(57)【要約】  Ｃ型肝炎に感染した宿主を治療するための構造：2020505423.tif 000067のヘミ硫酸塩、並びにその医薬組成物及び固体剤形を含む剤形。【選択図】図２４
2020505423.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式：
【化１】
2020505423.tif 000056
の化合物。
【請求項２】
約２０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬの代謝産物
【化２】
2020505423.tif 000057
の定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）をもたらす、
【化３】
2020505423.tif 000058
を含む、固体剤形。
【請求項３】
前記定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬである、請求項２に記載の固体剤形。
【請求項４】
前記定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜４５ｎｇ／ｍＬである、請求項２に記載の固体剤形。
【請求項５】
前記定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜３０ｎｇ／ｍＬである、請求項２に記載の固体剤形。
【請求項６】
前記定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜２５ｎｇ／ｍＬである、請求項２に記載の固体剤形。
【請求項７】
代謝産物
【化４】
2020505423.tif 000059
の曲線下面積は、約１５００ｎｇ＊ｈ／ｍＬ〜３０００ｎｇ＊ｈ／ｍＬである、請求項２〜６のいずれか一項に記載の固体剤形。
【請求項８】
前記曲線下面積は、約１８００ｎｇ＊ｈ／ｍＬ〜３０００ｎｇ＊ｈ／ｍＬである、請求項７に記載の固体剤形。
【請求項９】
前記曲線下面積は、約２１００ｎｇ＊ｈ／ｍＬ〜３０００ｎｇ＊ｈ／ｍＬである、請求項７に記載の固体剤形。
【請求項１０】
前記曲線下面積は、約２４００ｎｇ＊ｈ／ｍＬ〜３０００ｎｇ＊ｈ／ｍＬである、請求項７に記載の固体剤形。
【請求項１１】
前記曲線下面積は、約２７００ｎｇ＊ｈ／ｍＬ〜３０００ｎｇ＊ｈ／ｍＬである、請求項７に記載の固体剤形。
【請求項１２】
前記曲線下面積は、約２０００ｎｇ＊ｈ／ｍＬ〜２２００ｎｇ＊ｈ／ｍＬである、請求項７に記載の固体剤形。
【請求項１３】
薬学的に許容可能な担体中に有効量の式：
【化５】
2020505423.tif 000060
の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１４】
約３００ｍｇの前記化合物を送達する固体剤形である請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
約４００ｍｇの前記化合物を送達する固体剤形である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
約５００ｍｇの前記化合物を送達する固体剤形である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
約６００ｍｇの前記化合物を送達する固体剤形である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
約７００ｍｇの前記化合物を送達する固体剤形である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
約８００ｍｇの前記化合物を送達する固体剤形である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記固体剤形が約２０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬの代謝産物
【化６】
2020505423.tif 000061
の定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）を提供する、請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記固体定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記固体定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜４５ｎｇ／ｍＬである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記固体定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜３０ｎｇ／ｍＬである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記固体定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜２５ｎｇ／ｍＬである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記固体剤形が約２０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬの代謝産物
【化７】
2020505423.tif 000062
の定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）を提供する、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、約４０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬである、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記薬学的に許容可能な担体は、経口送達に適している、請求項１３〜２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記薬学的に許容可能な担体は、錠剤の形態である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
化合物
【化８】
2020505423.tif 000063
の結晶性形態であって、該化合物は、少なくとも６ヵ月間、外気条件下で保管した場合に０．５％未満の不純物を含有する、結晶性形態。
【請求項３０】
約０℃〜４０℃で保管される、請求項２９に記載の結晶性形態。
【請求項３１】
約３０％〜８０％の相対湿度で保管される、請求項２９に記載の結晶性形態。
【請求項３２】
治療を必要とする宿主においてＣ型肝炎感染又はＣ型肝炎感染に起因する病状を治療する方法であって、任意に薬学的に許容可能な担体中にある、有効量の
【化９】
2020505423.tif 000064
を提供することを含む、方法。
【請求項３３】
前記化合物は、経口投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記化合物は、制御放出によって投与される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記Ｃ型肝炎感染に起因する病状は、抗体陽性及び抗原陽性の状態、ウイルスによる慢性の肝臓炎症、進行性のＣ型肝炎に起因する肝臓癌、肝硬変又は倦怠感をもたらしている、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
少なくとも３００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
少なくとも４００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
少なくとも５００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
少なくとも６００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
少なくとも７００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
少なくとも８００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記化合物は、最大１２週間投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記化合物は、最大８週間投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記化合物は、最大６週間投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記化合物は、少なくとも６週間投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記化合物は、少なくとも８週間投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記化合物は、少なくとも１２週間投与される、請求項３２〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記化合物は、１日に１回投与される、請求項４２〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記化合物は、１日おきに投与される、請求項４２〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
別の抗ＨＣＶ剤と組み合わせて前記化合物を投与することを更に含む、請求項３２〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記追加の抗ＨＣＶ剤は、プロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、別のＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤、非基質阻害剤、インターフェロンアルファ−２ａ、リバビリン、ヘリカーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド、アプタマー、ヌクレアーゼ耐性リボザイム、ｉＲＮＡ、ＨＣＶに対する抗体、ＨＣＶに対する部分抗体、及びＨＣＶに対するドメイン抗体からなる群から選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記プロテアーゼ阻害剤は、テラプレビル、ボセプレビル、シメプレビル及びパリタプレビルからなる群から選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記Ｃ型肝炎のウイルスは、遺伝子型１ａ、１ｂ、２ａ、２ｂ、３ａ、４ａ、４ｄ、５ａ、又は６である、請求項３２に記載の方法。
【請求項５４】
前記Ｃ型肝炎のウイルスは、遺伝子型１ａ又は１ｂである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記Ｃ型肝炎のウイルスは、遺伝子型２ａ又は２ｂである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記Ｃ型肝炎のウイルスは、遺伝子型３ａである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
前記Ｃ型肝炎のウイルスは、遺伝子型４ａ又は４ｂである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ｃ型肝炎のウイルスは、遺伝子型５ａである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５９】
前記宿主はヒトである、請求項３２〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
治療を必要とする宿主におけるＣ型肝炎感染又はＣ型肝炎感染に起因する病状の治療における使用のための、任意に薬学的に許容可能な担体中の式
【化１０】
2020505423.tif 000065
の化合物。
【請求項６１】
経口投与される、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
制御放出によって投与される、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６３】
前記Ｃ型肝炎感染に起因する病状は、抗体陽性及び抗原陽性の状態、ウイルスによる慢性の肝臓炎症、進行性のＣ型肝炎に起因する肝臓癌、肝硬変又は倦怠感をもたらしている、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６４】
少なくとも３００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項６０〜６３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６５】
少なくとも４００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項６０〜６３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６６】
少なくとも５００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項６０〜６３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６７】
少なくとも６００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項６０〜６３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６８】
別の抗ＨＣＶ剤と組み合わせて前記化合物を投与することを更に含む、請求項６０〜６７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６９】
前記追加の抗ＨＣＶ剤は、プロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、別のＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤、非基質阻害剤、インターフェロンアルファ−２ａ、リバビリン、ヘリカーゼ阻害剤、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド、アプタマー、ヌクレアーゼ耐性リボザイム、ｉＲＮＡ、ＨＣＶに対する抗体、ＨＣＶに対する部分抗体、及びＨＣＶに対するドメイン抗体からなる群から選択される、請求項６８に記載の化合物。
【請求項７０】
治療を必要とする宿主におけるＣ型肝炎感染又はＣ型肝炎感染に起因する病状の治療のための医薬の調製における、任意に薬学的に許容可能な担体中の式
【化１１】
2020505423.tif 000066
の化合物の使用。
【請求項７１】
前記化合物は、経口投与される、請求項７０に記載の使用。
【請求項７２】
前記化合物は、制御放出によって投与される、請求項７０に記載の使用。
【請求項７３】
前記Ｃ型肝炎感染に起因する病状は、抗体陽性及び抗原陽性の状態、ウイルスによる慢性の肝臓炎症、進行性のＣ型肝炎に起因する肝臓癌、肝硬変又は倦怠感をもたらしている、請求項７０に記載の使用。
【請求項７４】
少なくとも３００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項７０〜７３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７５】
少なくとも４００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項７０〜７３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７６】
少なくとも５００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項７０〜７３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７７】
少なくとも６００ｍｇの前記化合物が投与される、請求項７０〜７３のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１７年２月１日付けで出願された米国仮特許出願第６２／４５３，４３７号、２０１７年３月１０日付けで出願された米国仮特許出願第６２／４６９，９１２号、２０１７年４月２１日付けで出願された米国仮特許出願第６２／４８８，３６６号、及び２０１７年１０月２０日付けで出願された米国仮特許出願第６２／５７５，２４８号の利益を主張するものである。これらの出願の全体が、全ての目的で引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００２】
発明の分野
本発明は、Ｃ型肝炎に感染した宿主を治療するための予想外の治療特性を有する厳選したヌクレオチド化合物のヘミ硫酸塩、並びにその医薬組成物及び剤形である。
【背景技術】
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、ＲＮＡ一本鎖ウイルスであり、またヘパシウイルス属のメンバーである。肝疾患の全ての症例の７５％がＨＣＶによって引き起こされると推定されている。ＨＣＶ感染は、肝硬変及び肝臓癌に結びつく場合があり、そのまま進行すれば、肝移植を必要とすることもある肝不全をもたらす可能性がある。世界中のおよそ７１００万人が慢性ＨＣＶに感染しており、毎年およそ３９万９０００人がＨＣＶにより、主に肝硬変及び肝細胞癌により死亡する。
