(57)【要約】  フタラジノン系化合物、その製造方法、医薬組成物及び使用であって、前記フタラジノン系化合物の構造は、式Ｉで示され、前記式Ｉの化合物が、ウイルスキャプシドを阻害することによりウイルスの複製を阻害し、ＨＢＶ  ＤＮＡ複製に対する高い阻害活性を有し、より良好な肝臓指向性を持ち、安定的に肝臓に存在して濃縮することができ、有効な新型Ｂ型肝炎ウイルス阻害剤である。2020529458.tif 000113
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物、又は薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグであって、
【化１】
2020529458.tif 000085
そのうち、
Ｒが、ＣＮ又はＣｌであり、
Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈであり、
Ａが、ヘテロアリール基であり、
Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基がそれぞれが独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、アルキル基、ハロアルキル基、置換されてもよいシクロアルキル基、置換されてもよい複素環基、置換されてもよい複素鎖状炭化水素基、置換されていてもよいアルコキシ基、アルカノイルオキシ基、−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され、
Ｒ４が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基がそれぞれが独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、置換されてもよいアルキル基、置換されてもよいアルコキシ基、アルカノイルオキシ基からなる群より選択され、
Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、置換されてもよいアルキル基、置換されてもよいシクロアルキル基、置換されてもよいアルコキシ基、アルカノイルオキシ基、アルキルスルホニル基、アルカノイル基、アルコキシカルボニル基、置換されていてもよい複素環基、−Ｎ（Ｑ１）（Ｑ２）からなる群より選択され、
或いは、Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、置換されてもよいアルキル基、置換されてもよいシクロアルキル基、置換されてもよいアルコキシ、アルカノイルオキシ基、任意に置換された複素環基、−Ｎ（Ｑ１）（Ｑ２）からなる群より選択され、
前記「置換されていてもよい」基において、置換基が、ハロゲン、ヒドロキシル基、アルキル基、ヒドロキシアルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルカノイル基、アルコキシアルコキシ基、アルコキシカルボニル基、カルボキシル基、複素環基、−Ｎ（Ｑ１）（Ｑ２）からなる群より選択され、
或いは、「置換されていてもよい」基において、置換基が、ハロゲン、ヒドロキシル基、アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルカノイル基、複素環基、−Ｎ（Ｑ１）（Ｑ２）からなる群より選択され、
そのうち、
ｎが、０〜１０からなる群より選択される整数であり、
Ｑ１、Ｑ２が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル基又はアルコキシカルボニル基であり、
或いは、Ｑ１、Ｑ２が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル基であり、
好ましくは、
Ｒ３が、１、２又は３つの置換基を表し、
Ｒ４が、１又は２つの置換基を表し、
前記「ヘテロアリール基」が、Ｎ、Ｏ及びＳからなる群より選択される１〜３個のヘテロ原子を含む５〜１０員のヘテロアリール基であり、Ｎ、Ｏ及びＳからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を含む６〜１０員のヘテロアリール基であってもよく、前記ヘテロアリール基が、ピリジル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、フラニル基、インドリル基、アザインドリル基、ナフチジル基、又はキノリニル基を含んでもよく、
前記「ハロゲン」が、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含み、
前記「アルキル基」、「ハロアルキル基」、「アルキルスルホニル基」、「アルコキシカルボニル基」、「アルコキシアルコキシ基」に含まれるアルキル基が、Ｃ１〜Ｃ１８直鎖状又は分岐鎖状アルキル基であり、あるいはＣ１〜Ｃ７直鎖状又は分岐鎖状アルキル基であってもよく、あるいはＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基であってもよく、前記アルキル基が、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、イソペンチル基、１−エチルプロピル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、イソヘキシル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基、ｎ−ヘプチル基、２−メチルヘキシル基、３−メチルヘキシル基、２，２−ジメチルペンチル基、３，３−ジメチルペンチル基、２，３−ジメチルペンチル基、２，４−ジメチルペンチル基、３−エチルペンチル基、２，２，３−トリメチルブチルを含んでもよく、前記「ハロアルキル」が、トリフルオロメチル基を含んでもよく、
前記「アルコキシ基」が、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基であり、あるいは前記アルコキシ基が、Ｃ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基であってもよく、あるいは前記アルコキシ基が、Ｃ１〜Ｃ３直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基であってもよく、前記アルコキシ基が、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基を含んでもよく、
前記「アルカノイルオキシ基」が、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状アルカノイルオキシ基であり、アセトキシ基を含んでもよく、
前記「シクロアルキル基」が、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基であり、前記シクロアルキル基が、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基を含んでもよく、
前記「複素環基」における複素環構造が、環内にＮ、Ｏ、Ｓからなる群より選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む飽和若しくは不飽和の３〜１０員の単環式又は多環式の非芳香族環構造であり、前記複素環基が、環内にＮ原子を含む３〜６員飽和環であってもよく、前記複素環基が、環内にＮ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を含む４〜６員非芳香族環構造であってもよく、前記複素環基が、ピロリジン環、テトラヒドロチオフェン環、テトラヒドロフラン環を含んでもよく、
前記「複素鎖状炭化水素基」における複素鎖状炭化水素構造が、鎖内にＮ、Ｏからなる群より選択される１〜３個のヘテロ原子を含む飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ７直鎖状又は分岐鎖状の複素鎖状構造であり、前記複素鎖状炭化水素基が、鎖内にＮ、Ｏからなる群より選択される１〜３個のヘテロ原子を含む飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状の複素鎖状構造であってもよく、前記複素鎖状炭化水素基が、鎖内に１〜３個のＯを含む飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状の複素鎖状構造であってもよく、
前記「アルカノイル基」が、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状のアルカノイル基であり、前記アルカノイル基が、ホルミル基、アセチル基を含んでもよく、
ｎが、０〜５からなる群より選択される整数であり、ｎが、０、１、２、３又は４であってもよく、
前記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグにおけるいずれか１つ又は複数の水素が重水素で置換されてもよく、Ｒ１、Ｒ２で表される水素がそれぞれ独立して重水素で置換されてもよく、Ｒ３で表される一つ又は複数の置換基におけるいずれか１つ又は複数の水素が重水素で置換されてもよく、Ｒ３で表される１つ又は複数のＨ、アルキル基、置換されてもよいアルコキシ基、置換されてもよい複素鎖状炭化水素基、−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５におけるいずれか１つ又は複数の水素が重水素で置換されてもよい
式Ｉの化合物、又は薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
【請求項２】
請求項１に記載の式Ｉの化合物、又は薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグであって、
Ｒが、Ｃｌ又はＣＮであり、
Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり、
Ａが、ピリジル基、ピリミジニル基又はピラジニル基であり、
Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基がそれぞれが独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、トリフルオロメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメチル基、ヒドロキシメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメトキシメチル基、アセトキシメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメトキシ基、メトキシエトキシ基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ｔ−ブチルアミノ基、シクロプロピルアミノ基、グリシジルアミノ基、アセチルアミノ基、オキセタニルアミノ基、メトキシメチルアミノ基、メトキシエチルアミノ基、メトキシプロピルアミノ基、エトキシエチルアミノ基、エトキシプロピルアミノ基、メトキシカルボニルエチルアミノ基、メトキシカルボニルプロピルアミノ基、エトキシカルボニルメチルアミノ基、エトキシカルボニルエチルアミノ基、エトキシカルボニルプロピルアミノ基、ヒドロキシエチルアミノ基、ヒドロキシプロピルアミノ基、ヒドロキシブチルアミノ基、シクロブチルアミノ基、アゼチジニル基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノブチルアミノ基、ｔ−ブトキシカルボニルアミノブチルアミノ基、５−モルホリニルメチル基、エチルアミノエチルアミノ基、エチルアミノプロピルアミノ基、エチルアミノブチルアミノ基、メトキシエトキシエトキシエチルアミノ基、エトキシエトキシエチルアミノ基、ｔ−ブトキシカルボニルエチルアミノ基、ｔ−ブトキシカルボニルプロピルアミノ基、ｔ−ブトキシカルボニルメトキシエチルアミノ基、カルボキシエチルアミノ基、カルボキシプロピルアミノ基、カルボキシメトキシエチルアミノ基、６−モルホリニルメチル基、６−（テトラヒドロフラニル）メチルアミノ基、メタンスルホニルエチルアミノ基、（２，２−ジメチル−[１，３]−ジオキソラン−４−イル）−メチルアミノ基、２，３−ジヒドロキシプロピルアミノ基、２−ヒドロキシプロピルアミノ基、トリフルオロメチルエチルアミノ基からなる群より選択され、
或いは、Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメチル基、ヒドロキシメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメトキシメチル基、アセトキシメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメトキシ基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ｔ−ブチルアミノ基、シクロプロピルアミノ基、グリシジルアミノ基、アセチルアミノ基、オキセタニルアミノ基、メトキシメチルアミノ基、シクロブチルアミノ基、アゼチジニル基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアミノ基、６−モルホリニルメチル基、６−（テトラヒドロフラニル）メチルアミノ基からなる群より選択され、
