(57)【要約】本開示は、変異免疫調節ポリペプチド、及び変異免疫調節ペプチドを含む融合ポリペプチドを提供する。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド、及びＴ細胞調節多量体ポリペプチドを含む組成物を提供し、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、本開示の変異免疫調節ポリペプチドを含む。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、及び核酸を含む宿主細胞を提供する。本開示は、Ｔ細胞の活性の調節方法を提供し、本方法は、Ｔ細胞と、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドとの接触を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に示されるものに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＩＬ−２ポリペプチドであって、
前記変異ＩＬ−２ポリペプチドは、配列番号１に示されるものと比較して１つまたは複数のアミノ酸置換を有し、
前記変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列を有するアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２受容体（ＩＬ２Ｒ）に対する配列番号１に示されるＩＬ−２アミノ酸配列の結合親和性と比較して、前記ＩＬ２Ｒに対する結合親和性の低下を示す、変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項２】
変異体は、Ｅ１５、Ｈ１６、Ｄ２０、Ｆ４２、Ｙ４５、及びＱ１２６のうちの１つまたは複数の置換を含む、請求項１に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項３】
変異免疫調節ポリペプチドが示す結合親和性は、配列番号１に示されるＩＬ２アミノ酸配列が前記ＩＬ２Ｒに対して示す結合親和性の１０％未満〜５０％未満である、請求項１または請求項２に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項４】
変異体は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕでのＦ４２の置換を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項５】
変異体は、Ｆ４２及びＤ２０の置換またはＦ４２及びＨ１６の置換を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項６】
変異体は、Ｆ４２、Ｄ２０、及びＹ４５の置換を含むか、または、Ｆ４２、Ｈ１６、及びＱ１２６の置換を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【請求項７】
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）任意選択の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ骨格
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む多量体ポリペプチドであって、
前記多量体ポリペプチドが、１つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインは、
Ａ）前記第１のポリペプチドのＣ末端、
Ｂ）前記第２のポリペプチドのＮ末端、
Ｃ）前記第２のポリペプチドのＣ末端、または
Ｄ）前記第１のポリペプチドのＣ末端及び前記第２のポリペプチドのＮ末端
に位置し、
前記免疫調節ドメインのうちの少なくとも１つは、天然起源の共刺激タンパク質の変異体であり、前記変異体は、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す、多量体ポリペプチド。
【請求項８】
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）任意選択の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ骨格
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む多量体ポリペプチドであって、
前記多量体ポリペプチドは、１つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインは、
Ａ）前記第１のポリペプチドのＣ末端、
Ｂ）前記第２のポリペプチドのＮ末端、
Ｃ）前記第２のポリペプチドのＣ末端、または
Ｄ）前記第１のポリペプチドのＣ末端及び前記第２のポリペプチドのＮ末端
に位置し、
前記１つまたは複数の免疫調節ドメインの少なくとも１つは、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチドであり、
前記多量体ポリペプチドは、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列を有するアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２受容体（ＩＬ２Ｒ）に対する配列番号１に示されるＩＬ２アミノ酸配列を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＩＬ２Ｒポリペプチドに対する結合親和性の低下を示す、多量体ポリペプチド。
【請求項９】
ａ）前記第１のポリペプチドは、
ｉ）前記エピトープ、
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドは、
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、
請求項８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１０】
ａ）前記第１のポリペプチドは、
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドは、
ｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド、
ｉｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、
請求項８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１１】
ａ）前記第１のポリペプチドは、
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドは、
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、
請求項８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１２】
ａ）前記第１のポリペプチドは、
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドは、
ｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド、及び
ｉｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、
請求項８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１３】
ａ）前記第１のポリペプチドは、
ｉ）前記エピトープ、
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドは、前記第２のＭＨＣポリペプチドを含む、
請求項８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１４】
前記非Ｉｇ骨格は、ＸＴＥＮポリペプチド、トランスフェリンポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド、シルク様ポリペプチド、またはシルク−エラスチン様ポリペプチドである、請求項７または請求項８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１５】
前記第１のＭＨＣポリペプチドは、β２−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、請求項７〜１４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１６】
前記β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図６に示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１７】
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃの重鎖である、請求項１５に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１８】
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａ〜５Ｃのうちの１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１９】
前記第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖ポリペプチドである、請求項７〜１４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２０】
前記エピトープは、Ｔ細胞エピトープである、請求項７〜１９のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２１】
多量体ポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドを含み、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである、請求項７〜１３及び請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２２】
前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図４Ａ〜４Ｃに示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２３】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとが、非共有結合で結合される、請求項７〜２２のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２４】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとが、互いに共有結合で連結される、請求項７〜２２のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２５】
前記共有結合は、ジスルフィド結合を介するものである、請求項２４に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２６】
前記第１のＭＨＣポリペプチド、または前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のリンカーは、アミノ酸置換を含むことで第１のＣｙｓ残基を与え、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、アミノ酸置換を含むことで第２のＣｙｓ残基を与え、前記ジスルフィド結合が、前記第１のＣｙｓ残基と前記第２のＣｙｓ残基との間に形成される、請求項２５に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２７】
前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間に挿入されたリンカーを含む、請求項７〜２６のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２８】
ＭＨＣポリペプチドと免疫調節ポリペプチドとの間に挿入されたリンカーを含む、請求項７〜２６のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項２９】
２つの変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む、請求項７〜２８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３０】
３つの変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む、請求項７〜２８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３１】
前記２つまたは３つの変異ＩＬ−２ポリペプチドは直列に存在し、前記多量体ポリペプチドは、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの間にリンカーを含む、請求項２９または請求項３０に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３２】
前記変異ＩＬ−２ポリペプチドは、Ｅ１５、Ｈ１６、Ｄ２０、Ｆ４２、Ｙ４５、及びＱ１２６のうちの１つまたは複数の置換を含む、請求項８〜２８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３３】
前記変異ＩＬ−２ポリペプチドは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕでのＦ４２の置換を含む、請求項８〜２８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３４】
前記変異ＩＬ−２ポリペプチドは、Ｆ４２及びＤ２０の置換またはＦ４２及びＨ１６の置換を含む、請求項３３に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３５】
前記変異ＩＬ−２ポリペプチドは、Ｆ４２、Ｄ２０、及びＹ４５の置換またはＦ４２、Ｈ１６、及びＱ１２６の置換を含む、請求項３３に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項３６】
組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、
ｉ）前記組換えポリペプチドは、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、
ｃ）免疫調節ポリペプチド、
ｄ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
前記免疫調節ポリペプチドは、天然起源の共刺激タンパク質の変異体であり、前記変異体は、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示すか、または
ｉｉ）前記組換えポリペプチドは、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、
ｃ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｄ）免疫調節ポリペプチド、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
前記免疫調節ポリペプチドは、天然起源の共刺激タンパク質の変異体であり、前記変異体は、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す、核酸。
【請求項３７】
組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、
ｉ）前記組換えポリペプチドは、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、
ｃ）免疫調節ポリペプチド、
ｄ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
前記免疫調節ポリペプチドは、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチドであるか、または
ｉｉ）前記組換えポリペプチドは、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、
ｃ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｄ）免疫調節ポリペプチド、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
前記免疫調節ポリペプチドは、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異免疫調節ポリペプチドである、核酸。
【請求項３８】
前記第１のＭＨＣポリペプチドは、β２−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、請求項３６または請求項３７に記載の核酸。
【請求項３９】
前記β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図６に示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の核酸。
【請求項４０】
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃの重鎖である、請求項３８に記載の核酸。
【請求項４１】
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａ〜５Ｃのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載の核酸。
【請求項４２】
前記第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖ポリペプチドである、請求項３６または請求項３７に記載の核酸。
【請求項４３】
前記エピトープは、Ｔ細胞エピトープである、請求項３６〜４２のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項４４】
前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである、請求項３６〜４３のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項４５】
前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図４Ａ〜４Ｃに示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４４に記載の核酸。
【請求項４６】
前記変異ＩＬ２免疫調節ポリペプチドは、Ｅ１５、Ｈ１６、Ｄ２０、Ｆ４２、Ｙ４５、及びＱ１２６のうちの１つまたは複数の置換を含む、請求項３７〜４５のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項４７】
多量体ポリペプチドは、ＣＤ７、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ−Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンフォトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、及びＨＶＥＭから選択される第２の免疫調節ポリペプチドを含む、請求項３６〜４６のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項４８】
前記タンパク分解により切断可能なリンカーまたはリボソームスキッピングシグナルは、
ａ）ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号２９）、
ｂ）ＥＮＬＹＴＱＳ（配列番号３０）、
ｃ）フューリン切断部位、
ｄ）ＬＶＰＲ（配列番号３２）、
ｅ）ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号３３）、
ｆ）ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号３４）、
ｇ）ＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号３５）、及び
ｈ）ＧＳＧＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号３６）
から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３６〜４７のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項４９】
前記組換えポリペプチドは、
ａ）第１のリーダーペプチド、
ｂ）前記エピトープ、
ｃ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、
ｄ）前記免疫調節ポリペプチド、
ｅ）前記タンパク分解により切断可能なリンカーまたはリボソームスキッピングシグナル、
ｆ）第２のリーダーペプチド、
ｇ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｈ）前記免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、請求項３６〜４８のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５０】
前記第１のリーダーペプチド及び前記第２のリーダーペプチドは、β２−Ｍリーダーペプチドである、請求項４９に記載の核酸。
【請求項５１】
前記ヌクレオチド配列が、転写制御要素に機能可能なように連結される、請求項３６〜５０のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５２】
前記転写制御要素は、真核細胞において機能するプロモーターである、請求項５１に記載の核酸。
【請求項５３】
前記第１のＭＨＣポリペプチド、または前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のリンカーは、アミノ酸置換を含むことで第１のＣｙｓ残基を与え、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、アミノ酸置換を含むことで第２のＣｙｓ残基を与え、前記第１のＣｙｓ残基及び前記第２のＣｙｓ残基は、前記第１のＭＨＣポリペプチドと前記第２のＭＨＣポリペプチドとの間にジスルフィド結合を生成する、請求項３６〜５２のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５４】
請求項３６〜５２のいずれか１項に記載の核酸を含む組換え発現ベクターであって、任意選択でウイルスベクターである、組換え発現ベクター。
【請求項５５】
請求項５４に記載の組換え発現ベクターで遺伝子改変された、宿主細胞。
【請求項５６】
前記宿主細胞はインビトロのものであり、前記宿主細胞は、前記宿主細胞が内在性のＭＨＣβ２−ミクログロブリンポリペプチドを産生しないように任意選択で遺伝子改変される、請求項５５に記載の宿主細胞。
【請求項５７】
ａ）
ｉ）エピトープ、
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸であって、
免疫調節ポリペプチドは、天然起源の共刺激タンパク質の変異体であり、前記変異体は、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【請求項５８】
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）天然起源の共刺激タンパク質の変異体である免疫調節ドメインであって、前記変異体は、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、その対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す免疫調節ドメイン、
ｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【請求項５９】
ａ）
ｉ）エピトープ、
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸であって、
前記免疫調節ドメインが、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチドである前記第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【請求項６０】
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチドである免疫調節ドメイン
ｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【請求項６１】
前記第１の核酸及び／または前記第２の核酸は、組換え発現ベクターに存在する、請求項５７〜６０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６２】
請求項５７〜６１のいずれか１項に記載の組成物で遺伝子改変された、宿主細胞。
【請求項６３】
請求項７〜３５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドを産生する方法であって、
ａ）請求項５５、請求項５６、及び請求項６２のいずれか１項に記載の宿主細胞が前記多量体ポリペプチドを合成する条件下での、培地における前記宿主細胞のインビトロの培養と、
ｂ）前記宿主細胞及び／または前記培地からの前記多量体ポリペプチドの単離と、
を含む、方法。
【請求項６４】
前記第２のポリペプチドは、親和性タグを含み、前記単離は、前記宿主細胞によって産生される前記多量体ポリペプチドと、前記親和性タグに対する結合パートナーとの接触を含み、前記結合パートナーが固定化されていることによって前記多量体ポリペプチドが固定化される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記固定化された多量体ポリペプチドの溶出を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
エピトープ特異的Ｔ細胞を選択的に活性化する方法であって、
前記エピトープ特異的Ｔ細胞と、請求項７〜３５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドとの接触を含み、前記接触によって前記エピトープ特異的Ｔ細胞が選択的に活性化される、方法。
【請求項６７】
前記接触は、インビトロのものである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記接触は、インビボのものである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記エピトープは、がん関連エピトープであり、投与によって、前記がん関連エピトープに特異的なＴ細胞の活性は選択的に増加する、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
個体におけるがんの治療方法であって、
ａ）請求項７〜３５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド、
ｂ）請求項７〜３５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数の組換え発現ベクター、または
ｃ）請求項７〜３５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数のｍＲＮＡ
を有効量で前記個体に投与することを含み、
前記エピトープは、がん関連エピトープであり、前記投与は、個体におけるがんエピトープ特異的Ｔ細胞の選択的活性化に有効である、方法。
【請求項７１】
前記投与は、皮下投与である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記投与は、静脈内投与である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記投与は、腫瘍周囲への投与である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記投与は、全身投与である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
前記投与はが、治療部位から遠い位置への投与である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７６】
前記投与は、局所投与である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７７】
前記投与は、治療部位または治療部位付近への投与である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７８】
ａ）請求項７〜３５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド、及び
ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤
を含む、組成物。
【請求項７９】
ａ）請求項３６〜５３のいずれか１項に記載の核酸、または請求項５４に記載の組換え発現ベクター、及び
ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤
を含む、組成物。
【請求項８０】
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）天然起源の共刺激タンパク質の変異体であって、前記変異体は、Ｔ細胞に存在するその対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示し、前記変異体は、任意選択で、請求項１〜６のいずれか１項に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチドであり得る変異体、
ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、ならびに
ｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、多量体ポリペプチド。
【請求項８１】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｎ２９７Ａ置換を含む、請求項８０に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項８２】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を含む、請求項８０に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項８３】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ｆ置換及びＬ２３５Ｅ置換を含む、請求項８０に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項８４】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を含む、請求項８０に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項８５】
前記第２のポリペプチドは、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む、請求項８０〜８４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項８６】
前記第１のポリペプチドは、前記エピトープと前記β２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、請求項８０〜８５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項８７】
前記第２のポリペプチドは、
ａ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、
ｂ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびに
ｃ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドと前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間
のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む、請求項８０〜８６のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項８８】
前記ペプチドリンカーが、（ＧＧＧＧＳ）3 、（ＧＧＧＧＳ）4 、及びＡＡＡＧＧから選択される、請求項８６または請求項８７に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項８９】
ａ）
ｉ）エピトープ、
ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリンポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）図３４Ｂに示されるアミノ酸配列を含む変異ＩＬ−２ポリペプチド、
ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、ならびに
ｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、多量体ポリペプチド。
【請求項９０】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｎ２９７Ａ置換を含む、請求項８９に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９１】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を含む、請求項８９に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９２】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ｆ置換及びＬ２３５Ｅ置換を含む、請求項８９に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９３】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を含む、請求項８９に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９４】
前記第２のポリペプチドは、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む、請求項８９〜９３のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９５】
前記第１のポリペプチドは、前記エピトープと前記β２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、請求項８９〜９４のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９６】
前記第２のポリペプチドは、
ａ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、
ｂ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびに
ｃ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドと前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間
のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む、請求項８９〜９５のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９７】
前記ペプチドリンカーが、（ＧＧＧＧＳ）3 、（ＧＧＧＧＳ）4 、及びＡＡＡＧＧから選択される、請求項９５または請求項９６に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項９８】
ａ）
ｉ）ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴというアミノ酸配列（配列番号１３）を含むエピトープ、及び
ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリンポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）図３４Ｂに示されるアミノ酸配列を含む変異ＩＬ−２ポリペプチド、
ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉｉ）図３３Ａ、図３３Ｂ、図３３Ｃ、または図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、多量体ポリペプチド。
【請求項９９】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｂに示されるアミノ酸配列を含む、請求項９８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１００】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｃに示されるアミノ酸配列を含む、請求項９８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１０１】
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含む、請求項９８に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１０２】
前記第２のポリペプチドは、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む、請求項９８〜１０１のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１０３】
前記第１のポリペプチドは、前記エピトープと前記β２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、請求項９８〜１０２のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１０４】
前記第２のポリペプチドは、
ａ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、
ｂ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびに
ｃ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドと前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間
のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む、請求項９８〜１０３のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１０５】
前記ペプチドリンカーが、（ＧＧＧＧＳ）3 、（ＧＧＧＧＳ）4 、及びＡＡＡＧＧから選択される、請求項１０３または請求項１０４に記載の多量体ポリペプチド。
【請求項１０６】
ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び
ｂ）図２２に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド
を含む、多量体ポリペプチド。
【請求項１０７】
ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び
ｂ）図２５に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド
を含む、多量体ポリペプチド。
【請求項１０８】
ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び
ｂ）図２８に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド
を含む、多量体ポリペプチド。
【請求項１０９】
ａ）請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド、及び
ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤
を含む、医薬組成物。
【請求項１１０】
請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、１つまたは複数の核酸。
【請求項１１１】
前記核酸は、組換え発現ベクターに存在する、請求項１１０に記載の１つまたは複数の核酸。
【請求項１１２】
エピトープ特異的Ｔ細胞を選択的に活性化する方法であって、
前記エピトープ特異的Ｔ細胞と、請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドとの接触を含み、前記接触によって前記エピトープ特異的Ｔ細胞が選択的に活性化される、方法。
【請求項１１３】
前記接触は、インビトロのものである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記接触は、インビボのものである、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１５】
ａ）請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチド、
ｂ）請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数の組換え発現ベクター、または
ｃ）請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数のｍＲＮＡ
を有効量で個体に投与することを含む方法であって、
前記投与によって前記個体においてエピトープに対するＴ細胞応答が誘導される、方法。
【請求項１１６】
前記投与は、皮下投与である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記投与は、静脈内投与である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１８】
前記投与は、全身投与である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１９】
前記投与は、筋肉内投与である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１２０】
前記投与は、治療部位から遠い位置への投与である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１２１】
前記投与は、局所投与である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１２２】
前記投与は、治療部位または治療部位付近への投与である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１２３】
共刺激ポリペプチドを標的Ｔ細胞に選択的に送達する方法であって、
混在Ｔ細胞集団と、請求項７〜３５及び請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドとの接触を含み、前記混在Ｔ細胞集団は、前記標的Ｔ細胞及び非標的Ｔ細胞を含み、
前記標的Ｔ細胞は、前記多量体ポリペプチド中に存在する前記エピトープに特異的であり、
前記接触によって、前記多量体ポリペプチド中に存在する前記共刺激ポリペプチドが前記標的Ｔ細胞に送達される、方法。
【請求項１２４】
