(57)【要約】１つ以上の徴候の処置におけるインターロイキン（ＩＬ）抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）およびその使用が本明細書に開示される。さらに、インターロイキン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）の１つ以上を含む医薬組成物とキットが本明細書に記載される。【選択図】図４Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離および修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドであって、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドとインターロイキン２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）との間の結合を減少させるが、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体を形成するためにインターロイキン２βγ受容体（ＩＬ−２Ｒβγ）シグナル伝達複合体との有意な結合を維持する、ポリペプチド上のある位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含み、ここで、ＩＬ−２Ｒαへの結合の減少は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドとＩＬ−２Ｒαとの間の結合と比較される、単離および修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチド。
【請求項２】
少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、単離および修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドであって、ここで、単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体に対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体に対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、第１の受容体シグナル伝達能力と第２の受容体シグナル伝達能力との間の差は、１０倍未満である、単離および修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチド。
【請求項３】
受容体シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である、請求項２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、およびＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、および１０７に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項５】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、およびＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、および７２に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項６】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、およびＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、および１０７に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項７】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、およびＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、および７２に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項８】
少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、およびＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、および６５に対応する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項９】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は：
リジンアナログであり；
芳香族側鎖を含み；
アジド基を含み；
アルキン基を含み；あるいは、
アルデヒド基またはケトン基を含む、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１０】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１１】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６−アジドエトキシ−Ｌ−リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６−プロパルギルエトキシ−Ｌ−リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ−Ｌ−リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、２−アミノ−８−オキソオクタン酸、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−アセチルフェニルアラニン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、ｐ−プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｌ−ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリルチロシン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、ホスホノチロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、２−アミノ−３−（（２−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン、または、セレノシステインを含む、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１２】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドに組み込まれる、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１３】
直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む、請求項１２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１４】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１５】
抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む、請求項１４に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１６】
水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１７】
水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む、請求項１５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１８】
ＰＥＧ分子が線形ＰＥＧである、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項１９】
ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである、請求項１７に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２０】
水溶性ポリマーは多糖類を含む、請求項１５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２１】
多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む、請求項２０に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２２】
脂質は脂肪酸を含む、請求項１５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２３】
脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む、請求項２２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２４】
脂肪酸は飽和脂肪酸である、請求項２２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２５】
タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む、請求項１５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２６】
抱合部分はＴＬＲアゴニストを含む、請求項１４に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２７】
タンパク質は、抗体またはその結合フラグメントを含む、請求項１５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２８】
抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む、請求項２７に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２９】
ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む、請求項１５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３０】
抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ−２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する、請求項１４に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３１】
リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む、請求項３０に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３２】
結合親和性の減少は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは１００％の減少である、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３３】
結合親和性の減少は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対して、約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３４】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは：
完全長のＩＬ−２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；
組み換えＩＬ−２ポリペプチド；あるいは、
組み換えヒトＩＬ−２ポリペプチドである、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３５】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、Ｎ末端欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３６】
Ｎ末端欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、
ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３７】
Ｃ末端欠失は、Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３８】
機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ−２領域１０−１３３、２０−１３３、３０−１３３、１０−１３０、２０−１３０、３０−１３０、１０−１２５、２０−１２５、３０−１２５、１−１３０、あるいは１−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている、請求項３４に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３９】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４０】
ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾ＩＬ−２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４１】
抱合部分あるいは非天然アミノ酸は、ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する、請求項１４に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４２】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる、ＩＬ−２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、前記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４３】
ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高い、請求項４２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４４】
ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い、請求項４２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４５】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、ここで、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、あるいはそれ以上高い、請求項１または２に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４６】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高く、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第２の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い、請求項４５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４７】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１倍低い、請求項４５に記載の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４８】
抱合部分に共有結合する非天然アミノ酸を含むインターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体であって、ＩＬ−２はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも８０％の配列同一性を含む、インターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体。
【請求項４９】
抱合部分に共有結合する非天然アミノ酸を含むインターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体であって、ここで、非天然アミノ酸は領域３５−１０７に位置し、および、領域３５−１０７はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の残基Ｋ３５−Ｙ１０７に対応する、インターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体。
【請求項５０】
インターロイキン２βγ受容体（ＩＬ−２Ｒβγ）結合タンパク質であって、ここで、前記結合タンパク質のインターロイキン２α受容体（ＩＬ−２Ｒα）の結合親和性は、野生型のヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）の結合親和性未満であり、および、前記結合タンパク質は、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、インターロイキン２βγ受容体（ＩＬ−２Ｒβγ）結合タンパク質。
【請求項５１】
前記結合タンパク質は、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドあるいはその機能的に活性なフラグメントであり、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、請求項５０に記載のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質。
【請求項５２】
少なくとも１つの非天然アミノ酸は領域３５−１０７に位置し、および、領域３５−１０７はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の残基Ｋ３５−Ｙ１０７に対応する、請求項５０に記載のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質。
【請求項５３】
非天然アミノ酸とＩＬ−２Ｒβγを含む修飾されたＩＬ−２ポリペプチドを含むＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体であって、ここで、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒαへの減少した結合親和性を有し、および、減少した結合親和性は、野生型のＩＬ２ポリペプチドとＩＬ−２Ｒαとの間の結合親和性と比較される、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体。
【請求項５４】
修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、非天然アミノ酸に共有結合された抱合部分をさらに含む、請求項５３に記載のＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体。
【請求項５５】
ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーターであって、前記アクチベーターは、細胞集団中のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞を選択的に拡張し、ここで、前記アクチベーターは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドを含む、アクチベーター。
【請求項５６】
前記アクチベーターが前記細胞集団に接している場合、前記アクチベーターは、２０％、１５％、１０％、５％、１％、あるいは０．１％未満、ＣＤ４＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞を拡張する、請求項５５に記載のアクチベーター。
【請求項５７】
前記アクチベーターは、前記細胞集団中のＴｒｅｇ細胞を拡張しない、請求項５５に記載のアクチベーター。
【請求項５８】
前記細胞集団はインビボの細胞集団である、請求項５５に記載のアクチベーター。
【請求項５９】
前記細胞集団はインビトロの細胞集団である、請求項５５に記載のアクチベーター。
【請求項６０】
前記細胞集団はエクスビボの細胞集団である、請求項５５に記載のアクチベーター。
【請求項６１】
請求項１−４７の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、請求項４８または４９のＩＬ−２抱合体、請求項５０−５２のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、あるいは、請求項５５−６０のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター；および、
薬学的に許容可能な賦形剤、
を含む、医薬組成物。
【請求項６２】
前記医薬組成物は全身送達のために製剤化される、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
前記医薬組成物は非経口投与のために製剤化される、請求項６１に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
被験体の増殖性疾患または疾病を処置する方法であって、
治療上有効な量の請求項１または２の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、請求項４８または４９のＩＬ−２抱合体、請求項５０のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、あるいは、請求項５５のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、または請求項６１の医薬組成物を、被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項６５】
前記増殖性疾患または疾病は癌である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
癌は固形腫瘍癌である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
固形腫瘍癌は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、大腸癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、腎癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、あるいは前立腺癌である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
癌は血液悪性腫瘍である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
血液悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキットリンパ高悪性度Ｂリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体腔性リンパ腫、あるいはリンパ腫様肉芽腫症である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
追加の治療薬を投与する工程をさらに含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項７１】
単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−２抱合体、ＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、または、医薬組成物、および追加の治療剤は同時に投与される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−２抱合体、ＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、または、医薬組成物、および追加の治療剤は順次投与される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−２抱合体、ＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、または、医薬組成物は、追加の治療剤の前に投与される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−２抱合体、ＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、または、医薬組成物は、追加の治療剤の投与後に投与される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を拡張する方法であって、前記方法は：
ＩＬ−２Ｒβγで複合体の形成を誘発するのに十分な時間にわたって、請求項１または２の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、請求項４８または４９のＩＬ−２抱合体、請求項５０のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、あるいは、請求項５５のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、または請求項６１の医薬組成物を、細胞集団に接触させる工程であって、それによって、Ｔｅｆｆおよび／またはＮＫ細胞集団の拡張を刺激する工程、を含む、方法。
【請求項７６】
請求項１または２の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、請求項４８または４９のＩＬ−２抱合体、請求項５０のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、請求項５５のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、または請求項６１の医薬組成物は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドに接触させたＣＤ３＋細胞集団中のＣＤ４＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞の拡張と比較して、ＣＤ３＋細胞集団において２０％、１５％、１０％、５％、１％、あるいは０．１％未満、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞を拡張する、          請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
請求項１または２の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、請求項４８または４９のＩＬ−２抱合体、請求項５０のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、請求項５５のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、あるいは請求項６１の医薬組成物は、細胞集団中のＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞を拡張しない、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
請求項１または２の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、請求項４８または４９のＩＬ−２抱合体、請求項５０のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、請求項５５のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、あるいは請求項６１の医薬組成物によるインキュベーション後の細胞集団中のＴｅｆｆ細胞対Ｔｒｅｇ細胞の比率は、約あるいは少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、２０：１、５０：１、あるいは１００：１である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記方法はインビボの方法である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
前記方法はインビトロの方法である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８１】
前記方法はエクスビボの方法である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８２】
被験体はヒトである、請求項６４−８１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項８３】
請求項１−４７の単離および修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、請求項４８または４９のＩＬ−２抱合体、請求項５０−５２のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、請求項５５−６０のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブおよび記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、または請求項６１−６３の医薬組成物を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１７年８月３日に出願された米国仮特許出願第６２／５４０，７８１号の利益を主張し、その全体は引用によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を引用することで本明細書に組み込まれる。２０１８年７月２７日に作成された上記ＡＳＣＩＩのコピーは、４６０８５−７１０＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔのファイル名であり、３，７０３バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
Ｔ細胞の特徴的な集団は、免疫の恒常性と耐性を維持するために免疫系を調節する。例えば、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、病的な自己反応性を予防することによって免疫系による不適切な反応を防ぎ、その一方で、細胞傷害性Ｔ細胞は感染細胞及び／又は癌細胞を標的とする。幾つかの例では、Ｔ細胞の異なる集団の調節は、疾患又は徴候の処置に関するオプションを提供する。
【発明の概要】
【０００４】
ある実施形態では、サイトカイン抱合体及び１つ以上の兆候の処置におけるその使用が本明細書に開示される。幾つかの実施形態において、インターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体と１つ以上の兆候の処置におけるその使用も本明細書に記載される。幾つかの例では、１つ以上の兆候は癌又は病原性感染症を含む。場合によっては、特定のＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及び／又はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を刺激するか拡大するために、ＩＬ−２とＩＬ−２受容体との間の相互作用を調節する方法が本明細書に記載される。さらなる場合において、本明細書に記載される１つ以上のインターロイキン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）を含む医薬組成物及びキットも本明細書に記載される。
【０００５】
ある実施形態では、インターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体が本明細書で開示され、上記インターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体は：単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチド；及び、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されたアミノ酸位置で単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドに結合する抱合部分を含み、アミノ酸残基の番号はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対応する。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置はＲ３８とＫ６４から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置はＥ６１、Ｅ６２、及びＥ６８から選択される。幾つかの実施形態において、アミノ酸位置はＥ６２である。幾つかの実施形態において、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されたアミノ酸残基はさらに、リジン、システイン、又はヒスチジンに変異する。幾つかの実施形態において、アミノ酸残基はシステインに変異する。幾つかの実施形態において、アミノ酸残基はリジンに変異する。幾つかの実施形態において、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されたアミノ酸残基はさらに、非天然アミノ酸に変異する。幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、Ｎ６−アジドエトキシ−Ｌ−リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６−プロパルギルエトキシ−Ｌ−リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ−Ｌ−リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、２−アミノ−８−オキソオクタン酸、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−アセチルフェニルアラニン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、ｐ−プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｌ−ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリルチロシン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、ホスホノチロシン、トリ−Ｏ−アセチル−��ｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、２−アミノ−３−（（２−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）サブユニットに対する減少した親和性を有する。幾つかの実施形態において、減少した親和性は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは９９％よりも大きな減少である。幾つかの実施形態において、減少した親和性は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、５００倍、あるいは１０００倍、又はそれ以上である。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は水溶性ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してＰＥＧを含む。幾つかの実施形態において、ＰＥＧは線形ＰＥＧあるいは分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立して多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してグリカンを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してポリアミンを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分はタンパク質を含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は、タンパク質を含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、Ｆｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、ＩｇＧのＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分はポリペプ���ドを含む。幾つかの実施形態において、ポリペプチドの各々は独立して、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドは、グルタルミル化によって修飾される。幾つかの実施形態において、抱合部分は、単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドに直接結合する。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーによって単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドに間接的に結合する。幾つかの実施形態では、リンカーはホモ二機能性リンカーを含む。幾つかの実施形態では、ホモ二機能性リンカーは、Ｌｏｍａｎｔの試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）ＤＳＰ、３’３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロプリオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベリン酸塩（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩（ＢＳ）、ジスクシンイミジル酒石酸塩（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジル酒石酸塩（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）、ジスクシンイミジルグルタル酸塩（ＤＳＧ）、Ｎ、Ｎ’−ジスクシンイミジル炭酸塩（ＤＳＣ）、アジプイミド酸ジメチル（ＤＭＡ）、ジメチルピメリミデートピメリミデート（ＤＭＰ）、ジメチルスベリミデート（ＤＭＳ）、ジメチル−３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４−ジ−（３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン、１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼンなどのハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ−トルイジン、３，３’−ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’−ｐ−ジアミノジフェニル、ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、あるいは、Ｎ，Ｎ’−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）を含む。幾つかの実施形態では、リンカーはヘテロ二機能性リンカーを含む。幾つかの実施形態において、ヘテロ二機能性リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＬＣ−ｓＰＤＰ）、水溶性の長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（スルホ−ＬＣ−ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル−６−［α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサン酸塩（スルホ−ＬＣ−ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレ��ミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（スルホ−ｓＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（スルホ−ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸塩（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸塩（スルホ−ｓＭＰＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢｓ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢｓ）、スクシンイミジル６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６−［６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル−４−（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６−（（（（（４−ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＣＸ）、ｐ−ニトロフェニルヨード酢酸（ＮＰＩＡ）、カルボニル反応性及びスルフヒドリル反応性の架橋剤、例えば、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−ヒドラジド−８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨ−ＡｓＡ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（スルホ−ＮＨ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−（４−アジドサリチルアミド）ヘキサン酸塩（スルホ−ＮＨ−ＬＣ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−２−（ρ−アジドサリチルアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸塩（ｓＡｓＤ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジド安息香酸塩（ＨｓＡＢ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジド安息香酸塩（スルホ−ＨｓＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−
６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（スルホ−ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ−ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）−エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＮＤ）、Ｎ−スクシンイミジル−４（４−アジドフェニル）１，３’−ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＤＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−アジドフェニル）−１，３’−ジチオプロピオン酸塩（スルホ−ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル  ４−（ρ−アジドフェニル）酪酸塩（スルホ−ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル  ２−（７−アジド−４−メチルクマリン−３−アセトアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル  ７−アジド−４−メチルクマリン−３−酢酸塩（スルホ−ｓＡＭＣＡ）、ρ−ニトロフェニルジアゾピルバート（ρＮＰＤＰ）、ρ−ニトロフェニル−２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオン酸塩（ＰＮＰ−ＤＴＰ）、１−（ρ−アジドサリチルアミド）−４−（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ−［４−（ρ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン−４−ヨードアセトアミド、ρ−アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４−（ρ−アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、あるいはρ−アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカーを随意に含む切断リンカーを含む。幾つかの実施形態において、ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、あるいはＶａｌ−Ｌｙｓを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは非切断可能なリンカーを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ｓＭＣＣ）、あるいはスルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（スルホ−ｓＭＣＣ）を随意に含む、マレイミドメチル基を含む。幾つかの実施形態において、リンカーはさらにスペーサーを含む。幾つかの実施形態において、スペーサーは、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、誘導体、又はそれらのアナログを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ−２抱合体の血清半減期を拡張することができる。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は、ＩＬ−２抱合体の血清半減期を拡張することができる。
【０００６】
ある実施形態では、インターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体が本明細書で開示され、上記インターロイキン２（ＩＬ−２）抱合体は：単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチド；及び、抱合部分を含み；ＩＬ−２抱合体は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）サブユニットに対する減少した親和性を有する。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ−２Ｒαと相互作用するアミノ酸残基に結合する。幾つかの実施形態において、抱合部分は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されたアミノ酸残基に結合し、アミノ酸残基の番号はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対応する。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は水溶性ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してＰＥＧを含む。幾つかの実施形態において、ＰＥＧは線形ＰＥＧあるいは分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立して多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してグリカンを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーの各々は独立してポリアミンを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分はタンパク質を含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は、タンパク質を含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、Ｆｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、タンパク質の各々は独立して、ＩｇＧのＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分はポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、ポリペプチドの各々は独立して、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドは、グルタルミル化によって修飾される。幾つかの実施形態において、抱合部分は、単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドに直接結合する。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーによって単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドに間接的に結合する。幾つかの実施形態では、リンカーはホモ二機能性リンカーを含む。幾つかの実施形態では、ホモ二機能性リンカーは、Ｌｏｍａｎｔの試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）ＤＳＰ、３’３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロプリオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベリン酸塩（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩（ＢＳ）、ジスクシンイミジル酒石酸塩（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジル酒石酸塩（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）、ジスクシンイミジルグルタル酸塩（ＤＳＧ）、Ｎ、Ｎ’−ジスクシンイミジル炭酸塩（ＤＳＣ）、アジプイミド酸ジメチル（ＤＭＡ）、ジメチルピメリミデートピメリミデート（ＤＭＰ）、ジメチルスベリミデート（ＤＭＳ）、ジメチル−３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４−ジ−（３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン、１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼンなどのハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ−トルイジン、３，３’−ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’−ｐ−ジアミノジフェニル、ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス（ヨードアセトアミド）、あるいは、Ｎ，Ｎ’−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）を含む。幾つかの実施形態では、リンカーはヘテロ二機能性リンカーを含む。幾つかの実施形態において、ヘテロ二機能性リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＬＣ−ｓＰＤＰ）、水溶性の長鎖Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（スルホ−ＬＣ−ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル−６−［α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサン酸塩（スルホ−ＬＣ−ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（スルホ−ｓＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢ）、Ｎ−スクシンイミジル（４���ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（スルホ−ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸塩（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸塩（スルホ−ｓＭＰＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢｓ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢｓ）、スクシンイミジル６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６−［６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸＸ）、スクシンイミジル−４−（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６−（（（（（４−ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＣＸ）、ｐ−ニトロフェニルヨード酢酸（ＮＰＩＡ）、カルボニル反応性及びスルフヒドリル反応性の架橋剤、例えば、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−ヒドラジド−８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨ−ＡｓＡ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（スルホ−ＮＨ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−（４−アジドサリチルアミド）ヘキサン酸塩（スルホ−ＮＨ−ＬＣ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−２−（ρ−アジドサリチルアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸塩（ｓＡｓＤ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル−４−アジド安息香酸塩（ＨｓＡＢ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジド安息香酸塩（スルホ−ＨｓＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（スルホ−ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ−ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）−エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＮＤ）、Ｎ−スクシンイミジル−４（４−アジドフェニル）１，３’−ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＤＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−アジドフェニル）−１，３’−ジチオプロピオン酸塩（スルホ−ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル  ４−（ρ−アジドフェニル）酪酸塩（スルホ−ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル  ２−（７−アジド−４−メチルクマリン−３−アセトアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオン酸塩（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル  ７−アジド−４−メチルクマリン−３−酢酸塩（スルホ−ｓＡＭＣＡ）、ρ−ニトロフェニルジアゾピルバート（ρＮＰＤＰ）、ρ−ニトロフェニル−２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオン酸塩（ＰＮＰ−ＤＴＰ）、１−（ρ−アジドサリチルアミド）−４−（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ−［４−（ρ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン−４−ヨードアセトアミド、ρ−アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４−（ρ−アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、あるいはρ−アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカーを随意に含む切断リンカーを含む。幾つかの実施形態において、ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、あるいはＶａｌ−Ｌｙｓを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは非切断可能なリンカーを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ｓＭＣＣ）、あるいはスルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（スルホ−ｓＭＣＣ）を随意に含む、マレイミドメチル基を含む。幾つかの実施形態において、リンカーはさらにスペーサーを含む。幾つかの実施形態において、スペーサーは、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、誘導体、又はそれらのアナログを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ−２抱合体の血清半減期を延長させることができる。幾つかの実施形態において、追加の抱合部分は、ＩＬ−２抱合体の血清半減期を延長させることができる。
【０００７】
幾つかの実施形態では、単離及び修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドが本明細書に開示され、これは、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドとインターロイキン２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）との間の結合を減少させるが、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体を形成するためにインターロイキン２βγ受容体（ＩＬ−２Ｒβγ）シグナル伝達複合体との結合を著しく損なわない、ポリペプチド上のある位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含み、ここで、ＩＬ−２Ｒαへの結合の減少は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドとＩＬ−２Ｒαとの間の結合と比較される。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、及びＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、及び６５に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は：リジンアナログであり；芳香族側鎖を含み；アジド基を含み；あるいは、アルデヒド又はケトン基を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６−アジドエトキシ−Ｌ−リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６−プロパルギルエトキシ−Ｌ−リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ−Ｌ−リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、２−アミノ−８−オキソオクタン酸、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−アセチルフェニルアラニン、��−アミノ−８−オキソノナン酸、ｐ−プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｌ−ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリルチロシン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、ホスホノチロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、２−アミノ−３−（（２−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドに組み込まれる。幾つかの実施形態において、直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は線形ＰＥＧである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態では、脂質は脂肪酸を含む。幾つかの実施形態において、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む。幾つかの実施形態では、脂肪酸は飽和脂肪酸である。幾つかの実施形態において、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質はＴＬＲアゴニストを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ−２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する。幾つかの実施形態において、リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、あるいは９９％の減少である。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは：完全長のＩＬ−２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；組み換えＩＬ−２ポリペプチド；あるいは、組み換えヒトＩＬ−２ポリペプチドである。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、Ｎ末端基欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、Ｎ末端基欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、Ｃ末端欠失は、Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ−２領域１０−１３３、２０−１３３、３０−１３３、１０−１３０、２０−１３０、３０−１３０、１０−１２５、２０−１２５、３０−１２５、１−１３０、あるいは１−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾ＩＬ−２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細��、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる。幾つかの実施形態において、抱合部分は、ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる、ＩＬ−２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドによる上記細胞集団の活性化と著しく異なるわけではなく、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの効能は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドの効能より少なくとも１倍高い。幾つかの実施形態において、上記アクチベーターが上記細胞集団に接している場合、修飾ＩＬ−２ポリペプチドは、２０％、１５％、１０％、５％、１％、あるいは０．１％未満、ＣＤ４＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞を拡張する。幾つかの実施形態において、修飾ＩＬ−２ポリペプチドは、上記細胞集団中のＴｒｅｇ細胞を拡張しない。
