(57)【要約】  デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドの誘導体、リボヌクレオチドの誘導体、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つを含む１つ以上のオリゴヌクレオチドを有する、アプタマー組成物が開示される。アプタマー組成物は、歯、エナメル質、象牙質、炭酸カルシウム欠損ヒドロキシアパタイト、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つである物質に対する結合親和性を有する。
2020529444.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドの誘導体、リボヌクレオチドの誘導体、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つであるオリゴヌクレオチドを含むアプタマー組成物であって、歯、エナメル質、象牙質、炭酸カルシウム欠損ヒドロキシアパタイト、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つに対して結合親和性を有する、アプタマー組成物。
【請求項２】
歯に対する結合親和性を有する、請求項１に記載のアプタマー組成物。
【請求項３】
配列番号１〜配列番号２３４と少なくとも５０％のヌクレオチド配列同一性を有する少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含み、好ましくは、前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１〜配列番号２３４のうちの少なくとも１つである、請求項１又は２に記載のアプタマー組成物。
【請求項４】
配列番号１、配列番号９、配列番号２５、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１３６、又は配列番号２２３〜配列番号２３４のうちの少なくとも１つであるオリゴヌクレオチドを含む、請求項１〜３のいずれかに記載のアプタマー組成物。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチドが、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、及び配列番号２４４のうちの少なくとも１つである１つ以上のモチーフを含む、請求項１又は２に記載のアプタマー組成物。
【請求項６】
前記オリゴヌクレオチドが、天然又は非天然の核酸塩基を含み、好ましくは、前記非天然核酸塩基が、ヒポキサンチン、キサンチン、７−メチルグアニン、５，６−ジヒドロウラシル、５−５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、チオウラシル、１−メチルヒポキサンチン、６−メチルイソキノリン−１−チオン−２−イル、３−メトキシ−２−ナフチル、５−プロピニルウラシル−１−イル、５−メチルシトシン−１−イル、２−アミノアデニン−９−イル、７−デアザ−７−ヨードアデニン−９−イル、７−デアザ−７−プロピニル−２−アミノアデニン−９−イル、フェノキサジニル、フェノキサジニル−Ｇ−クラム、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つである、請求項１〜５のいずれかに記載のアプタマー組成物。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドのヌクレオシドが、天然リン酸ジエステル、キラルホスホロチオエート、キラルメチルホスホネート、キラルホスホラミデート、キラルホスフェートキラルトリエステル、キラルボラノホスフェート、キラルホスホロセレノエート、ホスホロジチオエート、ホスホロチオエートアミデート、メチレンメチルイミノ、３’−アミド、３’アキラルホスホラミデート、３’アキラルメチレンホスホネート、チオホルムアセタール、チオエチルエーテル、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つである化学モチーフによって結合する、請求項１〜６のいずれかに記載のアプタマー組成物。
【請求項８】
前記リボヌクレオチドの誘導体又は前記デオキシリボヌクレオチドの誘導体が、ロックドオリゴヌクレオチド、ペプチドオリゴヌクレオチド、グリコールオリゴヌクレオチド、トレオースオリゴヌクレオチド、ヘキシトールオリゴヌクレオチド、アルトリトールオリゴヌクレオチド、ブチルオリゴヌクレオチド、Ｌ−リボヌクレオチド、アラビノオリゴヌクレオチド、２’−フルオロアラビノオリゴヌクレオチド、シクロヘキセンオリゴヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つである、請求項１に記載のアプタマー組成物。
【請求項９】
少なくとも１つの高分子材料を含み、前記少なくとも１つの高分子材料が、前記オリゴヌクレオチドに共有結合しており、好ましくは、前記少なくとも１つの高分子材料がポリエチレングリコールである、請求項１に記載のアプタマー組成物。
【請求項１０】
前記オリゴヌクレオチドの５’及び３’末端におけるヌクレオチドが反転している、請求項１〜９のいずれかに記載のアプタマー組成物。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、ペントース基の２’位でフッ素化されており、好ましくは、前記オリゴヌクレオチドのピリミジンヌクレオチドが、ペントース基の２’位でフッ素化されている、請求項１〜１０のいずれかに記載のアプタマー組成物。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチドが、ホワイトニング剤、光沢剤、抗ステイン剤、抗虫歯剤、抗侵食剤、抗タータ剤、抗歯石剤、抗歯垢剤、歯再石灰化剤、抗破砕剤、強化剤、耐摩耗剤、抗歯肉炎剤、抗微生物剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗酵母剤、抗ウイルス剤、抗悪臭剤、口臭消臭剤、着香剤、冷感剤、味増強剤、嗅覚増強剤、抗付着剤、平滑剤、表面改質剤、抗歯痛剤、抗過敏症剤、抗炎症剤、歯肉保護剤、歯周活性物質、組織再生剤、抗血液凝固剤、抗凝塊安定剤、唾液刺激剤、唾液レオロジー変性剤、強化された保持剤、軟／硬組織標的化剤、歯／軟組織洗浄剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、Ｈ−２拮抗薬、鎮痛剤、天然抽出物及び精油、染料、光学光沢剤、カチオン、リン酸塩、フッ素イオン源、ペプチド、栄養素、酵素、口及び喉用製品、又はこれらの混合物を含む少なくとも１つの口腔ケア活性成分に共有結合又は非共有結合している、請求項１〜１１のいずれかに記載のアプタマー組成物。
【請求項１３】
前記口腔ケア活性成分が、染料又は光学光沢剤のうちの少なくとも１つである、請求項１２に記載のアプタマー組成物。
【請求項１４】
前記口腔ケア活性成分が、４，４’−ジアミノ−２，２’−スチルベンジスルホン酸である、請求項１２に記載のアプタマー組成物。
【請求項１５】
１つ以上の口腔ケア活性成分を口腔に送達する方法であって、少なくとも１つの核酸アプタマー及び１つ以上の口腔ケア活性成分を含む口腔ケア組成物を投与すること、を含み、前記少なくとも１つの核酸アプタマー及び前記１つ以上の口腔ケア活性成分が、共有結合又は非共有結合しており、前記少なくとも１つの核酸アプタマーが、口腔構成要素に対する結合親和性を有する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、歯に対する高い結合親和性及び特異性を有する、核酸アプタマーに関する。また、本発明は、活性成分の口腔への送達ビヒクルとしての、このようなアプタマーの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アプタマーは、標的分子に結合する特定の複雑な三次元形状を有する短い一本鎖オリゴヌクレオチドである。アプタマーの分子認識は、構造適合性、並びに、静電気力、ファンデルワールス相互作用、水素結合、及び芳香環と標的物質とのπ−πスタッキング相互作用を含む分子間相互作用に基づく。アプタマーの標的としては、ペプチド、タンパク質、ヌクレオチド、アミノ酸、抗生物質、低分子量の有機又は無機化合物、及び更には全細胞が挙げられるが、これらに限定されない。アプタマーの解離定数は、典型的には、マイクロモルレベルとピコモルレベルとの間で変化し、これは抗体のその抗原に対する親和性に相当する。また、アプタマーは、高い特異性を有するように設計することができ、それによって、標的分子と密接に関連する誘導体とを識別することが可能になる。
【０００３】
アプタマーは、通常、ＳＥＬＥＸ（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment）によって、ランダム核酸の大きなライブラリからｉｎ  ｖｉｔｒｏで設計される。ＳＥＬＥＸ法は、１９９０年に最初に導入され、このとき、低分子量染料に対して一本鎖ＲＮＡが選別された（Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ａ．Ｄ．，Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．，１９９０．Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：８１８−８２２）。数年後に、一本鎖ＤＮＡアプタマー及び化学修飾されたヌクレオチドを含有するアプタマーも報告された（Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ａ．Ｄ．，Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．，１９９２．Ｎａｔｕｒｅ  ３５５：８５０−８５２；Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：６８３−６９５）。次いで、カチオン、低分子、タンパク質、細胞、又は組織などの数百の微小標的に対するアプタマーが選別された。文献からの例の収集物は、ウェブサイト：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｐｔａｇｅｎ．ｃｏｍ／ａｐｔａｍｅｒ−ｉｎｄｅｘ／ａｐｔａｍｅｒ−ｌｉｓｔ．ａｓｐｘにおけるデータベースに含まれている。しかしながら、歯を含む口腔内の表面に選択的に結合するアプタマーが依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ａ．Ｄ．，Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．，１９９０．Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：８１８−８２２
【非特許文献２】Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ａ．Ｄ．，Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．，１９９２．Ｎａｔｕｒｅ  ３５５：８５０−８５２
【非特許文献３】Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：６８３−６９５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明において、本発明者らは、歯に対するアプタマーを選別するためのＳＥＬＥＸの使用、及び活性成分を口腔に送達するためのこのようなアプタマーの使用を実証した。
【０００６】
本発明の特定の実施形態では、アプタマー組成物が提供される。アプタマー組成物は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドの誘導体、リボヌクレオチドの誘導体、又はこれらの混合物を含んでいてよい少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含み、当該アプタマー組成物は、歯、エナメル質、象牙質、炭酸カルシウム欠損ヒドロキシアパタイト、及びこれらの混合物からなる群から選択される物質に対する結合親和性を有する。
【０００７】
本発明の別の実施形態では、アプタマー組成物が提供される。アプタマー組成物は、配列番号１、配列番号９、配列番号２５、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１３６、又は配列番号２２３〜配列番号２３４を含む少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。
【０００８】
本発明の別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、又は配列番号２４４を含む１つ以上のモチーフを有する少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。
【０００９】
本発明の別の実施形態では、口腔ケア組成物が提供される。口腔ケア組成物は、少なくとも１つの核酸アプタマーを含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、口腔構成要素に対する結合親和性を有する。本発明の別の実施形態では、当該口腔構成要素は、歯、エナメル質、象牙質、又は口腔内の任意の他の表面のうちの少なくとも１つを含む。更に別の実施形態では、当該口腔構成要素は歯である。
【００１０】
本発明の別の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分を口腔に送達する方法が提供される。当該方法は、少なくとも１つの核酸アプタマー及び１つ以上の口腔ケア活性成分を含む口腔ケア組成物を投与すること、を含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマー及び当該１つ以上の口腔ケア活性成分は、共有結合又は非共有結合しており、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、口腔構成要素に対する結合親和性を有する。
【００１１】
本発明の別の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分を口腔に送達する方法が提供される。当該方法は、少なくとも１つの核酸アプタマー及び１つ以上のナノ物質を含む口腔ケア組成物を投与すること、を含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマー及び当該１つ以上のナノ物質は、共有結合又は非共有結合しており、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、口腔構成要素に対する結合親和性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
本開示をより完全に理解するために、以下の「発明を実施するための形態」及び図面を参照すべきである。
【図１】実験Ａについて様々な選別ラウンドにわたるコピー数の観点でトップ２０の配列の濃縮曲線（enrichment trajectories）を示す。
【図２】実験Ｂについて様々な選別ラウンドにわたるコピー数の観点でトップ２０の配列の濃縮曲線を示す。
【図３Ａ】陰性対照を示す。
【図３Ｂ】「ＯＣ１Ｒ−Ｂ１」として同定されたアプタマーの歯への結合を示す。
【図３Ｃ】「ＯＣ１Ｒ−Ｂ９」として同定されたアプタマーの歯への結合を示す。
【図３Ｄ】「ＯＣ１Ｒ−Ｂ２５／ＯＣ１Ｒ−Ａ９」として同定されたアプタマーの歯への結合を示す。
【図４】実験Ｂについてコピー数の観点でトップ１００の配列の濃縮曲線をクラスタリング（Ｗａｒｄ．Ｄ２法）することによって順序付けられた相関マトリックスを示す。
【図５】アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ１のランダム領域のモチーフ解析の結果を示す。
【図６】アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ１及びその保存モチーフの予測二次構造を示す。
【図７】アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ９のランダム領域のモチーフ解析の結果を示す。
【図８】アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ９及びその保存モチーフの予測二次構造を示す。
【図９】アプタマーＯＣ１Ｒ−Ａ９のランダム領域のモチーフ解析の結果を示す。
【図１０】アプタマーＯＣ１Ｒ−Ａ９及びその保存モチーフの予測二次構造を示す。
【図１１】アプタマーＯＣ１Ｒ−Ａ９の予測二次構造を示す。
【図１２】選別プロセス中に同定された少なくとも９０％のヌクレオチド配列同一性を有する例示的な配列のアラインメントを示す。
【図１３】選別プロセス中に同定された少なくとも７０％のヌクレオチド配列同一性を有する例示的な配列のアラインメントを示す。
【図１４】選別プロセス中に同定された少なくとも５０％のヌクレオチド配列同一性を有する例示的な配列のアラインメントを示す。
【図１５】歯に結合したＤＮＡアプタマーの量を示す。
【図１６】各洗浄後の歯に結合したＤＮＡアプタマーの量を示す。
【図１７】結合した（残存）、洗浄された（溶出）、及び歯から回収されなかった（喪失）ＤＮＡアプタマーの総量を示す。
【図１８Ａ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ１の予測二次構造を示す。
【図１８Ｂ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ１．１の予測二次構造を示す。
【図１８Ｃ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ１．２の予測二次構造を示す。
【図１８Ｄ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ１．３の予測二次構造を示す。
【図１９Ａ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ９の予測二次構造を示す。
【図１９Ｂ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ９．１の予測二次構造を示す。
【図１９Ｃ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ９．２の予測二次構造を示す。
【図２０Ａ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ａ９の予測二次構造を示す。
【図２０Ｂ】アプタマーＯＣ１Ｄ−Ａ９．１の予測二次構造を示す。
【図２１Ａ】切頭型ＤＮＡアプタマーの歯への結合を示す。
【図２１Ｂ】切頭型ＤＮＡアプタマーの歯への結合を示す。
【図２１Ｃ】切頭型ＤＮＡアプタマーの歯への結合を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、１つ以上のアプタマーを含む口腔ケア組成物を含み、当該アプタマーは、歯表面又は粘膜組織などの口腔内の特定の標的に結合するように設計されている。口腔ケア活性物質はアプタマーに結合することができ、それによって、活性物質を特定の口腔標的に送達することが可能になり、より高い効率及びより大きな効果が可能になる。
【００１４】
定義
本明細書で使用するとき、用語「アプタマー」とは、特定の標的に対して結合親和性を有する一本鎖オリゴヌクレオチド又はペプチドを指す。
【００１５】
本明細書で使用するとき、用語「核酸」とは、ヌクレオチドの高分子又はオリゴマーを指す。また、核酸は、ヌクレオチドの糖部分がＤ−リボースであるときには「リボ核酸」とも呼ばれ、糖部分が２−デオキシ−リボースであるときには「デオキシリボ核酸」とも呼ばれる。
【００１６】
本明細書で使用するとき、用語「ヌクレオチド」とは、通常、糖部分の５−炭素のヒドロキシル基を介して一リン酸、ポリリン酸、又はリン酸誘導体基にエステル化されたヌクレオシドからなる化合物を指す。また、ヌクレオチドは、糖部分がＤ−リボースであるときには「リボヌクレオチド」とも呼ばれ、糖部分が２−デオキシ−リボースであるときには「デオキシリボヌクレオチド」とも呼ばれる。
【００１７】
本明細書で使用するとき、用語「ヌクレオシド」とは、通常β−グリコシド結合を介して五炭糖（例えば、Ｄ−リボース又は２−デオキシ−リボース）に結合している、プリン又はピリミジンなどの核酸塩基からなるグリコシルアミンを指す。また、ヌクレオシドは、糖部分がＤ−リボースであるときには「リボヌクレオシド」とも呼ばれ、糖部分が２−デオキシ−リボースであるときには「デオキシリボヌクレオシド」とも呼ばれる。
【００１８】
本明細書で使用するとき、用語「核酸塩基」とは、塩基の化学的特性を有する窒素原子を含有する化合物を指す。核酸塩基の非限定的な例は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、チミン、シトシン、及びウラシルが挙げられるがこれらに限定されない、ピリジン、プリン、又はピリミジン部分を含む化合物である。
【００１９】
