(57)【要約】実施形態は、経口薬物送達のための組成物を含み得る。組成物は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を含んでもよい。生理活性物質は胃を横切って輸送されてもよい。生理活性物質は安定で、過酷な胃酸環境では分解しないものであり得る。生理活性物質の保護を助けるために、生理活性物質は担体と混合される。担体は、胃の胃酸に不溶性の液体であってもよい。生理活性物質は、担体に可溶であってもよい。粘膜付着性化合物は、生理活性物質の胃の内層への吸着を促進するために使用され得る。浸透促進剤は、胃壁を横切る生理活性物質の輸送を促進し得る。
2020511478.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
経口薬物送達のための組成物であって、
生理活性物質と、
担体化合物と、
粘膜付着性化合物と、
浸透促進剤と
を含む組成物。
【請求項２】
生理活性物質は、インスリン、ヒト成長ホルモン、グルカゴン様ペプチド−１、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモンの断片、エンフビルチド、又はオクトレオチドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
生理活性物質は、インスリン又はインスリン−ＰＥＧコンジュゲートを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
生理活性物質はインスリン−ＰＥＧコンジュゲートを含み、
インスリン−ＰＥＧコンジュゲートは２ｋＤａ〜５ｋＤａの範囲の分子量を有するＰＥＧを含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
生理活性物質はインスリンのアナログ、ホモログ、又は誘導体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
生理活性物質は、ＧＬＰ−１又はＧＬＰ−１−ＰＥＧコンジュゲートを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
生理活性物質はＧＬＰ−１−ＰＥＧコンジュゲートを含み、
ＧＬＰ−１−ＰＥＧコンジュゲートは２ｋＤａ〜５ｋＤａの範囲の分子量を有するＰＥＧを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
生理活性物質はＧＬＰ−１のアナログ、ホモログ、又は誘導体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
担体化合物は水不溶性である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
担体化合物は両親媒性かつ水不混和性の化合物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
担体化合物は、魚油、エステル化トリグリセリド、オメガ脂肪酸、オリーブ油、オレンジ油、オキアミ油、レモン油、ベニバナ油、ヒマシ油、硬化油、又はそれらの混合物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
粘膜付着性化合物は、シクロデキストリン、デンプン、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）、カプロラクトン、又は食品添加物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
浸透促進剤は、正に帯電した分子、負に帯電した分子、又は双性イオン分子を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
浸透促進剤は両親媒性分子を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
浸透促進剤は、アルキルグルコシド、アルキルコリン、アシルコリン、胆汁酸塩、リン脂質、又はスフィンゴ脂質を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
浸透促進剤はドデシルホスホコリン又はドデシル硫酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記生理活性物質、前記担体化合物、前記粘膜付着性化合物、及び前記浸透促進剤を封入したカプセルをさらに含み、カプセルは胃で分解するように構成されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
腸溶性コーティングを含まず、かつペプチダーゼ阻害剤を含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
有機酸の疎水性アニオンをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
有機酸は、パモ酸、ドキュセート、フロ酸、又はそれらの混合物を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
有機酸の疎水性アニオンは、脂肪酸アニオン、リン脂質アニオン、ポリスチレンスルホン酸アニオン、又はそれらの混合物を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
粘膜付着性化合物はシクロデキストリンを含み、
生理活性物質及び粘膜付着性化合物が、シクロデキストリンの包接複合体を形成している、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
生分解性ポリマーをさらに含み、生分解性ポリマーは生理活性物質を含む粒子を形成している、請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
生分解性ポリマーはポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）を含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
ｐＨ調整剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２６】
ペプチダーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
経口送達のための薬物製剤であって、
生理活性物質と、
粘膜付着性化合物、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のうちの少なくとも１つを含む材料とを含み、
生理活性物質化合物は、薬物製剤の質量中心を含み、
前記材料は生理活性物質と接触しており、かつ
前記材料の一部は、生理活性物質のどの部分よりも質量中心から遠くに配置されている、薬物製剤。
【請求項２８】
前記材料は、粘膜付着性化合物、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のうちの１つを含む、請求項２７に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項２９】
前記材料は、粘膜付着性化合物、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のうちの２つを含む、請求項２７に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３０】
前記材料は、粘膜付着性化合物、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のうちの３つを含む、請求項２７に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３１】
前記材料は、粘膜付着性化合物、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のうちの４つを含む、請求項２７に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３２】
前記材料は、生理活性物質が包接複合体を形成する化合物を含む、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３３】
前記材料は粘膜付着性化合物を含む、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３４】
前記材料は浸透促進剤を含む、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３５】
前記材料は逆ミセルを含む、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３６】
逆ミセルの一部は、生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のどの部分よりも質量中心から遠くに配置されている、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３７】
浸透促進剤の一部は、生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のどの部分よりも質量中心から遠くに配置されている、請求項２７〜３１及び３６のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３８】
粘膜付着性化合物の一部は、生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のどの部分よりも質量中心から遠くに配置されている、請求項２７〜３１、３６、及び３７のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項３９】
生理活性物質が包接複合体を形成する化合物は、生理活性物質と接触しており、
逆ミセルは、生理活性物質が包接複合体を形成する化合物と接触しており、
浸透促進剤は、生理活性物質が包接複合体を形成する化合物と接触しており、
粘膜接着剤は、逆ミセル又は浸透促進剤の少なくとも一方と接触している、請求項３１に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項４０】
粘膜付着性化合物の一部は、存在する場合、生理活性物質、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のどの部分よりも質量中心から遠くにあり、
生理活性物質が包接複合体を形成する化合物は、存在する場合、生理活性物質と接触しており、
逆ミセルは、存在する場合、生理活性物質が包接複合体を形成する化合物と接触しており、
浸透促進剤は、存在する場合、生理活性物質が包接複合体を形成する化合物と接触している、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項４１】
担体化合物をさらに含み、担体化合物の一部は、前記材料のどの部分よりも質量中心から遠くにある、請求項２７〜４０のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項４２】
カプセルをさらに含み、カプセルは前記生理活性物質、前記材料、及び前記担体化合物が存在する場合はそれらを封入する、請求項２７〜４１のいずれか一項に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項４３】
カプセルは腸溶性コーティングを含まない、請求項４２に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項４４】
カプセルをさらに含み、
前記材料は、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する化合物のうちの１つを含み、
カプセルは前記生理活性物質及び前記材料を封入しており、
粘膜付着性化合物は、薬物製剤の質量中心から遠い側のカプセルの面でカプセルに接触している、請求項２７に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項４５】
担体化合物をさらに含み、カプセルが担体化合物を封入している、請求項４４に記載の経口送達のための薬物製剤。
【請求項４６】
生理活性物質の経口送達用の薬物を製造する方法であって、
生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を組み合わせる工程と、
カプセルに生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を封入する工程とを含み、カプセルは、胃酸に溶解して生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を放出するように構成されている、方法。
【請求項４７】
生理活性物質は、インスリン、ヒト成長ホルモン、グルカゴン様ペプチド−１、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモンの断片、エンフビルチド、又はオクトレオチドを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
治療方法であって、
生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を含む組成物を含むカプセルを人に経口投与する工程と、
人の胃の中でカプセルの一部を溶解させて、生理活性物質と担体化合物を胃内に放出させる工程と、
生理活性物質の一部を胃の壁に吸着させる工程と、
生理活性物質を胃の壁を横切って血流に輸送する工程と
を含む方法。
【請求項４９】
前記生理活性物質の一部は、胃の壁に吸着する前に担体化合物中に留まっている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
胃の壁を横切る生理活性物質の輸送は、カプセルを経口投与した後、約３〜４時間である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
生理活性物質は、インスリン、ヒト成長ホルモン、グルカゴン様ペプチド−１、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモンの断片、エンフビルチド、又はオクトレオチドを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
生理活性物質はインスリンを含み、治療は糖尿病の治療である、請求項４８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