ＩＬ−２またはＩＬ−２変異体を標的Ｔ細胞に選択的に送達する方法であって、
混在Ｔ細胞集団と、請求項８〜３５及び請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドとの接触を含み、前記混在Ｔ細胞集団は、前記標的Ｔ細胞及び非標的Ｔ細胞を含み、
前記標的Ｔ細胞は、前記多量体ポリペプチド中に存在する前記エピトープに特異的であり、
前記接触によって、前記多量体ポリペプチド中に存在する前記ＩＬ−２またはＩＬ−２変異体が前記標的Ｔ細胞に送達される、方法。
【請求項１２５】
前記混在Ｔ細胞集団は、インビトロのものである、請求項１２３または請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記混在Ｔ細胞集団は、個体におけるインビボのものである、請求項１２３または請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２７】
前記多量体ポリペプチドを前記個体に投与することを含む、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記標的Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞である、請求項１２３〜１２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記標的Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である、請求項１２３〜１２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３０】
前記混在Ｔ細胞集団は、個体から得られたインビトロの混在Ｔ細胞集団であり、前記接触の結果、前記標的Ｔ細胞が活性化及び／または増殖し、活性化及び／または増殖した標的Ｔ細胞集団が生じる、請求項１２３または請求項１２４に記載の方法。
【請求項１３１】
前記活性化及び／または増殖した標的Ｔ細胞集団を前記個体に投与することをさらに含む、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
個体から得られた混在Ｔ細胞集団において目的エピトープに結合する標的Ｔ細胞の存在を検出する方法であって、
ａ）前記混在Ｔ細胞集団と、請求項７〜３５及び請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドとのインビトロの接触であって、前記多量体ポリペプチドは前記目的エピトープを含む接触と、
ｂ）前記接触に応答したＴ細胞の活性化及び／または増殖の検出であって、Ｔ細胞の活性化及び／または増殖が前記標的Ｔ細胞の存在を示す検出と、
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
適応免疫応答は、Ｔ細胞の表面に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と、主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ；ヒトにおいてはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体とも称される）によって抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に非共有結合で存在する小さなペプチド抗原との結合を伴う。この結合は、免疫系の標的化機構に相当するものであり、Ｔ細胞の調節（活性化または抑制）及びエフェクター機能に必要な分子相互作用である。エピトープ特異的な細胞標的化に続き、ＡＰＣに見られる共刺激タンパク質と、Ｔ細胞の対応する共刺激タンパク質との結合を介して標的化Ｔ細胞が活性化される。
【０００２】
Ｔ細胞の特異性及び活性化または抑制を誘導するためには、エピトープ／ＴＣＲ結合と、ＡＰＣの共刺激タンパク質及びＴ細胞の共刺激タンパク質の結合との両方のシグナルが必要である。ＴＣＲは所与のエピトープに特異的であるが、共刺激タンパク質はエピトープ特異的ではなく、代わりに、すべてのＴ細胞または大きなＴ細胞サブセットに一般に発現する。
【発明の概要】
【０００３】
本開示は、変異免疫調節ポリペプチド、及び変異免疫調節ペプチドを含む融合ポリペプチドを提供する。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド、及びＴ細胞調節多量体ポリペプチドを含む組成物を提供し、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、本開示の変異免疫調節ポリペプチドを含む。
【０００４】
本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、及び核酸を含む宿主細胞を提供する。本開示は、Ｔ細胞の活性の調節方法を提供し、この方法は、Ｔ細胞と、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドとの接触を含む。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】Ａ〜Ｄは、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドのさまざまな実施形態を模式的に示す。これらの実施形態では、別々のポリペプチドに存在するＭＨＣ（例えば、ＨＬＡ）ポリペプチドの間にジスルフィド結合が形成される。
【図２−１】Ａ〜Ｄは、野生型ヒトＩＬ−２のアミノ酸配列（Ａ）、及び変異ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列（Ｂ〜Ｄ）を示す。
【図２−２】Ｅ〜Ｈは、変異ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図２−３】Ｉ〜Ｌは、変異ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図２−４】Ｍ〜Ｐは、変異ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図２−５】Ｑは、変異ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図３−１】Ａ及びＢは、ＩＬ−２受容体のアルファ鎖、及びＩＬ−２受容体のベータ鎖のアミノ酸配列を示す。
【図３−２】Ｃは、ＩＬ−２受容体のガンマ鎖のアミノ酸配列を示す。
【図４Ａ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｂ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｃ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列を示す。
【図５−１】Ａ及びＢは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。シグナル配列には下線が引かれている。
【図５−２】Ｃは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列を示す。シグナル配列には下線が引かれている。
【図６】Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ＮＰ＿００４０３９．１；配列番号９５）、Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（ＮＰ＿００１００９０６６．１；配列番号９６）、Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ（ＮＰ＿００１０４０６０２．１；配列番号９７）、Ｂｏｓ  Ｔａｕｒｕｓ（ＮＰ＿７７６３１８．１；配列番号９８）、及びＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（ＮＰ＿０３３８６５．２；配列番号９９）に由来するベータ−２ミクログロブリン（β２Ｍ）前駆体（すなわち、リーダー配列を含む）の複数のアミノ酸配列のアライメントを示す。アミノ酸１〜２０は、シグナルペプチドである。
【図７Ａ】一過性の遺伝子導入の後の本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ（「Ｃｕｅ−ＩＬ−２−ａ」及び「Ｃｕｅ−ＩＬ−２−ｂ」）の産生（未精製収量）を示す。
【図７Ｂ】一過性の遺伝子導入の後の本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ（「Ｃｕｅ−ＩＬ−２−ａ」及び「Ｃｕｅ−ＩＬ−２−ｂ」）の産生（精製産物）を示す。
【図８Ａ】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの産生を示し、これらのＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃでは、ＩＬ−２ポリペプチドは、軽鎖（ＭＨＣクラスＩ分子の軽鎖（例えば、β２Ｍ）を含むポリペプチド鎖）または重鎖（ＭＨＣクラスＩ分子の重鎖を含むポリペプチド鎖）に存在する。
【図８Ｂ】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの産生を示し、これらのＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃでは、ＩＬ−２ポリペプチドは、軽鎖（ＭＨＣクラスＩ分子の軽鎖（例えば、β２Ｍ）を含むポリペプチド鎖）または重鎖（ＭＨＣクラスＩ分子の重鎖を含むポリペプチド鎖）に存在する。
【図９】ＩＬ−２／ｓｙｎ−Ｔａｃの発現レベルを示し、これらのＩＬ−２／ｓｙｎ−Ｔａｃでは、ＩＬ−２は、野生型（ｗｔ）であるか、またはＦ４２Ａ、Ｄ２０Ｋ、Ｑ１２６Ａ、Ｅ１５Ａ、Ｙ４５Ａ、及びＨ１６Ａのさまざまな組み合わせを含む。
【図１０】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの発現を示し、これらのＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃでは、ＩＬ−２の１つのコピー（１Ｘ）、２つのコピー（２Ｘ）、または３つのコピー（３Ｘ）がｓｙｎＴａｃに存在する。
【図１１】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃによる抗原特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞及び非特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞のインビトロの刺激を示し、ここでは、Ｆ４２Ａ置換及びＨ１６Ａ置換を含むＩＬ−２変異体の２つのコピーがｓｙｎＴａｃに存在する。
【図１２】特異的（リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ））ＣＤ８+ Ｔ細胞または非特異的（ＯＴ１（オボアルブミン認識））ＣＤ８+ Ｔ細胞に対するＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合を示す。
【図１３】抗原特異的（ＬＣＭＶ）ＣＤ８+ Ｔ細胞または非特異的（ＢＬ６）ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ介在性のシグナル伝達を示す。
【図１４Ａ】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃをさまざまなＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ濃度で用いてＣＤ８+ 抗原特異的（ＬＣＭＶ）細胞またはＣＤ８+ 非特異的（ＢＬ６）細胞を刺激した後のリン酸化シグナル伝達兼転写活性化因子５（ｐＳＴＡＴ５）陽性細胞のパーセントを示す。
【図１４Ｂ】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃをさまざまなＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ濃度で用いてＣＤ８+ 抗原特異的（ＬＣＭＶ）細胞またはＣＤ８+ 非特異的（ＢＬ６）細胞を刺激した後のリン酸化シグナル伝達兼転写活性化因子５（ｐＳＴＡＴ５）陽性細胞のパーセントを示す。
【図１４Ｃ】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃをさまざまなＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ濃度で用いてＣＤ８+ 抗原特異的（ＬＣＭＶ）細胞またはＣＤ８+ 非特異的（ＢＬ６）細胞を刺激した後のリン酸化シグナル伝達兼転写活性化因子５（ｐＳＴＡＴ５）陽性細胞のパーセントを示す。
【図１４Ｄ】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃをさまざまなＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ濃度で用いてＣＤ８+ 抗原特異的（ＬＣＭＶ）細胞またはＣＤ８+ 非特異的（ＢＬ６）細胞を刺激した後のリン酸化シグナル伝達兼転写活性化因子５（ｐＳＴＡＴ５）陽性細胞のパーセントを示す。
【図１４Ｅ】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃをさまざまなＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ濃度で用いてＣＤ８+ 抗原特異的（ＬＣＭＶ）細胞またはＣＤ８+ 非特異的（ＢＬ６）細胞を刺激した後のリン酸化シグナル伝達兼転写活性化因子５（ｐＳＴＡＴ５）陽性細胞のパーセントを示す。
【図１４Ｆ】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃをさまざまなＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ濃度で用いてＣＤ８+ 抗原特異的（ＬＣＭＶ）細胞またはＣＤ８+ 非特異的（ＢＬ６）細胞を刺激した後のリン酸化シグナル伝達兼転写活性化因子５（ｐＳＴＡＴ５）陽性細胞のパーセントを示す。
【図１５】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのインビボの活性を示す。左パネルは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、組換えＩＬ−２（ｒＩＬ−２）、または本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを投与した後の抗原特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞の数の倍率変化を示す。右パネルは、ＰＢＳ、ｒＩＬ−２、または本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを投与した後の抗原特異的な応答及び抗原非特異的な応答を示す。
【図１６Ａ】用量漸増による影響を示す。
【図１６Ｂ】投与経路による影響を示す。
【図１７Ａ】腫瘍に対するインビボの効力に与えるＩＬ−２のコピー数の影響を示す。
【図１７Ｂ】腫瘍に対するインビボの効力に与えるＩＬ−２のコピー数の影響を示す。
【図１８】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ量で腹腔内投与した後の、その血清半減期を示す。
【図１９】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ量で腹腔内投与してから２時間後の、その安定性を示す。
【図２０】本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを４℃または３７℃で５日間保持した後のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃに関するサイズ排除クロマトグラフィーのデータを示す。
【図２１】リーダーペプチドを含む本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの重鎖のアミノ酸配列を示し、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖は、Ｎ２９７Ａ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃを含む。
【図２２】リーダーペプチドを含まない本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの重鎖のアミノ酸配列を示し、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖は、Ｎ２９７Ａ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃを含む。
【図２３Ａ】図２１に示されるＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖をコードするヌクレオチド配列を示す。
【図２３Ｂ】図２３Ａの配列に対する説明を示す。
【図２４】リーダーペプチドを含む本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの重鎖のアミノ酸配列を示し、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖は、Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃを含む。
【図２５】リーダーペプチドを含まない本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの重鎖のアミノ酸配列を示し、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖は、Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃを含む。
【図２６Ａ】図２４に示されるＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖をコードするヌクレオチド配列を示す。
【図２６Ｂ】図２６Ａの配列に対する説明を示す。
【図２７】リーダーペプチドを含む本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの重鎖のアミノ酸配列を示し、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖は、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃを含む。
【図２８】リーダーペプチドを含まない本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの重鎖のアミノ酸配列を示し、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖は、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃを含む。
【図２９Ａ】図２７に示されるＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ重鎖をコードするヌクレオチド配列を示す。
【図２９Ｂ】図２９Ａの配列に対する説明を示す。
【図３０】リーダーペプチドを含む本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの軽鎖のアミノ酸配列を示し、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ軽鎖は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ７エピトープを含む。
【図３１】リーダーペプチドを含まない本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの軽鎖のアミノ酸配列を示し、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ軽鎖は、ＨＰＶ  Ｅ７エピトープを含む。
【図３２】図３０に示されるＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を示す。
【図３３】Ａ〜Ｄは、野生型ヒトＩｇＧ１  Ｆｃのアミノ酸配列（Ａ）、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃのアミノ酸配列（Ｂ）、Ｎ２９７Ａ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃのアミノ酸配列（Ｃ）、ならびにＬ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ１  Ｆｃのアミノ酸配列（Ｄ）を示す。
【図３４】Ａ〜Ｃは、β２−ミクログロブリン（Ｒ１２Ｃ）ポリペプチドのアミノ酸配列（Ａ）、変異ＩＬ−２（Ｈ１６Ａ、Ｆ４２Ａ）ポリペプチドのアミノ酸配列（Ｂ）、及びクラスＩ  ＭＨＣ−Ｈ鎖Ａ０２０１（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）のアミノ酸配列（Ｃ）を示す。
【図３５】ヒトＣＭＶ特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ介在性の増殖を示す。
【図３６】変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃの発現データ及び受容体結合データを示す。
【図３７】ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対するＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合をフローサイトメトリーによって検出したものを示す。
【図３８】ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対する変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合がＳＬＰ７６のリン酸化に与える影響を示す。
【図３９】ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＴ細胞に対する変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合がＣＤ２５、グランザイムＢ、及びＣＤ１０７αの産生に与える影響を示す。
【図４０】ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対する変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合がＩＦＮ−γの産生に与える影響を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、本明細書で互換的に使用され、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかであり、長さが任意の重合形態のヌクレオチドを指す。したがって、この用語は、限定はされないが、一本鎖、二本鎖、または多鎖のＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡとのハイブリッド、あるいはプリン塩基及びピリミジン塩基を含むポリマー、あるいは他の天然のヌクレオチド塩基、化学的もしくは生化学的に改変されたヌクレオチド塩基、非天然のヌクレオチド塩基、または誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーを含む。
【０００７】
「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用され、化学的または生化学的に改変または誘導体化されたアミノ酸であるコードアミノ酸及び非コードアミノ酸を含み得、長さが任意の重合形態のアミノ酸と、改変されたペプチド骨格を有するポリペプチドとを指す。
【０００８】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対してある一定パーセントの「配列同一性」を有し、このことは、アライメントがとられ、２つの配列が比較されると、その割合の塩基またはアミノ酸が同一であり、同一の相対位置に存在することを意味する。配列同一性は、多くの異なる方法において決定することができる。配列同一性を決定するために、さまざまな簡便な方法及びコンピュータープログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、Ｔ−ＣＯＦＦＥＥ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴなど）を使用して配列のアライメントをとることができ、こうした方法及びコンピュータープログラムは、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｌｉ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｔｃｏｆｆｅｅ／、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／、ｍａｆｆｔ．ｃｂｒｃ．ｊｐ／ａｌｉｇｎｍｅｎｔ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／を含む、いくつかのサイトでワールドワイドウェブを通じて利用可能である。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．２１５：４０３−１０を参照のこと。
【０００９】
「保存的アミノ酸置換」という用語は、同様の側鎖を有するアミノ酸残基の、タンパク質における互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の一群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンからなり、脂肪族−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の一群は、セリン及びスレオニンからなり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の一群は、アスパラギン及びグルタミンからなり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の一群は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の一群は、リジン、アルギニン、及びヒスチジンからなり、酸性側鎖を有するアミノ酸の一群は、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなり、含硫側鎖を有するアミノ酸の一群は、システイン及びメチオニンからなる。保存的なアミノ酸置換群の例は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン−グリシン、及びアスパラギン−グルタミンである。
【００１０】
（例えば、Ｔ細胞に存在するポリペプチド（例えば、Ｔ細胞受容体）に対する本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの結合に関して）本明細書で使用される「結合」は、介在する非共有結合的な相互作用を指す。結合相互作用は、解離定数（ＫD ）が１０-6Ｍ未満、１０-7Ｍ未満、１０-8Ｍ未満、１０-9Ｍ未満、１０-10 Ｍ未満、１０-11 Ｍ未満、１０-12 Ｍ未満、１０-13 Ｍ未満、１０-14 Ｍ未満、または１０-15 Ｍ未満であることによって一般に特徴付けられる。「親和性」は、結合強度を指し、結合親和性の上昇は、ＫD の低下と相関する。
【００１１】
本明細書で使用される「免疫学的シナプス」または「免疫シナプス」という用語は、一般に、適応免疫応答において相互作用する２つの免疫細胞の間の天然の界面を指し、こうした界面には、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または標的細胞と、エフェクター細胞（例えば、リンパ球、エフェクターＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、及び同様のものなど）との間の界面が含まれる。ＡＰＣとＴ細胞との間の免疫学的シナプスは、一般に、Ｔ細胞抗原受容体と主要組織適合抗原複合体分子との相互作用によって開始される。このことについては、例えば、Ｂｒｏｍｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１９：３７５−９６に記載されており、当該文献の開示内容は、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【００１２】
「Ｔ細胞」は、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４+ 細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８+ 細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、及びＮＫ−Ｔ細胞を含む、ＣＤ３を発現するすべての型の免疫細胞を含む。
【００１３】
本明細書で使用される「共刺激ポリペプチド」という用語は、Ｔ細胞に存在する関連共刺激ポリペプチドに特異的に結合することによって、一次シグナル（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、ペプチドが負荷された主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドとの結合によって生じる）に加えて、Ｔ細胞応答（限定はされないが、増殖、活性化、分化、及び同様のものを含む）を媒介するシグナルを生じさせる、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞、及び同様のもの）に存在するポリペプチドを含む。共刺激リガンドには、限定はされないが、ＣＤ７、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ−Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンフォトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、トールリガンド受容体（Ｔｏｌｌ  ｌｉｇａｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）に結合するアゴニストまたは抗体、及びＢ７−Ｈ３と特異的に結合するリガンドが含まれ得る。共刺激リガンドは、数ある中でも特に、Ｔ細胞に存在する共刺激分子と特異的に結合する抗体も包含し、Ｔ細胞に存在するこうした共刺激分子は、限定はされないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドなどである。
【００１４】
本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの「調節ドメイン」（「ＭＯＤ」）は、共刺激ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２ポリペプチド（本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドなど））を含む。
【００１５】
本明細書で使用される「異種」は、それぞれ天然の核酸またはタンパク質に見られないヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。
【００１６】
本明細書で使用される「組換え」は、特定の核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が、天然系に見られる内在性核酸とは区別可能な構造的なコード配列または非コード配列を有するコンストラクトが生じるクローニング段階、制限段階、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）段階及び／またはライゲーション段階のさまざまな組み合わせの産物であることを意味する。ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、ｃＤＮＡ断片から構築するか、または細胞もしくは細胞を含まない転写及び翻訳系に含められる組換え転写単位からの発現が可能な合成核酸を生成するための一連の合成オリゴヌクレオチドから構築することができる。
【００１７】
「組換え発現ベクター」または「ＤＮＡコンストラクト」という用語は、ベクター及び１つの挿入断片を含むＤＮＡ分子を指すために本明細書で互換的に使用される。組換え発現ベクターは、通常、挿入断片（複数可）の発現及び／または増幅、あるいは他の組換えヌクレオチド配列の構築を目的として生成される。挿入断片（複数可）は、プロモーター配列に機能可能なように連結されてもされなくてもよく、ＤＮＡ制御配列に機能可能なように連結されてもされなくてもよい。
【００１８】
例えば、組換え発現ベクターなどの外来性ＤＮＡが細胞の内部に導入されているとき、そのようなＤＮＡによって細胞は「遺伝子改変」または「形質転換」または「遺伝子導入」されている。外来性ＤＮＡが存在すると、持続性または一過性の遺伝子変化が生じる。形質転換ＤＮＡは、細胞のゲノムへの組み込み（共有結合での連結）が生じることも生じないこともあり得る。原核生物、酵母、及び哺乳類細胞では、例えば、形質転換ＤＮＡは、プラスミドなどのエピソーム要素で維持され得る。真核細胞に関しては、安定的に形質転換された細胞は、形質転換ＤＮＡが染色体に組み込まれており、その結果、染色体の複製を介して形質転換ＤＮＡが娘細胞によって受け継がれる細胞である。
【００１９】
本明細書で使用される「宿主細胞」は、インビボもしくはインビトロの真核細胞、または単細胞実体として培養される多細胞生物由来の細胞（例えば、細胞株）を指し、当該真核細胞は、核酸（例えば、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクター）のレシピエントとして使用することができるか、または使用されたことがあるものであり、その核酸によって遺伝子改変された元の細胞の子孫を含む。単細胞の子孫は、天然、偶発的、または計画的な変異が生じるため、形態またはゲノムＤＮＡ相補鎖もしくは全ＤＮＡ相補鎖が、元の親と必ずしも完全に同一ではあり得ないと理解される。「組換え宿主細胞」（「遺伝子改変宿主細胞」とも称される）は、例えば、発現ベクターなどの異種核酸が導入された宿主細胞である。例えば、遺伝子改変された真核生物宿主細胞が遺伝子改変されている所以は、例えば、真核生物宿主細胞にとって異質な外来性核酸、または真核生物宿主細胞に通常は見られない組換え核酸などの異種核酸が適切な真核生物宿主細胞に導入されているということにある。
【００２０】
「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」、「ｔｒｅａｔｉｎｇ（治療）」という用語、及び同様のものは、一般に、所望の薬理的及び／または生理的作用の発現を意味するために本明細書で使用される。作用は、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に予防するという点で予防的であり得、及び／または疾患及び／または疾患に起因し得る有害作用を部分的もしくは完全に治すという点で治療的であり得る。本明細書で使用される「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」は、動物における疾患または症状の任意の治療を包含すると共に、（ａ）疾患もしくは症状に罹りやすくあり得るが、それを有するとはまだ診断されていない対象における疾患もしくは症状の発症予防、（ｂ）疾患もしくは症状の抑制、すなわち、その発症の抑止、または（ｃ）疾患の軽減、すなわち、疾患の退縮誘起を含む。治療薬剤は、疾患または損傷の発生の前、間、または後に投与してよい。進行中の疾患の治療は、特に対象となるものであり、こうした治療では、治療は、患者の望ましくない臨床症状を安定化または低減するものである。そのような治療は、患部組織における機能が完全に失われる前に実施されることが望ましい。対象の治療は、望ましくは、疾患の兆候段階の間、及び場合によっては、疾患の兆候段階の後に投与されることになる。
【００２１】
「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、本明細書で互換的に使用され、診断、治療、または療法が望まれる任意の哺乳類対象を指す。哺乳類には、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス）、ウサギ類（例えば、ウサギ）、有蹄動物（例えば、雌ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギ、及び同様のもの）などが含まれる。
【００２２】
本発明の追加説明の前に、本発明は、記載される特定の実施形態に限定されず、したがって、実施形態は当然異なり得ると理解されることになる。本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態の説明のみを目的としており、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることになるため、本明細書で使用される専門用語による限定は意図されないとも理解されることになる。
【００２３】
値の範囲が与えられる場合、文脈上明確に示されない限り、その範囲の上限値と下限値との間に存在する、下限値の１０分の１の単位までの各介在値と、その記載範囲の任意の他の記載値または介在値とが本発明に包含されると理解される。こうしたより小さな範囲の上限値及び下限値は、そのより小さな範囲に独立して含まれ得るものであり、こうした上限値及び下限値もまた、本発明に包含され、記載範囲において具体的に除外される任意の限界値の対象になる。記載範囲が限界値の一方または両方を含む場合、そうした含まれる限界値のどちらか一方または両方を除外した範囲もまた、本発明に含まれる。
【００２４】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される専門用語及び科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同一の意味を有する。本発明の実施または試験においては、本明細書に記載のものと同様または同等の任意の方法及び材料を使用することもできるが、ここでは、好ましい方法及び材料が記載される。本明細書で言及される刊行物はすべて、刊行物が関連付けて引用される方法及び／または材料を開示及び説明するために、参照によって本明細書に援用される。
【００２５】
文脈上明確に示されない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、複数の参照対象を含むことに留意されなくてはならない。したがって、例えば、「変異ＩＬ−２ポリペプチド」に対する参照は、複数のそのようなポリペプチドを含み、「クラスＩ  ＨＬＡ重鎖ポリペプチド」に対する参照は、１つまたは複数のクラスＩ  ＨＬＡ重鎖ポリペプチド、及び当業者に知られるその同等形態に対する参照を含むなどである。特許請求の範囲は、任意選択の要素はいずれも除外して起草され得ることにさらに留意されたい。したがって、この記載は、請求要素の記載と関連する「単に」、「のみ」、及び同様のものなどの排他的用語の使用、または「負の」限定の使用のための先行的根拠として働くことが意図される。
【００２６】
本発明のある特定の特徴は、明確化するために別々の実施形態と関連して記載されるが、単一の実施形態において組み合わせて提供してもよいと理解される。逆に、本発明のさまざまな特徴は、簡略化するために単一の実施形態と関連して記載されるが、別々に提供するか、または任意の適切な部分的組み合わせにおいて提供してもよい。本発明に関する実施形態の組み合わせはすべて、本発明によって明確に包含され、それぞれ及びあらゆる組み合わせが個別かつ明示的に開示される場合と同様に本明細書に開示される。さらに、さまざまな実施形態及びそれらの要素の部分的組み合わせもすべて、本発明によって明確に包含され、それぞれ及びあらゆるそのような部分的な組み合わせが個別かつ明示的に本明細書に開示される場合と同様に本明細書に開示される。
【００２７】
本明細書で議論される刊行物は、単に、本出願の出願日より前にその開示内容が提供されているにすぎない。先行発明であるという理由によって本発明がそのような刊行物に先行する権利を有さないことを承認するものとして本明細書の記載が解釈されることには全くならない。さらに、提供される刊行物の日付は実際の刊行日とは異なり得るものであり、実際の刊行日は個別に確認する必要があり得る。
【００２８】
本開示は、変異免疫調節ポリペプチド、及び変異免疫調節ペプチドを含む融合ポリペプチドを提供する。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド、及びＴ細胞調節多量体ポリペプチドを含む組成物を提供し、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、本開示の変異免疫調節ポリペプチドを含む。本開示は、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、及び核酸を含む宿主細胞を提供する。本開示は、Ｔ細胞の活性の調節方法を提供し、この方法は、Ｔ細胞と、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドとの接触を含む。
【００２９】
本明細書に記載の実施形態では、多量体ポリペプチドは、代替ＡＰＣとして機能し、適応免疫応答を模倣する。そのようなことが多量体ポリペプチドによって実現することは、Ｔ細胞の表面に存在するＴＣＲと、多量体ポリペプチドに存在する、ＭＨＣと複合体を形成したエピトープ提示ペプチドとが結合することによるものである。この結合によって、エピトープ特異的細胞の標的化を達成する能力が多量体ポリペプチドに付与される。本明細書に記載の実施形態では、多量体ポリペプチドは、Ｔ細胞上の対応共刺激タンパク質（本明細書では「免疫調節ポリペプチド」、「関連免疫調節ポリペプチド」、または「関連共刺激タンパク質」などとも称される）と結合する少なくとも１つの免疫調節タンパク質（本明細書では「調節ドメイン」または「ＭＯＤ」とも称される）も有する。ＴＣＲに対するエピトープ／ＭＨＣの結合、及び関連共刺激ポリペプチドに対する免疫調節ポリペプチドの結合の両方のシグナルが生じることで、所望のＴ細胞特異性と抑制または活性化／増殖との両方が誘導される。本明細書にさらに記載されるように、少なくとも１つの免疫調節タンパク質は、天然起源の免疫調節タンパク質（例えば、天然起源のＩＬ−２）の変異体であり得、当該変異体は、Ｔ細胞上のその対応共刺激タンパク質（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する天然起源の免疫調節タンパク質の親和性と比較して、対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す。
【００３０】
本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドは、「ｓｙｎＴａｃポリペプチド」とも称される。本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、変異調節ドメインを含み、変異調節ドメインは、免疫調節ポリペプチド（関連共刺激ポリペプチド（例えば、Ｔ細胞の表面上の関連共刺激ポリペプチド））に対する野生型調節ドメインの親和性と比較して、免疫調節ポリペプチドに対する結合親和性の低下を示す。本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、標的Ｔ細胞の活性を調節することができる。本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、標的細胞の特異性を増進させる。
【００３１】
変異免疫調節ポリペプチド
本開示は、変異ＩＬ−２調節ポリペプチドを提供する。ヒトＩＬ−２の野生型アミノ酸配列は、図２Ａに示される。ヒトＩＬ−２ポリペプチドの野生型アミノ酸配列は、下記のものであり得る（配列番号１）。
【００３２】
【化１】
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【００３３】
