(57)【要約】  ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａを抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで含む複合体の患者への投与のための投与レジメンが開示される。このような投与レジメンは、障害、例えば、癌の予防、治療および／または管理において使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における癌を治療する方法であって、
（ａ）少なくとも１回の初期用量のインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）／ＩＬ−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）複合体とそれに続く反復または漸増用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を；
（ｂ）抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで前記対象に投与することを含む方法。
【請求項２】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａの前記初期用量が、０．５〜２μｇ／ｋｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａの前記初期用量が、１μｇ／ｋｇである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の前記反復用量が、１μｇ／ｋｇである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の前記漸増用量が、前回用量の２倍である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の前記初期用量が、１μｇ／ｋｇであり、それに続く前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の漸増用量が、２、４および８μｇ／ｋｇである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記用量の前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、３週間にわたり週１回皮下投与する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、２週間にわたり週３回皮下投与する、請求項１〜３、５および６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が、ヒトＩＬ−１５およびヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａのヘテロ二量体複合体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ヒトＩＬ−１５が、配列番号１のアミノ酸配列の残基４９〜１６２を含み、前記ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記用量の前記抗ＰＤ−１抗体分子を、均一用量で投与する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ＰＤ−１抗体分子の前記均一用量が、３００ｍｇまたは４００ｍｇである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記用量の前記抗ＰＤ−１抗体分子を、４週間毎に１回静脈内投与する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗ＰＤ−１抗体分子が、配列番号２９のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３１のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号３２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗ＰＤ−１抗体分子が、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号４５または６５のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗ＰＤ−１抗体分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４から選択されるヒト重鎖定常領域およびカッパまたはラムダから選択される軽鎖定常領域を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗ＰＤ−１抗体分子が、
（ａ）配列番号９８または９９の１０８位におけるセリン−プロリン突然変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域；
（ｂ）配列番号１０１の１８０位におけるアスパラギン−アラニン突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域；
（ｃ）配列番号１０２の１４８位におけるアスパラギン酸−アラニン突然変異および２１２位におけるプロリン−アラニン突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、およびカッパ軽鎖定常領域；または
（ｄ）配列番号１０３の１１７位におけるロイシン−アラニン突然変異および１１８位におけるロイシン−アラニン突然変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、およびカッパ軽鎖定常領域
の１つ以上を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗ＰＤ−１抗体分子が、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４７または６７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
一態様において、追加の薬剤、例えば、抗ＰＤ−１抗体との組合せでＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させるための、ＩＬ−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）に共有または非共有結合しているインターロイキン−１５（「ＩＬ−１５」）を含む複合体の患者への投与のための投与レジメンが、本明細書に記載される。具体的な態様において、組合せの投与レジメンは、免疫系の活性化が有益である障害、例えば、癌の予防、治療、および／または管理において有用である。
【背景技術】
【０００２】
サイトカインのインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）は、体内の多くの細胞により産生されるリンホカインのアルファ−４ヘリックスバンドルファミリーのメンバーである。ＩＬ−１５は、自然および適応免疫系の両方の活性のモジュレーション、例えば、侵入病原体に対するメモリーＴ細胞応答の維持、アポトーシスの阻害、樹状細胞の活性化、ならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞増殖および細胞毒性活性の誘導における極めて重要な役割を担う。
【０００３】
ＩＬ−１５受容体は、複数のサイトカイン受容体により共有される３つのポリペプチド、タイプ特異的ＩＬ−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）、ＩＬ−２／ＩＬ−１５受容体ベータ（またはＣＤ１２２）（「β」）、および共通ガンマ鎖（またはＣＤ１３２）（「γ」）からなる。ＩＬ−１５Ｒａは、広範な細胞タイプにより発現されると考えられるが、必ずしもβおよびγと同時に発現されない。ＩＬ−１５シグナリングは、ＩＬ−１５Ｒａ、β、およびγのヘテロ二量体複合体を介して；βおよびγのヘテロ二量体複合体を介して、またはマスト細胞上に見出されるサブユニット、ＩＬ−１５ＲＸを介して生じることが示されている。
【０００４】
ＩＬ−１５は可溶性タンパク質であるが、内因性ＩＬ−１５は、血清または体液中で容易に検出可能でない。それというのも、それは主に、いくつかのタイプのアクセサリー細胞により発現または獲得される膜結合形態として生じるためである。例えば、ＩＬ−１５ｍＲＮＡは造血および非造血系の両方の細胞中で検出されるが、Ｔ細胞はＩＬ−１５を産生しない。その代わり、ＩＬ−１５はＩＬ−１５Ｒａに結合し、Ｔ細胞上で細胞表面複合体を形成する。ＩＬ−１５は、受容体の細胞外ドメインのエキソン２中の「ｓｕｓｈｉドメイン」を介して高い親和性でＩＬ−１５Ｒａに特異的に結合する。トランス−エンドソームリサイクリングおよび細胞表面への再移動後、これらのＩＬ−１５複合体は、ＩＬ−１５Ｒβγ低親和性受容体複合体を発現するバイスタンダー細胞を活性化させる特性を獲得し、Ｊａｋ／Ｓｔａｔ経路を介するＩＬ−１５媒介シグナリングを誘導する。受容体の膜貫通ドメインのすぐ遠位の細胞外ドメイン中の開裂部位において開裂されるＩＬ−１５Ｒａの野生型可溶性形態（「ｓＩＬ−１５Ｒａ」）が観察されている。腫瘍壊死因子−アルファ変換酵素（ＴＡＣＥ／ＡＤＡＭ１７）がこのプロセスに関与するプロテアーゼとして関係している。
【０００５】
免疫系におけるその多面的役割に基づき、ＩＬ−１５媒介機能をモジュレートするために設計される種々の治療法が探索されてきた。近年の報告は、ＩＬ−１５は、ｓＩＬ−１５Ｒａ、またはｓｕｓｈｉドメインと複合体化された場合、その免疫向上機能を維持することを示唆している。組換えＩＬ−１５およびＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、種々の前臨床モデルにおいてメモリーＣＤ８Ｔ細胞およびＮＫ細胞の拡大を異なる程度で促進し、腫瘍拒絶を向上させることが示されている。さらに、マウスモデルにおけるＩＬ−１５またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体含有構築物の腫瘍標的化は、同系腫瘍が移植された免疫コンピテント動物またはヒト腫瘍細胞系が注射されたＴおよびＢ細胞欠損ＳＣＩＤマウス（ＮＫ細胞を保持）のいずれにおいても改善された抗腫瘍応答をもたらした。向上した抗腫瘍活性は、腫瘍内のＮＫおよび／またはＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞拡大の向上をもたらすＩＬ−１５含有部分の増加した半減期ならびに腫瘍細胞の表面上のＩＬ−１５のトランス提示に依存的であることが考えられる。したがって、ＩＬ−１５を発現するように遺伝子操作された腫瘍細胞は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞リクルートメント、増殖および機能を向上させることにより樹立腫瘍の拒絶を促進することも報告された（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，（２００９）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．１０６：７５１３−７５１８；Ｍｕｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，（１９９５）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５（２）：２８９−２９３；Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ，（１９９７）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９（１）：６６−７３；Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ，（２００４）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．１０１（７）：１９６９−７４；Ｓｎｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ，（２０１１）Ｂｌｏｏｄ．１１８（２６）：６８４５−６８４８；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，（２０１２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８８（１２）：６１５６−６１６４）。
【０００６】
ＩＬ−１５は前臨床動物モデルにおいて抗腫瘍活性および生存率増加を示す一方、データはそれがＣＤ８＋Ｔ細胞上のＰＤ−１を上方調節し、ＩＬ−１０を増加させる傾向を有し、その治療利益を潜在的に制限することも示した。前臨床試験において、組換えＩＬ−１５およびＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１軸を標的化するチェックポイントモジュレーターを用いる組合せ方針は、単剤療法と比較してＰＤ−１およびＩＬ−１０の両方を低減させ、全生存率を増加させた（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ，（２０１０）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１０：６０１９−２８）。
【０００７】
抗原に対する免疫応答を媒介するＴ細胞の能力は、２つの区別されるシグナリング相互作用を要求する（Ｖｉｇｌｉｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ４：６６６−６７５；Ｋｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：２９７−３３９）。第１に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上に配置された抗原が抗原特異的ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞に提示される。このような提示が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介してシグナルを送達し、それがＴ細胞に提示抗原に特異的な免疫応答の開始を指示する。第２に、ＡＰＣおよび区別されるＴ細胞表面分子の間の相互作用を介して媒介される種々の共刺激性および阻害性シグナルが、Ｔ細胞の活性化および増殖、ならびに最終的にその阻害を始動させる。
【０００８】
免疫系は共刺激性および共阻害性リガンドおよび受容体のネットワークにより厳格に制御される。これらの分子は、Ｔ細胞活性化のための第２のシグナルを提供し、感染に対する免疫応答を最大化するための正および負のシグナルのネットワークの平衡を提供する一方、自己への免疫を制限する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  Ｍａｒ．７，２０１１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８（３）：５７７−９２；Ｌｅｐｅｎｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ＆  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ８：２７９−２８８）。共刺激性シグナルの例としては、ＡＰＣのＢ７．１（ＣＤ８０）およびＢ７．２（ＣＤ８６）リガンドと、ＣＤ４＋Ｔリンパ球のＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４受容体との間の結合が挙げられる（Ｓｈａｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６；Ｌｉｎｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９：３０７−３２１）。Ｂ７．１またはＢ７．２のＣＤ２８への結合はＴ細胞活性化を刺激する一方、Ｂ７．１またはＢ７．２のＣＴＬＡ−４への結合は、このような活性化を阻害する（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．Ｒｅｓ．２８（１）：３９−４８；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５１５−５４８）。ＣＤ２８は、Ｔ細胞の表面上で構成的に発現される（Ｇｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３８０−３８８）一方、ＣＴＬＡ−４発現はＴ細胞活性化後に急速に上方調節される（Ｌｉｎｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：５３５−５４３）。
【０００９】
ＣＤ２８受容体の他のリガンドとしては、「Ｂ７スーパーファミリー」としても公知の関連Ｂ７分子群が挙げられる（Ｃｏｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２（３）：２０３−２０９；Ｓｈａｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：１１６−１２６；Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．６：２２３．１−２２３．７；Ｋｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）前掲）。Ｂ７スーパーファミリーのいくつかのメンバー、例として、Ｂ７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、プログラム細胞死１リガンド（ＰＤ−Ｌ１；Ｂ７−Ｈ１）、プログラム細胞死２リガンド（ＰＤ−Ｌ２；Ｂ７−ＤＣ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４およびＢ７−Ｈ６が公知である（Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）前掲）。
【００１０】
プログラム細胞死１（ＰＤ−１）タンパク質は、Ｔ細胞調節因子の拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーの阻害性メンバーである（Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４：３９１７７９−８２；Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：７１１−８）。ＣＤ２８ファミリーの他のメンバーとしては、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡが挙げられる。ＰＤ−１は、他のＣＤ２８ファミリーメンバーの不対システイン残基特徴を欠くモノマーとして存在することが示唆される。ＰＤ−１は、活性化Ｂ細胞、Ｔ細胞、および単球上で発現される。
【００１１】
ＰＤ−１遺伝子は、５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質をコードする（Ａｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：７６５−７２）。ＰＤ−１は、ＣＴＬＡ−４と構造的に類似するが、Ｂ７−１およびＢ７−２結合に重要なＭＹＰＰＹモチーフ（配列番号２３６）を欠く。ＰＤ−１についての２つのリガンドＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）が同定されており、ＰＤ−１への結合時にＴ細胞活性化を下方調節することが示されている（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７−３４；Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：６３４−４３）。ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の両方が、ＰＤ−１に結合するが、他のＣＤ２８ファミリーメンバーに結合しないＢ７ホモログである。ＰＤ−Ｌ１は、種々のヒト癌において豊富である（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７８７−９）。
【００１２】
ＰＤ−１は、ＴＣＲシグナルを負に調節する免疫阻害性タンパク質として公知である（Ｉｓｈｉｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：３８８７−３８９５；Ｂｌａｎｋ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｄｅｃ．２９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５６（５）：７３９−７４５）。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１間の相互作用は免疫チェックポイントとして作用し得、それは、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介増殖の減少、および／または癌性細胞による免疫回避をもたらし得る（Ｄｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８１：２８１−７；Ｂｌａｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５４：３０７−３１４；Ｋｏｎｉｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：５０９４−１００）。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２との局所的相互作用の阻害により逆転され得；この効果は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２との相互作用が同様に遮断された場合に相加的である（Ｉｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９９：１２２９３−７；Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：１２５７−６６）。
【００１３】
免疫チェックポイント、例として、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の抗体阻害剤は、種々の固形腫瘍を有する患者において、広い免疫活性化剤、例えば、ＩＬ−２およびＩＦＮ−αよりも低い毒性で有意な抗腫瘍活性を実証している。ＰＤ−１を標的化する２つのモノクローナル抗体ペムブロリズマブおよびニボルマブは、黒色腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）および他の固形腫瘍において有意な単一薬剤活性を実証している（Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ，（２０１２）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６６：２４４３−５４；Ｈａｍｉｄ  ｅｔ  ａｌ，（２０１３），Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１３４−４４；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ，（２０１４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３２：１０２０−３１；Ｓｅｉｗｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ，（２０１４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ（Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）３２（１５ｓ）：６０１１；Ｐｏｗｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ，（２０１４）Ｎａｔｕｒｅ  ５１５：５５８−６２；Ｇａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ，（２０１５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ  ３７２：２０１８−２８；Ｍｏｒｅｎｏ  ＆  Ｒｉｂａｓ（２０１５）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１２：１４２１−７；Ｒｏｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ，（２０１５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７２：３２０−３０）。既に治療された切除不能な黒色腫を有する患者において、ペムブロリズマブおよびニボルマブに対する奏効率はそれぞれ３４％および３１％であり；無進行生存期間はそれぞれ５０週間および９．７ヵ月であった（Ｒｉｂａｓ  ｅｔ  ａｌ，（２０１４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）３２（１５ｓ）：ＬＢＡ９０００；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ，（２０１４）前掲）。進行したこれまで未治療の非小細胞肺癌を有する患者において、ペムブロリズマブおよびニボルマブに対する奏効率は２６％および３０％であった（Ｒｉｚｖｉ  ｅｔ  ａｌ，（２０１４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）３２（１５ｓ）：８００７；Ｇｅｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，（２０１４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．（Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）３２（１５ｓ）：８０２４）。上記に詳述した奏効率から把握することができるような一部の患者における有意な活性にもかかわらず、単一薬剤抗ＰＤ−１免疫療法により治療された患者の大多数は、治療利益を得ない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
抗腫瘍免疫を向上させる治療アプローチは、免疫応答、例えば、抗腫瘍免疫応答の１つ以上の段階における複数の構成成分の標的化により免疫応答が最適化される場合により有効に機能し得ることが考えられる。例えば、細胞および体液性免疫応答を向上させる（例えば、食細胞および／または腫瘍浸潤リンパ球（例えば、ＮＫ細胞およびＴ細胞）を刺激、例えば、脱阻害することによる）一方、腫瘍免疫抑制シグナリングを遮断する（例えば、マクロファージ分極化を増加させ、Ｔｒｅｇ枯渇を増加させ、および／または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を減少させることによる）アプローチは、より有効な、および／または長期の治療応答をもたらし得る。したがって、癌免疫療法のための組合せ療法が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
したがって、腫瘍微小環境において免疫抑制効果を除去する組合せ療法が本明細書に開示され、したがって、本明細書に開示される組合せは、例えば、障害の治療において優れた有益な効果、例えば、組合せの治療剤の単剤療法投与と比較して向上した抗癌効果、低減した毒性および／または低減した副作用を提供し得る。例えば、組合せにおける治療剤の１つ以上を、単剤療法投与と比較して同一の治療効果を達成することが要求されるよりも低い投与量において、またはより短い投与期間もしくは少ない頻度で投与することができる。したがって、組合せ療法を使用して癌および他の免疫障害を治療するための組成物および方法が開示される。
【００１６】
一態様において、組合せ療法は、免疫阻害性タンパク質、例えば、ＰＤ−１の活性を、免疫向上剤、例えば、ｓＩＬ−１５Ｒａと複合体化されたＩＬ−１５との組合せでモジュレートして免疫系を向上させる薬剤を含む。このような組合せ療法は、例えば、癌免疫療法および他の病態、例えば、慢性感染の治療に使用することができる。
【００１７】
一実施形態において、対象における障害、例えば、過剰増殖病態または障害（例えば、癌）を治療する（例えば、阻害し、低減させ、改善し、または予防する）方法が本明細書に提供される。本方法は、ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させるための薬剤を対象に投与することを含み、ＩＬ−１５シグナル伝達を誘導し、ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させる薬剤を抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで対象に投与することを含む。より具体的には、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで対象に投与することにより、対象における障害、例えば、過剰増殖病態または障害（例えば、癌）を治療する（例えば、阻害し、低減させ、改善し、または予防する）方法が本明細書に提供される。対象における障害、例えば、過剰増殖病態または障害（例えば、癌）の治療（例えば、阻害、低減、改善、または予防）における使用のための、抗ＰＤ−１抗体分子との組合せのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体も提供される。対象における障害、例えば、過剰増殖病態または障害（例えば、癌）の治療（例えば、阻害、低減、改善、または予防）のための医薬品の調製における使用のための、抗ＰＤ−１抗体分子との組合せのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体がさらに提供される。
【００１８】
一実施形態において、対象における癌を治療する方法であって、（ａ）少なくとも１回の初期用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体とそれに続く漸増用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を；（ｂ）抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。対象における癌の治療における使用のための、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子であって、（ａ）初期用量におけるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体とそれに続く漸増用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が；（ｂ）抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで対象に投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子も本明細書に提供される。癌の治療のための医薬品の調製における使用のための、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子であって、（ａ）初期用量におけるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体とそれに続く漸増用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が；（ｂ）抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで対象に投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子がさらに提供される。
【００１９】
一実施形態において、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態との複合体を含む組成物が本明細書に提供される。一実施形態において、組成物のＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５である。複合体は、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態に共有または非共有結合しているＩＬ−１５を含み得る。特定の実施形態において、ヒトＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態に非共有結合している。特定の実施形態において、組成物のヒトＩＬ−１５は、表１の配列番号１のアミノ酸配列または表１の配列番号１のアミノ酸残基４９〜１６２を含み、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、組成物は、医薬組成物である。
【００２０】
一実施形態において、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）に高い親和性および特異性で結合する抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）が本明細書に提供される。抗体分子をコードする核酸分子、抗体分子を含む医薬組成物および用量配合物も提供される。
【００２１】
一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、例えば、治療プロトコルの一部として対象に投与することにより、例えば、（ａ）初期用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を第１の治療サイクルにおいて対象に投与すること；およびさらなる用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をそれぞれの連続治療サイクルにおいて対象に投与することにより、または（ｂ）初期用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を第１の治療サイクルにおいて対象に投与すること；および連続的に高くなる用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をそれぞれの連続治療サイクルにおいて対象に投与することにより過剰増殖病態または障害、例えば、癌を治療する方法が本明細書に提供される。例えば、一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を初期用量で第１の治療サイクルにおいて対象に投与し、次いで同一用量の反復投与を第２および反復治療サイクルにおいて行う。一部の実施形態において、第１のサイクルの用量は、０．２５μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇまたは８μｇ／ｋｇであり、それに同一用量の投与の連続サイクルが続く。ある実施形態において、第１のサイクルの用量は、１μｇ／ｋｇであり、それに第２のサイクルにおける１μｇ／ｋｇおよび第３のサイクルにおける１μｇ／ｋｇの用量が続く。例えば、対象は、それぞれの治療サイクル（２８日間）の間、同一用量を３週間にわたり週１回、次いで１週間の中断を受容し得る。ある実施形態において、用量は、皮下投与（ＳＣ）することができる。例えば、代替実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を初期用量で第１の治療サイクルにおいて対象に投与する場合、投与レジメンの第２のサイクルにおいて対象に投与される用量を、第１のサイクルの間に投与される用量に対して増加させ、第３のサイクルの間に対象に投与される用量を第２のサイクルの間に投与される用量に対して増加させ、第４のサイクルの間に対象に投与される用量を第３のサイクルの間に投与される用量に対して増加させ、第５のサイクルの間に対象に投与される用量を第４のサイクルで投与される用量に対して増加させる、など。一部の実施形態において、第１のサイクルの用量は、０．２５μｇ／ｋｇであり、それにそれぞれ０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇおよび８μｇ／ｋｇの用量レベルにおける連続サイクルが続く。ある実施形態において、第１のサイクルの用量は、１μｇ／ｋｇであり、それに第２のサイクルにおける２μｇ／ｋｇ、第３のサイクルにおける４μｇ／ｋｇおよび第４のサイクルにおける８μｇ／ｋｇの用量が続く。例えば、対象は、それぞれの治療サイクル（２８日間）の間、同一用量を２週間にわたり週３回、次いで２週間の中断を受容し得る。ある実施形態において、用量は、皮下投与（ＳＣ）することができる。
