(57)【要約】ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定及び使用する方法が提供される。当該方法には、がんを治療する方法が含まれるが、それに限定されない。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストには、酸性ｐＨ（例：ｐＨ６．０）でＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する、ＰＳＧＬ−１に結合する抗体及びＶＩＳＴＡに結合する抗体が含まれるがこれらに限定されず、ＰＳＧＬ−１及びＶＩＳＴＡ細胞外ドメインポリペプチドも含まれる。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１のＰＳＧＬ−１アンタゴニストの有効量をがんを有する対象に投与することを含む、がんを治療する方法。
【請求項２】
化学療法剤、抗血管新生剤、増殖阻害剤、免疫腫瘍剤及び抗腫瘍性組成物から選択される治療剤の有効量を対象に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＰＳＧＬ−１に（例えばＰＳＧＬ−１  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＶＩＳＴＡに（例えばＶＩＳＴＡ  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体から選択される、請求項３から５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
抗体が抗体断片である、請求項３から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
抗体断片が、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）で、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックする、請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）でＶＩＳＴＡに結合する抗体であるか、又は例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）でＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
アンタゴニストが、１０ｎＭ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項１から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
アンタゴニストが免疫刺激分子である、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
アンタゴニストがＴ細胞活性化を刺激する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
対象におけるがんを治療するための、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストの使用。
【請求項１５】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＰＳＧＬ−１に（例えばＰＳＧＬ−１  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＶＩＳＴＡに（例えばＶＩＳＴＡ  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体から選択される、請求項１５から１７の何れか一項に記載の使用。
【請求項１９】
抗体が抗体断片である、請求項１５から１８の何れか一項に記載の使用。
【請求項２０】
抗体断片が、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）で、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックする、請求項１４から２０の何れか一項に記載の使用。
【請求項２２】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）でＶＩＳＴＡに結合する抗体であるか、又は例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）でＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項１５から２１の何れか一項に記載の使用。
【請求項２３】
アンタゴニストが、１０ｎＭ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項１５から２２の何れか一項に記載の使用。
【請求項２４】
アンタゴニストが免疫刺激分子である、請求項１４から２３の何れか一項に記載の使用。
【請求項２５】
アンタゴニストがＴ細胞活性化を刺激する、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
対象に少なくとも１のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを投与することを含む、対象におけるＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する方法。
【請求項２７】
化学療法剤、抗血管新生剤、増殖阻害剤、免疫腫瘍剤及び抗腫瘍性組成物から選択される治療剤の有効量を対象に投与することをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体から選択される、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＰＳＧＬ−１に（例えばＰＳＧＬ−１  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＶＩＳＴＡに（例えばＶＩＳＴＡ  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体から選択される、請求項２８から３０の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
抗体が抗体断片である、請求項２８から３１の何れか一項に記載の方法。
【請求項３３】
抗体断片が、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）で、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックする、請求項２６から３３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）でＶＩＳＴＡに結合する抗体であるか、又は例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）でＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項２６から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
アンタゴニストが、１０ｎＭ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項２６から３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
アンタゴニストが免疫刺激分子である、請求項２６から３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
アンタゴニストがＴ細胞活性化を刺激する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
細胞上のＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する方法であって、細胞を少なくとも１のＰＳＧＬ−１アンタゴニストと接触させることを含む方法。
【請求項４０】
細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏである、請求項２７に記載の方法。
【請求項４１】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体から選択される、請求項３９又は４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＰＳＧＬ−１に（例えばＰＳＧＬ−１  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＶＩＳＴＡに（例えばＶＩＳＴＡ  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体から選択される、請求項４１から４３の何れか一項に記載の方法。
【請求項４５】
抗体が抗体断片である、請求項４１から４４の何れか一項に記載の方法。
【請求項４６】
抗体断片が、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）で、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックする、請求項３９から４６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４８】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）でＶＩＳＴＡに結合する抗体であるか、又は例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）でＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項３９から４７の何れか一項に記載の方法。
【請求項４９】
アンタゴニストが、１０ｎＭ以下のＫＤでＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項３９から４８の何れか一項に記載の方法。
【請求項５０】
アンタゴニストが免疫刺激分子である、請求項３９から４９の何れか一項に記載の方法。
【請求項５１】
アンタゴニストがＴ細胞活性化を刺激する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法であって、
ａ）候補分子、ＶＩＳＴＡ分子（例えば成熟全長ＶＩＳＴＡタンパク質又はその断片）及びＰＳＧＬ−１分子（例えば成熟全長ＰＳＧＬ−１タンパク質又はその断片）を含む組成物を形成することであって、ＶＩＳＴＡ分子がＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子を含み、ＰＳＧＬ−１分子がＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子を含む、形成することと、
ｂ）ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合を検出すること
とを含む方法において、
組成物が例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）を有し、且つ、候補分子の非存在下でのＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合と比較した、候補分子の存在下でのＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合の減少が候補分子はＰＳＧＬ−１アンタゴニストであることを示す、
方法。
【請求項５３】
ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合が、候補分子の存在下で少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％減少する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合が、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、増幅発光近接ホモジニアスアッセイ及びフローサイトメトリーから選択される方法によって検出される、請求項５２又は５３に記載の方法。
【請求項５５】
ＶＩＳＴＡ分子が細胞の表面で発現される、請求項５２から５４の何れか一項に記載の方法。
【請求項５６】
ＰＳＧＬ−１分子が細胞の表面で発現される、請求項５２から５５の何れか一項に記載の方法。
【請求項５７】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＶＩＳＴＡに結合する抗体である、請求項５２から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＰＳＧＬ−１に結合する抗体である、請求項５２から５６の何れか一項に記載の方法。
【請求項５９】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが小分子である、請求項５２から５６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６０】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストが低分子ペプチドである、請求項５２から５６の何れか一項に記載の方法。
【請求項６１】
ＶＩＳＴＡ抗体がＰＳＧＬ−１アンタゴニストであるかどうかを判定する方法であって、
ａ）ＶＩＳＴＡ抗体、ＶＩＳＴＡ分子（例えば成熟全長ＶＩＳＴＡタンパク質又はその断片）及びＰＳＧＬ−１分子（例えば成熟全長ＰＳＧＬ−１タンパク質又はその断片）を含む組成物を形成することであって、ＶＩＳＴＡ分子がＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子を含み、ＰＳＧＬ−１分子がＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子を含む、形成することと、
ｂ）ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合を検出すること
とを含む方法において、
組成物が例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）を有し、且つ、ＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１抗体の非存在下でのＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合とそれぞれ比較した、ＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１抗体の存在下でのＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合の減少がＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１抗体はＰＳＧＬ−１アンタゴニストであることを示す、
方法。
【請求項６２】
ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合が、候補分子の存在下で少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％減少する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合が、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、増幅発光近接ホモジニアスアッセイ及びフローサイトメトリーから選択される方法によって検出される、請求項６１又は６２に記載の方法。
【請求項６４】
ＶＩＳＴＡ分子が、細胞の表面で発現されるＶＩＳＴＡである、請求項６１から６３の何れか一項に記載の方法。
【請求項６５】
ＰＳＧＬ−１分子が、細胞の表面で発現されるＰＳＧＬ−１である、請求項６１から６４の何れか一項に記載の方法。
【請求項６６】
例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）で、ＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合を少なくとも部分的に阻害するＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項６７】
例えばｐＨ５．５からｐＨ６．５の範囲のｐＨ（例えばｐＨ６．０）で、ＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合を少なくとも９０％阻害する、請求項６６に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項６８】
免疫刺激分子である、請求項６６又は６７に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項６９】
Ｔ細胞活性化を阻害する、請求項６８に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項７０】
ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体から選択される、請求項６６から６９の何れか一項に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項７１】
ＰＳＧＬ−１に（例えばＰＳＧＬ−１  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項７０に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項７２】
ＶＩＳＴＡに（例えばＶＩＳＴＡ  ＥＣＤに）結合する抗体である、請求項７０に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項７３】
抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体から選択される、請求項７０から７２の何れか一項に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項７４】
抗体が抗体断片である、請求項７０から７３の何れか一項に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項７５】
抗体断片が、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項７４に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスト。
【請求項７６】
請求項６６から７５の何れか一項に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを含む組成物。
【請求項７７】
例えば、請求項１から６５の何れか一項に記載の方法における使用のための、（ａ）ＶＩＳＴＡ、又はそのＰＳＧＬ−１結合部分と（ｂ）ＰＳＧＬ−１、又はそのＶＩＳＴＡ結合部分とを含む組成物。
【請求項７８】
例えば、請求項１から６５の何れか一項に記載の方法における使用のための、（ａ）ＶＩＳＴＡ、又はそのＰＳＧＬ−１結合部分と（ｂ）ＰＳＧＬ−１、又はそのＶＩＳＴＡ結合部分とを含む複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定及び使用する方法が提供される。当該方法には、がんを治療する方法が含まれるが、それに限定されない。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストには、限定されないが、ＰＳＧＬ−１に結合する抗体及びＶＩＳＴＡに結合する抗体が含まれ、これらの抗体は、酸性ｐＨ（例：ｐＨ６．０）でのＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する。
【０００２】
配列表
本出願は、電子形式の配列表と共に提出される。配列表は、２０１８年１月１０日に作成されたサイズが４９１５２バイトの「２０１８−０１−１０＿０１１３４−００５８−００ＰＣＴ＿Ｆｉｎａｌ＿Ｓｅｑ＿Ｌｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というタイトルのファイルとして提出される。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００３】
Ｖ領域免疫グロブリン含有Ｔ細胞活性化抑制因子（ＶＩＳＴＡ）は、Ｔ細胞の活性を負に調節する細胞表面発現タンパク質である（Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577）。ＶＩＳＴＡは、単一の細胞外ＩｇＶ領域を持つ一回通過Ｉ型膜貫通タンパク質である。特に、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインは、同じく免疫応答の調節に役割を果たす、ＰＤＬ１などのＢ７ファミリーメンバーと相同性がある（Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577）。ＶＩＳＴＡの発現は造血細胞に限られ、単球、Ｔ細胞及び樹状細胞の一部分に存在する（Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577 & Flies et al., 2011, JI 187:1537）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＶＩＳＴＡ：Ｉｇでの治療は、ＣＤ４＋Ｔ細胞による増殖とサイトカイン産生を抑制する（Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577）。ＶＩＳＴＡ特異的モノクローナル抗体は、ＶＩＳＴＡ発現樹状細胞によって提示される抗原に応答してＴ細胞分裂の増加を誘発できる（Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577）。抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体による腫瘍担持動物のｉｎ  ｖｉｖｏ治療は、腫瘍成長を阻害する免疫介在性抗腫瘍応答を誘発した（Wang et al., 2011, JEM 208(3) 577）。まとめると、これらの結果は、免疫介在性腫瘍拒絶中に観察されるようなＴ細胞駆動免疫応答の調節因子としてのＶＩＳＴＡの重要性を浮き彫りにしている。ＶＩＳＴＡの同族結合パートナーは、現在不明である。
【０００４】
ＶＩＳＴＡの結合パートナーの同定は、Ｔ細胞活性化のＶＩＳＴＡ媒介性阻害の理解の一助となり、治療的に有効且つ安全な治療法、患者選択及びコンパニオン診断のためのバイオマーカー、併用療法の標的、並びにがん免疫療法剤を開発するための新しい標的の選択を含め、医薬品開発に多くの利点を提供する。
【発明の概要】
【０００５】
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法が提供される。いくつかの実施態様では、方法は、候補分子をＶＩＳＴＡ分子（例：成熟ＶＩＳＴＡタンパク質又はその断片）及びＰＳＧＬ−１分子（例：成熟ＰＳＧＬ−１タンパク質又はその断片）と接触させることを含み、ＶＩＳＴＡ分子はＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（「ＥＣＤ」）、又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子（例えばシグナル配列を除く；すなわち成熟ＶＩＳＴＡ又はその断片）を含み、ＰＳＧＬ−１分子はＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ、又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子（例えばシグナル配列を除く；すなわち成熟ＰＳＧＬ−１又はその断片）を含み、接触は酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０で、例えばｐＨ６．０で発生する。いくつかの実施態様では、方法は、候補分子、ＶＩＳＴＡ分子及びＰＳＧＬ−１分子を含む組成物を形成することを含み、ここで、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０で、ＶＩＳＴＡ分子はＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子を含み、ＰＳＧＬ−１分子はＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子を含む。いくつかの実施態様では、方法は、ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合を検出することをさらに含む。いくつかの実施態様において、候補分子の非存在下でのＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合と比較した、候補分子の存在下でのＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合の減少は、候補分子がＰＳＧＬ−１アンタゴニストであることを示している。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合は、ｉ候補分子の存在下で少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％減少する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合は、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、増幅発光近接ホモジニアスアッセイ（ＡＬＰＨＡ）及びフローサイトメトリーから選択される方法によって検出される。
【０００６】
本明細書に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニスを同定する方法の何れにおいても、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０でＶＩＳＴＡに結合する抗体であり得る。本明細書に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法の何れにおいても、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１に結合する抗体であり得る。本明細書に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法の何れにおいても、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは小分子であってもよい。    本明細書に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法の何れにおいても、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは低分子ペプチドであってもよい。
【０００７】
いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体がＰＳＧＬ−１アンタゴニストであるかどうかを判定する方法が提供される。いくつかの実施態様では、方法は、ＶＩＳＴＡ抗体をＶＩＳＴＡ分子及びＰＳＧＬ−１分子と接触させることを含み、ここで、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０で、ＶＩＳＴＡ分子はＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子を含み、ＰＳＧＬ−１分子はＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子を含む。いくつかの実施態様では、方法は、ＶＩＳＴＡ抗体、ＶＩＳＴＡ分子及びＰＳＧＬ−１分子を含む組成物を形成することを含み、ここで、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０で、ＶＩＳＴＡ分子はＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子を含み、ＰＳＧＬ−１分子はＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子を含む。いくつかの実施態様では、方法は、ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合を検出することをさらに含む。いくつかの実施態様において、ＶＩＳＴＡ抗体の非存在下でのＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合と比較した、ＶＩＳＴＡ抗体の存在下でのＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合の減少は、ＶＩＳＴＡ抗体がＰＳＧＬ−１アンタゴニストであることを示している。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合は、ＶＩＳＴＡ抗体の存在下で少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％減少する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合は、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、増幅発光近接ホモジニアスアッセイ及びフローサイトメトリーから選択される方法によって検出される。
【０００８】
本明細書に記載のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法の何れにおいても、ＶＩＳＴＡ分子は細胞の表面に発現されるＶＩＳＴＡであってもよく、且つ／又はＰＳＧＬ−１分子は細胞の表面に発現されるＰＳＧＬ−１であってもよい。
【０００９】
いくつかの実施態様では、対象におけるＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する方法が提供される。いくつかの実施態様では、方法は、少なくとも１のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを対象に投与することを含む。いくつかの実施態様では、細胞上のＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する方法が提供される。いくつかの実施態様では、方法は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０又は６．０−７．０、例えばｐＨ６．０で、細胞を少なくとも１のＰＳＧＬ−１アンタゴニストと接触させることを含む。いくつかの実施態様において、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏである。
【００１０】
いくつかの実施態様では、がんを治療する方法が提供される。いくつかの実施態様では、方法は、有効量の少なくとも１のＰＳＧＬ−１アンタゴニストをがんを有する対象に投与することを含む。いくつかの実施態様では、該方法は、化学療法剤、抗血管新生剤、増殖阻害剤、免疫腫瘍剤及び抗腫瘍性組成物から選択される治療剤の有効量を対象に投与することをさらに含む。本明細書に記載のいかなる実施態様においても、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックし得る。
【００１１】
本明細書に記載のいかなる実施態様においても、方法は、ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体から選択されるＰＳＧＬ−１アンタゴニストを投与することを含み得、該抗体は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０でＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する。本明細書に記載のいかなる実施態様においても、方法は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０でＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害するＰＳＧＬ−１抗体を投与することを含み得る。本明細書に記載のいかなる実施態様においても、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体から選択され得る。本明細書に記載のいかなる実施態様においても、抗体は、抗体断片であってもよい。いくつかの実施態様では、抗体断片は、ＩｇＧ（例：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２から選択される。
【００１２】
いくつかの実施態様では、対象におけるがんの治療のための、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストの使用が提供される。本明細書に記載のいかなる使用においても、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１抗体又はＶＩＳＴＡ抗体であり得、該抗体は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０でＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する。いくつかの実施態様では、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体から選択される。いくつかの実施態様において、抗体は抗体断片である。いくつかの実施態様では、抗体断片は、ＩｇＧ（例：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４）、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２から選択される。
【００１３】
本明細書に記載のいかなる実施態様又はそれらのいかなる組み合わせも、本明細書に記載の発明のあらゆる全ての方法に適用される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ＶＩＳＴＡデキストラマーの、様々なｐＨでのＴ細胞への結合のフローサイトメトリーの結果を示す図であり、より低いｐＨで強化された結合を示している。
【図２】Ａ−Ｂは、実施例２に記載されるように、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞への抗ＰＳＧＬ−１の結合を示す。図２Ｂは、これも実施例２に記載されるように、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＮＫ細胞へのＶＩＳＴＡデキストラマーの結合を示す。
【図３】コントロール抗体（・）、ｈＰＳＧＬ−１−Ｆｃ（▼）又はｐ−セレクチン（菱形）の存在下での、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞へのＶＩＳＴＡデキストラマーの相対的な結合を示す。
【図４】Ａ−Ｂは、ＰＳＧＬ−１がｐＨ６．０で２９３Ｔ−ｈＶＩＳＴＡ細胞に結合することを示す。図４Ｂは、ｐＨ６．０での２９３Ｔ−ｈＶＩＳＴＡへのＰＳＧＬ−１−Ｆｃの結合（点／黒丸）、ｐＨ７．２での著しい結合の欠如（黒四角形）、並びに、ｐＨ６．０及び７．２での、ｈＶＩＳＴＡを発現しない２９３Ｔ細胞へのＰＳＧＬ−１−Ｆｃの結合の欠如（それぞれ菱形と三角形、一部四角形の背後に隠れている）を示す。図４Ａは、図４Ｂをサポートする大まかなデータを提供し、ｐＨ６．０での２９３Ｔ−ｈＶＩＳＴＡ細胞へのＰＳＧＬ−１の結合を示す。
【図５】Ｔ細胞（「コントロールｇＲＮＡ」）及びＰＳＧＬ−１  ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞（「ＰＳＧＬ−１  ｇＲＮＡ＃１」及びＰＳＧＬ−１  ｇＲＮＡ＃２」、これらは、２つの異なるガイドＲＮＡを用いて得られる２つのクローンである）に結合するヒトＶＩＳＴＡの割合を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明者らは、ＰＳＧＬ−１をＶＩＳＴＡ，の結合パートナーとして同定し、ここで結合は酸性ｐＨで優先的に起こる。ＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１の相互作用を標的とすることは、ＶＩＳＴＡの免疫抑制効果を阻害することにより、がん細胞に対する免疫応答を高め得る。標的分子には、ＰＳＧＬ−１に結合する抗体及びＶＩＳＴＡに結合する抗体が含まれ、これらの抗体はＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合をブロックする。例示的な標的分子は、酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０でＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１に結合する分子である。このような標的分子は、がんを治療するための治療剤として提供される。
【００１６】
特許出願書類及び刊行物を含む、本明細書に引用される全ての参照文献は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。
【００１７】
本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的のみのものであって、記載される内容を制限するものとして解釈されない。
【００１８】
定義
特に定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈上特に必要でない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
【００１９】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養及び形質転換（例えばエレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応、並びに精製技術に関連して使用される例示的な技術は、当該技術分野で知られている。多くのそのような技術及び手順は、中でも、例えばSambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)) に記載されている。加えて、化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤化、送達、及び患者の治療のための例示的な技術も、当該技術分野で知られている。
【００２０】
本明細書において、別途指定のない限り、「又は（or）」は「及び／又は（and/or）」を意味する。多数項従属クレームの文脈において、「又は」の使用は、１より多い先行する独立又は従属クレームを択一的な形式によってのみ引用する。別途指示がない限り、「含む」（「include」、「includes」、「including」）という用語は、「含むが、それに限定されない」と同じ意味を持つ。同様に、「（例えば）〜など」（「such as」）という用語は、「限定されないが、〜など」（「such as, but not limited to」）という用語と同じ意味を持つ。また、「要素」（「element」）又は「成分」（「component」）などの用語は、特に明記しない限り、１つのユニットを含む要素及び成分、並びに複数のサブユニットを含む要素及び成分の両方を包含する。
【００２１】
本開示に従って利用される場合、以下の用語は、特に明記しない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００２２】
「核酸分子」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、互換的に使用することができ、ヌクレオチドのポリマーを指す。そのようなヌクレオチドのポリマーは、天然及び／又は非天然のヌクレオチドを含有することができ、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びＰＮＡが含まれるが、これらに限定されない。「核酸配列」とは、核酸分子又はポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの線形配列を指す。
【００２３】
「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指し、最小の長さに限定されない。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然又は非天然のアミノ酸残基を含んでもよく、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体、及び多量体が含まれるが、これらに限定されない。全長タンパク質及びその断片の両方が、この定義に包含される。この用語には、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化等も含まれる。さらに、本発明において、「ポリペプチド」とは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する修飾、例えば削除、付加及び置換を含むタンパク質（通常は保存的な性質である）を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発によるように意図的な場合もあれば、タンパク質を産生する宿主の突然変異、又はＰＣＲ増幅に起因するエラーなどによる、偶発的な場合もある。「タンパク質」には、ポリペプチドと、２つ以上のポリペプチドの複合体（例えば二量体及びポリマー）とが含まれる。「低分子ペプチド」とは、５０個以下のアミノ酸を有するペプチドを指す。いくつかの実施態様では、低分子ペプチドは、４０個以下又は３５個以下又は３０個以下又は２５個以下のアミノ酸．を有する。いくつかの実施態様では、低分子ペプチドは、１０から５０個のアミノ酸又は１５から３０個のアミノ酸．を有する。
【００２４】
「天然配列」ポリペプチドは、天然に見出されるポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。したがって、天然配列ポリペプチドは、任意の哺乳動物からの天然に存在するポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。このような天然配列ポリペプチドは、自然から単離することができるか、又は組換え若しくは合成手段により製造することができる。用語「天然配列」ポリペプチド」は、具体的には、ポリペプチドの天然に存在する切断又は分泌型（例えば細胞外ドメイン配列）、ポリペプチドの天然に存在するバリアント型（例えば選択的スプライシング型）及びポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子バリアントを包含する。
【００２５】
ポリペプチド「バリアント」とは、配列を整列させ、最大パーセント配列同一性を達成するために必要であればギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない場合、天然配列ポリペプチドと少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチドを意味する。このようなバリアントには、例えば、ポリペプチドのＮ若しくはＣ末端において１若しくは複数のアミノ酸残基が付加されているか又は削除されているポリペプチドが含まれる。いくつかの実施態様では、バリアントは、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有するものである。いくつかの実施態様では、バリアントは、少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性を有するものである。いくつかの実施態様では、バリアントは、天然配列と少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有するものである。いくつかの実施態様では、バリアントは、天然配列と少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性を有するものである。
【００２６】
本明細書で使用される場合、ペプチド、ポリペプチド又は抗体配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」及び「相同性」は、最大パーセント配列同一性を得るために必要であればギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない場合の、特定のペプチド又はポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセントと定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当該分野の技術の範囲内にある様々な方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭＥＧＡＬＩＧＮＴＭ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような一般に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して得ることができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを得るのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。
【００２７】
用語「Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１」及び「ＰＳＧＬ−１」は、特に明記しない限り、天然ＰＳＧＬ−１を指すのに互換的に使用される。したがって、（例えば非ヒト又はマウス又はカニクイザルのＰＳＧＬ−１について議論することにより）．そうでないことが明記されていない限り、ＰＳＧＬ−１への言及は、本文を通じてヒトＰＳＧＬ−１への言及と同じ意味を有する。非ヒトＰＳＧＬ−１は、霊長類（例：カニクイザル）及びげっ歯類（例：マウス及びラット）．などの哺乳類を含む、あらゆる脊椎動物由来のものであってよい。
【００２８】
ＰＳＧＬ−１という用語には、全長、非プロセシング型（unprocessed）ＰＳＧＬ−１だけでなく、細胞又はその任意の断片内でのプロセシングの結果として生じ、例えば≦１μＭ、≦１００ｎＭ，又は≦１０ｎＭ未満の親和性（Ｋｄ）でＶＩＳＴＡ，と特異的に結合する能力を保持している任意の型のＰＳＧＬ−１が含まれる。この用語はまた、天然に存在するＰＳＧＬ−１のバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントを包含する。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１は、配列番号１（ヒトアイソフォーム１前駆体、シグナルペプチドを含む）若しくは配列番号２（成熟ヒトアイソフォーム１、シグナルペプチドを含まない）のアミノ酸配列、又は配列番号１４（ヒトアイソフォーム２前駆体、シグナルペプチドを含む）若しくは配列番号１５（成熟ヒトアイソフォーム２、シグナルペプチドを含まない）のアミノ酸配列を含む。
【００２９】
「ＰＳＧＬ−１」という用語には、シグナルペプチドの有無にかかわらず、全長ＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１断片及びＰＳＧＬ−１バリアントも含まれる。本明細書で使用される場合、「全長ＰＳＧＬ−１」という用語は、全長、非プロセシング型ＰＳＧＬ−１だけでなく、細胞又はその任意の断片内でのプロセシングの結果として生じ、例えば≦１μＭ、≦１００ｎＭ又は≦１０ｎＭ未満の親和性（Ｋｄ）でＶＩＳＴＡ，と特異的に結合する能力を保持している任意の型のＰＳＧＬ−１を指す。いくつかの実施態様では、全長ＰＳＧＬ−１は、配列番号１（アイソフォーム１前駆体、シグナルペプチドを含む）又は配列番号２（成熟アイソフォーム１、シグナルペプチドを含まない）又は配列番号１４（アイソフォーム２前駆体、シグナルペプチドを含む）又は配列番号１５（成熟アイソフォーム２、シグナルペプチドを含まない）のアミノ酸配列を有する。本明細書で使用される場合、「ＰＳＧＬ−１断片」という用語は、全長ＰＳＧＬ−１のＮ末端及び／又はＣ末端から１若しくは複数の残基が削除されているＰＳＧＬ−１であって、ＶＩＳＴＡに結合する能力を保持しているものを指す。ＰＳＧＬ−１断片は、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも含まなくてもよい。本明細書で使用される場合、「ＰＳＧＬ−１バリアント」という用語は、アミノ酸の付加、削除及び置換を含み、ＶＩＳＴＡに結合する能力を保持しているＰＳＧＬ−１を指す。そのようなバリアントには、親ＰＳＧＬ−１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一である。２つのポリペプチドの％同一性は、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用して２つのポリペプチドのアミノ酸配列を、類似性を決定するためのデフォルト設定と比較することによって決定される類似性スコアによって測定され得る。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Smith及びWaterman, Advances in Applied Mathematics 2:482-489 (1981)の局所相同性アルゴリズムを用いて、２つの配列間の類似性の最も高いセグメントを見つける。
【００３０】
用語「Ｔ細胞活性化のＶ−領域Ｉｇサプレッサー」、「血小板受容体Ｇｉ２４アイソフォーム１前駆体」、「Ｂ７Ｈ５」及び「ＶＩＳＴＡ」は、特に明記しない限り、本明細書では天然ヒトＶＩＳＴＡを指す。したがって、「ＶＩＳＴＡ」及び「ヒトＶＩＳＴＡ」という表現は、（例えば、特に非ヒトＶＩＳＴＡ種に言及することによって）文脈から明らかにそうでないと分かる以外は、同じ意味を有する。ＶＩＳＴＡが非ヒトの場合、霊長類（例：カニクイザル）及びげっ歯類（例：マウス及びラット）などの哺乳類を含む、あらゆる脊椎動物由来のものであり得る。この用語には、全長、非プロセシング型ＶＩＳＴＡだけでなく、細胞又はその任意の断片内でのプロセシングの結果として生じ、例えば≦１μＭ、≦１００ｎＭ、又は≦１０ｎＭ未満の親和性（Ｋｄ）でＰＳＧＬ−１，と特異的に結合する能力を保持している任意の型のＩＳＴＡが含まれる。この用語はまた、天然に存在するＶＩＳＴＡのバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントを包含する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡは、配列番号５（前駆体、シグナルペプチドを含む）又は配列番号６（成熟、シグナルペプチドを含まない）のアミノ酸配列を含む。非限定的且つ例示的な非ヒトＶＩＳＴＡは、配列番号７（前駆体、シグナルペプチドを含む）又は配列番号８（成熟、シグナルペプチドを含まない）のアミノ酸配列を有するマウスＶＩＳＴＡである。
【００３１】
「アンタゴニスト」という用語は、最も広い意味で使用され、ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡなどのポリペプチドの生物活性を部分的又は完全に阻害又は中和するか、或いはポリペプチドをコードする核酸の転写又は翻訳を部分的又は完全に阻害する任意の分子を指す。例示的なアンタゴニスト分子には、限定されないが、アンタゴニスト抗体、小分子ペプチド、オリゴペプチド、有機分子（小分子を含む）、アプタマー及びアンチセンス核酸が含まれる。いくつかの実施態様では、アンタゴニスト剤は、ブロッキング剤（ブロッキング抗体など）と称されることがある。
【００３２】
「ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト」という用語は、ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡと相互作用し、ＰＳＧＬ−１及び／又はＶＩＳＴＡ媒介性シグナル伝達を阻害する分子を指す。例示的なＰＳＧＬ−１アンタゴニストには、ＰＳＧＬ−１に結合する抗体及びＶＩＳＴＡに結合する抗体が含まれる。いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストはＰＳＧＬ−１に対する抗体である。いくつかの実施様態では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡに対する結合をブロックする。
【００３３】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの検出可能な結合の量を少なくとも５０％減少させる場合、「ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックする」と考えられる。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの検出可能な結合の量を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％減少させる。いくつかのこのような実施態様では、アンタゴニストは、リガンド結合を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％等ブロックすると言われている。
【００３４】
「阻害」又は「阻害する」という用語は、任意の表現型特性の減少又は消滅を指すか、或いはその特性の発生率、程度又は可能性の減少又は停止を指す。いくつかの実施態様では、「減少させる」又は「阻害する」とは、２０％以上の減少を引き起こす能力を意味する。別の実施態様では、「減少させる」又は「阻害する」とは、５０％以上の減少を引き起こす能力を意味する。さらに別の実施態様では、「減少させる」又は「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％又はそれ以上の減少を引き起こす能力を意味する。
【００３５】
「ＰＳＧＬ−１抗体」又は「ＰＳＧＬ−１に結合する抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０でＰＳＧＬ−１に結合する抗体を指す。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１及び／又はＶＩＳＴＡ媒介性シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０で、例えばｐＨ６．０でＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックする。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、それがＰＳＧＬ−１を標的とするうえで診断及び／又は治療剤として有用であるように十分な親和性でＰＳＧＬ−１に結合することができる抗体を指す。いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体の、無関係な非ＰＳＧＬ−１タンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定された抗体のＰＳＧＬ−１への結合の約１０％未満である。いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体は、異なる種由来のＰＳＧＬ−１の中で保存されているＰＳＧＬ−１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１に結合する、ヒト又はヒト化ＰＳＧＬ−１抗体と同じエピトープに結合する。
【００３６】