小分子薬、ホルモン、タンパク質、診断薬、その他の医学的に活性な物質などの生理活性物質の患者への送達は、多くの課題に直面している。生理活性物質は患者の体内に送達される必要がある。生理活性物質を送達する１つの方法は、注射によるものである。注射は、治療のために生理活性物質を血流又は標的領域に迅速に又は直接的に到達させることができるが、注射は患者にとって不便であるか、又は痛みを伴う場合がある。多くの生理活性物質は、１日に数回など、頻繁に投与する必要がある。より頻繁な投与スケジュールは、患者への不便さを増す可能性があり、患者による服薬コンプライアンスを低下させる可能性があり、患者にとって最適な結果に至らない可能性がある。生理活性物質が注射で投与される場合、更なる注射は痛みの頻度、感染のリスク、及び患者の免疫反応の可能性を増加させる。注射に代わるものは摂取である。多くの場合、摂取は注射よりも便利であり、煩わしさも少ない。しかし摂取の場合、生理活性物質は患者の消化器系を通過しなければならず、治療のために血流又は標的領域に到達する前に分解する可能性がある。結果として、摂取の代わりに注射がよく用いられる。例えば、糖尿病の治療には通常、インスリンの経口投与ではなくインスリン注射が必要である。治療のために生理活性物質を血流又は標的領域に確実に経口投与する必要性が残っている。本明細書に記載される方法及び組成物は、これら及び他のニーズに対する解決策を提供する。
【発明の概要】
【０００２】
本技術の実施形態は、ヒト又は他の動物の血流への生理活性物質の経口送達を可能にする。生理活性物質は、主に胃壁を横切って輸送される。過酷な環境で分解される前に生理活性物質を胃全体に輸送するために、生理活性物質を担体と混合させる。担体は、胃の胃酸に不溶性の液体であってもよい。生理活性物質は、担体に可溶であってもよい。担体は、胃の胃酸とペプシンから生理活性物質を保護する。粘膜付着性化合物を使用して、生理活性物質の胃の内層への吸着を促進してもよい。浸透又は吸収促進剤は、胃壁を横切る生理活性物質の輸送を促進し得る。生理活性物質の経口送達は、望ましくない副作用を引き起こす可能性がある特定のコーティング又は阻害剤を不要とすることができる。
【０００３】
実施形態は、経口薬物送達のための組成物を含み得る。組成物は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を含んでもよい。
実施形態は、経口送達用の薬物製剤を含み得る。薬物製剤は、生理活性物質を含み得る。薬物製剤は、粘膜付着性化合物、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する化合物の少なくとも１つを含む材料も含み得る。生理活性物質化合物は、薬物製剤の質量中心を含んでもよい。上記材料は生理活性物質と接触していてもよい。上記材料の一部は、生理活性物質のどの部分よりも質量中心から遠くに配置されてもよい。
【０００４】
実施形態は、生理活性物質の経口送達のための薬物を製造する方法を含み得る。この方法は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を組み合わせることを含んでもよい。この方法は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤をカプセルに封入することをさらに含むことができる。カプセルは、胃酸に溶解して生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を放出するように構成されてもよい。カプセルは、粘膜付着性化合物でコーティングされていてもよい。
【０００５】
実施形態は、治療方法も含み得る。方法は、組成物を含むカプセルを人に経口投与することを含み得る。組成物は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を含み得る。方法はまた、人の胃の中でカプセルの一部を溶解させて、生理活性物質と担体化合物を胃内に放出することを含んでもよい。方法は、生理活性物質の一部を胃の壁に吸着させることをさらに含み得る。加えて、方法は、生理活性物質を胃の壁を横切って血流に輸送することを含み得る。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】本技術の実施形態による生理活性物質を含むカプセルの経口送達の図を示す。
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｅは、本技術の実施形態による生理活性物質の経口送達に関与する輸送プロセスの図を示す。
【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｅは、本技術の実施形態による生理活性物質の経口送達に関与する輸送プロセスの図を示す。
【図２Ｃ】図２Ａ〜２Ｅは、本技術の実施形態による生理活性物質の経口送達に関与する輸送プロセスの図を示す。
【図２Ｄ】図２Ａ〜２Ｅは、本技術の実施形態による生理活性物質の経口送達に関与する輸送プロセスの図を示す。
【図２Ｅ】図２Ａ〜２Ｅは、本技術の実施形態による生理活性物質の経口送達に関与する輸送プロセスの図を示す。
【図３Ａ】本技術の実施形態による経口送達組成物の構造層の図を示す。
【図３Ｂ】本技術の実施形態による経口送達組成物の構造層の図を示す。
【図３Ｃ】本技術の実施形態による経口送達組成物の構造層の図を示す。
【図３Ｄ】本技術の実施形態による経口送達組成物の構造層の図を示す。
【図３Ｅ】本技術の実施形態による経口送達組成物の構造層の図を示す。
【図３Ｆ】本技術の実施形態による経口送達組成物の構造層の図を示す。
【図３Ｇ】本技術の実施形態による経口送達組成物の構造層の図を示す。
【図４】本技術の実施形態による生理活性物質の経口送達用薬物の製造方法を示す。
【図５】本技術の実施形態による治療方法を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
生理活性物質を投与する従来の方法には注射が含まれる。より最近の取り組みは、生理活性物質を投与する経口法の開発に向けられている。しかし、ほとんどの努力は、生理活性物質が小腸に到達するまで、胃の胃酸中の生理活性物質を保護することに向けられている。続いて、生理活性物質は小腸を介して血流に運ばれる。生理活性物質が胃で完全に分解しないようにするために、従来の努力には腸溶性コーティング及び／又はプロテアーゼ阻害剤の添加が含まれる。腸溶性コーティングは、酸加水分解に耐性のあるコーティングである。プロテアーゼ阻害剤は、ペプチダーゼ阻害剤も含み得る。腸溶性コーティングとプロテアーゼ阻害剤は、食物の通常の消化を妨げる可能性があり、膨満感と便秘の副作用も有し得る。さらに、有意な量の生理活性物質が小腸から吸収されるためには、摂取前の組成物に高濃度の生理活性物質が存在することが必要な場合がある。小腸に、生理活性物質の適切な受容体が通常は存在しないような生理活性物質を通過させると、陰性結果につながる可能性がある。例えば、インスリン受容体は通常、小腸付近ではなく、膵臓及び肝臓の付近にある。腸壁を通過したインスリンタンパク質は、膵臓及び肝臓の受容体への直接的な経路を持たない。代わりに、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）受容体。ＩＧＦ受容体へのインスリン結合レベルの増加は、有糸分裂誘発につながり、癌に関係している。
【０００８】
本技術の実施形態は、生理活性物質の改善された経口送達を可能にし得る。生理活性物質を腸壁を横切って送達する代わりに、生理活性物質を胃壁を横切って送達してもよい。生理活性物質を胃壁を横切って輸送することには、いくつかの利点がある。膵臓又は肝臓は、タンパク質又はペプチドの受容体を含む場合があり、胃壁を横切る輸送は、腸壁を横切る輸送と比較して、これらの受容体への直接の又は減少した経路を提供し得る。生理活性物質は腸に到達する必要がないため、生理活性物質は、生理活性物質を保護する腸溶性コーティングを含まなくてよい。コーティングは望ましくない副作用を有する場合がある。消化管内のより短い時間では、分解されない生理活性物質が多くなると考えられるため、あるいは、腸壁よりも胃壁を横切って吸収される生理活性物質が多くなると考えられるため、摂取前の生理活性物質の濃度は、胃壁を横切る経路において、腸壁を横切る場合ほど高くなくてよい。腸溶性コーティングを失くすことで、生理活性物質を投与するコストを削減することができる。
【０００９】
生理活性物質が胃を横切って輸送されるためには、生理活性物質は安定であり、過酷な胃酸環境で分解されず、生理活性物質は胃壁を通して吸収される必要がある。この目的のために、本技術の実施形態は、胃内の生理活性物質の安定性を高め、生理活性物質の吸収を高める方法を含む。生理活性物質を保護するために、生理活性物質は担体と混合される。担体は、胃の胃酸に不溶の液体である。生理活性物質は、担体に可溶であってもよい。粘膜付着性化合物を使用して、生理活性物質の胃の内層への吸着を促進してもよい。浸透促進剤は、胃壁を横切る生理活性物質の輸送を促進し得る。
【００１０】
生理活性物質とは、生体内の望ましくない既存の状態の診断、予防、又は治療を可能にするために、生理学的プロセスを調節するものとして当技術分野で知られている天然、合成、又は遺伝子操作された化学的又は生物学的化合物を意味する。生理活性物質には、抗狭心症、抗不整脈薬、抗喘息薬、抗生物質、抗糖尿病薬、抗真菌薬、抗ヒスタミン薬、抗高血圧薬、抗寄生虫薬、抗腫瘍薬、抗癌剤、抗ウイルス薬、強心配糖体、除草剤、ホルモン、免疫調節剤、モノクローナル抗体、神経伝達物質、核酸、タンパク質、放射線造影剤、放射性核種、鎮静剤、鎮痛剤、ステロイド、精神安定剤、ワクチン、昇圧剤、麻酔薬、ペプチド、小分子などの薬剤が含まれる。
【００１１】
実施形態において、細胞内媒体、細胞、又は組織との局所相互作用により、示された生理活性物質への変換を受けるプロドラッグも、生理活性物質の代わりに、又はそれに加えて使用することができる。特定の生理活性物質が許容可能な塩を形成することができる場合、そのような塩も、実施形態の生理活性物質の代わりに、又はそれに加えて含まれることが想定される。塩には、ハロゲン化物塩、リン酸塩、酢酸塩、有機酸塩、及び他の塩が含まれ得る。
【００１２】
生理活性物質は、単独で又は組み合わせて使用することができる。医薬組成物中の物質の量は、生物の望ましくない既存の状態の診断、予防、又は治療を可能にするのに十分な量としてもよい。一般に、投与量は、患者の年齢、症状、性別、及び望ましくない症状の程度に応じて変化する可能性があり、当業者によって決定され得る。ヒトへの使用に適した用量範囲には、体表面積１平方メートルあたり０．１から６，０００ｍｇの範囲の生理活性物質が含まれる。
【００１３】
生理活性物質には、タンパク質又はペプチドが含まれ得る。タンパク質又はペプチドには、インスリン、ヒト成長ホルモン、グルカゴン様ペプチド−１、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモンの断片、エンフビルチド、又はオクトレオチドが含まれ得る。
【００１４】
インスリンは通常、膵臓によって産生される。インスリンは、血液中のグルコースの代謝を調節する。高レベルのグルコース又は他の高血糖は、インスリン産生の障害の兆候である可能性があり、糖尿病の兆候である可能性がある。インスリンは、多くの場合、糖尿病の治療薬として注射によって投与される。
【００１５】
生理活性物質として使用できる別のタンパク質は、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）である。３１アミノ酸のペプチドであるＧＬＰ−１は、血糖値を低下させることのできるホルモンであるインクレチンである。ＧＬＰ−１は、インスリン放出を刺激し、グルカゴン放出を阻害することにより、血糖に影響を与え得る。ＧＬＰ−１は、胃内容排出を減らすことにより、血流への栄養素の吸収速度を遅くすることができ、食物摂取を直接低下させることができる。グルコース値に影響を与えるＧＬＰ−１の能力は、ＧＬＰ−１を２型糖尿病及び他の苦痛の潜在的な治療法にしている。変換されていない状態では、タンパク質分解の結果、ＧＬＰ−１のｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期は２分未満である。
【００１６】
タンパク質又はペプチドには、ヒト成長ホルモンが含まれ得る。１９１アミノ酸のペプチドであるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、細胞の増殖と再生を促進するホルモンである。ｈＧＨは、成長障害及び欠乏症の治療に使用され得る。例えば、ｈＧＨは子供の低身長や成人の成長ホルモン欠乏症の治療に使用され得る。ｈＧＨを投与する従来の方法には、毎日の皮下注射が含まれる。
【００１７】
ｈＧＨ及びＧＬＰ−１と同様に、エンフビルチド（Ｆｕｚｅｏｎ（商標））は、患者に投与する際に困難に直面する生理活性物質である。エンフビルチドは、ＨＩＶ及びエイズの治療に役立つ可能性がある。ただし、エンフビルチドは１日に２回皮下注射する必要がある。注射は皮膚過敏反応の副作用を引き起こす可能性があり、エンフビルチドの継続使用を患者に思いとどまらせる可能性がある。ＨＩＶ及びＡＩＤＳ患者の服薬コンプライアンスを高め、コストを削減し、生活の質を向上させるには、経口エンフビルチド治療が必要になる場合がある。
【００１８】
別の生理活性物質は副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）又はＰＴＨの断片である。ＰＴＨは同化（骨形成）物質である。ＰＴＨは、分子量９，４２５Ｄａの８４アミノ酸を含むポリペプチドとして副甲状腺から分泌され得る。最初の３４個のアミノ酸は、ミネラル恒常性の生物学的に活性な部分であり得る。合成の切断型ＰＴＨは、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙからフォルテオ（商標）テリパラチドとして販売されている。ＰＴＨ又はＰＴＨの断片は、骨粗鬆症及び副甲状腺機能低下症の治療に使用される場合がある。テリパラチドは、コストが高く、毎日の注射が必要なため、他の治療後にしばしば使用される場合がある。他の生理活性物質と同様に、経口ＰＴＨ治療が望ましい場合がある。
【００１９】
生理活性物質は小分子を含み得る。小分子には、経口投与される薬物をその水溶性及び腸管透過性に基づいて分類するシステムであるＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（生物薬剤学分類システム、ＢＣＳ）で定義された薬物が含まれ得る。ＢＣＳは、経口投与される原薬を４つのクラスに分類する：クラス１、高浸透性、高溶解性；クラスＩＩ、高浸透性、低溶解性；クラスＩＩＩ、低浸透性、高溶解性；クラスＩＶ、低浸透性、低溶解性。溶解度の分類は、米国薬局方（ＵＳＰ）に基づく。原薬は、最高の濃さのものが３７±１℃で１〜６．８のｐＨ範囲内の２５０ｍＬ以下の水性媒体に溶解する場合、溶解性が高いと見なされる。原薬は、全身バイオアベイラビリティが、物質収支の決定に基づいて、又は静脈内参照用量と比較して、投与量の８５％以上であると決定された場合、浸透性が高いとみなされる。小分子に関する追加情報は、Ａｍｉｄｏｎ  ＧＬ、Ｌｅｎｎｅｒｎａｓ  Ｈ、Ｓｈａｈ  ＶＰ、及びＣｒｉｓｏｎ  ＪＲ、１９９５年、Ａ  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  Ｆｏｒ  ａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  Ｄｒｕｇ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｔｈｅ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ、１２：４１３−４２０に見ることができ、その内容はあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【００２０】
