(57)【要約】  ミルセンを、場合によりカンナビノイド及び他のテルペンと混合して含み、典型的にはTHC及びTHCAを実質的に含まない、TRPV1受容体を標的にする医薬組成物が提供される。医薬組成物を用いて、疼痛、心臓肥大等の心血管疾患、過活動膀胱、慢性咳を治療するためにTRPV1受容体を脱感作する方法も提供される。【選択図】図６Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミルセン、及び
薬学的に許容される担体又は希釈剤
を含有し、
ミルセン以外の少なくとも１種のカンナビノイド及び／又はテルペンを含有してもよい医薬組成物であって、 
20種以下の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物を含み、実質的にTHCを含まない、医薬組成物。
【請求項２】
15種以下のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
10種以下のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
5種以下のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ミルセンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10%(w/w)の量で存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ミルセンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも20%(w/w)の量で存在する、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ミルセンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも25%(w/w)の量で存在する、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ミルセンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも50%(w/w)の量で存在する、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ミルセンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも75%(w/w)の量で存在する、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ミルセンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも90%(w/w)の量で存在する、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
ネロリドールを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ネロリドールが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2%(w/w)の量で存在する、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ネロリドールが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
ネロリドールが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)の量で存在する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ネロリドールが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも7.5%(w/w)の量で存在する、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ネロリドールが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10%(w/w)の量で存在する、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
カンナビゲロール酸(CBGA)を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
CBGAが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10%(w/w)の量で存在する、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
CBGAが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも15%(w/w)の量で存在する、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
CBGAが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも20%(w/w)の量で存在する、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
CBGAが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも25%(w/w)の量で存在する、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
カンナビジオール(CBD)を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
CBDが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
CBDが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)の量で存在する、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
CBDが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも7.5%(w/w)の量で存在する、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
CBDが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10%(w/w)の量で存在する、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
カンナビジバリン(CBDV)を含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
CBDVが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)の量で存在する、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
CBDVが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも7.5%(w/w)の量で存在する、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
CBDVが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10%(w/w)の量で存在する、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
カンナビクロメンを含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
カンナビクロメンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも1%(w/w)の量で存在する、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
カンナビクロメンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも1.5%(w/w)の量で存在する、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
カンナビクロメンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2%(w/w)の量で存在する、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
カンナビクロメンが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する、請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
カンナビジオール酸(CBDA)を含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
CBDAが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
CBDAが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)の量で存在する、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
CBDAが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも7.5%(w/w)の量で存在する、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
カンナビゲロール(CBG)を含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
CBGが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
CBGが、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)の量で存在する、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
ミルセンが、組成物中に0.025%〜5%(w/v)の濃度で存在する、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
ミルセンが、組成物中に0.025%〜2.5%(w/v)の濃度で存在する、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
ミルセンが、組成物中に0.025%〜1%(w/v)の濃度で存在する、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
ミルセン以外のカンナビノイド及びテルペン化合物が、ミルセン依存性TRPV1カルシウム流を増加させるのに有効な量で存在する、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
局所投与用に製剤化されている、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
経口、口腔内、又は舌下投与用に製剤化されている、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
静脈内、筋肉内、又は皮下投与用に製剤化されている、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
吸入による投与用に製剤化されている、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
気化器、ネブライザー、又はエアロゾライザーによる投与用に製剤化されている、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
哺乳動物対象の細胞においてTRPV1脱感作をもたらす方法であって、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物を、対象内の細胞においてTRPV1脱感作を引き起こすのに十分な量で、投与経路によって、且つ期間にわたり対象に投与することを含む、方法。
【請求項５３】
細胞が侵害受容器である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
侵害受容器が末梢侵害受容器である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
侵害受容器が内臓侵害受容器である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
医薬組成物が局所投与される、請求項５３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
医薬組成物が全身投与される、請求項５３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
医薬組成物が静脈内投与される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
医薬組成物が皮下投与される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
医薬組成物が吸入により投与される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
哺乳動物対象の疼痛を治療する方法であって、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物を、対象内の侵害受容器においてTRPV1脱感作を引き起こすのに十分な量で、投与経路によって、且つ期間にわたり対象に投与することを含む、方法。
【請求項６２】
侵害受容器が末梢侵害受容器であり、医薬組成物が局所投与される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
侵害受容器が内臓侵害受容器であり、医薬組成物が全身投与される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
疼痛が神経障害性疼痛である、請求項６１〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
神経障害性疼痛が糖尿病性末梢神経障害性疼痛である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
疼痛が帯状疱疹後神経痛である、請求項６１〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
医薬組成物が、少なくとも３日間、少なくとも１日１回投与される、請求項６１〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
医薬組成物が、少なくとも５日間、少なくとも１日１回投与される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
医薬組成物が、少なくとも７日間、少なくとも１日１回投与される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
医薬組成物が、７日を超える期間、少なくとも１日１回投与される、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
医薬組成物が、侵害受容器におけるミルセンの有効レベルを少なくとも３日間維持するのに十分な用量で、投与経路によって、且つスケジュールにて投与される、請求項６１〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
医薬組成物が、侵害受容器におけるミルセンの有効レベルを少なくとも５日間維持するのに十分な用量で、投与経路によって、且つスケジュールにて投与される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
医薬組成物が、侵害受容器におけるミルセンの有効レベルを少なくとも７日間維持するのに十分な用量で、投与経路によって、且つスケジュールにて投与される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
哺乳動物対象の心臓肥大を治療する方法であって、対象に、抗肥大有効量の請求項１〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項７５】
医薬組成物が全身投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
医薬組成物が静脈内投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
医薬組成物が皮下投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
医薬組成物が吸入により投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
医薬組成物が経口投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
哺乳動物対象の心臓肥大を予防的に治療する方法であって、心臓肥大のリスクのある対象に、抗肥大有効量の請求項１〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項８１】
哺乳動物対象の過活動膀胱を治療する方法であって、対象に、治療有効量の請求項１〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項８２】
医薬組成物が全身投与される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
医薬組成物が膀胱灌注により投与される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
哺乳動物対象の難治性の慢性咳を治療する方法であって、対象に、治療有効量の請求項１〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項８５】
医薬組成物が全身投与される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
医薬組成物が吸入により投与される、請求項８５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
1. 関連出願の相互参照
本出願は、2017年5月22日に出願された米国仮出願第62/509,546号の利益を主張し、この出願はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
TRPV1、TRPM8、TRPA1などの一過性受容体スーパーファミリー(TRP)のチャネルは、哺乳動物の様々な細胞型にカルシウム及びナトリウムを導く非選択的カチオンチャネルである。それらは感覚ニューロン上に存在し、侵害模倣(nociomimetic)である植物二次代謝産物(例えば、カプサイシン)及びそうでなければ刺激性であり、熱感又は冷感を模倣する化合物(例えば、アリシン、シンナムアルデヒド、メントール)に対する分子レベルでの応答性のために、最初、侵害受容において役割を果たすと同定された。
【０００３】
