(57)【要約】共通の期間内の患者への投与のために２つの別個の免疫療法ソリューションを組み合わせることによって、がん患者を治療する方法及び組み合わせであって、点滴によって投与されるチェックポイント阻害剤抗体の構成要素（ＰＤ−１抗体又はＰＤ−Ｌ１抗体等）及び皮下投与されるＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンの構成要素を含み、少なくとも複数の連続した抗体のブーストが投与された初回抗体の構成要素に続き、少なくとも複数の連続したワクチンのブーストが投与された初回ワクチンの構成要素に続き、初回及び各々のブーストの両方は少なくとも前記共通の期間内で投与され、２つの前記別個の免疫療法ソリューションの組み合わせ投与が、単剤療法として単独で投与された場合の２つの別個の免疫療法の構成要素ソリューションのいずれかの治療効果のものを上回る促進された治療効果を提供する、前記方法及び組み合わせ。【選択図】図５
2020532553.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法及びチェックポイント阻害剤抗体療法の両方の組み合わせの共通の期間にわたる個体への投与を含み、単剤療法として使用された場合の前記ワクチン又はチェックポイント阻害剤のいずれか単独よりも大きな治療効果を生成するために、前記共通の期間にわたる各々の前記治療法の連続的なブーストの複数の投与を包含する、前記個体におけるがんを治療する免疫療法の方法。
【請求項２】
前記ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法が発現ベクターＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ワクチン療法が抗原特異的であり、皮下に投与され、前記チェックポイント阻害剤抗体療法が抗原非特異的であり、点滴によって投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも４回の連続的なワクチン療法のブーストが、前記共通の期間の１日目の初回ワクチン療法投与に続き、少なくとも９回の連続的なチェックポイント阻害剤抗体療法のブーストが、前記共通の期間の１日目の初回チェックポイント阻害剤抗体療法投与に続き、前記初回投与及びブーストが前記共通の期間（それは少なくとも６０日の期間である）内ですべて投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ワクチン療法についての用量レベルが０．１×１０１１ＶＰＵ〜１．０×１０１１ＶＰＵの範囲である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記チェックポイント阻害剤抗体療法についての用量レベルが２０ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記チェックポイント阻害剤抗体療法についての用量レベルが２〜１２ｍｇ／キログラム（ｋｇ）の範囲である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
個体への投与に適合したチェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素（同じもののさらなるブーストを包含する）、及び個体への投与に適合したＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法の構成要素（同じもののさらなるブーストを包含する）を含む、個体におけるがんの治療のための医薬用免疫療法の組み合わせであって、前記組み合わせ投与が、前記構成要素の各々の有効な治療量で、前記治療法の構成要素単独のいずれかの投与による前記個体の免疫応答の任意の増加を上回って、前記がんを治療する個体の免疫応答を増加させる能力を有する、前記組み合わせ。
【請求項９】
前記チェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素が点滴によって投与されるように構成され、前記ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法の構成要素が皮下投与されるように構成される、請求項８に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項１０】
前記組み合わせ投与の２つの治療法の構成要素のそれぞれの投薬量レベルが、がん増殖を抑制し、単剤療法として使用される前記２つの治療法の構成要素のうちのいずれかよりも大きく生存能力を増加させることが可能である、請求項８に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項１１】
前記２つの治療法の構成要素のそれぞれの投薬量レベルが、組み合わせ療法の効果（（ａ）単剤療法として使用される前記２つの治療法の構成要素のうちのいずれかが誘導するよりも前記がんに対するＣＤ８  Ｔ細胞の数の増加を誘導する、及び（ｂ）単剤療法として使用される前記２つの治療法の構成要素のうちのいずれかよりも骨髄由来抑制細胞の減少を誘導する）を生成するように構成される、請求項８に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項１２】
前記ワクチン療法の構成要素についての用量レベルが０．１×１０１１ＶＰＵ〜１．０×１０１１ＶＰＵの範囲である、請求項８に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項１３】
前記抗体療法の構成要素の用量レベルが２０ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲である、請求項１２に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項１４】
前記チェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素の用量レベルが２〜１２ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項１２に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項１５】
前記チェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素がＰＤ−Ｌ１抗体であり、前記ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法の構成要素が、発現ベクターＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌである、請求項９に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項１６】
前記チェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素がＰＤ−１抗体であり、前記ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法の構成要素が発現ベクターＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌである、請求項９に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項１７】
前記分離した治療法の構成要素各々が共通の期間内で投与される予定であり、各々の前記構成要素が異なる時間で又は同時であるが前記共通の期間内で投与されることができ、両方の構成要素が前記共通の期間の１日目に初回投与される、請求項８に記載の医薬用免疫療法の組み合わせを使用してがん患者を治療する方法。
【請求項１８】
前記共通の期間が少なくとも６０日であり、各々の治療法のブーストの２つ以上が同じ日に投与され、各々の治療法の前記ブーストの他のものが同じ日に投与されない、請求項１７に記載のがん患者を治療する方法。
【請求項１９】
１つの用量レベルで点滴によって投与される抗原非特異的チェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素の複数のもの、及び第２の用量レベルで皮下投与される抗原特異的ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法の構成要素（そこで前記ＴＡＡはムチンフラグメントである）の複数のものを含み、前記ワクチン療法の構成要素が前記チェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素と組み合わせて投与され、各々の前記構成要素が前記第１及び第２の用量レベルの有効量でそれぞれ構成され、前記チェックポイント阻害剤療法の構成要素の性能を増加させることによって患者の免疫応答を増加させ、単剤療法として作用する前記構成要素の各々を上回って促進される免疫応答の利益を提供する、２つの分離した免疫療法の構成要素を含むがん患者の治療のための医薬の組み合わせ。
【請求項２０】
前記組み合わせが、前記ワクチン療法の投薬量レベルでの前記ワクチン療法の構成要素の初回注射に加えて少なくとも４回のワクチンのブースト、及び前記チェックポイント阻害剤抗体療法の投薬量レベルでの前記抗体療法の構成要素の初回点滴に加えて少なくとも１０回の抗体のブーストを包含する、請求項１９に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項２１】
前記ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法の構成要素が発現ベクターＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌである、請求項１９に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項２２】
両方の構成要素の前記組み合わせ投与が、がん性腫瘍増殖を抑制し、患者生存時間を、単剤療法として使用されるいずれかの前記療法の構成要素よりも長く延長することが可能な、組み合わせの治療効果を誘導する有効な投薬量レベルである、請求項２０に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項２３】
前記ワクチン療法の構成要素についての用量レベルが０．１×１．０１１ＶＰＵ〜１．０×１０１１ＶＰＵの範囲である、請求項２１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項２４】
前記チェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素の用量レベルが、２０ｍｇ〜２５０ｍｇ又は２〜１２ｍｇ／ｋｇの範囲のＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項２５】
組み合わせでの前記２つの構成要素が、単独で作用する前記２つの構成要素のいずれかよりも多い数のＣＤ８  Ｔ細胞を生成する組み合わせの治療効果を誘導することが可能な有効投薬量のレベルである、請求項１９に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項２６】
