(57)【要約】  本発明は、フラビウイルスによる感染を防ぐために、個体に対し接種するための黄熱ウイルスワクチンを有するワクチンの組成を提供する。ここで、フラビウイルスは黄熱ウイルスではない。本発明はまた、フラビウイルスによる感染を防ぐために個体に対して接種するための、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを有するワクチンの組成を提供する。ここで、フラビウイルスは黄熱ウイルスではない。
2020511532.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する際の使用のための黄熱ウイルスワクチンを有するワクチン組成物であって、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とするワクチン組成物。
【請求項２】
フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するための薬剤の製造における、黄熱ウイルスワクチンを有するワクチン組成物の使用であって、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とするワクチン組成物の使用。
【請求項３】
フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する方法であって、黄熱ウイルスワクチンを有するワクチン組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とする方法。
【請求項４】
前記個体が以前に前記フラビウイルスに感染していない、および／または、前記フラビウイルスに対するワクチン接種を受けていないことを特徴とする請求項１に記載の使用のためのワクチン組成物、または請求項２に記載の使用、または請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記個体が以前に黄熱ウイルスに感染してない、および／または、前記黄熱ウイルスワクチンに対するワクチン接種を受けていないことを特徴とする請求項１に記載のワクチン組成物の使用、または請求項２に記載の使用、または請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記個体が以前に前記フラビウイルスに感染している、および／または、前記フラビウイルスに対するワクチン接種を受けていることを特徴とする請求項１に記載のワクチン組成物の使用、または請求項２に記載の使用、または請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記個体が以前に黄熱ウイルスに感染している、および／または、前記黄熱ウイルスに対するワクチン接種を受けていることを特徴とする請求項１に記載の使用のための組成物、または請求項２に記載の使用、または請求項３の方法。
【請求項８】
前記フラビウイルスがジカウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、およびオムスク出血熱ウイルスからなる群から選択された１つまたは複数のフラビウイルスであることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項９】
前記フラビウイルスがデングウイルスではないことを特徴とする請求項１〜８のいずれか１項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１０】
前記フラビウイルスによる感染に対して前記個体がワクチン接種を受けることにより、以降の前記フラビウイルスによる感染を予防または軽減することを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１１】
前記フラビウイルスによる感染に対して前記個体がワクチン接種を受けることにより、以降の前記フラビウイルスによる感染による一つまたは複数の障害および／または状態を予防および／または軽減することを特徴とする請求項１〜１０のいずれか一項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１２】
前記予防および／または軽減が最大で１年間、または５年間、または１０年間有効であることを特徴とする請求項１０または１１に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１３】
前記軽減が１００％、または９０％、または８０％、または７０％、または６０％または５０％の軽減であることを特徴とする請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１４】
前記フラビウイルスによる感染に対して前記個体がワクチン接種を受けることにより、前記個体における前記フラビウイルスに対する免疫を生成および／または増強することを特徴とする請求項１〜１３のいずれか１項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１５】
前記個体における前記フラビウイルスに対する免疫は、細胞性免疫およびまたは適応免疫を有することを特徴とする請求項１４に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１６】
前記個体における前記フラビウイルスに対する細胞性免疫は、Ｔ細胞活性を有することを特徴とする請求項１５に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１７】
前記Ｔ細胞活性は、ＣＤ４＋Ｔ細胞活性および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞活性を有することを特徴とする請求項１６に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１８】
前記個体における前記フラビウイルスに対する適応免疫は、Ｂ細胞活性および／または抗体活性を有することを特徴とする請求項１５に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項１９】
前記フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する際の使用のための、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを有するワクチン組成物であって、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とするワクチン組成物。
【請求項２０】
フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するための薬剤の製造における、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを有するワクチン組成物であって、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とするワクチン組成物。
【請求項２１】
フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する方法であって、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを有するワクチン組成物を前記個体に投与するステップを含み、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とする方法。
【請求項２２】
フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するために使用する黄熱ウイルスワクチンを有するワクチン組成物であって、前記使用は前記黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する前記１つまたは複数の追加のワクチンを前記個体に投与することを含み、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とするワクチン組成物。
【請求項２３】
フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するための薬剤の製造における黄熱ウイルスワクチン組成物の使用であって、前記使用は前記黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する前記１つまたは複数の追加のワクチンを前記個体に投与することを含み、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とするワクチン組成物の使用。  
【請求項２４】
フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する方法であって、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを前記個体に投与するステップを含み、前記フラビウイルスは黄熱ウイルスではないことを特徴とする方法。
【請求項２５】
前記黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する前記１つまたは複数の追加のワクチンを個体に同時に投与することを特徴とする請求項２２に記載の使用のためのワクチン組成物、または請求項２３に記載の使用、または請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する前記１つまたは複数の追加のワクチンを個体に順次に投与することを特徴とする請求項２２に記載の使用のためのワクチン組成物、または請求項２３に記載の使用、または請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記１つまたは複数の追加のワクチンが、ジカウイルスワクチン、ダニ媒介脳炎ウイルスワクチン、日本脳炎ウイルスワクチン、西ナイルウイルスワクチン、セントルイス脳炎ウイルスワクチン、オムスク出血熱ワクチンからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１９〜２６のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項２８】
前記１つまたは複数の追加のワクチンは、ダニ媒介脳炎ウイルスワクチンであり、ダニ媒介性脳炎による感染に対して個体にワクチン接種するためのものであることを特徴とする請求項１９〜２７のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項２９】
前記１つまたは複数の追加のワクチンは、日本脳炎ウイルスワクチンであり、日本脳炎ウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するためのものであることを特徴とする請求項１９〜２７のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３０】
前記個体は、以前に前記フラビウイルスに感染していないおよび／または前記フラビウイルスに対するワクチン接種を受けていることを特徴とする請求項１９〜２９のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３１】
前記個体は、以前に黄熱ウイルスに感染していないおよび／または前記黄熱ウイルスワクチン接種を受けていることを特徴とする請求項１９〜２９のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３２】
前記個体は、以前に前記フラビウイルスに感染しているおよび／または前記フラビウイルスに対するワクチン接種を受けていることを特徴とする請求項１９〜２９のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３３】
前記個体は、以前に前記黄熱ウイルスに感染しているおよび／または前記黄熱ウイルスに対するワクチン接種を受けていることを特徴とする請求項１９〜２９のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３４】
前記フラビウイルスがジカウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、オムスク出血熱ウイルスからなる群から選択された１つまたは複数であることを特徴とする請求項１９〜３３のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３５】
前記フラビウイルスは、デングウイルスではないことを特徴とする請求項１９〜３３のいずれか一項に記載の使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３６】
前記フラビウイルスによる感染に対して前記個体がワクチン接種を受けることにより、以降の前記フラビウイルスによる感染を予防および／または軽減することを特徴とする請求項１９〜３５のいずれか１項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３７】
前記フラビウイルスによる感染に対して前記個体がワクチン接種を受けることにより、以降の前記フラビウイルスによる感染による一つまたは複数の障害および／または状態を予防および／または軽減することを特徴とする請求項１９〜３６のいずれか１項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３８】
前記予防および／または軽減が最大で１年間、または５年間、または１０年間有効であることを特徴とする請求項３６または３７に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項３９】
前記軽減は、１００％、または９０％、または８０％、または７０％、または６０％または５０％の軽減であることを特徴とする請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項４０】
前記フラビウイルスによる感染に対して前記個体がワクチン接種を受けることにより、前記個体における前記フラビウイルスに対する免疫を生成および／または増強することを特徴とする請求項１９〜３９のいずれか１項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項４１】
前記個体における前記フラビウイルスに対する免疫は、細胞性免疫およびまたは適応免疫を有することを特徴とする請求項４０に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項４２】
前記個体における前記フラビウイルスに対する細胞性免疫は、Ｔ細胞活性を有することを特徴とする請求項４１に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項４３】
前記Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞活性および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞活性を有することを特徴とする請求項４２に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項４４】
前記個体における前記フラビウイルスに対する適応免疫は、Ｂ細胞活性および／または抗体活性を有することを特徴とする請求項４１に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項４５】
黄熱ワクチンのアジュバントとしての使用。
【請求項４６】
前記黄熱ワクチンは、例えば不活化ワクチンなど、ワクチンのアジュバントであることを特徴とする請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記黄熱ウイルスワクチンは、生ワクチン、好ましくは弱毒化生ワクチンであることを特徴とする請求項１〜４６のいずれか一項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項４８】
前記黄熱ウイルスワクチンは、黄熱ウイルス非構造タンパク質またはその断片、多様体または誘導体を有することを特徴とする請求項１〜４７のいずれか一項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項４９】
前記黄熱ウイルスワクチンは、黄熱ウイルス非構造タンパク質またはその断片、多様体または誘導体をコードするポリヌクレオチド配列を有することを特徴とする請求項１〜４８のいずれか一項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項５０】
前記黄熱ウイルス非構造タンパク質は、ＮＳ５タンパク質またはその断片、多様体または誘導体を有することを特徴とする請求項４８または４０に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項５１】
前記個体は、哺乳動物であることを特徴とする請求項１〜５０のいずれか一項に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項５２】
前記哺乳動物は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物であることを特徴とする請求項５０に記載の、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項５３】
黄熱ウイルスワクチン、およびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチン、および薬学上許容される賦形剤または希釈剤を有するワクチン組成物。
【請求項５４】
前記黄熱ウイルスワクチンは、請求項１９〜５２のいずれか一項により定義されるとおりであることを特徴とする請求項５３に記載のワクチン組成物。
【請求項５５】
フラビウイルスに対する前記１つまたは複数のワクチンは、請求項１９〜５２のいずれか一項により定義されるとおりであることを特徴とする請求項５３または５４に記載のワクチン組成物。
【請求項５６】
前記ワクチン組成物は、黄熱ウイルスワクチンとダニ媒介脳炎ウイルスワクチンを有することを特徴とする請求項５３〜５５のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項５７】
前記ワクチン組成物は、黄熱ウイルスワクチンと日本脳炎ウイルスワクチンを有することを特徴とする請求項５３〜５５のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項５８】
請求項１〜５２のいずれか一項により定義される黄熱ウイルスワクチン、および、請求項１９〜５２のいずれか一項により定義されるフラビウイルスに対する１つまたは複数のワクチンを有するキット。
【請求項５９】
フラビウイルスに対する前記１つまたは複数のワクチンは、ダニ媒介脳炎ウイルスワクチンであることを特徴とする請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
フラビウイルスに対する前記１つまたは複数のワクチンは、日本脳炎ウイルスワクチンであることを特徴とする請求項５８に記載のキット。
【請求項６１】
添付の特許請求の範囲、明細書、実施例、および図面を参照して実質的に請求される、使用のためのワクチン組成物、または使用、または方法。
【請求項６２】
添付の特許請求の範囲、明細書、実施例、および図面を参照して実質的に請求される、ワクチン組成物。
【請求項６３】
添付の特許請求の範囲、明細書、実施例、および図面を参照して実質的に請求される、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、主として、ワクチン組成物に関し、特に、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する際の使用のためのワクチン組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
本明細書よりも明らかに以前に先行技術文献上で公開されているリストや論議は、必ずしもそれらの文書が最新技術の一部、または一般的な一般知識であるという認識で受け取られるべきではない。
【０００３】
フラビウイルスはフラビウイルス科に属し、重度の疾患を引き起こす７０以上のウイルスで構成されている。これらのウイルスは、毎年数十万人の死亡と高い疾病率の原因となっている。多くのウイルスは、蚊またはダニによって脊椎動物の宿主に感染する。フラビウイルス属に分類されている、デングウイルス（ＤＥＮＶ）、黄熱ウイルス（ＹＦＶ）、西ナイルウイルス（ＷＮＶ）、ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）、日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）などは、人間に対して非常に病原性が高く、健康上重大な国際問題となっている。
【０００４】
フラビウイルスは、１０種類のタンパク質（Ｃ、ＰＲＭ、Ｅ、ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５）をコードする１本鎖ＲＮＡで構成されたゲノムを持つ。このうちＮＳ３およびＮＳ５をコードする領域は、種間で保存されていると考えられている。フラビウイルスは大きく、血管漏出および出血熱を引き起こすウイルス（ＤＥＮＶ、ＹＦＶ）と、脳炎を引き起こすウイルス（ＷＮＶ、ＺＩＫＶ、ＴＢＥＶおよびＪＥＶ）に分けられる。現在、個体が重度の臨床的疾患を発症するかどうかを予測することは不可能であり、ウイルスによって引き起こされる疾患の病因に関する我々の理解は十分でない。フラビウイルスによる感染には、概して特定の治療薬や効果的な抗ウイルス薬が存在しない。しかし、一部の感染症は予防接種によって予防できる。現在、ＹＦＶ、ＪＥＶ、およびＴＢＥＶの３つのフラビウイルスに対するワクチンが市販されている（以下の表１を参照）。  特に、弱毒生ＹＦＶワクチンは、非常に効果的で世界で最もよく接種されているワクチンの１つである。
【０００５】
弱毒生ＹＦＶワクチンは１９３０年代に開発され、その非常に高い有効性（単回投与により少なくとも１０年間有効）により近年新たに注目を集めている（表１を参照）。ＹＦＶワクチンは、複製能力のあるウイルス感染におけるヒトの免疫応の研究に利用できる。ＹＦＶワクチンによって引き起こされる獲得免疫応答および自然免疫応答はよく知られている。ＪＥＶおよびＴＢＥＶワクチンは不活化ワクチンであるため（表１）、免疫を保つために追加接種が必要となる。
【０００６】
ＴＢＥＶは主にダニを介してヒトに感染し、保菌者の３分の１が臨床疾患（ダニ媒介脳炎、ＴＢＥ）を発症すると推定されている。ＴＢＥは、神経精神的症状、重度の頭痛、ＱＯＬの低下など、感染の急性期後に患者の３分の１以上が生涯にわたる持続的な合併症を患う二相性疾患である（非特許文献１３）。過去数十年にわたりヨーロッパとアジアの両方において症例の報告数は急速に増加しているが（非特許文献４、１４）、治療法が確立していないため、対症的な処置しか施すことができない。ワクチンが存在するにもかかわらず、スウェーデンでは毎年２００件以上のＴＢＥのケースが報告されている。ヨーロッパにおいては、２種のホルマリン不活化ウイルスベースのワクチン（ＦＳＭＥ−ＩＭＭＵＮ、ＰＦＩＺＥＲ  ＩＮＮＯＶＡＴＩＯＮＳおよびＥＮＣＥＰＵＲ、ＧＬＡＸＯＳＭＩＴＨＫＬＩＮＥ）が利用可能であるが、これらのワクチンは免疫を維持するために初回ワクチン接種後３−５年ごとに追加接種が必要である。
【０００７】
ＪＥＶはＹＦＶと同様に、蚊を介してヒトに感染し、アジアにおける流行性脳炎の主たる原因である（非特許文献１）。このウイルスが引き起こす日本脳炎（ＪＥ）は、症候性疾患者の致死率が３０％に上り、また生存者のうち５０％は、長期にわたる神経精神的な後遺症に苦しんでいる。ＩＸＩＡＲＯ（登録商標）は、ＶＥＲＯ細胞から増殖させたＪＥＶに対する不活化ワクチンである。１年以上前に２回の初回ワクチン接種を受けていて、ＪＥＶ感染のリスクが依然としてある場合に追加接種が推奨される。その上、高価であるがために、東南アジアにおける何百万人もの人々は前期ワクチンを接種することができない。欧米諸国においても、流行地域を訪れる旅行者の多くは、ワクチンが高価であるため接種を控えている。
【０００８】
ＴＢＥワクチン不全の報告は増加しており、また、ＪＥワクチンについても追加接種を適切に受けたにもかかわらずワクチン不全となる恐れがある。つまり、ＪＥＶワクチンとＴＢＥＶワクチンの両方において、ＹＦＶワクチンにより提供される効果が欠けている。ＪＥＶおよびＴＢＥＶワクチンの改善は、これらのウイルスが流行しているスウェーデン、その他のヨーロッパ、およびアジアの公衆衛生にとって非常に重要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ，  ＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｆａｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｆｓ３８６／ｅｎ／  ＞  （２０１５）．
