(57)【要約】  本発明は、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト／ＦＧＦ２１化合物の活性比が最適化されたＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物およびＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む、組合せ物、医薬組成物、融合分子に関する。本発明はさらに、特に、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症の治療のための医薬としてのそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物およびＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む組合せ物であって、
ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１のＦＧＦ２１活性と同じまたは実質的に同じであるＦＧＦ２１活性を有し、
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、
前記組合せ物。
【請求項２】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から４８２分の１または９分の１から３１９分の１または９分の１から１２１分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項３】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて１８分の１から５０１分の１または１８分の１から４６９分の１または１８分の１から３１３分の１または１８分の１から１２３分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項４】
ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１であるか、または天然ＦＧＦ２１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するＦＧＦ２１変異体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組合せ物。
【請求項５】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、アミノ酸配列
Ｈ−Ｇ−Ｅ−Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｓ−Ｄ−Ｘ１０−Ｓ−Ｘ１２−Ｑ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｅ−Ｅ−Ｘ１８−Ｖ−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｆ−Ｉ−Ｅ−Ｗ−Ｌ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号３７）
［ここで、
Ｘ１０は、ＬまたはＫであり；
Ｘ１２は、ＫまたはＩであり；
Ｘ１４は、ＬまたはＭであり；
Ｘ１５は、ＥまたはＤであり；
Ｘ１８は、ＡまたはＲであり；
Ｘ２０は、ＲまたはＱであり；
Ｘ２１は、ＬまたはＥであり；
Ｘ２７は、Ｌ、Ｅ、Ｋ、またはＶであり；
Ｘ２８は、Ａ、Ｎ、またはＫであり；
Ｘ２９は、ＴまたはＧであり；
Ｘ３０は、ＧまたはＲであり；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基を含み；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＣ末端に１２、１１、または１０までのアミノ酸残基からなるペプチド延長を含む）
を含むか、またはそれからなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組合せ物。
【請求項６】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、配列番号９、１０、１２、１４、１５、１６、１７、１９、および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組合せ物。
【請求項７】
ＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物およびＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを、薬学的に許容される担体および／または賦形剤と一緒に含む医薬組成物であって、
ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１のＦＧＦ２１活性と同じまたは実質的に同じであるＦＧＦ２１活性を有し、
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、前記医薬組成物。
【請求項８】
ＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物およびＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む融合分子であって、
ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１のＦＧＦ２１活性と同じまたは実質的に同じであるＦＧＦ２１活性を有し、
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、前記融合分子。
【請求項９】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストおよび／またはＦＧＦ２１化合物は、請求項２〜６のいずれか１項において定義される、請求項７に記載の医薬組成物または請求項８に記載の融合分子。
【請求項１０】
請求項８または９に記載の融合分子をコードする、核酸分子。
【請求項１１】
請求項１０に記載の核酸分子を含有する、宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の組合せ物、請求項７もしくは９に記載の医薬組成物、請求項８もしくは９に記載の融合分子、請求項１０に記載の核酸分子、または請求項１１に記載の宿主細胞を含む、キット。
【請求項１３】
医薬としての使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組合せ物、請求項７もしくは９に記載の医薬組成物、請求項８もしくは９に記載の融合分子、請求項１０に記載の核酸分子、または請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組合せ物、請求項７もしくは９に記載の医薬組成物、請求項８もしくは９に記載の融合分子、請求項１０に記載の核酸分子、または請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１５】
肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療のための医薬の製造における、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組合せ物、請求項７もしくは９に記載の医薬組成物、請求項８もしくは９に記載の融合分子、請求項１０に記載の核酸分子、または請求項１１に記載の宿主細胞の使用。
【請求項１６】
肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害を治療する方法であって、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組合せ物、請求項７もしくは９に記載の医薬組成物、請求項８もしくは９に記載の融合分子、請求項１０に記載の核酸分子、または請求項１１に記載の宿主細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１７】
糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である、請求項１４に記載の使用、請求項１５に記載の使用、または請求項１６に記載の方法のための、組合せ物、医薬組成物、融合分子、核酸分子、または宿主細胞。
【請求項１８】
天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト。
【請求項１９】
アミノ酸配列
Ｈ−Ｇ−Ｅ−Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｓ−Ｄ−Ｘ１０−Ｓ−Ｘ１２−Ｑ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｅ−Ｅ−Ｘ１８−Ｖ−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｆ−Ｉ−Ｅ−Ｗ−Ｌ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号３７）
（ここで、
Ｘ１０は、ＬまたはＫであり；
Ｘ１２は、ＫまたはＩであり；
Ｘ１４は、ＬまたはＭであり；
Ｘ１５は、ＥまたはＤであり；
Ｘ１８は、ＡまたはＲであり；
Ｘ２０は、ＲまたはＱであり；
Ｘ２１は、ＬまたはＥであり；
Ｘ２７は、Ｌ、Ｅ、Ｋ、またはＶであり；
Ｘ２８は、Ａ、Ｎ、またはＫであり；
Ｘ２９は、ＴまたはＧであり；
Ｘ３０は、ＧまたはＲであり；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基を含み；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＣ末端に１２、１１、または１０までのアミノ酸残基からなるペプチド延長を含む）
を含むか、またはそれからなる、請求項１８に記載のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト。
【請求項２０】
配列番号９、１０、１２、１４、１５、１６、１７、１９、および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１８または１９に記載のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト／ＦＧＦ２１化合物の活性比が最適化されたＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物およびＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む、組合せ物、医薬組成物、融合分子に関する。本発明はさらに、特に、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症の治療のための医薬としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）化合物、例えば、組換え的に産生されたＦＧＦ２１ポリペプチドなどの投与は、例えば、非特許文献１および非特許文献２によって実証されるように、結果として、体重、血糖、および血漿脂質における大幅な減少、ならびにインスリン感受性の向上を生じる。グルカゴン様ペプチド−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）アゴニストは、例えば、非特許文献３および非特許文献４によって示されるように、ヒトにおいて効果的なグルコースおよび体重の低下を提供する。ＦＧＦ２１投与の有益な効果とＧＬＰ−１受容体アゴニストのグルコース低下効果の組合せは、驚くべきことに、結果として、疾患／障害、例えば、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症などのより包括的な治療を提供する相乗効果をもたらした（例えば、特許文献１および特許文献２を参照されたい）。
【０００３】
例えば、融合タンパク質の形態の、ＦＧＦ２１化合物およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストの組合せは、例えば、２型糖尿病を患う肥満体の異常脂血症患者に対する太り過ぎにおける血糖コントロールを改善するために使用することができる。
【０００４】
特に、ＦＧＦ２１およびＧＬＰ−１（一次ＧＬＰ−１Ｒアゴニストとして）は、異なる血漿中濃度において薬理効果をもたらす。より詳しくは、ＦＧＦ２１効果は、ＧＬＰ−１効果と比べてより高い血漿中レベルにおいて効力を生じる。さらに、より高いレベルにおいて、ＧＬＰ−１は、有害効果、例えば、吐き気および嘔吐などを有することが知られている。以上をまとめると、これは、例えば、融合タンパク質の形態において、ＦＧＦ２１化合物およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストの組合せ物を投与する場合のＧＬＰ−１媒介性有害効果の潜在的リスクを暗に示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２０１１／０８９２０３Ａ１
【特許文献２】ＷＯ２０１４／０３７３７３Ａ１
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｇａｉｃｈら（２０１３）Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  １８（３）：３３３〜３４０頁
【非特許文献２】Ｄｏｎｇら（２０１５）Ｂｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ８０（５）：１０５１〜１０６３頁
【非特許文献３】Ａｓｔｒｕｐら（２０１２）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３６（６）：８４３〜８５４頁
【非特許文献４】Ｎａｕｃｋら（２０１３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ  Ｍｅｔａｂ  １５（３）：２０４〜２１２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、本発明の目的は、潜在的有害効果（例えば、吐き気および嘔吐）を避けつつ有益な効果を達成するために、最適なＧＬＰ−１Ｒアゴニスト／ＦＧＦ２１化合物活性比を決定することであった。本発明のさらなる目的は、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト／ＦＧＦ２１化合物活性比が最適な、対応する組合せ物、医薬組成物、および融合分子を提供することであった。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様において、本発明は、ＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物およびＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む組合せ物であって、
ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１のＦＧＦ２１活性と同じまたは実質的に同じであるＦＧＦ２１活性を有し、
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１（または９．４４９分の１から５３１．０分の１）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、組合せ物に関する。
【０００９】
一実施形態において、ＦＧＦ２１活性は、ＦＧＦ２１受容体の活性化を意味する。一実施形態において、用語は、インビトロでの活性を意味する。一実施形態において、ＦＧＦ２１受容体の活性化は、インビトロでのＦＧＦ２１化合物との接触におけるＦＧＦ２１受容体の自己リン酸化を測定することよって決定される。一実施形態において、ＦＧＦ２１活性は、例えば、実施例３において本質的に説明されるように、Ｉｎ−Ｃｅｌｌ  Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイを使用して決定される。
【００１０】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性は、ＧＬＰ−１受容体の活性化を意味する。一実施形態において、用語は、インビトロでのアゴニスト活性を意味する。一実施形態において、ＧＬＰ−１受容体の活性化は、インビトロでの、アゴニストとの接触においてＧＬＰ−１受容体を安定して発現する細胞のｃＡＭＰ応答を測定することによって決定される。一実施形態において、ＧＬＰ−１受容体の活性化は、実施例４において本質的に説明されるように決定される。
【００１１】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から４８２分の１（または９．４４９分の１から４８２．３９６分の１）または９分の１から３１９分の１（または９．４４９分の１から３１９．３１１分の１）または９分の１から１２１分の１（または９．４４９分の１から１２１．１８９分の１）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００１２】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から３１９分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００１３】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて少なくとも９．４分の１、または少なくとも９．４５分の１、または少なくとも９．５分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００１４】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて少なくとも１０分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００１５】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて最大で４８２．４分の１または最大で４８２．３５分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００１６】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて最大で４８２分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００１７】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて１０分の１から４８２分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００１８】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて１０分の１から３１９分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００１９】
一実施形態において、当該ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９０分の１から１００分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００２０】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて少なくとも１８分の１（または少なくとも１８．２６８分の１）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００２１】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて１８分の１から５０１分の１（または１８．２６８分の１から５００．６８６分の１）または１８分の１から４６９分の１（または１８．２６８分の１から４６８．６７９分の１）または１８分の１から３１３分の１（または１８．２６８分の１から３１３．２１４分の１）または１８分の１から１２３分の１（または１８．２６８分の１から１２３．４６６分の１）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００２２】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて１８分の１から３１３分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００２３】
上記の一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて少なくとも１８．２分の１または少なくとも１８．３分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する。
【００２４】
一実施形態において、ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１であるか、または天然ＦＧＦ２１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するＦＧＦ２１変異体である。
【００２５】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、アミノ酸配列
