから単離した（１０）。ＢＭＰＲ２ｍｕｔ＋  ＰＡＨ患者及び彼らの非罹患親類からのリンパ球を、以前に記載された通り（２３）、勾配遠心分離とその後のウイルス形質転換を用いて全血から単離した。
【０１１８】
組織像及びＩＣＣ。マウス及びラット肺組織をパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中に４８時間固定し、ＥｔＯＨ中に保存した。パラフィン包埋した肺スライドをＭｏｖａｔペンタクローム染色（Ｈｉｓｔｏ−Ｔｅｃ，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）で染色し、ここで肺血管の血管欠損及び筋性化を光学顕微鏡により可視化した。肺切片に対する蛍光免疫細胞化学を、抗原賦活化後、フォン・ヴィルブランド因子（ｖＷＦ）及びα平滑筋アクチン（αＳＭＡ）に対する一次抗体を用いて脱パラフィン化（Ｈｉｓｔｏｃｌｅａｒ  ＩＩ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）組織切片上で実施した。ヒトＰＡＨ肺組織を、抗ＢＭＰＲ２（Ａｂ１３０２０６，Ａｂｃａｍ）及び抗ＦＨＩＴ（Ｋａｙ  Ｆ．Ｈｕｅｂｎｅｒ，Ｏｈｉｏ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの寄贈）に対して染色した。線維化形質転換を可視化するため、ＰＦＡ固定パラフィン包埋心臓組織をトリクローム染色で染色した（Ｈｉｓｔｏ−Ｔｅｃ，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）。
【０１１９】
細胞培養。ヒトＰＡＥＣ（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）又はヒトＰＡＳＭＣ（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）を各々、市販のＥＣ（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）又はＳＭＣ（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）培地中、ゼラチンコーティングしたディッシュ内で単層として増殖させた。細胞を１：３の比で継代し、３〜８継代の実験用に用いた。形質転換リンパ球（即ちリンパ芽球）を、１０〜１５％ＦＢＳを有するＲＰＭＩ１６４０中で培養した。
【０１２０】
ヒトＰＡＨ患者からの細胞の単離。ＩＰＡＨ及びＦＰＡＨ患者の肺移植時のＰＡＥＣを、以前に記載された通り（Ｅ１）、ＣＤ３１−ＡＢプルダウンビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、消化した全肺組織から入手した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、以前に記載された通り（Ｅ８）、フィコールパック密度勾配遠心分離、デキストラン沈降及びＲＢＣ溶解を通じて、陰性ＢＭＰＲ２突然変異状態の末期ＰＡＨ患者又は健常ボランティアの末梢血から単離した。ＢＭＰＲ２ｍｕｔ＋  ＰＡＨ患者及び彼らの非罹患親類からのリンパ球を、以前に記載された通り（Ｅ１）、勾配遠心分離とその後のウイルス形質転換を用いて全血から単離した。
【０１２１】
ＲＮＡ干渉。ＦＨＩＴの発現を、ＰＡ内皮細胞（ＰＡＥＣ）内のＲＮＡｉにより調節した。ＢＭＰＲ２、ＦＨＩＴ、ＬＣＫ又は非特異的対照プールにおける４つのｓｉＲＮＡのプール（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）を、ＲＮＡｉ  Ｍａｘキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＰＡＥＣに４８時間トランスフェクトした。ｍＲＮＡノックダウン効率をｑＰＣＲにより測定した。
【０１２２】
ｍＲＮＡ及びｍｉＲの発現を検出するためのｑＰＣＲアッセイ。ｍＲＮＡにおいては、ＲＮＡｅａｓｙ  Ｐｌｕｓキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、全ＲＮＡを全肺組織から抽出し、製造業者の使用説明書に従い、ランダムプライマーとともにＴａｑｍａｎ  ｃＤＮＡ逆転写キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、ｃＤＮＡに逆転写した。ｍｉＲにおいては、Ｔａｑｍａｎ  ｍｉＲＮＡ  ＡＢＣ精製キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて全ｍｉＲを、全肺組織から単離し、特異的プライマー及びＴａｑｍａｎマイクロＲＮＡ逆転写キット（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて逆転写した。ｍＲＮＡ及びｍｉＲの発現レベルを、標的に対するＴａｑｍａｎプライマー／プローブセットを用いて定量化し、ハウスキーピング対照に正規化した（ｍＲＮＡ：ＧＡＰＤＨ；ｍｉＲ：ＲＮＵ４８）。
【０１２３】
ウエスタンブロッティング。ウエスタンブロッティングを以前に記載されたように実施した（Ｅ１）。ＢＭＰＲ２に対する抗体（Ａｂ１３０２０６、モノクローナル、Ａｂｃａｍ）、ＦＨＩＴに対する抗体（ＮＢＰＩ−８９０６１、ポリクローナル、Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ；Ａｂ１８０８０６、ポリクローナル、Ａｂｃａｍ）、ＰＫＣに対する抗体（Ａｂ７６０１６、モノクローナル、Ａｂｃａｍ）、Ｐ−ＰＫＣに対する抗体（Ａｂ３２３７６、［Ｙ１２４］、モノクローナル、Ａｂｃａｍ）、ＬＣＫに対する抗体（ＮＢＰＩ−１９８４０、ポリクローナル、Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、ｐ３８に対する抗体（Ａｂ３１８２８、モノクローナル、Ａｂｃａｍ）、Ｉｄ１に対する抗体（ｓｃ１３３１０４、モノクローナル、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、Ｓｍａｄ１に対する抗体（＃９７４３、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、Ｐ−Ｓｍａｄ１／５／９に対する抗体（＃１３８２０Ｐ、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）及びβアクチンに対する抗体（Ｓｃ４７７７８、モノクローナル、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）を用いた。
【０１２４】
アポトーシス、ＤＮＡ損傷、ＭＴＴ増殖及びマトリゲルチューブ形成アッセイ。製造業者の使用説明書に従い、また以前に記載された通り（Ｅ１，Ｅ９）、アッセイを実施した。
【０１２５】
深部組織イメージング。アガロース膨張肺の深部組織イメージングを、以前に記載された通り（Ｅ１０，Ｅ１１）、Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｏｒｃａ  Ｆｌａｓｈ  ４．０ＬＴカメラを用いてＬｅｉｃａ  Ｍ２０５ＦＡ蛍光実体顕微鏡上で実施した。アガロース膨張肺の動脈筋性化を左葉二次外側気道分岐Ｌ４（Ｌ：Ｌ４）を伴う動脈において評価し（Ｅ１０）、その二分岐点前の分岐世代１と名付けた。さらに、同様に二分岐又はドメイン分岐によって生成された子孫動脈分岐世代を分岐世代２〜１２と名付けた。世代数における増加は、Ｆｈｉｔ−／−マウスにおける世代６〜１０において明白であった一方で、野生型マウスは、筋性化血管の世代７を越えなかった。
【０１２６】
統計分析。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン７．００、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を用いて、データを分析した。統計学的検定は、適宜実施し、以下に示す通り、スチューデントｔ検定、一元配置分散分析及び二元配置分散分析、その後の適切な事後検定を含んだ。差異は、以下：ｐ＜０．０５（＊／＃）、ｐ＜０．０１（＊＊／＃＃）、ｐ＜０．００１（＊＊＊／＃＃＃）、ｐ＜０．０００１（＊＊＊＊／＃＃＃＃）として統計学的に有意であると見なした。
【０１２７】
実施例ＶＩ．公的に利用可能なＰＡＨ遺伝子発現データのメタ分析
ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｍｎｉｂｕｓ（ＧＥＯ）からの７つの公的に利用可能なヒトＰＡＨトランスクリプトームデータセット（肺：ＧＳＥ１５１９７、ＧＳＥ２４９８８、ＧＳＥ４８１４９；ＰＢＭＣ：ＧＳＥ１９６１７、ＧＳＥ２２３５６、ＧＳＥ３３４６３、ＧＳＥ７０３）内のマウス筋芽細胞腫のＨＴＳから得られた７４のＢＭＰＲ２モディファイヤー遺伝子候補のリストを交差検証するため、新規な統合メタ分析アルゴリズム及び検証コホートを用いた。すべてのサンプルは、国立医学図書館（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）（ＮＬＭ）Ｕｎｉｔｅｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｎｇｕａｇｅ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＵＭＬＳ）にリンクされた標準化された語彙、Ｇｅｎｅ  Ｏｎｔｏｌｏｇｙ、ＳＮＯＭＥＤ−ＣＴ、ＩＣＤ−９、及びＩＣＤ−１０を含む親語彙、並びに百を超える他の一般に用いられる標準化された語彙を用いて一律に精選した。７つのＰＡＨデータセットは、ＰＡＨ肺（１５３サンプル）又はＰＢＭＣ（１３８サンプル）の何れかからの２９１のサンプルを含み、それらを用いてＰＡＨデータセットを発生させた。我々は、以前に記載された通り（Ｅ２〜Ｅ５）、各データセットをダウンロードし、手作業で精選した。つまり、以前に公表された方法を用いて（Ｅ６）、データ自体をｌｏｇ２に正規化及び変換した。我々は、以前に記載された通り（Ｅ７）、（ｉ）倍数変化の組み合わせと（ｉｉ）Ｐ値の組み合わせという２つの異なるメタ分析手法を用いた。（ｉ）特定の偽発見率閾値＜１０％を有し、且つ（ｉｉ）試験の少なくとも７５％において同じ方向に発現される（上方又は下方制御される）、差次的に発現される遺伝子を選択した。不均等なサンプル数に起因するデータ優位性を明らかにするため、我々はメタ分析におけるある時点で１つのデータセットを除去した。
【０１２８】
有望なＢＭＰＲ２モディファイヤー遺伝子がヒトＰＡＨサンプル中で重要であることを保証するため、マウス筋芽細胞腫のＨＴＳからの７４の標的をヒト肺及びＰＢＭＣ  ＰＡＨデータセットにおいて検証した。健常対照対象の可変性を説明し、ヒト疾患に最も関連性があり且つ最も一貫して調節される遺伝子標的を決定するには、二重スクリーニング手法が必要と思われた。
【０１２９】
ＨＴＳ  ｓｉＲＮＡの結果をＰＡＨ遺伝子発現データセットと比較することに加えて、我々は、本質的にＰＡＨシグネチャーに対する逆の遺伝子発現によって特徴づけられる、抗ＰＡＨシグネチャーを予測した。遺伝子発現特性データセットの薬剤としての有効性は、ＰＡＨを治療するのに有利なことがあるＦＤＡ承認薬の同定を可能にする。我々は、生理活性小分子で処置された培養ヒト細胞からの遺伝子発現特性の参照コレクションを統合した。データベースＬＩＮＣＳは、多数の薬剤を多数の細胞株にわたり特性化したものである。ＬＩＮＣＳは、異なる薬剤で処置された培養ヒト細胞の遺伝子発現特性の最大のデータベースである。分析時、Ｌ１０００プラットフォーム上で１８の「ゴールド」細胞株にわたり、ＬＩＮＣＳで２０，４１３の化学的摂動因子（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｅｒｔｕｒｂａｇｅｎｓ）が特性化された（ｗｗｗ．ｌｉｎｃｓｃｌｏｕｄ．ｏｒｇ）。このテクニックを用いて、我々は、エンザスタウリン及びダサチニブがどの遺伝子を標的とするか、またいずれの遺伝子発現特性がＰＡＨシグネチャー又は抗シグネチャーにより類似するかを予測した。
【０１３０】
実施例ＶＩＩ．ＢＭＰＲ２修飾物質のＨＴＳ及びマルチコホートＰＡＨ遺伝子発現アッセイ
「ＢＭＰＲ２モディファイヤー遺伝子」を見出すため、我々は、ＢＭＰＲ２シグナル伝達における読出しとして以前に記載のようなＢＲＥ−Ｉｄ１−Ｌｕｃレポーター細胞株を用いて（１２）、各遺伝子に対する４つのプールされたｓｉＲＮＡとともに、２２，１２４のマウス遺伝子（ＯＲＦ）を含むマウスゲノムワイドｓｉＲＮＡライブラリー（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてＨＴＳを実施した。２ステップスクリーニング手法では、標的遺伝子ｓｉＲＮＡがＩｄ１の発現をｓｉＢＭＰＲ２と同等の≦６０％に減少させた一方で、４つのｓｉＲＮＡで≧７０％又は２つのｓｉＲＮＡで≧８０％の一般的な細胞生存度を各々維持し、細胞死応答遺伝子を除外した。これにより、７４のＢＭＰＲ２−モディファイヤー遺伝子候補が得られ、次にそれらをパブリックドメインから得られたマルチコホートの多重組織ＰＡＨ遺伝子発現データセットと比較し（２４〜２６）、対照に対してＩＰＡＨにおいて差次的に下方制御される遺伝子のサブセットを同定した（図６Ａ）。我々は、ＩＰＡＨ患者における発現が減少し、それにより、ＨＴＳ候補のＢＭＰＲ２のモディファイヤー遺伝子：ＰＢＭＣデータセットからのＩＴＧＡ６、ＦＨＩＴ、ＬＣＫ、ＣＤ７及び肺データセットからのＰＰ１Ｒ１５Ｂ、ＰＰＭ１Ａ、ＧＲＩＮ２Ｂ、ＤＵＳＰ７と重複する、ＰＡＨにおいて潜在的な臨床的重要性がある、８つの候補遺伝子を同定した（図６Ｂ）。ＰＡＨ病態形成に関連するものとして、ＦＨＩＴ及びＬＣＫ（リンパ球に特異的なタンパク質チロシンキナーゼ）が最も有望であると思われた。ＦＨＩＴは、最も一貫して減少し（＞５０％；２−１）、ＰＡＨ病理における一貫した役割として納得されるものであった。ＬＣＫはＰＡＨの病態形成に強い関連性があった。というのは、ＬＣＫは、薬剤誘導性ＰＡＨの誘発が報告されている（２８）、ダサチニブによって阻害されることが知られている（２７）。
【０１３１】
我々はさらに、公的に利用可能なＰＡＨトランスクリプトームのＰＢＭＣデータセットから得られたＰＡＨ遺伝子発現シグネチャーを比較し、無料の抗ＰＡＨシグネチャーを予測し、両者を、ＦＨＩＴを増強することが知られた薬剤であるダサチニブ及びエンザスタウリンという２つの薬剤の遺伝子発現特性と比較した。両薬剤の両特性は、多数の薬剤を多数の細胞株にわたり特性化したＬＩＮＣＳデータベース（ｗｗｗ．ｌｉｎｃｓｃｌｏｕｄ．ｏｒｇ）から得られた。ＦＨＩＴを含有する遺伝子集団では、エンザスタウリン誘導性の遺伝子調節は、ＰＡＨ抗シグネチャーと類似した（図６Ｃ、ボックス）一方で、ダサチニブ誘導性の遺伝子調節は、ＰＡＨシグネチャーと類似した。これは、ＰＡＨ遺伝子発現シグネチャーを再現する薬剤、例えばダサチニブが、ＰＡＨに対して有害なことがある一方で、ＰＡＨシグネチャーを逆にした薬剤、例えばエンザスタウリンが、ＰＡＨの治療にとって有用となることを示唆する。
【０１３２】
実施例ＶＩＩＩ．ＢＭＰＲ２及びそのモディファイヤー遺伝子ＦＨＩＴの下方制御がＰＡＨ細胞及び肺組織において認められ、ＦＰＡＨの疾患浸透度を変更するように思われる
ＦＨＩＴ及びＬＣＫがＰＢＭＣ遺伝子発現データセットにおいて同定されると、我々はまず、ＦＨＩＴがＰＡＨ患者細胞、即ち末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、肺動脈内皮細胞（ＰＡＥＣ）及び形質転換リンパ球、並びに肺組織において一貫して減少するか否かを検討した。
【０１３３】
我々は、ＢＭＰＲ２突然変異を有しないＰＡＨ患者８名からのＰＢＭＣにおけるＢＭＰＲ２、ＦＨＩＴ及びＬＣＫの発現を測定し、３つすべての遺伝子の発現が有意に減少することを確認した（図７Ａ〜Ｃ）。肺移植時に収集したＩＰＡＨ患者肺から単離した微小血管ＥＣ（１２）（表１）は、ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２のｍＲＮＡ発現の間での陽性相関を示した（図７Ｄ）。ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２の免疫組織化学染色では、ＦＰＡＨ及びＩＰＡＨ患者において、ドナー肺と比べて減少した（図７Ｅ、表１、図１７Ａ〜１７Ｂ）。ＢＭＰＲ２突然変異の存在下で予想された通り、ＢＭＰＲ２が強力且つ一律に減少した一方で、ＦＨＩＴにおけるより不規則な減少が新生内膜及び内皮下層に限られ（図１８Ａ〜１８Ｆ、１７Ａ〜１７Ｂ）、血管リモデリングにおけるそれらの遺伝子発現及び潜在的役割に関連した、ＦＨＩＴとＢＭＰＲ２との間での不完全な重複が示唆された。
【０１３４】
次に我々は、ＢＭＰＲ２突然変異を有するＦＰＡＨ患者及び健常な偏性ＢＭＰＲ２キャリアにおけるこれらの遺伝子の発現を判定し、それらがＦＰＡＨにおける疾患浸透度を変更することがあるか否かを評価した。ＢＭＰＲ２突然変異を有する７家族のコホート：ＢＭＰＲ２突然変異を有する患者１０名（Ｐ１〜８）、関連の健常な偏性ＢＭＰＲ２突然変異キャリア１０名（Ｃ１〜８）及び非関連の健常対照を選択した（表１）。以前に記載された（２９）ように抽出した形質転換リンパ球では、ＢＭＰＲ２及びＦＨＩＴ  ｍＲＮＡは、患者において、健常キャリア（５／７の家族）よりも一貫して低く、ＦＨＩＴがＢＭＰＲ２突然変異キャリアにおける疾患浸透度を変更することがあると示唆された（図７Ｆ〜Ｉ、図１９Ｇ〜Ｈ）。しかし、ＢＭＰＲ２及びＦＨＩＴレベルは、家族間で可変であり、男性と女性とで異なり（図７Ｈ〜Ｉ、図１９）、ＰＡＨ病態形成の抑制に要求されるＢＭＰＲ２又はＦＨＩＴの閾値が遺伝的背景及び性別により変化することが示唆された。
【０１３５】