【０００４】
ＲＮＡポリメラーゼは、ＲＮＡ一本鎖ウイルスに対する薬物の開発における主要なターゲットである。ＨＣＶの非構造タンパク質ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼは、ウイルスＲＮＡ合成の開始及び触媒を担う主要な酵素である。ＮＳ５Ｂ阻害剤には２つの主なサブクラス、すなわちヌクレオシドアナログと、非ヌクレオシド阻害剤（ＮＮＩ）とがある。ヌクレオシドアナログは、ポリメラーゼに対する代替基質として作用する活性なトリホスフェートへと同化され（anabolized）、非ヌクレオシド阻害剤（ＮＮＩ）は、タンパク質上のアロステリックな領域に結合する。ヌクレオシド又はヌクレオチドの阻害剤は天然ポリメラーゼ基質を模倣し、連鎖停止剤として作用する。それらは、ＲＮＡ転写の開始及び新生ＲＮＡ鎖の伸長を阻害する。
【０００５】
ＲＮＡポリメラーゼをターゲッティングすることに加えて、併用療法においては、他のＲＮＡウイルスタンパク質をターゲットとしてもよい。例えば、治療アプローチの更なる標的であるＨＣＶタンパク質はＮＳ３／４Ａ（セリンプロテアーゼ）及びＮＳ５Ａ（ＨＣＶレプリカーゼの本質的な構成要素であり、細胞経路に対して一連の影響を及ぼす、非構造タンパク質）である。
【０００６】
２０１３年１２月に最初のヌクレオシドＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤であるソホスブビル（ソバルディ（商標）、Gilead Sciences）が承認された。ソバルディ（商標）は、肝細胞によって取り入れられるウリジンホスホロアミデートプロドラッグであり、細胞内活性化を経て活性代謝産物である２’−デオキシ−２’−α−フルオロ−β−Ｃ−メチルウリジン−５’−トリホスフェートを供給する。
【化１】
2020505423.tif 000003
【０００７】
ソバルディ（商標）は、インターフェロンとの同時投与を必要とせずに特定の種類のＨＣＶ感染を治療する安全性及び効力が実証された最初の薬物である。ソバルディ（商標）は、ＦＤＡから画期的治療薬指定の承認を受けた第３の薬物である。
【０００８】
２０１４年、米国ＦＤＡは、慢性Ｃ型肝炎ウイルス遺伝子型１の感染を治療するためハーボニー（商標）（レジパスビル、ＮＳ５Ａ阻害剤及びソホスブビル）を承認した。ハーボニー（商標）は、慢性ＨＣＶ遺伝子型１の感染を治療するために承認された最初の合剤（combination pill）である。また、インターフェロン又はリバビリンを伴う投与を必要としない、最初の承認された投薬計画である。さらに、ＦＤＡは、遺伝子型１  ＨＣＶ感染を伴う成人に対して毎日１回、全て経口の、インターフェロン及びリバビリンを含まない治療法として、ソホスブビル（ソバルディ（商標））と組み合わせたシメプレビル（オリシオ（商標））を承認した。
【０００９】
また米国ＦＤＡは、２０１４年、ダサブビル（非ヌクレオシドＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤）と、オムビタスビル（ＮＳ５Ａ阻害剤）と、パリタプレビル（ＮＳ３／４Ａ阻害剤）と、リトナビルとを含む配合剤パックである、AbbVieのヴィキラ・パック（商標）を承認した。ヴィキラ・パック（商標）は、代償性肝硬変の患者を含む遺伝子型１  ＨＣＶ感染患者を治療するため、リバビリンと共に、又はリバビリンなしで使用可能である。ヴィキラ・パック（商標）はインターフェロンとの併用療法を必要としない。
【００１０】
２０１５年７月、米国ＦＤＡは、ＨＣＶ遺伝子型４及びＨＣＶ遺伝子型３の治療に対してテクニヴィ（商標）及びダクルインザ（商標）をそれぞれ承認した。テクニヴィ（商標）（オムビタスビル／パリタプレビル／リトナビル）は、瘢痕化及び肝硬変のない患者におけるＨＣＶ遺伝子型４の治療について、リバビリンとの併用に対して承認され、これはインターフェロンとの同時投与を必要としない、ＨＣＶ−４感染患者に対する第１選択である。ダクルインザ（商標）は、ＨＣＶ遺伝子型３感染を治療するため、ソバルディ（商標）との使用に対して承認された。ダクルインザ（商標）は、ＨＣＶ遺伝子型３の治療において安全性及び効力が実証された、インターフェロン又はリバビリンの同時投与を必要としない最初の薬物である。
【００１１】
２０１５年１０月、米国ＦＤＡは、ＨＣＶ治療のヴィキラ・パック及びテクニヴィが、主として基礎となる進行した肝臓病を伴う患者において重篤な肝傷害を引き起こす場合があると警告し、安全性に関する追加情報をラベルに追加するよう要求した。
【００１２】
現在承認されている他のＨＣＶに対する治療法として、リバビリン（レベトール（商標）と共に投与される場合があるインターフェロンアルファ−２ｂ又はペグ化インターフェロンアルファ−２ｂ（ペグイントロン（商標））、ＮＳ３／４Ａテラプレビル（インシベック（商標）、Vertex及びJohnson & Johnson）、ボセプレビル（ビクトレリス（商標）、Merck）、シメプレビル（オリシオ（商標）、Johnson & Johnson）、パリタプレビル（AbbVie）、オムビタスビル（AbbVie）、（ＮＮＩ）ダサブビル（ＡＢＴ−３３３）及びMerckのゼパティア（商標）（２つの薬物、グラゾプレビルとエルバスビルとの単錠の組み合わせ）が挙げられる。
【００１３】
更なるＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は、現在開発中である。MerckはウリジンヌクレオチドプロドラッグＭＫ−３６８２（旧IdenixのＩＤＸ２１４３７）を開発している。該薬物は、現在、フェーズＩＩの組み合わせ試験（combination trials）にある。
【００１４】
ＨＣＶを含むフラビウイルス科の治療のためのヌクレオシドポリメラーゼ阻害剤が記載されている米国特許及びＷＯ出願としては、Idenix Pharmaceuticalsが出願したもの（米国特許第６，８１２，２１９号、同第６，９１４，０５４号、同第７，１０５，４９３号、同第７，１３８，３７６号、同第７，１４８，２０６号、同第７，１５７，４４１号、同第７，１６３，９２９号、同第７，１６９，７６６号、同第７，１９２，９３６号、同第７，３６５，０５７号、同第７，３８４，９２４号、同第７，４５６，１５５号、同第７，５４７，７０４号、同第７，５８２，６１８号、同第７，６０８，５９７号、同第７，６０８，６００号、同第７，６２５，８７５号、同第７，６３５，６８９号、同第７，６６２，７９８号、同第７，８２４，８５１号、同第７，９０２，２０２号、同第７，９３２，２４０号、同第７，９５１，７８９号、同第８，１９３，３７２号、同第８，２９９，０３８号、同第８，３４３，９３７号、同第８，３６２，０６８号、同第８，５０７，４６０号、同第８，６３７，４７５号、同第８，６７４，０８５号、同第８，６８０，０７１号、同第８，６９１，７８８号、同第８，７４２，１０１号、同第８，９５１，９８５号、同第９，１０９，００１号、同第９，２４３，０２５号、米国特許出願公開第２０１６／０００２２８１号、米国特許出願公開第２０１３／００６４７９４号、国際公開第２０１５／０９５３０５号、国際公開第２０１５／０８１１３３号、国際公開第２０１５／０６１６８３号、国際公開第２０１３／１７７２１９号、国際公開第２０１３／０３９９２０号、国際公開第２０１４／１３７９３０号、国際公開第２０１４／０５２６３８号、国際公開第２０１２／１５４３２１号）；Merckが出願したもの（米国特許第６，７７７，３９５号、同第７，１０５，４９９号、同第７，１２５，８５５号、同第７，２０２，２２４号、同第７，３２３，４４９号、同第７，３３９，０５４号、同第７，５３４，７６７号、同第７，６３２，８２１号、同第７，８７９，８１５号、同第８，０７１，５６８号、同第８，１４８，３４９号、同第８，４７０，８３４号、同第８，４８１，７１２号、同第８，５４１，４３４号、同第８，６９７，６９４号、同第８，７１５，６３８号、同第９，０６１，０４１号、同第９，１５６，８７２号、及び国際公開第２０１３／００９７３７号）；Emory Universityが出願したもの（米国特許第６，３４８，５８７号、同第６，９１１，４２４号、同第７，３０７，０６５号、同第７，４９５，００６号、同第７，６６２，９３８号、同第７，７７２，２０８号、同第８，１１４，９９４号、同第８，１６８，５８３号、同第８，６０９，６２７号、米国特許出願公開第２０１４／０２１２３８２号、及び国際公開第２０１４／１２４４４３０号）；Gilead Sciences/Pharmasset Inc.が出願したもの（米国特許第７，８４２，６７２号、同第７，９７３，０１３号、同第８，００８，２６４号、同第８，０１２，９４１号、同第８，０１２，９４２号、同第８，３１８，６８２号、同第８，３２４，１７９号、同第８，４１５，３０８号、同第８，４５５，４５１号、同第８，５６３，５３０号、同第８，８４１，２７５号、同第８，８５３，１７１号、同第８，８���１，７８５号、同第８，８７７，７３３号、同第８，８８９，１５９号、同第８，９０６，８８０号、同第８，９１２，３２１号、同第８，９５７，０４５号、同第８，９５７，０４６号、同第９，０４５，５２０号、同第９，０８５，５７３号、同第９，０９０，６４２号及び同第９，１３９，６０４号）並びに（米国特許第６，９０８，９２４号、同第６，９４９，５２２号、同第７，０９４，７７０号、同第７，２１１，５７０号、同第７，４２９，５７２号、同第７，６０１，８２０号、同第７，６３８，５０２号、同第７，７１８，７９０号、同第７，７７２，２０８号、同第ＲＥ４２，０１５号、同第７，９１９，２４７号、同第７，９６４，５８０号、同第８，０９３，３８０号、同第８，１１４，９９７号、同第８，１７３，６２１号、同第８，３３４，２７０号、同第８，４１５，３２２号、同第８，４８１，７１３号、同第８，４９２，５３９号、同第８，５５１，９７３号、同第８，５８０，７６５号、同第８，６１８，０７６号、同第８，６２９，２６３号、同第８，６３３，３０９号、同第８，６４２，７５６号、同第８，７１６，２６２号、同第８，７１６，２６３号、同第８，７３５，３４５号、同第８，７３５，３７２号、同第８，７３５，５６９号、同第８，７５９，５１０号及び同第８，７６５，７１０号）；Hoffman La-Rocheが出願したもの（米国特許第６，６６０，７２１号）；Rocheが出願したもの（米国特許第６，７８４，１６６号、同第７，６０８，５９９号、同第７，６０８，６０１号及び同第８，０７１，５６７号）；Alios BioPharma Inc.が出願したもの（米国特許第８，８９５，７２３号、同第８，８７７，７３１号、同第８，８７１，７３７号、同第８，８４６，８９６号、同第８，７７２，４７４号、同第８，９８０，８６５号、同第９，０１２，４２７号、米国特許出願公開第２０１５／０１０５３４１号、米国特許出願公開第２０１５／００１１４９７号、米国特許出願公開第２０１０／０２４９０６８号、米国特許出願公開第２０１２／００７０４１１号、国際公開第２０１５／０５４４６５号、国際公開第２０１４／２０９９７９号、国際公開第２０１４／１００５０５号、国際公開第２０１４／１００４９８号、国際公開第２０１３／１４２１５９号、国際公開第２０１３／１４２１５７号、国際公開第２０１３／０９６６８０号、国際公開第２０１３／０８８１５５号、国際公開第２０１０／１０８１３５号）；Enanta Pharmaceuticalsが出願したもの（米国特許第８，５７５，１１９号、同第８，８４６，６３８号、同第９，０８５，５９９号、国際公開第２０１３／０４４０３０号、国際公開第２０１２／１２５９００号）；Biotaが出願したもの（米国特許第７，２６８，１１９号、同第７，２８５，６５８号、同第７，７１３，９４１号、同第８，１１９，６０７号、同第８，４１５，３０９号、同第８，５０１，６９９号及び同第８，８０２，８４０号）；Biocryst Pharmaceuticalsが出願したもの（米国特許第７，３８８，００２号、同第７，４２９，５７１号、同第７，５１４，４１０号、同第７，５６０，４３４号、同第７，９９４，１３９号、同第８，１３３，８７０号、同第８，１６３，７０３号、同第８，２４２，０８５号及び同第８，４４０，８１３号）；Alla Chem, LLCが出願したもの（米国特許第８，８８９，７０１号及び国際公開第２０１５／０５３６６２号）；Inhibitexが出願したもの（米国特許第８，７５９，３１８号及び国際公開第２０１２／０９２４８４号）；Janssen Productsが出願したもの（米国特許第８，３９９，４２９号、同第８，４３１，５８８号、同第８，４８１，５１０号、同第８，５５２，０２１号、同第８，９３３，０５２号、同第９，００６，２９号及び同第９，０１２，４２８号）；the University of Georgia Foundationが出願したもの（米国特許第６，３４８，５８７号、同第７，３０７，０６５号、同第７，６６２，９３８号、同第８，１６８，５８３号、同第８，６７３，９２６号、同第８，８１６，０７４号、同第８，９２１，３８４号及び同第８，９４６，２４４号）；RFS Pharma, LLCが出願したもの（米国特許第８，８９５，５３１号、同第８，８５９，５９５号、同第８，８１５，８２９号、同第８，６０９，６２７号、同第７，５６０，５５０号、米国特許第２０１４／００６６３９５号、米国特許出願公開第２０１４／０２３５５６６号、米国特許出願公開第２０１０／０２７９９６９号、国際公開第２０１０／０９１３８６号及び国際公開第２０１２／１５８８１１号）；University College Cardiff Consultants Limitedが出願したもの（国際公開第２０１４／０７６４９０号、国際公開第２０１０／０８１０８２号、国際公開第２００８／０６２２０６号）；Achillion Pharmaceuticals, Inc.が出願したもの（国際公開第２０１４／１６９２７８号及び国際公開第２０１４／１６９２８０号）；Cocrystal Pharma, Inc.が出願したもの（米国特許第９，１７３，８９３号）；Katholieke Universiteit Leuvenが出願したもの（国際公開第２０１５／１５８９１３号）；Catabasisが出願したもの（国際公開第２０１３／０９０４２０号）；及びthe Regents of the University of Minnesotaが出願したもの（国際公開第２００６／００４６３７号）が挙げられる。
【００１５】
Atea Pharmaceuticals, Inc.は、米国特許第９，８２８，４１０号及び国際公開第２０１６／１４４９１８号において、ＨＣＶの治療用のβ−Ｄ−２’−デオキシ−２’−α−フルオロ−２’−β−Ｃ−置換−２−修飾−Ｎ６−（モノ及びジメチル）プリンヌクレオチドを開示している。Ateaはまた、米国特許出願公開第２０１８／０００９８３６号及び国際公開第２０１８／００９６２３号において、パラミクソウイルス及びオルソミクソウイルス感染の治療用のβ−Ｄ−２’−デオキシ−２’−置換−４’−置換−２−Ｎ６−置換−６−アミノプリンヌクレオチドを開示している。
【００１６】
安全、有効、かつ忍容性が良好な抗ＨＣＶ療法開発が医学的に強く必要とされている。薬物耐性が予測されることからその必要性は高まっている。より強力な直接作用型抗ウイルス薬は、著しく治療期間を短縮し、全てのＨＣＶ遺伝子型に感染した患者のコンプライアンス及びＳＶＲ（持続的ウイルス陰性化）率を改善する可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
したがって、ＨＣＶの感染を治療及び／又は予防するための化合物、医薬組成物、方法及び剤形を提供することは、本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
驚くべきことに、以下で化合物２と規定される化合物１のヘミ硫酸塩は、その遊離塩基（化合物１）を上回るバイオアベイラビリティー及び標的臓器選択性の増強を含む、予想外の好適な治療特性を示すことが発見された。これらの予想外の利点は、これまで予測することはできなかった。したがって、化合物２は、Ｃ型肝炎の治療のための、治療を必要とする宿主、通常ヒトに有効量で投与するのに治療上優れた組成物である。化合物２は、イソプロピル（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−（メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−Ｌ−アラニネートのヘミ硫酸塩と称される。化合物１は、米国特許９，８２８，４１０号に開示されている。
【化２】
2020505423.tif 000004
【００１９】
化合物２は化合物１と同様に、細胞において、その相当するトリホスフェートヌクレオチド（化合物１−６）に変換され、それは、活性代謝産物であり、ＲＮＡポリメラーゼの阻害剤である（以下のスキーム１を参照されたい）。化合物１−６は、細胞中で産生されて、細胞を離れないため、血漿中では測定不可能である。しかしながら、５’−ＯＨ代謝産物である化合物１−７（スキーム１を参照されたい）は、細胞から排出され、その結果として、血漿中で測定可能であり、細胞内活性代謝産物である化合物１−６の濃度の代替物として働く。
【００２０】
代替物である化合物１−７のｉｎ  ｖｉｖｏでの血漿濃度、したがって、化合物１−６の細胞内の濃度は、化合物１をｉｎ  ｖｉｖｏで投与する場合よりも、化合物２をｉｎ  ｖｉｖｏで投与する場合に実質的に高いことが発見された。化合物１及び化合物２を投薬したイヌの直接の比較（実施例１９、表２８）では、化合物２の投薬により、化合物１の投薬後のＡＵＣの２倍程度高い最終グアニン５’−ＯＨヌクレオシド代謝産物（１−７）のＡＵＣ（０時間〜４時間）が達成された。非共有結合塩が、親薬物（化合物１）の血漿濃度に対してかかる効果があることは予想外である。
【００２１】