【００２２】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子を、例えば、治療プロトコルの一部として、例えば、約３００ｍｇ〜４００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子の用量で対象に３週間毎に１回または４週間毎に１回投与することにより、過剰増殖病態または障害、例えば、癌を治療する方法が本明細書に提供される。一実施形態において、用量は、３週間毎に１回の約３００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子である。別の実施形態において、用量は、４週間毎に１回の約３００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子である。ある実施形態において、用量は、４週間毎に１回の約４００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子である。ある実施形態において、用量は、注入として静脈内投与（ＩＶ）することができる。
【００２３】
別の態様において、本発明は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および／または本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子）を含む組成物（例えば、１つ以上の組成物または剤形）を特徴とする。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子を含む配合物、例えば、投薬配合物、およびキット、例えば、治療キットも本明細書に記載される。ある実施形態において、組成物または配合物は、４００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子）を含む。一部の実施形態において、組成物または配合物は、３週間毎に１回投与または使用される。ある実施形態において、組成物または配合物は、４週間毎に１回投与または使用される。
【００２４】
一態様において、ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させる方法であって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を用量レジメンにおいて対象に皮下投与することを含み、レジメンにおける投与サイクルが、（ａ）ある用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を第１の期間にわたり設定時間間隔において対象に皮下投与すること；および（ｂ）ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を第２の期間にわたり投与しないことを含む方法が本明細書に提供される。ある実施形態において、投与サイクルは、２、３、４、５、６回、またはそれ以上反復し、毎回、同一または増加用量のいずれかのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を用いる。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、毎日、１日おき、３、４、５、６または７日毎の頻度において投与する。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａは、週３回（例えば、月曜日、水曜日、金曜日）投与する。他の実施形態において、第１および第２の期間は異なる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第１の投与期間は、１週間〜４週間の長さ、２〜４週間、２〜３週間、または１〜２週間である。他の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第１の投与期間は、１週間、２週間、３週間または４週間の長さである。一部の実施形態において、第２の期間は、１週間〜２ヵ月間、１〜８週間、２〜８週間、１〜６週間、２〜６週間、１〜５週間、２〜５週間、１〜４週間、２〜４週間、２〜３週間、１〜２週間、３週間、２週間または１週間の長さである。具体的な実施形態において、第１の期間は、３週間の長さであり、第２の期間は、１週間の長さである。一部の実施形態において、第１のサイクルの第１の期間の間に投与される用量は、同一であり、後続のサイクルについて不変のままである。例えば、第１のサイクルおよびそれぞれの後続のサイクルについての用量は、０．１μｇ／ｋｇ〜０．５μｇ／ｋｇ、０．２５μｇ／ｋｇ〜１μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ〜２μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜４μｇ／ｋｇ、または２μｇ／ｋｇ〜８μｇ／ｋｇ、より具体的には、０．２５μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇまたは８μｇ／ｋｇである。具体的な実施形態において、用量は、第１のサイクルの第１の期間について１μｇ／ｋｇであり、それぞれの後続のサイクルについて１μｇ／ｋｇである。さらなる実施形態において、第１のサイクルの用量は、用量レジメンの１つ以上の後続のサイクルにおいて使用される用量よりも低い。一実施形態において、後続のサイクルの用量は、前回のサイクルのものの２倍である。一実施形態において、第１のサイクルおよびそれぞれの後続のサイクルの用量は、０．１μｇ／ｋｇ〜０．５μｇ／ｋｇ、０．２５μｇ／ｋｇ〜１μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜５μｇ／ｋｇ、または５μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、第１のサイクルおよびそれぞれの後続のサイクルの第１の用量は、０．１μｇ／ｋｇ〜０．５μｇ／ｋｇ、０．２５μｇ／ｋｇ〜１μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ〜２μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜４μｇ／ｋｇ、または２μｇ／ｋｇ〜８μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、第１のサイクルの用量は、０．２５μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇまたは８μｇ／ｋｇである。ある実施形態において、第１のサイクルおよびそれぞれの後続のサイクルの用量は、それぞれ１μｇ／ｋｇ、および２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、８μｇ／ｋｇである。
【００２５】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子を、例えば、治療プロトコルの一部として、例えば、約３００ｍｇ〜４００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子の用量で対象に投与することにより、抗腫瘍免疫を向上させる方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、３週間毎に１回または４週間毎に１回投与することができる。ある実施形態において、用量は、約４００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子であり、４週間毎に１回投与する。ある実施形態において、用量は、約３００ｍｇの抗ＰＤ−１抗体分子であり、３週間毎に１回投与する。
【００２６】
一態様において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せを、例えば、治療プロトコルの一部として対象に投与することにより、例えば、（ａ）ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を初期用量で対象にＳＣ投与し、抗ＰＤ−１抗体分子をＩＶ注入により投与すること；（ｂ）対象へのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与を第１の期間にわたり設定時間間隔において反復すること；（ｃ）ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を第２の期間にわたり投与しないこと；および（ｄ）ステップ（ａ）〜（ｃ）を同一または漸増用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体において反復することにより、過剰増殖病態または障害を治療する方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第１の投与期間は、１週間、２週間、３週間または４週間の長さである。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第２の投与期間は、１週間、２週間、３週間または４週間の長さである。他の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子の投与期間は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間または６週間の長さである。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第１の投与期間は、３週間の長さであり、第２の期間は、１週間の長さであり、抗ＰＤ−１抗体分子の投与期間は、４週間である。ある実施形態において、第１のサイクルの用量は、用量レジメンの１つ以上の後続のサイクルにおいて使用される用量と同一である。代替実施形態において、第１のサイクルの用量は、用量レジメンの１つ以上の後続のサイクルにおいて使用される用量よりも低い。一実施形態において、後続のサイクルの用量は、前回のサイクルのものの２倍である。一実施形態において、初期用量およびそれぞれの後続または漸増用量におけるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量は、０．２５μｇ／ｋｇ〜１μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜５μｇ／ｋｇ、または５μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、初期用量およびそれぞれの後続または漸増用量におけるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量は、０．５μｇ／ｋｇ〜２μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜４μｇ／ｋｇ、または２μｇ／ｋｇ〜８μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、初期用量およびそれぞれの後続または漸増用量におけるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量は、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇまたは８μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せで投与される抗ＰＤ−１抗体分子の用量は、約３００ｍｇ〜４００ｍｇである。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、３週間毎に１回または４週間毎に１回投与することができる。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体との組合せで投与される抗ＰＤ−１抗体分子の用量は、約４００ｍｇであり、４週間毎に１回投与する。
【００２７】
一態様において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せを、例えば、治療プロトコルの一部として対象に投与することにより、過剰増殖病態または障害、例えば、癌を治療する方法が本明細書に提供される。一実施形態において、治療プロトコルは、（ａ）１μｇ／ｋｇの用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に最初の３週間の期間にわたり週１回皮下投与すること；および４００ｍｇの用量の抗ＰＤ−１抗体分子をＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第１の投与と同日にＩＶ注入により投与すること；および（ｂ）ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に投与しない第２の１週間の期間後、同一用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に３週間の期間にわたり週１回皮下投与すること；および４００ｍｇの用量の抗ＰＤ−１抗体分子を後続用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第１の投与と同日にＩＶ注入により投与することを含む。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量は、２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋまたは８μｇ／ｋｇである。代替実施形態において、治療プロトコルは、（ａ）１μｇ／ｋｇの用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に２週間の第１の期間にわたり週３回（例えば、月曜日、水曜日、金曜日）皮下投与すること；および４００ｍｇの用量の抗ＰＤ−１抗体分子をＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第１の投与と同日にＩＶ注入により投与すること；および（ｂ）ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に投与しない２週間の第２の期間後、より高用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に２週間の期間にわたり週３回（例えば、月曜日、水曜日、金曜日）皮下投与すること；および４００ｍｇの用量の抗ＰＤ−１抗体分子をより高用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の第１の投与と同日にＩＶ注入により投与することを含む。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量は、それぞれの治療サイクルについて、それぞれ２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、８μｇ／ｋｇに増加させる。
【００２８】
用量レジメンは、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、もしくはそれ以上、または２〜５回、５〜１０回、１０〜１５回、１５〜２０回、２０〜２５回もしくはそれ以上実施することができる。ある実施形態において、用量漸増レジメンは、少なくとも２ヵ月間、少なくとも３ヵ月間、少なくとも４ヵ月間、少なくとも５ヵ月間、少なくとも６ヵ月間、少なくとも７ヵ月間、少なくとも８ヵ月間、少なくとも９ヵ月間、少なくとも１０ヵ月間、少なくとも１１ヵ月間、少なくとも１年間またはそれ以上にわたり反復する。ある実施形態において、用量漸増レジメンは、３〜６ヵ月間、６〜９ヵ月間、６〜１２ヵ月間、１〜１．５年間、１〜２年間、１．５〜２年間、またはそれ以上にわたり反復する。
【００２９】
ある実施形態において、ＩＬ−１５の血漿レベルおよび／またはリンパ球数をモニタリングする。一部の実施形態において、対象を、副作用、例えば、血圧の減少および／または体温の増加および／または血漿中のサイトカインの増加についてモニタリングする。ある実施形態において、投与レジメンの第１のサイクルの間に投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量を、対象がいかなる有害効果も有さない場合、連続的に漸増させる。一部の実施形態において、投与レジメンの第１のサイクルの間に投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量を、対象がいかなる用量制限毒性、例えば、グレード３または４の有害事象、例えば、リンパ球減少、グレード３の顆粒球減少、グレード３の白血球増加（ＷＢＣ＞１００，０００／ｍｍ３）、または臓器機能不全も経験しない場合、投与レジメンの後続のサイクルについて漸増させる。
【００３０】
ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させることが有益である障害の非限定的な例としては、癌、リンパ球減少、免疫不全、感染性疾患、および創傷が挙げられる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させることが有益である障害は、癌、例として、転移性癌である。別の具体的な実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させることが有益である癌は、固形腫瘍、例えば、肉腫、癌腫またはリンパ腫を含む。固形腫瘍のより具体的な例としては、乳癌、前立腺癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、および黒色腫が挙げられる。別の実施形態において、癌は、抗ＰＤ−１抗体分子による治療に病歴的に感受性であり、例えば、黒色腫、非小細胞肺癌または膀胱癌である。代替実施形態において、癌は、抗ＰＤ−１抗体分子による治療に病歴的に耐性である。
【００３１】
本明細書に記載の方法により対象に投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５ＲａまたはＩＬ−１５Ｒａ誘導体に共有または非共有結合している野生型ＩＬ−１５またはＩＬ−１５誘導体を含み得る。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５および野生型ＩＬ−１５Ｒａを含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５誘導体および野生型ＩＬ−１５Ｒａを含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、天然存在ヘテロ二量体形態である。別の実施形態において、ＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５であり、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａである。具体的な実施形態において、ヒトＩＬ−１５は、表１の配列番号１のアミノ酸配列または表１の配列番号１のアミノ酸残基４９〜１６２を含み、ヒトＩＬ−１５Ｒａは、表１の配列番号６のアミノ酸配列またはその断片を含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５は、表１の配列番号１のアミノ酸配列または表１の配列番号１のアミノ酸残基４９〜１６２を含み、ＩＬ−１５Ｒａは、表１の配列番号７または１０のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態において、ヒトＩＬ−１５は、表１の配列番号１のアミノ酸配列のアミノ酸残基４９〜１６２を含み、ヒトＩＬ−１５Ｒａは、表１の配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
【００３２】
他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、グリコシル化がＩＬ−１５Ｒａの質量の少なくとも２０％、３０％、４０％もしくは５０％または２０％、３０％、４０％もしくは５０％超を占めるようにグリコシル化されている。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａ誘導体を含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５誘導体およびＩＬ−１５Ｒａ誘導体を含む。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態である。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、内因性プロテアーゼによる開裂を阻害する突然変異を含む。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａの細胞外ドメイン開裂部位は、異種プロテアーゼにより特異的に認識される開裂部位により置き換えられている。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａの細胞外ドメイン開裂部位は、異種細胞外ドメイン開裂部位（例えば、ＩＬ−１５Ｒａを開裂させる内因性プロセシング酵素と無関係の別の酵素により認識および開裂される異種膜貫通ドメイン）により置き換えられている。
【００３３】
一実施形態において、ＰＤ−１阻害剤は、米国特許出願第２０１５／０２１３７６９号明細書、表題「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ＰＤ−１  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」に記載の抗ＰＤ−１抗体分子である。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列からの少なくとも１つの抗原結合領域、例えば、可変領域またはその抗原結合断片を含む。
【００３４】
本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の方法における使用に好ましいが、他の抗ＰＤ−１抗体をその代わりに、または本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで使用することができる。
【００３５】
組合せ療法の使用
本明細書に開示される組合せは、以下の１つ以上をもたらし得る：抗原提示の増加、エフェクター細胞機能（例えば、Ｔ細胞増殖、ＩＦＮ−α分泌または細胞溶解機能の１つ以上）の増加、制御性Ｔ細胞機能の阻害、複数の細胞タイプ、例えば、制御性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞およびＮＫ細胞）の活性に対する効果、腫瘍浸潤リンパ球の増加、Ｔ細胞受容体媒介増殖の増加、および癌性細胞による免疫回避の減少。一実施形態において、組合せにおけるＩＬ−１５／Ｉｌ−１５Ｒａ複合体の使用は、免疫応答を刺激する。一実施形態において、組合せにおけるＰＤ−１阻害剤の使用は、ＰＤ−１の１つ以上の活性を阻害し、低減させ、または中和し、免疫チェックポイントの遮断または低減をもたらす。したがって、このような組合せを使用して対象における免疫応答の向上が望まれる障害、例えば、癌を治療または予防することができる。
【００３６】
したがって、別の態様において、対象における免疫応答をモジュレートする方法が提供される。本方法は、対象における免疫応答がモジュレートされるように、本明細書に開示される組合せ（例えば、治療有効量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子を含む組合せ）を単独で、または１つ以上の薬剤もしくは手順との組合せで対象に投与することを含む。対象は、哺乳動物、例えば、霊長類、好ましくは、高等霊長類、例えば、ヒト（例えば、本明細書に記載の障害を有し、または有するリスクがある患者）であり得る。一実施形態において、対象は、免疫応答の向上が必要とされている。一実施形態において、対象は、本明細書に記載の障害、例えば、本明細書に記載の癌または感染性障害を有し、または有するリスクがある。ある実施形態において、対象は、免疫不全であり、またはそうなるリスクがある。例えば、対象は、化学療法治療および／または放射線療法を受けており、または受けたことがある。あるいは、または組合せで、対象は、感染の結果として免疫不全であり、またはそうなるリスクがある。
【００３７】
一態様において、対象における癌または腫瘍を治療する（例えば、低減させ、阻害し、または進行を遅延させることの１つ以上）方法が提供される。本方法は、本明細書に開示される組合せ（例えば、治療有効量のＩｌ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子を含む組合せ）を対象に投与することを含む。
【００３８】
ある実施形態において、組合せにより治療される癌としては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫）、および転移性病変が挙げられる。一実施形態において、癌は、固形腫瘍である。固形腫瘍の例としては、悪性腫瘍、例えば、肉腫および癌腫、例えば、種々の臓器系の腺癌、例えば、肺、乳房、卵巣、リンパ、胃腸管（例えば、結腸）、肛門、生殖器および尿生殖路（例えば、腎細胞、尿路上皮細胞、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、ＣＮＳ（例えば、脳、神経またはグリア細胞）、頭頸部、皮膚（例えば、黒色腫）、および膵臓を冒すもの、ならびに腺癌、例として、悪性腫瘍、例えば、結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小腸の癌および食道の癌が挙げられる。癌は、早期、中期、後期または転移性癌であり得る。
【００３９】
一実施形態において、癌は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（例えば、扁平および非扁平組織構造を伴うＮＳＣＬＣ、またはＮＳＣＬＣ腺癌））、黒色腫（例えば、進行性黒色腫）、腎臓癌（例えば、腎細胞癌）、肝臓癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺癌、膀胱癌、乳癌（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、またはＨｅｒ２／ｎｅｕの１、２または全てを発現しない乳癌、例えば、トリプルネガティブ乳癌）、結腸直腸癌、膵臓癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、および癌、胃食道癌、甲状腺癌、子宮頸癌、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）または血液癌、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、または白血病（例えば、骨髄性白血病またはリンパ性白血病）から選択される。
【００４０】
別の実施形態において、癌は、癌腫（例えば、進行性または転移性癌腫）、黒色腫または肺癌、例えば、非小細胞肺癌から選択される。
【００４１】
一実施形態において、癌は、肺癌、例えば、非小細胞肺癌または小細胞肺癌である。
【００４２】
一実施形態において、癌は、黒色腫、例えば、進行性黒色腫である。一実施形態において、癌は、他の治療法に応答しない進行性または切除不能な黒色腫である。他の実施形態において、癌は、ＢＲＡＦ突然変異（例えば、ＢＲＡＦ  Ｖ６００突然変異）を有する黒色腫である。さらに他の実施形態において、本明細書に開示される組合せ（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子を含む組合せ）は、ＢＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブまたはダブラフェニブ）を用いるまたは用いない抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、イピリムマブ）による治療後に投与する。
【００４３】
別の実施形態において、癌は、肝細胞癌、例えば、ウイルス感染、例えば、慢性ウイルス肝炎を伴うまたは伴わない進行性肝細胞癌である。
【００４４】
別の実施形態において、癌は、前立腺癌、例えば、進行性前立腺癌である。
【００４５】
さらに別の実施形態において、癌は、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫である。
【００４６】
さらに別の実施形態において、癌は、腎臓癌、例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ）（例えば、転移性ＲＣＣまたは淡明細胞型腎細胞癌（ＣＣＲＣＣ））である。
【００４７】
一実施形態において、癌微小環境は、上昇したＰＤ−Ｌ１発現のレベルを有する。あるいは、または組合せで、癌微小環境は、増加したＩＦＮαおよび／またはＣＤ８発現を有し得る。
【００４８】
ある実施形態において、対象は、抗ＰＤ−１抗体分子による治療に病歴的に感受性である癌を有する。例えば、ＮＳＣＬＣ、黒色腫および膀胱癌。代替実施形態において、対象は、抗ＰＤ−１抗体分子による治療に病歴的に耐性である癌を有する。
【００４９】
一部の実施形態において、対象は、高いＰＤ−Ｌ１レベルまたは発現の１つ以上を有し、もしくは腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）＋（例えば、増加したＴＩＬ数を有する）であり、またはその両方の腫瘍を有し、または有すると同定される。ある実施形態において、対象は、高いＰＤ−Ｌ１レベルまたは発現を有し、ＴＩＬ＋である腫瘍を有し、または有すると同定される。一部の実施形態において、本明細書に記載の方法は、高いＰＤ−Ｌ１もしくは発現の１つ以上を有し、もしくはＴＩＬ＋であり、またはその両方の腫瘍を有することに基づき対象を同定することをさらに含む。ある実施形態において、本明細書に記載の方法は、高いＰＤ−Ｌ１レベルまたは発現を有し、ＴＩＬ＋である腫瘍を有することに基づき対象を同定することをさらに含む。一部の実施形態において、ＴＩＬ＋である腫瘍は、ＣＤ８およびＩＦＮγについて陽性である。一部の実施形態において、対象は、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８、および／またはＩＦＮγの１、２つまたはそれ以上について陽性である細胞の高い割合を有し、または有すると同定される。ある実施形態において、対象は、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８、およびＩＦＮγの全てについて陽性である細胞の高い割合を有し、または有すると同定される。
【００５０】
さらなる態様において、本発明は、対象における感染性疾患を治療する方法であって、本明細書に記載の組合せ、例えば、治療有効量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子を含む組合せを対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、感染性疾患は、肝炎（例えば、Ｃ型肝炎感染）、または敗血症から選択される。
【００５１】
本明細書に記載の組合せは、対象に全身（例えば、経口、非経口、皮下、静脈内、直腸、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、経皮、または吸入もしくは腔内設置により）投与することができる。
【００５２】
ある実施形態において、本明細書に記載の方法および組成物は、他の抗体分子、化学療法、他の抗癌療法（例えば、標的抗癌療法、遺伝子療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法  骨髄移植、ナノ療法、または腫瘍崩壊薬物）、細胞毒性剤、免疫ベース療法（例えば、サイトカインまたは細胞ベース免疫療法）、外科手術（例えば、腫瘍摘出または乳腺切除）もしくは放射線手順の１つ以上、または上記のいずれかの組合せとの組合せで投与する。追加の治療法は、アジュバントまたはネオアジュバント療法の形態であり得る。一部の実施形態において、追加の治療法は、酵素阻害剤（例えば、小分子酵素阻害剤）または転移阻害剤である。組合せで投与することができる例示的な細胞毒性剤としては、抗微小管剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、インターカレート剤、シグナル伝達経路を妨害し得る薬剤、アポトーシスを促進する薬剤、プロテオソーム阻害剤、および放射線（例えば、局所または全身照射（例えば、ガンマ放射線）が挙げられる。他の実施形態において、追加の治療法は、手術もしくは放射線、またはそれらの組合せである。他の実施形態において、追加の治療法は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路の１つ以上を標的化する治療法、ＨＳＰ９０阻害剤、またはチューブリン阻害剤である。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１−１】図１：ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）アッセイにおけるＩＬ−２産生に対するＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体と抗ＰＤ−１抗体分子との組合せの投与の相加または相乗効果を示す。ＩＬ−２発現は４人のドナーＰＢＭＣ調製物において計測し、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をＰＤＲ００１と同日に（「組合せ同時」）添加し、または抗ＰＤ−１抗体分子投与の７２時間後に培養物に新たに調製したＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を添加した（「組合せ連続」）。アッセイは、４人の異なるドナー（Ｅ−０１２、Ｅ４２１、Ｅ４４４および１０１１）に対してトリプリケートで実施し、結果をそれぞれ図１Ａ〜Ｂ、１Ｃ〜Ｄ、１Ｅ〜Ｆおよび１Ｇ〜Ｈに示す。
【図１−２】（上記の通り。）
【図１−３】（上記の通り。）
【図１−４】（上記の通り。）
【図１−５】（上記の通り。）
【図１−６】（上記の通り。）
【図１−７】（上記の通り。）
【図１−８】（上記の通り。）
【発明を実施するための形態】
【００５４】
少なくとも部分的に、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒａとの複合体、ならびにプログラム細胞死１（ＰＤ−１）に高い親和性および特異性で結合する抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）が本明細書に開示される。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗体分子をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞ならびにＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗体分子を作製する方法も提供される。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗体分子を含む医薬組成物および用量配合物も提供される。本明細書に開示されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子は、単独で、または組合せで使用して障害、例えば、癌性障害（例えば、固形および軟部組織腫瘍）、ならびに感染性疾患（例えば、慢性感染性障害または敗血症）を治療し、予防し、および／または診断することができる。したがって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せを使用して種々の障害、例として、癌および／または感染性疾患を治療するための組合せ組成物および方法が本明細書に開示される。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、漸増用量レジメンにおいて投与する。ある実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、均一または固定用量で投与し、または使用する。
【００５５】
理論により拘束されるものではないが、抗腫瘍免疫を向上させる治療アプローチは、免疫応答の異なる段階における複数の標的を介して免疫応答が最適化される場合により有効に機能することが考えられる。例えば、ＩＬ−１５媒介免疫機能の向上をもたらすアプローチは、免疫チェックポイント経路を調節するアプローチとの組合せで、より有効であり、および／または長期の治療応答をもたらし得る。
【００５６】
用語
追加の用語が以下に、本出願全体にわたり定義される。
【００５７】
本明細書において使用される冠詞「ａ」および「ａｎ」は、その冠詞の文法的対象の１つまたは２つ以上（例えば、少なくとも１つ）を指す。
【００５８】
用語「または」は、本明細書において、文脈がそうでないことを明示しない限り、用語「および／または」を意味するために使用され、それと互換的に使用される。
【００５９】
「約」および「およそ」は、一般に計測の性質または精度を考慮して、計測される量についての許容可能な誤差の程度を意味する。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には、１０％以内、より典型的には、５％以内である。
