(57)【要約】本発明は、ＣＤ１３７に特異的に結合する抗体−薬物コンジュゲートおよびリガンド−薬物コンジュゲートの使用による造血細胞の選択的枯渇により、移植片対宿主病および自己免疫疾患（例えば、移植療法から生じるものなど）を予防および治療する方法を提供する。本明細書に記載の組成物および方法は、幹細胞障害および他の血液状態を含む様々な病状を治療するために、使用することができる。
2020506176.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
移植片対宿主病の治療を必要とするヒト患者の移植片対宿主病を治療する方法であって、
前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能な有効量の抗体またはその抗原結合断片を、前記患者に投与することを含み、
前記抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、方法。
【請求項２】
移植片対宿主病を患っているヒト患者、または移植片対宿主病のリスクがあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、
前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能な有効量の抗体またはその抗原結合断片を、前記患者に投与することを含み、
前記抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、方法。
【請求項３】
自己免疫疾患の治療を必要とするヒト患者の自己免疫疾患を治療する方法であって、
前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能な有効量の抗体またはその抗原結合断片を、前記患者に投与することを含み、
前記抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、方法。
【請求項４】
自己免疫疾患を患っているヒト患者、または自己免疫疾患のリスクがあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、
前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能な有効量の抗体またはその抗原結合断片を、前記患者に投与することを含み、
前記抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、方法。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ポリクローナル抗体またはその抗原結合断片、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、二重特異性抗体またはその抗原結合断片、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２分子、およびタンデムｄｉ−ｓｃＦｖからなる群より選択される、請求項１〜４の何れかに記載の方法。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０のアミノ酸残基１１５〜１５６内に位置するエピトープで、ヒトＣＤ１３７の細胞外ドメインに結合する、請求項１〜５の何れかに記載の方法。
【請求項７】
前記抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥからなる群より選択されるアイソタイプを有する、請求項１〜６の何れかに記載の方法。
【請求項８】
前記抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、またはヒトＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記細胞毒素は微小管結合剤である、請求項１〜８の何れかに記載の方法。
【請求項１０】
前記微小管結合剤はメイタンシンである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記微小管結合剤はメイタンシノイドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記メイタンシノイドは、ＤＭ１、ＤＭ３およびＤＭ４、ならびにメイタンシノールからなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記抗体、その抗原結合断片、または可溶性ＣＤ１３７リガンドを前記患者に投与することを含む、請求項１〜１２の何れかに記載の方法。
【請求項１４】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記抗体、またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記抗体、またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む、請求項１〜１４の何れかに記載の方法。
【請求項１６】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記抗体、またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む、請求項１〜１４の何れかに記載の方法。
【請求項１７】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けてから約１時間〜１０日後に、前記抗体、またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けてから約３〜４日後に、前記抗体、またはその抗原結合断片を前記患者に投与することを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記移植は同種移植である、請求項１３〜１８の何れかに記載の方法。
【請求項２０】
前記移植は骨髄移植である、請求項１３〜１９の何れかに記載の方法。
【請求項２１】
前記移植は末梢血移植である、請求項１３〜１９の何れかに記載の方法。
【請求項２２】
前記移植は臍帯血移植である、請求項１３〜１９の何れかに記載の方法。
【請求項２３】
前記移植は造血細胞を含む、請求項１３〜２２の何れかに記載の方法。
【請求項２４】
造血幹細胞またはその子孫は、前記患者への前記造血幹細胞の移植から２日以上後において、造血幹細胞の機能的ポテンシャルを維持する、請求項１３〜２３の何れかに記載の方法。
【請求項２５】
造血幹細胞またはその子孫は、前記患者への前記造血幹細胞の移植後、造血組織に局在化することができ、かつ／または造血を再確立することができる、請求項１３〜２４の何れかに記載の方法。
【請求項２６】
前記造血幹細胞は、前記患者への移植時に、巨核球、栓球、血小板、赤血球、肥満細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞からなる群より選択される細胞集団の回復を引き起こす、請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記移植は白血球を含む、請求項１３〜２６の何れかに記載の方法。
【請求項２８】
前記白血球は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、癌細胞、好中球、好塩基球、および好酸球からなる群より選択される細胞を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＣＤ１３７＋細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、癌細胞、好中球、好塩基球、および好酸球からなる群より選択される細胞を含む、請求項２または４に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞は、前記患者の抗原に対する反応性を示す、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体、またはその抗原結合断片は、接触するとＴ細胞に取り込まれる、請求項１〜３０の何れかに記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体、またはその抗原結合断片は、Ｔ細胞の死を促進するか、またはＴ細胞の増殖を抑制する、請求項１〜３１の何れかに記載の方法。
【請求項３３】
前記抗体、またはその抗原結合断片は、前記患者への投与時に、１つ以上の補体タンパク質を細胞にリクルートすることができる、請求項１〜３２の何れかに記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体、またはその抗原結合断片は、前記患者への投与時に、１つ以上の補体タンパク質をＴ細胞にリクルートすることができる、請求項１〜３３の何れかに記載の方法。
【請求項３５】
前記自己免疫疾患は、Ｔ細胞駆動型またはＢ細胞駆動型の自己免疫疾患である、請求項３または４に記載の方法。
【請求項３６】
前記自己免疫疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、腸疾患、乾癬、ループス、または１型糖尿病である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記患者は幹細胞障害を患っている、請求項１〜３６の何れかに記載の方法。
【請求項３８】
前記患者はヘモグロビン障害を患っている、請求項１〜３６の何れかに記載の方法。
【請求項３９】
前記ヘモグロビン障害は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコーニ貧血、およびウィスコット−アルドリッチ症候群からなる群より選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記患者は免疫不全障害を患っている、請求項１〜３６の何れかに記載の方法。
【請求項４１】
前記免疫不全障害は先天性免疫不全である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記免疫不全障害は後天性免疫不全である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記後天性免疫不全は、ヒト免疫不全ウイルスまたは後天性免疫不全症候群である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記患者は代謝障害を患っている、請求項１〜３６の何れかに記載の方法。
【請求項４５】
前記代謝障害は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、および異染性白質ジストロフィーからなる群より選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記患者は癌を患っている、請求項１〜３６の何れかに記載の方法。
【請求項４７】
前記癌は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫および骨髄異形成症候群、ならびに神経芽細胞腫からなる群より選択される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記患者は、アデノシンデアミナーゼ欠損症および重症複合免疫不全症、高免疫グロブリンＭ症候群、チェディアック−東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵病、サラセミアメジャー、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、ならびに若年性関節リウマチからなる群より選択される障害を患っている、請求項１〜３６の何れかに記載の方法。
【請求項４９】
前記患者は、造血幹細胞の集団を含む移植を受けた、請求項３７〜４８の何れかに記載の方法。
【請求項５０】
前記障害または癌を治療する、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項５１】
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の治療を必要とするヒト患者のＧＶＨＤを治療する方法であって、
前記方法は、ＧＶＨＤが治療されるように、抗ＣＤ１３７抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を前記ヒト患者に投与することを含み、
前記ＡＤＣは、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である細胞毒素に結合した抗ＣＤ１３７抗体を含む、方法。
【請求項５２】
ＧＶＨＤを有するヒト患者、またはＧＶＨＤを発症するリスクのあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、
前記方法は、ＧＶＨＤ、前記ＣＤ１３７＋細胞の集団が枯渇するように、抗ＣＤ１３７  ＡＤＣを前記ヒト患者に投与することを含み、
前記ＡＤＣは、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である細胞毒素に結合した抗ＣＤ１３７抗体を含む、方法。
【請求項５３】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けてから約１時間〜１０日後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けてから約３〜４日後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記移植は同種移植である、請求項５１〜５８の何れかに記載の方法。
【請求項６０】
前記微小管結合剤はメイタンシノイドである、請求項５１〜５９の何れかに記載の方法。
【請求項６１】
前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである、請求項５１〜５９の何れかに記載の方法。
【請求項６２】
前記アマトキシンは、下記式（ＩＡ）：
【化１】
2020506176.tif 000028
で表わされ、
式（ＩＡ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり；
前記アマトキシンは、ＲＣ置換基を１つだけ含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記アマトキシンは、下記式（ＩＢ）：
【化２】
2020506176.tif 000029
で表わされ、
式（ＩＢ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり；
前記アマトキシンは、ＲＣ置換基を１つだけ含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマニチンである、請求項５１〜５９の何れかに記載の方法。
【請求項６５】
前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンからなる群より選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
同種移植を受けたヒト患者のアロ反応性Ｔ細胞を枯渇させる方法であって、
前記方法は、アロ反応性Ｔ細胞が枯渇するように、抗ＣＤ１３７  ＡＤＣを前記ヒト患者に投与することを含み、
前記ＡＤＣは、細胞毒素に結合した抗ＣＤ１３７抗体を含む、方法。
【請求項６７】
前記移植は骨髄移植である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記移植は末梢血移植である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記移植は臍帯血移植である、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記移植は造血細胞を含む、請求項６６〜６９の何れかに記載の方法。
【請求項７１】
前記造血幹細胞またはその子孫は、前記患者への前記造血幹細胞の移植から２日以上後において、造血幹細胞の機能的ポテンシャルを維持する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記細胞毒素はＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である、請求項６６〜７１の何れかに記載の方法。
【請求項７３】
前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記アマトキシンは、下記式（ＩＡ）：
【化３】
2020506176.tif 000030
で表わされ、
式（ＩＡ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり；
前記アマトキシンは、ＲＣ置換基を１つだけ含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記アマトキシンは、下記式（ＩＢ）：
【化４】
2020506176.tif 000031
で表わされ、
式（ＩＢ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；
ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；
Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；
Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；
Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；
ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；
ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；
Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；
Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり；
前記アマトキシンは、ＲＣ置換基を１つだけ含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマニチンである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７７】
前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンからなる群より選択される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記抗ＣＤ１３７抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングにより定義される抗体ＢＢＫ２のＣＤＲを含む、請求項１〜７７の何れかに記載の方法。
【請求項７９】
前記抗ＣＤ１３７抗体は、抗体ＢＢＫ２の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１〜７７の何れかに記載の方法。
【請求項８０】
前記抗ＣＤ１３７抗体はキメラＢＢＫ２である、請求項１〜７７の何れかに記載の方法。
【請求項８１】
前記抗ＣＤ１３７抗体は、配列番号２３を含有する重鎖配列および配列番号２４を含有する軽鎖配列を含む、請求項１〜７７の何れかに記載の方法。
【請求項８２】
前記抗ＣＤ１３７抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４である、請求項１〜７７の何れかに記載の方法。
【請求項８３】
ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分であって、
前記抗体は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含有する重鎖と、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含有する軽鎖とを含む、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８４】
インタクト抗体である、請求項８３に記載の抗ＣＤ１３７抗体。
【請求項８５】
請求項８３に記載の抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合部分を含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、
前記抗体、またはその抗原結合部分は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
【請求項８６】
前記細胞毒素は、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である、請求項８５に記載のＡＤＣ。
【請求項８７】
前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである、請求項８６に記載のＡＤＣ。
【請求項８８】
前記アマトキシンはアマニチンである、請求項８７に記載の抗ＣＤ１３７ＡＤＣ。
【請求項８９】
前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンからなる群より選択される、請求項８８に記載の抗ＣＤ１３７ＡＤＣ。
【請求項９０】
請求項８５〜８９の何れかに記載のＡＤＣと、薬学的に活性な担体とを含む、医薬組成物。
【請求項９１】
移植片不全またはＧＶＨＤの治療を必要とするヒト患者の移植片不全またはＧＶＨＤを治療する方法であって、
前記方法は、請求項７８〜８３の何れかに記載のＡＤＣの有効量を、前記ヒト患者に投与することを含み、
前記ヒト患者は、以前に移植を受けたことがある、方法。
【請求項９２】
前記ヒト患者は、前記ＡＤＣの投与前４日以内に前記移植を受けた、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
移植片不全またはＧＶＨＤのリスクがあるヒト患者を治療する方法であって、
前記方法は、請求項７８〜８３の何れかに記載のＡＤＣの有効量を、移植片不全またはＧＶＨＤのリスクがある前記ヒト患者に投与し、その後、前記ヒト患者に移植を行うことを含む、方法。
【請求項９４】
前記ＡＤＣは、単回投与として前記ヒト患者に投与される、請求項９１〜９３の何れかに記載の方法。
【請求項９５】
リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ１３７抗体を含む、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）。
【請求項９６】
前記抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号２５、２６、および２７に記載のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２９、３０、および３１に記載のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項９５に記載のＡＤＣ。
【請求項９７】
前記抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項９５または９６に記載のＡＤＣ。
【請求項９８】
前記重鎖可変領域は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、
前記軽鎖可変領域は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項９６に記載のＡＤＣ。
【請求項９９】
前記抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである、請求項９５〜９８の何れかに記載のＡＤＣ。
【請求項１００】
前記細胞毒素は、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である、請求項９５〜９９の何れかに記載のＡＤＣ。
【請求項１０１】
前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである、請求項１００に記載のＡＤＣ。
【請求項１０２】
前記アマトキシンはアマニチンである、請求項１０１に記載のＡＤＣ。
【請求項１０３】
前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンからなる群より選択される、請求項１０２に記載のＡＤＣ。
【請求項１０４】
請求項９５〜１０３の何れかに記載のＡＤＣと、薬学的に活性な担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１０５】
移植片不全またはＧＶＨＤの治療を必要とするヒト患者の移植片不全またはＧＶＨＤを治療する方法であって、
前記方法は、請求項９５〜１０３の何れかに記載のＡＤＣの有効量を、前記ヒト患者に投与することを含み、
前記ヒト患者は、以前に移植を受けたことがある、方法。
【請求項１０６】
前記ヒト患者は、前記ＡＤＣの投与前４日以内に前記移植を受けた、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
移植片不全またはＧＶＨＤのリスクがあるヒト患者を治療する方法であって、
前記方法は、請求項９５〜１０３の何れかに記載のＡＤＣの有効量を、移植片不全またはＧＶＨＤのリスクがある前記ヒト患者に投与し、その後、前記ヒト患者に移植を行うことを含む、方法。
【請求項１０８】
前記ＡＤＣは、単回投与として前記ヒト患者に投与される、請求項１０３〜１０７の何れかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２０１７年１月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／４４８，７４１、および２０１７年１２月７日に出願された米国仮特許出願第６２／５９５，９７７号に対する優先権を主張する。前述の出願の内容は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、移植療法の分野に関し、造血細胞によって発現された抗原に結合することができる抗体、抗体−薬物コンジュゲート、およびリガンド−薬物コンジュゲートの投与による、自己免疫疾患および移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の治療方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
造血幹細胞には大きな治療上の可能性があるが、診療所での使用を妨げている制限は、細胞移植の数日または数週間後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発生である。移植後のＧＶＨＤの治療に関しては著しい進歩があったが、特にＧＶＨＤによる死亡率の低減に関して、改善された方法に対するニーズが当技術分野において依然として存在する。ＧＶＨＤの従来の治療は、コルチコステロイドやシクロスポリンなどの強力な薬物による全身性免疫抑制療法を必要とする。ミコフェノール酸モフェチル、ラパマイシン（シロリムス）、イマチニブ、リツキシマブなどの薬剤は、ステロイド抵抗性ＧＶＨＤの患者に使用される。しかし、これらの治療法の有効性は限られており、しばしば重篤な副作用を引き起こす。ＧＶＨＤ患者の５０％のみが診断後５年以内に免疫抑制治療を中止でき、１０％は５年を超えて継続治療を必要とする。残りの４０％は死亡するか、ＧＶＨＤが解決する前に再発悪性腫瘍を発症する。高リスクＧＶＨＤ（血小板数＜１００，０００／マイクロリットル、またはＧＶＨＤからの進行性発症）患者の５年生存率はわずか４０〜５０％である。したがって、ＧＶＨＤを予防および治療するための革新的な戦略の開発は、満たされていない重要な臨床的ニーズを表す。
【０００４】
同様に、ＧＶＨＤ、多発性硬化症などの自己免疫疾患、関節リウマチ、腸疾患、乾癬、ループス、および１型糖尿病は、正常な自己組織に対する異常な免疫応答によって特徴付けられる。自己免疫疾患は、自己反応性Ｔ細胞と、宿主組織と反応する抗体（自己抗体）の産生を特徴とする。自己免疫疾患の伝統的な治療法には、免疫応答を全体的に弱める免疫抑制剤が含まれる。そのような薬剤の利点は、日和見感染に対する感受性、悪性腫瘍の長期リスク、毒性、およびその他の好ましくない副作用によってしばしば和らげられる。したがって、ＧＶＨＤおよび自己免疫疾患の両方の細胞メディエーターをより特異的に標的とする戦略を開発する必要がある。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、ＧＶＨＤおよび自己免疫疾患に伴う罹患率および死亡率を低減するために、造血幹細胞移植療法を受けているヒト患者などの患者における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）および自己免疫疾患の急性型および慢性型を予防および治療する方法を提供する。さらに本発明は、とりわけ鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコーニ貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、アデノシンデアミナーゼ欠乏症−重症複合免疫不全症、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド−ブラックファン貧血およびシュワックマン−ダイアモンド症候群、ヒト免疫不全ウイルス感染、および後天性免疫不全症候群などの様々な造血状態を治療する方法を特徴とする。本発明は、患者内において、Ｔ細胞などの造血細胞の集団を枯渇させるために、ＣＤ１３７などの造血細胞によって発現されるタンパク質に結合することができる抗体、抗体−薬物コンジュゲート、リガンド、およびリガンド−薬物コンジュゲートで患者を治療する方法を特徴とする。Ｔ細胞のこの選択的枯渇は、ＧＶＨＤおよび自己免疫疾患を大幅に減少させながら、全体的かつ再発のない患者の生存を改善する。
【０００６】
第１の態様では、本発明は、ＧＶＨＤの治療を必要とするヒト患者のＧＶＨＤを治療する方法であって、前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能な有効量の抗体もしくはその抗原結合断片または抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を、前記患者に投与することを含み、前記抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、方法を特徴とする。
【０００７】
第２の態様では、本発明は、ＧＶＨＤを患っているヒト患者、またはＧＶＨＤのリスクがあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能な有効量の抗体もしくはその抗原結合断片または抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を、前記患者に投与することを含み、前記抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、方法を提供する。
【０００８】
第３の態様では、本発明は、自己免疫疾患の治療を必要とするヒト患者の自己免疫疾患を治療する方法であって、前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能な有効量の抗体もしくはその抗原結合断片または抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を、前記患者に投与することを含み、前記抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、方法を特徴とする。
【０００９】
第４の態様では、自己免疫疾患を患っているヒト患者、または自己免疫疾患のリスクがあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能な有効量の抗体もしくはその抗原結合断片または抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を、前記患者に投与することを含み、前記抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、方法を提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、ポリクローナル抗体またはその抗原結合断片、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、二重特異性抗体またはその抗原結合断片、二重可変免疫グロブリンドメイン、一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、抗体様タンパク質スキャフォールド、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２分子、およびタンデムｄｉ−ｓｃＦｖからなる群より選択される。
【００１１】
いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０のアミノ酸残基１１５〜１５６内に位置するエピトープで、ヒトＣＤ１３７の細胞外ドメインに結合する。配列番号２０は、ＣＤ１３７の細胞外ドメインに対応し、以下のアミノ酸配列を有する：
2020506176.tif 000003
【００１２】
いくつかの実施形態では、前記抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥからなる群より選択されるアイソタイプを有する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、前記Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、前記Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ２アイソタイプのＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、前記Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ３アイソタイプのＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、前記Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインである。
【００１４】
別の態様では、本発明は、ＧＶＨＤの治療を必要とするヒト患者のＧＶＨＤを治療する方法であって、前記方法は、有効量の可溶性ＣＤ１３７リガンドを前記患者に投与することを含む、方法を特徴とする。
【００１５】
別の態様では、本発明は、ＧＶＨＤを患っているヒト患者、またはＧＶＨＤのリスクがあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、有効量の可溶性ＣＤ１３７リガンドを前記患者に投与することを含む、方法を特徴とする。
【００１６】
別の態様では、本発明は、自己免疫疾患の治療を必要とするヒト患者の自己免疫疾患を治療する方法であって、前記方法は、有効量の可溶性ＣＤ１３７リガンドを前記患者に投与することを含む、方法を特徴とする。