さらに、化合物２は、ｉｎ  ｖｉｖｏで心臓よりも肝臓に選択的に分配し（実施例１９、表２９）、肝臓がＨＣＶに感染した宿主における罹患臓器であることから、これは有益である。イヌに化合物１又は化合物２を投薬して、肝臓及び心臓における活性トリホスフェート（１−６）の濃度を測定した。表２９に示されるように、活性トリホスフェート濃度の肝臓対心臓の比は、化合物１と比較して、化合物２を投薬した後により高かった。具体的には、化合物１に関する肝臓／心臓の分配比が３．１であるのに対し、化合物２に関する肝臓／心臓の分配比は２０である。このデータは、意外にも、化合物２の投与が、化合物１と比較した場合に、心臓よりも肝臓において、活性グアニントリホスフェート（化合物１−６）の優先的な分布をもたらし、潜在的なオフターゲットの効果を低減させることを示す。化合物２の投与が、望ましくないオフターゲットの分配を著しく低減させることは予想外であった。これにより、医療関係者が望む場合には、化合物１よりも高い用量での化合物２の投与が可能となる。
【００２２】
さらに、化合物２の活性グアニントリホスフェート誘導体（代謝産物１−６）の肝臓及び心臓組織レベルを、ラット及びサルにおいて経口用量の化合物２後に測定した（実施例２０）。試験した全ての種の肝臓において、高レベルの活性グアニジントリホスフェート（１−６）が測定された。重要なことには、サルの心臓では、数量化不可能なレベルのグアニントリホスフェート（１−６）が測定され、これは、活性トリホスフェートの肝臓特異的な形成を示している。したがって、化合物１の投薬と比較して、化合物２の投薬は、グアニントリホスフェート（１−６）分布を改善することが発見された。
【００２３】
化合物２は、健常な患者及びＣ型肝炎感染患者に投与する場合、単回経口用量後の忍容性が良好であり、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ及びＡＵＣｔｏｔ薬物動態パラメーターは、両群において同等であった（表３４及び表３５）。実施例２４に記載するように、ＨＣＶ感染患者における単回用量の化合物２は、著しい抗ウイルス活性をもたらした。代謝産物１−７の血漿曝露は、研究範囲にわたって大部分が用量に比例していた。
【００２４】
化合物２を投薬した患者の個々の薬物動態／薬力学的分析により、ウイルス応答が、化合物２の代謝産物１−７の血漿曝露と相関することが示され（実施例２４、図２３Ａ〜図２３Ｆ）、十分な用量の化合物２を用いた場合に、強いウイルス応答が達成可能であることを示した。
【００２５】
実施例２４により、非限定的な実施の形態として、３００ｍｇ、４００ｍｇ及び６００ｍｇの単回経口用量が、ヒトにおいて著しい抗ウイルス活性をもたらすことが確認される。６００ｍｇ用量の化合物２後の代謝産物１−７のＣ２４トラフ血漿濃度は、３００ｍｇ用量の化合物２後の代謝産物１−７のＣ２４トラフ血漿濃度の２倍であった。
【００２６】
図２４及び実施例２５は、Ｃ型肝炎の治療のための化合物２によって提供される特筆すべき本発明を強調している。図２４に示されるように、ヒトにおける化合物２の投薬（６００ｍｇ  ＱＤ（遊離塩基５５０ｍｇと同等）及び４５０ｍｇ  ＱＤ（遊離塩基４００ｍｇと同等））後の代謝産物１−７の定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）を予測して、一連のＨＣＶ臨床分離株に対して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで化合物１のＥＣ９５と比較して、定常状態血漿濃度が、ＥＣ９５よりも一貫して高いかどうかを判定し、それが、ｉｎ  ｖｉｖｏで多重の臨床分離株に対して高い有効性をもたらす。化合物１に関するＥＣ９５は、化合物２のＥＣ９５と同じである。化合物２が有効であるためには、代謝産物１−７の定常状態トラフ血漿レベルが、ＥＣ９５を超えるべきである。
【００２７】
図２４に示されるように、試験した全てに臨床分離株に対する化合物２のＥＣ９５は、約１８ｎＭ〜２４ｎＭの範囲であった。
【００２８】
図２４に示されるように、ヒトにおける４５０ｍｇ  ＱＤ（遊離塩基４００ｍｇと同等）の用量の化合物２は、約４０ｎｇ／ｍＬの予測定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）をもたらす。ヒトにおける６００ｍｇ  ＱＤ（遊離塩基５５０ｍｇと同等）の用量の化合物２は、約５０ｎｇ／ｍＬの予測定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）をもたらす。
【００２９】
したがって、代替物である代謝産物１−７の予測定常状態血漿濃度は、試験した全ての臨床分離株（治療するのが困難であるＧＴ３ａでさえ）に対してＥＣ９５のほぼ２倍であり、これは、優れた性能を示している。
【００３０】
対比して、治療ヌクレオチドであるソホスブビル（ソバルディ）の標準物質のＥＣ９５は、試験した全てのＨＣＶ臨床分離株に対して、５０ｎＭ〜２６５ｎＭの範囲であり、ＥＣ９５は、２つの分離株ＧＴ２ａ及びＧＴ２ｂのみに関して、４００ｍｇの商用投与量での予測定常濃度より低い。ソホスブビル４００ｍｇの商用投与量に関するＥＣ９５は、他の臨床分離株ＧＴ１ａ、ＧＴ１ｂ、ＧＴ３ａ、ＧＴ４ａ、及びＧＴ４ｄに関する予測定常濃度よりも大きい。
【００３１】
図２４における有効性及び薬物動態定常状態パラメーターを比較するデータにより、Ｃ型肝炎の治療のための化合物２の予想外の治療的重要性が明らかに実証される。実際に、化合物２の投与後の予測定常状態（Ｃ２４，ｓｓ）血漿レベルは、試験した全ての遺伝子型に関してＥＣ９５よりも少なくとも２倍高いと予想され、ＧＴ２に対しては、３倍〜５倍強力である。このデータにより、化合物２は、ヒトにおいて強力な汎遺伝子型抗ウイルス活性を有することが示される。図２４に示されるように、ＧＴ１、ＧＴ３、及びＧＴ４に対するソホスブビルのＥＣ９５は、１００ｎｇ／ｍＬよりも高い。したがって、驚くべきことに、化合物２は、同等の剤形のソホスブビルによって達する定常状態トラフ濃度（約１００ｎｇ／ｍＬ）よりも低い定常状態トラフ濃度（４０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬ）を送達する剤形で、ＨＣＶに対して活性である。
【００３２】
したがって、一実施の形態において、本発明は、約１５ｎｇ／ｍＬ〜７５ｎｇ／ｍＬ、例えば、２０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬ、又は更には４０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７定常状態血漿トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）をもたらす化合物２の剤形を含む。これは、ソホスブビルの同等の代謝産物の定常状態濃度が約１００ｎｇ／ｍＬであるという事実を鑑みて予想外である。
【００３３】
さらに、化合物２は、ＨＣＶに対して活性を有する非常に安定で、高度に可溶性の非吸湿性塩であることが発見された。一硫酸塩（化合物３）を含む、ヘミ硫酸塩（化合物２）以外の化合物１の多数の塩は、物理的に安定でなく、その代わりに潮解性であるか、又はガム状固体となり（実施例４）、したがって、安定な固体医薬剤形に適さないことから、このことは驚くべきことである。驚くべきことに、化合物２は、ガム状にならないと同時に、化合物１と比較して、水に最大４３倍可溶性であり、疑似胃液（ＳＧＦ）条件下で、化合物１よりも６倍以上可溶性である（実施例１５）。
【００３４】
実施例１６で論述するように、化合物２は、加速安定性条件（４０℃／７５％ＲＨ）下で６ヵ月間、参照標準物質と一致するＩＲを有する白色固体のままである。化合物２は、外気条件（２５℃／６０％ＲＨ）及び冷蔵条件（５℃）では９ヵ月間安定である。
【００３５】
化合物２の固体剤形（５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠）もまた、加速条件（４０℃／７５％ＲＨ）及び冷蔵条件（５℃）下で６ヵ月間、化学的に安定である（実施例２６）。化合物２は、外気条件（２５℃／６０％ＲＨ）下で、固体剤形で少なくとも９ヵ月間安定である。
【００３６】
スキーム１は、化合物１及び化合物２の代謝経路を提供し、この代謝経路は、ホスホルアミデート（代謝産物１−１）の初期脱エステル化を含み、代謝産物１−２を形成する。次に、代謝産物１−２は、Ｎ６−メチル−２，６−ジアミノプリン−５’−モノホスフェート誘導体（代謝産物１−３）に変換され、続いて、遊離５’−ヒドロキシル−Ｎ６−メチル−２，６−ジアミノプリンヌクレオシド（代謝産物１−８）及び５’−モノホスフェートとしての（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メチルリン酸二水素（代謝産物１−４）に代謝される。代謝産物１−４は、相当するジホスフェート（代謝産物１−５）に、続いて、活性トリホスフェート誘導体（代謝産物１−６）に同化される（anabolized）。５’−トリホスフェートは、更に代謝されて、２−アミノ−９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）−１，９−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−オン（１−７）を生成することができる。代謝産物１−７は、血漿中で測定可能であり、したがって、血漿中では測定不可能な活性トリホスフェート（１−６）に対する代替物である。
【化３】
2020505423.tif 000005
【００３７】
一実施の形態において、本発明は、任意に薬学的に許容可能な担体中、治療を必要とする宿主においてＣ型肝炎（ＨＣＶ）を治療するための化合物２及びその使用である。一態様において、化合物２は、非晶質固体として使用される。別の態様において、化合物２は、結晶性固体として使用される。
【００３８】
本発明は、
（ｉ）フラスコ又は容器中で、有機溶媒、例えば、アセトン、酢酸エチル、メタノール、アセトニトリル、又はエーテル等中に化合物１を溶解させる第１の工程と、
（ｉｉ）第２のフラスコ又は溶液に、工程（ｉ）の有機溶媒と同じであり得るか、又は異なり得る第２の有機溶媒（該溶媒は例えばメタノールであり得る）を入れ、任意に第２の有機溶媒を０℃〜１０℃に冷却して、Ｈ２ＳＯ４を第２の有機溶媒に滴加して、Ｈ２ＳＯ４／有機溶媒混合物を作る工程と、
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の０．５／１．０のモル比のＨ２ＳＯ４／溶媒混合物を、工程（ｉ）の化合物１の溶液に、外気温又はわずかに高い温度若しくはわずかに低い温度（例えば、２３℃〜３５℃）で滴加する工程と、
（ｉｖ）化合物２の沈殿物が形成されるまで、例えば外気温又はわずかに高い温度若しくはわずかに低い温度で、工程（ｉｉｉ）の反応物を攪拌する工程と、
（ｖ）工程（ｉｖ）から得られた沈殿物を、任意に濾過して、有機溶媒で洗浄する工程と、
（ｖｉ）任意に高温、例えば５５℃、５６℃、５７℃、５８℃、５９℃、又は６０℃で、得られた化合物２を、真空中で任意に乾燥させる工程と、
を含む化合物２の調製に関する例示的な非限定的なプロセスを更に含む。
【００３９】
一実施の形態において、工程（ｉ）の有機溶媒は、３−メチル−２−ペンタノンである。一実施の形態において、工程（ｉ）の有機溶媒は、エチルイソプロピルケトンである。一実施の形態において、工程（ｉ）の有機溶媒は、プロピオン酸メチルである。一実施の形態において、工程（ｉ）の有機溶媒は、酪酸エチルである。
【００４０】
抗ウイルスヌクレオシドの多数の文献及び特許出願にもかかわらず、化合物２は、具体的に開示されていない。したがって、本発明は、本明細書中に記載されるような化合物２、又はその薬学的に許容可能な組成物若しくは剤形を含む。
【００４１】
化合物、方法、剤形、及び組成物は、有効量の化合物２の投与による、ＨＣＶウイルスに感染した宿主の治療のために提供される。或る特定の実施の形態において、化合物２は、少なくとも約１００ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、又は１０００ｍｇの用量で投与される。或る特定の実施の形態において、化合物２は、最大１２週間、最大１０週間、最大８週間、最大６週間、又は最大４週間投与される。代替的な実施の形態において、化合物２は、少なくとも４週間、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも１０週間、又は少なくとも１２週間投与される。或る特定の実施の形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、又は１日おきに投与される。或る特定の実施の形態において、化合物２は、約１５ｎｇ／ｍＬ〜７５ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する剤形で投与される。一実施の形態において、化合物２は、約２０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する剤形で投与される。或る特定の実施の形態において、化合物２は、約１２００ｎｇ＊ｈ／ｍＬ〜３０００ｎｇ＊ｈ／ｍＬの代謝産物１−７のＡＵＣを達成する剤形で投与される。一実施の形態において、化合物２は、約１５００ｎｇ＊ｈ／ｍＬ〜２１００ｎｇ＊ｈ／ｍＬの代謝産物１−７のＡＵＣを達成する剤形で投与される。
【００４２】
化合物、組成物、及び剤形はまた、抗ＨＣＶ抗体陽性及び抗原陽性の状態、ウイルスによる慢性の肝臓炎症、進行性のＣ型肝炎に起因する肝臓癌（肝細胞癌（ＨＣＣ））、肝硬変、慢性又は急性Ｃ型肝炎、Ｃ型劇症肝炎、慢性持続性Ｃ型肝炎及び抗ＨＣＶによる倦怠感等の関連病状を治療するのに使用することができる。化合物又は化合物を含む製剤はまた、抗ＨＣＶ抗体陽性若しくは抗原陽性であるか、又はＣ型肝炎に曝露された個体において臨床的疾患の進行を防止又は制限するのに予防的に使用することができる。
【００４３】
したがって、本発明は、下記の特徴を含む：
（ａ）本明細書中に記載されるような化合物２；
（ｂ）化合物２のプロドラッグ；
（ｃ）Ｃ型肝炎ウイルス感染の治療のための医薬の製造における化合物２の使用；
（ｄ）任意に薬学的に許容可能な担体中、Ｃ型肝炎を治療するために使用される化合物２；
（ｅ）Ｃ型肝炎ウイルス感染を治療するための治療的使用が意図される医薬を製造する方法であって、本明細書に記載されるような化合物２、又は薬学的に許容可能な塩を製造において使用することを特徴とする、方法、
（ｅ）薬学的に許容可能な担体又は希釈剤と共に、宿主を治療するのに有効な量の化合物２を含む医薬製剤、
（ｆ）有効量の化合物２を含む治療製品の調製方法、
（ｇ）有益な薬物動態プロファイルをもたらすものを含む固体剤形；及び、
（ｈ）本明細書中に記載されるような化合物２の製造プロセス。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１Ａ】実施例２及び実施例５に記載されるような、特性評価目的の安定性研究前の試料１−１（非晶質化合物１）、試料１−２（結晶性化合物１）、及び試料１−３（非晶質化合物２）のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図１Ｂ】実施例２に記載されるような、純度を決定するための非晶質化合物１（試料１−１）のＨＰＬＣクロマトグラフである。試料の純度は、９８．７％であった。ｘ軸は、分で測定される時間であり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図２Ａ】実施例２に記載されるような、純度を決定するための結晶性化合物１（試料１−２）のＨＰＬＣクロマトグラフである。試料の純度は、９９．１１％であった。ｘ軸は、分で測定される時間であり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図２Ｂ】実施例２に記載されるような、特性評価目的の任意の安定性研究前の結晶性化合物１（試料１−２）のＤＳＣ及びＴＧＡグラフである。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。
【図３】実施例２に記載されるような、絶対立体化学を示す化合物１のＸ線結晶画像である。
【図４Ａ】実施例２に記載されるような、２５℃及び６０％相対湿度で１４日間保管した後の試料１−１（非晶質化合物１）、試料１−２（結晶性化合物１）、及び試料１−３（非晶質化合物２）のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図４Ｂ】実施例４に記載されるような、２５℃及び６０％相対湿度で７日間保管した後の試料１−４、１−５、１−６、１−７、及び１−９のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図５Ａ】実施例４に記載されるような、２５℃及び６０％相対湿度で１４日間保管した後の試料１−４、１−６、１−７、及び１−９のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図５Ｂ】実施例５に記載されるような、非晶質化合物２（試料１−３）のＸＲＰＤパターンである。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図６Ａ】実施例５に記載されるような、純度を決定するための非晶質化合物２（試料１−３）のＨＰＬＣクロマトグラムである。試料の純度は、９９．６％であった。ｘ軸は、分で測定される時間であり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図６Ｂ】実施例５に記載されるような、特性評価目的の任意の安定性研究前の非晶質化合物２（試料１−３）に関するＤＳＣ及びＴＧＡグラフである。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。