２つの前記治療法が異なる時間で又は同時であるが前記共通の期間内で投与され得る、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも６０日の共通の期間内の患者への投与のために２つの別個の免疫療法治療を組み合わせることによって、前記患者におけるがんを治療する方法であって、インビボの点滴で投与されて患者におけるＴ細胞の結合のブロックによる治療法を提供する、チェックポイント阻害剤抗体治療、及びインビボの皮下で投与されて患者における樹状細胞活性化による治療法を誘導する、発現ベクターＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン治療を含み、少なくとも同じ第１の用量レベルでの複数の連続した抗体のブーストが、第１の用量レベルで投与された初回チェックポイント阻害剤抗体に続き、少なくとも同じ第２の用量レベルでの複数の連続したワクチンのブーストが、第２のレベルで投与された初回ワクチンに続き、前記初回投与が両方とも前記６０日の期間の１日目に起こり、前記ブーストが前記共通の期間内で投与される、前記方法。
【請求項２８】
前記ワクチン治療についての用量レベルが０．１×１０１１ＶＰＵ〜１．０×１０１１ＶＰＵの範囲である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記チェックポイント阻害剤抗体がＰＤ−１抗体であり、前記治療用量レベルが２０ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記チェックポイント阻害剤抗体がＰＤ−Ｌ１抗体であり、前記治療用量レベルが２ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇの範囲である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
コールドであると判断される患者のがん性腫瘍が、前記ワクチン治療によって、ホットであると判断されるがんへ変換され、それによって、前記患者におけるがんの治療への全奏効率を増加させる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
コールドな腫瘍を含むと判断される個体のがんが、前記ワクチン療法の構成要素によってコールドな腫瘍からホットな腫瘍に変換され、それによって、前記チェックポイント阻害剤抗体療法の構成要素への患者の全奏効率を増加させる、請求項８に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項３３】
がん患者の治療のための医薬用免疫療法の組み合わせであって、第１の投薬量レベルでの抗原特異的ワクチンの構成要素Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ（複数の分離したワクチンの皮下治療のブーストを包含する）及び第２の投薬量レベルでの抗原非特異的抗体の構成要素（複数の抗体構成要素の点滴治療のブーストを包含する）の両方からなり、前記ワクチンの構成要素及び抗体の構成要素が、前記ワクチンの構成要素が前記抗体の構成要素の有効性を増加させる触媒として作用することを可能にするのに有効な投薬量レベル量で構成され、前記組み合わせが、前記患者の単剤療法として使用される前記構成要素のいずれかのものを上回って前記がんに対する免疫応答を促進するように適合される、前記組み合わせ。
【請求項３４】
前記構成された投薬量レベル量が、ＣＤ８エフェクターＴ細胞のパーセンテージの増加を誘導し、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）のパーセンテージの減少を誘導することが可能である、請求項３３に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項３５】
前記抗体の構成要素がＰＤ−１抗体又はＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３３に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項３６】
前記抗原特異的ワクチン構成要素の投薬量レベルが、コールドであると判断されるがん患者の腫瘍をホットであると判断される腫瘍へ変換し、それによって、抗体へのがんの全奏効率を、単剤療法として使用された場合の抗体の奏効率を上回って増加させる能力を有する、請求項３３に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項３７】
前記患者の免疫系の前記促進が、免疫調節性環境の阻害性から免疫刺激性への変換の増進を支援するように構成された、前記ワクチンの構成要素及び抗体の構成要素のそれぞれの投薬量レベルによって達成される、請求項３３に記載の医薬用免疫療法の組み合わせ。
【請求項３８】
前記ワクチン療法のブーストが８、２２、４０及び６０日目に与えられ、前記抗体のブーストが４、７、１０、１３、１７、２０、２３、４０及び６０日目に与えられる、請求項４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年９月１日に出願された米国仮出願第６２／５５３，３６３号；２０１７年９月２５日に出願された同第６２／５６２，６３６号；及び２０１７年１２月６日に出願された同第６２／５９５，１０６号、ならびに２０１８年１月２９日に出願された米国出願第１５／８８２，１８１号（それらの開示はすべてその全体を参照することにより本明細書に援用される）に基づいて、３５  ＵＳＣ  １１９下で、優先権及び利益を主張する。
【０００２】
本発明は、がんの有る個別の患者への投与のための、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ治療用ワクチンと組み合わせた抗チェックポイント阻害性抗体から構成されるがんのための組み合わせ療法を用いることによって、身体自体の免疫系を促進して、身体ががん細胞に対する免疫応答を増幅することを可能にすることに関する。抗チェックポイントの阻害性抗体療法と組み合わせた場合に、本出願人のワクチンの相加効果は、ワクチン又は抗チェックポイント阻害性抗体療法のいずれかが単剤療法として使用された場合よりも、がん性腫瘍を消失させることについて、より有効な治療アプローチを提供する。
【背景技術】
【０００３】
本明細書において記載される本出願人の実験は、（ｉ）第１の実験（実験１）において、複数回にわたる異なる被験体への分離した投与によって、Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンベクター療法の単剤療法の皮下注射の効果を、抗ＰＤ−１チェックポイント阻害性抗体療法（市場において現在商業的に入手可能である）の単剤療法の腹腔内投与と比較し、次いで、（ｉｉ）第２の実験（実験２）において、２つの治療法（ワクチンベクター療法及びチェックポイント阻害剤ＰＤ−１抗体療法）の組み合わせの複数回にわたる投与が、単独で適用される２つの療法のいずれかよりも、マウス乳がんＥ３細胞株（それはヒトＭＵＣ−１抗原について陽性である）の増殖率のより高い抑制を提供するかどうかを試験するように、デザインされる。他の基準の中では、本出願人の目標は、ＰＤ−１抗体と組み合わせたＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンの投与が、腫瘍小結節（複数可）の中へトラフィッキングする抗原特異的Ｔ細胞の数を増加させ、（ｉ）個体における腫瘍細胞死の数による有効性が増加し、それと共に正常な組織（非がん性腫瘍）の破壊が低減すること、（ｉｉ）個体の生存期間が増加すること、及び（ｉｉｉ）比較的より短い期間にわたって抗体の用量レベルの低減を可能にすることが引き起こされるかどうかを決定することである。
【０００４】
腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１リガンドのＴ細胞上のＰＤ−１受容体との相互作用（それはＣＤ８エフェクターＴ細胞の腫瘍細胞への応答を抑制する）から、Ｔ細胞を解放する抗ＰＤ−１チェックポイント阻害性抗体療法の現在の使用は、周知である。現在、本出願人のワクチンプラットフォームは、免疫刺激タンパク質ＣＤ４０Ｌを腫瘍抗原特異的様式で使用して、樹状細胞を活性化し、それは今度は身体のＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化して、標的とされる抗原を持つ他の細胞を攻撃する。
【０００５】
この実験的研究において、Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンベクター療法（単独で及び抗ＰＤ−１チェックポイント阻害性抗体療法と組み合わせた）の抗がん活性は、ヒトＭＵＣ−１遺伝子について陽性のシンジェニックＥ３マウス乳がん細胞株を持つ免疫応答性ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて評価された。Ｅ３マウス乳がん細胞株をシンジェニック腫瘍モデルとして使用して、免疫療法関連産物の有効性を試験した。この研究は、腫瘍体積、生存及び体重の通常の観察をしながら、およそ１６〜１８週間の期間にわたって遂行された。しかしながら特定のこの実験において、アデノウイルスの発現ベクターはワクチンとして使用され、論じられるようにワクチンの複数の代替のバージョンがある。
【０００６】
本出願人のワクチンベクターは、分泌可能ポリペプチドをコードする転写単位を含み、このポリペプチドは、ＣＤ４０リガンドの細胞外ドメイン（ｅｃｄ）（それは膜貫通ドメインを実質的にすべて欠く）の上流に腫瘍抗原の分泌シグナル配列を上流に含み、ＣＤ４０Ｌを分泌可能にする。さらに、有効量のワクチンベクターの投与によって、腫瘍抗原を発現する細胞に対する免疫応答を生成する方法が提供される。
【０００７】
定義
「ＴＡＡ」は、標的関連抗原及び／又は腫瘍関連抗原を意味する。ＴＡＡは、対象の抗原であるだろう。それは例えばムチン抗原でありえる。
【０００８】
「がん」又は「腫瘍」は、がん、肉腫、メラノーマ、リンパ腫、白血病にかかわらず、固形がん又は非固形がんのタイプである、任意のタイプのがん及びがん転移を意味する。
【０００９】
「Ａｄ」は、アデノウイルスのベクターであるが、インビボで投与された場合に、標的細胞に侵入することができ、コードされたタンパク質を発現させることができるように用いられる、ウイルス性又は非ウイルス性のいずれかの発現ベクターを意味する。以下の「ベクター」の定義を参照されたい。
【００１０】
「ｅｃｄ」は、ＣＤ４０リガンドの細胞外ドメインを意味し、分泌を阻害する膜貫通ドメインを少なくとも特異的に除外する。
【００１１】
「ＭＵＣ−１」は１つのタイプのムチン抗原を指すが、ムチン抗原の形態のうちの任意の他のものも使用され得る。
【００１２】
「ｓｉｇ」は分泌シグナルを意味する。
【００１３】
「ＡＢ」は抗体を意味する。
【００１４】
「μｇ」はマイクログラムを意味する。
【００１５】
「ｍｇ」はミリグラムを意味する。
【００１６】
「ｍｍ」はミリメートルを意味する。
【００１７】
「ｓｃ」は皮下を意味する。
【００１８】
「ＶＰＵ」は、１単位あたりのウイルス粒子を意味する。
【００１９】
「ＤＣ」は樹状細胞を意味する。
【００２０】
「ベースライン」は実験１及び２についての１日目での腫瘍体積（ＴＶ）を意味する。１日目での研究開始のための５０〜１００ｍｍ３の間のＴＶ選択については、表１及び２中の無作為化及び研究開始を参照されたい。
【００２１】