【００１７】
別の態様では、本発明は、自己免疫疾患を患っているヒト患者、または自己免疫疾患のリスクがあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、有効量の可溶性ＣＤ１３７リガンドを前記患者に投与することを含む、方法を特徴とする。
【００１８】
いくつかの実施形態では、前記抗体またはその抗原結合断片は、微小管結合剤などの細胞毒素にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、前記抗体もしくはその抗原結合断片、または可溶性ＣＤ１３７リガンドは、リンカーを介して微小管結合剤にコンジュゲートされる。更に別の実施形態では、前記抗体またはその抗原結合断片は細胞毒素にコンジュゲートされ、前記細胞毒素は結合剤である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、前記微小管結合剤はメイタンシンである。
【００２０】
いくつかの実施形態では、前記微小管結合剤はメイタンシノイドである。
【００２１】
いくつかの実施形態では、前記微小管結合剤は、メイタンシンまたはメイタンシノイドである。
【００２２】
いくつかの実施形態では、前記メイタンシノイドは、ＤＭ１、ＤＭ３およびＤＭ４、ならびにメイタンシノールからなる群より選択される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、前記メイタンシノイドは、メイタンシノール類似体である。
【００２４】
いくつかの実施形態では、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性ＣＤ１３７リガンドは、前記患者に投与される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、前記造血幹細胞を前記患者に投与する約３日（例えば、１時間〜７日（例：１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、または７日））前に、微小管結合剤などの細胞毒素にコンジュゲートされた前記抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣまたは可溶性ＣＤ１３７リガンドは、前記患者に投与される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性ＣＤ１３７リガンドは、前記患者に投与される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性ＣＤ１３７リガンドは、前記患者に投与される。
【００２８】
いくつかの実施形態では、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性ＣＤ１３７リガンド（例えば、微小管結合剤などの細胞毒素にコンジュゲートされた）は、例えば、外因性造血幹細胞移植の実施の約１時間〜１０日（例：１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、または１０日）以上後に、患者に投与される。例えば、前記抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、移植の約３〜４日後に投与され得る。
【００２９】
いくつかの実施形態では、前記移植は同種移植である。いくつかの実施形態では、前記移植は自家移植である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、前記移植は、骨髄移植、末梢血移植、または臍帯血移植である。
いくつかの実施形態では、前記移植は造血細胞（例えば、造血幹細胞）を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、前記造血幹細胞はまたはその子孫は、前記患者への前記造血幹細胞の移植から２日以上後において、造血幹細胞の機能的ポテンシャルを維持する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、前記造血幹細胞はまたはその子孫は、前記患者への前記造血幹細胞の移植から２日以上（例えば、約２日〜約５日、約２日〜約７日、約２日〜約２０日、約２日〜約３０日（例：２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、または３０日以上））後において、造血幹細胞の機能的ポテンシャルを維持する。
【００３３】
いくつかの実施形態では、造血幹細胞またはその子孫は、前記患者への前記造血幹細胞の移植後、骨髄などの造血組織に局在化することができ、かつ／または造血を再確立することができる。
【００３４】
いくつかの実施形態では、前記造血幹細胞は、前記患者への移植時に、巨核球、栓球、血小板、赤血球、肥満細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞からなる群より選択される細胞集団の回復を引き起こす。
【００３５】
いくつかの実施形態では、前記移植は白血球を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態では、前記造血細胞は、前記患者への移植時に、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、癌細胞、好中球、好塩基球、および好酸球からなる群より選択される。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本発明は、ＧＶＨＤを患っているヒト患者、またはＧＶＨＤのリスクがあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、ＣＤ１３７に結合可能であり、かつ微小管結合剤などの細胞毒素にコンジュゲートされた有効量の抗体もしくは抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性ＣＤ１３７リガンドを前記患者に投与することを含み、ＣＤ１３７＋細胞を含む前記造血細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、癌細胞、好中球、好塩基球、および好酸球からなる群より選択される、方法を提供する。
【００３８】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、癌細胞、好中球、好塩基球、および好酸球からなる群より選択されたＣＤ１３７＋細胞は、前記患者の抗原に対する反応性を示す。
【００３９】
いくつかの実施形態では、抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性ＣＤ１３７リガンドは、患者への投与後に、ＣＤ１３７＋細胞に取り込まれる。例えば、前記抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性ＣＤ１３７リガンドは、受容体を介したエンドサイトーシス（例えば、細胞表面のＣＤ１３７への結合）により、ＣＤ１３７＋Ｔ細胞に取り込まれ得る。いくつかの実施形態では、前記抗体、その抗原結合断片またはＡＤＣに共有結合した細胞毒素は、化学的切断によって（例えば、本明細書に記載のリンカーの酵素的切断または非特異的切断によって）細胞内に放出され得る。次に、細胞毒素は、その細胞内標的（有糸分裂紡錘体装置、核ＤＮＡ、リボソームＲＮＡ、トポイソメラーゼなど）にアクセスして、ＣＤ１３７＋Ｔ細胞の死を促進し得る。
【００４０】
いくつかの実施形態では、前記抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣまたは可溶性ＣＤ１３７リガンドは、（例えば、微小管の動的不安定性を抑制することによって）ＣＤ１３７＋Ｔ細胞の有糸分裂停止を促進して、ＣＤ１３７＋細胞の増殖を抑制することができる。
【００４１】
いくつかの実施形態では、前記抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣまたは可溶性ＣＤ１３７リガンドは、前記患者への投与時に、１つ以上の補体タンパク質、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、および／または好酸球をリクルートすることによって、細胞死を促進し得る。
【００４２】
いくつかの実施形態では、前記抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣまたは可溶性ＣＤ１３７リガンドは、前記患者への投与時に、１つ以上の補体タンパク質、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、および／または好酸球をリクルートすることによって、ＣＤ１３７＋Ｔ細胞の死を促進し得る。
【００４３】
いくつかの実施形態では、前記抗体もしくはその抗原結合断片、または可溶性ＣＤ１３７リガンドは、Ｔ細胞駆動型またはＢ細胞駆動型の自己免疫疾患を治療するために用いられる。
【００４４】
いくつかの実施形態では、前記自己免疫疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、腸疾患、乾癬、ループス、または１型糖尿病である。
【００４５】
いくつかの実施形態では、前記方法は、患者、例えば、造血幹細胞を含む移植を受けた患者の1つ以上の障害または癌を治療するために使用される。例えば、前記患者は幹細胞障害を患っている患者であり得る。いくつかの実施形態では、前記患者は、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコーニ貧血、およびウィスコット−アルドリッチ症候群などのヘモグロビン症障害を患っている。前記患者は、先天性免疫不全や後天性免疫不全（例えば、ヒト免疫不全ウイルスまたは後天性免疫不全症候群）などの免疫不全を患っている可能性がある。いくつかの実施形態では、前記患者は、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、および異染性白質ジストロフィーなどの代謝障害を患っている。いくつかの実施形態では、前記患者は、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫および骨髄異形成症候群、ならびに神経芽細胞腫などの癌を患っている。いくつかの実施形態では、前記患者は、アデノシンデアミナーゼ欠損症および重症複合免疫不全症、高免疫グロブリンＭ症候群、チェディアック−東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵病、サラセミアメジャー、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、ならびに若年性関節リウマチからなる群より選択される障害を患っている。
【００４６】
更なる態様では、本発明は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の治療を必要とするヒト患者のＧＶＨＤを治療する方法であって、前記方法は、ＧＶＨＤが治療されるように、抗ＣＤ１３７抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を前記ヒト患者に投与することを含み、前記ＡＤＣは、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である細胞毒素に結合した抗ＣＤ１３７抗体を含む、方法を特徴とする。一実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。更なる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。更に別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けてから約１時間〜１０日後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。更なる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けてから約３〜４日後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。他の実施形態では、前記移植は同種移植である。
【００４７】
更に別の態様では、本発明は、ＧＶＨＤを有する患者、またはＧＶＨＤを発症するリスクのあるヒト患者のＣＤ１３７＋細胞の集団を枯渇させる方法であって、前記方法は、ＧＶＨＤ、前記ＣＤ１３７細胞の集団が枯渇するように、抗ＣＤ１３７  ＡＤＣを前記ヒト患者に投与することを含み、前記ＡＤＣは、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である細胞毒素に結合した抗ＣＤ１３７抗体を含む、方法を特徴とする。一実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける前に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受ける約３日前に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けるのと同時に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。更なる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けた後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。更に別の実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けてから約１時間〜１０日後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。更なる実施形態では、前記方法は、前記患者が造血幹細胞を含む移植を受けてから約３〜４日後に、前記ＡＤＣを前記患者に投与することを含む。他の実施形態では、前記移植は同種移植である。他の実施形態では、前記微小管結合剤はメイタンシノイドである。他の実施形態では、前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである。特定の実施形態では、前記アマトキシンは、下記式（ＩＡ）：
【化１】
2020506176.tif 000004
で表わされ、式（ＩＡ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり；Ａｍは、ＲＣ置換基を１つだけ含む。更に他の実施形態では、前記アマトキシンは、下記式（ＩＢ）：
【化２】
2020506176.tif 000005
で表わされ、式（ＩＢ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり；Ａｍは、ＲＣ置換基を１つだけ含む。
【００４８】
他の実施形態では、前記ＡＤＣは、細胞毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ１３７抗体を含み、前記細胞毒素はＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、例えばアマニチンである。一実施形態では、前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、またはプロアマヌリンである。
【００４９】
別の態様では、本発明は、同種移植を受けたヒト患者のアロ反応性Ｔ細胞を枯渇させる方法であって、前記方法は、アロ反応性Ｔ細胞が枯渇するように、抗ＣＤ１３７  ＡＤＣを前記ヒト患者に投与することを含み、前記ＡＤＣは、細胞毒素に結合した抗ＣＤ１３７抗体を含む、方法を特徴とする。特定の実施形態では、前記移植は骨髄移植である。他の実施形態では、前記移植は末梢血移植である。更に他の実施形態では、前記移植は臍帯血移植である。他の実施形態では、前記移植は造血細胞を含む。特定の実施形態では、前記造血幹細胞またはその子孫は、前記患者への前記造血幹細胞の移植から２日以上後において、造血幹細胞の機能的ポテンシャルを維持する。他の実施形態では、前記細胞毒素はＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である。別の実施形態では、前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである。他の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、Ｋａｂａｔナンバリングにより定義される抗体ＢＢＫ２のＣＤＲを含む。別の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、抗体ＢＢＫ２の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む（Ｌｅｅ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ．  ２００２年１０月；２９（５）：４４９−５２頁に記載されているように、その全体が参照により本明細書に援用される。）。他の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体はキメラＢＢＫ２である。他の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、配列番号２３を含有する重鎖配列および配列番号２４を含有する軽鎖配列を含む。更に別の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体はアンタゴニスト抗体である。
【００５０】
他の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４である。特定の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体はインタクト抗体である。
【００５１】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物で使用される前記微小管結合剤は、メイタンシノイドである。
【００５２】
他の実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物で使用される前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤は、アマトキシンである。特定の実施形態では、前記アマトキシンは、下記式（ＩＡ）：
【化３】
2020506176.tif 000006
で表わされ、式（ＩＡ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり；Ａｍは、ＲＣ置換基を１つだけ含む。更に別の実施形態では、前記アマトキシンは、下記式（ＩＢ）：
【化４】
2020506176.tif 000007
で表わされ、式（ＩＢ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；ＲＣは、−Ｌ−Ｚであり；ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、前記抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分であり；Ａｍは、ＲＣ置換基を１つだけ含む。他の実施形態では、前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマニチンである。更に別の実施形態では、前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、またはプロアマヌリンである。
【００５３】
一実施形態では、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ１３７抗体を含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を特徴とする。前記細胞毒素は、例えば、アマニチン（例：α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリン）であり得る。一実施形態では、前記細胞毒素はα−アマニチンである。一実施形態では、前記細胞毒素はβ−アマニチンである。一実施形態では、前記細胞毒素はγ−アマニチンである。一実施形態では、前記細胞毒素はε−アマニチンである。一実施形態では、前記細胞毒素はアマニンである。一実施形態では、前記細胞毒素はアマニンアミドである。一実施形態では、前記細胞毒素はアマヌリンである。一実施形態では、前記細胞毒素はアマヌリン酸である。一実施形態では、前記細胞毒素はプロアマヌリンである。一実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、ヒトＣＤ１３７の細胞外ドメインに結合する。一実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、抗体ＢＢＫ２と競合する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、抗体ＢＢＫ２のＣＤＲを含む。他の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、抗体ＢＢＫ２の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。更に他の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体はキメラＢＢＫ２である。他の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、配列番号２３を含有する重鎖配列および配列番号２４を含有する軽鎖配列を含む。特定の実施形態では、前記抗ＣＤ１３７抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４である。
【００５５】
別の態様では、本発明は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含有する重鎖と、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含有する軽鎖とを含む、抗体またはその抗原結合部分を特徴とする。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、インタクト抗体である。
【００５６】
別の態様では、本発明は、本発明の抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合部分を含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、前記抗体、その抗原結合部分は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされる、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を特徴とする。特定の実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である。他の実施形態では、前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである。更に他の実施形態では、前記アマトキシンはアマニチンである。他の実施形態では、前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、またはプロアマヌリンである。前記リンカーは、例えば、Ｖａｌ−ＡｌａまたはＶａｌ−Ｃｉｔであるジペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ここでｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、前記リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【００５７】
別の態様では、本発明は、本発明のＡＤＣと、薬学的に活性な担体とを含む、医薬組成物を特徴とする。
【００５８】
別の態様では、本発明は、移植片不全またはＧＶＨＤの治療を必要とするヒト患者の移植片不全またはＧＶＨＤを治療する方法であって、前記方法は、本発明のＡＤＣの有効量を、前記ヒト患者に投与することを含み、前記ヒト患者は、以前に移植を受けたことがある、方法を特徴とする。特定の実施形態では、前記ヒト患者は、前記ＡＤＣの投与前４日以内に前記移植を受けた。
【００５９】
別の態様では、本発明は、移植片不全またはＧＶＨＤのリスクがあるヒト患者を治療する方法であって、前記方法は、本明細書に記載のＡＤＣの有効量を、移植片不全またはＧＶＨＤのリスクがある前記ヒト患者に投与し、その後、前記ヒト患者に移植を行うことを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、前記ＡＤＣは、単回投与として前記ヒト患者に投与される。
【００６０】
別の態様では、本発明は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ１３７抗体を含むＡＤＣであって、前記抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号２５、２６、および２７に記載のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２９、３０、および３１に記載のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、ＡＤＣを特徴とする。いくつかの実施形態では、前記抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体である。特定の実施形態では、前記重鎖可変領域は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、前記抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである。他の実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である。更に他の実施形態では、前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである。更に他の実施形態では、前記アマトキシンはアマニチンである。他の実施形態では、前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリンからなる群より選択される。
【００６１】
別の態様では、本発明は、リンカーを介して細胞毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ１３７抗体を含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、前記抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号３３、３４、および３５に記載のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号３６、３７、および３８に記載のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を特徴とする。いくつかの実施形態では、前記抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体である。他の実施形態では、前記抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである。他の実施形態では、前記細胞毒素は、微小管結合剤またはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤である。更に他の実施形態では、前記ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤はアマトキシンである。更に他の実施形態では、前記アマトキシンはアマニチンである。他の実施形態では、前記アマニチンは、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチン、ε−アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、またはプロアマヌリンである。
【００６２】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載の何れかのＡＤＣと、薬学的に活性な担体とを含む、組成物を特徴とする。
【００６３】
別の態様では、本発明は、移植片不全またはＧＶＨＤの治療を必要とするヒト患者の移植片不全またはＧＶＨＤを治療する方法であって、前記方法は、本明細書に記載のＡＤＣの有効量を、前記ヒト患者に投与することを含み、前記ヒト患者は、以前に移植を受けたことがある、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、前記ヒト患者は、前記ＡＤＣの投与前４日以内に前記移植を受けた。いくつかの実施形態では、前記ＡＤＣは、単回投与として前記ヒト患者に投与される。
【００６４】
別の態様では、本発明は、移植片不全またはＧＶＨＤのリスクがあるヒト患者を治療する方法であって、前記方法は、本明細書に記載のＡＤＣの有効量を、移植片不全またはＧＶＨＤのリスクがある前記ヒト患者に投与し、その後、前記ヒト患者に移植を行うことを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、前記ＡＤＣは、単回投与として前記ヒト患者に投与される。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１Ａ】ＣＤ１３７を過剰発現するＪｕｒｋａｔ細胞（すなわち、ヒトＴリンパ球細胞株）とともにマウスＢＢＫ２（すなわち、「ＢＢＫ−ｍＩｇＧ１」）を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞結合アッセイの結果を示すグラフである。
【図１Ｂ】ＣＤ１３７を過剰発現するＪｕｒｋａｔ細胞（すなわち、ヒトＴリンパ球細胞株）とともにネガティブコントロール（すなわち、「ｍＩｇＧ１」）を含むｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞結合アッセイの結果を示すグラフである。
【図２Ａ】抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣ（すなわち、「ＣＤ１３７−アマニチン」）および抗Ｔ細胞特異的−アマニチンＡＤＣ（すなわち、「抗Ｔ細胞−アマニチン」を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏＴ細胞死滅アッセイの結果を、ネガティブコントロール（すなわち、「ｈＩｇＧ−アマニチン」）と比較して示すグラフである。結果は、ＡＤＣ濃度（ｘ軸）の関数として、各ＡＤＣの生きた活性化細胞の数（ｙ軸）を示す。
【図２Ｂ】抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣ（すなわち、「ＣＤ１３７−アマニチン」）および抗Ｔ細胞特異的−アマニチンＡＤＣ（すなわち、「抗Ｔ細胞−アマニチン」を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏＴ細胞死滅アッセイの結果を、ネガティブコントロール（すなわち、「ｈＩｇＧ−アマニチン」）と比較して示すグラフである。結果は、ＡＤＣ濃度（ｘ軸）の関数として、各ＡＤＣの生きた非活性化細胞の数（ｙ軸）を示す。
【図３】ＮＳＧマウスｘｅｎｏ−ＧＶＨＤモデルにおいて、コントロールＰＢＳ、裸の抗ＣＤ１３７抗体、およびアイソタイプ−アマニチンに対して、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣの移植後の日数（ｘ軸）の関数としてマウスの生存率％（ｙ軸）を比較するｉｎ  ｖｉｖｏアッセイの結果を示すグラフである。
【図４】ＮＳＧマウスｘｅｎｏ−ＧＶＨＤモデルにおいて、コントロールＰＢＳ、裸の抗ＣＤ１３７抗体、およびアイソタイプ−アマニチンに対して、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣの移植後の日数（ｘ軸）の関数として末梢血中で検出されたヒトＴ細胞の数（ｙ軸）を比較するｉｎ  ｖｉｖｏアッセイの結果を示すグラフである。
【図５Ａ】ＮＳＧマウスｘｅｎｏ−ＧＶＨＤモデルにおけるコントロールＰＢＳ、裸の抗ＣＤ１３７−ＢＢＫ抗体、アイソタイプ−アマニチン、および抗Ｔ細胞−アマニチンＡＤＣに対して、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣの移植後の５日目、９日目、１４日目、２２日目および２７日目に、生着およびＴ細胞頻度が測定されたヒト化ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスモデルにおける生着率を決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏアッセイの結果を示すグラフである。
【図５Ｂ】ＮＳＧマウスｘｅｎｏ−ＧＶＨＤモデルにおけるコントロールＰＢＳ、裸の抗ＣＤ１３７−ＢＢＫ抗体、アイソタイプ−アマニチン、および抗Ｔ細胞−アマニチンＡＤＣに対して、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣの移植後の５日目、９日目、１４日目、２２日目および２７日目に、生着およびＴ細胞頻度が測定されたヒト化ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスモデルにおけるＴ細胞頻度を決定するためのｉｎ  ｖｉｖｏアッセイの結果を示すグラフである。
【００６６】
定義
本明細書で使用される場合、「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、記載されている値の上下１０％以内の値を指す。例えば、「約５ｎＭ」という用語は、４．５ｎＭ〜５．５ｎＭの範囲を示す。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「同種（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ）」という用語は、同じ種に属するが遺伝的に異なる個体由来の細胞または組織を指し、したがって免疫学的に不適合である。したがって、「同種細胞（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  ｃｅｌｌｓ）」という用語は、遺伝的に異なるが、同じ種に属している細胞タイプを指す。通常、「同種（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ）」という用語は、ドナーから同じ種のレシピエントに移植される幹細胞などの細胞を定義するために使用される。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「アマトキシン（ａｍａｔｏｘｉｎ）」という用語は、タマゴテングダケ（Ａｍａｎｉｔａ  ｐｈａｌｌｏｉｄｅｓ）キノコによって産生されるペプチドのアマトキシンファミリーのメンバー、またはそのバリアントもしくは誘導体、例えば、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ活性を阻害できるバリアントもしくは誘導体、を指す。本明細書に記載の組成物および方法と併用して有用なアマトキシンには、α-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、およびプロアマヌリン、ならびにそれらの誘導体、例えば、本明細書に記載の式（Ｉ）、（ＩＡ）、および（ＩＩ）の何れかによって記載される誘導体が含まれる。
