(57)【要約】  遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症などの神経変性疾患の治療のための方法であって、そのような治療を必要とする対象に、治療有効量のフィブラートを含む薬剤を含む組成物を投与することを含む、前記方法が本明細書で提供される。【選択図】  図１Ａ
2020504752.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象に、治療有効量の、神経細胞アポトーシス細胞死を減少させる薬剤であって、フィブラートを含む前記薬剤を含む組成物を投与することを含む、神経変性疾患を有する対象における神経細胞アポトーシス細胞死を減少させる方法。
【請求項２】
フィブラートが、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート及びクリノフィブラートから成る群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
フィブラートがゲムフィブロジルである、請求項１記載の方法。
【請求項４】
神経変性疾患が、神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、多系統萎縮症(MSA)などのパーキンソン・プラス疾患(Parkinson's plus disease)を含むパーキンソン病、進行性核上性麻痺(PSP)、大脳皮質基底核変性症(CBD)及びレビー小体型認知症(DLB)から成る群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
神経変性疾患が遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症である、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
前記薬剤が対象における細胞死のホスホBCL2関連アゴニスト(P-BAD)のレベルを増加させる、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
P-BADのレベルが、対象の運動皮質又は線条体において増加する、請求項６記載の方法。
【請求項８】
治療有効量の、神経変性疾患を有する対象の寿命を、薬剤を受けていない対照と比較して延長させる薬剤であって、フィブラートを含む前記薬剤を含む組成物を対象に投与することを含む、神経変性疾患を有する対象の寿命を延長させる方法。
【請求項９】
フィブラートが、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート及びクリノフィブラートから成る群より選択される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
フィブラートがゲムフィブロジルである、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
神経変性疾患が、神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、多系統萎縮症(MSA)などのパーキンソン・プラス疾患を含むパーキンソン病、進行性核上性麻痺(PSP)、大脳皮質基底核変性症(CBD)及びレビー小体型認知症(DLB)から成る群より選択される、請求項８〜１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
神経変性疾患が遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症である、請求項８〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
治療有効量の、神経変性疾患を有する対象の運動行動を、薬剤を受けていない対照と比較して改善する薬剤であって、フィブラートを含む前記薬剤を含む組成物を対象に投与することを含む、神経変性疾患を有する対象の運動行動を改善する方法。
【請求項１４】
フィブラートが、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート及びクリノフィブラートから成る群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
フィブラートがゲムフィブロジルである、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
神経変性疾患が、神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、多系統萎縮症(MSA)などのパーキンソン・プラス疾患を含むパーキンソン病、進行性核上性麻痺(PSP)、大脳皮質基底核変性症(CBD)及びレビー小体型認知症(DLB)から成る群より選択される、請求項１３〜１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
神経変性疾患が遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症である、請求項１３〜１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
治療有効量の、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症を有する対象の脳における抗炎症因子のレベルを、薬剤を受けていない対照と比較して増加させる薬剤であって、フィブラートを含む前記薬剤を含む組成物を対象に投与することを含む、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症を有する対象の脳における抗炎症因子のレベルを増加させる方法。
【請求項１９】
フィブラートが、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート及びクリノフィブラートから成る群より選択される、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
フィブラートがゲムフィブロジルである、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
抗炎症因子のレベルの増加が、サイトカインシグナル伝達の抑制因子3(SOCS3)及びインターロイキン-1受容体アンタゴニスト(IL-1Ra)のレベルの増加を含む、請求項１８〜２０のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
前記薬剤が経口又は非経口投与のためのものである、請求項１、８、１３及び１８のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる2016年12月29日に出願された米国特許仮出願第62/440,305号の利益を主張する。
【０００２】
技術分野
本発明は、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症などの神経変性疾患を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