Ｈ−Ｇ−Ｅ−Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｓ−Ｄ−Ｘ１０−Ｓ−Ｘ１２−Ｑ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｅ−Ｅ−Ｘ１８−Ｖ−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｆ−Ｉ−Ｅ−Ｗ−Ｌ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号３７）、
（ここで、
Ｘ１０は、ＬまたはＫであり；
Ｘ１２は、ＫまたはＩであり；
Ｘ１４は、ＬまたはＭであり；
Ｘ１５は、ＥまたはＤであり；
Ｘ１８は、ＡまたはＲであり；
Ｘ２０は、ＲまたはＱであり；
Ｘ２１は、ＬまたはＥであり；
Ｘ２７は、Ｌ、Ｅ、Ｋ、またはＶであり；
Ｘ２８は、Ａ、Ｎ、またはＫであり；
Ｘ２９は、ＴまたはＧであり；
Ｘ３０は、ＧまたはＲであり；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基を含み；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＣ末端に１２、１１、または１０までのアミノ酸残基からなるペプチド延長を含む）
を含むか、またはそれからなる。
【００２６】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、配列番号９、１０、１２、１４、１５、１６、１７、１９、および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００２７】
別の態様において、本発明は、ＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物およびＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを、薬学的に許容される担体および／または賦形剤と一緒に含む医薬組成物であって、
ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１のＦＧＦ２１活性と同じまたは実質的に同じであるＦＧＦ２１活性を有し、
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１（または９．４４９分の１から５３１．０分の１）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、医薬組成物に関する。
【００２８】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストおよび／またはＦＧＦ２１化合物は、上記において定義されるとおりである。
【００２９】
さらなる別の態様において、本発明は、ＦＧＦ２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物およびＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む融合分子であって、
ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１のＦＧＦ２１活性と同じまたは実質的に同じであるＦＧＦ２１活性を有し
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１（または９．４４９分の１から５３１．０分の１）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する、融合分子に関する。
【００３０】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストおよび／またはＦＧＦ２１化合物は、上記において定義されるとおりである。
【００３１】
別の態様において、本発明は、上記において定義される融合分子をコードする核酸分子に関する。
【００３２】
別の態様において、本発明は、上記において定義される核酸分子を含有する宿主細胞に関する。
【００３３】
別の態様において、本発明は、上記において定義される組合せ物、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される融合分子、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞を含むキットに関する。
【００３４】
別の態様において、本発明は、医薬としての使用のための、上記において定義される組合せ物、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される融合分子、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞に関する。
【００３５】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療における使用のための、上記において定義される組合せ物、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される融合分子、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞に関する。
【００３６】
一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。
【００３７】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療のための医薬の製造における、上記において定義される組合せ物、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される融合分子、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞の使用に関する。
【００３８】
一実施形態において、当該疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、当該糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。
【００３９】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害を治療する方法であって、上記において定義される組合せ物、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される融合分子、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、上記方法に関する。
【００４０】
一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、当該糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。
【００４１】
別の態様において、本発明は、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１（または９．４４９分の１から５３１．０分の１）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有するＧＬＰ−１Ｒアゴニストに関する。
【００４２】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、上記において定義されるとおりである。
【００４３】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、アミノ酸配列
Ｈ−Ｇ−Ｅ−Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｓ−Ｄ−Ｘ１０−Ｓ−Ｘ１２−Ｑ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｅ−Ｅ−Ｘ１８−Ｖ−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｆ−Ｉ−Ｅ−Ｗ−Ｌ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号３７）、
（ここで、
Ｘ１０は、ＬまたはＫであり；
Ｘ１２は、ＫまたはＩであり；
Ｘ１４は、ＬまたはＭであり；
Ｘ１５は、ＥまたはＤであり；
Ｘ１８は、ＡまたはＲであり；
Ｘ２０は、ＲまたはＱであり；
Ｘ２１は、ＬまたはＥであり；
Ｘ２７は、Ｌ、Ｅ、Ｋ、またはＶであり；
Ｘ２８は、Ａ、Ｎ、またはＫであり；
Ｘ２９は、ＴまたはＧであり；
Ｘ３０は、ＧまたはＲであり；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基を含み；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＣ末端に１２、１１、または１０までのアミノ酸残基からなるペプチド延長を含む）
を含むか、またはそれからなる。
【００４４】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、配列番号９、１０、１２、１４、１５、１６、１７、１９、および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００４５】
別の態様において、本発明は、上記において定義されるＧＬＰ−１Ｒアゴニストをコードする核酸分子に関する。
【００４６】
別の態様において、本発明は、上記において定義される核酸分子を含有する宿主細胞に関する。
【００４７】
別の態様において、本発明は、上記において定義されるＧＬＰ−１Ｒアゴニスト、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞を含む医薬組成物またはキットに関する。
【００４８】
別の態様において、本発明は、医薬としての使用のための、上記において定義されるＧＬＰ−１Ｒアゴニスト、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞に関する。
【００４９】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療における使用のための、上記において定義されるＧＬＰ−１Ｒアゴニスト、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞に関する。
【００５０】
一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、当該糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。
【００５１】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療のための医薬の製造における、上記において定義されるＧＬＰ−１Ｒアゴニスト、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞の使用に関する。
【００５２】
一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。
【００５３】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害を治療する方法であって、上記において定義されるＧＬＰ−１Ｒアゴニスト、上記において定義される医薬組成物、上記において定義される核酸分子、または上記において定義される宿主細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法に関する。
【００５４】
一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病または２型糖尿病である。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】ＧＬＰ−１弱化倍率（１２か月のシミュレーション）に応じた、有害効果（胃排出（ｇａｓｔｒｉｃ  ｅｍｐｔｙｉｎｇ）（ＧＥ）速度）および薬力学的効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬ、脂肪量）のＥＣ５０を示すグラフである：  ・９．４４９（９に四捨五入することができる）を超えるＧＬＰ−１弱化倍率において、ＧＬＰ−１媒介性消化管有害効果（胃排出速度：ＧＥ速度）のＥＣ５０は、薬力学的効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）のＥＣ５０を超えた；  ・ＦＧＦ２１媒介性効果（脂質）およびＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）の幅拡大によって正規化された、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離は１２１．１８９であった；すなわち、ＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）と平均ＦＧＦ２１媒介性効果（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離における、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離が、１２１．１８９（１２１に四捨五入することができる）に存在する（図２を参照されたい）；  ・薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離は３１９．３１１（３１９に四捨五入することができる）であった；  ・平均薬力学的効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）と有害効果（ＧＥ速度）との間の最大距離は４８２．３９６（図２を参照されたい：４８２に四捨五入することができる）であった；  ・５３１．０において胃排出速度の最大値。（すべて：垂直線）。
【図２】ＧＬＰ−１弱化倍率（１２か月のシミュレーション）に応じた、胃排出（ＧＥ）速度および平均薬力学効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬ、脂肪量）のＥＣ５０を示すグラフである：  ・平均薬力学的効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）と有害効果（ＧＥ速度）との間の最大距離は、４８２．３９６（右側の垂直線：４８２に四捨五入することができる）であった；  ・ＦＧＦ２１媒介性効果（脂質）およびＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）の幅拡大よって正規化された、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離は１２１．１８９（左側の垂直線；１２１に四捨五入することができる）であった。曲線「（最大値−ＧＥ速度）／範囲」は、ＨｂＡ１ｃとＧＥ速度との間の最大距離と、ＨｂＡ１ｃと平均ＦＧＦ２１媒介性効果（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離との間の比率を表す。「（最大値−ＧＥ速度）／範囲」曲線の最小値（すなわち、１２１．１８９）に、ＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）とＦＧＦ２１媒介性効果（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離における、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離が存在する。
【図３】ＧＬＰ−１弱化倍率（３か月のシミュレーション）に応じた、有害効果（胃排出（ＧＥ）速度）および薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬ、脂肪量）のＥＣ５０を示すグラフである：  ・１８．２６８（１８に四捨五入することができる）を超えるＧＬＰ−１弱化倍率において、ＧＬＰ−１媒介性消化管要害効果（胃排出：ＧＥ速度）のＥＣ５０は、薬力学的効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）のＥＣ５０を超えた；  ・ＦＧＦ２１媒介性効果（脂質）およびＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）の幅拡大によって正規化された、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離は１２３．４６６であった；すなわち、ＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）と平均ＦＧＦ２１媒介性効果（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離における、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離が、１２３．４６６（１２３に四捨五入することができる）に存在する（図４を参照されたい）；  ・薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離は、３１３．２１４（３１３に四捨五入することができる）であった；  ・平均薬力学的効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）と有害効果（ＧＥ速度）との間の最大距離は、４６８．６７９であった（図４を参照されたい：４６９に四捨五入することができる）；  ・５００．６８６（５０１に四捨五入することができる）において胃排出速度の最大値。（すべて：垂直線）
【図４】ＧＬＰ−１弱化倍率（３か月のシミュレーション）に応じた、胃排出（ＧＥ）速度および平均薬力学効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬ、脂肪量）のＥＣ５０を示すグラフである：  ・平均薬力学的効果（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）と有害効果（ＧＥ速度）との間の最大距離は、４６８．６７９であった（右側の垂直線：４６９に四捨五入することができる）；  ・ＦＧＦ２１媒介性効果（脂質）およびＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）の幅拡大よって正規化された、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離は、１２３．４６６であった（左側の垂直線；１２３に四捨五入することができる）。曲線「（最大値−ＧＥ速度）／範囲」は、ＨｂＡ１ｃとＧＥ速度との間の最大距離と、ＨｂＡ１ｃと平均ＦＧＦ２１媒介性効果（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離との間の比率を表す。「（最大値−ＧＥ速度）／範囲」曲線の最小値に（すなわち、１２３．４６６に）、ＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）とＦＧＦ２１媒介性効果（すなわち、脂肪量、非ＨＤＬ、脂肪酸、トリグリセリド）との間の最小距離における、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果（ＧＥ速度）との最大値の間の最大距離が存在する。
【図５】Ｉｎ−Ｃｅｌｌ  Ｗｅｓｔｅｒｎよって測定された、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）による刺激の後のヒトＦＧＦＲ１ｃおよびベータ−ｋｌｏｔｈｏを過剰発現するＣＨＯ細胞における（Ａ）ＦＧＦＲ自己リン酸化または（Ｂ）ＥＲＫ１／２−リン酸化の用量−応答曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
本発明を以下において詳細に説明するが、本明細書において説明される特定の方法、プロトコール、および試薬は変わることがあるため、本発明はそれらに限定されるものではないことは理解されるべきである。本明細書において使用する専門用語は、特定の実施形態を説明する目的のみのためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではないということも理解されるべきである。特に明記されない限り、本明細書において使用される全ての技術的および科学的用語は、当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
【００５７】
以下において、本発明のある特定の要素について説明する。これらの要素は、特定の実施形態により列挙されるが、それらは、追加の実施形態を創出するためにあらゆる様式およびあらゆる数において組み合わせることができるということは理解されるべきである。様々に説明される実施例および好ましい実施形態は、明確に説明された実施形態のみに本発明を限定すると解釈すべきではない。この説明は、明確に説明される実施形態をいくつもの開示されたおよび／または好ましい要素と組み合わせる実施形態も、支持および包含すると理解されるべきである。さらに、本出願における全ての説明された要素のあらゆる順序および組合せは、文脈において明記されない限り、本出願の説明によって開示されるものと解釈すべきである。
【００５８】
