(57)【要約】  幾つかの実施形態では、子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがある被験体から得られるサンプル中の発現変動遺伝子を検出する方法及び組成物が本明細書で提供される。【選択図】図１Ｃ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＰＲＵＮＥ２、ＡＤＡＭＴＳ８、ＳＣＡＲＡ５、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＲ１、ＬＰＡＲ１、ＡＢＬＩＭ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＬＴＢＰ１、ＴＮＦＲＳＦ８、ＳＬＣ２７Ａ３、ＩＬ１、ＣＣＤＣ、ＰＰＡＰ２Ｃ、ＳＥＲＴＡＤＡ４、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、Ｃ１ｏｒｆ１３３及びＣＮＩＨ３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記被験体を降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、並びに分娩からなる群より選択される有効量の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験体を別の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記被験体が別の抗子癇前症療法を受けているか、又は別の抗子癇前症療法で治療された、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
バイオマーカーのレベルを決定することが、前記被験体から得られたサンプルに対してアッセイを行うことを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項６】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも５つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも７つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも９つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記バイオマーカーがＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１５個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ａ）が、前記群の全てのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
更にＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１のレベルを測定することから本質的になる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカータンパク質のレベルを決定することを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
各バイオマーカータンパク質のレベルを免疫組織化学アッセイ、免疫ブロットアッセイ又はフローサイトメトリーアッセイを用いて決定する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカー核酸のレベルを決定することを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
各バイオマーカー核酸のレベルをリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ又は核酸マイクロアレイアッセイによって測定する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
各バイオマーカー核酸のレベルを、ハイブリダイゼーションアッセイ及び少なくとも１つの標識結合物質を用いて測定する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの標識結合物質が少なくとも１つの標識オリゴヌクレオチド結合物質である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記サンプルが子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記サンプルがヒトから得られる、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ヒトが妊娠しているか又は妊娠しようとしている、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＨＳＤ１７Ｂ２、ＡＮＧＰＴ２、ＮＣＫＡＰ５、ＡＤＲＡ２Ａ、ＤＢＣ１、Ｃ１ＱＴＮＦ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＥＧＲ１、ＳＳＴＲ１、ＦＢＸＯ２、ＣＰＥ、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＧＲＰ、ＩＧＦＢＰ５、ＣＯＣＨ、ＡＲＨＧＤＩＢ、ＳＣＧ５、ＩＴＧＡ１１、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＲＬＮ２、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＬＩＣ２、ＴＭＥＭ２５、ＣＣＤＣ８１、ＭＹＣＮ、ＮＰＲ１、ＲＡＳＧＲＰ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＲＳＰＯ３、Ｃ１０ｏｒｆ１０、ＴＭＥＭ１３２Ｃ、ＰＰＡＰ２Ｂ、ＮＫＡＩＮ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＩＬ１５、ＳＬＣ７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＴＸ１、ＣＨＳＴ７、ＧＡＬＮＴＬ２、ＳＢＳＮ、ＥＤＮＲＡ、ＩＬ１Ｂ、ＳＰＡＲＣＬ１、ＳＣＡＲＡ５、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＣＬ８、Ｐ２ＲＹ１４、ＣＮＲ１及びＩＧＦＢＰ１から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む、方法。
【請求項２４】
前記被験体を降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、並びに分娩からなる群より選択される有効量の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記被験体を別の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記被験体が別の抗子癇前症療法を受けているか、又は別の抗子癇前症療法で治療された、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
バイオマーカーのレベルを決定することが、前記被験体から得られたサンプルに対してアッセイを行うことを含む、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項２８】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも５つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも７つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも９つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記バイオマーカーがＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１５個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも２０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも３０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも４０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
工程（ａ）が、前記群の全てのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項２３〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１のレベルを測定することを更に含む、請求項２３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカータンパク質のレベルを決定することを含む、請求項２３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
各バイオマーカータンパク質のレベルを免疫組織化学アッセイ、免疫ブロットアッセイ又はフローサイトメトリーアッセイを用いて決定する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカー核酸のレベルを決定することを含む、請求項２３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
各バイオマーカー核酸のレベルをリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ又は核酸マイクロアレイアッセイによって測定する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記サンプルが子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される、請求項２３〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記サンプルがヒトから得られる、請求項２３〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記ヒトが妊娠しているか又は妊娠しようとしている、請求項２３〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡ１ＢＧ−ＡＳ１、ＡＲＬ５Ｂ、ＢＡＣ１−ＡＳ、Ｃ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＰ、ＣＳＰＧ４、ＣＹＰ１９Ａ１、ＤＥＦＢ１、ＥＮＰＰ４、ＩＰＷ、ＬＯＣ１０１９２８４３９、ＬＯＣ１０１９２９６０７、ＬＯＣ６４４１７２、ＭＩＲ３６５Ａ、ＭＩＲ４５０９−１、ＭＩＲ５４８Ｈ１、ＭＭＥ−ＡＳ１、ＭＳ４Ａ２、ＯＧＮ、ＰＲＫＸＰ１、ＰＳＭＤ３、ＲＮＡ５ＳＰ１８７、ＲＮＡ５ＳＰ４６３、ＲＮＵ２−５Ｐ、ＲＮＵ４−３９Ｐ、ＲＮＵ４−７６Ｐ、ＲＮＵ４ＡＴＡＣ１ＢＰ、ＲＮＵ６−１１１１Ｐ、ＲＮＵ６−５２１Ｐ、ＲＮＵ６−５４０Ｒ、ＲＮＵ６Ｖ、ＲＮＵＣ−９０１Ｐ、ＲＰ１１−１０２６Ｍ７．３、ＲＰ１１−１０６Ｋ３．１、ＲＰ１１−１２Ｄ１６．２、ＲＰ１１−６６１Ａ１２．４、ＲＰ１１−８７２０１７．８、ＳＮＯＲＤ１１５−３２、ＳＮＯＲＤ５２、ＳＮＯＲＤ７１、ＳＰＩＮＫ１、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＲＡＪ５９、ＴＲＢＶ４−２、ＴＲＩＭ４８、ＴＳＰＡＮ１、ＵＧＴ２Ｂ７及びＺＮＦ４８３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む、方法。
【請求項４７】
前記被験体を降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、並びに分娩からなる群より選択される有効量の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記被験体を別の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記被験体が別の抗子癇前症療法を受けているか、又は別の抗子癇前症療法で治療された、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
バイオマーカーのレベルを決定することが、前記被験体から得られたサンプルに対してアッセイを行うことを含む、請求項４６又は４７に記載の方法。
【請求項５１】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも５つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも７つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも９つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１５個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも２０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも３０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも４０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
工程（ａ）が、前記群の全てのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項４６〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
更にＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１のレベルを測定することから本質的になる、請求項４６〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカータンパク質のレベルを決定することを含む、請求項４６〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
各バイオマーカータンパク質のレベルを免疫組織化学アッセイ、免疫ブロットアッセイ又はフローサイトメトリーアッセイを用いて決定する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカー核酸のレベルを決定することを含む、請求項４６〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
各バイオマーカー核酸のレベルをリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ又は核酸マイクロアレイアッセイによって測定する、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記サンプルが子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される、請求項４６〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記子宮内膜組織のサンプルが基底脱落膜のサンプルである、請求項４６〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記サンプルがヒトから得られる、請求項４６〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記ヒトが妊娠しているか又は妊娠しようとしている、請求項４６〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡＣ０７３２１８．２、ＡＣ０７３２１８．３、ＡＣＥ２、ＡＤＡＭＴＳ１５、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＯＸ１、ＢＭＰ２、ＣＴＣ−４９８Ｊ１２．１、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ８、ＤＯＣＫ４−ＡＳ１、ＤＳＣ３、ＧＢＰ２、ＧＰＲ１２６、ＩＣＡＭ１、ＩＥＲ３、ＩＧＳＦ１０、ＩＬ１Ａ、ＩＬ２３Ａ、ＩＮＨＢＡ、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＬＲＦ１、ＬＩＮＣ００３１２、ＬＩＮＣＯ１３３８、ＬＯＣ１００５０６５３０、ＬＯＣ１０１９２９１７４、ＭＭＰ１０、ＭＴ１ＣＰ、ＭＵＭ１Ｌ１、ＮＯＴＵＭ、ＰＤＧＦＤ、ＰＲＧ２、ＰＲＯＭ１、ＰＺＰ、ＲＮ７ＳＫＰ１６、ＲＮＡＳＥ２、ＲＮＵ６−１６２Ｐ、ＲＮＵ７−４０Ｐ、ＲＮＵＣ−１０２４Ｐ、ＲＰ１１−５７Ｐ１９．１、ＲＰ１１−５９Ｈ７．３、ＲＰ１−６８Ｄ１８．４、ＳＡＰＣＤ１、ＳＥＲＰＩＮ８１１、ＳＰＩＮＫ１、ＳＵＬＦ２、ＴＭＥＭ２７、ＴＮＣ、ＴＲＰＣ４及びＸｘｂａｃ−ＢＰＧ２５２Ｆから本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む、方法。
【請求項７０】
前記被験体を降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、並びに分娩からなる群より選択される有効量の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記被験体を別の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記被験体が別の抗子癇前症療法を受けているか、又は別の抗子癇前症療法で治療された、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
バイオマーカーのレベルを決定することが、前記被験体から得られたサンプルに対してアッセイを行うことを含む、請求項６９又は７０に記載の方法。
【請求項７４】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも５つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも７つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも９つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１５個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも２０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも３０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも４０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
工程（ａ）が、前記群の全てのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項６９〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
更にＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１のレベルを測定することから本質的になる、請求項６９〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカータンパク質のレベルを決定することを含む、請求項６９〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
各バイオマーカータンパク質のレベルを免疫組織化学アッセイ、免疫ブロットアッセイ又はフローサイトメトリーアッセイを用いて決定する、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカー核酸のレベルを決定することを含む、請求項６９〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
各バイオマーカー核酸のレベルをリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ又は核酸マイクロアレイアッセイによって測定する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記サンプルが子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される、請求項６９〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記子宮内膜組織のサンプルが壁側脱落膜のサンプルである、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記サンプルがヒトから得られる、請求項６９〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記ヒトが妊娠しているか又は妊娠しようとしている、請求項６９〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む、方法。
【請求項９３】
前記被験体を降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、並びに分娩からなる群より選択される有効量の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記被験体を別の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記被験体が別の抗子癇前症療法を受けているか、又は別の抗子癇前症療法で治療された、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
バイオマーカーのレベルを決定することが、前記被験体から得られたサンプルに対してアッセイを行うことを含む、請求項９２又は９３に記載の方法。
【請求項９７】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも５つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項９２〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも７つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項９２〜９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
工程（ａ）が、前記群の全てのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項９２〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
ＡＢＬＩＭ２、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＮＧＰＴ２、ＡＲＨＧＤＩＢ、Ｃ１０ｏｒｆ１０、Ｃ１ｏｒｆ１３３、Ｃ１ＱＴＮＦ７、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＣＣＤＣ、ＣＣＤＣ８１、ＣＣＬ８、ＣＬＩＣ２、ＣＮＩＨ３、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＰＥ、ＤＢＣ１、ＥＤＮＲＡ、ＥＧＲ１、ＧＡＬＮＴＬ２、ＧＲＰ、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ５、ＩＬ１、ＩＬ１５、ＩＬ１Ｂ、ＩＲＳ２、ＩＴＧＡ１１、ＬＰＡＲ１、ＬＴＢＰ１、ＭＹＣＮ、ＮＣＫＡＰ５、ＮＫＡＩＮ１、ＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１から本質的になる群の少なくとも１つの付加的なバイオマーカーのレベルを決定することを更に含む、請求項９２〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも５つの付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも７つの付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１００又は１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも９つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１００〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１０個の付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１００〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１５個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１００〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも２０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１００〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも３０個の付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１００〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
工程（ａ）が、前記群の全ての付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１００〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカータンパク質のレベルを決定することを含む、請求項９２〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
各バイオマーカータンパク質のレベルを免疫組織化学アッセイ、免疫ブロットアッセイ又はフローサイトメトリーアッセイを用いて決定する、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカー核酸のレベルを決定することを含む、請求項９２〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
各バイオマーカー核酸のレベルをリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ又は核酸マイクロアレイアッセイによって測定する、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記サンプルが子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される、請求項９２〜１１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記子宮内膜組織のサンプルが壁側脱落膜又は基底脱落膜のサンプルである、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記サンプルがヒトから得られる、請求項９２〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ヒトが妊娠しているか又は妊娠しようとしている、請求項９２〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が２未満であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有しないことを決定することと、
を含む、方法。
【請求項１１８】
１つ以上の受精卵又は胚を前記被験体に移植することを更に含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
バイオマーカーのレベルを決定することが、前記被験体から得られたサンプルに対してアッセイを行うことを含む、請求項１１７又は１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも５つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１１７〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも７つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１１７〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
工程（ａ）が、前記群の全てのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１１７〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２３】
ＡＢＬＩＭ２、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＮＧＰＴ２、ＡＲＨＧＤＩＢ、Ｃ１０ｏｒｆ１０、Ｃ１ｏｒｆ１３３、Ｃ１ＱＴＮＦ７、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＣＣＤＣ、ＣＣＤＣ８１、ＣＣＬ８、ＣＬＩＣ２、ＣＮＩＨ３、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＰＥ、ＤＢＣ１、ＥＤＮＲＡ、ＥＧＲ１、ＧＡＬＮＴＬ２、ＧＲＰ、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ５、ＩＬ１、ＩＬ１５、ＩＬ１Ｂ、ＩＲＳ２、ＩＴＧＡ１１、ＬＰＡＲ１、ＬＴＢＰ１、ＭＹＣＮ、ＮＣＫＡＰ５、ＮＫＡＩＮ１、ＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１から本質的になる群の少なくとも１つの付加的なバイオマーカーのレベルを決定することを更に含む、請求項１１７〜１２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２４】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも５つの付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも７つの付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１２３又は１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも９つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１２３〜１２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２７】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１０個の付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１２３〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも１５個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも２０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１２３〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３０】
