(57)【要約】本発明は、植物の近親交配種子の生産のため又は植物のハイブリッド種子の生産のための方法を提供し、ここで、得られた種子は、改変及び／又は改良された発芽特性、特に、改良された発芽特性、たとえば、強化された種子発芽率、強化された種子発芽能力、及び／又は強化された実生生重量を呈する。本発明はまた、種子の発芽特性を改良するための周縁キメラ植物の使用も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための方法であって、前記種子の１つ又は複数の発芽特性が改良されており、前記方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製するステップと、
ｂ）前記周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた前記種子を採取するステップと
を含む、方法。
【請求項２】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を改良するための方法であって、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製するステップと、
ｂ）前記周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた前記種子を採取するステップと
を含む方法。
【請求項３】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するための方法であって、前記種子の１つ又は複数の発芽特性が、改良されており、前記方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製するステップと、
ｂ）前記周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた前記種子を採取するステップと、
ｄ）ステップｃ）において得られた前記種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップと
を含む、方法。
【請求項４】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子を発芽させるための方法であって、前記種子の１つ又は複数の発芽特性が改良されており、前記方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた前記種子を採取するステップと、
ｄ）ステップｃ）において得られた前記種子を発芽させるステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｃ）において得られた前記種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップと
を含む、方法。
【請求項５】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための周縁キメラ植物の使用であって、前記周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【請求項６】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を改良するための周縁キメラ植物の使用であって、前記周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【請求項７】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を評価するための周縁キメラ植物の使用であって、前記周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【請求項８】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の発芽のための周縁キメラ植物の使用であって、前記周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【請求項９】
植物Ａ及びＣの遺伝子型が、互いに異なる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１０】
前記周縁キメラ植物において、前記Ｌ１及びＬ３シュート分裂組織層は、植物Ｃの遺伝子型を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１１】
前記周縁キメラ植物において、植物Ｃの遺伝子型は、植物Ａ及び／又は植物Ｂの遺伝子型の一部を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１２】
前記周縁キメラ植物において、前記Ｌ１シュート分裂組織層の遺伝子型は、植物Ｂの遺伝子型の一部を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１３】
植物Ａの遺伝子型が、植物Ｂの遺伝子型と同一であるか、請求項１〜４のいずれか一項で、ステップｂ）において、前記周縁キメラ植物が、自家受精している、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１４】
植物Ａの遺伝子型が、植物Ｂの遺伝子型とは異なる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１５】
前記１つ又は複数の発芽特性が、種子密度、種子生物量、発芽率、発芽能力、及び実生生重量からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１６】
発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量が、第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して、強化されている、請求項１５に記載の方法又は使用。
【請求項１７】
前記第２の植物Ｂが、非キメラ植物である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１８】
前記第１の植物Ａ及び前記第３の植物Ｃが、同じ属の種及び／又は前記属の種のハイブリッドに属する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１９】
前記第１の植物Ａ、前記第２の植物Ｂ、及び前記第３の植物Ｃが、すべて、同じ属の種及び／又は前記属の種のハイブリッドに由来する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２０】
前記第３の植物Ｃが、前記第１の植物Ａによって生産された種子と比較して、強化された発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量を有する種子を生産する、請求項１８又は１９に記載の方法又は使用。
【請求項２１】
台木品種の種子が、生産される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２２】
前記植物又はハイブリッド植物が、ソラナム属に属する種に由来する、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２３】
前記植物又はハイブリッド植物が、ソラナム・リコペルシクム種、ソラナム・ペンネリイ種、ソラナム・ハブロカイテス種、及びソラナム・ピンピネリフォリウム種、又はそれらのハイブリッドの群から選択される、請求項２２に記載の方法又は使用。
【請求項２４】
植物Ｃが、第１世代のＦ１ハイブリッド植物、好ましくは、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのＦ１ハイブリッド植物、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのＦ１ハイブリッド植物、又はソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ピンピネリフォリウムのＦ１ハイブリッド植物である、請求項２２又は２３に記載の方法又は使用。
【請求項２５】
植物Ｃが、ハイブリッド植物、好ましくは、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのハイブリッド植物、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのハイブリッド植物、又はソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ピンピネリフォリウムのハイブリッド植物であり、それぞれの種の遺伝子型の、全遺伝子型に対する寄与が、少なくとも０．５％、好ましくは少なくとも２％、より好ましくは少なくとも５％、さらにより好ましくは少なくとも１０％、なおもさらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは少なくとも３０％である、請求項２３又は２４に記載の方法又は使用。
【請求項２６】
植物Ｃの遺伝子型の少なくとも５０％が、トマト品種アイルサ・クレイグの遺伝子型である、請求項２４又は２５に記載の方法又は使用。
【請求項２７】
第１のトマト植物Ａを第２のトマト植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有するトマト種子の生産のための方法であって、前記種子の１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子と比較して、改良されており、前記方法が、
ａ）トマト植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びにトマト品種アイルサ・クレイグの遺伝子型の少なくとも５０％を含む遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラトマト植物を作製するステップと、
ｂ）前記周縁キメラ植物を、トマト植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた前記種子を採取するステップと
を含む、方法。
【請求項２８】
前記Ｌ１シュート分裂組織層が、ソラナム・リコペルシクム品種アイルサ・クレイグ×ソラナム・ペンネリイのハイブリッド植物、ソラナム・リコペルシクム品種アイルサ・クレイグ×ソラナム・ハブロカイテスのハイブリッド植物、又はソラナム・リコペルシクム品種アイルサ・クレイグ×ソラナム・ピンピネリフォリウムのハイブリッド植物の遺伝子型を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
トマト植物Ａの遺伝子型が、トマト植物Ｂの遺伝子型と同一であるか、又はステップｂ）において、前記周縁キメラ植物が、自家受精している、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３０】
植物Ａの遺伝子型が、植物Ｂの遺伝子型とは異なる、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３１】
発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量が、第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して、強化されている、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
台木品種の種子が、生産される、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのＦ１ハイブリッド植物、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのＦ１ハイブリッド植物、又はソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ピンピネリフォリウムのＦ１ハイブリッド植物に由来するＬ１シュート分裂組織層を含む周縁キメラトマト植物。
【請求項３４】
ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのハイブリッド植物、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのハイブリッド植物、又はソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ピンピネリフォリウムのハイブリッド植物に由来するＬ１シュート分裂組織層を含む周縁キメラトマト植物。
【請求項３５】
前記Ｌ２シュート分裂組織層が、ソラナム・リコペルシクム植物に由来する、請求項３３又は３４に記載の周縁キメラトマト植物。
【請求項３６】
台木種子生産の方法であって、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の周縁キメラトマト植物を、ソラナム・ペンネリイ植物、ソラナム・ハブロカイテス植物、又はソラナム・ピンピネリフォリウム植物の花粉で受粉させる方法。
【請求項３７】
請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法によって得られたか又は得ることができる種子であって、前記種子が、植物Ａを植物Ｃと交配することによって得られたか又は得ることができる種子と比較して、少なくとも１つの改良された発芽特性を有する、種子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、農業の分野に関する。特に、本発明は、種子の生産、並びに生産される種子の品質を改良する方法、特に、種子発芽特性を改良する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
作物の形質を強化するための標準的な解決策は、遺伝学法及び交配である。しかしながら、古典的な交配技法は、種子の特性が影響を受けるという副作用を有し得る。たとえば、トマトについては、新しいＦ１ハイブリッドは、かなりの割合で、低い種子品質、すなわち、低い種子発芽能力、種子発芽均質性、種子発芽率、並びに／又は実生生重量及び活力のために、市場に出ることはなく、これは、植物交配分野に対する研究投資の実質的な損失、並びに交配における進歩の阻止を意味する。ハイブリッド種子は、プライミング後に、商用として実現可能となるためには、少なくとも８０〜８５％が発芽する必要がある。植物の形質を改良させるだけでなく、良好な発芽特性を有する種子を生産することが、種子企業にとっての主な関心の対象である。
【０００３】
たとえば、高い果実若しくは葉収量、又は強調的／半自然的特徴、たとえば、ビーフトマトの場合では非常に大きな果実サイズは、種子の品質に対して多面的な負の作用を示し得、この作用は、他の可能性の中でもとりわけ、発生する種子から離れた望ましくない同化物分配によりもたらされ得、低い種子発芽能力、種子発芽均質性、種子発芽率、並びに／又は実生生重量及び活力をもたらし得る。そのような事例においては、植物産量形質と種子形質との間で、両方の側面が負に妥協されるバランスを探さなければならない。
【０００４】
種子品質が、原則として、交配によって改良され得る場合、それは、時間がかかり、困難なものであり、最も重要なことには、他の望ましいゲノム特性に影響を及ぼし得る。定量的形質として、これには、複数の望ましい遺伝子座を所望されるゲノムに導入することが必要となろう。特に、生殖質の交配においては、種子品質は選択の標的としては見過ごされており、良好な種子発芽特性を再度獲得する必要性は、交配プログラムの主な妨げとなるであろう。
【０００５】
したがって、所望される農業上又は園芸上の形質を有する植物を生産するために開発された近親交配種子又はハイブリッド種子の遺伝子組成に干渉すること、並びに系譜をたどり、古典的な交配及び選択によって種子品質の欠点を補正する必要性なしに、種子発芽能力、種子発芽均質性、種子発芽率、並びに／又は実生生重量及び活力など、植物によって生産される種子の特性を改良することが、当該技術分野において早急に必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
〔発明によって提供される解決策〕
本発明者は、周縁キメラ植物を利用して、既存の商用近親交配株又はＦ１ハイブリッド栽培種の種子を、別の栽培種の果実において生産させることによって、上述の問題に対する解決策が提供され得るという見識に至った。この生産系は、使用される特定の栽培種の遺伝子における適応を必要としないため、交配及び／又は遺伝子が関与する標準的な解決策に関する上述の問題が、克服される。
【０００７】
周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層が、配偶子の遺伝子型を決定することが、公知である（たとえば、Ｆｉｌｉｐｐｉｓら、Ｕｓｉｎｇ  ａ  ｐｅｒｉｃｌｉｎａｌ  ｃｈｉｍｅｒａ  ｔｏ  ｕｎｒａｖｅｌ  ｌａｙｅｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐｌａｎｔｓ，Ｔｈｅ  Ｐｌａｎｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１３，７５：１０３９−１０４９）。さらに、新しい栽培種を提供することにおける、この技術の有用性を調査するために、たとえば、イヌホオズキ（ｎｉｇｈｔｓｈａｄｅ）及びトマトを使用してキメラを作製することによって、予備的調査が行われたが、結果は残念なものとなった（Ｌｉｎｄｓａｙら、Ｇｒａｆｔ  ｃｈｉｍｅｒａｓ  ａｎｄ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｈｙｂｒｉｄｓ  ｆｏｒ  ｎｅｗ  ｃｕｌｔｉｖａｒｓ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｏｔａｎｙ，１９９５，Ｖｏｌ．３３：７９−９２）。
【０００８】
雌性親のＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層の遺伝子型を改変することによって、結果として得られる種子の遺伝子型を変更することなく、種子の発芽特性を劇的に強化することができることが見出されたというのは、驚くべきことである。この強化は、商用に不利益なハイブリッド株が、商用で実現可能となり得ることを意味し得る。蒔く種子の生産の間、母体植物（すなわち、種子をその後代として保持するもの）の健康状態及び活力は、良好な品質の種子を得ることに役立つ。これは、近親交配種子の生産に基づくかＦ１ハイブリッド種子の生産に基づくかに関係なく、すべての生産系に当てはまり、本発明は、非常に汎用性の高い解決策を提供する、すなわち、優れた品質の、任意の近親交配又はＦ１ハイブリッド交雑、並びに新しい品種の種子の直接的な商用生産を可能にする単純な手順を提供する。本発明の概念によると、種子は、先行技術の重大な欠点、並びに所望される近親交配種子又はハイブリッド種子の価値のある遺伝子組成の妨害を回避すると同時に、最適な種子発生に役立つ、すなわち、改良された種子品質、たとえば、改良された発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量を有する種子をもたらす、その母系特性だけについて選択した、意図的に選択した異なる母体植物に基づいて生産される。
【０００９】
〔発明の概要〕
本発明者は、まず、周縁キメラ植物を作製し、続いて、そのような植物において種子を生産させることによって、種子を生産する手段を見出した。この方法では、植物において生産される種子の表現型特性が改良され、特に、該種子の発芽特性、たとえば、発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量が、植物自体の遺伝子型の果実において生産される種子と比較して、改良される。
【００１０】
