(57)【要約】  本明細書では、Ｄ−ルシフェリン及び６−アミノ−Ｄ−ルシフェリンなどのベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させるための組成物及び方法が開示される。当該組成物は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログと、式（Ｉ）のチオ核酸塩基と、液体媒体とを含むことができ、このとき、チオ核酸塩基は、発光組成物を分解に対し安定化させるのに有効な量で存在する。本明細書で提供される方法は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを、液体媒体の存在下で、有効量のチオ核酸塩基化合物に接触させることにより、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。本明細書では、当該組成物を収容するキットも提供される。【選択図】図３
2020529442.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ベンゾチアゾールルシフェリンアナログ、またはその塩と、
（ｂ）有効量の式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体
2020529442.tif 000061
（式中、
Ｒ1は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、
Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールであり、
Ｒa及びＲbは、各出現において各々独立的に、水素、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールである）
と、
（ｃ）場合により、液体媒体と
を含む、組成物であって、
前記液体媒体が不在である場合、前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログ及び式（Ｉ）の前記化合物が固体混合物を形成し、
前記液体媒体が存在し、式（Ｉ）の前記化合物が６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン（ＡＴＴ）である場合、前記液体媒体がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含まない、
前記組成物。
【請求項２】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが式（ＩＩ’）の化合物である、請求項１に記載の組成物
2020529442.tif 000062
（式中、
2020529442.tif 000063
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による前記酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換し、
Ｗ1及びＷ2は、各々独立的に水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、もしくはアリールアルキルであり、またはＷ1及びＷ2は、自らが付着している炭素と共に、Ｃ3-Ｃ8シクロアルキルまたは４〜８員の複素環を形成し、前記シクロアルキル及び複素環は、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい）。
【請求項３】
Ｗ1及びＷ2が各々独立的にＣ1−Ｃ4アルキルである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが式（ＩＩ）の化合物である、請求項１または２に記載の組成物
2020529442.tif 000064
（式中、
2020529442.tif 000065
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４員〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による前記酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換する）。
【請求項５】
前記組成物が発光酵素を含有しない、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが分解に対し安定化される、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体を含まない組成物に比べて、分解に対し安定化される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の存在下で、分解に対し安定化される、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の不在下で、分解に対し安定化される、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、−８０℃〜６０℃の温度にて、分解に対し安定化される、請求項６〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
Ｒ1’がＨである、請求項２〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
Ｒ2’がＨであり、Ｒ3’がＨであり、Ｒ5’がＨである、請求項２〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の存在下で、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体を含まない組成物に比べて、分解に対し安定化される、請求項６〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の不在下で、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体を含まない組成物に比べて、分解に対し安定化される、請求項６〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
Ｒ4’が−ＯＨまたは−ＮＨ2である、請求項２〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が０．１ｍＭより大きい、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が１ｍＭより大きい、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
式（Ｉ）の前記化合物が、ＡＴＴ、ＡＴＣＡ、３−（４−アミノ−５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、テトラヒドロ−２−メチル−３−チオキソ−１，２，４−トリアジン−５，６−ジオン、４−（（２−フリルメチレン）アミノ）−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、６−ベンジル−３−スルファニル−１，２，４−トリアジン−５−オール、４−アミノ−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、３−（５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、（Ｅ）−６−メチル−４−（（チオフェン−２−イルメチレン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−６−メチル−４−（（３−ニトロベンジリデン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−４−（（４−（ジエチルアミノ）ベンジリデン）アミノ）−６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、ＡＴＣＡエチルエステル、ＴＡＫ−００１４、ＴＡＫ−０００２、ＴＡＫ−００２１、ＴＡＫ−００２０、ＴＡＫ−００１８、ＴＡＫ−０００９、ＴＡＫ−０００７、ＴＡＫ−０００８、ＴＡＫ−０００３、ＴＡＫ−０００４、３−チオキソ−６−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、６−シクロプロピル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、及び６−（ヒドロキシメチル）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンからなる群より選択される、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
前記液体媒体が不在である、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
前記液体媒体が存在する、請求項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴではない、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴであり、前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させるための方法であって、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログまたはその塩を、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体に接触させることを含み、前記接触により、前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログまたはその塩が分解に対し安定化され、
式（Ｉ）の前記化合物が
2020529442.tif 000066
（式中、
Ｒ1は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、
Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールであり、
Ｒa及びＲbは、各出現において各々独立的に、水素、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールである）である、前記方法。
【請求項２５】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが式（ＩＩ’）の化合物である、請求項２４に記載の方法
2020529442.tif 000067
（式中、
2020529442.tif 000068
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による前記酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換し、
Ｗ1及びＷ2は、各々独立的に水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、もしくはアリールアルキルであり、またはＷ1及びＷ2は、自らが付着している炭素と共に、Ｃ3-Ｃ8シクロアルキルまたは４〜８員の複素環を形成し、前記シクロアルキル及び複素環は、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい）。
【請求項２６】
Ｗ1及びＷ2が各々独立的にＣ1−Ｃ4アルキルである、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが式（ＩＩ）の化合物である、請求項２４または２５に記載の方法
2020529442.tif 000069
（式中、
2020529442.tif 000070
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４員〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による前記酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換する）。
【請求項２８】
式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が０．１ｍＭより大きい、請求項２４〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が１ｍＭより大きい、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
式（Ｉ）の前記化合物が、ＡＴＴ、ＡＴＣＡ、３−（４−アミノ−５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、テトラヒドロ−２−メチル−３−チオキソ−１，２，４−トリアジン−５，６−ジオン、４−（（２−フリルメチレン）アミノ）−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、６−ベンジル−３−スルファニル−１，２，４−トリアジン−５−オール、４−アミノ−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、３−（５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、（Ｅ）−６−メチル−４−（（チオフェン−２−イルメチレン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−６−メチル−４−（（３−ニトロベンジリデン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−４−（（４−（ジエチルアミノ）ベンジリデン）アミノ）−６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、ＡＴＣＡエチルエステル、ＴＡＫ−００１４、ＴＡＫ−０００２、ＴＡＫ−００２１、ＴＡＫ−００２０、ＴＡＫ−００１８、ＴＡＫ−０００９、ＴＡＫ−０００７、ＴＡＫ−０００８、ＴＡＫ−０００３、ＴＡＫ−０００４、３−チオキソ−６−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、６−シクロプロピル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、及び６−（ヒドロキシメチル）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンからなる群より選択される、請求項２４〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の存在下で、分解に対し安定化される、請求項２４〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の不在下で、分解に対し安定化される、請求項２４〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記ルシフェリンアナログが、−８０℃〜６０℃の温度にて、分解に対し安定化される、請求項２４〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
Ｒ1’がＨであり、Ｒ2’がＨであり、Ｒ3’がＨであり、Ｒ5’がＨである、請求項２５〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
Ｒ4’が−ＯＨまたは−ＮＨ2である、請求項２５〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記接触させることが、前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログと式（Ｉ）の前記化合物との固体混合物中で生じる、請求項２４〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記接触させることが液体媒体中で生じる、請求項２４〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴではない、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴであり、前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
請求項１〜２３のいずれかに記載の組成物を単一の容器内に含むキットであって、式（Ｉ）の前記化合物が前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させる、前記キット。
【請求項４２】
Ｒ1’がＨであり、Ｒ2’がＨであり、Ｒ3’がＨであり、Ｒ5’がＨである、請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
Ｒ4’が−ＯＨまたは−ＮＨ2である、請求項４１または４２に記載のキット。
【請求項４４】
式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が０．１ｍＭより大きい、請求項４１〜４３のいずれかに記載のキット。
【請求項４５】
式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が１ｍＭより大きい、請求項４４に記載のキット。
【請求項４６】