工程（ａ）が、前記群の少なくとも３０個の付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１２３〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３１】
工程（ａ）が、前記群の全ての付加的なバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる、請求項１２３〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３２】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカータンパク質のレベルを決定することを含む、請求項１１７〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
各バイオマーカータンパク質のレベルを免疫組織化学アッセイ、免疫ブロットアッセイ又はフローサイトメトリーアッセイを用いて決定する、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカー核酸のレベルを決定することを含む、請求項１１７〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
各バイオマーカー核酸のレベルをリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ又は核酸マイクロアレイアッセイによって測定する、請求項１３４に記載の方法。
【請求項１３６】
前記サンプルが子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される、請求項１１７〜１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
前記子宮内膜組織のサンプルが壁側脱落膜又は基底脱落膜のサンプルである、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
前記サンプルがヒトから得られる、
請求項１１７〜１３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３９】
前記ヒトが妊娠しているか又は妊娠しようとしている、請求項１１７〜１３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４０】
子癇前症と関連した１つ以上のバイオマーカーのレベルを決定するための固体分析装置であって、
１つ以上の分析領域を含むチップ、
を備え、各分析領域が５個〜１２９個の結合パートナーの群より本質的になり、
前記結合パートナーが各々、図１４〜図１６から選択されるバイオマーカーの発現産物に特異的に結合する、固体分析装置。
【請求項１４１】
各分析領域が前記群の５個〜２５個の結合パートナーから本質的になる、請求項１４０に記載の固体分析装置。
【請求項１４２】
各分析領域が前記群の２５個〜５０個の結合パートナーから本質的になる、請求項１４０又は１４１に記載の固体分析装置。
【請求項１４３】
各分析領域が前記群の５０個〜１００個の結合パートナーから本質的になる、請求項１４０〜１４２のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１４４】
各分析領域が前記群の１００個〜１２９個の結合パートナーから本質的になる、請求項１４０〜１４３のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１４５】
各分析領域が前記群の１００個〜１２９個の結合パートナーから本質的になる、請求項１４０〜１４４のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１４６】
前記バイオマーカーがＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる群より選択される、請求項１４０〜１４５のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１４７】
前記バイオマーカーがＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＰＲＵＮＥ２、ＡＤＡＭＴＳ８、ＳＣＡＲＡ５、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＲ１、ＬＰＡＲ１、ＡＢＬＩＭ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＬＴＢＰ１、ＴＮＦＲＳＦ８、ＳＬＣ２７Ａ３、ＩＬ１、ＣＣＤＣ、ＰＰＡＰ２Ｃ、ＳＥＲＴＡＤＡ４、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、Ｃ１ｏｒｆ１３３及びＣＮＩＨ３から本質的になる群より選択される、請求項１４０〜１４６のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１４８】
前記バイオマーカーがＨＳＤ１７Ｂ２、ＡＮＧＰＴ２、ＮＣＫＡＰ５、ＡＤＲＡ２Ａ、ＤＢＣ１、Ｃ１ＱＴＮＦ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＥＧＲ１、ＳＳＴＲ１、ＦＢＸＯ２、ＣＰＥ、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＧＲＰ、ＩＧＦＢＰ５、ＣＯＣＨ、ＡＲＨＧＤＩＢ、ＳＣＧ５、ＩＴＧＡ１１、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＲＬＮ２、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＬＩＣ２、ＴＭＥＭ２５、ＣＣＤＣ８１、ＭＹＣＮ、ＮＰＲ１、ＲＡＳＧＲＰ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＲＳＰＯ３、Ｃ１０ｏｒｆ１０、ＴＭＥＭ１３２Ｃ、ＰＰＡＰ２Ｂ、ＮＫＡＩＮ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＩＬ１５、ＳＬＣ７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＴＸ１、ＣＨＳＴ７、ＧＡＬＮＴＬ２、ＳＢＳＮ、ＥＤＮＲＡ、ＩＬ１Ｂ、ＳＰＡＲＣＬ１、ＳＣＡＲＡ５、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＣＬ８、Ｐ２ＲＹ１４、ＣＮＲ１及びＩＧＦＢＰ１から本質的になる群より選択される、請求項１４０〜１４７のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１４９】
前記バイオマーカーがＡ１ＢＧ−ＡＳ１、ＡＲＬ５Ｂ、ＢＡＣ１−ＡＳ、Ｃ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＰ、ＣＳＰＧ４、ＣＹＰ１９Ａ１、ＤＥＦＢ１、ＥＮＰＰ４、ＩＰＷ、ＬＯＣ１０１９２８４３９、ＬＯＣ１０１９２９６０７、ＬＯＣ６４４１７２、ＭＩＲ３６５Ａ、ＭＩＲ４５０９−１、ＭＩＲ５４８Ｈ１、ＭＭＥ−ＡＳ１、ＭＳ４Ａ２、ＯＧＮ、ＰＲＫＸＰ１、ＰＳＭＤ３、ＲＮＡ５ＳＰ１８７、ＲＮＡ５ＳＰ４６３、ＲＮＵ２−５Ｐ、ＲＮＵ４−３９Ｐ、ＲＮＵ４−７６Ｐ、ＲＮＵ４ＡＴＡＣ１ＢＰ、ＲＮＵ６−１１１１Ｐ、ＲＮＵ６−５２１Ｐ、ＲＮＵ６−５４０Ｒ、ＲＮＵ６Ｖ、ＲＮＵＣ−９０１Ｐ、ＲＰ１１−１０２６Ｍ７．３、ＲＰ１１−１０６Ｋ３．１、ＲＰ１１−１２Ｄ１６．２、ＲＰ１１−６６１Ａ１２．４、ＲＰ１１−８７２０１７．８、ＳＮＯＲＤ１１５−３２、ＳＮＯＲＤ５２、ＳＮＯＲＤ７１、ＳＰＩＮＫ１、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＲＡＪ５９、ＴＲＢＶ４−２、ＴＲＩＭ４８、ＴＳＰＡＮ１、ＵＧＴ２Ｂ７及びＺＮＦ４８３から本質的になる群より選択される、請求項１４０〜１４８のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１５０】
前記バイオマーカーがＡＣ０７３２１８．２、ＡＣ０７３２１８．３、ＡＣＥ２、ＡＤＡＭＴＳ１５、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＯＸ１、ＢＭＰ２、ＣＴＣ−４９８Ｊ１２．１、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ８、ＤＯＣＫ４−ＡＳ１、ＤＳＣ３、ＧＢＰ２、ＧＰＲ１２６、ＩＣＡＭ１、ＩＥＲ３、ＩＧＳＦ１０、ＩＬ１Ａ、ＩＬ２３Ａ、ＩＮＨＢＡ、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＬＲＦ１、ＬＩＮＣ００３１２、ＬＩＮＣＯ１３３８、ＬＯＣ１００５０６５３０、ＬＯＣ１０１９２９１７４、ＭＭＰ１０、ＭＴ１ＣＰ、ＭＵＭ１Ｌ１、ＮＯＴＵＭ、ＰＤＧＦＤ、ＰＲＧ２、ＰＲＯＭ１、ＰＺＰ、ＲＮ７ＳＫＰ１６、ＲＮＡＳＥ２、ＲＮＵ６−１６２Ｐ、ＲＮＵ７−４０Ｐ、ＲＮＵＣ−１０２４Ｐ、ＲＰ１１−５７Ｐ１９．１、ＲＰ１１−５９Ｈ７．３、ＲＰ１−６８Ｄ１８．４、ＳＡＰＣＤ１、ＳＥＲＰＩＮ８１１、ＳＰＩＮＫ１、ＳＵＬＦ２、ＴＭＥＭ２７、ＴＮＣ、ＴＲＰＣ４及びＸｘｂａｃ−ＢＰＧ２５２Ｆから本質的になる群より選択される、請求項１４０〜１４９のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１５１】
前記バイオマーカーの発現産物がｍＲＮＡである、請求項１４０〜１５０のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１５２】
前記バイオマーカーの発現産物がタンパク質である、請求項１４０〜１５１のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１５３】
前記チップが被験体から得られる少なくとも１つのサンプルを分析するために使用される、請求項１４０〜１５２のいずれか一項に記載の固体分析装置。
【請求項１５４】
前記サンプルが子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される、請求項１５３に記載の固体分析装置。
【請求項１５５】
前記サンプルがヒトから得られる、請求項１５３又は１５４に記載の固体分析装置。
【請求項１５６】
前記ヒトが妊娠しているか又は妊娠しようとしている、請求項１５５に記載の固体分析装置。
【請求項１５７】
請求項１４０に記載の固体分析装置と使用説明書とを含むキット。
【請求項１５８】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーは、以下の経路の少なくとも１つから選択される：細胞外構造の組織化、組織発達、炎症、免疫機能、輸送及び／又は代謝、細胞シグナリング、転写及び／又は翻訳、シグナル伝達、タンパク質分解、インスリン関連、Ｇタンパク質シグナリング、細胞周期及び活性化、並びに不特定；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む、方法。
【請求項１５９】
前記被験体を降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、並びに分娩からなる群より選択される有効量の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項１５８に記載の方法。
【請求項１６０】
前記被験体を別の抗子癇前症療法で治療することを更に含む、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６１】
前記被験体が別の抗子癇前症療法を受けているか、又は別の抗子癇前症療法で治療された、請求項１５９に記載の方法。
【請求項１６２】
バイオマーカーのレベルを決定することが、前記被験体から得られたサンプルに対してアッセイを行うことを含む、請求項１５８又は１５９に記載の方法。
【請求項１６３】
工程（ａ）が前記経路の１つの少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することを含む、請求項１５８〜１６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６４】
工程（ａ）が前記経路の２つ以上の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することを含む、請求項１５８〜１６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６５】
工程（ａ）が前記経路の各々の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することを含む、請求項１５８〜１６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６６】
工程（ａ）が少なくとも１つの付加的な経路の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することを含む、請求項１５８〜１６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６７】
更にＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１のレベルを測定することから本質的になる、請求項１５８１６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカータンパク質のレベルを決定することを含む、請求項１５８〜１６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６９】
各バイオマーカータンパク質のレベルを免疫組織化学アッセイ、免疫ブロットアッセイ又はフローサイトメトリーアッセイを用いて決定する、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
バイオマーカーのレベルを決定することが、バイオマーカー核酸のレベルを決定することを含む、請求項１５８〜１６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７１】
各バイオマーカー核酸のレベルをリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ又は核酸マイクロアレイアッセイによって測定する、請求項１７０に記載の方法。
【請求項１７２】
前記サンプルが子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される、請求項１５８〜１７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７３】
前記サンプルがヒトから得られる、請求項１５８〜１７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７４】
前記ヒトが妊娠しているか又は妊娠しようとしている、請求項１５８〜１７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７５】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することは、ハイブリダイゼーションアッセイ及び少なくとも１つの結合物質を含み、該少なくとも１つの結合物質は、配列番号１〜８から本質的になる群より選択され、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡＬＤＨ１Ａ１、ＩＧＦＢＰ１、ＮＡＮＯＳ３及びＨＳＤ１７Ｂ２から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む、方法。
【請求項１７６】
前記少なくとも１つの結合物質が少なくとも１つの標識結合物質を含む、請求項１７５に記載の方法。
【請求項１７７】
被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することは、ハイブリダイゼーションアッセイ及び少なくとも１つの標識結合物質を含み、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＰＲＵＮＥ２、ＡＤＡＭＴＳ８、ＳＣＡＲＡ５、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＲ１、ＬＰＡＲ１、ＡＢＬＩＭ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＬＴＢＰ１、ＴＮＦＲＳＦ８、ＳＬＣ２７Ａ３、ＩＬ１、ＣＣＤＣ、ＰＰＡＰ２Ｃ、ＳＥＲＴＡＤＡ４、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、Ｃ１ｏｒｆ１３３及びＣＮＩＨ３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１７年９月５日付で出願された米国仮特許出願第６２／５５４，４７１号の利益を主張し、その開示全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００２】
本明細書に記載される方法及び組成物は、子癇前症（preeclampsia：妊娠高血圧腎症）を有するか又は子癇前症を有するリスクがあることを示唆する発現変動遺伝子（例えば、バイオマーカー）の検出に関する。
【背景技術】
【０００３】
初妊娠の約８％で罹患する子癇前症（ＰＥ）は、毎年世界中で８００万の母子ペアに影響を与えている（非特許文献１、非特許文献２）。ヒトの妊娠に特有のこの合併症は、高血圧、タンパク尿、及び浮腫等の母体血管損傷の他の兆候の新たな発生を特徴とする（非特許文献３）。重症子癇前症（ｓＰＥ）は、血圧の更なる上昇（１６０ｍｍ  Ｈｇ以上の収縮期血圧又は１００ｍｍ  Ｈｇ以上の拡張期血圧）、又は以下のいずれか：血小板減少症、肝機能障害、進行性腎不全、肺水腫、及び脳障害若しくは視覚障害の新たな発生に基づいて診断される（非特許文献４）。現在、典型的な治療法は胎盤、ひいては乳児の娩出である。結果として、子癇前症は、米国において早産の１５％の原因となっている。数十年に及ぶ研究にもかかわらず、ＰＥの病因の完全な理解は依然として達成しにくく、予測バイオマーカーの特定及び標的治療戦略の開発に関連する問題の一因となっている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Winn et al., Pregnancy Hypertens, 2011, 1(1):100-108
【非特許文献２】Fisher, Am J Obstet Gynecol, 2015, 213(4 Suppl):S115-122
【非特許文献３】Roberts et al., Lancet, 2001, 357(9249):53-56
【非特許文献４】Gynecologists ACoOa & Pregnancy TFoHi, Obstet Gynecol, 2013, 122(5):1122-1131
【発明の概要】
【０００５】
本開示は一部には、或る特定の遺伝子（例えば、バイオマーカー）が、正常妊娠した女性と比較して、過去の妊娠で子癇前症（ＰＥ）を有していた女性において差次的に発現されるという研究結果に基づく。
【０００６】
したがって、本開示の態様は、発現変動遺伝子（例えば、バイオマーカー）を検出する方法及び組成物であって、発現変動遺伝子が子癇前症を有するか又は子癇前症を有するリスクがあることを示唆する、方法及び組成物を提供する。
【０００７】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＰＲＵＮＥ２、ＡＤＡＭＴＳ８、ＳＣＡＲＡ５、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＲ１、ＬＰＡＲ１、ＡＢＬＩＭ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＬＴＢＰ１、ＴＮＦＲＳＦ８、ＳＬＣ２７Ａ３、ＩＬ１、ＣＣＤＣ、ＰＰＡＰ２Ｃ、ＳＥＲＴＡＤＡ４、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、Ｃ１ｏｒｆ１３３及びＣＮＩＨ３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む。
【０００８】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＨＳＤ１７Ｂ２、ＡＮＧＰＴ２、ＮＣＫＡＰ５、ＡＤＲＡ２Ａ、ＤＢＣ１、Ｃ１ＱＴＮＦ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＥＧＲ１、ＳＳＴＲ１、ＦＢＸＯ２、ＣＰＥ、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＧＲＰ、ＩＧＦＢＰ５、ＣＯＣＨ、ＡＲＨＧＤＩＢ、ＳＣＧ５、ＩＴＧＡ１１、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＲＬＮ２、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＬＩＣ２、ＴＭＥＭ２５、ＣＣＤＣ８１、ＭＹＣＮ、ＮＰＲ１、ＲＡＳＧＲＰ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＲＳＰＯ３、Ｃ１０ｏｒｆ１０、ＴＭＥＭ１３２Ｃ、ＰＰＡＰ２Ｂ、ＮＫＡＩＮ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＩＬ１５、ＳＬＣ７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＴＸ１、ＣＨＳＴ７、ＧＡＬＮＴＬ２、ＳＢＳＮ、ＥＤＮＲＡ、ＩＬ１Ｂ、ＳＰＡＲＣＬ１、ＳＣＡＲＡ５、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＣＬ８、Ｐ２ＲＹ１４、ＣＮＲ１及びＩＧＦＢＰ１から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む。
【０００９】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡ１ＢＧ−ＡＳ１、ＡＲＬ５Ｂ、ＢＡＣ１−ＡＳ、Ｃ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＰ、ＣＳＰＧ４、ＣＹＰ１９Ａ１、ＤＥＦＢ１、ＥＮＰＰ４、ＩＰＷ、ＬＯＣ１０１９２８４３９、ＬＯＣ１０１９２９６０７、ＬＯＣ６４４１７２、ＭＩＲ３６５Ａ、ＭＩＲ４５０９−１、ＭＩＲ５４８Ｈ１、ＭＭＥ−ＡＳ１、ＭＳ４Ａ２、ＯＧＮ、ＰＲＫＸＰ１、ＰＳＭＤ３、ＲＮＡ５ＳＰ１８７、ＲＮＡ５ＳＰ４６３、ＲＮＵ２−５Ｐ、ＲＮＵ４−３９Ｐ、ＲＮＵ４−７６Ｐ、ＲＮＵ４ＡＴＡＣ１ＢＰ、ＲＮＵ６−１１１１Ｐ、ＲＮＵ６−５２１Ｐ、ＲＮＵ６−５４０Ｒ、ＲＮＵ６Ｖ、ＲＮＵＣ−９０１Ｐ、ＲＰ１１−１０２６Ｍ７．３、ＲＰ１１−１０６Ｋ３．１、ＲＰ１１−１２Ｄ１６．２、ＲＰ１１−６６１Ａ１２．４、ＲＰ１１−８７２０１７．８、ＳＮＯＲＤ１１５−３２、ＳＮＯＲＤ５２、ＳＮＯＲＤ７１、ＳＰＩＮＫ１、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＲＡＪ５９、ＴＲＢＶ４−２、ＴＲＩＭ４８、ＴＳＰＡＮ１、ＵＧＴ２Ｂ７及びＺＮＦ４８３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む。
【００１０】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡＣ０７３２１８．２、ＡＣ０７３２１８．３、ＡＣＥ２、ＡＤＡＭＴＳ１５、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＯＸ１、ＢＭＰ２、ＣＴＣ−４９８Ｊ１２．１、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ８、ＤＯＣＫ４−ＡＳ１、ＤＳＣ３、ＧＢＰ２、ＧＰＲ１２６、ＩＣＡＭ１、ＩＥＲ３、ＩＧＳＦ１０、ＩＬ１Ａ、ＩＬ２３Ａ、ＩＮＨＢＡ、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＬＲＦ１、ＬＩＮＣ００３１２、ＬＩＮＣＯ１３３８、ＬＯＣ１００５０６５３０、ＬＯＣ１０１９２９１７４、ＭＭＰ１０、ＭＴ１ＣＰ、ＭＵＭ１Ｌ１、ＮＯＴＵＭ、ＰＤＧＦＤ、ＰＲＧ２、ＰＲＯＭ１、ＰＺＰ、ＲＮ７ＳＫＰ１６、ＲＮＡＳＥ２、ＲＮＵ６−１６２Ｐ、ＲＮＵ７−４０Ｐ、ＲＮＵＣ−１０２４Ｐ、ＲＰ１１−５７Ｐ１９．１、ＲＰ１１−５９Ｈ７．３、ＲＰ１−６８Ｄ１８．４、ＳＡＰＣＤ１、ＳＥＲＰＩＮ８１１、ＳＰＩＮＫ１、ＳＵＬＦ２、ＴＭＥＭ２７、ＴＮＣ、ＴＲＰＣ４及びＸｘｂａｃ−ＢＰＧ２５２Ｆから本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む。
【００１１】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む。
【００１２】
幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法は、ＡＢＬＩＭ２、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＮＧＰＴ２、ＡＲＨＧＤＩＢ、Ｃ１０ｏｒｆ１０、Ｃ１ｏｒｆ１３３、Ｃ１ＱＴＮＦ７、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＣＣＤＣ、ＣＣＤＣ８１、ＣＣＬ８、ＣＬＩＣ２、ＣＮＩＨ３、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＰＥ、ＤＢＣ１、ＥＤＮＲＡ、ＥＧＲ１、ＧＡＬＮＴＬ２、ＧＲＰ、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ５、ＩＬ１、ＩＬ１５、ＩＬ１Ｂ、ＩＲＳ２、ＩＴＧＡ１１、ＬＰＡＲ１、ＬＴＢＰ１、ＭＹＣＮ、ＮＣＫＡＰ５、ＮＫＡＩＮ１、ＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１から本質的になる群の少なくとも１つの付加的なバイオマーカーのレベルを決定することを更に含む。
【００１３】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が２未満であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有しないことを決定することと、
を含む。
【００１４】
幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法は、ＡＢＬＩＭ２、ＡＤＲＡ２Ａ、ＡＮＧＰＴ２、ＡＲＨＧＤＩＢ、Ｃ１０ｏｒｆ１０、Ｃ１ｏｒｆ１３３、Ｃ１ＱＴＮＦ７、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＣＣＤＣ、ＣＣＤＣ８１、ＣＣＬ８、ＣＬＩＣ２、ＣＮＩＨ３、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＰＥ、ＤＢＣ１、ＥＤＮＲＡ、ＥＧＲ１、ＧＡＬＮＴＬ２、ＧＲＰ、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ５、ＩＬ１、ＩＬ１５、ＩＬ１Ｂ、ＩＲＳ２、ＩＴＧＡ１１、ＬＰＡＲ１、ＬＴＢＰ１、ＭＹＣＮ、ＮＣＫＡＰ５、ＮＫＡＩＮ１、ＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１から本質的になる群の少なくとも１つの付加的なバイオマーカーのレベルを決定することを更に含む。
【００１５】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、前記少なくとも１つのバイオマーカーは、以下の経路の少なくとも１つから選択される：細胞外構造の組織化、組織発達、炎症、免疫機能、輸送及び／又は代謝、細胞シグナリング、転写及び／又は翻訳、シグナル伝達、タンパク質分解、インスリン関連、Ｇタンパク質シグナリング、細胞周期及び活性化、並びに不特定；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む。
【００１６】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することは、ハイブリダイゼーションアッセイ及び少なくとも１つの結合物質を含み、該少なくとも１つの結合物質は、配列番号１〜８から本質的になる群より選択され、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＡＬＤＨ１Ａ１、ＩＧＦＢＰ１、ＮＡＮＯＳ３及びＨＳＤ１７Ｂ２から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む。幾つかの実施の形態では、前記少なくとも１つの結合物質は、少なくとも１つの標識結合物質を含む。
【００１７】
幾つかの実施の形態では、被験体に由来するサンプル中の子癇前症と関連した少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを検出する方法は、
（ａ）被験体から得られるサンプル中の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することと、