侵害受容における役割のため、TRPチャネルは疼痛障害を治療するための標的として特定されている。TRPチャネルのアンタゴニズムとアゴニズムの両方が、疼痛管理に活用されている。例えば、TRPV1アンタゴニストは、急性鎮痛に有用である。慢性疼痛管理には、通常、TRPV1アゴニストが使用されている。この後者の戦略は、TRPV1受容体アゴニズムの継続が細胞表面での脱感作(受容体インターナリゼーション、分解及びリサイクル)を引き起こすという事実を利用している。また、TRPV1の長期アゴニズムは、TRPV1を含む感覚ニューロンのカルシウム及びナトリウムカチオン過負荷を引き起こし、細胞死を引き起こす。
【０００４】
実際には、脱感作をもたらすためのTRPV1アゴニストの使用は、患部への、周知のTRPV1アゴニストであるカプサイシンの高レベルでの長期にわたる繰り返しの局所的適用を含む。この治療的アプローチには、有効性と低コストという利点がある。しかし、弱点もある。
【０００５】
第一に、高親和性及び高特異性TRPV1アゴニストは、TRPV1を含む侵害受容器のみを標的とし、他の感覚ニューロン及び痛みに関与するTRPチャネルはそのまま放置する。第二に、カプサイシンなどの高親和性及び高特異性TRPV1アゴニストの使用は、脱感作前の期間の、初期治療中に高レベルの不快感を引き起こす。そういう理由で、胃粘膜や生殖管粘膜などの敏感な領域に対する治療の刺激性が高いため、現在は、TRPV1を介した脱感作を使用してヘルペス後の痛みに対処できない。第三に、カプサイシンを介した脱感作治療は、局所使用に限定されている。この療法は、内臓痛、頭痛、及び特定の筋骨格痛障害には、対処していない。
【０００６】
したがって、カプサイシンよりも親和性が低い、TRPV1アゴニストなどの治療用TRPV1リガンドが必要とされている。このような低親和性リガンドは、脱感作中の痛みを軽減し、それにより敏感な身体領域の局所治療を可能にする。複数のタイプのTRPをもつ侵害受容器を標的とすることができ、それにより組織の脱感作の程度を改善できる、より広い標的特異性を備えたTRPV1リガンドが必要とされている。また、局所適用に加えて、全身投与に適したTRPV1リガンドも必要とされている。
【０００７】
このような新しい薬は、痛み以外のTRPV1に関連する様々な疾患の治療にも役立つだろう。TRPチャネルは痛みと侵害受容に関与することが最初に示されたが、現在では他の様々な生理学的役割があることが知られており、他の疾患の治療の標的になり得ることを示唆している。例えば、TRPチャネルは心血管疾患の治療の標的として特定されており、TRPV1の標的化された薬理学的阻害は、マウスモデルで心臓肥大を有意に減少させることが示されている。米国特許第9,084,786号参照。したがって、TRPV1アゴニストを用いた受容体脱感作によるTRPV1レベルの慢性的なダウンレギュレーションは、心臓肥大及びそれに関連する症状と結果(心臓リモデリング、心臓線維化、アポトーシス、高血圧、又は心不全)を同様に保護し、救出する可能性があることが期待される。しかし、現在、全身投与に適しており、臓器のTRPV1の慢性的なダウンレギュレーションに適しているTRPV1アゴニストはないので、上記の慢性疼痛アプローチに類似した方法でそのようなアプローチを開発する必要がある。
【発明の概要】
【０００８】
よって、TRPV1アンタゴニスト及びTRPV1アゴニストとして作用する新しい化合物を見出す必要がある。このような新しい化合物は、疼痛障害や心血管疾患など、TRPV1チャネルに関連する様々な疾患を治療するための新規でより効果的な方法を提供する。
【０００９】
2. 概要
カンナビス(Cannabis、大麻)は鎮痛を提供し、様々な種類の痛みを治療するために、数千年間使用されている。以下の実験例でさらに詳しく説明するように、既知の薬用カンナビスの化学プロファイルに基づいてモデル化されたテルペンとカンナビノイドの複合混合物を使用して、本発明者らは、カンナビスがTRPV1受容体を介して抗侵害受容効果を少なくとも部分的に発揮することを実証した。さらに、本発明者らは、観察されたTRPV1アゴニズムにミルセンが大きく寄与し、カプサイシンと同様に、長期暴露後にTRPV1脱感作を引き起こすことを実証した。
【００１０】
また、複合混合物中に存在する他のテルペン及びカンナビノイドは、それ自体では有意なTRPV1アゴニスト活性を示さないものを含め、共同して作用してミルセンの効力を高めることも実証された。カンナビス様の「環境(entourage)」が少なくとも一部機能して、多剤耐性タンパク質を介した生理活性リガンドであるミルセンの排出(export)がブロックされることも実証された。
【００１１】
最後に、ミルセンのより広範な治療の可能性を評価するために、GB SciencesのNetwork Pharmacology Platform(「NPP」)と呼ばれる独自のin silico予測法を使用して、ミルセンのターゲット分析及び疾患予測ネットワークを作成した。TRPV1に加えてネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの有効性が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRP受容体である他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【００１２】
したがって、第１の態様において、医薬組成物が提供される。医薬組成物は、ミルセン及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む。この組成物は、場合により、ミルセン以外の少なくとも１種のカンナビノイド及び／又は少なくとも１種のテルペンを含んでいてもよい。組成物は20種以下の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物を含み、実質的にTHCを含まない。
【００１３】
一部の実施形態において、組成物は、15種以下のカンナビノイド及びテルペン化合物、10種以下のカンナビノイド及びテルペン化合物、又は5種以下のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む。
【００１４】
一部の実施形態において、ミルセンは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10％(w/w)、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも20％(w/w)、又はカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも25％(w/w)の量で存在する。ある実施形態において、ミルセンは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも50%(w/w)、75%(w/w)、又は少なくとも 90%(w/w)の量で存在する。
【００１５】
一部の実施形態において、医薬組成物はネロリドールを含む。特定のこれらの実施形態において、ネロリドールは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2%(w/w)、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で、あるいはカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)、7.5%(w/w)、又は10% (w/w)の量でも存在する。
【００１６】
一部の実施形態において、医薬組成物は、カンナビゲロール酸(CBGA)を含む。ある実施形態において、CBGAは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10%(w/w)の量で存在する。特定の実施形態において、CBGAは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも15%(w/w)、20%(w/w)、又は25%(w/w)の量で存在する。
【００１７】
一部の実施形態において、医薬組成物はカンナビジオール(CBD)を含む。ある実施形態において、CBDは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する。特定の実施形態において、CBDは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)、7.5%(w/w)、又は10%(w/w)の量で存在する。 
【００１８】
一部の実施形態において、医薬組成物はカンナビジバリン(CBDV)を含む。ある実施形態において、CBDVは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)の量で存在する。特定の実施形態において、CBDVは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも7.5%(w/w)又は10%(w/w)の量で存在する。
【００１９】
一部の実施形態において、医薬組成物は、カンナビクロメンを含む。ある実施形態において、カンナビクロメンは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも1%(w/w)、1.5(w/w)、2%(w/w)、又は2.5%(w/w)の量で存在する。
【００２０】
一部の実施形態において、医薬組成物は、カンナビジオール酸(CBDA)を含む。様々な実施形態において、CBDAは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する。ある実施形態において、CBDAは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)又は7.5%(w/w)の量で存在する。
【００２１】
一部の実施形態において、医薬組成物は、カンナビゲロール(CBG)を含む。ある実施形態において、CBGは、カンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)、又は5%(w/w)の量で存在する。
【００２２】
様々な実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中に、0.025%〜5%(w/v)の濃度で存在する。一部の実施形態において、ミルセンは、組成物中に、0.025%〜2.5%(w/v)、又は0.025%〜1%(w/v)の濃度で存在する。
【００２３】
現在好ましい実施形態において、ミルセン以外のカンナビノイド化合物及びテルペン化合物は、存在する場合、ミルセン依存性TRPV1カルシウム流を増加させるのに有効な量で存在する。
【００２４】
様々な実施形態において、医薬組成物は、局所投与用に製剤化されている。様々な実施形態において、医薬組成物は、経口、口腔内、又は舌下投与用に製剤化されている。一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、又は皮下投与用に製剤化されている。
【００２５】
ある実施形態において、医薬組成物は、吸入による投与用に製剤化されている。特定の実施形態において、医薬組成物は、気化器、ネブライザー、又はエアロゾライザーによる投与用に製剤化されている。
【００２６】
別の態様において、哺乳動物対象の細胞においてTRPV1脱感作をもたらす方法が提供される。この方法は、本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を、対象内の細胞においてTRPV1脱感作を引き起こすのに十分な量で、投与経路により、且つ期間にわたって、対象に投与することを含む。
【００２７】
この方法のある実施形態において、細胞は侵害受容器である。特定の実施形態において、侵害受容器は末梢侵害受容器である。特定の実施形態において、侵害受容器は内臓侵害受容器である。
【００２８】
この方法の様々な実施形態において、医薬組成物は局所投与される。
【００２９】
一部の実施形態において、医薬組成物は全身投与される。ある全身投与の実施形態において、医薬組成物は静脈内投与される。他の実施形態において、医薬組成物は皮下投与される。他の実施形態において、医薬組成物は、吸入により投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、複数の投与経路により投与される。
【００３０】
別の態様において、哺乳動物対象の疼痛を治療する方法が提供される。この方法は、本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を、対象内の侵害受容器においてTRPV1脱感作を引き起こすのに十分な量で、投与経路によって、且つ期間にわたり、対象に投与することを含む。
【００３１】
一部の実施形態において、侵害受容器は末梢侵害受容器であり、医薬組成物は局所投与される。一部の実施形態において、侵害受容器は内臓侵害受容器であり、医薬組成物は全身投与される。
【００３２】
一部の実施形態において、疼痛は神経障害性疼痛である。特定の実施形態において、神経障害性疼痛は糖尿病性末梢神経障害性疼痛である。ある実施形態において、疼痛は帯状疱疹後神経痛である。
【００３３】
様々な実施形態において、医薬組成物は、少なくとも３日間、少なくとも５日間、又は少なくとも７日間、少なくとも１日１回投与される。特定の実施形態において、医薬組成物は、７日を超える期間、少なくとも１日１回投与される。
【００３４】
様々な実施形態において、医薬組成物は、侵害受容器におけるミルセンの有効レベルを少なくとも３日間、少なくとも５日間、又は少なくとも７日間維持するのに十分な用量で、投与経路により、且つスケジュールにて投与される。
【００３５】
別の態様において、哺乳動物対象の心臓肥大を治療する方法が提供される。この方法は、対象に、抗肥大有効量の本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を投与することを含む。
【００３６】
典型的な実施形態において、医薬組成物は全身投与される。特定の実施形態において、医薬組成物は静脈内投与される。ある実施形態において、医薬組成物は皮下投与される。ある実施形態において、医薬組成物は吸入により投与される。ある実施形態において、医薬組成物は経口投与される。
【００３７】
関連の態様において、哺乳動物対象の心臓肥大を予防的に治療する方法が提供される。この方法は、心臓肥大のリスクのある対象に、抗肥大有効量の本明細書に記載のミルセン含有医薬組成を投与することを含む。
【００３８】
さらなる態様において、哺乳動物対象の過活動膀胱を治療する方法が提供される。この方法は、対象に、治療有効量の本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を投与することを含む。
【００３９】
一部の実施形態において、医薬組成物は全身投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は膀胱灌注により投与される。
【００４０】
さらに別の態様において、哺乳動物対象の難治性の慢性咳を治療する方法が提供される。この方法は、治療有効量の本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を慢性咳を有する対象に投与することを含む。
【００４１】
一部の実施形態において、医薬組成物は全身投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は吸入により投与される。
【００４２】
本明細書にさらに記載されるように、カンナビノイド及びテルペンの独自の混合物を追加することにより、ミルセンなどの主要治療薬の比活性を高める方法が提供される。理論に束縛されることを望まないが、活性薬学的成分に含まれる追加の化合物は、標的細胞型において構成的に活性な多剤耐性タンパク質、MRP、トランスポーターファミリーによって媒介される一般的な分子輸送経路を阻害する。
【００４３】
典型的な実施形態において、ミルセン含有複合混合物は、カンナビス属種(Cannabis spp.)から同定され、広く2つのグループ：(a)カンナビノイド及び(b)テルペン、に分けられる複数の化合物を含む。植物中のこれらの化合物の濃度は、カンナビス株(Cannabis strains)、品種、時間、栽培方法及び環境条件等にわたって広く変動する。これらの化合物間の複雑な相互作用は、植物から臨床への転換が簡単ではないことを意味し、治療的に望ましい組成の混合物の脱構築、最適化及び再構築に対する必要性を明確に示す。本開示は、脱構築、最適化及び再構築プロセスにより治療的に望ましい組成物を同定するための方法、並びにこの方法により同定される組成物を提供することによってこのニーズを満たす。
【００４４】
上記で要約したように、本明細書に記載の医薬組成物は、TRPV1を含むがこれに限定されないTRPチャネルが関与する様々な疾患の治療に有効である。いくつかの態様において、医薬組成物は、ヒト及び他の哺乳動物における慢性及び急性の疼痛の治療及び予防、心臓肥大の治療、心臓肥大の予防的治療、心血管疾患の他の側面の治療、 過活動膀胱の治療、及び慢性咳の治療に使用することができる。
【００４５】
特に、本明細書に開示されているミルセン含有医薬組成物は、様々な疼痛障害を治療及び予防する新規且つ効果的な方法を提供する。そのような障害は、限定するものではないが、片頭痛及びその他の重篤な頭痛、関節炎及びその他の関節痛、線維筋痛、子宮内膜症、過敏性腸症候群、慢性間質性膀胱炎、外陰部痛、外傷又は術後痛、腰痛及びその他の筋骨格障害、顎関節障害、帯状疱疹、鎌状赤血球症、心疾患(狭心症)、がん、脳卒中、糖尿病、帯状疱疹後の痛み等を含む。
【００４６】
混合物は、当該技術分野で利用可能な他の疼痛アプローチに取って代わるか、又は補完することが期待される。第一に、現在利用可能なアプローチは、皮膚(dermal)及び内臓又は内部の両方の部位でTRPV1などのイオンチャネルを標的にすることはできない。第二に、本発明の化合物及び混合物は、カンナビス植物の二次メタボローム由来の複合混合物の使用により、多剤耐性タンパク質媒介性排出などの経路を介してリガンド流出を減少させることによりTRPチャネルを活性化し、主要リガンドの低用量の投与スケジュールの実施の可能性を提供する。第三に、敏感な粘膜を非常に刺激性の高い用量のカプサイシンに曝露する必要がある帯状疱疹後疼痛に対するTRPV1媒介アプローチの可能性は、本明細書に記載の医薬組成物により改善され得る。
【００４７】
さらに、本発明の化合物及びそれらの混合物は、以下のように、依然として不完全である、当技術分野で利用可能なマリファナベースの医薬品に取って代わるか、又は補完することが期待される：第一に、本方法は、疼痛治療用の所望のカンナビノイド/テルペン組成物に「的を絞って(home in)」おり、これは、後に治療的適用のための特注の合成組成物において、又は特定の天然カンナビス株/品種の利点の判定/評価のいずれかにおいて示され得、ほぼ事例証拠に基づく現在の処方又は株選択の方法論を超える改善である。第二に、本方法は、一貫して無汚染様式で製造し得る合成組成物の設計を提供し、これは、(植物間の生育条件の差異、遺伝子的な/エピジェネティックな及び代謝的な相違、並びに抽出方法の差異に起因して)バッチ間の一貫性が保証されず、微生物的汚染及び化学的汚染が持続的な問題である医療用マリファナ製造工程の現在の状況を超える改善である。第三に、本明細書中で示される特注混合物は、主要向精神活性カンナビノイドであるデルタ-9テトラヒドロカンナビノール(THC)を含まないか、又は実質的に含まない。従って、これらの混合物は、一般に利用可能であるため、医療マリファナと比較して規制的負担及び倫理的負担が軽減される。さらに、カンナビス（大麻）の中毒性又は強化の可能性は主要向精神活性成分の存在にある可能性が高いため、本明細書に記載の特注の混合物は、患者の中毒の可能性の減少に基づいて、疼痛に対するオピオイドベースの治療を超える改善をもたらす。したがって、本発明は、様々な疼痛障害の治療及び予防に大きな価値を有する。