リソソームは、脂質、タンパク質、炭水化物、および核酸の分解を担ういくつかの酸ヒドロラーゼを含有する膜結合型オルガネラである(De Duve & Wattiaux 1966)。それらのほとんど全てにおける欠陥/欠損は、リソソームにおける未消化の/部分消化された物質の蓄積をもたらし、いくつかのリソソーム蓄積障害(LSD)の基礎を形成する(De Duve & Wattiaux 1966, Perez-Salaら、2009)。遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症(Jansky-Bielschowsky病、LINCL、2型)は、Cln2遺伝子における多すぎる突然変異によって引き起こされるNCLの一形態である。これらの突然変異は、トリペプチジルトリペプチダーゼI(TPP-I、46kDaペプスタチン非感受性リソソームプロテアーゼ)の欠損および/または機能喪失をもたらし、脳における自己蛍光物質の蓄積をもたらす(Sleatら、1997、Laneら、1996)。LINCLは、典型的には、2〜4歳の年齢時に症状を引き起こし、急速に進行し、ニューロンおよび他の細胞の数の劇的な減少の結果として、8〜10歳の間に死に至る(Laneら、1996、Sleatら、1997)。したがって、LINCLまたは他のNCLを有する患者における寿命の増加および/または生活の質の改善は、重要な研究分野である。しかしながら、長年の調査にも拘わらず、この疾患、特に、LINCLのために利用可能な治療はたったの1つしかない；全ての手法は、単に支援的または症候的なものであり、新規治療手法の緊急の必要性を示している(Changら、2008)。
【０００４】
いくつかの研究は、神経炎症およびアポトーシス経路の誘導が、LINCLを含む多くの形態のNCLにおける神経損傷に起因し得ると結論付けている(Geraetsら、2016、Dharら、2002、Puranamら、1997、Kohanら、2011)。炎症は、LINCLにおける開始因子ではないが、グリア媒介性持続的炎症応答は、疾患進行に寄与すると考えられる(Cooperら、2015、Macauleyら、2014)。FDAに認可された脂質低下薬であるゲムフィブロジル(gem)は、血液循環中のトリグリセリドレベルを低下させ、高脂血症のリスクを減少させることが知られている(Robinsら、2001、Rubins & Robins 1992、Rubinsら、1999)。しかしながら、本発明者らおよびその他に由来するいくつかの最近の研究により、その脂質低下効果とは別に、gemは炎症、ヘルパーT細胞のスイッチング、細胞間接触、遊走、酸化的ストレス、およびリソソーム生合成を担う多くの他のシグナル伝達経路を調節することもできることが示されている(Ghosh & Pahan 2012a、Corbettら、2012、Ghoshら、2012、Janaら、2007、Jana & Pahan 2012、Dasguptaら、2007、Pahanら、2002、Roy & Pahan 2009、Ghoshら、2015)。
【０００５】
ここで、本発明者らは、LINCLのマウスモデルにおいてgemの治療効能を調査した。Cln2(-/-)マウスに関する行動分析および生存研究により、ビヒクル(0.1%メチルセルロース)処置対照と比較して、gem処置動物における寿命の増加および運動行動の改善が示された。貯蔵物質の負荷および神経細胞アポトーシスもまた、抗アポトーシス分子である、細胞死のホスホ-BCL2関連アゴニスト(phospho-BCL2 Associated Agonist Of Cell Death；P-BAD)のレベルの増加と共に、gem処置動物において部分的に低下することがわかった。さらに、サイトカインシグナル伝達抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3；SOCS3)およびインターロイキン-1受容体アンタゴニスト(Interleukin-1 receptor antagonist；IL-1Ra)のような抗炎症因子のレベルが、gem処置動物において上昇することがわかった。まとめると、本研究は、Cln2(-/-)動物におけるgemの神経保護的役割を示す。
【発明の概要】
【０００６】
本明細書では、神経変性疾患の治療のための方法が提供される。神経変性疾患は、神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、多系統萎縮症(MSA)などのパーキンソン・プラス疾患(Parkinson's plus disease)を含むパーキンソン病、進行性核上性麻痺(PSP)、大脳皮質基底核変性症(CBD)またはレビー小体型認知症(DLB)であってよい。バッテン病は、神経セロイドリポフスチン沈着症(NCL)と呼ばれる障害群の最も一般的な形態である。NCLは、小児性NCL(INCL、Santavuori-Haltia病)、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症(LINCL)、若年性NCL(JNCL)、または成人性NCL(ANCL)であってよい。神経変性疾患は、リソソーム蓄積障害によって引き起こされ得る。リソソーム蓄積障害は、例えば、テイサックス病、ファブリ病、ナイマン・ピック病、ゴーシェ病、ハンター症候群、アルファ-マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステリルエステル蓄積症、慢性ヘキソサミニダーゼA欠損症、シスチン蓄積症、ダノン病、ファーバー病、フコシドーシス、またはガラクトシアリドーシスであってよい。
【０００７】
前記方法は、そのような治療を必要とする対象に、治療有効量のフィブラートを含む薬剤を含む組成物を投与することを含んでもよい。フィブラートは、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラートまたはクリノフィブラートであってもよい。
【０００８】
また、本明細書では、神経変性疾患を有する対象における神経細胞アポトーシス細胞死を減少させる方法も提供される。この方法は、対象に、治療有効量の、神経細胞アポトーシス細胞死を減少させる薬剤であって、フィブラートを含む前記薬剤を含む組成物を投与することを含む。
【０００９】
さらに、本明細書では、神経変性疾患を有する対象の寿命を延長する方法が提供される。この方法は、対象に、治療有効量の、神経変性疾患を有する対象の寿命を延長する薬剤であって、フィブラートを含む前記薬剤を含む組成物を投与することを含む。
【００１０】
また、本明細書では、神経変性疾患を有する対象における運動行動を改善する方法も提供される。この方法は、対象に、治療有効量の、運動行動を改善する薬剤であって、フィブラートを含む前記薬剤を含む組成物を投与することを含む。
【００１１】
また、本明細書では、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症を有する対象の脳における抗炎症因子のレベルを増加させる方法が提供される。この方法は、対象に、治療有効量の、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症を有する対象の脳における抗炎症因子のレベルを、薬剤を受けていない対象と比較して増加させる薬剤であって、フィブラートを含む前記薬剤を含む組成物を投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１Ａ】ゲムフィブロジル(gem)がCln2(-/-)マウスの寿命を延長することを示す図である。Cln2(-/-)動物を、7.5mg/kg体重/日の用量で経口的にgem(0.1%MeC中に溶解)で処置した。全ての群について、処置を4週齢から開始した。1群の動物は、ビヒクルとしてMeCのみを受けた。図1A)生存率を、Kaplan-Meierプロットによって示す。図1B)平均生存日数を、3つ全ての群について示す。20匹のオスおよび20匹のメスを含有する40匹のマウス(n=40)を、各群において用いた。
【図１Ｂ】図１Ａの続きである。
【図２】gem処置が、Cln2(-/-)マウスにおける運動活性の喪失を遅延させることを示す図である：Cln2(-/-)動物(4週齢)を、7.5mg/kg体重/日の用量で経口的にgem(0.1%MeC中に溶解)で処置した。処置の8週後、マウスを、水平活動(2A)、移動時間(2B)、移動回数(2C)、総移動距離(2D)、常同行動計数(2E)、および休止時間(2F)についてモニタリングした。ビヒクルのみを受けるCln2(-/-)マウスおよびバックグラウンドを一致させた野生型(WT)マウスも、比較のために行った。結果を、1群あたり12匹のマウス(n=12)の平均±SEMで表す。オスおよびメスのマウスを各群において等しい比で保持した。