【００６０】
用語「疾患」および「障害」は、病態、特に病理学的病態を指すために互換的に使用される。ある実施形態において、用語「疾患」および「障害」は、ＩＬ−１５シグナル伝達により影響を受ける疾患および／または免疫エフェクター応答の促進により影響を受ける疾患を指すために互換的に使用される。
【００６１】
本明細書において使用される用語「治療する」、「治療」および「治療すること」は、障害、例えば、増殖性障害の進行、重症度および／もしくは持続期間の低減もしくは改善、または１つ以上の治療法の施与から生じる障害の１つ以上の症状（好ましくは、１つ以上の識別可能な症状）の改善を指す。具体的な実施形態において、用語「治療する」、「治療」および「治療すること」は、必ずしも患者により識別可能でない少なくとも１つの計測可能な増殖性障害の身体パラメータ、例えば、腫瘍の成長の改善を指す。他の実施形態において、用語「治療する」、「治療」および「治療すること」は、例えば、識別可能な症状の安定化による身体的な、例えば、身体パラメータの安定化による生理学的な、またはその両方での増殖性障害の進行の阻害を指す。他の実施形態において、用語「治療する」、「治療」および「治療すること」は、腫瘍サイズまたは癌性細胞数の低減または安定化を指す。
【００６２】
本明細書において使用される用語「治療法（ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）」および「治療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」は、疾患、例えば、癌、感染性疾患、リンパ球減少、および免疫不全、またはそれらに伴う症状の予防、治療、管理、または改善において使用することができる任意のプロトコル、方法、組成物、配合物、および／または薬剤を指し得る。ある実施形態において、用語「治療法（ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）」および「治療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」は、当業者に公知の疾患またはそれに伴う症状の治療、管理、予防、または改善において有用な生物療法、支持療法、および／または他の治療法を指す。
【００６３】
受容体（例えば、ＩＬ−１５ＲａまたはＩＬ−１５受容体βγ）およびリガンド（例えば、ＩＬ−１５）相互作用に関して本明細書において使用される用語「特異的に結合する」、「特異的に認識する」および類似の用語は、リガンドおよび受容体間の特異的結合または会合を指す。好ましくは、リガンドは、他の分子よりも受容体についての高い親和性を有する。具体的な実施形態において、リガンドは、野生型ＩＬ−１５であり、受容体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａである。別の具体的な実施形態において、リガンドは、野生型ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体であり、受容体は、βγ受容体複合体である。さらなる実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、βγ受容体複合体に結合し、ＩＬ−１５媒介シグナル伝達を活性化させる。受容体に特異的に結合するリガンドは、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、または当業者に公知の他の技術により同定することができる。
【００６４】
抗体に関して本明細書において使用される用語「免疫特異的に結合する」および「特異的に結合する」は、抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に特異的に結合し、別の分子に特異的に結合しない分子を指す。抗原に特異的に結合する分子は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）または当該技術分野において公知の他のアッセイにより決定してより低い親和性で他の抗原に結合し得る。具体的な実施形態において、抗原に結合する分子は、他の抗原と交差反応しない。
【００６５】
「組合せ」または「との組合せで」は、治療法または治療剤が同時に投与され、送達のために一緒に配合されなければならないことを意味するものではないが、それらの送達方法は本明細書に記載の範囲内である。組合せにおける治療剤は、１つ以上の他の追加の治療法または治療剤と同時に、それよりも前に、またはその後に投与することができる。治療剤または治療プロトコルは、任意の順序で投与することができる。一般に、それぞれの薬剤は、その薬剤について決定された用量で、および／または時間スケジュールで投与する。この組合せにおいて利用される追加の治療剤は、単一組成物中で一緒に投与し、または異なる組成物中で別個に投与することができることがさらに認識される。一般に、組合せにおいて利用される追加の治療剤は、それらが個々に利用されるレベルを超過しないレベルにおいて利用されることが予測される。一部の実施形態において、組合せにおいて利用されるレベルは、個々に利用されるものよりも低い。
【００６６】
用語「阻害」、「阻害剤」または「アンタゴニスト」は、所与の分子、例えば、免疫チェックポイント阻害因子のあるパラメータ、例えば、活性の低減を含む。例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％またはそれ以上の活性、例えば、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性の阻害がこの用語に含まれる。したがって、阻害は１００％である必要はない。
【００６７】
用語「抗癌効果」は、種々の手段、例として、限定されるものではないが、例えば、腫瘍容積の減少、癌細胞数の減少、転移数の減少、余命の延長、癌細胞増殖の減少、癌細胞生存の減少、または癌性病態に伴う種々の生理学的症状の改善により顕在化され得る生物学的効果を指す。「抗癌効果」は、ペプチド、ポリヌクレオチド、細胞および抗体が最初に癌の発生を予防する能力によっても顕在化され得る。
【００６８】
用語「抗腫瘍効果」は、種々の手段、例として、限定されるものではないが、例えば、腫瘍容積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、または腫瘍細胞生存の減少により顕在化され得る生物学的効果を指す。
【００６９】
用語「癌」は、異常細胞の急速で無制御な成長を特徴とする疾患を指す。癌細胞は局所的にまたは血流およびリンパ系を介して身体の他の部分に拡散し得る。種々の癌の例は本明細書に記載され、それとしては、限定されるものではないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵臓癌、結腸直腸癌、腎臓癌、肝臓癌、脳腫瘍、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。用語「腫瘍」および「癌」は本明細書において互換的に使用され、例えば、両方の用語は、固形および液性、例えば、びまん性または循環腫瘍を包含する。本明細書において使用される用語「癌」または「腫瘍」は、前悪性、ならびに悪性の癌および腫瘍を含む。
【００７０】
本明細書において使用される用語「免疫エフェクター」または「エフェクター」「機能」または「応答」は、標的細胞の免疫攻撃を向上させ、または促進する、例えば、免疫エフェクター細胞の機能または応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能または応答は、標的細胞の殺滅またはその成長もしくは増殖の阻害を促進するＴまたはＮＫ細胞の性質を指す。Ｔ細胞の場合、一次刺激および共刺激は免疫エフェクター機能または応答の例である。
【００７１】
用語「エフェクター機能」は、細胞の特殊化機能を指す。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、細胞溶解活性またはヘルパー活性、例として、サイトカイン分泌であり得る。
【００７２】
本発明の組成物および方法は、規定の配列、またはそれと実質的に同一もしくは類似する配列、例えば、規定の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列を有するポリペプチドおよび核酸を包含する。アミノ酸配列に関して、用語「実質的に同一」は、第１および第２のアミノ酸配列が共通の構造ドメインおよび／または共通の機能的活性を有し得るように、第２のアミノ酸配列とｉ）同一、またはｉｉ）第２のアミノ酸配列中のアラインされるアミノ酸残基の保存的置換である十分なまたは最小数のアミノ酸残基を含有する第１のアミノ酸を指すために本明細書において使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書に提供される配列と少なくとも約８５％、９０％。９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する共通の構造ドメインを含有するアミノ酸配列。
【００７３】
ヌクレオチド配列に関して、用語「実質的に同一」は、第１および第２のヌクレオチド配列が共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードし、または共通の構造ポリペプチドドメインもしくは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするように、第２の核酸配列中のアラインされるヌクレオチドと同一である十分なまたは最小数のヌクレオチドを含有する第１の核酸配列を指すために本明細書において使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書に提供される配列と少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列。
【００７４】
用語「機能的バリアント」は、野生型配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、または実質的に同一のヌクレオチド配列によりコードされ、野生型配列の１つ以上の活性を有し得るポリペプチドを指す。
【００７５】
配列間の相同性または配列同一性（これらの用語は、本明細書において互換的に使用される）の計算は、以下の通り実施される。
【００７６】
２つのアミノ酸配列の、または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するため、配列を最適比較目的のためにアラインする（例えば、最適アラインメントのためにギャップを第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方に導入することができ、比較目的のために非相同配列を無視することができる）。好ましい実施態様において、比較目的のためにアラインされる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９５％、いっそうより好ましくは少なくとも１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中のある位置が、第２の配列中の対応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドにより占有されている場合、それらの分子は、その位置において同一である（本明細書において使用されるアミノ酸または核酸「同一性」は、アミノ酸または核酸「相同性」と同等である）。
【００７７】
２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適アラインメントのために導入することが必要であるギャップ数、およびそれぞれのギャップの長さを考慮してそれらの配列により共有される同一位置の数の関数である。
【００７８】
２つの配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。好ましい実施態様において、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントを、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ＮＣＢＩから入手可能）におけるＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）アルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクス、およびギャップ加重１６、１４、１２、１０、８、６、または４および長さ加重１、２、３、４、５、または６を使用して決定する。さらに別の好ましい実施態様において、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントを、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクスおよびギャップ加重４０、５０、６０、７０、または８０および長さ加重１、２、３、４、５、または６を使用して決定する。特に好ましいパラメータセット（および特に規定のない限り使用すべきもの）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸張ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５のＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリクスである。
【００７９】
２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０加重残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用して決定することができる。
【００８０】
本明細書に記載の核酸およびタンパク質配列を「クエリー配列」として使用して公的データベースに対する検索を実施し、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連配列を同定することができる。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施することができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施して本発明の核酸（配列番号１）分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実施して本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためにギャップ付きアラインメントを得るため、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴをＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載の通り利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる（ＮＢＣＩから入手可能）。
【００８１】
本明細書において使用される用語「低いストリンジェンシー、中程度のストリンジェンシー、高いストリンジェンシーまたは極めて高いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を記載する。ハイブリダイゼーション反応を実施するための指針は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出すことができる。水性および非水性方法がその参考文献に記載されており、いずれのものも使用することができる。本明細書に言及される具体的なハイブリダイゼーション条件は、以下の通りである：１）低いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件、約４５℃における６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）とそれに続く０．２×ＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ中での少なくとも５０℃における２回の洗浄（洗浄の温度は、低いストリンジェンシー条件に関して５５℃まで増加させることができる）；２）中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件、約４５℃における６×ＳＳＣとそれに続く０．２×ＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ中での６０℃における１回以上の洗浄；３）高いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件、約４５℃における６×ＳＳＣとそれに続く０．２×ＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ中での６５℃における１回以上の洗浄；および好ましくは４）極めて高いストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、６５℃における０．５Ｍのリン酸ナトリウム、７％のＳＤＳとそれに続く０．２×ＳＳＣ、１％のＳＤＳ中での６５℃における１回以上の洗浄である。極めて高いストリンジェンシー条件（４）が好ましい条件であり、特に規定のない限り使用すべきものである。
【００８２】
本発明の分子は、機能に対する実質的な影響を有さない追加の保存的または非必須アミノ酸置換を有し得ることが理解される。
【００８３】
用語「アミノ酸」は、天然か合成かにかかわらず、アミノ官能性および酸官能性の両方を含み、野生型アミノ酸のポリマー中に含まれ得る全ての分子を包含することを意図する。例示的なアミノ酸としては、野生型アミノ酸；そのアナログ、誘導体および同族体；バリアント側鎖を有するアミノ酸アナログ；ならびに上記のいずれかのいずれかの全ての立体異性体が挙げられる。本明細書において使用される用語「アミノ酸」は、Ｄ−またはＬ−光学異性体の両方およびペプチド模倣体を含む。
【００８４】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基により置き換えられているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。
【００８５】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」（一本鎖である場合）は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。ポリマーは直鎖または分枝鎖であり得、修飾アミノ酸を含み得、非アミノ酸により中断されていてよい。本用語は、修飾、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作、例えば、標識構成成分とのコンジュゲーションがなされているアミノ酸ポリマーも包含する。ポリペプチドは天然供給源から単離することができ、真核生物もしくは原核生物宿主から組換え技術により産生することができ、または合成手順の生成物であり得る。
【００８６】
用語「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド配列」、および「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用される。これらは、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドのいずれか、またはそれらのアナログの任意の長さのヌクレオチドの重合形態を指す。ポリヌクレオチドは一本鎖または二本鎖のいずれかであり得、一本鎖である場合、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチドアナログを含み得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成成分により中断されていてよい。ポリヌクレオチドは、重合後に例えば、標識構成成分とのコンジュゲーションによりさらに修飾され得る。核酸は、組換えポリヌクレオチド、またはゲノム、ｃＤＮＡ、天然に生じず、もしくは自然界で見られない配置で別のポリヌクレオチドと結合している半合成、もしくは合成起源のポリヌクレオチドであり得る。
【００８７】
本明細書において使用される用語「単離」は、その元のまたは天然環境（例えば、野生型の場合、自然環境）から取り出された物質を指す。例えば、生存動物中に存在する野生型ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されていないが、ヒト介入により、自然系で併存する物質の一部または全てから分離された同一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されている。このようなポリヌクレオチドは、ベクターの一部であり得、および／またはこのようなポリヌクレオチドもしくはポリペプチドは組成物の一部であり得、そのようなベクターまたは組成物が天然に見出される環境の一部ではない点で依然として単離されている。
【００８８】
本発明の種々の態様は、以下にさらに詳細に記載される。追加の定義は、本明細書全体にわたり記載される。
【００８９】
ＩＬ−１５
本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５」および「インターロイキン−１５」は、野生型ＩＬ−１５またはＩＬ−１５誘導体を指す。タンパク質またはポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「野生型ＩＬ−１５」および「野生型インターロイキン−１５」は、任意の哺乳動物インターロイキン−１５アミノ酸配列、例として未成熟または前駆体および成熟形態を指す。野生型哺乳動物インターロイキン−１５の種々の種のアミノ酸配列についてのＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号の非限定的な例としては、ＮＰ＿０００５７６（ヒト、未成熟形態）、ＣＡＡ６２６１６（ヒト、未成熟形態）、ＮＰ＿００１００９２０７（イエネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ）、未成熟形態）、ＡＡＢ９４５３６（ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）、未成熟形態）、ＡＡＢ４１６９７（ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）、未成熟形態）、ＮＰ＿０３２３８３（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、未成熟形態）、ＡＡＲ１９０８０（イヌ）、ＡＡＢ６０３９８（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）、未成熟形態）、ＡＡＩ００９６４（ヒト、未成熟形態）、ＡＡＨ２３６９８（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、未成熟形態）、およびＡＡＨ１８１４９（ヒト）が挙げられる。表１に配列番号１に提供される長鎖シグナルペプチド（下線）および成熟ヒト天然ＩＬ−１５（イタリック）を含むヒトＩＬ−１５の未成熟／前駆体形態のアミノ酸配列。一部の実施形態において、ＩＬ−１５は、哺乳動物ＩＬ−１５の未成熟または前駆体形態である。他の実施形態において、ＩＬ−１５は、哺乳動物ＩＬ−１５の成熟形態である。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５の前駆体形態である。別の実施形態において、ＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５の成熟形態である。一実施形態において、ＩＬ−１５タンパク質／ポリペプチドは、単離または精製されている。
【００９０】
核酸に関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５」および「インターロイキン−１５」は、哺乳動物インターロイキン−１５、例として未成熟または前駆体および成熟形態をコードする任意の核酸配列を指す。野生型哺乳動物ＩＬ−１５の種々の種のヌクレオチド配列についてのＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号の非限定的な例としては、ＮＭ＿０００５８５（ｈｕｍａｎ）、ＮＭ＿００８３５７（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、およびＲＮＵ６９２７２（ドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ））が挙げられる。表１中の配列番号２に提供される長鎖シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（下線）および成熟ヒトＩＬ−１５をコードするヌクレオチド配列（イタリック）を含むヒトＩＬ−１５の未成熟／前駆体形態をコードするヌクレオチド配列。具体的な実施形態において、核酸は、単離または精製核酸である。一部の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５の未成熟または前駆体形態をコードする。他の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５の成熟形態をコードする。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５をコードする核酸は、ヒトＩＬ−１５の前駆体形態をコードする。別の実施形態において、ＩＬ−１５をコードする核酸は、ヒトＩＬ−１５の成熟形態をコードする。
【００９１】
タンパク質またはポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５誘導体」および「インターロイキン−１５誘導体」は、（ａ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるポリペプチド；（ｂ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一である核酸配列によりコードされるポリペプチド；（ｃ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上のアミノ酸突然変異（すなわち、付加、欠失および／または置換）を含有するポリペプチド；（ｄ）核酸によりコードされるポリペプチドは、高いまたは中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸にハイブリダイズし得る；（ｅ）高いまたは中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で少なくとも２０個の連続アミノ酸、少なくとも３０個の連続アミノ酸、少なくとも４０個の連続アミノ酸、少なくとも５０個の連続アミノ酸、少なくとも１００個の連続アミノ酸、または少なくとも１５０個の連続アミノ酸の野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの断片をコードする核酸配列にハイブリダイズし得る核酸配列によりコードされるポリペプチド；および／または；（ｆ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの断片を指す。ＩＬ−１５誘導体としては、哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの成熟形態のアミノ酸配列および異種シグナルペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドも挙げられる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、野生型ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの未成熟または前駆体形態の誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの成熟形態の誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、例えば、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８３：３５９８または米国特許第８，１６３，８７９号明細書に記載のＩＬ−１５Ｎ７２Ｄである。別の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、米国特許第８，１６３，８７９号明細書に記載のＩＬ−１５バリアントのものである。一実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、単離または精製されている。
【００９２】
好ましい実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、共免疫沈降により計測してＩＬ−１５Ｒａポリペプチドに結合する野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を保持する。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡおよび他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を保持する。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５誘導体は、例えば、当該技術分野において周知のリガンド／受容体結合アッセイにより評価してＩＬ−１５Ｒａおよび／またはＩＬ−１５Ｒβγに結合する。同一性パーセントは、当業者に公知の任意の方法を使用して、上記の通り決定することができる。
【００９３】
核酸に関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５誘導体」および「インターロイキン−１５誘導体」は、（ａ）哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一である核酸配列；（ｂ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるポリペプチドをコードする核酸配列；（ｃ）哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上の核酸塩基突然変異（すなわち、付加、欠失および／または置換）を含有する核酸配列；（ｄ）高いまたは中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列にハイブリダイズする核酸配列；（ｅ）高いまたは中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列の断片にハイブリダイズする核酸配列および／または（ｆ）哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列の断片をコードする核酸配列を指す。具体的な実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの未成熟または前駆体形態をコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの成熟形態をコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、例えば、Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９；前掲）、または米国特許第８，１６３，８７９号明細書に記載のＩＬ−１５Ｎ７２Ｄをコードする核酸配列である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５誘導体は、米国特許第８，１６３，８７９号明細書に記載のＩＬ−１５バリアントの１つをコードする核酸配列である。
【００９４】
ＩＬ−１５誘導体核酸配列としては、哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチド、例として、ＩＬ−１５ポリペプチドの成熟および未成熟形態をコードするコドン最適化核酸配列が挙げられる。他の実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸としては、哺乳動物ＩＬ−１５ＲＮＡ転写産物の安定性を増加させるためにアミノ酸配列への影響なしで潜在的スプライス部位および不安定エレメント（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕリッチエレメント）を排除する突然変異を含有する哺乳動物ＩＬ−１５ＲＮＡ転写産物をコードする核酸が挙げられる。一実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列としては、国際公開第２００７／０８４３４２号パンフレットに記載のコドン最適化核酸配列が挙げられる。ある実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列は、表１の配列番号４のコドン最適化配列である（そのような核酸配列によりコードされるアミノ酸配列は、表１の配列番号５に提供される）。
【００９５】
好ましい実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、共免疫沈降により計測してＩＬ−１５Ｒａに結合する野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を保持するタンパク質またはポリペプチドをコードする。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡおよび他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を保持するタンパク質またはポリペプチドをコードする。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５誘導体核酸配列は、例えば、当該技術分野において周知のリガンド／受容体結合アッセイにより評価してＩＬ−１５Ｒａおよび／またはＩＬ−１５Ｒβγに結合するタンパク質またはポリペプチドをコードする。
【００９６】
ＩＬ−１５Ｒａ
本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５Ｒａ」および「インターロイキン−１５受容体アルファ」は、野生型ＩＬ−１５Ｒａ、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体、または野生型ＩＬ−１５ＲａおよびＩＬ−１５Ｒａ誘導体を指す。タンパク質またはポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「野生型ＩＬ−１５Ｒａ」および「野生型インターロイキン−１５受容体アルファ」は、任意の哺乳動物インターロイキン−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）アミノ酸配列、例として、未成熟または前駆体および成熟形態およびアイソフォームを指す。種々の野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａのアミノ酸配列についてのＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号の非限定的な例としては、ＮＰ＿００２１８０（ヒト）、ＡＢＫ４１４３８（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ））、ＮＰ＿０３２３８４（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、Ｑ６０８１９（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））、ＣＡＩ４１０８２（ヒト）が挙げられる。表１の配列番号６に提供されるシグナルペプチド（下線）および成熟ヒトＩＬ−１５Ｒａ（イタリック）を含む全長ヒトＩＬ−１５Ｒａの未成熟形態のアミノ酸配列。表１の配列番号７に提供されるシグナルペプチド（下線）および成熟ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａ（イタリック）を含む可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａの未成熟形態のアミノ酸配列。一部の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの未成熟形態である。他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態である。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態である。他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの全長形態である。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの未成熟形態である。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態である。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態である。他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの全長形態である。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａタンパク質またはポリペプチドは、単離または精製されている。
