(57)【要約】  本発明は、組合せ製品及び治療におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ＮＴＺ及びこの類縁体から選択される化合物；並びに
（ｉｉ）少なくとも１つのＰＰＡＲアゴニスト
を含む、組合せ物。
【請求項２】
成分（ｉ）が、式（Ｉ）：
【化１】
2020506920.tif 000026
［式中、
Ｒ１は、水素原子（Ｈ）、重水素原子（Ｄ）、ハロゲン原子、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、スルホニル基、スルホキシド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、カルボキシル基、カルボキシレート基、ＮＯ２基、ＮＨ２基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基を表し、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ＮＯ２基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールカルボニルアミノ基、カルボキシル若しくはカルボキシレート基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基、ＮＨ２基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基を表し、又は、
Ｒ１及びＲ２は、これらが結合している炭素原子と一緒になって、置換若しくは非置換５〜８員のシクロアルキル、複素環若しくはアリール基を形成し、
Ｒ３は、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、Ｏ−Ｒ８基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、ＮＯ２、スルホニルアミノアルキル基、ＮＨ２基、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボキシル基、カルボキシレート基、アミノ酸（ここで、該アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群から選択される。）、又は、式（Ａ）：
【化２】
2020506920.tif 000027
（式中、
Ｒ’は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキルアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基を表し；
Ｒ”及びＲ”’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基又は窒素保護基を表す。）
の部分を表し、Ｒ８は、水素原子、重水素原子、又は
【化３】
2020506920.tif 000028
基を表し、ここで、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、同一であるか又は異なって、水素原子又は重水素原子を表し、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同一であるか又は異なって、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、ＮＯ２、スルホニルアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、ＮＨ２基、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボキシル基、カルボキシレート基、アミノ酸（該アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群から選択される。）、又は、式（Ａ）：
【化４】
2020506920.tif 000029
（式中、
Ｒ’は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基を表し；
Ｒ”及びＲ”’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基又は窒素保護基を表す。）
の部分を表す。］
の化合物又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１に記載の組合せ物。
【請求項３】
成分（ｉ）が、式（ＩＩ）：
【化５】
2020506920.tif 000030
［式中、
Ｒ９は、水素原子、重水素原子、Ｏ−Ｒ８基（Ｒ８は、上で定義されているとおりである。）、アミノ酸（該アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群から選択される。）、又は、式（Ａ）：
【化６】
2020506920.tif 000031
（式中、
Ｒ’は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基を表し；
Ｒ”及びＲ”’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基又は窒素保護基を表す。）
の部分を表す。］
の化合物又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１又は２に記載の組合せ物。
【請求項４】
成分（ｉ）が、ニタゾキサニド、チゾキサニド、［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ３）エタノエート、２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ２）エタノエート；又は２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ１）エタノエート、（（Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート塩酸塩）及び（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート塩酸塩）又は薬学的に許容されるその塩から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項５】
成分（ｉｉ）が、
少なくとも１つのＰＰＡＲアルファアゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲアルファ／デルタ二重アゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲアルファアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲアルファ／ガンマ二重アゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲアルファアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲガンマ／デルタ二重アゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト；
少なくとも１つのＰＰＡＲアルファ／ガンマ／デルタ  パンアゴニスト；並びに
少なくとも１つのＰＰＡＲアルファアゴニスト、少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト
から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項６】
少なくとも１つのＰＰＡＲアゴニストが、式（ＩＩＩ）：
【化７】
2020506920.tif 000032
［式中、
Ｙ１は、ハロゲン、Ｒａ又はＧａ−Ｒａ基を表し；
Ａは、ＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ２−ＣＨ２基を表し；
Ｙ２は、Ｇｂ−Ｒｂ基を表し；
Ｇａ及びＧｂは、同一であるか又は異なって、酸素又は硫黄の原子を表し；
Ｒａは、水素原子、非置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、又は１つ以上のハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキルチオ基、又は複素環基を表し；
Ｒｂは、少なくとも−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここで、Ｒｃは、水素原子、又は１つ以上のハロゲン原子により置換されているか若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、又は複素環基を表し；並びに
Ｙ４及びＹ５は、同一であるか又は異なって、１つ以上のハロゲン原子により置換されているか若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、又は複素環基を表す。］
の化合物又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項７】
成分（ｉｉ）が、エラフィブラノール、セラデルパル、サログリタザル及びラニフィブラノール、又は薬学的に許容されるその塩から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項８】
（ｉ）ニタゾキサニド、チゾキサニド、［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ３）エタノエート、２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ２）エタノエート；又は２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ１）エタノエート、（（Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート塩酸塩）及び（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート塩酸塩）から；又は薬学的に許容されるその塩から選択される化合物；並びに
（ｉｉ）エラフィブラノール若しくは薬学的に許容されるその塩
を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項９】
前記組合せ物が、成分ｉ）及びｉｉ）、並びに薬学的に許容される担体を含む組成物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項１０】
前記組合せ物が、連続、分離又は同時使用のための、成分ｉ）及びｉｉ）を含むキットオブパーツ（ｋｉｔ  ｏｆ  ｐａｒｔｓ）である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項１１】
ピルフェニドン、又はニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩのような受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）、又はアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断薬、又はＣＴＧＦ阻害剤、又はＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリンのような潜伏性ＴＧＦβ複合体の活性化剤を含むＴＧＦβ及びＢＭＰ活性化経路を妨害しやすい任意の抗線維化化合物、ＴＧＦβ受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型（ＴＧＦＢＩＩ）及びＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、Ｎｏｄａｌ、抗ミューラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰのようなそれらのリガンド、補助共受容体（ＩＩＩ型受容体としても知られる）又は調節性若しくは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含むＳＭＡＤ依存性キャノニカル経路の成分、又はＭＡＰＫシグナル伝達の種々の分岐を含むＳＭＡＤ非依存性若しくは非キャノニカル経路のメンバー、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰアーゼシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘導ＥＭＴプロセス、又はＨｈリガンド若しくは標的遺伝子を含むキャノニカル及び非キャノニカルヘッジホッグシグナル伝達経路、又はＴＧＦβに影響を与えやすいＷＮＴ若しくはＮｏｔｃｈ経路の任意のメンバーから選択される公知の抗線維化活性を有する少なくとも１つの治療的活性剤をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項１２】
ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤並びに他の抗炎症性及び／又は免疫抑制剤から選択される少なくとも１つの治療的活性剤をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項１３】
治療的活性剤が、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤＳ、シクロホスファミド、ニトロソウレア、葉酸類縁体、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、シクロスポリン、ミリオシン、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸誘導体、フィンゴリモド及び他のスフィンゴシン一リン酸受容体モジュレータ、炎症性サイトカイン及び炎症性サイトカイン受容体、Ｔ細胞受容体並びにインテグリンのような標的に対するモノクローナル及び／又はポリクローナル抗体から選択される、請求項１２に記載の組合せ物。
【請求項１４】
成分（ｉ）及び（ｉｉ）が、持効性及び／又は徐放性放出のために、注射可能な懸濁液、ジェル、オイル、ピル、錠剤、坐薬、粉末、カプセル、エアロゾル、軟膏、クリーム、パッチ、又はガレヌス形態の手段で製剤化される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項１５】
薬物として使用するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項１６】
炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患を治療するための方法において使用するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組合せ物。
【請求項１７】
線維性障害が、肝臓、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋肉、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（例えば、小腸）、胆道、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、関節及び胃線維症、特に肝臓、腸、肺、心臓、腎臓、筋肉、皮膚、軟部組織、骨髄、腸、及び関節線維症からなる群において選択される、請求項１６に記載の使用のための組合せ物。
【請求項１８】