図７Ａ〜７Ｅは、ＰＡＨにおけるＦＨＩＴの発現減弱がＢＭＰＲ２の発現低下と相関したことを示す。図７Ａ〜Ｃは、陰性ＢＭＰＲ２突然変異状態を伴う末期ＰＡＨ患者からのＰＢＭＣにおけるＢＭＰＲ２（図７Ａ）、ＦＨＩＴ（図７Ｂ）及びＬＣＫ（図７Ｃ）のｍＲＮＡ発現のｑＰＣＲ分析を健常対照と比べて表す（対照ｎ＝１２、ＰＡＨ  ｎ＝８、平均±平均値の標準誤差、対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００１、ウエルチｔ検定）。図７Ａ〜７Ｅは、陰性ＢＭＰＲ２突然変異状態を伴う末期ＰＡＨ患者からのＰＢＭＣにおけるｍＲＮＡ発現を健常対照と比べて示す（対照ｎ＝１２、ＰＡＨ  ｎ＝８、平均±平均値の標準誤差、対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．０００１、ウエルチｔ検定）。図７Ｄは、肺移植時のＩＰＡＨ患者のＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２及びＦＨＩＴのｍＲＮＡ発現の相関及び線形回帰分析である（対照ｎ＝６、ＩＰＡＨ  ｎ＝６、ＦＰＡＨ  ｎ＝４、対照ｒ＝−０．７７１４、ＰＡＨ  ｒ＝０．５４１０、ＩＰＡＨ  ｒ＝０．５２１８、スピアマンｒ、患者人口統計については表１Ｂを参照）。図７Ｅは、移植時のＰＡＨ患者及びドナー対照肺組織における代表的な肺の抗ＢＭＰＲ２及び抗ＦＨＩＴ  ＩＨＣ（ＨＲＰ−褐色染色）である（ｎ＝３、患者人口統計については表１Ｃを参照）。図７Ｆ〜７Ｇは、ＦＰＡＨ患者、非罹患ＢＭＰＲ２突然変異キャリア及び健常対照からの形質転換リンパ球におけるＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２発現のｑＰＣＲ分析である（ｎ＝１０、平均±平均値の標準誤差、＊ｐ＜０．０５、一元配置分散分析、ダネットの検定後、患者人口統計については表１Ａを参照）。図７Ｈ〜７Ｉは、選択した家族からの形質転換リンパ球におけるＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２発現のｑＰＣＲ分析である（ｎ＝５、Ｐ＝ＦＰＡＨ患者、Ｃ＝健常な突然変異キャリア、矢印は、ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２が一貫して増加したキャリア（彼らのＦＰＡＨ家族員と比べて）の方を指す、患者人口統計については表１Ａを参照）。
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【０１３６】
実施例ＩＸ．ｍｉＲ１７−５及びｍｉＲ２７−ａはＦＨＩＴ／ＢＭＰＲ２シグナル伝達を負に調節し、エンザスタウリンによって回復される
次に我々は、ＦＨＩＴ及びＬＣＫがＢＭＰＲ２の上流制御因子であることを同定した。ｓｉＲＮＡによるＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ及びＬＣＫのノックダウンにより、ＢＭＰＲ２の発現とその下流シグナル伝達の双方が低減され、それは標的ＩＤ１により測定された（図８Ａ、図８Ｂ）。逆に、ｓｉＢＭＰＲ２は、ＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ及びＬＣＫの発現に影響せず、ＢＭＰＲ２がＦＨＩＴ及びＬＣＫの下流であることが確認された（図８Ｃ、図８Ｄ）。興味深いことに、ｓｉＦＨＩＴはＬＣＫの発現を５０％に低下させ、両モディファイヤー遺伝子の潜在的な相互依存性が示唆された（図８Ｄ）。
【０１３７】
この試験の結果を図８Ａ〜８Ｍに示し、ここでｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるｍＲＮＡ発現及びマイクロＲＮＡプロファイリングは、エンザスタウリンによって会合されうるＦＨＩＴによるＢＭＰＲ２シグナル伝達の調節におけるマイクロＲＮＡのｍｉＲ１７−５及びｍｉＲ２７ａにおける潜在的役割を表す。図８Ａ〜８Ｄは、ｓｉＢＭＰＲ２、ｓｉＦＨＩＴ、ｓｉＬＣＫ又は非特異的対照（Ｎｔｓｉ）プールの４つのｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＰＡＥＣにおけるＧＡＰＤＨに正規化したＢＭＰＲ２（図８Ａ）、Ｉｄ１（図８Ｂ）、ＦＨＩＴ（図８Ｃ）及びＬＣＫ（図８Ｄ）の相対的ｍＲＮＡ発現である（ｑＰＣＲ、Ａｍａｘａヌクレオフェクション、ｔ＝４８時間、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、一元配置分散分析、ターキーの検定後）。図８Ｅ〜８Ｆは、ｓｉＦＨＩＴ、ｓｉＬＣＫ又は非特異的対照（Ｎｔｓｉ）プールの４つのｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＰＡＥＣにおけるＲＮＵ４８に正規化したｍｉＲ１７−５（図８Ｅ）及びｍｉＲ１００（図８Ｆ）の相対的ｍｉＲ発現である（ｑＰＣＲ、ｔ＝トランスフェクション後４８時間、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｎｔｓｉ対照に対する＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、一元配置分散分析、ダネットの検定後）。図８Ｇ〜８Ｉは、１５μＭのエンザスタウリンとともに２４時間インキュベートしたＰＡＥＣにおけるＧＡＰＤＨに正規化したＦＨＩＴ（図８Ｇ）、ＢＭＰＲ２（図８Ｈ）及びＩｄ１（図８Ｉ）の相対的ｍＲＮＡ発現である（ｑＰＣＲ、ｔ＝トランスフェクション後７２時間、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、媒体に対して＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、独立ｔ検定）。図８Ｊは、１５μＭのエンザスタウリンの存在下又は不在下で２４時間処置した、ｓｉＦＨＩＴ又は非特異的対照（Ｎｔｓｉ）プールの４つのｓｉＲＮＡをトランスフェクトしたＰＡＥＣにおけるＧＡＰＤＨに正規化したＦＨＩＴの相対的ｍＲＮＡ発現である（ｑＰＣＲ、ｔ＝トランスフェクション後７２時間、ＲＮＡｉｍａｘ、ｎ＝４、平均±平均値の標準誤差）。図８Ｋ〜８Ｌは、ｓｉＦＨＩＴ又は非特異的対照（Ｎｔｓｉ）プールの４つのｓｉＲＮＡをトランスフェクトした１５μＭのエンザスタウリンの存在下又は不在下で２４時間処置したＰＡＥＣにおけるＲＮＵ４８に正規化したｍｉＲ１７−５（Ｋ）及びｍｉＲ２７ａ（図８Ｌ）の相対的ｍｉＲ発現である（ｑＰＣＲ、ｔ＝トランスフェクション後７２時間、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｎｔｓｉ対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、ダネットの検定後）。図８Ｍは、ＦＨＩＴによるＢＭＰＲ２の提起された調節の図式モデルである。
【０１３８】
ＦＨＩＴ及びＬＣＫレベルがＢＭＰＲ２発現をいかに調節するかは未知である。ｍｉＲＮＡがＰＡＨにおけるＢＭＰＲ２シグナル伝達の調節において主要な役割を担うことが示されていることから（３０、３１）、我々は選択されたマイクロＲＮＡがＦＨＩＴ及びＬＣＫ媒介性のＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２発現の調節を組織化するものか否かを検討した。我々は、ｍｉＲ１７−５及びｍｉＲ１００（双方ともＢＭＰＲ２の直接的制御因子）、及びｍｉＲ２７ａ（基準のＳｍａｄシグナル伝達における読み出し）にフォーカスした（３０、３２）。ＦＨＩＴ  ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡによる減少がｍｉＲ１７−５の発現を増強し（３〜４倍；図８Ｅ、図８Ｋ）、且つｍｉＲ２７−ａの発現を増強したが（４倍；図８Ｌ）、ｍｉＲ１００の発現を増強しなかった（図８Ｇ）。ＬＣＫの欠損は、ｍｉＲ１７−５及びｍｉＲ１００の発現の双方を、各々８倍又は２倍に強力に増強した（図８Ｅ、８Ｆ）。
【０１３９】
エンザスタウリンによる２４時間の処置（１５μＭ）により、ＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の発現が増強された（図８Ｇ〜Ｉ、図２０Ａ〜２０Ｃ）。興味深いことに、エンザスタウリン（１５μＭ）は、ＦＨＩＴ  ｍＲＮＡのノックダウンを救済することができ（ノックダウンから２４時間後の処置、図８Ｊ）、エンザスタウリンがＦＨＩＴの発現を強力に上方制御するという以前の知見が支持された。さらに、エンザスタウリンは、ｓｉＦＨＩＴ媒介性のｍｉＲ１７−５及びｍｉＲ２７ａにおける増加を阻害し（図８Ｋ、８Ｌ）、ＦＨＩＴ及びエンザスタウリンがｍｉＲＮＡ発現を調節することによりＢＭＰＲ２レベルをいかにして制御する可能性があるかについてのいくつかの機構的洞察が得られた（図８Ｍ）。我々はさらに、ｓｉＦＨＩＴに加えて、抗ｍｉＲのトランスフェクションを用いてｍｉＲ１７−５を低減することにより、ＢＭＰＲ２及びＩＤ１の発現が増強されることを示し、ＦＨＩＴ媒介性のＢＭＰＲ２調節が部分的にはｍｉＲ１７−５依存性であることが示唆された（図２１Ａ〜２１Ｄ）。
【０１４０】
実施例Ｘ．エンザスタウリンはＦＨＩＴ／ＢＭＰＲ２シグナル伝達を上方制御し、インビトロでＦＨＩＴ欠損によって誘導される血管機能障害を予防する
ＰＡＨが肺血管の喪失によって特徴づけられると仮定し（３３）、我々は、ＦＨＩＴの発現が、血管形成の阻害、アポトーシスの増加、ＤＮＡ損傷（３４、３５）及びＰＡＥＣにおける細胞増殖にいかに関連するかを検討した。したがって我々は、ＰＡＥＣにおけるＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２の発現低下がＥＣ機能障害を悪化させるか否か、並びにエンザスタウリンによる２４時間の処置が該表現型を救済しうるか否かを評価した。
【０１４１】
この試験の結果を図９Ａ〜９Ｊに示し、それらはエンザスタウリンが、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２上流シグナル伝達分子ＦＨＩＴの発現を増強し、ＦＨＩＴ欠損ＰＡＥＣにおける管形成におけるＰＡＨ特異的な機能的欠損、アポトーシス、ＤＮＡ損傷及び増殖を回復に向かわせることを示す。図９Ａ〜９Ｂは、２４時間の１５μＭのエンザスタウリンによって救済されたｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるマトリゲル管形成アッセイである（ｔ＝トランスフェクション後４８時間、Ａｍａｘａヌクレオフェクション、Ｎｔｓｉ  ４３．３±５．９、ｓｉＢＭＰＲ２  ８．７±１．５、ｓｉＦＨＩＴ  １１．０±２．６管／５フィールドの平均（２０倍）、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｎｔｓｉに対する＊＊＊ｐ＜０．００１、一元配置分散分析、ダネットの検定後、バーは１ｍｍを表す）。図９Ｃは、１５μＭのエンザスタウリンによって救済されたｓｉＢＭＰＲ２及びｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるカスパーゼ３／７発光である（ｔ＝トランスフェクション後４８時間、ＲＮＡｉｍａｘ、カスパーゼ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７アッセイ、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｎｔｓｉに対して＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、非処置対照に対して＃ｐ＜０．０５、＃＃＃＃ｐ＜０．０００１、一元配置分散分析、ダネットの検定後）。図９Ｄ〜Ｅは、２４時間の１０μＭのエンザスタウリンによって救済されたｓｉＢＭＰＲ２及びｓｉＦＨＩＴ  ＰＡＥＣにおけるγＨ２ＡＸ染色である（ｔ＝トランスフェクション後７２時間、Ｄｈａｒｍａｆｅｃｔ、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｎｔｓｉに対して＊＊ｐ＜０．０１、非処置対照に対して＃ｐ＜０．０５、一元配置分散分析、ダネットの検定後）。定量化領域＝自動化ソフトウェアで定量化された核γＨ２ＡＸ染色を示す細胞の％（白色核＝陽性染色、灰色核＝バックグラウンド染色）。図９Ｆは、可変濃度のエンザスタウリンで培養された全細胞数及び％トリパンブルー＋ＰＡＥＣ（ｎ＝３、一元配置分散分析、非処置対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。図９Ｇ〜９Ｈは、エンザスタウリン処置した（０．５〜５０μＭ）、ＰＡＳＭＣ及びＰＡＥＣ各々におけるＭＴＴ増殖アッセイである。（ｎ＝３）。図９Ｉ〜９Ｊは、エンザスタウリン処置した（５μＭ）ｓｉＦＨＩＴ及びｓｉＢＭＰＲ２トランスフェクトＰＡＳＭＣの各々におけるＮｔｓｉ対照と比べてのＭＴＴ増殖アッセイである。（ｎ＝３）。
【０１４２】
マトリゲル管形成アッセイ（１２）において細胞を播種してから６時間後、対照Ｎｔｓｉで処置した細胞と比べて、ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２の欠損がＰＡＥＣの管形成を障害した（図９Ａ、図９Ｂ）。エンザスタウリン処置により、２４時間後、ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２欠損ＰＡＥＣにおける管形成の欠損が、この時点でのＦＨＩＴ発現を増強するその能力に応じて、完全に回復へ向かった（図９Ｊ）。
【０１４３】
累積生存度測定として、我々は、発光カスパーゼ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７アッセイ（３６）を用いてカスパーゼ３／７活性を、また免疫蛍光によるヒストンＨ２ＡＸリン酸化及び共焦点顕微鏡による核領域の染色（％）としての定量化を用いてＤＮＡ損傷を定量化した（３４、３５、３７）。ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２  ｍＲＮＡの減少により、トランスフェクション後４８時間でＰＡＥＣにおけるカスパーゼが活性化された（図９Ｃ）一方で、エンザスタウリンは、ｓｉＢＭＰＲ２及びｓｉＦＨＩＴ誘導性のＰＡＥＣのアポトーシスを減少させた。ＦＨＩＴレベルの低下により、４８時間後、ＤＮＡ損傷がＮｔｓｉ対照に対して約４倍増加し（図９Ｄ、９Ｅ）、これはＰＡＨ患者に対する以前のＰＢＭＣ試験（３５）にて認められたＤＮＡ損傷の程度に匹敵した。ＦＨＩＴ又はＢＭＰＲ２の欠損により誘導されたＤＮＡ損傷は、ＰＡＥＣにおいて、エンザスタウリンにより有意に減弱した。ＰＡＥＣの増殖を、ＭＴＴ増殖アッセイ及び血球計数器での細胞カウントを介して評価した（３６）。エンザスタウリンは、トリパンブルー生存度アッセイにより、細胞毒性を誘発しなかった。むしろ我々は、エンザスタウリン（最大５０μＭ）による処置後に細胞数増加を認めたが、ＰＡＥＣ増殖における増強が検出されなかったことから、それはアポトーシスの減少を反映している可能性が高い（図９Ｆ、９Ｇ）。
【０１４４】
ＰＡＨにおける内側肥厚及び血管リモデリングにおけるＳＭＣの役割を想定して、我々は、ＦＨＩＴが減少しても（図９Ｈ、Ｉ）、ＢＭＰＲ２が減少しない（図９Ｊ）ことにより、エンザスタウリンによって救済されたＰＡＳＭＣの増殖がインビトロで増強される（図９Ｉ）と判定した。我々は、これらのデータから、ＦＨＩＴの欠損がＰＡＥＣ及びＰＡＳＭＣ機能障害を促進し、それはＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２に依存した様式でエンザスタウリンにより改善されうると結論づける。ＰＡＳＭＣ機能と比べて、ＰＡＥＣ機能に対するエンザスタウリンのより強力な有益な効果は、ＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２のより強力な発現により説明してもよく、それによりＢＭＰＲ２調節療法に対するそれらの応答性が高まるかもしれない。
【０１４５】
実施例ＸＩ：インビボでのＦＨＩＴ欠損は低酸素に応答した肺高血圧症悪化の素因になる
ＰＡＨ患者におけるＦＨＩＴの減少並びにＥＣ及びＳＭＣ機能における適切なＦＨＩＴレベルの重要性により、我々はＦＨＩＴの欠損がインビボでＰＨの素因になるか否かを判定するに至った。Ｆｈｉｔ−／−マウス及びＷＴリタメイト（８週齢、雄／雌）を慢性低酸素（１０％）に３週間曝露し、その後、酸素正常状態下での回復期間を設けた（２１％、４週）（３８、３９）。右頸静脈を通じたＲＶ収縮期圧（ＲＶＳＰ）の測定により、ＰＨを評価した。３及び７週目に各々、動物を屠殺し、組織を収集した。ＲＶ肥大（ＲＶＨ）を、ＲＶの左室及び中隔重量に対する重量比（ＲＶ／ＬＶ＋Ｓ）を用いてアッセイした。Ｃ５７ＢＬ／６野生型マウスは、低酸素に対するステレオタイプ的な適応応答を呈し、ＲＶＳＰにおける増加（図１０Ａ、図１８Ａ）、ＲＶＨにおける増加（図１０Ｂ、図１８Ｂ）、細動脈及び細静脈における血管希薄化（図１０Ｄ、１８Ｃ）及び筋性化の増加（図１０Ｅ、図１８Ｄ）を伴い、室内気に戻る時、すべてが可逆的であった。それに対し、Ｆｈｉｔ−／−マウスは、ＲＶＳＰ及びＲＶＨにおける過剰な増加、低酸素下での血管希薄化及び筋性化の増加を呈し、酸素正常状態下で４週間後、不完全な回復を伴った（図１０Ａ〜１０Ｆ、図１８Ａ〜Ｆ）が、ＲＶ線維症を有しなかった（図２２）。さらに、Ｆｈｉｔ−／−マウス（７〜１０世代）において、ベースラインでの筋性化が、リタメイト対照と比べて、より遠位での血管生成に広がり（図１０Ｇ〜１０Ｈ）、ここで７世代を超える筋性化血管は認められなかった（４０）。注目すべきことに、我々は、ベースラインＲＶＳＰ、ＲＶＨ、血管希薄化及び小血管筋性化の程度における性別差を発見した（詳細な説明については付録を参照）。
【０１４６】
