(57)【要約】  化合物および／またはその薬学的に許容される塩は次式Ａを有する。これらの化合物は、ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼ阻害剤とすることができる。
2020511549.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2020511549.tif 000053
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり（ただし、Ｒ１は、シクロヘキシルでない）、
Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｎ＝ＣＨ−アルキル、−Ｎ＝ＣＨ−アリール、または−Ｎ＝ＣＨ−ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アリールおよびヘテロアリールのそれぞれは、置換されていてもよく、
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、もしくは置換されていてもよいヘテロシクリルであり（ただし、Ｒ３およびＲ４がこのような場合、Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルでない）、またはＲ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよいヘテロシクリルを形成する］
の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
式ＩＩ
【化２】
2020511549.tif 000054
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり（ただし、Ｒ１は、シクロヘキシルでない）、
Ｒ２は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、Ｎ＝ＣＨ−アルキル、Ｎ＝ＣＨ−アリール、またはＮ＝ＣＨ−ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アリールおよびヘテロアリールは置換されていてもよく、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立して、Ｈまたはメチルである］
の化合物および／またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
式ＩＩＩ
【化３】
2020511549.tif 000055
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり（ただし、Ｒ１は、シクロヘキシルでない）、
Ｒ９は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり、
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、もしくは置換されていてもよいヘテロシクリルであり、またはＲ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよいヘテロシクリルを形成する］
の化合物および／またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ１が、置換されていてもよいフェニル、置換されていてもよい低級アルキル、置換されていてもよい単環式ヘテロアリール、または置換されていてもよい単環式ヘテロシクリルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ１が、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいフェニルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒ１が、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいピリジニルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｒ１が、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいピリミジニルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
Ｒ１が、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいキノリニルまたはイソキノリニルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
Ｒ１が、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい低級アルキルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
Ｒ１が、アゼチジニル、オキセタニル、テトラヒドロフラン、またはピロリジニルであり、これらのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｒ２が、−Ｎ＝ＣＨ−アリール、−Ｎ＝ＣＨ−ヘテロアリール、または−Ｎ＝ＣＨ−アルキルであり、アリール、ヘテロアリール、およびアルキルのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい、請求項１または２に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
Ｒ２が、−Ｎ＝ＣＨ−フェニル、−Ｎ＝ＣＨ−ナフタレニル、−Ｎ＝ＣＨ−ピリジニル、−Ｎ＝ＣＨ−インドリル、または−Ｎ＝ＣＨ−低級アルキルであり、フェニル、ナフタレニル、ピリジニル、インドリル、および低級アルキルのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい、請求項１または２に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
Ｒ３およびＲ４が独立して、ＣＦ３、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、−ＯＣＦ３、および−Ｏ−低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい低級アルキルである、請求項１または３に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
Ｒ３およびＲ４が、それらが結合している窒素と一緒になって、単環式もしくは二環式ヘテロシクリルまたは二環式アリールを形成し、単環式、二環式ヘテロシクリルおよび二環式アリールのそれぞれが、低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい、請求項１または３に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１５】
単環式ヘテロシクリルが、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン（pyrolidine）、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン、チオモルホリン、チオモルホリン−Ｓ−オキシド、チオモルホリン−Ｓ，Ｓ−ジオキシド、アゼパン、１，４−オキサゼパン、または１，４−チアゼパンである、請求項１４に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６】
Ｒ９が、アリール、ヘテロアリール、またはアルキルであり、これらのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい、請求項３に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１７】
Ｒ９が、フェニル、ナフタレニル、ピリジニル、インドリル、または低級アルキルであり、フェニル、ナフタレニル、ピリジニル、インドリル、および低級アルキルのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい、請求項３に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１８】
Ｒ１が、
【化４】
2020511549.tif 000056
［式中、
【化５】
2020511549.tif 000057
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
である、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１９】
Ｒ２が、
【化６】
2020511549.tif 000058
［式中、
【化７】
2020511549.tif 000059
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
である、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２０】
Ｒ３およびＲ４が独立して、メチル、イソプロピル、または２−ヒドロキシルエチルである、請求項１または３に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２１】
Ｒ３およびＲ４が、それらが結合している窒素と一緒になって、以下の環：
【化８】
2020511549.tif 000060
［式中、
【化９】
2020511549.tif 000061
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
の１つを形成する、請求項１または３に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２２】
以下の化合物：
【化１０】
2020511549.tif 000062
から選択される、請求項１に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２３】
請求項１に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項２４】
ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼの阻害によって治療可能な疾患を患っている個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に、請求項１に記載の化合物および／またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の治療有効量を投与する工程を含み、このような投与が、疾患に関連する症状を低減または除去する、方法。
【請求項２５】
疾患が、様々な形態のがんおよび自己免疫障害から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
がんが、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、および急性骨髄単球性白血病から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
自己免疫障害が、関節リウマチ、炎症性腸疾患、乾癬、および多発性硬化症から選択される、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
[0001]  本出願は、全体として本明細書に組み込まれる、２０１７年３月２４日出願の米国特許仮出願第６２／６０１，５０１号の利益を主張する。
【０００２】
[0002]  本開示は、ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼ阻害剤とすることができ、がんや自己免疫障害などの疾患の治療にとって有用でありうる化合物および／またはそれらの薬学的に許容される塩を対象にする。
【背景技術】
【０００３】