野生型ＩＬ−２は、細胞の表面上のＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）に結合する。ＩＬ−２受容体は、場合によっては、アルファ鎖（ＩＬ−２Ｒα（ＣＤ２５とも称される））と、ベータ鎖（ＩＬ−２Ｒβ（ＣＤ１２２とも称される）と、ガンマ鎖（ＩＬ−２Ｒγ（ＣＤ１３２とも称される））とを含むヘテロ三量体ポリペプチドである。ヒトのＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、及びＩＬ−２Ｒγのアミノ酸配列は、図３Ａ〜３Ｃに示される。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒに対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＩＬ−２Ｒに対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ−２Ｒポリペプチドに対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＩＬ−２Ｒに結合する。例えば、場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ−２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ−２Ｒに結合する。そのような場合、結合親和性は、後述の手順を使用して決定される。
【００３４】
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１００ｎＭ〜１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。別の例として、場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性を有する。そのような場合、結合親和性は、後述の手順を使用して決定される。
【００３５】
本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して単一のアミノ酸置換を有し得る。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して２〜１０のアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して２つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して３つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して４つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して５つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して６つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して７つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して８つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して９つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチド）と比較して１０個のアミノ酸置換を有する。
【００３６】
本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１２０〜１４０のアミノ酸長を有し得、例えば、１２０〜１２５のアミノ酸長、１２５〜１３０のアミノ酸長、１３０〜１３５のアミノ酸長、または１３５〜１４０のアミノ酸長を有する。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００３７】
Ｅ１５の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｄに示されるアミノ酸配列（アミノ酸１５は、グルタミン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｄに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｄに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１５がＧｌｙである図２Ｄに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１５がＶａｌである図２Ｄに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１５がＬｅｕである図２Ｄに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１５がＩｌｅである図２Ｄに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＥ１５置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ−２Ｒ）に対する図２Ａに示される��ミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ−２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００３８】
Ｈ１６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｅに示されるアミノ酸配列（アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＶａｌである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＬｅｕである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＩｌｅである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＡｓｎである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＡｓｐである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＣｙｓである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＧｌｎである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＧｌｕである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＭｅｔである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＰｈｅである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＳｅｒである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＴｈｒである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＴｒｐである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＴｙｒである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＨ１６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ−２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくと��２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ−２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００３９】
Ｄ２０の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｃに示されるアミノ酸配列（アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＧｌｙである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＶａｌである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＬｅｕである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＩｌｅである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＬｙｓである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＡｓｎである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＧｌｎである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸２０がＨｉｓである図２Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＤ２０置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ−２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ−２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４０】
Ｆ４２の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＧｌｙである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示される��ミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４１】
Ｙ４５の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｆに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＧｌｙである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＶａｌである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＬｅｕである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＩｌｅである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＹ４５置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸��列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４２】
Ｑ１２６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｇに示されるアミノ酸配列（アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＶａｌである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＬｅｕである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＩｌｅである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＱ１２６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２��に示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４３】
Ｆ４２及びＨ１６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｈに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｈ１６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４４】
Ｆ４２及びＤ２０の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｉに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｄ２０置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４５】
Ｆ４２、Ｄ２０、及びＥ１５の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｊに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１５は、グルタミン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸１５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸１５がＧｌｙである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１５がＧｌｙである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１５がＧｌｙである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｄ２０／Ｅ１５置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖��及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４６】
Ｆ４２、Ｄ２０、及びＨ１６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｋに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｄ２０／Ｈ１６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、��びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４７】
Ｆ４２、Ｄ２０、及びＱ１２６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｌに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｄ２０／Ｑ１２６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態��を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４８】
Ｆ４２、Ｄ２０、及びＹ４５の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｍに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸４５がＧｌｙである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｄ２０／Ｙ４５置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及��ガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００４９】
Ｆ４２、Ｄ２０、Ｙ４５、及びＨ１６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｎに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＶａｌである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｄ２０／Ｙ４５／Ｈ１６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００５０】
Ｆ４２、Ｄ２０、Ｙ４５、及びＱ１２６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｏに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＶａｌである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｄ２０／Ｙ４５／Ｑ１２６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００５１】
Ｆ４２、Ｄ２０、Ｙ４５、Ｈ１６、及びＱ１２６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｐに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＶａｌであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、上記のＦ４２／Ｄ２０／Ｙ４５／Ｈ１６／Ｑ１２６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００５２】
Ｆ４２、Ｑ１２６、及びＨ１６の置換
場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｑに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｓｎであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＬｙｓであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｒｇであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＨｉｓであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆ４２／Ｑ１２６／Ｈ１６置換変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むア��ファ鎖、ベータ鎖、及びガンマ鎖を含むＩＬ２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも５％、１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ２Ｒに結合する。場合によっては、そのような変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【００５３】
融合ポリペプチド
本開示は、ＩＬ−２融合ポリペプチドを提供する。本開示の融合ポリペプチドは、ａ）本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド、及びｂ）異種融合パートナーを含む。場合によっては、異種融合パートナーは、変異ＩＬ−２ポリペプチドのＮ末端に融合している。場合によっては、異種融合パートナーは、変異ＩＬ−２ポリペプチドのＣ末端に融合している。場合によっては、本開示のＩＬ−２融合ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドのＮ末端に融合している第１の異種融合パートナー及び変異ＩＬ−２ポリペプチドのＣ末端に融合している第２の異種融合パートナーを含む。
【００５４】
本開示のＩＬ−２融合ポリペプチドの全長は、１３５アミノ酸〜２０００アミノ酸の範囲にわたり得る。例えば、本開示のＩＬ−２融合ポリペプチドは、１３５アミノ酸〜１５０アミノ酸、１５０アミノ酸〜１７５アミノ酸、１７５アミノ酸〜２００アミノ酸、２００アミノ酸〜２２５アミノ酸、２２５アミノ酸〜２５０アミノ酸、２５０アミノ酸〜２７５アミノ酸、２７５アミノ酸〜３００アミノ酸、３００アミノ酸〜３５０アミノ酸、３５０アミノ酸〜４００アミノ酸、４００アミノ酸、４００アミノ酸〜４５０アミノ酸、４５０アミノ酸〜５００アミノ酸、５００アミノ酸〜６００アミノ酸、６００アミノ酸〜７００アミノ酸、７００アミノ酸〜８００アミノ酸、８００アミノ酸〜９００アミノ酸、９００アミノ酸〜１０００アミノ酸、１０００アミノ酸〜１２５０アミノ酸、１２５０アミノ酸〜１５００アミノ酸、１５００アミノ酸〜１７５０アミノ酸、または１７５０アミノ酸〜２０００アミノ酸の範囲にわたり得る。
【００５５】
適切な融合パートナーとしては、限定されないが、膜貫通型ドメイン、抗体Ｆｃ領域、抗体の抗原結合領域、サイトカイン（ＩＬ−２以外）、免疫調節ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメインなどが挙げられる。
【００５６】
Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド
本開示は、多量体（例えば、ヘテロ二量体、ヘテロ三量体）ポリペプチドを提供する。多量体ポリペプチドはＴ細胞調節ポリペプチドであり、本明細書では、「Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド」または「ｓｙｎＴａｃ」（「Ｔ細胞活性化のための免疫学的シナプス」）とも称される。図１Ａ〜１Ｄは、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの概略図を示す。本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドは、「ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ」、「ｓｙｎＴａｃポリペプチド」または「多量体ポリペプチド」とも称される。
【００５７】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチドを含む。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーを含む。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含む。場合によっては、野生型ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ａに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００５８】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む。上記のように、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒに対する野生型ＩＬ−２の結合親和性と比較して、ＩＬ−２Ｒに対する結合親和性の低下を示す。本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む本開示の多量体ポリペプチドもまた、ＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する野生型ＩＬ−２を含む対照多量体ポリペプチドのものと比較して、ＩＬ−２Ｒに対する結合親和性の低下を示す。
【００５９】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒに対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＩＬ−２Ｒに対する結合親和性の低下を示す。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒに対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して低い結合親和性でＩＬ−２Ｒに結合する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する図２Ａに示されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドを含む対照ｓｙｎＴａｃポリペプチドの結合親和性と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性でＩＬ−２Ｒに結合する。
【００６０】
場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、１００ｎｍ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、約１００ｎＭ〜５００ｎＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約４５０ｎＭ、または約４５０ｎＭ〜約５００ｎＭのＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、約５００ｎＭ〜１μＭのＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性を有する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、または約９００ｎＭ〜約１μＭのＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、約１μＭ〜１０μＭのＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性を有する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、約１μＭ〜２μＭ、約２μＭ〜約３μＭ、約３μＭ〜約４μＭ、約４μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約６μＭ、約６μＭ〜約７μＭ、約７μＭ〜約８μＭ、約８μＭ〜約９μＭ、または約９μＭ〜約１０μＭのＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、約１０μＭ〜１００μＭのＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性を有する。例えば、場合によっては、本開示のｓｙｎＴａｃポリペプチドは、約１０μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約３０μＭ、約３０μＭ〜約４０μＭ、約４０μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約６０μＭ、約６０μＭ〜約７０μＭ、約７０μＭ〜約８０μＭ、約８０μＭ〜約９０μＭ、または約９０μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒ（例えば、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列（成熟形態）を含むアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性を有する。
【００６１】
結合親和性の決定
免疫調節ポリペプチドとその関連免疫共調節ポリペプチドとの間の結合親和性は、精製免疫調節ポリペプチド及び精製関連免疫共調節ポリペプチドを使用してバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって決定することができる。本開示のｓｙｎＴａｃとその関連免疫共調節ポリペプチドとの間の結合親和性もまた、精製ｓｙｎＴａｃ及び関連免疫共調節ポリペプチドを使用してＢＬＩによって決定することができる。ＢＬＩ法は、当業者によく知られている。例えば、Ｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．２０（４）：４９８−５０７、及びＳｈａｈ  ａｎｄ  Ｄｕｎｃａｎ（２０１４）Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．１８：ｅ５１３８３を参照のこと。免疫調節ポリペプチドとその関連免疫共調節ポリペプチドとの間、またはｓｙｎＴａｃとその関連免疫共調節ポリペプチドとの間の、本開示に記載の特異的及び相対的な結合親和性は、下記の手順を使用して決定することができる。
【００６２】
本開示のｓｙｎＴａｃとその関連免疫共調節ポリペプチドとの間の結合親和性を決定するために、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６（Ｐａｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ）機器または同様の機器を使用して下記のようにＢＬＩアッセイを実施することができる。Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（例えば、本開示のｓｙｎＴａｃ、または対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、野生型免疫調節ポリペプチドを含む））の結合親和性を決定するために、不溶性の支持体（「バイオセンサー」）上にＴ細胞調節多量体ポリペプチドが固定化される。固定化されたＴ細胞調節多量体ポリペプチドは、「標的」である。固定化は、不溶性の支持体上に捕獲抗体を固定化することによって達成でき、この場合、捕獲抗体によってＴ細胞調節多量体ポリペプチドが固定化される。例えば、固定化は、不溶性の支持体上に抗Ｆｃ（例えば、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ）抗体を固定化することによって達成でき、この場合、固定化された抗Ｆｃ抗体がＴ細胞調節多量体ポリペプチド（Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドは、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む）に結合し、当該抗Ｆｃ抗体によって当該Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドが固定化される。免疫共調節ポリペプチドがいくつかの異なる濃度で固定化Ｔ細胞調節多量体ポリペプチドに供され、機器の応答が記録される。２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ６．８）、５％のポリ（エチレングリコール）６０００、５０ｍＭのＫＣｌ、０．１％のウシ血清アルブミン、及び０．０２％のＴｗｅｅｎ２０非イオン性界面活性剤を含む液体媒体においてアッセイが実施される。固定化されたＴ細胞調節多量体ポリペプチドに対する免疫共調節ポリペプチドの結合は、３０℃で実施される。結合親和性の正の対照として、抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体を使用することができる。例えば、抗ＨＬＡクラスＩモノクローナル抗体Ｗ６／３２（アメリカンタイプカルチャーコレクション番号ＨＢ−９５；Ｐａｒｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９７９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：３４２）（７ｎＭのＫＤを有する）を使用することができる。検量線を、抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体の段階希釈系列を使用して作成することができる。免疫共調節ポリペプチドまたは抗ＭＨＣクラスＩｍＡｂは、「アナライト」である。ＢＬＩでは、ｉ）固定化ポリペプチド（「標的」）及びｉｉ）内部参照層という２つの表面から反射した白色光の干渉パターンが分析される。バイオセンサーチップに結合する分子（「アナライト」（例えば、免疫共調節ポリペプチド、抗ＨＬＡ抗体））の数が変化すると、干渉パターンがシフトする。この干渉パターンシフトは、リアルタイムで測定することができる。標的／アナライト相互作用の親和性を説明する動力学的用語は、結合定数（ｋa ）及び解離定数（ｋd ）という２つの用語である。これら２つの用語の比（ｋd  ／ｋa）から親和性定数ＫD が導かれる。
【００６３】
上記のように、免疫調節ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２またはＩＬ−２変異体）とその関連免疫共調節ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２Ｒ）との間の結合親和性の決定もまた、ＢＬＩによって実施することができる。アッセイは、ｓｙｎＴａｃ多量体ポリペプチドについて上に記載したものと同様である。Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６（Ｐａｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ）機器または同様の機器を使用して下記のようにＢＬＩアッセイを実施することができる。本開示のｓｙｎＴａｃの構成要素である免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）、及び対照免疫調節ポリペプチド（対照免疫調節ポリペプチドは、野生型免疫調節ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ−２）を含む）が不溶性の支持体（「バイオセンサー」）上に固定化される。免疫調節ポリペプチドは、「標的」である。固定化は、不溶性の支持体上に捕獲抗体を固定化することによって達成でき、この場合、捕獲抗体によって免疫調節ポリペプチドが固定化される。例えば、標的が免疫親和性タグ（例えば、ＦＬＡＧ、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ）に融合しているのであれば、その免疫親和性タグに対する適切な抗体（例えば、抗ヒトＩｇＧＦｃ）を不溶性の支持体上に固定化することによって固定化を達成でき、この場合、固定化された抗体が免疫調節ポリペプチド（免疫調節ポリペプチドは、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む）に結合し、当該抗体によって当該免疫調節ポリペプチドが固定化される。免疫共調節ポリペプチド（１つまたは複数）がいくつかの異なる濃度で固定化免疫調節ポリペプチドに供され、機器の応答が記録される。あるいは、免疫共調節ポリペプチド（１つまたは複数）がバイオセンサーに固定化され（例えば、ＩＬ−２受容体ヘテロ三量体については、単量体サブユニット、ヘテロ二量体部分複合体、または完全なヘテロ三量体として固定化される）、免疫調節ポリペプチドがいくつかの異なる濃度で固定化免疫共調節ポリペプチド（複数可）に供され、機器の応答が記録される。２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ６．８）、５％のポリ（エチレングリコール）６０００、５０ｍＭのＫＣｌ、０．１％のウシ血清アルブミン、及び０．０２％のＴｗｅｅｎ２０非イオン性界面活性剤を含む液体媒体においてアッセイが実施される。固定化された免疫調節ポリペプチドに対する免疫共調節ポリペプチドの結合は、３０℃で実施される。結合親和性の正の対照として、抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体を使用することができる。例えば、抗ＨＬＡクラスＩモノクローナル抗体Ｗ６／３２（アメリカンタイプカルチャーコレクション番号ＨＢ−９５；Ｐａｒｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９７９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：３４２）（７ｎＭのＫＤを有する）を使用することができる。検量線を、抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体の段階希釈系列を使用して作成することができる。免疫共調節ポリペプチドまたは抗ＭＨＣクラスＩｍＡｂは、「アナライト」である。ＢＬＩでは、ｉ）固定化ポリペプチド（「標的」）及びｉｉ）内部参照層という２つの表面から反射した白色光の干渉パターンが分析される。バイオセンサーチップに結合する分子（「アナライト」（例えば、免疫共調節ポリペプチド、抗ＨＬＡ抗体））の数が変化する���、干渉パターンがシフトする。この干渉パターンシフトは、リアルタイムで測定することができる。標的／アナライト相互作用の親和性を説明する動力学的用語は、結合定数（ｋa ）及び解離定数（ｋd ）という２つの用語である。これら２つの用語の比比（ｋd  ／ｋa）から親和性定数ＫD が導かれる。野生型免疫調節ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２）の、その受容体（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性と、変異免疫調節ポリペプチド（例えば、本明細書に開示のＩＬ−２変異体）の、その関連免疫共調節ポリペプチド（例えば、その受容体）（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性とを両方決定することによって、野生型免疫共調節ポリペプチドと比較した関連免疫共調節ポリペプチドに対する変異免疫共調節ポリペプチドの相対的な結合親和性を決定することが可能になる。すなわち、変異免疫調節ポリペプチドの、その受容体（その関連免疫共調節ポリペプチド）に対する結合親和性が、同一の関連免疫共調節ポリペプチドに対する野生型免疫調節ポリペプチドの結合親和性と比較して低下しているか否かを決定することができ、低下しているのであれば、野生型免疫共調節ポリペプチドの結合親和性からの低下パーセント値がいくつであるかを決定することができる。
【００６４】
ＢＬＩアッセイは、マルチウェルプレートにおいて実施される。アッセイを実施するために、Ｏｃｔｅｔデータ取得ソフトウェアにおいてプレートレイアウトが定義され、アッセイ段階が定義され、バイオセンサーが割り当てられる。バイオセンサー構築物が水和される。水和したバイオセンサー構築物及びアッセイプレートがＯｃｔｅｔ機器で１０分間平衡化される。データが得られると、取得データがＯｃｔｅｔデータ解析ソフトウェアに取り込まれる。参照差し引き、ｙ軸アライメント、段階間補正、及びＳａｖｉｔｚｋｙ−Ｇｏｌａｙフィルタリングのための方法を指定することによってプロセシングウィンドウにおいてデータが処理される。解析の段階（結合及び解離）を指定すること、曲線適合モデル（１：１）、適合方法（グローバル）、及び目的ウィンドウ（秒で表示）を選択することによって解析ウィンドウにおいてデータが解析される。適合の質が評価される。それぞれのデータトレースについてのＫD 値（アナライト濃度）は、３倍の範囲内であれば平均することができる。ＫD 誤差値は、親和性定数値の１０倍以内であるべきであり、Ｒ2 値は、０．９５を超えるべきである。例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７７：２０９を参照のこと。
【００６５】
場合によっては、ｉ）関連免疫共調節ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（対照は、野生型免疫調節ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ−２）を含む）の結合親和性と、ｉｉ）関連免疫共調節ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する、野生型免疫調節ポリペプチドの変異体（例えば、変異ＩＬ−２）を含む本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性との比は、（上記のように）ＢＬＩによって測定すると、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０2 ：１、少なくとも５×１０2 ：１、少なくとも１０3 ：１、少なくとも５×１０3 ：１、少なくとも１０4 ：１、少なくとも１０5 ：１、または少なくとも１０6 ：１である。場合によっては、ｉ）関連免疫共調節ポリペプチドに対する対照Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（対照は、野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、ｉｉ）関連免疫共調節ポリペプチドに対する、野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドの結合親和性との比は、ＢＬＩによって測定すると、１．５：１〜１０6 ：１の範囲内であり、例えば、１．５：１〜１０：１、１０：１〜５０：１、５０：１〜１０2 ：１、１０2 ：１：１〜１０3 ：１、１０3 ：１〜１０4 ：１、１０4 ：１〜１０5 ：１、または１０5 ：１〜１０6 ：１の範囲内である。
【００６６】
場合によっては、ｉ）関連免疫共調節ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する対照免疫調節ポリペプチド（対照は、野生型免疫調節ポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ−２）を含む）の結合親和性と、ｉｉ）関連免疫共調節ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する、野生型免疫調節ポリペプチドの変異体（例えば、変異ＩＬ−２）を含む本開示の免疫調節ポリペプチドの結合親和性との比は、（上記のように）ＢＬＩによって測定すると、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０2 ：１、少なくとも５×１０2 ：１、少なくとも１０3 ：１、少なくとも５×１０3 ：１、少なくとも１０4 ：１、少なくとも１０5 ：１、または少なくとも１０6 ：１である。場合によっては、ｉ）関連免疫共調節ポリペプチドに対する対照免疫調節ポリペプチド（対照は、野生型免疫調節ポリペプチドを含む）の結合親和性と、ｉｉ）関連免疫共調節ポリペプチドに対する、野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含む本開示の免疫調節ポリペプチドの結合親和性との比は、ＢＬＩによって測定すると、１．５：１〜１０6 ：１の範囲内であり、例えば、１．５：１〜１０：１、１０：１〜５０：１、５０：１〜１０2 ：１、１０2 ：１：１〜１０3 ：１、１０3 ：１〜１０4 ：１、１０4 ：１〜１０5 ：１、または１０5 ：１〜１０6 ：１の範囲内である。
【００６７】
本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、単一のアミノ酸置換を有することができる。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、２〜１０個のアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、２つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、３つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、４つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、５つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、６つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、７つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、８つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、９つのアミノ酸置換を有する。場合によっては、本開示のＳｙｎＴａｃポリペプチド中に存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、野生型ＩＬ−２ポリペプチド（例えば、図２Ａまたは配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、ＩＬ−２ポリペプチド）に対して、１０個のアミノ酸置換を有する。
