(57)【要約】  本明細書に記載されるのは、キメラ受容体である。キメラ受容体は、細胞質ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞外ドメインと、を含む。実施形態において、細胞質ドメインは、活性化された際にマクロファージを分極する受容体の細胞質部分を含む。更なる実施形態において、この細胞質部分を含む野生型タンパク質は、キメラ受容体の細胞外ドメインを含まない。実施形態において、キメラ受容体の細胞外ドメインに対するリガンドの結合が、キメラ受容体の細胞内部分を活性化する。キメラ受容体の細胞内部分の活性化は、マクロファージをＭ１又はＭ２マクロファージに分極し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ受容体であって、
細胞質ドメインと、
膜貫通ドメインと、
細胞外ドメインと、を含み、
前記細胞質ドメインが、活性化された際にマクロファージを分極する受容体の細胞質部分を含み、
前記細胞質部分を含む野生型タンパク質が、前記細胞外ドメインを含まない、キメラ受容体。
【請求項２】
前記細胞外ドメインとのリガンドの結合が、前記細胞質部分を活性化する、請求項１に記載のキメラ受容体。
【請求項３】
前記細胞質部分が活性化され、それがマクロファージをＭ１マクロファージに分極する、請求項１に記載のキメラ受容体。
【請求項４】
前記細胞質部分が活性化され、それがマクロファージをＭ２マクロファージに分極する、請求項１に記載のキメラ受容体。
【請求項５】
前記細胞質部分が、ｔｏｌｌ様受容体、ミエロイド系分化一次応答タンパク質（ＭＹＤ８８）、ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）、ｔｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）、ミエリン及びリンパ球タンパク質（ＭＡＬ）、インターロイキン−１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩＩ−Ａ（ＦＣＧＲ３Ａ）、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ−ａ（ＦＣＧＲ２Ａ）、並びに高親和性免疫グロブリンイプシロン受容体サブユニットガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）由来の細胞質ドメインを含む、請求項１に記載のキメラ受容体。
【請求項６】
前記リガンドが、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン−１６（ＭＵＣ−１６）、上皮成長因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソセリン、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、及びＣＤ１７１からなる群から選択される、請求項２に記載のキメラ受容体。
【請求項７】
前記細胞外ドメインが、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン−１６（ＭＵＣ−１６）、上皮成長因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソセリン、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、及びＣＤ１７１からなる群から選択されるリガンドに特異的な抗体又はその断片である、請求項１に記載のキメラ受容体。
【請求項８】
前記抗体又はその断片が、ＳｃＦｖ断片である、請求項７に記載のキメラ受容体。
【請求項９】
前記キメラ受容体が、前記膜貫通ドメインと前記細胞外ドメインとの間にリンカーを更に含む、請求項１に記載のキメラ受容体。
【請求項１０】
前記リンカーが、ＧＳリンカーである、請求項９に記載のキメラ受容体。
【請求項１１】
前記キメラ受容体が、前記膜貫通ドメインと前記細胞外ドメインとの間にヒンジ領域を更に含む、請求項１に記載のキメラ受容体。
【請求項１２】
前記キメラ受容体が、前記膜貫通ドメインと前記リンカーとの間にヒンジ領域を更に含む、請求項９に記載のキメラ受容体。
【請求項１３】
請求項１に記載のキメラ受容体をコードするポリヌクレオチドを含む、核酸。
【請求項１４】
前記ポリヌクレオチドと作動可能に連結されたプロモーターを更に含む、請求項１３に記載の核酸。
【請求項１５】
請求項１３に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項１６】
前記ベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項１５に記載のベクター。
【請求項１７】
請求項１に記載のキメラ受容体を含む、細胞。
【請求項１８】
前記細胞が、単球又はマクロファージである、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１９】
請求項１３に記載の核酸を含む、細胞。
【請求項２０】
前記細胞が、単球又はマクロファージである、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２１】
マクロファージを分極する方法であって、
請求項１に記載のキメラ受容体を含むマクロファージを、前記キメラ受容体の前記細胞外ドメインのリガンドと接触させることと、
前記リガンドを、前記キメラ受容体の前記細胞外ドメインと結合させることと、を含み、
前記キメラ受容体の前記細胞外ドメインに対する前記リガンドの前記結合が、前記細胞質部分を活性化させ、
前記細胞質部分の活性化が、前記マクロファージを分極する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、概してバイオテクノロジーに関する。より詳細には、本開示は、キメラ抗原受容体、キメラ抗原受容体をコードする核酸、キメラ抗原受容体及び／又はコードする核酸を保有するマクロファージ、並びに関連する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんは、制御されていない細胞増殖及び死、ゲノムの不安定性及び変異、腫瘍促進炎症、血管形成の誘導、免疫系の回避、代謝経路の脱調節、腫瘍細胞複製、並びに転移性組織浸潤を伴う疾患群からなる［１］。がんは、心臓疾患の次に米国において死亡の第２の原因である［２］。１６０万を超える新しいがんの症例が、毎年診断されると見込まれており、５８０，０００人を超えるアメリカ人が死亡すると予測され（１日あたり約１６００人のがんによる死亡）、アメリカの全死者数の４人に１人近くを占めている［２、３］。
【０００３】
免疫系は、がんの発達及び進行において重要な役割を果たす。腫瘍部位への免疫細胞浸潤は、悪性疾患の進行及び転移に不利に影響できる［４、５］。腫瘍部位へのマクロファージの浸潤は、特定の乳癌症例において腫瘍量の５０％超を占めることが示されており、マクロファージが腫瘍の進行に重要な役割を有することを示唆している［６〜８］。
【０００４】
マクロファージは、ミエロイド系由来の細胞であり、自然免疫系に属する。それらは、組織内に移行する血液単球由来である。それらの主要な機能の１つは、微生物を貪食し、細胞残屑を取り除くことである。これらは更に、炎症の開始及び敞消散の両方において重要な役割を果たす［９、１０］。そのうえ、マクロファージは、周囲の微小環境からそれらが受ける刺激の種類に応じて、炎症誘発から抗炎症までの範囲の異なる応答を表示することができる［１１］。極端なマクロファージ応答と相関する２つの主要なマクロファージ表現型である、Ｍ１及びＭ２が提案されている。
【０００５】
Ｍ１炎症誘発性マクロファージは、リポ多糖（ＬＰＳ）、ＩＦＮγ、ＩＬ−１β、ＴＮＦα、及びＴｏｌｌ様受容体係合などの特定の分子と接触すると活性化される。Ｍ１マクロファージは、感染症と戦うために展開される免疫系の強力なアームを構成する。これらは、病原体の直接的（病原体型認識受容体）又は間接的（Ｆｃ受容体、補体受容体）認識のいずれかであり得る。これらはまた、病原体の殺傷を助けるための手段として、反応性酸素種（ＲＯＳ）を生成する能力も備えている。更に、Ｍ１マクロファージは、他の種類の免疫細胞を誘引し、免疫応答を統合／編成する、炎症促進性サイトカイン及びケモカインを分泌する。Ｍ１活性化は、ＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦａ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＬＰＳ、及び他のｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンドによって誘導される。
【０００６】
対照的に、代替活性化マクロファージとしても知られるＭ２抗炎症マクロファージは、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、及びＩＬ−１０などの抗炎症分子によって活性化される［１２、１３］。Ｍ２マクロファージは、炎症の部位への調節性Ｔ細胞の補充を可能にする免疫調節、組織修復、及び血管形成の特性を示す。Ｍ２マクロファージは、均一な集団を構成せず、多くの場合に、Ｍ２ａ、Ｍ２ｂ、及びＭ２ｃカテゴリに更に細分化される。３つのサブ集団の全ての共通要素は、ＩＬ−１２の産生が低いことを伴う、ＩＬ−１０の産生が高いことである。これらの識別特性のうちの１つは、Ｌ−アルギニンを枯渇させ、それによってＴ細胞応答を抑制し、その基質のｉＮＯＳを欠乏させる酵素アルギニン１の産生である。
【０００７】
マクロファージの分極化の生体内分子機構は、細胞微小環境においてマクロファージが経験する様々なシグナルのために、十分に特徴付けられていない［１０、１４］。近年では、個体発生、妊娠、並びにアレルギー、慢性炎症、及びがんのような病理学的状態などの生理学的条件下での生体内でのマクロファージの分極の特定において進展がなされている。しかしながら、生体内でのマクロファージの分極は可塑性であり、マクロファージはサイトカインの助けを伴い、表現型のいずれかに前後に分極させることができることがわかっている［１５、１６］。インターフェロンγ（ＩＦＮγ）及びＩＬ−４は、マクロファージをＭ１及びＭ２表現型のそれぞれに分極できる、２つのサイトカインである［１５］。
【０００８】
マクロファージの存在は、腫瘍の進行及び増殖に重要であり、予後の決定において密接な関係を有する［１７、１８］。マクロファージは炎症性及び抗炎症性の両方を示すことができるため、腫瘍の進行及び転移におけるそれらの分極及び機能を理解することが重要である。
【０００９】
マクロファージの分極
腫瘍微小環境は、マクロファージの分極に影響を及ばすことができる。分極の過程は、ＩＬ−１０、グルココルチコイドホルモン、アポトーシス細胞、及び自然免疫細胞機能を妨げることができる免疫複合体の不利な環境により、多様及び複雑であり得る［１１、１９］。分極の機構は、依然として明確ではないが、転写調節を伴うことは知られている。例えば、ＬＰＳ又はＩＦＮγに曝露されたマクロファージは、Ｍ１表現型に向かって分極するが、ＩＬ−４又はＩＬ−１３に曝露されたマクロファージは、Ｍ２表現型に向かって分極する。ＬＰＳ又はＩＦＮγは、Ｔｒｉｆ及びＭｙＤ８８経路を誘導するマクロファージの表面上のＴｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）と相互作用し、転写因子ＩＲＦ３、ＡＰ−１、及びＮＦκＢの活性化を誘導し、したがって、炎症性Ｍ１マクロファージ応答に必要なＴＮＦ遺伝子、インターフェロン遺伝子、ＣＸＣＬ１０、ＮＯＳ２、ＩＬ−１２などを活性化させることができる［２０］。同様に、ＩＬ−４及びＩＬ−１３は、ＩＬ−４Ｒと結合し、抗炎症応答（Ｍ２応答）に関連する遺伝子であるＣＣＬ１７、ＡＲＧ１、ＩＲＦ４、ＩＬ−１０、ＳＯＣＳ３などの発現を調節するＪａｋ／Ｓｔａｔ６経路を活性化する。
【００１０】
マクロファージの分極の更なる機構としては、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）のマイクロマネジメントが含まれる。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡの分解速度に影響を及ぼすため、転写後に遺伝子発現を調節する長さ２２ヌクレオチドの小分子非コードＲＮＡである。いくつかのｍｉＲＮＡは、分極されたマクロファージ、特にｍｉＲＮＡ−１５５、ｍｉＲＮＡ−１２５、ｍｉＲＮＡ−３７８（Ｍ１分極）、及びｍｉＲＮＡ  ｌｅｔ−７ｃ、ｍｉＲＮＡ−９、ｍｉＲＮＡ−２１、ｍｉＲＮＡ−１４６、ｍｉＲＮＡ１４７、ｍｉＲＮＡ−１８７（Ｍ２分極）において高度に発現されることが示されている［２１］。
【００１１】
マクロファージの分極は複雑な過程であり、マクロファージの挙動であった、微小環境刺激に応じて異なる応答を誘発した。したがって、マクロファージの分極は、Ｍ１及びＭ２表現型がスペクトルの極値である連続的な活性化状態によってより良好に表される。近年では、マクロファージ活性化及びマクロファージの分極の定義／記述については、多くの議論がなされてきた。Ｍｕｒｒａｙらにより出版された最近の論文では、マクロファージ活性化、分極、活性化因子、及びマーカーの総意の定義／記述について考慮されるべき一連の基準を記載する。この刊行物は、活性化／分極されたマクロファージの定義及び特徴付けに非常に必要であった［２２］。
【００１２】
Ｍ１表現型
Ｍ１炎症誘発性マクロファージ又は古典的に活性化されたマクロファージは、活動的で貪食性が高く、大量の反応性酸素及び窒素種を生成し、それによってＴｈ１応答を促進する［１１］。Ｍ１マクロファージは、２つの重要な炎症性サイトカインであるＩＬ−１２及びＩＬ−２３を高レベルで分泌する。ＩＬ−１２は、炎症に寄与する大量のＩＬ−１７を分泌する、Ｔｈ１７細胞の活性化及びクローン増殖を誘導する［２３］。これらの特徴により、Ｍ１マクロファージは、転移を制御し、腫瘍成長を抑制し、微生物感染を制御することができる［２４］。更に、Ｍ１マクロファージの腫瘍部位への浸潤及び補充は、固形腫瘍を有する患者におけるより良好な予後及びより高い全体生存率と相関する［１７、１８、２５〜２８］。
【００１３】
Ｍ１表現型へのマクロファージの分極は、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、及びＬＰＳ、並びに転写因子、及びｍｉＲＮＡなどの炎症シグナルによって生体外で調節される［２９、３０］。古典的に活性化されたマクロファージは、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０としても知られる）、ＩＦＮ調節因子１、及びサイトカインシグナル伝達１の抑制因子を標的とするＳＴＡＴ１転写因子の誘導を開始する［３１］。サイトカインシグナル伝達１タンパク質は、サイトカイン受容体の下流で機能し、負のフィードバックループに加わり、サイトカインシグナル伝達を減衰する。腫瘍微小環境において、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達は、Ｍ１マクロファージの分極において重要な役割を果たし、それにより、転写因子ＲＢＰ−Ｊが古典的な活性化を調節することを可能にする。Ｎｏｔｃｈシグナル伝達において不十分なマクロファージは、他の外因性誘導因子にかかわらず、Ｍ２表現型を発現する［３２］。１つの重要なｍｉＲＮＡであるｍｉＲＮＡ−１５５は、マクロファージがＭ２からＭ１に移行する際に上方制御され、ｍｉＲＮＡ−１５５を過剰発現しているＭ１マクロファージは一般的により活動的であり、腫瘍の縮小に関連している［３３］。更に、ｍｉＲＮＡ−３４２−５ｐは、マウスにおけるＡｋｔ１を標的とすることによって、マクロファージにおけるより高い炎症応答を助長することが見出されている。このｍｉＲＮＡは、Ｎｏｓ２及びＩＬ−６の上方調節を更に促進し、これらの両方がマクロファージの炎症シグナルとして作用する［３４］。ＭｉＲＮＡ−１２５及びｍｉＲＮＡ−３７８などの他のｍｉＲＮＡは、マクロファージ（Ｍ１）の古典的な活性化経路に関与することが更に示されている［３５］。
【００１４】
古典的に活性化されたマクロファージは、その存在が通常、良好な予後を示すため、がん細胞の認識及び破壊において重要な役割を果たすと考えられる。認識後に、悪性細胞は、接触依存的貪食作用及び細胞傷害（すなわち、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン放出）を含むいくつかの機構を介して、Ｍ１マクロファージによって破壊され得る［２４］。しかしながら、腫瘍微小環境又は組織常在性細胞などの環境シグナルは、Ｍ１マクロファージをＭ２マクロファージに分極させることができる。マウスマクロファージの生体内研究は、マクロファージがサイトカイン及び表面マーカー発現において可塑性であり、がんの存在下でマクロファージがＭ１表現型に再分極することは、免疫系が腫瘍を拒絶するのを助けることができることを示している［１９］。
【００１５】
Ｍ２表現型
Ｍ２マクロファージは、抗炎症性であり、血管形成及び組織修復の過程において助成する。それらはスカベンジャー受容体を発現し、大量のＩＬ−１０及び他の抗炎症性サイトカインを産生する［３３、３６］。Ｍ２マクロファージによるＩＬ−１０の発現は、Ｔｈ２応答を促進する。結果として、Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−３及びＩＬ−４の産生を上方制御する。ＩＬ−３は、ミエロイド系（顆粒球、単球、及び樹状細胞）における全ての細胞の増殖を、他のサイトカイン、例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、及びＩＬ−６と併せて刺激する。ＩＬ−４は、細胞外マトリックスの産生に寄与するため、治癒の過程において重要なサイトカインである［２３］。Ｍ２マクロファージは、血管が悪性細胞に栄養を与えることを可能にし、したがって増殖を促進することによって腫瘍の進行を助け得る機能を示す。固形腫瘍の大部分におけるマクロファージ（Ｍ２と考えられる）の存在は、治療の成功及びより長い生存率と負に相関する［３７］。更に、Ｍ２マクロファージの存在は、乳癌における転移能に連鎖されている。Ｌｉｎ及び同僚らは、マウスにおける乳房腫瘍部位へのマクロファージの早期の補充が血管形成及び悪性腫瘍の発生率を増加することが見出された［３８］。腫瘍微小環境は、マクロファージがＭ２表現型を維持するのを助けると考えられる［２３、３９］。アディポネクチン及びＩＬ−１０などの腫瘍微小環境中に存在する抗炎症シグナルは、Ｍ２応答を増強できる［４１］。
【００１６】
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）
腫瘍微小環境に曝露された細胞は、異なる挙動である。例えば、固形腫瘍の周辺部に見られる腫瘍関連マクロファージは、腫瘍の増殖及び転移を促進するのを助け、Ｍ２様表現型を有すると考えられる［４２］。腫瘍関連マクロファージは、組織に存在するマクロファージ、又は骨髄由来の補充されたマクロファージ（単球からマクロファージに分化して組織に移行するマクロファージ）のいずれかであり得る。Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏによる研究では、脾臓中のＴＡＭ前駆体の多数が腫瘍間質に移行し、更にＴＡＭの貯蔵所としてこの器官を示唆することが見出された［４３］。脾臓に見られるＴＡＭ前駆体は、ＣＣＲ２ケモカイン受容体を通して移動を開始することが見出された［４３］。最近の研究では、がん細胞によるＣＳＦ−１産生が生存率の低下を予測し、全体的な予後不良を示す、マクロファージを腫瘍周辺に誘引する主要な因子としてＣＳＦ−１が見出されている［４４〜４６］。ＴＮＦ−α及びＩＬ−６などの他のサイトカインもまた、マクロファージの腫瘍周辺部への蓄積／補充に連鎖されている［４５］。
【００１７】
腫瘍境界周囲に補充されるマクロファージは、腫瘍内で活性化される「血管形成スイッチ」によって調節されると考えられる。血管形成スイッチは、腫瘍が、腫瘍が転移することを潜在的に可能にする血管の高密度ネットワークを発達させる過程として定義され、悪性転移に必要である。乳癌マウスモデルにおいて、完全な血管形成スイッチにマクロファージの存在が必要であることが観察された。腫瘍の周囲のマクロファージの成熟、移動、蓄積が遅延された場合に、血管形成スイッチも更に遅延され、血管形成スイッチはマクロファージの非存在下では発生せず、マクロファージの存在は悪性腫瘍の進行に必要であることが示唆された［４７］。更に、腫瘍間質細胞は、マクロファージを腫瘍周囲に補充するであろうＣＳＦ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、及び胎盤成長因子などのケモカインを産生する。これらのケモカインは、マクロファージが血管形成スイッチを活性化する環境を提供し、マクロファージは、高レベルのＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＡＲＧ−１、並びに低レベルのＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、及びＩＬ−６を産生するであろう。これらのサイトカインの発現レベルは、マクロファージが免疫排除を調節することを示唆する。マクロファージは、低酸素腫瘍環境に誘引され、血管新生に関連する遺伝子の転写を調節する低酸素誘導因子−１α（ＨＩＦ−１α）、及びＨＩＦ−２αを産生することによって応答するであろうことに留意することが重要である。血管形成スイッチの間、マクロファージは更に、血管の成熟及び血管透過性を促進するであろうＶＥＧＦ（ＮＦ−κＢ経路によって刺激される）を分泌することができる［４８］。
【００１８】
腫瘍関連マクロファージは、ＩｋＢキナーゼβ及びＮＦ−ｋＢシグナル伝達カスケードを介して媒介されるＩＬ−１Ｒ、及びＭｙＤ８８などの悪性細胞からの分極シグナルを受信することによって、それらのＭ２様表現型を維持することができると考えられる。ＴＡＭにおけるＮＦ−ｋＢの阻害は、古典的な活性化を促進する［４０］。更に、別の研究では、ｐ５０  ＮＦ−ｋＢサブユニットがＭ１マクロファージの抑制に関与し、炎症の低減が腫瘍成長を促進したことを示唆した。Ｓａｃｃａｎｉらにより生成されたｐ５０  ＮＦ−κＢノックアウトマウスは、ｐ５０  ＮＦ−ｋＢノックアウトでＭ１の活動性が回復し、腫瘍の生存率を減少させたことを示唆した［４９］。
【００１９】
腫瘍塊は多数のＭ２様マクロファージを含有するため、ＴＡＭは、がん治療の標的として使用されることができる。ＴＡＭの数を低減するか、又はＭ１表現型に向かって分極することは、がん細胞を破壊し、腫瘍の増殖を減らすのを助けることができる［５０〜５２］。Ｌｕｏ及び同僚らは、潜在的な腫瘍標的と考えられるＴＡＭにおいて上方制御されたシステインプロテアーゼ、及びストレスタンパク質であるレグメインに対するワクチンを使用した［５２］。レグメインに対するワクチンがマウスに投与された場合に、血管形成を制御する遺伝子が下方制御され、腫瘍の増殖が停止された［５２］。
【００２０】
代謝及び活性化経路
腫瘍細胞中に存在する代謝性異常は、がんを産生する同一の遺伝子変異によって制御される［５３］。これらの代謝性異常の結果として、がん細胞は、マクロファージの分極を改変し、腫瘍の増殖を促進することができるシグナルを生成できる［５４、５５］。
【００２１】
Ｍ１及びＭ２マクロファージは、それらの異なる挙動を反映する別個の代謝パターンを論証する［５６］。Ｍ１表現型は解糖を増加させ、グルコース代謝を酸化的ペントースリン酸経路に向けて傾斜し、これにより、酸素消費量が減少し、その結果、大量のラジカル酸素及び窒素種、並びにＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、ＩＬ−６などの炎症性サイトカインが産生される［５６、５７］。ペントースリン酸経路への流動を低減させ、一方で細胞全体の酸化還元電位を増加させる、Ｍ２表現型は脂肪酸の取り込み及び酸化を増加させ、その結果、スカベンジャー受容体、並びにＩＬ−１０及びＴＧＦ−βなどの免疫調節性サイトカインを上方制御する［５６］。
【００２２】
複数の代謝経路は、マクロファージの分極において重要な役割を果たす。Ａｋｔ１及びＡｋｔ２などのプロテインキナーゼは、がん細胞の生存、増殖、中間代謝の使用を可能にすることによってマクロファージの分極を変更する［５８］。他のプロテインキナーゼは、解糖を増加させ、酸素消費を低減させることによって、グルコース代謝を通してマクロファージの分極を誘導することができる［５７、５９］。Ｓｈｕ及び同僚らは、最初に、ＰＥＴスキャン及びグルコース類似体を使用して、生体内でマクロファージ代謝及び免疫応答を可視化した［６０］。