[0003]  ＰＩＫｆｙｖｅは、ＰｔｄＩｎｓ（３）Ｐをイノシトール環の５位でリン酸化して、ホスファチジルイノシトール３，５−ビスリン酸（PtdIns（3,5）P2）を生成するホスホイノシチドキナーゼである。
【０００４】
[0004]  ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼは、酵母Ｆａｂ１の哺乳類オルソログであり、最初に哺乳類細胞において発見された（Shishevaら、「Cloning, characterization, and expression of a novel Zn2+-binding FYVE finger-containing phosphoinositide kinase in insulin-sensitive cells」、Mol. Cell. Biol. 19（1）, pp.623-34, 1999）。続いて、ヒトＰＹＫｆｙｖｅのｃＤＮＡおよびタンパク質のクローニングおよびキャラクタリゼーションが行われた（Cabezasら、「Cloning and subcellular localization of a human phosphatidylinositol 3-phosphate 5-kinase, PIKfyve/Fab1.」、Gene, 371（1）, pp. 34-41, 2006）。ヒトＰＩＫｆｙｖｅ遺伝子は、２番染色体座位２ｑ３４に位置している。タンパク質は、４つの主ドメインを含む：１）ＰｔｄＩｎｓ（３）Ｐ結合ＦＹＶＥドメイン（アミノ酸残基１５０〜２１９）、２）膜結合ＤＥＰドメイン（残基３６５〜４４０）、３）シャペロニン様ドメイン（残基５５９〜１０６４）、および４）触媒ホスホイノシチドキナーゼホモロジードメイン（残基１７９１〜２０８５）。ＰＩＫｆｙｖｅタンパク質の細胞内局在は、大部分が後期および初期エンドソームの膜に限定される。生化学的に、ＰＩＫｆｙｖｅは、ホスファチジルイノシトール（PtdIns）のほうをホスホイノシチド（PI）基質よりも強く好むことを表し、ＰｔｄＩｎｓ  ５−ＰおよびＰｔｄＩｎｓ  ３，５−Ｐ２であると同定される２つの産物を生成する（Sbrissaら、「A mammalian ortholog of yeast Fab1p lipid kinase, synthesizes 5-phosphoinositides. Effect of insulin」、J. Biol. Chem., 274（31）, pp. 21589-97, 1999）。
【０００５】
[0005]  ＰＩＫｆｙｖｅによって産生されたＰｔｄＩｎｓ  ３，５−Ｐ２は、後期エンドサイトーシス膜の完全性を維持するのに必須である（Ikonomovら、「Functional dissection of lipid and protein kinase signals of PIKfyve reveals the role of PtdIns 3,5-P2 production for endomembrane integrity」、J. Biol. Chem., 277（11）, pp. 9206-11, 2002）。ＰｔｄＩｎｓに加えて、ＰＩＫｆｙｖｅは、タンパク質キナーゼ活性を有すると報告され、自己リン酸化を受けることができる（Sbrissaら、「PIKfyve lipid kinase is a protein kinase: downregulation of 5'-phosphoinositide product formation by autophosphorylation」、Biochemistry, 39（51）, pp. 15980-9, 2000）。
【０００６】
[0006]  ＰＩＫｆｙｖｅシグナル伝達経路は、複数の生物学的プロセスを、大部分はエンドソーム輸送において実績ある役割を通して調節すると報告された。ＰＩＫｆｙｖｅの生物学的性質の１つの重要な態様は、細胞性生得免疫系のキー成分であるＴｏｌｌ様受容体シグナル伝達におけるその関与である。したがって、ＴＬＲアゴニストに応答したＩＬ１２／２３分泌の低分子化合物アピリモッドによる阻害は、最近、化合物がＰＩＫｆｙｖｅのＰｔｄＩｎｓ−キナーゼ活性を阻害する能力に起因していた（Caiら、「PIKfyve, a class III PI kinase, is the target of the small molecular IL-12/IL-23 inhibitor apilimod and a player in Toll-like receptor signaling」、Chem. Biol., 20（7）, pp. 912-921, 2013）。注目すべきことに、アピリモッドは、クローン病または関節リウマチ患者に対する臨床試験において薬理作用剤としても調査されている。
【０００７】
[0007]  調節解除されたＩＬ１２／ＩＬ２３サイトカイン産生は、炎症性腸疾患、乾癬、関節リウマチ、および多発性硬化症を含む様々な炎症性疾患病状に関連付けられた。最近の研究から、ＩＬ１２／ＩＬ２３産生のさらにもう一つの低分子阻害薬ＡＰＹ０２０１は、ＰＩＫｆｙｖｅの高選択的阻害薬であることが明らかになる（Hayakawaら、「Structure-activity relationship study, target identification, and pharmacological characterization of a small molecular IL-12/23 inhibitor, APY0201」、Bioorg. Med. Chem., 22（11）, pp. 3021-9, 2014）。さらに、マウスマクロファージによるＩＬ−１２産生の新しい２つの低分子阻害薬ＡＳ２６７７１３１およびＡＳ２７９５４４０も、ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼを選択的に阻害するということが示された（Terajimaら、「Inhibition of c-Rel DNA binding is critical for the anti-inflammatory effects of novel PIKfyve inhibitor」、Eur. J. Pharmacol., 780, pp. 93-105, 2016）。ＡＳ２６７７１３１は、実験動物において関節リウマチの発症も予防した。
【０００８】
[0008]  ＰＩＫｆｙｖｅは、がんにおける薬理学的標的も表す。ＰＩＫｆｙｖｅは、自食作用およびマクロピノソーム分解に必須である細胞質空胞形成およびリソソーム融合反応において関与するため、ＰＩＫｆｙｖｅを阻害すると、一部のがんタイプにおいて作動するリソソーム依存性栄養生成経路の閉塞を導くことができる（Kimら、「Targeting cancer metabolism by simultaneously disrupting parallel nutrient access pathways」、J. Clin. Invest., 126（11）, pp. 4088-4102, 2016）。最近の研究から、ＰＩＫｆｉｖｅ（PtdIns 5-Psを通じて）は、ＲｈｏファミリーＧＴＰアーゼ  Ｒａｃ１を活性化することによってがん細胞移動性および侵襲性を調節することができることが明らかになる（Dupuis-Coronasら、「The nucleophosmin-anaplastic lymphoma kinase oncogene interacts, activates, and uses the kinase PIKfyve to increase invasiveness」、J.Biol. Chem., 286（37）, pp. 32105-14, 2011;Oppeltら、「PIKfyve, MTMR3 and their product PtdIns5P regulate cancer cell migration and invasion through activation of Rac1」、Biochem. J., 461（3）, pp.383-90, 2014）。ＰＩＫｆｙｖｅの低分子阻害薬ＹＭ２０１６３６は、インビトロモデルにおけるがん細胞の遊走を強く阻害した（Oppeltら）。抗がん療法にとってＰＩＫｆｙｖｅ阻害の役割は、いくつかのがん細胞系において観察されたアピリモッドの抗増殖効果によってさらに支持されている。ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬は、選択的ナノモル細胞傷害性をＢ細胞非ホジキンリンパ腫において示すが、正常細胞においては示さない（Gayleら、「Identification of apilimod as a first-in-class PIKfyve kinase inhibitor for treatment of B-cell non-Hodgkin lymphoma」、Blood, doi: 10.1182/blood-2016-09-736892, 2017）。
【０００９】
[0009]  科学研究は、がんならびに関節リウマチ、炎症性腸疾患、乾癬、および多発性硬化症などの自己免疫障害を含むいくつかの疾患状態における薬理学的インターベンションの治療標的としてのＰＩＫｆｙｖｅの選択を一緒に支持する。したがって、本発明に記載されている低分子化合物の有用性は、上記の障害に限定されないがそれらに適用可能であると当業者によってみなされるべきである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
[0010]  一態様において、式Ｉ
【００１１】
【化１】
2020511549.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり（ただし、Ｒ１は、シクロヘキシルでない）、
Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｎ＝ＣＨ−アルキル、−Ｎ＝ＣＨ−アリール、または−Ｎ＝ＣＨ−ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アリールおよびヘテロアリールのそれぞれは、置換されていてもよく、
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、もしくは置換されていてもよいヘテロシクリルであり（ただし、Ｒ３およびＲ４がこのような場合、Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルでない）、またはＲ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよいヘテロシクリルを形成する］
の化合物および／またはその薬学的に許容される塩などの２，５，７−三置換−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンが提供される。
【００１２】
[0011]  式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩は、ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼを阻害することができる。
【００１３】
[0012]  別の態様において、式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。
【００１４】
[0013]  別の態様において、ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼの阻害によって治療可能な疾患を患っている個体を治療する方法が提供される。この方法は、それを必要とする個体に、式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の治療有効量を投与する工程を含み、このような投与が、疾患に関連する症状が低減または除去する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】[0014]ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬ががん細胞系の増殖を選択的に阻害したことを示すグラフである。
【図１Ｂ】ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬ががん細胞系の増殖を選択的に阻害したことを示すグラフである。