なお、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することは、ハイブリダイゼーションアッセイ及び少なくとも１つの標識結合物質を含み、前記少なくとも１つのバイオマーカーはＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＰＲＵＮＥ２、ＡＤＡＭＴＳ８、ＳＣＡＲＡ５、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＲ１、ＬＰＡＲ１、ＡＢＬＩＭ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＬＴＢＰ１、ＴＮＦＲＳＦ８、ＳＬＣ２７Ａ３、ＩＬ１、ＣＣＤＣ、ＰＰＡＰ２Ｃ、ＳＥＲＴＡＤＡ４、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、Ｃ１ｏｒｆ１３３及びＣＮＩＨ３から本質的になる群より選択される；
（ｂ）前記バイオマーカーの対照レベルに対する前記サンプル中の該バイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が少なくとも２であることを決定し、それにより前記被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを決定することと、
を含む。
【００１８】
幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法は、前記被験体を降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、並びに分娩からなる群より選択される有効量の抗子癇前症療法で治療することを更に含み得る。幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法は、前記被験体を別の抗子癇前症療法で治療することを更に含み得る。幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される被験体は、別の抗子癇前症療法を受けているか、又は別の抗子癇前症療法で治療された。
【００１９】
幾つかの実施の形態では、本明細書に記載されるようにバイオマーカーのレベルを決定することは、前記被験体から得られたサンプルに対してアッセイを行うことを含む。
【００２０】
幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法の工程（ａ）は、前記群の少なくとも５つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる。幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法の工程（ａ）は、前記群の少なくとも７つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる。幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法の工程（ａ）は、前記群の少なくとも９つのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる。幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法の工程（ａ）は、前記群の少なくとも１０個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる。幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法の工程（ａ）は、前記群の少なくとも１５個のバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる。幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法の工程（ａ）は、前記群の全てのバイオマーカーのレベルを決定することから本質的になる。
【００２１】
幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法は、更にＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１のレベルを測定することから本質的になる。
【００２２】
幾つかの実施の形態では、前記バイオマーカーは、ＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる。
【００２３】
幾つかの実施の形態では、バイオマーカーのレベルを決定することは、バイオマーカータンパク質のレベルを決定することを含む。幾つかの実施の形態では、各バイオマーカータンパク質のレベルを免疫組織化学アッセイ、免疫ブロットアッセイ又はフローサイトメトリーアッセイを用いて決定する。
【００２４】
幾つかの実施の形態では、バイオマーカーのレベルを決定することは、バイオマーカー核酸のレベルを決定することを含む。幾つかの実施の形態では、各バイオマーカー核酸のレベルをリアルタイム逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ又は核酸マイクロアレイアッセイによって測定する。
【００２５】
幾つかの実施の形態では、本明細書に記載される方法は、１つ以上の受精卵又は胚を前記被験体に移植することを更に含む。
【００２６】
幾つかの実施の形態では、各バイオマーカー核酸のレベルを、ハイブリダイゼーションアッセイ及び少なくとも１つの標識結合物質を用いて測定する。幾つかの実施の形態では、前記少なくとも１つの標識結合物質は、少なくとも１つの標識オリゴヌクレオチド結合物質である。幾つかの実施の形態では、少なくとも１つの標識結合物質は、少なくとも１つの蛍光標識結合物質である。
【００２７】
幾つかの実施の形態では、サンプルは、子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び子宮内膜液のサンプルからなる群より選択される。幾つかの実施の形態では、サンプルは、ヒトから得られる。幾つかの実施の形態では、ヒトは、妊娠しているか又は妊娠しようとしている。
【００２８】
幾つかの実施の形態では、子癇前症と関連した１つ以上のバイオマーカーのレベルを決定するための固体分析装置は、
１つ以上の分析領域を含むチップ、
を備え、各分析領域が５個〜１２９個の結合パートナーの群から本質的になり、
前記結合パートナーが各々、図１４〜図１６から選択されるバイオマーカーの発現産物に特異的に結合する。
【００２９】
幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、前記群の５個〜２５個の結合パートナーから本質的になる各分析領域を含む。幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、前記群の２５個〜５０個の結合パートナーから本質的になる各分析領域を含む。幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、前記群の５０個〜１００個の結合パートナーから本質的になる各分析領域を含む。幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、前記群の１００個〜１２９個の結合パートナーから本質的になる各分析領域を含む。幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、前記群の１００個〜１２９個の結合パートナーから本質的になる各分析領域を含む。
【００３０】
幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、ＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３から本質的になる群より選択されるバイオマーカーを含む。
【００３１】
幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、ＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＰＲＵＮＥ２、ＡＤＡＭＴＳ８、ＳＣＡＲＡ５、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＲ１、ＬＰＡＲ１、ＡＢＬＩＭ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＬＴＢＰ１、ＴＮＦＲＳＦ８、ＳＬＣ２７Ａ３、ＩＬ１、ＣＣＤＣ、ＰＰＡＰ２Ｃ、ＳＥＲＴＡＤＡ４、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、Ｃ１ｏｒｆ１３３及びＣＮＩＨ３から本質的になる群より選択されるバイオマーカーを含む。
【００３２】
幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＡＮＧＰＴ２、ＮＣＫＡＰ５、ＡＤＲＡ２Ａ、ＤＢＣ１、Ｃ１ＱＴＮＦ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＥＧＲ１、ＳＳＴＲ１、ＦＢＸＯ２、ＣＰＥ、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＧＲＰ、ＩＧＦＢＰ５、ＣＯＣＨ、ＡＲＨＧＤＩＢ、ＳＣＧ５、ＩＴＧＡ１１、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＲＬＮ２、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＬＩＣ２、ＴＭＥＭ２５、ＣＣＤＣ８１、ＭＹＣＮ、ＮＰＲ１、ＲＡＳＧＲＰ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＲＳＰＯ３、Ｃ１０ｏｒｆ１０、ＴＭＥＭ１３２Ｃ、ＰＰＡＰ２Ｂ、ＮＫＡＩＮ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＩＬ１５、ＳＬＣ７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＴＸ１、ＣＨＳＴ７、ＧＡＬＮＴＬ２、ＳＢＳＮ、ＥＤＮＲＡ、ＩＬ１Ｂ、ＳＰＡＲＣＬ１、ＳＣＡＲＡ５、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＣＬ８、Ｐ２ＲＹ１４、ＣＮＲ１及びＩＧＦＢＰ１から本質的になる群より選択されるバイオマーカーを含む。
【００３３】
幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、Ａ１ＢＧ−ＡＳ１、ＡＲＬ５Ｂ、ＢＡＣ１−ＡＳ、Ｃ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＰ、ＣＳＰＧ４、ＣＹＰ１９Ａ１、ＤＥＦＢ１、ＥＮＰＰ４、ＩＰＷ、ＬＯＣ１０１９２８４３９、ＬＯＣ１０１９２９６０７、ＬＯＣ６４４１７２、ＭＩＲ３６５Ａ、ＭＩＲ４５０９−１、ＭＩＲ５４８Ｈ１、ＭＭＥ−ＡＳ１、ＭＳ４Ａ２、ＯＧＮ、ＰＲＫＸＰ１、ＰＳＭＤ３、ＲＮＡ５ＳＰ１８７、ＲＮＡ５ＳＰ４６３、ＲＮＵ２−５Ｐ、ＲＮＵ４−３９Ｐ、ＲＮＵ４−７６Ｐ、ＲＮＵ４ＡＴＡＣ１ＢＰ、ＲＮＵ６−１１１１Ｐ、ＲＮＵ６−５２１Ｐ、ＲＮＵ６−５４０Ｒ、ＲＮＵ６Ｖ、ＲＮＵＣ−９０１Ｐ、ＲＰ１１−１０２６Ｍ７．３、ＲＰ１１−１０６Ｋ３．１、ＲＰ１１−１２Ｄ１６．２、ＲＰ１１−６６１Ａ１２．４、ＲＰ１１−８７２０１７．８、ＳＮＯＲＤ１１５−３２、ＳＮＯＲＤ５２、ＳＮＯＲＤ７１、ＳＰＩＮＫ１、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＴＲＡＪ５９、ＴＲＢＶ４−２、ＴＲＩＭ４８、ＴＳＰＡＮ１、ＵＧＴ２Ｂ７及びＺＮＦ４８３から本質的になる群より選択されるバイオマーカーを含む。
【００３４】
幾つかの実施の形態では、固体分析装置は、ＡＣ０７３２１８．２、ＡＣ０７３２１８．３、ＡＣＥ２、ＡＤＡＭＴＳ１５、ＡＤＡＭＴＳ４、ＡＯＸ１、ＢＭＰ２、ＣＴＣ−４９８Ｊ１２．１、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ８、ＤＯＣＫ４−ＡＳ１、ＤＳＣ３、ＧＢＰ２、ＧＰＲ１２６、ＩＣＡＭ１、ＩＥＲ３、ＩＧＳＦ１０、ＩＬ１Ａ、ＩＬ２３Ａ、ＩＮＨＢＡ、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＫＬＲＦ１、ＬＩＮＣ００３１２、ＬＩＮＣＯ１３３８、ＬＯＣ１００５０６５３０、ＬＯＣ１０１９２９１７４、ＭＭＰ１０、ＭＴ１ＣＰ、ＭＵＭ１Ｌ１、ＮＯＴＵＭ、ＰＤＧＦＤ、ＰＲＧ２、ＰＲＯＭ１、ＰＺＰ、ＲＮ７ＳＫＰ１６、ＲＮＡＳＥ２、ＲＮＵ６−１６２Ｐ、ＲＮＵ７−４０Ｐ、ＲＮＵＣ−１０２４Ｐ、ＲＰ１１−５７Ｐ１９．１、ＲＰ１１−５９Ｈ７．３、ＲＰ１−６８Ｄ１８．４、ＳＡＰＣＤ１、ＳＥＲＰＩＮ８１１、ＳＰＩＮＫ１、ＳＵＬＦ２、ＴＭＥＭ２７、ＴＮＣ、ＴＲＰＣ４及びＸｘｂａｃ−ＢＰＧ２５２Ｆから本質的になる群より選択されるバイオマーカーを含む。
【００３５】
幾つかの実施の形態では、前記バイオマーカーの発現産物は、ｍＲＮＡである。幾つかの実施の形態では、前記バイオマーカーの発現産物は、タンパク質である。幾つかの実施の形態では、前記チップは、被験体から得られる少なくとも１つのサンプルを分析するために使用される。幾つかの実施の形態では、キットは、固体分析装置と使用説明書とを含む。
【００３６】
本技術のこれら及び他の態様は、以下の非限定的な図面によって説明され、発明を実施するための形態及び実施例により詳細に記載される。
【００３７】
以下の図面は本明細書の一部を形成し、本開示の或る特定の態様を更に実証するために含まれ、これらの態様は、これらの図面の１つ以上を、本明細書に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせて参照することによって、より良好に理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１Ａ】妊娠合併症のない女性（子癇前症（ＰＥ）なし）に由来するｈＥＳＣのローダミン−ファロイジン染色によるＦ−アクチンの局在化の代表的な免疫蛍光像を示す図である。スケールバー＝１００μｍ。
【図１Ｂ】ｓＰＥを有していた女性に由来するｈＥＳＣのローダミン−ファロイジン染色によるＦ−アクチンの局在化の代表的な免疫蛍光像を示す図である。
【図１Ｃ】正常妊娠患者に由来する非脱落膜化ｈＥＳＣ及び脱落膜化ｈＥＳＣの馴化培地中で検出されたＰＲＬレベルのグラフを示す図である。
【図１Ｄ】ｓＰＥ患者に由来する非脱落膜化ｈＥＳＣ及び脱落膜化ｈＥＳＣの馴化培地中で検出されたＰＲＬレベルのグラフを示す図である。
【図１Ｅ】正常妊娠患者及びｓＰＥ患者に由来する非脱落膜化ｈＥＳＣ及び脱落膜化ｈＥＳＣの馴化培地中のＰＲＬレベルをまとめたグラフを示す図である。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５。ｎ．ｓ．、有意でない。スケールバー＝１００μｍ。
【図１Ｆ】正常妊娠患者に由来する非脱落膜化ｈＥＳＣ及び脱落膜化ｈＥＳＣの馴化培地中で検出されたＩＧＦＢＰ１レベルのグラフを示す図である。
【図１Ｇ】ｓＰＥ患者に由来する非脱落膜化ｈＥＳＣ及び脱落膜化ｈＥＳＣの馴化培地中で検出されたＩＧＦＢＰ１レベルのグラフを示す図である。
【図１Ｈ】正常妊娠患者及びｓＰＥ患者に由来する非脱落膜化ｈＥＳＣ及び脱落膜化ｈＥＳＣの馴化培地中のＩＧＦＢＰ１レベルをまとめたグラフを示す図である。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００５。ｎ．ｓ．、有意でない。
【図２Ａ】研究デザインの概略図である。ｈＥＳＣを子宮内膜生検材料から単離し、細胞の一部をｉｎ  ｖｉｔｒｏで脱落膜化させた。ドナーは、以前に正常な妊娠転帰を有していた非妊娠女性又は元ｓＰＥ患者であった。
【図２Ｂ】群間で２倍以上の発現変動遺伝子（ＤＥＧ）の数を示すＬＩＭＭＡ一対比較の概要を示す図である。
【図２Ｃ】正常妊娠転帰群及び元ｓＰＥ患者に由来するｈＥＳＣの脱落膜化前に変調された５個のＤＥＧのヒートマップを示す図である。
【図２Ｄ】正常な妊娠転帰を有していたドナーに由来するｈＥＳＣの脱落膜化中に変調された５０個の最も高度なＤＥＧ（合計＝７４；図１３も参照されたい）のヒートマップを示す図である。
【図２Ｅ】正常妊娠したドナーと比較して以前にｓＰＥ妊娠したドナーに由来するｈＥＳＣの脱落膜化後に誤発現された５０個の最も高度なＤＥＧ（合計＝１２９；図１４を参照されたい）のヒートマップを示す図である。＊は、ｑＲＴ−ＰＣＲによって検証されたｍＲＮＡ発現パターンを意味する；Δ、倍率変化。
【図３Ａ】研究デザインの概略図である。レーザーマイクロダイセクションにより、基底板からの基底脱落膜及び壁側脱落膜（胎膜に隣接する）の一部の単離が可能であった。
【図３Ｂ】ｓＰＥ対感染の兆候のない早産（非感染早産；ｎＰＴＢ）における同等の脱落膜コンパートメント間の発現変動遺伝子（ＤＥＧ）の数を示すＬＩＭＭＡ一対比較の概要を示す図である。
【図３Ｃ】ｎＰＴＢ患者対ｓＰＥ患者の基底脱落膜における５０個の最も高度なＤＥＧ（合計＝７９；図１５も参照されたい）を示すヒートマップを示す図である。
【図３Ｄ】ｎＰＴＢ患者対ｓＰＥ患者の壁側脱落膜における５０個の最も高度なＤＥＧ（合計＝２２７；図１６も参照されたい）を示すヒートマップを示す図である。
【図４Ａ−４Ｄ】細胞栄養芽層（ＣＴＢ）の可視化を可能にするサイトケラチン（ＣＫ７）に対する抗体と、脱落膜マーカーＰＲＬ（図４Ａ及び図４Ｂは、それぞれ基底脱落膜及び壁側脱落膜に由来する切片を示す）及びＩＧＦＢＰ１（図４Ｃ及び図４Ｄは、それぞれ基底脱落膜及び壁側脱落膜に由来する切片を示す）とで共免疫染色した基底脱落膜又は壁側脱落膜の一部を含有していた母体−胎児境界面の代表的な組織切片を示す図である。
【図４Ｅ−４Ｆ】ＤＥＣ細胞を標識するために抗ビメンチン（ＶＩＭ）で染色した基底脱落膜（図４Ｅ）及び壁側脱落膜（図４Ｆ）に由来する代表的な隣接切片を示す図である。核をＤＡＰＩで可視化した。各サンプルの代表的な領域（３つ又は４つ）を分析した（ｓＰＥ、ｎ＝５症例；ｎＰＴＢ、ｎ＝４症例）。ｉＣＴＢ、浸潤性ＣＴＢ；Ａｍ、羊膜；ｓｃｈＣＴＢ、平滑絨毛膜ＣＴＢ。スケールバー：１００μｍ。
【図４Ｇ−４Ｈ】非感染早産（ｎＰＴＢ）患者及びｓＰＥ患者の基底脱落膜及び壁側脱落膜における相対ＰＲＬ免疫反応性（図４Ｇ）及び相対ＩＧＦＢＰ１免疫反応性（図４Ｈ）のグラフを示す図である。
【図５Ａ−５Ｊ】ｓＰＥ患者の脱落膜生検材料から新たに単離した間質細胞が培養中に脱落膜化異常を示したことを実証する代表的な画像を示す図である。細胞を基底脱落膜又は壁側脱落膜のいずれかから単離し、Ｐ０で分析した。ドナーは、妊娠が感染の兆候のない早産（非感染早産、ｎＰＴＢ；ｎ＝４）又は重症子癇前症（ｓＰＥ；ｎ＝５）を合併した女性であった。図５Ａ及び図５Ｂは、細胞のＦ−アクチン細胞骨格をローダミン−ファロイジン染色によって染色し、核をＤＡＰＩで染色した、基底脱落膜又は壁側脱落膜に由来する細胞の代表的な免疫蛍光像を示す。ｎＰＴＢ妊娠では、いずれかの脱落膜コンパートメントに由来する細胞は、アクチンフィラメントの複雑な十分に発達したネットワークを有する多角形形状を有していた。対照的に、ｓＰＥ妊娠の細胞は、はるかに発達していないアクチン細胞骨格を有し、扁平であった。図５Ｃ〜図５Ｈは、プロラクチン（ＰＲＬ）（図５Ｃ及び図５Ｄ）、インスリン様成長因子結合タンパク質１（ＩＧＦＢＰ１）（図５Ｅ及び図５Ｆ）及びビメンチン（図５Ｇ及び図５Ｈ）について染色した、ｎＰＴＢ患者又はｓＰＥ患者における基底脱落膜又は壁側脱落膜に由来する細胞の代表的な免疫蛍光像を示す。図５Ｉ及び図５Ｊは、ｎＰＴＢ患者又はｓＰＥ患者における基底脱落膜又は壁側脱落膜からのＰＲＬ（図５Ｉ）及びＩＧＦＢＰ１分泌（図５Ｊ）のグラフを示す。データは、三連で分析した各サンプルの平均±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１；スケールバー、１００μｍ。
【図６Ａ−６Ｂ】ｎＰＴＢ患者（図６Ａ）及びｓＰＥ患者（図６Ｂ）の基底脱落膜又は壁側脱落膜に由来する脱落膜化又は非脱落膜化生検材料のｈＥＳＣの代表的な免疫蛍光像を示す図である。Ｆ−アクチン細胞骨格は、ローダミン−ファロイジン染色により染色した。核はＤＡＰＩで染色した。
【図６Ｃ−６Ｄ】基底脱落膜又は壁側脱落膜に由来する脱落膜化及び非脱落膜化生検材料におけるＰＲＬ（図６Ｃ）及びＩＧＦＢＰ１（図６Ｄ）分泌のグラフを示す図である。レベルは、ＥＬＩＳＡを用いて測定した。データは、三連で分析した各サンプルの平均±ＳＥＭである。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１；ｎ．ｓ．、有意でない；スケールバー、１００μｍ。
【図７Ａ】実験デザインの図である。脱落膜細胞を基底脱落膜（basalis）（ＤＢ）又は壁側脱落膜（parietalis）（ＤＰ）から単離し、一晩培養した。次いで、馴化培地（ＣＭ）を単離した。ドナーは、妊娠が感染の兆候のない早産（非感染早産、ｎＰＴＢ；ｎ＝３）又は重症子癇前症（ｓＰＥ；ｎ＝４）のいずれかを合併した女性であった。ＣＴＢを妊娠中期の胎盤（１５週〜１７週、ｎ＝４；１８週〜２０週、ｎ＝３；２１週〜２３週、ｎ＝３）から単離した。これらをＭａｔｒｉｇｅｌコーティングＴｒａｎｓｗｅｌｌフィルター上にてｎＰＴＢ又はｓＰＥ脱落膜細胞によって馴化した培地中で培養した（７２時間）。フィルターの底面に達したＣＴＢ及び細胞過程を計数した。
【図７Ｂ】ｎＰＴＢドナー及びｓＰＥドナーに由来する培養物中のＣＴＢ及び細胞過程の数のグラフを示す図である。同等のｎＰＴＢサンプルと比較して、ｓＰＥドナーの細胞に由来するＣＭは、ＤＢから単離したか、又はＤＰから単離したかどうかにかかわらず、ＣＴＢ浸潤を有意に阻害した。
【図７Ｃ】ｎＰＴＢドナー及びｓＰＥドナーに由来する培養物中のＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１（各１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下でのＣＴＢ及び細胞過程の数のグラフを示す図である。新鮮培地へのＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１の添加は、ＣＴＢ浸潤を、細胞をｎＰＴＢ培養物に由来するＣＭ中でインキュベートした場合に観察されるレベルまで回復させた。データを二連ウェルの平均±ＳＥＭとして表す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１；ｎ．ｓ．、有意でない。
【図８Ａ】図２Ａ〜図２Ｅ及び図１３に記載される対照サンプルからのデータのＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓによる結果を示す図である。
【図８Ｂ】図３Ａ及び図３Ｂ、並びに図１４に記載される重症子癇前症サンプルからのデータのＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓによる結果を示す図である。黒色のバーは上方調節された経路を表し、灰色のバーは下方調節された経路を表す。
【図８Ｃ】正常な妊娠転帰を有していた女性に由来する細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化中に上方調節され、以前にｓＰＥ妊娠した女性に由来する細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化中に下方調節されたオーバーラップ遺伝子の図である。
【図８Ｄ】正常な妊娠転帰を有していた女性に由来する細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化中に下方調節され、以前にｓＰＥ妊娠した女性に由来する細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化中に上方調節されたオーバーラップ遺伝子の図である。
【図９】マイクロアレイデータのｑＲＴ−ＰＣＲ検証によって得られたｍＲＮＡ発現データのグラフを示す図である。倍率変化は、培養中に脱落膜化したｓＰＥ対対照ヒト子宮内膜間質細胞サンプルの遺伝子発現レベルとして算出した。ＦＣ、倍率変化。
【図１０】壁側脱落膜の８７６個のサンプル（ｓＰＥ対ｎＰＴＢ）中で調節異常を起こした遺伝子の経路分析の結果を示す図である。データは、図３Ｄ及び図１６に記載される結果のＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓによって生成した。黒色のバー、上方調節された；灰色のバー、下方調節された。ｐ≦０．０５。
【図１１Ａ−１１Ｃ】壁側脱落膜及び平滑絨毛膜の一部を含有する、分析した母体−胎児境界面の組織切片の代表的な画像を示す図である。ドナーは、感染の兆候のない早産（ｎＰＴＢ；ｎ＝５）又は重症子癇前症（ｓＰＥ；ｎ＝５）のいずれかを有していた女性であった。組織切片を、細胞栄養芽層（ＣＴＢ）の可視化を可能にするサイトケラチン（ＣＫ７）に対する抗体と、重症子癇前症を有するドナーの壁側脱落膜において差次的に発現される遺伝子：ＰＥＧ１（ＭＥＳＴ）（図１１Ａ）、ＰＲＧ２（図１１Ｂ）及びＢＭＰ２（図１１Ｃ）によってコードされるタンパク質を認識する抗体とで共免疫染色した。核はＤＡＰＩで染色した。ｎＰＴＢサンプルと比べて、ｓＰＥにおいてＰＥＧ１及びＰＲＧ２は上方調節され、ＢＭＰ２は下方調節された。スケールバー、１００μｍ。
【図１２Ａ】ＥＬＩＳＡを用いて測定した、ｓＰＥ（ｎ＝４）又は対照ｎＰＴＢ（ｎ＝３）症例の基底脱落膜及び壁側脱落膜のサンプルに由来する単離間質細胞によって馴化した培地中のＰＲＬレベルのグラフを示す図である。
【図１２Ｂ】ＥＬＩＳＡを用いて測定した、ｓＰＥ（ｎ＝４）又は対照ｎＰＴＢ（ｎ＝３）症例の基底脱落膜及び壁側脱落膜のサンプルに由来する単離間質細胞によって馴化した培地中のＩＧＰＢＰ１レベルのグラフを示す図である。
【図１３】対照ヒト子宮内膜間質細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化中に２倍以上差次的に発現された遺伝子を列挙したヒートマップを示す図である。倍率変化を右側に示す（Δ）。
【図１４】元ｓＰＥ患者から単離したヒト子宮内膜間質細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化中に２倍以上差次的に発現された遺伝子を列挙したヒートマップを示す図である。＊＝発現パターンをｑＲＴ−ＰＣＲによって検証した遺伝子。倍率変化を右側に示す（Δ）。
【図１５】感染の兆候のない早産（非感染早産；ｎＰＴＢ）を有する患者と比較して、ｓＰＥ患者から単離した基底脱落膜（decidual basalis）サンプル中で２倍以上差次的に発現された遺伝子を列挙したヒートマップを示す図である。倍率変化を右側に示す（Δ）。
【図１６】感染の兆候のない早産（非感染早産；ｎＰＴＢ）を有する患者と比較して、ｓＰＥ患者から単離した壁側脱落膜（decidual parietalis）サンプル中で２倍以上差次的に発現された遺伝子を列挙したヒートマップを示す図である。倍率変化を右側に示す（Δ）。
【図１７Ａ−１７Ｃ】子宮内膜転写プロファイルがｉｎ  ｖｉｖｏでｓＰＥ患者における脱落膜化異常を裏付けることを示す図である。サンプルの分布を示す主成分分析（ＰＣＡ）は、全（図１７Ａ）及び標的化（図１７Ｂ）ＲＮＡ−ｓｅｑアプローチに基づくものであった。図１７Ｃは、誘導シークエンシングによって標的化された１２９個の遺伝子の遺伝子発現と、全ＲＮＡ−ｓｅｑによって特定された同じ遺伝子の遺伝子発現との間の相関を示す。
【図１８】実施例８に記載される、正常妊娠女性と比較した元重症子癇前症患者から単離されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化ヒト子宮内膜間質細胞（ｈＥＳＣ）の差次的遺伝子発現パネルを示す図である。遺伝子発現値を前処理し（半バックグラウンド（half-background）強度中央値を各スポットの平均強度から減算した）、正規化し、Ｒソフトウェアのｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  ＬＩＭＭＡパッケージを用いて分析した。発現に有意な差があった遺伝子を偽発見率（調整ｐ値）の統計分析によって決定した。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本開示の態様は、発現変動遺伝子を検出する方法及び組成物に関する。幾つかの実施形態では、発現変動遺伝子を、子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがある被験体（例えば、患者）に由来するサンプルにおいて検出する。かかる方法は臨床目的、例えば子癇前症を有するか若しくは子癇前症のリスクがある被験体（例えば、患者）の特定、治療の選択、子癇前症の進行のモニタリング、子癇前症に対する治療の有効性の評定、又は被験体（例えば、患者）に対する治療過程の決定に有用であり得る。本明細書に記載されるアッセイ方法は、非臨床用途、例えば研究目的、例えば子癇前症の発症機構、及び／又は子癇前症に関与する生物学的経路及び／又は生物学的過程を研究すること、並びにかかる研究に基づいて子癇前症の新たな療法を開発することを含む研究目的でも有用であり得る。
【００４０】
バイオマーカー
本明細書に記載される方法は、少なくとも一部には、正常妊娠した女性と比較して、過去の妊娠で子癇前症（ＰＥ）を有していた女性において差次的に存在することが見出されたバイオマーカーの特定に基づく。
【００４１】
本明細書で使用される場合、「バイオマーカー」又は「バイオマーカーセット」という用語は、特定のレベルで存在する生体分子（例えば、タンパク質）又はかかる生体分子のセットを指す。１つ以上のかかるバイオマーカーが特定の細胞集団（例えば、ヒト子宮内膜間質細胞（ｈＥＳＣ））に存在する場合があり、各バイオマーカーのレベルが異なる細胞集団及び／又は異なる被験体（例えば、患者）における同じバイオマーカーのレベルから偏差し得る。例えば、子癇前症を示唆するバイオマーカーは、対照サンプル（例えば、子癇前症を有しないか又は子癇前症のリスクがない被験体等の正常被験体に由来するサンプル）における同じマーカーのレベルと比べて、被験体に由来するサンプル（例えば、子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがある被験体に由来するサンプル）において上昇したレベル又は低下したレベルを有し得る。
【００４２】
子癇前症を示唆する例示的なバイオマーカーを表１に提示する。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、正常妊娠した被験体に由来するサンプルと比較して、過去の妊娠で子癇前症を有していた被験体に由来するサンプルにおいて差次的に発現される。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、非脱落膜化サンプルと比較して、脱落膜化したサンプルにおいて差次的に発現される。
【００４３】
【表１】
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【００４４】
更に他の実施形態では、バイオマーカーは、表Ａに規定されるものの１つ以上（例えば、全て又は実質的に全て）である。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、ｓＰＥを有しない満期産及び早産患者から採取された対照生体組織と比較して、以前に重症子癇前症（ｓＰＥ）を有していた患者から採取された生体サンプルに由来する３６個の発現変動遺伝子（「ＤＥＧ」）のセットである。様々な実施形態では、生体サンプルは子宮内膜組織、子宮内膜細胞及び／又は子宮内膜液を含み得る子宮内膜サンプルである。他の実施形態では、生体サンプルは血液であり得る。表Ａのバイオマーカーとして以下のものが挙げられる。