【非特許文献２】Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ，＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｆａｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｆｓ１００／ｅｎ／＞  （２０１４）．
【非特許文献３】Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｄｅｎｇｕｅ  ａｎｄ  ｓｅｖｅｒｅ  ｄｅｎｇｕｅ，＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｆａｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｆｓ１１７／ｅｎ／＞  （２０１６）．
【非特許文献４】Ｌｉｎｄｑｕｉｓｔ，  Ｌ．  ＆  Ｖａｐａｌａｈｔｉ，  Ｏ．  Ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ．  Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  ３７１，  １８６１−１８７１，  ｄｏｉ：  １０．１０１６／ｓ０１４０−６７３６（０８）６０８００−４  （２００８）．
【非特許文献５】Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ，＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｆａｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｚｉｋａ／ｅｎ／＞  （２０１６）．
【非特許文献６】Ａｈｍｅｄ，  Ｒ．  ＆  Ａｋｏｎｄｙ，  Ｒ．  Ｓ．  Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｈｕｍａｎ  ＣＤ８（＋）  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｍｅｍｏｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ａｎｄ  ｓｍａｌｌｐｏｘ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ８９，  ３４０−３４５，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｉｃｂ．２０１０．１５５  （２０１１）．
【非特許文献７】Ｐｕｌｅｎｄｒａｎ，  Ｂ．  Ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅ：  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｖａｃｃｉｎｏｌｏｇｙ．  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９，  ７４１−７４７，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ２６２９  （２００９）．  Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｊ．  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍａｎ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｓｍａｌｌｐｏｘ  ａｎｄ  ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２８，  ７１０−７２２，  ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２００８．０２．０２０  （２００８）．
【非特許文献８】Ｍｉｌｌｅｒ，  Ｊ．  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍａｎ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｓｍａｌｌｐｏｘ  ａｎｄ  ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２８，  ７１０−７２２，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２００８．０２．０２０  （２００８）．
【非特許文献９】Ａｋｏｎｄｙ，  Ｒ．  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｖｉｒｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  ｂｒｏａｄ  ａｎｄ  ｐｏｌｙｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８３，  ７９１９−７９３０，  ｄｏｉ：  １０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．０８０３９０３  （２００９）．
【非特許文献１０】Ｂｌｏｍ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｖｉｒｕｓ  １７Ｄ  ａｓ  ｉｔ  ｍａｔｕｒｅｓ  ｆｒｏｍ  ａｎ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ−  ｔｏ  ａ  ｍｅｍｏｒｙ−ｔｙｐｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９０，  ２１５０−２１５８，  ｄｏｉ：  １０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．  １２０２２３４  （２０１３）．
【非特許文献１１】Ｍａｒｑｕａｒｄｔ，  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  ＮＫ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｆｅｖｅｒ  Ｖｉｒｕｓ  １７Ｄ  Ｉｓ  Ｐｒｉｍａｒｉｌｙ  Ｇｏｖｅｒｎｅｄ  ｂｙ  ＮＫ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ＮＫ  Ｃｅｌｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９５，  ３２６２−３２７２，  ｄｏｉ：  １０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．  １４０１  ８  １１  （２０１５）．
【非特許文献１２】Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ，  Ｃ．  Ｒ．  ｅｔａｌ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  ｆａｉｌｕｒｅｓ  ａｆｔｅｒ  ａｃｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｉｓａｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２８，  ２８２７−２８３１，  ｄｏｉ：  １０．１  ０  １６／ｊ．ｖａｃｃｉｎｅ．２０１  ０．０２．００１  （２０１０）．
【非特許文献１３】Ｈａｇｌｕｎｄ，  Ｍ．  ＆  Ｇｕｎｔｈｅｒ，  Ｇ．  Ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ−ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｏｕｒｓｅ  ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２  １  Ｓｕｐｐｌ  １，  Ｓ１１−１８  （２００３）．
【非特許文献１４】Ｄｏｎｏｓｏ  Ｍａｎｔｋｅ，  Ｏ．，  Ｓｃｈａｄｌｅｒ，  Ｒ．  ＆  Ｎｉｅｄｒｉｇ，  Ｍ．  Ａ  ｓｕｒｖｅｙ  ｏｎ  ｃａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ．  Ｅｕｒｏ  Ｓｕｒｖｅｉｌｌ  １３  （２００８）．
【非特許文献１５】Ｈａｌｓｔｅａｄ，  Ｓ．  Ｂ．  Ｄｅｎｇｕｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：  Ｋｎｏｗｎｓ  ａｎｄ  Ｕｎｋｎｏｗｎｓ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｓｐｅｃｔｒ２，  ｄｏｉ：１０．１  １２８／ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｓｐｅｃ．ＡＩＤ−００２２−２０１４  （２０１４）．
【非特許文献１６】Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ，  Ｋ．  Ｌ．  ｅｆ  ａｌ．  Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｊ  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ  ９２，  ２８２１−２８２９，  ｄｏｉ：  １０．１０９９／ｖｉｒ．０．０３１  ６４１−０  （２０１１）．
【非特許文献１７】Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉ，  Ｗ．  ｅｆ  ａｌ．  Ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｓｅｒｏ−ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｄｒｉｖｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｉ．３５１５  （２０１６）．
【非特許文献１８】Ｈｏｋｅ，  Ｃ．  Ｈ．  ｅｔａｌ．  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｂｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３１９，  ６０８−６１４，  ｄｏｉ：１０．１０５６／ＮＥＪＭ１９８８０９０８３１９１００４  （１９８８）．
【非特許文献１９】Ｔｕｒｔｌｅ，  Ｌ．  ｅｆ  ａｌ．  Ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ，  ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２０１５１５１７  （２０１６）．
【非特許文献２０】Ｔｕｒｔｌｅ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  Ｌｉｖｅ  Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  Ｊ  ａｐａｎｅｓｅ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  （ＪＥ）  Ｖａｃｃｉｎｅ  ＳＡ１４−１４−２  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ  ｉｎ  ａ  ＪＥ／Ｄｅｎｇｕｅ  Ｃｏ−Ｅｎｄｅｍｉｃ  Ａｒｅａ．  ＰＬｏＳ  Ｎｅｇｌ  Ｔｒｏｐ  Ｄｉｓ  １１，  ｅ０００５２６３，  ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｎｔｄ．０００５２６３  （２０１７）．
【非特許文献２１】Ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｔｏ  Ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｉｎ  Ｏｔｈｅｒ  Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ  Ｓｐｅｃｉｅｓ，＜ｈｔｔｐ：／／ｃｕｒｒｅｎｔｓ．ｐｌｏｓ．ｏｒｑ／ｏｕｔｂｒｅａｋｓ／ａｒｔｉｃｌｅ／ｉｄｅｎｔｉｆｖｉｎｑ−ｃａｎｄｉｄａｔｅ−ｔａｒｇｅｔｓ−ｏｆｉｍｍｕｎｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ−ｉｎ−ｚｉｋａ−ｖｉｒｕｓ−ｂａｓｅｄ−ｏｎ−ｈｏｍｏｌｏｑｙ−ｔｏ−ｅｐｉｔｏｐｅｓ−ｉｎ−ｏｔｈｅｒｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ−ｓｐｅｃｉｅｓ／  ＞  （２０１６）．
【非特許文献２２】Ｖｅｎｅ，  Ｓ．，  Ｈａｇｌｕｎｄ，  Ｍ．，  Ｖａｐａｌａｈｔｉ，  Ｏ．  ＆  Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔ，  Ａ．  Ａ  ｒａｐｉｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｆｏｃｕｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７３，  ７１−７５  （１９９８）．
【非特許文献２３】Ｑｕｅｒｅｃ，  Ｔ．  Ｄ．  ｅｒ  ａｌ．  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０，  １１６−１２５，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｉ．１６８８  （２００９）．
【非特許文献２４】Ｗｒａｍｍｅｒｔ，  Ｊ．  ｅｒａ／．  Ｒａｐｉｄ  ａｎｄ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｖｉｒｕｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｌａｓｍａｂｌａｓｔ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｃｕｔｅ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８６，  ２９１  １−２９１８，  ｄｏｉ：１０．１  １２８／ＪＶＩ．０６０７５−１  １  （２０１２）．
【非特許文献２５】Ｂｅｕｎｅｕ，  Ｈ．，  Ｇａｒｃｉａ，  Ｚ．  ＆  Ｂｏｕｓｓｏ，  Ｐ．  Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：  ｃｏｇｎａｔｅ  ＣＤ４  ｈｅｌｐ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｒｏｕｎｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７７，  １４０６−１４１０  （２００６）．
【非特許文献２６】Ｃａｓｔｅｌｌｉｎｏ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｂｙ  ｇｕｉｄｉｎｇ  ｎａｉｖｅ  ＣＤ８＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｓｉｔｅｓ  ｏｆ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４４０，  ８９０−８９５，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０４６５１  （２００６）．
【非特許文献２７】Ｋｕｍａｍｏｔｏ，  Ｙ．，  Ｍａｔｔｅｌ，  Ｌ．  Ｍ．，  Ｓｅｌｌｅｒｓ，  Ｓ．，  Ｐａｙｎｅ，  Ｇ．  Ｗ．  ＆  Ｉｗａｓａｋｉ，  Ａ．  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｓｕｐｐｏｒｔ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｐｒｉｍｉｎｇ  ｂｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ  ｉｎｐｕｔ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０８，  ８７４９−８７５４，  ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１  １００５６７１０８  （２０１  １）  ．
【非特許文献２８】Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，  Ｙ．，  Ｌｕ，  Ｂ．，  Ｇｅｒａｒｄ，  Ｃ．  ＆  Ｉｗａｓａｋｉ，  Ａ．  ＣＤ８（＋）  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｓ  ＣＤ４（＋）  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｈｅｌｐ．  Ｎａｔｕｒｅ  ４６２，  ５１０−５１３，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ０８５１  １  （２００９）．
【非特許文献２９】Ｓｔｒｕｔｔ，  Ｔ．  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ｉｎｎａｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ｐａｔｈｏｇｅｎ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １６，  ５５８−５６４，  ５５１ｐ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ５６４，  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．２１４２  （２０１０）．
【非特許文献３０】Ｒｏｍａｇｎａｎｉ，  Ｓ．  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ  （Ｔｈ１  ｖｅｒｓｕｓ  Ｔｈ２）．  Ａｎｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ８５，  ９−１８；  ｑｕｉｚ  １８，  ２１，  ｄｏｉ：  １０．１  ０  １６／Ｓ１０８１−１２０６（１０）６２４２６−Ｘ  （２０００）．
【非特許文献３１】Ｂｌｏｍ，  Ｋ．  ｅｒ  ａｌ．  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ  １１，  ｅ１００４６２２，  ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｐａｔ．１００４６２２  （２０１５）．
【非特許文献３２】Ｇｏｓｔｉｎ  ＬＯ，  Ｈｏｄｇｅ  ＪＧ，  Ｊｒ．  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ａｎｄ  ｇｌｏｂａｌ  ｈｅａｌｔｈ  ｓｅｃｕｒｉｔｙ．  Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ；  １６（１０）：  １０９９−１００．
【非特許文献３３】Ｖａｎｎｉｃｅ  ＫＳ，  Ｇｉｅｒｓｉｎｇ  ＢＫ，  Ｋａｓｌｏｗ  ＤＣ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｒｅｐｏｒｔ：  ＷＨＯ  ｃｏｎｓｕｌｔａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｎ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０１６．
【非特許文献３４】Ｐｌｏｔｋｉｎ  ＳＡ，  Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ  ＷＡ，  Ｏｆｆｉｔ  ＰＡ．  Ｖａｃｃｉｎｅｓ：  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ／Ｓａｕｎｄｅｒｓ；  ２０１２．
【非特許文献３５】Ｙｅｌｌｏｗ  ｆｅｖｅｒ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｂｏｏｓｔｅｒ  ｎｏｔ  ｎｅｅｄｅｄ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．
【非特許文献３６】Ｂａｒｏｎｔｉ  Ｃ，  Ｐｉｏｒｋｏｗｓｋｉ  Ｇ，  Ｃｈａｒｒｅｌ  ＲＮ，  Ｂｏｕｂｉｓ  Ｌ，  Ｌｅｐａｒｃ−Ｇｏｆｆａｒｔ  Ｉ，  ｄｅ  Ｌａｍｂａｌｌｅｒｉｅ  Ｘ．  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｆｒｅｎｃｈ  Ｐｏｌｙｎｅｓｉａ  ｏｕｔｂｒｅａｋ  ｉｎ  ２０１３．  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎｎｏｕｎｃ  ２０１４；  ２（３）．
【非特許文献３７】Ｂｌｏｍ  Ｋ，  Ｂｒａｕｎ  Ｍ，  Ｐａｋａｌｎｉｅｎｅ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  ＣＤ８  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．  ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ  ２０１５；  １１（１）：  ｅ  １００４６２２．
【非特許文献３８】Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ  ＫＬ，  Ｈｏｒｔｏｎ  ＤＬ，  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｎ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｊ  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ  ２０１  １；  ９２（Ｐｔ  １２）：  ２８２１−９．
【非特許文献３９】Ｄｅｊｎｉｒａｔｔｉｓａｉ  Ｗ，  Ｓｕｐａｓａ  Ｐ，  Ｗｏｎｇｗｉｗａｔ  Ｗ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｓｅｒｏ−ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｄｒｉｖｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１６．
【非特許文献４０】Ｔｕｒｔｌｅ  Ｌ，  Ｔａｔｕｌｌｏ  Ｆ，  Ｂａｌｉ  Ｔ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  Ｌｉｖｅ  Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  （ＪＥ）  Ｖａｃｃｉｎｅ  ＳＡ１４−１４−２  ｉｎ  Ａｄｕｌｔｓ  ｉｎ  ａ  ＪＥ／Ｄｅｎｇｕｅ  Ｃｏ−  Ｅｎｄｅｍｉｃ  Ａｒｅａ．  ＰＬｏＳ  Ｎｅｇｌ  Ｔｒｏｐ  Ｄｉｓ  ２０１７；  １１（１）：  ｅ０００５２６３．
【非特許文献４１】Ｊｏｌｌｅｓ  Ｓ，  Ｓｅｗｅｌｌ  ＷＡ，  Ｍｉｓｂａｈ  ＳＡ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ．  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５；  １４２（１）：  １−１  １．
【非特許文献４２】Ｖｅｎｅ  Ｓ，  Ｈａｇｌｕｎｄ  Ｍ，  Ｖａｐａｌａｈｔｉ  Ｏ，  Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔ  Ａ．  Ａ  ｒａｐｉｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｆｏｃｕｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９９８；  ７３（１）：  ７１−５．
【非特許文献４３】Ｋｕｉｖａｎｅｎ  Ｓ，  Ｈｅｐｏｊｏｋｉ  Ｊ，  Ｖｅｎｅ  Ｓ，  Ｖａｈｅｒｉ  Ａ，  Ｖａｐａｌａｈｔｉ  Ｏ．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｎｅａｒ  ｈｕｍａｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｏｆ  ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ．  Ｖｉｒｏｌ  Ｊ  ２０１４；  １１：  １１５．
