(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグを提供し、【化１】2020520388.tif 000095式中、Ａ１〜Ａ６およびＲ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りである。そのような化合物は、乳酸脱水素酵素Ａ（ＬＤＨＡ）の活性化によって媒介される疾患または状態、例えば、癌の治療または予防における使用に適している。
2020520388.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグであって、
【化１】
2020520388.tif 000082
式中、
Ａ１が、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり、
Ａ２が、ＮＲ（式中、ＲはＨまたはＣ１〜３アルキルのいずれかである）または−Ｏ−であり、
Ａ３が、ＮまたはＣＲ５であり、
Ａ４が、ＮまたはＣＲ６であり、
Ａ５が、ＮまたはＣＲ７であり、
Ａ６が、ＮまたはＣＲ８であり、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３が、独立して、Ｈおよびハロゲンから選択され、
Ｒ４が、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環、
−ＯＲ９であって、Ｒ９がハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環である、ＯＲ９、ならびに
−ＯＲ１０であって、Ｒ１０がＣ３〜８シクロアルキル基である、ＯＲ１０から選択され、
Ｒ５が、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−Ｃ１〜６アルキル、および
−Ｃ１〜６アルコキシから選択され、
Ｒ６が、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換されたＣ１〜６アルキル、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、アミノ、シアノ、ニトロ、およびＣ３〜８シクロアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換されたＣ１〜６アルコキシ、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、
−  −Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環、
−ＯＲ１１であって、Ｒ１１がハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環である、ＯＲ１１、ならびに
−ＯＲ１２であって、Ｒ１２がＣ３〜８シクロアルキル基である、ＯＲ１２から選択され、
Ｒ７およびＲ８が、独立して、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−Ｃ１〜６アルキル、および
−Ｃ１〜６アルコキシから選択され、
但し、
Ａ３およびＡ４は、共に同時にＮではなく、
Ａ５およびＡ６は、共に同時にＮではなく、
Ａ２がＮＲである場合、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの少なくとも１つは、ハロゲンである、化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグ。
【請求項２】
式（Ｉａ）を有し、
【化２】
2020520388.tif 000083
式中、Ａ１〜Ａ６およびＲ１〜Ｒ４が、請求項１に定義される通りであり、
ＲＰが、Ｈまたは式（ＩＩ）を有する基のいずれかであり、
【化３】
2020520388.tif 000084
式中、
＊が、分子の残部への前記基の付着点を示し、
Ｙが、−Ｏ−またはＮＲｉであり、式中、Ｒｉは、ＨまたはＣ１〜３アルキル（例えば、ＣＨ３）のいずれかであり、
Ｘが、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−ＮＲｊＲｋであって、式中、ＲｊおよびＲｋが、各々独立して、ＨおよびＣ１〜６アルキル（好ましくは、Ｃ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３）から選択される、ＮＲｊＲｋ、
−１つ以上の親水性基によって任意に置換された−Ｃ１〜１２アルキル、
−１つ以上のアリールまたはヘテロアリール基によって任意に置換された−Ｃ１〜１２アルキルであって、前記アリールまたはヘテロアリール基が、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、およびＣ１〜６ヒドロキシアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され得る、−Ｃ１〜１２アルキル、ならびに
−ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、およびＣ１〜６ヒドロキシアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され得る、アリールまたはヘテロアリール基から選択され、
ｐが、０または１であり、
ｑが、０〜６の整数であり、
ｒが、０または１であり、
ｓが、０または１である、請求項１に記載の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグ。
【請求項３】
Ａ１が、−Ｓ−である、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ａ２が、ＮＨである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ）を有し、
【化４】
2020520388.tif 000085
式中、Ａ３〜Ａ６、Ｒ１〜Ｒ４、およびＲＰが、請求項１または請求項２に定義される通りである、請求項１に記載の化合物、またはその互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。
【請求項６】
Ａ２が、Ｏである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
式（ＩＶ）または（ＩＶａ）を有し、
【化５】
2020520388.tif 000086
式中、Ａ３〜Ａ６、Ｒ１〜Ｒ４、およびＲＰが、請求項１または請求項２に定義される通りである、請求項１に記載の化合物、またはその互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。
【請求項８】
Ａ５が、ＣＨである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ａ６が、ＣＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ａ３が、Ｎである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ａ４が、ＣＲ６であり、好ましくは、Ｒ６が、Ｈ以外である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ４が、Ｈである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
式（Ｖ）または（Ｖａ）を有し、
【化６】
2020520388.tif 000087
式中、Ａ１、Ａ２、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ６、およびＲＰが、請求項１〜４および６のいずれか一項に定義される通りであり、好ましくは、Ｒ６が、Ｈ以外である、請求項１に記載の化合物、またはその互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。
【請求項１４】
Ｒ６が、ハロゲン（例えば、ＢｒまたはＣｌ、好ましくは、Ｂｒ）、または任意に置換されたＣ１〜６アルコキシ基である、請求項１〜１３のいずれか一項の化合物。
【請求項１５】
Ｒ６が、Ｃ３〜８シクロアルキル基によって置換された、例えば、非置換シクロペンチルによって置換されたＣ１〜６アルコキシ基である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ａ３が、ＣＲ５であり、好ましくは、Ａ３が、ＣＨである、請求項１〜６、１１、１２、１４、および１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ａ３が、ＣＨであり、Ａ４が、ＣＲ６であり、好ましくは、Ｒ６が、Ｈである、請求項１〜６、１１、１２、１４、および１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
式（ＶＩ）または（ＶＩａ）を有し、
【化７】
2020520388.tif 000088
式中、Ａ１、Ａ２、Ｒ１〜Ｒ４、およびＲＰが、請求項１〜４、６、および１２のいずれか一項に定義される通りである、請求項１に記載の化合物、またはその互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。
【請求項１９】
Ｒ４が、
−Ｈ
−ハロゲン、ならびに
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環から選択される、請求項１〜１１および１４〜１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ４が、Ｈ、Ｂｒ、またはモルホリニルである、請求項１〜１１および１４〜１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの少なくとも１つが、ハロゲンであり、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの１つまたは２つが、ハロゲンである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ１が、ハロゲンであり、Ｒ２およびＲ３が、Ｈであるか、Ｒ２が、ハロゲンであり、Ｒ１およびＲ３が、Ｈであるか、またはＲ３が、ハロゲンであり、Ｒ１およびＲ２が、Ｈである、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ１もしくはＲ３のいずれかが、−Ｃｌであるか、またはＲ２が、−Ｆである、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
ＲＰが、式（ＩＩ）を有する基を表し、
【化８】
2020520388.tif 000089
式中、Ｙが、−Ｏ−またはＮＲｉ（式中、Ｒｉは、ＨまたはＣ１〜３アルキル（例えば、ＣＨ３）のいずれかである）、好ましくは、−Ｏ−またはＮＨ、例えば、−Ｏ−であり、
Ｘが、
−ＮＲｊＲｋであって、式中、ＲｊおよびＲｋが、各々独立して、ＨおよびＣ１〜６アルキル（好ましくは、Ｃ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３）から選択される、ＮＲｊＲｋ、
−独立して−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨまたはＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３のいずれかである）および−ＮＲ”２（式中、各Ｒ”は独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３から選択される）から選択される１つ以上の親水性基によって任意に置換された−Ｃ１〜１２アルキル（好ましくは、Ｃ１〜６アルキル）、ならびに
−ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、およびＣ１〜６ヒドロキシアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され得る、アリールまたはヘテロアリール基から選択され、
ｐ、ｑ、ｒ、およびｓが、請求項２に定義される通りである、請求項２〜２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｙが、−Ｏ−である、請求項２〜２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｘが、−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨまたはＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３のいずれかである）および−ＮＲ”２（式中、各Ｒ”は独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３から選択される）から選択される１つ以上の基によって任意に置換されたＣ１〜１２アルキル（好ましくは、Ｃ１〜６アルキル）である、請求項２〜２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２７】
ＲＰが、式（ＶＩＩ）の基であり、
＊−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｘ（ＶＩＩ）
式中、＊およびｑが、請求項１に定義される通りであり、好ましくは、ｑが、０または１であり、
Ｘが、請求項２、２４、および２６のいずれか一項に定義される通りである、請求項２〜２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２８】
前記式（ＶＩＩ）の基が、以下のいずれかから選択される、請求項２７に記載の化合物。
【化９】
2020520388.tif 000090
【請求項２９】
ＲＰが、式（ＶＩＩＩ）の基であり、
＊−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｘ（ＶＩＩＩ）
式中、＊およびｑが、請求項２に定義される通りであり、好ましくは、ｑが、０または１であり、
Ｘが、請求項２、２４、および２６のいずれか一項に定義される通りである、請求項２〜２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３０】
前記式（ＶＩＩＩ）の基が、以下のいずれかから選択される、請求項２９に記載の化合物。
【化１０】
2020520388.tif 000091
【請求項３１】
ＲＰが、式（ＩＸ）の基であり、
＊−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｘ（ＩＸ）
式中、＊およびｑが、請求項２に定義される通りであり、好ましくは、ｑが、０または１であり、
Ｘが、請求項２、２４、および２６のいずれか一項に定義される通りである、請求項２〜２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
前記式（ＩＸ）の基が、以下である、請求項３１に記載の化合物。
【化１１】
2020520388.tif 000092
【請求項３３】
ＲＰが、式（Ｘ）の基であり、
＊−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｘ（Ｘ）
式中、＊およびｑが、請求項２に定義される通りであり、好ましくは、ｑが、０または１であり、
Ｘが、請求項２、２４、および２６のいずれか一項に定義される通りである、請求項２〜２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
前記式（Ｘ）の基が、以下である、請求項３３に記載の化合物。
【化１２】
2020520388.tif 000093
【請求項３５】
ＲＰが、式（ＸＩ）の基であり、
＊−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−ＣＯ−Ｘ（ＸＩ）
式中、＊およびｑが、請求項２に定義される通りであり、好ましくは、ｑが、０または１であり、
Ｘが、請求項２、２４、および２６のいずれか一項に定義される通りである、請求項２〜２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３６】
前記式（ＸＩ）の基が、以下である、請求項３５に記載の化合物。
【化１３】
2020520388.tif 000094
【請求項３７】
以下：
６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，４−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（６−エトキシピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，５−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，３−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，３−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン
３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
５−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−２−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルエチルカーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルメチルカーボネート、
５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６’−（シクロペンチルメトキシ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルアセテート、
５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルプロピルカーボネート、
５−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルエチルカーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルデシルカーボネート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
６−（５−ブロモピリジン−２−イル）−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオン、
３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（ピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオン、
３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（ピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオン、
２−（５−ブロモピリジン−２−イル）−５−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチルカーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオン、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルイソブチルカーボネート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルアセテート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルピバレート、
３−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
５−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルイソニコチネート、
５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルイソブチルカーボネート、
５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
５−（（２−クロロフェニル）チオ）−２−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネートから選択される、
請求項１〜３６のいずれか一項に記載の化合物、ならびにそれらの立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグ。
【請求項３８】
請求項１〜３７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグを、１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と共に含む、薬学的組成物。
【請求項３９】
療法における使用のため、または医薬品としての使用のための、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグ。
【請求項４０】
ＬＤＨＡの阻害における使用のため、例えば、ＬＤＨＢに対するＬＤＨＡの「選択的」阻害における使用のための、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグ。
【請求項４１】
ＬＤＨＡの阻害に応答性の疾患または障害、例えば、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される疾患または障害の治療または予防における使用のための、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグ。
【請求項４２】
癌腫もしくは腫瘍、またはそれらの転移の治療または予防における、請求項４０または請求項４１に記載の使用のための化合物。
【請求項４３】
以下の癌：骨原性および軟部組織肉腫を含む、肉腫；癌腫、例えば、乳、肺、脳、膀胱、甲状腺、前立腺、結腸、直腸、膵臓、胃、肝臓（ｌｉｖｅｒ）、子宮、肝臓（ｈｅｐａｔｉｃ）、腎臓、前立腺、子宮頸部、および卵巣癌腫；ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含む、リンパ腫；神経芽細胞腫、黒色腫、骨髄腫、ウィルムス腫瘍；急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病を含む、白血病；星状細胞腫、神経膠腫、および網膜芽細胞腫のいずれか１つの治療および／または予防における、請求項４２に記載の使用のための化合物。
【請求項４４】
乳癌または膵臓癌の治療および／または予防における、請求項４２に記載の使用のための化合物。
【請求項４５】
細胞の過増殖と関連した状態または代謝性疾患、例えば、てんかんの治療または予防における、請求項４０または請求項４１に記載の使用のための化合物。
【請求項４６】
炎症性障害、例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、または喘息などのアレルギー性状態の治療または予防における、請求項４５に記載の使用のための化合物。
【請求項４７】
ＬＤＨＡの阻害に応答性の疾患または障害、例えば、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される疾患または障害の治療または予防における使用のため、好ましくは、癌などの増殖性障害の治療または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグ。
【請求項４８】
請求項４２〜４６のいずれか一項に定義される疾患または障害の治療または予防における、請求項４８に記載の使用。
【請求項４９】
ＬＤＨＡの阻害に応答性の疾患または障害、例えば、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される疾患または障害の治療または予防の方法であって、前記方法が、それを必要とする患者（例えば、ヒト対象）に、薬学的に有効な量の、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグを投与するステップを含む、方法。
【請求項５０】
前記疾患または障害が、請求項４２〜４６のいずれか一項に定義される通りである、請求項４９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、それらを含有する薬学的組成物、および医薬品としてのそれらの使用に関する。
【０００２】
より具体的には、本発明は、乳酸脱水素酵素Ａ（「ＬＤＨＡ」）活性を阻害する化合物に関する。これらの化合物は、癌などの過増殖性細胞によって特徴付けられる疾患を含む、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される疾患または状態の治療または予防における使用を見出す。
【０００３】
化合物は、膵臓癌および乳癌などの低酸素性および／または高度解糖性癌に対する特定の使用を見出す。
【背景技術】
【０００４】
酸素の存在下、正常分化細胞は、ＡＴＰの形態のエネルギーを生成するために主にミトコンドリアにおける酸化的リン酸化に依存する。グルコースは、ピルビン酸の産生をもたらす解糖経路を介してサイトゾルにおいてまず代謝される。ピルビン酸は次いで、ミトコンドリアトリカルボン酸回路においてＣＯ２にさらに変換される。後者のプロセスは、酸化的リン酸化中のＡＴＰ産生を駆動するＮＡＤＨの産生と関連している。
【０００５】
健康な細胞は、「嫌気性解糖」と呼ばれるプロセスによって低酸素レベルに反応する。嫌気性解糖中、ピルビン酸は乳酸に変換され、解糖にとって重要であるＮＡＤ＋の連続再生を可能にする。しかしながら、癌細胞は主にグルコース発酵に依存し、産生されたピルビン酸は、十分な酸素レベルの存在下でも、乳酸に変換される。癌細胞におけるこの「好気性解糖」へのシフトは、「ワールブルク効果」と呼ばれる。
【０００６】
好気性解糖は、腫瘍細胞に、より多くの炭素をバイオマスに組み込み、酸素とは関係ない細胞プロセスに必要なＡＴＰを産生する能力を提供する。いくつかの研究では、解糖代謝におけるこの変化が予後不良および腫瘍侵襲の増加をもたらす癌細胞における増加したグルコース取り込みと相関することが示されている。グルコース代謝経路におけるいくつかの解糖酵素は、好気性解糖と関連し得る。様々な代謝酵素の阻害によるこの代謝経路への干渉は、癌および他の代謝性疾患の治療へのアプローチとして以前提案されている。しかしながら、癌自体の変化した代謝を標的とすることは、市販の薬物によってまだ提起されていない。
【０００７】
ピルビン酸の乳酸への変換は、ＮＡＤＨを補因子として用いる、酵素乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）によって触媒される。酵素は、２つのサブユニット、ＬＤＨＡ（Ｍ、筋肉）およびＬＤＨＢ（Ｈ、心臓）の組み合わせによって構築される、四量体構造を含む。これらのサブユニットの構造配置は、５つのアイソフォーム：２つのホモ四量体、主に心臓に見られるＬＤＨ１（Ｈ４、ＬＤＨＢ）および骨格筋に存在するＬＤＨ５（Ｍ４、ＬＤＨＡ）、ならびに他の組織（例えば、肺および腎臓）に見られる３つのヘテロ四量体を生じさせる。６つめのアイソフォームであるホモ四量体ＬＤＨＣ（Ｃ４）は、精巣および精子に特異的であり、男性の生殖能力と関連している。
【０００８】
いくつかの研究は、ＬＤＨＡが腫瘍の生存において重要な役割を果たすこと、およびその発現が癌性組織において上方調節されることを示した。上昇したレベルの乳酸は、腫瘍浸潤および転移を可能にする細胞外アシドーシスを引き起こす。ＬＤＨＡ発現のサイレンシングが低酸素での低減した腫瘍増殖、低減した腫瘍成長およびミトコンドリア呼吸の刺激をもたらすことを記載する報告は、癌治療における代謝変化の強力な可能性を指摘する。加えて、乳酸脱水素酵素Ｍサブユニット欠損を有する患者は、好気性条件下で筋硬直またはミオグロビン尿症の症状を有さず、ＬＤＨＡが安全な薬物標的であり、その阻害が重度の副作用を引き起こさないことを確認する。
【０００９】
ＬＤＨＡは、解糖活性によって産生されるピルビン酸プールの枯渇に寄与するように、浸潤性腫瘍細胞における解糖の促進において重要な役割を果たす。ピルビン酸は、そうでなければ、酸化的脱炭酸および細胞呼吸におけるさらなる下流反応に利用可能である。ＬＤＨＡの過剰発現は、多くのタイプの癌細胞において検出され、ｓｈＲＮＡ媒介性ＬＤＨＡノックダウンは、解糖依存性癌細胞株における腫瘍成長の有意な阻害をもたらす。外因性乳酸が内因性ピルビン酸に変換される逆反応は、乳酸脱水素酵素Ｂ（「ＬＤＨＢ」）によって触媒される。ＬＤＨＢは主に、嫌気性筋活動からの余剰の乳酸が高い運動中の拍動する心臓におけるエネルギー産生に寄与する心臓および赤血球において見られる。これはこの特定の酵素に対する選択性を達成する能力が望ましいことを示す。ＬＤＨＡ活性を阻害する、特にＬＤＨＡ活性を「選択的に」阻害する能力はよって、癌および関連疾患を治療するための新しい治療方法の開発への魅力的なアプローチを表す。
【００１０】
いくつかのＬＤＨＡ阻害剤が報告され、様々な癌の治療における使用について提案されている。これらの中に、ＷＯ２０１５／１４０１３３にＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記載される特定のピペリジン−ジオン化合物がある。この先の出願に開示される多数の化合物は、ＬＤＨＡ酵素阻害アッセイにおいて低いＬＤＨＡ  ＩＣ５０値を示すことが見出されたが、癌細胞における阻害アッセイが不足していた。