【図１Ｃ】ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬ががん細胞系の増殖を選択的に阻害したことを示すグラフである。
【図１Ｄ】ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬ががん細胞系の増殖を選択的に阻害したことを示すグラフである。
【図２Ａ】[0015]ＡＰＹ０２０１と本開示の化合物１は共に、ＩＬ−２３の分泌をブロックしたことを示すグラフである。
【図２Ｂ】ＡＰＹ０２０１と本開示の化合物１は共に、ＩＬ−２３の分泌をブロックしたことを示すグラフである。
【図３Ａ】[0016]ＡＰＹ０２０１が、ＭＬ−２がん細胞系においてアポトーシスを誘導することを示すグラフである。
【図３Ｂ】アピリモッドが、ＭＬ−２がん細胞系においてアポトーシスを誘導することを示すグラフである。
【図３Ｃ】本開示の化合物１が、ＭＬ−２がん細胞系においてアポトーシスを誘導することを示すグラフである。
【図４】[0017]ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼ阻害アッセイにおいてアピリモッド、ＡＰＹ  ０２０１、本開示の化合物１、および  ＹＭ２０１６３６の用量応答曲線を示すグラフである。
【図５Ａ】[0018]正常ヒト末梢血単核細胞（PBMC）において異なる血液がん細胞系に対するアピリモッド、ＡＰＹ  ０２０１、本開示の化合物１、およびＹＭ２０１６３６の用量応答曲線を示すグラフである。
【図５Ｂ】正常ヒト末梢血単核細胞（PBMC）において異なる血液がん細胞系に対するアピリモッド、ＡＰＹ  ０２０１、本開示の化合物１、およびＹＭ２０１６３６の用量応答曲線を示すグラフである。
【図５Ｃ】正常ヒト末梢血単核細胞（PBMC）において異なる血液がん細胞系に対するアピリモッド、ＡＰＹ  ０２０１、本開示の化合物１、およびＹＭ２０１６３６の用量応答曲線を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
[0019]  本明細書において用いられる単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上からそうでないことがはっきりしていない限り、複数の指示対象を包含する。
【００１７】
[0020]  部分が環式環であるとき、「ｎ員」という用語は、環が有する環原子の数を記載するのに使用される。例えば、４員シクロアルキルは、シクロブタンなどの４個の環原子を有するシクロアルキルを指す。
【００１８】
[0021]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「アルキル」という用語は、もっぱら単結合によって連結されている１〜２０個の炭素原子を含むが、いずれの環式構造も有さない直鎖または分枝鎖状炭化水素を指す。アルキル基の例は、限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ｉｓｏ−アミル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル（noyl）、デシル、ウンデシル、ドデシルトリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、エイコシルなどが挙げられる。「低級アルキル」という用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、またはペンチルなど、もっぱら単結合によって連結されている１〜６個の炭素原子を含むが、いずれの環式構造も有していない直鎖または分枝鎖状炭化水素を指す。
【００１９】
[0022]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「アリール」という用語は、合計５〜１４個の環原子を有する単環式、二環式（縮合）、および三環式（縮合またはスピロ）炭化水素環系を指す。アリールが単環式であるとき、単環は芳香族であり、ヘテロ原子を含まない。アリールが二環式または三環式であるとき、二環または三環中の環の少なくとも１つは芳香族であり、ヘテロ原子を含まず、他の環（複数可）が芳香族であるとき、他の環（複数可）はヘテロ原子を含まないが、他の環（複数可）が芳香族でないとき、他の環（複数可）はヘテロ原子を含んでも含まなくてもよい。結合点は、いずれの環原子上とすることもできる。アリールの例は、限定されるものではないが、ベンゼン、ナフタレン、インダン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、クロマン、イソクロマン、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン、チオクロマン１，１−ジオキシド、６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン、および２，３−ジヒドロベンゾフランが挙げられる。
【００２０】
[0023]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「シクロアルキル」という用語は、完全に飽和しており、または１つもしくは複数の不飽和単位を含む、合計３〜１４個の環原子を有する単環式、二環式（縮合、架橋、またはスピロ）、または三環式（縮合またはスピロ）炭化水素環系を指すが、単環式、二環式、または三環式炭化水素中の個々の環はいずれも芳香族ではなく、環原子はいずれもヘテロ原子でない。結合点は、飽和または不飽和炭素上とすることができる。架橋二環式シクロアルキルは、３個以上の炭素原子を共有し、少なくとも１個の原子を含む橋で２個の架頭炭素原子を分離する、２つの炭化水素環を指す。シクロアルキルの例としては、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、スピロ［２．５］オクタン、スピロ［３．５］ノナン、スピロ［４．５］デカン、およびスピロ［５．５］ウンデカンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
[0024]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「ヘテロシクリル」という用語は、完全に飽和されており、または１つもしくは複数の不飽和単位を含む、４〜１５個の環原子を有する単環式、二環式（縮合、架橋、もしくはスピロ）、または三環式（縮合もしくはスピロ）炭化水素環系を指すが、単環式、二環式、または三環式炭化水素中の個々の環はいずれも芳香族ではなく、さらに環原子の少なくとも１個がヘテロ原子である。架橋二環式ヘテロシクリルは、少なくとも１個の炭素がヘテロ原子で置き換えられている架橋二環式シクロアルキルである。ヘテロシクリルの例としては、アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランが挙げられるが、これらに限定されない。結合点は、飽和または不飽和炭素またはヘテロ原子上とすることができる。
【００２２】
[0025]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「ヘテロアリール」という用語は、合計５〜１４個の環原子を有する単環式、二環式（縮合）、および三環式（縮合またはスピロ）環系を指し、単環ならびに二環式および三環式環系中の環の少なくとも１つは、芳香族であり、Ｓ、Ｏ、およびＮから選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む。結合点は、いずれの環原子上とすることもできる。ヘテロアリールの例は、限定されるものではないが、フラン、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、インドール、ベンゾフラン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾフラン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、および４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インドールが挙げられる。
【００２３】
[0026]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「置換されていてもよいアルキル」という用語または同じ趣旨の用語は、非置換アルキル（または非置換（unsubtitted）低級アルキル）またはＣＮ、ハロ、−ＮＲＲ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、−ＯＲ、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、およびヘテロアリール（単環式ヘテロアリール（heteroayl）など）から選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されているアルキルを指し、ここで、Ｒは独立して、Ｈ、アルキル、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、またはヘテロアリール（単環式ヘテロアリールなど）である。同様に、「置換されていてもよい低級アルキル」という用語は、非置換低級アルキルまたは上記と同じ基のセットから選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されている低級アルキルを指す。
【００２４】
[0027]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「置換されていてもよいアリール」という用語または同じ趣旨の用語は、非置換アリールまたはアルキル、ＣＮ、ハロ、−ＮＲＲ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、−ＯＲ、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、およびヘテロアリール（単環式ヘテロアリール（heteroayl）など）から選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されているアリールを指し、ここで、Ｒは独立して、Ｈ、アルキル、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、またはヘテロアリール（単環式ヘテロアリールなど）である。同様に、「置換されていてもよいフェニル」という用語は、非置換フェニルまたは上記と同じ基のセットから選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されているフェニルを指す。
【００２５】
[0028]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「置換されていてもよいヘテロアリール」という用語または同じ趣旨の用語は、非置換ヘテロアリールまたはアルキル、ＣＮ、ハロ、−ＮＲＲ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−ＯＲ、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、およびヘテロアリール（単環式ヘテロアリール（heteroayl）など）から選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されているヘテロアリールを指し、ここで、Ｒは独立して、Ｈ、アルキル、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、またはヘテロアリール（単環式ヘテロアリールなど）である。同様に、「置換されていてもよい単環式ヘテロアリール」という用語は、非置換単環式ヘテロアリールまたは上記と同じ基のセットから選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されている単環式ヘテロアリールを指す。
【００２６】