本明細書で使用するとき、用語「オリゴヌクレオチド」とは、ヌクレオチドで構成されるオリゴマーを指す。
【００２０】
本明細書で使用するとき、２つ以上のオリゴヌクレオチド、核酸、又はアプタマーに関する用語「同一」又は「配列同一性」とは、配列比較アルゴリズムを使用して又は目視検査によって測定したとき、一致が最大になるように比較及びアラインメントしたときに同じであるか又は指定された百分率の同じヌクレオチドを有する２つ以上の配列を指す。
【００２１】
本明細書で使用するとき、２つ以上のオリゴヌクレオチド、核酸、又はアプタマーに関する用語「実質的に相同」又は「実質的に同一」とは、一般的に、配列比較アルゴリズムを使用して又は目視検査によって測定したとき、一致が最大になるように比較及びアラインメントしたときに少なくとも４０％、６０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のヌクレオチド同一性を有する２つ以上の配列又は部分配列を指す。
【００２２】
本明細書で使用するとき、用語「エピトープ」とは、アプタマーと相互作用する標的の領域を指す。エピトープは、標的内の連続的な一続きであってもよく、又は折り畳まれた形態の標的において物理的に近接している複数の点によって表すこともできる。
【００２３】
本明細書で使用するとき、用語「モチーフ」とは、特定の標的（例えば、歯）に対する結合親和性を有するアプタマーのライブラリ中に存在し、ランダムオリゴヌクレオチドのライブラリと比較して予想されるよりも統計的に有意に高い発生確率を示す、連続する又は一連の連続するヌクレオチドの配列を指す。モチーフ配列は、アプタマーの選別プロセスの結果又は駆動因子（driver）であることが多い。
【００２４】
本明細書で使用するとき、用語「結合親和性」は、以下の等式を使用して計算することができる：結合親和性＝１本以上の歯に結合したアプタマーの量／１本以上の歯と共にインキュベートしたアプタマーの総量。
【００２５】
「口腔ケア組成物」とは、本明細書で使用するとき、通常の使用過程において、治療剤を全身投与する目的で意図的に嚥下されるものではなく、むしろ、歯の表面又は口腔組織と接触させるのに十分な時間にわたって口腔内に保持される製品を意味する。口腔ケア組成物の例としては、歯磨剤、歯磨きゲル、歯肉縁下用ゲル、口内洗浄液、ムース、フォーム、マウススプレー、トローチ剤、チュアブル錠、チューインガム、歯用ホワイトニングストリップ、フロス及びフロスコーティング、口臭予防用溶解ストリップ、又は義歯用ケア若しくは付着性製品が挙げられる。口腔ケア組成物はまた、口腔表面への直接適用又は付着のためのストリップ又はフィルム上に組み込まれてもよい。
【００２６】
本明細書で使用するとき、用語「歯磨剤」は、特に指示がない限り、歯用又は歯肉縁下用ペースト、ゲル、又は液体配合物を包含する。歯磨剤組成物は、単相組成物であってもよく、又は２つ以上の別個の歯磨剤組成物の組み合わせであってもよい。歯磨剤組成物は、深い縞状、表面的な縞状、多層状、ペーストをゲルで包囲した状態、又はこれらのいずれかの組み合わせなど、任意の所望の形態であってもよい。２つ以上の別個の歯磨剤組成物を含む歯磨剤中の各歯磨剤組成物は、ディスペンサの物理的に分離された区画内に収容され、同時に分注されてもよい。
【００２７】
以下、本明細書において使用される全ての百分率及び比率は、特に指示がない限り、組成物全体の重量を基準とする。本明細書で言及される成分の百分率、比率、及び濃度は、特に指示がない限りかかる成分の実際の量に基づき、市販製品としてかかる成分に組み合わされている可能性がある溶媒、充填剤、又はその他の物質を含まない。
【００２８】
本明細書において言及される全ての測定は、別途指定されない限り、２５℃で行われる。
【００２９】
本明細書で使用するとき、用語「口腔」は、歯及び歯肉を含む口の部分と、硬及び軟口蓋によって上方の境界が定められ、並びに、舌及び粘膜によって下方の境界が定められる、歯及び歯肉の後方の空洞と、を意味する。
【００３０】
アプタマー組成物
核酸アプタマーは、高い親和性及び特異性で標的に結合することができる特定の二次及び三次構造を有する一本鎖オリゴヌクレオチドである。本発明の特定の実施形態では、アプタマー組成物は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドの誘導体、リボヌクレオチドの誘導体、又はこれらの混合物を含む少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含み、当該アプタマー組成物は、歯、エナメル質、象牙質、ヒドロキシアパタイト、炭酸カルシウム欠損ヒドロキシアパタイト、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つである物質に対する結合親和性を有する。別の実施形態では、当該アプタマー組成物は、歯に対する結合親和性を有する。
【００３１】
別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１〜配列番号２３４のうちの少なくとも１つである配列と少なくとも５０％のヌクレオチド配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１〜配列番号２３４を含む配列と少なくとも７０％のヌクレオチド配列同一性を有するオリゴヌクレオチドを含む、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。更に別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１〜配列番号２３４のうちの少なくとも１つと少なくとも９０％のヌクレオチド配列同一性を有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１〜配列番号２２２のうちの少なくとも１つからの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１〜配列番号２２２のうちの少なくとも１つからの少なくとも４０個の連続ヌクレオチドを有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１〜配列番号２２２のうちの少なくとも１つからの少なくとも６０個の連続ヌクレオチドを有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１〜配列番号２２２のうちの少なくとも１つからの少なくとも７０個の連続ヌクレオチドを有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１〜配列番号２２２のうちの少なくとも１つからの少なくとも８０個の連続ヌクレオチドを有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。
【００３２】
別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１、配列番号９、配列番号２５、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１３６、又は配列番号２２３〜配列番号２３４を含む、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１、配列番号９、配列番号２５、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１３６、又は配列番号２２３〜配列番号２３４のうちの少なくとも１つと少なくとも５０％のヌクレオチド配列同一性を有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１、配列番号９、配列番号２５、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１３６、又は配列番号２２３〜配列番号２３４のうちの少なくとも１つと少なくとも７０％のヌクレオチド配列同一性を有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号１、配列番号９、配列番号２５、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１３６、又は配列番号２２３〜配列番号２３４のうちの少なくとも１つと少なくとも９０％のヌクレオチド配列同一性を有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。配列番号１と少なくとも９０％のヌクレオチド配列同一性を有するオリゴヌクレオチドの非限定的な例は、配列番号４９、配列番号６９、及び配列番号７５である。配列番号９と少なくとも５０％のヌクレオチド配列同一性を有するオリゴヌクレオチドの非限定的な例は、配列番号１４である。
【００３３】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、又は配列番号２４４のうちの少なくとも１つ以上のモチーフを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、又は配列番号２４４のうちの少なくとも１つと少なくとも７０％のヌクレオチド配列同一性を有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、又は配列番号２４４のうちの少なくとも１つと少なくとも８０％のヌクレオチド配列同一性を有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。別の実施形態では、アプタマー組成物は、配列番号２３５、配列番号２３６、配列番号２３７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、又は配列番号２４４のうちの少なくとも１つと少なくとも９０％のヌクレオチド配列同一性を有する、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。
【００３４】
別の実施形態では、配列番号１〜配列番号１１１及び配列番号２２３〜２２８のフッ素化ピリミジンヌクレオチドは、対応する天然非フッ素化ピリミジンヌクレオチドによって置換される。
【００３５】
化学修飾は、標的との異なる分子相互作用、結合能力の改善、オリゴヌクレオチドの立体配座の安定性強化、又はヌクレアーゼに対する耐性の増大などの新しい特徴をアプタマーに導入することができる。特定の実施形態では、アプタマー組成物のオリゴヌクレオチドは、天然又は非天然のヌクレアーゼを含む。天然核酸塩基は、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、及びウラシルである。非天然核酸塩基の非限定的な例は、ヒポキサンチン、キサンチン、７−メチルグアニン、５，６−ジヒドロウラシル、５−５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、チオウラシル、１−メチルヒポキサンチン、６−メチルイソキノリン−１−チオン−２−イル、３−メトキシ−２−ナフチル、５−プロピニルウラシル−１−イル、５−メチルシトシン−１−イル、２−アミノアデニン−９−イル、７−デアザ−７−ヨードアデニン−９−イル、７−デアザ−７−プロピニル−２−アミノアデニン−９−イル、フェノキサジニル、フェノキサジニル−Ｇ−クラム、ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、及びこれらの混合物である。
【００３６】
オリゴヌクレオチドのリン酸骨格の修飾は、ヌクレアーゼ消化に対する耐性を増大させることもできる。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、天然リン酸ジエステル、キラルホスホロチオエート、キラルメチルホスホネート、キラルホスホラミデート、キラルホスフェートキラルトリエステル、キラルボラノホスフェート、キラルホスホロセレノエート、ホスホロジチオエート、ホスホロチオエートアミデート、メチレンメチルイミノ、３’−アミド、３’アキラルホスホラミデート、３’アキラルメチレンホスホネート、チオホルムアセタール、チオエチルエーテル、フルオロホスフェート、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つである化学モチーフによって結合する。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、天然リン酸ジエステルによって結合してもよい。
【００３７】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオシドの糖部分は、リボース、デオキシリボース、２’−フルオロデオキシリボース、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（３−アミノ）プロピルリボース、２’−Ｏ−（２−メトキシ）エチルリボース、２’−Ｏ−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノオキシ）エチルリボース、２’−Ｏ−２−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルオキシ］エチルリボース、２’−Ｏ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミジルリボース、Ｎ−モルホリノホスホロジアミデート、α−デオキシリボフラノシル、他のペントース、ヘキソース、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つであってよい。
【００３８】
別の実施形態では、当該リボヌクレオチドの誘導体又はデオキシリボヌクレオチドの誘導体は、ロックドオリゴヌクレオチド、ペプチドオリゴヌクレオチド、グリコールオリゴヌクレオチド、トレオースオリゴヌクレオチド、ヘキシトールオリゴヌクレオチド、アルトリトールオリゴヌクレオチド、ブチルオリゴヌクレオチド、Ｌ−リボヌクレオチド、アラビノオリゴヌクレオチド、２’−フルオロアラビノオリゴヌクレオチド、シクロヘキセンオリゴヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド、又はこれらの混合物のうちの少なくとも１つであってよい。
【００３９】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドの５’末端及び３’末端のヌクレオチドが反転している。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、ペントース基の２’位でフッ素化されている。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのピリミジンヌクレオチドは、ペントース基の２’位でフッ素化されている。別の実施形態では、アプタマー組成物は、少なくとも１つの高分子材料を更に含み、当該高分子材料は、オリゴヌクレオチドに共有結合していてよく、当該高分子材料は、ポリエチレングリコールであってよい。
【００４０】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１０〜約２００ヌクレオチド長であってよい。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１００ヌクレオチド長未満であってよい。更に別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約５０ヌクレオチド長未満であってよい。
【００４１】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の口腔ケア活性成分に共有結合又は非共有結合し得る。好適な口腔ケア活性成分は、口腔で用いるのに安全であると一般にみなされ、口腔の全体的な健康状態、具体的には、このような口腔ケア活性成分が相互作用する口腔表面の状態を変化させる任意の物質を含む。これら活性物質が対処する口腔状態の例としては、歯の外観及び構造の変化、ホワイトニング、ステインの予防及び除去、ステインの漂白、歯垢の予防及び除去、タータ（tartar）の予防及び除去、虫歯の予防及び治療、歯肉の炎症及び／又は出血、粘膜創傷、病変、潰瘍、アフター性潰瘍、ヘルペス、並びに歯の膿瘍が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４２】
別の実施形態では、当該１つ以上の口腔ケア活性成分は、ホワイトニング剤、光沢剤、抗ステイン剤、抗虫歯剤、抗侵食剤、抗タータ剤、抗歯石剤、抗歯垢剤、歯再石灰化剤、抗破砕剤、強化剤、耐摩耗剤、抗歯肉炎剤、抗微生物剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗酵母剤、抗ウイルス剤、抗悪臭剤、口臭消臭剤、着香剤、冷感剤、味増強剤、嗅覚増強剤、抗付着剤、平滑剤、表面改質剤、抗歯痛剤、抗過敏症剤、抗炎症剤、歯肉保護剤、歯周活性物質、組織再生剤、抗血液凝固剤、抗凝塊安定剤、唾液刺激剤、唾液レオロジー変性剤、強化された保持剤、軟／硬組織標的化剤、歯／軟組織洗浄剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、Ｈ−２拮抗薬、鎮痛剤、天然抽出物及び精油、染料、光学光沢剤、カチオン、リン酸塩、フッ素イオン源、ペプチド、栄養素、酵素、口及び喉用製品、並びにこれらの混合物を含む群から選択される。口腔ケア活性成分の非限定的な具体例をセクションＩＶに列挙する。
【００４３】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、分子相互作用を介して、１つ以上の口腔ケア活性成分に非共有結合する。分子相互作用の例は、静電気力、ファンデルワールス相互作用、水素結合、及び芳香環のπ−πスタッキング相互作用である。
【００４４】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上のリンカー又はスペーサを使用して、当該１つ以上の口腔ケア活性成分に共有結合し得る。リンカーの非限定的な例は、化学的に不安定なリンカー、酵素不安定性リンカー、及び切断不可能なリンカーである。化学的に不安定なリンカーの例は、酸で切断可能なリンカー及びジスルフィドリンカーである。酸で切断可能なリンカーは、ヒドラゾン結合などの酸で切断可能な結合の加水分解を誘発して活性成分又はペイロード（payload）を放出するために、低ｐＨを利用する。ジスルフィドリンカーは、還元環境下で活性成分を放出することができる。酵素不安定性リンカーの例は、プロテアーゼとペイロードを放出するグルクロニダーゼによって切断されるβ−グルクロニドリンカーとの存在下で切断することができるペプチドリンカーである。また、切断不可能なリンカーは、アプタマーがヌクレアーゼによって分解された場合、活性成分を放出することができる。
【００４５】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上のナノ物質に共有結合又は非共有結合し得る。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド及び１つ以上の口腔ケア活性成分は、１つ以上のナノ物質に共有結合又は非共有結合し得る。別の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分は、１つ以上のナノ物質によって担持される。ナノ物質の非限定的な例は、金ナノ粒子、ナノスケール酸化鉄、炭素ナノ物質（単層カーボンナノチューブ及びグラフェンオキシドなど）、メソ細孔性シリカナノ粒子、量子ドット、リポソーム、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコール酸）ナノ粒子、高分子ミセル、デンドリマー、血清アルブミンナノ粒子、及びＤＮＡベースのナノ物質である。これらナノ物質は、大量の口腔ケア活性成分のための担体として機能することができ、一方、アプタマーは、ナノ物質を活性物質と共に予想される標的へ送達するのを促進することができる。
【００４６】
ナノ物質は、様々な形状又は形態を有し得る。形状又は形態の非限定的な例は、球形、矩形、多角形、円盤形、ドーナツ形、錐体形、ピラミッド形、ロッド／円筒形、及び繊維状である。本発明に関連して、ナノ物質は、約１００μｍ未満、より好ましくは約１０μｍ未満である少なくとも１つの空間寸法を有し得る。ナノ物質は、固相、半固相、又は液相中に物質を含む。
【００４７】
また、アプタマーは、高い親和性及び特異性で標的に結合するペプチドであってもよい。これらのペプチドアプタマーは、スカフォールドタンパク質の一部であり得る。ペプチドアプタマーは、コンビナトリアルライブラリから単離され得、定方向変異、又は可変領域の変異誘発及び選別の繰り返し（rounds）によって改良され得る。本発明の特定の実施形態では、アプタマー組成物は、少なくとも１つのペプチド又はタンパク質を含んでいてよく、当該アプタマー組成物は、歯、エナメル質、象牙質、ヒドロキシアパタイト、炭酸カルシウム欠損ヒドロキシアパタイト、及びこれらの混合物からなる群から選択される物質に対する結合親和性を有する。
【００４８】
アプタマー組成物の設計方法