【図３】gem処置が、Cln2(-/-)マウスの運動皮質においてin vivoで貯蔵物質を減少させることを示す図である：Cln2(-/-)動物(4週齢)を、7.5mg/kg体重/日の用量で経口的にgem(0.1%MeC中に溶解)で処置した。処置の8週後、貯蔵色素を、サブユニットCの免疫蛍光分析によって皮質切片において観察した(3A)。DAPIを用いて、核を可視化した。(3B)サブユニットC陽性免疫蛍光を、方法のセクションに記載されるNIH Image Jソフトウェアを用いて、1群あたり6匹の異なるマウス(n=6)のそれぞれの2つの異なる切片(切片あたり2つの画像)において定量した。ap<0.001対WT-対照；bp＜0.05対Cln2(-/-)。
【図４】gem処置が、Cln2(-/-)マウスの運動皮質においてin vivoでアポトーシスを減弱させることを示す図である：Cln2(-/-)動物(4週齢)を、7.5mg/kg体重/日の用量で経口的にgem(0.1%MeC中に溶解)で処置した。処置の8週後、皮質切片(CA1海馬領域のすぐ背面)を、NeuNおよびTUNELについて二重標識した(4A)。NeuN+TUNEL+細胞を、1群あたり6匹の異なるマウス(n=6)のそれぞれの2つの異なる皮質切片において計数した(4B)。(4C)皮質ホモジェネートを、ホスホ-BADについてイムノブロットした。アクチンをローディング対照として用いた。(4D)バンドをスキャンし、値(P-BAD/アクチン)を、WT対照と比較して提示する。結果は、1群あたり4匹のマウスの平均±SEMである。
【図５】gem処置が、Cln2(-/-)マウスの線条体においてin vivoでアポトーシスを阻害することを示す図である：Cln2(-/-)動物(4週齢)を、7.5mg/kg体重/日の用量で経口的にgem(0.1%MeC中に溶解)で処置した。処置の8週後、線条体切片を、NeuNおよびTUNELについて二重標識した(5A)。NeuN+TUNEL+細胞を、MicroSuite画像化ソフトウェアを用いるOlympus IX81蛍光顕微鏡において、1群あたり6匹の異なるマウス(n=6)のそれぞれの2つの異なる切片において計数した(5B)。(5C)線条体ホモジェネートを、ホスホ-BADについてイムノブロットした。アクチンをローディング対照として用いた。(5D)バンドをスキャンし、値(P-BAD/アクチン)を、WT対照と比較して提示する。結果は、1群あたり4匹のマウスの平均±SEMである。
【図６】gem処置が、Cln2(-/-)マウスのCNSにおいてin vivoで抗炎症分子の発現を上方調節することを示す図である：Cln2(-/-)動物(4週齢)を、7.5mg/kg体重/日の用量で経口的にgem(0.1%MeC中に溶解)で処置した。処置の8週後、SOCS3およびIL-1Raの発現を、ウェスタンブロットによって運動皮質(6A〜6C)および線条体(6D〜6F)抽出物中でモニタリングした。アクチンをローディング対照として用いた。バンドをスキャンし、値(SOCS3/アクチン、6Bおよび6E；IL-1Ra/アクチン、6Cおよび6F)を、皮質(6Bおよび6C)および線条体(6Eおよび6F)についてWT対照と比較して提示する。結果は、1群あたり4匹のマウスの平均±SEMである。
【図７】gem処置が、Cln2(-/-)マウスの線条体においてin vivoでSOCS3を上方調節することを示す図である：Cln2(-/-)動物(4週齢)を、7.5mg/kg体重/日の用量で経口的にgem(0.1%MeC中に溶解)で処置した。処置の8週後、線条体切片を、GFAP & SOCS3 (7A)およびIba1 & SOCS3 (7B)について二重標識した。総SOCS3+(7C)、GFAP+SOCS3+(7D)およびIba1+SOCS3+(7E)細胞を、MicroSuite画像化ソフトウェアを用いるOlympus IX81蛍光顕微鏡において、1群あたり6匹の異なるマウス(n=6)の2つの異なる切片において計数した。結果は、1群あたり6匹のマウスの平均±SEMである。
【図８】gem処置が、Cln2(-/-)マウスの線条体においてin vivoでIL-1Raを上方調節することを示す図である：Cln2(-/-)動物(4週齢)を、7.5mg/kg体重/日の用量で経口的にgem(0.1%MeC中に溶解)で処置した。処置の8週後、線条体切片を、GFAP & IL-1Ra(8A)およびIba1 & IL-1Ra(8B)について二重標識した。総IL-1Ra+(8C)、GFAP+IL-1Ra+(8D)およびIba1+IL-1Ra+(8E)細胞を、MicroSuite画像化ソフトウェアを用いるOlympus IX81蛍光顕微鏡において、1群あたり6匹の異なるマウスの2つの異なる切片において計数した。結果は、1群あたり6匹のマウスの平均±SEMである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下に開示される実施形態は、包括的であることを意図するものでも、開示の範囲を、以下の説明における正確な形態に限定することを意図するものでもない。むしろ、実施形態は、他の当業者がその教示を用いることができるような例として選択および記載される。
【００１４】
本開示は、神経セロイドリポフスチン沈着症(NCL)、特に、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症(LINCL)を含む、神経変性障害の治療のための方法に関する。
【００１５】
薬剤は、フィブラートなどの脂質低下薬であってもよい。フィブラートの非限定例としては、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラートおよびクリノフィブラートが挙げられる。
【００１６】
定義
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本明細書が制御するものとする。好ましい方法および材料を以下に記載するが、本明細書に記載のものと類似するか、または等価な方法および材料を、本発明の実施または試験において用いることができる。本明細書に記載の全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。本明細書に開示される材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定を意図するものではない。
【００１７】
本明細書で用いられる用語「含む(comprise(s))」、「含む(include(s)」、「有する(having)」、「有する(has)」、「できる(can)」、「含有する(contain(s))」およびその変形は、追加の動作または構造の可能性を除外しない、制約のない暫定的な語句、用語、または単語であることが意図される。単数形の「a」、「および(and)」および「the」は、本文が別途明確に記述しない限り、複数の指示対象を含む。本開示はまた、明示的に記載されるかどうかに関係なく、本明細書に提示される実施形態または要素「を含む(comprising)」、「からなる(consisting of)」および「本質的にからなる(consisting essentially of)」他の実施形態も企図する。
【００１８】
本明細書で用いられる場合、「治療すること」、「治療する」または「治療」は、障害もしくは疾患と関連する症状の軽減、またはこれらの症状のさらなる進行もしくは悪化の停止、または疾患もしくは障害の防止もしくは予防を意味する。例えば、本開示の文脈の中で、治療の成功は、神経変性疾患の防止、神経変性疾患と関連する症状の軽減または神経変性疾患などの疾患の進行の停止を含んでもよい。本明細書で用いられる場合、それと比較した治療を測定するための対照は、治療剤を受けていない対象である。