【００１１】
Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって出願された関連出願であるＷＯ２０１５／１４２９０３は、組み換えタンパク質を産生するために使用される哺乳動物細胞培養における乳酸産生の制御に関する。同じピペリジン−ジオン化合物が記載され、同じＬＤＨＡ酵素阻害アッセイにおいてＬＤＨＡを阻害するそれらの能力について試験されている。化合物４４（ＷＯ２０１５／１４２９０３では「Ｇｘ」と称される−以下の構造参照）は、ＣＨＯ細胞成長、培養生存率、乳酸産生、および生成物収率に対するその効果を決定するために、組み換えヒト化モノクローナル抗体を産生するように安定にトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１宿主に由来するＣＨＯ細胞において試験されている。「Ｇｘ」は、以下の構造を有する。
【化１】
2020520388.tif 000003
【００１２】
これらの先のＧｅｎｅｎｔｅｃｈ出願の発明者らによって執筆されたその後の論文において、この特定のＬＤＨＡ阻害剤（論文では「ＧＮＥ−１４０」と称される）は、インビトロおよびインビボで腫瘍成長におけるＬＤＨＡの役割を調査するために使用された（Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ＤＯＩ：１０．１０３８／ＮＣＨＥＭＢＩＯ．２１４３，１  Ａｕｇｕｓｔ  ２０１６参照）。ＭＩＡ  ＰａＣａ−２ヒト膵臓細胞では、「ＧＮＥ−１４０」によるＬＤＨＡ阻害は、全体的な代謝に急速に影響を及ぼしたが、細胞死は継続的なＬＤＨＡ阻害の２日後まで発生しなかった。とりわけ、インビボでは、「ＧＮＥ−１４０」は、その急速なクリアランスのためにＬＤＨＡの阻害を１時間を超えて持続することができなかった。筆者は、ＬＤＨＡ阻害剤が、それらの臨床的有用性を増加させるために、複数日にわたる持続的なインビボ標的調整を提供することができる薬物動態特性を必要とすることを結論づけた。
【００１３】
よって、代替ＬＤＨＡ阻害剤の必要性は依然として存在する。
【００１４】
我々はここで、ＬＤＨＡ阻害活性を示し、少なくともいくつかの実施形態では、「選択的」ＬＤＨＡ阻害活性を示す、選択されたクラスの化合物を見出した。これらの化合物は、ＷＯ２０１５／１４０１３３およびＷＯ２０１５／１４２９０３に記載されるものなどの先行技術において知られているＬＤＨＡ阻害剤の代替を提供する。それらの特性は、それらを、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される状態または障害の治療または予防における使用に、例えば、低酸素性および／または高度解糖性腫瘍に対する使用のための抗癌剤として特に適したものとする。
【００１５】
本明細書に記載されるように、少なくともいくつかの実施形態では、本発明による化合物は、ＷＯ２０１５／１４０１３３およびＷＯ２０１５／１４２９０３に開示されるものに対する改善を提供する。
【発明の概要】
【００１６】
一態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物、それらの立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグに関し、
【化２】
2020520388.tif 000004
【００１７】
式中、
Ａ１は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり、
Ａ２は、ＮＲ（式中、ＲはＨまたはＣ１〜３アルキルのいずれかである）または−Ｏ−であり、
Ａ３は、ＮまたはＣＲ５であり、
Ａ４は、ＮまたはＣＲ６であり、
Ａ５は、ＮまたはＣＲ７であり、
Ａ６は、ＮまたはＣＲ８であり、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、独立して、Ｈおよびハロゲンから選択され、
Ｒ４は、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環、
−ＯＲ９であって、Ｒ９がハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環である、ＯＲ９、ならびに
−ＯＲ１０であって、Ｒ１０がＣ３〜８シクロアルキル基である、ＯＲ１０から選択され、
Ｒ５は、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−Ｃ１〜６アルキル、および
−Ｃ１〜６アルコキシから選択され、
−Ｒ６は、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換されたＣ１〜６アルキル、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、アミノ、シアノ、ニトロ、およびＣ３〜８シクロアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換されたＣ１〜６アルコキシ、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環、
−ＯＲ１１であって、Ｒ１１がハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環である、ＯＲ１１、ならびに
−ＯＲ１２であって、Ｒ１２がＣ３〜８シクロアルキル基である、ＯＲ１２から選択され、
Ｒ７およびＲ８は、独立して、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−Ｃ１〜６アルキル、および
−Ｃ１〜６アルコキシから選択され、
但し、
Ａ３およびＡ４は、共に同時にＮではなく、
Ａ５およびＡ６は、共に同時にＮではなく、
Ａ２がＮＲである場合、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの少なくとも１つは、ハロゲンである。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物の互変異性体およびその誘導体、例えば、式（Ｉａ）の化合物、それらの立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグに関し、
【化３】
2020520388.tif 000005
【００１９】
式中、Ａ１〜Ａ６およびＲ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りであり、
ＲＰは、Ｈまたは式（ＩＩ）を有する基のいずれかであり、
【化４】
2020520388.tif 000006
【００２０】
式中、
＊は、分子の残部への基の付着点を示し、
Ｙは、−Ｏ−またはＮＲｉであり、式中、Ｒｉは、ＨまたはＣ１〜３アルキル（例えば、ＣＨ３）のいずれかであり、
Ｘは、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−ＮＲｊＲｋであって、式中、ＲｊおよびＲｋが、各々独立して、ＨおよびＣ１〜６アルキル（好ましくは、Ｃ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３）から選択される、ＮＲｊＲｋ、
−１つ以上の親水性基によって任意に置換された−Ｃ１〜１２アルキル、
−１つ以上のアリールまたはヘテロアリール基によって任意に置換された−Ｃ１〜１２アルキルであって、アリールまたはヘテロアリール基が、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、およびＣ１〜６ヒドロキシアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され得る、−Ｃ１〜１２アルキル、ならびに
−ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、およびＣ１〜６ヒドロキシアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され得る、アリールまたはヘテロアリール基から選択され、
ｐは、０または１であり、
ｑは、０〜６の整数であり、
ｒは、０または１であり、
ｓは、０または１である。
【００２１】
さらなる態様では、式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグを、１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と共に含む、薬学的組成物に関する。
【００２２】
さらなる態様では、本発明は、療法における使用のため、または医薬品としての使用のための、式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグに関する。
【００２３】
さらなる態様では、本発明は、ＬＤＨＡの阻害における使用のため、例えば、ＬＤＨＢに対するＬＤＨＡの「選択的」阻害における使用のための、式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグに関する。
【００２４】
さらなる態様では、本発明は、ＬＤＨＡの阻害に応答性の疾患または障害、例えば、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される疾患または障害の治療または予防における使用のため、好ましくは、癌などの増殖性障害の治療または予防における使用のための、式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグに関する。
【００２５】
本発明のさらなる態様は、ＬＤＨＡの阻害に応答性の疾患または障害、例えば、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される疾患または障害の治療または予防における使用のため、好ましくは、癌などの増殖性障害の治療または予防における使用のための医薬品の製造における、式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグの使用に関する。
【００２６】
本発明のまたさらなる態様は、ＬＤＨＡの阻害に応答性の疾患または障害、例えば、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される疾患または障害の治療または予防の方法に関し、その方法は、それを必要とする患者（例えば、ヒト対象）に、薬学的に有効な量の、式（Ｉ）もしくは（Ｉａ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグを投与するステップを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、本発明に従った様々な化合物とのインキュベーション後２４、７２、および１２０時間でのＭＤＡ−ＭＢ−２３１癌細胞の細胞生存率を示し、
【図２】図２は、本発明に従った様々な化合物とのインキュベーション後２４、７２、および１２０時間でのＭＤＡ−ＭＢ−４６８癌細胞の細胞生存率を示し、
【図３】図３は、（ＷＯ２０１５／１４２９０３における化合物４４に対応する）実施例２４の既知の化合物ならびに実施例８および１０の化合物とのインキュベーション後１２０時間でのＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８癌細胞の細胞生存率を示し、
【図４】図４は、（ＷＯ２０１５／１４２９０３における化合物１９４に対応する）実施例２５の既知の化合物ならびに実施例１、３、および５の化合物とのインキュベーション後１２０時間でのＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８癌細胞の細胞生存率を示し、
【図５】図５は、実施例１０および１７の化合物とのインキュベーション後１２０時間でのＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８癌細胞の細胞生存率を示し、
【図６】図６は、実施例１〜２３の化合物とのインキュベーション後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２癌細胞における乳酸％を示し、
【図７】図７は、（ＷＯ２０１５／１４２９０３における化合物４４に対応する）実施例２４の既知の化合物とのインキュベーションと比較した実施例８、９、１０、および２９の化合物とのインキュベーション後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２癌細胞における乳酸％を示し、
【図８】図８は、（ＷＯ２０１５／１４２９０３における化合物１９４に対応する）実施例２５の既知の化合物とのインキュベーションと比較した実施例１、３、５、および７の化合物とのインキュベーション後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２癌細胞における乳酸％を示し、
【図９】図９は、実施例１０、１７、および３１の化合物とのインキュベーション後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２癌細胞における乳酸％を示し、
【図１０】図１０は、実施例８、１４、３２、および３３の化合物とのインキュベーション後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２癌細胞における乳酸％を示し、
【図１１】図１１は、そのエナンチオマーのうちの１つ（エナンチオマー１）と比較した（ラセミ混合物としての）実施例１０の化合物とのインキュベーション後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞における乳酸％（左側の図）、ならびに実施例１０の化合物の同じエナンチオマーについてのＭＩＡ  ＰａＣａ−２細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞、ＢＴ−５４９細胞、ＭＣＦ−７細胞、およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞における乳酸％（右側の図）を示し、
【図１２】図１２は、３時間間隔での１２０時間経過中の示された濃度の化合物実施例１０とのインキュベーション後のＭＤＡ−ＭＢ−４６８癌細胞の生存率（左側の図）および異なる化合物濃度の実施例１０の化合物について９６時間インキュベーション後の未処理ＭＤＡ−ＭＢ−４６８癌細胞の生細胞％（右側の図）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
定義
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、一価不飽和、直鎖または分岐、炭素鎖を指す。アルキル基の例としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシルなどが挙げられる。アルキル基は、好ましくは、１〜６個の炭素原子、例えば、１〜４個の炭素原子を含有する。別段に特定されない限り、任意のアルキル基は、１つ以上の位置において好適な置換基で置換され得る。２つ以上の置換基が存在する場合、これらは同じでも異なっていてもよい。好適な置換基としては、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、アミノ、シアノ、およびニトロ基、またはハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒ）が挙げられる。
【００２９】
本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−アルキル基を指し、アルキルは、本明細書に定義される通りである。アルコキシ基の例としては、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシなどが挙げられる。別段に特定されない限り、任意のアルコキシ基は、１つ以上の位置において好適な置換基で置換され得る。２つ以上の置換基が存在する場合、これらは同じでも異なっていてもよい。好適な置換基としては、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、アミノ、シアノ、およびニトロ基、またはハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒ）が挙げられる。
【００３０】
本明細書で使用される「アリール」という用語は、芳香族環系を指す。そのような環系は、単環式または二環式であり、少なくとも１つの不飽和芳香族環を含有し得る。これらが二環式環を含有する場合、これらは縮合され得る。好ましくは、そのような系は、６〜２０個の炭素原子、例えば、６個または１０個の炭素原子を含有する。そのような基の例としては、フェニル、１−ナフチル、および２−ナフチルが挙げられる。好ましいアリール基は、フェニルである。別段に記述されない限り、任意のアリール基は、本明細書に記載される１つ以上の置換基によって置換され得る。２つ以上の置換基が存在する場合、これらは同じであっても異なってもよい。
【００３１】
「シクロアルキル」という用語は、一価、飽和環式炭素系を指す。これは単環式および二環式環を含む。単環式環は、３〜８個の炭素原子を含有してもよく、二環式環は、７〜１４個の炭素原子を含有してもよい。単環式シクロアルキル基の例は、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが挙げられる。別段に特定されない限り、任意のシクロアルキル基は、１つ以上の位置において好適な置換基で置換され得る。２つ以上の置換基が存在する場合、これらは同じであっても異なってもよい。好適な置換基としては、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、アミノ、シアノ、およびニトロ基、またはハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒ）が挙げられる。
【００３２】
「ハロゲン」、「ハロ」、または「ハロゲン原子」という用語は、本明細書において互いに交換可能に使用され、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、または−Ｉを指す。
【００３３】
「ハロアルキル」という用語は、本明細書に定義されるアルキル基を指し、アルキル基の水素原子のうちの少なくとも１つは、ハロゲン原子、好ましくは、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒによって置換される。そのような基の例としては、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＨＣｌ２、
−ＣＨ２ＣＦ３などが挙げられる。
【００３４】
「ヒドロキシアルキル」という用語は、本明細書に定義されるアルキル基を指し、アルキル基の水素原子のうちの少なくとも１つは、ヒドロキシ基によって置換される。そのような基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシルなどが挙げられ、１つ以上の水素原子は、−ＯＨによって置換される。
【００３５】
本明細書で使用される「複素環式環」という用語は、飽和または部分不飽和、４〜６員（好ましくは、５員または６員）炭素環系を指し、少なくとも１つの環原子は、窒素、酸素、および硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は、炭素である。複素環式環構造は、炭素原子を通して、または窒素原子を通して分子の残部と結合し得る。複素環式環の例としては、これらに限定されないが、テトラヒドロフラン、ピペリジン、ピロリジン、ジオキサン、モルホリノなどが挙げられる。別段に記述されない限り、本明細書で言及される複素環式環は、同一でも異なっていてもよい、１つ以上の基、例えば、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、アミノ、シアノ、もしくはニトロ基、またはハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒ）によって任意に置換され得る。
【００３６】
本明細書で使用されるとき、「ヘテロアリール」という用語は、複素環式芳香族基を指す。そのような基は、単環式または二環式であり、少なくとも１つの不飽和ヘテロ芳香族環系を含有し得る。これらが単環式である場合、これらは、窒素、酸素、および硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含有し、十分な共役結合を含有して芳香族系を形成する、５員または６員環を含む。これらが二環式である場合、これらは９〜１１個の環原子を含有し得る。ヘテロアリール基の例としては、チオフェン、チエニル、ピリジル、チアゾリル、フリル、ピロリル、トリアゾリル、イミダゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾロニル、オキサゾロニル、チアゾロニル、テトラゾリル、チアジアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、インドリル、イソインドリル、ピリドニル、ピリダジニル、ピリミジニル、イミダゾピリジル、オキサゾピリジル、チアゾロピリジル、イミダゾピリダジニル、オキサゾロピリダジニル、チアゾロピリダジニル、およびプリニルが挙げられる。別段に記述されない限り、本明細書で言及されるヘテロアリール基は、本明細書に記載される１つ以上の基によって任意に置換され得る。２つ以上の置換基が存在する場合、これらは同じでも異なっていてもよい。
【００３７】
「親水性基」という用語は、水素結合が可能である置換基を指す。親水性基の例としては、これらに限定されないが、ヒドロキシ、チオール、およびアミンが挙げられる。
【００３８】
１つ以上の置換基が参照される場合、これは、独立して本明細書に定義される基から選択することができる、１〜１２個の置換基を指す。一実施形態では、１、２、３、４、５、または６個の置換基、好ましくは、１、２、または３個、例えば、１または２個が存在し得る。
【００３９】
本発明の化合物は、１つ以上の立体中心を含有し得、したがって、異なる立体異性体形態で存在し得る。「立体異性体」という用語は、同一の化学構造を有するが、原子または基の空間配置に関して異なる化合物を指す。立体異性体の例は、エナンチオマーおよびジアステレオマーである。「エナンチオマー」という用語は、互いの重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。「ジアステレオマー」という用語は、互いの鏡像ではない２つ以上の立体中心を有する立体異性体を指す。本発明は、ジアステレオマーおよびエナンチオマー、ならびにラセミ混合物およびエナンチオマーの比が１：１以外であるエナンチオマーに富む混合物まで及ぶとみなされる。
【００４０】
本明細書に記載される化合物は、それらのエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーに分解され得る。例えば、これらが１つのみの立体中心を含有する場合、これらはラセミ体もしくはラセミ混合物（エナンチオマーの５０：５０混合物）の形態で提供され得るか、または純粋なエナンチオマーとして、すなわち、ＲまたはＳ形態で提供され得る。ラセミ体として発生する化合物のいずれかは、キラル相上でのカラム分離などの当該技術分野で知られている方法によって、または光学活性溶媒からの再結晶によって、それらのエナンチオマーに分離され得る。少なくとも２つの不斉炭素原子を有するそれらの化合物は、それ自体が知られている方法を用いて、例えば、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶によって、それらの物理−化学的相違に基づいてそれらのジアステレオマーに分解され得、これらの化合物がラセミ形態で得られる場合、それらはその後それらのエナンチオマーに分解され得る。
【００４１】
本明細書で使用される「互変異性体」という用語は、単結合および隣接する二重結合の転換を伴うプロトンの転位を含み得る化学反応によって容易に相互変換する構造的異性体を指す。これは、特に、ケト−エノール互変異性体を含む。条件に応じて、化合物は主にケトまたはエノール形態のいずれかで存在し得、本発明は、本明細書で与えられる構造式のいずれかで示される特定の形態に限定されることを意図していない。
【００４２】
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書に記載される化合物のいずれかの任意の薬学的に許容される有機または無機塩を指す。薬学的に許容される塩は、対イオンなどの１つ以上の追加の分子を含み得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化する任意の有機または無機基であり得る。本発明の化合物が塩基である場合、好適な薬学的に許容される塩は、遊離塩基の有機または無機酸との反応によって調製され得る。本発明の化合物が酸である場合、好適な薬学的に許容される塩は、遊離酸の有機または無機塩基との反応によって調製され得る。好適な塩の非限定的な例は、本明細書に記載される。
【００４３】
「薬学的に許容される」という用語は、化合物または組成物が、製剤の他の成分と、または治療される患者（例えば、ヒト）と化学的および／または毒物学的に適合することを意味する。
【００４４】
「薬学的組成物」とは、医療目的で使用されるのに適した任意の形態の組成物を意味する。
【００４５】
「プロドラッグ」という用語は、使用の条件下、例えば、体内で変形が行われ、活性薬物を放出する、活性化合物の誘導体を指す。プロドラッグは、必ずしもそうである必要はないが、活性薬物に変換されるまで薬理学的に不活性であり得る。本明細書で使用されるとき、「プロドラッグ」という用語は、生理学的条件下で本明細書に記載される活性化合物のいずれかに変換される任意の化合物に及ぶ。好適なプロドラッグは、生理学的条件下で所望の分子に加水分解されるか、またはインビボで酵素の作用によって活性薬物に変形される化合物を含む。
【００４６】
プロドラッグは、典型的には、プロ基を用いて活性に少なくとも部分的に必要であるとみなされる親分子における１つ以上の官能基をマスクすることによって得られ得る。本明細書で使用される「プロ基」とは、活性薬物内の官能基をマスクするために使用され、特定の使用（例えば、体への投与）の条件下で切断などの変形が起こり、官能基を解放し、よって活性薬物を提供する基を意味する。プロ基は、典型的には、使用の条件下で、例えば、インビボで切断可能な結合（複数可）によって活性薬物の官能基に結合している。プロ基の切断は、使用の条件下で、例えば、加水分解によって自発的に起こり得るか、または他の物理的もしくは化学的手段によって、例えば、酵素によって、光への曝露によって、温度変化もしくはｐＨ変化への曝露などによって、触媒もしくは誘導され得る。切断が他の物理的または化学的手段によって誘導される場合、これらは使用の条件、例えば、標的腫瘍部位でのｐＨ条件に対して内因性であり得るか、またはこれらは外因的に供給され得る。
【００４７】
本明細書で使用されるとき、「治療」は、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、非ヒト哺乳動物）に利益をもたらし得る任意の治療的適用を含む。ヒトおよび獣医学的処置の両方が本発明の範囲内であるが、主に本発明はヒトの治療を目的とする。治療は、既存の疾患もしくは状態に関するものであり得るか、または予防的であり得る。
【００４８】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に有効な量」は、所望の薬理学的および／または治療的効果をもたらす量、すなわち、その意図した目的を達成するのに有効な薬剤の量に関する。個別の患者のニーズは異なり得るが、活性剤の有効量の最適な範囲の決定は、当業者の能力の範囲内である。一般的には、疾患または状態を本明細書に記載される化合物のいずれかで治療するための投与量レジメンは、医学的状態の性質およびその重症度を含む様々な因子に従って選択される。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、「乳酸脱水素酵素Ａ」または「ＬＤＨＡ」は、主に筋肉において発現し、ＮＡＤＨのＮＡＤ＋への酸化と相まって、解糖に由来するピルビン酸を乳酸に変換する酵素を指す。
【００５０】
本明細書における「乳酸脱水素酵素Ａ活性」または「ＬＤＨＡ活性」への任意の言及は、乳酸脱水素酵素Ａ、またはその断片の、ピルビン酸の乳酸への変換、細胞増殖活性、または任意の他の酵素活性に関する。「乳酸脱水素酵素Ａ阻害剤」または「乳酸脱水素酵素Ａの阻害」への言及は、適切に解釈されるべきである。「乳酸脱水素酵素Ａ阻害剤」はよって、乳酸脱水素酵素Ａによるピルビン酸の乳酸への変換を低減、乳酸脱水素酵素Ａ増殖活性を低減、またはそうでなければ乳酸脱水素酵素Ａ酵素活性を低減する化合物である。そのような低減は、完全である必要はないが、典型的には、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％の低減であるか、または少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％と高い場合もある。本発明の特定の実施形態では、本明細書に記載される化合物は、乳酸脱水素酵素Ａの酵素活性を「選択的に」阻害する。そのような阻害は、化合物が、乳酸脱水素酵素Ａの活性を、乳酸脱水素酵素Ｂのそれを阻害するよりも大きな程度に阻害する限り、「選択的」であるとみなされる。
【００５１】