ＳＥＫＥＸ（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment）として知られている核酸アプタマーの設計方法は、低分子及びタンパク質に対するアプタマーの選別について広く研究され、改善されてきた（国際公開第９１／１９８１３号）。簡潔に述べると、従来のバージョンのＳＥＬＥＸでは、プライマーとして機能する一定の５’及び３’末端に隣接するランダムに生成された固定長の配列からなるオリゴヌクレオチドの大きなライブラリの合成でプロセスを開始する。次いで、ライブラリ中のオリゴヌクレオチドを標的リガンドに曝露し、標的に結合しないものを除去する。結合した配列を溶出し、ＰＣＲによって増幅させることで、通常は溶出条件のストリンジェンシーを増大させて最も緊密に結合しているオリゴヌクレオチドを同定する、後続の選別ラウンドの準備をする。従来のＳＥＬＥＸに加えて、とりわけ、キャピラリー電気泳動ＳＥＬＥＸ、磁性ビーズベースのＳＥＬＥＸ、細胞ＳＥＬＥＸ、自動ＳＥＬＥＸ、複合体標的ＳＥＬＥＸなどの改善されたバージョンが存在する。アプタマースクリーニング法の概説は、「Ｋｉｍ，Ｙ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｂ．Ｇｕ（２０１４）．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｔａｍｅｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ａｐｔａｓｅｎｓｏｒｓ．Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４０（Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ａｐｔａｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ）：２９−６７」及び「Ｓｔｏｌｔｅｎｂｕｒｇ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．（２００７）．ＳＥＬＥＸ−Ａ（ｒ）ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｍｅｔｈｏｄ  ｔｏ  ｇｅｎｅｒａｔｅ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｌｉｇａｎｄｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｅｎｇ．２４（４）：３８１−４０３」にみられ、これらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ＳＥＬＥＸ法は広く適用されているが、予測的でもなく、全ての標的に対して標準化されているわけでもない。その代わり、この方法によって、実現可能なアプタマーを得るために、それぞれの具体的な標的に対して方法を開発する必要がある。
【００４９】
多数のアプタマーが選別されるにもかかわらず、ＳＥＬＥＸは、巨視的物質及び表面に対して結合親和性を有するアプタマーの選別には常用されていない。巨視的物質に対して高い結合親和性及び特異性を有するアプタマーの選別を成功させるためには、非特異的に結合するオリゴヌクレオチドの濃縮を最小化し、選別の特異性を増大させるのに十分な量及び純度でエピトープが存在する必要がある。また、正に帯電している基（例えば、一級アミノ基）の存在、水素結合の供与体及び受容体の存在、並びに平面性（芳香族化合物）が、アプタマーの選別を促進する。対照的に、負に帯電している分子（例えば、リン酸基を含有する）は、選別プロセスをより困難なものにする。予想外なことに、歯の有害な化学的特徴によってアプタマーの選別が困難になるにもかかわらず、本発明者らは、歯に対して高い結合親和性及び特異性を有するアプタマーの設計にＳＥＬＥＸを使用できることを見出した。
【００５０】
選別ライブラリ
ＳＥＬＥＸにおいて、初期候補ライブラリは、一般に、ライブラリの全ての候補の保存領域又はプライマー認識領域に３’末端及び５’末端で隣接するｎ個のヌクレオチドの長い可変領域を各々含む、化学的に合成されたＤＮＡオリゴヌクレオチドの混合物である。これらのプライマー認識領域によって、具体的にはＰＣＲを用いて、ＳＥＬＥＸ中に中央の可変領域を操作することが可能になる。
【００５１】
可変領域の長さがライブラリの多様性を決定し、これは、各位置が４つのヌクレオチドＡ、Ｔ、Ｇ又はＣのうちの１つによって占有され得るため、４ｎに等しい。長い可変領域では、巨大なライブラリの複雑さが生じる。例えば、ｎ＝５０のとき、理論的な多様性は４５０又は１０３０であるが、これは、各配列が１回示されるライブラリの場合１０５トンを超える物質に相当するため、実際には得難い値である。実験的限界は、２５ヌクレオチドの可変領域を有する全ての候補が示されるライブラリのものである、約１０１５種の異なる配列である。したがって、理論的多様性が約１０１８である３０ヌクレオチドの可変領域を含むライブラリを操作することを選択する場合、探索されるのはその可能性の１／１０００のみである。実際には、所望の特性を有するアプタマーを得るには、これで一般的に十分である。更に、使用されるポリメラーゼは信頼できず、約１０−４の割合でエラーを導入するので、ＳＥＬＥＸプロセス全体を通して配列プールの多様性を著しく高めるのに寄与する：１００のうちの１つの候補が、１００ヌクレオチド長のランダム領域を有するライブラリの各増幅サイクルにおいて改変され、したがって、ライブラリ全体について１０１３種の新しい候補を出現させる。
【００５２】
本発明の特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの出発混合物は、約１０６種を超える異なるオリゴヌクレオチド、又は約１０１３〜約１０１５種の異なるオリゴヌクレオチドを含んでいてよい。本発明の別の実施形態では、可変領域の長さは、約１０〜約１００ヌクレオチドであってよい。別の実施形態では、可変領域の長さは、約２０〜約６０ヌクレオチドであってよい。更に別の実施形態では、可変領域の長さは、約４０ヌクレオチドである。１０ヌクレオチドよりも短いランダム領域を使用してもよいが、二次又は三次構造を形成する能力、及び標的分子に結合する能力が制約を受ける場合がある。また、１００ヌクレオチドよりも長いランダム領域を使用してもよいが、合成コストの点で困難になる場合がある。可変領域のランダム性は、本発明の制約事項ではない。例えば、所与の標的に結合するオリゴヌクレオチドに関して予備知識が存在する場合、このような配列でスパイクされたライブラリは、完全にランダムなものと同等又はそれ以上に良好に機能し得る。
【００５３】
プライマー認識配列の設計では、配列間のアニーリングの可能性、配列内の折り畳まれた領域、又は同じ配列自体のアニーリングを最小限に抑えるように注意を要する。本発明の特定の実施形態では、プライマー認識配列の長さは、約１０〜約４０ヌクレオチドであってよい。別の実施形態では、プライマー認識配列の長さは、約１２〜約３０ヌクレオチドであってよい。更に別の実施形態では、プライマー認識配列の長さは、約１８〜約２６ヌクレオチド、すなわち、約１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又は２６ヌクレオチドであってよい。プライマー認識配列の長さ及び配列が、そのアニーリング温度を決定する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのプライマー認識配列は、約６０℃〜約７２℃のアニーリング温度を有し得る。
【００５４】
アプタマーは、リボヌクレオチド（ＲＮＡ）、デオキシヌクレオチド（ＤＮＡ）、又はこれらの誘導体であってよい。アプタマーがリボヌクレオチドであるとき、第１のＳＥＬＥＸ工程は、５’末端のプライマー認識配列を介して、化学的に合成されたＤＮＡオリゴヌクレオチドの初期混合物を転写することからなっていてよい。選別後、増幅する前に逆転写によって候補をＤＮＡに変換する。同等の特徴を有するＲＮＡ及びＤＮＡアプタマーが、同じ標的に対して選別され、当該技術分野において報告されている。更に、両方の種類のアプタマーは、互いの拮抗阻害剤であり得、このことは、相互作用部位が重複している可能性を示唆している。
【００５５】
選別の前又は後にヌクレアーゼを修飾することによって、疎水性又は光反応性などの新しい機能性をオリゴヌクレオチドに組み込むことができる。ピリミジンのＣ−５位又はプリンのＣ−８若しくはＮ−７位における修飾が、特に一般的であり、ＳＥＬＥＸの増幅工程中に使用される特定の酵素と適合性がある。本発明の特定の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドは、天然又は非天然の核酸塩基を含む。天然核酸塩基は、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、及びウラシルである。非天然核酸塩基の非限定的な例は、ヒポキサンチン、キサンチン、７−メチルグアニン、５，６−ジヒドロウラシル、５−５−メチルシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、チオウラシル、１−メチルヒポキサンチン、６−メチルイソキノリン−１−チオン−２−イル、３−メトキシ−２−ナフチル、５−プロピニルウラシル−１−イル、５−メチルシトシン−１−イル、２−アミノアデニン−９−イル、７−デアザ−７−ヨードアデニン−９−イル、７−デアザ−７−プロピニル−２−アミノアデニン−９−イル、フェノキサジニル、フェノキサジニル−Ｇ−クラム、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、及びこれらの混合物である。５−ブロモウラシル又は５−ヨードウラシルなどのいくつかの非天然核塩基を使用して、紫外線によって活性化されて標的と共有結合を形成することができる光架橋性アプタマーを生成することができる。
【００５６】
別の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、天然リン酸ジエステル、キラルホスホロチオエート、キラルメチルホスホネート、キラルホスホラミデート、キラルホスフェートキラルトリエステル、キラルボラノホスフェート、キラルホスホロセレノエート、ホスホロジチオエート、ホスホロチオエートアミデート、メチレンメチルイミノ、３’−アミド、３’アキラルホスホラミデート、３’アキラルメチレンホスホネート、チオホルムアセタール、チオエチルエーテル、フルオロホスフェート、及びこれらの混合物を含む群から選択される化学モチーフによって結合する。更に別の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、天然リン酸ジエステルによって結合する。
【００５７】
別の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドのヌクレオシドの糖部分は、リボース、デオキシリボース、２’−フルオロデオキシリボース、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（３−アミノ）プロピルリボース、２’−Ｏ−（２−メトキシ）エチルリボース、２’−Ｏ−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノオキシ）エチルリボース、２’−Ｏ−２−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチルオキシ］エチルリボース、２’−Ｏ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミジルリボース、Ｎ−モルホリノホスホロジアミデート、α−デオキシリボフラノシル、他のペントース、ヘキソース、及びこれらの混合物を含む群から選択され得る。
【００５８】
別の実施形態では、当該リボヌクレオチドの誘導体又は当該デオキシリボヌクレオチドの誘導体は、ロックドオリゴヌクレオチド、ペプチドオリゴヌクレオチド、グリコールオリゴヌクレオチド、トレオースオリゴヌクレオチド、ヘキシトールオリゴヌクレオチド、アルトリトールオリゴヌクレオチド、ブチルオリゴヌクレオチド、Ｌ−リボヌクレオチド、アラビノオリゴヌクレオチド、２’−フルオロアラビノオリゴヌクレオチド、シクロヘキセンオリゴヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド、及びこれらの混合物を含む群から選択される。
【００５９】
ＳＥＬＥＸプロセス中に修飾されたヌクレオチドを使用する場合、増幅工程中に使用される酵素と適合している必要がある。市販の酵素に適合する修飾の非限定的な例としては、ＲＮＡライブラリ中の糖の２’位における修飾が挙げられる。ピリミジンヌクレオチドのリボースの２’−ＯＨ基を、ヌクレアーゼによる分解からＲＮＡを保護する、２’−アミノ、２’−フルオロ、２’−メチル、又は２’−Ｏ−メチルで置換してもよい。ホスホロチオエート及びボラノホスフェートなどのリン酸リンカーにおける更なる修飾も、ポリメラーゼと適合性があり、ヌクレアーゼに対する耐性を付与する。
【００６０】
本発明の特定の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、ペントース基の２’位でフッ素化される。別の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドのピリミジンヌクレオチドは、ペントース基の２’位で少なくとも部分的にフッ素化される。更に別の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドの全てのピリミジンヌクレオチドは、ペントース基の２’位でフッ素化される。別の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、ペントース基の２’位でアミノ化される。
【００６１】
二次元ＳＥＬＥＸとして最近報告された別のアプローチは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのオリゴヌクレオチド選別及び動的コンビナトリアル化学（dynamic combinatorial chemistry、ＤＣＣ）、例えば、特定の群のオリゴヌクレオチド（アミン基）とアルデヒド化合物のライブラリとの間の可逆的反応を同時に適用する。この反応では、イミンオリゴヌクレオチドが生成され、これは従来のＳＥＬＥＸと同じ原理で選別される。したがって、天然アプタマーとは異なる標的ヘアピンＲＮＡ修飾アプタマーを同定することが可能であった。
【００６２】
非常に異なるアプローチは、光学異性体の使用に関する。天然オリゴヌクレオチドは、Ｄ型異性体である。Ｌ型アナログはヌクレアーゼに対して耐性であるが、ポリメラーゼによって合成することができない。光学異性化の法則によれば、Ｌシリーズのアプタマーは、その標的（Ｔ）のＤシリーズ異性体及び鏡像異性体（Ｔ’）によって形成される複合体と同じ特性を有する複合体を、当該標的（Ｔ）によって形成することができる。したがって、化合物Ｔ’を化学的に合成することができる場合、天然アプタマー（Ｄ）の選別を行うために使用することができる。同定されたら、このアプタマーをＬシリーズで化学的に合成することができる。このＬ型アプタマーは、天然標的（Ｔ）のリガンドである。
【００６３】
選別工程
一本鎖オリゴヌクレオチドは、二次及び三次構造を生成するように折り畳むことができ、これは塩基対の形成に類似している。したがって、初期配列ライブラリは、静電相互作用を誘発できる、水素原子を生成できるなどのユニットの分布にそれぞれが対応する、三次元形状のライブラリである。選別は、標的に適した形状、すなわち、最大数の相互作用を可能にし、最も安定なアプタマー−標的複合体の形成を可能にする形状をライブラリにおいて同定することが課題になる。小さな標的（染料、抗生物質など）については、同定されたアプタマーは、マイクロモル範囲の平衡解離定数を特徴とするが、一方、タンパク質標的については、１０−９Ｍ未満のＫｄ値も希ではない。
【００６４】
各ラウンドにおける選別は、標的と会合したオリゴヌクレオチドを遊離オリゴヌクレオチドから物理的に分離することによって行われる。複数の技術を適用してもよい（クロマトグラフィー、フィルター保持、電気泳動など）。オリゴヌクレオチド間で標的結合競合が生じるように、選択条件を調整する（標的／候補の相対濃度、イオン濃度、温度、洗浄など）。一般に、最も高い親和性を有するオリゴヌクレオチドの捕捉を促進するために、ラウンドが進行するにつれてストリンジェンシーを増大させる。更に、支持体又は望ましくない標的（例えば、フィルタ、ビーズなど）を認識するオリゴヌクレオチドを排除するために、対抗選別又は陰性選別を実行する。
【００６５】
標的特異的アプタマーを選別するためのＳＥＬＥＸプロセスは、５つの主な工程：オリゴヌクレオチドの標的への結合、低い結合親和性を有するオリゴヌクレオチドの分割又は除去、高い結合親和性を有するオリゴヌクレオチドの溶出、高い結合親和性を有するオリゴヌクレオチドの増幅又は複製、及び次のサイクルのためのオリゴヌクレオチドのコンディショニング又は調製、を繰り返すことを特徴とする。この選別プロセスは、標的物質に対して最も高い親和性及び特異性を有するオリゴヌクレオチドを同定するように設計される。
【００６６】
本発明の特定の実施形態では、アプタマー組成物を設計する方法は、ａ）オリゴヌクレオチドの混合物、ｂ）選別バッファ、並びにｃ）歯、エナメル質、象牙質、ヒドロキシアパタイト、炭酸カルシウム欠損ヒドロキシアパタイト、及びこれらの混合物からなる群から選択される標的物質を接触させる工程を含む。別の実施形態では、当該標的物質は歯である。別の実施形態では、当該歯は、当該接触工程の前に唾液で少なくとも部分的にコーティングされる。本発明の別の実施形態では、当該オリゴヌクレオチドの混合物は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドの誘導体、リボヌクレオチドの誘導体、及びこれらの混合物からなる群から選択されるオリゴヌクレオチドを含む。
【００６７】
ＳＥＬＥＸサイクルは、通常、高い結合親和性を有するオリゴヌクレオチドが同定されるまで、数回繰り返される。サイクル数は、標的の特徴及び濃度、出発ランダムオリゴヌクレオチドライブラリの設計、選別条件、標的結合部位のオリゴヌクレオチドに対する比、並びに分割工程の効率を含む、複数の変数に依存する。特定の実施形態では、当該接触工程は、少なくとも５回実施される。別の実施形態では、当該接触工程は、６〜１５回実施される。別の実施形態では、当該方法は、当該接触工程中に当該標的物質に結合しないオリゴヌクレオチドを除去する工程を更に含む。
【００６８】
オリゴヌクレオチドはオリゴ−アニオンであり、各ユニットは、特定のｐＨで電荷及び水素結合の供与体／受容体部位を有する。したがって、選別バッファのｐＨ及びイオン強度が重要であり、意図するアプタマーの適用の条件を表す必要がある。本発明の特定の実施形態では、当該選別バッファのｐＨは、約２〜約９である。別の実施形態では、当該選別バッファのｐＨは、約６〜約８である。更に別の実施形態では、当該選別バッファのｐＨは、約２〜約５である。アプタマーが酸性環境において良好な結合親和性を有すると予想される場合、低ｐＨを有する選別バッファが重要であり得る。
【００６９】
カチオンは、オリゴヌクレオチドの適切な折り畳みを促進し、口腔内で効果を与えることができる。本発明の特定の実施形態では、当該選別バッファはカチオンを含む。カチオンの非限定的な例は、Ｃａ２＋、Ｓｎ２＋、Ｓｎ４＋、Ｚｎ２＋、Ａｌ３＋、Ｃｕ２＋、Ｆｅ２＋、及びＦｅ３＋である。更に別の実施形態では、当該選別バッファは、Ｓｎ２＋及びＣａ２＋を含む群から選択される二価カチオンを含む。
【００７０】
アプタマーがその適用中にその構造及び機能を維持するために、開発中のものと同様の条件下でｉｎ  ｖｉｔｒｏでの選別プロセスを実施することができる。本発明の特定の実施形態では、当該選別バッファは、歯磨剤、歯磨剤、歯磨粉、マウスウォッシュ、口内洗浄剤、フロス、ブラシ、ストリップ、スプレー、パッチ、ペイントオン（paint on）、溶解可能物（dissolvables）、食用物（edibles）、ロゼンジ、ガム、チュアブル（chewables）、可溶性繊維、不溶性繊維、パテ、ワックス、義歯接着剤、義歯洗浄剤、及びこれらの混合物を含む群から選択される口腔ケア組成物の溶液又は懸濁液を含む。本発明の別の実施形態では、当該選別バッファは、歯磨剤の溶液を含む。本発明の別の実施形態では、当該選別バッファは、唾液の溶液を含む。
【００７１】
本発明の特定の実施形態では、当該選別バッファは、少なくとも１つの界面活性剤を含む。別の実施形態では、当該少なくとも１つの界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ベタイン、クロルヘキシジン、サルコシネート、プルロニック、及びトリクロサンを含む群から選択される。別の実施形態では、当該少なくとも１つの界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウムである。別の実施形態では、当該選別バッファは、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、ピロリン酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム（β相）、ケイ酸塩、アルミノケイ酸塩、ヒドロキシアパタイト、及びこれらの混合物を含む群から選択される少なくとも１つの研磨材料を含む。更に別の実施形態では、当該選別バッファは、ａ）少なくとも１つの界面活性剤と、ｂ）水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、ピロリン酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム（β相）、ケイ酸塩、アルミノケイ酸塩、ヒドロキシアパタイト、及びこれらの混合物を含む群から選択される少なくとも１つの研磨材料と、ｃ）少なくとも１つのリン酸塩と、ｄ）少なくとも１つのフッ化塩と、を含む。