【００９７】
核酸に関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５Ｒａ」および「インターロイキン−１５受容体アルファ」は、哺乳動物インターロイキン−１５受容体アルファ、例として、未成熟または前駆体および成熟形態をコードする任意の核酸配列を指す。種々の種の野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａのヌクレオチド配列についてのＧｅｎｅＢａｎｋアクセッション番号の非限定的な例としては、ＮＭ＿００２１８９（ヒト）、ＥＦ０３３１１４（アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ））、およびＮＭ＿００８３５８（ハツカネズミ（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ））が挙げられる。表１の配列番号８に提供されるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（下線）および成熟ヒトＩＬ−１５Ｒａをコードするヌクレオチド配列（イタリック）を含む野生型ヒトＩＬ−１５Ｒａの未成熟形態をコードするヌクレオチド配列。表１の配列番号９に提供されるシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列（下線）および成熟ヒト可溶性ＩＬ−１５Ｒａをコードするヌクレオチド配列（イタリック）を含む可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａタンパク質またはポリペプチドの未成熟形態をコードするヌクレオチド配列）。具体的な実施形態において、核酸は、単離または精製核酸である。一部の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの未成熟形態をコードする。他の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態をコードする。ある実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態をコードする。他の実施形態において、核酸は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの全長形態をコードする。具体的な実施形態において、核酸は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの前駆体形態をコードする。別の実施形態において、核酸は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの成熟をコードする。ある実施形態において、核酸は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態をコードする。他の実施形態において、核酸は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの全長形態をコードする。
【００９８】
タンパク質またはポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５Ｒａ誘導体」および「インターロイキン−１５受容体アルファ誘導体」は、（ａ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるポリペプチド；（ｂ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一である核酸配列によりコードされるポリペプチド；（ｃ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドに対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上のアミノ酸突然変異（すなわち、付加、欠失および／または置換）を含有するポリペプチド；（ｄ）高いまたは中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列にハイブリダイズし得る核酸配列によりコードされるポリペプチド；（ｅ）高いまたは中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で少なくとも２０個の連続アミノ酸、少なくとも３０個の連続アミノ酸、少なくとも４０個の連続アミノ酸、少なくとも５０個の連続アミノ酸、少なくとも１００個の連続アミノ酸、または少なくとも１５０個の連続アミノ酸の野生型哺乳動物ＩＬ−１５ポリペプチドの断片をコードする核酸配列にハイブリダイズし得る核酸配列によりコードされるポリペプチド；（ｆ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの断片；および／または（ｇ）本明細書に記載の規定のＩＬ−１５Ｒａ誘導体を指す。ＩＬ−１５Ｒａ誘導体としては、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態のアミノ酸配列および異種シグナルペプチドアミノ酸配列を含むポリペプチドも挙げられる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの未成熟形態の誘導体である。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの成熟形態の誘導体である。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの可溶性形態である。換言すると、ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体としては、哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が挙げられ、それらの可溶性形態は天然存在でない。ＩＬ−１５Ｒａ誘導体の他の例としては、本明細書に記載のヒトＩＬ−１５Ｒａのトランケート可溶性形態が挙げられる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、精製または単離されている。
【００９９】
好ましい実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、共免疫沈降により計測してＩＬ−１５ポリペプチドに結合する野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を保持する。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡおよび他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの機能の少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を保持する。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、当該技術分野において周知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡなどにより評価してＩＬ−１５に結合する。
【０１００】
核酸に関して本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５Ｒａ誘導体」および「インターロイキン−１５受容体アルファ誘導体」は、（ａ）哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一である核酸配列；（ｂ）野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるポリペプチドをコードする核酸配列；（ｃ）哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上の核酸突然変異（すなわち、付加、欠失および／または置換）を含有する核酸配列；（ｄ）高いまたは中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列にハイブリダイズする核酸配列；（ｅ）高いまたは中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下で哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列の断片にハイブリダイズする核酸配列；（ｆ）哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列の断片をコードする核酸配列；および／または（ｇ）本明細書に記載の規定のＩＬ−１５Ｒａ誘導体をコードする核酸配列を指す。具体的な実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドをコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの未成熟形態をコードする核酸配列の誘導体である。別の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ヒトＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟形態をコードする核酸配列の誘導体である。一実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、可溶性である哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの誘導体をコードする核酸配列を指す。ある実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、天然存在でない哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態をコードする核酸配列を指す。一部の実施形態において、核酸に関するＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、天然存在でないＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態であるヒトＩＬ−１５Ｒａの誘導体をコードする核酸配列を指す。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、単離または精製されている。
【０１０１】
ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列としては、ＩＬ−１５Ｒａポリペプチド、例として、ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの成熟および未成熟形態をコードするコドン最適化核酸配列が挙げられる。他の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸としては、ＩＬ−１５ＲａＲＮＡ転写産物の安定性を増加させるためにアミノ酸配列に影響せずに潜在的スプライス部位および不安定エレメント（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕリッチエレメント）を排除する突然変異を含有するＩＬ−１５ＲａＲＮＡ転写産物をコードする核酸が挙げられる。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、表１の配列番号１１、１３のコドン最適化配列である（そのような核酸配列によりコードされるアミノ酸配列は、それぞれ表１の配列番号１２、１４に提供される）。
【０１０２】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、共免疫沈降により計測してＩＬ−１５に結合する野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの機能の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を保持するタンパク質またはポリペプチドをコードする。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡおよび他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する野生型哺乳動物ＩＬ−１５Ｒａの機能の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を保持するタンパク質またはポリペプチドをコードする。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体核酸配列は、当該技術分野において周知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡなどにより評価してＩＬ−１５に結合するタンパク質またはポリペプチドをコードする。
【０１０３】
ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が本明細書に記載される。ヒトＩＬ−１５Ｒａのトランケート可溶性形態である規定のＩＬ−１５Ｒａ誘導体も本明細書に記載される。これらの規定のＩＬ−１５Ｒａ誘導体およびヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態は、部分的には、ヒトＩＬ−１５Ｒａのタンパク質分解開裂部位の同定をベースとする。ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化に基づき特徴づけされるＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が本明細書にさらに記載される。
【０１０４】
ヒトＩＬ−１５Ｒａのタンパク質分解開裂は、野生型全長ヒトＩＬ−１５Ｒａの未成熟形態の提供されるアミノ酸配列中で太字で示され、下線が付される残基（すなわち、Ｇｌｙ１７０およびＨｉｓ１７１）間で生じる：
【化１】
2020505350.tif 000002
（表１の配列番号６）
【０１０５】
したがって、一態様において、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態（例えば、ヒトＩＬ−１５Ｒａの精製可溶性形態）であって、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態のアミノ酸配列が野生型膜結合ヒトＩＬ−１５Ｒａのタンパク質分解開裂の部位において終結するヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が本明細書に提供される。特に、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態（例えば、ヒトＩＬ−１５Ｒａの精製可溶性形態）であって、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態のアミノ酸配列が、ＰＱＧ（表１の配列番号２０）（Ｇは、Ｇｌｙ１７０である）で終結するヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態が本明細書に提供される。特定の実施形態において、表１の配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態（例えば、ヒトＩＬ−１５Ｒａの精製可溶性形態）が本明細書に提供される。一部の実施形態において、（ｉ）表１の配列番号７と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であり；（ｉｉ）アミノ酸配列ＰＱＧ（表１の配列番号２０）で終結するポリペプチドであるＩＬ−１５Ｒａ誘導体（例えば、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体の精製および／または可溶性形態）が本明細書に提供される。他の特定の実施形態において、表１の配列番号１０のアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１５Ｒａ（例えば、ヒトＩＬ−１５Ｒａの精製可溶性形態）の可溶性形態が本明細書に提供される）。一部の実施形態において、表１の配列番号１０と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるポリペプチドであるＩＬ−１５Ｒａ誘導体（例えば、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体の精製および／または可溶性形態）であって、場合により、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体の可溶性形態のアミノ酸配列がＰＱＧ（表１の配列番号２０）で終結するＩＬ−１５Ｒａ誘導体が本明細書に提供される。
【０１０６】
一部の実施形態において、ヒトＩＬ−１５ＲａのＩＬ−１５Ｒａ誘導体であって、可溶性であり：（ａ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨＳＤＴＴ（表１の配列番号１５）からなり；（ｂ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨＳＤＴ（表１の配列番号１６）からなり；（ｃ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨＳＤ（表１の配列番号１７）からなり；（ｄ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨＳ（表１の配列番号１８）からなり；または（ｅ）ＩＬ−１５Ｒａ誘導体のＣ末端における最後のアミノ酸がアミノ酸残基ＰＱＧＨ（表１の配列番号１９）からなるＩＬ−１５Ｒａ誘導体が本明細書に提供される。ある実施形態において、これらのＩＬ−１５Ｒａ誘導体のアミノ酸配列は、表１の配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。一部の実施形態において、これらのＩＬ−１５Ｒａ誘導体は精製されている。
【０１０７】
別の態様において、ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製グリコシル化形態）であって、ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化が、当業者に公知の技術により評価してＩＬ−１５Ｒａの質量（分子量）の少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、または２０％〜２５％、２０％〜３０％、２５％〜３０％、２５％〜３５％、３０％〜３５％、３０％〜４０％、３５％〜４０％、３５％〜４５％、４０％〜５０％、４５％〜５０％、２０％〜４０％、もしくは２５％〜５０％を占めるＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態が本明細書に提供される。ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化が占めるＩＬ−１５Ｒａ（例えば、精製ＩＬ−１５Ｒａ）の質量（分子量）の割合は、例えば、限定されるものではないが、ゲル電気泳動およびゲルの定量的密度測定、ならびにＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製グリコシル化形態）と、ＩＬ−１５Ｒａの非グリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製非グリコシル化形態）との平均質量（分子量）の比較を使用して決定することができる。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ（例えば、精製ＩＬ−１５Ｒａ）の平均質量（分子量）は、マトリックスとしてシナピン酸を使用するＣｏｖａｌＸ  ＨＭ−１高質量検出器を備えるＶｏｙａｇｅｒ  Ｄｅ−Ｐｒｏ上でＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳスペクトルを使用して決定することができ、ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製グリコシル化形態）の質量をＩＬ−１５Ｒａの非グリコシル化形態（例えば、ＩＬ−１５Ｒａの精製非グリコシル化形態）の質量と比較してグリコシル化が占める質量の割合を決定することができる。
【０１０８】
別の態様において、ＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態であって、ＩＬ−１５Ｒａがあるアミノ酸残基においてグリコシル化（Ｎ−またはＯ−グリコシル化）されているＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態が本明細書に提供される。ある実施形態において、以下のグリコシル化部位；（ｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化２】
2020505350.tif 000003
（表１の配列番号２２）の５位におけるトレオニン上のＯ−グリコシル化；（ｉｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化３】
2020505350.tif 000004
（表１の配列番号２２）の７位におけるセリン上のＯ−グリコシル化；（ｉｉｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化４】
2020505350.tif 000005
（表１の配列番号２３）の８位におけるセリン上、またはＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化５】
2020505350.tif 000006
（表１の配列番号２４）の８位のセリン上のＮ−グリコシル化；（ｉｖ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列ＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳ（表１の配列番号２４）のＳｅｒ１８上のＮ−グリコシル化；（ｖ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化６】
2020505350.tif 000007
（表１の配列番号２４）の２０位におけるセリン上のＮ−グリコシル化；（ｖｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化７】
2020505350.tif 000008
（表１の配列番号２４）の２３位におけるセリン上のＮ−グリコシル化；および／または（ｖｉｉ）ＩＬ−１５Ｒａ中のアミノ酸配列
【化８】
2020505350.tif 000009
（表１の配列番号２４）の３１位におけるセリン上のＮ−グリコシル化の１、２、３、４、５、６、７つ、または全てにおいてグリコシル化されているヒトＩＬ−１５Ｒａが本明細書に提供される。
【０１０９】
具体的な実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、野生型ヒトＩＬ−１５Ｒａである。他の具体的な実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５ＲａのＩＬ−１５Ｒａ誘導体である。一部の実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、野生型可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａ、例えば、表１の配列番号７または１０である。他の実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態であるＩＬ−１５Ｒａ誘導体である。ある実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、精製または単離されている。
【０１１０】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体
本明細書において使用される用語「ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体」は、互いに共有または非共有結合しているＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａを含む複合体を指す。好ましい実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ＩＬ−１５についての比較的高い親和性、例えば、当該技術分野において公知の技術、例えば、ＫｉｎＥｘＡアッセイ、プラズマ表面共鳴（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）アッセイ）により計測して１０〜５０ｐＭのＫＤを有する。別の好ましい実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、ＥＬＩＳＡおよび他の免疫アッセイにより計測してＩＬ−１５媒介シグナル伝達を誘導する。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、βγ鎖に特異的に結合する能力を保持する。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、細胞から単離されている。
【０１１１】
ＩＬ−１５受容体のβγサブユニットに結合し、ＩＬ−１５シグナル伝達（例えば、Ｊａｋ／Ｓｔａｔシグナル伝達）を誘導し、ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させる複合体であって、インターロイキン−１５受容体アルファ（「ＩＬ−１５Ｒａ」）に共有または非共有結合しているＩＬ−１５を含む複合体（「ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体」）が本明細書に提供される。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、βγ受容体複合体に結合し得る。
【０１１２】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５またはＩＬ−１５誘導体および野生型ＩＬ−１５ＲａまたはＩＬ−１５Ｒａ誘導体から構成され得る。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５誘導体および上記のＩＬ−１５Ｒａを含む。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５誘導体および表１の配列番号１０のアミノ酸配列を有するＩＬ−１５Ｒａを含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５誘導体および上記のＩＬ−１５Ｒａのグリコシル化形態を含む。
【０１１３】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒａ誘導体および可溶性ＩＬ−１５Ｒａ（例えば、野生型可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａ）を含む。別の具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＩＬ−１５誘導体およびＩＬ−１５Ｒａ誘導体から構成される。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、野生型ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａ誘導体から構成される。一実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態である。ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態の具体例は、上記のものである。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態は、野生型ＩＬ−１５Ｒａの膜貫通ドメイン、および場合により、野生型ＩＬ−１５Ｒａの細胞内ドメインを欠く。別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａの細胞外ドメインまたはその断片である。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインまたはエキソン２を含む細胞外ドメインの断片である。一部の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインまたはエキソン２を含む細胞外ドメインの断片およびエキソン３によりコードされる少なくとも１つのアミノ酸を含む。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインまたはエキソン２を含む細胞外ドメインの断片およびＩＬ−１５Ｒａヒンジ領域またはその断片を含む。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、表１の配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
【０１１４】
別の実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａ誘導体は、野生型ＩＬ−１５Ｒａを開裂させる内因性プロテアーゼによる開裂を阻害する細胞外ドメイン開裂部位中の突然変異を含む。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａの細胞外ドメイン開裂部位は、異種の公知のプロテアーゼにより認識および開裂される開裂部位により置き換えられている。このような異種プロテアーゼ開裂部位の非限定的な例としては、フーリンプロテアーゼにより認識および開裂されるＡｒｇ−Ｘ−Ｘ−Ａｒｇ（表１の配列番号２５）；ならびにトロンビンプロテアーゼにより認識および開裂されるＡ−Ｂ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｘ−Ｙ（表１の配列番号２６）（ＡおよびＢは、疎水性アミノ酸であり、ＸおよびＹは、非酸性アミノ酸である）およびＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙが挙げられる。
【０１１５】
別の実施形態において、ＩＬ−１５は、例えば、国際公開第２００７／０８４３４２号パンフレットおよび国際公開第２０１０／０２００４７号パンフレット；ならびに米国特許第５，９６５，７２６号明細書；同第６，１７４，６６６号明細書；同第６，２９１，６６４号明細書；同第６，４１４，１３２号明細書；および同第６，７９４，４９８号明細書に記載の方法を使用してＩＬ−１５の発現を向上させるために最適化された核酸配列によりコードされる。
【０１１６】
ある実施形態において、表１の配列番号２２、２３および２４を参照して上記のグリコシル化部位の１、２、３、４、５、６、７つ、または全てにおいてグリコシル化されているヒトＩＬ−１５Ｒａを含むＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が本明細書に提供される。具体的な実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、野生型ヒトＩＬ−１５Ｒａである。他の具体的な実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５ＲａのＩＬ−１５Ｒａ誘導体である。一部の実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、野生型可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａ、例えば、表１の配列番号７または１０である。他の実施形態において、グリコシル化ＩＬ−１５Ｒａは、ヒトＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態であるＩＬ−１５Ｒａ誘導体である。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、精製または単離されている。
【０１１７】
ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａに加え、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、異種分子を含み得る。一部の実施形態において、異種分子は、タンパク質安定性を増加させる。このような分子の非限定的な例としては、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒａのインビボ半減期を増加させるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＩｇＧ免疫グロブリンのＦｃドメインもしくはその断片、またはアルブミンが挙げられる。ある実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１）のＦｃドメインまたはその断片にコンジュゲート／融合している。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５ＲａＦｃ融合タンパク質は、表１の配列番号２７または２８のアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、ＩＬ−１５ＲａＦｃ融合タンパク質は、Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１），Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ５６：８０４−８１０、米国特許第８，５０７，２２２号明細書または米国特許第８，１２４，０８４号明細書に記載のＩＬ−１５Ｒａ／Ｆｃ融合タンパク質である。異種分子を含むそれらのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体において、異種分子は、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａにコンジュゲートしていてよい。一実施形態において、異種分子は、ＩＬ−１５Ｒａにコンジュゲートしている。別の実施形態において、異種分子は、ＩＬ−１５にコンジュゲートしている。
【０１１８】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の構成成分は、非共有結合もしくは共有結合のいずれかを使用して（例えば、ペプチド結合を介してアミノ酸配列を組み合わせることにより）直接融合していてよく、および／または１つ以上のリンカーを使用して組み合わせることができる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の調製に好適なリンカーは、２つ以上の構成成分に一緒に結合し得るペプチド、アルキル基、化学置換アルキル基、ポリマー、または任意の他の共有結合もしくは非共有結合化学物質を含む。ポリマーリンカーは、当該技術分野において公知の任意のポリマー、例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。一部の実施形態において、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上のアミノ酸長のペプチドである。具体的な実施形態において、リンカーは、ＩＬ−１５Ｒａに結合するＩＬ−１５の能力を保存するほど十分長い。他の実施形態において、リンカーは、βγ受容体複合体に結合し、ＩＬ−１５シグナル伝達を媒介するアゴニストとして作用するＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の能力を保存するほど十分長い。
【０１１９】
特定の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、本明細書に記載の方法における使用前（例えば、細胞をＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体と接触させる前または対象へのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与前）、プレカップリングする。他の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、本明細書に記載の方法における使用前にプレカップリングしない。