本明細書において使用される用語は、「Ａ  ｍｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌ  ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｅｒｍｓ：（ＩＵＰＡＣ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）」，Ｈ．Ｇ．Ｗ．Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ．Ｎａｇｅｌ，ａｎｄ  Ｈ．Ｋｏｌｂｌ編，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，ＣＨ−４０１０  Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９９５）に記載される通りに定義される。
【００５９】
本発明の実施は、そうでないと明記されない限り、当技術分野における文献において説明される、化学、生化学、細胞生理学、免疫学、遺伝子組換えＤＮＡ技術における従来の方法を用いるであろう（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第３版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）。
【００６０】
以下の本明細書および特許請求の範囲全体を通して、文脈上必要とされない限り、言葉「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」およびその変形、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、言明されたメンバー、整数、または工程の包含だけでなく、任意の他のメンバー、整数、もしくは工程、または、メンバー、整数、または工程の群の包含を含意するが、いくつかの実施形態では、そのような他のメンバー、整数、または工程、または、メンバー、整数、もしくは工程の群が除外される場合もある、すなわち、主題が、言明されたメンバー、整数、もしくは工程、またはメンバー、整数、または工程の群の包含からなることも理解されるべきである。本発明を説明する文脈において使用される用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」ならびに同様の指示語は（特に特許請求の範囲の文脈において）、本明細書において別段の指示がないか、または文脈において明確に否定されない限り、単数および複数の両方を網羅すると解釈されるできである。本明細書における値の範囲の列挙は、単にその範囲内に属する別々の各値を個別に言及するための簡単な方法として機能する。本明細書において別段の指示がない限り、個々の各値は、それらが本明細書において個別に列挙されるかのように、本明細書に組み入れられる。本明細書において説明される全ての方法は、そうでないことが本明細書において示されていない限り、または文脈によって明確に否定されない限り、任意の適切な順序において実行することができる。本明細書において提供されるありとあらゆる実施例または例示言語（例えば、「例えば、〜など（ｓｕｃｈ  ａｓ）」）の使用は、単に本発明をよりよく解説することを意図するものであり、そうでないことが主張されない限り、発明の範囲に制限を課すものではない。明細書におけるいかなる言語も、非請求要素を発明の実施に不可欠なものと指摘していると解釈すべきではない。
【００６１】
いくつかの文献が、本明細書の本文全体を通して引用されている。本明細書において引用された各文献（全ての特許、特許出願、科学的刊行物、製造業者の仕様書、取扱説明書などを含む）は、上記および下記に関わらず、それらを参照することによりその全体を本明細書に組み入れる。本明細書のいかなる記載も、先行発明によるそのような開示に先行する権利がないことの承認として、解釈されるべきではない。
【００６２】
糖尿病病態生理学との関連においてＧＬＰ−１受容体シグナリングの主要成分およびＦＧ２１産生および作用を統合したシステム薬理学手法を使用することによって、本発明者らは、潜在的有害効果（例えば、吐き気および嘔吐）を避けつつ両方の活性薬剤の有益効果（例えば、体重、脂質、血糖コントロールに関して）を達成するための、最適なＧＬＰ−１Ｒアゴニスト／ＦＧＦ２１化合物活性比を決定することに成功した。
【００６３】
用語「組合せ物」は、本明細書において使用される場合、患者へのＦＧＦ２１化合物およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストの個別投与によって、またはＦＧＦ２１化合物およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストを含む組合せ製品の形態において、例えば、１つの医薬組成物において、または融合分子／タンパク質の形態において、ＦＧＦ２１化合物およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストを含む組合せ物を適用することを可能にする手段を含むことを意味する。別々に投与される場合、投与は、同時にまたは逐次に、任意の順序において行うことができる。ＦＧＦ２１化合物およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストの量ならびに投与の相対的タイミングは、所望の併用治療効果を達成するために、選択されるであろう。組合せ物の投与は、同時に、（１）全ての医薬品有効成分を含む単一の医薬組成物において；または（２）医薬品有効成分の少なくとも１つをそれぞれが含む別々の医薬組成物においてであってもよい。あるいは、組合せ物は、ある治療薬剤が最初に投与され、二番目に他の薬剤が投与されるか、またはその逆において、連続して別々に投与してもよい。そのような連続投与は、時間的に近くであっても、または時間的に離れていてもよい。一実施形態において、組合せ物は、キット、例えば、本明細書において定義されるキットなどの形態において提供される。
【００６４】
用語「線維芽細胞増殖因子２１」または「ＦＧＦ２１」は、本明細書において使用される場合、当技術分野において公知の任意のＦＧＦ２１タンパク質を意味し、特に、ヒトＦＧＦ２１を指す。一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１は、配列番号１のアミノ酸配列を有する。
【００６５】
用語「ＦＧＦ２１化合物」は、本明細書において使用される場合、概して、ＦＧＦ２１活性を有する化合物を指す。
【００６６】
一実施形態において、ＦＧＦ２１化合物は、ペプチド化合物、すなわち、ペプチドまたはタンパク質である。
【００６７】
用語「ペプチド」は、本明細書において使用される場合、ペプチド結合によって供給結合的に連結された、例えば、２以上、または３以上、または４以上、または６以上、または８以上、または９以上、または１０以上、または１３以上、または１６以上、または２１以上のアミノ酸を含む、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指す。ペプチドは、例えば、１００までのアミノ酸からなり得る。用語「ポリペプチド」は、大きなペプチド、好ましくは１００を超えるアミノ酸残基を有するペプチドを指す。用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において、互換的に使用される。
【００６８】
一実施形態において、ＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１であるか、または天然ＦＧＦ２１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性を有するＦＧＦ２１変異体である。
【００６９】
用語「天然ＦＧＦ２１」は、本明細書において使用される場合、天然に存在するＦＧＦ２１、例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＦＧＦ２１（「全長ヒト野生型ＦＧＦ２１」とも呼ばれる）を意味する。用語「天然ＦＧＦ２１」は、本明細書において使用される場合、成熟ＦＧＦ２１、すなわち、天然シグナル配列（シグナルペプチドとも呼ばれる）が欠如している天然に存在するＦＧＦ２１（シグナルペプチドとも呼ばれる）も含む。一実施形態において、天然ＦＧＦ２１は、配列番号１のアミノ酸１から２８（Ｍ１からＡ２８）が欠如している成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１であり、配列番号２によって表される。
【００７０】
２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」は、配列間において同一であるアミノ酸の割合を示す。比較のための配列の最適化アラインメントは、手作業以外に、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１、Ａｄｓ  Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２、４８２の局所的相同性アルゴリズムによって、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８、４４３の局所的相同性アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５、２４４４の類似検索方法によって、またはこれらのアルゴリズムを使用するコンピュータプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、生成され得る。
【００７１】
ＦＧＦ２１変異体は、天然ＦＧＦ２１（例えば、配列番号１または２）における／それへの少なくとも１つのアミノ酸残基の欠失、追加、および／または置換に基づいていてもよい。
【００７２】
そのような欠失、追加、および／または置換は、天然ＦＧＦ２１（例えば、配列番号１または２）に比べて変異体における増加した安定性、例えば、タンパク質分解安定性および／または熱安定性に貢献し得る。これは、例えば、置換されたアミノ酸においてかまたはその近くでのプロテアーゼ切断の防止によって、または１つまたはそれ以上の追加のジスルフィド架橋の形成によって達成される。
【００７３】
用語「アミノ酸」または「アミノ酸残基」は、本明細書において使用される場合、天然に存在するアミノ酸、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、および天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸模倣物、それらの構造がそのような立体異性形態を許容する場合にはそれらのＤおよびＬ立体異性体の全てを指す。アミノ酸は、本明細書において、それらの名前もしくは一般的に知られるそれらの３文字記号のどちらかにおいて、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名法委員会（ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）によって推奨される１文字記号によって呼ばれる。
【００７４】
アミノ酸に関連して使用される場合、用語「天然に存在する」は、慣習的な２０のアミノ酸（すなわち、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、およびチロシン（Ｙ））、ならびにセレノシステイン、ピロリシン（ＰＹＬ）、およびピロリン−カルボキシリシン（ＰＣＬ）を意味する。
【００７５】
用語「非天然アミノ酸」は、本明細書において使用される場合、自然にはコードされないかまたはどの有機体の遺伝子コードにも見出されないアミノ酸を意味することを指す。それらは、例えば、純粋に合成された化合物である場合がある。非天然アミノ酸の例としては、これらに限定されるわけではないが、ヒドロキシプロリン、ガンマ−カルボキシグルタメート、Ｏ−ホスホセリン、アゼチジンカルボン酸、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、ベータ−アラニン、アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、第三級ブチルグリシン、２，４−ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２’−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリシン、アロ−ヒドロキシリシン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルアラニン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−メチルペンチルグリシン、Ｎ−メチルバリン、ナフトアラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、Ｄ−オルニチン、Ｄ−アルギニン、ｐ−アミノフェニルアラニン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸、およびチオプロリンが挙げられる。
【００７６】
用語「アミノ酸類似体」は、本明細書において使用される場合、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を有する化合物を指す。アミノ酸類似体は、可逆的もしくは非可逆的に化学的に遮断されるか、またはそれらのＣ末端カルボキシ基、それらのＮ末端アミノ基、および／またはそれらの側鎖の官能基が化学的に修飾された、天然および非天然アミノ酸を含む。そのような類似体としては、これらに限定されるわけではないが、メチオニンスルホキシド、メチオニンスルホン、Ｓ−（カルボキシメチル）−システイン、Ｓ−（カルボキシメチル）−システインスルホキシド、Ｓ−（カルボキシメチル）−システインスルホン、アスパラギン酸−（ベータメチルエステル）、Ｎ−エチルグリシン、アラニンカルボキサミド、ホモセリン、ノルロイシン、およびメチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。
【００７７】
用語「アミノ酸模倣物」は、本明細書において使用される場合、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する化学化合物を指す。
【００７８】
いくつかの実施形態において、変異体は、そのＮ末端に、少なくとも１つの追加のアミノ酸を含む。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸は、プロリンを除く天然に存在するアミノ酸、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、およびアミノ酸模倣物から選択される。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸は、Ｇ、Ａ、Ｎ、およびＣからなる群から選択される。特定の実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸は、Ｇである。
【００７９】
本発明における使用にとって好適なＦＧＦ２１変異体は、例えば、参照によって本明細書に組み入れられるＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０７９５５１に記載されている。
【００８０】
一実施形態において、ＦＧＦ２１化合物は、配列番号３、４、５、および６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ＦＧＦ２１変異体である。
【００８１】
本発明の組合せ物、医薬組成物、および融合分子に含まれるＦＧＦ２１化合物は、天然ＦＧＦ２１（例えば、配列番号２）のＦＧＦ２１活性と同じまたは実質的に同じＦＧＦ２１活性を示す。一実施形態において、ＦＧＦ２１活性は、本明細書において定義される融合分子に含まれていない場合（融合分子の成分ではない場合）および／またはさらに修飾されていない場合（下記を参照されたい）の、ＦＧＦ２１化合物のＦＧＦ２１活性を意味する。
【００８２】
用語「実質的に同じ」は、本明細書において使用される場合、天然ＦＧＦ２１（例えば、配列番号２）のＦＧＦ２１活性の５０％から１５０％または６０％から１４０％または６５％から１３５％の範囲であるＦＧＦ２１活性を指す。
【００８３】
一実施形態において、用語「ＦＧＦ２１活性」（または「ＦＧＦ２１効力」）は、本明細書において使用される場合、ＦＧＦ２１受容体（ＦＧＦＲ、例えば、ＦＧＦＲ１ｃ）の活性化を意味する。一実施形態において、ＦＧＦ２１受容体は、ヒトＦＧＦ２１受容体である。一実施形態において、用語は、インビトロでの活性／効力を意味する。別の実施形態において、用語は、インビボでの活性／効力を意味する。一実施形態において、ＦＧＦ２１受容体の活性化は、インビトロでのＦＧＦ２１化合物との接触におけるＦＧＦ２１受容体の自己リン酸化を測定することよって決定される。一実施形態において、ＦＧＦ２１活性／効力は、Ｉｎ−Ｃｅｌｌ  Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイを使用することによって決定される。一実施形態において、活性／効力は、ＥＣ５０値を決定するために定量化される。
【００８４】
用語「Ｉｎ−Ｃｅｌｌ  Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイ」は、本明細書において使用される場合、免疫細胞化学的アッセイ、より詳しくは、通常はマイクロプレート（例えば、９６ウェル形式または３８４ウェル形式）において実施される、定量的免疫蛍光アッセイを指す。それは、ウェスタンブロットの特異性を、ＥＬＩＳＡの再現性および処理能力と組み合わせるものである（例えば、Ａｇｕｉｌａｒ  Ｈ．Ｎ．ら（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（４）：ｅ９９６５を参照されたい）。適切なＩＣＷアッセイシステムは市販されている（例えば、ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国）。一実施形態において、抗ｐＦＧＦＲおよび／または抗ｐＥＲＫは、ＩＣＷアッセイにおいて使用される。一実施形態において、ｐＦＧＦＲ  ＩＣＷアッセイが実施される。一実施形態において、ＩＣＷアッセイは、本質的に実施例３に記載されるとおりに実施される。
【００８５】
一実施形態において、天然ＦＧＦ２１のＦＧＦ２１活性と同じまたは実質的に同じであるＦＧＦ２１活性を有するＦＧＦ２１化合物は、ＦＧＦ２１受容体活性化のそのＥＣ５０値に関して定義される。例えば、天然ＦＧＦ２１（例えば、配列番号２）のＦＧＦ２１活性の５０％から１５０％または６０％から１４０％または６５％から１３５％の範囲のＦＧＦ２１活性を有するＦＧＦ２１化合物は、本明細書において、ＦＧＦ２１化合物とも呼ばれ、例えば、実施例３において本質的に説明されるように、ｐＦＧＦＲ  ＩＣＷアッセイにおいて、それぞれ、２．４０ｎｍｏｌ／Ｌから７．２０ｎｍｏｌ／Ｌまたは２．８８ｎｍｏｌ／Ｌから６．７２ｎｍｏｌ／Ｌまたは３．１２ｎｍｏｌ／Ｌから６．４８ｎｍｏｌ／ＬのＥＣ５０を有するＦＧＦ２１受容体を活性化する。一実施形態において、ＥＣ５０値は、ＥＣ５０±ＳＤとして与えられる。一実施形態において、ＳＤは、アッセイ依存の標準偏差である。一実施形態において、ＥＣ５０は、例えば、実施例３において本質的に説明されるように、ｐＦＧＦＲ  ＩＣＷアッセイにおいて、それぞれ、２．４０±ＳＤから７．２０±ＳＤｎｍｏｌ／Ｌまたは２．８８±ＳＤから６．７２±ＳＤｎｍｏｌ／Ｌまたは３．１２±ＳＤから６．４８±ＳＤｎｍｏｌ／Ｌである。一実施形態において、ＳＤは、１．８ｎｍｏｌ／Ｌである。
【００８６】
本発明により、ＦＧＦ２１化合物は、さらに修飾され、例えば、以下においてさらに説明されるように、別のエンティティ／分子、例えば、ポリマー（例えば、ＰＥＧ）など、またはペプチド／ポリペプチド、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）または免疫グロブリンもしくはその変異体のＦｃ領域／ドメインなどに融合／コンジュゲートされる。一実施形態において、本明細書において言及されるＦＧＦ２１化合物のＦＧＦ２１活性は、本明細書において「純粋なＦＧＦ２１化合物」とも呼ばれる、そのようなさらなる修飾を行っていないＦＧＦ２１化合物のＦＧＦ２１活性である。
【００８７】
用語「融合した」は、本明細書において使用される場合、特に、例えば、遺伝子組換えＤＮＡ技術などによる、遺伝子融合を指す。（ポリ）ペプチド半減期延長モジュールのアミノ酸配列は、変異体のアミノ酸配列内の任意の位置に導入することができ、例えば、コードされたタンパク質構造内においてループ形状を取ってもよく、または、Ｎ末端もしくはＣ末端に融合させることもできる。
【００８８】
用語「にコンジュゲートさせる」は、本明細書において使用される場合、特に、結果として（ポリ）ペプチドと別の分子との間、例えば、変異体および半減期延長モジュールなどとの間において安定な共有結合を生じる、化学的および／または酵素的コンジュゲーションを指す。そのようなコンジュゲーションは、（ポリ）ペプチドのＮ末端もしくはＣ末端または特定の側鎖において、例えば、リジン、システイン、チロシン、または非天然アミノ酸残基において、生じてもよい。
【００８９】
用語「ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト」（略して：「ＧＬＰ−１ＲＡ」）は、本明細書において使用される場合、概して、ＧＬＰ−１受容体に結合し活性化する化合物、例えば、ＧＬＰ−１（一次ＧＬＰ−１アゴニストとして）などを意味する。
【００９０】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、ペプチド化合物、すなわち、ペプチドまたはタンパク質である。別の実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、低分子、すなわち、９００Ｄａ未満の分子量を有する有機化合物である。