Ｒ４が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、メチル基、メトキシ基、シアノ基、トリフルオロメチル基からなる群より選択される、
式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグであって、
前記式Ｉの化合物が以下の式Ｉ−Ｉ〜Ｉ−Ｖで示される構造の化合物から選ばれ、
【化２】
2020529458.tif 000086
【化３】
2020529458.tif 000087
【化４】
2020529458.tif 000088
【化５】
2020529458.tif 000089
【化６】
2020529458.tif 000090
そのうち、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４の定義は、請求項１又は２と同じであり、
好ましくは、一般式Ｉ−Ｉでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、１〜２個のＮ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、アセトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基からなる群より選ばれる１〜２つの置換基で置換されたアミノ基であり、
好ましくは、一般式Ｉ−ＩＩでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、１又は２つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、又はイソブチル基であり、
好ましくは、一般式Ｉ−ＩＩＩでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、１又は２つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、又は−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基であり、
好ましくは、一般式Ｉ−ＩＶでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、Ｎ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、メトキシエトキシエトキシ基、エトキシエトキシ基、アセチル基、アセトキシ基、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニルメトキシ基、カルボキシ基、カルボキシメトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基、ｔ−ブトキシカルボニル基からなる群より選択される１〜２つの置換基で置換されたアミノ基、メタンスルホニル基、２，２−ジメチル−[１，３]−ジオキソラン−４−イル基、２，３−ジヒドロキシプロピル基、２−ヒドロキシプロピル基、トリフルオロエチル基であり、
或いは、一般式Ｉ−ＩＶでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、Ｎ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、アセトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基からなる群より選択される１〜２つの置換基で置換されたアミノ基であり、
好ましくは、一般式Ｉ−Ｖでは、Ｒが、Ｃｌ又はＣＮを表し；Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、Ｎ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ４が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１又は２つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、メチル基、エチル基、メトキシ基からなる群より選択され；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、メトキシエトキシエトキシ基、エトキシエトキシ基、アセチル基、アセトキシ基、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニルメトキシ基、カルボキシ基、カルボキシメトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基からなる群より選択される１〜２つの置換基で置換されたアミノ基、メタンスルホニル基、２，２−ジメチル−[１，３]−ジオキソラン−４−イル基、２，３−ジヒドロキシプロピル基、２−ヒドロキシプロピル基、トリフルオロエチル基であり、
或いは、一般式Ｉ−Ｖでは、Ｒが、Ｃｌ又はＣＮを表し；Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、Ｎ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ４が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１又は２つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、メチル基、エチル基、メトキシ基からなる群より選択され；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、アセトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基からなる群より選択される１〜２つの置換基で置換されたアミノ基である、
式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグであって、
前記式Ｉの化合物は、式Ｉの化合物の一つ又は複数の光学異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はラセミ混合物を含み、
前記薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物のアニオン塩及びカチオン塩を含んでもよく；前記薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩を含んでもよく；アルカリ金属は、ナトリウム、カリウム、リチウム、セシウムを含み、アルカリ土類金属は、マグネシウム、カルシウム、ストロンチウムを含んでもよく；前記薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物と有機塩基により形成される塩を含んでもよく；前記有機塩基は、トリアルキルアミン、ピリジン、キノリン、ピペリジン、イミダゾール、ピコリン、ジメチルアミノピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ−アルキルモルホリン、１，５−ジアザビシクロ[４．３．０]ノネン−５、１，８−ジアザビシクロ[５．４．０]ウンデセン−７、１，４−ジアザビシクロ[２．２．２]オクタンを含んでもよく；前記トリアルキルアミンは、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−エチルジイソプロピルアミンを含んでもよく；前記Ｎ−アルキルモルホリンは、Ｎ−メチルモルホリンを含んでもよく；前記薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物と酸により形成される塩を含んでもよく；前記酸は、無機酸、有機酸を含んでもよく；前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、炭酸を含んでもよく；前記有機酸は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、グルタミン酸、パモ酸を含んでもよく、
前記溶媒和物は、式Ｉの化合物と薬理学的に許容される溶媒との複合物であってもよく、前記薬理学的に許容される溶媒は、水、エタノール、酢酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、又はジメチルスルホキシドを含んでもよく、好ましくは、前記薬理学的に許容される溶媒は、水である、
ことを特徴とする式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグであって、
前記式Ｉの化合物は、
【化７】
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【化８】
2020529458.tif 000092
【化９】
2020529458.tif 000093
【化１０】
2020529458.tif 000094
【化１１】
2020529458.tif 000095
【化１２】
2020529458.tif 000096
【化１３】
2020529458.tif 000097
【化１４】
2020529458.tif 000098
【化１５】
2020529458.tif 000099
【化１６】
2020529458.tif 000100
【化１７】
2020529458.tif 000101
【化１８】
2020529458.tif 000102
【化１９】
2020529458.tif 000103
【化２０】
2020529458.tif 000104
【化２１】
2020529458.tif 000105
【化２２】
2020529458.tif 000106
【化２３】
2020529458.tif 000107
【化２４】
2020529458.tif 000108
【化２５】
2020529458.tif 000109
【化２６】
2020529458.tif 000110
の一つである式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの製造方法であって、
前記式Ｉの化合物の製造方法は、以下のスキームのいずれかの工程を含み、
スキーム１：
【化２７】
2020529458.tif 000111
ａ−１                      Ｉ
化合物ａ−１が鈴木カップリング反応により、化合物Ｉが製造され、
そのうち、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ａの定義は、請求項１〜５のいずれかと同じであり、
スキーム２：
【化２８】
2020529458.tif 000112
ｂ−１      ｂ−２                    Ｉ
化合物ｂ−１と化合物ｂ−２は、求核置換反応により、化合物Ｉが製造され、
そのうち、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ａの定義は、請求項１〜５のいずれかと同じである
請求項１〜５のいずれかに記載の式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの製造方法。
【請求項７】
治療的に有効な量の請求項１〜５のいずれかに記載の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの中の一種又は多種、及び任意に存在する薬理学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項８】
Ｂ型肝炎疾患を予防及び／又は治療する医薬の製造における、請求項１〜５のいずれかに記載の式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項９】
Ｂ型肝炎ウイルス阻害剤の製造における、請求項１〜５のいずれかに記載の式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１０】
Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルスを含むウイルスの複製を阻害する医薬の製造における、請求項１〜５のいずれかに記載の式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フタラジノン系化合物、その製造方法、医薬組成物及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界保健機関（ＷＨＯ）の統計によると、現在では世界中に、２０億人がＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染したことがあり、そして約３．５〜４．０億人が慢性感染に属する。毎年、約１００万人がＢ型肝炎ウイルス感染による肝硬変、肝不全、肝癌などの合併症で死亡する。したがって、Ｂ型肝炎ウイルス感染は、依然として公衆の健康に対して深刻な脅威を与える世界的な疾患である。
【０００３】