[0029]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「置換されていてもよいシクロアルキル」という用語または同じ趣旨の用語は、非置換シクロアルキルまたはアルキル、ＣＮ、ハロ、−ＮＲＲ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−ＯＲ、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、およびヘテロアリール（単環式ヘテロアリール（heteroayl）など）から選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されているシクロアルキルを指し、ここで、Ｒは独立して、Ｈ、アルキル、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、またはヘテロアリール（単環式ヘテロアリールなど）である。
【００２７】
[0030]  本明細書において単独でまたは組み合わせて用いられる「置換されていてもよいヘテロシクリル」という用語または同じ趣旨の用語は、非置換ヘテロシクロアルキルまたはアルキル、ＣＮ、ハロ、−ＮＲＲ、−ＮＨＳＯ２Ｒ、−ＯＲ、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、およびヘテロアリール（単環式ヘテロアリール（heteroayl）など）から選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されているヘテロシクロアルキルを指し、ここで、Ｒは独立して、Ｈ、アルキル、アリール（フェニルなど）、シクロアルキル（シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサンなど）、ヘテロシクロアルキル（アゼチジン、オキセタン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、およびテトラヒドロフランなど）、またはヘテロアリール（単環式ヘテロアリールなど）である。同様に、「置換されていてもよい単環式ヘテロシクリル」という用語は、非置換単環式ヘテロシクリル（heterocycyl）または上記と同じ基のセットから選択される１つ、２つ、もしくは３つの基で置換されている単環式ヘテロシクリル（heterocycyl）を指す。
【００２８】
[0031]  本明細書において、「個体」および「哺乳動物」という用語は同義に使用される。それらは両方とも、ヒトまたは動物を指す。
【００２９】
[0032]  本明細書で開示された化合物は、薬学的に許容される塩の形態で存在することができる。本明細書で用いられる「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書で開示された化合物の非毒性の酸性／アニオン性または塩基性／カチオン性塩の形態を指す。好適な薬学的に許容される塩には、例えば本明細書で開示された化合物の溶液を塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸などの薬学的に許容される酸の溶液と混合することによって形成することができる酸付加塩が含まれる。
【００３０】
[0033]  さらに、本明細書で開示された化合物が酸性部分を有するとき、その好適な薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属塩、例えばナトリウムまたはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩；および好適な有機リガンドを用いて形成される塩、例えば第四級アンモニウム塩を挙げることができる。したがって、代表的な薬学的に許容される塩は、限定されるものではないが、酢酸塩、アスピレート、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、炭酸水素塩、硫酸水素塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、カルシウム、カムシル酸塩（またはショウノウスルホン酸塩）、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、クラブラン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エディシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、ヒドロブロミン、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、イソチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、硝酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、パルミチン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩／リン酸水素塩、サッカリン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩およびトリフルオロ酢酸塩が挙げられる。ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍａｕｔｈによるＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｕｓｅ（Wiley-VCH、Weinberg, Germany、2002）を参照のこと。
【００３１】
[0034]  本明細書で開示された化合物は、非溶媒和物または溶媒和物の形態で存在することができる。本明細書で用いられる「溶媒和物」という用語は、本明細書で開示された化合物と１種または複数の薬学的に許容される溶媒分子、例えば水、エタノール、ＤＭＳＯ、または他の有機溶媒とを含む分子複合体を表現する。本明細書で開示された化合物が水と溶媒和物を形成するとき、「水和物」という用語を「溶媒和物」の代わりに使用することができる。薬学的に許容される溶媒和物には、溶媒が同位体置換されている可能性がある水和物および溶媒和物、Ｄ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯが含まれる。
【００３２】
[0035]  第１の態様において、本開示は、式Ｉ
【００３３】
【化２】
2020511549.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり（ただし、Ｒ１は、シクロヘキシルでない）、
Ｒ２は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｎ＝ＣＨ−アルキル、−Ｎ＝ＣＨ−アリール、または−Ｎ＝ＣＨ−ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アリールおよびヘテロアリールのそれぞれは、置換されていてもよく、
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、もしくは置換されていてもよいヘテロシクリルであり（ただし、Ｒ３およびＲ４がこのような場合、Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルでない）、またはＲ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよいヘテロシクリルを形成する］
の化合物またはその薬学的に許容される塩を対象にする。
【００３４】
[0036]  一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよいフェニルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい低級アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい単環式ヘテロアリールである。一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい単環式ヘテロシクリルである。
【００３５】
[0037]  一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいフェニルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいピリジニルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいピリミジニルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいキノリニルまたはイソキノリニルである。
【００３６】
[0038]  一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい低級アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、アゼチジニル、オキセタニル、テトラヒドロフラン、またはピロリジニルであり、これらのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。
【００３７】
[0039]  一部の実施形態において、Ｒ２は、−Ｎ＝ＣＨ−アリール、−Ｎ＝ＣＨ−ヘテロアリール、または−Ｎ＝ＣＨ−アルキルであり、アリール、ヘテロアリール、およびアルキルのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。一部の実施形態において、Ｒ２は、−Ｎ＝ＣＨ−フェニル、−Ｎ＝ＣＨ−ナフタレニル、−Ｎ＝ＣＨ−ピリジニル、−Ｎ＝ＣＨ−インドリル、または−Ｎ＝ＣＨ−低級アルキルであり、フェニル、ナフタレニル、ピリジニル、インドリルおよび低級アルキルのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。
【００３８】
[0040]  一部の実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、ＣＦ３、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、−ＯＣＦ３、および−Ｏ−低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい低級アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、単環式もしくは二環式ヘテロシクリルまたは二環式アリールを形成し、単環式、二環式ヘテロシクリルおよび二環式アリールのそれぞれが、低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。単環式もしくは二環式ヘテロシクリルまたは二環式アリールは、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される追加のヘテロ原子（複数可）を含むことができる。一部の実施形態において、単環式ヘテロシクリルは４、５、６、または７員ヘテロシクリルである。単環式ヘテロシクリルとしては、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン（pyrolidine）、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン、チオモルホリン、チオモルホリン−Ｓ−オキシド、チオモルホリン−Ｓ，Ｓ−ジオキシド、アゼパン、１，４−オキサゼパン、および１，４−チアゼパンが挙げられる。
【００３９】
[0041]  一部の実施形態において、Ｒ１は、
【００４０】
【化３】
2020511549.tif 000005
［式中、
【００４１】
【化４】
2020511549.tif 000006
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
である。
【００４２】
[0042]  一部の実施形態において、Ｒ２は、
【００４３】
【化５】
2020511549.tif 000007
［式中、
【００４４】
【化６】
2020511549.tif 000008
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