【００６８】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含み、ここでは、第１のポリペプチドは、アミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシル末端（Ｃ末端）の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、ｂ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、及びｃ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）を含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｂ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドを含む。他の場合では、本開示の多量体ポリペプチドは、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含み、ここでは、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、及びｂ）第１のＭＨＣポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｃ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。ある場合には、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドはクラスＩ  ＭＨＣポリペプチドであり、例えば、場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩβ２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍまたはβ２Ｍ）ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖（Ｈ鎖）であり、または第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ  Ｈ鎖であり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩβ２Ｍポリペプチドである。他の場合では、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドは、クラスＩＩ  ＭＨＣポリペプチドであり、例えば、場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα−鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ−鎖ポリペプチドである。他の場合では、第１のポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ−鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα−鎖ポリペプチドである。場合によっては、多量体ポリペプチドは、２つ以上の免疫調節ポリペプチドを含み、ここでは、免疫調節ポリペプチドの少なくとも１つは本開示の変異ＩＬ−２免疫調節ポリペプチドである。本開示の多量体ポリペプチドが２つ以上の免疫調節ポリペプチドを含む場合は、場合によっては、２つ以上の免疫調節ポリペプチドは同じポリペプチド鎖に存在し、直列状態でもよい。本開示の多量体ポリペプチドが２つ以上の免疫調節ポリペプチドを含む場合は、場合によっては、２つ以上の免疫調節ポリペプチドは別々のポリペプチドに存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドはヘテロ二量体である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは三量体ポリペプチドである。
【００６９】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド、及びｉｉｉ）免疫調節ドメイン（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）を含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉ）免疫調節ドメイン（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）を含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）免疫調節ドメイン（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）、及びｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉｉ）免疫調節ドメイン（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）を含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドが非Ｉｇ骨格を含む場合は、非Ｉｇ骨格は、ＸＴＥＮペプチド、トランスフェリンポリペプチド、Ｆｃ受容体ポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド、シルク様ポリペプチドまたはシルク−エラスチン様ポリペプチドである。
【００７０】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは一価である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは多価である。場合によっては、本開示の多価の多量体ポリペプチドは、第１または第２のポリペプチドのうちの１つに免疫グロブリンＦｃポリペプチドを含む。例えば、本開示の多量体ポリペプチド中に存在するＦｃポリペプチドに応じて、多量体ポリペプチドはホモ二量体でもよく、ここでは、多量体ポリペプチドの２つの分子はホモ二量体中に存在し、例えば、２つの分子中に存在するＦｃポリペプチドを介して、多量体ポリペプチドの２つの分子は互いにジスルフィド結合していてもよい。別の例として、本開示の多量体ポリペプチドは、多量体ポリペプチドの３つ、４つまたは５つの分子を含むことができ、ここでは、多量体ポリペプチドの分子は、例えば、分子中に存在するＦｃポリペプチドを介して、互いにジスルフィド結合していてもよい。
【００７１】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、及びｉｉｉ）本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）Ｆｃポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２Ｍポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド、ｉｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉｉ）Ｆｃポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｉｉ）本開示の第１の変異ＩＬ−２ポリペプチド、ｉｖ）本開示の第２の変異ＩＬ−２ポリペプチド、及びｖ）本開示の第３の変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖、及びｉｉ）Ｆｃポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、第１、第２及び第３の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有する。場合によっては、第１、第２及び第３の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸配列が互いに異なる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ、及びｉｉ）β２Ｍポリペプチドを含む第１のポリペプチド、ならびにｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）本開示の第１の変異ＩＬ−２ポリペプチド、ｉｉ）本開示の第２の変異ＩＬ−２ポリペプチド、及びｉｉｉ）本開示の第３の変異ＩＬ−２ポリペプチド、ｉｖ）クラスＩ  ＭＨＣ重鎖；及びｖ）Ｆｃポリペプチドを含む第２のポリペプチドを含む。場合によっては、第１、第２及び第３の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有する。場合によっては、第１、第２及び第３の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸配列が互いに異なる。
【００７２】
リンカー
本開示の多量体ポリペプチドは、例えば、エピトープとＭＨＣポリペプチドとの間、ＭＨＣポリペプチドと免疫調節ポリペプチドとの間、ＭＨＣポリペプチドとＩｇ  Ｆｃポリペプチドとの間、第１の変異ＩＬ−２ポリペプチドと第２の変異ＩＬ−２ポリペプチドとの間、または第２の変異ＩＬ−２ポリペプチドと第３の変異ＩＬ−２ポリペプチドとの間に挿入されたリンカーペプチドを含むことができる。
【００７３】
適切なリンカー（「スペーサー」とも称される）は、容易に選択することができ、いくつかの適切な長さ、例えば、４アミノ酸〜１０アミノ酸、５アミノ酸〜９アミノ酸、６アミノ酸〜８アミノ酸、または７アミノ酸〜８アミノ酸を含めた、１アミノ酸〜２５アミノ酸、３アミノ酸〜２０アミノ酸、２アミノ酸〜１５アミノ酸、３アミノ酸〜１２アミノ酸のうちのいずれかでもよい。適切なリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸の長さでもよい。
【００７４】
例示的リンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）n 、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）n 、（ＧＳＧＧＳ）n （配列番号８９）及び（ＧＧＧＳ）n （配列番号８６）を含め、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー及び当技術分野で既知の他の可動性リンカーが挙げられる。グリシンポリマー及びグリシン−セリンポリマーを使用することができ、ＧｌｙとＳｅｒは両方とも比較的構造不定であるので、成分間の中立のテザーとして働くことができる。グリシンポリマーを使用することができ、グリシンは、アラニンと比べてでさえ、それよりも有意に多くのファイ−プサイ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限されない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２（１９９２）を参照されたい）。例示的リンカーは、限定されないが、ＧＧＳＧ（配列番号２）、ＧＧＳＧＧ（配列番号３）、ＧＳＧＳＧ（配列番号４）、ＧＳＧＧＧ（配列番号５）、ＧＧＧＳＧ（配列番号６）、ＧＳＳＳＧ（配列番号７）などを含めたアミノ酸配列を含むことできる。例示的リンカーは、例えば、ｎが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、Ｇｌｙ（Ｓｅｒ４）n を含むことができる。場合によっては、リンカーは、ｎが４である、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）n （配列番号９３）を含む。場合によっては、リンカーは、ｎが５である、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）n （配列番号９４）を含む。場合によっては、リンカーは、ｎが１である、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）n （配列番号９）を含む。場合によっては、リンカーは、ｎが２である、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）n （配列番号９２）を含む。場合によっては、リンカーは、ｎが３である、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）n （配列番号８９）を含む。場合によっては、リンカーは、ｎが４である、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）n （配列番号９０）を含む。場合によっては、リンカーは、ｎが５である、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）n （配列番号９１）を含む。
【００７５】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド中に存在するリンカーポリペプチドは、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド中に存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基を含む。場合によっては、例えば、適切なリンカーは、下記のアミノ酸配列（配列番号１０）を含む。
【００７６】
【化２】
2020511949.tif 000003
【００７７】
エピトープ
本開示の多量体ポリペプチド中に存在するエピトープは、約４アミノ酸〜約２５アミノ酸の長さを有することができ、例えば、エピトープは、４アミノ酸（ａａ）〜１０ａａ、１０ａａ〜１５ａａ、１５ａａ〜２０ａａ、または２０ａａ〜２５ａａの長さを有することができる。例えば、本開示の多量体ポリペプチド中に存在するエピトープは、４アミノ酸（ａａ）、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、２０ａａ、２１ａａ、２２ａａ、２３ａａ、２４ａａ、または２５ａａの長さを有することができる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチド中に存在するエピトープは、５アミノ酸〜１０アミノ酸、例えば、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａの長さを有する。
【００７８】
本開示の多量体ポリペプチド中に存在するエピトープは、Ｔ細胞に特異的に結合し、すなわち、エピトープはエピトープ特異的Ｔ細胞に特異的結合する。エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープに結合するが、参照アミノ酸配列と異なるエピトープに実質的に結合しない。例えば、エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープに結合し、もし結合したとしても、１０-6Ｍ未満、１０-5Ｍ未満または１０-4Ｍ未満の親和性で、参照アミノ酸配列と異なるエピトープに結合する。エピトープ特異的Ｔ細胞は、少なくとも１０-7Ｍ、少なくとも１０-8Ｍ、少なくとも１０-9Ｍまたは少なくとも１０-10 Ｍの親和性で、特異的なエピトープに結合することができる。
【００７９】
適切なエピトープとしては、限定されないが、がん関連抗原中に存在するエピトープが挙げられる。がん関連抗原としては、限定されないが、α−葉酸受容体、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８、がん胎児抗原（ＣＥＡ）、上皮糖タンパク質−２（ＥＧＰ−２）、上皮糖タンパク質−４０（ＥＧＰ−４０）、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児アセチルコリン受容体、ガングリオシド抗原ＧＤ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、カッパ軽鎖、ＬｅＹ、Ｌ１細胞接着分子、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＮＫＧ２Ｄリガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍関連糖タンパク質−７２（ＴＡＧ−７２）、及び血管内皮増殖因子受容体−２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）が挙げられる。例えば、Ｖｉｇｎｅｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：１５、及びＶｉｇｎｅｒｏｎ（２０１５）ＢｉｏＭｅｄ  Ｒｅｓ．Ｉｎｔ’ｌ  Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ９４８５０１を参照されたい。場合によっては、エピトープは、ヒトパピローマウイルスＥ７抗原エピトープである。例えば、Ｒａｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３６：６６を参照されたい。
【００８０】
場合によっては、エピトープは、ＨＰＶ１６Ｅ７／８２〜９０（ＬＬＭＧＴＬＧＩＶ（配列番号１１））である。場合によっては、エピトープは、ＨＰＶ１６Ｅ７／８６〜９３（ＴＬＧＩＶＣＰＩ（配列番号１２））である。場合によっては、エピトープは、ＨＰＶ１６Ｅ７／１１〜２０（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１３））である。場合によっては、エピトープは、ＨＰＶ１６Ｅ７／１１〜１９（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴ（配列番号８７））である。追加の適切なＨＰＶエピトープについては、例えば、Ｒｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５９３４）を参照されたい。
【００８１】
ＭＨＣポリペプチド
上記のように、本開示の多量体ポリペプチドはＭＨＣポリペプチドを含む。本開示において、用語「主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド」は、ヒトＭＨＣ（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも称される）ポリペプチド、げっ歯類（例えば、マウス、ラットなど）のＭＨＣポリペプチド及び他の哺乳類種（例えば、ウサギ類、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギなど）のＭＨＣポリペプチドなどを含めた、様々な種のＭＨＣポリペプチドを含むことを意図する。用語「ＭＨＣポリペプチド」は、クラスＩ  ＭＨＣポリペプチド（例えば、β−２ミクログロブリン及びＭＨＣクラスＩ重鎖）ならびにＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩＩαポリペプチド及びＭＨＣクラスＩＩβポリペプチド）を含むことを意図する。
【００８２】
上記のように、本開示の多量体ポリペプチドのいくつかの実施形態では、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドはクラスＩ  ＭＨＣポリペプチドであり、例えば、場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖（Ｈ鎖）である。他の場合では、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドは、クラスＩＩ  ＭＨＣポリペプチドであり、例えば、場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα−鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ−鎖ポリペプチドである。他の場合では、第１のポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩβ−鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩα−鎖ポリペプチドである。
【００８３】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドは、ヒトＭＨＣポリペプチドであり、ヒトＭＨＣポリペプチドは、「ヒト白血球抗原」（「ＨＬＡ」）ポリペプチドとも称される。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドはクラスＩ  ＨＬＡポリペプチド、例えば、β２−ミクログロブリンポリペプチドまたはクラスＩ  ＨＬＡ重鎖ポリペプチドである。クラスＩ  ＨＬＡ重鎖ポリペプチドとしては、ＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｅ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｆ重鎖ポリペプチド及びＨＬＡ−Ｇ重鎖ポリペプチドが挙げられる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣポリペプチドは、クラスＩＩ  ＨＬＡポリペプチド、例えば、クラスＩＩ  ＨＬＡα鎖またはクラスＩＩ  ＨＬＡβ鎖である。ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとしては、ＭＣＨクラスＩＩ  ＤＰα及びβポリペプチド、ＤＭα及びβポリペプチド、ＤＯＡα及びβポリペプチド、ＤＯＢα及びβポリペプチド、ＤＱα及びβポリペプチドならびにＤＲα及びβポリペプチドが挙げられる。
【００８４】
一例を挙げると、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａに示されるヒトＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６５に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【００８５】
一例を挙げると、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のヒトＨＬＡ−Ａ重鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６５に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【００８６】
ＧＳＨＳＭＲＹＦＦＴＳＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＶＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＡＡＳＱＲＭＥＰＲＡＰＷＩＥＱＥＧＰＥＹＷＤＧＥＴＲＫＶＫＡＨＳＱＴＨＲＶＤＬＧＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＧＳＨＴＶＱＲＭＹＧＣＤＶＧＳＤＷＲＦＬＲＧＹＨＱＹＡＹＤＧＫＤＹＩＡＬＫＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＭＡＡＱＴＴＫＨＫＷＥＡＡＨＶＡＥＱＬＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＲＲＹＬＥＮＧＫＥＴＬＱＲＴＤＡＰＫＴＨＭＴＨＨＡＶＳＤＨＥＡＴＬＲＣＷＡＬＳＦＹＰＡＥＩＴＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＴＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＱＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＫＰＬＴＬＲＷＥＰ（配列番号１４）。
【００８７】
別の例として、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ｂに示されるヒトＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６２に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【００８８】
別の例として、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ｃに示されるヒトＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６２に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【００８９】
別の例として、本開示の多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。
【００９０】
ＧＰＨＳＬＲＹＦＶＴＡＶＳＲＰＧＬＧＥＰＲＦＩＡＶＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＡＤＮＰＲＦＥＰＲＡＰＷＭＥＱＥＧＰＥＹＷＥＥＱＴＱＲＡＫＳＤＥＱＷＦＲＶＳＬＲＴＡＱＲＹＹＮＱＳＫＧＧＳＨＴＦＱＲＭＦＧＣＤＶＧＳＤＷＲＬＬＲＧＹＱＱＦＡＹＤＧＲＤＹＩＡＬＮＥＤＬＫＴＷＴＡＡＤＴＡＡＬＩＴＲＲＫＷＥＱＡＧＤＡＥＹＹＲＡＹＬＥＧＥＣＶＥＷＬＲＲＹＬＥＬＧＮＥＴＬＬＲＴＤＳＰＫＡＨＶＴＹＨＰＲＳＱＶＤＶＴＬＲＣＷＡＬＧＦＹＰＡＤＩＴＬＴＷＱＬＮＧＥＤＬＴＱＤＭＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＬＧＫＥＱＮＹＴＣＨＶＨＨＫＧＬＰＥＰＬＴＬＲＷ（配列番号１５）。
【００９１】
本開示の多量体ポリペプチドのβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドは、ヒトβ２Ｍポリペプチド、非ヒト霊長類β２Ｍポリペプチド、マウスβ２Ｍポリペプチドなどでもよい。ある場合には、β２Ｍポリペプチドは、図６に示されるβ２Ｍアミノ酸配列に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合には、β２Ｍポリペプチドは、図６に示されるβ２Ｍアミノ酸配列のアミノ酸２１〜１１９に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００９２】
場合によっては、ＭＨＣポリペプチドは、参照ＭＨＣポリペプチド（参照ＭＨＣポリペプチドは野生型ＭＨＣポリペプチドでもよい）に対して、単一のアミノ酸置換を含み、ここでは、単一のアミノ酸置換は、あるアミノ酸をシステイン（Ｃｙｓ）残基と置換する。そのようなシステイン残基は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドのＭＨＣポリペプチド中に存在する場合に、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド鎖中に存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成することができる。
【００９３】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド中の第１のＭＨＣポリペプチド及び／または本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド中の第２のＭＨＣポリペプチドは、あるアミノ酸をシステインと置換するためのアミノ酸置換を含み、ここでは、第１のＭＨＣポリペプチド中の置換システインは第２のＭＨＣポリペプチド中のシステインとジスルフィド結合を形成し、第１のＭＨＣポリペプチド中のシステインは、第２のＭＨＣポリペプチド中の置換システインとジスルフィド結合を形成し、または第１のＭＨＣポリペプチド中の置換システインは、第２のＭＨＣポリペプチド中の置換システインとジスルフィド結合を形成する。
【００９４】
例えば、場合によっては、ＨＬＡβ２−ミクログロブリン及びＨＬＡクラスＩ重鎖中の残基の以下の対のうちの１つがシステインで置換される（ここでは、残基番号は成熟ポリペプチドのものである）。１）β２Ｍ残基１２、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３６、２）β２Ｍ残基１２、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３７、３）β２Ｍ残基８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３４、４）β２Ｍ残基１０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３５、５）β２Ｍ残基２４、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３６、６）β２Ｍ残基２８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３２、７）β２Ｍ残基９８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１９２、８）β２Ｍ残基９９、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３４、９）β２Ｍ残基３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１２０、１０）β２Ｍ残基３１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基９６、１１）β２Ｍ残基５３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基３５、１２）β２Ｍ残基６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基９６、１３）β２Ｍ残基６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１２２、１４）β２Ｍ残基６３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２７、１５）β２Ｍ残基Ａｒｇ３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｙ１２０、１６）β２Ｍ残基Ｈｉｓ３１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ９６、１７）β２Ｍ残基Ａｓｐ５３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ３５、１８）β２Ｍ残基Ｔｒｐ６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ９６、１９）β２Ｍ残基Ｔｒｐ６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｓｐ１２２、２０）β２Ｍ残基Ｔｙｒ６３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｔｙｒ２７、２１）β２Ｍ残基Ｌｙｓ６、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｕ２３２、２２）β２Ｍ残基Ｇｌｎ８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ２３４、２３）β２Ｍ残基Ｔｙｒ１０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｐｒｏ２３５、２４）β２Ｍ残基Ｓｅｒ１１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ２４２、２５）β２Ｍ残基Ａｓｎ２４、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｌａ２３６、２６）β２Ｍ残基Ｓｅｒ２８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｕ２３２、２７）β２Ｍ残基Ａｓｐ９８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｈｉｓ１９２、及び２８）β２Ｍ残基Ｍｅｔ９９、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ２３４。ＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ重鎖のアミノ酸の番号付けは、シグナルペプチドを有さない成熟ＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ重鎖に関してである。例えば、シグナルペプチドを含む、図５Ａに示されるアミノ酸配列では、Ｇｌｙ１２０はＧｌｙ１４４である、Ｇｌｎ９６はＧｌｎ１２０である、などである。場合によっては、β２ＭポリペプチドはＲ１２Ｃ置換を含み、ＨＬＡクラスＩ重鎖はＡ２３６Ｃ置換を含み、そのような場合では、β２ＭポリペプチドのＣｙｓ−１２とＨＬＡクラスＩ重鎖のＣｙｓ−２３６との間にジスルフィド結合が生じる。例えば、場合によっては、成熟ＨＬＡ−Ａアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図５Ａに示されるアミノ酸配列の残基２６０）がＣｙｓで置換される。場合によっては、成熟ＨＬＡ−Ｂアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図５Ｂに示されるアミノ酸配列の残基２６０）がＣｙｓで置換される。場合によっては、成熟ＨＬＡ−Ｃアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図５Ｃに示されるアミノ酸配列の残基２６０）がＣｙｓで置換される。場合によっては、図６に示されるアミノ酸配列の残基３２（成熟β２ＭのＡｒｇ−１２に対応する）がＣｙｓで��換される。
【００９５】
場合によっては、β２Ｍポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１６）を含む。
【００９６】
【化３】
2020511949.tif 000004
【００９７】
場合によっては、β２Ｍポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１７）を含む。
【００９８】
【化４】
2020511949.tif 000005
【００９９】
場合によっては、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１４）を含む。
【０１００】
【化５】
2020511949.tif 000006
【０１０１】
場合によっては、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１８）を含む。
【０１０２】
【化６】
2020511949.tif 000007
【０１０３】
場合によっては、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１９）を含む。
【０１０４】
【化７】
2020511949.tif 000008
【０１０５】
場合によっては、β２Ｍポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１７）を含む。
【０１０６】
【化８】
2020511949.tif 000009
【０１０７】
本開示の多量体ポリペプチドのＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１８）を含む。
【０１０８】
【化９】
2020511949.tif 000010
【０１０９】
これらの配列中、下線が引かれ、太字のＣｙｓ残基は、多量体ポリペプチド中で互いにジスルフィド結合を形成する。
【０１１０】
場合によっては、β２Ｍポリペプチドは、下記のアミノ酸配列（配列番号１７）を含む。
【０１１１】
【化１０】
2020511949.tif 000011
【０１１２】
免疫調節ポリペプチド
本開示の多量体ポリペプチドは、天然起源の共刺激タンパク質の変異体である上記の本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドを含み、当該変異体は、Ｔ細胞に存在するその対応（関連）共刺激タンパク質（例えば、ＩＬ−２Ｒ）に対する天然起源のＩＬ−２ポリペプチドの親和性と比較して、対応共刺激タンパク質（ＩＬ−２Ｒ）に対する親和性の低下を示す。したがって、本開示の多量体ポリペプチドは、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む。
【０１１３】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｅに示されるアミノ酸配列（アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＶａｌである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＬｅｕである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＩｌｅである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＡｓｎである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＡｓｐである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＣｙｓである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＧｌｎである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＧｌｕである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＭｅｔである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＰｈｅである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＳｅｒである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＴｈｒである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＴｒｐである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１６がＴｙｒである図２Ｅに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１１４】
Ｆ４２の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｂに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＧｌｙである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅである図２Ｂに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む���合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１１５】
Ｙ４５の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｆに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＧｌｙである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＶａｌである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＬｅｕである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４５がＩｌｅである図２Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、Ｉ���−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１１６】
Ｑ１２６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｇに示されるアミノ酸配列（アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＶａｌである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＬｅｕである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸１２６がＩｌｅである図２Ｇに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ���Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１１７】
Ｆ４２及びＨ１６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｈに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｈに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、Ｆ４２Ａ置換及びＨ１６Ａ置換を含むＩＬ−２変異体の２つのコピーを含み、多量体ポリペプチドは、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチド及びβ２Ｍポリペプチドを含み、ＩＬ−２（Ｆ４２Ａ、Ｈ１６Ａ）の２つのコピーは、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図３４Ｂに示されるアミノ酸配列（Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む）を含む。
【０１１８】
Ｆ４２及びＤ２０の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｉに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓである図２Ｉに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１１９】
Ｆ４２、Ｄ２０、及びＥ１５の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｊに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１５は、グルタミン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＡｓｐである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸１５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸１５がＧｌｙである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１５がＧｌｙである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１５がＧｌｙである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸１５がＡｌａである図２Ｊに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は���ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１２０】
Ｆ４２、Ｄ２０、及びＨ１６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｋに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｋに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖上に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１２１】
Ｆ４２、Ｄ２０、及びＱ１２６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｌに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｌに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１２２】
Ｆ４２、Ｄ２０、及びＹ４５の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｍに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸４５がＧｌｙである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａである図２Ｍに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１２３】