式（Ｉ）の前記化合物が、ＡＴＴ、ＡＴＣＡ、３−（４−アミノ−５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、テトラヒドロ−２−メチル−３−チオキソ−１，２，４−トリアジン−５，６−ジオン、４−（（２−フリルメチレン）アミノ）−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、６−ベンジル−３−スルファニル−１，２，４−トリアジン−５−オール、４−アミノ−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、３−（５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、（Ｅ）−６−メチル−４−（（チオフェン−２−イルメチレン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−６−メチル−４−（（３−ニトロベンジリデン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−４−（（４−（ジエチルアミノ）ベンジリデン）アミノ）−６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、ＡＴＣＡエチルエステル、ＴＡＫ−００１４、ＴＡＫ−０００２、ＴＡＫ−００２１、ＴＡＫ−００２０、ＴＡＫ−００１８、ＴＡＫ−０００９、ＴＡＫ−０００７、ＴＡＫ−０００８、ＴＡＫ−０００３、ＴＡＫ−０００４、３−チオキソ−６−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、６−シクロプロピル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、及び６−（ヒドロキシメチル）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンからなる群より選択される、請求項４１〜４５のいずれかに記載のキット。
【請求項４７】
前記液体媒体が不在である、請求項４１〜４６のいずれかに記載のキット。
【請求項４８】
前記液体媒体が存在する、請求項４１〜４６のいずれかに記載のキット。
【請求項４９】
式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴではない、請求項４８に記載のキット。
【請求項５０】
前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５１】
式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴであり、前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、請求項４８に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年８月４日に出願された米国仮出願第６２／５４１，３５０号の優先権を主張し、その内容全体が参照により本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させるための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発光は、レポーター分子の活性の尺度として、生物学的アッセイでしばしば使用される。一方レポーター分子は、発光測定を、転写（遺伝子発現）、翻訳（タンパク質発現）、タンパク質間相互作用などの目的の生物学的プロセスに結びつけ、それにより、生物学的プロセスで生じる変化の定量的測定を可能にする。
【０００４】
レポーター分子とは、典型的には、発光基質提供すると、光の産生、すなわち発光をもたらす発光酵素（例えば、ホタルルシフェラーゼ、Ｒｅｎｉｌｌａシフェラーゼ、Ｏｐｌｏｐｈｏｒｕｓルシフェラーゼなど）である。しかし、発光基質（例えば、ルシフェリン）は保管中に分解し、それにより生物学的アッセイにおける添加または使用の前に基質の損失がもたらされることがある。このような分解は、溶液中の発光基質が温度依存的様式で経時的に不安定であることの結果であり得る。この分解は、結果的に発光基質を浪費し、分解した発光基質を用いた生物学的アッセイに由来する発光測定の感受性及び再現性を低減する。加えて、この分解からの産物は、多くの場合発光反応を阻害する。
【０００５】
Ｄ−ルシフェリンは、ホタル及びコメツキムシのルシフェラーゼ向けの天然の基質である。ルシフェリン及びルシフェリン誘導体は、溶液中または湿気のある環境で周囲温度にてある期間にわたって保管されると、熱的に不安定である。主な分解産物として同定されているデヒドロルシフェリンは、ルシフェラーゼの強力な阻害物質であり、光出力性能の減少及び不整合を招く。プロルシフェリンアナログは、アナライト依存的なホタルルシフェラーゼ系アッセイシステムで広く使用されている。ルシフェリンと同様、対応するプロデヒドロルシフェリンへの分解も、発光性能に負の影響を及ぼす。分解産物の形成を低減する方法を有することは、特に、ルシフェリンまたはルシフェリン誘導体が上記の周囲温度以上で長期間にわたり溶液中で保管されることを必要とする適用においては、望ましいことである。
【０００６】
したがって、発光反応で使用する前の発光基質を安定化させるための新規の組成物及び／または方法を同定及び開発する必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、（ａ）ベンゾチアゾールルシフェリンアナログまたはその塩と、（ｂ）有効量の式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体
2020529442.tif 000003
（式中、
Ｒ1は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、
Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールであり；
Ｒa及びＲbは、各出現において各々独立的に、水素、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールである）
と、
（ｃ）場合により、液体媒体と
を含む、組成物を提供する。
【０００８】
本開示は、上記の組成物の構成成分を含むキットも提供する。
【０００９】
さらに、本開示は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させるための方法であって、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログまたはその塩を、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体に接触させることを含み、当該接触により、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログまたはその塩が分解に対し安定化され、式（Ｉ）の化合物が
2020529442.tif 000004
である、方法を提供する
（式中、
Ｒ1は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、
Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールであり、
Ｒa及びＲbは、各出現において各々独立的に、水素、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールである）。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】Ｄ−ルシフェリン及びデヒドロルシフェリンの構造を環原子のナンバリングと共に示し、さらに、あるいくつかのルシフェリン化合物について本明細書で使用されている略語も示している。
【図２】Ａは、ルシフェリンの経時的な代表的熱安定性を示し、Ｂは、デヒドロルシフェリンによるルシフェラーゼ活性の阻害を示している。
【図３】ＡＴＴの存在下及び不在下でのルシフェリンの安定性を示している。
【図４】ＡＴＴの存在下及び不在下での、ルシフェリンアナログ、ルシフェリンメチルエーテルの２−ヒドロキシエチルエステルの安定性（Ａ）と、対応するデヒドロ化合物の産生（Ｂ）とを示している。
【図５】還元剤ＴＣＥＰのありまたはなしでの定量による、ＡＴＴの存在下及び不在下での、ルシフェリンメチルエーテルの２−ヒドロキシエチルエステルの安定性（Ａ）と、対応するデヒドロ化合物の産生（Ｂ）とを示している。
【図６】Ａは、３７℃におけるＡＴＴの存在下及び不在下でのルシフェリン基質の経時的な代表的活性を示し、Ｂは、３７℃における対応するデヒドロ化合物の様々な濃度で測定された、ＡＴＴがルシフェリン基質のＴ80値に及ぼす代表的効果を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させるための組成物に関する。ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、式（ＩＩ’）の化合物またはその塩を含む
2020529442.tif 000005
（式中、
2020529442.tif 000006
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による当該酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換し、
Ｗ1及びＷ2は、各々独立的に水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、もしくはアリールアルキルであり、またはＷ1及びＷ2は、自らが付着している炭素と共に、Ｃ3-Ｃ8シクロアルキルまたは４〜８員の複素環を形成し、当該シクロアルキル及び複素環は、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい）。
【００１２】
一部の実施形態において、式（ＩＩ’）のベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、式（ＩＩ）の化合物またはその塩である
2020529442.tif 000007
（式中、
2020529442.tif 000008
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４員〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による当該酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換する）。
【００１３】
当該組成物は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログと、チオ核酸塩基と、液体媒体とを含むことができる。当該組成物は、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼ）を含むまたは含有する場合もあれば、発光酵素を含まないまたは含有しない場合もある。
【００１４】
チオ核酸塩基は、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体であり得る
2020529442.tif 000009
（式中、
Ｒ1は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、
Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールであり、
Ｒa及びＲbは、各出現において各々独立的に、水素、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールである）。
【００１５】
チオ核酸塩基は、光の存在下で、光の不在下で、及び／または異なる温度にて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し経時的に安定化させることができる。チオ核酸塩基は、光の存在下で、光の不在下で、及び／または異なる温度にて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを、１つ以上の分解産物への分解に対し経時的に安定化させることができる。
【００１６】
そのため、チオ核酸塩基を組成物中に含めることは、１つ以上の分解産物の形成を抑制または低減することにより、チオ核酸塩基を含まない組成物に比べて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。そしてこれにより、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、アッセイでベンゾチアゾールルシフェリンアナログを使用する前に顕著なベンゾチアゾールルシフェリンアナログの分解を伴うことなく、光の存在下及び／または不在下で、特定の温度にて一定期間、保管またはインキュベートすることが可能になる。
【００１７】
本発明は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させるための方法にも関する。このような方法は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる、及び／または１つ以上の分解産物の形成を抑制もしくは低減することができる。この方法は、緩衝溶液の存在下で、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを有効量のチオ核酸塩基（例えば、０．１〜５００ｍＭ）に接触させることを含むことができる。この接触させるステップは、上述の組成物を形成することを含むことができる。
【００１８】
１．定義
別途定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術的用語及び科学的用語は、当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。矛盾が生じる場合は、定義を含め、本文書が優先される。好ましい方法及び材料を以下に記載するが、本明細書に記載されている方法及び材料と同様または同等であるものも、本発明の実施及び試験で使用することができる。本明細書で言及されている全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。本明細書で開示される材料、方法、及び実施例は、例示的なものに過ぎず、限定的であるようには意図されていない。
【００１９】
本明細書で使用される「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「〜を有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「〜を有する（ｈａｓ）」、「〜することができる（ｃａｎ）」、「〜を含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」という用語、及びこれらの変形は、追加的な行為または構造の可能性を排除しないオープンエンドな移行句、用語、または単語であるように意図されている。文脈による別段の明確な定めがない限り、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、及び「ｔｈｅ」には複数の指示対象が含まれる。また、本開示は、明示的に示されているか否かにかかわらず、本明細書で提示されている実施形態または要素「を含む」または「から本質的になる」他の実施形態も企図している。
【００２０】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、好ましくは１〜３０個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、１〜６個の炭素原子、または１〜４個の炭素原子を有する線状または分枝状の炭化水素ラジカルを指す。「Ｃ1−Ｃ4アルキル」という用語は、線状または分枝状の配列で１、２、３、または４個の炭素を有するアルキル基を含むように定義される。例えば、「Ｃ1−Ｃ4アルキル」は、具体的には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、及びｉ−ブチルを含む。「Ｃ1−Ｃ6アルキル」という用語は、線状または分枝状の配列で１、２、３、４、５、または６個の炭素を有するアルキル基を含むように定義される。例えば、「Ｃ1−Ｃ6アルキル」は、具体的には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｉ−ブチル、ペンチル、及びヘキシルを含む。
【００２１】
本明細書で使用される「アルキレン」という用語は、直鎖または分枝状鎖の炭化水素から誘導される２価の基を指す。アルキレンの代表例としては、以下に限定されないが、−ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2−、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2−、及び−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ）3ＣＨ2−が挙げられる。
【００２２】
本明細書で使用される「アリールアルキル」という用語は、本明細書で定義されるようなアリール基であって、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加されているアリール基を指す。一部の実施形態において、アルキル基はＣ1−Ｃ4アルキルであり得る。
【００２３】
本明細書で使用される「ヘテロアリールアルキル」という用語は、本明細書で定義されるようなヘテロアリール基であって、本明細書で定義されるようなアルキル基を介して親分子部分に付加されているヘテロアリール基を指す。一部の実施形態において、アルキル基はＣ1−Ｃ4アルキルであり得る。
【００２４】
本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、３〜１０個の炭素原子と、ゼロのヘテロ原子と、ゼロの二重結合とを含有する炭素環式環系を指す。シクロアルキルの代表例としては、以下に限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、及びシクロデシルが挙げられる。
【００２５】
