(57)【要約】  本発明は、アプタマーでコーティングされたマイクロニードルベースの診断用皮膚パッチの製造方法及びその方法によって製造されたパッチに関する。本発明のパッチは、抗体物質に比べて物質のサイズが遥かに小さく、相対的に多数のマイクロニードルチップの表面に多数のアプタマーを結合できるという長所を有する。また、多くの種類のバイオマーカーに対するアプタマーを一度に付与することができるので、同時に多くの種類の物質を検出することができ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｉｎｇ）、マイクロニードルチップベースのスキンパッチもアプタマーを用いたタンパク質チップとして使用することができる。
2020504749.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリカーボネートマイクロニードルをチタンと金で順次コーティングし、コーティングされたポリカーボネートマイクロニードルを製造し、チオール基を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合したアプタマーを製造し、前記チタンと金がコーティングされたポリカーボネートマイクロニードルと、前記チオール基を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合したアプタマーとを結合させるステップを含む、アプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法。
【請求項２】
前記コーティングされた金の厚さは１０ｎｍ〜４０ｎｍであることを特徴とする、請求項１に記載のアプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法。
【請求項３】
ポリカーボネートマイクロニードルの表面をＨＮＯ３で処理した後、ＮａＢＨ４で還元し、最終的にアミノ基を結合させた後、一端にはカルボキシ基を、他端にはアプタマーと結合しているポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を、ＮＨＳ（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）、及びＥＤＣ（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３’−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）を触媒として用いて結合させるステップを含む、アプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか１項の方法によって製造されたアプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチ。
【請求項５】
前記皮膚診断パッチは、マイクロニードルチップの表面にアプタマーが付着し、前記アプタマーの末端には診断可能な成分が付着し得ることを特徴とする、請求項４に記載のマイクロニードルベースの皮膚診断パッチ。
【請求項６】
前記診断可能な成分は、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ又はＲＮＡであることを特徴とする、請求項４に記載のマイクロニードルベースの皮膚診断パッチ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アプタマーでコーティングされたマイクロニードルベースの診断用皮膚パッチの製造方法、及びその方法によって製造されたパッチに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、皮膚疾患は、世界において主要な健康管理への挑戦を代表する。米国（国立がん研究所、ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ）で毎年新たに百万件以上の皮膚がんが診断されており、皮膚疾患の予測及び診断はその管理面で重要である。現在の診断方法は、主に視覚的な観察及び生検に依存している。しかし、視覚的な観察に依存する検出方法は、皮膚状態又は疾患を診断するのに必ずしも効果的ではなく、臨床的な兆候が現れるまでは、危険（ｒｉｓｋ）又は疾患を検出することができない。さらに、生検などの侵襲性方法は、試験対象に対する外傷のみならず、感染の可能性も増加させる。また、前記方法は、安全に実施するために医者によって行われなければならなく、通常、一般的に反応に関与する細胞である皮膚の表面にある豊富な細胞サンプルを提供しない。
【０００３】
したがって、皮膚の状態及び疾患を診断及びモニタリングする非侵襲性方法は、患者の管理のための、そして、既存及び新しい治療剤、皮膚管理製品及び皮膚管理・摂生の効能を評価するための重要な手段を示す。また、前記方法は、皮膚疾患の発生に対する試験対象の遺伝的素因のみならず、試験対象の皮膚状態に基づく特異的な遺伝的変化に関して重要な情報を提供することができる。前記遺伝的変化の同定は、潜在的な薬物ターゲット及び予防的措置を同定し、特定治療剤、皮膚管理製品又は摂生に対して人が実際に反応するか否かを決定するのに重要であり得る。さらに、検出及び診断方法は、そのような治療、製品及び措置の安全性を評価するのに重要である。
【０００４】