【００９１】
本発明の組合せ物、医薬組成物、および融合分子に含まれるＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、本明細書において定義される天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のものと比べて低減したＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を示す。表現「ｘ分の１」における値「ｘ」は、本明細書において使用される場合、本明細書において、「弱化倍率（attenuation factor）」または「低減倍率（reduction factor）」と呼ばれる。一実施形態において、本明細書において定義される天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のものと比べて低減したＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性は、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストが、本明細書において定義される融合分子の成分である場合に示される。
【００９２】
用語「天然ＧＬＰ−１（７〜３６）」は、本明細書において使用される場合、場合によりそのＣ末端にアミド基を含む、配列番号７のアミノ酸配列を有するペプチドを指す。
【００９３】
一実施形態において、用語「ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性」（または「ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト効力」）は、本明細書において使用される場合、ＧＬＰ−１受容体の活性化を意味する。一実施形態において、用語は、インビトロにおけるアゴニスト活性／効力を意味する。別の実施形態において、用語は、インビボにおけるアゴニスト活性／効力を意味する。一実施形態において、ＧＬＰ−１受容体の活性化は、インビトロでの、アゴニストとの接触においてＧＬＰ−１受容体を安定して発現する細胞のｃＡＭＰ応答を測定することによって決定される。一実施形態において、細胞は、ＨＥＫ−２９３細胞株由来である。一実施形態において、ＧＬＰ−１受容体は、ヒトＧＬＰ−１受容体である。一実施形態において、ＧＬＰ−１受容体の活性化は、実施例４において本質的に説明されるように決定される。一実施形態において、活性／効力は、ＥＣ５０値を決定することによって定量化される。
【００９４】
一実施形態において、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて低減したＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有するＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、例えば、表４に示されるＧＬＰ−１受容体活性化のそのＥＣ５０値に関して定義される。例えば、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性と比べて９分の１から５３１分の１のＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有するＧＬＰ−１Ｒアゴニストも、本明細書において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストと呼ばれ、６．９３から４０８．８７ｐｍｏｌ／ＬなどのＥＣ５０を有するＧＬＰ−１受容体を活性化する。一実施形態において、ＥＣ５０値は、上記において説明されるように決定される。一実施形態において、ＥＣ５０値は、ＥＣ５０±ＳＤとして与えられる。一実施形態において、ＳＤは、アッセイ依存の標準偏差である。
【００９５】
天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のものと比べて低減したＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する好適なＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を決定するための本明細書において説明されるアッセイ、例えば、実施例４、またはＸｉａｏら（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４０（９）：２８６０〜９頁またはＧａｕｌｔら（２０１３）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８８（４９）：３５５８１〜９１頁に記載されるようなアッセイ、例えば、細胞質ｃＡＭＰのＧＬＰ−１Ｒアゴニスト誘導産生の分析、β細胞保存作用（アポトーシス）、またはグルコース刺激性インスリン分泌（ＧＳＩＳ）などによって特定することができる。それらは、例えば、既知のペプチド性ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト、例えば、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）などの変異体を産生することによって、例えば、無作為または部位特異的変異誘発または化学的合成（例えば、実施例５を参照されたい）およびその後の、対照として天然ＧＬＰ−１（７〜３６）を使用した、本明細書において説明される、それらのＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性の決定によって、特定することができる。あるいは、それらは、対照として天然ＧＬＰ−１（７〜３６）を使用してＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性に関して低分子ライブラリをスクリーニングすることによって特定することができる。これらのアッセイの全ては、ハイスループットアッセイの形態において実施することができる。
【００９６】
既知のペプチド性ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト（例えば、天然ＧＬＰ−１（７〜３６））の変異体は、既知のペプチド性ＧＬＰ−１Ｒアゴニストのアミノ酸配列における／それへの少なくとも１つのアミノ酸残基の欠失、追加、および／または置換に基づいていてもよい。
【００９７】
一実施形態において、変異体は、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５までのアミノ酸残基の置換を含む。
【００９８】
一実施形態において、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）の配列に１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５までのアミノ酸残基の置換を含む、天然ＧＬＰ−１（７〜３６）の変異体である。一実施形態において、置換は、Ａ８Ｇ、Ｖ１６Ｌ、Ｖ１６Ｋ、Ｓ１８Ｋ、Ｓ１８Ｉ、Ｙ１９Ｑ、Ｌ２０Ｍ、Ｅ２１Ｄ、Ｇ２２Ｅ、Ｑ２３Ｅ、Ａ２４Ｒ、Ａ２５Ｖ、Ｋ２６Ｒ、Ｋ２６Ｑ、Ｅ２７Ｌ、Ａ３０Ｅ、Ｖ３３Ｋ、Ｖ３３Ｌ、Ｖ３３Ｅ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ａ、Ｇ３５Ｔ、およびＲ３６Ｇ、ならびに／または表５に一覧されるような置換（配列番号８から２０の説明を参照されたい）を含むかもしくはそれらからなる群から選択される。
【００９９】
いくつかの実施形態において、変異体は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基を含む。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、プロリン、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、およびアミノ酸模倣物を除く、天然に存在するアミノ酸から選択される。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、Ｇ、Ａ、Ｎ、およびＣからなる群から選択される。特定の実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、（単一の）Ｇである。
【０１００】
いくつかの実施形態において、変異体は、そのＣ末端にペプチド延長を含む。ペプチド延長は、例えば、１２、１１、または１０までのアミノ酸残基からなり得る。一実施形態において、ペプチド延長は、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号３８）、ＰＶＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号３９）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＥＳ（配列番号４０）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＥ（配列番号４１）、ＰＫＫＱＲＬＳ（配列番号４２）、およびＰＫＫＩＲＹＳ（配列番号４３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【０１０１】
一実施形態において、本明細書において定義される天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のものと比べて低減したＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有するＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、アミノ酸配列
Ｈ−Ｇ−Ｅ−Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ｔ−Ｓ−Ｄ−Ｘ１０−Ｓ−Ｘ１２−Ｑ−Ｘ１４−Ｘ１５−Ｅ−Ｅ−Ｘ１８−Ｖ−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｆ−Ｉ−Ｅ−Ｗ−Ｌ−Ｘ２７−Ｘ２８−Ｘ２９−Ｘ３０（配列番号３７）
（ここで、
Ｘ１０は、任意のアミノ酸、例えば、ＬまたはＫであり；
Ｘ１２は、任意のアミノ酸、例えば、ＫまたはＩであり；
Ｘ１４は、任意のアミノ酸、例えば、ＬまたはＭであり；
Ｘ１５は、任意のアミノ酸、例えば、ＥまたはＤであり；
Ｘ１８は、任意のアミノ酸、例えば、ＡまたはＲであり；
Ｘ２０は、任意のアミノ酸、例えば、ＲまたはＱであり；
Ｘ２１は、任意のアミノ酸、例えば、ＬまたはＥであり；
Ｘ２７は、任意のアミノ酸、例えば、Ｌ、Ｅ、Ｋ、またはＶであり；
Ｘ２８は、任意のアミノ酸、例えば、Ａ、Ｎ、またはＫであり；
Ｘ２９は、任意のアミノ酸、例えば、ＴまたはＧであり；
Ｘ３０は、任意のアミノ酸、例えば、ＧまたはＲであり；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸残基を含み；
場合により、該アミノ酸配列は、そのＣ末端に１２、１１、または１０までのアミノ酸残基からなるペプチド延長を含む）
を含むか、またはそれからなる。
【０１０２】
一実施形態において、Ｘ２７は、Ｌ、Ｅ、またはＶ、例えば、Ｌである。一実施形態において、Ｘ２８は、ＡまたはＫ、例えば、Ａである。
【０１０３】
一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、Ｇ、Ａ、Ｎ、およびＣからなる群から選択される。特定の実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸残基は、（単一の）Ｇである。
【０１０４】
一実施形態において、ペプチド延長は、ＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号３８）、ＰＶＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号３９）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＥＳ（配列番号４０）、ＰＳＳＧＥＰＰＰＥ（配列番号４１）、ＰＫＫＱＲＬＳ（配列番号４２）、およびＰＫＫＩＲＹＳ（配列番号４３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【０１０５】
本明細書において開示される修飾、例えば、Ｎ末端でのＧの導入またはＸ１２＝Ｉなどは、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性の好適な低減をもたらす。
【０１０６】
一実施形態において、本明細書において定義される天然ＧＬＰ−１（７〜３６）のものと比べて低減したＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有するＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、配列番号９、１０、１２、１４、１５、１６、１７、１９、および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。
【０１０７】
本発明により、ＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、例えば、ＦＧＦ２１化合物に関連して上記において説明したように、さらに修飾してもよい。
【０１０８】
本発明による医薬組成物は、１種またはそれ以上の担体および／または賦形剤を含み、それら全ては、薬学的に許容される。用語「薬学的に許容される」は、本明細書において使用される場合、好ましくは、医薬組成物の活性剤の作用と相互作用しない材料の非毒性を意味する。
【０１０９】
用語「担体」は、適用を促進、増強、または可能にするために有効成分と組み合わされる、天然または合成の有機または無機成分を指す。本発明によれば、用語「担体」は、対象への投与にとって好適な、１種またはそれ以上の適合性の固体または液体の充填剤、希釈剤、または封入物質も含む。
【０１１０】
非経口投与のための可能な担体物質は、例えば、滅菌水、リンゲル液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、静菌性生理食塩水（例えば、０．９％ベンジルアルコールを含有する生理食塩水）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ハンクス液、ポリアルキレングリコール、水素化ナフタレン、および、特に、生体適合性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン／ポリオキシ−プロピレンコポリマーである。
【０１１１】
用語「賦形剤」は、本明細書において使用される場合、有効成分ではないが医薬組成物中に存在していてもよい全ての物質、例えば、塩、結合剤（例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、トレハロース、ソルビトール、マンニトール）、充填剤、潤滑剤、増粘剤、表面活性剤、防腐剤、乳化剤、緩衝剤物質、香味剤、または着色剤などを含むことが意図される。
【０１１２】
薬学的に許容される塩を製造するために、薬学的に許容されない塩を使用してもよく、それらは本発明に含まれる。この種類の薬学的に許容される塩は、非限定的に以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから製造されるものを含む。薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩などとして製造することもできる。塩は、イオン強度または張度を調節するために加えることができる。
【０１１３】
医薬組成物における使用のための好適な防腐剤としては、酸化防止剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、システイン、メチオニン、パラベン、チメロサール、フェノール、クレゾール、およびそれらの混合物が挙げられる。
【０１１４】
医薬組成物における使用のための好適な緩衝物質としては、塩での酢酸、塩でのクエン酸、塩でのホウ酸、塩でのリン酸、およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス、ＴＨＡＭ、トロメタモール）が挙げられる。
【０１１５】
本発明による医薬組成物は、好ましくは、滅菌組成物である。医薬組成物は、通常、一様な剤形において提供されることができ、それ自体公知の様式において製造される。医薬組成物は、例えば、溶液剤または懸濁剤の形態であってもよい。
【０１１６】
医薬組成物は、適切な希釈剤によって再構成される、安定な凍結乾燥された製品として製剤化することもでき、場合により、上記において定義されるような１種またはそれ以上の賦形剤を含む。
【０１１７】
本発明による医薬組成物は、少なくとも１種の他の医薬品有効成分をさらに含み得る。
【０１１８】
用語「医薬品有効成分」（ＡＰＩ）は、本明細書において使用される場合、いくつらかの薬理効果を提供し、例えば、本明細書において定義される疾患または障害などの状態を治療または予防するために使用される、任意の薬学的に活性な化学的または生物学的化合物ならびにそれらの任意の薬学的に許容される塩およびそれらの任意の混合物を含む。例示的な薬学的に許容される塩としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸、マレイン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、クエン酸、酒石酸、パモン酸、ラウリン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ミリスチン酸、ラウリル硫酸、ナフタリンスルホン酸、リノール酸、リノレン酸などが挙げられる。本明細書において使用される場合、用語「医薬品有効成分」、「活性剤」、「有効成分」、「活性物質」、「治療的に活性な化合物」、および「薬物」は、同義語であることが意図され、すなわち、同一の意味を有する。
【０１１９】
本発明により、医薬品有効成分は、場合により、以下から選択される：
−  Ｒｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ  ２０１４において言及される全ての薬物、例えば、Ｒｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ  ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ  １２において言及される全ての抗糖尿病薬、Ｒｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ  ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ  ０６において言及される全ての体重減量剤または食欲抑制剤、Ｒｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ  ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ  ５８において言及される全ての脂質低下剤、Ｒｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ  ２０１４  ｃｈａｐｔｅｒ  １７において言及される全ての抗高血圧症薬、Ｒｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅにおいて言及される全ての腎臓保護薬（ｎｅｐｈｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）、またはＲｏｔｅ  Ｌｉｓｔｅ  ２０１４ｃｈａｐｔｅｒ  ３６において言及される全ての利尿薬など；
−  インスリンおよびインスリン誘導体、例えば：インスリングラルギン（例えば、Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））、１００Ｕ／ｍＬ超に濃縮されたインスリングラルギン、例えば、２７０〜３３０Ｕ／ｍＬのインスリングラルギンまたは３００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン（ＥＰ２３８７９８９において開示される）、インスリングルリシン（例えば、Ａｐｉｄｒａ（登録商標））、インスリンデテミル（例えば、Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標））、インスリンリスプロ（例えば、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）、Ｌｉｐｒｏｌｏｇ（登録商標））、インスリンデグルデク（例えば、ＤｅｇｌｕｄｅｃＰｌｕｓ（登録商標）、ＩｄｅｇＬｉｒａ（ＮＮ９０６８））、インスリンアスパルトおよびアスパルト製剤（例えば、ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））、基礎インスリンおよび類似体（例えば、ＬＹ２６０５５４１、ＬＹ２９６３０１６、ＮＮ１４３６）、ペグ化インスリンリスプロ（例えば、ＬＹ−２７５５８５）、長時間作用型インスリン（例えば、ＮＮ１４３６、Ｉｎｓｕｍｅｒａ（ＰＥ０１３９）、ＡＢ−１０１、ＡＢ−１０２、Ｓｅｎｓｕｌｉｎ  ＬＬＣ）、中間時間作用型インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｎ、Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標）Ｎ）、速効性および短時間作用型インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｒ、Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標）Ｒ、Ｌｉｎｊｅｔａ（登録商標）（ＶＩＡｊｅｃｔ（登録商標））、ＰＨ２０インスリン、ＮＮ１２１８、ＨｉｎｓＢｅｔ（登録商標））、予備混合インスリン、ＳｕｌｉＸｅｎ（登録商標）、ＮＮ１０４５、インスリン＋Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標）、ＰＥ−０１３９、ＡＣＰ−００２ヒドロゲルインスリン、および経口、吸入可能、経皮、および口腔、または舌下インスリン（例えば、Ｅｘｕｂｅｒａ（登録商標）、Ｎａｓｕｌｉｎ（登録商標）、Ａｆｒｅｚｚａ（登録商標）、インスリントレゴピル（ｔｒｅｇｏｐｉｌ）、ＴＰＭ−０２インスリン、Ｃａｐｓｕｌｉｎ（登録商標）、Ｏｒａｌ−ｌｙｎ（登録商標）、Ｃｏｂａｌａｍｉｎ（登録商標）、経口インスリン、ＯＲＭＤ−０８０１、Ｏｓｈａｄｉ経口インスリン、ＮＮ１９５３、ＮＮ１９５４、ＮＮ１９５６、ＶＩＡｔａｂ（登録商標））。二官能性リンカーによってアルブミンまたは他のタンパク質に結合したこれらのインスリンの誘導体も好適である；