本明細書で使用される「アリール」という用語は、単環式、２環式、または３環式の芳香族ラジカルを指す。アリール基の代表例としては、以下に限定されないが、フェニル、ジヒドロインデニル、インデニル、ナフチル、ジヒドロナフタレニル、及びテトラヒドロナフタレニルが挙げられる。本発明のアリール基は、本明細書で定義されるような好適な１個以上の置換基により、好ましくは１〜５個の好適な置換基により置換されていてもよい。
【００２６】
本明細書で使用される「カルボン酸」という用語は、ＣＯＯＨを指す。
【００２７】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、１つ以上の分解産物または分解物への分解に対する、本明細書で説明されるようなルシフェリンアナログの所望の安定化を、様々な時間期間の間達成するのに必要となる、本明細書で説明されるような式（Ｉ）のチオ核酸塩基化合物の量を指す。
【００２８】
本明細書で使用される「エステル」という用語は、ＣＯ2Ｒc（式中、Ｒcはアルキルまたはアリールである）を指す。
【００２９】
本明細書で使用される「ヘテロアリール」という用語は、単環式ヘテロアリールまたは２環式ヘテロアリールを指す。単環式へテロアリールは５員または６員の環である。５員環は２つの二重結合を含有する。５員環は、ＯもしくはＳから選択される１個のヘテロ原子；または１、２、３、もしくは４個の窒素原子と、場合により、１個の酸素原子もしくは硫黄原子とを含有することができる。６員環は、３つの二重結合と、１、２、３、または４個の窒素原子とを含有する。単環式ヘテロアリールの代表例としては、以下に限定されないが、フラニル、イミダゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、１，３−オキサゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピロリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、１，３−チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、及びトリアジニルが挙げられる。２環式ヘテロアリールとしては、フェニルと縮合した単環式ヘテロアリール、または単環式シクロアルキルと縮合した単環式へテロアリール、または単環式シクロアルケニルと縮合した単環式へテロアリール、または単環式へテロアリールと縮合した単環式へテロアリール、または単環式複素環と縮合した単環式へテロアリールが挙げられる。２環式ヘテロアリール基の代表例としては、以下に限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、６，７−ジヒドロ−１．３−ベンゾチアゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、インダゾリル、インドリル、イソインドリル、イソキノリニル、ナフチリジニル、ピリドイミダゾリル、キナゾリニル、キノリニル、チアゾロ［５，４−ｂ］ピリジン−２−イル、チアゾロ［５，４−ｄ］ピリミジン−２−イル、及び５，６，７，８−テトラヒドロキノリン−５−イルが挙げられる。本発明のヘテロアリール基は、非置換であってもよく、または本明細書で定義されるような好適な１個以上の置換基により、好ましくは１〜５個の好適な置換基により置換されていてもよい。
【００３０】
本明細書で使用される「複素環」または「ヘテロシクリル」という用語は、単環式複素環、２環式複素環、または３環式複素環を指す。単環式複素環は、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から独立的に選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する、３員、４員、５員、６員、７員、または８員の環である。３員環または４員環は、ゼロまたは１つの二重結合と、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される１個のヘテロ原子とを含有する。５員環は、ゼロまたは１つの二重結合と、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される１個、２個、または３個のヘテロ原子とを含有する。６員環は、ゼロ、１つ、または２つの二重結合と、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される１個、２個、または３個のヘテロ原子とを含有する。７員環及び８員環は、ゼロ、１つ、２つ、または３つの二重結合と、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される１個、２個、または３個のヘテロ原子とを含有する。単環式複素環の代表例としては、以下に限定されないが、アゼチジニル、アゼパニル、アジリジニル、ジアゼパニル、１，３−ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、１，３−ジチオラニル、１，３−ジチアニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オキサジアゾリニル、オキサジアゾリジニル、オキサゾリニル、オキサゾリジニル、ホスフィナン、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピロリニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチエニル、チアジアゾリニル、チアジアゾリニジニル、チアゾリニル、チアゾリジニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキシドチオモルホリニル（チオモルホリンスルホン）、チオピラニル、トリチアニル、及び２，５−ジオキソ−ピロリジニルが挙げられる。２環式複素環は、フェニル基と縮合した単環式複素環、または単環式シクロアルキルと縮合した単環式複素環、または単環式シクロアルケニルと縮合した単環式複素環、または単環式複素環と縮合した単環式複素複素環、あるいは、環における隣接していない２個の原子が、１、２、３、もしくは４個の炭素原子のアルキレン架橋により、または２、３、もしくは４個の炭素原子のアルケニレン架橋により連結している、架橋した単環式複素環環系である。２環式複素環の代表例としては、以下に限定されないが、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、クロマニル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、２，３−ジヒドロベンゾチエニル、アザビシクロ［２．２．１］ヘプチル（２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イルを含む）、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリル、イソインドリニル、オクタヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロリル、オクタヒドロピロロピリジニル、９−ホスファビシクロ［３．３．１］ノナン、８−ホスファビシクロ［３．２．１］オクタン、及びテトラヒドロイソキノリニルが挙げられる。３環式複素環は、フェニル基と縮合した２環式複素環、または単環式シクロアルキルと縮合した２環式複素環、または単環式シクロアルケニルと縮合した２環式複素環、または単環式複素環と縮合した２環式複素環、あるいは、２環式環における隣接していない２個の原子が、１、２、３、もしくは４個の炭素原子のアルキレン架橋により、または２、３、もしくは４個の炭素原子のアルケニレン架橋により連結している、２環式複素環によって例示される。３環式複素環の例としては、以下に限定されないが、オクタヒドロ−２，５−エポキシペンタレン、ヘキサヒドロ−２Ｈ−２，５−メタノシクロペンタ［ｂ］フラン、ヘキサヒドロ−１Ｈ−１，４−メタノシクロペンタ［ｃ］フラン、アザ−アダマンタン（１−アザトリシクロ［３．３．１．１3,7］デカン）、オキサ−アダマンタン（２−オキサトリシクロ［３．３．１．１3,7］デカン）、及び２，４，６−トリオキサ−８−ホスファトリシクロ［３．３．１．１３，７］デカンが挙げられる。本発明の複素環式基は、非置換であってもよく、または上記で定義されるような１個以上の好適な置換基により、好ましくは１〜３個の好適な置換基により置換されていてもよい。本発明の複素環式基は、環に付着している１個以上のオキソ基（＝Ｏ）またはチオキソ基（＝Ｓ）を含有することができる。
【００３１】
本明細書で使用される「イミン」という用語は、−Ｎ＝ＣＲd（式中、Ｒdは、本明細書で定義されるようなアルキル、アリール、ヘテロアリール、またはシクロアルキルである）を指す。Ｒdは、非置換であってもよく、または本明細書で定義されるような１個以上の好適な置換基で置換されていてもよい。
【００３２】
本明細書で使用する「ヒドロキシ」という用語は−ＯＨ基を指す。
【００３３】
本明細書で使用される「オキソ」という用語は二重結合した酸素ラジカル（＝Ｏ）を指し、このとき、結合パートナーは炭素原子である。このようなラジカルは、カルボニル基とみなすこともできる。
【００３４】
本明細書で使用される「好適な置換基」という用語は、化学的に許容される官能基、例えば、本発明の化合物の活性を打ち消さない部分を意味するように意図されている。好適な置換基の実例としては、以下に限定されないが、ハロ基、パーフルオロアルキル基、パーフルオロアルコキシ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ヒドロキシ基、ハロ基、オキソ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アルコキシ基、ニトロ基、アジドアルキル基、アリールまたはヘテロアリール基、アリールオキシまたはヘテロアリールオキシ基、アラルキルまたはヘテロアラルキル基、アラルキルまたはヘテロアラルコキシ基、ＨＯ−（Ｃ＝Ｏ）−基、複素環基、シクロアルキル基、アミノ基、アルキル−及びジアルキルアミノ基、カルバモイル基、アルキルカルボニル基、アルキルカルボニルオキシ基、アルコキシカルボニル基、アルキルアミノカルボニル基、ジアルキルアミノカルボニル基、アリールカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基などが挙げられる。置換基は、追加の置換基によって置換されていてもよい。
【００３５】
置換基が、ある基から「独立的に選択されて」いると説明されている場合、各置換基は他方の置換基から独立的に選択される。そのため、各置換基は、他方の置換基（複数可）と同一である場合も異なる場合もある。
【００３６】
本明細書で使用される「光」という用語は、可視光、白色光（赤色光、青色光、及び黄色光の３原色の組合せであり得る）、紫色光、青色光、青緑色光、緑色光、黄緑色光、黄色光、橙色光、赤色光、もしくは近紫外光、またはこれらの任意の組合せを指すことができる。「光」という用語は、電磁スペクトルの領域（例えば、以下に限定されないが、可視光領域）からの光を指すことができる。また、「光」という用語は、約３８０ｎｍ〜約７８０ｎｍ、または約４００ｎｍ〜約７００ｎｍの波長を有する光も指すことができる。さらに、「光」という用語は、蛍光電球、発光ダイオード（ＬＥＤ）電球、白熱電球、またはこれらの任意の組合せからの光も指すことができる。一部の実施形態において、暗状態は光の不在であり得る。
【００３７】
本明細書における数値範囲の列挙については、同じ精度を伴った、その範囲の間に介在する各々の数が明示的に企図されている。例えば、６〜９という範囲については、６と９に加えて７と８という数が企図されており、６．０〜７．０という範囲については、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０という数が明示的に企図されている。
【００３８】
２．組成物
本発明は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログと、チオ核酸塩基と、場合により、液体媒体とを含む組成物を対象とする。当該組成物は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。当該組成物は、チオ核酸塩基を含有しない組成物に比べて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。チオ核酸塩基は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログからの１つ以上の分解産物の形成を低減または抑制することができる。例えば、以下でより詳細に説明されるように、チオ核酸塩基は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを、１つ以上の分解産物（例えば、ベンゾチアゾールデヒドロルシフェリン）への分解に対し、安定化させることができる。
【００３９】
本発明の組成物は、いかなる液体も水分も本質的に含まない乾燥形態をとることができる。代替的に、当該組成物は、液体媒体を含む液体形態をとることもできる。
【００４０】
当該組成物は、光の不在下で（例えば、暗状態で）、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。当該組成物は、光の不在下で、チオ核酸塩基を含有しない組成物に比べて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログの半減期を増加させることができる。
【００４１】
当該組成物は、光の存在下で、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。当該組成物は、光の存在下で、チオ核酸塩基を含有しない組成物に比べて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログの半減期を増加させることができる。当該組成物は、光の存在下で、チオ核酸塩基を含有しない組成物に比べて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログの半減期を約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３．０倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４．０倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、または５．０倍増加させることができる。
【００４２】
当該組成物は、約−１２０℃〜約８０℃、約−１１０℃〜約８０℃、約−１００℃〜約８０℃、約−９０℃〜約８０℃、約−８５℃〜約８０℃、約−８０℃〜約８０℃、約−７５℃〜約８０℃、約−７０℃〜約８０℃、約−６５℃〜約８０℃、約−６０℃〜約８０℃、約−５５℃〜約８０℃、約−５０℃〜約８０℃、約−４５℃〜約８０℃、約−４０℃〜約８０℃、約−３５℃〜約８０℃、約−３０℃〜約８０℃、約−２５℃〜約８０℃、約−２０℃〜約８０℃、約−１５℃〜約８０℃、約−１０℃〜約８０℃、約−５℃〜約８０℃、約０℃〜約８０℃、約−１２０℃〜約７５℃、約−１２０℃〜約７０℃、約−１２０℃〜約６５℃、約−１２０℃〜約６０℃、約−１２０℃〜約５５℃、約−１２０℃〜約５０℃、約−１２０℃〜約４５℃、約−１２０℃〜約４０℃、約−１２０℃〜約３５℃、約−１２０℃〜約３０℃、約−１２０℃〜約２５℃、約−１２０℃〜約２０℃、約−１００℃〜約７０℃、約−８０℃〜約６０℃、約−８０℃〜約５５℃、約−８０℃〜約５０℃、約−８０℃〜約４５℃、約−８０℃〜約４０℃、約−８０℃〜約３５℃、約−８０℃〜約３０℃、約−８０℃〜約２５℃、約−２０℃〜約６０℃、約−２０℃〜約５５℃、約−２０〜５０℃、約−２０℃〜約４５℃、約−２０℃〜約４０℃、約−２０℃〜約３５℃、約−２０℃〜約３０℃、または約−２０℃〜約２５℃の温度にて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。
【００４３】
当該組成物は、約−１２０℃、−１１５℃、−１１０℃、−１０５℃、−１００℃、−９５℃、−９０℃、−８９℃、−８８℃、−８７℃、−８６℃、−８５℃、−８４℃、−８３℃、−８２℃、−８１℃、−８０℃、−７９℃、−７８℃、−７７℃、−７６℃、−７５℃、−７４℃、−７３℃、−７２℃、−７１℃、−７０℃、−６９℃、−６８℃、−６７℃、−６６℃、−６５℃、−６４℃、−６３℃、−６２℃、−６１℃、−６０℃、−５９℃、−５８℃、−５７℃、−５６℃、−５５℃、−５４℃、−５３℃、−５２℃、−５１℃、−５０℃、−４９℃、−４８℃、−４７℃、−４６℃、−４５℃、−４４℃、−４３℃、−４２℃、−４１℃、−４０℃、−３９℃、−３８℃、−３７℃、−３６℃、−３５℃、−３４℃、−３３℃、−３２℃、−３１℃、−３０℃、−２９℃、−２８℃、−２７℃、−２６℃、−２５℃、−２４℃、−２３℃、−２２℃、−２１℃、−２０℃、−１９℃、−１８℃、−１７℃、−１６℃、−１５℃、−１４℃、−１３℃、−１２℃、−１１℃、−１０℃、−９℃、−８℃、−７℃、−６℃、−５℃、−４℃、−３℃、−２℃、−１℃、０℃、１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１１℃、１２℃、１３℃、１４℃、１５℃、１６℃、１７℃、１８℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃、４０℃、４１℃、４２℃、４３℃、４４℃、４５℃、４６℃、４７℃、４８℃、４９℃、５０℃、５１℃、５２℃、５３℃、５４℃、５５℃、５６℃、５７℃、５８℃、５９℃、６０℃、６１℃、６２℃、６３℃、６４℃、６５℃、６６℃、６７℃、６８℃、６９℃、７０℃、７５℃、または８０℃にて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。当該組成物は、約−８０℃、約−２０℃、約４℃、または約２０℃にて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。
