(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）のＰＥＧ化アミノ酸化合物及び薬学的に許容されるその塩［Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ及びｎは本明細書で定義の通りである。］に関するものである。本発明は、高濃度の生物学的活性成分（ＡＢＩ）と組み合わせて本発明のＰＥＧ化アミノ酸化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、及び薬学的に許容される担体を含む組成物に関するものでもある。本発明の実施形態において、前記ＡＢＩは、ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ−１）に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片である。本発明はさらに、医薬組成物の水溶液の粘度を低下させる方法であって、本発明の化合物を当該溶液に加えることを含む方法に関するものである。本発明は、処置を必要とする対象者に対して、治療上有効量の本発明の医薬組成物を投与することによる、がんのような病的疾患若しくは症状を治療する方法も提供する。    【化１】2020532562.tif 000069
2020532562.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【化１】
2020532562.tif 000061
［式中、
Ｘは、
【化２】
2020532562.tif 000062
であり、
Ｒ１は、Ｈ又はメチルであり；
Ｒ２は、Ｈ又は
【化３】
2020532562.tif 000063
であり、
Ｒ３Ａ及びＲ３Ｂは、それぞれＨであるか、又は、一緒になってオキソを形成し；
Ｒ４Ａ及びＲ４Ｂは、それぞれＨであるか、又は、一緒になってオキソを形成し；
Ｒ５はＨ又はメチルであり；そして、
ｎの各出現は、独立に１〜５であり；そしてここで、
【化４】
2020532562.tif 000064
は、化合物の残りの部分への結合箇所を示す。］
【請求項２】
Ｒ７がＨである、請求項１に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
Ｒ２が
【化５】
2020532562.tif 000065
である、請求項１に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
Ｒ２が
【化６】
2020532562.tif 000066
である、請求項３に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
Ｒ１がメチルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
Ｒ３Ａ及びＲ３ＢがＨである、請求項５に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項７】
Ｒ３Ａ及びＲ３Ｂが一緒になってオキソを形成する、請求項５に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項８】
ｎの各出現が独立に１〜３である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
下記構造を有する請求項１に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【化７】
2020532562.tif 000067
2020532562.tif 000068
【請求項１０】
生物学的活性成分（ＡＢＩ）及び請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物若しくは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物であって、ここで、当該ＡＢＩが、抗体若しくはその抗原結合性断片又は治療用タンパク質である医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＡＢＩが、濃度約５０〜２５０ｍｇ／ｍＬで存在する抗体若しくはその抗原結合性断片である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
約５ｍＭ〜約２０ｍＭの濃度で約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液をさらに含む、請求項１０又は１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
約０．０１％〜約０．０４％重量／体積のノニオン系界面活性剤をさらに含む、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記ノニオン系界面活性剤がポリソルベート８０である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ポリソルベート８０が約０．０２％重量／体積の重量比で存在する、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
安定剤をさらに含む、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記安定剤がショ糖である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記ショ糖が約６％〜約８％重量／体積の重量比で存在する、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記ＡＢＩが、ヒトプログラム死受容体１（ＰＤ−１）に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片である、請求項１０〜１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記抗ＰＤ−１抗体若しくはその抗原結合性断片が、配列番号１、配列番号２及び配列番号３を含む三つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）、及び配列番号６、配列番号７及び配列番号８を含む三つの重鎖ＣＤＲを含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記抗ヒトＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片が、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片が、配列番号５に記載のアミノ酸の配列を含む若しくはそれからなる軽鎖、及び配列番号１０に記載のアミノ酸の配列を含む若しくはそれからなる重鎖を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記ヒトＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片がペンブロリズマブである、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記抗体又はその抗原結合性断片が、１００〜２５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し、そしてここで、前記組成物が１０ｍＭヒスチジン、７％ショ糖及び０．０２％ポリソルベート８０を含む、請求項１１及び１９〜２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記組成物が水溶液である、請求項１０〜２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
第２のＡＢＩをさらに含む、請求項１０〜２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
１００〜２００ｍｇ／ｍＬのペンブロリズマブ、１０ｍＭヒスチジン緩衝液及び請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物若しくは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物。
【請求項２８】
ショ糖及びポリソルベート８０をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
（ａ）約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの濃度でＡＢＩを含む医薬製剤を提供し、ここで、当該製剤は水溶液である；及び
（ｂ）請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物を当該溶液に加える、
ことを含む医薬製剤の粘度を低下させる方法であって、
ここで、当該化合物の添加後の前記医薬製剤の粘度が≦２５ｍＰａ−Ｓである方法。
【請求項３０】
処置を必要とする対象者に対して、治療上有効量の請求項１０〜２８のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、疾患又は病的症状の治療方法。
【請求項３１】
前記医薬組成物が、静脈投与又は皮下投与によって投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
水溶液の医薬組成物の粘度を低下させるための請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物若しくは薬学的に許容されるその塩の使用であって、当該医薬組成物が、約５０〜２５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する生物学的活性成分（ＡＢＩ）を含む使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（Ｉ）の新規なＰＥＧ化アミノ酸及びそれの使用に関するものである。当該化合物は、高濃度の生物学的治療薬を含む製剤の粘度を低下させる賦形剤として有用である。
【０００２】
関連出願の相互参照
本願は、２０１７年９月５日出願の米国暫定特許出願第６２／５５４，１３４号（これの内容は、参照によって全体が本明細書に組み込まれる。）の恩恵を主張するものである。
【０００３】
電子的に提出された配列表の参照
本願の配列表は、ファイル名「２４４９４ＷＯＰＣＴ−ＳＥＱＬＩＳＴ−０７ＡＵＧ２０１８．ＴＸＴ」（作成日２０１８年８月７日、ファイルサイズ３３．１Ｋｂ）のＡＳＣＩＩフォーマット配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して提出されたこの配列表は、本願の一部であり、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
バイオテクノロジーの発達により、多くの治療用の組換えタンパク質及びモノクローナル抗体製品が登場した。商業的に可能な生物製品は多くの場合、特に皮下投与が好ましい送達経路である場合に、高濃度（５０ｍｇ／ｍＬ以上）の生物学的活性成分を含む液体製剤の開発を必要とする。しかしながら、これらの製品の製剤は、十分な安定性の提供、凝集物形成の可能性の克服、及びタンパク質又は抗体に関連する高粘度の克服を含むいくつかの問題を未だに抱えている。Ｓｈｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ９３（６）：１３９０−１４０２（２００４）を参照する。高粘度液体製剤は、製造及び送達に難があることから特に問題である。
【０００５】
製剤成分を変えることによる製剤粘度を管理するいくつかの方法が提案されている。総覧については、Ｊｅｚｅｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｏｆ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ６３：１１０１−１１１７（２０１１）；Ｔｏｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｉｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ；Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｉｇｈ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｄｒｕｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．  ＭＡＢＳ  ８（２）：２１６−２２８（２１１６）を参照する。例えば、ＥＰ２１１６２６５には、粘度を低下させる手段として生理ｐＨ範囲外に製剤ｐＨを変えること、又は製剤に＞１００ｍＭ塩を含めることが提案されている。Ｌｉｕら（ＵＳ２００７／００５３９００）は、他の製剤成分と組み合わせてヒスチジン及び／又はアルギニン−ＨＣｌを用いて、高濃度の抗体を含む製剤の粘度を制御することを提案している。Ｋａｉｓｈｅｖａら（ＵＳ２００３／０１３８４１７）は、高濃度抗体製剤でのコハク酸又はヒスチジン剤及びポリソルベートと組み合わせた、各種の塩又はアミノ酸、特にプロリンから選択される浸透張力調節剤の使用を開示している。Ｂｏｗｅｎら（ＷＯ２０１１／１３９７１８）は、ある種の荷電アミノ酸を含む特定の化合物を生物学的製剤に加えることで粘度を低下させることを提案している。Ｓｏａｎｅら（ＵＳ９，６０５，０５１）は、高濃度治療抗体製剤とともに使用するための粘度低下賦形剤としてのカフェインを開示している。製剤成分による生物学的製剤の溶液粘度のさらなる制御方法が、Ｌａｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  ＷＯ２０１５／０３８８１８、Ｄａｕｔｙ  ｅｔ  ａｌ．、及びＵＳ特許出願公開番号２０１４／００４４７０８に開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】ＥＰ２１１６２６５
【特許文献２】ＵＳ２００７／００５３９００
【特許文献３】ＵＳ２００３／０１３８４１７
【特許文献４】ＷＯ２０１１／１３９７１８
【特許文献５】ＵＳ９，６０５，０５１
【特許文献６】ＷＯ２０１５／０３８８１８
【特許文献７】ＵＳ特許出願公開番号２０１４／００４４７０８
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｓｈｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｉｇｈ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ９３（６）：  １３９０−１４０２  （２００４）
【非特許文献２】Ｊｅｚｅｋ  ｅｔ  ａｌ．  Ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｏｆ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，  ６３：１１０１−１１１７（２０１１）
【非特許文献３】Ｔｏｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｉｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ；Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｉｇｈ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｄｒｕｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．  ＭＡＢＳ  ８（２）：２１６−２２８（２１１６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
生物学的製剤の粘度低下のための上記の製剤成分が提案されているにも拘わらず、高濃度のタンパク質又は抗体を含む溶液の粘度を制御することができる製剤賦形剤及び組成物が現在も必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、生物学的活性成分を含む医薬製剤中で賦形剤として有用な式ＩのＰＥＧ化アミノ酸化合物に関する。詳細には、本発明は、下記式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩を含み：
【化１】
2020532562.tif 000003
【００１０】
式中、
Ｘは、
【化２】
2020532562.tif 000004
であり、
Ｒ１は、Ｈ又はメチルであり；
Ｒ２は、Ｈ又は
【化３】
2020532562.tif 000005
であり、
Ｒ３Ａ及びＲ３Ｂは、それぞれＨであるか、又は一緒になってオキソを形成し；
Ｒ４Ａ及びＲ４Ｂは、それぞれＨであるか、又は一緒になってオキソを形成し；
Ｒ５は、Ｈ又はメチルであり；そして
ｎの各出現は、独立に１〜５であり；
【化４】
2020532562.tif 000006
は、化合物の残りの部分への結合箇所を示す。
【００１１】
式Ｉの化合物は、生物学的活性成分；即ち抗体若しくはその抗原結合性断片又は治療用タンパク質を含む医薬製剤の粘度を低下させる上で有用である。従って、ある種の実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、生物学的活性成分（ＡＢＩ）、及び薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は、１以上の別の賦形剤を含んでいても良い。一部の実施形態において、ＡＢＩは、高濃度、例えば約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬで組成物中に存在する。特定の実施形態において、前記ＡＢＩは、ヒトＰＤ−１に特異的に結合する抗ヒトＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片である。本発明はさらに、処置を必要とする患者への式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩の投与による、又は式Ｉの化合物若しくはそれの塩及び薬学的に許容される担体を含む組成物の投与による、病的疾患若しくは症状の治療方法を含む。
【００１２】
本発明の実施形態、下位実施形態、態様及び特徴は、本明細書においてさらに詳細に記載されるか、下記の記述、実施例及び添付の特許請求の範囲から明らかになろう。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、式（Ｉ）の新規なＰＥＧ化アミノ酸及びそれの使用に関する。当該化合物は、高濃度の生物学的治療薬を含む製剤の粘度を低下させるための賦形剤として有用であり、それについては、以下でより詳細に説明する。
【００１４】
Ｉ．定義及び略称
本明細書及び特許請求の範囲を通じて使用される場合、下記の略称が用いられる。
【００１５】
ＡＢＩ：生物学的活性成分
ＡＰＩ：医薬活性成分
（Ｂｏｃ）２Ｏ：ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート
ＣＤＲ：別段の断りがない限り、カバット番号付けシステムを用いて定義される、免疫グロブリン可変領域における相補性決定領域
ＣＥＬＩＴＥ：珪藻土
ＣＨＯ：チャイニーズハムスター卵巣
ＣＩ：信頼区間
ＣＴＬＡ４：細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｄ２Ｏ：重水
ＤＴＰＡ：ジエチレントリアミン五酢酸
ＥＣ５０：５０％効力又は結合を生じる濃度
ＥＬＩＳＡ：酵素結合免疫吸着検定法
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＦＦＰＥ：ホルマリン固定、パラフィン包埋
ＦＲ：フレームワーク領域
ＨＡＴＵ：（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキサイド・ヘキサフルオロホスフェート）
ＨＲＰ：西洋ワサビペルオキシダーゼ
ＦＩＮＳＣＣ：頭頸部扁平上皮癌
ＩＣ５０：５０％阻害を生じる濃度
ＩｇＧ：免疫グロブリンＧ
ＩＨＣ：免疫組織化学又は免疫組織化学の
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣＭＳとも略される）
ｍＡｂ：モノクローナル抗体
Ｍｅ：メチル
ＭｅＯＨ：メタノール
ＭＥＳ：２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸
ＮＣＢＩ：全米バイオテクノロジー情報センター
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ＮＳＣＬＣ：非小細胞肺がん
ＰＣＲ：ポリメラーゼ連鎖反応
ＰＤ−１：プログラム死１（別名：プログラム細胞死−１及びプログラム死受容体１）
ＰＤ−Ｌ１：プログラム細胞死１リガンド１
ＰＤ−Ｌ２：プログラム細胞死１リガンド２
ＰＥＧ：ポリエチレングリコール
ＰＳ８０：ポリソルベート８０
ＴＥＡ：トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎとも略される）
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＮＢＣ：三種陰性乳がん
ＶＨ：免疫グロブリン重鎖可変領域
ＶＫ：免疫グロブリンκ軽鎖可変領域
ＶＬ：免疫グロブリン軽鎖可変領域
ｖ／ｖ：体積比
ＷＦＩ：注射用水
ｗ／ｖ：重量／体積。
【００１６】
本発明についての理解をより容易にできるようにするため、ある種の技術用語及び科学用語を下記で具体的に定義する。本文書中の別の箇所で具体的に定義されない限り、本明細書で使用される全ての他の技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における通常の技術を有する者によって共通に理解される意味を有するものである。
【００１７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通じて使用される場合、単数形「一つの（ａ）」、「一つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上他の意味が明瞭に示されていない限り、複数の言及を含むものである。
【００１８】
「又は」という場合、それは、文脈上、示された可能性のうちの一つが明瞭に指示されていない限り、どちらか又は両方の可能性を示すものである。場合により、「及び／又は」を用いて、どちらか又は両方の可能性を強調した。
【００１９】
本明細書で使用される場合、「生物学的活性成分」（又は「ＡＢＩ」）は、抗体若しくはその抗原結合性断片、又は治療用タンパク質又はペプチドのいずれかである医薬製剤の有効成分を指す。ＡＢＩは、患者に投与した場合に所望の陽性治療効果、例えば疾患若しくは症状の治療若しくは予防（それには、疾患又は病的症状の進行の停止若しくは遅延、疾患の臨床症状の重度若しくは期間の軽減／短縮、類似の未処置患者における予想生存と比較した患者の生存の延長、及び疾患若しくは症状の完全若しくは部分的緩和の誘発などがある。）を誘発する上で有用な、生物学的医薬製剤の成分である。「医薬活性成分」（又は「ＡＰＩ」）は、抗体及びその抗原結合性断片、タンパク質及び小分子（これらに限定されるものではない）を含む病的疾患若しくは症状を治療若しくは予防する上で有用な、医薬製剤中の有効成分を指す。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「抗体Ｂ」は、高アフィニティのヒト化ＩｇＧ１抗ＩＬ２３ｐ１９モノクローナル抗体である。
【００２１】
「治療する」又は「〜の治療」は、陽性治療効果を誘発するために、患者に本発明の組成物を投与することを意味する。それらの用語は、必ずしも、全ての疾患又は障害症状の完全な消失を示すものではない。がん又は免疫症状「の治療」は、免疫症状若しくはがん症状を有する患者、又はがん若しくは病原性感染（例えば、ウィルス、細菌、真菌）と診断若しくはその素因があるとされた患者に本発明の組成物を投与することで、少なくとも一つの陽性治療効果、例えばがん細胞数の低下、腫瘍サイズの低減、がん細胞の周囲臓器への浸潤速度低下、又は腫瘍転移若しくは腫瘍増殖の速度低下を達成することを指す。「治療」は、次のこと：抗腫瘍免疫応答の誘発／増加、病原体、毒物及び／又は自己抗原に対する免疫応答の刺激、ウィルス感染に対する免疫応答の刺激、１以上の腫瘍マーカーの数の低下、腫瘍細胞の増殖若しくは生存の阻害、１以上のがん病変若しくは腫瘍の消失若しくはサイズ低下、１以上の腫瘍マーカーのレベル低下、がんの改善、重度若しくは期間の軽減／短縮、類似の未処置患者における予想生存と比較した患者の生存の延長の１以上を含み得る。
【００２２】
「免疫症状」又は「免疫障害」は、例えば、病的炎症、及び自己免疫障害若しくは疾患を包含する。「免疫症状」は、感染、持続感染、及び、がん、腫瘍及び血管新生のような増殖症状、例えば免疫系による根絶に抵抗する感染、腫瘍及びがんも指す。「がん症状」には、例えば、がん、がん細胞、腫瘍、血管新生、及び、異形成のような前がん症状を含む。
【００２３】
がんにおける陽性治療効果は、多くの方法で測定することができる（Ｗ．  Ａ．  Ｗｅｂｅｒ，  Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ５０：１Ｓ−１０Ｓ（２００９）を参照）。例えば、腫瘍増殖阻害に関して、ＮＣＩ基準によれば、Ｔ／Ｃ≦４２％が、抗腫瘍活性の最小レベルである。Ｔ／Ｃ＜１０％は、高抗腫瘍活性レベルと考えられ、Ｔ／Ｃ（％）＝処置者腫瘍体積中央値／対照腫瘍体積中央値×１００である。一部の実施形態において、本発明の製剤の投与によって達成される処置は、無進行生存（ＰＦＳ）、無病生存（ＤＦＳ）又は全生存（ＯＳ）のいずれかである。ＰＦＳは、「腫瘍進行までの時間」とも称され、がんが増殖しない処置中及び処置後の時間の長さを示し、患者が完全応答若しくは部分応答を経験した時間、並びに患者が安定な疾患を経験した時間を含む。ＤＦＳは、患者が無疾患の症状である処置中及び処置後の時間の長さを指す。ＯＳは、未経験若しくは未処置の個体若しくは患者と比較した平均余命の延長を指す。本発明の製剤、治療方法及び使用の実施形態は全ての患者において陽性治療効果を達成する上で有効ではない可能性があるが、スチュデントｔ検定、カイ二乗検定、マン・ホイットニーによるＵ検定、クラスカル・ウォリス検定（Ｈ検定）、ヨンクヒール＝タプストラ検定及びウィルコクソン検定のような当業界で公知のいずれかの統計的検定によって決定される統計的に有意な対象者数においてそうあるべきである。
【００２４】