本開示は、以下の付記に表される方法、使用、態様、及び実施形態を教示する。
【００１１】
付記１
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための方法であって、種子の１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子と比較して、改変及び／又は改良されており、この方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと
を含む、方法。
【００１２】
付記２
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための方法であって、種子の１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子と比較して、改変及び／又は改良されており、この方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと
を含む、方法。
【００１３】
付記３
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を改変及び／又は改良するための方法であって、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと
を含む方法。
【００１４】
付記４
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を改変及び／又は改良するための方法であって、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと
を含む方法。
【００１５】
付記５
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良するための方法であって、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと
を含む方法。
【００１６】
付記６
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良するための方法であって、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと
を含む方法。
【００１７】
付記７
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するための方法であって、種子の１つ又は複数の発芽特性が、改変及び／又は改良されており、この方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと、
ｄ）ステップｃ）において得られた種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップと
を含む、方法。
【００１８】
付記８
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するための方法であって、種子の１つ又は複数の発芽特性が、改変及び／又は改良されており、この方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと、
ｄ）ステップｃ）において得られた種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップと
を含む方法。
【００１９】
付記９
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子を発芽させるための方法であって、種子の１つ又は複数の発芽特性が改変及び／又は改良されており、この方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと、
ｄ）ステップｃ）において得られた種子を発芽させるステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｃ）において得られた種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップと
を含む方法。
【００２０】
付記１０
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子を発芽させるための方法であって、種子の１つ又は複数の発芽特性が改変及び／又は改良されており、この方法が、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製又は提供するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと、
ｄ）ステップｃ）において得られた種子を発芽させるステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｃ）において得られた種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップと
を含む、方法。
【００２１】
付記１１
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を改変及び／又は改良するための周縁キメラ植物の使用であって、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００２２】
付記１２
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を改変及び／又は改良するための周縁キメラ植物の使用であって、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【００２３】
付記１３
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を改変及び／又は改良するための周縁キメラ植物の使用であって、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００２４】
付記１４
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を改変及び／又は改良するための周縁キメラ植物の使用であって、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【００２５】
付記１５
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００２６】
付記１６
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【００２７】
付記１７
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００２８】
付記１８
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【００２９】
付記１９
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を評価するための周縁キメラ植物の使用であって、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００３０】
付記２０
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を評価するための周縁キメラ植物の使用であって、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【００３１】
付記２１
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を評価するための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００３２】
付記２２
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の１つ又は複数の発芽特性を評価するための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【００３３】
付記２３
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の発芽のための周縁キメラ植物の使用であって、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００３４】
付記２４
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の発芽のための周縁キメラ植物の使用であって、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【００３５】
付記２５
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の発芽のための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００３６】
付記２６
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の発芽のための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３シュート分裂組織層を含む、使用。
【００３７】
付記２７
周縁キメラ植物において、Ｌ１及びＬ３シュート分裂組織層が、いずれも、第３の植物Ｃの遺伝子型を有する、付記１〜２６のいずれか１つに記載の方法又は使用。
【００３８】
付記２８
植物Ａの遺伝子型が、植物Ｂの遺伝子型と同一であるか、又は植物ＢのＬ２層の遺伝子型と同一である、付記１〜２７のいずれか１つに記載の方法又は使用。
【００３９】
付記２９
植物Ａの遺伝子型が、植物Ｂの遺伝子型とは異なるか、又は植物ＢのＬ２層の遺伝子型とは異なる、付記１〜２８のいずれか１つに記載の方法又は使用。
【００４０】
付記３０
１つ又は複数の発芽特性が、種子密度、種子生物量、種子発芽率、種子発芽能力、及び実生生重量からなる群から選択される、付記１〜２９のいずれか１つに記載の方法又は使用。
【００４１】
付記３１
種子発芽率、種子発芽能力、及び／又は実生生重量が、第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して、強化されている、付記３０に記載の方法又は使用。
【００４２】
付記３２
該第２の植物Ｂが、非キメラ植物である、付記１〜３１のいずれか１つに記載の方法又は使用。
【００４３】
付記３３
該第１の植物Ａ及び該第３の植物Ｃが、同じ種に由来する、付記１〜３２のいずれか１つに記載の方法又は使用。
【００４４】
付記３４
該第１の植物Ａ、該第２の植物Ｂ、及び該第３の植物Ｃが、すべて、同じ種に由来する、付記１〜３３のいずれか１つに記載の方法又は使用。
【００４５】
付記３５
該植物が、ソラナム属に属する種に由来する、付記３３又は３４に記載の方法又は使用。
【００４６】
付記３６
該第３の植物Ｃが、トマト品種アイルサ・クレイグである、付記３５に記載の方法又は使用。
【００４７】
付記３７
該第３の植物Ｃが、該第１の植物Ａによって生産された種子と比較して、強化された発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量を有する種子を生産する、付記１〜３６のいずれか１つに記載の方法又は使用。
【００４８】
付記３８
第１のトマト植物Ａを第２のトマト植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有するトマト種子の生産のための方法であって、種子の１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子と比較して、改変及び／又は改良されており、この方法が、
ａ）トマト植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及びトマト品種アイルサ・クレイグの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む周縁キメラトマト植物を作製するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、トマト植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと
を含む、方法。
【００４９】
付記３９
トマト植物Ａの遺伝子型が、トマト植物Ｂの遺伝子型と同一である、付記３８に記載の方法。
【００５０】
付記４０
植物Ａが、ビーフトマトである、付記３８又は３９に記載の方法。
【００５１】
付記４１
発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量が、第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して、強化されている、付記３８、３９、又は４０のいずれか１つに記載の方法。
【００５２】
付記４２
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための周縁キメラ植物の使用であって、１つ又は複数の発芽特性が、植物Ａ及びＢを交配することによって得られた種子の発芽特性と比較して、改変及び／又は改良されており、周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層及び第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１シュート分裂組織層を含む、使用。
【００５３】
付記４３
付記１〜４２のいずれか１つに記載の方法によって得られたか又は得ることができる種子であって、該種子が、植物Ａを植物Ｂと交配することによって得られたか又は得ることができる種子と比較して、少なくとも１つの改変及び／又は改良された発芽特性を有し、植物Ａ及びＢが、付記１〜４２において定義される通りである、種子。
【００５４】
付記４４
該種子が、周縁キメラ植物のＬ１層の遺伝子型を有する外皮又は種皮を有し、周縁キメラ植物が、付記１〜４２に定義される周縁キメラ植物である、付記４３に記載の種子。
【００５５】
第１の植物Ａ（本明細書において「植物Ａ」とも表記される）及び第３の植物Ｃ（本明細書において「植物Ｃ」とも表記される）は、本明細書において、非キメラ植物、すなわち、３つすべての分裂組織層Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３について同じ遺伝子型を有するとして、理解されるものとする。第２の植物Ｂ（本明細書において「植物Ｂ」とも表記される）は、キメラ植物であっても非キメラ植物であってもよい。植物Ｂが、キメラ植物である場合、「植物Ｂの遺伝子型」は、本明細書において、「植物ＢのＬ２層の遺伝子型」として解釈されるものとする。第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することは、本明細書において、第１の植物Ａを雌性植物とし、第２の植物Ｂを雄性植物として、交配することと理解されたい。上述の付記において言及されている植物Ａの遺伝子型及び／又は植物Ｃの遺伝子型は、任意の近親交配又はハイブリッドの遺伝子型であり得る。そのようなハイブリッド又は近親交配は、たとえば、ハイブリダイゼーション交雑におけるパートナーのうちの一方の遺伝子型を約０．５、１、２、５、７、１０、１５、２０、２５、３０、４０、又は５０％含んでもよい。植物Ｃの遺伝子型は、植物Ａ及び／又は植物Ｂの遺伝子型の一部を含んでもよい。たとえば、植物Ｃは、植物Ａ及び／又は植物Ｂの交配により得られた第１の世代のハイブリッド又はさらなる世代の近親交配種であり得る。周縁キメラ植物のＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層は、植物Ａ及び／又は植物Ｂの交配により得られた第１の世代のハイブリッド又はさらなる世代の近親交配種の遺伝子型を有し得る。
【００５６】
上述の付記において言及されている植物Ａの遺伝子型及び／又は植物Ｃの遺伝子型は、半数体、二倍体、異数体、又は多倍数体であり得る。
【００５７】
本明細書において使用される植物Ａ、植物Ｂ、及び植物Ｃは、株Ａの植物、株Ｂの植物、及び／又は株Ｃの植物で置き換えることができるが、かならずしもそうする必要はない。
【００５８】
種子の改変又は改良された発芽特性は、たとえば、より高い発芽能力、より均質な発芽、より高い発芽率、及び／又は増加した実生生物量若しくは生重量若しくは活力である。さらなる改変又は改良された発芽特性は、種子の比重又は種子の生物量であり得る。Ｌ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層の選択により、１つ又は複数の発芽特性のうちのどれが改良されるかが決定される。非キメラ植物の表現型特性、より詳細には、そのような植物から得られた種子の発芽特性を踏まえて、本発明の方法を使用することにより、当業者であれば、本発明の周縁キメラ植物を生産するために、どのシュート分裂組織層（すなわち、どの植物に由来するか）を選択すればよいかを認識している。特に、当業者であれば、生産される種子に、望ましい発芽特徴を付与するために、どのＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を選択すればよいかを認識している。
【００５９】
本発明はまた、本発明及び上述の付記のステップａに定義される、周縁キメラ植物の使用により、近親交配種子又はハイブリッド種子を提供する。特定の実施形態において、本発明の周縁キメラ植物は、種子生産のために、自家受精される。
【００６０】
好ましい実施形態において、Ｌ３シュート分裂組織層の幹細胞の遺伝子型は、本発明の周縁キメラ植物におけるＬ１シュート分裂組織層の幹細胞の遺伝子型と同一である。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】異なる発芽能力を有する植物株の発芽した種子の割合の経時的な展開を示す。発芽能力は、所与の期間における植えた種子の総数に対する割合として表される、発芽した種子の数である。取得期間は、発芽した種子の数がやがて横ばいになり、プラトー期に達するのを確実にするように十分に長いものである。この期間は、たとえば、ピーク値時間の３倍である。このプラトー期は、すべての種子が発芽している場合には１００％であり得るか、又は一部の種子がまったく発芽していない場合には、それよりも低い割合であり得る。この図において、線Ｂは、８０％の発芽能力を有する対照株である。線Ａは、改良された発芽能力（１００％）を有する株の例であり、線Ｃは、発芽能力が劣る例である。
【図２】ピーク値時間の概念を示す図である。ピーク値時間は、発芽曲線の接線が最も急勾配となる時点である、すなわち、単位時間当たりの発芽する種子の増加が最も高い時点である。発芽の動力学に関連する時点であるピーク値時間は、発芽能力を評価するのに必要な期間、たとえば、種子植え付けからピーク値時間までの時間の２倍、３倍、４倍、又は５倍、好ましくは、３倍に等しい期間を定めるために使用することができる。
【図３】種子の密度分布を示す。エラーバーは、９５％信頼区間を示す。重複しないエラーバーは、有意に異なるサンプル平均を示す（ｐ＝０．０５）。Ａ：密度クラス「３」において、線は、上から下に、Ｓ１＿ＹＹ（非キメラＹＹ植物の自殖後代）、Ｓ１−キメラ（キメラの自殖後代）、Ｓ１＿ＸＸ（非キメラＸＸ植物の自殖後代）、及びＳ２＿キメラ（Ｓ１−キメラの自殖後代）を表す。Ｂ：密度クラス「３」において、線は、上から下に、Ｆ１＿ＸＸ（非キメラ植物ＸＸと株ＺＺとの他家受精の後代）、Ｆ１＿キメラ（キメラと株ＺＺの他家受精の後代）を表す。
【図４】異なる密度クラスにおける種子の生物量分布を示す。エラーバーは、９５％信頼区間を示す。重複しないエラーバーは、有意に異なるサンプル平均を示す（ｐ＝０．０５）。Ａ：密度クラス「１」において、線は、上から下に、Ｓ１＿ＸＸ、Ｓ１＿キメラ、Ｓ１＿ＹＹを表す。Ｂ：密度クラス「３」において、線は、上から下に、Ｆ１＿キメラ、Ｆ１＿ＸＸを表す。