【００４５】
【表２】
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【００４６】
他の実施形態では、バイオマーカーは、表Ｂに規定されるものの１つ以上（例えば、全て又は実質的に全て）である。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、ｓＰＥを有しない早産患者（例えば、早産患者は、子癇前症患者と同じ妊娠期間を有する）から採取された対照生体組織と比較して、以前に重症子癇前症（ｓＰＥ）を有していた患者から採取された生体サンプルに由来する２４６個の発現変動遺伝子（「ＤＥＧ」）のセットである。様々な実施形態では、生体サンプルは子宮内膜組織、子宮内膜細胞及び／又は子宮内膜液を含み得る子宮内膜サンプルである。他の実施形態では、生体サンプルは血液であり得る。表Ｂのバイオマーカーとして以下のものが挙げられる。
【００４７】
【表３】
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【００４８】
別の実施形態では、バイオマーカーは、表Ｃに規定されるものの１つ以上（例えば、全て又は実質的に全て）である。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、ｓＰＥを有しない満期産患者から採取された対照生体組織と比較して、以前に重症子癇前症（ｓＰＥ）を有していた患者から採取された生体サンプルに由来する１５個の発現変動遺伝子（「ＤＥＧ」）のセットである。様々な実施形態では、生体サンプルは子宮内膜組織、子宮内膜細胞及び／又は子宮内膜液を含み得る子宮内膜サンプルである。他の実施形態では、生体サンプルは血液であり得る。表Ｃのバイオマーカーとして以下のものが挙げられる。
【００４９】
【表４】
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【００５０】
本明細書に記載されるバイオマーカーは、正常妊娠した女性から得られたサンプルにおける同じバイオマーカーのレベルと比較した場合に、少なくとも２０％（例えば、３０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍又はそれ以上）偏差する（例えば、増加又は減少する）、過去の妊娠で子癇前症を有していた被験体（例えば、患者）から得られるサンプルにおけるレベルを有し得る。本明細書に記載されるバイオマーカーは、非脱落膜化細胞における同じマーカーのレベルから少なくとも２０％（例えば、３０％、５０％、８０％、１００％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍又はそれ以上）偏差する（例えば、増加又は減少する）、脱落膜化細胞におけるレベルを有し得る。かかるバイオマーカー又はバイオマーカーのセットは、診断／予後診断用途及び非臨床用途（例えば、研究目的）の両方で使用することができる。
【００５１】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、表１の子癇前症を示唆する１個〜１２９個のバイオマーカー、及び／又は表Ａの子癇前症を示唆する１個〜３６個のバイオマーカー、及び／又は表Ｂの子癇前症を示唆する１個〜２４６個のバイオマーカー、及び／又は表Ｃの子癇前症を示唆する１個〜１５個のバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。例えば、幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、表１の子癇前症を示唆する５個〜１２９個のバイオマーカー、１０個〜１２９個のバイオマーカー、１５個〜１２９個のバイオマーカー、２５個〜１２９個のバイオマーカー、５０個〜１２９個のバイオマーカー、７５個〜１２９個のバイオマーカー、１００個〜１２９個のバイオマーカー又は１２５個〜１２９個のバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。例えば、幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、表Ａの子癇前症を示唆する５個〜３６個のバイオマーカー、１０個〜３６個のバイオマーカー、１５個〜３６個のバイオマーカー、２５個〜３６個のバイオマーカー、１０個〜１５個のバイオマーカー、１５個〜２５個のバイオマーカー、２５個〜３０個のバイオマーカー又は３０個〜３６個のバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、表Ｂの子癇前症を示唆する５個〜２４６個のバイオマーカー、１０個〜２４６個のバイオマーカー、１５個〜２４６個のバイオマーカー、２５個〜２４６個のバイオマーカー、５０個〜２４６個のバイオマーカー、７５個〜２４６個のバイオマーカー、１００個〜２４６個のバイオマーカー、１２５個〜２４６個のバイオマーカー、１５０個〜２４６個のバイオマーカー又は２００個〜２４６個のバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、表Ｃの子癇前症を示唆する５個〜１５個のバイオマーカー、１０個〜１５個のバイオマーカー又は５個〜１０個のバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。幾つかの実施形態では、異なる表のバイオマーカーの組合せが使用される。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、（例えば、表１、表Ａ、表Ｂ及び／又は表Ｃの１つ以上の）子癇前症を示唆する１個〜１２５個のバイオマーカー、１個〜１００個のバイオマーカー、１個〜７５個のバイオマーカー、１個〜５０個のバイオマーカー、１個〜２５個のバイオマーカー、１個〜１５個のバイオマーカー、１個〜１０個のバイオマーカー又は１個〜５個のバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。
【００５２】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、子癇前症を示唆する少なくとも１個のバイオマーカー、少なくとも２個のバイオマーカー、少なくとも３個のバイオマーカー、少なくとも４個のバイオマーカー、少なくとも５個のバイオマーカー、少なくとも６個のバイオマーカー、少なくとも７個のバイオマーカー、少なくとも８個のバイオマーカー、少なくとも９個のバイオマーカー又は少なくとも１０個のバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。
【００５３】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、５００個未満のバイオマーカー、４５０個未満のバイオマーカー、４００個未満のバイオマーカー、３５０個未満のバイオマーカー、３００個未満のバイオマーカー、２５０個未満のバイオマーカー、２００個未満のバイオマーカー、１５０個未満のバイオマーカー、１００個未満のバイオマーカー、５０個未満のバイオマーカー、２５個未満のバイオマーカー又は５個未満のバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。
【００５４】
様々な実施形態では、本明細書で使用され得るバイオマーカーは、表１、表Ａ、表Ｂ及び表Ｃのバイオマーカーの任意の組合せを含む。例えば、本明細書に記載される方法は、表１の１つ以上のバイオマーカーを表Ａの１つ以上のバイオマーカーと組み合わせて用いることができる。別の例では、本明細書に記載される方法は、表１の１つ以上のバイオマーカーを表Ｂの１つ以上のバイオマーカーと組み合わせて用いることができる。更に別の例では、本明細書に記載される方法は、表１の１つ以上のバイオマーカーを表Ｃの１つ以上のバイオマーカーと組み合わせて用いることができる。更に別の例では、本明細書に記載される方法は、表１の１つ以上のバイオマーカーを表Ａの１つ以上のバイオマーカー、及び／又は表Ｂの１つ以上のバイオマーカー、及び／又は表Ｃの１つ以上のバイオマーカーと組み合わせて用いることができる。方法は表１、表Ａ、表Ｂ及び表Ｃのバイオマーカーの任意の組合せを表１、表Ａ、表Ｂ又は表Ｃに含まれない本明細書に開示の任意の他のバイオマーカーと組み合わせて用いることができる。
【００５５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、子癇前症を示唆するバイオマーカーの群より選択される少なくとも１つのバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、子癇前症を示唆するバイオマーカーの２つ以上の群より選択される少なくとも１つのバイオマーカーのレベルの決定をもたらす。バイオマーカーの群は、子癇前症を示唆する少なくとも３個のバイオマーカー、少なくとも５個のバイオマーカー、少なくとも９個のバイオマーカー、少なくとも２２個のバイオマーカー、少なくとも５０個のバイオマーカー又は少なくとも１００個のバイオマーカーから本質的になり得る。
【００５６】
本明細書に記載される方法及び組成物は、限定されるものではないが、任意の組合せ又は数の記載のバイオマーカー又はバイオマーカー群を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になるものであり得る。本明細書で使用される場合、指定の遺伝子又は遺伝子産物のリスト「から本質的になる」バイオマーカーの群は、群に列挙される遺伝子（例えば、バイオマーカー）を含み、特許請求される群の基本的な新規の特徴に実質的に影響を及ぼさない１つ以上の重要度の低い又は対照の遺伝子（例えば、バイオマーカー）を含んでいてもよい。幾つかの実施形態では、１つ以上の対照遺伝子（例えば、バイオマーカー）は、例えば１つ以上のハウスキーピング遺伝子であり得る。幾つかの実施形態では、対照遺伝子（例えば、バイオマーカー）は陽性対照である。幾つかの実施形態では、対照遺伝子（例えば、バイオマーカー）は陰性対照である。幾つかの実施形態では、１つ以上の対照遺伝子（例えば、バイオマーカー）は検出対照を含む。幾つかの実施形態では、検出対照は標識核酸である。幾つかの実施形態では、検出対照は標識抗体である。幾つかの実施形態では、検出対照は、検出可能な標識を有するタンパク質である。
【００５７】
バイオマーカーは、特定のバイオマーカーの１つ以上の特徴に基づいて分類することができる。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、特定の患者集団（例えば、妊娠が子癇前症を合併した女性）におけるバイオマーカーの発現に基づいて分類される。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、特定の細胞（例えば、ヒト子宮内膜間質細胞（ｈＥＳＣ））におけるバイオマーカーの発現に基づいて分類される。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、特定の組織（例えば、基底脱落膜又は壁側脱落膜）におけるバイオマーカーの発現に基づいて分類される。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、特定の細胞過程（例えば、脱落膜化）中のバイオマーカーの発現に基づいて分類される。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、特定の経路（例えば、細胞外構造の組織化）との関連性に基づいて分類される。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、バイオマーカーの既知の機能に基づいて分類される。幾つかの実施形態では、バイオマーカーは、バイオマーカーの対照レベルに対するバイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値に基づいて分類される。
【００５８】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの群は、任意に表１、表Ａ、表Ｂ又は表Ｃのいずれかの１つ以上の付加的なバイオマーカーと組み合わせた、ＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＴＳＣ２２Ｄ３、ＰＲＵＮＥ２、ＡＤＡＭＴＳ８、ＭＡＯＡ、ＭＧＳＴ１、ＦＫＢＰ５、ＳＣＡＲＡ５、ＺＢＴＢ１６、ＧＬＵＬ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＲ１、ＬＰＡＲ１、ＡＰＯＤ、ＡＢＬＩＭ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＰＤＬＩＭ１、ＰＩＤ１、ＴＩＭＰ４、ＡＣＳＬ１、ＬＴＢＰ１、ＴＮＦＲＳＦ８、ＳＬＣ２７Ａ３、ＡＢＣＢ４、ＧＰＣ２、ＳＢＫ１、ＴＲＯ、ＴＳＰＡＮ６、ＤＯＣＫ６、ＧＮＢ１Ｌ、ＳＯＸ４、ＺＳＷＩＭ４、ＰＯＤＸＬ、ＳＥＲＴＡＤ４、ＬＭＯ２、ＦＯＸＬ２、ＡＦＡＰ１Ｌ２、ＣＯＣＨ、ＧＰＲＣ５Ｃ、ＦＢＸＯ２、Ｃ１ｏｒｆ１３３、ＴＭＳＢ１５Ａ、ＧＦＲＡ２、ＰＲＡＧＭＩＮ、ＴＳＰＡＮ１１、ＣＮＩＨ３、Ｆ２ＲＬ１及びＤＩＯ２を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００５９】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの群は、任意に表１、表Ａ、表Ｂ又は表Ｃのいずれかの１つ以上の付加的なバイオマーカーと組み合わせた、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＡＮＧＰＴ２、ＮＣＫＡＰ５、ＡＤＲＡ２Ａ、ＤＢＣ１、Ｃ１ＱＴＮＦ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＥＧＲ１、ＳＳＴＲ１、ＦＢＸＯ２、ＣＰＥ、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＧＲＰ、ＩＧＦＢＰ５、ＣＯＣＨ、ＡＲＨＧＤＩＢ、ＳＣＧ５、ＩＴＧＡ１１、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＲＬＮ２、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＬＩＣ３、ＴＭＥＭ２５、ＣＣＤＣ８１、ＭＹＣＮ、ＮＰＲ１、ＲＡＳＧＲＰ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＲＳＰＯ３、Ｃ１０ｏｒｆ１０、ＴＭＥＭ１３２Ｃ、ＰＰＡＰ２Ｂ、ＮＫＡＩＮ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＩＬ１５、ＳＬＣ７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＴＸ１、ＣＨＳＴ７、ＧＡＬＮＴＬ２、ＳＢＳＮ、ＥＤＮＲＡ、ＩＬ１Ｂ、ＳＰＡＲＣＬ１、ＳＣＡＲＡ５、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＣＬ８、Ｐ２ＲＹ１４、ＣＮＲ１及びＩＧＦＢＰ１を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００６０】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの群は、任意に表１、表Ａ、表Ｂ又は表Ｃのいずれかの１つ以上の付加的なバイオマーカーと組み合わせた、ＬＯＣ１０１９２８４３９、ＲＰ１１−１０２６Ｍ７．３、ＲＮＵ４ＡＴＡＣ１８Ｐ、ＴＲＢＶ４−２、ＲＰ１１−１２Ｄ１６．２、ＴＲＡＪ５９、ＲＮＵ４−３９Ｐ、ＲＮＵ６−５４０Ｐ、ＲＮＡ５ＳＰ１８７、ＰＲＫＸＰ１、ＭＩＲ４５０９−１、ＲＮＵ６−１１１１Ｐ、Ａ１ＢＧ−ＡＳ１、ＣＳＰＧ４、ＭＩＲ３６５Ａ、ＲＮＡ５ＳＰ４６３、ＢＡＣＥ１−ＡＳ、ＲＮＵ６−６２１Ｐ、ＲＮＵ４−７６Ｐ、ＴＲＩＭ４８、ＰＳＭＤ３、ＲＰ１１−６６１Ａ１２．４、ＬＯＣ６４４１７２、ＺＮＦ４８３、ＡＲＬ５Ｂ、ＥＮＰＰ４、ＩＰＷ、ＳＰＩＮＫ１、Ｃ７、ＳＮＯＲＤ５２、ＣＹＰ１９Ａ１、ＴＳＰＡＮ１、ＬＯＣ１０１９２９６０７、ＳＮＯＲＤ５２、ＲＮＵ２−５Ｐ、ＭＳ４Ａ２、ＳＮＯＲＤ７１、ＲＮＵ６Ｖ、ＲＮＵ６−９０１Ｐ、ＭＭＥ−ＡＳ１、ＴＡＳ２Ｒ４６、ＭＩＲ５４８Ｈ１、ＣＯＬ８Ａ１、ＳＮＯＲＤ１１５−３２、ＵＧＴ２Ｂ７、ＯＧＮ、ＲＰ１１−８７２Ｄ１７．８、ＲＰ１１−１０８Ｋ３．１、ＣＰ及びＤＥＦＢ１を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００６１】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの群は、任意に表１、表Ａ、表Ｂ又は表Ｃのいずれかの１つ以上の付加的なバイオマーカーと組み合わせた、ＰＲＧ２、ＡＣ０７３２１８．２、ＡＣ０７３２１８．３、ＲＮＡＳＥ２、ＬＯＣ１００５０６５３０、ＡＯＸ１、ＰＺＰ、ＲＰ１１−５７Ｐ１９．１、ＬＩＮＣ０１３３８、ＮＯＴＵＭ、ＴＭＥＭ２７、ＣＴＣ−４９８Ｊ１２．１、ＩＧＳＦ１０、ＫＬＲＦ１、ＴＲＰＣ４、ＧＰＲ１２６、ＡＤＡＭＴＳ１５、ＰＲＯＭ１、ＰＤＧＦＤ、ＫＩＲ２ＤＬ２、ＬＯＣ１０１９２９１７４、ＳＵＬＦ２、ＭＵＭ１Ｌ１、ＡＣＥ２、ＳＡＰＣＤ１、ＲＰ１１−５９Ｈ７．３、ＤＯＣＫ４−ＡＳ１、ＧＢＰ２、ＴＮＣ、ＸＸｂａｃ−ＢＰＧ２５２Ｐ９．１０、ＲＮＵ６−１０２４Ｐ、ＭＴ１ＣＰ、ＲＮ７ＳＫＰ１６、ＩＥＲ３、ＩＮＨＢＡ、ＤＳＣ３、ＳＥＲＰＩＮＢ１１、ＲＰ１−６８Ｄ１８．４、ＩＬ１Ａ、ＢＭＰ２、ＡＤＡＭＴＳ４、ＬＩＮＣ００３１２、ＭＭＰ１０、ＲＮＵ６−１６２Ｐ、ＣＸＣＬ５、ＩＣＡＭ１、ＲＮＵ７−４０Ｐ、ＳＰＩＮＫ１、ＩＬ２３Ａ及びＣＸＣＬ８を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００６２】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの群は、任意に表１、表Ａ、表Ｂ又は表Ｃのいずれかの１つ以上の付加的なバイオマーカーと組み合わせた、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＡＮＧＰＴ２、ＮＣＫＡＰ５、ＡＤＲＡ２Ａ、ＤＢＣ１、Ｃ１ＱＴＮＦ７、ＣＯＬ８Ａ１、ＥＧＲ１、ＳＳＴＲ１、ＦＢＸＯ２、ＣＰＥ、Ｃ４ｏｒｆ４９、ＧＲＰ、ＩＧＦＢＰ５、ＣＯＣＨ、ＡＲＨＧＤＩＢ、ＳＣＧ５、ＩＴＧＡ１１、ＳＬＣ３５Ｆ３、ＲＬＮ２、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＬＩＣ３、ＴＭＥＭ２５、ＣＣＤＣ８１、ＭＹＣＮ、ＳＬＩＴＲＫ６、ＴＴＲ、ＩＳＭ１、ＰＩＴＸ１、ＳＵＬＦ１、ＯＸＴＲ、ＡＡＤＡＣ、ＭＥＳＴ、Ｃ１７ｏｒｆ１０７、ＣＮＩＨ３、ＨＭＣＮ１、Ｃ１ｏｒｆ１３３、ＭＹＬＫ、ＣＬＥＣ３Ｂ、Ｆ２ＲＬ２、ＡＤＡＭＴＳ１９、ＡＴＣＡＹ、ＢＤＮＦ、ＤＵＳＰ６、ＫＬＦ２、ＲＥＥＰ２、ＤＥＮＮＤ２Ａ、ＬＰＬ、ＫＲＴＡＰ１７−１、ＬＯＸＬ４、ＮＡＮＯＳ３、ＯＬＦＭＬ１、Ｃ１４ｏｒｆ３７、ＥＮＳＴ０００００３１３６６４、ＬＡＭＡ５、ＬＹＰＤ１、ＧＢＰ２、ＦＡＭ１９Ａ２、ＳＥＲＴＡＤ４、ＣＨＯＤＬ、ＥＲＡＰ２、ＥＲＰ２７、ＦＡＭ３８Ｂ、ＧＡＬＮＴ１４、ＬＯＣ７２８３９２、ＰＤＧＦＤ、ＦＡＴ１、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＥＨＤ３、ＭＦＡＰ２、ＭＲＶＩ１、ＴＮＦＡＩＰ６、ＦＳＴ、ＤＭＫＮ、ＡＮＸＡ２、ＤＥＳ、ＥＦＥＭＰ１、ＲＧＳ２０、ＣＡ１２、ＧＧＴ５、ＥＮＳＴ０００００３８０４６４、ＬＴＢＰ１、Ｃ６ｏｒｆ１７６、ＴＮＦＲＳＦ８、ＢＡＩＡＰ２Ｌ２、ＬＳＡＭＰ、ＤＤＩＴ４、ＲＨＯＵ、ＩＲＳ２、ＥＤＮＲＢ、ＣＯＬ１５Ａ１、ＤＣＮ、ＷＮＴ６、ＬＰＡＲ１、ＲＧＳ１６、ＫＣＮＪ８、ＡＢＬＩＭ２、ＬＲＲＣ１５、ＣＲＬＦ１、ＲＡＳＬ１１Ｂ、ＣＦＤ、ＧＡＬ、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＰＲＵＮＥ２、ＮＰＲ１、ＲＡＳＧＲＰ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＲＳＰＯ３、Ｃ１０ｏｒｆ１０、ＴＭＥＭ１３２Ｃ、ＰＰＡＰ２Ｂ、ＮＫＡＩＮ１、ＡＤＡＭＴＳ８、ＩＬ１５、ＳＬＣ７Ａ２、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＴＸ１、ＣＨＳＴ７、ＧＡＬＮＴＬ２、ＳＢＳＮ、ＥＤＮＲＡ、ＩＬ１Ｂ、ＳＰＡＲＣＬ１、ＳＣＡＲＡ５、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＣＬ８、Ｐ２ＲＹ１４、ＣＮＲ１及びＩＧＦＢＰ１を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００６３】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの群は、任意に表１、表Ａ、表Ｂ又は表Ｃのいずれかの１つ以上の付加的なバイオマーカーと組み合わせた、ＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＰＲＵＮＥ２、ＡＤＡＭＴＳ８、ＳＣＡＲＡ５、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＮＰＲ１、ＬＰＡＲ１、ＡＢＬＩＭ２、ＣＨＩ３Ｌ２、ＬＴＢＰ１、ＴＮＦＲＳＦ８、ＳＬＣ２７Ａ３、ＩＬ１、ＣＣＤＣ、ＰＰＡＰ２Ｃ、ＳＥＲＴＡＤＡ４、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、Ｃ１ｏｒｆ１３３及びＣＮＩＨ３を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００６４】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの群は、任意に表１、表Ａ、表Ｂ又は表Ｃのいずれかの１つ以上の付加的なバイオマーカーと組み合わせた、ＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及びＳＥＲＰＩＮＡ３を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００６５】
任意の数及び／又は組合せの本明細書に挙げられるバイオマーカー又は本明細書に挙げられるバイオマーカーの群を記載の方法及び／又は装置に用いることができる。例えば、方法又はアッセイに用いられるバイオマーカーの群は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個、８０個、８１個、８２個、８３個、８４個、８５個、８６個、８７個、８８個、８９個、９０個、９１個、９２個、９３個、９４個、９５個、９６個、９７個、９８個、９９個、１００個、１０１個、１０２個、１０３個、１０４個、１０５個、１０６個、１０７個、１０８個、１０９個、１１０個、１１１個、１１２個、１１３個、１１４個、１１５個、１１６個、１１７個、１１８個、１１９個、１２０個、１２１個、１２２個、１２３個、１２４個、１２５個、１２６個、１２７個、１２８個、１２９個、１３０個又はそれ以上の本明細書に挙げられるバイオマーカーを含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になるものであり得る。
【００６６】
幾つかの実施形態では、方法又はアッセイに用いられるバイオマーカーの群は、１０個超、１１個超、１２個超、１３個超、１４個超、１５個超、１６個超、１７個超、１８個超、１９個超、２０個超、２１個超、２２個超、２３個超、２４個超、２５個超、２６個超、２７個超、２８個超、２９個超、３０個超、３１個超、３２個超、３３個超、３４個超、３５個超、３６個超、３７個超、３８個超、３９個超、４０個超、４１個超、４２個超、４３個超、４４個超、４５個超、４６個超、４７個超、４８個超、４９個超、５０個超、５１個超、５２個超、５３個超、５４個超、５５個超、５６個超、５７個超、５８個超、５９個超、６０個超、６１個超、６２個超、６３個超、６４個超、６５個超、６６個超、６７個超、６８個超、６９個超、７０個超、７１個超、７２個超、７３個超、７４個超、７５個超、７６個超、７７個超、７８個超、７９個超、８０個超、８１個超、８２個超、８３個超、８４個超、８５個超、８６個超、８７個超、８８個超、８９個超、９０個超、９１個超、９２個超、９３個超、９４個超、９５個超、９６個超、９７個超、９８個超、９９個超、１００個超、１０１個超、１０２個超、１０３個超、１０４個超、１０５個超、１０６個超、１０７個超、１０８個超、１０９個超、１１０個超、１１１個超、１１２個超、１１３個超、１１４個超、１１５個超、１１６個超、１１７個超、１１８個超、１１９個超、１２０個超、１２１個超、１２２個超、１２３個超、１２４個超、１２５個超、１２６個超、１２７個超、１２８個超又は１２９個超の本明細書に挙げられるバイオマーカーを含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になるものであり得る。
【００６７】
幾つかの実施形態では、方法又はアッセイに用いられるバイオマーカーの群は、１０個以下、１１個以下、１２個以下、１３個以下、１４個以下、１５個以下、１６個以下、１７個以下、１８個以下、１９個以下、２０個以下、２１個以下、２２個以下、２３個以下、２４個以下、２５個以下、２６個以下、２７個以下、２８個以下、２９個以下、３０個以下、３１個以下、３２個以下、３３個以下、３４個以下、３５個以下、３６個以下、３７個以下、３８個以下、３９個以下、４０個以下、４１個以下、４２個以下、４３個以下、４４個以下、４５個以下、４６個以下、４７個以下、４８個以下、４９個以下、５０個以下、５１個以下、５２個以下、５３個以下、５４個以下、５５個以下、５６個以下、５７個以下、５８個以下、５９個以下、６０個以下、６１個以下、６２個以下、６３個以下、６４個以下、６５個以下、６６個以下、６７個以下、６８個以下、６９個以下、７０個以下、７１個以下、７２個以下、７３個以下、７４個以下、７５個以下、７６個以下、７７個以下、７８個以下、７９個以下、８０個以下、８１個以下、８２個以下、８３個以下、８４個以下、８５個以下、８６個以下、８７個以下、８８個以下、８９個以下、９０個以下、９１個以下、９２個以下、９３個以下、９４個以下、９５個以下、９６個以下、９７個以下、９８個以下、９９個以下、１００個以下、１０１個以下、１０２個以下、１０３個以下、１０４個以下、１０５個以下、１０６個以下、１０７個以下、１０８個以下、１０９個以下、１１０個以下、１１１個以下、１１２個以下、１１３個以下、１１４個以下、１１５個以下、１１６個以下、１１７個以下、１１８個以下、１１９個以下、１２０個以下、１２１個以下、１２２個以下、１２３個以下、１２４個以下、１２５個以下、１２６個以下、１２７個以下、１２８個以下又は１２９個以下の本明細書に挙げられるバイオマーカーを含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になるものであり得る。
【００６８】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの群は、以下の経路の少なくとも１つと関連する：細胞外構造の組織化、組織発達、炎症、免疫機能、輸送及び／又は代謝、細胞シグナリング、転写及び／又は翻訳、シグナル伝達、タンパク質分解、インスリン関連、Ｇタンパク質シグナリング、並びに細胞周期及び活性化。
【００６９】
幾つかの実施形態では、細胞外構造の組織化の経路と関連したバイオマーカーの群は、ＬＡＭＡ５、ＤＭＫＮ、ＣＣＤＣ８１、ＤＥＳ、ＬＡＭＡ５、ＳＵＬＦ１、ＩＴＧＡ１１、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＯＬ１４Ａ１、ＭＦＡＰ２、ＢＡＩＡＰ２Ｌ２、ＭＲＶＩ１、ＴＭＥＭ１３２Ｃ及びＴＭＥＭ２５を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７０】
幾つかの実施形態では、組織発達経路と関連したバイオマーカーの群は、ＳＬＩＴＲＫ６、ＣＨＯＤＬ、ＭＥＳＴ及びＳＵＬＦ１を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７１】
幾つかの実施形態では、炎症経路と関連したバイオマーカーの群は、ＣＸＣＬ８、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ１Ａ、ＣＸＣＬ５及びＣＣＬ８を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７２】
幾つかの実施形態では、免疫機能経路と関連したバイオマーカーの群は、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ８、ＡＤＲＡ２Ａ、ＣＯＣＨ、ＦＡＮ１９Ａ２、ＧＡＬ、ＧＢＰ２、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１５、ＬＳＡＭＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ及びＳＬＣ７Ａ２を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７３】
幾つかの実施形態では、輸送及び／又は代謝の経路と関連したバイオマーカーの群は、ＡＬＤＨ１Ａ１、ＡＡＤＡＣ、ＣＮＲ１、ＣＨＳＴ７、ＣＡ１２、ＣＰＥ、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＬＩＣ３、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＬＰＬ、ＮＰＲ１、ＧＡＬＮＴ１４、ＰＲＵＮＥ２、ＯＸＴＲ、ＴＴＲ、ＡＴＣＡＹ、ＤＥＮＮＤ２Ａ、ＮＫＡＩＮ１、ＣＮＩＨ３、ＮＰＴＸ１、ＫＣＮＪ８、ＲＥＥＰ２、ＳＣＧ５、ＳＬＣ３５Ｆ３及びＥＲＡＰ２を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７４】
幾つかの実施形態では、細胞シグナリング経路と関連したバイオマーカーの群は、ＬＴＢＰ１、Ｆ２ＲＬ２、ＦＡＴ１、ＡＮＸＡ２、ＢＤＮＦ、ＤＣＮ、ＥＤＮＲＡ、ＥＤＮＲＢ、ＩＴＧＡ１１、ＬＲＲＣ１５、ＲＫＢ２、ＳＳＴＲ１  ＲＳＰＯ３、ＷＮＴ６、ＬＰＡＲ１、ＰＤＧＦＤ、ＲＨＯＵ、ＭＹＬＫ、ＤＤＩＴ４、ＡＲＨＧＤＩＢ及びＤＵＳＰ６を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７５】
幾つかの実施形態では、転写及び翻訳の経路と関連したバイオマーカーの群は、ＥＦＥＭＰ１、ＫＬＦ２、ＡＢＬＩＭ２、ＥＧＲ１、ＦＳＴ、ＰＩＴＸ１、ＮＴＣＢ及びＮＡＮＯＳ３を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７６】
幾つかの実施形態では、シグナル伝達経路と関連したバイオマーカーの群は、ＳＰＡＲＣＬ１、ＴＮＦＡＩＰ６、ＡＮＧＰＴ２、ＣＯＬ１５Ａ１及びＧＲＰを含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７７】