「患者」（別称として、本明細書では「対象者」又は「個体」と称される。）という用語は、本発明の製剤によって治療可能な哺乳動物（例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ）、最も好ましくはヒトを指す。「患者」という用語は、処置を必要とする非ヒト動物、例えば家畜及び飼育動物、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギ、ネコ、イヌ及び他の動物（これらに限定されるものではない）も含み得る。一部の実施形態において、患者は成体患者である。他の実施形態において、患者は小児患者である。「処置を必要とする」患者は、本発明の組成物が治療対象とする疾患若しくは障害と診断された、それを有すると疑われる、若しくはそれに罹患しやすい個体、又は障害の予防が望まれる患者である。
【００２５】
「抗体」という用語は、所望の生理活性を示すいずれかの形態の抗体を指す。従って、それは最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、ヒト化、完全ヒト抗体、及びキメラ抗体を包含するが、これらに限定されるものではない。「親抗体」は、所期の用途のための抗体の修飾、例えばヒト治療抗体として使用するための抗体のヒト化に先立つ抗原への免疫系の曝露によって得られる抗体である。
【００２６】
概して、基本的な抗体構造単位は、四量体を含む。各四量体には、二つの同一のポリペプチド鎖対が含まれ、各対は一つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び一つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識を担う約１００〜１１０又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各軽／重鎖対の可変領域が、抗体結合部位を形成している。従って、一般に、完全な抗体は二つの結合部位を有する。重鎖のカルボキシ末端部分は、主としてエフェクター機能を担う定常領域を規定し得る。典型的には、ヒト軽鎖は、κ軽鎖及びλ軽鎖に分類される。さらに、ヒト重鎖は、典型的にはμ、δ、γ、α又はεに分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして抗体のアイソタイプを規定する。軽鎖内及び重鎖内で、可変領域及び定常領域が、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖は約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．  ７（Ｐａｕｌ，  Ｗ．，  ｅｄ．，  ２ｎｄ  ｅｄ．  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．  Ｙ．（１９８９）を参照する。
【００２７】
典型的には、重鎖及び軽鎖の両方の可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される三つの超可変領域を含み、それらは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内にある。ＣＤＲは、通常、フレームワーク領域によってアラインされて、特異的エピトープに結合することが可能である。一般に、Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖双方の可変ドメインは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割当ては、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｋａｂａｔ，  ｅｔ  ａｌ．；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．；  ５ｔｈ  ｅｄ；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．  Ｎｏ．  ９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ  （１９７８）  Ａｄｖ．  Ｐｒｏｔ．  Ｃｈｅｍ．  ３２：１−７５；  Ｋａｂａｔ，  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａ，  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７、又はＣｈｏｔｈｉａ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３の定義に従っている。
【００２８】
特定の標的タンパク質「に特異的に結合する」抗体とは、他のタンパク質と比較して、その標的に対する優先結合を示す抗体であるが、この特異性は、絶対的な結合特異性を必要としない。その結合が、例えば偽陽性等の不所望の結果もたらすことなく、サンプル中の標的タンパク質の存在の決定因子であるならば、抗体がその所期の標的に「特異的」であると考えられる。本発明に有用な抗体又はその結合断片は、非標的タンパク質との親和性よりも少なくとも２倍、好ましくは少なくとも１０倍、より好ましくは少なくとも２０倍、最も好ましくは少なくとも１００倍大きい親和性で、標的タンパク質に結合する。本明細書で用いられる場合、抗体が所与のアミノ酸配列、例えば成熟ヒトＰＤ−１分子のアミノ酸配列を含むポリペプチドに結合するが、その配列がないタンパク質に結合しない場合に、この配列は、それを含むポリペプチドに特異的に結合すると言える。
【００２９】
「キメラ抗体」とは、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の生物種（例えばヒト）に由来する抗体、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、又はこれに相同である一方で、残りの鎖が、別の生物種（例えばマウス）に由来する抗体、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一である、又はこれに相同である抗体、並びにそのような抗体の断片（これらが所望の生物活性を示す限り）を指す。
【００３０】
「薬学的に有効量」又は「治療上有効量」という用語は、十分な治療組成物又は製剤が患者に導入されて疾患若しくは症状が治療される量を意味する。このレベルが、年齢、体重などの患者の特徴に応じて変動し得ることは、当業者であれば理解するものである。本発明の化合物（即ち、式Ｉの化合物）に関して用いられる場合の「有効量」という用語は、当該化合物を含まない同一製剤と比較して製剤粘度を低下させるのに十分な化合物量を意味する。医薬活性成分又は生物学的活性成分の「有効量」は、細胞、組織、系、動物又はヒトにおいて追求される応答を誘発する上で十分な量を意味する。１実施形態において、有効量は、治療される疾患若しくは症状の症状を緩和する上での「治療上有効量」である。別の実施形態において、有効量は、防がれる疾患若しくは症状の症状を予防する上での「予防上有効量」である。活性化合物（即ち、有効成分）を塩として投与する場合、有効成分の量に言及がある場合、それは、その化合物の遊離酸又は遊離塩基についてのものである。本発明の化合物、即ち式Ｉの化合物を修飾するのに用いられる場合、「有効量」は、所望の機能、例えば溶液粘度の許容される範囲内への低下又は維持を行う上で十分な化合物量が製剤中に存在することを意味する。
【００３１】
物質若しくは組成物の量（例えば、ｍＭ又はＭ）、製剤成分のパーセント（体積比又は重量／体積）、溶液／製剤のｐＨ、又は方法における段階を特徴付けるパラメータの値などを修飾する場合の、「約」という用語は、例えば物質若しくは組成物の製造、特性決定及び／又は使用に関与する典型的な測定手順、取り扱い手順及びサンプリング手順により；これらの手順における不慮のエラーにより；組成物の製造若しくは使用又は手順の実施に用いられる成分の製造、入手元もしくは純度における差によって生じ得る数量における変動を指す。ある種の実施形態において、「約」は、適切な単位の±０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１．０、２．０、３．０、４．０、又は５．０の変動を意味し得る。ある種の実施形態において、「約」は、±０．１％、０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、又は１０％の変動を意味し得る。
【００３２】
「がん」、「がん性の」、又は「悪性腫瘍」という用語は、典型的には、調節不能な細胞増殖によって特徴付けられる、哺乳類の生理学的状態を指し、又は説明する。がんの例として、癌腫、リンパ腫、白血病、芽腫及び肉腫を含み、これらに限定されない。そのようながんのより特定の例には、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、消化器（管）がん、腎臓がん、卵巣がん、肝がん、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、結腸直腸がん、子宮体がん、腎臓がん、前立腺がん、甲状腺がん、黒色腫、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵がん、多形神経膠芽腫、子宮頸がん、脳がん、胃がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸癌及び頭頚部がんを含む。
【００３３】
「Ｃｈｏｔｈｉａ」は、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＪＭＢ  ２７３：９２７−９４８（１９９７）に記載の抗体番号付けシステムを意味する。
【００３４】
本明細書で使用される「Ｋａｂａｔ」は、Ｅｌｖｉｎ  Ａ．  Ｋａｂａｔ（（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．）によって開発された免疫グロブリンアラインメント及び番号付けシステムを意味する。
【００３５】
「ＰＤ−１結合性断片」、「その抗原結合性断片」、「その結合性断片」又は「その断片」という用語は、抗原（ヒトＰＤ−１）に結合しその活性を抑制する（例えば、ＰＤＬ１及びＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を遮断する）その生物活性を実質的になおも保有する、抗体の断片又は誘導体を含む。従って、「抗体断片」又はＰＤ−１結合性断片という用語は、完全長抗体の一部分、一般には、その抗原結合性又は可変領域を意味する。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２及びＦｖ断片；ジアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子、例えばｓｃ−Ｆｖ；並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体などがある。典型的には、結合性断片又は誘導体はそのＰＤ−１抑制活性の少なくとも１０％を保有する。所望の生物学的効果を発揮するのに十分なアフィニティを有するいずれの結合性断片も有用であるが、好ましくは、結合性断片又は誘導体はそのＰＤ−１抑制活性の少なくとも２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％（又はそれ以上）を保有する。一部の実施形態において、抗原結合性断片は、関連のない抗原とのアフィニティの少なくとも２倍、好ましくは少なくとも１０倍、より好ましくは少なくとも２０倍、最も好ましくは少なくとも１００倍のアフィニティでそれの抗原に結合する。１実施形態において、抗体は、例えばスキャチャード解析によって測定される、約１０９リットル／ｍｏｌより大きいアフィニティを有する（Ｍｕｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８０）  Ａｎａｌｙｔ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ.  １０７：２２０−２３９）。ＰＤ−１結合性断片は、その生物活性を実質的に改変しない保存的アミノ酸置換を有する変異体を含み得るものでもある。
【００３６】
「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を指す。ヒト抗体は、マウスで、マウス細胞で又はマウス細胞由来のハイブリドーマで産生される場合、マウス炭水化物鎖を含み得る。同様に、「マウス抗体」又は「ラット抗体」は、それぞれマウス又はラット免疫グロブリン配列を含む抗体を指す。
【００３７】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト（例えば、マウス）抗体及びヒト抗体からの配列を含有する抗体の形態を意味する。そのような抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有する。一般に、該ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、そして、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、所望により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部分を含む。アフィニティを増加させるため、ヒト化抗体の安定性を増強するため又は他の理由により、あるアミノ酸置換が含まれ得るが、齧歯類抗体のヒト化形態は、一般に、該親齧歯類抗体の同一ＣＤＲ配列を含む。
【００３８】
本発明の組成物で有用な抗体には、エフェクター機能の改変をもたらすために修飾された（又は遮蔽された）Ｆｃ領域を有する抗体も含まれる。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、ＷＯ  ２００３／０８６３１０、ＷＯ  ２００５／１２０５７１、ＷＯ  ２００６／００５７７０２、Ｐｒｅｓｔａ（２００６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．５８：６４０−６５６を参照する。そのような修飾は、診断及び療法における可能な有益な効果を伴って免疫系の種々の反応を増強又は抑制するために用いられうる。Ｆｃ領域の改変には、アミノ酸変化（置換、欠失及び挿入）、グリコシル化又は脱グリコシル化及び複数のＦｃの付加が含まれる。該Ｆｃに対する改変は治療用抗体における抗体の半減期をも変化させ、より長い半減期はより低頻度の投与につながり、それに伴い、簡便さの向上及び物質の使用量の減少をもたらすであろう。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１（７３４−３５）を参照する。
【００３９】
「完全ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は、マウスにおいて、又はマウス細胞において、又はマウス細胞由来のハイブリドーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「マウス抗体」は、マウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は、ヒトにおいて、ヒト免疫グロブリン生殖系列配列を有するトランスジェニック動物において、ファージディスプレイ若しくは他の分子生物学的方法により産生されうる。
【００４０】
「超可変領域」は、抗原結合をもたらす抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は、「相補性決定領域」、即ち「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基、例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．）によって測定される軽鎖可変ドメイン内の残基２４〜３４（ＣＤＲＬ１）、５０〜５６（ＣＤＲＬ２）及び８９〜９７（ＣＤＲＬ３）並びに重鎖可変ドメイン内の残基３１〜３５（ＣＤＲＨ１）、５０〜６５（ＣＤＲＨ２）及び９５〜１０２（ＣＤＲＨ３））、並びに／又は、「超可変ループ」からの残基（即ち、軽鎖可変ドメイン内の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）及び９１〜９６（Ｌ３）並びに重鎖可変ドメイン内の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）及び９６〜１０１（Ｈ３）（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７））を含む。本明細書中で用いる「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基という用語は、本明細書中でＣＤＲ残基として定められた超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。ＣＤＲ及びＦＲ残基は、Ｋａｂａｔの標準配列定義に従って決定される（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．）。
【００４１】
「保存的修飾変異体」又は「保存的置換」は、当業者に公知のアミノ酸置換を意味し、生じる分子の生理活性を変えるすることなく該ポリペプチドの必須領域であっても作ることができる。そのような典型的な置換は、好ましくは、下記のように表１に記載のものに従って行うことができる。
【００４２】
表１：保存的アミノ酸置換の例
【表１】
2020532562.tif 000007
【００４３】
また、概して、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸の置換が生理活性を実質的に変えないことは当業者には認識されている。例えば、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８７）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．  Ｃｏ．，  ｐ．２２４（４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）を参照する。
【００４４】
本明細書及び特許請求の範囲を通じて用いられる、「からなる」という用語又はその変形型、例えば「から実質的になる」若しくは「から実質的になり」は、任意の列挙されている要素又は要素群の包含、及び特定されている投与計画、方法又は組成物の基本的又は新規特性を実質的に変化させない、列挙されている要素と類似した又は異なる性質の他の要素の随意的包含を示す。非限定的な例としては、列挙されているアミノ酸配列から実質的になる結合性化合物は、該結合性化合物の特性に実質的に影響を及ぼさない１以上のアミノ酸残基の置換を含む、１以上のアミノ酸をも含みうる。
【００４５】
「を含む」、又は、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」又は「からなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ  ｏｆ）」のような変形型は、本明細書及び特許請求の範囲を通じて、包括的に、即ち、言及されている特徴の存在を明記するが、文脈により、表現言語又は必要な示唆のために他の形でのものが必要とされない限り、本発明の実施形態のいずれかの実施又は使用を実質的に促進し得る別の特徴の存在又は付加を排除しないように使用される。
【００４６】
「単離抗体」及び「単離抗体断片」とは、精製状態を指し、そのような文脈において、名付けられた分子は、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、又は他の材料、例えば細胞残留物及び増殖培地のような他の生体分子が実質的にないことを意味する。通常、「単離〜」という用語は、本明細書中に記載される結合化合物の実験上の使用又は治療上の使用を実質的に妨害する量で存在しない限り、そのような材料の完全な不在、又は水、緩衝液、若しくは塩の不在を指すものではない。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」、「ｍＡｂ」又は「Ｍａｂ」とは、実質的に均質な抗体の集団を指し、即ち、その集団を構成する抗体分子は、微かに存在する可能性がある自然突然変異を除いて、アミノ酸配列が同一である。対照的に、従来の（ポリクローナル）抗体の調製物は、典型的には、可変ドメイン、特にＣＤＲ中に様々なアミノ酸配列を有する多数の様々な抗体を含んでおり、これらは多くの場合、様々なエピトープに対して特異的である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体集団から得られることとなる抗体の特性を示しており、特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、本発明に従って用いることができるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  （１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５が最初に記載したハイブリドーマ法によって作出してもよく、又は、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）によって作出してもよい。「モノクローナル抗体」はまた、例えばＣｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８及びＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：５８１−５９７に記載される技術を用いて、ファージ抗体ライブラリから単離してもよい。Ｐｒｅｓｔａ  （２００５）  Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１６：７３１も参照する。
【００４８】
「腫瘍」とは、任意のサイズの悪性の、若しくは潜在的に悪性の新生物、又は組織腫瘤を指し、そして原発腫瘍及び続発性新生物を含む。固形腫瘍とは、通常、嚢胞即ち液体領域を含有しない組織の異常増殖又は腫瘤である。異なる形態の固形腫瘍が、それを形成する細胞の種類から名付けられている。固形腫瘍の例としては、肉腫、癌腫及びリンパ腫である。白血病（血液のがん）は、一般に、固形腫瘍を形成しない（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｅｒｍｓ）。
【００４９】
本明細書で用いられる場合、「可変領域」又は「Ｖ領域」とは、異なる抗体間で配列が変異しているＩｇＧ鎖のセグメントを意味する。このセグメントは、軽鎖においてＫａｂａｔ残基１０９にまで、そして重鎖において１１３にまで及ぶ。
【００５０】
「バッファー」という用語は、本発明の製剤の溶液ｐＨを許容される範囲に維持するか、本発明の凍結乾燥製剤の場合、凍結乾燥前に許容される溶液ｐＨを提供する物質を包含する。
【００５１】
「医薬製剤」という用語は、有効成分を有効にしうる形態であり、該製剤が投与されると考えられる対象に対して有毒な追加的成分を全く含有しない製剤を指す。
【００５２】
「薬学的に許容される」は、使用される有効成分の有効用量を提供するために対象者に合理的に投与され得る賦形剤（媒体、添加剤）及び組成物であって、「一般に安全と見なされる」もの、例えばヒトに投与した場合に、生理的に耐容性であり、異常亢進などのアレルギー性又は類似の有害反応を通常は生じないものを指す。別の実施形態において、この用語は、連邦政府又は州政府の規制当局によって承認されているか、米国薬局方又は動物及び詳細にはヒトでの使用に関する別の一般に認められている薬局方に挙げられている分子体及び組成物を指す。
【００５３】
「安定」製剤は、それに含まれるＡＰＩが貯蔵に際してその物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生物活性を実質的に保有するような製剤である。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技術が当技術分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  ２４７−３０１，  Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ  Ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．，  Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ，  Ａ．  Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．  １０：２９−９０（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された温度で選択された時間にわたって測定されうる。
【００５４】
「安定」な医薬抗体製剤は、冷凍温度（２〜８℃）で少なくとも３か月間、好ましくは６か月間、より好ましくは１年間、より一層好ましくは２年間までにわたって観察される有意な変化を伴わない医薬抗体製剤である。さらに、「安定」な液体製剤には、２５℃及び４０℃を含む温度で、１か月間、３か月間、６か月間、１２か月間及び／又は２４か月間を含む期間にわたって所望の特徴を示すものが含まれる。安定性に関する典型的な許容される基準は以下のとおりである。ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより測定された場合に、典型的に、抗体単量体の約１０％以下、好ましくは約５％以下が分解する。該医薬抗体製剤は、視覚的分析により、無色、又は透明ないし微かにオパール色である。該製剤の濃度、ｐＨ及び浸透圧重量モル濃度は＋／−１０％以下の変化を有する。効力は、典型的に、参照体の５０〜１５０％の範囲内である。典型的に、約１０％以下、好ましくは約５％以下のクリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）が観察される。典型的に、約１０％以下、好ましくは約５％以下の凝集が生じる。
【００５５】
医薬製剤において抗体が「その物理的安定性を保有する」のは、それが、色及び／又は透明度の目視検査、或いはＵＶ光散乱、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）及び動的光散乱の際に、凝集、沈殿及び／又は変性の有意な増加を示さない場合である。タンパク質コンホメーションの変化は、タンパク質の三次元構造を決定する蛍光分光法により、及びタンパク質の二次構造を決定するＦＴＩＲ分光法により評価されうる。
【００５６】
医薬製剤において抗体が「その化学的安定性を保有する」のは、それが有意な化学的変化を示さない場合である。化学的安定性は、化学的に変化した形態のタンパク質を検出し定量することにより評価されうる。タンパク質の化学構造をしばしば改変する分解過程は、加水分解又はクリッピング（サイズ排除クロマトグラフィー及びＳＤＳ−ＰＡＧＥのような方法により評価される）、酸化（質量分析又はＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳと組み合わされたペプチドマッピングのような方法により評価される）、脱アミド化（イオン交換クロマトグラフィー、毛管等電点フォーカシング、ペプチドマッピング、イソアスパラギン酸測定のような方法により評価される）及び異性化（イソアスパラギン酸含量の測定、ペプチドマッピングなどにより評価される）を含む。