【００６９】
本明細書で使用される「アンタゴニスト（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）」という用語は、標的分子、例えばＣＤ１３７の生物学的活性を阻害または低減する任意の分子を表す。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、特定の抗原に特異的に結合するか、または特定の抗原に対して免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を指し、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、遺伝子改変抗体、およびその他の方法で改変された抗体の形態が含まれ、限定はされないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ）、ならびに例えばＦａｂ’ 断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、ｒｌｇＧ断片およびｓｃＦＶ断片を含む抗体の抗原結合断片が含まれる。別段の指定がない限り、「モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」（ｍＡｂ）という用語は、インタクトな分子と、標的タンパク質に特異的に結合することができる抗体断片（例えば、Ｆａｂ断片およびＦ（ａｂ’）２断片を含む）の両方を含むことを意味する。本明細書で使用される場合、Ｆａｂ断片およびＦ（ａｂ’）２断片は、インタクト抗体のＦｃ断片を欠く抗体断片を指す。これらの抗体断片の例は本明細書に記載されている。
【００７１】
抗体の重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭの５つの主要なクラスがあり、これらのいくつかはさらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分けられる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、μと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元配置はよく知られており、例えば、Ａｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第４版（２０００年）に一般的に記載されている。抗体は、抗体と1つ以上の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合により形成される、より大きな融合分子の一部であり得る。
【００７２】
本明細書で使用される場合、「抗原結合断片（ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｆｒａｇｍｅｎｔ）」という用語は、標的抗原に特異的に結合する能力を保持する1つ以上の抗体の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって果たされ得る。抗体断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、アフィボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体であり得る。抗体の「抗原結合断片」という用語に含まれる結合断片の例には、限定されないが、以下のものが含まれる：（１）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（２）ヒンジ領域でジスルフィド結合によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（３）ＶＨおよびＣＨ１ドメインで構成されるＦｄ断片；（４）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（５）ＶＨドメインおよびＶＬドメインを含むｄＡｂ；（６）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（例えば、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６頁，１９８９年を参照）；（７）ＶＨドメインまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ；（８）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（９）任意に合成リンカーによって結合され得る２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）の単離されたＣＤＲの組み合わせ。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬとＶＨは別々の遺伝子によってコードされているが、ＶＬとＶＨ領域は組換え法を使用して、ＶＬとＶＨが単一のタンパク質鎖として作られるようにすることを可能にするリンカーによって結合することができ、ＶＬ領域とＶＨ領域はペアになって一価分子を形成する（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来技術を使用して得ることができ、断片は、インタクト抗体と同じ方法によって有用性についてスクリーニングすることができる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術、インタクトな免疫グロブリンの酵素的切断もしくは化学的切断によって、または特定の場合には、当技術分野で公知の化学ペプチド合成手順によって生成することができる。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「抗ＣＤ１３７抗体（ａｎｔｉ−ＣＤ１３７  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含むタンパク質含有分子またはペプチド含有分子、例えば、限定はされないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲまたはそのリガンド結合部分、重鎖可変領域または軽鎖可変領域、重鎖定常領域または軽鎖定常領域、フレームワーク領域、あるいはＣＤ１３７に特異的に結合することができるそれらの任意の部分、を指す。抗ＣＤ１３７抗体には、構造および溶媒アクセス性が抗体ＣＤＲに類似したＢＣ、ＤＥ、およびＦＧ構造ループを含む第１０フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（１０Ｆｎ３）などの抗体様タンパク質スキャフォールドも含まれる。１０Ｆｎ３ドメインの三次構造は、ＩｇＧ重鎖の可変領域の構造に類似しており、当業者は、例えば、１０Ｆｎ３のＢＣループ、ＤＥループ、およびＦＧループの残基を、抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体の領域ＣＤＲＨ−１領域、ＣＤＲＨ−２領域、またはＣＤＲＨ−３領域由来の残基で置換することによって、フィブロネクチンスキャフォールドに抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体のＣＤＲを移植することができる。一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体は、ヒトＣＤ１３７に特異的に結合する。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、例えば、少なくとも２つの異なる抗原に結合することができるモノクローナル抗体、しばしばヒト抗体またはヒト化抗体を指す。例えば、結合特異性の１つはＴ細胞表面抗原、例えばＣＤ１３７に向けられ、もう１つは異なるＴ細胞表面抗原または別の細胞表面タンパク質、例えば、細胞の成長を阻害または制限するシグナル伝達経路などに関与する受容体または受容体サブユニットに向けられる。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「キメラ（ｃｈｉｍｅｒｉｃ）」抗体という用語は、鎖の残りの部分は、望ましい生物活性を示す限り、別の種に由来する抗体、または別の抗体クラスもしくは抗体サブクラスに属する抗体、およびそのような抗体の断片の対応する配列と同一または相同であるが、重鎖および／または軽鎖の一部は、特定の種に由来する抗体、または特定の抗体クラスもしくは抗体サブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である抗体を指す（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４年，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５頁を参照）。一実施形態では、キメラ抗体は、マウスの重鎖可変領域および軽鎖可変領域、ならびにヒトの軽鎖定常領域および重鎖定常領域を含む。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）」および「ＣＤＲ」という用語は、抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインの両方に見られる超可変領域を指す。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。抗体の超可変領域を描写するアミノ酸位置は、文脈および当技術分野で知られている様々な定義に応じて異なり得る。可変ドメイン内の一部の位置は、これらの位置が1つの基準セットの下で超可変領域内にあると見なされ、異なる基準セットの下で超可変領域外にあると見なされるという点で、ハイブリッド超可変位置と見なされる。これらの位置の1つ以上は、拡張された超可変領域にも見られる。本明細書に記載の抗体は、これらのハイブリッド超可変位置に改変を含み得る。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、βシート構成を主にとる４つのフレームワーク領域を含み、フレームワーク領域は３つのＣＤＲによって接続され、ＣＤＲは主にβシート構造を接続するループを形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によってＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４の順序で近接して保持され、他の抗体鎖のＣＤＲとともに、抗体の標的結合部位の形成に寄与する（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  米国国立衛生研究所，ベセスダ，メリーランド州，１９８７年、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／３Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ＤＢ／ｃｇｉ／ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ．ｃｇｉを参照）。ＣＤＲを含む免疫グロブリンアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．の免疫グロブリンアミノ酸残基ナンバリングに従って実施することができる。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「コンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」という用語は、抗体またはその抗原結合断片などの1つの分子の反応性官能基と、本明細書に記載の細胞毒素などの別の分子の適切な反応性官能基との化学結合によって形成される化合物を指す。コンジュゲートは、互いに結合した２つの分子の間、例えば抗体と細胞毒素の間のリンカーを含み得る。コンジュゲートの形成に使用できるリンカーの例には、ペプチド含有リンカー、例えば、天然アミノ酸またはＤ−アミノ酸などの非天然アミノ酸を含有するものが含まれる。リンカーは、本明細書に記載される、当技術分野で知られているさまざまな戦略を使用して調製できる。リンカーは、その中の反応性成分に応じて、例えば、酵素的加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核開裂、または有機金属開裂により切断され得る（例えば、Ｌｅｒｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０：５７１−５８２頁，２０１２年を参照）。特に、「コンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）」という用語（化合物を指す場合）は、本明細書では「薬物−抗体コンジュゲート」または「抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）」とも互換的に呼ばれる。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「カップリング反応（ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）」という用語は、各反応基に結合した分子断片をつなぐ（例えば共有結合的に）化学部分を形成するように、互いに反応するのに適した２つ以上の置換基が反応する化学反応を指す。カップリング反応には、細胞毒素、例えば当技術分野で既知のまたは本明細書に記載の細胞毒素である断片に結合した反応性置換基が、当技術分野で既知のまたは本明細書に記載のＣＤ１３７である断片に結合した適切な反応性置換基と反応するものが含まれる。適切な反応性置換基の例には、求核試薬/求電子試薬のペア（例えば、チオール／ハロアルキルのペア、アミン／カルボニルのペア、またはチオール／α、β−不飽和カルボニルのペアなど）、ジエン/ジエノフィルのペア（例えば、アジド／アルキンのペアなど）などが含まれる。カップリング反応には、チオールアルキル化、ヒドロキシルアルキル化、アミンアルキル化、アミン縮合、アミド化、エステル化、ジスルフィド形成、環化付加（例えば、［４＋２］Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ環化付加、［３＋２］Ｈｕｉｓｇｅｎ環化付加など）、求核芳香族置換、求電子芳香族置換、および当技術分野で知られているか本明細書に記載されている他の反応様式が含まれるが、これらに限定されない。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「ドナー（ｄｏｎｏｒ）」という用語は、細胞またはその子孫をレシピエントに投与する前に、1つ以上の細胞が単離されるヒトまたは動物を指す。１つ以上の細胞は、例えば、造血幹細胞の集団であり得る。
【００８０】
本明細書で使用される場合、「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」トいう用語は、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体を指し、各ポリペプチド鎖は、同じペプチド鎖上のＶＨおよびＶＬドメインの分子内結合を可能にするには短すぎるリンカー（例えば、５アミノ酸で構成されるリンカー）で連結されたＶＨおよびＶＬドメインを含む。この構成は、各ドメインが別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインとペアになり、ホモダイマー構造が形成されることを強いる。したがって、「トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）」という用語は、３つのペプチド鎖を含む三価抗体を指し、各ペプチド鎖は、同じペプチド鎖内のＶＨおよびＶＬドメインの分子内結合を可能にするためには短すぎるリンカー（例えば、１〜２アミノ酸で構成されるリンカー）で連結された１つのＶＨドメインおよび１つのＶＬドメインを含む。このように構成されたペプチドは、ネイティブ構造に折りたたむために、通常、三量体化して、隣接するペプチド鎖のＶＨおよびＶＬドメインを互いに空間的に近接して配置する（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８頁，１９９３年を参照）。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「二重可変ドメイン免疫グロブリン（ｄｕａｌ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）」（「ＤＶＤ−Ｉｇ」）は、四価の二重標的単一薬剤を作り出すために、リンカーを介して２つのモノクローナル抗体の標的結合可変ドメインを結合する抗体を指す（例えば、Ｇｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，５０２：２５−４１頁，２０１２年を参照）。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「内因性（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ）」という用語は、ヒト患者などの特定の生物に自然に見られる分子、細胞、組織、または器官などの物質（例えば、造血幹細胞、または巨核球、栓球、血小板、赤血球、マスト細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、もしくはＢ細胞などの造血系統の細胞）を表す。
【００８３】
本明細書で使用される場合、「外因性（ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ）」という用語は、ヒト患者などの特定の生物では自然に見られない分子、細胞、組織、または器官などの物質（例えば、造血幹細胞、または巨核球、栓球、血小板、赤血球、マスト細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、もしくはＢ細胞などの造血系統の細胞）を表す。外因性物質には、外部源から、生物または生物から抽出された培養物に与えられるものが含まれる。
【００８４】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｒｅｇｉｏｎ）」、「ＦＲ」、または「ＦＷ領域（ＦＷ  ｒｅｇｉｏｎ）」という用語には、抗体またはその抗原結合断片の可変領域内のＣＤＲに隣接するアミノ酸残基が含まれる。ＦＷ領域の残基は、例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、Ｆａｂ断片、一本鎖抗体断片、ｓｃＦｖ断片、抗体ドメイン、および二重特異性抗体などに存在し得る。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「半減期（ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ）」という用語は、体内の抗体薬物の血漿濃度が半分または５０％減少するのにかかる時間を指す。この血清濃度の５０％減少は、循環中で抗体クリアランスの自然な方法では除去されない薬物の量を反映する。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「造血幹細胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ）」（「ＨＳＣ」）という用語は、多様な系統を含む自己再生能力および成熟血液細胞に分化する能力を有する未成熟な血液細胞を指し、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、栓球（例、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、およびリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞）が含まれるが、これらに限定されない。そのような細胞にはＣＤ３４＋細胞が含まれ得る。ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４細胞表面マーカーを発現する未成熟な細胞である。ヒトでは、ＣＤ３４＋細胞は、上で定義した幹細胞特性を持つ細胞の亜集団を含むと考えられているが、マウスでは、ＨＳＣはＣＤ３４−である。さらに、ＨＳＣは、長期再増殖ＨＳＣ（ＬＴ−ＨＳＣ）および短期再増殖ＨＳＣ（ＳＴ−ＨＳＣ）も指す。ＬＴ−ＨＳＣおよびＳＴ−ＨＳＣは、機能的ポテンシャルおよび細胞表面マーカーの発現に基づいて区別される。例えば、ヒトＨＳＣはＣＤ３４＋、ＣＤ３８−、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ９０＋、ＣＤ４９Ｆ＋、およびｌｉｎ−（ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１１Ｂ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ２３５Ａを含む成熟系統マーカーが陰性）である。マウスでは、骨髄ＬＴ−ＨＳＣは、ＣＤ３４−、ＳＣＡ−１＋、Ｃ−ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５−、Ｓｌａｍｆｌ／ＣＤ１５０＋、ＣＤ４８−、およびｌｉｎ−（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ７ｒａを含む成熟系統マーカーが陰性）であるが、ＳＴ−ＨＳＣは、ＣＤ３４＋、ＳＣＡ−１＋、Ｃ−ｋｉｔ＋、ＣＤ１３５−、Ｓｌａｍｆｌ／ＣＤ１５０＋、およびｌｉｎ−（Ｔｅｒ１１９、ＣＤ１１ｂ、Ｇｒ１、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｂ２２０、ＩＬ７ｒａを含む成熟系統マーカーが陰性）である。さらに、ＳＴ−ＨＳＣは、恒常性条件下で、ＬＴ−ＨＳＣよりも静止性が低く、増殖性が高い。しかしながら、ＬＴ−ＨＳＣにはより大きな自己再生能力があるが（すなわち、成人期を通じて生存し、連続するレシピエントを通して連続的に移植することができる）、ＳＴ−ＨＳＣの自己複製は限られている（すなわち、限られた期間のみ生存し、連続移植の可能性はない）。これらのＨＳＣのいずれも、本明細書に記載の方法で使用することができる。ＳＴ−ＨＳＣは非常に増殖性が高く、したがって分化した子孫をより迅速に発生させることができるため、特に有用である。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「造血幹細胞の機能的ポテンシャル（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）」という用語は、以下を含む造血幹細胞の機能的特性を指す：１）多能性（顆粒球（例、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例：網状赤血球、赤血球）、栓球（例：巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例：単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、リンパ球（例：ＮＫ細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞）を含むがこれらに限定されない複数の異なる血液系統に分化する能力を指す）、２）自己再生（造血幹細胞が母細胞と同等のポテンシャルを持つ娘細胞を生成する能力を指し、さらに、この能力は消耗のない個人の生涯を通じて繰り返し発生し得ることを意味する）、および３）造血幹細胞またはその子孫が移植レシピエントに再導入されて、造血幹細胞のニッチに帰着し、生産的かつ持続的な造血を再確立する能力。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「ヒト抗体（ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、タンパク質の実質的にすべての部分（例えば、すべてのＣＤＲ、フレームワーク領域、ＣＬドメイン、ＣＨドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３など）、ヒンジ、ならびにＶＬドメインおよびＶＨドメイン）がヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、わずかな配列変化または変異のみを伴う抗体を指す。ヒト抗体は、ヒト細胞内で（例えば、組換え発現により）、または機能的に再構成されたヒト免疫グロブリン（重鎖および／または軽鎖など）遺伝子を発現できる非ヒト動物または原核細胞もしくは真核細胞により産生され得る。ヒト抗体が一本鎖抗体である場合、天然のヒト抗体には見られないリンカーペプチドを含むことができる。例えば、Ｆｖは、重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とを接続する２〜約８個のグリシンまたは他のアミノ酸残基などのリンカーペプチドを含むことができる。そのようなリンカーペプチドは、ヒト起源であると考えられる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージディスプレイ法を含む、当技術分野で知られている様々な方法によって作製することができる。ヒト抗体は、機能的な内因性免疫グロブリンを発現できないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用して、産生され得る。
【００８９】
「ヒト化（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）」抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む非ヒト抗体を指す。したがって、非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに相当する。ＦＷ領域のすべてまたは実質的にすべてはまた、ヒト免疫グロブリン配列のものであってもよい。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の部分を含むことができる。抗体のヒト化の方法は、当技術分野で知られている。
【００９０】
一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置換された、所望の特異性、親和性、および／または能力を有するヒト抗体（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含み得る。これらの変更は、抗体の性能をさらに改善するために行うことができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべてまたは実質的にすべては、非ヒト抗体のものに相当し、かつＦＲのすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリン配列のものであるだろう。ヒト化抗体はまた、任意選択で、抗体定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９頁（１９８８年）；およびＰｒｅｓｔａ，  Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６頁（１９９２年）を参照されたい。また、次の総説とそこに引用されている参考文献も参照されたい：Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５頁（１９９８年）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８頁（１９９５年）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３頁（１９９４年）。
【００９１】
「全長抗体（ｆｕｌｌ  ｌｅｎｇｔｈ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」および「インタクト抗体（ｉｎｔａｃｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、本明細書で定義される抗体断片ではなく、実質的にインタクトな形態の抗体を指す。したがって、ＩｇＧ抗体の場合、インタクト抗体は、それぞれ可変領域、定常領域およびＦｃ領域を含有する２つの重鎖、ならびにそれぞれ可変領域および定常領域を含有する２つの軽鎖を含む。より具体的には、インタクトＩｇＧは、それぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含有する２つの軽鎖を含み、かつそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）および３つの重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を含有する２つの重鎖を含む。ＣＨ２およびＣＨ３は、重鎖のＦｃ領域を表す。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「微小管結合剤（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）」という用語は、有糸分裂および間期の細胞機能に不可欠な微小管ネットワークを破壊することにより作用する化合物を指す。微小管結合剤の例には、メイタシン、メイタンシノイド、およびそれらの誘導体（例えば、本明細書に記載または当技術分野で公知のもの）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビンなどのビンカアルカロイド、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）およびパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）などのタキサン、ディスコデルモライド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、コチシン（ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ）、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）などのマクロライド、ならびにエポチロンＢまたはエポチロンＢの誘導体などのそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。パクリタキセルはＴＡＸＯＬ（登録商標）として、ドセタキセルはＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）として、硫酸ビンブラスチンはＶＩＮＢＬＡＳＴＩＮ  Ｒ．Ｐ（登録商標）として、硫酸ビンクリスチンはＦＡＲＭＩＳＴＩＮ（登録商標）として販売されている。また、パクリタキセルのジェネリック形態およびパクリタキセルの様々な剤形も含まれる。パクリタキセルのジェネリック形態には、ベタキソロール塩酸塩が含まるが、これに限定されない。パクリタキセルの様々な剤形には、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）、ＯＮＸＯＬ（登録商標）、ＣＹＴＯＴＡＸ（登録商標）として市販されているアルブミンナノ粒子パクリタキセルが含まれるが、これらに限定されない。ディスコデルモライドは、例えば、米国特許第５，０１０，０９９号に開示されているように得ることができる。また、米国特許第６，１９４，１８１号、国際公開第９８１０１２１号、国際公開第９８２５９２９号、国際公開第９８０８８４９号、国際公開第９９４３６５３号、国際公開第９８２２４６１号および国際公開第００３１２４７号に開示されているエポトリン（ｅｐｏｔｈｏｌｉｎｅ）誘導体も含まれ、これらのそれぞれの開示は参照により本明細書に援用される。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体を指し、当該抗体が産生される方法を意味しない。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「ＧＶＨＤのリスクがある患者（ｐａｔｉｅｎｔ  ａｔ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ＧＶＨＤ）」という用語は、ＧＶＨＤを発症する１つ以上のリスク因子を有する患者を指す。リスク因子には、ミスマッチヒト白血球抗原（ＨＬＡ）ドナーおよび性別ミスマッチドナーを含む同種ドナー移植（例、骨髄移植からの造血幹細胞の移植）、Ｔ細胞の豊富な幹細胞移植、ドナーおよびレシピエントの年齢、移植ドナーまたはホストにおけるサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）またはＣＭＶ抗体の存在、全身照射（ＴＢＩ）の線量増加、条件付けレジメン強度、急性ＧＶＨＤ予防、保護環境の欠如、脾臓摘出、免疫グロブリンの使用、基礎疾患、ＡＢＯ適合性、ヘルペスウイルスへの事前暴露、ドナー輸血、パフォーマンススコア、抗生物質消化管除染、および同種移植後輸血が含まれるが、これらに限定されない。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「自己免疫疾患のリスクがある患者（ｐａｔｉｅｎｔ  ａｔ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ａｎ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）」という用語は、自己免疫疾患を発症する１つ以上のリスク因子を有する患者を指す。リスク因子には、年齢（若年〜中年）、性別（女性）、民族（アフリカ系アメリカ人、アメリカインディアン、またはラテン系）、自己免疫疾患の家族歴、環境因子への曝露、以前の感染、慢性炎症、およびドナー移植（例えば、骨髄移植からの造血幹細胞の移植）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「レシピエント（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ）」という用語は、移植、例えば造血幹細胞の集団を含む移植を受ける患者を指す。レシピエントに投与される移植細胞は、例えば、自家細胞、同系細胞、または同種細胞であり得る。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「サンプル（ｓａｍｐｌｅ）」という用語は、患者から採取された検体（例えば、血液、血液成分（例：血清または血漿）、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織（例えば、胎盤または皮膚）、膵液、絨毛膜絨毛サンプル、および細胞）を指す。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「ｓｃＦｖ」という用語は、抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメインが連結されて一本鎖を形成している一本鎖Ｆｖ抗体を指す。ｓｃＦｖ断片は、リンカーにより分離された抗体軽鎖の可変領域（ＶＬ）（例：ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、および／またはＣＤＲ−Ｌ３）および抗体重鎖の可変領域（ＶＨ）（例：ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、および／またはＣＤＲ−Ｈ３）を含む単一のポリペプチド鎖を含有する。ｓｃＦｖ断片のＶＬ領域とＶＨ領域を連結するリンカーは、タンパク質構成アミノ酸で構成されるペプチドリンカーである。ｓｃＦｖ断片のタンパク質分解に対する耐性を高めるために（例えば、Ｄ−アミノ酸を含むリンカー）、ｓｃＦｖ断片の溶解性を高めるために（例えば、ポリエチレングリコール含有リンカーなどの親水性リンカー、または繰り返しグリシンおよびセリン残基を含むポリペプチド）、分子の生物物理学的安定性を改善するために（例えば、分子内ジスルフィド結合または分子間ジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含むリンカー）、またはｓｃＦｖ断片の免疫原性を減衰させるために（例えば、グリコシル化部位を含むリンカー）、代替のリンカーを使用することができる。本明細書に記載のｓｃＦｖ分子の可変領域は、それらが由来する抗体分子とはアミノ酸配列が異なるように改変できることも当業者には理解されるであろう。例えば、対応する抗体によって認識される抗原に結合するｓｃＦｖの能力を保持または強化するために、保存的置換またはアミノ酸残基の変化をもたらすヌクレオチドまたはアミノ酸の置換を行うことができる（例えば、ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基において）。