現在、インターフェロンとヌクレオシド系抗ＨＢＶ薬は、Ｂ型肝炎ウイルス感染の治療の主要な二つの手段である。しかし、インターフェロンは、耐性が悪く、副作用が多く、値段が高いなどの欠点が存在する。一方、現在市販している６種類のヌクレオシド系医薬（ラミブジン、アデホビルジピボキシル、エンテカビルカーン、テルビブジン、テノホビル、とクレブジン）は、いずれもＢ型肝炎ウイルス逆転写酵素に作用し、長期治療において、異なる程度の薬物耐性及び副作用が生じるため、これらの薬物の適用が大幅に制限されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そのため、新規な標的に作用し、新規な機構と新規な構造母核を有する非ヌクレオシド系低分子抗ＨＢＶ薬の研究開発は、ますます緊迫となり、現在、薬物化学分野における関心のある研究課題であり、理論的、経済的、社会的な面で、非常に重要な意義を持つ。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、フタラジノンを母核構造とする式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグを提供している。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】試験例２の非変性アガロースゲル電気泳動図であり、ここで、ｃａｐｓｉｄがキャプシドを示し、Ｃａｐｓｉｄ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ＨＢＶ  ＤＮＡがキャプシド関連のＨＢＶ  ＤＮＡを示し、Ｃｏｎｔｒｏｌが対照群を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明は、以下の技術案を提供する。
【０００８】
式Ｉの化合物、又は薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグであって、
【化１】
2020529458.tif 000003
そのうち、
Ｒが、Ｃｌ又はＣＮであり、
Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立してＨであり、
Ａが、ヘテロアリール基であり、
Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基がそれぞれが独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、アルキル基、ハロアルキル基、置換されてもよいシクロアルキル基、置換されてもよい複素環基、置換されてもよい複素鎖状炭化水素基、置換されていてもよいアルコキシ基、アルカノイルオキシ基、−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され、
Ｒ４が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基がそれぞれが独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、置換されてもよいアルキル基、置換されてもよいアルコキシ基、アルカノイルオキシ基からなる群より選択され、
Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、置換されてもよいアルキル基、置換されてもよいシクロアルキル基、置換されてもよいアルコキシ基、アルカノイルオキシ基、アルキルスルホニル基、アルカノイル基、アルコキシカルボニル基、置換されていてもよい複素環基、−Ｎ（Ｑ１）（Ｑ２）からなる群より選択され、
或いは、Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、置換されてもよいアルキル基、置換されてもよいシクロアルキル基、置換されてもよいアルコキシ、アルカノイルオキシ基、任意に置換された複素環基、−Ｎ（Ｑ１）（Ｑ２）からなる群より選択され、
前記「置換されていてもよい」基において、置換基が、ハロゲン、ヒドロキシル基、アルキル基、ヒドロキシアルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルカノイル基、アルコキシアルコキシ基、アルコキシカルボニル基、カルボキシル基、複素環基、−Ｎ（Ｑ１）（Ｑ２）からなる群より選択され、
或いは、「置換されていてもよい」基において、置換基が、ハロゲン、ヒドロキシル基、アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルカノイル基、複素環基、−Ｎ（Ｑ１）（Ｑ２）からなる群より選択され、
ここで、
ｎが、０〜１０からなる群より選択される整数であり、
Ｑ１、Ｑ２が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル基又はアルコキシカルボニル基であり、
或いは、Ｑ１、Ｑ２が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル基であってもよく、
好ましくは、
Ｒ３が、１、２又は３つの置換基を表し、
Ｒ４が、１又は２つの置換基を表し、
前記「ヘテロアリール基」が、Ｎ、Ｏ及びＳからなる群より選択される１〜３個のヘテロ原子を含む５〜１０員のヘテロアリール基であり、Ｎ、Ｏ及びＳからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を含む６〜１０員のヘテロアリール基であってもよく、前記ヘテロアリール基が、ピリジル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、フラニル基、インドリル基、アザインドリル基、ナフチジル基、又はキノリニル基を含んでもよく、
前記「ハロゲン」が、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含み、
前記「アルキル基」、「ハロアルキル基」、「アルキルスルホニル基」、「アルコキシカルボニル基」、「アルコキシアルコキシ基」に含まれるアルキル基が、Ｃ１〜Ｃ１８直鎖状又は分岐鎖状アルキル基であり、Ｃ１〜Ｃ７直鎖状又は分岐鎖状アルキル基であってもよく、Ｃ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基であってもよく、前記アルキル基が、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、３−メチルブチル基、イソペンチル基、１−エチルプロピル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、イソヘキシル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基、ｎ−ヘプチル基、２−メチルヘキシル基、３−メチルヘキシル基、２，２−ジメチルペンチル基、３，３−ジメチルペンチル基、２，３−ジメチルペンチル基、２，４−ジメチルペンチル基、３−エチルペンチル基、２，２，３−トリメチルブチルを含んでもよく、前記「ハロアルキル」が、トリフルオロメチル基を含んでもよく、
前記「アルコキシ基」が、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基であり、前記アルコキシ基が、Ｃ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基であってもよく、前記アルコキシ基が、Ｃ１〜Ｃ３直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基であってもよく、前記アルコキシ基が、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基を含んでもよく、
前記「アルカノイルオキシ基」が、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状アルカノイルオキシ基であり、アセトキシ基を含んでもよく、
前記「シクロアルキル基」が、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基であり、前記シクロアルキル基が、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基を含んでもよく、
前記「複素環基」における複素環構造が、環内にＮ、Ｏ、Ｓからなる群より選択される１個、２個又は３個のヘテロ原子を含む飽和若しくは不飽和の３〜１０員の単環式又は多環式の非芳香族環構造であり、前記複素環基が、環内にＮ原子を含む３〜６員飽和環であってもよく、前記複素環基が、環内にＮ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を含む４〜６員非芳香族環構造であってもよく、前記複素環基が、ピロリジン環、テトラヒドロチオフェン環、テトラヒドロフラン環を含んでもよく、
前記「複素鎖状炭化水素基」における複素鎖状炭化水素構造が、鎖内にＮ、Ｏからなる群より選択される１〜３個のヘテロ原子を含む飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ７直鎖状又は分岐鎖状の複素鎖状構造であり、前記複素鎖状炭化水素基が、鎖内にＮ、Ｏからなる群より選択される１〜３個のヘテロ原子を含む飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状の複素鎖状構造であってもよく、前記複素鎖状炭化水素基が、鎖内に１〜３個のＯを含む飽和若しくは不飽和のＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状の複素鎖状構造であってもよく、
前記「アルカノイル基」が、Ｃ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状のアルカノイル基であり、前記アルカノイル基が、ホルミル基、アセチル基を含んでもよく、
ｎが、０〜５からなる群より選択される整数であり、ｎが、０、１、２、３又は４であってもよい。
【０００９】
前記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグにおけるいずれか１つ又は複数の水素が重水素で置換されてもよく、Ｒ１、Ｒ２で表される水素がそれぞれ独立して重水素で置換されてもよく、Ｒ３で表される一つ又は複数の置換基におけるいずれか１つ又は複数の水素が重水素で置換されてもよく、Ｒ３で表される１つ又は複数のＨ、アルキル基、置換されてもよいアルコキシ基、置換されてもよい複素鎖状炭化水素基、−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５におけるいずれか１つ又は複数の水素が重水素で置換されてもよい。
【００１０】
或いは、上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグでは、
Ｒが、Ｃｌ又はＣＮであり、
Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり、
Ａが、ピリジル基、ピリミジニル基又はピラジニル基であり、
Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基がそれぞれが独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、トリフルオロメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメチル基、ヒドロキシメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメトキシメチル基、アセトキシメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメトキシ基、メトキシエトキシ基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ｔ−ブチルアミノ基、シクロプロピルアミノ基、グリシジルアミノ基、アセチルアミノ基、オキセタニルアミノ基、メトキシメチルアミノ基、メトキシエチルアミノ基、メトキシプロピルアミノ基、エトキシエチルアミノ基、エトキシプロピルアミノ基、メトキシカルボニルエチルアミノ基、メトキシカルボニルプロピルアミノ基、エトキシカルボニルメチルアミノ基、エトキシカルボニルエチルアミノ基、エトキシカルボニルプロピルアミノ基、ヒドロキシエチルアミノ基、ヒドロキシプロピルアミノ基、ヒドロキシブチルアミノ基、シクロブチルアミノ基、アゼチジニル基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノブチルアミノ基、ｔ−ブトキシカルボニルアミノブチルアミノ基、５−モルホリニルメチル基、エチルアミノエチルアミノ基、エチルアミノプロピルアミノ基、エチルアミノブチルアミノ基、メトキシエトキシエトキシエチルアミノ基、エトキシエトキシエチルアミノ基、ｔ−ブトキシカルボニルエチルアミノ基、ｔ−ブトキシカルボニルプロピルアミノ基、ｔ−ブトキシカルボニルメトキシエチルアミノ基、カルボキシエチルアミノ基、カルボキシプロピルアミノ基、カルボキシメトキシエチルアミノ基、６−モルホリニルメチル基、６−（テトラヒドロフラニル）メチルアミノ基、メタンスルホニルエチルアミノ基、（２，２−ジメチル−[１，３]−ジオキソラン−４−イル）−メチルアミノ基、２，３−ジヒドロキシプロピルアミノ基、２−ヒドロキシプロピルアミノ基、トリフルオロメチルエチルアミノ基からなる群より選択され、