である。
【００４５】
[0043]  一部の実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、メチル、イソプロピル、または２−ヒドロキシルエチルである。一部の実施形態において、Ｒ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、以下の環：
【００４６】
【化７】
2020511549.tif 000009
［式中、
【００４７】
【化８】
2020511549.tif 000010
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
の１つを形成する。
【００４８】
[0044]  一部の実施形態において、式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩は、式ＩＩ
【００４９】
【化９】
2020511549.tif 000011
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり（ただし、Ｒ１は、シクロヘキシルでない）、
Ｒ２は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、Ｎ＝ＣＨ−アルキル、Ｎ＝ＣＨ−アリール、またはＮ＝ＣＨ−ヘテロアリールであり、ここで、アルキル、アリールおよびヘテロアリールは置換されていてもよく、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立して、Ｈまたはメチルである］
の化合物および／またはその薬学的に許容される塩である。
【００５０】
[0045]  式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよいフェニルである。式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい低級アルキルである。式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい単環式ヘテロアリールである。式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい単環式ヘテロシクリルである。
【００５１】
[0046]  式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいフェニルである。式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいピリジニルである。式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいピリミジニルである。式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいキノリニルまたはイソキノリニルである。
【００５２】
[0047]  式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい低級アルキルである。式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、アゼチジニル、オキセタニル、テトラヒドロフラン、またはピロリジニルであり、これらのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。
【００５３】
[0048]  式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ２は、−Ｎ＝ＣＨ−アリール、−Ｎ＝ＣＨ−ヘテロアリール、または−Ｎ＝ＣＨ−アルキルであり、アリール、ヘテロアリール、およびアルキルのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ２は、−Ｎ＝ＣＨ−フェニル、−Ｎ＝ＣＨ−ナフタレニル、−Ｎ＝ＣＨ−ピリジニル、−Ｎ＝ＣＨ−インドリル、または−Ｎ＝ＣＨ−低級アルキルであり、フェニル、ナフタレニル、ピリジニル、インドリル、および低級アルキルのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。
【００５４】
[0049]  式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、
【００５５】
【化１０】
2020511549.tif 000012
［式中、
【００５６】
【化１１】
2020511549.tif 000013
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
である。
【００５７】
[0050]  式ＩＩの一部の実施形態において、Ｒ２は、
【００５８】
【化１２】
2020511549.tif 000014
［式中、
【００５９】
【化１３】
2020511549.tif 000015
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
である。
【００６０】
[0051]  一部の実施形態において、式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩は、式ＩＩＩ
【００６１】
【化１４】
2020511549.tif 000016
［式中、
Ｒ１は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり（ただし、Ｒ１は、シクロヘキシルでない）、
Ｒ９は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、または置換されていてもよいヘテロアリールであり、
Ｒ３およびＲ４は独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、もしくは置換されていてもよいヘテロシクリルであり、またはＲ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよいヘテロシクリルを形成する］
の化合物および／またはその薬学的に許容される塩である。
【００６２】
[0052]  式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよいフェニルである。一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい低級アルキルである。式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい単環式ヘテロアリールである。式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、置換されていてもよい単環式ヘテロシクリルである。
【００６３】
[0053]  式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいフェニルである。式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいピリジニルである。式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいピリミジニルである。式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよいキノリニルまたはイソキノリニルである。
【００６４】
[0054]  式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい低級アルキルである。式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、アゼチジニル、オキセタニル、テトラヒドロフラン、またはピロリジニルであり、これらのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、および低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。
【００６５】
[0055]  式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ９は、アリール、ヘテロアリール、またはアルキルであり、これらのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ９は、フェニル、ナフタレニル、ピリジニル、インドリル、または低級アルキルであり、フェニル、ナフタレニル、ピリジニル、インドリルおよび低級アルキルのそれぞれが、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＦ３、−ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２−低級アルキル、−ＯＣＦ３、−Ｏ−低級アルキル、低級アルキル、フェニル、および単環式ヘテロアリールから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。
【００６６】
[0056]  式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、ＣＦ３、ＯＨ、ＣＮ、ＮＨ２、−ＯＣＦ３、および−Ｏ−低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい低級アルキルである。式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、単環式もしくは二環式ヘテロシクリルまたは二環式アリールを形成し、単環式、二環式ヘテロシクリルおよび二環式アリールのそれぞれが、低級アルキルから選択される１つまたは２つの基で置換されていてもよい。単環式もしくは二環式ヘテロシクリルまたは二環式アリールは、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される追加のヘテロ原子（複数可）を含むことができる。式ＩＩＩの一部の実施形態において、単環式ヘテロシクリルは、４、５、６、または７員ヘテロシクリルである。単環式ヘテロシクリルとしては、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン（pyrolidine）、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン、チオモルホリン、チオモルホリン−Ｓ−オキシド、チオモルホリン−Ｓ，Ｓ−ジオキシド、アゼパン、１，４−オキサゼパン、および１，４−チアゼパンが挙げられる。
【００６７】
[0057]  式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ１は、
【００６８】
【化１５】
2020511549.tif 000017
［式中、
【００６９】
【化１６】
2020511549.tif 000018
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
である。
【００７０】
[0058]  式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ２は、
【００７１】
【化１７】
2020511549.tif 000019
［式中、
【００７２】
【化１８】
2020511549.tif 000020
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
である。
【００７３】
[0059]  式ＩＩＩの一部の実施形態において、Ｒ３およびＲ４は独立して、メチル、イソプロピル、または２−ヒドロキシルエチルである。一部の実施形態において、Ｒ３およびＲ４はそれらが結合している窒素と一緒になって、以下の環：
【００７４】
【化１９】
2020511549.tif 000021
［式中、
【００７５】
【化２０】
2020511549.tif 000022
は、分子の残りの部分への結合点を示す］
の１つを形成する。
【００７６】
[0060]  本明細書に開示されるＲ１〜Ｒ９のそれぞれの各実施形態を、別段の定めがない限り、互いとのいずれかの組合せとすることができることは本開示の範囲内である。