タンパク質及びタンパク質のコンジュゲートに関する追加情報は、２００４年４月８日に出願された米国特許出願第１０／５５３，５７０号（２０１５年５月２６日に米国特許第９，０４０，６６４号として発行）に記載されている。タンパク質及びコンジュゲートの濃度放出プロファイルに関する情報は、２０１５年１１月３０日出願の米国特許出願第１４／９５４，７０１号に記載されている。本開示における特許出願、刊行物、及び他の全ての参考文献の内容は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【００２１】
Ｉ．導入
図１は、生理活性物質を含むカプセル１０２の経口送達の図を示す。カプセル１０２は、ヒト１０６の口から摂取することができる。カプセルは、食道１０８を下って胃１１０に移動し得る。胃は胃液１１２を含み、胃液１１２はペプシン酵素も含む場合がある。カプセル１０２は胃１１０で溶解し、生理活性物質は胃壁を横切って吸収され得る。カプセル１０２は、十二指腸１１４及び小腸又は消化管の他の下流部分まで移動しなくてもよい。図１は説明のために提供されており、構成部分は縮尺通りに描かれていない。
【００２２】
図２Ａ〜２Ｅは、生理活性物質の経口送達に関与する輸送プロセスの図を示す。図２Ａは、カプセル２０２の図を示す。カプセル２０２は、生理活性物質２０４を含む。他の化合物もカプセル２０２に含まれ得る。例えば、他の化合物には、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤が含まれる。
【００２３】
図２Ｂは、胃２０６内のカプセル２０２を示す。胃２０６は、胃液及びペプシンを含む流体２０８を含む。胃液及びペプシンはそれぞれ、生理活性物質を個別に分解し得る。流体２０８はカプセル２０２を溶解することができ、これにより、生理活性物質２０４を含むカプセル内の化合物を放出することができる。
【００２４】
図２Ｃは、カプセル２０２が溶解した後の胃２０６内の生理活性物質２０４を示す。生理活性物質２０４は、生理活性物質２０４を流体２０８から保護する働きをする担体化合物２１０に浸されている。担体化合物２１０は、流体２０８に不溶性であってもよい。例えば、担体化合物２１０は、有機相、油相、又は非極性相であり得る。担体化合物２１０は油を含んでもよい。生理活性物質２０４は、担体化合物２１０に部分的に又は完全に可溶性であってもよい。担体化合物２０４は、水又は流体２０８よりも低い密度を有し得る。その結果、担体化合物２１０は、生理活性物質２０４と共に、流体２０８の上に浮くことができる。胃２０６は通常、流体２０８を空にすることはなく、担体化合物２１０は流体２０８の上に数時間浮くことができる。
【００２５】
図２Ｄは、胃２０６の壁に移動する生理活性物質２０４及び担体化合物２１０を示す。移動は、胃内の正常な流体の流れの結果であり得る。生理活性物質２０４は、生理活性物質２０４が胃壁から離れて移動するのを防ぐために、胃壁に吸着してもよい。カプセル２０２に含まれていてもよい粘膜付着性物質は、生理活性物質２０４の胃壁への吸着を助けることができる。
【００２６】
図２Ｅは、胃壁を横切って輸送される生理活性物質２０４を、担体化合物の一部２１２と共に示す。担体化合物の一部２１４は、胃２０６内に残っていてもよい。浸透促進剤化合物は、生理活性物質２０４が胃壁の細胞を横切るのを助けることができる。生理活性物質２０４は、その後、血流を介してタンパク質又はペプチド化合物の受容体に移動し得る。
【００２７】
もともとカプセル２０２内にあった生理活性物質の一部は、胃壁を横切って輸送されない場合がある。生理活性物質の保護に役立ち得る担体化合物及びその他の化合物があっても、生理活性物質の一部が胃液又はペプシンの方に失われる場合もある。生理活性物質の一部は、担体化合物を離れて胃液に入る場合がある。生理活性物質は、担体化合物に完全に浸漬されていない場合があり、生理活性物質の一部は胃液にさらされる可能性がある。全ての生理活性物質が胃壁を横切って輸送されるわけではない場合は、追加の損失が発生し得る。さらに、胃壁を横切って輸送された生理活性物質の全てが生理活性物質の受容体に到達するとも限らない。カプセル内の生理活性物質の初期用量は、予想される損失を考慮して調整される。
【００２８】
ＩＩ．組成物
実施形態は、経口薬物送達のための組成物を含み得る。組成物は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を含んでもよい。
【００２９】
生理活性物質には、インスリン、ヒト成長ホルモン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、副甲状腺ホルモンの断片、エンフビルチド、又はオクトレオチドを含む、本明細書に記載の任意の生理活性物質が含まれる。インスリンは、文脈がそうでないことを示さない限り、ヒトインスリンを指す。生理活性物質には、ＰＥＧとのコンジュゲートが含まれてもよい。例えば、生理活性物質には、インスリン−ＰＥＧコンジュゲート又はＧＬＰ−１−ＰＥＧコンジュゲートが含まれ得る。ＰＥＧは、２ｋＤａから５ｋＤａの範囲の分子量を有し得る。ＰＥＧ化インスリンは、ペグインスリン、ＰＥＧ−インスリン又はインスリン−ＰＥＧと呼ばれる場合がある。
【００３０】
生理活性物質には、タンパク質又はペプチドのアナログ、ホモログ、又は誘導体が含まれ得る。アナログは、タンパク質又はペプチド配列の１つ又は複数のアミノ酸を含み、配列の残りの部分が別のアミノ酸に置き換えられているか、又は配列にさらにアミノ酸が追加された化合物である。インスリンの場合、インスリンアナログには、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、インスリングルリジン、インスリングラルギンが含まれる。ホモログは、異なる動物に由来するタンパク質化合物又はペプチド化合物である。例えば、イヌのインスリン、ブタのインスリン、及びラットのインスリンはインスリンホモログである。さらに、インスリンホモログには、哺乳類インスリン、魚類インスリン、爬虫類インスリン、及び両生類インスリンが含まれる場合がある。誘導体は、部分（ｍｏｉｅｔｙ）が結合したタンパク質又はペプチドの化合物、アナログ、又はホモログである。例えば、デテミル、デグルデク、及びＰＥＧ−インスリンはインスリン誘導体である。アナログ、ホモログ、及び誘導体は、動物においてタンパク質又はペプチド化合物と類似の又は同じ代謝効果を有する必要がある。例えば、インスリンアナログ、インスリンホモログ、及びインスリン誘導体は、動物においてグルコースの代謝作用を有し得る。
【００３１】
実施形態は、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アゴニスト、又はＧＬＰ−１アナログ、ホモログ、又は誘導体を含み得る。ＧＬＰ−１アナログ及びアゴニストには、エキセンディン、セマグルチド、リラグルチド、デュラグルチド、アルビグルチド、及びリキシセナチドが含まれる。ＧＬＰ−１ホモログは、イヌＧＬＰ−１、ブタＧＬＰ−１、及びラットＧＬＰ−１を含んでもよく、これらはＧＬＰ−１ホモログである。さらに、ＧＬＰ−１ホモログには、哺乳類ＧＬＰ−１、魚類ＧＬＰ−１、爬虫類ＧＬＰ−１、及び両生類ＧＬＰ−１が含まれる。ＰＥＧ−ＧＬＰ−１はインスリン誘導体である。ＧＬＰ−１アナログ、ＧＬＰ−１ホモログ、及びＧＬＰ−１誘導体は、膵臓のインスリン放出を誘発することによりグルコースに応答し得る。
【００３２】
組成物は、タンパク質又はペプチド化合物の任意の組合せを含んでもよい。例えば、組成物は、インスリン、インスリンアナログ、インスリンホモログ、インスリン誘導体、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログ、ＧＬＰ−１ホモログ、ＧＬＰ−１誘導体、又はそれらのＰＥＧ化化合物の任意の組合せを含み得る。例えば、組成物は、インスリン、ＧＬＰ−１、ＰＥＧ化インスリン、及びＰＥＧ化ＧＬＰ−１を含み得る。
【００３３】
生理活性物質は小分子を含んでもよい。小分子には、本明細書に記載の任意の小分子が含まれ得る。小分子には、解熱薬、鎮痛薬、抗マラリア薬、抗生物質、防腐剤、気分安定剤、ホルモン補充薬、経口避妊薬、覚醒剤、精神安定剤、及びスタチンが含まれ得る。
【００３４】
担体化合物は水不溶性であってもよい。胃酸は水性混合物であり、生理活性物質化合物の分解を遅らせるために、担体化合物は胃酸と混合すべきではない。担体化合物は、両親媒性かつ水不混和性の化合物を含んでもよい。担体化合物には、魚油、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エステル化トリグリセリド、オメガ脂肪酸、オリーブ油、オレンジ油、オキアミ油、レモン油、ベニバナ油、ヒマシ油、硬化油、藻油、又はそれらの混合物が含まれ得る。魚油には、サバ、ニシン、マグロ、サケ、タラ肝油が含まれ得る。担体化合物には、クジラ油、アザラシ油、ベーコン油、ラード、及び液化バターが含まれ得る。担体化合物はまた、高いバイオアベイラビリティを有する化合物、胃壁を横切って血流に吸収される化合物であってもよい。担体化合物は、ＦＤＡレジストリのＧＲＡＳ（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｒｅｇａｒｄｅｄ  ａｓ  ｓａｆｅ（一般に安全と見なされている））であってもよい。担体化合物は、生理活性物質等価物１．５ｍｇごとに担体１ｍＬの比率で含まれてもよい。いくつかの実施形態では、担体化合物は、０．１〜０．５ｍＬ、０．５ｍＬ〜１ｍＬ、１ｍＬ〜１．５ｍＬ、１．５ｍＬ〜２．０ｍＬ、２．０ｍＬ〜２．５ｍＬ、２．５ｍＬ〜３．０ｍＬの比率で、又は生理活性物質１．５ｍｇごとに３ｍＬ超で添加され得る。
【００３５】
粘膜付着性化合物には、シクロデキストリン（例えば、ヘパキス２，６−Ｂ−Ｏ−メチル−Ｂ−シクロデキストリン）、デンプン、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、カプロラクトン、又は食品添加物が含まれ得る。粘膜付着性化合物には、ポリアクリル酸に由来するポリマー（例えば、ポリカルボフィル、カルボマー）、セルロースに由来するポリマー（例えば、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、アルギン酸塩、キトサン、レクチン、脂肪酸のエステル基（例えば、モノオレイン酸グリセリル、モノリノール酸グリセリン）、インベイシン、線毛タンパク質、抗体、チオール化分子（例えば、チオール化ポリマー）、及びそれらの誘導体が含まれ得る。粘膜付着性化合物として使用されるポリマーは、カチオン性、アニオン性、又は非イオン性であり得る。粘膜付着性化合物にはポロキサマー１８８が含まれ得る。粘膜付着性化合物は、Ｃａｒｖａｌｈｏら、“Ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ”、Ｂｒａｚｉｌｉａｎ  Ｊ．ｏｆ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、４５（１）（２０１０）に記載されており、その内容はあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【００３６】
シクロデキストリンは、生理活性物質と包接複合体を形成可能であるか、又はシクロデキストリンは、ＰＥＧ化生理活性物質のＰＥＧ成分と包接複合体を形成可能である。シクロデキストリンは、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、又はγ−シクロデキストリンを含み得る。シクロデキストリンは、化学的に修飾されたシクロデキストリンを含んでもよく、これは、ヒドロキシプロピル−Ｂ−シクロデキストリン、スルホブチルエーテルＢ−シクロデキストリン、ランダムメチル化Ｂ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン、重合シクロデキストリン、エピクロロヒドリン−Ｂ−シクロデキストリン、又はカルボキシメチルエピクロロヒドリンベータシクロデキストリンを含み得る。
【００３７】
理論に縛られるものではないが、生理活性物質はシクロデキストリン環構造内で、胃酸における分解から保護されていると推測される。包接複合体は、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、又は化学修飾シクロデキストリンのいずれかと任意のサイズのＰＥＧによって形成され得る。包接複合体は、生理活性物質と会合する１つ又は複数の化合物を含んでもよい。例えば、複数のシクロデキストリン分子が単一のＰＥＧ化タンパク質と結合してもよい。包接複合体は、０．５モル〜１モル過剰、１モル〜２モル過剰、２モル〜３モル過剰、３モル〜４モル過剰、４モル〜５モル過剰、５モル〜１０モル過剰、１０モル〜１５モル過剰、１５モル〜２０モル過剰、又は２０モル超過剰で形成されてもよい。
【００３８】
浸透促進剤は、正に帯電した分子、負に帯電した分子、又は双性イオン分子を含み得る。浸透促進剤は両親媒性分子を含んでもよい。浸透促進剤には、アルキルグルコシドなどの中性分子が挙げられる。正に帯電した分子には、アルキルコリン、アシルコリン、及び胆汁酸塩が挙げられる。負に帯電した分子には、ドデシル硫酸ナトリウムが挙げられる。両性イオン分子には、リン脂質、スフィンゴ脂質、及びドデシルホスホコリン（ＤＰＣ）が挙げられる。浸透促進剤には、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール−３−ホスホグリセロール（ＤＰＰＧ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、デオキシコール酸、デオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム塩、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、Ｎ−ドデシルＢ−Ｄ−マルトシド、トリデシルＢ−Ｄ−マルトシド、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ドキュセートナトリウム（ＤＳＳ）、胆汁酸塩、ナノエマルジョン（例えば、１５０ｎｍ未満の液滴サイズ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（商標）コポリマーベースのもの）、シクロデキストリン、キトサン誘導体（例えば、プロトン化キトサン、塩化トリメチルキトサン）、サポニン、及び直鎖脂肪酸（例えば、カプリン酸、ラウリン酸、オレイン酸）が挙げられる。浸透促進剤には、ポロキサマー１８８が挙げられる。浸透促進剤は、Ｓｈａｉｋｈら、“Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｐｏｏｒｌｙ  ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  ｄｒｕｇｓ：Ａ  ｒｅｖｉｅｗ”、Ｊ．ｏｆ  Ａｐｐｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、０２（０６）（２０１２）に記載されており、その内容はあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【００３９】