本発明は、少なくとも部分的に、既知のＬＤＨＡ阻害剤への特定の改変が、それらのＬＤＨＡ阻害活性を保持するだけでなく、ＬＤＨＡ阻害の選択性も示し得る化合物をもたらすという発見に基づく。この発見は、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される、対象における、例えば、ヒトにおける状態または疾患を治療するための化合物の使用につながる。化合物の細胞膜透過性は、これらが本明細書に記載される特定の誘導体の形態で提供される場合、さらに改善される。
【００５２】
一態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物、それらの立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグを提供し、
【化５】
2020520388.tif 000007
【００５３】
式中、
Ａ１は、−Ｏ−、−ＣＨ２−、または−Ｓ−であり、
Ａ２は、ＮＲ（式中、ＲはＨまたはＣ１〜３アルキルのいずれかである）または−Ｏ−であり、
Ａ３は、ＮまたはＣＲ５であり、
Ａ４は、ＮまたはＣＲ６であり、
Ａ５は、ＮまたはＣＲ７であり、
Ａ６は、ＮまたはＣＲ８であり、
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、独立して、Ｈおよびハロゲンから選択され、
Ｒ４は、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環、
−ＯＲ９であって、Ｒ９がハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環である、ＯＲ９、ならびに
−ＯＲ１０であって、Ｒ１０がＣ３〜８シクロアルキル基である、ＯＲ１０から選択され、
Ｒ５は、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−Ｃ１〜６アルキル、および
−Ｃ１〜６アルコキシから選択され、
Ｒ６は、
−Ｈ、
−ハロゲン、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換されたＣ１〜６アルキル、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、アミノ、シアノ、ニトロ、およびＣ３〜８シクロアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換されたＣ１〜６アルコキシ、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環、
−ＯＲ１１であって、Ｒ１１がハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環である、ＯＲ１１、ならびに
−ＯＲ１２であって、Ｒ１２がＣ３〜８シクロアルキル基である、ＯＲ１２から選択され、
Ｒ７およびＲ８は、独立して、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−Ｃ１〜６アルキル、および
−Ｃ１〜６アルコキシから選択され、
但し、
Ａ３およびＡ４は、共に同時にＮではなく、
Ａ５およびＡ６は、共に同時にＮではなく、
Ａ２がＮＲである場合、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの少なくとも１つは、ハロゲンである。
【００５４】
さらなる態様では、本発明は、式（Ｉａ）の化合物、それらの互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグを提供し、
【化６】
2020520388.tif 000008
【００５５】
式中、Ａ１〜Ａ６およびＲ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りであり、
ＲＰは、Ｈまたは式（ＩＩ）を有する基のいずれかであり、
【化７】
2020520388.tif 000009
【００５６】
式中、
＊は、分子の残部への基の付着点を示し、
Ｙは、−Ｏ−またはＮＲｉであり、式中、Ｒｉは、ＨまたはＣ１〜３アルキル（例えば、ＣＨ３）のいずれかであり、
Ｘは、
−Ｈ、
−ヒドロキシ、
−ＮＲｊＲｋであって、式中、ＲｊおよびＲｋが、各々独立して、ＨおよびＣ１〜６アルキル（好ましくは、Ｃ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３）から選択される、ＮＲｊＲｋ、
−１つ以上の親水性基によって任意に置換された−Ｃ１〜１２アルキル、
−１つ以上のアリールまたはヘテロアリール基によって任意に置換された−Ｃ１〜１２アルキルであって、アリールまたはヘテロアリール基が、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、およびＣ１〜６ヒドロキシアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され得る、−Ｃ１〜１２アルキル、ならびに
ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、およびＣ１〜６ヒドロキシアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され得る、アリールまたはヘテロアリール基から選択され、
ｐは、０または１であり、
ｑは、０〜６の整数であり、
ｒは、０または１であり、
ｓは、０または１である。
【００５７】
本明細書に記載される実施形態のいずれかは、式（Ｉ）の化合物または式（Ｉａ）の化合物、それらの互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグに関し得る。
【００５８】
一実施形態では、Ａ１は、−Ｓ−である。
【００５９】
一実施形態では、Ａ２は、ＮＨまたはＮ−メチル、好ましくは、ＮＨである。
【００６０】
一実施形態では、本発明は、式（ＩＩＩ）および（ＩＩＩａ）の化合物、それらの互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグに関し、
【化８】
2020520388.tif 000010
【００６１】
式中、Ａ３〜Ａ６、Ｒ１〜Ｒ４、およびＲＰは、本明細書に記載される通りである。
【００６２】
別の実施形態では、Ａ２は、Ｏである。Ａ２がＯである場合、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈまたはハロゲンのいずれかであり得る。一実施形態では、Ａ２は、Ｏであり、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、ハロゲンである。
【００６３】
一実施形態では、本発明は、式（ＩＶ）および（ＩＶａ）の化合物、それらの互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグに関し、
【化９】
2020520388.tif 000011
【００６４】
式中、Ａ３〜Ａ６、Ｒ１〜Ｒ４、およびＲＰは、本明細書に定義される通りである。
【００６５】
一実施形態では、Ａ５は、Ｎである。一実施形態では、Ａ４およびＡ５の両方は、Ｎである。
【００６６】
一実施形態では、Ａ５は、ＣＲ７であり、Ｒ７は、Ｈである。一実施形態では、Ａ６は、ＣＲ８であり、Ｒ８は、Ｈである。一実施形態では、Ａ５およびＡ６の両方は、ＣＨである。
【００６７】
一実施形態では、Ａ３は、Ｎである。Ａ３がＮである場合、Ａ４は、Ｎ以外、すなわち、ＣＲ６である。一実施形態では、Ａ３がＮである場合、Ａ４は、ＣＲ６であり、Ｒ４は、Ｈである。別の実施形態では、Ａ３がＮである場合、Ａ４は、ＣＲ６であり、Ｒ６は、Ｈ以外であり、Ｒ４は、Ｈである。別の実施形態では、Ａ３がＮである場合、Ａ４は、ＣＲ６であり、Ｒ６は、Ｈであり、Ｒ４は、Ｈ以外である。
【００６８】
一実施形態では、本発明は、式（Ｖ）および（Ｖａ）の化合物、それらの互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグに関し、
【化１０】
2020520388.tif 000012
【００６９】
式中、Ａ１、Ａ２、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ６、およびＲＰは、本明細書に定義される通りである。
【００７０】
本発明の化合物の一実施形態では、例えば、式（Ｖ）および（Ｖａ）の化合物では、Ｒ６は、Ｈ以外であり得る。例えば、Ｒ６は、以下：
−ハロゲン、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換されたＣ１〜６アルキル、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、アミノ、シアノ、ニトロ、およびＣ３〜８シクロアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換されたＣ１〜６アルコキシ、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環、
−ＯＲ１１であって、Ｒ１１がハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環である、ＯＲ１１、ならびに
−ＯＲ１２であって、Ｒ１２がＣ３〜８シクロアルキル基である、ＯＲ１２のいずれかから選択され得る。
【００７１】
一実施形態では、Ｒ６は、ハロゲン（例えば、ＢｒまたはＣｌ、好ましくは、Ｂｒ）または任意に置換されたＣ１〜６アルコキシ基である。
【００７２】
一実施形態では、Ｒ６は、本明細書に定義される任意に置換されたＣ１〜６アルコキシ基である。これが置換される場合、好適な置換基は、Ｃ３〜８シクロアルキル基、例えば、非置換シクロペンチルを含む。
【００７３】
一実施形態では、Ａ３は、ＣＲ５である。別の実施形態では、Ａ３は、ＣＨである。
【００７４】
一実施形態では、Ａ３がＣＨである場合、Ａ４は、ＣＲ６である。別の実施形態では、Ａ３がＣＨである場合、Ａ４は、ＣＲ６であり、Ｒ６は、Ｈである。
【００７５】
一実施形態では、本発明は、式（ＶＩ）および（ＶＩａ）の化合物、それらの互変異性体、立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグに関し、
【化１１】
2020520388.tif 000013
【００７６】
式中、Ａ１、Ａ２、Ｒ１〜Ｒ４、およびＲＰは、本明細書に定義される通りである。
【００７７】
本発明の化合物の一実施形態では、例えば、式（ＶＩ）および（ＶＩａ）の化合物では、Ｒ４は、Ｈ以外であり得る。例えば、Ｒ４は、以下：
−ハロゲン、
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環、
−ＯＲ９であって、Ｒ９がハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環である、ＯＲ９、ならびに
−ＯＲ１０であって、Ｒ１０がＣ３〜８シクロアルキル基である、ＯＲ１０のいずれかから選択され得る。
【００７８】
一実施形態では、Ｒ４は、
−Ｈ、
−ハロゲン、ならびに
−ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、
【００７９】
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜６アルキル、アミノ、シアノ、およびニトロ基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換された４〜６員複素環から選択される。
【００８０】
一実施形態では、Ｒ４は、
−Ｈ、
−ＢｒまたはＣｌ、好ましくは、Ｂｒ、および
−非置換である４〜６員複素環式環から選択される。
【００８１】
一実施形態では、Ｒ４は、Ｈ、Ｂｒ、またはモルホリノである。
【００８２】
本明細書に記載される化合物のいずれかにおいて、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各々独立して、Ｈおよびハロゲンから選択され、但し、Ａ２がＮＨまたはＮ−（Ｃ１−〜３アルキル）のいずれかである場合、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの少なくとも１つは、ハロゲンである。
【００８３】
本発明の特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの１つまたは２つは、ハロゲンである。一実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの１つは、ハロゲンである。別の実施形態では、Ｒ１は、ハロゲンであり、Ｒ２およびＲ３は、Ｈである。別の実施形態では、Ｒ２は、ハロゲンであり、Ｒ１およびＲ３は、Ｈである。別の実施形態では、Ｒ３は、ハロゲンであり、Ｒ１およびＲ２は、Ｈである。
【００８４】
Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３のうちの１つ以上がハロゲンである場合、これらは独立して、−Ｆ、−Ｃｌ、および−Ｂｒから選択され得る。一実施形態では、これらは、−Ｆおよび−Ｃｌから選択される。
【００８５】
一実施形態では、Ｒ１もしくはＲ３は、−Ｃｌであるか、またはＲ２は、−Ｆである。
【００８６】
一実施形態では、ＲＰは、式（ＩＩ）を有する基を表し、
【化１２】
2020520388.tif 000014
【００８７】
式中、
Ｙは、−Ｏ−またはＮＲｉ（式中、Ｒｉは、ＨまたはＣ１〜３アルキル（例えば、ＣＨ３）のいずれかである）、好ましくは、−Ｏ−またはＮＨ、例えば、−Ｏ−であり、
Ｘは、
−ＮＲｊＲｋであって、式中、ＲｊおよびＲｋが、各々独立して、ＨおよびＣ１〜６アルキル（好ましくは、Ｃ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３）から選択される、ＮＲｊＲｋ、
−独立して−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨまたはＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３のいずれかである）および−ＮＲ”２（式中、各Ｒ”は独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３から選択される）から選択される１つ以上の親水性基によって任意に置換された−Ｃ１〜１２アルキル（好ましくは、Ｃ１〜６アルキル）、ならびに
−ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ハロアルコキシ、およびＣ１〜６ヒドロキシアルキル基からなる群から選択される１つ以上の置換基によって任意に置換され得る、アリールまたはヘテロアリール基から選択され、
ｐ、ｑ、ｒ、およびｓは、本明細書に定義される通りである。
【００８８】
一実施形態では、Ｙは、−Ｏ−である。
【００８９】
一実施形態では、Ｘは、−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨまたはＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３のいずれかである）および−ＮＲ”２（式中、各Ｒ”は独立して、ＨおよびＣ１〜３アルキル、例えば、ＣＨ３から選択される）から選択される１つ以上の基によって任意に置換されたＣ１〜１２アルキル（好ましくは、Ｃ１〜６アルキル）である。
【００９０】
一実施形態では、ＲＰは、式（ＩＩ）の基であり、式中、ｐは、１であり、ｒおよびｓの各々は、０である。この実施形態では、ＲＰは、式（ＶＩＩ）の基であり、
＊−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｘ（ＶＩＩ）
式中、＊、ｑ、およびＸは、本明細書に定義される通りである。
【００９１】
式（ＶＩＩ）において、Ｘは、任意に置換されたＣ１〜１２アルキルであり得、アルキル基は、直鎖または分岐であり得る。任意に置換されたＣ１〜６アルキル、例えば、Ｃ１〜４アルキルなどの、短鎖アルキル基が好ましい場合がある。一実施形態では、Ｘは、非置換アルキルである。一実施形態では、ｑは、０または１である。
【００９２】
式（ＶＩＩ）の基の非限定的な例は、以下を含む（式中、＊は、分子の残部への基の付着点を示す）。
【化１３】
2020520388.tif 000015
【００９３】
一実施形態では、ＲＰは、式（ＩＩ）の基であり、式中、ｐ、ｒ、およびｓの各々は、０である。この実施形態では、ＲＰは、式（ＶＩＩＩ）の基であり、
＊−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｘ（ＶＩＩＩ）
式中、＊、ｑ、およびＸは、本明細書に定義される通りである。
【００９４】
式（ＶＩＩＩ）において、Ｘは、任意に置換されたＣ１〜１２アルキルであり得、アルキル基は、直鎖または分岐であり得る。任意に置換されたＣ１〜６アルキル、例えば、Ｃ１〜４アルキルなどの、短鎖アルキル基が好ましい場合がある。一実施形態では、Ｘは、非置換アルキルである。一実施形態では、ｑは、０または１である。
【００９５】
式（ＶＩＩＩ）において、Ｘは、任意に置換されたアリールまたはヘテロアリール基、例えば、非置換ヘテロアリール基であり得る。一実施形態では、ｑは、０または１、好ましくは、０である。
【００９６】
式（ＶＩＩＩ）の基の非限定的な例は、以下を含む（式中、＊は、分子の残部への基の付着点を示す）。
【化１４】
2020520388.tif 000016
【００９７】
一実施形態では、ＲＰは、式（ＩＩ）の基であり、式中、Ｙは、−Ｏ−であり、ｐおよびｒの各々は、１であり、ｓは、０である。この実施形態では、ＲＰは、式（ＩＸ）の基であり、
＊−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｘ（ＩＸ）
式中、＊、ｑ、およびＸは、本明細書に定義される通りである。
【００９８】
式（ＩＸ）において、Ｘは、任意に置換されたＣ１〜１２アルキルであり得、アルキル基は、直鎖または分岐であり得る。任意に置換されたＣ１〜６アルキル、例えば、Ｃ１〜４アルキルなどの、短鎖アルキル基が好ましい場合がある。一実施形態では、Ｘは、非置換アルキルである。一実施形態では、ｑは、０または１である。好ましくは、ｑは、１である。
【００９９】
式（ＩＸ）の基の非限定的な例は、以下を含む（式中、＊は、分子の残部への基の付着点を示す）。
【化１５】
2020520388.tif 000017
【０１００】
一実施形態では、ＲＰは、式（ＩＩ）の基であり、式中、Ｙは、−Ｏ−であり、ｐおよびｓの各々は、０であり、ｒは、１である。この実施形態では、ＲＰは、式（Ｘ）の基であり、
＊−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−Ｘ（Ｘ）
式中、＊、ｑ、およびＸは、本明細書に定義される通りである。
【０１０１】
式（Ｘ）において、Ｘは、任意に置換されたＣ１〜１２アルキルであり得、アルキル基は、直鎖または分岐であり得る。任意に置換されたＣ１〜６アルキル、例えば、Ｃ１〜４アルキルなどの、短鎖アルキル基が好ましい場合がある。一実施形態では、Ｘは、非置換アルキルである。一実施形態では、ｑは、０または１である。
【０１０２】
式（Ｘ）の基の非限定的な例は、以下を含む（式中、＊は、分子の残部への基の付着点を示す）。
【化１６】
2020520388.tif 000018
【０１０３】
一実施形態では、ＲＰは、式（ＩＩ）の基であり、式中、Ｙは、−Ｏ−であり、ｐは、０であり、ｒおよびｓの各々は、１である。この実施形態では、ＲＰは、式（ＸＩ）の基であり、
＊−ＣＯ−（ＣＨ２）ｑ−Ｏ−ＣＯ−Ｘ（ＸＩ）
式中、＊、ｑ、およびＸは、本明細書に定義される通りである。
【０１０４】
式（ＸＩ）において、Ｘは、任意に置換されたＣ１〜１２アルキルであり得、アルキル基は、直鎖または分岐であり得る。任意に置換されたＣ１〜６アルキル、例えば、Ｃ１〜４アルキルなどの、短鎖アルキル基が好ましい場合がある。一実施形態では、Ｘは、非置換アルキルである。一実施形態では、ｑは、０または１である。
【０１０５】
式（ＸＩ）の基の非限定的な例は、以下を含む（式中、＊は、分子の残部への基の付着点を示す）。
【化１７】
2020520388.tif 000019
【０１０６】
本発明に従った化合物の例としては、これらに限定されないが、以下：
６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，４−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（６−エトキシピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，５−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，３−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，３−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン
３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（ピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオン、
３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（ピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオン、
３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオン、
５−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−２−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルエチルカーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルメチルカーボネート、
５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６’−（シクロペンチルメトキシ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルアセテート、
５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルプロピルカーボネート、
５−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルエチルカーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルデシルカーボネート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
２−（５−ブロモピリジン−２−イル）−５−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチルカーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
６−（５−ブロモピリジン−２−イル）−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオン、
３−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン、
５−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルイソブチルカーボネート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルアセテート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルピバレート、
５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルイソブチルカーボネート、
５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルイソニコチネート、
５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
５−（（２−クロロフェニル）チオ）−２−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネート、
ならびにそれらの立体異性体、互変異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグが挙げられる。
【０１０７】
本発明に従った化合物は、無機または有機酸または塩基で、その塩、特にその薬学的に許容される塩に変換され得る。この目的に使用され得る酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルホン酸、メタンスルホン酸、リン酸、フマル酸、コハク酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、およびアスコルビン酸が挙げられる。この目的に適し得る塩基としては、アルカリおよびアルカリ土類金属水酸化物、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、または水酸化セシウム、アンモニアおよび有機アミン、例えば、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、およびジシクロヘキシルアミンが挙げられる。塩形成のための手順は、当該技術分野において従来的なものである。
【０１０８】
一実施形態では、本発明の化合物は、それらの対応するエノール誘導体の形態で提供され得る。これらとしては、式（Ｉｂ）によって表される化合物、それらの立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグが挙げられ、
【化１８】
2020520388.tif 000020
【０１０９】
式中、Ａ１〜Ａ６およびＲ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りである。これらの基のいずれかは、式（Ｉ）の化合物に関して本明細書に記載される実施形態のいずれかに従って定義され得る。
【０１１０】
一実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉｃ）の化合物、それらの立体異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグであり、
【化１９】
2020520388.tif 000021
【０１１１】
式中、Ａ１〜Ａ６、Ｒ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りであり、ＲＰは、本明細書に定義される通りである。
【０１１２】
式（Ｉｃ）におけるＡ１〜Ａ６、Ｒ１〜Ｒ４、およびＲＰのいずれかは、式（Ｉ）の化合物に関して本明細書に記載される実施形態のいずれかに従って定義され得る。
【０１１３】
理解される通り、本明細書に記載される化合物は、エナンチオマー、ジアステレオマー、およびそれらの混合物を含む、様々な立体異性体形態で存在し得る。本発明は、本明細書に記載される化合物の全ての光学異性体および光学異性体の混合物を包含する。したがって、ジアステレオマー、ラセミ体、および／またはエナンチオマーとして存在する化合物は、本発明の範囲内である。
【０１１４】
一実施形態では、本発明は、以下の立体化学を有する化合物、それらの互変異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグを提供し、
【化２０】
2020520388.tif 000022
【０１１５】
式中、Ａ１〜Ａ６およびＲ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りである。
【０１１６】
別の実施形態では、本発明は、以下の立体化学を有する化合物、それらの互変異性体、薬学的に許容される塩、およびプロドラッグを提供し、
【化２１】
2020520388.tif 000023
【０１１７】
式中、Ａ１〜Ａ６およびＲ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りである。
【０１１８】
この立体化学を有する化合物（Ｉａ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、および（ＶＩａ）のいずれか、ならびに適切な場合、その任意の互変異性体、薬学的に許容される塩、またはプロドラッグは、本発明のさらなる実施形態を形成する。
【０１１９】
本発明の化合物のいずれも、代替的にはプロドラッグの形態で提供され得る。プロドラッグは、本明細書に定義されるプロ基を用いて親分子における１つ以上の官能基をマスクすることによって得られ得る。プロドラッグを提供するために活性化合物における官能基をマスクするのに適した幅広い種類のプロ基は、当該技術分野において周知である。例えば、ヒドロキシ官能基は、親ヒドロキシ基を提供するためにインビボで加水分解され得るエステル、リン酸エスエル、またはスルホン酸エステルとしてマスクされ得る。アミド官能基は、親アミノ基を提供するためにインビボで加水分解され得る。カルボキシル基は、親カルボキシル基を提供するためにインビボで加水分解され得るエステルまたはアミドとしてマスクされ得る。好適なプロ基の他の例は、当業者には明らかであろう。
【０１２０】
一実施形態では、本発明の化合物は、好適なプロドラッグを生成するために誘導体化することができるヒドロキシ官能基を有する。例えば、ヒドロキシ基は、アルキルまたはアリールエステル、リン酸エステル、スルホン酸エステルなどに変換することができる。
【０１２１】