「有効量」は、本明細書において記載されるようながんの治療において、レシピエントの免疫応答を生成する（又は生成に寄与する）のに有効な、本発明の教示に従うがん薬剤投与及び／又は治療の量を意味する。「有効量」又は用量レベルは様々な因子に依存し、治療されている障害、特異的な化合物の活性、投与経路、ウイルスベクターのクリアランス率、ウイルスベクターと組み合わせて使用されるか又はウイルスベクターと同時にある薬物、障害の重症度、患者の病歴、患者の年齢、体重、性別、食餌、身体条件、及び／又は一般的な健康、治療の継続期間などに従って変動し得る。有効量は実験で使用される規定量よりも多く又は少なくなり、治療有効量の決定を考慮に入れた考察に依存し得る。治療有効量の決定において考慮に入れられる様々な一般的な考察は、当業者に公知であり、例えばＧｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ編、Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；及びＲｅｍｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）中に記載される。
【００２２】
「組み合わせ療法」、「組み合わせ治療」又は「組み合わせで」は、処方された期間内の、同時及び／又は異なる時間での、少なくともワクチン及びチェックポイント阻害剤治療（少なくとも前記２つの別個の治療剤によるもの）を意味する。
【００２３】
「チェックポイント阻害剤」及び／又は「抗体」は、個体（又は動物）へ投与するように市販化及び／又は販売されているかどうかにかかわらず、身体中のチェックポイント（それは免疫系が、部分的又は全体的に身体のＴ細胞を使用して、がんを攻撃することを防止し得る）をブロックしないための、そしてどのように投与されるかにかかわらず、市販の薬物及び／又はデザインされた市販されてない薬物のうちの任意の１つ又は複数を意味する。
【００２４】
「ＰＤ−１」は、チェックポイント阻害剤抗体のうちの１つの例を意味する。
【００２５】
「細胞株」は、特定の本出願の実施例実験における、ＢＡＬＢ／ｃマウス中のｈＭＵＣ−１陽性Ｅ３マウス乳がん細胞株を意味する（Ｖｉｃｔｏｒｉａ  Ｃａｒｒ−Ｂｒｅｎｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０：２４３５，２０００；ＥＬ−Ｎａｓｉｒ  Ｌａｌａｎｉ  ｅｔ  ａｌ，ＪＢＣ  ２６６：１５４２０，１９９１）。
【００２６】
「ＰＦＵ」は、体積単位あたりプラークを形成することが可能な粒子の数を意味する。
【００２７】
「ＴＧＩ」は腫瘍増殖抑制を意味する。
【００２８】
「ＭＨＣ」は主要組織適合遺伝子複合体を意味する。
【００２９】
「ＳＥＭ」は構造方程式モデリングを意味する。
【００３０】
「Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ」又は「Ｋ−Ｍ」は、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定量（積極限推定量としても公知である）が、寿命データからの生存関数の推測に使用されるノンパラメトリック統計であることを意味する。医学研究において、それは、多くの場合、治療後のある特定の量の時間についての生存患者の割合の測定に使用される。推定量は、Ｅｄｗａｒｄ  Ｌ．Ｋａｐｌａｎ及びＰａｕｌ  Ｍｅｉｅｒ（各々はＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎに類似する原稿を提出した）にちなんで命名される。
【００３１】
「ＭＤＳＣ」は骨髄由来抑制細胞を意味する。
【００３２】
「ＣＤ１１ｂ」は骨髄性の阻害細胞についてのマーカーである。
【００３３】
「ＯＲＲ」は全奏効率を意味する。
【００３４】
「ＴＡＡ」は腫瘍／標的関連抗原を意味する。
【００３５】
「分泌」は、融合タンパク質ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌを参照して使用され、融合タンパク質が、分泌を可能にしない細胞の膜貫通ドメイン等の要素に対立するものとして、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ融合タンパク質を分泌させる要素（分泌配列又はシグナル配列等）を含むことを意味する。
【００３６】
「抗原」は、ヒト、哺乳動物、トリ又は他の動物が免疫応答を生成することができる任意の抗原又はその部分を幅広く意味する。抗原は、本明細書において使用される時、免疫応答が向けられ得る少なくとも１つの抗原決定基を含有する分子を幅広く指す。免疫応答は、細胞媒介性、液性又は両方であり得る。
【００３７】
「ベクター」は、転写単位を含有する用語（すなわち「発現ベクター」）であり、本明細書において使用される時、インビボで投与された場合に、標的細胞に侵入することができ、コードされたタンパク質を発現することができる、ウイルス性及び／又は非ウイルス性の発現ベクターを指す。インビボの送達及び外来性タンパク質の発現に好適なウイルスベクターは周知であり、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアベクター、ポックスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター及び同種のものが挙げられる。ウイルスベクターは、好ましくは正常な細胞中で複製欠損にされる。例えば、米国特許第６，６６９，９４２号；同第６，５６６，１２８号；同第６，７９４，１８８号；同第６１１０７４４号及び同第５１３３０２９号を参照されたい。ベクターは、非経口的に（静脈内、動脈内、筋肉内、皮下、又は同種のもの等）投与され得る。投与は、経口的、経鼻的、経直腸的、経皮的又はエアロゾル吸入でもあり得る。ベクターは、ボーラスとして投与され得るか、又は緩慢に注入され得る。本出願中のベクターは、好ましくは皮下に投与される。
【００３８】
「転写単位」は、発現ベクターに関連して本明細書において使用される時、ＲＮＡポリメラーゼによって単一の連続的なｍＲＮＡの鎖として転写されるＤＮＡのストレッチを意味し、転写の開始及び終了のためのシグナルを含む。転写単位は、転写及び／又は翻訳発現制御要素（プロモーター等）、ならびに随意に、任意の上流又は下流のエンハンサーエレメント（複数可）との、作動可能なリンケージ中にある。有用なプロモーター／エンハンサーは、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター／エンハンサーである。米国特許第５，８４９，５２２号及び同第６，２１８，１４０号を参照されたい。
【００３９】
「ＣＤ４０リガンド」（ＣＤ４０Ｌ）は、本明細書において使用される時、ＣＤ１５４又はＴＮＦ５として公知の分子の全長又は部分を指す。ＣＤ４０Ｌは、Ｎ末端で細胞質ドメイン、膜貫通領域、及び次いでそのＣ末端で細胞外ドメイン（「ｅｃｄ」）を有するＩＩ型膜ポリペプチドである。特別の指示のない限り、全長ＣＤ４０ＬはＣＤ４０Ｌとして本明細書において表記される。マウス及びヒトからのＣＤ４０Ｌのヌクレオチド及びアミノ酸の配列は、当技術分野において周知である。配列中のバリエーションもＣＤ４０Ｌの意味内に包含され、リガンドが融合タンパク質と共同して免疫応答を惹起する能力を変更しない、保存的アミノ酸変化及び同種のものが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４０】
ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンプラットフォーム
ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ標的化ワクチンプラットフォームは、本出願人のうちの少なくとも１人によって複数の特許及び出版物中で完全に記載される。ＣＤ４０Ｌは免疫刺激タンパク質である。ＣＤ４０Ｌタンパク質（細胞外ドメイン（ｅｃｄ））の修飾形態は、樹状細胞（ＤＣ）上のＣＤ４０受容体へＴＡＡを添付して、樹状細胞を活性化し、クラスＩ  ＭＨＣに加えてクラスＩＩ  ＭＨＣ上のヒトＭＵＣ−１抗原の提示を増進し（選択されたムチン断片を使用して）、今度はＴ細胞を活性化し、それはヒトＭＵＣ−１陽性がん細胞を攻撃し殺傷する。例えば米国特許第８，１１９，１１７号、米国特許第８，２９９，２２９号、及び／又は米国特許第９，５３３，０３６号を参照されたい。ＴＡＡ（標的関連抗原及び／又は腫瘍関連抗原）は、がんを持つ特定のクラスの患者についての対象の標的化抗原である。米国特許第８，２９９，２２９号中で、ＴＡＡはヒトムチン抗原の断片であり、特にヒトＭＵＣ−１が対象の抗原であった。したがって、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌは、抗ＰＤ−１チェックポイント阻害性抗体（それは、Ｔ細胞上のＰＤ−１受容体へ結合するが、任意の特定の腫瘍関連抗原へ標的化されない（抗原非特異的））とは対照的に、対象の腫瘍を標的化する（抗原特異的）標的化ワクチンである。
【００４１】
本発明における使用に適用され得る、このワクチンの複数のバージョンがある。（ａ）ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ転写単位が複製能力のないアデノウイルスベクター（Ａｄ−ｓｉｇ−ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ）中に埋め込まれたもの（それは初回刺激注射として使用され、続いて、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質が少なくとも２回皮下注射される）；（ｂ）ワクチンがＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質のみからなるもの、及び（ｃ）ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質についての転写単位がプラスミドＤＮＡ発現ベクターの中へ挿入されるもの。ＴＡＡは、強力な免疫刺激シグナルＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の細胞外ドメインのアミノ末端端部へリンカーを介して接続される。本実験において使用される好ましいＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質はムチン抗原フラグメントを含み、アデノウイルス発現ベクターはＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌである。本出願において用いられるアデノウイルス発現ベクターＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌの構築は、本出願人のうちの１人が共同発明者としてリストされる米国特許第８，２９９，２２９号から抜き出されるか又はそれに由来し得る。前記第’２２９号の特許のカラム１３〜１６（そこで、前記アデノウイルス発現ベクターの構築が非常に詳細に検討される）を参照されたい。この特許の明細書及び図面の全体にわたる、発現ベクター及びアデノウイルス発現ベクターの考察及び記載も参照されたい。
【００４２】
ＣＤ４０ＬへのＴＡＡの添付は２つのことを達成する。（ａ）樹状細胞（ＤＣ）に加えてＢ細胞及びＴ細胞上のＣＤ４０受容体へのＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質の結合は、これらの細胞を活性化し、それによって、ＣＤ４０Ｌシグナル（それは高齢の個体のＣＤ４ヘルパーＴ細胞の原形質膜上で欠けている）を置換すること；及び（ｂ）一旦ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質がＤＣのＣＤ４０受容体上に係合されたならば、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質全体は、ＴＡＡがクラスＩ  ＭＨＣに加えてクラスＩＩ  ＭＨＣの提示経路を介してプロセシングされることを可能にする方法で樹状細胞（ＤＣ）の中へ内部移行されること。次いで、活性化されたＴＡＡをロードしたＤＣは、領域リンパ節（８）へ移動し、そこで、それらは、ＴＡＡ特異的ＣＤ８エフェクターＴ細胞の増幅を活性化し誘導することができる。