【００９８】
本明細書で使用される「特異的結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ）」という用語は、一般的なタンパク質ではなく、特定のタンパク質構造（エピトープ）を認識して結合する抗体（またはＡＤＣ）の能力を指す。抗体またはＡＤＣがエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識「Ａ」および抗体を含む反応において、エピトープＡ（または遊離の非標識Ａ）を含む分子が存在すると、抗体またはＡＤＣに結合した標識Ａの量は減少する。例として、抗体が標識されたときに、対応する非標識抗体によって標的から競合除外され得る場合、その抗体はその標的に「特異的に結合する」。一実施形態では、抗体の標的に対するＫＤが少なくとも約１０−４Ｍ、約１０−５Ｍ、約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、約１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ未満（１０−１２未満は１０−１２未満の数値、例えば１０−１３を意味する）である場合、その抗体はその標的、例えばＣＤ１３７に特異的に結合する。一実施形態では、本明細書で使用される「ＣＤ１３７への特異的結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ＣＤ１３７）」または「ＣＤ１３７に特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ＣＤ１３７）」という用語は、ＣＤ１３７に結合し、表面プラズモン共鳴によって決定される解離定数（ＫＤ）が１．０ｘ１０−７Ｍ以下である抗体またはＡＤＣを指す。一実施形態において、ＫＤは、標準的な生体層干渉計（ＢＬＩ）によって決定される。しかし、抗体またはＡＤＣは、配列が関連する２つ以上の抗原に特異的に結合できる可能性があることを理解されたい。例えば、一実施形態では、抗体は、ヒトおよび非ヒト（例えば、マウスまたは非ヒト霊長類）の両方のＣＤ１３７のオルソログに特異的に結合することができる。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「患者（ｓｕｂｊｅｃｔ）」および「患者（ｐａｔｉｅｎｔ）」という用語は、本明細書に記載の特定の疾患または状態の治療を受けるヒトなどの生物を指す。例えば、ヒト患者などの患者は、ＣＤ１３７を結合可能な本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、またはリガンドの投与によりＧＶＨＤを治療または予防するために、造血幹細胞移植療法の前に治療を受けることができる。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「血液から実質的に除去される（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｃｌｅａｒｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ）」という語句は、患者への治療薬（例えば、抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンド）の投与後で、患者から分離された血液サンプル中の治療薬の濃度が、治療薬が従来の方法では検出できない（例えば、治療薬が、その治療薬を検出するために使用されるデバイスまたはアッセイのノイズ閾値を超えて検出できない）ようなものである時点を指す。当技術分野で知られている、または本明細書に記載されているＥＬＩＳＡベースの検出アッセイなど、当技術分野で知られているさまざまな技術を使用して、抗体、抗体断片およびタンパク質リガンドを検出することができる。抗体、抗体断片、およびタンパク質リガンドを検出するために使用できる追加のアッセイには、当技術分野で知られている免疫沈降技術および免疫ブロットアッセイなどが含まれる。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「幹細胞障害（ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」という語句は、患者の標的組織を調整することによって、および／または標的組織内の内因性幹細胞集団を除去（例えば、患者の骨髄組織から内因性の造血幹細胞または前駆細胞集団を除去）することによって、および／または患者の標的組織に幹細胞を生着または移植することによって、治療または治癒される可能性のある任意の疾患、障害、または状態を広く指す。例えば、１型糖尿病は、造血幹細胞移植により治癒することが示されており、本明細書に記載の組成物および方法に従ってコンディショニングすることから利益を得る可能性がある。本明細書に記載の組成物および方法を使用して治療できる追加の障害には、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコーニ貧血、ウィスコット−アルドリッチ症候群、ＡＤＡ  ＳＣＩＤ、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、異染性白質ジストロフィー、ダイアモンド−ブラックファン貧血、およびシュワックマン−ダイアモンド症候群が含まれるが、これらに限定されない。患者は、遺伝性血液疾患（鎌状赤血球貧血など）または自己免疫疾患を有するか、罹患している場合がある。追加的または代替的に、患者は、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、または骨髄異形成症候群）および神経芽細胞腫からなる群より選択される悪性腫瘍などの悪性腫瘍を有するか、罹患している場合がある。いくつかの実施形態では、患者は代謝障害を有するか、そうでなければ代謝障害に罹患している。例えば、患者は、グリコーゲン貯蔵疾患、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィー、または本明細書に開示される治療および療法の恩恵を受け得る任意の他の疾患もしくは障害（限定されることなく、重症複合免疫不全、ウィスコット−アルドリッチ症候群、高免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）症候群、チェディアック−東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵病、サラセミアメジャー、鎌状赤血球症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、若年性関節リウマチ、および「Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｎｏｎ−Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ」ＡＳＨ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｂｏｏｋ，  １：３１９−３３８頁（２０００年）に記載される疾患もしくは障害を含む）からなる群より選択される代謝障害を患っているか、そうでなければそれらの代謝障害に罹患している可能性がある。上記文献の開示は、造血幹細胞移植療法の投与により治療され得る病状に関するので、その開示はその全体が参照により本明細書に援用される。）
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「疾患を患っている（ｓｕｆｆｅｒｉｎｇ  ｆｒｏｍ  ｄｉｓｅａｓｅ）」という用語は、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を経験している患者（例えば、ヒト）を指す。本発明が特定のサインもしくは症状、または疾患に限定されることは意図されていない。したがって、本発明は、無症状から本格的な疾患までのあらゆる範囲の疾患を経験している患者を包含し、その患者は、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患に関連する徴候（例えば、サインおよび症状）の少なくとも一部を示すことが意図される。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「トランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）」という用語は、エレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなど、外因性ＤＮＡを原核生物または真核生物の宿主細胞内に導入するために一般的に使用される多種多様な技術のいずれかを指す。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）」という用語は、その起源の部位からレシピエントの部位に移された任意の器官、体組織、または細胞、あるいはそうする行為を指す。
【０１０５】
「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、不所望の生理的変化または障害を予防または減速（軽減）すること、あるいは治療中の患者の有益な表現型を促進することを目的とする治療的処置を指す。有益な臨床結果または所望の臨床結果には、ＣＤ１３７＋細胞の細胞数の減少または相対濃度の減少、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患の細胞レベルおよび臨床レベルでの症状の減少、本明細書に記載の患者における外因性造血細胞の生着およびその後の造血幹細胞移植療法が含まれるが、これらに限定されない。追加の有益な結果には、ＧＶＨＤを患っているか、またはＧＶＨＤのリスクがある造血幹細胞の細胞数または相対濃度の増加が含まれる。本明細書に記載の治療の有益な結果には、造血幹細胞移植治療の後における、巨核球、栓球、血小板、赤血球、マスト細胞、筋芽細胞、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア細胞、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、またはＢ細胞などの1つ以上の造血系統の細胞の細胞数または相対濃度の増加も含まれ得る。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」または「治療有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、所望の結果を達成するのに、またはＧＶＨＤまたは自己免疫疾患に効果を及ぼすのに十分な量を指す。特定の患者に対する特定の治療上有効な用量レベルは、治療中の障害およびその障害の重症度；使用された特定の組成物；患者の年齢、体重、一般的な健康、性別および食事；投与の時間; 投与経路; 使用された特定の化合物の排泄率; 治療期間; 使用される特定の化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、および当技術分野で周知の同様の因子、を含む様々な因子に依存するであろう。投与量は様々であり、1日または数日間、毎日1回以上の投与量で投与することができる。
【０１０７】
抗体の「可変領域（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ）」または「可変ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ）」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインは「ＶＨ」と呼ばれる場合がある。軽鎖の可変ドメインは「ＶＬ」と呼ばれる場合がある。これらのドメインは通常、抗体の最も可変的な部分であり、抗原結合部位（ＣＤＲ）を含む。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「ベクター（ｖｅｃｔｏｒ）」という用語は、プラスミド、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、ウイルス、または他の適切なレプリコンなどの核酸ベクターを含む。本明細書に記載の発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、ならびに例えばタンパク質の発現および／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳動物細胞のゲノムへの組み込みに使用される追加の配列要素を含み得る。本発明の抗体および抗体断片の発現に使用できる特定のベクターには、遺伝子転写を指示するプロモーターおよびエンハンサー領域などの調節配列を含むプラスミドが含まれる。抗体および抗体断片の発現のための他の有用なベクターは、これらの遺伝子の翻訳速度を高めるか、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性もしくは核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含む。これらの配列要素には、発現ベクターに担持された遺伝子の効率的な転写を指示するために、例えば、５’非翻訳領域、３’非翻訳領域およびポリアデニル化シグナル部位が含まれ得る。本明細書に記載の発現ベクターはまた、そのようなベクターを含む細胞の選択のためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含み得る。適切なマーカーの例には、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、およびノーセオスリシン（ｎｏｕｒｓｅｏｔｈｒｉｃｉｎ）などの抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が含まれる。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「アルキル（ａｌｋｙｌ）」という用語は、例えば、鎖内に１〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基を指す。アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどが含まれる。
【０１１０】
本明細書で使用される場合、「アルキレン（ａｌｋｙｌｅｎｅ）」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価アルキル基を指す。二価の位置は、アルキル鎖内の同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。アルキレンの例には、メチレン、エチレン、プロピレン、イソプロピレンなどが含まれる。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキル（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｌ）」という用語は、例えば１〜２０個の炭素原子を鎖内に有し、さらに１つ以上のヘテロ原子（例えば、酸素、窒素、または硫黄など）を鎖内に含む直鎖または分岐鎖アルキル基を指す。
【０１１２】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキレン（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｌｅｎｅ）」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルキル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルキル鎖内の同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「アルケニル（ａｌｋｅｎｙｌ）」という用語は、例えば、鎖内に２〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖のアルケニル基を指す。アルケニル基の例には、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、ｔｅｒｔ−ブチレニル、ヘキセニルなどが含まれる。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「アルケニレン（ａｌｋｅｎｙｌｅｎｅ）」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価アルケニル基を指す。二価の位置は、アルケニル鎖内の同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。アルケニレンの例には、エテニレン、プロペニレン、イソプロペニレン、ブテニレンなどが含まれる。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルケニル（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｅｎｙｌ）」という用語は、例えば２〜２０個の炭素原子を鎖内に有し、さらに１つ以上のヘテロ原子（例えば、酸素、窒素、または硫黄など）を鎖内に含む直鎖または分岐鎖アルケニル基を指す。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルケニレン（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｅｎｙｌｅｎｅ）」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルケニル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルケニル鎖内の同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。
【０１１７】
本明細書で使用される場合、「アルキニル（ａｌｋｙｎｙｌ）」という用語は、例えば、鎖内に２〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキニル基を指す。アルキニル基の例には、プロパルギル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニルなどが含まれる。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、「アルキニレン（ａｌｋｙｎｙｌｅｎｅ）」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価アルキニル基を指す。二価の位置は、アルキニル鎖内の同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキニル（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｎｙｌ）」という用語は、例えば、２〜２０個の炭素原子を鎖内に有し、さらに1つ以上のヘテロ原子（例えば、酸素、窒素、または硫黄など）を鎖内に含む直鎖または分岐鎖アルキニル基を指す。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアルキニレン（ｈｅｔｅｒｏａｌｋｙｎｙｌｅｎｅ）」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価ヘテロアルキニル基を指す。二価の位置は、ヘテロアルキニル鎖内の同じまたは異なる原子にあってもよい。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキル（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）」という用語は、飽和しており、例えば３〜１２個の炭素環原子を有する単環式、または縮合、架橋、もしくはスピロ多環式環構造を指す。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ［３．１．０］ヘキサンなどが含まれる。
【０１２２】
本明細書で使用される場合、「シクロアルキレン（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌｅｎｅ）」という用語は、二価のシクロアルキル基を指す。二価の位置は、環構造内の同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。シクロアルキレンの例には、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレンなどが含まれる。
【０１２３】
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｌｏａｌｋｙｌ）」という用語は、飽和しており、例えば、環構造あたり３〜１２個の環原子を有する単環式、または縮合、架橋、もしくはスピロ多環式環構造を指し、当該環原子は炭素原子およびヘテロ原子から選択され、当該ヘテロ原子は例えば窒素、酸素、および硫黄から選択される。環構造は、例えば、炭素、窒素、または硫黄の環員に１つ以上のオキソ基を含み得る。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、「ヘテロシクロアルキレン（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏａｌｋｙｌｅｎｅ）」という用語は、二価のヘテロシクロアルキル基を指す。二価の位置は、環構造内の同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。本明細書で使用される場合、「アリール（ａｒｙｌ）」という用語は、例えば、６〜１９個の炭素原子を含む単環式または多環式の芳香族環系を指す。アリール基には、フェニル、フルオレニル、ナフチルなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「アリーレン（ａｒｙｌｅｎｅ）」という用語は、二価のアリール基を指す。二価の位置は、同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）」という用語は、単環式ヘテロ芳香族基、または二環式もしくは三環式の縮合環ヘテロ芳香族基を指す。ヘテロアリール基には、ピリジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，３，４−トリアジニル、１，２，３−トリアジニル、ベンゾフリル、［２，３−ジヒドロ］ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、ベンズイミダゾリル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノリジニル、キナゾリニル、フタラジニル、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、ピリド［３，４−ｂ］ピリジル、ピリド［３，２−ｂ］ピリジル、ピリド［４，３−ｂ］ピリジル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリル、５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、キサンテニル、ベンゾキノリルなどが含まれる。
【０１２７】
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリーレン（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌｅｎｅ）」という用語は、二価のヘテロアリール基を指す。二価の位置は、同じ原子上にあっても異なる原子上にあってもよい。
【０１２８】
個々の置換基の定義によって特に制限されない限り、「アルキル」基、「アルキレン」基、「ヘテロアルキル」基、「ヘテロアルキレン」基、「アルケニル」基、「アルケニレン」基、「ヘテロアルケニル」基、「ヘテロアルケニレン」基、「アルキニル」基、「アルキニレン」基、「ヘテロアルキニル」基、「ヘテロアルキニレン」基、「シクロアルキル」基、「シクロアルキレン」基、「ヘテロシクロアルキル」基、「ヘテロシクロアルキレン」基、「アリール」基、「アリーレン」基、「ヘテロアリール」基、および「ヘテロアリーレン」基などの前述の化学部分は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アルキルシクロアルキル、アルキルヘテロシクロアルキル、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、ニトロなどからなる群より選択される１〜５個の置換基で任意に置換することができる。置換には、隣接する置換基が閉環、例えばビシナル機能置換基の閉環を受けて、例えば保護基を提供するために、閉環によって形成される、例えば、ラクタム、ラクトン、環状無水物、アセタール、ヘミアセタール、チオアセタール、アミナール、およびヘミアミナールを形成した状況が含まれ得る。
【発明を実施するための形態】
【０１２９】
本発明は、造血細胞により発現される抗原に結合可能な抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドの投与により、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）および自己免疫疾患を予防し、治療する方法を提供する。この投与は、ホストに対して反応する外因性Ｔ細胞の集団の選択的枯渇を引き起こすことができる。本発明は、ＧＶＨＤおよび自己免疫疾患、例えば造血幹細胞移植療法から生じるものを予防および治療するために、ＣＤ１３７に結合可能な抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドを患者に投与することができるという発見に一部基づく。
【０１３０】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドの投与によるＧＶＨＤの予防と治療は、さまざまな臨床症状に現れ得る（例えば、ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｂｌｏｏｄ．１２７：１５４４−１４４０頁，２０１６年、およびＦｌｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１２５：６０６−６１５頁を参照。これらの開示は、限定されないが、急性および慢性ＧＶＨＤそれぞれの測定可能な臨床的特徴に関係するので、参照により本明細書に援用される。）。抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、またはＡＤＣの投与によるＧＶＨＤおよび自己免疫疾患の予防と治療は、様々な経験的測定に現れ得る。例えば、ＣＤ１３７＋細胞の枯渇は、移植後期間中に末梢血中のＣＤ１３７＋白血球数を測定するための当技術分野で知られている蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析方法によって、および／または骨髄吸引サンプル中におけるドナー細胞による骨髄細胞の回復を測定することにより。決定することができる。レシピエントの末梢血中のインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）産生Ｔ細胞の計算により、ＧＶＨＤおよび自己免疫疾患に対する抗ＣＤ１３７の有効性を評価することができる。ＦＡＣＳによって決定される免疫細胞集団の変化は、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患の指標となり得る。最後に、患者から採取した遺伝子バイオマーカーおよびプロテオミクスバイオマーカーも、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を示すことができる。
【０１３１】
以下のセクションでは、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を患っている、またはそのリスクがある患者に投与可能な抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドの説明と、そのような治療薬を患者に投与する方法を提供する。
【０１３２】
抗ＣＤ１３７抗体およびリガンド
本発明は、ＣＤ１３７（ＣＤｗ１３７、ＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ、およびＩＬＡとも呼ばれる）に結合可能な抗体、その抗原結合断片、および可溶性リガンドが、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を患っているか、または自己免疫疾患のリスクがある患者の造血幹細胞からのＧＶＨＤを予防および治療する治療薬として使用され得るという発見に一部基づく。さらに、ヒトＣＤ１３７ＬなどのＣＤ１３７に結合するリガンドは、ＧＶＨＤを患っているか、またはＧＶＨＤのリスクがある患者を予防または治療するための治療薬として使用できることが発見された。可溶性ヒトＣＤ１３７などのこれらのリガンドは、例えば抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を促進するために、Ｆｃドメインなどのエフェクタードメインに共有結合され得る。
【０１３３】
この抗原は共刺激分子の膜貫通ＴＮＦ受容体スーパーファミリーであり、さまざまな造血細胞で発現し、Ｔ細胞の活性化を促進し、Ｔ細胞の増殖および生存を調節するため、Ｔ細胞はＣＤ１３７を発現することが示されている（例えば、Ｃａｎｎｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１３１３−１３２４頁，２００１年を参照。Ｔ細胞によるＣＤ１３７の発現に関連するため、その開示は参照により本明細書に援用される。）。抗体、その抗原結合断片、およびリガンドは、当技術分野で公知であり本明細書に記載の技術、例えば、免疫化、計算モデリング技術、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択法（例えば、以下に記載されるファージディスプレイプラットフォームおよび細胞ベースディスプレイプラットフォーム）を使用して同定することができる。
【０１３４】
本明細書に開示される方法によりＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を予防および治療するために使用できる抗ＣＤ１３７抗体には、以下のＣＤＲの１つ以上またはすべてを有するものが含まれる：
ａ．アミノ酸配列ＳＴＹＷＩＳ（配列番号１）を有するＣＤＲ−Ｈ１；
ｂ．アミノ酸配列ＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧ（配列番号２）を有するＣＤＲ−Ｈ２；
ｃ．アミノ酸配列ＲＧＹＧＩＦＤＹ（配列番号３）を有するＣＤＲ−Ｈ３；
ｄ．アミノ酸配列ＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨ（配列番号４）を有するＣＤＲ−Ｌ１；
ｅ．アミノ酸配列ＱＤＫＮＲＰＳ（配列番号５）を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
ｆ．アミノ酸配列ＡＴＹＴＧＦＧＳＬＡＶ（配列番号６）を有するＣＤＲ−Ｌ３。
【０１３５】
本明細書に開示される方法によりＧＶＨＤおよび自己免疫疾患を予防および治療するために使用できる追加の抗ＣＤ１３７抗体には、以下のＣＤＲの１つ以上またはすべてを有するものが含まれる：
ａ．アミノ酸配列ＳＴＹＷＩＳ（配列番号１）を有するＣＤＲ−Ｈ１；
ｂ．アミノ酸配列ＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧ（配列番号２）を有するＣＤＲ−Ｈ２；
ｃ．アミノ酸配列ＲＧＹＧＩＦＤＹ（配列番号３）を有するＣＤＲ−Ｈ３；
ｄ．アミノ酸配列ＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨ（配列番号４）を有するＣＤＲ−Ｌ１；
ｅ．アミノ酸配列ＱＤＫＮＲＰＳ（配列番号５）を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
ｆ．アミノ酸配列ＳＴＹＴＦＶＧＦＴＴＶ（配列番号７）を有するＣＤＲ−Ｌ３。
【０１３６】
追加の抗ＣＤ１３７抗体には、以下のＣＤＲの１つ以上またはすべてを有するものが含まれる：
ａ．アミノ酸配列ＮＳＹＡＩＳ（配列番号８）を有するＣＤＲ−Ｈ１；
ｂ．アミノ酸配列ＧＩＩＰＧＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号９）を有するＣＤＲ−Ｈ２；
ｃ．アミノ酸配列ＲＫＮＥＥＤＧＧＦＤＨ（配列番号１０）を有するＣＤＲ−Ｈ３；
ｄ．アミノ酸配列ＳＧＤＮＬＧＤＹＹＡＳ（配列番号１１）を有するＣＤＲ−Ｌ１；
ｅ．アミノ酸配列ＤＤＳＮＲＰＳ（配列番号１２）を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
ｆ．アミノ酸配列ＱＴＷＤＧＴＬＨＦＶ（配列番号１３）を有するＣＤＲ−Ｌ３。
【０１３７】
追加の抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣには、以下のＣＤＲの１つ以上またはすべてを有するものが含まれる：
ａ．アミノ酸配列ＳＤＹＹＭＨ（配列番号１４）を有するＣＤＲ−Ｈ１；
ｂ．アミノ酸配列ＶＩＳＧＳＧＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）を有するＣＤＲ−Ｈ２；