【００７７】
[0061]  一部の実施形態において、式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩は、以下の化合物から選択される：
【００７８】
【化２１】
2020511549.tif 000023
【００７９】
[0062]  第２の態様において、本開示は、式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を対象とし、本明細書で開示されたその各実施形態を含む。医薬組成物を、個体に単独でまたは他の治療活性化合物、作用剤、薬物もしくはホルモンと組み合わせて投与することができる。本明細書で開示されたその各実施形態を含む、式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩に加えて、医薬組成物は、がんまたは自己免疫疾患を治療することが知られている別の治療上有効な作用剤を含むことができる。
【００８０】
[0063]  医薬組成物は、通常の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠作製、分級、乳化、カプセル化、封入、および凍結乾燥を含むが限定されない様々な方法のいずれかを使用して製造することができる。医薬組成物は、無菌液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤、錠剤、丸剤、ペレット剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、エリキシル剤、または投与に適しているいずれか他の剤形を含むが限定されない様々な形態のいずれかをとることができる。
【００８１】
[0064]  医薬組成物は、約１．０、５．０、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００、および１０００ミリグラムの式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩（その各実施形態を含む）など約１．０〜約１０００ミリグラムの式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩（その各実施形態を含む）を含む、経口投与のための錠剤またはカプセル剤の形態で提供することができる。
【００８２】
[0065]  医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含むことができる。本明細書で用いられる「薬学的に許容される担体」という用語は、投与されたとき長期または永続的有害効果を実質的に有さないいずれかの担体を指し、「薬学的に許容される媒体、安定剤、希釈剤、添加剤、補助剤、または賦形剤」などの用語を包含する。このような担体は、一般に活性化合物と混合され、または活性化合物を希釈もしくは封入することが可能になり、固体、半固体、もしくは液体の作用剤とすることができる。活性成分は可溶性とすることができ、または所望の担体もしくは希釈剤中の懸濁液として送達することができることが理解されよう。
【００８３】
[0066]  例えば水、食塩水、グリシン、ヒアルロン酸などの水性媒体；例えばデンプン、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、ラクトース、トレハロース、炭酸マグネシウムなどの固体担体；溶媒；分散媒；コーティング剤；抗細菌および抗真菌剤；等張および吸収遅延剤；またはいずれか他の不活性成分を含むが限定されない様々な薬学的に許容される担体のいずれでも使用することができる。薬学的に許容される担体の選択は、投与方法に依存することができる。いずれか薬学的に許容される担体が活性成分と非相溶である場合を除いて、薬学的に許容される組成物におけるその使用が企図される。このような医薬用担体の特定の使用の非限定的例は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Howard C. Anselら編、Lippincott Williams & Wilkins Publishers、7版、1999）; Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Alfonso R. Gennaro編、Lippincott, Williams & Wilkins、20版、2000）;Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Joel G. Hardmanら編、McGraw-Hill Professional、10版、2001）;およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（Raymond C. Roweら、APhA Publications、4版、2003）で見出すことができる。これらのプロトコルはルーチンであり、いずれの変形形態も、十分に当業者の範囲内であり、これらの中の教示からのものである。
【００８４】
[0067]  第３の態様において、本開示は、ＰＩＫｆｙｖｅキナーゼの阻害によって治療可能な疾患を患っている個体を治療する方法であって、それを必要とする個体に、式Ｉの化合物および／またはその薬学的に許容される塩（その各実施形態を含む）を含む医薬組成物の治療有効量を投与する工程を含み、このような投与が、疾患に関連する症状が低減または除去する、方法を対象にする。
【００８５】
[0068]  疾患には、様々な形態のがんおよび自己免疫障害が含まれる。例えば、がんには、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、および急性骨髄単球性白血病が含まれる。自己免疫障害には、例えば関節リウマチ、炎症性腸疾患、乾癬、および多発性硬化症が含まれる。
【００８６】
[0069]  以下の実施例は本来例示するものであって、決して限定することを意図するものではない。
【実施例】
【００８７】
実施例１
[0070]  式Ｉの化合物は、以下に例示する当業者に公知の方法によって調製することができる。
【００８８】
[0071]  カルボン酸とアミノグアニジンの反応を酸性条件下に高温で行って、３−置換−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミンが形成される：
【００８９】
【化２２】
2020511549.tif 000024
例えば、安息香酸はアミノグアニジンと反応して（Kurzer, F.; Godfrey, L. E. A. Angewandte Chemie 75, （23） 1157-75 （1963））、３−フェニル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミンを生成する：
【００９０】
【化２３】
2020511549.tif 000025
【００９１】
[0072]  このようなアミノトリアゾールは、マロン酸エステルまたはハリドと様々な条件下で２−置換−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５，７−ジオールを形成するように反応する（Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 22, （9）, 3198-3202 （2012））：
【００９２】
【化２４】
2020511549.tif 000026
【００９３】
[0073]  したがって、３−フェニル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミンは、マロノイルクロリドと反応して、２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５，７−ジオールを形成する：
【００９４】
【化２５】
2020511549.tif 000027
【００９５】
[0074]  ２つのヒドロキシ基は、オキシ塩化リン、ＰＢｒ５、塩化チオニルまたは塩化オキサリルなどいくつかのハロゲン化剤のいずれかを使用することによって塩素または他のハロゲンによって容易に置き換えることができる（Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 22, （9）, 3198-3202 （2012））。
【００９６】
【化２６】
2020511549.tif 000028
【００９７】
[0075]  したがって、２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５，７−ジオールは、オキシ塩化リンと容易に反応して、５，７−ジクロロ−２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンを生成する：
【００９８】
【化２７】
2020511549.tif 000029
【００９９】
[0076]  ７−Ｃｌ基は、穏やかな条件下に第二級アミンで選択的に置き換えられる（ＵＳ８９５７０６４Ｂ２）：
【０１００】
【化２８】
2020511549.tif 000030
【０１０１】
[0077]  したがって、５，７−ジクロロ−２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンは、モルホリンと反応して、４−（５−クロロ−２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンを生成する：
【０１０２】
【化２９】
2020511549.tif 000031
【０１０３】
[0078]  次いで、５−クロロ基を、より厳しい条件下にアンモニア、メチルアミンまたはヒドラジンなどの強求核性アミンで以下の通り置き換えることができる（ＪＰ０４０９９７７５Ａ（１９９２））：
【０１０４】
【化３０】
2020511549.tif 000032
【０１０５】
[0079]  したがって、４−（５−クロロ−２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンは、高温にてヒドラジン水和物と反応して、４−（５−ヒドラジニル−２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンを提供する：
【０１０６】
【化３１】
2020511549.tif 000033
【０１０７】
[0080]  ５−クロロ基に置き換わるアミンがヒドラジンである場合、最も一般的なアルデヒドと反応して、対応するイミノ化合物を形成することができる：
【０１０８】
【化３２】
2020511549.tif 000034
【０１０９】
[0081]  したがって、４−（５−ヒドラジニル−２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンは、ベンズアルデヒドなどのアルデヒドと反応して、（Ｅ）−４−（５−（２−ベンジリデンヒドラジニル）−２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンを生成する：
【０１１０】
【化３３】
2020511549.tif 000035
【０１１１】
実施例２
（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物１）の調製
工程１：３−（ピリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミンの調製
【０１１２】
【化３４】
2020511549.tif 000036
【０１１３】
[0082]  開放したバイアル中イソニコチン酸（１３．３６ｇ、１０８．５ｍｍｏｌ）とアミノグアニジン塩酸塩（５．０ｇ、４５．２ｍｍｏｌ）のよく混じった混合物を２３０℃で１時間加熱し、そのとき、ガスの発生が終わった。冷却した残渣を水の中におき、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＣＧ−５０−タイプ１樹脂のクロマトグラフィーによって精製した。水を用いた溶出によって、過剰のイソニコチン酸を除去し、さらに０．５Ｍ炭酸アンモニウム溶液を用いた溶出によって、純粋な３−（ピリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン（５．９７ｇ、収率８２％）を得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６１．８。