幾つかの実施形態では、タンパク質分解経路と関連したバイオマーカーの群は、ＥＲＰ２７、ＡＤＡＭＴＳ１９、ＡＤＡＭＴＳ８、ＦＢＸＯ２、ＣＦＤ、ＧＧＴ５、ＥＨＤ３、ＬＯＸＬ４及びＳＣＡＲＡ５を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７８】
幾つかの実施形態では、インスリン関連経路と関連したバイオマーカーの群は、ＩＧＦＢＰ１、ＩＧＦＢＰ５及びＩＲＳ２を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００７９】
幾つかの実施形態では、Ｇタンパク質シグナリング経路と関連したバイオマーカーの群は、Ｐ２ＲＹ１４、ＲＧＳ２０、ＲＡＳＧＲＰ２、ＲＡＳＬ１１Ｂ、ＲＧＳ１６及びＳＩＰＡ１Ｌ２を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００８０】
幾つかの実施形態では、細胞周期及び活性化の経路と関連したバイオマーカーの群は、ＬＹＰＤ１、ＨＭＣＮ１、ＣＲＬＦ１及びＣＬＥ３Ｂを含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００８１】
幾つかの実施形態では、不特定の経路と関連したバイオマーカーの群は、Ｃ１ＱＴＮＦ７、ＮＣＫＡＰ５、ＳＥＲＴＡＤ４、Ｃ１０ｏｒｆ１０、Ｃ１４ｏｒｆ３７、Ｃ１７ｏｒｆ１０７、ＩＳＭ１、ＯＬＦＭＬ１及びＳＢＳＮを含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００８２】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーの対照レベルに対するバイオマーカーの決定されたレベルの比率の絶対値が１０を超えるバイオマーカーの群は、ＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＣＨＳＴ７、ＴＳＣ２２Ｄ３、ＰＲＵＮＥ２、ＨＳＤ１７Ｂ２、ＡＮＧＰＴ２、ＮＣＫＡＰ５、ＡＤＲＡ２Ａ、ＤＢＣ１、Ｃ１ＱＴＮＦ７、ＳＰＡＲＣＬ１、ＳＣＡＲＡ５、ＳＩＰＡ１Ｌ２、ＣＣＬ８、Ｐ２ＲＹ１４、ＣＮＲ１、ＩＧＦＢＰ１、ＣＰ、ＤＥＦＢ１、ＰＲＧ２、ＡＣ０７３２１８．２、ＡＣ０７３２１８．３、ＲＮＵ７−４０Ｐ、ＳＰＩＮＫ１、ＩＬ２３Ａ及びＣＸＣＬ８を含む、それのみからなる又はそれのみから本質的になる。
【００８３】
バイオマーカーの有用性
本明細書に記載されるバイオマーカーはいずれも、単独で又は組み合わせて（例えば、少なくとも２個のバイオマーカー、少なくとも３個のバイオマーカー又はそれ以上のバイオマーカー）、子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがある被験体に由来するサンプルを分析するための同様に本明細書に記載されるアッセイ方法に用いることができる。かかるアッセイ方法によって得られた結果は、本明細書に記載されるものを含むが、これらに限定されない臨床用途又は非臨床用途のいずれにも用いることができる。
【００８４】
（ｉ）生体サンプルの分析
バイオマーカーを含有し得る任意のサンプル（例えば、子宮内膜組織、子宮内膜細胞又は子宮内膜液等の生体サンプル）は、本明細書に記載されるアッセイ方法によって分析することができる。本明細書に記載される方法は、被験体から得られるサンプルを準備することを含み得る。幾つかの例では、サンプルはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞培養（例えば、ヒト子宮内膜間質細胞（ｈＥＳＣ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養）によるものであり得る。本明細書で使用される場合、「サンプル」は、被験体に由来する子宮内膜組織、子宮内膜細胞又は子宮内膜液等（これらに限定されない）の生体物質を含む組成物を指す。サンプルは、被験体から採取された初期未処理サンプル、及び続いて処理された、例えば部分的に精製されるか又は保存された形態の両方を含む。例示的なサンプルとしては、子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞、胎盤組織、胎児組織、血液、血漿又は粘液が挙げられる。例示的な子宮内膜組織としては、基底脱落膜、被包脱落膜又は壁側脱落膜が挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、サンプルは、子宮内膜液サンプル等の体液サンプルである。幾つかの実施形態では、複数（例えば、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のサンプルを、例えば疾患の進行を評定するか又は治療の有効性を評価するために、被験体から経時的に又は特定の時間間隔で採取することができる。
【００８５】
サンプルは、当該技術分野で既知の任意の手段を用いて被験体から得ることができる。幾つかの実施形態では、サンプルは、被験体からサンプル（例えば、子宮内膜組織サンプル）を取り出すことによって被験体から得られる。幾つかの実施形態では、サンプルは、外科的手順（例えば、子宮内膜掻爬術（Ｄ＆Ｃ））によって被験体から得られる。幾つかの実施形態では、サンプルは、生検（例えば、子宮内膜生検）によって被験体から得られる。幾つかの実施形態では、サンプルは吸引、擦過、掻爬又はそれらの組合せによって被験体から得られる。幾つかの実施形態では、サンプルは、分娩後に被験体から得られる。幾つかの実施形態では、サンプルはヒトから得られる。
【００８６】
「被験体」という用語は、本明細書に記載される分析を必要とする被験体を指す。幾つかの実施形態では、被験体は患者である。幾つかの実施形態では、被験体はヒトである。幾つかの実施形態では、被験体は雌性ヒト（女性）である。幾つかの実施形態では、被験体は、以前に妊娠していた女性である。幾つかの実施形態では、被験体は、以前（例えば、以前の妊娠中に）に子癇前症を有していた女性である。幾つかの実施形態では、ヒトは、（例えば、初回又はその後の妊娠により）妊娠しているか又は妊娠しようとしている。幾つかの実施形態では、被験体は、（例えば、初回又はその後の妊娠により）妊娠している女性である。幾つかの実施形態では、被験体は、（既知又は未知を問わず）子癇前症のリスクがある。かかる被験体は、子癇前症と関連した１つ以上のリスク因子を呈し得る。例示的なリスク因子としては、双子以上の妊娠、慢性高血圧症、糖尿病、腎臓病又は臓器移植の既往、初回妊娠、肥満、４０歳を超える母体年齢、１８歳未満の母体年齢、子癇前症の家族歴、多嚢胞性卵巣症候群、１つ以上の自己免疫障害（例えば、ループス）を有する被験体、体外受精の既往歴、又は鎌状赤血球病が挙げられるが、これらに限定されない。被験体は、不妊治療（例えば、体外受精又は関連手順）を受けている人も含み得る。
【００８７】
代替的には、本明細書に記載される分析を必要とする被験体は、子癇前症を有するか又は子癇前症のリスク（既知又は未知）がある患者であり得る。かかる被験体は、現在子癇前症を有していても又は過去に子癇前症を有していてもよい。かかる被験体は、子癇前症のリスクがあってもよい。幾つかの例では、被験体は、例えば降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、及び／又は分娩による子癇前症の治療を受けているヒト患者である。他の例では、かかるヒト患者は、かかる治療を受けていなくてもよい（例えば、現在治療を受けていない）。幾つかの実施形態では、被験体に子癇前症のリスクがあることを特定した後に被験体において治療を開始する。
【００８８】
子癇前症の例としては、限定されるものではないが、軽症子癇前症、重症子癇前症（ｓＰＥ）、子癇及びＨＥＬＬＰ（溶血、肝酵素上昇、血小板減少）症候群が挙げられる。
【００８９】
本明細書に記載されるサンプルはいずれも、本明細書に記載される１つ以上のバイオマーカーのレベルを測定することを含む、本明細書に記載されるアッセイ方法を用いて分析に供することができる。本明細書に開示されるバイオマーカーのレベル（例えば、量）又はバイオマーカーのレベルの変化は、従来のアッセイ又は本明細書に記載されるアッセイを用いて評定することができる。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「決定する」若しくは「測定する」、又は代替的には「検出する」という用語は、かかる物質の定性的若しくは定量的な濃度レベルの導出、又はそうでなければ値の評価、及び／又は被験体に由来するサンプル中のかかる物質のカテゴリー化を含む、サンプル中の物質の存在、非存在、数量及び／又は量（有効量であり得る）を評定することを含み得る。
【００９１】
幾つかの実施形態では、バイオマーカーのレベルは、サンプル（例えば、子宮内膜組織サンプル、子宮内膜細胞サンプル又は子宮内膜液サンプル）中のタンパク質を直接検出することによって評定又は測定される。代替的には又は加えて、タンパク質のレベルは、例えばタンパク質の活性のレベルを検出すること（例えば、酵素アッセイ）によって、サンプルにおいて間接的に評定又は測定することができる。
【００９２】
タンパク質（例えば、バイオマーカータンパク質）のレベルは、イムノアッセイを用いて測定することができる。イムノアッセイの例としては、任意の既知のアッセイが挙げられ（限定されるものではない）、以下のいずれかが含まれ得る：免疫ブロットアッセイ（例えば、ウエスタンブロット）、免疫組織学的分析、フローサイトメトリーアッセイ、免疫蛍光アッセイ（ＩＦ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ、電気化学発光ベースの検出アッセイ、磁気イムノアッセイ、ラテラルフローアッセイ及び関連手法。本明細書で提供されるバイオマーカータンパク質を検出するための付加的な適切なイムノアッセイが当業者に明らかである。
【００９３】
かかるイムノアッセイは、標的バイオマーカーに特異的な作用物質（例えば、抗体）の使用を含み得る。標的バイオマーカーに「特異的に結合する」抗体等の作用物質は、当該技術分野で十分に理解されている用語であり、かかる特異的結合を決定する方法も当該技術分野で既知である。抗体は、代替バイオマーカーよりも特定の標的バイオマーカーとより頻繁に、より急速に、より長い持続時間で及び／又はより大きな親和性で反応又は会合する場合に「特異的結合」を示すとされる。例えば、第１の標的ペプチドに特異的に結合する抗体が第２の標的ペプチドに特異的又は選択的に結合しても又は結合しなくてもよいことも、この定義を読むことによって理解される。そのため、「特異的結合」又は「選択的結合」は、必ずしも排他的結合を必要とするわけではない（が、排他的結合を含み得る）。概して、必ずしもというわけではないが、結合への言及は選択的結合を意味する。幾つかの例では、標的ペプチド又はそのエピトープに「特異的に結合する」抗体は、同じ抗原中の他のペプチド又は他のエピトープに結合しない場合がある。幾つかの実施形態では、サンプルを異なるタンパク質バイオマーカーに結合する２つ以上の結合物質と同時又は順次に接触させてもよい（例えば、多重分析）。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン又は免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むタンパク質を指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書でＶＨと略される）及び軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書でＶＬと略される）を含み得る。別の例では、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合フラグメント（例えば、一本鎖抗体、Ｆａｂ及びｓＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ及びドメイン抗体（ｄＡｂ）フラグメント（de Wildt et al., Eur J Immunol. 1996; 26(3):629-39.））、並びに完全抗体を包含する。抗体はＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（及びそのサブタイプ）の構造的特徴を有していてもよい。抗体は、霊長類（ヒト及び非ヒト霊長類）及び霊長類化（primatized）（例えば、ヒト化）抗体を含むが、これらに限定されない任意の供給源に由来するものであり得る。
【００９５】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載される抗体を、検出可能な標識にコンジュゲートすることができ、関心のペプチドへの検出試薬の結合を、検出可能な標識から放出されるシグナルの強度に基づいて決定することができる。代替的には、検出試薬に特異的な二次抗体を使用してもよい。１つ以上の抗体を検出可能な標識に結合することができる。当該技術分野で既知の任意の適切な標識を本明細書に記載されるアッセイ方法に使用することができる。幾つかの実施形態では、検出可能な標識はフルオロフォアを含む。本明細書で使用される場合、「フルオロフォア」（「蛍光標識」又は「蛍光色素」とも称される）という用語は、規定の励起波長で光エネルギーを吸収し、異なる波長で光エネルギーを放出する部分を指す。幾つかの実施形態では、検出部分は、酵素であるか又は酵素を含む。幾つかの実施形態では、酵素は、無色の基質から着色した生成物を生成する酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ）である。
【００９６】
幾つかの例では、本明細書に記載されるアッセイ方法は、サンプル中の細胞バイオマーカーのレベルを測定するために適用される。かかる細胞は、日常慣行に従って採取することができ、細胞バイオマーカーのレベルは、従来の方法によって測定することができる。
【００９７】
他の例では、本明細書に記載されるアッセイ方法は、体液サンプル（例えば、血液サンプル又は血漿サンプル）、組織サンプル又は細胞サンプルを含むが、これらに限定されない任意の生体サンプルであり得るサンプル中の循環バイオマーカーのレベルを測定するために適用される。例えばイムノアッセイを含む、当該技術分野で既知のアッセイのいずれかを、かかるバイオマーカーのレベルを測定するために用いることができる。
【００９８】
本開示がイムノアッセイに限定されないことが当業者に明らかである。質量分析等の抗体に基づくものではない検出アッセイも、本明細書で提供されるバイオマーカーの検出及び／又は定量化に有用である。発色基質に依存するアッセイも、本明細書で提供されるバイオマーカーの検出及び／又は定量化に有用であり得る。
【００９９】
代替的には、サンプル中のバイオマーカーをコードする核酸のレベルは、従来の方法によって測定することができる。幾つかの実施形態では、バイオマーカーをコードする核酸の発現レベルの測定は、ｍＲＮＡを測定することを含む。幾つかの実施形態では、バイオマーカーをコードするｍＲＮＡの発現レベルは、リアルタイム逆転写酵素（ＲＴ）Ｑ−ＰＣＲ又は核酸マイクロアレイを用いて測定することができる。バイオマーカー核酸配列を検出する方法としては、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、逆転写酵素−ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）、ｉｎ  ｓｉｔｕ  ＰＣＲ、定量的ＰＣＲ（Ｑ−ＰＣＲ）、リアルタイム定量的ＰＣＲ（ＲＴ  Ｑ−ＰＣＲ）、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、サザンブロット、ノーザンブロット、配列分析、マイクロアレイ分析、レポーター遺伝子の検出、又は他のＤＮＡ／ＲＮＡハイブリダイゼーションプラットホームが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１００】
幾つかの実施形態では、サンプル中のバイオマーカーをコードする核酸のレベルは、ハイブリダイゼーションアッセイによって測定することができる。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、少なくとも１つの結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、少なくとも１つのオリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、少なくとも１つの標識オリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、少なくとも１対のオリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、少なくとも１対の標識オリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。
【０１０１】
幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、配列番号１〜８のいずれか１つとして記載される少なくとも１つのオリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、配列番号１及び配列番号２として記載される１対のオリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、配列番号３及び配列番号４として記載される１対のオリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、配列番号５及び配列番号６として記載される１対のオリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、ハイブリダイゼーションアッセイは、配列番号７及び配列番号８として記載される１対のオリゴヌクレオチド結合パートナーを含む。幾つかの実施形態では、標識は、本明細書に記載される蛍光標識、放射標識又は他の検出可能な標識であり得る。
【０１０２】
所望のバイオマーカーに特異的に結合する任意の結合物質を、サンプル中のバイオマーカーのレベルを測定するために、本明細書に記載される方法及びキットに用いることができる。幾つかの実施形態では、結合物質は、所望のタンパク質バイオマーカーに特異的に結合する抗体又はアプタマーである。他の実施形態では、結合物質は、コード核酸又はその一部に相補的な１つ以上のオリゴヌクレオチドであり得る。幾つかの実施形態では、サンプルを異なるバイオマーカーに結合する２つ以上の結合物質と同時又は順次に接触させてもよい（例えば、多重分析）。
【０１０３】
標的バイオマーカーのレベルを測定するために、サンプルを適切な条件下で結合物質と接触させることができる。概して、「接触」という用語は、サンプル中の結合物質と、もしあれば標的バイオマーカーとの複合体の形成に十分な適切な時間にわたるサンプル又はそれから採取した細胞による結合物質の曝露を指す。幾つかの実施形態では、接触は、サンプルが支持膜の表面を横切って移動する毛細管作用によって行われる。
【０１０４】
幾つかの実施形態では、アッセイは、単一アッセイフォーマットを含む低スループットプラットホームで行われる。例えば、低スループットプラットホームを用いて、診断法、疾患及び／又は治療の進行のモニタリング、及び／又は疾患若しくは障害に特定の治療が有効であり得るかの予測のために、サンプル（例えば、子宮内膜組織、子宮内膜間質細胞及び／又は子宮内膜液）中のタンパク質の存在及び量を測定することができる。
【０１０５】
幾つかの実施形態では、結合物質を支持部材に固定化する必要があり得る。結合物質を固定化する方法は、結合物質の性質及び支持部材の材料等の要因に依存し、特定のバッファーを必要とする場合がある。かかる方法は、当業者に明らかである。例えば、本明細書に記載されるサンプル中のバイオマーカーセットを、同様に本明細書に記載されるキット及び／又は検出装置のいずれかを用いて測定することができる。
【０１０６】
本明細書で提供されるもののようなバイオマーカーの検出及び／又は定量化に用いられる検出アッセイのタイプは、幾つかのパラメーターを挙げると、アッセイが用いられる特定の状況（例えば、臨床用途又は研究用途）、検出されるバイオマーカーの種類及び数、及び／又は並行して処理される患者サンプルの種類及び数によって決まり得る。
【０１０７】
本明細書に記載されるアッセイ方法は、臨床目的及び非臨床目的の両方で用いることができる。幾つかの例を本明細書で提示する。
【０１０８】
（ｉｉ）診断及び／又は予後診断用途
被験体から得られるサンプル中のバイオマーカーの１つ以上のレベルを本明細書に記載されるアッセイ方法によって測定し、様々な臨床目的に用いることができる。これらの臨床目的としては、子癇前症を有する被験体の特定、子癇前症を発症するリスクがある被験体の特定、被験体における子癇前症の進行のモニタリング、子癇前症に対する治療の有効性の評定、特定の治療に適した患者の特定、及び／又は被験体における子癇前症の再発の予測を挙げることができるが、これらに限定されない。したがって、本明細書に記載される１つ以上のバイオマーカーのレベルに基づく子癇前症（例えば、重症子癇前症（ｓＰＥ））の診断及び予後診断方法が本明細書に記載される。
【０１０９】
必要に応じて、本明細書に記載されるアッセイ方法によって決定されるサンプル中のバイオマーカーのレベルを、同じサンプル中の内部対照又は標準サンプル（所定量のバイオマーカーを有する）を用いて正規化し、正規化値を得ることができる。次いで、バイオマーカーの生の値又は正規化値を参照サンプル又は対照サンプルにおける値と比較することができる。参照又は対照サンプルにおける同じバイオマーカーの値と比べて、被験体から得られるサンプルにおけるバイオマーカーの偏差した（例えば、増加又は減少した）値は、サンプルにおける子癇前症を示唆する。かかるサンプルは、サンプルを得た被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがある可能性があることを示す。
【０１１０】
幾つかの実施形態では、被験体から得られるサンプルにおけるバイオマーカーのレベルは、そのバイオマーカーについての所定の閾値と比較することができ、バイオマーカーの偏差した（例えば、増加又は減少した）値は、被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを示し得る。
【０１１１】
対照サンプル又は参照サンプルは、健常個体から得られたサンプルであり得る。代替的には、対照サンプル又は参照サンプルは、評定されるバイオマーカーを既知の量で含有する。幾つかの実施形態では、対照サンプル又は参照サンプルは、対照被験体から得られたサンプルである。
【０１１２】
幾つかの実施形態では、対照被験体は、妊娠の合併症がない妊娠個体である。幾つかの実施形態では、対照被験体は、以前に少なくとも１回の正常妊娠転帰を有する非妊娠個体である。幾つかの実施形態では、対照被験体は、少なくとも１回の過去の妊娠で感染の兆候のない早産（非感染早産、ｎＰＴＢ）を合併した非妊娠個体である。幾つかの実施形態では、対照被験体は、以前に少なくとも１回の子癇前症妊娠転帰を有する非妊娠個体である。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、対照被験体は健常個体、すなわちタンパク質（複数の場合もある）のレベルを測定する時点で明らかに子癇前症を有しないか又は疾患の既往を有しない個体であり得る。対照被験体は、好ましくは本明細書に記載される方法によって分析される被験体と比較した場合に１つ以上の適合する特徴（例えば、年齢、妊娠期間、民族、妊娠状態）を有する健常被験体の集団であってもよい。
【０１１４】
対照レベルは、所定のレベル又は閾値であり得る。かかる所定のレベルは、子癇前症を有しない又は子癇前症のリスクがない被験体の集団におけるタンパク質のレベル（例えば、健常被験体の集団における平均レベル）であり得る。所定のレベルは、子癇前症を有する被験体の集団におけるタンパク質のレベルであってもよい。
【０１１５】
所定のレベルは、様々な形を取ることができる。例えば、中央値又は平均等の単一カットオフ値であり得る。幾つかの実施形態では、かかる所定のレベルは、或る規定の群が子癇前症を有することが知られ、別の規定の群が子癇前症を有しないことが知られる場合のような比較群に基づいて確立することができる。代替的には、所定のレベルは、例えば対照集団におけるタンパク質のレベルである範囲を含む範囲であってもよい。
【０１１６】
本明細書に記載される対照レベルは、当該分野で既知の任意の技術によって決定することができる。幾つかの例では、対照レベルは、従来の方法（例えば、本明細書に記載される試験サンプルにおけるタンパク質のレベルを得る、同じアッセイ）を、同様に本明細書に記載される対照サンプルに対して行うことによって得ることができる。他の例では、タンパク質のレベルは、対照集団の成員から得ることができ、結果を当該分野で既知の任意の方法（例えば、計算プログラム）によって分析し、対照集団におけるタンパク質のレベルである対照レベル（所定のレベル）を得ることができる。
【０１１７】
候補被験体から得られるサンプルにおけるバイオマーカーのレベルと、本明細書に記載される参照値とを比較することで、候補被験体が子癇前症（例えば、重症子癇前症（ｓＰＥ））を有する又はそのリスクがあるかを決定することができる。例えば、候補被験体に由来するサンプルにおけるバイオマーカー（複数の場合もある）のレベルが、参照値から（例えば、参照値から１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％又はそれ以上）偏差する（例えば、増加又は減少する）場合、候補被験体は、子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあるとして特定され得る。参照値が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがある被験体の集団におけるバイオマーカーのレベルの値の範囲である場合、その範囲に含まれる候補のサンプルにおけるバイオマーカーの値は、候補被験体が子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがあることを示す。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、「比率の絶対値」は、バイオマーカーの対照レベルに対するサンプル中のバイオマーカーの決定されたレベルの比率を指す。対照レベルは本明細書で詳細に記載される。幾つかの実施形態では、比率の絶対値は少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１５０、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００又は少なくとも１０００である。幾つかの実施形態では、比率の絶対値は２〜１０００である。幾つかの実施形態では、比率の絶対値は５〜１０００、１０〜１０００、１５〜１０００、２０〜１０００、３０〜１０００、４０〜１０００、５０〜１０００、６０〜１０００、７０〜１０００、８０〜１０００、９０〜１００、１００〜１０００、２００〜１０００、３００〜１０００、４００〜１０００又は５００〜１０００である。幾つかの実施形態では、比率の絶対値は２〜５００、２〜４００、２〜３００、２〜２００、２〜１００、２〜９０、２〜８０、２〜７０、２〜６０、２〜５０、２〜４０、２〜３０、２〜２０、２〜１５、２〜１０又は２〜５である。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、「上昇したレベル」、「増加したレベル」又は「参照値を上回るレベル」は、バイオマーカーのレベルが対照サンプルにおけるバイオマーカーのレベルの所定の閾値等の参照値よりも高いことを意味する。バイオマーカーの上昇又は増加したレベルは、例えば参照値を１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％又はそれ以上上回るバイオマーカーのレベルを含む。幾つかの実施形態では、試験サンプルにおけるバイオマーカーのレベルは、参照サンプルにおけるバイオマーカーのレベルよりも少なくとも１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、１０００倍、１００００倍又はそれ以上高い。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「下降したレベル」、「減少したレベル」又は「参照値を下回るレベル」は、バイオマーカーのレベルが対照サンプルにおけるバイオマーカーのレベルの所定の閾値等の参照値よりも低いことを意味する。バイオマーカーの下降又は減少したレベルは、例えば参照値を１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％又はそれ以上下回るバイオマーカーのレベルを含む。幾つかの実施形態では、試験サンプルにおけるバイオマーカーのレベルは、参照サンプルにおけるバイオマーカーのレベルよりも少なくとも１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、１０００倍、１００００倍又はそれ以上低い。
【０１２１】
幾つかの実施形態では、候補被験体は、子癇前症の症状を有するヒト患者である。例えば、被験体は、以下の症状又はそれらの組合せの１つ以上を有し得る：タンパク尿、腎障害、頭痛、視力変化、腹痛、嘔気又は嘔吐、尿量の減少、血小板減少症、肝機能障害、息切れ。他の実施形態では、被験体は、サンプルを採取する時点で子癇前症の症状を有しない若しくは症状を有しないように見えるか、子癇前症の症状の既往を有しないか、又は子癇前症の既往を有しない。また他の実施形態では、被験体は妊娠しているか又は妊娠しようとしている。
【０１２２】
本明細書に記載される方法において子癇前症を有するか又は子癇前症を有するリスクがあると特定される被験体は、本明細書に記載されるような降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、及び／又は分娩による治療等の適切な治療を受けることができる。
【０１２３】
バイオマーカーのレベルと子癇前症との間で確立された関係を考えると、本明細書に記載されるアッセイ方法及びキットを用いて、本明細書に記載されるもののような子癇前症に対する治療の有効性を評価することもできる。例えば、複数のサンプル（例えば、子宮内膜組織サンプル、子宮内膜液サンプル又は子宮内膜細胞サンプル）を、治療を行う被験体から治療の前及び後又は治療の途中に採取することができる。バイオマーカーのレベルを本明細書に記載されるアッセイ方法又は装置のいずれかによって測定することができ、それに応じてバイオマーカーの値（例えば、量）を決定することができる。例えば、バイオマーカーの絶対値により被験体が子癇前症を有することが示され、バイオマーカーのレベルが治療後又は治療の間に（例えば、先に採取したサンプルと比較して、後に採取したサンプルにおいて）変化する場合、治療が効果的であることが示される。幾つかの例では、治療は有効量の抗子癇前症療法を伴う。抗子癇前症療法の例としては、降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、並びに分娩が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２４】