或いは、Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメチル基、ヒドロキシメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメトキシメチル基、アセトキシメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいメトキシ基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ｔ−ブチルアミノ基、シクロプロピルアミノ基、グリシジルアミノ基、アセチルアミノ基、オキセタニルアミノ基、メトキシメチルアミノ基、シクロブチルアミノ基、アゼチジニル基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアミノ基、６−モルホリニルメチル基、６−（テトラヒドロフラニル）メチルアミノ基からなる群より選択され、
Ｒ４が、一つ又は複数の置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、メチル基、メトキシ基、シアノ基、トリフルオロメチル基からなる群より選択される。
【００１１】
或いは、上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグでは、前記式Ｉの化合物が以下の式Ｉ−Ｉ〜Ｉ−Ｖで示される構造の化合物から選ばれる。
【００１２】
【化２】
2020529458.tif 000004
【化３】
2020529458.tif 000005
【化４】
2020529458.tif 000006
【化５】
2020529458.tif 000007
【化６】
2020529458.tif 000008
【００１３】
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４の定義は、以上と同じである。
【００１４】
好ましくは、一般式Ｉ−Ｉでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；  Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、１〜２個のＮ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、アセトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基からなる群より選ばれる１〜２つの置換基で置換されたアミノ基である。
【００１５】
好ましくは、一般式Ｉ−ＩＩでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、１又は２つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、又はイソブチル基である。
【００１６】
好ましくは、一般式Ｉ−ＩＩＩでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、１又は２つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ７直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ６直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、又は−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基である。
【００１７】
好ましくは、一般式Ｉ−ＩＶでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、Ｎ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基（好ましくは、１個のＮ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基）、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、メトキシエトキシエトキシ基、エトキシエトキシ基、アセチル基、アセトキシ基、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニルメトキシ基、カルボキシ基、カルボキシメトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基、ｔ−ブトキシカルボニル基からなる群より選択される１〜２つの置換基で置換されたアミノ基、メタンスルホニル基、２，２−ジメチル−[１，３]−ジオキソラン−４−イル基、２，３−ジヒドロキシプロピル基、２−ヒドロキシプロピル基、トリフルオロエチル基である。
【００１８】
或いは、一般式Ｉ−ＩＶでは、Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、Ｎ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基（好ましくは、１個のＮ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基）、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、アセトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基からなる群より選択される１〜２つの置換基で置換されたアミノ基である。
【００１９】
好ましくは、一般式Ｉ−Ｖでは、Ｒが、Ｃｌ又はＣＮを表し；Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、ヒドロキシル基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、Ｎ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ４が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１又は２つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、メチル基、エチル基、メトキシ基からなる群より選択され；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、メトキシエトキシエトキシ基、エトキシエトキシ基、アセチル基、アセトキシ基、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニルメトキシ基、カルボキシ基、カルボキシメトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基からなる群より選択される１〜２つの置換基で置換されたアミノ基、メタンスルホニル基、２，２−ジメチル−[１，３]−ジオキソラン−４−イル基、２，３−ジヒドロキシプロピル基、２−ヒドロキシプロピル基、トリフルオロエチル基である。
【００２０】
或いは、一般式Ｉ−Ｖでは、Ｒが、Ｃｌ又はＣＮを表し；Ｒ１、Ｒ２が、それぞれ独立して、Ｈ又はＤであり；Ｒ３が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１、２又は３つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい任意の炭素原子がＯ原子で置換されたＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルキル基、１つ又は複数のＤで置換されてもよいＣ１〜Ｃ５直鎖状又は分岐鎖状アルコキシ基、Ｎ原子を含有する３〜６員の飽和複素環基、１つ又は複数のＤで置換されてもよい−（ＣＨ２）ｎ＋１Ｒ５、−Ｎ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｎ（Ｒ５）からなる群より選択され；ｎが、０、１、２、３又は４であり；Ｒ４が、一つ又は複数の置換基を表し、好ましくは１又は２つの置換基を表し、前記置換基が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、シアノ基、トリフルオロメチル基、メチル基、エチル基、メトキシ基からなる群より選択され；Ｒ５、Ｒ６が、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、メトキシ基、エトキシ基、アセトキシ基、Ｎ、Ｏからなる群より選択される１〜２個のヘテロ原子を有する４〜６員の非芳香族複素環基、又はメチル基、エチル基からなる群より選択される１〜２つの置換基で置換されたアミノ基である。
【００２１】
或いは、上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグは、
前記式Ｉの化合物は、式Ｉの化合物の一つ又は複数の光学異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はラセミ混合物を含み、
前記薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物のアニオン塩及びカチオン塩を含んでもよく、前記薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩を含んでもよく、前記アルカリ金属は、ナトリウム、カリウム、リチウム、セシウムを含み、アルカリ土類金属は、マグネシウム、カルシウム、ストロンチウムを含んでもよく、前記薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物と有機塩基との塩を含んでもよく、前記有機塩基は、トリアルキルアミン、ピリジン、キノリン、ピペリジン、イミダゾール、ピコリン、ジメチルアミノピリジン、ジメチルアニリン、Ｎ−アルキルモルホリン、１，５−ジアザビシクロ[４．３．０]ノネン−５、１，８−ジアザビシクロ[５．４．０]ウンデセン−７、１，４−ジアザビシクロ[２．２．２]オクタンを含んでもよく、前記トリアルキルアミンは、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−エチルジイソプロピルアミンを含んでもよく、前記Ｎ−アルキルモルホリンは、Ｎ−メチルモルホリンを含んでもよく、前記薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物と酸との塩を含んでもよく、前記酸は、無機酸、有機酸を含んでもよく、前記無機酸は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、炭酸を含んでもよく、前記有機酸は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、グルタミン酸、パモ酸を含んでもよく、
前記溶媒和物は、式Ｉの化合物と薬理学的に許容される溶媒との複合物であってもよく、前記薬理学的に許容される溶媒は、水、エタノール、酢酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドを含んでもよく、好ましくは、前記薬理学的に許容される溶媒は、水であることを特徴とする。
【００２２】
前記プロドラッグとは、薬物が化学構造上の変更により得られた、体外で活性がないか比較的に小さく、体内で酵素的又は非酵素的変換により活性薬物を放出して薬理学的効果を発揮する化合物を意味する。本発明におけるプロドラッグの形態は、特に限定されなく、体内で酵素的又は化学的作用により活性を持つ原薬を放出して、予期された薬理学的効果を発揮できればよく、キャリアプロドラッグ又は生物学的プロドラッグであってもよい。
【００２３】
或いは、上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグは、前記式Ｉの化合物が以下の化合物の一つであることを特徴とする。
【００２４】
【化７】
2020529458.tif 000009
【００２５】
【化８】
2020529458.tif 000010
【００２６】
【化９】
2020529458.tif 000011
【００２７】
【化１０】
2020529458.tif 000012
【００２８】
【化１１】
2020529458.tif 000013
【００２９】
【化１２】
2020529458.tif 000014
【００３０】
【化１３】
2020529458.tif 000015
【００３１】
【化１４】
2020529458.tif 000016
【００３２】
【化１５】
2020529458.tif 000017
【００３３】
【化１６】
2020529458.tif 000018
【００３４】
【化１７】
2020529458.tif 000019
【００３５】
【化１８】
2020529458.tif 000020
【００３６】
【化１９】
2020529458.tif 000021
【００３７】
【化２０】
2020529458.tif 000022
【００３８】
【化２１】
2020529458.tif 000023
【００３９】
【化２２】
2020529458.tif 000024
【００４０】
【化２３】
2020529458.tif 000025
【００４１】
【化２４】
2020529458.tif 000026
【００４２】
【化２５】
2020529458.tif 000027
【００４３】
【化２６】
2020529458.tif 000028
【００４４】