【０００８】
幾つかの実施形態では、単離及び修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドが本明細書に開示され、これは、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドとインターロイキン２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）との間の結合を減少させるが、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体を形成するためにインターロイキン２βγ受容体（ＩＬ−２Ｒβγ）シグナル伝達複合体との有意な結合を維持する、ポリペプチド上のある位置の少なくとも１つの非天然アミノ酸を含み、ここで、ＩＬ−２Ｒαへの結合の減少は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドとＩＬ−２Ｒαとの間の結合と比較される。幾つかの実施形態において、受容体シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、及びＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、及び６５に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は：リジンアナログであり；芳香族側鎖を含み；アジド基を含み；アルキン基を含み；あるいは、アルデヒド又はケトン基を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６−アジドエトキシ−Ｌ−リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６−プロパルギルエトキシ−Ｌ−リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ−Ｌ−リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、２−アミノ−８−オキソオクタン酸、ｐ−アセチル−Ｌ��フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−アセチルフェニルアラニン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、ｐ−プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｌ−ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリルチロシン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、ホスホノチロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、２−アミノ−３−（（２−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドに組み込まれる。幾つかの実施形態において、直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は線形ＰＥＧである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態では、脂質は脂肪酸を含む。幾つかの実施形態において、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む。幾つかの実施形態では、脂肪酸は飽和脂肪酸である。幾つかの実施形態において、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態では、抱合部分はＴＬＲアゴニストを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ−２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する。幾つかの実施形態において、リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは１００％の減少である。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対して、約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは：完全長のＩＬ−２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；組み換えＩＬ−２ポリペプチド；あるいは、組み換えヒトＩＬ−２ポリペプチドである。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、Ｎ末端基欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、Ｎ末端基欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、Ｃ末端欠失は、Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ−２領域１０−１３３、２０−１３３、３０−１３３、１０−１３０、２０−１３０、３０−１３０、１０−１２５、２０−１２５、３０−１２５、１−１３０、あるいは１−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾��Ｌ−２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる。幾つかの実施形態において、抱合部分あるいは非天然アミノ酸は、ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる、ＩＬ−２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、上記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高い。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、ここで、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、あるいはそれ以上高い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高く、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第２の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１倍低い。
【０００９】
ある実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、単離及び修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドが本明細書で開示され、単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体に対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体に対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、第１の受容体シグナル伝達能力と第２の受容体シグナル伝達能力との間の差は、１０倍未満である。幾つかの実施形態において、受容体シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、及びＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、及び６５に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は：リジンアナログであり；芳香族側鎖を含み；アジド基を含み；アルキン基を含み；あるいは、アルデヒド又はケトン基を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６−アジドエトキシ−Ｌ−リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６−プロパルギルエトキシ−Ｌ−リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ−Ｌ−リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、２−アミノ−８−オキソオクタン酸、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−アセチルフェニルアラニン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、ｐ−プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｌ−ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリルチロシン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、ホスホノチロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、２−アミノ−３−（（２−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドに組み込まれる。幾つかの実施形態において、直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は線形ＰＥＧである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態では、脂質は脂肪酸を含む。幾つかの実施形態において、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む。幾つかの実施形態では、脂肪酸���飽和脂肪酸である。幾つかの実施形態において、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態では、抱合部分はＴＬＲアゴニストを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ−２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する。幾つかの実施形態において、リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは１００％の減少である。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対して、約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは：完全長のＩＬ−２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；組み換えＩＬ−２ポリペプチド；あるいは、組み換えヒトＩＬ−２ポリペプチドである。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、Ｎ末端基欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、Ｎ末端基欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、Ｃ末端欠失は、Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ−２領域１０−１３３、２０−１３３、３０−１３３、１０−１３０、２０−１３０、３０−１３０、１０−１２５、２０−１２５、３０−１２５、１−１３０、あるいは１−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾ＩＬ−２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる。幾つかの実施形態において、抱合部分あるいは非天然アミノ酸は、ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる、ＩＬ−２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、上記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高い。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、ここで、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、あるいはそれ以上高い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高く、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第２の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１倍低い。
【００１０】
ある実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む、単離及び修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドが本明細書で開示され、単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体の活性化に対する第１のＥＣ５０値と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体の活性化に対する第２のＥＣ５０値を提供し、第１のＥＣ５０値と第２のＥＣ５０値との間の差は、１０倍未満である。幾つかの実施形態において、シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの実施形態において、受容体シグナル伝達能力の差は、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６４、６５、６８、６９、７１、７２、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４２、４３、４４、４５、６１、６２、６５、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｋ３５、Ｋ６４、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３５、６４、６９、７１、１０４、１０５、及び１０７に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６８、及びＬ７２から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置３７、３８、４１、４５、６１、６８、及び７２に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸の位置は、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｅ６２、及びＰ６５から選択され、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に記載される位置４２、４３、４４、６２、及び６５に対応する。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は：リジンアナログであり；芳香族側鎖を含み；アジド基を含み；アルキン基を含み；あるいは、アルデヒド又はケトン基を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、Ｎ６−アジドエトキシ−Ｌ−リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６−プロパルギルエトキシ−Ｌ−リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ−Ｌ−リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯリジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、２−アミノ−８−オキソオクタン酸、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−アセチルフェニルアラニン、２−アミノ−８−オキソノナン酸、ｐ−プロパギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｌ−ドパ、フッ素処理したフェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−アリルチロシン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、ホスホノチロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、２−アミノ−３−（（２−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン、又は、セレノシステインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの非天然アミノ酸は、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対によって、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドに組み込まれる。幾つかの実施形態において、直交合成酵素／ｔＲＮＡ対の直交のｔＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して抱合部分に共有結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は水溶性ポリマー、脂質、タンパク質、あるいはペプチドを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコールとプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーはＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は線形ＰＥＧである。幾つかの実施形態では、ＰＥＧ分子は分岐ＰＥＧである。幾つかの実施形態において、水溶性ポリマーは多糖類を含む。幾つかの実施形態において、多糖類はデキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、あるいはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。幾つかの実施形態では、脂質は脂肪酸を含む。幾つかの実施形態において、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０���炭素原子、あるいは、約１２から約１８の炭素原子を含む。幾つかの実施形態では、脂肪酸は飽和脂肪酸である。幾つかの実施形態において、タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、あるいはトランスサイレチンを含む。幾つかの実施形態では、抱合部分はＴＬＲアゴニストを含む。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗体あるいはその結合フラグメントは、抗体のＦｃ部分を含む。幾つかの実施形態において、ペプチドは、ＸＴＥＮペプチド、グリシンに富んだホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、あるいはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、リンカーを介して修飾されたＩＬ−２の少なくとも１つの非天然アミノ酸に間接的に結合する。幾つかの実施形態において、リンカーは、ホモ二機能性リンカー、ヘテロ二機能性リンカー、ゼロ長リンカー、切断あるいは非切断ジペプチドリンカー、マレイミド基、スペーサー、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性の約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは１００％の減少である。幾つかの実施形態において、結合親和性の減少は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２Ｒαに対して、約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８、９倍、１０倍、あるいはそれ以上である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは：完全長のＩＬ−２ポリペプチドの機能的に活性なフラグメント；組み換えＩＬ−２ポリペプチド；あるいは、組み換えヒトＩＬ−２ポリペプチドである。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、Ｎ末端基欠失、Ｃ末端欠失、あるいはこれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、Ｎ末端基欠失は、Ｎ末端から最初の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、あるいは３０の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、Ｃ末端欠失は、Ｃ末端から最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態において、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ−２領域１０−１３３、２０−１３３、３０−１３３、１０−１３０、２０−１３０、３０−１３０、１０−１２５、２０−１２５、３０−１２５、１−１３０、あるいは１−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性が減少した修飾ＩＬ−２ポリペプチドは、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張することができる。幾つかの実施形態において、抱合部分あるいは非天然アミノ酸は、ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる、ＩＬ−２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、上記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高い。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、ここで、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、あるいはそれ以上高い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高く、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第２の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１倍低い。
【００１１】
ある実施形態において、医薬組成物が本明細書に開示され、上記医薬組成物は、上記のＩＬ−２抱合体；及び、薬学的に許容可能な賦形剤を含む。幾つかの実施形態において、医薬組成物は非経口投与用に製剤化される。
【００１２】
ある実施形態において、被験体の増殖性疾患又は疾病を処置する方法が本明細書に開示され、上記方法は、治療上有効な量の上記の単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、上記のＩＬ−２抱合体、上記のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、上記のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、又は上記の医薬組成物を被験体に投与する工程を含む。幾つかの実施形態では、増殖性疾患又は疾病は、癌である。幾つかの実施形態では、癌は固形腫瘍癌である。幾つかの実施形態において、固形腫瘍癌は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、大腸癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、腎癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、あるいは前立腺癌である。幾つかの実施形態では、癌は血液悪性腫瘍である。幾つかの実施形態において、血液系悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキットリンパ高悪性度Ｂリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体腔性リンパ腫、あるいはリンパ腫様肉芽腫症である。幾つかの実施形態では、方法はさらに、追加の治療薬を投与する工程を含む。幾つかの実施形態において、単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−２抱合体、ＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、又は、医薬組成物、及び追加の治療剤は同時に投与される。幾つかの実施形態において、単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−２抱合体、ＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、又は、医薬組成物、及び追加の治療剤は順次投与される。幾つかの実施形態において、単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−２抱合体、ＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、又は、医薬組成物は、追加の治療剤の前に投与される。幾つかの実施形態において、単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、ＩＬ−２抱合体、ＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、又は、医薬組成物は、追加の治療剤���投与後に投与される。
【００１３】
ある実施形態では、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を拡張する方法が本明細書に開示され、上記方法は：ＩＬ−２Ｒβγで複合体の形成を誘発するのに十分な時間、治療上有効な上記の単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、上記のＩＬ−２抱合体、上記のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞のアクチベーター、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは上記のナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、又は上記の医薬組成物に、細胞集団を接触させる工程であって、それによって、Ｔｅｆｆ及び／又はＮＫ細胞集団の拡張を刺激する工程を含む。幾つかの実施形態において、上記の単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、上記のＩＬ−２抱合体、上記のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、又は、上記の医薬組成物は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドに接触させたＣＤ３＋細胞集団中のＣＤ４＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞の拡張と比較して、ＣＤ３＋細胞集団において、２０％、１５％、１０％、５％、あるいは１％未満、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞を拡張する。幾つかの実施形態において、上記の単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、上記のＩＬ−２抱合体、上記のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、上記のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、又は、上記の医薬組成物は、細胞集団中のＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞を拡張しない。幾つかの実施形態において、上記の単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、上記のＩＬ−２抱合体、上記のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、上記のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、又は、上記の医薬組成物を用いたインキュベーション後の細胞集団中のＴｅｆｆ細胞対Ｔｒｅｇ細胞の比率は、およそあるいは少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、２０：１、５０：１、あるいは１００：１である。幾つかの実施形態において、方法はインビボの方法である。幾つかの実施形態において、方法はインビトロの方法である。幾つかの実施形態において、方法はエクスビボの方法である。
【００１４】
ある実施形態では、ＣＤ４＋ヘルパー細胞集団、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞集団、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団、あるいはこれらの組み合わせを拡張する方法が本明細書で開示され、上記方法は：（ａ）細胞を上記ＩＬ−２抱合体に接触させる工程；及び、（ｂ）ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体を形成するために、ＩＬ−２をＩＬ−２ＲβとＩＬ−２Ｒγサブユニットと相互作用させる工程；ここで、ＩＬ−２抱合体はＩＬ−２Ｒαサブユニットに対する減少した親和性を有し、及び、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体は、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び／又は記憶細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、あるいはこれらの組み合わせの拡張を刺激する。
【００１５】
上記の単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチド、上記のＩＬ−２抱合体、上記のＩＬ−２Ｒβγ結合タンパク質、上記のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは上記のナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーター、あるいは上記のＩＬ−２抱合体を含む医薬組成物を含むキットが本明細書に開示される。幾つかの実施形態において、上記のＩＬ−２ポリペプチドをコードするポリ核酸分子を含むキットも本明細書に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
本発明の新規な特徴は、とりわけ添付の特許請求の範囲において説明される。本発明の特徴及び利点のより良い理解は、本発明の原理が用いられる例示的実施形態を説明する以下の詳細な説明と、以下の添付図面とを引用することによって得られるであろう。
【図１】典型的な非天然アミノ酸を示す。この図はＹｏｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｂｅｙｏｎｄ  ｔｈｅ  ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ２０  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ：  ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｌｅｘｉｃｏｎ，”  Ｊ．  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８５（１５）：  １１０３９−１１０４４  （２０１０）の図２を変更したものである。
【図２Ａ】典型的な非天然アミノ酸を例証する。図２Ａは典型的なリジン誘導体を例証する。
【図２Ｂ】典型的な非天然アミノ酸を例証する。図２Ｂは典型的なフェニルアラニン誘導体を例証する。
【図３Ａ】典型的な非天然アミノ酸を例証する。これらの非天然アミノ酸（ＵＡＡ）は、タンパク質（図３Ａ−ＵＡＡ番号１−４２；図３Ｂ−ＵＡＡ番号４３−８９；図３Ｃ−ＵＡＡ番号９０−１２８；図３Ｄ−ＵＡＡ番号１２９−１６７）中で遺伝学的にコードされた。図３Ａ〜図３Ｄは、Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５，  ６，  ５０−６９の表１から採用される。
【図３Ｂ】典型的な非天然アミノ酸を例証する。これらの非天然アミノ酸（ＵＡＡ）は、タンパク質（図３Ａ−ＵＡＡ番号１−４２；図３Ｂ−ＵＡＡ番号４３−８９；図３Ｃ−ＵＡＡ番号９０−１２８；図３Ｄ−ＵＡＡ番号１２９−１６７）中で遺伝学的にコードされた。図３Ａ〜図３Ｄは、Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５，  ６，  ５０−６９の表１から採用される。
【図３Ｃ】典型的な非天然アミノ酸を例証する。これらの非天然アミノ酸（ＵＡＡ）は、タンパク質（図３Ａ−ＵＡＡ番号１−４２；図３Ｂ−ＵＡＡ番号４３−８９；図３Ｃ−ＵＡＡ番号９０−１２８；図３Ｄ−ＵＡＡ番号１２９−１６７）中で遺伝学的にコードされた。図３Ａ〜図３Ｄは、Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５，  ６，  ５０−６９の表１から採用される。
【図３Ｄ】典型的な非天然アミノ酸を例証する。これらの非天然アミノ酸（ＵＡＡ）は、タンパク質（図３Ａ−ＵＡＡ番号１−４２；図３Ｂ−ＵＡＡ番号４３−８９；図３Ｃ−ＵＡＡ番号９０−１２８；図３Ｄ−ＵＡＡ番号１２９−１６７）中で遺伝学的にコードされた。図３Ａ〜図３Ｄは、Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５，  ６，  ５０−６９の表１から採用される。
【図４Ａ】Ｐ６５＿３０ｋＤ、Ｐ６５＿５ｋＤ、Ｅ６２＿３０ｋＤ、及びＥ６２＿５ｋＤ  ＰＥＧ抱合体の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を示す。図４Ａは、固定されたＩＬ−２Ｒαに結合するＩＬ−２変異体のＳＰＲ分析を示す。
【図４Ｂ】Ｐ６５＿３０ｋＤ、Ｐ６５＿５ｋＤ、Ｅ６２＿３０ｋＤ、及びＥ６２＿５ｋＤ  ＰＥＧ抱合体の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を示す。図４Ｂは、固定されたＩＬ−２Ｒβに結合するＩＬ−２変異体のＳＰＲ分析を示す。
【図５Ａ】ヒトＬＲＳ初代細胞集団におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達に関する典型的なＩＬ−２突然変異体用量反応曲線を示す。図５Ａ：ナイーブＩＬ−２；図５Ｂ：Ｅ６２＿３０ｋＤ；及び、図５Ｃ：Ｐ６５＿３０ｋＤ。
【図５Ｂ】ヒトＬＲＳ初代細胞集団におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達に関する典型的なＩＬ−２突然変異体用量反応曲線を示す。図５Ａ：ナイーブＩＬ−２；図５Ｂ：Ｅ６２＿３０ｋＤ；及び、図５Ｃ：Ｐ６５＿３０ｋＤ。
【図５Ｃ】ヒトＬＲＳ初代細胞集団におけるｐＳＴＡＴ５シグナル伝達に関する典型的なＩＬ−２突然変異体用量反応曲線を示す。図５Ａ：ナイーブＩＬ−２；図５Ｂ：Ｅ６２＿３０ｋＤ；及び、図５Ｃ：Ｐ６５＿３０ｋＤ。
【図６】Ｃ５７ＢＬ／６マウスに対するアルデスロイキン（ＩＬ−２）、Ｅ６２＿５、Ｅ６２＿３０、及びＰ６５＿３０の単回ＩＶボーラス投与後の、平均（±ＳＤ）血漿中濃度対時間のプロファイルを示す。
【図７】Ｃ５７ＢＬ／６マウスへのＰ６５＿３０あるいはアルデスロイキンの単回ＩＶ投与を用いる処置後の、末梢血におけるｐＳＴＡＴ５＋  ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合対時間の細胞（ｔｉｍｅ  ｃｅｌｌｓ）を示す。
【図８Ａ】Ｐ６５＿３０あるいはアルデスロイキン（ＩＬ−２）の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後のＰＢＭＣ集団中のＣＤ８＋  Ｔ細胞（図８ａ）、ＮＫ細胞（図８Ｂ）、及びＣＤ４＋  Ｔｒｅｇ細胞（図８ｃ）の割合を示す。血液は指定された時点に心臓穿刺を介して採取され、免疫細胞集団はフローサイトメトリーによって評価された。各データ点はそれぞれの時点の３つの複製物からの平均±ＳＥＭを表す。
【図８Ｂ】Ｐ６５＿３０あるいはアルデスロイキン（ＩＬ−２）の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後のＰＢＭＣ集団中のＣＤ８＋  Ｔ細胞（図８ａ）、ＮＫ細胞（図８Ｂ）、及びＣＤ４＋  Ｔｒｅｇ細胞（図８ｃ）の割合を示す。血液は指定された時点に心臓穿刺を介して採取され、免疫細胞集団はフローサイトメトリーによって評価された。各データ点はそれぞれの時点の３つの複製物からの平均±ＳＥＭを表す。
【図８Ｃ】Ｐ６５＿３０あるいはアルデスロイキン（ＩＬ−２）の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後のＰＢＭＣ集団中のＣＤ８＋  Ｔ細胞（図８ａ）、ＮＫ細胞（図８Ｂ）、及びＣＤ４＋  Ｔｒｅｇ細胞（図８ｃ）の割合を示す。血液は指定された時点に心臓穿刺を介して採取され、免疫細胞集団はフローサイトメトリーによって評価された。各データ点はそれぞれの時点の３つの複製物からの平均±ＳＥＭを表す。
【図９Ａ】Ｐ６５＿３０あるいはアルデスロイキン（ＩＬ−２）の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後のＣＤ３＋集団内の記憶ＣＤ８＋ＣＤ４４＋  Ｔ細胞増殖の刺激におけるＰ６５＿３０とＩＬ−２（アルデスロイキン）との間の差を示す。血液は指定された時点に心臓穿刺を介して採取され、免疫細胞集団はフローサイトメトリーによって評価された。データは独立ステューデントｔ検定を使用して分析された。＊＊＊Ｐ値＜０．００１に指定する。図９Ａは７２、９６、及び１２０時間時の記憶ＣＤ８＋ＣＤ４４＋  Ｔ細胞増殖を示す。
【図９Ｂ】Ｐ６５＿３０あるいはアルデスロイキン（ＩＬ−２）の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後のＣＤ３＋集団内の記憶ＣＤ８＋ＣＤ４４＋  Ｔ細胞増殖の刺激におけるＰ６５＿３０とＩＬ−２（アルデスロイキン）との間の差を示す。血液は指定された時点に心臓穿刺を介して採取され、免疫細胞集団はフローサイトメトリーによって評価された。データは独立ステューデントｔ検定を使用して分析された。＊＊＊Ｐ値＜０．００１に指定する。図９Ｂは１２０時間時点のこれらの細胞のフローサイトメトリー分析を示す。
【図１０Ａ】Ｐ６５＿３０の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後の同系のＢ１６Ｆ１０腫瘍を有するＣ５７Ｂｌ６マウスにおける腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の増加対時間を示す。図１０Ａは、処置の５日目のＰ６５＿３０処置された動物対未処置（ビヒクル）動物における、ＮＫ、ＣＤ８＋  Ｔ、及びＣＤ４＋  Ｔｒｅｇ細胞のパーセンテージ割合を示す。データは独立ステューデントｔ検定を使用して分析された。＊＊＊Ｐ値＜０．００１に指定する。
【図１０Ｂ】Ｐ６５＿３０の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後の同系のＢ１６Ｆ１０腫瘍を有するＣ５７Ｂｌ６マウスにおける腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の増加対時間を示す。図１０Ｂは、Ｐ６５＿３０処置された動物対対照（ビヒクル）動物における、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋  Ｔｒｅｇ細胞の比率を示す。データは独立ステューデントｔ検定を使用して分析された。＊＊＊Ｐ値＜０．００１に指定する。
【図１１Ａ】増加していくレベル（０．０１−５ｍｇ／ｋｇ）でのＰ６５＿３０あるいはアルデスロイキン（ＩＬ−２）の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後の、マウスのＩＬ−２、ＴＮＦ−α、ＩＦＮγ、ＩＬ−５、及びＩＬ−６の血漿レベルを示す。血漿中の各サイトカインの濃度はＥＬＩＳＡ（Ａｂｃａｍ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＵＫ）によって決定された。各投与群Ｎ＝３については、マウスとサンプルは、投与後４、３４、及び７２時間に採取された。図１１Ａはアルデスロイキンを投与された動物のサイトカインレベルを示し、図１１ＢはＰ６５＿３０を投与された動物のサイトカインレベルを示す。
【図１１Ｂ】増加していくレベル（０．０１−５ｍｇ／ｋｇ）でのＰ６５＿３０あるいはアルデスロイキン（ＩＬ−２）の単回ＩＶボーラス投与を用いる処置後の、マウスのＩＬ−２、ＴＮＦ−α、ＩＦＮγ、ＩＬ−５、及びＩＬ−６の血漿レベルを示す。血漿中の各サイトカインの濃度はＥＬＩＳＡ（Ａｂｃａｍ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＵＫ）によって決定された。各投与群Ｎ＝３については、マウスとサンプルは、投与後４、３４、及び７２時間に採取された。図１１Ａはアルデスロイキンを投与された動物のサイトカインレベルを示し、図１１ＢはＰ６５＿３０を投与された動物のサイトカインレベルを示す。
【図１２】オスのカニクイザルにＰ６５＿３０ｋＤの単回ボーラス投与後の白血球、リンパ球、及び好酸球数（平均±ＳＤ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
サイトカインは、細胞シグナル伝達タンパク質のファミリー、例えば、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンフォカイン、腫瘍壊死因子、及び、先天性ならびに適応性の免疫細胞ホメオスタシスにおいて複数の役割を果たす他の成長因子を含む。サイトカインは、免疫細胞、例えば、マクロファージ、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、及び、マスト細胞、内皮細胞、線維芽細胞、ならびに様々な間質細胞によって産生される。幾つかの例では、サイトカインは、体液性応答と細胞ベースの免疫応答との間の平衡を調節する。
【００１８】
インターロイキンは、Ｔリンパ球とＢリンパ球の発達と分化、単球血統の細胞、好中球、好塩基性細胞、好酸球、巨核球、及び造血細胞を調節するシグナル伝達タンパク質である。インターロイキンは、ヘルパーＣＤ４  Ｔ及びＢリンパ球、単球、マクロファージ、内皮細胞、ならびに他の組織常在物（ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｓｉｄｅｎｔｓ）によって産生される。場合によっては、１５のインターロイキン、インターロイキン１−１３、インターロイキン１５、及びインターロイキン１７がある。
【００１９】
インターロイキン２（ＩＬ−２）は、その構造が１５．５ｋＤａの４つのα−ヘリックスバンドルを含む多面発現性の１型サイトカインである。ＩＬ−２の前駆体形態は、長さが１５３アミノ酸残基であり、最初の２０のアミノ酸がシグナルペプチドを形成し、残基２１−１５３が成熟した形態を形成する。ＩＬ−２は主として抗原刺激後にＣＤ４＋  Ｔ細胞によって産生され、程度は少ないが、ＣＤ８＋細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及びナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、活性化樹状細胞（ＤＣ）、ならびにマスト細胞によって産生される。ＩＬ−２シグナル伝達は、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）サブユニットの特定の組み合わせ、ＩＬ−２Ｒα（ＣＤ２５としても知られている）、ＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２としても知られている）、及びＩＬ−２Ｒγ（ＣＤ１３２としても知られている）との相互作用によって生じる。ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαとの相互作用は、約１０−８ＭのＫｄの「低親和性」のＩＬ−２受容体複合体を形成する。ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒβ及びＩＬ−２Ｒγとの相互作用は、約１０−９ＭのＫｄの「中程度親和性」のＩＬ−２受容体複合体を形成する。ＩＬ−２の３つすべてのサブユニット、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、及びＩＬ−２Ｒγとの相互作用は、約１０−１１Ｍよりも大きなＫｄの「高親和性」のＩＬ−２受容体複合体を形成する。
【００２０】
幾つかの例では、「高親和性」ＩＬ−２Ｒαβγ複合体を介するＩＬ−２シグナル伝達は、制御性Ｔ細胞の活性化と増殖を調節する。制御性Ｔ細胞あるいはＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞は、ＣＤ４＋  Ｔ細胞、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、及びＮＫＴ細胞などのエフェクター細胞の抑制による免疫ホメオスタシスの維持を媒介する。幾つかの例では、Ｔｒｅｇ細胞は、胸腺から生成される（ｔＴｒｅｇ細胞）か、あるいは、末梢のナイーブＴ細胞から誘発される（ｐＴｒｅｇ細胞）。場合によっては、Ｔｒｅｇ細胞は、末梢性寛容のメディエーターとみなされる。実際に、ある研究では、ＣＤ２５枯渇末梢性ＣＤ４＋  Ｔ細胞の移動は、ヌードマウスにおいて様々な自己免疫疾患を引き起こし、その一方で、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋  Ｔ細胞の同時移動は、自己免疫の発達を抑制した（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｓｅｌｆ−ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＩＬ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ−ｃｈａｉｎｓ  （ＣＤ２５），”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５（３）：  １１５１−１１６４  （１９９５））。Ｔｒｅｇ細胞集団の増強は、エフェクターＴ細胞増殖をダウンレギュレートし、自己免疫とＴ細胞の非腫瘍性反応を抑える。
【００２１】
「中程度の親和性」のＩＬ−２Ｒβγ複合体を介するＩＬ−２シグナル伝達は、ＣＤ８＋作用因子Ｔ（Ｔｅｆｆ）細胞、ＮＫ細胞、及びＮＫＴ細胞の活性化及び増殖を調節する。ＣＤ８＋Ｔｅｆｆ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、Ｔｃ細胞、細胞毒性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔ−キラー細胞、及び細胞溶解性Ｔ細胞、Ｔｃｏｎ、あるいはキラーＴ細胞としても知られている）は、損傷を受けた細胞、癌細胞、及び病原体感染細胞を認識して殺すＴリンパ球である。ＮＫ及びＮＫＴの細胞は、ＣＤ８＋Ｔｅｆｆ細胞と同様に、癌細胞と病原体感染細胞を標的とするリンパ球の一種である。
【００２２】
幾つかの例では、ＩＬ−２シグナル伝達は、Ｔ細胞応答を調節するために、及び、その後、癌の処置のために利用される。例えば、ＩＬ−２は、癌の処置のためのＴｅｆｆ細胞集団の拡張を誘導するために、高用量の形態で投与される。しかしながら、高用量のＩＬ−２はさらに、抗腫瘍免疫応答を弱めるＴｒｅｇ細胞の同時刺激を引き起こす。高用量のＩＬ−２は、２型の先天性免疫細胞（ＩＬＣ−２）、好酸球、及び内皮細胞を含む、血管系中のＩＬ−２Ｒα鎖発現細胞の関与によって媒介される毒性の有害事象も誘発する。これは、好酸球増加症、毛細管漏出、及び血管漏出症候群（ＶＬＳ）を引き起こす。
【００２３】
ある実施形態において、サイトカイン／サイトカイン受容体シグナル伝達を介してリンパ球（例えば、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ＮＫ細胞、あるいはＮＫＴ細胞）の特徴的な集団を選択的にアップレギュレートする方法が本明細書に開示される。幾つかの例では、サイトカインは、インターロイキン、インターフェロン、あるいは腫瘍壊死因子を含む。場合によっては、サイトカインは、サイトカイン抱合体、例えば、インターロイキン抱合体、インターフェロン抱合体、腫瘍壊死因子抱合体である。さらなる場合において、本明細書に記載される１つ以上のサイトカイン抱合体を含む医薬組成物とキットが本明細書に記載される。
【００２４】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒシグナル伝達を介して、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ＮＫ細胞、及び／又はＮＫＴ細胞集団を選択的にアップレギュレートする方法も本明細書に記載される。幾つかの例では、ＩＬ−２はＩＬ−２抱合体であり、これは随意に、ＩＬ−２Ｒαβγ複合体と同様の能力と、野生型のＩＬ−２と比較して、弱められたＩＬ−２Ｒα相互作用とで、「中程度の親和性」のＩＬ−２Ｒβγ複合体と相互作用する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるＩＬ−２抱合体の使用によって癌を処置する方法が本明細書に記載される。さらなる実施形態において、本明細書に記載される１つ以上のＩＬ−２抱合体を含む医薬組成物とキットが本明細書に記載される。
【００２５】
サイトカイン抱合体
幾つかの実施形態において、サイトカイン抱合体が本明細書に記載される。幾つかの例では、サイトカインは、インターロイキン、腫瘍壊死因子、インターフェロン、ケモカイン、リンホカイン、あるいは成長因子を含む。幾つかの例では、サイトカインは、インターロイキンである。場合によっては、サイトカインはインターフェロンである。さらなる場合において、サイトカインは腫瘍壊死因子である。さらなる場合において、サイトカインは造血成長因子である。
【００２６】
幾つかの実施形態において、インターロイキン抱合体が本明細書に記載される。典型的なインターロイキンとしては、限定されないが、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、及びインターロイキン２１（ＩＬ−２１）が挙げられる。幾つかの例では、インターロイキンがＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、及びＩＬ−２１から選択されるインターロイキン抱合体が本明細書に記載される。
【００２７】
ＩＬ−２抱合体
幾つかの実施形態において、アミノ酸位置で修飾されたＩＬ−２抱合体が本明細書に記載される。幾つかの例では、修飾は天然アミノ酸に対するものである。幾つかの例では、修飾は非天然アミノ酸に対するものである。幾つかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチドが本明細書に記載される。幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドは、単離及び精製された哺乳動物ＩＬ−２、例えば、げっ歯類のＩＬ−２タンパク質あるいはヒトＩＬ−２タンパク質である。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはヒトＩＬ−２タンパク質である。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の配列からなる。さらなる場合には、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。さらなる場合には、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の配列を含む。さらなる場合には、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の配列からなる。
【００２８】
幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドは切断された変異体である。幾つかの例では、切断はＮ末端欠失である。他の例では、切断はＣ末端欠失である。さらなる例では、切断はＮ末端とＣ末端欠失の両方を含む。例えば、切断は、Ｎ末端あるいはＣ末端のいずれか、又は、Ｎ末端とＣ末端の両方からの少なくともあるいは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基の欠失であり得る。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、あるいはそれ以上の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約２の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約３の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約４の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約５の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約６の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約７の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約８の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約９の残基のＮ末端欠失を含む。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、少なくともあるいは約１０の残基のＮ末端欠失を含む。
【００２９】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２ポリペプチドは機能的に活性なフラグメントである。場合によっては、機能的に活性なフラグメントは、ＩＬ−２領域１０−１３３、２０−１３３、３０−１３３、１０−１３０、２０−１３０、３０−１３０、１０−１２５、２０−１２５、３０−１２５、１−１３０、あるいは１−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。場合によっては、機能的に活性なフラグメントはＩＬ−２領域１０−１３３を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。場合によっては、機能的に活性なフラグメントはＩＬ−２領域２０−１３３を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。場合によっては、機能的に活性なフラグメントはＩＬ−２領域３０−１３３を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。場合によっては、機能的に活性なフラグメントはＩＬ−２領域１０−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。場合によっては、機能的に活性なフラグメントはＩＬ−２領域２０−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。場合によっては、機能的に活性なフラグメントはＩＬ−２領域１−１３０を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。場合によっては、機能的に活性なフラグメントはＩＬ−２領域１−１２５を含み、ここで、残基位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の位置を基準にしている。
【００３０】
幾つかの実施形態において、単離され、精製され、及び、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドと抱合部分を含むＩＬ−２抱合体が本明細書に記載される。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、野生型ＩＬ−２ポリペプチドと比較して、ＩＬ−２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）サブユニットに対する減少した親和性を有する。場合によっては、抱合部分は、（例えば、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒα界面で）ＩＬ−２Ｒαと相互作用するアミノ酸残基に結合する。場合によっては、抱合部分は、（例えば、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒα界面から約５Ａ、約１０Ａ、約１５Ａ、あるいは約２０Ａ離れて）ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒα界面の近位にあるアミノ酸残基に結合する。本明細書で使用されるように、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒα界面に含まれる残基は、ＩＬ−２Ｒαサブユニットからの残基と、疎水的相互作用、水素結合、あるいはイオン相互作用を形成する、ＩＬ−２残基を含む。
【００３１】
幾つかの例では、抱合部分は、アミノ酸位置Ｙ３１、Ｋ３２、Ｎ３３、Ｐ３４、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ４７、Ｋ４８、Ｑ５７、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｌ６３、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｑ７４、Ｓ７５、Ｋ７６、Ｎ７７、Ｍ１０４、Ｃ１０５、Ｅ１０６、Ｙ１０７、Ａ１０８、Ｄ１０９、Ｅ１１０、Ｔ１１１、あるいはＡ１１２から選択されたアミノ酸残基に結合し、アミノ酸残基の番号はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対応する。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｙ３１、Ｋ３２、Ｎ３３、Ｐ３４、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ４７、Ｋ４８、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｑ７４、Ｓ７５、Ｋ７６、Ｎ７７、Ｍ１０４、Ｃ１０５、Ｅ１０６、Ｙ１０７、Ａ１０８、Ｄ１０９、Ｅ１１０、Ｔ１１１、及びＡ１１２から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｎ３３、Ｐ３４、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｍ３９、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｑ５７、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｌ６３、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、Ｅ１０６、Ｙ１０７、Ａ１０８、Ｄ１０９、Ｅ１１０、Ｔ１１１、及びＡ１１２から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置はＲ３８とＫ６４から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置はＥ６１、Ｅ６２、及びＥ６８から選択される。場合によっては、アミノ酸位置はＫ３５である。場合によっては、アミノ酸位置はＴ３７である。場合によっては、アミノ酸位置はＲ３８である。場合によっては、アミノ酸位置はＴ４１である。場合によっては、アミノ酸位置はＦ４２である。場合によっては、アミノ酸位置はＫ４３である。場合によっては、アミノ酸位置はＦ４４である。場合によっては、アミノ酸位置はＹ４５である。場合によっては、アミノ酸位置はＥ６１である。場合によっては、アミノ酸位置はＥ６２である。場合によっては、アミノ酸位置はＫ６４である。場合によっては、アミノ酸位置はＥ６８である。場合によっては、アミノ酸位置はＰ６５である。場合によっては、アミノ酸位置はＶ６９である。場合によっては、アミノ酸位置はＬ７２である。場合によっては、アミノ酸位置はＹ１０７である。場合によっては、アミノ酸位置はＬ７２である。場合によっては、アミノ酸位置はＤ１０９である。