【非特許文献４４】Ｂｒａｎｄｌｅｒ  Ｓ，  Ｔａｎｇｙ  Ｆ．  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｗｅｓｔ  Ｎｉｌｅ  ｖｉｒｕｓ．  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ２０１３；  ５（１０）：  ２３８４−４０９．
【非特許文献４５】Ｖａｎｎｉｃｅ  ＫＳ，  Ｇｉｅｒｓｉｎｇ  ＢＫ，  Ｋａｓｌｏｗ  ＤＣ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｒｅｐｏｒｔ：  ＷＨＯ  ｃｏｎｓｕｌｔａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｘｐｅｃｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  ｖｉｒｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｎ  ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ．  Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０１６．
【非特許文献４６】Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ  ＦＨ，  Ｈｉｒｓｃｈ  ＨＨ．  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｔｗｏ  Ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  Ｔｉｃｋ−Ｂｏｒｎｅ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  Ｖｉｒｕｓ  ＩｇＧ  Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙｓ．  Ｃｌｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１５；  ２２（７）：  ７５４−６０．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、フラビウイルスによる感染から防御するためのさらなるワクチン、特にＹＦＶ以外のフラビウイルスによる感染から防御するためのワクチンを開発することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、ＹＦＶワクチンがＴＢＥＶおよびＺＩＫＶを含むＹＦＶ以外のフラビウイルスに対する交差反応性免疫応答（特に、Ｔ細胞交差反応性応答）を引き起こすことを発見した。さらに、交差反応性の抗体反応も観察された。本発明者らは、ＹＦＶワクチンを別のフラビウイルスワクチンと組み合わせて使用した場合に、フラビウイルスに対して生じる免疫応答に関して驚くべき相乗効果も確認した。
【００１２】
フラビウイルスワクチンが交差反応性Ｔ細胞応答を形成できるということはこれまでに観察されておらず、発明者の発見は驚異的である（Ｋａｙｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９８５）  Ｊ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｖｉｒｏｌ．，  １７：  ３５−４５；Ｔｈｅｉｌｅｒ  ＆  Ｃａｓａｌ  （１９５８）  Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｐ  Ｍｅｄ  Ｈｙｇ．，  ７：５８５−５９４；  Ｗｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００８）  Ｅｐｉｄｅｍｏｌ  Ｉｎｆｅｃｔ．，  １３６（５）：６７０−８；  Ｔｕｒｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  （２０１７）  ＰＬｏＳ  Ｎｅｇｌ  Ｔｒｏｐ  Ｄｉｓ．，  １１（１））。
【００１３】
これらより、本発明の第１の態様は、フラビウイルスによる感染を防ぐために個体にワクチン接種する際に使用するための、ＹＦＶワクチンを有するワクチンの組成を提供する。ここで言うフラビウイルスはＹＦＶではない。
【００１４】
本発明は、フラビウイルスによる感染を防ぐために個体にワクチン接種するための薬剤の製造における、ＹＦＶワクチンを有するワクチン組成物の使用を含む。ここで言うフラビウイルスはＹＦＶではない。
【００１５】
本発明はまた、フラビウイルスによる感染を防ぐため個体にワクチン接種する方法を含む。この方法には、個体にＹＦＶワクチンを有するワクチン組成物を投与する過程を含む。ここで言うフラビウイルスはＹＦＶではない。
【００１６】
ＹＦＶワクチンには免疫源としての働きもあり、個体（免疫不全または免疫抑制されていない個体等）に投与すると、個体のＹＦＶに対する防御免疫応答を誘導することができる。それゆえに、ワクチンは、ＹＦＶによる後続の、あるいはそれ以降の攻撃に対し個体を防御することができることがあり、具体的には、感染を完全に防ぐ、もしくは、１つあるいは複数の疾患症状を抑えることにより感染の影響を軽減することによる。これは、ワクチンが個体に投与されていなかった場合起こりえないことである。
【００１７】
本明細書で使用される「免疫応答」とは、感染を抑制または予防する、または、感染によって引き起こされる疾患症状を抑制または予防するのに十分な細胞性および／または液性免疫応答を包含したものを意味する。
【００１８】
ＹＦＶワクチンが防御免疫応答を誘導できるかどうかは、当技術分野の任意の適切な方法を用いることで決定される。
【００１９】
ある実施形態においては、ＹＦＶワクチンが防御免疫応答を誘導できるかどうかは、ＹＦＶ感染後の個体におけるＹＦＶの存在を評価することにより決定される。防御免疫応答が誘導された場合、誘導後の任意の時点におけるＹＦＶのウイルス量は、防御免疫応答が誘導されていなかった場合に比べて少ないことが予想される。通常、防御免疫応答が誘導された個体のウイルス量は、防御免疫応答が誘導されていない個体（例えば、ＹＦＶワクチンを投与されていな個体）のウイルス量と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％、一般的には少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％減少する。
【００２０】
ウイルス量を測定する方法は当技術分野で周知であり、直接法と間接法の両方が含まれる。個体におけるＹＦＶの存在を直接評価する方法には、ウイルスゲノム（例えば逆転写ポリメラーゼ連鎖反応による）および／またはウイルスタンパク質などのウイルスの別の成分の存在を直接評価することを含むことがある。別の直接的なアプローチとして、血漿からウイルスを単離し、細胞培養により増殖させる方法がある。あるいは、ウイルス量を間接的に評価する方法がある。間接的な検出方法においては、通常、感染の後期にＩＧＭおよびＩＧＧ抗体による体液性免疫応答が十分に確立されているという事実を利用する。したがって、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ技術（ＥＬＩＳＡ法）を使用して、感染ウイルスを標的とする抗体を検出することにより、ウイルス量を間接的に評価することができる。ＹＦＶのウイルス量の測定においては、ウイルスＲＮＡまたはＮＳ１抗体などのウイルス抗体などによる検出が好ましい。
【００２１】
別の実施形態では、ＹＦＶワクチンが防御免疫応答を誘導できるかどうかは、個体のＹＦＶ感染後の個体におけるＹＦＶ感染の１つまたは複数の臨床症状を評価することにより決定される。防御免疫応答が誘導された場合、感染後の任意の時点で、防御免疫応答が誘導されていない場合の１つまたは複数の臨床症状よりも、１つまたは複数の臨床症状の数および／または重症度が少なくなると予想される。
【００２２】
ＹＦＶの症状は当技術分野で周知であり、発熱、頭痛、悪寒、背部痛（例えば、極度の腰痛）、疲労、食欲不振、筋肉痛、悪心および嘔吐が含まれる。疾患の第二の毒性段階に関連する他の症状には、肝障害による黄疸、腹痛、口内や目、胃腸管からの出血、血液の混じる嘔吐、腎不全、しゃっくり、せん妄がある。ＹＦＶ感染の１つまたは複数の臨床症状を評価することは、ＹＦＶ感染に関連する１つまたは複数の障害および／または状態を評価することを含み得ることもわかるだろう。ＹＦＶワクチンによって提供される防御を考えるに、無症候性の集団では多くの個体がワクチンを接種したのであろうことが考えられる。
【００２３】
さらに別の実施形態においては、ＹＦＶワクチンが防御免疫応答を誘導できるかどうかは、ＹＦＶワクチンによる個体の感染後、個体において直接その免疫応答の１つまたは複数の指標を検出することにより決まる。「免疫応答の１つまたは複数の指標」とは、その免疫応答の媒介に関与する１つまたは複数の細胞および／または分子および／または遺伝子の、それ自身の存在または変調（例えば、アップレギュレーション）による応答の検出を意味する。１つまたは複数の指標は、ＹＦＶに対する自然免疫応答および／またはＹＦＶに対する獲得免疫応答の指標であることがある。獲得免疫応答の１つまたは複数の指標は、ＹＦＶに対する細胞性免疫応答および／またはＹＦＶに対する体液性免疫応答の指標であることがある。免疫応答の１つまたは複数の指標はここでは、ＹＦＶに特異的に結合するＴ細胞（例えば、ＣＤ４および／またはＣＤ８  Ｔ細胞および／またはＴＲＥＧＴ細胞、ＮＫＴ細胞、およびＭＵＣＯＳＡＬ  ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ  ＩＮＶＡＲＩＡＮＴ  Ｔ細胞（ＭＡＩＴ）を含むほかのＴ細胞受容体陽性細胞）およびＹＦＶ特異的Ｂ細胞（例えば、記憶細胞および／または形質芽球および／またはほかのＢ細胞受容体陽性細胞）を含む。
【００２４】
通常、ＹＦＶワクチンは、個体の免疫系に作用して、ＹＦＶに特異的に結合する抗体の産生を誘導する。ＹＦＶの一次抗体の標的はＥタンパク質とＮＳ１である。このようにして産生された抗体は、個体内において、ＹＦＶ（例えばＥタンパク質またはＮＳ１タンパク質）に対し、個体内の他の分子（例えば非フラビウイルス由来分子）よりも高い親和性、例えば少なくとも２、または少なくとも５、または少なくとも１０、または少なくとも５０倍強い特異性をもって結合することが好ましい。さらには、抗体は個体において、ＹＦＶ（例えばＥタンパク質またはＮＳ１タンパク質）に対し、他の分子（例えば、非フラビウイルス由来の分子）よりも少なくとも１００、または少なくとも１，０００、または少なくとも１０，０００倍高い親和性をもつことが好ましい。抗体を検出する方法は当技術分野で周知であり、ＥＬＩＳＡなどの任意の適切な技術を使用することができる。ＹＦＶワクチンは、個体の免疫系を誘導して、ＹＦＶに特異的なＴ細胞を産生し得ることが理解されよう。ここでＴ細胞とは、ＣＤ８  Ｔ細胞および／またはＣＤ４  Ｔ細胞および／またはＴＲＥＧ細胞および／またはＮＫ  Ｔ細胞および／またはＭＡＩＴ  Ｔ細胞および／または他のＴ細胞受容体陽性細胞であることがある。そのような細胞を検出する方法は当技術分野で周知であり、以下の実施例に記載されている。例えば、非特許文献９および非特許文献１０に示される。便利なことに、フローサイトメトリーが使用されている。したがって、ある実施形態においては、ＹＦＶワクチンが防御免疫応答を誘導できるかどうかは、個体がＣＤ８  Ｔ細胞、ＣＤ４Ｔ細胞、ＴＲＥＧＴ細胞、ＮＫＴ細胞、ＭＡＩＴＴ細胞、およびＴＳＡＩＢＯＵ  受容体陽性細胞などの任意のＹＦＶに特異的なＴ細胞を持っているかどうかを評価することにより決定される。
【００２５】
同様に、ＹＦＶワクチンは個体の免疫系を誘導してＹＦＶに特異的なＢ細胞を産生する可能性があることが理解されよう。Ｂ細胞は、記憶Ｂ細胞、形質細胞、または形質芽球であることがある。そのような細胞を検出する方法は当技術分野で周知であり、以下の実施例に記載されている。便利なことに、フローサイトメトリーが使用されている。
【００２６】
通常、ＹＦＶワクチンは不活化あるいは弱毒化されている。
【００２７】
「不活化」ワクチンとは、病気を引き起こす能力を失うように処理されたが、防御免疫を誘導する能力を保持しているＹＦＶという意味が含まれる。ＹＦＶが死ぬこともある。ワクチンで使用するためにウイルスを不活性化する方法は、当技術分野で周知であり、化学的処理またはＵＶ光による処理が含まれる。
【００２８】
「弱毒化」ワクチンとは、選抜されるか、もしくは病気を引き起こす能力を大幅に低下させるように処理されたが、防御免疫を誘導する能力を保持しているＹＦＶという意味が含まれる。ワクチンで使用するためにウイルスを弱める方法は当技術分野で周知であり、毒性に関与する特定の遺伝子の変異または欠損によるウイルスの病原性の可能性の制限を含む。
【００２９】
ＹＦＶワクチンは生ワクチンであり得ることが理解される。ＹＦＶワクチンは弱毒生ワクチンであることが好ましい。
【００３０】
ある実施形態においては、ＹＦＶワクチンに、ＹＦＶの１つまたは複数のタンパク質成分に対応する１つまたは複数の免疫原を有する。「タンパク質成分」には、タンパク質全体またはタンパク質の一部という意味を含む。タンパク質部分は、翻訳後修飾、例えばグリコシル化されていてもいなくてもよいと認識する。したがって、「タンパク質」には、糖タンパク質などの翻訳後修飾タンパク質も含まれる。さらには、ＹＦＶワクチンは、タンパク質成分またはその一部をコードする核酸を含み得ることが分かる。
【００３１】
１つまたは複数のタンパク質成分は、構造タンパク質および／または非構造タンパク質、またはその断片、多様体もしくは誘導体であることがある。ＹＦＶの構造タンパク質には、ＡＮＣＨＣ、ＰＲＭ、およびＥタンパク質が含まれる。これらは、パッケージ化されたＲＮＡ分子とともにウイルスを形成し、カプシド（Ｃ、１２−１４  ＫＤＡ）、膜（Ｍ、およびその前駆体ＰＲＭ、１８−２２  ＫＤＡ）およびエンベロープ（Ｅ、５２−５４  ＫＤＡ）を構成する。ＹＦＶの非構造（ＮＳ）タンパク質には、合成順に１−５の番号が付けられている。フラビウイルス科において、ＮＳ１（３８−４１  ＫＤＡ）、ＮＳ３（６８−７０  ＫＤＡ）およびＮＳ５（１００−１０３  ＫＤＡ）の３つの大きな構造タンパク質は、高度に保存された配列を持っているため、タンパク質成分はＮＳ１  、ＮＳ３およびＮＳ５、またはその断片、多様体、誘導体により構成されている。ＹＦＶの他の小さなタンパク質には、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ４ＡおよびＮＳ４Ｂが含まれる。ＹＦＶワクチンがＮＳ５またはその断片、多様体、誘導体により構成されることは、特に好ましい。
【００３２】
通常、タンパク質成分は、非構造タンパク質、またはその断片、多様体、誘導体である。したがって、タンパク質成分は、ＮＳ５、またはその断片、多様体、または誘導体であることがある。同様に、タンパク質成分は、ＮＳ３、またはその断片、多様体、または誘導体であってもよい。
【００３３】
ＹＦＶワクチンがＮＳ５またはその断片、多様体もしくは誘導体を有する場合が好ましい。ＹＦＶの３つの株からのＮＳ５タンパク質のアミノ酸配列は、以下の実施例で提供され、これにより、ワクチンはこれらの特定のＮＳ５タンパク質のいずれか、またはその断片、多様体もしくは誘導体を含み得ることが分かる。
【００３４】
ＹＦＶの非構造タンパク質または構造タンパク質などのＹＦＶのタンパク質成分の「断片」について、ＹＦＶに対する個体の免疫応答を高める能力を保持するタンパク質成分の一部であるという意味を含める。断片は、５−２００個のアミノ酸であってもよい。通常断片は、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００アミノ酸などの、少なくとも５アミノ酸（例えば６、７、８、９または１０アミノ酸）以上である。ＮＳ５の適切な断片の例としてＥＴＡＣＬＳＫＡＹ（配列番号１）がある。適切な断片の他の例としては、ＶＬＡＰＹＭＰＤＶ（配列番号３９）、ＹＭＰＤＶＬＥＫＬ（配列番号４０）、ＲＮＳＴＨＥＭＹＹ（配列番号４１）、ＲＶＥＲＩＫＳＥＹ（配列番号４２）、ＷＦＹＤＮＤＮＰＹ（配列番号４３）、ＲＴＷＨＹＣＧＳＹ（配列番号４４）、ＭＡＭＴＤＴＴＰＦ（配列番号４５）、ＫＶＶＮＲＷＬＦＲ（配列番号４６）、ＲＳＨＡＡＩＧＡＹ（配列番号４７）、ＷＬＧＡＲＹＬＥＦ（配列番号４８）、ＧＶＥＧＩＧＬＱＹ（配列番号４９）、ＡＡＭＤＧＧＧＦＹ（配列番号５０）、ＹＭＳＰＨＨＫＫＬ（配列番号５１）、ＲＰＡＰＧＧＫＡＹ（配列番号５２）、ＲＰＩＤＤＲＦＧＬ（配列番号５３）、ＹＡＮＭＷＳＬＭＹ（配列番号５４）、ＹＦＨＫＲＤＭＲＬ（配列番号５５）、ＶＫＫＷＲＤＶＰＹ（配列番号５６）、ＲＴＬＩＧＱＥＫＹ（配列番号５７）、ＲＳＨＡＡＩＧＡＹ（配列番号５８）、ＴＰＦＧＱＱＲＶＦ（配列番号５９）、ＭＷＨＶＴＲＧＡＦ（配列番号６０）、ＳＶＣＥＤＬＶＡＹ（配列番号６１）、ＣＡＲＲＲＬＲＴＬ（配列番号６２）、ＲＲＲＬＲＴＬＶＬ（配列番号６３）、ＤＶＫＦＨＴＱＡＦ（配列番号６４）、ＡＭＣＨＡＴＬＴＹ（配列番号６５）、ＲＡＮＥＳＡＴＩＬ（配列番号６６）、ＶＶＶＬＮＲＫＴＦ（配列番号６７）、ＲＶＬＤＣＲＴＡＦ（配列番号６８）、ＳＭＬＬＤＮＭＥＶ（配列番号６９）が含まれる。
【００３５】
ＹＦＶの非構造タンパク質または構造タンパク質などのタンパク質成分の「誘導体」には、タンパク質またはタンパク質の一部であって、本来その生物において存在する形態から修飾されているものの、ＹＦＶに対する個体の免疫応答を高める能力を保持しているという意味を含む。
【００３６】
「誘導体」には、ペプチドの機能、言い換えれば特定の獲得免疫応答の形成（例えば生体内における特異的な抗体の産生）が、実質的に変わらずに維持されている場合において、ペプチドが合成される前または後に、１つまたは複数のアミノ酸残基が科学的に修飾されたペプチドを含む。そのような修飾には、酸または塩基、特に生理学的に許容される有機または無機酸および塩基との塩の形成、末端カルボキシル基のエステルまたはアミドの形成、およびＮｔ−ブトキシカルボニルなどのアミノ酸保護基の結合が含まれる。そのような修飾は、ペプチドを生体内代謝から保護し得る。ペプチドは、単一のコピーとして、または多重、例えばタンデムな反復配列として存在することがある。そのようなタンデムまたは多重の反復配列は、それ自体が十分に抗原性であるため、賦形剤の使用が不要になることがある。ペプチドのＮ末端とＣ末端が結合することによるループの形成、あるいは、１または複数のシステイン残基の末端への結合は、抗原性を高め、および／またはジスルフィド結合を形成するのに都合が良い場合がある。ペプチドが賦形剤、好ましくはポリペプチドに共有結合している場合、本発明のペプチドがループを形成しているように、好ましい配置となる。
【００３７】
ＹＦＶの非構造タンパク質または構造タンパク質などのＹＦＶのタンパク質成分の「多様体」には、ＹＦＶに対する個体の免疫応答を高めるために使用できるタンパク質成分またはその一部の配列多様体の意味が含まれる。  例えば、ＹＦＶのタンパク質成分は、自然界に自然に発生するタンパク質成分のアミノ酸配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する場合がある。多様体は、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％など、ＹＦＶの元のタンパク質成分またはその一部に対して少なくとも６０％の同一性の配列を有することが好ましい。さらに、多様体がＹＦＶの元のタンパク質成分に対して、少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％の同一性の配列を有することがより好ましい。
【００３８】
２つのポリペプチド間の配列同一性パーセントは、任意の適切なコンピュータープログラム、例えばウィスコンシン大学遺伝コンピューティンググループのＧＡＰプログラムを使用して決定することができ、同一性パーセントは、配列が最適にアラインされたポリペプチドに関して計算されることが理解されよう。あるいは、アライメントは、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗプログラム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２２、４６７３−８０を使用して実施することができる。使用されるパラメーターは次のとおりである。高速ペアワイズアラインメントパラメーターについては、Ｋ−ｔｕｐｌｅ（ｗｏｒｄ）サイズは１、ウィンドウサイズは５、ギャップペナルティは３、トップ対角線数は５、スコアリング方法はｘパーセントである。多重配列アライメントパラメーターについては、ギャップオープンペナルティは１０、ギャップ拡張ペナルティは０．０５、スコアリングマトリックはＢＬＯＳＵＭである。通常、配列の多様体は、そのタンパク質またはその一部の、元の配列と異なるアミノ酸残基を１００未満、または５０未満、または４０未満、または３０未満、または２０未満の有する。より好ましくは、配列の多様体は、そのタンパク質またはその一部の、元の配列と異なるアミノ酸残基を１５または１４または１３または１２または１１または１０または９または８または７または６または５または４または３または２または１つのみのアミノ酸残基を有する。
【００３９】
誘導体の配列は変更されている場合があり、それは薬剤の免疫原性は強化するために行われ、またはその免疫原性に影響を及ぼさないことがある。例えば、誘導体は、免疫原性に必須でない１つまたは複数のアミノ酸配列を有している場合がある。
【００４０】
タンパク質成分は、ウイルスの培養物から直接単離できることが理解されよう。しかし、便利なことに、タンパク質は、組換えＤＮＡ技術を使用して、タンパク質をコードする適切なＤＮＡコンストラクトの発現によって作成される。核酸のクローニング、操作、修飾および発現、および発現タンパク質の精製のための適切な技術は、当技術分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  （２００１  ）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている。
【００４１】
あるいは、タンパク質は、タンパク質化学技術、例えば、単離タンパク質の部分的なタンパク質分解（外因的または内因的）、またはデノボ合成によって作成されてもよい。Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ  （１９８１）  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ４６，  ３４３３およびその参考文献によって開示されているように、ペプチドは、Ｆｍｏｃ−ポリアミド化条件下におけるペプチド固相合成によって合成され得る。
【００４２】
ＹＦＶワクチンは、免疫系の経路を刺激または増強する薬剤を含んでもよいことが理解されよう。したがって、ワクチンはアジュバントを含んでもよい。しかし、ウイルスの増殖および免疫系による取り込みにより、ＹＦＶワクチン自体がアジュバントとして機能する可能性があることも理解されたい。したがって、ＹＦＶワクチンにはウイルスとキャリア（例えば、生理溶液）のみが含まれる場合がある。
【００４３】
好ましい実施形態において、ＹＦＶワクチンは、アカゲザルより感染した、Ａｓｉｂｉという男性患者から単離されたａｓｉｂｉ株に由来する黄熱ウイルスを有する（Ｓｔｏｋｅｓ，  １９２８，  Ｊ  Ａｍ  Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃ  ９０：  ２５３）。ａｓｉｂｉ株に由来するウイルス株は図１０に示されており、ＹＦＶワクチンはこれらの株のいずれかを含み得ることが理解されよう。特に好ましい実施形態では、ＹＦＶワクチンは、１７Ｄ株に由来するウイルス株を有する。好ましくは、ＹＦＶワクチンは、そのような株を有する弱毒生ワクチンである。
【００４４】
１７Ｄワクチンは１９３７年に開発され、ニワトリ胚でａｓｉｂｉ株を１７６回継代することにより得られた。現在、ワクチン製造には１７Ｄ、１７ＤＤ、および１７Ｄ−２０４の亜株が使用されている。現在までに、４つのワクチン製品がＷＨＯによって事前認証されており、そのすべてが市販されている。ワクチンはそれぞれ、Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｔａｒｙ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ  ｏｆ  Ｃｈｕｍａｋｏｖ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｐｏｌｉｏｍｙｅｌｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｖｉｒａｌ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｉｄｅｓ  ｏｆ  Ｒｕｓｓｉｏｎ  Ａｃａｄ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ｄｅ  Ｄａｋａｒ、Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ＳＡおよびＢｉｏ−  Ｍａｎｇｕｉｎｈｏｓ／Ｆｉｏｃｒｕｚにおいて製造されている。これらの市販のワクチンのいずれも本発明で使用することができる。ワクチンの使用に適したＹＦＶウイルス株には以下が含まれる。