【図５】種子の発芽率を示す。エラーバーは、９５％信頼区間を示す。重複しないエラーバーは、有意に異なるサンプル平均を示す（ｐ＝０．０５）。Ａ：左のカラムは、Ｓ１＿ＸＸを表し、右のカラムは、Ｓ１＿キメラを表す。Ｂ：左のカラムは、Ｆ１＿ＸＸを表し、右のカラムは、Ｆ１＿キメラを表す。
【図６】パネルＡ及びＢは、インビトロ発芽能力を示す。エラーバーは、９５％信頼区間を示す。重複しないエラーバーは、有意に異なるサンプル平均を示す（ｐ＝０．０５）。Ａ：上の線は、Ｓ１＿キメラを表し、下の線は、Ｓ１＿ＸＸを表す。Ｂ：上の線は、Ｆ１＿キメラを表し、下の線は、Ｆ１＿ＸＸを表す。パネルＣは、インビボ発芽能力を示す。左：非キメラＸＸの母体に由来するＸＺハイブリッド種子。右：キメラに由来するＸＺハイブリッド種子。
【図７】実生シュート生重量を示し、エラーバーは、９５％信頼区間を示す。Ａ：左のカラムは、Ｓ１＿ＸＸを表し、右のカラムは、Ｓ１＿キメラを表す。Ｂ：左のカラムは、Ｆ１＿ＸＸを表し、右のカラムは、Ｆ１＿キメラを表す。
【図８】種子の密度分布を示す。密度クラス「３」において、線は、上から下に：Ｆ１＿キメラ（キメラとＰＰ株との他家受精の後代）及びＦ１＿ＴＴ（非キメラ植物ＴＴとＰＰ株との他家受精の後代）を表す。
【図９】種子の発芽率を示す。左のカラムは、Ｆ１＿ＴＴを表し、右のカラムは、Ｆ１＿キメラを表す。
【図１０】インビトロ発芽能力を示す。上の線は、Ｆ１＿キメラを表し、下の線は、Ｆ１＿ＴＴを表す。
【図１１】ＴＨハイブリッド種子の比重を示す。黒色の線は、Ｆ１＿キメラ（キメラ、キメラとＨＨ株との他家受精の後代）を表し、灰色の線は、Ｆ１＿ＴＴ（対照、ＴＴとＨＨ株との他家受精の後代）を表す。
【図１２】ＴＨハイブリッド種子の発芽率を示す。黒色のカラムは、Ｆ１＿キメラを表し、灰色のカラムは、Ｆ１＿ＴＴを表す。
【図１３】ＴＨハイブリッド種子のインビトロ発芽能力を示す。黒色の線は、Ｆ１＿キメラを表し、灰色の線は、Ｆ１＿ＴＴを表す。
【図１４】ビーフトマト植物（対照）又はビーフトマトのＬ２及びＬ３並びにアイルサ・クレイグ×チェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株の交雑により得られたＦ１のＬ１を含むキメラ（キメラ、黒色の線）を自家受粉させることによって生産したＢＢ種子のインビトロ発芽能力を示す。
【図１５】ビーフトマト植物（対照）又はビーフトマトのＬ１及びＬ２並びにアイルサ・クレイグ×チェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株の交雑により得られたＦ１のＬ３を含むキメラ（キメラ、黒色の線）を自家受粉させることによって生産したＢＢ種子のインビトロ発芽能力を示す。
【図１６】ＢＭ種子のインビトロ発芽能力を示す。黒色の線は、Ｆ１＿キメラ（キメラ、キメラとＭＭ株との他家受精の後代）を表し、灰色の線は、Ｆ１＿ＢＢ（対照、ＢＢとＭＭ株との他家受精の後代）を表す。
【図１７】ＭＨ２種子のインビトロ発芽能力を示す。黒色の線は、Ｆ１＿キメラ（キメラ、キメラとＨ２Ｈ２株との他家受精の後代）を表し、灰色の線は、Ｆ１＿ＭＭ（対照、ＭＭとＨ２Ｈ２株との他家受精の後代）を表す。
【図１８】ＭＨ２種子のインビトロ発芽能力を示す。黒色の線は、Ｆ１＿キメラ（キメラ、キメラとＨ２Ｈ２株との他家受精の後代）を表し、灰色の線は、Ｆ１＿ＭＭ（対照、ＭＭとＨ２Ｈ２株との他家受精の後代）を表す。
【図１９】ＭＰ２種子のインビトロ発芽能力を示す。黒色の線は、Ｆ１＿キメラ（キメラ、キメラとＰ２Ｐ２株との他家受精の後代）を表し、灰色の線は、Ｆ１＿ＭＭ（対照、ＭＭとＰ２Ｐ２株との他家受精の後代）を表す。
【図２０】ＭＰ２種子のインビトロ発芽能力を示す。黒色の線は、Ｆ１＿キメラ（キメラ、キメラとＰ２Ｐ２株との他家受精の後代）を表し、灰色の線は、Ｆ１＿ＭＭ（対照、ＭＭとＰ２Ｐ２株との他家受精の後代）を表す。
【図２１】ＭＰ３種子のインビトロ発芽能力を示す。黒色の線は、Ｆ１＿キメラ（キメラ、キメラとＰ３Ｐ３株との他家受精の後代）を表し、灰色の線は、Ｆ１＿ＭＭ（対照、ＭＭとＰ３Ｐ３株との他家受精の後代）を表す。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
定義
以下の説明及び実施例において、いくつかの用語が使用される。そのような用語に与えられる範囲を含め、本明細書及び特許請求の範囲の明確で一貫した理解を提供するために、以下の定義が提供される。本明細書において別途定義されない限り、使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する。
【００６３】
本明細書において使用されるとき、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」及び「含む（ｔｏ  ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、並びにそれらの活用形は、これらの用語が、この単語に続く品目が含まれるが、具体的に述べられていない品目が除外されるわけではないことを意味して、非限定的に使用される状況を指す。これは、「からなる」というより制限的な動詞をもまた包含する。加えて、「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」という不定冠詞による要素への参照は、文脈によりその要素が１つ及び１つだけ存在することが明確に求められていない限り、その要素が１つを上回って存在する可能性を排除するものではない。「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」という不定冠詞は、したがって、通常、「少なくとも１つ」を意味する。
【００６４】
本明細書において使用されるとき、「及び／又は」という用語は、言及された事例のうちの１つ又はそれ以上が、単独で生じ得る、又は言及された事例のうちの少なくとも１つとの組合せで生じ得、最大で言及された事例のすべてとの組合せで生じ得る、状況を指す。
【００６５】
本発明の文脈において、種子の発芽は、種子胚からの植物の発生、得に、種皮からの幼根の出現の最初の段階を意味する。
【００６６】
発芽は、通常、プライミングと称されるプロセスの間に、水による種子の制御された事前処置によって、促進される。プライミング中に、種子は、水和又は部分水和を受ける。このプライミングプロセスの後、通常、種子を、再び乾燥させる。種子を蒔くか、植えるか、又はそうでなければ分配し、水に曝露した後、種子が発芽することになる。
【００６７】
湿層処理は、種子が、発芽の前に耐えなければならない可能性のある低温条件をシミュレーションするために、種子を事前処置するプロセスである。湿層処理は、胚の休眠期を打破する手段である。胚の休眠を打破するために、通常、低温期間が、可能性としては湿潤条件と組み合わせて、適用される。適用される温度は、１〜５℃であることが典型的であるが、これに限定されない。処置の期間、適用される温度、及び湿潤条件は、植物の種に依存し、当業者には公知であるか、又は当業者によって構築することもできる。湿層処理の期間は、植物種及び湿層処理の他の環境条件に応じて、たとえば、１週間〜２０週間、又は１ヶ月間〜３ヶ月間であり得る。種子は、冷水中に、たとえば、植物種に応じて、２〜２０時間浸漬され得、その後に、低温処置に曝露される。また、一部の事例において、低温処置には、種子を、植物種に応じて、及び植物種に応じた期間、温暖処置、たとえば、１２〜２５℃に曝露することが先行する。当業者であれば、所与の植物種の湿層処理条件を選択する方法を認識している。
【００６８】
実生は、種子に存在する植物の胚から発生した若い植物である。実生は、幼根（胚の根）、胚軸（胚の茎）、子葉（胚の葉）、シュート頂分裂組織、及び根頂分裂組織を含む。実生は、たとえば、子葉に加えて、第１の本葉を含み得る。そのような場合には、実生は、小植物体と称することもできる。
【００６９】
遺伝子型という用語は、植物細胞、実生、植物の一部、又は植物の遺伝子構成を指し、とりわけ、植物細胞、実生、植物の一部、又は植物の特定のアレルの構成を含む。当業者には周知のように、種子の構成要素は、胚である。「胚遺伝子型」という用語は、したがって、種子のこの構成要素の遺伝子構成を指す。遺伝子型判定とは、たとえば、異なる分裂組織層又は異なる（非キメラ）植物のサブセット間での遺伝子の変動（たとえば、ＳＮＰ）を判定するプロセスを指す。
【００７０】
ハイブリッド種子とは、遺伝子的に異なる親から生産された種子を指す。したがって、ハイブリッド種子は、遺伝子的にヘテロ接合性であるか、又は大部分が遺伝子的にヘテロ接合性である。ハイブリッド種子はまた、Ｆ１ハイブリッド種子とも称される。
【００７１】
近親交配種子は、近親交配株に由来する。近親交配株は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０世代連続の制御された自家受精、同胞交配、又は反復親への戻し交雑の結果として得られた純粋交配株である。近親交配株は、少なくとも５世代連続の制御された自家受精又は反復親への戻し交雑により得られた純粋交配株であることが、好ましい。
【００７２】
類似の環境条件とは、とりわけ、類似の温度、湿度、栄養、及び光の条件、並びに類似の灌水、昼／夜リズム、及び受精レジメンの使用を意味する。これらの条件は、たとえば、周縁キメラのＬ３シュート分裂組織層の幹細胞の遺伝子型を有する非キメラ植物、又は周縁キメラのＬ１シュート分裂組織層の幹細胞の遺伝子型を有する非キメラ植物を含むがこれらに限定されない、本明細書に記載される植物が、成長する条件である。類似の環境条件は、同一の環境条件を示唆する。
【００７３】
母体植物から、発生する種子への同化物の分配は、母体植物が、栄養源、たとえば、代謝産物及び／又はホルモンを種子に提供する、「分配」の相対レベルに関する。
【００７４】
本発明の文脈において、種子発芽特性という用語は、とりわけ、発芽能力、発芽の均質性、発芽率、実生生重量、及び／又は種子活力を指す。
【００７５】
種子密度は、種子の比重に関連する。この密度は、たとえば、種子の、たとえば、スクロース勾配における、液体密度分離によって、判定することができる。
【００７６】
本発明の文脈において、発芽能力は、所与の植物種に適切な固定期間以内に発芽する、すなわち、幼根の出現を示す、蒔かれたか、又は植えられたか、又はそうでなければ分配された種子の割合を意味する。したがって、発芽能力は、所与の期間以内に、発芽した種子の数を、蒔かれたか、又は植えられたか、又はそうでなければ分配された種子の総数で除し、割合として再計算したものとして計算することができる。種子発芽特性は、たとえば、分類及び選択の手順、たとえば、農業及び園芸における通常のものを行った後に、判定することができ、特定の植物種を目的とするものであり得る。種子は、たとえば、液体密度分離によって、又はＸ線分類（たとえば、トマト種子に使用することができるようなもの）によって、分離することができる。種子はまた、まず、プライミングしてもよい。当業者であれば、所与の植物種に適切な固定期間がどれほどの長さであるかを認識している。この期間は、たとえば、ピーク値時間の２倍、３倍、４倍、又は５倍であり得る。これは、ピーク値時間の３倍であることが、好ましい。この期間が、環境条件に応じて変動し得ることもまた、当業者には公知である。これらの条件は種子発芽に最適な条件であることが、好ましい。したがって、発芽率又は発芽均質性における変動性が、発芽能力の計算に影響を及ぼさない長さの期間が、選択される。この期間は、当業者が、発芽能力のある種子の大半が実際にこの期間内に発芽すると妥当に予測することができる場合、適切である。図１は、異なる発芽能力を有する植物株の発芽した種子の割合の経時的な展開を示す。取得期間は、発芽した種子の数がやがて横ばいになり、プラトー期に達するのを確実にするように十分に長いものである。このプラトー期は、すべての種子が発芽している場合には１００％であり得るか、又は一部の種子がまったく発芽していない場合には、それよりも低い割合であり得る。発芽能力とは、植物種に応じて、たとえば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％を意味する。したがって、８５％の発芽能力は、たとえば、ピーク値時間の３倍であるがこれに限定されない、所与の植物種に適切な期間以内に、蒔かれたか、又は植えられたか、又はそうでなければ分配された種子のうちの８５％が発芽する、すなわち、幼根の出現を示すことを、示唆する。高い発芽能力は、より多くの種子が幼根の出現を示すことを意味する。最適な環境条件下において発芽能力を構築するための、所与の植物種に適切な固定期間の例は、たとえば、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）については５日間、オオムギについては約７日間、オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ）については約７日間、タバコについては約７日間、トマトについては約７日間、キンポウゲについては約２８日間、及びインパチェンスについては約３０日間であるが、これらに限定されない。
【００７７】
本発明の文脈において、ピーク値時間は、本明細書において、種子が発芽するように種子を蒔いたか、植えたか、又はそうでなければ分配してからの、場合によっては種子の分類及び選択からの、又はたとえば種子のプライミング及び／若しくは湿層処理からの期間であって、発芽した種子の割合をｙ軸にプロットし、時間をｘ軸にプロットした曲線において、最も大きい正接に到達する期間である。図２は、ピーク値時間の概念を図示する。したがって、ピーク値時間は、時間単位当たりの発芽する種子の数の増加が最も高くなる瞬間に到達するのに必要な期間として決定される。ピーク値時間は、たとえば、ピーク値時間の２倍、３倍、４倍、又は５倍、好ましくはピーク値時間の３倍の期間で固定することによって、発芽能力又は発芽率の計算に役立てるために使用することができる。
【００７８】
本発明の文脈において、種子発芽の均質性又は発芽均質性は、固定割合の発芽した種子（Ｘ）に到達するのに必要な時間（Ｔ）である。この固定割合は、５０％（Ｔ５０）、７５％（Ｔ７５）、８０％（Ｔ８０）、９０％（Ｔ９０）、９５％（Ｔ９５）、９９％（Ｔ９９）、又は特定の種子バッチに適切な任意の割合であり得る。時間が短いほど、均質性が高い。種子発芽の均質性が、環境条件に応じて変動し得ることが、当業者には公知である。これらの条件が、種子発芽の最適な条件であることが、好ましい。種子発芽の均質性は、原則として、発芽能力又は発芽率とは独立しているが、かならずしもそうとは限らない様式で、測定される。
【００７９】
本発明の文脈において、発芽率は、１日当たりの総発芽種子の加重合計として定義される。式形式では、発芽率＝（１日目に発芽した種子の数を１で除したもの）＋（２日目に発芽した種子の数を２で除したもの）＋…＋（Ｚ日目に発芽した種子の数をＺで除したもの）であり、式中、Ｚは、測定の最終日である。この測定は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｅｅｄ  Ａｎａｌｙｓｔｓ（ＡＯＳＡ）（ＡＯＳＡ．，１９８３．Ｓｅｅｄ  ｖｉｇｏｒ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｈａｎｄｂｏｏｋ．Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｎｏ．３２  ｔｏ  ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｎ  ｓｅｅｄ  ｔｅｓｔｉｎｇ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｓｅｅｄ  Ａｎａｌｙｓｔｓ）によって定義される発芽指数（ＧＩ）と同じである。発芽率は、所与の植物種に適切な期間にわたって判定され、この期間は、当業者が、発芽する能力のある種子の大半が実際に発芽すると妥当に予測することができる期間である。当業者であれば、この期間を判定する方法を認知している。この期間は、たとえば、ピーク値時間の２倍、３倍、４倍、又は５倍であり得る。これは、ピーク値時間の３倍であることが、好ましい。発芽率が、環境条件に応じて変動し得ることが、当業者には公知である。これらの条件は種子発芽に最適な条件であることが、好ましい。しかしながら、準最適条件下においては、改良された種子バッチ品質もまた、強化された発芽率として評価することができ、これは、農業又は園芸の実施において一般的であり得る。
【００８０】
本発明の文脈において、種子活力は、種子から生じる実生が、植えたときに、生存し、成長する能力を意味する。したがって、高い活力を有する種子は、類似の条件下であれば、生存し、まず子葉が展開され、次に、シュートが大きくなり、最後に、第１の本葉が生じることによって、第１の本葉が生じた実生又は小植物体に成長する割合が高い。同じ条件下であれば、植物種に応じたある特定の期間内に観察され得る第１の本葉が生じた実生又は小植物体の割合が高いほど、種子活力が、より高いと考えられる。また、播種後の固定期間後の実生の総生物量（生重量及び／又は乾燥重量）が大きいほど、種子活力が、より高いと考えられる。したがって、実生の生重量は、とりわけ、種子活力の尺度である。
【００８１】
本発明の文脈において、種子表現型特性は、雑種の組織（胚及び胚乳）ではなく、植物の母系組織によって決定される、種子組成の生物化学的及び生物物理学的態様として、定義される。表現型特性は、植物の母系組織による主な栄養素（炭水化物、ミネラルなど）の供給によって決定される、胚及び胚乳内に保管される蓄えの量及び化学組成であり得る。他の表現型特性は、母系に由来する種皮の強度及び／又は厚さであり得る。表現型特性という用語は、生理学的特性を包含する。種子表現型特性は、種子発芽特性と関連する。
【００８２】
本発明の文脈における、改変された又は改変するとは、植物Ａを植物Ｂと交配することに由来する種子を、その表現型特性又は生理学的特性について、より詳細には、その発芽特性について、本発明による周縁キメラ植物から得られた種子と比較し、該表現型特性及び／又は生理学的特性が、変化していること、好ましくは、改良されていることを意味する。本発明による周縁キメラ植物は、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層を含み、一方で、Ｌ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層は、異なる遺伝子型を有する、植物である。本発明による非キメラ植物は、Ｌ１及びＬ３シュート分裂組織層と同じ遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層を含む植物である。本発明による周縁植物から得られた種子は、植物Ａと植物Ｂとの交配に由来する種子と比較して、強化された発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量を示し得る。本発明の方法により得られたか又は得ることができる種子は、類似の環境条件下において試験した場合、植物Ａと植物Ｂとの交配に由来する種子と比較して、改変又は改良された種子密度分布、強化された発芽率、強化された発芽能力、改良された発芽均質性、改良された種子活力、及び実生生重量のうちの少なくとも１つを示し得る。植物Ａ及びＢは、同一の遺伝子型を有してもよく、その場合、得られる種子は、近親交配種子であり、或いは植物Ａ及びＢは、異なる遺伝子型を有してもよく、その場合、得られる種子は、ハイブリッド種子である。
【００８３】