【００４８】
さらに、本明細書に開示されるミルセン含有混合物は、心臓リモデリング、心臓線維化、アポトーシス、高血圧、又は心不全のプロセスを含む、心臓肥大を含む心血管疾患を治療するための新しい方法を提供する。
【００４９】
本明細書に開示される化合物及び混合物は、以下：(1)内臓部位でTRPV1をダウンレギュレートするための治療的アプローチの必要性、及び(3)心臓リモデリング、心臓線維化、アポトーシス、高血圧、又は心不全のプロセスを減少又は逆転させる治療的アプローチの必要性、のように依然として不完全である当技術分野で利用可能な他の心血管治療アプローチに取って代わるか、又は補完することが期待される。したがって、本発明は、様々な心血管障害の治療及び予防に対して潜在的な価値を有する。
【００５０】
本発明のこれらの態様及び他の態様を、以下でさらに詳細に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
3. 図面の簡単な説明
【図１】図1は、TRPV1を含まない細胞型におけるTRPV1の誘導性発現が、細胞にカプサイシン感受性カルシウム流応答をもたらすことを示している。ここで、テトラサイクリン誘導性プロモーターの制御下にラットTRPV1遺伝子でトランスフェクトされたHEK細胞を、テトラサイクリンを1マイクロモルで16時間適用することにより、TRPV1遺伝子を転写し、TRPV1タンパク質を合成するように誘導した。カプサイシンはTRPV1の特異的リガンドであるため、このことにより、以下の試験で使用された実験システムが、明確かつ具体的にTRPV1特異的カルシウム流を報告するものであることが確立される。
【００５２】
【図２】図2A-2Cは、カンナビス由来のカンナビノイド及びテルペンの混合物によって誘発されたTRPV1を介して、テルペンがカルシウム流に大きく寄与することを示している。図2Aは、TRPV1をコードする構築物でトランスフェクトされたHEK細胞における経時的(秒、「s」)なカルシウム流入(相対蛍光単位、「Fluo-4 RFU」)を示している(最初は刺激無し(「NS」)、次いでビヒクル適用後(「veh」)、そして株A混合物の適用後(「株混合物」))。図2Bは、株A混合物に存在するカンナビノイドのみを含む混合物(「カンナビノイド混合物」)を適用した後のTRPV1発現HEK細胞におけるカルシウム流入を示している。図2Cは、株A混合物に存在するテルペンのみを含む混合物(「テルペン混合物」)の適用後のTRPV1発現HEK細胞におけるカルシウム流入を示している。
【００５３】
【図３Ａ】図3A-3Lは、TRPV1を介してテルペン混合物によって誘発されるカルシウム流に個々のテルペンが異なって寄与することを示している。図3Aは、TRPV1をコードする構築物でトランスフェクトされたHEK細胞における経時的なカルシウム流入を示している(刺激無し(「NS」)、ビヒクル適用後(「veh」)、そしてテルペン混合物の適用後(「全テルペン」))。図3B-3Lは、図3Aで使用したテルペン混合物に存在するテルペンそれぞれについて、TRPV1を発現するHEK細胞におけるベースライン減算カルシウム流入を経時的に示すグラフである。
【図３Ｂ−Ｅ】図3A-3Lは、TRPV1を介してテルペン混合物によって誘発されるカルシウム流に個々のテルペンが異なって寄与することを示している。図3Aは、TRPV1をコードする構築物でトランスフェクトされたHEK細胞における経時的なカルシウム流入を示している(刺激無し(「NS」)、ビヒクル適用後(「veh」)、そしてテルペン混合物の適用後(「全テルペン」))。図3B-3Lは、図3Aで使用したテルペン混合物に存在するテルペンそれぞれについて、TRPV1を発現するHEK細胞におけるベースライン減算カルシウム流入を経時的に示すグラフである。
【図３Ｆ−Ｉ】図3A-3Lは、TRPV1を介してテルペン混合物によって誘発されるカルシウム流に個々のテルペンが異なって寄与することを示している。図3Aは、TRPV1をコードする構築物でトランスフェクトされたHEK細胞における経時的なカルシウム流入を示している(刺激無し(「NS」)、ビヒクル適用後(「veh」)、そしてテルペン混合物の適用後(「全テルペン」))。図3B-3Lは、図3Aで使用したテルペン混合物に存在するテルペンそれぞれについて、TRPV1を発現するHEK細胞におけるベースライン減算カルシウム流入を経時的に示すグラフである。
【図３Ｊ−Ｌ】図3A-3Lは、TRPV1を介してテルペン混合物によって誘発されるカルシウム流に個々のテルペンが異なって寄与することを示している。図3Aは、TRPV1をコードする構築物でトランスフェクトされたHEK細胞における経時的なカルシウム流入を示している(刺激無し(「NS」)、ビヒクル適用後(「veh」)、そしてテルペン混合物の適用後(「全テルペン」))。図3B-3Lは、図3Aで使用したテルペン混合物に存在するテルペンそれぞれについて、TRPV1を発現するHEK細胞におけるベースライン減算カルシウム流入を経時的に示すグラフである。
【００５４】
【図４】図4は、ミルセンがテルペン混合物(「テルペン」)で見られるTRPV1を介したカルシウム応答に大きく寄与するが、シグナルの100％を構成しないことを示す。データは、TRPV1でトランスフェクトされ、TRPV1を誘導的に発現するHEK細胞から取得した。
【００５５】
【図５Ａ】図5A-5Cは、測定されたカルシウム応答がTRPV1イオンチャネルの存在に全体的又は部分的に依存することを示している。図5Aは、完全株A混合物の適用後の、HEK野生型細胞(「HEK野生型」)、及びTRPV1をトランスフェクトしたHEK細胞であってテトラサイクリン適用(16時間1μM)によりTRPV1を発現するように誘導されたHEK細胞(「HEK + TRPV1」)における経時的なカルシウム流入を示している。図5Bは、株A混合物に存在するカンナビノイドのみを含む混合物(「カンナビノイド混合物」)の適用後の、HEK野生型細胞及びHEK + TRPV1細胞における経時的なカルシウム流入を示している。図5Cは、株A混合物に存在するテルペンのみを含む混合物(「テルペン混合物」)の適用後の、HEK野生型細胞及びHEK + TRPV1細胞における経時的なカルシウム流入を示している。全データはビヒクル減算されている。
【図５Ｂ−Ｃ】図5A-5Cは、測定されたカルシウム応答がTRPV1イオンチャネルの存在に全体的又は部分的に依存することを示している。図5Aは、完全株A混合物の適用後の、HEK野生型細胞(「HEK野生型」)、及びTRPV1をトランスフェクトしたHEK細胞であってテトラサイクリン適用(16時間1μM)によりTRPV1を発現するように誘導されたHEK細胞(「HEK + TRPV1」)における経時的なカルシウム流入を示している。図5Bは、株A混合物に存在するカンナビノイドのみを含む混合物(「カンナビノイド混合物」)の適用後の、HEK野生型細胞及びHEK + TRPV1細胞における経時的なカルシウム流入を示している。図5Cは、株A混合物に存在するテルペンのみを含む混合物(「テルペン混合物」)の適用後の、HEK野生型細胞及びHEK + TRPV1細胞における経時的なカルシウム流入を示している。全てのデータがビヒクル減算されている。
【００５６】
【図６Ａ】図6A-6Cは、ミルセン誘発のカルシウム流入がTRPV1イオンチャネルの存在に全体的又は部分的に依存していることを示している。図6A-6Bは、さまざまな濃度(3.5 μg/mg (図6A)、1.75 μg/mg (図6B)、0.875 μg/mg (図6C)、及び0.43 μg/mg (図6D))のミルセンを適用した後のHEK野生型細胞(「HEK野生型」)及びHEK + TRPV1細胞における経時的なカルシウム流入を示している。全てのデータがベースライン減算されている。
【図６Ｂ】図6A-6Cは、ミルセン誘発のカルシウム流入がTRPV1イオンチャネルの存在に全体的又は部分的に依存していることを示している。図6A-6Bは、さまざまな濃度(3.5 μg/mg (図6A)、1.75 μg/mg (図6B)、0.875 μg/mg (図6C)、及び0.43 μg/mg (図6D))のミルセンを適用した後のHEK野生型細胞(「HEK野生型」)及びHEK + TRPV1細胞における経時的なカルシウム流入を示している。全てのデータがベースライン減算されている。
【図６Ｃ−Ｄ】図6A-6Cは、ミルセン誘発のカルシウム流入がTRPV1イオンチャネルの存在に全体的又は部分的に依存していることを示している。図6A-6Bは、さまざまな濃度(3.5 μg/mg (図6A)、1.75 μg/mg (図6B)、0.875 μg/mg (図6C)、及び0.43 μg/mg (図6D))のミルセンを適用した後のHEK野生型細胞(「HEK野生型」)及びHEK + TRPV1細胞における経時的なカルシウム流入を示している。全てのデータがベースライン減算されている。
【００５７】
【図７】図7A-7Bは、測定されたミルセン誘発カルシウム流入応答が、TRPV1イオンチャネルの特異的な薬理学的阻害剤によって阻害されることを示している。図7Aは、ビヒクル(「veh」)の適用、3.5μg/ mlのミルセンの適用、さらにTRPV1阻害剤であるカプサゼピン(10μM)の添加に応答したTRPV1発現HEK細胞におけるカルシウム流入を経時的(秒)に示している。図7Bは、ビヒクル(「veh」)の適用、3.5μg/ mlのミルセンの適用、さらにカプサゼピンの代わりのリン酸緩衝生理食塩水(「PBS」)の添加に応答した、TRPV1でトランスフェクトされたHEK細胞におけるカルシウム流入を経時的(秒)に示している。データはベースライン減算されている。
【００５８】
【図８】図8A-8Dは、外部のカルシウムが存在しない状態でミルセンを適用すると、高濃度でミルセンが内部貯蔵からTRPV1依存性のカルシウム放出を誘導し得ることを示している。図8A-Dは、さまざまな濃度のミルセン-3.5μg/ ml(図8A)、1.75μg/ ml(図8B)、0.875μg/ ml(図8C)及び0.43μg/ml(図8D)のミルセンに応答した、TRPV1を発現するトランスフェクトHEK細胞(「HEK TRPV1」)又は野生型HEK細胞(「HEK野生型」)における細胞質ゾルカルシウム流入を経時的に示している。実験は、培地に外部カルシウムが存在しない状態で実施された。全てのデータがベースライン減算されている。
【００５９】
【図９Ａ−Ｄ】図9A-9Gは、カンナビノイドがTRPV1を介してカルシウム流に異なって寄与することを示している。図9A-9Gは、図2Bで試験されたカンナビノイド混合物に存在するカンナビノイドのそれぞれについて、HEK野生型細胞及びTRPV1を発現するHEK細胞におけるカルシウム流入を経時的(秒、「秒(sec)」)に示している。すべての刺激は20秒で加えられた。全てのデータがベースライン減算されている。
【図９Ｅ−Ｇ】図9A-9Gは、カンナビノイドがTRPV1を介してカルシウム流に異なって寄与することを示している。図9A-9Gは、図2Bで試験されたカンナビノイド混合物に存在するカンナビノイドのそれぞれについて、HEK野生型細胞及びTRPV1を発現するHEK細胞におけるカルシウム流入を経時的(秒、「秒(sec)」)に示している。すべての刺激は20秒で加えられた。全てのデータがベースライン減算されている。
【００６０】
【図１０】図10は、ミルセンなどの生理活性リガンドの比活性が、多剤耐性タンパク質を介した生理活性リガンドの排出をブロックすることにより、カンナビス様の「環境(entourage)」の共インキュベーションによって高められることを示している。ビヒクルのみ(「veh」)、既知のMRP阻害剤であるクロロキン(「クロロキン」)の存在下、及び株A混合物中のミルセン以外のカンナビノイドとテルペンのすべての混合物である「CBMIX」の存在下、多剤耐性タンパク質(MRP)を介した蛍光マーカーCFDAの流出率をフローサイトメトリーで評価した。これらのデータは、主要治療化合物(primary therapeutic compound)の補助として使用される場合、複数のカンナビノイド及び/又はテルペンの同時適用が細胞からの治療化合物の流出を遅らせる傾向があり、このことが、単位用量あたりの主要治療化合物の比活性を増大させることを示唆している。
【００６１】
【図１１】図11は、TTD治療ターゲットデータベースエンリッチメント解析(Therapeutic Target Data Base Enrichment Analysis)が、疼痛及び心血管領域の開発(development)について、ネロリドールよりもミルセンを優先する傾向があることを示している。さらに、ミルセンは、天然のカンナビスについての予測される疾患標的セットに大きく寄与している。
【００６２】
【図１２】図12は、ミルセンによる直接的又は間接的モジュレーションについて、多様なイオンチャネルターゲットが予測されることを示している。
【００６３】
【図１３】図13は、ネロリドールによる直接的又は間接的モジュレーションについて、限られたイオンチャネルターゲット又はCNS活性ターゲットが予測されることを示している。
【００６４】
【図１４】図14A-14Bは、カプサイシンとミルセンによって開始されたTRPV1の脱感作パターンの比較を示している。図14Aは、さまざまな濃度のミルセンとカプサイシンに対する用量依存性カルシウム応答を、それぞれのTRPV1アゴニストの適用後20〜300秒で測定されたカルシウム流入曲線下面積(AUC) (y軸)を、対応する濃度(x軸)に対してプロットすることにより示したグラフである。図14Bは、イオノフォアであるイオノマイシン、ミルセン、又はカプサイシンの適用前及び適用後24時間でTRPV1発現HEK細胞において測定されたカルシウム流入曲線のAUCを示している。適用の前後に測定された値の抑制率も示されている(抑制％)。
【００６５】
【図１５】図15に、説明した実験で使用した化合物を示す。
【００６６】
【図１６Ａ−１】図16A-16Bは、2種のテルペンであるミルセン(図16A)及びネロリドール(図16B)のターゲット分析及び疾患予測ネットワークを示している。データは、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)を使用してin silicoで生成された。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【図１６Ａ−２】図16A-16Bは、2種のテルペンであるミルセン(図16A)及びネロリドール(図16B)のターゲット分析及び疾患予測ネットワークを示している。データは、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)を使用してin silicoで生成された。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【図１６Ａ−３】図16A-16Bは、2種のテルペンであるミルセン(図16A)及びネロリドール(図16B)のターゲット分析及び疾患予測ネットワークを示している。データは、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)を使用してin silicoで生成された。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【図１６Ａ−４】図16A-16Bは、2種のテルペンであるミルセン(図16A)及びネロリドール(図16B)のターゲット分析及び疾患予測ネットワークを示している。データは、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)を使用してin silicoで生成された。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【図１６Ｂ−１】図16A-16Bは、2種のテルペンであるミルセン(図16A)及びネロリドール(図16B)のターゲット分析及び疾患予測ネットワークを示している。データは、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)を使用してin silicoで生成された。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【図１６Ｂ−２】図16A-16Bは、2種のテルペンであるミルセン(図16A)及びネロリドール(図16B)のターゲット分析及び疾患予測ネットワークを示している。データは、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)を使用してin silicoで生成された。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【図１６Ｂ−３】図16A-16Bは、2種のテルペンであるミルセン(図16A)及びネロリドール(図16B)のターゲット分析及び疾患予測ネットワークを示している。データは、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)を使用してin silicoで生成された。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【図１６Ｂ−４】図16A-16Bは、2種のテルペンであるミルセン(図16A)及びネロリドール(図16B)のターゲット分析及び疾患予測ネットワークを示している。データは、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)を使用してin silicoで生成された。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【００６７】
【図１７】図17は、株A混合物中のミルセン以外のカンナビノイド及びテルペンが、多剤耐性タンパク質を介した生理活性リガンドの排出のブロックにより、ミルセンのTRPV1アゴニスト活性を高める一つのメカニズムを示している(図10を参照)。
【００６８】
【図１８】図18は、侵害受容性神経束の複数の受容体を標的とするミルセン及びミルセンを含む混合物の予測される可能性を示している。
【００６９】
【図１９】図19A-19Cは、ミルセン(M)の適用量を増やした後のTRPV1を過剰発現する単一HEK293細胞でのTRPV1イオンチャネル活性化を示している。図19Aは5μMのミルセン、図19Bは10μMのミルセン、図19Cは150μMのミルセンを示している。
【００７０】
【図２０Ａ−Ｂ】図20A-20Eは、5μMミルセン(M)及び1μMカプサイシン(Cap)を添加した後の、TRPV1を過剰発現している単一HEK293細胞の電気生理学的データを示している。図20A及び20Bは、ミルセン及びカプサイシンの添加前後の細胞の内向き及び外向きのイオン電流(nA)を示している。図20Bは、ミルセン誘発応答を示す図20Aの拡大図である。図20C-20Eは、ミルセン又はカプサイシンを添加する前(図20C)、又は5μMのミルセン(図20D)又は1μMのカプサイシン(図20E)を添加した後の細胞の電流/電圧トレースを示している。
【図２０Ｃ−Ｅ】図20A-20Eは、5μMミルセン(M)及び1μMカプサイシン(Cap)を添加した後の、TRPV1を過剰発現している単一HEK293細胞の電気生理学的データを示している。図20A及び20Bは、ミルセン及びカプサイシンの添加前後の細胞の内向き及び外向きのイオン電流(nA)を示している。図20Bは、ミルセン誘発応答を示す図20Aの拡大図である。図20C-20Eは、ミルセン又はカプサイシンを添加する前(図20C)、又は5μMのミルセン(図20D)又は1μMのカプサイシン(図20E)を添加した後の細胞の電流/電圧トレースを示している。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
4. 詳細な説明
4.1. 定義
別段に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味を有する。本明細書中で使用される場合、以下の用語は、以下のそれらに帰属する意味を有する。