【００３２】
幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体はさらに追加の突然変異を含む。場合によっては、追加の突然変異は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。そのような場合、アミノ酸は、血清の半減期、安定性、あるいはこれらの組み合わせの増加のために、追加の抱合部分に抱合する。代替的に、アミノ酸は、追加の抱合部分に結合する前に、リジン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、あるいはチロシンなどの天然アミノ酸；あるいは、非天然アミノ酸にまず変異する。
【００３３】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸修飾（例えば、野生型のＩＬ−２ポリペプチド）のない野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較した、ＩＬ−２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）サブユニットに対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの減少した親和性は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、あるいは９９％、又はそれよりも大きい。場合によっては、減少した結合親和性は約１０％である。場合によっては、減少した結合親和性は約２０％である。場合によっては、減少した結合親和性は約４０％である。場合によっては、減少した結合親和性は約５０％である。場合によっては、減少した結合親和性は約６０％である。場合によっては、減少した結合親和性は約８０％である。場合によっては、減少した結合親和性は約９０％である。場合によっては、減少した結合親和性は約９９％である。場合によっては、減少した結合親和性は約９９％よりも大きい。場合によっては、減少した結合親和性は約８０％である。場合によっては、減少した結合親和性は約１００％である。
【００３４】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸修飾（例えば、野生型のＩＬ−２ポリペプチド）のない同等のＩＬ−２ポリペプチドと比較した、ＩＬ−２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）サブユニットに対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの減少した親和性は、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、１０００倍、あるいはそれ以上である。場合によっては、減少した結合親和性は約１倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約２倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約４倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約５倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約６倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約８倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約１０倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約３０倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約５０倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約１００倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約３００倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約５００倍である。場合によっては、減少した結合親和性は約１０００倍である。場合によっては、減少した結合親和性は１０００倍を超える。
【００３５】
場合によっては、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドはＩＬ−２Ｒαと相互作用しない。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドはさらに抱合部分に抱合する。場合によっては、ＩＬ−２抱合体はＩＬ−２Ｒαと相互作用しない。
【００３６】
幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体に対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体に対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、第１の受容体シグナル伝達能力と第２の受容体シグナル伝達能力との間の差は、１０倍未満である。幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体に対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体に対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、第１の受容体シグナル伝達能力と第２の受容体シグナル伝達能力との間の差は、５倍未満である。幾つかの例では、差は、９倍未満、８倍未満、７倍未満、６倍未満、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、部分アゴニスト、例えば、受容体（例えば、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体あるいはＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体）を活性化するが、完全アゴニストと比較して上記受容体で部分的な有効性しか有していないアゴニストである。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、完全アゴニスト、例えば、最大応答時に、受容体（例えば、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体あるいはＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体）を活性化するアゴニストである。
【００３７】
幾つかの例では、受容体シグナル伝達能力はＥＣ５０値によって測定される。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体の活性化に対する第１のＥＣ５０値と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体の活性化に対する第２のＥＣ５０値を提供し、第１のＥＣ５０値と第２のＥＣ５０値との間の差は、１０倍未満である。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体の活性化に対する第１のＥＣ５０値と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体の活性化に対する第２のＥＣ５０値を提供し、第１のＥＣ５０値と第２のＥＣ５０値との間の差は、５倍未満である。場合によっては、差は、９倍未満、８倍未満、７倍未満、６倍未満、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。
【００３８】
幾つかの例では、受容体シグナル伝達能力はＥＤ５０値によって測定される。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体の活性化に対する第１のＥＤ５０値と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体の活性化に対する第２のＥＤ５０値を提供し、第１のＥＤ５０値と第２のＥＤ５０値との間の差は、１０倍未満である。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２βγシグナル伝達複合体の活性化に対する第１のＥＤ５０値と、ＩＬ−２αβγシグナル伝達複合体の活性化に対する第２のＥＤ５０値を提供し、第１のＥＤ５０値と第２のＥＤ５０値との間の差は、５倍未満である。場合によっては、差は、９倍未満、８倍未満、７倍未満、６倍未満、５倍未満、４倍未満、３倍未満、２倍未満、あるいは１倍未満である。
【００３９】
幾つかの実施形態において、抱合部分は、直接的に、あるいは、リンカーペプチドを介して間接的に、ＩＬ−２ポリペプチドのＮ末端あるいはＣ末端に結合される。場合によっては、抱合部分（例えば、ポリマー、タンパク質、あるいはペプチド）は、ＩＬ−２のＮ末端あるいはＣ末端において、直接的に、あるいは、リンカーペプチドを介して間接的に、ＩＬ−２に遺伝的に融合される。幾つかの例では、抱合部分は、Ｎ末端あるいはＣ末端のアミノ酸残基に結合する。幾つかの例では、抱合部分は、Ｎ末端又はＣ末端のアミノ酸残基に結合する反応基に結合する。
【００４０】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２Ｒαに対する結合親和性がしたＩＬ−２抱合体は、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を拡張することができる。場合によっては、抱合部分は、ＩＬ−２のＩＬ−２Ｒαとの結合を損なうか、妨害する。
【００４１】
場合によっては、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる、ＩＬ−２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して、上記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドの活性化と同等である。他の例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドの活性化よりも高い。場合によっては、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高い。場合によっては、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドのそれぞれの能力よりも少なくとも１倍高い。場合によっては、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドのそれぞれの能力よりも、約あるいは少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、１，０００倍、あるいはそれ以上高い。この場合、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブな及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと同様の活性を達成するために使用される修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの投与量又は濃度は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドのために使用される投与量又は濃度よりも低い。
【００４２】
幾つかの実施形態では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによる、ＩＬ−２Ｒβγ複合体を介する、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団の活性化は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドによる上記細胞集団の活性化の有意な効力を維持する。場合によっては、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγ複合体に対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。場合によっては、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドのそれぞれの能力よりも、約あるいは少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、あるいは５０倍低い。
【００４３】
幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力を示し、ＩＬ−２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示す。幾つかの例では、ＩＬ−２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して改善された能力である。幾つかの例では、ＩＬ−２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較して損なわれた能力である。幾つかの実施形態において、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒβγに対する第１の受容体シグナル伝達能力と、ＩＬ−２Ｒαβγに対する第２の受容体シグナル伝達能力を示し、ここで、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、あるいはそれ以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１倍以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも２倍以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも５倍以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１０倍以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも２０倍以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも５０倍以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１００倍以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも５００倍以上高い。幾つかの例では、第１の受容体シグナル伝達能力は、第２の受容体シグナル伝達能力よりも少なくとも１０００倍以上高い。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第１の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも高く、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドの第２の受容体シグナル伝達能力は、ＩＬ−２Ｒβγに対する野生型のＩＬ−２ポリペプチドの受容体シグナル伝達能力よりも低い。場合によっては、両方の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドのそれぞれの能力よりも低い。それ以外の場合では、両方の受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドのそれぞれの能力よりも高い。
【００４４】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、ＩＬ−２抱合体を用いて投与された被験体において毒性の有害事象を減少させる。例示的な毒性の有害事象は、好酸球増加症、毛細管漏出、及び血管漏出症候群（ＶＬＳ）を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２又はアルデスロイキンを用いて投与された第２の被験体と比較して、被験体における毒性の有害事象の発生率を、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは約１００％減少させる。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２又はアルデスロイキンを用いて投与された第２の被験体と比較して、被験体における毒性の有害事象の重症度を、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは約１００％減少させる。
【００４５】
幾つかの例では、毒性の有害事象は好酸球増加症である。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２又はアルデスロイキンを用いて投与された第２の被験体と比較して、被験体における好酸球増加症の発生率を、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは約１００％減少させる。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２又はアルデスロイキンを用いて投与された第２の被験体と比較して、被験体における好酸球増加症の重症度を、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは約１００％減少させる。
【００４６】
幾つかの例では、毒性の有害事象は毛細管漏出である。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２又はアルデスロイキンを用いて投与された第２の被験体と比較して、被験体における毛細管漏出の発生率を、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは約１００％減少させる。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２又はアルデスロイキンを用いて投与された第２の被験体と比較して、被験体における毛細管漏出の重症度を、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは約１００％減少させる。
【００４７】
幾つかの例では、毒性の有害事象はＶＬＳである。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２又はアルデスロイキンを用いて投与された第２の被験体と比較して、被験体におけるＶＬＳの発生率を、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは約１００％減少させる。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２又はアルデスロイキンを用いて投与された第２の被験体と比較して、被験体におけるＶＬＳの重症度を、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、あるいは約１００％減少させる。
【００４８】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、あるいはそれ以上よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、あるいはそれ以上よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、１時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、２時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、３時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、４時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、５時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、６時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、７時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、８時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、９時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、１０時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、１２時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、１８時間よりも長い血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、２４時間よりも長い血漿半減期を含む。
【００４９】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、あるいはそれ以上の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、あるいはそれ以上の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも１時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも２時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも３時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも４時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも５時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも６時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも７時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも８時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも９時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも１０時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも１２時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも１８時間の血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、少なくとも２４時間の血漿半減期を含む。
【００５０】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、約１時間から約７日間、約１２時間から約７日間、約１８時間から約７日間、約２４時間から約７日間、約１時間から約５日間、約１２時間から約５日間、約２４時間から約５日間、約２日間から約５日間、あるいは、約２日間から約３日間の血漿半減期を含む。
【００５１】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、約１時間から約１８時間、約１時間から約１２時間、約２時間から約１０時間、約２時間から約８時間、約４時間から約１８時間、約４時間から約１２時間、約４時間から約１０時間、約４時間から約８時間、約６時間から約１８時間、約６時間から約１２時間、約６時間から約１０時間、約６時間から約８時間、約８時間から約１８時間、約８時間から約１２時間、あるいは、約８時間から約１０時間の血漿半減期を含む。
【００５２】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、あるいはこれらの組み合わせを増殖及び／又は拡張することができるが、アポトーシスなどの有害な影響を及ぼさない血漿半減期を含む。
【００５３】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２と比較して、例えば、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、あるいはそれ以上、延長された血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２と比較して、例えば、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、あるいはそれ以上、延長された血漿半減期を含む。
【００５４】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２と比較して、例えば、約１時間から約１８時間、約１時間から約１２時間、約２時間から約１０時間、約２時間から約８時間、約４時間から約１８時間、約４時間から約１２時間、約４時間から約１０時間、約４時間から約８時間、約６時間から約１８時間、約６時間から約１２時間、約６時間から約１０時間、約６時間から約８時間、約８時間から約１８時間、約８時間から約１２時間、あるいは、約８時間から約１０時間の、延長された血漿半減期を含む。
【００５５】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−抱合体は、アルデスロイキンと比較して、例えば、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、あるいはそれ以上、延長された血漿半減期を含む。幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、アルデスロイキンと比較して、例えば、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、あるいはそれ以上、延長された血漿半減期を含む。
【００５６】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、アルデスロイキンと比較して、例えば、約１時間から約１８時間、約１時間から約１２時間、約２時間から約１０時間、約２時間から約８時間、約４時間から約１８時間、約４時間から約１２時間、約４時間から約１０時間、約４時間から約８時間、約６時間から約１８時間、約６時間から約１２時間、約６時間から約１０時間、約６時間から約８時間、約８時間から約１８時間、約８時間から約１２時間、あるいは、約８時間から約１０時間の、延長された血漿半減期を含む。
【００５７】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、毒性の減少した延長された血漿半減期を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、毒性の減少した、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、あるいはそれ以上延長された血漿半減期を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、毒性の減少した、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、あるいはそれ以上延長された血漿半減期を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、毒性の減少した、約１時間から約１８時間、約１時間から約１２時間、約２時間から約１０時間、約２時間から約８時間、約４時間から約１８時間、約４時間から約１２時間、約４時間から約１０時間、約４時間から約８時間、約６時間から約１８時間、約６時間から約１２時間、約６時間から約１０時間、約６時間から約８時間、約８時間から約１８時間、約８時間から約１２時間、あるいは、約８時間から約１０時間延長された血漿半減期を含む。場合によっては、減少した毒性は、野生型のＩＬ−２と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、あるいはそれ以上減少する。場合によっては、減少した毒性は、野生型のＩＬ−２と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、あるいはそれ以上減少する。
【００５８】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、毒性の減少した延長された血漿半減期を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、毒性の減少した、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、あるいはそれ以上延長された血漿半減期を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、毒性の減少した、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、あるいはそれ以上延長された血漿半減期を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は、毒性の減少した、約１時間から約１８時間、約１時間から約１２時間、約２時間から約１０時間、約２時間から約８時間、約４時間から約１８時間、約４時間から約１２時間、約４時間から約１０時間、約４時間から約８時間、約６時間から約１８時間、約６時間から約１２時間、約６時間から約１０時間、約６時間から約８時間、約８時間から約１８時間、約８時間から約１２時間、あるいは、約８時間から約１０時間延長された血漿半減期を含む。場合によっては、減少した毒性は、アルデスロイキンと比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、あるいはそれ以上減少する。場合によっては、減少した毒性は、アルデスロイキンと比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、あるいはそれ以上減少する。
【００５９】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、抱合部分のサイズ（例えば、体積あるいは長さ）が血漿安定性を向上させるが効力を減少させない抱合部分を含む。幾つかの例では、抱合部分のサイズは、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、あるいはそれ以上、血漿半減期を延長させる。幾つかの例では、抱合部分のサイズは、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、あるいはそれ以上、血漿半減期を延長させる。幾つかの例では、抱合部分のサイズは、約１時間から約１８時間、約１時間から約１２時間、約２時間から約１０時間、約２時間から約８時間、約４時間から約１８時間、約４時間から約１２時間、約４時間から約１０時間、約４時間から約８時間、約６時間から約１８時間、約６時間から約１２時間、約６時間から約１０時間、約６時間から約８時間、約８時間から約１８時間、約８時間から約１２時間、あるいは、約８時間から約１０時間、血漿半減期を延長させる。幾つかの例では、抱合部分のサイズは、アルデスロイキンと比較して、５％、４％、３％、２％、１％、あるいはそれ以上、効力を減少させる。
【００６０】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は、抱合部分のサイズ（例えば、体積あるいは長さ）が血漿安定性と効力を向上させる抱合部分を含む。幾つかの例では、抱合部分のサイズは、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、あるいはそれ以上、血漿半減期を延長させる。幾つかの例では、抱合部分のサイズは、少なくとも１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２４時間、あるいはそれ以上、血漿半減期を延長させる。幾つかの例では、抱合部分のサイズは、約１時間から約１８時間、約１時間から約１２時間、約２時間から約１０時間、約２時間から約８時間、約４時間から約１８時間、約４時間から約１２時間、約４時間から約１０時間、約４時間から約８時間、約６時間から約１８時間、約６時間から約１２時間、約６時間から約１０時間、約６時間から約８時間、約８時間から約１８時間、約８時間から約１２時間、あるいは、約８時間から約１０時間、血漿半減期を延長させる。幾つかの例では、抱合部分のサイズはさらに、アルデスロイキンと比較して、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、あるいはそれ以上、効力を増強する。
【００６１】
幾つかの実施形態において、抱合部分に共有結合した非天然アミノ酸を含むＩＬ−２抱合体が本明細書に記載され、ここで、非天然アミノ酸は領域３５−１０７に位置し、及び、領域３５−１０７はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の残基Ｋ３５−Ｙ１０７に対応する。
【００６２】
幾つかの実施形態において、インターロイキン２βγ受容体（ＩＬ−２Ｒβγ）結合タンパク質が本明細書に記載され、ここで、上記結合タンパク質のインターロイキン２α受容体（ＩＬ−２Ｒα）の結合親和性は、野生型のヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）の結合親和性未満であり、上記結合タンパク質のインターロイキン２α受容体（ＩＬ−２Ｒα）の結合親和性は、野生型のヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）の結合親和性未満である。幾つかの実施形態において、インターロイキン２βγ受容体（ＩＬ−２Ｒβγ）結合タンパク質が本明細書に記載され、ここで、上記結合タンパク質のインターロイキン２α受容体（ＩＬ−２Ｒα）の結合親和性は、野生型のヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）の結合親和性未満であり、及び、上記結合タンパク質は、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む。幾つかの例では、上記結合タンパク質は、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドあるいはその機能的に活性なフラグメントであり、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む。幾つかの例では、少なくとも１つの非天然アミノ酸は領域３５−１０７に位置し、及び、領域３５−１０７はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の残基Ｋ３５−Ｙ１０７に対応する。
【００６３】
幾つかの実施形態において、突然変異及びＩＬ−２Ｒβγを含む修飾されたＩＬ−２ポリペプチドを含んでいるＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体が本明細書に記載され、ここで、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒαへの減少した結合親和性を有し、及び、減少した結合親和性は、野生型のＩＬ２ポリペプチドとＩＬ−２Ｒαとの間の結合親和性と比較される。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、突然変異部位に共有結合された抱合部分をさらに含む。幾つかの例では、突然変異部位は、天然アミノ酸に変異したアミノ酸を含む。幾つかの例では、突然変異部位は、システイン残基に変異したアミノ酸を含む。幾つかの例では、突然変異部位は、リジン残基に変異したアミノ酸を含む。
【００６４】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸とＩＬ−２Ｒβγを含む修飾されたＩＬ−２ポリペプチドを含んでいるＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体が本明細書に記載され、ここで、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒαへの減少した結合親和性を有し、及び、減少した結合親和性は、野生型のＩＬ２ポリペプチドとＩＬ−２Ｒαとの間の結合親和性と比較される。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、非天然アミノ酸に共有結合された抱合部分をさらに含む。
【００６５】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸とＩＬ−２Ｒβγを含む修飾されたＩＬ−２ポリペプチドを含んでいるＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体が本明細書に記載され、ここで、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒαへの減少した受容体シグナル伝達能力を有し、及び、減少した受容体シグナル伝達能力は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドとＩＬ−２Ｒαとの間の受容体シグナル伝達能力と比較される。幾つかの例では、修飾されたＩＬ−２ポリペプチドは、非天然アミノ酸に共有結合された抱合部分をさらに含む。
【００６６】
幾つかの実施形態において、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーターであって、細胞集団中のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、あるいはこれらの組み合わせを選択的に拡張するアクチベーターが本明細書に記載され、ここで、上記アクチベーターは、少なくとも１つの突然変異を含む修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドを含む。幾つかの例では、突然変異は天然アミノ酸に対するものである。他の例では、突然変異は非天然アミノ酸に対するものである。幾つかの実施形態において、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞のアクチベーターであって、細胞集団中のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、あるいはこれらの組み合わせを選択的に拡張するアクチベーターが本明細書に記載され、ここで、上記アクチベーターは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドを含む。幾つかの例では、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと接触したＣＤ３＋細胞集団中のＣＤ４＋  Ｔｒｅｇ細胞の拡張と比較して、上記アクチベーターが上記ＣＤ３＋細胞集団に接しているとき、上記アクチベーターは、ＣＤ４＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞を、２０％、１５％、１０％、５％、１％、あるいは０．１％未満拡張する。幾つかの例では、上記アクチベーターは、上記細胞集団中のＴｒｅｇ細胞を拡張しない。幾つかの例では、上記細胞集団はインビボの細胞集団である。幾つかの例では、上記細胞集団はインビトロの細胞集団である。幾つかの例では、上記細胞集団はエクスビボの細胞集団である。
【００６７】
幾つかの例では、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を拡張する方法も本明細書で提供され、上記方法は：治療上有効な量のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞アクチベーターに上記細胞集団を接触させる工程を含み、上記アクチベーターは、少なくとも１つの突然変異を含む修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドを含み、それによって、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を拡張する。幾つかの例では、突然変異は天然アミノ酸に対するものである。他の例では、突然変異は非天然アミノ酸に対するものである。幾つかの例では、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を拡張する方法も本明細書に開示され、上記方法は：治療上有効な量のＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞アクチベーターに上記細胞集団を接触させる工程を含み、上記アクチベーターは、少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む修飾されたインターロイキン２（ＩＬ−２）ポリペプチドを含み、それによって、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、あるいはナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を拡張する。
【００６８】
ＩＬ−１５抱合体
幾つかの実施形態において、アミノ酸位置で修飾されたＩＬ−１５抱合体が本明細書に記載される。ＩＬ−１５は、Ｔ細胞とＮＫ細胞の活性化と増殖を調節する。幾つかの例では、ＩＬ−１５抱合体は、単離及び精製されたＩＬ−１５ポリペプチドと抱合部分を含む。幾つかの例では、ＩＬ−１５抱合体は、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドと比較して、ＩＬ−１５受容体に対する減少した親和性を有する。場合によっては、抱合部分は、ＩＬ−１５受容体と（例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα界面で）あるいはＩＬ−２Ｒβγサブユニットと相互作用するアミノ酸残基に結合する。場合によっては、抱合部分は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα界面に近接する（例えば、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα界面から約５Ａ、約１０Ａ、約１５Ａ、あるいは約２０Ａ離れて）、あるいは、ＩＬ−２Ｒβγサブユニットに近接するアミノ酸残基に結合する。本明細書で使用されるように、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα界面に含まれる残基は、ＩＬ−１５からの残基と疎水的相互作用、水素結合、あるいはイオン相互作用を形成する、ＩＬ−１５残基を含む。同様に、ＩＬ−１５／ＩＬ−２Ｒβγ界面に含まれる残基は、ＩＬ−２Ｒβγサブユニットからの残基と疎水的相互作用、水素結合、あるいはイオン相互作用を形成する、ＩＬ−１５残基を含む。場合によっては、抱合部分は、直接的に、あるいは、リンカーペプチドを介して間接的に、ＩＬ−１５ポリペプチドのＮ末端あるいはＣ末端に（例えば、Ｎ末端あるいはＣ末端のアミノ酸残基に、又は、末端アミノ酸残基に結合した反応基に）結合する。さらなる場合には、抱合部分は、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒとの間の相互作用を調節する。幾つかの例では、ＩＬ−１５抱合体は、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒシグナル伝達を介して腫瘍浸潤リンパ球の特徴的な集団をアップレギュレートする。幾つかの例では、ＩＬ−１５抱合体は、腫瘍に関連するリンパ球の増殖及び／又は拡張の減少を促す。幾つかの例では、ＩＬ−１５抱合体は免疫活性を調節する。
【００６９】
追加のサイトカイン抱合体
幾つかの実施形態において、アミノ酸位置で修飾された１つ以上の追加のサイトカイン抱合体が本明細書に記載される。例示的なサイトカインとしては、限定されないが、ＩＬ−１β、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＮＦ（例えば、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−κ、ＩＦＮ−δ、ＩＦＮ−ε、ＩＦＮ−τ、ＩＦＮ−ω、あるいはＩＦＮ−ζ）と、ＴＮＦ（例えば、ＴＮＦαあるいはＣＤ４０Ｌ）を含む。幾つかの例では、サイトカイン抱合体は、単離及び精製されたサイトカインポリペプチドと抱合部分を含む。幾つかの例では、サイトカイン抱合体は、その野生型のサイトカインと比較して、そのそれぞれの受容体に対する減少した親和性を有する。場合によっては、抱合部分は、受容体界面の近位にある（例えば、受容体界面から約５Ａ、約１０Ａ、約１５Ａ、あるいは約２０Ａ離れて）アミノ酸残基に結合する。場合によっては、抱合部分は、直接的に、あるいは、リンカーペプチドを介して間接的に、サイトカインのＮ末端あるいはＣ末端に結合される。さらなる場合には、抱合部分は、サイトカインとそのそれぞれの受容体との間の相互作用を調節する。幾つかの例では、サイトカイン抱合体は、腫瘍浸潤リンパ球の特徴的な集団をアップレギュレートする。幾つかの例では、サイトカインは、腫瘍に関連するリンパ球の増殖及び／又は拡張の減少を促す。幾つかの例では、サイトカインは免疫活性を調節する。
【００７０】
サイトカインの抱合体前駆体
突然変異サイトカイン（ＩＬ−２などの）を含むサイトカイン抱合体前駆体が本明細書に記載され、ここで、１つ以上のアミノ酸は野生型アミノ酸から変異する。そのような前駆体は、しばしば、疾患又は疾病を処置するために、本明細書に記載される方法と共に使用される。幾つかの実施形態において、サイトカイン前駆体は抱合されない。そのような突然変異は、様々な付加、欠失、又は置換を含む。幾つかの実施形態において、突然変異は異なる天然アミノ酸の置換を含む。幾つかの例では、突然変異体サイトカインは、アミノ酸位置Ｙ３１、Ｋ３２、Ｎ３３、Ｐ３４、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ４７、Ｋ４８、Ｑ５７、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｌ６３、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｑ７４、Ｓ７５、Ｋ７６、Ｎ７７、Ｍ１０４、Ｃ１０５、Ｅ１０６、Ｙ１０７、Ａ１０８、Ｄ１０９、Ｅ１１０、Ｔ１１１、又はＡ１１２の突然変異を含み、アミノ酸残基の番号付けはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対応する。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｙ３１、Ｋ３２、Ｎ３３、Ｐ３４、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ４７、Ｋ４８、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｑ７４、Ｓ７５、Ｋ７６、Ｎ７７、Ｍ１０４、Ｃ１０５、Ａ１０８、Ｄ１０９、Ｅ１１０、Ｔ１１１、及びＡ１１２から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｎ３３、Ｐ３４、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｍ３９、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｑ５７、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｌ６３、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、Ｅ１０６、Ｙ１０７、Ａ１０８、Ｔ１１１、及びＡ１１２から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置はＲ３８及びＫ６４から選択される。幾つかの例では、アミノ酸位置はＥ６１、Ｅ６２、及びＥ６８から選択される。場合によっては、アミノ酸位置はＫ３５である。場合によっては、アミノ酸位置はＴ３７である。場合によっては、アミノ酸位置はＲ３８である。場合によっては、アミノ酸位置はＴ４１である。場合によっては、アミノ酸位置はＦ４２である。場合によっては、アミノ酸位置はＫ４３である。場合によっては、アミノ酸位置はＦ４４である。場合によっては、アミノ酸位置はＹ４５である。場合によっては、アミノ酸位置はＥ６１である。場合によっては、アミノ酸位置はＥ６２である。場合によっては、アミノ酸位置は��６４である。場合によっては、アミノ酸位置はＥ６８である。場合によっては、アミノ酸位置はＰ６５である。場合によっては、アミノ酸位置はＶ６９である。場合によっては、アミノ酸位置はＬ７２である。場合によっては、アミノ酸位置はＹ１０７である。場合によっては、アミノ酸位置はＬ７２である。場合によっては、アミノ酸位置はＤ１０９である。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体は抱合部分を含み、ここで、抱合部分は突然変異体サイトカインにおける変異部位に結合される。
【００７１】
本明細書に記載されるサイトカイン突然変異体は、しばしば天然アミノ酸に対して１つ以上の突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及び少なくとも１つの突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｋ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｃ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ａ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｉ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｌ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｙ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｗ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｎ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｒ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｄ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｑ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｇ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｈ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｍ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｆ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｐ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｓ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｔ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及びＥ６２Ｖ突然変異を含む。
【００７２】
幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、及び少なくとも１つの突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｋ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｃ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ａ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｉ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｌ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｙ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｗ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｎ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｒ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｄ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｑ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｇ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｈ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｍ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｆ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｅ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｓ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｔ突然変異を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン突然変異体はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１及びＰ６５Ｖ突然変異を含む。
【００７３】
タンパク質又はペプチドの融合
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体は、ペプチド又はタンパク質に融合されるサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、あるいは他のサイトカイン）を含む（融合）。幾つかの実施形態において、ペプチド又はタンパク質は抗体又は抗体フラグメントである。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体は、抗体に融合されるサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、あるいは他のサイトカイン）、又はその結合フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカインは、複数のタンパク質又はペプチドに融合される。幾つかの実施形態において、サイトカイン結合体は、タンパク質又はペプチドへのサイトカイン融合及び少なくとも抱合部分を含む。幾つかの例では、抗体又はその結合フラグメントは、ヒト化抗体又はその結合フラグメント、マウス抗体又はその結合フラグメント、キメラ抗体又はその結合フラグメント、モノクローナル抗体又はその結合フラグメント、一価のＦａｂ’、二価のＦａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ヒューマボディ（ｈｕｍａｂｏｄｙ）、ジスルフィド安定Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ  ＮＡＲ、ｃａｍｅｌｉｄ抗体又はその結合フラグメント、二重特異性抗体又はその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘導体を含む。幾つかの例において、そのような融合タンパク質は、翻訳を介して直接生成される。幾つかの実施形態において、融合は化学的あるいは他の酵素的なライゲーション方法を使用して生成される。幾つかの実施形態において、サイトカイン結合体は、リンカーによって結合される融合ペプチド又はタンパク質を含む。幾つかの実施形態において、リンカーはペプチドである。幾つかの実施形態において、サイトカイン結合体はＮ末端ペプチド又はタンパク質の融合を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン結合体はＣ末端ペプチド又はタンパク質の融合を含む。場合によっては、ペプチド又はタンパク質に融合されるサイトカインは、以下に記載される１つ以上の抱合部分にさらに抱合される。
【００７４】
幾つかの例では、サイトカイン抱合体は、ｓｃＦｖ、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｓＦｖ、又はｓｄＡｂ融合への融合を含む。場合によっては、融合はｓｃＦｖを含む。場合によっては、サイトカイン抱合体は、ビス−ｓｃＦｖへの融合を含む。場合によっては、サイトカイン抱合体は、（ｓｃＦｖ）２への融合を含む。場合によっては、サイトカイン抱合体は、ｄｓＦｖへの融合を含む。場合によっては、サイトカイン抱合体は、ｓｄＡｂへの融合を含む。場合によっては、ｓｃＦｖ、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｓＦｖ、又はｓｄＡｂに融合されるサイトカインは、以下に記載される１つ以上の抱合部分にさらに抱合される。
【００７５】
幾つかの例では、サイトカイン抱合体は、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、又はＩｇＤ）のＦｃ部分への融合を含む。幾つかの例では、サイトカイン抱合体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ部分への融合を含む。場合によっては、Ｆｃ部分に融合するサイトカインは、以下に記載される１つ以上の抱合部分にさらに抱合される。
【００７６】
場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）のポリペプチドは、抗体、又はその結合フラグメントに融合される。場合によっては、サイトカインポリペプチドは、ヒト化抗体又はその結合フラグメント、マウス抗体又はその結合フラグメント、キメラ抗体又はその結合フラグメント、モノクローナル抗体又はその結合フラグメント、一価のＦａｂ’、二価のＦａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ  ＮＡＲ、ｃａｍｅｌｉｄ抗体又はその結合フラグメント、二重特異性抗体又はその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘導体に融合される。さらなる場合において、サイトカインポリペプチドは抗体のＦｃ部分に融合される。さらなる場合において、サイトカインポリペプチドは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ部分に融合される。場合によっては、抗体に融合されるサイトカイン、又はその結合フラグメントは、以下に記載される１つ以上の抱合部分に抱合される。
【００７７】
場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは抗体、又はその結合フラグメントに融合される。幾つかの例では、ＩＬ−２は、ヒト化抗体又はその結合フラグメント、マウス抗体又はその結合フラグメント、キメラ抗体又はその結合フラグメント、モノクローナル抗体又はその結合フラグメント、一価のＦａｂ’、二価のＦａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ  ＮＡＲ、ｃａｍｅｌｉｄ抗体又はその結合フラグメント、二重特異性抗体又はその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘導体に融合される。さらなる場合において、ＩＬ−２ポリペプチドは抗体のＦｃ部分に融合される。さらなる場合において、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ部分に融合される。さらなる場合において、抗体に融合されるＩＬ−２ポリペプチド、又はその結合フラグメントは、以下に記載される１つ以上の抱合部分に融合される。
【００７８】
天然及び非天然アミノ酸
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるアミノ酸残基（例えば、ＩＬ−２などのサイトカイン内）は、抱合部分に結合する（又は抱合部分と反応する）前に、リジン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、又はチロシンに変異する。例えば、リジン、システイン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、又はチロシンの側鎖は、本明細書に記載される抱合部分に結合することができる。幾つかの例では、アミノ酸残基はシステイン、リジン、又はヒスチジンに変異する。場合によっては、アミノ酸残基はシステインに変異する。場合によっては、アミノ酸残基はリジンに変異する。場合によっては、アミノ酸残基はヒスチジンに変異する。場合によっては、アミノ酸残基はチロシンに変異する。場合によっては、アミノ酸残基はトリプトファンに変異する。幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は抱合部分と抱合しない。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカインは非天然アミノ酸を含み、ここで、サイトカインはタンパク質に抱合され、結合点は非天然アミノ酸でない。