提供した定義は、完全及び十分であるが、説明が不足している場合には、その分野において提供されるさらなる定義は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｅｅｄ  Ｔｅｓｔｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＩＳＴＡ）のハンドブック及び種子商業のウェブサイト、たとえば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆａｏ．ｏｒｇ／ｄｏｃｒｅｐ／００６／ａｄ２３２ｅ／ａｄ２３２ｅ０９．ｈｔｍ又はｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｅｅｄｂｉｏｌｏｇｙ．ｄｅ／ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．ａｓｐにおいて見出すことができる。これらの供給源による定義は、上記に提供される定義と矛盾しない限り、参考にすることができ、矛盾した場合には、上記に提供した定義が、適用される。
【００８４】
〔詳細な説明〕
本発明は、第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子を有する種子を生産するのに好適な周縁キメラ植物を生産する方法であって、種子の１つ又は複数の発芽特性が、改変及び／又は改良されており、この方法が、
ｉ）第１の植物Ａ及び第３の植物Ｃの提供のステップと、
ｉｉ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製するステップと
を含む、方法を提供する。
【００８５】
生産される周縁キメラは、第２の植物Ｂの花粉での受粉に好適であることが、好ましい。
【００８６】
本発明はまた、該周縁キメラ植物を母体植物として使用して、該種子を生産するための方法も提供する。したがって、本発明はまた、種子の胚の遺伝子型に影響を及ぼす必要なしに、種子を生産するため及び／又は種子の発芽特性を改変するための方法も提供する。該方法は、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製するステップと、
ｂ）周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた種子を採取するステップと
を含み、
種子胚が、第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の遺伝子型を有する。
【００８７】
本明細書において上述のように、第１の植物Ａ（本明細書において「植物Ａ」とも表記される）及び第３の植物Ｃ（本明細書において「植物Ｃ」とも表記される）は、本明細書において、非キメラ植物、すなわち、３つすべての分裂組織層Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３について同じ遺伝子型を有するとして、理解されるものとする。第２の植物Ｂ（本明細書において「植物Ｂ」とも表記される）は、キメラ植物であっても非キメラ植物であってもよい。植物Ｂが、キメラ植物である場合、「植物Ｂの遺伝子型」は、本明細書において、「植物ＢのＬ２層の遺伝子型」として解釈されるものとする。第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することは、本明細書において、第１の植物Ａを雌性植物とし、第２の植物Ｂを雄性植物として、交配することと理解されたい。Ｌ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層は、Ｌ１シュート分裂組織層、Ｌ３シュート分裂組織層、並びにＬ１及びＬ３の両方のシュート分裂組織層のうちのいずれか１つとして理解されるものとする。ステップｃにおいて採取された種子の少なくとも１つ又は複数の発芽特性は、類似の環境条件下において試験した場合、植物Ａを植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して、改変、好ましくは改良されていてもよい。１つ又は複数の発芽特性は、類似の環境条件下において試験した場合、植物Ａを植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して、有意に強化されていることが、好ましい。少なくとも１つの発芽特性は、発芽能力、発芽均質性、発芽率、種子密度、実生生重量、及び／又は種子活力のうちのいずれか１つであることが、好ましい。任意選択で、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの発芽特性が、改良又は強化されている。ステップｃにおいて得られた種子は、類似の環境条件下において試験した場合、植物Ａを植物Ｂと交配することによって（植物Ａを植物Ｂの花粉で受粉させることによって）得られた種子と比較して、強化された発芽能力及び強化された発芽率；強化された発芽能力及び強化された実生生重量；強化された発芽率及び強化された実生生重量；又は強化された強化された発芽能力、強化された発芽率、及び強化された実生生重量を示す。本方法は、ステップｃにおいて得られた種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップ及び／又はステップｃにおいて得られた種子を発芽させるステップをさらに含んでもよい。したがって、そのような種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するための方法であって、上記に定義されるステップａ〜ｃ、及び得られた種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するための後続のステップを含む方法もまた、提供される。少なくとも１つの発芽特性は、発芽能力、発芽均質性、発芽率、種子密度、実生生重量、及び／又は種子活力のうちのいずれか１つであることが、好ましい。任意選択で、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの発芽特性が、評価される。これらの発芽特性は、第１の非キメラ植物Ａ（雌性植物として）を、第２の植物Ｂ（雄性植物として）と交配することによって得られた種子の発芽特性と比較されることが、好ましい。任意選択で、この方法は、少なくとも１つの発芽特性を評価する前に、種子を発芽させるステップをさらに含む。種子を発芽させるための方法であって、上記に定義されるステップａ〜ｃ、及びステップｃにおいて得られた種子を発芽させる後続のステップｄ）を含む方法が、さらに提供される。任意選択で、この方法は、少なくとも１つの発芽特性を評価する後続のステップをさらに含む。本発明はまた、これらの方法のうちのいずれか１つにおける周縁キメラ植物の使用も提供する。
【００８８】
好ましい実施形態において、胚乳の遺伝子型も、影響を受けることはない。たとえば、本発明では、改変された（たとえば、改良された）種子密度、生物量、発芽率、発芽能力、種子活力、及び／又は実生の生重量を有する種子が、提供され得る。発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量は、第１の植物Ａ（雌性植物として）を第２の植物Ｂ（雄性植物として）と交配することによって得られた種子と比較して、強化されていることが、好ましい。
【００８９】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られる胚遺伝子型を有する種子の発芽特性は、植物Ａ又はＢの交配の後代の遺伝子構成を改変することなく、改変又は改良することができる。この目標は、第３の植物Ｃに由来するＬ１及び／又はＬ３層、並びに第１の植物Ａに由来するＬ２層を含む周縁キメラを調製し、それを、たとえば、受粉によって、第２の植物Ｂと交配する方法によって、達成される。このようにしてキメラから得られた種子は、第１の植物Ａ及び第２の植物Ｂを交配することによって得られた種子の胚遺伝子型と同一の胚遺伝子型を示すが、第１の植物Ａ及び第２の植物Ｂを交配することによって得られた種子と比較して、修飾された発芽特性を示す。解決される問題は、種子の胚遺伝子型を修飾することなしで、種子の発芽特性を修飾することである。解決方法は、上述のように構築したキメラを使用することである。修飾しようとする発芽特性は、種子密度、生物量、発芽率、発芽能力、及び／又は実生の生重量と関連し得るが、発芽特性における任意の他の所望される変化であってもよい。
【００９０】
キメラにおいて使用される第３の植物Ｃは、所望される発芽特性の修飾に基づいて、及び特に種子の品質に関連するものを考慮して、選択され得る。たとえば、植物Ｃは、所与の密度、生物量を有する種子を生産することが公知の植物、又は所与の発芽能力若しくは実生の生重量を有する種子を提供することが公知の植物であり得る。そのような植物Ｃは、次いで、植物Ｃの種子の発芽特性により類似するように、種子の発芽特性を修飾するために、キメラにおいて使用され得る。たとえば、トマト種子生産においては多くの目的で、トマト品種アイルサ・クレイグを植物Ｃとして使用することが、有利であり得る。植物Ｃの選択は、さらに、又は上記に引用した選択基準に加えて、植物Ｃと植物Ｂとの交配により得られた種子の存在及び／又は発芽特性に基づき得る。換言すると、植物Ｃと植物Ｂとの交配が、種子、好ましくは、許容されるか良好な発芽特性を有する該種子をもたらすことが公知であるか又は確立されている場合、植物Ｃの遺伝子型を、本発明の方法において使用される周縁キメラ植物のＬ１及び／又はＬ３層の遺伝子型として選択することができる。双子葉植物において、植物の組織は、シュート頂分裂組織の３つのクローン的に異なる細胞層、すなわち、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３クローン細胞層における多能性幹細胞から生じる。Ｌ１クローン細胞層は、表皮を作製する。Ｌ３クローン細胞層は、脈管輸送系、すなわち、木部及び篩部を含む、すべての植物器官において内部組織の大部分を生じ、果実の子房内の胚珠の数、並びに種子における同化物の蓄積、並びにしたがって種子発芽の特性及び品質を制御する。さらに、Ｌ１クローン細胞層もまた、種子の品質に寄与するが、これは、種皮又は外種皮へと発生し、食物供給に関与する、胚珠の外皮を生じるためである。雌性配偶体及びしたがって卵細胞は、対照的に、Ｌ２クローン細胞層から別個かつ排他的に生じる。したがって、シュート頂分裂組織の３つの細胞層においてそれぞれの幹細胞から生じる細胞及び組織は、シュート頂分裂組織の３つの細胞層においてこれらの幹細胞それぞれの遺伝子型を有する。
【００９１】
「周縁キメラ」は、１つ又は複数の細胞層（１つ又は複数）Ｌ１、Ｌ２、及び／又はＬ３全体が、別の細胞層とは遺伝子的に異なる、キメラである。周縁キメラの事例において、単一の組織層自体は、同種であり、キメラではない。周縁キメラは、最も安定な形態のキメラであり、明確に異なった価値のある植物表現型をもたらす。これらの植物は、それらが生成された末端分裂組織と同じ頂組織を有する腋芽を生産する。したがって、周縁キメラは、栄養繁殖によって倍増し得、それらのキメラ層組織を維持することができる。周縁キメラは、シュート分裂組織の（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）層のうちの１つにおける幹細胞の体細胞変異生成によって、作製することができる。周縁キメラはまた、たとえば、Ｓｚｙｍｋｏｗｉａｋ，Ｅ．Ｊ．及びＳｕｓｓｅｘ，Ｉ．Ｍ．（１９９２），Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｒｉｓｔｅｍ  ｌａｙｅｒ（Ｌ３）ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  ｆｌｏｒａｌ  ｍｅｒｉｓｔｅｍ  ｓｉｚｅ  ａｎｄ  ｃａｒｐｅｌ  ｎｕｍｂｅｒ  ｉｎ  ｔｏｍａｔｏ  ｐｅｒｉｃｌｉｎａｌ  ｃｈｉｍｅｒａｓ，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ４，１０８９−１１００によって記載されているように、合成方法によって生産することもできる。該周縁キメラは、２つの接木された種の間で生じる種間の細胞層移入の例である。この特定の方法は、栽培室又は温室において、周囲条件下で実施される。これは、一方を台木とし、もう一方を穂木とした、２つの植物の通常の接木からなる。接木接着部は、癒合した後、切断され、不定シュートを再生成することが可能となる。これらの不定シュートの中に、キメラが自発的に出現し得る。周縁キメラを生産するためのインビトロ合成技法もまた、開発されている。これらには、次のものが含まれる：（１）２つの異なる植物に由来する隣接した幹切片を、一緒に培養してキメラカルスにし、不定キメラシュートが、ホルモンを補充したインビトロ成長培地でこれらのカルスから再生成される、細胞の共培養。（２）２つの異なる植物の細胞懸濁液を混合し、混合物を、成長させてキメラカルスにし、不定キメラシュートが、ホルモンを補充したインビトロ成長培地でこれらのカルスから再生成される、混合カルス培養。（３）２つの異なる植物のプロトプラスト懸濁液を、アガロースに埋め込み、非常に高い細胞密度に成長させると、キメラシュートが、ホルモンを補充したインビトロ成長培地でこれらのカルスから再生成される、プロトプラストの共培養。（４）２つの実生を、滅菌条件下において、それらの胚軸に沿って接木し、接木の頂端下の断面を培養して、キメラ不定カルス及びシュートを誘導する、インビトロ接木培養。このような技法は、組織培養の共通点に含まれ、個々の植物株又は種に特異的であり得る多数の異なるプロトコールからなる。当業者であれば、２つの異なる植物の細胞を一緒に組織培養して、周縁キメラである場合もそうでない場合もある植物を再生成する方法を、理解するであろう。植物キメラに関する詳細な考察については、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ａ．Ｅ．Ｔｉｌｎｅｙ−Ｂａｓｓｅｔｔによる「Ｐｌａｎｔ  Ｃｈｉｍｅｒａｓ」（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１）を参照されたい。
【００９２】
本発明は、周縁キメラを生産する方法を提供する。これらの周縁キメラは、Ｌ２クローン細胞層の遺伝子型並びに花粉の遺伝子型によって決定される、ある特定の所望される遺伝子型の種子の生産を可能にする。これらの種子は、Ｌ２クローン細胞層とは異なる遺伝子型を有するＬ３クローン細胞層及び／又はＬ２クローン細胞層とは異なる遺伝子型を有するＬ１クローン細胞層を有する、そのような周縁キメラ植物において成長する。Ｌ３クローン細胞層及び／又はＬ１クローン層の遺伝子型の選択は、遺伝子型が母系特性（それが由来する植物の）、たとえば、胚珠特性、果実サイズ、植物学的活力、及び発生する種子の良好な栄養供給について選択されるような方法で、行われ得る。他の態様において、これは、劣性株であってもよい。しかしながら、Ｌ３及び／又はＬ１クローン細胞層の遺伝子型の選択は、Ｌ３及び／又はＬ１層が、独立して、又は組み合わさって、本発明の方法により、生産される種子の改変された（たとえば、改良された）発芽特性、並びに良好な品質の種子（たとえば、改良された発芽特性、たとえば、強化された発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量を有するす種子）の生産に寄与し得るようなものであることが、好ましい。
【００９３】
Ｌ３及び／又はＬ１クローン細胞層は、遺伝子的に後代に寄与するのではなく、種子に栄養源を提供し、種子の発芽特性及び品質を決定する機能のみを果たすため、植物のＬ３及び／又はＬ１クローン層の遺伝子型の選択により、改変された（たとえば、改良された）発芽特性及びＬ２遺伝子型のみからなる非キメラ植物によって決定されるであろうものよりも高い品質を有する種子の生産が可能となる。換言すると、Ｌ２遺伝子型のみからなる非キメラ植物によって生産される種子と比較して、本発明の周縁キメラ植物によって生産される種子は、改変された（たとえば、改良された）発芽特性、特に、改良された発芽特性、たとえば、強化された発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量を示す。
【００９４】
一実施形態において、Ｌ２クローン細胞層と同じ遺伝子型を有する雄性植物（植物Ｂ）と交配させた場合、そのような周縁キメラで得られる配偶体は、Ｌ２クローン細胞層によって遺伝子型が決定されるが、種子へと方向付けられる同化物の量は、Ｌ１及び／又はＬ３クローン細胞層の遺伝子型によって決定され、さらに他の種子特性、たとえば、種皮の厚さは、Ｌ１クローン細胞層の遺伝子型によって決定される。
【００９５】
好ましい実施形態において、Ｌ１及び／又はＬ３クローン層は、Ｌ１及び／又はＬ３シュート分裂組織の幹細胞の遺伝子型を有する非キメラ植物が、雌性不稔性となるように選択される。単発的には、Ｌ１及びＬ３細胞は、Ｌ２層に侵入し、本発明の方法により得られた種子にいくらかの割合の望ましくない不純物をもたらす場合がある。Ｌ１及び／又はＬ３シュート分裂組織の幹細胞の遺伝子型を有する非キメラ植物が、雌性不稔性となるようなＬ１及び／又はＬ３クローン層を提供することにより、この望ましくない不純物が、防止される。この目的で、あらゆる形態の雌性不稔性を使用することができ、たとえば、不稔性は、遺伝子的なもの、たとえば、雌性配偶体の（一部の）発生及び機能に関与する変異の使用を通じたものであり得る。或いは、不稔性は、多倍数体又は異数体を使用して、たとえば、二倍体又は正倍数体の花粉ドナー植物と交配させたときに生存性のない卵、生存性のない胚乳、又は生存性のない胚を作出する、細胞遺伝子的なものであってもよい。
【００９６】
たとえば、トマトの近親交配株Ａにおいては、観察されている最大の本質的発芽能力は、６０％である。この能力を改良するために、株ＡのＬ２層、並びに株ＣのトマトのＬ１層及びＬ３層を有する、周縁キメラを生産する。株Ｃは、それが９５％という本質的に高い発芽能力を持つので選択する。周縁キメラを、株Ａ及びＣの実生を接木することによって作製し、これは、（１）胚軸を横方向に切断した後に隣接させて再接着させるステップ、（２）接木接合部を横方向に切断するステップ、並びに（３）カルスを成長させ、不定シュートが、接木接着の部位から再生成されるステップ、並びに（４）再生成された植物の中からキメラを選択するステップからなる。ステップ１〜４の技法は、当業者に公知である。一般に、接木及び再生成を使用する場合、周縁キメラが、不定シュートに生じる頻度は、約０．２％〜１０％であろう。したがって、多数の株Ａ及びＣの実生が、接木され、多数の独立した不定シュートが生成される。これらの不定シュートのそれぞれを、長さおよそ５ｃｍで、いくつかの葉を有する小植物体に成長させる。これらの小植物体から、シュート頂端を除去して、葉腋から葉腋シュートを生じさる。これらの葉腋シュートの中から、構成物質である株Ａ及びＣを区別する遺伝子マーカーを使用して、周縁キメラを特定する。これらのマーカーは、表現型、たとえば、異なる葉の色であってもよく、又は任意の形態学的若しくは生物化学的な違い、たとえば、果実の形状であってもよい。これらのマーカーは、遺伝子型、たとえば、株ＡとＣとの間のＤＮＡ又はＲＮＡ配列多型性であってもよい。表現型及び／又は遺伝子型マーカーは、適切な検出方法によって検出され、すべての個々の接木された植物対から再生成されたすべての不定シュートに由来するすべての葉腋シュートに適用される。周縁キメラは、生殖交雑の結果ではなく、接木接合部からの不定シュートの再生成の結果として、株Ａ及びＣの両方のマーカーの組合せを単一の植物に有するとして認識される。そのようなキメラは、その葉腋シュート、花序、開花、並びに周縁キメラのシュート頂分裂組織からの自然の成長及び発生から生じる植物のすべての他の成長部分を含め、植物のさらなる成長の間、これらのマーカーを安定に保持する。その幹細胞層Ｌ（１、２、３）の構成という点で、所望される種類の周縁キメラは、特定の組織、たとえば、表皮（Ｌ１）、脈管（Ｌ３）、花粉粒（Ｌ２）、又は主としてこれらの層に由来することが公知の任意の他の組織における、マーカーの存在を観察することによって、特定される。純系株Ａの種子の発芽能力を、ここで、（Ｌ１（Ｃ）、Ｌ２（Ａ）、Ｌ３（Ｃ））型の周縁キメラを、株Ａの遺伝子型の花粉で受粉させることによって、改良する。この花粉は、非キメラ株Ａ植物から採取するか、又は周縁キメラを自家受精させる場合には、周縁キメラ自体から採取する。そのような受粉により得られた種子は、母系及び父系の配偶体が、Ｌ２層に排他的に由来するため、純系遺伝子型Ａのものである。この方法で得られた株Ａの種子ロットの改変された（たとえば、改良された）発芽特性及び改良された発芽能力は、通常の播種実験によって評価される。高品質の株Ａの種子ロットを、この方法で生産させ、これらを、標準的な手順に従って処理することができ、続いて、（商用）流通に利用可能にすることができる。