【００１９】
本明細書における数値範囲の記載について、同じ正確度でその間にあるそれぞれの介在する数字が明示的に企図される。例えば、6〜9の範囲については、6および9に加えて、数字の7および8が企図され、6.0〜7.0の範囲については、数字の6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、および7.0が明示的に企図される。
【００２０】
神経変性疾患を治療する方法
本明細書では、神経変性疾患を治療する方法が提供される。神経変性疾患は、神経セロイドリポフスチン沈着症、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、多系統萎縮症(MSA)などのパーキンソン・プラス疾患を含むパーキンソン病、進行性核上性麻痺(PSP)、大脳皮質基底核変性症(CBD)またはレビー小体型認知症(DLB)であってよい。バッテン病は、神経セロイドリポフスチン沈着症(NCL)と呼ばれる障害群の最も一般的な形態である。神経セロイドリポフスチン沈着症(NCL)は、小児性NCL(INCL)、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症(LINCL)、若年性NCL(JNCL)、または成人性NCL(ANCL)であってよい。神経変性疾患は、リソソーム蓄積障害によって引き起こされ得る。リソソーム蓄積障害は、例えば、テイサックス病、ファブリ病、ナイマン・ピック病、ゴーシェ病、ハンター症候群、アルファ-マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステリルエステル蓄積症、慢性ヘキソサミニダーゼA欠損症、シスチン蓄積症、ダノン病、ファーバー病、フコシドーシス、またはガラクトシアリドーシスであってよい。
【００２１】
NCLは、典型的な常染色体劣性リソソーム蓄積障害を含む神経変性疾患群である。NCLは、進行性知能低下、認知機能障害、視覚異常、発作、および運動機能低下などの臨床症状を含んでもよい。NCLは、神経細胞および/または他の型の細胞における自己蛍光貯蔵物質の蓄積と関連し得る。NCLを、1型〜10型を含むいくつかの型に分けることができ、その型は、開始年齢、蓄積した貯蔵物質の超微細構造変化、および遺伝子変化に基づくものであり得る。現在、NCL、特に、LINCLの治療のために利用可能な治療は1つしかない。それどころか、現在の治療は、疾患症状を単に支援するものに過ぎない。
【００２２】
多くの型のNCLは、Cln遺伝子中の突然変異と関連し得る。例えば、遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症(LINCL)は、Cln2遺伝子中の突然変異と関連し得るが、小児性NCL(INCL)および若年性(JNCL)は、それぞれ、Cln1およびCln3遺伝子中の突然変異と関連し得る。
【００２３】
薬剤
薬剤は、フィブラートなどの脂質低下薬であってもよい。フィブラートの非限定例としては、ゲムフィブロジル、フェノフィブラート、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラートおよびクリノフィブラートが挙げられる。ゲムフィブロジル(5-(2,5-ジメチルフェノキシ)-2,2-ジメチルペンタン酸)は、Pfizerによる商標Lopid(登録商標)の下で商業的に入手可能である。フェノフィブラート(2-(4-(4-クロロベンゾイル)フェノキシ)-2-メチル-プロパン酸1-メチルエチルエステル)は、AbbvieによるTricor(登録商標)として商業的に入手可能である。さらなるフィブラートとしては、クロフィブラート(2-(4-クロロフェノキシ)-2-メチル-プロパン酸エチルエステル)、ベザフィブラート(2-(4-(2-クロロ-ベンゾイルアミノ)-エチル)フェノキシ)-2-メチル-プロパン酸)、シプロフィブラート(2-(4-(2,2-ジクロロシクロプロピル)フェノキシ)-2-メチルプロパン酸)およびクリノフィブラート(2-[4-[1-[4-(2-カルボキシブタン-2-イルオキシ)フェニル]シクロヘキシル]フェノキシ]-2-メチルブタン酸)が挙げられる。
【００２４】
医薬組成物
薬剤を、対象(ヒトまたは非ヒトであってもよい、患者など)への投与にとって好適な医薬組成物中に組み込むことができる。
【００２５】
医薬組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の薬剤を含んでもよい。「治療有効量」とは、所望の治療結果を達成するのに必要な用量および期間で有効な量を指す。当業者であれば、組成物の治療有効量を決定することができ、それは疾患状態、個体の年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を惹起する組成物の能力などの因子に応じて変化してもよい。治療有効量はまた、治療的に有益な効果が薬剤の任意の毒性または有害効果を上回るものである。「予防有効量」とは、所望の予防結果を達成するのに必要な用量および期間で有効な量を指す。典型的には、予防用量は疾患の前に、または疾患の初期段階で使用されるため、予防有効量は、治療有効量よりも低いであろう。
【００２６】
例えば、ゲムフィブロジルの治療有効量は、約5 mg〜約2000 mg、約10 mg〜約1900 mg、約15 mg〜約1800 mg、約20 mg〜約1700 mg、約25 mg〜約1600 mg、約30 mg〜約1500 mg、約35 mg〜約1400mg、約40 mg〜約1300 mg、約45 mg〜約1200 mg、約50 mg〜約1100 mg、約55 mg〜約1000 mg、約60 mg〜約900 mg、約65 mg〜約800 mg、約70 mg〜約700 mg、約75 mg〜約600 mg、約80 mg〜約500 mg、約85 mg〜約400 mg、約90 mg〜約300 mg、約95 mg〜約200 mg、または約100 mg〜約175 mgであってもよい。別の例においては、ゲムフィブロジルの治療有効量は、約600 mgまたは約1200 mgであってもよい。
【００２７】
例えば、フェノフィブラートの治療有効量は、約5 mg〜約2000 mg、約10 mg〜約1900 mg、約15 mg〜約1800 mg、約20 mg〜約1700 mg、約25 mg〜約1600 mg、約30 mg〜約1500 mg、約35 mg〜約1400mg、約40 mg〜約1300 mg、約45 mg〜約1200 mg、約50 mg〜約1100 mg、約55 mg〜約1000 mg、約60 mg〜約900 mg、約65 mg〜約800 mg、約70 mg〜約700 mg、約75 mg〜約600 mg、約80 mg〜約500 mg、約85 mg〜約400 mg、約90 mg〜約300 mg、約95 mg〜約200 mg、または約100 mg〜約175 mgであってもよい。別の例においては、フェノフィブラートの治療有効量は、約40 mg、約48 mg、約54 mg、約67 mg、約100mg、約120 mg、約134 mg、約145 mg、約160 mg、または約200 mgであってもよい。
【００２８】
例えば、クロフィブラートの治療有効量は、約5 mg〜約2000 mg、約10 mg〜約1900 mg、約15 mg〜約1800 mg、約20 mg〜約1700 mg、約25 mg〜約1600 mg、約30 mg〜約1500 mg、約35 mg〜約1400mg、約40 mg〜約1300 mg、約45 mg〜約1200 mg、約50 mg〜約1100 mg、約55 mg〜約1000 mg、約60 mg〜約900 mg、約65 mg〜約800 mg、約70 mg〜約700 mg、約75 mg〜約600 mg、約80 mg〜約500 mg、約85 mg〜約400 mg、約90 mg〜約300 mg、約95 mg〜約200 mg、または約100 mg〜約175 mgであってもよい。別の例においては、クロフィブラートの治療有効量は、約500 mgであってもよい。