【００７９】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるアミノ酸残基（例えば、ＩＬ−２などのサイトカイン内）は、抱合部分に結合する前に、非天然アミノ酸に変異させられる。場合によっては、非天然アミノ酸の突然変異は、免疫系の自己抗原反応を防ぐか、あるいは最小化する。本明細書で使用されるように、用語「非天然アミノ酸」は、タンパク質において自然に生じる２０のアミノ酸とは別のアミノ酸を指す。非天然アミノ酸の非限定的な例は、以下を含む：ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−メトキシフェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ボロノフェニルアラニン、Ｏ−プロパルギルチロシン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、セレノシステイン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、アジドリジン（ＡｚＫ）、チロシンアミノ酸の非天然アナログ；グルタミンアミノ酸の非天然アナログ；フェニルアラニンアミノ酸の非天然アナログ；セリンアミノ酸の非天然アナログ；トレオニンアミノ酸の非天然アナログ；アルキル、アリール、アシル、アジド、シアノ、ハロ、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシル、アルケニル、アルキニル（ａｌｋｙｎｌ）、エーテル、チオール、スルホニル、セレノ、エステル、チオ酸、ホウ酸塩、ボロン酸  、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、複素環式、エノン、イミン、アルデヒド、ヒドロキシルアミン、ケト、又はアミノ置換アミノ酸、あるいはそれらの組み合わせ；光活性化可能なクロスリンカーを有するアミノ酸；スピン標識アミノ酸；蛍光性アミノ酸；金属結合アミノ酸；金属含有アミノ酸；放射性アミノ酸；光ケージ化（ｐｈｏｔｏｃａｇｅｄ）アミノ酸及び／又は光異性化可能なアミノ酸；ビオチン又はビオチンアナログ含有アミノ酸；ケト含有アミノ酸；ポリエチレングリコール又はポリエーテルを含むアミノ酸；重原子置換アミノ酸；化学的に切断可能又は光切断可能なアミノ酸；細長い側鎖を有するアミノ酸；毒性基含有アミノ酸；糖置換アミノ酸；炭素に結合された糖を含有するアミノ酸；酸化還元活性アミノ酸；ヒドロキシ含有酸；アミノチオ酸；α、α二置換アミノ酸；β−アミノ酸；プロリン又はヒスチジン以外の環状アミノ酸、及びフェニルアラニン、チロシン、又はトリプトファン以外の芳香族アミノ酸。
【００８０】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、選択的反応基、又は標的ポリペプチドの部位選択的標識化のための反応基を含む。幾つかの例では、化学は生体直交型反応（ｂｉｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）（例えば、生体適合性及び選択的反応）である。場合によっては、化学は、Ｃｕ（Ｉ）−触媒化又は「銅を含まない」アルキン−アジド  トリアゾール−生成反応、シュタウディンガー・ライゲーション、逆電子要請型Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ（ＩＥＤＤＡ）反応、「光クリック（ｐｈｏｔｏ−ｃｌｉｃｋ）」ケミストリー、又はオレフィンメタセシス、及び鈴木・宮浦クロスカップリングあるいは薗頭カップリングなどの金属媒介プロセスである。
【００８１】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、例えば、ＵＶでの照射の際に架橋する光反応基を含む。
【００８２】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は光ケージ化アミノ酸を含む。
【００８３】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、パラ置換、メタ置換、又はオルト置換のアミノ酸誘導体である。
【００８４】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、ｐ−メトキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−プロパルギル−フェニルアラニン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃｐ−セリン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、エルドパ及びフッ素化フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、又はイソプロピル−Ｌ−フェニルアラニンを含む。
【００８５】
場合によっては、非天然アミノ酸は、３−アミノチロシン、３−ニトロチロシン、３，４−ジヒドロキシ−フェニルアラニン、又は３−ヨードチロシンである。
【００８６】
場合によっては、非天然アミノ酸はフェニルセレノシステインである。
【００８７】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、ベンゾフェノン、ケトン、ヨウ化物、メトキシ、アセチル、ベンゾイル、又はアジド含有フェニルアラニン誘導体である。
【００８８】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、ベンゾフェノン、ケトン、ヨウ化物、メトキシ、アセチル、ベンゾイル、又はアジド含有リジン誘導体である。
【００８９】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含む。
【００９０】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は芳香族側鎖を含まない。
【００９１】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はアジド基を含む。
【００９２】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はマイケルアクセプター基を含む。幾つかの例では、マイケルアクセプター基は、１、２−付加反応を介して共有結合を形成することができる不飽和部分を含む。幾つかの例では、マイケルアクセプター基は、電子不足アルケン又はアルキンを含む。幾つかの例では、マイケルアクセプター基は、限定されないが、α、β不飽和の：ケトン、アルデヒド、スルホキシド、スルホン、ニトリル、イミン、又は芳香族化合物を含む。
【００９３】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はデヒドロアラニンである。
【００９４】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はアルデヒド又はケトン基を含む。
【００９５】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はアルデヒド又はケトン基を含むリジン誘導体である。
【００９６】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、β、γ、又はδ位に１つ以上のＯ、Ｎ、Ｓｅ、又はＳ原子を含むリジン誘導体である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、γ位にＯ、Ｎ、Ｓｅ、又はＳ原子を含むリジン誘導体である。
【００９７】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、イプシロン  Ｎ原子が酸素原子と取り替えられるリジン誘導体である。
【００９８】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、自然発生の翻訳後に修飾されるリジンではないリジン誘導体である。
【００９９】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は側鎖を含むアミノ酸であり、α位から６番目の原子はカルボニル基を含む。幾つかの例では、非天然アミノ酸は側鎖を含むアミノ酸であり、ここで、α位から６番目の原子は、カルボニル基を含み、及び、α位からの５番目の原子は窒素である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は側鎖を含むアミノ酸であり、α位から７番目の原子は酸素原子である。
【０１００】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はセリンを含むセリン誘導体である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、セレノセリン（ｓｅｌｅｎｏｓｅｒｉｎｅ）（２−アミノ−３−ヒドロセレノプロパン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−３−（（２−（（３−（ベンジルオキシ）−３−オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−３−（フェニルセラニル）プロパン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸はセレニウムを含み、ここで、セレニウムの酸化は、アルケンを含む非天然アミノ酸の形成を結果としてもたらす。
【０１０１】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はシクロオクチニル基を含む。
【０１０２】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、トランスシクロテニル（ｔｒａｎｓｃｙｃｌｏｃｔｅｎｙｌ）基を含む。
【０１０３】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はノルボルネニル基を含む。
【０１０４】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はシクロプロペニル基を含む。
【０１０５】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はジアジリン基を含む。
【０１０６】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はテトラジン基を含む。
【０１０７】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はリジン誘導体であり、側鎖窒素はカルバミル化される。幾つかの例では、非天然アミノ酸はリジン誘導体であり、側鎖窒素はアシル化される。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−Ｂｏｃ−Ｎ６−メチルリシンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−アセチルリジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸はピロリシンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−トリフルオロアセチルリジン（ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｙｌｌｙｓｉｎｅ）である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ｐ−ヨードベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（ｐ−ニトロベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−プロリルリジン（ｐｒｏｌｙｌｌｙｓｉｎｅ）である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（シクロペンチロキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（シクロペンタンカルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（テトラヒドロフラン−２−カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（３−エチニルテトラヒドロフラン−２−カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（プロプ−２−イン−１−イルオキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（２−アジドシクロペンチルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（２−アジドエトキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−｛［（２−ニトロベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は２−アミノ−６−｛［（２−シクロオクチニルオキシ）カルボニル］アミノ｝ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（２−アミノブト−３−イノイル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−６−（（２−アミノブト−３−イノイル）オキシ）ヘキサン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（アリルオキシカルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（ブテニル−４−オキシカルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（ペンテニル−５−オキシカルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（ブト−３−イン−１−イルオキシ）カルボニル）−リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（ペンタ−４−イン−１−イルオキシ）カルボニル）−リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（チアゾリジン−４−カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−８−オキソノナン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−８−オキソオクタン酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（２−オキソアセチル）リジンである。
【０１０８】
幾つかの例では、非天然アミノ酸はＮ６−プロピオニルリジン（ｐｒｏｐｉｏｎｙｌｌｙｓｉｎｅ）である。幾つかの例では、非天然アミノ酸はＮ６−ブチリルリジン（ｂｕｔｙｒｙｌｌｙｓｉｎｅ）である。幾つかの例では、非天然アミノ酸はＮ６−（ブト−２−エノイル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸はＮ６−（（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−２−イルオキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（スピロ［２．３］ヘキサ（ｈｅｘ）−１−エン−５−イルメトキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（（４―（１−（トリフルオロメチル）シクロプロパ−２−エン−１−イル）ベンジル）オキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（ビシクロ［２．２．１］ヘプト−５−エン−２−イルメトキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、システイニルリジン（ｃｙｓｔｅｉｎｙｌｌｙｓｉｎｅ）である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（１−（６−ニトロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）エトキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（２−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）エトキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（３−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）プロポキシ）カルボニル）リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（メタ  ニトロベニルオキシ（ｎｉｔｒｏｂｅｎｙｌｏｘｙ））Ｎ６−メチルカルボニル）リジン）である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（ビシクロ［６．１．０］ノン−４−イン−９−イルメトキシ）カルボニル）−リジンである。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｎ６−（（シクロヘプト−３−エン−１−イルオキシ）カルボニル）−Ｌ−リジンである。
【０１０９】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、２−アミノ−３−（（（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）メチル）セラニル）プロパン酸である。
【０１１０】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、再目的化された（ｒｅｐｕｒｐｏｓｅｄ）アンバー、オパール、又はオーカー停止コドンによってサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。
【０１１１】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、４塩基コドンによってサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。
【０１１２】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、再目的化された希少センスコドンによってサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。
【０１１３】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、非天然核酸を含む合成コドンによってサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、直交する改変シンテターゼ／ｔＲＮＡ対によってサイトカインに組み込まれる。そのような直交対は非天然シンテターゼを含み、非天然シンテターゼは、非天然アミノ酸で非天然ｔＲＮＡをチャージする（ｃｈａｒｇｉｎｇ）ことができるが、ａ）非天然ｔＲＮＡへの他の内因性アミノ酸のチャージと、及びｂ）他の内因性ｔＲＮＡへの非天然アミノ酸のチャージを最小化する。そのような直交対はｔＲＮＡを含み、ｔＲＮＡは、非天然シンテターゼによってチャージされ得るが、内因性シンテターゼによって、ａ）他の内因性アミノ酸でチャージされるのを回避する。幾つかの実施形態において、そのような対は、細菌、酵母菌、古細菌、又はヒトのソースなどの様々な有機体から同定される。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼ／ｔＲＮＡ対は単一の有機体からの構成要素を含む。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼ／ｔＲＮＡ対は、２つの異なる有機体からの構成要素を含む。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼ／ｔＲＮＡ対は、修飾前に２つの異なるアミノ酸の翻訳を促進する構成要素を含む。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変アラニンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変アルギニンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変アスパラギンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変アスパラギン酸シンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変システインシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変グルタミンシンセターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変グルタミン酸シンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変アラニングリシンである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変ヒスチジンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変ロイシンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変イソロイシンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変リジンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変メチオニンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変フェニルアラニンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変プロリンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変セリンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変トレオニンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変トリプトファンシンセターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変チロシンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変バリンシンテターゼである。幾つかの実施形態において、直交シンテターゼは改変ホスホセリンシンテターゼで���る。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変アラニンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変アルギニンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変アスパラギンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変アスパラギン酸ｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変システインｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変グルタミンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変グルタミン酸ｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変アラニングリシンである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変ヒスチジンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変ロイシンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変イソロイシンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変リジンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変メチオニンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変フェニルアラニンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変プロリンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変セリンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変トレオニンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変トリプトファンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変チロシンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変バリンｔＲＮＡである。幾つかの実施形態において、直交ｔＲＮＡは改変ホスホセリンｔＲＮＡである。
【０１１４】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、アミノアシル（ａａＲＳ又はＲＳ）−ｔＲＮＡシンセターゼ−ｔＲＮＡ対によってサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。典型的なａａＲＳ−ｔＲＮＡ対としては、限定されないが、メタノカルドコックス・ヤンナスキイ（Ｍｊ−Ｔｙｒ）ａａＲＳ／ｔＲＮＡ対、大腸菌ＴｙｒＲＳ（Ｅｃ−Ｔｙｒ）／バチルス・ステアロサーモフィルス  ｔＲＮＡＣＵＡ対、大腸菌ＬｅｕＲＳ（Ｅｃ−Ｌｅｕ）／バチルス・ステアロサーモフィルス ｔＲＮＡＣＵＡ対、及びピロリジル−ｔＲＮＡ対が挙げられる。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｍｊ−ＴｙｒＲＳ／ｔＲＮＡ対によってサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。Ｍｊ−ＴｙｒＲＳ／ｔＲＮＡ対によって組み込まれ得る典型的なＵＡＡとしては、限定されないが、ｐ−アミノフェニルアラニン及びｐ−メチルフェニルアラニンなどのパラ置換フェニルアラニン誘導体；３−アミノチロシン、３−ニトロチロシン、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン、及び３−ヨードチロシンなどのメタ置換チロシン誘導体；フェニルセレノシステイン（ｐｈｅｎｙｌｓｅｌｅｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）；ｐ−ブロノフェイルアラニン（ｂｏｒｏｎｏｐｈｅｙｌａｌａｎｉｎｅ）；及びｏ−ニトロベンジルチロシンが挙げられる。
【０１１５】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｅｃ−ティール／ｔＲＮＡＣＵＡ又はＥｃ−Ｌｅｕ／ｔＲＮＡＣＵＡ対によってサイトカイン（例えば、ＩＬポリペプチド）に組み込まれる。Ｅｃ−Ｔｙｒ／ｔＲＮＡＣＵＡ又はＥｃ−Ｌｅｕ／ｔＲＮＡＣＵＡ対によって組み込まれ得る典型的なＵＡＡとしては、限定されないが、ベンゾフェノ、ケトン、ヨウ化物、又はアジド置換基を含むフェニルアラニン誘導体；Ｏ−プロパルギルチロシン；α−アミノカプリル酸、Ｏメチルチロシン、Ｏ−ニトロベンジルシステイン；及び、３−（ナフタレン−２−イルアミノ）−２−アミノ−プロパン酸が挙げられる。
【０１１６】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、ピロリジル−ｔＲＮＡ対によってサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。場合によっては、ＰｙｌＲＳは、古細菌から（例えば、メタン生成古細菌から）得られる。場合によっては、ＰｙｌＲＳは、メタノサルシナ・バーケリ、メタノサルシナ・マゼイ、又はメタノサルシナ・アセチボランスから得られる。ピロリジル−ｔＲＮＡ対によって組み込まれ得る典型的なＵＡＡとしては、限定されないが、２−アミノ−６−（（Ｒ）−テトラヒドロフラン−２−カルボキシアミド）ヘキサン酸、Ｎ−ε−Ｄ−プロリル−Ｌ−リジン、及びＮ−ε−シクロペンチロキシカルボニル−Ｌ−リジンなどのアミド及びカルバマート置換リジン；Ｎ−ε−アクリロイル  −Ｌ−リジン；Ｎ−ε−［（１−（６−ニトロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソ−ル（ｄｉｏｘｏｌ）−５−イル）エトキシ）カルボニル］−Ｌ−リジン；ならびに、Ｎ−ε−（１−メチルシクロプロ−２−エネカルボキシアミド（ｅｎｅｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ））リジンが挙げられる。
【０１１７】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、米国特許第９，９８８，６１９号及び米国特許第９，９３８，５１６号において開示されたシンテターゼによって、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。そのようなシンテターゼによって組み込まれ得る典型的なＵＡＡとしては、パラ−メチルアジド−Ｌ−フェニルアラニン、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアラルキル非天然アミノ酸、あるいは他のものが挙げられる。幾つかの実施形態において、そのようなＵＡＡは、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、チオフェニル、又は他の複素環を含む。幾つかの実施形態において、そのようなアミノ酸は、アジド、テトラジン、又は水溶性部分などの結合パートナーに抱合することができる他の化学基を含む。幾つかの実施形態において、そのようなシンテターゼは発現され、インビボでサイトカインにＵＡＡを組み込むために使用される。幾つかの実施形態において、そのようなシンテターゼは、無細胞翻訳系を使用して、サイトカインにＵＡＡを組み込むために使用される。
【０１１８】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、自然発生のシンテターゼによって、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる。幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、１つ以上のアミノ酸に対して栄養要求性の生物によってサイトカインに組み込まれる。幾つかの実施形態において、栄養要求性アミノ酸に対応するシンテターゼは、非天然アミノ酸で対応するｔＲＮＡをチャージすることができる。幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、セレノシステイン又はその誘導体である。幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、セレノメチオニン又はその誘導体である。幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、ヨウ化物などのハロゲン化アリールを含む芳香族アミノ酸である。実施形態において、非天然アミノ酸は、栄養要求性アミノ酸に構造的に類似する。
【０１１９】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、図１において例証される非天然アミノ酸を含む。
【０１２０】
幾つかの例では、非天然アミノ酸は、リジン又はフェニルアラニンの誘導体又はアナログを含む。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、リジン誘導体又はリジンアナログを含む。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、ピロリジン（Ｐｙｌ）を含む。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、フェニルアラニン誘導体又はフェニルアラニンアナログを含む。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、Ｗａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｙｒｒｏｌｙｓｙｌ−ｔＲＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ：  ａｎ  ｏｒｄｉｎａｒｙ  ｅｎｚｙｍｅ  ｂｕｔ  ａｎ  ｏｕｔｓｔａｎｄｉｎｇ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｃｏｄｅ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｔｏｏｌ，”  Ｂｉｏｃｈｅｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｅｔａ  １８４４（６）：  １０５９−４０７０  （２０１４）に記載される非天然アミノ酸である。幾つかの例では、非天然アミノ酸は、図２（例えば、図２Ａ及び図２Ｂ）において例証される非天然アミノ酸を含む。
【０１２１】
幾つかの実施形態において、非天然アミノ酸は、図３Ａ−図３Ｄにおいて例証される非天然アミノ酸を含む（Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１５，  ６，  ５０−６９の表１から採用される）。
【０１２２】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、ＩＬ  ポリペプチド）に組み込まれる非天然アミノ酸は、ＵＳ９，８４０，４９３；ＵＳ９，６８２，９３４；ＵＳ２０１７／０２６０１３７；ＵＳ９，９３８，５１６；又は、ＵＳ２０１８／００８６７３４に開示される。そのようなシンテターゼによって組み込まれ得る典型的なＵＡＡは、パラ−メチルアジド−Ｌ−フェニルアラニン、アラルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロアラルキル、及びリジン誘導体の非天然アミノ酸を含む。幾つかの実施形態において、そのようなＵＡＡは、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、チオフェニル、又は他の複素環を含む。幾つかの実施形態において、そのようなアミノ酸は、アジド、テトラジン、又は水溶性部分などの結合パートナーに抱合することができる他の化学基を含む。幾つかの実施形態において、ＵＡＡは、アルキルリンカーを介して芳香族部分に結合されるアジドを含む。幾つかの実施形態において、アルキルリンカーは、Ｃ１−Ｃ１０リンカーである。幾つかの実施形態において、ＵＡＡは、アルキルリンカーを介して芳香族部分に結合されるテトラジンを含む。幾つかの実施形態において、ＵＡＡは、アミノ基を介して芳香族部分に結合されるテトラジンを含む。幾つかの実施形態において、ＵＡＡは、アルキルアミノ基を介して芳香族部分に結合されるテトラジンを含む。幾つかの実施形態において、ＵＡＡは、アルキル鎖を介してアミノ酸側鎖の末端窒素（例えば、リジン誘導体のＮ６、短いアルキル側鎖を含む誘導体のＮ５、Ｎ４、又Ｎ３）に結合されるアジドを含む。幾つかの実施形態において、ＵＡＡは、アルキル鎖を介してアミノ酸側鎖の末端窒素に結合されるテトラジンを含む。幾つかの実施形態において、ＵＡＡは、アルキル基のリンカーを介してアミドに結合されるアジド又はテトラジンを含む。幾つかの実施形態において、ＵＡＡは、アジド又はテトラジン含有カルバマート、あるいは３−アミノアラニン、セリン、リジン、又はその誘導体のアミドである。幾つかの実施形態において、そのようなＵＡＡは、インビボでサイトカインに組み込まれる。幾つかの実施形態において、そのようなＵＡＡは、無細胞系におけるサイトカインに組み込まれる。
【０１２３】
抱合部分
特定の実施形態において、上に記載される１つ以上のサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）に結合される抱合部分が本明細書に開示される。幾つかの例では、抱合部分は、サイトカインとその受容体の相互作用を乱す分子である。幾つかの例では、抱合部分は、サイトカインに結合される場合、サイトカイン抱合を可能にして、免疫応答を調節することができる任意の分子である。幾つかの例では、抱合部分は、共有結合を介してサイトカインに結合される。幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカインは、トリアゾール基との抱合部分に結合される。幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカインは、ジヒドロピリダジン又はピリダジン基との抱合部分に結合される。幾つかの例では、抱合部分は水溶性高分子を含む。他の例では、抱合部分はタンパク質又はその結合フラグメントを含む。さらなる場合において、抱合部分はペプチドを含む。さらなる場合において、抱合部分は核酸を含む。さらなる場合において、抱合部分は小分子を含む。さらなる場合において、抱合部分は、バイオコンジュゲート（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ９アゴニストなどのＴＬＲアゴニスト；又は、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＣＦＡ、ＭＡＬＰ２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＦＳＬ−１、Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ポリＩＣ、ポリＡ：Ｕ、ＡＧＰ、ＭＰＬ  Ａ、ＲＣ−５２９、ＭＤＦ２β、ＣＦＡ、又はフラジェリンなどの合成リガンド）を含む。場合によっては、抱合部分は、血清半減期を増加させ、及び／又は安定性を改善する。場合によっては、抱合部分は、１つ以上のサイトカイン受容体ドメイン又はサブユニットとのサイトカイン相互作用を減少させる。さらなる場合において、抱合部分は、１つ以上のサイトカインドメイン又はその同族受容体を有するサブユニットとサイトカインとの相互作用を遮断する。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカイン抱合は、複数の複合部分を含む。幾つかの実施形態において、抱合部分は、サイトカインペプチドにおける非天然又は天然アミノ酸に結合される。幾つかの実施形態において、サイトカイン抱合体は、天然アミノ酸に結合される抱合部分を含む。幾つかの実施形態において、サイトカイン抱合体は、サイトカインペプチドにおける非天然アミノ酸に結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は、サイトカインペプチドのＮ末端又はＣ末端アミノ酸に結合される。様々な組み合わせ部位が本明細書に開示され、例えば、第１の抱合部分は、サイトカインペプチドにおける非天然又は天然アミノ酸に結合され、第２の抱合部分は、サイトカインペプチドのＮ末端又はＣ末端アミノ酸に結合される。幾つかの実施形態において、単一の抱合部分は、サイトカインペプチド（例えば、ステープル）の複数の残基に結合される。幾つかの実施形態において、抱合部分は、サイトカインペプチドのＮ末端及びＣ末端アミノ酸の両方に結合される。
【０１２４】
水溶性ポリマー
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合部分は水溶性高分子である。幾つかの例では、水溶性高分子は、非ペプチド性、無毒、及び生体適合性である。本明細書で使用されるように、生体組織（例えば、患者の投与）に関する物質のみの使用、あるいは他の物質（例えば、サイトカイン部分などの活性薬剤）との使用に関連する有益な効果が、臨床医（例えば、医師、毒物学者、臨床開発専門家）によって評価されるような任意の有害な影響より上回る場合、物質は生体適合性であるとみなされる。幾つかの例では、水溶性高分子はさらに非免疫原性である。幾つかの例では、インビボでの物質の意図された使用が望ましくない免疫応答（例えば、抗体の形成）をもたらさない場合、あるいは、臨床医（例えば、医師、毒物学者、臨床開発専門家）によって評価されるような、臨床的に有意又は重要であると認められない免疫応答が生じる場合、物質は非免疫原であるとみなされる。
【０１２５】
幾つかの例では、水溶性高分子は、約２〜約３００の終端を有するとして特徴付けられる。典型的な水溶性のポリマーとしては、限定されないが、ポリ（アルキレングリコール）、例えば、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）、エチレングリコール及びプロピレングリコールのコポリマーなど、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリアクリルアミド（ＰＡＡｍ）、ポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）（ＰＨＰＭＡ）、ポリジメチルアクリルアミド（ＰＤＡＡｍ）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）（国際公開第２００８／１０６１８６号に記載される）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、及び前述のもののいずれかの組み合わせが挙げられる。
【０１２６】
場合によっては、水溶性高分子は特定の構造に限定されない。場合によっては、水溶性高分子は、直鎖状（例えば、エンドキャップされた、例えば、アルコキシＰＥＧ、二官能性のＰＥＧ）、分枝状又は多アームの（例えば、ポリオールコアに結合される分岐したＰＥＧ又はＰＥＧ）、樹枝状の（又は、星状体）構造であり、各々は、１つ以上の分解性結合を有するか、あるいは有しない。さらに、水溶性高分子の内部構造は、任意の数の異なる反復パターンで構築することができ、ならびに、ホモポリマー、交互共重合体、ランダム共重合体、ブロック共重合体、交互トリポリマー（ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ  ｔｒｉｐｏｌｙｍｅｒ）、ランダムトリポリマー（ｒａｎｄｏｍ  ｔｒｉｐｏｌｙｍｅｒ）、ブロックトリポリマー（ｂｌｏｃｋ  ｔｒｉｐｏｌｙｍｅｒ）からなる群から選択することができる。
【０１２７】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体における水溶性高分子の重量平均分子量は、約１００ダルトン〜約１５０，０００ダルトンである。典型的な範囲は、例えば、５，０００ダルトン以上〜約１００，０００ダルトンの範囲、約６，０００ダルトン〜約９０，０００ダルトンの範囲、約８５，０００ダルトン〜約１０，０００ダルトンの範囲、１０，０００ダルトン以上〜約８５，０００ダルトンの範囲、約２０，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約５３，０００ダルトン〜約８５，０００ダルトンの範囲、約２５，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、約２９，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、約３５，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲、及び約４０，０００ダルトン〜約１２０，０００ダルトンの範囲の重量平均分子量を含む。
【０１２８】
水溶性高分子の典型的な重量平均分子量は、約１００ダルトン、約２００ダルトン、約３００ダルトン、４００ダルトン、約５００ダルトン、約６００ダルトン、約７００ダルトン、約７５０ダルトン、約８００ダルトン、約９００ダルトン、約１，０００ダルトン、約１，５００ダルトン、約２，０００ダルトン、約２，２００ダルトン、約２，５００ダルトン、約３，０００ダルトン、約４，０００ダルトン、約４，４００ダルトン、約４，５００ダルトン、約５，０００ダルトン、約５，５００ダルトン、約６，０００ダルトン、約７，０００ダルトン、約７，５００ダルトン、約８，０００ダルトン、約９，０００ダルトン、約１０，０００ダルトン、約１１，０００ダルトン、約１２，０００ダルトン、約１３，０００、約１４，０００ダルトン、約１５，０００ダルトン、約２０，０００ダルトン、約２２，５００ダルトン、約２５，０００ダルトン、約３０，０００ダルトン、約３５，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約４５，０００ダルトン、約５０，０００ダルトン、約５５，０００ダルトン、約６０，０００ダルトン、約６５，０００ダルトン、約７０，０００ダルトン、及び約７５，０００ダルトンを含む。前述のいずれかの総分子量を有する分枝状バージョンの水溶性高分子（例えば、２つの２０，０００ダルトンのポリマーから構成される分枝状の４０，０００ダルトンの水溶性高分子）も使用することができる。１つ以上の実施形態において、抱合体は、約６，０００ダルトン未満の重量平均分子量を有するＰＥＧに、直接又は間接的に結合されるＰＥＧ部分を有しないだろう。
【０１２９】
ＰＥＧは典型的に、多数の（ＯＣＨ２ＣＨ２）単量体［又は、ＰＥＧがどのように定義されるかに応じて（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）単量体］を含むだろう。本明細書で使用されるように、反復単位の数は「（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ」中の添字「ｎ」によって識別される。したがって、（ｎ）の値は、典型的には以下の範囲の１つ以上に該当する：約２〜約３４００、約１００〜約２３００、約１００〜約２２７０、約１３６〜約２０５０、約２２５〜約１９３０、約４５０〜約１９３０、約１２００〜約１９３０、約５６８〜約２７２７、約６６０〜約２７３０、約７９５〜約２７３０、約７９５〜約２７３０、約９０９〜約２７３０、及び約１，２００〜約１，９００。分子量が既知の所定のポリマーに関しては、反復単量体の分子量でポリマーの全重量平均分子量を割ることにより、反復単位（すなわち「ｎ」）の数を決定することが可能である。
【０１３０】
幾つかの例では、水溶性高分子は、エンドキャップされたポリマー、すなわち、より低いＣ１−６アルコキシ基、又はヒドロキシル基などの比較的不活性な基によりキャップされる少なくとも１つの終端を有するポリマーである。ポリマーがＰＥＧである場合、例えば、直鎖状のＰＥＧであるメトキシ−ＰＥＧ（一般的にｍＰＥＧと呼ばれる）が使用されてもよく、ここで、ポリマーの１つの終端はメトキシ（−−ＯＣＨ３）基であり、もう一方の終端は随意に化学的に改変されるヒドロキシル又は他の官能基である。
【０１３１】
幾つかの実施形態において、典型的な水溶性高分子としては、限定されないが、Ｑｕａｎｔａ  Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ，  Ｌｔｄの直鎖又は分枝状の個々のＰＥＧ（ｄＰＥＧ）；Ｎｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓの分枝状、直鎖状、あるいは分岐状のＰＥＧ；及び、ＪｅｎＫｅｍ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＹ状のＰＥＧ誘導体が挙げられる。
【０１３２】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ポリ（アルキレングリコール）、例えば、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）、エチレングリコール及びプロピレングリコールなどのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリアクリルアミド（ＰＡＡｍ）、ポリジメチルアクリルアミド（ＰＤＡＡｍ）、ポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）（ＰＨＰＭＡ）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、及びそれらの組み合わせから選択される水溶性高分子に抱合される。幾つかの例では、サイトカインポリペプチドはＰＥＧ（例えば、ペグ化された）に抱合される。幾つかの例では、サイトカインポリペプチドはＰＰＧに抱合される。幾つかの例では、サイトカインポリペプチドはＰＯＺに抱合される。幾つかの例では、サイトカインポリペプチドはＰＶＰに抱合される。
【０１３３】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるＩＬ−２は、ポリ（アルキレングリコール）、例えば、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）、エチレングリコール及びプロピレングリコールなどのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリラート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリアクリルアミド（ＰＡＡｍ）、ポリジメチルアクリルアミド（ＰＤＡＡｍ）、ポリ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）（ＰＨＰＭＡ）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、及びそれらの組み合わせから選択される水溶性高分子に抱合される。幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＥＧ（例えば、ペグ化された）に抱合される。幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＰＧに抱合される。幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＯＺに抱合される。幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＶＰに抱合される。
【０１３４】
幾つかの例では、水溶性高分子はポリグリセロール（ＰＧ）を含む。場合によっては、ポリグリセロールは、高分岐ＰＧ（ＨＰＧ）（例えば、Ｉｍｒａｎ，  ｅｔ  ａｌ．  “Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｌｉｎｅａｒ  ａｎｄ  ｂｒａｎｃｈｅｄ  ｐｏｌｙｇｌｙｃｅｒｏｌｓ  ｏｎ  ｔｈｅｉｒ  ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，”  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ３３：９１３５−９１４７  （２０１２）によって記載されるような）である。その他の場合において、ポリグリセロールは直鎖状ＰＧ（ＬＰＧ）である。さらなる場合において、ポリグリセロールは、中官能性ＰＧ、直鎖状のブロック高分岐ＰＧ（例えば、Ｗｕｒｍ  ｅｔ．  Ａｌ．  ，  “Ｓｑｕａｒｉｃ  ａｃｉｄ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｌｉｂｒａｒｙ  ｏｆ  ｌｉｎｅａｒ  ａｎｄ  ｈｙｐｅｒｂｒａｎｃｈｅｄ  ｐｏｌｙ（ｇｌｙｃｅｒｏｌ）−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １３：１１６１−１１７１  （２０１２））により記載される）、又は側鎖状の官能性ＰＧ（例えば、Ｌｉ，  ｅｔ．  ａｌ．，  “Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｌｉｎｅａｒ  ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ  ｐｏｌｙｏｌ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｓ  ｎｅｗ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ，”  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ２０：７８０−７８９  （２００９）により記載される）である。
【０１３５】
幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ＰＧ、例えば、ＨＰＧ、ＬＰＧ、中官能性ＰＧ、直鎖状のブロック高分岐ＰＧ、側鎖の官能性ＰＧに抱合される。幾つかの例では、サイトカインはＩＬ−２ポリペプチドである。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＰＧ、中官能性ＰＧ、直鎖状のブロック高分岐ＰＧに抱合される。
【０１３６】
幾つかの実施形態において、水溶性高分子は分解性合成ＰＥＧ代替物である。典型的な分解性合成ＰＥＧ代替物としては、限定されないが、ポリ［オリゴ（エチレングリコール）メタクリル酸メチル］（ＰＯＥＧＭＡ）；テレキーレック、あるいは両末端が官能基化されたＰＥＧベースのマクロモノマー重合によって生成された、骨格を修飾したＰＥＧ誘導体；分解性結合、例えば、ポリ［（エチレンオキシエ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｏｘｉｅ））−ｃｏ−（メチレンエチレンオキシド］［Ｐ（ＥＯ−ｃｏ−ＭＥＯ）、環状ケテンアセタール、例えば、５，６−ベンゾ−２−メチレン−１，３−ジオキセパン（ＢＭＤＯ）などの、２−メチレン−１，３−ジオキセパン（ＭＤＯ）、及びＯＥＧＭＡで共重合された２−メチレン−４−フェニル−１，３−ジオキソラン（ＭＰＤＬ）を含む、コモノマーを含むＰＥＧ誘導体；又は、ポリ（ε−カプロラクトン）−グラフト（ｇｒａｆｔ）−ポリ（エチレンオキシド）（ＰＣＬｇ−ＰＥＯ）が挙げられる。
【０１３７】
幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、分解性合成ＰＥＧ代替物、例えば、ＰＯＥＧＭ；テレキーレック、あるいは両末端が官能基化されたＰＥＧベースのマクロモノマー重合によって生成された、骨格を修飾したＰＥＧ誘導体；Ｐ（ＥＯ−ｃｏ−ＭＥＯ）；ＯＥＧＭＡにより共重合されたＢＭＤＯ、ＭＤＯ、及びＭＰＤＬなどの環状のケテンアセタール；又は、ＰＣＬ−ｇ−ＰＥＯなどに抱合される。幾つかの例では、サイトカインはＩＬ−２ポリペプチドである。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、分解性合成ＰＥＧ代替物、例えば、ＰＯＥＧＭ；テレキーレック、あるいは両末端が官能基化されたＰＥＧベースのマクロモノマー重合によって生成された、骨格を修飾したＰＥＧ誘導体；Ｐ（ＥＯ−ｃｏ−ＭＥＯ）；ＯＥＧＭＡにより共重合されたＢＭＤＯ、ＭＤＯ、及びＭＰＤＬなどの環状のケテンアセタール；又は、ＰＣＬ−ｇ−ＰＥＯなどに抱合される。
【０１３８】
幾つかの実施形態において、水溶性高分子はポリ（双性イオン）を含む。典型的なポリ（双性イオン）としては、限定されないが、ポリ（スルホベタインメタクリレート）（ＰＳＢＭＡ）、ポリ（カルボキシベタインメタクリレート）（ＰＣＢＭＡ）、及びポリ（２−メタクリロイルオキシエチル（ｍｅｔｈｙａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙｅｔｈｙｌ）ホスホリルコリン）（ＰＭＰＣ）が挙げられる。幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ポリ（双性イオン）、例えば、ＰＳＢＭＡ、ＰＣＢＭＡ、又はＰＭＰＣに抱合される。場合によっては、サイトカインはＩＬ−２ポリペプチドである。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、ポリ（双性イオン）、例えば、ＰＳＢＭＡ、ＰＣＢＭＡ、又はＰＭＰＣに抱合される。
【０１３９】
幾つかの実施形態において、水溶性高分子はポリカーボネートを含む。典型的なポリカーボネートとしては、限定されないが、ペンタフルオロフェニル５−メチル−２−オキソ−１，３−ジオキサン−５−カルボン酸塩（ＭＴＣ−ＯＣ６Ｆ５）が挙げられる。幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ポリカーボネート、例えば、ＭＴＣ−ＯＣ６Ｆ５に抱合される。場合によっては、サイトカインはＩＬ−２ポリペプチドである。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはポリカーボネート、例えば、ＭＴＣ−ＯＣ６Ｆ５に抱合される。
【０１４０】
幾つかの実施形態において、水溶性高分子は、ポリマーハイブリッド、例えば、ポリカーボネート／ＰＥＧポリマーハイブリッド、ペプチド／タンパク質ポリマー抱合体、又はヒドロキシル基を含む及び／又は両性イオンの誘導体化されたポリマー（例えば、ヒドロキシル基を含む及び／又は両性イオンの誘導体化されたＰＥＧポリマー）などを含む。幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ポリマーハイブリッド、例えば、ポリカーボネート／ＰＥＧポリマーハイブリッド、ペプチド／タンパク質ポリマー抱合体、又はヒドロキシル基を含む及び／又は両性イオンの誘導体化されたポリマー（例えば、ヒドロキシル基を含む及び／又は両性イオンの誘導体化されたＰＥＧポリマー）に抱合される。場合によっては、サイトカインはＩＬ−２ポリペプチドである。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、ポリマーハイブリッド、例えば、ポリカーボネート／ＰＥＧポリマーハイブリッド、ペプチド／タンパク質ポリマー抱合体、又はヒドロキシル基を含む及び／又両性イオンの誘導体化されたポリマー（例えば、ヒドロキシル基を含む及び／又は両性イオンの誘導体化されたＰＥＧポリマー）に抱合される。
【０１４１】
幾つかの例では、水溶性高分子は多糖を含む。典型的な多糖としては、限定されないが、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、デキストリン、又はヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）が挙げられる。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは多糖に抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはデキストランに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＳＡに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＨＡに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはアミロースに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはヘパリンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＨＳに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはデキストリンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＨＥＳに抱合される。
【０１４２】
場合によっては、水溶性高分子はグリカンを含む。グリカンの典型的なクラスは、Ｎ結合型グリカン、Ｏ結合型グリカン、糖脂質、Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ、及びグリコサミノグリカンを含む。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、グリカンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＮ結合型グリカンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＯ結合型グリカンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは糖脂質に抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＯ−ＧｌｃＮＡｃに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはグリコサミノグリカンに抱合される。
【０１４３】
幾つかの実施形態において、水溶性高分子はポリオキサゾリンポリマーを含む。ポリオキサゾリンポリマーは線状合成ポリマーであり、及びＰＥＧと類似し、低い多分散を含む。幾つかの例では、ポリオキサゾリンポリマーは、平均分子体重により特徴づけられる、多分散のポリオキサゾリンポリマーである。場合によっては、ポリオキサゾリンポリマーの平均分子体重は、例えば、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、１０，０００、１２，０００、２０，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、１００，０００、２００，０００、３００，０００、４００，０００又は５００，０００Ｄａを含む。幾つかの例では、ポリオキサゾリンポリマーは、ポリ（２−メチル２−オキサゾリン）（ＰＭＯＺ）、ポリ（２−エチル２−オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、ポリ（２−プロピル２−オキサゾリン）（ＰＰＯＺ）を含む。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ポリオキサゾリンポリマーに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはポリオキサゾリンポリマーに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＭＯＺに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＥＯＺに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＰＯＺに抱合される。
【０１４４】
幾つかの例では、水溶性高分子はポリアクリル酸ポリマーを含む。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ポリアクリル酸ポリマーに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはポリアクリル酸ポリマーに抱合される。
【０１４５】
幾つかの例では、水溶性高分子はポリアミンを含む。ポリアミンは、２つ以上の一級アミノ基を含む有機ポリマーである。幾つかの実施形態において、ポリアミンは、分岐ポリアミン、直鎖状ポリアミン、又は環状ポリアミンを含む。場合によっては、ポリアミンは低分子量の直鎖状ポリアミンである。典型的なポリアミンは、プトレッシン、カダベリン、スペルミジン、スペルミン、エチレンジアミン、１，３−ジアミノプロパン、ヘキサメチレンジアミン、テトラエチルメチレンジアミン、及びピペラジンを含む。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ポリアミンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはポリアミンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、プトレッシン、カダベリン、スペルミジン、スペルミン、エチレンジアミン、１，３−ジアミノプロパン、ヘキサメチレンジアミン、テトラエチルメチレンジアミン、又はピペラジンに抱合される。