被験体が治療に応答しないことが特定された場合、より高い用量及び／又は投与頻度の治療剤（例えば、降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質及び／又はグリコサミノグリカン）を投与してもよく、又は代替治療を行ってもよい。幾つかの実施形態では、治療剤の投与量又は投与頻度を、治療に応答するか又は更なる治療を必要としないことが特定された被験体において維持、低下又は中止する。代替的には、代替治療を初回又はその後の治療に応答しないことが見出された被験体に行うことができる。幾つかの実施形態では、代替治療を初回又はその後の治療に対して否定的な反応を有することが見出された被験体に行うことができる。
【０１２５】
他の実施形態では、バイオマーカー又はバイオマーカーセットの値を用いて、例えば降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、及び／又は分娩を用いて治療可能であり得る子癇前症を特定することもできる。この方法を行うために、子癇前症を有する被験体から採取したサンプル（例えば、子宮内膜組織サンプル）におけるバイオマーカーのレベルを、適切な方法（例えば、ウエスタンブロット又はＲＴ  Ｑ−ＰＣＲアッセイ等の本明細書に記載される方法）によって測定することができる。バイオマーカーのレベルが参照値から上昇又は低下している場合、抗子癇前症治療が疾患の治療に効果的であり得ることが示される。疾患が抗子癇前症療法による治療の影響を受けやすいことが特定される（例えば、子癇前症の１つ以上の症状を改善する又は止めることができる）場合、方法は、疾患を有する被験体に有効量の抗子癇前症療法を行うことを更に含み得る。
【０１２６】
他の実施形態では、バイオマーカー又はバイオマーカーセットの値を、子癇前症の重症度を評価するために利用することができる。例えば、本明細書に記載されるように、子癇前症は、被験体が疾患の症状を示さない軽症の状態である可能性がある。別の例では、子癇前症は、被験体が肝機能障害等の重篤な症状を有する重症子癇前症（ｓＰＥ）である可能性がある。幾つかの実施形態では、１つ以上のバイオマーカーのレベルは、被験体が子癇前症（例えば、重症子癇前症（ｓＰＥ））を示す、示している又は近いうちに示すかを示唆する。幾つかの実施形態では、方法は、子癇前症を有する被験体から得られるサンプルにおけるバイオマーカーのレベルと、同じ被験体に由来する対照サンプル、例えば妊娠前に同じ被験体から得られたサンプル、又は合併症のない（例えば、子癇前症を有しない）妊娠の間に同じ被験体から得られたサンプルにおけるバイオマーカーのレベルとを比較することを含む。
【０１２７】
１つ以上の受精卵又は胚の移植について被験体を評価する方法も本開示の範囲内である。この方法を行うために、妊娠しようとしており、子癇前症のリスクがある被験体から採取したサンプルにおけるバイオマーカーのレベルを適切な方法によって測定することができる。バイオマーカーのレベル（単数又は複数）により、被験体が子癇前症を患わない可能性があることが示される場合、１つ以上の受精卵又は胚を被験体に移植することができる。バイオマーカーのレベル（単数又は複数）により、被験体が子癇前症を患う可能性があるか又は子癇前症を患うことが示される場合、１つ以上の受精卵又は胚を子癇前症に対する１つ以上の治療の前、その後又はそれと同時に被験体に移植することができる。受精卵又は胚は、体外受精（ＩＶＦ）、超音波ガイド下ＩＶＦ及び外科的胚移植（ＳＥＴ）を含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知の任意の手段を用いて被験体に移植することができる。
【０１２８】
（ｉｉｉ）非臨床用途
さらに、本明細書に記載されるバイオマーカーのいずれかのレベルを、例えば研究目的の非臨床用途を含む非臨床用途に適用することができる。幾つかの実施形態では、本明細書に記載される方法を用いて細胞挙動及び／又は細胞機構を研究することができる。例えば、本明細書に記載されるバイオマーカーの１つ以上を用いて脱落膜化を評価することができ、これを脱落膜化に関する研究、及び脱落膜化異常を特異的に標的とする新たな作用物質の開発を含む様々な目的に用いることができる。
【０１２９】
幾つかの実施形態では、本明細書に記載されるバイオマーカーセットのレベルを、子癇前症に対する新たな治療法の開発に利用することができる。例えば、バイオマーカーのレベルを、新たな療法（例えば、臨床試験）を行った被験体から得られたサンプルにおいて測定することができる。幾つかの実施形態では、バイオマーカーセットのレベルは、新たな治療法の有効性、又は新たな療法を行う前、その最中若しくはその後の被験体における子癇前症の進行を示し得る。
【０１３０】
バイオマーカーを測定するためのキット及び検出装置
本開示は、本明細書に記載されるバイオマーカーセットのレベルの測定に使用されるキット及び装置も提供する。かかるキット又は装置は、図１３〜図１６、図１８、表１、表Ａ、表Ｂ及び／又は表Ｃに挙げられるバイオマーカー、及び／又はそのサブセット等の標的バイオマーカーの遺伝子産物に特異的に結合する１つ以上の結合物質（例えば、オリゴヌクレオチド、抗体等）を含み得る。例えば、かかるキット又は検出装置は、図１３〜図１６、図１８、表１、表Ａ、表Ｂ及び／又は表Ｃから選択される遺伝子から発現される１つ以上の転写産物（例えば、ｍＲＮＡ）若しくはタンパク質バイオマーカー、及び／又はそのサブセットに特異的な少なくとも１つの結合物質を含み得る。場合によっては、キット又は検出装置は、本明細書に記載されるＲＮＡ及び／又はタンパク質バイオマーカーセットの２つ以上の成員に特異的な結合物質を含む。
【０１３１】
遺伝子（例えば、ＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及び／又はＳＥＲＰＩＮＡ３、及び／又は表１、表Ａ、表Ｂ及び／又は表Ｃに挙げられる発現変動遺伝子のいずれか１つ以上）の特異的発現産物のレベルは、任意の適切な方法によって評定することができる。幾つかの実施形態では、特異的発現産物のレベルは、任意の固体支持体（例えば、１つ以上のチップ）を含む１つ以上のアッセイを用いて分析される。例えば、固体支持体（例えば、チップ）を用いて、被験体の又は被験体に由来する少なくとも１個の（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個又はそれ以上の）生体サンプルを分析することができる。したがって、幾つかの実施形態では、キットは、ハイブリダイゼーション及び／又はシークエンシングアッセイ（例えば、次世代シークエンシング反応）に用いることができる複数の遺伝子特異的ポリヌクレオチドプローブ又はプライマーを含む。幾つかの実施形態では、キットは、１つ以上の他の結合物質（例えば、アプタマー、抗体及び／又は他の結合物質）を含む。幾つかの実施形態では、異なる結合物質を別個の容器内で（例えば、乾燥粉末、溶液、懸濁液又は他の形態で）提供する。幾つかの実施形態では、２つ以上の結合物質（例えば、２つ以上のポリヌクレオチドプローブ又はプライマー）の混合物を（例えば、乾燥粉末、溶液、懸濁液又は他の形態で）提供する。幾つかの実施形態では、１つ以上の結合物質を固体支持体（例えば、チップ、例えばプローブ、プライマー又は抗体のアレイの形態のチップ）に付着させて提供する。幾つかの実施形態では、１つ以上の結合物質を（例えば、蛍光、発光、放射性、酵素リンカー又は他の検出可能なマーカーで）標識する。
【０１３２】
固体支持体（例えば、チップ）の一部を、１つの結合パートナー又は２つ以上の結合パートナーで修飾することができる。固体支持体は、任意の方法で結合パートナー（複数の場合もある）に連結することができる。非限定的な例としては、結合パートナー（複数の場合もある）を、固体支持体の表面上に物理吸着させる若しくは他の形で結合させる（例えば、直接結合させる）か、又は表面上のエポキシドを介した連結、表面上に存在するアミン若しくはカルボン酸基を用いたアミド連結の（例えば、ＮＨＳ  ＥＤＣ化学による）生成、チオールとチオール反応性基（例えば、マレイミド基）との間の連結、アルデヒドとアミンとの間のシッフ塩基の形成、表面上に存在する無水物との反応、及び／又は光活性化可能なリンカーを含むが、これらに限定されない任意の方法で、適切な結合化学により共有結合的に連結することができる。
【０１３３】
結合パートナーは、本組成物又は方法に有用な任意の結合パートナーであり得る。例えば、結合パートナーは、タンパク質（天然に存在するアミノ酸又は人工アミノ酸を含む）、天然に存在する塩基又は人工塩基のみからなる１つ以上の核酸（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡを含む）、糖、炭水化物、１つ以上の小分子（ビタミン、ホルモン、補助因子、ヘム基、キレート、脂肪酸若しくは他の既知の小分子、及び／又はファージの１つ以上を含むが、これらに限定されない）であり得る。
【０１３４】
結合パートナーは、ピペット、液体ディスペンサー、プロッター、ナノスポッター（nano-spotter）、ナノプロッター、アレイヤー、吹き付け機構又は他の適切な流体操作装置の使用を含むが、これらに限定されない任意の装置を用いた任意の様式での所定の位置での液滴の付着により基材の表面に適用することができる。
【０１３５】
幾つかの実施形態では、本方法及び組成物への使用に適した抗体又は抗原結合フラグメントが提供される。本組成物及び方法に有用なかかる抗体又は抗原結合フラグメントを用いるイムノアッセイは、直接フォーマット又は間接フォーマットのいずれかの競合的又は非競合的イムノアッセイであり得る。かかるイムノアッセイの非限定的な例は、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、サンドイッチアッセイ（免疫測定アッセイ）、フローサイトメトリーベースのアッセイ、ウエスタンブロットアッセイ、免疫沈降アッセイ、免疫組織化学アッセイ、免疫顕微鏡（immuno-microscopy）アッセイ、ラテラルフロー免疫クロマトグラフィーアッセイ及びプロテオミクスアレイである。例えば、結合パートナーはＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及び／又はＳＥＲＰＩＮＡ３の１つ以上を含む関心のタンパク質に対して特異性を有する抗体（又はその抗体結合フラグメント）であり得る。
【０１３６】
幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーを用いて、遺伝子の特異的発現産物のレベルを評定する。オリゴヌクレオチド結合パートナーは、既知の又は使用される任意のタイプであり得る。一連の非限定的な例としては、或る特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドプローブはＲＮＡオリゴヌクレオチド、ＤＮＡオリゴヌクレオチド、ＲＮＡオリゴヌクレオチドとＤＮＡヌクレオチドとの混合物、及び／又はＲＮＡとＤＮＡとの混合物であり得るオリゴヌクレオチドとすることができる。オリゴヌクレオチド結合パートナーは、天然に存在するものであっても又は合成であってもよい。オリゴヌクレオチド結合パートナーは、どのような長さであってもよい。一連の非限定的な例としては、オリゴヌクレオチド結合パートナーの長さは、約５ヌクレオチド〜約５０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド〜約４０ヌクレオチド又は約１５ヌクレオチド〜約４０ヌクレオチドの範囲であり得る。アレイは、各標的遺伝子に特異的な任意の数のオリゴヌクレオチド結合パートナーを含み得る。例えば、アレイは、各標的遺伝子に特異的な１０個未満（例えば、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個又は１個）のオリゴヌクレオチドプローブを含み得る。別の例としては、アレイは、各標的遺伝子に特異的な１０個超、５０個超、１００個超又は１０００個超のオリゴヌクレオチド結合パートナーを含み得る。
【０１３７】
アレイは、例えばミスマッチ対照オリゴヌクレオチド結合パートナー、又は対照抗体若しくはその抗原結合フラグメント等の対照結合パートナーを更に含み得る。ミスマッチ対照オリゴヌクレオチド結合パートナーが存在する場合、定量化工程は、オリゴヌクレオチド結合パートナーの各々とその対応するミスマッチ対照結合パートナーとの間のハイブリダイゼーションシグナル強度の差を算出することを含み得る。対照抗体又はその抗原結合フラグメントが存在する場合、定量化工程は、検査対象の遺伝子（例えば、ＡＤＡＭＴＳ８、ＣＨＩ３Ｌ２、ＣＨＳＴ７、ＣＮＲ１、ＣＯＣＨ、ＦＢＸＯ２、ＮＰＲ１、ＳＣＡＲＡ５及び／又はＳＥＲＰＩＮＡ３）の抗体又は抗原結合フラグメントと対照若しくは「ハウスキーピング」抗体又はその抗原結合フラグメントとの間のハイブリダイゼーションシグナル強度の差を算出することを含み得る。定量化は、各遺伝子についてオリゴヌクレオチドプローブの各々とその対応するミスマッチ対照プローブとの間のハイブリダイゼーションシグナル強度の平均差を算出することを更に含み得る。
【０１３８】
アレイ（例えば、チップ）は、任意の数の分析領域を含有し得る。一連の非限定的な例としては、アレイは、１個又は２個以上（例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個又はそれ以上）の分析領域を含有することができる。各分析領域は、その基材部分に固定化された任意の数の結合パートナーを含み得る。非限定的な一連の例としては、各分析領域は、その基材部分に固定化された１個〜１０００個の結合パートナー、１個〜５００個の結合パートナー、１個〜２５０個の結合パートナー、１個〜１００個の結合パートナー、２個〜１０００個の結合パートナー、２個〜５００個の結合パートナー、２個〜２５０個の結合パートナー、２個〜１００個の結合パートナー、３個〜１０００個の結合パートナー、３個〜５００個の結合パートナー、３個〜２５０個の結合パートナー又は３個〜１００個の結合パートナーを含み得る。
【０１３９】
関心の特異的抗原に結合する抗体又は抗原結合フラグメントを含むが、これらに限定されない結合パートナーは、例えば固体支持体（例えば、チップ、担体、膜、カラム、プロテオミクスアレイ等）に結合することによって固定化することができる。一連の実施形態では、固体支持体の形成に用いられる材料は、４００ｎｍ〜８００ｎｍの波長の光（例えば、可視範囲の光）で９０％超の光透過率を有する。光透過率は、例えば約２ｍｍ（又は他の実施形態では、約１ｍｍ又は約０．１ｍｍ）の厚さを有する材料を通して測定することができる。場合によっては、光透過率は、４００ｎｍ〜８００ｎｍの波長の光で８０％以上、８５％以上、８８％以上、９２％以上、９４％以上又は９６％以上である。幾つかの実施形態では、固体支持体の形成に用いられる材料は、４００ｎｍ〜８００ｎｍの波長の光で９９．９％以下、９６％以下、９４％以下、９２％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、５０％以下、３０％以下又は１０％以下の光透過率を有する。上述の範囲の組合せも可能である。
【０１４０】
アレイは、実質的に任意の形状の表面（例えば、アレイは平面であり得る）又は更には多様な表面上に組み立てることができる。本明細書に記載される組成物及び方法に有用な固体支持体材料の非限定的な例としては、ガラス、プラスチック、エラストマー材料、膜、又はイムノアッセイを行うのに適切な他の材料を挙げることができる。固体支持体は、１つの材料から形成されていても又は２つ以上の材料から形成されていてもよい。
【０１４１】
具体的な固体支持体材料としては、任意のタイプのガラス（例えば、石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、Ｐｙｒｅｘ（商標）又はＤｕｒａｎ（商標））を挙げることができるが、これらに限定されない。一実施形態では、固体支持体はガラスチップである。固体支持体はスパッタリング、ケイ素の酸化等のプロセス、又はシラン試薬の反応によって作製されるガラスフィルム二酸化物（glass film dioxide）でコーティングされた非ガラス基材（例えば、プラスチック基材）も含み得る。ガラス表面は、例えばアミン末端シラン（アミノプロピルトリエトキシシラン）及びエポキシド末端シラン（グリシドキシプロピルトリメトキシシラン）を含む官能化シラン試薬で更に修飾されていてもよい。
【０１４２】
付加的な具体的な固体支持体材料としては、熱可塑性ポリマーを挙げることができるが、これらに限定されず、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリメチルメタクリレート、環状オレフィンコポリマー、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、任意のフルオロポリマー（例えば、Ｔｅｆｌｏｎ（商標）としても知られるポリテトラフルオロエチレン）、ポリ乳酸、ポリ（メタクリル酸メチル）（ＰＭＭＡ又はアクリル樹脂としても知られる；例えば、Ｌｕｃｉｔｅ（商標）、Ｐｅｒｓｐｅｘ（商標）及びＰｌｅｘｉｇｌａｓ（商標））及びアクリロニトリルブタジエンスチレンの１つ以上が含まれ得る。
【０１４３】
付加的な具体的な固体支持体材料としては、ポリシロキサン（ポリジメチルシロキサン等のシリコーン）及びゴム（ポリイソプレン、ポリブタジエン、クロロプレン、スチレン−ブタジエン、ニトリルゴム、ポリエーテルブロックアミド、エチレン−酢酸ビニル、エピクロロヒドリンゴム、イソブテン−イソプレン、ニトリル、ネオプレン、エチレン−プロピレン及びハイパロン）を含む１つ以上のエラストマー材料を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１４４】
付加的な具体的な固体支持体材料としては、デキストラン、アミロース、ナイロン、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ガラス繊維、及び天然又は修飾セルロース（例えば、セルロース、ニトロセルロース、ＣＮＢｒ活性化セルロース、並びにポリアクリルアミド、アガロース及び／又はマグネタイトで修飾されたセルロース）等の１つ以上の膜基材を挙げることができるが、これらに限定されない。支持体の性質は、固定されていても又は溶液中に懸濁されていてもよい（例えば、ビーズ）。
【０１４５】
幾つかの実施形態では、固体支持体（例えば、チップ）の材料及び寸法（例えば、厚さ）は、水蒸気に実質的に不透過性である。幾つかの実施形態では、カバーが存在していてもよい。幾つかの実施形態では、カバーは、水蒸気に実質的に不透過性である。例えば、固体支持体（例えば、チップ）は金属箔、或る特定のポリマー、或る特定のセラミック及びそれらの組合せ等の高い蒸気バリア性をもたらすことが知られる材料を含むカバーを備えていてもよい。低い水蒸気透過性を有する材料の例を下記に提示する。他の場合では、材料は、チップの形状及び／又は構成に少なくとも一部基づいて選ばれる。例えば、平面の装置を形成するために或る特定の材料を使用することができ、他の材料が湾曲した又は不規則な形状の装置の形成により適切である。
【０１４６】
本明細書に記載される任意の組成物の部分又は構成要素の全て又は一部を形成するために使用される材料は、例えば約５．０ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満、約４．０ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満、約３．０ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満、約２．０ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満、約１．０ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満、約０．５ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満、約０．３ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満、約０．１ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満又は約０．０５ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ未満の水蒸気透過性を有し得る。場合によっては、水蒸気透過性は、例えば約０．０１ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ〜約２．０ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ、約０．０１ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ〜約１．０ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ、約０．０１ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ〜約０．４ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ、約０．０１ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ〜約０．０４ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ又は約０．０１ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄ〜約０．１ｇ・ｍｍ／ｍ２・ｄであり得る。水蒸気透過性は、例えば４０℃にて９０％相対湿度（ＲＨ）で測定することができる。上述の水蒸気透過性のいずれかを有する材料の組合せを本組成物又は方法に用いることができる。
【０１４７】
幾つかの実施形態では、固体支持体（例えば、チップ）及び／又はカバーの材料及び寸法は変化し得る。例えば、チップは、１つ以上の領域（例えば、液体貯蔵領域）をもたらすように構成することができる。或る特定の実施形態では、チップは、２つ以上の領域（例えば、液体貯蔵領域）をもたらすように構成することができる。或る特定の実施形態では、領域の２つ以上が他の領域から流体的に分離される。一実施形態では、領域の全てが他の領域から流体的に分離される。幾つかの実施形態では、領域の全てが流体的に接続される。チップは、任意の数の液体貯蔵領域を備えていてもよい。非限定的な例としては、チップは１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個の液体貯蔵領域を備えていてもよく、その各々が互いに流体的に分離されていてもよい。他の実施形態では、チップは、互いに流体的に接続された１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個の液体貯蔵領域を備えていてもよい。
【０１４８】
本明細書に記載される固体支持体（例えば、チップ）は、化学反応及び／又は生物学的反応、又は他のプロセス等の分析を行うのに適切な任意の容積を有し得る。固体支持体の全容積は、例えば任意の試薬保管域、分析領域、液体貯蔵領域、廃棄物域、及び１つ以上の識別子を含み得る。幾つかの実施形態では、少量の試薬及びサンプルを使用し、液体貯蔵領域の全容積は、例えば１０ｍＬ以下、５ｍＬ以下、１ｍＬ以下、５００μＬ以下、２５０μＬ以下、１００μＬ以下、５０μＬ以下、２５μＬ以下、１０μＬ以下、５μＬ以下又は１μＬ以下である。幾つかの実施形態では、少量の試薬及びサンプルを使用し、液体貯蔵領域の全容積は、例えば少なくとも１０ｍＬ、少なくとも５ｍＬ、少なくとも１ｍＬ、少なくとも５００μＬ、少なくとも２５０μＬ、少なくとも１００μＬ、少なくとも５０μＬ、少なくとも２５μＬ、少なくとも１０μＬ、少なくとも５μＬ又は少なくとも１μＬである。上述の値の組合せも可能である。
【０１４９】
固体支持体（例えば、チップ）の長さ及び／又は幅は、例えば３００ｍｍ以下、２００ｍｍ以下、１５０ｍｍ以下、１００ｍｍ以下、９５ｍｍ以下、９０ｍｍ以下、８５ｍｍ以下、８０ｍｍ以下、７５ｍｍ以下、７０ｍｍ以下、６５ｍｍ以下、６０ｍｍ以下、５５ｍｍ以下、５０ｍｍ以下、４５ｍｍ以下、４０ｍｍ以下、３５ｍｍ以下、３０ｍｍ以下、２５ｍｍ以下又は２０ｍｍ以下であり得る。幾つかの実施形態では、チップの長さ及び／又は幅は、例えば少なくとも３００ｍｍ、少なくとも２００ｍｍ、少なくとも１５０ｍｍ、少なくとも１００ｍｍ、少なくとも９５ｍｍ、少なくとも９０ｍｍ、少なくとも８５ｍｍ、少なくとも８０ｍｍ、少なくとも７５ｍｍ、少なくとも７０ｍｍ、少なくとも６５ｍｍ、少なくとも６０ｍｍ、少なくとも５５ｍｍ、少なくとも５０ｍｍ、少なくとも４５ｍｍ、少なくとも４０ｍｍ、少なくとも３５ｍｍ、少なくとも３０ｍｍ、少なくとも２５ｍｍ又は少なくとも２０ｍｍであり得る。上述の値の組合せも可能である。幾つかの実施形態では、固体支持体（例えば、チップ）の厚さは、例えば５ｍｍ以下、３ｍｍ以下、２ｍｍ以下、１ｍｍ以下、０．９ｍｍ以下、０．８ｍｍ以下、０．７ｍｍ以下、０．５ｍｍ以下、０．４ｍｍ以下、０．３ｍｍ以下、０．２ｍｍ以下又は０．１ｍｍ以下であり得る。幾つかの実施形態では、固体支持体（例えば、チップ）の厚さは、例えば少なくとも５ｍｍ、少なくとも３ｍｍ、少なくとも２ｍｍ、少なくとも１ｍｍ、少なくとも０．９ｍｍ、少なくとも０．８ｍｍ、少なくとも０．７ｍｍ、少なくとも０．５ｍｍ、少なくとも０．４ｍｍ、少なくとも０．３ｍｍ、少なくとも０．２ｍｍ又は少なくとも０．１ｍｍであり得る。上述の値の組合せも可能である。１つ以上の固体支持体（例えば、チップ）は、任意の適切な装置によって同時に分析することができる。アダプターを、１つ以上の固体支持体（例えば、チップ）を分析装置に挿入し、確実に保持するためにそれらと共に使用することができる。
【０１５０】
幾つかの実施形態では、固体支持体（例えば、チップ）は、１つ以上の識別子を備える。任意の方法又はタイプの識別を用いることができる。例えば、識別子は、バーコード又はＲＦＩＤタグ等の任意のタイプの標識であり得るが、これに限定されない。識別子は名前、患者番号、社会保障番号又は任意の他の被験体の識別方法を含み得る。識別子は、臨床状況で有用な任意のタイプの無作為化識別子であってもよい。
【０１５１】
本明細書に記載される固体支持体（例えば、チップ）及びそれらのそれぞれの構成要素が例示的なものであり、他の構成及び／又はタイプの固体支持体（例えば、チップ）及び構成要素を本明細書に記載されるシステム及び方法と共に用いることができることを理解されたい。
【０１５２】
１つ以上の結合パートナーの結合は、（例えば、抗原結合抗体複合体を含むが、これに限定されない関心のタンパク質又は他の物質の結合を検出するために）当該技術分野で既知の任意の方法によって定量化することができる。定量化は、例えば抗体に結合した活性分子の検出又は詮索によって行うことができる。２つ以上のアッセイが連続域で行われる多重フォーマットでは、各アッセイと関連したシグナルが他のアッセイとは区別可能であるものとする。（１）実質的に重複しないスペクトル特性及び／又は電気化学的特性を有する標識の使用、（２）トレーサー自体に極めて接近して付着又は堆積したままであるシグナル増幅化学の使用を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の適切な戦略を用いることができる。
【０１５３】
幾つかの実施形態では、標識結合パートナー（例えば、抗体又は抗原結合フラグメント）は、（例えば、抗原結合抗体複合体を用いて）結合を検出するためのトレーサーとして使用することができる。本方法及び組成物に有用であり得る標識のタイプの例としては、酵素、放射性同位体、コロイド金属、蛍光化合物、磁性化合物、化学発光化合物、電気化学発光基（electrochemiluminescent groups）、金属ナノ粒子及び生物発光化合物が挙げられる。放射標識結合パートナー（例えば、抗体）は、任意の既知の方法を用いて作製することができ、後にガンマカウンター、シンチレーションカウンター又はオートラジオグラフィーによって検出することができる１５３Ｅｕ、３Ｈ、３２Ｐ、３５Ｓ、５９Ｆｅ又は１２５Ｉ等の放射性同位体のカップリングを含み得る。結合パートナー（例えば、抗体又は抗原結合フラグメント）は、代替的には酵母アルコール脱水素酵素、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等の酵素で標識した後、発色させ、分光光度的又は視覚的に検出することができる。標識は、色原体を検出可能な発色団へと反応させるために使用することができる（例えば、色原体が沈殿色素である場合を含む）。
【０１５４】
適切な蛍光標識としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、フルオレスカミン、ローダミン、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）色素（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ４０５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ４８８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ５１４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ５３２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ５５５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ６１０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ６３５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ６８０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ７００、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ７５０又はＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（商標）  ７９０等）、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７及びＣｙ７．５等を含むが、これらに限定されないシアニン色素を挙げることができるが、これらに限定されない。標識は、時間分解蛍光（ＴＲＦ）原子（例えば、ＴＲＦ収率を高めるのに適切なリガンドを有するＥｕ又はＳｒ）であってもよい。蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）をもたらすことが可能な２つ以上のフルオロフォアを用いることもできる。適切な化学発光標識としては、アクリジニウムエステル、ルミノール、イミダゾール、シュウ酸エステル、ルシフェリン及び任意の他の同様の標識を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１５５】