【００４４】
当該組成物は、少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３５日間、４０日間、４５日間、５０日間、５５日間、６０日間、６５日間、７０日間、７５日間、８０日間、８５日間、９０日間、１００日間、１１０日間、１２０日間、１３０日間、１４０日間、１５０日間、１６０日間、１７０日間、１８０日間、１９０日間、２００日間、２１０日間、２２０日間、２３０日間、２４０日間、２５０日間、２６０日間、２７０日間、２８０日間、２９０日間、３００日間、３１０日間、３２０日間、３３０日間、３４０日間、３５０日間、３６０日間、１年間、２年間、３年間、４年間、または５年間、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。
【００４５】
当該組成物は、チオ核酸塩基を含まない組成物に比べて、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログの半減期を少なくとも約１．２５倍、１．５倍、１．７５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍、２１倍、２２倍、２３倍、２４倍、または２５倍増加させることができる。
【００４６】
ａ．ベンゾチアゾールルシフェリンアナログ
本発明に従うベンゾチアゾールルシフェリンアナログとしては、ＷＯ２００６／１３０５５１、ＷＯ２０１４／１５９０４４、ＵＳ２００７／００１５７９０、ＵＳ２０１４／０３０４８４２、ＵＳ２０１８／０１５５７６２、ＵＳ５，０９８，８２８、ＵＳ７，６９２，０２２、またはＵＳ７，９１０，０８７が挙げられ、これらはその全体が参照により本明細書に援用される。例えば、本明細書で開示されるベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、式（ＩＩ’）の化合物またはその塩を含む。
【００４７】
一部の実施形態において、Ｗ1及びＷ2は水素である。一部の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、Ｗ1が水素であり、Ｗ2がＣ1−Ｃ4アルキルまたはアリールアルキルである、式（ＩＩ’）の化合物である。例えば、Ｗ2は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、またはベンジルであり得る。
【００４８】
一部の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、Ｗ1及びＷ2が各々独立的にＣ1−Ｃ4アルキルである、式（ＩＩ’）の化合物である。例えば、Ｗ1及びＷ2は、各々独立的に、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、またはベンジルであり得る。一部の実施形態において、Ｗ1及びＷ2は、共にメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、またはベンジルであり得る。
【００４９】
一部の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、Ｗ1及びＷ2が、自らが付着している炭素と共にＣ3−Ｃ8シクロアルキルを形成し、当該Ｃ3−Ｃ8シクロアルキルが、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、式（ＩＩ’）の化合物である。例えば、Ｗ1及びＷ2は、自らが付着している炭素と共に
2020529442.tif 000010
を形成することができる。
【００５０】
一部の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、Ｗ1及びＷ2が、自らが付着している炭素と共に４〜８員の複素環を形成し、当該複素環が、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、式（ＩＩ’）の化合物である。例えば、Ｗ1及びＷ2は、自らが付着している炭素と共に
2020529442.tif 000011
を形成することができる。
【００５１】
一部の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、式（ＩＩ）の化合物またはその塩である。
【００５２】
一部の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、ベンゾチアゾールルシフェリン、例えばＤ−ルシフェリンであり得る。他の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、アミノルシフェリンなどのベンゾチアゾールルシフェリン、例えば、Ｒ1’、Ｒ2’、Ｒ3’、及びＲ5’が各々Ｈであり、Ｒ4’がＮＨ2である、式（ＩＩ’）または式（ＩＩ）の化合物である。ベンゾチアゾールルシフェリンはルシフェラーゼ酵素の基質である。
【００５３】
他の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、ベンゾチアゾールプロルシフェリンであり得る。本明細書で使用されるベンゾチアゾールプロルシフェリンは、ルシフェラーゼと合わせたときに発光を直接的に支持するわけではないが、（例えば、第２の酵素による）生体内変換により、ベンゾチアゾールルシフェリンに転換することができる。ベンゾチアゾールプロルシフェリンとしては、例えば、Ｒ4’が、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）Ｇ1であり、Ｇ1が酵素基質を含み、酵素による当該酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換する、式（ＩＩ’）または式（ＩＩ）の化合物が挙げられる。別のベンゾチアゾールプロルシフェリンの例としては、Ｒ1’が−Ｃ2アルキレン−ＯＨであり、Ｒ2’がＨであり、Ｒ3’がＨであり、Ｒ5’がＨであり、Ｒ4’が−ＯＣＨ3である、式（ＩＩ’）または式（ＩＩ）の化合物が挙げられる。
【００５４】
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による当該酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換する。一部の実施形態において、Ｇ1はＧ2−Ｌ1−であり、Ｇ2は酵素基質であり、Ｌ1は、Ｇ2を式（ＩＩ’）または式（ＩＩ）の化合物の残部（すなわち、親分子部分）に接続するリンカーである。Ｇ2は、酵素によって除去可能な基である。
【００５５】
一部の実施形態において、Ｌ1は、結合であるか、または中性の周囲条件下で安定性の原子の配列から構成された２価の基であり、この原子は、炭素、水素、窒素、酸素、硫黄、リン、及びケイ素から選択される。２価の基は、単結合（例えば、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ2−Ｏ）、二重結合（例えば、Ｃ＝Ｏ）、または三重結合（例えば、Ｃ≡Ｃ）を含むことができ、また環構造（例えば、シクロアルキル）を含有または含むことができる。一部の実施形態において、２価の基は、−Ｃ1-10アルキレン−、−Ｃ2-10アルキレン−Ｏ−、Ｃ3-8シクロアルキレン、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）2−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ1-4アルキル）−、−Ｎ（ＣＯＣ1-4アルキル）−、アミノ酸部分、保護アミノ酸部分、及びフェニレンのうちの１つ以上の配列であり、このとき、Ｃ3-8シクロアルキレン及びフェニレンは、独立的に、Ｃ1-4アルキル、Ｃ1-4ハロアルキル、Ｃ1-4アルコキシ、ハロ、シアノ、またはヒドロキシから独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい。一部の実施形態において、Ｌ1はＣ1−Ｃ10アルキレン（例えば、Ｃ2−Ｃ3アルキレン）である。
【００５６】
リンカーＬ1は、ＷＯ２００６／１３０５５１、ＷＯ２０１４／１５９０４４、ＵＳ２００７／００１５７９０、またはＵＳ２０１４／０３０４８４２（これらの全体が参照により本明細書に援用される）で開示されているようなベンゾチアゾールルシフェリンと酵素基質との間のリンカーであり得る。例えば、Ｌ1は、スキーム１に示すようなトリメチルロック、キノンメチド、ジペプチジル、パラアミノベンジルオキシカルボニル、またはアルキレンジアミノカルボニルリンカーなどのトレースレスリンカーであり得る。Ｇ2の酵素的生体内変換は、Ｇ2が付着しているヘテロ原子に対する結合の切断をもたらして、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを放出するように自発的に自己犠牲を行い得るリンカーを放出する。一部のトレースレスリンカー（例えば、アルキレンリンカー）は、ＷＯ２００６／１３０５５１で説明されているようにβ脱離によって自発的に脱離され得る。
スキーム１
2020529442.tif 000012
【００５７】
酵素基質Ｇ2の代表例としては、ＷＯ２００６／１３０５５１またはＵＳ２００７／００１５７９０（その全体が参照により本明細書に援用される）で説明されているようなプロテアーゼ向けの基質、シトクロム（ＣＹＰ）Ｐ４５０レダクターゼ、モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）、フラビンモノオキシゲナーゼ（ＦＭＯ）、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、デアルキラーゼ（例えば、デメチラーゼ）、デアセチラーゼ、デホルミラーゼ、スルファターゼ、ホスファターゼ（例えば、アルカリホスファターゼ（ＡＰ））、ベータラクタマーゼ、及びアルコールデヒドロゲナーゼが挙げられる。
【００５８】
代表的なプロテアーゼ基質としては、以下に限定されないが、Ｃｏｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ．によりＣｅｌｌ  Ｎｏｔｅｓ（２００７）１８，ｐｐ．９−１１（その全体が参照により本明細書に援用される）で説明されているようなＺ−ＤＥＶＤ−、Ｚ−ＬＥＴＤ−、ＧＰ−、Ｓｕｃ−ＬＬＶＹ−、Ｚ−ＬＲＲ−、Ｚ−ｎＬＰｎＬＤ−、Ｚ−ＱＥＶＹ−、ＶＰ−、Ｚ−ＶＤＶＡＤ−、Ｚ−ＶＥＩＤ−、Ｚ−ＡＴＡＤ−、Ｚ−ＩＥＰＤ−、Ｚ−ＩＥＴＤ−、Ｚ−ＴＳＡＶＬＱ−、及びＺ−ＶＮＳＴＬＱ−といったペプチドが挙げられる。これらのプロテアーゼ基質の場合、酵素基質は−Ｘに直接付着し、直接切断されるため、Ｌ1は結合である。
【００５９】
トレースレスリンカーを有するＧ1の代表例をスキーム２に示す。
スキーム２
2020529442.tif 000013
【００６０】
ベンゾチアゾールルシフェリンアナログのあるいくつかの実施形態は、
2020529442.tif 000014
Ｒ1’、Ｒ2’、Ｒ3’、及びＲ5’がＨであり、Ｒ4’が−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、Ｇが、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、または２個のＧが、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４〜８員の単環式複素環式環を形成し、Ｘ及びＧ1が本明細書で定義される通りである、式（ＩＩ’）または式（ＩＩ）の化合物を含む。
【００６１】
他の実施形態において、
2020529442.tif 000015
Ｒ4’は−ＸＧであり、Ｘは本明細書で定義される通りであり、少なくとも１個のＧは、Ｒ3’またはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成する。一部の実施形態において、１個のＧは、Ｒ3’と共に、本明細書で説明されているように置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成する。一部の実施形態において、Ｘは−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ12アルキル）−（例えば、−Ｎ（ＣＨ3）−）であり、Ｇは、Ｒ3’と共に、本明細書で説明されているように置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成する。一部の実施形態において、置換されていてもよい、ＧとＲ3’との間で形成される複素環式環は、
2020529442.tif 000016
からなる群より選択される。一部の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは
2020529442.tif 000017
である。一部の実施形態において、１個のＧは、Ｒ5’と共に、本明細書で説明されているように置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成する。一部の実施形態において、Ｘは−ＮＨ−または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ12アルキル）−（例えば、−Ｎ（ＣＨ3）−）であり、Ｇは、Ｒ5’と共に、本明細書で説明されているように、置換されていてもよい５〜８員の単環式複素環式環を形成する。一部の実施形態において、ＧとＲ5’との間で形成される、置換されていてもよい複素環式環は、
2020529442.tif 000018
からなる群より選択される。一部の実施形態において、Ｘは−Ｎ（Ｇ）−であり、各Ｇは、Ｒ3’またはＲ5’のうちの１つと共に、本明細書で説明されているように、置換されていてもよい５〜８員の単環式複素環式環
2020529442.tif 000019
を形成する。
【００６２】
一部の実施形態において、
2020529442.tif 000020
このとき、Ｒ1’、Ｒ10’、Ｒ11’、及びｎは本明細書で定義される通りである。一部の実施形態において、
2020529442.tif 000021
このとき、Ｒ1’及びＲ11’は本明細書で定義される通りである。さらなる実施形態において、Ｒ11’は−ＯＨまたは−ＮＨ2であり、Ｒ1’は本明細書で定義される通りである。（ｂ）の実施形態に従ったなおさらなる実施形態において、Ｒ1’はＨである。一部の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは
2020529442.tif 000022
である。他の実施形態において、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは
2020529442.tif 000023
である。
【００６３】
一部の実施形態において、
2020529442.tif 000024
このとき、Ｒ1’、Ｒ10’、Ｒ11’、及びｎは本明細書で定義される通りである。
【００６４】
一部の実施形態において、
2020529442.tif 000025
このとき、Ｒ1’、Ｒ10’、Ｒ11’、及びｎは本明細書で定義される通りである。
【００６５】
一部の実施形態において、本発明の組成物は液体媒体を含み、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、組成物中に約０．５ｍＭ〜約１０ｍＭ、約０．７５ｍＭ〜約１０ｍＭ、約１．０ｍＭ〜約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約９ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約８ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約７ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約６ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約４ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約３  ｍＭ、または０．５ｍＭ〜約２ｍＭにて存在することができる。ベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、組成物中に約０．５ｍＭ、０．６ｍＭ、０．７ｍＭ、０．８ｍＭ、０．９ｍＭ、１．０ｍＭ、１．１ｍＭ、１．２ｍＭ、１．２５ｍＭ、１．３ｍＭ、１．４ｍＭ、１．５ｍＭ、１．６ｍＭ、１．７ｍＭ、１．８ｍＭ、１．９ｍＭ、２ｍＭ、２．５ｍＭ、３ｍＭ、３．５ｍＭ、４ｍＭ、４．５ｍＭ、５ｍＭ、５．５ｍＭ、６ｍＭ、６．５ｍＭ、７ｍＭ、７．５ｍＭ、８ｍＭ、８．５ｍＭ、９ｍＭ、９．５ｍＭ、または１０ｍＭにて存在することができる。
【００６６】
ｂ．チオ核酸塩基
当該組成物は、チオ核酸塩基を含むことができる。チオ核酸塩基は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを、１つ以上の分解産物への分解に対し安定化させることができる。チオ核酸塩基は、１つ以上の分解産物の形成を低減または抑制することができる。このような安定化、低減、または抑制は、上記で説明されているように光の存在下、光の不在下、及び／または異なる温度にて行われる。
【００６７】
チオ核酸塩基は、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体であり得る
2020529442.tif 000026
（式中、
Ｒ1は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、
Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールであり、
Ｒa及びＲbは、各出現において各々独立的に、水素、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールである）。
【００６８】