【００７２】
陰性選別又は対抗選別工程は、標的内の望ましくない標的又は望ましくないエピトープに結合するオリゴヌクレオチドの濃縮を最小限に抑えることができる。口腔ケア用途では、歯染色物質へのアプタマーの結合は望ましくない場合がある。本発明の特定の実施形態では、当該アプタマー組成物を設計する方法は、ａ）オリゴヌクレオチドの混合物、ｂ）選別バッファ、及びｃ）１つ以上の歯染色物質を接触させる工程を更に含む。別の実施形態では、当該１つ以上の歯染色物質は、フラボノイド、カロテノイド、カラメル、タンニン、他の色素原、及びこれらの混合物を含む群から選択される１つ以上の天然又は合成の染料又は顔料を含む。更に別の実施形態では、当該１つ以上の歯染色物質は、ワイン、コーヒー、茶、炭酸ソーダ、及びこれらの混合物を含む群から選択される。陰性選別中又は対抗選別中、歯染色物質は、支持体に結合されていなくてもよく、固定化されていてもよい。未結合標的に対するアプタマーの陰性選別又は対抗選別の方法は、国際公開第２０１７３５６６６号に公開されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００７３】
本発明の特定の実施形態では、アプタマー組成物を設計する方法は、ａ）オリゴヌクレオチドの混合物を合成する工程と、ｂ）ｉ．当該オリゴヌクレオチドの混合物、ｉｉ．選別バッファ、並びにｉｉｉ．歯、エナメル質、象牙質、ヒドロキシアパタイト、炭酸カルシウム欠損ヒドロキシアパタイト、及びこれらの混合物からなる群から選択される標的物質を接触させて、標的懸濁液を生成する工程と、ｃ）当該標的懸濁液から液相を除去して、標的−オリゴヌクレオチド混合物を生成する工程と、ｄ）当該標的−オリゴヌクレオチド混合物を洗浄バッファと接触させ、液相を除去して標的−アプタマー混合物を生成する工程と、ｅ）当該標的−アプタマー混合物を溶出バッファと接触させ、当該液相を回収してアプタマー混合物を生成する工程と、を含み得る。別の実施形態では、当該工程は、少なくとも５回繰り返し実施される。別の実施形態では、当該工程は、６〜１５回実施される。
【００７４】
別の実施形態では、アプタマー組成物を設計する方法は、ａ）ｉ．５’末端におけるＴ７プロモーター配列、ｉｉ．中央の可変４０ヌクレオチド配列、及びｉｉｉ．３’末端における保存されたリバースプライマー認識配列からなるオリゴヌクレオチドを含むデオキシリボヌクレオチドのランダム混合物を合成する工程と、ｂ）ペントース基の２’位でフッ素化されたピリミジンヌクレオチド、及び天然プリンヌクレオチド、及び変異型Ｔ７ポリメラーゼを使用して、当該デオキシリボヌクレオチドのランダム混合物を転写して、フッ素化リボヌクレオチドの混合物を生成する工程と、ｃ）ｉ．当該フッ素化リボヌクレオチドの混合物、ｉｉ．選別バッファ、及びｉｉｉ．歯を接触させる工程であって、当該歯を唾液で少なくとも部分的にコーティングして、標的懸濁液を生成する、接触させる工程と、ｄ）当該標的懸濁液から液相を除去して、歯−オリゴヌクレオチド混合物を生成する工程と、ｅ）当該歯−オリゴヌクレオチド混合物を洗浄バッファと接触させ、液相を除去して、歯−アプタマー混合物を生成する工程と、ｆ）当該歯−アプタマー混合物を溶出バッファと接触させ、液相を回収して、ＲＮＡアプタマー混合物を生成する工程と、ｇ）当該ＲＮＡアプタマー混合物を逆転写及び増幅して、当該ＲＮＡアプタマー混合物のＤＮＡコピーを生成する工程と、ｈ）当該ＲＮＡアプタマー混合物の当該ＤＮＡコピーをシーケンシングする工程と、を含む。
【００７５】
選別後修飾
アプタマーの安定性を強化するために、選別プロセス後に、化学修飾をアプタマーに導入してもよい。例えば、リボース部分の２’−ＯＨ基を、２’−フルオロ、２’−アミノ、又は２’−Ｏ−メチル基で置換してよい。更に、アプタマーの３’末端及び５’末端を、とりわけ、ストレプトアビジン−ビオチン、反転チミジン、アミン、リン酸塩、ポリエチレングリコール、コレステロール、脂肪酸、タンパク質、酵素、フルオロフォアなどの異なる基で末端保護してもよく、これによって、オリゴヌクレオチドがエキソヌクレアーゼに対して耐性になり、又は何らかの追加的な効果が付与される。他の修飾については、本開示の前の章に記載されている。
【００７６】
アプタマー−標的相互作用特性を失わせることがある骨格修飾とは異なり、その特徴を損なうことなく送達ビヒクル、ツール、プローブ、又はセンサに変換するために、オリゴヌクレオチドの３’末端又は５’末端のうちの一方における様々な基をコンジュゲートさせることが可能である。この汎用性は、アプタマー、具体的には、本発明におけるその適用に関する重要な利点を構成する。本発明の特定の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分は、オリゴヌクレオチドの３’末端に共有結合する。別の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分は、オリゴヌクレオチドの５’末端に共有結合する。更に別の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分は、オリゴヌクレオチドのランダムな位置に共有結合する。
【００７７】
酵素又は化学的方法を使用してアプタマーに修飾を組み込むことができる。アプタマーの修飾に使用される酵素の非限定的な例は、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）、Ｔ４  ＲＮＡリガーゼ、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ（ＰＮＫ）、ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、及び当業者に既知の他の酵素である。ＴｄＴは、修飾されたデオキシヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドの３’末端に付加することができる、テンプレート独立性ポリメラーゼである。適切に修飾されたヌクレオシド３’，５’−二リン酸塩を使用することによって、３’末端においてリボヌクレオチドを標識するために、Ｔ４  ＲＮＡリガーゼを使用することができる。合成オリゴヌクレオチドの５’末端をリン酸化し、他の化学変換を可能にする（以下を参照）ために、ＰＮＫを使用することができる。ＤＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼは、このようなヌクレオチドが酵素と適合性である限り、修飾されたヌクレオチドを配列全体にわたってランダムに組み込むために一般的に使用される。
【００７８】
アプタマーの修飾に使用される化学的方法の非限定的な例は、本発明の実施形態として本明細書に組み込まれる、リボヌクレオチドの過ヨウ素酸酸化、５’−リン酸のＥＤＣ活性化、ランダム化学標識法、及び当業者に既知の他の化学的方法である。
【００７９】
過ヨウ素酸酸化中、メタ−及びオルト−過ヨウ素酸は、３’−リボヌクレオチドの隣接するジオール間のＣ−Ｃ結合を切断し、２つのアルデヒド部分を生成して、ＲＮＡアプタマーの３’末端における標識又は活性成分のコンジュゲートを可能にする。得られたアルデヒドは、ヒドラジド又は一級アミンを含有する分子と容易に反応することができる。アミンを使用するとき、生成されたシッフ塩基は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）でより安定な二級アミンに還元され得る。
【００８０】
５’−リン酸のＥＤＣ活性化を使用するとき、オリゴヌクレオチドの５’−リン酸は、多くの場合、ＥＤＣ（１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩）及びイミダゾールで活性化されて、反応性イミダゾリド中間体を生成し、続いて、一級アミンと反応して、５’末端が修飾されたアプタマーを生成する。反応には５’−リン酸基が必要であるので、まず、合成オリゴヌクレオチドをキナーゼ（例えば、ＰＮＫ）で処理してよい。
【００８１】
ランダムな化学的標識は、様々な方法で行うことができる。アプタマーに沿ったランダムな部位での標識が可能になるので、末端標識法と比較してより高度の修飾を達成することができる。しかしながら、核酸塩基が修飾されるので、アプタマーのその標的への結合が破壊されることがある。最も一般的なランダム化学修飾法は、フェニルアジド系試薬などの光反応性試薬の使用を伴う。フェニルアジド基がＵＶ光に曝露されたとき、それは、二重結合並びにアプタマーのＣ−Ｈ及びＮ−Ｈ部位と反応する不安定なニトレンを形成する。
【００８２】
アプタマーの修飾方法についての更なる情報は、「Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．Ｔ．（２００８）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ｐｐ．９６９−１００２，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ．」にまとめられており、この内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【００８３】
選別後、化学修飾に加えて、配列の切断を実施して、結合するのに、又は構造体に折り畳むのに必須ではない、領域を除去してもよい。更に、アプタマーは、異なる特徴又はより良好な親和性を提供するために互いに結合してもよい。したがって、本明細書に記載されるアプタマーの任意の切断又は組み合わせが、本発明の一部として組み込まれる。
【００８４】
口腔ケア製品におけるアプタマー組成物の適用
本発明のアプタマーは、１つ以上の効果を提供するために口腔ケア組成物において使用することができる。本発明の特定の実施形態では、口腔ケア組成物は、少なくとも１つの核酸アプタマーを含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、口腔構成要素に対する結合親和性を有する。別の実施形態では、口腔ケア組成物は、少なくとも１つの核酸アプタマーを含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、歯、エナメル質、象牙質、及び口腔内の任意の他の表面を含む群から選択される口腔構成要素に対する結合親和性を有する。別の実施形態では、口腔ケア組成物は、少なくとも１つの核酸アプタマーを含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、歯に対する結合親和性を有する。
【００８５】
本発明の口腔ケア組成物は、様々な形態であってよい。上記形態の非限定的な例は、歯磨剤（歯磨剤及び歯磨粉を含む）、マウスウォッシュ、口内洗浄剤、フロス、ブラシ、ストリップ、スプレー、パッチ、ペイントオン、溶解可能物、食用物、ロゼンジ、ガム、チュアブル、可溶性繊維、不溶性繊維、パテ、ワックス、義歯接着剤、義歯洗浄剤、液体、ペースト、ニュートン流体又は非ニュートン流体、ゲル、及びゾルである。
【００８６】
本発明の口腔エーカー組成物（oral acre compositions）は、以下のうちの１つ以上を含んでいてよい。
本発明で使用するのに好適なレオロジー変性剤としては、有機及び無機のレオロジー変性剤、並びにこれらの混合物が挙げられる。無機レオロジー変性剤としては、ヘクトライト及び誘導体、含水シリカ、三級及び四級ケイ酸マグネシウム誘導体、ベントナイト、並びにこれらの混合物が挙げられる。好ましい無機レオロジー変性剤は、ヘクトライト及び誘導体、含水シリカ、並びにこれらの混合物である。有機レオロジー変性剤としては、キサンタンガム、カラギーナン及び誘導体、ジェランガム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクレロチウムガム及び誘導体、プルラン、ラムザンガム（rhamsan gum）、ウェランガム（welan gum）、コンニャク、カードラン、カルボマー、アルギン、アルギン酸、アルギン酸塩及び誘導体、ヒドロキシエチルセルロース及び誘導体、ヒドロキシプロピルセルロース及び誘導体、リン酸デンプン誘導体、グアーガム及び誘導体、デンプン及び誘導体、無水マレイン酸とアルケンとのコポリマー及び誘導体、セルロースガム及び誘導体、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、ポロキサマー及び誘導体、ポリアクリレート及び誘導体、メチルセルロース及び誘導体、エチルセルロース及び誘導体、寒天及び誘導体、アラビアゴム及び誘導体、ペクチン及び誘導体、キトサン及び誘導体、樹脂性ポリエチレングリコール、例えばＰＥＧ−ＸＭ（式中、Ｘは≧１である）、カラヤゴム、ローカストビーンガム、納豆ガム、ビニルピロリドンとアルケンとのコポリマー、トラガカントガム、ポリアクリルアミド、キチン誘導体、ゼラチン、ベータグルカン、デキストリン、デキストラン、シクロデキストリン、メタクリレート、微結晶性セルロース、ポリクオタニウム、ファーセレランガム（furcellaren gum）、ガティガム（ghatti gum）、サイリウムガム、マルメロガム、タマリンドガム、カラマツガム、タラガム、並びにこれらの混合物が挙げられる。キサンタンガム、カラギーナン及び誘導体、ジェランガム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクレロチウムガム及び誘導体、プルラン、ラムザンガム、ウェランガム、コンニャク、カードラン、カルボマー、アルギン、アルギン酸、アルギン酸塩及び誘導体、ヒドロキシエチルセルロース及び誘導体、ヒドロキシプロピルセルロース及び誘導体、リン酸デンプン誘導体、グアーガム及び誘導体、デンプン及び誘導体、無水マレイン酸とアルケンとのコポリマー及び誘導体、セルロースガム及び誘導体、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、ポロキサマー及び誘導体、並びにこれらの混合物が好ましい。
【００８７】
特定の実施形態では、レオロジー変性剤の量は、歯磨剤などの全組成物の約０．１重量％〜約１５重量％又は約０．５重量％〜約３重量％の範囲であり得る。
【００８８】
上記成分に加えて、甘味料、着香料、保存剤、有効成分、研磨剤、フッ素イオン源、キレート剤、抗菌剤、シリコーン油、並びに保存剤及び着色剤などの他の補助剤が、必要に応じて添加されてもよい。
【００８９】
甘味料として、サッカリンナトリウム、スクロース、マルトース、ラクトース、ステビオシド、ネオヘスペリジルジグリドロカルコン（neohesperidildigydrochalcone）、グリチルリチン、ペリラルチン、ｐ−メトキシ桂皮アルデヒドなどを全組成物の０．０５〜５重量％の量で使用してよい。スペアミント油、ペパーミント油、サルビア油、ユーカリ油、レモン油、ライム油、冬緑油、及び桂皮油などの精油、他のスパイス及び果実着香料、並びにｌ−メントール、カルボン、アネトール、オイゲノールなどの単離及び合成着香材料を着香剤として使用してよい。着香料は、全組成物の０．１〜５重量％の量でブレンドしてよい。エチルパラオキシベンゾエート、ブチルパラオキシベンゾエートなどを保存剤として使用してよい。甘味料を研磨剤と共に添加してもよい。着香料及び保存剤は、わずかに膨張したレオロジー変性剤の液を調製するときに添加してもよく、湿潤剤と混合した後にレオロジー変性剤と混合してもよい。デキストラナーゼ、溶菌酵素、リゾチーム、アミラーゼなどの酵素、並びにεアミノカプロン酸及びトラネキサム酸などの抗プラスミン剤、モノフルオロリン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、及びフッ化第一スズなどのフッ素化合物、クロルヘキシジン塩、四級アンモニウム塩、アルミニウムクロロヒドロキシルアラントイン、グリチルリチン酸、クロロフィル、塩化ナトリウム、及びリン酸化合物を、有効成分として使用してよい。更に、シリカゲル、アルミニウムシリカゲル、有機酸、及びこれらの塩を、必要に応じてブレンドしてもよい。低粘度を有する有機有効成分は、わずかに膨張したレオロジー変性剤の液を調製するときに添加してよい。
【００９０】
本発明の口腔ケア組成物は、約０．１重量％を超える界面活性剤又は界面活性剤の混合物を含んでいてよい。ラウリル硫酸ナトリウムなどの一般的な原材料がより低い活性の水溶液として供給され得る場合であっても、本明細書で言及される界面活性剤レベルは、１００％活性物質ベースである。
【００９１】
好適な界面活性剤レベルは、全組成物の約０．１重量％〜約１５重量％、約０．２５重量％〜約１０重量％、又は約０．５重量％〜約５重量％である。本明細書に用いるのに好適な界面活性剤としては、アニオン性、両性、非イオン性、双極性、及びカチオン性の界面活性剤が挙げられるが、アニオン性、両性、非イオン性、及び双極性の界面活性剤（及びこれらの混合物）が好ましい。
【００９２】
本明細書で有用なアニオン性界面活性剤としては、アルキル基中に１０個〜１８個の炭素原子を有するアルキルサルフェート及びアルキルエーテルサルフェートの水溶性塩、並びに１０個〜１８個の炭素原子を有する脂肪酸のスルホン酸化モノグリセリドの水溶性塩が挙げられる。ラウリル硫酸ナトリウム及びココナツモノグリセリドスルホン酸ナトリウムが、この種のアニオン性界面活性剤の例である。
【００９３】
本発明で有用な好適なカチオン性界面活性剤は、塩化ラウリルトリメチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、ジ−イソブチルフェノキシエチル−ジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ココナツアルキルトリメチル−亜硝酸アンモニウム、フッ化セチルピリジニウムなどの、約８個〜１８個の炭素原子を含有する一本の長いアルキル鎖を有する、脂肪族四級アンモニウム化合物の誘導体として広く定義することができる。特定のカチオン性界面活性剤は、本明細書に開示される組成物中で殺菌剤として作用することもできる。
【００９４】
本発明の組成物において使用することができる好適な非イオン性界面活性剤は、アルキレンオキシド基（本質的に親水性）と、本質的に脂肪族及び／又は芳香族であり得る有機疎水性化合物との縮合によって生成される化合物として広く定義することができる。好適な非イオン性界面活性剤の例としては、ポロキサマー、ソルビタンジ−イソステアレートなどのソルビタン誘導体、ＰＥＧ−３０水素添加ヒマシ油などの水素添加ヒマシ油のエチレンオキシド縮合物、脂肪族アルコール又はアルキルフェノールのエチレンオキシド縮合物、エチレンオキシドとプロピレンオキシド及びエチレンジアミンの反応生成物との縮合から得られる生成物、長鎖三級アミンオキシド、長鎖三級ホスフィンオキシド、長鎖ジアルキルスルホキシド、並びにこのような材料の混合物が挙げられる。これらの材料は、口腔ケア組成物に対する過剰な粘度上昇に寄与することなく、泡を安定化するために有用である。
【００９５】
双極性界面活性剤は、脂肪族四級アンモニウム、ホスホニウム、及びスルホニウム化合物の誘導体として広く説明することができ、その脂肪族基は直鎖であっても分枝鎖であってもよく、脂肪族置換基の１つは約８個〜１８個の炭素原子を含有し、１つはアニオン性水溶性基、例えばカルボキシ基、スルホネート基、サルフェート基、ホスフェート基、又はホスホネート基を含有する。
【００９６】
本発明の口腔ケア組成物は、約５０％を超える液体担体材料を含んでいてよい。水は、全組成物の約２０重量％〜約７０重量％、又は約３０重量％〜約５０重量％を構成し得る。これらの水の量は、添加される遊離水に加えて、ソルビトールと共になど、他の物質と共に、及び界面活性剤溶液と共に導入される水を包含する。
【００９７】
一般的に、液体担体は、１つ以上の湿潤剤を更に含んでいてよい。好適な湿潤剤としては、グリセリン、ソルビトール、及び他の食用多価アルコール、例えば、約１５％〜約５０％のレベルの低分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。発泡特性と、乾燥に対する耐性との最良の均衡を提供するために、全水対全湿潤剤の比は、約０．６５：１〜約１．５：１、又は約０．８５：１〜約１．３：１であり得る。
【００９８】
本明細書での口腔ケア組成物の粘度は、組成物中に存在するニュートン液体の粘度の影響を受け得る。これらは、グリセリン若しくは水などの純粋な液体、又は水中のソルビトール溶液などの溶媒中の溶質溶液のいずれかであり得る。非ニュートン口腔ケア組成物の粘度に対するニュートン液体の寄与レベルは、ニュートン液体が組み込まれるレベルに依存する。水は、口腔ケア組成物中にかなりの量で存在し得、２５℃で約１ｍＰａ．ｓのニュートン粘度を有する。グリセリン及びソルビトール溶液などの湿潤剤は、典型的には、水よりも著しく高いニュートン粘度を有する。結果として、湿潤剤の全レベル、水対湿潤剤の比、及び湿潤剤の選択が、口腔ケア組成物の高い剪断速度粘度を決定するのを助ける。
【００９９】