【００４３】
これらの抗原特異的ＣＤ８エフェクター細胞はリンパ節中の数が増加するようになり、リンパ節から末梢血の中へ出て行く。抗原特異的ＣＤ８エフェクターＴ細胞は血管内区画を出て、炎症又は感染の血管外部位の中へ侵入する。このワクチンが、炎症の部位中の抗原特異的ＣＤ８エフェクターＴ細胞を増加させることが示されることに加えて、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質によるＢ細胞の活性化及び増幅が、血清中のＴＡＡ特異的抗体のレベルを増加させることが示された。
【００４４】
米国特許第９，５３３，０３６号中で言及されるように、本出願人のワクチンは、若い健康な個体に比較して、ＣＤ４０リガンドのレベルの低減を提示するＣＤ４  Ｔ細胞を有する個体の（低減したレベルのＣＤ４０リガンドを有する高齢の個人だけでなく、より若い個体も含む事例で）、がん抗原又は感染性病原体抗原のワクチン接種への免疫応答性を増加させることを提供する。これは、分泌可能融合タンパク質（がん又は感染性病原体の抗原及びｅｃｄＣＤ４０リガンドを有する）をコードする転写単位を有する発現ベクターの有効量を個体へ投与すること（そこで、発現ベクターワクチンの初回投与、続いて、ワクチンの複数の後続のブーストがある）によって達成される。さらに述べられるように、ワクチン療法は少なくとも１年の長期記憶を提供する。
【００４５】
任意の理論によって束縛されることを意図するものではないが、ベクターの皮下注射の近くで感染した細胞は、ムチン抗原／ＣＤ４０リガンド融合タンパク質を放出し、次いでそれは抗原提示細胞上のＣＤ４０受容体へ結合し、次いで結合されたその融合タンパク質は、Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン発現ベクター感染細胞の近くの抗原提示細胞（例えば樹状細胞）によって取り込まれると考えられる。次いで内部移行されたヒトムチン抗原はプロテアソーム中で消化され、もたらされたムチン抗原ペプチドは小胞体へトラフィッキングされ、そこで、それらはクラスＩ  ＭＨＣ分子へ結合するだろう。最終的には、樹状細胞は、樹状細胞の表面上のクラスＩ  ＭＨＣ分子へ結合されたヒトムチン抗原を提示するだろう。次いで活性化された腫瘍抗原をロードした抗原提示細胞（ＤＣ）は、リンパ球を持つ二次リンパ器官（ワクチン発現ベクターのもとの注射部位のリンパドレナージ領域中にある領域リンパ節又は脾臓等）へ移動するだろう。
【００４６】
ヒトムチン抗原／ｅｃｄＣＤ４０Ｌタンパク質の連続的な放出の２週間の間に、腫瘍関連抗原を保有した細胞を認識し殺傷することが可能なＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球は、活性化され抗原をロードした樹状細胞の存在によってリンパ節及び脾臓中で増幅されるだろう。ベクター感染細胞からの連続的な放出によるムチン抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞の刺激及び増幅の連続的な性質が、免疫応答を生成すると考えられ、その免疫応答は、非分泌性の非修飾ＣＤ４０リガンドへリンクされたヒトムチン抗原から構成される融合タンパク質をコードする転写単位を保有したベクターを使用して可能であるよりも、より大きな規模であるだろう。実験中で使用される例において、ＴＡＡはヒトＭＵＣ−１からのヒトムチン抗原ペプチドであるが、他のペプチド及び他の抗原が使用され得る。例えば、米国特許第８，１１９，１１７号中で、ＨＰＶのＥ６又はＥ７タンパク質の使用が示される。米国特許第８，２９９，２２９号中のカラム８で、ＴＡＡとして使用され得るムチンペプチドの表１が示される。
【００４７】
好ましい実施形態において、免疫療法発現ベクターは、ウイルス性発現ベクター又は非ウイルス性発現ベクター（例えばアデノウイルス発現ベクター）であり；抗原フラグメントは、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ３Ａ、ＭＵＣ３Ｂ、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６、ＭＵＣ７、ＭＵＣ８、ＭＵＣ９、ＭＵＣ１２、ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１５、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１７及びＭＵＣ１９〜ＭＵＣ２２を含む群から選択されるムチンからであり；ムチン抗原は、ムチンの細胞外ドメインからの断片；又はムチンの少なくとも１つのタンデム反復を含み；本発明中で使用されるムチン抗原フラグメントはＭＵＣ１からであり；転写単位は、腫瘍抗原とＣＤ４０リガンドとの間のリンカーをコードする配列を含む。好適なリンカーは、長さ及び組成物で変動し得る。発現ベクターは、転写単位の転写の制御のためにヒトサイトメガロウイルスプロモーター／エンハンサーを含み得る。腫瘍細胞は、ムチンファミリー以外であってもよく、任意の種類又は特性のがん細胞であってもよく、この方法は、とりわけがん細胞又はムチンに対する細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の生成をもたらす。がんは、調節されない増殖、浸潤又は転移を経験する被験体中の任意の細胞であり得る。がんは、骨髄性白血病、膀胱がん、脳腫瘍、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、神経系がん、頭頸部がん、頭頸部の扁平上皮細胞がん、腎臓がん、肺がん（小細胞肺がん及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）等）、膵臓がん、結腸がんなどであり得る。
【００４８】
チェックポイント阻害剤
免疫応答系の重要な能力は、身体中の正常な細胞と「外来」として見なすもの（がん細胞等）との間を識別する能力である。免疫系は、この能力によって、正常な細胞を損傷しないままにするががん（外来）細胞を攻撃することができる。免疫応答によって使用される１つのかかる機構は、免疫学的「チェックポイント」分子のクラス（ＣＤ８エフェクターＴ細胞リンパ球細胞上に存在する、ＰＤ−１受容体等）である。ＰＤ−１リガンドが身体の正常な細胞上に発現される場合に、又はがんを持つ患者の事例において、腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１はＴ細胞上のＰＤ−１受容体へ結合し、それらのＴ細胞は抑制され、最終的には死滅する。これは、腫瘍細胞と身体の正常な細胞が免疫応答による攻撃から保護される機構である。これはがん細胞が免疫応答による攻撃を回避することができる機構でもある。Ｔ細胞上のＰＤ−１受容体とがん細胞上のＰＤ−Ｌ１リガンドの相互作用をブロックする抗ＰＤ−１阻害性抗体又はＰＤ−Ｌ１阻害性抗体の投与（抗体の初回投与と抗体の複数の後続のブーストを包含するがこれらに限定されない）は、ＰＤ−Ｌ１陽性腫瘍細胞の増殖の抑制をもたらす。ＣＴＬＡ−４は、免疫系を抑制する「スイッチオフ」のタイプとして作用する、いくつかのＴ細胞上の別のタンパク質である。
【００４９】
ＰＤ−１はＴ細胞と呼ばれる免疫細胞上のチェックポイントタンパク質である。活性化されたＴ細胞上に、複数の異なるタイプの阻害性受容体のチェックポイントがある。ＰＤ−１は単に１つの例である。それは、通常はＴ細胞が身体中の正常な細胞を攻撃しないようにすることを支援する「スイッチオフ」のタイプとして作用する。しかし、エフェクターＴ細胞上のＰＤ−１受容体が腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１へ付着する場合に、その細胞は保護される。ＰＤ−１がＰＤ−Ｌ１へ結合する場合に、基本的にＰＤ−Ｌ１を単独で持つ細胞を放置するようにＴ細胞に伝える。いくつかのがん細胞は多量のＰＤ−Ｌ１を有し、それは、それらが免疫攻撃を回避するのを支援する。ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１のいずれかを標的化するモノクローナル抗体はこの結合をブロックすることができ、それによってがん細胞に対する免疫応答をブーストする。これらの抗体はある特定のがんの治療において大いに有望であることを示した。現在の普及している実践は、一般的には、２年の期間にわたって、２〜３週間ごとに、静脈内点滴を介して（例えばナノテクノロジーの使用を介して等の薬物送達の他の方法は使用され得るが）、チェックポイント阻害剤療法を投与して、有効性を達成することである。
【００５０】
薬物送達は、典型的には薬物存在の量及び継続期間の両方を考慮する。それは医療デバイス又は薬物−デバイスの組み合わせ産物を包含し得る。薬物送達技術は、産物の有効性及び安全性の改善の利益のために、薬物放出プロフィール、吸収、分布及び排出に加えて、患者の利便性及びコンプライアンスを修飾する。最も一般的な投与経路としては、好ましい非侵襲性経口経路（口を介する）、局所経路（皮膚）、経粘膜経路（例えば直腸）、及び吸入経路が挙げられる。多くの医薬物が、酵素分解に感受性があるか、又は治療的に有効である分子の大きさ及び電荷の問題に起因して全身循環の中へ効率的に吸収することができない。この理由のために、注射又はナノニードルアレイアレイによって多くのタンパク質及びペプチドの薬物を送達しなければならない。任意の事象において、チェックポイント阻害剤のための任意の適切な薬物送達機構は点滴以外であり得、本出願人のワクチンについては皮下投与アプローチの使用以外であり得ると考えられる。
【００５１】
残念なことに、チェックポイント阻害剤抗体療法は、いくつかのがんの治療においてかなり進歩しているが、腫瘍特異的抗原を標的化しない。さらに、がん患者のうちの大きなサブセットはこれらの新しい免疫療法へ応答せず、このことは、これら及び他の問題を克服するために組み合わせ療法についての研究の強化を導いた。多くの他の可能な治療ソリューションとチェックポイント阻害剤治療法を組み合わせることによって、どのようにチェックポイント阻害剤の有効性を最も良好に増加させるかを決定する多くの研究が現在施行されている。ある者は、放射線療法とチェックポイント阻害剤治療法を組み合わせることが１つのソリューションであると思っている。他の者は化学療法とチェックポイント阻害剤治療法を組み合わせる。さらに他の者は、化学放射線療法との組み合わせを調査する。なお他の者は、複数の新規分子の使用を研究している。大部分の専門家は、外科手術、放射線及び化学療法のような従来の治療法の代わりとして免疫療法を想定しない。さらに、チェックポイント阻害剤の投薬及びスケジューリングがコスト推進要因であるということは公知である。本出願人は、特異的腫瘍抗原（例えばＭＵＣ−１）を標的化するＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンと非標的化ＰＤ−１チェックポイント阻害性の抗体受容体の投与を組み合わせることによって、かかる組み合わせが抗腫瘍免疫応答の大きさを増加させることが可能であり、同時に、投薬及び／又は用量スケジューリングを低減し、そのことが、任意の潜在毒性（患者への任意の副作用（複数可）を包含する）を追加で低減し得ると考える。
【００５２】
ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法（それはマウスにおいてＴＡＡ＋の皮下（ｓｃ）の腫瘍小結節中のＴＡＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を増加させる標的化療法である）により適切に刺激されるならば、「コールドな」又は非炎症性の腫瘍（低レベルの浸潤ＣＤ８エフェクターＴ細胞）が、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン及び抗ＰＤ−１抗体療法の組み合わせへ応答すると、本出願人は考える。５７０５ページの図４及び５Ｂ（Ｔａｎｇ  ＹＣ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７７：５６９７−５７０７，２００６）を参照されたい。前述のことにもかかわらず、本出願人は、これらの２つの異なる免疫療法アプローチが投与（皮下及び点滴又は使用される他の送達アプローチ）及び操作の様式の両方で、全く別個であると考えた。チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞上のＰＤ−１受容体とがん細胞上のＰＤ−Ｌ１リガンドの相互作用をブロックする抗ＰＤ−１阻害性抗体又はＰＤ−Ｌ１阻害性抗体の投与により、非抗原特異的である。これとは対照的に、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法は抗原特異的であり、樹状細胞活性化を介して作用する。明らかに、薬物開発は予測可能な科学ではない。完全に異なる機構を介して働く２つの別個の治療法を組み合わせて使用することは、様々な理由のために互いに適合性がないかもしれない。したがって、これらの別個の２つの治療法の適合性を評価し、それらの組み合わせでの使用が適合性があるかどうか、及びそうであるならば、任意の許容できないか又は認容されない毒性の副作用をもたらすのかを決定することが、実験の目標であった。この理由のために、いくつかのものは、例えば患者を同時にではなく連続して治療することによって少なくとも１つの薬物へ応答する患者の確率を最大化し、それによって調剤副作用が低減され、有効な場合により高い投薬量を可能にし、治療コストの低下をもたらす可能性がある。実験の追加の目標は、抗ＰＤ−１抗体療法へのＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ治療法の添加又は組み合わせが、腫瘍を実際おそらくコールドからホットに変換し得るだけでなく、それによってワクチン療法から単独で生じる治療効果に加えてＰＤ−１抗体療法への全奏効率を増加させ得るかどうかを観察することであった。
【００５３】
実験プロトコールは、１５０万のＥ３マウス乳がん細胞株（ヒトＭＵＣ−１について陽性）をＢＡＬＢ／ｃマウスｓｃに注射し、腫瘍を７５〜１００ｍｍ３（触診可能）へ増殖させ、Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣｄ４０Ｌワクチン及び抗ＰＤ−１抗体ならびに次いで同じものの組み合わせにより分離して処理し、非処理対照マウス又はＥ２対照非処理マウスと比較して、実験の１つ又は複数の目標への答え（複数可）を決定することを支援した。
【００５４】
共通の期間にわたる抗ＰＤ−１チェックポイント阻害性抗体療法及びＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法の組み合わせ投与（広範囲な実験後の）を包含する本発明は、ＴＡＡ陽性がん細胞の増殖に対する組み合わせの抑制効果が、マウスモデル中の腫瘍小結節の増殖に対する抑制効果を増加させ、その結果、単剤療法として単独で使用された場合の抗体又はワクチンのいずれかよりも有意に大きいことが見出された。がん細胞上のＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２のリガンドとＴ細胞上のＰＤ−１受容体の相互作用をブロックするチェックポイント阻害剤抗体の例としては、例えばペムブロリザマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚａｍａｂ）、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、トレメリムマブ、イピリムマブ及びデュルバルマブが挙げられる。上記の例の抗体又は類似する抗体のうちの１つ又は複数の任意のもの（それはチェックポイント阻害剤の抑制効果からＴ細胞を解放し、それによってＴ細胞が身体中の腫瘍細胞を攻撃することを可能にする）は、「チェックポイント阻害剤」として本明細書において表記される。
【００５５】
実験の記載
したがって、この結果は、ワクチン療法が、ＰＤ−１抗体療法と組み合わせた場合に、がん性腫瘍組織の中へのＣＤ８エフェクターＴ細胞の侵入を増進するということを示し、したがって、コールドな非炎症性のがん性腫瘍組織をより高応答性のがん性腫瘍組織に変換すると考えられる。
【００５６】
材料及び試験システム
種：Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ
系統：ＢＡＬＢ／ｃ
供給源：Ｅｎｖｉｇｏ
性別及び月齢：メス；５〜６週
体重：２０〜２２ｇ
群の数：８
動物の数／群：ｎ＝１０
がん細胞株：ｈＭＵＣ−１陽性Ｅ３マウス乳がん細胞株
細胞接種密度：１００μｌの無血清培地（２０％のマトリゲルを含有）中で１．５×１０６細胞／動物
細胞注射の部位：乳腺脂肪体（４番目のペア）
研究開始：腫瘍体積（５０〜１００ｍｍ３）
研究の継続期間：１６〜１８週間
試験アイテム：Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンベクター；＊抗ＰＤ−１抗体
貯蔵条件：Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ：−６０℃
（注：これらのバイアルをＲｅｖｃｏフリーザー中で−６０℃で保存する。バイアルを融解する場合に、氷の中核がちょうどかろうじて検出可能になるまで、バイアルを３７℃の水浴中で渦を巻かせ、次いで水浴から除去する。）
抗ＰＤ−１抗体：２〜８℃
用量及び投薬スケジュール：Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンベクターは、１、８、２２、４０及び６０日目に０．１×１０８ＰＦＵ、１×１０８ＰＦＵ、１０×１０８ＰＦＵ
抗ＰＤ−１抗体は、、４、７、１０、１３、１７、２０、２３、４０及び６０日目に２０μｇ、１００μｇ及び２５０μｇ／動物
投薬の経路：Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンベクターは、皮下
抗ＰＤ−１抗体は、腹腔内
腫瘍体積及び体重測定：２日ごとに１回
腫瘍エンドポイント：腫瘍細胞の注射の６０日後、又は腫瘍小結節のサイズが直径１ｃｍ（１０００ｍｍ３）を超える時
注：抗ＰＤ−１抗体をＢＩＯＸＣＥＬＬから調達した（ＶｉｖｏＭＡｂ抗マウスＰＤ−１（ＣＤ２７９）；クローン：ＲＭＰ１−１４、カタログ番号：ＢＥ０１４６）
【００５７】
Ｅ３細胞株
本出願人の実験において使用されるＥ３細胞株は、ＣＲＴ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｉｍｉｔｅｄ）から、この実験のための許可を得て供給された。Ｅ３細胞株として公知の材料（ヒトＭＵＣ−１陽性Ｅ３マウス乳がん細胞株）の詳細は、Ｖｉｃｔｏｒｉａ  Ｃａｒｒ−Ｂｒｅｎｄｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０：２４３５，２０００；Ｅｌ−Ｎａｓｉｒ  Ｌａｌａｎｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６６：１５４２０，１９９１中で出版された。
研究の詳細
実験のための研究の詳細を以下の表Ｉ中で提示する。
【表１】
2020532553.tif 000003
【００５８】
投薬スケジュール：上の表１及び下の表２中で好ましい投薬スケジュール治療法の組み合わせ（ワクチン及び抗体の）を開示するが、低用量療法及び高用量療法の組み合わせの両方のために、異なる期間にわたる代替の投薬投与が乳がん細胞株のための使用され得る、及び／又は異なる種類のがん（或いは、それは最も良好な全奏効及び全生存について決定され得る）のために、免疫関連性応答基準が測定され得る。投与の間のタイミングに加えて好ましい投与量も、ワクチン及び抗体の分離した臨床使用において、好ましくは分離して決定された。例えば、いくつかの事例において、抗体投与の投薬量は、患者のキログラム体重あたりのミリグラムの数値によっても変動し、それによって投与は２週間又は３週間ごとであり得る。
【００５９】
腫瘍細胞の調製  −  実験１
本実験におけるすべての細胞培養手順を、滅菌技法に従ってラミナーフローフード中で遂行した。Ｅ３細胞株を、Ｔ７５ｍｍ及びＴ１５０ｍｍの培養フラスコを使用して、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足した培地中で増殖させた。
【００６０】
ワクチン又は抗ＰＤ−１抗体を、以下で指摘されるように、マウスにおける既知の治療レベルの用量レベル（１億ＶＰのワクチン及び１００マイクログラムの抗ＰＤ−１抗体）、及び他の事例において、マウスにおける治療レベル未満の用量（１０００万ＶＰのワクチン及び２０マイクログラムの抗ＰＤ−１抗体）のいずれかで投与する。動物の用量レベルも、マウスについての既知の治療レベルの２５０μｇと同じくらいであり得る。
【００６１】
以下のチャート中で示されるものに匹敵するヒト用量レベルは、通常は０．１×１０１１ＶＰＵ〜１．０×１０１１ベクター粒子（ＶＰ）の範囲であるが、匹敵するヒト抗体用量レベルの抗ＰＤ−１抗体は、通常は２０ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲であり得る。いくつかの抗体（ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＣＴＬＡ４であるかにかかわらず）の用量レベルの投与は、ヒトの体重に基づく。例えば、いくつかの抗体についてのヒト用量レベルは、一般的には２ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇのどこかであり得る。
【００６２】
任意の治療法及び／又は薬物の投与により、毒性の可能性を熟慮する必要があり、したがって、提供される複数の用量レベルの任意の治療を注意深く評価することは重要である。これに留意して、本実験のために選択される用量レベルは、実験的な用量レベルの最大化ではなく最小限にすることに傾き、ヒトのための組み合わせ療法の適用という面では、ガイドとしてこれらが使用され得ると理解される。したがって、この実験において本出願人は、ヒトのための臨床試験（そこで、毒性問題に遭遇しなかった）において本出願人が使用している、より低い同等ワクチン用量レベル、及びより低い同等用量レベルの抗体（それは、ヒト適用のために使用されてより低い毒性効果を有すると考えられる）を使用することを選択する。
【００６３】
抗ＰＤ−１抗体の毒性：抗ＰＤ−１抗体の毒性は概説されている（Ｊ．Ｎａｉｄｏｏ，ＤＢ  Ｐａｇｅ  ａｎｄ  ＢＴ  Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｎｉ−ＰＤ−１  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ＰＤ−１  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２６：２３７５−２３９１，２０１５）。これらの副作用としては、皮膚、肝臓、肺、胃腸管に加えて、内分泌腺の炎症性状態が挙げられ、それらは軽度の自己免疫疾患に似ている。したがって、有効であるならば、抗ＰＤ−１抗体の可能な限り低い用量レベルを治療のために使用することが好ましいだろう。