あるいくつかの実施形態において、Ｒ1は、水素、アルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、イミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、このとき、Ｒa及びＲbは各々独立的に、水素、アルキル、またはアリールであり、当該アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、及びイミンは、各出現において独立的に、非置換であるか、またはハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、シアノアルキル、シアノフルオロアルキル、シアノフルオロアルキル、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ハロシクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシフルオロアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、及びアシルからなる群より独立的に選択される１、２、３、４、５、６、もしくは７個の官能基で置換されている。
【００６９】
あるいくつかの実施形態において、Ｒ1は、アルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル、カルボン酸、エステル、またはオキソであり、このとき、当該アルキル、シクロアルキル、及びアリールアルキルは、各出現において独立的に、非置換であるか、またはハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、及び−ＣＯＯＨからなる群より独立的に選択される１、２、もしくは３個の官能基で置換されている。
【００７０】
あるいくつかの実施形態において、Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、イミン、アルキル、またはアリールであり、このとき、Ｒa及びＲbは各々独立的に、水素、アルキル、またはアリールであり、当該アルキル、イミン、及びアリールは、各出現において独立的に、非置換であるか、またはハロゲン、＝Ｏ、＝Ｓ、シアノ、シアノアルキル、シアノフルオロアルキル、シアノフルオロアルキル、ニトロ、フルオロアルキル、アルコキシフルオロアルキル、フルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ハロシクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環、シクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシフルオロアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキレン、アリールオキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アミノアルキル、アリールアミノ、スルホニルアミノ、スルフィニルアミノ、スルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノスルホニル、スルフィニル、−ＣＯＯＨ、ケトン、アミド、カルバメート、及びアシルからなる群より独立的に選択される１、２、３、４、５、６、もしくは７個の官能基で置換されている。
【００７１】
あるいくつかの実施形態において、Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、またはイミンであり、このとき、Ｒa及びＲbは各々独立的に、水素またはアルキルであり、当該イミンは、非置換であるか、またはハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、及びアルキルアミノからなる群より独立的に選択される官能基で置換されている。
【００７２】
あるいくつかの実施形態において、Ｒ2はイミンであり、このとき、イミンは−Ｎ＝ＣＲd（式中、Ｒdは、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはシクロアルキルである）であり、当該イミンは、非置換であるか、またはハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、及びアルキルアミノからなる群より独立的に選択される官能基で置換されている。
【００７３】
あるいくつかの実施形態において、Ｒ2はイミンであり、このとき、イミンは−Ｎ＝ＣＲd（式中、Ｒdは、アリールまたはヘテロアリールである）であり、当該イミンは、非置換であるか、またはニトロ及びアルキルアミノからなる群より独立的に選択される官能基で置換されている。
【００７４】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＡＴＴ（６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン）であってもよい。
2020529442.tif 000027
【００７５】
ＡＴＴは、６−アザ−２−チオチミンの別名でも知られ得る。ＡＴＴは市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号２７５５１４）から入手可能である。
【００７６】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＡＴＣＡ（５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−カルボン酸）であってもよい。
2020529442.tif 000028
【００７７】
ＡＴＣＡは市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｓ７８４０２８）から入手可能である。
【００７８】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する３−（４−アミノ−５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸であってもよい。
2020529442.tif 000029
【００７９】
この化合物は市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号ＯＴＶ０００３７９）から入手可能である。
【００８０】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するテトラヒドロ−２−メチル−３−チオキソ−１，２，４−トリアジン−５，６−ジオンであってもよい。
2020529442.tif 000030
【００８１】
この化合物は、チオトリアジノンの別名でも知られ得、市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号５４９７５６）から入手可能である。
【００８２】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する４−（（２−フリルメチレン）アミノ）−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オンであってもよい。
2020529442.tif 000031
【００８３】
この化合物は市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｌ１２５０１６）から入手可能である。
【００８４】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する６−ベンジル−３−スルファニル−１，２，４−トリアジン−５−オールであってもよい。
2020529442.tif 000032
【００８５】
この化合物は、ｂ−ＡＴＴ、ベンジル−ＡＴＴ、またはＴＡＫ−０００２の別名でも知られ得る。
【００８６】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する４−アミノ−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オンであってもよい。
2020529442.tif 000033
【００８７】
この化合物は市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号ＰＨ１２５９０３）から入手可能である。
【００８８】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する３−（５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸であってもよい。
2020529442.tif 000034
【００８９】
この化合物は市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｌ１５１６２９）から入手可能である。
【００９０】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する（Ｅ）−６−メチル−４−（（チオフェン−２−イルメチレン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンであってもよい。
2020529442.tif 000035
【００９１】
この化合物は市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｌ１５０８１９）から入手可能である。
【００９２】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する（Ｅ）−６−メチル−４−（（３−ニトロベンジリデン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンであってもよい。
2020529442.tif 000036
【００９３】
この化合物は市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｌ１５１２３８）から入手可能である。
【００９４】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する（Ｅ）−４−（（４−（ジエチルアミノ）ベンジリデン）アミノ）−６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンであってもよい。
2020529442.tif 000037
【００９５】
この化合物は市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｌ１５１２１１）から入手可能である。
【００９６】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＡＴＣＡエチルエステルであってもよい。
2020529442.tif 000038
【００９７】
この化合物は市販されており、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号ＰＨ００８５９２）から入手可能である。
【００９８】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−００２１であってもよい。
2020529442.tif 000039
【００９９】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−００２０であってもよい。
2020529442.tif 000040
【０１００】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−００１８であってもよい。
2020529442.tif 000041
【０１０１】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−０００９であってもよい。
2020529442.tif 000042
【０１０２】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−００１４であってもよい。
2020529442.tif 000043
【０１０３】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−０００７であってもよい。
2020529442.tif 000044
【０１０４】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−０００８であってもよい。
2020529442.tif 000045
【０１０５】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−０００３であってもよい。
2020529442.tif 000046
【０１０６】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有するＴＡＫ−０００４であってもよい。
2020529442.tif 000047
【０１０７】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する３−チオキソ−６−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンであってもよい。
2020529442.tif 000048
【０１０８】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する６−シクロプロピル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンであってもよい。
2020529442.tif 000049
【０１０９】
式（Ｉ）の化合物は、以下の構造を有する６−（ヒドロキシメチル）-３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンであってもよい。
2020529442.tif 000050
【０１１０】
ＴＡＫ−００１４、ＴＡＫ−０００２、ＴＡＫ−００２１、ＴＡＫ−００２０、ＴＡＫ−００１８、ＴＡＫ−０００９、ＴＡＫ−０００７、ＴＡＫ−０００８、ＴＡＫ−０００３、ＴＡＫ−０００４、３−チオキソ−６−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、６−シクロプロピル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、及び６−（ヒドロキシメチル）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンは、Ｓ．Ｊ．Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＲＫＩＶＯＣ（２００９）３３３−３４８及びＳ．Ｊ．Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｔｔｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１０）７：５−８（これらの両方の内容全体は参照により本明細書に援用される）で説明されているように合成した。
【０１１１】
チオ核酸塩基は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるのに有効な量で、組成物中に存在することができる。一部の実施形態において、本発明の組成物は液体媒体を含み、ルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるための組成物中のチオ核酸塩基の有効量は、約０．１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１５ｍＭ〜約５００ｍＭ、約２０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約３０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約５００ｎＭ、約７０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約９０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１１０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１７０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１９０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約２１０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約４７５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約４５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約４２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約４００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３７５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３５０ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３２５ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約３００ｍＭ、約０．１ｍＭ〜約２７５ｍＭ、約０．５ｍＭ〜約４５０ｍＭ、約１ｍＭ〜約４００ｍＭ、約２ｍＭ〜約３５０ｍＭ、約３ｍＭ〜約３００ｍＭ、約４ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約２５ｍＭであり得る。