工程２：５，７−ジクロロ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンの調製
【０１１４】
【化３５】
2020511549.tif 000037
【０１１５】
[0083]  ３−（ピリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン（５．０ｇ、３１．０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１２５ｍＬ）に溶解し、塩化マロニル（４．３７ｇ、３１．０ｍｍｏｌ）で処理し、不活性雰囲気下で２．５時間撹拌し、そのとき、別途の塩化マロニル（２．１８ｇ、１５ｍｍｏｌ）で処理した。さらに２時間撹拌した後、反応混合物を水と酢酸エチルとの間で分配した。層を分離し、水性層を２回抽出した。合わせた層を乾燥し、留去乾固して、粗残渣を得た。それを、氷冷したオキシ塩化リン（５０ｍＬ）中に懸濁した。混合物を５時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をジクロロメタンと水との間で分配し、有機層を乾燥し、蒸発させると、残渣が残った。酢酸エチル−ヘキサンを使用するコンビフラッシュクロマトグラフィーによって、粗生成物を精製し、純粋な５，７−ジクロロ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン（０．７６０ｇ、収率９．２％）を得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６５．９。
工程３：４−（５−クロロ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンの調製
【０１１６】
【化３６】
2020511549.tif 000038
【０１１７】
[0084]  ５，７−ジクロロ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン（０．５２０ｇ、１．９５ｍｍｏｌ）をジオキサン（１０ｍＬ）に溶解し、モルホリン（０．３４０ｇ、３．９ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、そのとき、混合物をジクロロメタンと水との間で分配した。層を分離し、水性層をジクロロメタンで再抽出した。合わせた有機層を乾燥し、留去乾固した。固体残渣を少量のメタノールで粉末にし、濾過し、乾燥して、純粋な４−（５−クロロ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（０．６００ｇ、収率９７％）を得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１６．８。
工程４：（（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物１）の調製
【０１１８】
【化３７】
2020511549.tif 000039
【０１１９】
[0085]  ４−（５−クロロ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（０．６００ｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水和物（１ｍＬ）を、封止したバイアル中でエタノール（２５ｍＬ）に懸濁し、マイクロ波反応器中、１５０℃で１０分間加熱し、次に１２０℃でさらに１０分間加熱した。冷却した反応混合物を水と酢酸エチルとの間で分配した。水性相を酢酸エチルで２回抽出し、合わせた有機抽出液を乾燥し、留去乾固した。粗残渣（［Ｍ＋Ｈ］＋＝３１３．１）をメタノール（１０ｍＬ）および酢酸（１０μＬ）に懸濁し、３−メチルベンズアルデヒド（０．２２８ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で３０分間撹拌し、そのとき、追加のメタノール（５ｍＬ）および３−メチルベンズアルデヒド（０．１１４ｇ）を添加した。室温でさらに６０分間撹拌した後、反応物を濾過し、こうして得られた固体（０．５９７ｇ、収率７６％）をピリジンに溶解し、ＨＰＬＣでさらに精製して、純粋な（（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物１）を得た。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１５．１。
【０１２０】
実施例３
（Ｅ）−２，２−ジメチル−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物２）の調製
【０１２１】
【化３８】
2020511549.tif 000040
【０１２２】
[0086]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程３におけるモルホリンの代わりに２，２−ジメチルモルホリンを用いて、（Ｅ）−２，２−ジメチル−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４３．１。
【０１２３】
実施例４
（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物３）の調製
【０１２４】
【化３９】
2020511549.tif 000041
【０１２５】
[0087]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程１におけるｉｓｏ−ニコチン酸の代わりにニコチン酸を用いて、（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−３−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１５．１。
【０１２６】
実施例５
（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メトキシベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物４）の調製
【０１２７】
【化４０】
2020511549.tif 000042
【０１２８】
[0088]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程４における３−メチルベンズアルデヒドの代わりに３−メトキシベンズアルデヒドを用いて、（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メトキシベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３１．１。
【０１２９】
実施例６
（Ｅ）−Ｎ−（３−（（２−（７−モルホリノ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−イル）ヒドラゾノ）メチル）フェニル）メタンスルホンアミド（化合物５）の調製
【０１３０】
【化４１】
2020511549.tif 000043
【０１３１】
[0089]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程４におけるヒドラジンの代わりに２−フェニルエチルアミンを用いて、（Ｅ）−Ｎ−（３−（（２−（７−モルホリノ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−イル）ヒドラゾノ）メチル）フェニル）メタンスルホンアミドが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４９４．１。
【０１３２】
実施例７
（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（キノリン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物６）の調製
【０１３３】
【化４２】
2020511549.tif 000044
【０１３４】
[0090]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程１におけるイソニコチン酸の代わりにキノリン−４−カルボン酸を用いて、（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（キノリン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６５．１。
【０１３５】
実施例８
（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリミジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物７）の調製
【０１３６】
【化４３】
2020511549.tif 000045
【０１３７】
[0091]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程１におけるイソニコチン酸の代わりにピリミジン−４−カルボン酸を用いて、（Ｅ）−４−（５−（２−（３−メチルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリミジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１６．１。
【０１３８】
実施例９
（Ｅ）−４−（５−（２−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチレン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物８）の調製
【０１３９】
【化４４】
2020511549.tif 000046
【０１４０】
[0092]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程４における３−メチルベンズアルデヒドの代わりにインドール−３−カルボキサルデヒドを用いて、（Ｅ）−４−（５−（２−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチレン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４０．１。
【０１４１】
実施例１０
（Ｅ）−４−（５−（２−（ピリジン−３−イルメチレン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物９）の調製
【０１４２】
【化４５】
2020511549.tif 000047
【０１４３】
[0093]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程４における３−メチルベンズアルデヒドの代わりにピリジン−３−カルボキサルデヒドを用いて、（Ｅ）−４−（５−（２−（ピリジン−３−イルメチレン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾール［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４０２．１。
【０１４４】
実施例１１
（Ｅ）−３−（（２−（７−モルホリノ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−イル）ヒドラゾノ）メチル）ベンゾニトリル（化合物１０）の調製
【０１４５】
【化４６】
2020511549.tif 000048
【０１４６】
[0094]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程４において３−メチルベンズアルデヒドに対して３−シアノベンズアルデヒドを置換して、（Ｅ）−３−（（２−（７−モルホリノ−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−イル）ヒドラゾノ）メチル）ベンゾニトリルが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４２６．１。