浸透促進剤は、生理活性物質１．５ｍｇ当たり３ｍｇの割合で含まれ得る。いくつかの実施形態では、浸透促進剤は、生理活性物質１．５ｍｇにつき０．５ｍｇ〜１．０ｍｇ、１．０ｍｇ〜１．５ｍｇ、１．５ｍｇ〜２．０ｍｇ、２．０ｍｇ〜２．５ｍｇ、２．５ｍｇ〜３．０ｍｇ、３．０ｍｇ〜３．５ｍｇ、３．５ｍｇ〜４．０ｍｇ、又は４．０ｍｇ超の比率で含まれてもよい。
【００４０】
組成物はまた、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を封入したカプセルを含んでもよい。カプセルは、胃で分解するように構成されてもよい。言い換えれば、カプセルの内容物を放出するために、カプセルの少なくとも一部が胃で分解又は溶解するようにカプセルを構成することができる。場合によっては、カプセル全体が胃で分解又は溶解してもよい。カプセル材料には、ゼラチン、多糖類、及び可塑剤が挙げられる。カプセル材料は腸溶性コーティングを含んでもよい。
【００４１】
組成物はまた、有機酸の疎水性アニオンを含んでもよい。有機酸の疎水性アニオンは、生理活性物質の疎水性を増加させることができ、これにより生理活性物質をより長い期間担体化合物中に留めることができる。有機酸には、パモ酸、ドキュセート（ＤＳＳ）、フロ酸、又はそれらの混合物が挙げられる。疎水性アニオンには、パモエートアニオン、ドキュセートアニオン、又はフロエートアニオンが挙げられる。これら又は他の例において、疎水性アニオンは、脂肪酸アニオン、リン脂質アニオン、ポリスチレンスルホン酸アニオン、又はそれらの混合物であり得る。リン脂質アニオンのリン脂質には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスホコリン、又はそれらの混合物が挙げられる。疎水性アニオンは、記載されたアニオンのいずれか又は記載されたアニオンの任意のグループを除外したものでもあり得る。疎水性アニオンは、タンパク質上の特定の側鎖に結合するか、生理活性物質上の複数の側鎖に結合し得る。疎水性アニオンのｌｏｇＰは１より大きくてもよい。ｌｏｇＰは水−オクタノール分配係数であり、水中のタンパク質塩の濃度に対するオクタノール中のタンパク質塩の濃度の対数として定義され得る。ｌｏｇＰが１０を超えると、オクタノール中の濃度が水中の濃度の１０倍になり得る。水−オクタノール分配係数は、分子自体が両親媒性の可能性がある場合、疎水性相に分配される性質について異なる分子を比較するのに役立つ。
【００４２】
組成物は逆ミセルを含んでもよい。ミセルは、親水性の頭と疎水性の尾を持つ分子であってもよい。ミセルは、親水性の頭が内側を向き、疎水性の尾が外側を向くことで逆向きと呼ばれる場合がある。逆ミセルには、リン脂質、ＤＰＰＧ、ＰＯＰＥ、デオキシコール酸、デオキシコール酸ナトリウム、グリココール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム塩、Ｎ−ドデシルＢ−Ｄ−マルトシド、トリデシルＢ−Ｄ−マルトシド、ＳＤＳ、ＤＳＳ、ＤＰＣ、及びそれらのアニオンが挙げられる。逆ミセルも浸透促進剤であり得る。
【００４３】
組成物は、生分解性ポリマーを含んでもよい。生分解性ポリマーは、生理活性物質を含む粒子を形成してもよい。生分解性ポリマーは、ＰＬＧＡ又はカプロラクトンを含んでもよい。ＰＬＧＡは生理活性物質を包含し、胃酸の分解に対する更なる耐性を提供し得る。生分解性ポリマーは水に不溶性であってもよい。生分解性ポリマーはカルボキシル末端基を有してもよく、これは生理活性物質とイオン対を形成し、生理活性物質を担体流体中に留まりやすくし得る。生分解性ポリマーは、粘膜付着性物質として作用し、胃の内層と相互作用し得る。
【００４４】
組成物は、ｐＨ調整剤、例えば胃のｐＨを増加させる化合物を含んでもよい。胃のｐＨが上昇すると、胃酸に対抗し、胃における生理活性物質の分解を遅らせることができる場合がある。例として、組成物は重炭酸ナトリウムを含んでもよく、これは胃のｐＨを上昇させ、ペプシンの活性を低下させ得る。胃酸調節剤の他の例には、Ｈ２受容体遮断薬、プロトンポンプ阻害薬、プロスタグランジンＥ１様化合物、制酸薬、及びその塩が挙げられる。制酸薬には、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、炭酸カルシウム、重炭酸カルシウム、重炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、重炭酸マグネシウム、水酸化マグネシウム、三ケイ酸マグネシウム、及びそれらの組合せが挙げられる。他の胃酸調節剤は、米国特許出願公開第２０１７／０１８９３６３号に記載されており、その内容は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【００４５】
組成物は、イオン性又は非イオン性界面活性剤を含んでもよい。イオン性界面活性剤の例には、硫酸塩、スルホン酸塩、リン酸塩、カルボン酸塩、ラウリル硫酸アンモニウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ミレス硫酸ナトリウム、ドキュセート（ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム）、ペルフルオロオクタンスルホン酸塩（ＰＦＯＳ）、ペルフルオロブタンスルホン酸塩、アルキルアリールエーテルリン酸塩、及びアルキルエーテルリン酸塩がある。非イオン性界面活性剤の例には、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、ポロキサマー、グリセロールモノステアレート、グリセロールモノラウレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（商標）４０、Ｔｗｅｅｎ（商標）６０、及びＴｗｅｅｎ（商標）８０がある。界面活性剤は、酸性水相から油相を保護するのに役立ち得る。
【００４６】
組成物はペプチダーゼ阻害剤を含んでもよい。ペプチダーゼ阻害剤には、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及び大豆トリプシン阻害剤（ＳＢＴＩ）が挙げられる。ペプチダーゼ阻害剤には、インヒビターＩ３Ａ、インヒビターＩ３Ｂ、インヒビターＩ４、インヒビターＩ９、インヒビターＩ１０、インヒビターＩ２４、インヒビターＩ２９、インヒビターＩ３４、インヒビターＩ３６、インヒビターＩ４２、インヒビターＩ４８、インヒビターＩ５３、インヒビターＩ６７、インヒビターＩ６８、及びインヒビターＩ７８を含む阻害剤のファミリーの任意のものが挙げられる。ペプチダーゼ阻害剤は、Ｒａｗｌｉｎｇｓら、“Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｆａｍｉｌｉｅｓ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ、３７８（３）７０５−７１６（２００４）に記載されており、その内容はあらゆる目的のために参照により組み込まれる。組成物はまた、ペプチダーゼ阻害剤を除外してもよく、あるいは従来の経口送達製剤で使用されるよりも低い濃度でペプチダーゼ阻害剤を含んでもよい。
【００４７】
組成物は油を含まなくてもよい。組成物は、本明細書に記載の任意の化合物又は化合物群を除外してもよい。
いくつかの化合物は、異なる化合物の特性を持つ場合がある。例えば、シクロデキストリンは粘膜付着性物質でもあり得るし、酸及び酵素触媒分解に対する安定剤でもあり得る。場合によっては、組成物は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤として、２、３、４、又は５つの異なる化合物を含んでもよい。場合によっては、組成物は、粘膜付着剤と浸透促進剤の両方として作用する単一の化合物を含んでもよい。
【００４８】
ＩＩＩ．構造
実施形態は、図３Ａ〜３Ｆ（縮尺通りではない）に示されるように、経口送達のための薬物製剤の構造を含んでもよい。図３Ａに示されるように、薬物製剤は生理活性物質３０２を含み得る。生理活性物質３０２は、本明細書に記載される任意の生理活性物質であり得る。生理活性物質３０２は、薬物製剤の質量中心３０４を含み得る。
【００４９】
薬物製剤は、粘膜付着性化合物、浸透促進剤、逆ミセル、又は生理活性物質が包接複合体を形成する包接化合物のうちの少なくとも１つを含む材料も含み得る。材料は生理活性物質と接触していてもよい。材料の一部は、生理活性物質のどの部分よりも質量中心から遠くに配置されてもよい。
【００５０】
材料は、粘膜付着性化合物、浸透促進剤、逆ミセル、又は包接化合物のうちの１つ、２つ、３つ、又は４つを含み得る。材料はまた、ペプチダーゼ阻害剤、ｐＨ調整剤、又は界面活性剤のうちの少なくとも１つを含み得る。
【００５１】
図３Ｂに示されるように、材料は、生理活性物質３０２が包接複合体を形成する包接化合物３０６を含んでもよい。包接化合物３０６は、本明細書に記載される任意の化合物を含み得る。
【００５２】
図３Ｃに示されるように、材料は浸透促進剤３０８を含んでもよい。浸透促進剤３０８の一部は、包接化合物３０６のどの部分よりも質量中心から遠くにあってよい。浸透促進剤３０８は、本明細書に記載される任意の化合物を含み得る。
【００５３】
図３Ｄに示されるように、材料は逆ミセル３１０を含んでもよい。逆ミセル３１０の一部は、包接化合物３０６のどの部分よりも質量中心から遠くにあってよい。逆ミセル３１０は、本明細書に記載の任意の逆ミセルであり得る。
【００５４】
図３Ｅに示されるように、材料は粘膜付着性化合物３１２を含み得る。粘膜付着剤３１２の一部は、包接化合物３０６のどの部分よりも質量中心から遠くにあってよい。粘膜付着性化合物３１２は、本明細書に記載の任意の粘膜付着性化合物であり得る。
【００５５】
包接化合物３０６は、生理活性物質３０２と接触してもよい。逆ミセル３０６は、包接化合物３０６と接触してもよい。浸透促進剤３０８は、包接化合物３０６と接触してもよい。粘膜接着剤３１２は、逆ミセル３１０又は浸透促進剤３０８の少なくとも一方と接触してもよい。
【００５６】
全ての化合物が存在する必要はない。粘膜付着性化合物の一部は、存在する場合、生理活性物質、浸透促進剤、逆ミセル、又は包接化合物のどの部分よりも質量中心から遠くにあってよい。包接化合物は、存在する場合、生理活性物質と接触してもよい。逆ミセルは、存在する場合、包接化合物又は生理活性物質と接触してもよい。浸透促進剤は、存在する場合、包接化合物又は生理活性物質と接触してもよい。存在する化合物は、質量中心により近い化合物と接触してもよい。例えば、粘膜付着性化合物は、浸透促進剤、逆ミセル、包接化合物、又は生理活性物質の少なくとも１つと接触してもよい。
【００５７】
図３Ｆに示すように、薬物製剤はカプセル３１４をさらに含むことができる。カプセル３１４は、生理活性物質３０２、材料、及び担体化合物３１６を封入してもよい。担体化合物３１６は、本明細書に記載の任意の担体化合物であり得る。図３Ｆは、図２Ａの一実施形態であり得る。カプセル３１４は、ペプチダーゼ阻害剤、ｐＨ調整剤、又は界面活性剤を封入してもよい。
【００５８】
図３Ｇに示すように、いくつかの実施形態では、粘膜付着性化合物３１２は、薬物製剤の質量中心から遠い側のカプセルの面でカプセル３１４と接触し得る。カプセル内部では、材料は、浸透促進剤３０８、逆ミセル３１０、又は包接化合物３０６のうちの少なくとも１つを含んでもよい。カプセル３１４は、生理活性物質及び材料を封入してもよい。カプセルはまた、担体化合物３１６を封入してもよい。追加の粘膜付着性化合物がカプセル３１４の内部に存在してもよく、図３Ｅ及び３Ｆのように構成されてもよい。図３Ｇは、図２Ａの一実施形態であり得る。
【００５９】
生理活性物質から上の様々な層は、生理活性物質が胃酸で分解するのを防ぐ保護層として機能し得る。
ＩＶ．製造方法
図４は、生理活性物質の経口送達用の薬物を製造する方法４００を示す。方法４００は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を組み合わせることを含み得る（ブロック４０２）。生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤は、本明細書に記載の任意の化合物とすることができ、本明細書に記載の任意の量で組み合わされ得る。方法４００は、ペプチダーゼ阻害剤、ｐＨ調整剤、又は界面活性剤を生理活性物質と組み合わせることをさらに含み得る。ペプチダーゼ阻害剤、ｐＨ調整剤、及び界面活性剤は、本明細書に開示の任意のものとすることができる。本明細書に記載の任意の化合物は、生理活性物質と組み合わせることから除外されてもよい。
【００６０】
生理活性物質の包接複合体は、ブロック４０２の前に最初に形成されてもよい。シクロデキストリン又は他の環状化合物を、水溶液中の生理活性物質と混合してもよい。包接錯体は、包接錯体である沈殿物を形成する場合がある。生理活性物質は、他の化合物と組み合わせたとき、包接複合体の中に存在してもよい。
【００６１】
いくつかの実施形態では、化合物を組み合わせてから撹拌してもよく、他の実施形態では撹拌しなくてもよい。混合物を超音波処理することにより、化合物を撹拌してもよい。混合物を室温で超音波処理してもよい。生理活性物質、担体化合物、粘膜付着剤は、浸透促進剤の添加前に最初に一緒に超音波処理されてもよい。浸透促進剤との混合物は、軽く渦巻かせて又はボルテックスして混合することができる。いくつかの実施形態では、方法４００は、生理活性物質を担体化合物でコーティングすることを含み得る。
【００６２】
方法４００は、カプセルに生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を封入することをさらに含み得る。カプセルは、胃酸に溶解して生理活性物質、担体化合物、及び粘膜付着性化合物を放出するように構成されてもよい。カプセルは、本明細書に記載の任意のカプセルとすることができる。カプセルは腸溶性コーティングを含んでもよい。実施形態では、カプセルは腸溶性コーティングを除外してもよく、カプセル及び／又はカプセル内の組成物はペプチダーゼ阻害剤を除外してもよい。
【００６３】
Ｖ．治療方法
図５は治療方法５００を示す。治療には、代謝経路に影響を与える障害の治療が含まれ得る。障害には、糖尿病、成長不全、ＨＩＶ、ＡＩＤＳ、骨障害、又は骨粗鬆症が挙げられる。
【００６４】
方法５００は、組成物を含むカプセルを人に経口投与することを含み得る（ブロック５０２）。組成物は、生理活性物質、担体化合物、粘膜付着性化合物、及び浸透促進剤を含んでもよい。組成物は、ペプチダーゼ阻害剤、ｐＨ調整剤、又は界面活性剤のうちの少なくとも１つを含んでもよい。組成物は、本明細書に記載される任意の組成物であり得る。
【００６５】
方法５００は、人の胃の中でカプセルの一部を溶解させ、生理活性物質及び担体化合物を胃に放出させることも含み得る（ブロック５０４）。
方法５００は、生理活性物質の一部を胃の壁に吸着させることをさらに含み得る（ブロック５０６）。生理活性物質の一部が胃の壁に吸着する前に、その生理活性物質の一部は担体化合物中に留まっていてもよい。担体は胃酸に不混和性である場合があるため、生理活性物質を胃壁に吸着される前に分解されないようにすることができる。
【００６６】
加えて、方法５００は、生理活性物質を胃の壁を横切って血流に輸送することを含み得る（ブロック５０８）。胃の壁を横切る生理活性物質の輸送は、カプセルを経口投与した後、約３〜４時間であり得る。