【０１１２】
ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるための組成物中のチオ核酸塩基の有効量は、約０．１ｍＭ、０．２ｍＭ、０．３ｍＭ、０．４ｍＭ、０．５ｍＭ、０．６ｍＭ、０．７ｍＭ、０．８ｍＭ、０．９ｍＭ、１．０ｍＭ、１．５ｍＭ、２．０ｍＭ、２．５ｍＭ、３．０ｍＭ、３．５ｍＭ、４．０ｍＭ、４．５ｍＭ、５．０ｍＭ、５．５ｍＭ、６．０ｍＭ、６．５ｍＭ、７．０ｍＭ、７．５ｍＭ、８．０ｍＭ、８．５ｍＭ、９．０ｍＭ、９．５ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２１ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、２５ｍＭ、２６ｍＭ、２７ｍＭ、２８ｍＭ、２９ｍＭ、３０ｍＭ、３１ｍＭ、３２ｍＭ、３３ｍＭ、３４ｍＭ、３５ｍＭ、３６ｍＭ、３７ｍＭ、３８ｍＭ、３９ｍＭ、４０ｍＭ、４１ｍＭ、４２ｍＭ、４３ｍＭ、４４ｍＭ、４５ｍＭ、４６ｍＭ、４７ｍＭ、４８ｍＭ、４９ｍＭ、５０ｍＭ、５１ｍＭ、５２ｍＭ、５３ｍＭ、５４ｍＭ、５５ｍＭ、５６ｍＭ、５７ｍＭ、５８ｍＭ、５９ｍＭ、６０ｍＭ、６１ｍＭ、６２ｍＭ、６３ｍＭ、６４ｍＭ、６５ｍＭ、６６ｍＭ、６７ｍＭ、６８ｍＭ、６９ｍＭ、７０ｍＭ、７１ｍＭ、７２ｍＭ、７３ｍＭ、７４ｍＭ、７５ｍＭ、７６ｍＭ、７７ｍＭ、７８ｍＭ、７９ｍＭ、８０ｍＭ、８１ｍＭ、８２ｍＭ、８３ｍＭ、８４ｍＭ、８５ｍＭ、８６ｍＭ、８７ｍＭ、８８ｍＭ、８９ｍＭ、９０ｍＭ、９１ｍＭ、９２ｍＭ、９３ｍＭ、９４ｍＭ、９５ｍＭ、９６ｍＭ、９７ｍＭ、９８ｍＭ、９９ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２０５ｍＭ、２１０ｍＭ、２１５ｍＭ、２２０ｍＭ、２２５ｍＭ、２３０ｍＭ、２３５ｍＭ、２４０ｍＭ、２４５ｍＭ、２５０ｍＭ、２５５ｍＭ、２６０ｍＭ、２６５ｍＭ、２７０ｍＭ、２７５ｍＭ、２８０ｍＭ、２８５ｍＭ、２９０ｍＭ、２９５ｍＭ、３００ｍＭ、３０５ｍＭ、３１０ｍＭ、３１５ｍＭ、３２０ｍＭ、３２５ｍＭ、３３０ｍＭ、３３５ｍＭ、３４０ｍＭ、３４５ｍＭ、３５０ｍＭ、３５５ｍＭ、３６０ｍＭ、３６５ｍＭ、３７０ｍＭ、３７５ｍＭ、３８０ｍＭ、３８５ｍＭ、３９０ｍＭ、３９５ｍＭ、４００ｍＭ、４０５ｍＭ、４１０ｍＭ、４１５ｍＭ、４２０ｍＭ、４２５ｍＭ、４３０ｍＭ、４３５ｍＭ、４４０ｍＭ、４４５ｍＭ、４５０ｍＭ、４５５ｍＭ、４６０ｍＭ、４６５ｍＭ、４７０ｍＭ、４７５ｍＭ、４８０ｍＭ、４８５ｍＭ、４９０ｍＭ、４９５ｍＭ、または５００ｍＭであり得る。
【０１１３】
ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるための組成物中のチオ核酸塩基の有効量は、０．１ｍＭ、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、または１０ｍＭより大きい可能性がある。あるいくつかの実施形態において、本発明の組成物は液体媒体を含有し、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるためのチオ核酸塩基の有効量は、約１ｍＭ〜約１０ｍＭであり、これには約２ｍＭ〜約１０ｍＭ、約３ｍＭ〜約１０ｍＭ、約４ｍＭ〜約１０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、約６ｍＭ〜約１０ｍＭ、約７ｍＭ〜約１０ｍＭ、約８ｍＭ〜約１０ｍＭ、及び約９ｍＭ〜約１０ｍＭが含まれる。
【０１１４】
一部の実施形態において、チオ核酸塩基がＡＴＴである場合、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるためのＡＴＴの有効量は、約０．１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１１０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１２０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１４０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１６０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１７０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１８０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１９０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約２００ｍＭ〜約５００ｍＭ、約２１０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約９０ｍＭ〜約４７５ｍＭ、約９０ｍＭ〜約４５０ｍＭ、約９０ｍＭ〜約４２５ｍＭ、約９０ｍＭ〜約４００ｍＭ、約９０ｍＭ〜約３７５ｍＭ、約９０ｍＭ〜約３５０ｍＭ、約９０ｍＭ〜約３２５ｍＭ、約９０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約９０ｍＭ〜約２７５ｍＭ、約１００ｍＭ〜約４５０ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約４００ｍＭ、約１７５ｍＭ〜約３５０ｍＭ、または約２００ｍＭ〜約３００ｍＭであり得る。
【０１１５】
他の実施形態において、チオ核酸塩基がＡＴＴである場合、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるためのＡＴＴの有効量は、約０．１ｍＭ、０．２ｍＭ、０．３ｍＭ、０．４ｍＭ、０．５ｍＭ、０．６ｍＭ、０．７ｍＭ、０．８ｍＭ、０．９ｍＭ、１．０ｍＭ、１．５ｍＭ、２．０ｍＭ、２．５ｍＭ、３．０ｍＭ、３．５ｍＭ、４．０ｍＭ、４．５ｍＭ、５．０ｍＭ、５．５ｍＭ、６．０ｍＭ、６．５ｍＭ、７．０ｍＭ、７．５ｍＭ、８．０ｍＭ、８．５ｍＭ、９．０ｍＭ、９．５ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２０１ｍＭ、２０２ｍＭ、２０３ｍＭ、２０４ｍＭ、２０５ｍＭ、２０６ｍＭ、２０７ｍＭ、２０８ｍＭ、２０９ｍＭ、２１０ｍＭ、２１１ｍＭ、２１２ｍＭ、２１３ｍＭ、２１４ｍＭ、２１５ｍＭ、２１６ｍＭ、２１７ｍＭ、２１８ｍＭ、２１９ｍＭ、２２０ｍＭ、２２１ｍＭ、２２２ｍＭ、２２３ｍＭ、２２４ｍＭ、２２５ｍＭ、２２６ｍＭ、２２７ｍＭ、２２８ｍＭ、２２９ｍＭ、２３０ｍＭ、２３１ｍＭ、２３２ｍＭ、２３３ｍＭ、２３４ｍＭ、２３５ｍＭ、２３６ｍＭ、２３７ｍＭ、２３８ｍＭ、２３９ｍＭ、２４０ｍＭ、２４１ｍＭ、２４２ｍＭ、２４３ｍＭ、２４４ｍＭ、２４５ｍＭ、２４６ｍＭ、２４７ｍＭ、２４８ｍＭ、２４９ｍＭ、２５０ｍＭ、２５１ｍＭ、２５２ｍＭ、２５３ｍＭ、２４５ｍＭ、２５５ｍＭ、２５６ｍＭ、２５７ｍＭ、２５８ｍＭ、２５９ｍＭ、２６０ｍＭ、２６１ｍＭ、２６２ｍＭ、２６３ｍＭ、２６４ｍＭ、２６５ｍＭ、２６６ｍＭ、２６７ｍＭ、２６８ｍＭ、２６９ｍＭ、２７０ｍＭ、２７１ｍＭ、２７２ｍＭ、２７３ｍＭ、２７４ｍＭ、２７５ｍＭ、２７６ｍＭ、２７７ｍＭ、２７８ｍＭ、２７９ｍＭ、２８０ｍＭ、２８１ｍＭ、２８２ｍＭ、２８３ｍＭ、２８４ｍＭ、２８５ｍＭ、２８６ｍＭ、２８７ｍＭ、２８８ｍＭ、２８９ｍＭ、２９０ｍＭ、２９１ｍＭ、２９２ｍＭ、２９３ｍＭ、２９４ｍＭ、２９５ｍＭ、２９６ｍＭ、２９７ｍＭ、２９８ｍＭ、２９９ｍＭ、３００ｍＭ、３０５ｍＭ、３１０ｍＭ、３１５ｍＭ、３２０ｍＭ、３２５ｍＭ、３３０ｍＭ、３３５ｍＭ、３４０ｍＭ、３４５ｍＭ、３５０ｍＭ、３５５ｍＭ、３６０ｍＭ、３６５ｍＭ、３７０ｍＭ、３７５ｍＭ、３８０ｍＭ、３８５ｍＭ、３９０ｍＭ、３９５ｍＭ、４００ｍＭ、４０５ｍＭ、４１０ｍＭ、４１５ｍＭ、４２０ｍＭ、４２５ｍＭ、４３０ｍＭ、４３５ｍＭ、４４０ｍＭ、４４５ｍＭ、４５０ｍＭ、４５５ｍＭ、４６０ｍＭ、４６５ｍＭ、４７０ｍＭ、４７５ｍＭ、４８０ｍＭ、４８５ｍＭ、４９０ｍＭ、４９５ｍＭ、または５００ｍＭであり得る。
【０１１６】
あるいくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログと、ＡＴＴと、液体媒体とを含有し、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるためのＡＴＴの有効量は、約１ｍＭ〜約１０ｍＭであり、これには約２ｍＭ〜約１０ｍＭ、約３ｍＭ〜約１０ｍＭ、約４ｍＭ〜約１０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、約６ｍＭ〜約１０ｍＭ、約７ｍＭ〜約１０ｍＭ、約８ｍＭ〜約１０ｍＭ、及び約９ｍＭ〜約１０ｍＭが含まれる。他の実施形態において、本発明の組成物は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログと、ＡＴＴと、液体媒体とを含有し、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるためのＡＴＴの有効量は、１０ｍＭより大きい、約２５ｍＭより大きい、約５０ｍＭより大きい、または約１００ｍＭより大きい可能性がある。
【０１１７】
ｃ．乾燥形態の組成物
本発明の組成物は、いかなる液体媒体も含有しない乾燥形態をとることができる。乾燥組成物においては、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログ及びチオ核酸塩基を混合して固体混合物を形成することができる。例えば、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログ及びチオ核酸塩基は、２つの化合物が一様に分散した均質な固体混合物を形成することができる。
【０１１８】
一部の実施形態において、乾燥組成物におけるベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、水に可溶の塩である。本明細書で開示されるこのようなベンゾチアゾールルシフェリンアナログとチオ核酸塩基との乾燥形態の組成物は、このようなベンゾチアゾールルシフェリンアナログの安定性を改善することができる。概して、塩形態のルシフェリンは保管中にＨ2Ｏを吸収する傾向がある。プロルシフェリン及びその他のルシフェリンアナログ、例えば、本明細書で開示されるベンゾチアゾールルシフェリンアナログは、通常は冷凍庫で保管されるが、繰り返し使用する間に水分を捕捉する可能性がある。湿気のある環境において、これらの化合物は対応するデヒドロ化合物に分解する可能性があり、この分解は発光性能に影響を及ぼし得る。本明細書で開示されるように、チオ核酸塩基をこのような化合物と共に混合物に含めることで、このような化合物の貯蔵寿命は、分解の速度を遅くすることにより改善し得る。特定の実施形態において、乾燥組成物は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログと、チオ核酸塩基と、その他の必要な成分（例えば、固体形態のリン酸塩及び界面活性剤）とを含有する、固体混合物である。有利なことには、乾燥組成物は固体形態で保管して、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログの貯蔵寿命を延ばすことができる。一部の実施形態において、適切な量の液体媒体（例えば、Ｈ2Ｏ）を用いた本明細書で開示される乾燥組成物の簡便な再構成は、生物学的適用向けにすぐに使用可能なベンゾチアゾールルシフェリンアナログのストック溶液をもたらすことができる。
【０１１９】
ベンゾチアゾールルシフェリンアナログとチオ核酸塩基との固体混合物は、公知の方法により、例えば、好適なフリーズドライ装置を用いた凍結乾燥により、調製することができる。
【０１２０】
ｄ．液体媒体
一部の実施形態において、組成物は、液体媒体を含む液体形態をとることできる。概して、本開示のベンゾチアゾールルシフェリンアナログ及びチオ核酸塩基の各々は、存在する場合、液体媒体中に少なくとも部分的に溶解している。一部の実施形態において、組成物は液体形態をとり、この液体形態は、本開示のベンゾチアゾールルシフェリンアナログとチオ核酸塩基と（いずれも液体媒体中に溶解している）の混合物を含む。
【０１２１】
液体媒体は、有機溶媒、水性媒体、またはこれらの混合物を含むことができる。液体媒体は、本明細書で開示されるベンゾチアゾールルシフェリンアナログもしくはチオ核酸塩基、またはこれらの混合物を溶解するための溶媒として好適であり得る。あるいくつかの実施形態において、液体媒体は、本明細書で開示されるベンゾチアゾールルシフェリンアナログもしくは本明細書で開示されるチオ核酸塩基、またはこれらの混合物が使用される、生物学的アッセイシステムに含まれてもよい。生物学的アッセイシステムとしては、当技術分野で公知の酵素アッセイ、細胞試験、及び動物試験のための様々なシステムが挙げられる。
【０１２２】
一部の実施形態において、液体媒体は、１つ以上の有機物質を含む有機溶媒である。有機溶媒は、本明細書で開示される化合物を溶解して溶液を形成するのに使用することができる。溶解後、化合物は、ある温度で一定期間、溶液中で保管することができる。この溶液は、生物学的アッセイシステムに直ちに添加しても、一定期間保管した後に添加してもよい。有機溶媒に溶解したベンゾチアゾールルシフェリンアナログ及びチオ核酸塩基化合物は、別々にまたは混合物として、生物学的アッセイシステムに添加することができる。
【０１２３】
有機溶媒は、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、またはこれらの任意の組合せであり得る。当該アルコールは、エタノールであり得る。
【０１２４】
一部の実施形態において、有機溶媒はアルコールとプロピレングリコールとの組合せであり得る。他の実施形態において、有機溶媒はエタノールとプロピレングリコールとの組合せであり得る。なお他の実施形態において、有機溶媒は１：１の比のエタノール：プロピレングリコール（例えば、５０％（ｖ／ｖ）エタノール：５０％（ｖ／ｖ）プロピレングリコール）であり得る。別の実施形態において、有機溶媒は４０％（ｖ／ｖ）エタノール：６０％（ｖ／ｖ）プロピレングリコールであり得る。
【０１２５】
一部の実施形態において、有機溶媒はアルコールとグリセロールとの組合せであり得る。他の実施形態において、有機溶媒はエタノールとグリセロールとの組合せであり得る。なお他の実施形態において、有機溶媒は８５％（ｖ／ｖ）エタノール：１５％（ｖ／ｖ）グリセロールであり得る。
【０１２６】
一部の実施形態において、液体媒体は、水性媒体、例えば、水中の溶液または緩衝液である。水性の溶液または緩衝液は、本明細書で開示される化合物を溶解するのに使用することができる。水性媒体に溶解した後、化合物は、ある温度で一定期間、溶液中で保管することができる。この溶液は、生物学的アッセイシステムに直ちに添加しても、一定期間保管した後に添加してもよい。水性媒体に溶解したベンゾチアゾールルシフェリンアナログ及びチオ核酸塩基化合物は、別々にまたは混合物として、生物学的アッセイシステムに添加することができる。
【０１２７】
好適な水性媒体としては、およそｐＨ６〜１０の様々な緩衝液が挙げられ得る。好適な緩衝液の非限定的な例としては、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ、ＭＥＳ、及びトリス−ＨＣｌが挙げられる。
【０１２８】
一部の実施形態において、組成物は液体媒体を含み、チオ核酸塩基化合物はＡＴＴではない。例えば、組成物は、ＡＴＴ以外のチオ核酸塩基化合物と、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒とを含むことができる。
【０１２９】
一部の実施形態において、組成物は、ＡＴＴと、ＤＭＳＯを含まない液体媒体とを含む。例えば、組成物は、ＡＴＴと、アルコール、プロピレングリコール、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒とを含むことができる。
【０１３０】
一部の実施形態において、本明細書で開示される化合物は、界面活性剤を含有する緩衝液中に溶解している。界面活性剤としては、カチオン性界面活性剤（例えば、４級アンモニウム化合物）、アニオン性界面活性剤（例えば、アルキルベンゼンスルホネート化合物）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート及び様々なポリオキシエチレン系化合物）、またはこれらの混合物が挙げられ得る。一部の実施形態において、界面活性剤はカチオン性界面活性剤である。
【０１３１】
一部の実施形態において、液体媒体は、生物発光定量に好適な水性媒体または緩衝液（例えば、およそｐＨ６．０〜８．０のリン酸緩衝液）である。このような媒体は、追加的に、生物発光解析に使用される酵素及びその他の試薬（例えば、ルシフェラーゼ酵素、還元剤、及び界面活性剤を含む）を含有することができる。
【０１３２】
ｅ．ルシフェラーゼ酵素
上記で説明されているように、当該組成物は、発光酵素、そのバリアント、その変異体、またはこれらの組合せを含む場合もあれば含まない場合もある。発光酵素は、天然、組換え、または変異体であり得る。発光酵素は、上記で説明されている発光基質（その誘導体またはアナログを含む）を、光を産生する反応または光の産生に至る反応を触媒する基質として使用することができる。
【０１３３】
発光酵素はルシフェリン利用ルシフェラーゼを含むことができる。このようなルシフェラーゼとしては、以下に限定されないが、甲虫などの様々な生物（例えば、Ｐｈｏｔｉｎｕｓ  ｐｙｒａｌｉｓ及びＰｈｏｔｕｒｉｓ  ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉｃａ（北米のホタル）ならびにＰｙｒｏｐｈｏｒｕｓ  ｐｌａｇｉｏｐｈｔｈａｌａｍｕｓ（ジャマイカのコメツキムシ））に見いだされるルシフェラーゼが挙げられる。一部の実施形態において、好適なルシフェラーゼには、コメツキムシ緑ルシフェラーゼ、コメツキムシ赤ルシフェラーゼ、及びホタルルシフェラーゼが含まれ得る。一部の実施形態において、ルシフェラーゼには、Ｕｌｔｒａ−Ｇｌｏ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）などの組換えルシフェラーゼが含まれ得る。