ソルビトール、グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどの一般的な湿潤剤、及びそれらの混合物が使用され得るが、使用される特定レベル及び比率は、湿潤剤の選択に応じて異なる。ソルビトールが使用されてもよいが、その比較的高いニュートン粘度に起因して、特定の実施形態では、それが口腔ケア組成物の高い剪断速度粘度に著しく寄与するため、組成物の４５重量％を超えるレベルで組み込むことができない。逆に、プロピレングリコールは、ソルビトールより低いニュートン粘度を有し、したがって口腔ケア組成物の高い剪断速度粘度にそれほど寄与しないため、より高いレベルで用いられ得る。グリセリンは、ソルビトール及びポリエチレングリコールのニュートン粘度の中間で、中間ニュートン粘度を有する。
【０１００】
エタノールも口腔ケア組成物中に存在し得る。これらの量は、全組成物の約０．５重量％〜約５重量％、又は約１．５重量％〜約３．５重量％の範囲であり得る。また、エタノールは、有用な溶媒であり得、香味剤の影響を強化するように機能することもできるが、この後者の点では、通常、低レベルのみが用いられる。また、プロピレングリコールなどの非エタノール溶媒を使用してもよい。また、低分子量ポリエチレングリコールも本明細書において有用である。
【０１０１】
本発明の口腔ケア組成物は、歯磨剤で使用されるものなどの歯科用研磨剤を含んでいてもよい。研磨剤は、歯を磨く、表面沈着物を除去する、又は両方の機能を有する。本明細書での使用が考慮される研磨剤物質は、歯の象牙質を過度に摩耗しない任意の物質であることができる。好適な研磨剤としては、不溶性リン酸塩研磨剤、例えば、リン酸二カルシウム、リン酸三カルシウム、ピロリン酸カルシウム、β相ピロリン酸カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物、無水リン酸カルシウム、不溶性メタリン酸ナトリウムなどが挙げられる。また、炭酸カルシウム及び炭酸マグネシウムなどのチョーク系研磨剤、キセロゲル、ハイドロゲル、エアロゲル、及び沈降物を含むシリカ、アルミナ及びαアルミナ三水和物などのその水和物、焼成ケイ酸アルミニウム及びケイ酸アルミニウムなどのアルミノケイ酸塩、三ケイ酸マグネシウムなどのケイ酸マグネシウム及びケイ酸ジルコニウム、並びに尿素とホルムアルデヒドとの粒子状縮合生成物などの熱硬化性重合樹脂、ポリメチルメタクリレート、粉末状ポリエチレン、並びに米国特許第３，０７０，５１０号に開示されているものなどの他のものも好適である。また、研磨剤の混合物を使用することもできる。研磨磨き材料は、一般に０．１μｍ〜３０μｍ、又は約１μｍ〜１５μｍの平均粒子サイズを有する。
【０１０２】
様々な種類のシリカ歯科用研磨剤は、歯のエナメル質又は象牙質を過度に磨耗させることなく優れた歯の洗浄及び研磨性能を付与する。シリカ研磨剤は、米国特許第３，５３８，２３０号、同第３，８６２，３０７号に記載されている沈降性シリカ又はシリカキセロゲルのようなシリカゲルであり得る。シリカ１００ｇあたり３０ｇ〜シリカ１００ｇあたり１００ｇの吸油量を有するシリカを使用してよい。低い吸油量レベルを有するシリカは、あまり構造化していないためより高度に構造化しているため高い吸油量レベルを有するシリカと同程度まで、口腔ケア組成物の粘度を上昇させないことがわかった。本明細書で使用するとき、吸油量は、シリカが２５℃で吸収することができる亜麻仁油の最大量を測定することによって測定される。
【０１０３】
好適な研磨剤レベルは、全組成物の約０重量％〜約２０重量％、特定の実施形態では、１０％未満、例えば１％〜１０％であってよい。特定の実施形態では、全組成物の３重量％〜５重量％の研磨剤レベルが使用され得る。
【０１０４】
抗カリエス保護の場合、フッ素イオン源は、通常、口腔ケア組成物中に存在する。フッ素源としては、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化カルシウム、フッ化第一スズ、モノフルオロリン酸スズ、及びモノフルオロリン酸ナトリウムが挙げられる。好適なレベルは、口腔ケア組成物の２５〜２５００重量ｐｐｍの利用可能なフッ素イオンを提供する。
【０１０５】
好適なキレート剤としては、有機酸及びその塩、例えば、酒石酸及びその製薬上許容できる塩、クエン酸、並びにアルカリ金属クエン酸塩、並びにこれらの混合物が挙げられる。キレート剤は、細菌の細胞壁にみられるカルシウムを錯化することができる。また、キレート剤は、このバイオマスを無傷のまま保持するのを助けているカルシウム架橋から、カルシウムを除去することによって、歯垢を崩壊させることもできる。しかしながら、カルシウムに対して高すぎる親和性を有するキレート剤を使用すると、歯を脱灰させる可能性がある。特定の実施形態では、キレート剤は、約１０１〜約１０５のカルシウム結合定数を有し、歯垢及び歯石形成の低減と共に、洗浄の改善を提供する。本発明の配合物に使用され得るキレートの量は、約０．１％〜約２．５％、約０．５％〜約２．５％、又は約１．０％〜約２．５％である。酒石酸塩キレート剤は、単独で、又は他の任意選択のキレート剤と組み合わせて使用してよい。
【０１０６】
本発明においてキレート剤として使用するのに特に好適な剤の別の群は、抗歯石剤として有用な水溶性のポリリン酸塩、ポリホスホン酸塩、及びピロリン酸塩である。本組成物において使用されるピロリン酸塩は、アルカリ金属ピロリン酸塩のいずれであってもよい。本組成物において有用なピロリン酸塩の有効量は、一般に、少なくとも１．０％のピロリン酸イオン又は約１．５％〜約６％のこのようなイオンを提供するのに十分である。ピロリン酸塩は、Ｋｉｒｋ＆Ｏｔｈｍｅｒ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌｕｍｅ  １５，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９６８）により詳細に記載されている。
【０１０７】
トリポリリン酸ナトリウム、トリポリホスホン酸カリウム、及びヘキサメタホスホン酸ナトリウムなどの水溶性ポリホスホン酸塩が使用されてもよい。この種の他の長鎖抗歯石剤は、国際公開第９８／２２０７９号に記載されている。水溶性ジホスホン酸塩も好ましい。好適な可溶性ジホスホン酸塩としては、エタン−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホン酸塩（ＥＨＤＰ）（ethane-1-hydroxy-1,1,-diphosphonate）及びアザ−シクロヘプタン−ジホスホン酸塩（ＡＨＰ）（aza-cycloheptane-diphosphonate）が挙げられる。トリポリリン酸塩及びジホスホン酸塩は、水溶性の低い化学的ステイン除去剤ほど粘度を上昇させることなく抗タータ活性及びステイン除去活性の両方を提供し、また水中における加水分解に対して安定であるので、特に有効である。可溶性ポリリン酸塩及びジホスホン酸塩は、脱ステイン活性物質として有益である。理論に束縛されるものではないが、これらの成分は、歯のエナメル質表面からステインの付着したペリクルを脱着することによって、ステインを除去すると考えられる。水溶性ポリホスホン酸塩及びジホスホン酸塩の好適なレベルは、口腔ケア組成物の約０．１重量％〜約１０重量％、約１重量％〜約５重量％、又は約１．５重量％〜約３重量％である。
【０１０８】
本発明での使用に好適な、更に別の可能なキレート剤の群は、アニオン性高分子ポリカルボキシレートである。このような物質は当該技術分野において公知であり、その遊離酸の形態で使用されるか、又は部分的に若しくは好ましくは完全に中和された水溶性アルカリ金属（例えば、カリウム、好ましくはナトリウム）若しくはアンモニウムの塩の形態で使用される。更なる高分子ポリカルボキシレートは、米国特許第４，１３８，４７７号及び同第４，１８３，９１４号に開示されており、スチレン、イソブチレン、又はエチルビニルエーテルと無水マレイン酸とのコポリマー；ポリアクリル酸、ポリイタコン酸、及びポリマレイン酸；並びにＵｎｉｒｏｙａｌ  ＮＤ−２として入手可能な、わずか１，０００程度のＭＷのスルホアクリルオリゴマーが挙げられる。
【０１０９】
抗菌剤もまた本発明で有用である。ピロリン酸第一スズ及びグルコン酸第一スズなどの第一スズ塩、乳酸亜鉛及びクエン酸亜鉛などの亜鉛塩、ビスグリシン酸銅などの銅塩、塩化セチルピリジニウム及び塩化テトラデシルエチルピリジニウムなどの四級アンモニウム塩、ビス−ビグアニド塩、並びにトリクロサンなどの非イオン性抗菌剤を含む、多種多様な抗菌剤を使用することができる。チモールなどの特定の香味油も抗菌活性を有し得る。このような剤は、米国特許第２，９４６，７２５号及び米国特許第４，０５１，２３４号に開示されている。国際公開第９９／４３２９０号に記載されている亜塩素酸ナトリウムも有用である。
【０１１０】
抗菌剤は、存在する場合、典型的には、約０．０１％〜約１０％のレベルで含まれる。第一スズ及びカチオン性抗菌剤のレベルは、染色問題を回避するために、約５％未満又は約１％未満に維持され得る。
【０１１１】
特定の実施形態では、抗菌剤は、米国特許第５，０３７，６３７号に記載されるものなどの非カチオン性抗菌剤である。特に有効な抗菌剤は、２’，４，４’−トリクロロ−２−ヒドロキシ−ジフェニルエーテル（トリクロサン）である。
【０１１２】
本組成物における任意選択の成分は、シリコーン油である。シリコーン油は、国際公開第９６／１９１９１号に開示されているように、歯垢バリアとして有用であり得る。シリコーン油の好適な分類としては、ジメチコーン、ジメチコノール、ジメチコーンコポリオール、及びアミノアルキルシリコーンが挙げられるが、これらに限定されない。シリコーン油は、一般に、約０．１重量％〜約１５重量％、約０．５重量％〜約５重量％、又は約０．５重量％〜約３重量％のレベルで存在する。
【０１１３】
サッカリンナトリウム、シクラミン酸ナトリウム、アセスルファムＫ、アスパルテーム、スクロースなどの甘味剤は、約０．１重量％〜５重量％のレベルで含まれていてよい。また、着香料、保存剤、乳白剤、及び着色剤を含む他の添加剤が組み込まれてもよい。典型的な着色剤は、Ｄ＆Ｃイエロー１０号、ＦＤ＆Ｃブルー１号、ＦＤ＆Ｃレッド４０号、Ｄ＆Ｃレッド３３号、及びこれらの組み合わせである。着色剤のレベルは、約０．０００１％〜約０．１％の範囲であり得る。
【０１１４】
口腔ケア組成物は、好ましくは、対象とする使用時に、適用された口腔構成要素にとって有害ではなく、１つ以上の効果を促進するレベルの少なくとも１つの核酸アプタマーを含む。本発明の特定の実施形態では、当該口腔ケア組成物は、約０．００００１％〜約１０％の少なくとも１つの核酸アプタマーを含む。別の実施形態では、当該口腔ケア組成物は、約０．００００５％〜約５％の少なくとも１つの核酸アプタマーを含む。別の実施形態では、当該口腔ケア組成物は、約０．０００１％〜約１％の少なくとも１つの核酸アプタマーを含む。
【０１１５】
別の実施形態では、口腔ケア組成物は、少なくとも１つのペプチドアプタマーを含み、当該少なくとも１つのペプチドアプタマーは、歯、エナメル質、象牙質、及び口腔内の任意の他の表面からなる群から選択される口腔構成要素に対する結合親和性を有する。別の実施形態では、当該少なくとも１つのペプチドアプタマーは、歯に対する結合親和性を有する。
【０１１６】
本発明のアプタマーは、口腔構成要素に結合したときに、歯の再石灰化（例えば、歯へのカルシウム沈着を改善することによって）、歯の耐酸性、歯の外観及び構造の変化、ステイン予防（例えば、染料又は顔料などの歯着色物質を忌避することによって）、歯垢予防、タータ予防、並びに虫歯の予防及び治療を含むが、これらに限定されない、いくつかの効果を提供することができる。一例として、フッ素化ヌクレオチドを含むアプタマーが結合後に劣化又は分解された場合、それは、フッ素イオンを歯に有効に送達することができ、これによって、虫歯予防効果を提供することができる。フッ素化ヌクレオチドの非限定的な例としては、フルオロリン酸ヌクレオチド、２’−フルオロデオキシリボヌクレオチド、及びフッ素化核酸塩基を有するヌクレオチドが挙げられる。
【０１１７】
特定の標的（例えば、歯）の異なるエピトープに結合するアプタマーを併用すると、異なる個体にわたって、より高い全体的な標的被覆率及び／又は有効性を提供することができる。異なるエピトープに結合するアプタマーの同定は、実施例３に記載されるＳＥＬＥＸ選別のラウンド中のオリゴヌクレオチド頻度の変化について共分散分析を行うことによって達成することができる。本発明の特定の実施形態では、口腔ケア組成物は、少なくとも２つの異なる核酸アプタマーを含み、当該少なくとも２つの異なる核酸アプタマーは、歯の異なるエピトープに対する結合親和性を有する。別の実施形態では、当該少なくとも２つの異なる核酸アプタマーは、配列番号１、配列番号９、配列番号２５、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１３６、及び配列番号２２３〜配列番号２３４からなる群から選択される。
【０１１８】
また、口腔構成要素に活性成分を有効に送達するために、本発明のアプタマーを口腔ケア製品に配合することもできる。本発明の特定の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分を口腔に送達する方法は、少なくとも１つの核酸アプタマー及び１つ以上の口腔ケア活性成分を含む口腔ケア組成物を投与すること、を含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマー及び当該１つ以上の口腔ケア活性成分は、共有結合又は非共有結合しており、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、口腔構成要素に対する結合親和性を有する。これら口腔ケア活性成分が対処する口腔状態の例としては、歯の外観及び構造の変化、ホワイトニング、ステインの予防及び除去、ステインの漂白、歯垢の予防及び除去、タータの予防及び除去、虫歯の予防及び治療、歯肉の炎症及び／又は出血、粘膜創傷、病変、潰瘍、アフター性潰瘍、ヘルペス、及び歯膿瘍が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
別の実施形態では、当該１つ以上の口腔ケア活性成分を送達する方法における当該口腔構成要素は、歯、エナメル質、象牙質、及び口腔内の任意の他の表面を含む群から選択される。別の実施形態では、当該口腔構成要素は歯である。
【０１２０】
別の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分を口腔に送達する方法は、少なくとも１つのペプチドアプタマー及び１つ以上の口腔ケア活性成分を含む口腔ケア組成物を投与すること、を含み、当該少なくとも１つのペプチドアプタマー及び当該１つ以上の口腔ケア活性成分は、共有結合又は非共有結合し、当該少なくとも１つのペプチドアプタマーは、口腔構成要素に対する結合親和性を有する。
【０１２１】
別の実施形態では、当該１つ以上の口腔ケア活性成分は、ホワイトニング剤、光沢剤、抗ステイン剤、抗虫歯剤、抗侵食剤、抗タータ剤、抗歯石剤、抗歯垢剤、歯再石灰化剤、抗破砕剤、強化剤、耐摩耗剤、抗歯肉炎剤、抗微生物剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗酵母剤、抗ウイルス剤、抗悪臭剤、口臭消臭剤、着香剤、冷感剤、味増強剤、嗅覚増強剤、抗付着剤、平滑剤、表面改質剤、抗歯痛剤、抗過敏症剤、抗炎症剤、歯肉保護剤、歯周活性物質、組織再生剤、抗血液凝固剤、抗凝塊安定剤、唾液刺激剤、唾液レオロジー変性剤、強化された保持剤、軟／硬組織標的化剤、歯／軟組織洗浄剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、Ｈ−２拮抗薬、鎮痛剤、天然抽出物及び精油、染料、光学光沢剤、カチオン、リン酸塩、フッ素イオン源、ペプチド、栄養素、酵素、口及び喉用製品、並びにこれらの混合物を含む群から選択される。また、本発明は、当該技術分野において既に開示されている他の口腔ケア活性成分を含む。別の実施形態では、当該口腔ケア活性成分は、染料及び光学光沢剤からなる群から選択される。別の実施形態では、当該口腔ケア活性成分は、染料及び光学光沢剤からなる群から選択され、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、歯に対する結合親和性を有する。
【０１２２】
ホワイトニング剤の非限定的な例は、染料、光学光沢剤、過酸化物、金属の亜塩素酸塩、過ホウ酸塩、過炭酸塩、ペルオキシ酸、及びこれらの混合物である。好適な過酸化物化合物としては、過酸化水素、過酸化カルシウム、過酸化カルバミド、及びこれらの混合物が挙げられる。カルバミドペルオキシドが最も好ましい。好適な金属亜塩素酸塩としては、亜塩素酸カルシウム、亜塩素酸バリウム、亜塩素酸マグネシウム、亜塩素酸リチウム、亜塩素酸ナトリウム、及び亜塩素酸カリウムが挙げられる。追加のホワイトニング活性物質は、次亜塩素酸塩及び二酸化塩素であってよい。好ましい亜塩素酸塩は、亜塩素酸ナトリウムである。
【０１２３】
染料及び光学光沢剤は、望ましいホワイトニング及び他の美容効果を歯に与えることができる。染料の非限定的な例は、ブリリアントブルーＦＣＦ（ＦＤ＆Ｃブルー１又はＤ＆Ｃブルー４）、ファストグリーンＦＣＦ（ＦＤ＆Ｃグリーン３）、及びパテントブルーＶを含むトリアリールメタン染料、インジゴカルミン（ＦＤ＆Ｃブルー２）を含むインジゴイド染料、サンセットバイオレット１３（Ｄ＆Ｃバイオレット２）を含むアントラキノン染料、アゾイック染料、キサンテン染料、クロロフィル、スピルリナ、及びアントシアニンを含む天然染料、これらの誘導体、並びにこれらの混合物である。
【０１２４】
蛍光ホワイトニング剤としても知られている光学光沢剤は、溶液中で無色〜薄い色の有機化合物であり、紫外線（例えば、昼光から、約３００〜４３０ｎｍ）を吸収し、吸収されたエネルギーの大部分を青色蛍光（４００〜５００ｎｍ）として再放出する。したがって、日中、光学光沢剤は、歯及び他の物質にみられる、多くの場合望ましくない黄色がかった色調を補正することができる。更に、日中のＵＶ光（肉眼では知覚されない）は可視光に変換されるため、歯の輝度を強化して、輝くような白色を作り出すことができる。光学光沢剤の非限定的な例は、４，４’−ジアミノ−２，２’−スチルベンジスルホン酸を含む、炭素環、スチルベン、及び４，４’−ジアミノスチルベンの誘導体；ジスチリルベンゼン、ジスチリルビフェニル、及びジビニルスチルベンの誘導体；トリアジニルアミノスチルベンの誘導体；スチルベニル−２Ｈ−トリアゾールの誘導体；ベンゾキサゾール、スチルベニルベンゾキサゾール、及びビス（ベンゾキサゾール）の誘導体；フラン、ベンゾ［ｂ］フラン、ベンゾイミダゾール、ビス（ベンゾ［ｂ］フラン−２−イル）ビフェニル、及びカチオン性ベンゾイミダゾールの誘導体；１，３−ジフェニル−２−ピラゾリンの誘導体；クマリンの誘導体；ナフタルイミドの誘導体；１，３，５−トリアジン−２−イルの誘導体；ビス（ベンゾオキサゾール−２−イル）の誘導体；及びこれらの混合物である。一般的に使用されている光学光沢剤の総説は、「Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｂｒｉｇｈｔｅｎｅｒｓ」ｂｙ  Ｓｉｅｇｒｉｓｔ，Ａ．Ｅ．，Ｅｃｋｈａｒｄｔ，Ｃ．，Ｋａｓｃｈｉｇ，Ｊ．ａｎｄ  Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｅ．；Ｕｌｌｍａｎｎ’ｓ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，２００３にみられ、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。本発明の特定の実施形態では、当該口腔ケア活性成分は、４，４’−ジアミノ−２，２’−スチルベンジスルホン酸である。
【０１２５】
抗虫歯剤の非限定的な例は、ａ）ピロリン酸塩、トリポリリン酸塩、トリメタリン酸塩、及びヘキサメタリン酸塩などのポリリン酸塩を含むリン含有剤；グリセロリン酸塩、フィチン酸塩、１，６−フルクトース二リン酸、乳酸リン酸カルシウム、カゼイン−ホスホペプチド非晶質リン酸カルシウム（casein-phosphopeptide amorphous calcium phosphate、ＣＰＰ−ＡＣＰ）、及びカゼイン酸ナトリウムなどの有機リン酸塩；リンタンパク質；エタンヒドロキシジホスホネートなどのホスホン酸塩；及びホスホケイ酸塩；ｂ）乳酸カルシウムを含むカルシウム含有剤；ｃ）抗微生物剤；ｄ）亜鉛、スズ、アルミニウム、銅、鉄、及びカルシウムを含む金属及びそのカチオン；ｅ）クエン酸塩を含む他の有機剤；並びにｆ）フッ化ナトリウム、フッ化第一スズ、オラフルル（フッ化アミン２９７）及びデクタフルルなどのフッ化アミン、モノフルオロリン酸ナトリウム、フルオロケイ酸塩、フルオロジルコン酸塩、フルオロ亜スズ酸塩、フルオロホウ酸塩、フルオロチタン酸塩、並びにフルオロゲルマン酸塩を含むフッ化物イオン源剤である。カチオンの非限定的な例は、Ｃａ２＋、Ｓｎ２＋、Ｓｎ４＋、Ｚｎ２＋、Ａｌ３＋、Ｃｕ２＋、Ｆｅ２＋、及びＦｅ３＋である。
【０１２６】
また、デンタルケア製品において使用するための公知の抗タータ剤は、ピロリン酸塩、ポリリン酸塩、ポリホスホン酸塩、及びこれらの混合物などのリン酸塩を含んでいてもよい。ピロリン酸塩は、デンタルケア製品用として最も知られているうちでもとりわけのものである。歯に送達されるピロリン酸イオンは、ピロリン酸塩に由来する。本発明の組成物で有用なピロリン酸塩としては、ジアルカリ金属ピロリン酸塩、テトラアルカリ金属ピロリン酸塩、及びこれらの混合物が挙げられる。非水和形態及び水和形態のピロリン酸二水素二ナトリウム（Ｎａ２Ｈ２Ｐ２Ｏ７）、ピロリン酸四ナトリウム（Ｎａ４Ｐ２Ｏ７）、及びピロリン酸四カリウム（Ｋ４Ｐ２Ｏ７）が好ましい化学種である。上記のピロリン酸塩のいずれを使用してもよいが、ピロリン酸四ナトリウム塩が好ましい。