「ＶＩＳＴＡ抗体」又は「ＶＩＳＴＡに結合する抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０でＶＩＳＴＡに結合する抗体を指す。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＰＳＧＬ−１及び／又はＶＩＳＴＡ媒介性シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、上で定義されているように、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０でＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックする。したがっていくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体はＰＳＧＬ−１アンタゴニストである。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、それがＶＩＳＴＡを標的とするうえで診断及び／又は治療剤として有用であるように十分な親和性でＶＩＳＴＡに結合することができる抗体を指す。いくつかの実施態様において、ＶＩＳＴＡ抗体の、無関係な非ＶＩＳＴＡタンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定された抗体のＶＩＳＴＡへの結合の約１０％未満である。いくつかの実施態様において、ＶＩＳＴＡ抗体は、異なる種由来のＶＩＳＴＡの中で保存されているＶＩＳＴＡのエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ヒトＶＩＳＴＡに結合する、ヒト又はヒト化ＶＩＳＴＡ抗体と同じエピトープに結合する。
【００３７】
本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含むがこれらの限定されない種々の抗体構造を包含する。本明細書で使用される「抗体」という用語はさらに、重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３とを含む分子を指し、この分子は抗原に結合する能力を有する。抗体という用語には、限定されないが、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２など、抗原に結合する能力を有する断片が含まれる。抗体という用語には、限定されないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザル等の様々な種の抗体も含まれる。
【００３８】
いくつかの実施態様では、抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１の重鎖と、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１の軽鎖とを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、各重鎖が重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも２つの重鎖と、各軽鎖が軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも２つの軽鎖とを含む。本明細書で使用される場合、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又は例えば６つのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ）全てを含む単一ポリペプチド鎖を含む他の任意の抗体は、重鎖及び軽鎖を有するとみなされる。いくつかのそのような実施態様では、重鎖は３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体の領域であり、軽鎖は３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体の領域である。
【００３９】
本明細書で使用される「重鎖可変領域」という用語は、重鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３及びＣＤＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施態様では、重鎖可変領域はまた、ＣＤＲ１のＮ末端にあるＦＲ１の少なくとも一部及び／又はＣＤＲ３のＣ末端にあるＦＲ４の少なくとも一部も含む。
【００４０】
本明細書で使用される「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常領域、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的且つ例示的な重鎖定常領域には、γ、δ及びαが含まれる。また、非限定的且つ例示的な重鎖定常領域には、ε及びμも含まれる。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応している。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体である。さらに、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。いくつかのアイソタイプは、さらにサブクラスに分類できる。例えば、ＩｇＧ抗体には、限定されないが、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体が含まれ、ＩｇＡ抗体には、限定されないが、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が含まれ、ＩｇＭ抗体には、限定されないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２が含まれる。
【００４１】
本明細書で使用される「重鎖」という用語は、リーダー配列の有無にかかわらず、少なくとも重鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施態様では、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用される「全長重鎖」という用語は、リーダー配列の有無にかかわらず、また、Ｃ末端リジンの有無にかかわらず、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００４２】
本明細書で使用される「軽鎖可変領域」という用語は、軽鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３及びＣＤＲ３を含む領域を指す。いくつかの実施態様では、軽鎖可変領域は、ＦＲ１及び／又はＦＲ４も含む。
【００４３】
本明細書で使用される「軽鎖定常領域」という用語は、軽鎖定常領域ＣＬを含む領域を指す。非限定的且つ例示的な軽鎖定常領域には、λ及びλも含まれる。
【００４４】
本明細書で使用される「軽鎖」という用語は、リーダー配列の有無にかかわらず、少なくとも軽鎖可変領域を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施態様では、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用される「全長重鎖」という用語は、リーダー配列の有無にかかわらず、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００４５】
抗体競合アッセイによって決定される参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、 競合アッセイにおける参照抗体のその抗原への結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、逆に参照抗体は、競合アッセイにおける抗体のその抗原への結合を５０％以上ブロックする。同じエピトープについて競合する抗体の文脈で使用される場合の「競合する」という用語は、抗体間の競合が、試験される抗体が参照抗体の共通抗原（例：ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡ）への特異的結合を防止又は阻害するアッセイによって決定されることを意味する。例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ），固相直接又は間接エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例：Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例：Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619参照）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例：Harlow and Lane, 1988,抗体、A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press参照）；１−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（例：Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15参照）；固体相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例：Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552参照）；及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32 (77-82）など、多くの種類の競合結合アッセイが使用され得る。典型的には、そのようなアッセイは、非標識化試験抗原結合タンパク質及び標識化参照抗体の何れかを有する固体表面又は細胞に結合した精製抗原の使用を含む。競合的阻害は、試験抗体の存在下で、固体表面又は細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体と、参照抗体が結合するエピトープに対して立体障害が起こるほど十分に近接する隣接エピトープと結合する抗体とが含まれる。いくつかの実施態様では、競合抗体は、過剰に存在する場合、参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％又は７５％阻害する。場合によっては、結合は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％又は９７％若しくはそれ以上阻害される。
【００４６】
「抗原」という用語は、抗体又はその免疫機能断片などの選択的結合剤によって結合され得、且つ、その抗原に結合可能な抗体を産生するために哺乳動物において使用され得る分子又は分子の一部を指す。抗原は、抗体と相互作用することができる１又は複数のエピトープを有していてもよい。
【００４７】
「エピトープ」という用語は、抗体又はその断片などの選択的結合剤によって結合される分子の部分である。この用語は、抗体に特異的に結合することができる任意の決定基を含む。エピトープは、連続又は不連続であり得る（例えば、ポリペプチドにおいて、ポリペプチド配列中では互いに連続していないが、分子との関連において抗原結合タンパク質によって結合されるアミノ酸残基）。いくつかの実施態様において、エピトープは、抗体を生成するために使用されるエピトープに類似する三次元構造を含むが、抗体を生成するために使用されるそのエピトープに見られるアミノ酸残基の何れも含まないか又は一部のみを含むという意味でミメティックであり得る。エピトープ決定基は、分子の化学的に活性な表面群（surface groupings）、例えばアミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル基等を含み、且つ、特異的な三次元構造的特性及び／又は特異的な荷電特性を有する。いくつかの実施態様では、「エピトープ」は、それを決定するために使用される方法によって特定される。例えば、いくつかの実施態様において、抗体と参照抗体は、それらが抗原の同じ領域に結合する場合、水素重水素交換（ＨＤＸ）によって決定される同じエピトープに結合する。特定の実施態様において、抗体と参照抗体は、それらが抗原の同じ領域に結合する場合、Ｘ線結晶解析によって決定される同じエピトープに結合する。
【００４８】
本明細書で使用される「キメラ抗体」という用語は、第１の種（マウス、ラット、カニクイザル等）由来の少なくとも１の可変領域と、第２の種（ヒト、カニクイザル、ニワトリ等）由来の少なくとも１の定常領域とを含む抗体を指す。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも１のマウス可変領域と、少なくとも１のヒト定常領域とを含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも１のカニクイザル可変領域と、少なくとも１のヒト定常領域をと含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体の可変領域の全てが第１の種に由来し、キメラ抗体の定常領域の全てが第２の種に由来する。
【００４９】
本明細書で使用される「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域（マウス、ラット、カニクイザル、ニワトリ等）のフレームワーク領域の少なくとも１のアミノ酸が、ヒト可変領域の対応するアミノ酸で置換されている抗体を指す。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１のヒト定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２等である。
【００５０】
本明細書で使用される「ＣＤＲ移植抗体」は、第１（非ヒト）の種の１又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２（ヒト）の種のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植されたヒト化抗体を指す。
【００５１】
本明細書で使用される「ヒト抗体」は、ヒトで産生される抗体、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）などのヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物において産生される抗体及びファージディスプレイなどのｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、抗体レパートリーがヒト免疫グロブリン配列に基づいているｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法を用いて選択される抗体を指す。
【００５２】
用語「ＰＳＧＬ−１細胞外ドメイン」（「ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ」）には、全長ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片、及びＰＳＧＬ−１  ＥＣＤバリアントが含まれ、細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを欠く、シグナルペプチドを含むか又は含まないＰＳＧＬ−１ポリペプチドを指す。ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤポリペプチドは、別段の定めがない限り、天然ヒトＥＣＤである。本明細書で使用される「全長ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ」という用語は、細胞外ドメインの最後のアミノ酸にまで及ぶＰＳＧＬ−１  ＥＣＤを指し、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも含まなくてもよく、細胞外ドメインの天然ライスバリアントを指す。非限定的且つ例示的なＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、配列番号１のアミノ酸１から２４（シグナル配列を含む）又は配列番号１のアミノ酸２３から２４１（シグナル配列を含まない）、配列番号２、配列番号３又は配列番号４のアミノ酸１から２１９を含む。別の例示的なＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、配列番号１４のアミノ酸１から２４（シグナル配列を含む）又は配列番号１４のアミノ酸２３から２４１（シグナル配列を含まない）、又は配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７又は配列番号１８のアミノ酸１から２１９を含む。本明細書で使用される場合、「ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片」という用語は、全長ＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端から１若しくは複数の残基が削除されているＰＳＧＬ−１  ＥＣＤであって、ＶＩＳＴＡに結合する能力を保持しているものを指す。ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片は、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも含まなくてもよい。本明細書で使用される場合、「ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤバリアント」という用語は、アミノ酸の付加、削除及び置換を含み、ＶＩＳＴＡに結合する能力を保持しているＰＳＧＬ−１  ＥＣＤを指す。そのようなバリアントには、親ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤと少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一である。２つのポリペプチドの％同一性は、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用して２つのポリペプチドのアミノ酸配列を、類似性を決定するためのデフォルト設定と比較することによって決定される類似性スコアによって測定され得る。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Smith及びWaterman, Advances in Applied Mathematics 2:482-489 (1981）の局所相同性アルゴリズムを用いて、２つの配列間の類似性の最も高いセグメントを見つける。
【００５３】
「ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子」という用語は、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ及び１又は複数の「融合パートナー」を含む分子を指す。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ及び融合パートナーは、共有結合されている（「融合されている」）。融合パートナーもポリペプチドである（「融合パートナーポリペプチド」）場合、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドは連続アミノ酸配列の一部であり得、融合パートナーポリペプチドはＰＳＧＬ−１  ＥＣＤのＮ末端又はＣ末端の何れかに結合され得る。そのような場合、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドは、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤと融合パートナーポリペプチドの両方をコードするコード配列から単一のポリペプチドとして翻訳され得る（「ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合タンパク質」）。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ及び融合パートナーは、例えばペプチド結合以外の化学結合などの他の手段を介して共有結合される。ポリペプチドを他の分子（例えば融合パートナー）に共有結合させる多くの既知の方法を用いることができる。他の実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ及び融合パートナーは、少なくとも１のアミノ酸又は化学部分から構成される「リンカー」を介して融合され得る。配列番号１９は、本明細書の実施例のＰＳＧＬ−１  Ｆｃ融合分子において使用されるリンカーを提供する。非限定的で例示的なＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子は、T. Pouyani et al., Cell 83: 333-343 (1995)に記載の融合分子を含む。非限定的且つ例示的なＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子は、例えば（ａ）配列番号１のアミノ酸１から２４１（シグナル配列を含む）、又は配列番号１のアミノ酸２３から２４１（シグナル配列を含まない）、配列番号２、配列番号３若しくは配列番号４のアミノ酸１から２１９、又は配列番号１４のアミノ酸１から２４１（シグナル配列を含む）、又は配列番号１４のアミノ酸２３から２４１（シグナル配列を含まない）、又は配列番号１５、配列番号１６若しくは配列番号１７若しくは配列番号１８のアミノ酸１から２１９の、（ｂ）ヒトＩｇＧ１由来のＦｃ（例えば配列番号１１、１２又は１３のＦｃなど）又はＦｃ領域との結合など、Ｆｃと結合したＰＳＧＬ−１  ＥＣＤを含む。
【００５４】
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドと融合パートナーは、共有結合していない。いくつかのそのような実施態様では、それらは、例えば結合対を用いて結合され得る。例示的な結合対には、限定されないが、ビオチン及びアビジン又はストレプトアビジン、並びに抗体及びその抗原等が含まれる。
【００５５】
例示的な融合パートナーには、限定されないが、免疫グロブリンＦｃ領域、アルブミン、及びポリエチレングリコールが含まれる。非限定的且つ例示的なＦｃ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１から１３に示されている。
【００５６】
上記のように、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、特に明記しない限り、天然ヒトＰＳＧＬ−１配列に由来する。但し、いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤアミノ酸配列は、非ヒト哺乳動物のものに由来する。そのような実施態様では、非ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤアミノ酸配列は、げっ歯類（マウス、ラット、ハムスターを含む）、ウサギ、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類の実験動物、哺乳類の家畜、哺乳類の競技用動物及び哺乳類のペットを含むがこれらに限定されない哺乳動物に由来し得る。非ｈｕｍＰＳＧＬ−１  ＥＣＤを組み込んだＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子は、「非ｈｕｍＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子」又は「非ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子」と呼ばれる。ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子と同様に、非ヒト融合分子は、融合パートナー、任意選択のリンカー、及び非ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤを含んでもよい。このような非ヒト融合分子は、シグナルペプチドも含み得る。
【００５７】
「ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片」という用語は、全長ヒトＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端から１若しくは複数の残基が削除されているＰＳＧＬ−１  ＥＣＤであって、ヒトＶＩＳＴＡに結合する能力を保持しているものを指す。「非ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片」とは、全長ＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端から１若しくは複数の残基が削除されている非ｈｕｍＰＳＧＬ−１  ＥＣＤであって、配列が由来する非ヒト動物のＶＩＳＴＡに結合する能力を保持しているものを指す。これは、「ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤバリアント」とは対照的であり、天然ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤと比べてアミノ酸の付加、削除及び置換を含み、ヒトＶＩＳＴＡに結合する能力を保持しているＰＳＧＬ−１  ＥＣＤを指す。
【００５８】
「非ｈｕｍＰＳＧＬ−１  ＥＣＤバリアント」とは、アミノ酸の付加、削除及び置換を含み、配列が由来する動物のＶＩＳＴＡに結合する能力を保持している非ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤを指す。これは、アミノ酸の付加、削除及び置換を含み、ヒトＶＩＳＴＡに結合する能力を保持しているヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤを指す「ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤバリアント」と対照的である。
【００５９】
本明細書に記載のいかなる実施態様においても、全長ＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１断片、ＰＳＧＬ−１バリアント、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ、及びＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合タンパク質を含むがこれらに限定されないＰＳＧＬ−１は、さらにタグも含み得る。非限定的且つ例示的なタグには、ＦＩＴＣ、Ｈｉｓ６、ビオチン、並びに当該技術分野で既知の他の標識及びタグが含まれる。
【００６０】