【０１３４】
３．安定化の方法
本明細書では、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させるための方法も提供される。本方法は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させることができる。本方法は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを、１つ以上の分解産物への分解に対し安定化させることができる。
【０１３５】
本方法は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを有効量のチオ核酸塩基に接触させることを含むことができる。一部の実施形態において、接触させることは、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログとチオ核酸塩基との固体混合物中で生じる。例えば、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログ及びチオ核酸塩基を含有する乾燥組成物は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが固体混合物を形成する公知の方法を用いて調製することができる。本明細書で開示されるチオ核酸塩基は、乾燥組成物中のベンゾチアゾールルシフェリンアナログの安定性を改善することができる。
【０１３６】
また、本方法は、液体媒体の存在下で、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを有効量のチオ核酸塩基に接触させることも含むことができる。液体媒体は、上記で説明されているように、有機溶媒、水性媒体、またはこれらの混合物を含むことができる。いかなる理論への限定も伴うことなく、ｐＨ、温度、光、及び緩衝液構成成分は、緩衝溶液中のベンゾチアゾールルシフェリンの安定性に影響を及ぼす可能性があるものと仮定されている。本明細書で開示されるようなチオチミンアナログ（例えば、ＡＴＴ）が、液体媒体中（例えば、緩衝液または水性溶液中）のベンゾチアゾールルシフェリンを安定化し得るのは予想外である。
【０１３７】
一部の実施形態において、本方法は液体媒体を含み、チオ核酸塩基化合物はＡＴＴではない。例えば、本方法は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む液体媒体中で、ＡＴＴ以外のチオ核酸塩基化合物に接触させることを含むことができる。
【０１３８】
一部の実施形態において、本方法は、ＡＴＴと、ＤＭＳＯを含まない液体媒体とを含む。例えば、本方法は、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを、アルコール、プロピレングリコール、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む液体媒体中で、ＡＴＴに接触させることを含むことができる。
【０１３９】
チオチミン化合物がベンゾチアゾールルシフェリンアナログの安定性を改善し得る温度範囲としては、以下に限定されないが、−８０℃〜６０℃、−４０℃〜６０℃、−２０℃〜６０℃、０℃〜６０℃、２０℃〜６０℃、３０℃〜６０℃、３０℃〜４５℃、及び３０℃〜４０℃の温度が挙げられる。一部の実施形態において、温度範囲は生物発光定量に好適な範囲、例えば、３０℃〜４０℃、または約３７℃である。
【０１４０】
ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを分解に対し安定化させるチオ核酸塩基の有効量は、上記で説明されている。したがって、接触させるステップは、上記で説明されている組成物を形成し、それにより発光基質を分解に対し安定化させることを含むことができる。
【０１４１】
４．キット
本明細書では、上述された組成物を含むキットも提供される。当該組成物は、単一の容器内に収容することができる。
【０１４２】
本開示に従うキットは、好ましくは、組成物及び／または組成物を収容している単一の容器を保管するための説明書を含む。本開示のキットに含まれる説明書は、パッケージング材料に貼付されていてもよく、添付文書として含まれていてもよい。説明書は、典型的には文字で書かれた資料つまり印刷された資料であるが、これに限定されない。本開示では、このような説明書を保管し、それをエンドユーザーに伝達することが可能な任意の媒体が企図されている。このような媒体としては、以下に限定されないが、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学的媒体（例えば、ＣＤ  ＲＯＭ）などが挙げられる。本明細書で使用される「説明書」という用語は、説明書を提供するインターネットサイトのアドレスを含むことができる。
【０１４３】
本発明は、以下の非限定的な実施例によって例示される複数の態様を有する。
【０１４４】
５．実施例
実施例１．熱安定性
ルシフェリンにおける代表的な熱安定性プロファイリング：ＵＬＴＲＡ−ＧＬＯ（商標）ルシフェラーゼ（［酵素］最終＝０．１ｍｇ／ｍＬ；Ｐｒｏｍｅｇａ）ありまたはなしで、様々な量の界面活性剤を含有するルシフェリンストック溶液（ｐＨ＝６．０、［ＬＨ２］最終＝７．０ｍＭ）を６０℃にてインキュベートした。アリコート（２０μＬ）を様々な時点で取り出し、Ｈ2Ｏ（１８０μＬ）で希釈し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより解析した。構成成分のパーセンテージを、６’−ＯＨ−ルシフェリンの場合は３３０ｎｍ、６’−ＮＨ2−ルシフェリンの場合は２９５ｎｍにおけるＵＶ吸光度に基づいて計算した。図２Ａに示されているように、デヒドロルシフェリンがルシフェリンの主な分解産物であり、ルシフェラーゼはルシフェリンの分解にほとんど影響を及ぼさなかった。
【０１４５】
デヒドロルシフェリンによるルシフェラーゼ活性の阻害：検出試薬緩衝液中ＵＬＴＲＡ−ＧＬＯ（商標）ルシフェラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ、０．１ｍｇ／ｍＬ）＋０．１％のＰＲＩＯＮＥＸを調製した。溶液を２つの部分に分割し、一方の部分には０．２５ｍＭのラセミＨ−ルシフェリンを添加し、もう一方の部分には０．２５ｍＭのラセミＮＨ２ルシフェリンを添加した。Ｈ−デヒドロルシフェリン（０．２５ｍＭ）をラセミＨ−ルシフェリン溶液のアリコートに添加し、ＮＨ２−デヒドロルシフェリン（０．２５ｍＭ）をラセミＮＨ２ルシフェリン溶液のアリコートに添加した。ラセミ溶液を希釈剤として用いて、各々のデヒドロルシフェリン試料の２×系列希釈液を調製した（５００μＬのデヒドロルシフェリン溶液を５００μＬのＵＬＴＲＡ−ＧＬＯ＋ラセミルシフェリンに添加した）。次いで、５０μＬのＨ−デヒドロルシフェリン滴定系列を５０μＬの０．２μＭ  ＡＴＰに添加し、５０μＬのＮＨ２−デヒドロルシフェリン滴定を５０μＬの０．２ｍＭ  ＡＴＰに添加した。ラセミ基質の最終濃度を０．１２５ｍＭとし、ＡＴＰの最終濃度を０．１ｍＭ（ＮＨ２−デヒドロルシフェリンの場合）または０．１μＭ（Ｈ−デヒドロルシフェリンの場合）とした。試料を１分間インキュベートし、ＧＬＯＭＡＸ（登録商標）−Ｍｕｌｔｉ＋プレートルミノメーター（ｎ＝６）上で発光を測定した。図２Ｂに示されているように、デヒドロルシフェリンはルシフェラーゼの強力な阻害物質であったが、このことは、ルシフェリンストック溶液を長期間、周囲温度にて保管した後に光出力が減少することを説明し得るものである。
【０１４６】
実施例２．安定化効果
ＡＴＴの不在下または存在下でのルシフェリン分解の程度を比較することにより、ＡＴＴがルシフェリン安定性に及ぼす影響を調べた。ＡＴＴ（Ｓｉｇｍａ、最終濃度２．０ｍＭ）ありまたはなしで、ｐＨ６．０の様々なカチオン性界面活性剤を含有する緩衝液中で代表的なルシフェリンを再構成した（最終濃度１．０ｍＭ）。混合物を６０℃にてインキュベートした。アリコート（２０μＬ）を様々な時点で取り出し、Ｈ2Ｏ（１８０μＬ）で希釈し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより解析した。３３０ｎｍにおけるＵＶ吸光度に基づいて構成成分のパーセンテージを計算した。図３に示されているように、ＡＴＴはデヒドロルシフェリンの形成を低減し、そのため、ルシフェリンの熱安定性は、その分解が防止されることによって改善した。
【０１４７】
加えて、ＡＴＴがプロルシフェリンの安定性も改善することが見いだされた。Ｐ４５０酵素検出に特異的な発光性プロルシフェリン基質である、ルシフェリンメチルエーテルの２−ヒドロキシエチルエステルの安定性を試験した。この化合物のＤＭＳＯ中ストック溶液をｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液に添加して、１．０ｍＭの最終濃度及び５％  ＤＭＳＯに到達させた。ＡＴＴ（Ｓｉｇｍａ、最終濃度８．０ｍＭ）ありまたはなしで、混合物を３７℃にてインキュベートした。アリコート（２０μＬ）を様々な時点で取り出し、Ｈ2Ｏ（１８０μＬ）で希釈し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより解析した。３３０ｎｍにおけるＵＶ吸光度に基づいて構成成分のパーセンテージを計算した。図４に示されているように、ＡＴＴは、プロルシフェリン化合物の分解の速度を遅くし、対応するデヒドロルシフェリン誘導体の形成を低減した。
【０１４８】
実施例３．生物発光試験
ＡＴＴは、生物発光システムで一般的に使用されている添加物に適合性であることも示された。プロルシフェリン化合物、ルシフェリンメチルエーテルの２−ヒドロキシエチルエステルのＤＭＳＯ中ストック溶液をｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液に添加して、１．０ｍＭの最終濃度及び５％  ＤＭＳＯに到達させた。ＡＴＴ（Ｓｉｇｍａ、最終濃度８．０ｍＭ）ありまたはなし、及びＴＣＥＰ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、最終濃度１０ｍＭ）ありまたはなしで、混合物を３７℃にてインキュベートした。アリコート（２０μＬ）を様々な時点で取り出し、Ｈ2Ｏ（１８０μＬ）で希釈し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより解析した。３３０ｎｍにおけるＵＶ吸光度に基づいて構成成分のパーセンテージを計算した。図５に示されているように、ＡＴＴは、生物発光試験で一般的に使用されている還元剤であるＴＣＥＰの存在下で、プロルシフェリン化合物の安定性を改善した。具体的には、ＴＣＥＰの存在は、ＡＴＴのプロルシフェリン分解を低減する能力（上パネル）及びデヒドロ化合物産生を低減する能力（下パネル）に影響を及ぼさない。
【０１４９】
加えて、ＡＴＴ（デヒドロルシフェリン添加ありまたはなし）をＵｌｔｒａ−Ｇｌｏ（商標）系ＡＴＰ検出試薬（Ｕｌｔｒａ−Ｇｌｏ（商標）酵素、ルシフェリン基質、細胞溶解用界面活性剤、及び緩衝液中のその他の構成成分（例えば、ｐＨ６．０の様々なカチオン性界面活性剤を含有する緩衝液）を含む）に添加することで、３７℃における完全試薬の熱安定性が改善することが示された（図６）。試薬の熱安定性を反映するパラメーターＴ80（完全ＡＴＰ検出試薬が８０％以上の光出力を新規作製直後の試薬から産生した蓄積時間）は、３７℃においてＡＴＴの添加後１倍改善した。詳細には、ＡＴＴの不在下（０ｍＭ）でのＴ80値が４日であったのに対し、ＡＴＴの存在下（３ｍＭ）でのＴ80値は８日であった（図６Ａ）。さらに、添加剤としてのデヒドロルシフェリンとＡＴＴとの組合せは試薬の安定性をさらに改善し、Ｔ80値が１８日に増加した（図６Ｂ、３ｍＭのＡＴＴ及び０．３ｍＭの対応するデヒドロ化合物の場合）。したがって、本明細書で開示されるチオ核酸塩基は、発光酵素及びルシフェリンアナログを含む生物発光解析システムを妨害しなかった。その代わり、チオ核酸塩基化合物は、ルシフェリンアナログの安定性を改善し、ひいては、このような化合物を伴わないシステムに比べて長期間にわたり生物発光解析のシグナルを改善した。
【０１５０】
６．条項
完全性の理由により、本発明の様々な態様を以下の番号付きの条項に示す。
【０１５１】
条項１．（ａ）ベンゾチアゾールルシフェリンアナログ、またはその塩と、
（ｂ）有効量の式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体
2020529442.tif 000051
（式中、
Ｒ1は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、
Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールであり、
Ｒa及びＲbは、各出現において各々独立的に、水素、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールである）
と、
（ｃ）場合により、液体媒体と
を含む、組成物であって、
前記液体媒体が不在である場合、前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログ及び式（Ｉ）の前記化合物が固体混合物を形成し、
前記液体媒体が存在し、式（Ｉ）の前記化合物が６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン（ＡＴＴ）である場合、前記液体媒体がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含まない、
前記組成物。
【０１５２】
条項２．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが式（ＩＩ’）の化合物である、条項１に記載の組成物
2020529442.tif 000052
（式中、
2020529442.tif 000053
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルキル、またはＣ1−Ｃ4ハロアルキルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による前記酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換し、
Ｗ1及びＷ2は、各々独立的に水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、もしくはアリールアルキルであり、またはＷ1及びＷ2は、自らが付着している炭素と共に、Ｃ3-Ｃ8シクロアルキルまたは４〜８員の複素環を形成し、前記シクロアルキル及び複素環は、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい）。
【０１５３】
条項３．Ｗ1及びＷ2が各々独立的にＣ1−Ｃ4アルキルである、条項１または２に記載の組成物。
【０１５４】
条項４．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが式（ＩＩ）の化合物である、条項１または２に記載の組成物
2020529442.tif 000054
（式中、
2020529442.tif 000055
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４員〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による前記酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換する）。
【０１５５】
条項５．前記組成物が発光酵素を含有しない、条項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【０１５６】
条項６．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが分解に対し安定化される、条項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【０１５７】
条項７．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体を含まない組成物に比べて、分解に対し安定化される、条項６に記載の組成物。
【０１５８】
条項８．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の存在下で、分解に対し安定化される、条項６または７に記載の組成物。
【０１５９】
条項９．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の不在下で、分解に対し安定化される、条項６または７に記載の組成物。
【０１６０】
条項１０．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、−８０℃〜６０℃の温度にて、分解に対し安定化される、条項６〜９のいずれかに記載の組成物。
【０１６１】
条項１１．Ｒ1’がＨである、条項２〜１０のいずれかに記載の組成物。
【０１６２】
条項１２．Ｒ2’がＨであり、Ｒ3’がＨであり、Ｒ5’がＨである、条項２〜１１のいずれかに記載の組成物。
【０１６３】
条項１３．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の存在下で、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体を含まない組成物に比べて、分解に対し安定化される、条項６〜１２のいずれかに記載の組成物。
【０１６４】