【００４５】
１、黄熱ａｓｉｂｉ株（元の分離株および１７Ｄより産生されたワクチンの前駆体すべて）ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏＶ／ｎｕｃｃｏｒｅ／ＡＹ６４０５８９１
２、ＹＦＶ  １７ＤＤ（ＹＦ−ＶＡＸ）ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｎｕｃｃｏｒｅ／７０７２４９７７
３、ＹＦＶ  １７Ｄ２０４（Ｓｔａｍａｒｉｌ）ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏＶ／ｎｕｃｃｏｒｅ／ＫＦ７６９０１５１
特に好ましい実施形態では、ＹＦＶワクチンはＳｔａｍａｒｉｌ（登録商標）（Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ＳＡ）である。Ｓｔａｍａｒｉｌ（登録商標）は、１，０００ＩＵ以上の黄熱ウイルス１７Ｄ−２０４株、粉末（ラクトース、ソルビトールＥ４２０Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−アラニン、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸二ナトリウム、カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム）、液体（ナトリウム塩化物、注射用水）を含む。
【００４６】
ワクチンの使用において、ポリヌクレオチド剤は、さまざまな複製（例えば、組換えアデノウイルスワクチン）または非複製（ＤＮＡワクチン）ベクターで送達される。
【００４７】
組換えタンパク質で構成されるワクチンの通常の用量は、約５−１０μρである。細菌ワクチンの通常の用量は、１０コロニー／ｍｌである（非特許文献８）。
【００４８】
通常、ワクチン組成物はさらに、薬学上許容される賦形剤、希釈剤またはアジュバントを有する。賦形剤およびアジュバントは、当技術分野で周知である。適切なアジュバントには、完全または不完全なフロイントアジュバント、ムラミルジペプチド、ＥＰ  １０９  ９４２、ＥＰ  １８０  ５６４およびＥＰ  ２３１  ０３９の「Ｉｓｃｏｍｓ」、水酸化アルミニウム、サポニン、ＤＥＡＥ−デキストラン、中性油（例えばミグリオール）、植物油（例えば落花生油）、リポソーム、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）ポリオールまたはＲｉｂｉアジュバント系（例えば、ＧＢ−Ａ−２  １８９  １４１を参照）を含む。
【００４９】
賦形剤は、本発明の薬剤と適合性があり、その患者に有害でないという意味で「許容可能」でなければならない。通常、賦形剤は滅菌済みで発熱物質を含まない水または生理食塩水である。
【００５０】
通常、ワクチンは、経皮、表皮、皮内、皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、経口、肺、または例えば膣または直腸などの他の粘膜経路を介して投与される。
【００５１】
ワクチン組成物は非経口投与用に製剤化することがあり、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、および対象患者の血液と等張にする溶質を含む水性または非水性の滅菌注射溶液を有することがあり、および／または、懸濁剤および増粘剤を含むことがある水性または非水性の滅菌懸濁液を有することがある。即席の注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から調整することがある。
【００５２】
ワクチン組成物は、鼻腔内投与用に製剤化することができ、加圧容器、ポンプ、スプレー、または適切な噴射剤と共に用いるネブライザーといったエアロゾルスプレーの形で便利に送達することができる。上記適切な噴霧剤は例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４Ａ３または１，１，１，２，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ  ２２７ＥＡ３））などのハイドロフルオロアルカン、二酸化炭素またはその他の適切なものガスである。  加圧エアロゾルの場合、計量単位を送達するバルブを提供することにより、投与単位を決定することができる。加圧容器、ポンプ、スプレーまたはネブライザーには、薬剤の溶液または懸濁液、例えばエタノールと噴射剤の混合物を溶媒として使用したもの、が含まれ、それには追加でソルビタントリオレエートといった潤沢剤が含まれていることがある。
【００５３】
ＹＦＶワクチンがＳｔａｍａｒｉｌ（登録商標）であり、少なくとも４．７４ｌｏｇ  １０プラーク形成単位（ＰＦＵ）を有する０．５  ｍＬの用量で投与される場合が好ましい。
【００５４】
ワクチンの効力（ｅｆｆｉｃａｃｙ）は、最も好ましい条件下における、ワクチン接種を受けていないグループとの比較によるワクチン接種を受けたグループの疾患の割合の減少によって示される（Ｗｅｉｎｂｕｒｇ＆Ｓｚｉｌａｇｙｉ（２０１０）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ２０１（１１）：１６０７−１６１０）。ワクチンの効力は、理想的な条件下で１００％のワクチンが取り込まれた場合におけるワクチンの効果を示すが、ワクチンの有効性（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ）は、その地域の日常的な状況で使用された場合のワクチンの効力を評価する。アウトカムデータ（ワクチンの効力）は一般に、ワクチン未接種（ＡＲＵ）とワクチン接種（ＡＲ）ケース間における疾患の発病率（ＡＲ）の比例的減少によって示され、ワクチン接種グループ内の疾患の相対リスクによって計算でき、それには、ＶＥ＝［（ＡＲＵ−ＡＲＶ）／ＡＲＵ］  ｘ  １００の公式を使用する。ここで、ＶＥ＝ワクチンの効力、ＡＲＵ＝ワクチン未接種グループの発病率、ＡＲＶ＝ワクチン接種グループの発病率である。ワクチンが１００％防御するということは通常は無いが、市販のＹＦＶワクチンはそれに近い（通常、ワクチン接種グループの９９％）。したがって、一実施形態では、ＹＦＶワクチンは、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、あるいは９８％など少なくとも５０％のＶＥを有し、最も好ましくは、ＹＦＶワクチンは少なくとも９９％のＶＥを有する。
【００５５】
一実施形態では、ＹＦＶワクチンは、フラビウイルスによる感染に対して個体に免疫をつける。ここで、フラビウイルスとは、ジカウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、およびオムスク出血熱ウイルスから選択される１つまたは複数である。フラビウイルスが、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス、およびジカウイルスから選択される場合は特に好ましい。
【００５６】
デングウイルスは４つの血清型（ＤＥＮＶ１−ＤＥＮＶ４）として存在し、一次感染後、個体は感染した血清型にのみ結合するＤＥＮＶ特異抗体を産生する。ＤＥＮＶ血清型間の交差反応性の明らかな欠如を考えるに、ＤＥＮＦに対する免疫におけるＹＦＶワクチンの効果は不明である。したがって、一実施形態では、フラビウイルスはデングウイルスではない。言い換えると、一実施形態において、本発明はフラビウイルスの感染に対するワクチン接種の方法を提供し、前記方法は個体にＹＦＶワクチンを有するワクチン組成物を投与するステップを含む。ここで、フラビウイルスはＹＦＶではなく、フラビウイルスはデングウイルスではない。同様に、一実施形態において、本発明は、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する際に使用するＹＦＶワクチンを有するワクチン組成物を提供する。ここで、フラビウイルスはＹＦＶではなく、フラビウイルスはデングウイルスではない、同様に、一実施形態では、本発明は、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するための薬剤の製造におけるＹＦＶワクチンを有するワクチン組成物の使用を提供する。ここで、フラビウイルスはＹＦＶではなく、フラビウイルスはデングウイルスではない。
【００５７】
「フラビウイルスによる感染に対して個体に免疫をつける」ことにより、個体にフラビウイルスに対する防御免疫が誘導されるという意味が含まれる。例えば、ワクチンは、個体におけるフラビウイルスによるその後の感染を予防および／または軽減することがある。ワクチンは、フラビウイルスに対する個体の免疫を形成および／または増強させることがある。
【００５８】
一実施形態において、ＹＦＶワクチンがフラビウイルスに対する防御免疫応答を誘導できるかどうかは、フラビウイルス感染後の個体におけるフラビウイルスの存在を評価することにより決定される。防御免疫応答が誘導された場合のフラビウイルスのウイルス量は、ＹＦＶワクチンによる誘導があった防御免疫応答が誘導されなかった場合のフラビウイルスのウイルス量に比べて、感染後の任意の時点で少ないと予想される。通常、ウイルス量は、ＹＦＶワクチンが防御免疫応答を誘導しなかった個体（例えば、ＹＦＶワクチンは投与されなかった個体）に比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％、より一般的には少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％減少する。ウイルス量を測定する方法は当技術分野で周知であり、上記のような直接的および間接的な方法の両方が含まれる。
【００５９】
別の実施形態では、ＹＦＶワクチンがフラビウイルスに対する防御免疫応答を誘導できるかどうかは、フラビウイルスによるその個体の感染後の個体におけるフラビウイルス感染の１つまたは複数の症候症状を評価することにより決定される。ＹＦＶワクチンが防御免疫応答を誘導する場合の一つまたは複数の症候症状は、ＹＦＶが防御免疫応答を誘導しない場合の一つまたは複数の症候症状に比べて、感染後の任意の時点において、その数および／または重症度は少ないと予想される。フラビウイルス感染が別の障害および／または状態に関連している場合、ＹＦＶワクチンがフラビウイルスに対する防御免疫応答を誘導できるかどうかは、ＹＦＶワクチンが障害および／または症状を軽減させるどうかを評価することによって決定できることも理解されよう。
【００６０】
特定のフラビウイルスによる感染と、感染／関連障害または症状の症状を診断する方法の概要を以下に示す。本明細書に記載のように、これらの方法を使用して、ＹＦＶワクチンがフラビウイルスに対する防御免疫応答を誘導できるかどうかを評価することができることが理解されよう。
（ジカウイルス（ＺＩＫＶ））
（診断）
ＺＩＫＶ特異的ＩｇＭ抗体は、症状の発症後５日目以降、血清検体を用いたＥＬＩＳＡまたは免疫蛍光アッセイにより検出できる。
（症状）
ジカウイルスは通常、数日から１週間続く症状を伴う軽度の感染を引き起こす。人々は通常、病院での治療を必要とするほどの病状にはならず、ジカウイルス感染で死亡することはほとんど無い。このため、多くの人は自分が感染していることに気付かないかもしれない。ジカ熱の症状は、デング熱やチクングニア熱などの蚊に刺されることにより拡散される他のウイルスに似ている。ジカウイルスに感染した多くの人は、症状がないか、軽度の症状しかない。ジカ熱の最も一般的な症状は、発熱、発疹、関節痛、結膜炎（赤目）、筋肉痛、頭痛である。
（感染関連症候群／症状）
ギランバレー症候群
（先天異常）
小頭症および先天性ジカ症候群
（ダニ媒介性脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ））
（診断）
疾患の最初の段階の臨床検査でみられる最も一般的な異常は、白血球数の減少（白血球減少症）と血小板数の減少（血小板減少症）である。血清中の肝酵素もわずかに上昇することがある。第二期と呼ばれる神経疾患の発症後は、通常、血液および脳脊髄液（ＣＳＦ）中の白血球数の増加が見られる。ウイルスは、病気の最初の段階で血液から分離できる。臨床検査診断は通常、血液またはＣＳＦのいずれかの特定のＩｇＭまたはＩｇＧの検出に依存し、通常、後の段階、つまり疾患の第２段階で現れる。
（症状）
無症候性感染は、感染者の６０−７０％で発生する。感染した患者は、髄膜炎（発熱、頭痛、頸部硬直など）、脳炎（眠気、錯乱、感覚障害、および／または麻痺などの運動異常）または髄膜脳炎といった症状を伴う中枢神経系に関連する臨床疾患を伴うことがある。入院している患者の３０％以上で、長期的な（時には生涯にわたる）症状が発生する。
（日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ））
（診断）
ＪＥの臨床検査は一般に、血清または脳脊髄液（ＣＳＦ）を検査して、ウイルス特異的ＩｇＭ抗体を検出することによって行われる。ＪＥウイルスＩｇＭ抗体は、通常、疾患の発症後３−８日目に検出可能であり、３０−９０日間持続するが、より長期間の持続も記録されている。したがって、ＩｇＭ抗体陽性は、過去の感染またはワクチン接種によるすることがある。
（症状）
日本脳炎（ＪＥ）ウイルスに感染した人の１％未満が臨床疾患を発症する。症状を呈する人において、潜伏期間（感染から発症までの期間）は通常５−１５日である。初期症状には、しばしば発熱、頭痛、嘔吐が含まれる。精神状態の変化、神経学的症状、脱力感、運動障害は、その後数日間で発生する可能性がある。発作は、特に子供の間でよく見られる。
（西ナイルウイルス（ＷＮＶ））
（診断）
通常の臨床検査研究では、ＷＮＶ感染症を他の多くのウイルス感染症と区別していない。神経浸潤性疾患の患者は一般に、脳脊髄液（ＣＳＦ）にリンパ球性多細胞症を起こすが、病気の初期には好中球が優勢になる場合がある。血清またはＣＳＦ中のＷＮＶ特異的免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｍの検出は、直近のＷＮＶ感染の強力な証拠となる。ほとんどの患者では、ＷＮＶに対するＩｇＭ抗体は通常、疾患の発症後８日以内で検出可能である。しかし、ＷＮＶ神経浸潤性疾患の患者においては、ほぼ常に、疾患の発症時までに特異的ＩｇＭが血清およびＣＳＦより検出可能である。
（症状）
ヒトにおける感染の約８０％は明らかに無症候性である。疾患を発症する人のほとんどは、発熱、頭痛、疲労、倦怠感、筋肉痛、脱力感といった急性発症を特徴とする自然治癒的な西ナイル熱（ＷＮＦ）を患う。上記症状のほかに、時に胃腸症状と体幹および四肢の一過性黄斑発疹が報告されている。神経浸潤性疾患は、髄膜炎、脳炎、麻痺などの形で、ＷＮＶ感染者の１％未満において発症する（神経浸潤性疾患はＷＮＦまたは無症候性感染よりも報告される可能性が高いため、報告では神経浸潤性疾患の割合が高くなる）。脳炎のリスクは年齢とともに増加する。
（セントルイス脳炎ウイルス（ＳＬＥＶ））
（診断）
ＳＬＥＶ疾患は、血清またはＣＳＦ中のＳＬＥＶ特異的ＩｇＭ抗体の検出により確認できる。ＳＬＥＶ  ＩｇＭ検査の陽性結果は、州の公衆衛生研究所またはＣＤＣで急性期および回復期の血清検体の中和抗体検査により確認する必要がある。
（症状）
セントルイス脳炎ウイルス（ＳＬＥＶ）感染の１％未満が臨床的に明らかになっているが、感染の大部分は未診断のままである。ＳＬＥＶ疾患の潜伏期間（感染した蚊に刺されてから疾患が発症するまでの期間）は５−１５日である。病気の発症は通常急激であり、発熱、頭痛、めまい、吐き気、倦怠感を伴う。兆候と症状は数日から１週間にわたり激化する。一部の患者は、この期間後に自然に回復するが、他の患者は、肩こり、混乱、見当識障害、めまい、震え、および不安定性を含む中枢神経系感染の徴候を呈する。重症の場合、昏睡に至る可能性がある。この疾患は一般に、年配の大人よりも子供の方が軽い。ＳＬＥＶ疾患の小児および若年成人の約４０％は、発熱と頭痛または無菌性髄膜炎のみを発症するが、ＳＬＥＶ病の高齢者のほぼ９０％が脳炎を発症する。全体の致死率は５−１５％である。致命的な症状のリスクも年齢とともに増加する。急性ＳＬＥＶ神経浸潤性疾患の場合、脳脊髄液（ＣＳＦ）検査では、中程度の（通常はリンパ球性）髄液細胞増加症が見られる。ＣＳＦタンパク質は、約半分から３分の２での症例で上昇している。通常、コンピューター断層撮影（ＣＴ）による脳のスキャンは正常を示すが、脳波（ＥＥＧ）の結果は、焦点活動を伴わない全般的な減速をしばしば示す。
（オムスク出血熱ウイルス（ＯＨＦＶ））
（診断）
血清学、ＩｇＭ  ＩｇＧ
（症状）
３〜８日間の潜伏期間後、ＯＨＦの症状は突然始まり、それには、悪寒、発熱、頭痛、嘔吐を伴う激しい筋肉痛、胃腸症状、最初の症状発症の３〜４日目に起こる出血がある。患者は異常に低い血圧と低血小板数、低赤血球数、低白血球数を経験することもある。２週間後、回復する患者もいれば回復しない患者もいる。彼らは、歯肉、子宮、肺の粘膜に限局性出血を経験し、時折神経が関与する可能性がある。患者が３週間後なおＯＨＦを患っている場合、症状の第二の波が発生するであろう。これには脳炎の兆候も含まれる。この期間が経過しても病状が消えない場合、ほとんどの場合で患者は死亡する。ＯＨＦから回復した患者は、難聴、脱毛、および神経学的状態に関連する行動的または心理的困難を経験することがある。
【００６１】
個体にＹＦＶワクチンを接種すると、個体のフラビウイルスに対する免疫経路が形成および／または増強する可能性があることが理解されよう。免疫は、自然免疫および／または獲得免疫であり得る。免疫は、細胞性および／または体液性免疫であり得る。
【００６２】
一実施形態では、個体にＹＦＶワクチンを接種すると、フラビウイルスに対する個体のＴ細胞の活性を含むフラビウイルスに対する細胞性免疫が形成および／または増強する。例えば、ワクチンは新しいＴ細胞を産生し、および／またはＹＦＶを認識し、他のフラビウイルスと交差反応するＴ細胞のレベルを増加させる。したがって、本発明の第一の態様に従って使用するためのワクチン組成物は、交差反応性Ｔ細胞、すなわちＹＦＶだけでなくＹＦＶではないほかのフラビウイルスを認識するＴ細胞を産生および／または増殖させることが理解されよう。ＹＦＶワクチンが個体内におけるフラビウイルスに対するＴ細胞活性をもつフラビウイルスに対する細胞性免疫を増大させる場合、細胞性免疫は通常、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍増加する。
【００６３】
Ｔ細胞は、未熟なナイーブＴ細胞として胸腺から放出される。ペプチド付加ＭＨＣ分子（この場合はワクチン由来ペプチド）へのＣＤ３／ＴＣＲ複合体の関与と結合により、ナイーブＴ細胞が活性化されるが、効果的な活性化には特異の共刺激受容体による共刺激が必要である。Ｔ細胞が第二の共刺激シグナルを受信しない場合、アポトーシスを起こす。プロフェッショナルな抗原提示細胞（ＡＰＣ）との相互作用を介して発生する活性化またはプライミングにより、Ｔ細胞はエフェクター細胞とメモリー細胞に成熟、分裂、分化することができる。Ｔ細胞の表面に見られる一般的な共受容体はＣＤ２８であり、ＡＰＣ上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合して活性化を開始する。ＣＤ８  Ｔ細胞が活性化されると、ＣＤ８Ｔ細胞は分裂し、このクローンの増殖はＴ細胞成長因子ＩＬ−２によって促進される。Ｔ細胞はエフェクター細胞のサブセットに分化し、その多くは血液に入り、感染部位に移動する。病原体の除去に続き、エフェクターＴ細胞の集団は収縮し、抗原特異的Ｔ細胞の大部分がアポトーシスに入る。ただし、抗原特異的Ｔ細胞の一部の集団（５−１０％）は、記憶細胞として残る。記憶細胞の集団は、特定の抗原とは無関係に、主にＩＬ−７およびＩＬ−１５の記憶Ｔ細胞生存の促進作用によりサイトカイン依存的に維持さる。抗原に再び曝されると、記憶細胞は速やかに多数のエフェクターＴ細胞へと増殖する。記憶Ｔ細胞サブセットは、当初、速やかなエフェクター機能を媒介する能力と、細胞が二次リンパ器官に移動する能力によって定義されていた。
【００６４】
個体で形成されるＴ細胞の活性には、ＹＦＶを認識するＣＤ４、ＣＤ８、Ｔｒｅｇ  Ｔ細胞、ＮＫ  Ｔ細胞、ＭＡＩＴ  Ｔ細胞、または他のＴ細胞受容体陽性細胞（例えば、より自然免疫機能を持つＴ細胞）のいずれかの産生が含まれ、また、他のフラビウイルスと交差反応する。Ｔ細胞の集団の測定は、当技術分野における基本的な操作であり、典型的には、例えばＴ細胞の特定のサブセットで発現されるマーカーを利用するフローサイトメトリーを伴う。
【００６５】
一実施形態では、ＹＦＶワクチンの投与は、ＨＬＡ−Ａ１陽性個体のエピトープＥＴＡＣＬＳＫＡＹ（配列番号１）を認識するＣＤ８  Ｔ細胞のレベルを形成および／または増大させる。ＥＴＡＣＬＳＫＡＹ（配列番号１）は、ＴＢＥＶのＮＳ５タンパク質と共通のＹＦＶのＮＳ５タンパク質におけるエピトープである。
【００６６】
ＹＦＶワクチン接種後に産生および／または増殖される他の交差反応性Ｔ細胞は、異なるフラビウイルスタンパク質（ＮＳ５またはＮＳ３タンパク質など）間で共有される（または非常に類似した）ペプチドを認識すると考えられる。例えば、Ｔ細胞はＮＳ５またはＮＳ３などのフラビウイルスの非構造タンパク質に結合する場合がある。ジカウイルスおよびＴＢＥウイルスの予測されたＴ細胞エピトープは、以下の実施例の表２および３にリストされている。これにより、一実施形態では、Ｔ細胞は表２および３にリストされたエピトープのいずれかに結合することができることがある（すなわちＥＴＡＣＬＡＫＳＹ（配列番号１）、ＲＴＷＡＹＨＧＳＹ（配列番号２）、ＡＬＮＴＦＴＮＬＶ（配列番号３）、ＹＭＷＬＧＡＲＦＬ（配列番号４）、ＲＴＴＷＳＩＨＧＫ（配列番号５）、ＣＶＹＮＭＭＧＫＲ（配列番号６）、ＧＬＶＲＶＰＬＳＲ（配列番号７）、ＹＴＹＱＮＫＶＶＫ（配列番号８）、ＮＭＭＧＫＲＥＫＫ（配列番号９）、ＧＬＧＬＱＲＬＧＹ（配列番号１０）、ＶＰＣＲＨＱＤＥＬ（配列番号１１）、ＧＬＱＲＬＧＹＶＬ（配列番号１２）、ＷＬＧＡＲＦＬＥＦ（配列番号１３）、ＬＬＹＦＨＲＲＤＬ（配列番号１４）ＳＧＱＶＶＴＹＡＬ（配列番号１５）、ＳＴＬＮＧＧＬＦＹ（配列番号１６）、ＥＴＡＣＬＳＫＡＹ（配列番号１７）、ＧＶＥＧＩＳＬＮＹ（配列番号１８））、ＶＭＥＷＲＤＶＰＹ（配列番号１９）、ＶＬＡＰＹＲＰＥＶ（配列番号２０）、ＹＭＷＬＧＳＲＦＬ（配列番号２１）、ＭＬＶＳＧＤＤＣＶ（配列番号２２）、ＹＡＬＮＴＬＴＮＩ（配列番号２３）、ＴＬＴＮＩＫＶＱＬ（配列番号２４）、ＣＶＹＮＭＭＧＫＲ（配列番号２５）、ＫＬＧＥＦＧＶＡＫ（配列番号２６）、ＡＫＶＫＳＮＡＡＬ（配列番号２７）、ＶＶＴＹＡＬＮＴＬ（配列番号２８）、ＩＡＫＶＫＳＮＡＡ（配列番号２９）、ＳＧＱＶＶＴＹＡＬ（配列番号３０））。
【００６７】
Ｔ細胞集団の交差反応性の測定には、当技術分野で周知でありまた実施例に記載もされている、従来のＴ細胞刺激アッセイを使用することができる。そのようなアッセイは通常、ドナーから採取された血液サンプルという生体外反応系で行われ、初代培養の血液細胞がそのようなアッセイで直接使用されるように処理する。前記方法は、Ｔ細胞応答の測定前にペプチドまたはタンパク質サンプルをＡＰＣとＴ細胞の混合物とインキュベートするか、ペプチドまたはタンパク質サンプルをＡＰＣとインキュベートし、Ｔ細胞応答の測定前にＴ細胞を添加することを広く含む。どちらのタイプのアッセイでも、複数の血液サンプルを個別に使用して、個々のペプチドまたはタンパク質サンプルについて並行してテストを行い、通常１つの時点におけるＴ細胞の応答を測定する。したがって、特定のＴ細胞集団が別のフラビウイルスに対して交差反応性であるかどうかは、そのＴ細胞集団を他のフラビウイルスから調製したペプチドまたはタンパク質サンプル（例えばＮＳ５タンパク質）で刺激し、応答を測定することで評価できる。ペプチドまたはタンパク質サンプルが応答を形成する場合、Ｔ細胞集団はそのフラビウイルスに対して交差反応を示す。Ｔ細胞応答は通常、増殖しているＴ細胞へのトリチウム標識チミジン（３ＨＴｄＲ）などの放射性標識のパルスの結合（「Ｔ細胞増殖」）または活性化したＴ細胞からのＩＦＮ−ｇ、ＴＮＦおよび／またはＩＬ−などのサイトカインの放出（「サイトカイン放出」）によって測定される。ＭＨＣクラスＩマルチマー（例えば、テトラマー、ペンタマーまたはデキストラマー）を使用して、交差反応性Ｔ細胞を検出でき得ることも理解されよう（Ｗｏｏｌｄｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ、２００９、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１２６（２）：１４７−６４）。非特許文献１０に記載されている方法も使用できる。
【００６８】
一実施形態では、個体にＹＦＶワクチンを接種すると、フラビウイルスに対する個体のＢ細胞活性および／または抗体活性を含むフラビウイルスに対する獲得免疫が形成および／または増強される。