Ｆ４２、Ｄ２０、Ｙ４５、及びＨ１６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｎに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＶａｌである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｎに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１２４】
Ｆ４２、Ｄ２０、Ｙ４５、及びＱ１２６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｏに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＶａｌである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａである図２Ｏに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１２５】
Ｆ４２、Ｄ２０、Ｙ４５、Ｈ１６、及びＱ１２６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｐに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸２０は、アスパラギン酸以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸２０は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、またはＧｌｕであり、アミノ酸４５は、チロシン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４５は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｙであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＧｌｙであり、アミノ酸１２６がＶａｌであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸２０がＡｌａであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｓｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＧｌｎであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＬｙｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＡｒｇであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸２０がＨｉｓであり、アミノ酸４５がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｐに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１２６】
Ｆ４２、Ｑ１２６、及びＨ１６の置換
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、図２Ｑに示されるアミノ酸配列（アミノ酸４２は、フェニルアラニン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸４２は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１２６は、グルタミン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１２６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、アミノ酸１６は、ヒスチジン以外のアミノ酸であり、例えば、アミノ酸１６は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、またはＧｌｕである）に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＨｉｓであり、アミノ酸１６がＡｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＩｌｅである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＧｌｙであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＶａｌであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＬｅｕであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＧｌｙである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＩｌｅであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｓｎであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｌａであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＬｙｓであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＡｒｇであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在する変異ＩＬ−２ポリペプチドは、アミノ酸４２がＡｌａであり、アミノ酸１２６がＨｉｓであり、アミノ酸１６がＡｌａである図２Ｑに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドには、変異ＩＬ−２ポリペプチドの単一のコピーが存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含み、例えば、２つのコピーは、２つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの３つのコピーを含み、例えば、３つのコピーは、３つのコピーの間にリンカーを挟まずに直列に存在するか、またはリンカーペプチドを挟んで直列に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、ＨＬＡクラスＩ重鎖を含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがＨＬＡクラスＩ重鎖及びβ２Ｍを含む場合、ＩＬ−２ポリペプチド（複数可）は、β２Ｍポリペプチドを含むポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドまたは変異ＩＬ−２ポリペプチドを含むｓｙｎＴａｃは、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭのＩＬ−２Ｒに対する結合親和性を有する。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、１３３のアミノ酸長を有する。
【０１２７】
複数の免疫調節ドメイン
上記のように、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、２つ以上の免疫調節ポリペプチドを含み、ここでは、２つ以上の免疫調節ポリペプチドの少なくとも１つは本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドである。
【０１２８】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、２コピー以上の本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む。場合によっては、２つ以上の変異ＩＬ−２ポリペプチドが、本開示の多量体ポリペプチドの同じポリペプチド鎖に存在する。場合によっては、２つ以上の変異ＩＬ−２ポリペプチドが、本開示の多量体ポリペプチドの別々のポリペプチド鎖に存在する。
【０１２９】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、第１の免疫調節ポリペプチド及び少なくとも第２の免疫調節ポリペプチドを含み、ここでは、第１の免疫調節ポリペプチドは本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドであり、第２の免疫調節ポリペプチドはＩＬ−２ポリペプチドではない。例えば、場合によっては、第２の免疫調節ポリペプチドは腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、例えば、ＦａｓＬポリペプチド、４−１ＢＢＬポリペプチド、ＣＤ４０ポリペプチド、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、ＣＤ３０Ｌポリペプチド、ＣＤ７０ポリペプチドなどである。場合によっては、本開示の多量体の第２のポリペプチド免疫調節ポリペプチドはＴ細胞共刺激ポリペプチドであり、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバー、例えば、ＣＤ７ポリペプチド、ＣＤ８６ポリペプチド、ＩＣＡＭポリペプチドなどである。場合によっては、第２の免疫調節ポリペプチドは、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＩＣＡＭ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８６、ＦａｓＬ及びＰＤ−Ｌ２である。本開示の多量体ポリペプチドの適切な免疫調節ポリペプチドとしては、例えば、ＣＤ７、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ−Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンフォトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４またはＨＶＥＭが挙げられる。場合によっては、第２の免疫調節ポリペプチドは、天然起源の共刺激タンパク質（免疫調節ポリペプチド）の、その対応（関連）共刺激タンパク質に対する親和性と比較して、Ｔ細胞に見られるその対応共刺激タンパク質に対する親和性（上記のように決定される）の低下を示す変異体（例えば、天然起源の４−１ＢＢＬの変異体）である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、第１の免疫調節ポリペプチド及び少なくとも第２の免疫調節ポリペプチドを含み、いずれも変異ＩＬ−２ポリペプチドではない。本開示は、一般に、天然起源の免疫調節ポリペプチドの変異体である免疫調節ポリペプチドの使用に関し、こうした変異体は、対応（関連）共刺激タンパク質に対する天然起源の共刺激タンパク質（免疫調節ポリペプチド）の親和性と比較して、対応共刺激タンパク質に対する親和性（上記のように決定される）の低下を示すことを理解されたい。
【０１３０】
本開示の多量体ポリペプチド中に含まれ得るさらなるＴ細胞調節ドメイン（ＭＯＤ）としては、天然に存在するまたは合成のヒト遺伝子産物（タンパク質）、限定されないが、古典的及び非古典的（例えば、ＦＧＦ２、ＩＬ１、Ｓ１００Ａ４）分泌機構から生じるすべての分泌タンパク質を含めたヒト遺伝子産物を標的とする親和性試薬（例えば、抗体、抗体断片、単鎖Ｆｖ、アプタマー、ナノボディ）、ならびに天然に存在する遺伝的にコードされたタンパク質セグメント（単一もしくは複数の膜スパン）またはＧＰＩ結合などの翻訳後修飾によって固定されているすべての細胞表面タンパク質の外部ドメインが挙げられる。細胞表面グリカンまたは他の翻訳後修飾（例えば、硫酸化）を標的とする任意の天然に存在するまたは合成の親和性試薬（例えば、抗体、抗体断片、単鎖Ｆｖ、アプタマー、ナノボディ、レクチンなど）が挙げられる。例としては、限定されないが、ＴＮＦ／ＴＮＦＲファミリーのメンバー（ＯＸ４０Ｌ、ＩＣＯＳＬ、ＦＡＳＬ、ＬＴＡ、ＬＴＢ  ＴＲＡＩＬ、ＣＤ１５３、ＴＮＦＳＦ９、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫ、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＮＦＳＦ１３ｂ、ＴＮＦＳＦ１４、ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦＳＦ１８、ＣＤ４０ＬＧ、ＣＤ７０）またはＴＮＦ／ＴＮＦＲファミリーのメンバーに対する親和性試薬、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバー（ＶＩＳＴＡ、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７１、Ｂ７２、ＣＴＬＡ４、ＣＤ２８、ＴＩＭ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、Ｔ細胞受容体鎖、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳリガンド、ＨＨＬＡ２、ブチロフィリン、ＢＴＬＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＣＤ３、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＩｇＳＦ  ＣＡＭＳ（ＣＤ２、ＣＤ５８、ＣＤ４８、ＣＤ１５０、ＣＤ２２９、ＣＤ２４４、ＩＣＡＭ−１を含める）、白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＬＲ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ））、レクチンスーパーファミリーのメンバー、セレクチン、サイトカイン／ケモカイン及びサイトカイン／ケモカイン受容体、増殖因子及び増殖因子受容体）、接着分子（インテグリン、フィブロネクチン、カドヘリン）もしくは多スパン内在性膜タンパク質の外部ドメインまたは免疫グロブリンスーパーファミリー及び列挙される遺伝子産物に対する親和性試薬が挙げられる。さらに、限定されないが、ウイルス配列（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ）、細菌配列、真菌配列、真核病原体（例えば、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｂａｂｅｓｉａ、Ｅｉｍｅｒｉａ、Ｔｈｅｉｌｅｒｉａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ及びＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）ならびに哺乳類由来コード領域を含めた、これらの遺伝子産物の活性なホモログ／オルソログが挙げられる。さらに、ＭＯＤは、ヒト遺伝子産物を標的とする小分子薬物を含むことができる。
【０１３１】
骨格ポリペプチド
本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドまたは別の適切な骨格ポリペプチドを含む。
【０１３２】
適切な骨格ポリペプチドとしては、抗体ベースの骨格ポリペプチド及び非抗体ベースの骨格が挙げられる。非抗体ベースの骨格としては、例えば、アルブミン、ＸＴＥＮ（伸長組換え）ポリペプチド、トランスフェリン、Ｆｃ受容体ポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（例えば、Ｈａｓｓｏｕｎｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０２：２１５を参照されたい。例えば、Ｘがプロリン以外の任意のアミノ酸である（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ（配列番号１００））のペンタペプチド繰り返し単位を含むポリペプチド）、アルブミン結合ポリペプチド、シルク様ポリペプチド（例えば、Ｖａｌｌｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｈｉｌｏｓ  Ｔｒａｎｓ  Ｒ  Ｓｏｃ  Ｌｏｎｄ  Ｂ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ．３５７：１６５）を参照されたい）、シルク−エラスチン様ポリペプチド（ＳＥＬＰ；例えば、Ｍｅｇｅｅｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．５４：１０７５を参照されたい）などが挙げられる。適切なＸＴＥＮポリペプチドとしては、例えば、ＷＯ２００９／０２３２７０、ＷＯ２０１０／０９１１２２、ＷＯ２００７／１０３５１５、ＵＳ２０１０／０１８９６８２及びＵＳ２００９／００９２５８２に開示されているものが挙げられ、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：１１８６）も参照されたい。適切なアルブミンポリペプチドとしては、例えば、ヒト血清アルブミンが挙げられる。
【０１３３】
適切な骨格ポリペプチドは、場合によっては、半減期延長ポリペプチドである。したがって、場合によっては、適切な骨格ポリペプチドは、骨格ポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清半減期）を延ばす。例えば、場合によっては、骨格ポリペプチドは、骨格ポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清半減期）を少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍または１００倍超延ばす。一例を挙げると、場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドを欠く対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清半減期）を少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍または１００倍超延ばす。
【０１３４】
Ｆｃポリペプチド
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１及び／または第２のポリペプチド鎖は、Ｆｃポリペプチドを含む。本開示の多量体ポリペプチドのＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃなどでもよい。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａ〜Ｃに示されるＦｃ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃ領域は、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃ領域は、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つＮ７７の置換を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、Ｎ７７Ａ置換を含む。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸９９〜３２５に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図４Ａに示されるヒトＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１９〜２４６に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ｂに示されるヒトＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも��９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図４Ｂに示されるヒトＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドに対するアミノ酸１〜２７６に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｆｃポリペプチドは、図４Ｃに示されるヒトＩｇＡ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図４Ｃに示されるヒトＩｇＡ  Ｆｃポリペプチドに対するアミノ酸１〜２３４に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１３５】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含むが、但し、アスパラギン以外のアミノ酸でＮ２９７が置換されている。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ｃに示されるアミノ酸配列（Ｎ２９７Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含むが、但し、ロイシン以外のアミノ酸でＬ２３４が置換されている。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含むが、但し、ロイシン以外のアミノ酸でＬ２３５が置換されている。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ｄに示されるアミノ酸配列（Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含むが、但し、プロリン以外のアミノ酸でＰ３３１が置換されており、場合によっては、置換は、Ｐ３３１Ｓ置換である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含むが、但し、ロイシン以外のアミノ酸でＬ２３４及びＬ２３５が置換されている。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含むが、但し、ロイシン以外のアミノ酸でＬ２３４及びＬ２３５が置換されており、プロリン以外のアミノ酸でＰ３３１が置換されている。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図３３Ｂに示されるアミノ酸配列（Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）を含む。
【０１３６】
さらなるポリペプチド
本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖は、上記のものに加えて、１つまたは複数のポリペプチドを含むことができる。適切なさらなるポリペプチドとしては、エピトープタグ及び親和性ドメインが挙げられる。１つまたは複数のさらなるポリペプチドは、本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖のＮ末端、本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖のＣ末端または本開示の多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖の内部に含まれ得る。
【０１３７】
エピトープタグ
適切なエピトープタグとしては、限定されないが、ヘマグルチニン（ＨＡ；例えば、ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号２０）；ＦＬＡＧ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号２１）；ｃ−ｍｙｃ（例えば、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ；配列番号２２）などが挙げられる。
【０１３８】
親和性ドメイン
親和性ドメインは、特定または精製に有用な結合パートナー、例えば固体支持体に固定化されたものなどと相互作用することができるペプチド配列を含む。複数の連続した単一アミノ酸、例えばヒスチジンをコードするＤＮＡ配列は、発現タンパク質に融合している場合に、ニッケルセファロースなどの樹脂カラムへの高親和性結合による組換えタンパク質のワンステップ精製に使用することができる。例示的親和性ドメインとしては、Ｈｉｓ５（ＨＨＨＨＨ）（配列番号２３）、ＨｉｓＸ６（ＨＨＨＨＨＨ）（配列番号２４）、Ｃ−ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ）（配列番号２２）、Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号２１）、ＳｔｒｅｐＴａｇ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ）（配列番号２５）、ヘマグルチニン、例えば、ＨＡタグ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ）（配列番号２０）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、セルロース結合ドメイン、ＲＹＩＲＳ（配列番号２６）、Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号８８）、キチン結合ドメイン、Ｓ−ペプチド、Ｔ７ペプチド、ＳＨ２ドメイン、Ｃ末端ＲＮＡタグ、ＷＥＡＡＡＲＥＡＣＣＲＥＣＣＡＲＡ（配列番号２７）、金属結合ドメイン、例えば、亜鉛結合ドメインまたはカルシウム結合ドメイン、例えば、カルシウム結合タンパク質、例えば、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルシニューリンＢ、ミオシン軽鎖、リカバリン、Ｓ−モジュリン、ビジニン、ＶＩＬＩＰ、ニューロカルシン、ヒポカルシン、フリクエニン、カルトラクチン、カルパイン大サブユニット、Ｓ１００タンパク質、パルブアルブミン、カルビンディンＤ９Ｋ、カルビンディンＤ２８Ｋ及びカルレチニン由来のもの、インテイン、ビオチン、ストレプトアビジン、ＭｙｏＤ、Ｉｄ、ロイシンジッパー配列ならびにマルトース結合タンパク質が挙げられる。
【０１３９】
本開示の多量体ポリペプチドの例
下記のものは、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ多量体ポリペプチドの非限定的な実施形態である。
【０１４０】
場合によっては、本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド、ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、ならびにｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１  ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、変異ＩＬ−２ポリペプチドは、Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｎ２９７Ａ置換を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ｆ置換及びＬ２３５Ｅ置換を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を含む。場合によっては、第２のポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む。場合によっては、第１のポリペプチドは、エピトープとβ２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む。場合によっては、第２のポリペプチドは、ａ）変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、ｂ）変異ＩＬ−２ポリペプチドとＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびにｃ）ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む。場合によっては、ペプチドリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）3 （配列番号８９）、（ＧＧＧＧＳ）4 （配列番号９０）、及びＡＡＡＧＧ（配列番号２８）から選択される。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｃに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含む。
【０１４１】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）エピトープ、ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリンポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）図３４Ｂに示されるアミノ酸配列を含む変異ＩＬ−２ポリペプチド、ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、ならびにｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１  ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｎ２９７Ａ置換を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ｆ置換及びＬ２３５Ｅ置換を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｃに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、第２のポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む。場合によっては、第１のポリペプチドは、エピトープとβ２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む。場合によっては、第２のポリペプチドは、ａ）変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、ｂ）変異ＩＬ−２ポリペプチドとＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびにｃ）ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む。場合によっては、ペプチドリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）3 （配列番号８９）、（ＧＧＧＧＳ）4 （配列番号９０）、及びＡＡＡＧＧ（配列番号２８）から選択される。
【０１４２】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）ｉ）ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴというアミノ酸配列（配列番号１３）を含むエピトープ、ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリンポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）図３４Ｂに示されるアミノ酸配列を含む変異ＩＬ−２ポリペプチド、ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、及びｉｉｉ）図３３Ａ、図３３Ｂ、図３３Ｃ、または図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１  ＦｃポリペプチドをＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｃに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、第２のポリペプチドは、変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む。場合によっては、第１のポリペプチドは、エピトープとβ２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む。場合によっては、第２のポリペプチドは、ａ）変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、ｂ）変異ＩＬ−２ポリペプチドとＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびにｃ）ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む。場合によっては、ペプチドリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）3 （配列番号８９）、（ＧＧＧＧＳ）4 （配列番号９０）、及びＡＡＡＧＧ（配列番号２８）から選択される。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｃに示されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含む。
【０１４３】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、ｂ）図２２に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドとを含む。
【０１４４】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、ｂ）図２５に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドとを含む。
【０１４５】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドは、ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドと、ｂ）図２８に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドとを含む。
【０１４６】
核酸
本開示は、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本開示は、本開示のＩＬ−２融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。
【０１４７】
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖は、別々の核酸にコードされる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのすべてのポリペプチド鎖は、単一の核酸にコードされる。場合によっては、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。場合によっては、単一の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１４８】
本開示の核酸の非限定的な例は、図２３Ａ、図２６Ａ、図２９Ａ、及び図３２に示される。
【０１４９】
多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖をコードする別々の核酸
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。上記のように、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖は、別々の核酸にコードされる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの別々のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素、例えば、真核細胞で機能的なプロモーターなどのプロモーターに作動可能に連結され、ここでは、プロモーターは構成的プロモーターでもよいし、誘導性プロモーターでもよい。
【０１５０】
本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を提供し、ここでは、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、及びｃ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）を含み、第２の核酸は本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｂ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。適切なＴ細胞エピトープ、ＭＨＣポリペプチド、免疫調節ポリペプチド及びＩｇ  Ｆｃポリペプチドはこれまでに記載されている。場合によっては、第１及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素に作動可能に連結される。場合によっては、転写制御要素は真核細胞で機能的なプロモーターである。場合によっては、核酸は別々の発現ベクター中に存在する。
【０１５１】
本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を提供し、ここでは、第１の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、及びｂ）第１のＭＨＣポリペプチドを含み、第２の核酸は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｃ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。適切なＴ細胞エピトープ、ＭＨＣポリペプチド、免疫調節ポリペプチド及びＩｇ  Ｆｃポリペプチドはこれまでに記載されている。場合によっては、第１及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素に作動可能に連結される。場合によっては、転写制御要素は真核細胞で機能的なプロモーターである。場合によっては、核酸は別々の発現ベクター中に存在する。
【０１５２】
多量体ポリペプチド中に存在する２つ以上のポリペプチドをコードする核酸
本開示は、少なくとも本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドが、第１、第２及び第３のポリペプチドを含む場合は、核酸は、第１、第２及び第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された、タンパク分解により切断可能なリンカーを含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入されたリボソームスキッピングシグナル（またはシス作用性ヒドロラーゼ要素、ＣＨＹＳＥＬ）を含む。核酸の例は以下に記載され、ここでは、タンパク分解により切断可能なリンカーは、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとをコードするヌクレオチド配列の間に提供され、これらの実施形態のうちのいずれかでは、タンパク分解により切断可能なリンカーをコードするヌクレオチド配列の代わりに、ＩＲＥＳまたはリボソームスキッピングシグナルを使用することができる。
【０１５３】
場合によっては、第１の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。場合によっては、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及び第２のポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列は、それぞれ、転写制御要素、例えば、真核細胞で機能的なプロモーターなどのプロモーターに作動可能に連結され、ここでは、プロモーターは構成的プロモーターでもよいし、誘導性プロモーターでもよい。
【０１５４】
本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、ここでは、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ（例えば、Ｔ細胞エピトープ）、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｃ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）、ｄ）タンパク分解により切断可能なリンカー、ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｆ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドを含む。本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、ここでは、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第１のリーダーペプチド、ｂ）エピトープ、ｃ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｄ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）、ｅ）タンパク分解により切断可能なリンカー、ｆ）第２のリーダーペプチド、ｇ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｈ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、ここでは、組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）エピトープ、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｃ）タンパク分解により切断可能なリンカー、ｄ）免疫調節ポリペプチド（例えば、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド）、ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｆ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。場合によっては、第１のリーダーペプチド及び第２のリーダーペプチドはβ２−Ｍリーダーペプチドである。場合によっては、ヌクレオチド配列は転写制御要素に作動可能に連結される。場合によっては、転写制御要素は真核細胞で機能的なプロモーターである。
【０１５５】
適切なＭＨＣポリペプチドはこれまでに記載されている。場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはβ２−ミクログロブリンポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである。場合によっては、β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図６に示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−ＫまたはＨＬＡ−Ｌ重鎖である。場合によっては、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａ〜５Ｃのうちの１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドはＭＨＣクラスＩＩベータ鎖ポリペプチドである。
【０１５６】
適切なＦｃポリペプチドはこれまでに記載されている。場合によっては、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  ＦｃポリペプチドまたはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである。場合によっては、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図４Ａ〜４Ｃに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０１５７】
適切な免疫調節ポリペプチドはこれまでに記載されている。
【０１５８】