ｃ．アミノ酸配列ＲＬＹＡＱＦＥＧＤＦ（配列番号１６）を有するＣＤＲ−Ｈ３；
ｄ．アミノ酸配列ＳＧＤＮＩＧＳＫＹＶＳ（配列番号１７）を有するＣＤＲ−Ｌ１；
ｅ．アミノ酸配列ＳＤＳＥＲＰＳ（配列番号１８）を有するＣＤＲ−Ｌ２；および
ｆ．アミノ酸配列ＱＳＷＤＧＳＩＳＲＶ（配列番号１９）を有するＣＤＲ−Ｌ３。
【０１３８】
前述の抗体は、例えば、米国特許第９，４６８，６７８号に記載されており、その開示は、抗ＣＤ１３７抗体およびその抗原結合断片に関連するため、参照により本明細書に援用される。米国特許第９，４６８，６７８号に開示されている抗体およびその断片は、本明細書に開示されている方法と併せて使用することができる。
【０１３９】
別の実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物（ＡＤＣを含む）で使用され得る抗ＣＤ１３７抗体は、マウス抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ；ＭＳ６２１ＰＡＢＸ）、またはＢＢＫ２抗体に対応する抗原結合領域を含む抗ＣＤ１３７抗体である。ＢＢＫ２抗体（ＢＢＫ−２抗体または抗４−１ＢＢ抗体とも呼ばれる）は、ヒト４−１ＢＢ組換えタンパク質（４−１ＢＢはＣＤ１３７としても知られる）の細胞外ドメインに結合するマウスモノクローナル抗体（ＩｇＧ１、κ）である。特定の実施形態では、本開示の方法および組成物は、ＢＢＫ２抗体の結合領域（例えば、ＣＤＲ）を含む抗ＣＤ１３７抗体を含む。別の実施形態では、本開示の方法および組成物は、ＣＤ１３７上のエピトープへのＢＢＫ２抗体の結合を競合的に阻害する抗体を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体は、ヒト化ＢＢＫ２またはキメラＢＢＫ２である。
【０１４０】
一実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物は、ＢＢＫ２の可変重鎖および軽鎖領域を含有するキメラ抗ＣＤ１３７（ｃｈ−ＢＢＫ２）抗体を含む。特定の実施形態では、キメラＢＢＫ２抗体は、ヒト定常領域を含むＩｇＧ１抗体である。ｃｈ−ＢＢＫ２の重鎖アミノ酸配列は配列番号２３に記載されており、ｃｈ−ＢＢＫ２の軽鎖アミノ酸配列は配列番号２４に記載されている。各重鎖配列および軽鎖配列のＣＤＲ領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）は、以下に太字で記載される。可変領域はイタリック体で記載される。
【０１４１】
配列番号２３
2020506176.tif 000008
【０１４２】
配列番号２４
2020506176.tif 000009
【０１４３】
前述のＣＤＲ領域（およびＢＢＫ２抗体）は、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００２年）  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２９（５）：４４９−４５２頁に記載されている。したがって、一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（ｃｈ−ＢＢＫ２を含む）のＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列は以下の通りである：ＳＧＹＴＦＴＳＹＷ（ＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号３３）；ＮＩＹＰＳＤＳＹＴ（ＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号３４）およびＴＲＮＧＶＥＧＹＰＨＹＹＡＭＥ（ＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号３５）。抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（ｃｈ−ＢＢＫ２を含む）のＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列は以下の通りである：ＳＱＤＬＳＮＨ（ＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号３６）；ＹＹＴＳ（ＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号：３７）およびＣＱＱＧＹＴＬＰＹ（ＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号：３８）。
【０１４４】
あるいは、ＢＢＫ２のＣＤＲ領域は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って定義され得る。Ｋａｂａｔナンバリングにより定義されるＣＤＲが、重鎖と軽鎖の各配列について以下に記載される（以下に太字で記載される）。ＢＢＫ２の可変領域はイタリック体で記載される。
【０１４５】
ｃｈ−ＢＢＫ２重鎖；配列番号２３
2020506176.tif 000010
【０１４６】
ｃｈ−ＢＢＫ２軽鎖；配列番号２４
2020506176.tif 000011
【０１４７】
したがって、一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（ｃｈ−ＢＢＫ２を含む）のＶＨ  ＣＤＲアミノ酸配列は以下の通りである：ＳＹＷＩＮ（ＶＨ  ＣＤＲ１；配列番号２５）；  ＮＩＹＰＳＤＳＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤ（ＶＨ  ＣＤＲ２；配列番号２６）およびＮＧＶＥＧＹＰＨＹＹＡＭＥＹ（ＶＨ  ＣＤＲ３；配列番号２７）。そして、抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（ｃｈ−ＢＢＫ２を含む）のＶＬ  ＣＤＲアミノ酸配列は以下の通りである：ＲＡＳＱＤＬＳＮＨＬＹ（ＶＬ  ＣＤＲ１；配列番号２９）；  ＹＴＳＲＬＨＳ（ＶＬ  ＣＤＲ２；配列番号３０）およびＱＱＧＹＴＬＰＹＴ（ＶＬ  ＣＤＲ３；配列番号３１）。
【０１４８】
ＢＢＫ２の重鎖可変領域は、配列番号２８にＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＹＰＳＤＳＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＶＹＭＱＬＮＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＮＧＶＥＧＹＰＨＹＹＡＭＥＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳとして記載される。ＢＢＫ２の軽鎖可変領域は、配列番号３２にＤＩＱＭＴＱＴＴＳＡＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＧＣＲＡＳＱＤＬＳＮＨＬＹＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＲＮＬＥＱＥＤＶＡＴＹＦＣＱＱＧＹＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫとして記載される。抗ＣＤ１３７抗体（抗ＣＤ１３７  ＡＤＣを含む）は、それぞれ配列番号２８および配列番号３２に記載の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含むことができる。
【０１４９】
一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体、例えばキメラ（ｃｈ−ＢＢＫ２）抗体またはヒト化ＢＢＫ２抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ２、および配列番号２７のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、配列番号２９のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１５０】
一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体、例えばキメラ（ｃｈ−ＢＢＫ２）抗体またはヒト化ＢＢＫ２抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ２、および配列番号３５のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、配列番号３６のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ２、および配列番号３８のアミノ酸配列を含有するＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１５１】
したがって、ＢＢＫ２抗体、ヒト化ＢＢＫ２抗体、またはキメラＢＢＫ２抗体は、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７  ＡＤＣおよび方法に使用することができる。これらの抗体のそれぞれは、当該分野で公知の方法および本明細書に記載される方法を使用して、以下に記載される細胞毒素のいずれかにコンジュゲートされ得る。
【０１５２】
本明細書に記載の細胞毒素と併せて使用され得る他の抗ＣＤ１３７抗体は、当技術分野で知られている技術（例えば、ハイブリドーマ産生）を使用して同定することができる。ハイブリドーマはマウス系を使用して調製できる。免疫化のプロトコルおよびその後の融合のための脾細胞の単離のプロトコルは、当技術分野で知られている。融合パートナーおよびハイブリドーマ生成の手順も知られている。ヒト抗ＣＤ１３７抗体は、ＨｕＭＡｎ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）またはＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭにおいても生成できる。抗ＣＤ１３７抗体の作製時に、ＣＤ１３７抗原は単離および／または精製される。ＣＤ１３７抗原は、ＣＤ１３７の細胞外ドメイン由来のＣＤ１３７の断片であり得る。動物の免疫化は、当該分野で公知の任意の方法によって実施され得る。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、１９９０年を参照されたい。マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシおよびウマなどの動物を免疫化する方法は、当技術分野で周知である。例えば、前出のＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、および米国特許第５，９９４，６１９号を参照されたい。ＣＤ１３７抗原は、免疫応答を刺激するためにアジュバントとともに投与される。当技術分野で公知のアジュバントには、完全もしくは不完全フロイントアジュバント、ＲＩＢＩ（ムラミルジペプチド）またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）が含まれる。ＣＤ１３７抗原で動物を免疫化した後、抗体産生不死化細胞株が免疫動物から単離された細胞から調製される。免疫化後、動物を犠牲にし、リンパ節および／または脾臓Ｂ細胞を当技術分野で公知の方法（例えば、癌遺伝子導入、発癌性ウイルスの形質導入、発癌性化合物もしくは変異化合物への曝露、不死化細胞（例：骨髄腫細胞）との融合、および腫瘍抑制遺伝子の不活性化）により不死化する。例えば、前出のＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅを参照されたい。強力な増殖、高い抗体産生、所望の抗体特性などの所望の特性について、ハイブリドーマを選択し、クローン化し、さらにスクリーニングすることができる。
【０１５３】
抗ＣＤ１３７抗体は、本開示により提供されるＣＤ１３７結合分子のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子から生成され得る。ヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列は、ＣＤＲ、１、２、または３つのＣＤＲを含む配列、重鎖の可変領域、軽鎖の可変領域など抗体の任意の部分であり得、あるいは全長の重鎖または全長の軽鎖であり得る。本開示の核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得、イントロン配列を含んでも含まなくてもよい。通常、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【０１５４】
抗体および抗原結合断片に加えて、ヒトＣＤ１３７リガンドなどの可溶性ＣＤ１３７リガンドを、本明細書に記載の方法に従って患者に投与して、造血幹細胞移植療法の前に患者を調整することができる。例えば、ヒトＣＤ１３７リガンドなどのＣＤ１３７リガンドは、細胞毒素（例えば、以下に記載されるか、または当該分野で公知の方法に従って）またはＦｃドメインなどの別のエフェクター分子にコンジュゲートされ得る。本明細書に記載の方法で使用するメイタンシン細胞毒素には、例えば、ヒトＣＤ１３７リガンド−ＩｇＧ１  Ｆｃコンジュゲート、ヒトＣＤ１３７リガンド−ＩｇＧ２  Ｆｃコンジュゲート、ヒトＣＤ１３７リガンド−ＩｇＧ３  Ｆｃコンジュゲート、ヒトＣＤ１３７リガンド−ＩｇＧ４  Ｆｃコンジュゲート、ヒトＣＤ１３７リガンド−ＩｇＡ  Ｆｃコンジュゲート、ヒトＣＤ１３７リガンド−ＩｇＥ  Ｆｃコンジュゲート、ヒトＣＤ１３７リガンド−ＩｇＭ  Ｆｃコンジュゲート、およびヒトＣＤ１３７リガンド−ＩｇＤ  Ｆｃコンジュゲートが含まれる。
【０１５５】
本明細書に記載の組成物および方法と併せて使用するための抗体およびリガンドには、上記の抗体のバリアント、例えばＦｃドメインを含むまたは含まない抗体断片、ならびに本明細書に記載の非ヒト抗体のヒト化バリアント、および本明細書に記載の抗体、抗体断片、または可溶性リガンドのＣＤＲもしくはその等価領域の１つ以上またはすべてを含む抗体様タンパク質スキャフォールド（例えば、１０Ｆｎ３ドメイン）が含まれる。
【０１５６】
抗体およびリガンドを同定する方法
ＣＤ１３７に結合可能な分子の抗体、抗体断片、リガンドのライブラリのハイスループットスクリーニングの方法は、例えばＧＶＨＤまたは自己免疫疾患の予防および治療に有用な薬剤の同定と親和性の成熟化に使用できる。そのような方法には、とりわけ、ファージディスプレイ、細菌ディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ｍＲＮＡディスプレイ、およびｃＤＮＡディスプレイなどの当技術分野で公知のｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術が含まれる。生物学的に関連する分子に結合する抗体、抗原結合断片、またはリガンドを単離するためのファージディスプレイの使用は、例えば、Ｆｅｌｉｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．１：１４９−１８３頁，１９９５年；Ｋａｔｚ，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．２６：２７−４５頁，１９９７年；およびＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４：１−２０，１９９８年に記載され、それらのそれぞれの開示は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術に関係するため、参照により本明細書に援用される。Ｋａｙ，  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｄｅｓ．２：２５１−２６８頁，１９９５年およびＫａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｄｉｖｅｒｓ．１：１３９−１４０頁，１９９６年に記載されているように、細胞表面抗原に結合するポリペプチドを選択するために、ランダム化されたコンビナトリアルペプチドライブラリが構築されており、それらの各々の開示は、それらが抗原結合分子の発見に関連するため、参照により本明細書に援用される。多量体タンパク質などのタンパク質は、機能性分子としてファージディスプレイに成功している（例えば、ＥＰ０３４９５７８；ＥＰ４５２７８３９；およびＥＰ０５８９８７７、ならびにＣｈｉｓｗｅｌｌ  ａｎｄ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：８０−８４頁，１９９２年を参照。それらの開示は、抗原結合分子の発見のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術の使用に関連するため、参照により本明細書に援用される。）。さらに、Ｆａｂ断片およびｓｃＦｖ断片などの機能的抗体断片は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ形式で発現されている（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４頁，１９９０年；Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：７９７８−７９８２頁，  １９９１年；  ａｎｄ  Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８頁，１９９１年を参照。それらの開示は、抗原結合分子の発見のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイプラットフォームに関係するため、参照により本明細書に援用される。）。ヒト抗ＣＤ１３７抗体はまた、例えば、ＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）またはＸｅｎｏＭｏｕｓｅＴＭにおいて生成することもできる。これらの技術は、とりわけ、ＣＤ１３７に結合する抗体、抗体断片およびリガンドの親和性を特定および改善するために使用することができ、それら抗体、抗体断片およびリガンドは患者の造血細胞を枯渇させるために使用することができる。
【０１５７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイテクニックに加えて、計算モデリングテクニックを使用して、例えば米国特許出願公開第２０１３／０２８８３７３号に記載されている手順を使用して、抗ＣＤ１３７抗体、抗体断片、およびリガンドをｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで設計および同定でき、抗ＣＤ１３７抗体を同定するための分子モデリング法に関連するため、その開示は本明細書に援用される。例えば、コンピューターモデリング技術を使用して、当業者は、ＣＤ１３７の細胞外エピトープなどのＣＤ１３７上の特定のエピトープに結合可能な分子について、抗体、抗体断片、およびリガンドのライブラリをｉｎ  ｓｉｌｉｃｏでスクリーニングすることができる。
【０１５８】
細胞（Ｔ細胞など）の表面上のＣＤ１３７に結合し、かつ例えば受容体を介したエンドサイトーシスなどによって細胞に取り込まれる抗体、抗原結合断片、およびそのリガンドを特定するために、追加の手法が使用され得る。例えば、上記のｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術は、造血幹細胞の表面上のＣＤ１３７に結合し、その後取りこまれる抗体、その抗原結合断片、およびリガンドをスクリーニングするように適合させることができる。ファージディスプレイは、このスクリーニングパラダイムと組み合わせて使用できるそのような手法の1つである。ＣＤ１３７に結合し、その後造血幹細胞に取り込まれる抗ＣＤ１３７抗体、その断片、およびリガンドを特定するために、当業者は、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １９：１４３２−１４３８頁，２００５年に記載されるファージディスプレイ技術を使用することができ、当該文献の開示はその全体が参照により本明細書に援用される。例えば、当該分野で公知の突然変異誘発方法を使用して、抗体、抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ断片、Ｆａｂ断片、ダイアボディ、トリアボディ、および１０Ｆｎ３ドメインなど）、またはランダム化されたアミノ酸カセット（例えば、１つ以上もしくはすべてのＣＤＲまたはその等価領域、抗体または抗体断片において）を含むリガンドをコードする組換えファージライブラリを作製することができる。フレームワーク領域、ヒンジ、Ｆｃドメイン、および抗体または抗体断片の他の領域は、例えば、ヒト生殖細胞系列抗体配列またはヒト生殖細胞系抗体に対して相対的にわずかな変動のみを示す配列を有することにより、ヒトにおいて非免疫原性であるように設計することができる。
【０１５９】
本明細書に記載のまたは当技術分野で公知のファージディスプレイ技術を使用して、ファージ粒子に共有結合したランダム化抗体、抗体断片、またはリガンドを含むファージライブラリは、非特異的なタンパク質結合を示す抗体、その断片、またはリガンドをコードするファージ、ならびにＦｃドメインに結合する抗体またはその断片をコードするファージを除去するように、例えばブロッキングライブラリ（例えば、乳タンパク質、ウシ血清アルブミン、および／またはＩｇＧなど）とファージライブラリを最初にインキュベートし、次いでＣＤ１３７＋である造血幹細胞の集団とファージライブラリをインキュベートすることにより、ＣＤ１３７抗原とインキュベートされ得る。ファージライブラリは、ＣＤ１３７特異抗体、その抗原結合断片、またはリガンドが細胞表面ＣＤ１３７に結合し、その後造血幹細胞に取り込まれるのに十分な時間（例：４℃で３０分〜６時間（例えば、４℃で１時間など））、造血幹細胞とインキュベートされ得る。造血幹細胞への結合および取り込みを可能にするのに十分なＣＤ１３７に対する親和性を示さない抗体、その断片、またはリガンドを含むファージは、その後、例えば冷（４℃）グリシンバッファー（ｐＨ２．８、０．１Ｍ）で細胞を洗浄することにより除去され得る。造血幹細胞によって取り込まれた抗体、その断片、またはリガンドに結合したファージは、例えば、細胞を溶解し、細胞培養培地から取り込まれたファージを回収することにより同定され得る。次いで、例えば、当該分野で公知の方法を用いて２ｘＹＴ培地中で細菌細胞を回収されたファージとインキュベートすることにより、細菌細胞内でファージを増幅することができる。次いで、この培地から回収されたファージは、例えば、ファージゲノム内に挿入された抗体、その断片、またはリガンドをコードする遺伝子の核酸配列を決定することにより特徴付けられ得る。コードされた抗体、その断片、またはリガンドは、（例えば、ｓｃＦｖ断片などの抗体断片、またはＣＤ１３７リガンドの）化学合成または（例えば、完全長抗体の）組換え発現により、新たに調製され得る。
【０１６０】
調製された抗体、その断片、またはリガンドの取り込まれる能力は、例えば、当該分野で公知の放射性核種取り込みアッセイを使用して評価され得る。例えば、本明細書に記載のまたは当技術分野で既知のｉｎ  ｖｉｔｒｏディスプレイ技術を使用して同定された抗ＣＤ１３７抗体、その断片、またはリガンドは、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、１６９Ｙｂ、１８６Ｒｅ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、７７Ｌｕ、７７Ａｓ、７２Ａｓ、８６Ｙ、９０Ｙ、８９Ｚｒ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、または２２５Ａｃなどの放射性同位体の取り込みにより機能化され得る。例えば、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２２Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１２９Ｉ、１３１Ｉ、２１１Ａｔなどの放射性ハロゲンは、求電子性ハロゲン試薬を含むポリスチレンビーズ（例えば、Ｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ  Ｂｅａｄｓ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，ケンブリッジ、マサチューセッツ州）などのビーズを使用して、抗体、その断片、またはリガンドに組み込まれ得る。放射性標識された抗体、その断片、ＡＤＣ、またはリガンドは、取り込みを可能にするのに十分な時間（例：４℃で３０分〜６時間（例えば、４℃で１時間など））、造血幹細胞とインキュベートされ得る。次いで、細胞を洗浄して、取り込まれていない抗体またはその断片を（例えば、ｐＨ２．８の冷（４℃）０．１Ｍグリシンバッファーを使用して）除去することができる。取り込まれた抗体、その断片、またはリガンドは、回収された洗浄バッファーの放射線（例：γ線）と比較して、得られた造血幹細胞の放射線（例：γ線）を検出することにより特定され得る。前述の取り込みアッセイは、ＡＤＣの特性評価にも使用され得る。
【０１６１】
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え法および組換え組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）のＶＬを含むアミノ酸配列および／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードし得る。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は以下を含む（例えば、形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施形態では、宿主細胞は真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例：Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞など）である。一実施形態では、抗ＣＬＬ−１抗体を作製する方法が提供され、当該方法は、上記で提供された抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を抗体の発現に適した条件下で培養すること、および任意で宿主細胞（または宿主細胞培地）から抗体を回収することを含む。
【０１６２】
抗ＣＤ１３７抗体の組換え産生のために、例えば上記のような抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニングおよび／または宿主細胞における発現のために１つ以上のベクターに挿入される。そのような核酸は、従来の手順を使用して容易に単離および配列決定され得る（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）。
【０１６３】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要でない場合、抗体は細菌内で産生され得る。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、米国特許第５，７８９，１９９号、および米国特許第５，８４０，５２３号を参照されたい（大腸菌での抗体断片の発現について説明しているＣｈａｒｌｔｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．  Ｌｏ、ｅｄ．、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、トトワ、ニュージャージー州、２００３年）、２４５−２５４頁も参照）。発現後、抗体は可溶性画分で細菌細胞ペーストから単離され、さらに精製され得る。
【０１６４】
脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で増殖するように適合された哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児腎臓系（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７年）に記載の２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０年）に記載のＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ）；水牛のラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８頁（１９８２年）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞系には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０年））；およびＹ０、ＮＳ０、Ｓｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に適した特定の哺乳類宿主細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，  ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，トトワ，ニュージャージー州），２５５−２６８頁（２００３年）を参照されたい。
【０１６５】
薬物−抗体コンジュゲート
細胞毒素
本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、およびリガンド（例えば、ＣＤ１３７を認識して結合する抗体、その抗原結合断片、および可溶性リガンド）は、患者への投与時に宿主反応性Ｔ細胞などの造血細胞の枯渇を促進するために、微小管結合剤（例：メイタンシンまたはメイタンシノイド）、アマトキシン、シュードモナス外毒素Ａ、デボウガニン、α−アマニチンなどのジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、ＳＮ−３８、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、またはそれらのバリアントなどの細胞毒素、あるいは本明細書に記載の、または当技術分野で知られている別の細胞毒性化合物にコンジュゲート（または連結）され得る。いくつかの実施形態では、細胞毒性分子は取り込まれる抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、または可溶性リガンドにコンジュゲートされ、その結果、抗体、その断片、または可溶性リガンドの細胞への取り込み後に、細胞毒素はその細胞内標的にアクセスして造血細胞の死を媒介し得る。本明細書に記載の組成物および方法での使用に適した追加の細胞毒素には、当技術分野で知られているものの中でも、ＤＮＡ挿入剤（例えば、アントラサイクリン）、有糸分裂紡錘体装置を破壊することができる薬剤（例えば、ビンカアルカロイド、メイタンシン、メイタンシノイド、およびそれらの誘導体）、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤（例えば、α−アマニチンなどのアマトキシン、およびそれらの誘導体）、タンパク質生合成を破壊できる薬剤（例、サポリンおよびリシンＡ鎖などのｒＲＮＡ  Ｎ−グリコシダーゼ活性を示す薬剤）が含まれる。
【０１６６】
メイタンシノイド
抗ＣＤ１３７抗体は、微小管結合剤である細胞毒素にコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、細胞毒素はメイタンシン、メイタンシノイドまたはメイタンシノイド類似体である。メイタンシノイドは、チューブリン重合を妨げる微小管結合剤である。適切なメイタンシノイドの例には、メイタンシノールのエステル、合成メイタンシノール、ならびにメイタンシノールの類似体および誘導体が含まれる。メイタンシノイド、メイタンシノール、ならびにメイタンシノールの類似体および誘導体と同様に、微小管形成を阻害し、哺乳動物細胞に対して非常に有毒な任意の薬物が含まれる。
【０１６７】
適切なメイタンシノールエステルの例には、修飾芳香環を有するものおよび他の位置に修飾を有するものが含まれる。そのような適切なメイタンシノイドは、米国特許第４，１３７，２３０号；米国特許４，１５１，０４２号；米国特許４，２４８，８７０号；米国特許４，２５６，７４６号；米国特許４，２６０，６０８号；米国特許４，２６５，８１４号；米国特許４，２９４，７５７号；米国特許４，３０７，０１６号；米国特許４，３０８，２６８号；米国特許４，３０８，２６９号；米国特許４，３０９，４２８号；米国特許４，３１３，９４６号；米国特許４，３１５，９２９号；米国特許４，３１７，８２１号；米国特許４，３２２，３４８号；米国特許４，３３１，５９８号；米国特許４，３６１，６５０号；米国特許４，３６２，６６３号；米国特許４，３６４，８６６号；米国特許４，４２４，２１９号；米国特許４，４５０，２５４号；米国特許４，３２２，３４８号；米国特許４，３６２，６６３号；米国特許４，３７１，５３３号；米国特許５，２０８，０２０号；米国特許５，４１６，０６４号；米国特許５，４７５，０９２号；米国特許５，５８５，４９９号；米国特許５，８４６，５４５号；米国特許６，３３３，４１０号；米国特許７，２７６，４９７号；および米国特許７，４７３，７９６号に開示されており、それらの開示は、メイタンシノイドおよびその誘導体に関連するため、参照により本明細書に援用される。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫コンジュゲート（ＡＤＣ）は、細胞毒性剤として、正式にはＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシンと呼ばれるチオール含有メイタンシノイド（ＤＭ１）を利用する。ＤＭ１は、次の構造式で表される：
【化５】
2020506176.tif 000012
別の実施形態では、本発明のコンジュゲートは、細胞毒性剤として、チオール含有メイタンシノイドであるＮ２’−デアセチル−Ｎ２’（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン（例えばＤＭ４）を利用する。ＤＭ４は、次の構造式で表される：
【化６】
2020506176.tif 000013
立体障害チオール結合を含有する側鎖を含む別のメイタンシノイドは、次の構造式（ＩＩＩ）で表されるＮ２’−デアセチル−Ｎ−２’（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン（ＤＭ３と呼ばれる）である。
【化７】
2020506176.tif 000014
米国特許第５，２０８，０２０号および米国特許第７，２７６，４９７号に教示されている各々のメイタンシノイドも、本発明のコンジュゲートに使用され得る。これに関して、米国特許第５，２０８，０２０号および米国特許第７，２７６，４９７号7の開示全体が参照により本明細書に援用される。
【０１６９】
メイタンシノイドの多くの位置は、連結部分を化学的に連結する位置として機能することができる。例えば、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシで修飾されたＣ−１５位、およびヒドロキシ基を有するＣ−２０位はすべて有用であると予想される。いくつかの実施形態では、Ｃ−３位置は、連結部分を化学的に連結する位置として機能し、いくつかの特定の実施形態では、メイタンシノールのＣ−３位置は、連結部分を化学的に連結する位置として機能する。