【００６９】
例えば、ワクチンはＹＦＶを認識し、他のフラビウイルスと交差反応するＢ細胞を産生および／または数を増やすことがある。ワクチンによって産生および／または増殖する可能性のある特定のタイプのＢ細胞については、以下でさらに詳しく説明する。
【００７０】
ＹＦＶワクチンが個体におけるフラビウイルスに対するＢ細胞活性および／または抗体活性のあるフラビウイルスに対する獲得免疫を増強する場合、Ｂ細胞活性および／または抗体活性は通常少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、あるいは１０倍増加する。
【００７１】
表現型に応じて異なるＢ細胞コンパートメントを識別でき、感染の急性期には、いくつかのＢ細胞のサブセットがその血液中を循環する。ナイーブＢ細胞、メモリーＢ細胞、形質細胞（ＰＣ）は、表面マーカーで染色した後、フローサイトメトリーで表現型を調べることができる。一次感染において、ナイーブＢ細胞が刺激され、抗原特異的Ｂ細胞へと成熟する。これらのＢ細胞は、二次リンパ器官に存在する記憶Ｂ細胞、または抗原特異的抗体を分泌するＰＣに分化する。ＰＣへの分化の前に、Ｂ細胞は数サイクルの増殖をし、形質芽細胞（ＰＢ）と呼ばれる中間状態に分化する。短命のＰＣは急性感染中に活動するが、長命のＰＣ（ＬＬＰＣ）は骨髄に移動し、長期の体液性免疫を担う。表面に抗原特異的抗体を保持している記憶Ｂ細胞は親和性成熟を経て、最も親和性の高い抗体を持つクローンのみが長期間生存する。記憶Ｂ細胞は、抗原想起応答に関与する細胞であり、二次感染時に速やかに活性化される。したがって、ワクチンは、ＹＦＶを認識し、他のフラビウイルスと交差反応するナイーブＢ細胞、記憶Ｂ細胞、形質細胞および／または形質芽球を産生および／または増殖させる可能性がある。Ｂ細胞は、ＮＳ５またはＮＳ３などのフラビウイルスの非構造タンパク質に結合することがある。
【００７２】
一実施形態では、ＹＦＶワクチンによって産生および／または増殖したＢ細胞は、以下のエピトープのいずれかに結合する；  ＡＬＮＴＬＴＮＩＫＶＱＬＩ  ＲＭＭＥ（配列番号３１）、ＡＬＮＴＬＴＮＩＫＶＱＬＩＲＭＭＥＧ（配列番号３２）、ＧＫＡＬＹＦＬＮＤＭＡＫＴＲＫＤＩＧ（配列番号３３）またはＷＳＩＨＡＳＧＡＷＭＴＴＥＤＭＬＤＶ（配列番号３４）。これらのエピトープは、ＴＢＥＶのＮＳ５タンパク質に存在する（非特許文献４３）。
【００７３】
別の実施形態では、ＹＦＶワクチンによって産生および／または増殖したＢ細胞は、エピトープＰＷＬＡＷＨＶＡＡＮＶＳＳＶＴＤＲＳ（配列番号３５）に結合する。このエピトープは、ＴＢＥＶのＮＳ３タンパク質内に存在する。
【００７４】
Ｂ細胞集団の交差反応性は、当技術分野で周知であり、実施例にも記載されている従来のＢ細胞刺激アッセイを使用して測定することができる。そのようなアッセイは通常、ドナーから採取された血液サンプルという生体外反応系で行われ、初代培養の血液細胞がそのようなアッセイで直接使用されるように処理する。この方法は、ペプチドまたはタンパク質サンプルをＢ細胞とインキュベートし、Ｂ細胞の応答を測定することを広く含む。したがって、特定のＢ細胞集団に別のフラビウイルスに対して交差反応性があるかどうかは、そのＢ細胞集団を他のフラビウイルスから調製されたペプチドまたはタンパク質サンプルで刺激し、応答を測定することにより評価できる。ペプチドまたはタンパク質サンプルが応答を形成する場合、Ｂ細胞集団はそのフラビウイルスと交差反応する。Ｂ細胞応答は通常、トリチウム化チミジン（３ＨＴｄＲ）などの放射性標識のパルスの増殖Ｂ細胞への結合（「Ｂ細胞増殖」）、または増殖マーカーＫｉ６７の細胞内発現の増加によって測定される。実施例に記載されているように、フローサイトメトリーを使うことができる。
【００７５】
ワクチンは、ＹＦＶに結合し、他のフラビウイルスにも結合する（つまり、交差反応する）抗体を産生することがある。通常、抗体の検出には、当技術分野で周知であり、Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ  （ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイ（Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ  Ｃ，  Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｌ，  Ｎｙｇｒｅｎ  Ｈ，  Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ  Ｏ，  Ｔａｒｋｏｗｓｋｉ  Ａ  （１９８３）．  “Ａ  ｓｏｌｉｄ−  ｐｈａｓｅ  ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ  （ＥＬＩＳＰＯＴ）  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−  ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ”．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ６５  （１−２）：  １０９−１２１）（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧの検出のため）や、プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ）アッセイ（Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ  Ｃ，  Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｌ，  Ｎｙｇｒｅｎ  Ｈ，  Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ  Ｏ，  Ｔａｒｋｏｗｓｋｉ  Ａ  （１９８３）．  “Ａ  ｓｏｌｉｄ−  ｐｈａｓｅ  ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ  （ＥＬＩＳＰＯＴ）  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−  ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ”．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ６５  （１−２）：  １０９−１２１、Ｖｅｎｅ  Ｓ，  Ｈａｇｌｕｎｄ  Ｍ，  Ｖａｐａｌａｈｔｉ  Ｏ，  Ｌｕｎｄｋｖｉｓｔ  Ａ．  （１９９８）  Ａ  ｒａｐｉｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｆｏｃｕｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ７３（１）：７１−５）を含む標準的な手法が用いられよう（実施例１参照）。また、ＥＬＩＳＡを使うこともできる（非特許文献４１）。
【００７６】
ＰＲＮＴアッセイの基本設計により、ウイルスと抗体の相互作用を試験管またはマイクロタイタープレートで発生させることができ、混合物をウイルス感受性細胞に添加することにより、ウイルス感染性に対する抗体の影響を測定できる。細胞は子孫ウイルスの拡散を防ぐ、半固形培地で覆われる。増殖的感染を開始する各ウイルスは、さまざまな方法で検出できる局所的な感染領域（プラーク）を形成する。プラークを数え、ウイルスの開始時の濃度と比較して、全体的なウイルス感染力の減少率を決定する。ＰＲＮＴアッセイでは、通常、標準量のウイルスと混合する前に、テスト対象の血清検体を段階希釈する。ウイルスの濃度は一定に保たれるので、感受性細胞とそれに重なった半固形培地に加えると、個々のプラークを識別して数えることができる。こうして、各血清検体におけるＰＲＮＴエンドポイント力価を、選択された任意のウイルス活性の低下率のもとに計算することができる。例えば、５０％減少したプラーク数（ＰＲＮＴ５０）を中和エンドポイントとして使用できる。これにより、ＰＲＮＴ５０値が得られる。さまざまな希釈度の血清検体およびコントロールの製剤で形成されたプラークを数えることができる。血清検体でカウントされたプラークの割合は、コントロールの製剤のプラークの数と比較される。コントロールウイルスの５０％を中和するために最低限必要な希釈数の逆数は、ＰＲＮＴ５０力価を表す。したがって、ＰＲＮＴ５０力価は、プラークをカウントし、最終的なプラーク希釈の逆数として力価を報告することにより計算され、コントロールプラークの逆滴定に基づいてコントロールプラーク数の５０％減少を表す（Ｃｕｔｃｈｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ  （１９６０）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｓｅｐ；  ８５：２７５−８３）。他の中和エンドポイントを使用できることは理解されるであろう（例えば、プラークカウントのそれぞれ８０％または９０％の減少に対応するＰＲＮＴｅｏまたはＰＲＮＴ９０）。
【００７７】
通常、ＹＦＶワクチンは、個体の免疫系を誘導して、ＹＦＶおよび他のフラビウイルスに特異的に結合する抗体を産生する。一次抗体の標的はＥタンパク質とＮＳ１である。好ましくは、こうして産生された抗体は、個体において、個体の他の分子（例えば非フラビウイルス由来分子）よりも高い親和性でＹＦＶおよび他のフラビウイルス（例えばそのＥタンパク質またはＮＳ１タンパク質）に特異的に、例えば、個体内の他の分子（例えば、非フラビウイルス由来分子）よりも２、または少なくとも５、または少なくとも１０、または少なくとも５０倍などの高い親和性で結合する。より好ましくは、抗体は、ＹＦＶおよび他のフラビウイルス（例えば、そのＥタンパク質またはそのＮＳ１タンパク質）に、他の分子（例えば、非フラビウイルス由来分子）よりも少なくとも１００、または少なくとも１，０００、または少なくとも１０，０００倍高い親和性で結合する。抗体を検出する方法は当技術分野で周知であり、ＥＬＩＳＡなどの任意の適切な技術を使用することができる。
【００７８】
特定の理論に束縛されることを望まないが、本発明者らは、ＹＦＶワクチンは、個体が以前にそのフラビウイルスに感染したおよび／またはそのフラビウイルスに対するワクチン接種を受けたかどうかにかかわらず、フラビウイルスによる感染に対して個体をワクチン接種すると考えている。例えば、以前に感染またはワクチン接種された個体は、交差反応性のＹＦＶ特異的Ｔ細胞について追加接種の効果を得る可能性がある。他のフラビウイルスによる以前の感染および／またはワクチン接種は、他のフラビウイルスに対する防御を強化する可能性がある。したがって、一実施形態では、個体は以前にフラビウイルスに感染している、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されている。もちろん、個体が、以前にフラビウイルスに感染またはワクチン接種されていなかった場合、産生された交差反応性ＹＦＶ特異的Ｔ細胞は、個体に対し、フラビウイルスに対する一次免疫を与えると予想される。したがって、別の実施形態では、個体は以前にフラビウイルスに感染していない、および／またはフラビウイルスに対するワクチン接種されていない。
【００７９】
個体が以前にフラビウイルスに感染しおよび／またはフラビウイルスに対するワクチン接種をされたかどうかは、抗体、例えばフラビウイルス特異的抗体を検出する任意の血清学的アッセイなどの当技術分野で周知の標準的な方法により決定できる。
【００８０】
特定の理論に束縛されることを望まないが、本発明者らは、個体が以前にＹＦＶに感染していたおよび／またはＹＦＶに対してワクチン接種されたかどうかにかかわらず、ＹＦＶワクチンはフラビウイルスによる感染に対して個体に免疫をつけると考えている。したがって、一実施形態では、個体は以前にＹＦＶに感染および／またはＹＦＶワクチンでワクチン接種されていなかったが、代替実施形態では、個体は以前にＹＦＶに感染および／またはＹＦＶワクチンを接種された。以前にＹＦＶに感染している、および／またはＹＦＶに対するワクチン接種を受けた個体は、ＹＦＶを受けた時に、フラビウイルスに対する免疫の増大という利益を得ることが期待されている。免疫システムは、ＹＦＶワクチンによって引き起こされるリコール応答を通じて追加接種の効果を得ることが期待される。
【００８１】
個体が以前にＹＦＶに感染し、および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されたかどうかは、抗体、例えばＹＦＶ特異的抗体を検出する任意の血清学的アッセイなどの当技術分野で知られている標準的な方法によって決定できる。
【００８２】
一実施形態において、個体は、以前にフラビウイルスに感染し、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されているが、以前にＹＦＶに感染および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されていない。
【００８３】
一実施形態では、個体は、以前にフラビウイルスに感染していないおよび／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されておらず、以前にＹＦＶに感染していないおよび／またはＹＦＶに対してワクチン接種されていない。
【００８４】
一実施形態では、個体は、以前にフラビウイルスに感染し、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されており、以前にＹＦＶに感染し、および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されている。
【００８５】
一実施形態では、個体は、以前にフラビウイルスに感染していないおよび／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されておらず、以前にＹＦＶに感染しておよび／またはＹＦＶに対してワクチン接種されている。
【００８６】
個体がＹＦＶナイーブ状態にある場合、すなわち、個体が以前にＹＦＶに感染していない、および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されていない場合が好ましい。特定の理論に束縛されることを望まないが、個体が真のＹＦＶ感染症にかかっていた場合、免疫系はワクチンを直接殺すことがあり、アジュバント効果は減少または失われるだろう。ただし、交差反応性のＴ細胞と抗体は追加刺激を受け、それによって防御が誘導される場合がある。したがって、防御のメカニズムは、ＹＦＶナイーブな個体と比較して異なる場合がある。
【００８７】
好ましい実施形態では、個体は、以前にフラビウイルスに感染し、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されているが、以前にＹＦＶに感染および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されていない。
【００８８】
好ましい実施形態では、個体は、以前にフラビウイルスに感染していないおよび／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されておらず、以前にＹＦＶに感染していないおよび／またはＹＦＶに対してワクチン接種されていない。
【００８９】
上記で説明したように、ワクチンの効力（ＶＥ）は、最も好ましい条件下における、ワクチン接種を受けていないグループとの比較によるワクチン接種を受けたグループの疾患の割合の減少である。本発明者らは、ＹＦＶワクチンが、ＹＦＶではないフラビウイルスに対し、個体に免疫を与えることを発見した。通常、ＹＦＶワクチンは、他のフラビウイルスに対して免疫を提供するＶＥを少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％など、少なくとも５０％持っている。ＹＦＶワクチンのＶＥが少なくとも８５％である場合が望ましい。通常、他のフラビウイルスに対する免疫を提供するＶＥは５０％以上だが、正確なＶＥは宿主の因子（例えば、宿主の遺伝子および宿主の免疫状態）、感染量、および他の多くの因子に依存することを理解されたい。ＶＥの測定では、血清学（ＥＬＩＳＡによる交差反応性ＩｇＧ抗体の測定など）やＰＲＮＴを使用した交差中和抗体の測定など、特定のフラビウイルスに対する免疫レベルを評価するための上記の手法を使用できる。
【００９０】
一実施形態では、ＹＦＶワクチンによって提供されるフラビウイルスに対する免疫（例えば、フラビウイルスによるその後の感染の予防および／または減少、またはフラビウイルスによる感染に関連する１つまたは複数の障害および／または状態の予防および／または減少）は、最長１年、または５年または１０年続く。便利なことに、これは、当技術分野で既知である、上記の方法を使用して、個体におけるフラビウイルスに対する交差反応性抗体の濃度により評価、測定されるだろう。測定は、フラビウイルスによる攻撃が無い状態における抗体濃度の測定による。例えば、ＥＬＩＳＡでＩｇＧレベルを測定し、ＰＲＮＴで中和抗体を測定できる。通常、これは特定の時点で個体からサンプルを採取し、フラビウイルスに対する交差反応性抗体のレベルを陽性および／または陰性コントロールのレベルと比較することにより行われる。陽性コントロールは、ワクチン接種を受けた、および／または以前にＹＦＶまたはＴＢＥに感染した個体であることがある。陰性コントロールは、ワクチン接種を受けていない、および／または以前にＹＦＶまたはＴＢＥに感染していない個体であることがある。免疫力の維持は、ＰＲＮＴアッセイにおいて陰性コントロールと比較した際のプラーク数の減少または陽性コントロールにおけるＩｇＧレベルに匹敵するＩｇＧ力価の維持をもたらす、中和抗体の存在を意味すると考え得る。
【００９１】
実施例でより詳細に説明するように、ＰＲＮＴアッセイにおけるプラークの数は、血清サンプル中の中和抗体の濃度の指標として使用できることが理解されよう。中和抗体の力価が高いほど、陰性コントロール（例えば、血清サンプルなしで、ウイルスのみ）と比較して、プラーク数の減少が大きくなる。  好ましくは、ＹＦＶワクチンによって提供されるフラビウイルスに対する免疫を示す中和抗体の力価は、陰性コントロールと比較してプラークの数を少なくとも８５％または９０％または９５％または９９％または１００％の削減など、少なくとも８０％減少させるものである。一実施形態では、ＹＦＶワクチンにより提供されるフラビウイルスに対する免疫を示す中和抗体の力価は、５以上のＰＲＮＴ９０値を与えるものである。
一実施形態では、ＹＦＶワクチンによってもたらされる、フラビウイルスによるその後の感染の減少、および／またはフラビウイルスによる感染に関連する１つまたは複数の障害および／または状態の減少は、１００％、または９０％、または８０％、または７０％、または６０％、または５０％の減少である。
【００９２】
個体が一度ＹＦＶワクチンでワクチン接種されると、ＹＦＶ以外のフラビウイルスのウイルス量は、感染後（他のフラビウイルス）の任意の時点において、防御免疫応答が起こらなかった場合のウイルス量よりも少ないと予想される。通常、ウイルス量は、ＹＦＶワクチンを投与されていない個体におけるウイルス量と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％、より一般的には少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％減少するであろう。ウイルス量を測定する方法は当技術分野で周知であり、上記のものが含まれる。ウイルス量は、ウイルス排除の増加および／またはウイルス増殖の減少（例えば、交差反応性抗体による遊離ウイルスの中和および／または交差反応性Ｔ細胞によるウイルス感染細胞の排除、による）により減少する可能性がある。
【００９３】
本発明の第二の態様は、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する際に使用するための、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを含むワクチン組成物を提供する。ここで、フラビウイルスとは黄熱ウイルスを言わない。したがって、ワクチン組成物は、ＹＦＶワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンの両方を含むことが理解されよう。
【００９４】
同様に、本発明は、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するための薬剤の製造における、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを含むワクチン組成物の使用を含む。ここで、フラビウイルスとは黄熱ウイルスではない。
【００９５】
同様に、本発明は、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する方法を含む。この方法は、個体に黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを含むワクチン組成物を投与するステップを含む。ここで、フラビウイルスとは黄熱ウイルスではない。
【００９６】
本発明の第三の態様は、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する際に使用するための黄熱ウイルスワクチンを含むワクチン組成物を提供する。ここで、使用とは、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを個体に投与することを含む。ここで、フラビウイルスとは黄熱ウイルスではない。本発明のこの態様において、ＹＦＶワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンは同一のワクチン組成物の一部である必要はなく、以下でさらに議論するように、別々に投与することができる。
【００９７】
同様に、本発明は、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するための薬剤の製造における黄熱ウイルスワクチンを含むワクチン組成物の使用を含む。ここで、使用とは、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを個体に投与することを含む。ここで、フラビウイルスとは黄熱ウイルスではない。
【００９８】
同様に、本発明は、フラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種する方法を含む。この方法は、個体に黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを投与するステップを含む。ここで、フラビウイルスとは黄熱ウイルスではない。
【００９９】
ＹＦＶワクチンならびに投与の経路および方法の選好には、本発明の第一の態様に関して上述したものが含まれる。ＹＦＶワクチンがＳｔａｍａｒｉｌ（登録商標）またはＹＦ−ＶＡＸ（登録商標）である場合は特に好ましい。
【０１００】
本発明の第三の態様の一実施形態では、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンは、実質的に同時に個体に投与される。
【０１０１】
本発明の第三の態様の代替実施形態では、黄熱ウイルスワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンが、個体に順次投与される。したがって、個体は、すでにＹＦＶワクチンを投与された者であってもよく、フラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンが続いて個体に投与される。あるいは、個体は、フラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンをすでに投与された者であってもよく、ＹＦＶワクチンはその後個体に投与される。
【０１０２】
したがって、本発明は、フラビウイルスに対し個体にワクチン接種に使用するためのＹＦＶワクチンを含むワクチン組成物を含み、ここで、個体はフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを投与され、フラビウイルスとはＹＦＶではない。フラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンは、個体に対し、ＹＦＶワクチンの前、同時、または後に投与することができる。
【０１０３】
したがって、本発明は、フラビウイルスに対し個体にワクチン接種するための薬剤の製造におけるＹＦＶワクチンの使用を含み、ここで、個体はフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを投与されるものであり、フラビウイルスとはＹＦＶではない。フラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンは、個体に対し、ＹＦＶワクチンの前、同時、または後に投与することができる。