【００２９】
医薬組成物は、製薬上許容し得る担体を含んでもよい。本明細書で用いられる用語「製薬上許容し得る担体」とは、非毒性の、不活性な固体、半固体または液体充填剤、希釈剤、封入材料または任意の型の製剤化補助剤を意味する。製薬上許容し得る担体として働くことができる材料のいくつかの例は、限定されるものではないが、ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖；限定されるものではないが、コーンスターチおよびジャガイモスターチなどのスターチ；セルロースおよび限定されるものではないが、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのその誘導体；粉末化トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；限定されるものではないが、ココアバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤；限定されるものではないが、ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；限定されるものではないが、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル；限定されるものではないが、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；発熱原を含まない水；等張性食塩水；リンゲル液；エチルアルコール、およびリン酸緩衝溶液、ならびに限定されるものではないが、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの他の非毒性の適合性潤滑剤であり、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香味剤および香料、保存剤および酸化防止剤も、処方者の判断によって、組成物中に存在してもよい。
【００３０】
投与方法
遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症などの神経疾患を治療する方法は、薬剤または薬剤の医薬組成物を投与する任意数の様式を含んでもよい。投与様式は、錠剤、ピル、糖衣錠、硬質および軟質ゲルカプセル、顆粒、ペレット、水性、液体、油性または他の溶液、水中油エマルジョンなどのエマルジョン、リポソーム、水性または油性懸濁液、シロップ、エリキシル剤、固体エマルジョン、固体分散剤または分散性粉末を含んでもよい。経口投与のための医薬組成物の調製のために、薬剤を、例えば、アラビアゴム、タルカム、スターチ、糖(例えば、マンニトース、メチルセルロース、ラクトースなど)、ゼラチン、界面活性剤、ステアリン酸マグネシウム、水性もしくは非水性溶媒、パラフィン誘導体、架橋剤、分散剤、乳化剤、潤滑剤、保存剤、香料(例えば、エーテル油)、溶解促進剤(例えば、安息香酸ベンジルもしくはベンジルアルコール)または生体利用率増強剤(例えば、Gelucire.TM.)などの一般に公知であり、使用されるアジュバントおよび賦形剤と混合することができる。医薬組成物中では、薬剤を、微粒子、例えば、ナノ粒子状組成物中に分散させることもできる。
【００３１】
非経口投与のために、薬剤または薬剤の医薬組成物を、例えば、水、バッファー、可溶化剤を含む、もしくは含まない油、界面活性剤、分散剤または乳化剤などの生理的に許容される希釈剤中に溶解または懸濁することができる。油として、例えば、限定されるものではないが、オリーブ油、ピーナッツ油、綿実油、大豆油、ヒマシ油およびゴマ油を用いることができる。より一般的に言えば、経口投与のために、薬剤または薬剤の医薬組成物は、水性、液体、油性もしくは他の種類の溶液もしくは懸濁液の形態にあってもよく、またはさらには、リポソームもしくはナノ懸濁液の形態で投与することができる。
【００３２】
本明細書で用いられる用語「経口」とは、経口、経腸、経頬、唇下、舌下の胃および直腸投与を含む投与様式を指す。
【００３３】
本明細書で用いられる用語「非経口的」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内注入および輸注を含む投与様式を指す。
【００３４】
本開示は、以下の非限定的な実施例によって例示される、複数の態様を有する。
【実施例】
【００３５】
〔実施例１〕
材料および方法：
試薬および抗体：凍結脳切片上でのTUNELアッセイのための試薬を、EMD Millipore (Billerica、MA)から購入し、製造業者のプロトコールに従って実験を行った。免疫ブロット(IB)のためのブロッキングバッファーおよび二次抗体(IRDye 700またはIRDye 800標識)を、Licor (Lincoln、NE)から購入した。免疫組織化学(IHC)のための二次抗体（FITCまたはCy5標識)を、Jackson ImmunoResearch (West Grove、PA)から購入した。本研究において用いた一次抗体の供給源をその適用および希釈率と共に表1に列挙する。
【００３６】
動物：動物の維持および実験は、National Institute of Healthの指針に従い、Rush University of Medical Center、Chicago、ILのInstitutional Animal Care and Use委員会(IACUC)によって認可された。軽度の発作および震えを示す動物に、動物給餌針を介して給餌および給水した。しかしながら、マウスが瀕死状態になった場合、ケタミン/キシラジン注射を用いる麻酔後に、頭部を切断した。瀕死の状態は以下の通りであった：中枢神経系の撹乱(頭部傾斜、発作、震え、回転行動、痙性、および麻痺)；直立状態を維持できないこと；筋萎縮の証拠；慢性の下痢または便秘；粗毛および腹部の膨張；疾患により引き起こされた脱毛領域の拡大；咳、水泡音、喘鳴および鼻汁；明確な横断および/または蒼白(貧血)；顕著に変色した尿、多尿または無尿；任意の開口部からの明らかな出血；持続的な自己誘導性外傷。Cln2(+/-)動物は、Dr. Peter Lobel (Center for Advanced Biotechnology and Medicine, Robert Wood Johnson Medical School, Piscataway, New Jersey, USA)によって親切に提供された。これらの動物は近交系であり、その後の世代をRTPCRによってスクリーニングして、Cln2(+/+)、Cln2(+/-)およびCln2(-/-)株をさらに得た。これらのCln2(-/-)動物は、検出不可能なTPP1活性を有し、運動行動の低下、寿命の減少、CNSにおける神経病理の増加、およびグリア活性化の促進などのヒト疾患の類似の特徴を模倣する(Sleatら、2004)。
【００３７】
ゲムフィブロジル(gem)を用いたCln2(-/-)マウスの処置：同じバックグラウンドに由来する年齢および性別を一致させたCln2(+/+)マウスを野生型(WT)対照として使用し、Cln2(-/-)動物を異なる処置群において使用した。gem(7.5 mg/kg体重/日)を、DMSOに溶解した後、0.1%メチルセルロース(MeC)中に希釈した。生化学試験のために、Cln2(-/-)マウスを、8週間、給餌しなかった(未処置群)、0.1%MeCを強制給餌した(ビヒクル処置群)、またはgem(gem処置群)を強制給餌した。生存試験のために、動物が上記のような瀕死であると考えられない限り、同様の処置レジメンを行った。ここで、1群あたり40匹のマウス(20匹のオスおよび20匹のメス)を使用し、動物(4週齢)を任意の群について無作為に選択した。