【図７Ａ】化合物２の結晶化から同定される結晶性試料（試料２−２、２−６及び２−７）及び難結晶性試料（試料２−３、２−４、２−５、及び２−８）のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである（実施例６）。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図７Ｂ】化合物２の結晶化から同定される非晶質試料（試料２−９、２−１０及び２−１１）のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである（実施例６）。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図８Ａ】２５℃及び６０％相対湿度で６日間の保管後の試料（試料２−２、２−３、２−４、２−５、２−６、２−７及び２−８）のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである（実施例６）。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図８Ｂ】試料２−２に関するＤＳＣ及びＴＧＡグラフである（実施例６）。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。ＤＳＣ及びＴＧＡ収集に関する実験手順は、実施例２に与えられている。
【図９Ａ】試料２−３に関するＤＳＣ及びＴＧＡグラフである（実施例６）。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。ＤＳＣ及びＴＧＡ収集に関する実験手順は、実施例２に与えられている。
【図９Ｂ】試料２−４に関するＤＳＣ及びＴＧＡグラフである（実施例６）。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。ＤＳＣ及びＴＧＡ収集に関する実験手順は、実施例２に与えられている。
【図１０Ａ】試料２−５に関するＤＳＣ及びＴＧＡグラフである（実施例６）。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。ＤＳＣ及びＴＧＡ収集に関する実験手順は、実施例２に与えられている。
【図１０Ｂ】試料２−６に関するＤＳＣ及びＴＧＡグラフである（実施例６）。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。ＤＳＣ及びＴＧＡ収集に関する実験手順は、実施例２に与えられている。
【図１１Ａ】試料２−７に関するＤＳＣ及びＴＧＡグラフである（実施例６）。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。ＤＳＣ及びＴＧＡ収集に関する実験手順は、実施例２に与えられている。
【図１１Ｂ】試料２−８に関するＤＳＣ及びＴＧＡグラフである（実施例６）。ｘ軸は、℃で測定される温度であり、左ｙ軸は、（Ｗ／ｇ）で測定される熱流量であり、右ｙ軸は、パーセントで測定される重量である。ＤＳＣ及びＴＧＡ収集に関する実験手順は、実施例２に与えられている。
【図１２Ａ】実施例７で論述するような、非晶質化合物４（試料３−１２）のＸＲＰＤパターンである。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。マロン酸塩の結晶化は、使用する溶媒に関わらず観察されなかった。
【図１２Ｂ】マロン酸塩を用いた化合物１の不成功の（attempted）結晶化から同定される非晶質試料（試料３−６、３−１０、３−１１、及び３−１２）のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである（実施例７）。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図１３Ａ】実施例７に記載されるような、マロン酸塩を用いた化合物１の不成功の結晶化からの試料３−１２のＨＰＬＣクロマトグラムである。試料は、純度９９．２％であった。ｘ軸は、分で測定される時間であり、ｙ軸は、ｍＡｕで測定される強度である。
【図１３Ｂ】実施例８に記載されるような、ＬＡＧを使用した結晶化から得られた固体試料（試料４−１３、４−１２、４−９、４−３、及び４−１）の、化合物１（試料１−２）と比較したＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである。ＸＲＤＰは全て、更なるピークを伴わずに、結晶性酸対イオンのパターンに適合する。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図１４Ａ】実施例１０に記載されるような、結晶化溶媒として酢酸エチルを利用することから得られる試料（試料６−１３、６−１２、６−１１、６−１０、６−８、６−７、６−６、６−５、６−４、及び６−２）の結晶性化合物１（試料１−２）と比較したＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである。ＸＲＰＤパターンは概して、わずかな差を示す試料６−２、６−４、及び６−５を除いて、化合物１のパターンに適合することが見出された。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図１４Ｂ】実施例９に記載されるような、ＭＥＫ中での第２の溶解並びに貧溶媒シクロヘキサン及びパモ酸の添加後の試料５−１のＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである。パモ酸を用いて結晶化させた試料５−１は、成熟後に固体であったが、ＸＲＰＤパターンは、パモ酸のパターンに適合した。
【図１５Ａ】実施例１０に記載されるような、結晶化溶媒として酢酸エチルを利用することから得られる試料（試料６−５、６−４、及び６−２）の、結晶性化合物１（試料１−２）と比較したＸＲＰＤディフラクトグラムのオーバーレイである。ＸＲＰＤパターンは概して、わずかな差を示す試料６−２、６−４、及び６−５を除いて、化合物１のパターンに適合することが見出された。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度であり、結晶化で使用される酸を付す。
【図１５Ｂ】実施例１４に記載されるような、化合物２に関するＸＲＰＤパターンである。ｘ軸は、度で測定される２シータであり、ｙ軸は、カウントで測定される強度である。
【図１６Ａ】ラット、イヌ、及びサルの肝臓及び心臓における活性ＴＰ（代謝産物１−６）濃度レベルのグラフである（実施例１８）。ｘ軸は、各種に関してｍｇ／ｋｇで測定される投与量であり、ｙ軸は、ｎｇ／ｇで測定される活性ＴＰ濃度である。
【図１６Ｂ】単回経口用量の化合物１又は化合物２の４時間後に測定したイヌの肝臓及び心臓における活性ＴＰ（代謝産物１−６）濃度レベルのグラフである（実施例１９）。ｘ軸は、ｍｇ／ｋｇで測定される各化合物の投与量であり、ｙ軸は、ｎｇ／ｇで測定される活性ＴＰ濃度である。
【図１７】投薬後７２時間にわたり測定した単回５００ｍｇ／ｋｇ経口用量の化合物２を付与したラットにおける化合物１及び代謝産物１−７の血漿プロファイルである（実施例２０）。ｘ軸は、時間で測定される時間であり、ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される血漿濃度である。
【図１８】投薬後７２時間にわたり測定した３０ｍｇ、１００ｍｇ、又は３００ｍｇの単回経口用量の化合物２を付与したサルにおける化合物１及び代謝産物１−７の血漿プロファイルである（実施例２０）。ｘ軸は、時間で測定される時間であり、ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される血漿濃度である。
【図１９】ＨＣＶ臨床分離株に対するソホスブビル及び化合物１のｎＭで測定されるＥＣ９５のグラフである。化合物１に関するＥＣ９５値は、ソホスブビルよりも７倍〜３３倍低い（実施例２２）。ｘ軸には、遺伝子型を付し、ｙ軸は、ｎＭで測定されるＥＣ９５である。
【図２０】ＨＣＶ遺伝子型１ａ、１ｂ、２ａ、３ａ、４ａ及び５ａの実験室株に対するソホスブビル及び化合物１のｎＭで測定されるＥＣ５０のグラフである。化合物１は、遺伝子型１−５ではソホスブビルよりも約６倍〜１１倍強力である（実施例２２）。ｘ軸には、遺伝子型を付し、ｙ軸は、ｎＭで測定されるＥＣ５０である。
【図２１】実施例２４に記載されるような、研究のパートＢの全てのコホートにおける単回用量の化合物２の投与後の化合物１の平均血漿濃度−時間プロファイルのグラフである。化合物１は、パートＢの全てのコホートにおいて、急速に吸収されて、約８時間以内で迅速に代謝された。ｘ軸は、時間で測定される時間であり、ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される幾何平均血漿濃度である。
【図２２】実施例２４に記載されるような、研究のパートＢの全てのコホートにおける単回用量の化合物２の投与後の代謝産物１−７の平均血漿濃度−時間プロファイルのグラフである。代謝産物１−７は、パートＢの全てのコホートにおいて、持続的な血漿濃度を示した。ｘ軸は、時間で測定される時間であり、ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される幾何平均血漿濃度である。
【図２３Ａ】実施例２４に記載されるような、１ｂコホートに登録した対象の個々の薬物動態／薬力学的分析である。グラフは、血漿代謝産物１−７曝露及びＨＣＶ  ＲＮＡ減少レベルを示す。破線は、ＧＴ１ｂに対するＥＣ９５値よりも大きなウイルス応答を持続するのに必要とされる代謝産物１−７の最小濃度を表す。ｘ軸は、時間で測定される時間である。左ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される代謝産物１−７血漿濃度であり、右ｙ軸は、ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬで測定されるＨＣＶ  ＲＮＡ減少である。
【図２３Ｂ】実施例２４に記載されるような、１ｂコホートに登録した対象の個々の薬物動態／薬力学的分析である。グラフは、血漿代謝産物１−７曝露及びＨＣＶ  ＲＮＡ減少レベルを示す。破線は、ＧＴ１ｂに対するＥＣ９５値よりも大きなウイルス応答を持続するのに必要とされる代謝産物１−７の最小濃度を表す。ｘ軸は、時間で測定される時間である。左ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される代謝産物１−７血漿濃度であり、右ｙ軸は、ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬで測定されるＨＣＶ  ＲＮＡ減少である。
【図２３Ｃ】実施例２４に記載されるような、１ｂコホートに登録した対象の個々の薬物動態／薬力学的分析である。グラフは、血漿代謝産物１−７曝露及びＨＣＶ  ＲＮＡ減少レベルを示す。破線は、ＧＴ１ｂに対するＥＣ９５値よりも大きなウイルス応答を持続するのに必要とされる代謝産物１−７の最小濃度を表す。ｘ軸は、時間で測定される時間である。左ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される代謝産物１−７血漿濃度であり、右ｙ軸は、ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬで測定されるＨＣＶ  ＲＮＡ減少である。
【図２３Ｄ】実施例２４に記載されるような、３ｂコホートに登録した対象の個々の薬物動態／薬力学的分析である。各グラフは、血漿代謝産物１−７曝露及びＨＣＶ  ＲＮＡ減少レベルを示す。破線は、ＧＴ１ｂに対するＥＣ９５値よりも大きなウイルス応答を持続するのに必要とされる代謝産物１−７の最小濃度を表す。ｘ軸は、時間で測定される時間である。左ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される代謝産物１−７血漿濃度であり、右ｙ軸は、ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬで測定されるＨＣＶ  ＲＮＡ減少である。
【図２３Ｅ】実施例２４に記載されるような、３ｂコホートに登録した対象の個々の薬物動態／薬力学的分析である。各グラフは、血漿代謝産物１−７曝露及びＨＣＶ  ＲＮＡ減少レベルを示す。破線は、ＧＴ１ｂに対するＥＣ９５値よりも大きなウイルス応答を持続するのに必要とされる代謝産物１−７の最小濃度を表す。ｘ軸は、時間で測定される時間である。左ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される代謝産物１−７血漿濃度であり、右ｙ軸は、ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬで測定されるＨＣＶ  ＲＮＡ減少である。
【図２３Ｆ】実施例２４に記載されるような、３ｂコホートに登録した対象の個々の薬物動態／薬力学的分析である。各グラフは、血漿代謝産物１−７曝露及びＨＣＶ  ＲＮＡ減少レベルを示す。破線は、ＧＴ１ｂに対するＥＣ９５値よりも大きなウイルス応答を持続するのに必要とされる代謝産物１−７の最小濃度を表す。ｘ軸は、時間で測定される時間である。左ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される代謝産物１−７血漿濃度であり、右ｙ軸は、ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬで測定されるＨＣＶ  ＲＮＡ減少である。
【図２４】ＧＴ１、ＧＴ２、ＧＴ３、及びＧＴ４  ＨＣＶ感染患者の臨床分離株に対する化合物１及びソホスブビルのＥＣ９５値のグラフである。破線の横線（−−−−−）は、４００ｍｇ  ＱＤの用量のソホスブビル後のソホスブビルヌクレオシドの定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を表す。実線の横線（−）は、化合物２  ６００ｍｇ（化合物１  ５５０ｍｇと同等）後の代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を表す。点線の横線（・・・・・・・・・・・）は、化合物２  ４５０ｍｇ（化合物１  ４００ｍｇと同等）後の代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を表す。実施例２５で論述するように、化合物２  ６００ｍｇ及び４５０ｍｇ後の代謝産物１−７の予測定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、試験した全ての臨床分離株に対して、化合物１のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＥＣ９５を超える。ソホスブビルの定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）は、ＧＴ２臨床分離株でのみ、ＥＣ９５を超える。ｘ軸には、臨床分離株を付し、ｘ軸の下の表は、化合物１及びソホスブビルに関するＥＣ９５値を列挙する。ｙ軸は、ｎｇ／ｍＬで測定される臨床分離株に対するＥＣ９５である。ＥＣ９５は、ヌクレオシド当量として表される。ソホスブビル及び化合物２は、毎日投与した（ＱＤ）。
【図２５】実施例２６に記載されるような、化合物２の５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠の製造プロセスを示す流れ図である。工程１では、結晶セルロース、化合物２、ラクトース一水和物、及びクロスカルメロースナトリウムを、６００μＭのスクリーンに通して濾過する。工程２では、工程１からの内容物を、Ｖ−ブレンダーに入れて、２５ｒｐｍで５分間混合する。工程３では、ステアリン酸マグネシウムを、６００μＭのスクリーンに通して濾過する。工程４では、ステアリン酸マグネシウムを、工程２からの内容物（結晶セルロース、化合物２、ラクトース一水和物、及びクロスカルメロースナトリウム）が入ったＶ−ブレンダーに入れて、２５ｒｐｍで２分間混合する。次に、共通ブレンドを、５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠の生産用に分割する。５０ｍｇ錠を生産するために、工程４からのブレンドを、６ｍｍの丸型標準凹面ツーリングで圧縮する。１００ｍｇ錠を生産するために、工程４からのブレンドを、８ｍｍの丸型標準凹面ツーリングで圧縮する。続いて、錠剤を、ＰＰキャップでインダクションシーリングされたＨＤＰＥボトルに、乾燥剤とともに包装する。
【図２６】ＨＣＶウイルスの治療に関して、相当する遊離塩基よりも有益な薬理学的特性を示すヘミ硫酸塩である。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本明細書中に開示する本発明は、任意に薬学的に許容可能な担体中、有効量の本明細書中に記載されるイソプロピル（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−（メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−Ｌ−アラニネートのヘミ硫酸塩（化合物２）の投与を含むＨＣＶウイルスのヒト及び他の宿主動物における感染、又はヒト及び他の宿主動物への曝露の治療のための化合物、方法、組成物、及び固体剤形である。一実施形態において、化合物２は、非晶質固体である。更に別の実施形態において、化合物２は、結晶性固体である。
【化４】
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【００４６】
化合物、組成物、及び剤形はまた、ＨＣＶウイルス曝露に関連するか、又はその結果として起こる状態を治療するのに使用することができる。例えば、活性化合物は、ＨＣＶ抗体陽性及びＨＣＶ抗原陽性の状態、ウイルスによる慢性の肝臓炎症、進行性のＣ型肝炎に起因する肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肝硬変、急性Ｃ型肝炎、Ｃ型劇症肝炎、慢性持続性Ｃ型肝炎及び抗ＨＣＶによる倦怠感を治療するのに使用することができる。
【００４７】