用語「ＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン」（「ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ」）には、全長ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片、及びＶＩＳＴＡ  ＥＣＤバリアントが含まれ、細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを欠く、シグナルペプチドを含むか又は含まないＶＩＳＴＡポリペプチドを指す。該ポリペプチドは、別段の定めがない限り、天然ヒトＥＣＤである。本明細書で使用される「全長ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ」という用語は、細胞外ドメインの最後のアミノ酸にまで及ぶＶＩＳＴＡ  ＥＣＤを指し、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも含まなくてもよく、細胞外ドメインの天然ライスバリアントを指す。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片」という用語は、全長ＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端から欠失している１若しくは複数の残基を有し、ＰＳＧＬ−１に結合する能力を保持しているＶＩＳＴＡ  ＥＣＤを指す。ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片は、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも含まなくてもよい。本明細書で使用される場合、「ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤバリアント」という用語は、アミノ酸の付加、削除及び置換を含み、ＰＳＧＬ−１に結合する能力を保持しているＶＩＳＴＡ  ＥＣＤを指す。そのようなバリアントには、親ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤと少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一である。
【００６２】
２つのポリペプチドの％同一性は、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用して２つのポリペプチドのアミノ酸配列を、類似性を決定するためのデフォルト設定と比較することによって決定される類似性スコアによって測定され得る。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Smith及びWaterman, Advances in Applied Mathematics 2:482-489 (1981)の局所相同性アルゴリズムを用いて、２つの配列間の類似性の最も高いセグメントを見つける。いくつかの実施態様において、Ｈｉｓタグを含むＶＩＳＴＡ  ＥＣＤは、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施態様では、ＨｉｓタグのないＶＩＳＴＡ  ＥＣＤは、配列番号１０のアミノ酸１−２０２のアミノ酸配列を有する（配列番号１０の全配列からその配列の最後の６つのＨｉｓ残基を差し引いたものに相当する）。
【００６３】
「ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子」という用語は、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ及び１又は複数の「融合パートナー」を含む分子を指す。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ及び融合パートナーは、共有結合されている（「融合されている」）。融合パートナーもポリペプチドである（「融合パートナーポリペプチド」）場合、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドは連続アミノ酸配列の一部であり得、融合パートナーポリペプチドはＶＩＳＴＡ  ＥＣＤのＮ末端又はＣ末端の何れかに結合され得る。そのような場合、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドは、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤと融合パートナーポリペプチドの両方をコードするコード配列から単一のポリペプチドとして翻訳され得る（「ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合タンパク質」）。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ及び融合パートナーは、例えばペプチド結合以外の化学結合などの他の手段を介して共有結合される。ポリペプチドを他の分子（例えば融合パートナー）に共有結合させる多くの既知の方法を用いることができる。他の実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ及び融合パートナーは、少なくとも１のアミノ酸又は化学部分から構成される「リンカー」を介して融合され得る。非限定的且つ例示的なＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子は、配列番号９の配列を含む。別の例示的なＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子は、配列番号１０のアミノ酸配列１−２０２に配列番号１１、１２又は１３のＦｃ配列を加えたものを含む。
【００６４】
いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ポリペプチドと融合パートナーは、共有結合していない。いくつかのそのような実施態様では、それらは、例えば結合対を用いて結合され得る。例示的な結合対には、限定されないが、ビオチン及びアビジン又はストレプトアビジン、並びに抗体及びその抗原等が含まれる。
【００６５】
例示的な融合パートナーには、限定されないが、免疫グロブリンＦｃ領域、アルブミン、及びポリエチレングリコールが含まれる。非限定的且つ例示的なＦｃ領域のアミノ酸配列は、配列番号１１から１３に示されている。
【００６６】
ここでも、特に明記しない限り、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤアミノ酸配列はヒトの配列に由来する。但し、いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤアミノ酸配列は、非ヒト哺乳動物のものに由来する。そのような実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤアミノ酸配列は、げっ歯類（マウス、ラット、ハムスターを含む）、ウサギ、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類の実験動物、哺乳類の家畜、哺乳類の競技用動物及び哺乳類のペットを含むがこれらに限定されない哺乳動物に由来し得る。非ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤを組み込んだＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子は、「非ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子」と呼ばれる。ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子と同様に、非ヒト融合分子は、融合パートナー、任意選択のリンカー、及びＶＩＳＴＡ  ＥＣＤを含んでもよい。このような非ヒト融合分子は、シグナルペプチドも含み得る。対照的に、「ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片」という用語は、全長ヒトＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端から１若しくは複数の残基が削除されている天然ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤであって、ヒトＰＳＧＬ−１に結合する能力を保持しているものを指す。
【００６７】
「非ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片」とは、全長ＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端から１若しくは複数の残基が削除されている非ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤであって、配列が由来する非ヒト動物のＰＳＧＬ−１に結合する能力を保持しているものを指す。対照的に、「ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤバリアント」とは、天然ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤと比べてアミノ酸の付加、削除及び置換を含み、ヒトＰＳＧＬ−１に結合する能力を保持しているＶＩＳＴＡ  ＥＣＤを指す。「非ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤバリアント」とは、その親ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤと比べてアミノ酸の付加、削除及び置換を含み、配列が由来する動物のＰＳＧＬ−１に結合する能力を保持しているＶＩＳＴＡ  ＥＣＤを指す。
【００６８】
本明細書に記載のいかなる実施態様においても、全長ＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ断片、ＶＩＳＴＡバリアント、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ、及びＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合タンパク質を含むがこれらに限定されないＶＩＳＴＡは、さらにタグも含み得る。非限定的且つ例示的なタグには、ＦＩＴＣ、Ｈｉｓ６、ビオチン、並びに当該技術分野で既知の他の標識及びタグが含まれる。
【００６９】
「シグナルペプチド」という用語は、ポリペプチドのＮ末端に位置し、ポリペプチドの哺乳動物細胞からの分泌を促進するアミノ酸残基の配列を指す。シグナルペプチドは、ポリペプチドが哺乳動物細胞から外へ輸送されると切断され、成熟タンパク質を形成する。シグナルペプチドは、天然又は合成であってもよく、それらが結合しているタンパク質と異種であっても同種であってもよい。例示的なシグナルペプチドには、限定されないが、ＰＳＧＬ−１及びＶＩＳＴＡのシグナルペプチドが含まれる。また、例示的なシグナルペプチドには、異種タンパク質由来のシグナルペプチドも含まれる。「シグナル配列」とは、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を指す。
【００７０】
「ベクター」という用語は、宿主細胞内でクローン化されたポリヌクレオチド又は増殖され得るポリヌクレオチドを含むように工学操作され得るポリヌクレオチドを記述するために使用される。ベクターは、以下の要素のうちの１又は複数を含んでもよい：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する１又は複数の調節配列（例えばプロモーター及び／又はエンハンサーなど）、及び／又は１若しくは複数の選択マーカー遺伝子（例えば抗生物質耐性遺伝子及び比色アッセイで使用される得る遺伝子、例えばβ−ガラクトシダーゼなど）。「発現ベクター」という用語は、宿主細胞内で目的のポリペプチドを発現させるために使用されるベクターを指す。
【００７１】
「宿主細胞」とは、ベクター又は単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、又はレシピエントである細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞である。例示的な真核細胞には、霊長類又は非霊長類動物細胞などの哺乳動物細胞；酵母などの真菌細胞；植物細胞；及び昆虫細胞が含まれる。非限定的且つ例示的な哺乳動物細胞には、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、並びに２９３及びＣＨＯ細胞とこれらの誘導体（それぞれ２９３−６Ｅ及びＤＧ４４細胞など）が含まれるが、これらに限定されない。
【００７２】
本明細書で使用される「単離された」という用語は、天然で通常一緒に見出される成分の少なくともいくつかから分離された分子、又は通常一緒に生成される成分の少なくともいくつかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離される場合、「単離された」という。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、ポリペプチドを含む上清をポリペプチドを産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」とみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが天然で通常見出される、より大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡなど）の一部ではない場合、又は、例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」という。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが天然でそのベクターに見出されない限り、「単離された」と呼ぶことができる。
【００７３】
「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒトを指す。いくつかの実施態様では、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類の実験動物、哺乳類の家畜、哺乳類の競技用動物及び哺乳類のペットを含むがこれらに限定されない他の哺乳類を治療する方法も提供される。場合によっては、「対象」又は「患者」は、疾患又は障害のための治療を必要とする対象又は患者を指す。
【００７４】
本明細書で使用される用語「試料」又は「患者試料」は、例えば、物理的、生化学的、化学的及び／又は生理学的特性に基づいて特徴付けられる及び／又は同定される細胞実体及び／又は他の分子実体を含有する、目的の対象から得られるか又は由来する材料を指す。例えば、語句「疾患試料」及びその変化形は、特徴付けられる細胞及び／又は分子実体を含むことが予想されるか又は知られている対象から得られた試料を指す。「組織又は細胞試料」は、対象又は患者の組織から得られた類似の細胞の集合を意味する。組織又は細胞試料の供給源は、新鮮な、凍結した及び／又は保存された臓器又は組織試標本又は生検又は吸引液由来の固形組織；血液又はあらゆる血液成分；痰、脳脊髄液、羊水、腹水又は間質液などの体液；対象の妊娠期又は発生期の任意の時点からの細胞であってよい。組織試料はまた、初代若しくは培養細胞又は細胞株であってもよい。任意選択的に、組織又は細胞試料は、疾患組織／臓器から得られる。組織試料は、自然界で該組織と自然に混在されない化合物、例えば防腐剤、抗凝血剤、緩衝剤、定着剤、栄養剤、抗生物質等を含む場合がある。
【００７５】
本明細書で使用される「参照試料」、「参照細胞」又は「参照組織」とは、本発明の方法又は組成物を使用して同定しようとしている疾患又は状態に罹患していないことが分かっているか又はそう考えられる供給源から得られた試料、細胞又は組織を指す。一実施態様では、参照試料、参照細胞又は参照組織は、本発明の組成物又は方法を使用して疾患又は状態が同定されている同じ対象又は患者の身体の健康な部分から得られる。一実施態様では、参照試料、参照細胞又は参照組織は、本発明の組成物又は方法を使用して疾患又は状態が同定されている対象又は患者ではない少なくとも１の個体の身体の健康な部分から得られる。いくつかの実施態様では、参照試料、参照細胞又は参照組織は、疾患若しくは状態を発症する前に又は疾患若しくは状態の早い段階で予め患者から得たものである。
【００７６】
状態は、その状態を有する患者の少なくともサブセットにおいて、又はその状態の１若しくは複数の動物モデルにおいてその状態の特徴が示されていたとき、「以前に［特徴］を有すると特徴付けられていた」。いくつかの実施態様において、状態のそのような特徴は、本発明の１又は複数のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを治療する患者において決定される必要はない。本方法及び／又は組成物を使用して治療される特定の患者における該特徴の存在は、患者がその特徴を有すると以前に特徴付けられた状態を有するとみなされるために決定されている必要はない。
【００７７】
「障害」又は「疾患」は、本発明の１又は複数のＰＳＧＬ−１アンタゴニストによる治療から利益を得るであろう任意の状態である。これには、哺乳動物が問題の障害にかかりやすくなるような病的状態を含む慢性及び急性の障害又は疾患が含まれる。本明細書において治療される障害の非限定的な例には、がんが含まれる。
【００７８】
「がん」という用語は、本明細書では、異常に高いレベルの増殖及び成長を示す細胞の文を指すのに使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも呼ばれる）、前悪性又は悪性の場合がある。がん細胞は、固形がん細胞（すなわち固形腫瘍の形成）又は白血病がん細胞であり得る。「がんの成長」という用語は、本明細書において、がんのサイズ又は程度の対応する増加もたらす、がんを含む細胞（単数又は複数）による増殖又は成長を指すのに使用される。
【００７９】
がんの例には、限定されないが、カルシノーマ、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれる。このようながんのより具体的且つ非限定的な例には、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟部肉腫、非小細胞肺がん、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜のがん、肝細胞がん、消化管がん、膵がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、大腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝細胞癌、脳がん、子宮内膜がん、精巣がん、胆管細胞癌、胆嚢癌、胃がん、メラノーマ、及び種々の頭頸部がんが含まれる。
【００８０】
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学的化合物である。化学療法剤の例には、限定されないが、チオテパ及びシトキサン（登録商標）シクロホスファミド；ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン等のアルキルスルホネート；ベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレデパ（meturedopa）、ウレデパ（uredopa）等のアジリジン類；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）を含むエチレンイミン類及びメチルアメラミン類（methylamelamines）；アセトゲニン類（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン、カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシン及びビセレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン類（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン（ranimnustine）等のニトロソ尿素類（nitrosureas）などのアルキル化剤；エンジイン抗生物質（例：カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えばAgnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: Engl. (1994)参照）；ジネマイシンＡを含むジネマイシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；並びにネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン類（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（登録商標）、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン類、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート等の葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン��のプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン等のピリミジンアナログなどの代謝拮抗剤；カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の副腎抑制薬（anti-adrenals）；フォリン酸（frolinic acid）などの葉酸補充薬（replenisher）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（aldophosphamide glycoside）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；  ビスアントレン；エダトレキセート（edatraxate）；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジクオン；エフロルニチン（elfornithine）；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（lonidainine）；メイタンシン及びアンサマイトシン類などのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモル（mopidanmol）；ニトラクリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（オレゴン州ユージーンのＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（特にＴ−２トキシン、ベルカリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばタキソール（登録商標）（パクリタキセル）（ニュージャージー州プリンストンのブリストルマイヤーズスクイブ社腫瘍領域）、アブラキサン（登録商標）（イリノイ州シャンバーグのアメリカンファーマシューティカルパートナーズ）（クレモホール不含）、（パクリタキセルのアルブミン操作（albumin-engineered）ナノ粒子製剤）、及びタキソテール（登録商標）（ドセタキセル）（フランス、アントニーのＲｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ジェムザール（登録商標）（ゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチン等の白金アナログ；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ナベルビン（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼロータ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ−１１）（５−ＦＵ及びロイコボリンとイリノテカンの治療レジメンを含むｊ）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン（オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）も含む）；細胞増殖を減少させる、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＥＧＦＲの阻害剤（例：エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、並びに上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が含まれる。
【００８１】
さらなる非限定的且つ例示的な化学療法剤には、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）など、がんに対してホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えばタモキシフェン（ノルバデックス（登録商標）（タモキシフェン）を含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びフェアストン（登録商標）（トレミフェン）；副腎でのエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）−イミダゾール類、アミノグルテチミド、メガス（Ｍｅｇａｓｅ）（登録商標）（メゲストロールアセテート）、アロマシン（登録商標）（エキセメスタン）、ホルメスタン、ファドロゾール、リビソル（Ｒｉｖｉｓｏｒ）（登録商標）（ボロゾール）、フェマラ（登録商標）（レトロゾール）、及びアリミデクス（登録商標）（アナストロゾール）；並びにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセリン等の抗アンドロゲン薬；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、接着細胞（abherant cell）増殖に関係するシグナル伝達経路における遺伝子（例えばＰＫＣ−アルファ、Ｒａｌｆ及びＨ−Ｒａｓ等）の発現を阻害するもの；ＶＥＧＦ発現阻害剤（例：アンギオザイム（登録商標）（リボザイム）など）及びＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；例えばアロベクチン（登録商標）ワクチン、ロイベクチン（登録商標）ワクチン、及びバキシド（Vaxid）（登録商標）ワクチン等、遺伝子治療ワクチンなどのワクチン；プロロイキン（登録商標）（ｒＩＬ−２）；ラルトテカン（登録商標）（トポイソメラーゼ１阻害剤）；アバレリックス（登録商標）（ｒｍＲＨ）；並びに上記の何れかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が含まれる。
【００８２】
「抗血管新生剤」又は「血管新生阻害剤」とは、血管新生、脈管形成又は望ましくない血管透過を直接的又は間接的に阻害する、低分子量の物質、ポリヌクレオチド（例えば阻害ＲＮＡ（ＲＮＡｉ又はｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離タンパク質、組換えタンパク質、抗体、又はそれらのコンジュゲート若しくは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤には、結合して血管新生因子又はその受容体の血管新生活性をブロックする薬剤が含まれる。例えば抗血管新生剤は、血管新生剤に対する抗体又は他のアンタゴニスト、例えばＶＥＧＦ−Ａ（例：ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））又はＶＥＧＦ−Ａ受容体（例：ＫＤＲ受容体又はＦｌｔ−１受容体）に対する抗体、ＶＥＧＦ−Ｃに対する抗体、グリベック（登録商標）（イマチニブメシル酸塩）などの抗ＰＤＧＦＲ阻害剤；ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する小分子（例：ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、スーテント（登録商標）／ＳＵ１１２４８（スニチニブリンゴ酸塩）、ＡＭＧ７０６、又は例えば国際公開第２００４／１１３３０４号に記載されているもの）である。また、抗血管新生剤には、天然の血管新生阻害剤、例えばアンジオスタチン、エンドスタチンなども含まれる。例えば、Klagsbrun及びD’Amore (1991) Annu. Rev. Physiol. 53:217-39;Streit及びDetmar (2003) Oncogene 22:3172-3179（例：悪性メラノーマにおける抗血管新生療法の一覧を示す表３）；Ferrara & Alitalo (1999) Nature Medicine 5(12): 1359-1364;Tonini et al. (2003) Oncogene 22:6549-6556（例：既知の抗血管新生因子の一覧を示す表２）；及びSato (2003) Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206（例：臨床試験で使用された抗血管新生剤の一覧を示す表１）を参照のこと。