【０１７０】
本発明はまた、メイタンシノイドおよびコンジュゲートの様々な異性体および混合物を含む。本発明の特定の化合物およびコンジュゲートは、様々な立体異性体、鏡像異性体、およびジアステレオマーの形態で存在し得る。そのような抗体−メイタンシノイドコンジュゲートを生成するためのいくつかの説明は、米国特許第５，２０８，０２０号、米国特許第５，４１６，０６４号、米国特許第６，３３３，４１０号、米国特許第６，４４１，１６３号、米国特許第６，７１６，８２１号、および米国特許第７，３６８，５６５号に提供されており、これらの各々の全体が本明細書に援用される。
【０１７１】
抗体分子あたりの結合したメイタンシノイド分子の治療上有効な数は、２５２ｎｍと２８０ｎｍでの吸光度の比を分光測光法で測定することにより決定することができる。抗体１分子あたり1分子の毒素は、抗体単独よりも細胞毒性を高めることができるが、抗体１分１子あたり平均３〜４個のメイタンシノイド分子がコンジュゲートされていると、抗体の機能や溶解性に悪影響を与えることなく、標的細胞の細胞毒性を高めるこができる。抗体もしくはその抗原結合断片、または可溶性リガンド1分子あたりのメイタンシノイド分子の平均数は、例えば１〜１０または２〜５であり得る。
【０１７２】
アマトキシン
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマトキシンまたはその誘導体、例えばα-アマニチン、β-アマニチン、γ-アマニチン、ε-アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、アマヌリン酸、またはプロアマヌリンである。例えば、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、または可溶性リガンドにコンジュゲートされ得る適切な細胞毒素には、式（ＩＶ）で表されるアマトキシンまたはその誘導体が含まれる：
【化８】
2020506176.tif 000015
式（ＩＶ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；ＲＣは、Ｌ−Ｚであり；ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンなどのリンカーであり；Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、ＣＤ１３７に結合する抗体、その抗原結合断片、または可溶性リガンド内に存在する反応性置換基との間でカップリング反応を形成する化学部分である。いくつかの実施形態では、細胞毒素は１つのＲＣ置換基を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、細胞毒素は、式（ＩＶＡ）で表されるアマトキシンまたはその誘導体である：
【化９】
2020506176.tif 000016
式（ＩＶＡ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、任意に置換された５員のヘテロシクロアルキル基を形成し；Ｒ３は、Ｈ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、ＯＲＤ、ＮＨＲＣ、またはＮＲＣＲＤであり；Ｒ９は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＯＲＤであり；Ｘは、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、または−ＳＯ２−であり；ＲＣは、Ｌ−Ｚであり；ＲＤは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクロアルキル、任意に置換されたアリール、または任意に置換されたヘテロアリールであり；Ｌは、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン、任意に置換されたシクロアルキレン、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；Ｚは、Ｌ上に存在する反応性置換基と、ＣＤ１３７に結合する抗体、その抗原結合断片、または可溶性リガンド内に存在する反応性置換基との間でカップリング反応を形成する化学部分であり；細胞毒素は１つのＲＣ置換基を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成し：
【化１０】
2020506176.tif 000017
上記の式中、ＹはＯ、Ｓ、ＮＲＥ、およびＣＲＥＲＥ’から選択され、ＲＥおよびＲＥ’は、それぞれ独立して、任意に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルケニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニレン−ＲＣ、任意に置換されたＣ２−Ｃ６ヘテロアルキニレン−ＲＣ、任意に置換されたシクロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたヘテロシクロアルキレン−ＲＣ、任意に置換されたアリーレン−ＲＣ、または任意に置換されたヘテロアリーレン−ＲＣである。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、細胞毒素は、式（ＩＡ）で表されるアマトキシンまたはその誘導体であり、式（ＩＡ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；Ｒ２はＨ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成し：
【化１１】
2020506176.tif 000018
Ｒ３は、ＨまたはＲＣであり；Ｒ４は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ，ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ，ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ６は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ，ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ７は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＣ，ＯＲＤ、ＲＣ、またはＲＤであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり；Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり；ＲＣおよびＲＤは、それぞれ上記で定義したとおりである。本明細書に記載のコンジュゲートと併せて有用な毒素には、式（ＩＶＡ）で表されるアマトキシンまたはその誘導体を含有するものが含まれ、式（ＩＶＡ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＡ、またはＯＲＣであり；Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、ＯＲＢ、またはＯＲＣであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成し：
【化１２】
2020506176.tif 000019
Ｒ３は、ＨまたはＲＣであり；Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ，ＲＣ、またはＯＲＤであり；Ｒ６およびＲ７は、それぞれＨであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり；Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり；ＲＣは、上記で定義したとおりである。
【０１７６】
本明細書に記載のコンジュゲートと併せて有用な毒素には、式（ＩＶＡ）で表されるアマトキシンまたはその誘導体を含有するものが含まれ、式（ＩＶＡ）中、Ｒ１は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＡであり；Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲＢであり；ＲＡおよびＲＢは、ＲＡおよびＲＢが結合している酸素原子と一緒になって、以下を形成し：
【化１３】
2020506176.tif 000020
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり；Ｒ５は、ＯＲＣであり；Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり；Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり；ＲＣは、上記で定義したとおりである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第２０１６／０００２２９８号に記載されており、その開示はその全体が参照により本明細書に援用される。
【０１７７】
本明細書に記載のコンジュゲートと併せて有用な毒素には、式（ＩＶＡ）で表されるアマトキシンまたはその誘導体を含有するものが含まれ、式（ＩＶＡ）中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立してＨまたはＯＨであり；Ｒ３はＲＣであり；Ｒ４、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり；Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、またはＯＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり；Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり；ＲＣは、上記で定義したとおりである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第２０１４／０２９４８６５号に記載されており、その開示はその全体が参照により本明細書に援用される。
本明細書に記載のコンジュゲートと併せて有用な毒素には、式（ＩＡ）で表されるアマトキシンまたはその誘導体を含有するものが含まれ、式（ＩＡ）中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立してＨまたはＯＨであり；Ｒ３、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり；Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立してＨ、ＯＨ、ＯＲＣ、またはＲＣであり；Ｒ８は、ＯＨまたはＮＨ２であり；Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり；ＲＣは、上記で定義したとおりである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号に記載されており、その開示はその全体が参照により本明細書に援用される。
【０１７８】
本明細書に記載のコンジュゲートと併せて有用な毒素には、式（ＩＶＡ）で表されるアマトキシンまたはその誘導体を含有するものが含まれ、式（ＩＶＡ）中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立してＨまたはＯＨであり；Ｒ３、Ｒ６、およびＲ７は、それぞれＨであり；Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立してＨまたはＯＨであり；Ｒ８は、ＯＨ、ＮＨ２、ＯＲＣ、またはＮＨＲＣであり；Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり；ＲＣは、上記で定義したとおりである。そのようなアマトキシンコンジュゲートは、例えば、米国特許第９，２３３，１７３号および米国特許第９，３９９，６８１号に記載されており、それらのそれぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、α-アマニチンなどのアマトキシンまたはそのバリアントにコンジュゲートされる。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体または抗原結合断片（例えば、ＣＤ１３７を認識して結合する抗体または抗原結合断片）は、式（Ｖ）で表されるα−アマニチン化合物にコンジュゲートされる：
【化１４】
2020506176.tif 000021
式中、Ｘは、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり；Ｒ１はＨであるか、または抗体、その抗原結合断片もしくはリガンドに共有結合したリンカーであり；Ｒ２はＨであるか、または抗体、その抗原結合断片もしくはリガンドに共有結合したリンカーであり；Ｒ１がＨであるとき、Ｒ２はリンカーであり；Ｒ２がＨであるとき、Ｒ１はリンカーである。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はα-アマニチンである。いくつかの実施形態では、α-アマニチンは式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのα−アマニチンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのα−アマニチンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はβ-アマニチンである。いくつかの実施形態では、β-アマニチンは式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのβ−アマニチンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのβ−アマニチンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はγ-アマニチンである。いくつかの実施形態では、γ-アマニチンは式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのγ−アマニチンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのγ−アマニチンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はε-アマニチンである。いくつかの実施形態では、ε-アマニチンは式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのε−アマニチンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのε−アマニチンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマニンである。いくつかの実施形態では、アマニンは式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのアマニンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのアマニンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８５】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマニンアミドである。いくつかの実施形態では、アマニンアミドは式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのアマニンアミドは、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのアマニンアミドに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマヌリンである。いくつかの実施形態では、アマヌリンは式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのアマヌリンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのアマヌリンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８７】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はアマヌリン酸である。いくつかの実施形態では、アマヌリン酸は式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのアマヌリン酸は、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのアマヌリン酸に結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、細胞毒素はプロアマヌリンである。いくつかの実施形態では、プロアマヌリンは式ＩＶの化合物である。いくつかの実施形態では、式ＩＶのプロアマヌリンは、リンカーＬを介して抗ＣＤ１３７抗体に結合される。リンカーＬは、いくつかの可能な位置のいずれか１つ（例えば、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか）で、式ＩＶのプロアマヌリンに結合され得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ１で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは位置Ｒ２で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ３で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ４で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ５で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ６で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ７で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ８で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、位置Ｒ９で結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、パラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１８９】
本明細書に記載の組成物および方法と共に使用する抗体、抗原結合断片、およびリガンドは、当技術分野で公知のまたは本明細書に記載のコンジュゲーション技術を使用して、α−アマニチンなどのアマトキシン、またはそのバリアントにコンジュゲートされ得る。例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号に記載されているように、ＣＤ１３７を認識して結合する抗体、その抗原結合断片、およびリガンドは、α−アマニチンまたはその変異体にコンジュゲートされ得、その開示は、例えば、α−アマニチンなどのアマトキシンおよびその変異体、ならびに共有結合コンジュゲーションに使用できる共有結合リンカーに関連するため、参照により本明細書に援用される。
【０１９０】
本明細書に記載の方法と併せて有用な例示的な抗体−薬物コンジュゲートおよびリガンド−薬物コンジュゲートは、抗体、その抗原結合断片またはリガンドと、抗体、その抗原結合断片またはリガンド上の反応性残基との反応に適した置換基を含有するリンカーにコンジュゲートされたアマトキシンとの反応によって形成され得る。抗体、その抗原結合断片、またはリガンド上の反応性残基との反応に適した置換基を含有するリンカーにコンジュゲートされたアマトキシンには、制限なく、以下のものが含まれる：７’Ｃ−（４−（６−（マレイミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボニル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（３−カルボキシプロパナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（２−ブロモアセトアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（４−（マレイミド）ブタナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（マレイミド）アセチル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（３−（マレイミド）プロパノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（４−（マレイミド）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（３−（（６−（マレイミド）ヘキサナミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（３−（（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサナミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（３−（（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（３−（（６−（（４−（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサナミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ヘキサナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（４−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ブタナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（４−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（マレイミド）ヘキサアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（マレイミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；（Ｒ）−７’Ｃ−（（３−（（６−（マレイミド）ヘキサアミド）メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；（Ｓ）−７’Ｃ−（（３−（（６−（マレイミド）ヘキサナミド）メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサナミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサナミド）−Ｓ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサナミド）−Ｒ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）−Ｓ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）−Ｒ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサナミド）メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（３−カルボキシプロパナミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（マレイミド）アセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（３−（マレイミド）プロパノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（４−（マレイミド）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−（マレイミド）アセトアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（４−（マレイミド）ブタナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（マレイミド）ヘキサナミド）メチル）アゼチジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（２−（６−（マレイミド）ヘキサアミド）エチル）アゼチジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）メチル）アゼチジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（２−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）エチル）アゼチジン−１イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサナミド）エチル）アゼチジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（（２−（６−（マレイミド）−Ｎ−メチルヘキサナミド）エチル）（メチル）アミノ）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（（４−（６−（マレイミド）−Ｎ−メチルヘキサナミド）ブチル（メチル）アミノ）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（２−（２−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）エチル）アジリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（２−（２−（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサアミド）エチル）アジリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（６−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ヘキサナミド）ヘキサノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（１−（アミノオキシ）−２−オキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３−アザヘプタデカン−１７−オイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）アセチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（３−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）プロパノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（４−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ブタノイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ヘキサナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）アセトアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（４−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）ブタナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２０−（アミノオキシ）−４，１９−ジオキソ−６，９，１２，１５−テトラオキサ−３，１８−ジアザイコシル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（（２−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）−Ｎ−メチルヘキサアミド）エチル）（メチル）アミノ）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（（４−（６−（２−（アミノオキシ）アセトアミド）−Ｎ−メチルヘキサアミド）ブチル）（メチル）アミノ）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサナミド）メチル）ピロリジン−１−イル）−Ｓ−メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（３−（（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキサナミド）−Ｒ−メチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−ブロモアセトアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（２−ブロモアセトアミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；７’Ｃ−（（４−（２−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパナミド）エチル）ピペリジン−１−イル）メチル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキシル）−アマトキシン；６’Ｏ−（５−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ペンチル）−アマトキシン；６’Ｏ−（２−（（６−（マレイミド）ヘキシル）オキシ）−２−オキソエチル）−アマトキシン；６’Ｏ−（（６−（マレイミド）ヘキシル）カルバモイル）−アマトキシン；６’Ｏ−（（６−（４−（（マレイミド）メチル）シクロヘキサンカルボキサミド）ヘキシル）カルバモイル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（２−ブロモアセトアミド）ヘキシル）−
アマトキシン；７’Ｃ−（４−（６−（アジド）ヘキサナミド）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（ｈｅｘ−５−イノイルアミノ）ピペリジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（マレイミド）ヘキサアミド）エチル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；７’Ｃ−（４−（２−（６−（６−（マレイミド）ヘキサナミド）ヘキサナミド）エチル）ピペラジン−１−イル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（６−（１１，１２−ジデヒドロ−５，６−ジヒドロ−ジベンゾ［ｂ、ｆ］アゾシン−５−イル）−６−オキソヘキサナミド）ヘキシル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（ｈｅｘ−５−イノイルアミノ）ヘキシル）−アマトキシン；６’Ｏ−（６−（２−（アミノオキシ）アセチルアミド）ヘキシル）−アマトキシン；６’Ｏ−（（６−アミノオキシ）ヘキシル）−アマトキシン；および６’Ｏ−（６−（２−ヨードアセトアミド）ヘキシル）−アマトキシン。本明細書に記載の組成物および方法に関連して特に有用な前述のリンカーは、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２２０号に記載されており、その開示はその全体が参照により本明細書に援用される。
【０１９１】