また、局所的な皮膚疾患はもちろん、多様な疾病状態で皮膚の物質の組成が変わることが報告されている。脂質、構造タンパク質、炎症性物質、核酸、代謝産物などの様々な物質が疾病の状態に応じて皮膚から多様に検出されることが知られている。現在は、アトピー性皮膚炎、黒色腫、皮膚の細菌性炎症の他にも、アルツハイマー病、パーキンソン病、乳がん、心血管疾患、糖尿病、薬物中毒などの多様な疾患において皮膚のバイオマーカー分析が行われている。しかし、ほとんどの場合、非常に侵襲的な皮膚生検（Ｓｋｉｎ  Ｂｉｏｐｓｙ）が使用されている。非侵襲的方法としては、イオン導入（Ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、微小透析（Ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ）、テープストリッピング（Ｔａｐｅ  ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ）、超音波（Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ）、マイクロニードル（Ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ）などが使用されているが、その効率は非常に低い（Ｐａｌｉｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｓｋｉｎ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５０：５４６−５５６）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】大韓民国特許公開番号第１０２０１２０００６９４５号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記問題を解決するためになされたものであって、その目的は、多様な疾患の診断に用いるためのパッチの製造方法を提供することにある。
【０００７】
本発明の他の目的は、多様な疾患の診断に用いるためのパッチを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記目的を達成するために、本発明は、ポリカーボネートマイクロニードルをチタンと金で順次コーティングし、コーティングされたポリカーボネートマイクロニードルを製造し、チオール基を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合したアプタマーを製造し、前記チタンと金がコーティングされたポリカーボネートマイクロニードルと、前記チオール基を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合したアプタマーとを結合させるステップを含む、アプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法を提供する。
【０００９】
本発明の一実施例において、前記コーティングされた金の厚さは１０ｎｍ〜４０ｎｍであることが好ましいが、これに限定されない。
【００１０】
また、本発明は、ａ）アプタマーにアミノ基を結合させるステップ；ｂ）マイクロニードルチップの表面にプラズマ酸化でシラノールを付与した後、ヒドロキシ基に対して３−ＧＰＴＭＳ（３−ｇｌｙｃｉｄｏｘｙｐｒｏｐｙｌｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ）でシラン処理を行った後、前記３−ＧＰＴＭＳに含まれるエポキシ基と、前記アプタマーに結合したアミノ基とを結合させるステップを含む、」アプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法を提供する。
【００１１】
また、本発明は、ポリカーボネートマイクロニードルの表面をＨＮＯ３で処理した後、ＮａＢＨ４で還元し、最終的にアミノ基を結合させた後、一端にはカルボキシ基を、他端にはアプタマーと結合しているポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を、ＮＨＳ（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）、及びＥＤＣ（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３’−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）を触媒として用いて結合させるステップを含む、アプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法を提供する。
【００１２】
また、本発明は、前記方法によって製造されたアプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチを提供する。
【００１３】
本発明の一実施例において、前記皮膚診断パッチは、マイクロニードルチップの表面にアプタマーが付着し、前記アプタマーの末端には診断可能な成分が付着し得ることを特徴とするが、これに限定されない。前記診断可能な成分は、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ又はＲＮＡであることが好ましいが、これに限定されない。
【００１４】
以下、本発明を説明する。
【００１５】
本発明は、皮膚の角質層（ｓｔｒａｔｕｍ  ｃｏｒｎｅｕｍ）を浸透して表皮層に至ることができる長さ約２００μｍのマイクロニードルの表面をアプタマーでコーティングし、皮膚内の細胞間質に存在する多様なバイオマーカーを効果的に検出できるようにした診断用スキンパッチである。