【００７２】
「ミルセン」(「β-ミルセン」と同義)は、7-メチル-3-メチリデンオクタ-1,6-ジエンである。
【００７３】
「株A混合物」とは、カンナビジバリン(CBDV)、カンナビクロメン(CBC)、カンナビジオール(CBD)、カンナビジオール酸(CBDA)、カンナビゲロール(CBG)、カンナビゲロール酸(CBGA)、カンナビノール(CBN)、アルファ-ビサボロール(α-ビサボロール)、アルファ-フムレン(α-フムレン)、アルファ-ピネン(α-ピネン)、ベータ-カリオフィレン(β-カリオフィレン)、ミルセン、(+)-ベータ-ピネン(β-ピネン)、カンフェン、リモネン 、リナロール、及びネロリドールの混合物を意味する。表1及び図15参照。混合物の組成は、米国ネバダ州で現在医療用として使用されているカンナビス・サティバ(Cannabis sativa)品種の実際の化学プロファイルに基づいている。株の化学プロファイルデータは、質量％及びmg/g存在量として表され、これらの量を、培養細胞への曝露のために混合物に含まれるべき量に変換した。株A混合物において、THCとTHCAの意図的な除去、及び特定の不安定又は不溶性成分の除去により実際の化学プロファイルを修正した。
【００７４】
「テルペン混合物」とは、株A混合物のテルペンのみ、すなわちアルファ-ビサボロール(α-ビサボロール)、アルファ-フムレン(α-フムレン)、アルファ-ピネン(α-ピネン)、ベータ-カリオフィレン(β- カリオフィレン)、ミルセン、(+)-ベータ-ピネン(β-ピネン)、カンフェン、リモネン、リナロール及びネロリドールを含む混合物を意味する。
【００７５】
「選択されたテルペン」とはネロリドールを意味する。
【００７６】
「カンナビノイド混合物」とは、株A混合物のカンナビノイドのみ、すなわちカンナビジバリン(CBDV)、カンナビクロメン(CBC)、カンナビジオール(CBD)、カンナビジオール酸(CBDA)、カンナビゲロール(CBG)、カンナビゲロール酸(CBGA)、及びカンナビノール(CBN)を含む混合物を意味する。
【００７７】
「選択されたカンナビノイド」とは、カンナビゲロール酸(CBGA)、カンナビジオール(CBD)、カンナビジバリン(CBDV)、カンナビクロメン、カンナビジオール酸、又はカンナビゲロール(CBG)を意味する。
【００７８】
「薬学的活性成分」(活性薬学的成分と同義)とは、医薬品の製造に使用することを目的とした物質又は物質の混合物を意味し、医薬の製造に使用した場合、医薬品の活性成分になる。そのような物質は、病気の診断、治療、緩和、処置又は予防において薬理学的活性又は他の直接的な効果を与えること、又は身体の構造及び機能に影響を及ぼすことが意図されている。このような物質又は物質の混合物は、連邦食品医薬品化粧品法のセクション501(a)(2)(B)に基づく現在の適正製造基準(CGMP)規制に準拠して生成されることが好ましい。
【００７９】
薬学的活性成分は、その成分が0.3%(w/v)未満のデルタ-9テトラヒドロカンナビノールを含有する場合、「THCを実質的に含まない」。医薬組成物は、医薬組成物が0.3%(w/v)未満のデルタ-9テトラヒドロカンナビノールを含有する場合、「THCを実質的に含まない」。
【００８０】
「カンナビス・サティバ抽出物」は、流体及び/又は気体抽出によって、例えば、CO2による超臨界流体抽出(SFE)によってカンナビス・サティバ植物材料から得られる組成物である。カンナビス・サティバ抽出物は、典型的には、ミルセン、選択されたカンナビノイド、選択されたテルペン、並びにまた、他のテルペン、フィトカンナビノイド、及び二次代謝産物を含有する。例えば、カンナビス・サティバ抽出物は、テルピネン、カリオフィレン、ゲラニオール、グアイオール、イソプレゴール(isopulegoll)、オシメン、シメン、ユーカリプトール、及びテルピノレンの1種以上を含み得る。
【００８１】
「疼痛障害」には、緊張(strains)、捻挫、関節炎、又はその他の関節痛、打撲、背部痛、線維筋痛症、子宮内膜症、手術後の痛み、糖尿病性神経障害、三叉神経痛、帯状疱疹後神経痛、群発性頭痛、乾癬、過敏性腸症候群、慢性間質性膀胱炎、外陰部痛、外傷、筋骨格障害、帯状疱疹、鎌状赤血球症、心臓病、がん、脳卒中(stroke)、又は化学療法又は放射線による口内炎に関連するものが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００８２】
「治療」、「治療する」などの用語は、本明細書中で、一般的に、所望の薬理学的効果及び/又は生理学的効果を得ることを意味するために使用される。この効果は、疾患、状態、又はその症状を完全に又は部分的に予防するという点で予防的であってもよく、並びに/あるいは疾患若しくは状態及び/又は有害作用(例えば、疾患若しくは状態に起因する症状)の部分的又は完全な治癒という点で治療的であってもよい。本明細書中で使用される場合、「治療」は、哺乳動物、特にヒトの疾患又は状態の任意の治療を包含し、(a) 疾患若しくは状態にかかりやすい傾向にあるが、その疾患若しくは状態を有すると未だ診断されていない対象において、疾患若しくは状態が発生することを予防すること；(b) 疾患若しくは状態を阻害すること(例えば、その発症を停止すること)；又は(c) 疾患若しくは状態を軽減すること(例えば、疾患又は状態の退縮を引き起こし、1つ以上の症状を改善すること)を含む。任意の状態の改善は、当技術分野において公知の標準的な方法及び技術に従って容易に評価することができる。本方法によって治療される対象の集団としては、望ましくない状態又は疾患に罹患している対象、並びに状態又は疾患の発症のリスクを有する対象などが挙げられる。
【００８３】
「治療有効用量」又は「治療有効量」という用語は、それが投与される目的の所望の効果を生じさせる用量又は量を意味する。正確な用量又は量は治療の目的により決定され、公知技術を用いて当業者により確認される(例えば、Lloyd (2012) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding、第4版を参照)。治療有効量は、予防は治療とみなされ得るので、「予防有効量」であり得る。
【００８４】
「十分な量」という用語は、所望の効果を生じさせるのに十分な量を意味する。
【００８５】
「改善する」という用語は、病態、例えば免疫障害の治療における任意の治療的に有益な結果、例えば、それらの予防、重症度又は進行の緩和、寛解、又は治癒などを指す。
【００８６】
4.2. 他の解釈上の慣例
本明細書中で列挙される範囲は、列挙された端点を含めて、その範囲内の値の全てについての省略表現であることが理解される。例えば、1〜50の範囲は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、及び50からなる群から選択される任意の数、数の組合せ、又は副範囲を含むと理解される。
【００８７】
別段に示されない限り、1つ以上の立体中心を有する化合物への言及は、それぞれの立体異性体、及びそれらの立体異性体の全ての組合せを意図する。
【００８８】
4.3. 実験結果の概説
カンナビスは鎮痛をもたらし、さまざまな種類の疼痛を治療するために、数千年間使用されてきた。カンナビスが抗侵害受容効果を少なくとも一部、TRPV1受容体を介して発揮するかどうかを調べ、もしそうであれば、医療用カンナビス抽出物中の何百もの化合物のどれがその効果に寄与するかを調べた。
【００８９】
以下の実施例のセクションでより詳しく説明するように、現在米国ネバダ州で医療用として使用されているカンナビス・サティバ品種の実際の化学プロファイルに基づいて、カンナビノイドとテルペンの複合混合物である株A混合物を調製した。株の化学プロファイルデータは、％質量及びmg/g存在量として表され、これらの量を混合物に含まれるべき量に変換した。株A混合物において、向精神活性成分を除去するためにTHCとTHCAを意図的に除き、特定の不安定又は不溶性成分を除くことにより実際の化学プロファイルを修正した。また、株A混合物の化合物のサブセットを含む複合混合物である、CBMIX、カンナビノイド混合物及びテルペン混合物も調製した。表1参照。
【００９０】
TRPV-1アゴニスト活性のin vitroアッセイを作成するために、HEK細胞にTRPV1のテトラサイクリン誘導性発現を付与する発現ベクターでHEK細胞をトランスフェクトし、細胞内カルシウムレベルの標準蛍光レポーター(フロ-4アセトキシメチルエステル)(「fluo-4」)を使用した。図1は、TRPV1の誘導性発現がカプサイシン感受性カルシウム流応答をHEK細胞に付与することを示しており、これにより、実験システムがTRPV1特異的カルシウム流を明確に報告するものであることが確立された。
【００９１】
同じアッセイで株A混合物を試験したところ、カンナビス由来のカンナビノイドとテルペンの混合物(株A混合物)がTRPV1をトランスフェクトしたHEK細胞に有意なカルシウム流を引き起こすことがわかった(図2A)。トランスフェクトされていない野生型HEK細胞を用いて並行して得られたシグナルを比較することにより、完全な株A混合物で観察されたカルシウム流がTRPV1受容体の存在に依存することが確認された(図5A)。
【００９２】
サブ混合物を使用して、株A混合物のテルペンが、観察された効果に大きく寄与することが確認された(図2C)。株A混合物に存在するカンナビノイドによって、より少ない流入が引き起こされた(図2B)。テルペン混合物とカンナビノイド混合物を使用して観察されたシグナルは、TRPV1受容体の存在に依存していた(図5B、5C)。
【００９３】
次に、株A混合物に存在する個々のテルペンを試験し、個々のテルペンがTRPV1を介してカルシウム流に異なって寄与することを見出した(図3A-3L)。ミルセンは、アゴニスト活性に大きく寄与するが(図3C)、シグナルの100％を構成するわけではない(図4)。ネロリドールは、単独で試験した場合、より低めのアゴニスト活性を持つことが観察された(図3I)。ミルセン誘発カルシウムの流入は用量依存的であり、TRPV1受容体の発現に全体的又は部分的に依存していた(図6)。さらに、TRPV1阻害剤であるカプサゼピンを使用して、TRPV1への依存性を確認した。図7は、ミルセン誘発カルシウム流入応答がカプサゼピンによって阻害されることを示している。
【００９４】
細胞外カルシウムが存在しない場合(1 mM EGTAを補充した、名目上カルシウムを含まない細胞外環境の構築により達成される)、高濃度でミルセンが内部貯蔵からのTRPV1依存性カルシウム放出を誘発できることが実証された(図8)。
【００９５】
ミルセンの急性アゴニスト効力をカプサイシンと比較したところ、カプサイシンと同じカルシウム流入を誘導するには、より高い濃度のミルセンが必要であることがわかった(図14A)。データは、ミルセンが、カプサイシンと同様に作用する(ただし効力が低い)、有効なTRPV1アゴニストであることを示唆している。また、カプサイシンと同様に、ミルセンは24時間の曝露後に脱感作を引き起こす。
【００９６】
同様の実験を行って、株A混合物中の個々のカンナビノイドの寄与を決定し、カンナビノイドがTRPV1を介してカルシウム流に異なって寄与していることを見出した(図9A-9G)。カンナビノイドのうち、カンナビゲロール酸(CBGA)、カンナビジオール(CBD)、カンナビジバリン(CBDV)、カンナビクロメン、及びカンナビジオール酸は、アッセイで個別に試験したときに最も強力であった。
【００９７】
株A混合物中のテルペンとカンナビノイドの複合混合物がミルセン単独よりも高いシグナルを提供するメカニズムを調べるために、カンナビス様の「環境(entourage)」が、生理活性リガンドであるミルセンの多剤耐性タンパク質を介した排出をブロックするように作用している可能性があるかどうかを試験した。多剤耐性タンパク質(MRP)を介した蛍光マーカーCFDAの流出率(efflux rates)を、ビヒクルのみ(「veh」)、既知のMRP阻害剤であるクロロキン(「クロロキン」)の存在下で、またミルセン以外の株A混合物中のカンナビノイドとテルペンのすべての混合物である「CBMIX」の存在下で、フローサイトメトリーにより評価した。図10に示すデータは、主要治療化合物の補助として用いた場合、複数のカンナビノイド及び/又はテルペンの同時適用は、細胞からの治療化合物の流出を遅らせる傾向があることを示唆しており、したがって、単位用量あたりの主要治療化合物の比活性を増加させることを示唆している。
【００９８】
顕著なTRPV1アゴニスト効果を有するオリジナルのカンナビス株A混合物中の2種のテルペンであるミルセン及びネロリドールのより広範な治療上の可能性を評価するために、GB Sciencesのネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform、「NPP」)と呼ばれる、独自のin silico予測アプローチを使用した。
【００９９】
図11は、治療ターゲットデータベースエンリッチメント解析が、疼痛と心血管領域の開発について、ネロリドールよりもミルセンを優先する傾向があることを示している。さらに、ミルセンは、天然カンナビスの予測される疾患標的セットに大きく寄与している。図12は、ミルセンによる直接的又は間接的なモジュレーションについて、多様なイオンチャネルターゲットが予測されることを示しているが、図13は、ネロリドールによる直接的又は間接的なモジュレーションについては、より限られたイオンチャネルターゲット又はCNS活性ターゲットのセットが予測されることを示している。
【０１００】
図16Aは、GB SciencesのNPPを使用したミルセンのターゲット分析と疾病予測ネットワークを示している。ネットワーク内の複数のTRPチャネルの存在は、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRP受容体である他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【０１０１】
4.4. 医薬組成物
したがって、第１の態様では、医薬組成物が提供される。組成物は、ミルセンと薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む。組成物は、場合により、ミルセン以外に、少なくとも１種のカンナビノイド及び/又は少なくとも１種のテルペンを含む。組成物は、20種以下の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物を含み、典型的な実施形態では、THCを実質的に含まない。
【０１０２】
様々な実施形態において、医薬組成物は、19種以下の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物、18種、17種、16種、15種、14種、13種、12種、11種、又は10種以下を含む。ある実施形態において、医薬組成物は、9種以下の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物、8種以下、7種以下、6種以下、又は5種以下を含む。特定の実施形態において、医薬組成物は、4種以下の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物、3種以下、又は2種以下を含む。選択された実施形態では、医薬組成物は、1種以下のカンナビノイド及びテルペン化合物を含み、これらの種はミルセンである。
【０１０３】
様々な実施形態において、医薬組成物は、少なくとも2種の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物、少なくとも3種、少なくとも4種、少なくとも5種、少なくとも6種、少なくとも7種、少なくとも8種、少なくとも9種、又は少なくとも10種を含み、各場合において、20種以下を含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、少なくとも11種の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物、少なくとも12種、少なくとも13種、少なくとも14種、又は少なくとも15種を含み、各場合において、20種以下を含む。
【０１０４】
一部の実施形態において、医薬組成物は、20種の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物、19種、18種、17種、16種、15種、14種、13種、12種、11種又は10種を含む。様々な実施形態において、医薬組成物は、9種、8種、7種、6種、5種、4種、3種、又は2種の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む。
【０１０５】
様々な実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10％(w/w)の量で存在する。一部の実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも 15%(w/w)、少なくとも20%(w/w)、少なくとも25%(w/w)、少なくとも30%(w/w)、少なくとも35%(w/w)、少なくとも40% (w/w)、少なくとも45%(w/w)、又は少なくとも50%(w/w)の量で存在する。ある実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも55%(w/w)、少なくとも60%(w/w)、少なくとも65%(w/w)、少なくとも70%(w/w)、少なくとも75%(w/w)、少なくとも80%(w/w)、少なくとも85%(w/w)、又は少なくとも90%(w/w)の量で存在する。特定の実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも95%(w/w)の量で存在する。
【０１０６】
様々な実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中に、0.025%〜5%(w/v)の濃度で存在する。一部の実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中に、0.025%〜2.5%(w/v)の濃度で存在する。一部の実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中に、0.025%〜1%(w/v)の濃度で存在する。一部の実施形態において、ミルセンは、医薬組成物中に、2%(w/v)、3%(w/v)、4%(w/v)、 5%(w/v)、6%(w/v)、7%(w/v)、8%(w/v)、9% (w/v)、又は10%(w/v)の濃度で存在する。
【０１０７】
少なくとも2種の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む一部の実施形態において、ミルセン以外の化合物の少なくとも1種は、選択されたカンナビノイドである。少なくとも2種の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む特定の実施形態において、ミルセン以外のすべての化合物が選択されたカンナビノイドである。
【０１０８】
様々な実施形態において、医薬組成物はカンナビゲロール酸(CBGA)を含む。一部の実施形態において、CBGAは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも10％(w/w)の量で存在する。一部の実施形態において、CBGAは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも11%(w/w)、12% (w/w)、13%(w/w)、14%(w/w)又は15%(w/w) の量で存在する。一部の実施形態において、CBGAは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも20% (w/w)、21%(w/w)、22%(w/w)、23%(w/w)、24%(w/w)又は25%(w/w)の量で存在する。