−  グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１類似体、およびＧＬＰ−１受容体アゴニスト、例えば：ＧＬＰ−１（７〜３７）、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミド、リキシセナチド（例えば、Ｌｙｘｕｍｉａ（登録商標））、エキセナチド（例えば、エキセンディン−４、ｒエキセンディン−４、Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）、Ｂｙｄｕｒｅｏｎ（登録商標）、エキセナチドＮｅｘＰ）、エキセナチド−ＬＡＲ、リラグルチド（例えば、Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））、セマグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド、デュラグルチド、アルブゴン、オキシントモジュリン、ゲニプロシド、ＡＣＰ−００３、ＣＪＣ−１１３１、ＣＪＣ−１１３４−ＰＣ、ＧＳＫ−２３７４６９７、ＰＢ−１０２３、ＴＴＰ−０５４、ラングレナチド（ＨＭ−１１２６０Ｃ）、ＣＭ−３、ＧＬＰ−１Ｅｌｉｇｅｎ、ＡＢ−２０１、ＯＲＭＤ−０９０１、ＮＮ９９２４、ＮＮ９９２６、ＮＮ９９２７、Ｎｏｄｅｘｅｎ、Ｖｉａｄｏｒ−ＧＬＰ−１、ＣＶＸ−０９６、ＺＹＯＧ−１、ＺＹＤ−１、ＺＰ−３０２２、ＣＡＭ−２０３６、ＤＡ−３０９１、ＤＡ−１５８６４、ＡＲＩ−２６５１、ＡＲＩ−２２５５、エキセナチド−ＸＴＥＮ（ＶＲＳ−８５９）、エキセナチド−ＸＴＥＮ＋グルカゴン−ＸＴＥＮ（ＶＲＳ−８５９＋ＡＭＸ−８０８）、およびポリマー結合ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１類似体；
−  二重ＧＬＰ−１／ＧＩＰアゴニスト（例えば、ＲＧ−７６９７（ＭＡＲ−７０１）、ＭＡＲ−７０９、ＢＨＭ０８１、ＢＨＭ０８９、ＢＨＭ０９８）；二重ＧＬＰ−１／グルカゴン受容体アゴニスト（例えばＢＨＭ−０３４、ＯＡＰ−１８９（ＰＦ−０５２１２３８９、ＴＫＳ−１２２５）、ＴＴ−４０１／４０２、ＺＰ２９２９、ＬＡＰＳ−ＨＭＯＸＭ２５、ＭＯＤ−６０３０）；
−  二重ＧＬＰ−１／ガストリンアゴニスト（例えば、ＺＰ−３０２２）；
−  胃腸ペプチド、例えば、ペプチドＹＹ３−３６（ＰＹＹ３−３６）またはその類似体および膵臓ポリペプチド（ＰＰ）またはその類似体；
−  グルカゴン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グレリンアンタゴニストまたはインバースアゴニスト、キセニンおよびその類似体；
−  ジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ（ＤＰＰ−４）阻害剤、例えば：アログリプチン（例えば、Ｎｅｓｉｎａ（登録商標）、Ｋａｚａｎｏ（登録商標））、リナグリプチン（例えば、Ｏｎｄｅｒｏ（登録商標）、Ｔｒａｊｅｎｔａ（登録商標）、Ｔｒａｄｊｅｎｔａ（登録商標）、Ｔｒａｙｅｎｔａ（登録商標））、サキサグリプチン（例えば、Ｏｎｇｌｙｚａ（登録商標）、Ｋｏｍｂｏｇｌｙｚｅ  ＸＲ（登録商標））、シタグリプチン（例えば、Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標）、Ｘｅｌｅｖｉａ（登録商標）、Ｔｅｓａｖｅｌ（登録商標）、Ｊａｎｕｍｅｔ（登録商標）、Ｖｅｌｍｅｔｉａ（登録商標）、Ｊｕｖｉｓｙｎｃ（登録商標）、Ｊａｎｕｍｅｔ  ＸＲ（登録商標））、アナグリプチン、テネリグリプチン（例えば、Ｔｅｎｅｌｉａ（登録商標））、トレラグリプチン、ビルダグリプチン（例えば、Ｇａｌｖｕｓ（登録商標）、Ｇａｌｖｕｍｅｔ（登録商標））、ゲミグリプチン、オマリグリプチン、エボグリプチン、デュトグリプチン、ＤＡ−１２２９、ＭＫ−３１０２、ＫＭ−２２３、ＫＲＰ−１０４、ＰＢＬ−１４２７、ピノキサシンヒドロクロリド、およびＡｒｉ−２２４３；
−  ナトリウム依存性グルコーストランスポーター２（ＳＧＬＴ−２）阻害剤、例えば：カナグリフロジン、ダパグリフロジン、レモグリフロジン、エタボン酸レモグリフロジン、セルグリフロジン、エンパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、ルセオグリフロジン、エルツグリフロジン、ＥＧＴ−０００１４４２、ＬＩＫ−０６６、ＳＢＭ−ＴＦＣ−０３９、およびＫＧＡ−３２３５（ＤＳＰ−３２３５）；
−  ＳＧＬＴ−２およびＳＧＬＴ−１の二重阻害剤（例えば、ＬＸ−４２１１、ＬＩＫ０６６）。
−  肥満防止薬、例えば、回腸型胆汁酸トランスポーター（ＩＢＡＴ）阻害剤（例えば、ＧＳＫ−１６１４２３５＋ＧＳＫ−２３３０６７２）と組み合わせたＳＧＬＴ−１阻害剤（例えばＬＸ−２７６１、ＫＧＡ−３２３５）またはＳＧＬＴ−１阻害剤；
−  ビグアニド（例えば、メトホルミン、ブホルミン、フェンホルミン）；
−  チアゾリジンジオン（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、グリタゾン類似体（例えば、ロベグリタゾン）；
−  ペルオキシソーム増殖活性化受容体（ＰＰＡＲ−）（アルファ、ガンマ、またはアルファ／ガンマ）アゴニストまたはモジュレーター（例えば、サログリタザル（例えば、Ｌｉｐａｇｌｙｎ（登録商標））、ＧＦＴ−５０５）、またはＰＰＡＲガンマ部分アゴニスト（例えば、Ｉｎｔ−１３１）；
−  スルホニル尿素（例えば、トルブタミド、グリベンクラミド、グリメピリド、Ａｍａｒｙｌ（登録商標）、グリピザイド）およびメグリチニド（例えば、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニド）；
−  アルファ−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ミグリトール、ボグリボース）；
−  アミリンおよびアミリン類似体（例えば、プラムリンチド、Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））；
−  Ｇタンパク質結合受容体１１９（ＧＰＲ１１９）アゴニスト（例えば、ＧＳＫ−１２９２２６３、ＰＳＮ−８２１、ＭＢＸ−２９８２、ＡＰＤ−５９７、ＡＲＲＹ−９８１、ＺＹＧ−１９、ＤＳ−８５００、ＨＭ−４７０００、ＹＨ−Ｃｈｅｍ１）；
−  ＧＰＲ４０アゴニスト（例えば、ＴＵＧ−４２４、Ｐ−１７３６、Ｐ−１１１８７、ＪＴＴ−８５１、ＧＷ９５０８、ＣＮＸ−０１１−６７、ＡＭ−１６３８、ＡＭ−５２６２）；
−  ＧＰＲ１２０アゴニストおよびＧＰＲ１４２アゴニスト；
−  全身性または低吸収性ＴＧＲ５（ＧＰＢＡＲ１＝Ｇタンパク質結合胆汁酸受容体１）アゴニスト（例えば、ＩＮＴ−７７７、ＸＬ−４７５、ＳＢ７５６０５０）；
−  糖尿病免疫療法、例えば：経口Ｃ−Ｃケモカインレセプタータイプ２（ＣＣＲ−２）アンタゴニスト（例えば、ＣＣＸ−１４０、ＪＮＪ−４１４４３５３２）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ−１β）アンタゴニスト（例えばＡＣ−２０１）、または経口モノクローナル抗体（ＭｏＡ）（例えば、メタゾラミド、ＶＶＰ８０８、ＰＡＺ−３２０、Ｐ−１７３６、ＰＦ−０５１７５１５７、ＰＦ−０４９３７３１９）；
−  メタボリック症候群および糖尿病の治療のための抗炎症剤、例えば：核内因子カッパＢ阻害剤（例えば、Ｔｒｉｏｌｅｘ（登録商標））；
−  アデノシンモンリン酸−活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）刺激剤、例えば：Ｉｍｅｇｌｉｍｉｎ（ＰＸＬ−００８）、Ｄｅｂｉｏ−０９３０（ＭＴ−６３−７８）、Ｒ−１１８；
−  １１−ベータ−ヒドロキシステロイド脱水素酵素１（１１−ベータ−ＨＳＤ−１）の阻害剤（例えば、ＬＹ２５２３１９９、ＢＭＳ７７０７６７、ＲＧ−４９２９、ＢＭＳ８１６３３６、ＡＺＤ−８３２９、ＨＳＤ−０１６、ＢＩ−１３５５８５）；
−  グルコキナーゼの活性剤（例えば、ＰＦ−０４９９１５３２、ＴＴＰ−３９９（ＧＫ１−３９９）、ＧＫＭ−００１（ＡＤＶ−１００２４０１）、ＡＲＲＹ−４０３（ＡＭＧ−１５１）、ＴＡＫ−３２９、ＴＭＧ−１２３、ＺＹＧＫ１）；
−  ジアシルグリセロールＯ−アシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）の阻害剤（例えば、プラジガスタット（ＬＣＱ−９０８））、プロテインチロシンホスファターゼ１の阻害剤（例えば、トロズスクエミン）、グルコース−６−ホスファターゼの阻害剤、フルクトース−１，６−ビスホスファターゼの阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼの阻害剤、ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼの阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼの阻害剤、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼの阻害剤；
−  グルコーストランスポーター−４のモジュレーター、ソマトスタチン受容体３アゴニスト（例えば、ＭＫ−４２５６）；
−  １種またはそれ以上の脂質低下剤も組合せパートナーとして好適であり、例えば：
３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−コエンザイム−Ａ−レダクターゼ（ＨＭＧ−ＣｏＡ−レダクターゼ）阻害剤、例えば、シンバスタチン（例えば、Ｚｏｃｏｒ（登録商標）、Ｉｎｅｇｙ（登録商標）、Ｓｉｍｃｏｒ（登録商標））、アトルバスタチン（例えば、Ｓｏｒｔｉｓ（登録商標）、Ｃａｄｕｅｔ（登録商標））、ロスバスタチン（例えば、Ｃｒｅｓｔｏｒ（登録商標））、プラバスタチン（例えば、Ｌｉｐｏｓｔａｔ（登録商標）、Ｓｅｌｉｐｒａｎ（登録商標））、フルバスタチン（例えば、Ｌｅｓｃｏｌ（登録商標））、ピタバスタチン（例えば、Ｌｉｖａｚｏ（登録商標）、Ｌｉｖａｌｏ（登録商標））、ロバスタチン（例えば、Ｍｅｖａｃｏｒ（登録商標）、Ａｄｖｉｃｏｒ（登録商標））、メバスタチン（例えば、Ｃｏｍｐａｃｔｉｎ（登録商標））、リバスタチン、セリバスタチン（Ｌｉｐｏｂａｙ（登録商標））、フィブレート、例えば、ベザフィブレート（例えば、Ｃｅｄｕｒ（登録商標）ｒｅｔａｒｄ）、シプロフィブレート（例えば、Ｈｙｐｅｒｌｉｐｅｎ（登録商標））、フェノフィブレート（例えば、Ａｎｔａｒａ（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｅｎ（登録商標）、Ｌｉｐａｎｔｈｙｌ（登録商標））、ゲンフィブロジル（例えば、Ｌｏｐｉｄ（登録商標）、Ｇｅｖｉｌｏｎ（登録商標））、エトフィブレート、シンフィブレート、ロニフィブレート、クリノフィブレート、クロフィブリド、ニコチン酸およびその誘導体（例えば、ナイアシン、例えば、ナイアシンの徐放性製剤など）、ニコチン酸受容体１アゴニスト（例えば、ＧＳＫ−２５６０７３）、ＰＰＡＲ−デルタアゴニスト、アセチル−ＣｏＡ−アセチルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤（例えば、アバシミベ）、コレステロール吸収阻害剤（例えば、エゼチミブ、Ｅｚｅｔｒｏｌ（登録商標）、Ｚｅｔｉａ（登録商標）、Ｌｉｐｔｒｕｚｅｔ（登録商標）、Ｖｙｔｏｒｉｎ（登録商標）、Ｓ−５５６９７１）、胆汁酸結合物質（例えば、コレスチラミン、コレセベラム）、回腸胆汁酸トランスポート（ＩＢＡＴ）阻害剤（例えば、ＧＳＫ−２３３０６７２、ＬＵＭ−００２）、ミクロソーマールトリグリセリド移転タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤（例えば、ロミタピド（ＡＥＧＲ−７３３）、ＳＬｘ−４０９０、グラノタピド）、前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）のモジュレーター（例えば、アリロクマブ（ＲＥＧＮ７２７／ＳＡＲ２３６５５３）、ＡＭＧ−１４５、ＬＧＴ−２０９、ＰＦ−０４９５０６１５、ＭＰＳＫ３１６９Ａ、ＬＹ３０１５０１４、ＡＬＤ−３０６、ＡＬＮ−ＰＣＳ、ＢＭＳ−９６２４７６、ＳＰＣ５００１、ＩＳＩＳ−３９４８１４、１Ｂ２０、ＬＧＴ−２１０、１Ｄ０５、ＢＭＳ−ＰＣＳＫ９Ｒｘ−２、ＳＸ−ＰＣＫ９、ＲＧ７６５２）、ＬＤＬ受容体アップレギュレーター、例えば、肝臓選択性甲状腺ホルモン受容体ベータアゴニス（例えば、エプロチローム（ＫＢ−２１１５）、ＭＢ０７８１１、ソベチロム（ＱＲＸ−４３１）、ＶＩＡ−３１９６、ＺＹＴ１）、ＨＤＬ−上昇化合物（ＨＤＬ−ｒａｉｓｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、例えば：コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤（例えば、アナセトラピブ（ＭＫ０８５９）、ダル���トラピブ、エバセトラピブ、ＪＴＴ−３０２、ＤＲＬ−１７８２２、ＴＡ−８９９５、Ｒ−１６５８、ＬＹ−２４８４５９５、ＤＳ−１４４２）、または二重ＣＥＴＰ／ＰＣＳＫ９阻害剤（例えばＫ−３１２）、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ１）レギュレーター、脂質代謝モジュレーター（例えば、ＢＭＳ−８２３７７８、ＴＡＰ−３０１、ＤＲＬ−２１９９４、ＤＲＬ−２１９９５）、ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）阻害剤（例えば、ダラプラディブ、Ｔｙｒｉｓａ（登録商標）、バレスプラジブ、リラプラジブ）、ＡｐｏＡ−Ｉエンハンサー（例えば、ＲＶＸ−２０８、ＣＥＲ−００１、ＭＤＣＯ−２１６、ＣＳＬ−１１２）、コレステロール合成阻害剤（例えば、ＥＴＣ−１００２）、脂質代謝モジュレーター（例えば、ＢＭＳ−８２３７７８、ＴＡＰ−３０１、ＤＲＬ−２１９９４、ＤＲＬ−２１９９５）、およびオメガ−３脂肪酸およびその誘導体（例えば、イコサペント酸エチル（ＡＭＲ１０１）、Ｅｐａｎｏｖａ（登録商標）、ＡＫＲ−０６３、ＮＫＰＬ−６６、ＰＲＣ−４０１６、ＣＡＴ−２００３）；
−  ブロモクリプチン（例えば、Ｃｙｃｌｏｓｅｔ（登録商標）、Ｐａｒｌｏｄｅｌ（登録商標））、フェンテルミンおよびフェンテルミン処方物または組合せ（例えば、Ａｄｉｐｅｘ−Ｐ、Ｉｏｎａｍｉｎ、Ｑｓｙｍｉａ（登録商標））、ベンズフェタミン（例えば、Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、ジエチルプロピオン（例えば、Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フェンジメトラジン（例えば、Ａｄｉｐｏｓｔ（登録商標）、Ｂｏｎｔｒｉｌ（登録商標））、ブプロピオンおよび組合せ（例えば、Ｚｙｂａｎ（登録商標）、Ｗｅｌｌｂｕｔｒｉｎ  ＸＬ（登録商標）、Ｃｏｎｔｒａｖｅ（登録商標）、Ｅｍｐａｔｉｃ（登録商標））、シブトラミン（例えば、Ｒｅｄｕｃｔｉｌ（登録商標）、Ｍｅｒｉｄｉａ（登録商標））、トピラマート（例えば、Ｔｏｐａｍａｘ（登録商標））、ゾニサミド（例えば、Ｚｏｎｅｇｒａｎ（登録商標））、テソフェンシン、オピオイドアンタゴニスト、例えば、ナルトレキソン（例えば、Ｎａｌｔｒｅｘｉｎ（登録商標）、ナルトレキソン＋ブプロピオン）、カンナビノイド受容体１（ＣＢ１）アンタゴニスト（例えば、ＴＭ−３８８３７）、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ−１）アンタゴニスト（例えば、ＢＭＳ−８３０２１６、ＡＬＢ−１２７１５８（ａ））、ＭＣ４受容体アゴニストおよび部分的アゴニスト（例えば、ＡＺＤ−２８２０、ＲＭ−４９３）、ニューロペプチドＹ５（ＮＰＹ５）またはＮＰＹ２アンタゴニスト（例えば、ベルネペリト、Ｓ−２３４４６２）、ＮＰＹ４アゴニスト（例えば、ＰＰ−１４２０）、ベータ−３−アドレナリン受容体アゴニスト、レプチンまたはレプチン模倣物、５−ヒドロキシトリプタミン２ｃ（５ＨＴ２ｃ）受容体のアゴニスト（例えば、ロルカセリン、Ｂｅｌｖｉｑ（登録商標））、プラムリンチド／メトレレプチン、リパーゼ阻害剤、例えば、セチリスタット（例えば、Ｃａｍｅｔｏｒ（登録商標））、オルリスタット（例えば、Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標）、Ｃａｌｏｂａｌｉｎ（登録商標））、血管新生阻害剤（例えば、ＡＬＳ−Ｌ１０２３）、ベータヒスチジンおよびヒスタミンＨ３アンタゴニスト（例えば、ＨＰＰ−４０４）、ＡｇＲＰ（アグーチ関連タンパク質）阻害剤（例えば、ＴＴＰ−４３５）、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチン（例えば、Ｆｌｕｃｔｉｎｅ（登録商標））、ジュロキセチン（例えば、Ｃｙｍｂａｌｔａ（登録商標））、二重または三重モノアミン取り込み阻害剤（ドーパミン、ノルエピネフリン、およびセロトニン再取り込み）、例えば、セルトラリン（例えば、Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標））、テソフェンシン、メチオニンアミノペプチダーゼ−２（ＭｅｔＡＰ２）阻害剤（例えば、ベロラニブ）、および線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）の産生に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＩＳＩＳ−ＦＧＦＲ４Ｒｘ）またはプロヒビチン標的指向性ペプチド−１（例えば、Ａｄｉｐｏｔｉｄｅ（登録商標））；
−  硝酸オキシド供与体、ＡＴ１アンタゴニストまたはアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ２）受容体アンタゴニスト、例えば、テルミサルタン（例えば、Ｋｉｎｚａｌ（登録商標）、Ｍｉｃａｒｄｉｓ（登録商標））、カンデサルタン（例えば、Ａｔａｃａｎｄ（登録商標）、Ｂｌｏｐｒｅｓｓ（登録商標））、バルサルタ（例えば、Ｄｉｏｖａｎ（登録商標）、Ｃｏ−Ｄｉｏｖａｎ（登録商標））、ロサルタン（例えば、Ｃｏｓａａｒ（登録商標））、エプロサルタン（例えば、Ｔｅｖｅｔｅｎ（登録商標））、イルベサルタン（例えば、Ａｐｒｏｖｅｌ（登録商標）、ＣｏＡｐｒｏｖｅｌ（登録商標））、オルメサルタン（例えば、Ｖｏｔｕｍ（登録商標）、Ｏｌｍｅｔｅｃ（登録商標））、タソサルタン、アジルサルタン（例えば、Ｅｄａｒｂｉ（登録商標））、二重アンジオテンシン受容体遮断薬（二重ＡＲＢ）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ＡＣＥ−２活性剤、レニン阻害剤、プロレニン阻害剤、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤、エンドセリン受容体（ＥＴ１／ＥＴＡ）遮断薬、エンドセリンアンタゴニスト、利尿薬、アルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アルファ遮断薬、アルファ−２アドレナリン受容体のアンタゴニスト、ベータ遮断薬、混合アルファ／ベータ遮断薬、カルシウムアンタゴニスト、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、カルシウムチャネル遮断薬ジルチアゼムの経鼻剤（例えば、ＣＰ−４０４）、二重ミネラルコルチコイド／ＣＣＢ、中枢作用性抗高血圧症薬、中性エンドペプチダーゼの阻害剤、アミノペプチダーゼＡ阻害剤、バソペプチド阻害剤、二重バソペプチド阻害剤、例えば、ネプリリシンＡＣＥ阻害剤またはネプリリシン−ＥＣＥ阻害剤、二重作用性ＡＴ受容体−ネプリリシン阻害剤、二重ＡＴ１／ＥＴＡアンタゴニスト、終末糖化産物（ＡＧＥ）分解剤、遺伝子組換えレナラーゼ、血圧ワクチン、例えば、抗ＲＡＡＳ（レニン−アンジオテンシン−アルドステロン−システム）ワクチン、ＡＴ１−またはＡＴ２−ワクチンなど、高血圧症ファーマコゲノミクスに基づく薬物、例えば、抗高血圧応答を有する遺伝的多型のモジュレーター、栓球凝集抑制因子、および他のものまたはそれらの組合せが好適である。
【０１２０】