条項１４．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の不在下で、式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体を含まない組成物に比べて、分解に対し安定化される、条項６〜１２のいずれかに記載の組成物。
【０１６５】
条項１５．Ｒ4’が−ＯＨまたは−ＮＨ2である、条項２〜１４のいずれかに記載の組成物。
【０１６６】
条項１６．式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が０．１ｍＭより大きい、条項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【０１６７】
条項１７．式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が１ｍＭより大きい、条項１６に記載の組成物。
【０１６８】
条項１８．式（Ｉ）の前記化合物が、ＡＴＴ、ＡＴＣＡ、３−（４−アミノ−５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、テトラヒドロ−２−メチル−３−チオキソ−１，２，４−トリアジン−５，６−ジオン、４−（（２−フリルメチレン）アミノ）−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、６−ベンジル−３−スルファニル−１，２，４−トリアジン−５−オール、４−アミノ−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、３−（５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、（Ｅ）−６−メチル−４−（（チオフェン−２−イルメチレン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−６−メチル−４−（（３−ニトロベンジリデン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−４−（（４−（ジエチルアミノ）ベンジリデン）アミノ）−６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、ＡＴＣＡエチルエステル、ＴＡＫ−００１４、ＴＡＫ−０００２、ＴＡＫ−００２１、ＴＡＫ−００２０、ＴＡＫ−００１８、ＴＡＫ−０００９、ＴＡＫ−０００７、ＴＡＫ−０００８、ＴＡＫ−０００３、ＴＡＫ−０００４、３−チオキソ−６−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、６−シクロプロピル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、及び６−（ヒドロキシメチル）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンからなる群より選択される、条項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
【０１６９】
条項１９．前記液体媒体が不在である、条項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【０１７０】
条項２０．前記液体媒体が存在する、条項１〜１８のいずれかに記載の組成物。
【０１７１】
条項２１．式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴではない、条項２０に記載の組成物。
【０１７２】
条項２２．前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、条項２１に記載の組成物。
【０１７３】
条項２３．式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴであり、前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、条項２０に記載の組成物。
【０１７４】
条項２４．ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させるための方法であって、ベンゾチアゾールルシフェリンアナログまたはその塩を、有効量の式（Ｉ）の化合物またはその互変異性体に接触させることを含み、前記接触により、前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログまたはその塩が分解に対し安定化され、
式（Ｉ）の前記化合物が
2020529442.tif 000056
である、前記方法
（式中、
Ｒ1は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、カルボン酸、エステル、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、ヒドロキシル、またはオキソであり、
Ｒ2は、水素、ＮＲaＲb、置換されていてもよいイミン、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールであり、
Ｒa及びＲbは、各出現において各々独立的に、水素、置換されていてもよいアルキル、または置換されていてもよいアリールである）。
【０１７５】
条項２５．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが式（ＩＩ’）の化合物である、条項２４に記載の方法
2020529442.tif 000057
（式中、
2020529442.tif 000058
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による前記酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換し、
Ｗ1及びＷ2は、各々独立的に水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、もしくはアリールアルキルであり、またはＷ1及びＷ2は、自らが付着している炭素と共に、Ｃ3-Ｃ8シクロアルキルまたは４〜８員の複素環を形成し、前記シクロアルキル及び複素環は、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい）。
【０１７６】
条項２６．Ｗ1及びＷ2が各々独立的にＣ1−Ｃ4アルキルである、条項２４または２５に記載の方法。
【０１７７】
条項２７．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが式（ＩＩ）の化合物である、条項２４または２５に記載の方法
2020529442.tif 000059
（式中、
2020529442.tif 000060
Ｒ1’は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＨ、−Ｃ2−Ｃ4アルキレン−ＯＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ3−Ｃ7シクロアルキル、アリール、ベンジルもしくは置換ベンジル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、または−（ＣＨ2）q−Ｐ（Ｐｈ）3（ｑは、１、２、３、４、５、及び６から選択される整数である）であり、
Ｒ2’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ3’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ4’は、−ＸＧまたは−ＸＧ1であり、
Ｒ5’は、水素、ハロゲン、メチル、またはトリフルオロメチルであり、
Ｒ10’は、各出現において独立的に、ハロ、−ＳＯ3Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）であり、
Ｒ11’は、−ＯＨ、−Ｏ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＮＨ2、−ＮＨ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）（Ｃ1−Ｃ10アルキル）、−ＯＧ1、−ＮＨＧ1、または−Ｎ（Ｃ1−Ｃ10アルキル）Ｇ1であり、
ｎは０〜５であり、
Ｘは−Ｏ−または−Ｎ（Ｇ）−であり、
Ｇは、各出現において独立的に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキルであり、またはＲ3’もしくはＲ5’のうちの１つと共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、５〜８員の単環式複素環式環を形成し、あるいは、２個のＧは、自らが付着している窒素原子と共に、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4ハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、及び−Ｏ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）からなる群より独立的に選択される１〜４個の置換基で置換されていてもよい、４員〜８員の単環式複素環式環を形成し、
Ｇ1は酵素基質を含み、酵素による前記酵素基質の生体内変換がＧ1をＨに転換する）。
【０１７８】
条項２８．式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が０．１ｍＭより大きい、条項２４〜２７のいずれかに記載の方法。
【０１７９】
条項２９．式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が１ｍＭより大きい、条項２８に記載の方法。
【０１８０】
条項３０．式（Ｉ）の前記化合物が、ＡＴＴ、ＡＴＣＡ、３−（４−アミノ−５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、テトラヒドロ−２−メチル−３−チオキソ−１，２，４−トリアジン−５，６−ジオン、４−（（２−フリルメチレン）アミノ）−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、６−ベンジル−３−スルファニル−１，２，４−トリアジン−５−オール、４−アミノ−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、３−（５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、（Ｅ）−６−メチル−４−（（チオフェン−２−イルメチレン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−６−メチル−４−（（３−ニトロベンジリデン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−４−（（４−（ジエチルアミノ）ベンジリデン）アミノ）−６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、ＡＴＣＡエチルエステル、ＴＡＫ−００１４、ＴＡＫ−０００２、ＴＡＫ−００２１、ＴＡＫ−００２０、ＴＡＫ−００１８、ＴＡＫ−０００９、ＴＡＫ−０００７、ＴＡＫ−０００８、ＴＡＫ−０００３、ＴＡＫ−０００４、３−チオキソ−６−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、６−シクロプロピル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、及び６−（ヒドロキシメチル）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンからなる群より選択される、条項２４〜２９のいずれかに記載の方法。
【０１８１】
条項３１．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の存在下で、分解に対し安定化される、条項２４〜３０のいずれかに記載の方法。
【０１８２】
条項３２．前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログが、光の不在下で、分解に対し安定化される、条項２４〜３０のいずれかに記載の方法。
【０１８３】
条項３３．前記ルシフェリンアナログが、−８０℃〜６０℃の温度にて、分解に対し安定化される、条項２４〜３２のいずれかに記載の方法。
【０１８４】
条項３４．Ｒ1’がＨであり、Ｒ2’がＨであり、Ｒ3’がＨであり、Ｒ5’がＨである、条項２５〜３３のいずれかに記載の方法。
【０１８５】
条項３５．Ｒ4’が−ＯＨまたは−ＮＨ2である、条項２５〜３４のいずれかに記載の方法。
【０１８６】
条項３６．前記接触させることが、前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログと式（Ｉ）の前記化合物との固体混合物中で生じる、条項２４〜３５のいずれかに記載の方法。
【０１８７】
条項３７．前記接触させることが液体媒体中で生じる、条項２４〜３５のいずれかに記載の方法。
【０１８８】
条項３８．式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴではない、条項３７に記載の方法。
【０１８９】
条項３９．前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、条項３８に記載の方法。
【０１９０】
条項４０．式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴであり、前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、条項３７に記載の方法。
【０１９１】
条項４１．条項１〜２３のいずれかに記載の組成物を単一の容器内に含むキットであって、式（Ｉ）の前記化合物が前記ベンゾチアゾールルシフェリンアナログを安定化させる、前記キット。
【０１９２】
条項４２．Ｒ1’がＨであり、Ｒ2’がＨであり、Ｒ3’がＨであり、Ｒ5’がＨである、条項４１に記載のキット。
【０１９３】
条項４３．Ｒ4’が−ＯＨまたは−ＮＨ2である、条項４１または４２に記載のキット。
【０１９４】
条項４４．式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が０．１ｍＭより大きい、条項４１〜４３のいずれかに記載のキット。
【０１９５】
条項４５．式（Ｉ）の前記化合物の前記有効量が１ｍＭより大きい、条項４４に記載のキット。
【０１９６】
条項４６．式（Ｉ）の前記化合物が、ＡＴＴ、ＡＴＣＡ、３−（４−アミノ−５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、テトラヒドロ−２−メチル−３−チオキソ−１，２，４−トリアジン−５，６−ジオン、４−（（２−フリルメチレン）アミノ）−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、６−ベンジル−３−スルファニル−１，２，４−トリアジン−５−オール、４−アミノ−３−メルカプト−６−メチル−１，２，４−トリアジン−５（４Ｈ）−オン、３−（５−オキソ−３−チオキソ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，２，４−トリアジン−６−イル）プロパン酸、（Ｅ）−６−メチル−４−（（チオフェン−２−イルメチレン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−６−メチル−４−（（３−ニトロベンジリデン）アミノ）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、（Ｅ）−４−（（４−（ジエチルアミノ）ベンジリデン）アミノ）−６−メチル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、ＡＴＣＡエチルエステル、ＴＡＫ−００１４、ＴＡＫ−０００２、ＴＡＫ−００２１、ＴＡＫ−００２０、ＴＡＫ−００１８、ＴＡＫ−０００９、ＴＡＫ−０００７、ＴＡＫ−０００８、ＴＡＫ−０００３、ＴＡＫ−０００４、３−チオキソ−６−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、６−シクロプロピル−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オン、及び６−（ヒドロキシメチル）−３−チオキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，４−トリアジン−５（２Ｈ）−オンからなる群より選択される、条項４１〜４５のいずれかに記載のキット。
【０１９７】
条項４７．前記液体媒体が不在である、条項４１〜４６のいずれかに記載のキット。
【０１９８】
条項４８．前記液体媒体が存在する、条項４１〜４６のいずれかに記載のキット。
【０１９９】
条項４９．式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴではない、条項４８に記載のキット。
【０２００】
条項５０．前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、条項４９に記載のキット。
【０２０１】
条項５１．式（Ｉ）の前記化合物がＡＴＴであり、前記液体媒体が、アルコール、プロピレングリコール、アセトニトリル、グリセロール、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される有機溶媒を含む、条項４８に記載のキット。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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