疾患が、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬剤誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染病原体誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、循環器疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧、原発性硬化性胆管症（ＰＳＣ）及び原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような慢性胆管症からなる群において選択される、請求項１６に記載の使用のための組合せ物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療のためのＰＰＡＲアゴニストと組み合わせたニタゾキサニド（ＮＴＺ）又はその誘導体の組合せに関する。
【背景技術】
【０００２】
［２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル］エタノエート（又はニタゾキサニド、又はＮＴＺ）は１９７５年に初めて記載され（Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ  ａｎｄ  Ｃａｖｉｅｒ、１９７５年）、嫌気性原生動物、蠕虫及び嫌気性と好気性細菌の両方を含む広範囲の微生物に対して高度に効果的であることが明らかにされた（Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ  ａｎｄ  Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ、１９８４年；Ｄｕｂｒｅｕｉｌ、Ｈｏｕｃｋｅら、１９９６年；Ｍｅｇｒａｕｄｄ、Ｏｃｃｈｉａｌｉｎｉら、１９９８年；Ｆｏｘ  ａｎｄ  Ｓａｒａｖｏｌａｔｚ、２００５年；Ｐａｎｋｕｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｅｌｂａｕｍ、２００６年；Ｆｉｎｅｇｏｌｄ、Ｍｏｌｉｔｏｒｉｓら、２００９年）。ニタゾキサニドは腸管寄生条虫の処置のために人において初めて研究され（Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ  ａｎｄ  Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ、１９８４年）、合衆国では現在、寄生原虫クリプトスポリジウム・パルバム及びジアルジア・インテスティナリスにより引き起こされる下痢の処置用に認可されている（Ａｌｉｎｉａ（登録商標）、Ｒｏｍａｒｋ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。ＮＴＺは、ラテンアメリカで及びインドで広く商品化されており、そこではＮＴＺは広域スペクトルの腸内寄生性感染症の処置に必要とされている（Ｈｅｍｐｈｉｌｌ、Ｍｕｅｌｌｅｒら、２００６年）。ＮＴＺがその抗寄生虫活性を発揮する提唱されている作用機序は、嫌気性代謝に不可欠であるピルベート：フェレドキシンオキシドレダクターゼ（ＰＦＯＲ）酵素依存性電子移動反応の阻害を通じてである（Ｈｏｆｆｍａｎ、Ｓｉｓｓｏｎら、２００７年）。ＮＴＺはマイコバクテリウム・ツベルコローシスに対する活性も示し、この菌はＰＦＯＲの相同体を持たず、したがって、別の作用機序が示唆される。実際、筆者らは、ＮＴＺが、膜電位及び生体内部ｐＨ恒常性を撹乱する脱共役剤としての機能も果たすことが可能であることを明らかにした（ｄｅ  Ｃａｒｖａｌｈｏ、Ｄａｒｂｙら、２０１１年）。
【０００３】
ＮＴＺの薬理効果はその抗寄生虫又は抗菌活性に限定されてはおらず、最近、いくつかの研究により、ＮＴＺが抗ウイルス活性も与えることが可能であることが明らかにされた（Ｄｉ  Ｓａｎｔｏ  ａｎｄ  Ｅｈｒｉｓｍａｎ、２０１４年；Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ、２０１４年）。ＮＴＺは、赤血球凝集素（インフルエンザ）若しくはＶＰ７（ロタウイルス）タンパク質の成熟の遮断又は自然免疫応答に関与しているタンパク質ＰＫＲの活性化を含む多様なやり方でウイルス複製を妨げる（概論は、Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ、２０１４年を参照）。ＮＴＺは、極めて重要な代謝及び細胞死促進（ｐｒｏｄｅａｔｈ）シグナル伝達経路を妨げることにより広い抗がん特性を有することも明らかにされた（Ｄｉ  Ｓａｎｔｏ  ａｎｄ  Ｅｈｒｉｓｍａｎ、２０１４年）。
【０００４】
ＰＰＡＲ（α、β／δ（本明細書では、δ後）及びγ）はホルモン活性化核内受容体ファミリーに属する。ＰＰＡＲ又は「ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体」は、以下のリガンド：ステロイド／甲状腺ホルモン／レチノイドにより活性化される転写因子のスーパーファミリーに由来する核内受容体である。現在まで、マウス及びヒトにおいて３つのＰＰＡＲアイソタイプ：ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ及びＰＰＡＲγが同定されている。ヒトにおけるＰＰＡＲβ／δ発現は遍在すると思われるが、ＰＰＡＲα及びγは差次的な組織分布を示す（Ｂｒａｉｓｓａｎｔ  Ｏ  ａｎｄ  Ｗａｈｌｉ  Ｗ、１９９８年）。ＰＰＡＲαは、高脂肪酸異化活性がある細胞において及び高ペルオキシソーム活性がある細胞において発現される（肝細胞、心筋細胞、腎近位尿細管、腸管粘膜）。ＰＰＡＲβ／δは大半の組織において遍在性に及び豊富に発現される。ＰＰＡＲγ発現に関しては、主に脂肪細胞、ある特定の免疫系細胞及び網膜に限られており、他の器官には微量にしか存在しない（Ｂｒａｉｓｓａｎｔ  Ｏ  ａｎｄ  Ｗａｈｌｉ  Ｗ、１９９８年）。
【０００５】
ＰＰＡＲαを例にとると、その作用は脂質低下効果があるフィブラートのような化合物のクラスにより媒介される。例えば、脂肪酸、エイコサノイド（ロイコトリエンＢ４）及び８（Ｓ）−ヒドロキシエイコサテトラエン酸のような天然のリガンドも同定されている（Ｋｌｉｅｗｅｒ  ＳＡら、１９９７年）。ＰＰＡＲは主に脂質及びグルコース代謝に関連付けられている。フィブラートのようなＰＰＡＲ活性化因子は、ＰＰＡＲαの活性化を介して血漿コレステロール及びトリグリセリド濃度の調節を可能にする（Ｈｏｕｒｔｏｎ  Ｄら、２００１年）。フィブラート療法により肝臓において脂肪酸酸化が増加する。フィブラートはトリグリセリドの合成も減らす（Ｓｔａｅｌｓ  Ｂ  ａｎｄ  Ａｕｗｅｒｘ  Ｊ、１９９８年）。ＰＰＡＲα活性化因子は、高血糖及びインスリンレベルを修正することもできる。フィブラートは、食物摂取及びレプチン遺伝子発現とは無関係である機序を通じて脂肪組織量を低減もする（Ｇｕｅｒｒｅ−Ｍｉｌｌｏ  Ｍら、２０００年）。ＰＰＡＲγアゴニストの治療的関心は、２型糖尿病の処置において広く調査されてきた（Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ  ＢＭ、１９９８年）。ＰＰＡＲγアゴニストは、２型糖尿病の動物モデルでもヒトでも標的組織においてインスリン感受性を回復させ血漿グルコース、脂質及びインスリンレベルを低減することが明らかにされた（Ｒａｍ  ＶＪ、２００３年）。リガンドによるＰＰＡＲ活性化は、炎症、血管新生、細胞増殖及び分化、アポトーシスのようなプロセスに関与する遺伝子の発現並びにｉＮＯＳ、ＭＭＰアーゼ及びＴＩＭＰの活性を調節するのにも役割を果たす。ケラチノサイトにおけるＰＰＡＲαａの活性化により、ケラチノサイトの増殖及び分化に関与する遺伝子の発現が休止する（Ｋｏｍｕｖｅｓ  ＬＧら、２０００年）。ＰＰＡＲは抗炎症特性を有する。なぜならば、ＰＰＡＲは、ＮＦ−κＢのような他の転写因子又はＳＴＡＴ及びＡＰ−１のような転写活性化因子を含む転写機構にネガティブに干渉するからである（Ｄｅｓｖｅｒｇｎｅ  Ｂ  ａｎｄ  Ｗａｈｌｉ  Ｗ、１９９９年）。前記抗炎症及び抗増殖特性があるのでＰＰＡＲ（特にＰＰＡＲα）は、血管閉塞性疾患（アテローム性動脈硬化、等）、高血圧、血管新生に関係する疾患（糖尿病性網膜症、等）、炎症性疾患（炎症性腸疾患、乾癬、等）及び新生物疾患（発がん、等）のような疾患の処置のための興味深い治療標的になっている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ  ａｎｄ  Ｃａｖｉｅｒ、１９７５年
【非特許文献２】Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ  ａｎｄ  Ｍａｉｓｏｎｎｅｕｖｅ、１９８４年
【非特許文献３】Ｄｕｂｒｅｕｉｌ、Ｈｏｕｃｋｅら、１９９６年
【非特許文献４】Ｍｅｇｒａｕｄｄ、Ｏｃｃｈｉａｌｉｎｉら、１９９８年
【非特許文献５】Ｆｏｘ  ａｎｄ  Ｓａｒａｖｏｌａｔｚ、２００５年
【非特許文献６】Ｐａｎｋｕｃｈ  ａｎｄ  Ａｐｐｅｌｂａｕｍ、２００６年
【非特許文献７】Ｆｉｎｅｇｏｌｄ、Ｍｏｌｉｔｏｒｉｓら、２００９年
【非特許文献８】Ｈｅｍｐｈｉｌｌ、Ｍｕｅｌｌｅｒら、２００６年
【非特許文献９】Ｈｏｆｆｍａｎ、Ｓｉｓｓｏｎら、２００７年
【非特許文献１０】ｄｅ  Ｃａｒｖａｌｈｏ、Ｄａｒｂｙら、２０１１年
【非特許文献１１】Ｄｉ  Ｓａｎｔｏ  ａｎｄ  Ｅｈｒｉｓｍａｎ、２０１４年
【非特許文献１２】Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ、２０１４年
【非特許文献１３】Ｂｒａｉｓｓａｎｔ  Ｏ  ａｎｄ  Ｗａｈｌｉ  Ｗ、１９９８年
【非特許文献１４】Ｋｌｉｅｗｅｒ  ＳＡら、１９９７年
【非特許文献１５】Ｈｏｕｒｔｏｎ  Ｄら、２００１年
【非特許文献１６】Ｓｔａｅｌｓ  Ｂ  ａｎｄ  Ａｕｗｅｒｘ  Ｊ、１９９８年
【非特許文献１７】Ｇｕｅｒｒｅ−Ｍｉｌｌｏ  Ｍら、２０００年
【非特許文献１８】Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ  ＢＭ、１９９８年
【非特許文献１９】Ｒａｍ  ＶＪ、２００３年
【非特許文献２０】Ｋｏｍｕｖｅｓ  ＬＧら、２０００年
【非特許文献２１】Ｄｅｓｖｅｒｇｎｅ  Ｂ  ａｎｄ  Ｗａｈｌｉ  Ｗ、１９９９年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ＮＴＺ類似体とＰＰＡＲアゴニストの新規組合せ並びに治療における、特に炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患の処置におけるその使用を説明する。
【０００８】
本発明者らは、ＮＴＺ、合成抗原虫薬若しくはその誘導体又はその代謝物をＰＰＡＲアゴニストと組み合わせると、治療において、特に免疫、炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患の処置に有用である治療活性を示すことを見出した。
【０００９】
したがって、本発明は、
（ｉ）ＮＴＺ及びこの類似体から選択される化合物；並びに
（ｉｉ）少なくとも１つのＰＰＡＲアゴニスト
を含む組合せ物に関する。
【００１０】
特定の実施形態では、組合せ製品の成分（ｉ）の化合物は式（Ｉ）：
【００１１】
【化１】
2020506920.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、水素原子（Ｈ）、重水素原子（Ｄ）、ハロゲン原子、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、スルホニル基、スルホキシド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、カルボキシル基、カルボキシレート基、ニトロ基（ＮＯ２）、アミノ基（ＮＨ２）、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基を表し、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ＮＯ２基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールカルボニルアミノ基、カルボキシル若しくはカルボキシレート基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基、ＮＨ２基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基を表し、
又は
Ｒ１及びＲ２は、これらが結合している炭素原子と一緒に、置換若しくは非置換５〜８員のシクロアルキル、複素環若しくはアリール基を形成し、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同一であるか又は異なって、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、ＮＯ２基、スルホニルアミノアルキル基、ＮＨ２基、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボキシル基、カルボキシレート基又はＲ９基を表し；
Ｒ９は、Ｏ−Ｒ８基、又はアミノ酸（該アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群から選択される。）、又は式（Ａ）：
【００１２】
【化２】
2020506920.tif 000003
（式中、Ｒ’は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキルアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基を表し；
Ｒ”及びＲ”’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基又は窒素保護基を表す。）
の部分を表し、
Ｒ８は、水素原子、重水素原子、グルクロニジル基又は
【００１３】
【化３】
2020506920.tif 000004
基を表し、ここで、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、同一であるか又は異なって、水素原子又は重水素原子を表す。）
の化合物又は薬学的に許容されるその塩である。
【００１４】
さらなる特定の実施形態では、組合せ物の成分（ｉ）の化合物は式（Ｉ）：
【００１５】
【化４】
2020506920.tif 000005
［式中、
Ｒ１は、水素原子（Ｈ）、重水素原子（Ｄ）、ハロゲン原子、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、スルホニル基、スルホキシド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、カルボキシル基、カルボキシレート基、ＮＯ２基、ＮＨ２基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基を表し、
Ｒ２は、水素原子、重水素原子、ＮＯ２基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、ハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールカルボニルアミノ基、カルボキシル酸若しくはカルボキシレート基、アミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミド基、（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミド基、ＮＨ２基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基を表し、
又は
Ｒ１及びＲ２は、これらが結合している炭素原子と一緒に、置換若しくは非置換５〜８員のシクロアルキル、複素環若しくはアリール基を形成し、