【００１６】
皮膚内の細胞間質に含まれて捕集可能なバイオマーカーの種類は、各種感染性疾患で感染菌自体や感染菌が分泌する物質として、例えば、マラリアの場合、マラリア菌自体や菌が排出するタンパク質などで、代表的なタンパク質はＰｆＨＲＰ２であり、各種ウイルスの場合、そのウイルス自体を検出することができる。また、各種退行性脳疾患の場合、例えば、Ｔａｕタンパク質がパーキンソン病或いはアルツハイマー病で増加してマーカーとして使用可能である。さらに、α−シヌクレイン（Ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ）もパーキンソン病の重要な診断マーカーとして使用可能であり、アミロイドβ（Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ）もアルツハイマー病の診断マーカーとして使用可能である。また、各種腫瘍マーカーも、捕集可能なバイオマーカーとして使用可能である。
【００１７】
本発明のアプタマーがコーティングされたマイクロニードルの製作と関連して、ＢＭＩｓ（Ｂｒａｉｎ−ｍａｃｈｉｎｅ  ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ）や皮膚を介した効果的な薬物の伝達のためにこれまで多くの種類のマイクロニードルが開発されているが、これは、実際に頭皮を介した脳波の測定時などにテストされている。
【００１８】
一例として、２０１１年に発表された論文（Ａｍｉ，Ｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏ／Ｎａｎｏｌｉｔｈｏｇｒａｐｈｙ，ＭＥＭＳ，ａｎｄ  ＭＯＥＭＳ．１０（１），０１１５０３，Ｍａｒｃｈ  ２０１１）を参考にすると、ＰＤＭＳ（Ｐｏｌｙｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｘａｎｅ）を材料として用いて厚さ５０μｍ×長さ２００μｍの先が尖ったスキン浸透用マイクロニードルを成功裏に開発したことが分かる。（図１）
【００１９】
その他に、多様な素材及び長さのマイクロニードル（或いは小突起アレイ）が製作されている。マイクロニードルの素材として使用される化学物質の種類としては、ＰＵ（Ｐｏｌｙｕｒｅｔｈａｎｅ）、ＰＰ（Ｐｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）、ＰＥ（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ）、ＰＳ（Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ）、ＰＭＭＡ（Ｐｏｌｙ（ｍｅｔｈｙｌ  ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ）、ＰＤＭＳ（Ｐｏｌｙｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｘａｎｅ）、ＰＳ（Ｐｏｌｙｃａｒｂｏｎａｔｅ）、ＬＣＰ（Ｌｉｑｕｉｄ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｐｏｌｙｍｅｒ）を挙げることができる。
【００２０】
アプタマーという一本鎖ＤＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｔｒａｎｄ  ＤＮＡ）やＲＮＡの三次元構造を用いて特定物質を検出する方法によると、抗原−抗体反応と類似するが、物質のサイズが遥かに小さいので、マイクロニードルの端や内部のホールに多数のアプタマーを結合できるという長所がある。
【００２１】
また、多くの種類のバイオマーカーに対するアプタマーを一度に付与することができるので、（遺伝子チップと類似する概念）同時に多くの種類の物質を検出することができる（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｉｎｇ）。遺伝子チップの場合、手の爪サイズのチップ上に１０，０００種類以上のＤＮＡやＲＮＡを検出可能な遺伝体を結合できるので、理論的には、スキンパッチも、多様な物質に対するアプタマーでマイクロニードルを活性化し、バイオマーカーチップとして使用可能である。
【００２２】
アプタマーを用いた皮膚診断パッチの開発の場合、表皮層の細胞間質に存在するバイオマーカーを検出しなければならないので、約２０μｍの角質層を通過しなければならないという問題がある。この問題をマイクロニードルによって解決する診断用スキンパッチを製作するために、次のようにアプタマーをマイクロニードルに付与することができる。
【発明の効果】
【００２３】
本発明により分かるように、本発明において、アプタマーという一本鎖ＤＮＡやＲＮＡの三次元構造を用いて特定物質を検出する方法によると、抗原−抗体反応と類似するが、物質のサイズが遥かに小さく、相対的に多数のマイクロニードルチップの表面に多数のアプタマーを結合できるという長所がある。
【００２４】
また、多くの種類のバイオマーカーに対するアプタマーを一度に付与することができるので、同時に多くの種類の物質を検出することができ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｉｎｇ）、マイクロニードルチップベースのスキンパッチもアプタマーを用いたタンパク質チップとして使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ＰＤＭＳを用いたマイクロニードルの製作と皮膚の層に合わせた構造を示す図である。