使用に適切な電気化学発光基としては、非限定的な例としてルテニウム及び同様の基を挙げることができる。金属ナノ粒子を標識として使用することもできる。金属ナノ粒子を、金属増感（metal enhancement）反応を触媒するために使用することができる（銀増感のための金コロイド等）。
【０１５６】
本明細書に記載されるか又は当該分野で既知の標識のいずれかを、共有又は非共有手段を用いてトレーサーに連結することができる。標識をビーズ（例えば、プレーンビーズ、中空ビーズ、又は強磁性コアを有するビーズを含む）のような物体の上又は内部に存在させることができ、続いてビーズを結合パートナー（例えば、抗体又はその抗原結合フラグメント）に付着させる。標識は、アップコンバートリン光系（up-converting phosphorescent system）、ナノドット、量子ドット、ナノロッド及び／又はナノワイヤを含むが、これらに限定されないナノ粒子であってもよい。抗体に連結させる標識は核酸であってもよく、次いでこれを（例えば、ＰＣＲを用いて）増幅させた後、光学的、電気的又は電気化学的手段の１つ以上により定量化することができる。
【０１５７】
幾つかの実施形態では、結合パートナーは、オリゴヌクレオチド結合パートナーである。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、バイオマーカーの核酸配列に結合する。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、標識オリゴヌクレオチド結合パートナーである。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、配列番号１として記載される。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、配列番号２として記載される。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、配列番号３として記載される。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、配列番号４として記載される。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、配列番号５として記載される。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、配列番号６として記載される。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、配列番号７として記載される。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチド結合パートナーは、配列番号８として記載される。
【０１５８】
幾つかの実施形態では、結合パートナーは、結合複合体の形成前に固体支持体上に固定化される。他の実施形態では、抗体及び抗原結合フラグメントの固定化は、結合複合体の形成後に行われる。
【０１５９】
一実施形態では、本明細書に開示されるイムノアッセイ方法は、結合パートナー（例えば、抗体又は抗原結合フラグメント）を固体支持体（例えば、チップ）に固定化することと、サンプル（例えば、子宮内膜液サンプル）を、サンプル中に存在する場合に１つ以上の結合パートナー（例えば、１つ以上の抗体又は抗原結合フラグメント）へのバイオマーカー（例えば、タンパク質）の発現産物の結合を可能にする条件下で固体支持体に適用することと、過剰なサンプルを固体支持体から除去することと、結合複合体を、（例えば、抗原に結合した固定化抗体又は抗原結合フラグメントへの発現産物の）結合を可能にする条件下で（例えば、検出可能に標識された抗体又は抗原結合フラグメントを用いて）検出することと、固体支持体を洗浄することと、標識についてアッセイすることとを含む。
【０１６０】
試薬は、様々な時間にわたってチップ内又はチップ上に保管することができる。例えば、試薬は１時間超、６時間超、１２時間超、１日超、１週間超、１ヶ月超、３ヶ月超、６ヶ月超、１年超又は２年超にわたって保管することができる。任意に、保管を延長するためにチップを適切な方法で処理することができる。例えば、保管試薬を含有するチップを真空密閉し、暗い環境で保管し、及び／又は低温（例えば、４℃又は０℃未満）で保管することができる。保管期間は、使用する特定の試薬、保管試薬の形態（例えば、湿潤又は乾燥）、基材及びカバー層（複数の場合もある）の形成に使用される寸法及び材料、基材及びカバー層（複数の場合もある）を接着する方法、並びにチップ全体を処理又は保管する方法等の１つ以上の要因によって決まる。固体支持体材料上の試薬（例えば、液体又は乾燥試薬）の保管は、使用前又はパッケージング中にチップを被覆及び／又は密閉することを含み得る。
【０１６１】
本明細書に記載される任意の固体分析装置は、キット内に含まれ得る。キットは、かかる装置に有用な任意のパッケージングを含み得る。キットは、任意のフォーマット又は言語での使用説明書を含み得る。キットは、１つ以上の位置（物理的又は電子的）から更なる説明書を得ることを使用者に指示してもよい。含まれる説明書は、ヒト患者等の被験体から採取した生体サンプルにおけるバイオマーカーセット（例えば、タンパク質バイオマーカー又は核酸バイオマーカー）のレベルを測定するためにキットに含まれる構成要素を使用する方法の説明を含み得る。キットの使用に関する説明書は概して、本明細書に記載されるアッセイ方法を行うのに適切な各構成要素の量及び条件に関する情報を含む。
【０１６２】
キット内の構成要素は単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回用パッケージ）又は単位用量未満の用量（sub-unit doses）であってもよい。キットは、本明細書に記載される１つ以上のバッファーを含んでいてもよいが、コーティングバッファー、ブロッキングバッファー、洗浄バッファー及び／又は停止バッファーに限定されない。
【０１６３】
本開示のキットは、適切なパッケージングに入れられる。適切なパッケージングとしては、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージング（例えば、密封マイラー又はプラスチック袋）等が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＣＲ機、核酸アレイ又はフローサイトメトリーシステム等の特定の装置と組み合わせて使用されるパッケージも企図される。
【０１６４】
キットは対照及び／又は標準等の説明情報、又は参照サンプル等の付加的な構成要素を任意に提供してもよい。通常は、キットは容器と、容器上の又は容器と同梱したラベル又は添付文書（複数の場合もある）を含む。幾つかの実施形態では、本開示は、上記のキットの内容を含む製品を提供する。
【０１６５】
子癇前症の治療
本明細書に記載される方法を用いて特定される、子癇前症を有するか又は子癇前症のリスクがある被験体は、任意の適切な抗子癇前症療法で治療することができる。幾つかの実施形態では、提供される方法は、記載の方法の結果、例えばバイオマーカーセットのレベルの測定に基づいて被験体に対する治療を選択することを含む。
【０１６６】
幾つかの実施形態では、方法はアッセイ、例えばバイオマーカー検出の結果に基づいて被験体に対して行われる療法、例えば降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、及び／又は分娩を選択するか又は行うことの一方又は両方を含む。
【０１６７】
幾つかの実施形態では、療法は、降圧薬の投与を含む。降圧薬の例としては、中枢作用性α２−アドレナリン作動薬（例えば、メチルドーパ又はクロニジン）、抹消作用性アドレナリン受容体拮抗薬（例えば、ラベタロール又はプラゾシン）、カルシウムチャネル遮断薬（例えば、ニフェジピン又はベラパミル）、血管拡張薬（例えば、ヒドララジン又はニトロプルシドナトリウム）、及び利尿薬（例えば、チアジド系利尿薬、例えばクロロチアジド、クロルタリドン、ヒドロクロロチアジド、インダパミド、及びメトラゾン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６８】
幾つかの実施形態では、療法は、抗凝血剤の投与を含む。抗凝血剤の例としては、糖タンパク質血小板抑制薬（例えば、アブシキシマブ、エプチフィバチド、チロフィバン）、血小板凝集抑制薬（例えば、アスピリン、カングレロル、シロスタゾール、クロピドグレル、ジピリダモール、プラスグレル、チクロピジン、又はチカグレロル）、及びプロテアーゼ活性化受容体−１拮抗薬（例えば、ボラパクサール）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６９】
幾つかの実施形態では、療法は、コルチコステロイドの投与を含む。コルチコステロイドの例としては、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、ハルシノニド、トリアムシノロンアセトニド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルオコルトロン、ハロメタゾン、モメタゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、酪酸クロベタゾン、酢酸フルプレドニデン、フロ酸モメタゾン、シクレソニド、酢酸コルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸プロピオン酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、吉草酸ヒドロコルチゾン、プレドニカルベート、及びピバル酸チキソコルトールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７０】
幾つかの実施形態では、療法は、抗痙攣薬の投与を含む。抗痙攣薬の例としては、硫酸マグネシウム、パラアルデヒド、スチリペントール、フェノバルビタール、プリミドン、メチルフェノバルビタール、メホバルビタール、バルベキサクロン、クロバザム、クロナゼパム、クロラゼプ酸、ジアゼパム、ミダゾラム、ロラゼパム、ニトラゼパム、テマゼパム、ニメタゼパム、臭化カリウム、フェルバメート、カルバマゼピン、オクスカルバゼピン、酢酸エスリカルバゼピン、バルプロ酸、バルプロ酸ナトリウム、ジバルプロエクスナトリウム、ビガバトリン、プロガビド、チアガビン、ビガバトリン、プロガビド、トピラマート、ガバペンチン、プレガバリン、ヒダントイン、エトトイン、フェニトイン、メフェニトイン、ホスフェニトイン、オキサゾリンジオン、パラメタジオン、トリメタジオン、エタジオン、プロピオン酸、ベクラミド、ピリミジンジオン、ピロリジン、ブリバラセタム、レベチラセタム、セレトラセタム、スクシンイミド、エトスクシミド、フェンスクシミド、メスクシミド、スルホンアミド、アセタゾラミド、スルチアム、メタゾラミド、ゾニサミド、トリアジン、ラモトリギン、フェネトライド、フェナセミド、バルプロミド、バルノクタミド、及びペランパネルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７１】
幾つかの実施形態では、療法は、抗酸化物質を投与することを含む。抗酸化物質の例としては、ビタミンＣ及びビタミンＥが挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、療法は、低用量アスピリンを投与することを含む。幾つかの実施形態では、療法は床上安静を含む。幾つかの実施形態では、療法は入院を含む。幾つかの実施形態では、療法は、母体及び胎児のモニタリングを含む。幾つかの実施形態では、療法は、胎児の娩出を含む。
【０１７２】
幾つかの実施形態では、療法は、グリコサミノグリカンを投与することを含む。グリコサミノグリカンの例としては、低分子量ヘパリン、ヘパリン硫酸（heparin sulfate）、化学修飾ヘパリン又はヘパリン硫酸、低分子量デルマタン硫酸、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７３】
有効量の子癇前症療法は、治療を必要とする被験体（例えば、ヒト）に静脈内投与、例えばボーラス又は一定期間にわたる持続注入、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内（intracerebrospinal）、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内、経口、吸入又は局所経路等の適切な経路によって行うことができる。
【０１７４】
「有効量」は、本明細書で使用される場合、単独で又は１つ以上の他の活性物質と組み合わせて、被験体に対して治療効果をもたらすのに必要とされる各活性物質の量を指す。有効量は、当業者に認識されるように、治療される特定の病態、病態の重症度、年齢、健康状態、体格、体重を含む個々の患者のパラメーター、治療の期間、併用療法（もしあれば）の性質、特定の投与経路、並びに医療関係者の知識及び技能の範囲内の同様の要因に応じて変化する。これらの要因は当業者に既知であり、単なる日常実験で対処することができる。概して、個々の構成要素又はその組合せの最大用量、すなわち正しい医学的判断に従う最高安全用量を使用することが好ましい。しかしながら、患者が医学的理由、心理的理由又は実質的に任意の他の理由から、より低い用量又は許容用量を要求し得ることが当業者には理解される。
【０１７５】
作用物質の半減期等の経験的考察が概して投与量の決定に寄与する。投与の頻度は、療法を通じて決定及び調整することができ、概して、必ずしもというわけではないが、子癇前症の治療及び／又は抑制及び／又は回復及び／又は遅延に基づく。代替的には、治療剤の持続連続放出配合物が適切であり得る。持続放出を達成するための様々な配合物及び装置が当該技術分野で既知である。
【０１７６】
本明細書で使用される場合、「治療する」という用語は、障害、疾患の症状及び／又は子癇前症の素因を治癒する、治す、緩和する、軽減する、変化させる、癒やす、回復させる、改善する又はそれらに作用する目的での子癇前症、子癇前症の症状、及び／又は子癇前症の素因を有する被験体への１つ以上の活性物質を含む組成物の適用又は投与を指す。
【０１７７】
子癇前症の緩和は、疾患の発症若しくは進行を遅延すること及び／又は疾患の重症度を低減することを含む。疾患の緩和は、必ずしも治癒的結果を必要とするわけではない。
【０１７８】
本明細書で使用される場合、疾患（子癇前症等）の発症を「遅延する」とは、疾患の進行を先送りする、妨げる、減速する、遅らせる、安定させる及び／又は先延ばしにすることを意味する。この遅延は、疾患の既往及び／又は治療される個体に応じて様々な長さの時間であり得る。疾患の発症を「遅延する」若しくは緩和し、及び／又は疾患の発生を遅延する方法は、方法を用いない場合と比較して、所与の時間枠内で疾患の１つ以上の症状を発症する可能性を低減し、及び／又は所与の時間枠内で症状の程度を低減する方法である。かかる比較は通例、統計的に有意な結果を得るのに十分な数の被験体を用いた臨床研究に基づく。
【０１７９】
疾患の「発症」又は「進行」は、疾患の初期兆候及び／又はその後の進行を意味する。疾患の発症は、検出可能であり、当該技術分野で既知の標準的な臨床手法を用いて評定することができる。しかしながら、発症は、検出不能で有り得る進行も指す。本開示の目的上、発症又は進行は、症状の生物学的経過を指す。「発症」は発現、再発及び発生を含む。本明細書で使用される場合、子癇前症の「発生」又は「発現」は、初期発生及び／又は再発を含む。
【０１８０】
幾つかの実施形態では、療法は、被験体に対して１回以上行われる。療法、例えば降圧薬、抗凝血剤、コルチコステロイド、抗痙攣薬、抗酸化物質、グリコサミノグリカン、床上安静、入院、母体及び胎児のモニタリング、及び／又は分娩は、子癇前症の治療のための併用療法の一環として別の療法と共に行ってもよい。
【０１８１】
併用療法という用語は、本明細書で使用される場合、これらの作用物質の連続的な投与、すなわち各治療剤を異なる時点で投与する投与、及びこれらの治療剤又は少なくとも２つの作用物質の実質的に同時の投与を包含する。
【０１８２】
各作用物質の連続的な又は実質的に同時の投与は経口経路、静脈内経路、筋肉内、皮下経路、及び粘膜組織を介した直接吸収を含むが、これらに限定されない任意の適切な経路によって行うことができる。作用物質は、同じ経路又は異なる経路によって投与することができる。例えば、第１の作用物質を経口投与することができ、第２の作用物質を静脈内投与することができる。
【０１８３】
本明細書で使用される場合、「連続的な」という用語は、他に指定のない限り、規則的な順序又は順番を特徴とすることを意味し、例えば投与計画が第１の治療剤及び第２の治療剤の投与を含む場合、連続投与計画は第２の治療剤の投与の前、それと同時の、それと実質的に同時の又はその後の第１の治療剤の投与を含み得るが、両方の作用物質を規則的な順序又は順番で投与する。「別々の」という用語は、他に指定のない限り、互いに離すことを意味する。「同時に」という用語は、他に指定のない限り、同じ時点で起こる又は行うこと、例えば本発明の複数の作用物質を同じ時点で投与することを意味する。「実質的に同時に」という用語は、複数の作用物質を数分の間隔で（例えば、１０分の間隔で）投与することを意味し、共同投与（joint administration）及び逐次投与を包含することを意図するが、投与が逐次的である場合、僅かな時間（例えば、医師が２つの作用物質を別々に投与するのにかかる時間）の時間的な隔たりしかない。本明細書で使用される場合、併用投与及び実質的に同時の投与は、区別なく使用される。連続投与は、本明細書に記載される複数の作用物質の時間的に隔たりのある投与を指す。
【０１８４】
更に詳述することなく、当業者が上記の説明に基づいて本発明を最大限に利用することができると考えられる。以下の具体的な実施形態は、したがって、単なる例示に過ぎず、いかなることがあっても本開示の残りの部分を限定するものではないと解釈すべきである。本明細書に引用される全ての文献は、本明細書に言及される目的又は主題のために引用することにより本明細書の一部をなす。
【実施例】
【０１８５】
明細書に記載される発明がより十分に理解され得るように、以下の実施例を記載する。本願に記載される実施例は、本明細書で提供される方法、組成物及びシステムを説明するために提示され、いかなる形でもそれらの範囲を限定すると解釈すべきでない。
【０１８６】
材料及び方法
子宮内膜サンプルの採取
Hospital La Fe（スペイン、バレンシア）の臨床研究倫理委員会（Comites de Etica en Investigacion Clinica）により、本明細書に記載される子宮内膜サンプルの採取が承認され、書面によるインフォームドコンセントを組織採取前に全ドナーから得た。サンプルは、研究の１年〜５年前に妊娠していた女性から採取した。全てのドナーが規則的な月経を有し、基礎的な子宮内膜病理を有さず、サンプル採取前の３ヶ月間にホルモン療法を受けていなかった。子宮内膜生検材料を、黄体期前期（生理１５日目〜１７日目）に滅菌条件下でｐｉｐｅｌｌｅ（Genetics、ベルギー）によって得た。サンプルは、６時間以内に処理するまでＰＢＳ中に置いた。以前のｓＰＥ妊娠及び正常妊娠の臨床的特徴を表２及び表３にまとめる。
【０１８７】
【表５】
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【０１８８】
【表６】
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【０１８９】
ｈＥＳＣの単離及び培養
子宮内膜サンプルを処理し、ｈＥＳＣを穏やかなコラゲナーゼ消化によって単離し、以前に記載のように培養した（Simon et al., J Clin Endocinol Metab, 1994, 78(3):675-682）。
【０１９０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化
ｈＥＳＣを以前に記載のようにｃＡＭＰ及びＭＰＡ処理によって脱落膜化させた（Brar et al., Endocrine, 1997, 6(3):301-307）。対照として、ｈＥＳＣを添加剤なしに並行して培養した。
【０１９１】
Ｆ−アクチン染色
形態学的レベルでの脱落膜化の確認は、以前に記載のようにＦ−アクチン染色によって達成した（Garrido-Gomez et al, FASEB J, 2012, 26(9):3715-3727）。
【０１９２】
ＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１のＥＬＩＳＡ
培養したｈＥＳＣからの馴化培地を脱落膜化の５日目に採取した。ＰＲＬ（Boster Immunoleader、米国）及びＩＧＦＢＰ１（Raybiotech、米国）の濃度を、市販のＥＬＩＳＡキットを用い、製造業者の取扱説明書に従ってアッセイした。
【０１９３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで脱落膜化させたｈＥＳＣのトランスクリプトームワイド分析
ｓＰＥ妊娠（ｎ＝５）又は正常妊娠（ｎ＝７）したドナーに由来する脱落膜化及び非脱落膜化ｈＥＳＣを５日間の培養後に採取し、全ＲＮＡを製造業者の取扱説明書（Life Technologies）に従ってＴｒｉｚｏｌに抽出した。ＲＮＡ品質を、ＲＮＡ  ＬａｂＣｈｉｐ及びＡ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Agilent Technologies）を用いて評定した。ＲＮＡ完全性が７超のサンプルをマイクロアレイ分析に選択した。サンプル調製及びハイブリダイゼーションを、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ技術を用い、製造業者のガイドラインに従って達成した。ハイブリダイズしたマイクロアレイをＡｘｏｎ  ４１００Ａスキャナー（Molecular Devices）で画像化し、データをＧｅｎｅＰｉｘ  Ｐｒｏ  ６．０ソフトウェア（Molecular Devices）で抽出した。遺伝子発現値を前処理し（半バックグラウンド強度中央値を各スポットの平均強度から減算した）、正規化し（ＲソフトウェアのＢｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ  ＬＩＭＭＡパッケージ）、ＡＮＯＶＡによって統計的に分析した。発現変動遺伝子（ｐ値＜０．０５）を、ＵＰＧＭＡ及びピアソン相関オプションを用いてクラスタリングした。倍率変化をＬＩＭＭＡによって推定した。ｐ値補正を、多重試験効果を説明するために偽発見率を用いて行った（Benjamini Y et al., Behav Brain Res, 2001, 125(1-2):279-284）。データをＧｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｏｍｎｉｂｕｓに蓄積した（アクセッション番号ＧＳＥ９４６４４）。
【０１９４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ遺伝子発現データのｑＲＴ−ＰＣＲ検証
４つの遺伝子（ＡＬＤＨ１Ａ１、ＩＧＦＢＰ１、ＮＡＮＯＳ３及びＨＳＤ１７Ｂ２）の相対発現レベルを、β−アクチンを内部対照として用いてｑＲＴ−ＰＣＲによって決定した。各遺伝子に特異的なプライマーを表４に提示する。
【０１９５】
【表７】
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【０１９６】
胎盤及び胎膜の採取
ＵＣＳＦ治験審査委員会により、本明細書に記載される胎盤及び胎膜の採取が承認された。書面によるインフォームドコンセントを全ドナーから得た。検体を分娩直後に採取した。サンプルを分娩の１時間以内に得て、ＰＢＳで洗浄し、２．５％ＦＢＳを添加した「Ｃｙｔｏｗａｓｈ培地」（ＤＭＥＭ  Ｈ−２１、１％グルタミンプラス、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、０．１％ゲンタマイシン）に移し、処理まで氷上に置いた。重症子癇前症（ｓＰＥ）妊娠及び妊娠期間を適合させた非感染早産（ｎＰＴＢ）妊娠の臨床的特徴を表５及び表６にまとめる。
【０１９７】
【表８】
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【０１９８】
【表９】
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【０１９９】
レーザーマイクロダイセクション及びマイクロアレイ分析
レーザーマイクロダイセクションを用いて、基底脱落膜及び壁側脱落膜をｓＰＥ及びｎＰＴＢサンプル（ｎ＝４／群）から単離した。胎盤／基底脱落膜及び平滑絨毛膜／壁側脱落膜の生検材料を冷ＰＢＳで繰り返し洗浄し、血液不純物を除去した。組織の損傷及び／又は壊死を示す部位は捨てた。次いで、サンプルをＯＣＴの入ったクライオモールド（cryomolds）に入れ、ドライアイス／エタノールスラリーで凍結し、−８０℃で保管した。ブロックを、Ｌｅｉｃａ  ＣＭ３０５０クライオスタットを用いて２０μｍの切片にした。切片をＵＶ処理ＰＥＮ膜スライド上にマウントし、同日中のレーザーマイクロダイセクションまで氷下で保管した。手順の直前に、切片をＯＣＴが溶解するまで冷ＰＢＳに浸漬し（約１分間）、０．１％トルイジンブルーに３０秒間浸し、冷ＰＢＳで洗浄し、段階的エタノール系列（７５％、７５％、９５％、１００％）で脱水し（３０秒間／処理）、次いで圧縮窒素により急速に乾燥させた。全ての溶液をヌクレアーゼ無含有水で作製した。基底脱落膜及び壁側脱落膜にレーザーマイクロダイセクション（Ｌｅｉｃａ  ＬＭＤ  ７０００）を行い、ＲＬＴ  Ｐｌｕｓ（Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓ  ５１８  Ｍｉｃｒｏキット）に直接採取した。全ＲＮＡを製造業者のプロトコルに従って単離し、濃度を測光法で測定した（ＮａｎｏＤｒｏｐ  ２０００ｃ）。ＲＮＡ完全性をマイクロ流体泳動（microfluidic phoresis）（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ  ２１００）によって決定した。サンプルを−８０℃で保管した。
【０２００】
全遺伝子プロファイリングを、ＧｅｎｅＣｈｉｐＨｕＧｅｎｅ  ２．０  ＳＴアレイ（Affymetrix）を用いて達成した。サンプル処理及びハイブリダイゼーションを、UCSF Gladstone (NHLBI) Genomics Core Facilityによって考案されたプロトコルに従って行った。遺伝子レベル発現データの品質を検証し、正規化し（ＲＭＡ）、要約した（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃｏｎｓｏｌｅソフトウェア）。有意な差次的発現を偽発見率の統計分析（ＦＤＲ＜０．０５）及び２以上の絶対線形倍率変化（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｃｏｎｓｏｌｅソフトウェア）によって決定した。
【０２０１】
組織切片の免疫蛍光
サンプルをパラホルムアルデヒド中で固定し、ＯＣＴ中で凍結し、以前に記載のように免疫染色した（Genbacev et al., Hum Reprod, 2016, 31(6):1300-1314）。本書に記載される研究に使用した抗体の供給元及び濃度を表７に挙げる。
【０２０２】
【表１０】
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【０２０３】
基底脱落膜及び壁側脱落膜からの間質細胞の単離
基底板及び平滑絨毛膜／壁側脱落膜からのサンプルを、１％ペニシリン−ストレプトマイシン、０．２５％ファンギゾン及び０．１％ゲンタマイシンを添加した冷滅菌ＰＢＳ（Ｃａ＋＋−Ｍｇ＋＋無含有）で洗浄した。基底脱落膜の薄層（０．５ｍｍ〜２．０ｍｍ）を基底板から切り離し、小片（３ｍｍ２〜４ｍｍ２）に解離させ、これを再び抗生物質及び抗真菌剤を含有するＰＢＳで洗浄した。壁側脱落膜を単離するために、羊膜を平滑絨毛膜から手で分離した。次いで、脱落膜層を絨毛ＣＴＢの母体面から優しく擦り取り、再び抗生物質及び抗真菌剤を含有するＰＢＳで洗浄した。基底脱落膜及び壁側脱落膜の小片を一連の酵素消化工程に供した。最初のコラゲナーゼ消化（１５分間〜２０分間）は、１００ｍｌ当たり３５ｍｇのＩ型コラゲナーゼ（Sigma、米国）、４０ｍｇのＤＮａｓｅ（Sigma、米国）、６９ｍｇのヒアルロニダーゼ（Sigma、米国）及び１００ｍｇのＢＳＡ（Sigma、米国）を含有する１倍ＰＢＳ（１０ｍｌ／ｇ（組織））中で行った。上清を捨てた。次いで、組織を１００ｍｌ当たり６．９ｍｇのトリプシン（Sigma、米国）、２０ｍｇのＥＤＴＡ（Invitrogen、米国）及び４０ｍｇのＤＮａｓｅ（Sigma、米国）を含有する１倍ＰＢＳ中で２５分間〜３０分間インキュベートした（２回目の消化）。消化は３７℃で軽く振盪しながら水浴内にて１：９の組織（ｇ）と解離バッファー容量（ｍｌ）との比率で行った。酵素活性を、１０％ＦＢＳを含有する同量のＣｙｔｏｗａｓｈ培地を添加することによって停止させた。上清（細胞懸濁液）を７０μｍ滅菌ストレーナーに通して濾過し、１２００×ｇで７分間遠心分離した。付加的なコラゲナーゼ処理（３回目の消化）を、細胞ペレットの重量（ｇ）に基づいて算出された７倍コラゲナーゼ消化バッファー（上記を参照されたい）を添加することによって行い、続いて３７℃で１５分間〜２０分間、軽く振盪しながら水浴内でインキュベートした。上清（細胞懸濁液）を遠心分離によって二度目に採取した。トリプシン消化及び２回目のコラゲナーゼ消化による細胞ペレットを合わせ、Ｐｅｒｃｏｌｌ（Sigma、米国）勾配で精製した（４４）。勾配を２７００×ｇで２５分間遠心分離し（４℃）、２０％〜４０％密度画分を採取した。Ｃｙｔｏｗａｓｈ培地で繰り返し洗浄した後、単離脱落膜細胞を１０％チャコールストリッピングＦＢＳ及び０．１％ペニシリン−ストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ  Ｆ１２中で成長させた。
【０２０４】
培養細胞の免疫蛍光
カバーガラスを５０μＬの０．５％ゼラチン（Sigma、米国）と共に３７℃で３０分間インキュベートした。基底脱落膜又は壁側脱落膜から単離した細胞を、コーティングしたカバーガラス上で細胞がコンフルエンスに達するまで培養した。次いで、細胞を以前に記載のように免疫染色した（Genbacev et al., Hum Reprod, 2016, 31(6):1300-1314）。
【０２０５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの再脱落膜化
基底脱落膜又は壁側脱落膜から単離した間質細胞を５回継代した（ｐ）。細胞は、急速に非脱落膜化形態学的表現型に戻った（ｐ１〜ｐ２）。ｐ３又はｐ４では細胞が脱落膜化し、本明細書に記載されるように分析した（形態、免疫学的局在決定及びＥＬＩＳＡ）。
【０２０６】
ＣＴＢ浸潤アッセイ