【０１０４】
同様に、本発明は、フラビウイルスに対し個体にワクチン接種に使用するためのフラビウイルスに対する１つまたは複数のワクチンを含み、個体はＹＦＶワクチンを投与されるものであり、フラビウイルスとはＹＦＶではない。ＹＦＶワクチンは、個体に対し、フラビウイルスに対する１つまたは複数のワクチンの前、同時、または後に投与することができる。
【０１０５】
本発明は同様に、フラビウイルスに対し個体にワクチン接種するための薬剤の製造のためのフラビウイルスに対する１つまたは複数のワクチンの使用を含み、ここで個体はＹＦＶワクチンを投与された者であり、ここでフラビウイルスとはＹＦＶではない。ＹＦＶワクチンは個体に対し、フラビウイルスに対する１つまたは複数のワクチンの前、同時、または後に投与することができる。
【０１０６】
ＹＦＶワクチンとフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンが同時に投与されない場合、少なくとも２、３、４、５、６、または７日間隔など、少なくとも１日間隔で投与される。ウイルス量は、一般的に使用されるＹＦＶワクチンの投与後７日でピークに達するため、一実施形態では、ＹＦＶワクチンとフラビウイルスに対する１つ以上の追加のワクチンは、７日間隔、少なくとも７日間隔、または７日以内の間隔で投与される。一般に、ＹＦＶワクチンとフラビウイルスに対する１つ以上の追加のワクチンは、１４日を超えて、例えば１３、１２、１１、１０、９、８、または７日を超えた間隔での投与はされない。
【０１０７】
一実施形態では、ＹＦＶワクチンは、フラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンが投与される７−１４日前、例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４日前に投与される。別の実施形態において、フラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンは、ＹＦＶワクチンの７−１４日前、例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４日前に投与される。
【０１０８】
ＹＦＶワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを、例えば同じ投与経路で同時に投与してもよいこと、またはＹＦＶワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンを例えば別々の投与経路で連続的に投与してもよいことが理解されよう。ワクチンの適切な方法および経路または投与には、本発明の第一の態様に関連して上述したものが含まれる。通常、ワクチンは例えば腕の皮下または筋肉内に投与される。
【０１０９】
フラビウイルスに対するワクチンには、個体（例えば免疫不全や免疫抑制がされていない人）に投与したときに、個体のフラビウイルスに対する防御免疫応答を誘導できる免疫原の意味が含まれる。したがって、ワクチンは、例えば感染を完全に防ぐか、１つまたは複数疾患の、ワクチンを投与されなかった場合に起こる症状の軽減による感染の影響の軽減など、フラビウイルス自体による攻撃（例えば後続または後の）に対して防御するものであり得る。
【０１１０】
ワクチンが防御免疫応答を誘導できるかどうかは、本発明の第一の態様に関して上述した方法を含む、当技術分野の任意の適切な方法によって決定することができる。例えば、フラビウイルスの感染後の個体におけるフラビウイルスの存在を評価することにより（例えば、ウイルス量を評価することにより）決定され得る。それは、フラビウイルスによる個体の感染に続いて、その個体におけるフラビウイルス感染の１つまたは複数の臨床症状を評価することにより決定され得る。さまざまなフラビウイルス感染症の症状は上記で示されている。また、個体にフラビウイルスを感染させた後、個体で免疫応答の１つまたは複数の指標（フラビウイルスに特異的に結合する抗体、フラビウイルスに特異的なＴ細胞、およびフラビウイルスに特異的なＢ細胞）を直接検出することによって決定することもできる。ＹＦＶワクチンがＹＦＶに対する防御免疫応答を誘導できるかどうかの判定に関連する上記の方法はいずれも、フラビウイルスに対してワクチンがそのフラビウイルスに対する防御免疫応答を誘導できるかどうかを判定するために、同様に適用できることが理解されよう。
【０１１１】
一般に、フラビウイルスに対するワクチンは、不活化ワクチンまたは弱毒化生ワクチンなどの弱毒化ワクチンである。
【０１１２】
本発明の第２および第３の態様の実施形態では、フラビウイルスに対するワクチンは、フラビウイルスの１つまたは複数のタンパク質成分に対応する１つまたは複数の免疫原を含む。ワクチンは、タンパク質成分またはその一部をコードする核酸を含み得ることが理解される。適切なタンパク質成分、ならびにその部分多様体、および誘導体には、本発明の第１の態様に関連して上述したものが含まれる。ワクチンが少なくとも特定のフラビウイルスのＮＳ５タンパク質を含む場合が好ましい。
【０１１３】
フラビウイルスに対する１つまたは複数のワクチンには、フラビウイルスに対する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のワクチンの意味が含まれる。
【０１１４】
フラビウイルスに対する２つ以上のワクチンが使用される場合、フラビウイルスに対する２つ以上のフラビウイルスに対するワクチンは、同じフラビウイルスまたは異なるフラビウイルスに対する２つ以上のワクチンであり得ることが理解されよう。したがって、フラビウイルスに対する２つ以上のワクチンは、それぞれ異なるフラビウイルスに対する２つ以上のワクチン、例えば３つ以上の異なるフラビウイルス、４つ以上の異なるフラビウイルスなどを含んでもよい。
【０１１５】
さらなる実施形態において、１つまたは複数の追加のワクチンには、ジカウイルスワクチン、ダニ媒介性脳炎ウイルスワクチン、日本脳炎ウイルスワクチン、西ナイルウイルスワクチン、セントルイス脳炎ウイルスワクチン、オムスク出血熱ウイルスワクチンからなる群から選択される。好ましくは、１つまたは複数の追加のワクチンは、ＴＢＥＶ、ＪＥＶ、ジカウイルスから選択される。
【０１１６】
ワクチンに含まれる可能性があるフラビウイルス株には、以下にリストされているものが含まれる。
【０１１７】
１．ＴＢＥＶ  Ｎｅｕｄｏｒｆｌ（ＴＢＥＶ  Ｅｕ、ＦＳＭＥおよびＥｎｃｅｐｕｒベースの株）
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏＶ／ｐｒｏｔｅｉｎ／Ｐ１４３３６．４
２．ＴＢＥＶ  Ｓｏｊｉｆｉｎ  （ＴＢＥＶ  Ｆａｒ  Ｅａｓｔｅｒｎ）
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／１３０５２０
３．ＴＢＥＶ  Ｆｅ−２０５  （ＴＢＥＶ  ＥｎｃｅＶｉｒ  ｖａｃｃｉｎｅ）
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．  ｎｌｍ．ｇｏｖ／ｎｕｃｃｏｒｅ／１  １６１０９０５３
４．ＴＢＥＶ  Ｓｅｎｚｈａｎｇ  （Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，  ＣＩＢＰ）
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇＯｖ／ｎｕｃｃｏｒｅ／ＡＹ１８２００９．１  ５．  
５．ＪＥＶ  Ｎａｋａｙａｍａ  
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．  ｎｃｂｉ．  ｎｌｍ  ．  ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｎｕｃｃｏｒｅ／ＥＦ５７１８５３．１
６．ＪＥＶ  ＳＡ−１４−１４−２  （ＩＸＩＡＲＯ  ｓｔｒａｉｎ  ＋  ＣＤ．  ＪＥＶＡＸ）
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏＶ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ＡＡＡ４６２４８．１
７．ＺＩＫＶ  Ｐｏｌｙｎｅｓｉａｎ  株  ２０１３
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／６３１２５０７４３
適切なＴＢＥウイルスワクチンを以下に示す。
【０１１８】
（Ｅｎｃｅｐｕｒ  子供用）
１回分（０．２５ｍｌ）には、水酸化アルミニウム（水素化物）（０．１５〜０．２０ｍｇ  Ａｌ  ３＋）に吸着された０．７５マイクログラムの不活化ＴＢＥ（ダニ媒介性脳炎）ウイルスＫ２３株＊、トロメタモール、スクロース、塩化ナトリウム、注射用水、が含まれる。
【０１１９】
（Ｅｎｃｅｐｕｒ  大人用）
１回分（０．５  ｍｌ）には、水酸化アルミニウム（水素化物）（０．３〜０．４  ｍｇＡｌ３＋）に吸着された１．５マイクログラムの不活化ＴＢＥ（ダニ媒介脳炎）ウイルスＫ２３  株＊、トロメタモール、スクロース、塩化ナトリウム、注射用水が含まれる。
【０１２０】
（ＦＳＭＥ  子供用）
懸濁液の各用量（０．２５ｍｌ）には、ｋｙｃｋｌｉｎｇｅｍｂｒｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｒ（ＣＥＦ細胞）で増殖し、水酸化アルミニウム水和物（０．１７ｍｇ  Ａｌ  ３＋）に吸着された１．２マイクログラムの不活化ＴＢＥウイルス（ｎｅｕｄｏｒｆｌ株）ヒトアルブミン、塩化ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、スクロース、注射用水、水酸化アルミニウム水和物を含む。
【０１２１】
（ＦＳＭＥ  大人用）
懸濁液の各用量（０．５ｍｌ）には、ｋｙｃｋｌｉｎｇｅｍｂｒｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｒ（ＣＥＦ細胞）で増殖し、水酸化アルミニウム水和物（０．３５ｍｇ  Ａｌ  ３＋）に吸着された２．４マイクログラムの不活性化ＴＢＥウイルス（ｎｅｕｄｏｒｆｌ株）、ヒトアルブミン、塩化ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、スクロース、注射用水、水酸化アルミニウム水和化物が含まれる。
【０１２２】
（ＴＢＥ  Ｍｏｓｃｏｗ）
懸濁液の各用量（０．５ｍｌ）には、ｋｙｃｋｌｉｎｇｅｍｂｒｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ（ＣＥＦ細胞）で増殖し、水酸化アルミニウム水和物（０．３５ｍｇ  Ａｌ  ３＋）に吸着された０．５−０．７５マイクログラムの不活化ＴＢＥウイルス（ＴＢＥＶ−ＦＥ  Ｓｏｊｆｉｎ株）、ヒトアルブミン、塩化ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、スクロース、注射用水、水和水酸化アルミニウム水和物が含まれる。  
【０１２３】
（ＥｎｃｅＶｉｒ）
懸濁液の各用量（０．５ｍｌ）には、ｋｙｃｋｌｉｎｇｅｍｂｒｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ（ＣＥＦ細胞）で増殖し、水酸化アルミニウム水和物（０．３５ｍｇ  Ａｌ  ３＋）に吸着された２．０−２．５マイクログラムの不活化ＴＢＥウイルス（ＴＢＥＶ−Ｆｅ−２０５株）、ヒトアルブミン、塩化ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、スクロース、注射用水、水酸化アルミニウム水和物が含まれる。
【０１２４】
（ＴＢＥＶ  ＣＩＢＰ）
懸濁液の各用量（未知の量）には、ハムスター腎初代培養細胞（ＰＨＫＣ）で増殖し、水酸化アルミニウム水和物（０．３５ｍｇ  Ａｌ  ３＋）に吸着された不活化ＴＢＥウイルス（ＴＢＥＶ−Ｆｅ  Ｓｅｎｚｈａｎｇ株）、ヒトアルブミン、塩化ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、注射用水、水酸化アルミニウム水和物が含まれる。
【０１２５】
適切なＪＥウイルスワクチンを以下に示す。
【０１２６】
（ＩＸＩＡＲＯ（登録商標））
１用量（０．５  ｍｌ）のＩＸＩＡＲＯ（登録商標）には、４６０ｎｇ以下（ＥＤ５０）のパワーに対応する日本脳炎ウイルス株ＳＡ１４−１４−２（不活化）６ＡＥ、塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝生理食塩水、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二ナトリウム、注射用水が含まれる。
【０１２７】
現在開発中のワクチンも使用できることが理解されよう。例えば、西ナイルウイルスワクチンは現在開発中であり（非特許文献４４）、ジカウイルスワクチンについても同様である（非特許文献３３）。
【０１２８】
フラビウイルスに対する選択されたワクチンの適切な投与レジメンを以下に示す。
2020511532.tif 000003
【０１２９】
2020511532.tif 000004
【０１３０】
2020511532.tif 000005
【０１３１】
2020511532.tif 000006
【０１３２】
2020511532.tif 000007
【０１３３】
2020511532.tif 000008
【０１３４】
2020511532.tif 000009
【０１３５】
2020511532.tif 000010
【０１３６】
2020511532.tif 000011
【０１３７】
他のフラビウイルスに対する１つまたは複数のワクチンは、通常、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤またはアジュバントをさらに含むことが理解されよう。適切な賦形剤、希釈剤およびアジュバント、投与経路、およびワクチンの製剤化方法には、本発明の第１の態様に関して上述したものが含まれる。本発明の第２および第３の態様のさらなる実施形態を以下に説明する。
【０１３８】
他のフラビウイルスの選好には、本発明の第１の態様に関連して上述したものが含まれる。したがって、フラビウイルスは、ダニ媒介性脳炎ウイルス日本脳炎ウイルス西ナイルウイルスセントルイス脳炎ウイルスオムスク出血熱ウイルスからなる群から選択される１つまたは複数のフラビウイルスであり得る。フラビウイルスが、ジカウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルスおよび日本脳炎ウイルスからなる群から選択される１つまたは複数のフラビウイルスである場合は特に好ましい。
【０１３９】
一実施形態において、フラビウイルスは、デングウイルスではない。
【０１４０】
一実施形態において、１つまたは複数の追加のワクチンは、ダニ媒介脳炎ウイルスワクチンであり、ダニ媒介脳炎による感染に対して個体にワクチン接種するためのものである。
【０１４１】
一実施形態において、１つまたは複数の追加のワクチンは、日本脳炎ウイルスワクチンであり、日本脳炎ウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するためのものである。
【０１４２】
一実施形態において、１つまたは複数の追加のワクチンは、ジカウイルスワクチンであり、ジカウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するためのものである。
【０１４３】
一実施形態において、１つまたは複数の追加のワクチンは、ダニ媒介脳炎ウイルスおよび日本脳炎ウイルスワクチンであり、ダニ媒介脳炎ウイルスおよび日本脳炎ウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するためのものである。
【０１４４】
一実施形態において、１つまたは複数の追加のワクチンは、ダニ媒介脳炎ウイルスおよびジカウイルスワクチンであり、ダニ媒介脳炎ウイルスおよびジカウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するためのものである。
【０１４５】
一実施形態において、１つまたは複数の追加のワクチンは、日本脳炎ウイルスおよびジカウイルスワクチンであり、日本脳炎ウイルスおよびジカウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するためのものである。
【０１４６】
一実施形態において、１つまたは複数の追加のワクチンは、日本脳炎ウイルスワクチン、ジカウイルスワクチン、およびダニ媒介脳炎ウイルスワクチンであり、日本脳炎ウイルス、ジカウイルス、およびダニ媒介脳炎ウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種するためのものである。
【０１４７】
一実施形態において、個体は、以前にフラビウイルスに感染しており、および／またはフラビウイルスに対してワクチンを接種したことがない。個体が以前にフラビウイルスに感染していない場合は、そのフラビウイルスに対するワクチン接種が不要になるように生涯にわたる免疫が形成される可能性があるため、好ましい。
【０１４８】
一実施形態において、個体は、黄熱ウイルスに以前に感染しておらず、および／または黄熱ウイルスワクチンを接種されたことがない。個体にＹＦＶに対する以前の免疫記憶がない場合、ＹＦＶワクチンは一次感染となり、１つまたは複数の追加のワクチン（ＴＢＥＶまたはＪＥＶなど）とともにより良い免疫応答を形成するため、望ましい場合がある。
【０１４９】
一実施形態において、個体は以前にフラビウイルスに感染しており、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されている。
【０１５０】
一実施形態において、個体は、以前に黄熱ウイルスに感染しており、および／または黄熱ウイルスワクチンでワクチン接種されている。個体は依然として他のフラビウイルスに対する防御という恩恵を受けると予想されるが、いかなる理論にも拘束されることを望まずに、基礎的なメカニズムのバランスが異なる可能性があると考えられる。例えば、ＹＦＶに以前に感染したことがない、および／またはＹＦＶワクチンを接種したことがない個体と比較して、ＹＦＶワクチンのアジュバント効果は低く、ＹＦＶワクチンによって引き起こされる交差反応性は高くなる可能性がある。
【０１５１】
一実施形態において、個体は、以前にフラビウイルスに感染しており、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されているが、以前にＹＦＶに感染および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されていない。
【０１５２】
一実施形態において、個体は、以前にフラビウイルスに感染しておらずおよび／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されておらず、以前にＹＦＶに感染していないおよび／またはＹＦＶに対してワクチン接種されていない。
【０１５３】
一実施形態において、個体は、以前にフラビウイルスに感染しており、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されており、以前にＦＶに感染し、および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されている。
【０１５４】
一実施形態において、個体は、以前にフラビウイルスに感染しておらず、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されておらず、以前にＹＦＶに感染しており、および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されている。
【０１５５】
特に好ましい実施形態において、個体は、以前にフラビウイルスに感染しておらず、および／またはフラビウイルスに対してワクチン接種されておらず、以前にＹＦＶに感染しておらず、および／またはＹＦＶに対してワクチン接種されていない。
【０１５６】
本発明の第２および第３の態様においてフラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種することは、本発明の第１の態様においてフラビウイルスによる感染に対して個体にワクチン接種することと同じ意味を含み、したがって、本発明の第１の態様で概説された選好、制限および定義のすべてが本発明の第２および第３の態様に等しく適用されることが理解されよう。
【０１５７】
例えば、本発明の第２および第３の態様の文脈における、フラビウイルスによる感染に対する個体へのワクチン接種は、フラビウイルスによるその後の感染を予防および／または軽減し得る。  同様に、本発明の第２および第３の態様の文脈にける、フラビウイルスによる感染に対する個体へのワクチン接種は、フラビウイルスによる感染に関連する１つまたは複数の障害および／または状態を予防および／または軽減し得る。そのような予防および軽減を評価する方法は、本発明の第１の態様に関連して上記で説明されている。
【０１５８】
通常、本発明の第２および第３の態様の文脈おいて示されるフラビウイルスに対する免疫（例えば、フラビウイルスによるその後の感染の予防および／または軽減、または１つまたは複数の障害および／またはフラビウイルスによる感染に関連する状態の予防および／または軽減）は、本発明の第１の態様に関して上述したように、最大１年、または５年または１０年の期間続く。
【０１５９】
一般に、フラビウイルスによるその後の感染の減少、および／またはフラビウイルスによる感染に関連する１つまたは複数の障害および／または状態の軽減は、本発明の第２および第３の態様の文脈で与えられており、１００％、または９０％、または８０％、または７０％、または６０％、または５０％の軽減である。
【０１６０】
通常、本発明の第２および第３の態様のワクチン接種レジメンにおいては、別のフラビウイルスに対する免疫を提供する上で、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％など、少なくとも５０％のＶＥを有する。ワクチン接種レジメンが少なくとも８５％のＶＥを有する場合が好ましい。ＶＥの測定は、本発明の第１の態様に関連して上記で説明した方法のいずれかによって行うことができる。
【０１６１】
本発明の第１の態様に関して上述したように、本発明の第２または第３の態様の文脈におけるフラビウイルスによる感染に対する個体へのワクチン接種は、フラビウイルスに対する個体の免疫を形成および／または増大させ得る。免疫は、フラビウイルスに対する個体の細胞性免疫および／または獲得免疫を含んでもよく、そのような免疫の選好には、本発明の第１の態様に関して上記のものが含まれる。
【０１６２】
特定の理論に束縛されることを望まないが、発明者らは、本発明の第２および第３の態様に従って、ＹＦＶワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数のワクチンの両方を個体に投与すると、相乗的に作用してフラビウイルスに対する防御免疫を提供すると考えている。例えば、実施例でより詳細に説明するように、発明者らは、１つではなく２つのワクチンを投与すると抗体を産生する形質芽細胞が劇的に増加することを示した。これは、１つのワクチンを投与した場合よりも感染に対する抗体が多く産生されることを意味する。さらに、２つのワクチンを投与すると、複数の単回ＴＢＥ用量を投与した場合には見られない、ＴＢＥ−Ｔ細胞の発生が見られ、Ｂ細胞およびＴ細胞コンパートメントの相乗効果が示される。本発明者らは、そのような相乗効果により、それぞれのワクチンのより低いおよび／またはより少ない用量での接種が可能になり、その両方が患者集団におけるコンプライアンスを増加させると考えている。より低いおよび／またはより少ない用量は、より費用対効果が高い。本発明者らは、そのような相乗効果により、アジュバントフラビウイルスワクチンの必要性を回避できると考えている。例えば、ＹＦＶ＋ＴＢＥおよびＹＦＶ＋ＪＥワクチンを使用できる場合、ＴＢＥ／ＪＥワクチンのミョウバンアジュバントが不要となる。
【０１６３】
本発明者らは、ＹＦＶワクチンは他のフラビウイルスワクチンによってもたらされる免疫力を高めるだけでなく、他のワクチンの一般的なアジュバントとして作用すると予想できると考える。したがって、本発明の第４の態様は、黄熱ウイルスワクチンのアジュバントとしての使用を提供する。
【０１６４】
ＹＦＶワクチンの選好には、本発明の第１の態様に関して上述したものが含まれる。例えば、ＹＦＶがＳｔａｍａｒｉｌ（登録商標）などの弱毒生ワクチンである場合が好ましい。
【０１６５】
アジュバントとは、ＹＦＶワクチンが抗原に対する免疫応答を増強するという意味を含む。言い換えれば、抗原およびＹＦＶワクチンが個体に投与される場合、抗原に対する免疫応答は、ＹＦＶワクチンが一緒に投与されなかった場合の抗原に対する免疫応答よりも大きい。  例えば、免疫応答は、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍、またはさらに少なくとも２０倍、例えば５０倍または１００倍大きい場合がある。通常、免疫応答は少なくとも１−３倍大きくなり得るが、アジュバントの存在は、免疫応答が検出される場合と全くない場合との差であり得ることが理解されよう。