【０１０９】
様々な実施形態において、医薬組成物はカンナビジオール(CBD)を含む。一部の実施形態において、CBDは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する。一部の実施形態において、CBDは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも3%(w/w)、3.5%(w/w)、4%(w/w)、4.5%(w/w)又は5%(w/w)の量で存在する。ある実施形態において、CBDは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも7.5%(w/w)又は10% (w/w)の量で存在する。
【０１１０】
様々な実施形態において、医薬組成物はカンナビジバリン(CBDV)を含む。一部の実施形態において、CBDVは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)の量で存在する。一部の実施形態において、CBDVは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも7.5%(w/w)、10%(w/w)、又は15%(w/w)の量で存在する。
【０１１１】
様々な実施形態において、医薬組成物はカンナビクロメンを含む。一部の実施形態において、カンナビクロメンは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも1% (w/w)の量で存在する。一部の実施形態において、カンナビクロメンは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも1.5%(w/w)、少なくとも2%(w/w)、又は少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する。一部の実施形態において、カンナビクロメンは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)、7.5%(w/w)又は10%(w/w)の量で存在する。 
【０１１２】
様々な実施形態において、医薬組成物はカンナビジオール酸(CBDA)を含む。一部の実施形態において、CBDAは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する。一部の実施形態において、CBDAは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)、7.5%(w/w)、又は10%(w/w)の量で存在する。 
【０１１３】
様々な実施形態において、組成物は、カンナビゲロール(CBG)を含む。一部の実施形態において、CBGは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)の量で存在する。 一部の実施形態において、CBGは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも5%(w/w)の量で存在する。 
【０１１４】
少なくとも2種の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む一部の実施形態では、ミルセン以外の化合物の少なくとも１種は、選択されたテルペンである。少なくとも2種の異なる種類のカンナビノイド及びテルペン化合物を含む特定の実施形態において、ミルセン以外の化合物は全て、選択されたテルペンである。
【０１１５】
様々な実施形態において、医薬組成物はネロリドールを含む。一部の実施形態において、ネロリドールは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも 2% (w/w) の量で存在する。一部の実施形態において、ネロリドールは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも2.5%(w/w)、3%(w/w)、3.5%(w/w)、4%(w/w)、4.5%(w/w)又は5% (w/w) の量で存在する。特定の実施形態において、ネロリドールは、医薬組成物中のカンナビノイド及びテルペンの総含有量の少なくとも7.5%(w/w)又は10%(w/w)の量で存在する。
【０１１６】
典型的な実施形態において、ミルセン以外のカンナビノイド及びテルペン化合物は、ミルセン依存性TRPV1カルシウム流を増大させるのに有効な量で存在する。
【０１１７】
4.4.1. デルタ-9テトラヒドロカンナビノール(THC)含有量
典型的な実施形態において、医薬組成物には、デルタ-9テトラヒドロカンナビノール(THC)が完全に又は実質的に含まれていないため、向精神作用がなく、このことは、特定の規制その他の生理学的な利点を提供する。
【０１１８】
ある実施形態において、医薬組成物はデルタ-9 THCを実質的に含まない。これらの特定の実施形態では、医薬組成物は、1〜10重量パーセント(wt％)のTHCを含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、2〜9重量％のTHC、3〜8重量％のTHC、4〜7重量％のTHCを含む。ある実施形態において、医薬組成物は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10wt％のTHCを含む。
【０１１９】
4.4.2. その他の成分
一部の実施形態において、ミルセン、任意成分のカンナビノイド、及びミルセン以外の任意成分のテルペンは、合計で、医薬組成物中の活性薬学的成分の100％(wt％)未満を構成する。
【０１２０】
様々なそのような実施形態において、ミルセン、任意成分のカンナビノイド、及びミルセン以外の任意成分のテルペンは、合計で、薬学的活性成分の少なくとも75重量％、ただし100 wt％未満を構成する。特定の実施形態において、ミルセン、任意成分のカンナビノイド、及びミルセン以外の任意成分のテルペンは、合計で、活性成分の少なくとも80重量%、少なくとも85重量%、少なくとも90重量%、少なくとも91重量%、少なくとも92重量%、少なくとも93重量%、少なくとも94重量%、又は少なくとも95重量%、ただし100 wt％未満を構成する。特定の実施形態において、ミルセン、任意成分のカンナビノイド、及びミルセン以外の任意成分のテルペンは、合計で、活性成分の少なくとも96重量%、少なくとも97重量%、少なくとも98重量%、又は少なくとも99重量%、ただし100 wt％未満を構成する。
【０１２１】
ミルセン、任意成分のカンナビノイド、及びミルセン以外の任意成分のテルペンが合計で薬学的活性成分の100重量%(wt%)未満を構成する実施形態において、活性成分は、ミルセン、任意成分のカンナビノイド、及びミルセン以外の任意成分のテルペン以外の化合物をさらに含む。典型的なそのような実施形態において、活性成分中のその他の化合物はすべて、カンナビス・サティバから抽出可能である。特定の実施形態において、活性成分中のその他の化合物はすべて、カンナビス・サティバから製造された抽出物に存在する。
【０１２２】
一部の実施形態において、ミルセン、任意成分のカンナビノイド、及びミルセン以外の任意成分のテルペンは、合計で、薬学的活性成分の100％(w/v)未満を構成する。 
【０１２３】
4.4.3. 製剤
医薬組成物は、液剤、油剤、乳剤、ゲル剤、コロイド剤、エアロゾル剤又は固形剤などの、ヒト又は非ヒト動物への投与に適した任意の形態にすることができ、また、経腸及び非経口投与経路などの、ヒト又は動物用医薬に適した任意の投与経路による投与用に製剤化することができる。 
【０１２４】
4.4.3.1. 吸入による投与に適合した薬理学的組成物
様々な実施形態において、医薬組成物は、吸入による投与用に製剤化されている。
【０１２５】
ある実施形態において、医薬組成物は、気化器による投与用に製剤化されている。ある実施形態において、医薬組成物は、ネブライザーによる投与用に製剤化されている。特定の実施形態において、ネブライザーはジェットネブライザー又は超音波ネブライザーである。ある実施形態において、医薬組成物は、エアロゾライザーによる投与用に製剤化されている。ある実施形態において、医薬組成物は、乾燥粉末吸入器による投与用に製剤化されている。
【０１２６】
一部の実施形態において、気化器、ネブライザー、エアロゾライザー、又は乾燥粉末吸入器による医薬組成物の投与に適合した、本明細書に記載される医薬組成物の単位剤形が提供される。一部の実施形態において、剤形は、バイアル、アンプルであり、場合により、使用者による開封を可能とするために切れ目が付けられている。
【０１２７】
様々な実施形態において、医薬組成物は水溶液であり、鼻スプレー又は肺スプレーとして投与される。液体を鼻スプレーとして分配するための好ましいシステムは、米国特許第4,511,069号に開示されている。このような製剤は、本発明による組成物を水に溶解して水溶液を生成し、溶液を滅菌することによって簡便に調製することができる。製剤は、例えば、米国特許第4,511,069号に開示されている密封された分配システムにおいて、複数回用量容器で提供され得る。他の好適な鼻スプレー送達システムは、Transdermal Systemic Medication、Y. W. Chien 編、Elsevier Publishers、New York、1985；M. Naefら、Development and pharmacokinetic characterization of pulmonal and intravenous delta-9-tetrahydrocannabinol (THC) in humans、J. Pharm. Sci. 93、1176-84 (2004)；並びに米国特許第4,778,810号；同第6,080,762号；同第7,052,678号；及び同第8,277,781号(それぞれは参照により本明細書中に組み込まれる)に記載されている。さらなるエアロゾル送達形態としては、医薬溶媒(例えば、水、エタノール、又はそれらの混合物)に溶解又は懸濁した生物学的に活性な薬剤を送達する、圧縮空気ネブライザー、ジェットネブライザー、超音波ネブライザー、及び圧電ネブライザーなどが挙げられる。
【０１２８】
粘膜製剤は、ある実施形態においては、例えば、鼻腔内送達用の、適切な粒径、又は適切な粒径範囲内の、乾燥(通常は凍結乾燥)形態の生物学的に活性な薬剤を含む乾燥粉末製剤として投与される。鼻経路又は肺経路内に沈着するのに適した最小粒径は、多くの場合、約0.5ミクロンの空気力学的質量中央径(mass median equivalent aerodynamic diameter)(MMEAD)、一般に約1ミクロンのMMEAD、より典型的には約2ミクロンのMMEADである。鼻腔内の沈着に適した最大粒径は、多くの場合、約10ミクロンのMMEAD、一般に約8ミクロンのMMEAD、より典型的には約4ミクロンのMMEADである。これらのサイズ範囲内の鼻腔内呼吸用粉末は、様々な従来技術、例えば、ジェットミル、噴霧乾燥、溶媒沈殿、超臨界流体凝縮などにより製造することができる。適切なMMEADのこれらの乾燥粉末は、粉末をエアロゾル化量に分散させるために肺又は鼻吸入時に患者の呼吸に頼る従来の乾燥粉末吸入器(DPI)を介して患者に投与することができる。あるいは、乾燥粉末は、粉末をエアロゾル量に分散させるために外部電源を使用する空気補助装置、例えば、ピストンポンプを介して投与され得る。
【０１２９】
4.4.3.2. 経口/口腔/舌下投与に適合した薬理学的組成物
様々な実施形態において、医薬組成物は、経口、口腔内、又は舌下投与用に製剤化されている。
【０１３０】
経口、口腔又は舌下投与用の製剤は、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤(風味付けされた基剤、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカントを使用する)、散剤、顆粒剤の形態であってもよく、又は水性若しくは非水性液体中の液剤若しくは懸濁剤として、又は水中油型若しくは油中水型液体乳剤として、又はエリキシル剤若しくはシロップ剤として、又はトローチ剤(不活性基剤、例えばゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシアを使用する)として、及び/又はマウスウォッシュ剤などとしてであり得、それぞれ、活性成分として所定量の主題のポリペプチド治療剤を含有する。懸濁剤は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド(aluminum metahydroxide)、ベントナイト、寒天及びトラガカント、並びにそれらの混合物を含有し得る。
【０１３１】
経口、口腔又は舌下投与用の固体剤形(カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など)において、1種以上の治療剤は、1種以上の薬学的に許容される担体、例えば、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウム、及び/又は以下のいずれかと混合され得る：(1)充填剤又は増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及び/又はケイ酸；(2)結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及び/又はアカシアなど；(3)保湿剤、例えば、グリセロール；(4)崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム；(5)溶解遅延剤、例えばパラフィン；(6)吸収促進剤、例えば第4級アンモニウム化合物；(7)湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びグリセロールモノステアレートなど；(8)吸収剤、例えば、カオリン及びベントナイト粘土；(9)滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの混合物；並びに(10)着色剤。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合、医薬組成物は緩衝剤も含み得る。類似の種類の固体組成物もまた、ラクトース又は乳糖、並びに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル剤における充填剤として利用することができる。経口投与用の液体剤形としては、例えば薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルション剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及びエリキシル剤などが挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、当該技術分野において一般に使用されている不活性希釈剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、油(特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油)、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、並びにそれらの混合物を含有し得る。不活性希釈剤に加えて、経口組成物はまた、アジュバント、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香料、着色剤、芳香剤、及び保存剤も含み得る。
【０１３２】
4.4.3.3. 注射に適合した薬理学的組成物
ある実施形態において、医薬組成物は、注射による投与用に製剤化されている。
【０１３３】
静脈内、筋肉内、若しくは皮下注射、又は苦痛部位における注射については、活性成分は、発熱物質を含まず、好適なpH、等張性及び安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態であろう。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張ビヒクルを用いて、好適な溶液を十分に調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤及び/又は他の添加剤が含まれ得る。
【０１３４】
様々な実施形態において、医薬組成物は、単位剤形で提供される。単位剤形は、バイアル、アンプル、ボトル、又は予め充填されたシリンジである。一部の実施形態において、単位剤形は、0.01mg、0.1mg、0.5mg、1mg、2.5mg、5mg、10mg、12.5mg、25mg、50mg、75mg又は100mgのカンナビノイド組成物を含有する。一部の実施形態において、単位剤形は、125mg、150mg、175mg、又は200mgのカンナビノイド組成物を含有する。一部の実施形態において、単位剤形は、250mgのカンナビノイド組成物を含有する。
【０１３５】
典型的な実施形態において、単位剤形中の医薬組成物は液体形態である。様々な実施形態において、単位剤形は、0.1mL〜50mLの医薬組成物を含有する。一部の実施形態において、単位剤形は、1mL、2.5mL、5mL、7.5mL、10mL、25mL、又は50mLの医薬組成物を含有する。
【０１３６】
特定の実施形態において、単位剤形は、0.01mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、又は1mg/mLの濃度で1mLのミルセン含有混合物を含有するバイアルである。一部の実施形態において、単位剤形は、0.01mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、又は1mg/mLの濃度で2mLのミルセン含有混合物を含有するバイアルである。
【０１３７】
一部の実施形態において、単位剤形の医薬組成物は、固体形態、例えば、可溶化に適した凍結乾燥物(lyophilate)である。
【０１３８】
皮下、皮内、又は筋肉内投与に適した単位剤形の実施形態としては、それぞれ所定量の本明細書中上記の医薬組成物を含有する、予め装填されたシリンジ、自動注射器、及び自動注射ペンなどが挙げられる。
【０１３９】
様々な実施形態において、単位剤形は、シリンジ及び所定量の医薬組成物を含む、予め装填されたシリンジである。特定の予め装填されたシリンジの実施形態において、シリンジは皮下投与用に適合される。特定の実施形態において、シリンジは自己投与に適している。特定の実施形態において、予め装填されたシリンジは使い捨てシリンジである。
【０１４０】
様々な実施形態において、予め装填されたシリンジは、約0.1mL〜約0.5mLの医薬組成物を含有する。特定の実施形態において、シリンジは、約0.5mLの医薬組成物を含有する。具体的実施形態において、シリンジは、約1.0mLの医薬組成物を含有する。特定の実施形態において、シリンジは、約2.0mLの医薬組成物を含有する。
【０１４１】
特定の実施形態において、単位剤形は自動注射ペンである。この自動注射ペンは、本明細書中に記載される医薬組成物を含有する自動注射ペンを含む。一部の実施形態において、自動注射ペンは所定の体積の医薬組成物を送達する。他の実施形態において、自動注射ペンは、使用者によって設定された体積の医薬組成物を送達するように構成される。
【０１４２】
様々な実施形態において、自動注射ペンは、約0.1mL〜約5.0mLの医薬組成物を含有する。具体的実施形態において、自動注射ペンは、約0.5mLの医薬組成物を含有する。特定の実施形態では、自動注射ペンは、約1.0mLの医薬組成物を含有する。他の実施形態において、自動注射ペンは、約5.0mLの医薬組成物を含有する。
【０１４３】
4.4.3.4. 局所投与に適合した薬理学的組成物
様々な実施形態において、医薬製剤は、局所投与用に製剤化されている.