タンパク分解により切断可能な適切なリンカーはこれまでに記載されている。場合によっては、タンパク分解により切断可能なリンカーは、ａ）ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号２９）、ｂ）ＥＮＬＹＴＱＳ（配列番号３０）、ｃ）ＤＤＤＤＫ（配列番号３１）、ｄ）ＬＶＰＲ（配列番号３２）、及びｅ）ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号３３）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１５９】
場合によっては、エピトープと第１のＭＨＣポリペプチドとの間のリンカーは第１のＣｙｓ残基を含み、第２のＭＨＣポリペプチドは、第２のＣｙｓ残基をもたらすようにアミノ酸置換を含み、その結果、第１及び第２のＣｙｓ残基がリンカーと第２のＭＨＣポリペプチドとの間にジスルフィド結合をもたらす。場合によっては、第１のＭＨＣポリペプチドは第１のＣｙｓ残基をもたらすようにアミノ酸置換を含み、第２のＭＨＣポリペプチドは第２のＣｙｓ残基をもたらすようにアミノ酸置換を含み、その結果、第１のＣｙｓ残基及び第２のＣｙｓ残基が、第１のＭＨＣポリペプチドと第２のＭＨＣポリペプチドとの間にジスルフィド結合をもたらす。
【０１６０】
組換え発現ベクター
本開示は、本開示の核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。場合によっては、組換え発現ベクターは非ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、組換え発現ベクターはウイルスコンストラクト、例えば、組換えアデノ随伴ウイルスコンストラクト（例えば、米国特許第７，０７８，３８７号を参照されたい）、組換えアデノウイルスコンストラクト、組換えレンチウイルスコンストラクト、組換えレトロウイルスコンストラクト、非組込みウイルスベクターなどである。
【０１６１】
適切な発現ベクターとしては、限定されないが、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルス（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５：２５４３  ２５４９，１９９４、Ｂｏｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ６：５１５  ５２４，１９９９、Ｌｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ  ９２：７７００  ７７０４，１９９５、Ｓａｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ５：１０８８  １０９７，１９９９、ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９、ＷＯ９３／１９１９１、ＷＯ９４／２８９３８、ＷＯ９５／１１９８４及びＷＯ９５／００６５５を参照されたい）、アデノ随伴ウイルス（例えば、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ９：８１  ８６，１９９８、Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：６９１６  ６９２１，１９９７、Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３８：２８５７  ２８６３，１９９７、Ｊｏｍａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ４：６８３  ６９０，１９９７、Ｒｏｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０：６４１  ６４８，１９９９、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ５：５９１  ５９４，１９９６、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｉｎ  ＷＯ９３／０９２３９、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９）６３：３８２２−３８２８、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）１６６：１５４−１６５、及びＦｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９３）９０：１０６１３−１０６１７を参照されたい）、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：１０３１９  ２３，１９９７、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７３：７８１２  ７８１６，１９９９を参照されたい）に基づくウイルスベクター）、レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ならびにラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、レンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス及び乳房腫瘍ウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクター）などが挙げられる。
【０１６２】
多数の適切な発現ベクターが当業者に既知であり、多くが市販されている。例として、真核宿主細胞用：ｐＸＴ１、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ及びｐＳＶＬＳＶ４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）のベクターが提供される。。しかし、宿主細胞に適合さえすれば、任意の他のベクターを使用することができる。
【０１６３】
利用する宿主／ベクター系に応じて、構成的及び誘導性プロモーター、転写エンハンサー要素、転写ターミネータなどを含めたいくつかの適切な転写及び翻訳制御要素を発現ベクターで使用することができる（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３：５１６−５４４を参照されたい）。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、制御要素、例えば、プロモーターなどの転写制御要素に作動可能に連結される。転写制御要素は、真核細胞、例えば哺乳類細胞、または原核細胞（例えば、細菌細胞または古細菌細胞）のいずれかで機能的であり得る。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を原核細胞及び真核細胞の両方で可能にする複数の制御要素に作動可能に連結される。
【０１６５】
適切な真核性プロモーター（真核細胞で機能的なプロモーター）の非限定例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ、初期及び後期ＳＶ４０、レトロウイルスのロングターミナルリピート（ＬＴＲ）ならびにマウスメタロチオネイン−Ｉ由来のものが挙げられる。適切なベクター及びプロモーターの選択は、十分に当技術分野の通常の技能のレベル内である。発現ベクターは、翻訳開始のためのリボソーム結合部位及び転写ターミネータも含むことができる。発現ベクターは、発現を増幅するための適切な配列を含むこともできる。
【０１６６】
遺伝子改変宿主細胞
本開示は、宿主細胞が本開示の核酸で遺伝子改変されている、遺伝子改変宿主細胞を提供する。
【０１６７】
適切な宿主細胞としては、酵母細胞、昆虫細胞及び哺乳類細胞などの真核細胞が挙げられる。場合によっては、宿主細胞は哺乳類細胞株の細胞である。適切な哺乳類細胞株としては、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株などが挙げられる。適切な哺乳類細胞株としては、限定されないが、ＨｅＬａ細胞（例えば、アメリカ培養細胞株保存機関（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）、ベロ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが挙げられる。
【０１６８】
場合によっては、宿主細胞は、内生のＭＨＣβ２−Ｍを合成しないように遺伝子改変された哺乳類細胞である。
【０１６９】
多量体ポリペプチドの生成方法
本開示は、本開示の多量体ポリペプチドの生成方法を提供する。この方法は、一般に、多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターで遺伝子改変されている宿主細胞を培養培地で培養すること、ならびに遺伝子改変宿主細胞及び／または培養培地から多量体ポリペプチドを単離することを含む。多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターで遺伝子改変されている宿主細胞は、「発現宿主」とも称される。上記のように、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖は、別々の組換え発現ベクターにコードされる。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドのすべてのポリペプチド鎖は、単一の組換え発現ベクターにコードされる。
【０１７０】
発現宿主細胞（例えば、発現宿主細胞のライセート）及び／または宿主細胞が培養される培養培地からの多量体ポリペプチドの単離は、タンパク質精製の標準的な方法を使用して行うことができる。
【０１７１】
例えば、ライセートを発現宿主から調製することができ、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィーまたは他の精製技法を使用してライセートを精製することができる。あるいは、多量体ポリペプチドが発現宿主細胞から培養培地中に分泌される場合は、ＨＰＬＣ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィーまたは他の精製技法を使用して、多量体ポリペプチドを培養培地から精製することができる。場合によっては、使用される組成物は、生成物の調製及びその精製の方法と関係がある混入物と比べて、少なくとも８０重量％、少なくとも約８５重量％、少なくとも約９５重量％または少なくとも約９９．５重量％の所望の生成物を含む。ここで、パーセンテージは総タンパク質に基づき得る。
【０１７２】
場合によっては、例えば、多量体ポリペプチドが親和性タグを含む場合は、親和性タグの固定化された結合パートナーを使用して、多量体ポリペプチドを精製することができる。
【０１７３】
組成物
本開示は、医薬組成物を含めて、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む組成物を提供する。本開示は、医薬組成物を含めて、本開示の多量体ポリペプチドを含む組成物を提供する。本開示は、医薬組成物を含めて、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む組成物を提供する。
【０１７４】
多量体ポリペプチドを含む組成物
本開示の組成物は、本開示の多量体ポリペプチドに加えて、以下の１つまたは複数を含むことができる。塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ2 、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ4 など；緩衝剤、例えば、トリス緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；デタージェント、例えば、非イオン性デタージェント、例えばＴｗｅｅｎ−２０など；プロテアーゼ阻害剤；グリセロールなどである。
【０１７５】
組成物は、医薬的に許容可能な賦形剤を含むことができ、様々な医薬的に許容可能な賦形剤が当技術分野で既知であり、本明細書で詳細に論じる必要はない。医薬的に許容可能な賦形剤は、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ  Ｅｄ．（１９９５）または最新版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ  ７th  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃを含めた、様々な刊行物で十分に記載されている。
【０１７６】
医薬組成物は、本開示の多量体ポリペプチド及び医薬的に許容可能な賦形剤を含むことができる。場合によっては、対象の医薬組成物は対象への投与に適しており、例えば、無菌である。例えば、いくつかの実施形態では、対象の医薬組成物はヒト対象への投与に適しており、例えば、ここでは、組成物は無菌であり、検出可能な発熱物質及び／または他の毒素を含んでいない。
【０１７７】
タンパク質組成物は、他の成分、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカン、セルロース、グルコース、ショ糖、マグネシウム、カーボネートなどを含むことができる。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容可能な補助物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、塩酸塩、硫酸塩、溶媒和化合物（例えば、混合イオン性塩、水、有機物）、水和物（例えば、水）などを含むことができる。
【０１７８】
例えば、組成物は、水溶液、粉体、顆粒、錠剤、丸剤、坐剤、カプセル、懸濁液、スプレーなどを含むことができる。組成物は、以下に記載の様々な投与経路に応じて製剤化することができる。
【０１７９】
本開示の多量体ポリペプチドが（例えば、皮下に、腹腔内に、筋肉内に、及び／または静脈内に）直接的に組織に注射剤として投与される場合、製剤は、すぐに使える剤形として、または非水性形態（例えば、再構成可能な貯蔵安定性粉末剤）または水性形態、例えば、医薬的に許容可能な担体及び賦形剤から構成される液剤として、提供することができる。タンパク質含有製剤は、投与後に対象タンパク質の血清半減期を延ばすように提供することもできる。例えば、タンパク質は、コロイドとして調製されたリポソーム製剤、または血清半減期を延ばすための他の従来の技法で提供することができる。例えば、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．１９８０  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７、米国特許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号及び第４，８３７，０２８号に記載されているように、リポソームを調製するために様々な方法が利用可能である。制御放出形態または徐放性形態で調製物を提供することもできる。
【０１８０】
非経口投与に適した製剤の他の例としては、等張無菌注射液、抗酸化剤、静菌薬及び製剤を目的のレシピエントの血液と等張にする溶質、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤及び防腐剤が挙げられる。例えば、対象の医薬組成物は、容器、例えば無菌容器、例えば注射器中に存在していてもよい。製剤は、単位用量または多用量の密閉容器、例えば、アンプル及びバイアル中に提供することができ、注射のために無菌液体賦形剤、例えば水を使用直前に添加することしか必要としないフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵することができる。即時の注射液及び懸濁液は、無菌の粉末剤、顆粒剤及び錠剤から調製することができる。
【０１８１】
製剤中の本開示の多量体ポリペプチドの濃度は、広範に変動する（例えば、重量基準で、約０．１％未満（通常、約２％または少なくとも２％）〜２０％から５０％程度またはそれ以上）可能性があり、選択される特定の投与様式及び患者の要求に従って、主として流体量、粘性及び患者に基づく因子を基に通常選択される。
【０１８２】
本開示は、本開示の組成物、例えば液体組成物を含む容器を提供する。容器は、例えば、注射器、アンプルなどでもよい。場合によっては、容器は無菌である。場合によっては、容器及び組成物の両方が無菌である。
【０１８３】
本開示は、医薬組成物を含めて、本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む組成物を提供する。組成物は、ａ）本開示の変異ＩＬ−２ポリペプチド、及びｂ）多量体ポリペプチドについて上述した賦形剤を含むことができる。場合によっては、賦形剤は医薬的に許容可能な賦形剤である。
【０１８４】
核酸または組換え発現ベクターを含む組成物
本開示は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む組成物、例えば医薬組成物を提供する。多種多様の医薬的に許容可能な賦形剤が当技術分野で既知であり、本明細書で詳細に論じる必要はない。医薬的に許容可能な賦形剤は、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ  ７th  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３rd  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃを含めた、様々な刊行物に十分に記載されている。
【０１８５】
本開示の組成物は、ａ）対象の核酸または組換え発現ベクター、及びｂ）緩衝液、界面活性剤、抗酸化剤、親水性ポリマー、デキストリン、キレート剤、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、静菌剤、湿潤剤及び防腐剤の１つまたは複数を含むことができる。適切な緩衝液としては、限定されないが、例えば、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ−トリス（ヒドロキシメチル）メタン（ビス−トリス）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’３−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、グリシルグリシン、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタン−スルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、炭酸水素ナトリウム、３−（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチル−アミノ）−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸）ＴＡＰＳＯ、（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−グリシン（トリシン）、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）などが挙げられる。適切な塩としては、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ2 、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ4 などが挙げられる。
【０１８６】
本開示の医薬製剤は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを約０．００１％〜約９０％（ｗ／ｗ）の量で含むことができる。以下の製剤の説明では、「対象の核酸または組換え発現ベクター」は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含むと理解される。例えば、いくつかの実施形態では、対象の製剤は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む。
【０１８７】
対象の核酸または組換え発現ベクターを、他の化合物または化合物の混合物と混合する、カプセル化する、コンジュゲートするまたは結合させることができ、そのような化合物としては、例えば、リポソームまたは受容体標的分子を挙げることができる。対象の核酸または組換え発現ベクターを、取込み、分配及び／また吸収を助ける１種または複数の成分と製剤中で組み合わせることができる。
【０１８８】
対象の核酸または組換え発現ベクターの組成物は、限定されないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ剤、軟質ゲル剤、坐剤及び浣腸剤などの多くの考えられる剤形のうちのいずれかに製剤化することができる。対象の核酸または組換え発現ベクターの組成物は、水性、非水性または混合媒体の懸濁剤として製剤化することもできる。水性懸濁剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール及び／またはデキストランを含めた、懸濁剤の粘性を高める物質をさらに含むことができる。懸濁剤は、安定化剤を含むこともできる。
【０１８９】
対象の核酸または組換え発現ベクターを含む製剤は、リポソーム製剤でもよい。本明細書で使用する場合、用語「リポソーム」は、球状の二重層（複数可）に配置された両親媒性脂質から構成される小胞を意味する。リポソームは、親油性材料から形成される膜及び送達される組成物を含む水性の内部を有する、単層または多層状の小胞である。陽イオン性リポソームは、負に荷電したＤＮＡ分子と相互作用して安定な複合体を形成することができる、正に荷電したリポソームである。ｐＨ感受性であるまたは負に荷電したリポソームは、ＤＮＡとの複合体化ではなく、ＤＮＡを封入すると考えられている。陽イオン性リポソーム及び非陽イオン性リポソームの両方を、対象の核酸または組換え発現ベクターを送達するために使用することができる。
【０１９０】
リポソームは「立体的に安定化した」リポソームも含み、本明細書で使用する場合、この用語は、リポソームに組み込まれた場合に、特殊化した脂質を欠くリポソームと比較して循環寿命を高める１種または複数の特殊化した脂質を含むリポソームを指す。立体的に安定化したリポソームの例は、リポソームの小胞形成脂質部分の一部が１種または複数の糖脂質を含むか、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分などの１種または複数の親水性ポリマーで誘導体化されているものである。リポソーム及びその使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１９１】
本開示の製剤及び組成物は界面活性剤を含むこともできる。薬物製品、製剤及び乳剤における界面活性剤の使用は当技術分野で周知である。界面活性剤及びその使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されている。
【０１９２】
一実施形態では、核酸の効率的な送達をもたらすために、様々な浸透促進剤が含まれる。細胞膜を超えて非親油性薬物が拡散するのを助けることに加えて、浸透促進剤は、親油性薬物の透過性も高める。浸透促進剤は、５つの広いカテゴリー、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤及び非キレート化非界面活性剤のうちの１つに属するように分類され得る。浸透促進剤及びその使用は米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１９３】
経口投与用の組成物及び製剤としては、粉末剤もしくは顆粒剤、マイクロ粒子剤、ナノ粒子剤、水もしくは非水性媒体中の懸濁剤もしくは溶液剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、サッシェ剤、錠剤またはミニ錠剤が挙げられる。増粘剤、着香剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤または結合剤が望ましい場合もある。適切な経口製剤としては、対象のアンチセンス核酸が、１種または複数の浸透促進剤、界面活性剤及びキレート剤とともに投与されるものが挙げられる。適切な界面活性剤としては、限定されないが、脂肪酸及び／またはそのエステルもしくは塩、胆汁酸及び／またはその塩が挙げられる。適切な胆汁酸／塩及び脂肪酸ならびにその使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載されている。浸透促進剤の組み合わせ、例えば、胆汁酸／塩と組み合わせた脂肪酸／塩も適切である。例示的な適切な組み合わせは、ラウリン酸、カプリン酸及びＵＤＣＡのナトリウム塩である。さらなる浸透促進剤としては、限定されないが、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル及びポリオキシエチレン−２０−セチルエーテルが挙げられる。適切な浸透促進剤としては、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、トリエタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−ピロリドン及びそれらの誘導体、テトラヒドロフルフリルアルコールならびにＡＺＯＮＥ（商標）も挙げられる。
【０１９４】
Ｔ細胞活性の調節方法
本開示は、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する方法を提供し、この方法は、Ｔ細胞を本開示の多量体ポリペプチドと接触させることを含み、ここでは、Ｔ細胞を本開示の多量体ポリペプチドと接触させることが、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する。場合によっては、接触はインビトロで起こる。場合によっては、接触はインビボで起こる。場合によっては、接触はエキソビボで起こる。
【０１９５】
場合によっては、例えば、標的Ｔ細胞がＣＤ８+ Ｔ細胞である場合は、多量体ポリペプチドは、クラスＩ  ＭＨＣポリペプチド（例えば、β２−ミクログロブリン及びクラスＩ  ＭＨＣ重鎖）を含む。場合によっては、例えば、標的Ｔ細胞がＣＤ４+ Ｔ細胞である場合は、多量体ポリペプチドは、クラスＩＩ  ＭＨＣポリペプチド（例えば、クラスＩＩ  ＭＨＣα鎖；クラスＩＩ  ＭＨＣβ鎖）を含む。
【０１９６】
本開示の多量体ポリペプチドが、活性化ポリペプチドである免疫調節ポリペプチドを含む場合は、Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることは、エピトープ特異的Ｔ細胞を活性化する。ある場合には、エピトープ特異的Ｔ細胞はがん細胞に存在するエピトープに対して特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることは、がん細胞に対するＴ細胞の細胞障害活性を増大させる。ある場合には、エピトープ特異的Ｔ細胞はがん細胞に存在するエピトープに対して特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることは、エピトープ特異的Ｔ細胞の数を増加させる。
【０１９７】
ある場合には、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞に存在するエピトープに対して特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることは、ウイルス感染細胞に対するＴ細胞の細胞障害活性を増大させる。ある場合には、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞に存在するエピトープに対して特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることは、エピトープ特異的Ｔ細胞の数を増加させる。
【０１９８】
本開示の多量体ポリペプチドが抑制ポリペプチドである免疫調節ポリペプチドを含む場合は、Ｔ細胞をこの多量体に接触させることは、エピトープ特異的Ｔ細胞を阻害する。ある場合には、エピトープ特異的Ｔ細胞は自己抗原に存在するエピトープに対して特異的な自己反応性Ｔ細胞であり、接触が自己反応性Ｔ細胞の数を減らす。
【０１９９】
共刺激ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２）を選択的に送達する方法
本開示は、例えば所与のエピトープに特異的なＴＣＲが標的となるような様式で、選択Ｔ細胞または選択Ｔ細胞集団に対して共刺激ポリペプチド（ＩＬ−２など）または天然起源の共刺激ポリペプチドの親和性低下変異体（本明細書に開示のＩＬ−２変異体など）を送達する方法を提供する。本開示は、本開示の多量体ポリペプチドに存在するエピトープに特異的なＴＣＲを有する標的Ｔ細胞に対して共刺激ポリペプチド（ＩＬ−２など）または天然起源の共刺激ポリペプチドの親和性低下変異体（本明細書に開示のＩＬ−２変異体など）を選択的に送達する方法を提供する。方法は、Ｔ細胞集団と、本開示の多量体ポリペプチドとの接触を含む。Ｔ細胞集団は、ｉ）標的Ｔ細胞と、ｉｉ）エピトープに特異的ではない非標的Ｔ細胞（例えば、エピトープ特異的Ｔ細胞が結合するエピトープ以外のエピトープ（複数可）に特異的なＴ細胞）とを含む混在集団であり得る。エピトープ特異的Ｔ細胞は、多量体ポリペプチドに存在するエピトープ提示ペプチドに特異的であり、多量体ポリペプチドによって提供されるペプチドＨＬＡ複合体またはペプチドＭＨＣ複合体に結合する。Ｔ細胞集団と多量体ポリペプチドとが接触すると、多量体ポリペプチドに存在するエピトープに特異的なＴ細胞（複数可）に対して、多量体ポリペプチドに存在する共刺激ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２またはＩＬ−２の親和性低下変異体）が選択的に送達される。
【０２００】
したがって、本開示は、共刺激ポリペプチド（ＩＬ−２など）もしくは天然起源の共刺激ポリペプチドの親和性低下変異体（本明細書に開示のＩＬ−２変異体など）、または両方の組み合わせを標的Ｔ細胞に選択的に送達する方法を提供し、この方法は、混在Ｔ細胞集団と、本開示の多量体ポリペプチドとの接触を含む。混在Ｔ細胞集団は、標的Ｔ細胞及び非標的Ｔ細胞を含む。標的Ｔ細胞は、多量体ポリペプチド中に存在するエピトープに特異的である。混在Ｔ細胞集団と本開示の多量体ポリペプチドとが接触すると、多量体ポリペプチド中に存在する共刺激ポリペプチド（複数可）が標的Ｔ細胞に送達される。
【０２０１】
例えば、ｉ）多量体ポリペプチドに存在するエピトープに特異的な標的Ｔ細胞（複数可）、及びｉｉ）非標的Ｔ細胞（複数可）（例えば、多量体ポリペプチドに存在するエピトープではない第２のエピトープ（複数可）に特異的なＴ細胞（複数可）を含むＴ細胞集団と、本開示の多量体ポリペプチドとの接触が実施される。集団との接触の結果、多量体ポリペプチドに存在する共刺激ポリペプチド（複数可）（例えば、天然起源の共刺激ポリペプチド（例えば、天然起源のＩＬ−２）または天然起源の共刺激ポリペプチドの親和性低下変異体（例えば、本明細書に開示のＩＬ−２変異体））が標的Ｔ細胞に選択的に送達される。したがって、例えば、多量体ポリペプチドに結合する非標的Ｔ細胞の割合は、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または４％未満、３％未満、２％未満、もしくは１％未満であり、結果として、非標的Ｔ細胞には共刺激ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２またはＩＬ−２変異体）が送達されない。
【０２０２】
場合によっては、Ｔ細胞集団はインビトロのものであり、本開示の多量体ポリペプチドに対する標的Ｔ細胞集団の生物学的応答（例えば、Ｔ細胞の活性化及び／または増殖及び／または表現型分化）は、インビトロの培養の状況下で誘発される。例えば、個体から混在Ｔ細胞集団を得ることができ、多量体ポリペプチドとインビトロで接触させることができる。そのような接触は、定義された用量（複数可）及び／または曝露スケジュール（複数可）での曝露にＴ細胞集団を１回または複数回供することを含み得る。場合によっては、当該接触の結果、Ｔ細胞集団に含まれる標的Ｔ細胞が選択的に結合／活性化及び／または増殖し、活性化及び／または増殖した標的Ｔ細胞集団が生じる。一例として、混在Ｔ細胞集団は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）であり得る。例えば、標準的な採血及びＰＢＭＣ濃縮手法によって患者からＰＢＭＣを得た後、標準的なリンパ球培養条件下で０．１〜１０００ｎＭの本開示の多量体ポリペプチドに曝露することができる。定義された用量及びスケジュールでの混在Ｔ細胞集団の曝露の前、間、及び後の時点で、インビトロの培養における標的Ｔ細胞の存在量を、特定のペプチド−ＭＨＣ多量体及び／または表現型マーカー及び／または機能活性（例えば、サイトカインＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）によって監視することができる。場合によっては、抗原特異的な細胞の存在量及び／または表現型がインビトロで最適化された時点で、活性化及び／または増殖した標的Ｔ細胞集団のすべてまたは一部が個体（混在Ｔ細胞集団の取得元である個体）に投与される。
【０２０３】
場合によっては、Ｔ細胞集団は、インビトロのものである。例えば、個体から混在Ｔ細胞集団が得られ、本開示の多量体ポリペプチドとのインビトロの接触に供される。そのような接触（インビトロの細胞培養の状況下で、定義された用量（複数可）及び／または曝露スケジュール（複数可）での曝露にＴ細胞を１回または複数回供することを含み得る）は、多量体ポリペプチドによって提示されたエピトープに特異的なＴ細胞を混在Ｔ細胞集団が含むか否かを決定するために使用することができる。多量体ポリペプチドのエピトープに特異的なＴ細胞の存在は、混在Ｔ細胞集団を含む試料をアッセイすることによって決定でき、当該Ｔ細胞集団は、エピトープに特異的ではないＴ細胞（非標的Ｔ細胞）を含むと共に、エピトープに特異的なＴ細胞（標的Ｔ細胞）を含み得る。標的Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を検出するために既知のアッセイを使用することができ、それにより個体に存在するＴ細胞に結合するエピトープを特定の多量体ポリペプチド（ｓｙｎＴａｃ）が有するか否か、ひいては、その個体に対する治療組成物としての潜在的用途を多量体ポリペプチドが有するか否かを決定できるエクスビボアッセイがもたらされ得る。標的Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を検出するための適切な既知のアッセイには、例えば、Ｔ細胞の表現型及び／または抗原特異性及び／または増殖をフローサイトメトリーによって特徴付けることが含まれる。エピトープ特異的Ｔ細胞の存在を検出するためのそのようなアッセイ（例えば、コンパニオン診断）は、多量体ポリペプチドが選択的に標的Ｔ細胞に結合／を活性化及び／または増殖させているか否かを決定するための追加のアッセイ（例えば、エフェクターサイトカインＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）及び／または適切な対照（例えば、抗原特異的及び抗原非特異的な多量体ペプチド−ＨＬＡ染色試薬）をさらに含み得る。したがって、例えば、本開示は、個体から得られた混在Ｔ細胞集団において目的エピトープに結合する標的Ｔ細胞の存在を検出する方法を提供し、この方法は、ａ）混在Ｔ細胞集団と本開示の多量体ポリペプチドとのインビトロの接触であって、多量体ポリペプチドが目的エピトープを含む接触と、ｂ）当該接触に応答したＴ細胞の活性化及び／または増殖の検出であって、Ｔ細胞の活性化及び／または増殖が標的Ｔ細胞の存在を示す検出と、を含む。あるいは、及び／またはさらに、多量体ポリペプチドを使用することで所望のＴ細胞集団が活性化及び／または増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）（増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ））するのであれば、活性化／増殖したＴ細胞を含むＴ細胞集団のすべてまたは一部を、治療剤として個体に投与し戻すことができる。
【０２０４】
場合によっては、Ｔ細胞集団は、個体におけるインビボのものである。そのような場合、共刺激ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２または親和性低下ＩＬ−２）をエピトープ特異的Ｔ細胞に選択的に送達するための本開示の方法は、多量体ポリペプチドを個体に投与することを含む。
【０２０５】
共刺激ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２または親和性低下ＩＬ−２）が選択的に送達されるエピトープ特異的Ｔ細胞は、本明細書では「標的Ｔ細胞」とも称される。場合によっては、標的Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。場合によっては、Ｔｒｅｇは、自己反応性Ｔ細胞の活性を抑制または抑止する。
【０２０６】
場合によっては、標的Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。例えば、標的Ｔ細胞は、がんエピトープ（例えば、がん細胞によって提示されるエピトープ）に特異的な細胞傷害性Ｔ細胞であり得る。
【０２０７】
治療方法
本開示は、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する方法を提供し、この方法は、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節するために有効な量の本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードする１種または複数の核酸を個体に投与することを含む。場合によっては、本開示の治療方法は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数の組換え発現ベクターをそれらを必要とする個体に投与することを含む。場合によっては、本開示の治療方法は、本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種または複数のｍＲＮＡ分子をそれらを必要とする個体に投与することを含む。場合によっては、本開示の治療方法は、本開示の多量体ポリペプチドをそれらを必要とする個体に投与することを含む。
【０２０８】
本開示は、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する方法を提供し、この方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種もしくは複数の核酸（例えば、発現ベクター、ｍＲＮＡなど）を個体に投与することを含み、ここでは、多量体ポリペプチドは、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する。エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節することは、個体において疾患または障害を治療することができる。したがって、本開示は、有効量の本開示の多量体ポリペプチドをそれらを必要とする個体に投与することを含む治療方法を提供する。
【０２０９】
場合によっては、免疫調節ポリペプチドは活性化ポリペプチドであり、多量体ポリペプチドはエピトープ特異的Ｔ細胞を活性化する。場合によっては、エピトープはがん関連エピトープであり、多量体ポリペプチドはがん関連エピトープに対して特異的なＴ細胞の活性を高める。
【０２１０】
本開示は、個体においてがんを治療する方法を提供し、この方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種もしくは複数の核酸（例えば、発現ベクター、ｍＲＮＡなど）を個体に投与することを含み、ここでは、多量体ポリペプチドはがんエピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは、本明細書に記載の刺激性免疫調節ポリペプチドを１つまたは複数含む。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体においてがん細胞の数を減らす量である。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、多量体ポリペプチドの投与前の、または多量体ポリペプチドを用いる投与がない状態の個体におけるがん細胞の数と比較して、個体において、がん細胞の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％減らす量である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体において、がん細胞の数を検出不能レベルまで減らす量である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体において、腫瘍量を低減する量である。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、多量体ポリペプチドの投与前の、または多量体ポリペプチドを用いる投与がない状態の個体における腫瘍量と比較して、個体において、腫瘍量を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％低減する量である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体の生存期間を延ばす量である。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、多量体ポリペプチドを用いる投与がない状態の個体の期待される生存期間と比較して、個体の生存期間を少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、３か月〜６か月、６か月〜１年、１年〜２年、２年〜５年、５年〜１０年または１０年超延ばす量である。
【０２１１】
ある場合には、エピトープ特異的Ｔ細胞はウイルス感染細胞に存在するエピトープに対して特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることは、ウイルス感染細胞に対するＴ細胞の細胞障害活性を増大させる。ある場合には、エピトープ特異的Ｔ細胞はウイルス感染細胞に存在するエピトープに対して特異的なＴ細胞であり、エピトープ特異的Ｔ細胞を多量体ポリペプチドと接触させることは、エピトープ特異的Ｔ細胞の数を増加させる。
【０２１２】
したがって、本開示は、個体においてウイルス感染を治療する方法を提供し、この方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種もしくは複数の核酸を個体に投与することを含み、ここでは、多量体ポリペプチドはウイルスエピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは、本明細書に記載の刺激性免疫調節ポリペプチドを１つまたは複数含む。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体においてウイルス感染細胞の数を減らす量である。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、多量体ポリペプチドの投与前の、または多量体ポリペプチドを用いる投与がない状態の個体におけるウイルス感染細胞の数と比較して、個体においてウイルス感染細胞の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％減らす量である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体においてウイルス感染細胞の数を検出不能レベルまで減らす量である。
【０２１３】
したがって、本開示は、個体において感染を治療する方法を提供し、この方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種もしくは複数の核酸を個体に投与することを含み、ここでは、多量体ポリペプチドは、病原体関連エピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは、本明細書に記載の刺激性免疫調節ポリペプチドを１つまたは複数含む。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体において病原体の数を減らす量である。例えば、場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、多量体ポリペプチドの投与前の、または多量体ポリペプチドを用いる投与がない状態の個体における病原体の数と比較して、個体において、病原体の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％減らす量である。場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体において病原体の数を検出不能レベルまで減らす量である。病原体としては、ウイルス、細菌、原生動物などが挙げられる。