【００５７】
医薬製剤において抗体が「その生物活性を保有する」のは、ある時点における該抗体の生物活性が、該医薬製剤が製造された時点で示した生物活性の所定範囲内である場合である。抗体の生物活性は、例えば、抗原結合アッセイにより決定されうる。
【００５８】
本発明の１実施形態は、最初に定義の、又は前記実施形態、下位実施形態、態様、クラス又は下位クラスのいずれかで定義の式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩であり、ここで、その化合物又はその塩は、実質的に純粋型のものである。本明細書で使用される場合、「実質的に純粋な」は、好適には少なくとも約６０重量％、典型的には少なくとも約７０重量％、好ましくは少なくとも約８０重量％、より好ましくは少なくとも約９０重量％（例えば、約９０重量％〜約９９重量％）、さらにより好ましくは少なくとも約９５重量％（例えば、約９５重量％〜約９９重量％、又は約９８重量％〜１００重量％）、最も好ましくは少なくとも約９９重量％（例えば、１００重量％）の式Ｉの化合物若しくはその塩を含む生成物（例えば、当該化合物又は塩を与える反応混合物から単離された生成物）が当該化合物又は塩からなることを意味する。当該化合物及び塩の純度のレベルは、標準的な分析方法、例えば薄層クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィー、及び／又は質量分析を用いて求めることができる。１を超える分析方法を用い、それらの方法が測定される純度レベルにおいて実験的に有意な差を提供する場合、最も高いレベルの純度を提供する方法が優先される。１００％純度の化合物又は塩は、標準的な分析方法によって求められる検出可能な不純物を含まないものである。
【００５９】
１以上の不斉中心を有し、立体異性体の混合物として得られる可能性がある本発明の化合物に関して、実質的に純粋な化合物は、別段で明瞭に描かれていない限り、立体異性体の実質的に純粋な混合物又は実質的に純粋な個々のジアステレオマー若しくはエナンチオマーであることができる。本発明は、式Ｉの化合物の全ての立体異性体型を包含するものである。具体的な立体化学が示されていない限り、本発明は、これら化合物のそのような全ての異性体型を包含することを意図する。式Ｉの化合物に存在する不斉中心は、全てが互いに独立に、（Ｒ）配置又は（Ｓ）配置を有することができる。キラル炭素への結合が本発明の構造式中で直線として描かれている場合、キラル炭素の（Ｒ）配置及び（Ｓ）配置の両方、従って、両方のエナンチオマー及びそれらの混合物がその式に包含されることは理解される。同様に、キラル炭素についてのキラル指定なしに化合物名が記載されている場合、キラル炭素の（Ｒ）配置及び（Ｓ）配置の両方、従って、個々のエナンチオマー及びそれらの混合物がその名称によって包含されることが理解される。具体的な立体異性体又はそれの混合物の製造は実施例で特定され、その場合に、そのような立体異性体又は混合物が得られたが、それは、全ての立体異性体及びそれの混合物が本発明の範囲に含まれることをいかなる形でも制限するものではない。
【００６０】
本発明は、全ての可能なエナンチオマー及びジアステレオマー及び２以上の立体異性体の混合物、例えばあらゆる比率でのエナンチオマー及び／又はジアステレオマーの混合物を含む。従って、エナンチオマーは、左旋性対掌体及び右旋性対掌体の両方としてのエナンチオマー的に純粋な形で、ラセミ体の形で、及びあらゆる比率での二つのエナンチオマーの混合物の形で本発明の主題である。シス／トランス異性の場合、本発明はシス型及びトランス型並びに全ての比率でのこれらの型の混合物を含む。個々の立体異性体の製造は、所望に応じて、一般的方法による混合物の分離によって、例えばクロマトグラフィー又は結晶化によって、合成のための立体化学的に均一な出発材料の使用によって、又は立体選択的合成によって行うことができる。適宜に、立体異性体の分離前に誘導体化を行うことができる。立体異性体の混合物の分離は、式Ｉの化合物の合成時の中間段階で行うことができ、又はそれを最終ラセミ生成物で行うことができる。絶対立体化学は、必要に応じて、既知の立体配置の立体中心を含む試薬で誘導体化される結晶性生成物又は結晶性中間体のＸ線結晶構造解析によって決定することができる。そのようなラセミ体、エナンチオマー、又はジアステレオマーの特定の異性体、塩、溶媒和物（水和物など）又は溶媒和塩が示されていなければ、本発明は、そのような全ての異性体、並びにそのようなラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー及びそれらの混合物の塩、溶媒和物（水和物を含む）及び溶媒和塩を含む。
【００６１】
「オキソ」は、二重結合によって別の原子に連結されている酸素原子を意味し、「＝Ｏ」と表すことができる。
【００６２】
何らかの可変要素（例えば、ｎ）がいずれかの構成要素又は式Ｉで複数ある場合、各出現についてのそれの定義は、全ての他の出現でのそれの定義から独立である。さらに、置換基及び／又は可変要素の組み合わせは、そのような組み合わせによって安定な化合物となる場合にのみ可能である。
【００６３】
本明細書で使用される場合、波線：
【化５】
2020532562.tif 000008
は、その化合物の残り部分への結合箇所を示す。
【００６４】
本開示を通じて使用される標準的な命名法下では、指定の側鎖の末端部分が最後に記載され、その前に結合箇所に向かって隣接する官能基が記載される。
【００６５】
本発明の化合物を選択するに当たり、各種置換基、即ちＲ１、Ｒ２などを、化学構造の連結性及び安定性の公知の原理と一致するように選択すべきであることは、当業者には明らかであろう。
【００６６】
異なることが明瞭に記載されていない限り、本明細書で引用される範囲はいずれも包括的である。例えば、式Ｉにおいて、「ｎは１〜５である。」は、ｎが１、２、３、４又は５であることができることを意味する。やはり理解すべき点として、本明細書で引用のいずれの範囲も、その範囲内の全ての下位範囲をそれの範囲に包含する。従って、例えば、「ｎは１〜５である。」は、それの態様として、ｎが１〜４である、ｎが１〜３である、ｎが１又は２である、ｎが２〜５である、ｎが２〜４である、及びｎが２又は３である、を含む。
【００６７】
「安定な」化合物は、製造および単離が可能であり、それの構造および特性がそのままであるか、本明細書に記載の目的（例えば、対象者への治療的投与）のための当該化合物の使用を可能とするだけの期間にわたって本質的に変化しないままとすることができる化合物である。本発明の化合物は、式Ｉによって包含される安定な化合物に限定される。
【００６８】
「化合物」という用語は、ある種の実施形態において、それが安定である限りにおいて、それの水和物又は溶媒和物を指す。水和物は水と錯形成した化合物であり、溶媒和物は有機溶媒と錯形成した化合物である。
【００６９】
上記で示したように、本発明の化合物は、薬学的に許容される塩の形態で用いることができる。当業者には、本発明の化合物が塩を形成し得る場合は明らかであろう。「薬学的に許容される塩」という用語は、親化合物に類似の有効性を保有し、生物学的又は他の点で望ましくないものではない（例えば、その被投与者にとって有毒でもなく、他の点でも有害でない）塩（両性イオンのような内部塩を含む）を指す。従って、本発明の１実施形態は、本発明の化合物の薬学的に許容される塩を提供する。本明細書で用いられる場合、「塩」という用語は、次のもの：無機及び／又は有機酸と形成された酸性塩、並びに無機及び／又は有機塩基と形成された塩基性塩のいずれかを示す。本発明の化合物の塩は、当業者には公知の方法によって、例えば、媒体中、例えば塩が沈殿する媒体中、又は水系媒体中、ある量の、例えば当量の酸若しくは塩基と本発明の化合物を反応させ、次に凍結乾燥することで形成することができる。そのような酸塩及び塩基塩は全て、本発明の範囲内の薬学的に許容される塩であり、全ての酸塩及び塩基塩は、本発明の目的に関して対応する化合物の遊離型と等価であると考えられる。
【００７０】
本明細書で記載のように、本発明は、式Ｉの化合物、生物学的活性成分、適宜に１以上の他の活性成分（例えば、第２のＡＢＩ若しくはＡＰＩ）、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を含む。担体の特徴は、投与経路によって決まる。「薬学的に許容される」は、医薬組成物の成分が互いに適合性でなければならず、有効成分の有効性を障害せず、その被投与者に有害（例えば、有毒）はないことを意味する。従って、本発明による組成物は、阻害剤に加えて、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、及び当業界で公知の他の材料を含むことができる。
【００７１】
本発明の組成物の投与は、好適には非経口であることができ、ここで、当該組成物は、好適には当業界で公知の製剤方法、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ−Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ,  ２１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ,  ２００６の３９、４１、４２、４４及び４５章に記載の製剤の調製及び投与方法を用いる特定の経路により投与用に製剤される。１実施形態において、本発明の化合物は、病院環境で静脈投与される。別の実施形態では、投与は皮下である。
【００７２】
ＩＩ．本発明の化合物：
本発明の化合物（即ち、式Ｉの化合物）は、製剤の粘度を低下させるため、生物学的活性成分（即ち、抗体又はその抗原結合性断片）を含む医薬製剤、特には高濃度の生物学的活性成分を含む製剤中の賦形剤として有用である。高濃度ＡＢＩ及び本発明の化合物を含む組成物は、処置を必要とする患者に対して、静脈投与又は皮下投与を介して投与されることができる。
【００７３】
本明細書に記載の本発明の化合物の各種実施形態のそれぞれにおいて、式Ｉ、及びそれの各種実施形態の可変要素などの各可変要素は、別段の断りがない限り、他の可変要素から独立に選択される。
【００７４】
本発明は、別段の断りがない限り、本明細書に記載の本発明の化合物の各種実施形態、例えば式Ｉの化合物及びそれの各種実施形態及び実施例の化合物のそれぞれについて、その化合物の全ての形態、例えば当該化合物及び薬学的に許容されるその塩の溶媒和物、水和物、立体異性体及び互変異体を包含する。さらに、本明細書に記載の実施例において、本発明の化合物は、塩の形で描かれる場合がある。そのような場合、理解すべき点として、本発明の化合物は、そのような塩の遊離酸型若しくは遊離塩基型、及び任意の前記遊離酸型若しくは遊離塩基型の薬学的に許容される塩を含む。
【００７５】
１態様において、本発明は、下記式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩を含み：
【化６】
2020532562.tif 000009
【００７６】
式中、
Ｘ、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３Ａ、及びＲ３Ｂは、式（Ｉ）の化合物について本明細書で定義の通りであり（即ち、「発明を解決するための手段」で定義の通りである）；ここで、当該化合物は、溶液の全体的な粘度を低下させるため、液体医薬製剤中の賦形剤としての使用に好適であり得る。
【００７７】
本発明の第１の実施形態（実施形態Ｅ１）は、Ｘ、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３Ａ；及びＲ３Ｂが「発明を解決するための手段」で式（Ｉ）において定義の通りである式Ｉの化合物、又は薬学的に許容されるその塩である。
【００７８】
第２の実施形態（実施形態Ｅ２）は、Ｘが
【化７】
2020532562.tif 000010
【００７９】
であり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００８０】
第３の実施形態（実施形態Ｅ３）は、Ｘが
【化８】
2020532562.tif 000011
【００８１】
であり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００８２】
第４の実施形態（実施形態Ｅ４）は、Ｘが
【化９】
2020532562.tif 000012
【００８３】
であり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００８４】
第５の実施形態（実施形態Ｅ５）は、Ｘが
【化１０】
2020532562.tif 000013
【００８５】
であり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００８６】
第６の実施形態（実施形態Ｅ６）は、Ｘが
【化１１】
2020532562.tif 000014
【００８７】
であり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００８８】
第７の実施形態（実施形態Ｅ７）は、Ｘが実施形態Ｅ２〜Ｅ６のいずれかで定義されており、Ｒ１がＨであり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００８９】
実施形態（実施形態Ｅ８）は、Ｘが実施形態Ｅ２〜Ｅ６のいずれかで定義されており、Ｒ１がメチルであり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００９０】
第９の実施形態（実施形態Ｅ９）は、Ｘが実施形態Ｅ２〜Ｅ６のいずれかで定義されており、Ｒ１が実施形態Ｅ７〜Ｅ８のいずれかで定義されており、Ｒ２がＨであり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００９１】
第１０の実施形態（実施形態Ｅ１０）は、Ｘが実施形態Ｅ２〜Ｅ６のいずれかで定義されており、Ｒ１が実施形態Ｅ７〜Ｅ８のいずれかで定義されており、Ｒ２が
【化１２】
2020532562.tif 000015
【００９２】
であり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００９３】
第１１の実施形態（実施形態Ｅ１１）は、Ｘが実施形態Ｅ２〜Ｅ６のいずれかで定義されており、Ｒ１が実施形態Ｅ７〜Ｅ８のいずれかで定義されており、Ｒ２が
【化１３】
2020532562.tif 000016
【００９４】
であり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【００９５】
実施形態Ｅ１１の下位実施形態において、Ｒ２は
【化１４】
2020532562.tif 000017
である。
【００９６】
実施形態Ｅ１１の別の下位実施形態において、Ｒ２は
【化１５】
2020532562.tif 000018
である。
【００９７】
実施形態Ｅ１１の別の下位実施形態において、Ｒ２は
【化１６】
2020532562.tif 000019
である。
【００９８】
第１２の実施形態（実施形態Ｅ１２）は、Ｘが実施形態Ｅ２〜Ｅ６のいずれかで定義されており、Ｒ１が実施形態Ｅ７〜Ｅ８のいずれかで定義されており、Ｒ２が
【化１７】
2020532562.tif 000020
【００９９】
であり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【０１００】
実施形態Ｅ１２の下位実施形態において、Ｒ２は
【化１８】
2020532562.tif 000021
である。
【０１０１】
実施形態Ｅ１２の別の下位実施形態において、Ｒ２は
【化１９】
2020532562.tif 000022
である。
【０１０２】
実施形態Ｅ１０〜Ｅ１２の下位実施形態において、Ｒ２におけるｎは１である。実施形態Ｅ１０〜Ｅ１２の別の下位実施形態において、Ｒ２におけるｎは２である。実施形態Ｅ１０〜Ｅ１２の別の下位実施形態において、Ｒ２におけるｎは３である。実施形態Ｅ１０〜Ｅ１２のさらに他の下位実施形態において、Ｒ２におけるｎは４である。実施形態Ｅ１０〜Ｅ１２のさらに別の下位実施形態において、Ｒ２におけるｎは５である。実施形態Ｅ１０〜Ｅ１２の他の下位実施形態において、Ｒ２におけるｎは、１〜４、１〜３又は１〜２である。
【０１０３】
第１３の実施形態（実施形態Ｅ１３）は、Ｘが実施形態Ｅ２〜Ｅ６のいずれかで定義されており、Ｒ１が実施形態Ｅ７〜Ｅ８のいずれかで定義されており、Ｒ２が実施形態Ｅ９〜Ｅ１２のいずれかで定義されており、Ｒ３Ａ及びＲ３ＢがそれぞれＨであり、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【０１０４】
第１４の実施形態（実施形態Ｅ１４）は、Ｘが実施形態Ｅ２〜Ｅ６のいずれかで定義されており、Ｒ１が実施形態Ｅ７〜Ｅ８のいずれかで定義されており、Ｒ２が実施形態Ｅ９〜Ｅ１３のいずれかで定義されており、Ｒ３Ａ及びＲ３Ｂが一緒になってオキソを形成しており、そして、他の全ての可変要素が実施形態Ｅ１で定義の通りである、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩である。
【０１０５】
本発明の第１５の実施形態（実施形態Ｅ１５）は、下記の構造：
【化２０】
2020532562.tif 000023
2020532562.tif 000024
【０１０６】
を有するか、その構造からなる式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩である。
【０１０７】
本発明の他の実施形態には、下記を含む。
【０１０８】
（ａ）有効量の生物学的活性成分、上記で定義の式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【０１０９】
（ｂ）有効量の第２の生物学的活性成分又は医薬活性成分をさらに含む、（ａ）の医薬組成物。
【０１１０】
（ｃ）前記ＡＢＩが、抗体又はその抗原結合性断片である（ａ）の医薬組成物。
【０１１１】
（ｄ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＴＩＧＩＴ、ＩＬＴ２、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＩＬＴ５、ＳＩＲＰα、ＫＧ２Ａ、ＫＧ２Ｃ、ＫＧ２Ｅ、ＴＳＬＰ、ＩＬ１０、ＶＩＳＴＡ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、他の増殖因子受容体、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ−４０Ｌ、ＣＤ７０、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ、及びＩＣＯＳからなる群から選択される抗原に特異的に結合する、（ｃ）の医薬組成物。
【０１１２】
（ｅ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、及びＴＩＧＩＴからなる群から選択される抗原に特異的に結合する、（ｄ）の医薬組成物。
【０１１３】
（ｆ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する、（ｃ）の医薬組成物。
【０１１４】
（ｇ）ＡＢＩが、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ又はデュルバルマブである、（ｆ）の医薬組成物。
【０１１５】
（ｈ）前記抗体又はその抗原結合性断片が、ＰＤ−１に特異的に結合する、（ｃ）の医薬組成物。
【０１１６】
（ｉ）前記ＡＢＩがペンブロリズマブである、（ａ）の医薬組成物。
【０１１７】
（ｊ）第２のＡＢＩをさらに含み、ここで、第２のＡＢＩが、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７及びＴＩＧＩＴからなる群から選択される抗原に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片である、（ｆ）、（ｇ）又は（ｈ）の医薬組成物。
【０１１８】
（ｋ）疾患又は他の病的症状の治療方法であって、そのような治療を必要とする対象者に対して、有効量の上記で定義の式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、及び治療上有効量のＡＢＩを含む組成物を投与することを含む治療方法。
【０１１９】
（ｌ）がん性症状の治療方法であって、そのような治療を必要とする対象者に対して、治療上有効量のＡＢＩと組み合わせて有効量の上記で定義の式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩を投与することを含む方法。
【０１２０】
（ｍ）疾患又は他の病的症状の治療方法であって、そのような治療を必要とする対象者に対して、治療上有効量の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、又は（ｊ）の医薬組成物を投与することを含む方法。
【０１２１】
（ｎ）がん性症状の治療方法であって、そのような治療を必要とする対象者に対して、治療上有効量の（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）又は（ｊ）の医薬組成物を投与することを含む方法。
【０１２２】
（ｑ）（ｌ）又は（ｎ）に記載のがん性症状の治療方法であって、ここで、がんが、メラノーマ、肺がん、頭頸部がん、膀胱がん、乳がん、消化管がん、多発性骨髄腫、肝細胞がん、リンパ腫、腎臓がん、中皮腫、卵巣がん、食道がん、肛門がん、胆道がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、甲状腺がん、唾液腺がん、前立腺がん（例えば、ホルモン抵抗性前立腺腺癌）、膵臓がん、結腸がん、食道がん、肝臓がん、甲状腺がん、膠芽細胞腫、神経膠腫、及び他の新生物性悪性腫瘍からなる群から選択される方法。
【０１２３】
本発明は、生物学的製剤（即ち、ＡＢＩを含む製剤）の粘度を低下させるのに使用される、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩も含む。
【０１２４】
本発明はさらに、（ｉ）癌治療で使用される、（ｉｉ）癌治療のための医薬として使用される、又は（ｉｉｉ）癌治療のための医薬の調製（又は製造）で使用される、式Ｉの化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、及び（ａ）抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片、（ｂ）抗ＰＤＬ１抗体又はその抗原結合性断片、（ｃ）抗ＰＤＬ２抗体又はその抗原結合性断片、（ｄ）抗Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ抗体又はその抗原結合性断片、（ｅ）抗ＯＸ４０抗体又はその抗原結合性断片、（ｅ）抗４−１ＢＢ抗体又はその抗原結合性断片、（ｆ）抗ＣＴＬＡ４抗体又はその抗原結合性断片、（ｇ）抗ＬＡＧ３抗体又はその抗原結合性断片、（ｈ）抗ＧＩＴＲ抗体又はその抗原結合性断片、（ｉ）抗ＣＤ２７抗体又はその抗原結合性断片、及び（ｊ）抗ＴＩＧＩＴ抗体又はその抗原結合性断片から選択されるＡＢＩを含む医薬製剤を含む。これらの使用において、本発明の化合物は、１以上の追加の治療剤と組み合わせて用いても良い。
【０１２５】
本発明の化合物及び塩の実施形態において、理解すべき点として、組み合わせが安定な化合物若しくは塩を提供し、当該実施形態の記述と一致する程度に、各実施形態を１以上の他の実施形態と組み合わせることができる。さらに理解すべき点として、上記の（ａ）から（ｇ）として提供される組成物及び方法の実施形態は、実施形態の組み合わせの結果としてのそのような実施形態を含む、化合物及び／又は塩の全ての実施形態を包含するものと理解される。
【０１２６】
本発明の別の実施形態は、使用される本発明の化合物が、上記で記載の実施形態、下位実施形態、クラス又は下位クラスのうちの一つの化合物である、上記の医薬組成物、組み合わせ及び方法、及び前の段落に記載の使用を含む。当該化合物は、これらの実施形態において、薬学的に許容される塩の形で用いても良い。
【０１２７】
本発明の別の実施形態には、使用される本発明の化合物又はそれの塩が実質的に純粋である、前述の段落に記載の医薬組成物、組み合わせ、方法及び使用のそれぞれを含む。
【０１２８】
ＩＩＩ．本発明の組成物
本発明は、本発明の化合物（即ち式Ｉの化合物）又は薬学的に許容されるその塩、及び生物学的活性成分（ＡＢＩ）を含む安定な生物学的製剤（即ち医薬組成物）であって、前記ＡＢＩが抗体若しくはその抗原結合性断片、又は治療用タンパク質又はペプチドである製剤を提供する。別の実施形態において、本発明は、本発明の化合物及び治療上有効量の医薬活性成分を含む安定な製剤を提供する。特定の実施形態において、ＡＰＩは小分子である。
【０１２９】
本発明はさらに、本発明の化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、及びＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＴＩＧＩＴ、ＩＬＴ２、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＩＬＴ５、ＳＩＲＰα、ＫＧ２Ａ、ＫＧ２Ｃ、ＫＧ２Ｅ、ＴＳＬＰ、ＩＬ１０、ＶＩＳＴＡ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、他の増殖因子受容体、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ−４０Ｌ、ＣＤ７０、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ、及びＩＣＯＳからなる群から選択される抗原に特異的に結合する抗体若しくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を提供する。
【０１３０】
本発明の実施形態において、ＡＢＩの量は、治療上有効量である。
【０１３１】
具体的な実施形態において、本発明は、本発明の化合物（即ち式（Ｉ）の化合物）若しくは薬学的に許容されるその塩、及び、生物学的活性成分（ＰＤ−１  ＡＢＩ）として、ヒトＰＤ−１（例えば、ヒト又はヒト化抗ＰＤ−１抗体）に特異的に結合する抗ヒトＰＤ−１抗体若しくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物、並びにその本発明の製剤の使用方法に関するものである。抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片を、本発明の組成物及び方法で用いることができる。特定の実施形態において、ＰＤ−１  ＡＢＩは、ペンブロリズマブ（ペンブロリズマブ後発生物製剤を含む）及びニボルマブ（ニボルマブ後発生物製剤を含む）から選択される抗ＰＤ−１抗体である。具体的な実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はペンブロリズマブである。別の実施形態において、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブである。表２は、例示的な抗ヒトＰＤ−１抗体ペンブロリズマブ及びニボルマブのアミノ酸配列を提供する。本発明の製剤及び方法で有用な別のＰＤ−１抗体及び抗原結合性断片を表３に示している。