【００３８】
自発運動：自発運動を、本発明者らによって記載されたDigiscan Monitor (Omnitech Electronics, Inc., Columbus, OH)を用いて、gem処置の8週後に、Cln2(-/-)マウスにおいて測定した(Khasnavis & Pahan 2014, Ghosh et al. 2007, Ghosh et al. 2009)。このDigiscan Monitorは、水平活動、総移動距離、移動時間、休止時間などの基本的な運動パラメータ、ならびに線条体によって直接制御される常同行動を記録する。簡単に述べると、マウスをそのケージから直接的に取り出し、オープンフィールド装置の特定の角に鼻を最初に優しく置き、放した後、5分間隔でデータ獲得を開始した。DIGISCANソフトウェアを用いて、赤外線ビームにより自動的にモニタリングした、水平および垂直活動データを分析および保存した。ここで、1群あたり12匹の動物を用いた。オープンフィールド試験の後、これらのマウスのうちの6匹(n=6)を、免疫組織化学分析のためにかん流し、4匹のマウス(n=4)をウェスタンブロット分析のために用いた。
【００３９】
免疫組織化学および細胞計数：処置の8週間後、マウスを犠牲にし、その脳を固定、包埋し、プロセッシングした。Leica Cryostatを用いて異なる脳領域(運動皮質および線条体)から切片(30μm)を作製し、新鮮な凍結切片上での免疫蛍光染色を、記載のように実施した(Corbettら、2015、Royら、2015、Royら、2016)。簡単に述べると、ブロッキングバッファー(PBS中の2%BSA)を添加する前に、自己蛍光を減少させるために100mMグリシン中で20分間、切片をインキュベートした。抗体濃度に関する詳細については、表1を参照されたい。試料をマウントし、Olympus IX41蛍光顕微鏡下で観察した。タッチカウンティングモジュールを援用した画像化アプリケーションのためにOlympus Microsuite Vソフトウェアを用いて、計数分析を実施した(Corbettら、2015、Royら、2015)。20倍の対物レンズ下で画像を獲得した後、画像を以下のようにさらに分析した。細胞を計数する前に、画像面積全体を、タッチカウンティングパネルで利用可能な長方形のボックスを援用して較正した。一度、画像の面積を測定したら、タッチカウンティングプログラムを適用して、シンプルマウスクリック法を用いて蛍光シグナルの数を計測した。次に、所与の面積中のシグナルの総数を、画像の総面積で除算し、平方ミリメートル単位あたりの細胞数として提示した。
【００４０】
貯蔵物質の検出：免疫蛍光によりミトコンドリアATPシンターゼ(SCMAS)のサブユニットcをモニタリングすることによって、それを実施した。抗体希釈率に関する詳細については、表1を参照されたい。DAPIを用いて、核をモニタリングした。SCMAS関連蛍光強度を、Olympus Microsuite Vソフトウェアを用いることによって定量した。簡単に述べると、捕捉された画像を、無限画像ビューワー中で開き、顆粒の周囲で輪郭を描き、蛍光強度を取得した。
【００４１】
イムノブロット分析：処置の8週間後、マウスを犠牲にし、皮質および線条体領域を単離し、RIPAバッファー(150 mM塩化ナトリウム、1.0%NP-40またはTriton X-100、0.5%デオキシコール酸ナトリウム、0.1%SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)、50 mM Tris、pH8.0)中でホモジェネートし、上清を取得し、タンパク質をBioRadタンパク質アッセイによって見積もった。組織抽出物に由来する等量のタンパク質を、12%または15%Bis-Trisゲル中で分離し、タンパク質を、Thermo-Pierce Fast Semi-Dry Blotter (Corbettら、2015、Royら、2015、Royら、2016)を用いてニトロセルロース膜(Bio-Rad)上に転移させた。次いで、TBS + Tween 20 (TBST)中で15分間、膜を洗浄し、BSAを含有するTBST中で1時間、ブロックした。次に、膜を、以下のタンパク質：β-アクチン、IL-1Ra、ホスホ-Bad、およびSOCS3のための抗体を用いる振とう条件下、4℃で一晩インキュベートした。抗体希釈率に関する詳細については表1を参照されたい。次の日、膜をTBST中で1時間洗浄し、一次抗体宿主に対する二次抗体(全て1:10,000; Jackson ImmunoResearch)中で1時間インキュベートし、さらに1時間洗浄し、Odyssey(登録商標)Infrared Imaging System (Li-COR, Lincoln, NE)の下で可視化した。
【００４２】
統計分析：全ての値を、平均±SEMとして表す。一元配置分散分析、次いで、TukeyまたはScheffeのポストホック検定、Studentのt検定およびKaplan-Meier生存推定(χ2)を、SPSS19を用いて、データ分析のために用いた。
【００４３】
〔実施例２〕
gem処置はCln2(-/-)マウスにおける寿命を延長させる
Cln2(-/-)マウスは、LINCLに対する新しい治療手法を試験するための重要な動物モデルとして役立つ(Cabrera-Salazarら、2007、Sleatら、2008、Changら、2008、Sleatら、2004)。通常、LINCLは急速に進行し、8〜10歳の間に死に至る(Soharら、1999、Sleatら、1997)。同様に、Cln2(-/-)マウスもまた、140日以内に死亡する(Sleatら、2004)。したがって、第1に、本発明者らは、経口gem処置がCln2(-/-)マウスの寿命を増加させることができるかどうかを検査した。以前に、本発明者らは、経口投与後、gemがCNSに進入することを証明した(Dasguptaら、2007)。マウスを、4週齢から強制摂取によりgem(7.5 mg/kg体重/日)で毎日処置した。gemを0.1%メチルセルロース中に溶解したため、1群のCln2(-/-)マウスにも、ビヒクルとして0.1%のメチルセルロースを投与した。未処置のCln2(-/-)オスおよびメスマウスは、95日目から死に始め、137日以内に、全てのCln2(-/-)マウスが死亡した(図1A)。生存に関しては、本発明者らは、オスとメスのCln2(-/-)マウスの間でいかなる差異も見出さなかった。しかしながら、gem処置したCln2(-/-)マウスは、204日目まで生存し、これは、gemが2ヶ月を超えてCln2(-/-)マウスの寿命を増加させることができることを示唆している(図1A)。他方、全てのビヒクル処置マウスが、150日以内に死亡した(図1A)が、これは、ビヒクルのみによる非常に軽度の保護を示唆している。これらの結果はまた、各マウス群の平均生存日数によっても支持される(図1B)。
【００４４】
〔実施例３〕
gem処置はCln2(-/-)マウスにおける運動行動を改善する
寿命の増加と共に、LINCL患者のための神経保護の別の治療目標は、機能障害を減少させることである。したがって、gemがCln2(-/-)マウスにおける寿命を増加させるだけでなく、運動行動も改善するかどうかを検査するために、本発明者らは、自発運動をモニタリングした。自発運動を、gem処置後8週間モニタリングした。Cln2(-/-)マウスは、WTマウスと比較して水平活動(図2A)、移動時間(図2B)、移動回数(図2C)、総移動距離(図2D)、および常同行動数(図2E)の顕著な減少を示した。他方、休止時間は、WTマウスよりもCln2(-/-)マウスにおいてより多かった(図2F)。しかしながら、gemの経口投与は、Cln2(-/-)マウスにおける自発運動を有意に改善した(図2A〜F)。