活性化合物及び組成物はまた、一連のＨＣＶ遺伝子型を治療するのに使用することができる。それぞれが多数ののサブタイプを有するＨＣＶの少なくとも６つの別個の遺伝子型が世界規模で同定されている。遺伝子型１〜３は、世界中に蔓延しており、遺伝子型４、５及び６は、地理的に、より限定されている。遺伝子型４は、中東アフリカで一般的である。遺伝子型５は、殆どが南アフリカで見られる。遺伝子型６は、主に東南アジアに存在する。アメリカ合衆国において最も一般的な遺伝子型は、遺伝子型１であるが、遺伝子型及びサブタイプの規定が、治療タイプ及び治療期間に役立ち得る。例えば、異なる遺伝子型は、異なる投薬に対して異なって応答し、最適な治療時間は、遺伝子型感染に応じて様々である。遺伝子型内で、遺伝子型１ａ及び遺伝子型１ｂ等のサブタイプも同様に、治療に対して異なって応答する。遺伝子型の１つのタイプによる感染は、異なる遺伝子型による後の感染を排除しない。
【００４８】
実施例２２に記載されるように、化合物２は、遺伝子型１〜５を含む一連のＨＣＶ遺伝子型に対して活性である。一実施形態において、化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型１、ＨＣＶ遺伝子型２、ＨＣＶ遺伝子型３、ＨＣＶ遺伝子型４、ＨＣＶ遺伝子型５、又はＨＣＶ遺伝子型６を治療するのに使用される。一実施形態において、化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型１ａを治療するのに使用される。一実施形態において、化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型１ｂを治療するのに使用される。一実施形態において、化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型２ａを治療するのに使用される。一実施形態において、化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型２ｂを治療するのに使用される。一実施形態において、化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型３ａを治療するのに使用される。一実施形態において、化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型４ａを治療するのに使用される。一実施形態において、化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型４ｄを治療するのに使用される。
【００４９】
一実施形態において、化合物１又は化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型５ａを治療するのに使用される。一実施形態において、化合物１又は化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型６ａを治療するのに使用される。一実施形態において、化合物１又は化合物２は、ＨＣＶ遺伝子型６ｂ、６ｃ、６ｄ、６ｅ、６ｆ、６ｇ、６ｈ、６ｉ、６ｊ、６ｋ、６ｌ、６ｍ、６ｎ、６ｏ、６ｐ、６ｑ、６ｒ、６ｓ、６ｔ、又は６ｕを治療するのに使用される。
【００５０】
実施例２５で論述するように、また図２４に示されるように、４５０ｍｇ（遊離塩基４００ｍｇ）の用量及び６００ｍｇ（遊離塩基５５０ｍｇ）の用量の化合物２後の代謝産物１−７の予測定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）は、約４０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬである。このＣ２４，ｓｓレベルは、ＨＣＶ遺伝子型１ａ、１ｂ、２ａ、２ｂ、３ａ、４ａ、及び４ｄで化合物１のＥＣ９５を超える。このデータにより、化合物２は、強力な汎遺伝子型活性を有することが確認される。化合物２は、同等のソホスブビル投薬後のソホスブビルのヌクレオシド代謝産物の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）よりも小さい定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成するため、これは驚くべきことである。ソホスブビルの相当するヌクレオシド代謝産物の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）は、約１００ｎｇ／ｍｇであるが、このレベルは、ＧＴ２臨床分離株に対してのみ、ソホスブビルのＥＣ９５を超える（図２４）。化合物２は、ＧＴ１、ＧＴ２、ＧＴ３、及びＧＴ４に対して、ソホスブビルよりも強力であることから、剤形が送達するその代謝産物の定常状態トラフ濃度を小さくすることが可能になり、濃度が低くても、ＨＣＶの試験した全ての遺伝子型に対して有効である。一実施形態において、約１５ｎｇ／ｍＬ〜７５ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約２０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬ、又は約２０ｎｇ／ｍＬ〜４０ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。
【００５１】
一実施形態において、化合物、化合物を含む製剤、又は固体剤形はまた、ＨＣＶ抗体若しくはＨＣＶ抗原陽性であるか、又はＣ型肝炎に曝露された個体において臨床的疾患の進行を防止又は遅延するのに予防的に使用することができる。
【００５２】
特に、化合物２は、ＨＣＶに対して活性であり、その遊離塩基（化合物１）と比較して優れた薬物様特性及び薬理学的特性を示すことが発見された。驚くべきことに、化合物２は、化合物１よりもバイオアベイラビリティーが高く、またより高いＡＵＣを達成し（実施例１９）、化合物２は、化合物１よりも、標的臓器である肝臓に対してより選択的である（実施例１９）。
【００５３】
化合物２はまた、溶解性及び化学的安定性の観点で、化合物１よりも有益である。イソプロピル（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−（メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−Ｌ−アラニネートの一硫酸塩（化合物３）は不安定であり、粘着性ガムの外観を示す一方で、ヘミ硫酸塩である化合物２は、安定な白色固体であるため、これは驚くべきことである。ヘミ硫酸塩は、固体として、また固体剤形で、ともに９ヵ月以上非常に安定であり、吸湿性ではない。
【化５】
2020505423.tif 000007
【００５４】
抗ウイルスヌクレオシドの多数の文献及び特許出願にもかかわらず、化合物２は、具体的に開示されていない。
【００５５】
化合物２は、リン原子にてＳ−立体化学を有し、それは、Ｘ線結晶解析を用いて確認されている（図３、実施例２）。代替的な実施形態において、化合物２は、純粋なエナンチオマーまでを含む任意の所望の比のリンＲ−エナンチオマー及びＳ−エナンチオマーの形態で使用することができる。幾つかの実施形態において、化合物２は、反対のエナンチオマーを少なくとも９０％含まない形態で使用され、反対のエナンチオマーを少なくとも９８％、９９％、又は更には１００％含まない場合がある。別段の記載がない限り、鏡像異性体的に富化された（enantiomerically enriched）化合物２は、反対のエナンチオマーを少なくとも９０％含まない。さらに、代替的な実施形態において、ホルホルアミデートのアミノ酸は、Ｄ若しくはＬ−立体配置、又はラセミ混合物を含むそれらの混合物で存在し得る。
【００５６】
別段の規定がない限り、本明細書中に記載する化合物は、β−Ｄ−立体配置で提供される。代替的な実施形態において、化合物は、β−Ｌ−立体配置で提供され得る。同様に、キラリティーを示す任意の置換基は、ラセミ形態、エナンチオマー形態、ジアステレオマー形態、又はそれらの任意の混合物で提供され得る。ホスホルアミデートがキラリティーを示す場合、Ｒ若しくはＳキラルリン誘導体又はラセミ混合物を含むそれらの混合物として提供され得る。これらの立体配置の組み合わせは全て、本明細書中に記載する本発明における代替的な実施形態である。別の実施形態において、化合物２（ヌクレオチド又はヘミ硫酸塩）の水素の少なくとも１つを、重水素で置換することができる。
【００５７】
これらの代替的な立体配置として、下記が挙げられるが、これらに限定されない：
【化６】
2020505423.tif 000008
2020505423.tif 000009
【００５８】
Ｉ．イソプロピル（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−（メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−Ｌ−アラニネートのヘミ硫酸塩（化合物２）
本発明の活性化合物は、化合物２であり、それは、その薬学的に許容可能な組成物又は固体剤形で提供することができる。一実施形態において、化合物２は、非晶質固体である。更なる実施形態において、化合物２は、結晶性固体である。
【００５９】
化合物２の合成
本発明は、
（ｉ）フラスコ又は容器中で、有機溶媒、例えば、アセトン、酢酸エチル、メタノール、アセトニトリル、又はエーテル等中に化合物１を溶解させる第１の工程と、
（ｉｉ）第２のフラスコ又は溶液に、工程（ｉ）の有機溶媒と同じであり得るか、又は異なり得る第２の有機溶媒（該溶媒は例えばメタノールであり得る）を入れ、任意に第２の有機溶媒を０℃〜１０℃に冷却して、Ｈ２ＳＯ４を第２の有機溶媒に滴加して、Ｈ２ＳＯ４／有機溶媒混合物を作る工程と、
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の０．５／１．０のモル比のＨ２ＳＯ４／溶媒混合物を、工程（ｉ）の化合物１の溶液に、外気温又はわずかに高い温度若しくはわずかに低い温度（例えば、２３℃〜３５℃）で滴加する工程と、
（ｉｖ）化合物２の沈殿物が形成されるまで、例えば外気温又はわずかに高い温度若しくはわずかに低い温度で、工程（ｉｉｉ）の反応物を攪拌する工程と、
（ｖ）工程（ｉｖ）から得られた沈殿物を、任意に濾過して、有機溶媒で洗浄する工程と、
（ｖｉ）任意に高温、例えば５５℃、５６℃、５７℃、５８℃、５９℃、又は６０℃で、得られた化合物２を、真空中で任意に乾燥させる工程と、
を含む化合物２の調製に関する例示的な非限定的なプロセスを更に含む。
【００６０】
或る特定の実施形態において、上記工程（ｉ）は、アセトン中で実施される。さらに、工程（ｉｉ）の第２の有機溶媒は、例えばメタノールとすることができ、工程（ｖ）の有機溶媒の混合物は、メタノール／アセトンである。
【００６１】
一実施形態において、化合物１は、工程（ｉ）において酢酸エチル中に溶解される。一実施形態において、化合物１は、工程（ｉ）においてテトラヒドロフラン中に溶解される。一実施形態において、化合物１は、工程（ｉ）においてアセトニトリル中に溶解される。更なる実施形態において、化合物１は、工程（ｉ）においてジメチルホルムアミド中に溶解される。
【００６２】
一実施形態において、工程（ｉｉ）の第２の有機溶媒は、エタノールである。一実施形態において、工程（ｉｉ）の第２の有機溶媒は、イソプロパノールである。一実施形態において、工程（ｉｉ）の第２の有機溶媒は、ｎ−ブタノールである。
【００６３】
一実施形態において、溶媒の混合物、例えばエタノール／アセトンは、工程（ｖ）の洗浄用に使用される。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、イソプロパノール／アセトンである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、ｎ−ブタノール／アセトンである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、エタノール／酢酸エチルである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、イソプロパノール／酢酸エチルである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、ｎ−ブタノール／酢酸エチルである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、エタノール／テトラヒドロフランである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、イソプロパノール／テトラヒドロフランである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、ｎ−ブタノール／テトラヒドロフランである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、エタノール／アセトニトリルである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、イソプロパノール／アセトニトリルである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、ｎ−ブタノール／アセトニトリルである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、エタノール／ジメチルホルムアミドである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、イソプロパノール／ジメチルホルムアミドである。一実施形態において、工程（ｖ）の洗浄用の溶媒の混合物は、ｎ−ブタノール／ジメチルホルムアミドである。
【００６４】
ＩＩ．イソプロピル（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−（メチルアミノ）-９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−Ｌ−アラニネート（化合物２）の代謝
化合物１及び化合物２の代謝は、５’−モノホスフェートの生産、続くＮ６−メチル−２，６−ジアミノプリン塩基（１−３）の同化作用を含み、５’−モノホスフェートとして（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メチルリン酸二水素（１−４）を生成する。次に、モノホスフェートは、活性なトリホスフェート種：５’−トリホスフェート（１−６）に更に同化される。５’−トリホスフェートは、更に代謝されて、２−アミノ−９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）−３−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）−１，９−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−オン（１−７）を生成することができる。或いは、５’−モノホスフェート１−２は、代謝されて、プリン塩基１−８を生成することができる。イソプロピル（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−（メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−Ｌ−アラニネートに関する代謝経路をスキーム１に示す（上記に示す）。
【００６５】
ＩＩＩ．化合物１の更なる塩
代替的な実施形態において、本発明は、シュウ酸塩（化合物４）又はＨＣｌ塩（化合物５）としての化合物１を提供する。
【化７】
2020505423.tif 000010
【００６６】
１：１のシュウ酸塩及び１：１のＨＣｌ塩はともに、Ｃ型肝炎を患うヒト等の宿主の治療用の固体剤形にとって合理的な特性を有する固体を形成する。しかしながら、シュウ酸塩は、患者が腎臓結石になりやすい場合には、あまり望ましくない可能性があり、おそらく適していない。ＨＣｌ塩は、ヘミ硫酸塩よりも吸湿性である。したがって、ヘミ硫酸塩は依然として、予想外の特性を有する化合物１の最も所望の塩形態である。
【００６７】
ＩＶ．定義
本発明の文脈で使用される「Ｄ配置」の用語は、非天然起源ヌクレオシドすなわち「Ｌ」配置の逆である、糖部分の天然配置を模倣する原理配置を指す。「β」又は「βアノマー」の用語は、ヌクレオシドアナログ中のフラノース部分の平面の上にヌクレオシド塩基が形成される（配置される）ヌクレオシドアナログに関して使用される。
【００６８】
「同時投与する」及び「同時投与」、又は併用療法の用語は、少なくとも１つの他の活性剤、例えば適切な場合、少なくとも１つの追加の抗ＨＣＶ剤と組み合わせた、本発明による化合物２の投与を記載するため使用される。同時投与のタイミングは、患者を治療する専門医によって最適に決定される。薬剤が同時に投与されることが好ましい場合もある。代替的には、併用療法に対して選択された薬物は、異なる時に患者に投与されてもよい。当然ながら、２以上のウイルス若しくは他の感染、又は他の病状が存在する場合、本発明の化合物を必要に応じて他の感染又は病状を治療するために他の薬剤と組み合わせてもよい。
【００６９】
本明細書で使用される「宿主」の用語は、そこでＨＣＶウイルスを複製することができる、細胞株及び動物、典型的にヒトを含む、単細胞又は多細胞の生物を指す。宿主の用語は、具体的には、感染細胞、ＨＣＶゲノムの全て又は一部を用いてトランスフェクトされた細胞、並びに動物、特に霊長動物（チンパンジーを含む）及びヒトを指す。本発明の大半の動物の適用において、宿主はヒト患者である。しかしながら、獣医学的用途は、特定の適応では、本発明によって明確に予想される（チンパンジー等）。宿主は、例えば、ウシ、ウマ、トリ、イヌ、ネコ等であってもよい。
【００７０】
アイソトープ置換