【００６７】
ＶＩ．実施例
特に明記しない限り、ヒトインスリンを実施例で使用した。
Ａ．実施例１
全て３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート（５ｋＤａのＰＥＧ）及び１ｍＬの魚油を含む３つの試料を準備した。
【００６８】
試料１：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、１ｍＬの魚油、５０ｍｇのβ−シクロデキストリン、及び３ｍｇのドデシルホスホコリン（ＤＰＣ）。
試料２：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、１ｍＬの魚油、０．７ｍｇのパモ酸。
【００６９】
試料３：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
試料１〜３を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、各試料をペプシンを含まない模擬胃液５ｍＬに加えた。混合物を数回転倒混和した。
【００７０】
試料を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけて、インスリン−ＰＥＧが油相に留まっているかを確認した。ＨＰＬＣから、試料１〜３では、１５分以内にインスリン−ＰＥＧが油相を出て胃液相に入ることが示された。この実施例の試料はいずれも、インスリン−ＰＥＧコンジュゲートが油相に十分長く留まらなかったため、インスリンの経口送達に適しているとは認められなかった。
【００７１】
Ｂ．実施例２
インスリン−ＰＥＧのパモ酸塩（５ｋＤａ）について、インスリン−ＰＥＧパモ酸塩が油相により長い間留まるか否かを確認するための試験を行った。インスリン−ＰＥＧパモ酸塩は、インスリン−ＰＥＧを７を超えるｐＨでパモ酸ナトリウムと混合することにより調製した。次に、ｐＨを４に下げた。次いで、沈殿物を収集し、凍結乾燥により乾燥させた。インスリン−ＰＥＧパモ酸塩は、試料４及び６に含まれていた。試料５では、インスリン−ＰＥＧパモ酸塩を形成させることなくパモ酸ナトリウムをインスリン−ＰＥＧに加えた。
【００７２】
試料４：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧパモ酸塩、１ｍＬの魚油、５０ｍｇのβ−シクロデキストリン、３ｍｇのＤＰＣ。
試料５：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧ、０．５ｍｇのパモ酸ナトリウム、１ｍＬの魚油、５０ｍｇのβ−シクロデキストリン、３ｍｇのＤＰＣ。
【００７３】
試料６：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧパモ酸塩、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
試料４〜６を、混濁して均質になるまで超音波処理した。次に、各試料を５ｍＬの模擬胃液（ペプシンなし）に加えた。混合物を数回転倒混和した。
【００７４】
試料を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけて、インスリン−ＰＥＧが油相に留まっているかを確認した。試料５では、インスリン−ＰＥＧは１５分以内に油相を出て、胃液相で見つかった。試料６では、インスリン−ＰＥＧは油相に少なくとも１．５時間留まり、その後胃液相で見つかった。試料４では、５時間後でも、インスリンは油相に留まるか沈殿したかのいずれかであり、胃液相にわずかな量のインスリン−ＰＥＧが見つかっただけであった。
【００７５】
この実施例の試料は、パモ酸ナトリウムをインスリン−ＰＥＧに加えたときよりも、インスリン−ＰＥＧパモ酸塩が油相に長く留まることを示しているように見受けられる。試料４は、インスリンの経口送達に最適な結果を示した。これは、β−シクロデキストリンの結果である可能性がある。
【００７６】
Ｃ．実施例３
インスリン−ＰＥＧ（５ｋＤａ）とα−シクロデキストリンの包接複合体を試験した。インスリン−ＰＥＧ及び１０モル過剰のα−シクロデキストリンを水溶液中で混合し、４℃で一晩保持して沈殿物を形成させた。得られた沈殿物を凍結乾燥し、試料７で使用した。
【００７７】
試料７：６．２ｍｇのインスリン−ＰＥＧ及びα−シクロデキストリン包接複合体、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
試料８：３．１ｍｇのインスリン−ＰＥＧ、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
【００７８】
試料７及び８を形成する際に、インスリン−ＰＥＧ（又はインスリン−ＰＥＧ包接複合体）及び魚油を３０分間超音波処理した。次に、超音波処理した混合物にＤＰＣを添加し、混合物を軽く渦巻かせて又はボルテックスして混合した。得られた混合物を室温で１時間保持した。次に、試料を５ｍＬの模擬胃液（ペプシンなし）に加えた。混合物を数回転倒混和した。
【００７９】
ＨＰＬＣから、試料７では、包接複合体の３５％が３時間後に油相に留まっていることが確認された。同時に、試料８ではインスリン−ＰＥＧが全て水相に分配された。この実施例は、インスリン−ＰＥＧ包接複合体が、包接複合体の一部ではないインスリン−ＰＥＧコンジュゲートよりも長く油相に留まることを示した。
【００８０】
Ｄ．実施例４
包接複合体を、ペプシンの水溶液中で試験した。
試料９：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（５ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体。
【００８１】
試料９を１ｍＬの模擬胃液中１ｍｇのペプシンの水溶液に加えた。インスリン−ＰＥＧは完全に消化された。この実施例は、包接複合体が、試験した濃度ではインスリンを分解から保護するのに十分ではなかったことを示している。
【００８２】
Ｅ．実施例５
実施例３の試料７を、１ｍｇ／ｍｌのペプシンを含む模擬胃液に加えた。ＨＰＬＣから、３時間後に約１２％のインスリン−ＰＥＧが油相に存在することが示された。この実施例は、インスリン−ＰＥＧが油相に留まる場合、包接複合体がインスリン−ＰＥＧの分解を保護することを示唆している。
【００８３】
Ｆ．実施例６
α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、及びγ−シクロデキストリンとの包接複合体を試験した。α−シクロデキストリンは環によって形成されるドーナツ穴が最も小さく、γ−シクロデキストリンはそれが最も大きい。インスリン−ＰＥＧ（５ｋＤａ）と１０モル過剰のα−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、又はγ−シクロデキストリンのいずれかを水溶液中で混合し、４℃で一晩保持して沈殿物を形成させた。得られた沈殿物を凍結乾燥した。実施例１のように、模擬胃液で分配の試験を実施した。３時間後、α−シクロデキストリンとの包接複合体の３５％、β−シクロデキストリンとの包接複合体の７％、及びγ−シクロデキストリンとの包接複合体の１０％が油相に残った。この実施例は、５ｋＤａのＰＥＧとのα−シクロデキストリン包接複合体がインスリン−ＰＥＧに対して最高の性能を有することを示した。α−シクロデキストリンは、他のシクロデキストリンよりもインスリン−ＰＥＧに対してより適切なサイズのドーナツ穴を有し得る。
【００８４】
Ｇ．実施例７
２ｋＤａのＰＥＧとのインスリン−ＰＥＧを、包接複合体として、及び包接複合体を含まない場合の両方について試験した。インスリン−ＰＥＧ及び１０モル過剰のα−シクロデキストリンを水溶液中で混合し、４℃で一晩保持して沈殿物を形成させた。得られた沈殿物を凍結乾燥し、試料１０で使用した。
【００８５】
試料１０：６．２ｍｇのインスリン−ＰＥＧとα−シクロデキストリンの包接複合体、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
試料１１：３．１ｍｇのインスリン−ＰＥＧ、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
【００８６】
試料１０及び１１を形成する際に、インスリン−ＰＥＧ（又はインスリン−ＰＥＧ包接複合体）及び魚油を３０分間超音波処理した。次に、超音波処理した混合物にＤＰＣを添加し、混合物を軽く渦巻かせて又はボルテックスして混合した。得られた混合物を室温で１時間保持した。次に、試料を５ｍＬの模擬胃液（ペプシンなし）に加えた。混合物を数回転倒混和した。
【００８７】
ＨＰＬＣから、試料１０では、包接複合体の２０％が３時間後に油相に留まっていることが確認された。同時に、試料１１ではインスリン−ＰＥＧの６％が油相に留まっていた。この実施例は、インスリン−ＰＥＧ包接複合体が、包接複合体の一部ではないインスリン−ＰＥＧコンジュゲートよりも長く油相に留まることを示した。加えて、試料１１では、実施例３の試料８よりも多くの量のインスリン−ＰＥＧが油相に留まっていた。実施例７の結果は、２ｋＤａのＰＥＧを有するインスリン−ＰＥＧが５ｋＤａのＰＥＧを有するインスリン−ＰＥＧよりも良好に油中に留まったことを示している。
【００８８】
Ｈ．実施例８
様々な製剤の膜透過性を推定するために、Ｃａｃｏ−２透過性試験を実施した。試験した化合物は、インスリン−ＰＥＧ（５ｋＤａ）、インスリン−ＰＥＧ（５ｋＤａ）包接複合体、インスリン−ＰＥＧ（５ｋＤａ）包接複合体及びＤＰＣ、インスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）、及びインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）包接複合体である。全ての化合物を１ｍｇインスリン／ｍＬ培地の濃度で培地に溶解し、Ｃａｃｏ−２単層に加えた。インスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）では、３時間後にインスリン−ＰＥＧの１％が細胞層を透過した。インスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）包接複合体では、３時間後に５％のインスリン−ＰＥＧが細胞層を透過した。他の化合物はいずれも、３時間後に細胞層を透過しなかった。この研究は、インスリン−ＰＥＧがＣａｃｏ−２腸細胞層を透過できることを示した。これらの結果に基づき、インスリン−ＰＥＧは胃壁を透過できると予測することができる。
【００８９】
Ｉ．実施例９
様々なインスリン−ＰＥＧ試料及び魚油のみの媒体群で、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施した。
【００９０】
試料１２：３．１ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（５ｋＤａ）、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
試料１３：６．２ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（５ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
【００９１】
試料１４：２．１ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
試料１５：４．８７ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
【００９２】
試料１２〜１５を形成する際に、インスリン−ＰＥＧ（又はインスリン−ＰＥＧ包接複合体）及び魚油を３０分間超音波処理した。次に、超音波処理した混合物にＤＰＣを添加し、混合物を軽く渦巻かせ又はボルテックスして混合した。得られた混合物を室温で１時間保持した。試料を強制経口投与によりラットに１５０ＩＵ／ｋｇ（５ｋＤａのＰＥＧの場合）及び７５ＩＵ／ｋｇ（２ｋＤａのＰＥＧの場合）で投与した。所定の間隔で、頸静脈から血液を採取し、グルコース値を分析した。
【００９３】
インスリン−ＰＥＧ製剤を投与した一部のラットで、有意なグルコース低下が観察された。５ｋＤａインスリン−ＰＥＧ（試料１２及び１３）を投与した各群の１匹のラットでは、３０分以内に≦２０ｍｇ／ｄＬへの有意なグルコース低下があった。これらのラットのグルコース値は、次の数時間で徐々に増加し、約３時間までにベースライン（約５０ｍｇ／ｄＬ）に戻った。これらの群の残りのラットは、対照群と同様のグルコース反応を示した。試料１４（２ｋＤａのＰＥＧ）を投与した２匹のラットは、３０分以内に≦２０ｍｇ／ｄＬにグルコースが減少し、グルコースは３時間低いままであり、この時点でこれら２匹のラットには、グルコース値が低すぎるためにデキストロースを与えなければならなかった。この群の残りのラットは、対照群と同様のグルコース反応を示した。試料１５（２ｋＤａのＰＥＧ）を投与した２匹のラットは、３０分以内に≦２０ｍｇ／ｄＬにグルコースが減少し、これらのラットのうち一方は２時間後にベースラインに近いグルコース値を有し、他方のラットのグルコース値は３時間低いままであり、この時点でグルコース値が低すぎるためにデキストロースを与えなければならなかった。この群の残りのラットは、対照群と同様のグルコース反応を示した。有意なグルコース反応を示したラットは、ＥＬＩＳＡでの検出において、検出可能なレベルの血清中インスリン−ＰＥＧも有していた。２ｋＤａのＰＥＧを含むインスリン−ＰＥＧは、ラットによっては５ｋＤａのＰＥＧよりもよく吸収されるようであった。これは、これらのラットでは血清インスリン−ＰＥＧの量が多かったためである。これにより、２ｋＤａインスリン−ＰＥＧを使用した再現性の高い長期にわたるグルコースの減少がもたらされた。これは、実施例８の結果と一致している。
【００９４】
Ｊ．実施例１０
経口インスリン−ＰＥＧ試料をインスリン−ＰＥＧ及びインスリンの皮下注射と比較するために、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施した。
【００９５】
試料１６：２．１ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
試料１７：０．０１５ｍｇ／ｋｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）
試料１８：０．０１１ｍｇ／ｋｇのインスリン
試料１６を形成する際に、インスリン−ＰＥＧ及び魚油を３０分間超音波処理した。次に、超音波処理した混合物にＤＰＣを添加し、混合物を軽く渦巻かせ又はボルテックスして混合した。得られた混合物を室温で１時間保持した。試料１６を強制経口投与によりラットに４０及び６０ＩＵ／ｋｇで投与した。試料１７及び１８は、０．３ＩＵ／ｋｇで皮下投与した。所定の間隔で、頸静脈から血液を採取し、グルコース値を分析した。
【００９６】