用語「融合分子」は、一般的に、２つ以上の異なる分子（例えば、タンパク質および／またはペプチド）を連結、特に共有結合させ、結果として元の各分子に由来する機能特性を有する単一の分子を生じさせることよって作り出された分子を指す。タンパク質および／またはペプチドの場合、融合分子は、「融合タンパク質」と呼ばれる。融合分子は、遺伝子融合によって（例えば、遺伝子組換えＤＮＡ技術によって）、または化学的および／または酵素的コンジュゲーションによって生じさせることができる。２つ以上の異なる分子は、好適なリンカー分子、例えば、ペプチドリンカーまたは非ペプチドポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などによって連結させてもよい。
【０１２１】
一般的に、ペプチドリンカーは、柔軟性およびプロテアーゼ耐性を提供するように設計される。一実施形態において、当該ペプチドリンカーは、１から３０、１から２５、または１から２０のアミノ酸残基の長さを有する。一実施形態において、ペプチドリンカーは、少なくとも５つのアミノ酸残基を含む。一実施形態において、ペプチドリンカーは、グリシン−セリンリッチなリンカーであり、この場合、アミノ酸の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも８５％は、それぞれ、グリシンまたはセリン残基である。一実施形態において、ペプチドリンカーは、そのＣ末端にアラニン残基を含む。別の実施形態において、アミノ酸は、グリシンおよびセリンから選択され、すなわち、ペプチドリンカーは、排他的に、グリシンおよびセリンで構成される（グリシン−セリンリンカーと呼ばれる）。一実施形態において、ペプチドリンカーは、配列番号２２または配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。ペプチドリンカーはさらに、１つまたはそれ以上の特定のプロテアーゼ切断部位を含み得る。
【０１２２】
一実施形態において、融合分子は、融合タンパク質である。一実施形態において、融合タンパク質は、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）のＦｃ領域／ドメインまたはそれらの変異体をさらに含む。一実施形態において、Ｆｃ領域／ドメインの変異体は、Ｆｃ領域／ドメインの野生型配列と比較して、５、４、または３までの変異を含む。一実施形態において、前記変異は、アミノ酸の置換および欠失、例えば、Ｎ末端またはＣ末端欠失からなる群から選択される。一実施形態において、ＩｇＧ４のＦｃ領域／ドメインの変異体（「ＩｇＧ４  Ｆｃ変異体」とも呼ばれる」は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。一実施形態において、ＦＧＦ２１化合物およびＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、構造Ｌ１−Ｆｃ−Ｌ２を介して連結され、ここで、Ｌ１およびＬ２は、ペプチドリンカーであり（Ｌ１およびＬ２は、同じであるかまたは異なっている）、ならびにＦｃは、免疫グロブリンのＦｃ領域／ドメインまたはそれらの変異体である。
【０１２３】
一実施形態において、融合タンパク質は、配列番号２５、２６、２８、３０、３１、３２、３３、３５、および３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【０１２４】
本発明による融合タンパク質のさらなる特徴は、例えば、参照によって本明細書に組み入れられるＷＯ２０１４／０３７３７３Ａ１およびＷＯ２０１７／０９３４６５Ａ１に記載されている。
【０１２５】
「核酸分子」は、本発明により、好ましくは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）である。核酸分子は、本発明により、一本鎖または二本鎖の、および直鎖状であるかまたは環を形成するように共有結合により閉じている、分子の形態である。
【０１２６】
用語「ＤＮＡ」は、デオキシリボヌクレオチド残基を含む分子、好ましくは、完全にまたは実質的にデオキシリボヌクレオチド残基で構成される分子に関する。「デオキシリボヌクレオチド」は、ベータ−Ｄ−リボフラノシル基の２’位においてヒドロキシル基を欠くヌクレオチドに関する。用語「ＤＮＡ」は、単離ＤＮＡ、例えば、部分的または完全に精製されたＤＮＡ、本質的に純粋なＤＮＡ、合成ＤＮＡ、および遺伝子組換えにより生じたＤＮＡを含み、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの追加、欠失、置換、および／または改変によって天然に存在するＤＮＡとは異なる修飾ＤＮＡも含む。そのような改変は、ＤＮＡの末端または内部などへの、例えば、ＤＮＡの１つまたはそれ以上のヌクレオチドへの、非ヌクレオチド材料の追加を含み得る。ＤＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非標準的ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドなども含むことができる。これらの改変ＤＮＡは、類似体または天然に存在するＤＮＡの類似体と呼ぶことができる。用語「天然に存在する」は、ヌクレオチドと組み合わせて使用される場合、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）の塩基を指す。
【０１２７】
用語「ＲＮＡ」は、リボヌクレオチド残基を含む分子、好ましくは、完全にまたは実質的に、リボヌクレオチド残基で構成された分子に関する。「リボヌクレオチ」は、ベータ−Ｄ−リボフラノシル基の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドに関する。用語「ＲＮＡ」は、単離ＲＮＡ、例えば、部分的または完全に精製されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、および遺伝子組換えにより生じたＲＮＡを含み、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの追加、欠失、置換、および／または改変によって、天然に存在するＲＮＡとは異なる修飾ＲＮＡを含む。そのような改変は、ＲＮＡの末端または内部などへの、例えば、ＲＮＡの１つまたはそれ以上のヌクレオチドでの、非ヌクレオチド材料の追加を含み得る。ＲＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非標準的ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドもしくは化学的に合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなども含むことができる。これらの改変ＲＮＡは、類似体または天然に存在するＲＮＡの類似体と呼ぶことができる。本発明によれば、「ＲＮＡ」は、一本鎖ＲＮＡまたは二本鎖ＲＮＡを指す。一実施形態において、ＲＮＡは、ｍＲＮＡ、例えば、インビトロにおいて転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ  ＲＮＡ）または合成ＲＮＡである。ＲＮＡは、例えば、ＲＮＡの安定性（例えば、半減期）を増加させる１つまたはそれ以上の修飾によって、修飾することができる。そのような変更は、当業者に公知であり、そのようなものとして、例えば、５’−キャップまたは５’キャップ類似体が挙げられる。
【０１２８】
本発明による核酸分子は、ベクターに含有させる／含ませることができる。用語「ベクター」は、本明細書において使用される場合、プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクター、例えば、ラムダファージなど、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルスもしくはバキュロウイルスベクターなど、または人工染色体ベクター、例えば、バクテリア人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、もしくはＰ１人工染色体（ＰＡＣ）などを含む、当業者に公知の全てのベクターを含む。前記ベクターは、発現ベクターおよびクローニングベクターを含む。発現ベクターは、プラスミドおよびウイルスベクターを含み、一般的に、特定の宿主生物（例えば、細菌、酵母、植物、昆虫、または哺乳動物）における、またはインビトロ発現系における、所望のコード配列と、作動可能に連結されたコード配列の発現のために必要な適切なＤＮＡ配列とを含有する。クローニングベクターは、一般的に、ある特定の所望のＤＮＡ断片を設計および増幅するために使用され、所望のＤＮＡ断片の発現に必要な機能的配列を欠き得る。
【０１２９】
あるいは、本発明による核酸分子は、ゲノム、例えば、宿主細胞のゲノム、に統合させてもよい。特定の核酸分子をゲノムに統合するための手段および方法は、当業者に公知である。
【０１３０】
用語「細胞」または「宿主細胞」は、好ましくは、完全細胞、すなわち、その正常な細胞内成分、例えば、酵素、細胞小器官、または遺伝物質などを放出していない、完全膜を有する細胞に関する。完全細胞は、好ましくは、生存細胞、すなわち、その正常な代謝機能を行うことができる生きた細胞である。好ましくは、前記用語は、本発明により、外因性核酸によってトランスフェクトまたは形質転換することができる任意の細胞に関連する。外因性の核酸をトランスフェクトまたは形質導入させ、レシピエントに移した細胞は、好ましくは、レシピエントにおいてその核酸を発現することができる。用語「細胞」は、原核細胞、例えば、細菌細胞など、および真核生物細胞、例えば、酵母細胞、真菌細胞、または哺乳動物細胞などを含む。好適な細菌細胞としては、グラム陰性細菌株、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、およびシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の細菌株など、およびグラム陽性細菌株、例えば、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、およびラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）などに由来する細胞が挙げられる。好適な真菌細胞としては、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、ニューロスポーラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒ）、およびアスペルギルス属  （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）の種に由来する細胞が挙げられる。好適な酵母細胞としては、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）の種（例えば、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）の種（例えば、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ））、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）の種（例えば、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）およびピチア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ））、およびハンゼヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）の種に由来する細胞が挙げられる。好適な哺乳動物細胞としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３などが挙げられる。一実施形態において、ＨＥＫ２９３細胞が使用される。しかしながら、両生類細胞、昆虫細胞、植物細胞、および異種タンパク質の発現のために当技術分野において使用される任意の他の細胞も、使用することができる。哺乳動物細胞は、養子移入にとって特に好ましく、ヒト、マウス、ハムスター、ブタ、ヤギ、および霊長類に由来する細胞が挙げられる。これらの細胞は、多くの組織型から誘導することができ、初代細胞および細胞株、例えば、免疫系の細胞など、特に抗原提示細胞、例えば、樹枝状細胞およびＴ細胞など、幹細胞、例えば、造血幹細胞および間充織幹細胞など、ならびに他の細胞型を含む。抗原提示細胞は、その表面上の主要組織適合遺伝子複合体との関連において抗原を示す細胞である。Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用して、この複合体を認識することができる。「細胞」または「宿主細胞」は、単離してもよく、または組織または有機体、特に「非人体」、の一部であってもよい。
【０１３１】
用語「非人体」は、本明細書において使用される場合、非ヒト霊長類または他の動物、特に哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、もしくはげっ歯類、例えば、マウス、ラット、モルモット、およびハムスターなどを含むことを意味する。
【０１３２】
本明細書において使用される場合、用語「部品のキット（簡潔に：キット）」は、１つまたはそれ以上の容器と、場合によりデータ媒体とを含む製品を指す。前記１つまたはそれ以上の容器は、上記において言及した薬剤（試薬）の１つまたはそれ以上で満たされる。キットには、例えば、希釈剤、緩衝剤、およびさらなる試薬を収容する追加の容器を含ませてもよい。前記データ媒体は、非電子的データ媒体、例えば、グラフィックデータ媒体、例えば、情報リーフレット、情報シート、バーコードもしくはアクセスコード、または電子的データ媒体、例えば、コンパクトディスク（ＣＤ）、デジタル多用途ディスク（ＤＶＤ）、マイクロチップ、もしくは別の半導体ベースの電子的データ媒体である。アクセスコードは、データベース、例えば、インターネットデータベース、集中データベース、分散データベースなどへのアクセスの可能にする。前記データキャリアは、本発明の薬剤、例えば、組合せ物、医薬組成物、および融合分子、ならびに関連薬剤、例えば、本明細書において説明される核酸分子および宿主細胞などの使用のための取扱説明書を含み得る。
【０１３３】
本明細書において説明される薬剤および組成物は、任意の従来の経路、例えば、経口、経肺、吸入によって、または注射もしくは注入による非経口において投与することができる。一実施形態において、非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、皮内、または筋肉内において使用される。本明細書において説明される薬剤および組成物は、徐放性投与によって投与することもできる。
【０１３４】
非経口投与にとって好適な医薬組成物は、好ましくは、活性物質の滅菌水性または非水性調製物を含み、これらは、通常、レシピエントの血液に対して等張である。適合性の担体／溶媒／希釈剤の例は、滅菌水、リンゲル液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、静菌性生理食塩水（例えば、０．９％ベンジルアルコールを含有する生理食塩水）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、およびハンクス液である。さらに、通常、滅菌の不揮発性油も、溶液または懸濁液媒体として使用することができる。
【０１３５】
本明細書において説明される薬剤および組成物は、通常、治療有効量において投与される。「治療有効量」は、好ましくは、許容できない副作用を引き起こすことなく、単独でまたはさらなる用量と一緒に、所望の治療反応または所望の治療効果を達成する量を指す。特定の疾患または特定の状態の治療の場合、所望の反応は、好ましくは、疾患の経過の阻害に関する。これは、疾患の進行を減速させること、および、特に疾患の進行を中断または逆転させることを含む。疾患または状態の治療における所望の反応は、前記疾患または状態の発生の遅延または発生の予防であってもよい。本明細書において説明される薬剤および組成物の有効量は、治療される状態、疾患の重篤度、対象の個々のパラメータ、例えば、年齢、生理的条件、サイズ、および体重など、治療の持続期間、付随する療法のタイプ（存在する場合）、投与の特定の経路、ならびに同様の因子に依存するであろう。したがって、本明細書において説明される薬剤の投与される用量は、様々なそのようなパラメータに依存する。対象における反応が、初回用量において十分でない場合、より多い用量（または、別のより局所的経路の投与によって効果的に達成される、より多い用量）を使用することもできる。
【０１３６】
本発明により、用語「疾患または障害」は、任意の病理学的状態または不健康な状態、特に、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、糖尿病性網膜症、高血糖、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症を指す。
【０１３７】
用語「肥満」は、健康に負の影響を有し得る程度にまで過剰な体脂肪が蓄積された医学的状態を指す。ヒト（成人）対象に関して、肥満は、３０ｋｇ／ｍ２以上の肥満度指数（ＢＭＩ）（ＢＭＩ≧３０ｋｇ／ｍ２）として定義することができる。
【０１３８】
用語「太り過ぎ」は、体脂肪の量が、最適に健康である量を超えている医学的状態を指す。ヒト（成人）対象に関して、「太り過ぎ」は、２５ｋｇ／ｍ２以上の肥満度指数（ＢＭＩ）（例えば、２５ｋｇ／ｍ２≦ＢＭＩ＜３０ｋｇ／ｍ２）として定義することができる。
【０１３９】
ＢＭＩは、成人において太り過ぎおよび肥満を分類するために一般的に使用される身長体重比の単純な指標である。それは、キログラムで表した人の体重をメートルで表したその人の身長の二乗で割ったものとして定義される（ｋｇ／ｍ２）。
【０１４０】
「メタボリック症候群」は、以下の医学的状態のうちの少なくとも３つのクラスタリングとして定義することができる：腹部（中心性）肥満（例えば、コーカソイドの男性の場合には胴回り≧９４ｃｍおよびコーカソイドの女性の場合は≧８０ｃｍ、他の群に関しては民族的特有の値を有すると定義）、高い血圧（例えば、１３０／８５ｍｍＨｇ以上）、高い空腹時血漿グルコース（例えば、少なくとも１００ｍｇ／ｄＬ）、高い血清トリグリセリド（少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬＥ）、および低い高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）レベル（例えば、男性の場合には４０ｍｇ／ｄＬ未満および女の場合は５０ｍｇ／ｄＬ未満）。
【０１４１】
「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ）」（単に「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）」とも呼ばれる）は、インスリン産生、インスリン作用、またはその両方における欠陥から結果として生じる血中グルコースの高濃度によって特徴付けられる代謝病の群を指す。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、緩徐発症成人自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、ならびに特定の遺伝的条件、薬物、栄養不良、感染症、および他の病気からの結果として生じる他のタイプの糖尿病からなる群から選択される。
【０１４２】
糖尿病の現在のＷＨＯ診断基準は以下の通りである：空腹時血漿グルコース≧７．０ｍｍｏｌ／ｌ（１２６ｍｇ／ｄＬ）または２時間血漿グルコース≧１１．１ｍｍｏｌ／ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）。
【０１４３】
「１型糖尿病」（「インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）」または「若年性糖尿病」としても知られる）は、インスリンの完全な欠乏によって引き起こされる高い血中グルコース濃度によって特徴付けられる状態である。これは、体の免疫システムが、膵臓におけるインスリンを産生するベータ細胞を攻撃し、それらを破壊する場合に生じる。膵臓は、インスリンを少ししか、または全く産生しない。膵臓除去または膵疾患も、インスリンを産生するベータ細胞の欠乏を生じ得る。１型糖尿病は、糖尿病の症例の５％から１０％の間を占める。
【０１４４】
「２型糖尿病」（「インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）」または「成人発症型糖尿病」としても知られる）は、インスリンの可用性にかかわらない過剰なグルコース産生と、不十分なグルコースクリアランス（インスリン作用）の結果として過度に高いレベルのままにグルコースレベルが循環することによって特徴付けられる状態である。２型糖尿病は、糖尿病の全ての診断症例の約９０から９５％を占める。
【０１４５】
「妊娠性糖尿病」は、それ以前に糖尿病と診断されていない女性が、妊娠中（特に妊娠第三期）に高い血中グルコースレベルを示す状態である。妊娠性糖尿病は、調査された集団に応じて、妊娠の３〜１０％に影響する。
【０１４６】
「緩徐発症成人自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）」（「遅発性１型糖尿病」とも呼ばれる）は、成人において生じる、多くの場合において発症の経過がより遅い、１型糖尿病の形態である。
【０１４７】
「若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）」は、インスリン産生を妨害する常染色体優性遺伝子における変異によって引き起こされる、糖尿病の遺伝子型を指す。