Ｒ３は、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、Ｏ−Ｒ８基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、ＮＯ２、スルホニルアミノアルキル基、ＮＨ２基、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボキシル基、カルボキシレート基、アミノ酸（該アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群から選択される。）、又は式（Ａ）：
【００１６】
【化５】
2020506920.tif 000006
（式中、Ｒ’は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキルアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基を表し；
Ｒ”及びＲ”’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基又は窒素保護基を表す。）
の部分を表し、Ｒ８は、水素原子、重水素原子、又は
【００１７】
【化６】
2020506920.tif 000007
基を表し、ここで、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、同一であるか又は異なって、水素原子又は重水素原子を表し、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同一であるか又は異なって、水素原子、重水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールオキシ基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基、複素環基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、ＮＯ２、スルホニルアミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、ＮＨ２基、アミノ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルカルボニルアミノ基、カルボキシル基、カルボキシレート基、アミノ酸（該アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群から選択される。）、又は式（Ａ）：
【００１８】
【化７】
2020506920.tif 000008
（式中、Ｒ’は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基を表し；Ｒ”及びＲ”’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基又は窒素保護基を表す。）
の部分を表す。］
の化合物又は薬学的に許容されるその塩である。
【００１９】
特定の実施形態では、本発明の式（Ｉ）の化合物において：
（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基は、置換又は非置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、特に置換又は非置換（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基でもよく；
（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基は、置換又は非置換（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基でもよく；
（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基は、置換又は非置換（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基でもよく；
（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルオキシ基は、置換又は非置換（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルオキシ基のような置換又は非置換でもよく；
（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基は、置換又は非置換（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルチオ基のような置換又は非置換でもよく；
（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルアミノ基は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ基でもよく；
（Ｃ１〜Ｃ６）ジアルキルアミノ基は、（Ｃ１〜Ｃ４）ジアルキルアミノ基でもよく；
（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基は、置換又は非置換（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基でもよく；
複素環基は、置換又は非置換ヘテロシクロアルキル又はヘテロアリール基でもよい。
【００２０】
特定の実施形態では、組合せ物の成分（ｉ）の化合物は式（ＩＩ）：
【００２１】
【化８】
2020506920.tif 000009
［式中、Ｒ９は、水素原子、重水素原子、Ｏ−Ｒ８基（Ｒ８は上で定義されているとおりである。）、又はアミノ酸（該アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンからなる群から選択される。）、又は式（Ａ）：
【００２２】
【化９】
2020506920.tif 000010
（式中、Ｒ’は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルケニル（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基を表し；Ｒ”及びＲ”’は、独立して、水素原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基又は窒素保護基を表す。）
の部分を表す。］
の化合物である。
【００２３】
特定の実施形態では、本発明の組合せ物の成分（ｉ）は：
・ＮＴＺ：
【００２４】
【化１０】
2020506920.tif 000011
・チゾキサニド：
【００２５】
【化１１】
2020506920.tif 000012
又は
・チゾキサニドグルクロニド（ＴＺＧ）：
【００２６】
【化１２】
2020506920.tif 000013
から選択される。
【００２７】
別の実施形態では、組合せ物の成分（ｉ）は式（Ｉ）又は（ＩＩ）
［式中、
Ｒ８は、水素原子、重水素原子若しくは
【００２８】
【化１３】
2020506920.tif 000014
基を表し、ここで、Ｒ８ａ、Ｒ８ｂ及びＲ８ｃは、同一であるか若しくは異なって、水素原子若しくは重水素原子を表し、及び／又は
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ２ｃ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は同時に水素原子ではないという条件で、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、同一であるか若しくは異なって、水素原子若しくは重水素原子を表す。］
の化合物である。
【００２９】
特定の実施形態では、成分（ｉ）は［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ３）エタノエート、２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ２）エタノエート；又は２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ１）エタノエートである。
【００３０】
別の特定の実施形態では、成分（ｉ）は、（（Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート塩酸塩）（ＲＭ５０６１）又は式：
【００３１】
【化１４】
2020506920.tif 000015
である。
【００３２】
別の特定の実施形態では、成分（ｉ）は、式：
【００３３】
【化１５】
2020506920.tif 000016
の（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート塩酸塩）（ＲＭ５０６６）である。
【００３４】
さらなる特定の実施形態では、ＰＰＡＲアゴニストは、ＰＰＡＲアルファアゴニスト、ＰＰＡＲガンマアゴニスト、ＰＰＡＲデルタアゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／ガンマ二重アゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／デルタ二重アゴニスト、ＰＰＡＲガンマ／デルタ二重アゴニスト、又はＰＰＡＲアルファ／ガンマ／デルタ  パンアゴニストである。
【００３５】
本発明に従えば、本発明の組合せに含まれるＰＰＡＲアゴニスト及び成分（ｉ）は、本発明の組合せの前記ＰＰＡＲアゴニストと成分（ｉ）の組合せが、炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患に対して相乗作用を提供するように、選択することができる。そのような相乗作用は、実施例に記載されているエクセスオーバーブリス（ＥＯＢ）法を使用することによってのような、当技術分野で周知の方法に従って決定することができる。
【００３６】
特定の実施形態では、組合せ物の成分（ｉｉ）は
・少なくとも１つのＰＰＡＲアルファアゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲアルファ／デルタ二重アゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲアルファアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲアルファ／ガンマ二重アゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲアルファアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲガンマ／デルタ二重アゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト；
・少なくとも１つのＰＰＡＲアルファ／ガンマ／デルタ  パンアゴニスト；並びに
・少なくとも１つのＰＰＡＲアルファアゴニスト、少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト
である。
【００３７】
本発明に従えば、用語「ＰＰＡＲアゴニスト」とは、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニストのことであり、これは脂質及びグルコース恒常性に中心的な役割をはたいている薬物のクラスである。ＰＰＡＲαは主に脂肪酸代謝に影響を与え、その活性化は脂質レベルを低下させ、ＰＰＡＲγは大部分が脂肪生成、エネルギー収支及び脂質生合成の調節に関与している。ＰＰＡＲδは、大部分骨格筋及び心筋において脂肪酸酸化に関与しているが、血糖値及び血中コレステロール値も調節している。
【００３８】
本発明に従えば、本明細書で使用される用語「ＰＰＡＲアルファアゴニスト」は、フェノフィブラート、シプロフィブラート、ペマフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、ビニフィブラート、クリノフィブラート、クロフィブリン酸、ニコフィブラート、ピリフィブラート、プラフィブリド、ロニフィブラート、テオフィブラート、トコフィブラート及びＳＲ１０１７１を含むが、これらに限定されない。
【００３９】
本発明に従えば、本明細書で使用される用語「ＰＰＡＲガンマアゴニスト」は、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、重水素化ピオグリタゾン、エファツタゾン、ＡＴｘ０８−００１、ＯＭＳ−４０５、ＣＨＳ−１３１、ＴＨＲ−０９２１、ＳＥＲ−１５０−ＤＮ、ＫＤＴ−５０１、ＧＥＤ−０５０７−３４−Ｌｅｖｏ、ＣＬＣ−３００１及びＡＬＬ−４を含むが、これらに限定されない。
【００４０】
本発明に従えば、本明細書で使用される用語「ＰＰＡＲデルタアゴニスト」は、ＧＷ５０１５１６（エンドゥーラブル又は（｛４−［（｛４−メチル−２−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，３−チアゾール−５−イル｝メチル）スルファニル］−２−メチルフェノキシ｝酢酸））、ＭＢＸ８０２５（セラデルパル又は｛２−メチル−４−［５−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルメチルスルファニル］−フェノキシ｝−酢酸）、ＧＷ０７４２（［４−［［［２−［３−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−メチル−５−チアゾールイル］メチル］チオ］−２−メチルフェノキシ］酢酸）、Ｌ１６５０４１、ＨＰＰ−５９３及びＮＣＰ−１０４６を含むが、これらに限定されない。
【００４１】
本発明に従えば、本明細書で使用される用語「ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト」（グリタザールとも名付けられる）は、サログリタザル、アレグリタザル、ムラグリタザル、テサグリタザル及びＤＳＰ−８６５８を含むが、これらに限定されない。
【００４２】
本発明に従えば、本明細書で使用される用語「ＰＰＡＲアルファ／デルタアゴニスト」は、エラフィブラノール（ＧＦＴ５０５）又はＴ９１３６５９を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
本発明に従えば、本明細書で使用される用語「ＰＰＡＲガンマ／デルタアゴニスト」は、コンジュゲートリノール酸（ＣＬＡ）、Ｔ３Ｄ−９５９を含むが、これらに限定されない。
【００４４】
本発明に従えば、本明細書で使用される用語「ＰＰＡＲアルファ／ガンマ／デルタアゴニスト」は、ＩＶＡ３３７（ラニフィブラノール（Ｌａｎｉｆｉｂｒａｎｏｒ））、ＴＴＡ（テトラデシルチオ酢酸）、ババキニン、ＧＷ４１４８、ＧＷ９１３５、ベザフィブラート、ロベグリタゾン及びＣＳ０３８を含むが、これらに限定されない。さらなる実施形態では、ＰＰＡＲアルファ／ガンマ／デルタアゴニストは、２−（４−（５，６−メチレンジオキシベンゾ［ｄ］チアゾール−２−イル）−２−メチルフェノキシ）−２−メチルプロパン酸（ＭＨＹ２０１３）である。
【００４５】
ＰＰＡＲアゴニストは、塩、水和物、溶媒和物、多形又は共結晶の形態でもよい。ＰＰＡＲアゴニストは、塩の水和物、溶媒和物、多形又は共結晶の形態でもよい。
【００４６】
さらに詳細な実施形態では、ＰＰＡＲアゴニストは、式（ＩＩＩ）
【００４７】
【化１６】
2020506920.tif 000017
［式中、Ｙ１はハロゲン、Ｒａ又はＧａ−Ｒａ基を表し；
ＡはＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ２−ＣＨ２基を表し；
Ｙ２はＧｂ−Ｒｂ基を表し；
Ｇａ及びＧｂは、同一であるか又は異なって、酸素又は硫黄の原子を表し；