予想通り、ＦＨＩＴタンパク質は、あらゆる条件下でＦｈｉｔ−／−肺において有意に減少した。慢性低酸素は、Ｆｈｉｔ−／−肺におけるＢＭＰＲ２タンパク質を減少させ、Ｆｈｉｔ−／−マウスにおいて慢性低酸素下で認められたＲＶＳＰ及びＲＶＨの増加と相関した（図１０Ｉ）。意外にも、低酸素に曝露させ、エンザスタウリン（ミニ浸透圧ポンプを介して５ｍｇ／ｋｇ／日）で処置したＦｈｉｔ−／−マウスは、全肺組織において、ＰＨの改善、並びにＢＭＰＲ２及びＩＤ１の発現増強を示した。予想通り、ＦＨＩＴ  ｍＲＮＡの発現は測定不能な程度に低く、ＢＭＰＲ２調節に対するエンザスタウリンのさらなるＦＨＩＴ非依存性機構が示唆された（図２３Ｂ）。エンザスタウリンは慢性低酸素に曝露されたマウスにおけるＰＨを予防する。
【０１４７】
ＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２レベル並びに内皮及び平滑筋細胞機能障害に対するその有益な効果を増加させるエンザスタウリンの能力を想定して、我々は、インビボ齧歯類モデルにおいてエンザスタウリンを用いて、実験的ＰＨ及び血管リモデリングを予防する又は回復に向かわせるようなその傾向を評価した。低酸素下での雄Ｆｈｉｔ−／−マウスにおけるＰＨの重症度増加に基づき、我々は雄動物において排他的にエンザスタウリンを用いた。パイロット予防モデルとして、我々は、Ｂｍｐｒ２＋／−マウス及び野生型リタメイト（８週齢）を低酸素（１０％）に３週間曝露し、皮下に移植したミニ浸透圧ポンプを用いて、１５ｍｇ／ｋｇ／日のエンザスタウリン又は媒体を供した。エンザスタウリンは、Ｂｍｐｒ２＋／−及び野生型マウスにおいて、ＲＶＳＰ及びＲＶＨの増加（図２４Ａ、２４Ｂ）、血管希薄化並びに遠位血管の筋性化（図２４Ｃ、２４Ｄ）を予防した。我々はさらに、低酸素に３週間曝露したＣ５７ＢＬ６マウスを、ＦＫ５０６（０．０５ｍｇ／ｋｇ／日）、エンザスタウリン（５ｍｇ／ｋｇ／日）又は双方の組み合わせの何れかで処置し、ＰＨ（ＲＶＳＰによる測定として）の予防、ＢＭＰＲ２及びＩＤ１の発現に関連するＦＫ５０６とエンザスタウリンとの相加的効果を記録した（図２５Ａ〜２５Ｄ）。
【０１４８】
実施例ＸＩＩ．エンザスタウリンはＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素／酸素正常状態ラットにおける実験的ＰＨを回復に向かわせる
回復モデルとして、我々は、大規模な血管リモデリングとともに、ヒト末期ＰＡＨを十分に再現するＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素／酸素正常状態ラットモデルを用いた。この実験におけるデータを図１１Ａ〜１１Ｋにまとめる。
【０１４９】
以前に記載された通り（４１）、スプラーグドーリーラットに、２０ｍｇ／ｋｇのＳＵＧＥＮ５４１６を１回皮下注射し、慢性低酸素下（１０％、３週間）、次いで酸素正常状態下に５週間に収容した。皮下へのＳＵＧＥＮ５４１６注射から８週間後、ラットは毎日、５ｍｇ／ｋｇ／日のエンザスタウリン又は媒体対照の経口経管栄養を３週間受けた。動物の血行動態評価（心エコー、右心カテーテル）を屠殺及び組織収集前に実施した。ラットは、管腔閉塞及び右心不全によって特徴づけられる重度の閉塞性「末期」ＰＨを発生した（図１１Ｄ〜Ｈ、図２６）。組織学的観察結果に一致して、ＲＶＳＰ（＞１００ｍｍＨｇ）及びＲＶＨがＳＵＧＥＮ５４１６注射ラットにおいて著しく増加し（図１１Ａ〜１１Ｂ）、間質性線維症の増加がこれら動物におけるＲＶにおいて認められた（図１１Ｉ〜１１Ｋ）。
【０１５０】
この実験におけるデータは、図１１Ａ〜１１Ｋに示し、エンザスタウリンが、ＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおいて、血行動態パラメータ、重度の血管リモデリング、肺気腫、心線維症及びＲＶＨを回復に向かわせることを示す。雄スプラーグドーリーラットにおいて、２０ｍｇ／ｋｇ体重のＳＵ５４１６の皮下注射により実験的ＰＨが誘導された。動物を、５ｍｇ／ｋｇ体重のエンザスタウリン又は媒体対照の経口経管栄養による毎日投与を経ながら、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、その後、酸素正常状態下（Ｎｘ、２１％Ｏ２）での５週間の期間を設けた。図１１Ａでは、右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（ｎ＝４、平均±平均値の標準誤差、Ｎｘ対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、一元配置分散分析、シダックの検定後）。図１１Ｂでは、右室（ＲＶ）肥大を、ＲＶの左室及び中隔に対する重量比により示す（ｎ＝４、平均±平均値の標準誤差、Ｎｘ対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、媒体対照に対して＃ｐ＜０．０５、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図１１Ｃは、肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管の比であり、図１１Ｄは、それらの完全又は部分的な閉鎖（％）であり、また図１１Ｅでは、それらの完全又は部分的な筋性化（％）をＭＯＶＡＴ染色した肺切片において評価した（ｎ＝４、平均±平均値の標準誤差、Ｎｘ対照に対して＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、媒体対照に対して＃＃＃ｐ＜０．００１、＃＃＃＃ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図１１Ｆは、代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像であり、大きな肺血管を強調している。図１１Ｇは、全肺組織におけるＧＡＰＤＨに正規化したＦＨＩＴ又はＢＭＰＲ２の相対的ｍＲＮＡ発現である（ｑＰＣＲ、ｎ＝４、平均±平均値の標準誤差、二元配置分散分析）。図１１Ｈは、血管閉塞を示す代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。図１１Ｉは、ＲＶにおける全組織に対する線維性組織の百分率である（ｎ＝４、平均±平均値の標準誤差、Ｎｘ対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、媒体対照に対して＃＃ｐ＜０．０１、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図１１Ｊ〜１１Ｋでは、全ＲＶ組織（図１１Ｊ）及び拡大切片（図１１Ｋ）の代表的なトリクローム染色を表す。
【０１５１】
エンザスタウリンによる処置により、全肺におけるＦＨＩＴ及びＢＭＰＲ２の発現が増強され（図１１Ｇ）、ほぼ全体的に血管閉塞が回復に向かい（図１１Ｄ）、小血管及び大血管の筋性化（図１１Ｅ）、並びにＲＶＨ（図１１Ｂ）及びＲＶ線維症（図１１Ｉ）が強力に低減された。エンザスタウリンで処置したＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素／酸素正常状態ラットにおいて、ＲＶＳＰが３０ｍｍＨｇ超低下した。
【０１５２】
実施例ＸＩＩＩ．エンザスタウリンはＳＵＧＥＮ５４１６／低酸素ラットにおける肺気腫を回復に向かわせる
雄Ｓａｓｃｏスプラーグドーリーラットにおいて、２０ｍｇ／ｋｇ体重のＳＵ５４１６の皮下注射により、実験的ＰＨを誘導した。動物を、５ｍｇ／ｋｇ体重のエンザスタウリン又は媒体対照の経口経管栄養による毎日投与を経ながら、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、その後、酸素正常状態下（Ｎｘ、２１％Ｏ２）で５週間の期間を設けた。ＭＯＶＡＴ肺組織像の線形切片分析（ｎ＝４、平均±平均値の標準誤差、Ｎｘ対照に対する＊ｐ＜０．０５、媒体対照に対する＃＃ｐ＜０．０１、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。気腫性変化（矢印による標識）及び血管閉塞を呈する、代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像。図２７Ａ及び２７Ｂにおけるデータが示すように、エンザスタウリン処置動物は、気腫性変化及び血管閉塞についての非処置対照よりも有意に低い証拠を示し、エンザスタウリンが肺気腫に伴う肺組織損傷を回復に向かわせうることが示される。
【０１５３】
追加的な実施例
実施例Ｓ１．Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６とリタメイト野生型（Ｃ５７）マウスを、正常酸素圧（Ｎｘ、２０％Ｏ２）、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、４週間の低酸素回復（Ｒｅｃ、３週間のＨｘ／４週間のＮｘ）期間を設け、７週間のＮｘ対照と比較した。βアクチンハウスキーピング対照に正規化した、肺組織内でのＦＨＩＴタンパク質発現の代表的な濃度測定分析（雄、Ｃ５７  ｎ＝３、Ｆｈｉｔ−／−Ｎｘ  ｎ＝３、Ｆｈｉｔ−／−Ｈｘ  ｎ＝５、Ｆｈｉｔ−／−Ｒｅｃ  ｎ＝４）。すべてのバーは平均±平均値の標準誤差を意味する。Ｃ５７対照に対して＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、ターキーの検定後。この実験におけるデータを図１２にまとめる。
【０１５４】
実施例Ｓ２．雄Ｓａｓｃｏスプラーグドーリーラットにおいて、２０ｍｇ／ｋｇ体重のＳＵ５４１６の皮下注射により、実験的ＰＡＨを誘導した。動物を、５ｍｇ／ｋｇ体重のエンザスタウリン又は媒体対照の経口経管栄養による毎日投与を経ながら、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下に３週間収容し、その後、酸素正常状態下（Ｎｘ、２０％Ｏ２）で５週間の期間を設けた。βアクチンハウスキーピング対照に正規化した、肺組織内でのＰＫＣ（図１３Ａ）及びｐ−ＰＫＣ（図１３Ｂ）タンパク質発現（雄、Ｎｘ  ｎ＝４、Ｎｘ  Ｅｎｚ  ｎ＝４、ＳｕＨｘ  ｎ＝３、ＳｕＨｘ  Ｅｎｚ  ｎ＝５）及びＰＫＣに正規化したｐ−ＰＫＣ（図１３Ｃ）の濃度測定分析。ＰＫＣ、ｐ−ＰＫＣ及びβアクチンの代表的ブロット（図１３Ｄ）。すべてのバーは平均±平均値の標準誤差を意味する。二元配置分散分析、ターキーの検定後。
【０１５５】
実施例Ｓ３．ヒトＰＡＥＣを６ウェルプレートに蒔いた。７０〜８０％のコンフルエントであるとき、細胞を、０．５ｍＭ、５ｍＭ及び１５ｍＭのエンザスタウリンで各々、２４時間処置した。ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｐｌｕｓ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）により単離し、Ｆｈｉｔ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１遺伝子発現をＴａｑｍａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイにより測定した。（図１４Ａ）ＦＨＩＴの相対的発現、（図１４Ｂ）ＢＭＰＲ２の相対的発現、（図１４Ｃ）ＩＤ１の相対的発現。すべてのバーは平均±平均値の標準誤差を意味する。ｎ＝３、一元配置分散分析、ダネットの比較検定、対照と比べて＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。
【０１５６】
実施例Ｓ４．図１５Ａ〜１５Ｂは、様々な濃度（５ｎＭ〜５μＭ）の（図１５Ａ）選択的ＰＫＣβ阻害剤Ｌｙ３３３５３１塩酸塩（図１５Ｂ）又は非選択的ＰＫＣ阻害剤ＧＦ１０９２０３Ｘとともに２４時間インキュベートした同調ＰＡＥＣにおけるＧＡＰＤＨに正規化したＢＭＰＲ２の相対的ｍＲＮＡ発現である（ｑＰＣＲ、ｔ＝２４時間、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、一元配置分散分析、ダネットの検定後、ＮＳ）。図１５Ｃ〜１５Ｄは、様々な濃度（５ｎＭ〜５μＭ）の（図１５Ｃ）選択的ＰＫＣβ阻害剤Ｌｙ３３３５３１塩酸塩（図１５Ｄ）又は非選択的ＰＫＣ−阻害剤ＧＦ１０９２０３Ｘ（図１５Ｆ）とともに２４時間インキュベートした同調ＰＡＥＣにおけるＧＡＰＤＨに正規化したＩｄ１の相対的ｍＲＮＡ発現である（ｑＰＣＲ、ｔ＝２４時間、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、一元配置分散分析、ダネットの検定後、ＮＳ）。図１５Ｅ〜１５Ｆは、様々な濃度（５ｎＭ〜５μＭ）の（図１５Ｅ）選択的ＰＫＣβ阻害剤Ｌｙ３３３５３１塩酸塩（図１５Ｆ）又は非選択的ＰＫＣ阻害剤ＧＦ１０９２０３Ｘ（Ｉ）とともに２４時間インキュベートした同調ＰＡＥＣにおけるＧＡＰＤＨに正規化したＦＨＩＴの相対的ｍＲＮＡ発現である（ｑＰＣＲ、ｔ＝２４時間、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、媒体対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、一元配置分散分析、ダネットの検定後）。
【０１５７】
実施例Ｓ５．５μＭ若しくは１５μＭのエンザスタウリン（灰色バー）及び／又は５μＭの選択的ＰＫＣβ阻害剤Ｌｙ３３３５３１塩酸塩若しくは５μＭの非選択的ＰＫＣ阻害剤ＧＦ１０９２０３Ｘとともに２４時間インキュベートした同調ＰＡＥＣにおけるカスパーゼ３／７発光（ｔ＝２４時間、カスパーゼ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７アッセイ、ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、非エンザスタウリン処置対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、非処置媒体対照に対して＃＃＃＃ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、ダネットの検定後）。図１６を参照のこと。
【０１５８】
実施例Ｓ６．（ＢＭＰＲ２突然変異を伴わない）ＩＰＡＨ患者からの代表的な免疫組織化学スライド。図１７Ａ：ＢＭＰＲ２の発現、図１７Ｂ：ＦＨＩＴの発現。ＦＨＩＴの減少は、主に新生内膜に局在化される。
【０１５９】
実施例Ｓ７．雌Ｆｈｉｔ−／−Ｃ５７ＢＬ／６とリタメイト野生型（Ｃ５７）マウスを、正常酸素圧（Ｎｘ、２０％Ｏ２）、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、低酸素回復（Ｒｅｃ、３週間のＨｘ／４週間のＮｘ）期間を４週間設け、７週間のＮｘ対照と比較した。データを図１８Ａ〜１８Ｆに示す。図１８Ａでは、右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（雌、Ｃ５７  ｎ＝３、ＦＨＩＴ−／−Ｎｘ  ｎ＝４、ＦＨＩＴ−／−Ｈｘ  Ｒｅｃ  ｎ＝３）。図１８Ｂでは、右室（ＲＶ）肥大をＲＶの左室及び中隔に対する重量比（ＲＶ／ＬＶ＋Ｓ）により示す（雌、Ｃ５７  ｎ＝３、Ｆｈｉｔ−／−Ｎｘ  ｎ＝４、ＦＨＩＴ−／−Ｈｘ  ｎ＝３、Ｆｈｉｔ−／−Ｒｅｃ  ｎ＝５）。図１８Ｃは、肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損である。図１８Ｄでは、ＡＷ又はＡＤ血管の完全又は部分的な筋性化（％）をＭＯＶＡＴ染色した肺切片にて評価した（雌、Ｃ５７  ｎ＝３、Ｆｈｉｔ−／−Ｎｘ  ｎ＝４、Ｆｈｉｔ−／−Ｈｘ  Ｒｅｃ  ｎ＝３）。図１８Ｅ〜１８Ｆは、小さい遠位血管の血管欠損（図１８Ｅ）又は血管筋性化（図１８Ｆ）を表す代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。矢印は血管位置を示す。Ｎｘ対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、Ｃ５７対照に対して＃ｐ＜０．０５、＃＃＃ｐ＜０．００１、＃＃＃＃ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析、ターキーの検定後。
【０１６０】
実施例Ｓ８．ＦＨＩＴのｑＰＣＲ  ｍＲＮＡ分析を図１９Ａ〜１９Ｈにまとめる。女性（図１９Ｂ、１９Ｅ）、男性（図１９Ｃ、１９Ｆ）及び組み合わせ対象（図１９Ａ、１９Ｄ）について分析した、健常対照と比べての、ＦＰＡＨ患者及び健常な突然変異キャリアを有する選択した家族からの形質転換リンパ球における（図１９Ａ〜１９Ｃ）及びＢＭＰＲ２（図１９Ｄ〜Ｆ）の発現。Ｎ＝１０、平均±平均値の標準誤差、＊ｐ＜０．０５、一元配置分散分析、ダネットの検定後、患者人口統計については表１を参照。（図１９Ｇ、１９Ｈ）ＦＰＡＨ患者におけるＢＭＰＲ２及びＦＨＩＴ発現の、同じ家族のキャリアと比べてのグラフィック表示。対応ｔ検定ｐ＝０．００５４  ＢＭＰＲ２、ｐ＝０．００２６ＦＨＩＴ。
【０１６１】