【０１４４】
局所投与用の医薬組成物及び製剤としては、経皮パッチ剤、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴下剤、坐剤、スプレー剤、液剤及び散剤などが挙げられる。従来の医薬担体、水性基剤、粉末基剤又は油性基剤、増粘剤などが必要又は望ましい場合がある。被覆コンドーム、グローブなどもまた有用であり得る。好適な局所製剤としては、本発明において特徴付けられるミルセン含有複合混合物が、局所送達剤、例えば、脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド、キレート剤及び界面活性剤と混合されているものなどが挙げられる。好適な脂質及びリポソームとしては、中性(例えば、ジオレオイルホスファチジルDOPEエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルコリンDMPC、ジステアロイルホスファチジルコリン)、陰性(例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロールDMPG)及びカチオン性(例えば、ジオレオイルテトラメチルアミノプロピルDOTAP及びジオレオイルホスファチジルエタノールアミンDOTMA)の脂質及びリポソームが挙げられる。本発明において特徴付けられるミルセン含有混合物は、リポソーム内に封入されていてもよいか、又はリポソーム、特にカチオン性リポソームに複合体を形成していてもよい。あるいは、ミルセン含有混合物は、脂質、特にカチオン性脂質に複合体化されていてもよい。好適な脂肪酸及びエステルとしては、限定するものではないが、アラキドン酸、オレイン酸、エイコサン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプレート、トリカプレート、モノオレイン、ジラウリン、グリセリル1-モノカプレート、1-ドデシルアザシクロヘプタン-2-オン、アシルカルニチン、アシルコリン、又はC1〜10アルキルエステル(例えば、ミリスチン酸イソプロピルIPM)、モノグリセリド、ジグリセリド又はそれらの薬学的に許容される塩などが挙げられる。
【０１４５】
4.5. 活性成分の調製方法
一部の実施形態において、薬学的活性成分は、化学的に純粋なミルセンと、場合により1種以上の選択されたカンナビノイドと、場合により選択されたテルペンとを所望の最終濃度に混合することによって調製される。ミルセン、選択されたカンナビノイド、及び選択されたテルペンはそれぞれ独立して、全合成又は中間体の合成修飾のいずれかにより、化学合成することができ、カンナビス・サティバ抽出物などの組成混合物から精製することができ、あるいは下記の実施例のように、市販品を購入することができる。
【０１４６】
他の実施形態において、薬学的活性成分は、ミルセン、任意成分の選択されたカンナビノイド、及び任意成分の選択されたテルペンのいずれか1つ又は複数を所定の所望の最終濃度に調整することにより、出発組成混合物から調製される。典型的な実施形態において、出発組成混合物は、カンナビス・サティバ抽出物である。現在好ましい実施形態において、出発組成混合物はカンナビス・サティバ抽出物であり、ミルセン、選択されたカンナビノイド、及び選択されたテルペンの1つ以上を、所定の所望の最終濃度になるように混合物に加える。
【０１４７】
典型的には、このような実施形態において、前記方法は、出発組成混合物中の各所望のミルセン、任意成分の選択されたカンナビノイド、及び任意成分の選択されたテルペンの濃度を決定する初期ステップをさらに含む。
【０１４８】
特定のこれらの実施形態において、上記方法は、カンナビス・サティバ抽出物を調製する、さらに先行するステップをさらに含む。カンナビス・サティバ抽出物を調製する方法は、米国特許第6,403,126号、同第8,895,078号及び同第9,066,910号；Doorenbosら、Cultivation, extraction, and analysis of Cannabis sativa L.、Annals of The New York Academy of Sciences、191、3-14 (1971) ；Fairbairn and Liebmann、The extraction and estimation of the cannabinoids in Cannabis sativa L. and its products、Journal of Pharmacy and Pharmacology、25、150-155 (1973)；Oroszlan及びVerzar-petri、Separation, quantitation and isolation of cannabinoids from Cannabis sativa L. by overpressured layer chromatography、Journal of Chromatography A、388、217-224(1987)に記載されており、それらの開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態において、抽出方法は、活性成分の所定の組成に最も近い含量のミルセン、任意成分の選択されたカンナビノイド、及び任意成分の選択されたテルペンを含む抽出物を提供するように選択される。
【０１４９】
一部の実施形態において、この方法はさらに、治療薬又は治療のための抽出化合物の供給源として、その後の開発のためにカンナビス・サティバ株を選択する最初のステップを含む。
【０１５０】
ある実施形態において、選択された株は、植物全体に又はその抽出可能な部分に、活性成分の所定の組成に最も近い典型的な含量のミルセン、任意成分の選択されたカンナビノイド、及び任意成分の選択されたテルペンを含む。ある実施形態において、選択された株は、活性成分の所定の組成に最も近い抽出物を提供できるものである。特定の実施形態において、選択された株は、植物、その抽出可能部分、又はその抽出物に、所望のミルセン、選択されたカンナビノイド、及び選択されたテルペンの所定の重量比に最も近い典型的な含量を有する。特定の実施形態において、選択された株は、植物、その抽出可能部分、又はその抽出物に、最小数の所望のミルセン、選択されたカンナビノイド、及び選択されたテルペンの濃度で調整を必要とする典型的な含有量を有する。特定の実施形態において、選択された株は、植物、その抽出可能な部分、又はその抽出物に、所望のミルセン、選択されたカンナビノイド、及び選択されたテルペンの濃度で最も安価な調整を必要とする典型的な含有量を有する。
【０１５１】
4.6. 方法による生成物
典型的な実施形態において、薬学的活性成分は、上記のセクション4.5に記載される方法の1つにより調製される。
【０１５２】
ミルセン、任意成分の選択されたカンナビノイド、及び任意成分の選択されたテルペンのうちのいずれか1つ以上を所定の所望の最終濃度に調整することによって、薬学的活性成分が出発組成混合物から調製される実施形態において、ミルセン、選択されたカンナビノイド、及び選択されたテルペン以外の活性成分における全ての化合物は、出発組成混合物内に存在する。出発組成混合物がカンナビス・サティバ抽出物である実施形態において、ミルセン、選択されたカンナビノイド、及び選択されたテルペン以外の活性成分における全ての化合物は、カンナビス・サティバ抽出物内に存在する。
【０１５３】
4.7. 用量範囲、一般
In vivo及び/又はin vitroアッセイを場合により利用して、使用のための最適な投与量範囲の同定を補助することができる。製剤中で用いられる正確な用量はまた、投与経路、及び状態の重篤度にも依存し、医師の判断及び各対象の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、in vitro試験系又は動物モデル試験系から導出される用量応答曲線から外挿され得る。
【０１５４】
4.8. 単位剤形
医薬組成物は、単位剤形で都合よく提供され得る。
【０１５５】
単位剤形は、典型的には、医薬組成物の1つ以上の特定の投与経路に適合される。
【０１５６】
様々な実施形態において、単位剤形は、吸入による投与用に適合される。特定のこれらの実施形態において、単位剤形は、気化器による投与用に適合される。特定のこれらの実施形態において、単位剤形は、ネブライザーによる投与用に適合される。特定のこれらの実施形態において、単位剤形は、エアロゾライザーによる投与用に適合される。
【０１５７】
様々な実施形態において、単位剤形は、経口投与用、口腔投与用、又は舌下投与用に適合される。
【０１５８】
一部の実施形態において、単位剤形は、静脈内、筋肉内、又は皮下投与用に適合される。
【０１５９】
一部の実施形態において、単位剤形は、髄腔内又は脳室内投与用に適合される。
【０１６０】
一部の実施形態において、医薬組成物は、局所投与用に製剤化されている。
【０１６１】
単回剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般に、治療効果を生じる化合物の量である。
【０１６２】
4.9. 治療方法
4.9.1. 哺乳動物対象の細胞においてTRPV1脱感作を行う方法
本明細書に記載のミルセン含有組成物は、TRPV1に対して急性アゴニスト作用及び長期脱感作効果を有することが実証された。したがって、これらの組成物は、TRPV1を急性活性化するか、慢性適用によりTRPV1を脱感作するか、又はその両方によって、TRPV1を介した治療効果を奏することができる。さらに、TRPV1に顕著な相加効果又は相乗効果を奏する、ミルセン並びに選択されたカンナビノイド及び/又は選択されたテルペンの特定の組み合わせが同定された。
【０１６３】
よって、哺乳動物対象の細胞においてTRPV1脱感作をもたらす方法であって、本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を、対象内の細胞においてTRPV1脱感作を引き起こすのに十分な量で、投与経路により、且つ期間にわたり、対象に投与することを含む、方法が提供される。
【０１６４】
様々な実施形態において、医薬組成物は局所投与される。
【０１６５】
様々な実施形態において、医薬組成物は全身投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、経口、口腔内、又は舌下投与される。
【０１６６】
一部の実施形態において、医薬組成物は非経口投与される。ある実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は皮下投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は吸入により投与される。
【０１６７】
これらの方法は、哺乳動物、特にヒトの治療的及び予防的治療を特に目的としている。
【０１６８】
投与される実際の量、並びに投与の速度及びスケジュールは、治療される疾患の性質及び重症度に依存する。治療の処方、例えば、投与量の決定等は、一般的な医師及び他の医療専門家の責任の範囲内であり、典型的には、治療される障害、個々の患者の状態、投与経路、治療される部位、及び医師に知られている他の因子を考慮に入れる。上述の技術及びプロトコールの例は、Remington's Pharmaceutical Sciences、第16版、Osol, A. (編)、1980に見られ得る。
【０１６９】
In vivo及び/又はin vitroアッセイを場合により利用して、使用のための最適な投与量範囲並びに投与経路及び回数の同定を補助することができる。製剤中で用いられる正確な用量はまた、投与経路、及び状態の重篤度にも依存し、医師の判断及び各対象の状況に従って決定されるべきである。有効用量及び投与方法は、in vitro試験系又は動物モデル試験系から導出される用量応答曲線から外挿され得る。
【０１７０】
一部の実施形態において、ミルセンは、1回投与あたり1g未満、500mg未満、100mg未満、10mg未満の量で投与される。
【０１７１】
本明細書に記載の治療方法において、ミルセン含有医薬組成物は単独で、又はミルセン含有組成物と同時に又は連続して投与される他の治療と組み合わせて投与することができる。
【０１７２】
4.9.2. 疼痛を治療する方法
一部の実施形態において、TRPV1脱感作の対象となる細胞は侵害受容器であり、方法は、本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を、対象内の侵害受容器においてTRPV1脱感作を引き起こすのに十分な量で、投与経路によって、且つ期間にわたり、対象に投与することを含む。
【０１７３】
一部の実施形態において、侵害受容器は末梢侵害受容器である。あるこれらの実施形態において、医薬組成物は局所投与される。一部の実施形態において、痛覚ニューロンは内臓である。あるこれらの実施形態において、医薬組成物は全身投与される。
【０１７４】
下記の実施例8に記載の、GB Sciences ネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform)を使用したin silico分析は、ミルセンの治療効力がTRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。
【０１７５】
したがって、関連の態様において、哺乳動物対象の疼痛を治療する方法が提供される。この方法は、本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を、疼痛を低減するのに十分な量で、投与経路によって、且つ期間にわたり、対象に投与することを含む。
【０１７６】
ある実施形態において、疼痛は神経障害性疼痛である。特定の実施形態において、神経障害性疼痛は糖尿病性末梢神経障害性疼痛である。特定の実施形態において、疼痛は帯状疱疹後神経痛である。特定の実施形態において、疼痛は三叉神経痛である。
【０１７７】
一部の実施形態において、対象は、緊張(strains)、捻挫、関節炎、又はその他の関節痛、打撲、背部痛、線維筋痛症、子宮内膜症、手術、片頭痛、群発性頭痛、乾癬、過敏性腸症候群、慢性間質性膀胱炎、外陰部痛、外傷、筋骨格障害、帯状疱疹、鎌状赤血球症、心臓病、がん、脳卒中(stroke) 、又は化学療法又は放射線による口内炎若しくは潰瘍に関連する疼痛又はそれらによって引き起こされる疼痛を有する。
【０１７８】
一部の実施形態において、医薬組成物は、少なくとも３日間、少なくとも１日１回投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、少なくとも５日間、少なくとも１日１回投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、少なくとも７日間、少なくとも１日１回投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、７日を超える期間、少なくとも１日１回投与される。
【０１７９】
様々な実施形態において、医薬組成物は、侵害受容器におけるミルセンの有効レベルを少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも７日間維持するのに十分な用量で、投与経路によって、且つスケジュールにて投与される。
【０１８０】
4.9.3. 心臓肥大を治療する方法
別の態様において、哺乳動物対象の心臓肥大を治療する方法が提供される。この方法は、対象に、抗肥大有効量の本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を投与することを含む。