Ｒａは、水素原子、非置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール基又は１つ以上のハロゲン原子、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ又は（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキルチオ基又は複素環基を表し；
Ｒｂは、少なくとも−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここで、Ｒｃは水素原子、又は１つ以上のハロゲン原子により置換されているか若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基又は複素環基を表し；並びに
Ｙ４及びＹ５は、同一であるか又は異なって、１つ以上のハロゲン原子により置換されているか若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基又は複素環基を表す。］
の化合物、又は薬学的に許容されるその塩である。
【００４８】
式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、
Ｙ１はハロゲン、Ｒａ又はＧａ−Ｒａ基を表し；
ＡはＣＨ＝ＣＨ基を表し；
Ｙ２はＧｂ−Ｒｂ基を表し；
Ｇａ及びＧｂは、同一であるか又は異なって、酸素又は硫黄の原子を表し；
Ｒａは、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基、特に１つ以上のハロゲン原子により置換されているか若しくは置換されていない（Ｃ１〜Ｃ７）アルキル又は（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基を表し；
Ｒｂは、−ＣＯＯＲ３基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここで、Ｒｃは水素原子又は１〜４炭素原子を有するアルキル基を表し；並びに
Ｙ４及びＹ５は、独立して（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表す。
【００４９】
式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、
Ｙ１はＲａ又はＧａ−Ｒａ基を表し；
ＡはＣＨ２−ＣＨ２基を表し；
Ｙ２はＧｂ−Ｒｂ基を表し；
Ｇａは酸素又は硫黄の原子を表し、Ｇｂは酸素原子を表し；
Ｒａは、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル基を表し；
Ｒｂは、少なくとも−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここで、Ｒｃは水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表し；並びに
Ｙ４及びＹ５は、独立して（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表す。
【００５０】
式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、
Ｙ１はハロゲン原子又はＲａ若しくはＧａ−Ｒａ基を表し；
ＡはＣＨ２−ＣＨ２基を表し；
Ｙ２はＧｂ−Ｒｂ基を表し；
Ｇａは酸素又は硫黄の原子を表し、Ｇｂは酸素原子を表し；
Ｒａは、１つ以上のハロゲン原子で置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３〜Ｃ１４）シクロアルキル基を表し；
Ｒｂは、１つ以上のハロゲン原子により置換されているか又は置換されていない及び少なくとも−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を表し、ここで、Ｒｃは水素原子又は（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表し；並びに
Ｙ４及びＹ５は（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表す。
【００５１】
式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｇｂは酸素原子でありＲｂは−ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であり、ここで、Ｒｃは水素原子又は非置換の直鎖若しくは分岐（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を表す。
【００５２】
式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態では、Ｙ１は、直鎖又は分岐である（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基であって、１つ以上のハロゲン原子により置換されているか又は置換されていない（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を含む（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルチオ基である。
【００５３】
特定の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン（エラフィブラノール又はＧＦＴ５０５）、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−イソプロピルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−ｔ−ブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−トリフルオロメチルフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−ｔ−ブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−トリフルオロメチルフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−トリフルオロメチルオキシフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−ｔ−ブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、１−［４−トリフルオロメチルオキシフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン、２−［２，６−ジメチル−４−［３−［４−（メチルチオ）フェニル］−３−オキソ−プロピル］フェノキシ］−２−メチルプロパン酸及び２−［２，６−ジメチル−４−［３−［４−（メチルチオ）フェニル］−３−オキソ−プロピル］フェノキシ］−２−メチル−プロパン酸イソプロピルエステルからなる群において選択される。
【００５４】
さらに詳しい実施形態では、ＰＰＡＲアゴニストは、１−［４−メチルチオフェニル］−３−［３，５−ジメチル−４−カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ−２−エン−１−オン（又はエラフィブラノール−ＧＦＴ５０５）又は薬学的に許容されるその塩である。
【００５５】
本発明の組合せ物の特定の実施形態では、
・成分（ｉｉ）はエラフィブラノール、サログリタザル、セラデルパル及びラニフィブラノールからなる群において選択され、成分（ｉｉ）はより詳細にはエラフィブラノールであり；
・成分（ｉ）はＮＴＺ、ＴＺ、２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ３）エタノエート、２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ２）エタノエート、２−［（５−ニトロ−１，３−チアゾール−２−イル）カルバモイル］フェニル（ｄ１）エタノエート、（（Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート塩酸塩）又は（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート塩酸塩）から選択される。
【００５６】
さらなる実施形態では、成分（ｉ）は、ＴＺＧ、２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート（（Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート又はその塩酸塩のような）、２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート又はその塩酸塩のような）、２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート（（Ｓ）−２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート又はその塩酸塩のような）、及び２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−ジメチルペンタノエート（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート又はその塩酸塩のような）から選択される。この実施形態のさらなる変異形では、成分（ｉｉ）は、エラフィブラノール、サログリタザル、セラデルパル及びラニフィブラノールからなる群において選択され、成分（ｉｉ）はより詳細にはエラフィブラノールであり；成分（ｉ）は、ＴＺＧ、２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート（（Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート又はその塩酸塩のような）、２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−ニトロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート又はその塩酸塩のような）、２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート（（Ｓ）−２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３，３−ジメチルブタノエート又はその塩酸塩のような）、及び２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（５−クロロチアゾール−２−イルカルバモイル）フェニル  ２−アミノ−３−メチルペンタノエート又はその塩酸塩のような）から選択される。
【００５７】
特定の実施形態では、本発明の組合せ物は、抗線維化剤、抗炎症剤又は免疫抑制剤のような少なくとも１つの他の治療的活性剤をさらに含む。
【００５８】
例示的な抗線維化剤は、ピルフェニドン、又はニンテダニブ、ソラフェニブ及び他のＲＴＫＩのような受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）、又はアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ１）受容体遮断薬、又はＣＴＧＦ阻害剤、又はＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＴＨＢＳ１若しくは細胞表面インテグリンのような潜伏性ＴＧＦβ複合体の活性化剤を含むＴＧＦβ及びＢＭＰ活性化経路を妨害しやすい任意の抗線維化化合物、ＴＧＦβ受容体Ｉ型（ＴＧＦＢＲＩ）若しくはＩＩ型（ＴＧＦＢＩＩ）及びＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、Ｎｏｄａｌ、抗ミューラー管ホルモン、ＧＤＦ若しくはＢＭＰのようなそれらのリガンド、補助共受容体（ＩＩＩ型受容体としても知られる）、又は調節性若しくは阻害性ＳＭＡＤタンパク質を含むＳＭＡＤ依存性キャノニカル経路の成分、又はＭＡＰＫシグナル伝達の種々の分岐を含むＳＭＡＤ非依存性若しくは非キャノニカル経路、ＴＡＫ１、Ｒｈｏ様ＧＴＰアーゼシグナル伝達経路、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ／ＡＫＴ経路、ＴＧＦβ誘導ＥＭＴプロセス、又はＨｈリガンド若しくは標的遺伝子を含むキャノニカル及び非キャノニカルヘッジホッグシグナル伝達経路のメンバー、又はＴＧＦβに影響を与えやすいＷＮＴ若しくはＮｏｔｃｈ経路の任意のメンバーを含む。
【００５９】
例示的な抗炎症及び／又は免疫抑制剤は、グルココルチコイド、ＮＳＡＩＤＳ、シクロホスファミド、ニトロソウレア、葉酸類似体、プリン類似体、ピリミジン類似体、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、シクロスポリン、ミリオシン、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸誘導体、フィンゴリモド及び他のスフィンゴシン一リン酸受容体モジュレータ、炎症性サイトカイン及び炎症性サイトカイン受容体、Ｔ細胞受容体並びにインテグリンのような標的に対するモノクローナル及び／又はポリクローナル抗体を含む。
【００６０】
特定の実施形態では、本発明の組合せ物は、上記の成分（ｉ）及び（ｉｉ）並びに薬学的に許容される担体を含む組成物である。
【００６１】
特定の実施形態では、組合せ物は、連続、分離又は同時使用のための上記の成分（ｉ）及び（ｉｉ）を含むキットオブパーツである。
【００６２】
さらなる実施形態では、成分（ｉ）及び（ｉｉ）は、持効性及び／又は徐放性放出のために、注射可能な懸濁液、ジェル、オイル、ピル、錠剤、坐薬、粉末、カプセル、エアロゾル、軟膏、クリーム、パッチ、又はガレヌス形態の手段で処方される。
【００６３】
別の実施形態では、組合せ物の成分（ｉ）及び（ｉｉ）は、上記疾患のいずれかの治療において使用される。
【００６４】
本発明は、薬物としての使用のための本発明に従った組合せ物にも関する。
【００６５】
本発明は、前記疾患の治療のための方法における使用のための、本明細書で開示される組合せ物にも関する。別の実施形態では、本発明は、疾患の治療のための方法であって、本明細書で開示される治療有効量の組合せ物を治療を必要とする対象に投与することを含む方法に関する。別の実施形態では、疾患の治療のための薬物の製造のための本発明に従った組合せ物の使用が提供される。
【００６６】