好適なプロ基は、それらが連結した−Ｏ−原子と共に、アルキルエステル、リン酸エステル、スルホン酸エステル、カーボネート、またはカーバメート基を形成するものを含む。プロ基の正確な性質は、必要性に従って、例えば、プロドラッグの所望の油もしくは水溶性、その意図した投与方法および／または活性薬物化合物を生成する標的部位でのその意図した代謝モードに応じて選択され得る。プロ基は、必要な水溶性を増加または減少させるために、例えば、親水性または親油性であり得る。プロ基の選択は、胃腸管からの向上した吸収、改善した薬安定性などのような他の所望の特性も与え得る。
【０１２２】
本発明に従った化合物は、当該技術分野で知られている合成方法を用いて、例えば、その全体が本明細書に参照により組み込まれる、ＷＯ２０１５／１４０１３３に記載されるものに類似する方法を用いて、容易に入手可能な出発材料から調製され得る。
【０１２３】
以下のスキームは、本発明の化合物および重要な中間体を調製するための一般的な方法を示す。そのような方法は、本発明のさらなる態様を形成する。出発材料として使用される化合物は、文献から知られるか、または市販され得るかのいずれかである。あるいは、これらは、文献から知られる方法によって容易に得られ得る。理解されるように、他の合成経路は、異なる出発材料、異なる試薬、および／または異なる反応条件を用いて化合物を調製するために使用され得る。本発明に従った化合物の調製方法のより詳細な記載は、実施例において見られる。
【０１２４】
スキーム１：
【化２２】
2020520388.tif 000024
【０１２５】
スキーム１では、Ａ２は、ＮＲ（ＲはＨまたはＣ１〜３アルキルである）であり、Ａ３〜Ａ６、Ｒ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りである。
【０１２６】
スキーム２：
【化２３】
2020520388.tif 000025
【０１２７】
スキーム２では、Ａ３〜Ａ６およびＲ１〜Ｒ４は、本明細書に定義される通りである。
【０１２８】
スキーム３：
【化２４】
2020520388.tif 000026
【０１２９】
スキーム３では、Ａ２〜Ａ６、Ｒ１〜Ｒ４、およびＲＰは、本明細書に定義される通りであり、Ｚは、ハロゲン原子、例えば、Ｃｌなどの脱離基である。
【０１３０】
本発明に従った化合物は、価値のある生理学的特性、特にＬＤＨＡに対する阻害効果を有する。ＬＤＨＡを阻害するそれらの能力を考慮して、本発明に従った化合物は、ＬＤＨＡの活性化によって媒介される任意の状態または疾患の治療および／または予防に適している。
【０１３１】
ＬＤＨＡは、様々な癌の病理において中心的な役割を果たす。本発明の化合物は、よって、ＬＤＨＡが上方調節される悪性および前悪性癌状態、例えば、癌腫または腫瘍、およびそれらの転移、肉腫および癌腫などの腫瘍、特に固形腫瘍の予防および／または治療に特に適している。
【０１３２】
より具体的には、化合物は、以下の癌：骨原性および軟部組織肉腫を含む、肉腫；癌腫、例えば、乳、肺、脳、膀胱、甲状腺、前立腺、結腸、直腸、膵臓、胃、肝臓（ｌｉｖｅｒ）、子宮、肝臓（ｈｅｐａｔｉｃ）、腎臓、前立腺、子宮頸部、および卵巣癌腫；ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含む、リンパ腫；神経芽細胞腫、黒色腫、骨髄腫、ウィルムス腫瘍；急性リンパ芽球性白血病および急性骨髄芽球性白血病を含む、白血病；星状細胞腫、神経膠腫、および網膜芽細胞腫の治療および／または予防において有効である。
【０１３３】
本発明に従って治療され得る癌の例としては、結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、胃癌、肝臓癌（例えば、肝細胞および肝芽腫癌腫）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽腫、皮膚癌（例えば、黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌（例えば、卵巣子宮内膜癌）、膀胱癌、甲状腺癌（例えば、退形成性甲状腺癌）、頭頸部癌、乳癌、前立腺癌、および神経膠芽腫が挙げられる。
【０１３４】
特に好ましくは、本明細書に記載される化合物は、乳癌、非小細胞肺癌、卵巣、甲状腺、結腸直腸、膵臓、および前立腺癌、ならびに神経膠芽腫の治療および／または予防において使用され得る。膵臓癌および乳癌の治療は、本発明の好ましい態様である。
【０１３５】
さらなる態様から見ると、本発明はよって、療法における使用について本明細書に記載される化合物を提供する。別段に特定されない限り、本明細書で使用される「療法」という用語は、治療および予防の両方を含むことを意図している。
【０１３６】
さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載される状態のいずれかの治療または予防における、例えば、結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌、胃癌、肝臓癌（例えば、肝細胞および肝芽腫癌腫）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽腫、皮膚癌（例えば、黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、退形成性甲状腺癌、頭頸部癌、乳癌、前立腺癌、または神経膠芽腫の治療または予防における使用のための、本明細書に記載される化合物を提供する。
【０１３７】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載される状態のいずれかの治療または予防の方法における使用のための医薬品の製造における、本明細書に記載される化合物の使用を提供する。
【０１３８】
同様に提供されるものは、本明細書に記載される状態のいずれかと闘うか、またはこれを予防するため、例えば、結腸癌（結腸直腸癌など）、膵臓癌、胃癌、肝臓癌（例えば、肝細胞および肝芽腫癌腫）、腎臓のウィルムス腫瘍、髄芽腫、皮膚癌（例えば、黒色腫）、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣子宮内膜癌、膀胱癌、退形成性甲状腺癌、頭頸部癌、乳癌、前立腺癌、または神経膠芽腫と闘うか、またはこれを予防するための、ヒトまたは非ヒト動物の体の治療の方法であり、その方法は、その体に有効量の本明細書に記載される化合物を投与するステップを含む。
【０１３９】
本明細書に記載される化合物はまた、細胞の過増殖と関連した他の状態およびてんかんなどの他の代謝疾患の治療または予防における使用を見出す。
【０１４０】
脳は機能するために多くのエネルギーが必要であり、その高エネルギー需要は、血流から供給される、その主なエネルギー源、グルコースから満たされる。しかしながら、脳は、ケトン体および乳酸などの他のエネルギー基質も使用することができる。ケトンは長期間の飢餓中に消費され、乳酸は運動などの激しい身体活動中に消費される。脂肪分が高く、炭水化物分が低いケトジェニックダイエットは、１９２０年代から、薬物抵抗性てんかんを有するてんかん患者のための、それらの発作を制御し、よって低減する方法として使用されている（Ｇｅｙｅｌｉｎ，Ｍｅｄ．Ｒｅｃ．９９：１０３７−１０３９，１９２１、Ｐｅｔｅｒｍａｎ，Ａｍ．Ｊ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ．２８：２８−３３，１９２４、およびＮｅａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．Ｖｏｌ．７（６）：５００−５０６，２００８）。これはてんかんが療法としてＬＤＨＡ阻害剤から恩恵を受け得る代謝疾患であることを示す。
【０１４１】
アストロサイト、脳における星状グリア細胞は、グルコースを使用し、これを乳酸に変換し、これを次いでニューロンにおいてピルビン酸に変換し、これはアストロサイト−ニューロン乳酸シャッフルと呼ばれる。乳酸は、てんかん患者が発作を起こしているとき、神経興奮中のエネルギー源としてニューロンによって高度に消費される（Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  １３２：２８３９−２８４９，２００９）。ニューロンにおいて産生される有機化合物であるピルビン酸は、神経細胞を脱分極することによっててんかん活性を促進することが示された（Ｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４７，６２２８：１３６２−１３６７，２０１５）。ピルビン酸および乳酸は、酵素ＬＤＨによって互いに変換することができ、よってこれによって調節される。ピルビン酸の構造類似体およびＬＤＨＡの既知の阻害剤であるシュウ酸の半アミドの塩、オキサメートは、側頭葉てんかんを有するマウスの海馬に直接注射され、それらの発作を抑制することが見出された（Ｓａｄａ  ｅｔ  ａｌ．、上記）。ＬＤＨの阻害は、乳酸の脱分極効果を排除し、また神経細胞が過分極となり、それらがより興奮性でなく、より安定性であり、よっててんかん活性の傾向がなかったことを意味する。これらの観察はまとめると、ＬＤＨＡの阻害剤がケトジェニックダイエットを模倣し、てんかんのための可能な抗痙攣薬としても役立ち得ることを示す。
【０１４２】
癌細胞などの高度増殖性細胞は、高エネルギー需要を有し、ＤＮＡ、タンパク質、および脂質などの高分子を構築するための生合成前駆体の一定の供給を必要とする。この需要を満たすために、感染または炎症中、損傷が発生した場合に免疫および炎症細胞において同様に観察される効果である、グルコース取り込みが増加される。炎症中、Ｔ細胞は、活性化され、よってそれらの代謝を、ミトコンドリア機能とは関係なく、乳酸の増加した産生を含む、好気性解糖のあまり効率的ではないがより高速のプロセスを使用するように切り替える（ＭａｃＩｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：２５９−２８３，２０１３、Ｐａｌｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，６：１，２０１５）。喘息および関節炎などの自己免疫疾患を有するマウスを用いる実験は、ジクロロアセテートなどの解糖阻害剤がそれらの炎症を軽減したことを示した（Ｂｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．１１，Ｒ１３２，２００９）。クミンおよびパネポキシドンなどの抗炎症特性を有することが知られる自然発生化合物も存在し、ＬＤＨＡを阻害することも示された（Ｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏｓ  ＯＮＥ  ９，ｅ９９５８３，２０１４、Ａｒｏｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ６：６６２−６７８，２０１５）。
【０１４３】
本明細書に記載されるＬＤＨＡ阻害剤は、細胞代謝を好気性解糖から酸化的リン酸化へと戻すことができ、したがって、これらの状態が増加した解糖およびＬＤＨ活性によって特徴付けられるので、関節リウマチなどの炎症障害、多発性硬化症、および喘息などのアレルギー性状態のための治療剤としての使用にも適している。
【０１４４】
治療的または予防的処置における使用について、本発明の化合物は、典型的には、薬学的製剤として製剤化されるであろう。さらなる態様では、本発明はよって、本発明に従った化合物を、１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と共に含む、薬学的組成物を提供する。
【０１４５】
治療的使用に許容される担体、賦形剤、および希釈剤は、当該技術分野で周知であり、意図する投与経路および標準的な薬学的実務に関して選択することができる。例としては、結合剤、潤滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤、保存剤、湿潤剤、乳化剤、界面活性剤、甘味剤、着色剤、香味剤、抗酸化剤、着臭剤、緩衝剤、安定化剤、および／または塩が挙げられる。
【０１４６】
本発明の化合物は、当該技術分野で周知の技法に従って１つ以上の従来の担体および／または賦形剤と製剤化され得る。典型的には、組成物は、例えば、経皮、皮下、腹腔内、または静脈内注射による、経口または非経口投与に適合されるであろう。
【０１４７】
例えば、これらは、従来の賦形剤、例えば、溶媒、希釈剤、結合剤、甘味剤、芳香剤、ｐＨ調整剤、粘度調整剤、抗酸化剤などを用いて、従来の経口投与形態、例えば、錠剤、コーティング錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤、分散剤、懸濁剤、シロップ剤、乳剤などに製剤化され得る。好適な賦形剤は、例えば、トウモロコシデンプン、ラクトース、グルコース、微結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、エタノール、グリセロール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、セチルステアリンアルコール、カルボキシメチルセルロース、もしくは飽和脂肪などの脂肪性物質、またはそれらの好適な混合物などを含み得る。
【０１４８】
非経口投与が使用される場合、これは、例えば、静脈内、皮下、または筋肉内注射によるものであり得る。この目的のために、活性剤を含有する滅菌液剤、例えば、水中油型乳剤が使用され得る。水が存在する場合、適切な緩衝系（例えば、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、またはホウ酸ナトリウム）は、貯蔵条件下でのｐＨドリフトを防止するために添加され得る。
【０１４９】
経口投与可能な組成物、例えば、錠剤、コーティング錠剤、カプセル剤、シロップ剤などの使用が特に好ましい。
【０１５０】
製剤は、溶解および／または混合手順などの従来の技法を用いて調製され得る。
【０１５１】
本明細書に記載される化合物の所望の活性を達成するために必要な投与量は、選択される化合物、その投与方法および頻度、処置が治療的か予防的か、ならびに疾患または状態の性質および重症度などのような様々な因子に依存するであろう。典型的には、医師が、個別の対象に最も適した実際の投与量を決定するであろう。任意の特定の患者のための投与量の具体的な用量レベルおよび頻度は、様々であり得、使用される具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用時間、患者の年齢、投与の方法および時間、ならびに特定の状態の重症度などの因子に依存するであろう。化合物および／または薬学的組成物は、１日あたり１〜１０回、例えば、１日あたり１回または２回のレジメンに従って投与され得る。ヒト患者への経口および非経口投与について、薬剤の１日投与量レベルは、単回または分割用量であり得る。
【０１５２】
本明細書に記載される化合物の好適な１日投与量は、０．１ｍｇ〜１ｇの化合物、１ｍｇ〜５００ｍｇの化合物、１ｍｇ〜３００ｍｇの化合物、５ｍｇ〜１００ｍｇの化合物、または１０ｍｇ〜５０ｍｇの化合物の範囲内であると予想される。「１日投与量」とは、２４時間あたりの投与量を意味する。
【０１５３】
本発明の化合物の薬理学的特性は、機能活性についての標準的なアッセイを用いて分析することができる。本発明の化合物の試験のための詳細なプロトコルを、実施例において提供する。
【実施例】
【０１５４】
本発明はここで、以下の非限定的な実施例によって、添付の図面を参照しながら、より詳細に記載される。
【０１５５】
実施例に記載される化学反応は、例えば、当該技術分野で知られている他の試薬を使用することによって、反応条件を変更することによって、および／または任意の好適な保護基を選択することなどによって、本発明に従った他のＬＤＨＡ阻害剤を調製するように容易に適合され得る。
【０１５６】
市販されている全ての試薬および溶媒は、さらなる精製なしに使用した。ＮＭＲ（１Ｈ、１３Ｃ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＩＩ−４００ＭＨｚ、ＡＶＩＩＩ−４００ＭＨｚ、またはＤＰＸ−３００ＭＨｚ分光計で記録した。結合定数（Ｊ）は、ヘルツ（Ｈｚ）で報告され、化学シフトは、ＣＤＣｌ３（１Ｈについて７．２６ｐｐｍおよび１３Ｃについて７７．１６ｐｐｍ）、メタノール−ｄ４（１Ｈについて３．３１ｐｐｍおよび１３Ｃについて４９．１５ｐｐｍ）、およびＤＭＳＯ−ｄ６（１Ｈについて２．５０ｐｐｍおよび１３Ｃについて３９．５２ｐｐｍ）に対する百万分率（ｐｐｍ）で報告される。全ての収率は、未修正である。
【０１５７】
略語：
ＤＣＭ：ジクロロメタン、ｈｒ：時間、ＭｅＯＨ：メタノール、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、
ｅ．ｅ．：エナンチオマー過剰率、Ｒｔ：保持時間。
【０１５８】
出発材料の調製：
全てのピペリジン−ジオン出発材料を、ＷＯ２０１５／１４０１３３に記載された手順、またはその好適に修正されたバージョンを用いて調製した。
【０１５９】
Ａ．６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製：
【化２５】
2020520388.tif 000027
【０１６０】
ステップＡ：Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１４．６ｇ、０．１５ｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（５７．０ｇ、０．１５ｍｏｌ）、およびジイソプロピルエチルアミン（４７．８ｇ、０．３７ｍｏｌ）を、ＤＣＭ（３７０ｍＬ）中の６−ブロモピコリン酸（２５．３ｇ、０．１２５ｍｏｌ）のスラリーに添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を、水性ＨＣｌ  １Ｍ（２ｘ２００ｍＬ）で洗浄し、濾過して任意の白色の固体を除去した。減圧下での濃縮後、粗生成物をクーゲルロール蒸留およびシリカクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル：１０〜２５％）によって精製して、６−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミドを７４％収率で得た。
【０１６１】
ステップＢ：ｎ−ブチルリチウム（４８ｍＬ、０．１２ｍｏｌ）を、ジイソプロピルエーテル（２８０ｍＬ）中の３−ブロモチオフェン（１９．６ｇ、０．１２ｍｏｌ）の溶液に−７８℃でゆっくり添加した。−７８℃で３０分間撹拌後、ジイソプロピルエーテル（３０ｍＬ）中の６−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミド（２２．５ｇ、９２ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、−７８°Ｃで２時間撹拌した。反応混合物を水性飽和ＮＨ４Ｃｌ（８５ｍＬ）でクエンチし、次いで周囲温度まで加温した。溶液を酢酸エチル（１１０ｍＬ）で希釈し、水（３ｘ１００ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、（６−ブロモピリジン−２−イル）（チオフェン−３−イル）メタノンを５６％収率で得た。
【０１６２】
ステップＣ：（６−ブロモピリジン−２−イル）（チオフェン−３−イル）メタノン（１３．８ｇ、５１．５ｍｍｏｌ）およびチタンエトキシド（３１．４ｍＬ、１５０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（１２．２ｇ、１００ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を還流下で２０時間撹拌した。溶液を周囲温度まで冷却させ、氷水に注ぎ、濾過し、酢酸エチル（５ｘ１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を酢酸エチル（２ｘ５０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘキサン／酢酸エチル：１０〜２５％）によって精製して、Ｎ−（（６−ブロモピリジン−２−イル）（チオフェン−３−イル）メチレン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドを８８％収率で得た。
【０１６３】
ステップＤ：ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のメチル３−オキソブタノエート（１０．５ｇ、９０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のＮａＨ（３．６ｇ、９０ｍｍｏｌ）の懸濁液に０℃で添加した。ｎ−ブチルリチウム（３６ｍＬ、９０ｍｍｏｌ）を混合物にゆっくり添加し、反応物を０℃で３０分間撹拌した。ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のＮ−（（６−ブロモピリジン−２−イル）（チオフェン−３−イル）メチレン）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（１６．４ｇ、４５ｍｍｏｌ）を混合物に添加し、０℃でさらに２時間撹拌した。混合物を、一晩室温まで加温し、０℃まで冷却させた。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（８５ｍＬ）で希釈した。有機相を水（２ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、メチル５−（６−ブロモピリジン−２−イル）−５−（（ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエートを得た。
【０１６４】
ステップＥ：ＴＭＳＣｌ（１９．１ｇ、０．１８ｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）にゆっくり添加し、混合物をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中のメチル５−（６−ブロモピリジン−２−イル）−５−（（ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエート（４５ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。混合物を室温で１時間撹拌し、次いで０℃まで冷却し、水性ＮａＯＨ  ２Ｍ（８０ｍＬ）を用いてｐＨ７までゆっくり調整した。溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を酢酸エチル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、メチル５−アミノ−５−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエートを得た。
【０１６５】
ステップＦ：炭酸カリウム（２０．７ｇ、１５０ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中のメチル５−アミノ−５−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエート（４５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を還流下で２時間および室温で一晩撹拌した。メタノールを減圧下で除去し、粗生成物を水（１００ｍＬ）で溶解し、酢酸エチル（２ｘ４０ｍＬ）で洗浄した。水相を、水性ＨＣｌ  ３Ｎ（９５ｍＬ）を用いてｐＨ４まで酸性化した。水相を酢酸エチル（５ｘ４０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、６−（６−ブロモ−２−ピリジニル）−６−（３−チエニル）ピペリジン−２，４−ジオンを４１％収率で３ステップかけて得た。
【０１６６】
Ｂ．ジスルフィドの調製：
方法Ａ：フェニルスルフィド（６．２ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した。ＣＦ３ＣＨ２ＯＨ（３ｍＬ）およびＨ２Ｏ２溶液（０．６６ｍＬ、６．８ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。反応混合物を激しく撹拌しながら室温で一晩撹拌した。白色の沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥させ、所望のジスルフィドを送達した。
【０１６７】
方法Ｂ：フェニルスルフィド（１０ｍｍｏｌ、１当量）をＣＨＣｌ３（５０ｍＬ）に溶解し、１，３−ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（１．４３ｇ、５ｍｍｏｌ、０．５当量）を添加した。室温で１時間後、チオ硫酸ナトリウムの飽和水性溶液を添加した（１０ｍＬ）。相を分離し、水相をＤＣＭ（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル：９５／５）によって所望のジスルフィドを送達した。
【０１６８】
１，２−ビス（２−クロロフェニル）ジスルファンの調製：
【化２６】
2020520388.tif 000028
【０１６９】
方法Ａ：収率＝９１％．１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ）：δ＝７．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｔｄ，Ｊ＝８．０，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔｄ，Ｊ＝８．０，１．６  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１７０】
１，２−ビス（２，５−ジクロロフェニル）ジスルファンの調製：
【化２７】
2020520388.tif 000029
【０１７１】
方法Ｂ：収率＝７２％．１Ｈ  ＮＭＲ：δ＝７．５２（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１７２】
１，２−ビス（２−クロロ−４−フルオロフェニル）ジスルファンの調製：
【化２８】
2020520388.tif 000030
【０１７３】
方法Ａ：収率＝７０％．１Ｈ  ＮＭＲ：δ＝７．５３（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，７．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，７．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．６，１０．８，３．６  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１７４】
１，２−ビス（２，４−ジクロロフェニル）ジスルファンの調製：
【化２９】
2020520388.tif 000031
【０１７５】
方法Ａ：収率＝９２％．１Ｈ  ＮＭＲ：δ＝７．４６（ｄ，Ｊ＝１１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，２．８  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１７６】
１，２−ビス（２，３−ジクロロフェニル）ジスルファンの調製：
【化３０】
2020520388.tif 000032
【０１７７】
方法Ｂ：収率＝７３％．１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ）：δ＝７．４２（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄｄ，Ｊ＝１０．８，２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｔ，Ｊ＝１０．８  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１７８】
Ｃ．６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３１】
2020520388.tif 000033
【０１７９】
（４−ブロモフェニル）（チオフェン−３−イル）メタノンを、ＷＯ２０１５／１４０１３３に記載される手順に従って調製した。
【０１８０】
ステップＡ：トルエン（１１０ｍＬ）中の（４−ブロモフェニル）（チオフェン−３−イル）メタノン（３．００ｇ、１１．２ｍｍｏｌ、１当量）、モルホリン（１．６０ｍＬ、１８．０ｍｍｏｌ、１．５当量）、キサントホス（３９３ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ、０．０６当量）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３１１ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、０．０３当量）、およびＫ３ＰＯ４（４．３０ｇ、２０．０ｍｍｏｌ、１．８当量）を還流で１８時間撹拌した。混合物を冷却し、セライト上で濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／酢酸エチル：８／２〜２／１〜１／１）によって精製して、［４−（モルホリン−４−イル）フェニル］（チオフェン−３−イル）メタノン（２．９０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を９５％収率で得た。
【０１８１】