本発明は、さらに、以下のスキームのいずれかの工程を含む、上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの製造方法を提供し、前記式Ｉの化合物の製造方法は、下記スキームのいずれかを含むことを特徴とする、即ち：
スキーム１：
【化２７】
2020529458.tif 000029
ａ−１                      Ｉ
化合物ａ−１が鈴木カップリング反応により、化合物Ｉが製造され、
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ａの定義は、以上と同じであり、
スキーム２：
【化２８】
2020529458.tif 000030
ｂ−１      ｂ−２                    Ｉ
化合物ｂ−１と化合物ｂ−２は、求核置換反応により、化合物Ｉが製造され、
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ａの定義は、以上と同じである。
【００４５】
或いは、以上の製造方法は、以下のスキームのいずれかにおける工程を含むことを特徴とする。
スキーム１：
【化２９】
2020529458.tif 000031
【００４６】
一般式Ｈ１で示される化合物は、加水分解により一般式Ｈ２で示される化合物が得られ、一般式Ｈ２で示される化合物は、ｐ−クロロベンジルクロライドＨ３との求核置換反応により、一般式Ｈ４で示される化合物が得られ、最後に、金属触媒又は塩基の作用下で、鈴木カップリング反応により、一般式Ｈ５で示されるフタラジノン系化合物が得られる。
【００４７】
ここで、Ｒ４は、Ｈであり、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ａの定義は、以上と同じであり、
スキーム２：
【化３０】
2020529458.tif 000032
一般式Ｈ６で示される化合物は、まず一般式Ｈ７で示されるグリニャール試薬に製造され、次に無水フタル酸との付加反応により、一般式Ｈ８で示される化合物が得られ、一般式Ｈ８で示される化合物は、ヒドラジン水和物との閉環反応により、一般式Ｈ９で示される化合物が得られ、一般式Ｈ９で示される化合物は、ｐ−クロロベンジルクロライドＨ３との求核置換反応により、一般式Ｈ１０で示される化合物が得られ、
ここで、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４の定義は、以上と同じであり、ただし、Ｒ４は、Ｈではない。
【００４８】
好ましくは、上記方法では、前記加水分解反応は、酸性又は塩基性条件下、溶媒中で行われ、前記酸は、酢酸、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸からなる群より選ばれる一つ又は複数であり、前記塩基は、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシドからなる群より選ばれる一つ又は複数であり、前記溶媒は、エタノール、メタノール、水、酢酸からなる群より選ばれる一つ又は複数である。
【００４９】
好ましくは、上記方法では、前記求核置換反応は、塩基の存在下、溶媒中で行われ、前記塩基は、好ましくは、炭酸カリウム、炭酸セシウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、カリウムｔ−ブトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、又は水酸化ナトリウムの一つ又は複数であり、前記溶媒は、好ましくは、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はテトラヒドロフランの一つ又は複数である。
【００５０】
好ましくは、上記方法では、前記鈴木カップリング反応は、溶媒中で、金属触媒、塩基及びリガンドの存在下、加熱条件下で行われ、前記溶媒は、好ましくは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、トルエン又は１，４−ジオキサンであり、前記加熱条件は、加熱還流か、マイクロ波加熱であり、前記塩基は、好ましくは、炭酸セシウム、炭酸カリウム、カリウムｔ−ブトキシド及びナトリウムｔ−ブトキシドの一つ又は複数であり、前記金属触媒は、好ましくは、パラジウムアセテート、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４又はＰｄ（ｄｐｐｆ）２Ｃｌ２の一つ又は複数であり、前記リガンドは、好ましくは、トリフェニルホスフィン、１，１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン、ジフェニルホスフィノビナフチル、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６'−ジメトキシ−ビフェニル、及び２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２'−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ビフェニルの一つ又は複数である。
【００５１】
好ましくは、上記方法では、上記製造されたグリニャール試薬は、マグネシウム、鉄、銅、亜鉛、及びリチウムの塩であってもよい。
【００５２】
上記式Ｉの化合物の薬理学的に許容される塩は、式Ｉの化合物を対応する酸の飽和アルコール溶液で反応させることにより製造することができ、例えば、式Ｉで示されるフタラジノン系化合物を飽和ＨＣｌメタノール溶液に溶解させ、室温で３０分間撹拌し、溶媒を蒸発させることにより、対応する式Ｉの化合物の塩酸塩が得られる。
【００５３】
本発明は、さらに、治療的に有効な量の上記式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグの一種又は多種、および任意に存在する薬理学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。
【００５４】
前記薬理学的に許容される担体とは、例えば、製薬分野で慣用の医薬担体を意味し、例えば、水などの希釈剤；デンプン、スクロースなどの充填剤；セルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなどのバインダー；グリセロールなどの保湿剤；寒天、炭酸カルシウム及び重炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；セチルアルコールなどの界面活性剤；カオリン及びベントナイトなどの吸着担体；タルク、ステアリン酸カルシウム及びステアリン酸マグネシウム、及びポリエチレングリコール等の滑沢剤が挙げられる。また、上記医薬組成物に、さらに、甘味料、香料等のその他の賦形剤を添加することができる。
【００５５】
上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は医薬組成物は、そのような治療を必要とする患者に、経口、直腸又は非経口投与の方法により投与することができる。経口投与の場合に、これらは、一般的に、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などの固形製剤、又は水性若しくは油性懸濁液などの液体製剤、又はシロップなどの他の液体製剤として製造することができる。非経口投与の場合、注射液、水性又は油性懸濁液等として製造することができる。
【００５６】
本発明は、さらに、Ｂ型肝炎疾患を予防及び／又は治療する医薬の製造における、上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は上記医薬組成物の使用を提供する。
【００５７】
本発明は、さらに、Ｂ型肝炎ウイルス阻害剤の製造における、上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は上記医薬組成物の使用を提供する。
【００５８】
本発明は、さらに、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルスを含むウイルスの複製を阻害する医薬の製造における、上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は上記医薬組成物の使用を提供する。
【００５９】
本発明は、さらに、有効量の上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は上記医薬組成物の使用を投与することを含む、Ｂ型肝炎疾患を予防及び／又は治療する方法を提供する。
【００６０】
本発明は、さらに、有効量の上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は上記医薬組成物の使用を投与することを含む、Ｂ型肝炎ウイルスを阻害する方法を提供する。
【００６１】
本発明は、さらに、有効量の上記式Ｉの化合物、又はその薬理学的に許容される塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ、又は上記医薬組成物の使用を投与することを含む、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルスを含むウイルスの複製を阻害する方法を提供する。
【００６２】
ある局面の特定の実施形態によれば、化合物が、ウイルスＲＮＡのキャプシド形成を阻害することにより抗ウイルス活性を発揮し、細胞レベルでＨＢＶ  ＤＮＡ複製に対する高い阻害活性を有し、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞の増殖に対して毒性が比較的に低い。
【００６３】
ある局面の特定の実施形態によれば、化合物が、より良好な肝臓指向性をもち、安定的に肝臓に存在して濃縮することができ、有効なＢ型肝炎ウイルス阻害剤である。
【実施例】
【００６４】
以下、本発明の具体的な実施形態を詳細に説明する。なお、ここで記載される具体的な実施形態は、本発明を例示的に説明するためのものであり、本発明を限定するものではないと理解すべきである。
【００６５】
以下の実施例では、プロトン核磁気共鳴スペクトルはＢｒｕｋｅｒＡＭＸ−４００型、Ｇｅｍｉｎｉ−３００型又はＡＭＸ−６００型核磁気共鳴装置で記録され、化学シフトδの単位はｐｐｍである。比旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ２４１型自動旋光計により測定され、使用されたマイクロ波は、ＣＥＭ−ｄｉｓｃｏｖｅｒｙマイクロ波反応器であった。カラムクロマトグラフィーで使用されたシリカゲル（２００〜３００メッシュ）は、青島海洋化工サブプラント製のものであった。薄層クロマトグラフィーは、煙台化工研究所製のＧＦ２５４高効プレートを使用した。分取薄層クロマトグラフィープレートは、中国科学院上海薬物研究所製のものであり、固定相は、それぞれ青島海洋化工社製と中国医薬（グループ）上海化学試薬社製のＧＦ２５４（ＨＧ／Ｔ２３５４−９２）シリカゲルとカルボキシメチルセルロースナトリウム（８００〜１２００）で製造された。特に説明しない限り、全ての溶媒は分析グレードの試薬であり、使用された試薬は、国薬集団化学試薬有限公司から購入された。ヨウ素、ＵＶ蛍光などの方法により着色した。有機溶媒の減圧留去は、ロータリーエバポレーターで行われた。
【００６６】
＜実施例１＞
化合物Ｉ−１の合成スキームは、以下に示した。
【化３１】
2020529458.tif 000033
【００６７】
工程ａ：
３，６−ジクロロフタラジン（１０ｇ、５０．３ｍｍｏｌ）を、酢酸（１５０ｍＬ）に溶解し、１２０℃で６時間還流した。反応の完了をＴＬＣにより検知した後、反応を停止し、反応物を室温に冷却し、そしてロータリーエバポレーターで酢酸を減圧留去して、白色固体２（８．５ｇ、９４％）が得られた。
【００６８】
工程ｂ：
フタラジノン２（１．０ｇ、５．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（７０ｍＬ）に溶解し、順次、ｐ−クロロベンジルクロリド（１．１ｇ、６．６ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（２．１ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応系を５０℃で５時間撹拌した後、反応の完了をＴＬＣにより検知した。反応溶液に、酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）を加え、有機層を水（１００ｍＬ×４）及び飽和食塩水（１００ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで１／２時間乾燥した後、濃縮して粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥＡ=１００：０〜１０：１）により単離精製して、白色固体３が得られた（１．５ｇ、８８％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.49 - 8.44 (m, 1H), 8.02 - 7.99 (m, 1H), 7.88 (dtd, J = 16.4, 7.3, 1.4 Hz, 2H), 7.50 - 7.43 (m, 2H), 7.34 - 7.30 (m, 2H), 5.34 (s, 2H). MS (ESI): 305.1 [M+H]+.