特に、本発明の組合せ物は、免疫、炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患のような疾患の治療に有用である。特定の実施形態では、疾患は、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬剤誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染病原体誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、循環器疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧、原発性硬化性胆管症（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような慢性胆管症、胆道閉鎖、家族性胆内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、炎症性疾患、神経変性疾患、がん、肝臓がん、肝細胞癌、胃腸がん、胃がん、神経線維腫症に伴う髄膜腫、膵内分泌腫瘍、膵外分泌腫瘍、白血病、骨髄増殖性／骨髄異形成（ｍｙｅｌｏｄｉｓｐｌａｓｔｉｃ）疾患、肥満細胞症、皮膚線維肉腫、乳がん、肺がん、甲状腺がん又は結腸直腸がんを含む固形腫瘍、前立腺がん、任意の起源の肝線維症又は硬変、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬剤誘発性肝線維症又は硬変、感染病原体誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ及びＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆道線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患による肝線維症又は硬変、任意の病因の腸線維症、クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、皮膚線維症、表皮線維症、内皮線維症、強皮症／全身性硬化症による皮膚線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺性線維症、特発性肺性線維症（ＩＰＦ）のような慢性炎症性気道疾患に続く肺線維症、心臓線維症、腎線維症、腎性全身性線維症、筋線維症、軟部組織線維症（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄線維症、関節線維症（ｊｏｉｎｔ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、腱線維症、軟骨線維症、膵臓線維症、子宮線維症、神経系線維症、精巣線維症、卵巣線維症、副腎線維症、動脈線維症、静脈線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維形成、着床前後線維症及び石綿症、関節線維症（ａｒｔｈｒｏｆｉｂｒｏｓｉｓ）、癒着性関節包炎からなる群において選択される。
【００６７】
きわめて好ましい実施形態では、疾患は、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬剤誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染病原体誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、循環器疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧、原発性硬化性胆管症（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような慢性胆管症、胆道閉鎖、家族性胆内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞癌、胃腸がん、胃がん、結腸直腸がん、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬剤誘発性肝線維症又は硬変、感染病原体誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ及びＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆道線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患による肝線維症又は硬変、任意の病因の腸線維症、クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺性線維症、特発性肺性線維症（ＩＰＦ）のような慢性炎症性気道疾患に続く肺線維症からなる群において選択される。
【００６８】
さらなる態様では、本発明はコラーゲン線維の産生の原因である及び／又は細胞外マトリックスの産生の原因である繊維芽細胞の増殖及び／又は活性化の阻害において使用するための本発明の組合せに関する。
【００６９】
本発明に従えば、用語「自己免疫疾患」は、身体中に通常存在する物質及び組織に対する身体の異常な免疫応答から生じる状態を名付けるのに使用される。疾患はある特定の器官（例えば、Ｉ型糖尿病又は自己免疫性甲状腺炎において）に制限されるか又は異なる場所での特定の組織（例えば、グッドパスチャー病、肺及び腎臓での基底膜の疾患において）に関連してもよい。
【００７０】
用語「炎症」は、細胞／組織損傷の原因はもちろん最初の損傷から生じる壊死性細胞／組織も取り除いて、修復過程を開始するのに役立つ可能性がある宿主細胞、血管及びタンパク質並びに他のメディエーターが関わる防御応答から生じる状態を名付けるのに使用される。炎症反応は、疼痛、熱、発赤、膨潤、血管膨張、血流増加及び機能喪失により現れることがある。
【００７１】
用語「線維症」、「線維性疾患」、「線維性障害」及びこの語形変化は、器官又は組織における線維性結合組織の過剰な沈着という病的状態を意味する。さらに具体的には、線維症は、組織損傷に対する応答としての結合組織による病理過程であり、これは、持続性の線維性傷跡形成及び細胞外マトリックスの過剰産生を含む。生理的には、結合組織の沈着は、根底にある器官又は組織の構造及び機能を消し去ることが可能である。
【００７２】
本発明に従えば、線維症又は線維性障害はいかなる器官又は組織線維症にも関連していてよい。特定の器官線維症の例示的、非限定的例は、肝臓、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋肉、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、陰茎、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（例えば、小腸）、胆道、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、関節（例えば、膝、肩又は他の関節）又は胃線維症を含む。
【００７３】
特定の実施形態では、線維性障害は、肝臓、腎臓、皮膚、表皮、内皮、筋肉、腱、軟骨、心臓、膵臓、肺、子宮、神経系、精巣、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（例えば、小腸）、胆道、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、関節（例えば、膝、肩又は他の関節）、目又は胃線維症からなる群において選択される。
【００７４】
好ましい実施形態では、線維性障害は、肝臓、腸、肺、心臓、腎臓、筋肉、皮膚、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、腸、及び関節（例えば、膝、肩又は他の関節）線維症からなる群において選択される。
【００７５】
さらに好ましい実施形態では、線維性障害は、肝臓、肺、腸、心臓、皮膚、腎臓及び腸線維症からなる群において選択される。
【００７６】
別の実施形態では、線維性障害は、肝臓、肺、心臓及び腸線維症からなる群において選択される。さらに詳細な実施形態では、線維性障害は肝臓、肺、皮膚、腎臓及び腸線維症からなる群において選択される。別の実施形態では、線維性障害は肝線維症である。
【００７７】
本発明のさらに好ましい実施形態では、治療された線維性障害は、線維性障害の以下の包括的ではない一覧：非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肺性線維症、特発性肺性線維症（ＩＰＦ）、皮膚線維症、眼線維症（水晶体嚢線維症のような）、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維形成、慢性炎症性気道疾患（ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、ＩＰＦ）に続く肺線維症、アルコール又は薬剤誘発性肝線維症、肝硬変、感染誘発性肝線維症、放射線又は化学療法誘発性線維症、腎性全身性線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、関節線維症（ａｒｔｈｒｏｆｉｂｒｏｓｉｓ）、癒着性関節包炎のいくつかの形態、原発性硬化性胆管症（ＰＳＣ）及び原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような慢性線維化胆管症、胆道閉鎖、家族性胆内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、着床前後線維症並びに石綿症からなる群において選択される。
【００７８】
胆汁うっ滞は、肝細胞による分泌障害（肝細胞性胆汁うっ滞）又は肝内若しくは肝外胆管を通じた胆汁流の閉塞（閉塞性胆汁うっ滞）に起因する胆汁流の減少と定義される。診療では、胆汁うっ滞は、肝臓からの胆汁の流れが遅くなる又は遮断される任意の状態である。本発明の特定の実施形態に従えば、胆汁うっ滞性疾患は、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管症（ＰＳＣ）、妊娠性肝内胆汁うっ滞、進行性家族性胆内胆汁うっ滞、胆道閉鎖、胆石症、感染性胆管炎、ランゲルハンス細胞組織球症に伴う胆管症、アラジール症候群、非症候性管欠乏（Ｎｏｎｓｙｎｄｒｏｍｉｃ  ｄｕｃｔａｌ  ｐａｕｃｉｔｙ）、薬剤誘発性胆汁うっ滞及び完全非経口栄養関連胆汁うっ滞（Ｔｏｔａｌ  ｐａｒｅｎｔａｌ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃｈｏｌｅｓｔａｓｉｓ）からなる群において選択される。好ましい実施形態では、胆汁うっ滞性疾患は、ＰＢＣ又はＰＳＣ、特にＰＢＣである。
【００７９】
炎症性疾患、線維性疾患、代謝性疾患及び胆汁うっ滞性疾患の例は、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬剤誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染病原体誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、循環器疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧、原発性硬化性胆管症（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような慢性胆管症、胆道閉鎖、家族性胆内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性硬化症、炎症性疾患、神経変性疾患、がん、肝臓がん、肝細胞癌、胃腸がん、胃がん、神経線維腫症に伴う髄膜腫、膵内分泌腫瘍、膵外分泌腫瘍、白血病、骨髄増殖性／骨髄異形成疾患、肥満細胞症、皮膚線維肉腫、乳がん、肺がん、甲状腺がん又は結腸直腸がんを含む固形腫瘍、前立腺がん、任意の起源の肝線維症又は硬変、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬剤誘発性肝線維症又は硬変、感染病原体誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ及びＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆道線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患による肝線維症又は硬変、任意の病因の腸線維症、クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、皮膚線維症、表皮線維症、内皮線維症、強皮症／全身性硬化症による皮膚線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺性線維症、特発性肺性線維症（ＩＰＦ）のような慢性炎症性気道疾患に続く肺線維症、心臓線維症、腎線維症、腎性全身性線維症、筋線維症、軟部組織線維症（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄線維症、関節線維症（ｊｏｉｎｔ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、腱線維症、軟骨線維症、膵臓線維症、子宮線維症、神経系線維症、精巣線維症、卵巣線維症、副腎線維症、動脈線維症、静脈線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維形成、着床前後線維症及び石綿症、関節線維症（ａｒｔｈｒｏｆｉｂｒｏｓｉｓ）、癒着性関節包炎を含む。
【００８０】
好ましくは、疾患は、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬剤誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染病原体誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、循環器疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧、原発性硬化性胆管症（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような慢性胆管症、胆道閉鎖、家族性胆内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝臓がん、肝細胞癌、胃腸がん、胃がん、結腸直腸がん、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬剤誘発性肝線維症又は硬変、感染病原体誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ及びＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆道線維症、任意の慢性胆汁うっ滞性疾患による肝線維症又は硬変、任意の病因の腸線維症、クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺線維症、ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者の肺、結核、肺性線維症、特発性肺性線維症（ＩＰＦ）のような慢性炎症性気道疾患に続く肺線維症からなる群において選択される。
【００８１】
用語「治療」又は「治療する」とは、治療を必要とする対象において線維性障害の治療処置又は予防処置のことである。治療は、障害を予防し、治療し、遅延させ、好転させ又はこの進行の速度を遅くし、これらによって対象の状態を改善するための、表明された障害を有する対象への、すなわち、患者への本発明の組合せの投与を含む。治療は、健康である又は線維性障害を発症するリスクがある対象にも施してよい。
【００８２】
したがって、本発明に従えば、免疫、炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患の治療は、障害を治療し、遅延させ、好転させ若しくはこの進行の速度を遅くし、このようにして患者の状態を改善するために、表明された障害を有する対象に、又は健康な対象、特にそのような疾患を発症するリスクがある対象に、例えば、組合せの成分（ｉ）及び（ｉｉ）を含有する医薬組成物の形態で本発明の組合せを投与することを含む。
【００８３】
治療は、患者の状態を治療し、遅延させ、若しくはこの進行の速度を遅くし、このようにして患者の状態を改善するために、表明された障害を有する患者に、又は健康な対象、特に炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患を発症するリスクがある対象に、本発明の組合せを投与することを含む。
【００８４】