ステップＢ：ＴＨＦ（８０ｍＬ）中の［４−（モルホリン−４−イル）フェニル］（チオフェン−３−イル）メタノン（５．４３ｇ、１９．９ｍｍｏｌ、１当量）、ｔ−ブチルスルフィンアミド（７．２６ｇ、６０．０ｍｍｏｌ、３当量）、およびＴｉ（ＯＥｔ）４（２０．９ｍＬ、１００ｍｍｏｌ、５当量）を還流下で６６時間撹拌した。混合物を氷上に注ぎ、酢酸エチル（２ｘ２０ｍＬ）で洗浄した。水相を酢酸エチル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／酢酸エチル：８／２〜７／３〜１／１）によって精製して、２−メチル−Ｎ−［−［４−（モルホリン−４−イル）フェニル］（チオフェン−３−イル）メチリデン］プロパン−２−スルフィンアミド（４．７４ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）を６３％収率で得た。
【０１８２】
ステップＣ：０℃のＴＨＦ（５０ｍＬ）中のＮａＨ（１．０１ｇ、２５．２ｍｍｏｌ、２当量）の懸濁液に、アセト酢酸メチル（２．９２ｇ、２５．２ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。０℃で５分後、ｎ−ブチルリチウム（１０．１ｍＬ、２５．２ｍｍｏｌ、２当量）を添加し、反応混合物を３０分間０℃で撹拌した。ＴＨＦ（１３ｍＬ）中の２−メチル−Ｎ−［［４−（モルホリン−４−イル）フェニル］（チオフェン−３−イル）メチリデン］プロパン−２−スルフィンアミド（４．７４ｇ、１２．６ｍｍｏｌ、１当量）を添加し、撹拌を０℃で１．５時間継続した。ＴＬＣは、残った出発材料を示した。したがって、試薬の別の部分を、アセト酢酸メチル（１．３ｍＬ）、ＮａＨ（５００ｍｇ）、およびｎ−ブチルリチウム（５．０ｍＬ）で調製し、反応混合物に添加した。０℃で１．５時間後、反応を飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（２０ｍＬ）の添加によって停止した。相を分離し、水相を酢酸エチル（２ｘ５０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、飽和水性ＮａＨＣＯ３（４０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／酢酸エチル：３／１〜２／１〜１／１〜１／３〜酢酸エチル）によって精製して、メチル５−（（ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−５−（４−モルホリノフェニル）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエート（３．４０ｇ、６．９０ｍｍｏｌ）を５５％収率で得た。
【０１８３】
ステップＤ：メタノール（６９ｍＬ）中のメチル５−（（ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）アミノ）−５−（４−モルホリノフェニル）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエート（３．４０ｇ、６．９０ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＭＳＣｌ（２．６２ｍＬ、２０．７ｍｍｏｌ、３当量）を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応を水性ＮａＯＨ  ２Ｍ（１１ｍＬ）の添加によって停止し、メタノールを減圧下で除去した。水相を酢酸エチル（３ｘ５０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物（２．６５ｇ）を得、これを次のステップで直接使用した。
【０１８４】
ステップＥ：メタノール（３４ｍＬ）中のメチル５−アミノ−５−（４−モルホリノフェニル）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエート（２．６５ｇ、６．８２ｍｍｏｌ、１当量）およびＫ２ＣＯ３（２．８３ｇ、２０．５ｍｍｏｌ、３当量）を還流で２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水性ＨＣｌ  １Ｍ（３０ｍＬ）で希釈した。水相を酢酸エチル（３ｘ５０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／酢酸エチル：４／１〜２／１〜１／１〜１／３〜酢酸エチル〜２％ＭｅＯＨ）によって精製して、６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（７２６ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を３０％収率で２ステップかけて得た。
【０１８５】
最終化合物の調製：
実施例１  ６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，４−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３２】
2020520388.tif 000034
【０１８６】
ステップＡ：ＭｅＯＨ（１４ｍＬ）中の６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（５００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、１，２−ビス（２，４−ジクロロフェニル）ジスルファン（３０３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ、０．６当量）および炭酸カリウム（５９３ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ、３当量）を添加した。反応物を還流下で２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（７ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：７０／３０〜３０／７０）によって精製して、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，４−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（４８７ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を６５％収率で得た。
【０１８７】
ステップＢ：０℃のＴＨＦ（４ｍＬ）中のＮａＨ（７６ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ、５当量）の懸濁液に、シクロペンタンメタノール（２０４μＬ、１．９ｍｍｏｌ、５当量）を添加した。反応物を０℃で３０分間撹拌し、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，４−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応物を還流下で一晩撹拌し、水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（５ｍＬ）の添加によってクエンチした。水相を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：７５／２５）によって精製して、６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，４−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（１１５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を５５％収率で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．７５（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄｄ，Ｊ＝９．２，３．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝２．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１．２  Ｈｚ），７．１９−７．１７（ｍ，２Ｈ），６．８０−６．７６（ｍ，２Ｈ），５．９４（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．２９−４．２１（ｍ，２Ｈ），３．９１（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），２．３５−２．２９（ｍ，１Ｈ），１．８５−１．７７（ｍ，２Ｈ），１．６８−１．５４（ｍ，４Ｈ），１．４１−１．３１（ｍ，２Ｈ）．
【０１８８】
実施例２−６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３３】
2020520388.tif 000035
【０１８９】
ＭｅＯＨ（１４ｍＬ）中の６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（５００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、１，２−ビス（２−クロロ−４−フルオロフェニル）ジスルファン（５５０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ、１．２当量）および炭酸カリウム（５９３ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ、３当量）を添加した。反応物を還流下で２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（７ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：７０／３０〜３０／７０）によって精製して、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（４６６ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を６４％収率で得た。
【０１９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ）：δ＝１１．７９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．５８（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄｄ，Ｊ＝８．８，８．０  Ｈｚ，２Ｈ），７．５６（ｄｄ，Ｊ＝５．２，３．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝８．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．７２（ｔｄ，Ｊ＝８．８，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），５．９５（ｄｄ，Ｊ＝８．８，６．０  Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１９１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，１００  ＭＨｚ）：δ＝１６６．１，１６４．４，１５８．９（ｄ，Ｊ＝２４２  Ｈｚ），１４４．４，１４０．７，１４０．１，１３３．２（ｄ，Ｊ＝４  Ｈｚ），１２９．３（ｄ，Ｊ＝１０  Ｈｚ），１２７．０，１２７．０，１２６．４，１２５．８（ｄ，Ｊ＝７．７  Ｈｚ），１２２．２，１２０．６，１１６．５（ｄ，Ｊ＝２５  Ｈｚ），１１４．２（Ｊ＝２１  Ｈｚ），６０．５．
【０１９２】
実施例３−３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３４】
2020520388.tif 000036
【０１９３】
シクロペンタンメタノール（２６３μＬ、２．５ｍｍｏｌ、５当量）を、０℃のＴＨＦ（５ｍＬ）中のＮａＨ（９８ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ、５当量）の懸濁液に添加した。反応物を０℃で３０分間撹拌し、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（２５０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応物を次いで還流下で一晩撹拌し、水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（５ｍＬ）の添加によってクエンチした。水相を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：７５／２５）によって精製して、３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（１９２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を７４％収率で得た。
【０１９４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，７．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．８，７．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄｄ，Ｊ＝２．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１５−７．１１（ｍ，２Ｈ），７．０９（ｄｄ，Ｊ＝４．８，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．５４（ｔｄ，Ｊ＝８．４，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），５．９９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，６．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．２７−４．１８（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），２．３６−２．２８（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．７４（ｍ，２Ｈ），１．６６−１．５３（ｍ，４Ｈ），１．３９−１．２９（ｍ，２Ｈ）．
【０１９５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，１００  ＭＨｚ）：δ＝１６６．９，１６１．６，１５８．６（ｄ，Ｊ＝２４５  Ｈｚ），１５７．２，１４３．５，１３８．２，１３０．７（ｄ，Ｊ＝４  Ｈｚ），１２４．８（ｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ），１２４．７，１２４．５，１２０．１，１１４．７（ｄ，Ｊ＝２５  Ｈｚ），１１２．３（ｄ，Ｊ＝２１  Ｈｚ），１１１．８，１０８．０，１００．０，６８．３，５９．３，３９．１，３７．３，２７．５，２３．４．
【０１９６】
実施例４−３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（６−エトキシピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３５】
2020520388.tif 000037
【０１９７】
この化合物を、エタノールおよび６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンを用いて実施例３における手順に従って９０％収率で調製した。
【０１９８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，３００  ＭＨｚ）：δ＝７．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，７．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝５．１，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．７  Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄｄ，Ｊ＝８．１，０．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｔｄ，Ｊ＝８．１，２．７  Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．７  Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｑ，Ｊ＝６．９  Ｈｚ，２Ｈ），３．９０（ｄ，Ｊ＝１６．５  Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄ，Ｊ＝１６．５  Ｈｚ，１Ｈ），１．３４（ｔ，Ｊ＝６．９  Ｈｚ，３Ｈ）．
【０１９９】
実施例５−６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，５−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３６】
2020520388.tif 000038
【０２００】
ステップＡ：１，２−ビス（２，５−ジクロロフェニル）ジスルファン（４８０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、０．６当量）および炭酸カリウム（９３０ｍｇ、６．８ｍｍｏｌ、３当量）を、ＭｅＯＨ（２３ｍＬ）中の６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（７９０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に添加した。反応物を還流下で２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（７ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：７０／３０〜３０／７０）によって精製して、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，５−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（１７９ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を１５％収率で得た。
【０２０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．７５（ｔ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．６１−７．５６（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．２４−７．２２（ｍ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝１．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．２４（ｓ，１Ｈ），３．９８（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２０２】
ステップＢ：シクロペンタンメタノール（１７２μＬ、１．６ｍｍｏｌ、５当量）を、０℃のＴＨＦ（３．５ｍＬ）中のＮａＨ（６４ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ、５当量）の懸濁液に添加した。反応物を０℃で３０分間撹拌し、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，５−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（１７０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応物を次いで還流下で一晩撹拌し、水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（５ｍＬ）の添加によってクエンチした。水相を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：７５／２５）によって精製して、
６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，５−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（１０４ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を５９％収率で得た。
【０２０３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．６９（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄｄ，Ｊ＝４．８，３．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．２４−７．２１（ｍ，２Ｈ），７．１２−７．０９（ｍ，２Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．２８−４．１８（ｍ，２Ｈ），９．２５（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），２．３６−２．２８（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．７４（ｍ，２Ｈ），１．６５−１．５２（ｍ，４Ｈ），１．４０−１．２９（ｍ，２Ｈ）．
【０２０４】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，１００  ＭＨｚ）：δ＝１６６．５，１６１．６，１５８．０，１４３．７，１３８．３，１３７．５，１３１．１，１２８．５，１２７．０，１２４．７，１２４．３，１２３．５，１２３．０，１１９．９，１１１．５，６８．２，５９．１，３９．１，３７．４，２７．６，２３．５．
【０２０５】
実施例６−６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，３−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３７】
2020520388.tif 000039
【０２０６】
１，２−ビス（２，３−ジクロロフェニル）ジスルファン（４６３ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ、１．２当量）および炭酸カリウム（４５６ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ、３当量）を、ＭｅＯＨ（１１ｍＬ）中の６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に添加した。反応物を還流下で２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（７ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：７０／３０〜３０／７０）によって精製して、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，３−クロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（４４７ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を７７％収率で得た。
【０２０７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．７４（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｔ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄｄ，Ｊ＝５．２，３．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝２．８，１．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄｄ，Ｊ＝２．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），５．９９（ｄ，Ｊ＝８．０，１Ｈ），３．８９（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２０８】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，１００  ＭＨｚ）：δ＝１７６．６，１６９．４，１６４．９，１４５．７，１４２．１，１４１．３，１４１．０，１３４．０，１２９．２，１２８．６，１２８．４，１２８．０，１２７．３，１２７．０，１２４．６，１２３．５，１２１．６，９５．５，６２．１，４１．９，１４．５．
【０２０９】
実施例７−６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，３−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３８】
2020520388.tif 000040
【０２１０】
シクロペンタンメタノール（１５１μＬ、１．４ｍｍｏｌ、５当量）を、０℃のＴＨＦ（３．５ｍＬ）中のＮａＨ（５６ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、５当量）の懸濁液に添加した。反応物を０℃で３０分間撹拌し、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−［（２，３−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応物を次いで還流下で一晩撹拌し、水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（５ｍＬ）の添加によってクエンチした。水相を酢酸エチル（３ｘ１５ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：７５／２５〜５０／５０）によって精製して、６−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−３−［（２，３−ジクロロフェニル）スルファニル］−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（７３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を４８％収率で得た。
【０２１１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．７１（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．４５−７．４３（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．２７（ｍ，１Ｈ），７．１５−７．１１（ｍ，３Ｈ），６．７６−６．６９（ｍ，２Ｈ），５．９０（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．２７−４．１８（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），２．３５−２．２７（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．７４（ｍ，２Ｈ），１．６３−１．５２（ｍ，４Ｈ），１．３７−１．３０（ｍ，２Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，１００  ＭＨｚ）：δ＝１６９．８，１６４．５，１６１．１，１４６．４，１４１．２，１３３．９，１２９．１，１２８．４，１２７．６，１２７．４，１２６．９，１２４．６，１２３．０，１１４．８，１１０．９，７１．２，６２．２，４２．１，４０．２，３０．５，２６．３．
【０２１２】
実施例８−３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化３９】
2020520388.tif 000041
【０２１３】
この化合物を、６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよび１，２−ビス（２−クロロ−４−フルオロフェニル）ジスルファンを用いて、５５％収率で、実施例２に従って調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．５６（ｄｄ，Ｊ＝５．２，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，２Ｈ），７．３２−７．３１（ｍ，１Ｈ），７．２１−７．１６（ｍ，２Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，２Ｈ），７．６０（ｔｄ，Ｊ＝８．４，２．４  Ｈｚ，１Ｈ），５．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６  Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｄｄ，Ｊ＝４．８，４．８  Ｈｚ，４Ｈ），３．２８（ｓ，２Ｈ），３．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．２，４．４  Ｈｚ，４Ｈ）．