【００６９】
工程ｃ：
３（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）と水（５ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、次いでピリジン−４−ボロン酸（５２．９ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（７６．０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）、及びＫ３ＰＯ４（１３９ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を順次に加えた。Ｎ２で３回置換した後、１００℃で一晩反応した。翌日、反応の完了をＴＬＣにより検知した後、反応系を室温に冷却した。ロータリーエバポレーターで溶媒を減圧留去した後、残留物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出し、溶解し、そして有機層を水（３０ｍＬ×３）及び飽和食塩水（３０ｍＬ）で順次洗浄した。その後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより単離精製して、生成物Ｉ−１が得られた（９２ｍｇ、８１％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.69 (dd, J = 4.5, 1.7 Hz, 2H), 7.66 (dd, J = 4.5, 1.7 Hz, 2H), 7.58 (dt, J = 8.1, 2.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 2H), 7.34 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 2H), 7.33 - 7.27 (m, 2H), 5.36 (s, 2H).
【００７０】
実施例１と同様の方法で以下の化合物を製造した。
【００７１】
【表１】
2020529458.tif 000034
【００７２】
【表２】
2020529458.tif 000035
【００７３】
【表３】
2020529458.tif 000036
【００７４】
【表４】
2020529458.tif 000037
【００７５】
【表５】
2020529458.tif 000038
【００７６】
【表６】
2020529458.tif 000039
【００７７】
【表７】
2020529458.tif 000040
【００７８】
【表８】
2020529458.tif 000041
【００７９】
【表９】
2020529458.tif 000042
【００８０】
【表１０】
2020529458.tif 000043
【００８１】
【表１１】
2020529458.tif 000044
【００８２】
【表１２】
2020529458.tif 000045
【００８３】
【表１３】
2020529458.tif 000046
【００８４】
【表１４】
2020529458.tif 000047
【００８５】
【表１５】
2020529458.tif 000048
【００８６】
【表１６】
2020529458.tif 000049
【００８７】
【表１７】
2020529458.tif 000050
【００８８】
【表１８】
2020529458.tif 000051
【００８９】
【表１９】
2020529458.tif 000052
【００９０】
【表２０】
2020529458.tif 000053
【００９１】
【表２１】
2020529458.tif 000054
【００９２】
＜実施例２＞
化合物Ｉ−２４の合成スキームは、以下に示した。
【化３２】
2020529458.tif 000055
【００９３】
工程ａ：
ｐ−クロロベンズアルデヒド（１ｇ、７．１ｍｍｏｌ）を無水メタノール（５０ｍＬ）に溶解し、ＮａＢＤ４（３６０ｍｇ、８．５ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１時間撹拌した後、溶媒をロータリーエバポレーターで蒸発させた。残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）に溶解し、有機層を水（１００ｍＬ×４）及び飽和食塩水（１００ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで１／２時間乾燥した後、濃縮して粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより単離精製して、白色固体５が得られた（０．９ｇ、９０％）。
【００９４】
工程ｂ：
５（５００ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）をトルエン（２０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（２ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）及び塩化メタンスルホニル（０．３２ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）を順次に加えて、室温で２時間撹拌した後、ロータリーエバポレーターで溶媒を減圧留去した。残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）に溶解し、有機層を水（１００ｍＬ×４）及び飽和食塩水（１００ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで１／２時間乾燥した後、濃縮して粗生成物が得られた。
【００９５】
前記工程の粗生成物（５００ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、６−クロロ−フタラジノン（化合物２）（４０７ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（７５０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を順次に加えた。反応系を５０℃で５時間撹拌した後、反応の完了をＴＬＣにより検知した。反応溶液に酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）を加えて、有機層を水（１００ｍＬ×４）及び飽和食塩水（１００ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで１／２時間乾燥した後、濃縮して粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより単離精製して、白色固体６が得られた（４９０ｍｇ、７０％）。
【００９６】
工程ｃ：
６（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）と水（５ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、次いで２−フルオロ−メチルピリジン−３−ボロン酸（５２．９ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（７６．０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）、及びＫ３ＰＯ４（１３９ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を順次に加えた。Ｎ２で３回置換した後、１００℃で一晩反応した。翌日、反応の完了をＴＬＣにより検知した後、反応系を室温に冷却した。ロータリーエバポレーターで溶媒を減圧留去した後、残留物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出し、溶解し、そして有機層を水（３０ｍＬ×３）及び飽和食塩水（３０ｍＬ）で順次洗浄した。その後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより単離精製して、生成物Ｉ−２４が得られた（８４ｍｇ、７５％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.56 - 8.47 (m, 1H), 7.80 (tdd, J = 8.9, 8.3, 4.5 Hz, 3H), 7.47 (dd, J = 9.0, 2.6 Hz, 3H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.26 (dd, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 2.65 (s, 3H).
【００９７】
実施例２と同様の方法で以下の化合物を製造した。
【００９８】
【表２２】
2020529458.tif 000056
【００９９】
【表２３】
2020529458.tif 000057
【０１００】
＜実施例３＞
化合物Ｖ−１の合成スキームは、以下に示した。
【化３３】
2020529458.tif 000058
【０１０１】
工程ａ：
２−フルオロ−３−ブロモ−６−メチルピリジン（５００ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、マグネシウム削り屑（１２６ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ２で３回置換し、室温で１時間撹拌した後、４−フルオロフタル酸無水物（４７４ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を加えて、室温で一晩反応した。翌日、ロータリーエバポレーターで溶媒を減圧留去した、残留物を酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）に溶解し、有機層を水（３０ｍＬ×３）及び飽和食塩水（３０ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで１／２時間乾燥した後、濃縮して粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより単離精製して、白色固体７が得られた（０．６ｇ、８０％）。
【０１０２】
工程ｂ：
７（０．６ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を無水エタノール（３０ｍＬ）に溶解し、８５％ヒドラジン水和物（７９μＬ）を加えて、５時間還流した。ロータリーエバポレーターで溶媒を減圧留去し、粗生成物８が得られた（３８４ｍｇ、６７％）。
【０１０３】
工程ｃ：
前記工程の粗生成物（３００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、ハロゲン化物（１．３ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（４２９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を順次に加えた。反応系を５０℃で５時間撹拌した後、反応の完了をＴＬＣにより検知した。反応溶液に酢酸エチル（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）を加えて、有機層を水（１００ｍＬ×４）及び飽和食塩水（１００ｍＬ）で順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで１／２時間乾燥した後、濃縮して粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより単離精製して、白色結晶Ｖ−１が得られた（３２７ｍｇ、７５％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.66 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.35 (d, J = 35.0 Hz, 4H), 4.87 (s, 2H), 2.68 (s, 3H).