ＣＤ１３７を認識および結合する抗体、その抗原結合断片、およびリガンドにコンジュゲートされ得る、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患の治療における使用のための追加の細胞毒素には、とりわけ、５−エチニルウラシル、アビラテロン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミフォスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラフォライド、血管新生阻害剤、アンタレリックス、抗背側形成タンパク質−１、抗アンドロゲン、前立腺癌、抗エストロゲン、抗新生物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシン、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス調節因子、アプリン酸、アスクラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット、ＢＣＲ／ＡＢＬ拮抗薬、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータラクタム誘導体、ベータ−アレチン、ベータクラマイシンＢ、ベツリン酸、ｂＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブフレート、ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルホキシミン、カルシポトリオール、カルフォスチンＣ、カンプトテシン誘導体（例えば、１０−ヒドロキシ−カンプトテシン）、カペシタビン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、カルゼレシン、カゼインキナーゼ阻害剤、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セトロレリックス、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シス−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェンおよびその類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クランベシジン８１６、クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペンタントラキノン、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビンオクフォスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデムニンＢ、２’デオキシコホルマイシン（ＤＣＦ）、デスロレリン、デキシフォスファミド、デキスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジコン、ジデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジヒドロタキソール、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ディスコデルモリド、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン、エデルフォシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフール、エポチロン、エピチロン、エプリステリド、エストラムスチンおよびそれらの類似体、エトポシド、エトポシド４’−リン酸（エトポホスとも呼ばれる）、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、フルオロダウノルニシン塩酸塩、フォルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリシン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム、ホモハリントニン（ＨＨＴ）、ヒペリシン、イバンドロン酸、イドキシフェン、イドラマントン、イルモフォシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫刺激ペプチド、イオベングアネ、ヨードドキソルビシン、イポメアノール、イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトルスタチン、レトロゾール、親油性白金化合物、リソクリンアミド７、ロバプラチン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロソキサントロン、ロキソリビン、ルテテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、マソプロコール、マスピン、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、ルネバロン、メテリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、ＭＩＦ阻害剤、イフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスティム、ミトラシン、ミトグアゾン、ミトララクト、マイトマイシンおよびその類似体、ミトナフィド、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスティム、ミカペロキシドＢ、ミリアポロン、Ｎ−アセチルジナリン、Ｎ−置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチプ、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、ニルタミド、ニサマイシン、ニトリン、オクトレオチド、オキセノン、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、オルマプラチン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセルおよびその類似体、パラオアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ペントサン多硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、パーフルブロン、パーフォスファミド、フェナジノマイシン、ピシバニル、ピラルビシン、ピリトレキシム、ポドフィロトキシン、ポルフィロマイシン、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、ラルチトレキセド、リゾキシン、ログレチミド、ロヒチカイン、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、サントピン、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、ソブゾキサン、ソネルミン、スパルフォス酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スチピアミド、スルフィノシン、タリムスチン、テガフール、テモゾロミド、テニポシド、サリブラスチン、チオコラリン、チラパザミン、トポテカン、トプセンチン、トリシリビン、トリメトレキサート、ベラミン、ビノレルビン、ビンサルチン、ボロゾール、ゼニプラチン、およびジルスコルブが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９２】
化学的コンジュゲーションためのリンカー
様々なリンカーを使用して、本明細書に記載の抗体、抗原結合断片、およびリガンド（例えば、ＣＤ１３７を認識して結合する抗体、その抗原結合断片、および可溶性リガンド）を細胞毒性分子と結合させることができる。適切なリンカーには、例えば、酵素加水分解、光分解、酸性条件下での加水分解、塩基性条件下での加水分解、酸化、ジスルフィド還元、求核性開裂、または有機金属開裂により切断され得るものが含まれる（例えば、Ｌｅｒｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０：５７１−５８２頁，２０１２年を参照。その開示は、共有結合コンジュゲーションに適したリンカーに関するため、参照により本明細書に組み込まれる。）。薬物−抗体コンジュゲートおよび薬物−リガンドコンジュゲートの合成に有用なリンカーの例には、とりわけ、抗体、抗原結合断片、およびリガンド内に存在するアミンやチオール部分などの求核置換基との反応に適した、マイケルアクセプター（例、マレイミド）、活性化エステル、電子欠乏性カルボニル化合物、アルデヒドなどの求電子体を含有するものが含まれる。例えば、薬物−抗体コンジュゲートおよび薬物−リガンドコンジュゲートの合成に適したリンカーには、これらに限定されないが、例えば、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１８：６９０−６９７頁，１９７９年に記載されたスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−Ｌ−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、スルホ−ＳＭＣＣ、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、およびヨード酢酸スクシンイミジルなどが含まれ、その開示は、化学的コンジュゲーションのためのリンカーに関係するため、参照により本明細書に援用される。追加のリンカーには、アウリスタチンなどの微小管破壊剤のコンジュゲーションに特に有用な非開裂性マレイミドカプロイルリンカーが含まれ、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１７：１４−２４頁，２００６年に記載されており、その開示は、化学的コンジュゲーションのためのリンカーに関係するため、参照により本明細書に援用される。本明細書に記載の薬物−抗体コンジュゲートおよび薬物−リガンドコンジュゲートの合成に適した追加のリンカーには、１，６−脱離プロセスにより細胞毒素を放出できるもの、例えば、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢＣ）、６−マレイミドヘキサン酸、ｐＨ感受性炭酸塩、およびＪａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．３２：３５２６−３５４０頁，２０１５年に記載されているその他の試薬が含まれ、その開示はその全体が参照により本明細書に援用される。
【０１９３】
抗体、その抗原結合断片、またはリガンドを細胞毒性剤に結合するために使用し得るリンカーには、リンカーの一端で細胞毒性剤に共有結合し、リンカーの他端に、リンカー上に存在する反応性置換基と、ＣＤ１３７に結合する抗体、その抗原結合断片、またはリガンド内に存在する反応性置換基との間のカップリング反応から形成される化学部分を含むリンカーが含まれる。ＣＤ１３７に結合する抗体、その抗原結合断片、またはリガンド内に存在し得る反応性置換基には、セリン、スレオニンおよびチロシン残基のヒドロキシル部分；リジン残基のアミノ部分；アスパラギン酸およびグルタミン酸残基のカルボキシル部分; およびシステイン残基のチオール部分、ならびに非天然アミノ酸のプロパルギル、アジド、ハロアリール（例えば、フルオロアリール）、ハロヘテロアリール（例えば、フルオロヘテロアリール）、ハロアルキル、およびハロヘテロアルキル部分が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に記載の抗体−薬物コンジュゲートおよびリガンド−コンジュゲートと併せて有用なリンカーには、以下の表１に示すようなカップリング反応により形成される化学部分を含有するリンカーが含まれるが、これらに限定されない。曲線は、それぞれ、抗体、抗原結合断片、またはリガンドへの結合点、および細胞毒性分子への結合点を示す。
【０１９４】
【表１−１】
2020506176.tif 000022
【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
2020506176.tif 000027
【０１９５】
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、リンカーを介して毒素にコンジュゲートされた抗ＣＤ１３７抗体を含み、当該リンカーはヒドラジン、ジスルフィド、チオエーテルまたはジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖａｌ−ＡｌａおよびＶａｌ−Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーはパラアミノベンジル基（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーはＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーはＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ部分を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−ユニットを含み、ｎは１〜６の整数である。いくつかの実施形態では、リンカーは、−ＰＡＢ−Ｃｉｔ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。いくつかの実施形態では、リンカーは−ＰＡＢ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−である。
【０１９６】
抗体の薬物動態プロファイル
いくつかの実施形態では、抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲートは、一定の血清半減期を有する。本明細書に記載の方法において有用な抗体、その抗原結合断片、およびコンジュゲートには、例えば１〜２４時間の血清半減期を有するものが含まれる。いくつかの実施形態では、循環抗体のレベルが治療上有効なレベルである場合、移植は、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲートの前、同時または後に行われる。血清レベルの測定による薬物動態分析は、当技術分野で知られているアッセイによって実施され得る。
【０１９７】
投与経路および投薬経路
本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、およびリガンドは、様々な剤形で患者（例えば、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を患っているか、またはそのリスクがあるヒト患者）に投与することができる。例えば、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、およびリガンドは、水溶液の形態、例えば１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む水溶液の形態で、ＧＶＨＤを患っている患者またはＧＶＨＤのリスクがある患者に投与することができる。本明細書に記載の組成物および方法と共に使用するのに適した薬学的に許容可能な賦形剤には、粘度調整剤が含まれる。水溶液は、当該分野で公知の技術を使用して滅菌され得る。
【０１９８】
本明細書に記載の抗ＣＤ１３７  ＡＤＣを含む医薬製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、そのようなＡＤＣを１つ以上の任意の薬学的に許容可能な担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０年））と混合することにより調製される。薬学的に許容可能な担体は、一般的に、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して無毒であり、以下を含むがこれらに限定されない：リン酸、クエン酸、その他の有機酸などのバッファー; アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤; 保存料（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成性対イオン;金属複合体（例：Ｚｎ−タンパク質複合体）;および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤。
【０１９９】
本明細書に記載の抗体、抗原結合断片、ＡＤＣ、およびリガンドは、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、眼内、または非経口などの様々な経路で投与され得る。任意のケースにおいて投与に最適な経路は、投与される特定の抗体、抗原結合断片またはＡＤＣ、患者、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間と投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療中の疾患の重症度、患者の食事、および患者の排泄率に依存する。
【０２００】
本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、またはリガンドの有効用量は、例えば、単回（例えば、ボーラス）投与、複数回投与、または連続投与当たり約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり得、あるいは抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣまたは可溶性リガンドの最適な血清濃度（例えば、０．０００１〜５０００μｇ／ｍＬの血清濃度）を達成する範囲であり得る。用量は、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を患っているか、またはそのリスクがある患者（たとえば、ヒト）に、１日、１週または１月につき１回以上（例えば、２〜１０回）投与することができる。抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、またはリガンドは、例えば、造血幹細胞移植の前に、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上、宿主反応性Ｔ細胞の量を減少させるのに十分な量で投与され得る。
【０２０１】
治療方法
移植片寛容を達成するために、本明細書に記載の組成物および方法を使用して、移植片不全および自己免疫疾患に関連する活性化Ｔ細胞を枯渇させることができる。本明細書に記載の組成物および方法は、ＧＶＨＤおよび自己免疫疾患の予防および治療に特に有用である。本明細書に開示される方法および組成物は、同種移植を受けるヒト患者の移植不全のリスクを低減するのにも有用である。好ましい患者はヒトである。投与される抗体、抗体−薬物コンジュゲート、またはリガンド−薬物コンジュゲートの量は、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を促進する細胞、例えば、活性化Ｔ細胞を枯渇させるのに十分でなければならない。治療上有効な用量の決定は、当技術分野の開業医の能力の範囲内であるが、一例として、ＧＨＶＤまたは自己免疫疾患の治療のために抗体の全身投与を利用する本明細書に記載の方法の実施形態では、有効なヒト用量は０．１〜１５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇなど）の範囲にあるだろう。投与経路は、推奨用量に影響を与え得る。採用された投与様式に応じて、有効なレベルを維持するため、例えば、ＧＶＨＤまたは自己免疫疾患を減衰または阻害するために、反復全身投与が考えられる。
【０２０２】
抗体、抗体−薬物コンジュゲート、またはリガンド−薬物コンジュゲートは、患者への細胞または固形臓器の移植の前、同時、または後に、必要なヒト患者に投与され得る。一実施形態では、抗ＣＤ１３７ＡＤＣは、細胞または固形臓器の移植前（例えば、３日前、２日前、１２時間前）に、それを必要とするヒト患者に投与される。一実施形態では、抗ＣＤ１３７ＡＤＣは、細胞または固形臓器の移植後（例えば、１日後、２日後、３日後、または４日後）に、それを必要とするヒト患者に投与される。抗ＣＤ１３７ＡＤＣの単回投与は、細胞または臓器の移植の前、同時、または後に、ヒト患者に与えることができ、そのような単回投与はＧＶＨＤまたは移植片不全を治療または予防するのに十分である。
【０２０３】
抗ＣＤ１３７ＡＤＣは、同種移植を含む移植の受容を促進するために使用される従来物（例えば、化学療法および／または放射線）の代替として使用され得る。従来物は一般に、移植された細胞または臓器の生着と受容を促進するために、患者の免疫応答を低下させる。本明細書に記載の方法および組成物は、ＣＤ１３７を発現する活性化Ｔ細胞を標的とし枯渇させながら、患者の免疫系の大部分を無傷のままにすることができるより選択的な治療法を提供する。したがって、特に、細胞または固形臓器の移植を成功させるために、アロ活性化免疫細胞を標的にして枯渇させることができることを考えると、本明細書に開示される抗ＣＤ１３７ＡＤＣの活性化Ｔ細胞を選択的に枯渇させる能力は、移植の文脈において従来の療法よりも有利な療法を提供する。
【０２０４】
本明細書に開示される方法および組成物は、移植片不全を予防または治療するために使用され得る。同種間の造血幹細胞移植後の不全を含む、移植片不全または移植片拒絶は、一般に、ドナー細胞の初期生着の欠如、または初期生着後のドナー細胞の喪失のいずれかとして現れ得る（総説については、Ｍａｔｔｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００８年）Ｂｉｏｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１４（Ｓｕｐｐｌ  １）：１６５−１７０頁を参照）。本明細書に開示される組成物および方法は、移植不全が懸念される移植片または移植シナリオ、例えば、ヒト患者が固形臓器または細胞の移植後に移植片不全を発症するリスクがある移植片または移植シナリオ、特に移植された細胞または臓器が同種である場合において、ＣＤ１３７を発現する活性化Ｔ細胞を枯渇させるために使用され得る。
【０２０５】
一実施形態では、抗ＣＤ１３７抗体、抗体−薬物コンジュゲート、またはリガンド−薬物コンジュゲートを使用して、細胞、移植片または臓器をヒト患者に移植する前に、細胞、移植片または固形臓器を、抗ＣＤ１３７抗体、抗体−薬物コンジュゲート、またはリガンド−薬物コンジュゲートと接触させることによって、ＣＤ１３７発現ドナー細胞、例えばＣＤ１３７を発現する活性化Ｔ細胞を枯渇させる。一実施形態では、細胞、移植片または臓器は同種である。
【０２０６】
ＧＶＨＤのリスクは、現在の治療法による移植後も高いままである。本明細書に開示される方法および組成物は、ヒト患者における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を阻害するために使用され得る。幹細胞移植などの移植を受ける患者の活性化Ｔ細胞を選択的に標的とするために、抗ＣＤ１３７  ＡＤＣは使用され得る。本明細書に記載の抗ＣＤ１３７  ＡＤＣは、ＨＳＣ移植など（ただしこれに限定されない）の移植を受ける予定の患者、または既に移植を受けた患者のＣＤ１３７＋細胞を標的にして枯渇させることにより、ＧＶＨＤのリスクを軽減するためにも使用され得る。特定の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法は、移植療法（例えば、同種ＨＳＣ）後の患者においてＧＶＨＤの症状が現れる前に、ＧＶＨＤを治療するためのものである。
【０２０７】
本明細書に記載の方法は、宿主対移植片（ＨｖＧ）反応の予防にも有用である。抗ＣＤ１３７−ＡＤＣは、宿主対移植片（ＨｖＧ）反応を防止するために、免疫抑制剤としても使用することができ、それにより、同種移植片不全のリスクを防止または軽減がされる。ＨｖＧ反応のリスクがある患者における抗ＣＤ１３７  ＡＤＣの使用は、ＨＬＡ−ミスマッチの程度がより大きいドナー細胞の生着を可能にする。追加の用途には、ＣＤ１３７−ＡＤＣによって宿主対移植片反応が防止または抑制される固形臓器移植における寛容誘導が含まれる。これらには、臓器が非ヒト起源であり、かつ/または遺伝子組み換えされた異種移植を含む、造血幹細胞移植の有無にかかわらず行われる固形臓器移植が含まれる。
【０２０８】
一実施形態では、抗ＣＤ１３７−ＡＤＣは、２人のドナーが使用される同種移植の状況において、移植片対移植片（ＧｖＧ）を防ぐために使用される。例には、成人患者および小児患者における２人の臍帯血幹細胞ドナーの使用が含まれる。両方の幹細胞源がうまく生着するため、ＧｖＧの予防は、移植後のより迅速な造血（例えば、好中球および血小板）再構成を可能にする。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、移植は同種移植である。いくつかの実施形態では、移植は自家移植である。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、移植は、骨髄移植、末梢血移植、または臍帯血移植である。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、移植は造血細胞（例えば、造血幹細胞）を含む。
【０２１２】
本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、移植は、任意の固形臓器または皮膚の移植であり得る。いくつかの実施形態では、移植は、腎臓移植、心臓移植、肝臓移植、膵臓移植、肺移植、腸移植および皮膚移植からなる群より選択される。
【０２１３】
本明細書に記載の方法は、多発性硬化症（ＭＳ）の治療に有用である。ＭＳは、中枢神経系の壊滅的な自己免疫炎症性疾患である。中枢神経系（ＣＮＳ）の損傷は、ミエリン鞘内の（自己）抗原に対する自己免疫攻撃に起因することは広く受け入れられている。ＭＳの組織損傷の原因となるメカニズムには、ミエリン鞘のタンパク質を攻撃する自己反応性Ｔ細胞の活性化が含まれる。個人が１５〜５０歳の年齢で最初の兆候を経験するのが一般的である。罹患者は、悪化−送金（ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎ−ｒｅｍｉｔｔａｎｃｅ）という病気の典型的な経過を生み出す炎症性脱髄の発作に遭遇する。
【０２１４】
本明細書に記載の方法は、ヒト全身性ループス（ＳＬＥ）の治療にも有用である。ＳＬＥ、またはループスは、自己抗原に対する自己抗体産生を特徴とする全身性慢性自己免疫疾患である。自己反応性Ｂ細胞は、二本鎖ＤＮＡ、核タンパク質抗原、およびリボ核タンパク質に対する抗体を含む自己抗原によって駆動される。Ｂ細胞寛容の喪失を促進し、自己抗体産生を駆動する因子は不明である。全身性ループスは、ほとんどすべての臓器または身体系に影響を及ぼすことができる。全身性ループスには、症状があってもほとんどない時期（「寛解」）、および疾患がより活発になる他の時期（「フレア」）が含まれ得る。
【０２１５】
本明細書に記載の方法は、関節リウマチ（ＲＡ）の治療にも有用である。ＲＡは、最初は滑膜、すなわち関節間の空洞を裏打ちし、潤滑液を分泌する結合組織膜を攻撃する全身性自己免疫疾患である。ＲＡの原因は不明であるが、感染性の要因、遺伝的要因、およびホルモン性の要因がＲＡに寄与し得る。ＲＡを患っている患者の関節は、マクロファージや樹状細胞などの白血球、Ｔ細胞およびＢ細胞によってひどく浸潤されているため、ＲＡは異常な免疫に関連している。この病気はどの年齢でも発生する可能性があるが、病気発症のピーク発生は２５歳から５５歳の間である。発生率は年齢とともに増加する。病気の発症は通常、漸進的であり、疲労、１時間以上続く朝硬直、びまん性の筋肉痛、食欲不振、および衰弱を伴う。最終的に、非活動後の関節の温感、腫れ、圧痛、硬直を伴う関節痛が現れる。
【０２１６】
本明細書に記載の方法は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療にも有用である。ＩＢＤの症状には、潰瘍性大腸炎、クローン病、リンパ球性大腸炎、コラーゲン性大腸炎が含まれる。ＩＢＤは自然に再発する免疫学的に媒介された胃腸管の障害であり、制御されない炎症と粘膜免疫系の持続的な活性化を特徴とする。ＣＤ４  Ｔ細胞は、炎症を起こした粘膜への流入により、ヒトＩＢＤの病因において重要な役割を果たすと考えられる。
【０２１７】
本明細書に記載の方法は、乾癬の治療に特に有用である。乾癬は、赤いうろこ状の隆起したプラークを特徴とする慢性炎症性皮膚疾患である。乾癬は、Ｔ細胞およびサイトカインレベルの関連する上昇によって媒介され、細胞分裂の増加と異常な分化をもたらす。乾癬は、様々な程度の重症度を伴う慢性の再発性皮膚疾患であり、乾癬性関節炎、うつ病、悪性腫瘍、メタボリックシンドローム、心血管疾患の罹患率および死亡率、ならびに炎症性腸疾患（ＩＢＤ）などの自己免疫疾患を含む重篤な併存疾患にも関連している。
【０２１８】
本明細書に記載の方法は、１型真性糖尿病（１型糖尿病）の治療にも有用である。１型糖尿病はどの年齢でも発生し得るが、1型糖尿病は、年齢および身長に対して過体重ではない若年発症患者を含むヒトの代謝障害であり、早期に、多くの場合３０歳以前に疾患が急速に発症する。１型糖尿病は自己免疫病因の疾患であると考えられている。ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞は、β細胞（インスリン産生細胞）の損傷の原因物質として示唆されている。
【０２１９】
本明細書に記載の方法は、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、全身性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、再生不良性貧血、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性卵巣炎、バロ病、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、シャーガス病、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、クローン病、瘢痕性類天疱瘡、セリアック性スプルー皮膚炎、疱疹状皮膚炎、寒冷凝集素病、ＣＲＥＳＴ症候群、デゴス病、円板状ループス、自律神経失調症、子宮内膜症、本態性混合クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、特発性および／または急性血小板減少性紫斑病、特発性肺線維症、ＩｇＡ神経障害、間質性膀胱炎、若年性関節炎、川崎病、扁平苔癬、ライム病、メニエール病、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、重症筋無力症、神経ミオトニー、オプソクローヌスミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、視神経炎、オード甲状腺炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、多発性軟骨炎、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性胆汁性肝硬変、結節性多発性動脈炎、多発性腺症候群、多発性筋痛、原発性無ガンマグロブリン血症、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフパーソン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎（「巨細胞性動脈炎」としても知られる）、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、外陰部痛（「外陰部前庭炎」）、およびウェゲナー肉芽腫症を含むが、これらに限定されない他の自己免疫疾患の治療にも有用である。
【０２２０】
本明細書に記載の組成物および方法は、非悪性ヘモグロビン症（例えば、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコーニ貧血、およびウィスコット−アルドリッチ症候群からなる群より選択されるヘモグロビン症）を含むがこれらに限定されない様々な障害を治療するために、使用することができる。追加的または代替的に、本明細書に記載の組成物および方法は、先天性免疫不全などの免疫不全を治療するために使用することができる。追加的または代替的に、本明細書に記載の組成物および方法は、後天性免疫不全（例えば、ＨＩＶおよびＡＩＤＳからなる群より選択される後天性免疫不全）を治療するために使用することができる。本明細書に記載の組成物および方法は、代謝障害（例えば、グリコーゲン蓄積症、ムコ多糖症、ゴーシェ病、ハーラー病、スフィンゴ脂質症、異染性白質ジストロフィーからなる群より選択される代謝障害）を治療するために使用することができる。追加的または代替的に、本明細書に記載の組成物および方法は、血液癌（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）などの悪性腫瘍、ならびに神経芽細胞腫を含む他の癌状態を治療するために使用することができる。
【０２２１】
本明細書に記載の組成物および方法の投与によって治療することができる追加の障害には、アデノシンデアミナーゼ欠損症および重症複合免疫不全症、高免疫グロブリンＭ症候群、チェディアック−東病、遺伝性リンパ組織球症、大理石骨病、骨形成不全症、貯蔵病、サラセミアメジャー、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、ならびに若年性関節リウマチが含まれる。
【実施例】
【０２２２】
以下の実施例は、本明細書に記載される組成物および方法がどのように使用、作成、および評価され得るかについての説明を当業者に提供するために提示され、本発明を単に例示することを意図しており、発明者が自らの発明とみなす範囲を限定することを意図するものではない。
【０２２３】
（実施例１）
造血幹細胞移植療法の準備におけるヒト患者への抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣの投与
本明細書に開示される方法によれば、当業者はＣＤ１３７に結合できる抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンド、例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体をヒト患者に投与することができる。抗体、その断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドは、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の細胞毒素などの毒素、またはＦｃドメインに共有結合的にコンンジュゲートさせることができる。例えば、抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドは、微小管結合剤、メイタンシン、メイタンシノイド、アマトキシン、シュードモナス外毒素Ａ、デボウガニン、α−アマニチンなどのジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、ＳＮ−３８、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、あるいはそれらのバリアントなどの細胞毒素に共有結合的にコンジュゲートされ得る。
【０２２４】
このコンジュゲーションは、本明細書に記載のまたは当技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲートもしくは薬物−リガンドコンジュゲートは、その後、外因性造血幹細胞（例えば、同種造血幹細胞）の患者への移植の前に、例えば静脈内投与により患者に投与され得る。
【０２２５】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、造血幹細胞移植療法の前、同時、または後に、宿主反応性Ｔ細胞の量を例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上減少させるのに十分な量で投与され得る。ドナーＴ細胞数の減少は、患者から採取された血液サンプル中の特徴的な造血細胞表面抗原を発現する細胞のＦＡＣＳ分析など、当技術分野で知られている従来の技術を使用して監視することができる。例えば、当業者は、様々な時点で患者から血液サンプルを採取し、ＦＡＣＳ分析を行って、ドナーＴ細胞抗原に結合する抗体を使用してサンプル中のＴ細胞の相対濃度を解明することにより、ドナーＣＤ１３７＋Ｔ細胞の減少の程度を決定することができる。
【０２２６】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、粘度調整剤などの１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む水溶液で、患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載の技術または当技術分野で知られている技術を使用して滅菌され得る。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、造血幹細胞移植片の患者への投与前に、例えば０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施の１時間〜７日（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、または７日）前、またはそれ以上前に患者に投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、移植の約３日前に投与され得る。あるいは、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施と同時に患者に投与することができる。さらに、抗体、その抗原結合断片、薬物-抗体コンジュゲート、または薬物-リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施の１時間〜１０日（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、または１０日）後、またはそれ以上後に患者に投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、移植の約３〜４日後に投与され得る。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートの量は、当技術分野で知られている方法によって患者の血漿中で定量化され、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートの濃度がいつ最大に達したかを決定することができる。