【０２１４】
実施例９−３−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化４０】
2020520388.tif 000042
【０２１５】
この化合物を、６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよび１，２−ビス（２，３−ジクロロフェニル）ジスルファンを用いて、５５％収率で、実施例２に従って調製した。この例では、出発材料の調製におけるステップＢは、ラセミ体の代わりに（Ｓ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミドを用いて実施した。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，３００  ＭＨｚ）：δ＝７．５１（ｄｄ，Ｊ＝５．１，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．０  Ｈｚ，２Ｈ），７．２８−７．２７（ｍ，１Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝９．０  Ｈｚ，２Ｈ），６．７３（ｔ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），５．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），３．８７−３．８４（ｍ，４Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ），３．２１−３．１７（ｍ，４Ｈ）．
【０２１６】
実施例１０−３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化４１】
2020520388.tif 000043
【０２１７】
この化合物を、６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよび１，２−ビス（２，５−ジクロロフェニル）ジスルファンを用いて、５５％収率で、実施例２に従って調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．５０（ｄｄ，Ｊ＝５．２，３．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，２Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝４．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．０３−７．０１（ｍ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝９．２  Ｈｚ，２Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝２．８  Ｈｚ），３．８４−３．８２（ｍ，４Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），３．２０−３．１７（ｍ，４Ｈ）．
【０２１８】
実施例１０を、ラセミ体として、および加えて単一エナンチオマーとしてアッセイで試験した。エタノール／アセトニトリル／ジエチルアミン（９０／１０／０．１）溶媒系を用いる最終生成物のキラル分取ＨＰＬＣによって個別のエナンチオマーを得ることができた。同じ溶媒系を用いるＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＣカラム上でのＨＰＬＣによるエナンチオマーの分析は、エナンチオマーが、１００．０％（エナンチオマー１：Ｒｔ＝５．０分）および９９．４％（エナンチオマー２：Ｒｔ＝７．０分）ｅ．ｅ．で単離されたことを明らかにした。
【化４２】
2020520388.tif 000044
【０２１９】
実施例１１−５−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−２−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルエチルカーボネートの調製
【化４３】
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【０２２０】
０℃のＤＣＭ（１．５ｍＬ）中の３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（８０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ジイソプリルアミンエチルアミン（４０μＬ、０．２３ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。０℃で５分後、クロロギ酸エチル（１７μＬ、０．１８ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加し、反応物を０℃で１．５時間撹拌した。反応物をＮＨ４Ｃｌ（２ｍＬ）および水（５ｍＬ）の飽和水性溶液の添加によってクエンチし、水相を酢酸エチル（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：８０／２０〜５０／５０）によって精製して、５−［（２−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］−２−［６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル］−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルエチルカーボネート（５５ｍｇ、９１μｍｏｌ）を６１％収率で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．７０（ｔ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．４５−７．４２（ｍ，１Ｈ），７．２６−７．２５（ｍ，１Ｈ），７．１４−７．１１（ｍ，２Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｔｄ，Ｊ＝８．０，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，５．６  Ｈｚ，１Ｈ），４．２６−４．２１（ｍ，３Ｈ），４．１７−４．１２（ｍ，１Ｈ），３．９４（ｄ，Ｊ＝１７．２  Ｈｚ，１Ｈ），３．５８（ｄ，Ｊ＝１７．２  Ｈｚ，１Ｈ），２．３６−２．２９（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．６６−１．５４（ｍ，４Ｈ），１．３８−１．２７（ｍ，２Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，３Ｈ）．
【０２２１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，１００  ＭＨｚ）：δ＝１６６．１，１６４．５（ｄ，Ｊ＝２２１  Ｈｚ），１６４．４，１６０．６，１５１．８，１４５．７，１４１．１，１３４．５（ｄ，Ｊ＝１０．６  Ｈｚ），１３１．５（ｄ，Ｊ＝８．６  Ｈｚ），１３１．２（ｄ，Ｊ＝３．６  Ｈｚ），１２７．７，１２７．４，１２３．５，１１７．８（ｄ，Ｊ＝２５．５  Ｈｚ），１１６．１，１１５．５（ｄ，Ｊ＝２１．７  Ｈｚ），１１５．１，１１１．１，７１．３，６７．０，６２．８，４１．３，４０．２，３０．４９，３０．４３，２６．３６，２６．３２，１４．３
【０２２２】
実施例１２−６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルメチルカーボネートの調製
【化４４】
2020520388.tif 000046
【０２２３】
この化合物を、クロロギ酸メチルおよび６−（６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル）−３−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンを用いて、５１％収率で、実施例１１に従って調製した。
【０２２４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．７３（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．４７−７．４４（ｍ，１Ｈ），７．３０−７．２７（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝５．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．８０−６．７６（ｍ，２Ｈ），６．０３（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．２６−４．１４（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｄ，Ｊ＝１６．８  Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．６４（ｄ，Ｊ＝１６．８  Ｈｚ，１Ｈ），２．３６−２．２８（ｍ，１Ｈ），１．８２−１．７４（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．５２（ｍ，４Ｈ），１．３９−１．３０（ｍ，２Ｈ）．
【０２２５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，１０１  ＭＨｚ）：δ＝１６７．０，１６５．９，１６４．５，１６０．６，１５２．４，１４９．７，１４５．７，１４１．１，１３８．９，１３４．２，１３０．４，１２８．６，１２８．２，１２７．７，１２７．５，１２７．０，１２３．６，１１５．４，１１５．２，１１１．２，７１．３，６２．９，５６．８，４０．２，３０．４６，３０．４４，２６．３．
【０２２６】
実施例１３−５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６’−（シクロペンチルメトキシ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルアセテートの調製
【化４５】
2020520388.tif 000047
【０２２７】
この化合物を、塩化アセチルおよび３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンを用いて、４２％収率で、実施例１１に従って調製した。
【０２２８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．６６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．２，３．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．２４−７．２３（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｄｄ，Ｊ＝５．２，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．６２−６．５７（ｍ，２Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ），６．０９（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．６  Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−４．０５（ｍ，４Ｈ），３．２５（ｄ，Ｊ＝１７．２  Ｈｚ，１Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｑ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），１．８５−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．５６（ｍ，４Ｈ），１．４０−１．３２（ｍ，２Ｈ）．
【０２２９】
実施例１４−５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルプロピルカーボネートの調製
【化４６】
2020520388.tif 000048
【０２３０】
この化合物を、３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸ｎ−プロピルを用いて、６８％収率で、実施例１１に従って調製した。
【０２３１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．５２（ｄｄ，Ｊ＝５．２，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．３５−７．３３（ｍ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，２Ｈ），７．１６−７．１３（ｍ，２Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，２Ｈ），６．６４（ｔｄ，Ｊ＝８．４，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．８，６．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｔ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ，２Ｈ），３．８７−３．８５（ｍ，４Ｈ），３．６０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．２１−３．１８（ｍ，４Ｈ），１．７１（ｓｅｘｔ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，２Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，３Ｈ）．
【０２３２】
実施例１５−５−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルエチルカーボネートの調製
【化４７】
2020520388.tif 000049
【０２３３】
この化合物を、３−（（２，３−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸エチルを用いて、６０％収率で、実施例１１に従って調製した。
【０２３４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，３００  ＭＨｚ）：δ＝７．５１（ｄｄ，Ｊ＝５．１，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝９．０  Ｈｚ，２Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．６，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝９．０  Ｈｚ，２Ｈ），６．７８（ｔ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｍ，１Ｈ），４．２４（ｑ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，２Ｈ），３．８６−３．８１（ｍ，４Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），３．１９−３．１６（ｍ，４Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，４Ｈ）．
【０２３５】
実施例１６−６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イルデシルカーボネートの調製
【化４８】
2020520388.tif 000050
【０２３６】
この化合物を、６−（６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル）−３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびデシルカルボノクロリデートを用いて、５０％収率で、実施例１１に従って調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，４００  ＭＨｚ）：δ＝７．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．０，７．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝４．８，２．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．４０−７．３８（ｍ，２Ｈ），７．２０−７．１６（ｍ，３Ｈ），６．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．０，０．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｍ，２Ｈ），４．２６−４．１９（ｍ，４Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝１７．２  Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝１７．２  Ｈｚ，１Ｈ），２．３８（ｑ，Ｊ＝７．６  Ｈｚ，１Ｈ），１．８６−１．７９（ｍ，２Ｈ），１．７０−１．５６（ｍ，６  Ｈ），１．４２−１．３２（ｍ，１６Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，３Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，１００  ＭＨｚ）：δ＝１６６．５，１６４．５，１６４．１，１６０．７，１５１．６，１４６．０，１４１．６，１３８．１，１３３．９，１３１．９，１３０．７，１２８．１３，１２７．９８，１２７．９６，１２７．６，１２３．４，１１５．０，１１４．６，１１１．４，１０１．２，７１．１１，７１．０９，６２．６，３２．９，３０．５２，３０．４９，３０．４８，３０．３２，３０．１５，２９．４，２６．６，２６．３７，２６．３３，２３．７，１４．８．
【０２３７】
実施例１７−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネートの調製
【化４９】
2020520388.tif 000051
【０２３８】
この化合物を、３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸２−（メトキシ）エチルを用いて、６０％収率で、実施例１１に従って調製した。
【０２３９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，３００  ＭＨｚ）：δ＝７．４６（ｄｄ，Ｊ＝５．１，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３１−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．２８−７．２５（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．７，２．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝９．０  Ｈｚ，２Ｈ），６．４２（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｓ，１Ｈ），４．３４−４．３１（ｍ，２Ｈ），３．８４−３．８１（ｍ，４Ｈ），３．６３−３．５９（ｍ，４Ｈ），３．３４（ｓ，３Ｈ），３．１８−３．１５（ｍ，４Ｈ）．
【０２４０】
実施例１７の化合物を、ラセミ体として、および加えて単一エナンチオマーとしてアッセイで試験した。エタノール／アセトニトリル／ジエチルアミン（９０／１０／０．１）溶媒系を用いる出発材料のキラル分取ＨＰＬＣによって個別のエナンチオマーを得ることができた。同じ溶媒系を用いるＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＣカラム上での分析ＨＰＬＣによるエナンチオマーの分析は、エナンチオマーが、１００％（エナンチオマー１：Ｒｔ＝５．０分）および９９．４％（エナンチオマー２：Ｒｔ＝７．０分）ｅ．ｅ．で単離されたことを明らかにした。実施例１１における方法が次いで各エナンチオマーに対して個別に行われ得る。
【化５０】
2020520388.tif 000052
【０２４１】
実施例１８−６−（６−ブロモ−２−ピリジル）−３−（２−クロロフェニル）スルファニル−６−（３−チエニル）テトラヒドロピラン−２，４−ジオンの調製
【化５１】
2020520388.tif 000053
【０２４２】
ステップＡ：１，１’−カルボニルジイミダゾール（２１．１ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を、０℃のＤＣＭ中の５−ブロモピコリン酸（２０．２ｇ、１００ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を０℃で２時間撹拌し、トリメチルアミン（４２ｍＬ、３００ｍｍｏｌ）を添加した。撹拌を０℃で４５分間継続し、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１２．７ｇ、１３０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、一晩室温まで加温し、ＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈した。有機相を水性飽和ＮＨ４Ｃｌ（２回）、水、および水性飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、５−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミドを５８％収率で得た。
【０２４３】
ステップＢ：−７８℃のジイソプロピルエーテル（１７５ｍＬ）中の３−ブロモチオフェン（６．５ｍＬ、６９ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のｎ−ブチルリチウム（２７．６ｍＬ、６９ｍｍｏｌ）の溶液を１５分かけてゆっくり添加した。混合物を−７８℃で３０分間撹拌し、ジイソプロピルエーテル（１０ｍＬ）中の５−ブロモ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミド（１４．１ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を−７８〜−７０°Ｃで２時間撹拌した。飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（７５ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチル（３回）で抽出した。組み合わされた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル＝２０％〜３０〜５０）によって精製して、（５−ブロモピリジン−２−イル）（チオフェン−３−イル）メタノンを６６％収率で得た。
【０２４４】
ステップＣ：−７８℃のＴＨＦ（４ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（３０９μＬ、２．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のｎ−ブチルリチウム（０．８４ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。−７８℃で１０分後、ＴＨＦ（２ｍＬ）中の２−（（２−クロロフェニル）チオ）−３−オキソブタン酸メチル（２５９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、ＴＨＦ（２ｍＬ）中の（５−ブロモピリジン−２−イル）（チオフェン−３−イル）メタノン（１６１ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で１．５時間後、反応物を水性飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチし、水相を酢酸エチル（３回）で抽出した。組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル＝１０％〜２０）によって精製して、メチル５−（５−ブロモピリジン−２−イル）−２−（（２−クロロフェニル）チオ）−５−ヒドロキシ−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエートを８３％収率で得た。
【０２４５】
ステップＤ：メタノール（２．４ｍＬ）中のメチル５−（５−ブロモピリジン−２−イル）−２−（（２−クロロフェニル）チオ）−５−ヒドロキシ−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエート（２５５ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（２００ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液を、６０℃で６時間を撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水および水性ＨＣｌで希釈した。水相を酢酸エチル（３回）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル＝２０％）によって精製して、６−（６−ブロモ−２−ピリジル）−３−（２−クロロフェニル）スルファニル−６−（３−チエニル）テトラヒドロピラン−２，４−ジオンを６１％収率で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ）：δ＝８．６１（ｄｄ，Ｊ＝２．１，０．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，０．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．３３−７．２６（ｍ，２Ｈ），７．１２（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．９０−６．８４（ｍ，１Ｈ），６．２１（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄ，Ｊ＝１７．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄ，Ｊ＝１７．４  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２４６】
実施例１９−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（ピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオンの調製
【化５２】
2020520388.tif 000054
【０２４７】
ステップＡ：−７８℃のＴＨＦ（６３ｍＬ）中のピリミジン−５−カルボアルデヒド（１．０ｇ、６．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のテトラメチルエチレンジアミン（１．４ｍＬ、９．５ｍｍｏｌ）およびｎ−ブチルリチウム（２．８ｍＬ、６．９ｍｍｏｌ）を添加した。−７８℃で３０分後、チオフェン−３−カルボアルデヒド（８３０μＬ、９．５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１．５時間の期間かけて−４０℃まで加温し、−４０℃でさらに３０分間撹拌した。反応物を、水性飽和ＮＨ４Ｃｌの添加によって停止し、酢酸エチルで希釈した。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル＝３０％〜５０〜７０）によって精製して、ピリミジン−５−イル（チオフェン−３−イル）メタノノールを４１％収率で得た。
【０２４８】
ステップＢ：０℃のジクロロメタン中のピリミジン−５−イル（チオフェン−３−イル）メタノール（４８０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＭＰＯ（３．９ｍｇ、２５μｍｏｌ）、ＫＢｒ（２０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、硫酸水素テトラブチルアンモニウム（４１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、およびＮａＯＣｌ水溶液（２．４ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で１．５時間激しく撹拌し、水で希釈した。水相をジクロロメタン（２回）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル＝２０％〜３０〜５０）によって精製して、ピリミジン−５−イル（チオフェン−３−イル）メタノンを６０％収率で得た。