【０２１４】
場合によっては、免疫調節ポリペプチドは抑制ポリペプチドであり、多量体ポリペプチドはエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を阻害する。場合によっては、エピトープは自己エピトープであり、多量体ポリペプチドは自己エピトープに対して特異的なＴ細胞の活性を選択的に阻害する。
【０２１５】
本開示は、個体において自己免疫障害を治療する方法を提供し、この方法は、有効量の、本開示の多量体ポリペプチドまたは多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１種もしくは複数の核酸を個体に投与することを含み、ここでは、多量体ポリペプチドは自己エピトープであるＴ細胞エピトープを含み、多量体ポリペプチドは、抑制免疫調節ポリペプチドを含む。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、多量体ポリペプチドの投与前の、または多量体ポリペプチドを用いる投与がない状態の個体における自己反応性Ｔ細胞の数と比較して、自己反応性Ｔ細胞の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％減らす量である。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体においてＴｈ２サイトカインの生成を低減させる量である。場合によっては、多量体ポリペプチドの「有効量」は、それらを必要とする個体に１または複数用量で投与される場合に、個体において自己免疫疾患に付随する１つまたは複数の症状を回復させる量である。
【０２１６】
上述したように、場合によっては、対象の治療方法の実施において、本開示の多量体ポリペプチドは、それ自体がポリペプチドとしてそれらを必要とする個体に投与される。他の場合では、対象の治療方法の実施において、本開示の多量体ポリペプチドをコードする１種または複数のヌクレオチド配列を含む核酸がそれらを必要とする個体に投与される。したがって、他の場合では、本開示の１種または複数の核酸、例えば、本開示の１種または複数の組換え発現ベクターがそれらを必要とする個体に投与される。
【０２１７】
製剤
適切な製剤はこれまでに記載され、適切な製剤は医薬的に許容可能な賦形剤を含む。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチド、及びｂ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸、及びｂ）医薬的に許容可能な賦形剤を含み、ある場合には、核酸はｍＲＮＡである。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸、ｂ）本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸、及びｃ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクター、及びｂ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む。場合によっては、適切な製剤は、ａ）本開示の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の組換え発現ベクター、ｂ）本開示の多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の組換え発現ベクター、及びｃ）医薬的に許容可能な賦形剤を含む。
【０２１８】
適切な医薬的に許容可能な賦形剤はこれまでに記載されている。
【０２１９】
投薬量
適切な投薬量は、様々な臨床因子に基づいて、主治医または資格を有する他の医療関係者が決定することができる。医学分野で周知であるように、任意のある患者に対する投薬量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与の時間及び経路、全体的な健康状態ならびに同時に投与される他の薬物を含めた、多くの因子に依存する。本開示の多量体ポリペプチドは、投与あたり１ｎｇ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜５ｍｇ／ｋｇ体重の間の量で投与することができるが、特に前述の因子を考慮すれば、この例示的範囲より低いまたは高い用量が想定される。レジメンが持続注入である場合は、これはまた、１μｇ〜１０ｍｇ／キログラム体重／分の範囲でもよい。本開示の多量体ポリペプチドは、約１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与することができ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ体重〜約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重〜約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重〜約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重〜約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与することができる。
【０２２０】
場合によっては、本開示の多量体ポリペプチドの適切な用量は、０．０１μｇ〜１００ｇ／ｋｇ体重、０．１μｇ〜１０ｇ／ｋｇ体重、１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、１０μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、１００μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重または１００μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重である。体液または組織における投与される薬剤の測定した滞留時間及び濃度に基づいて、当業者は投薬の反復速度を容易に推定することができる。成功した治療に続いて、病態の再発を予防するために、維持療法を患者に受けさせることが望ましい場合もあり、ここでは、本開示の多量体ポリペプチドは、０．０１μｇ〜１００ｇ／ｋｇ体重、０．１μｇ〜１０ｇ／ｋｇ体重、１μｇ〜１ｇ／ｋｇ体重、１０μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、１００μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重または１００μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の維持量で投与される。
【０２２１】
当業者は、特定の多量体ポリペプチド、症状の重症度及び副作用に対する対象の感受性に応じて、用量レベルが変動し得ることを容易に認識する。所与の化合物に対する好ましい投薬量は、様々な手段で当業者によって容易に決定される。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、複数回用量の本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターが投与される。本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターの投与頻度は、様々な因子のうちのいずれか、例えば、症状の重症度などに応じて変動し得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは、月１回、月２回、月３回、隔週（ｑｏｗ）、週１回（ｑｗ）、週２回（ｂｉｗ）、週３回（ｔｉｗ）、週４回、週５回、週６回、隔日（ｑｏｄ）、１日１回（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）または１日３回（ｔｉｄ）投与される。
【０２２３】
本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターの投与の持続期間、例えば、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターが投与される期間は、様々な因子のうちのいずれか、例えば、患者の応答などに応じて変動し得る。例えば、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは、約１日〜約１週、約２週〜約４週、約１か月〜約２か月、約２か月〜約４か月、約４か月〜約６か月、約６か月〜約８か月、約８か月〜約１年、約１年〜約２年、または約２年〜約４年、またはそれ以上に及ぶ期間にわたって投与することができる。
【０２２４】
投与経路
活性薬剤（本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクター）は、インビボ及びエキソビボの方法を含めた、薬物送達に適した任意の利用可能な方法及び経路、ならびに全身的及び局部的投与経路を使用して、個体に投与される。
【０２２５】
従来の医薬的に許容可能な投与経路としては、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、気管内、頭蓋内、皮下、皮内、局所適用、静脈内、動脈内、直腸、経鼻、経口ならびに他の経腸及び非経口投与経路が挙げられる。投与経路は、必要であれば、多量体ポリペプチド及び／または所望の効果に応じて、組み合わせることができ、または調整することができる。本開示の多量体ポリペプチドまたは本開示の核酸もしくは組換え発現ベクターは、単回用量または複数回用量で投与することができる。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは筋肉内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは局部的に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは腫瘍内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは腫瘍周囲に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは頭蓋内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは皮下に投与される。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは静脈内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは筋肉内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは局部的に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは腫瘍内に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは腫瘍周囲に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の多量体ポリペプチドは頭蓋内に投与される。いくつかの実施形態では、多量体ポリペプチドは皮下に投与される。
【０２２８】
本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターは、全身的または局部的経路を含めた、従来の薬物の送達に適した任意の利用可能な従来の方法及び経路を使用して、宿主に投与することができる。一般に、本開示の方法における使用が企図される投与経路としては、必ずしも限定されるわけではないが、経腸、非経口、及び吸入による経路が挙げられる。
【０２２９】
吸入投与以外の非経口投与経路としては、必ずしも限定されるわけではないが、局所、経皮、皮下、筋肉内、眼窩内、嚢内、髄腔内、胸骨内、腫瘍内、腫瘍周囲及び静脈内経路、すなわち、消化管経由以外の任意の投与経路が挙げられる。非経口投与は、本開示の多量体ポリペプチド、本開示の核酸または本開示の組換え発現ベクターの全身的または局部的送達をもたらすために行うことができる。全身的送達が所望される場合に、投与は、典型的には、侵襲的または全身的に吸収される、医薬調製物の局所または粘膜投与を含む。
【０２３０】
治療に適する対象
本開示の方法による治療に適する対象としては、がんを有すると診断された個体、がんを治療したが、治療に応答することができなかった個体、及びがんを治療し、初期に応答したが、その後に治療に対して抵抗性になった個体を含めた、がんを有する個体が挙げられる。本開示の方法による治療に適する対象としては、感染を有すると診断された個体、及び感染を治療したが、治療に応答することができなかった個体を含めた、感染（例えば、病原体、例えば、細菌、ウイルス、原生動物などによる感染）を有する個体が挙げられる。本開示の方法による治療に適する対象としては、細菌感染を有すると診断された個体、及び細菌感染を治療したが、治療に応答することができなかった個体を含めた、細菌感染を有する個体が挙げられる。本開示の方法による治療に適する対象としては、ウイルス感染を有すると診断された個体、及びウイルス感染を治療したが、治療に応答することができなかった個体を含めた、ウイルス感染を有する個体が挙げられる。本開示の方法による治療に適する対象としては、自己免疫疾患を有すると診断された個体、及び自己免疫疾患を治療したが、治療に応答することができなかった個体を含めた、自己免疫疾患を有する個体が挙げられる。
【０２３１】
場合によっては、例えば、エピトープがＨＰＶエピトープである場合、本開示の方法での治療に適した対象は、ＨＰＶと関連するがんまたはＨＰＶ起因性のがんを有すると診断されたことがある個体である。ＨＰＶと関連するがんまたはＨＰＶ起因性のがんとしては、例えば、頭頸部癌、子宮頸癌、及び生殖肛門癌（ｇｅｎｉｔｏａｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）が挙げられる。
【０２３２】
本開示の非限定的な態様の例
上記の本発明の対象の態様は、実施形態を含めて、単独で有利であるか、または１つもしくは複数の他の態様もしくは実施形態と組み合わせて有利であり得る。前述の説明を限定するものではないが、本開示のある特定の非限定的な態様が１〜１３２の番号を付けて以下に提供される。本開示を読めば当業者には明らかであろうが、個別に番号付けされた態様のそれぞれを使用するか、または個別に番号付けされた態様のそれぞれを、個別に番号付けされた先行態様もしくは後述態様のいずれかと組み合わせることができる。これは、態様のすべてのそのような組み合わせを支援することが意図されたものであり、以下に明示的に提供される態様の組み合わせに限定されるものではない。
【０２３３】
態様１．
配列番号１に示されるものに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む変異ＩＬ−２ポリペプチドであって、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドが、配列番号１に示されるものと比較して１つまたは複数のアミノ酸置換を有し、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドが、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列を有するアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）に対する配列番号１に示されるＩＬ−２アミノ酸配列の結合親和性と比較して、前記ＩＬ−２Ｒに対する結合親和性の低下を示す、変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【０２３４】
態様２．
前記変異体が、Ｅ１５、Ｈ１６、Ｄ２０、Ｆ４２、Ｙ４５、及びＱ１２６のうちの１つまたは複数の置換を含む、態様１に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
態様３．
前記変異免疫調節ポリペプチドが示す結合親和性は、配列番号１に示されるＩＬ−２アミノ酸配列が前記ＩＬ−２Ｒに対して示す結合親和性の１０％未満〜５０％未満である、態様１または態様２に記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
態様４．
前記変異体が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕでのＦ４２の置換を含む、態様１〜３のいずれか１つに記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【０２３５】
態様５．
前記変異体が、Ｆ４２及びＤ２０の置換またはＦ４２及びＨ１６の置換を含む、態様１〜３のいずれか１つに記載の変異Ｉ
及びＹ４５の置換を含むか、または前記変異体が、Ｆ４２、Ｈ１６、及びＱ１２６の置換Ｌ−２ポリペプチド。
態様６．
前記変異体が、Ｆ４２、Ｄ２０、を含む、態様１〜３のいずれか１つに記載の変異ＩＬ−２ポリペプチド。
【０２３６】
態様７．
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）任意選択の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ骨格
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む多量体ポリペプチドであって、
前記多量体ポリペプチドが、１つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインが、
Ａ）前記第１のポリペプチドのＣ末端、
Ｂ）前記第２のポリペプチドのＮ末端、
Ｃ）前記第２のポリペプチドのＣ末端、または
Ｄ）前記第１のポリペプチドのＣ末端及び前記第２のポリペプチドのＮ末端
に位置し、
前記免疫調節ドメインの少なくとも１つが、天然起源の共刺激タンパク質の変異体であり、前記変異体が、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す、多量体ポリペプチド。
【０２３７】
態様８．
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）任意選択の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ骨格
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む多量体ポリペプチドであって、
前記多量体ポリペプチドが、１つまたは複数の免疫調節ドメインを含み、前記１つまたは複数の免疫調節ドメインが、
Ａ）前記第１のポリペプチドのＣ末端、
Ｂ）前記第２のポリペプチドのＮ末端、
Ｃ）前記第２のポリペプチドのＣ末端、または
Ｄ）前記第１のポリペプチドのＣ末端及び前記第２のポリペプチドのＮ末端
に位置し、
前記１つまたは複数の免疫調節ドメインの少なくとも１つが、態様１〜６のいずれか１つに記載の変異ＩＬ−２ポリペプチドであり、
前記多量体ポリペプチドが、図３Ａ〜３Ｃに示されるアミノ酸配列を有するアルファポリペプチド、ベータポリペプチド、及びガンマポリペプチドを含むＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）に対する配列番号１に示されるＩＬ−２アミノ酸配列を含む対照多量体ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記ＩＬ−２Ｒポリペプチドに対する結合親和性の低下を示す、多量体ポリペプチド。
【０２３８】
態様９．
ａ）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記エピトープ、
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、
態様８に記載の多量体ポリペプチド。
【０２３９】
態様１０．
ａ）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド、
ｉｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、
態様８に記載の多量体ポリペプチド。
【０２４０】
態様１１．
ａ）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、
態様８に記載の多量体ポリペプチド。
【０２４１】
態様１２．
ａ）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記エピトープ、及び
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）第２のポリペプチドが、
ｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド、及び
ｉｉ）前記第２のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、
態様８に記載の多量体ポリペプチド。
【０２４２】
態様１３．
ａ）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記エピトープ、
ｉｉ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
ｂ）前記第２のポリペプチドが、前記第２のＭＨＣポリペプチドを含む、
態様８に記載の多量体ポリペプチド。
【０２４３】
態様１４．
前記非Ｉｇ骨格が、ＸＴＥＮポリペプチド、トランスフェリンポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド、シルク様ポリペプチド、またはシルク−エラスチン様ポリペプチドである、態様７または態様８に記載の多量体ポリペプチド。
態様１５．
前記第１のＭＨＣポリペプチドが、β２−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、態様７〜１４のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様１６．
前記β２−ミクログロブリンポリペプチドが、図６に示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１５に記載の多量体ポリペプチド。
【０２４４】
態様１７．
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃの重鎖である、態様１５に記載の多量体ポリペプチド。
態様１８．
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、図５Ａ〜５Ｃのうちの１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１５に記載の多量体ポリペプチド。
態様１９．
前記第１のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖ポリペプチドである、態様７〜１４のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
【０２４５】
態様２０．
前記エピトープが、Ｔ細胞エピトープである、態様７〜１９のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様２１．
多量体ポリペプチドが、Ｆｃポリペプチドを含み、前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである、態様７〜１３及び態様１５〜２０のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様２２．
前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、図４Ａ〜４Ｃに示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２１に記載の多量体ポリペプチド。
【０２４６】
態様２３．
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとが、非共有結合で結合される、態様７〜２２のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様２４．
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドとが、互いに共有結合で連結される、態様７〜２２のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様２５．
前記共有結合が、ジスルフィド結合を介するものである、態様２４に記載の多量体ポリペプチド。
【０２４７】
態様２６．
前記第１のＭＨＣポリペプチド、または前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のリンカーが、アミノ酸置換を含むことで第１のＣｙｓ残基を与え、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、アミノ酸置換を含むことで第２のＣｙｓ残基を与え、前記ジスルフィド結合が、前記第１のＣｙｓ残基と前記第２のＣｙｓ残基との間に形成される、態様２５に記載の多量体ポリペプチド。
態様２７．
前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間に挿入されたリンカーを含む、態様７〜２６のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様２８．
前記ＭＨＣポリペプチドと前記免疫調節ポリペプチドとの間に挿入されたリンカーを含む、態様７〜２６のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
【０２４８】
態様２９．
２つの変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む、態様７〜２８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様３０．
３つの変異ＩＬ−２ポリペプチドを含む、態様８〜２８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様３１．
前記２つまたは３つの変異ＩＬ−２ポリペプチドが直列に存在し、前記多量体ポリペプチドが、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの間にリンカーを含む、態様２９または態様３０に記載の多量体ポリペプチド。
【０２４９】
態様３２．
前記変異ＩＬ−２が、Ｅ１５、Ｈ１６、Ｄ２０、Ｆ４２、Ｙ４５、及びＱ１２６のうちの１つまたは複数の置換を含む、態様８〜３１のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様３３．
前記変異ＩＬ−２が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＬｅｕによるＦ４２の置換を含む、態様８〜３２のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
【０２５０】
態様３４．
前記変異ＩＬ−２が、Ｆ４２及びＤ２０の置換またはＦ４２及びＨ１６の置換を含む、態様３３に記載の多量体ポリペプチド。
態様３５．
前記変異ＩＬ−２が、Ｆ４２、Ｄ２０、及びＹ４５の置換を含むか、または前記変異ＩＬ−２が、Ｆ４２、Ｈ１６、及びＱ１２６の置換を含む、態様３３に記載の多量体ポリペプチド。
【０２５１】
態様３６．
組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、
ｉ）前記組換えポリペプチドが、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、
ｃ）免疫調節ポリペプチド、
ｄ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
前記免疫調節ポリペプチドが、天然起源の共刺激タンパク質の変異体であり、前記変異体が、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示すか、または
ｉｉ）前記組換えポリペプチドが、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、
ｃ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｄ）免疫調節ポリペプチド、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
前記免疫調節ポリペプチドが、天然起源の共刺激タンパク質の変異体であり、前記変異体が、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す、核酸。
【０２５２】
態様３７．
組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、
ｉ）前記組換えポリペプチドが、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１の主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、
ｃ）免疫調節ポリペプチド、
ｄ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
前記免疫調節ポリペプチドが、態様１〜６のいずれか１つに記載の変異免疫調節ポリペプチドであるか、または
ｉｉ）前記組換えポリペプチドが、
ａ）エピトープ、
ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、
ｃ）タンパク分解により切断可能なリンカーもしくはリボソームスキッピングシグナル、
ｄ）免疫調節ポリペプチド、
ｅ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｆ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含み、
前記免疫調節ポリペプチドが、態様１〜６のいずれか１つに記載の変異免疫調節ポリペプチドである、核酸。
【０２５３】
態様３８．
前記第１のＭＨＣポリペプチドが、β２−ミクログロブリンポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、態様３６または態様３７に記載の核酸。
態様３９．
前記β２−ミクログロブリンポリペプチドが、図６に示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様３８に記載の核酸。
態様４０．
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃの重鎖である、態様３８に記載の核酸。
【０２５４】
態様４１．
前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、図５Ａ〜５Ｃのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様４０に記載の核酸。
態様４２．
前記第１のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖ポリペプチドである、態様３６または態様３７に記載の核酸。
態様４３．
前記エピトープが、Ｔ細胞エピトープである、態様３６〜４２のいずれか１つに記載の核酸。
【０２５５】
態様４４．
前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである、態様３６〜４３のいずれか１つに記載の核酸。
態様４５．
前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、図４Ａ〜４Ｃに示されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様４４に記載の核酸。
【０２５６】
態様４６．
前記変異ＩＬ−２免疫調節ポリペプチドが、Ｅ１５、Ｈ１６、Ｄ２０、Ｆ４２、Ｙ４５、及びＱ１２６のうちの１つまたは複数の置換を含む、態様３７〜４５のいずれか１つに記載の核酸。
態様４７．
前記多量体ポリペプチドが、ＣＤ７、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ−Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンフォトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、及びＨＶＥＭから選択される第２の免疫調節ポリペプチドを含む、態様３６〜４６のいずれか１つに記載の核酸。
【０２５７】
態様４８．
前記タンパク分解により切断可能なリンカーまたはリボソームスキッピングシグナルが、
ａ）ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号２９）、
ｂ）ＥＮＬＹＴＱＳ（配列番号３０）、
ｃ）フューリン切断部位、
ｄ）ＬＶＰＲ（配列番号３２）、
ｅ）ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号３３）、
ｆ）ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号３４）、
ｇ）ＧＳＧＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号３５）、及び
ｈ）ＧＳＧＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号３６）
から選択されるアミノ酸配列を含む、態様３６〜４７のいずれか１つに記載の核酸。
【０２５８】
態様４９．
前記組換えポリペプチドが、
ａ）第１のリーダーペプチド、
ｂ）前記エピトープ、
ｃ）前記第１のＭＨＣポリペプチド、
ｄ）前記免疫調節ポリペプチド、
ｅ）前記タンパク分解により切断可能なリンカーまたはリボソームスキッピングシグナル、
ｆ）第２のリーダーペプチド、
ｇ）前記第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｈ）前記免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む、態様３６〜４８に記載の核酸。
【０２５９】
態様５０．
前記第１のリーダーペプチド及び前記第２のリーダーペプチドが、β２−Ｍリーダーペプチドである、態様４９に記載の核酸。
態様５１．
前記ヌクレオチド配列が、転写制御要素に機能可能なように連結される、態様３６〜５０のいずれか１つに記載の核酸。
態様５２．
前記転写制御要素が、真核細胞において機能するプロモーターである、態様５１に記載の核酸。
【０２６０】
態様５３．
前記第１のＭＨＣポリペプチド、または前記エピトープと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のリンカーが、アミノ酸置換を含むことで第１のＣｙｓ残基を与え、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、アミノ酸置換を含むことで第２のＣｙｓ残基を与え、前記第１のＣｙｓ残基及び前記第２のＣｙｓ残基が、前記第１のＭＨＣポリペプチドと前記第２のＭＨＣポリペプチドとの間にジスルフィド結合を生成する、態様３６〜５２のいずれか１つに記載の核酸。
【０２６１】
態様５４．
態様３６〜５２のいずれか１つに記載の核酸を含む組換え発現ベクターであって、前記ベクターが、任意選択で、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターである、組換え発現ベクター。
【０２６２】
態様５５．
態様５４に記載の組換え発現ベクターで遺伝子改変された、宿主細胞。
態様５６．
前記宿主細胞がインビトロのものであり、前記宿主細胞が、前記細胞が内在性のＭＨＣβ２−ミクログロブリンポリペプチドを産生しないように任意選択で遺伝子改変される、態様５５に記載の宿主細胞。
【０２６３】
態様５７．
ａ）
ｉ）エピトープ、
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸であって、
前記免疫調節ポリペプチドが、天然起源の共刺激タンパク質の変異体であり、前記変異体が、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【０２６４】
態様５８．
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）天然起源の共刺激タンパク質の変異体である免疫調節ドメインであって、前記変異体が、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示す前記免疫調節ドメイン、
ｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【０２６５】
態様５９．
ａ）
ｉ）エピトープ、
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）免疫調節ドメイン
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸であって、
前記免疫調節ドメインが、態様１〜６のいずれか１つに記載の変異ＩＬ−２ポリペプチドである第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【０２６６】
態様６０．
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、
ｂ）
ｉ）態様１〜６のいずれか１つに記載の変異ＩＬ−２ポリペプチドである免疫調節ドメイン、
ｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉｉ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、
を含む、組成物。
【０２６７】
態様６１．
前記第１の核酸及び／または前記第２の核酸が、組換え発現ベクターに存在する、態様５７〜６０のいずれか１つに記載の組成物。
態様６２．
態様５７〜６１のいずれか１つに記載の組成物で遺伝子改変された、宿主細胞。
【０２６８】
態様６３．
態様７〜３６のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドの産生方法であって、
ａ）態様５５、態様５６、及び態様６２のいずれか１つに記載の宿主細胞が前記多量体ポリペプチドを合成する条件下での、培地における前記宿主細胞のインビトロの培養と、
ｂ）前記宿主細胞及び／または前記培地からの前記多量体ポリペプチドの単離と、
を含む、方法。
【０２６９】
態様６４．
前記第２のポリペプチドが、親和性タグを含み、前記単離が、前記細胞によって産生される前記多量体ポリペプチドと、前記親和性タグに対する結合パートナーとの接触を含み、前記結合パートナーが固定化されていることによって前記多量体ポリペプチドが固定化される、態様６３に記載の方法。
態様６５．
前記固定化された多量体ポリペプチドの溶出を含む、態様６４に記載の方法。
態様６６．
エピトープ特異的Ｔ細胞を選択的に活性化する方法であって、
前記Ｔ細胞と、態様７〜３５のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドと、の接触を含み、前記接触によって前記エピトープ特異的Ｔ細胞が選択的に活性化される、方法。
【０２７０】
態様６７．
前記接触が、インビトロのものである、態様６６に記載の方法。
態様６８．
前記接触が、インビボのものである、態様６６に記載の方法。
態様６９．
前記エピトープが、がん関連エピトープであり、前記投与によって、前記がん関連エピトープに特異的なＴ細胞の活性が選択的に増加する、態様６６に記載の方法。
【０２７１】
態様７０．
個体におけるがんの治療方法であって、
ａ）態様７〜３５のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド、または
ｂ）態様７〜３５のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数の組換え発現ベクター、または
ｃ）態様７〜３５のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数のｍＲＮＡ
を有効量で前記個体に投与することを含み、
前記エピトープが、がん関連エピトープであり、前記投与が、個体におけるがんエピトープ特異的Ｔ細胞の選択的活性化に有効である、方法。
【０２７２】
態様７１．
前記投与が、皮下投与である、態様７０に記載の方法。
態様７２．
前記投与が、静脈内投与である、態様７０に記載の方法。
態様７３．
前記投与が、腫瘍周囲への投与である、態様７０に記載の方法。
【０２７３】
態様７４．
前記投与が、全身投与である、態様７０に記載の方法。
態様７５．
前記投与が、治療部位から遠い位置への投与である、態様７０に記載の方法。
【０２７４】
態様７６．
前記投与が、局所投与である、態様７０に記載の方法。
態様７７．
前記投与が、治療部位または治療部位付近への投与である、態様７０に記載の方法。
【０２７５】
態様７８．
ａ）態様７〜３５のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド、及び
ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤
を含む、組成物。
【０２７６】
態様７９．
ａ）態様３６〜５３のいずれか１つに記載の核酸、または態様５４に記載の組換え発現ベクター、及び
ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤
を含む、組成物。
【０２７７】
態様８０．
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）天然起源の共刺激タンパク質の変異体であって、前記変異体が、その対応共刺激タンパク質に対する前記天然起源の共刺激タンパク質の親和性と比較して、前記対応共刺激タンパク質に対する親和性の低下を示し、前記変異体が、任意選択で、態様１〜６のいずれか１つに記載の変異ＩＬ−２ポリペプチドであり得る変異体、
ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、ならびに
ｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくと、それぞれＮ７７Ａ、Ｌ１４Ａ、Ｌ１５Ａ、Ｌ１４Ｆ、Ｌ１５Ｅ、及びＰ１１１Ｓ）から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、多量体ポリペプチド。
【０２７８】
態様８１．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｎ２９７Ａ置換（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくとＮ７７Ａ）を含む、態様８０に記載の多量体ポリペプチド。
態様８２．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくとＬ１４Ａ及びＬ１５Ａ）を含む、態様８０に記載の多量体ポリペプチド。
態様８３．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｌ２３４Ｆ置換及びＬ２３５Ｅ置換（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくとＬ１４Ｆ及びＬ１５Ｅ）を含む、態様８０に記載の多量体ポリペプチド。
【０２７９】
態様８４．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくとＬ１４Ｆ置換、Ｌ１５Ｅ置換、及びＰ１１１Ｓ置換）を含む、態様８０に記載の多量体ポリペプチド。
態様８５．
前記第２のポリペプチドが、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む、態様８０〜８４のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様８６．
前記第１のポリペプチドが、前記エピトープと前記β２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、態様８０〜８５のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