【００９７】
本発明はまた、Ｆ１ハイブリッド種子を生産する方法であって、周縁キメラのＬ２クローン細胞層の遺伝子型、並びに雄性植物の遺伝子型からなるＦ１ハイブリッド種子を生産するために、上述の周縁キメラを、所望される遺伝子型の雄性植物と交配する方法も提供する。
【００９８】
本明細書において定義される本発明の方法、すなわち、種子を生産する方法及び／又は種子の発芽特性を改変させる方法には、さらなるステップ、すなわち、得られた種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップが、含まれる。発芽特性は、通常の播種実験によって評価することができる。本発明の方法は、本明細書において上記に定義される、改変された、好ましくは改良された、発芽特性を示す種子の特定及び／又は選択を含み得、ここで、改変された又は改良されたとは、類似の環境条件下において試験した場合、植物Ａを植物Ｂと交配することにより得られた種子の発芽特性と比較して、改変又は改良されていることとして理解されるものとする。
【００９９】
本発明の方法又は使用において、植物Ａ及びＣの遺伝子型は、互いに異なってもよい。本発明の方法又は使用における周縁キメラが、植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１を含む場合、キメラのＬ３層は、好ましくは、植物Ａ又はＣの遺伝子型を有する。本発明の方法又は使用における周縁キメラが、植物Ｃの遺伝子型を有するＬ３を含む場合、キメラのＬ１層は、好ましくは、植物Ａ又はＣの遺伝子型を有する。周縁キメラ植物のＬ１及びＬ３シュート分裂組織層の両方が、植物Ｃの遺伝子型を有してもよい。任意選択で、周縁キメラ植物において、植物Ｃの遺伝子型は、植物Ａ及び／又は植物Ｂの遺伝子型の一部を含む。ある実施形態において、植物Ｃは、植物Ａ及び／又は植物Ｂの遺伝子型の一部を含む、植物Ａ及び植物Ｂの交配（任意選択での自家受粉、同胞交配、及び／又は戻し交雑ステップを含む）により得られたハイブリッド及び／又は近親交配植物であってもよい。たとえば、植物Ａの遺伝子型の、植物Ｃの全遺伝子型に対する寄与は、少なくとも０．５％、好ましくは少なくとも２％、より好ましくは少なくとも５％、さらにより好ましくは少なくとも１０％、なおもさらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは少なくとも３０％、又は少なくとも５０％である。追加又は代替として、この実施形態において、植物Ｂの遺伝子型の、植物Ｃの全遺伝子型に対する寄与は、少なくとも０．５％、好ましくは少なくとも２％、より好ましくは少なくとも５％、さらにより好ましくは少なくとも１０％、なおもさらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは少なくとも３０％、又は少なくとも５０％である。換言すると、任意選択で、周縁キメラ植物のＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層は、植物Ａ及び／又は植物Ｂの遺伝子型の一部を含む。周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層の遺伝子型は、植物Ｂ、好ましくは、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型の一部を含み得る。植物Ａの遺伝子型は、植物Ｂの遺伝子型と同一であってもよいか又は異なってもよく、好ましくは、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層と同一であってもよいか又は異なってもよい。換言すると、周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型は、上記に定義されるステップｂにおいて周縁キメラ植物を受粉させるのに使用される、植物Ｂ、好ましくは、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型と同一であってもよいか又は異なってもよい。任意選択で、上記に定義されるステップｂにおいて、周縁キメラ植物は、自家受精される。本発明の方法又は使用の植物Ｂは、非キメラ植物であってもよい。本発明の方法又は使用の第１の植物Ａ及び第３の植物Ｃは、同じ属の種及び／又は該属の種のハイブリッド若しくは近親交配種に属し得る。本発明の方法又は使用の第１の植物Ａ、第２の植物Ｂ、及び第３の植物Ｃは、すべてが、同じ属の種及び／又は該属の種のハイブリッド若しくは近親交配に由来するものであってもよい。任意選択で、第３の植物Ｃは、該第１の植物Ａによって生産される種子と比較して、強化された１つ又は複数の発芽特性、たとえば、発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量を有する種子を生産し得る。本発明の方法又は使用において、台木品種の種子が、生産され得る。本方法又は使用は、トマト種子の生産のためのものであり得る。本発明の方法又は使用の１つ又は複数の植物又はハイブリッド植物若しくは近親交配植物Ａ、Ｂ、及びＣは、ソラナム属に属する種に由来し得る。本発明の方法又は使用の１つ又は複数の植物又はハイブリッド植物若しくは近親交配植物Ａ、Ｂ、及びＣは、ソラナム・リコペルシクム種、ソラナム・ペンネリイ種、ソラナム・ハブロカイテス種、及びソラナム・ピンピネリフォリウム種、又はこれらのハイブリッド若しくは近親交配種の群から選択され得る。任意選択で、植物Ｃは、第１世代のＦ１ハイブリッド植物、好ましくは、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのＦ１ハイブリッド植物、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのＦ１ハイブリッド植物、又はソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ピンピネリフォリウムのＦ１ハイブリッド植物であり得る。任意選択で、植物Ｃは、ハイブリッド又は近親交配植物、好ましくは、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのハイブリッド若しくは近親交配植物、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのハイブリッド若しくは近親交配植物、又はソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ピンピネリフォリウムのハイブリッド若しくは近親交配植物であり、ここで、それぞれの種の遺伝子型の、全遺伝子型に対する寄与は、少なくとも０．５％、好ましくは少なくとも２％、より好ましくは少なくとも５％、さらにより好ましくは少なくとも１０％、なおもさらにより好ましくは少なくとも２０％、最も好ましくは少なくとも３０％、又は少なくとも５０％である。植物Ｃの遺伝子型のうちの少なくとも５０％は、トマト品種アイルサ・クレイグの遺伝子型であり得る。本発明の方法又は使用の周縁キメラ植物のＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム品種アイルサ・クレイグ×ソラナム・ペンネリイのハイブリッド植物、ソラナム・リコペルシクム品種アイルサ・クレイグ×ソラナム・ハブロカイテスのハイブリッド植物、又はソラナム・リコペルシクム品種アイルサ・クレイグ×ソラナム・ピンピネリフォリウムのハイブリッド植物の遺伝子型を有し得る。
【０１００】
植物Ａ、Ｂ、及びＣのうちの少なくとも１つは、ソラナム・リコペルシクム植物であることが、好ましい。ソラナム・リコペルシクム植物は、ソラナム・リコペルシクム植物品種アイルサ・クレイグであることが、好ましい。ソラナム・リコペルシクム植物品種アイルサ・クレイグは、アクセッション番号ＬＡ３５７９を有し得ることが、好ましい。ソラナム・リコペルシクム植物は、ソラナム・リコペルシクムビーフ品種である（たとえば、２つを上回る、好ましくは３つを上回る子房を有する）ことが、好ましい。ソラナム・リコペルシクム植物は、マネーメーカー品種であることが、好ましい。マネーメーカー品種は、アクセッションＬＡ２７０６を有し得ることが、好ましい。ソラナム・リコペルシクム植物は、チェリータイプソラナム・リコペルシクム植物であることが、好ましい。ソラナム・リコペルシクム品種セラシフォルム（ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ）が好ましい。
【０１０１】
植物Ａ、Ｂ、及びＣのうちの少なくとも１つは、ソラナム・ペンネリイ植物であることが、好ましい。ソラナム・ペンネリイ植物は、ソラナム・ペンネリイアクセッションＬＡ７１６であることが、好ましい。
【０１０２】
植物Ａ、Ｂ、及びＣのうちの少なくとも１つは、ソラナム・ハブロカイテス植物であることが、好ましい。ソラナム・ハブロカイテス植物は、ソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６であることが、好ましい。
【０１０３】
植物Ａ、植物Ｂ、及び植物Ｃのうちの少なくとも１つは、ソラナム・ニグラム（Ｓｏｌａｎｕｍ  ｎｉｇｒｕｍ）ではないことが、好ましい。植物Ａ、植物Ｂ、及び植物Ｃは、ソラナム・ニグラムではないことが、好ましい。
【０１０４】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ペンネリイ株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ペンネリイとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ３シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ１又はＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ｂは、ソラナム・ペンネリイ株ＬＡ７１６の植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ペンネリイ株ＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１０５】
本発明の方法又は使用のさらなる実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ペンネリイ株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ペンネリイとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ２又はＬ３シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ｂは、ソラナム・ペンネリイ株ＬＡ７１６の植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ペンネリイ株ＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１０６】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ハブロカイテス株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ペンネリイとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ３シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ１又はＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ｂは、ソラナム・ハブロカイテスアクセッション番号ＰＩ１２７８２６の植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ペンネリイ株ＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１０７】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ハブロカイテス株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ペンネリイとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ２又はＬ３シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ｂは、ソラナム・ハブロカイテスアクセッション番号ＰＩ１２７８２６の植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ペンネリイ株ＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１０８】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムのビーフ品種の近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層もまた、ソラナム・リコペルシクムのビーフ品種の近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ３シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ１又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１０９】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムのビーフ品種の近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層もまた、ソラナム・リコペルシクムのビーフ品種の近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ３又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１１０】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムのビーフ品種の近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ２又はＬ３シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ｂは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であることが好ましく、並びに／又は植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが好ましい。
【０１１１】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムのビーフ品種の近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ３シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ１又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ｂは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であることが好ましく、並びに／又は植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが好ましい。
【０１１２】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ハブロカイテス株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ハブロカイテスとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ３シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ１又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ａは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１１３】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ハブロカイテス株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ハブロカイテスとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ３又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ａは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１１４】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ハブロカイテス株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ペンネリイとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ３シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ１又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ａは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ハペンネリイアクセッションＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１１５】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ハブロカイテス株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ペンネリイとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ３又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ａは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ペンネリイアクセッションＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ペンネリイ株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ハブロカイテスとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ３シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ１又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ａは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１１６】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ペンネリイ株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ハブロカイテスとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ３又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ａは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１１７】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ペンネリイ株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ペンネリイとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ３シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ１又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ａは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ペンネリイアクセッションＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１１８】