【００８３】
本明細書中で使用される「増殖阻害剤」は、細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の増殖をｉｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで阻害する化合物又は組成物を指す。したがって、増殖阻害剤は、Ｓ期で細胞（ＶＥＧＦ発現細胞）の割合を有意に減少させるものである。増殖阻害剤の例には、限定されないが、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の段階で）ブロックする薬剤、例えばＧ１期停止及びＭ期停止を誘発する薬剤が含まれる。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ類（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン類、及びトポイソメラーゼＩＩ阻害剤（ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド及びブレオマイシン等）が含まれる。また、例えばＤＮＡアルキル化剤（タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル及びａｒａ−Ｃ等）など、Ｇ１期で停止させる薬剤は、Ｓ期停止にも波及する。さらなる情報は、Murakamiら,「Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs」, Mendelsohn及びIsrael編, The Molecular Basis of Cancer, 第1章, (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995）,例えばｐ．１３に見出すことができる。タキサン類（パクリタキセル及びドセタキセル）は、共にイチイに由来する抗がん剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（タキソテール（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、ブリストルマイヤーズスクイブ）の半合成アナログである。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の集合を促進し、細胞の有糸分裂を阻害する結果を招く脱重合を防ぐことによって微小管を安定化する。
【００８４】
「抗腫瘍性組成物」という用語は、少なくとも１の活性治療剤を含む、がんを治療するのに有用な組成物を指す。治療剤の例には、限定されないが、化学療法剤、増殖阻害薬剤、細胞傷害性剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤（免疫腫瘍剤とも呼ばれる）、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、及びがんを治療するための他の薬剤、例えば抗ＨＥＲ−２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例：チロシキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例：エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、血小板由来増殖因子阻害剤（例：グリベック（登録商標）（イマチニブメシル酸塩））、ＣＯＸ−２阻害剤（例：セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例：抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ヤーボイ（登録商標）））、ＰＤ−１阻害剤（例：抗ＰＤ１抗体、ＢＭＳ−９３６５５８）、ＰＤＬ１阻害剤（例：抗ＰＤＬ１抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ＰＤＬ２阻害剤（例：抗ＰＤＬ２抗体）、ＶＩＳＴＡ阻害剤（例：抗ＶＩＳＴＡ抗体）、サイトカイン、次の標的：ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ４、ＶＩＳＴＡ又はＶＥＧＦ受容体（単数又は複数）の１つ以上に結合するアンタゴニスト（例：中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、並びに他の生物活性剤及び有機化学剤等が含まれる。これらの組み合わせも本発明に含まれる。
【００８５】
「治療」とは、本明細書で使用される場合、例えば標的とする病的状態又は障害を減速させる（緩和する）ことを目的とするだけではなく、例えば病的状態又は障害の再発を阻止することも目的とするものである。「治療」とは、本明細書で使用される場合、ヒトを含む哺乳動物における疾患（本明細書では「障害」又は「状態」とも呼ばれる）のための治療薬の如何なる投与又は適用をも包含し、疾患若しくは疾患の進行を阻止すること、疾患若しくはその進行を阻止若しくは遅らせること、その発生を止めること、疾患を部分的若しくは完全に取り除くこと、疾患の１若しくは複数の症状を部分的若しくは完全に取り除くこと、又は損傷、欠損、欠陥のある機能を回復させるか若しくは修復すること、又は非効率的な過程を刺激することを含む。「治療」という用語には、任意の表現型特性の重症度を下げること、及び／又はその特性の発生率、程度若しくは可能性を減らすことも含まれる。治療を必要とする者には、既にその障害を有している者だけではなく、その障害の再発のリスクがある者、又はその障害を予防若しくは減速させるべき者が含まれる。
【００８６】
「有効量」又は「治療的有効量」という用語は、対象における疾患又は障害を治療するために有効な薬物の量を指す。いくつかの実施態様において、有効量とは、所望の治療的又は予防結果を達成するための、必要な投与で、且つ、必要な期間にわたる、有効な量を指す。本発明のＰＳＧＬ−１アンタゴニストの治療的有効量は、個体の病状、年齢、性別及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発するアンタゴニストの能力等の因子によって変わり得る。治療的有効量は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストの毒性又は有害作用よりも治療的に有益な作用が上回る量を含む。
【００８７】
「予防的有効量」とは、所望の予防的結果を達成するための、必要な投与における及び必要な期間にわたる有効な量を指す。必ずではないが通常、予防的用量は、疾患に先立って又は疾患の初期の段階で対象に使用されるため、治療的有効量よりも少ない。
【００８８】
「薬学的に許容される担体」とは、対象に投与するための「薬学的組成物」を一緒に含む治療剤と共に使用するための、当該技術分野で一般的な無毒の固体、半固体若しくは液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤補助剤又は担体を指す。薬学的に許容される担体は、使用される用量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容される担体は、使用される製剤に適している。例えば、治療剤が経口投与される場合、担体はゲルカプセルであってもよい。治療剤を皮下投与する場合、担体は理想的には皮膚に対して刺激性ではなく、注射部位の反応を引き起こさない。
【００８９】
「製造品」とは、少なくとも１の試薬、例えば疾患若しくは障害の治療のための医薬、又は本明細書に記載のバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む任意の製造物（例えばパッケージ又は容器）又はキットである。いくつかの実施態様では、製造物又はキットは、本明細書に記載の方法を実施するためのユニットとして宣伝、配布又は販売される。
【００９０】
治療的組成物及び方法
疾患を治療する方法
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ヒト及び他の哺乳動物を治療する方法における使用のために提供される。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストをヒト及び他の哺乳動物に投与することを含む疾患を治療する方法が提供される。
【００９１】
がんを治療する方法
いくつかの実施態様では、必要とする対象に有効量のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを投与することを含む、がんを治療又は予防する方法が提供される。
【００９２】
本発明者らは、ＰＳＧＬ−１をＶＩＳＴＡの結合パートナーとして同定した。ＶＩＳＴＡは、様々な免疫細胞（Ｔ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、単球、マクロファージ等）の表面にある受容体であり、能動免疫応答の阻害剤として機能する。がん及び／又は免疫細胞（例：Ｔ細胞及びＮＫ細胞）の表面でのＰＳＧＬ−１及び／又はＶＩＳＴＡの発現は、ＰＳＧＬ−１及び／又はＶＩＳＴＡを結合させることにより免疫応答を阻害する可能性がある。ＶＩＳＴＡ−ＰＳＧＬ−１相互作用の阻害は、がん細胞の免疫介在性死滅を促進する可能性がある。
【００９３】
いくつかの実施態様では、がんを有する対象にＰＳＧＬ−１アンタゴニストを投与することを含む、がんを治療する方法が提供される。いくつかの実施態様では、がんを治療するための、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストの使用が提供される。本明細書では、カルシノーマ、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含む、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストで治療することができる非限定的且つ例示的ながんが提供される。このようながんのより具体的且つ非限定的な例には、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟部肉腫、非小細胞肺がん、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜のがん、肝細胞がん、消化管がん、膵がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、大腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝細胞癌、脳がん、子宮内膜がん、精巣がん、胆管細胞癌、胆嚢癌、胃がん、メラノーマ、及び種々の頭頸部がんが含まれる。いくつかの実施態様において、肺がんは、非小細胞肺がん又は肺扁平上皮癌．である。いくつかの実施態様において、白血病は、急性骨髄性白血病又は慢性リンパ球性白血病である。いくつかの実施態様において、乳がんは、浸潤性乳癌である。いくつかの実施態様において、卵巣がんは、卵巣漿液性嚢胞腺癌である。いくつかの実施態様において、腎臓がんは、腎明細胞癌（kidney renal clear cell carcinoma）である。いくつかの実施態様において、結腸がんは、結腸腺癌である。いくつかの実施態様において、膀胱がんは、膀胱尿路上皮癌である。
【００９４】
いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体から選択される。いくつかの実施様態において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１抗体である。がんを治療するためのＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡの間の相互作用を阻害する非抗体タンパク質（ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡなど）又はその一部分（例：ＥＣＤ）であってもよく、場合によっては融合パートナーを融合分子の形態でさらに含む。様々な例示的なＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、以下のセクションでより詳細に説明される。
【００９５】
投与経路及び担体
様々な実施態様において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、皮下又は静脈内に投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心内、脳室内、気管内、頬側、直腸内、腹腔内、吸入、皮内、局所、経皮、及び髄腔内を含むがこれらに限定されない様々な経路で、又はその他、例えば移植によって、ｉｎ  ｖｉｖｏで投与され得る。主題の組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、坐薬、浣腸剤、注射液、吸入薬、及びエアロゾルを含むがこれらに限定されない、固体、半固体、液体又は気体状の調製物に製剤化することができる。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、遺伝子治療を使用して送達される。非限定的な例として、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストをコードする核酸分子を金微小粒子でコーティングし、例えば文献に記載されているように（例えばTang et al., Nature356:152-154 (1992)参照）、微粒子銃装置又は「遺伝子銃」によって皮内送達することができる。
【００９６】
様々な実施態様において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを含む組成物は、多種多様な薬学的に許容される担体を含む製剤で提供される（例えばGennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rded., Pharmaceutical Press (2000)参照）。ビヒクル、アジュバント、及び希釈剤を含む、様々な薬学的に許容される担体が利用可能である。さらに、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤、安定剤、湿潤剤等の様々な薬学的に許容される補助物質も利用可能である。非限定的且つ例示的な担体には、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びこれらの組み合わせが含まれる。
【００９７】
様々な実施態様において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを含む組成物は、それを植物油又は他の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル又はプロピレングリコール等の水性又は非水性溶媒に、所望であれば可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、及び防腐剤等の従来の添加剤と共に溶解、懸濁又は乳化させることによって、皮下注射を含む注射用に製剤化することができる。様々な実施態様において、組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の許容可能な加圧噴射剤を使用して、吸入用に製剤化することができる。組成物は、様々な実施態様において、生分解性又は非生分解性ポリマーなどを用いて、徐放性マイクロカプセルに製剤化することもできる。非限定的且つ例示的な生分解性製剤には、ポリ乳酸−グリコール酸ポリマーが含まれる。非限定的且つ非生分解性製剤には、ポリグリセリン脂肪酸エステルが含まれる。このような製剤を作製する特定の方法は、例えばＥＰ第１１２５５８４号に記載されている。
【００９８】
また、各々に１以上の用量のＰＳＧＬ−１アンタゴニストが入っている１又は複数の容器を含む医薬品包装も提供される。いくつかの実施態様では、単位用量が提供され、ここで単位用量は、１又は複数の追加の薬剤の有無にかかわらず、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを含む組成物の所定量を含む。いくつかの実施態様では、このような単位用量は、使い捨ての注射用事前充填シリンジで供給される。いくつかの実施態様では、単位用量に含まれる組成物は、生理食塩水、スクロース等；リン酸塩などの緩衝液等を含んでもよく、且つ／又は安定で効果的なｐＨ範囲内で製剤化される。或いは、いくつかの実施態様において組成物は、適切な液体、例えば滅菌水の添加により再構成され得る凍結乾燥粉末として提供され得る。いくつかの実施態様では、組成物は、スクロース及びアルギニンを含むがこれらに限定されない、タンパク質凝集を阻害する１又は複数の物質を含む。いくつかの実施態様では、本発明の組成物は、ヘパリン及び／又はプロテオグリカンを含む。
【００９９】
薬学的組成物は、特定の適応症の治療又は予防のために有効な量で投与される。治療的有効量は通常、治療される対象の体重、体調又は健康状態、治療される状態の範囲、又は治療される対象の年齢に依存する。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、用量当たり約５０μｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、用量当たり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。
【０１００】
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、用量当たり約１０ｍｇから約１０００ｍｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、用量当たり約２０ｍｇから約５００ｍｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、用量当たり約２０ｍｇから約３００ｍｇの範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、用量当たり約２０ｍｇから約２００ｍｇの範囲の量で投与され得る。
【０１０１】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト組成物は、必要に応じて対象に投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストの有効用量が対象に１回以上投与される。様々な実施態様では、有効用量のＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、１ヶ月に１回、１ヶ月に１回未満、例えば２ヶ月ごと、３ヶ月ごと又は６ヶ月ごとに対象に投与される。他の実施態様では、有効用量のＰＳＧＬ−１アンタゴニストが、月に１回以上、例えば２週間ごと、毎週、週２回、週３回、毎日、又は１日に複数回投与される。有効用量のＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、少なくとも１回、対象に投与される。いくつかの実施態様では、有効用量のＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、少なくとも１ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１年などの期間に複数回投与され得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、状態の１又は複数の症状を緩和するために必要に応じて対象に投与される。
【０１０２】
併用療法
疾患の治療のために、本発明によるＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、その機能断片も含め、他の生物学的に活性な物質又は他の治療手順と組み合わせて、必要とする対象に投与することができる。例えば、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、単独で又は他の治療方法と共に投与され得る。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、放射線療法などの他の治療方法の前、実質的に同時、又は後に提供され得る。
【０１０３】
がんの治療のために、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤又は抗腫瘍性組成物等の抗がん剤の１又は複数と併せて投与されてもよい。本発明の１又は複数のＰＳＧＬ−１アンタゴニストと組み合わせて使用され得る化学療法剤、増殖阻害剤、抗血管新生剤、及び抗腫瘍性組成物の非限定的な例は、本明細書の「定義」で提供される。
【０１０４】
特定の実施態様では、ＰＳＧＬ−１に特異的に結合するＰＳＧＬ−１アンタゴニスト（「ＰＳＧＬ−１結合アンタゴニスト」）、例えばＰＳＧＬ−１アンタゴニスト抗体は、ＶＩＳＴＡに特異的に結合するアンタゴニスト（「ＶＩＳＴＡ結合アンタゴニスト」）、例えばＶＩＳＴＡアンタゴニスト抗体と共に、免疫系の刺激が有益である疾患、例えばがん又は感染症を有する対象に投与される。この２つのアンタゴニストは、例えばＰＳＧＬ−１アンタゴニストと免疫腫瘍剤との組み合わせについて以下に記載されるように、同時に又は逐次に投与され得る。例えばがん又は感染症のために、ＰＳＧＬ−１結合アンタゴニスト及びＶＩＳＴＡ結合アンタゴニストによる治療に、１又は複数の追加の治療法、例えばチェックポイント調節薬を追加してもよい。
【０１０５】
特定の実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、別の治療と共に同時に又は逐次に、対象、例えばがんを有する対象に投与される。例えば、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、放射線療法、手術、又は化学療法、例えば標的化学療法又は免疫療法のうちの１つ以上と共に投与され得る。免疫療法、例えばがん免疫療法には、がんワクチン及び免疫腫瘍剤が含まれる。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１に結合する、例えばタンパク質、抗体、抗体断片又は小分子であってもよい。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であってもよい。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡに結合する、例えばタンパク質、抗体、抗体断片又は小分子であってもよい。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であってもよい。
【０１０６】
特定の実施態様では、がんを有する対象を治療する方法は、がんを有する対象にＰＳＧＬ−１アンタゴニスト（例えばＰＳＧＬ−１抗体又はＶＩＳＴＡ抗体）及び１又は複数の免疫腫瘍剤を投与することを含む。免疫療法、例えば免疫腫瘍剤を用いる療法は、対象における免疫応答を強化、刺激及び／又は上方制御するのに有効である。一態様では、免疫腫瘍剤とＰＳＧＬ−１アンタゴニストの投与は、がんの治療において、例えば腫瘍増殖の阻害において相乗効果を有する。
【０１０７】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストと別の薬剤（例えば免疫腫瘍剤）との組み合わせについての本明細書の説明としては、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＰＳＧＬ−１結合アンタゴニストである場合、免疫腫瘍剤はＶＩＳＴＡ結合アンタゴニストであり、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストがＶＩＳＴＡ結合アンタゴニストである場合、免疫腫瘍剤はＰＳＧＬ−１結合アンタゴニストである。
【０１０８】
一態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、免疫腫瘍剤の投与の前に逐次的に投与される。一態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、免疫腫瘍学剤と同時に投与される。一態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、免疫腫瘍剤の投与の後に逐次的に投与される。これらの２つの薬剤の投与は、例えば３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日若しくは１週間以上離れた時点で開始されることもあり、又は二番目の薬剤の投与が、第１の薬剤が投与されてから例えば３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日又は１週間以上後で開始されることもある。
【０１０９】
特定の態様において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤は同時に投与され、例えば３０分又は６０分にわたって同時に患者に注入される。ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、免疫腫瘍剤と共製剤化されていてもよい。
【０１１０】
免疫腫瘍剤には、例えば小分子薬、抗体若しくはその断片、又は他の生体分子若しくは小分子が含まれる。生物学的免疫腫瘍剤の例には、限定されないが、抗体、抗体断片、ワクチン及びサイトカインが含まれる。一態様において、抗体は、モノクローナル抗体である。特定の態様において、モノクローナル抗体は、ヒト化又はヒト抗体である。
【０１１１】
一態様において、免疫腫瘍剤は、Ｔ細胞上などの免疫細胞上の（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例：受容体又はリガンド）のアゴニスト又は（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例：受容体又はリガンド）アンタゴニストであり、双方とも抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす。特定の態様において、免疫腫瘍剤は、ＮＫ細胞などの自然免疫に関与する細胞上の（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例：受容体又はリガンド）のアゴニスト又は（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例：受容体又はリガンド）アンタゴニストであり、免疫腫瘍剤は自然免疫を高める。このような免疫腫瘍剤は大抵、免疫チェックポイント調節因子、例えば免疫チェックポイント阻害剤又は免疫チェックポイント刺激剤と呼ばれる。
【０１１２】
特定の実施態様において、免疫腫瘍剤は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーである刺激又は阻害分子を標的とする。例えば、免疫腫瘍剤は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）、Ｂ７−ＤＣ（ＰＤ−Ｌ２）、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５及びＢ７−Ｈ６を含む、膜結合リガンドのＢ７ファミリーのメンバーを標的とする（又はそれに特異的に結合する）薬剤、又はＢ７ファミリーのメンバーに特異的に結合する共刺激又は共阻害受容体であってもよい。免疫腫瘍剤は、膜結合リガンドのＴＮＦファミリーのメンバーを標的とする薬剤、又はそれに特異的に結合する共刺激又は共阻害受容体（例えばＴＮＦ受容体ファミリーメンバー）であってもよい。免疫腫瘍剤によって標的とされ得る例示的なＴＮＦ及びＴＮＦＲファミリーメンバーには、ＣＤ４０及びＣＤ４０Ｌ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ及びＮＧＦＲが含まれる。がんを治療するためにＰＳＧＬ−１アンタゴニスト剤と組わせて使用され得る免疫腫瘍剤は、例えば、上記のＢ７ファミリーメンバー、Ｂ７受容体ファミリーメンバー、ＴＮＦファミリーメンバー又はＴＮＦＲファミリーメンバー等のＩｇＳＦメンバーを標的とする抗体などの薬剤であってもよい。