ＣＴＢを妊娠中期ヒト胎盤から以前に記載のように単離した（Kliman et al., Endocrinology, 1986, 118(4):1567-1582、Hunkapiller et al., Development, 2011, 138(14):2987-2998）。浸潤を、１０μｌの非希釈Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Corning Corp、米国）でコーティングされた８μｍの細孔を有するＴｒａｎｓｗｅｌｌポリカーボネートインサート（６．５ｍｍ）を用いて定量化した。簡潔に述べると、ＣＴＢ（１０個の胎盤から単離した）を、一晩培養した基底脱落膜又は壁側脱落膜の新たに単離した細胞に由来する４００μＬの馴化培地を含む２４ウェルプレートに１インサート当たり２５００００細胞の密度でプレーティングした（ｐ０；図７Ａを参照されたい）。ＰＲＬ（１０ｎｇ／ｍｌ；Boster Immunoleader、米国）及び／又はＩＧＦＢＰ１（１０ｎｇ／ｍｌ；Raybiotech、米国）を新鮮培地に添加し、ＣＴＢ浸潤に対する影響を、添加剤を含まない同じ培地と比較して定量化した。実験条件及び対照条件を二連で試験した。浸潤を以前に記載のようにアッセイした（Genbacev et al., Hum Reprod, 2016, 31(6):1300-1314）。実験全体を４回繰り返した。二連測定の平均値を算出した。結果を平均±ＳＥＭとしてプロットした。スチューデントｔ検定を用いて群間の差を分析した。
【０２０７】
統計
データを平均値±ＳＥＭとして示し、ｎで実験の回数を表した。スチューデントｔ分布を用いて、群間の大域差を分析した。０．０５以下のｐ値を有意であるとみなした。
【０２０８】
実施例１：以前にｓＰＥ妊娠した女性に由来するヒト子宮内膜間質細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏで脱落膜化しないこと
過去の妊娠においてｓＰＥを発症した患者（ｎ＝１３）の子宮内膜生検材料から単離したｈＥＳＣの脱落膜化を評定し、正常な産科的結果を有していた対照患者（ｎ＝１３）と比較した。参加者の母親及び新生児の特徴を表２にまとめる。ｈＥＳＣをｃＡＭＰ及び酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）での５日間の処理によって脱落膜化した。実験対照として、同じドナーに由来する細胞をｃＡＭＰ及びＭＰＡの非存在下で並行して培養した。
【０２０９】
妊娠合併症のない女性に由来する脱落膜化細胞におけるＦ−アクチンの局在化から、線維芽細胞から脱落膜表現型への転換と一致する、予測される細胞骨格再構成及び形態変化が示される（図１Ａ）。対照的に、ｓＰＥを有していた女性に由来するｈＥＳＣは、これらの変化を起こすことができなかった（図１Ｂ）。非脱落膜化ｈＥＳＣでは、馴化培地において検出されたＰＲＬ（図１Ｃ〜図１Ｅ）及びＩＧＦＢＰ１（図１Ｆ〜図１Ｈ）のレベルは低く、２つの群間で統計的に異ならなかった。両方の分子の分泌が対照培養物の大半の脱落膜化後に大幅に増加したが、元ｓＰＥ患者に由来するｈＥＳＣは、増加を示すことができなかった（図１Ｄ、図１Ｅ、図１Ｇ及び図１Ｈ）。
【０２１０】
このため、結果から、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化が元ｓＰＥ患者から得られたｈＥＳＣにおいて対照と比較して損なわれることが示唆された。
【０２１１】
実施例２：元ｓＰＥ患者に由来する脱落膜化ｈＥＳＣの全転写プロファイルの変化
ｓＰＥを経験した女性に由来するｈＥＳＣに見られる機能的脱落膜化異常の原因となる分子変化を特定するために、マイクロアレイ戦略を用いた。具体的には、正常妊娠群及びｓＰＥ妊娠群から樹立された非脱落膜化及び脱落膜化ｈＥＳＣのトランスクリプトーム分析をｉｎ  ｖｉｔｒｏで行った（図２Ａ）。子宮内膜ドナーの臨床的特徴を表３に示す。
【０２１２】
結果の概要を図２Ｂに提示する。非脱落膜化状態では、対照とｓＰＥサンプルとで５つの遺伝子のみが差次的に発現され、倍率差は少しであった（図２Ｃ）。このため、基礎的状態では、元ｓＰＥ患者に由来するｈＥＳＣは、対照女性に由来するｈＥＳＣと非常によく似ていた。
【０２１３】
対照ドナーに由来するサンプルの脱落膜化中に、７４個の遺伝子の発現が２倍以上顕著に調節された（図２Ｄ及び図１３）。結果は、脱落膜化に関与することが知られている、遺伝子（例えば、ＣＮＲ１、ＩＲＳ２及びＭＡＯＡ）の上方調節及び遺伝子（例えば、ＣＯＣＨ、ＳＥＲＴＡＤＡ４及びＣＮＩＨ３）の下方調節を含んでいた。経路レベルでは、酸素応答、インスリン分泌及び増殖の調節を含む脱落膜化に関連する過程が上方調節された（図８Ａ）。経路の顕著な下方調節は検出されなかった。
【０２１４】
図１Ａ〜図１Ｈに示される結果と一致して、元ｓＰＥ患者から単離した非脱落膜化ｈＥＳＣと脱落膜化ｈＥＳＣとの比較では、遺伝子発現の変調を検出することができなかった（０  ＤＥＧ；図２Ｂ）。対照的に、２つの群の脱落膜化細胞のトランスクリプトームを比較することで、１２９個の誤発現された遺伝子が明らかとなった（２倍以上；図２Ｅ及び図１４）。発現パターンをｑＲＴ−ＰＣＲ分析によって検証したｍＲＮＡ（図９）は、図２Ｅ及び図１４においてアスタリスクで示す。ＤＥ遺伝子には、ホルモン転換（ＨＳＤ１７Ｂ２）、細胞外構造の組織化（ＬＡＭＡ５、ＳＵＬＦ１及びＩＴＧＡ１１）、血管発生（ＡＮＧＰＴ２、ＥＧＲ１及びＲＥＬＡＸＩＮ２）及びペプチドへの応答（ＫＬＦ２、ＳＳＴＲ１及びＩＧＢＦＰ５）（図８Ｂ）に関与する分子をコードするｍＲＮＡの上方調節が含まれていた。下方調節されたカテゴリーには、脱落膜化において重要な役割を果たす遺伝子（例えば、ＩＧＦＢＰ１、ＣＮＲ１及びＩＬ−１Ｂ）が含まれていた。後者の群は、サイトカイン−受容体相互作用、創傷応答、炎症応答、エストロゲン応答及びＴＧＦ−βシグナリング等の多数の経路において機能していた（図８Ｂ）。
【０２１５】
最後に、正常妊娠した女性に由来する非脱落膜化ｈＥＳＣ対脱落膜化ｈＥＳＣ（図２Ｄ）及び脱落膜化後のｓＰＥ群対正常妊娠群（図２Ｅ）におけるＤＥ遺伝子間の重複を分析した。１５個の遺伝子が正常ｈＥＳＣ脱落膜化中に上方調節され、ｓＰＥ女性に由来するｈＥＳＣの脱落膜化中に下方調節された。これらには、全てが脱落膜化において重要な機能を有するＣＮＲ１、ＩＲＳ２、ＬＰＡＲ１、ＡＢＬＩＭ２及びＬＴＢＰ１等のシグナリング分子が含まれていた（図８Ｃ）。対照的に、７個の遺伝子が正常脱落膜化中に下方調節され、元ｓＰＥ患者に由来する同等のサンプルにおいて上方調節された（図８Ｄ）。これらにはＣＯＣＨ及びＣＮＩＨ３等の分子が含まれていた。
【０２１６】
このため、本明細書に記載される基底脱落膜及び壁側脱落膜の全転写プロファイリングにより、対照妊娠と比較したｓＰＥ妊娠における発現変動遺伝子が明らかとなった。
【０２１７】
実施例３：対照対ｓＰＥ妊娠からの基底脱落膜又は壁側脱落膜のｉｎ  ｓｉｔｕの分子の欠損
レーザーマイクロダイセクションアプローチを用いて、基底脱落膜（ＤＢ）又は壁側脱落膜（ＤＰ）の一部を単離した。ｓＰＥを有する女性対対照の症例からの細胞を生検標本の組織切片から捕捉した（感染の兆候のない早産（ｎＰＴＢ）を有していた女性に由来する妊娠期間を適合させたサンプル；図３Ａ）。参加者の臨床的特徴を表８にまとめる。
【０２１８】
【表１１】
2020532745.tif 000037
【０２１９】
結果の概要を図３Ｂに示す。基底脱落膜では、７９個の遺伝子が少ない倍率変化でｓＰＥ対ｎＰＴＢにおいて顕著にＤＥであった（図３Ｃ及び図１５）。これらの遺伝子には、ＲＮＡプロセシングに関与する分子をコードするｍＲＮＡの上方調節が含まれていた。下方調節された遺伝子にはＤＥＦＢ１、ＣＰ、ＯＧＮ及びＣＯＬ８Ａ１が含まれていた。
【０２２０】
平滑絨毛膜と壁側脱落膜との間の明確な境界により後者の細胞の効率的なレーザーマイクロダイセクションが可能であった。ｓＰＥ症例対ｎＰＴＢ対照から単離したｍＲＮＡサンプルのヒートマップの比較により、ｓＰＥにおいて２倍以上でＤＥであった２２７個の遺伝子が明らかとなった（図３Ｄ及び図１６）。上方調節された遺伝子は、ＰＲＧ２及びＫＬＲＦ１等の免疫機能を有する分子をコードしていた。このカテゴリーの他の遺伝子には、成体幹細胞の維持において役割を果たすＲＮＡＳＥ２、ＰＺＰ、ＰＤＧＦＤ、ＮＯＴＵＭ及びＰＲＯＭ１が含まれていた。酸化ストレスの考え得る兆候であるスーパーオキシド及びＮＯの形成を触媒するＡＯＸ１も上方調節された。経路レベルでは、数ある経路の中でも細胞伝達の調節、幾つかの代謝過程及び膜貫通受容体タンパク質チロシンキナーゼシグナリングが顕著に上方調節された（図１０）。
【０２２１】
下方調節されたｍＲＮＡには、脱落膜化において重要な役割を果たすインターロイキン（ＣＸＣＬ８、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ１Ａ）、ＣＸＣＬ５、並びにプロテイナーゼ及びそれらの阻害物質（ＳＰＩＮＫ１、ＡＤＡＭＴＳ４及びＭＭＰ１０）が含まれていた。経路レベルでは、細胞接着、移動及び遊走の調節、形態形成、細胞外構造、並びに免疫過程が影響を受けた（図１０）。
【０２２２】
マイクロアレイ結果を、３つのＤＥ遺伝子（ｓＰＥにおいて上方調節されたＰＥＧ１／ＭＥＳＴ及びＰＲＧ２；ｓＰＥにおいて下方調節されたＢＭＰ２）についてタンパク質レベルで検証した。これらの実験では、免疫学的局在決定アプローチを、隣接壁側脱落膜を有する胎膜の組織切片に適用した。いずれの場合にも、タンパク質レベル結果により、トランスクリプトームデータによって示唆される発現パターンが確認された（図１１Ａ〜図１１Ｃ）。
【０２２３】
このため、本明細書に記載される基底脱落膜及び壁側脱落膜の全転写プロファイリングにより、対照妊娠に対する重症子癇前症（ｓＰＥ）における発現変動遺伝子（ＤＥＧ）が明らかとなった。
【０２２４】
実施例４：ｓＰＥ妊娠における脱落膜化マーカーの非存在
脱落膜化をｉｎ  ｓｉｔｕで分析するために、ｓＰＥ（ｎ＝５）における基底脱落膜及び壁側脱落膜の組織切片中のＰＲＬ（図４Ａ及び図４Ｂ）及びＩＧＦＢＰ１（図４Ｃ及び図４Ｄ）の発現を、ｎＰＴＢ（ｎ＝４）と比較して評定した。妊娠の臨床的特徴を表９にまとめる。
【０２２５】
【表１２】
2020532745.tif 000038
【０２２６】
細胞栄養芽層の同一性を抗サイトケラチン７免疫反応性によって検証し（ＣＫ７；図４Ａ〜図４Ｆ）、間質細胞を抗ビメンチンで可視化した（ＶＩＭ；図４Ｅ及び図４Ｆ）。結果から、ＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１が対照ｎＰＴＢサンプルにおいて脱落膜化間質細胞（基底脱落膜及び壁側脱落膜）によって広く発現されることが示された（図４Ａ及び図４Ｃ）。対照的に、両方の脱落膜化マーカーの発現はｓＰＥサンプルにおいて大幅に低下し、多くの場合、認められなかった（図４Ｂ及び図４Ｄ）。相対免疫反応性をＰＲＬ（図４Ｇ）及びＩＧＦＢＰ１（図４Ｈ）について定量化した。
【０２２７】
このため、結果から、ｓＰＥが脱落膜におけるＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１の発現の下方調節と関連することが実証される。結果により、ｓＰＥが分娩直後に得られたサンプルにおいて明らかであった脱落膜化の広範な欠陥と関連するという付加的な証拠も提供された。
【０２２８】
実施例５：ｓＰＥ脱落膜生検材料に由来する新たに単離した間質細胞における脱落膜化マーカー発現の不全
脱落膜細胞を、通例これらの細胞と関連する段階特異的（stage-specific）抗原の発現に関するそれらの状態を決定することを目的にｓＰＥ（ｎ＝５）又はｎＰＴＢ（ｎ＝４）症例から単離した。
【０２２９】
マクロファージを含む、一晩培養した、新たに単離した間質細胞は、内皮細胞又は造血細胞のマーカーに特異的な抗体とは反応しなかった（データは示さない）。プレーティングの直後に、ローダミン−ファロイジン免疫染色により、対照ｎＰＴＢサンプルに由来する基底脱落膜又は壁側脱落膜から単離した多形性／円形細胞におけるＦ−アクチン分布の予測パターンが示された（図５Ａ）。対照的に、ｓＰＥ患者の脱落膜生検材料に由来する間質細胞は、線維芽細胞様Ｆ−アクチン構成を有する伸長形態を有していた（図５Ｂ）。抗ＰＲＬ（図５Ｃ及び図５Ｄ）又は抗ＩＧＦＢＰ１（図５Ｅ及び図５Ｆ）による免疫染色により、同定がビメンチン発現によって検証された（図５Ｇ及び図５Ｈ）、ｓＰＥ脱落膜に由来する間質細胞が、対照ｎＰＴＢサンプルにおいて観察されるよりもはるかに低い抗体反応性を有することが示された。付加的に、ＰＲＬ（図５Ｉ）及びＩＧＦＢＰ１（図５Ｊ）の細胞分泌を一晩の培養後に定量化した。ｎＰＴＢでは、壁側脱落膜から単離した細胞による両方の分子の産生が基底脱落膜と比較して高かった。比較すると、ｓＰＥは、両方のコンパートメントから単離した細胞によるＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１の分泌の劇的な低減と関連していた。
【０２３０】
まとめると、結果から、ｓＰＥ患者の脱落膜生検材料に由来する新たに単離した間質細胞が培養中に脱落膜化異常を示すことが実証された。
【０２３１】
実施例６：ｓＰＥ患者から分娩時に得られた脱落膜生検材料から単離した間質細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏで再脱落膜化しないこと
３継代〜５継代にわたって培養した単離間質細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏで再脱落膜化し得るかを決定するために、形態変化及び分泌バイオマーカー（ＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１）を５日間のホルモン治療後にモニタリングした。
【０２３２】
ｎＰＴＢ対照患者に由来する細胞では、それらの起源のコンパートメントにかかわらず、脱落膜化は、ローダミン−ファロイジン免疫染色によって実証される特徴的な多形性／円形表現型と関連していた（図６Ａ）。対照的に、ｓＰＥ患者に由来する間質細胞は、再脱落膜化中に形態変化を示すことができなかった（図６Ｂ）。脱落膜化後の対照細胞では、ＰＲＬ（図６Ｃ）及びＩＧＦＢＰ１（図６Ｄ）の分泌が増加した。対照的に、ｓＰＥ患者から単離し、培養した同等の細胞は、ＭＰＡ及びｃＡＭＰ処理に応答して、どちらの分子の分泌も増加することができなかった（図６Ｃ及び図６Ｄ）。
【０２３３】
まとめると、結果から、ｓＰＥ患者の脱落膜生検材料に由来する培養ヒト子宮内膜間質細胞（ｈＥＳＣ）がｉｎ  ｖｉｔｒｏで再脱落膜化することができないことが実証された。
【０２３４】
実施例７：ｓＰＥ脱落膜細胞に由来する馴化培地が細胞栄養芽層浸潤を促進しないこと
ｓＰＥ関連脱落膜化異常がＣＴＢ浸潤の低減に関係するかを決定するために、間質細胞をｓＰＥ（ｎ＝４）又は対照ｎＰＴＢ（ｎ＝３）症例の基底脱落膜及び壁側脱落膜のサンプルから単離した。間質細胞を一晩培養し、馴化培地（ＣＭ）を採取した。ｓＰＥサンプルのＣＭは、ｎＰＴＢ培養物と比較してＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１分泌の下方調節を示した（図１２Ａ及び図１２Ｂ）。したがって、実験ＣＭ又は対照ＣＭを、マトリゲル基材上で培養した妊娠中期ＣＴＢ（ｎ＝１０個の胎盤）に添加した。浸潤を、フィルターの底面に達したＣＴＢの数又はそれらの細胞過程を計数することによってアッセイした（図７Ａ）。対照（ｎＰＴＢ）ＣＭの存在下では、着実な浸潤が観察され、これは基底脱落膜サンプル中又は壁側脱落膜サンプル中で培養したＣＴＢ間で統計的に異なっていなかった（図７Ｂ）。対照的に、ｓＰＥ症例の同等の間質細胞集団に由来するＣＭは、ＣＴＢ浸潤を支持しなかった。
【０２３５】
ｓＰＥ患者に由来する脱落膜化間質細胞によるＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１分泌の低減が、これらの細胞に由来するＣＭがＣＴＢ浸潤を刺激することができないことに関係があるかを決定するために、細胞を新鮮培地中で培養した。細胞を馴化培地ではなく新鮮培地中で培養した場合、ＣＴＢは殆どフィルター底面に達さず（図７Ｃ）、ｎＰＴＢ脱落膜細胞がＣＴＢ浸潤を促進する因子を放出することが示唆された。新鮮培地へのＰＲＬ又はＩＧＦＢＰ１（１０ｎｇ／ｍｌ）の添加は、僅かな影響しか有しなかった。しかしながら、組み合わせたＰＲＬ及びＩＧＦＢＰ１は、浸潤を有意に増加させた。
【０２３６】
このため、これらの結果から、ｓＰＥ患者の脱落膜細胞に由来する馴化培地がｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞栄養芽層（ＣＴＢ）浸潤を阻害することが示された。
【０２３７】
論考
本明細書に記載されるように、異常な脱落膜化は、子癇前症（ＰＥ）と関連する胎盤形成における表現型変化の一因であった。ヒト子宮内膜間質細胞（ｈＥＳＣ）を、以前の妊娠が重症ＰＥ（ｓＰＥ）を合併していた非妊娠ドナーから単離した。対照細胞と比較すると、ｓＰＥ患者から単離したｈＥＳＣは、形態学的基準及び段階特異的抗原（例えば、ＩＧＦＢＰ１及びＰＲＬ）の分析によって実証されるように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで脱落膜化することができなかった。結果を全転写プロファイリングデータによって検証し、ｓＰＥ患者から単離したｈＥＳＣが転写的に不活性であることが示された。付加的に、レーザーマイクロダイセクションを用いて、ｓＰＥにおける母体−胎児境界面の組織切片から脱落膜を単離した。全転写プロファイリングから遺伝子発現の欠陥が明らかとなった。さらに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで脱分化したｓＰＥ患者に由来する脱落膜細胞は、培養中に再脱落膜化することができなかった。ｓＰＥ患者から単離したｈＥＳＣに由来する馴化培地は、ＣＴＢ浸潤を支持することができなかったが、これはＩＧＦＢＰ１及びＰＲＬの併用添加によって挽回された。これらのデータから、脱落膜化の欠陥がｓＰＥにおけるＣＴＢ浸潤の下方調節の重要な一因であることが示唆された。
【０２３８】
実施例８：全転写プロファイリングは、重症子癇前症における子宮内膜の脱落膜化不全パターンを裏付ける
以上で論考される結果から、以前に１２９個の遺伝子の発現に影響を及ぼす重症子癇前症（ｓＰＥ）を有していた患者から単離した子宮内膜間質細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ脱落膜化不全が実証される。ｉｎ  ｖｉｖｏでこれらの研究結果を裏付けるために、ここで全及び標的化ＲＮＡシークエンシングを行い、以前にｓＰＥを患っていた患者における月経周期の分泌期中のこの脱落膜子宮内膜異常を特定した。
【０２３９】
早産（ｎ＝１０）及び満期産（ｎ＝８）を含む正常妊娠転帰を有する対照に対する、子宮内膜生検材料を以前にｓＰＥ妊娠した患者（ｎ＝１６）から分泌期中に得た前向き研究試験を行った。
【０２４０】
全遺伝子プロファイリング及び標的化ＲＮＡシークエンシングはどちらも、調節異常を起こした１２９個の遺伝子のために設計したカスタムパネルを用いて行った（表１及び図１８を参照されたい）。ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ  ｍｉｎｉ−ｋｉｔ（Qiagen）を用いて抽出し、Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（AATI、米国）によって品質検査した。遺伝子発現を、全ＲＮＡｓｅｑについてＮｅｘＳｅｑ  ５００プラットホーム（Illumina、米国）でＴｒｕＳｅｑ  Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ｍＲＮＡを用い、またカスタムパネルについてＩｏｎ  Ｓ５システム（Life Tech、米国）でＩｏｎ  ＡｍｐｌｉＳｅｑ  ＲＮＡを用いて分析した。全ての配列を前処理し、正規化し、分析して、ｓＰＥと対照試料（「ＳＡＮＡＳ」）とを比較した。発現変動遺伝子（ＤＥＧ）を、０．０５未満のＦＤＲ及び２以上の倍率変化の統計分析によって決定した。
【０２４１】
全ＲＮＡｓｅｑ分析から、対照妊娠に対して以前にｓＰＥを有していた患者の子宮内膜における３６個のＤＥＧ（表Ａを参照されたい）が明らかとなった。具体的には、ｓＰＥ対早産対照及びｓＰＥ対満期産対照妊娠のサンプル比較により、それぞれ２４６個のＤＥＧ（表Ｂを参照されたい）及び１５個のＤＥＧ（表Ｃを参照されたい）が示された。興味深いことに、満期産対照妊娠と早産対照妊娠との比較では、遺伝子プロファイルのいかなる差も検出することができなかった。主成分分析（ＰＣＡ）により、ｓＰＥ群と対照群とのそれらの転写プロファイルに基づく区別が示された。際だったことに、全及び標的化ＲＮＡｓｅｑアプローチにより、ＰＣＡにおける全サンプルの同様の分布が得られた（図１７Ａ及び図１７Ｂ）。相関分析から、標的化された１２９個のＤＥＧと全トランスクリプトーム分析によって検出されたこれらの遺伝子との間の強い遺伝子発現の関連性が明らかとなった（ピアソン値＝０．８９）（図１７Ｃ）。
【０２４２】
全遺伝子プロファイリング及び標的化ＲＮＡシークエンシングを用いた結果から、ｓＰＥ患者におけるｉｎ  ｖｉｖｏ脱落膜化転写プロファイルの変化の存在が裏付けられる。これらの研究結果により、ｓＰＥについて考え得る母体側の原因が更に強調され、早期診断及び考え得る治療の戦略を見出す新たな方向性が開かれる。
【０２４３】
均等物
本明細書において幾つかの本発明の実施形態を説明及び図示してきたが、当業者であれば、本明細書において説明した機能を実行し、及び／又は本明細書において説明した結果及び／又は利点のうちの１つ以上を得る様々な他の手段及び／又は構造を容易に想像するであろう。そのような変形形態及び／又は変更形態のそれぞれは、本明細書において説明した本発明の実施形態の範囲内にあるとみなされる。より一般的には、当業者であれば、本明細書において説明した全てのパラメーター、寸法、材料、及び構成は例示であることが意図され、実際のパラメーター、寸法、材料、及び／又は構成は、本発明の教示が用いられる特定の単数又は複数の用途に依存することを容易に理解するであろう。当業者であれば、本明細書において説明した特定の本発明の実施形態の多くの均等物を認識し、又は日常的な実験にすぎないものを用いて確かめることができるであろう。したがって、上記実施形態は、例として提示されたものにすぎず、添付の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内で、具体的に説明したもの及び特許請求の範囲に記載したものとは別の方法で本発明の実施形態を実施することができることが理解されるであろう。本開示の本発明の実施形態は、本明細書において説明した個々の各特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法を対象としている。加えて、２つ以上のそのような特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法が相互に不整合でない場合には、そのような特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法の任意の組み合わせは、本開示の本発明の範囲内に含まれる。
【０２４４】
本明細書において定義されて用いられているような全ての定義は、辞書の定義、引用によって組み込まれた文書内の定義、及び／又は定義された用語の通常の意味よりも優先されるものと解釈される。
【０２４５】
本明細書に開示される全ての参照文献、特許及び特許出願は、各々が引用され、場合によっては文書全体を包含し得る主題に関して引用することにより本明細書の一部をなす。
【０２４６】
本明細書及び特許請求の範囲において用いられている不定冠詞「一（a、an）」は、そうではないことが明らかに示されていない限り、「少なくとも１つ」を意味するものと解釈される。
【０２４７】
本明細書及び特許請求の範囲において用いられる語句「及び／又は」は、そのように接続された要素の「いずれか又は双方」、すなわち、幾つかの場合には連言的に存在する要素、及びそれ以外の場合には選言的に存在する要素を意味するものと解釈される。「及び／又は」を用いて列挙された複数の要素は、同様に、すなわち、そのように接続された要素の「１つ以上」と解釈される。「及び／又は」節によって具体的に特定された要素以外の他の要素が、具体的に特定された要素との関係の有無を問わず、任意選択で存在してもよい。したがって、非限定的な例として、「Ａ及び／又はＢ」というとき、これは、「〜を備える／含む（comprising）」等の非限定的（open-ended：開放型）な文言とともに用いられる場合に、１つの実施形態では、Ａのみ（任意選択でＢ以外の要素を含む）、別の実施形態では、Ｂのみ（任意選択でＡ以外の要素を含む）、更に別の実施形態では、Ａ及びＢ（任意選択で他の要素を含む）の双方等を指すことができる。
【０２４８】
本明細書及び特許請求の範囲に用いられる「又は」は、上記で定義したような「及び／又は」と同じ意味を有すると解釈される。例えば、一覧の項目を分離するとき、「又は」又は「及び／又は」は、包含的であると解釈される。すなわち、複数の要素又は要素の一覧のうちの少なくとも１つを含むが、２つ以上も含み、任意選択で、一覧にない追加の項目も含むものと解釈される。「〜のうちの１つ／一方のみ」若しくは「〜のうちの厳密に１つ／一方」、又は特許請求の範囲において用いられるときは「〜のみからなる（consisting of）」等の明らかに逆のことを示す用語のみが、複数の要素又は要素の一覧のうちの厳密に１つ／一方の要素を含むことを指す。一般に、本明細書において用いられる用語「又は」は、「いずれか」、「〜のうちの１つ／一方」、「〜のうちの１つ／一方のみ」、又は「〜のうちの厳密に１つ／一方」等の排他的な用語が後置されているときにのみ排他的な二者択一（すなわち「一方又は他方であって、双方ではない」）を示すものと解釈される。「本質的に〜のみからなる（consisting essentially of）」は、特許請求の範囲において用いられるとき、特許法の分野において用いられるその通常の意味を有する。
【０２４９】
１つ以上の要素の一覧に関して、本明細書及び特許請求の範囲に用いられる語句「少なくとも１つ／一方」は、要素の一覧内の要素のうちの任意の１つ以上から選択された少なくとも１つ／一方の要素を意味するが、要素の一覧内に具体的に挙げられたありとあらゆる要素のうちの少なくとも１つ／一方を必ずしも含むものではなく、要素の一覧内の要素の任意の組み合わせを除外しないものと解釈される。この定義も、具体的に特定された要素との関係の有無を問わず、語句「少なくとも１つ／一方」が指す要素の一覧内で具体的に特定される要素以外の要素が任意選択で存在してもよいことを可能にする。したがって、非限定的な例として、「Ａ及びＢのうちの少なくとも一方」（又は同様の意味として「Ａ又はＢのうちの少なくとも一方」、又は同様の意味として「Ａ及び／又はＢのうちの少なくとも一方」）は、１つの実施形態では、少なくとも一方であるＡ（任意選択で２つ以上を含む）を指すとともにＢが存在しない（任意選択でＢ以外の要素を含む）ことを指し、別の実施形態では、少なくとも一方であるＢ（任意選択で２つ以上を含む）を指すとともにＡが存在しない（任意選択でＡ以外の要素を含む）ことを指し、更に別の実施形態では、少なくとも一方であるＡ（任意選択で２つ以上を含む）及び少なくとも一方であるＢ（任意選択で２つ以上を含む）（任意選択で他の要素を含む）を指す等とすることができる。
【０２５０】
また、そうではないことが明らかに示されない限り、２つ以上の工程又は行為を含む本明細書で特許請求される任意の方法において、方法の工程又は行為の順序が、方法の工程又は行為が列挙される順序に必ずしも限定されないことを理解されたい。
【０２５１】
特許請求の範囲及び上記明細書において、「〜を備える／含む（comprising）」、「〜を含む／備える（including）」、「〜を担持する（carrying）」、「〜を有する（having）」、「〜を含む／包含する（containing）」、「〜を伴う（involving）」、「〜を保持する（holding）」、「〜から構成される（composed of）」等の全ての移行句は、非限定的（open-ended：開放型）である、すなわち、〜を含むが、それらに限定されるものではないと解釈される。移行句「〜のみからなる（consisting of）」及び「本質的に〜のみからなる（consisting essentially of）」のみが、米国特許商標庁特許審査便覧のセクション２１１１．０３に規定されているように、それぞれ限定的（closed：閉鎖型）又は半限定的（semi-closed）な移行句である。非限定的な移行句（例えば、「含む（comprising）」）を用いて本書で記載される実施形態が、代替的な実施形態では、その非限定的な移行句によって記載される特徴「のみからなる（consisting of）」及び「のみから本質的になる（consisting essentially of）」ことも企図されることを理解すべきである。例えば、本開示に「Ａ及びＢを含む組成物」が記載される場合、代替的な実施形態である「Ａ及びＢのみからなる組成物」及び「Ａ及びＢのみから本質的になる組成物」も本開示で企図される。
【図１Ａ】
2020532745.tif 000039
【図１Ｂ】
2020532745.tif 000040
【図１Ｃ】
2020532745.tif 000041
【図１Ｄ】
2020532745.tif 000042
【図１Ｅ】
2020532745.tif 000043
【図１Ｆ】
2020532745.tif 000044
【図１Ｇ】
2020532745.tif 000045
【図１Ｈ】
2020532745.tif 000046
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
2020532745.tif 000051
【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2020532745.tif 000053
【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
2020532745.tif 000071
【図５Ｉ】
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【図５Ｊ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
2020532745.tif 000079
【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１４−３】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１６−３】
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【図１６−４】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１８−３】
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【図１８−４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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