実施例Ｓ９．ヒトＰＡＥＣを６ウェルプレートに蒔き（０．５×１０６個の細胞／ウェル）、それにｓｉＦｈｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ  Ｓｉｌｅｎｃｅｒ（登録商標）セレクト、Ｐ／Ｎ４３９２４２０）１００ｎＭをトランスフェクトし、次にＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により１００ｎＭの非特異的ｓｉＲＮＡで４８時間処置した。次に、細胞をエンザスタウリン１５ｕＭで２４時間処置した。ＲＮＡをＲＮｅａｓｙ（登録商標）Ｐｌｕｓ  Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）により単離し、Ｆｈｉｔ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の遺伝子発現をＴａｑｍａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイにより分析する（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ。Ｆｈｉｔ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の遺伝子発現は、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いて測定した）。図２０Ａ：ＦＨＩＴの相対的発現、図２０Ｂ：ＢＭＰＲ２、図２０Ｃ：ＩＤ１。すべてのバーは平均±平均値の標準誤差を意味する、ｎ＝３、一元配置分散分析、シダックの多重比較検定、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１  Ｎｔｓｉ対ｓｉＦＨＩＴ、＃＃＃ｐ＜０．０００５、＃＃Ｐ＜０．０１  ｓｉＦＨＩＴ対ｓｉＦＨＩＴ＋Ｅｎｚ。
【０１６２】
実施例Ｓ１０．ＦＨＩＴノックダウンによるＰＡＥＣにおけるＢＭＰＲ２及びＩＤ１の減少は、部分的にはｍｉＲ１７−５依存性である。ヒトＰＡＥＣを６ウェルプレートに蒔き（０．５×１０６個の細胞／ウェル）、それにｓｉＦｈｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ  Ｓｉｌｅｎｃｅｒ（登録商標）セレクト、Ｐ／Ｎ４３９２４２０）１００ｎＭ及び抗ｍｉＲ１７−５阻害剤（ＡＭ１２４１２、Ａｍｂｉｏｎ）をＲＮＡｉＭａｘにより４８時間トランスフェクトした。抗ｍｉＲ  ＭｉＲＮＡ阻害剤を陰性対照（ＡＭ１７０１０、Ａｍｂｉｏｎ）ｌとして用いた。ＭｉＲＮＡをＴａｑＭａｎ（登録商標）ｍｉＲＮＡ  ＡＢＣ精製キットにより単離し、単離したｍｉＲＮＡを、Ｔａｑｍａｎ（登録商標）マイクロＲＮＡアッセイを用いて分析した。Ｆｈｉｔ、ＢＭＰＲ２及びＩｄ１の遺伝子発現をＴａｑｍａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いて測定し；データを、図２１Ａ：ｍｉＲ１７．５の相対的発現；図２１Ｂ：ＦＨＩＴ；図２１Ｃ：ＢＭＰＲ２；及び図２１Ｄ：ＩＤ１に示す。すべてのバーは平均±平均値の標準誤差を意味する、ｎ＝３、Ｎｔｓｉに対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、一元配置分散分析、ターキーの検定後、ＮｔＭｉｒに対して＃ｐ＜０．０５、不対スチューデントｔ検定。
【０１６３】
実施例Ｓ１１．ＷＴ及びＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、低酸素処置後、ＲＶ線維症を発生しない。雄野生型及びＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６（Ｃ５７）マウスを、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、低酸素回復（Ｒｅｃ、３週間のＨｘ／４週間のＮｘ）期間を４週間設けた。代表的なトリクローム心組織像を示す。線維症は青色によって示す。ＲＶ及びＬＶ＋中隔は、ＲＶ／ＬＶ＋中隔の重量評価のため、互いから分離する必要があった。図２２を参照のこと。
【０１６４】
実施例Ｓ１２．エンザスタウリンは、ＦＨＩＴ−／−マウスにおける低酸素下で、ＲＶＳＰの上昇から保護し、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１  ｍＲＮＡを上方制御する。雄ＦＨＩＴ−／−Ｃ５７ＢＬ／６（Ｃ５７）マウスを低酸素下（Ｈｘ、１０％Ｏ２）に３週間曝露し、ミニ浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔモデル２００４）により５ｍｇ／ｋｇ体重の濃度でエンザスタウリン又は媒体（生理食塩水）対照で処置した。図２３Ａを参照のこと。右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、シャム対照に対して＊ｐ＜０．０５、不対スチューデントｔ検定）。図２３Ｂ〜２３Ｃは、肺組織におけるｍＲＮＡ発現のΔΔＣｔ分析である（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、シャム対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、不対スチューデントｔ検定）。略称：Ｅｎｚ−エンザスタウリン。
【０１６５】
実施例Ｓ１３．エンザスタウリンは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける低酸素誘導性の実験的ＰＡＨの発生を予防する。雄野生型及びＢｍｐｒ２＋／−Ｃ５７ＢＬ／６（Ｃ５７）マウスを、正常酸素圧（Ｎｘ、２０％Ｏ２）及び低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下に３週間収容し、経口経管栄養／Ａｌｚｅｔミニ浸透圧ポンプモデル２００６により、５ｍｇ／ｋｇのエンザスタウリンの毎日投与の存在下又は不在下で処置した。データを図２４Ａ〜２４Ｇにまとめる。図２４Ａでは、右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｎｘ対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、一元配置分散分析、シダックの検定後）。図２４Ｂでは、右室（ＲＶ）肥大をＲＶの左室及び中隔に対する重量比により示す（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、媒体対照に対して＃ｐ＜０．０５、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図２４Ｃは、肺胞壁（ＡＷ）及び肺胞管（ＡＤ）の肺血管欠損であり、図２４Ｄでは、それらの完全又は部分的な筋性化（％）をＭＯＶＡＴ染色した肺切片にて評価した（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、Ｃ５７対照に対して＊ｐ＜０．０５、媒体対照に対して＃＃ｐ＜０．０１、＃ｐ＜０．００１、二元配置分散分析、ターキーの検定後）。図２４Ｅは、代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。矢印は血管位置を示す。図２４Ｆ〜２４Ｇは各々、大血管（図２４Ｆ）及び小血管（図２４Ｇ）の代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像である。矢印は血管位置を示す。
【０１６６】
実施例Ｓ１４．ＦＫ５０６及びエンザスタウリンは、低酸素下の野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＢＭＰＲ２／Ｉｄ１に対してさらなる効果を有するが、ＦＨＩＴ  ｍＲＮＡに対しては有さず、ＲＶＳＰにおける上昇から保護する。雄野生型Ｃ５７ＢＬ／６（Ｃ５７）マウスを低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）下に３週間曝露し、ミニ浸透圧ポンプ（Ａｌｚｅｔモデル２００４）により、０．０５ｍｇ／ｋｇ／日のＦＫ５０６の存在下又は不在下で、５ｍｇ／ｋｇ体重のエンザスタウリン又は媒体対照（生理食塩水）で処置した。結果を図２５Ａ〜２５Ｄに表す。図２５Ａでは、右室収縮期圧（ＲＶＳＰ）を肺動脈カテーテル法により測定した（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、シャム対照に対して＊＊ｐ＜０．０１、一元配置分散分析、ダネットの検定後）。図２５Ｂ〜２５Ｄは、肺組織におけるｍＲＮＡの発現のΔΔＣｔ分析である。（ｎ＝３、平均±平均値の標準誤差、シャム対照に対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、一元配置分散分析、ダネットの検定後）。略称：ＦＫ−ＦＫ５０６、Ｅｎｚ−エンザスタウリン。
【０１６７】
実施例Ｓ１５．エンザスタウリン処置から３週間後、酸素正常状態とＳｕｇｅｎ／低酸素状態とを比較する、スプラーグドーリーラット肺における代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像。
【０１６８】
雄Ｓａｓｃｏスプラーグドーリーラットにおいて、２０ｍｇ／ｋｇ体重のＳＵ５４１６の皮下注射により実験的ＰＡＨを誘導した。動物を、５ｍｇ／ｋｇ体重のエンザスタウリン又は媒体対照の経口経管栄養による毎日投与を経ながら、低酸素（Ｈｘ、１０％Ｏ２）状態下で３週間収容し、その後、酸素正常状態下（Ｎｘ、２０％Ｏ２）で５週間の期間を設けた。小肺血管の代表的なＭＯＶＡＴ肺組織像を図２６に示す。
【０１６９】
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５．Ｒｉｃｈ  ＪＤ，Ｓｈａｈ  ＳＪ，Ｓｗａｍｙ  ＲＳ，Ｋａｍｐ  Ａ，Ｒｉｃｈ  Ｓ．Ｉｎａｃｃｕｒａｃｙ  ｏｆ  Ｄｏｐｐｌｅｒ  ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ  ｅｓｔｉｍａｔｅｓ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｐｒｅｓｓｕｒｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ．Ｃｈｅｓｔ  ２０１１；１３９：９８８−９９３．
６．Ｌｏｎｇ  Ｌ，Ｏｒｍｉｓｔｏｎ  ＭＬ，Ｙａｎｇ  Ｘ，Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄ  Ｍ，Ｇｒａｆ  Ｓ，Ｍａｃｈａｄｏ  ＲＤ，Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｍ，Ｋｉｎｚｅｌ  Ｂ，Ｙｕｎｇ  ＬＭ，Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ＪＭ，Ｍｏｏｒｅ  ＳＤ，Ｄｒａｋｅ  ＫＭ，Ａｌｄｒｅｄ  ＭＡ，Ｙｕ  ＰＢ，Ｕｐｔｏｎ  ＰＤ，Ｍｏｒｒｅｌｌ  ＮＷ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ＢＭＰＲ−ＩＩ  ｗｉｔｈ  ＢＭＰ９  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１５；２１：７７７−７８５．
７．Ｌｏｎｇ  Ｌ，Ｙａｎｇ  Ｘ，Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄ  Ｍ，Ｌｕ  Ｊ，Ｍａｒｃｉｎｉａｋ  ＳＪ，Ｄｕｎｍｏｒｅ  ＢＪ，Ｍｏｒｒｅｌｌ  ＮＷ．Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｖｉａ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ａｎｄ  ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  ２０１３；１１２：１１５９−１１７０．
８．Ｂｒｉｔｔａｉｎ  ＥＬ，Ｔｈｅｎａｐｐａｎ  Ｔ，Ｍａｒｏｎ  ＢＡ，Ｃｈａｎ  ＳＹ，Ａｕｓｔｉｎ  ＥＤ，Ｓｐｉｅｋｅｒｋｏｅｔｔｅｒ  Ｅ，ＢｏｇａａｒｄＨＪ，Ｇｕｉｇｎａｂｅｒｔ  Ｃ，Ｐａｕｌｉｎ  Ｒ，Ｍａｃｈａｄｏ  ＲＦ，Ｙｕ  ＰＢ．Ｕｐｄａｔｅ  ｉｎ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ２０１６  ａｎｄ  ２０１７．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２０１８．
９．Ｌｉｕ  Ｄ，Ｙａｎ  Ｙ，Ｃｈｅｎ  ＪＷ，Ｙｕａｎ  Ｐ，Ｗａｎｇ  ＸＪ，Ｊｉａｎｇ  Ｒ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｚｈａｏ  ＱＨ，Ｗｕ  ＷＨ，Ｓｉｍｏｎｎｅａｕ  Ｇ，Ｑｕ  ＪＭ，Ｊｉｎｇ  ＺＣ．Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＢＭＰＲ２  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ  Ｏｃｃｕｒｓ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｅｒｉｔａｂｌｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＢＭＰＲ２  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２０１７；１９６：９２５−９２８．
１０．Ｓｐｉｅｋｅｒｋｏｅｔｔｅｒ  Ｅ，Ｓｕｎｇ  ＹＫ，Ｓｕｄｈｅｅｎｄｒａ  Ｄ，Ｓｃｏｔｔ  Ｖ，Ｄｅｌ  Ｒｏｓａｒｉｏ  Ｐ，Ｂｉｌｌ  Ｍ，Ｈａｄｄａｄ  Ｆ，Ｌｏｎｇ−Ｂｏｙｌｅ  Ｊ，ＨｅｄｌｉｎＨ，Ｚａｍａｎｉａｎ  ＲＴ．Ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ＦＫ５０６（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）ｆｏｒ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ２０１７；５０．
１１．Ｓｐｉｅｋｅｒｋｏｅｔｔｅｒ  Ｅ，Ｓｕｎｇ  ＹＫ，Ｓｕｄｈｅｅｎｄｒａ  Ｄ，Ｂｉｌｌ  Ｍ，Ａｌｄｒｅｄ  ＭＡ，ｖａｎ  ｄｅ  Ｖｅｅｒｄｏｎｋ  ＭＣ，Ｖｏｎｋ  Ｎｏｏｒｄｅｇｒａａｆ  Ａ，Ｌｏｎｇ−Ｂｏｙｌｅ  Ｊ，Ｄａｓｈ  Ｒ，Ｙａｎｇ  ＰＣ，Ｌａｗｒｉｅ  Ａ，Ｓｗｉｆｔ  ＡＪ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ，Ｚａｍａｎｉａｎ  ＲＴ．Ｌｏｗ−Ｄｏｓｅ  ＦＫ５０６（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）ｉｎ  Ｅｎｄ−Ｓｔａｇｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２０１５；１９２：２５４−２５７．
１２．Ｓｐｉｅｋｅｒｋｏｅｔｔｅｒ  Ｅ，Ｔｉａｎ  Ｘ，Ｃａｉ  Ｊ，Ｈｏｐｐｅｒ  ＲＫ，Ｓｕｄｈｅｅｎｄｒａ  Ｄ，Ｌｉ  ＣＧ，Ｅｌ−Ｂｉｚｒｉ  Ｎ，ＳａｗａｄａＨ，Ｈａｇｈｉｇｈａｔ  Ｒ，Ｃｈａｎ  Ｒ，Ｈａｇｈｉｇｈａｔ  Ｌ，ｄｅ  Ｊｅｓｕｓ  Ｐｅｒｅｚ  Ｖ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｒｅｄｄｙ  Ｓ，Ｚｈａｏ  Ｍ，Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  Ｄ，Ｓｏｌｏｗ−Ｃｏｒｄｅｒｏ  ＤＥ，Ｂｅａｃｈｙ  ＰＡ，Ｗａｎｄｌｅｓｓ  ＴＪ，Ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ  Ｐ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．ＦＫ５０６  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ＢＭＰＲ２，ｒｅｓｃｕｅｓ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０１３；１２３：３６００−３６１３．
１３．Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ，Ｇａｒｒｉｓｏｎ  ＰＮ，Ｂａｒｎｅｓ  ＬＤ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＦＨＩＴ／ＦＲＡ３Ｂ  ｌｏｃｕｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｇｅｎｅｔ  １９９８；３２：７−３１．
１４．Ｓｏｚｚｉ  Ｇ，Ｓａｒｄ  Ｌ，Ｄｅ  Ｇｒｅｇｏｒｉｏ  Ｌ，Ｍａｒｃｈｅｔｔｉ  Ａ，Ｍｕｓｓｏ  Ｋ，Ｂｕｔｔｉｔｔａ  Ｆ，Ｔｏｒｎｉｅｌｌｉ  Ｓ，Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ  Ｓ，Ｖｅｒｏｎｅｓｅ  ＭＬ，Ｍａｎｅｎｔｉ  Ｇ，Ｉｎｃａｒｂｏｎｅ  Ｍ，Ｃｈｅｌｌａ  Ａ，Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ  ＣＡ，Ｐａｓｔｏｒｉｎｏ  Ｕ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ，Ｂｅｖｉｌａｑｕａ  Ｇ，Ｐｉｌｏｔｔｉ  Ｓ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ，Ｐｉｅｒｏｔｔｉ  ＭＡ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅ  ｓｍｏｋｉｎｇ  ａｎｄ  ＦＨＩＴ  ｇｅｎｅ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９９７；５７：２１２１−２１２３．