【０２８０】
態様８７．
前記第２のポリペプチドが、
ａ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、
ｂ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびに
ｃ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドと前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間
のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む、態様８０〜８６のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様８８．
前記ペプチドリンカーが、（ＧＧＧＧＳ）3 、（ＧＧＧＧＳ）4 、及びＡＡＡＧＧから選択される、態様８６または態様８７に記載の多量体ポリペプチド。
【０２８１】
態様８９．
ａ）
ｉ）エピトープ、及び
ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリンポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）図３４Ｂに示されるアミノ酸配列を含む変異ＩＬ−２ポリペプチド、
ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、ならびに
ｉｉｉ）Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくと、それぞれＮ７７Ａ、Ｌ１４Ａ、Ｌ１５Ａ、Ｌ１４Ｆ、Ｌ１５Ｅ、及びＰ１１１Ｓ）から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、多量体ポリペプチド。
【０２８２】
態様９０．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｎ２９７Ａ置換（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくとＮ７７Ａ）を含む、態様８９に記載の多量体ポリペプチド。
態様９１．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくとＬ１４Ａ及びＬ１５Ａ）を含む、態様８９に記載の多量体ポリペプチド。
態様９２．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｌ２３４Ｆ置換及びＬ２３５Ｅ置換（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくとＬ１４Ｆ及びＬ１５Ｅ）を含む、態様８９に記載の多量体ポリペプチド。
【０２８３】
態様９３．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換（図３３Ａに示されるアミノ酸の番号付けに基づくとＬ１４Ｆ、Ｌ１５Ｅ、及びＰ１１１Ｓ）を含む、態様８９に記載の多量体ポリペプチド。
態様９４．
前記第２のポリペプチドが、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む、態様８９〜９３のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様９５．
前記第１のポリペプチドが、前記エピトープと前記β２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、態様８９〜９４のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
【０２８４】
態様９６．
前記第２のポリペプチドが、
ａ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、
ｂ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびに
ｃ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドと前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間
のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む、態様８９〜９５のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様９７．
前記ペプチドリンカーが、（ＧＧＧＧＳ）3 、（ＧＧＧＧＳ）4 、及びＡＡＡＧＧから選択される、態様９５または態様９６に記載の多量体ポリペプチド。
【０２８５】
態様９８．
ａ）
ｉ）ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴというアミノ酸配列（配列番号１３）を含むエピトープ、及び
ｉｉ）図３４Ａに示されるアミノ酸配列を含むβ２−ミクログロブリンポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）図３４Ｂに示されるアミノ酸配列を含む変異ＩＬ−２ポリペプチド、
ｉｉ）図３４Ｃに示されるアミノ酸配列を含む主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）重鎖ポリペプチド、及び
ｉｉｉ）図３３Ａ、図３３Ｂ、図３３Ｃ、または図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド
をＮ末端からＣ末端の順序で含む第２のポリペプチドと、
を含む、多量体ポリペプチド。
【０２８６】
態様９９．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、図３３Ｂに示されるアミノ酸配列を含む、態様９８に記載の多量体ポリペプチド。
態様１００．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、図３３Ｃに示されるアミノ酸配列を含む、態様９８に記載の多量体ポリペプチド。
態様１０１．
前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、図３３Ｄに示されるアミノ酸配列を含む、態様９８に記載の多量体ポリペプチド。
【０２８７】
態様１０２．
前記第２のポリペプチドが、前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの２つのコピーを含む、態様９８〜１０１のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様１０３．
前記第１のポリペプチドが、前記エピトープと前記β２Ｍポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む、態様９８〜１０２のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
【０２８８】
態様１０４．
前記第２のポリペプチドが、
ａ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第１のコピーと前記変異ＩＬ−２ポリペプチドの第２のコピーとの間、
ｂ）前記変異ＩＬ−２ポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとの間、ならびに
ｃ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドと前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドとの間
のうちの１つまたは複数にペプチドリンカーを含む、態様９８〜１０３のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド。
態様１０５．
前記ペプチドリンカーが、（ＧＧＧＧＳ）3 、（ＧＧＧＧＳ）4 、及びＡＡＡＧＧから選択される、態様１０３または態様１０４に記載の多量体ポリペプチド。
【０２８９】
態様１０６．
ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び
ｂ）図２２に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド
を含む、多量体ポリペプチド。
態様１０７．
ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び
ｂ）図２５に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド
を含む、多量体ポリペプチド。
【０２９０】
態様１０８．
ａ）図３１に示されるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び
ｂ）図２８に示されるアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド
を含む、多量体ポリペプチド。
態様１０９．
ａ）態様８０〜１０８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド、及び
ｂ）医薬的に許容可能な賦形剤
を含む、医薬組成物。
【０２９１】
態様１１０．
態様８０〜１０８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドの第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、１つまたは複数の核酸。
態様１１１．
前記核酸（複数可）が、組換え発現ベクターに存在する、態様１１０に記載の１つまたは複数の核酸。
【０２９２】
態様１１２．
エピトープ特異的Ｔ細胞を選択的に活性化する方法であって、
前記Ｔ細胞と、態様８０〜１０８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドとの接触を含み、前記接触によって前記エピトープ特異的Ｔ細胞が選択的に活性化される、方法。
態様１１３．
前記接触が、インビトロのものである、態様１１２に記載の方法。
態様１１４．
前記接触が、インビボのものである、態様１１２に記載の方法。
【０２９３】
態様１１５．
ａ）態様８０〜１０８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチド、
ｂ）態様８０〜１０８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数の組換え発現ベクター、または
ｃ）態様８０〜１０８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数のｍＲＮＡ
を有効量で個体に投与することを含む方法であって、前記投与によって前記個体においてエピトープに対するＴ細胞応答が誘導される、方法。
【０２９４】
態様１１６．
前記投与が、皮下投与である、態様１１５に記載の方法。
態様１１７．
前記投与が、静脈内投与である、態様１１５に記載の方法。
態様１１８．
前記投与が、全身投与である、態様１１５に記載の方法。
【０２９５】
態様１１９．
前記投与が、筋肉内投与である、態様１１５に記載の方法。
態様１２０．
前記投与が、治療部位から遠い位置への投与である、態様１１５に記載の方法。
態様１２１．
前記投与が、局所投与である、態様１１５に記載の方法。
態様１２２．
前記投与が、治療部位または治療部位付近への投与である、態様１１５に記載の方法。
【０２９６】
態様１２３．
共刺激ポリペプチドを標的Ｔ細胞に選択的に送達する方法であって、
混在Ｔ細胞集団と、態様７〜３５及び態様８０〜１０８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドとの接触を含み、前記混在Ｔ細胞集団が、前記標的Ｔ細胞及び非標的Ｔ細胞を含み、前記標的Ｔ細胞が、前記多量体ポリペプチド中に存在する前記エピトープに特異的であり、前記接触によって、前記多量体ポリペプチド中に存在する前記共刺激ポリペプチドが前記標的Ｔ細胞に送達される、方法。
【０２９７】
態様１２４．
ＩＬ−２またはＩＬ−２変異体を標的Ｔ細胞に選択的に送達する方法であって、
混在Ｔ細胞集団と、態様８〜３５及び態様８０〜１０８のいずれか１つに記載の多量体ポリペプチドとの接触を含み、前記混在Ｔ細胞集団が、前記標的Ｔ細胞及び非標的Ｔ細胞を含み、前記標的Ｔ細胞が、前記多量体ポリペプチド中に存在する前記エピトープに特異的であり、前記接触によって、前記多量体ポリペプチド中に存在する前記ＩＬ−２またはＩＬ−２変異体が前記標的Ｔ細胞に送達される、方法。
【０２９８】
態様１２５．
前記Ｔ細胞集団が、インビトロのものである、態様１２３または態様１２４に記載の方法。
態様１２６．
前記Ｔ細胞集団が、個体におけるインビボのものである、態様１２３または態様１２４に記載の方法。
態様１２７．
前記多量体ポリペプチドを前記個体に投与することを含む、態様１２６に記載の方法。
【０２９９】
態様１２８．
前記標的Ｔ細胞が、制御性Ｔ細胞である、態様１２３〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
態様１２９．
前記標的Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞である、態様１２３〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
【０３００】
態様１３０．
前記混在Ｔ細胞集団が、個体から得られたインビトロの混在Ｔ細胞集団であり、前記接触の結果、前記標的Ｔ細胞が活性化及び／または増殖し、活性化及び／または増殖した標的Ｔ細胞集団が生じる、態様１２３または態様１２４に記載の方法。
態様１３１．
前記活性化及び／または増殖した標的Ｔ細胞集団を前記個体に投与することをさらに含む、請求項１３０に記載の方法。
【０３０１】
態様１３２．
個体から得られた混在Ｔ細胞集団において目的エピトープに結合する標的Ｔ細胞の存在を検出する方法であって、
ａ）前記混在Ｔ細胞集団と、請求項７〜３５及び請求項８０〜１０８のいずれか１項に記載の多量体ポリペプチドとのインビトロの接触であって、前記多量体ポリペプチドが前記目的エピトープを含む接触と、ｂ）前記接触に応答したＴ細胞の活性化及び／または増殖の検出であって、Ｔ細胞の活性化及び／または増殖が前記標的Ｔ細胞の存在を示す検出と、を含む、方法。
【実施例】
【０３０２】
以下の実施例は、本発明の製造方法及び使用方法を当業者に完全に開示及び説明するために提供され、本発明者らが自身の発明であると見なすものの範囲を限定することを意図せず、また、以下の実験がすべての、または唯一の実施した実験であることを示すことも意図しない。使用される数字（例えば、量、温度など）に関して正確性を確実にするために努力したが、いくらかの実験上の誤差及び偏差は考慮されるべきである。別段指示がない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。標準的な省略形を使用することができ、例えば、ｂｐは塩基対（複数可）、ｋｂはキロベース（複数可）、ｐｌはピコリットル（複数可）、ｓまたはｓｅｃは秒（複数可）、ｍｉｎは分（複数可）、ｈまたはｈｒは時間（複数可）、ａａはアミノ酸（複数可）、ｋｂはキロベース（複数可）、ｂｐは塩基対（複数可）、ｎｔはヌクレオチド（複数可）、ｋＤａはキロダルトン（複数可）、ｉ．ｍ．は筋肉内の（筋肉内に）、ｉ．ｐ．は腹腔内の（腹腔内に）、ｓ．ｃ．は皮下の（皮下に）などである。
【０３０３】
実施例１：ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの産生
一過性に遺伝子導入された哺乳類細胞によるＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの産生を分析した。図７Ａに示されるように、細胞に一過性に遺伝子導入してから６〜７日後、２つの異なるＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの産生レベル（ｍｇ／Ｌ培地）は９０ｍｇ／Ｌを超えていた。
【０３０４】
哺乳類細胞によって産生したＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを精製し、還元処理あり及び還元処理なしでポリアクリルアミドゲル電気泳動に供した。結果は、図７Ｂに示される。サイズは、ｋＤａで示される。
【０３０５】
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、ＩＬ−２ポリペプチドが「軽鎖」（すなわち、ＭＨＣクラスＩ軽鎖（例えば、β２Ｍ）を含むポリペプチド）に存在するもの、またはＩＬ−２ポリペプチドが「重鎖」（すなわち、ＭＨＣクラスＩ重鎖を含むポリペプチド）に存在するものを生じさせた。これらのＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの発現レベル及び安定性を分析した。
【０３０６】
これらのｓｙｎＴａｃは、哺乳類細胞において産生させた。図８Ａに示されるように、ＩＬ−２を重鎖に含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの産生レベルは、ＩＬ−２を軽鎖に含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのレベルと比較して約２５倍高かった。
【０３０７】
哺乳類細胞によって産生したこれらのＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを還元処理あり及び還元処理なしでポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、クマシーブルーでゲルを染色した。図８Ｂに示されるように、ＩＬ−２を重鎖に含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの安定性は、ＩＬ−２を軽鎖に含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃと比較して高かった。サイズは、ｋＤａで示される。
【０３０８】
変異ＩＬ−２を含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの発現レベルを評価した。図９は、ＩＬ−２／ｓｙｎ−Ｔａｃの発現レベルを示し、これらのＩＬ−２／ｓｙｎ−Ｔａｃでは、ＩＬ−２は、野生型（ｗｔ）であるか、またはＦ４２Ａ、Ｄ２０Ｋ、Ｑ１２６Ａ、Ｅ１５Ａ、Ｙ４５Ａ、及びＨ１６Ａのさまざまな組み合わせを含む。発現レベルは、野生型ＩＬ−２を含むｓｙｎＴａｃの発現レベルに対する変化率（％）として示される。
【０３０９】
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃにおけるＩＬ−２のコピー数が発現レベルに与える影響を評価した。ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、１つのコピー（１Ｘ）、２つのコピー（２Ｘ）、または３つのコピー（３Ｘ）を当該ｓｙｎＴａｃに含むようにした。これらのさまざまなＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを哺乳類細胞において産生させ、発現レベルをアッセイした。データは、図１０に示される。ＩＬ−２の１つのコピーまたは２つのコピーを含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは同様の発現レベルを示した一方で、ＩＬ−２の３つのコピーを含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは低い発現レベルを示した。発現レベルは、ＩＬ−２の単一のコピーを含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの発現レベルに対する倍率変化として示される。
【０３１０】
実施例２：ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのインビトロの活性
Ｔ細胞受容体を介する標的化の特異性を最大化するためには、共刺激ポリペプチドのそのリガンドに対する親和性は、ＴＣＲに対するＭＨＣの親和性と比較して低くあるべきである。ＴＣＲに対するペプチド／ＭＨＣの親和性は、約１０μＭであり得る。
【０３１１】
Ｆ４２Ａ置換及びＨ１６Ａ置換を含む変異ＩＬ−２の２つのコピーを含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを生成した。ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃによって誘導される共刺激シグナル伝達を抗原特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞及び非特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞で試験した。抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞及び非特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞をさまざまな濃度のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃと接触させた。
【０３１２】
図１１に示されるように、非特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞と比較して、抗原特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞においてＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがはるかに低い濃度で共刺激シグナル伝達を誘導した。
【０３１３】
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合選択性を試験した。ＬＣＭＶマウスまたはＯＴ１マウスの脾臓からＣＤ８+ Ｔ細胞を単離した。このＣＤ８+ Ｔ細胞をさまざまな濃度のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃと共にインキュベートし、２０分間結合させた。このＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、ＩｇＧ２ａＦｃを含むものである。ＣＤ８+ Ｔ細胞に対するＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合は、フィコエリトリン（ＰＥ）で標識された抗ＩｇＧ２ａ抗体を使用して検出した。フローサイトメトリーを使用してＰＥの蛍光を検出することでＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃに結合した細胞のパーセントを決定した。
【０３１４】
図１２に示されるように、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、抗原特異的な様式でＬＣＭＶ  ＣＤ８+ Ｔ細胞に結合するが、ＯＴ１  ＣＤ８+ Ｔ細胞に対しては顕著な結合を示さない。したがって、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、そのＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃに存在するエピトープに特異的なＣＤ８+ Ｔ細胞に選択的に結合する。
【０３１５】
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃが標的Ｔ細胞を選択的に活性化するか否かを決定した。ＬＣＭＶマウスまたはＯＴ１マウスの脾臓からＣＤ８+ Ｔ細胞を単離した。単一のアミノ酸置換（Ｆ４２Ａ）を含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ、またはＦ４２Ａ置換及びＨ１６Ａ置換を含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを使用した。さまざまな濃度のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃでＣＤ８+ Ｔ細胞を２０分間刺激した。その後、ＰＥで標識された抗リン酸化ＳＴＡＴ５抗体で細胞を染色した。フローサイトメトリーを使用してＰＥの蛍光を検出することでリン酸化ＳＴＡＴ５陽性細胞のパーセントを決定した。ここでは、リン酸化ＳＴＡＴ５は、活性化のマーカーである。
【０３１６】
図１３に示されるように、非特異的（ＢＬ６）ＣＤ８+ Ｔ細胞と比較して、抗原特異的（ＬＣＭＶ）ＣＤ８+ Ｔ細胞においてＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがはるかに低い濃度でＣＤ８+ 刺激（リン酸化ＳＴＡＴ５陽性細胞の％によって示される）を誘導した。
【０３１７】
さまざまなＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの特異的な活性を分析した。ＩＬ−２の単一のコピー、ＩＬ−２の２つのコピー、またはＩＬ−２の３つのコピーを含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ（これらのＩＬ−２には、Ｆ４２Ａ置換、Ｄ２０Ｋ置換、Ｑ１２６Ａ置換、Ｅ１５Ａ置換、Ｈ１６Ａ置換、及びＹ４５Ａ置換をさまざまな組み合わせで含めた）を、ＣＤ８+ 抗原特異的（ＬＣＭＶ）細胞またはＣＤ８+ 非特異的（ＢＬ６）細胞の刺激についてさまざまな濃度で試験した。リン酸化シグナル伝達兼転写活性化因子５（ｐＳＴＡＴ５）の陽性パーセントを決定した。データは、図１４Ａ〜１４Ｆに示される。
【０３１８】
実施例３：ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのインビボの活性
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのインビボの活性を試験した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、組換えＩＬ−２（ｒＩＬ−２）、または本開示のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを投与した後、抗原特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞のインビボの倍率変化を試験した。データは、図１５の左パネルに示される。このデータは、ｒＩＬ−２と比較してＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃが１０倍強力であることを示す。
【０３１９】
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのインビボの特異性を試験した。ＰＢＳ、ｒＩＬ−２、またはＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを投与した後に、抗原特異的な応答及び抗原非特異的な応答を評価した。データは、ＰＢＳ、ｒＩＬ−２、またはＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを投与した後の抗原特異的なリンパ節細胞または抗原非特異的なリンパ節細胞のパーセントとして示される。図１５の右パネルに示されるように、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃによって抗原特異的な応答（カルボキシフルオセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）の最大希釈に対する％（Ｔ細胞増殖の指標）として示される）が誘導された。対照的に、ｒＩＬ−２によって誘導された応答は抗原特異的ではなかった。
【０３２０】
用量応答アッセイを実施した。ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ（Ｆ４２Ａ、Ｈ１６Ａ）を４ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、及び１６ｍｇ／ｋｇの濃度で腹腔内投与した。結果は、図１６Ａに示される。図１６Ａに示されるように、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを４ｍｇ／ｋｇまたは８ｍｇ／ｋｇで投与すると、同様の結果が得られ、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを１６ｍｇ／ｋｇで投与すると、最も強力な免疫賦活活性が誘導された。
【０３２１】
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの投与経路の影響を試験した。皮下（ＳｕｂＱ）または腹腔内（ＩＰ）にＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ（Ｆ４２Ａ、Ｈ１６Ａ）を４ｍｇ／ｋｇで投与した。図１６Ｂに示されるように、ＩＰ投与と比較して、皮下投与によってより強力な免疫賦活活性が得られた。
【０３２２】
ＩＬ−２のコピー数が効力に与える影響を決定した。ＩＬ−２（Ｆ４２Ａ、Ｈ１６Ａ）の単一のコピーまたはＩＬ−２（Ｆ４２Ａ、Ｈ１６Ａ）の２つのコピーを含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを、ＨＰＶ  Ｅ７エピトープを有する腫瘍を有するマウスに注射した。ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃに含めるエピトープは、ＨＰＶ  Ｅ７エピトープとした。図１７Ａ及び図１７Ｂに示されるように、ＩＬ−２（Ｆ４２Ａ、Ｈ１６Ａ）の単一のコピーのみを含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃと比較して、ＩＬ−２（Ｆ４２Ａ、Ｈ１６Ａ）の２つのコピーを含むＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、腫瘍サイズを低減する上で、より有効であった。
【０３２３】
実施例４：ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのＰＫ／ＰＤ及び安定性の試験
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの薬物動態（ＰＫ）分析を実施した。ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ（Ｆ４２Ａ、Ｄ２０Ｋ、Ｈ１６Ａ）を１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。投与後のさまざまな時点で血清試料を採取し、血清試料におけるＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのレベルを測定した。図１８に示されるように、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの血清半減期は、約４時間であった。
【０３２４】
ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを１０ｍｇ／ｋｇでＣ５７ＢＬ／６マウスに腹腔内注射し、注射の２時間後に血清を採取した。このＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、Ｈｉｓ６タグを含めたものである。１００ｎｇのインプットタンパク質または４０μｌの血清に相当するものをドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に供し、抗（Ｈｉｓ）6 抗体または抗β−２Ｍ抗体で探索した。結果は、図１９に示されており、この結果は、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃがインビボで安定かつインタクトなまま少なくとも２時間残存することを示す。
【０３２５】
４℃または３７℃でＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを５日間保持した。それぞれの試料０．５ｍｇ（１０ｍｇ／ｍｌ）をサイズ排除クロマトグラフィーによって分析した。図２０に示されるように、ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、４℃または３７℃で少なくとも５日間、安定かつインタクトである。
【０３２６】
実施例５：ヒトＣＭＶ特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ介在性の増殖
ＩＦＮ−ガンマ酵素免疫スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイを使用し、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）−ペプチドプールに対する反応性について、ヒトドナーに由来する末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をスクリーニングした。スポット形成数（ＳＦＣ）によって、ＣＭＶ−前駆体高頻度群、ＣＭＶ−前駆体中頻度群、ＣＭＶ−前駆体低頻度群、またはＣＭＶ−前駆体群なし群としてＰＢＭＣを分類した。それぞれの群のＰＢＭＣを３０ｎＭ〜２ｎＭの用量範囲のＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ（「ＣＵＥ：ＩＬ−２」（Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む変異ＩＬ−２  ＭＯＤの２つのコピーを含むｓｙｎＴａｃ））で刺激した。５日目に、条件培地の５０パーセントを新鮮な培地と交換した。７日目に、抗体の一団で試料を染色し、フローサイトメトリーによって分析した。ＣＭＶペプチドであるＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号３７）を標的とする五量体染色を使用することで抗原特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞の頻度を決定した。データは、図３５に示される。ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃのＥＣ50は、約１ｎＭ〜約５ｎＭの範囲内であることが決定された。図３５は、非処理対照と比較したときの抗原特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞の増殖倍率を示す。Ｘ軸上の数値は、それぞれのドナーＰＢＭＣのＳＦＣ数を示す。誤差バーは、技術的に反復測定されたそれぞれのデータ点に由来する平均値＋／−ＳＤ値を示す。
【０３２７】
図３５に示されるデータは、エピトープ特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞の測定可能な前駆体集団（例えば、五量体染色またはＳＦＣによって測定可能なもの）が存在する場合、そのようなエピトープ特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞の数を増殖させる上でＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃが有効であることを示す。
【０３２８】
実施例６：Ｈ１６にアミノ酸置換を有するＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ
Ｈ１６に置換を有するＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃ変異体を生成し、発現レベル及びＩＬ−２Ｒに対する親和性を決定した。ＩＬ−２Ｒに対する親和性は、ＢＬＩを使用して決定した。データは、図３６に示される。
【０３２９】
実施例７：抗原特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対するＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの作用
変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃを、ヒト対象に由来する初代ＣＤ８+ Ｔ細胞と接触させた。この変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、ｉ）エピトープ提示ペプチドとしてのＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１３））と、ｉｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む変異ＩＬ−２  ＭＯＤの２つのコピーと、を含むものである。ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）に特異的なＣＤ８+ Ｔ細胞またはバルクのＣＤ８+ Ｔ細胞に対する上記の変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合を評価した。データは、図３７に示される。
【０３３０】
図３７は、ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対する本開示の変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合をフローサイトメトリーによって検出したものを示す。ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的ＣＤ８+ Ｔ細胞に対する結合のＥＣ50は２．６ｎＭであった。したがって、変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、腫瘍抗原特異的初代ヒトＴ細胞との高親和性相互作用を示した。結合は、非標的（バルク）ＣＤ８+ Ｔ細胞に対する結合と比較して、抗原特異的Ｔ細胞に高度に選択的であった。
【０３３１】
ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対する変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）近位マーカーであるＳＬＰ７６のリン酸化に与える影響を評価した。データは、図３８に示される。
【０３３２】
図３８は、ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対する変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合がＳＬＰ７６のリン酸化に与える影響を示す。ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃが結合すると、ＳＬＰ７６のリン酸化が急速に増加した。この作用は強力であった（ＥＣ50＝６５ｎＭ）。ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）の代わりにＣＭＶペプチドを含む対照ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃで生じたＳＬＰ７６のリン酸化が低レベルなものにすぎなかったことから、上記の作用は選択的でもあった。
【０３３３】
Ｔ細胞の活性化及び細胞溶解活性の主要マーカーを評価した。０ｎＭまたは１００ｎＭの変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃと共にＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＴ細胞を２日間インキュベートした。この変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃは、ｉ）エピトープ提示ペプチドとしてのＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）と、ｉｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む変異ＩＬ−２  ＭＯＤの２つのコピーとを含むものである。ｉ）ＣＤ２５（ＣＤ８+ Ｔ細胞活性化のマーカー）と、ｉｉ）グランザイムＢ（顆粒介在性経路を介する標的細胞死の重要メディエーター）と、ｉｉｉ）ＣＤ１０７α（ＣＤ８＋Ｔ細胞に存在する脱顆粒マーカー）との産生を評価した。データは、図３９に示される。
【０３３４】
図３９は、ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＴ細胞に対する変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合がＣＤ２５、グランザイムＢ、及びＣＤ１０７αの産生に与える影響を示す。データは、ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＴ細胞に変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃが結合することで、細胞溶解性エフェクター細胞へのＴ細胞の分化が誘導されることを示しており、このことは、ＣＤ２５、グランザイムＢ、及びＣＤ１０７αの発現増加によって証拠付けられる。
【０３３５】
ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対する変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合がＩＦＮ−γの産生に与える影響を評価した。ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用することでＩＦＮ−γの産生を検出した。データは、図４０に示される。
【０３３６】
図４０は、ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に対する変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃの結合がＩＦＮ−γの産生に与える影響を示す。データは、ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）特異的初代ヒトＣＤ８+ Ｔ細胞に変異ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃが結合すると、ＩＦＮ−γが用量依存的に分泌されることを示す。ＨＰＶ１６  Ｅ７（１１〜２０）の代わりにＣＭＶペプチドを含む対照ＩＬ−２／ｓｙｎＴａｃではＩＦＮ−γの産生は全く観測されなかった。
【０３３７】
本発明をその特定の実施形態に関して説明してきたが、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができ、均等物で置換することができることを当業者は理解されたい。さらに、特定の状況、材料、物質の組成物、方法、方法のステップ（複数可）を本発明の目的、趣旨及び範囲に適合させるために、多くの修正を行うことができる。すべてのそのような修正は、本明細書に添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。
【０３３８】
相互参照
本出願は、２０１６年１２月２２日出願の米国仮特許出願第６２／４３８，２７２号、２０１７年３月１３日出願の米国仮特許出願第６２／４７０，７７４号、２０１７年９月７日出願の米国仮特許出願第６２／５５５，４３５号、及び２０１７年１１月６日出願の米国仮特許出願第６２／５８２，１３２号の利益を主張し、これらの出願はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【０３３９】
テキストファイルとして提供される配列表の参照による援用
２０１７年１１月１４日に作成された、サイズが１５３ＫＢのテキストファイルである「ＣＵＥＢ−１０７ＷＯ＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ＿１７１１３３＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」として、本明細書と共に配列表が提供される。このテキストファイルの内容は、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１４Ｅ】
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【図１４Ｆ】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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