【０２４９】
ステップＣ：メチル２−（（２−クロロフェニル）チオ）−５−ヒドロキシ−３−オキソ−５−（ピリミジン−５−イル）−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエートを、ピリミジン−５−イル（チオフェン−３−イル）メタノンを用いて、５６％収率で、実施例１８、ステップＣに従って調製した。
【０２５０】
ステップＤ：メタノール中のメチル２−（（２−クロロフェニル）チオ）−５−ヒドロキシ−３−オキソ−５−（ピリミジン−５−イル）−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエート（２５０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３２３ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）の溶液を、還流下で７時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水および水性ＨＣｌで希釈した。水相を酢酸エチル（３回）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝０％〜１〜２％によって精製して、３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（ピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオンを３０％収率で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ）：δ＝９．１１（ｓ，１Ｈ），８．８１（ｓ，２Ｈ），７．４８−７．４７（ｍ，２Ｈ），７．２１−７．１３（ｍ，２Ｈ），６．９５−６．９０（ｍ，１Ｈ），６．８０−６．７５（ｍ，１Ｈ），５．９０（ｄ，Ｊ＝８．１  Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝１７．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４８（ｄ，Ｊ＝１７．４  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２５１】
実施例２０−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（ピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオンの調製
【化５３】
2020520388.tif 000055
【０２５２】
ステップＡ：０℃のＤＣＭ中の２−ピコリン酸（５．０ｇ、４１ｍｍｏｌ）の溶液に、１，１’−カルボニルジイミダゾール（８．６ｇ、５３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃で１．５時間撹拌し、トリメチルアミン（１７ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（５．２ｇ、５３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、一晩室温まで加温し、ＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈した。有機相を、水性ＨＣｌ  １Ｍおよび水性飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル＝３０％〜５０〜７０％）によって精製して、Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミドを８１％収率で得た。
【０２５３】
ステップＢ：ピリジン−２−イル（チオフェン−３−イル）メタノンを、Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルピコリンアミドを用いて、９１％収率で、実施例１８、ステップＢに従って調製した。
【０２５４】
ステップＣ：メチル２−（（２−クロロフェニル）チオ）−５−ヒドロキシ−３−オキソ−５−（ピリジン−２−イル）−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエートを、ピリジン−２−イル（チオフェン−３−イル）メタノンを用いて、７９％収率で、実施例１８、ステップＣに従って調製した。
【０２５５】
ステップＤ：３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（ピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオンを、６１％収率で、実施例１８、ステップＤに従って調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ）：δ＝８．４０−８．３８（ｍ，１Ｈ），７．６５−７．５７（ｍ，２Ｈ），７．２２−７．１３（ｍ，３Ｈ），７．０９−６．９５（ｍ，２Ｈ），６．７１（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．５６（ｔｄ，Ｊ＝７．８，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），５．７１（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１７．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝１７．４  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２５６】
実施例２１−２−（５−ブロモピリジン−２−イル）−５−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチルカーボネートの調製
【化５４】
2020520388.tif 000056
【０２５７】
０℃のＤＣＭ中の６−（５−ブロモピリジン−２−イル）−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオンの溶液に、ジイソプロピルアミンエチルアミンを添加した。０℃で５分後、クロロギ酸メチルを添加し、反応物を０℃で１．５時間撹拌した。反応物を水（２ｍＬ）の添加によってクエンチし、水相をＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：９０／１０〜７０／３０）によって精製して、２−（５−ブロモピリジン−２−イル）−５−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチルカーボネートを２４％収率で得た。
【０２５８】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ）：δ＝８．６２（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．７  Ｈｚ，１Ｈ），７．３７−７．３５（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．３０（ｍ，１Ｈ），７．２７−７．２４（ｍ，１Ｈ），７．１２−７．０３（ｍ，２Ｈ），６．９１−６．８５（ｍ，１Ｈ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝１８．０  Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝１８．０  Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２５９】
実施例２２−６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネートの調製
【化５５】
2020520388.tif 000057
【０２６０】
この化合物を、６−（６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル）−３−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸２−メトキシメチルを用いて、５８％収率で、実施例２１に従って調製した。
【０２６１】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ）：δ＝７．５９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，７．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄｄ，Ｊ＝５．１，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２２−７．２０（ｍ，２Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｄｄ，Ｊ＝７．２，０．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，０．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．３０（ｄ，Ｊ＝８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−４．３２（ｍ，２Ｈ），４．１７−４．１５（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝１７．１  Ｈｚ，１Ｈ），３．６４−３．６１（ｍ，２Ｈ），３．３８（ｓ，３Ｈ），３．３４（ｄ，Ｊ＝１７．１  Ｈｚ，１Ｈ），２．３６−２．２７（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．７６（ｍ，２Ｈ），１．６７−１．５３（ｍ，４Ｈ），１．３９−１．３０（ｍ，２Ｈ）．
【０２６２】
実施例２３−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオンの調製
【化５６】
2020520388.tif 000058
【０２６３】
ステップＡ：室温のＭｅＣＮ（７０ｍＬ）中のモルホリン（１．４４ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２．２８ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１時間後、５−ブロモ−２−クロロ−ピリミジン（２．９０ｇ、１５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を還流で１８時間撹拌した。反応を水（５０ｍＬ）の添加によって停止し、相を分離した。水相を酢酸エチル（２ｘ５０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、４−（５−ブロモピリミジン−２−イル）モルホリンを定量的収率で得た。
【０２６４】
ステップＢ：−７８℃のＴＨＦ（１５０ｍＬ）中の４−（５−ブロモピリミジン−２−イル）モルホリン（３．６ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のＴＭＥＤＡ（３．３３ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）およびｎ−ブチルリチウム（６．６ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）を添加した。−７８℃で３０分後、チオフェン−３−カルボアルデヒド（１．９６ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を−７８℃〜−７０℃で２時間撹拌した。反応物を、水性飽和ＮＨ４Ｃｌの添加によって停止し、酢酸エチル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。組み合わされた有機相をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル＝１５〜２０〜３０〜５０〜７０％）によって精製して、（２−モルホリノピリミジン−５−イル）（チオフェン−３−イル）メタノールを７６％収率で得た。
【０２６５】
ステップＣ：０℃のＤＣＭ（２ｍＬ）中の（２−モルホリノピリミジン−５−イル）（チオフェン−３−イル）メタノール（３１０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）、硫酸水素テトラブチルアンモニウム（１９．０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）、ＫＢｒ（１３．３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、およびＴＥＭＰＯ（１．８ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＣｌ水溶液（１．０８ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃で１．５時間撹拌し、水性飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（５ｍＬ）および水性飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）の添加によって停止した。水相をＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／ＥＡ：２０〜３０〜５０％）によって精製して、（２−モルホリノピリミジン−５−イル）（チオフェン−３−イル）メタノンを７８％収率で得た。ＤＭＦ（３６ｍＬ）中のアセト酢酸メチル（１．３ｍＬ、１２．１ｍｍｏｌ）、２−クロロ−フェニル−ジスルフィド（３．８ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（５．０ｇ、３６ｍｍｏｌ）の混合物を、９５℃で４時間撹拌した。混合物を、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ）および水性ＨＣｌ  １Ｍ（５０ｍＬ）で希釈した。有機相をブライン（３ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：１％〜２〜３〜５％）によって精製して、２−（（２−クロロフェニル）チオ）−３−オキソブタン酸メチルを３９％収率で得た。
【０２６６】
ステップＤ：−７８℃のＴＨＦ（５ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサン中のｎ−ブチルリチウム（０．８８ｍＬ、２．２ｍｏｌ）をゆっくり添加した。−７８℃で１０分後、ＴＨＦ（２ｍＬ）中の２−（（２−クロロフェニル）チオ）−３−オキソブタン酸メチル（２８５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を０℃で３０分間継続した。
ＴＨＦ（２ｍＬ）中の（２−モルホリノピリミジン−５−イル）（チオフェン−３−イル）メタノン（２３０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。反応を水性飽和ＮＨ４Ｃｌ（５ｍＬ）の添加によって停止し、水相を酢酸エチル（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ＤＣＭ〜１％ＭｅＯＨ〜２〜４％）によって精製して、メチル２−（（２−クロロフェニル）チオ）−５−ヒドロキシ−５−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエートを９８％収率で得た。
【０２６７】
ステップＥ：メタノール（４ｍＬ）中のメチル２−（（２−クロロフェニル）チオ）−５−ヒドロキシ−５−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−３−オキソ−５−（チオフェン−３−イル）ペンタノエート（４３９ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３４０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液を、還流で５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水（５ｍＬ）および水性ＨＣｌ  １Ｍ（５ｍＬ）で希釈した。水相を酢酸エチル（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗製材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ＤＣＭ〜１％ＭｅＯＨ〜２〜４％）によって精製して、３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオンを４３％収率で得た。
【０２６８】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ）：δ＝８．３１（ｓ，２Ｈ），７．４３−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．３４（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．２９−７．２６（ｍ，１Ｈ），７．１１（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｔｄ，Ｊ＝７．７，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．８８（ｔｄ，Ｊ＝７．７，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．９８−３．９４（ｍ，１Ｈ），３．８３−３．７３（ｍ，８Ｈ），３．４７（ｓ，２Ｈ）．
【０２６９】
実施例２４−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製（ＷＯ２０１５／１４２９０３における実施例４４）
【化５７】
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【０２７０】
メタノール（１．５ｍＬ）中の６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、１，２−ビス（２−クロロフェニル）ジスルファン（４８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（５８ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）の溶液を、還流で２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮し、水（３ｍＬ）および水性ＨＣｌ  １Ｍ（１ｍＬ）で希釈した。水相を酢酸エチル（３ｘ５ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘプタン／酢酸エチル：２／１〜１／１〜１／３）によって精製して、３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンを６１％収率で得た。分析データは、文献（ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．７：８９６−９０１，２０１６）と同一であった。
【０２７１】
実施例２４の化合物を、ラセミ体として、および加えて単一エナンチオマーとしてアッセイで試験した。エタノール／アセトニトリル／ジエチルアミン（９０／１０／０．１）溶媒系を用いる最終生成物のキラル分取ＨＰＬＣによって個別のエナンチオマーを得ることができた。同じ溶媒系を用いるＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＣカラム上での分析ＨＰＬＣによるエナンチオマーの分析は、エナンチオマーが、１００％（エナンチオマー１：Ｒｔ  ＝５．５分）および９７％（エナンチオマー２：Ｒｔ＝７．５分）ｅ．ｅ．で単離されたことを明らかにした。
【化５８】
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【０２７２】
実施例２５−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製（ＷＯ２０１５／１４２９０３における実施例１９４）
【化５９】
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【０２７３】
０℃のＴＨＦ（３ｍＬ）中のＮａＨ（６１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＣｐＭｅＯＨ（０．１６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で３０分後、６−（６−ブロモピリジン−２−イル）−３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオン（１５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を還流で１８時間撹拌した。反応を水（１０ｍＬ）およびＨＣｌ  １Ｍ（３ｍＬ）の添加によって停止した。水相を酢酸エチル（３ｘ１０ｍＬ）で抽出し、組み合わされた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗材料をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：ヘプタン／酢酸エチル：８／２〜７／３〜１／１）によって精製して、３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンを６２％収率で得た。
【０２７４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＭｅＯＨ−ｄ４）：δ＝７．７０（ｔ，Ｊ＝７．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄｄ，Ｊ＝５．０，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．９  ＨＺ，１Ｈ），７．１５−７．１２（ｍ，２Ｈ），６．９４（ｔ，Ｊ＝７．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．７７−６．７３（ｍ，２Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝８．０  Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｍ，２Ｈ９，３．９１（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝１６．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｓ，１Ｈ），２．３５−２．２８（ｍ，１Ｈ），１．８２−１．７３（ｍ，２Ｈ），１．６４−１．５１（ｍ，４Ｈ），１．３８−１．３０（ｍ，２Ｈ）．
【０２７５】
実施例２６−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルイソブチルカーボネートの調製
【化６０】
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【０２７６】
この化合物を、３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸イソブチルを用いて、６０％収率で、実施例１１における方法に従って調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３７（ｄｄ，Ｊ＝５．１，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），７．１９−７．１７（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．６  Ｈｚ，２Ｈ），６．９７（ｄｄ，Ｊ＝２．７，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝１．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，２Ｈ），６．５３（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．９６（ｄ，Ｊ＝Ｈｚ，２Ｈ），３．８７−３．８４（ｍ，４Ｈ），３．５５（ｓ，２Ｈ），３．１９−３．１６（ｍ，４Ｈ），１．９７（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，１Ｈ），１．２６（ｔ，Ｊ＝７．１  Ｈｚ，２Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，６Ｈ）．
【０２７７】
実施例２７−酢酸５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルの調製
【化６１】
2020520388.tif 000063
【０２７８】
この化合物を、３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよび塩化アセチルを用いて、４２％収率で、実施例１１における方法に従って調製した。
【０２７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３７（ｄｄ，Ｊ＝５．０，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．９９−６．９７（ｍ，１Ｈ），６．９７−６．９５（ｍ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），６．５２（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．８７−３．８４（ｍ，４Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ），３．１９−３．１６（ｍ，４Ｈ），２．１６（ｓ，３Ｈ）．
【０２８０】
実施例２８−ピバル酸５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルの調製
【化６２】
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【０２８１】
この化合物を、３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよび塩化ピバロイルを用いて、４８％収率で、実施例１１における方法に従って調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３７（ｄｄ，Ｊ＝５．１，３．１  Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝９．０  Ｈｚ，２Ｈ），７．１９（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９９−６．９３（ｍ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．８７−３．８３（ｍ，４Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），３．１９−３．１６（ｍ，４Ｈ），１．１７（ｓ，９Ｈ）．
【０２８２】
実施例２９−３−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの調製
【化６３】
2020520388.tif 000065
【０２８３】
この化合物を、６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよび１，２−ビス（２，４−ジクロロフェニル）ジスルファンを用いて、５０％収率で、実施例２における方法に従って調製した。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＭｅＯＤ−ｄ４，３００  ＭＨｚ）：δ＝７．４９（ｄｄ，Ｊ＝５．０，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．８  Ｈｚ，２Ｈ），７．２６−７．２２（ｍ，２Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝５．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），６．７２（ｄｄ，Ｊ＝７．６，２．０  Ｈｚ，１Ｈ），５．８４（ｄ，Ｊ＝８．７  Ｈｚ），３．８６−３．８３（ｍ，４Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），３．２０−３．１７（ｍ，４Ｈ）．
【０２８４】
実施例３０−５−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネートの調製
【化６４】
2020520388.tif 000066
【０２８５】
この化合物を、３−（（２，４−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸２−（メトキシ）エチルを用いて、４７％収率で、実施例１１における方法に従って調製した。