【０１３２】
一部の実施形態において、本発明の医薬組成物で使用される抗ヒトＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３の３種類の軽鎖ＣＤＲ及び／又はＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３の３種類の重鎖ＣＤＲを含む。
【０１３３】
本発明の１実施形態において、ＣＤＲＬ１は配列番号１若しくは配列番号１の変異体であり、ＣＤＲＬ２は配列番号２又は配列番号２の変異体であり、そして、ＣＤＲＬ３は、配列番号３又は配列番号３の変異体である。
【０１３４】
１実施形態において、ＣＤＲＨ１は配列番号６又は配列番号６の変異体であり、ＣＤＲＨ２は配列番号７又は配列番号７の変異体であり、そして、ＣＤＲＨ３は、配列番号８若しくは配列番号８の変異体である。
【０１３５】
１実施形態において、前記３種類の軽鎖ＣＤＲは配列番号１、配列番号２及び配列番号３であり、前記３種類の重鎖ＣＤＲは、配列番号６、配列番号７及び配列番号８である。
【０１３６】
本発明の別の実施形態において、ＣＤＲＬ１は配列番号１１若しくは配列番号１１の変異体であり、ＣＤＲＬ２は配列番号１２若しくは配列番号１２の変異体であり、そして、ＣＤＲＬ３は、配列番号１３若しくは配列番号１３の変異体である。
【０１３７】
１実施形態において、ＣＤＲＨ１は配列番号１６若しくは配列番号１６の変異体であり、ＣＤＲＨ２は配列番号１７若しくは配列番号１７の変異体であり、そして、ＤＲＨ３は、配列番号１８若しくは配列番号１８の変異体である。
【０１３８】
１実施形態において、前記３種類の軽鎖ＣＤＲは、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３であり、前記３種類の重鎖ＣＤＲは、配列番号６、配列番号７及び配列番号８である。
【０１３９】
別の実施形態において、前記３種類の軽鎖ＣＤＲは、配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３であり、前記３種類の重鎖ＣＤＲは、配列番号１６、配列番号１７及び配列番号１８である。
【０１４０】
本発明のさらなる実施形態において、ＣＤＲＬ１は、配列番号２１又は配列番号２１の変異体であり、ＣＤＲＬ２は、配列番号２２又は配列番号２２の変異体であり、そして、ＣＤＲＬ３は、配列番号２３又は配列番号２３の変異体である。
【０１４１】
さらに別の実施形態において、ＣＤＲＨ１は配列番号２４又は配列番号２４の変異体であり、ＣＤＲＨ２は配列番号２５又は配列番号２５の変異体であり、そして、ＣＤＲＨ３は配列番号２６又は配列番号２６の変異体である。
【０１４２】
別の実施形態において、前記３種類の軽鎖ＣＤＲは、配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３であり、前記３種類の重鎖ＣＤＲは、配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６である。
【０１４３】
ある種の実施形態において、本発明は、式（Ｉ）の化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、及び抗ヒトＰＤ−１抗体若しくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を提供し、ここで、前記抗ＰＤ−１抗体又は抗原結合性断片は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、前記軽鎖可変領域は配列番号４又は配列番号４の変異体を含み、そして、前記重鎖可変領域は配列番号９又は配列番号９の変異体を含む。さらに別の実施形態において、前記軽鎖可変領域は配列番号１４若しくは配列番号１４の変異体を含み、そして、前記重鎖可変領域は配列番号１９若しくは配列番号１９の変異体を含む。さらに別の実施形態において、前記重鎖可変領域は配列番号２７又は配列番号２７の変異体を含み、そして、前記軽鎖可変領域は配列番号２８若しくは配列番号２８の変異体、配列番号２９若しくは配列番号２９の変異体、又は配列番号３０若しくは配列番号３０の変異体を含む。そのような実施形態において、変異体軽鎖又は重鎖可変領域配列は、１個、２個、３個、４個若しくは５個のアミノ酸置換を有する以外、参照配列と同一である。一部の実施形態において、前記置換は、フレームワーク領域（即ち、ＣＤＲの外）にある。一部の実施形態において、前記アミノ酸置換のうちの１個、２個、３個、４個若しくは５個が保存的置換である。
【０１４４】
本発明の医薬組成物の１実施形態において、抗ヒトＰＤ−１抗体又は抗原結合性断片は、配列番号４を含む若しくはそれからなる軽鎖可変領域及び配列番号９を含む若しくはそれからなる重鎖可変領域を含む。さらに別の実施形態において、抗ヒトＰＤ−１抗体又は抗原結合性断片は、配列番号１４を含む若しくはそれからなる軽鎖可変領域及び配列番号１９を含む若しくはそれからなる重鎖可変領域を含む。本発明の製剤の１実施形態において、抗ヒトＰＤ−１抗体又は抗原結合性断片は、配列番号２８を含む若しくはそれからなる軽鎖可変領域及び配列番号２７を含む若しくはそれからなる重鎖可変領域を含む。さらに別の実施形態において、抗ヒトＰＤ−１抗体又は抗原結合性断片は、配列番号２９を含む若しくはそれからなる軽鎖可変領域及び配列番号２７を含む若しくはそれからなる重鎖可変領域を含む。別の実施形態において、抗体又は抗原結合性断片は、配列番号３０を含む若しくはそれからなる軽鎖可変領域及び配列番号２７を含む若しくはそれからなる重鎖可変領域を含む。
【０１４５】
別の実施形態において、本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、及び上記のＶＬドメイン又はＶＨドメインのうちの一方と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％又は５０％の配列相同性を有するＶＬドメイン及び／又はＶＨドメインを有し、ＰＤ−１への特異的結合を示す抗ヒトＰＤ−１抗体又は抗原結合性タンパク質を含む。別の実施形態において、本発明の医薬組成物の抗ヒトＰＤ−１抗体又は抗原結合性タンパク質は、１、２、３、４又は５以上までのアミノ酸置換を有するＶＬ及びＶＨドメインを含み、ＰＤ−１への特異的結合を示す。
【０１４６】
上記実施形態のいずれにおいても、ＰＤ−１  ＡＢＩはヒトＰＤ−１に特異的に結合する全長抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合性断片であり得る。ある種の実施形態において、ＰＤ−１ＡＢＩは、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む任意の種類の免疫グロブリンから選択される全長抗ＰＤ−１抗体である。好ましくは、その抗体はＩｇＧ抗体である。任意のアイソタイプのＩｇＧを用いることができ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。異なる定常ドメインは、本明細書で提供のＶＬ及びＶＨ領域に付加させることができる。例えば、本発明の抗体（又は断片）の特定の所期の用途が、変化したエフェクター機能を誘発することであった場合、ＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインを用いることができる。ＩｇＧ１抗体は、長い半減期及びエフェクター機能、例えば補体活性化及び抗体依存性細胞傷害性を提供するが、そのような活性は、抗体の全ての用途に望ましいとは限らない可能性がある。そのような場合、例えば、ＩｇＧ４定常ドメインを用いることができる。
【０１４７】
本発明の実施形態において、ＰＤ−１  ＡＢＩは、配列番号５に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる軽鎖及び配列番号１０に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる重鎖を含む抗ＰＤ−１抗体である。別の実施形態において、ＰＤ−１  ＡＢＩは、配列番号１５に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる軽鎖及び配列番号２０に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる重鎖を含む抗ＰＤ−１抗体である。別の実施形態において、ＰＤ−１  ＡＰＩは、配列番号３２に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる軽鎖及び配列番号３１に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる重鎖を含む抗ＰＤ−１抗体である。別の実施形態において、ＰＤ−１  ＡＰＩは、配列番号３３に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる軽鎖及び配列番号３１に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる重鎖を含む抗ＰＤ−１抗体である。さらに別の実施形態において、ＰＤ−１  ＡＰＩは、配列番号３４に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる軽鎖及び配列番号３１に記載のアミノ酸残基の配列を含む若しくはそれからなる重鎖を含む抗ＰＤ−１抗体である。一部の本発明の共製剤において、ＰＤ−１  ＡＰＩは、ペンブロリズマブ又はペンブロリズマブ後発生物製剤である。一部の本発明の共製剤において、ＰＤ−１  ＡＰＩは、ニボルマブ又はニボルマブ後発生物製剤である。
【０１４８】
通常、本発明の医薬組成物の抗ＰＤ−１抗体及び抗原結合性断片のアミノ酸配列変異体は、参照抗体又は抗原結合性断片（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨ、ＶＬ、又はヒト化配列）と少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５、９８又は９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有するであろう。本明細書で定義の配列に関する同一性若しくは相同性は、本明細書において、必要な場合は、配列をアラインさせ、ギャップを導入して最大配列同一性パーセントを達成させた後、配列同一性の一部として保存的置換を全く考慮しないで、抗ＰＤ−１残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントと定義される。Ｎ末端、Ｃ末端若しくは内部の伸長、欠失若しくは抗体配列への挿入のいずれも、配列同一性又は相同性に影響するものと解釈すべきではない。
【０１４９】
配列同一性は、二つのポリペプチドのアミノ酸が、その二つの配列を至適にアラインした場合に等価な位置で同一である度合いを指す。配列同一性は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを用いて求めることができ、その場合に、個々の参照配列の全長にわたり個々の配列間で最大の一致を提供するように、そのアルゴリズムのパラメータを選択する。次の参考文献は、配列解析に多くの場合で用いられるＢＬＡＳＴアルゴリズムに関するものである。ＢＬＡＳＴ  ＡＬＧＯＲＩＴＨＭＳ：  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９０）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３−４１０；  Ｇｉｓｈ，  Ｗ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９３）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．  ３  ：２６６−２７２；  Ｍａｄｄｅｎ，  Ｔ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９６）  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ２６６：  １３１−１４１；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９７）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４０２；  Ｚｈａｎｇ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９７）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  ７：６４９−６５６；  Ｗｏｏｔｔｏｎ，  Ｊ．Ｃ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９３）  Ｃｏｍｐｕｔ．  Ｃｈｅｍ．  １７：  １４９−１６３；  Ｈａｎｃｏｃｋ，  Ｊ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ，  （１９９４）  Ｃｏｍｐｕｔ．  Ａｐｐｌ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  １０：６７−７０；  ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ  ＳＣＯＲＩＮＧ  ＳＹＳＴＥＭＳ：  Ｄａｙｈｏｆｆ，  Ｍ．Ｏ．，  ｅｔ  ａｌ，  ″Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．″ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  （１９７８）  ｖｏｌ．  ５，  ｓｕｐｐｌ．  ３．  Ｍ．Ｏ．  Ｄａｙｈｏｆｆ  （ｅｄ．），  ｐｐ．  ３４５−３５２，  Ｎａｔｌ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｒｅｓ．  Ｆｏｕｎｄ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  ＤＣ；  Ｓｃｈｗａｒｔｚ，  Ｒ．Ｍ．，  ｅｔ  ａｌ，  ″Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．″  ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  （１９７８）  ｖｏｌ．  ５，  ｓｕｐｐｌ．  ３．″  Ｍ．Ｏ．  Ｄａｙｈｏｆｆ  （ｅｄ．），  ｐｐ．  ３５３−３５８，  Ｎａｔｌ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｒｅｓ．  Ｆｏｕｎｄ．，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  ＤＣ；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．Ｆ．，  （１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１９：５５５−５６５；  Ｓｔａｔｅｓ，  Ｄ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９１）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３  ：６６−７０；  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９：  １０９１５−１０９１９；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９３）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｅｖｏｌ．  ３６：２９０−３００；  ＡＬＩＧＮＭＥＮＴ  ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＳ：  Ｋａｒｌｉｎ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ，  （１９９０）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７：２２６４−２２６８；  Ｋａｒｌｉｎ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳ���  ９０：５８７３−５８７７；  Ｄｅｍｂｏ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４）  Ａｎｎ．  Ｐｒｏｂ．  ２２：２０２２−２０３９；  ａｎｄ  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．Ｆ．  ″Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ．″  ｉｎ  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  （Ｓ．  Ｓｕｈａｉ，  ｅｄ．），  （１９９７）  ｐｐ．  １−１４，  Ｐｌｅｎｕｍ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ。
【０１５０】
同様に、いずれのクラスの軽鎖も、本明細書における組成物及び方法で用いることができる。具体的には、κ、λ又はそれの変異体が本発明の組成物及び方法で有用である。
【０１５１】
表２．ＰＤ−１抗体配列の例
【表２】
2020532562.tif 000025
2020532562.tif 000026
2020532562.tif 000027
【０１５２】
表３．本発明の組成物で有用な別のＰＤ−１抗体及び抗原結合性断片
【表３】
2020532562.tif 000028
【０１５３】
本発明の医薬組成物の一部の実施形態において、ＡＢＩ（例えば、抗ＰＤ−１抗体若しくはその抗原結合性断片）は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。別の実施形態において、ＡＢＩは、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、又は約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【０１５４】
別の実施形態において、ＡＢＩは、約１０ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、又は約２５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
【０１５５】
本明細書で記載のように、式Ｉの化合物は、溶液の粘度を低下させるのに有用であることで、高濃度のＡＢＩを溶液製剤で用いることが可能となる（即ち、高濃度のＡＢＩを達成するのに凍結乾燥／再生を必要とせず）。従って、ある種の実施形態において、本発明の医薬組成物は水溶液である。本発明のこの態様の実施形態において、溶液の粘度は、≦３０ｍＰａ−Ｓ（ミリパスカル．秒又はｃＰ（センチポアズ））、ｍＰａ−Ｓ、≦２９ｍＰａ−Ｓ、≦２８ｍＰａ−Ｓ、≦２７ｍＰａ−Ｓ、≦２６ｍＰａ−Ｓ、≦２５ｍＰａ−Ｓ、≦２４ｍＰａ−Ｓ、≦２３ｍＰａ−Ｓ、≦２２ｍＰａ−Ｓ、≦２１ｍＰａ−Ｓ、≦２０ｍＰａ−Ｓ、≦１９ｍＰａ−Ｓ、又は≦１８ｍＰａ−Ｓである。さらなる実施形態において、溶液の粘度は、約１５ｍＰａ−Ｓ〜約３０ｍＰａ−Ｓ、約１７ｍＰａ−Ｓ〜約２８ｍＰａ−Ｓ、約１７ｍＰａ−Ｓ〜約２７ｍＰａ−Ｓ、約１７ｍＰａ−Ｓ〜約２６ｍＰａ−Ｓ、約１７ｍＰａ−Ｓ〜約２５ｍＰａ−Ｓ、約１８ｍＰａ−Ｓ〜約２８ｍＰａ−Ｓ、約１８ｍＰａ−Ｓ〜約２７ｍＰａ−Ｓ、約１８ｍＰａ−Ｓ〜約２６ｍＰａ−Ｓ、約１８ｍＰａ−Ｓ〜約２５ｍＰａ−Ｓ、約１９ｍＰａ−Ｓ〜約２８ｍＰａ−Ｓ、約１９ｍＰａ−Ｓ〜約２７ｍＰａ−Ｓ、約１９ｍＰａ−Ｓ〜約２６ｍＰａ−Ｓ、約１９ｍＰａ−Ｓ〜約２５ｍＰａ−Ｓ、約２０ｍＰａ−Ｓ〜約２８ｍＰａ−Ｓ、約２０ｍＰａ−Ｓ〜約２７ｍＰａ−Ｓ、約２０ｍＰａ−Ｓ〜約２６ｍＰａ−Ｓ、又は約２０ｍＰａ−Ｓ〜約２５ｍＰａ−Ｓである。粘度は、当業界で公知の粘度計、例えば、ｍＶＲＯＣ（粘度計／流量計−Ｏｎ−Ａ−Ｃｈｉｐ、ＲｈｅｏＳｅｎｓｅ，  Ｉｎｃ．  Ｓａｎ  Ｒａｍｏｎ，  ＣＡ）を用いて測定することができる。
【０１５６】
特定の製剤が開発される必要に応じて、１以上の追加の賦形剤を本発明の医薬組成物に加えることができる。そのような追加の賦形剤は、医薬組成物での使用において安全であり、製剤の安定性に悪影響を与えるものではない。本発明の製剤に加えることができる追加の賦形剤の１例には、患者の免疫系のＡＢＩに対する免疫応答を高めるために加えることができる補助剤を含む。製剤に加えることができる他の賦形剤には、緩衝剤、安定剤、可溶化剤、浸透張力調節剤、キレート剤、保存剤、デキストラン、硫酸デキストラン、デキストランＴ４０、ジエタノールアミン、グアニジン、塩化カルシウム、クエン酸ナトリウム、アルブミン、ゼラチン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、脂質及びヘパリンを含むが、これらに限定されるものではない。当業者であれば、製剤中での機能並びに計画されている投与方法、用量並びに製剤の予想貯蔵時間及び温度のような他の要素に応じてどの追加賦形剤を所望の医薬製剤に含めるべきであるかを容易に決定することができる。当業者は、前記追加賦形剤の量は変動し得るものであることを理解するものであり、ヒト若しくは動物への投与に安全であり、且つ所望の機能に有効でもある適切な量を容易に決定することができる。典型的には、追加の賦形剤は、約１０〜約５００ｍＭの濃度で存在することができる。
【０１５７】
ＩＶ．使用方法
１態様において、本発明は、式Ｉの化合物を当該製剤に加えることを含む医薬製剤の粘度の低下方法に関しここで、該製剤は水溶液である。本発明の実施形態において、当該医薬製剤はＡＢＩを含む。具体的な実施形態において、ＡＢＩは、５０ｍｇ／ｍＬ以上、７５ｍｇ／ｍＬ以上、１００ｍｇ／ｍＬ以上、１２５ｍｇ／ｍＬ以上、１５０ｍｇ／ｍＬ以上、１７５ｍｇ／ｍＬ以上、又は２００ｍｇ／ｍＬ以上の濃度で存在する。
【０１５８】
従って、本発明は、
（ａ）ＡＢＩ及び式Ｉの化合物を含む医薬製剤を提供し、ここで、当該ＡＢＩは、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し、当該製剤は水溶液である；そして
（ｂ）式Ｉの化合物を当該溶液に加える；ことを含む、医薬製剤の粘度の低下方法を提供し、ここで、当該化合物の添加後の当該医薬製剤の粘度は、≦３０ｍＰａ−Ｓ、≦２９ｍＰａ−Ｓ、≦２８ｍＰａ−Ｓ、≦２７ｍＰａ−Ｓ、≦２６ｍＰａ−Ｓ、≦２５ｍＰａ−Ｓ、≦２４ｍＰａ−Ｓ、≦２３ｍＰａ−Ｓ、≦２２ｍＰａ−Ｓ、≦２１ｍＰａ−Ｓ、≦２０ｍＰａ−Ｓ、≦１９ｍＰａ−Ｓ、又は≦１８ｍＰａ−Ｓである。
【０１５９】
溶液での本発明の医薬組成物の粘度は、同じ賦形剤を含み同じｐＨであるが、式Ｉの化合物を含まない医薬組成物より低い。本発明のある種の実施形態において、溶液での本発明の医薬組成物の粘度は、アルギニン若しくは薬学的に許容されるその塩、ヒスチジン若しくは薬学的に許容されるその塩、フェニルアラニン若しくは薬学的に許容されるその塩、チロシン若しくは薬学的に許容されるその塩、又はリジン若しくは薬学的に許容されるその塩を含む（即ち、式Ｉの化合物を含まない）同じ組成物より低い。
【０１６０】
本発明はまた、当該対象者に対して、（１）ＡＢＩ、（２）式（Ｉ）の化合物若しくは薬学的に許容されるその塩、及び（３）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む、対象者におけるがんの治療方法に関するものでもあり、ここで、ＡＢＩは、抗体又はその抗原結合性断片であるか、又はがんを治療する治療的タンパク質又はペプチドである。この方法の具体的な実施形態において、当該組成物は、静脈投与を介して対象者に投与される。他の実施形態において、当該組成物は、皮下投与によって対象者に投与される。
【０１６１】
本発明の方法のいずれにおいても、がんは、メラノーマ、肺がん、頭頸部がん、膀胱がん、乳がん、消化管がん、多発性骨髄腫、肝細胞がん、リンパ腫、腎臓がん、中皮腫、卵巣がん、食道がん、肛門がん、胆道がん、結腸直腸がん、子宮頸がん、甲状腺がん、唾液腺がん、前立腺がん（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、膵臓がん、結腸がん、食道がん、肝臓がん、甲状腺がん、膠芽細胞腫、神経膠腫、及び他の新生物性悪性腫瘍からなる群から選択することができる。
【０１６２】
一部の実施形態において、肺がんは非小細胞肺がんである。
【０１６３】
別の実施形態において、肺がんは小細胞肺がんである。
【０１６４】
一部の実施形態において、リンパ腫はホジキンリンパ腫である。
【０１６５】
他の実施形態において、リンパ腫は非ホジキンリンパ腫である。特定の実施形態において、リンパ腫は縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
【０１６６】
一部の実施形態において、乳がんは三種陰性乳がんである。
【０１６７】
さらに別の実施形態において、乳がんはＥＲ＋／ＨＥＲ２−乳がんである。
【０１６８】
一部の実施形態において、膀胱がんは尿路上皮がんである。
【０１６９】
一部の実施形態において、頭頸部がんは上咽頭がんである。一部の実施形態において、がんは甲状腺がん．他の実施形態において、がんは唾液腺がんである。他の実施形態において、がんは頭頸部の扁平細胞癌である。
【０１７０】
一部の実施形態において、がんは、高レベルのマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｈ）を有する転移性結腸直腸がんである。
【０１７１】
一部の実施形態において、がんは、メラノーマ、非小細胞肺がん、再発性若しくは難治性の古典的ホジキンリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、頭頸部扁平細胞癌、尿路上皮がん、食道がん、胃がん、子宮頸がん及び肝細胞がんからなる群から選択される。
【０１７２】
上記治療方法の他の実施形態において、がんは血液系腫瘍である。ある種の実施形態において、その血液系腫瘍は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、ＥＢＶ陽性ＤＬＢＣＬ、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄細胞白血病−１タンパク質（Ｍｃｌ−１）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である。