本発明の方法又は使用の実施形態において、植物Ａ、及び周縁キメラ植物のＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株の遺伝子型を有し、植物Ｂ、より詳細には、植物ＢのＬ２シュート分裂組織層は、ソラナム・ペンネリイ株の遺伝子型を有し、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株とソラナム・ペンネリイとの第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層は、好ましくは、Ｌ３又はＬ２シュート分裂組織層、好ましくはＬ２シュート分裂組織層の遺伝子型を有する。すべての他の変数は、本明細書において上記に定義される通りであり得る。この実施形態において、植物Ａは、ソラナム・リコペルシクム栽培種マネーメーカーの植物であり、植物Ｃ、及び周縁キメラ植物のＬ３シュート分裂組織層は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株アイルサ・クレイグとソラナム・ペンネリイアクセッションＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドの遺伝子型を有することが、好ましい。
【０１１９】
本発明はまた、植物Ａを植物Ｂと交配することによって得られたか又は得ることができる種子と比較して、少なくとも１つの改変された、好ましくは改良された発芽特性を有する種子を提供する。該種子は、本発明の方法により、すなわち、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を提供し、周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させ、そのようにして得られた種子を採取することによって、得ることができる。該種子は、類似の環境条件下において試験した場合、植物Ａと植物Ｂとの交配に由来する種子と比較して、改変された（たとえば、改良された）種子密度分布、強化された発芽率、強化された発芽能力、改良された発芽均質性、改良された種子活力、及び実生生重量のうちの少なくとも１つを示すことが、好ましい。発芽特性のうちの少なくとも１つが、改変及び／又は改良されていることが好ましく、任意選択で、複数の特性が改変及び／又は改良されていることが好ましい。種子は、好ましくは、外皮又は種皮を有し、これらは、本発明の方法の周縁キメラ植物のＬ１シュート分裂組織層の遺伝子型を有するであろう。Ｌ２シュート分裂組織層が、植物Ａの遺伝子型を有し、Ｌ１シュート分裂組織層が、植物Ｃの遺伝子型を有する、本発明の方法によって得られたか又は得ることができる種子は、その外皮又は種皮が植物Ｃの遺伝子型を有し、その胚が、本明細書において定義される植物Ａと植物Ｂとの交配によって得られる遺伝子型と同一の遺伝子型を有することによって、認識される。
【０１２０】
本発明はまた、本発明の方法又は使用における、本明細書において定義される周縁キメラ植物を提供する。該周縁キメラ植物は、本明細書において定義される本発明の方法において使用するためのものであることが、好ましい。本発明の方法において使用するための周縁キメラ植物は、Ｌ１シュート分裂組織層が、ソラナム・ペンネリイアクセッションＬＡ７１６の遺伝子型を有し、Ｌ２及びＬ３シュート分裂組織層が、ソラナム・リコペルシクム栽培種ハインツ１７０６の遺伝子型を有する、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３シュート分裂組織層の組合せを含まないことが、好ましい。本発明はまた、受精した周縁キメラ、すなわち、胚を含むものである、本明細書において定義される周縁キメラを提供する。胚は、植物Ａと植物Ｂとの交配により得られる遺伝子型と同様に、植物Ａの遺伝子型及び植物Ｂの遺伝子型の組合せを含むことが、好ましい。
【０１２１】
本発明はまた、台木品種のための種子生産、台木品種の種子、及び台木を提供し、ここで、種子は、高品質な種間Ｆ１ハイブリッド種子である。商用の野菜生産は、台木接木を利用する系を利用することが増えている。そのような系において、栽培種のシュート（穂木、たとえば、Ｆ１ハイブリッドトマト品種）を、第２の栽培種の根（台木）に接木する。台木自体は、通常、Ｆ１ハイブリッド品種、特に、穂木の成長及び生産に役立つその優れた台木特性のために交配されたものである。台木により、たとえば、土壌伝播性の病原体に対する抵抗性、最適な栄養成長対繁殖成長のバランス、寒冷地に対する抵抗性、及び寿命の延長が付与される。
【０１２２】
台木は、市場性のある産物（たとえば、果実、種子、又は葉）の品質パラメーターを満たす必要がないため、その遺伝子構成において高い自由度で交配させることができる。たとえば、栽培種と野生種との第１世代のＦ１ハイブリッドを利用することが可能であり、野生種により、生物的及び／又は非生物的ストレスに対する広範な遺伝的抵抗性への直接的なアクセスが得られる。たとえば、トマトの場合、ほとんどの台木は、野生種（たとえば、ソラナム・ハブロカイテス、ソラナム・ペンネリイ）と、雌性ソラナム・リコペルシクムとの種間交雑により得られたＦ１ハイブリッドである。
【０１２３】
そのような広範なハイブリッドの利点は明白であるが、必要とされる交雑は、遺伝子の不適合性レベルが問題となり、結果として（非常に）少なく、低い品質のＦ１種子をもたらすことが、欠点である。トマト台木ハイブリッドの場合、種子の欠陥をもたらす不適合性は、通常、胚乳に欠陥があり、胚の栄養不良が生じることが原因とされる。胞子体の母系種子組織（外皮）が、胚乳の欠陥において役割を果たす。シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）の外皮に発現される遺伝子ＴＴＧ２のバリアント発現レベルにより、種間交雑を補正することができる（Ｂｕｒｋａｒｔ−Ｗａｃｏ  Ｄ．，Ｎｇｏａ  Ｋ．，Ｄｉｌｋｅｓ  Ｂ，Ｊｏｓｅｆｓｓｏｎ  Ｃ、及びＣｏｍａｉ  Ｌ（２０１３）Ｅａｒｌｙ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｔｅｒｎａｌ−ｚｙｇｏｔｉｃ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｆｅｎｓｅ−ｌｉｋｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ  ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｒｏｓｓｅｓ．Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ２５（６）：２０３７−２０５５）。台木ハイブリッドの商用としての成功は、その台木自体としての特性と同程度に、その発芽特性に高度に依存する。これは、台木交配において最も高度に需要のある形質の良好な発芽のものをもたらす。本発明は、そのような良好な発芽特性を提供する。
【０１２４】
例示的な実施形態において、本発明は、Ｌ２層が、たとえば、ソラナム・リコペルシクム（ＥＥ）のものであり、Ｌ１層が、たとえば、ＥＥと遺伝子型ＷＷの野生種との交雑に由来するハイブリッド遺伝子型ＥＷのものである、周縁キメラを利用する。Ｌ３の遺伝子型は、自由に選択することができる。そのような周縁キメラを、雌性として、純系遺伝子型ＷＷの雄性植物と交配すると、結果として得られる種子から発芽する植物は、通常のＥ×Ｗの交雑と遺伝子型の区別がつかないが、より改良された発芽特性を有するものとなるであろう。これにより、高品質の種間Ｆ１ハイブリッド種子の生産への道が開ける。
【０１２５】
本開示において、ソラナム・リコペルシクム植物品種アイルサ・クレイグは、アクセッション番号ＬＡ３５７９を有し得、ソラナム・リコペルシクム植物品種マネーメーカーは、たとえば、アクセッションＬＡ２７０６を有し得る。
【実施例】
【０１２６】
実施例１：ビーフトマトＦ１ハイブリッドにおける種子発芽の改良
Ｆ１ハイブリッドトマト品種ＸＺの種子の発芽特性が、改良された。この品種は、大型のビーフタイプのものであり、母系（ＸＸ）及び父系（ＺＺ）の近親交配株を交配し、トマトＦ１ハイブリッド種子を生産することによって、生産する。
【０１２７】
｛Ｌ３（ＹＹ）、Ｌ２（ＸＸ）、Ｌ１（ＹＹ）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＹＹ及びＸＸは、二倍体を示す（Ｘ及びＹが、半数体である）。ＹＹは、近親交配トマト品種アイルサ・クレイグ（アクセッションＬＡ３５７９）である。まず、ＹＹ穂木をＸＸ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、表現型マーカーｘａ（Ｓｚｙｍｋｏｗｉａｋ，Ｅ．Ｊ．及びＳｕｓｓｅｘ，Ｉ．Ｍ．（１９９２），Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｒｉｓｔｅｍ  ｌａｙｅｒ（Ｌ３）ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  ｆｌｏｒａｌ  ｍｅｒｉｓｔｅｍ  ｓｉｚｅ  ａｎｄ  ｃａｒｐｅｌ  ｎｕｍｂｅｒ  ｉｎ  ｔｏｍａｔｏ  ｐｅｒｉｃｌｉｎａｌ  ｃｈｉｍｅｒａｓ，Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ４，ｐｐ．１０８９−１１００）、並びにＹＹ株によって保持されるＵ（Ｐｏｗｅｌｌら、Ｕｎｉｆｏｒｍ  ｒｉｐｅｎｉｎｇ  Ｅｎｃｏｄｅｓ  ａ  Ｇｏｌｄｅｎ  ２−ｌｉｋｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  Ｔｏｍａｔｏ  Ｆｒｕｉｔ  Ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９  Ｊｕｎ  ２０１２：Ｖｏｌ．３３６，Ｉｓｓｕｅ  ６０８９，ｐｐ．１７１１−１７１５）を使用して、周縁キメラを、目視により選択した。半優性マーカーｘａは、ヘテロ接合性であり、黄色の葉をもたらす。優性マーカーＵは、果実に緑色のショルダーをもたらす。いずれのマーカーも、ＸＸには存在しない。所望される種類のキメラは、薄緑色の中心部（Ｌ３黄色）及び深緑色のリム（緑色のＬ２）を有し、緑色のショルダーを有する果実を示すことによって認識した。Ｌ１層の同一性は、表皮細胞におけるＸＸをＹＹと区別するＳＮＰマーカーの有無をスコア付けすることによって、ＹＹであると判定した。このキメラは、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。葉及び茎において黄色の部分として現れる自発的なＬ２（ＸＸ）層の置換えは、稀であった。
【０１２８】
キメラの交配挙動を、ゲノムにわたって分布している５１８個のＳＮＰ遺伝子座を使用して分析した（データは示されない）。キメラの自殖後代（Ｓ１実生、ｎ＝１４）の遺伝子型は、非キメラＸＸ植物で生産された種子に由来するＸＸ  Ｓ１実生と区別することができなかった。これを、ｘａマーカーの分離比分析によって、さらに確認した。キメラに由来する５００個のＳ１実生において、黄色の実生は１つも観察されなかった。対照的に、非キメラＹＹの自殖後代（ＸＡ／ｘａヘテロ接合性）は、５０％が黄色の実生に分離する。
【０１２９】
このデータは、キメラが、遺伝子型Ｘに由来する配偶体を保持していたこと、及びＹＹ組織が、胞子体の役割しか果たさなかったことを示した。
【０１３０】
キメラ、並びに非キメラＸＸ及びＹＹ植物から、種子を生産させた。この目的で、それぞれの６つの植物を、遺伝子型ＸＸの台木に接木して、それらの根系を等しくした。これらは、自家受精させて、株種子（Ｓ１）を生産させたか、又は株ＺＺに由来する花粉で他家受精させて、ＸＺハイブリッド種子（Ｆ１）を生産させたかのいずれかであった。すべての植物を、４月〜８月の期間、通常の温室で成長させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで摂氏１０度／相対湿度１０％で保管した。
【０１３１】
種子の５つの発芽特性を定め、測定した。
【０１３２】
（ａ）密度
（ｂ）生物量
（ｃ）発芽率
（ｄ）発芽能力
（ｅ）実生生重量
すべての測定は、以下の逐次的な方法で行った。
【０１３３】
（ａ）密度
成熟種子の密度は、その生理学的組成の一次関数である。これは、主として、種皮内の空間を占める胚乳及び胚における代謝化合物の量及び生化学的性質によって決定される。密度（比重）は、スクロース水溶液における液体密度分離によって判定した。約５００個の種子を、メスシリンダーにおいて、水１リットル当たり０、２００、及び４００グラムのスクロースに順番に通過させた。軽い溶液中に沈む種子を収集し、次へ進めた。これにより、低いものから高いものへ、次の４つの密度画分が得られた：０、２００、４００、及び４００＋。これらの画分を、水道水で十分にすすぎ、室温において、ろ紙の上で少なくとも７２時間乾燥させた。１画分当たりの種子の数を計数し、密度クラスにわたる分布を判定した。試験を、独立した種子５００個のサンプルで、合計約２５００個の種子を用いて、５回反復した。
【０１３４】
図３Ａに示されるように、キメラのＳ１種子は、ＹＹのＳ１種子のものとは同一であるが、ＸＸのＳ１種子とは大きく異なる、密度分布を有していた。キメラに由来するＳ１種子及びＸＸのＳ１種子は、胚及び胚乳が遺伝子的に同一であるため、密度における差は、ＹＹ胞子体によって種子に生理学的に付与されたものであると結論付けなければならない。これを、キメラに由来するＳ１植物のＳ２種子を分析することによって、確認した。ＸＸ胞子体において成長させたＳ２種子は、ＸＸのものと同一の密度分布を有していた（図３Ａ）。同じパターンが、Ｆ１ハイブリッド種子で観察され（図３Ｂ）、ＹＹによって付与される種子密度形質が、胚及び胚乳の遺伝子型から独立していることが示された。
【０１３５】
（ｂ）生物量
生物量は、種子内に存在する生物材料の総量の関数であり、種子密度とは独立している。種子における生物量の蓄積は、胚及び胚乳が従属栄養性であるため、最終的には胞子体によって制限される。上述の（ａ）部の密度画分のそれぞれ及び５回の反復のそれぞれから、乾燥及び計数した種子の総生物量を、精密天秤で測定した。データを、個別の種子ごとの平均量に変換した。
【０１３６】
図４Ａに示されるように、Ｓ１種子の生物量は、４つの密度クラス間及び遺伝子型間で、それほど違わなかった。密度クラス３の種子の生物量が最も大きいという傾向があった。これは、純系のＹＹ植物で最も顕著であり、密度クラス３から密度クラス４で、急激な重量の減少が見られた。このＹＹパターンは、キメラに由来するＦ１種子に付与されていた（図４Ｂ）。加えて、キメラＦ１種子は、クラス３において、ＸＸに由来するＦ１種子よりも有意に重かった（図４Ｂ）。
【０１３７】
（ｃ）発芽率
１００個の種子を、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、成長チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、７日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。次いで、発芽率を、以下の式に従って計算した：発芽率＝（＃１／１）＋（＃２／２）＋……＋（＃７／７）、式中、＃１は、２４時間後に発芽していた種子の数であり、＃２は、４８時間後に発芽していた種子の数である、といって具合である。発芽率の数字が大きいほど、幼根の出現が速い。試験を、独立した種子１００個のサンプルで、合計約９００個の種子を用いて、９回反復した。
【０１３８】
図５は、キメラ及びＸＸ対照植物に由来するＳ１及びＦ１種子のインビトロ発芽率試験の結果を示す。種子は、密度クラス３（キメラ由来）又は密度クラス４（ＸＸ由来）からのみ得たが、これは、これらのクラスが、それぞれの標準値を表すためである。ＹＹ植物の種子は、ＹＹ遺伝子型の胚を保持し、したがって、直接的に比較することができないため、含めなかった。キメラが、Ｓ１（図５Ａ）及びＦ１（図５Ｂ）の両方の種子について、より高い発芽率を有する種子を生産したことは、図５から明らかである。この率の増加は、Ｆ１種子で特に顕著であり、播種後の最初の２日間において、対照よりも顕著に発芽した（図６Ａ及び６Ｂを参照されたい）。キメラ及びＸＸ対照に由来する胚及び胚乳は、遺伝子的に同一であるため、発芽率の差は、胞子体ＹＹによって付与されていると結論付けなければならない。
【０１３９】
（ｄ）発芽能力
発芽能力を、上述の（ｃ）部に記載されるものと同じアレイにおいて、７日後に発芽した種子の総数（％）をスコア付けすることによって、インビトロで測定した。加えて、１２０個の種子（キメラについては密度クラス３、ＸＸについては密度クラス４）を、１０個ずつ１２個の群で、格子状のアレイに入れて土壌に蒔き、細粒土壌の薄い層をかぶせ、軽く水やりをすることによって、発芽能力を、インビボで測定した。インビボでの発芽に関して、種子はまた、最も大きい種子を蒔くように、サイズによって手作業で選択した。発芽した実生の数を、温室において、７日後にスコア付けした。
【０１４０】
結果を、図６に示す。インビトロでの発芽能力は、キメラのＳ１種子（図６Ａ）及びＦ１種子（図６Ｂ）の両方で、ＸＸ対照植物と比較して、有意に高かった。Ｆ１種子は、Ｓ１よりも本質的に低い能力を有していた。発芽能力の差は、インビボ条件下において、特に顕著であった。７日後に、キメラ由来の種子は、９８％まで均質に発芽したが、一方で対照は、低く、不規則な発芽を示した（図６Ｃ）。
【０１４１】
（ｅ）実生生重量
実生シュート生重量を、まず、２０個のランダムに選択した発芽した種子（（ｃ）部に記載される手順の２日目に発芽した）を、土壌を充填したフラットに移すことによって、測定した。摘み取りの時点において、これらの種子は、ほとんどが、根の出現のみを有しているだけであったが、胚軸の出現の最初の兆候を有する場合もあった。種子を土壌表面に置き、細粒土壌の薄い層をかぶせ、水をやった。移動の際には、若い実生を傷つけないように、注意を払った。温室において周囲条件下で７日間成長させた後に、測定を行った。実生−シュート全体（胚軸−根の接合部まで）を、新しく採取し、精密天秤で計量した。
【０１４２】
図７から見ることができるように、キメラに由来するＳ１の実生（図７Ａ）及びＦ１の実生（図７Ｂ）は、対照よりも有意に重かった。この差は、Ｆ１種子において特に顕著であった。実生が重いということは、成熟した種子における豊富な食物貯蔵及び／又はＹＹ胞子体による栄養供給によって可能となる発生中の胚の成長の強化のいずれかに起因する可能性が高い。