試料１７及び１８を皮下投与した全てのラットでは、３０分以内に血糖値が≦２０ｍｇ／ｄＬに低下した。試料１７（インスリン−ＰＥＧ）では、グルコースが徐々に増加し、約４時間までにベースライン（約６０ｍｇ／ｄＬ）に戻った。試料１８（インスリン）では、グルコースが徐々に増加し、約３時間までにベースラインに戻った。４０ＩＵ／ｋｇの試料１６を経口投与した１匹のラットでは、３０分の時点でグルコースが４０ｍｇ／ｄＬに減少し、１匹のラットでは６時間の時点で４０ｍｇ／ｄＬに減少し、これらのラットのグルコース値はその次の時点でベースラインに戻った。残りのラットには、有意なグルコース低下はなかった。６０ＩＵ／ｋｇの試料１６を経口投与した２匹のラットは、２時間の時点でグルコースが４０ｍｇ／ｄＬに減少し、３時間でベースラインに戻り、１匹のラットは８時間の時点で３０ｍｇ／ｄＬに減少した。残りのラットには、有意なグルコース低下はなかった。４０及び６０ＩＵ／ｋｇでの経口製剤からいくらかのグルコース低下が見られたが、応答は、投与された用量が高かった実施例９で見られたものほど顕著ではなかった。
【００９７】
Ｋ．実施例１１
経口インスリン−ＰＥＧ試料をインスリン−ＰＥＧの皮下注射と比較するために、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施した。この研究は、経口製剤が７５ＩＵ／ｋｇで投与されたことを除いて、実施例１０と同様であった。
【００９８】
試料１９：０．０１１ｍｇ／ｋｇのインスリン
試料２０：２．１ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）、１ｍＬの魚油、３ｍｇのＤＰＣ。
【００９９】
試料２０を形成する際に、インスリン−ＰＥＧ及び魚油を３０分間超音波処理した。次に、超音波処理した混合物にＤＰＣを添加し、混合物を軽く渦巻かせ又はボルテックスして混合した。得られた混合物を室温で１時間保持した。試料２０を、強制経口投与によりラットに７５ＩＵ／ｋｇで投与した。試料１９は０．３ＩＵ／ｋｇで皮下投与した。所定の間隔で、頸静脈から血液を採取し、グルコース値を分析した。
【０１００】
試料１９を皮下投与した全てのラットでは、３０分以内に血糖値が２０ｍｇ／ｄＬに低下し、この値は徐々に上昇して約３時間までにベースライン（約６０ｍｇ／ｄＬ）に戻った。試料２０を経口投与した５匹のラットのうち３匹では、３０分で血糖値が２０〜４０ｍｇ／ｄＬに減少し（少なくとも３０％の減少）、この値は徐々に上昇して約３時間までにベースラインに戻った。残りの２匹のラットには、有意なグルコース低下はなかった。これらの結果は試料１４と同様であった。
【０１０１】
Ｌ．実施例１２
異なるタンパク質／ペプチド有効成分（Ａｃｔｉｖｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ、ＡＰＩ）（インスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）又はＧＬＰ−１（５ｋＤａのＰＥＧを含む）のいずれか）、浸透促進剤、粘膜付着性化合物、及び担体化合物を用いて、１７種類の試料を調製した。一部の化合物は、浸透促進剤と粘膜付着性化合物の両方として機能することができる。
【０１０２】
試料２１：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、１ｍＬの魚油。
試料２２：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのＤＰＣ、１ｍＬの魚油。
【０１０３】
試料２３：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇの１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール−３−ホスホグリセロール（ＤＰＰＧ）、１ｍＬの魚油。
試料２４：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇの１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、１ｍＬの魚油。
【０１０４】
試料２５：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのデオキシコール酸、１ｍＬの魚油。
試料２６：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのデオキシコール酸ナトリウム、１ｍＬの魚油。
【０１０５】
試料２７：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのグリコール酸ナトリウム、１ｍＬの魚油。
試料２８：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのタウロコール酸ナトリウム塩、１ｍＬの魚油。
【０１０６】
試料２９：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのＮ−ドデシルＢ−Ｄ−マルチダーゼ、１ｍＬの魚油。
試料３０：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのトリデシルＢ−Ｄ−マルチダーゼ、１ｍＬの魚油。
【０１０７】
試料３１：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１ｍＬの魚油。
試料３２：２ｍｇのＧＬＰ−ｌ−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのＤＰＣ、１ｍＬの魚油。
【０１０８】
試料３３：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのＤＰＣ、１ｍＬのオキアミ油。
試料３４：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＳＤＳ、１ｍＬの魚油。
【０１０９】
試料３５：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのドキュセートナトリウム（ＤＳＳ）、１ｍＬの魚油。
試料３６：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのＤＰＣ、５０ｍｇのヘパキス２，６−Ｂ−Ｏ−メチル−Ｂ−シクロデキストリン、１ｍＬの魚油。
【０１１０】
試料３７：２ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、３ｍｇのＤＰＣ、５０ｍｇのポリラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＧＡ）、１ｍＬの魚油。
試料２１〜３７のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。次に、試料をペプシンを含まない模擬胃液５ｍＬに加えた。混合物を数回転倒混和した。
【０１１１】
胃液相の試料を、インスリン−ＰＥＧが油相中で保護されたままであるかどうか、及び水相にどれだけ入ったかを確認するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析した。ＨＰＬＣから、ほとんどの製剤でインスリン−ＰＥＧが１５分以内に油相を出て、胃液相に入ることが示された。一部の結果では、実験誤差やその他の誤差の結果として１００％を超えるＡＰＩが示された。試料２３、２４、及び３１では、インスリン−ＰＥＧが油相をよりゆっくり出ていくように見え、ＤＰＰＧ、ＰＯＰＥ、及びＤＳＳがインスリンを油中に保持するのを助けることを示唆している。
【０１１２】
【表１】
2020511478.tif 000003
【０１１３】
Ｍ．実施例１３
異なる浸透促進剤、粘膜付着性化合物、及び担体化合物を含むインスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）を用いて、６種類の試料を調製した。一部の化合物は、浸透促進剤及び粘膜付着性化合物の両方として機能することができる。
【０１１４】
試料３８：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、６ｍｇのトリデシル−Ｂ−マルトシド、１ｍＬの魚油。
試料３９：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、４ｍｇの１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、１ｍＬの魚油。
【０１１５】
試料４０：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、４ｍｇのＤＰＣ、１ｍＬのオリーブ油。
試料４１：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、４ｍｇのＤＰＣ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、１ｍＬのオリーブ油。
【０１１６】
試料４２：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、４ｍｇのＰＯＰＥ、１ｍＬのオリーブ油。
試料４３：３ｍｇのインスリン−ＰＥＧコンジュゲート、４ｍｇのＰＯＰＥ、４ｍｇのＤＰＣ、１ｍＬのオリーブ油。
【０１１７】
試料３８〜４３のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。次に、ペプシンを含まない模擬胃液５ｍＬに試料を加えた。混合物を数回転倒混和した。
【０１１８】
試料を、インスリン−ＰＥＧが油相中に留まっているかどうか、及び水相にどれだけ入ったかを確認するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけた。ＨＰＬＣから、ほとんどの製剤でインスリン−ＰＥＧが１５分以内に油相を出て、胃液相に入ることが示された。試料３９及び４２では、インスリン−ＰＥＧは油相をよりゆっくり出ていくように見え、ＰＯＰＥがインスリン−ＰＥＧを油相中に保持するのを助けることをここでも示唆している。しかし、インスリン−ＰＥＧ吸収に重要なＤＰＣの存在下でのＰＯＰＥは、インスリン−ＰＥＧを油中に保持するのに寄与しないようであった。
【０１１９】
【表２】
2020511478.tif 000004
【０１２０】
Ｎ．実施例１４
経口インスリン−ＰＥＧ試料をインスリンの皮下注射と比較するために、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施した。表３に詳述されているように、異なる包接複合体、浸透促進剤、粘膜付着性化合物、及び担体化合物を含むインスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）を含む４種類の製剤を経口送達用に調製した。
【０１２１】
【表３】
2020511478.tif 000005
【０１２２】
製剤４４〜４７のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。試料を室温で一晩保存した。正常なＳＤラット（５匹／群）を一晩絶食させた後、７５ＩＵ／ｋｇのインスリン相当量で強制経口投与した。比較のため、５番目の群（試料４８）にヒューマリンＲ（組換えヒトインスリン）を０．３ＩＵ／ｋｇで皮下投与した。グルコメーターによるグルコース測定のために、投与前（−３０分）及び投与後（１０分、３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間）に血液を採取した。
【０１２３】
試料４８を皮下投与したラットは全て、３０分以内に血糖値が≦２０ｍｇ／ｄＬに低下した。グルコース値は徐々に上昇し、３時間でベースラインに戻った。試料４４を投与した５匹のラットのうち３匹で、血糖値が少なくとも３０％低下し、２時間又は３時間で最小になった。４時間の時点で、これらのラットの血糖値はベースラインに戻ったが、１匹のラットでは６時間にわたり血糖値がベースラインレベルを下回っていた。試料４７を投与した１匹のラットでは、グルコースが大幅に減少し、２時間で最小となった。血糖値はゆっくりとベースラインレベルに戻ったが、それまでに８時間かかった。試料４５を投与した２匹のラットでは、３０分以内にグルコースが≦２０ｍｇ／ｄＬに低下し、１匹のラットは２時間で３０％低下した。試料４６を与えられた１匹のラットでは、３０分以内にグルコースが≦２０ｍｇ／ｄＬに低下した。これらのラットは、最小グルコース値に達した約２時間後にベースライングルコース値に戻った。注意点として、１０分後の採血時に、試料４５を与えられた２匹のラットと試料４６を与えられた１匹のラットの口の周りに油が見られ、これらはグルコースが減少したラットと一致した。口の周りの油は、投与量がこれらのラットの胃に完全に送達されていない可能性を示唆し、これらのラットは３０分で有意なグルコース低下を示した。
【０１２４】
Ｏ．実施例１５
異なる粘膜付着性化合物又は浸透促進剤を含むインスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）を用いて、６種類の試料を調製した。
【０１２５】
試料４９：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
試料５０：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、２．６ｍｇのＤＰＣ、１０．６ｍｇのポロキサマー１８８、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１２６】
試料５１：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、２．６ｍｇのＤＰＣ、１０ｍｇの低分子量キトサン、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１２７】
試料５２：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、２．６ｍｇのＤＰＣ、１０ｍｇの低分子量キトサン、２５ｍｇのＤＳＳ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１２８】
試料５３：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、２．６ｍｇのＤＰＣ、１０ｍｇのカルボキシメチルセルロース、２５ｍｇのＤＳＳ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１２９】
試料５４：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、２．６ｍｇのＤＰＣ、４０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１３０】
試料４９〜５４のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。次に、試料をペプシンを含まない模擬胃液５ｍＬに加えた。混合物を数回転倒混和した。
【０１３１】
試料を、インスリン−ＰＥＧが油相中に留まっているかどうか、及び水相にどれだけ入ったかを確認するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけた。ＤＳＳを含む試料５２及び５３では、インスリン−ＰＥＧは油相をよりゆっくりと出ていくように見え、ＤＳＳがインスリン−ＰＥＧを油相中に保持するのを助けることを示唆している。
【０１３２】
【表４】