１５．Ｔｈａｖａｔｈｉｒｕ  Ｅ，Ｌｕｄｅｓ−Ｍｅｙｅｒｓ  ＪＨ，ＭａｃＬｅｏｄ  ＭＣ，Ａｌｄａｚ  ＣＭ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｍｏｎ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｆｒａｇｉｌｅ  ｓｉｔｅ  ｇｅｎｅｓ，ＷＷＯＸ／ＦＲＡ１６Ｄ  ａｎｄ  ＦＨＩＴ／ＦＲＡ３Ｂ  ｉｓ  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｔｏ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓ，ＵＶ，ａｎｄ  ＢＰＤＥ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｂｙ  ＩＲ．Ｍｏｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｇ  ２００５；４４：１７４−１８２．
１６．Ｋｕｊａｎ  Ｏ，Ａｂｕｄｅｒｍａｎ  Ａ，Ａｌ−Ｓｈａｗａｆ  ＡＺ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＨＩＴ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｉｎｔｅｒｖ  Ｍｅｄ  Ａｐｐｌ  Ｓｃｉ  ２０１６；８：７−１３．
１７．Ｓｏｚｚｉ  Ｇ，Ｐａｓｔｏｒｉｎｏ  Ｕ，Ｍｏｉｒａｇｈｉ  Ｌ，Ｔａｇｌｉａｂｕｅ  Ｅ，Ｐｅｚｚｅｌｌａ  Ｆ，Ｇｈｉｒｅｌｌｉ  Ｃ，Ｔｏｒｎｉｅｌｌｉ  Ｓ，Ｓａｒｄ  Ｌ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ，Ｐｉｅｒｏｔｔｉ  ＭＡ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ，Ｐｉｌｏｔｔｉ  Ｓ．Ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＦＨＩＴ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｐｒｅｉｎｖａｓｉｖｅ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｌｅｓｉｏｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９９８；５８：５０３２−５０３７．
１８．Ｃａｍｐｉｇｌｉｏ  Ｍ，Ｐｅｋａｒｓｋｙ  Ｙ，Ｍｅｎａｒｄ  Ｓ，Ｔａｇｌｉａｂｕｅ  Ｅ，Ｐｉｌｏｔｔｉ  Ｓ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ．ＦＨＩＴ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｔａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９９９；５９：３８６６−３８６９．
１９．Ｔｏｌｅｄｏ  Ｇ，Ｓｏｌａ  ＪＪ，Ｌｏｚａｎｏ  ＭＤ，Ｓｏｒｉａ  Ｅ，Ｐａｒｄｏ  Ｊ．Ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＦＨＩＴ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｈｉｇｈ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｌｏｗ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｗｏｒｓｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００４；１７：４４０−４４８．
２０．Ｈｕａｎｇ  Ｑ，Ｌｉｕ  Ｚ，Ｘｉｅ  Ｆ，Ｌｉｕ  Ｃ，Ｓｈａｏ  Ｆ，Ｚｈｕ  ＣＬ，Ｈｕ  Ｓ．Ｆｒａｇｉｌｅ  ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  ｔｒｉａｄ（ＦＨＩＴ）ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ  ｐａｔｈｗａｙ．ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌ  ２０１４；２０１４：１７９６９８．
２１．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ＭＪ，Ｋａｈｌ  ＢＳ，Ｖｏｓｅ  ＪＭ，ｄｅ  Ｖｏｓ  Ｓ，Ｌａｕｇｈｌｉｎ  Ｍ，Ｆｌｙｎｎ  ＰＪ，Ｒｏｗｌａｎｄ  Ｋ，Ｃｒｕｚ  ＪＣ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  ＳＬ，Ｍｕｓｉｂ  Ｌ，Ｄａｒｓｔｅｉｎ  Ｃ，Ｅｎａｓ  Ｎ，Ｋｕｔｏｋ  ＪＬ，Ａｓｔｅｒ  ＪＣ，Ｎｅｕｂｅｒｇ  Ｄ，Ｓａｖａｇｅ  ＫＪ，ＬａＣａｓｃｅ  Ａ，Ｔｈｏｒｎｔｏｎ  Ｄ，Ｓｌａｐａｋ  ＣＡ，Ｓｈｉｐｐ  ＭＡ．Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ，ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ  ｂｅｔａ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００７；２５：１７４１−１７４６．
２２．Ｄａｎｎｅｗｉｔｚ  Ｐｒｏｓｓｅｄａ  Ｓ，Ｓｕｈｅｅｎｄｒａ  Ｄ，Ｔｉａｎ  Ｘ，Ｋｕｎｇ  Ｊ，Ｂｏｈｍ  Ｍ，Ｋｕｍａｍｏｔｏ  Ｋ，Ｓｏｌｏｗ−Ｃｏｒｄｅｒｏ  Ｄ，Ｓａｌｄｉｖａｒ  Ｊ，Ａｕｓｔｉｎ  Ｅ，Ｌｏｙｄ  ＪＥ，Ｈｕｂｅｒ  Ｋ，Ｋｈａｔｒｉ，Ｐｕｒｖｅｓｈ．，Ｓｐｉｅｋｅｒｋｏｅｔｔｅｒ  Ｅ．Ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ  Ｒｅｖｅｒｓｅｓ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｂｙ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｎｏｖｅｌ  ＢＭＰＲ２  Ｍｏｄｉｆｉｅｒ  ＦＨＩＴ．ＡＴＳ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；２０１７．ｐ．Ａ４２２８．
２３．Ａｕｓｔｉｎ  ＥＤ，Ｈａｍｉｄ  Ｒ，Ｈｅｍｎｅｓ  ＡＲ，Ｌｏｙｄ  ＪＥ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｔ，Ｙｕ  Ｃ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  Ｉｉｉ  ＪＡ，Ｇａｄｄｉｐａｔｉ  Ｒ，Ｇｌａｄｓｏｎ  Ｓ，Ｇｕ  Ｅ，Ｗｅｓｔ  Ｊ，Ｌａｎｅ  ＫＢ．ＢＭＰＲ２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｂｉｏｌ  Ｓｅｘ  Ｄｉｆｆｅｒ  ２０１２；３：６．
２４．Ｋｈａｔｒｉ  Ｐ，Ｒｏｅｄｄｅｒ  Ｓ，Ｋｉｍｕｒａ  Ｎ，Ｄｅ  Ｖｕｓｓｅｒ  Ｋ，Ｍｏｒｇａｎ  ＡＡ，Ｇｏｎｇ  Ｙ，Ｆｉｓｃｈｂｅｉｎ  ＭＰ，Ｒｏｂｂｉｎｓ  ＲＣ，Ｎａｅｓｅｎｓ  Ｍ，Ｂｕｔｔｅ  ＡＪ，Ｓａｒｗａｌ  ＭＭ．Ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｍｏｄｕｌｅ（ＣＲＭ）ｆｏｒ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ａｃｒｏｓｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｒｇａｎｓ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｏｒｇａｎ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１３；２１０：２２０５−２２２１．
２５．Ｓｗｅｅｎｅｙ  ＴＥ，Ｈａｙｎｅｓ  ＷＡ，Ｖａｌｌａｎｉａ  Ｆ，Ｉｏａｎｎｉｄｉｓ  ＪＰ，Ｋｈａｔｒｉ  Ｐ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｉａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２０１７；４５：ｅ１．
２６．Ｌｉ  ＭＤ，Ｂｕｒｎｓ  ＴＣ，Ｍｏｒｇａｎ  ＡＡ，Ｋｈａｔｒｉ  Ｐ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｍｕｌｔｉ−ｃｏｈｏｒｔ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２０１４；２：９３．
２７．Ｌｅｅ  ＫＣ，Ｏｕｗｅｈａｎｄ  Ｉ，Ｇｉａｎｎｉｎｉ  ＡＬ，Ｔｈｏｍａｓ  ＮＳ，Ｄｉｂｂ  ＮＪ，Ｂｉｊｌｍａｋｅｒｓ  ＭＪ．Ｌｃｋ  ｉｓ  ａ  ｋｅｙ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｉｍａｔｉｎｉｂ  ａｎｄ  ｄａｓａｔｉｎｉｂ  ｉｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１０；２４：８９６−９００．
２８．Ｍｏｎｔａｎｉ  Ｄ，Ｂｅｒｇｏｔ  Ｅ，Ｇｕｎｔｈｅｒ  Ｓ，Ｓａｖａｌｅ  Ｌ，Ｂｅｒｇｅｒｏｎ  Ａ，Ｂｏｕｒｄｉｎ  Ａ，Ｂｏｕｖａｉｓｔ  Ｈ，Ｃａｎｕｅｔ  Ｍ，Ｐｉｓｏｎ  Ｃ，Ｍａｃｒｏ  Ｍ，Ｐｏｕｂｅａｕ  Ｐ，Ｇｉｒｅｒｄ  Ｂ，Ｎａｔａｌｉ  Ｄ，Ｇｕｉｇｎａｂｅｒｔ  Ｃ，Ｐｅｒｒｏｓ  Ｆ，Ｏ’Ｃａｌｌａｇｈａｎ  ＤＳ，Ｊａｉｓ  Ｘ，Ｔｕｂｅｒｔ−Ｂｉｔｔｅｒ  Ｐ，Ｚａｌｃｍａｎ  Ｇ，Ｓｉｔｂｏｎ  Ｏ，Ｓｉｍｏｎｎｅａｕ  Ｇ，Ｈｕｍｂｅｒｔ  Ｍ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｂｙ  ｄａｓａｔｉｎｉｂ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１２；１２５：２１２８−２１３７．
２９．Ｈａｍｉｄ  Ｒ，Ｃｏｇａｎ  ＪＤ，Ｈｅｄｇｅｓ  ＬＫ，Ａｕｓｔｉｎ  Ｅ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＪＡ，Ｎｅｗｍａｎ  ＪＨ，Ｌｏｙｄ  ＪＥ．Ｐｅｎｅｔｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ  ＢＭＰＲ２  ａｌｌｅｌｅ．Ｈｕｍ  Ｍｕｔａｔ  ２００９；３０：６４９−６５４．
３０．Ｄｒａｋｅ  ＫＭ，Ｚｙｇｍｕｎｔ  Ｄ，Ｍａｖｒａｋｉｓ  Ｌ，Ｈａｒｂｏｒ  Ｐ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｃｏｍｈａｉｒ  ＳＡ，Ｅｒｚｕｒｕｍ  ＳＣ，Ａｌｄｒｅｄ  ＭＡ．Ａｌｔｅｒｅｄ  ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｉｎ  ｈｅｒｉｔａｂｌｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ａｎ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ｓｍａｄ−８．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２０１１；１８４：１４００−１４０８．
３１．Ｃａｒｕｓｏ  Ｐ，ＭａｃＬｅａｎ  ＭＲ，Ｋｈａｎｉｎ  Ｒ，ＭｃＣｌｕｒｅ  Ｊ，Ｓｏｏｎ  Ｅ，Ｓｏｕｔｈｇａｔｅ  Ｍ，ＭａｃＤｏｎａｌｄ  ＲＡ，Ｇｒｅｉｇ  ＪＡ，Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ  ＫＥ，Ｍａｓｓｏｎ  Ｒ，Ｄｅｎｂｙ  Ｌ，Ｄｅｍｐｓｉｅ  Ｙ，Ｌｏｎｇ  Ｌ，Ｍｏｒｒｅｌｌ  ＮＷ，Ｂａｋｅｒ  ＡＨ．Ｄｙｎａｍｉｃ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｄｕｅ  ｔｏ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｙｐｏｘｉａ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｒｏｔａｌｉｎｅ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ  ２０１０；３０：７１６−７２３．
３２．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＡＡ，Ｌａｗｒｉｅ  Ａ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２０１７；２３：３１−４５．
３３．Ｈｉｓｌｏｐ  Ａ，Ｒｅｉｄ  Ｌ．Ｎｅｗ  ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉｅｓ  ｏｆ  ｒａｔｓ  ｗｉｔｈ  ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｂｒ  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｐａｔｈｏｌ  １９７６；５７：５４２−５５４．
３４．Ｍｅｌｏｃｈｅ  Ｊ，Ｐｆｌｉｅｇｅｒ  Ａ，Ｖａｉｌｌａｎｃｏｕｒｔ  Ｍ，Ｐａｕｌｉｎ  Ｒ，Ｐｏｔｕｓ  Ｆ，Ｚｅｒｖｏｐｏｕｌｏｓ  Ｓ，Ｇｒａｙｄｏｎ  Ｃ，Ｃｏｕｒｂｏｕｌｉｎ  Ａ，Ｂｒｅｕｉｌｓ−Ｂｏｎｎｅｔ  Ｓ，Ｔｒｅｍｂｌａｙ  Ｅ，Ｃｏｕｔｕｒｅ  Ｃ，Ｍｉｃｈｅｌａｋｉｓ  ＥＤ，Ｐｒｏｖｅｎｃｈｅｒ  Ｓ，Ｂｏｎｎｅｔ  Ｓ．Ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１４；１２９：７８６−７９７．
３５．Ｆｅｄｅｒｉｃｉ  Ｃ，Ｄｒａｋｅ  ＫＭ，Ｒｉｇｅｌｓｋｙ  ＣＭ，ＭｃＮｅｌｌｙ  ＬＮ，Ｍｅａｄｅ  ＳＬ，Ｃｏｍｈａｉｒ  ＳＡ，Ｅｒｚｕｒｕｍ  ＳＣ，Ａｌｄｒｅｄ  ＭＡ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＤＮＡ  Ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２０１５；１９２：２１９−２２８．
３６．ｄｅ  Ｊｅｓｕｓ  Ｐｅｒｅｚ  ＶＡ，Ａｌａｓｔａｌｏ  ＴＰ，Ｗｕ  ＪＣ，Ａｘｅｌｒｏｄ  ＪＤ，Ｃｏｏｋｅ  ＪＰ，Ａｍｉｅｖａ  Ｍ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．Ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｖｉａ  Ｗｎｔ−ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ａｎｄ  Ｗｎｔ−ＲｈｏＡ−Ｒａｃ１  ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２００９；１８４：８３−９９．
３７．Ｃｈｅｎ  ＰＩ，Ｃａｏ  Ａ，Ｍｉｙａｇａｗａ  Ｋ，Ｔｏｊａｉｓ  ＮＦ，Ｈｅｎｎｉｇｓ  ＪＫ，Ｌｉ  ＣＧ，Ｓｗｅｅｎｅｙ  ＮＭ，Ｉｎｇｌｉｓ  ＡＳ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｌｉ  Ｄ，Ｙｅ  Ｍ，Ｆｅｌｄｍａｎ  ＢＪ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．Ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅｓ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．ＪＣＩ  Ｉｎｓｉｇｈｔ  ２０１７；２：ｅ９０４２７．
３８．Ｆｏｎｇ  ＬＹ，Ｆｉｄａｎｚａ  Ｖ，Ｚａｎｅｓｉ  Ｎ，Ｌｏｃｋ  ＬＦ，Ｓｉｒａｃｕｓａ  ＬＤ，Ｍａｎｃｉｎｉ  Ｒ，Ｓｉｐｒａｓｈｖｉｌｉ  Ｚ，Ｏｔｔｅｙ  Ｍ，Ｍａｒｔｉｎ  ＳＥ，Ｄｒｕｃｋ  Ｔ，ＭｃＣｕｅ  ＰＡ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ．Ｍｕｉｒ−Ｔｏｒｒｅ−ｌｉｋｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｉｎ  Ｆｈｉｔ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ２０００；９７：４７４２−４７４７．
３９．Ｚａｎｅｓｉ  Ｎ，Ｆｉｄａｎｚａ  Ｖ，Ｆｏｎｇ  ＬＹ，Ｍａｎｃｉｎｉ  Ｒ，Ｄｒｕｃｋ  Ｔ，Ｖａｌｔｉｅｒｉ  Ｍ，Ｒｕｄｉｇｅｒ  Ｔ，ＭｃＣｕｅ  ＰＡ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ．Ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｉｎ  ＦＨＩＴ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ２００１；９８：１０２５０−１０２５５．
４０．Ｍｅｔｚｇｅｒ  ＲＪ，Ｋｌｅｉｎ  ＯＤ，Ｍａｒｔｉｎ  ＧＲ，Ｋｒａｓｎｏｗ  ＭＡ．Ｔｈｅ  ｂｒａｎｃｈｉｎｇ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００８；４５３：７４５−７５０．