【００６４】
本出願人は、実験２において、チェックポイント阻害性抗体とＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンを選択的に組み合わせることによって、抗ＰＤ−１抗体と関連するこれらの毒性問題のいくつかが低減され得る可能性がると考えたが、それは、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンと組み合わせて与えられた場合に抗ＰＤ−１抗体がはるかに低い用量で有効であり得る、及び／又は、抗ＰＤ−１抗体のより少ない用量が必要であり得るからである。
【表２】
2020532553.tif 000004
【００６５】
【化１】
2020532553.tif 000005
【００６６】
観察及びエンドポイント
・体重及び腫瘍の体積を研究期間の間に２日ごとに１回測定した。
・腫瘍体積を以下の式を使用して計算した。腫瘍体積（ｍｍ３）＝Ｖ＝π／６（ＬＤ）（ＰＤ）２（式中、ＬＤ＝最長の直径及びＰＤ＝ＬＤへ垂直な直径）
・％腫瘍増殖抑制（ＴＧＩ）を計算し、ベヒクル対照と統計的に比較した。
・生存データもリストし図示する。
・剖検：腫瘍の収集：実験期間の終了（１００日目）で、生存したすべての動物を安楽死させ、乳腺脂肪体から腫瘍小結節を収穫するだろう。
・組織学：腫瘍組織を１０％の中性緩衝ホルマリン中で２４時間固定した。次いで腫瘍組織にプロセシングを行い、パラフィン包埋組織ブロックを調製した。５ミクロンの厚さの薄切片をとり、ヘマトキシリン−エオシンにより染色した。病理学者が、腫瘍における形態的及び炎症性の変化、多形態性、線維血管間質、有糸分裂像、壊死の面積などについてスライドをスクリーニングした。
・ＩＨＣ：非染色のポリ−ｌ−リジンスライドをマウスＣＤ８エフェクターＴ細胞のＩＨＣ検出のために使用した。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】実験１をグラフで図示し、それぞれの５つの群（４つの単剤療法群及び対照）のうちの各々についての腫瘍体積（ｍｍ３）増殖ｖｓ日（１日目〜５７日目、５５日目ですべての対照マウスは死亡した）である。
【図１Ａ】実験１をグラフで図示し、それぞれの５つの群（４つの単剤療法群及び１つの対照）のうちの各々についての腫瘍体積（ｍｍ３）増殖ｖｓ９９日目までの日（実験１が中止された時）である。
【図２】第１の実験部分の５７日目での図１中のそれぞれの単剤療法群についての腫瘍体積の図１中のグラフ表示の表によるリスト、及び５５日目での対照群動物の寿命の最後の日のＴＧＩ（腫瘍増殖抑制）である。
【図３】腫瘍体積増殖動態、及び腫瘍体積（ｍｍ３）増殖ｖｓ日を図示する５５日目までの実験１及び実験２のグラフ表示である。
【図４】図３中のグラフ表示についての表によるリスト（そこで明示された腫瘍体積カラムは実験２の５５日目である）であり、％Ｔ／Ｃ（対照体積に対する腫瘍体積）は５５日目での腫瘍増殖パーセンテージを表わす。
【図５】対照動物の寿命の最後の５５日目までの、両方の対照と一緒の、２つの単剤療法の高用量群のみの実験１、及び組み合わせの高用量の実験２の腫瘍増殖動態ｖｓ日をグラフで図示する。
【図５Ａ】実験１の９９日及び実験２の１１３日目での終了までの、両方の対照と一緒の、高用量の組み合わせ（実験２）及びそのそれぞれの高用量の単剤療法（実験１）の腫瘍増殖動態をグラフで図示する。
【図６】実験１及び２の高用量群のみ及び対照の図５中のグラフ表示の値の表によるリスト、ならびに５５日目での％Ｔ／Ｃである。
【図７】５５日目までの、両方の対照と一緒の、２つの単剤療法の低用量群のみの実験１、及び組み合わせの低用量の実験２の腫瘍増殖動態をグラフで図示する。
【図７Ａ】実験１の９９日での終了及び実験２の１１３日目での終了までの、両方の対照と一緒の、低用量の組み合わせ（実験番号２）及びそのそれぞれの単剤療法（実験番号１）の腫瘍増殖動態をグラフで図示する。
【図８】実験１及び２の低用量群のみ及び両方の対照の図７中のグラフ表示の表による表示、ならびに５５日目での％Ｔ／Ｃである。
【図９】ワクチン及びＰＤ−１抗体の高用量及び低用量の組み合わせの両方の治療処理ならびに実験２のみの対照をグラフで図示する（グラフ形式及び表形式で）。１１３日目までマウスモデルにおいてＥ３乳がんの腫瘍体積増殖が抑制される。
【図１０】自然に死亡したマウスのみに関して、対照、単剤療法及び高用量の組み合わせについて比較した、実験１及び２のパーセント生存期間中央値の比率のグラフによる図示である。
【図１０Ａ】自然に死亡したマウスのみに関して、対照、単剤療法及び低用量の組み合わせについて比較した、実験１及び２のパーセント生存期間中央値の比率のグラフによる図示である。
【図１１】自然に死亡したマウスに関して、両方の対照、４つの単剤療法群、高用量の組み合わせ及び低用量の組み合わせについての、Ｅ３担腫瘍マウスの生存期間中央値のＫＭ（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ）推定値の処理群による表のリストを図示する。
【図１１Ａ】自然に死亡したマウスに関して、両方の対照、４つの単剤療法群、高用量の組み合わせ及び低用量の組み合わせについての、Ｅ３担腫瘍マウスの生存期間中央値のＫＭ（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ）推定値の処理群による表のリストを図示する。
【図１２】実験２について図示する棒グラフであり、高用量及び低用量のワクチン及びＰＤ−１抗体の組み合わせｖｓ対照により処理されたＥ３  ＳＣ腫瘍小結節マウスにおけるＣＤ８陽性細胞についての陽性細胞のパーセントである。
【図１３】実験２について図示する棒グラフであり、高用量及び低用量のワクチン及びＰＤ−１抗体の組み合わせｖｓ対照により処理されたＥ３  ＳＣ腫瘍小結節マウスにおけるＣＤ１１ｂ陽性細胞についての陽性細胞のパーセントである。
【図１４】図１２及び１３中で図示される実験２の表によるリストであり、ワクチン及びＰＤ−１抗体により処理されたＥ３  ＳＣ腫瘍小結節マウスにおけるＣＤ８及びＣＤ１１ｂについて陽性の細胞のパーセントである。
【００６８】
実験における値を、実験１の１〜１０匹の動物及び実験２の１〜５匹の動物の平均±標準誤差として各々の群を表現する。統計解析を、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（バージョン５）を使用して、二元配置ＡＮＯＶＡに続いてＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後検定によって実行する。
【００６９】
上で参照されるグラフによる図中のすべてのグラフ表示に関して、腫瘍増殖曲線における突然の変化は、グラフによる図中のそれぞれのグループ化からの１匹又は複数の動物の死亡／人道的な安楽死に起因する。
【実施例】
【００７０】
実験１の評価／結果
実験１  −  ヒトＭＵＣ−１陽性Ｅ３マウス乳がん細胞株の増殖率に対する単剤療法（各々分離して与えられる）としての、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン及び抗ＰＤ−１抗体の投与の効果の研究：出願人は、本実験における全体的な考慮の第１のパートとして、これらのワクチン及び抗体の各々を投与して、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンプラットフォーム及び抗ＰＤ−１抗体について試験して、各々の治療法を単剤療法として単独で使用し且つ組み合わせ療法で使用しない場合の、腫瘍増殖を抑制するのに有効な治療能力を分離して決定する。これらの治療処理が分離して投与された場合に本有効性研究の腫瘍増殖動態を制御する能力を、図１中で（そこで、「ｙ」軸は立方体のｍｍ３での腫瘍増殖を表わし、「ｘ」軸は日での時間を表わす）、それと一緒に、図１中で記録されたデータを表形式で追加でリストする図２として示される表で示す。
【００７１】
本明細書における表１及び２中で部分的に表されるように、マウスにＥ３乳腺細胞株を最初に注射し、次いで腫瘍増殖がおよそ７６ｍｍ３となるおよそ４０日後に組み合わせ研究を開始した。次いで０．１×１０８ＰＦＵ及びＡＢ２０の低用量組み合わせ群、及び１．０×１０８ＰＦＵ及びＡＢ１００の高用量組み合わせ群を各々、実験２の１日目で開始した。初回の適用可能なベクターワクチンを皮下注射し（高用量及び低用量の組み合わせ群）、続いて、各々を８、２２、４０及び６０日目でそれぞれの（高用量又は低用量）ベクターワクチンのブーストを行った。同時に、初回のＰＤ−１抗体投与（腹腔内）も、１日目（各々について、それぞれの高用量及び低用量の組み合わせ群）で開始し、次いでそれぞれの（高用量又は低用量）ブーストを、４、７、１０、１３、１７、２０、２３、４０及び６０日目で投与した。ワクチンのブーストはベクターでもあるが、２０１４年９月９日に交付された本出願人の米国特許第８，８２８，９５７号中で示されるように、融合タンパク質のブーストが第１のベクターワクチン注射に後続して投与され得ることが指摘されるべきである。本実験における組み合わせ投与期間は６０日であったが、組み合わせ投与期間は、例えば１２０日、１８０日、３６０日及び／又は２年であり得ることを理解するべきである。或いは、例えば最初の６０日の期間後に、任意の１つの時点でワクチン及び薬物の組み合わせ投与を停止することができ、その結果、次いでチェックポイント阻害剤又はワクチンのいずれかを単剤療法として継続することができる。これらのすべての可能性は毒性及び他の問題に依存して考慮されて、被験体の最良の利益であるように決定され得る。
【００７２】
示されるように、実験のこの部分は、５７日の期間にわたって行われ、５５日目までに対照動物はすべて死亡した。示されるように、対照群として示される無処理対照マウスにおける腫瘍小結節の増殖に比較して、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン及び抗ＰＤ−１抗体の試験されたすべての用量は、増殖している腫瘍小結節の増殖を抑制した。実験１を、ベースライン又は１日目から５７日の期間にわたって遂行し、そこで、以前に明示されるように、ｙ軸上のベースラインの腫瘍体積は図１で７６ｍｍ３である。
【００７３】
他の図は５５日の期間より長く継続しカバーされた実験を図示するが、５５日の期間は、対照マウスが５５日目まで生きていた実験１の代表的な様相であると判断され、その結果、対照に対する比較は５５日の期間を超えて存在しない。それにもかかわらず、生存及び付随的な考慮は、実験１に加えて実験２について１００日目を超えて試験を継続する根拠であった。
【００７４】
実験１において、各々１０匹のマウスの５つの実験群があった。処理が与えられない「対照」の群ＶＩがあった。２つの異なるワクチン用量群があった。１つのワクチン用量群Ｉは０．１×１０８ＶＰであり、他方のワクチン用量群ＩＩは１．０×１０８ＶＰであった。２つのＰＤ−１抗体用量レベル群があった。第１の抗体群ＩＩＩを２０μｇにより処理し、第２の抗体群ＩＶを１００μｇにより処理した。図１及び図２中で図示されるように、治療の単剤療法処理のうちの各々（ワクチン及びＰＤ−１抗体）は、腫瘍増殖を減速又は阻害する能力を有していた。より高用量レベルは、各々のワクチン及び抗体の、より遅い腫瘍増殖を引き起こすのにより有効であることが示された。それにもかかわらず、腫瘍増殖は依然としてすべての事例において起こっていた。この例において、治療剤が１日目で初回投与された場合に、ベースラインリーディングは図１中で指摘されるように７６ｍｍ３である。図１Ａは、５５日目から９９日目（実験１が終了した時）を超えて行われた単剤療法増殖動態を図示する。