【０２８６】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．０，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝２．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝５．０，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），６．７７（ｄ，Ｊ＝８．５，２．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−４．３１（ｍ，２Ｈ），３．８９−３．８６（ｍ，４Ｈ），３．６３−３．６０（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），３．２０−３．１７（ｍ，４Ｈ）．
【０２８７】
実施例３１−イソニコチン酸５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルの調製
【化６５】
2020520388.tif 000067
【０２８８】
この化合物を、３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよび塩化イソニコチノイル塩酸塩を用いて、４２％収率で、実施例１１における方法に従って調製した。
【０２８９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．７９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝５．０  Ｈｚ，２Ｈ），７．４１−７．３８（ｍ，１Ｈ），７．２９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．２２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．０１−６．９４（ｍ，４Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝２．３  Ｈｚ，２Ｈ），３．９０−３．８７（ｍ，４Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），３．２２−３．１９（ｍ，４Ｈ）．
【０２９０】
実施例３２−５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イルイソブチルカーボネートの調製
【化６６】
2020520388.tif 000068
【０２９１】
この化合物を、３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸イソブチルを用いて、７６％収率で、実施例１１における方法に従って調製した。この例では、３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンは、改変された方法に従って調製され、６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの合成におけるステップＢは、ラセミ体の代わりに（Ｓ）−ｔ−ブチルスルフィンイミドを使用した。ステップＣは次いで、ある程度のジアステレオ制御で進み、１Ｈ  ＮＭＲによるジアステレオマーの分析は、８５：１５のジアステレオマー比を明らかにした。この比は、最終生成物のエナンチオマー比において表されるであろう。
【０２９２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３６（ｄｄ，Ｊ＝５．０，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），７．１８−７．１６（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．７  Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．９  Ｈｚ，２Ｈ），６．６２−６．５５（ｍ，２Ｈ），６．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．８  Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｄ，Ｊ＝７．７  Ｈｚ，２Ｈ），３．８８−３．８５（ｍ，４Ｈ），３．４９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），３．１９−３．１６（ｍ，４Ｈ），１．９６（ｈｅｐｔ，Ｊ＝６．７  Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｔ，Ｊ＝７．１  Ｈｚ，２Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．７  Ｈｚ，６Ｈ）．
【０２９３】
実施例３３−５−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−２−（４−モルホリノフェニル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネートの調製。
【化６７】
2020520388.tif 000069
【０２９４】
この化合物を、３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸２−メトキシエチルを用いて、４０％収率で、実施例１１における方法に従って調製した。この例では、３−（（２−クロロ−４−フルオロフェニル）チオ）−６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンは、改変された方法に従って調製され、６−（４−モルホリノフェニル）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンの合成におけるステップＢは、ラセミ体の代わりに（Ｓ）−ｔ−ブチルスルフィンイミドを使用した。ステップＣは次いで、ある程度のジアステレオ制御で進み、１Ｈ  ＮＭＲによるジアステレオマーの分析は、８５：１５のジアステレオマー比を明らかにした。この比は、最終生成物のエナンチオマー比において表されるであろう。
【０２９５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．３８−７．３６（ｍ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．６  Ｈｚ，２Ｈ），７．１７（ｍ，１Ｈ），７．００（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝５．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２−６．８８（ｍ，２Ｈ），６．５８（ｔｄ，Ｊ＝８．４，２．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝８．７，５．８  Ｈｚ，１Ｈ），４．３４−．４３２（ｍ，２Ｈ），３．８９（ｍ，４Ｈ），３．６３−３．６１（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｄ，Ｊ＝２．６  Ｈｚ，２Ｈ），３．３８（ｓ，３Ｈ），３．２０−３．１８（ｍ，４Ｈ）．
【０２９６】
実施例３４−６’−（シクロペンチルメトキシ）−５−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロ−［２，２’−ビピリジン］−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネートの調製
【化６８】
2020520388.tif 000070
【０２９７】
この化合物を、６−（６−（シクロペンチルメトキシ）ピリジン−２−イル）−３−（（２，５−ジクロロフェニル）チオ）−６−（チオフェン−３−イル）ピペリジン−２，４−ジオンおよびクロロギ酸２−（メトキシ）エチルを用いて、６３％収率で、実施例１１における方法に従って調製した。
【０２９８】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．２，７．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝５．０，３．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１．５  Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝７．３  Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝８．２  Ｈｚ，１Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝２．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−４．３２（ｍ，２Ｈ），４．１６（ｄ，Ｊ＝７．０  Ｈｚ，２Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１７．０  Ｈｚ，１Ｈ），３．６４−３．５８（ｍ，３Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），２．３５−２．２６（ｍ，１Ｈ），１．８６−１．７４（ｍ，２Ｈ），１．６５−１．５６（ｍ，４Ｈ），１．４１−１．３１（ｍ，２Ｈ）．
【０２９９】
実施例３５−５−（（２−クロロフェニル）チオ）−２−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−６−オキソ−２−（チオフェン−３−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル（２−メトキシエチル）カーボネートの調製
【化６９】
2020520388.tif 000071
【０３００】
この化合物を、３−（（２−クロロフェニル）チオ）−６−（２−モルホリノピリミジン−５−イル）−６−（チオフェン−３−イル）ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４（３Ｈ）−ジオンおよびクロロギ酸２−（メトキシ）エチルを用いて、３８％収率で、実施例１１に従って調製した。
【０３０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝８．２９（ｓ，２Ｈ），７．４４−７．３９（ｍ，２Ｈ），７．２８−７．２２（ｍ，１Ｈ），７．０９（ｄｄ，Ｊ＝４．４３，２．１７  Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｔｄ，Ｊ＝７．６６，１．５４  Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｔｄ，Ｊ＝７．６３，１．４４  Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｄｄ，Ｊ＝７．９３，１．５２  Ｈｚ，１Ｈ），４．３９−４．３３（ｍ，２Ｈ），３．９０−３．７１（ｍ，１０Ｈ），３．６６−３．５９（ｍ，５Ｈ）．
【０３０２】
実施例３６−結合ジアホラーゼアッセイ
化合物の阻害特性を、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）反応をジアホラーゼによる蛍光レゾルフィンの産生と関連付ける結合酵素アッセイを用いて調査した。
【０３０３】
ヒト乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）は、ピルビン酸と乳酸との間の可逆的相互変換を触媒する。ＬＤＨは、ＮＡＤＨまたはＮＡＤ＋のいずれかを補因子として用いて、正（ピルビン酸から乳酸）および逆（乳酸からピルビン酸）反応の両方を触媒することができる。反応は、基質利用可能性、必要な補因子の存在、温度、およびｐＨなどの様々な因子に応じていずれかの方向で進行する。酵素の異なるアイソフォーム（ＬＤＨ  Ａ、Ｂ、およびＣ）は、異なる反応方向を好み、ＬＤＨＡがピルビン酸から乳酸への変換を好む一方で、ＬＤＨＢは優先的に乳酸をピルビン酸へと酸化させる。
【０３０４】
結合アッセイは、ＬＤＨ（アイソフォームＡ、Ｂ、およびＣ）による乳酸のピルビン酸への変換全体を通したＮＡＤ＋のＮＡＤＨへの酸化に依存する。産生したＮＡＤＨは、非蛍光レサズリンを蛍光レゾルフィンに還元する、ジアホラーゼ反応における補因子として機能する。したがって、アッセイは、ピルビン酸産生率を間接的に監視する。分子の固有の蛍光（励起：３４０ｎｍ、発光：４６０ｎｍ）によってＮＡＤＨの消費を直接監視することができないが、直接読み出し方法と関連した問題がある。化学ライブラリーにおける多くの化合物は、ＮＡＤＨと類似した蛍光特性によってアッセイに干渉することが示されている。ＬＤＨ反応をジアホラーゼによるレサズリンの蛍光レゾルフィンへの変換と関連付けることによってアッセイをより長い波長にシフトすることは、この化合物の干渉を低減する。アッセイ方向はよって、ロバストで信頼できるアッセイを提供するように選択された。
【０３０５】
ＮＡＤＨのＮＡＤ＋への酸化下でのピルビン酸の乳酸への変換について好ましい方向でＬＤＨＡ反応を適用することは、ＬＤＨＡ反応を８０％完了まで行い、ＮＡＤＨについての酵素完了を回避するために、後でジアホラーゼアッセイ試薬を追加することを必要とするであろう。結果として、そのような方法は、高過ぎる変換率が得られたＩＣ５０値の軽減につながるので、よりエラーが発生しやすいと予想されるであろう（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＳＳＡＹ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈ．１４（３）：１７５−１７９，２０１６）。アッセイをＬＤＨＡについて好ましい方向で行っていない場合、他のＬＤＨＡ阻害剤化合物について先に公表された結果と比較して、より保守的なＩＣ５０値が得られると予想されるであろう。したがって、実際のＩＣ５０値はよって、より低くなると予想され得る。
【０３０６】
ＩＣ５０値の決定について、結合ジアホラーゼアッセイは、Ｂｅｍｂｅｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ．（Ａ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｔｈｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎ  ＮＡＤ  Ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ．ＡＳＳＡＹ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，２００５．３（５）：５３３−５４１）から採用した。化合物は、５０００μＭから開始して３０μＭまでの１１の個別の濃度を含む２倍、３倍、または４倍段階希釈物を用いて２通り試験した。１００％阻害またはオキサメート阻害対照を表す非基質対照（アッセイにおける２８．７ｍＭ最終オキサメート濃度）および完全に阻害されていない反応を表す完全基質溶液およびＤＭＳＯを含有する対照を追加した。オキサメートは、高い特異性でインビトロでｍＭ範囲のＬＤＨ酵素活性を阻害する十分に特徴付けられたＬＤＨの阻害剤である（Ｐａｐａｃｏｓｔａｎｔｉｎｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３６：２７８−２８４，１９６１）。対照は各データ点についての阻害パーセンテージ計算を可能にした。アッセイバッファーは、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ  ７．４、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、および０．０５％プルロン酸Ｆ−１２７で構成した。４〜７ｎＭのＬＤＨＡまたは６ｎＭのＬＤＨＢ、および反応ウェル中０．２Ｕ／ｍｌのジアホラーゼの最終濃度をもたらす酵素溶液を、ＣｙＢｉ（登録商標）−ＳＥＬＭＡロボットピペッターを用いて３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ｂｉｏ−ｏｎｅ）に分注した。化合物希釈物および酵素を、室温で少なくとも２０分間インキュベートした。その後、基質溶液を添加し（最終濃度：５００μＭ乳酸、１５０μＭ  ＮＡＤ＋、３μＭレサズリン）、反応を１０分間進行させた。反応を停止溶液の添加によってクエンチした（最終濃度：２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、４００ｍＭ  ＮａＣｌ、４０ｍＭピルビン酸）。蛍光を、５分のインキュベーション後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘプレートリーダーで５６０ｎｍの励起波長および５９０ｎｍの発光波長で読み出した。
【０３０７】
カウンタースクリーンを使用して、ジアホラーゼ反応のみを阻害する偽陽性を除去した。したがって、ジアホラーゼのみを含有する酵素溶液を、化合物希釈系列とインキュベートした。１５μＭのＮＡＤＨおよび３μＭのレサズリンの最終濃度をもたらす基質溶液を添加し、本明細書に記載されるようにアッセイを行った。レサズリンのみを含有する基質溶液を１００％阻害対照として使用した。
【０３０８】
蛍光データを、ＤＭＳＯおよび阻害対照に対して正規化し、各化合物濃度についての阻害パーセンテージを得た。用量応答曲線を、標準的な４パラメータフィット（Ｌｅｖｅｎｂｅｒｇ−Ｍａｒｑｕａｒｄｔあてはめ手順）を用いてＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ（ｗｗｗ．ｓｙｎｅｒｇｙ．ｃｏｍ）またはＤｏｔｍａｔｉｃｓソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｄｏｔｍａｔｉｃｓ．ｃｏｍ）にあてはめ、試験化合物のＩＣ５０値を得た。結果を表１に表す。
【表１−１】
2020520388.tif 000072
【表１−２】
2020520388.tif 000073
【表１−３】
2020520388.tif 000074
【表１−４】
2020520388.tif 000075
【表１−５】
2020520388.tif 000076
【表１−６】
2020520388.tif 000077
【表１−７】
2020520388.tif 000078
【表１−８】
2020520388.tif 000079
【表１−９】
2020520388.tif 000080
【０３０９】
実施例３７−等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）
【０３１０】
ＩＴＣ実験を、ＭｉｃｏｒＣａｌ  ＰＥＡＱ  ＩＴＣ装置を用いて行った。実験前に、ＬＤＨＡを、５０ｍＭのリン酸カリウムバッファーｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００２％プルロン酸Ｆ−１２７に対して、４℃で一晩、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅからのミニ透析キットを用いて透析した。試験された化合物を１００ｍＭまでＤＭＳＯに溶解した。透析後、タンパク質を１４，０００ｒｐｍ、４℃で３０分間遠心分離した。参照セルのためのバッファーおよびＭｉｌｌｉＱ水を使用前に脱気した。タンパク質濃度を、Ｎａｎｏｄｒｏｐを用いてＡ２８０ｎｍ測定によって決定した。全てのＩＴＣ実験を、７５０ｒｐｍで撹拌しながら、２５°Ｃで行った。典型的な実験では、目的の化合物を試料セルに２０μＭで装填し、ＬＤＨＡ（シリンジ中２００μＭ）を連続的な注射で化合物溶液に滴定した。ＮＡＤＨ（１ｍＭ）およびＤＭＳＯ濃度（２％）は、全ての溶液において一致していた。データを、ＭｉｃｒｏＣａｌ  ＰＥＡＱ−ＩＴＣ分析ソフトウェアを用いて分析し、単一部位結合モデルにあてはめ、結合定数Ｋｄ、エンタルピーΔＨ、エントロピーΔＳ、および化学量論Ｎを得た。
【０３１１】
実施例３、５、および１０の化合物の結合結果を表２に表す。これらは、化合物がＬＤＨＡに特異的であり、これに結合することを示す。
【表２】
2020520388.tif 000081
【０３１２】
実施例３８−癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、およびＭＩＡ  ＰａＣａ−２におけるインビトロ試験
【０３１３】
細胞培養：
ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＭＤＡ−ＭＢ−２３、および膵臓癌細胞株ＭＩＡ  ＰａＣａ−２（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および抗生物質（ストレプトマイシンおよびペニシリン）が補足されたダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ＋Ｆ１２）で、５％ＣＯ２を有する３７℃のインキュベーターにおいて培養した。全ての細胞培養試薬はＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈによって製造された。
【０３１４】
スクリーニング細胞生存率アッセイ：
細胞生存率に対する化合物の効果を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８  Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ／Ｄｅａｄ  Ｃｅｌｌ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて決定した。アネキシンＶは、アポトーシス細胞上のホスファチジルセリンに結合するが、第２の色素ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）は核酸に結合する。このマーカーは、インタクトな細胞には入らず、よって死細胞を選択的に染色する。細胞を、２００μＬ培養培地において９６ウェル培養プレートにウェルあたり１０，０００細胞で播種した。１６時間のインキュベーション後、化合物を細胞に、最高濃度を１００μＭとして濃度依存的に添加した。細胞生存率を、２４、７２、および１２０時間後に決定した。上清を、脱離した細胞を含むように収集した。接着細胞を、０．０５％トリプシンで脱離させ、上清と組み合わせた。試料を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、アネキシン結合バッファー中のアネキシンＶおよびＰＩと１５分間インキュベートした。細胞を、インキュベーション直後にＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａ（またはＬＳＲＩＩ）フローサイトメーターを用いて分析した。以下の対照−未処理細胞、ＤＭＳＯのみの対照、および２−デオキシ−グルコース（２−ＤＯＧ）を評価に含めた。２−ＤＯＧは、解糖の既知の阻害剤であり（Ｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ＢｉｏｌＣｈｅｍ．２２４，（２）：９５３−９５９，１９５７）、この場合では細胞死の陽性対照として使用した。データを、ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を用いて分析した。
【０３１５】
上記フローベースのアネキシン細胞生存率アッセイを、異なる条件を用いる多くの化合物の試験を促進するために、９６ウェルフォーマットにおける低細胞数でのスクリーニングアッセイとして使用した。異なる癌細胞タイプの解糖経路およびそれらのアポトーシス特性に対する特定の化合物の効果を、それぞれ、乳酸アッセイおよびカスパーゼアッセイを用いて評価した。
【０３１６】
乳酸アッセイ：
解糖経路に対する化合物の阻害効果を、癌細胞の乳酸産生を測定することによって試験した。細胞を、９６ウェル培養プレートに、プレートあたり２０，０００細胞の密度で、２００μＬ完全培養培地において播種した。翌日、培地を除去し、新鮮な培地、および９０μＭの開始濃度での１０の個別のデータ点を含む２倍段階希釈物を添加した。細胞を３７℃で７５分間さらにインキュベートした。各ウェルの合計１００μＬの細胞培養培地のうちの５０μＬを、５０μＬの「微小透析」−乳酸試薬（製造業者の指示に従って調製）と混合することによってアッセイした。赤−紫色のキノンイミンの形成は、１５分後に５３０ｎｍで測光的に測定され、細胞において産生される乳酸に比例する。標準曲線を、０〜２０ｎモルの範囲の乳酸の希釈系列（Ａｂｃａｍ）を用いて、各実験と並行して作製した。データを、ＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈ（ｗｗｗ．ｓｙｎｅｒｇｙ．ｃｏｍ）を用いて分析し、ＩＣ５０値を、標準的な４パラメータフィット（Ｌｅｖｅｎｂｅｒｇ−Ｍａｒｑｕａｒｄｔあてはめ手順）を用いて決定した。
【０３１７】
カスパーゼアッセイ：
細胞生存率に対する選択される化合物の効果を、ＣｅｌｌＥｖｅｎｔ（商標）Ｃａｓｐａｓｅ−３／７  Ｇｒｅｅｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて詳細に決定した。組織培養培地に添加される場合、この非蛍光基質は、細胞膜を通り、そこでこれはアポトーシス細胞の活性化カスパーゼ−３／７によって切断され、緑色蛍光色素の放出および核ＤＮＡの染色をもたらす。カスパーゼ−３／７の動力学的活性化は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）ベーシックアナライザーを用いて監視および定量化することができる。
【０３１８】
（Ｌｅｎｔｉ、ＥＦ−１アルファでのレンチウイルス形質導入によって導入され、ピューロマイシンで選択される）ＣｙｔｏＬｉｇｈｔ  Ｒｅｄ蛍光色素を安定に発現するＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞を、
１００μＬ培養培地において９６ウェル培養プレートにウェルあたり２，０００細胞で播種した。２０時間のインキュベーション後、培地を除去し、新鮮な培地および化合物を細胞に、最高濃度を１００μＭとして濃度依存的に添加した。細胞生存率を、３時間毎に緑色および赤色蛍光シグナルのフィルターで撮像することによって決定した。総細胞数（赤色シグナル）に対するアポトーシス細胞（緑色シグナル）の割合を、ＩｎｃｕＣｙｔｅ分析プログラム（Ｅｓｓｅｎ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＫａｌｅｉｄａＧｒａｐｈソフトウェアを用いて分析した。
【０３１９】
実施例１〜２３の様々な化合物（化合物１〜２３と示される）についてのスクリーニングアッセイからの結果を、それぞれ乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８について、図１および図２に示す。
【０３２０】
これらの実験を実施例２４および２５の既知の化合物に関して繰り返し、結果を本発明による構造的に類似の化合物と比較した。実施例２４の化合物（ＷＯ２０１５／１４２９０３における化合物４４）ならびに実施例８および１０の化合物についての結果を図３に示す。
【０３２１】
図４は、実施例２５の化合物（ＷＯ２０１５／１４２９０３における化合物１９６）ならびに実施例１、３、および５の化合物についての結果を示す。
【０３２２】
実施例１０および１７の化合物についての結果の比較を図５に示す。実施例１７は、実施例１０の化合物の誘導体である。
【０３２３】
実施例１〜２３の化合物（化合物１〜２３と示される）についての結果を、乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−４６８および膵臓癌細胞株ＭＩＡ  ＰａＣａ−２について図６に示す。
【０３２４】
図７は、実施例２４の既知の化合物（ＷＯ２０１５／１４２９０３における化合物４４）との比較における実施例８、９、１０、および２９の構造的に類似の化合物についての結果を示す。
【０３２５】
図８は、実施例２５の化合物（ＷＯ２０１５／１４２９０３における化合物１９６）との比較における実施例１、３、５、および７の化合物についての結果を示す。
【０３２６】
実施例１０および１７および３１の化合物についての結果の比較を図９に示す。実施例１７の化合物は、実施例１０の化合物の誘導体である。
【０３２７】
図１０は、実施例８の化合物との比較における実施例１４、３２、および３３の化合物の効果を示す。
【０３２８】
図１１は、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞株に対する実施例１０の化合物の富化エナンチオマー（エナンチオマー１）と比較したラセミ混合物として使用される実施例１０の化合物の比較を示す（左側の図）。この図は、同様に示される様々な他の示される細胞株に対する実施例１０の化合物の富化エナンチオマーについての結果も示す（右側の図）。
【０３２９】
図１２は、１２０時間の時間経過中のＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞株の細胞生存率に対する実施例１０の化合物の効果（左側の図）および異なる濃度の実施例１０の化合物との９６時間のインキュベーション後の未処理ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞の生細胞％（右側の図）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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