【００２３】
Ｌ−アルギニン代謝は、マクロファージにおけるサイトカイン発現に重要な個別的な転換を示し、ＴＡＭ腫瘍細胞相互作用を変更する別個の代謝経路を例示する［６１］。古典的に活性化された（Ｍ１）マクロファージは、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）を支持する。ｉＮＯＳ経路は、細胞傷害性一酸化窒素（ＮＯ）を産生し、その結果、抗腫瘍挙動を示す。あるいは、活性化された（Ｍ２）マクロファージは、アルギナーゼ経路を支持し、進行性腫瘍細胞増殖に寄与するウレウム及びｌ−オルニチンを産生することが示されている［６１、６２］。
【００２４】
代謝経路の直接的な操作は、マクロファージの分極を変更できる。グルコース代謝において役割を果たす炭水化物キナーゼ様タンパク質（ＣＡＲＫＬ）タンパク質は、マクロファージサイトカイン識別特性を変更するために使用されている［５６、５７］。ＣＡＲＫＬがＲＮＡｉによってノックダウンされると、マクロファージは、Ｍ１様代謝経路（解糖に向かって傾斜され、酸素消費を低減させる代謝）を採用する傾向がある。ＣＡＲＫＬが過剰発現されると、マクロファージは、Ｍ２様代謝（解糖流動の減少、及びより多くの酸素消費）を採用する［５６］。マクロファージがＬＰＳ／ＴＬＲ４係合を介してＭ１様の代謝状態を採用すると、ＣＡＲＫＬレベルが低下し、ＮＦκＢ経路によって制御される遺伝子が活性化され（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、及びＩＬ−６）、ＮＡＤＨ：ＮＡＤ＋及びＧＳＨ：ＧＳＳＳＧ複合体の濃度の増加により、細胞の酸化還元電位が増加する。Ｍ２様代謝状態の間、マクロファージは、ＣＡＲＫＬ及びＳＴＡＴ６／ＩＬ−４（ＩＬ−１０及びＴＧＦ−β）によって調節される遺伝子を上方制御する。
【００２５】
肥満は、マクロファージの分極に更に影響を及ぼすことができる。肥満は、慢性炎症の状態、Ｍ２応答に向かってマクロファージを駆動するＮＫＴ細胞を活性化するためにＩＬ４／ＳＴＡＴ６経路を駆動する環境と関連付けられる。後期食事性肥満中に、マクロファージは脂肪組織に移行し、免疫細胞が脂肪組織のＴＨ１又はＴＨ２サイトカイン発現のレベルを変更し、Ｍ２表現型の傾向、場合によってはインスリン感受性の増加を引き起こす［６３］。
【００２６】
ＴＡＭＳにおける代謝経路の標的化によるＭ１表現型傾向は、腫瘍の増殖及び転移を減少する代替的な手段を提供し得る。
【００２７】
がんに対するマクロファージ免疫療法のアプローチ
がん免疫療法の役割は、免疫系を刺激してがん細胞を認識、拒絶、及び破壊することである。単球／マクロファージを用いたがん免疫療法は、マクロファージを炎症促進応答（Ｍ１）に向かって分極することを目的とし、したがって、マクロファージ及び他の免疫細胞が腫瘍を破壊することを可能にする。多数のサイトカイン及び細菌化合物は、生体外でこれを達成できるが、典型的には、副反応が生体内で非常に深刻である。重要なのは、患者の副反応が最小限又は簡単に管理される化合物を見つけることである。単球／マクロファージを使用する免疫療法は過去数十年に使用されており、新しいアプローチは毎年開発されている［６４、６５］。早期免疫療法は、より良好ながん療法のための良好な基盤が確立されており、免疫療法を用いて治療された患者における生存率が増加された［６６］。
【００２８】
がん免疫療法に対するいくつかのアプローチとしては、活性化マクロファージ及び他の免疫細胞を腫瘍部位に補充するサイトカイン又はケモカインの使用が含まれ、これにより、腫瘍部位の認識及び標的の破壊を可能にする［６７、６８］。ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βは、細胞分化及びアポトーシスを誘導することによって腫瘍の進行を阻害することが示されている［６９］。更に、ＩＦＮ治療は抗増殖性であり、細胞周期におけるＳ期の期間を増加させることができる［７０、７１］。Ｚｈａｎｇ及び同僚らは、ヒト前立腺癌細胞を標的として、ＩＦＮ−β遺伝子療法を使用してヌードマウスにおける研究を実施した。それらの結果は、アデノウイルス送達ＩＦＮ−β遺伝子療法がマクロファージを伴い、増殖及び転移を抑制するのを助けることを示す［７２］。
【００２９】
マクロファージ阻害因子（ＭＩＦ）は、がん免疫療法において使用されることができる別のサイトカインである。通常、ＭＩＦは、固形腫瘍において見られ、予後不良を示す。ＭＩＦは、活動的なマクロファージ機能を阻害し、Ｍ２表現型に向かってマクロファージを駆動し、これは腫瘍の増殖及び進行を補助することができる。Ｓｉｍｐｓｏｎ、Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ、及びＣｒｏｓｓ（２０１２）は、ＭＩＦが、マクロファージ前駆体であるミエロイド系細胞の、Ｍ２表現型を発現するミエロイド系細胞の抑制集団への分化を誘導することを見出した［７３］。ＭＩＦを標的化することにより、マクロファージのこの抑制集団を枯渇させ、増殖を阻害し、したがって腫瘍の増殖及び転移を制御することができた［７３］。
【００３０】
ケモカイン受容体２型、ＣＣＲ２は、炎症部位への単球の補充にとって重要であり、腫瘍部位へのマクロファージの補充、血管形成、及び転移を防止する標的として示されている。Ｓａｎｆｏｒｄ及び同僚ら（２０１３）は、膵臓マウスモデルにおいて新規ＣＣＲ２阻害剤（ＰＦ−０４１３６３０９）を研究し、ＣＣＲ２阻害剤が、単球／マクロファージの腫瘍部位への補充を枯渇させ、腫瘍の増殖及び転移を低減させ、抗腫瘍免疫を増加させたことを実証している［７４］。Ｓｃｈｍａｌｌらによる別の最近の研究は、１０種類の異なるヒト肺癌と共培養されたマクロファージがＣＣＲ２発現を上方制御したことが示された。更に、これらは、ＣＣＲ２アンタゴニストを用いて治療された肺マウスモデルにおいて腫瘍の増殖及び転移が減少したことを示した［７５］。
【００３１】
他の研究では、薬物を送達して腫瘍からＭ２マクロファージを枯渇させ、血管形成を停止させるリポソームが使用されている。高レベルのＩＬ−１βを発現するがん細胞は、より速く増殖し、生体内でより多くの血管形成を誘導する。Ｋｉｍｕｒａ及び同僚らは、ＩＬ−１βを発現する腫瘍細胞に曝露されたマクロファージが、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧ−Ａ）、ＩＬ−８、単球走化性タンパク質１などの高レベルの血管形成因子及びケモカインを産生し、腫瘍の増殖及び血管形成を促進することを見出した［７６］。マクロファージを枯渇させるためにクロドロネートリポソームを使用すると、それらは、より少ないＩＬ−１β産生腫瘍細胞が見られた。更に、がん細胞内でＮＦ−κＢ及びＡＰ−１転写因子を阻害することにより、腫瘍の増殖及び血管形成が減少されたことが見出された。これらの所見は、腫瘍部位を取り囲むマクロファージが、腫瘍の増殖及び血管形成の促進に関与し得ることを示唆し得る［７６］。
【００３２】
メチオニンエンケファリン（ＭＥＮＫ）などの化合物は、生体内及び生体外で抗腫瘍特性を有する。ＭＥＮＫは、ＣＤ２０６及びアルギナーゼ−１（Ｍ２マーカー）を下方制御し、一方でＣＤ６４、ＭＨＣ−ＩＩ、及び一酸化窒素の産生（Ｍ１マーカー）を上方制御することにより、Ｍ２マクロファージをＭ１マクロファージに分極する能力を有する。更に、ＭＥＮＫは、ＴＮＦ−αを上方制御し、ＩＬ−１０を下方制御できる［７７］。
【００３３】
最近の研究では、Ｍ２マクロファージの潜在的な阻害剤としてビスホスホネートに焦点が当てられている。ビスホスホネートは、骨吸収などの骨格の合併症を予防し、転移性乳癌の患者を治療するために一般的に使用される［７８］。ビスホスホネートは短期間で体内に留まると同時に、ビスホスホネートは、ヒドロキシアパタイトに対して高い親和性のために、破骨細胞、マクロファージと同じファミリーの細胞を標的とすることができる。ビスホスホネートが骨に結合すると、骨マトリックスは、エンドサイトーシスによってビスホスホネートを内部化する。一度細胞質に入ると、ビスホスホネートは、インテグリンのシグナル伝達とエンドソームの輸送を防ぐ事象であるタンパク質のプレニル化を阻害でき、それにより、細胞をアポトーシスさせる［６９］。最近まで、ビスホスホネートが腫瘍関連マクロファージを標的とし得るかは不明であったが、Ｊｕｎａｎｋａｒらによる最近の研究では、マクロファージが食作用及び貪食作用により窒素含有ビスホスホネート化合物を取り込み、事象は腫瘍周囲の上皮細胞では発生しないことが示されている［７９］。ビスホスホネートを使用して、強制的にＴＡＭをアポトーシスに進めると、血管形成及び転移を減少させることができた。
【００３４】
がん免疫療法への更なるアプローチとしては、免疫応答を誘発し得る生体材料の使用が含まれる。カチオン性ポリマーは、水に溶解されると反応するため、免疫療法において使用される。Ｃｈｅｎらは、ＰＥＩ、ポリリジン、カチオン性デキストラン、及びカチオン性ゼラチンを含むカチオン性ポリマーを使用して、強いＴｈ１免疫応答を生成する［７７］。これらは、ＣＤ４＋細胞の増殖、及びＭ１マクロファージの典型的なＩＬ−１２の分泌を誘導することが更にできた［７７］。Ｈｕａｎｇ及び同僚らは、ＴＬＲ４を標的化することにより、ＴＡＭが抗腫瘍応答を引き起こすように誘因する生体材料を使用した［８０］。この研究は、ＴＡＭがＭ１表現型に分極し、ＩＬ−１２を発現できたことを見出した。これらのカチオン性分子は、直接的な殺腫瘍性の活性を有し、マウスにおける腫瘍の減少を実証することが見出された［８０］。
【００３５】
ＴＬＲ４
Ｔｏｌｌ様受容体４は、ＴＬＲ４遺伝子によりコードされるヒトのタンパク質である。ＴＬＲ４は、グラム陰性細菌上でリポ多糖（ＬＰＳ）を検出し、したがって、危険の認識及び自然免疫系の活性化に根本的な役割を果たす（図７）。それは、マクロファージがＬＰＳによって誘導される際に、シグナル伝達を媒介するために、ＬＹ９６（ＭＤ−２）及びＣＤ１４と協働する。ＴＬＲ４の細胞質ドメインは、ＬＰＳの存在を検出する際に、Ｍ１マクロファージの活性化に関与する。これは、ＣＡＲが標的タンパク質に結合する際に、単球／マクロファージの活性化を誘導するために、ＭＯＴＯ−ＣＡＲ（すなわち、キメラ受容体）と結合される受容体の機能部分である。
【００３６】
アダプタータンパク質ＭｙＤ８８及びＴＩＲＡＰは、ＴＬＲ４  Ｔｏｌｌ／インターロイキン−１受容体（ＩＬ−１Ｒ）（ＴＩＲ）ドメインとの直接的な相互作用を介して、いくつかの及び場合によっては全ての経路の活性化に寄与する。しかしながら、経路の特定のサブセットの活性化に必要とされる追加のアダプターが存在し得、これは標的遺伝子の差異的な調節に寄与し得る。
【００３７】
チミジンキナーゼ
ヒトチミジンキナーゼ１（ＴＫ１）は、腫瘍での過剰発現の状況下において大部分が研究されている、周知のヌクレオチドサルベージ経路の酵素である。当初ＴＫ１は、がん患者の血清（ｓＴＫ）での発現により最初に一般化されたため、その診断及び予後の可能性は広範に研究されてきた。例えば、いくつかの研究では、多くの異なるがん患者におけるｓＴＫ１が、より進行した腫瘍を示す、より高いレベルのＴＫ１を有するステージ上様式で上昇されることが実証されている［８１］。
【００３８】
他の研究では、ＴＫ１の予後の可能性が調査されている。このような研究の１つは、原発性乳房腫瘍におけるＴＫ１レベルを使用して再発を予測することができることを実証する。他の興味深いＴＫ１の予後研究は、患者が治療に応答した際にｓＴＫ１レベルの有意な減少を示した一方で、ｓＴＫ１レベルは、それらの治療に応答したことを現わさない患者において上昇し続ける。ｓＴＫ１レベルは再発前に上昇し始めることも知られており、いくつかの場合でのｓＴＫ１レベルは、「臨床症状の発症の１〜６ヶ月前」に再発を予測できることも広く知られている。いくつかの他の研究では、がんの診断及び予後の指標としてＴＫ１の豊富な可能性を確認する［８２］。
【００３９】
ＴＫ１の診断及び予後の可能性は十分に確立されているが、比較してＴＫ１の治療の可能性は不明瞭さが残されている。ＨＳＶ−ＴＫが遺伝子治療に使用されており、ＰＥＴイメージングではＴＫ１を利用して増殖中のがん細胞を特定しているのは事実であるが、ＴＫ１免疫療法の可能性に取り組んでいる任意の研究である場合は、ほぼない。おそらくこれは、主にＴＫ１が既知のサイトゾルタンパク質であるためである。最近では、ＴＫ１はがん細胞のみならず、複数の腫瘍種類の表面膜上にも発現されており、したがって、腫瘍免疫療法のための非常に実現可能な標的であることが発見されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００４０】
本明細書に記載されるのは、キメラ受容体である。キメラ受容体は、細胞質ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞外ドメインと、を含む。実施形態において、細胞質ドメインは、活性化された際にマクロファージを分極する受容体の細胞質部分を含む。更なる実施形態において、この細胞質部分を含む野生型タンパク質は、キメラ受容体の細胞外ドメインを含まない（例えば、図２１を参照されたい）。実施形態において、キメラ受容体の細胞外ドメインに対するリガンドの結合が、キメラ受容体の細胞内部分を活性化する（例えば、図２２を参照されたい）。キメラ受容体の細胞内部分の活性化は、マクロファージをＭ１又はＭ２マクロファージに分極し得る（例えば、図２３、及び図２４（Ａ）、及び図２５を参照されたい）。
【課題を解決するための手段】
【００４１】
特定の実施形態において、細胞外ドメインは、リガンドと特異的に結合する抗体又はその断片を含み得る。実施形態において、キメラ受容体は、リンカーを含み得る。実施形態において、キメラ受容体は、ヒンジ領域を含み得る。
【００４２】
更なる実施形態は、キメラ受容体又はキメラ受容体をコードする核酸を含む細胞を含む。
【００４３】
実施形態は、キメラ受容体を含むマクロファージを、キメラ受容体の細胞外ドメインのリガンドと接触させることと、リガンドをキメラ受容体の細胞外ドメインと結合させることとによって、マクロファージを分極する方法を含む。キメラ受容体の細胞外ドメインに対するリガンドの結合は、細胞質部分を活性化し、細胞質部分の活性化が、マクロファージを分極する。
【００４４】
本開示のこれら及び他の態様は、本明細書に含まれる教示を考慮すれば当業者には明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１Ａ】キメラ受容体ＴＫｓ１−ＭＯＴＯ１における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１Ｂ】ＴＫ１−ＭＯＴＯ１の配列（配列番号３５）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３１３はＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、及びアミノ酸３１４〜４９６はＴＬＲ４サイトゾルドメインである。
【図２Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯＴＯ２における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図２Ｂ】ＴＫ１−ＭＯＴＯ２の配列（配列番号３６）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜２９５はＬＲＲの短いヒンジであり、アミノ酸２９６〜３１８はＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、及びアミノ酸３１９〜５００はＴＬＲ４サイトゾルドメインである。
【図３Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯＴＯ３における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図３Ｂ】ＴＫ１−ＭＯＴＯ３の配列（配列番号３７）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３４５はＬＲＲの長いヒンジであり、アミノ酸３４６〜３６８はＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、及びアミノ酸２６９〜５０１はＴＬＲ４サイトゾルドメインである。
【図４Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯＴＯ４における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図４Ｂ】ＴＫ１−ＭＯＴＯ４の配列（配列番号３８）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３０２はＩｇＧ４の短いヒンジであり、アミノ酸３０３〜３２５はＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、アミノ酸３２６〜５０８はＴＬＲ４サイトゾルドメインである。
【図５Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯＴＯ５における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図５Ｂ】ＴＫ１−ＭＯＴＯ５の配列（配列番号３９）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜４０９はＩｇＧ  １１９アミノ酸媒介ヒンジであり、アミノ酸４１０〜４３２はＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、及びアミノ酸４３３〜６１５はＴＬＲ４サイトゾルドメインである。
【図６Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯＴＯ６における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図６Ｂ】ＴＫ１−ＭＯＴＯ６の配列（配列番号４０）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜５１８はＩｇＧ４の長いヒンジであり、アミノ酸５１９〜５４１はＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、及びアミノ酸５４２〜７２４はＴＬＲ４サイトゾルドメインである。
【図７Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯＴＯ７における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図７Ｂ】ＴＫ１−ＭＯＴＯ７の配列（配列番号４１）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３５８はＣ３３９Ｓ及びＣ３５６Ｓで変異されたＣＤ８のヒンジであり、アミノ酸３５９〜３８１はＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、及びアミノ酸３８２〜５６４はＴＬＲ４サイトゾルドメインである。
【図８Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯＴＯ８における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図８Ｂ】ＴＫ１−ＭＯＴＯ８の配列（配列番号４２）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３５８はＣＤ８ヒンジの一部であり、アミノ酸３５９〜３８１はＴＬＲ４膜貫通ドメインであり、及びアミノ酸３８２〜５６４はＴＬＲ４サイトゾルドメインである。
【図９Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−１における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図９Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−１の配列（配列番号４３）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３１１はＦＣＧＲ３Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸３１２〜３３６はＦＣＧＲ３Ａサイトゾルドメインであり、及びアミノ酸３３７〜３７８はＦＣＥＲ１Ｇサイトゾルドメインである。
【図１０Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−２における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１０Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−２の配列（配列番号４４）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３５８はＣ３３９Ｓ及びＣ３５６Ｓで変異されたＣＤ８のヒンジであり、アミノ酸３５９〜３７９はＦＣＧＲ３Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸３８０〜４０４はＦＣＧＲ３Ａサイトゾルドメインであり、及びアミノ酸４０５〜４４６はＦＣＥＲ１Ｇサイトゾルドメインである。
【図１１Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−３における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１１Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−３の配列（配列番号４５）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３５８はＣＤ８ヒンジの一部であり、アミノ酸３５９〜３７９はＦＣＧＲ３Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸３８０〜４０４はＦＣＧＲ３Ａサイトゾルドメインであり、及びアミノ酸４０５〜４４６はＦＣＥＲ１Ｇサイトゾルドメインである。
【図１２Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−４における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１２Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−４の配列（配列番号４６）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３０３はＩｇＧ４の短いヒンジであり、アミノ酸３０４〜３２４はＦＣＧＲ３Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸３２５〜３４９はＦＣＧＲ３Ａサイトゾルドメインであり、及びアミノ酸３５０〜３９１はＦＣＥＲ１Ｇサイトゾルドメインである。
【図１３Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−５における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１３Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−５の配列（配列番号４７）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜４０９はＩｇＧ４の１１９アミノ酸ヒンジであり、アミノ酸４１０〜４３０はＦＣＧＲ３Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸４３１〜４５５はＦＣＧＲ３Ａサイトゾルドメインであり、及びアミノ酸４５６〜４９７はＦＣＥＲ１Ｇサイトゾルドメインである。
【図１４Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−６における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１４Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧＲＡ−ＣＡＲ−６の配列（配列番号４８）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜５１９はＩｇＧ４の長いヒンジであり、アミノ酸５２０〜５４０はＦＣＧＲ３Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸５４１〜５６５はＦＣＧＲ３Ａサイトゾルドメインであり、及びアミノ酸５６６〜６０７はＦＣＥＲ１Ｇサイトゾルドメインである。