2020511478.tif 000006
【０１３３】
Ｐ．実施例１６
異なる種類と量の浸透促進剤を含むインスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）を用いて９種類の試料を調製した。異なる浸透促進剤には、ＤＰＣ、ＤＳＳ、及びＰＯＰＥが含まれていた。
【０１３４】
試料５５：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、２．４ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
試料５６：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１３５】
試料５７：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
試料５８：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、３ｍｇのＰＯＰＥ、３ｍｇのＤＳＳ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１３６】
試料５９：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、３ｍｇのＰＯＰＥ、３０ｍｇのＤＳＳ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１３７】
試料６０：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、３ｍｇのＤＳＳ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１３８】
試料６１：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、１５ｍｇのＰＯＰＥ、３０ｍｇのＤＳＳ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１３９】
試料６２：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、３ｍｇのＤＳＳ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
試料６３：３．６８ｍｇのインスリン−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及びα−シクロデキストリン包接複合体、３０ｍｇのＤＳＳ、２．６ｍｇのＤＰＣ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１４０】
試料５５〜６３のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。次に、試料をペプシンを含まない模擬胃液５ｍＬに加えた。混合物を数回転倒混和した。
【０１４１】
試料を、インスリン−ＰＥＧが油相中に留まっているかどうか、及び水相にどれだけ入ったかを確認するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけた。等量のＤＳＳ及びＰＯＰＥを含む試料５８、及びＰＯＰＥよりもＤＳＳを多く含む試料５９及び６１では、インスリン−ＰＥＧは油相をよりゆっくりと出ていくように見えた。ＤＳＳを含むがＰＯＰＥを含まない試料６２及び６３において、油相を出たインスリン−ＰＥＧの量は、試料５８、５９、及び６１よりも多く、ＤＳＳ及びＰＯＰＥが一緒に作用してインスリン−ＰＥＧを油相中に保持し得ることを示している。
【０１４２】
【表５】
2020511478.tif 000007
【０１４３】
Ｑ．実施例１７
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験用に試料を準備した。表６に詳述されているように、異なる浸透促進剤を含むインスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）を含む４種類の製剤を経口送達用に調製した。
【０１４４】
【表６】
2020511478.tif 000008
【０１４５】
製剤６４〜６６のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。試料を室温で一晩保存した。正常なＳＤラット（８匹／群）を一晩絶食させた後、７５ＩＵ／ｋｇのインスリン相当量で、又はオリーブ油のみ（試料６７）を強制経口投与した。グルコメーターによるグルコース測定のために、投与前（−３０分）及び投与後（１０分、３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間）に血液を採取した。
【０１４６】
試料６４〜６６を投与した全てのラットで、最初の１時間以内に血糖値が約５０％上昇し、その後２〜８時間から初期レベル付近に戻った。同様の傾向が媒体群（試料６７）で観察され、この実施例において試料６４〜６６がこれらの特定のラットで血糖値を下げるのに効果的ではなかったことを示唆している。
【０１４７】
Ｒ．実施例１８
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験用に試料を準備した。表７に詳述されているように、異なる担体化合物、浸透促進剤、及び粘膜付着性化合物を含むインスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）を含む４種類の製剤を経口送達用に調製した。これらの試料は全て、粘膜接着剤としてＰＬＧＡを含み、ラットに高用量（１００ＩＵ／ｋｇ）で投与されたことを除き、実施例１７の試料と同様である。
【０１４８】
【表７】
2020511478.tif 000009
【０１４９】
製剤６９〜７１のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。試料を室温で一晩保存した。正常なＳＤラット（８匹／群）を一晩絶食させた後、１００ＩＵ／ｋｇのインスリン相当量で、又はオリーブ油のみ（試料７２）を強制経口投与した。グルコメーターによるグルコース測定のために、投与前（−３０分）及び投与後（１０分、３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間）に血液を採取した。
【０１５０】
試料６９を投与したラットは、対照群（試料７２）と同様のグルコース応答を示した。試料７０を投与した１匹のラットでは、血糖値が有意に低下し、グルコース値は０．５〜３時間で２３〜３９ｍｇ／ｄＬ、４時間で４７ｍｇ／ｄＬ、６時間で４４ｍｇ／ｄＬであった。グルコース値は、８時間でベースライン（約７５ｍｇ／ｄＬ）に戻った。この群の残りのラットは、対照群と同様のグルコース反応を示した。試料７１を投与した１匹のラットでは、血糖値が有意に低下し、グルコース値は０．５時間で６４ｍｇ／ｄＬ、１〜２時間で３５〜４０ｍｇ／ｄＬ、３〜４時間で５３〜５７ｍｇ／ｄＬであり、６時間でベースライン近くに戻った。この群の残りのラットは、対照群と同様のグルコース反応を示した。試料７０及び７１におけるＤＳＳ及びＰＬＧＡの存在は、７５ＩＵ／ｋｇから１００ＩＵ／ｋｇへの投与量の増加とともに、試料６４〜６６と比較してグルコースの減少にさらに寄与した。これは、製剤中のＤＳＳ及びＰＬＧＡの存在が薬物吸収に寄与することを示唆している。
【０１５１】
Ｓ．実施例１９
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験用に試料を準備した。表８に詳述されているように、異なる浸透促進剤、粘膜付着性化合物、担体化合物、及び界面活性剤を含むインスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）を含む７種類の製剤を経口送達用に調製した。
【０１５２】
【表８】
2020511478.tif 000010
【０１５３】
試料７７の包接複合体を、試料７３〜７５及び７９とは異なる方法で調製した。インスリン−ＰＥＧ及び１０モル過剰のα−シクロデキストリンを水溶液中で混合し、４℃で一晩維持して沈殿物を形成させた。得られた沈殿物をろ過して可溶性インスリン−ＰＥＧ及びα−シクロデキストリンを除去してから凍結乾燥し、試料７７で使用した。この複合体の調製方法は、製剤中の遊離シクロデキストリンを減少させるはずである。製剤７３〜７５及び７７〜７９のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。試料を室温で一晩保存した。正常なＳＤラット（８匹／群）を一晩絶食させた後、１００ＩＵ／ｋｇのインスリン相当量で、又はオリーブ油及びＤＨＡのみ（試料７６）を強制経口投与した。試料７３〜７６では、グルコメーターによるグルコース測定のために、投与前（−３０分）及び投与後（１０分、３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間）に血液を採取し、試料７７〜７９では投与後（１０分、３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、４時間）に血液を採取した。
【０１５４】
試料７３を投与された１匹のラットでは血糖値が有意に低下し、このラットのベースラインは９５ｍｇ／ｄＬであり、３０分までにグルコースは６０ｍｇ／ｄＬに低下し、グルコースは１〜３時間の間３４〜４７ｍｇ／ｄＬを維持し、４時間で６５ｍｇ／ｄＬであった。試料７３〜７９を与えられた他の全てのラットは、対照と同様の血糖応答を示した。これは、試験された製剤の中で試料７３の吸収率が最高であったことを示唆している。
【０１５５】
Ｔ．実施例２０
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験用に試料を準備した。インスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）又はインスリン、異なる浸透促進剤、粘膜付着性化合物、担体化合物、及びプロテアーゼ阻害剤を含む４種類の製剤を経口送達用に調製した。製剤は、小腸に到達するまで溶解しないように設計された腸溶性カプセル、又は胃で溶解するゼラチンカプセルを用いて形成した。試料の詳細を表９に示す。
【０１５６】
【表９】
2020511478.tif 000011
【０１５７】
製剤８２〜８５のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。次に、試料をカプセルに加えた。試料８２及び８３では、油の混合物を加える前に、ＳＢＴＩをカプセルに加えた。試料を室温で一晩保存した。正常なビーグル犬（６匹／群）を一晩絶食させた後、８ｍｇ／匹のインスリン相当量で錠剤を投与した。グルコメーターによるグルコース測定のために、投与前（−３０分）及び投与後（１０分、３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、５時間、７時間）に血液を採取した。採取された血液試料を、インスリンとｃ−ペプチドについても分析した。
【０１５８】
試料８２を投与したイヌでは、有意なグルコースの減少は見られなかった。試料８３を与えられた６匹のイヌのうち２匹は３０％を超える血糖値の低下を示し、０．５時間で最低となり、血糖値は２時間でベースラインに戻った。この群の他のイヌでは、有意なグルコース低下は見られなかった。試料８４及び８５を投与されたイヌでは、血糖値の有意な低下は見られなかった。これらの結果から、試料８３はゼラチンカプセルで送達されたため、腸溶性コーティングカプセルは送達の成功に必要でないことが示唆される。また、ペプチダーゼ阻害剤ＳＢＴＩの存在は、タンパク質の消化を抑制することにより吸収を促進したと考えられる。
【０１５９】
血清インスリンはＥＬＩＳＡで測定され、血糖値が著しく低下した２匹のイヌで血清インスリンレベルの上昇が検出され、さらに他の試料でインスリンのいくらかの上昇が検出された。試料８３では、インスリンの最大濃度は、血糖値が低下した２匹のイヌでは１０分で３．７ｎｇ／ｍｌ、３０分で６．４ｎｇ／ｍｌであった。インスリンは、試料８２を投与した４匹のイヌで検出され、１．０ｎｇ／ｍｌ〜１．６ｎｇ／ｍｌのＣｍａｘが１０〜６０分で生じた。インスリンは試料８４の２匹のイヌで検出され、１．２ｎｇ／ｍｌ〜１．３ｎｇ／ｍｌのＣｍａｘが６０〜９０分で生じた。試料８５を投与した２匹のイヌでインスリンが検出され、１．５ｎｇ／ｍｌ〜１．８ｎｇ／ｍｌのＣｍａｘが１０〜３０分で生じた。総合すると、これらの結果は、グルコースの低下を達成するために１．８ｎｇ／ｍｌを超える血清インスリンレベルが必要であることを示唆している。
【０１６０】
血糖値が低下したイヌでは、Ｃ−ペプチドレベルも抑制された。Ｃ−ペプチドは内因性インスリンの指標として使用される。プロインスリンは、インスリンとＣ−ペプチドに切断される。インスリンが内因性の場合、等モル量のＣ−ペプチドが生成される。Ｃ−ペプチドのレベルが下がれば、動物のインスリン産生量は少なくなる。これは、外因性インスリンが内因性インスリンに取って代わっていることを示している。試料８３を投与されグルコースが低下した２匹のイヌでは、血清Ｃ−ペプチドもベースラインレベルの６４％〜９２％に減少した。総合すると、血清インスリンの増加を伴う血糖値の低下及びＣ−ペプチドの減少は、血糖値の低下が外因性インスリンによって引き起こされたことを示している。
【０１６１】
Ｕ．実施例２１
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験用に試料を準備した。インスリン−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧを含む）又はインスリン、異なる浸透促進剤、粘膜付着性化合物、担体化合物、及びプロテアーゼ阻害剤を含む４種類の製剤を経口送達用に調製した。製剤は、小腸に到達するまで溶解しないように設計された腸溶性カプセル、又は胃で溶解するゼラチンカプセルを用いて形成した。さらに、胃のｐＨを上げるために、試料８６〜８９の投与の前に、別のゼラチンカプセルに入った２００ｍｇの重炭酸ナトリウムを投与した。ペプシンはｐＨ２を超えると活性が低下するため、胃のｐＨを上げるとペプシン活性が低下し、インスリンを胃で分解されにくくすることができる。さらに、分解は低ｐＨで生じ得るため、胃のｐＨを上げると、インスリンの安定性を向上させることができる。試料８６〜８９の詳細を表１０に示す。
【０１６２】
【表１０】
2020511478.tif 000012
【０１６３】
製剤８６〜８８のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。試料８６及び８７では、油の混合物の前にＳＢＴＩをカプセルに加え、試料８８では油の混合物の前にＳＢＴＩ及びＥＤＴＡを加えた。試料８９は、ＳＢＴＩを除く全ての成分を水に溶解することにより調製した。各成分を加えた後、混合物が均質になるまで試料をボルテックスした。次に、混合物を急速冷凍して凍結乾燥し、ＳＢＴＩを含むカプセルに加えた。胃のｐＨを上げるために、試料８６〜８９の投与の前に、別のゼラチンカプセルに入った２００ｍｇの重炭酸ナトリウムを投与した。試料を４℃で一晩保存した。正常なビーグル犬（６匹／群）を一晩絶食させた後、８ｍｇ／匹のインスリン相当量で錠剤を投与した。グルコメーターによるグルコース測定のために、投与前（−３０分）及び投与後（１０分、３０分、１時間、１．５時間、２時間、３時間、５時間、７時間）に血液を採取した。