【０１１３】
一態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、（ｉ）ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン−１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ−４及びＧＬ−１等、Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニスト（例：免疫チェックポイント阻害剤）、並びに（ｉｉ）Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３及びＣＤ２８Ｈ等、Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニストの１又は複数と共に投与される。
【０１１４】
一態様では、免疫腫瘍剤は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えばＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−s、ＶＥＧＦ、及び他の免疫抑制性サイトカイン）を阻害する薬剤（すなわちサイトカインのアンタゴニスト）であるか、又はＴ細胞活性化を刺激し、免疫応答を刺激するサイトカイン（例えばＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びＩＦＮα）のアゴニスト（例えばサイトカイン自体）である。
【０１１５】
例えばがん及び感染症の治療のため、免疫系を刺激するためにＰＳＧＬ−１アンタゴニストと組み合わせることができる他の薬剤には、ＮＫ細胞の阻害性受容体のアンタゴニスト又はＮＫ細胞の活性化受容体のアゴニストが含まれる。例えば、抗ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＫＩＲのアンタゴニストと組み合わせることができる。
【０１１６】
併用療法のためのさらなる他の薬剤には、ＲＧ７１５５を含むＣＳＦ−１Ｒアンタゴニスト抗体などのＣＳＦ−１Ｒアンタゴニストを含むがこれらに限定されない、マクロファージ又は単球を阻害又は枯渇させる薬剤が含まれる（国際公開第１１／７００２４号、国際公開第１１／１０７５５３号、国際公開第１１／１３１４０７号、国際公開第１３／８７６９９号、国際公開第１３／１１９７１６号、国際公開第１３／１３２０４４号）又はＦＰＡ００８（国際公開第１１／１４０２４９号；国際公開第１３１６９２６４号；（国際公開第１４／０３６３５７号）。
【０１１７】
免疫腫瘍剤にはまた、ＴＧＦ−βシグナル伝達を阻害する薬剤も含まれる。
【０１１８】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストと組み合わせることができる追加の薬剤には、腫瘍抗原提示を増強する薬剤、例えば樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド及びイミキモド、又は腫瘍細胞の免疫原性を高める療法（例：アントラサイクリン類）が含まれる。
【０１１９】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストと組み合わせることができるさらなる他の療法には、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇又はブロックする療法、例えばＣＤ２５に特異的に結合する薬剤が含まれる。
【０１２０】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストと組み合わせることができる別の療法は、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ又は一酸化窒素合成酵素等の代謝酵素を阻害する療法である。
【０１２１】
使用され得る別のクラスの薬剤には、アデノシンの形成を阻害するか、又はアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤が含まれる。
【０１２２】
がんの治療のためにＰＳＧＬ−１アンタゴニストと組み合わせることができる他の療法には、Ｔ細胞のアネルギー又は消耗を逆転／予防する療法、並びに腫瘍部位での自然免疫活性化及び／又は炎症を引き起こす療法が含まれる。
【０１２３】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、２つ以上の免疫腫瘍剤と組み合わされてもよく、例えば、次の療法：腫瘍抗原提示を増強する療法（例：樹状細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えばＣＴＬＡ−４及び／若しくはＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２経路を阻害することによって、並びに／又はＴｒｅｇ若しくは他の免疫抑制細胞を枯渇若しくはブロックすることにより負の免疫調節を阻害する療法；例えば、ＣＤ−１３７、ＯＸ−４０及び／若しくはＧＩＴＲ経路を刺激し、且つ／又はＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストを用いて正の免疫調節を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させる療法；例えばＣＤ２５のアンタゴニスト（例：ダクリズマブ）を使用するか、又はｅｘ  ｖｉｖｏでの抗ＣＤ２５ビーズ枯渇による、例えば腫瘍内のＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを枯渇させるか又は阻害する療法；腫瘍内の抑制性骨髄細胞の機能に影響を与える療法；腫瘍細胞の免疫原性を高める療法（例：アントラサイクリン類）；遺伝子改変細胞、例えばキメラ抗原受容体によって改変された細胞（ＣＡＲ−Ｔ療法）を含む養子Ｔ細胞又はＮＫ細胞移入；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ又は一酸化窒素合成酵素等の代謝酵素を阻害する療法；Ｔ細胞アネルギー又は消耗を逆転／予防する療法；腫瘍部位での自然免疫活性化及び／又は炎症を引き起こす療法；免疫刺激性サイトカインの投与又は免疫抑制性サイトカインの遮断のうちの１つ以上など、免疫経路の複数の要素を標的とする組み合わせ手法と組み合わされてもよい。
【０１２４】
例えば、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、正の共刺激受容体を結合する１若しくは複数のアゴニスト剤；腫瘍微小環境内の異なる免疫抑制経路を克服するアンタゴニストなど、阻害性受容体を介したシグナル伝達を減衰させる１若しくは複数のアンタゴニスト（ブロッキング剤）（例えばＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ２相互作用をブロックする）；Ｔ細胞などの抗腫瘍免疫細胞の頻度を全身的に増加させ、（例えばＣＤ２５を阻害することにより）Ｔｒｅｇを枯渇又は阻害する１若しくは複数の薬剤；ＩＤＯなどの代謝酵素を阻害する１若しくは複数の薬剤；Ｔ細胞アネルギー又は消耗を逆転／予防する１若しくは複数の薬剤；及び腫瘍部位での自然免疫活性化及び／又は炎症を引き起こす１若しくは複数の薬剤と共に使用することができる。
【０１２５】
一実施態様では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体などのＣＴＬＡ−４アンタゴニストである。好適なＣＴＬＡ−４抗体には、例えばＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）又はトレメリムマブが含まれる。
【０１２６】
一実施態様では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アンタゴニストＰＤ−１抗体などのＰＤ−１アンタゴニストである。好適なＰＤ−１抗体には、例えばＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペンブロリズマブ）又はＭＥＤＩ−０６８０（ＡＭＰ−５１４；国際公開第２０１２／１４５４９３号）が含まれる。また、免疫腫瘍剤には、ピディリズマブ（ＣＴ−０１１），も含まれ得るが、ＰＤ−１結合に対するその特異性には疑問がある。ＰＤ−１受容体を標的とする別のアプローチは、ＡＭＰ−２２４とも呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）の細胞外ドメインで構成される組換えタンパク質である。
【０１２７】
一実施態様では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アンタゴニストＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１アンタゴニストである。好適なＰＤ−Ｌ１抗体には、例えばＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｇ７４４６；国際公開第２０１０／０７７６３４号）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ−９３６５５９（国際公開第２００７／００５８７４号）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（国際公開第２０１３／７９１７４号）又はｒＨｉｇＭ１２Ｂ７が含まれる。
【０１２８】
一実施態様では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アンタゴニストＬＡＧ−３抗体などのＬＡＧ−３アンタゴニストである。好適なＬＡＧ３抗体には、例えばＢＭＳ−９８６０１６（国際公開第１０／１９５７０号、国際公開第１４／０８２１８号）、又はＩＭＰ−７３１又はＩＭＰ−３２１（国際公開第０８／１３２６０１号、国際公開第０９／４４２７３号）が含まれる。
【０１２９】
一実施態様では免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アゴニストＣＤ１３７抗体などのＣＤ１３７（４−１ＢＢ）アゴニストである。好適なＣＤ１３７抗体には、例えばウレルマブ又はＰＦ−０５０８２５６６（国際公開第１２／３２４３３号）が含まれる。
【０１３０】
一実施態様では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アゴニストＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲアゴニストである。好適なＧＩＴＲ抗体には、例えばＴＲＸ−５１８（国際公開第０６／１０５０２１号、国際公開第０９／００９１１６号）、ＭＫ−４１６６（国際公開第１１／０２８６８３号）又は国際公開第２０１５／０３１６６７号に開示されているＧＩＴＲ抗体が含まれる。
【０１３１】
一実施態様では免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アゴニストＯＸ４０抗体などのＯＸ４０アゴニストである。好適なＯＸ４０抗体には、例えばＭＥＤＩ−６３８３、ＭＥＤＩ−６４６９又はＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；国際公開第０６／０２９８７９号）が含まれる。
【０１３２】
一実施態様では免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アゴニストＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アゴニストである。特定の実施態様では、免疫腫瘍剤は、アンタゴニストＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アンタゴニストである。好適なＣＤ４０抗体には、例えばルカツムマブ（ＨＣＤ１２２）、ダセツズマブ（ＳＧＮ−４０）、ＣＰ−８７０，８９３又はＣｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４が含まれる。
【０１３３】
一実施態様では免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、アゴニストＣＤ２７抗体などのＣＤ２７アゴニストである。好適なＣＤ２７抗体には、例えばバルリルマブ（varlilumab）が含まれる。
【０１３４】
一実施態様では免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）（国際公開第１１／１０９４００号）である。
【０１３５】
一実施態様では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、リリルマブなどのＫＩＲアンタゴニストである。
【０１３６】
一実施態様では免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、ＩＤＯアンタゴニストである。好適なＩＤＯアンタゴニストには、例えばＩＮＣＢ−０２４３６０（（国際公開第２００６／１２２１５０号、（国際公開第０７／７５５９８号、国際公開第０８／３６６５３号、国際公開第０８／３６６４２号）、インドキシモド、ＮＬＧ−９１９（ＷＯ０９／７３６２０、国際公開第０９／１１５６６５２号、国際公開第１１／５６６５２号、国際公開第１２／１４２２３７号）又はＦ００１２８７が含まれる。
【０１３７】
一実施態様では免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、例えばＴＬＲ２／４アゴニスト（例：無菌化ウシ型結核菌（Bacillus Calmette-Guerin））；ＴＬＲ７アゴニスト（例：ヒルトノール（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ）又はイミキモド）；ＴＬＲ７／８アゴニスト（例：レシキモド）；又はＴＬＲ９アゴニスト（例：ＣｐＧ７９０９）である。
【０１３８】
一実施態様では、免疫系の刺激から利益を得る可能性のある疾患、例えばがん又は感染症を有する対象は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト及び免疫腫瘍剤の対象への投与により治療され、ここで免疫腫瘍剤は、ＴＧＦ−β阻害剤、例えばＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７又はＩＭＣ−ＴＲ１である。
【０１３９】
例示的なＰＳＧＬ−１アンタゴニスト
いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体から選択される。いくつかの実施様態において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１抗体である。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡ抗体である。がんを治療するためのＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１とＶＩＳＴＡの間の相互作用を阻害する非抗体タンパク質（ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡなど）又はその一部分（例：ＥＣＤ）であってもよく、場合によっては融合パートナーを融合分子の形態でさらに含む。また、このアンタゴニストは、他の実施態様では、小分子又は低分子ペプチドでもあり得る。
【０１４０】
ＰＳＧＬ−１抗体及びＶＩＳＴＡ抗体
いくつかの実施態様では、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０で、例えばｐＨ６．０でＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックする抗体が提供される。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１−媒介性シグナル伝達を阻害する抗体が提供される。いくつかの実施態様では、該抗体は、ＰＳＧＬ−１抗体である。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合する。いくつかの実施様態では、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡに対する結合を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＶＩＳＴＡ媒介性シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１媒介性シグナル伝達を阻害する。
【０１４１】
いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１、例えばｈｕｍＰＳＧＬ−１に対して≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ−１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ−１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１、例えばｈｕｍＰＳＧＬ−１に対して、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０で、例えばｐＨ６．０で、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ−１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ−１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０１４２】
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される特徴を有するＰＳＧＬ−１抗体は、ＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１に対する結合を少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、９０％又は１００％阻害する。
【０１４３】
いくつかの実施態様では、抗体は、複数の種由来のＰＳＧＬ−１に結合する。例えばいくつかの実施態様では、抗体は、ヒトＰＳＧＬ−１に結合し、また、マウス、ラット、イヌ、モルモット及びカニクイザルから選択される少なくとも１の哺乳動物のＰＳＧＬ−１にも結合する。
【０１４４】
いくつかの実施態様では、抗体は、ＶＩＳＴＡ抗体である。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１への結合を阻害する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡ媒介性シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＰＳＧＬ−１−媒介性シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施態様において、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡ、例えばヒトＩＳＴＡに対して≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ−１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ−１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの実施態様において、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡ、例えばヒトＶＩＳＴＡに対して、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０で、例えばｐＨ６．０で、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ−１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ−１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０１４５】
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される特徴を有するＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡのＰＳＧＬ−１に対する結合を少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、９０％又は１００％阻害する。
【０１４６】
いくつかの実施態様では、抗体は、複数の種由来のＶＩＳＴＡに結合する。例えばいくつかの実施態様では、抗体は、ヒトＶＩＳＴＡに結合し、また、マウス、ラット、イヌ、モルモット及びカニクイザルから選択される少なくとも１の哺乳動物のＶＩＳＴＡにも結合する。
【０１４７】
いくつかの実施態様では、多重特異性抗体が提供される。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体が提供される。非限定的且つ例示的な二重特異性抗体には、第１の抗原に結合する重鎖／軽鎖の組み合わせを含む第１のアームと第２の抗原に結合する重鎖／軽鎖の組み合わせを含む第２のアームとを含む抗体が含まれる。さらなる非限定的且つ例示的な多重特異性抗体は、二重可変領域抗体である。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害する第１のアームと、例えばＣＤ３を結合することによりＴ細胞を刺激する第２のアームとを含む。いくつかの実施態様において、第１のアームは、ＰＳＧＬ−１に結合する。
【０１４８】
ヒト化抗体
いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡ抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、治療用抗体への免疫応答を引き起こし、治療効果の低下を招く可能性のある、非ヒト抗体へのヒト免疫応答（ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答など）を低減又は排除するため、治療用分子として有用である。
【０１４９】
抗体は、任意の方法でヒト化することができる。    ヒト化の非限定的且つ例示的な方法には、例えば米国特許第５５３０１０１号；同第５５８５０８９号；同第５６９３７６１号：同第５６９３７６２号；同第６１８０３７０号；Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-27 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534-36 (1988)；及び米国特許出願公開第２００９／０１３６５００号に記載されている方法を含む。
【０１５０】
上記のように、ヒト化抗体は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１のアミノ酸が、ヒトフレームワーク領域内の対応する位置からのアミノ酸で置換されている抗体である。いくつかの実施態様では、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１５又は少なくとも２０のアミノ酸は、１又は複数のヒトフレームワーク領域内の１又は複数の対応する位置からのアミノ酸で置換される。
【０１５１】
いくつかの実施態様では、置換に使用される対応するヒトアミノ酸のいくつかは、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域からのものである。すなわち、このようないくつかの実施態様では、１又は複数の非ヒトアミノ酸を、第１のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えるか、又は第１のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードすることができ、１又は複数の非ヒトアミノ酸は、第２のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えるか、又は第２のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードすることができ、１又は複数の非ヒトアミノ酸は、第３のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えるか、又は第３のヒト免疫ブロブリン遺伝子等によってコードすることができる。さらに、いくつかの実施態様では、単一のフレームワーク領域、例えばＦＲ２の置換に使用される、対応するヒトアミノ酸の全てが同じヒトフレームワークからである必要はない。但し、いくつかの実施態様では、置換に使用される、対応するヒトアミノ酸は全て、同じヒト抗体からであるか、又は同じヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる。
【０１５２】
いくつかの実施態様では、抗体は、１又は複数のフレームワーク領域全体を対応するヒトフレームワーク領域で置換することによりヒト化される。いくつかの実施態様では、置換される非ヒトフレームワーク領域に対して最高レベルの相同性を有するヒトフレームワーク領域が選択される。いくつかの実施態様では、このようなヒト化抗体は、ＣＤＲ移植抗体である。
【０１５３】
いくつかの実施態様では、ＣＤＲ移植に続いて、１又は複数のフレームワークアミノ酸は、マウスフレームワーク領域の対応するアミノ酸に戻される。いくつかの実施態様では、このような「逆突然変異」は、１又は複数のＣＤＲの構造に寄与しているようであり、且つ／又は抗原接触に関与している可能性があり、且つ／又は抗体の全体的な構造的完全性に関与するようである１又は複数のマウスフレームワークアミノ酸を保持するために行われる。いくつかの実施態様では、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、１又は０の逆突然変異がＣＤＲ移植後の抗体のフレームワーク領域に対して行われる。
【０１５４】
いくつかの実施態様では、ヒト化抗体はまた、ヒト重鎖可変領域及び／又はヒト軽鎖可変領域を含む。
【０１５５】
キメラ抗体
いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体又はＶＩＳＴＡ抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体又はＶＩＳＴＡ抗体は、少なくとも１の非ヒト可変領域と、少なくとも１のヒト定常領域とを含む。このようないくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体又はＶＩＳＴＡ抗体の可変領域の全てが非ヒト可変領域であり、ＰＳＧＬ−１抗体又はＶＩＳＴＡ抗体の定常領域の全てがヒト定常領域である。いくつかの実施態様では、キメラ抗体の１又は複数の領域は、マウス可変領域である。キメラ抗体のヒト定常領域は、それが置き換える非ヒト定常領域（もしあれば）と同じアイソタイプである必要はない。キメラ抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号；及びMorrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-55 (1984)で論じられている。