【図１５Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−１における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１５Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−１の配列（配列番号４９）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３１２はＦＣＧＲ２Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸３１３〜３９０はＦＣＧＲ２Ａサイトゾルドメインである。
【図１６Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−２における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１６Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−２の配列（配列番号５０）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３５８はＣ３３９Ｓ及びＣ３５６Ｓで変異されたＣＤ８のヒンジであり、アミノ酸３５９〜３８０はＦＣＧＲ２Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸３８１〜４５８はＦＣＧＲ２Ａサイトゾルドメインである。
【図１７Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−３における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１７Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−３の配列（配列番号５１）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３５８はＣＤ８のヒンジの一部であり、アミノ酸３５９〜３８０はＦＣＧＲ２Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸３８１〜４５８はＦＣＧＲ２Ａサイトゾルドメインである。
【図１８Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−４における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１８Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−４の配列（配列番号５２）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜３０３はＩｇＧ４の短いヒンジであり、アミノ酸３０４〜３２５はＦＣＧＲ２Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸３２６〜４０３はＦＣＧＲ２Ａサイトゾルドメインである。
【図１９Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−５における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図１９Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−５の配列（配列番号５３）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜４０９はＩｇＧ４の１１９アミノ酸ヒンジであり、アミノ酸４１０〜４３１はＦＣＧＲ２Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸４３２〜５０９はＦＣＧＲ２Ａサイトゾルドメインである。
【図２０Ａ】キメラ受容体ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−６における構成分子の整列のブロック図を示す。
【図２０Ｂ】ＴＫ１−ＭＯ−ＦＣＧ２Ａ−ＣＡＲ−６の配列（配列番号５４）を示す。アミノ酸１〜１８はシグナルペプチド（ＳＰ）であり、アミノ酸１９〜２７５は抗ＴＫ１  ＳｃＦｖであり、アミノ酸２７６〜２９０はＧＳリンカーであり、アミノ酸２９１〜５１９はＩｇＧ４の長いヒンジであり、アミノ酸５２０〜５４１はＦＣＧＲ２Ａ膜貫通ドメインであり、アミノ酸５４２〜６１９はＦＣＧＲ２Ａサイトゾルドメインである。
【図２１】キメラ受容体を示す概略図である。
【図２２】キメラ受容体を発現するマクロファージを示す概略図である。示されるように、キメラ受容体は、Ｔｏｌｌ様受容体のサイトゾルドメイン、膜貫通ドメイン、及びリガンドに特異的なＳｃＦｖを含む。矢印は、ＳｃＦｖがリガンドと結合する際にマクロファージを分極させるシグナル伝達を示す。
【図２３】キメラ受容体を構築するために利用され得る異なるマクロファージ受容体を示す概略図である。
【図２４Ａ】細胞活性化につながるＦｃガンマ受容体ＩＩＩシグナル伝達カスケードを示す概略図である。
【図２４Ｂ】カルシウム流動及び増殖の阻害につながるＦｃガンマ受容体ＩＩＩシグナル伝達カスケードを示す概略図である。
【図２４Ｃ】アポトーシスにつながるＦｃガンマ受容体ＩＩＩシグナル伝達カスケードを示す概略図である。
【図２５】Ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達カスケードを示す概略図である。
【図２６】発現された抗体断片が目的のリガンドと結合することを確認するフローサイトメトリーを示すグラフを提示する。
【図２７】キメラ受容体を用いた形質導入後のマクロファージにおける表現型の変化を示す２つの画像を提示する。
【図２８】単球におけるキメラ受容体の発現を確認する２つの画像を提示する。
【図２９】ｄＴｏｍａｔｏの発現を実証する蛍光活性化セルソーティングの３つの散布図を示す。左端のプロットは、細胞の０．５８％のみが、ｄＴｏｍａｔｏの発現を表すであろう蛍光を示す対照を示す。右２つのプロットは、形質導入後に２７．１パーセントの形質導入効率を示す。
【図３０】キメラ受容体を用いて形質導入されたマクロファージにおける色素（Ａｌｅｘａ  ６４７）の保持、並びにＣＤ８０、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、及びＣＤ１４の発現を実証する蛍光活性化セルソーティングの６つの散布図を提示する。
【図３１】キメラ受容体を用いて形質導入されたマクロファージにおけるＣＤ８０、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、及びＣＤ１４の相対的な発現レベルを示すヒストグラムを提示する。
【図３２】肺癌細胞株（ＮＣＩ−Ｈ４６０）において検出、攻撃、及び細胞死を誘導するキメラ受容体を発現する形質導入されたマクロファージの６つの画像を提示する。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
本明細書に記載されるのは、キメラ受容体である。キメラ受容体は、細胞質ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞外ドメインと、を含む。実施形態において、細胞質ドメインは、活性化された際にマクロファージを分極する受容体の細胞質部分を含む。更なる実施形態において、この細胞質部分を含む野生型タンパク質は、キメラ受容体の細胞外ドメインを含まない。実施形態において、キメラ受容体の細胞外ドメインに対するリガンドの結合が、キメラ受容体の細胞内部分を活性化する。キメラ受容体の細胞内部分の活性化は、マクロファージをＭ１又はＭ２マクロファージに分極し得る。
【００４７】
特定の実施形態において、キメラ受容体の細胞質部分は、ｔｏｌｌ様受容体、ミエロイド系分化一次応答タンパク質（ＭＹＤ８８）（配列番号１９）、ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）（配列番号１）、ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）（配列番号３）、ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）（配列番号７）、ｔｏｌｌ様受容体８（ＴＬＲ８）（配列番号９）、ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）（配列番号１１）、ミエリン及びリンパ球タンパク質（ＭＡＬ）（配列番号２１）、インターロイキン−１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）（配列番号２３）、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩＩ−Ａ（ＦＣＧＲ３Ａ）（配列番号１５）、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ−ａ（ＦＣＧＲ２Ａ）（配列番号１３）、高親和性免疫グロブリンイプシロン受容体サブユニットガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）（配列番号１９）由来の細胞質ドメイン、並びに前述のうちのいずれか１つの細胞質ドメインと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。特定の実施形態において、細胞質部分は、ｔｏｌｌ様受容体、ＦＣＧＲ３Ａ、ＩＬ−１受容体、又はＩＦＮ−ガンマ受容体由来の細胞質ドメインではない。実施形において、サイトゾル部分は、活性化されるとマクロファージの分極をもたらすであろう任意のポリペプチドであり得る。
【００４８】
更なる実施形態において、細胞外ドメインと結合するリガンドの例は、チミジンキナーゼ（ＴＫ１）、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）、ムチン−１６（ＭＵＣ−１６）、上皮成長因子受容体ｖＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、メソセリン、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、エリスロポエチン産生肝細胞癌Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）リガンド、ジシアロガングリオシド２（ＧＤ２）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、及びＣＤ１７１であり得るが、これらに限定されない。特定の実施形態において、リガンドはＴＫ１又はＨＰＲＴではない。
【００４９】
キメラ受容体の細胞外ドメインを生成するように改造され得る抗体は、当該技術分野において十分に周知であり、市販されている。市販の抗体の例としては、抗ＨＧＰＲＴ、ｃｌｏｎｅ  １３Ｈ１１．１（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、抗ＲＯＲ１（ａｂ１３５６６９）（Ａｂｃａｍ）、抗ＭＵＣ１［ＥＰ１０２４Ｙ］（ａｂ４５１６７）（Ａｂｃａｍ）、抗ＭＵＣ１６［Ｘ７５］（ａｂ１１０７）（Ａｂｃａｍ）、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ［Ｌ８Ａ４］（Ａｂｓｏｌｕｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ［ＥＰＲ２６８５（２）］（ａｂ１３４１０９）（Ａｂｃａｍ）、ＨＥＲ２［３Ｂ５］（ａｂ１６９０１）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＥＡ（ＬＳ−Ｃ８４２９９−１０００）（ＬｉｆｅＳｐａｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ＢＣＭＡ（ａｂ５９７２）（Ａｂｃａｍ）、抗Ｇｌｙｐｉｃａｎ  ３［９Ｃ２］（ａｂ１２９３８１）（Ａｂｃａｍ）、抗ＦＡＰ（ａｂ５３０６６）（Ａｂｃａｍ）、抗ＥｐｈＡ２［ＲＭ−００５１−８Ｆ２１］（ａｂ７３２５４）（Ａｂｃａｍ）、抗ＧＤ２（ＬＳ−Ｃ５４６３１５）（ＬｉｆｅＳｐａｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ＣＤ１９［２Ｅ２Ｂ６Ｂ１０］（ａｂ３１９４７）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ２０［ＥＰ４５９Ｙ］（ａｂ７８２３７）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ３０［ＥＰＲ４１０２］（ａｂ１３４０８０）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ３３［ＳＰ２６６］（ａｂ１９９４３２）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ１２３（ａｂ５３６９８）（Ａｂｃａｍ）、抗ＣＤ１３３（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、抗ＣＤ１２３（１Ａ３Ｈ４）ａｂ１８１７８９（Ａｂｃａｍ）、及び抗ＣＤ１７１（Ｌ１．１）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）が含まれるが、これらに限定されない。既知の抗体からのＳｃＦｖなどの抗体断片を作製するための技術は、当該技術分野において慣例である。更に、かかる断片をコードする、及びキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドの一部としてそれらを組換え的に含む配列を生成することもまた、当該技術分野において慣例である。
【００５０】
特定の実施形態において、細胞外ドメインは、リガンドと特異的に結合する抗体又はその断片を含み得る。抗体及びその断片の例としては、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一価抗体、ＳｃＦｖ断片、ｓｃＲｖ−Ｆｃ断片、ＩｇＮＡＲ、ｈｃＩｇＧ、ＶｈＨ抗体、ナノボディ、及びアルファボディが含まれるが、これらに限定されない。更なる実施形態において、細胞外ドメインは、二量体化ドメイン、受容体、結合ポケットなどを含むがこれらに限定されない、リガンドの特異的結合を可能にする任意のアミノ酸配列を含み得る。
【００５１】
実施形態において、キメラ受容体は、リンカーを含み得る。限定されないが、リンカーは、キメラ受容体の細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間に配置され得る。限定されないが、リンカーは、Ｇリンカー、ＧＳリンカー、Ｇ４Ｓリンカー、ＥＡＡＡＫリンカー、ＰＡＰＡＰリンカー、又は（Ａｌａ−Ｐｒｏ）ｎリンカーであり得る。リンカーの他の例は、当該技術分野において十分に周知である。
【００５２】
実施形態において、キメラ受容体は、ヒンジ領域を含み得る。限定されないが、ヒンジ領域は、キメラ受容体の細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置され得る。更なる実施形態において、ヒンジ領域は、リンカーと膜貫通ドメインとの間に配置され得る。限定されないが、リンカーは、ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）、又はｔｏｌｌ様受容体、ＩｇＧ、ＩｇＧ４、ＣＤ８ｍ、若しくはＦｃγＩＩＩａ−ｈｉｎｇのヒンジ領域であり得る。実施形態において、ヒンジ領域内のシステインは、セリンで交換され得る。ヒンジ領域の他の例は、当該技術分野において周知である。
【００５３】
本明細書に記載のキメラ受容体は、配列番号１、３、４、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、及び２５〜３４のうちの１つ以上、それらのうちのいずれかの断片、並びに／又は配列番号１、３、４、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、及び２５〜３４のうちの少なくとも１つと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチド、若しくはその断片を含み得る。キメラ受容体の例としては、配列番号３５〜５４、又はその相同物若しくは断片が含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態において、ポリペプチドは、配列番号３５〜５４のうちの少なくとも１つと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００５４】
実施形態は、上述されるキメラ受容体をコードする核酸配列を含む核酸配列を含む。かかる核酸の例としては、配列番号２、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４のうちの１つ以上、それらのうちのいずれかの断片、並びに／又は配列番号２、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４のうちの少なくとも１つと少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸、若しくはその断片が含まれ得る。更なる例としては、配列番号２４〜５４のうちの１つ以上をコードする核酸、及びそれらのうちのいずれかの断片が含まれる。
【００５５】
実施形態において、キメラ受容体は、グリコシル化、ペグ化、及び／又は他の方法で翻訳後に修飾され得る。更に、核酸配列は、ベクターの一部であり得る。例として、ベクターは、プラスミド、ファージ、コスミド、人工染色体、ウイルスベクター、ＡＡＶベクター、アデノウイルスベクター、又はレンチウイルスベクターであり得る。特定の実施形態において、キメラ受容体をコードする核酸は、プロモーター及び／又は他の制御配列（例えば、エンハンサー、サイレンサー、インスレーター、遺伝子座制御領域、シス作用領域など）と作動可能に連結され得る。
【００５６】
更なる実施形態としては、キメラ受容体又はキメラ受容体をコードする核酸を含む細胞が含まれる。かかる細胞の非限定的な例としては、ミエロイド系細胞、ミエロイド系前駆細胞、単球、好中球、好塩基球、好酸球、巨核球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、白血球、リンパ球、樹状細胞、及びマクロファージが含まれる。
【００５７】
実施形態は、キメラ受容体を含むマクロファージを、キメラ受容体の細胞外ドメインのリガンドと接触させることと、リガンドをキメラ受容体の細胞外ドメインと結合させることとによって、マクロファージを分極する方法を含む。キメラ受容体の細胞外ドメインに対するリガンドの結合は、細胞質部分を活性化し、細胞質部分の活性化が、マクロファージを分極する。
【００５８】
本開示に従って、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、又は核酸配列は、単量体及び二量体形態の二本鎖若しくは一本鎖のＤＮＡ若しくはＲＮＡ、並びにＤＮＡ若しくはＲＮＡの転写産物の両方を意味するものとして理解されるであろう。
【００５９】
本開示の態様は、例えば、イオン交換クロマトグラフィーなどの分離方法から開始され、分子サイズに基づく除外、親和性、若しくは代替的に異なる溶媒への溶解性に基づく分取技術によって単離、精製、若しくは部分精製することが可能とされており、又は増幅、クローニング、サブクローニングなどの遺伝子工学の方法から開始され、配列をベクターによって運ぶことが可能である、ヌクレオチド配列に関する。
【００６０】
ヌクレオチド配列断片は、任意のヌクレオチド断片を示すものとして理解され得、非限定的な例として、それが起源となる配列の少なくとも８、１２、２０、２５、５０、７５、１００、２００、３００、４００、５００、１０００以上の連続的なヌクレオチドの長さが含まれ得る。
【００６１】
ヌクレオチド配列の特定の断片は、対応する野生型配列とのアライメント及び比較の後に、少なくとも１つ少ないヌクレオチド又は塩基を有する任意のヌクレオチド断片を示すものとして理解されるであろう。
【００６２】
本明細書で使用される相同ヌクレオチド配列とは、ヌクレオチド配列の塩基と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、又は９９．７％の同一性の割合を有するヌクレオチド配列を意味すると理解され、この割合は純粋に統計的であり、２つのヌクレオチド配列間の差を無作為、及びその全長にわたって分布させることが可能である。
【００６３】
本開示の概念における特定の相同ヌクレオチド配列とは、上記で定義されたような特定の断片の少なくとも１つの配列を有する相同配列を意味するものとして理解される。「特定の」相同配列とは、例えば、ゲノム配列又はゲノム配列のバリアントを表すその断片の配列に対応する配列を含むことができる。したがって、これらの特定の相同配列は、配列内の変異に関連する変化に対応することができ、特に少なくとも１つのヌクレオチドの短縮、置換、欠失、及び／又は追加に対応することができる。同様に、相同配列は、遺伝子コードの縮重に関連する変化に対応し得る。
【００６４】
「配列相同性の程度又は割合」という用語は、本出願で定義される「最適なアライメント後の２つの配列間の配列同一性の程度又は割合」を指す。
【００６５】
以下に記載されるように、２つのヌクレオチド配列は、２つの配列内のアミノ酸又はヌクレオチド残基の配列が最大一致のためにアライメントされる場合に、「同一」であると言われる。典型的には、２つ（又はそれ以上）のペプチド又はポリヌクレオチド間の配列比較は、セグメント若しくは「比較ウィンドウ」で最適にアライメントされた２つの配列の配列を比較して、配列類似性の局所領域を特定及び比較することによって実行される。比較のための配列の最適なアライメントは、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズム、Ａｄ．Ａｐｐ．Ｍａｔｈ  ２：４８２（１９８１）、Ｎｅｄｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈの相同性アライメントアルゴリズム、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）、Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎの類似法の検索、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４（１９８８）、これらのアルゴリズムの電子化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ内のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、又は目視的検閲によって実行され得る。
【００６６】
「配列同一性の割合」（又は同一性の程度）は、比較ウィンドウで最適にアライメントされた２つの配列を比較することにより決定され、比較ウィンドウにおけるペプチド又はポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適なアライメントのために参照配列（追加又は欠失を含まない）と比較して追加又は欠失（即ち、ギャップ）を含み得る。割合は、同一のアミノ酸残基又は核酸塩基が両方の配列に出現する位置の数を決定して一致する位置の数を求め、一致した位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除算し、結果に１００を掛けて、配列同一性の割合を求める。
【００６７】
上記の配列同一性の定義は、当業者によって使用される定義である。それ自体の定義は、任意のアルゴリズムの助けを必要とせず、アルゴリズムは、配列同一性の計算ではなく、配列の最適なアライメントを達成するためにのみ役立つ。
【００６８】
上記の定義から、２つの比較された配列間の配列同一性の値は、最良又は最適なアライメントで得られた値に対応する、明確に定義された１つの値のみが存在することになる。
【００６９】