【０１２７】
ピロリン酸塩は、Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌｕｍｅ  １７，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８２）により詳細に記載されている。追加の抗歯石剤としては、１９８６年５月２０日にＰａｒｒａｎ  ＆  Ｓａｋｋａｂに発行された米国特許第４，５９０，０６６号に開示されているピロリン酸塩又はポリリン酸塩；ポリアクリレート及び他のポリカルボキシレート、例えば、１９６９年２月２５日にＳｈｅｄｌｏｖｓｋｙに発行された米国特許第３，４２９，９６３号、１９８１年１２月８日にＣｈａｎｇに発行された米国特許第４，３０４，７６６号、及び１９８７年４月２８日にＢｅｎｅｄｉｃｔ  ＆  Ｓｕｎｂｅｒｇに発行された米国特許第４，６６１，３４１号に開示されているもの；ポリエポキシスクシネート、例えば、１９８９年７月１１日にＢｅｎｅｄｉｃｔ，Ｂｕｓｈ  ＆  Ｓｕｎｂｅｒｇに発行された米国特許第４，８４６，６５０号に開示されているもの；１９３７年２月１５日付の英国特許第４９０，３８４号に開示されているエチレンジアミン四酢酸；１９７２年７月１８日にＷｉｄｄｅｒ  ＆  Ｂｒｉｎｅｒに発行された米国特許第３，６７８，１５４号に開示されているニトリロ三酢酸及び関連化合物；１９７３年６月５日にＦｒａｎｃｉｓに発行された米国特許第３，７３７，５３３号、１９７６年１０月２６日にＰｌｏｇｅｒ，Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｄｕｎｋｅｒ  ＆  Ｇｌｏｘｈｕｂｅｒに発行された米国特許第３，９８８，４４３号、及び１９８９年１０月３１日にＤｅｇｅｎｈａｒｄｔ  ＆  Ｋｏｚｉｋｏｗｓｋｉに発行された米国特許第４，８７７，６０３号に開示されているポリホスホン酸塩が挙げられる。抗歯石リン酸塩としては、ピロリン酸カリウム及びピロリン酸ナトリウム；トリポリリン酸ナトリウム；エタン−１−ヒドロキシ−１，１−ジホスホネート、１−アザシクロヘプタン−１，１−ジホスホネート、及び直鎖アルキルジホスホネートなどのジホスホネート；直鎖カルボン酸；及びクエン酸亜鉛ナトリウムが挙げられる。
【０１２８】
ピロリン酸塩の代わりに又は組み合わせて使用することができる剤としては、例えばＧａｆｆａｒらの米国特許第４，６２７，９７７号に記載されているポリアクリレート、及び無水マレイン酸又はマレイン酸とメチルビニルエーテルとのコポリマー（例えば、Ｇａｎｔｒｅｚ）を含む合成アニオン性高分子のような公知の物質に加えて、例えば、ポリアミノプロパンスルホン酸（ＡＭＰＳ）、クエン酸亜鉛三水和物、ポリリン酸塩（例えば、トリポリリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩）、ジホスホン酸塩（例えば、ＥＨＤＰ、ＡＨＰ）、ポリペプチド（ポリアスパラギン酸及びポリグルタミン酸など）、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０１２９】
フッ素イオン源は、抗虫歯剤として口腔ケア組成物で使用することが公知である。フッ素イオンは、この目的のため、多くの口腔ケア組成物、特に歯磨剤に含有されている。このような歯磨剤を開示している特許としては、Ｐａｄｅｒらへの米国特許第３，５３８，２３０号、Ｐａｄｅｒへの米国特許第３，６８９，６３７号、Ｃｏｌｏｄｎｅｙらへの米国特許第３，７１１，６０４号、Ｈａｒｒｉｓｏｎへの米国特許第３，９１１，１０４号、Ｒｏｂｅｒｔｓらへの米国特許第３，９３５，３０６号、及びＷａｓｏｎへの米国特許第４，０４０，８５８号が挙げられる。
【０１３０】
歯牙エナメル質へのフッ素イオンの適用は、歯をう蝕から保護する役割を果たす。多種多様なフッ素イオン生成物質が、本発明の組成物の可溶性フッ化物源として採用され得る。好適なフッ素イオン生成材料の例は、１９７０年１０月２０日に発行されたＢｒｉｎｅｒらの米国特許第３，５３５，４２１号及び１９７２年７月１８日に発行されたＷｉｄｄｅｒらの米国特許第３，６７８，１５４号にみられる。本明細書に用いるのに好ましいフッ素イオン源としては、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、及びフッ化アンモニウムが挙げられる。フッ化ナトリウムが特に好ましい。
【０１３１】
本発明の口腔ケア組成物又は物質中に抗微生物剤が存在していてもよい。このような剤としては、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ，１１ｔｈ  ｅｄ．（１９８９），ｐｐ．１５２９（エントリー番号９５７３）、米国特許番号第３，５０６，７２０号、及び１９８８年１月７日に公開されたＢｅｅｃｈａｍ  Ｇｒｏｕｐ，ＰＬＣの欧州特許出願第０，２５１，５９１号に記載されているトリクロサン、５−クロロ−２−（２，４−ジクロロフェノキシ）−フェノール；クロルヘキシジン（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、２０９０号）、アレキシジン（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、２２２号）；ヘキセチジン（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、４６２４号）、サンギナリン（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、８３２０号）、塩化ベンザルコニウム（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、１０６６号）、サリチルアニリド（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、８２９９号）、臭化ドミフェン（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、３４１１号）、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）（Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ、２０２４号）、塩化テトラデシルピリジニウム（ＴＰＣ）、Ｎ−テトラデシル−４−エチルピリジニウム塩化物（ＴＤＥＰＣ）、オクテニジン、デルモピノール、オクタピノール、及び他のピペリジノ誘導体；ナイシン調製物；亜鉛／第一スズイオン剤；バクテリオシン；オーグメンチン、アモキシシリン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、及びメトロニダゾールなどの抗生物質；並びに上記抗微生物抗歯垢剤のアナログ及び塩；チモール、ゲラニオール、カルバクロール、シトラール、ヒノキチオール、オイカリプトール、カテコール（特に、４−アリルカテコール）、及びこれらの混合物を含む精油；サリチル酸メチル、過酸化水素、亜塩素酸金属塩、並びにこれらの混合物を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１３２】
着香剤及び冷感剤の非限定的な例は、メントール、メントン、酢酸メチル、メントフラン、１，８−シネオール、Ｒ−（−）−カルボン、リモネン、ジヒドロカルボン、サリチル酸メチル、糖アルコール又はポリオール（例えば、キシリトール、ソルビトール、及びエリスリトール）、及びこれらの誘導体である。歯再石灰化剤の非限定的な例は、ヒドロキシアパタイトナノ結晶である。
【０１３３】
また、本発明の口腔ケア組成物又は物質中に抗炎症剤が存在していてもよい。このような剤としては、ケトロラク、フルルビプロフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、インドメタシン、アスピリン、ケトプロフェン、ピロキシカム、及びメクロフェナム酸などの非ステロイド性抗炎症剤、すなわち、ＮＳＡＩＤを挙げることができるが、これらに限定されない。ケトロラクなどのＮＳＡＩＤの使用は、米国特許第５，６２６，８３８号（１９９７年５月６日発行）において請求されている。この特許には、口腔又は中咽頭に有効量のＮＳＡＩＤを局所投与することによって、口腔又は中咽頭の原発性及び再発性の扁平上皮細胞癌を予防及び／又は治療する方法が開示されている。
【０１３４】
栄養素は、口腔の状態を改善することができる。栄養素としては、ミネラル、ビタミン、経口栄養補給剤、経腸栄養補給剤、及びこれらの混合物が挙げられる。本発明の組成物と共に含めることができるミネラルとしては、カルシウム、リン、フッ化物、亜鉛、マンガン、カリウム、及びこれらの混合物が挙げられる。これらのミネラルは、Ｄｒｕｇ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ（ｌｏｏｓｅ  ｌｅａｆ  ｄｒｕｇ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｅｒｖｉｃｅ），Ｗｏｌｔｅｒｓ  Ｋｌｕｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，（ｃ）１９９７，ｐｐ１０−１７に開示されている。ビタミンは、ミネラルと共に含めることも、ミネラルとは別に用いることもできる。ビタミンとしては、ビタミンＣ、ビタミンＤ、チアミン、リボフラビン、パントテン酸カルシウム、ナイアシン、葉酸、ニコチンアミド、ピリドキシン、シアノコバラミン、ｐ−アミノ安息香酸、バイオフラボノイド、及びこれらの混合物が挙げられる。このようなミネラルは、Ｄｒｕｇ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ（ｌｏｏｓｅ  ｌｅａｆ  ｄｒｕｇ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｅｒｖｉｃｅ），Ｗｏｌｔｅｒｓ  Ｋｌｕｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，（ｃ）１９９７，ｐｐ．３−１０に開示されている。経口栄養補助剤としては、Ｄｒｕｇ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ（ｌｏｏｓｅ  ｌｅａｆ  ｄｒｕｇ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｅｒｖｉｃｅ），Ｗｏｌｔｅｒｓ  Ｋｌｕｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，（ｃ）１９９７，ｐｐ．５４−５４ｅに開示されているアミノ酸、脂向性剤、魚油、及びこれらの混合物が挙げられる。アミノ酸としては、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−リジン、メチオニン、スレオニン、レボカルニチン、又はＬ−カルニチン、及びこれらの混合物が挙げられる。脂向性剤としては、コリン、イノシトール、ベタイン、リノール酸、リノレン酸、及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限らない。魚油は、大量のω−３（Ｎ−３）多価不飽和脂肪酸、エイコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸を含有する。経腸栄養補助剤としては、Ｄｒｕｇ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ（ｌｏｏｓｅ  ｌｅａｆ  ｄｒｕｇ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｅｒｖｉｃｅ），Ｗｏｌｔｅｒｓ  Ｋｌｕｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，（ｃ）１９９７，ｐｐ．５５−５７に開示されているタンパク質製品、グルコース高分子、コーン油、ベニバナ油、中鎖トリグリセリドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３５】
酵素は、口腔を洗浄するために用いると、いくつかの利点をもたらす。プロテアーゼは、歯の表面上に吸収されて、ペリクル（生じるプラークの第１の層である）を形成する唾液タンパク質を分解する。プロテアーゼは、リパーゼと共に、細菌細胞壁と細菌細胞膜との構造成分を形成する、タンパク質と脂質とを溶解することによって殺菌する。デキストラナーゼは、細菌付着のためのマトリックスを形成する細菌によって作られる有機骨格構造を分解する。プロテアーゼ及びアミラーゼは、歯垢の形成を予防するだけでなく、カルシウムと結合する炭水化物−タンパク質複合体を分解して石灰化を防ぐことによって、歯石の発生も予防する。本発明において有用な酵素としては、あらゆる市販のプロテアーゼ、グルカノヒドロラーゼ、エンドグリコシダーゼ、アミラーゼ、ムタナーゼ、リパーゼ、及びムチナーゼ、又はこれらの適合性のある混合物が挙げられる。好ましいのは、プロテアーゼ、デキストラナーゼ、エンドグリコシダーゼ、及びムタナーゼであり、最も好ましいのは、パパイン、エンドグリコシダーゼ、又はデキストラナーゼとムタナーゼとの混合物である。本発明で使用するのに好適な追加の酵素は、Ｄｒｉｎｇらへの米国特許第５，０００，９３９号、Ｎｅｅｓｅｒへの同第４，９９２，４２０号、Ｒａｂｕｓｓａｙへの同第４，３５５，０２２号、Ｐａｄｅｒへの同第４，１５４，８１５号、Ｃｏｌｏｄｎｅｙへの同第４，０５８，５９５号、Ｖｉｒｄａらへの同第３，９９１，１７７号、及びＷｅｅｋｓへの同第３，６９６，１９１号に開示されている。
【０１３６】
本発明で使用することができる他の材料としては、一般的に知られている口及び喉用製品が挙げられる。このような製品は、Ｄｒｕｇ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ（ｌｏｏｓｅ  ｌｅａｆ  ｄｒｕｇ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｅｒｖｉｃｅ），Ｗｏｌｔｅｒｓ  Ｋｌｕｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，（ｃ）１９９７，ｐｐ．５２０ｂ−５２７に開示されている。これらの製品としては、抗真菌剤、抗生物質、及び鎮痛剤が挙げられる。
【０１３７】
酸化防止剤は、本発明の組成物などの組成物において有用であると一般にみなされている。酸化防止剤は、Ｍａｒｃｅｌ  ＤｅｋｋｅｒによるＣａｄｅｎａｓ  ａｎｄ  Ｐａｃｋｅｒ，Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ，（ｃ）１９９６などの文献に開示されている。本発明の口腔ケア組成物又は物質に含めることができる酸化防止剤としては、ビタミンＥ、アスコルビン酸、尿酸、カロテノイド、ビタミンＡ、フラボノイド及びポリフェノール、薬草酸化防止剤、メラトニン、アミノインドール、リポ酸、及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３８】
別の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分を口腔に送達する方法は、少なくとも１つの核酸アプタマー及び１つ以上のナノ物質を含む口腔ケア組成物を投与すること、を含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマー及び当該１つ以上のナノ物質は、共有結合又は非共有結合しており、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、口腔構成要素に対する結合親和性を有する。
【０１３９】
別の実施形態では、１つ以上の口腔ケア活性成分を口腔に送達する方法は、ａ）少なくとも１つの核酸アプタマーと、ｂ）１つ以上のナノ物質と、ｃ）１つ以上の口腔ケア活性成分と、を含む口腔ケア組成物を投与すること、を含み、当該少なくとも１つの核酸アプタマー及び当該１つ以上のナノ物質は、共有結合又は非共有結合しており、当該少なくとも１つの核酸アプタマーは、口腔構成要素に対する結合親和性を有する。別の実施形態では、当該１つ以上の口腔ケア活性成分は、当該１つ以上のナノ物質に共有結合又は非共有結合している。更に別の実施形態では、当該１つ以上の口腔ケア活性成分は、当該１つ以上のナノ物質によって担持されている。
【０１４０】
ナノ物質の非限定的な例は、金ナノ粒子、ナノスケール酸化鉄、炭素ナノ物質（単層カーボンナノチューブ及びグラフェンオキシドなど）、メソ細孔性シリカナノ粒子、量子ドット、リポソーム、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコール酸）ナノ粒子、高分子ミセル、デンドリマー、血清アルブミンナノ粒子、及びＤＮＡベースのナノ物質である。
【０１４１】
少なくとも１つの核酸アプタマーに加えてまた、本発明の口腔ケア組成物は、界面活性剤及び／又は洗剤、磨き剤（polishing agents）、研磨材料（abrasive materials）、結合剤、担体、増粘剤、湿潤剤、塩、及び他の成分を含んでいてもよい。界面活性剤又は洗剤は、望ましい発泡品質を提供することができる。好適な界面活性剤は、広いｐＨ範囲にわたって、適度に安定かつ発泡性であるものである。界面活性剤は、アニオン性、非イオン性、両性、双極性、カチオン性、又はこれらの混合物であってよい。本明細書で有用なアニオン性界面活性剤としては、アルキル基中に８個〜２０個の炭素原子を有するアルキルサルフェートの水溶性塩（例えば、アルキル硫酸ナトリウム）、及び８個〜２０個の炭素原子を有する脂肪酸のスルホン化モノグリセリドの水溶性塩が挙げられる。ラウリル硫酸ナトリウム及びココナツモノグリセリドスルホン酸ナトリウムは、この種類のアニオン性界面活性剤の例である。他の好適なアニオン性界面活性剤は、ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、タウレート、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、ラウロイルイセチオン酸ナトリウム、ラウレスカルボン酸ナトリウム及びドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなどのサルコシネートである。アニオン性界面活性剤の混合物も使用することができる。多数の好適なアニオン性界面活性剤が、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第３，９５９，４５８号（Ａｇｒｉｃｏｌａら、１９７６年５月２５日発行）に開示されている。本発明の組成物に用いることができる非イオン性界面活性剤は、アルキレンオキシド基（本質的には親水性）と、本質的には脂肪族又はアルキル−芳香族であってもよい有機疎水性化合物との縮合によって生成される化合物として広く定義できる。好適な非イオン性界面活性剤の例としては、ポロキサマー（商品名Ｐｌｕｒｏｎｉｃとして販売）、ポリオキシエチレン、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（商標名Ｔｗｅｅｎｓとして販売）、脂肪族アルコールエトキシレート、アルキルフェノールのポリエチレンオキシド縮合物、プロピレンオキシド及びエチレンジアミンの反応生成物とエチレンオキシドとの縮合から得られる生成物、脂肪族アルコールのエチレンオキシド縮合物、長鎖三級アミンオキシド、長鎖三級ホスフィンオキシド、長鎖ジアルキルスルホキシド、及びこのような物質の混合物が挙げられる。本発明において有用な両性界面活性剤は、脂肪族二級及び三級アミンの誘導体として広く記載されることができ、そこで、脂肪族基は直鎖であっても分枝鎖であってもよく、脂肪族置換基の１つは約８〜約１８個の炭素原子を含有し、１つはアニオン性水溶性基、例えばカルボキシレート、スルホネート、サルフェート、ホスフェート、又はホスホネートを含有する。他の好適な両性界面活性剤はベタイン、特に、コカミドプロピルベタインである。両性界面活性剤の混合物も使用できる。これらの好適な非イオン性及び両性の界面活性剤の多くは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、１９７７年９月２７日に発行されたＧｉｅｓｋｅらの米国特許第４，０５１，２３４号に開示されている。本組成物は、典型的には、１つ以上の界面活性剤を各々が組成物の約０．２５重量％��約１２重量％、好ましくは約０．５重量％〜約８重量％、及び最も好ましくは約１重量％〜約６重量％の濃度で含む。
【０１４２】