【０１５６】
ヒト抗体
いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体又はＶＩＳＴＡ抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、任意の適切な方法で作製され得る。非限定的且つ例示的な方法には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体の作製が含まれる。例えばJakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551-55 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-8 (1993); Lonberg et al., Nature 368: 856-9 (1994)；並びに米国特許第５５４５８０７号；同第６７１３６１０号；同第６６７３９８６号；同第６１６２９６３号；同第５５４５８０７号；同第６３００１２９号；同第６２５５４５８号；同第５８７７３９７号；同第５８７４２９９号；及び同第，５４５８０６号を参照されたい。
【０１５７】
非限定的且つ例示的な方法には、ファージディスプレイライブラリーを使用してヒト抗体を作製することも含まれる。例えばHoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227: 381-8 (1992); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-97 (1991)；及び国際公開第９９／１０４９４号を参照されたい。
【０１５８】
ヒト抗体定常領域
いくつかの実施態様では、本明細書に記載のヒト化、キメラ又はヒト抗体は、１又は複数のヒト定常領域を含む。いくつかの実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４を含む。いくつかの実施態様では、抗体又はＦｃ融合パートナーは、例えばＩｇＧ１定常領域にＣ２３７Ｓ突然変異を含む。例えば、配列番号１７を参照されたい。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。いくつかのこのような実施態様では、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６９００２９２号に記載されているような、Ｐ３３１Ｓ突然変異を含む。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのこのような実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ突然変異を含む。例えば、Angal et al. Mol. Immunol. 30(1): 105-108 (1993)を参照されたい。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【０１５９】
重鎖定常領域の選択により、抗体がｉｎ  ｖｉｖｏ．エフェクター機能を有するかどうかを決定できる。いくつかの実施態様では、このようなエフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を含み、抗体が結合している細胞の死滅をもたらし得る。通常、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３重鎖を含む抗体は、エフェクター機能を有する。
【０１６０】
いくつかの実施態様では、エフェクター機能は、望ましいものではない。いくつかの実施態様では例えば、エフェクター機能は、炎症状態及び／又は自己免疫障害の治療において望ましくない場合がある。いくつかのこのような実施態様では、ヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域が選択されるか又は工学操作される。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ４定常領域は、Ｓ２４１Ｐ突然変異を含む。
【０１６１】
抗体の例示的な特性
ＰＳＧＬ−１抗体の例示的な特性
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０で、例えばｐＨ６．０でＰＳＧＬ−１へ結合し、ＰＳＧＬ−１媒介性シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡに対する結合をブロックする。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、９０％又は１００％ブロックする。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１抗体は、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、又は１ｎＭ未満の結合親和性（Ｋｄ）でＰＳＧＬ−１に結合する。いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体の、無関係な非ＰＳＧＬ−１タンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定された抗体のＰＳＧＬ−１への結合の約１０％未満である。いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体は、異なる種由来のＰＳＧＬ−１の中で保存されているＰＳＧＬ−１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１抗体は、ｈｕｍＰＳＧＬ−１に結合するヒト又はヒト化ＰＳＧＬ−１抗体と同じエピトープに結合する。
【０１６２】
ＶＩＳＴＡ抗体の例示的な特性
いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０で、例えばｐＨ６．０でＶＩＳＴＡへ結合し、ＰＳＧＬ−１媒介性シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡに対する結合をブロックする。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を少なくとも２５％、５０％、７５％、８０％、９０％又は１００％ブロックする。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、又は１ｎＭ未満の結合親和性（Ｋｄ）でＶＩＳＴＡに結合する。いくつかの実施態様において、ＶＩＳＴＡ抗体の、無関係な非ＶＩＳＴＡタンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定された抗体のＶＩＳＴＡへの結合の約１０％未満である。いくつかの実施態様において、ＶＩＳＴＡ抗体は、異なる種由来のＶＩＳＴＡの中で保存されているＶＩＳＴＡのエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、ヒトＶＩＳＴＡに結合する、ヒト又はヒト化ＶＩＳＴＡ抗体と同じエピトープに結合する。
【０１６３】
抗体コンジュゲート
いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡ抗体は、標識にコンジュゲートしている。本明細書で使用される場合、標識は、抗体の検出を容易にし、且つ／又は抗体が結合する分子の検出を容易にする部分である。非限定的且つ例示的な標識には、限定されないが、放射性同位体、蛍光基、酵素基、化学発光基、ビオチンタグ、金属結合タグ等が含まれる。当業者は、当該技術分野で目的の用途に従って適切なラベルを選択することができる。
【０１６４】
いくつかの実施態様では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで化学的方法を使用して、標識を抗体に結合させる。コンジュゲーションの非限定的且つ例示的な方法は、当該技術分野で知られており、例えばＴｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｅｓ（旧Ｐｉｅｒｃｅ；イリノイ州ロックフォード）、Ｐｒｏｚｙｍｅ（カリフォルニア州ヘイワード）、ＳＡＣＲＩ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（カナダ、カルガリー）、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ（ノースカロライナ州ローリー）等の一般に利用可能なサービス、方法及び／又は試薬を含む。いくつかの実施態様では、標識がポリペプチドである場合、該標識は、抗体鎖に融合された標識を含むポリペプチドを生成するために、少なくとも１の抗体鎖を有する同じ発現ベクターから発現され得る。
【０１６５】
ＰＳＧＬ−１及びＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ、ＥＣＤ融合分子、並びに低分子ペプチド
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合を阻害するＰＳＧＬ−１ポリペプチド、例えば全長ＰＳＧＬ−１又はＰＳＧＬ−１の断片などである。いくつかの実施様態において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）である。いくつかの実施様態において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、全長ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤである。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、それが由来する全長ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤアミノ酸配列の、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％を含むＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片である。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、それが由来する全長ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤと、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を含むＰＳＧＬ−１  ＥＣＤバリアントである。他の実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、非ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤからのものであり、全長、断片又はバリアントの何れかであり得る。
【０１６６】
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１又はＰＳＧＬ−１断片は、少なくとも１の融合パートナーと組み合わされる。したがって、いくつかのこのような実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、全長ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤと少なくとも１の融合パートナーとを含み、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子を形成し得る。いくつかの実施態様では、該融合分子のＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ部分は、それが由来する全長ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤアミノ酸配列の、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％を含むＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片である。いくつかの実施態様では、該融合分子のＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ部分は、それが由来する全長ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤと、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を含むＰＳＧＬ−１  ＥＣＤバリアントである。他の実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ成分は、非ヒトＰＳＧＬ−１  ＥＣＤからのものであり、全長、断片又はバリアントの何れかであり得る。上記の融合分子の実施態様の何れにおいても、融合パートナーは、免疫グロブリンＦｃ分子（例えばヒトＦｃ分子）か、又はいくつかの実施態様において配列番号１１−１３から選択される配列を有するＦｃを含んでもよい。他の実施態様において、融合パートナーは、アルブミン又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの異なる分子であってもよい。いくつかの実施態様では、１又は複数の融合パートナーは、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤに結合され得る。いくつかの実施態様では、融合パートナー（単数及び複数）は、ＥＣＤのＣ末端に結合しているが、アミノ酸側鎖上又はＮ末端でなど、他の結合も可能である。融合パートナーのＰＳＧＬ−１  ＥＣＤへの結合は、直接的（すなわち共有結合による）であっても、又はリンカーを介して間接的であってもよい。リンカーは、共有結合又は非共有結合のいずれかで融合パートナーをＥＣＤに連結する役割を果たす、例えば少なくとも１の介在アミノ酸又は他の化学部分を含んでもよい。
【０１６７】
上記の実施態様の何れにおいても、ＰＳＧＬ−１ポリペプチドは、シグナル配列を含むか、又は成熟形態である（すなわちシグナル配列．を含まない）かの何れかである。シグナル配列は、天然のＰＳＧＬ−１分子からのものであっても、又は異なるタンパク質、例えば細胞培養におけるＰＳＧＬ−１ポリペプチドの発現を増強するために選択されたタンパク質からのものであってもよい。
【０１６８】
いくつかの実施態様において、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、配列番号１のアミノ酸配列１−２４１又は配列番号１４のアミノ酸配列１−２４１（それぞれ、シグナル配列を含むヒトアイソフォーム１及び２）を含み得る。他の実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、配列番号１のアミノ酸配列２３−２４１又は配列番号１４のアミノ酸配列２３−２４１又は配列番号２のアミノ酸配列１−２１９又は配列番号１５のアミノ酸配列１−２１９、又は配列番号３若しくは配列番号４若しくは配列番号１６若しくは配列番号１７（ヒトアイソフォーム１及び２、シグナル配列を含まない成熟型）のアミノ酸配列又は配列番号１８（別の例示的なＥＣＤ配列）を含み得る。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、上記アミノ酸配列のうちの１つから成っていてもよい。上記の場合の何れにおいても、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤは、上記のアミノ酸配列が直接的に、又はＦｃ、アルブミン若しくはＰＥＧ等のリンカーを介して間接的に融合パートナーに結合できるように、融合分子の一部であってもよい。例えば、アンタゴニストがＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子であるいくつかの実施態様では、融合分子は、上記配列のうちの１つに加えて配列番号１１−１３（免疫グロブリンＦｃ配列）の少なくとも１又はヒトＩｇＧ１からのＦｃを含み得る。ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ  Ｆｃ融合分子は、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤアミノ酸配列のＦｃアミノ酸配列への直接結合によって、又はリンカー（介在アミノ酸又はアミノ酸配列又は別の化学部分の何れか）を介して形成され得る。例えば配列番号１９は、後述の実施例で使用されるＰＳＧＬ−１  Ｆｃ分子において用いられるリンカーを提供する。追加のＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ  Ｆｃ融合分子は、T. Pouyani et al., Cell83: 333-343 (1995)に記載されている。
【０１６９】
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡとＰＳＧＬ−１との間の相互作用を阻害する全長ＶＩＳＴＡ又はＶＩＳＴＡの断片などのＶＩＳＴＡポリペプチドである。例えば、いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、全長ＶＩＳＴＡポリペプチドである。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）である。いくつかの実施様態において、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、全長ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤである。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤは、それが由来する全長ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤアミノ酸配列の、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％を含むＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片であり得る。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤは、それが由来する全長ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤと、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を含むＶＩＳＴＡ  ＥＣＤバリアントである。他の実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤは、非ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤからのものであり、全長、断片又はバリアントの何れかであり得る。
【０１７０】
いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ又はＶＩＳＴＡ断片は、少なくとも１の融合パートナーと組み合わされる。したがって、いくつかのこのような実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、全長ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤと少なくとも１の融合パートナーとを含み、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子を形成し得る。いくつかの実施態様では、該融合分子のＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ部分は、それが由来する全長ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤアミノ酸配列の、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％を含むＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片である。いくつかの実施態様では、該融合分子のＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ部分は、それが由来する全長ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤと、例えば少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を含むＶＩＳＴＡ  ＥＣＤバリアントである。他の実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ成分は、非ヒトＶＩＳＴＡ  ＥＣＤからのものであり、全長、断片又はバリアントの何れかであり得る。上記の融合分子の実施態様の何れにおいても、融合パートナーは、いくつかの実施態様において配列番号１１−１３から選択される配列を有する免疫グロブリンＦｃ分子（例えばヒトＦｃ分子）を含むことができる。他の実施態様において、融合パートナーは、アルブミン又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの異なる分子であってもよい。いくつかの実施態様では、１又は複数の融合パートナーは、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤに結合され得る。いくつかの実施態様では、融合パートナー（単数及び複数）は、ＥＣＤのＣ末端に結合しているが、アミノ酸側鎖上又はＮ末端でなど、他の結合も可能である。融合パートナーのＶＩＳＴＡ  ＥＣＤへの結合は、直接的（すなわち共有結合による）であっても、又はリンカーを介して間接的であってもよい。リンカーは、共有結合又は非共有結合のいずれかで融合パートナーをＥＣＤに連結する役割を果たす、例えば少なくとも１の介在アミノ酸又は他の化学部分を含んでもよい。
【０１７１】
上記の実施態様の何れにおいても、ＶＩＳＴＡポリペプチドは、シグナル配列を含むか、又は成熟形態である（すなわちシグナル配列．を含まない）かの何れかである。シグナル配列は、天然のＶＩＳＴＡ分子からのものであっても、又は異なるタンパク質、例えば細胞培養におけるＶＩＳＴＡポリペプチドの発現を増強するために選択されたタンパク質からのものであってもよい。
【０１７２】
いくつかの実施態様において、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤは、配列番号１０のアミノ酸配列１−２０２を含み得る。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤは、上記アミノ酸配列から成っていてもよい。上記の場合の何れにおいて、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤは、上記のアミノ酸配列が直接的に、又はＦｃ、アルブミン若しくはＰＥＧ等のリンカーを介して間接的に融合パートナーに結合できるように、融合分子の一部であってもよい。例えば、アンタゴニストがＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子であるいくつかの実施態様において、融合分子は、配列番号１０のアミノ酸配列１−２０２に加えて、配列番号１１−１３（免疫グロブリンＦｃ配列）の少なくとも１を含んでもよく、又は融合分子全体は、配列番号９のアミノ酸配列（例示的なＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ  Ｆｃ融合タンパク質）を含むか若しくはそれから成っていてもよい。ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ  Ｆｃ融合分子は、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤアミノ酸配列のＦｃアミノ酸配列への直接結合によって、又はリンカー（介在アミノ酸又はアミノ酸配列又は別の化学部分の何れか）を介して形成され得る。
【０１７３】
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、小分子又はペプチド、例えば低分子ペプチドであってもよい。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片のアミノ酸配列を含む低分子ペプチドであってもよい。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片のアミノ酸配列を含む低分子ペプチドであってもよい。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストは例えば３から２０、例えば３から１５又は３から１０のアミノ酸を有する低分子ペプチドであり、そのペプチドは直鎖でも環状でもよく、ＰＳＧＬ−１断片、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片、ＶＩＳＴＡ断片又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片、又はＰＳＧＬ−１断片、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ断片、ＶＩＳＴＡ断片若しくはＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ断片のバリアントを含む配列を含む。このようなＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡ断片のバリアントは、それが由来する天然の断片配列に対し、例えば少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％の配列同一性を有し得る。
【０１７４】
シグナルペプチド
いくつかの分泌タンパク質が大量に発現及び分泌するためには、異種タンパク質からのシグナルペプチドが望ましい場合がある。異種シグナルペプチドを使用することは、シグナルペプチドが分泌プロセス中にＥＲで除去されるため、得られる成熟ポリペプチドが変化しないままであるという点で有利あり得る。いくつかのタンパク質を発現及び分泌するために、異種シグナルペプチドの追加が必要になる場合がある。
【０１７５】
非限定的且つ例示的なシグナルペプチド配列は、例えば、シンガポール国立大学生化学部によって維持されているオンラインシグナルペプチドデータベースに記載されている。Choo et al., BMC Bioinformatics, 6: 249 (2005)；及び国際公開第２００６／０８１４３０号を参照されたい。
【０１７６】
共翻訳修飾及び翻訳後修飾
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１若しくはＶＩＳＴＡ抗体又はＰＳＧＬ−１若しくはＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ等のポリペプチドは、翻訳中又は翻訳後に、例えばグリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、又は抗体分子若しくは他の細胞リガンドへの結合によって差次的に修飾される。複数の化学修飾の何れも、臭化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼによる特異的な化学開裂；ＮＡＢＨ４；アセチル化；ホルミル化；酸化；還元；及び／又はツニカマイシンの存在下での代謝合成を含むがこれらに限定されない既知の技法によって実行され得る。
【０１７７】
本発明に包含される追加の翻訳後修飾には、例えばＮ−結合型又はＯ−結合型糖鎖；Ｎ末端又はＣ末端のプロセシング；化学部分のアミノ酸骨格への結合；Ｎ−結合型又はＯ−結合型糖鎖の化学修飾；及び細胞発現の結果としてのＮ末端メチオニン残基の付加又は削除が含まれる。
【０１７８】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストをコードする核酸分子