【０１６４】
試料８６を投与されたイヌのうち、２匹が３０分で最大のグルコース減少を示し（２７％及び６５％の減少）、１匹が１時間で最大のグルコース減少（３９％）を示した。残りの３匹のイヌは、ベースライン値の１５％未満のグルコース変化を示した。結果は試料８３で観察された結果と類似しており、重炭酸ナトリウムの存在が薬物吸収を有意に変化させなかったことを示している。試料８７を投与されたイヌのうち、４匹が３０分で最大のグルコース低下を示し（３７％、４１％、５１％、及び４２％）、グルコース値がベースラインに戻ったのは、３匹のイヌではさらに３０分後、４匹目のイヌでは１時間後であった。残りの２匹のイヌでは、グルコース変化はベースライン値の１５％未満であった。試料８８を投与されたイヌのうち、２匹が３０分で最大のグルコース減少（３０％及び６９％の減少）を示し、１匹が１時間で最大のグルコース減少（５３％）を示した。グルコースは２匹のイヌで１時間後、３匹目のイヌで３時間後にベースライン値に戻った。残りの３匹のイヌでは、グルコース変化はベースライン値の１５％未満であった。試料８９を投与されたイヌのうち、１匹で１時間後に最大のグルコース低下が見られた（２９％）。残りの５匹のイヌは、ベースライン値の１５％未満のグルコース変化を示したため、担体化合物が吸収に影響することが観察されました。
【０１６５】
Ｖ．実施例２２
Ｃ末端がペグ化されたアミノ酸残基１〜３４からなる副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）のペプチド断片（ＰＴＨ−ＰＥＧ）を用いて、４種類の試料を調製した。コンジュゲーションに使用したＰＥＧは、以下に特定されているように、２ｋＤａ又は５ｋＤａのいずれかであった。
【０１６６】
試料９１：１．６８ｍｇのＰＴＨ−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及び０．２ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１６７】
試料９２：１．６８ｍｇのＰＴＨ−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及び０．２ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１６８】
試料９３：２．５ｍｇのＰＴＨ−ＰＥＧ（５ｋＤａ）及び０．２ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１６９】
試料９４：２．５ｍｇのＰＴＨ−ＰＥＧ（５ｋＤａ）及び０．２ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１７０】
試料９１〜９４のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。次に、試料をペプシンを含まない４ｍＬの模擬胃液に加えた。混合物を数回転倒混和した。
【０１７１】
試料を、ＰＴＨ−ＰＥＧが油相中に留まっているかどうか、及び水相にどれだけ入ったかを確認するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけた。全ての試料で、０．２５時間で油相を出て水相に入ったのは＜４０％であり、３時間では油の中にはＰＴＨがほとんど残っていなかった。結果を表１１に示す。
【０１７２】
【表１１】
2020511478.tif 000013
【０１７３】
Ｗ．実施例２３
経口ＰＴＨ−ＰＥＧ試料をＰＴＨの皮下注射と比較するために、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施した。正常ラットへの強制経口投与用に、ＰＴＨ−ＰＥＧコンジュゲート（アミノ酸残基１〜３４及び２ｋＤａのＰＥＧ）を含む製剤を調製した。比較のために、非ペグ化ＰＴＨ（アミノ酸残基１〜３４）を含む皮下注射投与用の試料を調製した。
【０１７４】
試料９５：２ｍｇのＰＴＨ及び０．０１％Ｔｗｅｅｎ（商標）８０を含む１０ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７（ＰＢＳＴ）。
試料９６：８．６ｍｇのＰＴＨ−ＰＥＧ及び１．３ｍｇのα−シクロデキストリン、５ｍｇのＰＯＰＥ、４ｍｇのＤＰＣ、５ｍｇのＤＳＳ、６２．５ｍｇのＳＢＴＩ、０．９ｍＬのオリーブ油、及び０．１ｍＬのＤＨＡ。
【０１７５】
試料９５のペプチドを、投与の約３０分前にＰＢＳＴに溶解し、数回転倒混和した。
試料９６のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を試料に加え、混濁しているが均質に見えるまで再度超音波処理した。試料を２〜８℃で一晩（約１２時間）保存した。投与の約３０分前にＳＢＴＩを製剤に加えた。
【０１７６】
正常ラット（５匹／群）を一晩絶食させた。試料９５は、ラットに０．２ｍｇＰＴＨ／ｍＬ／ｋｇで皮下注射により投与した。試料９６は、ラットに１５ｍｇＰＴＨ−ＰＥＧ／ｋｇ（８．６ｍｇ／ｍＬ）で強制経口投与した。投与前（−３０分）及び投与後（１５分、１時間、２時間、４時間、２４時間）に血液を採取した。血清試料をＰＴＨ及び血清カルシウム濃度についてＥＬＩＳＡで分析した。
【０１７７】
試料９５を皮下投与したラットの１５分でのＰＴＨの最大レベルは、１，４７４〜７，９６８ｐｇ／ｍＬに及んだ。これらのレベルは急速に低下し、１時間後に測定可能なレベルにあったのは２匹のラットのみであった。試料９５を投与されたラットの対応するカルシウムレベルは、２時間で最大レベルに達し、５７．３〜６６．９μｇ／ｍＬに及んだ。試料９６を経口投与した５匹のラットのうち、測定可能なＰＴＨレベルを示したのは１匹のみであり、Ｃｍａｘは１５分で１７８，５８５ｐｇ／ｍＬであった。このラットのＰＴＨレベルは徐々に低下したが、２４時間でもまだ測定可能であった（１，８１３ｐｇ／ｍＬ）。このラットの血清カルシウム濃度は１時間で最大レベル（８０．２μｇ／ｍＬ）に達し、２〜４時間でレベルはベースライン（約５０μｇ／ｍＬ）に戻った。残りの４匹のラットの血清カルシウム濃度は１時間で最大レベルに達し、値は５６．４〜７３．５μｇ／ｍＬに及んだ。平均カルシウムレベルは２時間の時点で上昇したままであり、４時間までにベースライン付近になった。この実験は、本願の技術が塩基性及び酸性の両方のタンパク質薬に使用できることを実証した。インスリンは酸性タンパク質（ｐＩが５．５）であり、ＰＴＨは塩基性（ｐＩ８．０）である。したがって、組成物は塩基性タンパク質及び酸性タンパク質の両方を含むことができる。
【０１７８】
Ｘ．実施例２４
グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−ＰＥＧコンジュゲート（２ｋＤａのＰＥＧ又は５ｋＤａのＰＥＧを含む）、又はインスリンを用いて、４種類の試料を調製した。
【０１７９】
試料９７：０．７２ｍｇのＧＬＰ−１及び０．２ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１８０】
試料９８：１．２５ｍｇのＧＬＰ−１−ＰＥＧ（２ｋＤａ）及び０．２ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１８１】
試料９９：１．８４ｍｇのＧＬＰ−１−ＰＥＧ（５ｋＤａ）及び０．２ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１８２】
試料１００：１．３６ｍｇのインスリン（５ｋＤａ）及び０．２ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１８３】
試料９７〜１００のペプチド及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。試料９８は他の試料よりも著しく濁っていた。次に、試料をペプシンを含まない４ｍＬの模擬胃液に加えた。混合物を数回転倒混和した。
【０１８４】
試料を、タンパク質又はペグ化タンパク質が油相中に留まっているかどうか、及び水相にどれだけ入ったかを確認するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけた。試料９７〜１００では、タンパク質は水相で定量化できなかった。表１２に示すように、試料９７、９８、及び１００では、３時間後に一部のタンパク質が油相に留まっていた。２ｋＤａのＰＥＧを含むＧＬＰ−１（試料９８）、又は５ｋＤａのＰＥＧを含むＧＬＰ−１（試料９９）よりも多くの非ＰＥＧ化ＧＬＰ−１（試料９７）が油相中で保護されており、これは、ＰＥＧ分子量が油中のＧＬＰ−１の分配に貢献することを示唆している。
【０１８５】
【表１２】
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【０１８６】
Ｙ．実施例２５
油溶性小分子エソメプラゾールマグネシウム水和物を用いて４種類の試料を調製した。
試料１０１：１．９４ｍｇのエソメプラゾールマグネシウム水和物、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１８７】
試料１０２：１．１１ｍｇのエソメプラゾールマグネシウム水和物、１ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１８８】
試料１０３：３３．６ｍｇのエソメプラゾールマグネシウム水和物β−シクロデキストリン包接錯体、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１８９】
試料１０４：３３．９ｍｇのエソメプラゾールマグネシウム水和物γ−シクロデキストリン包接錯体、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１９０】
試料１０３及び１０４では、エソメプラゾールマグネシウム水和物と水溶液中の１０モル過剰のβ又はγシクロデキストリンを組み合わせることにより、包接複合体を形成した。４℃で一晩インキュベートした後、白色の沈殿物が形成され、これを急速冷凍して凍結乾燥した。
【０１９１】
試料１０１〜１０４のエソメプラゾールマグネシウム水和物及び油を、混濁しているが均質に見えるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。次に、試料を、ペプシンを含まない５０％アセトニトニル及び５０％ＰＢＳの溶液４ｍＬに加えた。混合物を数回転倒混和した。
【０１９２】
試料を、エソメプラゾールマグネシウム水和物が油相中に留まっているかどうか、及び水相にどれだけ入ったかを確認するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけた。結果を表１３に示す。
【０１９３】
【表１３】
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【０１９４】
試料１０２のように、α−シクロデキストリンを油混合物に添加すると、水相に入るエソメプラゾールマグネシウム水和物の量は減少した。試料１０３及び１０４のように、β又はγシクロデキストリンとの包接錯体を油混合物に添加すると、水相に入るエソメプラゾールマグネシウム水和物の量はさらに減少した。
【０１９５】
Ｚ．実施例２６
水溶性小分子セフトリアキソンナトリウムを用いて２種類の試料を調製した。
試料１０５：２．１５ｍｇのセフトリアキソンナトリウム、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１９６】
試料１０６：１．８５ｍｇのセフトリアキソンナトリウム、１ｍｇのα−シクロデキストリン、３ｍｇのＰＯＰＥ、２．４ｍｇのＤＰＣ、３ｍｇのＤＳＳ、５０ｍｇのＰＬＧＡ、０．８ｍＬのオリーブ油。
【０１９７】
【表１４】
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【０１９８】
試料１０５〜１０６のセフトリアキソンナトリウム及び油を、混濁しているが均質になるまで超音波処理した。次に、残りの成分を各試料に加えた。試料を、混濁しているが均質に見えるまで再び超音波処理した。次に、試料を４ｍＬの溶液模擬胃液に加えた。混合物を数回転倒混和した。
【０１９９】
模擬胃液の３００ｎｍでの吸光度を使用して、セフトリアキソンナトリウムが水相に入ったかどうかを判断した。
結果は、試料１０５及び１０６ではセフトリアキソンナトリウムがゆっくりと水相に入り、３時間で水相中に５０％しかなく、残りの５０％が油相に留まっていることを示唆している。
【０２００】
活性医薬成分の代わりに、ヒト成長ホルモン、グルカゴン様ペプチド−１、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモンの断片、エンフビルチド、及びオクトレオチドを用いて、実施例１〜２６が繰り返される。
【０２０１】
本開示において議論される全ての特許、特許公開公報、特許出願、雑誌記事、書籍、技術文献などは、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
前述の説明では、説明の目的で、本技術の様々な実施形態の理解を提供するために多くの詳細が述べられてきた。しかし、これらの詳細の一部がなくても、又は詳細を追加しても特定の実施形態を実施できることは、当業者には明らかであろう。
【０２０２】
いくつかの実施形態を説明したが、本発明の趣旨から逸脱することなく、様々な変更、代替構成、及び同等物を使用できることは、当業者によって認識されるであろう。さらに、本発明を不必要に不明瞭にすることを避けるために、多くの周知のプロセス及び要素は説明されていない。また、特定の実施形態における詳細は、その実施形態の変形形態においても常に存在する必要はなく、他の実施形態に追加されてもよい。
【０２０３】
値の範囲が提示される場合、文脈が明確にそうでないことを明記しない限り、その範囲の上限と下限の間の、下限値の単位の１０分の１までの各中間値も具体的に開示されることが理解される。記載した範囲内の記載した値又は中間値と、その記載した範囲内の他の記載した値又は中間値との間のより狭い範囲も包含される。これらのより狭い範囲の上限及び下限は、互いに独立してその範囲に含まれても除外されてもよく、それらの各範囲も本発明に含まれ、記載された範囲における具体的に除外される限界値の対象となる。記載された範囲が限界値の一方又は両方を含む場合、含まれる限界値のいずれか又は両方を除外した範囲も含まれる。
【０２０４】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「１つ」、「前記」、及び「その」は、文脈が明確にそうでないことを示さない限り、複数の指示対象を含む。つまり、例えば「１つの方法」と言う場合は複数のそのような方法を含み、「前記組織」と言う場合は、１つ又は複数の組織及び当業者に知られているその同等物を含む、等である。本発明は、明確性と理解の目的で詳細に説明された。しかし、添付の特許請求の範囲内である種の変更及び修正を実施できることが理解されよう。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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