【０１４３】
上記に示したデータは、様々な種子発芽態様（ａ〜ｅ）における顕著な変化が、胚及び胚乳には遺伝子的に無関係な胞子体遺伝子型の影響下において生じたことを示す。結果は、異なる環境条件下において、発芽率及び発芽能力として、並びに実生活力として測定した場合の改良された種子品質であった。
【０１４４】
実施例２：ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのＦ１ハイブリッドにおける改良された種子発芽
種間Ｆ１ハイブリッド品種ＴＰに由来するトマト種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの母系近親交配株ＴＴを、ソラナム・ペンネリイの父系株ＰＰに交配することによって、生産される。
【０１４５】
｛Ｌ３（ＴＴ）、Ｌ２（ＴＴ）、Ｌ１（ＥＰ）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＴＴ及びＥＰは、二倍体を示す（Ｔ及びＥ及びＰが、半数体である）。ＴＴは、標準的な近親交配トマト（ソラナム・リコペルシクム）品種である。ＥＰは、ソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とソラナム・ペンネリイ株ＰＰ（アクセッションＬＡ７１６）との第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＰ穂木をＴＴ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、周縁キメラを、表現型マーカーｘａに加えてＥＰ穂木によってもたらされる高いトリコーム密度を使用して、目視により選択した。半優性マーカーｘａは、ヘテロ接合性条件下において、Ｌ２及び／又はＬ３に存在する場合、黄色の葉をもたらす。所望される種類のキメラは、緑色の葉（ＴＴのＬ２及びＬ３）に加えて、高いトリコーム密度（ＥＰのＬ１）を有することによって、認識した。このキメラは、葉及び茎において黄色の区域として現れたであろうＬ１細胞のＬ２への自発的な侵入が完全に存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。このキメラの交配挙動を、ｘａマーカーの分離比分析を使用して、分析した。５００個のキメラの実生において、ＰＰとの戻し交雑により、黄色の実生は１つも観察されなかった。これらのデータは、このキメラが、遺伝子型Ｔ由来の配偶体を排他的に保持していたこと、及びＥＰ組織が、胞子体の役割しか果たさなかったことを示した。Ｌ１層は、胚珠の外皮を生じ、後に成熟種子の種皮を生じることが周知であるため、キメラの種子発生におけるＥＰの胞子体の役割は、外皮及び種皮のものである。
【０１４６】
種間のＴＰ  Ｆ１ハイブリッド種子を、キメラ並びに非キメラＴＴ植物から生産させた。この目的で、それぞれの６つの植物を、遺伝子型ＴＴの台木に接木して、それらの根系を等しくした。それらを、ＰＰ株由来の花粉で他家受精させて、ＴＰハイブリッド種子（Ｆ１）を生産させた。すべての植物を、４月〜８月の期間、通常の温室で成長させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで摂氏１０度／相対湿度１０％で保管した。
【０１４７】
種子の３つの発芽特性を定め、測定した。
【０１４８】
（ａ）密度
（ｂ）発芽率
（ｃ）発芽能力
【０１４９】
すべての測定は、以下の逐次的な方法で行った。
【０１５０】
（ａ）密度
成熟種子の密度は、その生理学的組成の一次関数である。これは、主として、種皮内の空間を占める胚乳及び胚における代謝化合物の量及び生化学的性質によって決定される。密度（比重）は、スクロース水溶液における液体密度分離によって判定した。約５００個の種子を、メスシリンダーにおいて、水１リットル当たり０、２００、及び４００グラムのスクロースに順番に通過させた。軽い溶液中に沈む種子を収集し、次へ進めた。これにより、低いものから高いものへ、次の４つの密度画分が得られた：０、２００、４００、及び４００＋。これらの画分を、水道水で十分にすすぎ、室温において、ろ紙の上で少なくとも７２時間乾燥させた。１画分当たりの種子の数を計数し、密度クラスにわたる分布を判定した。
【０１５１】
図８に示されるように、非キメラＴＴをＰＰに交配することにより作製した種間Ｆ１種子は、キメラをＰＰと交配したものとは大きく異なる密度分布を有していた。キメラ交雑とは対照的に、非キメラ交雑は、充填度の低い軽い種子を高比率で有していた。これらの２つの交雑種における胚及び胚乳の遺伝子型は、同一であるため、密度分布における差は、ＥＰ胞子体によって種子に生理学的に付与されたものであると結論付けなければならない。充填度の低い種子の比率が高いことは、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイの交雑種の特徴であり、これらの種間における軽度の種間交雑障壁の現れである。キメラでは、この障壁が有意に緩和されていた。
【０１５２】
（ｂ）発芽率
１００個の種子を、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、７日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。次いで、発芽率を、以下の式に従って計算した：発芽率＝（＃１／１）＋（＃２／２）＋……＋（＃７／７）、式中、＃１は、２４時間後に発芽していた種子の数であり、＃２は、４８時間後に発芽していた種子の数である。発芽率の数字が大きいほど、幼根の出現が速い。試験は、種子１００個のサンプルで行った。
【０１５３】
図９は、キメラ植物及びＴＴ対照植物に由来するＦ１種子のインビトロ発芽率試験の結果を示す。未処理の種子バッチのみを蒔いた、すなわち、播種の前に、密度分画は行わなかった。図９から、キメラが、より発芽率の高い種子バッチを生産したことは明らかである。キメラ及びＴＴ対照に由来する胚及び胚乳は、遺伝子的に同一であるため、発芽率の差は、胞子体ＥＰによって生理学的に付与されていると結論付けなければならない。遅い種子発芽は、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイの交雑種の特徴であり、これらの種間における軽度の種間交雑障壁の現れである。キメラでは、この障壁が有意に克服される。
【０１５４】
（ｃ）発芽能力
発芽能力を、上述の（ｂ）部に記載されるものと同じアレイにおいて、１０日後に発芽した種子の総数（％）をスコア付けすることによって、インビトロで測定した。結果を、図１０に示す。インビトロでの発芽能力は、キメラの種子では、ＴＴ対照植物と比較して高かった。
【０１５５】
実施例３：ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのＦ１ハイブリッドにおける改良された種子発芽
種間Ｆ１ハイブリッド品種ＴＨに由来するトマト種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの母系近親交配株ＴＴを、ソラナム・ハブロカイテスに由来する父系株ＨＨに交配することによって、生産される。
【０１５６】
｛Ｌ３（ＴＴ）、Ｌ２（ＴＴ）、Ｌ１（ＥＰ）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＴＴ及びＥＰは、二倍体を示す（Ｔ及びＥ及びＰが、半数体である）。ＴＴは、標準的な近親交配トマト（ソラナム・リコペルシクム）品種である。ＥＰは、標準的なソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とソラナム・ペンネリイ株ＰＰ（アクセッションＬＡ７１６）との第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＰ穂木をＴＴ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、周縁キメラを、表現型マーカーｘａに加えてＥＰ穂木によってもたらされる高いトリコーム密度を使用して、目視により選択した。ヘテロ接合性条件下において存在する半優性マーカーｘａは、Ｌ２及び／又はＬ３に存在する場合、黄色い葉をもたらす。所望される種類のキメラは、緑色の葉（ＴＴのＬ２及びＬ３）に加えて、高いトリコーム密度（ＥＰのＬ１）を有することによって、認識した。このキメラは、葉及び茎において黄色の区域として現れたであろうＬ１細胞のＬ２への自発的な侵入が完全に存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。このキメラの交配挙動を、ｘａマーカーの分離比分析を使用して、分析した。５００個のキメラの実生において、ＰＰとの戻し交雑により、黄色の実生は１つも観察されなかった。これらのデータは、このキメラが、遺伝子型Ｔ由来の配偶体を排他的に保持していたこと、及びＥＰ組織が、胞子体の役割しか果たさなかったことを示した。Ｌ１層は、胚珠の外皮を生じ、後に成熟種子の種皮を生じることが周知であるため、キメラの種子発生におけるＥＰの胞子体の役割は、外皮及び種皮のものである。
【０１５７】
キメラ、並びに非キメラＴＴ対照植物を、ＨＨと表記されるソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６に由来する花粉で他家受精させて、ＴＨハイブリッド種子（Ｆ１）生産させた。すべての植物を、４月〜８月の期間、通常の温室で成長させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０１５８】
種子の４つの発芽特性を定め、測定した。
【０１５９】
（ａ）比重
（ｂ）発芽率
（ｃ）発芽能力
【０１６０】
すべての測定は、以下の逐次的な方法で行った。
【０１６１】
（ａ）比重
成熟種子の密度は、その生理学的組成の一次関数である。これは、主として、種皮内の空間を占める胚乳及び胚における代謝化合物の量及び生化学的性質によって決定される。比重は、スクロース水溶液における液体密度分離によって判定した。約５００個の種子を、メスシリンダーにおいて、水１リットル当たり０、２００、及び４００グラムのスクロースに順番に通過させた。軽い溶液中に沈む種子を収集し、次へ進めた。これにより、低いものから高いものへ、次の４つの密度画分が得られた：０、２００、４００、及び４００＋。これらの画分を、水道水で十分にすすぎ、室温において、ろ紙の上で少なくとも７２時間乾燥させた。１画分当たりの種子の数を計数し、密度画分にわたる分布を判定した。
【０１６２】
図１１に示されるように、非キメラＴＴをＨＨに対照交配することにより作製した種間Ｆ１種子は、キメラをＨＨと交雑させたものとは異なる密度分布を有していた。対照交雑は、充填度の低い軽い種子を高比率で有していた。これらの２つの交雑種における胚及び胚乳の遺伝子型は、同一であるため、密度分布における差は、ＥＰ胞子体によって種子に生理学的に付与されたものであると結論付けなければならない。充填度の低い種子の比率が高いことは、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスの交雑種の特徴であり、これらの種間における種間交雑障壁の現れである。キメラ交雑におけるＥＰ胞子体組織により、これが補正された。
【０１６３】
（ｂ）発芽率
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、７日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。次いで、発芽率を、以下の式に従って計算した：発芽率＝（＃１／１）＋（＃２／２）＋……＋（＃７／７）、式中、＃１は、２４時間後に発芽していた種子の数であり、＃２は、４８時間後に発芽していた種子の数である。発芽率の数字が大きいほど、幼根の出現が速い。試験は、種子１００個のサンプル３つで行った。
【０１６４】
図１２は、キメラ植物及びＴＴ対照植物で生産されたＦ１種子の発芽率試験の結果を示す。未処理の種子バッチのみを蒔いた、すなわち、播種の前に、密度分画は行わなかった。図１２から、キメラが、より発芽率の高い種子バッチを生産したことは明らかである。キメラ及びＴＴ対照に由来する胚及び胚乳は、遺伝子的に同一であるため、発芽率の差は、胞子体ＥＰによって生理学的に付与されていると結論付けなければならない。非常に低い種子発芽は、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスの交雑種の特徴であり、これらの種間における種間交雑障壁の現れである。キメラ交雑種におけるＥＰ胞子体組織により、この障壁が緩和された。
【０１６５】
（ｃ）発芽能力
発芽能力を、上述の（ｂ）部に記載されるものと同じアレイにおいて、７日後に発芽した種子の総数（％）をスコア付けすることによって、インビトロで測定した。結果を、図１３に示す。インビトロでの発芽能力は、キメラで作製した種子では、ＴＴ対照植物で作製した種子と比較してさらに高かった。
【０１６６】
実施例４：ビーフトマト近親交配種子の改良された種子発芽
ビーフ品種ＢＢに由来する近親交配種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株ＢＢの自家受精によって生産される。
【０１６７】
｛Ｌ３（ＢＢ）、Ｌ２（ＢＢ）、Ｌ１（ＥＲ）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＢＢ及びＥＲは、二倍体を示す（Ｂ及びＥ及びＲが、半数体である）。ＥＲは、ソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株ＲＲとの第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＲ穂木をＢＢ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、まず、半優性表現型マーカーｘａ（ＥＲハイブリッドに存在する）を使用して、黄緑色の葉の不完全周縁キメラを目視により特定することによって選択した後、完全に緑色の葉腋枝を選択することによって、周縁キメラを選択した。緑色の枝は、ＢＢをＥＥと区別するＳＮＰマーカーを用いて遺伝子型判定した。ＥＥ  ＳＮＰの存在は、シュートが、ＢＢのＬ２及びＬ３層の上に、遺伝子型ＥＲのＬ１層を保持する周縁キメラであることを示した。このキメラは、本来であれば緑色の組織において黄色の区画として現れたであろうＬ１細胞のＬ２への自発的な侵入が存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。
【０１６８】
キメラ、並びに非キメラＢＢ対照植物を、自家受精させた。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０１６９】
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、８日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。図１４で見ることができるように、キメラは、強力に改良された発芽速度及び能力を有する種子を生産した。
【０１７０】
実施例５：ビーフトマト近親交配種子の改良された種子発芽
ビーフ品種ＢＢに由来する近親交配種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの近親交配株ＢＢの自家受精によって生産される。
【０１７１】
｛Ｌ３（ＥＲ）、Ｌ２（ＢＢ）、Ｌ１（ＢＢ）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＢＢ及びＥＲは、二倍体を示す（Ｂ及びＥ及びＲが、半数体である）。ＥＲは、標準的なソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株ＲＲとの第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＲ穂木をＢＢ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、まず、半優性表現型マーカーｘａ（ＥＲハイブリッドに存在する）を使用して、黄緑色の葉の不完全周縁キメラを目視により特定することによって、周縁キメラを選択した。色がいくらか薄緑色である葉の中央部、及び深緑色の外側リムを有する、葉腋枝を選択した。これらの枝は、ＢＢをＥＥと区別するＳＮＰマーカーを用いて遺伝子型判定した。遺伝子型判定を、茎の髄（Ｌ３由来）及び表皮の薄い剥離片（Ｌ１）からの切片組織に由来するＤＮＡに行った。前者にＥＥ  ＳＮＰが存在し、後者にそれが存在しないことは、シュートが、ＢＢのＬ２及びＬ１層の下に、遺伝子型ＥＲのＬ３層を保持する周縁キメラであることを示した。このキメラは、本来であれば緑色の組織において完全な黄色の区画として現れたであろうＬ３細胞のＬ２への自発的な侵入が存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。
【０１７２】
キメラ、並びに非キメラＢＢ対照植物を、自家受精させた。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０１７３】
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、８日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。図１５で見ることができるように、キメラは、非常に強力に改良された発芽速度及び能力を有する種子を生産した。
【０１７４】
実施例６：ビーフタイプの母体植物に由来するＦ１種子の改良された種子発芽
Ｆ１ハイブリッド品種ＢＭに由来するトマト種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの母系ビーフタイプ近親交配株ＢＢを、ソラナム・リコペルシクムに由来する父系株ＭＭ（栽培種マネーメーカー）に交配することによって、生産される。
【０１７５】
｛Ｌ３（ＥＲ）、Ｌ２（ＢＢ）、Ｌ１（ＢＢ）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＢＢ及びＥＲは、二倍体を示す（Ｂ及びＥ及びＲが、半数体である）。ＥＲは、標準的なソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とチェリータイプソラナム・リコペルシクム近親交配株ＲＲとの第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＲ穂木をＢＢ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、まず、半優性表現型マーカーｘａ（ＥＲハイブリッドに存在する）を使用して、黄緑色の葉の不完全周縁キメラを目視により特定することによって、周縁キメラを選択した。色がいくらか薄緑色である葉の中央部、及び深緑色の外側リムを有する、葉腋枝を選択した。これらの枝は、ＢＢをＥＥと区別するＳＮＰマーカーを用いて遺伝子型判定した。遺伝子型判定を、茎の髄（Ｌ３由来）及び表皮の薄い剥離片（Ｌ１）からの切片組織に由来するＤＮＡに行った。前者にＥＥ  ＳＮＰが存在し、後者にそれが存在しないことは、シュートが、ＢＢのＬ２及びＬ１層の下に、遺伝子型ＥＲのＬ３層を保持する周縁キメラであることを示した。このキメラは、本来であれば緑色の組織において完全な黄色の区画として現れたであろうＬ３細胞のＬ２への自発的な侵入が存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。
【０１７６】
キメラ、並びに非キメラＢＢ対照植物を、ＭＭに由来する花粉で他家受精させて、ＢＭハイブリッド種子（Ｆ１）生産させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０１７７】