４１．Ａｂｅ  Ｋ，Ｔｏｂａ  Ｍ，Ａｌｚｏｕｂｉ  Ａ，Ｉｔｏ  Ｍ，Ｆａｇａｎ  ＫＡ，Ｃｏｏｌ  ＣＤ，Ｖｏｅｌｋｅｌ  ＮＦ，ＭｃＭｕｒｔｒｙ  ＩＦ，Ｏｋａ  Ｍ．Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌｅｘｉｆｏｒｍ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｓｅｖｅｒｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１０；１２１：２７４７−２７５４．
４２．Ｍｅｙｒｉｃｋ  ＢＯ，Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ＤＢ，Ｂｉｌｌｈｅｉｍｅｒ  ＤＤ，Ｃｏｇａｎ  ＪＤ，Ｐｒｉｎｃｅ  ＭＡ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＪＡ，Ｌｏｙｄ  ＪＥ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｆａｍｉｌｙ  ｗｉｔｈ  ｆａｍｉｌｉａｌ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２００８；１７７：９９−１０７．
４３．Ｇｕ  Ｍ，Ｓｈａｏ  ＮＹ，Ｓａ  Ｓ，Ｌｉ  Ｄ，Ｔｅｒｍｇｌｉｎｃｈａｎ  Ｖ，Ａｍｅｅｎ  Ｍ，Ｋａｒａｋｉｋｅｓ  Ｉ，Ｓｏｓａ  Ｇ，Ｇｒｕｂｅｒｔ  Ｆ，Ｌｅｅ  Ｊ，Ｃａｏ  Ａ，Ｔａｙｌｏｒ  Ｓ，Ｍａ  Ｙ，Ｚｈａｏ  Ｚ，Ｃｈａｐｐｅｌｌ  Ｊ，Ｈａｍｉｄ  Ｒ，Ａｕｓｔｉｎ  ＥＤ，Ｇｏｌｄ  ＪＤ，Ｗｕ  ＪＣ，Ｓｎｙｄｅｒ  ＭＰ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．Ｐａｔｉｅｎｔ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉＰＳＣ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ  Ｕｎｃｏｖｅｒ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  ｔｈａｔ  Ｐｒｏｔｅｃｔ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ＢＭＰＲ２  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ．Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ２０１７；２０：４９０−５０４．ｅ４９５．
４４．Ｎｉｃｏｌｌｓ  ＭＲ，Ｔａｒａｓｅｖｉｃｉｅｎｅ−Ｓｔｅｗａｒｔ  Ｌ，Ｒａｉ  ＰＲ，Ｂａｄｅｓｃｈ  ＤＢ，Ｖｏｅｌｋｅｌ  ＮＦ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ａ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ２００５；２６：１１１０−１１１８．
４５．Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ，Ｇｕｉｇｎａｂｅｒｔ  Ｃ，Ｈｕｍｂｅｒｔ  Ｍ，Ｎｉｃｏｌｌｓ  ＭＲ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  ２０１４；１１５：１６５−１７５．
４６．Ｈｅｍｎｅｓ  ＡＲ，Ｔｒａｍｍｅｌｌ  ＡＷ，Ａｒｃｈｅｒ  ＳＬ，Ｒｉｃｈ  Ｓ，Ｙｕ  Ｃ，Ｎｉａｎ  Ｈ，Ｐｅｎｎｅｒ  Ｎ，Ｆｕｎｋｅ  Ｍ，Ｗｈｅｅｌｅｒ  Ｌ，Ｒｏｂｂｉｎｓ  ＩＭ，Ａｕｓｔｉｎ  ＥＤ，Ｎｅｗｍａｎ  ＪＨ，Ｗｅｓｔ  Ｊ．Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｏｆ  ｖａｓｏｄｉｌａｔｏｒ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１５；１３１：４０１−４０９；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  ４０９．
４７．Ｓｉｌｖａ  Ｓｏａｒｅｓ  ＥＷ，ｄｅ  Ｌｉｍａ  Ｓａｎｔｏｓ  ＳＣ，Ｂｕｅｎｏ  ＡＧ，Ｃａｖａｌｌｉ  ＩＪ，Ｃａｖａｌｌｉ  ＬＲ，Ｆｏｕｔｏ  Ｍａｔｉａｓ  ＪＥ，ｄｅ  Ｓｏｕｚａ  Ｆｏｎｓｅｃａ  Ｒｉｂｅｉｒｏ  ＥＭ．Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ  ａｔ  ｔｈｅ  ＢＲＣＡ１  ａｎｄ  ＦＨＩＴ  ｇｅｎｅｓ  ａｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｓｐｏｒａｄｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔ  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ  ２０１０；１９９：２４−３０．
４８．Ａｎｄｒｉａｎｉ  Ｆ，Ｒｏｚ  Ｅ，Ｃａｓｅｒｉｎｉ  Ｒ，Ｃｏｎｔｅ  Ｄ，Ｐａｓｔｏｒｉｎｏ  Ｕ，Ｓｏｚｚｉ  Ｇ，Ｒｏｚ  Ｌ．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｏｔｈ  ＦＨＩＴ  ａｎｄ  ｐ５３  ｃｏｏｐｅｒａｔｅ  ｉｎ  ｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１２；７：６３１−６４２．
４９．Ｐｅｋａｒｓｋｙ  Ｙ，Ｚａｎｅｓｉ  Ｎ，Ｐａｌａｍａｒｃｈｕｋ  Ａ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ．ＦＨＩＴ：ｆｒｏｍ  ｇｅｎｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｔｏ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ  ２００２；３：７４８−７５４．
５０．Ｐａｉｓｉｅ  ＣＡ，Ｓｃｈｒｏｃｋ  ＭＳ，Ｋａｒｒａｓ  ＪＲ，Ｚｈａｎｇ  Ｊ，Ｍｉｕｍａ  Ｓ，Ｏｕｄａ  ＩＭ，Ｗａｔｅｒｓ  ＣＥ，Ｓａｌｄｉｖａｒ  ＪＣ，Ｄｒｕｃｋ  Ｔ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ．Ｅｘｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ｓｉｎｇｌｅ−ｂａｓｅ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｉｓｓｕｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ  Ｆｈｉｔ  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｏｕｓｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ  ２０１６；１０７：５２８−５３５．
５１．Ｓｃｈｉｅｓｓ  Ｒ，Ｓｅｎｎ  Ｏ，Ｆｉｓｃｈｌｅｒ  Ｍ，Ｈｕｂｅｒ  ＬＣ，Ｖａｔａｎｄａｓｌａｒ  Ｓ，Ｓｐｅｉｃｈ  Ｒ，Ｕｌｒｉｃｈ  Ｓ．Ｔｏｂａｃｃｏ  ｓｍｏｋｅ：ａ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ？  Ａ  ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓｔｕｄｙ．Ｃｈｅｓｔ  ２０１０；１３８：１０８６−１０９２．
５２．Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ．ＦＲＡ３Ｂ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｃｏｍｍｏｎ  ｆｒａｇｉｌｅ  ｓｉｔｅｓ：ｔｈｅ  ｗｅａｋｅｓｔ  ｌｉｎｋｓ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００１；１：２１４−２２１．
５３．Ｙｏｏ  ＹＧ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  Ｊ，Ｈｕａｎｇ  ＬＥ．ＨＩＦ−１α  ｃｏｎｆｅｒｓ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｔｒａｉｔｓ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ｉｔｓ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１１；７１：１２４４−１２５２．
５４．Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｄ，Ｒａｊｅｗｓｋｙ  ＭＦ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｍｏｎ  ｆｒａｇｉｌｅ  ｓｉｔｅ  ＦＲＡ３Ｂ  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ａｆｆｅｃｔ  ＦＨＩＴ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２００１；２０：１７９８−１８０１．
５５．Ｊａｃｑｕｉｎ  Ｓ，Ｒｉｎｃｈｅｖａｌ  Ｖ，Ｍｉｇｎｏｔｔｅ  Ｂ，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｓ，Ｈｕｍｂｅｒｔ  Ｍ，Ｍｅｒｃｉｅｒ  Ｏ，Ｌｏｎｄｏｎｏ−Ｖａｌｌｅｊｏ  Ａ，Ｆａｄｅｌ  Ｅ，Ｅｄｄａｈｉｂｉ  Ｓ．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ５３  Ｉｓ  Ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｔｏ  Ｉｎｄｕｃｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ＰｕｌｍｏｎａｒｙＨｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｒａｔｓ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１５；１０：ｅ０１３１９４０．
５６．Ｙａｎ  Ｗ，Ｘｕ  Ｎ，Ｈａｎ  Ｘ，Ｚｈｏｕ  ＸＭ，Ｈｅ  Ｂ．Ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ＦＨＩＴ  ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ，ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗ．Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ２０１６；６：１９３０３．
５７．Ｗａｌｉ  Ａ．ＦＨＩＴ：ｄｏｕｂｔｓ  ａｒｅ  ｃｌｅａｒ  ｎｏｗ．ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＷｏｒｌｄＪｏｕｒｎａｌ  ２０１０；１０：１１４２−１１５１．
５８．Ｇｕｌｅｒ  Ｇ，Ｉｌｉｏｐｏｕｌｏｓ  Ｄ，Ｈａｎ  ＳＹ，Ｆｏｎｇ  ＬＹ，Ｌｕｂｅｔ  ＲＡ，Ｇｒｕｂｂｓ  ＣＪ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ．Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｆｈｉｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｅｇｉｏｎ  ａｒｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ．Ｍｏｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｇ  ２００５；４３：１７５−１８１．
５９．Ｔａｎａｋａ  Ｈ，Ｓｈｉｍａｄａ  Ｙ，Ｈａｒａｄａ  Ｈ，Ｓｈｉｎｏｄａ  Ｍ，Ｈａｔｏｏｋａ  Ｓ，Ｉｍａｍｕｒａ  Ｍ，Ｉｓｈｉｚａｋｉ  Ｋ．Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ５’  ＣｐＧ  ｉｓｌａｎｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＦＨＩＴ  ｇｅｎｅ  ｉｓ  ｃｌｏｓｅｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １９９８；５８：３４２９−３４３４．
６０．Ｚｏｃｈｂａｕｅｒ−Ｍｕｌｌｅｒ  Ｓ，Ｆｏｎｇ  ＫＭ，Ｍａｉｔｒａ  Ａ，Ｌａｍ  Ｓ，Ｇｅｒａｄｔｓ  Ｊ，Ａｓｈｆａｑ  Ｒ，Ｖｉｒｍａｎｉ  ＡＫ，Ｍｉｌｃｈｇｒｕｂ  Ｓ，Ｇａｚｄａｒ  ＡＦ，Ｍｉｎｎａ  ＪＤ．５’  ＣｐＧ  ｉｓｌａｎｄ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＦＨＩＴ  ｇｅｎｅ  ｉｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ａｎｄ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００１；６１：３５８１−３５８５．
６１．Ｙａｎｇ  Ｑ，Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｍ，Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｙ，Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ｇ，Ｓｕｚｕｍａ  Ｔ，Ｕｍｅｍｕｒａ  Ｔ，Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｙ，Ｍｏｒｉ  Ｉ，Ｓａｋｕｒａｉ  Ｔ，Ｋａｋｕｄｏ  Ｋ．Ｔｗｏ−ｈｉｔ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＨＩＴ  ｂｙ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００２；８：２８９０−２８９３．
６２．Ｄｈｉｌｌｏｎ  ＶＳ，Ｓｈａｈｉｄ  Ｍ，Ｈｕｓａｉｎ  ＳＡ．ＣｐＧ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＦＨＩＴ，ＦＡＮＣＦ，ｃｙｃｌｉｎ−Ｄ２，ＢＲＣＡ２  ａｎｄ  ＲＵＮＸ３  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  Ｇｒａｎｕｌｏｓａ  ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒｓ（ＧＣＴｓ）ｏｆ  ｏｖａｒｉａｎ  ｏｒｉｇｉｎ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００４；３：３３．
６３．Ｋｉｍ  ＪＳ，ＫｉｍＨ，Ｓｈｉｍ  ＹＭ，Ｈａｎ  Ｊ，Ｐａｒｋ  Ｊ，Ｋｉｍ  ＤＨ．Ａｂｅｒｒａｎｔ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＦＨＩＴ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｓｍｏｋｅｒｓ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｕｎｇ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２００４；２５：２１６５−２１７１．
６４．Ｋｏｒｎｅｒ  Ａ，Ｍｕｄｄｕｌｕｒｕ  Ｇ，Ｍａｎｅｇｏｌｄ  Ｃ，ＡｌｌｇａｙｅｒＨ．Ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｉｎｖａｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｙ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１０；１０３：８０２−８１１．
６５．Ｚｅｎｇ  Ｙ，Ｑｕ  Ｘ，ＬｉＨ，Ｈｕａｎｇ  Ｓ，Ｗａｎｇ  Ｓ，Ｘｕ  Ｑ，Ｌｉｎ  Ｒ，Ｈａｎ  Ｑ，Ｌｉ  Ｊ，Ｚｈａｏ  ＲＣ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ−１００  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｄｉｐｏｓｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＢＭＰＲ２．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ２０１２；５８６：２３７５−２３８１．
６６．Ｓｕｎ  Ｑ，Ｍａｏ  Ｓ，Ｌｉ  Ｈ，Ｚｅｎ  Ｋ，Ｚｈａｎｇ  ＣＹ，Ｌｉ  Ｌ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｍｉＲ−１７  ｆａｍｉｌｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｌｏｏｐ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｎ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１３；８：ｅ８３０６７．