結合剤系は一般に、口腔ケア組成物のレオロジー特性を決定する主要因子である。結合剤は、口腔ケア成分の固相を懸濁状態に維持させ、その結果、口腔ケア成分の固相部分が液相部分から分離するのを防ぐ役割も果たす。更に、結合剤は、口腔ケア組成物に濃さ（body）又は粘り（thickness）を与えることもできる。ゆえに、場合によってはまた、結合剤は、口腔ケア組成物に増粘機能を与えることもできる。結合剤の例としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セルロースエーテル、キサンタンガム、カラギーナン、アルギン酸ナトリウム、カーボポール、又は含水リチウムマグネシウムケイ酸ナトリウムなどのケイ酸塩が挙げられる。好適な結合剤の他の例としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、グアーガム、トラガカントガム、カラヤガム、アラビアガム、アイリッシュモス、デンプン、及びアルギネートなどの高分子が挙げられる。あるいは、結合剤には、粘土、例えば、ヘクトライトなどの合成粘土又は天然粘土を挙げることができる。結合剤の各々は、単独で、又は他の結合剤と組み合わせて使用することができる。
【０１４３】
増粘剤の非限定的な例としては、増粘シリカ、高分子、粘土、及びこれらの組み合わせが挙げられる。約４重量％〜約８重量％（例えば、約６重量％）の量の増粘シリカ、例えば、ＳＩＬＯＤＥＮＴ１５含水シリカは、望ましい口内特性をもたらす。本明細書に記載される「口内特性」という語句は、歯磨剤がユーザーの口内で発泡したときの濃さ（body）又は粘り（thickness）に関する。
【０１４４】
磨き剤の非限定的な例としては、炭酸塩（例えば、重炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム）、水−コロイダルシリカ、沈降性シリカ（例えば、含水シリカ）、アルミノケイ酸ナトリウム、アルミナを含有するシリカグレード、含水アルミナ、リン酸二カルシウム、リン酸水素カルシウム、ピロリン酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム（β相）、ヒドロキシアパタイト、不溶性メタリン酸ナトリウム、及びマグネシウム（例えば、リン酸三マグネシウム）などの研磨材料が挙げられる。磨き剤の適切な量は、優れた研磨及び洗浄を安全にもたらす量であり、他の成分と組み合わせた場合に、滑らかで流動性があり、粒状感の強すぎない組成物をもたらす量である。一般に、磨き剤が含まれる場合、当該磨き剤は、約５重量％〜約５０重量％（例えば、約５重量％〜約３５重量％又は約７重量％〜約２５重量％）の量で存在する。
【０１４５】
担体の例としては、水、ポリエチレングリコール、グリセリン、ポリプロピレングリコール、デンプン、スクロース、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノールなど）又は、それらの組み合わせが挙げられる。組み合わせの例としては、水とアルコールとの様々な組み合わせ、及びポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとの様々な組み合わせが挙げられる。一般に、含まれる担体の量は、溶解した塩、界面活性剤、及び分散した相の量と共に、結合剤系の濃度に応じて決まる。
【０１４６】
一般に、湿潤剤は、ポリオールである。湿潤剤の例としては、グリセリン、ソルビトール、プロピレングリコール、キシリトール、ラクチトール、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、水素添加コーンシロップ及びそれらの混合物が挙げられる。一般に、保湿剤が含まれる場合、保湿剤は約１０重量％〜約６０重量％の量で存在することができる。
【０１４７】
緩衝剤及び塩の例としては、一級、二級、又は三級のアルカリ金属リン酸塩、クエン酸、クエン酸ナトリウム、サッカリンナトリウム、ピロリン酸四ナトリウム、水酸化ナトリウムなどが挙げられる。また、本発明の口腔ケア組成物は、例えば、虫歯を予防し、歯を白くし、口臭を消臭し、経口薬を送達し、また、上述のものなどの他の治療的及び美容的効果を提供するために、活性成分を含んでいてもよい。活性成分の例としては、以下が挙げられる：虫歯予防剤（例えば、水溶性フッ化塩、フルオロケイ酸塩、フルオロジルコン酸塩、フルオロ亜スズ酸塩、フルオロホウ酸塩、フルオロチタン酸塩、フルオロゲルマン酸塩、混合ハロゲン化物及びカゼイン）；抗タータ剤；抗歯石剤（例えば、アルカリ金属ピロリン酸塩、次亜リン酸塩含有高分子、有機ホスホクエン酸塩、ホスホクエン酸塩、ポリリン酸塩）；抗菌剤（例えば、バクテリオシン、抗体、酵素）；抗菌増強剤；抗微生物剤（例えば、トリクロサン、クロルヘキシジン、銅、亜鉛及び第一スズの塩、例えば、クエン酸亜鉛、硫酸亜鉛、グリシン酸亜鉛、サンギナリン抽出物、メトロニダゾール、四級アンモニウム化合物、例えば、塩化セチルピリジニウム；ビスグアニド、例えば、クロルヘキシジンジグルコネート、ヘキセチジン、オクテニジン、アレキシジン、及びハロゲン化ビスフェノール化合物、例えば、２，２’メチレンビス−（４−クロロ−６−ブロモフェノール））；減感剤（例えば、クエン酸カリウム、塩化カリウム、酒石酸カリウム、重炭酸カリウム、シュウ酸カリウム、硝酸カリウム、及びストロンチウム塩）；ホワイトニング剤（例えば、ペルオキシ化合物などの漂白剤、例えば、ペルオキシ二リン酸カリウム）；抗歯垢剤；歯肉保護剤（例えば、ヒマワリ油、菜種油、大豆油、及びベニバナ油などの植物油、並びにシリコーン油及び炭化水素油などの他の油）。歯肉保護剤は、歯肉の透過障壁を改善可能な剤とすることができる。他の活性成分としては、創傷治癒剤（例えば、尿素、アラントイン、パンテノール、アルカリ金属チオシアネート、カモミール系活性物質及びアセチルサリチル酸誘導体、イブプロフェン、フルルビプロフェン、アスピリン、インドメタシンなど）；歯緩衝剤；脱灰剤；抗炎症剤；抗悪臭剤；口臭消臭剤、及び歯肉炎又は歯周炎などの口腔状態を治療するための剤が挙げられる。
【０１４８】
また、本発明の口腔ケア組成物は、以下を含む他の成分のうちの１つ以上を含んでいてもよい：フェノール化合物（例えば、２−メチル−フェノール、３−メチル−フェノール、４−メチル−フェノール、４−エチル−フェノール、２，４−ジメトール−フェノール、及び３，４−ジメトール−フェノールを含むフェノール及びその相同体）甘味剤（例えば、サッカリンナトリウム、シクラミン酸ナトリウム、スクロース、ラクトース、マルトース、及びフルクトース）；着香料（例えば、ペパーミント油、スペアミント油、ユーカリ油、アニシード油、ウイキョウ油、ヒメウイキョウ油、酢酸メチル、桂皮アルデヒド、アネトール、バニリン、チモール、及び他の天然若しくは天然と同一の精油、又は合成着香料）；保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、エチル、又はプロピルエステル、ソルビン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、ブロモクロロフェン、トリクロサン、ヘキセチジン、サリチル酸フェニル、ビグアニド、及び過酸化物）；二酸化チタン又はＦＤ＆Ｃ染料などの乳白剤及び着色剤；並びにレチノール、トコフェロール、又はアスコルビン酸などのビタミン。
【０１４９】
歯磨剤などの口腔ケア組成物で使用することができるアプタマーの合成例を以下に示す。
【０１５０】
アプタマーの調製：
１５ｍＭ  ２’−フルオロＣＴＰ、１５ｍＭ  ２’−フルオロＵＴＰ、５ｍＭ  ＡＴＰ、５ｍＭ  ＧＴＰ、変異型Ｔ７ポリメラーゼ（Ｔ７  Ｒ＆ＤＮＡ）、及び他の標準試薬の混合物を使用して、対応する二本鎖ＤＮＡテンプレートからの酵素転写によって、アプタマー配列番号１、配列番号９、及び配列番号２５を合成する。次いで、製造業者の指示書に従って、アプタマーをＺｙｍｏ  ＲＮＡクリーンアップカラムで洗浄し、反応バッファ（例えば、ＥＤＴＡとリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（phosphate buffered saline）：１０ｍＭリン酸ナトリウム、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２）で溶出させる。
【０１５１】
コンジュゲート反応：
まず、４，４’−ジアミノ−２，２’−スチルベンジスルホン酸（０．２５Ｍ）及びイミダゾール（０．１Ｍ）の水溶液（ｐＨ６）を調製する。次いで、ＥＤＣ（１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩）を反応バイアル瓶に量り入れ、上記のように調製したアプタマー溶液のアリコートと混合する。アミン／イミダゾール溶液のアリコートを反応バイアルに直ちに添加し、全ての成分が溶解するまでボルテックスする。イミダゾール溶液（０．１Ｍ、ｐＨ６）の追加のアリコートを反応バイアルに添加し、反応混合物を室温で少なくとも２時間インキュベートする。インキュベート後、未反応のＥＤＣ及びその副生成物並びにイミダゾールを、透析によって、又はスピン脱塩カラム及び好適なバッファ（例えば、１０ｍＭリン酸ナトリウム、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２）を使用することによって、修飾アプタマーから分離する。コンジュゲートのプロトコルについての更なる詳細は、「Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ  Ｇ．Ｔ．（２００８）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ｐｐ．９６９−１００２，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ．」に記載されており、この内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５２】
生成された修飾アプタマーを、５’末端で４，４’−ジアミノ−２，２’−スチルベンジスルホン酸とコンジュゲートさせ、歯と接触したときに歯のホワイトニング効果を提供するために口腔ケア組成物（例えば、歯磨剤）中に配合してよい。
【０１５３】
本発明の１つ以上のアプタマーを含む有望な歯磨剤配合物の例を、以下の表１に示す。表１に列挙される成分を使用し、当該技術分野において既知の標準的な方法を使用して、サンプル歯磨剤配合物を調製することができる。
【０１５４】
【表１】
2020529444.tif 000003
【実施例】
【０１５５】
実施例１．アプタマーの設計。
Ａ．固定化フィールドの調製
他の文献に記載されているとおり（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１８  Ｊａｎ  ５；１３（１）：ｅ０１９０２１２）、５’末端にジスルフィド基を有する８ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドのランダムライブラリ（固定化フィールドライブラリ）を合成することによって、固定化フィールドを調製した。簡潔に述べると、８ｍｅｒのチオール化ランダムオリゴヌクレオチドライブラリを、最終濃度１０μＭで１×ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）５０μＬに溶解させた。７ｍｍ×１０ｍｍ×０．３ｍｍの寸法を有する金コーティングされたガラススライド（Ｘａｎｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の表面を、１０μＬの固定化フィールドライブラリ５滴で逐次処理した。次いで、固定化フィールドライブラリの金表面へのコンジュゲートを促進するために、スライドを暗所において室温で１時間インキュベートした。
【０１５６】
このインキュベート期間後、固定化フィールドライブラリは、金表面上にコンジュゲートされているとみなした。残りの溶液を除去し、表面を室温で乾燥させた。
【０１５７】
次いで、残りの表面を、分子式：ＣＨ３Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ及び平均分子量５５０ダルトンの短いチオール末端ポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＳＨ）（short thiol terminated polyethylene glycol）でブロッキングした。２８６μＭの濃度の１×ＰＢＳバッファ中のＰＥＧ−ＳＨ溶液の５０μＬのアリコートをチップに適用し、穏やかに振盪しながら室温で一晩インキュベートした。穏やかに振盪しながら室温で３０分間のインキュベート期間で、このプロセスを、第２のブロッキング工程で繰り返した。
【０１５８】
チップをブロッキングした後、後者を、室温で振盪しながら５分間、１×ＨＥＰＥＳバッファ（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ２）６００μＬで洗浄した。
【０１５９】
Ｂ．ライブラリの調製
２つの保存領域、すなわち、５’末端におけるＴ７プロモーター配列（５’−ＧＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＧＡＣＡＴＡＴＧＡＴ−３’）及び３’リバースプライマー認識配列（５’−ＴＴＧＡＣＴＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＡＣＴＴ−３’）に隣接した４０ヌクレオチドのランダム領域を含む、約１０１５種の異なる配列のＤＮＡライブラリを、２’−フルオロピリミジンヌクレオチド及び天然プリンヌクレオチドと変異型Ｔ７ポリメラーゼ（Ｔ７  Ｒ＆ＤＮＡ）との３：１混合物を使用してＲＮＡに転写した。
【０１６０】
約１０１５種のＲＮＡ配列を含む転写された選別ライブラリのアリコートを、１×選別バッファ（１０ｍＭカコジル酸バッファ、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、５０μＭ  ＳｎＦ２）５０μＬで希釈した。ライブラリ配列の保存領域に対して相補的な等モル数のオリゴヌクレオチド（Ｔ７プロモータープライマー及び３’リバースプライマー）又はブロッカーを添加し、合計体積１００μＬの選別ライブラリと共にインキュベートした。ブロッカーの選別ライブラリへの適切なアニーリングに干渉する場合のある任意の二次又は三次構造を確実に除去するために、この溶液を４５℃で１０分間加熱した。次いで、混合物を１５分間室温に平衡化させることによって、ブロッカーを選別ライブラリにアニーリングさせた。
【０１６１】
次いで、このブロッキングされた選別ライブラリを、１０μＬの５滴で逐次固定化フィールドに曝露した。ブロッキングされた選別ライブラリを、室温のインキュベータ内でゆっくりと振盪しながら３０分間、固定化フィールド上でインキュベートした。この期間の後に上部に残った溶液を除去し、廃棄した。選別バッファ５０μＬを添加して、チップを２回洗浄した。バッファをチップ上にピペットで移し、次いで、廃棄した。
【０１６２】
６０％ＤＭＳＯ５０μＬを適用し、室温で１０分間インキュベートすることによって、固定化フィールドに結合したブロッキングされた選別ライブラリ配列をチップから回収した。溶液を新しいチューブに取り出し、このプロセスを更に２回繰り返した。３つの溶出溶液を合わせた（合計１５０μＬ）。次いで、製造業者の指示書に従って、Ｚｙｍｏ  ＲＮＡクリーンアップカラム（Ｚｙｍｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）でＲＮＡ配列を洗浄した。精製された選別ライブラリを３５μＬの水で溶出し、１０μＬの５×選別バッファ及び５μＬの５００μＭ  ＳｎＦ２と合わせた。
【０１６３】
Ｃ．アプタマーの選別
清潔な萌出していない３番目の臼歯を、水１ｍＬを３回逐次適用して洗浄し、数人の個体から採取したヒト唾液のサンプルに浸漬した。コーティングされていないようにみえる歯の領域上に、唾液をピペットで移した。上記（セクションＢ）のように調製したライブラリ溶液５０μＬを、顕微鏡スライド（凹面スライド、厚さ３．２ｍｍ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上のくぼみにピペットで移し、歯をこのくぼみに置いた。次いで、スライドを、３７℃で１時間、５０ｒｐｍの振盪インキュベータに入れた。歯を取り出し、各１ｍＬの選別バッファで２回洗浄した。次いで、歯を新しいくぼみスライド上に置き、６０％ＤＭＳＯ５０μＬを添加して、結合している配列を溶出させた。この溶出プロセスを繰り返し、２つの溶出溶液を合わせた（合計１００μＬ）。製造業者の指示書に従って、Ｚｙｍｏ  ＲＮＡクリーンアップカラムで溶出されたＲＮＡライブラリを洗浄した。ライブラリを、Ｐｒｏｔｏｓｃｒｉｐｔ  ＲＴ  ＩＩ酵素を用いてＤＮＡに逆転写し、２段階プロセスでＰＣＲ増幅させた。まず、様々な数の逐次ＰＣＲサイクル（例えば、４、６、８、及び１０サイクル）を用いて、４つの別個のＰＣＲ反応を行った。次いで、これら各ＰＣＲ反応の産物をゲル電気泳動によって分析して、増幅に必要な最適サイクル数、すなわち、ＰＣＲ産物のコンカテマーが全く出現しない可能な限り高い収率を決定した。次いで、この数のＰＣＲサイクルをライブラリ増幅に適用して、選別ラウンドを完了した。
【０１６４】
ライブラリを２つのアリコートに分割して、同じ条件下で２つの実験を実施した（実験Ａ及び実験Ｂ）。選別プロセスを、更に１１回繰り返した。選別ラウンド６、９、及び１２中に、選別バッファ中０．３２２％の濃度で歯磨剤（Ｃｒｅｓｔ  Ｃａｖｉｔｙ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）を添加した。
【０１６５】
コーヒー及びワインに対する陰性選択も実施した。選別ラウンド７及び１０中に、インスタントコーヒーの５μＬのアリコートをライブラリ溶液に添加し（最終的に１：１０希釈）、混合物を、室温のインキュベータ内で振盪しながら３０分間、固定化フィールドと共にインキュベートした。コーヒー中に存在する分子に対する特異性を有するオリゴヌクレオチドは、固定化フィールドに結合するとは予想されない。したがって、この期間の後に上部に残った溶液を除去し、廃棄した。選別バッファ５０μＬを添加して、チップを２回洗浄した。バッファをピペットで表面上に移し、次いで、廃棄した。６０％ＤＭＳＯ５０μＬを適用し、室温で１０分間インキュベートすることによって、固定化フィールドに結合したライブラリ配列をチップから回収した。溶液を新しいチューブに取り出し、このプロセスを更に２回繰り返した。３つの溶出溶液を合わせた（合計１５０μＬ）。次いで、製造業者の指示書に従って、Ｚｙｍｏ  ＲＮＡクリーンアップカラムでＲＮＡ配列を洗浄した。上記のとおり、ライブラリを、Ｐｒｏｔｏｓｃｒｉｐｔ  ＲＴ  ＩＩ酵素を用いてＤＮＡに逆転写し、２段階プロセスでＰＣＲ増幅させて、選択サイクルを完了した。選別ラウンド８及び１１中にワインを用いて同じプロセスを実施した。
【０１６６】
Ｄ．アプタマーのシーケンシング
両実験の選別ラウンド７〜１２のアリコートを、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）（next generation sequencing）分析のために調製した。合計２３００万を超える配列を分析した。捕捉された配列の数は、選別のストリンジェンシーの増大に応じて、選別ラウンド１１及び１２でははるかに少なかった。選別が成功したことの１つの指標は、特定の配列のコピー数が選別ラウンドを通じて増加したという所見である（図１及び図２を参照）。図１及び図２に示すグラフでは、選別プロセスのラウンド１２における頻度に基づいてトップ２０の配列をグラフ化した。例えば、図１では、配列は、（ラウンド１２に基づいて）最も上の線から最の下の線の順にＯＣ１Ｒ−Ａ１〜ＯＣ１Ｒ−Ａ２０である。図１は、実験Ａの様々な選別ラウンドにわたるコピー数の観点でトップ２０の配列の濃縮曲線を示す。図２は、実験Ｂの様々な選別ラウンドにわたるコピー数の観点でトップ２０の配列の濃縮曲線を示す。全ての選別実験についてのコピー数の観点でのトップ配列を表２に列挙する。興味深いことに、選択実験Ａにおけるコピー数に基づくトップ１５の配列は、選択実験Ｂのトップ４０の配列においても同定された。更に、両実験におけるトップ２の配列は同一であったが、ランキングは逆であった。
【０１６７】
実施例２．ＲＮＡアプタマーの結合。
選別されたアプタマー（ＯＣ１Ｒ−Ｂ１／ＯＣ１Ｒ−Ａ２、ＯＣ１Ｒ−Ｂ９、及びＯＣ１Ｒ−Ｂ２５／ＯＣ１Ｒ−Ａ９）をコードしているＤＮＡオリゴヌクレオチド及び陰性対照アプタマー（Ｎｅｇ）をコードしているものを、１ｍＭビオチン化ＵＴＰ、１５ｍＭ  ２’−フルオロＣＴＰ、１４ｍＭ  ２’−フルオロＵＴＰ、５ｍＭ  ＡＴＰ、５ｍＭ  ＧＴＰ、変異型Ｔ７ポリメラーゼ（Ｔ７  Ｒ＆ＤＮＡ）、及び他の標準試薬の混合物を使用してＲＮＡに転写した。次いで、製造業者の指示書に従って、修飾されたＲＮＡオリゴヌクレオチドをＺｙｍｏ  ＲＮＡクリーンアップカラムで洗浄した。１×結合バッファ（１０ｍＭ  カコジル酸バッファ、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、５０μＭ  ＳｎＦ２、及び０．３２２％歯磨剤）中１μＭ修飾されたＲＮＡの２５０μＬのアリコートを、顕微鏡スライド（凹面スライド、厚さ３．２ｍｍ；Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｕｋｅｇａｎ，ＩＬ）のくぼみに入れた。別個に、清潔な萌出していない３番目の臼歯を水で洗浄し、乾燥させ、数人から新たに採取したヒト唾液でコーティングした。次いで、修飾されたＲＮＡを含有するスライドのくぼみに歯を入れ、室温で３０分間インキュベートした。歯をスライドから取り出し、２５０μＬの結合バッファで２回洗浄した。
【０１６８】