【００２６】
【図２】マイクロニードルとこれを用いたパッチの例を示す図である。
【００２７】
【図３】マイクロニードルチップの表面にプラズマ酸化でシラノールを付与した後、ヒドロキシ基に対して３−ＧＰＴＭＳでシラン処理を行った後、３−ＧＰＴＭＳに含まれるエポキシ基と、アプタマーと結合したＰＥＧのアミノ基とを結合させる方法を示す図である。
【００２８】
【図４】アミノ（ＮＨ２−）基が結合したＰＥＧに連結したアプタマーを示す図である。
【００２９】
【図５】ポリカーボネートマイクロニードルの表面をＰＥＧの一端に結合したアプタマーでコーティングする方法を示す図であって、（Ａ）ＰＣマイクロニードルの表面をＨＮＯ３で処理した後、ＮａＢＨ４で還元し、最終的にアミノ基を結合させる。その後、一端にはカルボキシ基を、他端にはアプタマーと結合しているＰＥＧをＥＤＣ／ＮＨＳと共にＰＣ−ＮＨ２で処理し、ＰＥＧ−アプタマー機能化された（ａｐｔａｍｅｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ）ＰＣマイクロニードルを完成させる。（Ｂ）ＡＴＲ−ＦＴＩＲを通じてＮＨ２−が結合したＰＣを確認する。（Ｃ）蛍光タグ付きのアンチセンスオリゴヌクレオチド（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｔａｇｇｅｄ  ａｎｔｉ−ｓｅｎｓｅ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）を用いてＰＣ表面に付着したアプタマーの量を分析する。
【００３０】
【図６】ＰＥＧ−アプタマーで表面がコーティングされたＰＣマイクロニードルを示す図である。
【００３１】
【図７】金がコーティングされたポリカーボネートマイクロニードルを使用した例を示す図であって、ＰＣマイクロニードルをスパッタリングによって厚さ１０ｎｍのチタンと厚さ４０ｎｍの金で順次コーティングした後、チオール−金反応によってＰＥＧ−アプタマーをマイクロニードルの表面に結合させる。
【００３２】
【図８】ＰＣマイクロニードルにチオール−金結合によってコーティングされたＰＥＧ−アプタマーの分子数と常温安定性を約４０日間テストした結果を示した図であって、金コーティングの厚さに比例してＰＥＧ−アプタマー結合分子数が増加することが確認され、常温で安定的に長期間にわたって結合を維持することが確認された。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下、非限定的な実施例を通じて本発明をより詳細に説明する。但し、下記の実施例は、本発明を例示するために記載したものであって、本発明の範囲が下記の実施例によって制限されると解釈してはならない。
【００３４】
実施例１：マイクロニードルチップの表面にアプタマーを付着させる反応例
【００３５】
マイクロニードルに非特異的に結合するタンパク質による診断の不正確性を回避するために、マイクロニードルの表面をＰＥＧ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）で処理した後、アプタマーをＰＥＧの端に付着させることによって機器を構成する。
【００３６】
Ａ．ＰＤＭＳマイクロニードルの例：
【００３７】
マイクロニードルを構成するＰＤＭＳの表面にプラズマ酸化によってシラノール（ＳｉＯＨ）を形成する。ヒドロキシ基を、エポキシ基を有している３−ＧＰＴＭＳ（３−ｇｌｙｃｉｄｏｘｙｐｒｏｐｙｌｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ）でシラン処理した後、このエポキシ基と、アプタマーと結合したＰＥＧのアミノ基（図４）とを結合させることによってマイクロニードルの表面にアプタマー−ＰＥＧを構成することができる（図３）。
【００３８】
Ｂ．ポリカーボネートマイクロニードルの表面をＰＥＧの一端に結合したアプタマーでコーティングする方法：
【００３９】
ＰＣマイクロニードルの表面に対して硝酸（ｎｉｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）処理で求電子置換（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）を行った後、ニトロ基を還元し、第一級アミノ基を付加することによってＰＣ−ＮＨ２を準備する。これに、カルボキシ基を有するＰＥＧに結合したアプタマーをＮＨＳ（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）、ＥＤＣ（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３’−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）を触媒として用いて結合させる（図５Ａ）。すなわち、ＰＣマイクロニードルの表面をＨＮＯ３で処理した後、ＮａＢＨ４で還元し、最終的にアミノ基を結合させる。その後、一端にはカルボキシ基を、他端にはアプタマーと結合しているＰＥＧをＥＤＣ／ＮＨＳと共にＰＣ−ＮＨ２で処理し、完成したＰＥＧ−アプタマー機能化されたＰＣマイクロニードルを完成させる。
【００４０】