【００４５】
〔実施例４〕
gem処置はCln2(-/-)マウスの脳における貯蔵物質量を低下させる
LINCLを含むリソソーム蓄積障害の一般的な特徴の1つは、脳を含む全ての組織における自己蛍光封入体の蓄積である(Boustany 2013、Hachiyaら、2006)。最近、本発明者らは、ゲムフィブロジルがTFEBのPPARα媒介性転写上方調節を介してリソソーム生合成を刺激することができることを詳述した(Ghoshら、2015)。gem処置はCln2(-/-)マウスの寿命を延長し、運動行動を改善するため、本発明者らは、gem処置が運動皮質中、in vivoで貯蔵物質量を減少させることができるかどうかを検査した。予想通り、本発明者らは、WTマウスと比較して、Cln2(-/-)マウスの運動皮質においてミトコンドリアATPシンターゼ(SCMAS)蓄積のサブユニットcの顕著な増加を観察した(図3A〜B)。しかしながら、Cln2(-/-)マウスのgem処置は、SCMASの有意な減少をもたらした(図3A〜B)。ビヒクル処置は貯蔵物質のそのような減少をもたらさなかったため、これらの結果は特異的であった(図3A〜B)。
【００４６】
〔実施例５〕
gem処置はCln2(-/-)マウスの脳における神経細胞アポトーシスを防止する
他の神経変性障害において見られるように(Cotman & Anderson 1995、Saha & Pahan 2006)、アポトーシスはまた、LINCLにおける神経変性も担っている(Dharら、2002、Puranamら、1997、Laneら、1996)。したがって、本発明者らは、gem処置がCln2(-/-)マウスのCNSにおいて神経細胞アポトーシスを抑制することができるかどうかを検査した。NeuN陽性ニューロンがCln2(-/-)マウスの運動皮質においてアポトーシスを受けたことが図4A〜Bから明らかである。
【００４７】
しかしながら、gemの経口処置は、運動皮質においてin vivoで神経細胞アポトーシスを強く阻害した(図4A〜B)。ビヒクル(0.1%メチルセルロース)処置は神経細胞アポトーシスを抑制しなかったため、これらの結果は特異的である(図4A〜B)。BADはアポトーシス分子であるが、BADのリン酸化は、細胞生存を支援することが公知である(Dattaら、1999、Dattaら、2002)。したがって、本発明者らは、Cln2(-/-)マウスの運動皮質におけるホスホ-BAD(P-BAD)のレベルを検査した。アポトーシスの増加と一致して、P-BADのレベルは、Cln2(-/-)マウスの運動皮質において減少した(図4C〜D)。しかしながら、ビヒクルではなく、gemによるCln2(-/-)マウスの処置は、P-BADの上方調節をもたらした(図4C〜D)。gemの効果が運動皮質に限られるのか、または脳の他の部分もgem処置によって利益を受けるのかを理解するために、本発明者らは、線条体におけるアポトーシスをモニタリングした。運動皮質と同様、本発明者らはまた、Cln2(-/-)マウスの線条体においてアポトーシスの増加(図5A〜B)およびP-BADの減少(図5C〜D)を観察した。しかしながら、gem処置は、線条体においてin vivoで神経細胞アポトーシスを減少させ(図5A〜B)、P-BADのレベルを増加させた(図5C〜D)が、これは、経口gem処置がCln2(-/-)マウスの脳の異なる部分においてアポトーシスを抑制することができることを示唆している。
【００４８】
〔実施例６〕
gemはCln2(-/-)マウスの脳における抗炎症因子のレベルを増加させる
本発明者らは、gemが抗炎症性であり(Jana & Pahan 2012、Janaら、2007、Pahanら、2002)、gemが様々な脳細胞において、抗炎症因子であるSOCS3およびIL-1Raのレベルを増加させる(Corbettら、2012、Ghosh & Pahan 2012b)ことを証明した。したがって、ここで、本発明者らは、gem処置が、Cln2(-/-)マウスの脳においてin vivoでこれらの抗炎症分子を上方調節することができるかどうかを精査した。12週齢で、本発明者らは、週齢を一致させたWTマウスと比較して、Cln2(-/-)マウスの運動皮質(図6A〜C)および線条体(図6D〜F)においてSOCS3およびIL-1Raの減少を観察した。しかしながら、ビヒクルではなく、gemによる経口処置の8週後に、Cln2(-/-)マウスの運動皮質と線条体との両方において、SOCS3(図6A、B、DおよびE)およびIL-1Ra(図6A、D、CおよびF)の増加が見られた。これらの知見をさらに確認するために、次に、本発明者らは、線条体切片において二重標識免疫蛍光を実施した。本発明者らは、WTマウスと比較してCln2(-/-)マウスの線条体切片においてより多くのアストログリア(図7A）およびミクログリア(図7B)を観察したが、後者と比較して前者において、SOCS3の喪失があった(図7A〜C)。しかしながら、ウェスタンブロットの結果と同様、gem処置の後にCln2(-/-)マウスの線条体においてSOCS3の顕著な増加が見られた(図7A〜C)。SOCS3のこの増加は、アストロサイト(図7AおよびD)、ミクログリア(図7BおよびE)ならびに他の脳細胞(図7)において可視的であった。SOCS3と同様、本発明者らは、WTマウスと比較してCln2(-/-)マウスの線条体におけるIL-1Raの喪失にも気付いた(図8A〜E)。しかしながら、ビヒクルではなく、gemによるCln2(-/-)マウスの処置は、線条体におけるIL-1Raの回復および/または上方調節をもたらした(図8A〜E)。また、Cln2(-/-)マウスの線条体におけるin vivoでのIL-1Raのgemにより誘導される増加は、アストロサイト(図8AおよびD)とミクログリア(図8BおよびE)との両方において見られた。興味深いことに、Cln2(-/-)マウスの運動皮質と線条体との両方において、本発明者らは、gem処置後にアストログリアまたはミクログリアのいかなる減少も観察しなかった(図7および8)が、これは、一度、アストログリア生成またはミクログリア生成がCln2(-/-)マウスにおいて見られたような慢性神経変性状態の脳においてin vivoで生じたら、ゲムフィブロジル処置は、その数を減少させることなく、抗炎症モードに向かってその機能をモジュレートし得るに過ぎないことを示唆している。
【００４９】
実施例2〜6の考察
Cln2の突然変異は、TPP1酵素の機能の欠損および/または喪失をもたらし、最終的には、LINCLを引き起こす(Bellettato & Scarpa 2010、Walusら、2010、Soharら、1999)。酵素補充療法および遺伝子療法の臨床試験が進行中であるが、確立された薬物媒介療法は、LINCLについては現在のところ利用可能ではない。したがって、LINCL患者の疾患進行を遅延させる、運動機能を改善する、およびその生存を増加させるための神経保護的治療手法の開発は、最重要である。Cln2(-/-)マウスは、LINCLのための新しい治療戦略の決定および新規薬物の効能の試験において有用である。ここで、本発明者らは、ヒトにおける高脂血症のためのFDAに認可された薬物であるゲムフィブロジル(gem)が、Cln2(-/-)マウスの運動機能を改善し、その寿命を延長することを初めて証明する。最近、本発明者らは、ゲムフィブロジルが、培養されたマウスおよびヒトの脳細胞ならびにマウスの脳においてin vivoで、PPARα/RXRα経路を介して、TPP1を上方調節することができることを詳述した(Ghoshら、2012)。しかしながら、Cln2(-/-)マウスにはTPP1は存在しない。したがって、この場合、gemは、Cln2(-/-)マウスにおいて疾患進行を遅延させるために、TPP1に依存しない機構を用いている。
【００５０】