【０１８１】
典型的な実施形態において、医薬組成物は全身投与される。
【０１８２】
一部の実施形態において、医薬組成物は、静脈内投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、皮下投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、吸入により投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、経口投与される。
【０１８３】
4.9.4. 心臓肥大を予防的に治療する方法
別の態様において、哺乳動物対象の心臓肥大を予防的に治療する方法が提供される。この方法は、心臓肥大のリスクのある対象に、抗肥大有効量の本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を投与することを含む。
【０１８４】
4.9.5. 過活動膀胱を治療する方法
別の態様において、哺乳動物対象の過活動膀胱を治療する方法が提供される。この方法は、対象に、治療有効量の本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を投与することを含む。
【０１８５】
典型的な実施形態において、医薬組成物は、全身投与される。
【０１８６】
4.9.6. 難治性の慢性咳(refractory chronic cough)を治療する方法
別の態様において、難治性の慢性咳を治療する方法が提供され、この方法は、対象に、治療有効量の本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物を投与することを含む。
【０１８７】
一部の実施形態において、医薬組成物は、全身投与される。
【０１８８】
一部の実施形態において、医薬組成物は、吸入により投与される。
【０１８９】
4.9.7. TRPV1病因による障害(disorders with TRPV1 etiology)を治療する方法
別の態様において、本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物で治療される疾患又は障害には、TRPV1の異常な機能に関連する疾患が含まれる。これらの疾患は、TRPV1の異常な活性化、抑制、又は調節不全に関連し得る。一部の実施形態において、これらの疾患は、TRPV1をコードする遺伝子の異常な発現又は突然変異に関連している。
【０１９０】
一部の実施形態において、本明細書に記載のミルセン含有医薬組成物で治療される疾患は、内因性TRPV1アゴニストの異常合成に関連する疾患である。
【実施例】
【０１９１】
4.10. 実施例
以下の実施例は、限定ではなく例示を目的として提供される。
4.10.1. 実施例1: テルペン、カンナビノイド、及びテルペンとカンナビノイドの両方を含む混合物
【０１９２】
米国ネバダ州で現在医療用として使用されているカンナビス・サティバ品種の実際の化学プロファイルに基づいて、カンナビノイドとテルペンの複合混合物である、株A混合物を調製した。株の化学プロファイルデータは、％質量とmg/g存在量として表され、これらの量を混合物に含まれるべき量に変換した。株A混合物において、THCとTHCAの意図的な除去、及び特定の不安定又は不溶性成分の除去により、実際の化学プロファイルを修正した。株A混合物中の化合物のサブセットを含む複合混合物、CBMIX、カンナビノイド混合物及びテルペン混合物も調製した。
【０１９３】
以下の表1に指定されているように、個々の成分を混合することによってすべての混合物を調製した。表には、各混合物に含まれる個々の成分の重量基準の百分率比(比率、％)が示されている。また、以下で説明する実験における細胞培養に適用される各成分の最終濃度も示されている(濃度、μg/ml)。
【表１】
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【０１９４】
個々の成分は、様々な供給業者から入手した：東京化成工業製のネロリドール(#N0454)、東京化成工業製のリナロール(#L0048)、Sigma Aldrich製のアルファ-ピネン(#P45680)、MP Biomedicals製のリモネン(#155234)、Ultr Scientific製のフィトール(#FLMS-035)、Sigma Aldrich製のカンナビジバリン(#C-140)、Sigma Aldrich製のカンナビクロメン(#C-143)、Sigma Aldrich製のカンナビジオール(#C-045)、Sigma Aldrich製のカンナビゲロール(#C-141)、及びSigma Aldrich製のカンナビノール(#C-046)。MP Biomedicalが製造したミルセンは、VWRから入手した(製品番号M0235)。 上記の表1で指定されているように、各成分を混合した。
【０１９５】
4.10.2. 実施例2: TRPV1を介したカルシウム応答を試験するための細胞培養系
HEK293細胞株を、pcDNA6TR(Invitrogen、CA)プラスミド(テトラサイクリン感受性TRExリプレッサータンパク質をコードする)で安定にトランスフェクトし、37℃の加湿した5%CO2雰囲気下でDMEM+10%ウシ胎仔血清(55℃にて1時間不活性化した)+2mMグルタミン中に維持した。TRex293細胞に対する選択圧は、10μg/mlのブラストサイジン(Sigma、St Louis、MO)中での連続培養によって維持した。
【０１９６】
TRPV1の誘導発現を用いてTRex HEK293細胞を産生するために、親細胞を、pcDNA4TOベクターにおけるラットTRPV1 cDNAを用いてエレクトロポレーションし、クローン細胞株を、400μg/mlのゼオシン(Invitrogen、CA)の存在下で限界希釈によって選択した。37℃にて16時間、1μg/mlのテトラサイクリンを使用してTRPV1発現を誘導した。抗FLAGウェスタンブロットを使用して安定な株を誘導タンパク質発現についてスクリーニングし、誘導発現を確認した。電気生理学的測定により、これらの誘導細胞におけるTRPV1の存在及びI/V曲線「シグネチャ」をさらに確認した。さらに、TRPV1をコードする構築物を含まないHEK野生型細胞ではカルシウム流が検出されなかったので、図1に示されたカプサイシン特異的カルシウム流によって、細胞におけるTRPV1の発現及び特異的応答も確認された。
【０１９７】
TRPV1を介したカルシウム応答を、細胞培養系におけるカルシウムアッセイによって試験した。細胞を洗浄し、以下の組成(mM):NaCl 145、KCl 2.8、CsCl 10、CaCl2 10、MgCl2 2、グルコース10、Hepes・NaOH 10、pH7.4、330mOsmの標準改変リンゲル溶液中で37℃にて30分間、0.2μMのFluo-4アセトキシメチルエステル(「Fluo-4」)とインキュベートした。細胞を50,000個の細胞/ウェルにて96ウェルプレートに移し、示したように刺激した。Flexstation 3(Molecular Devices、Sunnydale、USA)を使用してカルシウム信号を取得した。SoftMax(登録商標)Pro 5(Molecular Devices)を使用してデータを分析した。示される場合、名目上カルシウムを含まない外部条件は、1mMのEGTAを含有する0mMのCaCl2リンゲル溶液の調製によって達成した。示される場合、カプサイシン(10μM)及びイオノマイシン(500nM)を陽性対照として使用してカルシウム応答を誘導した。示される場合、カプサゼピン(10μM)を使用してTRPV1媒介性カルシウム応答を特異的にアンタゴナイズした。示される場合、ベースライントレース(刺激なし、NS)を差し引いた。示される場合、ビヒクル単独のトレースを差し引いた。示される場合、対応する混合物と一致した種々の希釈剤を含むビヒクルを陰性対照として使用した。
【０１９８】
4.10.3. 実施例3: 株A混合物、カンナビノイド混合物、又はテルペン混合物に対するTRPV1媒介性カルシウム流応答
上記のような株A混合物、カンナビノイド混合物、及びテルペン混合物に対するTRPV1媒介性カルシウム流応答を試験した。各混合物を細胞培養培地に適用して、表1に示すように細胞を個々の成分の最終濃度にさらした(「濃度μg/ ml」)。 例えば、株A混合物を適用して、細胞を5.6μg/ mlのカンナビジバリン(CBDV)、8.75μg/ mlのミルセンなどにさらした。
【０１９９】
図2A〜図2Cは、経時的(秒)にFluo-4相対蛍光単位(Fluo-4RFU)として測定されたカルシウム流データを示す。図2A〜Cに示されているとおり、株A混合物(図2A)及びテルペン混合物(図2C)の適用に対して有意なカルシウム流応答が観察されたが、カンナビノイド混合物の適用(図2B)に対するカルシウム流応答はそれほどでもなかった。刺激の非存在下(「NS」)での、又はビヒクルの適用(「veh」)に対するカルシウム流応答は検出されなかった(図2A〜C)。
【０２００】
TRPV1構築物を含まない野生型HEK細胞を同じ刺激条件で提示した場合、カルシウム流は観察されなかった(図5A〜5C)。これらのデータは、株A混合物、カンナビノイド混合物、又はテルペン混合物に対するカルシウム流入応答がTRPV1に特異的であり、TRPV1によって媒介されることを示している。
【０２０１】
4.10.4. 実施例4: 個々のテルペンに対するTRPV1媒介性カルシウム流入応答
テルペン混合物は、実施例3において、株A混合物のTRPV1アゴニスト作用に大きく関与することが特定されたため(図2A〜2Cを参照)、テルペン混合物の個々の成分に対するTRPV1媒介性カルシウム流入応答を試験した。各成分を細胞培地に加え、蛍光シグナルをモニターした。個々のテルペン化合物について経時的に測定された蛍光シグナルは、図3B〜3Lに示されている。
【０２０２】
有意なカルシウム流入応答が一部の成分に対して検出されたが、試験したテルペン化合物のすべてではなかった。特に、ミルセン(図3D)及びネロリドール(図3I)に対して有意なカルシウム流応答が検出された。
【０２０３】
ミルセン単独とテルペン混合物の間でTRPV1アゴニスト作用を比較すると、ミルセンはTRPV1媒介性カルシウム応答に大きく寄与することが観察されたが、カルシウム流入シグナルの100％を占めてはいなかった。図4に示されているとおり、テルペン混合物(実線の曲線)は、ミルセン単独(点線の曲線)よりも有意な作用を有していた。これは、ネロリドールを含むいくつかのテルペンが、ミルセンとともに適用された場合、TRPV1に相加的又は相乗的な効果を及ぼし得ることを示唆している。
【０２０４】
4.10.5. 実施例5: ミルセンによるTRPV1の活性化
TRPV1に対するミルセンのアゴニスト作用を、様々な条件下でさらに試験した。まず、種々の濃度のミルセン(3.5μg/ml、1.75μg/ml、0.875μg/ml及び0.43μg/ml)に対するTRPV1媒介性カルシウム流の応答を試験した。図6A〜6Dに示されるように、ミルセンに対するカルシウム応答は用量依存的であり、3.5μg/mlのミルセンに応答する流が最大であり、0.43μg/mlのミルセンに対する流が最小であった。カルシウム流は、野生型HEK細胞培養ではかなり小さく(図6A〜6Dの点線の曲線)、ミルセンがTRPV1チャネルを介してカルシウム流を誘導することを示している。
【０２０５】
ミルセンのTRPV1に対するアゴニスト作用は、3.5μg/mlのミルセンを用いて活性化された細胞にTRPV1阻害剤である10μMのカプサゼピンを適用することでさらに確認された。図7Aに示されているとおり、ミルセンによって誘発されたカルシウム流は、カプサゼピンに反応して減少した。図7Bに示されているとおり、カルシウム流は、対照として適用されたPBSに対しては変化しなかった。このデータは、ミルセンがTRPV1を活性化することによりカルシウム流を誘導することを示している。
【０２０６】
ミルセンによるTRPV1の活性化も、カルシウムを含まない培地条件下で試験した。これらの条件下では、低濃度のミルセン(0.43μg/ml、0.875μg/ml及び1.75μg/ml)はカルシウムによって媒介される蛍光の増大を引き起こさなかったが(図8B、8C、8Dを参照)、高濃度のミルセン(3.5μg/ml)はそのような増大を誘発した(図8A)。このことは、ミルセンが低濃度ではほとんど細胞外バッファーからカルシウム流を誘導するが、高濃度では細胞内貯蔵から細胞質ゾルにカルシウム流を誘導できることを示唆している。カルシウム流入はTRPV1のない野生型HEK細胞では観察されなかったか、最小限しか観察されなかったので、細胞外及び細胞内の流は両方ともTRPV1に依存している(図8A〜8Dの点線の曲線)。 
【０２０７】
ミルセンによるTRPV1の活性化を確認し、さらに調査するために、ラットTRPV1を過剰発現している単一HEK293細胞でのパッチクランプ実験によりチャネル電流を評価した。HEK293細胞は、140mM NaCl、1mM CaCl2、2mM MgCl2、2.8mM KCl、11mMグルコース、及び10mM HEPES-NaOHを含み、pH 7.2及び浸透圧300 mOsmolのナトリウムベースの細胞外リンゲル溶液に保持した。細胞の脂肪質ゾルに、140mM Cs-グルタメート、8mM NaCl、1mM MgCl2、3mM MgATP、及び10mM HEPES-CsOHを含む細胞内パッチピペット溶液を灌流させた。標準内部Ca2+濃度を、4mM Ca及び10mM BAPTAで180 nMに緩衝化した。WebMaxCで提供される計算機(http://www.stanford.edu/~cpatton/webmaxcS.htm)を使用して、フリーの緩衝化されていないCaのレベルを調整した。最終溶液のpHをpH7.2に調整し、浸透圧を300mOsmolで測定した。 
【０２０８】
TRPV1チャネルを、細胞外溶液に5μM、10μM、又は150μMミルセンを加えることで活性化させた。1μMカプサイシンをTRPV1活性化の陽性対照として使用した。細胞外溶液の迅速な適用と交換は、SmartSquirtデリバリーシステム(Auto-Mate Scientific、サンフランシスコ)を使用して行った。システムには、電子バルブとEPC-9アンプ(HEKA、ランブレヒト、ドイツ)の間にValveLink TTLインターフェイスが含まれいる。この構成により、PatchMasterソフトウェア(HEKA、Lambrecht、ドイツ)を介してプログラム可能な溶液変更が可能になる。
【０２０９】
パッチクランプ実験を、21〜25℃でホールセル構成で実施した。パッチピペットの抵抗は2〜3MΩであった。EPC-9アンプを制御するPatchMasterソフトウェアでデータを取得した。-100から100mVの電圧範囲にわたる50msの電圧ランプを、500msの期間にわたって0.5 Hzのレートで0mVの保持電位から供給した。電圧を、10mVの液間電位差に対して補正した。電流を2.9 kHzでフィルタリングし、100μs間隔でデジタル化した。各電圧ランプの前に、容量性電流を決定し、補正した。特定の電位に対する電流の発生を、-80mV及び+80mVの電圧で電流振幅を測定することにより、個々のランプ電流記録から抽出した。データは、FitMaster(HEKA、ランブレヒト、ドイツ)、及びIgorPro(WaveMetrics、レイクオスウィーゴ、オレゴン、米国)で分析した。該当する場合、平均化されたデータの統計誤差は、平均値±s.e.m.として示される。
【０２１０】