治療する対象は哺乳動物、好ましくはヒトである。本発明に従って治療する対象は、以前の薬物処置、関連病理、遺伝子型、危険因子への曝露、ウイルス感染のような線維性疾患に関連するいくつかの基準に基づいて、並びに撮像方法及び免疫学的、生化学的、酵素的、化学的又は核酸検出方法の手段により評価することが可能な任意の適切なバイオマーカーの検出に基づいて選択することが可能である。
【００８５】
本発明に従って治療する対象は、以前の薬物治療、関連病理、遺伝子型、危険因子への曝露、ウイルス感染のような炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患に関連するいくつかの基準、並びに撮像方法及び免疫学的、生化学的、酵素的、化学的又は核酸検出方法の手段により評価することが可能な任意の他の適切なバイオマーカーに基づいて選択することが可能である。
【００８６】
ＮＴＺ又は類似体の合成は、例えば、（Ｒｏｓｓｉｇｎｏｌ  ａｎｄ  Ｃａｖｉｅｒ、１９７５年）に記載される通りに、又は当業者が知っている他の任意の合成方法により実行可能である。
【００８７】
特定の実施形態では、炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患の治療は、ＮＴＺ及びＮＴＺ類似体から選択される少なくとも２つの化合物を含む組成物の投与を含んでいてもよい。この実施形態では、投与された少なくとも１つのＰＰＡＲアゴニストは２つの化合物と同じ組成物中で、又は異なる組成物中でのような分離した形態で提供される。
【００８８】
別の実施形態では、本発明の組合せは、治療において同時、連続又は分離した投与用であり、したがって、おそらく異なる組成物中に含まれる。連続投与の場合、ＮＴＺ及び／又はＮＴＺ類似体はＰＰＡＲアゴニストに先立って投与してもよく、又はＰＰＡＲアゴニストはＮＴＺ及び／若しくはＮＴＺ類似体に先立って投与される。
【００８９】
ＮＴＺ及びＮＴＺ類似体は、薬学的に許容される塩、特に医薬使用に適合する酸性又は塩基性塩として処方することが可能である。ＮＴＺ及びＮＴＺ類似体の塩は、薬学的に許容される酸付加塩、薬学的に許容される塩基付加塩、薬学的に許容される金属塩、アンモニウム及びアルキル化アンモニウム塩を含む。これらの塩は、化合物の最終精製ステップ中に、又は塩をすでに精製された化合物中に組み込むことにより得ることが可能である。
【００９０】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物と１つ以上のＰＰＡＲアゴニストの組合せは、式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の化合物又はＰＰＡＲアゴニストの有機又は無機塩基又は酸から得られる薬学的に許容される非毒性塩として処方することが可能である。これらの塩は、化合物の最終精製ステップ中に、又は塩をすでに精製された化合物中に組み込むことにより得ることが可能である。
【００９１】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物及び１つ以上のＰＰＡＲアゴニストを含む本発明の医薬組成物は、薬学的状況内で許容される１つ又はいくつかの賦形剤又は溶媒（例えば、医薬用途に適合し当業者であれば周知の生理食塩水、生理溶液、等張液、等）も含むことが可能である。
【００９２】
これらの組成物は、分散剤、可溶化剤、安定化剤、保存剤、等の間から選択される１つ若しくはいくつかの作用物質又は溶媒も含むことが可能である。これらの製剤に有用な作用物質又は溶媒（液体及び／又は注射液及び／又は固体）は特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、ラクトース、植物油、アカシア、リポソーム、等である。
【００９３】
これらの組成物は、最終的には持効性及び／又は徐放性放出を保証するガレヌス形態又はデバイスを用いて、注射可能な懸濁液、ゲル、オイル、軟膏、ピル、座薬、粉末、ゲルカップ、カプセル、エアゾール、等の形態で処方することが可能である。この種の製剤では、セルロース、炭酸塩又はデンプンのような作用物質を有利に使用することが可能である。
【００９４】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物及び１つ以上のＰＰＡＲアゴニストを含む本発明の医薬組成物は、異なる経路により及び異なる形態で投与してもよい。例えば、化合物は、全身的な方法を介して、経口的に、非経口的に、吸入により、鼻噴霧により、鼻滴下注入により、又は、例えば、静脈内に、筋肉内経路により、皮下経路により、経皮経路により、局所的経路により、動脈内経路により、等のような注射によって投与してもよい。
【００９５】
当然のことながら、投与経路は、当業者には周知である手順に従って、１つ以上のＰＰＡＲアゴニストと組み合わせたＮＴＺ及び／又はＮＴＺ類似体の形態に適合させる。
【００９６】
１つ以上のＰＰＡＲアゴニストと組み合わせたＮＴＺ及び／又はＮＴＺ類似体は治療有効量で投与される。本発明の文脈内では、用語「有効量」とは、所望の治療結果をもたらすのに十分な化合物の量のことである。
【００９７】
投与に関連する回数及び／又は用量は、患者、病理、投与の形態、等の相関関係で、当業者であれば適応させることが可能である。典型的には、本発明の組合せ（医薬組成物又はキットオブパーツの形態のような）は、５０ｍｇ／日〜２０００ｍｇ／日、及び特に１００ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日のような０．０１ｍｇ／日〜４０００ｍｇ／日で含まれる、式（Ｉ）又は（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物のようなＮＴＺ若しくはＮＴＺ類似体又はＰＰＡＲアゴニストについての用量で線維性疾患の治療のために投与することが可能である。
【００９８】
前記組合せ中のＰＰＡＲアゴニストの用量は、ＰＰＡＲアゴニストそれ自体により変動してもよい。用量はＰＰＡＲアゴニストの効率に適合される。
【００９９】
本発明の好ましい実施形態では、ＮＴＺは、ＮＴＺでは１００ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日（１０００ｍｇ／日のような）（特に２０ｍｇ／日〜４０ｍｇ／日）及びエラフィブラノールでは８０〜１２０ｍｇ／日で含まれる用量でエラフィブラノールと組み合わせて使用される。
【０１００】
別の好ましい実施形態では、活性成分は、経口摂取を目的とするピルの形態で１つ以上の医薬組成物として投与される。
【０１０１】
投与は、毎日又は必要ならば１日あたり数回でさえ実施することが可能である。
【０１０２】
本発明は、以下の非限定的実施例を参照してさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】ＴＧＦβ誘発性ｈＨＳＣにおけるエラフィブラノール及びニタゾキサニドの抗線維性効果。血清由来ＨＳＣは、線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍｌ）での活性化前にエラフィブラノール（Ａ）又はニタゾキサニド（Ｂ）又はベザフィブラート（Ｃ）と一緒に１時間プレインキュベートした。４８時間のインキュベーション後、α−ＳＭＡの発現はＥＬＩＳＡにより測定した。得られた値は、ＴＧＦβ１対照に対するパーセント阻害に変換した。データは平均（３通り）±標準偏差（ＳＤ）として表示されている。カーブフィッティング及び５０％阻害濃度（ＩＣ５０）の計算はＸＬＦｉｔソフトウェア５．３．１．３を用いて実施した。
【図２】ＴＧＦβ誘発性ｈＨＳＣにおいてエラフィブラノールとニタゾキサニドの組合せはα−ＳＭＡを相乗的に阻害する。組合せは用量応答マトリックスフォーマットにおいて試験し、エクセスオーバーブリス（ＥＯＢ）アディティビズム（ｅｘｃｅｓｓ  ｏｖｅｒ  Ｂｌｉｓｓ（ＥＯＢ）  ａｄｄｉｔｉｖｉｓｍ）モデルに従って分析した。それぞれのＤＭＳＯ対照を含む、エラフィブラノール（横の列）及びニタゾキサニド（縦の列）の希釈系列を調製した。得られた混合物は、線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍｌ）での活性化の１時間前に、血清由来ＨＳＣに添加した。（Ａ）すべての組合せ対についてのＴＧＦβ１対照に対するα−ＳＭＡ阻害のパーセント。データは４通りの平均として表示されている。（Ｂ）ＥＯＢスコアーは材料及び方法に記載される通りに計算した。プラスのＥＯＢ値を有するいかなる化合物対も相乗的と見なした（淡い灰色から黒色まで色付けした）。すべての組合せを含む全ＥＯＢスコアーも計算した。（Ｃ）相乗的組合せ対由来のデータ値は棒グラフ表示にプロットした。データは平均（４通り）±標準偏差（ＳＤ）として表示している。ＥＯＨＳＡモデルは、選択されたＮＴＺ／ＥＬＡ組合せ対の相乗作用を確かめるために材料及び方法のセクションに記載される通りに使用した。
【図３】ＴＧＦβ誘発性ｈＨＳＣにおいてＰＰＡＲアゴニストとニタゾキサニドの組合せはα−ＳＭＡを相乗的に阻害する。組合せは用量応答マトリックスフォーマットにおいて試験し、エクセスオーバーブリス（ＥＯＢ）アディティビズムモデルに従って分析した。それぞれのＤＭＳＯ対照を含む、サログリタザル、セラデルパル及びラニフィブラノール並びにニタゾキサニドの希釈系列を調製した。得られた混合物は、線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍｌ）での活性化の１時間前に、血清由来ＨＳＣに添加した。すべての組合せ対についてのＴＧＦβ１対照に対するα−ＳＭＡ阻害のパーセントを計算した。ＥＯＢスコアーは材料及び方法に記載される通りに計算した。プラスのＥＯＢ値を有するいかなる化合物対も相乗的と見なした（淡い灰色から黒色まで色付けした）。（Ａ）サログリタザル（ＳＡＲＯ）（Ｂ）セラデルパル（ＳＥＬＡ）（Ｃ）ラニフィブラノール（ＬＡＮＩ）相乗的組合せ対由来のＴＧＦβ１対照に対するα−ＳＭＡ阻害のパーセントは棒グラフ表示にプロットした。データは平均（４通り）±標準偏差（ＳＤ）として表示している。ＥＯＨＳＡモデルは、組合せ対の相乗作用を確かめるために材料及び方法のセクションに記載される通りに使用した。
【図４】肝臓コラーゲン含有量。生後６週間のＣ５７ＢＬ／６マウスに、対照（ＣＳＡＡ）食、ＣＤＡＡ＋１％ＣＨＯＬ（ＣＤＡＡｃ）食、又はＮＴＺ（１２週間で３０ｍｇ／ｋｇ／日又は１００ｍｇ／ｋｇ／日）又はエラフィブラノール（１ｍｇ／ｋｇ／日又は３ｍｇ／ｋｇ／日）又はエラフィブラノールとＮＴＺの組合せ（それぞれ１＋３０ｍｇ／ｋｇ／日、１＋１００ｍｇ／ｋｇ／日、３＋３０ｍｇ／ｋｇ／日及び３＋１００ｍｇ／ｋｇ／日）を補充したＣＤＡＡｃ食を与えた。グラフごとに、曝露用量の正確な量を示した。屠殺後、肝臓コラーゲン含有量を決定した。
【図５】肝線維症パーセント。生後６週間のＣ５７ＢＬ／６マウスに、対照（ＣＳＡＡ）食、ＣＤＡＡ＋１％ＣＨＯＬ（ＣＤＡＡｃ）食、又はＮＴＺ（１２週間で３０ｍｇ／ｋｇ／日又は１００ｍｇ／ｋｇ／日）又はエラフィブラノール（１ｍｇ／ｋｇ／日又は３ｍｇ／ｋｇ／日）又はエラフィブラノールとＮＴＺの組合せ（それぞれ１＋３０ｍｇ／ｋｇ／日、１＋１００ｍｇ／ｋｇ／日、３＋３０ｍｇ／ｋｇ／日及び３＋１００ｍｇ／ｋｇ／日）を補充したＣＤＡＡｃ食を与えた。グラフごとに、曝露用量の正確な量を示した。屠殺後、肝線維症面積を決定した。
【図６】肝臓αＳＭＡ遺伝子発現。
【図７】肝臓ＣＣＲ２遺伝子発現。
【図８】肝臓ＣＣＲ５遺伝子発現。
【図９】肝臓Ｃｏｌ１ａ２遺伝子発現。
【図１０】肝臓ＭＭＰ２遺伝子発現。
【図１１】肝臓ＴＩＭＰ２遺伝子発現。
【図１２】肝臓ＴＧＦβ１遺伝子発現。
【発明を実施するための形態】
【０１０４】
図において、表において及び本文において使用される略語
ＡＰ−１              活性化タンパク質
ＡＳＢＴｉ            アピカルナトリウム共依存性胆汁酸トランスポーター阻害剤
ＡＳＫ１              シグナル調節キナーゼ１
ＡＴ１                アンジオテンシン１
ＣＯＰＤ              慢性閉塞性肺疾患
ＣＴＧＦ              結合組織成長因子
ＤＧＡＴ              ジアシルグリセロール−Ｏ−アシルトランスフェラーゼ
ＤＭＳＯ              ジメチルスルホキシド
ＤＮＡ                デオキシリボ核酸
ＤＰＰ４              ジペプチジルペプチダーゼ
ＥＬＩＳＡ            酵素結合免疫アッセイ
ＥＯＢ                エクセスオーバーブリス
ＦＡＢＡＣ            脂肪酸胆汁酸コンジュゲート
ＦＢＳ                ウシ胎仔血清
ＦＧＦ                線維芽細胞成長因子
ＦＸＲ                ファルネソイドＸ受容体
ＧＤＦ                増殖分化因子
ＧＬＰ−１            グルカゴン様ペプチド−１
ＧＰＣＲ              Ｇタンパク質共役型受容体
ＨＢＶ                Ｂ型肝炎ウイルス
ＨＣＶ                Ｃ型肝炎ウイルス
１５−ＨＥＰＥ        ５−ヒドロキシエイコサペンタエン酸
ＨＩＶ                ヒト免疫不全ウイルス
ＨＳＣ                肝星細胞
ＩＣ５０                ５０％阻害濃度
ｉＮＯＳ              誘導型一酸化窒素合成酵素
ＩＰＦ                特発性肺性線維症
ＬＡＮＩ              ラニフィブラノール
ＬＢＤ                リガンド結合ドメイン
ＬＰＳ                リポ多糖
ＬＴ                  ロイコトリエン
ＭＡＰＫ              マイトジェン活性化プロテインキナーゼ
ＭＭＰ−９            メタロプロテアーゼ９
ＭＭＰａｓｅ          メタロプロテアーゼ
ＮＡＤＰＨ            ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸
ＮＡＦＬＤ            非アルコール性脂肪性肝疾患
ＮＡＳＨ              非アルコール性脂肪性肝炎
ＮＦ−κＢ            核内因子カッパＢ
ＮＯＸ                ＮＡＤＰＨオキシダーゼ
ＮＳＡＩＤｓ          非ステロイド性抗炎症剤
ＮＴＺ                ニタゾキサニド
ＰＡＲ                プロテアーゼ活性化受容体
ＰＢＣ                原発性胆汁性胆管炎
ＰＤＥ                ホスホジエステラーゼ
ＰＤＧＦ              血小板由来成長因子
ＰＦＩＣ３            家族性肝内胆汁うっ滞型３
ＰＦＯＲ              ピルベート：フェレドキシン酸化還元酵素
ＰＰＡＲ              ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体
ＰＰＲＥ              ＰＰＡＲ応答エレメント
ＰＳＣ                原発性硬化性胆管炎
ＲＯＣＫ              Ｒｈｏ関連タンパク質キナーゼ
ＲＴＫ                受容体チロシンキナーゼ
ＳＡＲＯ              サログリタザル
ＳＤ                  標準偏差
ＳＥＬＡ              セラデルパル
ＳＧＬＴ              ナトリウムグルコース輸送
ＳＴＡＴ              転写のシグナルトランスデューサー及び活性化因子
ＴＧＦβ              形質転換成長因子β
ＴＧＦＢＲＩ          ＴＧＦβ受容体Ｉ型
ＴＧＦＢＲＩＩ        ＴＧＦβ受容体ＩＩ型
ＴＨＢＳ１            トロンボスポンジン１