ポリカーボネートへのアミノ基の結合はＡＴＲ−ＦＴＩＲ方法によって確認し（図５Ｂ）、二番目の反応によるＰＥＧに結合したアプタマーの結合は蛍光タグ付きのオリゴヌクレオチド（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｔａｇｇｅｄ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）を用いた方法によって証明した（図５Ｃ）。
【００４１】
前記二つのステップの反応により、図６に示したポリカーボネートマイクロニードルの表面を、ＰＥＧに付着したアプタマーでコーティングした皮膚のバイオマーカー診断用スキンパッチを構築した。
【００４２】
Ｃ．金がコーティングされたポリカーボネートマイクロニードルを使用した例：
【００４３】
ＰＣマイクロニードルの表面をスパッタリングによってチタンと金で順次コーティングした後、チオール基を有するＰＥＧに結合したアプタマーをＴＣＥＰ（Ｔｒｉｓ（２−ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ）ｐｈｏｓｐｈｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）と１時間常温で反応させた後、アプタマー−ＰＥＧ−ＴＣＥＰを前記準備した金でコーティングされたＰＣマイクロニードルと２４時間常温で結合させる方法によってＤＮＡアプタマーで表面が機能化された診断用マイクロニードルを具現することができる（図７）。表面のコーティング状態はＳＥＭ（ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）によって確認した。
【００４４】
ＰＣマイクロニードルの表面に結合したＰＥＧ−アプタマーの数と常温での結合安定性をテストした結果、約２×１０１０個のアプタマーが４０日以上安定的にマイクロニードルの表面に結合されていることが確認された（図８）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年6月26日(2019.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリカーボネートマイクロニードルをチタンと金で順次コーティングし、コーティングされたポリカーボネートマイクロニードルを製造し、チオール基を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合したアプタマーを製造し、前記チタンと金がコーティングされたポリカーボネートマイクロニードルと、前記チオール基を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合したアプタマーとを結合させるステップを含む、アプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法。
【請求項２】
前記コーティングされた金の厚さは１０ｎｍ〜４０ｎｍであることを特徴とする、請求項１に記載のアプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法。
【請求項３】
ポリカーボネートマイクロニードルの表面をＨＮＯ３で処理した後、ＮａＢＨ４で還元し、最終的にアミノ基を結合させた後、一端にはカルボキシ基を、他端にはアプタマーと結合しているポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を、ＮＨＳ（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）、及びＥＤＣ（１−ｅｔｈｙｌ−３−（３’−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）を触媒として用いて結合させるステップを含む、アプタマーがコーティングされた請求項１に記載のマイクロニードルベースの皮膚診断パッチの製造方法。
【請求項４】
前記方法は、a）アプタマーにアミン基を結合させるステップと、b）マイクロニードルチップの表面をプラズマ酸化によりシラノールを形成させた後、そのヒドロキシル基を３−ＧＰＴＭＳ（３−ｇｌｙｃｉｄｏｘｙｐｒｏｐｙｌｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｓｉｌａｎｅ）でシラン処理した後、前記3-GPTMSに含まれるエポキシ基に、前記アプタマーに結合されたアミン基を結合させるステップを含む請求項１に記載のアプタマーコーティングされたマイクロニードルベース肌診断パッチの製造方法。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか１項の方法によって製造されたアプタマーがコーティングされたマイクロニードルベースの皮膚診断パッチ。
【請求項６】
前記皮膚診断パッチは、マイクロニードルチップの表面にアプタマーが付着し、前記アプタマーの末端には診断可能な成分が付着し得ることを特徴とする、請求項５に記載のマイクロニードルベースの皮膚診断パッチ。
【請求項７】
前記診断可能な成分は、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ又はＲＮＡであることを特徴とする、請求項６に記載のマイクロニードルベースの皮膚診断パッチ。
【国際調査報告】
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2020504749.tif 000017
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