【００７５】
図２中の表において、「腫瘍体積（ｍｍ３）」とタイトルをつけた中央のカラム中の数「ｎ」は、依然として生存する動物の数を指す。この第１の実験において、多くの動物が５７日目までに腫瘍増殖の結果として死亡したことが指摘される。図１中で図示される腫瘍増殖曲線の観察に基づいて、４０日目での様々な腫瘍増殖曲線から、実験２のために組み合わせ（ＰＤ−１用量及びワクチン用量）治療法を選択することを決定した。これに基づいて、実験２のための群Ａの組み合わせ療法として、低用量ワクチン０．１×１０８ＰＦＵ及びＡＢ２０μｇを組み合わせ、加えて実験２のための群Ｂの組み合わせ療法として、高用量ワクチン１．０×１０８ＰＦＵ及びＡＢ１００μｇを組み合わせることを決定した。対照は、実験２について群Ｃとして表記する。実験２におけるこれらの３つの群のうちの各々中のマウスの数は、５匹のマウスであった。実験２に使用したマウスは、実験１に使用したマウスと同じ供給源ならびに同じ種及び系統からであった。したがって、実験１が継続している間に、実験２を実験１の４０日目に開始した。
【００７６】
実験２の評価／結果
組み合わせ療法の投与試験：腫瘍増殖：図３及び４は、各々の実験１及び２についての２つの対照曲線、実験１のワクチン及び抗体の単剤療法曲線、ならびに高用量群（１．０×１０８ＰＦＵ及びＡＢ１００ｕｇ）及び低用量群（０．１×１０８及びＡＢ２０μｇ）の２つの組み合わせ療法を図示する。ワクチン療法及び抗体ＡＢ療法が組み合わせられた（すなわち共通の期間にわたって組み合わせ療法として投与されること）場合に（その間に２つの組み合わせ療法は同時及び／又は異なる時間に投与された）、この組み合わせは、ワクチン又は抗体の単剤療法の分離した投与によって達成されたものを超えて腫瘍増殖を成功裡に抑制したか又はその抑制を増加させるだけではなく、図３中で図示されるように、高用量ワクチン及びＡＢ１００群の組み合わせは、大まかに８〜２０日目の間の初期のステージでベースライン未満の腫瘍退縮を引き起こすことさえ可能であった。
【００７７】
上記の表１及び２中で部分的に表されるように、そして実験１に類似して、マウスにＥ３乳腺細胞株を最初に注射し、次いで腫瘍増殖がおよそ７５ｍｍ３となるおよそ４０日後に、各々の動物群Ａ及びＢ（高用量及び低用量の組み合わせ）についてのベクターワクチンの皮下注射及び抗体の組み合わせによって研究を開始し、続いて、それぞれのベクターワクチン用量レベルについて８、２２、４０及び６０日目ならびにそれぞれのＰＤ−１抗体用量レベルについて４、７、１０、１３、１７、２０、２３、４０及び６０日目でブースト（動物の分離した群について必要に応じて、高用量及び低用量）を行った。ワクチンのブーストはベクターでもあるが、本出願人の米国特許第８，８２８，９５７号中で示されるように、融合タンパク質のブーストが初回のベクターワクチン注射に後続して投与され得ることが再び指摘されるべきである。示されるように、組み合わせ療法の両方を１、４０及び６０日目に投与した。初回用量を同じ日に投与し、最後の２用量を同じ日（４０及び６０日目）に投与した。残りの治療ブースト（ワクチン及び抗体）を各々共通の時間枠内に投与したが、異なる日に投与した。
【００７８】
図４中の表のリストは、実験１の５５日目と比較した実験２の５５日目での図３の結果を図示し、実験１及び２の対照（群ＶＩ及び群Ｃ）、ならびに高用量及び低用量の両方についてのワクチン及び抗体の分離した単剤療法投与（群Ｉ〜ＩＶ）、ならびに各々についての組み合わせ療法（群Ａ及びＢ）を包含する。図４中の腫瘍体積のカラム（５５日目での腫瘍体積を表す）から、及びＴ／Ｃのパーセンテージ（５５日目での対照体積に対する腫瘍体積）から、組み合わせ療法の利点は、追加よりも大きいことが示される。実際、各々の事例（高用量及び低用量）において、増加は２倍の増加に接近するか又は超えていた。例えば、図４中の右側カラム中で、高用量の％Ｔ／Ｃ（対照増殖に対する腫瘍増殖のパーセンテージ）は２０％であったが、高用量の単剤療法（０．１×１０８ＰＦＵのワクチン及びＡＢ２０）はそれぞれ３６％及び３７％であった。
【００７９】
異なる観点から見て、そしてわずかに早い時間で（実験１の４３日目及び実験２の４３日目で）、各々についてのおよその測定（単剤療法の実験１及び組み合わせの実験２）から、単剤療法高用量ワクチンの腫瘍体積平均は２２８ｍｍ３であり、単剤療法ＡＢ１００高用量の腫瘍体積平均は２３７ｍｍ３であったが、組み合わせ高用量の腫瘍体積平均は１１６ｍｍ３であった。後者の組み合わせ療法のがん抑制能力は実験の有望な目標であったが、それにもかかわらず、本明細書において進歩した理由の多くに起因して、それは予想されず、抑制の程度は意外であった。
【００８０】
さらに別の例で（実験１の４３日目及び実験２の４３日目で）、各々についてのおよその測定（単剤療法の実験１及び組み合わせの実験２）から、単剤療法低用量ワクチンの腫瘍体積平均は３２３ｍｍ３であり、単剤療法ＡＢ２０低用量の腫瘍値平均は３４３ｍｍ３であり、組み合わせ高用量の腫瘍体積平均は１５３ｍｍ３であった。
【００８１】
図５及び６は、実験１における分離した高用量のワクチン及び抗体の単剤療法投与と比較した、実験２における高用量の組み合わせの比較を単独で提供する。図５Ａは、実験２が終了した時の１１３日目まで延長された高用量グラフ（各々の単剤療法及び組み合わせ療法について）を図示する。同様に、５５日目以降に、図７及び８は、実験１における分離した低用量のワクチン及び抗体の単剤療法投与と比較した、実験２における低用量の組み合わせの比較を提供する。図７Ａは、実験２が終了した時の１１３日目まで延長された低用量グラフを図示する。図９は、実験２（そこで、実験２は生存考慮のために１１３日目まで継続された）についての対照と比較した、低用量及び高用量の組み合わせ療法の増殖動態を追加で図示し、本出願人は、図示されるような高用量の組み合わせが、有意により良好な増殖抑制を示すより好ましい組み合わせであることを見出した。
【００８２】
組み合わせ療法の投与：生存：高用量の組み合わせについての組み合わせ試験における動物の生存に関して、図１０中で示されるように、高用量の組み合わせで処理したマウスがかなりの期間の間生存したことも驚くべきことであり予想外であり、図１１Ａ中でリストされるようにＥ３担腫瘍マウスの生存期間中央値のＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ推定値を使用して、高用量組み合わせ群ＡのＫＭ生存期間中央値は、かなりのマージン（ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅ  ｍａｒｇｉｎ）で他のすべての群を上回って９９．５であった。図１０Ａ及び１１（ＫＭ生存期間中央値の表）は、低用量の組み合わせ療法についての生存を図示する。
【００８３】
実験の一部として、すべての処理群の腫瘍スライドの免疫組織化学を遂行して、観察された病理学的変化を査定した後に、ＣＤ８陽性細胞及びＣＤ１１ｂ陽性細胞についての定量的評価を遂行した。ＣＤ８及びＣＤ１１ｂの染色の各々のために、プロトコールを開発した。各々の事例において、各々のスライドについて３つの異なる顕微鏡視野からの３００細胞をＣＤ８及びＣＤ１１ｂのマーカーについてカウントした。パーセント陽性細胞を、ＣＤ８及びＣＤ１１ｂのマーカーについて３００細胞から計算した。
【００８４】
図１２中で図示されるように、実験２において、ワクチン療法及びＰＤ−１抗体療法による組み合わせ治療処理は、各々の事例において、対照と比較して、陽性ＣＤ８エフェクターＴ細胞のパーセンテージの増加を明らかに誘導した。ＣＤ８陽性細胞のパーセントは、低用量の組み合わせに比較して、高用量の組み合わせにおいてわずかに高かった。ＣＤ８陽性細胞は、対照（処理無し）群中で観察されなかった。より高い用量の組み合わせについてのエラーバーは無処理対照マウスのエラーバーとオーバーラップしない。したがって、この結果は、ワクチン療法が、ＰＤ−１抗体療法と組み合わせた場合に、がん性腫瘍組織の中へのＣＤ８エフェクターＴ細胞の侵入を増進するということを示し、したがって、コールドな非炎症性のがん性腫瘍組織をより高応答性のがん性腫瘍組織に変換すると考えられる。
【００８５】
同時に、図１３中で示されるように、抗体及びワクチン療法のより高い用量の組み合わせによる処理は、対照と比較して、ＣＤ１１ｂについて陽性細胞のパーセンテージの減少を誘導した。低用量組み合わせ処理におけるＣＤ１１ｂについて陽性細胞のパーセントは、高用量組み合わせ処理に比較して、わずかに高かった。ＣＤ１１ｂ陽性細胞は対照（処理無し）群において最大であった。ＣＤ１１ｂは骨髄性阻害細胞についてのマーカーである。したがって、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン−ＰＤ−１抗体の組み合わせ処理は、図１３中で図示されるように、Ｅ３腫瘍小結節における微小環境を変化させた。したがって、ＰＤ−１抗体とＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンの組み合わせによる処理は、免疫調節性環境を阻害性から免疫刺激性へ変換したと考えられる。これは図１４の表によるリスト中でさらに図示され、対照と比較して、ＣＤ８エフェクターＴ細胞のパーセンテージの増加及びＣＤ１１ｂ陽性細胞のパーセンテージの減少を示す。
【００８６】
ＣＤ１１ｂ細胞（骨髄由来抑制細胞又はＭＤＳＣとしても公知である）のパーセンテージの減少は、ポジティブな指標であるが、それは、それらがＴ細胞の分裂増殖及び活性化を阻害することが公知であるからである。慣性的な炎症性病態（ウイルス感染及び細菌感染）又はがんの下で、骨髄分化はＭＤＳＣの増幅へと傾く。これらのＭＤＳＣは炎症部位及び腫瘍に侵入し、そこでは、例えばそれらはＴ細胞及びＮＫ細胞（ナチュラルキラー細胞）の抑制又は阻害によって、免疫応答を停止する。ＭＤＳＣは、サイトカイン及びＴＧＦβ等の因子の発現を介して、血管新生、腫瘍進行及び転移も加速する。臨床的及び実験的な証拠は、ＭＤＳＣの高い浸潤を備えたがん組織が患者の予後不良及び治療法への耐性と関連することを示した。したがって、それらは重要な治療法の標的になっており、組み合わせ療法が単剤療法を上回る有意な改善であるように、本事例において追加支援を提供する。
【００８７】
任意の理論によって束縛されることを意図するものではないが、実験結果に基づいて、非標的化抗ＰＤ−１抗体療法へ応答しない非炎症性又はコールドな腫瘍（低レベルの浸潤ＣＤ８エフェクターＴ細胞）は、組み合わせの標的化されたワクチン療法により、ＰＤ−１抗体療法へ応答性のホットな腫瘍になり、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌは、マウスにおけるＴＡＡ皮下腫瘍結節中のＴＡＡ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を増加させると考えられる。異なるタイプの治療法の投与（皮下及び腹腔内）と共に、標的化アプローチ及び非標的化アプローチに起因して、このことは、有効性及び生存の両方に関して有意な治療効果を有する所望の効果をもたらすとも考えられる。
【００８８】
要約すると、前述のことにもかかわらず、全体的な実験は、Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法が、治療応答を誘導するそれ自身の能力に加えて、触媒及び／又は刺激として作用して、ＰＤ−１抗体療法への全体的な治療奏効率の増加（寿命を延長する生存時間の増加を包含する）を可能にするという証拠をもたらすと思われる。明らかに、がん免疫療法の予測不能の分野において意外にも有意な改善をもたらす２つの治療法の相互作用及び／又は協働があり、がん患者の治療における新規アプローチであると思われる。したがって、本出願人の発明は、ＰＤ−１抗体療法と組み合わせた場合に二重の治療能力を提示すると考えられるワクチン療法を提供する。