【０１２０】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＥＬＩＳＡ、および細胞増殖アッセイを使用してＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体が投与されない対象における免疫機能に対して対象における免疫機能を少なくとも９９％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、または少なくとも１０％だけ向上させ、または誘導する。具体的な実施形態において、免疫機能は、サイトカイン放出（例えば、インターフェロン−ガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、またはトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）−ベータ）である。一実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能は、ＮＫ細胞増殖であり、それは、例えば、フローサイトメトリーによりアッセイしてＮＫ細胞のマーカー（例えば、ＣＤ５６）を発現する細胞の数を検出することができる。別の実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能は、抗体産生であり、それは、例えば、ＥＬＩＳＡによりアッセイすることができる。一部の実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能は、エフェクター機能であり、それは、例えば、細胞毒性アッセイまたは当該技術分野において周知の他のアッセイによりアッセイすることができる。
【０１２１】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体により向上される免疫機能の例としては、リンパ球の増殖／拡大（例えば、リンパ球数の増加）、リンパ球のアポトーシスの阻害、樹状細胞（または抗原提示細胞）の活性化、および抗原提示が挙げられる。特定の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体により向上される免疫機能は、ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１およびＴｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、アルファ／ベータＴ細胞、およびガンマ／デルタＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細胞、樹状細胞（未成熟または成熟）、抗原提示細胞、マクロファージ、マスト細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、腫瘍常在性Ｔ細胞、ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、またはナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の数の増殖／拡大またはそれらの活性化である。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、リンパ球前駆細胞の増殖／拡大またはその数を向上させる。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１およびＴｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、アルファ／ベータＴ細胞、およびガンマ／デルタＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細胞、樹状細胞（未成熟または成熟）、抗原提示細胞、マクロファージ、マスト細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、腫瘍常在性Ｔ細胞、ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、またはナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の数を、陰性対照（例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体により処理もされず、それと培養もされず、それと接触もされないそれぞれの細胞の数）に対しておよそ１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍またはそれ以上だけ増加させる。
【０１２２】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）により活性化される全血上のＩＬ−２の発現を増加させる。例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、ＳＥＢを単独で使用した場合のＩＬ−２の発現と比較してＩＬ−２の発現を少なくとも約２、３、４、または５倍だけ増加させる。
【０１２３】
抗ＰＤ−１抗体分子
本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の方法に従い、単独でまたは本明細書に記載の１つ以上の追加の薬剤との組合せで使用することができる。ある実施態様において、本明細書に記載の組合せは、ＰＤ−１阻害剤、例えば、本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、ヒト化抗体分子）を含む。
【０１２４】
一部の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子（例えば、単離または組換え抗体分子）は、以下の特性の１つ以上を有する：
（ｉ）ＰＤ−１、例えば、ヒトＰＤ−１に、高親和性で、例えば、少なくとも約１０７Ｍ−１、典型的には、約１０８Ｍ−１、より典型的には、約１０９Ｍ−１〜１０１０Ｍ−１またはそれ以上の親和性定数で結合する；
（ｉｉ）ＣＤ２８にも、ＣＴＬＡ−４にも、ＩＣＯＳにも、ＢＴＬＡにも実質的に結合しない；
（ｉｉｉ）ＰＤ−１リガンド、例えば、ＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２、またはその両方へのＰＤ−１の結合を阻害し、または低減させる；
（ｉｖ）ＰＤ−１上のエピトープ、例えば、表１に記載の抗体ＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅにより認識されるエピトープと同一または類似のエピトープに特異的に結合する；
（ｖ）表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅと同一または類似の結合親和性もしくは特異性、またはその両方を示す；
（ｖｉ）抗体分子、例えば、表１の配列番号３５および４５または配列番号５５および６５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域と同一または類似の結合親和性もしくは特異性、またはその両方を示す；
（ｖｉｉ）抗体分子、例えば、表１のヌクレオチド配列の配列番号３６および４６または配列番号５６および６６によりコードされる重鎖可変領域および軽鎖可変領域と同一または類似の結合親和性もしくは特異性、またはその両方を示す；
（ｖｉｉｉ）抗体分子、例えば、表１の配列番号３７および４７または配列番号５７および６７のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖と同一または類似の結合親和性もしくは特異性、またはその両方を示す；
（ｉｘ）ＰＤ−１への第２の抗体分子の結合を阻害し、例えば、競合阻害し、第２の抗体分子は、本明細書に記載の抗体分子、例えば、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体分子である；
（ｘ）ＰＤ−１に対する第２の抗体分子と同一のまたは重複するエピトープに結合し、第２の抗体分子は、本明細書に記載の抗体分子、例えば、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体分子である；
（ｘｉ）ＰＤ−１に対する第２の抗体分子の結合について競合し、および／または同一のエピトープに結合し、第２の抗体分子は、本明細書に記載の抗体分子、例えば、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体分子である；
（ｘｉｉ）本明細書に記載の抗体分子、例えば、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体分子の１つ以上の生物学的特性を有する；
（ｘｉｉｉ）本明細書に記載の抗体分子、例えば、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体分子の１つ以上の薬物動態特性を有する；
（ｘｉｖ）ＰＤ−１の１つ以上の活性を阻害し、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の増加、Ｔ細胞受容体媒介増殖の増加、または癌性細胞による免疫回避の減少の１つ以上をもたらす；
（ｘｖ）ヒトＰＤ−１に結合し、カニクイザルＰＤ−１と交差反応性である；
（ｘｖｉ）ＰＤ−１のＣ鎖、ＣＣ’ループ、Ｃ’鎖、もしくはＦＧループ内の１つ以上の残基、またはＰＤ−１のＣ鎖、ＣＣ’ループ、Ｃ’鎖もしくはＦＧループの２、３つもしくは全ての組合せに結合し、例えば、結合は、ＥＬＩＳＡまたはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）を使用してアッセイする；または
（ｘｖｉｉ）ＶＨ領域よりもＰＤ−１への結合に寄与するＶＬ領域を有する。
【０１２５】
一部の実施態様において、抗体分子は、ＰＤ−１に、高親和性で、例えば、ネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、本明細書に記載のネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤとほぼ同一、またはそれよりも少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％もしくは９０％高いもしくは低いＫＤで結合する。一部の実施態様において、ネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）法により計測して約０．４、０．３、０．２、０．１、または０．０５ｎＭ未満である。一部の実施態様において、ネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤは、約０．２ｎＭ未満、例えば、約０．１３５ｎＭである。他の実施態様において、ネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤは、例えば、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、３００．１９細胞）への結合により計測して約１０、５、３、２、または１ｎＭ未満である。一部の実施態様において、ネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＫＤは、約５ｎＭ未満、例えば、約４．６０ｎＭ（または約０．６９μｇ／ｍＬ）である。
【０１２６】
一部の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＤ−１に、１×１０−４、５×１０−５、または１×１０−５ｓ−１よりも遅い、例えば、約１．６５×１０−５ｓ−１のＫｏｆｆで結合する。一部の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＰＤ−１に、１×１０４、５×１０４、１×１０５または５×１０５Ｍ−１ｓ−１よりも速い、例えば、約１．２３×１０５Ｍ−１ｓ−１のＫｏｎで結合する。
【０１２７】
一部の実施態様において、抗体分子の発現レベルは、ネズミまたはキメラ抗体分子、例えば、本明細書に記載のネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子の発現レベルよりも高く、例えば、少なくとも約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍高い。一部の実施態様において、抗体分子は、ＣＨＯ細胞中で発現される。
【０１２８】
一部の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、１つ以上のＰＤ−１関連活性を、ネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、本明細書に記載のネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＩＣ５０とほぼ同一またはそれよりも低い、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％低いＩＣ５０（５０％阻害における濃度）で低減させる。一部の実施態様において、ネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＩＣ５０は、例えば、ＰＤ−１を発現する細胞（例えば、３００．１９細胞）への結合により計測して約６、５、４、３、２、または１ｎＭ未満である。一部の実施態様において、ネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子のＩＣ５０は、約４ｎＭ未満、例えば、約３．４０ｎＭ（または約０．５１μｇ／ｍＬ）である。一部の実施態様において、低減されるＰＤ−１関連活性は、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の結合である。一部の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）により活性化される末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に結合する。他の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＳＥＢにより活性化される全血上のＩＬ−２の発現を増加させる。例えば、抗ＰＤ−１抗体は、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用する場合のＩＬ−２の発現と比較してＩＬ−２の発現を少なくとも約２、３、４、または５倍だけ増加させる。
【０１２９】
一部の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、改善された安定性を有し、例えば、インビボまたはインビトロでネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、本明細書に記載のネズミまたはキメラ抗ＰＤ−１抗体分子よりも少なくとも約０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０倍安定である。
【０１３０】
一実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子はヒト化抗体分子であり、３００〜７００、４００〜６５０、４５０〜６００のＴ細胞エピトープ分析に基づくリスクスコア、または本明細書に記載のリスクスコアを有する。
【０１３１】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列からの少なくとも１、２、３または４つの可変領域を含む。
【０１３２】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列からの少なくとも１または２つの重鎖可変領域を含む。
【０１３３】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列からの少なくとも１または２つの軽鎖可変領域を含む。
【０１３４】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ４についての重鎖定常領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ４は、ＥＵナンバリングによる２２８位における置換（例えば、Ｓｅｒ−Ｐｒｏ置換）を含む。さらに別の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩｇＧ１、例えば、ヒトＩｇＧ１についての重鎖定常領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングによる２９７位における置換（例えば、Ａｓｎ−Ａｌａ置換）を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングによる２６５位における置換、ＥＵナンバリングによる３２９位における置換、またはその両方（例えば、２６５位におけるＡｓｐ−Ａｌａ置換および／または３２９位におけるＰｒｏ−Ａｌａ置換）を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングによる２３４位における置換、ＥＵナンバリングによる２３５位における置換、またはその両方（例えば、２３４位におけるＬｅｕ−Ａｌａ置換および／または２３５位におけるＬｅｕ−Ａｌａ置換）を含む。一実施態様において、重鎖定常領域は、表１の配列番号９８〜１０３に記載のアミノ配列、またはそれと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列を含む。
【０１３５】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ抗体分子は、カッパ軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパ軽鎖定常領域を含む。一実施形態において、軽鎖定常領域は、表１の配列番号１０４に記載のアミノ配列、またはそれと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列を含む。
【０１３６】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩｇＧ４、例えば、ヒトＩｇＧ４についての重鎖定常領域、およびカッパ軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパ軽鎖定常領域、例えば、表１に記載のアミノ配列、またはそれと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列を含む重鎖および軽鎖定常領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ４は、ＥＵナンバリングによる２２８位における置換（例えば、Ｓｅｒ−Ｐｒｏ置換）を含む。さらに別の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩｇＧ１、例えば、ヒトＩｇＧ１についての重鎖定常領域、およびカッパ軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパ軽鎖定常領域、例えば、表１に記載のアミノ配列、またはそれと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列を含む重鎖および軽鎖定常領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングによる２９７位における置換（例えば、Ａｓｎ−Ａｌａ置換）を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングによる２６５位における置換、ＥＵナンバリングによる３２９位における置換、またはその両方（例えば、２６５位におけるＡｓｐ−Ａｌａ置換および／または３２９位におけるＰｒｏ−Ａｌａ置換）を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ１は、ＥＵナンバリングによる２３４位における置換、ＥＵナンバリングによる２３５位における置換、またはその両方（例えば、２３４位におけるＬｅｕ−Ａｌａ置換および／または２３５位におけるＬｅｕ−Ａｌａ置換）を含む。
【０１３７】
別の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのアミノ酸配列、または表１に記載のまたは表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列を含む重鎖可変ドメインおよび定常領域、軽鎖可変ドメインおよび定常領域、またはその両方を含む。抗ＰＤ−１抗体分子は、場合により、重鎖、軽鎖、もしくはその両方からのリーダー配列、またはそれと実質的に同一である配列を含む。
【０１３８】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体の重鎖可変領域、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列からの少なくとも１、２、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【０１３９】
さらに別の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表１に示されるアミノ酸配列、または表１に示されるヌクレオチド配列によりコードされるものを含む重鎖可変領域からの少なくとも１、２、または３つのＣＤＲ（またはまとめてＣＤＲの全て）を含む。一実施態様において、ＣＤＲの１つ以上（またはまとめてＣＤＲの全て）は、表１に示されるアミノ酸配列、または表１に示されるヌクレオチド配列によりコードされるものに対して１、２、３、４、５、６つまたはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０１４０】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列の軽鎖可変領域からの少なくとも１、２または３つのＣＤＲを含む。
【０１４１】
さらに別の実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、表１に示されるアミノ酸配列、または表１に示されるヌクレオチド配列によりコードされるものを含む軽鎖可変領域からの少なくとも１、２または３つのＣＤＲ（またはまとめてＣＤＲの全て）を含む。一実施態様において、ＣＤＲの１つ以上（またはまとめてＣＤＲの全て）は、表１に示されるアミノ酸配列、または表１に示されるヌクレオチド配列によりコードされるものに対して１、２、３、４、５、６つまたはそれ以上の変化、例えば、アミノ酸置換または欠失を有する。
【０１４２】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるものからの６つ全てのＣＤＲ、または密接に関連するＣＤＲ、例えば、同一であり、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するＣＤＲを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の任意のＣＤＲを含み得る。ある実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、軽鎖ＣＤＲ中の置換、例えば、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３中の１つ以上の置換を含む。
【０１４３】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列の重鎖可変領域からのＫａｂａｔらによる少なくとも１、２、もしくは３つのＣＤＲ（例えば、表１に記載のＫａｂａｔ定義による少なくとも１、２、または３つのＣＤＲ）；または表１に示されるＫａｂａｔらによる１、２、もしくは３つのＣＤＲに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。
【０１４４】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列の軽鎖可変領域からのＫａｂａｔらによる少なくとも１、２、もしくは３つのＣＤＲ（例えば、表１に記載のＫａｂａｔ定義による少なくとも１、２、または３つのＣＤＲ）；または表１に示されるＫａｂａｔらによる１、２、もしくは３つのＣＤＲに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。
【０１４５】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列の重鎖および軽鎖可変領域からのＫａｂａｔらによる少なくとも１、２、３、４、５、もしくは６つのＣＤＲ（例えば、表１に記載のＫａｂａｔ定義による少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ）；または表１に示されるＫａｂａｔらによる１、２、３、４、５、もしくは６つのＣＤＲに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。
【０１４６】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列の重鎖および軽鎖可変領域からのＫａｂａｔらによる６つ全てのＣＤＲ（例えば、表１に記載のＫａｂａｔ定義による６つ全てのＣＤＲ）；または表１に示されるＫａｂａｔらによる６つ全てのＣＤＲに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の任意のＣＤＲを含み得る。
【０１４７】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるものの重鎖可変領域からの少なくとも１、２、もしくは３つのＣｈｏｔｈｉａ超可変ループ（例えば、表１に記載のＣｈｏｔｈｉａ定義による少なくとも１、２、または３つの超可変ループ）；または少なくともＰＤ−１と接触するそれらの超可変ループからのアミノ酸；または表１に示されるＣｈｏｔｈｉａらによる１、２、もしくは３つの超可変ループに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。
【０１４８】
別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるものの軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、もしくは３つのＣｈｏｔｈｉａ超可変ループ（例えば、表１に記載のＣｈｏｔｈｉａ定義による少なくとも１、２、または３つの超可変ループ）；または少なくともＰＤ−１と接触するそれらの超可変ループからのアミノ酸；または表１に示されるＣｈｏｔｈｉａらによる１、２、もしくは３つの超可変ループに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。
【０１４９】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体、または表１のヌクレオチド配列によりコードされるものの重鎖および軽鎖可変領域からの少なくとも１、２、３、４、５、もしくは６つの超可変ループ（例えば、表１に記載のＣｈｏｔｈｉａ定義による少なくとも１、２、３、４、５、または６つの超可変ループ）；または少なくともＰＤ−１と接触するそれらの超可変ループからのアミノ酸；または表１に示されるＣｈｏｔｈｉａらによる１、２、３、４、５もしくは６つの超可変ループに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。
【０１５０】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載のＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体の重鎖可変領域からの６つ全ての超可変ループ（例えば、表１に記載のＣｈｏｔｈｉａ定義による６つ全ての超可変ループ）、または密接に関連する超可変ループ、例えば、同一であり、もしくは少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有する超可変ループ；または表１に示されるＣｈｏｔｈｉａらによる６つ全ての超可変ループに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の任意の超可変ループを含み得る。
【０１５１】
さらに別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、ＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体の対応する超可変ループと同一のカノニカル構造、例えば、本明細書に記載の重鎖および／または軽鎖可変ドメインの少なくともループ１および／またはループ２と同一のカノニカル構造を有する少なくとも１、２、または３つの超可変ループを含む。例えば、超可変ループカノニカル構造の説明についてはＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８参照。これらの構造は、それらの参照文献に記載の表の精査により決定することができる。
【０１５２】
ある実施態様において、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＫａｂａｔらまたはＣｈｏｔｈｉａらにより定義されるＣＤＲまたは超可変ループの組合せを含む。
【０１５３】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、ＫａｂａｔもしくはＣｈｏｔｈｉａ定義による表１に示されるＢＡＰ０４９−クローン−ＢもしくはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅから選択される抗体；または表１のヌクレオチド配列によりコードされるもの；または上記配列のいずれかと実質的に同一（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一）である配列の重鎖可変領域からの少なくとも１、２もしくは３つのＣＤＲもしくは超可変ループ（例えば、表１に記載のＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａ定義による少なくとも１、２、または３つのＣＤＲまたは超可変ループ）；または表１に示されるＫａｂａｔもしくはＣｈｏｔｈｉａによる１、２、もしくは３つのＣＤＲもしくは超可変ループに対して少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３もしくは４つ以下の変更（例えば、置換、欠失または挿入、例えば、保存的置換）を有するものを含む。
【０１５４】
例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に示される、ＫａｂａｔらによるＶＨ  ＣＤＲ１もしくはＣｈｏｔｈｉａらによるＶＨ超可変ループ１、またはそれらの組合せを含み得る。一実施態様において、ＶＨ  ＣＤＲ１のＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの組合せは、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＷＭＨ（配列番号９３）、またはそれと実質的に同一であるアミノ酸配列（例えば、少なくとも１つのアミノ酸変更を有するが、２、３または４つ以下の変更（例えば、置換、欠失、または挿入、例えば、保存的置換）を有する）を含む。抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１に示される、例えば、ＫａｂａｔらによるＶＨ  ＣＤＲ２〜３およびＫａｂａｔらによるＶＬ  ＣＤＲ１〜３をさらに含み得る。したがって、一部の実施態様において、フレームワーク領域は、Ｋａｂａｔらにより定義されるＣＤＲおよびＣｈｏｔｈｉａらにより定義される超可変ループの組合せに基づき定義される。例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、ＣｈｏｔｈｉａらによるＶＨ超可変ループ１に基づき定義されるＶＨ  ＦＲ１およびＫａｂａｔらによるＶＨ  ＣＤＲ１〜２に基づき定義されるＶＨ  ＦＲ２を含み得る。抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、ＫａｂａｔらによるＶＨ  ＣＤＲ２〜３に基づき定義されるＶＨ  ＦＲ３〜４およびＫａｂａｔらによるＶＬ  ＣＤＲ１〜３に基づき定義されるＶＬ  ＦＲ１〜４をさらに含み得る。
【０１５５】
抗ＰＤ−１抗体分子は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ定義によるＣＤＲまたは超可変ループの任意の組合せを含有し得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の抗体、例えば、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ定義によるＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される抗体の軽鎖可変領域からの少なくとも１、２または３つのＣＤＲ（例えば、表１に記載のＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ定義による少なくとも１、２、または３つのＣＤＲ）を含む。
【０１５６】
本明細書の組合せにおいて、別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、（ｉ）配列番号２９、配列番号３２、または配列番号９３から選択されるＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３０または配列番号３３のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３１のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに（ｉｉ）配列番号３９または配列番号４２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４０または配列番号４３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号４１または配列番号４４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１５７】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号２９のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３１のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号３９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号４１のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１５８】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号３２のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３３のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３４のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号４２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号４４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１５９】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号９３のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３３のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号３４のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号４２のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４３のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号４４のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む；または。
【０１６０】
一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号９３のＶＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３０のＶＨＣＤＲ２アミノ酸配列；および配列番号３１のＶＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号３９のＶＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号４０のＶＬＣＤＲ２アミノ酸配列、および配列番号４１のＶＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【０１６１】