核酸分子が提供され、該核酸分子は、ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡ抗体など、本明細書に記載の抗体の１又は複数の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様では、核酸分子は、本明細書に記載の抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様では、核酸分子は、本明細書に記載の抗体の重鎖をコードすると軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施態様では、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。
【０１７９】
いくつかの実施態様では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとして、１つの核酸分子から、又は２つの別個の核酸分子から発現される。抗体がｓｃＦｖである場合などのいくつかの実施態様では、単一のポリヌクレオチドは、一緒に連結された重鎖と軽鎖の両方を含む単一のポリペプチドをコードする。
【０１８０】
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されると重鎖又は軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上述のように、リーダー配列は、天然の重又は軽鎖のリーダー配列であっても、別の異種リーダー配列であってもよい。
【０１８１】
ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ分子又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子を含むＰＳＧＬ−１の断片又はバリアントなど、及びＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ分子又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子を含むＶＩＳＴＡの断片又はバリアントなどのような、他のＰＳＧＬ−１アンタゴニストをコードする核酸も提供される。核酸分子は、当該技術分野で一般的な組換えＤＮＡ技術を使用して構築することができる。いくつかの実施態様では、核酸分子は、選択された宿主細胞内での発現に適した発現ベクターである。
【０１８２】
ポリペプチドの発現及び生産
ベクター
本明細書に記載の抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。このようなベクターには、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター等が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様では、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列と軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列とを含む。いくつかの実施態様では、重鎖及び軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。いくつかの実施態様において、重鎖及び軽鎖は、例えば抗体がｓｃＦｖである場合などは、単一のポリペプチドの一部として発現される。
【０１８３】
いくつかの実施態様では、第１のベクターは重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施態様では、第１のベクター及び第２のベクターは、同様の量（同様のモル量又は同様の質量量など）で宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施態様では、第１のベクターと第２のベクターの５：１から１：５の間のモル比又は質量比が、宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施態様では、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターに対して１：１から１：５の間の質量比が用いられる。いくつかの実施態様では、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターに対して１：２の質量比が用いられる。
【０１８４】
いくつかの実施態様では、ＣＨＯ若しくはＣＨＯ由来細胞又はＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されたベクターが選択される。例示的なこのようなベクターは、例えばRunning Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)に記載されている。
【０１８５】
いくつかの実施態様では、ヒトを含む動物におけるＰＳＧＬ−１アンタゴニストのｉｎ  ｖｉｖｏ発現のためにベクターが選択される。いくつかのこのような実施態様において、ポリペプチド又はポリペプチドの発現は、組織特異的に機能するプロモーター（単数又は複数）の制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターは、例えば国際公開第２００６／０７６２８８号に記載されている。
【０１８６】
宿主細胞
様々な実施態様において、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／又は軽鎖は、細菌細胞などの原核細胞内で、又は真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞及び哺乳類細胞などの真核細胞内で発現され得る。このような発現は、例えば当該技術分野で既知の手順に従って実施され得る。ポリペプチドを発現させるために使用することができる例示的な真核細胞には、ＣＯＳ  ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３−６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ−Ｓ及びＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；並びにＮＳＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／又は軽鎖は、酵母内で発現され得る。例えば米国特許出願公開第２００６／０２７００４５号を参照のこと。いくつかの実施態様では、特定の真核生物宿主細胞は、ＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡ抗体の重鎖及び／又は軽鎖に所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施態様では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞内で産生される同じポリペプチドよりも高レベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。
【０１８７】
１又は複数の核酸の所望の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染等を含むがこれらに限定されない任意の方法によって達成され得る。非限定的且つ例示的な方法は、例えばSambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rded. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)に記載されている。核酸は、任意の適切な方法に従って、所望の宿主細胞に一過性に又は安定にトランスフェクトされ得る。
【０１８８】
いくつかの実施態様では、１又は複数のポリペプチドは、任意の適切な方法に従って、ポリペプチドをコードする１又は複数の核酸分子で工学操作又はトランスフェクトされた動物においてｉｎ  ｖｉｖｏで生産され得る。
【０１８９】
ポリペプチドの精製
本明細書に記載の抗体は、任意の適切な方法に従って、精製され得る。当該方法には、限定されないが、親和性マトリックス又は疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が含まれる。適切な親和性リガンドには、抗体が結合する抗原及び／又はエピトープ、並びに抗体定常領域に結合するリガンドが含まれる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ又は抗体アフィニティーカラムを使用して、定常領域に結合し、抗体を精製することができる。
【０１９０】
いくつかの実施態様では、疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えばブチル又はフェニルカラムも、いくつかのポリペプチドを精製するために使用される。ポリペプチドを精製する多くの方法が、当該技術分野で既知である。
【０１９１】
ポリペプチドの無細胞生産
いくつかの実施態様では、本明細書に記載の抗体は、無細胞系において生産される。非限定的且つ例示的な無細胞系は、例えばSitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv.21: 695-713 (2003)に記載されている。
【０１９２】
ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法が提供される。いくつかの実施態様では、方法は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０で候補分子（すなわちアンタゴニスト活性について試験されている分子）をＶＩＳＴＡ、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子（まとめて「ＶＩＳＴＡ分子」という），と接触させることを含む。いくつかの実施態様では、方法は、候補分子／ＶＩＳＴＡ分子混合物をＰＳＧＬ−１、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子（まとめて「ＰＳＧＬ−１分子」という）と接触させることをさらに含む。いくつかの実施態様では、方法は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０で、候補分子をＰＳＧＬ−１分子と接触させ、その後候補分子／ＰＳＧＬ−１分子混合物をＶＩＳＴＡ分子と接触させることを含む。いくつかの実施態様では、方法は、候補分子をＶＩＳＴＡ分子及びＰＳＧＬ−１分子とほぼ同時に接触させることを含む。いくつかの実施態様では、方法は、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０又は６．０−７．０、例えばｐＨ６．０で、ＶＩＳＴＡ分子とＰＳＧＬ−１分子とを含む第１の組成物を形成し、その後候補分子を第１の組成物と接触させることを含む。当業者は、成分が互いに接触する順序がアッセイ設計に応じて変化し得ることを認識するであろう。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ分子、ＰＳＧＬ−１分子及び候補分子の接触は、酸性ｐＨ、又はｐＨ８．０未満、ｐＨ７．０未満、ｐＨ６．５未満若しくはｐＨ６．０未満のｐＨで、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０で起こる。該組成物のｐＨは、ｐＨ５．０−ｐＨ８．０、ｐＨ５．５−ｐＨ７．０、ｐＨ６．０−ｐＨ８又はｐＨ６．５−ｐＨ８であり得る。
【０１９３】
いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ分子は、全長ＶＩＳＴＡ、例えば細胞の表面に発現されるＶＩＳＴＡである。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ分子は、ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ又はＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ融合分子などの可溶性ＶＩＳＴＡである。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１分子は、全長ＰＳＧＬ−１、例えば細胞の表面に発現されるＰＳＧＬ−１である。いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１分子は、ＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ又はＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ融合分子などの可溶性ＰＳＧＬ−１である。
【０１９４】
いくつかの実施態様では、候補分子をＶＩＳＴＡ分子及び／又はＰＳＧＬ−１分子と接触させた後、ＶＩＳＴＡ分子に結合するＰＳＧＬ−１分子を検出するためのアッセイ（単数又は複数）を実施する。ＶＩＳＴＡ分子に結合するＰＳＧＬ−１分子を検出するための非限定的且つ例示的なアッセイには、ＥＬＩＳＡアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ（例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標））、フローサイトメトリーベースのアッセイ（例えば、１若しくは複数の成分がビーズに結合する場合、または細胞の表面に発現される場合）、増幅発光近接ホモジニアスアッセイ（ＡＬＰＨＡ）等が含まれる。タンパク質間結合を検出する方法は当該技術分野で知られており、当業者は適切なアッセイ方法を選択することができる。さらに、抗体（標識あり又はなし）、二次抗体（標識あり又はなし）、標識アッセイ成分（標識ＰＳＧＬ−１分子及び／又は標識ＶＩＳＴＡ分子などを含むがこれらに限定されない）等、必要に応じて様々な試薬が検出のために使用され得る。
【０１９５】
いくつかの実施態様では、ＰＳＧＬ−１アンタゴニストを同定する方法は、候補分子の存在下及び非存在下、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０、例えばｐＨ６．０でＶＩＳＴＡ分子／ＰＳＧＬ−１分子結合の程度を比較することを含む。いくつかの実施態様において、候補分子の非存在下での結合と比較して、候補分子の存在下でＶＩＳＴＡ分子／ＰＳＧＬ−１分子の結合が減少する場合、候補分子はＰＳＧＬ−１アンタゴニストである。いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ分子とＰＳＧＬ−１分子との間の結合は、候補分子の存在下で少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％減少する。いくつかのこのような実施態様では、候補分子はＰＳＧＬ−１アンタゴニストである。
【０１９６】
候補分子の例示的な種類には、限定されないが、抗体、ペプチド、小分子、及びアプタマーが含まれる。いくつかの実施態様では、候補分子は、ＶＩＳＴＡに結合することが知られている抗体（すなわちＶＩＳＴＡ抗体）である。いくつかの実施態様では、候補分子は、ＰＳＧＬ−１に結合することが知られている抗体（すなわちＰＳＧＬ−１抗体）である。
【０１９７】
いくつかの実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体がＰＳＧＬ−１アンタゴニストであるかどうかを判定する方法が提供される。このような実施態様では、ＶＩＳＴＡ抗体は、候補分子として上記のアッセイにおいて試験される。いくつかの実施態様では、例えば酸性ｐＨ、例えばｐＨ＜７．０、≦６．８、≦６．５若しくは≦６．３で、又はｐＨ５．５−６．５、６．０−６．５、６．５−７．０若しくは６．０−７．０で、例えばｐＨ６．０でＶＩＳＴＡ抗体がＰＳＧＬ−１のＶＩＳＴＡへの結合をブロックするかどうかを判定する方法が提供される。いくつかの実施態様において、当該方法は、ＶＩＳＴＡ抗体をＶＩＳＴＡ分子及びＰＳＧＬ−１分子と接触させることと、該抗体の存在下で、例えば上記及び本明細書に記載のように、ＶＩＳＴＡ分子のＰＳＧＬ−１分子への結合を検出することとを含む。
【０１９８】
製造品
いくつかの実施態様では、バイオマーカー（例えばＰＳＧＬ−１又はＶＩＳＴＡ）の検出又は上記の障害の治療、予防及び／若しくは診断に有用な材料を含む製造品又はキットが提供される。製造品は、容器と容器上の又は容器に付随するラベル又は添付文書を含む。適切な容器には、例えばボトル、バイアル、シリンジ等が含まれる。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。いくつかの実施態様では、容器は、状態の治療、予防、及び／又は診断に有効な、単独の又はその他の組成物と併用される組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有することができる（例えば、容器は皮下注射針により穿孔可能なストッパーを有する静脈内溶液のバッグ又はバイアルであってよい）。ラベル又は添付文書は、組成物を選択肢の状態の治療のために使用するよう指示するものである。いくつかの実施態様では、製造品は、（ａ）本発明のＰＳＧＬ−１アンタゴニストを含む組成物を中に収容する第１の容器、及び（ｂ）さらなる細胞傷害性剤を含む組成物を中に収容する第２の容器を含んでもよい。製造品は、組成物が特定の状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含んでもよい。代替的に又は追加的に、製造品は、薬学的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液を含む第２（又は第３）の容器をさらに含んでもよい。製造品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含めた、商業的及び使用者の観点から望ましいその他の材料をさらに含んでもよい。
【０１９９】
いくつかの実施態様では、本発明の分子は、単独で、又はキットとして他の治療化合物と組み合わせてパッケージ化することができる。一実施態様では、治療化合物は、抗がん剤である。別の実施態様では、治療化合物は、免疫抑制剤である。キットには、粉末形態を再構成するためのバイアル、注射用シリンジ、カスタマイズされたＩＶ送達系、吸入器等、患者への単位用量の投与を支援する任意選択の構成要素を含めることができる。さらに、単位用量キットは、組成物の調製及び投与のための指示書を含むことができる。該キットは、１名の患者のための１回使用の単位用量として、又は１名の特定の患者のための複数回使用（一定用量での、又は治療が進行するにつれて個々の化合物の効力が変動し得るもの）として製造されることが可能であり、又は該キットは、複数の患者への投与に適した複数用量を含有し得る（「バルクパッケージング」）。キットの構成要素は、カートン、ブリスターパック、ボトル、チューブ等の中に集められる。
【実施例】
【０２００】
以下の実施例は、本発明を単に例示することを意図しており、決して本発明を限定するものと考えられるべきではない。実施例は、下記の実験が実施された全て又は唯一の実験であることを表すものではない。使用された数値（例えば量、温度など）に関して正確性を確保するように努力がなされたが、いくらかの実験の誤差及び偏差を考慮する必要がある。別段の指示がない限り、部は重量部、分子量は平均分子量、温度は摂氏温度、圧力は大気圧又は大気圧近傍である。
【０２０１】
実施例１：ＶＩＳＴＡ  ＥＣＤはヒスチジンリッチ、ＶＩＳＴＡデキストラマーは酸性ｐＨで白血球に選択的に結合
免疫グロブリン受容体スーパーファミリー（ＩｇＳＦ）メンバーの細胞外ドメイン内のヒスチジン残基の頻度を分析し、ＶＩＳＴＡは、他の受容体又はリガンドに比べて非常にヒスチジンが豊富であることが分かった。
【０２０２】
ＰＢＭＣ  ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で血液から分離され、１：１の比率の抗ＣＤ３／ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）及び組換えヒトＩＬ−２で３−４日間刺激された。刺激後、ＣＤ４＋Ｔ細胞を洗浄し、その後６．９７から５．９９の範囲のｐＨで、蛍光コンジュゲートヒトＶＩＳＴＡデキストラマー（最適なモル比のモノビオチン化組換えヒトＶＩＳＴＡ分子をロードしたストレプトアビジンデキストラマー）とインキュベートした。フローサイトメトリーで結合が検出された。
【０２０３】
結果は、図１に示すが、ＶＩＳＴＡが中性ｐＨではなく酸性ｐＨで選択的にＴ細胞に結合することを示している。
【０２０４】
実施例２：酸性ｐＨでのＶＩＳＴＡカウンター受容体としてのＰＳＧＬ−１の同定
ＬＲＣ−ＴｒｉＣＥＰＳＴＭ技術を使用して、Ｔ細胞上のＶＩＳＴＡ受容体を同定した（Frei et al. (2013) Nat. Protoc. 8:1321; Frei and Jeon (2012) Nat. Biotechnol. 30:997 and Omasits et al. (2014) Bioinformatics 15:884）。ヒトＶＩＳＴＡ−ＦｃをＴｒｉＣＥＰＳに結合し、ｐＨ６．０で初代ヒトＴ細胞上でインキュベートした。抗ＣＤ３もＴｒｉＣＥＰＳ試薬に結合し、ポジティブコントロールとして機能させた。いくつかのタンパク質がスクリーニングで同定され、そのうちのいくつかはＶＩＳＴＡ−ＦｃのＦｃ部分にのみ結合するようであった。ヒトＰＳＧＬ−１は、ヒトＶＩＳＴＡに結合するタンパク質と同定された。スクリーニング実験を同じ条件でもう一度繰り返し、ＰＳＧＬ−１を再度同定した。
【０２０５】
Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１（ＰＳＧＬ−１又はＳＥＬＰＬ）は、Ｐ−、Ｅ−、及びＬ−セレクチンのリガンドであり、高度にグリコシル化及びチロシン硫酸化され、Ｔ細胞を含むほとんどの白血球によって発現．される。セレクチンのＰＳＧＬ−１の関与は、白血球の血管外漏出と細胞内輸送に不可欠である。
【０２０６】
実施例３：ＰＳＧＬ−１発現はＶＩＳＴＡデキストラマー結合と相関する
ｆｉｃｏｌｌ−ｐａｑｕｅ勾配遠心分離によってＰＢＭＣを血液から単離し、洗浄し、その後ｐＨ７．２のハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）中、蛍光コンジュゲート抗ＰＳＧＬ−１抗体と共に、又はｐＨ６．０で蛍光コンジュゲートヒトＶＩＳＴＡデキストラマー（最適なモル比のモノビオチン化組換えヒトＶＩＳＴＡ分子をロードしたストレプトアビジンデキストラマー）と共にインキュベートした。フローサイトメトリーで結合が検出された。
【０２０７】
結果は、図２Ａ−Ｂに示すが、ＰＢＭＣリンパ球上のＰＳＧＬ−１表面発現が酸性ｐＨでＶＩＳＴＡデキストラマー結合と相関することを示している。
【０２０８】
実施例４：可溶性ＰＳＧＬ−１及びＰ−セレクチンは、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞へのＶＩＳＴＡデキストラマーの結合をブロックする
可溶性ＰＳＧＬ−１がＴ細胞へのＶＩＳＴＡデキストラマーの結合を妨害する能力を、ｐＨ６．０のハンクス平衡塩類溶液中、滴定濃度のコントロール（すなわち非ＶＩＳＴＡ又はＰＳＧＬ−１特異的）抗体（点）、組換えヒトＰＳＧＬ−１−Ｆｃ融合タンパク質（三角形）又は組換えヒトＰ−セレクチン（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、菱形）の存在下で、活性化Ｔ細胞を蛍光コンジュゲートＶＩＳＴＡデキストラマー（準最適なモル比のモノビオチン化組換えヒトＶＩＳＴＡ分子をロードしたストレプトアビジンデキストラマー）とインキュベートすることによって評価した。組換えヒトＰＳＧＬ−１  Ｆｃ融合分子は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号３３４５−ＰＳから入手したものであり、配列番号１８に示されるＰＳＧＬ−１  ＥＣＤ配列を含み、この配列は、Ｃ末端でＩＥＧＲＭＤリンカー配列（配列番号１９）に結合した寄託番号ＡＡ５００６１のヒトＰＳＧＬ−１配列の４２−２９５位、その後にヒトＩｇＧ１のアミノ酸Ｐ１００−Ｋ３３０を含む。インキュベーション後、ＶＩＳＴＡデキストラマーのＴ細胞への結合をフローサイトメトリーで測定した。ＩＣ５０値は、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）の非線形回帰によって計算した。結果は、図３と表１に示すが、ＰＳＧＬ−１及びＰ−セレクチンがＶＩＳＴＡの活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞への結合を酸性ｐＨで用量依存的に阻害することを示している。
表１
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【０２０９】
実施例５：ＰＳＧＬ−１−Ｆｃは酸性ｐＨで細胞表面に発現したＶＩＳＴＡに結合する
ｈｕｍＰＳＧＬ−１−Ｆｃの、ヒトＶＩＳＴＡを異所性発現する２９３Ｔ細胞への結合を試験した。ヒトＶＩＳＴＡ及びＧＦＰを発現する２９３Ｔ細胞（点と四角形と、ＶＩＳＴＡもＧＦＰも発現しない２９３Ｔ細胞（菱形と三角形）とを培養した。これらの細胞を洗浄し、その後ｐＨ７．２（三角形と四角形）又はｐＨ６．０（菱形と点曲線）のハンクス平衡塩類溶液中で、ＰＳＧＬ−１−Ｆｃ融合タンパク質（（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号３３４５）とインキュベートした。一次インキュベーション後、細胞を洗浄し、蛍光コンジュゲート抗ｈＩｇＧ二次検出抗体とインキュベートした。二次インキュベーション後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより結合を検出した。結果は、図４ＡとＢに示すが、ｈｕｍＰＳＧＬ−１−Ｆｃは、ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）を発現する２９３Ｔ細胞には結合するが、ヒトＶＩＳＴＡを発現しない２９３Ｔ細胞には結合しないことを示している。さらにこの結果は、ＰＳＧＬ−１−Ｆｃの結合は、ｐＨ６．０（図４Ｂの丸／点と図４Ａの右曲線）では結合するが、ｐＨ７．２（図４Ｂの四角形と図４Ａの左曲線）ではそれほどでもないことから、ｐＨ依存的であることが示している。
【０２１０】
実施例６：ＰＢＭＣ  ＣＤ４  Ｔ細胞ＰＳＧＬ−１  ＣＲＩＳＰＲはＶＩＳＴＡデキストラマー結合を除去する
ヒトＣＤ４  Ｔ細胞を全血から分離し、プレートに蒔かれコーティングされたＯＫＴ３及びＣＤ２８．２で２日間活性化した。その後、Ｔ細胞に、ＣＤ４、ＰＳＧＬ１、又はヒト配列相同性のないｇＲＮＡ（非標的化コントロール）の何れかを標的とするガイドＲＮＡをロードしたＣａｓ９リボ核タンパク質（ＲＮＰ）をトランスフェクトした。トランスフェクションは、三連で行われた。トランスフェクション後、ＣＤ３／ＣＤ２８コーティングＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）で細胞を４日間再活性化した。その後、細胞を組換えヒトａｖｉタグ付きＶＩＳＴＡをロードしたデキストラマーで染色して、ＶＩＳＴＡへの結合を評価した。最大のＶＩＳＴＡ結合のパーセンテージは、ノックアウト集団の平均的な（average）ＶＩＳＴＡデキストラマー平均蛍光強度（mean fluorescence intensity: MFI）を非標的化コントロールの平均的なＩＳＴＡデキストラマーＭＦＩで割ることによって決定された。
【０２１１】
結果は、図５に示すが、ＰＳＧＬ−１が除去されたＴ細胞では、Ｔ細胞へのＶＩＳＴＡ結合が約半分減少したことを示している。さらにこれらの結果は、ＰＳＧＬ−１がＴ細胞のＶＩＳＴＡカウンター受容体であることを示唆している。
【０２１２】
［配列表］
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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