６７．Ｂｒｏｃｋ  Ｍ，Ｔｒｅｎｋｍａｎｎ  Ｍ，Ｇａｙ  ＲＥ，Ｍｉｃｈｅｌ  ＢＡ，Ｇａｙ  Ｓ，Ｆｉｓｃｈｌｅｒ  Ｍ，Ｕｌｒｉｃｈ  Ｓ，Ｓｐｅｉｃｈ  Ｒ，Ｈｕｂｅｒ  ＬＣ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＳＴＡＴ３−ｍｉｃｒｏＲＮＡ  ｃｌｕｓｔｅｒ  １７／９２  ｐａｔｈｗａｙ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ  ２００９；１０４：１１８４−１１９１．
６８．Ｈａｎｓｍａｎｎ  Ｇ，ｄｅ  Ｊｅｓｕｓ  Ｐｅｒｅｚ  ＶＡ，Ａｌａｓｔａｌｏ  ＴＰ，Ａｌｖｉｒａ  ＣＭ，Ｇｕｉｇｎａｂｅｒｔ  Ｃ，Ｂｅｋｋｅｒ  ＪＭ，Ｓｃｈｅｌｌｏｎｇ  Ｓ，Ｕｒａｓｈｉｍａ  Ｔ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｍｏｒｒｅｌｌ  ＮＷ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．Ａｎ  ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ＢＭＰ−２／ＰＰＡＲｇａｍｍａ／ａｐｏＥ  ａｘｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ＳＭＣｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２００８；１１８：１８４６−１８５７．
６９．Ｂｒｏｃｋ  Ｍ，Ｓａｍｉｌｌａｎ  ＶＪ，Ｔｒｅｎｋｍａｎｎ  Ｍ，Ｓｃｈｗａｒｚｗａｌｄ  Ｃ，Ｕｌｒｉｃｈ  Ｓ，Ｇａｙ  ＲＥ，Ｇａｓｓｍａｎｎ  Ｍ，Ｏｓｔｅｒｇａａｒｄ  Ｌ，Ｇａｙ  Ｓ，Ｓｐｅｉｃｈ  Ｒ，Ｈｕｂｅｒ  ＬＣ．ＡｎｔａｇｏｍｉＲ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ｍｉＲ−２０ａ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＢＭＰＲ２  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ  ｉｎ  ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．ＥｕｒＨｅａｒｔ  Ｊ  ２０１４；３５：３２０３−３２１１．
７０．Ｄｉｅｂｏｌｄ  Ｉ，Ｈｅｎｎｉｇｓ  ＪＫ，Ｍｉｙａｇａｗａ  Ｋ，Ｌｉ  ＣＧ，Ｎｉｃｋｅｌ  ＮＰ，Ｋａｓｃｈｗｉｃｈ  Ｍ，Ｃａｏ  Ａ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｒｅｄｄｙ  Ｓ，Ｃｈｅｎ  ＰＩ，Ｎａｋａｈｉｒａ  Ｋ，Ａｌｃａｚａｒ  ＭＡ，Ｈｏｐｐｅｒ  ＲＫ，Ｊｉ  Ｌ，Ｆｅｌｄｍａｎ  ＢＪ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．ＢＭＰＲ２  ｐｒｅｓｅｒｖｅｓ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｄｕｒｉｎｇ  ｒｅｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  ２０１５；２１：５９６−６０８．
７１．Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０１２；１２２：４３０６−４３１３．
７２．Ａｌｄｒｅｄ  ＭＡ，Ｃｏｍｈａｉｒ  ＳＡ，Ｖａｒｅｌｌａ−Ｇａｒｃｉａ  Ｍ，Ａｓｏｓｉｎｇｈ  Ｋ，Ｘｕ  Ｗ，Ｎｏｏｎ  ＧＰ，Ｔｈｉｓｔｌｅｔｈｗａｉｔｅ  ＰＡ，Ｔｕｄｅｒ  ＲＭ，Ｅｒｚｕｒｕｍ  ＳＣ，Ｇｅｒａｃｉ  ＭＷ，Ｃｏｌｄｒｅｎ  ＣＤ．Ｓｏｍａｔｉｃ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｕｎｇｓ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２０１０；１８２：１１５３−１１６０．
７３．Ｃｉｒｏｍｂｅｌｌａ  Ｒ，Ｍｏｎｔｒｏｎｅ  Ｇ，Ｓｔｏｐｐａｃｃｉａｒｏ  Ａ，Ｇｉｇｌｉｏ  Ｓ，Ｖｏｌｉｎｉａ  Ｓ，Ｇｒａｚｉａｎｏ  Ｐ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ，Ｖｅｃｃｈｉｏｎｅ  Ａ．Ｆｈｉｔ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｐｒｅｎｅｏｐｌａｓｉａ：ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ  ２０１０；２９１：２３０−２３６．
７４．Ｄｒａｋｅ  ＫＭ，Ｄｕｎｍｏｒｅ  ＢＪ，ＭｃＮｅｌｌｙ  ＬＮ，Ｍｏｒｒｅｌｌ  ＮＷ，Ａｌｄｒｅｄ  ＭＡ．Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｎｓｅｎｓｅ  ＢＭＰＲ２  ａｎｄ  ＳＭＡＤ９  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｂｙ  ａｔａｌｕｒｅｎ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２０１３；４９：４０３−４０９．
７５．Ｂｅｔａｐｕｄｉ  Ｖ，Ｓｈｕｋｌａ  Ｍ，Ａｌｌｕｒｉ  Ｒ，Ｍｅｒｋｕｌｏｖ  Ｓ，ＭｃＣｒａｅ  ＫＲ．Ｎｏｖｅｌ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｐ５６／Ｌｃｋ  ｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２０１６；３０：３５１５−３５２６．
７６．Ｊｏａｎｎｅｓ  Ａ，Ｇｒｅｌｅｔ  Ｓ，Ｄｕｃａ  Ｌ，Ｇｉｌｌｅｓ  Ｃ，Ｋｉｌｅｚｔｋｙ  Ｃ，Ｄａｌｓｔｅｉｎ  Ｖ，Ｂｉｒｅｍｂａｕｔ  Ｐ，Ｐｏｌｅｔｔｅ  Ｍ，Ｎａｗｒｏｃｋｉ−Ｒａｂｙ  Ｂ．Ｆｈｉｔ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ＥＭＴ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｎ  ＥＧＦＲ／Ｓｒｃ／ＥＲＫ／Ｓｌｕｇ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｘｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４；１２：７７５−７８３．
７７．Ｊｏａｎｎｅｓ  Ａ，Ｂｏｎｎｏｍｅｔ  Ａ，Ｂｉｎｄｅｌｓ  Ｓ，Ｐｏｌｅｔｔｅ  Ｍ，Ｇｉｌｌｅｓ  Ｃ，Ｂｕｒｌｅｔ  Ｈ，Ｃｕｔｒｏｎａ  Ｊ，Ｚａｈｍ  ＪＭ，Ｂｉｒｅｍｂａｕｔ  Ｐ，Ｎａｗｒｏｃｋｉ−Ｒａｂｙ  Ｂ．Ｆｈｉｔ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｉｎｖａｓｉｏｎ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０１０；２９：１２０３−１２１３．
７８．Ｓｕｈ  ＳＳ，Ｙｏｏ  ＪＹ，Ｃｕｉ  Ｒ，Ｋａｕｒ  Ｂ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ，Ｌｅｅ  ＴＫ，Ａｑｅｉｌａｎ  ＲＩ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ．ＦＨＩＴ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ−ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ．ＰＬｏＳ  Ｇｅｎｅｔ  ２０１４；１０：ｅ１００４６５２．
７９．Ｓｍａｄｊａ  ＤＭ，Ｍａｕｇｅ  Ｌ，Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｏ，Ｓｉｌｖｅｓｔｒｅ  ＪＳ，Ｇｕｅｒｉｎ  Ｃ，Ｇｏｄｉｅｒ  Ａ，Ｈｅｎｎｏ  Ｐ，Ｇａｕｓｓｅｍ  Ｐ，Ｉｓｒａｅｌ−Ｂｉｅｔ  Ｄ．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ２０１０；３６：１２８４−１２９３．
８０．Ｖｉｔａｌｉ  ＳＨ，Ｈａｎｓｍａｎｎ  Ｇ，Ｒｏｓｅ  Ｃ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｇｏｎｚａｌｅｚ  Ａ，Ｓｃｈｅｉｄ  Ａ，Ｍｉｔｓｉａｌｉｓ  ＳＡ，Ｋｏｕｒｅｍｂａｎａｓ  Ｓ．Ｔｈｅ  Ｓｕｇｅｎ  ５４１６／ｈｙｐｏｘｉａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ：ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ．Ｐｕｌｍ  Ｃｉｒｃ  ２０１４；４：６１９−６２９．
８１．Ｇｏｍｅｚ−Ａｒｒｏｙｏ  ＪＧ，Ｆａｒｋａｓ  Ｌ，Ａｌｈｕｓｓａｉｎｉ  ＡＡ，Ｆａｒｋａｓ  Ｄ，Ｋｒａｓｋａｕｓｋａｓ  Ｄ，Ｖｏｅｌｋｅｌ  ＮＦ，ＢｏｇａａｒｄＨＪ．Ｔｈｅ  ｍｏｎｏｃｒｏｔａｌｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２０１２；３０２：Ｌ３６３−３６９．
８２．Ｄｅａｎ  Ａ，Ｎｉｌｓｅｎ  Ｍ，Ｌｏｕｇｈｌｉｎ  Ｌ，Ｓａｌｔ  ＩＰ，ＭａｃＬｅａｎ  ＭＲ．Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ  Ｒｅｖｅｒｓｅｓ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｖｉａ  Ａｒｏｍａｔａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ２０１６；６８：４４６−４５４．
８３．Ｓａｖａｉ  Ｒ，Ａｌ−Ｔａｍａｒｉ  ＨＭ，Ｓｅｄｄｉｎｇ  Ｄ，Ｋｏｊｏｎａｚａｒｏｖ  Ｂ，Ｍｕｅｃｋｅ  Ｃ，Ｔｅｓｋｅ  Ｒ，Ｃａｐｅｃｃｈｉ  ＭＲ，Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ  Ｎ，Ｇｒｉｍｍｉｎｇｅｒ  Ｆ，Ｓｅｅｇｅｒ  Ｗ，Ｓｃｈｅｒｍｕｌｙ  ＲＴ，Ｐｕｌｌａｍｓｅｔｔｉ  ＳＳ．Ｐｒｏ−ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｃｏｎｖｅｒｇｅ  ｏｎ  ＦｏｘＯ１  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１４；２０：１２８９−１３００．
８４．Ｎｗａｎｋｗｏ  Ｎ，Ｚｈａｎｇ  Ｚ，Ｗａｎｇ  Ｔ，Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｃ，Ｒｅｓｔａ  Ｌ，Ｅｒｍｉｓｃｈ  Ｓ，Ｄａｙ  Ｊ，Ｄｅｃｋｅｒ  Ｒ，Ｋｏｒｎｂｅｒｇ  Ｌ，Ｎｉｃｏｌ  Ｓ，Ｔｈｏｒｎｔｏｎ  Ｄ，Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ＤＫ，Ｃａｒｄｕｃｃｉ  ＭＡ．Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ  ａｎｄ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃａｎｃｅｒ：ｓａｆｅｔｙ，ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  ２０１３；３１：６５３−６６０．
８５．Ｓｃｈｍｉｄｉｎｇｅｒ  Ｍ，Ｓｚｃｚｙｌｉｋ  Ｃ，Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ  ＣＮ，Ｋａｎｉａ  Ｍ，Ｋｅｌｌｙ  ＣＳ，Ｄｅｃｋｅｒ  Ｒ，Ｈａｍｉｄ  Ｏ，Ｆａｅｌｋｅｒ  Ｔ，Ｅｓｃｕｄｉｅｒ  Ｂ．Ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ  ａｎｄ  ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ  ｖｅｒｓｕｓ  ｐｌａｃｅｂｏ  ａｎｄ  ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１２；３５：４９３−４９７．
８６．Ｔｅｉｃｈｅｒ  ＢＡ，Ａｌｖａｒｅｚ  Ｅ，Ｍｅｎｏｎ  Ｋ，Ｅｓｔｅｒｍａｎ  ＭＡ，Ｃｏｎｓｉｄｉｎｅ  Ｅ，Ｓｈｉｈ  Ｃ，Ｆａｕｌ  ＭＭ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃｂｅｔａ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００２；４９：６９−７７．
８７．Ｐｏｄａｒ  Ｋ，Ｒａａｂ  ＭＳ，Ｚｈａｎｇ  Ｊ，ＭｃＭｉｌｌｉｎ  Ｄ，Ｂｒｅｉｔｋｒｅｕｔｚ  Ｉ，Ｔａｉ  ＹＴ，Ｌｉｎ  ＢＫ，Ｍｕｎｓｈｉ  Ｎ，Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ  Ｔ，Ｃｈａｕｈａｎ  Ｄ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＫＣ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＰＫＣ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ，ｏｒａｌｌｙ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｅｎｚａｓｔａｕｒｉｎ（ＬＹ３１７６１５．ＨＣｌ）．Ｂｌｏｏｄ  ２００７；１０９：１６６９−１６７７．
８８．Ｂｉａｎｃｈｉ  Ｆ，Ｍａｇｎｉｆｉｃｏ  Ａ，Ｏｌｇｉａｔｉ  Ｃ，Ｚａｎｅｓｉ  Ｎ，Ｐｅｋａｒｓｋｙ  Ｙ，Ｔａｇｌｉａｂｕｅ  Ｅ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ，Ｍｅｎａｒｄ  Ｓ，Ｃａｍｐｉｇｌｉｏ  Ｍ．ＦＨＩＴ−ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆａｍｉｌｙ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ２００６；１０３：１８９８１−１８９８６．
８９．Ｐｉｃｈｉｏｒｒｉ  Ｆ，Ｏｋｕｍｕｒａ  Ｈ，Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｔ，Ｇａｒｒｉｓｏｎ  ＰＮ，Ｇａｓｐａｒｉｎｉ  Ｐ，Ｓｕｈ  ＳＳ，Ｄｒｕｃｋ  Ｔ，ＭｃＣｏｒｋｅｌｌ  ＫＡ，Ｂａｒｎｅｓ  ＬＤ，Ｃｒｏｃｅ  ＣＭ，Ｈｕｅｂｎｅｒ  Ｋ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｒａｇｉｌｅ  ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  ｔｒｉａｄ（Ｆｈｉｔ）ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｆｅａｔｕｒｅｓ  ｗｉｔｈ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２００９；２８４：１０４０−１０４９．
９０．Ｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，１１（１）：５９，Ａｕｇｕｓｔ  ２０１３．
Ｅ１．Ｓｐｉｅｋｅｒｋｏｅｔｔｅｒ  Ｅ，Ｔｉａｎ  Ｘ，Ｃａｉ  Ｊ，Ｈｏｐｐｅｒ  ＲＫ，Ｓｕｄｈｅｅｎｄｒａ  Ｄ，Ｌｉ  ＣＧ，Ｅｌ−Ｂｉｚｒｉ  Ｎ，Ｓａｗａｄａ  Ｈ，Ｈａｇｈｉｇｈａｔ  Ｒ，Ｃｈａｎ  Ｒ，Ｈａｇｈｉｇｈａｔ  Ｌ，ｄｅ  Ｊｅｓｕｓ  Ｐｅｒｅｚ  Ｖ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｒｅｄｄｙ  Ｓ，Ｚｈａｏ  Ｍ，Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  Ｄ，Ｓｏｌｏｗ−Ｃｏｒｄｅｒｏ  ＤＥ，Ｂｅａｃｈｙ  ＰＡ，Ｗａｎｄｌｅｓｓ  ＴＪ，Ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ  Ｐ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．ＦＫ５０６  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ＢＭＰＲ２，ｒｅｓｃｕｅｓ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０１３；１２３：３６００−３６１３．
Ｅ２．Ｃｈｅｎ  Ｒ，Ｋｈａｔｒｉ  Ｐ，Ｍａｚｕｒ  ＰＫ，Ｐｏｌｉｎ  Ｍ，Ｚｈｅｎｇ  Ｙ，Ｖａｋａ  Ｄ，Ｈｏａｎｇ  ＣＤ，Ｓｈｒａｇｅｒ  Ｊ，Ｘｕ  Ｙ，Ｖｉｃｅｎｔ  Ｓ，Ｂｕｔｔｅ  ＡＪ，Ｓｗｅｅｔ−Ｃｏｒｄｅｒｏ  ＥＡ．Ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ＰＴＫ７  ａｓ  ａ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４；７４：２８９２−２９０２．