構築物および細胞
ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子をコードする核酸は、哺乳動物細胞、細菌、酵母、およびウイルス中での発現のための核酸構築物中に挿入することができる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａは、同一の核酸構築物から（例えば、バイシストロン性核酸構築物を使用して）または異なる核酸構築物から（例えば、モノシストロン性核酸構築物を使用して）組換え発現させることができる。一実施形態において、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａは、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａの単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む単一核酸構築物から組換え発現させることができる。
【０１６２】
核酸構築物は、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子のコード配列に作動可能に結合している１つ以上の転写調節エレメントを含み得る。転写調節エレメントは、典型的には、コード配列に対して５’側であり、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子をコードする核酸の転写を指向する。一部の実施形態において、野生型ＩＬ−１５および／または野生型ＩＬ−１５Ｒａ遺伝子の転写を調節することが本来見出される転写調節エレメントの１つ以上が、転写を制御するために使用される。他の実施形態において、野生型ＩＬ−１５および／または野生型ＩＬ−１５Ｒａ遺伝子に対して異種である１つ以上の転写調節エレメントが、転写を制御するために使用される。当業者に公知の任意の転写調節エレメントを使用することができる。転写調節エレメントのタイプの非限定的な例としては、構成的プロモーター、組織特異的プロモーター、および誘導性プロモーターが挙げられる。具体的な実施形態において、転写は、少なくとも部分的には、哺乳動物（一部の実施形態において、ヒト）転写調節エレメントにより制御される。具体的な実施形態において、転写は、少なくとも部分的に、強力なプロモーター、例えば、ＣＭＶにより制御される。他の態様において、誘導性プロモーターを使用することができる。
【０１６３】
核酸構築物は、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子のコード配列に作動可能に結合している１つ以上の転写後調節エレメントも含み得る。転写後調節エレメントは、コード配列に対して５’および／または３’側であり、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子をコードするＲＮＡ転写産物の翻訳の転写後調節を指向し得る。
【０１６４】
別の態様において、核酸構築物は、例えば、国際公開第１９９４／１２６５０号パンフレットおよび国際公開第２００１／６８８８２号パンフレットに記載の通り、遺伝子の既存の調節領域を、異なる遺伝子から単離された調節配列または新規調節配列により置き換えるベクターを標的化する遺伝子であり得る。ある実施形態において、宿主細胞は、例えば、内因性ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａ遺伝子の調節領域を変更することにより内因性ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａの産生を増加させるように遺伝子操作することができる。
【０１６５】
選択される核酸構築物は、種々の因子、例として、限定されるものではないが、転写調節エレメントの強度ならびにＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子を発現させるために使用すべき宿主細胞に依存する。核酸構築物は、プラスミド、ファージミド、コスミド、ウイルスベクター、ファージ、人工染色体などであり得る。一態様において、ベクターは、任意の好適な手段（形質転換、形質移入、コンジュゲーション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクションなど）により適切な宿主細胞中に導入してそれらを形質転換することができるエピソームまたは非相同的組込みベクターであり得る。
【０１６６】
核酸構築物は、宿主細胞中でのＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子の一過的または安定的発現のためのプラスミドまたは安定的組込みベクターであり得る。安定的発現のため、ベクターは、標的部位またはランダム染色体部位における染色体組込みを媒介し得る。ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子を発現させるために使用することができる宿主細胞−ベクター系の非限定的な例としては、ウイルス（例えば、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルスなど）が感染した哺乳動物細胞系；ウイルス（例えば、バキュロウイルス）が感染した昆虫細胞系；微生物、例えば、酵母ベクターを含有する酵母、またはバクテリオファージ、ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡにより形質転換された細菌；および選択マーカーを使用する形質転換により生成された安定的細胞系が挙げられる。一部の実施形態において、核酸構築物は、選択マーカー遺伝子、例として、限定されるものではないが、ネオマイシン（ｎｅｏ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｄｈｆｒ）およびハイグロマイシン（ｈｙｇ）を含む。
【０１６７】
核酸構築物は、モノシストロン性またはマルチシストロン性であり得る。マルチシストロン性核酸構築物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個もしくはそれ以上、または２〜５、５〜１０もしくは１０〜２０個の範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列をコードし得る。例えば、バイシストロン性核酸構築物は、以下の順で、プロモーター、第１の遺伝子（例えば、ＩＬ−１５）、および第２の遺伝子および（例えば、ＩＬ−１５Ｒａ）を含み得る。このような核酸構築物において、両方の遺伝子の転写はプロモーターによりドライブされる一方、第１の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存性スキャニング機序によるものであり、第２の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ非依存性機序、例えば、ＩＲＥＳによるものである。
【０１６８】
これらの態様を実施するための技術は、特に示されない限り、当業者により定型的に実施される分子生物学、微生物学、ならびに組換えＤＮＡ操作および産生の慣用の技術を用いる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ（Ｇｌｏｖｅｒ，Ｅｄ．１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｇａｉｔ，Ｅｄ．１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．１９８４）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｅｄ．１９８６）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｍｉｌｌｅｒ  ＆  Ｃａｌｏｓ，Ｅｄｓ．１９８７，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １５４  ａｎｄ  １５５（それぞれＷｕ  ＆  Ｇｒｏｓｓｍａｎ，ａｎｄ  Ｗｕ，Ｅｄｓ．）、（Ｍａｙｅｒ  ＆  Ｗａｌｋｅｒ，Ｅｄｓ．，１９８７）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｓｃｏｐｅｓ，１９８７），Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，１９９１）参照。
【０１６９】
核酸の発現のために選択される宿主細胞は、細胞の使用目的に依存する。例えば、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａおよび／または抗ＰＤ−１抗体分子を内因的に発現する細胞と同様に細胞がグリコシル化するか否かのような因子を、宿主細胞の選択において考慮することができる。
【０１７０】
本明細書の核酸構築物によりコードされるタンパク質を発現させるために使用することができる宿主細胞の非限定的な例としては、哺乳動物細胞、細菌細胞、酵母細胞、初代細胞、不死化細胞、植物細胞および昆虫細胞が挙げられる。具体的な実施形態において、宿主細胞は、哺乳動物細胞系である。哺乳動物細胞系の例としては、限定されるものではないが、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨｅｐＧ２、ＭＣＦ７、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＲＤ、ＰＣ１２、ハイブリドーマ、プレＢ細胞、２９３、２９３Ｈ、Ｋ５６２、ＳｋＢｒ３、ＢＴ４７４、Ａ２０４、Ｍ０７Ｓｂ、ＴＦβ１、Ｒａｊｉ、Ｊｕｒｋａｔ、ＭＯＬＴ−４、ＣＴＬＬ−２、ＭＣ−ＩＸＣ、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ、ＳＫ−Ｎ−ＭＣ、ＳＫ−Ｎ−ＤＺ、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ、Ｃ１２７、Ｎ０、およびＢＥ（２）−Ｃ細胞が挙げられる。発現のための宿主として利用可能な他の哺乳動物細胞系は当該技術分野において公知であり、それとしては、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から利用可能な多くの不死化細胞系が挙げられる。
【０１７１】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５またはＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸構築物は、同一の宿主細胞または異なる宿主細胞中に同時形質移入または形質移入することができる。場合により、選択マーカー遺伝子をコードする核酸を含む核酸構築物を同一の細胞中に形質移入して形質移入細胞を選択することもできる。ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸を含む核酸構築物が異なる細胞中に形質移入される場合、異なる細胞により発現されるＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａを単離し、上記のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を形成するために好適な条件下で互いに接触させることができる。当業者に公知の任意の技術、例として、例えば、形質転換、形質移入、コンジュゲーション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、ならびにウイルス、例として、限定されるものではないが、アデノウイルス、レンチウイルス、およびレトロウイルスによる感染を使用して核酸により宿主細胞を形質移入または形質導入することができる。
【０１７２】
組換えＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａポリペプチドならびに／または抗ＰＤ−１抗体分子の長期高収量産生のため、安定的細胞系を生成することができる。例えば、細胞系は、同一または別個の核酸構築物上に選択マーカー遺伝子を含有し得る本明細書に記載の核酸構築物を使用して形質転換することができる。選択マーカー遺伝子は、同時形質移入により同一の細胞中に導入することができる。ベクターの導入後、細胞を濃縮培地中で１〜２日間成長させてから選択培地に交換して導入核酸を良好に発現する細胞の成長および回収を可能とする。安定的形質転換細胞の耐性クローンは、細胞タイプに適切である当該技術分野において周知の組織培養技術を使用して増殖させることができる。特定の実施形態において、細胞系は、無血清培地中で成長するように適合されたものである。一実施形態において、細胞系は、シェーカーフラスコ中で無血清培地中で成長するように適合されたものである。一実施形態において、細胞系は、撹拌または回転フラスコ中で成長するように適合されたものである。ある実施形態において、細胞系は、懸濁液中で培養される。特定の実施形態において、細胞系は、接着しておらず、または非接着細胞として成長するように適合されたものである。ある実施形態において、細胞系は、低カルシウム条件下で成長するように適合されたものである。一部の実施形態において、細胞系は、低血清培地中で培養され、または成長するように適合されている。
【０１７３】
具体的な実施形態において、本発明の組換えポリペプチドの高収量産生の特に好ましい方法は、米国特許第４，８８９，８０３号明細書に記載の連続的に増加するレベルのメトトレキサートの使用によるＤＨＦＲ欠損ＣＨＯ細胞中のジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）増幅の使用を介するものである。このような細胞から得られたポリペプチドは、グリコシル化形態であり得る。
【０１７４】
一実施形態において、細胞系は、野生型ヒトＩＬ−１５および野生型可溶性ヒトＩＬ−１５Ｒａの安定的ヘテロ二量体を発現するように遺伝子操作し、次いでそれを精製し、ヒトに投与することができる。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａヘテロ二量体の安定性は、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａの両方を組換え発現する細胞系から産生された場合に増加する。
【０１７５】
具体的な実施形態において、宿主細胞は、ＩＬ−１５および全長ＩＬ−１５Ｒａを組換え発現する。別の具体的な実施形態において、宿主細胞は、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態を組換え発現する。別の具体的な実施形態において、宿主細胞は、ＩＬ−１５および細胞の表面から開裂されず、細胞と会合したままであるＩＬ−１５Ｒａの膜結合形態を組換え発現する。一部の実施形態において、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａ（全長または可溶性形態）を組換え発現する宿主細胞は、別のポリペプチド（例えば、サイトカインまたはその断片）も組換え発現する。
【０１７６】
ある実施形態において、このような宿主細胞は、このような宿主細胞は、ＩＬ−１５Ｒａポリペプチドに加え、ＩＬ−１５ポリペプチドを組換え発現する。ＩＬ−１５および／またはＩＬ−１５Ｒａをコードする核酸を使用してＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａの単離および精製のためにＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａを多量に組換え発現する哺乳動物細胞を生成することができ、好ましくは、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａは、複合体として会合している。一実施形態において、多量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、対照細胞（例えば、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｒａ、もしくはＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａの両方を組換え発現するように遺伝子操作されていない細胞、または空ベクターを含む細胞）により内因的に発現されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の量よりも少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、または２０倍よりも多い、細胞により発現されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の量を指す。一部の実施形態において、本明細書に記載の宿主細胞は、当業者に公知の技術（例えば、ＥＬＩＳＡ）により計測しておよそ０．１ｐｇ〜２５ｐｇ、０．１ｐｇ〜２０ｐｇ、０．１ｐｇ〜１５ｐｇ、０．１ｐｇ〜１０ｐｇ、０．１ｐｇ〜５ｐｇ、０．１ｐｇ〜２ｐｇ、２ｐｇ〜１０ｐｇ、または５〜２０ｐｇのＩＬ−１５を発現する。ある実施形態において、本明細書に記載の宿主細胞は、当該技術分野において公知の技術（例えば、ＥＬＩＳＡ）により計測して１日当たりおよそ０．１〜０．２５ｐｇ、１日当たり０．２５〜０．５ｐｇ、１日当たり０．５〜１ｐｇ、１日当たり１〜２ｐｇ、１日当たり２〜５ｐｇ、または１日当たり５〜１０ｐｇのＩＬ−１５を発現する。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、ＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態である。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５Ｒａは、安定的ヘテロ二量体でＩＬ−１５と会合しているＩＬ−１５Ｒａの可溶性形態であり、それは収量を増加させ、生物活性ヘテロ二量体ＩＬ−１５／可溶性ＩＬ−１５Ｒａサイトカインの産生および精製を簡易化させる。
【０１７７】
組換えＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａならびに抗ＰＤ−１抗体分子は、組換えタンパク質産生および精製の方法を使用して精製することができ、それらは当該技術分野において周知である、例えば、国際公開第２００７／０７０４８８号パンフレット参照。簡潔に述べると、ポリペプチドは、細胞内で、ペリプラズム空間中で産生することができ、または培地中で直接分泌させることができる。ポリペプチドを含む細胞溶解物または上清は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができる。タンパク質精製のための他の技術、例えば、イオン交換カラム上の分別、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）（ゲル濾過物質；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）上でのクロマトグラフィー、アニオンまたはカチオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）上でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿も利用可能である。
【０１７８】
一部の実施形態において、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａは、合成し、または異なる細胞により組換え発現させ、続いて単離し、合わせてＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をインビトロで形成してから対象に投与する。他の実施形態において、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａは、合成し、または異なる細胞により組換え発現させ、続いて単離し、次いでＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体をインサイチューまたはインビボで対象に同時投与する。さらに他の実施形態において、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒａは、合成し、または同一の細胞により一緒に発現させ、形成されたＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を単離する。
【０１７９】
組成物
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を含む組成物が本明細書に提供される。抗ＰＤ−１抗体分子を含む組成物も本明細書に提供される。組成物としては、医薬組成物の製造において有用なバルク薬物組成物（例えば、不純または非滅菌組成物）および単位剤形の調製において使用することができる医薬組成物（すなわち、対象または患者への投与に好適な組成物）が挙げられる。組成物（例えば、医薬組成物）は、有効量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体もしくは抗ＰＤ−１抗体分子、またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体もしくは抗ＰＤ−１抗体分子の組合せおよび薬学的に許容可能な担体を含む。具体的な実施形態において、組成物（例えば、医薬組成物）は、有効量の１つ以上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子および薬学的に許容可能な担体を含む。一部の実施形態において、組成物は、追加の治療薬、例えば、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、アジュバントをさらに含む。このような治療薬の非限定的な例は、以下に提供される。
【０１８０】
具体的な実施形態において、用語「薬学的に許容可能な」は、動物、特にヒトにおける使用について連邦政府の管理機関もしくは州政府により承認されているまたは米国薬局方もしくは一般に認知されている他の薬局方に列記されていることを意味する。用語「担体」は、治療薬と投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全および不完全）、または、より好ましくは、ＭＦ５９Ｃ．１アジュバント）、賦形剤またはビヒクルを指す。このような医薬担体は、無菌液体、例えば、水および油、例として、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などであり得る。一実施形態において、医薬組成物が静脈内投与される場合、水が担体である。生理食塩水ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液を液状担体、特に、注射液剤用として用いることもできる。好適な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、所望により、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有し得る。これらの組成物は、液剤、懸濁液剤、乳濁液剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性配合物などの形態を取り得る。
【０１８１】
医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体または賦形剤を使用して任意の慣用の様式で配合することができる。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法に従って対象に投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子は、医薬組成物として投与される。
【０１８２】
一般に、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子を含む医薬組成物の構成成分は、単位剤形で別個にまたは一緒に混合して供給され、例えば、密閉容器、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたは小袋中の乾燥凍結粉末または無水濃縮物として供給される。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子を注入により投与すべき場合、滅菌された医薬グレードの水または生理食塩水（例えば、ＰＢＳ）を含有する注入ボトルにより分注することができる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子を注射により投与する場合、成分を投与前に混合することができるように注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。
【０１８３】
一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子は、当業者に公知の任意の方法による投与、例として、限定されるものではないが、非経口（例えば、皮下、静脈内、腫瘍内または筋肉内）投与のために配合することができる。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子は、局所または全身非経口投与、例えば、腫瘍内投与のために配合される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子は、それぞれ皮下または静脈内投与のために配合される。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子は、薬学的に適合性の溶液中で配合される。
【０１８４】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子は、注射による、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために配合することができる。注射用配合物は、例えば、アンプルまたは複数回投与用容器中で添加された保存剤とともに単位剤形で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中で、懸濁液剤、液剤または乳濁液剤のような形態を取り得、配合剤、例えば、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤を含有し得る。あるいは、活性成分は、好適なビヒクル、例えば、滅菌パイロジェンフリー水による使用前の構成のための粉末形態であり得る。
【０１８５】
予防および治療的使用のための用量レジメン
一態様において、ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させる方法であって、複合体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を規定の用量レジメンにおいて対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。ＩＬ−１５媒介免疫機能の向上はある障害の予防、治療および／または管理に有益であるため、そのような障害を予防し、治療し、および／または管理する方法であって、それが必要とされる対象にＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を投与することを含む方法が本明細書に提供される。ＩＬ−１５媒介免疫機能を向上させることが有益である障害の非限定的な例としては、癌、リンパ球減少、免疫不全、感染性疾患、および創傷が挙げられる。
【０１８６】
一実施形態において、対象における障害を予防し、治療し、および／または管理するにあたり、ＩＬ−１５媒介免疫機能の向上がそのような障害の予防、治療および／または管理に有益である方法であって、同一用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に治療サイクルの持続期間にわたり投与することを含む方法が本明細書に提供される。一実施形態において、用量は、０．１μｇ／ｋｇおよび０．５μｇ／ｋｇの範囲である。一実施形態において、用量は、０．２５μｇ／ｋｇおよび１μｇ／ｋｇの範囲である。具体的な実施形態において、用量は、０．５μｇ／ｋｇおよび２μｇ／ｋｇの範囲である。別の実施形態において、用量は、１μｇ／ｋｇ〜４μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、用量は、２μｇ／ｋｇ〜８μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、用量は、０．１μｇ／ｋｇ、０．２５μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、６μｇ／ｋｇ、８μｇ／ｋｇである。具体的な実施形態において、用量は、１μｇ／ｋｇである。ある実施形態において、用量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上、または１〜３、１〜４、２〜４、２〜５、２〜６、３〜６、４〜６、６〜８、５〜８、もしくは５〜１０回投与される。一部の実施形態において、用量は、５〜７日間、５〜１０日間、７〜１２日間、７〜１４日間、７〜２１日間または１４〜２１日間の期間にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上、または１〜３、１〜４、２〜４、２〜５、１〜５、２〜６、３〜６、４〜６もしくは６〜８回投与される。具体的な実施形態において、それぞれの用量は、５〜７日間、５〜１０日間、７〜１２日間、７〜１４日間、７〜２１日間または１４〜２１日間の期間にわたり少なくとも１、２、３、４、５、６回またはそれ以上投与される。別の具体的な実施形態において、それぞれの用量は、少なくとも１回投与され、対象は、３週間の期間にわたり週１回用量が投与される。
【０１８７】
別の実施形態において、対象における障害を予防し、治療し、および／または管理するにあたり、ＩＬ−１５媒介免疫機能の向上がそのような障害の予防、治療および／または管理に有益である方法であって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に投与レジメンにおいて非投与期間前に投与サイクルにおいて少なくとも１、２、４回または６回投与することを含む方法が本明細書に提供される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を３週間にわたり週１回提供し、４週目は投与しない。次いで、この投与サイクルを繰り返す。
【０１８８】
代替実施形態において、対象における障害を予防し、治療し、および／または管理するにあたり、ＩＬ−１５媒介免疫機能の向上がそのような障害の予防、治療および／または管理に有益である方法であって、（ａ）少なくとも１回の初期低用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に投与すること；および（ｂ）連続的に高くなる用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を治療サイクルの持続期間にわたり対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。具体的な実施形態において、対象における癌を予防し、治療し、および／または管理する方法であって、（ａ）初期用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に治療サイクルの持続期間にわたり投与すること；および（ｂ）連続的に高くなる用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を対象に治療サイクルの持続期間にわたり投与することを含む方法が本明細書に提供される。具体的な実施形態において、初期用量は、０．１μｇ／ｋｇおよび０．５μｇ／ｋｇの範囲である。具体的な実施形態において、初期用量は、０．２５μｇ／ｋｇおよび１μｇ／ｋｇの範囲である。別の実施形態において、初期用量は、０．５μｇ／ｋｇおよび２μｇ／ｋｇの範囲である。具体的な実施形態において、初期用量は、１μｇ／ｋｇ〜４μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、初期用量は、２μｇ／ｋｇおよび８μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、初期用量は、約０．２５μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、初期用量は、約０．５μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、初期用量は、約１μｇ／ｋｇである。別の実施形態において、初期用量は、０．１μｇ／ｋｇ、０．２５μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、２μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ、６μｇ／ｋｇ、８μｇ／ｋｇである。ある実施形態において、初期用量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上、または１〜３、１〜４、２〜４、２〜５、２〜６、３〜６、４〜６、６〜８、５〜８、もしくは５〜１０回投与される。一部の実施形態において、初期用量は、５〜７日間、５〜１０日間、７〜１２日間、７〜１４日間、７〜２１日間もしくは１４〜２１日間の期間にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上、または１〜３、１〜４、２〜４、２〜５、１〜５、２〜６、３〜６、４〜６もしくは６〜８回投与される。ある実施形態において、それぞれの連続的に高くなる用量は、前回用量よりも１．２、１．２５、１．３、１．３５、１．４、１．４５、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、もしくは６倍高く、または前回用量よりも１．２〜２、２〜３、２〜４、１〜５、２〜６、３〜４、３〜６、もしくは４〜６倍高く、または前回用量よりも２倍高い。一部の実施形態において、それぞれの連続的に高くなる用量は、前回用量よりも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１３０％、１３５％、１４０％、１４５％、１５０％、１５５％、１６０％、１６５％、１７０％、１７５％、１８０％、１８５％、１９０％、１９���％、または２００％高い。具体的な実施形態において、それぞれの用量は、５〜７日間、５〜１０日間、７〜１２日間、７〜１４日間、７〜２１日間または１４〜２１日間の期間にわたり少なくとも１、２、３、４、５、６回またはそれ以上投与される。別の具体的な実施形態において、それぞれの用量は少なくとも１回投与され、対象は、２週間の期間にわたり週７日間当たり３回（例えば、月曜日、水曜日および金曜日）用量を投与される。
【０１８９】
ある実施形態において、対象は、以下の有害事象、例えば、グレード３または４の血小板減少、グレード３または４の顆粒球減少、グレード３または４の白血球増加（白血球（ＷＢＣ）＞１００，０００ｍｍ３）、グレード３または４のＷＢＣ、リンパ球絶対数（ＡＬＣ）および／または好中球絶対数（ＡＮＣ）の減少、リンパ球増加ならびに臓器機能不全（例えば、肝または腎機能不全）についてモニタリングされる。ある実施形態において、用量は増加させず、対象が有害事象、例えば、グレード３または４の血小板減少、グレード３または４の顆粒球減少、グレード３または４の白血球増加（白血球（ＷＢＣ）＞１００，０００ｍｍ３）、グレード３または４のＷＢＣ、リンパ球絶対数（ＡＬＣ）および／または好中球絶対数（ＡＮＣ）の減少、リンパ球増加、ならびに臓器機能不全（例えば、肝または腎機能不全）を経験する場合には用量は同一のままであり得、停止または低減させることができる。これらの実施形態によれば、対象に投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量は、有害事象が減少または消失するまで低減させることができ、または同一のままであり得る。
【０１９０】
別の実施形態において、対象における障害を予防し、治療し、および／または管理するにあたり、ＩＬ−１５媒介免疫機能の向上がそのような障害の予防、治療および／または管理に有益である方法であって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、０．２５μｇ／ｋｇ〜４μｇ／ｋｇの初期用量を含む第１のサイクルから開始し、後続のサイクルにおいて用量を前回の用量と比べて２〜３倍増加させる用量レジメンにおいてヒト対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。それぞれの用量は、少なくとも１、２、４回または６回投与してから用量を次のレベルに上昇させ、ある用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与後の一定期間（例えば、ある用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与後のおよそ２４時間〜およそ４８時間、およそ２４時間〜およそ３６時間、およそ２４時間〜およそ７２時間、およそ４８時間〜およそ７２時間、およそ３６時間〜およそ４８時間、またはおよそ４８時間〜６０時間および別の用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与前）、対象から得られた試料（例えば、血漿試料）中の遊離ＩＬ−１５の濃度をモニタリングしてから用量を次のレベルに上昇させる。