【０１４６】
幾つかの例では、水溶性高分子は、米国特許第７，７４４，８６１号、第８，２７３，８３３号、及び第７，８０３，７７７号に記載されている。幾つかの例では、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、米国特許第７，７４４，８６１号、第８，２７３，８３３号、又は第７，８０３，７７７号に記載されるリンカーに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、米国特許第７，７４４，８６１号、第８，２７３，８３３号、又は第７，８０３，７７７号に記載されるリンカーに抱合される。
【０１４７】
脂質
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合部分は脂質である。幾つかの例において、脂質は脂肪酸である。場合によっては、脂肪酸は飽和脂肪酸である。その他の場合において、脂肪酸は不飽和脂肪酸である。典型的な脂肪酸は、限定されないが、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２炭素原子、約１２から約２０炭素原子、又は約１２から約１８炭素原子を含む脂肪酸を含む。場合によっては、脂質は、１つ以上の血清タンパク質に結合し、それによって、血清安定性及び／又は血清半減期を増加させる。
【０１４８】
幾つかの実施形態において、脂質はＩＬ−２に抱合される。幾つかの例では、脂質は、脂肪酸、例えば、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸である。場合によっては、脂肪酸は、約６から約２６の炭素原子、約６から約２４の炭素原子、約６から約２２の炭素原子、約６から約２０の炭素原子、約６から約１８の炭素原子、約２０から約２６の炭素原子、約１２から約２６の炭素原子、約１２から約２４の炭素原子、約１２から約２２の炭素原子、約１２から約２０の炭素原子、又は約１２から約１８の炭素原子である。場合によっては、脂肪酸は、約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、あるいは２６炭素原子の長さを含む。場合によっては、脂肪酸は、カプロン酸（ヘキサン酸）エナント酸（ヘプタン酸）、カプリル酸（オクタン酸）、ペラルゴン酸（ノナン酸）、カプリン酸（デカン酸）、ウンデシル酸（ウンデカン酸）、ラウリン酸（ドデカン酸）、トリデシル酸（トリデカン酸）、ミリスチン酸（テトラデカン酸）、ペンタデシル酸（ペンタデカン酸）、パルミチン酸（ヘキサデカン酸）、マルガリン酸（ヘプタデカン酸）、ステアリン酸（オクタデカン酸）、ノナデシル酸（ノナデカノン酸）、アラキジン酸（エイコサン酸）、ヘンイコシル酸（ヘンイコサノン酸）、ベヘン産（ドコサン酸）、トリコシル酸（トリコサノン酸）、リグノセリン酸（テトラコサン酸）、ペンタコシル酸（ペンタコサン酸）又はセロチン酸（ヘキコサン酸）を含む。
【０１４９】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２脂質抱合体は、血清安定性及び／又は血清半減期を増加させる。
【０１５０】
タンパク質
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合部分は、タンパク質又はその結合フラグメントである。典型的なタンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、又はトランスサイレチンを含む。幾つかの例では、タンパク質又はその結合フラグメントは、抗体、又はその結合フラグメントを含む。場合によっては、サイトカイン抱合体は、タンパク質又はその結合フラグメントを含む。場合によっては、タンパク質又はその結合フラグメントを含むＩＬ−２抱合体は、増加した血清半減期、及び／又は安定性を有する。場合によっては、タンパク質又はその結合フラグメントを含むＩＬ−２抱合体は、１つ以上のＩＬ−２Ｒサブユニットと減少したＩＬ−２の相互作用を有する。さらなる場合において、タンパク質又はその結合フラグメントは、１つ以上のＩＬ−２ＲサブユニットとＩＬ−２の相互作用を遮断する。
【０１５１】
幾つかの実施形態において、抱合部分はアルブミンである。アルブミンは、水溶性の球状たんぱくのファミリーである。それは、一般に血漿において見られ、全血漿たんぱく質の約５５−６０％を構成する。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、三次構造３つのドメイン、つまり、ドメインＩ（アミノ酸残基１−１９５）、ドメインＩＩ（アミノ酸残基１９６−３８３）及びドメインＩＩＩ（アミノ酸残基３８４−５８５）へと三次構造が分割される、５８５のアミノ酸ポリペプチドである。各ドメインは、内在性リガンド、例えば、長鎖脂肪酸及び中鎖脂肪酸、ビリルビン、又はヘミン、あるいは、外因性化合物、例えば、複素環化合物又は芳香族化合物と、可逆的に又は不可逆的に相互作用することができる結合部位を含む。
【０１５２】
場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、アルブミンに抱合される。場合によっては、サイトカインポリペプチドは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に抱合される。さらなる場合において、サイトカインポリペプチドは、アルブミンの機能性フラグメントに抱合される。
【０１５３】
幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドはアルブミンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に抱合される。さらなる場合おいて、ＩＬ−２ポリペプチドはアルブミンの機能性フラグメントに抱合される。
【０１５４】
幾つかの実施形態において、抱合部分はトランスフェリンである。トランスフェリンは、約８０ｋＤａのサイズであり、２つのＦｅ３＋結合部位を含む（Ｎ末端ドメインに１つと、Ｃ末端ドメインに１つ）、６７９のアミノ酸ポリペプチドである。幾つかの例では、ヒトトランスフェリンは、約７−１２日の半減期を有する。
【０１５５】
幾つかの例では、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、トランスフェリンに抱合される。場合によっては、サイトカインポリペプチドは、ヒトトランスフェリンに抱合される。さらなる場合において、サイトカインポリペプチドは、トランスフェリンの機能性フラグメントに抱合される。
【０１５６】
幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドはトランスフェリンに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはヒトトランスフェリンに抱合される。さらなる場合において、ＩＬ−２ポリペプチドは、トランスフェリンの機能性フラグメントに抱合される。
【０１５７】
幾つかの実施形態において、抱合部分はトランスサイレチン（ＴＴＲ）である。トランスサイレチンは、レチノールに結合された甲状腺ホルモンチロキシン（Ｔ４）及びレチノール結合タンパク質を運ぶ、血清及び脳脊髄液に存在する輸送タンパク質である。
【０１５８】
幾つかの例では、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、トランスサイレチンに抱合される（その終端の１つ、又は内部ヒンジ領域を介して）。場合によっては、サイトカインポリペプチドは、トランスサイレチンの機能性フラグメントに抱合される。
【０１５９】
幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドは、トランスサイレチン（その終端の１つ、又は内部ヒンジ領域を介して）に抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、トランスサイレチンの機能性フラグメントに抱合される。
【０１６０】
幾つかの実施形態では、抱合部分は、抗体又はその結合フラグメントである。幾つかの例では、抗体又はその結合フラグメントは、ヒト化抗体又はその結合フラグメント、マウス抗体又はその結合フラグメント、キメラ抗体又はその結合フラグメント、モノクローナル抗体又はその結合フラグメント、一価のＦａｂ’、二価のＦａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ  ＮＡＲ、ｃａｍｅｌｉｄ抗体又はその結合フラグメント、二重特異性抗体又はその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘導体を含む。
【０１６１】
幾つかの例では、抱合部分は、ｓｃＦｖ、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｓＦｖ、又はｓｄＡｂを含む。場合によっては、抱合部分はｓｃＦｖを含む。場合によっては、抱合部分はビス−ｓｃＦｖを含む。場合によっては、抱合部分は（ｓｃＦｖ）２を含む。場合によっては、抱合部分はｄｓＦｖを含む。場合によっては、抱合部分はｓｄＡｂを含む。
【０１６２】
幾つかの例では、抱合部分は、抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、又はＩｇＤのＦｃ部分を含む。幾つかの例では、上記部分は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ部分を含む。
【０１６３】
場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、抗体、又はその結合フラグメントに抱合される。幾つかの例では、サイトカインポリペプチドは、ヒト化抗体又はその結合フラグメント、マウス抗体又はその結合フラグメント、キメラ抗体又はその結合フラグメント、モノクローナル抗体又はその結合フラグメント、一価のＦａｂ’、二価のＦａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ  ＮＡＲ、ｃａｍｅｌｉｄ抗体又はその結合フラグメント、二重特異性抗体又はその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘導体に抱合される。さらなる場合において、サイトカインポリペプチドは抗体のＦｃ部分に抱合される。さらなる場合において、サイトカインポリペプチドは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ部分に抱合される。
【０１６４】
場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドは、抗体、又はその結合フラグメントに抱合される。幾つかの例では、ＩＬ−２ポリペプチドは、ヒト化抗体又はその結合フラグメント、マウス抗体又はその結合フラグメント、キメラ抗体又はその結合フラグメント、モノクローナル抗体又はその結合フラグメント、一価のＦａｂ’、二価のＦａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ  ＮＡＲ、ｃａｍｅｌｉｄ抗体又はその結合フラグメント、二重特異性抗体又はその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘導体に抱合される。さらなる場合において、ＩＬ−２ポリペプチドは抗体のＦｃ部分に抱合される。さらなる場合において、ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ部分に抱合される。
【０１６５】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２ポリペプチドは、水溶性高分子（例えば、ＰＥＧ）、抗体又はその結合フラグメントに抱合される。場合によっては、抗体又はその結合フラグメントは、ヒト化抗体又はその結合フラグメント、マウス抗体又はその結合フラグメント、キメラ抗体又はその結合フラグメント、モノクローナル抗体又はその結合フラグメント、一価のＦａｂ’、二価のＦａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス−ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、トリアボディ、テトラボディ、ヒューマボディ、ジスルフィド安定Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ  ＮＡＲ、ｃａｍｅｌｉｄ抗体又はその結合フラグメント、二重特異性抗体又はその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘導体を含む。場合によっては、抗体又はその結合フラグメントは、ｓｃＦｖ、ビス−ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｓＦｖ、又はｓｄＡｂを含む。場合によっては、抗体又はその結合フラグメントはｓｃＦｖを含む。場合によっては、抗体又はその結合フラグメントはＩＬ−２抱合体を対象の標的細胞へと導き、及び水溶性高分子は安定性及び／又は血清半減期を増加させる。
【０１６６】
幾つかの例では、１つ以上のＩＬ−２ポリペプチド−水溶性高分子（例えば、ＰＥＧ）抱合体は、抗体又はその結合フラグメントにさらに結合される。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体対抗体の比率は、約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、又は１２：１である。場合によっては、ＩＬ−２結合体対抗体の比率は約１：１である。その他の場合において、ＩＬ−２結合体対抗体の比率は、約２：１、３：１、又は４：１である。さらなる場合において、ＩＬ−２結合体対抗体の比率は約６：１以上である。
【０１６７】
幾つかの実施形態において、１つ以上のＩＬ−２ポリペプチド−水溶性高分子（例えば、ＰＥＧ）抱合体は、抗体又はその結合フラグメントに直接結合される。他の例では、ＩＬ−２抱合体は、リンカーにより抗体又は結合そのフラグメントに間接的に結合される。典型的なリンカーは、ホモ二官能性リンカー、ヘテロ官能性リンカー、マレイミドベースのリンカー、ゼロトレースのリンカー、自壊性リンカー、スペーサー等を含む。
【０１６８】
幾つかの実施形態において、抗体又はその結合フラグメントは、ＩＬ−２ポリペプチド−水溶性高分子（例えば、ＰＥＧ）抱合体のＩＬ−２ポリペプチド部分に直接あるいは間接的に結合される。そのような場合、ＩＬ−２ポリペプチドに対する抗体の抱合部位は、ＩＬ−２ＲβγとＩＬ−２ポリペプチドとの結合を妨害しない部位である。さらなる場合において、ＩＬ−２ポリペプチドに対する抗体の抱合部位は、ＩＬ−２ＲβγとＩＬ−２ポリペプチドとの結合を部分的に遮断する部位である。さらなる場合において、ＩＬ−２ポリペプチドに対する抗体の抱合部位は、ＩＬ−２ＲαとＩＬ−２ポリペプチドとの結合を妨害するか、あるいはさらに妨害する部位である。他の実施形態では、抗体又はその結合フラグメントは、ＩＬ−２ポリペプチド−水溶性高分子（例えば、ＰＥＧ）抱合体の水溶性高分子部分に直接又は間接的に結合される。
【０１６９】
ペプチド
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合部分はペプチドである。幾つかの例では、ペプチドは非構造化ペプチドである。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ペプチドに抱合される。場合によっては、ペプチドを含むＩＬ−２抱合体は、増加した血清半減期、及び／又は安定性を有する。場合によっては、ペプチドを含むＩＬ−２抱合体は、１つ以上のＩＬ−２Ｒサブユニットと減少したＩＬ−２の相互作用を有する。さらなる場合において、ペプチドは、１つ以上のＩＬ−２ＲサブユニットとＩＬ−２の相互作用を遮断する。
【０１７０】
幾つかの例では、抱合部分は、ＸＴＥＮ（商標）ペプチド（Ａｍｕｎｉｘ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｉｎｃ．）であり、その修飾はＸＴＥＮｙｌａｔｉｏｎと呼ばれる。ＸＴＥＮｙｌａｔｉｏｎは、ＸＴＥＮ（商標）ペプチド（Ａｍｕｎｉｘ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｉｎｃ．）、すなわち、６つのアミノ酸（Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、及びＴｈｒ）の異なるパーセンテージを含む長い非構造化親水性ペプチドをコードする核酸と、対象のポリペプチドをコードする核酸との遺伝学的な融合である。幾つかの例では、ＸＴＥＮ（商標）ペプチドは、発現、遺伝子安定性、溶解度、凝集抵抗、半減期の増加、効力の増強、及び／又は、対象のポリペプチドと組み合わせたインビトロの活性の増大などの特性に基づいて選択されている。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ＸＴＥＮペプチドに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＸＴＥＮペプチドに抱合される。
【０１７１】
幾つかの例では、抱合部分は、グリシンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）であり、その修飾はＨＡＰｙｌａｔｉｏｎと呼ばれる。ＨＡＰｙｌａｔｉｏｎは、グリシンに富むホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）をコードする核酸と、対象のポリペプチドをコードする核酸との遺伝学的な融合である。幾つかの例では、ＨＡＰポリマーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ反復モチーフ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）を含み、時に、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、又はそれ以上の長さの残基である。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドはＨＡＰに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＨＡＰに抱合される。
【０１７２】
幾つかの実施形態において、抱合部分はＰＡＳポリペプチドであり、その修飾はＰＡＳｙｌａｔｉｏｎと呼ばれる。ＰＡＳｙｌａｔｉｏｎは、ＰＡＳポリペプチドをコードする核酸と、対象のポリペプチドをコードする核酸との遺伝学的な融合である。ＰＡＳポリペプチドは、Ｐｒｏ、Ａｌａ、及びＳｅｒ残基から成る親水性の非荷電ポリペプチドである。幾つかの例では、ＰＡＳポリペプチドの長さは、少なくとも約１００、２００、３００、４００、５００、又は６００のアミノ酸である。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ＰＡＳポリペプチドに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＰＡＳポリペプチドに抱合される。
【０１７３】
幾つかの実施形態において、抱合部分はエラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）であり、その修飾はＥＬＰｙｌａｔｉｏｎと呼ばれる。ＥＬＰｙｌａｔｉｏｎは、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）をコードする核酸と、対象のポリペプチドをコードする核酸との遺伝学的な融合である。ＥＬＰはＶＰＧｘＧ反復モチーフ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）を含み、ここで、ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸である。場合によっては、サイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、ＥＬＰに抱合される。場合によっては、ＩＬ−２ポリペプチドはＥＬＰに抱合される。
【０１７４】
幾つかの実施形態において、抱合部分はＣＴＰペプチドである。ＣＴＰペプチドは、３１のアミノ酸残基ペプチドＦＱＳＳＳＳ＊ＫＡＰＰＰＳ＊ＬＰＳＰＳ＊ＲＬＰＧＰＳ＊ＤＴＰＩＬＰＱ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）を含み、ここで、Ｓ＊がＯ糖鎖付加部位（ＯＰＫＯ）を意味する。幾つかの例では、ＣＴＰペプチドは、サイトカインポリペプチド（例えば、ＩＬ−２ポリペプチド）に遺伝学的に融合される。場合によっては、サイトカインポリペプチド（例えば、ＩＬ−２ポリペプチド）は、ＣＴＰペプチドに抱合される。
【０１７５】
幾つかの実施形態において、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２ポリペプチド）は、グルタミル化（ｇｌｕｔａｍｙｌａｔｉｏｎ）によって修飾される。グルタミル化（又は、ポリグルタミル化）は、グルタミン酸の可逆的な翻訳後修飾であり、ここで、遊離グルタミン酸のアミノ基とのペプチド様結合を形成し、グルタミン酸のγ−カルボキシ基はα−カルボキシ基がポリグルタミン酸鎖へと伸長する。
【０１７６】
幾つかの実施形態において、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２ポリペプチド）は、ゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーによって修飾される。幾つかの例では、ＧＬＫポリマーはＧｌｙ−Ｘａａ−Ｙａａの複数の反復を含み、ここで、Ｘａａ及びＹａａは主にそれぞれプロリン及び４−ヒドロキシプロリンを含む。場合によっては、ＧＬＫポリマーは、アミノ酸残基Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ｑｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、及びＬｙｓをさらに含む。場合によっては、ＧＬＫポリマーの長さは、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１５０残基又はそれ以上である。
【０１７７】
付加的な抱合部分
幾つかの例では、抱合部分は細胞外のバイオマーカーを含む。幾つかの例では、細胞外のバイオマーカーは腫瘍抗原である。幾つかの例では、典型的な細胞外のバイオマーカーは、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ６、ＣＤ７０、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐｈＡ３、ＥｐＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＦＡＰ、ＦＲα、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＲＯＲ１、ＴＡＧ７２、ＶＥＧＦＲ２、ＣＤ１１、Ｇｒ−１、ＣＤ２０４、ＣＤ１６、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＢ２２０を含む。幾つかの例では、抱合部分はサイトカイン（例えばＩＬ−２）に結合されるか、あるいは抱合される。場合によっては、抱合部分は、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２）の、例えば、Ｎ末端又はＣ末端で、遺伝学的に融合される。
【０１７８】
幾つかの例では、抱合部分は、翻訳後修飾からの分子を含む。幾つかの例では、翻訳後修飾の例は、ミリストイル化、パルミトイル化、イソプレニル化（又はプレニル化）（例えばファルネシル化又はゲラニルゲラニル化）、グリピエーション、アシル化（例えば、Ｏアシル化、Ｎ−アシル化、Ｓアシル化）、アルキル化（例えば、メチル又はエチル基などのアルキル基の付加的な）、アミド化、グリコシル化、ヒドロキシル化、ヨウ素化、ヌクレオチド付加、酸化、リン酸化、サクシニル化、硫酸化、糖化、カルバミル化、グルタミル化、又は脱アミドを含む。幾つかの例では、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２）は、翻訳後修飾、例えば、ミリストイル化、パルミトイル化、イソプレニル化（又は、プレニル化）（例えば、ファルネシル化あるいはゲラニルゲラニル化）、グリピエーション、アシル化（例えば、Ｏアシル化、Ｎ−アシル化、Ｓアシル化）、アルキル化（例えば、メチル又はエチル基などのアルキル基の付加的な）、アミド化、グリコシル化、ヒドロキシル化、ヨウ素化、ヌクレオチド付加、酸化、リン酸化、サクシニル化、硫酸化、糖化、カルバミル化、グルタミル化、又は脱アミドによって修飾される。
【０１７９】
抱合
リンカー
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカインポリペプチド（例えば、ＩＬ−２ポリペプチド）の抱合部分に抱合するか、あるいは結合するための有用な官能性反応基は、例えば、０又は高次のリンカーを含む。幾つかの例では、本明細書に記載されるインターロイキンに組み込まれる非天然アミノ酸は、官能性反応基を含む。幾つかの例では、リンカーは、本明細書に記載されるインターロイキンに組み込まれる非天然アミノ酸と反応する官能性反応基を含む。幾つかの例では、抱合部分は、本明細書に記載されるインターロイキンに組み込まれる非天然アミノ酸と反応する官能性反応基を含む。幾つかの例では、抱合部分は、本明細書に記載されるリンカー（随意に、サイトカインペプチドにあらかじめ結合される）と反応する官能性反応基を含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、本明細書に記載されるサイトカインペプチド中の天然アミノ酸と反応する反応基を含む。場合によっては、高次のリンカーは、ホモ二官能性リンカー又はヘテロ官能性リンカーなどの官能性リンカーを含む。典型的なモ二官能性リンカーとしては、限定されないが、Ｌｏｍａｎｔ試薬ジチオビス（サクシニミヂルプロピオネート  ＤＳＰ及び３’３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジル  プロピオン酸塩（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジル  スベリン酸（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩（ＢＳ）、ジスクシンイミジルタルトレート（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジルタルトレート（スルホ  ＤＳＴ）、エチレングリコビス（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｂｉｓ）（スクシンイミジルスクシナート（ＥＧＳ）、ジスクシニミジルグルタラート（ＤＳＧ）、Ｎ、Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネート（ＤＳＣ）、ジメチルアジピミデート（ＤＭＡ）、ジメチルピメリミダート（ＤＭＰ）、ジメチルスベルイミデート（ＤＭＳ）、ジメチル−３、３’−ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４−ジ−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、例えば、例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン、あるいは１，３−ジフルオロ−４，６−ジニトロベンゼン、４，４’−ジフルオロ−３，３’−ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス−［β−（４−アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ−トルイジン、３，３’−ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α’−ｐ−ジアミノジフェニル、ジヨード−ｐ−キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス（ヨードアセトアミド又はＮ，Ｎ’−ヘキサメチレン−ビス（ヨードアセトアミド）を含む。
【０１８０】
幾つかの実施形態では、二官能性リンカーはヘテロ官能性リンカーを含む。典型的なヘテロ官能性リンカーとしては、限定されないが、アミン反応性クロスリンカー及びスルフヒドリルクロスリンカー、例えば、Ｎ−サクシニミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ−サクシニミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＬＣ−ｓＰＤＰ）、水溶性の長鎖Ｎ−サクシニミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（スルホ  ＬＣ−ｓＰＤＰ）、クシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル−６−［α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサン酸塩（スルホＬＣ−ｓＭＰＴ）、サクシニミジル−４―（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル−４ー（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（スルホ−ｓＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢｓ）、Ｎ−サクシニミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾアート（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ−ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（スルホ−ｓＭＰＢ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢｓ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢｓ）、サクシニミジル６−（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸ）、サクシニミジル６−［６−（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサン酸塩（ｓＩＡＸＸ）、サクシニミジル４−（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ｓＩＡＣ）、サクシニミジル６−（（（（４−ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン−１−カルボニル）アミノ）ヘキサン酸塩（ｓＩＡＣＸ）、ｐ−ニトロフェニルヨード酢酸（ＮＰＩＡ）、カルボニル反応性クロスリンカー及びスルフヒドリル反応性のクロスリンカー、例えば、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシル−ヒドラジド−８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３−（２−ピリジルジチオ）プロビオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、アミン反応性クロスリンカー及び光反応性クロスリンカー、例えば、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（ＮＨ−ＡｓＡ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドサリチル酸（スルホ−ＮＨ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−（４−アジドサリチルアミド）ヘキサノエート（スルホ−ＮＨ−ＬＣ−ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル−２−（ρ−アジドサリチルアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオネート（ｓＡｓＤ）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジド安息香酸（ＨｓＡＢ）、Ｎ−ヒド��キシスルホスクシンイミジル−４−アジド安息香酸（スルホ−ＨｓＡＢ）、Ｎ−サクシニミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）ヘキサン酸塩（スルホ−ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ−ＮＯｓ）、スルホスクシンイミジル−２−（ｍ−アジド−ｏ−ニトロベンズアミド）−エチル−１，３’−ジチオプロピオナート（ｓＡＮＤ）、Ｎ−サクシニミジル−４（４−アジドフェニル）１，３’−ジチオプロピオナート（ｓＡＤＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル（４−アジドフェニル）−１，３’−ジチオプロピオナート（スルホ−ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル  ４−（ρ−アジドフェニル）酪酸塩（スルホ−ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル  ２−（７−アジド−４−メチルクマリン−３−アセトアミド）エチル−１，３’−ジチオプロピオナート（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル  ７−アジド−４−メチルクマイン−３−酢酸塩（スルホ−ｓＡＭＣＡ）、ρ−ニトロフェニルジアゾピルバート（ρＮＰＤＰ）、ρ−ニトロフェニル−２−ジアゾ−３，３，３−トリフルオロプロピオネート（ＰＮＰ−ＤＴＰ）、スルフヒドリル反応性クロスリンカー及び光反応性クロスリンカー、例えば１−（ρ−アジドサリチルアミド）−４−（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ−［４−（ρ−アジドサリチルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン−４−ヨードアセトアミド、ベンゾフェノン−４−マレイミド、カルボニル反応性クロスリンカー及び光反応性クロスリンカー、例えばρ−アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、カルボキシラート反応性クロスリンカー及び光反応性クロスリンカー、例えば、４−（ρ−アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、及びアルギニン反応性クロスリンカー及び光反応性クロスリンカー、例えば、ρ−アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。
【０１８１】
幾つかの例では、反応性官能基は、結合部分（例えば、抱合部分、又はＩＬ−２）上で存在する求電子基に反応する求核基を含む。典型的な求電子基は、カルボニル基、例えば、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、エノン、酸ハロゲン化物、又は酸無水物を含む。幾つかの実施形態において、反応性官能基はアルデヒドである。典型的な求核基は、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、カルボン酸ヒドラジン、及びアリールヒドラジドを含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されたインターロイキンに組み込まれる非天然アミノ酸は、求電子基を含む。
【０１８２】
幾つかの実施形態では、リンカーは切断可能なリンカーである。幾つかの実施形態では、切断可能なリンカーはジペプチドリンカーである。幾つかの実施形態において、ジペプチドリンカーは、バリン−シトルリン（Ｖａｌ−Ｃｉｔ）、フェニルアラニン−リジン  （Ｐｈｅ−Ｌｙｓ）、バリン−アラニン（Ｖａｌ−Ａｌａ）、及びバリン−リジン（Ｖａｌ−Ｌｙｓ）である。幾つかの実施形態において、ジペプチド−リンカーはバリン−シトルリンである。
【０１８３】
幾つかの実施形態において、リンカーは、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、又はそれより多くのアミノ酸を含むペプチド−リンカーである。幾つかの例では、ペプチド−リンカーは、最大で、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、又はそれより少ないアミノ酸を含む。場合によっては、ペプチドリンカーは、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、あるいは５０のアミノ酸を含む。
【０１８４】
幾つかの実施形態では、リンカーは自壊性リンカー部分を含む。幾つかの実施形態において、自壊性リンカー部分は、それらのｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ−アミノベンジオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、又は誘導体あるいはそのアナログを含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、ジペプチドリンカー部分及び自壊性リンカー部分を含む。幾つかの実施形態において、自壊性リンカー部分は、米国特許第９０８９６１４号及びＷＯ２０１５０３８４２６に記載されるものなどである。
【０１８５】
幾つかの実施形態において、切断可能なリンカーはグルクロニドである。幾つかの実施形態において、切断可能なリンカーは酸切断可能なリンカーである。幾つかの実施形態において、酸切断可能なリンカーはヒドラジンである。幾つかの実施形態において、切断可能なリンカーは還元可能なリンカーである。
【０１８６】
幾つかの実施形態では、リンカーマレイミド基を含む。幾つかの例において、マレイミド基はマレイミドスペーサーとも呼ばれる。幾つかの例において、マレイミド基は、マレイミドカプロイル（ｍｃ）を形成するカプロン酸を含む。場合によっては、リンカーはマレイミドカプロイル（ｍｃ）を含む。場合によっては、リンカーはマレイミドカプロイル（ｍｃ）である。他の例において、マレイミド基は、上述のスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ｓＭＣＣ）又はスルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（スルホ−ｓＭＣＣ）などのマレイミドメチル基を含む。
【０１８７】
幾つかの実施形態において、マレイミド基は自己安定化マレイミドである。幾つかの例において、自己安定化マレイミドは、チオスクシンイミド環加水分解の分子内の触媒作用を提供するべくマレイミドに隣接する塩基性アミノ基を組み込むジアミノプロピオン酸（ＤＰＲ）を利用し、それにより、マレイミドがレトロマイケル反応を介して脱離反応を受けることを排除する。幾つかの例において、自己安定化マレイミドは、Ｌｙｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｓｅｌｆ−ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇ  ｍａｌｅｉｍｉｄｅｓ  ｉｍｐｒｏｖｅ  ｔｈｅ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ３２（１０）：１０５９−１０６２  （２０１４）．に記載されるマレイミド基である。幾つかの例において、リンカーは自己安定化マレイミドを含む。幾つかの例において、リンカーは自己安定化マレイミドである。
【０１８８】
抱合化学
様々な抱合反応は、リンカー、抱合部分、及び本明細書に記載されるサイトカインペプチドに組み込まれる非天然アミノ酸を抱合するために使用される。そのような抱合反応はしばしば、「生体直交型」反応などの水性条件に適合する。幾つかの実施形態において、抱合反応は、化学試薬、例えば、リンカー、抱合部分、又は非天然アミノ酸上で発見される触媒、光、又は反応性化学基によって媒介される。幾つかの実施形態において、抱合反応は酵素によって媒介される。幾つかの実施形態において、本明細書に使用される抱合反応は、Ｇｏｎｇ，  Ｙ．，  Ｐａｎ，  Ｌ．  Ｔｅｔｔ．  Ｌｅｔｔ．  ２０１５，  ５６，  ２１２３に記載される。幾つかの実施形態において、本明細書で使用される抱合反応は、Ｃｈｅｎ，  Ｘ．；  Ｗｕ．  Ｙ−Ｗ．  Ｏｒｇ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２０１６，  １４，  ５４１７に記載される。
【０１８９】
本明細書に記載される幾つかの実施形態において、抱合反応は、求核分子とケトン又はアルデヒドとの反応を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は、オキシムを形成するために、アミノキシ基とケトンとの反応を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は、イミンを形成するために、アリール又はヘテロアリールとアミン基とのケトンの反応を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は、イミンを形成するために、アリール又はヘテロアリールとアミン基とのアルデヒドの反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、オキシムを介して結合されるリンカー又は抱合の部分を含むサイトカインペプチドを結果としてもたらす。幾つかの実施形態において、抱合反応は、トリプタミン求核分子とのアルデヒド又はケトンのピクテ・スペングラー反応を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応はヒドラジノ・ピクテ・スペングラー反応を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応はピクテ・スペングラー・ライゲーションを含む。
【０１９０】
本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、アジド及びホスフィンの反応を含む（シュタウディンガー・ライゲーション）。幾つかの実施形態において、ホスフィンはアリールホスフィンである。幾つかの実施形態において、アリールホスフィンはオルトエステル基を含む。幾つかの実施形態において、ホスフィンは、メチル２−（ジフェニルホスファニル）安息香酸塩の構造を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、アリルアミドを介して結合されるリンカー又は抱合部分を含むサイトカインペプチドを結果としてもたらす。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、アミドを介して結合されるリンカー又は抱合部分を含むサイトカインペプチドを結果としてもたらす。
【０１９１】
本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、１、３−双極子付加環化反応を含む。幾つかの実施形態において、１，３−双極子付加環化反応は、アジド及びホスフィンの反応を含む（「クリック」反応）。幾つかの実施形態において、抱合反応は銅によって触媒される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、トリアゾールを介して結合されるリンカー又は抱合部分を含むサイトカインペプチドを結果としてもたらす。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、歪みオレフィンとアジドとの反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、歪みアルキンとアジドとの反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、シクロアルキン、例えば、ＯＣＴ、ＤＩＦＯ、ＤＩＦＢＯ、ＤＩＢＯ、ＢＡＲＡＣ、ＴＭＴＨ、又は他の歪みシクロアルキンとアジドとの反応を含み、それらの構造はＧｏｎｇ，  Ｙ．，  Ｐａｎ，  Ｌ．  Ｔｅｔｔ．  Ｌｅｔｔ．  ２０１５，  ５６，  ２１２３において示される。幾つかの実施形態において、１、３−双極子付加環化反応は、光によって触媒される（「光クリック」）。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、テトラゾール及び光と末端アリル基との反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、テトラゾール及び光と末端アルキニル基との反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、テトラジン及び光とＯ−アリルアミノ酸との反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、テトラジン及び光とＯ−アリルチロシンとの反応を含む。
【０１９２】
本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ジエン及び求ジエン体を含む逆電子要請型付加環化反応を含む。幾つかの実施形態において、ジエンはテトラジンを含む。幾つかの実施形態において、求ジエン体はアルケンを含む。幾つかの実施形態において、求ジエン体はアルキンを含む。幾つかの実施形態において、アルキンは歪みアルキンである。幾つかの実施形態において、アルケンは歪みジエンである。幾つかの実施形態において、アルキンはｔｒａｎｓ−シクロオクテンである。幾つかの実施形態において、アルキンはシクロオクテンである。幾つかの実施形態において、アルケンは、シクロプロペンである。幾つかの実施形態において、アルケンは、フルオロシクロプロペンである。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、環内に２つの窒素原子を含む６−員環の複素環を介してリンカー又は抱合部分に結合されるサイトカインペプチドの形成を結果としてもたらす。
【０１９３】
本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、オレフィン病部転位反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ルテニウム触媒とアルケン及びアルキンとの反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ルテニウム触媒と２つのアルケンとの反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ルテニウム触媒と２つのアルキンとの反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ルテニウム触媒及びアリル基を含むアミノ酸とアルケン又はアルキンとの反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ルテニウム触媒及び硫化アリル又はセレン化物を含むアミノ酸とアルケン又はアルキンとの反応を含む。幾つかの実施形態において、ルテニウム触媒は第２世代Ｈｏｖｅｄａ−Ｇｒｕｂｂｓ触媒である。幾つかの実施形態において、オレフィンメタセシス反応は、１つ以上の歪みアルケン又はアルキンの反応を含む。
【０１９４】
本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、クロスカップリング反応を含む。幾つかの実施形態において、クロスカップリング反応は、イリジウム、金、ルテニウム、ロジウム、パラジウム、ニッケル、白金又は他の遷移金属触媒及び１つ以上のリガンドなどの遷移金属触媒を含む。幾つかの実施形態において、遷移金属触媒は水溶性である。本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、鈴木・宮浦クロスカップリング反応を含む。本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ハロゲン化アリール（あるいはトリフラート、又はトシラート）、アリール又はアルケニルボロン酸、及びパラジウム触媒の反応を含む。本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、薗頭カップリング反応を含む。本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ハロゲン化アリール（あるいはトリフラート、又はトシラート）、アルキン、及びパラジウム触媒の反応を含む。幾つかの実施形態において、クロスカップリング反応は、炭素−炭素結合を介してサイトカインペプチドへのリンカー又は抱合部分の結合を結果としてもたらす。
【０１９５】
本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、抱合前の反応基の脱保護又は「アンケージング（ｕｎｃａｇｉｎｇ）」反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、光との反応基のアンケージング、その後の、抱合反応を含む。幾つかの実施形態において、反応基は、１つ以上のニトロ基を含むアラルキル部分により保護される。幾つかの実施形態において、反応基のアンケージングは、遊離アミン、硫化物、又は他の反応基を結果としてもたらす。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、遷移金属触媒を用いた反応基のアンケージング、その後の抱合反応を含む。幾つかの実施形態において、遷移金属触媒はパラジウム及び１つ以上のリガンドを含む。幾つかの実施形態において、反応基はアリル部分により保護される。幾つかの実施形態において、反応基はアリルカルバマートにより保護される。幾つかの実施形態において、反応基はプロパルギル部分により保護される。幾つかの実施形態において、反応基はプロパルギルカルバマートで保護される。幾つかの実施形態において、反応基は求ジエン体により保護され、ここで、ジエン（テトラジンなどの）への曝露は、反応基の脱保護を結果としてもたらす。
【０１９６】
本明細書に記載される幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応はリガンド指向反応を含み、ここで、反応基に（随意に）結合されたリガンドは、反応基とサイトカインペプチドとの間の抱合の部位を促進する。幾つかの実施形態において、リガンドは、反応基とサイトカインペプチドの反応中、あるいはその反応後に切断される。幾つかの実施形態において、サイトカインペプチドの抱合部位は天然アミノ酸である。幾つかの実施形態において、サイトカインペプチドの抱合部位は、リジン、システイン、又はセリンである。幾つかの実施形態において、サイトカインペプチドの抱合部位は、本明細書に記載される非天然アミノ酸である。幾つかの実施形態において、反応基は、電子不足アリール又はヘテロアリール基などの脱離基を含む。幾つかの実施形態において、反応基は、サイトカインペプチドによって置換する電子不足アルキル基などの、脱離基を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、ラジカル種とのラジカル捕捉剤の反応を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、酸化的ラジカル付加反応を含む。幾つかの実施形態において、ラジカル捕捉剤はアニールアミンである。幾つかの実施形態において、ラジカル種はチロシルラジカルである。幾つかの実施形態において、ラジカル種は、ルテニウム触媒（［Ｒｕ（ｂｐｙ）３］などの）及び光によって生成される。
【０１９７】
酵素反応は、本明細書に記載される抱合反応に随意に使用される。典型的な酵素的な抱合は、ＳｏｒｔＡ媒介抱合、ＴＧ媒介抱合、又はＦＧＥ媒介抱合を含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される抱合反応は、アミド結合を形成するためのチオエステルを有する末端１−アミノ−２−チオ基の未変性タンパク質ライゲーション（ＮＰＬ）を含む。
【０１９８】
サイトカインペプチドとリンカー又は抱合部分とを反応させるための様々な抱合反応が本明細書に記載され、ここで、上記反応は、サイトカインペプチド中の天然（「基準」）アミノ酸により起こる。幾つかの実施形態において、天然アミノ酸は、抱合位置で見られ、野生型配列において見られ、あるいは、その位置が変異されている。幾つかの実施形態において、抱合反応は、システイン残基でのジスルフィド結合の形成を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は、システイン又はリジンの１，４マイケル付加反応を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は、システインのシアノベンゾチアゾールライゲーションを含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は１，３−ジクロロ−２−プロピオン酸などのアセトン部分により架橋することを含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は、Ｏ−メシチレンスルホニルヒドロキシルアミンとシステインとの反応によって形成される、デヒドロアラニンの１，４マイケル付加を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は、トリアゾリンジオン（ＴＡＤ）とチロシン、又はＴＡＤ誘導体との反応を含む。幾つかの実施形態において、抱合反応は、ロジウムカルベノイドとトリプトファンとの反応を含む。
【０１９９】
使用の方法
増殖性疾患又は疾病
幾つかの実施形態において、被験体における増殖性疾患又は疾病を処置する方法が本明細書に記載され、上記方法は、本明細書に記載される治療上有効な量のサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）を被験体に投与する工程を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチド及び抱合部分を含み、ここで、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較してＩＬ−２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）サブユニットに対する減少した親和性を有する。幾つかの例では、ＩＬ−２結合体は、単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチド；及び、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択されるアミノ酸位置の単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドに結合する抱合部分を含み、ここで、アミノ酸残基の番号付けは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対応する。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体を形成するために、ＩＬ−２Ｒβ及びＩＬ−２Ｒβγサブユニットと優先的に相互作用する。場合によっては、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体は、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／又はＮＫＴ細胞の拡張を刺激及び／又は増強する。さらなる場合において、Ｔｅｆｆ細胞の拡張は、Ｔｅｆｆ集団よりにＴｅｆｆ：Ｔｒｅｇ比率を歪める。
【０２００】
幾つかの実施形態では、増殖性疾患又は疾病は癌である。幾つかの例では、癌は固形腫瘍である。典型的な固形腫瘍としては、限定されないが、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、大腸癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、腎癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、又は前立腺癌が挙げられる。幾つかの例において、固形腫瘍は転移性癌である。幾つかの場合では、固形腫瘍は、再発性又は難治性の癌である。
【０２０１】
幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）抱合体は、固形腫瘍を処置するために、それを必要とする被験体に投与される。この場合、被験体は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、大腸癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、腎癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、又は前立腺癌を有する。場合によっては、固形腫瘍は転移性癌である。場合によっては、固形腫瘍は再発性又は難治性の癌である。
【０２０２】
幾つかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−２抱合体は、固形腫瘍を処置するために、それを必要とする被験体に投与される。この場合、被験体は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、大腸癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、腎癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、又は前立腺癌を患っている。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は膀胱癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は乳癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は大腸癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は食道癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は頭頚部癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は腎癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は肺癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は黒色腫の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は卵巣癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は膵臓癌の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は前立腺癌の処置のために被験体に投与される。
【０２０３】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は転移性癌の処置のために被験体に投与される。幾つかの例では、転移性癌は、転移性膀胱癌、転移性骨癌、転移性脳癌、転移性乳癌、転移性大腸癌、転移性食道癌、転移性眼癌、転移性頭頚部癌、転移性腎癌、転移性肺癌、転移性黒色腫、転移性卵巣癌、転移性膵臓癌、又は転移性前立腺癌を含む。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、転移性膀胱癌、転移性骨癌、転移性脳癌、転移性乳癌、転移性大腸癌、転移性食道癌、転移性眼癌、転移性頭頚部癌、転移性腎癌、転移性肺癌、転移性黒色腫、転移性卵巣癌、転移性膵臓癌、又は転移性前立腺癌の処置のために、被験体に投与される。
【０２０４】
幾つかの実施形態において、ＩＬ−２抱合体は再発性又は難治性癌の処置のために被験体に投与される。幾つかの例では、再発性又は難治性癌は、再発性又は難治性膀胱癌を含む、再発性又は難治性骨癌、再発性又は難治性脳癌、再発性又は難治性乳癌、再発性又は難治性大腸癌、再発性又は難治性食道癌、再発性又は難治性眼癌、再発性又は難治性頭頚部癌、再発性又は難治性腎癌、再発性又は難治性肺癌、再発性又は難治性黒色腫、再発性又は難治性卵巣癌、再発性又は難治性膵臓癌、あるいは再発性又は難治性前立腺癌を含む。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、再発性又は難治性膀胱癌、再発性又は難治性骨癌、再発性又は難治性脳癌、再発性又は難治性乳癌、再発性又は難治性大腸癌、再発性又は難治性食道癌、再発性又は難治性眼癌、再発性又は難治性頭頚部癌、再発性又は難治性腎癌、再発性又は難治性肺癌、再発性又は難治性黒色腫、再発性又は難治性卵巣癌、再発性又は難治性膵臓癌、あるいは再発性又は難治性前立腺癌の処置のために、被験体に投与される。
【０２０５】
幾つかの実施形態では、癌は未処置の癌である。この場合、未処置の癌は治療によって治療されていない癌である。場合によっては、未処置の癌は、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、大腸癌、食道癌、眼癌、頭頚部癌、腎癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、又は前立腺癌などの固形腫瘍である。幾つかの実施形態において、被験体における未処置の固形腫瘍を処置する方法が本明細書に記載され、それは、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）を、それを必要とする被験体に投与する工程を含む。
【０２０６】
幾つかの実施形態では、癌は血液悪性腫瘍である。幾つかの例では、血液悪性腫瘍は、白血病、リンパ腫、又は骨髄腫を含む。場合によっては、血液悪性腫瘍はＴ細胞悪性腫瘍である。他の場合において、血液悪性腫瘍はＢ細胞悪性腫瘍である。例示的な血液悪性腫瘍としては、限定されないが、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキットリンパ高悪性度Ｂリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体腔性リンパ腫、又はリンパ腫様肉芽腫症が挙げられる。
【０２０７】
場合によっては、血液悪性腫瘍は転移性癌である。場合によっては、転移性癌は、転移性Ｔ細胞悪性腫瘍又は転移性Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【０２０８】
場合によっては、血液悪性腫瘍は再発性又は難治性の癌である。場合によっては、再発性又は難治性の癌は、再発性又は難治性Ｔ細胞悪性腫瘍又は再発性又は難治性Ｂ細胞悪性腫瘍である。
【０２０９】
幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）は、血液悪性腫瘍の処置のために、それを必要とする被験体に投与される。場合によっては、被験体にはＴ細胞悪性腫瘍を有する。幾つかの実施形態では、被験体はＢ細胞悪性腫瘍を患っている。場合によっては、被験体は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキットリンパ高悪性度Ｂリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体腔性リンパ腫、又はリンパ腫様肉芽腫症を有する。
【０２１０】