【０１０４】
実施例３と同様の方法で以下の化合物を製造した。
【０１０５】
【表２４】
2020529458.tif 000059
【０１０６】
【表２５】
2020529458.tif 000060
【０１０７】
【表２６】
2020529458.tif 000061
【０１０８】
【表２７】
2020529458.tif 000062
【０１０９】
＜実施例４＞
【化３４】
2020529458.tif 000063
【０１１０】
工程ａ：
ＩＶ−５（１５０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を無水エタノール（１０ｍＬ）に溶解し、２−メトキシエチルアミン（０．３５ｍＬ、４ｍｍｏｌ）を加え、還流で一晩反応した。翌日、ロータリーエバポレーターで溶媒を減圧留去した、残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）に溶解し、有機層を飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで１／２時間乾燥した後、濃縮して粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより単離精製して、白色固体ＩＶ−２６が得られた（０．９ｇ、５２％）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.52 - 8.47 (m, 1H), 7.83 - 7.76 (m, 2H), 7.67 - 7.52 (m, 7H), 6.43 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 5.49 (s, 2H), 5.26 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.72 - 3.53 (m, 4H), 3.43 (s, 3H).。
【０１１１】
工程ｂ：
ＩＶ−２６（８０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、Ｎ−クロロスクシンイミド（２５ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えて、５時間還流した。ロータリーエバポレーターで溶媒を減圧留去して、粗生成物が得られた。前記粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより単離精製して、白色固体ＩＶ−２７が得られた（７３ｍｇ、８５％）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.52 - 8.45 (m, 1H), 7.85 - 7.77 (m, 2H), 7.66 - 7.61 (m, 3H), 7.59 - 7.56 (m, 3H), 5.71 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.76 - 3.69 (m, 2H), 3.63 (dd, J = 5.3, 4.2 Hz, 2H), 3.44 (s, 3H).
【０１１２】
【表２８】
2020529458.tif 000064
【０１１３】
【表２９】
2020529458.tif 000065
【０１１４】
【表３０】
2020529458.tif 000066
【０１１５】
【表３１】
2020529458.tif 000067
【０１１６】
【表３２】
2020529458.tif 000068
【０１１７】
【表３３】
2020529458.tif 000069
【０１１８】
【表３４】
2020529458.tif 000070
【０１１９】
【表３５】
2020529458.tif 000071
【０１２０】
【表３６】
2020529458.tif 000072
【０１２１】
【表３７】
2020529458.tif 000073
【０１２２】
【表３８】
2020529458.tif 000074
【０１２３】
【表３９】
2020529458.tif 000075
【０１２４】
【表４０】
2020529458.tif 000076
【０１２５】
【表４１】
2020529458.tif 000077
【０１２６】
【表４２】
2020529458.tif 000078
【０１２７】
【表４３】
2020529458.tif 000079
【０１２８】
＜試験実施例１：ＨＢＶ  ＤＮＡの複製能力に対する実施例で製造した化合物の影響＞
１．実験材料
１．１  スクリーニングシステム
安定的に全長ＨＢＶをトランスフェクトしたヒト肝癌細胞ＨｅｐＧ２．２．１５細胞株（中国科学院上海薬物研究所から提供）。
【０１２９】
１．２  実験機器
インキュベータ（ＴｈｅｒｍｏＦｏｒｍａ３１１１）；マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  １９０）、電子天秤、顕微鏡、生物学的安全キャビネット（Ｈｅａｌ  Ｆｏｒｃｅ  ｓａｆｅ  １５）、遠心分離機（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ  ５８１０Ｒ）、リアルタイムＰＣＲ（ＦＡＳＴＡ  ＧＥＮ−ＤＮＡ  ｆａｓｔ２０００）
【０１３０】
１．３  実験薬及び試薬
陽性薬及び構成：ラミブジン（３ＴＣ）、中国科学院上海薬物研究所薬物化学グループにより合成され、ＤＭＥＭ／高グルコース培地で（ダルベッコ改変イーグル培地、Ｈｙｃｌｏｎｅ社製）４０ｍＭストック溶液を調製した。
【０１３１】
他の溶液と構成：
ＤＭＥＭ／高グルコース培地：ダルベッコ改変イーグル培地１×（Ｈｙｃｌｏｎｅ社製）リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．３、１Ｌ）：ＮａＣｌ，８．０ｇ；Ｎａ２ＨＰＯ４，１．１６ｇ；ＫＨ２ＰＯ４，０．２ｇ；ＫＣｌ：０．２ｇ。
ＭＴＴ溶液：ＭＴＴ（Ｓｉｇｍａ社）、ＰＢＳで５ｍｇ／ｍＬに調製した。
ＤＮＡ抽出キット：ＤＮｅａｓｙ(R)  Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ（Ｑｉａｇｅｎ社）
【０１３２】
２．実験方法
２．１  細胞培養
従来の方法により、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を継代培養した。使用された培地は、ＤＭＥＭであり、１０％（ｖ／ｖ）のウシ血清及び選択的抗生物質Ｇ４１８を含み、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで８日間培養した（４日目に培地交換をした）。
【０１３３】
２．２  試験化合物及び陽性薬の調製
試験化合物は、ＤＭＳＯを含む４０ｍＭストック溶液に調製し、１０％ＨｙｃｌｏｎｅＴＭ  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍを含むＤＭＥＭ培地で所定の最高濃度の溶液に調製して、希釈した。陽性薬は、ラミブジンであり、同様に１０％ＨｙｃｌｏｎｅＴＭ  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍで所定の濃度に調製した。
【０１３４】
２．３  細胞毒性のＭＴＴアッセイ
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を９６ウェルプレートに５×１０３細胞/ウェルで播種し、上記の方法により薬剤の作用下で８日間培養し、２００μＬの上清を取り出した後、ＭＴＴ溶液を加えた。４時間培養後、溶解物を加えた。１２時間培養した後、ＯＤ５７０をマイクロプレートリーダーで測定し、コントロールウェルの吸光度と比較して、生細胞の割合を計算し、半数細胞毒性に必要な濃度ＣＣ５０を計算した。
【０１３５】
２．４  細胞培養上清中のＨＢＶ  ＤＮＡ含有量の測定
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞を異なる濃度の化合物で８日間処理し（４日目に培地を交換した）、培養上清を吸引し、上清中の成熟ウイルス粒子に含まれるＨＢＶ  ＤＮＡをリアルタイムＰＣＲ法により定量的に検出した。
【０１３６】
ＨｅｐＧ２．２．１５細胞上清ＤＮＡをカラム抽出した（Ｑｉａｇｅｎ、ＤＮｅａｓｙ（登録商標）  Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）
【０１３７】
１）９６ウェルプレートから上清ＤＮＡを収集し、各ウェル２００μＬで、同じＥＰチューブに重複のウェルを収集し、４０００ｒｃｆ×５分間遠心分離し、上清を採取した。
２）２００上清を取り、１．５ｍＬのＥＰチューブに加え、２０μＬのプロテイナーゼＫと２００μＬのＢｕｆｆｅｒ  ＡＬを加え（Ｑｉａｇｅｎ、ＤＮｅａｓｙ（登録商標）  Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ）、ボルテックスして完全に混合し、５６℃で１０分間インキュベートした。
３）２００エタノールを加え、ボルテックスして完全に混合した。