図19A〜19Cに示されるように、ミルセンは個々の細胞において用量依存的応答を誘発した。内向き及び外向きの電流の発生が経時的に示されている。各データポイント(DP)は約1秒に相当する。5μM(図19A)、10μM(図19B)、及び150μM(図19C)のミルセンは、1μMカプサイシンの適用により誘導された4〜10nAの電流(図示せず)と比較して、0.5〜2.2nAの電流を誘導した。ミルセンの用量を増やすと、活性化電流の振幅(図19A〜19C)とカルシウム流入(データは示していない)の両方に依存する形で不活性化した内向き整流性の非選択的カチオン電流が生じる。
【０２１１】
図20Aは、ミルセン適用後にカプサイシンを追加した以外は図19Aと同じ実験を示す。ラットTRPV1を過剰発現するHEK293細胞を、1mM Caを含む細胞外リンゲル液で平衡化した。細胞外バッファーを、データポイント(DP)60で5μMミルセンを含むバッファーに交換した。ミルセン溶液を、DP 120で1μMカプサイシンを含む細胞外バッファーに交換した。内向き及び外向きの電流(nA)を各DPで測定した。図20Aは、6つの独立した実験の平均内向き及び外向き電流を示している。5μMミルセンは時間とともに約0.5nAの内向き電流を誘導し、1μMカプサイシンは約9nAの内向き電流を誘導した。ミルセンとカプサイシンはどちらも、内向き電流よりも低い振幅で外向き電流を誘導した。 図20Bは、ミルセン誘導電流の拡大図を示す。 
【０２１２】
次に、ミルセン及びカプサイシンによって誘導される電流と実験電圧との関係を分析した。データポイント1、59、119、179で電圧ランプを実行し(図20A、矢印1〜4 IV)、ミルセンとカプサイシンの添加の前後にIVの関係を評価した(図20C〜E)。図20Cは、リンゲル液の存在下での初期の電流発生(図20Aの「2 IV」)と細胞のブレークイン電流(break-in current)(図20Aの「1 IV」)を示している。図20Dは、ミルセンによって誘導されたTRPV1の活性化を示している(図20Aの「3 IV」)。図20Eは、カプサイシンによって誘導されたTRPV1の活性化を示している(図20Aの「4 IV」)。
【０２１３】
カプサイシンは、TRPV1チャネルのCa2+イオン透過性を選択的に高めることが知られているTRPV1アゴニストである。チャネルの透過特性は、以前に2つの状態で実証されている。この非選択的カチオンチャネル(NSCC)の状態1は、ナトリウムに対するカルシウムの選択性はわずかであるか、選択性がない。状態2(拡張状態又は遷移状態)は、ポアの特性が変化して大きなカチオン(例えばNMDG)を透過させ、それに対応して大量のカルシウム及びナトリウム流をサポートする到達状態を表す。状態1から状態2への遷移は、IV曲線の顕著な線形化によって特徴付けられ、それに対応して状態1よりも大きな内向き電流を伴う。図19及び図20は、ミルセンがTRPV1の強力な活性化剤であり、nA電流を生成することを示している。カプサイシンとは対照的に、ミルセンは主に状態1でチャネルを活性化する。ミルセン誘発性とカプサイシン誘発性のTRPV1活性化特性の違いは、TRPV1活性化の振幅、選択性、したがって生理学的結果を、従来のリガンドであるカプサイシンとは対照的に、ミルセンに対するTRPV1媒介性の応答の示差的電気生理学的特性に基づいて合理的な方法で操作し得ることを示唆している。
【０２１４】
4.10.6. 実施例6: TRPV1に対する株A混合物のミルセン以外の成分の作用
ミルセン単独では株A混合物のTRPV1アゴニスト作用のすべてを説明できなかったので、株A混合物の残りのTRPV1-アゴニスト作用を理解するために、個々のカンナビノイド及びCBMIX(すなわち、ミルセンを含まない株A混合物)のTRPV1に対する作用をさらに調査した。
【０２１５】
まず、個々のカンナビノイドを細胞培養培地に加え、蛍光シグナルをモニターした。図9A〜9Gは、カンナビノイドがTRPV1を介するカルシウム流に異なった貢献をすることを示している。カンナビノイド化合物のすべてではないが、一部に対し、中程度のカルシウム応答が検出された。特に、カンナビジバリン(CBDV)、カンナビクロメン(CBC)、カンナビジオール(CBD)、カンナビジオール酸(CBDA)、及びカンナビゲロール酸(CBGA)に対してカルシウム流の応答が検出された。そのようなカルシウム応答は、TRPV1のない細胞においてはごくわずかであるか、欠如しており、これは、カルシウム応答がTRPV1によって媒介されることを示している。
【０２１６】
(i)ミルセンはTRPV1を介したカルシウム応答に大きく寄与するが、テルペン混合物のカルシウム流入シグナルの100％を占めてはいなかった(図4)；(ii)テルペン混合物は、TRPV1を介したカルシウム応答に寄与するが、株A混合物のカルシウム流入シグナルの100％を占めてはいなかった(図2A〜2C)ことが観察されたので、ミルセンを含まない株A混合物(「CBMIX」)のカンナビノイドとテルペンの混合物が、生理活性リガンドであるミルセンの多剤耐性タンパク質(MRP)を介した排出に影響するかどうかを試験した。図10に示されるように、CBMIXを適用すると、MRPを介した蛍光マーカーCFDAの排出が大幅に抑制された。理論に縛られることを望まないが、これは、CBMIX中のテルペンとカンナビノイドの混合物が、ミルセンのMRP媒介排出を阻止することにより、ミルセンのTRPV1-アゴニスト作用を増強し得ることを示唆している。例えば、CBMIXは細胞からのミルセンの排出を遅らせ、単位用量あたりのミルセンの比活性を高めることができる。
【０２１７】
4.10.7. 実施例7: ミルセンによるTRPV1の脱感作
ミルセンとカプサイシンのTRPV1-アゴニスト作用を様々な濃度で比較した。具体的には、ミルセンとカプサイシンのカルシウム応答曲線の曲線下面積(AUC)を個別に計算し、図14Aの対応する濃度にプロットした。カプサイシンと同じカルシウム流入を誘導するには、より高い濃度のミルセンが必要であった。例えば、カルシウム応答曲線の20と300nMの間のAUCに基づいてカルシウム流入の程度を決定した場合、約200nMのミルセン及び約30nMのカプサイシンは、同程度のカルシウム流入を誘導した。
【０２１８】
ミルセンとカプサイシンのTRPV1への長期的な作用も比較した。図14Bに示されているように、ミルセンとカプサイシンは双方とも、各化合物に24時間暴露した後、TRPV1の脱感作を誘発した。例えば、ミルセンがTRPV1発現細胞に初めて導入されたとき、ミルセンはカルシウム流を誘発し、AUC(20〜300nM)66の応答曲線を生成した。しかし、細胞をミルセンと24時間インキュベートした後、ミルセンはAUC 32のカルシウム応答を誘発した。したがって、ミルセンとのプレインキュベーションは、その後のカルシウム応答を52％抑制した。同様に、カプサイシンがTRPV1発現細胞に初めて導入されたとき、カプサイシンはカルシウム流入を誘発し、124のAUCの応答曲線を生成した。細胞をカプサイシンと24時間インキュベートした後、カプサイシンは38のAUCのカルシウム応答を誘導した。したがって、カプサイシンとのプレインキュベーションは、その後のカルシウム応答を69％抑制した。
【０２１９】
TRPV1に対するミルセンとカプサイシンの長期脱感作作用を、対照化合物としてのイオノマイシンの長期作用と比較した。ミルセン又はカプサイシンと同様に、イオノマイシンの最初の適用によりカルシウム流入が誘発され、AUC 128の応答曲線が生成された。ただし、イオノマイシンの長期脱感作作用はミルセン又はカプサイシンよりも小さかった。図14Bに示されているように、500nMのイオノマイシンとのプレインキュベーションでは、ミルセン又はカプサイシンに対するその後のカルシウム流入の応答をそれぞれ27％又は38％だけ減少させた。
【０２２０】
データは、ミルセンがカプサイシンと同様の方法で作用する効果的なTRPV1アゴニストであることを示唆している。ミルセンは、短時間の暴露後にTRPV1媒介性のカルシウム流入を誘発し得、長時間の暴露後にTRPV1の脱感作を誘発し得る。これは、ミルセンが、TRPV1に関連する様々な疾患であって、その治療には現在カプサイシンが使用されている疾患を治療するための効果的なTRPV1アゴニストとして使用できることを示唆している。ミルセンは、様々な適応症の薬学的活性成分としてカプサイシンに取って代わることができる。
【０２２１】
4.10.8. 実施例8: ネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform)
有意なTRPV1アゴニスト作用を有するオリジナルのカンナビス株A混合物に含まれる2つのテルペンであるミルセン及びネロリドールがformatting arguments、他のTRPチャネルにおいて効果を有するかどうかを評価するために、GB Sciences ネットワーク薬理学プラットフォーム(Network Pharmacology Platform)と呼ばれるin silico予測法を開発した。
【０２２２】
ノード及びエッジのデータは、http：//bionet.ncpsb.org/batman-tcm/ 結果ページのソースから取得した。データには、ソース及びターゲットの情報、及びWebサイトでCytoscapeネットワークグラフを生成するために使用されるグループの割り当てが含まれている。ノード及びエッジテキストファイルを、コンマ区切りファイル(csv)としてR統計分析プログラムにロードした。
【０２２３】
ファイルから余分なラベリングと特殊文字が削除され、dplyrライブラリを使用して、明確に定義された変数列と観測行を含むノードデータフレームとエッジデータフレームに配置された。ノードデータは、バットマンの割り当てに従ってグループ指定を再割り当てされ、dplyrライブラリを使用してアルファ順にソートされた。ネットワークライブラリを使用して、有向ネットワークデータオブジェクトを生成するために、エッジデータフレームが使用された。ネットワークオブジェクトには2つの変数が追加された：(i)ノードデータフレームからのソートされたグループ割り当て、及び(ii)エッジリストから計算され、snaライブラリを使用して各ノードに割り当てられるフリーマン度属性(Freeman degree attribute)。ネットワークグラフは、ggnetwork及びggrepelライブラリのグラフインタプリタを介してレンダリングされ、これは、ネットワークオブジェクトからグラフをレンダリングし、スタイルにフォーマット引数(formatting arguments)を使用する。
【０２２４】
図16Aは、ミルセンのターゲット分析と疾患予測ネットワークを示している。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ミルセンの効力が、TRPV1を超えて、一次痛伝導チャネルが別個のTRPである他の侵害受容ニューロンにまで及ぶ可能性が高いことを示している。図16Bは、ネロリドールのターゲット分析と疾患予測ネットワークを示している。ネットワーク内に複数のTRPチャネルが存在することは、ネロリドールの効力が、ミルセンが示されていないTRPチャネルを大幅に追加しないことを示している。
【０２２５】
図11は、治療ターゲットデータベース(TD)エンリッチメント解析(Therapeutic Target Database (TD) enrichment analysis)が、疼痛及び心血管適応症における開発のために、ネロリドールよりもミルセンを優先する傾向があることを示している。さらに、ミルセンは、天然カンナビスについての予測疾患ターゲットセットに大きく寄与している。
【０２２６】
図12は、ミルセンによる直接的又は間接的モジュレーションに対して多様なイオンチャネルターゲットが予測されることを示している。
【０２２７】
参照による組み込み
この出願において引用される全ての刊行物、特許、特許出願及び他の文献は、それぞれの個別の刊行物、特許、特許出願又は他の文献があらゆる目的のために個別に示されて参照により組み込まれるのと同程度に、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２８】
均等物
様々な具体的実施形態が示され且つ記載されているが、上記の明細書は限定的ではない。本発明(1つ又は複数)の精神及び範囲から逸脱することなく様々な変更を行い得ることが理解されるだろう。本明細書を概観すれば、当業者には多くの変形が明らかであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ−Ｅ】
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【図３Ｆ−Ｉ】
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【図３Ｊ−Ｌ】
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【図４】
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【図５Ａ】
2020520966.tif 000011
【図５Ｂ−Ｃ】
2020520966.tif 000012
【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ−Ｄ】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ−Ｄ】
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【図９Ｅ−Ｇ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ−１】
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【図１６Ａ−２】
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【図１６Ａ−３】
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【図１６Ａ−４】
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【図１６Ｂ−１】
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【図１６Ｂ−２】
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【図１６Ｂ−３】
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【図１６Ｂ−４】
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【図１７】
2020520966.tif 000034
【図１８】
2020520966.tif 000035
【図１９】
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【図２０Ａ−Ｂ】
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【図２０Ｃ−Ｅ】
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【国際調査報告】
2020520966.tif 000039
2020520966.tif 000040
2020520966.tif 000041