幾つかの例では、本明細書に記載されるＩＬ−２抱合体は、血液悪性腫瘍を処置するために、それを必要とする被験体に投与される。場合によっては、被験体にはＴ細胞悪性腫瘍を有する。幾つかの実施形態では、被験体はＢ細胞悪性腫瘍を患っている。場合によっては、被験体は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキットリンパ高悪性度Ｂリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体腔性リンパ腫、又はリンパ腫様肉芽腫症を有する。場合によっては、ＩＬ−２抱合体はＣＬＬの処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体はＳＬＬの処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体はＦＬの処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体はＤＬＢＣＬの処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体はＭＣＬの処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体はワルデンシュトレームマクログロブリン血症の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は多発性骨髄腫の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体はバーキットリンパ腫の処置のために被験体に投与される。
【０２１１】
場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、転移性血液系悪性腫瘍の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、転移性Ｔ細胞悪性腫瘍の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、転移性Ｂ細胞悪性腫瘍の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、転移性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキットリンパ高悪性度Ｂリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体腔性リンパ腫、又は転移性リンパ腫様肉芽腫症の処置のために、被験体に投与される。
【０２１２】
場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、再発性又は難治性血液悪性腫瘍の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、再発性又は難治性Ｔ細胞悪性腫瘍の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、再発性又は難治性Ｂ細胞悪性腫瘍の処置のために被験体に投与される。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、再発性又は難治性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキットリンパ高悪性度Ｂリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体腔性リンパ腫、又は転移性リンパ腫様肉芽腫症の処置のために、被験体に投与される。
【０２１３】
追加の治療薬
幾つかの実施形態において、追加の治療剤が被験体にさらに投与される。場合によっては、追加の治療剤は、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）と同時に投与される。その他の場合において、追加の治療剤及びＩＬ−２抱合体は連続して投与され、例えば、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は追加の治療剤の投与前に投与され、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は追加の治療剤の投与後に投与される。
【０２１４】
場合によっては、追加の治療剤は、化学療法剤、免疫療法剤、標的療法、放射線治療、又はそれらの組み合わせを含む。例示的な追加の治療剤としては、限定されないが、アルトレタミン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ロムスチン、メルファラン、オキサリプラチン、テモゾロミド、又はチオテパなどのアルキル化剤；５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、カペシタビン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、又はペメトレキセドなどの代謝拮抗剤；ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、又はイダルビシンなどのアントラサイクリン；トポテカン又はイリノテカン（ＣＰＴ−１１）などのトポイソメラーゼＩ阻害剤；エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、又はミトキサントロンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ドセタセル、エストラムスチン、イキサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、又はビノレルビンなどの有糸分裂阻害剤；プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、又はデキサメタゾンなどのコルチコステロイドが挙げられる。
【０２１５】
場合によっては、追加の治療剤は一次治療を含む。本明細書で使用されるように、「一次治療」は、癌を患う被験体のための一次処置を含む。幾つかの例において、癌は原発癌である。幾つかの場合において、癌は、転移性又は再発性の癌である。場合によっては、一次治療は化学療法を含む。その他の場合において、一次処置は放射線治療を含む。当業者は、異なる一次処置が異なるタイプの癌に適用可能であり得ることを容易に理解するだろう。
【０２１６】
場合によっては、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、アルトレタミン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ロムスチン、メルファラン、オキサリプラチン、テモゾロミド、又はチオテパなどのアルキル化剤；５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、カペシタビン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、又はペメトレキセドなどの代謝拮抗剤；ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、又はイダルビシンなどのアントラサイクリン；トポテカン又はイリノテカン（ＣＰＴ−１１）などのトポイソメラーゼＩ阻害剤；エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、又はミトキサントロンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤；ドセタセル、エストラムスチン、イキサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、又はビノレルビンなどの有糸分裂阻害剤；プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、又はデキサメタゾンなどのコルチコステロイドから選択される追加の治療剤とともに投与される。
【０２１７】
幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、酵素ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の阻害剤とともに投与される。典型的なＰＡＲＰ阻害剤としては、限定されないが、オラパリブ（Ａｓｔｒａ  ＺｅｎｅｃａのＡＺＤ−２２８１、Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標））及びルカパリブ（Ｃｌｏｖｉｓ  ＯｎｃｏｌｏｇｙのＰＦ−０１３６７３３８、クローヴィス腫瘍内科学からのＲｕｂｒａｃａ（登録商標））、ニラパリブ（ＴｅｓａｒｏのＭＫ−４８２７、Ｚｅｊｕｌａ（登録商標））、タラゾパリブ（ＢｉｏＭａｒｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ．のＢＭＮ−６７３）、ベリパリブ（ＡｂｂＶｉｅのＡＢＴ−８８８）、ＣＫ−１０２（Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．の旧名ＣＥＰ  ９７２２）、Ｅ７０１６（  Ｅｉｓａｉの）、イニパリブ（ＳａｎｏｆｉのＢＳＩ  ２０１）、及びｐａｍｉｐａｒｉｂ（ＢｅｉＧｅｎｅのＢＧＢ−２９０）が挙げられる。場合によっては、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、ＣＫ−１０２、Ｅ７０１６、イニパリブ、又はｐａｍｉｐａｒｉｂなどのＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせて投与される。
【０２１８】
幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、免疫チェックポイント阻害剤とともに投与される。典型的なチェックポイント阻害剤は以下のものを含む：
【０２１９】
ＧｅｎｅｎｔｅｃｈのＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６）、ＢｉｏＸｃｅｌｌの抗マウスＰＤ−Ｌ１抗体クローン１０Ｆ．９Ｇ２（Ｃａｔ＃  ＢＥ０１０１）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒ’ｓ  Ｓｑｕｉｂｂの抗ＰＤ−Ｌ１モノクローナル抗体ＭＤＸ−１１０５（ＢＭＳ−９３６５５９）及びＢＭＳ−９３５５５９、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、マウス抗ＰＤ−Ｌ１クローン２９Ｅ．２Ａ３、及びＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのＭＥＤＩ４７３６などの、ＰＤ−Ｌ１阻害剤；
【０２２０】
ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＡＭＰ−２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、及びｒＨＩｇＭ１２Ｂ７などのＰＤ−Ｌ２阻害剤；
【０２２１】
ＢｉｏＸｃｅｌｌの抗マウスＰＤ−１抗体クローンＪ４３（Ｃａｔ＃  ＢＥ００３３−２）、ＢｉｏＸｃｅｌｌの抗マウスＰＤ−１抗体クローンＲＭＰ１−１４（Ｃａｔ＃  ＢＥ０１４６）、マウス抗ＰＤ−１抗体クローンＥＨ１２、ＭｅｒｃｋのＭＫ−３４７５抗マウスＰＤ−１抗体（キイトルーダ、ペンブロリズマブ、ラムブロリズマブ）、ＡＮＢ０１１としても知られているＡｎａｐｔｙｓＢｉｏの抗ＰＤ−１抗体、抗体ＭＤＸ−１  １０６（ＯＮＯ−４５３８）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂのヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのＡＭＰ−５１４及びＡＭＰ−２２４、及びＣｕｒｅＴｅｃｈ  Ｌｔｄのピディリズマブ（ＣＴ−０１１）などの、ＰＤ−１阻害剤；
【０２２２】
Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂの抗−ＣＴＬＡ−４抗体イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）、ＭＤＸ−０１０、ＢＭＳ−７３４０１６及びＭＤＸ−１０１としても知られている）、ミリポアの抗ＣＴＬＡ４抗体クローン９Ｈ１０、Ｐｆｉｚｅｒのトレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６、チシリムマブ）、及びＡｂｃａｍの抗ＣＴＬＡ４抗体クローンＢＮＩ３などの、ＣＴＬＡ−４阻害剤；
【０２２３】
ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅの抗ラグ−３抗体クローンｅＢｉｏＣ９Ｂ７Ｗ（Ｃ９Ｂ７Ｗ）、  ＬｉｆｅＳｐａｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓの抗ラグ３抗体ＬＳ−Ｂ２２３７、ＩｍｍｕｔｅｐのＩＭＰ３２１（ＩｍｍｕＦａｃｔ）、抗Ｌａｇ３抗体ＢＭＳ−９８６０１６、及びＬＡＧ−３キメラ抗体Ａ９Ｈ１２などの、ＬＡＧ３阻害剤；
【０２２４】
ＭＧＡ２７１などのＢ７−Ｈ３阻害剤；
【０２２５】
Ｌｉｒｉｌｕｍａｂ（ＩＰＨ２１０１）などのＫＩＲ阻害剤；
【０２２６】
ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ）（ＢＭＳ−６６３５１３Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＰＦ−０５０８２５６６（抗４−１ＢＢ、ＰＦ−２５６６、Ｐｆｉｚｅｒ）、又はＸｍＡｂ−５５９２（Ｘｅｎｃｏｒ）などの、ＣＤ１３７阻害剤；
【０２２７】
ＢａｖｉｔｕｘｉｍａｂなどのＰＳ阻害剤；
【０２２８】
ならびに、抗体又はそのフラグメント（例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化された抗体、又はキメラ抗体）、ＲＮＡｉ分子、あるいはＴＩＭ３、ＣＤ５２、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２）、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＤＲ３、ＣＤ２２６、ＣＤ２、又はＳＬＡＭに対する小分子などの、阻害剤。
【０２２９】
幾つかの例では、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、トレメリムマブ、又はイピリムマブと組み合わせて投与される。
【０２３０】
幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、アレムツズマブ、トラスツズマブ、イブリツモマブチウクセタン、ブレンツキシマブベドチン、トラスツズマブ  エムタンシン又はブリナツモマブなどの抗体とともに投与される。
【０２３１】
幾つかの例では、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、追加のサイトカインから選択された追加の治療剤とともに投与される。幾つかの例では、追加のサイトカインは、Ｔエフェクター細胞の拡張及び／又は増殖を増強する及び／又は相乗作用を与える。場合によっては、追加のサイトカインは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、又はＴＮＦαを含む。場合によっては、追加のサイトカインはＩＬ−７である。場合によっては、追加のサイトカインはＩＬ−１５である。場合によっては、追加のサイトカインはＩＬ−２１である。場合によっては、追加のサイトカインはＴＮＦαである。
【０２３２】
幾つかの例では、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、受容体アゴニストから選択される追加の治療剤とともに投与される。幾つかの例では、受容体アゴニストはＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンドを含む。場合によっては、ＴＬＲリガンドは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ９を含む。場合によっては、ＴＬＲリガンドは、例えば、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＣＦＡ、ＭＡＬＰ２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＦＳＬ−１、Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ポリ：ＩＣ、ポリＡ：Ｕ、ＡＧＰ、ＭＰＬ  Ａ、ＲＣ−５２９、ＭＤＦ２β、ＣＦＡ、又はフラジェリンなどの合成リガンドを含む。場合によっては、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９から選択される１つ以上のＴＬＲアゴニストとともに投与される。場合によっては、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）はＰａｍ３Ｃｙｓ、ＣＦＡ、ＭＡＬＰ２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＦＳＬ−１、Ｈｉｂ−ＯＭＰＣ、ポリＩ：Ｃ、ポリＡ：Ｕ、ＡＧＰ、ＭＰＬ  Ａ、ＲＣ−５２９、ＭＤＦ２β、ＣＦＡ、及びフラジェリンから選択される１つ以上のＴＬＲアゴニストとともに投与される。
【０２３３】
幾つかの実施形態において、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、養子Ｔ細胞移入（ＡＣＴ）治療法と組み合わせて使用される。一実施形態では、ＡＣＴは、例えば、抗腫瘍の活性を有する被験体における自己Ｔリンパ球の同定、インビトロでの自己Ｔリンパ球の拡大、及び拡大したＴリンパ球の被験体への後の再注入を含む。別の実施形態では、ＡＣＴは、例えば、抗腫瘍の活性を有する同種異系Ｔリンパ球の使用、インビトロでのＴリンパ球の拡大、及び拡大された同種異系Ｔリンパ球のそれを必要とする被験体への後の注入を含む。幾つかの例では、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、ＡＣＴ治療法の一部として自己Ｔリンパ球と組み合わせて使用される。他の例では、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、ＡＣＴ治療法の一部として同種異系Ｔリンパ球と組み合わせて使用される。場合によっては、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、それを必要とする被験体にＡＣＴ治療法と同時に投与される。その他の場合において、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、それを必要とする被験体へとＡＣＴ治療法とともに連続して投与される。
【０２３４】
幾つかの実施形態において、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、自己及び／又は同種異系Ｔ細胞移入のエクスビボ活性化及び／又は増大のために使用される。この場合、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、自己及び／又は同種異系Ｔ細胞を含むサンプルを活性化及び／又は増大するために使用され、ならびに、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、それを必要とする被験体にサンプルを投与する前に、サンプルから随意に取り除かれる。
【０２３５】
幾つかの実施形態において、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、ワクチンとともに投与される。幾つかの例では、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は腫瘍溶解性のウイルスと組み合わせて利用される。この場合、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、免疫応答を調節するための成長促進剤として作用する。幾つかの例では、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、補助療法の一部として腫瘍溶解性のウイルスと共に使用される。典型的な腫瘍溶解性のウイルスは、Ｔ−Ｖｅｃ（Ａｍｇｅｎ）、Ｇ４７Δ（Ｔｏｄｏ  ｅｔ  ａｌ．）、ＪＸ−５９４（Ｓｉｌｌａｊｅｎ）、ＣＧ００７０（Ｃｏｌｄ  Ｇｅｎｅｓｙｓ）、及びＲｅｏｌｙｓｉｎ（Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を含む。場合によっては、サイトカイン抱合体（例えばＩＬ−２抱合体）は、Ｔ−Ｖｅｃ、Ｇ４７Δ、ＪＸ−５９４、ＣＧ００７０又はＲｅｏｌｙｓｉｎなどの腫瘍溶解性のウイルスと組み合わせて使用される。
【０２３６】
幾つかの実施形態において、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、放射線治療と組み合わせて投与される。
【０２３７】
幾つかの実施形態において、サイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、手術と組み合わせて投与される。
【０２３８】
病原性の感染
幾つかの実施形態において、被験体における病原性の感染を処置する方法が本明細書に記載され、上記方法は、本明細書に記載される治療上有効な量のサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）を被験体に投与する工程を含む。幾つかの例では、ＩＬ−２抱合体は単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチド及び抱合部分を含み、ここで、ＩＬ−２抱合体は、野生型のＩＬ−２ポリペプチドと比較してＩＬ−２受容体α（ＩＬ−２Ｒα）サブユニットに対する減少した親和性を有する。幾つかの例では、ＩＬ−２結合体は、単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチド；及び、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択されるアミノ酸位置の単離及び精製されたＩＬ−２ポリペプチドに結合する抱合部分を含み、ここで、アミノ酸残基の番号付けは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対応する。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体を形成するために、ＩＬ−２Ｒβ及びＩＬ−２Ｒβγサブユニットと優先的に相互に作用し、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ及び記憶細胞、ＮＫ細胞、及び／又はＮＫＴ細胞の拡張を刺激及び／又は増強する。さらなる場合において、ＩＬ−２抱合体は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって病原性リザーバ（ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）の認識を促進する。
【０２３９】
幾つかの実施形態において、病原性の感染症はウイルス感染であり、該ウイルス感染において、抗ウイルス治療による処置の際、ウイルスリザーバ（例えば、休止ＣＤ４＋Ｔ細胞）は処置された宿主に留まる。そのような例において、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えばＩＬ−２抱合体）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞（又は細胞傷害性Ｔ細胞）によりウイルスリザーバの認識を誘導する。場合によっては、サイトカイン抱合体（例えばＩＬ−２抱合体）は、単独療法として利用されることで、排除のためにＣＤ８＋Ｔ細胞を感染した休止細胞へと再び向ける。によっては、サイトカイン抱合体（例えばＩＬ−２抱合体）は、追加の治療薬と組み合わせて利用されることで、排除のためにＣＤ８＋Ｔ細胞を感染した休止細胞へと再び向ける。典型的な追加の治療薬には、抗ウイルス剤処置、例えばアシクロビル、ブリブジン、ドコサノール、ファムシクロビル、ホスカルネット、イドクスウリジン、ペンシクロビル、トリフルリジン、バラシクロビル、及びプリテリビル（ｐｒｉｔｅｌｉｖｉｒ）などが挙げられる。
【０２４０】
幾つかの実施形態において、ウイルスはＤＮＡウイルス又はＲＮＡウイルスである。ＤＮＡウイルスは、一本鎖（ｓｓ）ＤＮＡウイルス、二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡウイルス、又は、ｓｓ及びｄｓ両方のＤＮＡ領域を含有するＤＮＡウイルスを含む。ＲＮＡウイルスは一本鎖（ｓｓ）ＲＮＡウイルス又は二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡウイルスを含む。場合によっては、ｓｓＲＮＡウイルスは、プラス鎖ＲＮＡウイルス又はマイナス鎖ＲＮＡウイルスへと更に分類される。
【０２４１】
典型的なｄｓＤＮＡウイルスには、以下のウイルス科由来のウイルスが挙げられる：ミオウイルス科、ポドウイルス科、サイフォウイルス科、ロヘルペスウイルス科、ヘルペスウイルス科、マラコヘルペスウイルス科、リポスリクスウイルス科、ルディウイルス科、アデノウイルス科、アムプラウイルス科（Ａｍｐｕｌｌａｖｉｒｉｄａｅ）、アスコウイルス科、アスファウイルス科、バキュロウイルス科、ビカウダウイルス科、クラバウイルス科（Ｃｌａｖａｖｉｒｉｄａｅ）、コルチコウイルス科、フセロウイルス科、グロブロウイルス科、グッタウイルス科、ヒトロサウイルス科（Ｈｙｔｒｏｓａｖｉｒｉｄａｅ）、イリドウイルス科、マルセイユウイルス科、ミミウイルス科、ニマウイルス科、パンドラウイルス科、パピローマウイルス科、フィコドナウイルス科、プラズマウイルス科、ポリドナウイルス科、ポリオーマウイルス科、ポックスウイルス科、スファエロリポウイルス科（Ｓｐｈａｅｒｏｌｉｐｏｖｉｒｉｄａｅ）、及びテクティウイルス科。
【０２４２】
典型的なｓｓＤＮＡウイルスには、以下のウイルス科由来のウイルスが挙げられる：アネロウイルス科、バシラリオドナウイルス科（Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ビドナウイルス科（Ｂｉｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）、サーコウイルス科、ジェミニウイルス科、イノウイルス科、ミクロウイルス科、ナノウイルス科、パルボウイルス科、及びスピラウイルス科（Ｓｐｉｒａｖｉｒｉｄａｅ）。
【０２４３】
ｓｓ及びｄｓ両方のＤＮＡ領域を含有する典型的なＤＮＡウイルスは、ポリオウイルスの群由来のウイルスを含む。場合によっては、ポリオウイルスには、Ｈａｌｏａｒｃｕｌａ  ｈｉｓｐａｎｉｃａ多形性ウイルス１、Ｈａｌｏｇｅｏｍｅｔｒｉｃｕｍ多形性ウイルス１、Ｈａｌｏｒｕｂｒｕｍ多形性ウイルス１、Ｈａｌｏｒｕｂｒｕｍ多形性ウイルス２、Ｈａｌｏｒｕｂｒｕｍ多形性ウイルス３、及びＨａｌｏｒｕｂｒｕｍ多形性ウイルス６が挙げられる。
【０２４４】
典型的なｄｓＲＮＡウイルスには、以下のウイルス科由来のウイルスが挙げられる：ビルナウイルス科、クリソウイルス科、シストウイルス科、エンドルナウイルス科、ハイポウイルス科、メガビルナウイルス科、パルティティウイルス科、ピコビルナウイルス科、レオウイルス科、ロタウイルス科、及びトティウイルス科。
【０２４５】
典型的なプラス鎖ｓｓＲＮＡウイルスには、以下のウイルス科由来のウイルスが挙げられる：アルファフレキシウイルス科、アルファテトラウイルス科、アルベルナウイルス科、アルテリウイルス科、アストロウイルス科、バルナウイルス科、ベータフレキシウイルス科、プロモウイルス科、カリチウイルス科、カルモテトラウイルス科、クロステロウイルス科、コロナウイルス科、ジシストロウイルス科、フラビウイルス科、ガンマフレキシウイルス科、イフラウイルス科、レヴィウイルス科、ルテオウイルス科、マルナウイルス科、メソニウイルス科、ナルナウイルス科、ノダウイルス科、ペルムトテトラウイルス科、ピコルナウイルス科、ポチウイルス科、ロニウイルス科、セコウイルス科、トガウイルス科、トンブスウイルス科、ティモウイルス科、及びビルガウイルス科。
【０２４６】
典型的なマイナス鎖ｓｓＲＮＡウイルスには、以下のウイルス科由来のウイルスが挙げられる：アレナウイルス科、ボルナウイルス科、ブニヤウイルス科、フィロウイルス科、ニアミウイルス科、オフィオウイルス科、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、及びラブドウイルス科。
【０２４７】
幾つかの実施形態において、病原性感染症は、次のものにより引き起こされる：エーベルソン白血病ウイルス、エーベルソンマウス白血病ウイルス、エーベルソンウイルス、急性喉頭気管気管支炎ウイルス、アデレードリバーウイルス、アデノ関連ウイルス、アデノウイルス、アフリカウマ症ウイルス、アフリカ豚コレラウイルス、ＡＩＤＳウイルス、アリューシャンミンク病パルボウイルス、アルファレトロウイルス、アルファウイルス、ＡＬＶ関連ウイルス、アマパリウイルス、アフタウイルス、アクアレオウイルス、アルボウイルス、アルボウイルス群Ｃ、アルボウイルス群Ａ、アルボウイルス群Ｂ、アレナウイルス群、アルゼンチン出血熱ウイルス、アルゼンチン出血熱ウイルス、アルテリウイルス、アストロウイルス、クモザルヘルペスウイルス群、オーエスキー病ウイルス、アウラウイルス、Ａｕｓｄｕｋ病ウイルス、オーストラリアバットリッサウイルス、アビアデノウイルス、トリ赤芽球症ウイルス、トリ伝染性気管支炎ウイルス、トリ白血病ウイルス、トリ白血症ウイルス、トリリンパ腫症ウイルス、トリ骨髄芽細胞症ウイルス、トリパラミクソウイルス、トリ肺脳炎ウイルス、トリ網内皮症ウイルス、トリ肉腫ウイルス、トリＣ型レトロウイルス群、アビヘパドナウイルス、アビポックスウイルス、Ｂウイルス、Ｂ１９ウイルス、ババンキウイルス、ヒヒヘルペスウイルス、バキュロウイルス、バーマフォレストウイルス、ベバルウイルス、ベリマー（Ｂｅｒｒｉｍａｈ）ウイルス、ベータレトロウイルス、ビルナウイルス、ビトナーウイルス、ＢＫウイルス、ブラッククリークカナルウイルス、ブルータングウイルス、ボリビア出血熱ウイルス、ボルナ病（Ｂｏｍａ  ｄｉｓｅａｓｅ）ウイルス、ヒツジ・ボーダー病ウイルス、ボルナウイルス、ウシ・アルファヘルペスウイルス１、ウシ・アルファヘルペスウイルス２、ウシ・コロナウイルス、ウシ流行熱ウイルス、ウシ免疫不全ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ウシ白血症ウイルス、ウシ乳頭炎ウイルス、ウシ乳頭腫ウイルス、ウシ丘疹性口内炎ウイルス、ウシ・パルボウイルス、ウシ多核体ウイルス、ウシＣ型オンコウイルス、ウシ・ウイルス性下痢症ウイルス、バギークリーク（Ｂｕｇｇｙ  Ｃｒｅｅｋ）ウイルス、弾丸形状ウイルス群、ブニヤムウェラウイルスの超群、ブンヤウイルス、バーキットリンパ腫ウイルス、ブワンバ熱、ＣＡウイルス、カリチウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、ラクダ痘ウイルス、カナリア痘ウイルス、イヌヘルペスウイルス、イヌコロナウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌヘルペスウイルス、イヌ微小ウイルス、イヌパルボウイルス、カーニョ・デルガディト（Ｃａｎｏ  Ｄｅｌｇａｄｉｔｏ）ウイルス、ヤギ関節炎ウイルス、ヤギ脳炎ウイルス、ヤギヘルペスウイルス、Ｃａｐｒｉｐｏｘウイルス、カルジオウイルス、テンジクネズミ科ヘルペスウイルス１、サルヘルペスウイルス１、オナガザルヘルペスウイルス１、オナガザルヘルペスウイルス２、チャンディプラウイルス、チャンギノラウイルス、アメリカナマズウイルス、チャールビルウイルス、水痘ウイルス、チクングニヤウイルス、チンパンジーヘルペスウイルス、ウグイレオウイルス、シロザケウイルス、球菌ウイルス、ギンザケレオウイルス、媾疹ウイルス、コロラドダニ熱ウイルス、コルチウイルス、コロンビアＳＫウイルス、カゼウイルス、伝染性膿瘡ウイルス、伝染性膿胞性皮膚炎ウイルス、コロナウイルス、コリパルタウイルス、鼻風邪ウイルス、牛痘ウイルス、コクサッキーウイルス、ＣＰＶ（細胞質多角体病ウイルス）、クリケット麻痺（ｃｒｉｃｋｅｔ  ｐａｒａｌｙｓｉｓ）ウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、偽膜性喉頭炎随伴ウイルス、クリプトウイルス、サイポウイルス、サイトメガロウイルス、サイトメガロウイルス群、細胞質多角体病ウイルス、シカ乳頭腫ウイルス、デルタレトロウイルス、デング熱ウイルス、デンソウイルス、デペンドウイルス、ドーリウイルス、ディプロマ（ｄｉｐｌｏｍａ）ウイルス、Ｃ型ショウジョウバエウイルス、Ｂ型アヒル肝炎ウイルス、アヒル肝炎ウイルス１、アヒル肝炎ウイルス２、デュオウイルス（ｄｕｏｖｉｒｕｓ）、デュベンヘイジウイルス、変形翼ウイルス（Ｄｅｆｏｒｍｅｄ  ｗｉｎｇ  ｖｉｒｕｓ）ＤＷＶ、東部ウマ脳脊髄炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、ＥＢウイルス、エボラウイルス、エボラ様ウイルス、エコーウイルス、エコーウイルス、エコーウイルス１０、エコーウイルス２８、エコーウイルス９、エクトロメリアウイルス、ＥＥＥウイルス、ＥＩＡウイルス、ＥＩＡウイルス、脳炎ウイルス、脳心筋炎群ウイルス、脳心筋炎ウイルス、エンテロウイルス、酵素上昇ウイルス、酵素上昇ウイルス（ＬＤＨ）、流行性出血熱ウイルス、伝染性出血性疾患ウイルス、エプスタイン・バーウイルス、ウマアルファヘルペスウイルス１、ウマアルファヘルペスウイルス４、ウマヘルペスウイルス２、ウマ流産ウイルス、ウマ動脈炎ウイルス、ウマ大脳症ウイルス、ウマ伝染性貧血ウイルス、ウマモルビリウイルス、ウマ鼻腔肺炎ウイルス、ウマリノウイルス、ユーベナンジーウイルス、ヨーロッパエルク乳頭腫ウイルス、ヨーロッパブタコレラウイルス、エバーグレーズウイルス、アイア（Ｅｙａｃｈ）ウイルス、ネコヘルペスウイルス１、ネコカリチウイルス、ネコ線維肉腫ウイルス、ネコヘルペスウイルス、ネコ免疫不全ウイルス、ネコ伝染性腹膜炎ウイルス、ネコ白血病／肉腫ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコパルボウイルス、ネコ肉腫ウイルス、ネコ多核体ウイルス、フィロウイルス、フランダースウイルス、フラビウイルス、口蹄疫ウイルス、フォートモーガンウイルス、フォーコーナーズ・ハンタウイルス、家禽アデノウイルス１、鶏痘ウイルス、フレンドウイルス、ガンマレトロウイルス、ＧＢ肝炎ウイルス、ＧＢウイルス、風疹ウイルス、ゲタウイルス、テナガザル白血病ウイルス、腺熱ウイルス、ヤギ痘ウイルス、ｇｏｌｄｅｎ  ｓｈｉｎｎｅｒウイルス、ゴノメタ（Ｇｏｎｏｍｅｔａ）ウイルス、ガチョウパルボウイルス、顆粒病ウイルス、グロスウイルス、リスＢ型肝炎ウイルス、Ａ群アルボウイルス、グアナリトウイルス、モルモット・サイトメガロウイルス、モルモットＣ型ウイルス、ハンタンウイルス、ハンタウイルス、ボンビノスガイレオウイルス（ｈａｒｄ  ｃｌａｍ  ｒｅｏｖｉｒｕｓ）、野兎線維腫ウイルス、ＨＣＭＶ（ヒトサイトメガロウイルス）、赤血球吸着ウイルス２、日本血球凝集性ウイルス、出血熱ウイルス、ヘンドラウイルス、ヘニパウイルス、ヘパドナウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス群、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、デルタ肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｆ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス、肝炎ウイルス、肝炎ウイルス（非ヒト）、肝因性脳脊髄炎レオウイルス３、ヘパトウイルス、アオサギＢ型肝炎ウイルス、Ｂ型ヘルペスウイルス、単純疱疹ウイルス、単純疱疹ウイルス１、単純疱疹ウイルス２、ヘルペスウイルス、ヘルペスウイルス７、ヘルペスウイルスアテレス、ヘルペスウイルスホミニス、ヘルペスウイルス感染、ヘルペスウイルスサイミリ、ヘルペスウイルススイス、水痘・帯状疱疹ウイルス、高地Ｊウイルス（Ｈｉｇｈｌａｎｄｓ  Ｊ  ｖｉｒｕｓ）、ヒラメラブドウイルス、ブタコレラウイルス、ヒトアデノウイルス２、ヒトアルファヘルペスウイルス１、ヒトアルファヘルペスウイルス２、ヒトアルファヘルペスウイルス３、Ｂ型ヒトリンパ向性ウイルス、ヒトベータヘルペスウイルス５、ヒトコロナウイルス、ヒトサイトメガロウイルス群、ヒトフォーミーウイルス、ヒトガンマヘルペスウイルス４、ヒトガンマヘルペスウイルス６、ヒトＡ型肝炎ウイルス、ヒトヘルペスウイルス１群、ヒトヘルペスウイルス２群、ヒトヘルペスウイルス３群、ヒトヘルペスウイルス４群、ヒトヘルペスウイルス６、ヒトヘルペスウイルス８、ヒト免疫不全ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス１、ヒト免疫不全ウイルス２、ヒトパピローマウイルス、ヒトＴ細胞白血球ウイルス、ヒトＴ細胞白血球ウイルスＩ、ヒトＴ細胞白血球ウイルスＩＩ、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩＩＩ、ヒトＴ細胞リンパ腫ウイルスＩ、ヒトＴ細胞リンパ腫ウイルスＩＩ、１型ヒトＴリンパ球好性ウイルス、２型ヒトＴリンパ球好性ウイルス、ヒトＴリンパ向性ウイルスＩ、ヒトＴリンパ向性ウイルスＩＩ、ヒトＴリンパ向性ウイルスＩＩＩ、イクノウイルス、幼児胃腸炎ウイルス、ウシ伝染性鼻気管炎ウイルス、伝染性造血性壊死ウイルス、伝染性膵臓壊死症ウイルス、インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、インフルエンザウイルスＤ、インフルエンザウイルスｐｒ８、昆虫イリデツセント（ｉｎｓｅｃｔ  ｉｒｉｄｅｓｃｅｎｔ）ウイルス、昆虫ウイルス、イリドウイルス、日本Ｂウイルス、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、フニンウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ケメロボウイルス、キラムラットウイルス、クラマスウイルス、コロンゴ（Ｋｏｌｏｎｇｏ）ウイルス、韓国型出血熱ウイルス、クンバ（ｋｕｍｂａ）ウイルス、キャヌサール森林病ウイルス、キジラガッチ（Ｋｙｚｙｌａｇａｃｈ）ウイルス、ラクロスウイルス、乳酸デヒドロゲナーゼ上昇ウイルス、乳酸脱水素酵素ウイルス、ラゴスコウモリウイルス、ラングールウイルス、ウサギパルボウイルス、ラッサ熱ウイルス、ラッサウイルス、潜伏性ラットウイルス、ＬＣＭウイルス、リーキー（Ｌｅａｋｙ）ウイルス、レンチウイルス、レポリポックスウイルス、白血病ウイルス、ロイコウイルス、ランピースキン病ウイルス、リンパ節腫関連ウイルス、リンホクリプトウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、リンパ増殖性ウイルス群、マチュポウイルス、狂犬病恐怖症ウイルス、Ｂ型哺乳動物オンコウイルス群、Ｂ型哺乳動物レトロウイルス、Ｃ型哺乳動物レトロウイルス群、Ｄ型哺乳動物レトロウイルス、乳癌ウイルス、マプエラウイルス、マールブルグウイルス、マールブルク様ウイルス、マソンファイザーサルウイルス、マストアデノウイルス、マヤロウイルス、ＭＥウイルス、麻疹ウイルス、メナングルウイルス、メンゴウイルス、メンゴウイルス、ミデルビュルフウイルス、授乳者小結節ウイルス、ミンク腸炎ウイルス、マウスの微小ウイルス、ＭＬＶ関連ウイルス、ＭＭウイルス、モコラウイルス、モルシポックスウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、サルＢウイルス、サル痘ウイルス、モノネガウイルス、モルビリウイルス、マウントエルゴンコウモリウイルス、マウスサイトメガロウイルス、マウス脳脊髄炎ウイルス、マウス肝炎ウイルス、マウスＫウイルス、マウス白血病ウイルス、マウス乳癌ウイルス、マウス微小ウイルス、マウス肺炎ウイルス、マウスポリオウイルス、マウスポリオーマウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス痘ウイルス、モザンビークウイルス、ムカンボウイルス、粘膜病ウイルス、ムンプスウイルス、ネズミベータヘルペスウイルス１、ネズミサイトメガロウイルス２、ネズミサイトメガロウイルス群、マクス脳脊髄炎ウイルス、マウス肝炎ウイルス、マウス白血病ウイルス、マウス小結節誘発ウイルス、マウスポリオーマウイルス、マウス肉腫ウイルス、ムロメガロウイルス、マリーバレー脳炎ウイルス、ミキソーマウイルス、ミクソウイルス、ミクソウイルスの多形、耳下腺炎ミクソウイルス、ナイロビヒツジ病ウイルス、ナイロウイルス、ナニルナウイルス（Ｎａｎｉｒｎａｖｉｒｕｓ）、ナリバ（Ｎａｒｉｖａ）ウイルス、ヌドゥムウイルス、ニースリングウイルス、ネルソンベイウイルス、神経向性ウイルス、ニューワールドアレナウイルス、新生児肺炎ウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ニパウイルス、非細胞病原性ウイルス、ノーウォークウイルス、核多角体病ウイルス（ＮＰＶ）、ニップルネックウイルス、オニョンニョンウイルス、オケルボ（Ｏｃｋｅｌｂｏ）ウイルス、腫瘍ウイルス、腫瘍形成性ウイルス様粒子、オンコルナウイルス、オルビウイルス、オルフウイルス、オロポーシェウイルス、オルトヘパドナウイルス、オルトミクソウイルス、オルソポックスウイルス、オルソレオウイルス、オルンゴ（Ｏｒｕｎｇｏ）、ヒツジパピロ
マウイルス、ヒツジカタル熱ウイルス、フクロウ・サル・ヘルペスウイルス、パリアムウイルス、パピローマウイルス、ウサギパピロマウイルス（Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ  ｓｙｌｖｉｌａｇｉ）、パポバウイルス、パラインフルエンザウイルス、１型パラインフルエンザウイルス、２型パラインフルエンザウイルス、３型パラインフルエンザウイルス、４型パラインフルエンザウイルス、パラミクソウイルス、パラポックスウイルス、パラワクシニアウイルス、パルボウイルス、パルボウイルスＢ１９、パルボウイルス群、ペスチウイルス、フレボウイルス、アザラシジステンパーウイルス、ピコドナウイルス、ピコルナウイルス、ブタサイトメガロウイルス−鳩痘ウイルス、ピリウイルス、ピクスナウイルス、マウス肺炎ウイルス、肺炎ウイルス、灰白脊髄炎ウイルス、ポリオウイルス、ポリドナウイルス、多角性ウイルス、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルス、ポリオーマウイルス・ボビス、ポリオーマウイルス・セルコピテシ、ポリオーマウイルス・ホミニス（ｈｏｍｉｎｉｓ）２、ポリオーマウイルス・マカセア（ｍａｃｃａｃａｅ）１、ポリオーマウイルス・ムリス（ｍｕｒｉｓ）１、ポリオーマウイルス・ムリス２、ポリオーマウイルス・パピオニス（ｐａｐｉｏｎｉｓ）１、ポリオーマウイルス・パピオニス２、ポリオーマウイルス・シルビラジ（ｓｙｌｖｉｌａｇｉ）、オランウータンヘルペスウイルス１、ブタ伝染性下痢ウイルス、ブタ血球凝集脳脊髄炎ウイルス、ブタパルボウイルス、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス、ブタＣ型ウイルス、ポックスウイルス、ポックスウイルス、痘瘡ウイルス、プロスペクトヒルウイルス、プロウイルス、偽牛痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、ｐｓｉｔｔａｃｉｎｅｐｏｘウイルス、ｑｕａｉｌｐｏｘウイルス、ウサギ線維腫ウイルス、ウサギ腎臓空胞化ウイルス、ウサギパピロマウイルス、狂犬病ウイルス、アライグマパルボウイルス、アライグマポックスウイルス、ラニケットウイルス、ラットサイトメガロウイルス、ラットパルボウイルス、ラットウイルス、ローシャーウイルス、組み換え型ワクシニアウイルス、組み替えウイルス、レオウイルス、レオウイルス１、レオウイルス２、レオウイルス３、爬虫類Ｃ型ウイルス、呼吸器感染症ウイルス、呼吸系発疹ウイルス、呼吸系ウイルス、細網内皮症ウイルス、ラブドウイルス、ラブドウイルス・カルピア（ｃａｒｐｉａ）、ラジノウイルス、ライノウイルス、リジディオウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ライリーウイルス、牛疫ウイルス、ＲＮＡ腫瘍ウイルス、ロスリバーウイルス、ロタウイルス、ｒｏｕｇｅｏｌｅウイルス、ラウス肉腫ウイルス、風疹ウイルス、風疹ウイルス、ルビウイルス、ロシア秋脳炎ウイルス、ＳＡ  １１シミアンウイルス、ＳＡ２ウイルス、サビアウイルス、サギヤマウイルス、サイミリンヘルペスウイルス１、唾液腺ウイルス、パパタシ熱ウイルス群、サンジンバ（Ｓａｎｄｊｉｍｂａ）ウイルス、ＳＡＲＳウイルス、ＳＤＡＶ（唾液腺炎ウイルス）、シールポックス（ｓｅａｌｐｏｘ）ウイルス、セムリキ森林熱ウイルス、ソウルウイルス、ヒツジ痘ウイルス、ショープ線維腫ウイルス、ショープ乳頭腫ウイルス、シミアンフォーミーウイルス、シミアンＡ型肝炎ウイ��ス、シミアンヒト免疫不全ウイルス、シミアン免疫不全ウイルス、シミアンパラインフルエンザウイルス、シミアンＴ細胞リンパ増殖性ウイルス、シミアンウイルス、シミアンウイルス４０、単純ウイルス、シンノンブルウイルス、シンドビスウイルス、天然痘ウイルス、南アメリカ出血熱ウイルス、スズメ痘ウイルス、スプマウイルス、リス線維腫ウイルス、リスザルレトロウイルス、ＳＳＶ  １ウイルス群、Ｉ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、ＩＩ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、ＩＩＩ型ＳＴＬＶ（シミアンＴリンパ向性ウイルス）、丘疹性口炎ウイルス、顎下腺ウイルス、ブタアルファヘルペスウイルス１、ブタヘルペスウイルス２、スイポックスウイルス、沼地熱ウイルス、豚痘ウイルス、スイスマウス白血病ウイルス、ＴＡＣウイルス、タカリベウイルス群、タカリベウイルス、タナ痘ウイルス、タテラポックス（Ｔａｔｅｒａｐｏｘ）ウイルス、テンチレオウイルス、タイラー脳脊髄炎ウイルス、タイラーウイルス、トゴトウイルス、トッタパラヤム（Ｔｈｏｔｔａｐａｌａｙａｍ）ウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、チオマンウイルス、トガウイルス、トロウイルス、腫瘍ウイルス、ツパイウイルス、七面鳥鼻気管炎ウイルス、七面鳥痘ウイルス、Ｃ型レトロウイルス、Ｄ型オンコウイルス、Ｄ型レトロウイルス群、潰瘍性疾患ラブドウイルス、ウナウイルス、ウークニエミウイルス群、ワクシニアウイルス、空胞形成ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、バリセロウイルス、バリコラ（Ｖａｒｉｃｏｌａ）ウイルス、大痘瘡ウイルス、痘瘡ウイルス、ウアシン・ギシュウー病ウイルス、ＶＥＥウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルス、ベネズエラ出血熱ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、ベシクロウイルス、ビリュイスクウイルス、クサリヘビレトロウイルス、ウイルス性造血性敗血症ウイルス、ビスナマエディウイルス、ビスナウイルス、ハタネズミ痘（Ｖｏｌｅｐｏｘ）ウイルス、ＶＳＶ（水疱性口内炎ウイルス）、ウォーラルウイルス、ウォリゴウイルス、疣ウイルス、ＷＥＥウイルス、西ナイルウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳脊髄炎ウイルス、ワタロアウイルス、冬季嘔吐ウイルス、ウッドチャックＢ型肝炎ウイルス、ウーリーモンキー肉腫ウイルス、創傷腫瘍ウイルス、ＷＲＳＶウイルス、ヤバサル腫瘍ウイルス、ヤバウイルス、ヤタポックスウイルス、黄熱ウイルス、又はユグボグダノヴァツ（Ｙｕｇ  Ｂｏｇｄａｎｏｖａｃ）ウイルス。
【０２４８】
幾つかの実施形態において、病原性感染症はレトロウイルスにより引き起こされる。典型的なレトロウイルスには、限定されないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血球ウイルス（ＨＴＬＶ）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、トリ白血病及び肉腫ウイルス、又はメーソン−ファイザー・サルウイルスが挙げられる。
【０２４９】
幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、レトロウイルス感染症を抱える又は潜伏期中の被験体に投与することで、静止期にある感染細胞を減少及び／又は排除する。場合によっては、レトロウイルスには、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血球ウイルス（ＨＴＬＶ）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、トリ白血病及び肉腫ウイルス、又はメーソン−ファイザー・サルウイルスが挙げられる。場合によっては、サイトカイン抱合体は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を再び向けることで、静止期にある感染細胞を認識し且つ排除する。
【０２５０】
場合によっては、サイトカイン抱合体はＩＬ−２抱合体である。幾つかの例において、ＩＬ−２抱合体は、レトロウイルス感染症を抱える又は潜伏期中の被験体に投与することで、静止期にある感染細胞を減少及び／又は排除する。場合によっては、レトロウイルスには、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴ細胞白血球ウイルス（ＨＴＬＶ）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、トリ白血病及び肉腫ウイルス、又はメーソン−ファイザー・サルウイルスが挙げられる。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を再び向けることで、静止期にある感染細胞を認識し且つ排除する。更なる場合、ＩＬ−２抱合体は抗レトロウイルス治療薬と組み合わせて被験体に投与される。
【０２５１】
幾つかの実施形態において、レトロウイルスはＨＩＶである。幾つかの例において、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を抱える又は潜伏期中の被験体に投与することで、静止期にあるＨＩＶ感染細胞（例えばＣＤ４＋Ｔ細胞）を減少及び／又は排除する。場合によっては、サイトカイン抱合体はＩＬ−２抱合体である。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は抗レトロウイルス治療薬と組み合わせて被験体に投与される。典型的なＨＩＶ抗レトロウイルス治療薬は以下を含む：
【０２５２】
ヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬（ＮＲＴＩ）、例えばアバカルビル、エムトリシタビン、ラミブジン、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩、及びジドブジンなど；
【０２５３】
非核酸系逆転写酵素阻害薬（ＮＮＲＴＩ）、例えばエファビレンツ、エトラビリン、ネビラピン、又はリルピビリンなど；
【０２５４】
プロテアーゼ阻害剤（ＰＩ）、例えばアタザナビル、ダルナビル、ホスアンプレナビル、リトナビル、サキナビル、及びチプラナビルなど；
【０２５５】
融合阻害剤、例えばエンフュービルタイド；
【０２５６】
ＣＣＲ５アンタゴニスト、例えばマラビロク；
【０２５７】
インテグラーゼ阻害剤、例えばドルテグラビル及びラルテグラビルなど；
【０２５８】
結合後阻害剤（ｐｏｓｔ−ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、例えばイバリズマブ；
【０２５９】
薬物動態増強剤、例えばコビシスタット；及び
【０２６０】
カクテル、例えばアバカルビル及びラミブジン；アバカルビル、ドルテグラビル、及びラミブジン；アバカルビル、ラミブジン、及びジドブジン；アタザナビル及びコビシスタット；ビクテグラビル、エムトリシタビン、及びテノホビル・アラフェナミド；ダルナビル及びコビシスタット；ドルテグラビル及びリルピビリン；エファビレンツ、エムトリシタビン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エファビレンツ、ラミブジン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エファビレンツ、ラミブジン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エルビテグラビル、コビシスタット、エムトリシタビン、及びテノホビルアラフェナミドフマル酸塩；エルビテグラビル、コビシスタット、エムトリシタビン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エムトリシタビン、リルピビリン、及びテノホビル・アラフェナミド；エムトリシタビン、リルピビリン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エムトリシタビン及びテノホビル・アラフェナミド；エムトリシタビン及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；ラミブジン及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；ラミブジン及びジドブジン；並びにロピナビル及びリトナビル。
【０２６１】
場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、ヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬（ＮＲＴＩ）などの抗レトロウイルス治療薬と組み合わせて被験体に投与され、例えば以下が挙げられる：アバカルビル、エムトリシタビン、ラミブジン、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩、及びジドブジン；非核酸系逆転写酵素阻害薬（ＮＮＲＴＩ）、例えばエファビレンツ、エトラビリン、ネビラピン、又はリルピビリンなど；プロテアーゼ阻害剤（ＰＩ）、例えばアタザナビル、ダルナビル、ホスアンプレナビル、リトナビル、サキナビル、及びチプラナビルなど；融合阻害剤、例えばエンフュービルタイド；ＣＣＲ５アンタゴニスト、例えばマラビロク；インテグラーゼ阻害剤、例えばドルテグラビル及びラルテグラビルなど；結合後阻害剤（ｐｏｓｔ−ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、例えばイバリズマブ；薬物動態増強剤、例えばコビシスタット；又はカクテル、例えばアバカルビル及びラミブジン；アバカルビル、ドルテグラビル、及びラミブジン；アバカルビル、ラミブジン、及びジドブジン；アタザナビル及びコビシスタット；ビクテグラビル、エムトリシタビン、及びテノホビル・アラフェナミド；ダルナビル及びコビシスタット；ドルテグラビル及びリルピビリン；エファビレンツ、エムトリシタビン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エファビレンツ、ラミブジン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エファビレンツ、ラミブジン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エルビテグラビル、コビシスタット、エムトリシタビン、及びテノホビルアラフェナミドフマル酸塩；エルビテグラビル、コビシスタット、エムトリシタビン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エムトリシタビン、リルピビリン、及びテノホビル・アラフェナミド；エムトリシタビン、リルピビリン、及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；エムトリシタビン及びテノホビル・アラフェナミド；エムトリシタビン及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；ラミブジン及びテノホビルジソプロキシルフマル酸塩；ラミブジン及びジドブジン；並びにロピナビル及びリトナビル。
【０２６２】
幾つかの実施形態において、ウイルスは肝炎ウイルス、例えばＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、又はＥ型肝炎である。幾つかの例において、本明細書に記載されるサイトカイン抱合体（例えば、ＩＬ−２抱合体）は、肝炎感染症を抱える又は潜伏期中の被験体に投与することで、静止期にある感染細胞を減少及び／又は排除する。場合によっては、サイトカイン抱合体は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を再び向けることで、静止期にある感染細胞を認識し且つ排除する。
【０２６３】
場合によっては、サイトカイン抱合体はＩＬ−２抱合体である。幾つかの例において、ＩＬ−２抱合体は、肝炎感染症を抱える又は潜伏期中の被験体に投与することで、静止期にある感染細胞を減少及び／又は排除する。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は、ＣＤ８＋Ｔ細胞を再び向けることで、静止期にある感染細胞を認識し且つ排除する。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は抗ウイルス治療薬と組み合わせて被験体に投与される。肝炎に対する典型的な抗ウイルス治療薬には、以下が挙げられる：リバビリン；ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ阻害剤、例えばパリタプレビル、シメプレビル、及びグラゾプレビルなど；ＮＳ５Ａプロテアーゼ阻害剤、例えばレジパスビル、オムビタスビル、エルバスビル、及びダクラタスビルなど；ＮＳ５Ｂヌクレオチド／ヌクレオシド及び非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、例えばソホスブビル及びダサブビルなど；並びに組み合わせ、例えばレジパスビル−ソホスブビル、ダサブビル−オムビタスビル−パリタプレビル−リトナビル；エルバスビル−グラゾプレビル、オムビタスビル−パリタプレビル−リトナビル、ソホスブビル−ベルパタスビル、ソホスブビル−ベルパタスビル−ボキシラプレビル、及びグレカプレビル−ピブレンタスビル；並びにインターフェロン、例えばペグインターフェロン・アルファ−２ａ、ペグインターフェロン・アルファ−２ｂ、及びインターフェロン・アルファ−２ｂなど。場合によっては、ＩＬ−２抱合体は抗ウイルス治療薬と組み合わせて被験体に投与され、抗ウイルス治療薬には以下が挙げられる：リバビリン；ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ阻害剤、例えばパリタプレビル、シメプレビル、及びグラゾプレビルなど；ＮＳ５Ａプロテアーゼ阻害剤、例えばレジパスビル、オムビタスビル、エルバスビル、及びダクラタスビルなど；ＮＳ５Ｂヌクレオチド／ヌクレオシド及び非ヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤、例えばソホスブビル及びダサブビルなど；並びに組み合わせ、例えばレジパスビル−ソホスブビル、ダサブビル−オムビタスビル−パリタプレビル−リトナビル；エルバスビル−グラゾプレビル、オムビタスビル−パリタプレビル−リトナビル、ソホスブビル−ベルパタスビル、ソホスブビル−ベルパスビル−ボキシラプレビル、及びグレカプレビル−ピブレンタスビル；並びにインターフェロン、例えばペグインターフェロン・アルファ−２ａ、ペグインターフェロン・アルファ−２ｂ、及びインターフェロン・アルファ−２ｂなど。
【０２６４】
細胞集団拡張の方法
幾つかの実施形態において、本明細書には付加的に、リンパ球集団、例えばＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ細胞及びメモリー細胞、ＮＫ細胞、及び／又はＮＫＴ細胞の集団を拡張させる方法、或いはＴｒｅｇ細胞集団を拡張する方法が記載される。幾つかの例において、前記方法は、細胞を本明細書に記載されるサイトカイン抱合体と接触させる工程、及び複合体を形成するためにサイトカインをサイトカイン受容体と相互作用させる工程を含み、ここで、前記複合体は別個のリンパ球集団の拡張を刺激する。
【０２６５】
幾つかの例において、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ細胞及びメモリー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、又はナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞集団を拡張させる方法は、細胞集団と上述の単離及び修飾されたＩＬ−２ポリペプチドとを、ＩＬ−２Ｒβを含む複合体の形成を誘導するのに十分な時間にわたり接触させる工程を含み、これにより、Ｔｅｆｆ細胞集団及び／又はＮＫ細胞集団の拡張を刺激する。幾つかの例において、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ細胞及びメモリー細胞、ＮＫ細胞、及び／又はＮＫＴ細胞集団を拡張させる方法は、（ａ）細胞集団を本明細書に記載されるＩＬ−２抱合体と接触させる工程；及び（ｂ）ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体を形成するためにＩＬ−２をＩＬ−２Ｒβ及びＩＬ−２Ｒγサブユニットと相互作用させる工程を含み；ここで、ＩＬ−２抱合体においてはＩＬ−２Ｒαサブユニットへの親和性が減少しており、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒβγ複合体は、ＣＤ４＋ヘルパー細胞、ＣＤ８＋エフェクターナイーブ細胞及びメモリー細胞、ＮＫ細胞、及び／又はＮＫＴ細胞の拡張を刺激する。上述のように、ＩＬ−２抱合体は、単離され且つ精製されたＩＬ−２ポリペプチド；及び抱合部分を含有しており、該抱合部分は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６０、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｎ７１、Ｌ７２、Ｍ１０４、Ｃ１０５、及びＹ１０７から選択されるアミノ酸位置において単離され且つ精製されたＩＬ−２ポリペプチドに結合し、ここで、アミノ酸残基の番号付けはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に相当する。幾つかの例において、アミノ酸位置は、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例において、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。幾つかの例において、アミノ酸位置はＲ３８及びＫ６４から選択される。幾つかの例において、アミノ酸位置はＥ６１、Ｅ６２、及びＥ６８から選択される。場合によっては、アミノ酸位置はＥ６２である。
【０２６６】
幾つかの例において、ＩＬ−２抱合体は、細胞集団におけるＣＤ４＋Ｔ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞を２０％、１５％、１０％、５％、又は１％未満拡張させる。幾つかの例において、ＩＬ−２抱合体は、細胞集団におけるＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞を拡張させない。幾つかの例において、単離且つ修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによるインキュベーションの後の細胞集団におけるＴｅｆｆ細胞対Ｔｒｅｇ細胞の比率は、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、２０：１、５０：１、又は１００：１である。幾つかの例において、単離且つ修飾されたＩＬ−２ポリペプチドによるインキュベーションの後の細胞集団におけるＴｅｆｆ細胞対Ｔｒｅｇ細胞の比率は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、２０：１、５０：１、又は１００：１である。