本発明は、天然存在度を上回る、すなわち濃縮されたアイソトープの量で原子の所望のアイソトープの置換を伴う化合物及び化合物２の使用を含む。アイソトープは、同じ原子番号であるが、異なる質量数を有する、すなわち同数の陽子であるが中性子の数が異なる原子である。一般的な例として、またこれに限定されず、例えば、水素のアイソトープである重水素（２Ｈ）及びトリチウム（３Ｈ）を、記載される構造の任意の場所に使用してもよい。代替的には、又は追加的には、炭素のアイソトープ、例えば１３Ｃ及び１４Ｃを使用してもよい。好ましいアイソトープの置換は、薬物の性能を改善するため、分子上の１以上の位置における水素の重水素への置換である。重水素は、代謝中の結合切断の位置で（α−重水素速度同位体効果）、又は結合切断部位に隣接して若しくはその部位近くに（β−重水素速度同位体効果）結合され得る。Achillion Pharmaceuticals, Inc.（国際公開第２０１４／１６９２７８号、及び国際公開第２０１４／１６９２８０号）は、分子の５位を含む、それらの薬物動態又は薬効を改善するためのヌクレオチドの重水素化を記載している。
【００７１】
重水素等のアイソトープによる置換は、例えばｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の増加、又は必要な投薬量の減少等のより大きな代謝安定性に起因する特定の治療上の利点を与えることができる。代謝性分解の部位における水素の重水素への置換は、その結合における代謝の速度を減少させるか、又はその結合における代謝を排除することができる。水素原子が存在し得る化合物の任意の位置において、水素原子は、プロチウム（１Ｈ）、重水素（２Ｈ）及びトリチウム（３Ｈ）を含む水素の任意のアイソトープであってもよい。したがって、文脈に明確な別段の指示がない限り、本明細書における化合物に対する参照は、全ての可能性のあるアイソトープの形態を包含する。
【００７２】
「アイソトープ標識化」アナログの用語は、「重水素化アナログ」、「１３Ｃ標識化アナログ」又は「重水素化／１３Ｃ標識化アナログ」であるアナログを指す。「重水素化アナログ」の用語は、Ｈ−アイソトープ、すなわち水素／プロチウム（１Ｈ）が、Ｈ−アイソトープ、すなわち重水素（２Ｈ）によって置換された本明細書に記載される化合物を意味する。重水素置換は、部分的であってもよく、完全であってもよい。部分的な重水素置換は、少なくとも１つの水素が少なくとも１つの重水素によって置換されることを意味する。或る特定の実施形態では、アイソトープは任意の目的の位置のアイソトープ中に９０％、９５％又は９９％以上に濃縮される。幾つかの実施形態では、所望の位置で９０％、９５％又は９９％に濃縮されるのは重水素である。これに反する指定がなければ、重水素化は選択された位置において少なくとも８０％である。ヌクレオシドの重水素化が、所望の結果をもたらす任意の置換可能な水素において起こる場合がある。
【００７３】
Ｖ．治療又は予防の方法
本明細書で使用される治療は、例えば、ＨＣＶウイルスに感染している又は感染している可能性のある人間等の宿主に対する化合物２の投与を指す。
【００７４】
「予防の（prophylactic）」又は阻止（preventative）の用語は、使用された場合、ウイルス性の障害の発生可能性を予防するか、又は減少させるための化合物２の投与を指す。本発明は治療法及び予防療法（prophylactic）又は阻止療法（preventative）の両方を含む。一実施形態では、化合物２は、Ｃ型肝炎ウイルスに曝露されたため、それによる感染症のリスクにある宿主に投与される。
【００７５】
本発明は、ＨＣＶの薬物耐性及び多剤耐性の形態を含むＣ型肝炎ウイルス、並びに肝硬変及び関連する肝毒性を含む、ＨＣＶ感染の関連する疾患の状態、病状又は合併症、また同様に、特に、虚弱、食欲不振、体重減少、乳房腫大（特に男性において）、発疹（特に手のひらの）、血液凝固の問題、皮膚のクモ状血管、錯乱、昏睡（脳症）、腹腔の体液貯留（腹水）、食道静脈瘤、門脈圧亢進、腎不全、脾腫、血球の減少、貧血、血小板減少症、黄疸、及び肝細胞癌等のＨＣＶ感染の二次的な他の病状の治療又は予防の方法に関する。上記方法は、有効量の本明細書に記載される化合物２を、任意に少なくとも１つの追加の生理活性剤、例えば追加の抗ＨＣＶ剤と組み合わせて、また薬学的に許容可能な担体、添加剤及び／又は賦形剤と更に組み合わせて、それを必要とする宿主、典型的にはヒトに投与することを含む。
【００７６】
更に別の態様では、本発明は、ＨＣＶ感染、又は特に、肝硬変及び関連する肝毒性、虚弱、食欲不振、体重減少、乳房腫大（特に男性における）、発疹（特に手のひらの）、血液凝固の問題、皮膚のクモ状血管、錯乱、昏睡（脳症）、腹腔の体液貯留（腹水）、食道静脈瘤、門脈圧亢進、腎不全、脾腫、血球の減少、貧血、血小板減少症、黄疸、及び肝細胞（肝臓）癌を含む、ＨＣＶ感染の疾患状態、又は関連する疾患状態若しくは後続する疾患状態、病状又は合併症の阻止又は予防の方法であり、上記方法は、有効量の上に記載されるような化合物２を、薬学的に許容可能な担体、添加剤又は賦形剤と組み合わせて、また、任意に別の抗ＨＣＶ剤と組み合わせて、リスクのある患者に投与することを含む。別の実施形態では、本発明の活性化合物を、肝炎に関連する肝臓移植の後、新たな臓器を保護するために患者に投与することができる。
【００７７】
代替的な実施形態において、化合物２は、化合物の説明で記載される特定のホスホルアミデート以外の化合物１のホスホルアミデートのヘミ硫酸塩として提供される。各種エステル及びホスホ−エステルを含む広範なホスホルアミデートは、当業者に既知であり、その任意の組み合わせを使用して、ヘミ硫酸塩の形態で本明細書中に記載される活性化合物を提供することができる。
【００７８】
ＶＩ．医薬組成物及び剤形
本発明の態様では、本発明による医薬組成物は、任意に薬学的に許容可能な担体、添加剤又は賦形剤と組み合わせて、また少なくとも１つの他の活性化合物と更に任意に組み合わせて、若しくはそれと交互に（alternation with）、抗ＨＣＶウイルスに有効な量の本明細書に記載される化合物２を含む。一実施形態において、本発明は、薬学的に許容可能な担体中の化合物２の固体剤形を含む。
【００７９】
本発明の態様では、本発明による医薬組成物は、任意に薬学的に許容可能な担体、添加剤又は賦形剤と組み合わせて、また抗ＨＣＶ剤等の少なくとも１つの他の抗ウイルス薬と更に任意に組み合わせて、抗ＨＣＶに有効な量の本明細書に記載される化合物２を含む。
【００８０】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染を治療するのに有効な量の本発明の化合物２、又はその塩若しくはプロドラッグを薬学的に許容可能な担体又は賦形剤中に含む医薬組成物を含む。代替的な実施形態では、本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染を予防するのに有効な量の本発明の化合物２、又はその塩若しくはプロドラッグを薬学的に許容可能な担体又は賦形剤中に含む医薬組成物を含む。
【００８１】
当業者は、治療的有効量が、治療される感染又は病状、その重症度、採用される治療計画、使用される薬剤の薬物動態、また同じく、治療される患者又は対象（動物又はヒト）に応じて変化し、またかかる治療量が主治医又は専門家によって決定可能であることを認識する。
【００８２】
本発明による化合物２を、薬学的に許容可能な担体との混合物に製剤化してもよい。一般に、経口投与用形態、特に丸剤又は錠剤等の固体剤形の医薬組成物を投与することが望ましい。特定の製剤は、非経口、静脈内、筋肉内、局所、経皮、バッカル、皮下、坐剤、鼻腔スプレーを含む他の経路により投与されてもよい。静脈内及び筋肉内の製剤は、しばしば、無菌の生理食塩水中で投与される。当業者は、製剤を水又は別のビヒクルにより可溶性にするため製剤を変更してもよく、例えば、これは、十分に当該技術分野の通常の知識である、わずかな変更（塩製剤、エステル化等）によって、容易に遂行され得る。また、患者における最大の有益な効果に対する本発明の化合物の薬物動態を管理するため、本書に更に詳細に記載されるように、化合物２の投与経路及び投薬計画を修正することも、当業者の通常の作業に含まれる。
【００８３】
或る特定の薬学的剤形においては、特にアシル化（アセチル化又はその他）、及びエーテル（アルキル及び関連する）誘導体、リン酸エステル、チオホスホルアミデート、ホスホルアミデート、及び本発明の化合物の様々な塩の形態を含む、上記化合物のプロドラッグ形態が、所望の効果を達成するために使用され得る。当業者は、宿主生物又は患者の標的部位への活性化合物の送達を容易にするため、如何にして本発明の化合物をプロドラッグ形態へと容易に変更するかを認識する。当業者はまた、上記化合物の意図される効果を最大化するための宿主生物又は患者の標的部位への上記化合物の送達において、適用可能である場合は、プロドラッグ形態の好都合な薬物動態学のパラメーターを利用する。
【００８４】
本発明による治療上活性な製剤内に含まれる化合物２の量は、本発明による所望の転帰を達成するのに、例えば、ＨＣＶ感染を治療するために、ＨＣＶ感染の可能性を減少するために、又はＨＣＶ、若しくはＨＣＶに続発して起きる疾患状態、病状、及び／又は合併症を含むその二次的影響の阻害、減少及び／又は消失のために有効な量である。一般に、薬学的剤形における本発明の化合物の治療的有効量は、通常、使用される化合物、治療される病状又は感染、及び投与経路に応じて、患者に対して１日当たり約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ以上、多くの場合、１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇよりわずかに少ない量〜約２５ｍｇ／ｋｇより相当多い量の範囲に及び得る。化合物２は、患者における薬剤の薬物動態に応じて、患者に対して１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの範囲の量でしばしば投与される。この投薬量範囲は、一般に、患者の血液１ｃｃ当たり約０．００１マイクログラム〜約１００マイクログラム、約０．０５マイクログラム〜約１００マイクログラムの範囲に及ぶ場合がある活性化合物の有効血中濃度をもたらす。
【００８５】
多くの場合、これらの感染を治療するために、これらの感染を予防するために、又はこれらの感染の発症を遅延させるために、及び／又はＨＣＶウイルス感染、若しくはＨＣＶの二次的疾患状態、病状若しくは合併症の可能性を低減するために、化合物２は、固体剤形で、約２５０マイクログラムから、最大約８００ミリグラム又はそれ以上の範囲の量で、少なくとも１日に１回、例えば、少なくとも約５、１０、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、又は８００ミリグラム又はそれ以上の範囲の量で、１日に１回、２回、３回又は最大４回、医療機関の指示に従って投与される。化合物２は多くの場合、経口投与されるが、非経口的に、局所的に、若しくは坐剤の形態で、及び鼻内で、鼻スプレーとして、又は本明細書中の別段の記載通りに投与され得る。より一般的には、化合物２は、錠剤、カプセル、注射、静脈内製剤、懸濁液、液体、エマルジョン、移植物、粒子、球体、クリーム、軟膏、坐剤、吸入形態、経皮形態、頬形態、舌下形態、局所形態、ゲル形態、粘膜形態等で投与され得る。
【００８６】
本明細書中の剤形が、ミリグラム重量用量を指す場合、それとは矛盾する別段の規定がない限り、化合物２の量（即ち、ヘミ硫酸塩の重量）を指す。
【００８７】
或る特定の実施形態において、医薬組成物は、単位剤形で、約１ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約５００ｍｇ、又は約４００ｍｇ〜約４５０ｍｇの化合物２を含有する剤形である。或る特定の実施形態において、医薬組成物は、単位剤形で、最大約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、又は約１０００ｍｇ又はそれ以上の化合物２を含有する剤形で、例えば固体剤形で存在する。一実施形態において、化合物２は、少なくとも約３００ｍｇを送達する剤形で投与される。一実施形態において、化合物２は、少なくとも約４００ｍｇを送達する剤形で投与される。一実施形態において、化合物２は、少なくとも約５００ｍｇを送達する剤形で投与される。一実施形態において、化合物２は、少なくとも約６００ｍｇを送達する剤形で投与される。一実施形態において、化合物２は、少なくとも約７００ｍｇを送達する剤形で投与される。一実施形態において、化合物２は、少なくとも約８００ｍｇを送達する剤形で投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、最大１２週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、最大１０週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、最大８週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、最大６週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、最大４週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、少なくとも４週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、少なくとも６週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、少なくとも８週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、少なくとも１０週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日に１回、少なくとも１２週間投与される。或る実施形態において、化合物２は、少なくとも１日おきに、最大１２週間、最大１０週間、最大８週間、最大６週間、又は最大４週間投与される。或る特定の実施形態において、化合物２は、少なくとも１日おきに、少なくとも４週間、少なくとも６週間、少なくとも８週間、少なくとも１０週間、又は少なくとも１２週間投与される。一実施形態において、少なくとも約６００ｍｇの化合物２が、少なくとも１日に１回、最大６週間投与される。一実施形態において、少なくとも約５００ｍｇの化合物２が、少なくとも１日に１回、最大６週間投与される。一実施形態において、少なくとも約４００ｍｇの化合物２が、少なくとも１日に１回、最大６週間投与される。一実施形態において、少なくとも３００ｍｇの化合物２が、少なくとも１日に１回、最大６週間投与される。一実施形態において、少なくとも２００ｍｇの化合物２が、少なくとも１日に１回、最大６週間投与される。一実施形態において、少なくとも１００ｍｇの化合物２が、少なくとも１日に１回、最大６週間少投与される。
【００８８】
代謝産物１−６は、化合物２の活性トリホスフェートであるが、代謝産物１−６は、血漿中では測定不可能である。代謝産物１−６の代替物は、代謝産物１−７である。代謝産物１−７は、血漿中で測定可能なヌクレオシド代謝産物であり、したがって代謝産物１−６の細胞内濃度の指標となる。最大ＨＣＶ抗ウイルス活性に関して、化合物２の剤形は、化合物２のＥＣ９５値を超える代謝産物１−７定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成しなくてはならない。図２４に示されるように、ＧＴ１、ＧＴ２、ＧＴ３、及びＧＴ４の臨床分離株に対する化合物１のＥＣ９５は、２５ｎｇ／ｍＬ未満である（化合物１のＥＣ９５及び化合物２のＥＣ９５値は同じである）。一実施形態において、約１５ｎｇ／ｍＬ〜７５ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約２０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約３０ｎｇ／ｍＬ〜６０ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約２０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約３０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約２０ｎｇ／ｍＬ〜４５ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約２０ｎｇ／ｍＬ〜３０ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約２０ｎｇ／ｍＬ〜３５ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。一実施形態において、約２０ｎｇ／ｍＬ〜２５ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７の定常状態トラフ濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を達成する化合物２の剤形が送達される。剤形のおおよその濃度値は、定常状態トラフ濃度の±１０％である。
【００８９】
一実施形態において、化合物２は、約１２００ｎｇ／ｍＬ〜３０００ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７ＡＵＣ（曲線下面積）を達成する量で投薬される。一実施形態において、化合物２は、約１５００ｎｇ／ｍＬ〜３０００ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７ＡＵＣを達成する量で投薬される。一実施形態において、化合物２は、約１８００ｎｇ／ｍＬ〜３０００ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７ＡＵＣを達成する量で投薬される。一実施形態において、化合物２は、約２１００ｎｇ／ｍＬ〜３０００ｎｇ／ｍＬの代謝産物１−７ＡＵＣを達成する量で投薬される。好ましい一実施形態において、化合物２は、約２２００ｎｇ＊ｈ／ｍＬの代謝産物１−７ＡＵＣを達成する量で投薬される。剤形のおおよそのＡＵＣ値は、ＡＵＣの±１０％である。