【０１４８】
「糖尿病性網膜症」は、糖尿病患者に生じる代謝の混乱によって引き起こされる眼疾患であり、進行性の視力低下を引き起こす。
【０１４９】
用語「高血糖」は、血液中の過剰な糖（グルコース）を指す。
【０１５０】
用語「異常脂血症」は、リポタンパク質の過剰産生（高脂肪血症）または欠乏（低脂血症）を含む、リポタンパク質代謝の障害を指す。異常脂血症は、血中の総コレステロール、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールおよび／もしくはトリグリセリド濃度の上昇、ならびに／または高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール濃度の減少によって明らかにされる。
【０１５１】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、肝細胞の炎症および変性を伴う、脂肪の蓄積（脂肪滴）によって特徴付けられる肝臓疾患である。一度罹患すると、この疾患は、肝臓機能が変化して肝不全へと進行し得る状態である、肝硬変の高リスクを伴う。その後、ＮＡＳＨは、多くの場合、肝臓がんへと進行する。
【０１５２】
「アテローム性動脈硬化症」は、動脈内腔の狭窄を引き起こして線維症および石灰化へと進行し得る、大動脈および中動脈の血管内膜におけるプラークと呼ばれる不規則に分布する脂質沈着によって特徴付けられる血管疾患である。病巣は、通常、限局性であり、ゆっくりと断続的に進行する。時折、血流障害を生じ、その結果として、閉塞に対して末梢側の組織死を引き起こす、プラークの破裂を生じる。血流の制限は、ほとんどの臨床徴候の主要因であり、これは、閉塞の分布および重篤度によって変わる。
【０１５３】
用語「医薬」は、本明細書において使用される場合、治療法において、すなわち、疾患および障害の治療において使用される、物質／組成物を指す。
【０１５４】
「治療」は、疾患または障害を予防または除去するため；対象の疾患および障害を停止または鈍化させるため；対象における新たな疾患または障害の発生を阻害または鈍化させるため；現在または以前に疾患または障害を有している対象における症状の頻度もしくは重篤度および／または再発を減少させるため；および／または、対象の寿命を延長、すなわち増加させるために、化合物もしくは組成物または化合物もしくは組成物の組合せを対象に投与することを意味する。
【０１５５】
特に、用語「疾患または障害を治療すること／治療」は、治癒、期間の短縮、改善、予防、進行または悪化の鈍化または阻害、または疾患もしくは障害もしくはそれらの症状の発症を予防または遅延させることを包含する。
【０１５６】
用語「対象」は、本明細書において、治療のための対象、特に罹患した対象（「患者」とも呼ばれる）、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、または他の動物、特に哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、またはげっ歯類、例えば、マウス、ラット、モルモット、およびハムスターなどを意味する。一実施形態において、対象／患者は、ヒトである。
【０１５７】
本発明は、ここで、以下の実施例を参照することによってさらに説明されるが、それは、説明するものであって、本発明の範囲を制限するものではないことが意図される。
【実施例１】
【０１５８】
システム薬理学モデリングによって最適なＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１活性比を決定する
最適なＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１力価比を特定するために、ヒトにおけるＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質の薬理効果への改善された推定機構を使用した。ヒトにおけるグルコース、脂質、およびエネルギー代謝に対するＧＬＰ−１およびＦＧＦ２１の効果を説明する、機械的システム薬理学モデルを開発した（Ｃｕｅｖａｓ−Ｒａｍｏｓら（２００９）Ｃｕｒｒ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｖ  ５（４）：２１６〜２２０頁；Ｄｅａｃｏｎら（２０１１）Ｒｅｖ  Ｄｉａｂｅｔ  Ｓｔｕｄ  ８（３）：２９３〜３０６頁；Ｋｉｍら（２００８）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｖ  ６０（４）：４７０〜５１２頁；Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら（２０１４）Ｍｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ３（３）：２２１〜２２９頁）。
【０１５９】
モデルは、ＧＬＰ−１およびＦＧＦ２１の効果のための関連する経路を表した。シミュレートされた薬物治療（例えば、ＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質、リラグルチド、ＦＧＦ２１類似物のＬＹ２４０５３１９）に対する治療応答を評価するために、血糖コントロール（すなわち、ＨｂＡ１ｃ、空腹時血漿グルコース、食後のグルコース）、脂質パラメータ（すなわち、血漿トリグリセリド、脂肪酸、コレステロール）、およびエネルギーバランス（すなわち、体重、食物摂取量、エネルギー消費量）を得た。ＬＹ２４０５３１９に関しては、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら（２０１３）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８（３）：ｅ５８５７５頁を参照されたい。
【０１６０】
モデルは、ホルモン、インスリン、グルカゴン、およびインクレチン（ＧＬＰ−１、ＧＩＰ）によって制御されるグルコース恒常性の重要な側面を含んだ。血糖コントロールに関する主要なモデルエンドポイントは、ＨｂＡ１ｃであった。ＨｂＡ１ｃは、前の数か月にわたる平均血漿グルコース濃度を見積もるために使用される一般的な臨床エンドポイントである。ＨｂＡ１ｃは、Ｎａｔｈａｎら（２００８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３１（８）：１４７３〜１４７８頁によって報告されるように、平均血漿グルコースとＨｂＡ１ｃとの間の線形相関を使用してモデル内において見積もった。
【０１６１】
モデルは、コレステロールの表現を含む基本的な脂質代謝を取り扱うのに適切なレベルでのトリグリセリドおよび脂肪酸の代謝を組み込んだ。ＨＤＬおよび非ＨＤＬ、すなわち、ＬＤＬおよびＶＬＤＬコレステロールは、循環性リポタンパク質である。脂質代謝の表現は、脂質へのＦＧＦ２１化合物の影響およびスタチンとの相互作用のシミュレートを可能にした。ＦＧＦ２１化合物は、脂質濃度に対して有意な効果を有した（Ｇａｉｃｈら（２０１３）Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  １８（３）：３３３〜３４０頁；Ｆｉｓｈｅｒら（２０１１）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １５２（８）：２９９６〜３００４頁）。
【０１６２】
モデルにおける体重減少または体重増加は、身体の脂肪量の変化として測定した。脂肪の量と体重との間には直接的関係が存在した（Ｂｒｏｙｌｅｓら（２０１１）Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ  １０５（８）：１２７２〜１２７６頁）。食物摂取量は、基礎代謝率および安静時代謝率に基づいた（Ａｍｉｒｋａｌａｌｉら（２００８）Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  ６２（７）：２８３〜２９０頁）。エネルギー消費量がカロリー摂取量と等しい場合、身体の脂肪量は一定のままであった。食物摂取量に対する治療効果は、（Ｇｏｂｅｌら（２０１４）Ｏｂｅｓｉｔｙ（Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ）２２（１０）：２１０５〜２１０８頁）の式を使用してモデルにおいて実践した。
【０１６３】
食物は、炭水化物（グルコース同等物）、脂肪（脂肪酸同等物）、およびタンパク質（アミノ酸同等物）であると見なした。全ての栄養素は、胃に入り、遅延ノードを通過して、次いで３コンパートメントの胃腸管を通過した。胃腸管の設計は、食物の消化および吸収によって（Ｂａｓｔｉａｎｅｌｌｉら（１９９６）Ｊ  Ａｎｉｍ  Ｓｃｉ  ７４（８）：１８７３〜１８８７頁；  Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ（１９９７）Ｍｅｄ  Ｉｎｆｏｒｍ（Ｌｏｎｄ）２２（１）：３５〜４５頁）によって為された仕事に基づいた。
【０１６４】
栄養素、ホルモン、薬物、および疾患状態は、胃排出の遅れを引き起こし得る。健全な状態下では、胃排出速度は、食事のサイズ、そのエネルギー密度、および胃内の栄養素の量に依存した（Ａｃｈｏｕｒら（２００１）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  ５５（９）：７６９〜７７２頁；Ｆｏｕｉｌｌｅｔら（２００９）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌ  Ｉｎｔｅｇｒ  Ｃｏｍｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９７（６）：Ｒ１６９１〜１７０５頁）。糖尿病を患う個体は、多くの場合、経口ブドウ糖負荷試験または食事試験で見られるグルコース吸収に遅れを有した（Ｂｈａｒｕｃｈａら（２００９）Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（Ｏｘｆ）７０（３）：４１５〜４２０頁；  Ｃｈａｎｇら（２０１２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３５（１２）：２５９４〜２５９６頁）。この遅れは、胃排出の減速の結果と考えられた。糖尿病対象の胃排出の遅れを説明するために、胃と小腸との間の遅延をモデルに加えた。薬物およびホルモン（ＧＬＰ−１）は、胃の迷走神経緊張に影響することができ、それは、機械的混合および／または蠕動を低減させ、これも、胃排出を減速させる（Ｊｅｌｓｉｎｇら（２０１２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ  Ｍｅｔａｂ  １４（６）：５３１〜５３８頁；Ｌｉｔｔｌｅら（２００６）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９１（５）：１９１６〜１９２３頁；Ｎａｕｃｋら（２０１１）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ６０（５）：１５６１〜１５６５頁；ｖａｎ  Ｃａｎら（２０１３）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３８（６）：７８４〜９３頁）。
【０１６５】
この調査の目的の１つは、ＧＬＰ−１に関連する有害効果、すなわち、吐き気および嘔吐を防ぐことであった（Ｌｅａｎら（２０１４）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３８（５）：６８９〜６９７頁）。胃排出の度合いは、胃排出の低速と相関関係がある吐き気および嘔吐などの有害事象の推定を提供した。したがって、モデルにおける胃の有害事象のためのマーカは、胃排出速度の合計であった。
【０１６６】
様々な仮想患者を、健康なおよび疾患の異なる段階の２型糖尿病患者を表すモデルプラットフォームにより実行した。さらに、仮想患者は、様々な程度の肥満および異常脂血症を網羅した。仮想患者は、診療所において観察された、疾患の重症度における変動性ならびに病態生理学および表現型の変動性を表した。
【０１６７】
いくつかの治療法、すなわち、ＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質、リラグルチド、ＦＧＦ２１類似物のＬＹ２４０５３１９、メトホルミン、アトルバスタチン、シタグリプチン、ヒトインスリンをモデルにより実行した。これらの治療法は、シミュレーションにおいてオンまたはオフに切り替えることができる。仮想患者は、ＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質を投与した場合のメトホルミンおよびアトルバスタチンのバックグラウンドであると仮定した。
【０１６８】
仮想のＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質を、モデルにより実行した。融合タンパク質は、ＦＧＦ２１およびＧＬＰ−１アゴニスト活性の両方を含有し、それは、ＦＧＦ２１およびＧＬＰ−１受容体アゴニストの両方と同じ効果を有した。仮想の融合タンパク質の薬物動態プロファイルは、デュラグルチドと同様であると仮定した（Ｇｅｉｓｅｒら（２０１６）Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ  ５５（５）：６２５〜３４頁）。
【０１６９】
モデルを、多数のデータセットとの比較によって検証した。シミュレーションの結果は、関連データおよび知識、例えば、Ｈｅｌｌｅｒｓｔｅｉｎら（１９９７）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １００（５）：１３０５〜１３１９頁；Ｍｕｓｃｅｌｌｉら（２００８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５７（５）：１３４０〜１３４８頁、と定性的に一致していた。モデルは、関連する定量的試験データ、例えば、Ａｓｃｈｎｅｒら（２００６）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２９（１２）：２６３２〜２６３７頁；Ｄａｌｌａ  Ｍａｎ，  Ｃａｕｍｏら（２００５）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ２８９（５）：Ｅ９０９〜９１４頁；Ｄａｌｌａ  Ｍａｎら（２００５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５４（１１）：３２６５〜３２７３頁；Ｆｉａｌｌｏ−Ｓｃｈａｒｅｒ（２００５）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９０（６）：３３８７〜３３９１頁；Ｈａｈｎら（２０１１）Ｔｈｅｏｒ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  Ｍｏｄｅｌ  ８：  １２；Ｈｅｒｍａｎら（２００５）Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ７８（６）：６７５〜６８８頁；Ｈｅｒｍａｎら（２００６）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ４６（８）：８７６〜８８６頁およびＪ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ９１（１１）：４６１２〜４６１９頁；Ｈｏｊｌｕｎｄら（２００１）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ２８０（１）：Ｅ５０〜５８頁；Ｍｏｎａｕｎｉら（２０００）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４９（６）：９２６〜９３５頁；Ｎａｕｃｋら（２００９）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３２（１）：８４〜９０頁；Ｎａｕｃｋら（１９９３）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９１（１）：３０１〜３０７頁；Ｎａｕｃｋら（２００４）Ｒｅｇｕｌ  Ｐｅｐｔ  １２２（３）：２０９〜２１７頁；Ｔｚａｍａｌｏｕｋａｓら（１９８９）Ｗｅｓｔ  Ｊ  Ｍｅｄ  １５０（４）：４１５〜４１９頁；Ｓｉｋａｒｉｓ（２００９）Ｊ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ３（３）：４２９〜４３８頁；Ｖｉｃｉｎｉ  ａｎｄ  Ｃｏｂｅｌｌｉ（２００１）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ２８０（１）：Ｅ１７９〜１８６頁；Ｖｏｌｌｍｅｒら（２００８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５７（３）：６７８〜６８７頁と一致した。
【０１７０】
直接比較のために、ＦＧＦ２１類似物およびＧＬＰ−１受容体アゴニストを含む既存の治療法をモデルにより実行した。ＦＧＦ２１類似物の効果は、臨床データ、例えば、Ｇａｉｃｈら  ２０１３などによって検証した。ＧＬＰ−１受容体アゴニストのリラグルチドは、標的に対する直接的な競合相手であり、その実行を様々な臨床データ、例えば、Ｊａｃｏｂｓｅｎら（２００９）Ｂｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６８（６）：８９８〜９０５頁；Ｅｌｂｒｏｎｄら（２００２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２５（８）：１３９８〜１４０４頁；Ｃｈａｎｇら（２００３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５２（７）：１７８６〜１７９１頁；Ｋｏｌｔｅｒｍａｎら（２００３）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ８８（７）：３０８２〜３０８９頁；Ｄｅｇｎら（２００４）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５３（５）：１１８７〜１１９４頁；Ｋｏｌｔｅｒｍａｎら（２００５）Ａｍ  Ｊ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｙｓｔ  Ｐｈａｒｍ  ６２（２）：１７３〜１８１頁；Ｖｉｌｓｂｏｌｌら（２００８）Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ  ２５（２）：１５２〜１５６頁；Ｂｕｓｅら（２００９）Ｌａｎｃｅｔ  ３７４（９６８３）：３９〜４７頁；Ｊｅｌｓｉｎｇら（２０１２）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ  Ｍｅｔａｂ  １４（６）：５３１〜５３８頁；Ｈｅｒｍａｎｓｅｎら（２０１３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ  Ｍｅｔａｂ  １５（１１）：１０４０〜１０４８頁；Ｓｕｚｕｋｉら（２０１３）Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  ５２（１０）：１０２９〜１０３４頁；ｖａｎ  Ｃａｎら（２０１３）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３８（６）：７８４〜９３頁；Ｚｉｎｍａｎら（２００９）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３２（７）：１２２４〜１２３０頁；Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎｅｓら（２００９）Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ５２（１０）：２０４６〜２０５５頁；Ｐｒａｔｌｅｙら（２０１１）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  ６５（４）：３９７〜４０７頁；Ｎａｕｃｋら（２０１３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｏｂｅｓ  Ｍｅｔａｂ  １５（３）：２０４〜２１２頁；Ｆｌｉｎｔら（２０１１）Ａｄｖ  Ｔｈｅｒ  ２８（３）：２１３〜２２６頁；Ｋａｐｉｔｚａら（２０１１）Ａｄｖ  Ｔｈｅｒ  ２８（８）：６５０〜６６０頁；Ａｓｔｒｕｐら（２０１２）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）３６（６）：８４３〜８５４頁、と比較した。
【０１７１】
モデルプラットフォームは、様々な活性比における仮想のＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質の有益効果および有害効果のシミュレーションを可能にした。有効なＦＧＦ２１媒介性ＥＣ５０値は、Ｇａｉｃｈら（２０１３）Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  １８（３）：３３３〜３４０頁から導かれる定数に設定した。有効なＧＬＰ−１媒介性ＥＣ５０値は、内因性ＧＬＰ−１に対して１の増分において２分の１から６００分の１の倍率で低減した（表１）。
【０１７２】
【表１】
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【０１７３】