ＢＬＡＳＴ  Ｎ又はＢＬＡＳＴ  Ｐ「ＢＬＡＳＴ２配列」において、ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｂｌ２．ｈｔｍｌのウェブサイトにおいて入手可能なソフトウェアであり、発明者及び一般的に２つの配列間の同一性を比較及び決定するために当業者によって通常使用される場合、比較される配列の長さに依存するギャップコストはソフトウェアによって直接的に選択される（即ち、長さが＞８５の置換マトリックスＢＬＯＳＵＭ−６２の場合は１１．２）。
【００７０】
本明細書で使用される配列の相補的ヌクレオチド配列とは、ヌクレオチドが配列のヌクレオチドと相補的であり、その方向が逆である任意のＤＮＡ（アンチセンス配列）を意味するものとして理解される。
【００７１】
本明細書で使用されるヌクレオチド配列を用いたストリンジェンシーの条件下でのハイブリダイゼーションは、相補的なＤＮＡの２つの断片間のハイブリダイゼーションの維持を可能にするような方法で選択される温度及びイオン強度の条件下でのハイブリダイゼーションを意味するものとして理解される。
【００７２】
例示として、上記のヌクレオチド断片を定義することを目的としたハイブリダイゼーションのステップの非常にストリンジェントな条件は、以下において有利である。
【００７３】
ハイブリダイゼーションは、ＳＳＣ緩衝液、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ及び０．０５Ｍクエン酸Ｎａに対応する１×ＳＳＣの存在下で、６５℃の特恵な温度で行われる。洗浄ステップは、例えば、２×ＳＳＣ、周囲温度、その後２×ＳＳＣで２回洗浄、６５℃で０．５％ＳＤＳ；２×０．５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ；６５℃でそれぞれ１０分間であり得る。
【００７４】
例えば、２×ＳＳＣバッファーの存在下で４２℃の温度を使用する中程度のストリンジェンシー、又は２×ＳＳＣバッファーの存在下で３７℃の温度の低度のストリンジェンシーの条件は、それぞれ、２つの配列間のハイブリダイゼーションに対して、全体的に低度に有意な相補性が必要である。
【００７５】
およそ３５０塩基のサイズを有するポリヌクレオチドについて上述されたストリンジェントなハイブリダイゼーションの条件は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９の教示に従って、当業者によってより大きい又はより小さいサイズのオリゴヌクレオチドに適合されるであろう。
【００７６】
本明細書に記載されるヌクレオチド配列の中には、相同配列を得ることを可能にする方法においてプライマー又はプローブとして使用することができるものがあり、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、核酸クローニング、及びシーケンシングなどのこれらの方法は、当業者に十分に周知である。
【００７７】
ヌクレオチド配列の中には、特定の核酸、その断片のうちの１つか、又は以下に定義されるようなそれらのバリアントのうちの１つの存在を決定することを可能にする方法において、プライマー又はプローブとして使用できるものがある。実施形態において、ヌクレオチド配列は、膜貫通ドメイン、サイトゾルドメイン、又はその一部をコードする配列番号２、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４の断片を含み得る。更なる断片としては、配列番号２６〜３４のうちの１つ以上をコードするヌクレオチドなどのリンカー、ヒンジ、又はその断片をコードするヌクレオチド配列が含まれ得る。更なる断片としては、配列番号３５〜５４のうちの１つ以上をコードするヌクレオチド配列の断片が含まれ得る。
【００７８】
ヌクレオチド配列の断片は、例えば、ＰＣＲなどの特異的な増幅によって、又はヌクレオチド配列の適切な制限酵素による消化後に得られることが出でき、特定のこれらの方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９の研究に記載される。更に、かかる断片は、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（登録商標）などの企業から入手可能な遺伝子合成標準技術を用いて得ることができ得る。かかる代表的な断片は、当業者に十分に周知の方法に従って、化学合成によって同様に得ることができる。
【００７９】
修飾されたヌクレオチド配列は、当業者に十分に周知の技術に従って変異原性により得られた野生型配列に関する修飾、例えば、特にポリペプチドの発現速度の調節若しくは複製サイクルの調節につながるポリペプチド発現の制御及び／又はプロモーター配列における変異を含む、任意のヌクレオチド配列を意味することが理解されるであろう。
【００８０】
修飾されたヌクレオチド配列は、同様に、以下に定義されるような修飾されたポリペプチドをコードする任意のヌクレオチド配列を意味するものとして理解される。
【００８１】
キメラ受容体をコードするヌクレオチド配列が開示され、ヌクレオチド配列は、配列番号２、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４、又はその断片のうちの１つから選択されるヌクレオチド配列を含む。かかる断片は、膜貫通ドメイン、又はサイトゾルドメイン、又はそれらの一部などの特定のドメインをコードし得る。更なるキメラ受容体をコードするヌクレオチド配列としては、配列番号２６〜３４のうちの１つ以上をコードするヌクレオチドなどのリンカー、ヒンジ、又はその断片をコードするヌクレオチド配列が含まれ得る。キメラ受容体をコードするヌクレオチド配列は更に、配列番号３５〜５４、又はその断片のうちの１つ以上をコードするヌクレオチド配列であり得る。
【００８２】
同様に、実施形態は、ａ）配列番号２、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４のヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つ、配列番号２５〜５４のうちの少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列、若しくはその断片のうちの１つ、ｂ）ａ）で定義されるような配列の特定の断片のヌクレオチド配列、ｃ）ａ）又はｂ）で定義されるような配列と少なくとも８０％の同一性を有する相同ヌクレオチド配列、ｄ）ａ）、ｂ）又はｃ）で定義されるような配列に対応する相補的なヌクレオチド配列若しくはＲＮＡの配列、並びにｅ）ａ）、ｂ）、ｃ）、又はｄ）で定義されるような配列によって修飾されたヌクレオチド配列以下から選択されるヌクレオチド配列を含むことを特徴とするヌクレオチド配列に関する。
【００８３】
ヌクレオチド配列の中には、配列番号２、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４のうちのヌクレオチド配列、配列番号２５〜５４のうちの少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列、又はその断片、並びに配列番号２、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４の配列のうちの少なくとも１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、若しくは９９．７％の同一性の相同性を有する任意のヌクレオチド配列、及び配列番号２５〜５４のうちの少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列、又はその断片がある。相同配列は、例えば、野生型配列に対応する配列を含むことができる。同様に、これらの特定の相同配列は、野生型配列内の変異に関連する変化に対応することができ、特に少なくとも１つのヌクレオチドの短縮、置換、欠失、及び／又は追加に対応することができる。当業者には明らかであるように、かかる相同体は、標準的な技術及びＢＬＡＳＴなどの公的に利用可能なコンピュータプログラムを使用して容易に創造及び同定される。したがって、上記で参照された各相同体は、本明細書で明らかにされ、十分に記載されていると評価されるべきである。
【００８４】
実施形態は、本明細書に記載されるヌクレオチド配列によってコード化されたキメラ受容体、又はその配列が断片によって表されるその断片を含む。ポリペプチドに対応するアミノ酸配列は、配列番号３５〜５４の配列のうちの少なくとも１つの、３つの読み取り可能なフレームのうちの１つに従ってコード化されることができる。
【００８５】
同様に、実施形態は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、及び２５〜５４のアミノ酸配列のうちの少なくとも１つ、又はその断片のうちの１つから選択されるポリペプチドを含むことを特徴とするキメラ受容体に関する。
【００８６】
ポリペプチドの中には、実施形態に従って、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、及び２５〜５４のうちのアミノ酸配列のポリペプチド、若しくはその断片、又は配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、及び２５〜５４の配列のうちの少なくとも１つと少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、若しくは９９．７％の同一性の相同性を有するその他のポリペプチド、若しくはその断片がある。当業者には明らかであるように、かかる相同体は、標準的な技術及びＢＬＡＳＴなどの公的に利用可能なコンピュータプログラムを使用して容易に創造及び同定される。したがって、上記で参照された各相同体は、本明細書で明らかにされ、十分に記載されていると評価されるべきである。
【００８７】
実施形態はまた、ａ）アミノ酸配列のポリペプチドの少なくとも５つのアミノ酸の特定の断片、ｂ）ａ）で定義されるようなポリペプチドに相同なポリペプチド、ｃ）ａ）又はｂ）で定義されるようなポリペプチドの特定の生物学的に活性な断片、及びｄ）ａ）、ｂ）又はｃ）で定義されるようなポリペプチドによって修飾されたポリペプチドから選択されるポリペプチドを含むことを特徴とするポリペプチドに関する。
【００８８】
本明細書において、ポリペプチド、ペプチド、及びタンパク質という用語は、互換性がある。
【００８９】
実施形態において、キメラ受容体は、グリコシル化、ペグ化、及び／又は他の方法で翻訳後修飾され得る。更なる実施形態において、グリコシル化、ペグ化、並びに／又は他の翻訳後修飾は、生体内若しくは生体外で生じ得、及び／若しくは化学技術を使用して実行され得る。更なる実施形態において、任意のグリコシル化、ペグ化、及び／又は他の翻訳後修飾は、Ｎ−連結型若しくはＯ−連結型であり得る。
【００９０】
実施形態において、キメラ受容体のうちのいずれか１つは酵素的又は機能的に活性であり得、細胞外ドメインがリガンドによって結合されると、シグナルが変換されてマクロファージを分極する。
【００９１】
本明細書で使用される「分極されたマクロファージ」とは、Ｍ１又はＭ２マクロファージ表現型と相関するマクロファージである。Ｍ１分極されたマクロファージは、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３を分泌する。Ｍ１に分極されたマクロファージの決定は、標準的なサイトカインアッセイを使用してＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の発現を測定し、その発現を新たに分化した非分極マクロファージによる発現と比較することによって実行され得る。あるいは、この決定は、細胞がＣＤ１４＋、ＣＤ８０＋、ＣＤ２０６＋、及びＣＤＣＤ１６３−であるかを決定することによって実行され得る。Ｍ２分極されたマクロファージは、ＩＬ−１０を分泌する。Ｍ２に分極されたマクロファージの決定は、標準的なサイトカインアッセイを使用してＩＬ−１０の発現を測定し、その発現を新たに分化した非分極マクロファージによる発現と比較することによって実行され得る。あるいは、この決定は、細胞がＣＤ１４＋、ＣＤ８０−、ＣＤ２０６＋、及びＣＤＣＤ１６３＋であるかを決定することによって実行され得る。
【００９２】
本開示の態様は、遺伝子組換え、又は化学合成により得られたキメラ受容体に関してであり、したがって以下に説明されるように、それらが非天然アミノ酸を含み得る。
【００９３】
実施形態に従って「ポリペプチド断片」は、少なくとも５つの連続的なアミノ酸、好ましくは１０個の連続的なアミノ酸、又は１５個の連続的なアミノ酸を含むポリペプチドを示すものとして理解される。
【００９４】
本明細書では、特定のポリペプチド断片は、ヌクレオチド配列の特定の断片によってコード化される連続的なポリペプチド断片を示すものとして理解される。
【００９５】
「相同ポリペプチド」は、天然のポリペプチドに関して、少なくとも１つのアミノ酸の欠失、追加、若しくは置換、切断、伸長、キメラ融合、及び／又は変異などの特定の修飾を有するポリペプチドを示すものとして理解されるであろう。相同ポリペプチドの中では、そのアミノ酸配列が、本明細書に記載されるポリペプチドのアミノ酸配列と少なくとも８０％又は９０％の相同性を有することが好ましい。
【００９６】
「特定の相同ポリペプチド」は、上記で定義されるような相同ポリペプチドを示し、本明細書に記載されるポリペプチドポリペプチドの特定の断片を有するものとして理解されるであろう。
【００９７】
置換の場合、１つ以上の連続的又は非連続的なアミノ酸は、「同等の」アミノ酸で交換される。本明細書では、「同等の」アミノ酸という表現は、対応するペプチドの生物学的活性を本質的に変更することなく、基本構造のアミノ酸の１つで置換されることが可能な任意のアミノ酸を示すことを目的とし、以下のように定義される。当業者には明らかであるように、かかる置換は、標準的な分子生物学技術及びＢＬＡＳＴなどの公的に利用可能なコンピュータプログラムを使用して容易に創造及び同定される。したがって、上記で参照された各置換は、本明細書で明らかにされ、十分に記載されていると評価されるべきである。
【００９８】
これらの等価なアミノ酸は、それらが置換するアミノ酸との構造的相同性に応じて、又は実行可能な異なるポリペプチド間の生物学的活性の比較試験の結果に応じて決定することができる。
【００９９】
非限定的な例として、対応する修飾されたポリペプチドの生物学的活性の広範な修飾を生じさせることなく実行できる置換の可能性が言及され、例えば、バリン又はイソロイシンによるロイシンの交換、グルタミン酸によるアスパラギン酸の交換、アスパラギンによるグルタミンの交換、リジンによるアルギニンの交換などが自然に逆置換される同じ条件下で想定される。
【０１００】
更なる実施形態において、置換は、同様に同定された酵素活性を有する他のタンパク質間で保存されていないアミノ酸における置換に限定される。例えば、当業者は、類似の生物において同じ機能のタンパク質を整列させ、どのアミノ酸がその機能のタンパク質間で一般的に保存されているかを決定し得る。かかるアライメントを生成するために使用され得るプログラムの一例は、ＮＣＢＩによって提供されるデータベースと併せてｗｏｒｄｌｗｉｄｅｗｅｂ．ｃｈａｒｉｔｅ．ｄｅ／ｂｉｏｉｎｆ／ｓｔｒａｐ／である。
【０１０１】
したがって、一実施形態に従って、置換又は変異は、その機能のタンパク質間で一般的に保存されている位置で行われ得る。更なる実施形態において、核酸配列は、それらがコードするアミノ酸が変更されないように変異若しくは置換され得（退化する置換及び／又は変異）、及び／又は任意の結果として生じるアミノ酸置換若しくは変異が、その機能のタンパク質間で一般的に保存される位置で行われるように、変異若しくは置換され得る。
【０１０２】
同様に、特定の相同ポリペプチドは、上記で定義されるような特定の相同ヌクレオチド配列によってコード化されるポリペプチドに対応し、したがって、本定義において、特に少なくとも１つのアミノ酸残基の切断、置換、欠失、及び／又は追加に対応する野生型配列において存在できる、変異型若しくはバリアント体と対応するポリペプチドを含む。
【０１０３】
本明細書で使用される「ポリペプチドの特定の生物学的に活性な断片」は、特に、本明細書に記載されるポリペプチドの特徴の少なくとも１つを有する、上記で定義されるような特定のポリペプチド断片を示すものとして理解されるであろう。特定の実施形態におけるペプチドは、活性化されるとマクロファージを分極するキメラ抗原受容体として挙動することが可能である。
【０１０４】
本明細書で使用されるポリペプチドの「修飾されたポリペプチド」とは、野生型配列に関して少なくとも１つの修飾を有する、以下に記載されるであろう遺伝子組換え又は化学合成によって得られるポリペプチドを示すものとして理解される。かかる修飾は、本明細書に記載されるポリペプチドの特異性及び／若しくは活性の起源、又は構造的適合、局在化、及び膜挿入の能力の起源のアミノ酸を担うことができ得るか、又はでき得ない。したがって、同等の、増加される、又は低減される活性、及び同等、より制限される、又はより広範な特異性のポリペプチドを作製することが可能となるであろう。修飾されたポリペプチドの中で、最大５つ以上のアミノ酸が修飾され、Ｎ−若しくはＣ−末端で切断され、又は更に欠失若しくは追加されることができるポリペプチドを言及する必要がある。
【０１０５】
真核生物又は原核生物の調整の実証を可能にする方法は、当業者に十分に周知である。同様に、例えば、以下に記載されるようなベクターを介して、調整のために修飾されたポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を使用することが可能であろうことが十分に理解される。
【０１０６】
前述の修飾されたポリペプチドは、モデル、細胞培養又は微生物でそれらを試験する前に、ポリペプチドの一部を体系的に変化させて、例えば、最も活性が高い又は求められる特性を有する化合物を選択することが可能であるコンビナトリアルケミストリーを使用することによって得られることができる。
【０１０７】
同様に、化学合成は、非天然アミノ酸又は非ペプチド結合を使用することが可能であるという利点を有する。
【０１０８】
したがって、ポリペプチドの寿命を改善するために、例えば、Ｄ型の非天然アミノ酸、又は例えば、アミノ酸類似体、特に硫黄含有型を使用することは重要であり得る。
【０１０９】
最後に、ポリペプチドの構造、その特異的又は修飾された相同形態を、ポリペプチド型又はその他の化学構造に組み込むことが可能であろう。したがって、プロテアーゼにより認識されないＮ−及びＣ−末端化合物を提供することは重要であり得る。
【０１１０】
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、同様に本明細書に開示される。
【０１１１】
同様に、実施形態は、配列が本明細書に記載されるヌクレオチド配列から選択されることを特徴とする、プライマー又はプローブとして利用可能なヌクレオチド配列に関する。
【０１１２】
同様に、様々な実施形態は、特に以下に記載されるような当業者に十分に周知である手順による天然のポリペプチドからの精製、遺伝子組換え、又は化学合成により得られることが可能なヌクレオチド配列によりコード化されるキメラ受容体を含む特定のポリペプチドに関連することは十分に理解される。同様に、ヌクレオチド配列によってコード化される特定のポリペプチドに対する標識化若しくは非標識化のモノ又はポリクローナル抗体が更に本開示によって包括される。
【０１１３】
実施形態は更に、核酸配列の検出及び／又は増幅のためのプライマー若しくはプローブとしてのヌクレオチド配列の使用に関する。
【０１１４】
したがって、実施形態に従ってヌクレオチド配列は、特にＰＣＲ技術（ポリメラーゼ連鎖反応）によってヌクレオチド配列を増幅するために使用されることができる（Ｅｒｌｉｃｈ，１９８９、Ｉｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０、Ｒｏｌｆｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１、及びＷｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。
【０１１５】
これらのオリゴデオキシリボヌクレオチド又はオリゴリボヌクレオチドプライマーは、有利には、少なくとも８ヌクレオチド、好ましくは少なくとも１２ヌクレオチド、更により好ましくは少なくとも２０ヌクレオチドの長さを有する。
【０１１６】
標的核酸の他の増幅技術は、ＰＣＲの代替として有利に利用されることができる。
【０１１７】
本明細書に記載されるヌクレオチド配列、特にプライマーは、標的核酸の増幅の他の手順、例えば、１９８９年にＫｗｏｈらによって記載されたＴＡＳ技術（転写系増幅システム）、１９９０年にＧｕａｔｅｌｌｉらによって記載された３ＳＲ技術（自家持続配列複製法（Self-Sustained Sequence Replication））、１９９１年にＫｉｅｖｉｔｉｓらによって記載されたＮＡＳＢＡ技術（核酸シーケンスベースの増幅）、ＳＤＡ技術（鎖置換増幅）（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）、ＴＭＡ技術（転写媒介増幅）で同様に利用されることができる。
【０１１８】
キメラ受容体を含むポリヌクレオチドは、熱安定性リガーゼを利用する１９８８年にＬａｎｄｅｇｒｅｎらによって記載され、１９９１年にＢａｒａｎｙらによって改善されたＬＣＲ技術（リガーゼ連鎖反応）、１９９２年にＳｅｇｅｖによって記載されたＲＣＲ技術（修復連鎖反応）、１９９０年にＤｕｃｋらによって記載されたＣＰＲ技術（サイクリングプローブ反応）、１９８３年にＭｉｅｌｅらによって記載され、特に、１９８６年にＣｈｕら、１９８８年にＬｉｚａｒｄｉらによって、その後Ｂｕｒｇらによって、及び１９９６年にＳｔｏｎｅらによって改善されたＱ−ベータレプリカーゼを用いた増幅技術などのプローブとして機能する核酸の増幅又は修飾の技術において更に利用されることができる。
【０１１９】
検出される標的ポリヌクレオチドがおそらくＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡである場合に、少なくとも１つのプライマーの助けを伴う増幅反応を利用する前に、又は少なくとも１つのプローブの助けを伴う検出手順を利用する前に、生物学的試料内に含まれるＲＮＡからｃＤＮＡを得るための逆転写酵素類の酵素を使用することが可能であるだろう。したがって、得られるｃＤＮＡは、増幅又は検出手順に利用されるプライマー（複数可）若しくはプローブ（複数可）の標的として機能するであろう。
【０１２０】
検出プローブは、標的配列又は標的配列から生成されたアンプリコンとハイブリダイズするような様式で選択される。配列として、かかるプローブは、有利には、少なくとも１２ヌクレオチド、特に少なくとも２０ヌクレオチド、及び好ましくは少なくとも１００ヌクレオチドの配列を有する。
【０１２１】
実施形態は、放射性化合物若しくは非放射性化合物で標識化されることを特徴とする、プローブ又はプライマーとして利用可能なヌクレオチド配列を更に含む。
【０１２２】
非標識化ヌクレオチド配列は、プローブ又はプライマーとして直接的に使用できるが、配列は一般に放射性同位体（３２Ｐ、３５Ｓ、３Ｈ、１２５Ｉ）若しくは非放射性分子（ビオチン、アセチルアミノフルオレン、ジゴキシゲニン、５−ブロモデオキシウリジン、フルオレセイン）で標識化され、多くの用途に利用可能なプローブが得られる。
【０１２３】
ヌクレオチド配列の非放射性標識の例は、例えば、仏国特許第７８，１０９７５号、又は１９８８年にＵｒｄｅａらによって、若しくはＳａｎｃｈｅｚ  Ｐｅｓｃａｄｏｒらによって記載される。
【０１２４】
後者の場合において、特許ＦＲ−２  ４２２  ９５６及びＦＲ−２  ５１８  ７５５に記載される標識方法のうちの１つを使用することも可能であろう。
【０１２５】
ハイブリダイゼーション技術は、様々な様式（Ｍａｔｔｈｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）で実行されることができる。最も一般的な方法は、支持体（ニトロセルロース、ナイロン、ポリスチレンなど）上の細胞の核酸抽出物を固定化し、及び十分に定義された条件下で固定化された標的核酸をプローブと培養することからなる。ハイブリダイゼーション後に、過剰なプローブが除去され、形成されたハイブリッド分子は適切な方法（プローブに連結された放射活性、蛍光、又は酵素活性の測定）によって検出される。
【０１２６】
同様に、様々な実施形態は、共有結合又は非共有結合的に支持体上に固定化されることを特徴とする、本明細書に記載されるヌクレオチド配列又はポリペプチド配列を含む。