【００８９】
上で同定された共通の期間（それはたまたま実験的な目的のために６０日で選択されている）内で及び／又はその外側で、追加のワクチンのブースト、追加の抗体ブースト及び／又は治療法の他の追加の形態（複数可）が、追加で投与され得ることは、もちろん理解されるべきである。さらに、組み合わせ療法の適用について共通の期間は、９０、１２０もしくは場合によっては１８０日又はそれ以上であり得る。任意の１名又は複数の患者についての組み合わせ療法は、チェックポイント阻害剤抗体療法のみの投与のために現在処方される期間の限り（それは多くについて２年の期間である）、続き得る。用量バリエーションもあり得る。例えば、初回ワクチン用量はベクターであり得るが、ブーストは融合タンパク質であり得る。他のバリエーションとしては、異なる用量レベルである用量のブーストが挙げられ得る。例えば、初回抗体用量は１００ｍｇであり得、連続した抗体のブーストは８０ｍｇであり得る。上の実験の目的は、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン及び抗体療法の組み合わせが、もし共通の時間枠内で一緒に適用されれば、重篤な副作用を生じること無しに、がん患者のために促進された治療効果及び／もしくは生存効果を生成する相互作用及び／もしくは相乗作用のうちのいくつかの形態を産生し得るか、ならびに／又は触媒として作用し得るかどうかを決定することであった。
【００９０】
実験的研究のいくつかの結論
１．ワクチン及びＰＤ−１抗体の組み合わせは、少なくともいずれかの治療法単独に対して２倍の係数で、Ｅ３腫瘍細胞の増殖を抑制する効力を有する。
２．２つの治療法の組み合わせは、単剤療法として使用される治療法の各々によって得ることができない、１つ又は複数の利益を提供する。
３．組み合わせ療法のうちの各々の１つは、組み合わせの全体的な効果（有効性、継続期間及び／又は安全性）を実質的に促進する、意味のある寄与を提供する。
４．Ａｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌ処理マウス（群ＩＩ）は、無処理対照マウス（群ＶＩ又はＣ、それぞれ５６日及び６２．５日まで）よりも長く（７１日）生存する。
５．抗ＰＤ−１処理マウス（群ＩＶ）は、無処理対照マウス（５６日又は６２．５日）よりも長く（７５日）生存する。
６．ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン及び抗体の組み合わせにより処理されたマウス（群Ａ）は、単剤療法ワクチン（７１日）又は単剤療法抗体（７５日）により単独で処理されたマウスよりも長く（９９．５日）生存する。
７．ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン及び抗ＰＤ−１の抗体の組み合わせによる処理は、ＣＤ８エフェクターＴ細胞の増加を誘導し、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）（腫瘍小結節中の阻害細胞）の減少を追加で増進し、それによって、免疫調節性環境を阻害性から免疫刺激性へと増加させる。
【００９１】
複数の利点
本出願人の実験から証明されるように、例えば以下のように、明細書中で記載されていた様式で、チェックポイント阻害剤（例えばＰＤ−１）と一緒のＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンの組み合わせ療法のアプローチを使用することで、解明されたと考えられる多くの有意な利点がある。
【００９２】
チェックポイント阻害剤抗体療法と一緒のＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチン療法は、抗原標的ワクチン及び抗体のおそらく低減用量レベルの使用ならびに／又はＰＤ−１療法投与の現在の慣習的又は標準的な期間に比較してより短い期間にわたる用量の投与に起因して、腫瘍小結節（複数可）の中へトラフィッキングする抗原特異的Ｔ細胞の数を増加させ、被験体における正常な組織（非がん性腫瘍）の破壊の低減により有効性の促進を引き起こす。或いは、がん患者のより大きな集団は、組み合わせによって成功裡に治療され得る。
【００９３】
より長い生存期間は、有効性の促進に加えて達成され得る。
【００９４】
治療法のＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンの投与と組み合わせて、抗体の投与／点滴のより低い用量レベル及び／又は数を使用することによって、臨床的有効性を減じること無しに、患者への毒性問題を低減する。
【００９５】
２〜３週間ごとに２年の期間にわたって現在投与されるチェックポイント阻害剤療法を投与されている患者の用量頻度の必要性を低減し、それは有効性を減じずに、抗体投与と関連した費用の低減をもたらし得る。
【００９６】
チェックポイント阻害剤と組み合わせたＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンプラットフォームの利用は、ワクチン療法が免疫療法記憶を追加で提供することが以前に示されているので、より長い期間にわたる生存を介して患者の利益になり得る。
【００９７】
ａ）対象の腫瘍抗原を標的化すること及びｂ）ワクチン単剤療法単独又は抗体単剤療法単独へ応答する患者のパーセンテージとは対照的に、組み合わせの免疫療法へ応答する患者のパーセンテージを増幅することによって、全体的な治療の追加の効力を増加させる。
【００９８】
ワクチン療法は、ＰＤ−１抗体療法と組み合わせた場合に、コールドな炎症を起こしていないがん性腫瘍組織を、より高度に応答性のホットな又は炎症を起こしたがん性腫瘍組織へ変換すると考えられる。
【００９９】
上記の複数の利点は、適切な投薬量レベルで組み合わせて使用される場合の２つの治療法の相互作用が、各々が単剤療法として単独で使用される場合の２つの治療法の総計よりも大きい全体的な相乗的効果及び／又は補完的効果を産生することを強調する。
【図１】
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【図１Ａ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図５Ａ】
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【図６】
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【図７】
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【図７Ａ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１０Ａ】
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【図１１】
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【図１１Ａ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年5月1日(2020.5.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(ｉ)個体に投与されるチェックポイント阻害剤抗体の構成要素と、（ｉｉ）個体に投与されるＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０Ｌワクチンの構成要素とを含む、個体における腫瘍抗原に対する免疫応答を生成するための医薬がん免疫療法の組み合わせであって、共通の期間にわたって有効量で組み合わされる構成要素が、単剤療法として投与される二つの構成要素のいずれかの免疫応答を上回って高められた相乗的な免疫応答を生成する能力を有する、上記組み合わせ。
【請求項２】
前記組み合わされる構成要素が、２倍の係数で骨髄由来抑制細胞を減少させ、かつＣＤ８  Ｔ細胞を増加せる能力を有する、請求項１に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項３】
前記組み合わされる構成要素が、がん性腫瘍に対するＣＤ８  Ｔ細胞の増加及びＣＤ１１ｂ骨髄由来抑制細胞の減少の両方を誘導するように個体における免疫治療効果を生成する能力を有する、請求項１に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項４】
ＣＤ１１ｂ骨髄由来抑制細胞における減少が５０％の係数で減少させることができる、
請求項３に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項５】
前記ワクチン構成要素についての効果的用量が０．１×１０１１ＶＰＵ〜１．０×１０１１ＶＰＵの範囲である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項６】
前記抗体構成要素の効果的用量が２０ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項７】
前記チェックポイント阻害剤抗体治療構成要素の効果的用量が２〜１２ｍｇ／キログラム（ｋｇ）個体体重の範囲である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項８】
前記高められた免疫応答が２倍の係数で腫瘍の成長を抑制することを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項９】
投与されると、ＴＡＡ／ｅｃｄＣＤ４０ＬワクチンへのＴＡＡの添付が樹状細胞上のＣＤ４０受容体へ結合する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項１０】
前記チェックポイント阻害剤抗体構成要素が点滴で投与され、抗原非特異的ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１又はＣＴＬＡ−４抗体の一つである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項１１】
前記ワクチンの構成要素が、皮下投与される抗原特異的ベクターＡｄ−ｓｉｇ−ｈＭＵＣ−１／ｅｃｄＣＤ４０Ｌを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項１２】
前記組み合わされる構成要素が、コールド又は無反応であると判断されるがん性ムチン腫瘍を、ホットである又は応答性であると判断されるがん性ムチン腫瘍へ変換する能力を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項１３】
前記組み合わされる構成要素が、個体におけるがん性ムチン腫瘍サイトの少なくとも一部の免疫調節性環境を免疫阻害性から免疫刺激性へ変換する能力を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【請求項１４】
前記抗原特異的ＴＡＡがＭＵＣ−１である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬がん免疫療法の組み合わせ。
【国際調査報告】
2020532553.tif 000025