【０２６７】
幾つかの例において、ＩＬ−２Ｒβとの複合体の形成を誘導するのに十分な時間は、少なくとも５分、１０分、１５分、２０分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、８時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、又は７日である。幾つかの例において、ＩＬ−２Ｒβとの複合体の形成を誘導するのに十分な時間は、約５分、１０分、１５分、２０分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、８時間、１０時間、１２時間、１８時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、又は７日である。
【０２６８】
幾つかの例において、前記方法はインビボの方法である。
【０２６９】
幾つかの例において、前記方法はインビトロの方法である。
【０２７０】
幾つかの例において、前記方法はエキソビボの方法である。
【０２７１】
サイトカインポリペプチド産生
幾つかの例において、本明細書に記載されるサイトカイン（例えば、インターロイキン、ＩＦＮ、又はＴＮＦ）ポリペプチドは、天然アミノ酸突然変異又は非天然アミノ酸突然変異の何れかを含んで、組み換えにより作成されるか、或いは化学合成される。幾つかの例において、本明細書に記載されるサイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドは、組み換えにより、例えば、宿主細胞系により、或いは無細胞系において生成される。
【０２７２】
幾つかの例において、サイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドは、宿主細胞系を介して組み換えにより生成される。場合によっては、宿主細胞は、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、又は植物細胞）或いは原核細胞（例えば、グラム陽性菌又はグラム陰性菌）である。場合によっては、真核宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である。場合によっては、哺乳動物宿主細胞は、安定した細胞株、或いは、対象の遺伝物質をそれ自体のゲノムに組み込み、且つ細胞分裂の多くの世代後に遺伝物質の生成物を発現する能力を有している細胞株である。他の場合、哺乳動物宿主細胞は、一過性の細胞株、或いは、対象の遺伝物質をそれ自体のゲノムに組み込まず、且つ細胞分裂の多くの世代後に遺伝物質の生成物を発現する能力を有していない細胞株である。
【０２７３】
典型的な哺乳動物宿主細胞には、限定されないが、２９３Ｔ細胞株、２９３Ａ細胞株、２９３ＦＴ細胞株、２９３Ｆ細胞、２９３Ｈ細胞、Ａ５４９細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＣＨＯ  ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ−Ｓ細胞、ＣＨＯ−Ｋ１細胞、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）Ｔ−ＲＥｘ（商標）２９３細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−２９３細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）３Ｔ３細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−ＢＨＫ細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−ＣＨＯ細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−ＣＶ−１細胞株、Ｆｌｐ−Ｉｎ（商標）−Ｊｕｒｋａｔ細胞株、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３Ｆ細胞、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ−Ｓ細胞、ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）２９３ＭＳＲ細胞株、ＧＳ−ＣＨＯ細胞株、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞、Ｔ−ＲＥｘ（商標）Ｊｕｒｋａｔ細胞株、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、Ｔ−ＲＥｘ（商標）−２９３細胞株、Ｔ−ＲＥｘ（商標）−ＣＨＯ細胞株、及びＴ−ＲＥｘ（商標）−ＨｅＬａ細胞株が挙げられる。
【０２７４】
幾つかの実施形態において、真核宿主細胞は昆虫宿主細胞である。典型的な昆虫宿主細胞は、ショウジョウバエＳ２細胞、Ｓ２細胞、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ（商標）細胞、及びｅｘｐｒｅｓＳＦ＋（登録商標）細胞を含む。
【０２７５】
幾つかの実施形態において、真核宿主細胞は酵母宿主細胞である。典型的な酵母宿主細胞は、ＧＳ１１５、ＫＭ７１Ｈ、ＳＭＤ１１６８、ＳＭＤ１１６８Ｈ、及びＸ−３３などのピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）酵母菌株、並びにＩＮＶＳｃ１などのサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）酵母菌株を含む。
【０２７６】
幾つかの実施形態において、真核宿主細胞は植物宿主細胞である。幾つかの例において、植物細胞は藻類由来の細胞を含む。典型的な植物細胞株は、コナミドリムシ１３７ｃ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ  １３７ｃ）、又はＳｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｌｏｎｇａｔｕｓ  ＰＰＣ  ７９４２を含む。
【０２７７】
幾つかの実施形態において、宿主細胞は原核宿主細胞である。典型的な原核生物の宿主細胞には、ＢＬ２１、Ｍａｃｈ１（商標）、ＤＨ１０Ｂ（商標）、ＴＯＰ１０、ＤＨ５α、ＤＨ１０Ｂａｃ（商標）、ＯｍｎｉＭａｘ（商標）、ＭｅｇａＸ（商標）、ＤＨ１２Ｓ（商標）、ＩＮＶ１１０、ＴＯＰ１０Ｆ’、ＩＮＶαＦ、ＴＯＰ１０／Ｐ３、ｃｃｄＢ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ、ＰＩＲ１、ＰＩＲ２、Ｓｔｂｌ２（商標）、Ｓｔｂｌ３（商標）、又はＳｔｂｌ４（商標）が挙げられる。
【０２７８】
幾つかの例において、本明細書に記載されるＩＬ−２ポリペプチドの産生に適切なポリ核酸分子又はベクターは、真核生物又は原核生物のソースに由来する適切なベクターを含む。典型的なポリ核酸分子又はベクターは、細菌（例えばＥ．ｃｏｌｉ）、昆虫、酵母（例えばピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ））、藻類、又は哺乳動物に由来するベクターを含む。細菌ベクターには、例えば、ｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＳＫ７５、ｐＢＡＤ配列ベクター系、ｐＢＡＤＭ配列ベクター系、ｐＥＴ配列ベクター系、ｐＥＴＭ配列ベクター系、ｐＧＥＸ配列ベクター系、ｐＨＡＴ、ｐＨＡＴ２、ｐＭａｌ−ｃ２、ｐＭａｌ−ｐ２、ｐＱＥ配列ベクター系、ｐＲＳＥＴ  Ａ、ｐＲＳＥＴ  Ｂ、ｐＲＳＥＴ  Ｃ、ｐＴｒｃＨｉｓ２系、ｐＺＡ３１−Ｌｕｃ、ｐＺＥ２１−ＭＣＳ−１、ｐＦＬＡＧ  ＡＴＳ、ｐＦＬＡＧ  ＣＴＳ、ｐＦＬＡＧ  ＭＡＣ、ｐＦＬＡＧ  Ｓｈｉｆｔ−１２ｃ、ｐＴＡＣ−ＭＡＴ−１、ｐＦＬＡＧ  ＣＴＣ、又はｐＴＡＣ−ＭＡＴ−２が挙げられる。
【０２７９】
媒介昆虫には、例えば、ｐＦａｓｔＢａｃ１、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＤＵＡＬ、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＥＴ、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＨＴａ、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＨＴｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ  ＨＴｃ、ｐＦａｓｔＢａｃ  Ｍ３０ａ、ｐＦａｓｔＢａｃｔ  Ｍ３０ｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ、Ｍ３０ｃ、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３、ｐＶＬ１３９３  Ｍ１０、ｐＶＬ１３９３  Ｍ１１、ｐＶＬ１３９３  Ｍ１２、ｐＰｏｌｈ−ＦＬＡＧ１又はｐＰｏｌｈ−ＭＡＴ２などのＦＬＡＧベクター、或いはｐＰｏｌｈ−ＭＡＴ１又はｐＰｏｌｈ−ＭＡＴ２などのＭＡＴベクターが挙げられる。
【０２８０】
酵母ベクターには、例えば、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１５ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１７ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）２４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＹＥＳ−ＤＥＳＴ５２ベクター、ｐＢＡＤ−ＤＥＳＴ４９  Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）デスティネーションベクター、ｐＡＯ８１５ピキアベクター、ｐＦＬＤ１ピキ・パストリスベクター、ｐＧＡＰＺＡ、Ｂ、及びＣのピキア・パストリスベクター、ｐＰＩＣ３．５Ｋピキアベクター、ｐＰＩＣ６  Ａ、Ｂ、及びＣのピキアベクター、ｐＰＩＣ９Ｋピキアベクター、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＣＴ酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＮＴ  Ａ、Ｂ、及びＣの酵母ベクター、或いはｐＹＥＳ３／ＣＴ酵母ベクターが挙げられる。
【０２８１】
藻類ベクターには例えば、ｐＣｈｌａｍｙ−４ベクター又はＭＣＳベクターが挙げられる。
【０２８２】
哺乳動物ベクターには例えば、一過性発現ベクター又は安定した発現ベクターが挙げられる。典型的な哺乳動物の一過性発現ベクターには、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ８、ｐＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ１９、ｐＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ２３、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ２、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ６ａ，ｂ，ｃ、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ５．１、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ５ａ，ｂ，ｃ、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ７．１、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ２０、ｐ３ｘＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ２４、ｐＣＭＶ−ＦＬＡＧ−ＭＡＴ１、ｐＣＭＶ−ＦＬＡＧ−ＭＡＴ２、ｐＢＩＣＥＰ−ＣＭＶ３、又はｐＢＩＣＥＰ−ＣＭＶ４が挙げられる。典型的な哺乳動物の安定した発現ベクターには、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ３、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ９、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ１３、ｐＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ２１、ｐ３ｘＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ２５、ｐＦＬＡＧ−ＣＭＶ４、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ１０、ｐ３ｘＦＬＡＧ−ＣＭＶ１４、ｐＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ２２、ｐ３ｘＦＬＡＧ−Ｍｙｃ−ＣＭＶ２６、ｐＢＩＣＥＰ−ＣＭＶ１、又はｐＢＩＣＥＰ−ＣＭＶ２が挙げられる。
【０２８３】
幾つかの例において、無細胞系は、本明細書に記載されるサイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドの産生のために使用される。場合によっては、無細胞系は、細胞からの細胞質成分及び／又は核成分の混合物を含み、インビトロでの核酸合成に適している。幾つかの例において、無細胞系は原核細胞成分を利用する。他の例において、無細胞系は真核細胞成分を利用する。核酸合成は、例えば、ショウジョウバエ細胞（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｃｅｌｌ）、ツメガエル卵子（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｅｇｇ）、古細菌、或いはＨｅＬａ細胞に基づいて無細胞系において得られる。典型的な無細胞系には、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｓ３０  Ｅｘｔｒａｃｔ系、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｔ７  Ｓ３０系、又はＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）、ＸｐｒｅｓｓＣＦ、及びＸｐｒｅｓｓＣＦ＋が挙げられる。
【０２８４】
無細胞翻訳系は多様に、構成成分、例えばプラスミド、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、シンテターゼ、遊離因子、リボソーム、シャペロンタンパク質、翻訳開始因子及び伸長因子、天然アミノ酸及び／又は非天然アミノ酸、及び／又は、タンパク質発現のために使用される他の構成成分を含む。そのような構成成分は随意に修飾されることで、収率を改善し、合成速度を増大させ、タンパク質生成物の忠実度を増大させ、又は非天然アミノ酸を組み込む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるサイトカインは、次のものに記載される無細胞翻訳系を使用して合成される：ＵＳ８，７７８，６３１；ＵＳ２０１７／０２８３４６９；ＵＳ２０１８／００５１０６５；ＵＳ２０１４／０３１５２４５；又はＵＳ８，７７８，６３１。幾つかの実施形態において、無細胞翻訳系は、修飾された遊離因子、或いは更に系からの１つ以上の遊離因子の除去を含む。幾つかの実施形態において、無細胞翻訳系は、減少されたプロテアーゼ濃度を含む。幾つかの実施形態において、無細胞翻訳系は、非天然アミノ酸をコードするために使用される再配置されたコドンを含む、修飾されたｔＲＮＡを含む。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるシンテターゼは、非天然アミノ酸の取り込みのために、無細胞翻訳系において使用される。幾つかの実施形態において、ｔＲＮＡは、無細胞翻訳系に加える前に酵素的方法又は化学的方法を使用して非天然アミノ酸を予め充填される。幾つかの実施形態において、無細胞翻訳系の構成成分は、修飾された有機体、例えば修飾された細菌、酵母菌、又は他の有機体などから得られる。
【０２８５】
幾つかの実施形態において、サイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドは、環状に順列された形態として、発現宿主系を介して又は無細胞系を通じて生成される。
【０２８６】
非天然アミノ酸を含むサイトカインポリペプチドの産生
直交の又は拡張された遺伝子コードは本開示において使用することができ、そこでは、サイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドの核酸配列に存在する１つ以上の特定のコドンが割り当てられることで、非天然アミノ酸がコードされ、その結果、非天然アミノ酸が、直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対の使用によりサイトカイン（例えばＩＬ−２）へと遺伝学的に組み込まれ得る。直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対は、ｔＲＮＡに非天然アミノ酸を充填することができ、且つコドンに応じてその非天然アミノ酸をポリペプチド鎖に組み込むことができる。
【０２８７】
幾つかの例において、コドンは、コドンアンバー、オーカー、オパール、又はクアドルプレットコドン（ｑｕａｄｒｕｐｌｅｔ  ｃｏｄｏｎ）である。場合によっては、コドンは、非天然アミノ酸を運ぶために使用される直交ｔＲＮＡに相当する。場合によっては、コドンはアンバーである。他の場合、コドンは直交コドンである。
【０２８８】
幾つかの例において、コドンはクアドルプレットコドンであり、直交リボソームｒｉｂｏ−Ｑ１によりデコードされ得る。場合によっては、クアドルプレットコドンは、Ｎｅｕｍａｎｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ｖｉａ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｑｕａｄｒｕｐｌｅｔ−ｄｅｃｏｄｉｎｇ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ，”  Ｎａｔｕｒｅ，  ４６４（７２８７）：  ４４１−４４４  （２０１０）に説明される通りのものである。
【０２８９】
幾つかの例において、本開示において使用されるコドンは、再コードされたコドン、例えば、代替的なコドンと置き換えられる同義コドン又はレアコドンである。場合によっては、再コードされたコドンは、Ｎａｐｏｌｉｔａｎｏ，  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｅｍｅｒｇｅｎｔ  ｒｕｌｅｓ  ｆｏｒ  ｃｏｄｏｎ  ｃｈｏｉｃｅ  ｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ  ｂｙ  ｅｄｉｔｉｎｇ  ｒａｒｅ  ａｒｇｉｎｅ  ｃｏｄｏｎｓ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ，”  ＰＮＡＳ，  １１３（３８）：  Ｅ５５８８−５５９７  （２０１６）に記載される通りのものである。場合によっては、再コードされたコドンは、Ｏｓｔｒｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｄｅｓｉｇｎ，  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ａｎｄ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｔｏｗａｒｄ  ａ  ５７−ｃｏｄｏｎ  ｇｅｎｏｍｅ，”  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３５３（６３０１）：  ８１９−８２２  （２０１６）に記載される通りのものである。
【０２９０】
幾つかの例において、非天然核酸は、サイトカイン（例えばＩＬ−２）への１つ以上の非天然アミノ酸の組み込みをもたらすために利用される。典型的な非天然核酸には、限定されないが次のものが挙げられる：ウラシル−５−イル、ヒポキサンチン−９−イル（Ｉ）、２−アミノアデニン−９−イル、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−２）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６−メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２−プロピル及び他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル及びシトシン、５−プロピニルウラシル及びシトシン、６−アゾウラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル及び他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル及び他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニン、並びに３−デアザグアニン及び３−デアザアデニン。特定の非天然核酸、例えば５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、及びＮ−２置換プリンなど、Ｎ−６置換プリン、Ｏ−６置換プリン、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、５−メチルシトシン、二重形成の安定性を増大させるもの、普遍的な核酸、疎水性核酸、乱雑な核酸、サイズ拡張された核酸、フッ素処理した核酸、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン及びＮ−２、Ｎ−６、並びに０−６の置換プリンには、以下が挙げられる：２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、及び５−プロピニルシトシン、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、アデニン及びグアニンの他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２−プロピル及び他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシル、５−プロピニルシトシン、ピリミジン核酸の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル及び他の８−置換アデニン、５−ハロ、特に５−ブロも、５−トリフルオロメチル、他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン、７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン、８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、３−デアザアデニン、三環式ピリミジン、フェノキサジンシチジン（［５，４−ｂ］［１，４］ベンズオキサジン−２（３Ｈ）−オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンゾチアジン−２（３Ｈ）−オン）、Ｇ−クランプ、フェノキサジンシチジン（例えば９−（２−アミノエトキシ）−Ｈ−ピリミド［５，４−ｂ］［１，４］ベンズオキサジン−２（３Ｈ）−オン）、カルバゾールシチジン（２Ｈ−ピリミド［４，５−ｂ］インドール−２−オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ−ピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−オン）、プリン塩基又はピリミジン塩基が他の複素環式化合物により置換されるもの、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン、２−ピリドン、アザシトシン、５−ブロモシトシン、ブロモウラシル、５−クロロシトシン、塩素化シトシン、シクロシトシン、シトシンアラビノサイド、５−フルオロピリミジン、フルオロピリミジン、フルオロウラシル、５，６−ジヒドロシトシン、５−ヨードシトシン、ヒドロキシ尿素、ヨードウラシル、５−ニトロシトシン、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、及び５−ヨードウラシル、２−アミノ−アデニン、６−チオ−グアニン、２−チオ−チミン、４−チオ−チミン、５−プロピニル−ウラシル、４−チオ−ウラシル、Ｎ４−エチルシトシン、７−デアザグアニン、７−デアザ−８−アザグアニン、５−ヒドロキシシトシン、２’−デオキシウリジン、２−アミノ−２’−デオキシアデノシン、及び、米国特許第３，６８７，８０８号；４，８４５，２０５号；４，９１０，３００号；４，９４８，８８２号；５，０９３，２３２号；５，１３０，３０２号；５，１３４，０６６号；５，１７５，２７３号；５，３６７，０６６号；５，４３２，２７２号；５，４５７，１８７号；５，４５９，２５５号；５，４８４，９０８号；５，５０２，１７７号；５，５２５，７１１号；５，５５２，５４０号；５，５８７，４６９号；５，５９４，１２１号；５，５９６，０９１号；５，６１４，６１７号；５，６４５，９８５号；５，６８１，９４１号；５，７５０，６９２号；５，７６３，５８８号；５，８３０，６５３号及び６，００５，０９６号；ＷＯ２００８／１１６０６４；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００１）  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ９：８０７−８１３；Ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，  Ｊ．Ｉ．，  Ｅｄ．，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  １９９０，  ８５８−  ８５９；Ｅｎｇｌｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９１，  ３０，  ６１３；及びＳａｎｇｈｖｉ，  Ｃｈａｐｔｅｒ  １５，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｃｒｏｏｋｅａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ  Ｅｄｓ．，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９３，  ２７３−２８８に記載されるもの。追加の塩基修飾は、例えば米国特許第３，６８７，８０８号；Ｅｎｇｌｉｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ，  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  １９９１，  ３０，  ６１３；及びＳａｎｇｈｖｉ，  Ｃｈａｐｔｅｒ  １５，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  ｐａｇｅｓ  ２８９−３０２，  Ｃｒｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｌｅｂｌｅｕ  ｅｄ．，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９９３に見出すことができる。
【０２９１】
様々な複素環式の塩基及び様々な糖部分（及び糖アナログ）を含有する非天然核酸が当技術分野において利用可能であり、核酸は場合によっては、自然発生の核酸の主要な５つの塩基成分とは別の１つ以上の複素環式塩基を含む。例えば、複素環式塩基は場合によっては、ウラシル−５−イル、シトシン−５−イル、アデニン−７−イル、アデニン−８−イル、グアニン−７−イル、グアニン−８−イル、４−アミノピロロ［２．３−ｄ］ピリミジン−５−イル、２−アミノ−４−オキソピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル、２−アミノ−４−オキソピロロ［２．３−ｄ］ピリミジン−３−イル基を含み、ここで、プリンは９位置を介して核酸の糖部分に、１位置を介してピリミジンに、７位置を介してピロロピリミジンに、及び１位置を介してピラゾロピリミジンに結合する。
【０２９２】
幾つかの実施形態において、ヌクレオチドアナログもリン酸塩部分にて修飾される。修飾されたリン酸塩部分は、限定されないが、２つのヌクレオチド間の結合にて修飾を有するものを含み、及び、例えばホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル及び他のアルキルホスホン酸塩、例えば３’−アルキレンホスホン酸塩及びキラルホスホン酸塩など、ホスフィネート、ホスホラミデート、例えば３’−アミノホスホラミデート及びアミノアルキルホスホラミデートなど、チオホスホラミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、及びボラノホスフェートを含有する。２つのヌクレオチド間のこれらリン酸塩又は修飾されたリン酸塩結合は、３’−５’結合又は２’−５’結合を経由し、結合は、逆転した極性、例えば３’−５’〜５’−３’、又は２’−５’〜５’−２’などを含むことを理解されたい。様々な塩、混合塩、及び遊離酸形態も含まれている。多数の米国特許は、修飾されたリン酸塩を含有するヌクレオチドを作成且つ使用する方法を教示しており限定されないが以下が挙げられる：米国特許第３，６８７，８０８号；４，４６９，８６３号；４，４７６，３０１号；５，０２３，２４３号；５，１７７，１９６号；５，１８８，８９７号；５，２６４，４２３号；５，２７６，０１９号；５，２７８，３０２号；５，２８６，７１７号；５，３２１，１３１号；５，３９９，６７６号；５，４０５，９３９号；５，４５３，４９６号；５，４５５，２３３号；５，４６６，６７７号；５，４７６，９２５号；５，５１９，１２６号；５，５３６，８２１号；５，５４１，３０６号；５，５５０，１１１号；５，５６３，２５３号；５，５７１，７９９号；５，５８７，３６１号；及び５，６２５，０５０号。
【０２９３】
幾つかの実施形態において、非天然核酸は、２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロ−ヌクレオシド（ＰＣＴ／ＵＳ２００２／００６４６０）、５’−置換ＤＮＡ及びＲＮＡの誘導体（ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３３９６１；Ｓａｈａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｒｇ  Ｃｈｅｍ．，  １９９５，  ６０，  ７８８−７８９；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  １９９９，  ９，  ８８５−８９０；及びＭｉｋｈａｉｌｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，  １９９１，  １０（１−３），  ３３９−３４３；Ｌｅｏｎｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  １４（３−５），  ９０１−９０５；及びＥｐｐａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，  ２００４，  ８７，  ３００４−３０２０；ＰＣＴ／ＪＰ２０００／００４７２０；ＰＣＴ／ＪＰ２００３／００２３４２；ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１３２１６；ＰＣＴ／ＪＰ２００５／０２０４３５；ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３１５４７９；ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３２４４８４；ＰＣＴ／ＪＰ２００９／０５６７１８；ＰＣＴ／ＪＰ２０１０／０６７５６０）、又は修飾塩基と共に一リン酸塩として作成された５’−置換単量体（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，  ２００４，  ２３  （１  ＆  ２），  ３１７−３３７）を含む。
【０２９４】
幾つかの実施形態において、非天然核酸は、修飾を糖骨格環の５’−位置及び２’−位置に含み（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０２９９３）、例えば、５’−ＣＨ２−置換２’−Ｏ−保護ヌクレオシド（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，  ２０００，  ８３，  １１２７−１１４３  ａｎｄ  Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １９９９，  １０，  ９２１−９２４）などを含む。場合によっては、非天然核酸は、アミド結合ヌクレオシド二量体を含んで、オリゴヌクレオチドへの組み込みのために調製され、ここで、二量体（５’〜３’）における３’結合ヌクレオシドは２’−ＯＣＨ３及び５’−（Ｓ）−ＣＨ３を含む（Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｙｎｌｅｔｔ，  １９９７，  １２８７−１２９０）。非天然核酸は、２’−置換５’−ＣＨ２（又はＯ）修飾ヌクレオシドを含み得る（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０１０２０）。非天然核酸は、５’−メチレンホスホナートＤＮＡ及びＲＮＡ単量体、及び二量体を含み得る（Ｂｏｈｒｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｅｔ．  Ｌｅｔｔ．，  １９９３，  ３４，  ２７２３−２７２６；  Ｃｏｌｌｉｎｇｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｙｎｌｅｔｔ，  １９９５，  ７，  ７０３−７０５；  ａｎｄ  Ｈｕｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，  ２００２，  ８５，  ２７７７−２８０６）。非天然核酸は、２’−置換を有する５’−ホスホン酸塩単量体（ＵＳ２００６／００７４０３５）、及び他の修飾５’−ホスホン酸塩単量体（ＷＯ１９９７／３５８６９）を含み得る。非天然核酸は、５’−修飾メチレンホスホナート単量体を含み得る（ＥＰ６１４９０７及びＥＰ６２９６３３）。非天然核酸は、５’及び／又は６’位置にてヒドロキシル基を含有する５’又は６’ホスホネートリボヌクレオシドのアナログを含み得る（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，  Ｓｕｌｆｕｒ  ａｎｄ  Ｓｉｌｉｃｏｎ，  ２００２，  ７７７，  １７８３−１７８６；  Ｊｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  ２０００，  ８，  ２５０１−２５０９；  Ｇａｌｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．，  ２００７，  ９２５−９３３；  ａｎｄ  Ｈａｍｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  １９７６，  １９（８），  １０２９−１０３３）。非天然核酸は、５’−ホスホネートデオキシリボヌクレオシド単量体、及び５’−リン酸基を有する二量体を含み得る（Ｎａｗｒｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，  ２００６，  １６（１），  ６８−８２）。非天然核酸は、６’−ホスホネート基を有するヌクレオシドを含み、ここで、５’及び／又は６’位置は、置換されない、或いはチオ−ｔｅｒｔ−ブチル基（ＳＣ（ＣＨ３）３）（及びそのアナログ）；メチレンアミノ基（ＣＨ２ＮＨ２）（及びそのアナログ）、又はシアノ基（ＣＮ）（及びそのアナログ）により置換される（Ｆａｉｒｈｕｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｙｎｌｅｔｔ，  ２００１，  ４，  ４６７−４７２；Ｋａｐｐｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  １９８６，  ２９，  １０３０−１０３８；  Ｋａｐｐｌｅｒ  ｅｔ  ���ｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  １９８２，  ２５，  １１７９−１１８４；  Ｖｒｕｄｈｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  １９８７，  ３０，  ８８８−８９４；  Ｈａｍｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．，  １９７６，  １９，  １３７１−１３７７；  Ｇｅｚｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ，  １９８３，  １０５（２６），  ７６３８−７６４０；及びＨａｍｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ，  １９７３，  ９５（１３），  ４４０４−４４１４）。
【０２９５】
幾つかの実施形態において、非天然核酸は糖部の修飾も含む。場合によっては、核酸は、糖群が修飾された１つ以上のヌクレオシドを含む。そのような糖が修飾されたヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の増強、結合親和性の増加、又は他の幾つかの有益な生物学的特性を与える場合がある。特定の実施形態において、核酸は化学修飾されたリボフラノース環部分を含む。化学修飾されたリボフラノース環の例には、限定されないが、置換基の付加（５’及び／又は２’置換基；二環式核酸（ＢＮＡ）を形成するための２つの環原子の架橋；リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）、又はＣ（Ｒ１）（Ｒ２）（Ｒ＝Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル又は保護基）への置換を含む）；及びこれらの組み合わせが挙げられる。化学修飾された糖の例は、ＷＯ２００８／１０１１５７、ＵＳ２００５／０１３０９２３、及びＷＯ２００７／１３４１８１に見出すことができる。
【０２９６】
幾つかの例において、修飾された核酸は修飾された糖又は糖アナログを含む。故に、リボース及びデオキシリボースに加えて、糖部分は、ペントース基、デオキシペントース基、ヘキソース基、デオキシヘキソース基、グルコース基、アラビノース基、キシロース基、リキソース基、又は糖「アナログ」シクロペンチル基であり得る。糖はピラノシル又はフラノシルの形態であってもよい。糖部分は、リボース、デオキシリボース、アラビノース、又は２’−Ｏ−アルキルリボースのフラノシドであり、糖は、［α］又は［β］アノマー配置の何れかの各複素環式塩基に結合され得る。糖修飾には、限定されないが、２’−アルコキシ−ＲＮＡアナログ、２’−アミノ−ＲＮＡアナログ、２’−フルオロ−ＤＮＡ、及び２’−アルコキシ又はアミノ−ＲＮＡ／ＤＮＡキメラが挙げられる。例えば、糖修飾は２’−Ｏ−メチル−ウリジン又は２’−Ｏ−メチル−シチジンを含み得る。糖修飾は２’−Ｏ−アルキル−置換デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−エチレングリコール様のリボヌクレオシドを含む。これら糖又は糖アナログの調製物、及びそのような糖又はアナログが複素環式塩基（核酸塩基）に結合される各「ヌクレオシド」は、既知である。糖修飾はまた、他の修飾により行われ、且つそれと組み合わせられ得る。
【０２９７】
糖部分の修飾は、非天然修飾と共にリボース及びデオキシリボースの天然修飾も含む。糖修飾は、限定されないが、２’位置に以下の修飾を含む：ＯＨ；Ｆ；Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、又はＮ−アルキル；Ｏ−アルケニル、Ｓ−アルケニル、又はＮ−アルケニル；Ｏ−アルキニル、Ｓ−アルキニル、又はＮ−アルキニル；或いは又はＯ−アルキル−Ｏ−アルキル、ここで、アルキル、アルケニル、及びアルキニルは、置換又は非置換のＣ１〜Ｃ１０アルキル、或いはＣ２〜Ｃ１０アルケニル及びアルキニルであり得る。２’糖修飾はまた、限定されないが、−Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、及び−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２を含み、ここでｎ及びｍは１から約１０である。
【０２９８】
２’位置の他の修飾は、限定されないが以下を含む：Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、Ｏ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２  ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレータ、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善するための基、又はオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改善するための基、及び同様の特性を有する他の置換基。同様の修飾はまた、糖の上の他の位置、具体的には３’末端ヌクレオチド又は２’−５’結合オリゴヌクレオチドにおける糖の３’位置、及び５’末端ヌクレオチドの５’位置に作られ得る。修飾された糖はまた、ＣＨ２及びＳなどの架橋環酸素に修飾を含むものを含む。ヌクレオチド糖アナログはまた、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分などの糖模倣物を有し得る。そのような修飾された糖構造の調製を教示し、且つ塩基修飾の範囲を詳述及び説明する、多数の米国特許が存在し、例えば、米国特許第４，９８１，９５７号；５，１１８，８００号；５，３１９，０８０号；５，３５９，０４４号；５，３９３，８７８号；５，４４６，１３７号；５，４６６，７８６号；５，５１４，７８５号；５，５１９，１３４号；５，５６７，８１１号；５，５７６，４２７号；５，５９１，７２２号；５，５９７，９０９号；５，６１０，３００号；５，６２７，０５３号；５，６３９，８７３号；５，６４６，２６５号；５，６５８，８７３号；５，６７０，６３３号；４，８４５，２０５号；５，１３０，３０２号；５，１３４，０６６号；５，１７５，２７３号；５，３６７，０６６号；５，４３２，２７２号；５，４５７，１８７号；５，４５９，２５５号；５，４８４，９０８号；５，５０２，１７７号；５，５２５，７１１号；５，５５２，５４０号；５，５８７，４６９号；５，５９４，１２１号；５，５９６，０９１号；５，６１４，６１７号；５，６８１，９４１号；及び５，７００，９２０号などであり、これら各々は全体の参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２９９】
修飾された糖部分を有する核酸の例は、限定されないが、５’−ビニル、５’−メチル（Ｒ又はＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３、及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３の置換基を含有する核酸を含む。２’位置における置換基はまた、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）、ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＮ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択することができ、各Ｒｍ及びＲｎは独立して、Ｈ或いは置換又は非置換のＣ１−Ｃ１０アルキルである。
【０３００】
特定の実施形態において、本明細書に記載される核酸は１つ以上の二環式核酸を含む。そのような特定の実施形態において、二環式核酸は、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子との間の架橋を含む。特定の実施形態において、本明細書で提供される核酸は１つ以上の二環式核酸を含み、ここで架橋は４’〜２’の二環式核酸を含む。そのような４’〜２’の二環式核酸の例は、限定されないが、以下の式の１つを含む：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’及び４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’、及びそれらのアナログ（米国特許第７，３９９，８４５号参照）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’及びそのアナログ（ＷＯ２００９／００６４７８、ＷＯ２００８／１５０７２９、ＵＳ２００４／０１７１５７０、米国特許第７，４２７，６７２号、Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．，  ２０９，  ７４，  １１８−１３４、及びＷＯ２００８／１５４４０１）。更に、例えばＳｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏｍｍｕｎ．，  １９９８，  ４，  ４５５−４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，  １９９８，  ５４，  ３６０７−３６３０；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．  Ｓ．  Ａ．，  ２０００，  ９７，  ５６３３−５６３８；Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔｔ．，  １９９８，  ８，  ２２１９−２２２２；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．，  １９９８，  ６３，  １００３５−１００３９；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  ２００７，  １２９（２６）  ８３６２−８３７９；Ｅｌａｙａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｎｓ．  Ｄｒｕｇｓ，  ２００１，  ２，  ５５８−５６１；Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ，  ２００１，  ８，  １−７；Ｏｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．  Ｔｈｅｒ．，  ２００１，  ３，  ２３９−２４３；米国特許第４，８４９，５１３号；５，０１５，７３３号；５，１１８，８００号；５，１１８，８０２号；７，０５３，２０７号；６，２６８，４９０号；６，７７０，７４８号；６，７９４，４９９号；７，０３４，１３３号；６，５２５，１９１号；６，６７０，４６１号；及び７，３９９，８４５号；国際公開番号ＷＯ２００４／１０６３５６、ＷＯ１９９４／１４２２６、ＷＯ２００５／０２１５７０、ＷＯ２００７／０９００７１、及びＷＯ２００７／１３４１８１；米国特許公開番号ＵＳ２００４／０１７１５７０、ＵＳ２００７／０２８７８３１、及びＵＳ２００８／００３９６１８；米国仮特許出願第６０／９８９，５７４号、６１／０２６，９９５号、６１／０２６，９９８号、６１／０５６，５６４号、６１／０８６，２３１号、６１／０９７，７８７号、及び６１／０９９，８４４号；並びに国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２、及びＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３号を参照。
【０３０１】
特定の実施形態において、核酸は結合された核酸を含む。核酸は、任意の相互核酸結合を使用して共に結合され得る。相互核酸結合基の２つの主なクラスは、リン原子の有無によって定められる。代表的なリン含有相互核酸結合は、限定されないが、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホラミデート、及びホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）を含む。代表的な非リン含有相互核酸結合は、限定されないが、メチレンメチルイミノ（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−ＣＨ２−）、チオジエステル（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｓ−）、チオカルバメート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）（ＮＨ）−Ｓ−）；シロキサン（−Ｏ−Ｓｉ（Ｈ）２−Ｏ−）；及びＮ，Ｎ＊−ジメチルヒドラジン（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｎ（ＣＨ３））。特定の実施形態において、キラル原子を有する相互核酸結合は、ラセミ混合物、別個のエナンチオマー、例えばアルキルホスホネート及びホスホロチオエートとして調製され得る。非天然核酸は単一の修飾を含み得る。非天然核酸は、部分の１つの内に、又は異なる部分間に複数の修飾を含み得る。
【０３０２】
核酸への骨格リン酸塩修飾は、限定されないが、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホラミデート（架橋又は非架橋）、ホスホトリエステル、ホスホロジチオエート、ホスホジチオエート、及びボラノホスフェートを含み、及び、任意の組み合わせにおいて使用されてもよい。他の非リン酸塩結合も使用されてもよい。
【０３０３】
幾つかの実施形態において、骨格修飾（例えばメチルホスホナート、ホスホロチオエート、ホスホラミデート、及びホスホロジチオエートのヌクレオチド間結合）は、修飾された核酸に免疫修飾物質活性を付与し、及び／又はインビボでそれらの安定性を増強することができる。
【０３０４】
幾つかの例において、リン誘導体（又は修飾されたリン酸基）は、糖又は糖アナログ部分に結合され、及び、モノホスフェート、ジホスフェート、トリホスフェート、アルキルホスホナート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホラミデートなどであり得る。修飾されたリン酸塩結合又は非リン酸塩結合を含んでいる典型的なポリヌクレオチドは、以下に見出すことができる：Ｐｅｙｒｏｔｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２４：  １８４１−１８４８；Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２４：２３１８−２３２３；及びＳｃｈｕｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，  （１９９６）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２４：２９６６−２９７３；Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ，  １９９７，  “Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｓ：  ａｎ  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ”  ｉｎ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ，  （Ｃｈａｄｗｉｃｋ  ａｎｄ  Ｃａｒｄｅｗ，  ｅｄ．）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ；Ｚｏｎ，  １９９３，  “Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｓ”  ｉｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ，  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ｐｐ．  １６５−１９０；Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９７１，  ＪＡＣＳ  ９３：６６５７−６６６５；Ｊａｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２７：７２４７−７２４６；Ｎｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  ＪＯＣ  ６２：７２７８−７２８７；米国特許第５，４５３，４９６号；及びＭｉｃｋｌｅｆｉｅｌｄ，  ２００１，  Ｃｕｒｒ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ８：  １１５７−１１７９。
【０３０５】
場合によっては、骨格修飾は、ホスホジエステル結合を代替的な部分、例えば陰イオン基、中性基、又は陽イオン基に置換することを含む。そのような修飾の例には以下が挙げられる：陰イオン性ヌクレオシド間結合；Ｎ３’〜Ｐ５’のホスホラミデート修飾；ボラノホスフェートＤＮＡ；プロオリゴヌクレオチド；メチルホスホネートなどの中性ヌクレオシド間結合；アミド結合ＤＮＡ；メチレン（メチルイミノ）結合；ホルムアセタール（ｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）及びチオホルムアセタール（ｔｈｉｏｆｏｒｍａｃｅｔａｌ）結合；スルホニル基を含有する骨格；モルホリノオリゴ；ペプチド核酸（ＰＮＡ）；及び正に荷電したデオキシリボ核グアニジン（ＤＮＧ）オリゴ（Ｍｉｃｋｌｅｆｉｅｌｄ，  ２００１，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８：  １１５７−１１７９）。修飾された核酸は、１つ以上の修飾、例えばホスホジエステル及びホスホロチオエートの結合の組み合わせなどのリン酸塩結合の組み合わせを含むキメラ骨格又は混合骨格を含み得る。
【０３０６】
リン酸塩の置換基は、例えば、短鎖アルキル又はシクロアルキルのヌクレオシド間結合、混合されたヘテロ原子及びアルキル又はシクロアルキルのヌクレオシド間結合、或いは１つ以上の短鎖ヘテロ原子又は複素環式のヌクレオシド間結合を含む。これらは、（ヌクレオシドの糖部分から部分的に形成される）モルホリノ結合を有するもの；シロキサン骨格；硫化物、スルホキシド、及びスルホン骨格；ホルムアセチル骨格及びチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチル骨格及びメチレンチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファメート骨格；メチレンイミノ骨格及びメチレンヒドラジノ骨格；スルホネート骨格及びスルホンアミド骨格；アミド骨格；及び混合されたＮ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ２成分の部分を有する他のものを含み得る。多数の米国特許は、これらのタイプのリン酸塩置換を作成且つ使用する方法を開示しており、限定されないが、米国特許第５，０３４，５０６号；５，１６６，３１５号；５，１８５，４４４号；５，２１４，１３４号；５，２１６，１４１号；５，２３５，０３３号；５，２６４，５６２号；５，２６４，５６４号；５，４０５，９３８号；５，４３４，２５７号；５，４６６，６７７号；５，４７０，９６７号；５，４８９，６７７号；５，５４１，３０７号；５，５６１，２２５号；５，５９６，０８６号；５，６０２，２４０号；５，６１０，２８９号；５，６０２，２４０号；５，６０８，０４６号；５，６１０，２８９号；５，６１８，７０４号；５，６２３，０７０号；５，６６３，３１２号；５，６３３，３６０号；５，６７７，４３７号；及び５，６７７，４３９号が挙げられる。ヌクレオチドの糖及びリン酸塩両方の部分が、例えばアミド型結合（アミノエチルグリシン）（ＰＮＡ）により置換され得ることも、ヌクレオチド置換基において理解される。米国特許第５，５３９，０８２号；５，７１４，３３１号；及び５，７１９，２６２号は、ＰＮＡ分子を作成且つ使用する方法を教示しており、その各々は参照により本明細書に組み込まれる。また、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９９１，  ２５４，  １４９７−１５００を参照。更に、他のタイプの分子（抱合体）をヌクレオチド又はヌクレオチドアナログに結合して、例えば細胞取込みを増強することも可能である。抱合体は、ヌクレオチド又はヌクレオチドアナログに化学結合され得る。そのような抱合体は、限定されないが、脂質部分、例えばコレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  １９８９，  ８６，  ６５５３−６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔ．  ，  １９９４，  ４，  １０５３−１０６０）、チオエテール、例えばヘキシル−Ｓ−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎ．  ＫＹ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １９９２，  ６６０，  ３０６−３０９；  Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｏｒｇ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  Ｌｅｔ．，  １９９３，  ３，  ２７６５−２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １９��２，  ２０，  ５３３−５３８）、脂肪族鎖、例えばドデカンジオール又はウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭ５ＯＪ，  １９９１，  １０，  １１１１−１１１８；  Ｋａｂａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  １９９０，  ２５９，  ３２７−３３０；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，  １９９３，  ７５，  ４９−５４）、リン脂質、例えばジ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロール又はトリエチルアンモニウム１−ジ−Ｏ−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−Ｓ−Ｈ−ホスホン酸塩（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．  ，  １９９５，  ３６，  ３６５１−３６５４；  Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １９９０，  １８，  ３７７７−３７８３）、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，  １９９５，  １４，  ９６９−９７３）、又はアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，  １９９５，  ３６，  ３６５１−３６５４）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ，  １９９５，  １２６４，  ２２９−２３７）、又はオクタデシルアミン或いはヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．，  １９９６，  ２７７，  ９２３−９３７）を含む。多数の米国特許は、そのような抱合体の調製を教示し、限定されないが、以下が挙げられる：米国特許第４，８２８，９７９号；４，９４８，８８２号；５，２１８，１０５号；５，５２５，４６５号；５，５４１，３１３号；５，５４５，７３０号；５，５５２，５３８号；５，５７８，７１７号；５，５８０，７３１号；５，５８０，７３１号；５，５９１，５８４号；５，１０９，１２４号；５，１１８，８０２号；５，１３８，０４５号；５，４１４，０７７号；５，４８６，６０３号；５，５１２，４３９号；５，５７８，７１８号；５，６０８，０４６号；４，５８７，０４４号；４，６０５，７３５号；４，６６７，０２５号；４，７６２，７７９号；４，７８９，７３７号；４，８２４，９４１号；４，８３５，２６３号；４，８７６，３３５号；４，９０４，５８２号；４，９５８，０１３号；５，０８２，８３０号；５，１１２，９６３号；５，２１４，１３６号；５，０８２，８３０号；５，１１２，９６３号；５，２１４，１３６号；５，２４５，０２２号；５，２５４，４６９号；５，２５８，５０６号；５，２６２，５３６号；５，２７２，２５０号；５，２９２，８７３号；５，３１７，０９８号；５，３７１，２４１号；５，３９１，７２３号；５，４１６，２０３号；５，４５１，４６３号；５，５１０，４７５号；５，５１２，６６７号；５，５１４，７８５号；５，５６５，５５２号；５，５６７，８１０号；５，５７４，１４２号；５，５８５，４８１号；５，５８７，３７１号；５，５９５，７２６号；５，５９７，６９６号；５，５９９，９２３号；５，５９９，９２８号；及び５，���８８，９４１号。
【０３０７】
場合によっては、非天然核酸は更に非天然塩基対を形成する。インビボ条件下で非天然ＤＮＡ又はＲＮＡ塩基対（ＵＢＰ）を形成可能な典型的な不自然なヌクレオチドは、限定されないが、５ＳＩＣＳ、ｄ５ＳＩＣＳ、ＮＡＭ、ｄＮａＭ、及びそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、非天然ヌクレオチドは以下を含む：
【０３０８】
【化１】
2020529977.tif 000003
【０３０９】
幾つかの実施形態において、非天然塩基対は、Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ  ｌｏｇｉｃａｌ  ｃｏｄｏｎ  ｒｅａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ−Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｙ，”  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ６：  ５０−６９  （２０１５）に記載される非天然アミノ酸を生成する。
【０３１０】
ｔＲＮＡ、ｔＲＮＡ合成酵素、及び目的のタンパク質が産生されるように、本明細書に開示される構築物又はベクターが導入される宿主細胞が、適切な媒体において培養又は維持される。目的のタンパク質が非天然アミノ酸を組み込むように、媒体は更に非天然アミノ酸を含む。
【０３１１】