【０１６６】
一実施形態では、ＹＦＶワクチンは、不活化ワクチンなどのワクチンのアジュバントとして使用される。しかし、ＹＦＶワクチンは、ＤＮＡおよびタンパク質ベースのワクチンなどの他の形態のワクチンのアジュバントとして使用できることが理解されよう。
【０１６７】
不活化ワクチンは、Ａ型肝炎ワクチン、インフルエンザワクチン（ｓｈｏｔ）、狂犬病ワクチン、日本脳炎ワクチンなどのウイルスワクチンであることがある。
【０１６８】
不活化ワクチンは、不活化腸チフスワクチン、不活化コレラワクチン、ペストワクチン、ジフテリア、破傷風および百日咳ワクチンなどの細菌ワクチンであることがある。
【０１６９】
不活化ワクチンは、Ｂ型肝炎またはＨＰＶワクチンなどのサブユニットワクチンであることがある。
【０１７０】
したがって、本発明のこの態様には、抗原（例えば、不活化ワクチンなどのワクチン）に対する免疫応答を増強する方法が含まれ、この方法は、抗原を投与された個体に黄熱ウイルスワクチンを投与することを含むことが理解されよう。抗原はＹＦＶワクチンに実質的に同時に投与されてもよいが、それらは順次投与されてもよいことが理解される。好ましくは、ＹＦＶおよび抗原は同時に投与される。
【０１７１】
本発明のすべての態様に関して本明細書で使用される場合、用語「個体」は、好ましくは哺乳動物の個体である。哺乳動物は好ましくはヒトであるが、個体は、ウマ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ラット、マウス、モルモットまたは霊長類のいずれかなどの非ヒト哺乳動物であり得ることが理解されよう。
【０１７２】
いくつかのフラビウイルスは小児集団で流行しているため、一実施形態では、個体は子供（すなわち１８歳未満）であることが理解されよう。発明者らは、本発明のワクチンレジメン（すなわち、本発明の第１、第２、および第３の態様による）は、後の感染の予防に有用であり、早期（６ヶ月以降、例えば１年、２年、３年、４年、５年など）のワクチン接種が望まれる。
【０１７３】
本発明の第５の態様は、黄熱ウイルスワクチン、フラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチン、および薬学的に許容される賦形剤または希釈剤を含むワクチン組成物を提供する。
【０１７４】
ＹＦＶワクチンおよびフラビウイルスに対する１つまたは複数の追加のワクチンの選好には、本発明の第１、第２、および第３の態様に関連して上述したものが含まれる。
【０１７５】
本発明の第６の態様は、黄熱ウイルスワクチンおよび１つまたは複数のフラビウイルスに対するワクチンを含むキットを提供する。この場合も、ＹＦＶワクチンおよび１つまたは複数のフラビウイルスに対する追加のワクチンに対する選好には、本発明の第１、第２、および第３の態様に関連して上述したものが含まれる。
【０１７６】
本発明の第５の態様のワクチン組成物および本発明の第６の態様のキットは、フラビウイルスに対する少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のワクチンを含み得る。
【０１７７】
フラビウイルスに対する２つ以上のワクチンが使用される場合、フラビウイルスに対する２つ以上のフラビウイルスに対するワクチンは、同じフラビウイルスまたは異なるフラビウイルスに対する２つ以上のワクチンであり得ることが理解されよう。したがって、フラビウイルスに対する２つ以上のワクチンは、それぞれ異なるフラビウイルスに対する２つ以上のワクチン、例えば３つ以上の異なるフラビウイルス、４つ以上の異なるフラビウイルスなどを含んでもよい。
【０１７８】
一実施形態では、本発明の第５の態様のワクチン組成物または本発明の第６の態様のキットは、ＴＢＥウイルスワクチンを含む。
【０１７９】
一実施形態では、本発明の第５の態様のワクチン組成物または本発明の第６の態様のキットは、ＪＥＶワクチンを含む。
【０１８０】
一実施形態では、本発明の第５の態様のワクチン組成物または本発明の第６の態様のキットは、ジカウイルスワクチンを含む。
【０１８１】
一実施形態では、本発明の第５の態様のワクチン組成物または本発明の第６の態様のキットは、ＴＢＥウイルスワクチンとＪＥＶワクチンを含む。
【０１８２】
一実施形態では、本発明の第５の態様のワクチン組成物または本発明の第６の態様のキットは、ＴＢＥワクチンとジカウイルスワクチンを含む。
【０１８３】
一実施形態では、本発明の第５の態様のワクチン組成物または本発明の第６の態様のキットは、ジカウイルスワクチンとＪＥＶウイルスワクチンを含む。
【０１８４】
一実施形態では、本発明の第５の態様のワクチン組成物または本発明の第６の態様のキットは、ＴＢＥウイルスワクチン、ＪＥＶワクチンおよびジカウイルスワクチンを含む。
【０１８５】
本発明の第７の態様は、免疫学的血清を生成する方法を提供し、この方法は以下の２段階を含む
（ａ）本発明の第２または第３の態様のワクチン組成物を個体にワクチン接種する。
【０１８６】
（ｂ）個体から免疫血清を入手する。
【０１８７】
免疫血清の取得は、ＭｃＫｉｎｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９８７：９６（２）：２７１−８）に記載されている方法を含む、当技術分野の任意の適切な方法によって行うことができる。
【０１８８】
本発明は、本発明の第７の態様の方法により得られる免疫血清を含むことが理解されよう。
【０１８９】
そのように生成された免疫血清は、患者個体、例えば免疫不全または免疫抑制を有する個体、またはウイルス粒子の急速な中和を必要とする個体に受動免疫を提供するために使用できることが理解されよう。したがって、免疫血清は、免疫グロブリンの静脈内投与の一部として使用できる（非特許文献４６）。
【０１９０】
したがって、本発明は、本発明の第２または第３の態様のワクチン組成物によるワクチンを接種された個体から得られた免疫血清を個体に投与することを含む、個体に受動免疫を提供する方法を含むことが理解されよう。免疫血清は、本発明の第２または第３の態様のワクチン組成物によるワクチンを接種された個体の集団から得られ得ることが理解される。
【０１９１】
例えば、免疫グロブリン療法（ＩＶＩＧ）は、バッチあたり１，０００−１５，０００人のドナーの血清から調製された血液製剤である場合がある。これは、抗体欠乏症の患者に最適な治療法である。この適応のために、ＩＶＩＧは２００から４００ｍｇ／ｋｇ体重の「置換用量」で使用され、約３週間に１回投与される。対照的に、２ｇ／ｋｇ／月という最も頻繁に投与される「大量」ＩＶＩＧ（ｈｄｌＶＩＧ）は、ますます多くの免疫疾患および炎症性疾患の「免疫調節」薬として使用されている。ｈｄｌＶＩＧの最初の使用は、小児の免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）であった。受動免疫には、ＩＶＩＧとｈｄｌＶＩＧの両方の投与が含まれることが理解されよう。
【０１９２】
本発明は、添付の特許請求の範囲、説明、実施例および図面を参照して実質的に本明細書で請求される、使用のためのワクチン組成物、またはその使用またはその方法を含む。
【０１９３】
本発明は、添付の特許請求の範囲、説明、実施例および図面を参照して実質的に本明細書で請求されるワクチン組成物を含む。
【０１９４】
本発明は、添付の特許請求の範囲、説明、実施例および図面を参照して実質的に本明細書で請求されるキットを含む。
【図面の簡単な説明】
【０１９５】
【図１】フラビウイルスＲＮＡは１０個のタンパク質をコードする。
【図２】ＮｅｔＣＴＬ予測スコアサイトの概略図。
【図３】ワクチン接種後、０、７、１５または２８日目（ＴＢＥワクチン接種後は２８日目）における短命の抗体分泌形質芽細胞の出現（Ａ）ワクチン接種前およびワクチン接種後７日目および１５日目の同一のアルファドナーの形質芽細胞を示すフロープロット（Ｂ）ＹＦＶ単独（青）、ＴＢＥワクチン単独（黒）、およびＹＦＶとＴＢＥワクチンを同時に投与（赤）した後の形質芽細胞の総Ｂ細胞に対する割合。
【図４】黄熱ワクチン接種後のＴＢＥＶ中和抗体のレベル。ＴＢＥＶ中和抗体は、ＹＦＶワクチンを接種した３人のドナーの血清中におけるもの。アルファＴ０については、ＹＦＶとＴＢＥの一次ワクチンの同時接種を受けた後、ＴＢＥワクチンを２回追加接種した。サンプリングの時点は、一次免疫形成の３年後であり、中和抗体のレベルは８０％であった。ベータＹ１は以前にいくつかのＴＢＥワクチンを受けており、最後の追加接種はＹＦＶワクチンの４か月前に行われ、中和抗体のレベルは２０％（ＹＦＶワクチン接種前）から４０％（ＹＦＶワクチン接種後８０日）に増加した。ベータＹ２はＴＢＥワクチン未接種であり、ＹＦＶワクチンを接種された後、ＴＢＥＶ中和抗体は検出されなかった（データは示していない）。
【図５】ＴＢＥＶおよびＺＩＫＶに対する交差反応性ＣＤ４  Ｔ細胞は、ＹＦＶおよびＴＢＥワクチンの同時投与後に発生する（Ａ）１人のドナー（アルファＴ２）に由来した細胞について、ＺＩＫＶまたはＴＢＥＶ  ＮＳ５のオーバーラップライブラリー存在下における、同時ワクチン接種前、接種後１５日目および２２日目におけるＰＢＭＣの活性化（Ｂ）１人のドナー（アルファＴ１）に由来した細胞について、ＴＢＥＶ  ＮＳ５のオーバーラップライブラリー存在下における、ワクチン接種前および接種後１５日目におけるＰＢＭＣの活性化（Ｃ）１人のドナーに由来した細胞について、ＴＢＥＶ  ＮＳ５のオーバーラップライブラリー存在下における、ＦＭＳＥの２回目投与後２８日目および３回目の投与後２８日目におけるＰＢＭＣの活性化。
【図６】ＴＢＥＶおよびＺＩＫＶに対する交差反応性ＣＤ８  Ｔ細胞は、ＹＦＶおよびＴＢＥワクチンの投与後に発生する（Ａ）プロットは、ＹＦＶワクチンのみの接種を受けた１人のドナー（ベータＹ１）に由来した細胞について、無刺激の状態（−ｃｎｔｒ）、ＹＦＶ−ＮＳ４Ｂをカバーするライブラリー存在下（＋ｃｎｔｒ）、ＴＢＥＶ  ＮＳ５をカバーするペプチドライブラリー存在下、またはＺＩＫＶ  ＮＳ５をカバーするライブラリー存在下のいずれかにおける、活性化後のＩＦＮ−ｙおよびＴＮＦの二重陽性ＣＤ８  Ｔ細胞を示す（Ｂ）プロットは、ワクチン接種後０日目（上）、１５日目（中）、２２日目（下）のＩＦＮ−γおよびＴＮＦ二重陽性ＣＤ８  Ｔ細胞を示す。細胞は、ＹＦＶおよびＴＢＥの同時接種を受けた１人のドナー（アルファＴ２）に由来し、ＹＦＶ−ＮＳ４Ｂをカバーするライブラリー存在下（＋ｃｎｔｒ）、またはＺＩＫＶ  ＮＳ５をカバーするペプチドライブラリー存在下における、活性化後のものである（Ｃ）プロットは、ＹＦＶおよびＴＢＥの同時接種を受けている１人のドナー（アルファＴ１）に由来した細胞について、ＺＩＫＶ  ＮＳ５をカバーするペプチドライブラリー存在下における、活性化後の経時的なＩＦＮ−γおよびＴＮＦ二重陽性ＣＤ８  Ｔ細胞を示す（Ｄ）プロットは、ＴＢＥＶ  ＮＳ５をカバーするライブラリー存在下における、ＴＢＥ単一ワクチンの２回目の追加接種後２８日目および３回目の追加接種後２８日目における活性化後のＰＢＭＣを示す。
【図７】ＴＢＥＶおよびＺＩＫＶに対する交差反応性Ｔ細胞は、ＹＦＶ単独ワクチンの接種後に発生する。（Ａ）ＹＦＶ接種後１５日目より、無刺激の状態（陰性コントロール、左パネル）、または予想されたＴＢＥＶペプチドであるＥＴＡＣＬＳＫＡＹ（配列番号１）の存在下（右パネル）において、６日間増殖させた時の、２人のＹＦＶワクチン接種ドナー（ＨＬＡ−Ａ１陽性）に由来するＰＢＭＣを示す。特定の細胞が、増殖（ＣＦＳＥ低）およびＩＦＮ−γ陽性として測定される（Ｂ）ワクチン接種の１日目および１５日目のＴ細胞を、予想されるＺＩＫＶ  ＮＳ５  ＣＤ８エピトープで６時間活性化した。特定の細胞は、ＣＤ１０７ａ（脱顆粒）とＴＮＦの同時発現によって測定される。
【図８】ジカウイルス特異的Ｔ細胞は黄熱ワクチン接種後に発生する。ＹＦＶワクチン接種の前（０日目）および１５日目に、ジカウイルス特異的なＮＳ５ライブラリーによって活性化された２人の個体（ドナー１およびドナー２）に由来するＰＢＭＣを示す。Ｚｉｋａ−ＮＳ５ライブラリーに応答するＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦの産生によって同定される。図中の数字は、ＣＤ４  Ｔ細胞とＣＤ８  Ｔ細胞の割合を示す。
【図９】ＹＦＶとＴＢＥＶの同時接種と採血のスケジュール。２８日目にＴＢＥＶワクチンを追加接種し、同日に採血を行う。
【図１０】Ａｓｉｂｉ株に由来するウイルス株。
【図１１】ワクチン接種前（０日目）およびワクチン接種１５日目に、ＹＶＦワクチンを接種した健康なドナー（ドナーＢｙ４）に由来した、凍結ＰＢＭＣにおけるＣＤ８  Ｔ細胞に対するＪＥＶ  ＮＳ５による刺激（１２時間）。ＴＮＦの産生は０．０３％から０．３％に増加し、これはＪＥＶ  ＮＳ５ペプチドライブラリーに対する応答であり、１０倍の増加である。
【発明を実施するための形態】
【０１９６】
ＹＦＶワクチンは他のフラビウイルスに対する免疫応答を誘導／増強する。
【実施例１】
【０１９７】
フラビウイルスは、重大な疾病をもたらす７０以上のウイルスが属するフラビウイルス科に属している。これらのウイルスは毎年数十万人の死者を出し、また、その疾病率は著しく高い。現在３つのフラビウイルス（ＹＦＶ、ＪＥＶ、ＴＢＥＶ）に対するワクチンが市販されている（表１）。これらのワクチンのうち、弱毒生ＹＦＶワクチンは最も効果的なワクチンの１つであり、世界中で使用されている。
【０１９８】
【表１】
2020511532.tif 000012
【０１９９】
この例では、ＹＦＶワクチンと他のフラビウイルス、特にＴＢＥＶと２１ＫＶとの交差反応性を調べる。
【０２００】
（材料および方法論）
（ペプチドライブラリー）
ペプチドライブラリーを使用して、複数の線形ペプチド断片を並行して表示し、特定のエピトープを推定する。我々は、ＣＤ４とＣＤ８のＴ細胞を活性化するために、ＴＢＥＶとＺＩＫＶのＮＳ５タンパク質のオーバーラップペプチドライブラリーを、抗原全体のペプチドのオーバーラップ部分を用いて設計した。結合はフローサイトメトリーにより評価され、この方法はワクチンの開発に特に有用である。
【０２０１】
（ＣＤ８  Ｔ細胞エピトープの予測）
フローサイトメトリーを用いてウイルス特異的ＣＤ８  Ｔ細胞を同定するためには、ウイルスのＴ細胞エピトープが未知の場合、同定する必要がある。エピトープの同定には、抗原の体系的なスクリーニングが必要であるが、抗原に複数の構造または結合ドメインがある場合は困難である。特定の病原体に対するＴ細胞エピトープを同定する別の方法には、オンライン検索エンジンを利用する方法があり、これにより、ＨＬＡタイプおよび細胞表面上のＭＨＣ分子による考え得るペプチド提示を検討する。従来の全ゲノムライブラリーを用いる方法にはＨＬＡに偏りがないという利点もあるが、予測アルゴリズムはより高いスループットテクノロジーを有する。我々は、最も一般的なＨＬＡタイプ（ＨＬＡ−Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ｂ７およびＢ８）に、ＺＩＫＶ（表２）とＴＢＥＶ（表３）のＮＳ５タンパク質における予測されたエピトープに対する、ＺＩＫＶおよびＴＢＥＶ  ＣＤ８のプールを作成した。ＮｅｔＣＴＬ検索エンジンを用いて、ペプチドＭＨＣのクラスＩ結合、プロテアソームＣ末端切断、ＴＡＰ輸送効率の予測を統合するエピトープを予測した（図２）。
【０２０２】
【表２】
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【０２０３】
【表３】
2020511532.tif 000014
【０２０４】
（研究デザインと主題）
末梢血および血清は、ＹＦＶワクチンの初回接種を受けた４人のドナー（ベータＹドナー）から接種後７日目および１５日目、および初回接種でＹＦＶとＴＢＥの同時ワクチン接種を受けた２人のドナー（アルファＴドナー）から接種後７日目、１５日目および２２日目に採取された。陰性コントロールとして、ＴＢＥ（ＦＳＭＥ）のみをワクチン接種した個体から、２回目および３回目接種よりそれぞれ２８日目に、ＰＢＭＣを採取した。ＰＢＭＣはＥＤＴＡチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）により単離された。ＰＢＭＣは、後の分析のため、フレッシュな状態で染色、もしくは９０％ＦＣＳ、１０％ＤＭＳＯ溶液中で凍結保存した。
【０２０５】
（フローサイトメトリー用の抗体）
マルチカラーフローサイトメトリーにより免疫応答が評価された。モノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  （Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，  ＣＡ）社製のａｎｔｉ−ＣＤ１０７ａ  ＦＩＴＣ、ａｎｔｉ−ＣＤ４  ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ３９５、ａｎｔｉ−  ＣＤ１９  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｕｌｔｒａ  ｖｉｏｌｅｔ  ３９５、ａｎｔｉ−ＣＤ４  ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ７３７、ａｎｔｉ−ＨＬＡ−ＤＲ  ＡＰＣ、ａｎｔｉ−  Ｋｉ６７  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７００、ａｎｔｉ−ＭＩＰ−１  β  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７００、ａｎｔｉ−ＣＤ１４  ＢＤ  ｈｏｒｉｚｏｎ  Ｖ５００、ａｎｔｉ−ＣＤ１９  ＢＤ  ｈｏｒｉｚｏｎ  Ｖ５００、およびａｎｔｉ−ＴＮＦ  ＰＥ−ＣＦ５９４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ  （Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）社製のａｎｔｉ−ＣＤ４５ＲＡ  ＡＰＣ−Ｃｙ７、ａｎｔｉ−ＩＦＮ−γ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ４２１、ａｎｔｉ−ＣＤ２７  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ６５０、ａｎｔｉ−ＣＤ３８  ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｖｉｏｌｅｔ  ７８５、ａｎｔｉ−ｌｇＧ  ＰＥ、およびａｎｔｉ  ＩｇＤ  ＰＥ−Ｃｙ７、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  （Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）社製のａｎｔｉ−ＣＤ８  Ｑｄｏｔ  ６０５、およびＡｑｕａ  Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  （Ｂｒｅａ，ＣＡ）社製のａｎｔｉ−ＣＤ３  ＰＥ−Ｃｙ５およびａｎｔｉ−ＣＤ５６  ＥＣＤを使用した。
【０２０６】
（フローサイトメトリー）
細胞の表現型分析のために、ＰＢＭＣを表面ｍＡｂｓとともに暗所にて４℃で３０分間インキュベートした後、ＰＢＳで洗浄した。ＣＤ１０７ａの染色には、ＣＤ１０７ａ抗体に６時間刺激を加えた後、追加のＣＤ１０７ａ抗体を表面ｍＡｂｓと共に加え、暗所にて４℃で３０分間インキュベートした。細胞を、ｆｉｘ／  ｐｅｒｍ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて４℃で３０分間固定および透過の処理をした。その後、細胞を洗浄し、細胞内ｍＡｂを用いて染色した。サンプルはＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ機器（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で得られ、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン９．４（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，  Ａｓｈｌａｎｄ，  ＯＲ）を使用して分析された。Ｂ細胞形質芽細胞は、リンパ球（拡張ゲート）、単一細胞、生細胞およびＣＤ１４  ／  ＣＤ１２３陰性、ＣＤ３およびＣＤ４陰性、ＣＤ２０陰性およびＣＤ１９陽性、ＣＤ２７およびＣＤ３８二重陽性として同定された。Ｔ細胞は、リンパ球、シングレット、ダンプ陰性（ＣＤ１９、ＣＤ１４およびアクア死細胞マーカー）およびＣＤ３、ＣＤ４またはＣＤ８が陽性であると同定された。
（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能アッセイ）
ＰＢＭＣを、１０％ＦＣＳ、２  ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１％ペニシリンおよびストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＲＰＭＩ  １６４０培地において３７℃で一晩静置した。細胞は、ブレフェルジンＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）、モネンシン（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および精製ＣＤ２８／ＣＤ４９ｄ抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｓｅｓ）の存在下において、９６ウェル丸底プレート内で１０  ｐｇのペプチドを用いて１２または６時間刺激した。染色、フローサイトメトリー、および分析は上記のように実施された。
【０２０７】
（プラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ））
ワクチン接種後の個体から採取された血清は、スウェーデン感染症対策研究所の標準的な臨床診断プロトコルに従って調製された（非特許文献２２）。血清（陽性および陰性コントロールを含む）は、不活性化され、２％不活性化ＦＣＳ、２％１  Ｍ  ＨＥＰＥＳを含むハンクスの平衡塩溶液で２倍に希釈された。等量の血清希釈液と約５０  ＰＦＵのウイルス１００  ｍｌを混合し、そのチューブを３７°Ｃで５％ＣＯ２下において１時間インキュベートした。インキュベーション後、２００  μｌの血清−ウイルス混合物をＶｅｒｏ細胞の単層プレートに加えた。３７°Ｃで５％ＣＯ２下において１時間インキュベートした後、一部１％アガロースで、また一部は８％ＦＣＳ、２％１  Ｍ  ＨＥＰＥＳを添加した２倍の基礎イーグル培地の混合物２  ｍｌのオーバーレイをウェル内に重ねた。プレートを３７℃で５％ＣＯ  ２下において６日間インキュベートし、３．３％ニュートラルレッドを含む第２オーバーレイを２  ｍｌ／ウェルで加えた。プレートをインキュベーターに戻し、翌日にプラークを数えた。ウイルスの投与量が３０−７０  ＰＦＵの範囲内であれば、試験結果を容認できる。中和抗体価は、ウイルスコントロールと比較したときに、プラーク数を８０％減少させた血清希釈率の逆数として計算された。
【０２０８】
（結果と考察）
（フラビウイルスＮＳ５タンパク質の高い交差相同性）
ＮＳ５は、フラビウイルスにおいて多機能で保存されたタンパク質であり、ウイルスポリメラーゼを構成する。ＹＦＶ、ＴＢＥＶ  ＪＥＶ、およびＺＩＫＶのＮＳ５タンパク質の配列を比較したところ、ＹＦＶ  ＮＳ５タンパク質はＴＢＥＶ、ＪＥＶ、およびＺＩＫＶのＮＳ５タンパク質と６０％以上の相同性を持っていることがわかった。
【０２０９】
【表４】
2020511532.tif 000015
【０２１０】
ＹＦＶを単独接種した個体、またはＹＦＶとＴＢＥのワクチンを同時接種した個体から血液を分離した。
【０２１１】
（ＹＦＶとＴＢＥのワクチン同時接種により、ＹＦＶ単独接種時よりも多くの抗体産生Ｂ細胞が産生された。）
ワクチン接種後の免疫応答は、複数の方法で測定できる。感染およびワクチン接種において最も早く反応する免疫細胞の１つはＢ細胞である。胚中心は、抗原／ワクチン曝露後に一時的に発生し、Ｂ細胞を選択および分化して短命の抗体産生形質芽細胞および記憶Ｂ細胞にするための重要な部位である。形質芽細胞応答は、ワクチン接種により誘導される抗体レベルの予測尺度であることが示されており、したがってワクチンの効力の早期評価に役立つ（非特許文献２３）。形質芽細胞は、感染の急性期にフローサイトメトリーで検出できる（非特許文献２４）が、ワクチン初回接種後の検出では生成量が少ないため少し困難となる。通常、ワクチン接種後にそれらを検出するには、いくつかの追加接種が必要である。
【０２１２】
ワクチン接種後の形質芽細胞の外観を評価するために、ＹＦＶ単独投与（ベータＹドナー）またはＹＦＶとＴＢＥの同時投与（アルファＴドナー）において、投与前、７日目、１５日目に得られたフレッシュなＰＢＭＣを染色した（図３ＡおよびＢ）。形質芽細胞はワクチン接種後７日目に両方のコホートで見られるが、アルファドナーでは１５日目に総Ｂ細胞の１０−３０％に達するピークを迎える（図３ＡおよびＢ）。これらは、急性デング熱感染で測定可能なレベルである（非特許文献２４）。
【０２１３】