【０２２７】
次いで、患者は、抗体もしくはその抗原結合断片もしくは薬物−抗体コンジュゲートを投与したのと同じ医師または異なる医師などから、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を受け得る。医師は、例えば、１×１０３〜１×１０９ＣＤ３４＋細胞／ｋｇの用量で、自家造血幹細胞、同系造血幹細胞、または同種造血幹細胞の注入を患者に与え得る。医師は、例えば、患者から血液サンプルを採取し、移植の実施後の造血幹細胞または造血系統の細胞（巨核球、栓球、血小板、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞など）の濃度の増加を決定することにより、造血幹細胞移植の生着を監視することができる。この分析は、例えば、造血幹細胞移植療法後、１時間〜６ヶ月以上（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２１週間、２２週間、２３週間、２４週間、またはそれ以上）にわたって実施され得る。造血幹細胞または造血系の細胞の濃度が、移植療法前の対応する細胞型の濃度と比較して、移植療法後に（例えば、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、５００％、またはそれ以上）増加したという発見は、抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートによる治療が、移植された造血幹細胞移植片の生着を首尾よく促進したという１つの指標を提供する。
【０２２８】
（実施例２）
ファージディスプレイによる抗ＣＤ１３７抗体の生成
本明細書に記載の組成物および方法と共に使用するための抗ＣＤ１３７抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ進化の例示的な方法は、ファージディスプレイである。ファージディスプレイライブラリは、抗体のＣＤＲまたは抗体様スキャフォールドの類似領域（例えば、１０Ｆｎ３ドメインのＢＣループ、ＣＤループ、およびＤＥループ）のコード配列内に、設計された一連の変異またはバリエーションを作ることにより作製することができる。これらの変異が導入されるテンプレート抗体をコードする配列は、例えば、ナイーブなヒト生殖系列配列であり得る。これらの変異は、当該分野で公知の標準的な突然変異誘発技術を使用して実施され得る。したがって、各変異体配列は、１つ以上のアミノ酸変異を除いて、テンプレートに対応する抗体をコードする。レトロウイルスおよびファージディスプレイのベクターは、当該分野で公知の標準的なベクター構築技術を使用して設計され得る。適合するタンパク質発現ベクターとともにＰ３ファージディスプレイベクターを使用して、抗体多様化のためのファージディスプレイベクターを生成することができる。
【０２２９】
変異ＤＮＡは配列の多様性を提供し、各形質転換体ファージは、ＤＮＡによってコードされる初期テンプレートのアミノ酸配列の１つのバリアントを表示し、互いに異なるが構造的に関連する膨大な数のアミノ酸配列を表示するファージ集団（ライブラリ）が導かれる。抗体の超可変領域の明確な構造により、ファージディスプレイスクリーニングに導入されたアミノ酸変異は、全体の分子構造を大きく変えることなく、結合ペプチドまたはドメインの結合特性を変えると予想される。
【０２３０】
典型的なスクリーニングでは、ファージライブラリをＣＤ１３７またはＣＤ１３７のエピトープと接触させて結合させることができる。結合物と非結合物の分離を容易にするには、標的を固体支持体に固定するのが便利である。ＣＤ１３７結合部分を有するファージは、固体支持体上の標的と複合体を形成することができるが、非結合ファージは溶液中に残り、過剰のバッファーで洗い流すことができる。結合したファージは、バッファーを極端なｐＨ（ｐＨ２またはｐＨ１０）に変更すること、バッファーのイオン強度を変更すること、変性剤を添加すること、またはその他の既知の手段によって、ターゲットから遊離され得る。
【０２３１】
回収されたファージは次いで細菌細胞の感染によって増幅され、非結合抗体が枯渇され、ＣＤ１３７に結合する抗体が濃縮された新しいプールで、スクリーニングプロセスを繰り返すことができる。少数の結合ファージでさえ回収すれば、その後のスクリーニングの反復のためにファージを増幅するのに十分である。数ラウンドのセレクションの後、結合プール内の選択されたファージクローンに由来する抗体またはその抗原結合断片をコードする遺伝子配列は、従来の方法によって決定され、標的へのファージの結合親和性を与えるペプチド配列が明らかになる。パニングプロセス中、所望のペプチド結合抗体が残るまで、セレクションの各ラウンドで集団の配列の多様性が減少する。配列は、少数の関連抗体またはその抗原結合断片に収束する場合がある。セレクションの各ラウンドで回収されるファージ数の増加は、ライブラリの収束がスクリーニングで発生したことを示す。
【０２３２】
（実施例３）
ヒト化抗ＣＤ１３７抗体の作製
ＣＤ１３７に結合する非ヒト抗体は、例えば以下の手順に従ってヒト化することができる。コンセンサスヒト抗体の重鎖および軽鎖の配列は、当技術分野で知られている（例えば、「ＶＢＡＳＥ」ヒト生殖系列配列データベース；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．免疫学的関心のあるタンパク質の配列、第５版、米国保健福祉省、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、１９９１年；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８頁，１９９２年；Ｃｏｘ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６頁，１９９４年を参照。それらの開示は、コンセンサスヒト抗体重鎖および軽鎖の配列に関係するため、参照により本明細書に援用される。）。確立された手順を使用して、当業者は、コンセンサス抗体配列の可変ドメインフレームワーク残基およびＣＤＲを同定することができる（例えば、配列アラインメントにより）。ヒト化抗体を産生するために、コンセンサスヒト抗体の重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインの１つ以上のＣＤＲを、ＣＤ１３７に結合する非ヒト抗体の１つ以上の対応するＣＤＲで置換することができる。このＣＤＲ交換は、本明細書に記載のまたは当技術分野で知られている遺伝子編集技術を使用して実施することができる。
【０２３３】
コンセンサスヒト抗体の可変ドメインの一例は、米国特許第６，０５４，２９７号で特定される重鎖可変ドメイン（ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＥＮＧＳＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＧＡＶＳＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ；配列番号２１）および軽鎖可変ドメイン（ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴ；配列番号２２）を含み、その開示は、ヒト抗体コンセンサス配列に関連するため、参照により本明細書に援用される。上記配列中のＣＤＲは太字で示されている。
【０２３４】
ヒト化抗体を産生するために、１つ以上の可変領域ＣＤＲがＣＤ１３７に結合する非ヒト抗体の１つ以上の可変領域ＣＤＲ配列で置換された上記コンセンサス配列をコードするポリヌクレオチドを組換えにより発現することができる。ＣＤ１３７に対する抗体の親和性は主にＣＤＲ配列によって決定されるため、得られるヒト化抗体は、ヒト化抗体が由来する非ヒト抗体の親和性とほぼ同じＣＤ１３７に対する親和性を示すと予想される。標的抗原に対する抗体の親和性を決定する方法には、例えば、本明細書に記載され当技術分野で知られているＥＬＩＳＡベースの技術、ならびにとりわけ表面プラズモン共鳴、蛍光異方性、および等温滴定型熱量測定が含まれる。
【０２３５】
（実施例４）
ＧＶＨＤのリスクがあるか、またはＧＶＨＤを患っているヒト患者への抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣの投与
本明細書に開示される方法によれば、当業者は、ＣＤ１３７に結合する抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンド、例えば本明細書に記載される抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣを、ヒト患者に投与することができる。抗体、その断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドは、本明細書に記載のもしくは当技術分野で公知の細胞毒性分子などの毒素、またはＦｃドメインに共有結合的にコンジュゲートさせることができる。例えば、抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、または可溶性リガンドは、微小管結合剤、メイタンシン、メイタンシノイド、アマトキシン、シュードモナス外毒素Ａ、デボウガニン、α−アマニチンなどのジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、ＳＮ−３８、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、あるいはそれらのバリアントなどの細胞毒素に共有結合的にコンジュゲートさせることができる。
【０２３６】
このコンジュゲーションは、本明細書に記載のまたは当技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、続いて、例えばＧＶＨＤのリスクがある患者に静脈内投与により投与することができる。抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、続いて、例えばＧＶＨＤを患っている患者に静脈内投与により投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞（同種造血幹細胞など）の移植前、移植時、または移植後に患者に投与することができる。
【０２３７】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、造血幹細胞移植療法の後に、宿主反応性Ｔ細胞の量を例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上減少させるのに十分な量で投与され得る。ドナーＴ細胞数の減少は、患者から採取された血液サンプル中の特徴的な造血細胞表面抗原を発現する細胞のＦＡＣＳ分析など、当技術分野で知られている従来の技術を使用して監視することができる。例えば、当業者は、様々な時点で患者から血液サンプルを採取し、ＦＡＣＳ分析を行って、ドナーＴ細胞抗原に結合する抗体を使用してサンプル中のＴ細胞の相対濃度を解明することにより、ドナーＣＤ１３７＋Ｔ細胞の減少の程度を決定することができる。
【０２３８】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、粘度調整剤などの１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む水溶液で、患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載の技術または当技術分野で知られている技術を使用して滅菌され得る。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、造血幹細胞移植片の患者への投与前に、例えば０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、ＧＶＨＤの予防および治療を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施の１時間〜７日（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、または７日）前、またはそれ以上前に患者に投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、移植の約３日前に投与され得る。あるいは、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施と同時に患者に投与することができる。さらに、抗体、その抗原結合断片、薬物-抗体コンジュゲート、または薬物-リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施の１時間〜１０日（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、または１０日）後、またはそれ以上後に患者に投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、移植の約３〜４日後に投与され得る。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートの量は、当技術分野で知られている方法によって患者の血漿中で定量化され、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートの濃度がいつ最大に達したかを決定することができる。
【０２３９】
次いで、患者は、抗体もしくはその抗原結合断片または薬物−抗体コンジュゲートを投与したのと同じ医師から、または異なる医師から、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を受け得る。医師は、例えば１×１０３〜１×１０９ＣＤ３４＋細胞／ｋｇの投与量で、自家造血幹細胞または同種造血幹細胞の注入を患者に投与することができる。
【０２４０】
当業者は、ＣＤ１３７に結合可能な抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンド、例えば本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体をヒト患者に投与した後、ＧＶＨＤの臨床症状を評価することができる。
【０２４１】
（実施例５）
造血幹細胞移植の結果として自己免疫疾患を発症するヒト患者への抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣの投与
本明細書に開示される方法によれば、当業者は、ＣＤ１３７に結合可能な抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンド、例えば本明細書に記載される抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣを、ヒト患者に投与することができる。抗体、その断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドは、本明細書に記載のもしくは当技術分野で公知の細胞毒性分子などの毒素、またはＦｃドメインに共有結合的にコンジュゲートさせることができる。例えば、抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、または可溶性リガンドは、微小管結合剤、メイタンシン、メイタンシノイド、アマトキシン、シュードモナス外毒素Ａ、デボウガニン、α−アマニチンなどのジフテリア毒素、サポリン、アウリスタチン、アントラサイクリン、カリケアマイシン、イリノテカン、ＳＮ−３８、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン、およびインドリノベンゾジアゼピン二量体、あるいはそれらのバリアントなどの細胞毒素に共有結合的にコンジュゲートさせることができる。
【０２４２】
このコンジュゲーションは、本明細書に記載のまたは当技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、続いて、例えば自己免疫疾患（例：多発性硬化症、関節リウマチ、腸疾患、乾癬、ループス、１型糖尿病）のリスクがある患者に静脈内投与により投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞（自家造血幹細胞または同種造血幹細胞など）の移植後に発症する自己免疫疾患を患っている患者に投与することができる。
【０２４３】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、造血幹細胞移植療法の前に、宿主反応性Ｔ細胞の量を例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上減少させるのに十分な量で投与され得る。ドナーリンパ球数の減少は、患者から採取された血液サンプル中の特徴的な造血細胞表面抗原を発現する細胞のＦＡＣＳ分析など、当技術分野で知られている従来の技術を使用して監視することができる。例えば、当業者は、様々な時点で患者から血液サンプルを採取し、ＦＡＣＳ分析を行って、Ｔ細胞抗原に結合する抗体を使用してサンプル中のＴ細胞の相対濃度を解明することにより、ＣＤ１３７＋Ｔ細胞の減少の程度を決定することができる。自己免疫疾患に対する有効性は、当該分野で公知のアッセイ（例えば、血清サンプルからの自己抗体応答測定、および自己抗原に応答したＴ細胞増殖）によって測定することができる。
【０２４４】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、粘度調整剤などの１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む水溶液で、患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載の技術または当技術分野で知られている技術を使用して滅菌され得る。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、造血幹細胞移植片の患者への投与前に、例えば０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、自己免疫疾患の予防および治療を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施の１時間〜７日（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、または７日）前、またはそれ以上前に患者に投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、移植の約３日前に投与され得る。あるいは、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施と同時に患者に投与することができる。さらに、抗体、その抗原結合断片、薬物-抗体コンジュゲート、または薬物-リガンドコンジュゲートは、外因性造血幹細胞の生着を最適に促進する時点、例えば外因性造血幹細胞移植の実施の１時間〜１０日（例えば、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、または１０日）後、またはそれ以上後に患者に投与することができる。例えば、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、移植の約３〜４日後に投与され得る。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートの量は、当技術分野で知られている方法によって患者の血漿中で定量化され、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートの濃度がいつ最大に達したかを決定することができる。
【０２４５】
次いで、患者は、抗体もしくはその抗原結合断片または薬物−抗体コンジュゲートを投与したのと同じ医師から、または異なる医師から、外因性造血幹細胞の注入（例えば、静脈内注入）を受け得る。医師は、例えば１×１０３〜１×１０９  ＣＤ３４＋細胞／ｋｇの投与量で、自家造血幹細胞または同種造血幹細胞の注入を患者に投与することができる。
【０２４６】
当業者は、ＣＤ１３７に結合可能な抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンド、例えば本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣをヒト患者に投与した後、自己免疫疾患の臨床症状を評価することができる。
【０２４７】
（実施例６）
自己免疫疾患のリスクがあるか、または自己免疫疾患を患っているヒト患者への抗ＣＤ１３７抗体の投与
本明細書に開示される方法によれば、当業者は、ＣＤ１３７に結合可能な抗体、その抗原結合断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンド、例えば本明細書に記載される抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣを、ヒト患者に投与することができる。抗体、その断片、ＡＤＣ、または可溶性リガンドは、本明細書に記載のもしくは当技術分野で公知の細胞毒性分子などの毒素、またはＦｃドメインに共有結合的にコンジュゲートさせることができる。
【０２４８】
このコンジュゲーションは、本明細書に記載のまたは当技術分野で知られている共有結合形成技術を使用して実施することができる。抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、続いて、例えば自己免疫疾患（例：多発性硬化症、関節リウマチ、腸疾患、乾癬、ループス、１型糖尿病）のリスクがある患者に静脈内投与により投与することができる。抗体、その抗原結合断片、または薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、続いて、例えば自己免疫疾患（例：多発性硬化症、関節リウマチ、腸疾患、乾癬、ループス、１型糖尿病）を患っている患者に静脈内投与により投与することができる。
【０２４９】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、宿主反応性リンパ球の量を例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上減少させるのに十分な量で投与され得る。ドナーリンパ球数の減少は、患者から採取された血液サンプル中の特徴的な造血細胞表面抗原を発現する細胞のＦＡＣＳ分析など、当技術分野で知られている従来の技術を使用して監視することができる。例えば、当業者は、様々な時点で患者から血液サンプルを採取し、ＦＡＣＳ分析を行って、Ｔ細胞抗原に結合する抗体を使用してサンプル中のＴ細胞の相対濃度を解明することにより、ＣＤ１３７＋Ｔ細胞の減少の程度を決定することができる。自己免疫疾患に対する有効性は、当該分野で公知のアッセイ（例えば、血清サンプルからの自己抗体応答測定、および自己抗原に応答したＴ細胞増殖）によって測定することができる。
【０２５０】
抗ＣＤ１３７抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、粘度調整剤などの１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む水溶液で、患者に投与することができる。水溶液は、本明細書に記載の技術または当技術分野で知られている技術を使用して滅菌され得る。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、造血幹細胞移植片の患者への投与前に、例えば０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートは、自己免疫疾患の予防および治療を最適に促進する時点で患者に投与することができる。抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートの量は、当技術分野で知られている方法によって患者の血漿中で定量化され、抗体、その抗原結合断片、薬物−抗体コンジュゲート、または薬物−リガンドコンジュゲートの濃度がいつ最大に達したかを決定することができる。
【０２５１】
当業者は、ＣＤ１３７に結合可能な抗体、その抗原結合断片、または可溶性リガンド、例えば本明細書に記載の抗ＣＤ１３７抗体またはＡＤＣをヒト患者に投与した後、自己免疫疾患の臨床症状を評価することができる。
【０２５２】
（実施例７）
Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ細胞株結合アッセイ
ｈＣＤ１３７の安定した過剰発現を特徴とするＪｕｒｋａｔ細胞（すなわち、不死化ヒトＴリンパ球細胞株）を２０，０００細胞／ウェルでプレーティングし、一次マウス抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（ＢＢＫ２−ｍＩｇＧ１）の滴定で、４℃で４時間染色した。一定量の二次抗マウスＡＦ４８８染色液を４℃で３０分間添加した。洗浄後、プレートをフローサイトメーターにかけ、ＢＢＫ２−ｍＩｇＧ１（およびネガティブコントロール、すなわちｍＩｇＧ１）の結合をＡＦ４８８チャンネルの幾何学的平均蛍光強度に基づいて決定した。これらのアッセイの結果は、図１Ａと図１Ｂに示されている。
【０２５３】
図１Ａおよび１Ｂに示すように、マウスＢＢＫ２抗体は、ヒトＴ細胞（すなわち、ＣＤ１３７発現Ｊｕｒｋａｔ細胞）に結合し、ＥＣ５０＝３５ｐＭである。
【０２５４】
（実施例８）
Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔ細胞死滅アッセイを使用した抗ＣＤ１３７−アマニチン抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）のＩｎ  Ｖｉｔｒｏ分析
凍結保存されたネガティブセレクション初代ヒトＴ細胞を解凍し、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、ビーズ：細胞＝０．５：１で刺激した。アッセイの開始時に、３８４ウェルプレートのウェルごとに２ｅ４のＴ細胞を播種し、３７℃および５％ＣＯ２のインキュベーターに入れる前に、０．００３ｎｍ〜３０ｎｍの様々な濃度でＡＤＣをウェルに添加した。４日間の培養後、細胞をフローサイトメトリーで分析した。細胞を生存マーカーであるＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ  Ｙｅｌｌｏｗ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色し、容積測定フローサイトメーターで測定した。生きた活性化細胞の数（図２Ａ）および生きた非活性化細胞の数（図２Ｂ）は、ＦＳＣ対ＳＳＣによって決定された。アマニチンにコンジュゲートされた非特異的ヒトＩｇＧ（ｈＩｇＧ−アマニチン）は、ネガティブコントロールとして機能した。したがって、コントロールを２つの異なるＡＤＣと比較した：１）アマニチンにコンジュゲートされたキメラ抗ＣＤ１３７抗体ＢＢＫ２（ＣＤ１３７−アマニチン）；２）アマニチンにコンジュゲートされたＴ細胞抗原に特異的な抗体を含むＡＤＣ（抗Ｔ細胞−アマニチン）。抗Ｔ細胞−アマニチンＡＤＣは、活性化Ｔ細胞と非活性化Ｔ細胞の両方に結合して死滅させることが予想されたため、ポジティブコントロールとして機能した。
【０２５５】
図２Ａおよび２Ｂに示すように、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣ（すなわち、「ＣＤ１３７−アマニチン」）は、活性化Ｔ細胞を特異的に殺し、非活性化（静止、定常状態）Ｔ細胞を感知できるほど殺さなかった。さらに、活性化Ｔ細胞および非活性化Ｔ細胞の両方を特異的に標的とするＡＤＣであるポジティブコントロール（すなわち、「抗Ｔ細胞−アマニチン」ＡＤＣ）は、活性化Ｔ細胞および非活性化Ｔ細胞の両方を殺した。
【０２５６】
（実施例９）
Ｘｅｎｏ−ＧＶＨＤマウスモデルを使用したＧＶＨＤの予防の分析
ＧＶＨＤの形成または発生を防ぐ抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣの能力は、ｘｅｎｏ−ＧＶＨＤマウスモデルを使用してｉｎ  ｖｉｖｏで評価された。雌の６−８週齢のＮＳＧマウスに放射線を照射（２００ｃＧｙ）し、翌日に６×１０６のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を移植してＧＶＨＤマウスモデルを作製した。１日後、動物に抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣ（「ＣＤ１３７−アマニチン」）、または様々なコントロール、すなわち試薬（バッファーのみ、「ＰＢＳ」）、抗ＣＤ１３７抗体（［裸のＣＤ１３７））もしくはＣＤ１３７に特異的ではないアマニチンベースのＡＤＣ（「イソタイプ−アマニチン」）を動物に（３ｍｇ／ｋｇで）投与した。本実施例において、ＡＤＣ中で使用されるとともに、裸の抗体として使用された抗ＣＤ１３７抗体は、キメラＢＢＫ２であった。
【０２５７】
動物は、投薬後、ＧＶＨＤの徴候および／または体調の低下（姿勢の乱れ、毛並みの乱れ、体重減少、および/または活動制限を含むが、これらに限定されない）について毎日密接に追跡された。重篤な身体状態の懸念がある動物、または＞２０％の体重減少を示した動物を屠殺し、それらの組織がヒト細胞のために分析された。マウスの末梢血および脾臓が、ｈＣＤ４５、ｍＣＤ４５、ｈＣＤ３、およびｈＣＤ１３７抗体を含む抗体のカクテルで染色され、赤血球が溶解され、フローサイトメトリーによって分析された。血液中のヒトＴ細胞の数はｈＣＤ４５＋ＣＤ３＋として定義され、入力血液量に対して正規化された。治療後の日数の関数としての生存率％を図３に示す。移植後の日数の関数としての末梢血中のヒトＴ細胞の数を図４に示す。
【０２５８】
図３に示すように、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣ（「ＣＤ１３７−アマニチン」）の単回投与で治療した動物は、移植後８０日でもＧＶＨＤの本質的に完全な予防を示したが、コントロール（すなわち、ＰＢＳ、抗ＣＤ１３７抗体（裸）、およびアイソタイプ−アマニチン）で治療した動物、はすべて、移植後１１〜１３日以内に死亡した。これらの結果はまた、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣがすべての動物で耐容性が高く、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣの単回投与で（複数回投与が必要であるのに対して）ＧＶＨＤを完全に予防するのに十分であったことを示している。図４に示すように、抗ＣＤ１３７−アマニチン処理マウスへの移植後少なくとも７０日間の期間にわたって、マウスの末梢血でヒトＴ細胞は検出されなかったが、コントロールで処理した動物は、移植後数日、マウスの末梢血に検出可能なヒトＴ細胞を有すると特徴づけられ、コントロールで処理した動物におけるＧＶＨＤの発生が示された。
【０２５９】
（実施例１０）
ｈＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスモデルにおける生着率および定常状態Ｔ細胞枯渇の決定
雌のヒト化ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスを、ｈＣＤ４５、ｍＣＤ４５、ｈＣＤ３、およびｈＣＤ１３７抗体を使用したフローサイトメトリーにより、末梢血におけるベースラインのヒト造血（全体およびＴ細胞）の生着率について評価した。マウスをランダム化し、ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣ（キメラＢＢＫ２−アマニチンＡＤＣ）、アイソタイプ−アマニチンＡＤＣ、または抗Ｔ細胞−アマニチンＡＤＣで、それぞれ３ｍｇ／ｋｇの用量で処理した。マウスの末梢における生着およびＴ細胞の枯渇は、治療後５日目、９日目、１４日目、２２日目および２７日目に測定された（図５Ａおよび５Ｂ）。キメラおよびＴ細胞の数の変化を評価するために、末梢血を染色した。等量の血液を容積測定フローサイトメーターで流し、イベント数に基づいて絶対カウントを決定した。生着およびＴ細胞数の減少はベースライン値に正規化された。
【０２６０】
図５Ａおよび５Ｂの結果は、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣがこのマウスモデルで十分に許容されたことを示している。さらに、生着およびＴ細胞頻度（ベースラインに正規化した後）はベースラインレベル近くに留まり、抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣ処理マウスについては生着およびＴ細胞頻度の中程度から一時的な減少を伴った。これらのデータは、通常、定常状態のヒト化ＮＳＧマウスにはＴ細胞の枯渇がないことを示しており、このことは、ほとんどのＴ細胞が枯渇されていないため、免疫機能が抗ＣＤ１３７−アマニチンＡＤＣ処理マウスで維持され得ることを示している。反対に、代替のＴ細胞マーカーを特異的に標的とするＡＤＣで処理されたマウス（「抗Ｔ細胞−アマニチン」）は、生着およびＴ細胞数の完全な除去を示した。
【０２６１】
上記の実施例に記載されているキメラＢＢＫ２の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号２３および配列番号２４に記載されている。
【０２６２】
他の実施形態
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、および特許出願はの独立した各刊行物または各特許出願が参照により援用されることがあたかも具体的かつ個別に示されているのと同じ程度に、参照により本明細書に援用される。
【０２６３】
本発明はその特定の実施形態に関連して説明されてきたが、本出願は、さらなる修正が可能であり、本出願は、一般に、本発明の原理に従うとともに、本発明が関連し、上記の本質的な特徴に適用され得、特許請求の範囲に続く技術分野内の既知の慣行または慣習の範囲内にある本発明からの逸脱を含む、本発明の任意の変形、使用、または適応を網羅することを意図していることを理解されたい。
【０２６４】
他の実施形態は特許請求の範囲内にある。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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