直交ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対は非天然アミノ酸によりｔＲＮＡをチャージし、且つコドンに応じて非天然アミノ酸をポリペプチド鎖に組み込むことができる。典型的なａａＲＳ−ｔＲＮＡは、限定されないが、Ｍｅｔｈａｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｊａｎｎａｓｃｈｉｉ（Ｍｊ−Ｔｙｒ）ａａＲＳ／ｔＲＮＡ対、Ｅ．  ｃｏｌｉ  ＴｙｒＲＳ（Ｅｃ−Ｔｙｒ）／Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｔＲＮＡＣＵＡ対、Ｅ．  ｃｏｌｉ  ＬｅｕＲＳ（Ｅｃ−Ｌｅｕ）／Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｔＲＮＡＣＵＡ対、及びピロリジル（ｐｙｒｒｏｌｙｓｙｌ）−ｔＲＮＡ対を含む。
【０３１２】
非天然アミノ酸を含むサイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドは、ｔＲＮＡ及びｔＲＮＡ合成酵素を含み、且つ１つ以上のインフレーム直交（停止）コドンにより目的の核酸配列を含む、本明細書に記載される核酸構築物の宿主細胞への導入により調製される。宿主細胞は、非天然アミノ酸を含む生理溶液に晒され、宿主細胞はその後、対象のコード配列のタンパク質の発現を可能にする条件下で維持される。非天然アミノ酸はコドンに応じてポリペプチド鎖へと組み込まれる。例えば、１つ以上の非天然アミノ酸はサイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドへと組み込まれる。代替的に、２つ以上の非天然アミノ酸は、タンパク質中の２つ以上の部位にてサイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドへと組み込まれ得る。
【０３１３】
複数の非天然アミノ酸がサイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドへと組み込まれることになっている場合、ｔＲＮＡ合成酵素／ｔＲＮＡ対がコドンに応じて非天然アミノ酸の組み込みを導くことができるように、複数のコドンは所望の位置にてコード核酸配列へと組み込まれる必要がある。核酸をコードする少なくとも１、２、３、又は４つ以上のコドンは、目的の核酸配列へと組み込まれ得る。
【０３１４】
１より多くのタイプの非天然アミノ酸を目的のタンパク質へと組み込み単一のタンパク質とすることが望まれるとき、第２の又は更なる直交ｔＲＮＡ−ｔＲＮＡ合成酵素対は、第２の又は更なる非天然アミノ酸を組み込むために使用され；適切な場合、第２の又は更なる直交ｔＲＮＡ−ｔＲＮＡ合成酵素対は、２つ以上の非天然アミノ酸が単一生産工程においてタンパク質中の異なる定義された部位へと特異的に組み込まれ得るように、目的のタンパク質をコードする核酸において異なるコドンを認識する。特定の実施形態において、２つ以上の直交ｔＲＮＡ−ｔＲＮＡ合成酵素対が故に使用されてもよい。
【０３１５】
一旦非天然アミノ酸を組み込むサイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドが宿主細胞中で産生されると、それは、当該技術分野で既知の様々な技術、例えば、酵素溶解、化学溶解、及び／又は浸透圧溶解、並びに物理的破壊などにより、そこから抽出され得る。サイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチドは、当該技術分野で既知の標準技術、例えば分取クロマトグラフィー、親和性精製、又は他のあらゆる適切な技術などによって精製され得る。
【０３１６】
適切な宿主細胞は、細菌細胞（例えば大腸菌）を含むが、最も適切な場合、宿主細胞は、真核細胞（例えば昆虫細胞（例えばキイロショウジョウバエなどのショウジョウバエ）、酵母菌、線虫（例えばシー・エレガンス（Ｃｅｌｅｇａｎｓ））、マウス（例えばハツカネズミ）、又は哺乳動物細胞（チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）又はＣＯＳ細胞、ヒト２９３Ｔ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞、及びマウス赤白血症（ＭＥＬ）細胞など）、或いはヒト細胞又は他の真核細胞である。他の適切な宿主細胞は当業者に知られている。適切な場合、宿主細胞は、ヒト細胞又は昆虫細胞などの哺乳動物細胞である。
【０３１７】
本発明の実施形態において一般的に使用され得る他の適切な宿主細胞は、実施例のセクション中に記載されるものである。ベクターＤＮＡは従来の形質転換又は形質移入技術を介して宿主細胞へと導入され得る。本明細書に使用されるように、用語「形質転換」及び「形質移入」は、宿主細胞へと外来性核酸分子（例えばＤＮＡ）を導入するための様々な十分に認識された技術、例えばリン酸カルシウム又は塩化カルシウム共沈、ＤＥＡＥデキストラン媒介性形質移入、リポフェクション、又はエレクトロポレーションなどを指すように意図される。宿主細胞を形質転換又は形質移入するのに適した方法は当該技術分野で周知である。
【０３１８】
細胞株を作成する場合、通常は安定した細胞株が調製されることが好ましい。哺乳動物細胞の安定した形質移入に関しては、例えば、使用される発現ベクター及び形質移入技術に応じて、細胞の小さな画分のみが外来性ＤＮＡをゲノムに統合できることが知られている。これらの成分を同定及び選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性のための）をコードする遺伝子は一般に、対象の遺伝子と共に宿主細胞へと導入される。好ましい選択可能なマーカーは、Ｇ４１８、ヒグロマイシン、又はメトトレキサートなどの、薬物に対する耐性を与えるものを含む。選択マーカーをコード化する核酸分子は、同じベクター上の宿主細胞へと導入され得るか、又は別々のベクター上で導入され得る。導入された核酸分子によって安定して形質移入された細胞は、薬物選択によって同定され得る（例えば、選択マーカー遺伝子を組み込んだ細胞は残存するが、一方で他の細胞は死滅する）。
【０３１９】
一実施形態において、本明細書に記載される構築物は、宿主細胞のゲノムへと統合される。安定した統合の利点は、個別の細胞又はクローン間の均一性が達成されるということである。他の利点は、最良の生産者の選択が実行され得るということである。従って、安定した細胞株を作成することが望ましい。別の実施形態において、本明細書に記載される構築物は、宿主細胞へと形質移入される。宿主細胞へと構築物を形質移入するという利点は、タンパク質収率が最大化され得るということである。一態様において、本明細書に記載される核酸構築物又はベクターを含む細胞が記載される。
【０３２０】
医薬組成物と製剤
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物及び製剤は、被験体に複数の投与経路、例えば限定されないが、非経口、経口、頬側、直腸、舌下、又は経皮の投与経路などにより投与される。場合によっては、非経口投与は、静脈内、皮下、筋肉内、脳内、鼻腔内、動脈内、関節内、皮内、硝子体内、骨内の注入、腹腔内、或いは髄腔内の投与を含む。幾つかの例において、医薬組成物は局所投与のために製剤される。他の例において、医薬組成物は全身投与のために製剤される。
【０３２１】
幾つかの実施形態において、医薬製剤は、水性液体分散、自己乳化分散、固溶体、リポソーム分散液、エアロゾル、固形剤形、粉末剤、即時放出製剤、制御放出製剤、速溶製剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出製剤、拡張放出製剤、パルス放出製剤、多重微粒子製剤（例えばナノ粒子製剤）、及び即時混合且つ制御放出の製剤を含むが、これらに限定されない。
【０３２２】
幾つかの実施形態において、医薬製剤は、本明細書に開示される組成物との適合性並びに所望の剤形の放出プロファイル特性に基づいて選択された、担体又は担体材料を含む。典型的な担体材料としては、例えば、結合剤、懸濁化剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、安定剤、潤滑剤、湿潤剤、希釈剤などが挙げられる。薬学的に適合性のある担体材料は、限定されないが、アラビアゴム、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、コレステロール、コレステロールエステル、カゼイン酸ナトリウム、大豆レシチン、タウロコール酸、ホスファチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウム、リン酸二カリウム、セルロース及びセルロース抱合体、糖ナトリウム・ステアロイルラクチラート塩（ｓｕｇａｒｓ  ｓｏｄｉｕｍ  ｓｔｅａｒｏｙｌ  ｌａｃｔｙｌａｔｅ）、カラギーナン、モノグリセリド、ジグリセリド、α化デンプンなどを含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄ  （Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．：  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  １９９５），  Ｈｏｏｖｅｒ，  Ｊｏｈｎ  Ｅ．，  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９７５，  Ｌｉｂｅｒｍａｎ，  Ｈ．Ａ．  ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎ，  Ｌ．，  Ｅｄｓ．，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．，  １９８０，  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｅｄ．  （Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ１９９９）を参照。
【０３２３】
場合によっては、医薬組成物は免疫リポソームとして製剤され、これは、リポソームの脂質二重層に直接又は間接的に結合された複数のＩＬ−２抱合体を含む。典型的な脂質は、限定されないが、脂肪酸；リン脂質；コレステロールなどのステロール；スフィンゴミエリンなどのスフィンゴ脂質；ガングリオシド、グロボシド、及びセレブロシドなどのグリコスフィンゴ脂質；ステアリル、オレイル、及びリノレイルアミンなどの界面活性アミンを含む。幾つかの例において、脂質は陽イオン性脂質を含む。幾つかの例において、脂質はリン脂質を含む。典型的なリン脂質には、限定されないが以下が挙げられる：ホスファチジン酸（「ＰＡ」）、ホスファチジルコリン（「ＰＣ」）、ホスファチジルグリセロール（「ＰＧ」）、ホスファチジルエタノールアミン（「ＰＥ」）、ホスファチジルイノシトール（「ＰＩ」）、及びホスファチジルセリン（「ＰＳ」）、スフィンゴミエリン（脳スフィンゴミエリンを含む）、レシチン、リソレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、セレブロシド、ジアラキドイルホスファチジルコリン（「ＤＡＰＣ」）、ジデカノイル−Ｌ−α−ホスファチジルコリン（「ＤＤＰＣ」）、ジエライドイルホスファチジルコリン（「ＤＥＰＣ」）、ジラウロイルホスファチジルコリン（「ＤＬＰＣ」）、ジリノレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）、ジオレオイルホスファチジルコリン（「ＤＯＰＣ」）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（「ＤＰＰＣ」）、ジステアロイルホスファチジルコリン（「ＤＳＰＣ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルコリン（「ＰＯＰＣ」）、ジアラキドイルホスファチジルグリセロール（「ＤＡＰＧ」）、ジデカノイル−Ｌ−α−ホスファチジルグリセロール（「ＤＤＰＧ」）、ジエライドイルホスファチジルグリセロール（「ＤＥＰＧ」）、ジラウロイルホスファチジルグリセロール（「ＤＬＰＧ」）、ジリノレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（「ＤＯＰＧ」）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（「ＤＰＰＧ」）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（「ＤＳＰＧ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルグリセロール（「ＰＯＰＧ」）、ジアラキドイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＡＰＥ」）、ジデカノイル−Ｌ−α−ホスファチジルエタノール（「ＤＤＰＥ」）、ジエライドイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＥＰＥ」）、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＬＰＥ」）、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＭＰＥ」）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＯＰＥ」）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＰＰＥ」）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＳＰＥ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルエタノールアミン（「ＰＯＰＥ」）、ジアラキドイルホスファチジルイノシトール（「ＤＡＰＩ」）、ジデカノイル−Ｌ−α−ホスファチジ���イノシトール（「ＤＤＰＩ」）、ジエライドイルホスファチジルイノシトール（「ＤＥＰＩ」）、ジラウロイルホスファチジルイノシトール（「ＤＬＰＩ」）、ジリノレオイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール（「ＤＭＰＩ」）、ジオレオイルホスファチジルイノシトール（「ＤＯＰＩ」）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（「ＤＰＰＩ」）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（「ＤＳＰＩ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルイノシトール（「ＰＯＰＩ」）、ジアラキドイルホスファチジルセリン（「ＤＡＰＳ」）、ジデカノイル−Ｌ−α−ホスファチジルセリン（「ＤＤＰＳ」）、ジエライドイルホスファチジルセリン（「ＤＥＰＳ」）、ジラウロイルホスファチジルセリン（「ＤＬＰＳ」）、ジリノレオイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン（「ＤＭＰＳ」）、ジオレオイルホスファチジルセリン（「ＤＯＰＳ」）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（「ＤＰＰＳ」）、ジステアロイルホスファチジルセリン（「ＤＳＰＳ」）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ホスファチジルセリン（「ＰＯＰＳ」）、ジアラキドイルスフィンゴミエリン、ジデカノイルスフィンゴミエリン、ジエライドイルスフィンゴミエリン、ジラウロイルスフィンゴミエリン、ジリノレオイルスフィンゴミエリン、ジミリストイルスフィンゴミエリン、スフィンゴミエリン、ジオレオイルスフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイルスフィンゴミエリン、及び１−パルミトイル−２−オレオイル−スフィンゴミエリン。
【０３２４】
幾つかの例において、医薬組成物は更に、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、及び塩酸などの酸、水酸化ナトリウム、リン酸塩ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、及びトリス−ヒドロキシメチルアミノメタンなどの塩基、クエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウム、及び塩化アンモニウムなどの緩衝液を含む、ｐＨ調整剤を含む。このような酸、塩基、及び緩衝剤は、組成物のｐＨを許容可能な範囲で維持することを必要とする量で含まれる。
【０３２５】
幾つかの例において、医薬製剤は、組成物の浸透圧を許容可能な範囲にするのに必要な量の１つ以上の塩を含む。このような塩は、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムのカチオン及び塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、炭酸水素塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、又は亜硫酸水素塩を有する塩を含み、適切な塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、及び硫酸アンモニウムが挙げられる。
【０３２６】
幾つかの実施形態において、医薬製剤は、限定されないが、トレハロース、スクロース、マンニトール、マルトース、グルコースのような糖、或いは、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、硫酸アンモニウムのような塩、及び／又は、ポリペプチドの溶解度及びインビボの安定性を増大させるヘパリンなどの他の薬剤を含む。
【０３２７】
幾つかの例において、医薬組成物は更に、より安定した環境を提供することができることから、化合物を安定化させるために使用される希釈剤を含む。緩衝液（ｐＨの制御又は維持をもたらすこともできる）の中で溶解された塩は、当技術分野で希釈剤として利用され、例えばリン酸緩衝生理食塩溶液が挙げられるがこれに限定されない。特定の例において、希釈剤は組成物のかさ（ｂｕｌｋ）を増やして圧縮を促すか、又はカプセル充填のための均質混合のために十分なかさを作り出す。そのような化合物は、例えばラクトース、デンプン、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）などの微結晶性セルロース、リン酸水素カルシウム、リン酸カルシウム二水和物、リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム、無水ラクトース、噴霧乾燥ラクトース、α化デンプン、Ｄｉ−Ｐａｃ（登録商標）（Ａｍｓｔａｒ）などの圧縮可能な糖、マンニトール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、スクロースベースの希釈剤、粉砂糖、一塩基性硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム二水和物、乳酸カルシウム三水和物、デキストラート、加水分解シリアル固形物、アミロース、粉末セルロース、炭酸カルシウム、グリシン、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、イノシトール、ベントナイトなどを含み得る。
【０３２８】
場合によっては、医薬製剤は、物質の分解又は崩壊を促進するために崩壊剤又は分解剤を含む。用語「分解する」は、胃腸液と接触した際の剤形の溶解と分散の両方を含む。崩壊剤の例は、デンプン、例えば、トウモロコシデンプン又はジャガイモデンプンなどの天然のデンプン、Ｎａｔｉｏｎａｌ１５５１又はＡｍｉｊｅｌ（登録商標）などのα化デンプン、或いはＰｒｏｍｏｇｅｌ（登録商標）又はＥｘｐｌｏｔａｂ（登録商標）などのデンプングリコール酸ナトリウム、木材生成物などのセルロース、メチル結晶性セルロース（例えば、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０１、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０２、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０５、Ｅｌｃｅｍａ（登録商標）Ｐ１００、Ｅｍｃｏｃｅｌ（登録商標）、Ｖｉｖａｃｅｌ（登録商標）、Ｍｉｎｇ  Ｔｉａ（登録商標）、及びＳｏｌｋａ−Ｆｌｏｃ（登録商標）、メチルセルロース、クロスカルメロース、又は、架橋セルロース、例えば、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ（登録商標））、架橋カルボキシメチルセルロース、又は架橋クロスカルメロース、架橋デンプン、例えば、デンプングリコール酸ナトリウムなど、架橋ポリマー、例えば、クロスポビドンなど、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸塩、例えば、アルギン酸又はアルギン酸ナトリウムの塩など、Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標）ＨＶ（ケイ酸アルミニウムマグネシウム）などの粘土、ゴム、例えば、寒天、グアー、イナゴマメ、カラヤ、ペクチン、又はトラガント、デンプングリコール酸ナトリウム、ベントナイト、天然のスポンジ、界面活性剤、陽イオン交換樹脂などの樹脂、柑橘類の果肉、ラウリル硫酸ナトリウム、デンプンと組み合わせたラウリル硫酸ナトリウムなどを含む。
【０３２９】
幾つかの例において、医薬製剤は、充填剤、例えばラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶性セルロース、セルロース粉末、デキストロース、デキストラート、デキストラン、デンプン、α化デンプン、スクロース、キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコールなどを含む。
【０３３０】
潤滑剤及び滑剤も、物質の接着又は摩擦を予防するか、減少するか、阻害するための本明細書に記載された医薬製剤において随意に含まれている。典型的な潤滑剤は、例えば、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、フマル酸ステアリルナトリウム、鉱油などの炭化水素、或いは、例えば水素化大豆油（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ（登録商標））などの硬化植物油、高脂肪酸、及びそのアルカリ金属とアルカリ土類金属塩、例えばアルミニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール、タルク、ワックス、Ｓｔｅａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ−４０００）又はＣａｒｂｏｗａｘ（商標）などのメトキシポリエチレングリコール、オレイン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、ベへン酸グリセリル、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸マグネシウム又はラウリル硫酸ナトリウム、Ｓｙｌｏｉｄ（商標）などのコロイダルシリカ、Ｃａｂ−Ｏ−Ｓｉｌ（登録商標）、トウモロコシデンプンなどのデンプン、シリコーン油、界面活性剤などを含む。
【０３３１】
可塑剤は、マイクロカプセル化材料又はフィルムコーティングを軟化することでそれらの脆さを抑えるために使用される化合物を含む。適切な可塑剤は、例えばＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ１４５０、ＰＥＧ３３５０、及びＰＥＧ８００などのポリエチレングリコール、ステアリン酸、プロピレングリコール、オレイン酸、トリエチルセルロース、及びトリアセチンを含む。可塑剤はまた、分散剤又は湿潤剤としても機能することができる。
【０３３２】
可溶化剤は、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクサートナトリウム、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ｎ−ブタノール、イソプロピルアルコール、コレステロール、胆汁塩、ポリエチレングリコール２００−６００、グリコフロール、トランスクトール、プロピレングリコール、及びジメチルイソソルビドなどの化合物を含む。
【０３３３】
安定化剤は、任意の抗酸化剤、緩衝液、酸、防腐剤などの化合物を含む。典型的な安定化剤は、塩酸Ｌ−アルギニン、トロメタミン、アルブミン（ヒト）、クエン酸、ベンジルアルコール、フェノール、リン酸水素二ナトリウム無水物、プロピレングリコール、メタクレゾール又は、ｍ−クレゾール、酢酸亜鉛、ポリソルベート−２０又はＴｗｅｅｎ（登録商標）２０、又はトロメタモールを含む。
【０３３４】
懸濁化剤は、化合物、例えばポリビニルピロリドン、例えばポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、ポリビニルピロリドンＫ３０、ビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー（Ｓ６３０）、ポリエチレングリコール（例えばポリエチレングリコールは約３００〜約６０００、約３３５０〜約４０００、又は約７０００〜約５４００の分子量を有する）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースアセテートステアレート、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゴム、例えばトラガカントゴム、アカシアゴム、グアーゴム、キサンタンゴムを含むキサンタン、糖、セルロース系のもの、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースなど、ポリソルベート８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシレートソルビタンモノラウリン酸、ポリエトキシレートソルビタンモノラウリン酸、ポビドンなどを含む。
【０３３５】
界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクサートナトリウム、Ｔｗｅｅｎ６０又は８０、トリアセチン、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、モノオレイン酸ソルビタン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ポリソルベート、ポロクサマー（ｐｏｌａｘｏｍｅｒ）、胆汁塩、モノステアリン酸グリセリル、エチレンオキシド及びプロピレンオキシドのコポリマー、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）（ＢＡＳＦ）などの化合物を含む。追加の界面活性剤は、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリド、及び植物油、例えばポリオキシエチレン（６０）水素化ヒマシ油、及びポリオキシエチレンアルキルエーテルとアルキルフェニルエーテル、例えばオクトキシノール１０、オクトキシノール４０を含む。時に、界面活性剤は、物理的安定性を高めるために、又は他の目的のために含まれる。
【０３３６】
粘度増強剤は、例えば、メチルセルロース、キサンタンゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアラート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート、カルボマー、ポリビニルアルコール、アルギン酸塩、アカシア、キトサン、及びそれらの組み合わせを含む。
【０３３７】
湿潤剤は、オレイン酸、モノステアリン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ナトリウムドクセート、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ナトリウムドクセート、トリアセチン、Ｔｗｅｅｎ８０、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、アンモニウム塩などの化合物を含む。
【０３３８】
治療レジメン
幾つかの実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物は治療用途のために投与される。幾つかの実施形態において、医薬組成物は１日１回、１日２回、１日３回、又はそれ以上投与される。医薬組成物は、毎日、１日おき、週５日、週１日、１週おき、１か月に２週、１か月に３週、月１回、月２回、１か月に３回、又はそれ以上投与される。医薬組成物は、少なくとも１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１８か月、２年、３年、又はそれ以上の間投与される。
【０３３９】
患者の状態が改善する場合、医師の判断に基づいて、組成物の投与は連続的に与えられてもよく、代替的に、投与される組成物の投与量は、一時的に減少するか、一定時間（即ち「休薬期間」）にわたり一時的に停止される。幾つかの例において、休薬期間の長さは２日から１年の間で変動し、ほんの一例として、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日、又は３６５日が挙げられる。休薬日中の投与量の減少は１０％−１００％であり、ほんの一例として、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％が挙げられる。
【０３４０】
一旦、患者の疾病の改善が生じると、必要ならば維持量が投与される。その後、用量又は投与頻度、或いはその両方は、症状に応じて、疾患、障害、又は疾病の改善が保持されるレベルにまで減少可能である。
【０３４１】
幾つかの実施形態において、そのような量に相当する与えられた薬剤の量は、特定の化合物、疾患の重症度、処置を必要とする被験体又は宿主の同一性（例えば重量）などの要因に依存して変動するが、それにも関わらず、症例を取り囲む特定の状況、例えば投与される特定の薬剤、投与経路、及び処置されている被験体又は宿主などに従い当該技術分野で既知の方法で慣例的に決定される。幾つかの例において、所望の投与量は一回量において、或いは、同時に（又は短時間にわたり）又は適切な間隔を置いて、例えば１日に２、３、又は４以上の下位用量として投与された分割量として都合よく提示される。
【０３４２】
個々の処置レジメンに関する変数の数が大きいため、前述の範囲は単なる示唆的なものに過ぎず、これらの推奨値からかなり逸脱することは珍しいことではない。こうした投与量は、多くの変数、限定されないが、使用される化合物の活性、治療される疾患又は疾病、投与の形態、個々の被験体の要件、処置されている疾患又は疾病の重症度、及び医師の判断に依存して変更される。
【０３４３】
幾つかの実施形態において、こうした治療レジメンの毒性と治療の有効性は、限定されないが、ＬＤ５０（母集団の５０％までの致死投与量）と、ＥＤ５０（母集団の５０％に治療上有効な投与量）の決定を含む、細胞培養又は実験動物における標準的な製薬手順によって決定される。毒性と治療効果との間の用量比は治療指数であり、これはＬＤ５０とＥＤ５０との間の比率として表される。高い治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養アッセイと動物研究から得られたデータは、ヒトで使用される一連の投与量を製剤するのに使用される。そのような化合物の用量は、好ましくは毒性が最小限のＥＤ５０を含む、血中濃度の範囲内にある。投与量は、使用された剤形と利用される投与経路に応じてこの範囲内で変動する。
【０３４４】
キット／製品
本明細書には、特定の実施形態において、本明細書に記載される１つ以上の方法及び組成物を使用するためのキット及び製品が開示される。このようなキットは、バイアルやチューブなどの１以上の容器を収容するために仕切られた運搬装置、パッケージ、又は容器を含み、容器の各々は本明細書に記載される方法において使用される別個の要素の１つを備えている。適切な容器として、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、及び試験管が挙げられる。他の実施形態において、容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成される。
【０３４５】
本明細書で提供される製品は、包装材料を含む。製薬用包装材料の例としては、限定されないが、ブリスターパック、ボトル、チューブ、バッグ、容器、ボトル、及び、選択された製剤と投与及び処置の意図した形態に適切な任意の包装材料が挙げられる。
【０３４６】
例えば、容器は、本明細書に開示されるサイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチド又はサイトカイン（例えばＩＬ−２）抱合体の１つ以上、及び随意に、サイトカイン（例えばＩＬ−２）ポリペプチド又はサイトカイン（例えばＩＬ−２）抱合体の送達を促進するために本明細書に記載される１つ以上の医薬賦形剤を含有する。そのようなキットは更に、識別用の記載又はラベル、或いは本明細書に記載される方法における使用に関する説明書を随意に含む。
【０３４７】
キットは典型的に、内容物を列挙するラベル及び／又は使用説明書と、使用説明書を備えた添付文書とを含んでいる。１セットの説明書も典型的に含まれる。
【０３４８】
１つの実施形態において、ラベルは容器上にあるか容器に付随される。一実施形態において、ラベルを形成する文字、数、或いは他の特徴が容器自体に取り付けられるか、成型されるか、又はエッチングされるとき、ラベルは容器上にあり、ラベルが例えば添付文書として容器を保持するレセプタクル又は運搬装置内に存在する場合、ラベルは容器に関連付けられる。一実施形態において、ラベルは、内容物が特定の治療用途に用いられるべきものであるということを示すために用いられる。ラベルはまた、例えば本明細書に記載の方法などにおける内容物の使用に関する指示を示す。
【０３４９】
特定の実施形態において、医薬組成物は、本明細書で提供される化合物を含む１以上の単位剤形を含むパック又はディスペンサーデバイスにおいて提供される。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属又はプラスチックホイルを含む。一実施形態において、パック又はディスペンサーデバイスには、投与の説明書が付随する。別の実施形態において、パック又はディスペンサーには、医薬品の製造、使用、又は販売を制御する政府機関によって規定された形態の容器に付属の通知書が添付してあり、この通知書は、ヒト又は動物の投与のための薬物の形態に関する政府機関の承認を反映するものである。このような通知書は、例えば、薬物又は承認された製品の挿入物に関して、米国食品医薬品局により承認されたラベルである。１つの実施形態において、適合可能な医薬担体において製剤される、本明細書に提供される化合物を含有する組成物も調製され、適切な容器に入れられ、及び示された疾病の処置についてラベル付けされる。
【０３５０】
特定の用語
別段の定めのない限り、本明細書で使用される技術用語と科学用語は全て、主張される主題が属する当該技術分野の当業者により一般に理解されるのと同じ意味を持っている。詳細な記載は典型的且つ説明的なものに過ぎず、主張される主題を制限するものではないことを理解されたい。本出願において、単数形の使用は、特に別記しない限り複数を含む。本明細書で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうではないと定めていない限り、複数の指示対象を含む。本出願において、「又は」の使用は、特に明記しない限り、「及び／又は」を意味する。更に、用語「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」といった他の形態と同じく、制限はない。
【０３５１】
本発明の様々な特徴は単一の実施形態の文脈において記載され得るが、それらの特徴はまた、個別に又は任意の適切な組み合わせで提供され得る。反対に、本発明は明確性のために別個の実施形態の観点から本明細書に記載され得るが、本発明は単一の実施形態でも実施され得る。
【０３５２】
本明細書における「幾つかの実施形態」、「実施形態」、「一実施形態」、又は「他の実施形態」への言及は、実施形態と関連して記載される特定の特徴、構造、又は特性が、本発明の少なくとも幾つかの実施形態に含まれるが、必ずしも全ての実施形態には含まれていないことを意味するものである。
【０３５３】
本明細書で使用されるように、範囲及び量は、「およその（ａｂｏｕｔ）」特定の値又は範囲として表現可能である。「約」は正確な量も含んでいる。従って、「約５μＬ」は、「約５μＬ」と「５μＬ」も意味する。一般に、用語「約」は、実験誤差の範囲内、例えば、１５％、１０％、又は５％以内であると予想される量を含む。
【０３５４】
本明細書に使用されるセクションの見出しは、単に構成上の目的のためであり、記載される主題を制限すると解釈されるものではない。
【０３５５】
本明細書で使用されるように、用語「個体」、「被験体」、及び「患者」は任意の哺乳動物を意味する。幾つかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。幾つかの実施形態では、哺乳動物はヒトではない。いかなる用語も、保健従事者（例えば、医師、正看護師、臨床看護師、医師助手、看護助手、又はホスピスの職員）の監督（例えば、常時又は断続的）を特徴とする状況には制限されない。
【０３５６】
本明細書に使用されるように、用語「有意な」又は「有意に」は、結合親和性に関して、標的受容体へのサイトカイン（例えばＩＬ−２ポリペプチド）の結合に影響を及ぼすのに十分なサイトカイン（例えばＩＬ−２ポリペプチド）の結合親和性における変化を意味する。幾つかの例において、この用語は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれ以上の変化を指す。幾つかの例において、前記用語は、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、又はそれ以上の変化を指す。
【０３５７】
幾つかの例において、用語「有意な」又は「有意に」は、サイトカインシグナル伝達複合体を介した１つ以上の細胞集団の活性化に関して、細胞集団を活性化するのに十分な変化を意味する。場合によっては、細胞集団を活性化する変化は受容体シグナル伝達能力として測定される。この場合、ＥＣ５０値が提供され得る。他の場合、ＥＤ５０値が提供され得る。更なる場合、サイトカインの濃度又は用量が提供され得る。
【０３５８】
本明細書に使用されるように、用語「効力」は、標的効果をもたらすことを求められるサイトカイン（例えばＩＬ−２ポリペプチド）の量を指す。幾つかの例において、用語「効力」は、標的サイトカイン受容体（例えばＩＬ−２受容体）を活性化することを求められるサイトカイン（例えばＩＬ−２ポリペプチド）の量を指す。他の例において、用語「効力」は、標的細胞集団を活性化することを求められるサイトカイン（例えばＩＬ−２ポリペプチド）の量を指す。場合によっては、効力は、ＥＤ５０（５０％有効量）、又は最大効果の５０％をもたらすことを求められる投与量として測定される。他の場合、効力は、ＥＣ５０（５０％有効濃度）、又は集団の５０％において標的効果をもたらすことを求められる投与量として測定される。
【実施例】
【０３５９】
これら実施例は例示目的のためだけに提供され、本明細書に提供される請求の範囲を制限するものではない。
【０３６０】
実施例１
キナーゼ受容体及びサイトカイン受容体の二量化アッセイ
【０３６１】
細胞の取り扱い
【０３６２】
ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ細胞株を、冷凍装置ストックから標準手順に従い拡張させた。細胞を、２０μＬの総容量において、白色の壁付きの３８４ウェルマイクロプレートの中に蒔いて、試験前に適切な時間にわたり培養した。
【０３６３】
アゴニストフォーマット
【０３６４】
アゴニスト判定のために、細胞をサンプルと共にインキュベートして反応を誘導した。サンプルストックの中間希釈を行い、５Ｘサンプルをアッセイ緩衝液中に生成した。約５μＬの５Ｘサンプルを細胞に添加し、３７℃で６〜１６時間、アッセイに応じてインキュベートした。ビヒクル濃度は１％であった。
【０３６５】
シグナル検出
【０３６６】
アッセイシグナルを、アゴニストアッセイ及びアンタゴニストアッセイそれぞれに対する１２．５又は１５μＬ（５０％ｖ／ｖ）のＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ検出試薬カクテルの添加一回を介して生成し、その後に１時間のインキュベーションを室温で行った。幾つかのアッセイに関して、活性を、高感度性検出試薬（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ  Ｆｌａｓｈキット）を使用して検出し、アッセイパフォーマンスを改善した。これらアッセイにおいて、等容量の検出試薬（２５又は３０ｕＬ）をウェルに添加し、その後に１時間のインキュベーションを室温で行った。マイクロプレートを、化学発光シグナル検出のためにＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）器機を用いるシグナル生成に従って、読み取った。
【０３６７】
データ分析
【０３６８】
化合物活性を、ＣＢＩＳデータ分析スイート（ＣｈｅｍＩｎｎｏｖａｔｉｏｎ、ＣＡ）を使用して分析した。アゴニストモードアッセイに関して、パーセンテージ活性を、以下の式を使用して算出した：
％活性＝１００％×（試験サンプル−の平均ＲＬＵ−ビヒクル対照の平均ＲＬＵ）／（平均ＭＡＸ  ＲＬＵ対照リガンド−ビヒクル対照の平均ＲＬＵ）。
【０３６９】
アンタゴニストモードアッセイに関して、パーセンテージ阻害を、以下の式を使用して算出した：
％阻害＝１００％×（１−／（試験サンプルの平均ＲＬＵ−ビヒクル対照の平均ＲＬＵ）／（ＥＣ８０対照の平均ＲＬＵ−ビヒクル対照の平均ＲＬＵ）。
【０３７０】
実施例２
ＩＬ−２Ｒα関与が無いペグ化ＩＬ−２化合物の同定のための細胞ベースのスクリーニング
【０３７１】
ＩＬ−２／ヘテロ三量体受容体シグナル伝達複合体（ＰＤＢ：２ＥＲＪ）の構造データを使用して、ｎＡＡ−ペグ化部位の設計を導いて、特異的にＩＬ−２及びＩＬ−２受容体αサブユニット（ＩＬ−２Ｒα）の相互作用を抑制した。典型的なＩＬ−２抱合体を機能分析にさらした：Ｋ３５、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｅ６２、及びＰ６５。ＩＬ−２抱合体を、大腸菌における封入体として発現させ、精製し、標準手順を用いて再度折り重ねて、その後に、ＩＬ−２生成物を、ＤＢＯＣ媒介性の銅を含まないクリック化学を用いて部位特異的にペグ化して、安定した共有結合のｍＰＥＧ部分をＡｚＫに結合させた。
【０３７２】
ＩＬ−２抱合体を、ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒのＩＬ−２サイトカイン受容体アッセイを使用して、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ（Ｆｒｅｍｏｎｔ  ＣＡ）にて機能的活性についてスクリーニングした。このアッセイは、ＩＬ−２受容体β（ＩＬ−２Ｒβ）及びγ（ＩＬ−２Ｒγ）サブユニットを発現する組み換え体ヒトＵ２ＯＳ細胞株を使用し、各々は、分割されたレポーター酵素β−ガラクトシダーゼの半分に縮合される。第２の細胞株を更に操作して、ＩＬ−２Ｒαサブユニットを発現させた。これらの２つの細胞株を用いる平行試験は、ＩＬ−２受容体αβγの他、基礎のβγ複合体の変異体活性化の評価を可能にする。ＩＬ−２βγ受容体複合体に対するＩＬ−２アゴニスト活性は、受容体二量化、及び化学発光シグナルをもたらすレポーターβ−ガラクトシダーゼ再構成を刺激する。アッセイをアゴニストモードで行い各被験物質のＥＣ５０を判定し、ＩＬ２Ｒαの陽性細胞型と陰性細胞型との間の用量反応曲線プロファイルの比較は、観察された活性に対するＩＬ２Ｒαの寄与の判定を可能にする。
【０３７３】
表１は、３０ｋＤのペグ化ＩＬ−２抱合体に関する細胞ベースのスクリーンにおけるＩＬ−２受容体アゴニズムのＥＣ５０データを示す。
【０３７４】
【表１】
2020529977.tif 000004
【０３７５】
ペグ化ＩＬ−２のヒトＩＬ−２受容体サブユニットとの生化学物質相互作用
【０３７６】
ヒトＩＬ−２受容体サブユニットとのペグ化ＩＬ−２化合物相互作用の動態を、Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  Ｔｏｏｌｓ  ＬＬＣ  （Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，  ＵＴ）にて表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定した。これら研究のために、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ縮合ＩＬ−２  Ｒα（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ＃１０１６５−Ｈ０２Ｈ）及びβ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ＃１０６９６−Ｈ０２Ｈ）の細胞外ドメインを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＡでコーティングしたＣＭ４センサチップの表面上に捉えた。これらの表面を二通りに探索し、２倍の系列希釈は、Ｂｉａｃｏｒｅ  ２０００  ＳＰＲ器機を使用して、２μＭの何れかの未変性ＩＬ−２（野生型のＩＬ−２；Ｔｈｅｒｍｏ  ＃  ＰＨＣ００２１）、Ｐ６５＿３０ｋＤ、Ｐ６５＿５ｋＤ、Ｅ６２＿３０ｋＤ、又はＥ６２＿５ｋＤから出発した。試験サンプルを６０秒間注入して、会合の測定を可能にし、その後、緩衝液（洗浄）のみを３０秒間用いて、解離を測定した。反応ユニット（ＲＵ、Ｙ軸）を時間（ｓ、Ｘ軸）に対してプロットする。
【０３７７】
βへのＩＬ−２結合に対するＩＬ−２受容体αサブユニットの効果を評価するために、αを、βに比べて２倍過剰に捕捉した。これらの表面に、未変性ＩＬ−２（野生型ＩＬ−２）、Ｐ６５＿３０ｋＤ、Ｐ６５＿５ｋＤ、Ｅ６２＿３０ｋＤ、又はＥ６２＿５ｋＤを、２．５μＭにて開始する３倍系列希釈において適用した。結合データを、バルクシフト（ｂｕｌｋ  ｓｈｉｆｔ）に含まれる１：１の相互作用モデルに適合させ、抽出された動力学的パラメータを表２Ａ及び表２Ｂに要約する。
【０３７８】
【表２】
2020529977.tif 000005
【０３７９】
【表３】
2020529977.tif 000006
【０３８０】
固定されたＩＬ−２Ｒαを含有するセンサ表面上で、未変性ＩＬ−２は、迅速な会合及び遅い解離の動態を示して、高親和性結合を実証した（図４Ａ）。対照的に、Ｐ６５＿３０ｋＤ又はＥ６２＿３０ｋＤは何れも、２μＭの最高試験濃度でさえもＩＬ−２Ｒα表面と相互作用しない（図４Ａ）。固定されたＩＬ−２Ｒβを含有する表面は、未変性ＩＬ−２（野生型のＩＬ−２）及びＩＬ−２  Ｐ６５＿３０ｋＤの両方に対する同等の会合及び解離の反応を示した（図４Ｂ）。β−サブユニットに対する化合物間に観察されたＫＤでの適度な差異は、未変性ＩＬ−２に対するＩＬ−２  Ｐ６５＿３０ｋＤのレートの減少によるものであり、このペグ化化合物（より低い拡散係数）の流体力学半径の変化の他、離れた結合表面上の大きなＰＥＧ部分の非特異的遮蔽効果から予想される。これらの結果は、Ｐ６５＿３０ｋＤ及びＥ６２＿３０ｋＤがＩＬ−２Ｒα相互作用を欠く一方で、大部分がＩＬ−２Ｒβに結合して保持されていることを示唆する。
【０３８１】
主要なヒト白血球減少系（ＬＲＳ）由来のＰＢＭＣサンプルにおけるＩＬ−２  Ｐ６５＿３０ｋＤ及びＥ６２＿ｋＤのエクスビボでの免疫応答プロファイリング
【０３８２】
ＩＬ−２  Ｐ６５＿３０ｋＤ及びＥ６２＿３０ｋＤの差次的な受容体特異性が主要な免疫細胞部分母集団の活性化をどのように成し遂げるかを判定するために、ヒトのＬＲＳ由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）サンプルにおけるリンパ球活性化の濃縮反応プロファイリングを、多色フローサイトメトリーを用いて行った。これらの研究をＰｒｉｍｉｔｙＢｉｏ  ＬＬＣ（Ｆｒｅｍｏｎｔ，  ＣＡ）において行った。新鮮なＬＲＳ由来のサンプルを、未変性ＩＬ−２、Ｐ６５＿３０ｋＤ、又はＥ６２＿３０ｋＤにより、３０μｇ／ｍＬの上位濃度で出発する５倍系列希釈において処理した。４５分のインキュベーション後、サンプルを固定し、抗体により染色して、転写因子ＳＴＡＴ５（ｐＳＴＡＴ５）のリン酸化形態、ＩＬ−２受容体シグナル伝達複合体の上流関与及び活性化のマーカー、及び表面マーカー（表３）の群（ｐａｎｅｌ）を検出することで、特異的なＴ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の部分母集団におけるｐＳＴＡＴ５形成を追跡した。
【０３８３】
【表４】
2020529977.tif 000007
【０３８４】
フローサイトメトリーデータを、濃度反応モードにおいて様々なＴ細胞及びＮＫ細胞の部分集合の活性化について分析し、未変性ＩＬ−２（図１４ａ）、Ｅ６２＿３０ｋＤ（図５Ｂ）、及びＰ６５＿３０ｋＤ（図５Ｃ）による処置後にｐＳＴＡＴ５蓄積を読み取る。ＮＫ細胞及びエフェクターＴ細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）の集団において、ＩＬ−２  Ｐ６５＿３０ｋＤ及びＩＬ−２  Ｅ６２＿３０ｋＤは、天然ＩＬ−２に対して効力を保持し、ｐＳＴＡＴ５産生に対するＥＣ５０値は未変性ＩＬ−２の４−５倍以内であった（図５Ａ）。これに対して、Ｔｒｅｇ部分母集団（ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＩＬ−２Ｒα＋ＣＤ１２７−）におけるＩＬ−２  Ｐ６５＿３０ｋＤのｐＳＴＡＴ５誘導に対するＥＣ５０値は、未変性ＩＬ−２に比べて９００倍減少したが、ＮＫ細胞及びＴｅｆｆ細胞の集団に対するＥＣ５０と同様のままであった（図５Ｃ）。特異的にＴｒｅｇ集団におけるＩＬ−２  Ｐ６５＿３０ｋＤに対するＥＣ５０における、このようなかなりの増加は、これら位置におけるＩＬ−２のペグ化によりＩＬ−２受容体のアゴニズムが可能となったが、エフェクターＴ細胞に比べてＴｒｅｇ刺激に対するＩＬ−２のバイアスを排除していることを示す。
【０３８５】
【表５】
2020529977.tif 000008
【０３８６】
ＥＣ５０値（ｐｇ／ｍＬ）を、ＭＦＩプロットから作成した用量反応曲線から算出した。
【０３８７】
実施例３
天然（Ｅ３８２６−Ｕ１７０４）及びＢ１６−Ｆ１０担癌（Ｅ３８２６−Ｕ１８０３）Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＰＫ／ＰＤ研究
【０３８８】
研究設計を表５と６に要約する。末端血液サンプルを、示された点における心臓の穿刺を介して採取した。研究Ｅ３８２６−Ｕ１７０４は、各時点につき３匹のマウスを屠殺する１３の時点（０．１３、０．２５、０．５、１、２、４、８、１２、２４、４８、７２、９６、及び１２０ｈ）を含み、研究Ｅ３８２６−Ｕ１８０３は、各時点につき４−７のマウスを屠殺する９つの時点（２、８、１２、２４、４８、７２、１２０、１６８、及び２４０ｈ）を含んでいた。研究Ｅ３８２６−Ｕ１８０３における血漿及び血液の細胞（両方の試験における）及び腫瘍を、ＰＫ及びＰＤの分析のために採取した。
【０３８９】
血漿サンプルの生体分析を、適任のヒトＩＬ−２  ＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｂｃａｍ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＵＫ）を使用して行った。アルデスロイキン、Ｅ６２＿３０ｋＤ、及びＰ６５＿３０ｋＤの濃度、及び血漿から得たサンプル中の内標準を、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定した。ＰＫデータ分析をＮＷ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｓｅａｔｔｌｅ，  ＷＡ）において行った。ＰＫデータを分析のためにＰｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．４（Ｃｅｒｔａｒａ／Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ，  Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，  ＮＪ）へ移した。群平均血漿中濃度対時間のデータを、ＩＶボーラス投与モデルを使用する非区画方法により分析した。
【０３９０】
【表６】
2020529977.tif 000009
【０３９１】
【表７】
2020529977.tif 000010
【０３９２】
０．３ｍｇ／ｋｇでの、Ｐ６５＿３０ｋＤ、Ｅ６２＿３０ｋＤ、Ｅ６２＿５ｋＤ、及びアルデスロイキンの血漿中濃度プロファイルを、図６においてプロットする。
【０３９３】
研究Ｅ３８２６−Ｕ１７０４において、Ｐ６５＿３０ｋＤ及びＥ６２＿３０ｋＤの両方は、表３にて要約されるようなアルデスロイキンに対する優れたＰＫプロファイルを示す。アルデスロイキンの単回ＩＶボーラス投与後、Ｔｍａｘを投与後０．０３ｈにて観察し（投与後最初に測定された時点）、平均血漿濃度は投与後４ｈまで測定可能であった。Ｐ６５＿３０ｋＤ及びＥ６２＿３０ｋＤの単回ＩＶボーラス投与後、Ｔｍａｘを投与後０．０３ｈにて観察し、平均血漿中濃度は投与後１２０ｈまで測定可能であった（最後の測定された時点）。別個の試験において、Ｅ６２＿５ｋＤのＩＶ投与後、Ｔｍａｘを投与後０．１３３ｈｒにて観察し、平均血漿中濃度は投与後１２ｈｒまで測定可能であった。
【０３９４】
Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０−ｔに基づく曝露は以下のとおりであった：Ｐ６５＿３０ｋＤ＞＞Ｅ６２＿３０ｋＤ＞＞Ｅ６２＿５ｋＤ＞アルデスロイキン。より小さなＰＥＧを伴うＥ６２＿５ｋＤにはｒＩＬ−２に近いＰＫプロファイルがあった。Ｐ６５＿３０ｋＤ曝露は、Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０−ｔに基づくアルデスロイキンよりもそれぞれ５．５倍及び２００倍高かった。加えて、Ｐ６５＿３０ｋＤは、アルデスロイキンに比べて、２３倍に拡張したｔ１／２（１３．３ｈ対０．５７ｈ）及び約１９８倍減少したＣＬ（６．５８対１３００ｍＬ／ｈ／ｋｇ）を実証した。Ｐ６５＿３０ｋＤ及びＥ６２＿３０ｋＤの両方に関して、分布容積（それぞれ８２．４及び９２．３ｍＬ／ｋｇ）は、アルデスロイキンに比べて４．２〜４．７倍減少し、及びマウス（８５ｍＬ／ｋｇ；［Ｂｏｅｒｓｅｎ  ２０１３］）における血液量と同様であった。このことは、Ｐ６５＿３０ｋＤ及びＥ６２＿３０ｋＤの大半が体循環内で分布されることを示唆している。
【０３９５】
【表８】
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【０３９６】
実施例４
末梢血区画における薬力学的観察
【０３９７】
細胞増殖（初期の分子マーカーＫｉ−６７及び細胞数）のＳＴＡＴ５リン酸化及び誘導を薬力学的な読み出しとして使用して、その薬物動態に対するＰ６５＿３０ｋＤの薬理学的特性を評価した。ｐＳＴＡＴ５  ＰＤマーカーは、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞における、Ｐ６５＿３０ｋＤ及びアルデスロイキン両方に対するＰＫとの良好な相関性を示した（表７）。ｐＳＴＡＴ５の持続的な上昇を、ＮＫ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方では最大７２時間までに、及びＴｒｅｇでは最大２４時間までに観察した。ｐＳＴＡＴ５誘導は、アルデスロイキンを投与したマウスにおいてわずか２時間後にベースラインに戻った（図７）。ＳＴＡＴ５リン酸化は、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞及びＮＫ細胞の遅延増殖反応（７２−１２０時間）へと翻訳されたが、Ｔｒｅｇ（図８Ａ−８Ｃ）により、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の表現型分析は、この集団内のＣＤ４４＋記憶細胞のかなりの拡張を明らかにしなかった（図９Ａ−９Ｂ）。
【０３９８】
Ｂ１６−Ｆ１０担癌（Ｅ３８２６−Ｕ１８０３）Ｃ５７ＢＬ／６マウスの腫瘍区画における薬力学的観察
【０３９９】
表８は、Ｂ１６−Ｆ１０担癌マウスにおける３ｍｇ／ｋｇでＰ６５＿３０ｋＤを１回投与した後の血漿中濃度及び腫瘍薬物濃度を示す。腫瘍半減期は血漿内半減期の２倍であり（２４．４対１２．６）、このことはＰ６５＿３０ｋＤが腫瘍に浸透し且つ腫瘍において保持されることを示している。曲線交差の尾部末端は、血漿が腫瘍よりも迅速に排除する（ｅｌｉｍｉｎａｔｅｓ）ことを示している。腫瘍：血漿のＡＵＣ比率は、１及び３ｍｇ／ｋｇの投与量に対してそれぞれ９．７％及び８．４％であった。
【０４００】
【表９】
2020529977.tif 000012
【０４０１】
図１０Ａ−図１０Ｂは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍におけるＰ６５＿３０ｋＤによるＮＫ細胞及びＣＤ＋Ｔ細胞の拡張を示す。図１０Ａは、３ｇ／ｋｇにおける単回ＩＶボーラス投与量のＰ６５＿３０ｋＤによる処置後の腫瘍ＣＤ３＋Ｔ細胞集団におけるＮＫ細胞、ＣＤ８＋細胞、及びＴｒｅｇのパーセンテージを示す。腫瘍サンプルを、フローサイトメトリーによる処置後に５日間、免疫細胞集団に対し分析した。各データポイントは、各時点での３つの複製からの平均、±ＳＥＭを表わす。表わされた細胞集団データを５日目の腫瘍サンプルから集め、ＣＤ８／Ｔｒｅｇの比率を７日目のサンプルから算出した。図１０Ｂは、３ｍｇ／ｋｇにおける単回ＩＶボーラス投与量のＰ６５＿３０ｋＤによる処置の７日後の、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞に対するＣＤ８＋エフェクターの比率を示す。各データポイントは、各時点での３つの複製からの平均、±ＳＥＭを表わす。
【０４０２】
Ｂａｌｂ／ｃマウスＥ３８２６−Ｕ１８０２のＭＴＤ研究
【０４０３】
Ｐ６５＿３０ｋＤの用量設定研究を、Ｃｒｏｗｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ．  （Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）にて、ナイーブなメスのＢａｌｂ／ｃマウスにおいて行った。研究設計を表９に示す。血液サンプルを、７つの時点（０．２５、１、４、１２、２４、３４、４８、及び７２ｈ）にて顎下静脈（ｓｕｂｍａｎｄｉｂｕｌａｒ  ｖｅｉｎ）を介して引き抜いた。血漿細胞及び血液細胞の両方をＰＫ及びＰＤの分析のために採取した。
【０４０４】
全ての血漿サンプルを、ヒトＩＬ−２の他、マウスＩＬ−２、ＴＮＦ−α、ＩＦＮγ、ＩＬ−５、及びＩＬ−６のサイトカインに対して分析し、市販のＥＬＩＳＡキットを利用した。
【０４０５】
【表１０】
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【０４０６】
Ｂａｌｂ／ｃマウスを使用するＭＴＤ研究における毒性学観察
【０４０７】
高用量のＩＬ−２に関連付けられる大規模の毒性は、毛細血管漏出症候群及び関連するサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）である。これをマウスにおいて評価するために、Ｐ６５＿３０ｋＤの単回投与量のＩＶ投与を、０．０１−５．０ｍｇ／ｋｇに及ぶ投与量で行った（表１０）。行われた分析は、血液学分析、組織病理学分析、臓器重量分析、及びサイトカイン分析であった。異常は、Ｐ６５＿３０ｋＤ又はアルデスロイキン両方を伴うビヒクル対照マウスに比べて、血液学分析、組織病理学分析、又は体重分析において観察されなかった。サイトカイン分析に関して、アルデスロイキンは、１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇにて出発して血漿ＩＬ−５レベルを上昇させたことが観察された（図１１Ａ）。Ｐ６５＿３０ｋＤにより、ＩＬ−５における中程度の増加は５ｍｇ／ｋｇの投与量にしか見られず、これはアルデスロイキンに比べて少ないものであった（図１１Ｂ）。ＩＦＮγの全身レベルにおける一時的な上昇を、アルデスロイキン及びＰ６５＿３０ｋＤの両方にて観察した。
【０４０８】
実施例５
カニクイザル研究番号：２０１５７２７６におけるＰＫ／ＰＤ
【０４０９】
Ｐ６５＿３０ｋＤの薬物動態及び薬力学のプロファイルを、０．３ｍｇ／ｋｇでの単回静脈内投与量の投与後の非ナイーブなカニクイザルにおいて評価した。研究をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｉｎｃ．  （Ｒｅｎｏ，  ＮＶ）にて行い、ＰＫデータ分析をＮＷ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  （Ｓｅａｔｔｌｅ，  ＷＡ）にて行った。血液サンプルを、投与前、及び２１の時点（投与後０．５、１、２、４、８、１２、２４、３６、４８、７２、１２０、１４４、１６８、１９２、及び２４０ｈ）において採取した。血漿細胞及び血液細胞の両方をＰＫ及びＰＤの分析のために採取した。選択された時点を、ＰＫ、ＰＤ、細胞集団、及び血液学分析のために使用した。
【０４１０】
全ての血漿サンプルをヒトＩＬ−２（ＰＫ読み出し）に対して分析し、市販のＥＬＩＳＡキットを利用した。
【０４１１】
表１０は、カニクイザルにおけるＰ６５＿３０ｋＤ  ＰＫパラメータを示す。
【０４１２】
【表１１】
2020529977.tif 000014
【０４１３】
単回ＩＶボーラス投与後、Ｔｍａｘを投与後０．５ｈにて観察し（投与後最初に測定された時点）、平均の血漿濃度は投与後１６８ｈまで測定可能であった（最後の測定）。Ｐ６５＿３０ｋＤに対するｔ１／２及びＡＵＣはそれぞれ１３．６ｈ及び１２１０００ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬであった。
【０４１４】
血液学パラメータ−カニクイザル研究番号：２０１５７２７６
【０４１５】
血液パラメータに対して、評価時点は、−１日目、及び、投与後１、３、６、８、１０、１２、１４、１７、１９、２１日目に相当する。
【０４１６】
図１２は絶対的な白血球数及び微分計数を示す。データは平均±ＳＤ（Ｎ＝２動物／投与群）を表わす。
【０４１７】
白血球（ＷＢＣ）部分母集団の分析は、ＷＢＣ数における主要な増加が、Ｐ６５＿３０ｋＤの機構と一致しているリンパ球集団の拡張によるものであったことを明らかにした。好酸球の上昇はない。
【０４１８】
実施例６
表１１は、本明細書に記載されるＩＬ−２配列を説明する。
【０４１９】
【表１２】
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【０４２０】
本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され且つ記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されるものであることは、当業者に明らかであろう。多数の変形、変更、及び置き換えは、本発明から逸脱することなく、当業者によって現在想到されるものである。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されるかもしれないことを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本発明の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲及びその同等物の範囲内の方法及び構造は、それにより包含されることが、意図されている。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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