生成された抗体の中和効果を測定するために、ＹＦＶワクチンを接種した３人のドナーに対してＴＢＥＶ２２のプラーク減少中和試験（ＰＲＮＴ）を実施した。１人のドナーはＹＦＶワクチンとＴＢＥワクチンの両方に陰性であり（ベータＹ２）、１人のドナーは以前に複数回ＴＢＥワクチンを受け、最後の追加接種はＹＦＶワクチンの４ヶ月前であり（ベータＹ１）、もう１人のドナーはＹＦＶとＴＢＥ同時の初回接種を受けた後、完全なＴＢＥワクチンプログラム（ＴＢＥワクチンの２回の追加接種をし、最後の追加接種はサンプリング時点の４か月前）を受けていた（アルファＴ０）。ベータＹ１は、ＹＦＶワクチンの投与の前後で１００％の増加（２０−４０％の中和）を示した（図４）。さらに、Ａｌｐｈａ  Ｔ０ではＴＢＥＶに対する中和抗体の最高レベルが測定された（８０％の中和）。合わせて、これは、（１）ＹＦＶワクチンは（このアッセイにより測定された）ＴＢＥＶに対する交差中和抗体を産生させないこと、（２）ＹＦＶワクチンは既存のＴＢＥＶ  Ｎａｂのはたらきを促進させること、（３）初回のＹＦＶワクチンとＴＢＥワクチンを同時接種すると、ＴＢＥＶ  Ｎａｂが高レベルに産生されること、を示唆する。
【０２１４】
（ＹＦＶワクチンは、ＴＢＥＶおよびＺＩＫＶに対する防御交差反応性ＣＤ４  Ｔ細胞を産生し、抗原に応答する）
抗原に応答するＣＤ４  Ｔ細胞は、さまざまなサイトカインの産生と放出を介して免疫応答を活性化および調節する上で重要な機能を持ち、また、感染やワクチンによりプライミングされた、ウイルスに対する防御免疫に重要な役割を果たす。ＣＤ４  Ｔ細胞は、ＣＤ８  Ｔ細胞と二次リンパ組織のＤＣ間における伝達を促進し（非特許文献２５、２６）、リンパ系細胞を流入領域リンパ節２７に補充し、生来または抗原特異的エフェクターをウイルス複製部位へ誘導する（非特許文献２８、２９）。ＣＤ４  Ｔ細胞は、そのサイトカインプロファイルに応じて異なるサブセットに分かれることができる。簡単に言えば、Ｔｈ１サブセットはＩＦＮ−γ、ＴＮＦおよびＩＬ−２の産生を介して細胞性免疫応答を活性化し、Ｔｈ２サブセットは主にＢ細胞活性化をサポートするサイトカインを産生する（３０）。
【０２１５】
ＹＦＶおよびＴＢＥＶ特異的、およびＺＩＫＶ交差反応性ＣＤ４  Ｔ細胞がワクチン接種後に生じるかどうかを調べるために、ＹＦＶおよびＴＢＥをワクチン接種されたドナーから得られた０日目および１５日目（図５）のＰＢＭＣを、ＴＢＥＶまたはＺＩＫＶ  ＮＳ５をカバーするライブラリーと共に培養した。アルファＴ２ドナーでは、ＴＢＥＶとＺＩＫＶ  ＮＳ５の両方のライブラリーに対する特異的な細胞を検出できた。二重にワクチン接種されたアルファＴ１ドナーにおいても、１５日目にＺＩＫＶ特異的な細胞が出現した（図５Ｂ）。ただし、ＴＢＥワクチンの単独接種では、３回接種のうち２回目以降において、ＣＤ４特異的Ｔ細胞を誘導しないようだ（図５Ｃ）。
（ＹＦＶワクチンは、ＴＢＥＶとの同時ワクチン接種後に、ＴＢＥＶ特異的Ｔ細胞の産生を促進し、ＺＩＫＶに対する交差反応性Ｔ細胞を生成する）
ＣＤ８  Ｔ細胞には、ウイルス感染を制御するためのさまざまな機能がある。ここでは、ワクチン接種前（０日目）および後１５日目、２２日目における、ＴＢＥ／ＺＩＫＶ  ＮＳ５ライブラリー（図６）または予測ＺＩＫＶ／ＴＢＥＶ  ＣＤ８  Ｔ細胞プール（図６）による活性化後のサイトカイン発現（ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ）および脱顆粒（ＣＤ１０７ａ）を評価した。ベータＹ１ドナーに対するＹＦＶ単独接種では、１５日目にＴＢＥＶ  ＮＳ５とＺＩＫＶ  ＮＳ５の両方に対する少量の交差反応性ＣＤ８  Ｔ細胞が生成された（図６Ａ）。ＺＩＫＶ特異的ＣＤ８  Ｔ細胞は以前には存在しなかったが、ＹＦＶおよびＴＢＥＶワクチンとの同時接種後１５日目で検出可能であった（図６ＢおよびＣ）。これらの細胞は、２回目および３回目のＴＢＥワクチンの投与後は全くに存在せず（図６Ｄ）、ＴＢＥＶワクチンのみでは特異的のＣＤ８  Ｔ細胞を生成できないことが示唆された。合わせてこれは、ＹＦＶワクチンと同時に投与された場合において、ＴＢＥワクチンの１回の投与後にＴＢＥＶ  ＣＤ８  Ｔ細胞が生成されることを示す。
【０２１６】
単一ＴＢＥＶペプチド配列に対するＣＤ８  Ｔ細胞応答の存在を評価するために（表３）、直近にＹＦＶのワクチンを接種した２人のＨＬＡ−Ａ１陽性ドナーから得られたＰＢＭＣを、ＣＦＳＥ標識し、対応する合成ペプチドと共に６日間培養した。６日目の終わりまでに、これらの培養物をペプチド存在下において１２時間再刺激し、ＩＦＮ−γの細胞内染色によって応答を検出した（図７Ａ）。ペプチド処理下における増殖やＩＦＮ−γ産生を示すＣＦＳＥの希釈度合により、応答中の細胞は二重陽性であると同定された。ＨＬＡ−Ａ１陽性ドナーで提示されると予測された１つのペプチドについて、両方のドナーにおける最大１．９％のＩＦＮ−γ陽性細胞において、応答が誘導された。次に、以前にＹＦＶワクチン接種された１人のドナーについて、ワクチン接種前とワクチン接種後１５日目に予測ＣＤ８  ＺＩＫＶプール（表２）でＴ細胞を活性化した。ＣＤ１０７ａおよびＴＮＦを産生するＺＩＫＶ特異的Ｔ細胞は、ＹＦＶ投与後１５日目に発生する。
【０２１７】
（結論）
これらのデータにより、ＹＦＶ投与およびＹＦＶとＴＢＥワクチンとの一緒に同時投与により、抗体産生形質芽細胞は発生し、投与後１５日目にピークに達することが示される。形質芽細胞のレベルは、ＹＦＶ単独投与を受けた個体と比較して、同時ワクチン接種を受けた個体で高かった（図３）。これは、ＴＢＥＶとＹＦＶの同時ワクチン接種を受けたときに相乗的なアジュバント効果が発生することを示している可能性がある。
【０２１８】
ＹＦＶ単独接種では、ＺＩＫＶ、ＪＥＶ、ＴＢＥＶに対して小さいが検出可能な防御交差反応性ＣＤ８  Ｔ細胞が産生される（図６および７）。しかし、ＹＦＶとＴＢＥの同時ワクチン接種を受けた個体では、ＴＢＥワクチンのみを受けた個体と比較して、ＴＢＥＶ  ＮＳ５ペプチドに対するより良いＣＤ４  Ｔ細胞応答が検出された（図５）。ＹＦＶとＴＢＥの同時ワクチン接種を受けた個体は、ＺＩＫＶ  ＮＳ５ライブラリーに対して強いＣＤ８  Ｔ細胞応答を示し（図５）、フラビウイルスワクチンの異種間の防御効果を示している。
【０２１９】
（討論）
私たちは数年にわたり、ＮＫ細胞とＴ細胞による応答は時間とともにどのように展開するか、ということに焦点を当てて、ＹＦＶを接種された健康なボランティアのコホートを確立し、研究してきた。ワクチンの開発には何年もかかり、このことは新興病原体を考えるに国際保健に対して害であり得る。フラビウイルスワクチンの作用機序や、それらが誘発する応答についてよりよく理解していれば、ＺＩＫＶのような新興ウイルスに対するワクチンをより良く設計でき、および／またはＴＢＥＶまたはＪＥＶワクチンまたは予防接種スケジュールを改善することができる。ＺＩＫＶの市販ワクチンはまだ無いが、他のフラビウイルスワクチン接種から得られる免疫の交差反応性は、感染から高リスク地域の人々を保護するのに役立つ可能性がある。さらに、将来のＺＩＫＶワクチンが完全に効果的でないことが判明した場合、ＹＦＶワクチンとの同時ワクチン接種により、ワクチン接種が改善される可能性がある。
【０２２０】
ＴＢＥおよびＪＥワクチンは比較的弱く、複数回の追加接種が必要であり、さらに近年報告されたワクチンの失敗の数により、改善の必要性が非常に高まっている。同時予防接種により免疫反応がより強固になる場合、感染に対するより良い防御が得られ、ワクチンの失敗が少なくなる。結果はまた、必要な追加接種が少なくなることで、より費用効果の高いワクチン接種レジメンにつながり、さらに、ワクチン接種された個体にはより長い期間十分な防御が維持されることを示唆する。予防接種は、ＴＢＥＶまたはＪＥＶの流行地域に住んでいる人々にとってより経済的に利用可能になり、最終的に感染の数を減らし、それによって疾患に関連した死亡または生涯にわたる合併症を少なくするかもしれない。
【０２２１】
関連する病原体に対するワクチンの交差反応性を調査することは、ワクチンに対する免疫応答の発生機序、および関与するメカニズムを理解するために重要である。生じたデータは、これらのワクチン接種の背後にある免疫メカニズムに対する重要な洞察を与え、フラビウイルスの予防接種戦略の改善につながり、また同時に、未だワクチンが開発中であるジカウイルスからの防御の可能性を供する。ここで生じたデータは、フラビウイルスワクチンに対する理解に貢献し、潜在的な新規のワクチン接種法につながる。
【実施例２】
【０２２２】
（黄熱ワクチンにより生成されるジカウイルス特異的Ｔ細胞応答）
２０１６年２月１日に、ＷＨＯは、報告された小頭症およびその他の神経障害のクラスターが国際的に懸念される公衆衛生上の緊急事態（ＰＨＥＩＣ）に該当する旨を宣言した。ジカウイルスの流行は、世界の重要な部分に影響を与える前例のない公衆衛生上の脅威を意味する（非特許文献３２）。現在、流行はラテンアメリカとカリブ海で進行しており、これまでに、ブラジル、コロンビア、メキシコ、ペルーなどにおいて、大規模な人口で感染の影響が見られている。いくつかのワクチンの候補が現在開発中にあるが、感染は現在、特定の治療やワクチンなしで進行している（非特許文献３３）。
【０２２３】
ジカウイルスは、フラビウイルス（フラビウイルス科）のグループに属する蚊媒介ウイルスであり、黄熱ウイルス（ＹＦＶ）などと密接に関連している。１９３９年、Ｍａｘ  ＴｈｅｉｌｅｒはＹＦＶの弱毒化に成功した。その後まもなく、ＹＦＶに対するワクチンが世界中で開発および拡散され、現在までに３億回以上のワクチンがヒトに投与されている（非特許文献３４）。実のところ、ＹＦＶワクチンは、世界で最も効果のあるワクチンの１つと考えられており、１回の投与で少なくとも１０年（またはおそらく生涯）の感染に対する免疫が得られる（非特許文献３５）。ここでは、ＹＦＶワクチンがジカウイルス抗原に対する交差反応性ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞応答を生成することを報告する。ＺｉｋａウイルスのＮＳ５タンパク質について応答が検出された。
【０２２４】
ＮＳ５タンパク質は、フラビウイルスにおいて多機能で保存されたタンパク質であり、ウイルスポリメラーゼを構成する。現在使用されている弱毒生ＹＦＶワクチンとジカウイルスとのＮＳ５タンパク質配列の比較分析により（非特許文献３６）、黄熱ワクチン由来のＮＳ５タンパク質はジカウイルスのＮＳ５と６４％の相同性があることがわかった。これにより、ＹＦＶワクチン接種により得られたＴ細胞とジカウイルス特異抗原との間に交差反応性の応答が発生する可能性があるという仮説を立てた。これをテストするために、ＹＦＶワクチンの投与前（０日目）および投与後１５日目に、２人のジカウイルスナイーブドナーから末梢血を採取した。Ｚｉｋａ−ＮＳ５オーバーラップペプチドライブラリー（ジカウイルスフランス領ポリネシア分離株、長さ１８アミノ酸、重複部分１０アミノ酸（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔのライブラリーより））で細胞を１２時間刺激した（標準的な方法による（非特許文献３７））。ジカウイルス特異的Ｔ細胞は、その後、リンパ球、シングレット、ダンプ−（ＣＤ１９、ＣＤ１４および死細胞マーカー）、ＣＤ３＋ＣＤ４＋／ＣＤ３＋ＣＤ８＋およびＩＦＮｙ＋ＴＮＦ＋細胞として同定された。Ｚｉｋａ−ＮＳ５ライブラリーに応答して、ＩＦＮ−γとＴＮＦの両方を産生するＣＤ４  Ｔ細胞は、ＹＦＶワクチン接種後１５日目で明らかに増加した。同様に、Ｚｉｋａ−ＮＳ５ライブラリーに応答して、ＩＦＮ−γとＴＮＦの両方を産生するＣＤ８  Ｔ細胞は、ＹＦＶワクチン接種後１５日目で明らかに増加した（図８を参照）。これらの結果は、ＹＦＶワクチンとジカウイルスＮＳ５の間の相同性が、ＣＤ４およびＣＤ８両方の系譜においてジカ特異的Ｔ細胞を誘導するのに十分高いことを示している。
【０２２５】
Ｂ細胞により産生される中和抗体は、ウイルス疾患からの防御において不可欠である。フラビウイルス間の交差反応性抗体は以前に報告されており、これらが防御的であるか、または発病の原因であるかどうかは現在議論されている（非特許文献３８、３９）。反対に、フラビウイルス間における交差反応性Ｔ細胞媒介性免疫はあまり研究されていない。最近になり、日本脳炎に対するワクチンは、デング熱ウイルスおよび西ナイルウイルスと交差反応するＴ細胞を産生することが実証された（非特許文献４０）。今回の発見は、ＹＦＶワクチンがジカウイルスに対する細胞性免疫応答を形成することを示している。
【実施例３】
【０２２６】
（ＹＦＶとＴＢＥＶの同時接種による応答の相乗効果）
（方法論）
ＹＦＶワクチン（０日目）とＴＢＥ（０＋２８日目）ワクチンを用いて同時接種した最初の２０人の個体から、ワクチン接種前と接種後の複数の時点における血液が採取された（図９）。ＹＦＶまたはＴＢＥのワクチン単独接種で免疫した個体をコントロール群として使用する。免疫応答は、いくつかの異なるアプローチを用いて検出される。
【０２２７】
ＹＦＶとＴＢＥＶ（非特許文献１０、３１）の両方のエピトープを以前に同定しており、これらは（ｉ）ＴＢＥおよびＹＦＶ特異的Ｔ細胞（ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、Ｃ  ＣＲ５、ＣＤ１２７、Ｔ−ｂｅｔ、Ｅｏｍｅｓ、ＣＤ４５ＲＡ、Ｋｉ６７、ＣＤ６９、パーフォリン、グランザイムＢおよびＣＤ３８のマーカーを含む研究、および（ｉｉ）脱顆粒（ＣＤ１０７ａ）、およびサイトカインとケモカイン（ＴＮＦ、ＩＦＮ−γ、ＭＩＰ−１βおよびＩＬ−２）マーカーを含むワクチンによって誘導されるＴ細胞の機能の研究などのように利用されている。
【０２２８】
ワクチン接種後の形質芽細胞出現の動態と大きさは、マルチカラーフローサイトメトリーで研究されている。ＣＤ２０、細胞内ＩｇＧ、Ｋｉ６７、ＰＤ−１、ＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ８０のマーカーを用いて、経時的な表現型評価が実施される。予備実験では、ＴＢＥＶに対する追加免疫後に形質芽細胞が容易に検出できることが示されており、このアプローチの実行可能性が示唆された（図３）。
【０２２９】
Ｅｌｉｓｐｏｔは、検出された形質芽細胞がワクチン特異的であることを機能的に検証するために使用される。そのような方法は最近、我々の研究室において確立された（Ｊａｈｎｉｍａｔｚ  ｅｉ  ａｌ、２０１３、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、３９１（１−２）：５０−９を参照）。
【０２３０】
中和抗体は、プラーク減少中和試験を使用して評価され（非特許文献２２）、ワクチン特異的な記憶Ｂ細胞および形質芽球数と相関する。
【０２３１】
すべての時点における血清についてマルチプレックスアッセイを行うことにより、炎症性サイトカインと自然および獲得サイトカインが測定される。
【実施例４】
【０２３２】
（ＹＦＶとＪＥＶの同時予防接種による応答の相乗効果）
（方法論）
ＹＦＶワクチン（０日目）とＪＥＶ（０＋２８日目）ワクチンを用いて同時接種した最初の２０人の個体から、ワクチン接種前と接種後の複数の時点における血液が採取された（実施例３、図１と同じ採取スケジュールによる）。ＹＦＶまたはＪＥのワクチン単独接種で免疫した個体をコントロール群として使用する。免疫応答は、例３と同様のアプローチで決定される。
ＹＦＶワクチンは、０日目にＪＥＶワクチンと同時に投与され、ＪＥＶワクチンは２８日目に追加接種を行う。初期の自然免疫のメカニズムの活性化は、実施例３と同様のアプローチで評価される。
【実施例５】
【０２３３】
（ＹＦＶワクチン接種とＺＩＫＶの交差反応性）
（方法論）
黄熱ウイルスの予防接種を受けた健康なボランティアのコホートを集めた。ＰＢＭＣおよび血清は、ワクチン投与前および投与後１０、１５、および９０日目に採取された。交差反応性のある可能性があるＴ細胞を測定するために、ＺＩＫＶおよびＴＢＥウイルスの保存されたＮＳ５の領域のオーバーラップペプチドライブラリーを作成した。
【０２３４】
ＺＩＫＶとＴＢＥＶのオーバーラップペプチドライブラリーは、ＹＦＶワクチン接種ドナーのＴ細胞を活性化するために使用される。
【０２３５】
ＹＦＶワクチン接種個体におけるＺＩＫＶおよびＴＢＥＶペプチドによって誘発される応答は、フローサイトメトリーによって研究される。Ｔ細胞機能の古典的なマーカー（ＩＦＮ−γ、ΜΙΡ−１β、ＩＬ−２）とともに、ＣＤ４（Ｔヘルパー）およびＣＤ８（細胞傷害性Ｔ細胞）のマーカーがみられるだろう。
【０２３６】
ＨＬＡクラスＩ四量体は、交差反応性Ｔ細胞の外観、大きさ、表現型についての研究のために、選択されたエピトープに対して生成される。
【０２３７】
（ＮＳ５配列）
（ＹＦＶ  ａｓｉｂｉ（配列番号３６））
ＶＳＲＧＴＡＫＬＲＷＦＨＥＲＧＹＶＫＬＥＧＲＶＩＤＬＧＣＧＲＧＧＷＣＹＹＡＡＡＱＫＥＶＳＧＶＫＧＦＴＬＧＲＤＧＨＥＫＰＭＮＶＱＳＬＧＷＮＩＩＴＦＫＤＫＴＤＩＨＲＬＥＰＶＫＣＤＴＬＬＣＤＩＧＥＳＳＳＳＳＶＴＥＧＥＲＴＶＲＶＬＤＴＶＥＫＷＬＡＣＧＶＤＮＦＣＶＫＶＬＡＰＹＭＰＤＶＬＥＫＬＥＬＬＱＲＲＦＧＧＴＶＩＲＮＰＬＳＲＮＳＴＨＥＭＹＹＶＳＧＡＲ
ＴＬＥＡＤＶＩＬＰＩＧＴＲＳＶＥＴＤＫＧＰＬＤＫＥＡＩＥＥＲＶＥＲＩＫＳＥＹＭＴＳＷＦＹＤＮＤＮＰＹＲＴＷＨＹＣＧＳＹＶＴＫＴＳＧＳＡＡＳＭＶＮＧＶＩＫＩＬＴＹＰＷＤＲＩＥＥＶＴＲＭＡＭＴＤＴＴＰＦＧＱＱＲＶＦＫＥＫＶＤＴＲＡＫＤＰＰＡＧＴＲＫＩＭＫＶＶＮＲＷＬＦＲＨＬＡＲＥＫＮＰＲＬＣＴＫＥＥＦＩＡＫＶＲＳＨＡＡＩＧＡＹＬＥＥＱＥＱＷＫＴＡＮＥＡＶＱＤＰＫＦＷＥＬＶＤＥＥＲＫＬＨＱＱＧＲＣＲＴＣＶＹＮＭＭＧＫＲＥＫＫＬＳＥＦＧＫＡＫＧＳＲＡＩＷＹＭＷＬＧＡＲＹＬＥＦＥＡＬＧＦＬＮＥＤＨＷＡＳＲＥＮＳＧＧＧＶＥＧＩＧＬＱＹＬＧＹＶＩＲＤＬＡＡＭＤＧＧＧＦＹＡＤＤＴＡＧＷＤＴＲＩＴＥＡＤＬＤＤＥＱＥＩＬＮＹＭＳＰＨＨＫＫＬＡＱＡＶＭＥＭＴＹＫＮＫＶＶＫＶＬＲＰＡＰＧＧＫＡＹＭＤＶＩＳＲＲＤＱＲＧＳＧＱＶＶＴＹＡＬＮＴＩＴＮＬＫＶＱＬＩＲＭＡＥＡＥＭＶＩＨＨＱＨＶＱＤＣＤＥＳＶＬＴＲＬＥＡＷＬＴＥＨＧＣＮＲＬＫＲＭＡＶＳＧＤＤＣＶＶＲＰＩＤＤＲＦＧＬＡＬＳＨＬＮＡＭＳＫＶＲＫＤＩＳＥＷＱＰＳＫＧＷＮＤＷＥＮＶＰＦＣＳＨＨＦＨＥＬＱＬＫＤＧＲＲＩＶＶＰＣＲＥＱＤＥＬＩＧＲＧＲＶＳＰＧＮＧＷＭＩＫＥＴＡＣＬＳＫＡＹＡＮＭＷＳＬＭＹＦＨＫＲＤＭＲＬＬＳＬＡＶＳＳＡＶＰＴＳＷＶＰＱＧＲＴＴＷＳＩＨＧＫＧＥＷＭＴＴＥＤＭＬＥＶＷＮＲＶＷＩＴＮＮＰＨＭＱＤＫＴＭＶＫＥＷＲＤＶＰＹＬＴＫＲＱＤＫＬＣＧＳＬＩＧＭＴＮＲＡＴＷＡＳＨＩＨＬＶＩＨＲＩＲＴＬＩＧＱＥＫＹＴＤＹＬＴＶＭＤＲＹＳＶＤＡＤＬＱ
（ＹＦＶ１７ＤＤ（ＹＦＶＡＸ）（配列番号３７））
ＶＳＲＧＴＡＫＬＲＷＦＨＥＲＧＹＶＫＬＥＧＲＶＩＤＬＧＣＧＲＧＧＷＣＹＹＡＡＡＱＫＥＶＳＧＶＫＧＦＴＬＧＲＤＧＨＥＫＰＭＮＶＱＳＬＧＷＮＩＩＴＦＫＤＫＴＤＩＨＲＬＥＰＶＫＣＤＴＬＬＣＤＩＧＥＳＳＳＳＳＩＴＥＧＥＲＴＶＲＶＬＤＴＶＥＫＷＬＡＣＧＶＤＮＦＣＶＫＶＬＡＰＹＭＰＤＶＬＥＫＬＥＬＬＱＲＲＦＧＧＴＶＩＲＮＰＬＳＲＮＳＴＨＥＭＹＹＶＳＧＡＲ
ＴＬＥＡＤＶＩＬＰＩＧＴＲＳＶＥＴＤＫＧＰＬＤＫＥＡＩＥＥＲＶＥＲＩＫＳＥＹＭＴＳＷＦＹＤＮＤＮＰＹＲＴＷＨＹＣＧＳＹＶＴＫＴＳＧＳＡＡＳＭＶＮＧＶＩＫＩＬＴＹＰＷＤＲＩＥＥＶＴＲＭＡＭＴＤＴＴＰＦＧＱＱＲＶＦＫＥＫＶＤＴＲＡＫＤＰＰＡＧＴＲＫＩＭＫＶＶＮＲＷＬＦＲＨＬＡＲＥＫＳＰＲＬＣＴＫＥＥＦＩＡＫＶＲＳＨＡＡＩＧＡＹＬＥＥＱＥＱＷＫＴＡＮＥＡＶＱＤＰＫＦＷＥＬＶＤＥＥＲＫＬＨＱＱＧＲＣＲＴＣＶＹＮＭＭＧＫＲＥＫＫＬＳＥＦＧＫＡＫＧＳＲＡＩＷＹＭＷＬＧＡＲＹＬＥＦＥＡＬＧＦＬＮＥＤＨＷＡＳＲＥＮＳＧＧＧＶＥＧＩＧＬＱＹＬＧＹＶＩＲＤＬＡＡＭＤＧＧＧＦＹＡＤＤＴＡＧＷＤＴＲＩＴＥＡＤＬＤＤＥＱＥＩＬＮＹＭＳＰＨＨＫＫＬＡＱＡＶＭＥＭＴＹＫＮＫＶＶＫＶＬＲＰＡＰＧＧＫＡＹＭＤＶＩＳＲＲＤＱＲＧＳＧＱＶＶＴＹＡＬＮＴＩＴＮＬＫＶＱＬＩＲＭＡＥＡＥＮＶＩＨＨＱＨＶＱＤＣＤＥＳＶＬＴＲＬＥＡＷＬＴＥＨＧＣＮＲＬＫＲＭＡＶＳＧＤＤＣＶＶＲＰＩＤＤＲＦＧＬＡＬＳＨＬＮＡＭＳＫＶＲＫＤＩＳＥＷＱＰＳＫＧＷＮＤＷＥＮＶＰＦＣＳＨＲＦＨＥＬＱＬＫＤＧＲＲＩＶＶＰＣＲＥＱＤＥＬＩＧＲＧＲＶＳＰＧＮＧＷＭＩＫＥＴＡＣＬＳＫＡＹＡＮＭＷＳＬＭＹＦＨＫＲＤＭＲＬＬＳＬＡＶＳＳＡＶＰＴＳＷＶＰＱＧＲＴＴＷＳＩＨＧＫＧＥＷＭＴＴＥＤＭＬＥＶＷＮＲＶＷＩＴＮＮＰＨＭＱＤＫＴＭＶＫＫＷＲＤＶＰＹＬＴＫＲＱＤＫＬＣＧＳＬＩＧＭＴＮＲＡＴＷＡＳＨＩＨＬＶＩＨＲＩＲＴＬＩＧＱＥＫＹＴＤＹＬＴＶＭＤＲＹＳＶＤＡＤＬＱ
（ＹＦＶ１７Ｄ２０４（Ｓｔａｍａｒｉｌ）（配列番号３８））
ＶＳＲＧＴＡＫＬＲＷＦＨＥＲＧＹＶＫＬＥＧＲＶＩＤＬＧＣＧＲＧＧＷＣＹＹＡＡＡＱＫＥＶＳＧＶＫＧＦＴＬＧＲＤＧＨＥＫＰＭＮＶＱＳＬＧＷＮＩＩＴＦＫＤＫＴＤＩＨＲＬＥＰＶＫＣＤＴＬＬＣＤＩＧＥＳＳＳＳＳＶＴＥＧＥＲＴＶＲＶＬＤＴＶＥＫＷＬＡＣＧＶＤＮＦＣＶＫＶＬＡＰＹＭＰＤＶＬＥＫＬＥＬＬＱＲＲＦＧＧＴＶＩＲＮＰＬＳＲＮＳＴＨＥＭＹＹＶＳＧＡＲ
ＴＬＥＡＤＶＩＬＰＩＧＴＲＳＶＥＴＤＫＧＰＬＤＫＥＡＩＥＥＲＶＥＲＩＫＳＥＹＭＴＳＷＦＹＤＮＤＮＰＹＲＴＷＨＹＣＧＳＹＶＴＫＴＳＧＳＡＡＳＭＶＮＧＶＩＫＩＬＴＹＰＷＤＲＩＥＥＶＴＲＭＡＭＴＤＴＴＰＦＧＱＱＲＶＦＫＥＫＶＤＴＲＡＫＤＰＰＡＧＴＲＫＩＭＫＶＶＮＲＷＬＦＲＨＬＡＲＥＫＮＰＲＬＣＴＫＥＥＦＩＡＫＶＲＳＨＡＡＩＧＡＹＬＥＥＱＥＱＷＫＴＡＮＥＡＶＱＤＰＫＦＷＥＬＶＤＥＥＲＫＬＨＱＱＧＲＣＲＴＣＶＹＮＭＭＧＫＲＥＫＫＬＳＥＦＧＫＡＫＧＳＲＡＩＷＹＭＷＬＧＡＲＹＬＥＦＥＡＬＧＦＬＮＥＤＨＷＡＳＲＥＮＳＧＧＧＶＥＧＩＧＬＱＹＬＧＹＶＩＲＤＬＡＡＭＤＧＧＧＦＹＡＤＤＴＡＧＷＤＴＲＩＴＥＡＤＬＤＤＥＱＥＩＬＮＹＭＳＰＨＨＫＫＬＡＱＡＶＭＥＭＴＹＫＮＫＶＶＫＶＬＲＰＡＰＧＧＫＡＹＭＤＶＩＳＲＲＤＱＲＧＳＧＱＶＶＴＹＡＬＮＴＩＴＮＬＫＶＱＬＩＲＭＡＥＡＥＭＶＩＨＨＱＨＶＱＤＣＤＥＳＶＬＴＲＬＥＡＷＬＴＥＨＧＣＮＲＬＫＲＭＡＶＳＧＤＤＣＶＶＲＰＩＤＤＲＦＧＬＡＬＳＨＬＮＡＭＳＫＶＲＫＤＩＳＥＷＱＰＳＫＧＷＮＤＷＥＮＶＰＦＣＳＨＨＦＨＥＬＱＬＫＤＧＲＲＩＶＶＰＣＲＥＱＤＥＬＩＧＲＧＲＶＳＰＧＮＧＷＭＩＫＥＴＡＣＬＳＫＡＹＡＮＭＷＳＬＭＹＦＨＫＲＤＭＲＬＬＳＬＡＶＳＳＡＶＰＴＳＷＶＰＱＧＲＴＴＷＳＩＨＧＫＧＥＷＭＴＴＥＤＭＬＥＶＷＮＲＶＷＩＴＮＮＰＨＭＱＤＫＴＭＶＫＫＷＲＤＶＰＹＬＴＫＲＱＤＫＬＣＧＳＬＩＧＭＴＮＲＡＴＷＡＳＨＩＨＬＶＩＨＲＩＲＴＬＩＧＱＥＫＹＴＤＹＬＴＶＭＤＲＹＳＶＤＡＤＬＱ
【実施例６】
【０２３８】
（ＹＦＶワクチン接種とＪＥＶの交差反応性）
（方法論）
Ｔ細胞エピトープのマッピングのために、以前にはＪＥＶ陰性であり、ＹＦＶワクチンを投与されたドナーから、新たに単離されたＰＢＭＣを、ＪＥＶ  ＮＳ５ペプチドライブラリー（１８ｍｅｒペプチド、純度７０％、ＪＥＶのＮＳ５タンパク質と重複）存在下において、ブレフェルジンＡおよびモネンシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）とともに１２時間インキュベートした。
【０２３９】
表現型分析のために、細胞を、表面ｍＡｂｓと共に、暗所、４℃で３０分間インキュベートした。
【０２４０】
ＴＮＦおよびＩＦＮ−γの細胞内染色のために、暗所、４℃で３０分間、Ｆｉｘ  Ｐｅｒｍ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて細胞を固定、透過処理した。
【０２４１】
フローサイトメトリーのｍＡｂとして、ａｎｔｉ−ＣＤ４  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ７３７、ａｎｔｉ−  ＣＤ８  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ３９５、ａｎｔｉ−ＣＤ３  ＰＥ−Ｃｙ５、ａｎｔｉ−ＴＮＦ  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、ａｎｔｉ−ＩＦＮ−γ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｖｉｏｌｅｔ  ７８５、Ｎｅａｒ  ＩＲ、ａｎｔｉ  ＣＤ１９  Ｖ５００、ａｎｔｉ  ＣＤ１４  Ｖ５００を使用した。フローサイトメトリーは  ＢＤ  ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得、分析した。
【０２４２】
（結果）
図１１は、ワクチン接種前（０日目）とワクチン接種後１５日目にＹＶＦワクチンを接種した１人のドナー（ドナーＢｙ４）における、ＣＤ８  Ｔ細胞を示す。ＴＮＦの産生は０．０３％から０．３％に増加しており、ＪＥＶ  ＮＳ５ペプチドライブラリーへの応答が１０倍増加した。
【０２４３】
（結論）
図１１は、ＪＥＶペプチドに応答してＴＮＦを産生できるＪＥＶ特異的Ｔ細胞が、ＹＦＶ単独のワクチンにより生じることを示している。
【図１】
2020511532.tif 000016
【図２】
2020511532.tif 000017
【図３】
2020511532.tif 000018
【図４】
2020511532.tif 000019
【図５】
2020511532.tif 000020
【図６】
2020511532.tif 000021
【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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