【０１２７】
ヌクレオチド配列を採用する別の有利な様式によると、後者は支持体上に固定化されて使用でき、したがって、特定のハイブリダイゼーションにより、試験される生体試料から得られる標的核酸を捕捉する役割を果たすことができる。必要に応じて、固体支持体はサンプルから分離され、次いで、捕捉プローブと標的核酸との間に形成されたハイブリダイゼーション複合体は、容易に検出可能な要素で標識された第２のプローブ、いわゆる検出プローブを用いて検出される。
【０１２８】
別の態様は、本明細書に記載のヌクレオチド配列を含むことを特徴とする、配列のクローニング及び／又は発現のためのベクターである。
【０１２９】
決定された宿主細胞におけるヌクレオチド配列の組み込み、発現、及び／又は分泌を可能にする要素を含むことを特徴とする、ベクターが同様に提供される。
【０１３０】
次いで、ベクターは、プロモーター、翻訳の開始及び終結のシグナル、並びに転写の調節の適切な領域を含み得る。宿主細胞において安定的に維持することができ得、任意に、翻訳されたタンパク質の分泌を特定する特定のシグナルを有することができる。これらの異なる要素は、使用される宿主細胞の機能として選択され得る。この目的のために、本明細書に記載されるヌクレオチド配列は、選択された宿主内の自律複製ベクター、又は選択された宿主の組み込まれたベクターに挿入され得る。
【０１３１】
かかるベクターは、当業者によって現在使用される方法に従って調製され、それから得られるクローンを、例えばリン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、エレクトロポレーション、及び熱ショックなどの標準的な方法によって適切な宿主に導入することが可能であろう。
【０１３２】
ベクターは、例えば、プラスミド又はウイルス起源のベクターに従うものである。本明細書に記載されるポリペプチドの発現のためのベクターの例は、プラスミド、ファージ、コスミド、人工染色体、ウイルスベクター、ＡＡＶベクター、バキュロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、キメラウイルスベクター、及びＡＤ５／Ｆ３５などのキメラアデノウイルスである。
【０１３３】
これらのベクターは、本明細書に記載されるヌクレオチド配列をクローン又は発現させるために宿主細胞を形質転換するのに有用である。
【０１３４】
同様に、実施形態は、ベクターによって形質転換された宿主細胞を含む。
【０１３５】
これらの細胞は、上記に定義したようなベクターに挿入されたヌクレオチド配列の宿主細胞への導入し、次いで、形質導入されたヌクレオチド配列の複製及び／又は発現を可能にする条件下で細胞を培養することによって得ることができる。
【０１３６】
宿主細胞は、例えば細菌細胞（Ｏｌｉｎｓ及びＬｅｅ、１９９３）などの原核生物又は真核生物系、しかし同様に、酵母細胞（Ｂｕｃｋｈｏｌｚ、１９９３）、及びシロイヌナズナ種などの植物細胞、並びに動物細胞、特に哺乳類細胞の培養物（Ｅｄｗａｒｄｓ及びＡｒｕｆｆｏ、１９９３）、例えば、ＨＥＫ２９３、細胞、ＨＥＫ  ２９３Ｔ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ミエロイド系細胞、ミエロイド系前駆細胞、単球、好中球、好塩基球、好酸球、巨核球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、白血球、リンパ球、樹状細胞、及びマクロファージ、しかし同様に、バキュロウイルスを利用する手順を使用することが可能な昆虫の細胞、例えばｓｆ９昆虫細胞（Ｌｕｃｋｏｗ、１９９３）から選択されることができる。
【０１３７】
同様に、実施形態は、形質転換された細胞のうちの１つを含む生物に関する。
【０１３８】
１つ以上の核酸又は核酸の一部を発現するトランスジェニック生物の取得は、ウイルス性若しくは非ウイルス性の遺伝子導入などの当業者に十分に周知の方法に従って、例えば、ラット、マウス、若しくはウサギで実行され得る。ユビキタス性の強力なプロモーターの制御下で、又は１種の組織に選択的な遺伝子の複数コピーの遺伝子導入により、１つ以上の遺伝子を発現するトランスジェニック生物を得ることが可能であろう。同様に、胚細胞株における相同組換え、これらの細胞株の胚への導入、生殖系のレベルでの影響を受けたキメラの選択、及びキメラの成長により、トランスジェニック生物を得ることが可能であろう。
【０１３９】
形質転換された細胞及びトランスジェニック生物は、組換えポリペプチドの調製のための手順において利用可能である。
【０１４０】
現在、発現ベクターによって形質転換された細胞を使用する、又はトランスジェニック生物を使用する遺伝子工学技術により、比較的大量の組換えポリペプチドを生産することが可能である。
【０１４１】
ベクター、及び／又はベクターによって形質転換された細胞、及び／又は、形質転換された細胞のうちの１つを含むトランスジェニック生物を利用することを特徴とする、組換え型のキメラ受容体などのポリペプチドの調製されるための手順は、それ自体が本開示に含まれる。
【０１４２】
本明細書で使用される「形質転換」及び「形質転換された」は、原核生物又は真核生物にかかわらず、細胞への核酸の導入に関する。更に、本明細書で使用される「形質転換」及び「形質転換された」は、成長制御又は成長調節に関係する必要はない。
【０１４３】
組換え型のキメラ受容体などのポリペプチドの調製するための手順の中で、調製手順は、ベクター、及び／又は、ベクターによって形質転換された細胞、及び／又はキメラ受容体をコードするものなどのヌクレオチド配列を含む形質転換された細胞のうちの１つを含むトランスジェニック生物を利用する。
【０１４４】
本明細書で使用されるバリアントは、「担体」タンパク質（キメラタンパク質）に融合された組換えポリペプチドを生成することからなり得る。この系の利点は、組換え産物のタンパク質分解の安定化及び／又は低減、生体外での再生の過程における溶解度の増加、及び／又は融合パートナーが特定のリガンドに対する親和性を有する場合の精製の簡素化を可能にし得ることである。
【０１４５】
より詳細には、実施形態は、ａ）ヌクレオチド配列の組換えポリペプチドの発現を可能にする条件下での形質転換された細胞の培養、ｂ）必要な場合に、組換えポリペプチドの回収のステップを含むポリペプチドの調製のための手順に関する。
【０１４６】
キメラ受容体などのポリペプチドの調製のための手順のトランスジェニック生物を利用する場合に、組換えポリペプチドは、生物から抽出され得、又はそのまま残され得る。
【０１４７】
実施形態はまた、前述のような手順によって得られることが可能なポリペプチドに関する。
【０１４８】
実施形態は、ポリペプチドのアミノ酸の配列を使用することを特徴とする、合成ポリペプチドの調製のための手順を更に含む。
【０１４９】
同様に、本開示は、手順によって得られるキメラ受容体などの合成ポリペプチドに関する。
【０１５０】
同様に、キメラ受容体などのポリペプチドは、ペプチド合成の分野において従来の技術によって調製されることができる。この合成は、均質な溶液又は固相で実行されることができる。
【０１５１】
例えば、１９７４年にＨｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌによって記載された均質な溶液における合成の技術に頼ることができる。
【０１５２】
この合成方法は、必要な順序で連続したアミノ酸を２つずつ連続して縮合させる、又は以前に形成され、既に好適な順序でいくつかのアミノ酸を含むアミノ酸及び断片を凝縮させる、又は代替的に、この手段において以前に準備された、いくつかの断片からなり、ペプチドの合成において十分に周知である方法に従って、特にカルボキシル官能基の活性化後に、通常はペプチド結合の形成において関与する必要がある、一方がアミン官能基及び他方がカルボキシル基、若しくはその逆も同様な場合を除く、これらのアミノ酸又は断片によって運搬される全ての反応性官能基を事前に保護する必要があることが理解される。
【０１５３】
更に、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄによって記載された技術に頼ることができ得る。
【０１５４】
Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの手順に従ってペプチド鎖を作製するために、非常に多孔性の高分子樹脂に頼ることができ、その上には鎖の最初のＣ末端アミノ酸が固定化される。このアミノ酸は、そのカルボキシル基を介して樹脂上に固定化され、そのアミン官能基が保護される。したがって、ペプチド鎖を形成しようとするアミノ酸は、既に形成されたペプチド鎖の部分が毎回事前に脱保護され、樹脂に付着されたアミノ基上に次々に固定化される。所望のペプチド鎖の全体が形成されていると、ペプチド鎖を形成する異なるアミノ酸の保護基が除去され、ペプチドが酸の補助で樹脂から分離される。
【０１５５】
これらのハイブリッド分子は、部分的に、おそらく免疫原性部分、特にジフテリア毒素、破傷風毒素、Ｂ型肝炎ウイルスの表面抗原（特許ＦＲ  ７９  ２１８１１）、ポリオウイルスのＶＰ１抗原、又は任意のその他のウイルス若しくは細菌の毒素若しくは抗原のエピトープに関連するポリペプチド担体分子又はその断片から形成され得る。
【０１５６】
キメラ受容体を含むポリペプチド、以下に記載される抗体、及び前述のうちのいずれかをコードするヌクレオチド配列は、マクロファージの分極のための手順において有利に利用できる。
【０１５７】
実施形態において、キメラ受容体をコードする核酸配列は、細胞に提供される。次いで、細胞は、コード化されたキメラ受容体を発現し得る。発現されたキメラ受容体は、細胞の表面上又は細胞質内に存在し得る。特定の実施形態において、キメラ受容体を発現する細胞は、マクロファージである。マクロファージが発現されたキメラ受容体はリガンドと結合し得、リガンドと結合されることは、前述のようにマクロファージの分極を誘導するようにキメラ受容体を活性化し得る。
【０１５８】
実施形態において、キメラ受容体をコードする核酸配列を提供された細胞は、対象から単離され得る。細胞に核酸が提供された後に、細胞は、例えば注入又は輸注によって、それが得られた対象に戻され得る。他の実施形態において、核酸を提供された細胞は、ドナーによって提供され得る。ドナー細胞に核酸が提供された後に、次いで、細胞はドナー以外の個体に提供され得る。ドナー細胞の例としては、対象からの初代細胞、及び細胞株からの細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５９】
他の実施形態において、キメラ受容体は、細胞に直接的に導入され得る。マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、膜融合、及びタンパク質形質導入ドメインの使用を含むがこれらに限定されない、タンパク質を細胞に導入する任意の方法が使用され得る。細胞にキメラ受容体が提供された後に、細胞は、例えば注入又は輸注によって、それが得られた対象に戻され得る。他の実施形態において、キメラ受容体を提供された細胞は、ドナーによって提供される。ドナー細胞に核酸が提供された後に、次いで、細胞はドナー以外の個体に提供され得る。ドナー細胞の例としては、対象からの初代細胞、及び細胞株からの細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６０】
同様に、実施形態は、蛍光又は放射性型の酵素などの好適な標識の補助で標識化された、キメラ受容体などのポリペプチドに関する。
【０１６１】
ポリペプチドは、ポリペプチドを特異的に認識することを特徴とする、モノクローナル又はポリクローナル抗体が調製されることを可能にする。１９７５年にＫｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎによって記載された技術に従って、ハイブリドーマからモノクローナル抗体を調製することが有利に可能であろう。例えば、動物、特にマウスを免疫応答のアジュバントに関連するポリペプチド又はＤＮＡで免疫し、次に抗原として機能されているポリペプチドが予め固定化されているアフィニティーカラム上で免疫された動物の血清中に含まれる特異的抗体の精製をすることによって、ポリクローナル抗体を調製することが可能であろう。ポリクローナル抗体は、ポリペプチドが予め固定化されているアフィニティーカラム上で、キメラ受容体、又はそのポリペプチド若しくは断片により免疫学的に負荷された動物の血清内中に含まれる抗体の精製により調製されることが更にできる。
【０１６２】
更に、抗体を使用して、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一価抗体、ｓｃＦｖ断片、ｓｃＲｖ−Ｆｃ断片、ＩｇＮＡＲ、ｈｃＩｇＧ、ＶｈＨ抗体、ナノボディ、及びアルファボディを含むがこれらに限定されない結合分子の他の形態を調製できる。
【０１６３】
同様に、実施形態は、本明細書に記載されるポリペプチド、又はポリペプチド及び／若しくはキメラ受容体のリガンドを特異的に認識できることを特徴とする、モノ又はポリクローナル抗体若しくはその断片、又はキメラ抗体若しくはその断片に関する。
【０１６４】
同様に、抗体は、蛍光又は放射型の酵素の標識化などの、核酸プローブについて前述された同じ様式において標識化されることが可能であろう。キメラ受容体の一部として、かかる抗体及び／又はその断片を含むことも可能であろう。非限定的な例として、かかる抗体又はその断片は、キメラ受容体の細胞外ドメインの一部を構成し得る。
【０１６５】
実施形態は、ａ）試料とモノ若しくはポリクローナルとの接触（抗体と生体試料中に存在する可能性のあるキメラ受容体との間の免疫学的反応を可能にする条件下）、ｂ）形成された可能性のある抗原抗体複合体の実証のステップを含むことを特徴とする、試料中のキメラ受容体の検出及び／又は同定のための手順を更に目的とする。
【０１６６】
実施形態は、以下の例示的な実施例において更に詳細に記載される。実施例は、選択された実施形態のみを表し得るが、以下の実施例は例示的であり、限定するものではないことを理解されたい。
【０１６７】
実施例
実施例１：特定のリガンドに対するＳｃＦｖ断片の単離
ｃＤＮＡは、ヒトＴＫ１と特異的な抗体を発現する、モノクローナル抗体ハイブリドーマ細胞（ＣＢ１）から精製した。単離されたｃＤＮＡを使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を介してＣＢ１可変領域の重鎖及び軽鎖を増幅させた。その重鎖及び軽鎖からの配列を、ＮＣＢＩ  Ｂｌａｓｔを使用して確認した。ＣＢ１重鎖及び軽鎖を、部位重複伸長（ＳＯＥ）ＰＣＲを介して一緒に融合させ、Ｇ４Ｓリンカーを使用して一本鎖断片可変（ｓｃＦｖ）を形成させた。Ｇ４Ｓリンカーを、タンパク質発現を最大化するために、ＩＤＴ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｉｄｔｄｎａ．ｃｏｍ／ＣｏｄｏｎＯｐｔ）により提供されるコドン最適化ツールを使用して、酵母及びヒトに対してコドン最適化した。ＣＢ１  ｓｃＦｖを、制限酵素を用いて切断し、ｐＭＰ７１  ＣＡＲベクターに挿入した。
【０１６８】
ＴＫ−１及びＨＰＲＴ特異的ヒトｓｃＦｖ断を酵母抗体ライブラリから単離した。ＴＫ−１及びＨＰＲＴタンパク質を単離し、Ｈｉｓでタグ付けし、精製した。ＴＫ−１及びＨＰＲＴタンパク質を、抗Ｈｉｓビオチン化された抗体で標識化し、ライブラリに追加して、ＴＫ−１及びＨＰＲＴ特異的抗体クローンを選択した。ＴＫ−１及びＨＰＲＴ抗体クローンを、ストレプトアビジン又は抗ビオチンマイクロビーズで交互に染色し、磁気カラムを使用して濃縮した。選別及び選択の２つの追加ラウンドを実施して、ＴＫ−１及びＨＰＲＴ特異的抗体を単離した。最終選択のために、可能性のあるＴＫ−１及びＨＰＲＴ抗体クローン並びにそれぞれのタンパク質は、ＴＫ−１及びＨＰＲＴ特異的抗体を分離するために、蛍光標識化された抗ＨＡ又は抗ｃ−ｍｙｃ抗体で交互に標識することにより、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）によって選別した。高親和性クローンを、キメラ受容体構築のために選択した。他のヒト抗体又は他の動物由来のヒト化抗体を、ファージディスプレイ又は他の組換え方法を使用することによって特異的に、ＴＫ−１又はＨＰＲＴに選択又は改変することができる。
【０１６９】
次いで、選択したｓｃＦｖクローンを、ヒトＩｇＧ１定常ドメインと組み合わせて、ｓｃＦｖの結合特異性を確認するためのウエスタンブロット又はＥＬＩＳＡなどの用途で使用するための抗体を作製した。抗体構築物を、ｐＰＮＬ９酵母分泌ベクターに挿入し、ＹＶＨ１０酵母を構築物で形質転換し、抗体を産生するように誘導した。大腸菌又は哺乳類系などの他の発現系を使用して抗体を分泌させることもできる。
【０１７０】
タンパク質特異的抗体断片の単離及び特徴付け。
図２６を参照すると、１０５の酵母は、蛍光タグＡＰＣを用いて標識化された２．５ｕｇの目的タンパク質と培養された。左のより高いピーク（赤色）は、目的のタンパク質と結合されていない酵母集団を示す（陰性対照）。左の左下のピーク（青色）は、その表面タンパク質を発現しない酵母を示し、一方で右側の高いピーク（青色）は、発現された抗体断片の目的のタンパク質との結合を示す。
【０１７１】
抗体間の構造的一致は、抗原５結合部位、ＰＬｏＳ  ＣｏｍｐｕｔＢｉｏｌ．８（２）：ｅ１００２３８８．ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００２３８８，Ｋｕｎｉｋ  Ｖ，Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  Ｓ，Ｏｆｒａｎ  Ｙ（２０１２）を定義する。パラトープ：配列又は構造に基づいて抗体において抗原結合領域を体系的に識別するためのオンラインツールは、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０１２  Ｊｕｌ；４０（Ｗｅｂ  Ｓｅｒｖｅｒ  ｉｓｓｕｅ）：Ｗ５２１−４．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｓ４８０．Ｅｐｕｂ  ２０１２  Ｊｕｎ  ６である。
【０１７２】
実施例２：キメラ受容体の作製
キメラ受容体ベクターの構築：
過程における第１のステップは、合成キメラ受容体遺伝子のヌクレオチド配列の設計、及び好適なレンチウイルスベクターの選択である。全てのベクターの設計は、高度なソフトウェアバージョン９．１．６で実行される。配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ及びＨｕｍａｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｄａｔａ  ｂａｓｅ及びＮＣＢＩからも取得する。
【０１７３】
ベクターは、組換えＤＮＡ技術及び遺伝子合成の組み合わせで合成する。
【０１７４】
一本鎖可変断片の配列は、ヒト化抗体酵母ディスプレイライブラリ又はファージディスプレイライブラリを用いて生成する。ＴＫ１、ＨＰＲＴ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ−１６、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソセリン、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＧＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、及びＣＤ１７１のそれぞれに対して特異的なＳｃＦｖをコードする核酸。ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、及びｅ）のそれぞれのうちの少なくとも１つを有するキメラ受容体をコードする全ての可能性のある核酸の組み合わせであり、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、及びｅ）が、
ａ）ＴＫ１、ＨＰＲＴ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ−１６、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、メソセリン、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＧＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、及びＣＤ１７１に対して特異的なＳｃＦｖ、
ｂ）ＧＳリンカー又はＧＳリンカー無し、
ｃ）ＬＲＲの５アミノ酸の短いヒンジ、ＬＲＲの長いヒンジ、ＩｇＧ４の短いヒンジ、ＩｇＧの１１９アミノ酸媒介ヒンジ、及びＩｇＧ４の長いヒンジ、ＣＤ８のヒンジ、システインがセリンに変換されたＣＤ８ヒンジから選択されるヒンジ領域、並びにヒンジ無し、
ｄ）ＭＹＤ８８、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ３Ａ、及びＦＣＥＲ１Ｇの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン
ｅ）Ｍｙｄ８８、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＭＡＬ、ＩＲＡＫ１、ＦＣＧＲ２Ａ、ＦＣＧＲ３Ａ、及びＦＣＥＲ１Ｇのサイトゾルドメインから選択されるサイトゾルドメインである。
【０１７５】
前述のキメラ受容体をコードする核酸は、組換えＤＮＡ技術及び遺伝子合成の組み合わせで合成される。
【０１７６】
マクロファージは、キメラ受容体をコードする核酸を提供するために、レンチウイルス媒介遺伝子導入を介した組み込まれた遺伝子の送達法により遺伝子的に改変する。Ａｄｄｇｅｎｅからの第３世代のレンチウイルスシステムを使用して、レンチウイルスベクターを梱包する。ｐＨＩＶ−ｄＴｏｍａｔｏ（＃２１３７４）及びｐＵｌｔｒａ−ｃｈｉｌｌｉ（＃４８６８７）は、遺伝子導入プラスミドである。ｐＣＭＶ−ＶＳＶ−Ｇ（＃８４５４）、ｐＭＤＬｇ／ｐＲＲＥ（＃１２２５１）、ｐＲＳＶ−Ｒｅｖ（＃１２２５３）、ｐＨＣＭＶ−ＡｍｐｈｏＥｎｖ（＃１５７９９）は、梱包化プラスミドである。ヒトリンパ球のレンチウイルス媒介遺伝子導入は、以前から最大５０％の形質導入の効率を得るように標準化されている。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、リン酸カルシウム法（ＳＩＧＭＡ  ＣＡＰＨＯＳ）を用いてトランスフェクトする。およそ１０μｇの各梱包化プラスミド及び２０ｕｇのキメラ受容体をコードするベクターが、トランスフェクションごとに使用される。４８〜３６時間後に、ウイルス粒子を回収し、滅菌濾過する。ウイルスの滴定は、ＨＴ１０８０及びＵ９３７細胞に感染していると決定される。
【０１７７】
分析は、赤色蛍光タンパク質を検出するフローサイトメトリーによって実行する。ウイルスの滴定後のヒト単球を、レトロネクチンプレート（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ、Ｔ１００Ｂ）及びスピン感染法を使用して形質導入する。
【０１７８】
レンチウイルス形質導入の前に、単球を、Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ＩＩ、ヒト（ＭＡＣＳ１３０−０９１−１５３）を使用して、陰性選択及び磁気選別により、ＰＢＭＮＣ全体から単離する。単球の単離後、細胞を、２つのｎｕｎｃｌｏｎの６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、１４５３８０）に分割し、各ベクターについて各ウェルに１．５×１０６細胞を播種する。１つ目のプレートは直ぐに形質導入し、一方で２つ目のプレートは、単球からＭ１マクロファージへの生体外の分化に使用する。Ｍ１マクロファージは、Ｍ１−Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ  ＤＦＸ（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ、Ｃ−２８０５５）培地を使用して生成する。７日後にマクロファージを形質導入し、９日目にＬＰＳ（５００Ｘ）（Ａｆｆｉｍｅｔｒｙｘ、００−４９７６−０３）及びＩＦＮγ（Ｐｒｏｍｏｋｉｎｅ、Ｃ−６０７２４）を用いて活性化させる。形質導入効率は、フローサイトメトリーによって分析する。形質導入細胞を、ＦＡＣＳ  Ａｒｉａセルソータを使用して細胞選別することによって分離する。細胞選別後、形質転換された単球を、分化の前に数日間、生体外で培養し、同時に分化したマクロファージは１か月持続することができる。