結合バッファ中ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）（horse radish peroxidase）の溶液を調製し、２５０μＬのアリコートを、清潔なスライド（凹面スライド、厚さ３．２ｍｍ；Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のくぼみに入れた。歯も同じくぼみに入れ、室温で３０分間インキュベートした。インキュベート後、歯を結合バッファ２ｍＬで洗浄した。最後に、アプタマー結合を検出するために、歯を１０×ＬｕｍｉＧＬＯ（登録商標）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）及び１０×過酸化水素（２０×原液の５０：５０混合物）の溶液に浸漬した。歯に結合するアプタマーのみが暗所で化学発光した（図３Ａ〜３Ｄを参照）。図３Ａ〜３Ｄは、暗所における歯の化学発光によって実証される、様々なアプタマーの歯への結合を示す。図３Ａは、陰性対照を示す。図３Ｂは、「ＯＣ１Ｒ−Ｂ１」として同定されたアプタマーの歯への結合を示す。図３Ｃは、「ＯＣ１Ｒ−Ｂ９」として同定されたアプタマーの歯への結合を示す。図３Ｄは、「ＯＣ１Ｒ−Ｂ２５／ＯＣ１Ｒ−Ａ９」として同定されたアプタマーの歯への結合を示す。
【０１６９】
実施例３．配列の共分散分析。
実験Ｂのトップ１００のアプタマーに対して、配列頻度の変化についての共分散分析を行った。まず、各選別ラウンドについて、各アプタマーの観察された頻度を、トップ１００のアプタマーの頻度の平均で除すことによって、頻度データを正規化した。この正規化により、異なる選別ラウンド間の、ＮＧＳ分析前にＰＣＲ増幅によって生じる潜在的な差異を排除することができた。次いで、選別ラウンド７における各アプタマーの正規化された値を、選別ラウンド８〜１２における対応するアプタマーの正規化された値から減じた。得られたマトリックスを相関解析に使用した。
【０１７０】
選別ラウンドにわたってピアソン相関を実行した。各選別ラウンドで異なる歯を使用したので、アプタマー頻度間の共分散は、当該アプタマーが結合する歯内のエピトープの存在量の共分散に起因すると仮定するのが妥当である。したがって、共変動するアプタマーの各クラスタは、歯内の異なるエピトープに結合するアプタマーの群に対応する。相関マトリックスからユークリッド距離マトリックスを作成し、Ｗａｒｄ．Ｄ２アルゴリズムによるクラスタリングのための基準として使用した（図４参照）。図４は、実験Ｂのトップ１００のアプタマーの濃縮曲線のクラスタリング（Ｗａｒｄ．Ｄ２法）によって順序付けられた相関マトリックスを示す。これらの分析は、ソフトウェアＲを用いて実施した。
【０１７１】
図４に基づいて、５つの異なるエピトープは、選択されたアプタマーの結合部位である尤度が高い。各クラスタ／エピトープについてのこのようなアプタマーの配列番号（配列番号）を以下に列挙する。
【０１７２】
［１］
2020529444.tif 000004
【０１７３】
共分散分析は、アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ１（配列番号１）、ＯＣ１Ｒ−Ｂ９（配列番号９）、及びＯＣ１Ｒ−Ｂ２５／ＯＣ１Ｒ−Ａ９（配列番号２５）が歯内の異なるエピトープに結合することを示唆している。更に、クラスタＡ内のアプタマーは、ＯＣ１Ｒ−Ｂ１と同じエピトープに結合する尤度が高く、クラスタＣ内のアプタマーは、ＯＣ１Ｒ−Ｂ９と同じエピトープに結合する尤度が高く、クラスタＥ内のアプタマーは、ＯＣ１Ｒ−Ｂ２５（又はＯＣ１Ｒ−Ａ９）と同じエピトープに結合する尤度が高い。クラスタＢ及びＤにおけるアプタマーは、上記のアプタマーとは異なるエピトープに結合する確率が高い。
【０１７４】
クラスタ間で有意な負の相関が観察され、これは、この研究で使用した歯のエナメル質の化学組成のばらつきによって引き起こされた可能性があることに留意されたい。このばらつきは、歯が抽出された個体間の自然変動、又は歯の抽出後処理の差のいずれかに起因し得る。
【０１７５】
異なるクラスタからのアプタマーを併用することにより、異なる個体にわたってより高い全体的な歯被覆率及び／又は有効性を提供することができ、これは本発明の実施形態の１つとして含まれる。この実施例から得られた情報を使用して、異なる歯エピトープに結合するアプタマーを選別することができる。更に、これらのアプタマーの使用は、ｉｎ  ｖｉｖｏで歯のエナメル質の化学組成を診断するために使用することができる。
【０１７６】
実施例４．モチーフ及び予測構造分析。
アプタマーは、それが形成する最低自由エネルギー形状に基づいて標的分子に結合する。最低自由エネルギー形状は、一本鎖配列内の領域間の相同性の関数である。これらの相同性の領域は互いに折り返され、それによって、結合を可能にするのに重要なアプタマーの二次及び三次形状を作製する。本発明者らは、保存されたモチーフ配列の複合解析及びアプタマー全体の予測構造に対するその効果を通じて、これらアプタマーのコアな特徴を特性評価した。これに関連するモチーフは、規定の長さのヌクレオチドの連続配列として定義される。この実施例では、本発明者らは、特性評価した各アプタマーのランダム領域内のそれぞれの可能性のある重複する６ヌクレオチドモチーフについて検討した。
【０１７７】
選別ライブラリのサブセット（コピー数に関してトップ１，０００のオリゴヌクレオチド）内のアプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ１、ＯＣ１Ｒ−Ｂ９、及びＯＣ１Ｒ−Ａ９のランダム領域からの６個以上のヌクレオチドのモチーフの頻度を決定した。これらのアプタマーは全て、同じ標的（歯）への結合について選別されたので、ランダム分布よりも高い頻度で存在したこのライブラリ内のモチーフが、選別されたアプタマー内の重要な配列を表すのが当然である。更に、これらの配列を含む予測構造は、当然、選別された構造を表すと予想されるべきものである。したがって、モチーフ配列の選別及びそれが形成する予測構造の分析は、歯に結合する能力を有するアプタマーの必要要件をより広く理解するための基礎を提供する。
【０１７８】
ＲＮＡ構造を用いてアプタマーの二次構造を予測した（ｈｔｔｐｓ：／／ｒｎａ．ｕｒｍｃ．ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ．ｅｄｕ／ＲＮＡｓｔｒｕｃｔｕｒｅＷｅｂ／Ｓｅｒｖｅｒｓ／Ｐｒｅｄｉｃｔ１／Ｐｒｅｄｉｃｔ１．ｈｔｍｌ）。
【０１７９】
Ａ．アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ１内の構造に対する保存モチーフの役割の分析：
モチーフ分析の結果を図５に提示する。アプタマーのランダム領域を含む重複する６ヌクレオチドのモチーフを、この図中ｘ軸に沿って連続的に提供する。ｙ軸は、ライブラリ内の各モチーフについての統計的有意性（Ｚ値）を提供する。ライブラリ内のこのモチーフの観察された頻度からライブラリ内の全てのモチーフの頻度の平均を減じたものとしてＺ値を計算し、この減算の解（subtractant）をライブラリ内の全てのモチーフの標準偏差で除して、Ｚ値を得た。したがって、Ｚ値２とは、ライブラリ内のこのモチーフの頻度が全てのモチーフの平均値よりも２標準偏差分大きいことを表す。
【０１８０】
図５中、配列ＵＵＣＣＵＡ及び配列ＵＵＵＡＵＣＵＵは、平均から２標準偏差分超大きいことを表すレベルで保存されていたことが明らかである。これらの２つの保存配列は、保存されていなかったＧ及びＵで連続して分離されていた。これらの保存されていないヌクレオチドをＮとみなすことによって、これらの２つのコンセンサス配列を結合させることができる。
【０１８１】
配列番号２３５：５’ＵＵＣＣＵＡＮＮＵＵＵＡＵＣＵＵ  ３’。
ＯＣ１Ｒ−Ｂ１アプタマーの最低自由エネルギー予測構造を図６に示す。図６、８、１０、１１、１２、１８Ａ〜１８Ｄ、１９Ａ〜１９Ｃ、２０Ａ、及び２０Ｂ中の数字は、５’末端から３’末端までの配列に沿った位置を示し、オリゴを追跡及びアラインメントするのに有用である。コンセンサスモチーフは、ステム間の小さなループの形成、及びアプタマーの２つの末端の結合に重要であると見られる。二本鎖構造を維持しながら、この配列を改変すると、結合能力を破壊し得るので、ステム（二本鎖領域）自体の配列が重要である。二本鎖領域の配列の性質は、塩基のスタッキングエネルギーの観点で重要であり、このスタッキングエネルギーは、アプタマー内の他の箇所における結合などの事象によって影響を受けると考えられる。配列番号２３５として記載される保存モチーフを、ボックスでハイライトする。配列番号２３５〜２４４を表５に示す。
【０１８２】
本発明者らが、このアプタマーのＤＮＡバージョンも歯に有効に結合することを示した（実施例７を参照されたい）ことに鑑みて、ＲＮＡ配列中の保存モチーフに関するこの実施例で得られた結論がＤＮＡ配列にも同様に当てはまるのが当然である。したがって、対応するデオキシリボヌクレオチドモチーフを含有する任意の配列
配列番号２３６：５’−ＴＴＣＣＴＡＮＮＴＴＴＡＴＣＴＴ−３’
も歯に結合すると予想され、本発明の実施形態として含まれる。
【０１８３】
Ｂ．アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ９内の構造に対する保存モチーフの役割の分析：
アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ９内の構造に対する保存モチーフの役割の分析を、ＯＣ１Ｒ−Ｂ１について記載したものと同一の方法で行った。図７は、アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ９のモチーフ分析の概要を提供する。選択されたライブラリにおける全体的な平均モチーフ頻度から２標準偏差分を超える頻度で存在した１０ヌクレオチドのモチーフがアプタマーの５’末端付近に存在する：
配列番号２３７：５’−ＵＵＣＧＣＡＮＡＡＧ−３’。
【０１８４】
この配列は、その中に単一の縮重ヌクレオチドを有する。ランダム配列の３’末端付近に、追加の高度に保存された１４ヌクレオチドのモチーフが存在する：
配列番号２３８：５’−ＵＧＣＧＧＣＡＮＧＣＧＣＧＵ−３’。
【０１８５】
この配列も、１つの縮重ヌクレオチドを含有する。ＯＣ１Ｒ−Ｂ９の予測二次構造及びその保存モチーフを図８に示す。２つのコンセンサスモチーフが互いに関連しており、それぞれが同じ二本鎖二次構造の異なる側を含むことが、この図において明らかである。これらのモチーフのいずれかを含有する配列も歯に結合すると予想され、本発明の実施形態として含まれる。本発明者らが、このアプタマーのＤＮＡバージョンも歯に結合することを実証したことに鑑みて、このアプタマーのＤＮＡバージョン内の同じコンセンサスモチーフが、結合機能のために必要なコアエレメントであるのが当然である。したがって、対応するデオキシリボヌクレオチドモチーフのいずれかを含有する任意の配列：
配列番号２３９：５’−ＴＴＣＧＣＡＮＡＡＧ−３’
配列番号２４０：５’−ＴＧＣＧＧＣＡＮＧＣＧＣＧＴ−３’
も歯に結合すると予想され、本発明の実施形態として含まれる。
【０１８６】
Ｃ．アプタマーＯＣ１Ｒ−Ａ９内の構造に対する保存モチーフの役割の分析：
アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ１及びＯＣ１Ｒ−Ｂ９について記載したものと同一の方法で、アプタマーＯＣ１Ｒ−Ａ９のモチーフ分析及び予測二次構造について行った。アプタマーＯＣ１Ｒ−Ａ９のモチーフ分析を図９に提供する。図９中、セクションＡに記載したとおり、ｙ軸は、ライブラリ内の各モチーフについての統計的有意性（Ｚ値）を提供する。ライブラリ内のこのモチーフの観察された頻度からライブラリ内の全てのモチーフの頻度の平均を減じたものとしてＺ値を計算し、この減算の解をライブラリ内の全てのモチーフの標準偏差で除して、Ｚ値を得た。１０ヌクレオチドのモチーフ、
配列番号２４１：５’−ＣＵＵＵＵＣＵＵＣＣ−３’
が、この選択されたライブラリ内のモチーフの全体的な平均頻度から２標準偏差分を超える頻度で存在していた。アプタマーの構造に対するこのモチーフの役割を図１０に提供する。このモチーフがアプタマー内の二本鎖領域の形成に関与することは明らかである。したがって、アプタマー内のこの二本鎖領域が、歯への結合に必要であることが当然である。このアプタマーのＤＮＡバージョン内のこのモチーフ、ＯＣ１Ｄ−Ａ９も、二本鎖領域の形成に関与している（図１１）。したがって、このモチーフを含有する配列も歯に結合すると予想され、本発明の実施形態として含まれる。したがって、対応するデオキシリボヌクレオチドモチーフを含有する任意のＤＮＡ配列
配列番号２４２：５’−ＣＴＴＴＴＣＴＴＣＣ−３’
も歯に結合すると予想されることが当然であり、本発明の実施形態として含まれる。
【０１８７】
Ｄ．アプタマーライブラリ内の共通モチーフの分析：
実験Ｂから得られた頻度の観点でトップ１０，０００の配列内の共通のモチーフの検索を行った。ランダム分布からの有意な偏差の観点で同定されたリードモチーフは、配列番号２４３であった。
【０１８８】
配列番号２４３：５’−ＧＣＧＣＧＣＧＣ−３’
このモチーフは、簡略化のために５’−及び３’−プライマー認識配列が除外された、以下の各配列にみられた。モチーフ配列番号２４３を含むオリゴヌクレオチドは、本発明の実施形態として含まれる。
【０１８９】
［２］
2020529444.tif 000005
【０１９０】
対応するデオキシリボヌクレオチドモチーフを含有する任意の配列
配列番号２４４：５’−ＧＣＧＣＧＣＧＣ−３’
も歯に結合すると予想され、本発明の実施形態として含まれる。
【０１９１】
実施例５．配列類似性の分析。
Ｔｈｅｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃによるＶｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  １１．５．４のコンポーネントであるソフトウェアＡｌｉｇｎ  Ｘを使用して、配列番号１〜配列番号１１１のアラインメントを実施した。配列のいくつかの群は、図１２、１３、及び１４のアラインメントに示すように、少なくとも９０％、少なくとも７０％、又は少なくとも５０％のヌクレオチド配列同一性を有する。これらのアラインメントには、簡略化のためにアプタマーの中央可変領域のみが含まれている。したがって、配列番号１〜配列番号１１１からなる群から選択される配列に対して少なくとも５０％、少なくとも７０％、又は少なくとも９０％のヌクレオチド配列同一性を有するオリゴヌクレオチドは、本発明の実施形態として含まれる。図１２は、選別プロセス中に同定された少なくとも９０％のヌクレオチド配列同一性を有する例示的な配列のアラインメントを示す。図１３は、選別プロセス中に同定された少なくとも７０％のヌクレオチド配列同一性を有する例示的な配列のアラインメントを示す。図１４は、選別プロセス中に同定された少なくとも５０％のヌクレオチド配列同一性を有する例示的な配列のアラインメントを示す。
【０１９２】
実施例７．ＤＮＡアプタマーの結合。
５’末端にＦＡＭ蛍光部位を有する、選択されたＤＮＡアプタマー（ＯＣ１Ｄ−Ｂ１／ＯＣ１Ｄ−Ａ２、ＯＣ１Ｄ−Ｂ９、及びＯＣ１Ｄ−Ｂ２５／ＯＣ１Ｄ−Ａ９）を化学的に合成した（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ）。１×結合バッファ（１０ｍＭカコジル酸バッファ、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、５０μＭ  ＳｎＦ２、及び０．３２２％練り歯磨き、ｐＨ７．２）中１μＭ  ＤＮＡアプタマーの２５０μＬのアリコートを、顕微鏡スライド（凹面スライド、厚さ３．２ｍｍ；Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のくぼみに入れた。別個に、清潔な萌出していない３番目の臼歯を水で洗浄し、乾燥させ、数人の個体から新たに採取したヒト唾液でコーティングした。次いで、ＤＮＡアプタマーを含有するスライドのくぼみに歯を入れ、室温で２０分間インキュベートした。歯を取り出した後に溶液中に残っている蛍光を測定することによって、結合したアプタマーの量を決定した（図１５参照）。歯をスライドから取り出し、２５０μＬの中性結合バッファで数回洗浄した。各洗浄溶液の蛍光を測定した（図１６を参照）。２５０ｍＭ  ＮａＯＨの２つのアリコートで歯を洗浄することによって、結合アプタマーを回収した。各溶出溶液の蛍光も測定した（図１７を参照）。歯と共にインキュベートしたアプタマーの全てが回収されたわけではなく、これは、歯の内側の非常に強い結合又は吸着に起因する確率が高かった。
【０１９３】
本発明者らが、アプタマーＯＣ１Ｒ−Ｂ１／ＯＣ１Ｒ−Ａ２、ＯＣ１Ｒ−Ｂ９、及びＯＣ１Ｒ−Ｂ２５／ＯＣ１Ｒ−Ａ９のＤＮＡバージョンも歯に有効に結合することを示したことに鑑みて、この本実施例内で得られた結論が、残りの選択されたアプタマー（配列番号１１２〜配列番号２２２）のＤＮＡバージョンにも当てはまるのが当然であり、本発明の一部として本明細書に含まれ、表３に列挙される。
【０１９４】
実施例８．アプタマーの切断。
選択されたアプタマー（ＯＣ１Ｄ−Ｂ１、ＯＣ１Ｄ−Ｂ９、及びＯＣ１Ｄ−Ａ９）の予測二次構造から出発して、二次構造エレメントのうちのいくつかを含むより小さなオリゴヌクレオチドを設計した。これらの予測構造内のコンセンサスモチーフの検討が、切頭型アプタマーの設計に含まれていた（図５〜１０）。切頭型アプタマーは全て、元のアプタマー内のステム／ループ構造に含まれる高度に選択されたモチーフ配列を含有していた。これらの選択された構造は、切頭型アプタマー中で保存されていた。
【０１９５】
例えば、アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ１．１、ＯＣ１Ｄ−Ｂ１．２、及びＯＣ１Ｄ−Ｂ１．３は、アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ１に由来していた（図１８Ａ〜１８Ｄを参照）。ＯＣ１Ｄ−Ｂ１．１は、構造の屈曲したステム／ループ構造を完全に含み、ＯＣ１Ｄ−Ｂ１．２は、屈曲したステム／ループ構造の最上部のみを含むが、ＯＣ１Ｄ−Ｂ１．３は、緊密なステム／ループ構造を含む。アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ９．１及びＯＣ１Ｄ−Ｂ９．２は、アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ９（図１９Ａ〜１９Ｃを参照）に由来し、その２つの底部ステム／ループのサブ構造に対応する。最小アプタマーにおける保存されているモチーフエレメントを維持する目的で、アプタマーＯＣ１Ｄ−Ａ９．１はアプタマーＯＣ１Ｄ−Ａ９（図２０Ａ及び２０Ｂを参照）に由来していた。
【０１９６】
図２１Ａ〜図２１Ｃは、これらの切頭型アプタマーのそれぞれについての歯への結合結果を示す。これらの結合アッセイを実施し、完全長アプタマーについて前述したもの（実施例７を参照）と同一の方法で分析した。ＯＣ１Ｄ−Ｂ１由来のアプタマーについては、屈曲したステム／ループ構造全体を含有する切頭型アプタマー（ＯＣ１Ｄ−Ｂ１．１）が、他の２つと比較して歯に対して良好に機能した。これにより、ＲＮＡアプタマーで同定された保存モチーフが保存されており、このアプタマーの機能にも重要であることが確認される。ＯＣ１Ｄ−Ｂ９のアプタマーについては、底部屈曲したステム／ループ構造を含む切頭型アプタマーＯＣ１Ｄ−Ｂ９．２のみが、歯に良好に結合する。これは、ＯＣ１Ｄ−Ｂ９．１内の保存モチーフと比較して、ＯＣ１Ｄ−Ｂ９．２内の保存モチーフに関連する統計的有意性のレベルが高いこととよく対応している。最後に、切頭型アプタマーＯＣ１Ｄ−Ａ９．１は、親アプタマーよりも高い結合親和性を有するが、他の切頭型アプタマーほど高くはない。切頭型アプタマーの配列のリストを表４に含める。
【０１９７】
【表２−１】
2020529444.tif 000006
【０１９８】
【表２−２】
2020529444.tif 000007
【０１９９】
【表２−３】
2020529444.tif 000008
【０２００】
【表２−４】
2020529444.tif 000009
【０２０１】
【表２−５】
2020529444.tif 000010
【０２０２】
【表２−６】
2020529444.tif 000011
【０２０３】
【表３−１】
2020529444.tif 000012
【０２０４】
【表３−２】
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【０２０５】
【表３−３】
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【０２０６】
【表３−４】
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【０２０７】
【表３−５】
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【０２０８】
【表４】
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【０２０９】
【表５】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2020529444.tif 000052
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