【００９０】
本明細書に別記されるような別の抗ＨＣＶ化合物と組み合わせた化合物２の同時投与の場合、投与される本発明による化合物２の量は、同時投与される第２の薬剤、並びにウイルスに対する効力、患者の病状及び治療される疾患又は感染の重症度及び投与経路に応じて、約０．０１ｍｇ／患者ｋｇ〜約８００ｍｇ／患者ｋｇ以上、又はそれより相当多い量である。他の抗ＨＣＶ剤は、例えば約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約８００ｍｇ／ｋｇの範囲の量で投与されてもよい。第２の活性薬剤の投薬量の例は、少なくとも１日に１回、約２５０マイクログラムから最大約７５０ｍｇ以上の範囲の量、例えば、１日に最大４回、少なくとも約５ミリグラム、１０ミリグラム、２０ミリグラム、２５ミリグラム、５０ミリグラム、７５ミリグラム、１００ミリグラム、１５０ミリグラム、２００ミリグラム、２５０ミリグラム、３００ミリグラム、３５０ミリグラム、４００ミリグラム、４５０ミリグラム、５００ミリグラム、６００ミリグラム、７００ミリグラム、若しくは８００ミリグラム又はそれより多い量である。或る特定の好ましい実施形態では、化合物２は、一般に、患者における２つの薬剤の薬物動態に応じて、しばしば、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ以上（通常、最大約１００ｍｇ／ｋｇ）の範囲の量で投与され得る。これらの投薬量範囲は、一般に、患者において活性化合物の有効血中濃度をもたらす。
【００９１】
本発明の目的について、本発明による組成物の予防的又は阻止的な有効量は、治療的有効量について上に述べられたものと同じ濃度範囲に含まれ、通常、治療的有効量と同じである。
【００９２】
化合物２の投与は、連続的（静脈内点滴）から１日当たり数回の経口若しくは鼻内投与（例えばＱ．Ｉ．Ｄ．）、又は経皮投与を含んでもよく、また、他の投与経路のうち、経口、局所、非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（浸透増強剤を含んでもよい）、バッカル及び坐剤による投与を含んでもよい。また、経口投与経路に対する化合物のバイオアベイラビリティーを増強するため、腸溶性経口錠剤を使用してもよい。最も有効な剤形は、選択される特定の薬剤のバイオアベイラビリティー／薬物動態、また同様に患者の疾患の重症度に依存する。経口剤形は、投与の容易さ、及び予期される好都合な患者コンプライアンスのため、特に好ましい。
【００９３】
本発明による医薬組成物を調製するため、しばしば、治療的有効量の本発明による化合物２を、従来の薬学的配合技術に従って薬学的に許容可能な担体と本質的に混合して服用量を生じる。担体は、例えば、経口又は非経口の投与に望ましい調剤形態に応じて多様な形態をとってもよい。経口剤形への医薬組成物の調製において、通常の薬学的媒質のいずれを使用してもよい。したがって、懸濁液、エリキシル剤及び溶液等の液体経口調剤に対し、水、グリコール、油、アルコール、香料、防腐剤、着色剤等を含む好適な担体及び添加物を使用してもよい。散剤、錠剤、カプセル剤等の固体経口調剤、及び坐剤等の固形調剤に対し、デンプン、デキストロース等の糖担体、マニホールド、ラクトース、及び関連する担体、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等を含む、好適な担体及び添加剤を使用してもよい。所望に応じて、錠剤又はカプセル剤は、標準的な技術によって腸溶性であってもよく、徐放性であってもよい。これらの剤形の使用は、患者における化合物のバイオアベイラビリティーを著しく増強し得る。
【００９４】
非経口製剤について、担体は、通常、無菌の水又は塩化ナトリウム水溶液を含むが、分散液を補助するものを含む他の成分を含んでもよい。滅菌水が無菌として使用され維持されることになっている場合、当然に、組成物及び担体も滅菌されなければならない。また、注射用懸濁液を調製してもよく、その場合、適切な液体担体、懸濁化剤等を利用してもよい。
【００９５】
また、薬学的に許容可能な担体を産生するため、リポソーム懸濁液（ウイルス性抗原に標的化されたリポソームを含む）を従来の方法によって作製してもよい。これは、本発明によるヌクレオシド化合物の遊離ヌクレオシド、アシル／アルキルヌクレオシド又はリン酸エステルプロドラッグの形態の送達に適切な場合がある。
【００９６】
本発明による典型的な実施形態では、化合物２及び上記の組成物は、ＨＣＶ感染、又はＨＣＶの二次的な疾患状態、病状又は合併症を治療、予防、又は遅延するために使用される。
【００９７】
ＶＩＩ．併用療法及び交互療法（alternation therapy）
ウイルスの薬剤耐性変異体が、抗ウイルス剤による長期の治療の後に出現する場合があることは十分認識される。薬剤耐性は、ウイルス複製で使用される酵素をコードする遺伝子の突然変異によって生じることがある。ＨＣＶ感染に対する薬物の効力は、異なる突然変異を誘導するか、又は原則の薬物のそれとは異なる経路を通って作用する、別の（おそらくは更に２種又は３種の他の）抗ウイルス化合物と組み合わせて、又は該抗ウイルス剤と交互に上記化合物を投与することにより、延長、増大、又は回復され得る。代替的には、薬物動態、体内分布、半減期又は薬物の他のパラメーターは、かかる併用療法（協調するとされる場合は、交互療法を含む場合がある）によって変更され得る。開示される化合物２は、ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤であることから、例えば以下と組み合わせて宿主に上記化合物を投与することが有用な場合がある。
（１）プロテアーゼ阻害剤（ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ阻害剤等）、
（２）ＮＳ５Ａ阻害剤、
（３）別のＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤、
（４）ＮＳ５Ｂ非基質阻害剤、
（５）ペグ化されてもよく、別の方法で修飾されてもよい、インターフェロンアルファ−２ａ、及び／又はリバビリン、
（６）非基質系阻害剤、
（７）ヘリカーゼ阻害剤、
（８）アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（Ｓ−ＯＤＮ）、
（９）アプタマー、
（１０）ヌクレアーゼ耐性リボザイム、
（１１）ｍｉｃｒｏＲＮＡ及びＳｉＲＮＡを含むｉＲＮＡ、
（１２）ウイルスに対する抗体、部分抗体、若しくはドメイン抗体、又は、
（１３）宿主抗体応答を誘導するウイルス性抗原若しくは部分抗原。
【００９８】
単独で、又はこのリストからの多数の薬物とともに、本発明の化合物２と組み合わせて投与することができる抗ＨＣＶ剤の非限定的な例は、
（ｉ）テラプレビル（インシベック（商標））、ボセプレビル（ビクトレリス（商標））、シメプレビル（オリシオ（商標））、パリタプレビル（ＡＢＴ−４５０）、グレカプレビル（ＡＢＴ−４９３）、リトナビル（ノービア）、ＡＣＨ−２６８４、ＡＺＤ−７２９５、ＢＭＳ−７９１３２５、ダノプレビル、フィリブビル、ＧＳ−９２５６、ＧＳ−９４５１、ＭＫ−５１７２、セトロブビル、ソバプレビル、テゴブビル、ＶＸ−１３５、ＶＸ−２２２、及びＡＬＳ−２２０等のプロテアーゼ阻害剤、
（ｉｉ）ＡＣＨ−２９２８、ＡＣＨ−３１０２、ＩＤＸ−７１９、ダクラタスビル、レジスパスビル、ベルパタスビル（エプクルーサ）、エルバスビル（ＭＫ−８７４２）、グラゾプレビル（ＭＫ−５１７２）、及びオムビタスビル（ＡＢＴ−２６７）等のＮＳ５Ａ阻害剤、
（ｉｉｉ）ＡＺＤ−７２９５、クレミゾール、ダサブビル（Ｅｘｖｉｅｒａ）、ＩＴＸ−５０６１、ＰＰＩ−４６１、ＰＰＩ−６８８、ソホスブビル（ソバルディ（商標））、ＭＫ−３６８２、及びメリシタビン等のＮＳ５Ｂ阻害剤、
（ｉｖ）ＡＢＴ−３３３、及びＭＢＸ−７００等のＮＳ５Ｂ阻害剤、
（ｖ）ＧＳ−６６２４等の抗体、
（ｖｉ）ハーボニー（レジパスビル／ソホスブビル）、ヴィキラパック（オムビタスビル／パリタプレビル／リトナビル／ダサブビル）、ヴィキラックス（オムビタスビル／パリタプレビル／リトナビル）、Ｇ／Ｐ（パリタプレビル及びグレカプレビル）、テクニヴィ（オムビタスビル／パリタプレビル／リトナビル）及びエプクルーサ（ソホスブビル／ベルパタスビル）及びゼパティア（エルバスビル及びグラゾプレビル）等の併用薬物である。
【００９９】
化合物２が、肝臓癌又は肝硬変に結びつく進行性のＣ型肝炎ウイルスを治療するため投与される場合、一実施形態では、例えば、"New Agents on the Horizon in Hepatocellular Carcinoma" Therapeutic Advances in Medical Oncology, V 5(1), (January 2013), 41-50にてAndrew Zhuによって説明されるように、肝細胞癌（ＨＣＣ）を治療するために典型的に使用される別の薬物と、上記化合物を組み合わせて、又は該化合物と交互に投与することができる。宿主がＨＣＣを有するか、又はそのリスクにある場合の併用療法に適した化合物の例として、抗血管形成剤、スニチニブ、ブリバニブ、リニファニブ、ラムシルマブ、ベバシズマブ、セジラニブ、パゾパニブ、ＴＳＵ−６８、レンバチニブ、ＥＧＦＲに対する抗体、ｍＴｏｒ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、及びヒストンデアセチラーゼ）阻害剤が挙げられる。
【実施例】
【０１００】
一般的な方法
１Ｈ、１９Ｆ及び３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルを、４００ＭＨｚ  フーリエ変換Ｂｒｕｅｃｋｅｒ分光計で記録した。別段の規定がない限り、スペクトルは、ＤＭＳＯ−ｄ６中で得られた。スピン多重度は、記号ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｍ（マルチプレット）及びｂｒ（ブロード）で表示される。カップリング定数（Ｊ）は、Ｈｚで報告する。反応は概して、Sigma-Aldrich社の無水溶媒を使用して、乾燥窒素雰囲気下で実施した。一般的な化学物質は全て、商業的供給源から購入した。
【０１０１】
以下の略語を実施例で使用する。
ＡＵＣ：曲線下面積
Ｃ２４：２４時間時の血漿中の薬物の濃度
Ｃ２４，ｓｓ：定常状態で投薬した２４時間後の濃度
Ｃｍａｘ：血漿中で達成される薬物の最大濃度
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＨＰＬＣ：高圧液体クロマトグラフィー
ＮａＯＨ：水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４：硫酸ナトリウム（無水）
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＭｅＮＨ２：メチルアミン
ＭｅＯＨ：メタノール
Ｎａ２ＳＯ４：硫酸ナトリウム
ＮａＨＣＯ３：重炭酸ナトリウム
ＮＨ４Ｃｌ：塩化アンモニウム
ＮＨ４ＯＨ：水酸化アンモニウム
ＰＥ：石油エーテル
Ｐｈ３Ｐ：トリフェニルホスフィン
ＲＨ：相対湿度
シリカゲル（２３０〜４００メッシュ、Sorbent）
ｔ−ＢｕＭｇＣｌ：ｔ−ブチルマグネシウムクロリド
Ｔｍａｘ：Ｃｍａｘが達成される時間
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、無水
ＴＰ：トリホスフェート
【０１０２】
実施例１．化合物１の合成
【化８】
2020505423.tif 000011
【０１０３】
工程１：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−（メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−４−メチルテトラヒドロフラン−３−オール（２−２）の合成
５０Ｌ容のフラスコに、メタノール（３０Ｌ）を入れて、１０±５℃で攪拌した。ＮＨ２ＣＨ３（３．９５Ｋｇ）を、１０±５℃で反応器へ徐々に通気した。化合物２−１（３．７７ｋｇ）を２０±５℃で数回に分けて添加して、１時間攪拌して、透明な溶液を得た。反応物を更に６時間〜８時間攪拌し、その時点で、ＨＰＬＣにより、中間体が溶液の０．１％未満であることが示された。反応器に固体ＮａＯＨ（２５４ｇ）を入れて、３０分間攪拌して、５０±５℃で濃縮した（真空度：−０．０９５）。得られた残渣にＥｔＯＨ（４０Ｌ）を入れて、６０℃で１時間、再度スラリー状にした。次に、混合物をセライトに通して濾過し、フィルターケーキを、ＥｔＯＨ（１５Ｌ）を用いて、６０℃で１時間、再度スラリー状にした。濾液をもう一度濾過して、先の濾過からの濾液と組み合わせて、続いて、５０±５℃で濃縮した（真空度：−０．０９５）。大量の固体が沈殿した。ＥｔＯＡｃ（６Ｌ）を固体残渣に添加して、混合物を５０±５℃で濃縮した（真空度：−０．０９５）。続いて、ＤＣＭを残渣に添加して、混合物を還流下で１時間、再度スラリー状にして、室温に冷却して、濾過して、真空炉中で５０±５℃で乾燥させて、化合物２−２をオフホワイト色固体として得た（１．８９Ｋｇ、９５．３％、純度９９．２％）。
【０１０４】
化合物２−２に関する分析方法：化合物２−２（１５ｍｇ）の純度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０  ＥＣ−Ｃ１８  ４．６＊１５０ｍｍ  ４−Ｍｉｃｒｏｎカラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムを使用して、下記条件：流速１ｍＬ／分、２５４ｎｍで読み取り、カラム温度３０℃、注入容量１５μＬ、及び実行時間３１分で得られた。試料をアセトニトリル−水（２０：８０）（ｖ／ｖ）中に溶解した。勾配方法を以下に示す。
【０１０５】
【表１】
2020505423.tif 000012
【０１０６】
工程２：イソプロピル（（Ｓ）−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２−アミノ−６−（メチルアミノ）−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−フルオロ−３−ヒドロキシ−４−メチルテトラヒドロフラン−２−イル）メトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−Ｌ−アラニネート（化合物１）の合成
化合物２−２及び化合物２−３（イソプロピル（（パーフルオロフェノキシ）（フェノキシ）ホスホリル）−Ｌ−アラニネート）をＴＨＦ（１Ｌ）中に溶解して、窒素下で攪拌した。次に、懸濁液を−５℃未満の温度に冷却して、温度５℃〜１０℃を維持しながら、ｔ−ＢｕＭｇＣｌ溶液の１．７Ｍ溶液（３８４ｍＬ）を１．５時間かけて徐々に添加した。ＮＨ４Ｃｌ（２Ｌ）及び水（８Ｌ）の溶液を、続いてＤＣＭを、室温で懸濁液に添加した。混合物を５分間攪拌した後、Ｋ２ＣＯ３の５％水溶液（１０Ｌ）を添加して、混合物を更に５分間攪拌し、その後、珪藻土（５００ｇ）に通して濾過した。珪藻土をＤＣＭで洗浄して、濾液を分離した。有機相を、５％Ｋ２ＣＯ３水溶液（１０Ｌ×２）、ブライン（１０Ｌ×３）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４（５００ｇ）で約１時間乾燥させた。その間に、このプロセス全体を並行して７回繰り返し、８個のバッチを組み合わせた。有機相を濾過して、４５±５℃で濃縮した（真空度０．０９ＭＰａ）。ＥｔＯＡｃを添加して、混合物を６０℃で１時間、続いて室温で１８時間攪拌した。次に、混合物を濾過して、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で洗浄して、粗製化合物１を得た。粗製材料をＤＣＭ（１２Ｌ）中に溶解して、ヘプタン（１８Ｌ）を１０℃〜２０℃で添加して、混合物をこの温度で３０分間攪拌させた。混合物を濾過し、ヘプタン（５Ｌ）で洗浄し、５０±５℃で乾燥させて、純粋な化合物１（１６５０ｇ、６０％）を得た。
【０１０７】
化合物１に関する分析方法：化合物１（２５ｍｇ）の純度は、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｈｅｎｙｌ  ５μｍ  ４．６＊２５０ｍｍカラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムを使用して、下記条件：流速１ｍＬ／分、２５４ｎｍで読み取り、カラム温度３０℃、注入容量１５μＬ、及び実行時間２５分で得られた。試料をアセトニトリル−水（５０：５０）（ｖ／ｖ）中に溶解した。勾配方法を以下に示す。
【０１０８】
【表２】
2020505423.tif 000013
【０１０９】
実施例２．非晶質化合物１及び結晶性化合物１の特性評価
非晶質化合物１及び結晶性化合物１をまず、ＸＲＰＤ、１ＨＮＭＲ、及びＨＰＬＣで分析した。両方の化合物に関するＸＲＰＤパターンを図１Ａに示し、純度を決定するＨＰＬＣトレースを、それぞれ図１Ｂ及び図２Ａに示す。表１は、結晶性化合物１のＸＲＰＤからのピークのリストであり、表２は、ＨＰＬＣトレースからの相対保持時間（ＲＴＴ）のリストである。非晶質化合物１は、純度９８．６１％であり、結晶性化合物１は、純度９９．１１％であった。化合物はともに、白色固体であった。図２Ｂは、結晶性化合物１のＴＧＡ及びＤＳＣグラフである。結晶性化合物１に関して、８８．６℃で吸熱が観察され、８０℃〜１１０℃で７．８％の質量損失が見られた。
【０１１０】
化合物１の試料をＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶させて、ＯＲＴＥＰを用いて描画した。化合物１の絶対構造は、単一結晶の再結晶化によって確認した。図３は、化合物１のＯＲＴＥＰ図である。結晶データ及び測定データを表３に示す。Ｘ線結晶解析に基づく化合物１の絶対立体化学を以下に示す：