【０１７３】
生検材料又は手術用材料における腫瘍浸潤性リンパ球の存在に関して改善された無病生存率及び全生存率を示す悪性腫瘍、例えば、メラノーマ、結腸直腸がん、肝臓がん、腎臓がん、胃がん／食道がん、乳がん、膵臓がん及び卵巣がんが、本明細書に記載の方法及び治療に包含される。そのようながんのサブタイプは、Ｔリンパ球による免疫による制御に対して影響されやすいことが知られている。さらに、増殖が本明細書に記載の抗体を用いて阻害可能な難治性若しくは再発性悪性腫瘍が含まれる。
【０１７４】
一部の実施形態において、本発明の組成物は、被験組織検体におけるＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２の発現上昇を特徴とするがん、例えば卵巣がん、腎臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、乳がん、肝臓がん、胃がん、食道がん及びメラノーマを有する対象者に投与される。本発明の組成物による治療が有効であり得る別のがんには、例えばカポジ肉腫、肝臓がん、上咽頭がん、リンパ腫、子宮頸がん、外陰がん、肛門がん、陰茎がん及び口腔がんの原因であることが知られているヒト免疫不全ウィルス、Ａ型、Ｂ型及びＣ型肝炎ウィルス、エプスタイン・バーウィルス、ヒトパピローマウイルスのようなウィルスによる持続的感染に関連するがんを含む。
【０１７５】
別の態様には、本発明の医薬組成物を用いて、感染又は感染性疾患を有する、有する疑いがある、または有するリスクを持った患者を治療する方法を含む。本発明のこの態様の具体的な実施形態において、当該医薬組成物のＡＢＩは、拮抗薬である抗ＰＤ−１抗体又は抗原結合性断片である。従って、本発明は、有効量の本発明の組成物を対象者に投与することを含む、哺乳動物対象者における慢性感染の治療方法を提供する。この方法の一部の具体的な実施形態において、組成物は、静脈投与によって対象者に投与される。他の実施形態において、組成物は、皮下投与によって対象者に投与される。
【０１７６】
この態様において、本発明の組成物は単独で又はワクチンと組み合わせて用いて、病原体、毒物及び自己抗原に対する免疫応答を刺激することができる。本発明の組成物を用いて、ヒト免疫不全ウィルス、Ａ型、Ｂ型及びＣ型肝炎ウィルス、エプスタイン・バーウィルス、ヒトサイトメガロウィルス、ヒトパピローマウィルス及びヘルペスウィルスを含む（これらに限定されるものではない）ヒトへのウィルス感染に対する免疫応答を刺激することができる。拮抗薬である抗ＰＤ−１抗体又は抗体断片を含む本発明の組成物を用いて、細菌若しくは真菌寄生生物及び他の病原体による感染に対する免疫応答を刺激することができる。慢性ウィルス感染と考えられるものには、Ｂ型及びＣ型肝炎及びＨＩＶによるウィルス感染がある。
【０１７７】
本発明の組成物は、１以上の「追加の治療剤」と組み合わせて患者に投与することができる。その追加の治療剤は、生物学的薬物（ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、他の増殖因子受容体、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ−４０Ｌ、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ、及びＩＣＯＳに対する抗体を含む（これらに限定されるものではない））、増殖阻害剤、免疫原（例えば、弱毒化がん細胞、腫瘍抗原、抗原提示細胞、例えば腫瘍由来の抗原若しくは核酸を加えた樹状細胞、免疫刺激サイトカイン類（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮα２、ＧＭ−ＣＳＦ）、及び限定されるものではないがＧＭ−ＣＳＦのような免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子でトランスフェクションされた細胞）であることができる。
【０１７８】
上記で記載のように、本発明の方法の一部の実施形態において、当該方法はさらに、追加の治療剤を投与することを含む。特定の実施形態において、前記追加の治療剤は、抗ＬＡＧ３抗体若しくはその抗原結合性断片、抗ＧＩＴＲ抗体若しくはその抗原結合性断片、抗ＴＩＧＩＴ抗体若しくはその抗原結合性断片、抗ＣＤ２７抗体若しくはその抗原結合性断片、ＩＬＴ２抗体若しくはその抗原結合性断片、ＩＬＴ３抗体若しくはその抗原結合性断片、ＩＬＴ４抗体若しくはその抗原結合性断片、ＩＬＴ５抗体若しくはその抗原結合性断片、又はＩＬ−１０抗体若しくはその抗原結合性断片である。１実施形態において、前記追加の治療剤は、ＩＬ−１２を発現するニューカッスル病ウィルスベクターである。さらに別の実施形態において、前記追加の治療剤は、ディナシクリブである。さらに別の実施形態において、前記追加の治療剤は、ＳＴＩＮＧ作動薬である。さらに別の実施形態において、前記追加の治療剤は、ディナシクリブである。さらに別の実施形態において、前記追加の治療剤は、ＰＡＲＰ阻害剤である。さらに別の実施形態において、前記追加の治療剤は、ディナシクリブである。別の実施形態において、前記追加の治療剤は、ＭＥＫ阻害剤である。別の実施形態において、前記追加の治療剤は、ＣＸＣＲ２拮抗薬である。別の実施形態において、前記追加の治療剤は、ナバリキシンである。別の実施形態において、前記追加の治療剤は、オラパリブである。別の実施形態において、前記追加の治療剤は、セルメチニブである。
【０１７９】
好適な投与経路には、例えば、非経口送達、例えば筋肉投与、皮下投与、並びにくも膜下投与、直接心室内投与、静脈投与、腹腔内投与を含み得る。薬剤は、腹腔内投与、非経口投与、動脈注射若しくは静脈注射のような多様な従来法で投与されることができる。
【０１８０】
前記追加の治療剤の用量の選択は、その者の血清若しくは組織代謝速度、症状のレベル、その者の免疫原性、及び標的細胞のアクセス性、治療される個体の組織若しくは臓器を含むいくつかの要素によって決まる。前記追加の治療剤の用量は、許容されるレベルの副作用を与える量であるべきである。従って、それぞれの追加の治療剤（例えば、生物学的薬物又は化学療法剤）の用量及び投与回数は、部分的に、特定の治療剤、治療されるがんの重度、及び患者の特徴によって決まる。抗体、サイトカイン及び小細胞の適切な用量を選択する上での指針が利用可能である。例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ  （１９９６）  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．  Ｌｔｄ，  Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，  ＵＫ；  Ｋｒｅｓｉｎａ  （ｅｄ．）  （１９９１）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｂａｃｈ  （ｅｄ．）  （１９９３）  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｂａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４８：６０１−６０８；  Ｍｉｌｇｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４１  ：  １９６６−１９７３；  Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４４：７８３−７９２；  Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４２：６１３−６１９；  Ｇｈｏｓｈ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４８：２４−３２；  Ｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４３  ：  １５９４−１６０２；  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３  （Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，  ５７ｔｈ  Ｅｄ）；  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；  ＩＳＢＮ：  １５６３６３４４５７；  ５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００２）を参照する。適切な投与法の決定は、例えば、治療に影響するか治療に影響すると予測されることが当業界で公知であるか疑われているパラメータ又は因子を用いて、臨床医が行うことができ、それは、例えば、患者の病歴（例えば、過去の治療）、治療されるがんの種類及び段階、及び併用療法における治療剤の１以上に対する応答のバイオマーカーに依存する。
【０１８１】
各種参考文献が、前記追加の治療剤のための薬学的に許容される担体又は賦形剤の選択を容易にする上で利用可能であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ  （１９８４）；  Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｏｉｌｍａｎ  ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ｇｅｎｎａｒｏ  （２０００）  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；  Ａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９３）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｔａｂｌｅｔｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  （１９９０）  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  ＮＹ；  Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ  （２０００）  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹを参照する。
【０１８２】
一部の実施形態において、本発明の組成物は、連続注入によって、又は例えば、１日、１〜７回／週、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月などの間隔での用量によって投与される。好ましい用量プロトコールは、重大な望ましくない副作用を回避する最大容量又は投薬回数が関与するものである。合計１週用量は、通常は少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ、０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ以上である。例えば、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４９：４２７−４３４；  Ｈｅｒｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４６：  １６９２−１６９８；  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  Ｐｓｙｃｈ．  ６７：４５１−４５６；  Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ５２：  １３３−１４４を参照する。小分子治療剤、例えば、ペプチド模倣剤、天然物又は有機化合物の所望の用量は、モル／ｋｇ基準で抗体又はポリペプチドに関してほぼ同じである。
【０１８３】
ある種の実施形態において、投与は、治療の期間を通じて、医薬製剤、即ちＡＢＩ及び式Ｉの化合物を含む製剤の用量を１．０、３．０、及び１０ｍｇ／ｋｇと上昇させながら対象者に投与することを含むことになろう。その製剤は、再生液体製剤であることができるか、それは凍結乾燥されたことがない液体製剤であることができる。時間経過は変えることができ、所望の効果が得られる限り続けることができる。ある種の実施形態において、用量上昇を、約１０ｍｇ／ｋｇの用量まで続ける。ある種の実施形態において、対象者は、メラノーマ又は他の形態の固形腫瘍の組織学的若しくは細胞学的診断を有するものであり、ある種の場合、対象者は、計測できない疾患を有する可能性がある。ある種の実施形態において、対象者は、他の化学療法で治療されたことがあり、他の実施形態では対象者は処置未経験であろう。
【０１８４】
さらに別の実施形態において、投与レジメは、治療の期間を通じて、本明細書に記載の医薬製剤（即ち、ＡＢＩ及び式Ｉの化合物を含む製剤）のいずれかの１、３、又は１０ｍｇ／ｋｇの用量を投与することを含む。そのような一定量投与レジメの場合、投与の間隔は、約１４日（±２日）である。ある種の実施形態において、投与の間隔は約２１日（±２日）である。
【０１８５】
ある種の実施形態において、投与レジメは、患者内用量上昇を行いながら、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量を投与することを含む。ある種の実施形態において、５ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの用量を、３週間に１回、又は２週間に１回の間隔で投与する。さらに別の実施形態において、メラノーマ患者又は他の固形腫瘍の患者の場合、３ｍｇ／ｋｇの用量を３週間の間隔で投与する。これらの実施形態において、患者は切除不能の疾患を有するべきであるが、患者は手術を過去に受けたことがあっても良い。
【０１８６】
ある種の実施形態において、対象者は、本明細書に記載の任意の医薬製剤の３０分間ＩＶ注入投与を受ける。用量上昇のある種の実施形態において、用量間隔は、第１の用量と第２の用量の間で約２８日（±１日）である。ある種の実施形態において、第２の用量と第３の用量の間の間隔は、約１４日（±２日）である。ある種の実施形態において、第２の用量に続く用量については、投与間隔は約１４日（±２日）となる。
【０１８７】
皮下投与は、注射器を用いるか、又は他の注射機器（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（登録商標）装置）；注射ペン；又は無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ及びＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（登録商標））を用いて、注射によって行うことができる。
【０１８８】
本発明の実施形態は、（ａ）治療法（例えば、ヒト身体の）；（ｂ）医薬；（ｃ）抗腫瘍免疫応答の誘発若しくは増強；（ｄ）患者における１以上の腫瘍マーカー数の低減；（ｅ）腫瘍若しくは血液がんの増殖の停止若しくは遅延；（ｆ）ＰＤ−１関連疾患の進行の停止若しくは遅延；（ｇ）進行がんの停止若しくは遅延；（ｈ）ＰＤ−１関連疾患の安定化；（ｉ）腫瘍細胞の増殖若しくは生存の阻害；（ｊ）１以上のがん性病変若しくは腫瘍の消去若しくは大きさ低減；（ｋ）ＰＤ−１関連疾患の進行、発症若しくは重度の軽減；（ｌ）がんのようなＰＤ−１関連疾患の臨床症状の重度若しくは期間の低減、（ｍ）同様の未治療患者における予想生存と比較した患者生存の延長、（ｎ）がん性症状若しくは他のＰＤ−１関連疾患の完全若しくは部分的緩和の誘発、（ｏ）がんの治療、又は（ｐ）感染若しくは感染疾患の治療の：（ｉ）そのための使用、（ｉｉ）それのための医薬若しくは組成物としての使用、又は（ｉｉｉ）それのための医薬製造における使用のための、本明細書に記載の生物学的製剤の１以上も含む。
【０１８９】
本明細書で言及した全ての刊行物が、本発明に関連して使用されると考えられる方法及び材料についての記載及び開示に関して、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１９０】
以上、添付の図面を参照して、本明細書における本発明の異なる実施形態について説明したが、理解すべき点として、本発明は、それらの正確な実施形態に限定されるものではなく、添付の特許請求の範囲で定義の本発明の範囲若しくは精神を逸脱しない限りにおいて、各種の変更及び改変を当業者が行うことが可能である。
【０１９１】
実施例１
化合物１（Ｃ１）：（Ｓ）−１２−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−酸の製造
【化２１】
2020532562.tif 000029
【０１９２】
段階１．（Ｓ）−メチル１２−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−オエートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（１−１）（５ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍＬ）及びトリエチルアミン（８．９７、８９ｍｍｏｌ）中溶液に、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）アセチルクロライド（１−２）（５．８１ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）（酸から新たに調製）を０℃で滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、次に、それを濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル１２−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−オエート（１−３）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１４Ｈ２３Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値：３３０．３５、実測値：３３０．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６：δ８．１５（ｄ、Ｊ＝１０．４０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６３（ｓ、１Ｈ）、６．８６（ｓ、１Ｈ）、４．５８（ｔ、Ｊ＝９．２０Ｈｚ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、２Ｈ）、３．６５（ｓ、３Ｈ）、３．５８（ｓ、３Ｈ）、３．５０−３．５２（ｍ、８Ｈ）、２．９７（ｄ、Ｊ＝９．２０Ｈｚ、２Ｈ）。
【０１９３】
段階２．（Ｓ）−１２−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−酸の製造：
（Ｓ）−メチル１２−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−オエート（１−３）（４．７ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０．０ｍＬ）及び水（１０．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（０．８５ｇ、２１．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。１．５Ｎ  ＨＣｌを反応混合物に加え、それを減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−１２−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−酸（Ｃ１）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１３Ｈ２１Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３１６．３３、実測値：３１６．４。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．０６（ｓ、１Ｈ）、４．４１（ｔ、Ｊ＝４．８０Ｈｚ、１Ｈ）、３．９４（ｓ、２Ｈ）、３．５２−３．５４（ｍ、８Ｈ）、３．２６（ｓ、３Ｈ）、３．１６（ｑ、Ｊ＝４．８０Ｈｚ、１Ｈ）、２．９８（ｑ、Ｊ＝８．４０Ｈｚ、１Ｈ）。
【０１９４】
実施例２
化合物２（Ｃ２）：（Ｓ）−１２−（３−グアニジノプロピル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−酸の製造
【化２２】
2020532562.tif 000030
【０１９５】
段階１．（Ｓ）−エチル１２−（３−グアニジノプロピル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−オエートの製造：
（Ｓ）−エチル２−アミノ−５−グアニジノペンタノエート（２−１）（５ｇ、２４．７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍＬ）及びトリエチルアミン（１０．３４ｍＬ、７４．２ｍｍｏｌ）中溶液に、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）アセチルクロライド（２−２）（４．８６ｇ、２４．７２ｍｍｏｌ）（酸から新たに調製）を０℃で滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、それを濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−エチル１２−（３−グアニジノプロピル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−オエート（２−３）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１５Ｈ３０Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値：３６３．４２、実測値：３６３．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６：δ８．０１（ｓ、１Ｈ）、７．８３（ｓ、１Ｈ）、４．２６（ｔ、Ｊ＝８．００Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｑ、Ｊ＝１．２０Ｈｚ、２Ｈ）、４．０９−４．１０（ｍ、２Ｈ）、３．９５（ｓ、２Ｈ）、３．５３−３．５４（ｍ、８Ｈ）、３．４３（ｓ、３Ｈ）、１．８７−１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．４６−１．４８（ｍ、２Ｈ）、１．１９（ｔ、Ｊ＝９．６０Ｈｚ、３Ｈ）。
【０１９６】
段階２．（Ｓ）−１２−（３−グアニジノプロピル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−酸の製造：
（Ｓ）−エチル１２−（３−グアニジノプロピル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−オエート（２−３）（４ｇ、１１．０４ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（０．６６２ｇ、１６．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌで中和し、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−１２−（３−グアニジノプロピル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−酸（Ｃ２）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１３Ｈ２６Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３３５．１９、実測値：３３５．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ４．１４−４．１６（ｍ、１Ｈ）、４．０１（ｓ、２Ｈ）、３．６０−３．６１（ｍ、６Ｈ）、３．５３−３．５３（ｍ、２Ｈ）、３．３０（ｓ、３Ｈ）、３．１１（ｔ、Ｊ＝６．３６Ｈｚ、２Ｈ）、１．７９−１．８１（ｍ、１Ｈ）、１．６６−１．６８（ｍ、１Ｈ）、１．５１−１．５２（ｍ、２Ｈ）。
【０１９７】
実施例３
化合物３（Ｃ３）：（Ｓ）−５−グアニジノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）ペンタン酸の製造
【化２３】
2020532562.tif 000031
【０１９８】
図式における使用される各種原料及び試薬は、市販されているか、当業者によって容易に作成される。化合物３−２を、Ｓｅｉｆｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２０１４，  ５７，  ９８７０−９８８８に開示の文献プロトコールに従って合成した。
【０１９９】
段階２．（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタノエートの製造：
（Ｓ）−エチル２−アミノ−５−グアニジノペンタノエート（３−３）（３０．０ｇ、１４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３００．０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（３−２）（２６．２ｇ、２２２ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．６９ｍＬ、２９．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（１３．８ｇ、２２２ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタノエート（３−４）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１３Ｈ２８Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３０５．３、実測値：３０５．２。
【０２００】
段階３．（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）ペンタノエートの製造：