ＴＨＲβ              甲状腺受容体β
ＴＩＭＰ              メタロプロテアーゼの組織阻害剤
ＴＬＲ−４            Ｔｏｌｌ様受容体４
ＴＺ                  チゾキサニド
ＴＺＧ                チゾキサニドグルクロニド
ＶＡＰ−１            血管接着タンパク質−１
【実施例】
【０１０５】
材料及び方法
化合物はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｆｌｕｋａ  カタログ番号４１６４０）に溶解させた。ニタゾキサニド（ＩＮＴＥＲＣＨＩＭ  カタログ番号ＲＱ５５０Ｕ）、チゾキサニド（ＩＮＴＥＲＣＨＩＭ  カタログ番号ＲＰ２５３）、ラニフィブラノール（ＡＲＫ  ＰＨＡＲＭ  カタログ番号ＡＫ６８９１０２）、セラデルパル（ＡＲＫ  ＰＨＡＲＭ  カタログ番号ＡＫ６８９１４６）及びサログリタザル（ＣＨＥＭＥＸＰＲＥＳＳ  カタログ番号ＹＹ−１９９７Ａ）は市販のものを入手した。
【０１０６】
ｈＨＳＣ培養
ヒト始原肝星細胞（ｈＨＳＣ）（ｉｎｎｏｐｒｏｔ）を、２％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  カタログ番号００１０）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  カタログ番号０５０３）及び星細胞成長補助剤（ＳｔｅＣＧＳ；ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  カタログ番号５３５２）を補充したＳＴｅＣＭ培地（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  カタログ番号５３０１）で培養した。細胞培養フラスコは、接着をよくするためにポリ−Ｌ−リジン（Ｓｉｇｍａ  カタログ番号Ｐ４７０７）で被覆した。
【０１０７】
組成物の調製
２成分組合せマトリックス（ＮＴＺ／エラフィブラノール）
これらの実験では、チェッカーボードマトリックスを作成した。ＮＴＺ及びエラフィブラノールストックは、９６ウェルプレート又は３８４ウェルプレートの横の列（ＰＰＡＲアゴニストエラフィブラノール）の５ポイントシリーズで、及び縦の列ＮＴＺ）の６ポイントシリーズでＤＭＳＯに連続希釈した。その後、５×６組合せマトリックスを、すべての単剤濃度の１対１混合により作成した。化合物ごとの試験濃度は、ＴＧＦ−β１で刺激されたＨＳＣモデルにおいてα−ＳＭＡ含有量を測定することにより得られる単剤としてそれぞれの化合物のそれぞれのＩＣ５０に基づいて選んだ。
【０１０８】
次に、２倍及び４倍の濃度並びに２分の１及び４分の１濃度を選択した。
【０１０９】
ＴＧＦ−β１を用いたｈＨＳＣの活性化及び化合物処置
ヒト始原肝星細胞（ｈＨＳＣ）（ｉｎｎｏｐｒｏｔ）を上記の通りに、標準条件下で培養した。それに続いて細胞を、ＥＬＩＳＡによるα−ＳＭＡの測定のために、９６ウェルプレートに２×１０４細胞／ウェル及び３８４ウェルプレートに６５００細胞／ウェルの密度で蒔いた。次の日、細胞培養培地を取り除き、細胞はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  カタログ番号１４１９０）で洗浄した。ｈＨＳＣは、無血清及びＳｔｅＣＧＳ無し培地で２４時間欠乏させた。
【０１１０】
ＮＴＺ、エラフィブラノール又は他のＰＰＡＲアゴニスト及びそれぞれのＮＴＺ／エラフィブラノール又はＰＰＡＲアゴニスト組合せを用いた処置では、血清欠乏ｈＨＳＣは化合物と一緒に１時間プレインキュベートし、続いて無血清及びＳｔｅＣＧＳ無し培地において追加の４８時間の期間、線維形成促進性刺激ＴＧＦ−β１（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  カタログ番号１００−２１、１ｎｇ／ｍＬ）を添加した。
【０１１１】
α−ＳＭＡ  ＥＬＩＳＡ
α−ＳＭＡのレベルはサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して測定した。手短に述べれば、ＥＬＩＳＡプレートのウェルにまず４℃で一晩捕捉抗体（マウスモノクローナル抗ＡＣＴＡ２、Ａｂｎｏｖａ）で被覆した。ＰＢＳ＋０．２％のＴｗｅｅｎ２０で３回洗浄した後、ＰＢＳ＋０．２％のＢＳＡからなるブロッキング液を添加して１時間置き、次にさらに洗浄サイクルにかけた。細胞可溶化物は、室温で２時間の期間、捕捉抗体への結合のためにウェルに移した。洗浄手順後、検出抗体（ビオチン化マウスモノクローナル抗ＡＣＴＡ２、Ａｂｎｏｖａ）を室温で添加して２時間置き、続いて３回洗浄した。検出では、ＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジン（Ｒ＆Ｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  カタログ番号ＤＹ９９８）をまず室温で３０分間適用させた。洗浄後、ＨＲＰ基質ＴＭＢ（ＢＤ、番号５５５２１４）を添加し、室温暗所で７分間インキュベートした。酸化させると、ＴＭＢは水溶性の青色反応生成物を形成し、これは硫酸の添加で黄色になり（溶解停止）、分光光度計を使用する４５０ｎｍでの強度の正確な測定が可能になる。発色は溶解物中に存在するα−ＳＭＡの量に正比例する。
【０１１２】
エクセスオーバーブリス（ＥＯＢ）法による相乗作用の決定及びＥＯＳＨＡ（エクセスオーバーハイエスト単剤）による確認
αＳＭＡ  ＥＬＩＳＡアッセイで得られた値は、まずＴＧＦ−β１対照に対するパーセント阻害に変換した。次に、これらのパーセント阻害を使用して、ＥＯＢ（エクセスオーバーブリス）を決定して薬剤組合せの相乗効果を明確にした。予測されるブリスアディティビズムスコアー（Ｅ）は第一に式：
Ｅ＝（Ａ＋Ｂ）−（Ａ×Ｂ）により決定し、Ａ及びＢは所与の用量でのＮＴＺ（Ａ）及びエラフィブラノール、サログリタザル、セラデルパル又はラニフィブラノール（Ｂ）のパーセント阻害である。同じ用量での組合せＮＴＺ／エラフィブラノール、サログリタザル、セラデルパル又はラニフィブラノールのブリス予測と観測された阻害の差は「エクセスオーバーブリス」スコアーである。
【０１１３】
・エクセスオーバーブリススコアー＝０は、組合せ処置が相加的であることを示している（独立した経路効果について予測される通り）
・エクセスオーバーブリススコアー＞０は、相加的よりも大きな活性を示している（相乗的）；及び
・エクセスオーバーブリススコアー＜０は、組合せが相加的よりも低いことを示している（拮抗的）。
組合せＮＴＺ＋エラフィブラノールでは、付加的な全ブリススコアーはすべてのＥＯＢの合計により計算した。
【０１１４】
ＥＯＨＳＡは薬剤組合せの評価のためにＦＤＡが使用する相乗作用の標準尺度であり、薬剤組合せにより生み出される効果と組み合わせた場合と同じ濃度で組合せ単剤のそれぞれにより生み出される最大の効果の差として計算される（Ｂｏｒｉｓｙら、２００３年）。ＥＯＢ法により同定される相乗的組合せでは、実験％阻害は棒グラフでプロットされ、ＮＴＺ／ＥＬＡと単剤の間の観察される差の有意性は、一元配置分散分析及び未修正フィッシャーＬＳＤ事後により評価した（＊：ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【０１１５】
線維を形成しているＮＡＳＨ（１２週間）の場合、慢性ＣＤＡＡ＋１％コレステロールモデルにおけるエラフィブラノール、ニタゾキサニド及び組合せエラフィブラノール＋ニタゾキサニドの評価
実験設計
コリン欠乏及びＬアミノ酸限定（ＣＤＡＡ）食はコリンを欠き、コリンは肝臓β酸化及び極めて低密度のリポタンパク質産生に不可欠であり、肝細胞を誘導して脂肪を貯蔵させその後細胞損傷を引き起こすと考えられている。ＣＤＡＡ食誘発性齧歯類モデルは比較的短期間内に線維症を発症し、ＮＡＳＨ病理、特に線維症の可逆性を迅速に研究するのに理想的である。
【０１１６】
ＮＡＳＨのいくつかのマウスモデルではコレステロール摂取量が増加すると肝線維症が加速される。肝線維症の悪化は主に肝星細胞での遊離コレステロールの蓄積を含み、そのために形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）に対する細胞の感受性が増し、その後肝線維症はさらに悪化する。
【０１１７】
本研究では、１％のコレステロールを補充されたＣＤＡＡ食を与えられるＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスにおいて肝線維症に対するニタゾキサニドの効果を調べた。
【０１１８】
エラフィブラノール単独、ＮＴＺ単独及び両方の組合せの予防効果をＣＤＡＡ＋１％コレステロール食を与えたマウスの線維を形成しているＮＡＳＨモデルにおいて評価した。生後６週間のオスＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスに対照（ＣＳＡＡ）食、ＣＤＡＡ＋１％コレステロール食、又はエラフィブラノール１及び３ｍｇ／ｋｇ／日、ＮＴＺ３０及び１００ｍｇ／ｋｇ／日を補充したＣＤＡＡ＋１％コレステロール食、若しくは組合せ薬物（エラフィブラノール１及び３ｍｇ／ｋｇ／日をＮＴＺ３０及び１００ｍｇ／ｋｇ／日と組み合わせた）を１２週間与えた。
【０１１９】
体重及び食糧摂取量は週ごとに２度モニターした。処置の最終日、マウスは６時間の絶食期間後屠殺した。生化学及び組織学的研究のために肝臓を速やかに切除した。
【０１２０】
すべての動物手順は、標準プロトコルに従って、並びに実験動物の適切な世話及び使用についての標準推奨通りに実施した。
【０１２１】
生後６週間のＣ５７ＢＬ／６Ｊオスマウスに、表１に詳述される実験計画に従って１２週間餌を与えた。
【０１２２】
【表１】
2020506920.tif 000018
【０１２３】
対照はＣＳＡＡ食であった。
一部のマウスにはＣＤＡＡｃ食を与えた。
一部のマウスにはエラフィブラノール１又は３ｍｇ／ｋｇ／日を補充したＣＤＡＡｃ食を与えた。
一部のマウスにはＮＴＺ３０又は１００ｍｇ／ｋｇ／日を補充したＣＤＡＡｃ食を与えた。
一部のマウスにはエラフィブラノールとＮＴＺ組合せを異なる比：１＋３０、１＋１００、３＋３０及び３＋１００ｍｇ／ｋｇ／日で補充したＣＤＡＡｃ食を与えた。
【０１２４】
ＮＴＺを３０ｍｇ／ｋｇで補充したＣＤＡＡｃ食に対応する群は、３０ｍｇ／ｋｇ／日の理論的用量に対応するＣＤＡＡ食＋ニタゾキサニド０．０２％（ｗｔ／ｗｔ）を与えられるＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスとも名付けられる。
【０１２５】
ＮＴＺを１００ｍｇ／ｋｇで補充したＣＤＡＡｃ食に対応する群は、１００ｍｇ／ｋｇ／日の理論的用量に対応するＣＤＡＡ食＋ニタゾキサニド０．０６６７％（ｗｔ／ｗｔ）を与えられるＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウスとも名付けられる。
【０１２６】
餌はＳｓｎｉｆｆ（登録商標）社（Ｓｏｅｓｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。
【０１２７】
ニタゾキサニド（表１の注記参照）はＳｓｎｉｆｆ（登録商標）によりＣＤＡＡ＋１％コレステロール食中に粉末形態で要求される用量まで組み込まれた。
【０１２８】
ニタゾキサニドの注記及びバッチ番号は表２にまとめられている。
【０１２９】
【表２】
2020506920.tif 000019
【０１３０】
用量ごとに、正確な用量の計算は以下の例に従って行った。これにより、それぞれのマウス群が正確に摂取したそれぞれの製品の正確な用量を計算に入れることが可能になる。
【０１３１】
実際の処置用量の計算：ニタゾキサニド０．０２％（ｗｔ／ｗｔ）の場合の例
・餌摂取量は、グラム餌／グラム動物／日で表される
・餌中０．０２％のニタゾキサニド
○０．０２ｇのｃｐｄ／１００ｇの餌＝０．２ｍｇのｃｐｄ／ｇの餌
・ｃｐｄの実際の用量：
○０．２ｍｇのｃｐｄ／グラム餌／グラム動物／日
○（０．２ｍｇのｃｐｄ／グラム餌／グラム動物／日）×１０００＝（０．２ｍｇのｃｐｄ／グラム餌／ｋｇの動物／日）＝２００ｍｇのｃｐｄ／グラム餌／ｋｇの動物／日
したがって、グラム餌／グラム動物／日で表される餌摂取量値に２００を掛ける；得られた値は、ｍｇのＮＴＺ／ｋｇの動物／日で表される実際の投与用量に一致する。
【０１３２】
同じ様に、
・ＮＴＺ０．００６６７％ｗｔ／ｗｔの用量では、実際の処置用量は餌摂取量値（グラム餌／グラム動物／日）に６６．７を掛けることにより得られた。
【０１３３】
・ＮＴＺ０．０６６７％ｗｔ／ｗｔの用量では、実際の処置用量は餌摂取量値（グラム餌／グラム動物／日）に６６７を掛けることにより得られた。
【０１３４】
計算に従えば、計算された用量対推定用量は以下の表３及び４で与えられる。
【０１３５】
【表３】
2020506920.tif 000020
【０１３６】
【表４】
2020506920.tif 000021
【０１３７】
体重及び餌摂取量は研究中ずっと週２度記録した。
【０１３８】
処置期間の終了時、動物はイソフルランで麻酔にかけ、血液試料は下記の通りに採取した。次に動物は頸椎脱臼により屠殺し、脳切除及び秤量のために首を切断した。肝臓も収集して秤量した。肝臓の一部は４％ホルマリンで固定してパラフィンに包埋し、組織学的分析に使用した。残りの肝臓は液体窒素で瞬間凍結させ、さらなる分析のために使用するまで−８０℃に保った。
【０１３９】
血液試料採取は６時間の絶食期間に続く屠殺時に実施した。血液試料は後眼窩穿刺（ｒｅｔｒｏ  ｏｒｂｉｔａｌ  ｐｕｎｃｔｕｒｅ）により麻酔下で引き出した。血液を含有するヘパリンチューブを急速に遠心分離し（４，０００ｒｐｍ／４℃で１５分間）、血漿画分を収集した。血漿アリコートはさらなる分析まで−２０℃で保存した。
【０１４０】
血漿生化学
アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）
ＡＬＴの血漿濃度は、Ｄａｙｔｏｎａ  ａｕｔｏｍａｔｅの適切なＲａｎｄｏｘキット（Ｒａｎｄｏｘ、カタログ番号ＡＬ３８０１）を使用して決定した。手短に述べれば、血漿試料内のＡＬＴは、αオキソグルタル酸及びＬ−アラニンをＬ−グルタミン酸塩及びピルベートに酵素的に変換する。ＮＡＤＨの存在下で、生成したピルベートは乳酸デヒドロゲナーゼにより転換されてＬ−乳酸塩及びＮＡＤ＋を形成する。反応の動態学は研究されており、ＡＬＴの血漿レベルを計算することができる。結果はＵ／Ｌで表される。
【０１４１】
アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）
ＡＳＴの血漿濃度は、Ｄａｙｔｏｎａ  ａｕｔｏｍａｔｅの適切なＲａｎｄｏｘキット（Ｒａｎｄｏｘ、カタログ番号ＡＳ３８０４）を使用して決定した。手短に述べれば、血漿試料内のＡＳＴは、αオキソグルタル酸塩及びＬ−アスパラギン酸塩をＬ−グルタミン酸塩及びオキサロ酢酸塩に酵素的に変換する。ＮＡＤＨの存在下で、生成したオキサロ酢酸塩はリンゴ酸デヒドロゲナーゼにより転換されてＬ−リンゴ酸塩及びＮＡＤ＋を形成する。反応の動態学は研究されており、ＡＳＴの血漿レベルを計算することができる。結果はＵ／Ｌで表される。
【０１４２】
組織学
屠殺時、肝臓試料は組織学的分析のために処理され、以下の通りに試験した。
【０１４３】
組織包埋及び切片化
肝臓切片は先ずホルマリン４％液中１２時間固定した。次に、肝臓片はＰＢＳで３０分間洗浄し、エタノール液（７０、８０、９５及び１００％エタノールの連続浴槽）中で脱水した。肝臓片はキシレンの３つの異なる浴槽（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号５３４０５６）、続いて液体パラフィン（６０℃）の２つの浴槽でインキュベートした。次に、肝臓片はＨｉｓｔｏｗａｘ（登録商標）で穏やかに満たされたラック中に入れ組織を完全に覆った。
【０１４４】