【０１７９】
実施例３：キメラ受容体を介したマクロファージの分極
実施例２において調製した形質導入されたマクロファージは、ＴＫ１、ＨＰＲＴ、ＲＯＲ１、ＭＵＣ−１６、ＥＧＦＲｖＩＩＩ，メソセリン、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ３、ＦＡＰ、ＥｐｈＡ２、ＮＫＧ２Ｄ共役リガンド、ＧＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、及びＣＤ１７１に別個で曝露され、標準的なサイトカインアッセイを使用してＩＬ−１２及びＩＬ−２３の分泌をモニタリングするか、又はＲＮＡ産生を測定することによって、Ｍ１表現型への分極について試験された。キメラ受容体を有するマクロファージは、特定のキメラ受容体に対して特異的なリガンドに曝露され、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２３の分泌が増加されることによって決定されると、Ｍ１表現型に分極される。特定のキメラ受容体に対する特異的リガンド以外のリガンドは、ＩＬ−１２及び／又はＩＬ−２１の増加を示さない。
【０１８０】
実施例４：単球由来マクロファージの産生及び形質導入
分化の７日後の単球由来マクロファージは、表現型の変化を受けていた。これらの変化は、形質導入細胞と非形質導入細胞とが比較されたものである。図２７で観察できるように、形質導入された細胞は、Ｍ１又は古典的に活性化されたマクロファージと同様のより活動的な表現型を有する。図２７は、分化の８日目での非形質導入及び形質導入された単球由来マクロファージの画像を示す。この時点では、インターフェロンガンマ及びＬＰＳは追加されていない。キメラ受容体を用いて形質導入されたマクロファージの表現型は、非形質導入マクロファージとは異なることが観察できる。形質導入された細胞は、マクロファージ活性化を示す古典的に活性化された又はＭ１様表現型を表示した。改変された表現型は、形質導入過程及び新たな合成受容体の発現の組み合された効果であり得る。
【０１８１】
図２８は、形質導入から４８〜７２時間後のｄＴｏｍａｔｏの発現により確認されたように、キメラ受容体をコードする構築物の挿入及び発現の確認を提供する。これは、ヒト単球由来マクロファージの形質導入の成功を実証する。
【０１８２】
実施例５：形質導入効率
分化の１０日後の形質導入効率が評価され、キメラ受容体を発現するマクロファージが細胞選別された。レンチウイルス形質導入は、マクロファージにおいて困難である。しかしながら、ＥＦ１−αプロモーターを有するＨＩＶ−１系システムを使用して、ほぼ３０％のマクロファージ形質導入が達成された。マクロファージ分化の初期段階における細胞の形質導入は、異なる形質導入効率を表示した。分化の早期段階における単球又はマクロファージは、形質導入がより容易である。キメラアデノウイルスＡＤ５／Ｆ３５を用いたアデノウイルス形質導入は、マクロファージ形質導入の別の選択肢として現れている。図２９は、形質導入されたマクロファージの結果を、ＦＡＣＳＡｒｉａシステムを使用して細胞選別した結果を示す。マクロファージ形質導入の約３０％は、レンチウイルスアプローチを使用して達成された。左端のプロットは、細胞の０．５８％のみが、ｄＴｏｍａｔｏの発現を表すであろう蛍光を示す対照を示す。右２つのプロットは、形質導入後に２７．１パーセントの形質導入効率を示す。
【０１８３】
実施例６：形質導入されたマクロファージの免疫表現型
キメラ受容体の発現のためのベクターを用いて形質導入されたマクロファージの免疫表現型検査を行い、形質導入された細胞の活性化状態を特定した。ＴＬＲ−４の細胞外ドメインの修飾により、そのシグナル伝達ドメインの定常的な活性化が誘導され得ることが報告されている（Ｇａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。ＴＬＲ−４シグナル伝達の定常的な活性化は、マクロファージ活性化又はＭ１表現型をもたらし得る。ＴＬＲ−４に基づいて使用された構築物が、ＴＬＲ−４から取得されたＴＩＲドメインを介したシグナル伝達の定常的な活性化を誘因できるかどうかは知られていない。しかしながら、形質導入の過程の後に、表現型の変化が観察され、マクロファージ内の細胞表面マーカーの発現が変化した。これは、レンチウイルス形質導入とキメラ受容体タンパク質の発現との組み合わせに起因する可能性が高い。ＣＤ１４、ＣＤ８０、Ｄ２０６の発現及びＣＤ１６３の発現が低いことは、Ｍ１表現型に向かうマクロファージの分極の指標であった。これらの細胞表面マーカーの発現は、形質導入された細胞において観察された。図３０は、キメラ受容体を用いて形質導入されたマクロファージにおける色素（Ａｌｅｘａ  ６４７）の保持、並びにＣＤ８０、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、及びＣＤ１４の発現を実証する蛍光活性化セルソーティングの６つの散布図を提示する。
【０１８４】
図３１は、キメラ受容体を発現するためのベクターを用いて形質導入されたマクロファージにおけるＭ１細胞表面マーカーの相対的な発現レベルのヒストグラムを示す。
【０１８５】
実施例７：ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞に対してキメラ受容体が形質導入されたマクロファージを標的とするＴＫ１の生体外での毒性。
キメラ受容体が形質導入されたマクロファージを標的とするＴＫ１の腫瘍活性を、ＮＣＩ−Ｈ４６０−ＧＦＰ細胞に対して試験した。使用されたＥ：Ｔ比は、１：１０であった。分析は、共焦点顕微鏡検査を用いて実行した。蛍光の検出は、１２時間の間、５分毎に実行した。タイムラプス中に、キメラ受容体を形質導入したマクロファージを標的とするＴＫ１がＨ４６０−ＧＦＰ細胞に向かって移行し、それらを攻撃することが観察された。シナプスの後に、標的細胞に特異的な細胞死が誘導される。図３２において画像によって実証されるように、ＴＫ１標的化キメラ受容体で形質導入されたマクロファージは、ＴＫ１を発現する肺癌細胞株において検出、攻撃、及び細胞死を誘導することができる。ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞は、改変されてＧＦＰを発現させた。キメラ受容体が形質導入されたマクロファージを標的とするＴＫ１の殺腫瘍活性は、標的細胞における蛍光の喪失として共焦点顕微鏡を用いて検出された。
【０１８６】
本開示は、この開示の趣旨及び範囲内で更に修正されることができる。したがって、本出願は、その一般原理を使用して、開示の任意の変形、使用、又は適合を網羅することを意図している。更に、本出願は、本開示が関連し、添付の特許請求の範囲及びそれらの法的均等物の範囲内に含まれ、当技術分野で既知又は慣習的な実施の範囲内に収まる、本開示からのそのような逸脱を網羅することを意図している。
【０１８７】
参考文献の一覧表
１．Ｈａｎａｈａｎ，Ｄ．，＆Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｒ．ａ．（２０１１）．Ｈａｌｌｍａｒｋｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ  ｎｅｘｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ，１４４（５），６４６−７４．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１１．０２．０１３
２．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．（２０１５）．Ｃａｎｃｅｒ  Ｆａｃｔｓ＆Ｆｉｇｕｒｅｓ  ２０１５．
３．Ｈｏｙｅｒｔ，Ｄ．Ｌ．，＆Ｘｕ，Ｊ．（２０１２）．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｖｉｔａｌ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  Ｄｅａｔｈｓ：Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｄａｔａ  ｆｏｒ  ２０１１（Ｖｏｌ．６１）．
４．Ｋｕｒａｈａｒａ，Ｈ．，Ｓｈｉｎｃｈｉ，Ｈ．，Ｍａｔａｋｉ，Ｙ．，Ｍａｅｍｕｒａ，Ｋ．，Ｎｏｍａ，Ｈ．，Ｋｕｂｏ，Ｆ．，．．．Ｔａｋａｏ，Ｓ．（２０１１）．Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  Ｍ２−ｐｏｌａｒｉｚｅｄ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１６７（２），ｅ２１１−９．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｊｓｓ．２００９．０５．０２６
５．Ｓｔｅｉｄｌ，Ｃ．，Ｌｅｅ，Ｔ．，＆Ｓｈａｈ，Ｓ．（２０１０ａ）．Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｃｌａｓｓｉｃ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，８７５−８８５．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｅｊｍ．ｏｒｇ／ｄｏｉ／ｆｕｌｌ／１０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ０９０５６８０から取得された
６．Ｅｉｒｏ，Ｎ．，＆Ｖｉｚｏｓｏ，Ｆ．Ｊ．（２０１２）．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，４（３），６２−７２．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．４２４０／ｗｊｇｓ．ｖ４．ｉ３．６２
７．Ｋｅｌｌｙ，Ｐ．Ｍ．，Ｄａｖｉｓｏｎ，Ｒ．Ｓ．，Ｂｌｉｓｓ，Ｅ．，＆ＭｃＧｅｅ，Ｊ．Ｏ．（１９８８）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ：ａ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，５７（２），１７４−７．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｕｂｍｅｄｃｅｎｔｒａｌ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ａｒｔｉｃｌｅｒｅｎｄｅｒ．ｆｃｇｉ？ａｒｔｉｄ＝２２４６４３６＆ｔｏｏｌ＝ｐｍｃｅｎｔｒｅｚ＆ｒｅｎｄｅｒｔｙｐｅ＝ａｂｓｔｒａｃｔから取得された
８．Ｌｅｗｉｓ，Ｃ．，＆Ｌｅｅｋ，Ｒ．（１９９５）．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ．．．，５７（Ｍａｙ），７４７−７５１．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｌｅｕｋｂｉｏ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／５７／５／７４７．ｓｈｏｒｔから取得された
９．Ｍａｎｔｏｖａｎｉ，Ａ．，Ｂｉｓｗａｓ，Ｓ．Ｋ．，Ｇａｌｄｉｅｒｏ，Ｍ．Ｒ．，Ｓｉｃａ，Ａ．，＆Ｌｏｃａｔｉ，Ｍ．（２０１３）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｐａｉｒ  ａｎｄ  ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２２９（２），１７６−８５．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｐａｔｈ．４１３３
１０．Ｐｏｒｔａ，Ｃ．，Ｒｉｍｏｌｄｉ，Ｍ．，Ｒａｅｓ，Ｇ．，Ｂｒｙｓ，Ｌ．，Ｇｈｅｚｚｉ，Ｐ．，Ｄｉ  Ｌｉｂｅｒｔｏ，Ｄ．，．．．Ｓｉｃａ，Ａ．（２００９）．Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ａｎｄ  Ｍ２（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ）ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｒｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｐ５０  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａＢ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，１０６（３５），１４９７８−８３．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０７３／ｐｎａｓ．０８０９７８４１０６
１１．Ｓｉｃａ，Ａ．，＆Ｍａｎｔｏｖａｎｉ，Ａ．（２０１２）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｖｅｒｉｔａｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１２２（３），７８７−７９６．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１７２／ＪＣＩ５９６４３ＤＳ１
１２．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃ．Ｆ．，＆Ｍｏｓｓｅｒ，Ｄ．Ｍ．（２００２）．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｆｏｒ  ａｎ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ：ｔｈｅ  ｔｙｐｅ  ２  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，７２（１），１０１−６．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／１２１０１２６８から取得された
１３．Ｇｈａｓｓａｂｅｈ，Ｇ．Ｈ．，Ｄｅ  Ｂａｅｔｓｅｌｉｅｒ，Ｐ．，Ｂｒｙｓ，Ｌ．，Ｎｏｅｌ，Ｗ．，Ｖａｎ  Ｇｉｎｄｅｒａｃｈｔｅｒ，Ｊ．ａ，Ｍｅｅｒｓｃｈａｕｔ，Ｓ．，．．．Ｒａｅｓ，Ｇ．（２００６）．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｇｅｎｅ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｃｅｌｌｓ  ｅｌｉｃｉｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｂｌｏｏｄ，１０８（２），５７５−８３．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００５−０４−１４８５
１４．Ｌｉａｏ，Ｘ．，Ｓｈａｒｍａ，Ｎ．，＆Ｋａｐａｄｉａ，Ｆ．（２０１１）．Ｋｒｕｐｐｅｌ−ｌｉｋｅ  ｆａｃｔｏｒ  ４  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１２１（７）．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１７２／ＪＣＩ４５４４４ＤＳ１
１５．Ｄａｖｉｓ，Ｍ．Ｊ．，Ｔｓａｎｇ，Ｔ．Ｍ．，Ｑｉｕ，Ｙ．，Ｄａｙｒｉｔ，Ｊ．Ｋ．，Ｆｒｅｉｊ，Ｊ．Ｂ．，Ｈｕｆｆｎａｇｌｅ，Ｇ．Ｂ．，＆Ｏｌｓｚｅｗｓｋｉ，Ｍ．Ａ．（２０１３）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍ１／Ｍ２  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｄｙｎａｍｉｃａｌｌｙ  ａｄａｐｔｓ  ｔｏ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．ｍＢｉｏ，４（３），ｅ００２６４−１３．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１２８／ｍＢｉｏ．００２６４−１３
１６．Ｍａｎｔｏｖａｎｉ，Ａ．，Ｓｏｚｚａｎｉ，Ｓ．，Ｌｏｃａｔｉ，Ｍ．，Ａｌｌａｖｅｎａ，Ｐ．，＆Ｓｉｃａ，Ａ．（２００２）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｓ  ａ  ｐａｒａｄｉｇｍ  ｆｏｒ  ｐｏｌａｒｉｚｅｄ  Ｍ２  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２３（１１），５４９−５５．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／１２４０１４０８から取得された
１７．Ｅｄｉｎ，Ｓ．，Ｗｉｋｂｅｒｇ，Ｍ．Ｌ．，Ｄａｈｌｉｎ，Ａ．Ｍ．，Ｒｕｔｅｇａｒｄ，Ｊ．，Ｏｂｅｒｇ，Ａ．，Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ，Ｐ．−Ａ．，＆Ｐａｌｍｑｖｉｓｔ，Ｒ．（２０１２）．Ｔｈｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍ１  ｏｒ  ｍ２  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ，７（１０），ｅ４７０４５．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００４７０４５
１８．Ｆｏｒｓｓｅｌｌ，Ｊ．，Ｏｂｅｒｇ，Ａ．，Ｈｅｎｒｉｋｓｓｏｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｓｔｅｎｌｉｎｇ，Ｒ．，Ｊｕｎｇ，Ａ．，＆Ｐａｌｍｑｖｉｓｔ，Ｒ．（２００７）．Ｈｉｇｈ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ａｌｏｎｇ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｆｒｏｎｔ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１３（５），１４７２−９．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／１０７８−０４３２．ＣＣＲ−０６−２０７３
１９．Ｇｕｉｄｕｃｃｉ，Ｃ．，Ｖｉｃａｒｉ，Ａ．Ｐ．，Ｓａｎｇａｌｅｔｔｉ，Ｓ．，Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ，Ｇ．，＆Ｃｏｌｏｍｂｏ，Ｍ．Ｐ．（２００５）．Ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｌｉｃｉｔｅｄ  ｔｕｍｏｒ  ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏｗａｒｄｓ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６５（８），３４３７−４６．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−０４−４２６２
２０．Ｂａｃｃａｌａ，Ｒ．，Ｈｏｅｂｅ，Ｋ．，Ｋｏｎｏ，Ｄ．Ｈ．，Ｂｅｕｔｌｅｒ，Ｂ．，＆Ｔｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．Ｎ．（２００７）．ＴＬＲ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｄ  ＴＬＲ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１３（５），５４３−５１．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｎｍ１５９０
２１．Ｂａｎｅｒｊｅｅ，Ｓ．，Ｘｉｅ，Ｎ．，Ｃｕｉ，Ｈ．，Ｔａｎ，Ｚ．，Ｙａｎｇ，Ｓ．，Ｉｃｙｕｚ，Ｍ．，．．．Ｌｉｕ，Ｇ．（２０１３）．ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ｌｅｔ−７ｃ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０），１９０（１２），６５４２−９．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１２０２４９６
２２．Ｍｕｒｒａｙ，Ｐ．Ｊ．，Ａｌｌｅｎ，Ｊ．Ｅ．，Ｂｉｓｗａｓ，Ｓ．Ｋ．，Ｆｉｓｈｅｒ，Ｅ．Ａ．，Ｇｉｌｒｏｙ，Ｄ．Ｗ．，Ｇｏｅｒｄｔ，Ｓ．，．．．Ｗｙｎｎ，Ｔ．Ａ．（２０１４）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，４１（１），１４−２０．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２０１４．０６．００８
２３．Ｈａｏ，Ｎ．−Ｂ．，Ｌｕ，Ｍ．−Ｈ．，Ｆａｎ，Ｙ．−Ｈ．，Ｃａｏ，Ｙ．−Ｌ．，Ｚｈａｎｇ，Ｚ．−Ｒ．，＆Ｙａｎｇ，Ｓ．−Ｍ．（２０１２）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１２，９４８０９８．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５５／２０１２／９４８０９８
２４．Ｓｉｎｈａ，Ｐ．，Ｃｌｅｍｅｎｔｓ，Ｖ．Ｋ．，＆Ｏｓｔｒａｎｄ−Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．（２００５）．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｉｄ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍ１  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ  ｔｈｅ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７４（２），６３６−４５．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／１５６３４８８１から取得された
２５．Ｂｉｎｇｌｅ，Ｌ．，Ｂｒｏｗｎ，Ｎ．Ｊ．，＆Ｌｅｗｉｓ，Ｃ．Ｅ．（２００２）．Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｕｍｏｕｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｔｕｍｏｕｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９６（３），２５４−６５．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｐａｔｈ．１０２７
２６．Ｈｅｒｂｅｕｖａｌ，Ｊ．−Ｐ．，Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｃ．，Ｓａｂｉｄｏ，Ｏ．，Ｃｏｔｔｉｅｒ，Ｍ．，Ｆｏｕｒｎｅｌ，Ｐ．，Ｄｙ，Ｍ．，＆Ｇｅｎｉｎ，Ｃ．（２００３）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｆｒｏｍ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＴＲＡＩＬ，ＴＲＡＩＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ａｎｄ  ｃｏｌｏｎ  ｔｕｍｏｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，９５（８），６１１−２１．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／１２６９７８５４から取得された
２７．Ｍａ，Ｊ．，Ｌｉｕ，Ｌ．，Ｃｈｅ，Ｇ．，Ｙｕ，Ｎ．，Ｄａｉ，Ｆ．，＆Ｙｏｕ，Ｚ．（２０１０）．Ｔｈｅ  Ｍ１  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｓ  ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｔｉｍｅ．ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ，１０，１１２．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／１４７１−２４０７−１０−１１２