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のＨＡＴＵ（２５．５ｇ、６７．１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１２．４７ｍＬ、８９ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタノエート（３−４）（１７．７０ｇ、５８．２ｍｍｏｌ）を、２−（２−メトキシエトキシ）酢酸（３−５）（６ｇ、４４．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、生成物をジクロロメタンで抽出した（１００ｍＬで５回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）ペンタノエート（３−６）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１８Ｈ３６Ｎ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：４２１．５、実測値：４２１．２。
【０２０１】
段階４．（Ｓ）−５−グアニジノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）ペンタン酸の製造：
（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）ペンタノエート（３−６）（４ｇ、９．０７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４０．０ｍＬ）及び水（８．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（０．５７１ｇ、１４．２７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌで中和し、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に１０％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−５−グアニジノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）ペンタン酸（Ｃ３）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ３２Ｎ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３９３．４４、実測値：３９３．４。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：５４．３３−４．３１（ｍ、１Ｈ）、４．２４（ｓ、２Ｈ）、３．５８−３．６２（ｍ、１２Ｈ）、３．２３（ｓ、３Ｈ）、３．２８（ｓ、３Ｈ）、３．０９−３．１１（ｍ、２Ｈ）、１．８９−１．９２（ｍ、１Ｈ）、１．６４−１．６７（ｍ、１Ｈ）、１．４７−１．４８（ｍ、２Ｈ）。
【０２０２】
実施例４
化合物４（Ｃ４）：（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパン酸の製造
【化２４】
2020532562.tif 000032
【０２０３】
段階１．（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（４−１）（１５ｇ、８９ｍｍｏｌ）のメタノール（１５０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（４−２）（１５．６ｇ、１３３ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．０１ｍＬ、１７．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（８．３６ｇ、１３３ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエート（４−３）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１２Ｈ２１Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：２７２．３、実測値：２７２．２。
【０２０４】
段階２．（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパノエートの製造：
２−（２−メトキシエトキシ）酢酸（４−４）（４．２ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４０ｍＬ）中溶液に、ジクロロメタン（６０ｍＬ）中のＨＡＴＵ（１７．８６ｇ、４７．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８．８０ｍＬ、６２．６ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエート（４−３）（８．５ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、生成物をジクロロメタンで抽出した（１００ｍＬで５回）。次に、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、５％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパノエート（４−４）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１７Ｈ２９Ｎ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３８８．４２、実測値：３８８．２。
【０２０５】
段階４．（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパン酸の製造：
（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパノエート（４−５）（７．１ｇ、１５．２１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（７０．０ｍＬ）及び水（１５．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（１．０８ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌで中和し、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に１０％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパン酸（Ｃ４）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ２７Ｎ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３７４．４４、実測値：３７４．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．４９（ｓ、１Ｈ）、７．１５（ｓ、１Ｈ）、４．３５−４．３６（ｍ、１Ｈ）、４．２７（ｓ、２Ｈ）、３．４８−３．５０（ｍ、１２Ｈ）、３．２９−３．２７（ｍ、２Ｈ）、３．２９（ｓ、３Ｈ）、３．２５（ｓ、３Ｈ）。
【０２０６】
実施例５
化合物５（Ｃ５）：（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）グアニジノペンタン酸の製造
【化２５】
2020532562.tif 000033
【０２０７】
段階２．（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエートの製造：
（Ｓ）−エチル２−アミノ−５−グアニジノペンタノエート（５−３）（１０．０ｇ、４９．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００．０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（５−２）（２３．３ｇ、１９８ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．５６５ｍＬ、９．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（４．６６ｇ、７４．２ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、生成物をジクロロメタンで抽出した（１００ｍＬで５回）。次に、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエート（５−４）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１８Ｈ３８Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値：４０６．２８、実測値：４０７．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ７．４２（ｂｓ、１Ｈ）、７．２５（ｂｓ、１Ｈ）、６．８５（ｂｓ、２Ｈ）、４．１２−４．０５（ｍ、２Ｈ）、３．４９−３．４７（ｍ、４Ｈ）、３．４３−３．４０（ｍ、８Ｈ）、３．３８−３．３６（ｍ、１Ｈ）、３．２４（ｓ、６Ｈ）、３．１１−３．０９（ｍ、２Ｈ）、２．８０−２．６６（ｍ、４Ｈ）、１．６３−１．６０（ｍ、２Ｈ）、１．５０−１．４３（ｍ、２Ｈ）、１．２０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【０２０８】
段階３．（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタン酸の製造：
（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエート（５−４）（５．４ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０．０ｍＬ）及び水（１０．０ｍＬ）中溶液を攪拌しながら、それに水酸化ナトリウム（０．７９７ｇ、１９．９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。１．５Ｎ  ＨＣｌを反応混合物に加え、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に１０％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタン酸（Ｃ５）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ３４Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３７９．４、実測値：３７９．０。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ３．８６−３．６６（ｍ、４Ｈ）、３．８６−３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．６２−３．６０（ｍ、４Ｈ）、３．５７−３．５５（ｍ、４Ｈ）、３．４７−３．３９（ｍ、４Ｈ）、３．２９（ｓ、６Ｈ）、３．１７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．８６−１．８０（ｍ、２Ｈ）、１．７４−１．６２（ｍ、２Ｈ）。
【０２０９】
実施例６
化合物６（Ｃ６）：（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸の製造
【化２６】
2020532562.tif 000034
【０２１０】
段階２．（Ｓ）−メチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（６−３）（１０ｇ、５９．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００．０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（６−２）（２７．９ｇ、２３６ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．６７ｍＬ、１１．８２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（５．５７ｇ、８９ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、生成物をジクロロメタンで抽出した（１００ｍＬで５回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物を７％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（６−４）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１７Ｈ３１Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値：３７４．４４、実測値：３７４．２。
【０２１１】
段階３．（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸の製造：
（Ｓ）−メチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（６−４）（６．５ｇ、１７．３０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６５．０ｍＬ）及び水（１２．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（１．０３ｇ、２５．９５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌで中和し、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に１０％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸（Ｃ６）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ２９Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３６０．４１、実測値：３６０．２。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．１５（ｓ、１Ｈ）、３．９０（ｔ、Ｊ＝７．２０Ｈｚ、１Ｈ）、３．６０−３．６２（ｍ、４Ｈ）、３．５５−３．５６（ｍ、４Ｈ）、３．５０−３．５０（ｍ、４Ｈ）、３．２８（ｓ、６Ｈ）、３．１９−３．１９（ｍ、４Ｈ）、３．０６−３．０７（ｍ、２Ｈ）。
【０２１２】
実施例７
化合物７（Ｃ７）：（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパン酸塩酸塩の製造
【化２７】
2020532562.tif 000035
【０２１３】
段階２．（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（７−３）（１５ｇ、８９ｍｍｏｌ）のメタノール（１５０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（７−２）（１５．６ｇ、１３３ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．０１ｍＬ、１７．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（８．３６ｇ、１３３ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を７％メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエート（７−４）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１２Ｈ２１Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：２７２．３、実測値：２７２．２。
【０２１４】
段階３．（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパノエートの製造：
２−（２−メトキシエトキシ）酢酸（７−５）（４．２ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４０ｍＬ）中溶液に、ジクロロメタン（６０ｍＬ）中のＨＡＴＵ（１７．８６ｇ、４７．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８．８０ｍＬ、６２．６ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエート（７−４）（８．５ｇ、３１．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、生成物をジクロロメタンで抽出した（１００ｍＬで５回）。次に、合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、５％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパノエート（７−６）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１７Ｈ２９Ｎ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３８８．４２、実測値：３８８．２。
【０２１５】
段階４．（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパン酸塩酸塩の製造：
（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパノエート（７−６）（７．１ｇ、１８．３４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（７０．０ｍＬ）及び水（１５．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（１．１ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２〜３の酸性とし、減圧下に濃縮した。粗生成物を、０．１％ＨＣｌ水溶液で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）−Ｎ−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アセトアミド）プロパン酸塩酸塩（Ｃ７）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ２７Ｎ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３７４．４４、実測値：３７４．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．５２（ｓ、１Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、４．３２（ｓ、２Ｈ）、４．２８−４．２９（ｍ、１Ｈ）、３．５４−３．５４（ｍ、１２Ｈ）、３．４３−３．４３（ｍ、２Ｈ）、３．３０（ｓ、３Ｈ）、３．２５（ｓ、３Ｈ）。
【０２１６】
実施例８
化合物８（Ｃ８）：（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタン酸・２塩酸塩の製造
【化２８】
2020532562.tif 000036
【０２１７】
段階２．（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエートの製造：
（Ｓ）−エチル２−アミノ−５−グアニジノペンタノエート（８−３）（１０．０ｇ、４９．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００．０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（８−２）（２３．３ｇ、１９８ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．５６５ｍＬ、９．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（４．６６ｇ、７４．２ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、生成物をジクロロメタンで抽出した（１００ｍＬで５回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエート（８−４）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１８Ｈ３８Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値：４０７．２８、実測値：４０７．４。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ７．４２（ｂｓ、１Ｈ）、７．２５（ｂｓ、１Ｈ）、６．８５（ｂｓ、２Ｈ）、４．１２−４．０５（ｍ、２Ｈ）、３．４９−３．４７（ｍ、４Ｈ）、３．４３−３．４０（ｍ、８Ｈ）、３．３８−３．３６（ｍ、１Ｈ）、３．２４（ｓ、６Ｈ）、３．１１−３．０９（ｍ、２Ｈ）、２．８０−２．６６（ｍ、４Ｈ）、１．６３−１．６０（ｍ、２Ｈ）、１．５０−１．４３（ｍ、２Ｈ）、１．２０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）。
【０２１８】
段階３．（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタン酸・２塩酸塩の製造：
（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエート（８−４）（５．４ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０．０ｍＬ）及び水（１０．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（０．７９７ｇ、１９．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。１．５Ｎ  ＨＣｌを反応混合物に加え、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２〜３の酸性とし、減圧下に濃縮した。粗生成物を、０．１％ＨＣｌ水溶液で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタン酸・２塩酸塩（Ｃ８）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ３４Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３７９．２５、実測値：３７９．０。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）：δ３．８６−３．６６（ｍ、４Ｈ）、３．８６−３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．６２−３．６０（ｍ、４Ｈ）、３．５７−３．５５（ｍ、４Ｈ）、３．４７−３．３９（ｍ、４Ｈ）、３．２９（ｓ、６Ｈ）、３．１７（ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、２Ｈ）、１．８６−１．８０（ｍ、２Ｈ）、１．７４−１．６２（ｍ、２Ｈ）。
【０２１９】
実施例９
化合物９（Ｃ９）：（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸・２塩酸塩の製造
【化２９】
2020532562.tif 000037
【０２２０】
段階２．（Ｓ）−メチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（９−３）（１０ｇ、５９．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００．０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（９−２）（２７．９ｇ、２３６ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．６７ｍＬ、１１．８２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（５．５７ｇ、８９ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、生成物をジクロロメタンで抽出した（１００ｍＬで５回）。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。粗生成物を、７％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（９−４）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１７Ｈ３１Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋１］＋の計算値：３７４．４４、実測値：３７４．２。
【０２２１】
段階３．（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸・２塩酸塩の製造：
（Ｓ）−メチル２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（９−４）（６．５ｇ、１７．３０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６５．０ｍＬ）及び水（１２．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（１．０３ｇ、２５．９５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２〜３の酸性とし、減圧下に濃縮した。残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を、０．１％ＨＣｌ水溶液で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸・２塩酸塩（Ｃ９）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ２９Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３６０．４１、実測値：３６０．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．５８（ｓ、１Ｈ）、７．３４（ｓ、１Ｈ）、４．４３（ｔ、Ｊ＝４．６０Ｈｚ、１Ｈ）、３．７９−３．８０（ｍ、４Ｈ）、３．５８−３．５９（ｍ、６Ｈ）、３．４７−３．４８（ｍ、６Ｈ）、３．３９−３．４０（ｍ、２Ｈ）、３．２６（ｓ、６Ｈ）。