それぞれの仮想の融合タンパク質に対して、暴露−応答関係を、関連する薬力学的エンドポイント、すなわち、ＨｂＡ１ｃ、トリグリセリド、脂肪酸、非ＨＤＬコレステロール、および脂肪量、に対してシミュレートした。ＧＬＰ−１媒介性有害事象に対するマーカとして、胃排出速度を使用した。ＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質による平均的な肥満体の脂質異常症の２型糖尿病仮想患者の５２週間の治療を広い用量範囲に対してシミュレートした。５２週間の治療後、全ての関連する薬力学的エンドポイントは、定常状態に達すると予想される。各エンドポイントに対して、暴露−応答曲線から５０％最大効果濃度（ＥＣ５０値）を決定した。特に、主にＧＬＰ−１媒介性エンドポイントのＨｂＡ１ｃおよび胃排出速度に対して、ＥＣ５０値は、活性比によって変わった。図１は、ＧＬＰ−１弱化倍率に依存するＥＣ５０値を表している。増加したＧＬＰ−１弱化倍率は、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性における低減を示している。
【０１７４】
この手法は、薬力学的効果と比較してより高い血漿中濃度において有害効果が始まる、関連する活性比の特定を可能にした。９を超えるＧＬＰ−１弱化倍率に対して、ＧＬＰ−１媒介性胃腸有害効果のＥＣ５０は、薬力学的効果のＥＣ５０を超えた。したがって、胃有害効果は、薬力学的効果よりも高い血漿中レベルにおいて始まった。ＧＬＰ−１媒介性胃腸有害効果を避けつつ、全ての望ましい薬力学的効果を提供する用量を見出すことは可能である。したがって、１：１０を下回る活性比は、関係なかった。
【０１７５】
胃排出速度に対する最大ＥＣ５０値は、弱化倍率５３１で達成された。有害効果と平均薬力学的効果との間の最大距離は、弱化倍率４８２で達成された（図２）。したがって、１：４８２を超えた活性比は、関係なかった。薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果との最大値の間の最大距離は、３１９であった。ＦＧＦ２１媒介性効果（脂質）およびＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）の幅拡大によって正規化された、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果との最大値の間の最大距離は１２１であった。
【０１７６】
１：１０から１：４８２の間の効力比を有するＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質は、脂質プロファイル、体重、グルコース代謝の改善において最も有益であること、および、おそらく、胃排出応答に基づく有意な有害事象を生じないことが予想された。より低い効力比は、胃排出における予測される強い阻害と有害事象に対する可能性に基づいて、おそらく、良い候補ではなかった。より高い効力比は、十分に有効ではない可能性が高く、したがって、競争的ではなかった。
【０１７７】
その上、主にＧＬＰ−１媒介性パラメータＨｂＡ１ｃは、臨床的に、１２週間の治療後に安定状態に達したため、ＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質による平均的な肥満体の脂質異常症の２型糖尿病仮想患者の１２週間の治療を、広い用量範囲に対してシミュレートした。
【０１７８】
図３は、１２週間のシミュレーションの場合のＧＬＰ−１弱化倍率に依存するＥＣ５０値を表している。１８を超えるＧＬＰ−１弱化倍率に対して、ＧＬＰ−１媒介性胃腸有害効果のＥＣ５０は、薬力学的効果のＥＣ５０を超えた。胃排出速度に対する最大ＥＣ５０値は、弱化倍率５０１で達成された。有害効果と平均薬力学的効果との間の最大距離は、弱化倍率４６９で達成された（図４）。薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果との最大値の間の最大距離は、３１３であった。ＦＧＦ２１媒介性効果（脂質）およびＧＬＰ−１媒介性効果（ＨｂＡ１ｃ）の幅拡大によって正規化された、薬力学的効果（ＨｂＡ１ｃ）と有害効果との最大値の間の最大距離は１２３であった。
【０１７９】
様々な活性比を有するＧＬＰ−１ＲＡ／ＦＧＦ２１融合タンパク質に対する有効性および有害事象に対する可能性を、説明したシステム薬理学アプローチを用いて調査した。計算されたおそらく理想的と思われる効力比を有する融合タンパク質を特定し、胃排出応答に基づくＧＬＰ−１ＲＡ関連の有意な有害効果をおそらく生じ得ることなく、脂質プロファイル、体重、血糖コントロールの改善において有益であると予想した。したがって、モデル情報に基づく（ｍｏｄｅｌ−ｉｎｆｏｒｍｅｄ）効力比を有する選択された化合物は、良好な効率対リスクプロファイルを提供するとを予想された。
【実施例２】
【０１８０】
ＨＥＫ２９３細胞におけるＧＬＰ１ＲＡ−ＦＧＦ２１融合タンパク質の発現
配列番号２のＦＧＦ２１タンパク質を、ＧＬＰ１ＲＡに直接融合させるか、またはリンカー配列をＧＬＰ１ＲＡとＦＧＦ２１配列との間に挿入した。全てのコンストラクトにおいて、ＦＧＦ２１コンストラクトを、Ｃ末端においてＧＬＰ１ＲＡ配列に融合させた。リンカーを挿入する場合、ＧＬＰ１ＲＡをＮ末端においてリンカー配列に融合させ、ＦＧＦ２１をＣ末端においてリンカー配列に融合させた。ＧＬＰ１ＲＡ−ＦＧＦ２１融合タンパク質のＤＮＡ配列をＮ末端においてＩＬ２シグナル配列に融合させ、その後、ヒスチジンリッチな配列（Ｈｉｓタグ）およびＴｅｖ切断部位を融合させた。ＧＬＰ１ＲＡ−ＦＧＦ２１融合タンパク質を、ＨＥＫ２９３細胞の一過性トランスフェクションによって産生した。シグナル配列は、培養培地中への所望の融合タンパク質の分泌のために必要であった。固定化金属イオン親和性クロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）を使用して、所望の融合タンパク質を培養上清から精製した。ＩＭＡＣカラムからの溶離の後、Ｔｅｖプロテアーゼの添加によってＮ末端のＨｉｓタグを切断した。コンストラクトスクリーニング目的のため、ＧＬＰ１ＲＡ−活性アッセイのためのインキュベーション培地への直接のＴｅｖプロテアーゼの添加によってＨｉｓタグを切断した。Ｈｉｓタグの完全な切断を確実にするために、アッセイを開始する前のインキュベーション時間は１０〜６０分であった。所望の範囲においてＧＬＰ１ＲＡ活性を有するコンストラクトを、より大きなスケールにおいて作製した。ＧＬＰ１ＲＡ−Ｆｃ−ＦＧＦ２１融合タンパク質を、ＨＥＫ２９３細胞における一過性トランスフェクションによって産生した。ｃＯｍｐｌｅｔｅ  Ｈｉｓタグ精製樹脂（Ｒｏｃｈｅ）によるＩＭＡＣを使用して、所望の融合タンパク質を培養上清から精製した。Ｈｉｓタグの切断後、切断反応溶液を、ＩＭＡＣカラム（ｃＯｍｐｌｅｔｅ（商標）Ｈｉｓタグ精製樹脂（Ｒｏｃｈｅ））に２回通過させ、（ｈｉｓタグ不含の）素通り画分を収集した。ランニングバッファーとしてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）によるゲルろ過カラムを使用して、融合タンパク質をさらに精製した。所望の融合タンパク質を含有する画分を収集し、プールし、濃縮し、さらなる利用まで−８０℃で貯蔵した。
【実施例３】
【０１８１】
ＣＨＯ細胞におけるヒトＦＧＦ２１受容体の有効性についてのインビトロ細胞アッセイ（Ｉｎ−Ｃｅｌｌ  Ｗｅｓｔｅｒｎ）
成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）またはＦＧＦ２１変異体の細胞インビトロ有効性を、特異的な高感度のＩｎ−Ｃｅｌｌ  Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイを使用して測定した。ＩＣＷアッセイは、通常、マイクロプレート形式において実施される、免疫細胞化学的アッセイである。Ｉｎ−Ｃｅｌｌ  Ｗｅｓｔｅｒｎ（Ａｇｕｉｌａｒ  Ｈ．Ｎ．ら（２０１０）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ５（４）：ｅ９９６５頁）を使用するＦＧＦ２１受容体自己リン酸化アッセイのために、ヒトベータ−Ｋｌｏｔｈｏ（ＫＬＢ）と共にヒトＦＧＦＲ１ｃ（ＦＧＦ受容体１ｃアイソフォーム）を安定して発現するＣＨＯ  Ｆｌｐ−Ｉｎ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ダルムシュタット、ドイツ）を使用した。ＭＰＡキナーゼＥＲＫ１／２の受容体自己リン酸化レベルまたは下流活性を決定するために、２×１０４細胞／ウェルを、９６ウェルプレートに播種し、４８時間培養した。細胞を、ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ、ダルムシュタット、ドイツ）を伴う無血清培地ハムＦ−１２  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘによって３〜４時間、血清飢餓させた。続いて、細胞を、増加した濃度の、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）のいずれかによって、３７℃で５時間処理した。インキュベーション後、培地を捨て、細胞を、３．７％の新たに調製したパラ−ホルムアルデヒドにおいて２０分間固定させた。２０分間、ＰＢＳ中で細胞に０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００を浸透させた。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、室温で２時間、ブロッキングを実施した。一次抗体（抗ｐＦＧＦＲ  Ｔｙｒ６５３／６５４（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ、フランクフルト、ドイツ）または抗ｐＥＲＫホスホ−ｐ４４／４２  ＭＡＰキナーゼＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ））を加えて、４℃で一晩インキュベートした。一次抗体のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。二次抗マウス８００ＣＷ抗体（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）を、室温で１時間インキュベートした。続いて、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で再び洗浄し、Ｏｄｙｓｓｅｙ画像表示装置（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、赤外色素シグナルを定量した。結果を、ＴＯ−ＰＲＯ３染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスルーエ、ドイツ）によるＤＮＡの定量化によって正規化した。任意単位（ＡＵ）としてデータを得て、用量−応答曲線からＥＣ５０値を得て、それらを表２にまとめる。図５は、ヒトＦＧＦＲ１ｃ＋ＫＬＢを過剰発現するＣＨＯ細胞によるＩＣＷの結果を示している。
【０１８２】
【表２】
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【実施例４】
【０１８３】
ヒトＧＬＰ−１受容体有効性のインビトロ細胞アッセイ
ヒトＧＬＰ−１受容体を安定して発現するＨＥＫ−２９３細胞株におけるｃＡＭＰ応答を測定する機能アッセイによって、ヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）受容体のための化合物のアゴニズムを決定した。
【０１８４】
細胞のｃＡＭＰ含有量を、ＨＴＲＦ（ホモジニアス時間分解蛍光（Ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  Ｔｉｍｅ  Ｒｅｓｏｌｖｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ））に基づく、Ｃｉｓｂｉｏ  Ｃｏｒｐ．製のキット（カタログ番号６２ＡＭ４ＰＥＣ）を使用して決定した。調製のため、細胞をＴ１７５培養フラスコに分け、培地（ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ）において、一晩かけてコンフルエンス近くまで増殖させた。次いで、培地を除去し、細胞を、カルシウムおよびマグネシウムを欠いたＰＢＳによって洗浄し、続いてアクターゼ（ａｃｃｕｔａｓｅ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  カタログ番号Ａ６９６４）によってプロテイナーゼ処理を行った。分離させた細胞を洗浄し、アッセイバッファー（１×ＨＢＳＳ；２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のＢＳＡ、２ｍＭのＩＢＭＸ）に再懸濁させ、細胞密度を決定した。次いで、それらを４×１０５細胞／ｍＬに希釈し、２５μＬアリコートを９６ウェルプレートのウェルに分注した。測定のため、アッセイバッファー中における試験化合物２５μＬをウェルに加え、続いて、室温で３０分間インキュベートした。溶解バッファー（キットの成分）において希釈されたＨＴＲＦ試薬を添加した後、プレートを１時間インキュベートし、続いて、６６５／６２０ｎｍにおいて蛍光比の測定を行った。最大応答の５０％活性化を生じる濃度（ＥＣ５０）を決定することによって、インビトロでのアゴニストの効力を定量化した。結果を表３にまとめる。
【０１８５】
【表３】
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【０１８６】
【表４】
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【実施例５】
【０１８７】
ペプチド化合物の合成
融合タンパク質は、遺伝子組換え法（実施例２を参照されたい）によって産生したが、単離されたペプチドＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、化学的に合成した。
【０１８８】
より詳細には、ペプチドを、以下の手作業の合成手順を使用して合成した：
乾燥させたＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂０．３ｇ（０．６６ｍｍｏｌ／ｇ）を、ポリプロピレンフィルタを備えるポリエチレン製容器に入れた。樹脂を、ＤＣＭ（１５ｍｌ）中で１時間、およびＤＭＦ（１５ｍｌ）中で１時間、膨潤させた。２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液によって５分および１５分の２回処理することによって、樹脂上のＦｍｏｃ基を脱保護した。樹脂を、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ６：６：６回）で洗浄した。固体支持体からＦｍｏｃが除去されたことの確認のために、カイザー試験（定量法）を使用した。脱保護された樹脂に、乾燥ＤＭＦ中におけるＣ末端Ｆｍｏｃ−アミノ酸（樹脂ローディングに対して５当量過剰）を加え、ＤＭＦ中における５当量過剰なＤＩＣおよびＨＯＢＴによって、次のＦｍｏｃ−アミノ酸のカップリングを開始させた。反応混合物中の各反応剤の濃度は、およそ０．４Ｍであった。混合物を室温で２時間、ローター上において回転させた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ６：６：６回）で洗浄した。カップリング完了時のペプチド樹脂アリコートに対するカイザー試験は陰性であった（樹脂に着色はない）。最初のアミノ酸の結合の後、もし存在すれば、樹脂中の未反応のアミノ基を、配列のあらゆる欠失を避けるために、２０分かけて無水酢酸／ピリジン／ＤＣＭ（１：８：８）を使用してキャッピングした。キャッピング後、樹脂をＤＣＭ／ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ６／６／６／６回）で洗浄した。２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液によって５分および１５分の２回処理することによって、ペプチジル樹脂に結合させたＣ末端アミノ酸上のＦｍｏｃ基を脱保護した。樹脂を、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ６：６：６回）で洗浄した。Ｆｍｏｃ−脱保護の完了時のペプチド樹脂アリコートに対するカイザー試験は陽性であった。
【０１８９】
ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂上の標的配列における残りのアミノ酸を、ＤＭＦ中における樹脂充填に相当する５当量過剰を用いて、Ｆｍｏｃ  ＡＡ／ＤＩＣ／ＨＯＢｔ方法を使用して、逐次的にカップリングさせた。反応混合物中の各反応剤の濃度は、およそ０．４Ｍであった。混合物を室温で２時間、ローター上において回転させた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ６：６：６回）で洗浄した。各カップリング工程およびＦｍｏｃ脱保護工程の後、反応の完全性を確認するために、カイザー試験を行った。直鎖状配列が完成した後、分枝点または修飾点として使用したリジンのε−アミノ基を、ＤＭＦ中における２．５％ヒドラジン水和物を使用して、１５分間で２回、脱保護し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ６：６：６回）で洗浄した。グルタミン酸のγ−カルボキシル末端を、ＤＭＦ中においてＤＩＣ／ＨＯＢｔ法（樹脂充填に対して５当量過剰）によりＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＨ）−ＯｔＢｕを使用して、Ｌｙｓのε−アミノ基に結合させた。混合物を室温で２時間、ローター上において回転させた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ３０ｍｌで６回）で洗浄した。グルタミン酸上のＦｍｏｃ基を、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液によって５分間および１５分間（各２５ｍｌ）の２回処理することにより脱保護した。樹脂を、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ６：６：６回）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護完了時のペプチド樹脂アリコートに対するカイザー試験は陽性であった。
【０１９０】
側鎖の分枝がさらに、γ−グルタミン酸をもう１つ含有する場合、ＤＭＦ中においてＤＩＣ／ＨＯＢｔ法（樹脂充填に対して５当量過剰）によるγ−グルタミン酸の遊離アミノ基への結合のために、第２のＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＨ）−ＯｔＢｕを用いた。混合物を室温で２時間、ローター上において回転させた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ３０ｍｌで６回）で洗浄した。γ−グルタミン酸上のＦｍｏｃ基を、２０％（ｖ／ｖ）ピペリジン／ＤＭＦ溶液によって５分間および１５分間（各２５ｍｌ）の２回処理することにより脱保護した。樹脂を、ＤＭＦ／ＤＣＭ／ＤＭＦ（それぞれ６：６：６回）で洗浄した。Ｆｍｏｃ脱保護完了時のペプチド樹脂アリコートに対するカイザー試験は陽性であった。
【０１９１】
樹脂からのペプチドの最終的な切断：
手作業での合成によって合成したペプチジル樹脂を、ＤＣＭ（１０ｍｌで６回）、ＭｅＯＨ（１０ｍｌで６回）、およびエーテル（１０ｍｌで６回）で洗浄し、真空乾燥機で一晩乾燥させた。ペプチド樹脂を室温で３時間、試薬カクテル（８０％  ＴＦＡ／５％チオアニソール／５％フェノール／２．５％  ＥＤＴ／２．５％  ＤＭＳ／５％  ＤＣＭ）で処理することによって、固体支持体からのペプチドの切断を達成した。切断混合物をろ過によって収集し、樹脂をＴＦＡ（２ｍｌ）およびＤＣＭ（５ｍｌで２回）で洗浄した。過剰なＴＦＡおよびＤＣＭを、窒素下で小さい体積に濃縮し、少量のＤＣＭ（５〜１０ｍｌ）を残留物に加え、窒素下で蒸発させた。プロセスを３〜４回繰り返すことにより、揮発性不純物のほとんどを除去した。残留物を０℃に冷却し、無水エーテルを加えてペプチドを沈殿させた。沈殿したペプチドを、遠心分離し、上清のエーテルを除去し、新鮮なエーテルをペプチドに加え、再び遠心分離した。粗製の試料を分取ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥させた。ペプチドの同一性をＬＣＭＳによって確認した。
【０１９２】
【表５】
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【０１９３】
【表６】
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【０１９４】
【表７】
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【０１９５】
【表８】
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【０１９６】
【表９】
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【０１９７】
【表１０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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