４）工程３）のすべての液体を２ｍＬ廃液回収チューブにおけるＤＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ｑｉａｇｅｎ、ＤＮｅａｓｙ（登録商標））  Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ）に加え、６０００ｒｃｆ×１分間で遠心分離し、上清を捨てた。
５）ＤＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎを新しい２ｍＬ廃液回収チューブに入れ、５００μＬのＢｕｆｆｅｒ  ＡＷ１（Ｑｉａｇｅｎ、ＤＮｅａｓｙ（登録商標）  Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ）を加えて、６０００ｒｃｆ×１分間で遠心分離し、上清を捨てた。
６）ＤＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎを新しい２ｍＬ廃液回収チューブに入れ、５００μＬのＢｕｆｆｅｒ  ＡＷ２（Ｑｉａｇｅｎ、ＤＮｅａｓｙ（登録商標）  Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ）を加えて、２００００ｒｃｆ×３分間で遠心分離し、上清を捨てた。
７）ＤＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎを新しい１．５ｍＬのＥＰチューブに入れ、５０μＬのＢｕｆｆｅｒ  ＡＥ（Ｑｉａｇｅｎ、ＤＮｅａｓｙ（登録商標）  Ｂｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｋｉｔ）を吸出して、そのままＤＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎの膜に加え、室温で５分間放置し、６０００ｒｃｆ×１分間遠心分離して膜上のＤＮＡを抽出し、ＤＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎを廃棄し、ＤＮＡ試料を−２０℃で回収した。
【０１３８】
上清ＨＢＶ  ＤＮＡのリアルタイムＰＣＲ検出（Ｂ型肝炎ウイルス核酸定量検出キット、Ｄａａｎ  Ｇｅｎｅ社）
【０１３９】
１）検量線：１ｅ７〜１ｅ４ＩＵ／ｍＬ、１μＬをロードし、ブランクウェルを設置して、反応系が汚染されているか否かを確認した。
２）１μＬのＤＮＡ試料を順番に加えた。
３）酵素と反応緩衝液の添加：最初に２本のチューブにおける反応液に酵素を加え、均一に混合した後に、軽く遠心分離して氷上において、ロード後に酵素反応溶液１９μＬを加え、添加する際にＤＮＡ試料に汚染しないように触れないことを確保した。
４）シールフィルムを取り付け、遠心分離した。
５）ＰＣＲ反応：
第一段階：９３℃、２分間
第二段階：１０サイクル
第１の工程：９３℃、４５秒間
第２の工程：５５℃、１分間
第三段階：４５サイクル
第１の工程：９３℃、３０秒間
第２の工程：５５℃、４５秒間
試料：２０μＬ
検出：第三段階の第２の工程（５５℃、４５秒間）の完了後にデータを収集した。
【０１４０】
２．８  データ処理
実験データをＯｒｉｇｉｎソフトウェアで統計解析し、ＩＣ５０を計算した。
実験結果：
実験結果を表１に示した。
【０１４１】
【表４４】
2020529458.tif 000080
【０１４２】
【表４５】
2020529458.tif 000081
【０１４３】
ＩＣ５０は、実施例の化合物のＨＢＶ  ＤＮＡ複製に対する阻害が半数（５０％）となる濃度である。
【０１４４】
試験結果から分かるように、実施例の化合物のＩＣ５０はいずれも１０μＭ未満であり、細胞レベルでＨＢＶ  ＤＮＡ複製を阻害する高い活性を持ち、かつＨｅｐＧ２．２．１５細胞の増殖に対する毒性が低かった。
【０１４５】
＜試験例２：実施例で製造した化合物のＢ型肝炎ウイルスキャプシドに対する影響＞
非変性アガロースゲル電気泳動
１×１０６個の細胞を分解して、１００μＬの細胞溶解液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０）を加え、氷上で１５分間溶解し、５分ごとにボルテックスして、細胞溶解を確実にした。４℃、１００００×ｇで１０分間遠心して、細胞核と細胞片を除去した。２０μＬの細胞溶解液を取り、１．２％または１．８％アガロースゲルのゲルウェルに加えて、７０Ｖ、４℃で２．５時間電気泳動した。試料は二部作製された。電気泳動後、膜をサイフォンで一晩転写した。一方の試料をニトロセルロース膜（ＡｍｅｒｓｈａｍＴＭ  Ｈｙｂｏｎｄ−ＥＣＬ、ＧＥ）に移し、ウエスタンキャプション法を使用して抗ＨＢｃＡｇ抗体（Ａｂｃａｍ）でキャプシドを検出した。他方の試料を変性液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、０．５Ｍ  ＮａＯＨ）で４５分間のｉｎ  ｓｉｔｕゲル変性し、中和溶液（１．５Ｍ  ＮａＣｌ、１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．４）で４５分間中和し、ナイロン膜（ＡｍｅｒｓｈａｍＴＭ  Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎ＋、ＧＥ）に移し、その後にサザンブロット法によりＨＢＶ特異的プローブでキャプシド内の核酸レベルを検出した。結果を図１に示した。
【０１４６】
図１に示した結果から、化合物Ｉ−１１、Ｉ−２６、Ｉ−１０、Ｉ−９、Ｉ−２４、Ｉ−３、及びＩ−１２は、いずれも、より速い電気泳動移動速度を持つ異常キャプシドの生成を誘導でき、かつキャプシドにおけるＢ型肝炎ウイルスＤＮＡの含有量が大幅に減少し、ウイルスキャプシドのアセンブリを阻害することにより化合物が抗ＨＢＶ活性を発揮したことが確認された。
【０１４７】
＜試験例３：マウスでの実施例で製造した化合物の組織分布＞
１．試料前処理方法
血漿と組織試料を採取した：１０μＬ〜１．５ｍＬの遠心管において、１００μＬの内部標準溶液（５．００ｎｇ／ｍＬベラパミルと５０．０ｎｇ／ｍＬグリベンクラミドアセトニトリル溶液）を加え、６０秒間ボルテックスした後、遠心力１２０００ｒｐｍで３分間遠心した。７５μＬの上清を、等容積の水を含む９６ウェルの試料プレートに移し、振動してから試料をロードして解析し、注入量をいずれも１０μＬにした。
【０１４８】
２．検量線と品質管理試料の準備
内部標準：適切な量のベラパミル及びグリベンクラミド標準物質を正確に量り、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶解及び希釈し、よく振って濃度２０００μｇ／ｍＬのストック溶液を調製し、５．００ｎｇ／ｍＬ及び５０．０ｎｇ／ｍＬの濃度の内部標準作業溶液に希釈した。
【０１４９】
ストック溶液：適切な量の化合物を正確に量り、ＤＭＳＯで２．００ｍｇ／ｍＬのストック溶液を調製した。
【０１５０】
作業溶液：ストック溶液を、各濃度勾配を得るための勾配により希釈された。５．００μＬの参照標準作業溶液を４５．０μＬのブランクラット血漿とブランク組織に加えた。次に、「試料処理方法」の項での説明に従って処理した。
【０１５１】
３．被験物質製剤の調製
投与溶液：一定量の化合物を正確に量り、２．５％ＤＭＳＯ＋９７．５％（０．５％ＭＣ）の比率に従って２．００ｍｇ／ｍＬの乳白色懸濁液を調製した。
【０１５２】
各動物をイソフルランで麻酔した後、眼窩から採取した約０．１ｍＬの血液と肝臓を、ＥＤＴＡＫ２で抗凝固させた。ＰＯ群の採取時点は、被験物質投与の１時間後、３時間後、８時間後であった。血液検体を採取して、分析した。比較化合物Ｉ−７０及びＩ−８８を使用し、結果を以下の表２に示した。
【０１５３】
【化３５】
2020529458.tif 000082
【０１５４】
【化３６】
2020529458.tif 000083
【０１５５】
【表４６】
2020529458.tif 000084
【０１５６】
表２の試験結果から、実施例の化合物は、比較化合物よりもはるかに優れた代謝特性（すなわち、肝臓での代謝安定性）を有した。化合物Ｉ−１０、Ｉ−１１、ＩＶ−５、ＩＶ−１５は、マウスでの良好な肝臓指向性を持ち、安定して存在し、肝臓で濃縮された一方、血漿レベルが低いことがわかった。
【０１５７】
実施例の化合物は、ウイルスＲＮＡのキャプシド化を阻害することにより抗ウイルス活性を発揮し、細胞レベルでＨＢＶ  ＤＮＡ複製を阻害する効果的な活性を有し、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞の増殖に対する毒性が低く、より良好な肝臓指向性を持ち、肝臓に安定して存在し、濃縮され、効果的なＢ型肝炎ウイルス阻害剤である。
【０１５８】
以上、本発明の好適な実施形態について詳細に説明したが、本発明は上記実施形態の特定の詳細に限定されるものではない。本発明の技術的思想の範囲内で、本発明の技術的解決策に対して様々な簡単な変形を行うことができる。当該変形は、いずれも本発明の保護範囲に属する。
【図１】
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【国際調査報告】
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