【０２２２】
実施例１０
化合物１０（Ｃ１０）：（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）アセトアミド）ヘキサン酸の製造
【化３０】
2020532562.tif 000038
【０２２３】
化合物１０−２を、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  ２０１５，  ｖｏｌ．１３７，  ６９７５−６９７８に記載のプロトコールに従って合成した。
【０２２４】
段階２．（Ｓ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）アセトアミド）ヘキサン酸の製造：
（Ｓ）−２−アミノ−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（１０−２）（９．１８ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）及びトリエチルアミン（１１．３ｇ、１１１ｍｍｏｌ）中溶液に、ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の２−（２−メトキシエトキシ）アセチルクロライド（１０−３）（５．６６ｇ、３７．３ｍｍｏｌ（酸から新たに調製）を０℃で滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、１５％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）アセトアミド）ヘキサン酸（１０−４）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ３０Ｎ２Ｏ７［Ｍ＋１］＋の計算値：３６３．４１、実測値：３６３．２。
【０２２５】
段階３．（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）アセトアミド）ヘキサン酸の製造：
（Ｓ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（２−（２−メトキシエトキシ）アセトアミド）ヘキサン酸（１０−４）（４ｇ、１１．０４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、ＴＦＡ（８．５０ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌで中和し、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に１０％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−（２−メトキシエトキシ）アセトアミド）ヘキサン酸（Ｃ１０）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１１Ｈ２２Ｎ２Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：２６３．３、実測値：２６３．４。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ４．１４（ｔ、Ｊ＝５．２０Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１（ｓ、２Ｈ）、３．６５−３．６６（ｍ、２Ｈ）、３．５６−３．５７（ｍ、２Ｈ）、３．３１（ｓ、３Ｈ）、２．８９（ｔ、Ｊ＝７．６０Ｈｚ、２Ｈ）、１．７８−１．７８（ｍ、１Ｈ）、１．６４−１．６６（ｍ、３Ｈ）、１．５５−１．５５（ｍ、２Ｈ）。
【０２２６】
実施例１１
化合物１１（Ｃ１１）：（Ｓ）−６−アミノ−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ヘキサン酸の製造
【化３１】
2020532562.tif 000039
【０２２７】
段階２．（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸の製造：
（Ｓ）−２−アミノ−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（１１−２）（６ｇ、２４．３６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０．０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（１１−３）（１１．５１ｇ、９７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．２７ｍＬ、４．８７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とした。水素化シアノホウ素ナトリウム（４．５９ｇ、７３．１ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、反応混合物を室温で２０時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（１１−４）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ２１Ｈ４２Ｎ２Ｏ８［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：４５１．５６、実測値：４５１．２。
【０２２８】
段階３．（Ｓ）−６−アミノ−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ヘキサン酸の製造：
（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（１１−４）（３ｇ、６．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１５．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、ＴＦＡ（５．０６ｍＬ、６６．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウムで中和し、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に１０％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−６−アミノ−２−（ビス（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ヘキサン酸（Ｃ１１）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ３４Ｎ２Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３５１．４５、実測値：３５１．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ３．５２−３．５３（ｍ、１３Ｈ）、３．２８（ｓ、６Ｈ）、３．２６−３．２８（ｍ、４Ｈ）、２．９１（ｔ、Ｊ＝７．６０Ｈｚ、２Ｈ）、１．７４−１．７６（ｍ、２Ｈ）、１．５８−１．６０（ｍ、２Ｈ）、１．４３−１．４４（ｍ、２Ｈ）。
【０２２９】
実施例１２
化合物１２（Ｃ１２）：（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパン酸の製造
【化３２】
2020532562.tif 000040
【０２３０】
段階２．（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（１２−３）（１０ｇ、５９ｍｍｏｌ）のメタノール（１５０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（１２−２）（１０．４７ｇ、８８．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．０１ｍＬ、１７．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（５．４９ｇ、８８．７ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエート（１２−４）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１２Ｈ２１Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：２７２．３、実測値：２７２．２。
【０２３１】
段階３．（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパン酸の製造：
（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエート（１２−４）（５ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０．０ｍＬ）及び水（１０．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（１．１ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパン酸（Ｃ１２）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１１Ｈ１９Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：２５８．２８、実測値：２５８．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ７．５４（ｓ、１Ｈ）、６．７８（ｓ、１Ｈ）、３．４９−３．５０（ｍ、６Ｈ）、３．２６（ｓ、３Ｈ）、３．２４（ｔ、Ｊ＝７．２０Ｈｚ、１Ｈ）、２．７６−２．７６（ｍ、２Ｈ）、２．６６−２．６７（ｍ、１Ｈ）、２．５０−２．５２（ｍ、１Ｈ）。
【０２３２】
実施例１３
化合物１３（Ｃ１３）：（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−ヒスチジンの製造
【化３３】
2020532562.tif 000041
【０２３３】
段階１．メチル（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−ヒスチジネートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（１３−１）（５ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍＬ）及びトリエチルアミン（８．９７、８９ｍｍｏｌ）中溶液に、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の２−（２−メトキシエトキシ）アセチルクロライド（１３−２）（４．４９ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）（酸から新たに調製）を０℃で滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、それを濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、メチル（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−ヒスチジネート（１３−３）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１２Ｈ１９Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋１］＋の計算値：２８６．３０、実測値：２８６．２。
【０２３４】
段階２．（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−ヒスチジンの製造：
メチル（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−ヒスチジネート（１３−３）（４．７ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４７．０ｍＬ）及び水（５．０ｍＬ）中溶液に、水酸化ナトリウム（０．９８ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。１．５Ｎ  ＨＣｌを反応混合物に加え、それを減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−ヒスチジン（Ｃ１３）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１１Ｈ１７Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：２７２．２７、実測値：２７２．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．０６（ｓ、１Ｈ）、４．４１（ｑ、Ｊ＝４．９６Ｈｚ、１Ｈ）、３．９３（ｄ、Ｊ＝３．００Ｈｚ、２Ｈ）、３．５５−３．５７（ｍ、４Ｈ）、３．２５（ｓ、３Ｈ）、３．１３−３．１６（ｍ、１Ｈ）、２．９９−３．００（ｍ、１Ｈ）。
【０２３５】
実施例１４
化合物１４（Ｃ１４）：（Ｓ）−５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタン酸の製造
【化３４】
2020532562.tif 000042
【０２３６】
段階２．（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタノエートの製造：
（Ｓ）−エチル２−アミノ−５−グアニジノペンタノエート（１４−３）（３０．０ｇ、１４８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３００．０ｍＬ）中溶液に、２−（２−メトキシエトキシ）アセトアルデヒド（１４−２）（２６．２ｇ、２２２ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．６９ｍＬ、２９．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（１３．８ｇ、２２２ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、それを濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタノエート（１４−４）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１３Ｈ２８Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３０５．３、実測値：３０５．２。
【０２３７】
段階３．（Ｓ）−５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタン酸の製造：
メチル（Ｓ）−エチル５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタノエート（１４−４）（５ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０．０ｍＬ）及び水（５．０ｍＬ）中溶液に、水酸化ナトリウム（０．９８ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。１．５Ｎ  ＨＣｌを反応混合物に加え、それを減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（Ｓ）−５−グアニジノ−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）ペンタン酸（Ｃ１４）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１１Ｈ２４Ｎ４Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：２７７．３４、実測値：２７７．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ３．５５−３．５６（ｍ、６Ｈ）、３．２８（ｓ、３Ｈ）、３．１５−３．１７（ｍ、１Ｈ）、３．１０（ｔ、Ｊ＝６．８０Ｈｚ、２Ｈ）、２．８１−２．８２（ｍ、１Ｈ）、２．６８−２．７０（ｍ、１Ｈ）、１．５０−１．５２（ｍ、４Ｈ）。
【０２３８】
実施例１５
化合物１５（ＣＩ５）：（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−アルギニン・２塩酸塩の製造
【化３５】
2020532562.tif 000043
【０２３９】
段階１．エチル（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）−Ｌ−アルギニネートの製造
（Ｓ）−エチル２−アミノ−５−グアニジノペンタノエート（１５−１）（５ｇ、２４．７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍＬ）及びトリエチルアミン（１０．３４ｍＬ、７４．２ｍｍｏｌ）中溶液に、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の２−（２−メトキシエトキシ）アセチルクロライド（１５−２）（３．７６ｇ、２４．７２ｍｍｏｌ）（酸から新たに調製）を０℃で滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、エチル（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）−Ｌ−アルギニネート（１５−３）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１３Ｈ２６Ｎ４Ｏ５［Ｍ＋１］＋の計算値：３１９．３７、実測値：３１９．２。
【０２４０】
段階２．（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−アルギニン・２塩酸塩の製造：
メチルエチル（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）−Ｌ−アルギニネート（１５−３）（６．１ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６１．０ｍＬ）及び水（６．０ｍＬ）中溶液に、水酸化ナトリウム（１．１５ｇ、２８．７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌでｐＨ（２−３）の酸性とし、減圧下に濃縮した。残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を、０．１％ＨＣｌ水溶液で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって精製して、（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−アルギニン・２塩酸塩（Ｃ１５）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１１Ｈ２２Ｎ４Ｏ５［Ｍ＋１］＋の計算値：２９１．３２、実測値：２９１．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６：δ９．３６（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｓ、１Ｈ）、７．６７（ｓ、４Ｈ）、３．８９（ｔ、Ｊ＝６．００Ｈｚ、１Ｈ）、３．８５（ｓ、２Ｈ）、３．５８−３．５９（ｍ、２Ｈ）、３．４４−３．４７（ｍ、２Ｈ）、３．２６（ｓ、３Ｈ）、３．０２−３．０４（ｍ、２Ｈ）、１．６４−１．６５（ｍ、２Ｈ）、１．５６−１．５７（ｍ、２Ｈ）。
【０２４１】
実施例１６
化合物１６（Ｃ１６）：（（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−ヒスチジンの製造
【化３６】
2020532562.tif 000044
【０２４２】
段階１．メチル（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−ヒスチジネートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（１６−１）（５ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍＬ）及びトリエチルアミン（８．９７、８９ｍｍｏｌ）中溶液に、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイルクロライド（１６−２）（５．８１ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）（酸から新たに調製）を０℃で滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、混合物を濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、メチル（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−ヒスチジネート（１６−３）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ２７Ｎ３Ｏ７［Ｍ＋１］＋の計算値：３７４．１８、実測値：３７４．２。
【０２４３】
段階２．（（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−ヒスチジンの製造：
（Ｓ）−メチル１２−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−オキソ−２，５，８−トリオキサ−１１−アザトリデカン−１３−オエート（１６−３）（４．７ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０．０ｍＬ）及び水（１０．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（０．８５ｇ、２１．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。１．５Ｎ  ＨＣｌを反応混合物に加え、それを減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、セライト床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−ヒスチジン（Ｃ１６）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１５Ｈ２５Ｎ３Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３１７．３３、実測値：３１７．１７。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．５２（ｓ、１Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、４．７０−４．５９（ｍ、１Ｈ）、３．９９−３．９７（ｍ、２Ｈ）、３．５４−３．６１（ｍ、１１Ｈ）、３．２６−３．２８（ｍ、４Ｈ）、３．０９−３．０７（ｍ、２Ｈ）。
【０２４４】
実施例１７
化合物１７（Ｃ１７）：（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−アルギニンの製造
【化３７】
2020532562.tif 000045
【０２４５】
段階１．エチル（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−アルギニネートの製造：
エチルＬ−アルギニネート（１７−１）（９ｇ、４４．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）及びトリエチルアミン（１０．３４ｍＬ、７４．２ｍｍｏｌ）中溶液に、ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイルクロライド（１７−２）（１０．７１ｇ、４４．５ｍｍｏｌ）（酸から新たに調製）を０℃で滴下した。反応混合物を室温で３時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、１０％メタノール／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、エチル（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−アルギニネート（１７−３）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１７Ｈ３４Ｎ４Ｏ７［Ｍ＋１］＋の計算値：４０７．２４、実測値：４０７．２。
【０２４６】
段階２．（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−アルギニンの製造：
エチル（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−アルギニネート（１７−３）（５ｇ、１１．１９ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（０．７４ｇ、１８．４５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。反応混合物を１．５Ｎ  ＨＣｌで中和し、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−オイル）−Ｌ−アルギニン（Ｃ１７）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１５Ｈ３０Ｎ４Ｏ７［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３７９．２１、実測値：３７９．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ４．３５−４．３６（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｓ、２Ｈ）、３．５８−３．６９（ｍ、１０Ｈ）、３．５２−３．５３（ｍ、２Ｈ）、３．２９−０．００（ｍ、３Ｈ）、３．１４（ｔ、Ｊ＝６．８０Ｈｚ、２Ｈ）、１．８６−１．８７（ｍ、１Ｈ）、１．６９−１．７０（ｍ、１Ｈ）、１．５４−１．５６（ｍ、２Ｈ）。
【０２４７】
実施例１８
化合物１８（Ｃ１８）：（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−イル）−Ｌ−ヒスチジンの製造
【化３８】
2020532562.tif 000046
【０２４８】