LINCLを含むLSDの発症機序における自己蛍光貯蔵物質の重要性は公知ではないが、これらの封入体は、LSDの特質の1つである(Boustany 2013)。最近、本発明者らは、gemがTFEBのPPARα媒介性転写活性化を介してリソソーム生合成を刺激することができることも証明した(Ghoshら、2015)が、これは、gem処置による貯蔵物質の減少の可能性を示唆している。したがって、gemは、Cln2(-/-)マウスの運動皮質に由来する貯蔵物質を減少させることができた。したがって、TPP1(分解経路における必須酵素)が存在しない場合であっても、gemは、他のリソソーム酵素のTFEB媒介性活性化を介して自食クリアランスを刺激することができる。以前に、本発明者らは、LINCLを有する患者の皮膚線維芽細胞において、ゲムフィブロジルとレチノイン酸との組合せが、疾患状態とは無関係にリソソーム生合成を増加させることを証明した(Ghoshら、2015)。
【００５１】
神経細胞アポトーシスは、リソソーム蓄積障害などの公知の神経変性疾患の多くの特質である(Dharら、2002、Puranamら、1997、Laneら、1996)。gemによるCln2(-/-)マウスのCNSの様々な部分における神経細胞アポトーシスの強力な阻害は、gemのこの抗アポトーシス特性がこれらのマウスにおけるその寿命延長効能に寄与し得ることを示唆する。BCL-2ファミリーのメンバーであるBADは、アポトーシスの重要な調節因子である(Dattaら、1999、Dattaら、2002)。非リン酸化型BADは、生存タンパク質Bcl-xおよびBcl-2とヘテロ二量体を形成することによって、他の2つのアポトーシス促進タンパク質であるBAKおよびBAXが凝集し、シトクロムcの放出を誘導することができるようにすることによって、アポトーシスを誘導することが知られている(Dattaら、1999、Dattaら、2002)。他方、リン酸化型BADは、14-3-3に結合することによって細胞質中に隔離され、それによって、細胞生存を可能にする。ここで、本発明者らは、gem処置は、Cln2(-/-)マウスの運動皮質および線条体におけるP-BADのレベルを回復する/上方調節することを証明した。BADのリン酸化をもたらすシグナル伝達機構は、明らかになってきている。ホスファチジルイノシトール-3キナーゼ(PI3K)は、細胞生存を含む幅広い生物学的応答の調節に関与する重要なシグナル伝達分子である(Koyasu 2003)。いくつかの研究が、PI3Kの活性化がAktを介してBADのリン酸化をもたらすことを示した(Ellert-Miklaszewskaら、2005、Liら、2001)。興味深いことに、gemは、脳細胞においてp85α関連IA型PI3Kの活性化を誘導する(Janaら、2007)。したがって、gemは、PI3K-(P)BAD経路を介してCln2(-/-)マウスのCNSにおけるアポトーシスを抑制することができる。
【００５２】
CNSにおけるアポトーシスには多くの原因があるが、神経炎症は重要なものである。したがって、活性化されたグリア細胞により媒介される慢性炎症は、LINCLを含むいくつかの神経変性障害の特質になっている(Shyng & Sands 2014、Cooperら、2015、Macauleyら、2014)。炎症性サイトカインであるIL-1βは、神経変性疾患の発症に関与している。IL-1βはその高親和性受容体であるIL-1Rに結合し、炎症性シグナル伝達経路を上方調節するが、IL-1Rアンタゴニスト(IL-1Ra)は同じ受容体に付着し、炎症性細胞シグナル伝達を阻害する(Basuら、2004)。同様に、サイトカインシグナル伝達の抑制因子(SOCS)タンパク質もまた、グリア細胞を含む様々な細胞型におけるサイトカインシグナル伝達および炎症遺伝子発現の阻害において重要な役割を果たしている(Bakerら、2009、Chenら、2000)。したがって、IL-1RaおよびSOCSの上方調節は、炎症を減弱させるのに重要であると考えられる。最近、本発明者らは、gemがKLF4のPI3K媒介性活性化を介してグリア細胞中のSOCS3を上方調節すること (Ghosh & Pahan 2012b)およびgemがCREBのPI3K媒介性活性化を介してIL-1Raを増加させること(Corbettら、2012)を見出した。gem処置が、Cln2(-/-)マウスの線条体および皮質におけるSOCS3とIL-1Raの両方のレベルを増加させたことを見るのは重要である。したがって、これらの重要な抗炎症分子を上方調節することによって、gemはCln2(-/-)マウスにおいて保護を示し、疾患開始を遅延させることができる。
【００５３】
gemは、他の有望な神経保護剤を超えるいくつかの利点を有する。例えば、gemは、経口薬であり、かなり非毒性的である(Backesら、2007、Roy & Pahan 2009、Pahan 2006)。それは、ヒトおよび動物試験において良好に許容された。薬学においては「ロピッド」として知られ、1981年のFDA認可以来、それはヒトにおいて一般的に用いられる脂質低下薬である。Veterans Affairs High-Density Lipoprotein Intervention Trial (VA-HIT)は、優勢な脂質異常が低いHDL-Cである場合、患者においてgemにより冠動脈心疾患イベントが有意に減少すると報告した(Robinsら、2001)。二重盲検、無作為化、プラセボ対照試験において、この薬物は、パターンAと比較して低密度リポタンパク質パターンBと分類される正脂血性対象において低分子低密度リポタンパク質をより多く減少させることが示された(Superkoら、2005)。別の最近の試験は、低密度リポタンパク質およびHDL粒子サブクラスが、gem療法により好ましく変化することを示した(Otvosら、2006)。gemはまた、代謝症候群を有する小児集団において合理的な安全性で、トリグリセリドを低下させ、HDLを上昇させる(Smalley & Goldberg 2008)。
【００５４】
まとめると、本発明者らは、ヒトにおけるFDAに認可された脂質低下薬であるゲムフィブロジルが、Cln2(-/-)マウスの貯蔵物質を減少させ、抗炎症分子を上方調節し、神経細胞アポトーシスを抑制し、寿命を増加させることを証明した。Cln2(-/-)マウスの脳のin vivoでの状況およびgemによるその処置は、LINCLを有する患者におけるin vivoでの神経変性状況と本当に類似しているわけではないが、本発明者らの結果は、LINCL患者における寿命を延長させる可能性のある治療剤としてgemを同定する。
【００５５】
上記の図面および開示は、例示的なものであり、包括的なものではないことが意図される。本明細書は、当業者に対して多くの変更および代替物を示唆する。全てのそのような変更および代替物は、添付の特許請求の範囲内に包含されることが意図される。当業者であれば、等価物もまた添付の特許請求の範囲によって包含されることが意図される本明細書に記載の特定の実施形態に対する他の等価物を認識することができる。
【００５６】
【表１】
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【００５７】
参考文献
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【００５８】
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【００５９】
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【００６０】
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【００６１】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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