【０１９１】
別の実施形態において、対象における障害を予防し、治療し、および／または管理するにあたり、ＩＬ−１５媒介免疫機能の向上がそのような障害の予防、治療および／または管理に有益である方法であって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を、以下の連続用量：（ｉ）０．２５μｇ／ｋｇ；（ｉｉ）０．５μｇ／ｋｇ；（ｉｉｉ）１μｇ／ｋｇ；（ｉｖ）２μｇ／ｋｇ；（ｖ）４μｇ／ｋｇ；および（ｖｉ）８μｇ／ｋｇにおける用量レジメンにおいて対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、以下の連続用量：（ｉ）１μｇ／ｋｇ；（ｉｉ）２μｇ／ｋｇ；（ｉｉｉ）４μｇ／ｋｇ；および（ｉｖ）８μｇ／ｋｇにおける用量レジメンにおいて対象に投与する。それぞれの用量は、投与サイクルにおいて少なくとも１、２、４回または６回投与してから用量を次のレベルに上昇させ、ある用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与後の一定期間（例えば、ある用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与後のおよそ２４時間〜およそ４８時間後、およそ２４時間〜およそ３６時間、およそ２４時間〜およそ７２時間、およそ４８時間〜およそ７２時間、およそ３６時間〜およそ４８時間、またはおよそ４８時間〜６０時間および別の用量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与前）、対象から得られた試料（例えば、血漿試料）中の遊離ＩＬ−１５の濃度をモニタリングしてから用量を次のレベルに上昇させる。
【０１９２】
別の実施形態において、対象における癌を予防し、治療し、および／または管理する方法であって、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を以下の連続用量：（ｉ）１μｇ／ｋｇ；（ｉｉ）２μｇ／ｋｇ；（ｉｉｉ）４μｇ／ｋｇ；および（ｉｖ）８μｇ／ｋｇにおける用量レジメンにおいて対象に投与することを含み、それぞれの用量を、投与サイクルにおいて少なくとも少なくとも１、２、４回または６回投与してから用量を次のレベルに上昇させる方法が本明細書に提供される。
【０１９３】
特定の実施形態において、対象は、ヒト対象である。ある実施形態において、治療サイクルにおける用量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上、または１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜５、１〜６、２〜６、１〜６、３〜６、４〜６、６〜８、５〜８、もしくは５〜１０回投与される。一部の実施形態において、用量は、５〜７日間、５〜１０日間、７〜１２日間、７〜１４日間、７〜２１日間または１４〜２１日間の期間にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上、または１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜５、２〜６、１〜６、３〜６、４〜６もしくは６〜８回投与される。ある実施形態において、それぞれの用量は、１投与サイクル当たり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上、または１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜５、１〜６、２〜６、１〜６、３〜６、４〜６、６〜８、５〜８、もしくは５〜１０回投与される。具体的な実施形態において、それぞれの用量は、５〜７日間、５〜１０日間、７〜１２日間、７〜１４日間、７〜２１日間または１４〜２１日間の期間にわたり少なくとも１、２、３、４、５、６回もしくはそれ以上、または１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜５、１〜６、２〜６、１〜６、３〜６、４〜６、６〜８、５〜８、もしくは５〜１０回投与される。
【０１９４】
別の具体的な実施形態において、対象は、週７日間当たり３回（例えば、月曜日、水曜日および金曜日）用量を投与される。ある実施形態において、対象は、以下の有害事象、例えば、グレード３または４の血小板減少、グレード３または４の顆粒球減少、グレード３または４の白血球増加（白血球（ＷＢＣ）＞１００，０００ｍｍ３）、グレード３または４のＷＢＣ、リンパ球絶対数（ＡＬＣ）および／または好中球絶対数（ＡＮＣ）の減少、リンパ球増加、ならびに臓器機能不全（例えば、肝または腎機能不全）についてモニタリングされる。ある実施形態において、用量は増加させず、対象が有害事象、例えば、グレード３または４の血小板減少、グレード３または４の顆粒球減少、グレード３または白血球増加（白血球（ＷＢＣ）＞１００，０００ｍｍ３）、グレード３または４のＷＢＣ、リンパ球絶対数（ＡＬＣ）および／または好中球絶対数（ＡＮＣ）の減少、リンパ球増加、ならびに臓器機能不全（例えば、肝または腎機能不全）を経験する場合には用量は同一のままであり得、停止または低減させることができる。これらの実施形態によれば、対象に投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の用量は、有害事象が減少または消失するまで低減させることができ、または同一のままであり得る。
【０１９５】
具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法によれば、それぞれの用量は、３週間にわたり週１回投与される。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法によれば、それぞれの用量は、２週間にわたり週１回、３回投与される。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法によれば、それぞれの用量は、２、３、または４週間にわたり週１回、３回投与される。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法によれば、それぞれの用量は、２、３、または４週間にわたり週１回、６回投与される。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法によれば、それぞれの用量は、２、３、または４週間にわたり１日おきに１回投与される。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法によれば、それぞれの用量は、２、３、または４週間にわたり毎日１回投与される。
【０１９６】
ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、本明細書に記載の方法により対象に皮下投与される。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、本明細書に記載の方法により対象に静脈内または筋肉内投与される。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、本明細書に記載の方法により対象に腫瘍内投与される。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、本明細書に記載の方法により対象における部位（例えば、感染の部位）に局所投与される。
【０１９７】
ある実施形態において、本明細書に記載の方法により対象から得られる試料は、血液試料である。具体的な実施形態において、試料は血漿試料である。ＩＬ−１５の基底血漿レベルは、ヒトにおいておよそ１ｐｇ／ｍｌ、サル（例えば、マカク）においておよそ８〜１０ｐｇ／ｍｌ、および齧歯動物（例えば、マウス）においておよそ１２ｐｇ／ｍである。当業者に公知の技術を使用して対象から試料を得ることができる。
【０１９８】
一実施形態において、対象における障害、例えば、対象における過剰増殖病態または障害（例えば、癌）を予防し、治療し、および／または管理する方法であって、抗ＰＤ−１抗体分子を対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、注射により（例えば、皮下または静脈内）、約２００ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば、約２５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、約３００ｍｇ〜４００ｍｇ、約２５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、約３５０ｍｇ〜４５０ｍｇ、または約３００ｍｇもしくは約４００ｍｇの用量（例えば、均一用量）において投与される。投与スケジュール（例えば、均一投与スケジュール）は、例えば、週１回〜２、３、４、５、または６週間毎に１回で変動し得る。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、３週間毎に１回または４週間毎に１回、約３００ｍｇ〜４００ｍｇの用量で投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、３週間毎に１回、約３００ｍｇからの用量で投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、４週間毎に１回、約４００ｍｇからの用量で投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、４週間毎に１回、約３００ｍｇからの用量で投与される。一実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、３週間毎に１回、約４００ｍｇからの用量で投与される。
【０１９９】
本明細書に記載の方法によれば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、対象に医薬組成物中で投与することができる。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、１つ以上の他の治療薬、例えば、抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで投与される。組合せ療法としては、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の同時および連続投与が挙げられる。本明細書において使用されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子は、それらが同日に、例えば、同時に、または１、２、３、４、５、６、７、もしくは８時間空けて患者に投与される場合、同時投与されると考えられる。対照的に、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子は、それらが患者に異なる日に投与される、例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子を１日、２日または３日間隔において投与することができる場合、連続的に投与されると考えられる。本明細書に記載の方法において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の投与は、抗ＰＤ−１抗体分子の投与の前でも後でもよい。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子は、同時投与される場合、同一の医薬組成物または異なる医薬組成物中に存在し得る。
【０２００】
具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法により向上される免疫機能の例としては、リンパ球の増殖／拡大（例えば、リンパ球数の増加）、リンパ球のアポトーシスの阻害、樹状細胞（または抗原提示細胞）の活性化、および抗原提示が挙げられる。特定の実施形態において、本明細書に記載の方法により向上される免疫機能は、ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１およびＴｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、アルファ／ベータＴ細胞、およびガンマ／デルタＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細胞、樹状細胞（未成熟または成熟）、抗原提示細胞、マクロファージ、マスト細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、腫瘍常在性Ｔ細胞、ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、またはナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の数の増殖／拡大またはそれらの活性化である。一実施形態において、本明細書に記載の方法は、リンパ球前駆細胞の増殖／拡大またはその数を向上させる。一部の実施形態において、本明細書に記載の方法は、ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１およびＴｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球、アルファ／ベータＴ細胞、およびガンマ／デルタＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細胞、樹状細胞（未成熟または成熟）、抗原提示細胞、マクロファージ、マスト細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、腫瘍常在性Ｔ細胞、ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、またはナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）の数を、陰性対照に対しておよそ１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、またはそれ以上増加させる。
【０２０１】
具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＥＬＩＳＡ、および細胞増殖アッセイを使用してＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せを投与していない対象における免疫機能に対して対象における免疫機能を少なくとも０．２倍、０．５倍、０．７５倍、１倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または少なくとも１０倍だけ向上させ、または誘導する。具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＥＬＩＳＡおよび細胞増殖アッセイを使用してＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せを投与していない対象における免疫機能に対して対象における免疫機能を少なくとも９９％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、または少なくとも１０％だけ向上させ、または誘導する。具体的な実施形態において、免疫機能はサイトカイン放出（例えば、インターフェロン−ガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、またはトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）−ベータ）である。一実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能はＮＫ細胞増殖であり、それは、例えば、フローサイトメトリーによりアッセイしてＮＫ細胞のマーカー（例えば、ＣＤ５６）を発現する細胞数を検出することができる。一実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能はＣＤ８＋Ｔ細胞増殖であり、それは、例えば、フローによりアッセイすることができる。別の実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能は抗体産生であり、それは、例えば、ＥＬＩＳＡによりアッセイすることができる。一部の実施形態において、ＩＬ−１５媒介免疫機能はエフェクター機能であり、それは、例えば、細胞毒性アッセイまたは当該技術分野において周知の他のアッセイによりアッセイすることができる。末梢血リンパ球数に対する１つ以上のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せの１回以上の投与の効果は、当業者に公知の標準的な技術を使用してモニタリング／評価することができる。哺乳動物における末梢血リンパ球数は、例えば、前記哺乳動物から末梢血の試料を得、例えば、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）勾配遠心分離を使用して末梢血の他の構成成分、例えば、血漿からリンパ球を分離し、トリパンブルーを使用してリンパ球を計数することにより決定することができる。哺乳動物における末梢血Ｔ細胞数は、例えば、例えばＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）勾配遠心分離の使用を使用して末梢血の他の構成成分、例えば、血漿からリンパ球を分離し、Ｔ細胞抗原、例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、およびＣＤ８に指向されるＦＩＴＣまたはフィコエリスリンにコンジュゲートしている抗体によりＴ細胞を標識し、ＦＡＣＳによりＴ細胞の数を計測するこ���により決定することができる。さらに、Ｔ細胞の特定のサブセット（例えば、ＣＤ２＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋ＲＯ＋、ＣＤ８＋ＲＯ＋、ＣＤ４＋ＲＡ＋、またはＣＤ８＋ＲＡ＋）またはＮＫ細胞に対する効果は、当業者に公知の標準的な技術、例えば、ＦＡＣＳを使用して決定することができる。
【０２０２】
ＩＬ−１５および／またはＰＤ−１の血漿レベルは、当業者に公知の標準的な技術を使用して評価することができる。例えば、血漿は、対象から得られた血液試料から得ることができ、血漿中のＩＬ−１５および／またはＰＤ−１のレベルは、ＥＬＩＳＡにより計測することができる。
【０２０３】
癌治療
本明細書において使用される用語「癌」は、組織病理学タイプまたは浸潤のステージにかかわらず癌性成長または癌遺伝子プロセス、転移性組織または悪性形質転換細胞、組織、もしくは臓器の全てのタイプを含むことを意味する。
【０２０４】
癌を予防し、治療し、および／または管理する方法であって、有効量のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子を含む組成物を、それが必要とされる対象に投与することを含む方法が本明細書に提供される。具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体は、同一の反復用量、あるいは用量漸増レジメンのいずれかにおいて皮下投与される。具体的な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、均一投与レジメンにおいて静脈内注入として投与される。
【０２０５】
具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法による対象へのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せの投与は、１、２、もしくは３つまたはそれ以上の結果を達成する：（１）腫瘍または新生物の成長の低減；（２）腫瘍の形成の低減；（３）原発性、局所性および／または転移性癌の根絶、除去または制御；（４）転移拡散の低減；（５）死亡率の低減；（６）生存率の増加；（７）生存期間の増加；（８）寛解患者数の増加；（９）入院率の減少；（１０）入院期間の減少；ならびに（１１）腫瘍のサイズが１０％超だけ、または８％超だけ、または６％超だけ、または４％超だけ増加しない；好ましくは腫瘍のサイズが２％超だけ増加しないような、腫瘍のサイズの維持。
【０２０６】
具体的な実施形態において、本明細書に記載の方法による癌を有する対象（一部の実施形態において、癌についての動物モデル）へのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せの投与は、当該技術分野において周知のアッセイを使用して計測して、陰性対照を投与した癌を有する対象（一部の実施形態において、癌についての同一の動物モデル）における腫瘍の成長に対して腫瘍の成長を少なくとも２倍、好ましくは少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、または少なくとも１０倍だけ阻害し、または低減させる。別の実施形態において、本明細書に記載の方法による癌を有する対象（一部の実施形態において、癌についての動物モデル）へのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せの投与は、当該技術分野において周知のアッセイを使用して計測して、陰性対照、またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体もしくは抗ＰＤ−１抗体分子を単一薬剤として投与した癌を有する対象（一部の実施形態において、癌についての同一の動物モデル）における腫瘍の成長に対して腫瘍の成長を少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％だけ阻害し、または低減させる。
【０２０７】
癌性障害の例としては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液腫瘍、軟部組織腫瘍、および転移性病変が挙げられる。固形腫瘍の例としては、種々の臓器系の悪性腫瘍、例えば、肉腫、および癌腫（例として、腺癌および扁平上皮癌）、例えば、肝臓、肺、乳房、リンパ、胃腸管（例えば、結腸）、尿生殖路（例えば、腎細胞、尿路上皮細胞）、前立腺および咽頭を冒すものが挙げられる。腺癌としては、悪性腫瘍、例えば、ほとんどの結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸の癌および食道の癌が挙げられる。扁平上皮癌としては、例えば、肺、食道、皮膚、頭頸部領域、口腔、肛門、および頸部中の悪性腫瘍が挙げられる。一実施形態において、癌は、黒色腫、例えば、進行期黒色腫である。上記の癌の転移性病変も、本発明の方法および組成物を使用して治療または予防することができる。
【０２０８】
本明細書に開示されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せを使用して成長を阻害することができる例示的な癌としては、免疫療法に典型的に応答性である癌が挙げられる。治療のための好ましい癌の非限定的な例としては、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎臓癌（例えば、淡明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、乳癌、結腸癌および肺癌（例えば、非小細胞肺癌）が挙げられる。さらに、本明細書に記載の組合せ療法を使用して不応性または再発性悪性腫瘍を治療することができる。
【０２０９】
治療することができる他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部の癌、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、腎臓癌、肛門癌、胃食道、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰の癌腫、メルケル細胞癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、慢性または急性白血病、例として、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、幼児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、腎臓または尿管の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘導癌、例として、石綿により誘導されるもの（例えば、中皮腫）、および前記癌の組合せが挙げられる。
【０２１０】
具体的な実施形態において、癌は、黒色腫、腎臓癌、結腸癌、または前立腺癌である。別の実施形態において、癌は、転移性である。
【０２１１】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、１つ以上の他の治療薬、例えば、抗癌剤、サイトカインまたは抗ホルモン剤と一緒に投与して癌を治療および／または管理することができる。抗癌剤の非限定的な例は、以下に記載される。
【０２１２】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、例えば、ｘ線、ガンマ線およびの他の放射線源の使用を含む放射線療法と一緒に投与して癌細胞を破壊することもできる。具体的な実施形態において、放射線治療は、外部ビーム放射または遠隔療法（放射線が離隔源から指向される）として施与される。他の実施形態において、放射線治療は、内科療法または近接照射療法として施与され、放射能線源は、癌細胞または腫瘍塊に近い身体の内側に配置される。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子は、化学療法との組合せで投与することもできる。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載の方法により放射線療法または化学療法の前、その間またはその後に投与することができる。一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、手術の前、その間またはその後に投与することができる。
【０２１３】
一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、癌を罹患し、または癌と診断された対象に投与される。他の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、癌を発症しやすく、または発症すると疑われる対象に投与される。
【０２１４】
ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、０〜６カ月齢、６〜１２カ月齢、１〜５歳、５〜１０歳、１０〜１５歳、１５〜２０歳、２０〜２５歳、２５〜３０歳、３０〜３５歳、３５〜４０歳、４０〜４５歳、４５〜５０歳、５０〜５５歳、５５〜６０歳、６０〜６５歳、６５〜７０歳、７０〜７５歳、７５〜８０歳、８０〜８５歳、８５〜９０歳、９０〜９５歳または９５〜１００歳の対象に投与される。他の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、ヒト成人に投与される。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、手術、化学療法および／または放射線療法を受けている、受ける予定である、または受けた対象に投与される。一部の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、不応性患者に投与される。ある実施形態において、不応性患者は、標準的な抗癌療法に不応性の患者である。ある実施形態において、癌が有意に根絶されず、および／または症状が有意に緩和されなかった場合、癌を有する患者は治療法に不応性である。患者が不応性か否かの決定は、そのような背景において当該技術分野において認められている意味の「不応性」を使用して、治療の有効性をアッセイするための当該技術分野において公知の任意の方法によりインビボまたはインビトロのいずれかで行うことができる。種々の実施形態において、癌性腫瘍が減少せず、または増加した場合、癌を有する患者は不応性である。
【０２１５】
感染性疾患
本発明の他の方法を使用して特定の毒素または病原体に曝露された患者を治療する。したがって、本発明の別の態様は、対象における感染性疾患を治療する方法であって、本明細書に開示される組合せ、例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子を含む組合せを対象に投与し、その結果、対象を感染性疾患について治療することを含む方法を提供する。
【０２１６】
感染（例えば、急性および／または慢性）の治療において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せの投与は、感染に対する自然宿主免疫防御の刺激に加え、またはその代わりに慣用の治療と組み合わせることができる。感染に対する自然宿主免疫防御としては、限定されるものではないが、炎症、発熱、抗体媒介宿主防御、Ｔリンパ球媒介宿主防御、例として、リンホカイン分泌および細胞傷害性Ｔ細胞（特にウイルス感染の間）、補体媒介溶解およびオプソニン化（食作用の容易化）、ならびに食作用が挙げられる。機能不全Ｔ細胞を再活性化させる抗ＰＤ−１抗体分子の能力は、慢性感染、特に、細胞媒介免疫が完全回復に重要であるものを治療するために有用である。
【０２１７】
抗体媒介ＰＤ−１遮断は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体投与に対するアジュバントとして、またはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および／もしくはワクチンとの組合せで作用して病原体、毒素および自己抗原に対する免疫応答を刺激することができる。この治療アプローチが特に有用であり得る病原体の例としては、有効なワクチンが現存しない病原体、または慣用のワクチンが完全に有効ではない病原体が挙げられる。これらとしては、限定されるものではないが、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ、およびＣ）、インフルエンザ属（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、ヘルペス属（Ｈｅｒｐｅｓ）、ジアルジア属（Ｇｉａｒｄｉａ）、マラリア属（Ｍａｌａｒｉａ）、リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）が挙げられる。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体およびＰＤ−１遮断による免疫系刺激は、感染の過程にわたり変更した抗原を提示する作用物質、例えば、ＨＩＶによる確立した感染に対して特に有用である。これらの新規エピトープは治療時点において外来物質として認識され、したがって、例えば、ＰＤ−１を介する負のシグナルにより減衰されない強力なＴ細胞応答を誘発する。
【０２１８】
付加／組合せ療法
疾患、例えば、癌、感染性疾患、リンパ球減少、免疫不全および創傷の予防、治療および／または管理のためにＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子との組合せで使用することができる他の治療法としては、限定されるものではないが、小分子、合成薬物、ペプチド（環状ペプチドを含める）、ポリペプチド、タンパク質、核酸（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡヌクレオチド、例として、限定されるものではないが、アンチセンスヌクレオチド配列、３重らせん、ＲＮＡｉ、および生物学的に活性なタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドをコードするヌクレオチド配列）、抗体、合成または天然の無機分子、模倣薬剤、ならびに合成または天然の有機分子が挙げられる。このような治療法の具体例としては、限定されるものではないが、免疫調節剤（例えば、インターフェロン）、抗炎症剤（例えば、アドレノコルチコイド、コルチコステロイド（例えば、ベクロメタゾン、ブデソニド、フルニソリド、フルチカゾン、トリアムシノロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ヒドロコルチゾン、糖質コルチコイド、ステロイド、および非ステロイド性抗炎症性薬（例えば、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、およびＣＯＸ−２阻害剤）、鎮痛薬、ロイコトリエンアンタゴニスト（例えば、モンテルカスト、メチルキサンチン、ザフィルルカスト、およびザイリュートン）、ベータ２−アゴニスト（例えば、アルブテロール、ビテロール（ｂｉｔｅｒｏｌ）、フェノテロール、イソエタリエ（ｉｓｏｅｔｈａｒｉｅ）、メタプロテレノール、ピルブテロール、サルブタモール、テルブタリンホルモテロール、サルメテロール、およびサルブタモールテルブタリン）、抗コリン作動剤（例えば、臭化イプラトロピウムおよび臭化オキシトロピウム）、スルファサラジン、ペニシラミン、ダプソン、抗ヒスタミン薬、抗マラリア剤（例えば、ヒドロキシクロロキン）、抗ウイルス剤（例えば、ヌクレオシド類似体（例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガンシクロビル、ビダラビン、イドクスウリジン、トリフルリジン、およびリバビリン）、フォスカーネット、アマンタジン、リマンタジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、およびＡＺＴ）ならびに抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧名アクチノマイシン）、ブレオマイシン、エリスロマイシン、ペニシリン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））が挙げられる。
【０２１９】
ＩＬ−１５機能／シグナリングおよび／または／免疫チェックポイントモジュレーションにより影響を受ける疾患の予防、管理、および／または治療に有用であることが公知の、またはそれに使用された、もしくは現在使用されている任意の治療法を、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せ療法との組合せで使用することができる。疾患または障害、例えば、癌、感染性疾患、リンパ球減少、免疫不全および創傷の予防、治療および／または管理に使用された、または現在使用されている治療法（例えば、予防または治療剤）に関する情報については、例えば、Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｅｒｋｏｗ，Ｍ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ  ＆  Ｄｏｈｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ，  １９９９；Ｃｅｃｉｌ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０ｔｈ  Ｅｄ．，Ｂｅｎｎｅｔｔ  ａｎｄ  Ｐｌｕｍ（ｅｄｓ．），Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６，ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（６６ｔｈ  ｅｄ．２０１２）参照。
【０２２０】
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せ療法に加えて使用することができる１つ以上の他の治療法の非限定的な例としては、免疫調節剤、例えば、限定されるものではないが、化学療法剤および非化学療法免疫調節剤が挙げられる。化学療法剤の非限定的な例としては、メトトレキサート、シクロスポリンＡ、レフルノミド、シスプラチン、イホスファミド、タキサン、例えば、タキソールおよびパクリタキソール、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、ＣＰＴ１１、トポテカン、９ＡＣ、およびＧＧ２１１）、ゲムシタビン、ビノレルビン、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ビノレルビン、テモダール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンホモログ、ならびにシトキサンが挙げられる。