段階２．メチル（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−イル）−Ｌ−ヒスチジネートの製造：
メチルＬ−ヒスチジネート（１８−１）（６．０ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０．０ｍＬ）中溶液に、２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−アール（１８−２）（７０．９７ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．６９ｍＬ、２９．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（３．３４ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、メチル（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−イル）−Ｌ−ヒスチジネート（１８−３）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１６Ｈ２９Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３６０．２１、実測値：３６０．２。
【０２４９】
段階３．（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−イル）−Ｌ−ヒスチジンの製造：
メチル（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−イル）−Ｌ−ヒスチジネート（１８−３）（４．５ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０．０ｍＬ）及び水（５．０ｍＬ）中溶液に、水酸化ナトリウム（０．７５ｇ、１８．７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。１．５Ｎ  ＨＣｌを反応混合物に加え、減圧下に濃縮した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（２，５，８，１１−テトラオキサトリデカン−１３−イル）−Ｌ−ヒスチジン（Ｃ１８）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１５Ｈ２７Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３４６．１９、実測値：３４６．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ４．３７（ｔ、Ｊ＝４．００Ｈｚ、１Ｈ）、４．０５（ｓ、２Ｈ）、３．５２−３．５３（ｍ、１２Ｈ）、３．２９（ｓ、３Ｈ）、３．１４（ｔ、Ｊ＝６．８０Ｈｚ、２Ｈ）、１．８７−１．８８（ｍ、１Ｈ）、１．６９−１．７０（ｍ、１Ｈ）、１．５４−１．５６（ｍ、２Ｈ）。
【０２５０】
実施例１９
化合物１９（Ｃ１９）：（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチル）−Ｌ−ヒスチジンの製造
【化３９】
2020532562.tif 000047
【０２５１】
段階２．メチル（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチル）−Ｌ−ヒスチジネートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（１９−１）（５ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）のメタノール（７５ｍＬ）中溶液に、２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）アセトアルデヒド（１９−２）（７．１ｇ、４４．３ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．０１ｍＬ、１７．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌した。反応混合物を冷却して０℃とし、水素化シアノホウ素ナトリウム（２．７９ｇ、４４．３ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。次に、飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、７％メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、メチル（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチル）−Ｌ−ヒスチジネート（１９−３）を得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１４Ｈ２５Ｎ３Ｏ５の計算値：［Ｍ＋Ｈ］＋３１６．１８、実測値：３１６．２。
【０２５２】
段階３．（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチル）−Ｌ−ヒスチジンの製造：
（Ｓ）−メチル３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−（（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）アミノ）プロパノエート（１９−３）（３ｇ、９．５１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０．０ｍＬ）及び水（１０．０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム（０．５７ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で５時間攪拌した。反応完了をＴＬＣによって確認した。粗残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥ床で濾過し、濾液を再度濃縮した。粗生成物を最初に５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、そして、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによって再度精製して、（２−（２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ）エチル）−Ｌ−ヒスチジン（Ｃ１９）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１３Ｈ２３Ｎ３Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３０２．１６、実測値：３０２．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．２０（ｓ、１Ｈ）、７．１６（ｓ、１Ｈ）、３．８５（ｔ、Ｊ＝６．４０Ｈｚ、１Ｈ）、３．７０（ｔ、Ｊ＝４．８０Ｈｚ、２Ｈ）、３．５９−３．６１（ｍ、６Ｈ）、３．５２−３．５３（ｍ、２Ｈ）、３．２８（ｓ、３Ｈ）、３．１６−３．１７（ｍ、４Ｈ）。
【０２５３】
実施例２０
化合物２０（Ｃ２０）：（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタン酸の製造
【化４０】
2020532562.tif 000048
【０２５４】
段階１．（Ｓ）−エチル１０−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）エチル）−１１−（３−グアニジノプロピル）−２，２，３，３−テトラメチル−４，７−ジオキサ−１０−アザ−３−シラドデカン−１２−オエートの製造：
（Ｓ）−エチル２−アミノ−５−グアニジノペンタノエート（２０−１）（１０ｇ、４９．６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の攪拌溶液に、２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）アセトアルデヒド（２０−２）（４３．２ｇ、１９８ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．０ｍＬ）を加え、反応混合物を０℃で１５分間攪拌した。次に、水素化シアノホウ素ナトリウム（２．７９ｇ、４４．３ｍｍｏｌ）を同じ温度で加えた。次に、得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳ分析により、所望の生成物の生成が示された。飽和重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍＬ）を反応混合物に加え、それを次に濃縮した。水層をＤＣＭで逆抽出した（１００ｍＬで５回）。合わせた有機層をブラインで洗浄した（１５０ｍＬで１回）。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗取得物を、１０％ＭｅＯＨで溶離を行うシリカゲル６０−１２０メッシュでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−エチル１０−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）エチル）−１１−（３−グアニジノプロピル）−２，２，３，３−テトラメチル−４，７−ジオキサ−１０−アザ−３−シラドデカン−１２−オエート（２０−３）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ２８Ｈ６２Ｎ４Ｏ６Ｓｉ２［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：６０６．４２、実測値：６０６．１。
【０２５５】
段階２．（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエートの製造：
（Ｓ）−エチル１０−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）エチル）−１１−（３−グアニジノプロピル）−２，２，３，３−テトラメチル−４，７−ジオキサ−１０−アザ−３−シラドデカン−１２−オエート（２０−３）（５．１ｇ、８．４０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の攪拌溶液に、ＨＣｌ／ジオキサン（１０．５ｍＬ、４２．０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応混合物を濃縮して、（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエートを固体として得た。
【０２５６】
段階３．（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタン酸の製造：
（Ｓ）−エチル２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタノエート（３．１１ｇ、８．２２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の攪拌溶液に、水（１０ｍＬ）及びＮａＯＨ（０．４９３ｇ、１２．３３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で５時間攪拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳ分析により、所望の生成物の生成が示された。反応混合物を濃縮し、１．５Ｎ  ＨＣｌで中和し、濃縮した。残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥで濾過し、濃縮して、粗生成物を得た。粗取得物を、３−５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−５−グアニジノペンタン酸（Ｃ２０）を固体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１４Ｈ３０Ｎ４Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３５１．２２、実測値：３５１．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ３．８２−３．８３（ｍ、１Ｈ）、３．７７−３．７８（ｍ、４Ｈ）、３．６４−３．６５（ｍ、４Ｈ）、３．５５−３．５６（ｍ、４Ｈ）、３．４２−３．４８（ｍ、４Ｈ）、３．１７（ｔ、Ｊ＝６．８０Ｈｚ、２Ｈ）、１．８２−１．８４（ｍ、４Ｈ）。
【０２５７】
実施例２１
化合物２１（Ｃ２１）：（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸の製造
【化４１】
2020532562.tif 000049
【０２５８】
段階１．（Ｓ）−メチル１１−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）エチル）−２，２，３，３−テトラメチル−４，７−ジオキサ−１０−アザ−３−シラドデカン−１２−オエートの製造：
（Ｓ）−メチル２−アミノ−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（２１−１）（５ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の攪拌溶液に、２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）アセトアルデヒド（２１−２）（３２．３ｇ、１４８ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．８４６ｍＬ、１４．７８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１５分間攪拌した。次に、水素化シアノホウ素ナトリウム（２．７９ｇ、４４．３ｍｍｏｌ）を同じ温度で加えた。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳ分析により、所望の生成物の生成が示された。飽和重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍＬ）を反応混合物に加え、それを濃縮した。水層をＣＨ２Ｃｌ２で逆抽出した（１００ｍＬで５回）。合わせた有機層をブラインで洗浄した（１５０ｍＬで１回）。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗取得物を、１０％ＭｅＯＨ／ジクロロメタンで溶離を行うシリカゲル６０−１２０メッシュでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、（Ｓ）−メチル１１−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）エチル）−２，２，３，３−テトラメチル−４，７−ジオキサ−１０−アザ−３−シラドデカン−１２−オエート（２１−３）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ２８Ｈ５７Ｎ３Ｏ６Ｓｉ２［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：５８９．３８、実測値：５８９．２。
【０２５９】
段階２：（Ｓ）−メチル１１−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−１０−（２−（２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エトキシ）エチル）−２，２，３，３−テトラメチル−４，７−ジオキサ−１０−アザ−３−シラドデカン−１２−オエート３（８ｇ、１３．９４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）中の攪拌溶液に、ＨＣｌ／ジオキサン（８．６８ｇ、６９．７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃で１時間攪拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳ分析により、所望の生成物の生成が示された。反応混合物を減圧下に濃縮して、所望の化合物（Ｓ）−メチル２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエートを得て、それを精製せずに次の段階で用いた。
【０２６０】
段階３：（Ｓ）−メチル２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパノエート（３．０ｇ、８．６９ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍＬ）中の攪拌溶液に、ＮａＯＨ（０．５２１ｇ、１３．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で４時間攪拌した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳ分析により、所望の生成物の生成が示された。反応混合物を濃縮し、水相を１．５Ｎ  ＨＣｌで中和し、濃縮し、残留物をメタノールに溶かし、ＣＥＬＩＴＥで濾過し、濃縮して粗生成物を得た。粗取得物を、３−５％アンモニア／メタノールで溶離を行うシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって精製して、生成物を得て、それを、水で溶離を行う逆相クロマトグラフィーによってさらに精製して、（Ｓ）−２−（ビス（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）アミノ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパン酸（Ｃ２１）を液体として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１４Ｈ２５Ｎ３Ｏ６［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３３２．１７、実測値：３３２．２。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ：δ８．２１（ｓ、１Ｈ）、７．１５（ｓ、１Ｈ）、３．９６（ｔ、Ｊ＝７．１２Ｈｚ、１Ｈ）、３．６６−３．６７（ｍ、４Ｈ）、３．５７−３．５９（ｍ、４Ｈ）、３．５０−３．５１（ｍ、４Ｈ）、３．２５−３．２６（ｍ、６Ｈ）。
【０２６１】
実施例２２
化合物２２（Ｃ２２）：［（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−フェニルアラニンの製造
【化４２】
2020532562.tif 000050
【０２６２】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−３−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル）プロパノエート塩酸塩（２２−１）（２．７５ｇ、１０．６７ｍｍｏｌ）及び２−（２−メトキシエトキシ）酢酸（２２−２）（１．７１７ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２  ５０ｍＬに懸濁させた。２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキサイド（Ｔ３Ｐ）溶液（５０％ＥｔＯＡｃ溶液、１３．５８ｍＬ、２１．３４ｍｍｏｌ）を加え、その直後にＤＩＥＡ（２．７９ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。次に、混合物をＴＦＡ（８．１６ｍＬ、１０７ｍｍｏｌ）で処理し、終夜攪拌した。混合物を高真空下に濃縮した。残留物について、０−７０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃ−ＥｔＯＨ（３：１）で溶離を行うシリカでのクロマトグラフィーを行って、（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−フェニルアラニン（Ｃ２２）を油状物として得た。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１４Ｈ１９ＮＯ５［Ｍ＋１］＋の計算値：２８２．１３、実測値：２８２．１８。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６：δ１２．７１（ｓ、１Ｈ）、７．７６（ｄ、Ｊ＝８．２１Ｈｚ、１Ｈ）、７．１９−７．３１（ｍ、５Ｈ）、４．５３（ｍ、１Ｈ）、３．８５（ｍ、２Ｈ）、３．４７（ｍ、４Ｈ）、３．２５（ｓ、１Ｈ）、３．１２（ｄｄ、Ｊ＝４．８１Ｈｚ、１４．１０Ｈｚ、１Ｈ）、２．９８（ｄｄ、Ｊ＝９．１９Ｈｚ、１４．２０Ｈｚ、１Ｈ）。
【０２６３】
実施例２３
化合物２３（Ｃ２３）：（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−チロシンの製造
【化４３】
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【０２６４】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−３−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）フェニル）プロパノエート塩酸塩（２３−１）（３．４８ｇ、１０．５５ｍｍｏｌ）及び２−（２−メトキシエトキシ）酢酸（２３−２）（１．６９８ｇ、１２．６６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２  ５０ｍＬに懸濁させた。２，４，６−トリプロピル−１，３，５，２，４，６−トリオキサトリホスフィナン２，４，６−トリオキサイド（Ｔ３Ｐ）溶液（５０％ＥｔＯＡｃ溶液、１３．４３ｍＬ、２１．１０ｍｍｏｌ）を加え、その直後にＤＩＥＡ（２２．７６ｍＬ、１５．８２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。次に、混合物をＴＦＡ（８．０７ｍＬ、１０５ｍｍｏｌ）で処理し、終夜攪拌した。混合物を高真空下に濃縮した。残留物について、０−７０％ヘキサン／ＥｔＯＡｃ−ＥｔＯＨ（３：１）で溶離を行うシリカでのクロマトグラフィーを行って、（２−（２−メトキシエトキシ）アセチル）−Ｌ−チロシン（Ｃ２３）を油状物として得た。その油状物は、室温で１週間静置しているとゆっくり固化して、半固体を与えた。ＬＣ−ＭＳ  ＥＳＩ／ＡＰＣＩ；Ｃ１４Ｈ１９ＮＯ６［Ｍ＋１］＋の計算値：２９８．１２、実測値：２９８．１９。１Ｈ  ＮＭＲ  ４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６：δ１２．７４（ｓ、１Ｈ）、９．１９（ｓ、１Ｈ）、７．６５（ｄ、Ｊ＝９．３７Ｈｚ、１Ｈ）、６．９９（ｄ、Ｊ＝８．４５Ｈｚ、２Ｈ）、６．６６（ｄ、Ｊ＝８．６２Ｈｚ、２Ｈ）、４．４４（ｍ、１Ｈ）、３．８５（ｍ、２Ｈ）、３．４１−３．５６（ｍ、４Ｈ）、３．２６（ｓ、１Ｈ）、２．９９（ｄｄ、Ｊ＝５．１５Ｈｚ、１４．００Ｈｚ、１Ｈ）、２．８６（ｄｄ、Ｊ＝８．５８Ｈｚ、１３．９１Ｈｚ、１Ｈ）。
【０２６５】
実施例２４
ＰＥＧ化賦形剤を含む医薬組成物の粘度
ペンブロリズマブ製剤は、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、濃度２００ｍｇ／ｍＬのペンブロリズマブ、及び濃度２００ｍＭの被験賦形剤（本明細書に記載の、本発明のＰＥＧ化賦形剤）（ｐＨをｐＨ５．５に調節）を含むものであった。賦形剤を含まないペンブロリズマブ製剤は、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ５．５）中の２００ｍｇ／ｍＬペンブロリズマブからなるものであった。ペンブロリズマブ製剤とともに用いる１０ｍＭヒスチジン緩衝液は、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン／無菌水（ｐＨを５．５に調節）からなるものであった。
【０２６６】
抗体Ｂ製剤は、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、濃度１７７ｍｇ／ｍＬの抗体Ｂ及び濃度２００ｍＭの被験賦形剤（本明細書に記載の、本発明のＰＥＧ化賦形剤）（ｐＨをｐＨ６．０に調節）を含むものであった。賦形剤を含まない抗体Ｂ製剤は、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）中の１７７ｍｇ／ｍＬ抗体Ｂからなるものであった。抗体Ｂとともに用いる１０ｍＭヒスチジン緩衝液は、１０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン／無菌水（ｐＨを６．０に調節）からなるものであった。
【０２６７】
粘度測定：全ての粘度測定は、ｍＶＲＯＣ（粘度計／流量計−Ｏｎ−Ａ−Ｃｈｉｐ、ＲｈｅｏＳｅｎｓｅ，  Ｉｎｃ．  Ｓａｎ  Ｒａｍｏｎ，  ＣＡ）を用いて行った。被験製剤を２５０μＬ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ気密注射器に入れ、次にそれを、ｍＶＲＯＣの注射器ジャケット内に入れた。その装置は、適切な流量での粘度測定のために、製剤をチップに注入した。ほとんどの測定を二連で行った。
【０２６８】
被験製剤の粘度を、下記の表４で提供している。結果は、被験ＰＥＧ化賦形剤（即ち、式Ｉの化合物）が、本発明の賦形剤を含まない同じ製剤と比較して高濃度のモノクローナル抗体製剤の粘度を低下させることができたことを示している。さらに、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、２００ｍｇ／ｍＬペンブロリズマブ、及び０．２Ｍ式Ｉの化合物を含む全ての被験製剤は、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、２００ｍｇ／ｍＬペンブロリズマブ、０．２Ｍアルギニン又はヒスチジンを含む被験製剤より低い粘度を有しており、それは、本発明の化合物が業界において典型的に使用される化合物と比較して高い粘度低下能力を提供することを示している。同様に、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、１７７ｍｇ／ｍＬ抗体Ｂ、及び０．２Ｍ式Ｉの化合物を含む被験製剤は、式Ｉの化合物を含まない同じ製剤より低い粘度を有していた。
【０２６９】
表４．被験製剤の粘度
【表４】
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【国際調査報告】
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