Ｅ３．Ｋｈａｔｒｉ  Ｐ，Ｒｏｅｄｄｅｒ  Ｓ，Ｋｉｍｕｒａ  Ｎ，Ｄｅ  Ｖｕｓｓｅｒ  Ｋ，Ｍｏｒｇａｎ  ＡＡ，Ｇｏｎｇ  Ｙ，Ｆｉｓｃｈｂｅｉｎ  ＭＰ，Ｒｏｂｂｉｎｓ  ＲＣ，Ｎａｅｓｅｎｓ  Ｍ，Ｂｕｔｔｅ  ＡＪ，Ｓａｒｗａｌ  ＭＭ．Ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｍｏｄｕｌｅ（ＣＲＭ）ｆｏｒ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ａｃｒｏｓｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｒｇａｎｓ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｏｒｇａｎ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１３；２１０：２２０５−２２２１．
Ｅ４．Ｌｉ  ＭＤ，Ｂｕｒｎｓ  ＴＣ，Ｍｏｒｇａｎ  ＡＡ，Ｋｈａｔｒｉ  Ｐ．Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｍｕｌｔｉ−ｃｏｈｏｒｔ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２０１４；２：９３．
Ｅ５．Ｌｅｅ  ＫＣ，Ｏｕｗｅｈａｎｄ  Ｉ，Ｇｉａｎｎｉｎｉ  ＡＬ，Ｔｈｏｍａｓ  ＮＳ，Ｄｉｂｂ  ＮＪ，Ｂｉｊｌｍａｋｅｒｓ  ＭＪ．Ｌｃｋ  ｉｓ  ａ  ｋｅｙ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｉｍａｔｉｎｉｂ  ａｎｄ  ｄａｓａｔｉｎｉｂ  ｉｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１０；２４：８９６−９００．
Ｅ６．Ｄｒａｇｈｉｃｉ  Ｓ，Ｓｅｌｌａｍｕｔｈｕ  Ｓ，Ｋｈａｔｒｉ  Ｐ．Ｂａｂｅｌ’ｓ  ｔｏｗｅｒ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ：ａ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｒｅｓｏｕｒｃｅ  ｆｏｒ  ｃｒｏｓｓ−ｒｅｆｅｒｅｎｃｉｎｇ  ａｃｒｏｓｓ  ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ  ｄａｔａｂａｓｅｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００６；２２：２９３４−２９３９．
Ｅ７．Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ  Ｙ，Ｄｒａｉ  Ｄ，Ｅｌｍｅｒ  Ｇ，Ｋａｆｋａｆｉ  Ｎ，Ｇｏｌａｎｉ  Ｉ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆａｌｓｅ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｒａｔｅ  ｉｎ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｂｅｈａｖ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ２００１；１２５：２７９−２８４．
Ｅ８．Ｓｐｉｅｋｅｒｋｏｅｔｔｅｒ  Ｅ，Ｓｕｎｇ  ＹＫ，Ｓｕｄｈｅｅｎｄｒａ  Ｄ，Ｓｃｏｔｔ  Ｖ，Ｄｅｌ  Ｒｏｓａｒｉｏ  Ｐ，Ｂｉｌｌ  Ｍ，Ｈａｄｄａｄ  Ｆ，Ｌｏｎｇ−Ｂｏｙｌｅ  Ｊ，Ｈｅｄｌｉｎ  Ｈ，Ｚａｍａｎｉａｎ  ＲＴ．Ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ＦＫ５０６（ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ）ｆｏｒ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ２０１７；５０．
Ｅ９．Ｃｈｅｎ  ＰＩ，Ｃａｏ  Ａ，Ｍｉｙａｇａｗａ  Ｋ，Ｔｏｊａｉｓ  ＮＦ，Ｈｅｎｎｉｇｓ  ＪＫ，Ｌｉ  ＣＧ，Ｓｗｅｅｎｅｙ  ＮＭ，Ｉｎｇｌｉｓ  ＡＳ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｌｉ  Ｄ，Ｙｅ  Ｍ，Ｆｅｌｄｍａｎ  ＢＪ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．Ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅｓ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．ＪＣＩ  Ｉｎｓｉｇｈｔ  ２０１７；２：ｅ９０４２７．
Ｅ１０．Ｍｅｔｚｇｅｒ  ＲＪ，Ｋｌｅｉｎ  ＯＤ，Ｍａｒｔｉｎ  ＧＲ，Ｋｒａｓｎｏｗ  ＭＡ．Ｔｈｅ  ｂｒａｎｃｈｉｎｇ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００８；４５３：７４５−７５０．
Ｅ１１．Ｓｈｅｉｋｈ  ＡＱ，Ｍｉｓｒａ  Ａ，Ｒｏｓａｓ  ＩＯ，Ａｄａｍｓ  ＲＨ，Ｇｒｅｉｆ  ＤＭ．Ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ  ａｒｅ  ｐｒｉｍｅｄ  ｔｏ  ｍｕｓｃｕｌａｒｉｚｅ  ｉｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１５；７：３０８ｒａ１５９．
Ｅ１２．Ａｕｓｔｉｎ  ＥＤ，Ｌａｈｍ  Ｔ，Ｗｅｓｔ  Ｊ，Ｔｏｆｏｖｉｃ  ＳＰ，Ｊｏｈａｎｓｅｎ  ＡＫ，Ｍａｃｌｅａｎ  ＭＲ，Ａｌｚｏｕｂｉ  Ａ，Ｏｋａ  Ｍ．Ｇｅｎｄｅｒ，ｓｅｘ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ａｎｄ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｐｕｌｍ  Ｃｉｒｃ  ２０１３；３：２９４−３１４．
Ｅ１３．Ｈａｎｓｍａｎｎ  Ｇ，Ｗａｇｎｅｒ  ＲＡ，Ｓｃｈｅｌｌｏｎｇ  Ｓ，Ｐｅｒｅｚ  ＶＡ，Ｕｒａｓｈｉｍａ  Ｔ，Ｗａｎｇ  Ｌ，Ｓｈｅｉｋｈ  ＡＹ，Ｓｕｅｎ  ＲＳ，Ｓｔｅｗａｒｔ  ＤＪ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ  Ｍ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｓ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓｅｄ  ｂｙ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｇａｍｍａ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００７；１１５：１２７５−１２８４．
Ｅ１４．Ｓａｉｄ  ＳＩ，Ｈａｍｉｄｉ  ＳＡ，Ｄｉｃｋｍａｎ  ＫＧ，Ｓｚｅｍａ  ＡＭ，Ｌｙｕｂｓｋｙ  Ｓ，Ｌｉｎ  ＲＺ，Ｊｉａｎｇ  ＹＰ，Ｃｈｅｎ  ＪＪ，Ｗａｓｃｈｅｋ  ＪＡ，Ｋｏｒｔ  Ｓ．Ｍｏｄｅｒａｔｅ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｌｅ  ｍｉｃｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｔｈｅ  ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｇｅｎｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００７；１１５：１２６０−１２６８．
Ｅ１５．Ｄｅｍｐｓｉｅ  Ｙ，ＭａｃＬｅａｎ  ＭＲ．Ｔｈｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｇｅｎｄｅｒ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｅｘｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２０１３；９８：１２５７−１２６１．
Ｅ１６．Ｃｚａｒｎｅｃｋａ  ＫＨ，Ｍｉｇｄａｌｓｋａ−Ｓｅｋ  Ｍ，Ｄｏｍａｎｓｋａ  Ｄ，Ｐａｓｔｕｓｚａｋ−Ｌｅｗａｎｄｏｓｋａ  Ｄ，Ｄｕｔｋｏｗｓｋａ  Ａ，Ｋｏｒｄｉａｋ  Ｊ，Ｎａｗｒｏｔ  Ｅ，Ｋｉｓｚａｌｋｉｅｗｉｃｚ  Ｊ，Ａｎｔｃｚａｋ  Ａ，Ｂｒｚｅｚｉａｎｓｋａ−Ｌａｓｏｔａ  Ｅ．ＦＨＩＴ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｓｔａｔｕｓ，ｌｏｗ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｈｉｇｈ  ｍＲＮＡ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１６；４９：１１７５−１１８４．
Ｅ１７．ＺｈｅｎｇＨ，Ｔｓｕｎｅｙａｍａ  Ｋ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｈ，Ｍｉｗａ  Ｓ，Ｎｏｍｏｔｏ  Ｋ，Ｓａｉｔｏ  Ｈ，Ｍａｓｕｄａ  Ｓ，Ｔａｋａｎｏ  Ｙ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＰＴＥＮ  ａｎｄ  ＦＨＩＴ  ｉｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｂａｌａｎｃｅ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００７；２７：５７５−５８１．
Ｅ１８．Ｐｕｇｈ  ＭＥ，Ｈｅｍｎｅｓ  ＡＲ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  ｗｏｍｅｎ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｔｈｅｒ  ２０１０；８：１５４９−１５５８．
Ｅ１９．Ｒａｂｅｌｏ  ＲＡ，Ａｎｔｕｎｅｓ  ＬＭ，Ｅｔｃｈｅｂｅｈｅｒｅ  ＲＭ，Ｎｏｍｅｌｉｎｉ  ＲＳ，Ｎａｓｃｅｎｔｅｓ  ＧＡ，Ｍｕｒｔａ  ＥＦ，Ｐｅｄｒｏｓａ  ＡＬ．Ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｒａｇｉｌｅ  ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  ｔｒｉａｄ（ＦＨＩＴ）ｌｏｃｕｓ  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＦＨＩＴ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｂｒｅａｓｔ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  ２０１３；４０：８９−９４．
【図１Ａ−１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図１Ｇ】
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【図１Ｈ−１Ｋ】
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【図２Ａ−２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図３Ａ−３Ｄ】
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【図３Ｅ−３Ｆ】
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【図４Ａ−４Ｄ】
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【図４Ｅ−４Ｆ】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ−７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ−７Ｉ】
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【図８Ａ−８Ｄ】
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【図８Ｅ−８Ｆ】
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【図８Ｇ−８Ｊ】
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【図８Ｋ−８Ｌ】
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【図８Ｍ】
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【図９Ａ−９Ｂ】
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【図９Ｃ−９Ｄ】
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【図９Ｅ−９Ｆ】
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【図９Ｇ−９Ｈ】
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【図９Ｉ−９Ｊ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ−１０Ｆ】
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【図１０Ｇ−１０Ｈ】
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【図１０Ｉ】
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【図１１Ａ−１１Ｂ】
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【図１１Ｃ−１１Ｅ】
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【図１１Ｆ】
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【図１１Ｇ−１１Ｈ】
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【図１１Ｉ−１１Ｋ】
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【図１２】
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【図１３Ａ−１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４Ａ−１４Ｃ】
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【図１５Ａ−１５Ｆ】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ−１８Ｄ】
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【図１８Ｅ】
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【図１８Ｆ】
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【図１９Ａ−１９Ｃ】
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【図１９Ｄ−１９Ｆ】
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【図１９Ｇ−１９Ｈ】
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【図２０Ａ−２０Ｃ】
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【図２１Ａ−２１Ｄ】
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【図２２】
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【図２３Ａ−２３Ｃ】
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【図２４Ａ−２４Ｄ】
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【図２４Ｅ−２４Ｆ】
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【図２４Ｇ】
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【図２５Ａ−２５Ｄ】
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【図２６】
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【図２７Ａ−２７Ｂ】
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【国際調査報告】
2020520906.tif 000069
2020520906.tif 000070
2020520906.tif 000071