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、８日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。図１６で見ることができるように、キメラは、強力に改良された発芽速度及び能力を有する種子を生産した。
【０１７８】
実施例７：種間のソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのＦ１種子の改良された種子発芽
Ｆ１ハイブリッド品種ＭＨ２に由来するトマト種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの母系近親交配株ＭＭ（マネーメーカー）を、ソラナム・ハブロカイテスに由来する父系株Ｈ２Ｈ２に交配することによって、生産させる。
【０１７９】
｛Ｌ３（ＭＭ）、Ｌ２（ＭＭ）、Ｌ１（ＥＨ１）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＭＭ及びＥＨ１は、二倍体を示す（Ｍ及びＥ及びＨ１が、半数体である）。ＥＨ１は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６との第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＨ１穂木をＭＭ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、まず、半優性表現型マーカーｘａ（ＥＨ１ハイブリッドに存在する）を使用して、黄緑色の葉の不完全周縁キメラを目視により特定することによって選択した後、完全に緑色の葉腋枝を選択することによって、周縁キメラを選択した。緑色の枝は、ＭＭをＥＥと区別するＳＮＰマーカーを用いて遺伝子型判定した。ＥＥ  ＳＮＰの存在は、シュートが、ＭＭのＬ２及びＬ３層の上に、遺伝子型ＥＨ１のＬ１層を保持する周縁キメラであることを示した。そのようなキメラは、さらに、ＥＨ１ハイブリッドの異なるトリコーム構造によって、容易に認識することができる。
【０１８０】
このキメラは、本来であれば緑色の組織において黄色の区画として現れたであろうＬ１細胞のＬ２への自発的な侵入が存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。
【０１８１】
キメラ、並びに非キメラＭＭ対照植物を、ソラナム・ハブロカイテス遺伝子型Ｈ２（アクセッションＬＡ１６２５）に由来する花粉で他家受精させて、ＭＨ２ハイブリッド種子を生産させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０１８２】
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、７日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。図１７で見ることができるように、キメラは、強力に改良された発芽速度及び能力を有する種子を生産した。
【０１８３】
実施例８：種間のソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのＦ１種子の改良された種子発芽
Ｆ１ハイブリッド品種ＭＨ２に由来するトマト種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの母系近親交配株ＭＭ（マネーメーカー）を、ソラナム・ハブロカイテスに由来する父系株Ｈ２Ｈ２に交配することによって、生産させる。
【０１８４】
｛Ｌ３（ＭＭ）、Ｌ２（ＭＭ）、Ｌ１（ＥＰ１）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＭＭ及びＥＰ１は、二倍体を示す（Ｍ及びＥ及びＰ１が、半数体である）。ＥＰ１は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とソラナム・ペンネリイアクセッションＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＰ１穂木をＭＭ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、まず、半優性表現型マーカーｘａ（ＥＰ１ハイブリッドに存在する）を使用して、黄緑色の葉の不完全周縁キメラを目視により特定することによって選択した後、完全に緑色の葉腋枝を選択することによって、周縁キメラを選択した。緑色の枝は、ＭＭをＥＥと区別するＳＮＰマーカーを用いて遺伝子型判定した。ＥＥ  ＳＮＰの存在は、シュートが、ＭＭのＬ２及びＬ３層の上に、遺伝子型ＥＰ１のＬ１層を保持する周縁キメラであることを示した。そのようなキメラは、さらに、ＥＰ１ハイブリッドの異なるトリコーム構造によって、容易に認識することができる。
【０１８５】
このキメラは、本来であれば緑色の組織において黄色の区画として現れたであろうＬ１細胞のＬ２への自発的な侵入が存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。
【０１８６】
キメラ、並びに非キメラＭＭ対照植物を、ソラナム・ハブロカイテス遺伝子型Ｈ２（アクセッションＬＡ１６２５）に由来する花粉で他家受精させて、ＭＨ２ハイブリッド種子を生産させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０１８７】
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、７日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。図１８で見ることができるように、キメラは、強力に改良された発芽速度能力を有する種子を生産した。
【０１８８】
実施例９：種間のソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのＦ１種子の改良された種子発芽
Ｆ１ハイブリッド品種ＭＰ２に由来するトマト種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの母系近親交配株ＭＭ（マネーメーカー）を、ソラナム・ペンネリイに由来する父系株Ｐ２Ｐ２に交配することによって、生産させる。
【０１８９】
｛Ｌ３（ＭＭ）、Ｌ２（ＭＭ）、Ｌ１（ＥＨ１）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＭＭ及びＥＨ１は、二倍体を示す（Ｍ及びＥ及びＨ１が、半数体である）。ＥＨ１は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６との第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＨ１穂木をＭＭ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、まず、半優性表現型マーカーｘａ（ＥＨ１ハイブリッドに存在する）を使用して、黄緑色の葉の不完全周縁キメラを目視により特定することによって選択した後、完全に緑色の葉腋枝を選択することによって、周縁キメラを選択した。緑色の枝は、ＭＭをＥＥと区別するＳＮＰマーカーを用いて遺伝子型判定した。ＥＥ  ＳＮＰの存在は、シュートが、ＭＭのＬ２及びＬ３層の上に、遺伝子型ＥＨ１のＬ１層を保持する周縁キメラであることを示した。そのようなキメラは、さらに、ＥＨ１ハイブリッドの異なるトリコーム構造によって、容易に認識することができる。
【０１９０】
このキメラは、本来であれば緑色の組織において黄色の区画として現れたであろうＬ１細胞のＬ２への自発的な侵入が存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。
【０１９１】
キメラ、並びに非キメラＭＭ対照植物を、ソラナム・ペンネリイ遺伝子型Ｐ２（アクセッションＬＡ１８０９）に由来する花粉で他家受精させて、ＭＰ２ハイブリッド種子を生産させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０１９２】
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、７日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。図１９で見ることができるように、キメラは、強力に改良された発芽速度及び能力を有する種子を生産した。
【０１９３】
実施例１０：種間のソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのＦ１種子の改良された種子発芽
Ｆ１ハイブリッド品種ＭＰ２に由来するトマト種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの母系近親交配株ＭＭ（マネーメーカー）を、ソラナム・ペンネリイに由来する父系株Ｐ２Ｐ２に交配することによって、生産させる。
【０１９４】
｛Ｌ３（ＭＭ）、Ｌ２（ＭＭ）、Ｌ１（ＥＰ１）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＭＭ及びＥＰ１は、二倍体を示す（Ｍ及びＥ及びＰ１が、半数体である）。ＥＰ１は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とソラナム・ペンネリイアクセッションＬＡ７１６との第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＰ１穂木をＭＭ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、まず、半優性表現型マーカーｘａ（ＥＰ１ハイブリッドに存在する）を使用して、黄緑色の葉の不完全周縁キメラを目視により特定することによって選択した後、完全に緑色の葉腋枝を選択することによって、周縁キメラを選択した。緑色の枝は、ＭＭをＥＥと区別するＳＮＰマーカーを用いて遺伝子型判定した。ＥＥ  ＳＮＰの存在は、シュートが、ＭＭのＬ２及びＬ３層の上に、遺伝子型ＥＰ１のＬ１層を保持する周縁キメラであることを示した。そのようなキメラは、さらに、ＥＰ１ハイブリッドの異なるトリコーム構造によって、容易に認識することができる。
【０１９５】
このキメラは、本来であれば緑色の組織において黄色の区画として現れたであろうＬ１細胞のＬ２への自発的な侵入が存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。
【０１９６】
キメラ、並びに非キメラＭＭ対照植物を、ソラナム・ペンネリイ遺伝子型Ｐ２（アクセッションＬＡ１８０９）に由来する花粉で他家受精させて、ＭＨ２ハイブリッド種子を生産させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０１９７】
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、７日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。図２０で見ることができるように、キメラは、強力に改良された発芽速度能力を有する種子を生産した。
【０１９８】
実施例１１：種間のソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのＦ１種子の改良された種子発芽
Ｆ１ハイブリッド品種ＭＰ３に由来するトマト種子の発芽特性が、改良された。この品種は、ソラナム・リコペルシクムの母系近親交配株ＭＭ（マネーメーカー）を、ソラナム・ペンネリイに由来する父系株Ｐ３Ｐ３に交配することによって、生産させる。
【０１９９】
｛Ｌ３（ＭＭ）、Ｌ２（ＭＭ）、Ｌ１（ＥＨ１）｝型の周縁キメラを作製し、ここで、ＭＭ及びＥＨ１は、二倍体を示す（Ｍ及びＥ及びＨ１が、半数体である）。ＥＨ１は、ソラナム・リコペルシクム近親交配株ＥＥ（栽培種アイルサ・クレイグアクセッションＬＡ３５７９）とソラナム・ハブロカイテスアクセッションＰＩ１２７８２６との第１世代のＦ１ハイブリッドである。まず、ＥＨ１穂木をＭＭ台木に接木した後、１０日間、接木を癒合させることによって、周縁を生産させた。接木接合部を、次いで、横方向に切断し、そうすると、カルスの成長及びシュートの再生成が、自発的に生じた。再生成されたシュートの中から、まず、半優性表現型マーカーｘａ（ＥＨ１ハイブリッドに存在する）を使用して、黄緑色の葉の不完全周縁キメラを目視により特定することによって選択した後、完全に緑色の葉腋枝を選択することによって、周縁キメラを選択した。緑色の枝は、ＭＭをＥＥと区別するＳＮＰマーカーを用いて遺伝子型判定した。ＥＥ  ＳＮＰの存在は、シュートが、ＭＭのＬ２及びＬ３層の上に、遺伝子型ＥＨ１のＬ１層を保持する周縁キメラであることを示した。そのようなキメラは、さらに、ＥＨ１ハイブリッドの異なるトリコーム構造によって、容易に認識することができる。
【０２００】
このキメラは、本来であれば緑色の組織において黄色の区画として現れたであろうＬ１細胞のＬ２への自発的な侵入が存在しないことから判断すると、発生の間及び葉腋シュートの挿木苗からの繁殖の間、非常に安定していた。
【０２０１】
キメラ、並びに非キメラＭＭ対照植物を、ソラナム・ペンネリイ遺伝子型Ｐ３（アクセッションＬＡ２６５７）に由来する花粉で他家受精させて、ＭＰ３ハイブリッド種子を生産させた。交配は、開花期の直前に花の除雄を行い、１〜２日後に受粉させることによって行った。成熟果実から種子を採取し、０．５％  ＨＣｌ中に１時間浸漬した後、水道水で十分にすすぎ、ろ紙の上で乾燥させ、使用するまで１週間〜数週間、周囲条件で保管した。
【０２０２】
１００個の種子のバッチを、密封したペトリ皿において、湿潤させた（水道水）ろ紙の上の格子状のアレイに蒔き、続いて、人工気候チャンバにおいて、摂氏２３度で１６／２４時間の白色光下においてインキュベートすることによって、発芽率をインビトロで判定した。発芽は、７日間の期間にわたって、目に見える幼根の出現として、２４時間間隔でスコア付けした。図２１で見ることができるように、キメラは、強力に改良された発芽速度及び能力を有する種子を生産した。
【図１】
2020501590.tif 000002
【図２】
2020501590.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
2020501590.tif 000022
【図２１】
2020501590.tif 000023
【手続補正書】
【提出日】令和1年8月22日(2019.8.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有する種子の生産のための方法であって、前記種子の１つ又は複数の発芽特性が、前記第１の植物Ａを前記第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して改良されており、
ａ）植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含む周縁キメラ植物を作製するステップと、
ｂ）前記周縁キメラ植物を、植物Ｂの花粉で受粉させるステップと、
ｃ）そのようにして得られた前記種子を採取するステップと
を含み、
植物Ａと植物Ｃの遺伝子型が互いに異なる、方法。
【請求項２】
ｄ）ステップｃ）において得られた前記種子を発芽させるステップと、
ｅ）任意選択で、ステップｃ）において得られた前記種子の少なくとも１つの発芽特性を評価するステップと
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と同一の胚遺伝子型を有し、前記第１の植物Ａを前記第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して、１つ又は複数の改良された発芽特性を有する種子の生産のための周縁キメラ植物の使用であって、前記周縁キメラ植物が、植物Ａの遺伝子型を有するＬ２シュート分裂組織層、並びに第３の植物Ｃの遺伝子型を有するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含み、
植物Ａと植物Ｃの遺伝子型が互いに異なる、使用。
【請求項４】
前記周縁キメラ植物において、植物Ｃがハイブリッドである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項５】
前記周縁キメラ植物において、植物Ｃの遺伝子型は、植物Ａ及び／又は植物Ｂの遺伝子型の一部を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項６】
前記周縁キメラ植物において、前記Ｌ１シュート分裂組織層の遺伝子型は、植物Ｂの遺伝子型の一部を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項７】
植物Ａの遺伝子型が、植物Ｂの遺伝子型と同一であるか、請求項１又は２で、ステップｂ）において、前記周縁キメラ植物が、自家受精している、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項８】
前記１つ又は複数の発芽特性が、種子密度、種子生物量、発芽率、発芽能力、及び実生生重量からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項９】
発芽率、発芽能力、及び／又は実生生重量が、第１の植物Ａを第２の植物Ｂと交配することによって得られた種子と比較して、強化されている、請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項１０】
前記第１の植物Ａ及び前記第３の植物Ｃが、同じ属の種及び／又は前記属の種のハイブリッドに属する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１１】
前記第１の植物Ａ、前記第２の植物Ｂ、及び前記第３の植物Ｃが、すべて、同じ属の種及び／又は前記属の種のハイブリッドに由来する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１２】
台木品種の種子が生産される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１３】
前記植物又はハイブリッド植物が、ソラナム属に属する種に由来し、好ましくは、ソラナム・リコペルシクム種、ソラナム・ペンネリイ種、ソラナム・ハブロカイテス種、及びソラナム・ピンピネリフォリウム種、又はそれらのハイブリッドの群から選択される、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項１４】
ソラナム属植物Ａに由来するＬ２シュート分裂組織層、ハイブリッド植物Ｃに由来するＬ１及び／又はＬ３シュート分裂組織層を含み、
植物Ｃが、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ペンネリイのハイブリッド植物、ソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ハブロカイテスのハイブリッド植物、又はソラナム・リコペルシクム×ソラナム・ピンピネリフォリウムのハイブリッド植物であり、
植物Ａ及び植物Ｃの遺伝子型が互いに異なる、周縁キメラトマト植物。
【請求項１５】
前記ハイブリッド植物が、Ｆ１ハイブリッド植物である、請求項１４に記載の周縁キメラトマト植物。
【請求項１６】
前記Ｌ２シュート分裂組織層が、ソラナム・リコペルシクム植物に由来する、請求項１４又は１５に記載の周縁キメラトマト植物。
【請求項１７】
植物Ａと植物Ｂとの交配によって得られる遺伝子型と同一の遺伝子型を有する胚、及び植物Ｃの遺伝子型を有する外皮を含み、
植物Ａ及び植物Ｃの遺伝子型が互いに異なり、
植物Ａを植物Ｂと交配することによって得られたか又は得ることができる種子と比較して、少なくとも１つの改良された発芽特性を有する、種子。
【国際調査報告】
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