【０１４７】
実施例１２
（Ｅ）−４−（５−（２−（（６−メトキシナフタレン−２−イル）メチレン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物１１）の調製
【０１４８】
【化４７】
2020511549.tif 000049
【０１４９】
[0095]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程４における３−メチルベンズアルデヒドの代わりに６−メトキシ−２−ナフトアルデヒドを用いて、（Ｅ）−４−（５−（２−（（６−メトキシナフタレン−２−イル）メチレン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８１．１。
【０１５０】
実施例１３
（Ｅ）−４−（５−（２−（３−イソプロピルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリン（化合物１２）の調製
【０１５１】
【化４８】
2020511549.tif 000050
【０１５２】
[0096]  実施例２に記載されている手順を使用し、工程４における３−メチルベンズアルデヒドの代わりに３−イソプロピルベンズアルデヒドを用いて、（Ｅ）−４−（５−（２−（３−イソプロピルベンジリデン）ヒドラジニル）−２−（ピリジン−４−イル）−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル）モルホリンが調製される。［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４３．１。
【０１５３】
実施例１４
ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬ＡＰＹ０２０１は、がん細胞系の増殖を選択的に阻害する
[0097]  いくつかのがん細胞系の生存率を、２つの化合物：ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬ＡＰＹ０２０１、およびディナシクリブ（がん細胞増殖の強力な阻害薬としても当業者に公知であるＣＤＫ阻害薬）の存在下で評価した。多発性骨髄腫ＫＭＳ１２Ｅ、非ホジキンリンパ腫ＳＵ−ＤＨＬ４、Ｔ細胞リンパ腫Ｈｕｔ−７８の３つのがん細胞系、および健常個体に由来する正常なヒト末梢血単核細胞を試験した。細胞を、３８４ウェルプレートにおいて１０％ウシ胎仔血清を添加したＲＰＭＩ培地に播種した。がん細胞を１０００細胞／ウェルで播種し、正常細胞を１ウェル当たり１０，０００細胞で全体積３０μＬ／ウェルとして播種した。播種の直後に、被験化合物を５つの濃度：１０μＭ−１μＭ−０．０１μＭ−０．００１μＭで各濃度についてデュプリケートウェルに添加した。細胞を、加湿インキュベータ中で５％ＣＯ２を用いて化合物に３７℃で７０時間曝露した。細胞生存率をＰｒｅｓｔｏ  Ｂｌｕｅ試薬（Thermo Scientific/Invitrogen）によって決定した。ディナシクリブは、すべての細胞タイプの生存率を同様の効力で阻害した（ＩＣ５０：１０ｎＭ〜１５ｎＭ）。ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬ＡＰＹ０２０１は、３つのがん細胞系の生存率を強力に阻害した（ＩＣ５０：３３ｎＭ〜４６ｎＭ）が、ディナシクリブと異なって、正常ＰＢＭＣの生存率を有意には阻害せず（ＩＣ５０＞１０μＭ）、これは、正常細胞に比べてがん細胞に対する選択性が＞１００倍であることを示す。図１Ａ〜１Ｄを参照のこと。
【０１５４】
[0098]  同様に、がん細胞系：Ｔ細胞リンパ腫Ｈｕｔ−７８、多発性骨髄腫ＫＭＳ１２Ｅ、および正常ヒト末梢血単核細胞の生存率を、アピリモッド（apilomod）、ＡＰＹ０２０１、本開示の化合物１（本開示の実施例２に記載されている）、およびＹＭ２０１６３６の存在下で評価した。アピリモッド、ＡＰＹ０２０１および化合物１は、正常細胞に比べてがん細胞に対する選択性を示した：
【０１５５】
【表１】
2020511549.tif 000051
図５Ａ〜Ｃも参照のこと。
【０１５６】
実施例１５
ＬＰＳで刺激された正常ヒト末梢単球によるＩＬ２３分泌に対するＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬ＡＰＹ０２０１および化合物１（本開示の実施例２に記載されている）の効果
[0099]  ヒトＰＢＭＣを、９６ウェルプレートにおいて１ウェル当たり１５０，０００細胞の密度で１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ培地に播種した。細胞を化合物と共に２時間プレインキュベートした。プレインキュベートした後に、細胞を１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで１８時間刺激した。分泌されたＩＬ−２３をＥＬＩＳＡによって決定した（ヒトIL-23 Quantikine ELISAキット、R&D cat#D2300B）。結論：ＡＰＹ０２０１および化合物１（NSN22769と称する）は、ＬＰＳ誘導ＰＢＭＣによるＩＬ−２３の分泌を完全にブロックした。図２Ａおよび２Ｂを参照のこと。
【０１５７】
実施例１６
ＰＩＫｆｙｖｅ阻害薬および化合物１（本開示の実施例２に記載されている）は、ＭＬ−２がん細胞系においてアポトーシスを誘導する
[0100]  急性骨髄単球性白血病細胞ＭＬ−２を、９６ウェルプレートにおいて１ウェル当たり５０，０００細胞の密度で１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ培地に播種した。細胞を化合物に曝露し、早期アポトーシスマーカーであるカスパーゼ３／７活性を化合物に曝露して１５時間、２４時間および４１時間後に細胞において測定した。カスパーゼ活性は、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７Ａｓｓａｙ（Promega）を使用して、製造業者によって提供されたプロトコルに従って決定された。結論: 化合物1（NSN22769と称する）を含む３つの化合物はすべて、ＭＬ−２細胞において早期アポトーシスの特徴であるカスパーゼ３／７活性化を起こした。図３Ａ〜３Ｃを参照のこと。
【０１５８】
実施例１７
生化学的ＰＩＫｆｙｖｅアッセイ
[0101]  バキュロウイルス発現系においてＮ末端ＧＳＴ−融合タンパク質（２６５ｋＤａ）として発現した全長ヒト組換えＰＩＫＦＹＶＥは、Ｃａｒｎａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Kobe、Japan）から得られた。Ｂｏｄｉｐｙ標識ホスファチジルイノシトール３−ホスフェート（PI3P）は、Ｅｃｈｅｌｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Salt Lake City, UT USA）から得られた。１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（PS）は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ（Alabaster、AL US）から購入した。
【０１５９】
[0102]  ＰＩ３Ｐ／ＰＳ基質を以下の通り調製した：クロロホルム中１０ｍＭのＰＳ貯蔵液をガラス容器で調製した。１ｍＭのＰＩ３Ｐ貯蔵液を５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）で調製した。実験の前に、ＰＳ貯蔵液を窒素流下で急速に蒸発させ、乾燥ペレットを５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）に再懸濁して、最終濃度２０μＭにした。再懸濁したＰＳとＰＩ３Ｐを、１０μＭ  ＰＳと１μＭ  ＰＩＰ２の１０：１のモル比で混合した。調製したＰＩ３Ｐ／ＰＳミックスを超音波水浴中で１５分間音波処理した（３回、それぞれ５分）。
【０１６０】
[0103]  キナーゼ反応を３８４ウェルプレート（Greiner）において全体積２０μＬで以下の通り組み合わせた：キナーゼタンパク質を、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ  ＤＴＴ、２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２および２．５ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．００５％トリトンＸ−１００を含むアッセイバッファーに前希釈し、３８４ウェルプレートに（１ウェル当たり１０μＬ）分注した。被験化合物をＤＭＳＯに段階的に前希釈し、アコースティック分注（Labcyte Echo）によってタンパク質試料に添加した。ＤＭＳＯの濃度を、すべての試料において１％に等しくした。すべての被験化合物を、１２の濃度で３回繰り返して試験した。対照試料（阻害薬の非存在下で０％阻害、ＤＭＳＯのみ）および１００％阻害（酵素の非存在下）を、４回繰り返して組み合わせ、化合物の存在下における％阻害を算出するために使用した。反応は、１０μＬのＡＴＰを添加したＰＩ３Ｐ／ＰＳ基質の添加によって開始した。酵素の最終濃度は２ｎＭであった。ＡＴＰの最終濃度は１０μＭであった。キナーゼ反応を室温で３時間進行させた。インキュベートした後、５０μＬの停止バッファー（１００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、０．０１％トリトンＸ−１００、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ）の添加によって、反応をクエンチした。停止させたプレートをマイクロ流体電気泳動装置（Caliper LabChip（登録商標） 3000、Caliper Life Sciences/Perkin Elmer）で分析した。ＰＩ（３）Ｐ基質およびＰＩ（３，５）Ｐ産物ピークの相対蛍光強度の変化をパラメータ測定した。各被験試料における活性を、産物対総計の比（ＰＳＲ）：Ｐ／（Ｓ＋Ｐ）［式中、Ｐは、産物のピーク高さであり、Ｓは、基質のピーク高さである］として決定した。
【０１６１】
[0104]  阻害（％）（Ｐ阻害）は、次の方程式:Ｐ阻害＝（ＰＳＲ０％阻害−ＰＳＲ化合物）／（ＰＳＲ０％阻害−ＰＳＲ１００％阻害）＊１００［式中、ＰＳＲ化合物は、化合物の存在下における産物／総計比であり、ＰＳＲ０％阻害は、化合物の非存在下における産物／総計比であり、ＰＳＲ１００％阻害は、酵素の非存在下における産物／総計比である］を使用して決定した。化合物のＩＣ５０（５０％阻害）を決定するために、ＸＬｆｉｔソフトウェア（IDBS）を使用して４パラメータＳ字状用量応答モデルによって、％阻害ｃｄａｔａ（Ｐ阻害対化合物濃度）を適合させた。
【０１６２】
[0105]  このアッセイにおいて、アピリモッド、ＡＰＹ０２０１、本開示の化合物１（本開示の実施例２に記載されている）、およびＹＭ２０１６３６がＰＩＫｆｙｖｅキナーゼを阻害する能力について試験した。結果を図４および下記の表に示す。
【０１６３】
【表２】
2020511549.tif 000052
【図１Ａ】
2020511549.tif 000063
【図１Ｂ】
2020511549.tif 000064
【図１Ｃ】
2020511549.tif 000065
【図１Ｄ】
2020511549.tif 000066
【図２Ａ】
2020511549.tif 000067
【図２Ｂ】
2020511549.tif 000068
【図３Ａ】
2020511549.tif 000069
【図３Ｂ】
2020511549.tif 000070
【図３Ｃ】
2020511549.tif 000071
【図４】
2020511549.tif 000072
【図５Ａ】
2020511549.tif 000073
【図５Ｂ】
2020511549.tif 000074
【図５Ｃ】
2020511549.tif 000075
【国際調査報告】
2020511549.tif 000076
2020511549.tif 000077
2020511549.tif 000078