組織片を含有するパラフィンブロックはラックから取り除き、室温で保存した。肝臓塊は３μｍ薄片に切断した。
【０１４５】
ピクロシリウスレッド染色
肝臓切片は脱パラフィンし、再水和し、０．５％酢酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号６９５０９２）の浴槽ですすぐ前にＦａｓｔ  Ｇｒｅｅｎ  ＦＣＦ０．０４％（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｆ７２５８）の溶液中１５分間インキュベートした。次に、肝臓切片は水ですすぎ、飽和水性ピクリン酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｐ６７４４）中Ｆａｓｔ  Ｇｒｅｅｎ  ＦＣＦ０．０４％〜０．１％シリウスレッド（Ｄｉｒｅｃｔ  Ｒｅｄ８０、Ｆｌｕｋａ  カタログ番号４３６６５）の溶液中３０分間インキュベートした。次に切片は脱水し、ＣＶ  Ｍｏｕｎｔ培地（Ｌｅｉｃａ、カタログ番号１４０４６４３００１１）を使用してマウントした。
【０１４６】
組織学的検査
それぞれの肝臓検体の供給源に盲検の専門家が組織学的検査を実施した。バーチャルスライドは、３Ｄ  ＨｉｓｔｅｃｈからＰａｎｎｏｒａｍｉｃ  ２５０スキャナーを使用して作成した。Ｑｕａｎｔ  Ｃｅｎｔｅｒソフトウェア（Ｐａｔｔｅｒｎ  Ｑｕａｎｔ及びＨｉｓｔｏ  Ｑｕａｎｔモジュールを含む、３Ｄ  Ｈｉｓｔｅｃｈ）を使用して、コラーゲン染色域を定量化した。手短に述べれば、Ｐａｔｔｅｒｎ  Ｑｕａｎｔを使用して組織を検出し、その表面を測定した。次に、Ｈｉｓｔｏ  Ｑｕａｎｔを使用して、色閾値法に基づいて、染色コラーゲン含有量を検出しその表面を測定した。次に線維症域は、動物ごとの全組織に対するコラーゲン表面のパーセントとして表した。
【０１４７】
肝線維症ステージ分類は、ＣＲＮ線維症基準を使用して盲検評価した。
【０１４８】
パラメータ、定量化／計数化及び検討した分野の数に関する詳細は以下の表５に提供されている。
【０１４９】
【表５】
2020506920.tif 000022
【０１５０】
統計解析
実験結果は平均±標準偏差（ＳＤ）として表され、棒グラフ又は曲線としてプロットした。統計解析は、Ｐｒｉｓｍバージョン７を使用して以下の通りに実施した。屠殺後に実施した測定では、ＣＳＡＡ対ＣＤＡＡ＋１％コレステロール群を、スチューデントｔ検定（＃：ｐ＜０．０５；＃＃：＜０．０１；＃＃＃：ｐ＜０．００１）により又はマンホイットニー検定（＄：ｐ＜０．０５；＄＄：＜０．０１；＄＄＄：ｐ＜０．００１）により比較した。処置群は、一元配置分散分析及び未修正フィッシャーＬＳＤ事後によりＣＤＡＡ＋１％コレステロール食と比較した（＊：ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．０１；＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【０１５１】
肝臓コラーゲン含有量の測定
肝臓コラーゲン含有量は適切なＱｕｉｃｋＺｙｍｅキット（Ｔｏｔａｌ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ａｓｓａｙ、カタログ番号ＱＺＢ−ｔｏｔｃｏｌ５）を使用して決定した。アッセイはヒドロキシプロリンの検出に基づいており、これはコラーゲンの三重螺旋体で主に見出される非タンパク質原性アミノ酸である。したがって、組織加水分解物中のヒドロキシプロリンは、組織に存在するコラーゲンの量の直接の尺度として使用することが可能である（プロコラーゲン、成熟コラーゲン及びコラーゲン分解産物の区別はない）。
【０１５２】
ヒドロキシプロリンの投与前には９５℃、６ＭのＨＣｌでの組織試料の完全な加水分解が必要である。アッセイにより５７０ｎｍで最大吸光度を有する色素原が生成する。結果はｍｇコラーゲン／ｇ肝臓として表される。
【０１５３】
プロコラーゲンＩＩＩ  Ｎ終端プロペプチド（ＰＩＩＩＮＰ）
ＰＩＩＩＮＰの血漿濃度は、Ｃｌｏｕｄ−Ｃｌｏｎｅ  Ｃｏｒｐ社製のＥＬＩＳＡアッセイ（カタログ番号ＳＥＡ５７３Ｒａ）を製造業者の説明書に従って使用して決定した。マイクロタイタープレートにＰＩＩＩＮＰに特異的な抗体をプレコートする。標準又は試料を、ＰＩＩＩＮＰに特異的なビオチンコンジュゲート抗体と一緒に適切なマイクロタイタープレートウェルに添加する。次に、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートしたアビジンをそれぞれのマイクロプレートウェルに添加しインキュベートする。ＴＭＢ基質溶液を添加した後、ＰＩＩＩＮＰ、ビオチンコンジュゲート抗体及び酵素コンジュゲートアビジンを含有するウェルのみが色の変化を示す。酵素基質反応は硫酸溶液の添加により終了させ、色の変化は４５０ｎｍ±１０ｎｍの波長で分光光度的に測定する。次に試料中のＰＩＩＩＮＰの濃度は、試料のＯＤを標準曲線と比較することにより決定する。結果はｐｇ／ｍＬで表される。
【０１５４】
遺伝子発現
ＲＮＡ抽出
肝臓全ＲＮＡは、Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ（登録商標）９６キット（Ｍａｃｈｅｒｅｙ  Ｎａｇｅｌ）を製造業者の説明書に従って使用して単離した。１５０ｎｇの全ＲＮＡは、ＲＴバッファー１×（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  カタログ番号Ｐ／ＮＹ０２３２１）、１ｍＭのＤＴＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  カタログ番号Ｐ／ＮＹ００１４７）、０．５ｍＭのｄＮＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、２００ｎｇ  ｐｄＮ６（Ｒｏｃｈｅ  カタログ番号１１０３４７３１００１）及び４０Ｕのリボヌクレアーゼ阻害剤（Ｐｒｏｍｅｇａ  カタログ番号Ｎ２５１５）の存在下、Ｍ−ＭＬＶ−ＲＴ（モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  カタログ番号２８０２５）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。
【０１５５】
次に、定量的ＰＣＲを、ＣＦＸ９６  Ｔｏｕｃｈ（商標）リアルタイムＰＣＲ検出システム（Ｂｉｏｒａｄ）を使用して実行した。手短に述べれば、ＰＣＲ反応を、ｉＱ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘキット（Ｂｉｏｒａｄ  カタログ番号１７０８８７）を使用して、９６ウェルプレートにおいて５×希釈逆転写混合物の５μｌで実施した。実験条件は、２０μＬの容積反応並びに０．５μＬのそれぞれのリバース及びフォワードプライマー（１０ｐモル）であった。
【０１５６】
【表６】
2020506920.tif 000023
【０１５７】
発現レベルは参照としてＧＡＰＤＨ遺伝子の発現を使用して正規化した。
【０１５８】
遺伝子ごとに、ＰＣＲ反応効率が１００％に近付き相関係数が１に近づくように、最良のポイント（少なくとも３ポイント）を選択することにより標準曲線を描いた。発現レベルは、ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子の両方についての標準曲線方程式を使用して決定した（それぞれの標的遺伝子の特定のＰＣＲ効率を考慮して）。
【０１５９】
結果及び結論
分化した筋線維芽細胞の異常な持続性は多くの線維性疾患の特徴である。
【０１６０】
肝損傷に続いて、静止状態のＨＳＣは、（α−ＳＭＡ）陽性筋線維芽細胞への分化を特徴とする活性化の過程を経る。
【０１６１】
単剤としてのＮＴＺは、ＴＧＦβ誘発性ｈＨＳＣにおいて抗線維化活性を与えることが明らかにされた（図１Ｂ）。ＮＴＺはその活性な代謝物チゾキサニド（ＴＺ）に急速に加水分解されることが知られているので（Ｂｒｏｅｋｈｕｙｓｅｎ、Ｓｔｏｃｋｉｓら、２０００年）、この代謝物もＨＳＣにおけるその抗線維化活性について評価した。ＴＺは、親薬物に類似するプロファイルを示した（データは示さず）。一方、エラフィブラノールのような一部のＰＰＡＲアゴニストも、ＴＧＦβ誘発性ＨＳＣモデルにおいて抗線維化プロファイルを有することが明らかになった（図１Ａ）。ベザフィブラートのような他のＰＰＡＲアゴニストは弱い活性を有することが明らかになった。これから、ＰＰＡＲアゴニストがその抗線維化プロファイルに関して等価ではないことが示唆される（図１Ｃ）。
【０１６２】
エラフィブラノールとＮＴＺの組合せが相乗的様式で線維症を低減することができるかどうかを評価するため、ＴＧＦβ誘発性ＨＳＣにおいて組合せマトリックス実験を実施した。手短に述べれば、ＮＴＺ及びエラフィブラノール溶液をエラフィブラノール／ＮＴＺ比の大きなパネルに及ぶ４２の組合せマトリックスを作成するチェッカーボードフォーマットで連続希釈した。相乗作用はまずエクセスオーバーブリススコアーを計算することにより判定した。これらの実験により、ＮＴＺはエラフィブラノールと相乗作用して活性化ＨＳＣにおいてα−ＳＭＡ産生を低減することが可能であることが明らかにされた。いくつかの組合せ対は１０よりも上のＥＯＢスコアーを有することが明らかになった。このスコアーは相乗作用を示している（図２Ｂ）。
【０１６３】
相乗作用を検証するため、上位ＥＯＢスコアーに対応する実験値を棒グラフにプロットした（図２Ｃ）．これらのグラフは、ＮＴＺとエラフィブラノールの組合せが、最も高い単剤（ＮＴＺ又はエラフィブラノール）と比べて統計的に有意である優れた抗線維化効果を示していることを図示している。最も印象的な例は、ＮＴＺ０．６μＭとエラフィブラノール５μＭの組合せ対で表されている。ＮＴＺは０．６μＭではほぼ全く抗線維化活性を示さないが、エラフィブラノールを５μＭ添加するとα−ＳＭＡの５５％の強い低下が生じ、この数字は単剤単独で観察される効果よりもはるかに強い。他のＰＰＡＲアゴニスト、サログリタザル、セラデルパル及びラニフィブラノールとＮＴＺの組合せが線維症を相乗的様式で低減することが可能かどうかを評価するため、組合せマトリックス実験もＴＧＦβ誘発性ＨＳＣにおいて実施し、ＥＯＢスコアーを決定した。ＮＴＺのサログリタザルとの組合せを用いた相乗作用を評価するために、セラデルパル及びラニフィブラノールを抗線維化活性に関して検証した。ＮＴＺとサログリタザル、セラデルパル又はラニフィブラノールとの組合せはＥＯＢスコアー＞０有することが明らかになった。この数字は相乗作用を示している。サログリタザル２．５μＭとＮＴＺ０．６２５μＭの組合せもα−ＳＭＡの５２％の強い低下が生じ、この数字は単剤単独で観察される効果よりもはるかに強い（図３Ａ）。セラデルパル２０μＭとＮＴＺ２．５μＭの組合せもα−ＳＭＡの７２％の強い低下が生じ、この数字は単剤単独で観察される効果よりもはるかに強い（図３Ｂ）。これほどではないが、ラニフィブラノール１０μＭとＮＴＺ１．２５μＭの組合せは有意（ｐ＝０．０６）である傾向があり、ＮＴＺと比べて活性化ＨＳＣにおけるα−ＳＭＡ産生を低減する（図３Ｃ）。
【０１６４】
結論として、本出願者は、式（Ｉ）の化合物と特定のＰＰＡＲアゴニストの組合せについて思いがけない抗線維化活性を発見した。これらの結果は、式（Ｉ）の化合物とＰＰＡＲアゴニストの組合せが相乗的になることが可能であり、複数のタイプの線維性疾患に治療効果をもたらすことが可能であることを示唆している。
【０１６５】
コリン欠乏及びＬ−アミノ酸欠乏（ＣＤＡＡ）＋１％コレステロール食をマウスに投与すると、ヒト非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に病理学的に類似する進行性線維化脂肪性肝炎を引き起こす。
【０１６６】
ＣＤＡＡ＋１％コレステロール食は、図４に示されるように、特に肝臓コラーゲンの有意な増加を誘発する。
【０１６７】
この図は、エラフィブラノール又はＮＴＺ単独の投与が肝臓コラーゲン含有量を減少することも示している。コラーゲンの減少は投与されたエラフィブラノール又はＮＴＺの用量に比例する。
【０１６８】
エラフィブラノールとＮＴＺの組合せを投与した場合、産生されるコラーゲンの減少は、別々に服用したそれぞれの化合物について観察される減少よりも大きい。
【０１６９】
したがって、コラーゲン産生の減少に対してエラフィブラノールとＮＴＺの組合せの相乗効果がある。言い換えると、エラフィブラノールとＮＴＺを組み合わせると、抗線維化効果が認められる。
【０１７０】
計算された用量で表すと、エラフィブラノール２．８ｍｐｋ（ｋｇあたりのｍｇ）とＮＴＺ７７．７ｍｐｋを含む組合せではさらに優れた効果が観察される。
【０１７１】
図５は組織学を用いて得られた結果、すなわち、動物ごとの全組織に対するコラーゲン表面のパーセントとして表された線維症域の決定を表している。
【０１７２】
ＣＤＡＡ＋１％コレステロール食は、特に、線維症パーセントの有意な増加を誘発する。
【０１７３】
図５は、エラフィブラノール又はＮＴＺ単独の投与が線維症パーセントを減少することも示している。減少は投与されたエラフィブラノール又はＮＴＺの用量に比例する。
【０１７４】
エラフィブラノールとＮＴＺの組合せを投与した場合、線維症パーセントの減少は、別々に服用したそれぞれの化合物について観察される減少よりも大きい。
【０１７５】
したがって、線維症パーセントの減少に対してエラフィブラノールとＮＴＺの組合せの相乗効果がある。言い換えると、エラフィブラノールとＮＴＺを組み合わせると、抗線維化効果が認められる。
【０１７６】
計算された用量で表すと、エラフィブラノール２．８ｍｐｋ（ｋｇあたりのｍｇ）とＮＴＺ７７．７ｍｐｋを含む組合せではさらに優れた効果が観察される。
【０１７７】
図６〜１２は、線維症の異なる肝臓マーカーの遺伝子発現を表している。すべてのマーカーで、ＣＤＡＡ＋１％コレステロール食は、特に、遺伝子発現の有意な増加を誘発する。
【０１７８】
エラフィブラノール又はＮＴＺ単独の投与が異なる遺伝子発現のレベルを減少することも認められる。減少は投与されたエラフィブラノール又はＮＴＺの用量に比例する。
【０１７９】
エラフィブラノールとＮＴＺの組合せを投与した場合、遺伝子発現の減少は、別々に服用したそれぞれの化合物について観察される減少よりも大きい。
【０１８０】
したがって、線維症の異なる肝臓マーカーの遺伝子発現の減少に対してエラフィブラノールとＮＴＺの組合せの相乗効果がある。言い換えると、エラフィブラノールとＮＴＺを組み合わせると、相乗的な抗線維化効果が認められる。
【０１８１】
結論として、本出願者は、式（Ｉ）の化合物と特定のＰＰＡＲアゴニストの組合せについて思いがけない相乗的な抗線維化活性を発見した。これらの結果は、式（Ｉ）の化合物とＰＰＡＲアゴニストの組合せが相乗的になることが可能であり及び／又は付加効果を有することが可能であり、複数のタイプの線維性疾患に治療効果をもたらすことも可能であることを示唆している。
【０１８２】
【表７】
2020506920.tif 000024
2020506920.tif 000025
【図１】
2020506920.tif 000033
【図２】
2020506920.tif 000034
【図３】
2020506920.tif 000035
【図４】
2020506920.tif 000036
【図５】
2020506920.tif 000037
【図６】
2020506920.tif 000038
【図７】
2020506920.tif 000039
【図８】
2020506920.tif 000040
【図９】
2020506920.tif 000041
【図１０】
2020506920.tif 000042
【図１１】
2020506920.tif 000043
【図１２】
2020506920.tif 000044
【配列表】
2020506920000001.app
【国際調査報告】
2020506920.tif 000045
2020506920.tif 000046