【０２２１】
生物学的活性
一態様において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および／または抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、抗体応答（体液性応答）または細胞性免疫応答、例えば、サイトカイン分泌（例えば、インターフェロンガンマ）、ヘルパー活性または細胞性細胞毒性であり得る免疫応答を増加させる。一実施形態において、免疫応答の増加は、サイトカイン分泌、抗体産生、エフェクター機能、Ｔ細胞増殖、および／またはＮＫ細胞増殖の増加である。このような活性を計測するための種々のアッセイは当該技術分野において周知であり、それとしては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ；例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９７のセクション２．１参照）、抗原特異的Ｔ細胞を同定するための「四量体染色」アッセイ（Ａｌｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４−９６参照）、混合リンパ球標的培養アッセイ（例えば、Ｐａｌｌａｄｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７），Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：５０７４−５０７９参照）およびインビトロでサイトカイン放出を計測するために使用することができるＥＬＩＳＰＯＴアッセイ（例えば、Ｓｃｈｅｉｂｅｎｂｏｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７１：９３２−９３６参照）が挙げられる。
【０２２２】
一部の態様において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せにより誘導または向上される免疫応答は、当該技術分野において公知の任意の方法によりアッセイして陰性対照により、または単一薬剤として投与されるＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体もしくは抗ＰＤ−１抗体分子により誘発される免疫応答に対して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、または１２倍向上され、または増加する。ある実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せに誘導される免疫応答は、当該技術分野において公知の任意の方法によりアッセイして陰性対照により誘導される免疫応答に対して少なくとも０．５〜２倍、少なくとも２〜５倍、少なくとも５〜１０倍、少なくとも１０〜５０倍、少なくとも５０〜１００倍、少なくとも１００〜２００倍、少なくとも２００〜３００倍、少なくとも３００〜４００倍または少なくとも４００〜５００倍だけ向上される。具体的な実施形態において、免疫応答を評価するために使用されるアッセイは、抗体産生、サイトカイン産生、または細胞性細胞毒性のレベルを計測し、そのようなアッセイは当該技術分野において周知である。一部の実施形態において、免疫応答を計測するために使用されるアッセイは、抗体またはサイトカインレベルを決定する酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、サイトカイン放出を決定するＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、または細胞性細胞毒性を決定する［５１Ｃｒ］放出アッセイである。
【０２２３】
具体的な実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せは、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）により活性化される全血上のＩＬ−２の発現を増加させる。例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体、抗ＰＤ−１抗体分子またはアイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）が単独使用される場合のＩＬ−２の発現と比較してＩＬ−２の発現を少なくとも約２、３、４、または５倍だけ増加させる。このような効果は実施例１において実証され、図１〜４に示される。相加または相乗的効果は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を抗ＰＤ−１抗体分子と同日に投与した場合が、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体を抗ＰＤ−１抗体分子の投与の７２時間後に投与した場合よりも明白であった。
【０２２４】
一実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せと接触させた癌細胞の増殖または生存度は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＣＳＦＥ、ＢｒｄＵ、および放射性チミジン取り込みを使用する細胞増殖アッセイを使用して計測して、陰性対照または単一薬剤としてのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体または抗ＰＤ−１抗体分子と接触させた場合の癌細胞の増殖に対して少なくとも２倍、好ましくは少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、または少なくとも１０倍だけ阻害され、または減少する。あるいは、細胞生存度は、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、細胞溶解時に放出される安定的細胞質酵素を計測するアッセイにより、または細胞溶解時の［５１Ｃｒ］の放出により計測することができる。別の実施形態において、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体および抗ＰＤ−１抗体分子の組合せと接触させた癌細胞の増殖は、当該技術分野において周知のアッセイ、例えば、ＣＳＦＥ、ＢｒｄＵ、および放射性チミジン取り込みを使用する細胞増殖アッセイを使用して計測して、陰性対照または単一薬剤としてのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体もしくは抗ＰＤ−１抗体分子と接触させた癌細胞に対して少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％だけ阻害され、または低減する。
【０２２５】
このようなアッセイを実施することができる癌細胞系は、当業者に周知である。壊死、アポトーシスおよび増殖アッセイを初代細胞、例えば、組織外植片に対して実施することもできる。
【０２２６】
一実施形態において、壊死細胞は、色素、例えば、ニュートラルレッド、トリパンブルー、またはＡＬＡＭＡＲ（商標）ブルー（Ｐａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３），Ｉｎｔｌ．Ｊ．ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３：４７３−４７６）を取り込む細胞の能力の有無により計測される。このようなアッセイにおいて、細胞を、色素含有培地中でインキュベートし、細胞を洗浄し、細胞の色素の取り込みを反映する残留色素を分光光度法により計測する。別の実施形態において、色素はスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）であり、タンパク質へのその結合を細胞毒性の尺度として使用することができる（Ｓｋｅｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０），Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８２：１１０７−１２）。さらに別の実施形態において、テトラゾリウム塩、例えば、ＭＴＴが、生存しており死滅していない細胞を検出することによる哺乳動物細胞の生存および増殖についての定量的比色アッセイに使用される（例えば、Ｍｏｓｍａｎｎ，（１９８３），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：５５−６３参照）。
【０２２７】
他の実施形態において、アポトーシス細胞が、培養物の付着および「浮遊」コンパートメントの両方で計測される。両方のコンパートメントは、上清を除去し、付着細胞をトリプシン処理し、遠心分離洗浄ステップ（１０分間、２０００ｒｐｍ）の後に両方の調製物を組み合わせることにより回収される。スリンダクおよび関連化合物により腫瘍細胞培養物を治療して有意な量のアポトーシスを得るためのプロトコルが文献に記載されている（例えば、Ｐｉａｚｚａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：３１１０−１６参照）。この方法の特徴は、浮遊および付着細胞の両方を回収し、アポトーシスの観察に最適な治療時間および用量範囲を同定し、最適な細胞培養条件を同定することを含む。別の実施形態において、アポトーシスは、ＤＮＡ断片化を計測することにより定量化される。ＤＮＡ断片化の定量的インビトロ決定のための市販の光度測定方法が、利用可能である。このようなアッセイの例、例として、ＴＵＮＥＬ（断片化ＤＮＡ中の標識ヌクレオチドの取り込みを検出する）およびＥＬＩＳＡベースアッセイは、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ，（１９９９），ｎｏ．２，ｐｐ．３４−３７（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）に記載されている。さらに別の実施形態において、アポトーシスを形態的に観察することができる。
【０２２８】
具体的な実施形態、引用および参照文献
本発明は、本明細書に記載の具体的な実施形態により範囲が限定されるべきでない。実際、本明細書に記載のものに加えて、本発明の種々の改変が、上記の詳細な説明および添付の図面から当業者に明らかとなる。このような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に収まるものとする。
【０２２９】
種々の参照文献、例として、特許出願、特許、および科学刊行物が本明細書において引用され；それぞれのそのような参照文献の開示は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０２３０】
【表１】
2020505350.tif 000010
【０２３１】
【表２】
2020505350.tif 000011
【０２３２】
【表３】
2020505350.tif 000012
【０２３３】
【表４】
2020505350.tif 000013
【０２３４】
【表５】
2020505350.tif 000014
【０２３５】
【表６】
2020505350.tif 000015
【０２３６】
【表７】
2020505350.tif 000016
【０２３７】
【表８】
2020505350.tif 000017
【０２３８】
【表９】
2020505350.tif 000018
【０２３９】
【表１０】
2020505350.tif 000019
【実施例】
【０２４０】
実施例１：ヒトＰＢＭＣを使用するＩＬ−１５／Ｉｌ−１５Ｒａ複合体およびおよび抗ＰＤ−１抗体分子の組合せの相加／相乗的効果の実証
本実施例は、タイトレート濃度の組換えヘテロ二量体ＩＬ−１５／可溶性ＩＬ−１５Ｒａ複合体（ｈｅｔＩＬ−１５）および固定濃度の抗ＰＤ−１抗体分子ＰＤＲ００１の存在下でエクスビボブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）アッセイを利用してＳＥＢにより活性化される全血上のＩＬ−２の産生の増加を決定する。６つのパラメータを試験した：
（ｉ）ｈｅｔＩＬ−１５単独
（ｉｉ）ｈｅｔＩＬ−１５＋ｈＩｇＧ４（アイソタイプ対照）０．５μｇ／ｍｌ
（ｉｉｉ）ｈｅｔＩＬ−１５＋ＰＤＲ００１  ０．５μｇ／ｍｌ
（ｉｖ）ＰＤＲ００１  ０．５μｇ／ｍｌ単独
（ｖ）ＳＥＢ  １ｎｇ／ｍｌ単独
（ｖｉ）ＳＥＢなし
【０２４１】
材料および方法
ＧｉｂｃｏからのＩＭＤＭ培地（１２４４０−０５３）をベースとして新鮮なＴ細胞培養培地を以下の追加のサプリメントを用いて調製した：１０％のウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号２６１４０−０７９）、１％のピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１３６０−０７０）、１％のＬ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号２５０３０−０８１）、１％のＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１５６３０−０８０）、１％のペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１５１４０−１２２）および１％のＭＥＭ  ＮＡＡ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１１４０−０５０）。
【０２４２】
アッセイのため、Ｌｅｕｃｏｃｅｐ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅ、カタログ番号２２７−２９０）を使用して４人のヒトドナー（Ｅ−０１２、Ｅ４２１、Ｅ４４４および１０１１）の全血からＰＢＭＣを単離した。最後の洗浄後、細胞を５ｍｌのＴ細胞培養培地中で再懸濁させた。細胞を株化することにより単一細胞懸濁液を生成し、１：２０の希釈物を１ｍｌのＴ細胞培養培地中で調製した。Ｖｉ−Ｃｅｌｌ  ＸＲ（Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｎａｌｙｚｅｒ）を使用して細胞計数を行った。細胞をＴ細胞培養培地中で４×１０６個の細胞／ｍｌに希釈し、５０μｌの細胞を９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３５９６）のそれぞれのウェルに添加した。
【０２４３】
４×１μｇ／ｍｌのｈｅｔＩＬ−１５（濃度：１．６２７ｍｇ／ｍｌ；臨床グレード）をＴ細胞培養培地中で調製し、プレート下方への６点用量応答により１：１０用量タイトレーションを実施した。５０μｌのタイトレートｈｅｔＩＬ−１５を適切なプレートウェルに添加した。４×０．５μｇ／ｍｌのＰＤＲ００１またはアイソタイプ対照ｈＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）をＴ細胞培地中で調製した。５０μｌの培地単独または２μｇ／ｍｌのＰＤＲ００１（濃度：１０ｍｇ／ｍｌ；臨床グレード）またはｈＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（濃度：３．６３ｍｇ／ｍｌ）調製原液を、適切な群／ウェルに添加した。プレートを組織培養インキュベーター中で１時間インキュベートした。「組合せ同時」群については、ｈｅｔＩＬ−１５をＰＤＲ００１と同日に添加した。「組合せ連続」については、ｈｅｔＩＬ−１５を新たに調製し、ＰＤＲ００１添加の７２時間後に培養物に添加した。
【０２４４】
新たなＴ細胞培養培地中で、最初に２．５ｍｇ／ｍｌのＳＥＢ原液を２５μｇ／ｍｌ（１：１００）に希釈することにより４×１ｎｇ／ｍｌのＳＥＢを調製し、次いでそれを使用して４ｎｇ／ｍｌの原液を調製した。プレートを１時間インキュベートした後に５０μｌの４×ＳＥＢを適切なウェルに１ｎｇ／ｍｌの最終濃度に添加した。
【０２４５】
ＳＥＢなし（２つのウェル）、培地単独とＳＥＢ（２つのウェル）および０．５μｇ／ｍｌにおけるＰＤＲ００１とＳＥＢ（２つのウェル）を含む対照群を調製した。試験群は、ｈｅｔＩＬ−１５単独、ｈｅｔＩＬ−１５＋ｈＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）およびｈｅｔＩＬ−１５＋ＰＤＲ００１を含む。試験群の全ての試料を３つ組でランした。
【０２４６】
プレートを３７℃において５％のＣＯ２中で４日間インキュベートした。４日目、プレートを２０００ｒｐｍにおいて２分間回転させた。およそ１２０μｌの細胞上清を９６ウェルポリプロピレンＶ字底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅ、カタログ番号６５１２６１、ロットＥ１５０９３５Ｐ）中に回収した。プレートを密封し、アッセイするまで−８０℃において冷凍した。
【０２４７】
Ｖ−ＰＬＥＸ（ＭＳＤ、カタログ番号Ｋ１５１ＱＱＤ−４）を製造業者のプロトコルに従って使用してＩＬ−２計測を実施した。試料をキットからの希釈剤２中で１：５に希釈し、４つ組でランした。ＭＳＤ分析ソフトウェアを使用してデータを分析した。
【０２４８】
結果
１μｇ／ｍｌの濃度において、ｈｅｔＩＬ−１５は、４人全員のドナーにおいてＳＥＢ誘導ＩＬ−２産生を増強することが観察された。しかしながら、この効果は、ＰＤＲ００１の存在により、特にその組合せを同時に投与した場合にさらに増強され、したがって、ｈｅｔＩＬ−１５およびＰＤＲ００１の組合せは、ｈｅｔＩＬ−１５単独について観察されたものよりもＳＥＢ誘導ＩＬ−２産生をさらに向上させた。したがって、これらの結果は、ドナーＰＢＭＣからのＩＬ−２産生に対するｈｅｔＩＬ−１５とＰＤＲ００１との組合せについての相加または相乗的効果を実証する。
【０２４９】
実施例２：転移性癌を有する成人における単独または抗ＰＤ−１抗体分子との組合せのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒａ複合体の１／１ｂ相試験
本実施例は、転移性癌を有するヒト患者に単独または抗ＰＤ−１抗体分子ＰＤＲ００１との組合せで投与される皮下（ＳＣ）組換えヘテロ二量体ＩＬ−１５／可溶性ＩＬ−１５Ｒａ複合体（ｈｅｔＩＬ−１５）の安全性、忍容性、用量制限毒性（ＤＬＴ）および最大忍容用量（ＭＴＤ）を決定するための試験を記載する。患者は、目下、転移性であり、標準的医学治療では難治性であり、またはそれが不適切である癌の確定診断を有する。本試験はまた、（ｉ）単独およびＰＤＲ００１との組合せのｈｅｔＩＬ−１５の予備抗腫瘍活性を評価し得；（ｉｉ）単独およびＰＤＲ００１との組合せのｈｅｔＩＬ−１５の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを特徴づけ得；（ｉｉｉ）単独およびＰＤＲ００１との組合せのｈｅｔＩＬ−１５の免疫原性を評価し得；（ｉｖ）単独およびＰＤＲ００１との組合せのｈｅｔＩＬ−１５の薬力学（ＰＤ）効果を評価し得る。
【０２５０】
試験における包含のために選択されるヒト患者は、以下の基準の全てを満たす：
ａ．年齢≧１８歳。
ｂ．患者は、転移性または切除不能であり、少なくとも１回の先行治療に関して進行しており、標準的な治癒もしくは緩和尺度が存在せず、または最小の患者生存利益（患者および／または試験医により定義）を伴う、組織学的に確定された固形悪性腫瘍を有する。安全に生検することができる腫瘍を有する患者の包含が奨励される。
さらに、試験における包含のために選択されるヒト患者はまた、以下の基準の１つ以上、または全てを満たす：
ｃ．患者は、生検に適した疾患の部位を有さなければならず、治療施設の指針に従う腫瘍生検についての候補でなければならない。患者は、ベースラインにおける新たな腫瘍生検を受け、本試験時の治療法の間に再度腫瘍生検を受ける意思を有さなければならない。
ｄ．患者は、慣用の技術を用いて≧２０ｍｍとして、または脊髄コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを用いて≧１０ｍｍとして少なくとも１つの寸法（非結節性病変については記録することができる最長直径および結節性病変については短軸）で正確に計測することができる少なくとも１つの病変として定義される評価可能または計測可能な疾患を有さなければならない。
ｅ．患者は、４週間よりも前に施与された先行の化学療法または生物療法の毒性から、ＮＣＩ有害事象共通用語基準（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）（ＣＴＣＡＥ）バージョン４．０．３の≦グレード１に回復していなければならない。
ｆ．任意の癌のためのビスホスホネートまたは前立腺癌のためのホルモン療法を受けている患者は、この治療法を継続し得る。しかしながら、前立腺癌を有する患者は、去勢レベルのテストステロンを産生するホルモン療法にかかわらず進行した確定された転移性疾患を有さなければならない。（去勢テストステロンレベルは、去勢の数時間以内、およびホルモン放出ホルモンアゴニストの黄体化の２〜３週間以内に生じる。）
ｇ．米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）性能状態≦１。
ｈ．患者は、以下に定義される正常臓器および骨髄機能を有さなければならない：
−  白血球≧３，０００／μＬ
−  好中球絶対数（ＡＮＣ）≧１，５００／μＬおよび血小板≧１００，０００／μＬ
−  ヘモグロビン＞８．０ｇ／ｄＬおよび施設の正常限界内の総ビリルビン
−  ＡＳＴ／ＡＬＴ≦２．５×施設の正常限界上限
−  クレアチニン＜１．５×施設の正常限界上限または施設正常値よりも１．５倍高い血清クレアチニンレベルを有する患者についてはクレアチニンクリアランス≧６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２。
ｉ．ＤＬＣＯ／ＶＡおよびＦＥＶ１≧肺機能試験時の予測値の５０％
ｊ．二次（転移性）ＣＮＳ腫瘍は、それらが試験エントリー前３０日間の期間にわたり臨床的に安定であり、ステロイドも抗痙攣療法も要求されない場合、許容される。
【０２５１】
以下の基準の１つ以上、または全てを満たす患者は、試験のための患者として選択することができない：
ａ．任意の先行ＩＬ−１５治療を受けた患者。登録前４週間以内に細胞毒性療法も、免疫療法も、放射線療法も、大手術も、抗腫瘍ワクチンもなし。しかしながら、患者は、第１サイクル１日目（Ｃ１Ｄ１）の６週間よりも前に先行する抗−ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１またはニトロソウレアまたはマイトマイシンＣを有したことを許容される。
ｂ．本試験において治療されるもの以外の悪性疾患を有する患者。この除外の例外としては、以下のものが挙げられる：治療により治癒され、試験治療前の２年以内に再発しなかった悪性腫瘍；完全に切除された基底細胞および扁平上皮皮膚癌；ならびに完全に切除された任意のタイプのインサイチュー癌腫。
ｃ．原発性脳腫瘍または活性ＣＮＳ転移を有する患者。
ｄ．ｈｅｔＩＬ−１５と類似の化学または生物組成の化合物に起因するアレルギー反応の既往歴を有する患者。
ｅ．無制御な介入疾病、例として、限定されるものではないが、進行中もしくは活性感染、認知機能障害、活性物質乱用、または試験医の観点から安全な治療もしくはインフォームドコンセントを与える能力を妨げ、試験要件の順守を制限する精神疾病／社会的状況を有する患者。
ｆ．心臓機能障害または臨床的に有意な心疾患、例として、以下のいずれかを有する患者：（ａ）臨床的に有意なおよび／または無制御な心疾患、例えば、治療を要求する鬱血性心不全（ＮＹＨＡグレード≧２）、無制御な高血圧または臨床的に有意な不整脈；（ｂ）スクリーニングＥＣＧ時のＱＴｃＦ＞４７０ｍｓｅｃまたは先天性ＱＴ延長症候群；（ｃ）試験エントリー前の＜３ヵ月の急性心筋梗塞または不安定狭心症。
ｇ．治療法の間、患者の有効な避妊を実施する能力の不存在もしくは拒絶または妊娠もしくは活性授乳の存在。
ｈ．確認されたＨＩＶ感染もしくは血清学的陽性、活性細菌感染、活性または慢性Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎についての血清学的もしくはＰＣＲのエビデンスを有する患者。
ｉ．重度の喘息の既往歴または慢性吸入コルチコステロイド医薬についての絶対的要求を有する患者。
ｊ．自己免疫疾患の既往歴を有する患者
ｋ．副腎不全の状況における補充用量ステロイド以外の≧１０ｍｇ／日のプレドニゾンまたは類似薬の全身ステロイド療法による長期間治療を要求する患者。局所、吸入、鼻腔および眼内ステロイドは禁止されない。
ｌ．試験治療の開始の４週間以内の感染性疾患（例えば、インフルエンザ、水痘、肺炎球菌）に対する任意のワクチンの使用は許容されない。
ｍ．試験薬物の開始前の２週間の血液コロニー刺激成長因子（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ）の使用は許容されず；しかしながら、赤血球刺激剤は、それが試験治療の１回目の投与の少なくとも２週間前に開始され、安定用量において維持される限り許容される。
【０２５２】
単一薬剤ｈｅｔＩＬ−１５のＭＴＤおよび／または展開のための推奨用量（ＲＤＥ）は、このオープンラベル試験の第Ｉ相パートにおいて決定する。単一薬剤のＭＴＤおよび／またはＲＤＥの同定後、用量展開パートをオープンして単剤療法の安全性、ＰＫ、ＰＤ、および予備活性をさらに特徴づけすることができる。
【０２５３】
ｈｅｔＩＬ−１５とＰＤＲ００１との組合せのＭＴＤおよび／またはＲＤＥは、この試験の第Ｉｂ相パートにおいて決定する。ＭＴＤまたはＲＤＥの同定時、展開パートをオープンして組合せの安全性、ＰＫ、ＰＤ、および予備活性をさらに特徴づけすることができる。展開パートは２つの群からなり、抗ＰＤ−１療法に病歴的に耐性である癌を有する患者および抗ＰＤ−１療法に病歴的に感受性である癌を有する患者である（病歴的に感受性の癌としては、限定されるものではないが、ＮＳＣＬＣ、黒色腫、および膀胱が挙げられる）。
【０２５４】
患者は、疾患進行まで、または停止規則を満たすまで単一薬剤ｈｅｔＩＬ−１５またはそれとＰＤＲ００１との組合せを受け続ける。
【０２５５】
実施例３：第Ｉ相についての用量漸増指針
３．１  ｈｅｔＩＬ−１５投与
患者は、それぞれの治療サイクル（２８日間）の間、合計６回のｈｅｔＩＬ−１５のＳＣ注射（２週間にわたり週３回［ＭＷＦ］）とそれに続く２週間の中断を受ける。患者は、試験へのエントリーのそれらのオーダーに基づき連続的に用量レベルに割り当てる。表２は、評価される仮用量レベルを提供する。試験の過程の間、追加および／または間欠的用量レベルを添加することが可能である。さらに、ｈｅｔＩＬ−１５の代替投与スケジュール、例えば、サイクルの最初の２週間の間の週１または２回のｈｅｔＩＬ−１５の投与を評価することができる。コホートは、ＭＴＤ未満で任意の用量レベルにおいて追加して安全性、ＰＫ、および／またはＰＤをより良好に理解することができる。
【０２５６】
３．２  単一薬剤ｈｅｔＩＬ−１５についての合理的な開始用量
ｈｅｔＩＬ−１５の０．２５μｇ／ｋｇ／ＳＣ注射の開始用量を選択した。それというのも、それはマカクにおいて試験された最低用量（１．２７μｇ／ｋｇ）よりも５倍低く、ＮＯＡＥＬ用量（１２．６７μｇ／ｋｇ）よりも５０倍低いためである。この開始用量は、体表面積の差に基づく種間調整により少なくとも１０倍の安全マージンを提供する。
【０２５７】
【表１１】
2020505350.tif 000020
【０２５８】
３．３  第Ｉ相の単一薬剤用量漸増およびＭＴＤ／ＲＤＥの決定についての指針
本試験の第Ｉ相部分は、ＭＴＤおよび／またはＲＤＥを決定するための単一薬剤ｈｅｔＩＬ−１５の漸増用量からなる。ＭＴＤは、３または６人の≧２人の患者がＤＬＴを経験した用量未満の用量レベルと定義され、最初の治療サイクル（最初の２８日間）の間に生じる事象に限定される。患者は、最小の安全性評価および薬物曝露で少なくとも１つの治療サイクルを完了し、または用量漸増決定について評価可能であるとみなすことができる最初の治療サイクル内でＤＬＴを有さなければならない。患者がＤＬＴを経験せず、最小の曝露基準を満たなかった場合、その患者はＭＴＤの決定について評価可能でなく、交替させる。
【０２５９】
新たな患者は登録せず、前回の用量レベルにおいて治療された全ての患者が治療の２８日目の第１サイクルに達し、試験責任医師および試験依頼者間の同意がなされるまで次の用量コホートにおいて治療を開始する。
【０２６０】
試験は、単一患者投与コホートで開始し、最初のグレード２以上のＡＥが観察される場合に標準的３＋３設計に切り替える。３＋３アルゴリズムに基づく用量漸増スキームを図２に提示する。単一患者コホートは、０．２５μｇ／ｋｇ／注射における投与を開始し、いかなる有意な≧グレード２の臨床または実験室治療発生ＡＥまたはＤＬＴも不存在下で、用量漸増は、患者が、投与コホートの拡大を要求するＡＥを有さず、またはＤＬＴを有さない限り、表２に示される通り連続的に進行する。
【０２６１】
用量漸増の過程の間、３＋３またはＭＴＤにより決定される次の用量レベル未満の任意の計画または中間用量レベルにおいて最大６人の患者の追加のコホートを登録して安全性、ＰＫ、および／またはＰＤをより良好に理解することが可能である。これらの追加コホートにおいて観察されるＤＬＴデータは３＋３アルゴリズム（表３参照）において考慮することができないが、試験依頼者および試験責任医師は、これらのデータのレビュー後に、両者が３＋３アルゴリズムにより決定されたものよりも低い用量において次のコホートをオープンすることがより適切であることに同意する場合、３＋３アルゴリズムの却下を決定することができる。
【０２６２】
【表１２】
2020505350.tif 000021
【０２６３】
ＭＴＤ／ＲＤＥの同定後、展開パートをオープンして単剤療法の安全性をさらに特徴づけすることができる。９人の患者を安全展開に含め、その患者らをそれぞれの治療サイクル（２８日間）の間、同一スケジュール（２週間にわたり週３回［ＭＷＦ］）下でＭＴＤ／ＲＤＥにおいて治療し、次いで２週間中断する。毒性プロファイルに基づき、ｈｅｔＩＬ−１５の代替投与スケジュール、例えば、サイクルの最初の２週間の間の週１または２回のｈｅｔＩＬ−１５の投与を探索することができる。
【０２６４】
実施例４：第Ｉｂ相についての用量漸増指針
４．１  ＰＤＲ００１およびｈｅｔＩＬ−１５投与
本試験の第Ｉｂ相の用量漸増部分は、固定用量（４００ｍｇ、ＩＶ注入、Ｑ４Ｗ）のＰＤＲ００１ならびに展開コホートにおいて使用することができる組合せの安全性、忍容性を評価し、ＭＴＤおよび／またはＲＤＥを決定するための漸増用量のｈｅｔＩＬ−１５からなる。ＰＤＲ００１およびｈｅｔＩＬ−１５を同日に投与する日、ＰＤＲ００１を最初に投与し、ＰＤＲ００１注入を完了させた後にｈｅｔＩＬ−１５を投与する。
【０２６５】
４．２  ｈｅｔＩＬ−１５とＰＤＲ００１との組合せに合理的な開始用量
ＰＤＲ００１は、固定用量（４００ｍｇ  Ｑ４Ｗ  ＩＶ注入）において与える。組合せにおけるｈｅｔＩＬ−１５の開始用量は、１μｇ／ｋｇ／用量である。０．２５、０．５および１μｇ／ｋｇ／用量の用量は評価されており、ＤＬＴは同定されていない。２μｇ／ｋｇ／用量が現在調査されている。ｈｅｔＩＬ−１５の用量を漸増させて展開群において使用される組合せにおけるＭＴＤおよび／またはＲＤＥを決定する。ｈｅｔＩＬ−１５の用量レベルの漸増は表２に概略される通り進行し、１μｇ／ｋｇ／用量レベルから開始する。追加および／または中間用量レベルを試験の過程の間に添加することが可能である。さらに、ｈｅｔＩＬ−１５の代替投与スケジュール、例えば、サイクルの最初の２週間の間の週１または２回のｈｅｔＩＬ−１５の投与を評価することができる。ＭＴＤ未満の任意の用量レベルにおいてコホートを追加して安全性、ＰＫ、および／またはＰＤをより良好に理解することができる。ＰＤＲ００１との組合せで与える場合、ＭＴＤに対してｈｅｔＩＬ−１５の用量もその頻度も単一薬剤を超過する場合はない。
【０２６６】
ＰＤＲ００１は、進行中の多施設オープンラベル試験ＣＰＤＲ００１Ｘ２１０１において、第Ｉ相用量漸増パートとそれに続く第ＩＩ相パートで試験されている。用量漸増から得られる薬物動態データ、曝露データのモデリング、および安全性データは、均一またはｍｇ／ｋｇ投与のいずれかの使用を支持する。予測ＰＤＲ００１トラフ濃度は、いくつかの癌タイプにおける実質的効力が承認されているペムブロリズマブについての観察された定常状態平均トラフ濃度と一致する。ＰＤＲ００１の推奨される第２相の用量は、４００ｍｇ  Ｑ４Ｗと申告された。免疫関連毒性は用量関連であると考えられず、したがって、固定濃度の４００ｍｇ  Ｑ４ＷにおけるＰＤＲ００１と、１ｍｇ／ｋｇ用量（ＤＬＴを有さない安全用量であることが証明されている）の用量において開始する漸増用量のｈｅｔＩＬ−１５が開始用量である。
【０２６７】
４．３  第Ｉｂ相の用量漸増およびＭＴＤ／ＲＤＥの決定についての指針
上記のセクション３．３および表３に提示したものと同一の指針を二重組合せの漸増に使用し、但しＤＬＴ観察の期間を２サイクル（最初の５６日間）に拡大することを除く。したがって、ＭＴＤは、サイクル１または２（最初の５６日間）において６人のうち２人未満（＜３３％）の患者がＤＬＴを経験する最大用量レベルと定義される。用量レベルにおいて登録された第１の患者は、少なくとも２週間の治療を完了してからコホートにおける次の患者の登録を考慮する。得られるＭＴＤは、少なくとも６人の患者において実証されていなければならず、≦１人の患者が最初の投与の５６日以内にＤＬＴを経験している。
【０２６８】
実施例５：第Ｉｂ相についての用量展開指針
組合せについてのＲＤＥが第Ｉｂ相の用量漸増パートにおいて申告されると、患者を試験の用量展開パートにおいて登録し、組合せｈｅｔＩＬ−１５＋ＰＤＲ００１について同定されたＲＤＥを投与する。
【０２６９】
用量展開パートは、以下に列記される２つの異なる群からなる。群への登録は、患者がＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の治療未経験であるか前治療されているかに無関係である：
第１群：病歴的に抗ＰＤ−１耐性の癌を有する患者
第２群：病歴的に抗ＰＤ−１感受性の癌を有する患者
それぞれの群は２０人の患者を登録する。
【０２７０】
実施例６：用量制限毒性の定義
用量制限用量を表４に定義する。全ての毒性は、ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥバージョン４．０３に従って格付けする。用量制限毒性を、単剤療法ｈｅｔＩＬ−１５治療の開始からの第１サイクル（最初の２８日間）または組合せ治療の開始からの５６日間の間に生じるｈｅｔＩＬ−１５またはＰＤＲ００１またはその組合せに関して評価されるグレード３または４のＡＥと定義し、以下に例外を表４に概略する。さらに、表４は、ＤＬＴとみなされる一部のＧ２のＡＥも列記する：
【０２７１】
【表１３】
2020505350.tif 000022
【０２７２】
６．１  治療法の持続期間
ＤＬＴを経験せず、ｉｒＲＣによる疾患進行を示唆する臨床的悪化のエビデンスも有さない患者は、第２の治療サイクルに進行し、第３サイクル１日目（±３日間）の放射線学的疾患評価を受ける。
【０２７３】
免疫関連応答基準（ｉｒＲＣ）による疾患進行のエビデンスを有する患者は、プロトコル治療を中止する。安定的疾患（ＳＤ）を有し、または第２サイクル後応答評価における治療応答（マーカー病変の合計の＞１５％の減少および／または一部の非計測不可能な病変の改善もしくは消失および／または腫瘍マーカーの＞１０％の減少と定義）の一部のエビデンスを有する患者は、ｉｒＲＣによる疾患進行まで試験治療を継続し得る。
【０２７４】
６．２  フォローアップの持続期間
ｈｅｔＩＬ−１５のみを受容する患者は、試験医薬の最後の投与後３０日間追跡する。組合せを受容した患者は、ＰＤＲ００１の最後の投与後１５０日間追跡する。許容不可能なＡＥまたはＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα抗体の発生について試験から除外された患者は、ＡＥの消散または安定化まで追跡する。
【０２７５】
実施例７：ｈｅｔＩＬ−１５による臨床経験
２０１６年６月２３日現在、６人の患者がｈｅｔＩＬ−１５により本試験の単一薬剤用量漸増パートで治療されていた。患者は、０．２５μｇ／ｋｇ／用量（Ｎ＝１）、０．５μｇ／ｋｇ／用量（Ｎ＝２）、または１．０μｇ／ｋｇ／用量（Ｎ＝３）を、それぞれの２８日間サイクルの最初の２週間の間、週３回受容した。ＤＬＴはこれまで同定されなかった。登録は、１．０μｇ／ｋｇ／用量漸増コホートまで継続している。
【図１−１】
2020505350.tif 000023
【図１−２】
2020505350.tif 000024
【図１−３】
2020505350.tif 000025
【図１−４】
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【図１−５】
2020505350.tif 000027
【図１−６】
2020505350.tif 000028
【図１−７】
2020505350.tif 000029
【図１−８】
2020505350.tif 000030
【配列表】
2020505350000001.app
【国際調査報告】
2020505350.tif 000031
2020505350.tif 000032
2020505350.tif 000033
2020505350.tif 000034
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