２８．Ｏｈｒｉ，Ｃ．Ｍ．，Ｓｈｉｋｏｔｒａ，Ａ．，Ｇｒｅｅｎ，Ｒ．Ｈ．，Ｗａｌｌｅｒ，Ｄ．ａ，＆Ｂｒａｄｄｉｎｇ，Ｐ．（２００９）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ＮＳＣＬＣ  ｔｕｍｏｕｒ  ｉｓｌｅｔｓ  ａｒｅ  ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ  ｏｆ  ａ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｍ１  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ，３３（１），１１８−２６．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８３／０９０３１９３６．０００６５７０８
２９．Ｕｒｂａｎ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｈｅｐａｒｄ，Ｈ．Ｍ．，Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｕｇａｒｍａｎ，Ｂ．Ｊ．，＆Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｈ．（１９８６）．Ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ：ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌｉｎｇ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，８３（１４），５２３３−７．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｕｂｍｅｄｃｅｎｔｒａｌ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ａｒｔｉｃｌｅｒｅｎｄｅｒ．ｆｃｇｉ？ａｒｔｉｄ＝３２３９２５＆ｔｏｏｌ＝ｐｍｃｅｎｔｒｅｚ＆ｒｅｎｄｅｒｔｙｐｅ＝ａｂｓｔｒａｃｔから取得された
３０．Ｗｏｎｇ，Ｓ．−Ｃ．，Ｐｕａｕｘ，Ａ．−Ｌ．，Ｃｈｉｔｔｅｚｈａｔｈ，Ｍ．，Ｓｈａｌｏｖａ，Ｉ．，Ｋａｊｉｊｉ，Ｔ．Ｓ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．，．．．Ｂｉｓｗａｓ，Ｓ．Ｋ．（２０１０）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｔｏ  ａ  ｕｎｉｑｕｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｄｒｉｖｅｎ  ｂｙ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４０（８），２２９６−３０７．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００２／ｅｊｉ．２００９４０２８８
３１．Ｈａｒｄｉｓｏｎ，Ｓ．Ｅ．，Ｈｅｒｒｅｒａ，Ｇ．，Ｙｏｕｎｇ，Ｍ．Ｌ．，Ｈｏｌｅ，Ｃ．Ｒ．，Ｗｏｚｎｉａｋ，Ｋ．Ｌ．，＆Ｗｏｒｍｌｅｙ，Ｆ．Ｌ．（２０１２）．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＳＴＡＴ１−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｌａｓｓｉｃａｌ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０），１８９（８），４０６０−８．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１１０３４５５
３２．Ｗａｎｇ，Ｙ．−Ｃ．，Ｈｅ，Ｆ．，Ｆｅｎｇ，Ｆ．，Ｌｉｕ，Ｘ．−Ｗ．，Ｄｏｎｇ，Ｇ．−Ｙ．，Ｑｉｎ，Ｈ．−Ｙ．，．．．Ｈａｎ，Ｈ．（２０１０）．Ｎｏｔｃｈ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  ｔｈｅ  Ｍ１  ｖｅｒｓｕｓ  Ｍ２  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７０（１２），４８４０−９．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−１０−０２６９
３３．Ｃａｉ，Ｘ．，Ｙｉｎ，Ｙ．，Ｌｉ，Ｎ．，Ｚｈｕ，Ｄ．，Ｚｈａｎｇ，Ｊ．，Ｚｈａｎｇ，Ｃ．−Ｙ．，＆Ｚｅｎ，Ｋ．（２０１２）．Ｒｅ−ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｔｏ  ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｍ１  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｂｙ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ−１５５．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，４（５），３４１−３．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ｊｍｃｂ／ｍｊｓ０４４
３４．Ｗｅｉ，Ｙ．，Ｎａｚａｒｉ−Ｊａｈａｎｔｉｇｈ，Ｍ．，Ｃｈａｎ，Ｌ．，Ｚｈｕ，Ｍ．，Ｈｅｙｌｌ，Ｋ．，Ｃｏｒｂａｌａｎ−Ｃａｍｐｏｓ，Ｊ．，．．．Ｓｃｈｏｂｅｒ，Ａ．（２０１３）．Ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ−３４２−５ｐ  ｆｏｓｔｅｒｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｎ  Ａｋｔ１−ａｎｄ  ｍｉｃｒｏＲＮＡ−１５５−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１２７（１５），１６０９−１９．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１６１／ＣＩＲＣＵＬＡＴＩＯＮＡＨＡ．１１２．０００７３６
３５．Ｓｑｕａｄｒｉｔｏ，Ｍ．Ｌ．，Ｅｔｚｒｏｄｔ，Ｍ．，Ｄｅ  Ｐａｌｍａ，Ｍ．，＆Ｐｉｔｔｅｔ，Ｍ．Ｊ．（２０１３）．ＭｉｃｒｏＲＮＡ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３４（７），３５０−９．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｉｔ．２０１３．０２．００３
３６．Ｂｉｓｗａｓ，Ｓ．Ｋ．，Ｇａｎｇｉ，Ｌ．，Ｐａｕｌ，Ｓ．，Ｓｃｈｉｏｐｐａ，Ｔ．，Ｓａｃｃａｎｉ，Ａ．，Ｓｉｒｏｎｉ，Ｍ．，．．．Ｓｉｃａ，Ａ．（２００６）．Ａ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ａｎｄ  ｕｎｉｑｕｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ（ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ＮＦ−ｋａｐｐａＢ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ＩＲＦ−３／ＳＴＡＴ１  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）．Ｂｌｏｏｄ，１０７（５），２１１２−２２．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００５−０１−０４２８
３７．Ｓｔｅｉｄｌ，Ｃ．，Ｌｅｅ，Ｔ．，＆Ｓｈａｈ，Ｓ．（２０１０ｂ）．Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｃｌａｓｓｉｃ  Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３６２（１０），８７５−８８５．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｅｊｍ．ｏｒｇ／ｄｏｉ／ｆｕｌｌ／１０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ０９０５６８０から取得された
３８．Ｌｉｎ，Ｅ．Ｙ．，Ｌｉ，Ｊ．−Ｆ．，Ｇｎａｔｏｖｓｋｉｙ，Ｌ．，Ｄｅｎｇ，Ｙ．Ｚｈｕ，Ｌ．，Ｇｒｚｅｓｉｋ，Ｄ．ａ，．．．Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｊ．Ｗ．（２００６）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｔｈｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｓｗｉｔｃｈ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６６（２３），１１２３８−４６．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−０６−１２７８
３９．Ｈａｇｅｍａｎｎ，Ｔ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．，Ｂｕｒｋｅ，Ｆ．，Ｋｕｌｂｅ，Ｈ．，Ｌｉ，Ｎ．Ｆ．，Ｐｌｕｄｄｅｍａｎｎ，Ａ．，．．．Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．Ｒ．（２００６）．Ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｐｏｌａｒｉｚｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｔｏｗａｒｄ  ａ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７６（８），５０２３−３２．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／１６５８５５９９から取得された
４０．Ｈａｇｅｍａｎｎ，Ｔ．，Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｔ．，ＭｃＮｅｉｓｈ，Ｉ．，Ｃｈａｒｌｅｓ，Ｋ．ａ，Ｋｕｌｂｅ，Ｈ．，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｒ．Ｇ．，．．．Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．Ｒ．（２００８）．「Ｒｅ−ｅｄｕｃａｔｉｎｇ」ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＮＦ−ｋａｐｐａＢ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０５（６），１２６１−８．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８４／ｊｅｍ．２００８０１０８
４１．Ｍａｎｄａｌ，Ｐ．，Ｐｒａｔｔ，Ｂ．Ｔ．，Ｂａｒｎｅｓ，Ｍ．，ＭｃＭｕｌｌｅｎ，Ｍ．Ｒ．，＆Ｎａｇｙ，Ｌ．Ｅ．（２０１１）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｍ２  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ：ｌｉｎｋ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｆｕｌｌ−ｌｅｎｇｔｈ  ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８６（１５），１３４６０−９．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１１０．２０４６４４
４２．Ｍａｎｔｏｖａｎｉ，Ａ．，Ａｌｌａｖｅｎａ，Ｐ．，Ｓｉｃａ，Ａ．，＆Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．（２００８）．Ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ，４５４（７２０３），４３６−４４．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０７２０５
４３．Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏ，Ｖ．，Ｅｔｚｒｏｄｔ，Ｍ．，Ｎｅｗｔｏｎ，Ａ．，Ｒａｕｃｈ，Ｐ．Ｊ．，Ｃｈｕｄｎｏｖｓｋｉｙ，Ａ．，Ｂｅｒｇｅｒ，Ｃ．，．．．Ｐｉｔｔｅｔ，Ｍ．Ｊ．（２０１２）．Ｏｒｉｇｉｎｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，１０９（７），２４９１−６．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０７３／ｐｎａｓ．１１１３７４４１０９
４４．Ｈｅｒｃｕｓ，Ｔ．Ｒ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ｄ．，Ｇｕｔｈｒｉｄｇｅ，Ｍ．Ａ．，Ｅｋｅｒｔ，Ｐ．Ｇ．，Ｋｉｎｇ−Ｓｃｏｔｔ，Ｊ．，Ｐａｒｋｅｒ，Ｍ．Ｗ．，＆Ｌｏｐｅｚ，Ａ．Ｆ．（２００９）．Ｔｈｅ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｌｉｎｋｉｎｇ  ｉｔｓ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｔｏ  ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ，１１４（７），１２８９−９８．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ−２００８−１２−１６４００４
４５．Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．Ｏ．，Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，Ｎ．Ｄ．，Ｑｕａｌｌｓ，Ｃ．Ｒ．，Ｆｌｉｇｅｌｍａｎ，Ｔ．，Ｗａｎｇ，Ｔ．，Ｌｉｎ，Ｃ．−Ｙ．，．．．Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｊ．Ｗ．（２０１３）．Ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎ  ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，７（１），４１−５４．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｏｎｃ．２０１２．０７．００２
４６．Ｗｅｓｔ，Ｒ．Ｂ．，Ｒｕｂｉｎ，Ｂ．Ｐ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．Ａ．，Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ，Ｓ．，Ｋａｙｇｕｓｕｚ，Ｇ．，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｋ．．．．ｖａｎ  ｄｅ  Ｒｉｊｎ，Ｍ．（２００６）．Ａ  ｌａｎｄｓｃａｐｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｉｎ  ｔｅｎｏｓｙｎｏｖｉａｌ  ｇｉａｎｔ−ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒ  ｆｒｏｍ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＳＦ１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ａ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｍｉｎｏｒｉｔｙ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，１０３（３），６９０−５．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０７３／ｐｎａｓ．０５０７３２１１０３
４７．Ｌｉｎ，Ｅ．Ｙ．，＆Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｊ．Ｗ．（２００７）．Ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｐｒｅｓｓ  ｔｈｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｓｗｉｔｃｈ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６７（１１），５０６４−６．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−０７−０９１２
４８．Ｄａｌｔｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ａｒｍａｉｚ−Ｐｅｎａ，Ｇ．Ｎ．，Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｖｉｌｌａｓａｎａ，Ｖ．，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，Ｇ．，Ｂａｒ−Ｅｌｉ，Ｍ．，＆Ｓｏｏｄ，Ａ．Ｋ．（２０１４）．Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７４（５），１２８７−９３．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−１３−２８２５
４９．Ｓａｃｃａｎｉ，Ａ．，Ｓｃｈｉｏｐｐａ，Ｔ．，Ｐｏｒｔａ，Ｃ．，Ｂｉｓｗａｓ，Ｓ．Ｋ．，Ｎｅｂｕｌｏｎｉ，Ｍ．，Ｖａｇｏ，Ｌ．，．．．Ｓｉｃａ，Ａ．（２００６）．ｐ５０  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａＢ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｍ１  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６６（２３），１１４３２−４０．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／０００８−５４７２．ＣＡＮ−０６−１８６７
５０．Ｇａｚｚａｎｉｇａ，Ｓ．，Ｂｒａｖｏ，Ａ．Ｉ．，Ｇｕｇｌｉｅｌｍｏｔｔｉ，Ａ．，ｖａｎ  Ｒｏｏｉｊｅｎ，Ｎ．，Ｍａｓｃｈｉ，Ｆ．，Ｖｅｃｃｈｉ，Ａ．，．．．Ｗａｉｎｓｔｏｋ，Ｒ．（２００７）．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＣＰ−１  ｒｅｄｕｃｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１２７（８），２０３１−４１．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓｊ．ｊｉｄ．５７００８２７
５１．Ｌｕｏ，Ｙ．，Ｚｈｏｕ，Ｈ．，＆Ｋｒｕｅｇｅｒ，Ｊ．（２００６）．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１１６（８），２１３２−２１４１．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１７２／ＪＣＩ２７６４８．２１３２
５２．Ｚｅｉｓｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．Ｍ．，Ｏｄｅｒｍａｔｔ，Ｂ．，Ｍａｒｔｙ，Ｃ．，Ｚｅｈｎｄｅｒ−Ｆｊａｌｌｍａｎ，ａ  Ｈ．Ｍ．，Ｂａｌｌｍｅｒ−Ｈｏｆｅｒ，Ｋ．，＆Ｓｃｈｗｅｎｄｅｎｅｒ，Ｒ．ａ．（２００６）．Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ−ｌｉｐｏｓｏｍｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｕｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ：ａ  ｎｅｗ  ａｎｄ  ｈｉｇｈｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ  ａｐｐｒｏａｃｈ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，９５（３），２７２−８１．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓｊ．ｂｊｃ．６６０３２４０
５３．Ｂｅｔｔｅｎｃｏｕｒｔ−Ｄｉａｓ，Ｍ．，Ｇｉｅｔ，Ｒ．，Ｓｉｎｋａ，Ｒ．，Ｍａｚｕｍｄａｒ，ａ，Ｌｏｃｋ，Ｗ．Ｇ．，Ｂａｌｌｏｕｘ，Ｆ．，．．．Ｇｌｏｖｅｒ，Ｄ．Ｍ．（２００４）．Ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ，４３２（７０２０），９８０−７．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０３１６０
５４．Ｇｅｓｃｈｗｉｎｄ，Ｊ．Ｈ．，Ｖａｌｉ，Ｍ．，＆Ｗａｈｌ，Ｒ．（２００６）．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ３  ｂｒｏｍｏｐｙｒｕｖａｔｅ（ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ  ２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｏｎ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｌｅｗｉｓ  ｒａｔｓ  ｕｓｉｎｇ  ２−（Ｆ−１８）ｆｌｕｏｒｏ−２−ｄｅｏｘｙ−ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ．２００６  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ（ｐｐ．１２−１４）．
５５．Ｗｏｌｆ，Ａ．，Ａｇｎｉｈｏｔｒｉ，Ｓ．，Ｍｉｃａｌｌｅｆ，Ｊ．，Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ，Ｊ．，Ｓａｂｈａ，Ｎ．，Ｃａｉｒｎｓ，Ｒ．，．．．Ｇｕｈａ，Ａ．（２０１１）．Ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ  ２  ｉｓ  ａ  ｋｅｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  ａｅｒｏｂｉｃ  ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｍｕｌｔｉｆｏｒｍｅ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０８（２），３１３−２６．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１０１４７０
５６．Ｂｌａｇｉｈ，Ｊ．，＆Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｇ．（２０１２）．Ｐｏｌａｒｉｚｉｎｇ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，１５（６），７９３−５．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｍｅｔ．２０１２．０５．００８
５７．Ｈａｓｃｈｅｍｉ，Ａ．，Ｋｏｓｍａ，Ｐ．，Ｇｉｌｌｅ，Ｌ．，Ｅｖａｎｓ，Ｃ．Ｒ．，Ｂｕｒａｎｔ，Ｃ．Ｆ．，Ｓｔａｒｋｌ，Ｐ．，．．．Ｗａｇｎｅｒ，Ｏ．（２０１２）．Ｔｈｅ  ｓｅｄｏｈｅｐｔｕｌｏｓｅ  ｋｉｎａｓｅ  ＣＡＲＫＬ  ｄｉｒｅｃｔｓ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，１５（６），８１３−２６．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｍｅｔ．２０１２．０４．０２３
５８．Ａｒｒａｎｚ，Ａ．，Ｄｏｘａｋｉ，Ｃ．，Ｖｅｒｇａｄｉ，Ｅ．，Ｍａｒｔｉｎｅｚ  ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ，Ｙ．，Ｖａｐｏｒｉｄｉ，Ｋ．，Ｌａｇｏｕｄａｋｉ，Ｅ．Ｄ．，．．．Ｔｓａｔｓａｎｉｓ，Ｃ．（２０１２）．Ａｋｔ１  ａｎｄ  Ａｋｔ２  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ  ｔｏ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，１０９（２４），９５１７−２２．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０７３／ｐｎａｓ．１１１９０３８１０９
５９．Ｊｏｎｅｓ，Ｒ．Ｇ．，＆Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｃ．Ｂ．（２００７）．Ｒｅｖｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｅｎｇｉｎｅ：ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｕｅｌｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２７（２），１７３−８．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２００７．０７．００８
６０．Ｓｈｕ，Ｃ．Ｊ．，Ｇｕｏ，Ｓ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｊ．，Ｓｈｅｌｌｙ，Ｓ．Ｍ．，Ｎｉｊａｇａｌ，Ａ．，Ｒａｙ，Ｐ．，．．．Ｗｉｔｔｅ，Ｏ．Ｎ．（２００５）．Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｂｙ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，１０２（４８），１７４１２−７．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０７３／ｐｎａｓ．０５０８６９８１０２
６１．Ｖａｎ  Ｇｉｎｄｅｒａｃｈｔｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｍｏｖａｈｅｄｉ，Ｋ．，Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ  Ｇｈａｓｓａｂｅｈ，Ｇ．，Ｍｅｅｒｓｃｈａｕｔ，Ｓ．，Ｂｅｓｃｈｉｎ，Ａ．，Ｒａｅｓ，Ｇ．，＆Ｄｅ  Ｂａｅｔｓｅｌｉｅｒ，Ｐ．（２００６）．Ｃｌａｓｓｉｃａｌ  ａｎｄ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ：Ｐｉｃｋｉｎｇ  ｔｈｅ  ｂｅｓｔ  ｏｆ  ｂｏｔｈ  ｗｏｒｌｄｓ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２１１（６），４８７−５０１．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｃｉｅｎｃｅｄｉｒｅｃｔ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ／ａｒｔｉｃｌｅ／ｐｉｉ／Ｓ０１７１２９８５０６０００８２９から取得された
６２．Ｍｉｌｌｓ，Ｃ．Ｄ．，Ｓｈｅａｒｅｒ，Ｊ．，Ｅｖａｎｓ，Ｒ．，＆Ｃａｌｄｗｅｌｌ，Ｍ．Ｄ．（１９９２）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０），１４９（８），２７０９−１４．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／１４０１９１０から取得された
６３．Ｊｉ，Ｙ．，Ｓｕｎ，Ｓ．，Ｘｕ，Ａ．，Ｂｈａｒｇａｖａ，Ｐ．，Ｙａｎｇ，Ｌ．，Ｌａｍ，Ｋ．Ｓ．Ｌ．，．．．Ｑｉ，Ｌ．（２０１２）．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｍ２  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｄｉｐｏｓｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｖｉａ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−４（ＩＬ−４）／ＳＴＡＴ６  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｘｉｓ  ｉｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８７（１７），１３５６１−７１．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１１２．３５００６６
６４．Ａｎｄｒｅｅｓｅｎ，Ｒ．，Ｓｃｈｅｉｂｅｎｂｏｇｅｎ，Ｃ．，＆Ｂｒｕｇｇｅｒ，Ｗ．（１９９０）．Ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｆｒｏｍ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ：ａ  ｎｅｗ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７４５０−７４５６．ｈｔｔｐ：／／ｃａｎｃｅｒｒｅｓ．ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／５０／２３／７４５０．ｓｈｏｒｔから取得された
６５．Ｋｏｒｂｅｌｉｋ，Ｍ．，Ｎａｒａｐａｒａｊｕ，Ｖ．Ｒ．，＆Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｎ．（１９９７）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｓ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｔｏ  ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，７５（２），２０２−７．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｕｂｍｅｄｃｅｎｔｒａｌ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ａｒｔｉｃｌｅｒｅｎｄｅｒ．ｆｃｇｉ？ａｒｔｉｄ＝２０６３２７０＆ｔｏｏｌ＝ｐｍｃｅｎｔｒｅｚ＆ｒｅｎｄｅｒｔｙｐｅ＝ａｂｓｔｒａｃｔから取得された
６６．Ｅｌｌｅｍ，Ｋ．Ａ．Ｏ．，Ｒｏｕｒｋｅ，Ｍ．Ｇ．Ｅ．Ｏ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．Ｒ．，Ｐａｒｒｙ，Ｇ．，Ｍｉｓｋｏ，Ｉ．Ｓ．，Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｃ．Ｗ．，．．．Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｒ．Ｃ．（１９９７）．Ａ  ｃａｓｅ  ｒｅｐｏｒｔ：ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ−ｆａｃｔｏｒ−ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，１０−２０．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｐｒｉｎｇｅｒｌｉｎｋ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ／ＪＱ４ＥＢ２１Ｅ４Ｃ７ＡＤＭＴ７．ｐｄｆから取得された
６７．Ｇａｓｔ，Ｇ．ｄｅ，＆Ｋｌｕｍｐｅｎ，Ｈ．（２０００）．ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ，ｌｏｗ−ｄｏｓｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２，ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｉ±  ｉｎ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｃａｎｃｅｒｒｅｓ．ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／６／４／１２６７．ｓｈｏｒｔから取得された
６８．Ｈｉｌｌ，Ｈ．，Ｊｒ，Ｔ．Ｃ．，＆Ｓａｂｅｌ，Ｍ．（２００２）．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １２  ａｎｄ  Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ−ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ  Ｃｏｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｎａｔｅ  ａｎｄ  Ａｄａｐｔｉｖｅ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．ｈｔｔｐ：／／ｃａｎｃｅｒｒｅｓ．ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／６２／２４／７２５４．ｓｈｏｒｔから取得された
６９．Ｌｏｋｓｈｉｎ，Ａ．，Ｍａｙｏｔｔｅ，Ｊ．，＆Ｌｅｖｉｔｔ，Ｍ．（１９９５）．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｂｅｔａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｓｑｕａｍｏｕｓ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ−Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，８７，２０６−２１２．ｈｔｔｐ：／／ｊｎｃｉ．ｏｘｆｏｒｄｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／８７／３／２０６．ｓｈｏｒｔから取得された
７０．Ｊｏｈｎｓ，Ｔ．，＆Ｍａｃｋａｙ，Ｉ．（１９９２）．Ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｐｏｔｅｎｃｉｅｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ  ｏｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ：ｈｉｇｈｅｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｉ２．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，（ｔｙｐｅ  ＩＩ），１１８５−１１９０．ｈｔｔｐ：／／ｊｎｃｉ．ｏｘｆｏｒｄｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／８４／１５／１１８５から取得された
７１．Ｑｉｎ，Ｘ．−Ｑ．，Ｒｕｎｋｅｌ，Ｌ．，Ｄｅｃｋ，Ｃ．，ＤｅＤｉｏｓ，Ｃ．，＆Ｂａｒｓｏｕｍ，Ｊ．（１９９７）．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｂｅｔａ  ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｓ  ｐｈａｓｅ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＆Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７（６），３５５−３６７．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８９／ｊｉｒ．１９９７．１７．３５５
７２．Ｚｈａｎｇ，Ｆ．，Ｌｕ，Ｗ．，＆Ｄｏｎｇ，Ｚ．（２００２）．Ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｒｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ＩＮＦ−β  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２９４２−２９５１．ｈｔｔｐ：／／ｃｌｉｎｃａｎｃｅｒｒｅｓ．ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／８／９／２９４２．ｓｈｏｒｔから取得された
７３．Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｋ．Ｄ．，Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ，Ｄ．Ｊ．，＆Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｖ．（２０１２）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｂｙ  Ｉｎｄｕｃｉｎｇ  Ｍｙｅｌｏｉｄ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１２０１１６１
７４．Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｄ．Ｅ．，Ｂｅｌｔ，Ｂ．Ａ．，Ｐａｎｎｉ，Ｒ．Ｚ．，Ｍａｙｅｒ，Ａ．，Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ，Ａ．Ｄ．，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ，Ｄ．，．．．Ｌｉｎｅｈａｎ，Ｄ．Ｃ．（２０１３）．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ：ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＣＣＬ２／ＣＣＲ２  ａｘｉｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈの公報，１９（１３），３４０４−１５．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／１０７８−０４３２．ＣＣＲ−１３−０５２５
７５．Ｓｃｈｍａｌｌ，Ａ．，Ａｌ−Ｔａｍａｒｉ，Ｈ．Ｍ．，Ｈｅｒｏｌｄ，Ｓ．，Ｋａｍｐｓｃｈｕｌｔｅ，Ｍ．，Ｗｅｉｇｅｒｔ，Ａ．，Ｗｉｅｔｅｌｍａｎｎ，Ａ．，．．．Ｓａｖａｉ，Ｒ．（２０１４）．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｃｒｏｓｓｔａｌｋ  ｖｉａ  ＣＣＲ２  ａｎｄ  ＣＸ３ＣＲ１  ｉｓ  ａ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  Ｄｒｉｖｉｎｇ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１６４／ｒｃｃｍ．２０１４０６−１１３７ＯＣ
７６．Ｋｉｍｕｒａ，Ｙ．Ｎ．，Ｗａｔａｒｉ，Ｋ．，Ｆｏｔｏｖａｔｉ，Ａ．，Ｈｏｓｏｉ，Ｆ．，Ｙａｓｕｍｏｔｏ，Ｋ．，Ｉｚｕｍｉ，Ｈ．，．．．Ｏｎｏ，Ｍ．（２００７）．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｓｔｉｍｕｌｉ  ｆｒｏｍ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，９８（１２），２００９−１８．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１１１／ｊ．１３４９−７００６．２００７．００６３３．ｘ
７７．Ｃｈｅｎ，Ｈ．，Ｌｉ，Ｐ．，Ｙｉｎ，Ｙ．，Ｃａｉ，Ｘ．，Ｈｕａｎｇ，Ｚ．，Ｃｈｅｎ，Ｊ．，．．．Ｚｈａｎｇ，Ｊ．（２０１０）．Ｔｈｅ  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  １  Ｔ  ｈｅｌｐｅｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｖｉａ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−４  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ＩＬ−１２  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，３１（３２），８１７２−８０．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１０．０７．０５６
７８．Ｒｏｇｅｒｓ，Ｔ．Ｌ．，＆Ｈｏｌｅｎ，Ｉ．（２０１１）．Ｔｕｍｏｕｒ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｏｆ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，９（１），１７７．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／１４７９−５８７６−９−１７７
７９．Ｊｕｎａｎｋａｒ，Ｓ．，Ｓｈａｙ，Ｇ．，Ｊｕｒｃｚｙｌｕｋ，Ｊ．，Ａｌｉ，Ｎ．，Ｄｏｗｎ，Ｊ．，Ｐｏｃｏｃｋ，Ｎ．．．．Ｒｏｇｅｒｓ，Ｍ．Ｊ．（２０１５）．Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｉｎｔｒａｖｉｔａｌ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｓ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｓ  ｔｈｅ  ｅｘｔｒａｓｋｅｌｅｔａｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，５（１），３５−４２．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１４−０６２１
８０．Ｈｕａｎｇ，Ｚ．，Ｙａｎｇ，Ｙ．，Ｊｉａｎｇ，Ｙ．，Ｓｈａｏ，Ｊ．，Ｓｕｎ，Ｘ．，Ｃｈｅｎ，Ｊ．，．．．Ｚｈａｎｇ，Ｊ．（２０１３）．Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｖｉａ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｂｙ  ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，３４（３），７４６−５５．ｈｔｔｐ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１２．０９．０６２
８１．Ｑ．Ｈｅ，Ｔ．Ｆｏｒｎａｎｄｅｒ，Ｈ．Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  １  ｉｎ  ｓｅｒｕｍ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｏｒ  ｌｏｃｏ−ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｓｕｒｇｅｒｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ，」Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．２６，ｎｏ．６，ｐｐ．４７５３−４７５９，２００６．
８２．Ｋ．Ｌ．Ｏ’Ｎｅｉｌｌ，Ｍ．Ｈｏｐｅｒ，ａｎｄ  Ｇ．Ｗ．Ｏｄｌｉｎｇ−Ｓｍｅｅ，「Ｃａｎ  ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｔｕｍｏｒｓ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ？」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｖｏｌ．８４，ｎｏ．２３，ｐｐ．１８２５−１８２８，１９９２．
【図１Ａ】
2020520252.tif 000002
【図１Ｂ】
2020520252.tif 000003
【図２Ａ】
2020520252.tif 000004
【図２Ｂ】
2020520252.tif 000005
【図３Ａ】
2020520252.tif 000006
【図３Ｂ】
2020520252.tif 000007
【図４Ａ】
2020520252.tif 000008
【図４Ｂ】
2020520252.tif 000009
【図５Ａ】
2020520252.tif 000010
【図５Ｂ】
2020520252.tif 000011
【図６Ａ】
2020520252.tif 000012
【図６Ｂ】
2020520252.tif 000013
【図７Ａ】
2020520252.tif 000014
【図７Ｂ】
2020520252.tif 000015
【図８Ａ】
2020520252.tif 000016
【図８Ｂ】
2020520252.tif 000017
【図９Ａ】
2020520252.tif 000018
【図９Ｂ】
2020520252.tif 000019
【図１０Ａ】
2020520252.tif 000020
【図１０Ｂ】
2020520252.tif 000021
【図１１Ａ】
2020520252.tif 000022
【図１１Ｂ】
2020520252.tif 000023
【図１２Ａ】
2020520252.tif 000024
【図１２Ｂ】
2020520252.tif 000025
【図１３Ａ】
2020520252.tif 000026
【図１３Ｂ】
2020520252.tif 000027
【図１４Ａ】
2020520252.tif 000028
【図１４Ｂ】
2020520252.tif 000029
【図１５Ａ】
2020520252.tif 000030
【図１５Ｂ】
2020520252.tif 000031
【図１６Ａ】
2020520252.tif 000032
【図１６Ｂ】
2020520252.tif 000033
【図１７Ａ】
2020520252.tif 000034
【図１７Ｂ】
2020520252.tif 000035
【図１８Ａ】
2020520252.tif 000036
【図１８Ｂ】
2020520252.tif 000037
【図１９Ａ】
2020520252.tif 000038
【図１９Ｂ】
2020520252.tif 000039
【図２０Ａ】
2020520252.tif 000040
【図２０Ｂ】
2020520252.tif 000041
【図２１】
2020520252.tif 000042
【図２２】
2020520252.tif 000043
【図２３】
2020520252.tif 000044
【図２４Ａ】
2020520252.tif 000045
【図２４Ｂ】
2020520252.tif 000046
【図２４Ｃ】
2020520252.tif 000047
【図２５】
2020520252.tif 000048
【図２６】
2020520252.tif 000049
【図２７】
2020520252.tif 000050
【図２８】
2020520252.tif 000051
【図２９】
2020520252.tif 000052
【図３０】
2020520252.tif 000053
【図３１】
2020520252.tif 000054
【図３２】
2020520252.tif 000055
【配列表】
2020520252000001.app
【国際調査報告】
2020520252.tif 000056
2020520252.tif 000057