【化９】
2020505423.tif 000014
【０１１１】
ＤＳＣデータは、５０ポジションのオートサンプラーを装備したＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｑ２０００で収集した。熱容量に関する較正は、サファイアを使用して実行し、エネルギー及び温度に関する較正は、認定インジウムを使用して実行した。通常、各試料約３ｍｇを、ピンホール型アルミニウム皿中で、１０℃／分で２５℃から２００℃まで加熱した。５０ｍｌ／分での乾燥窒素のパージを、試料上で維持した。機器制御ソフトウェアは、Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｆｏｒ  Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ  ｖ２．８．０．３９４及びＴｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｖ５．５．３であり、データは、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｖ４．５Ａを使用して分析した。
【０１１２】
ＴＧＡデータは、１６ポジションのオートサンプラーを装備したＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｑ５００  ＴＧＡで収集した。機器は、認定アルメル及びニッケルを使用して温度較正した。通常、各試料５ｍｇ〜１０ｍｇを、予め風袋の重量を計ったアルミニウムＤＳＣ皿上に入れて、１０℃／分で、外気温から３５０℃まで加熱した。６０ｍｌ／分での窒素パージを、試料上で維持した。機器制御ソフトウェアは、Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｆｏｒ  Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ  ｖ２．５．０．２５６及びＴｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ｖ５．５．３であり、データは、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｖ４．５を使用して分析した。
【０１１３】
非晶質化合物１（１−１）：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．０１〜１．１５（ｍ，９Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ，３Ｈ）、２．７５〜３．０８（ｍ，３Ｈ）、３．７１〜３．８７（ｍ，１Ｈ）、４．０２〜４．１３（ｍ，１Ｈ）、４．２２〜４．５３（ｍ，３Ｈ）、４．８１（ｓ， １Ｈ）、５．６９〜５．８６（ｍ，１Ｈ）、６．０４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１９．３３Ｈｚ，４Ｈ）、７．１２〜７．２７（ｍ，３Ｈ）、７．２７〜７．４４（ｍ，３Ｈ）、７．８１（ｓ，１Ｈ）
【０１１４】
結晶性化合物１（１−２）：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９７〜１．１６（ｍ，１６Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ）、２．８７（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、３．０８（ｓ，２Ｈ）、３．７９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，１Ｈ）、４．０８（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）、４．１７〜４．５５（ｍ，３Ｈ）、４．８１（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．２５Ｈｚ，１Ｈ）、５．７８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．９１〜６．１５（ｍ，４Ｈ）、７．１０〜７．２６（ｍ，３Ｈ）、７．２６〜７．４４（ｍ，３Ｈ）、７．８１（ｓ，１Ｈ）
【０１１５】
【表３】
2020505423.tif 000015
【０１１６】
【表４】
2020505423.tif 000016
【０１１７】
【表５】
2020505423.tif 000017
【０１１８】
この初期特性評価に続いて、２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）で１４日間保管して、７日後及び１４日後に、ＨＰＬＣ及びＸＲＰＤで分析した。図４Ａは、２５℃／６０％（ＲＨ）で１４日後のＸＲＰＤである。非晶質化合物１（試料１−１）は、依然として難結晶性であったのに対して、結晶性化合物１（試料１−２）は、その結晶化度を保持したが、これらの化合物はともに、２５℃／６０％（ＲＨ）で１４日後に安定であった。
【０１１９】
実施例３．シュウ酸塩化合物４の形成
まず、シュウ酸塩を溶媒（５倍容量、１００μＬ）と混合して、全ての溶液を室温で蒸発させることによって、化合物１のシュウ酸塩である化合物４が形成された。任意の懸濁液を３時間成熟させて（室温〜５０℃）、結晶化度を評価した。
【化１０】
2020505423.tif 000018
【０１２０】
表４は、化合物４の生成に使用する種々の溶媒を示す。２つ（シクロヘキサン及びｎ−ヘプタン）を除く全ての溶媒が、結晶性生成物を生じた。化合物４の高い結晶化度及び溶解度にもかかわらず、腎臓結石の形成の可能性に起因して、シュウ酸塩は、臨床開発には許容されず、化合物１の他の塩を研究した。
【０１２１】
【表６】
2020505423.tif 000019
【０１２２】
実施例４．非晶質化合物１の塩化合物
シュウ酸塩化合物４（実施例３）が、腎臓結石を形成する可能性のため、臨床試験で前進することができなかったため、表５に列挙する対イオンを用いて、化合物１の非晶質塩を形成した。化合物１をｔ−ブタノール（２０倍容量、６ｍｌ）中に溶解して、溶液を酸対イオンで処理した（各試料に関して１当量、但し、試料１−９は、０．５当量の硫酸塩を有していた）。次に、試料を凍結させて、溶媒を凍結乾燥によって除去した。まず、試料１−４、１−５、１−６、１−７、１−８、及び１−９中の残留固体を、ＸＲＰＤ及びＨＰＬＣによって分析した。
【０１２３】
【表７】
2020505423.tif 000020
【０１２４】
１ＨＮＭＲスペクトルは、試料全てに関して収集した。
【０１２５】
試料１−４、ＨＣｌ（１：１）塩：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９３〜１．３９（ｍ，１６Ｈ）、２．９７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．７０〜３．８８（ｍ，１Ｈ）、４．１０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．１８〜４．４９（ｍ，３Ｈ）、４．７０〜４．８８（ｍ，１Ｈ）、５．７１〜５．９４（ｍ，１Ｈ）、６．０７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１９．０７Ｈｚ，２Ｈ）、７．１４〜７．２７（ｍ，３Ｈ）、７．２９〜７．４４（ｍ，２Ｈ）、７．８３〜８．１９（ｍ，１Ｈ）
【０１２６】
試料１−５、硫酸（１：１）塩：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９７〜１．３８（ｍ，１５Ｈ）、２．９６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．０６〜４．１８（ｍ，１Ｈ）、４．１９〜４．４９（ｍ，３Ｈ）、４．６６〜４．９１（ｍ，１Ｈ）、５．７０〜５．９５（ｍ，１Ｈ）、５．９６〜６．１６（ｍ，２Ｈ）、７．１０〜７．２７（ｍ，３Ｈ）、７．３０〜７．４３（ｍ，２Ｈ）、７．８８〜８．１９（ｍ，１Ｈ）
【０１２７】
試料１−６、フマル酸（１：１）塩：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９５〜１．３１（ｍ，２１Ｈ）、２．８７（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、３．７９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ，１Ｈ）、４．０１〜４．１３（ｍ，１Ｈ）、４．１６〜４．２３（ｍ，１Ｈ）、４．１６〜４．２４（ｍ，１Ｈ）、４．２０（ｓ，１Ｈ）、４．１８〜４．２３（ｍ，１Ｈ）、４．２４〜４．５２（ｍ，１Ｈ）、４．２４〜４．５２（ｍ，１Ｈ）、４．２４〜４．４９（ｍ，１Ｈ）、４．７２〜４．８８（ｍ，１Ｈ）、５．６８〜５．８６（ｍ，１Ｈ）、６．０４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１９．３３Ｈｚ，４Ｈ）、６．６３（ｓ，１Ｈ）、６．６１〜６．６６（ｍ，１Ｈ）、７．１２〜７．２７（ｍ，３Ｈ）、７．２７〜７．４５（ｍ，３Ｈ）、７．８１（ｓ，１Ｈ）、１３．１６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）
【０１２８】
試料１−７、安息香酸（１：１）塩：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９６〜１．３０（ｍ，１５Ｈ）、２．８７（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、３．７９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，１Ｈ）、４．０７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．２０（ｓ，１Ｈ）、４．２５〜４．５２（ｍ，３Ｈ）、４．８１（ｓ，１Ｈ）、５．７１〜５．８５（ｍ，１Ｈ）、６．０４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１９．３３Ｈｚ，４Ｈ）、７．０８〜７．２７（ｍ，３Ｈ）、７．２７〜７．４３（ｍ，３Ｈ）、７．４５〜７．５７（ｍ，２Ｈ）、７．６３（ｓ，１Ｈ）、７．８１（ｓ，１Ｈ）、７．９５（ｄｄ，Ｊ＝８．２７，１．３３Ｈｚ，２Ｈ）、１２．９８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
【０１２９】
試料１−８、コハク酸（１：１）塩：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９８〜１．２８（ｍ，１５Ｈ）、２．４２（ｓ，５Ｈ）、２．８７（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、３．５７〜３．６２（ｍ，１Ｈ）、３．７０〜３．８６（ｍ，１Ｈ）、４．０２〜４．１４（ｍ，１Ｈ）、４．２０（ｓ，１Ｈ）、４．２４〜４．５１（ｍ，３Ｈ）、４．７０〜４．８８（ｍ，１Ｈ）、５．６９〜５．８６（ｍ，１Ｈ）、６．０４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１９．３３Ｈｚ，４Ｈ）、７．１２〜７．２７（ｍ，３Ｈ）、７．２７〜７．４４（ｍ，３Ｈ）、７．８１（ｓ，１Ｈ）、１１．９５〜１２．５８（ｍ，２Ｈ）
【０１３０】
試料１−９、硫酸（０．５：１）塩：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．０２〜１．３１（ｍ，１５Ｈ）、２．９４（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、３．７９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．２０Ｈｚ，２Ｈ）、４．０９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．２２〜４．４８（ｍ，３Ｈ）、４．７２〜４．９０（ｍ，１Ｈ）、５．７１〜５．９２（ｍ，１Ｈ）、６．０７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１９．０７Ｈｚ，２Ｈ）、７．１２〜７．２８（ｍ，３Ｈ）、７．３１〜７．４４（ｍ，２Ｈ）、７．７５〜８．１９（ｍ，１Ｈ）。
【０１３１】
次に、試料を２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）で１４日間保管して、７日後（図４Ｂ）及び１４日後（図５Ａ）にＨＰＬＣ及びＸＲＰＤによって分析した。調製した塩は全て、非晶質のままであり、その観察結果を表６に示す。一硫酸塩（試料１−５）及びコハク酸塩（試料１−８）は、物理的に不安定及び潮解性である、又は研究の過程でガムになることがわかった。フマル酸塩（試料１−６）及び安息香酸塩（試料１−７）は、ガラス状固体であることがわかった。ＨＣｌ塩（試料１−４）は、その物理的外観を保持することがわかった。驚くべきことに、粘着性ガムである一硫酸塩化合物（試料１−５）とは対照的に、ヘミ硫酸塩（試料１−９）もまた、白色固体としてその物理的外観を保持した。結果を表６に示す。一ＨＣｌ塩（試料１−４）及びヘミ硫酸塩（試料１−９）は、２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）で２週の保管後に、物理的にかつ化学的に安定であることがわかった。これらの塩はともに、２週にわたって安定であったが、ＨＣｌ塩が吸湿性であるため、ヘミ硫酸塩と比較して、長期保管又は使用にはあまり有用でないことから、ヘミ硫酸塩は、ＨＣｌ塩よりも優れていた。
【０１３２】
【表８】
2020505423.tif 000021
【０１３３】
実施例５．非晶質化合物２の特性評価
非晶質化合物２をまず、ＸＲＰＤ、１ＨＮＭＲ、ＤＳＣ、ＴＧＡ、及びＨＰＬＣで分析した。非晶質化合物１及び結晶性化合物１と重ね合わせた非晶質化合物２に関するＸＲＰＤパターンを図１Ａに示し、非晶質化合物２単独のＸＲＰＤパターンを図５Ｂに示す。表７は、図５Ｂに示されるＸＲＰＤパターンからのピークリストである。純度を決定するＨＰＬＣトレースを図６Ａに示す。表８は、図６Ａに示されるＨＰＬＣトレースからの相対保持時間（ＲＴＴ）のリストである。非晶質化合物２は、純度９９．６８％であった。図６Ｂは、非晶質化合物２のＴＧＡ及びＤＳＣグラフである。ＴＧＡ及びＤＳＣ実験に関する詳細は、実施例２で付与する。
【０１３４】
【表９】
2020505423.tif 000022
【０１３５】
【表１０】
2020505423.tif 000023
【０１３６】
非晶質化合物２：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９３〜１．２９（ｍ，１３Ｈ）、２．９４（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、３．７９（ｔｄ，Ｊ＝１０．０４，７．０７Ｈｚ，２Ｈ）、４．０５〜４．１９（ｍ，１Ｈ）、４．１９〜４．５０（ｍ，３Ｈ）、４．８１（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．２５Ｈｚ，１Ｈ）、５．７１〜５．９４（ｍ，１Ｈ）、５．９７〜６．１６（ｍ，２Ｈ）、７．１４〜７．２８（ｍ，３Ｈ）、７．３１〜７．４４（ｍ，２Ｈ）、７．８２〜８．０９（ｍ，１Ｈ）
【０１３７】
実施例６．非晶質化合物２の結晶化
ヘミ硫酸塩は、表６に示されるように１４日安定性研究後に、固体として留まることがわかったため、１１個の異なる溶媒を使用して結晶化条件を研究する予備試験を行った。非晶質化合物２を、２５℃で５倍容量の溶媒中に懸濁させた（試料２−１、２−２、２−３、２−４、２−５、２−６、２−７、２−８、２−９、２−１０、及び２−１１）。流動性のない試料（２−１、２−２、２−３、２−４、２−５、２−６、２−７、２−８、及び２−１０）に、更に５倍容量の溶媒を添加した。次に、１日後に透明な溶液であることが観察された試料２−１を除いて、試料を２５℃から５０℃で（温度間では１℃／分、及び各温度で４時間）６日間成熟させて、外気条件下で蒸発させた。結果を表９に示す。結晶性パターンは、イソブタノール（試料２−１）、アセトン（試料２−２）、ＥｔＯＡｃ（試料２−６）及びｉＰｒＯＡｃ（試料２−７）を用いた結晶化から生じた。２つの難結晶性試料もまた、ＭＥＫ（試料２−４）及びＭＩＢＫ（試料２−５）を用いた結晶化から同定された。ＸＲＰＤパターンを図７Ａに示す。
【０１３８】
【表１１】
2020505423.tif 000024
【０１３９】
７つの試料（試料２−２、２−３、２−４、２−５、２−６、２−７及び２−８）を、２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）での６日間の保管後に、ＤＳＣ、ＴＧＡ、１Ｈ−ＮＭＲ及びＩＣによって（表１０、図８Ａ、図８Ｂ、図９Ａ、図９Ｂ、図１０Ａ、図１０Ｂ、図１１Ａ、及び図１１Ｂ）、並びにＸＲＰＤによって分析した（試料は全て、安定性後に結晶性／難結晶性のままであった）。試料は全て、硫酸塩のほぼ半分の当量を保持したが、比較的大量の残留溶媒を含有した。非晶質試料２−９、２−１０、及び２−１１のＸ線ディフラクトグラムのオーバーレイを図７Ｂに示す。
【０１４０】
【表１２】
2020505423.tif 000025
【０１４１】
１ＨＮＭＲスペクトルは、全ての試料に関して収集して、以下に列挙した。
【０１４２】
試料２−２：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．８３（ｄ，Ｊ＝６．６９Ｈｚ，７Ｈ）、０．９９〜１．２６（ｍ，１４Ｈ）、１．６１（ｄｔ，Ｊ＝１３．２６，６．６３Ｈｚ，１Ｈ）、３．７３〜３．８７（ｍ，２Ｈ）、４．０３〜４．１８（ｍ，１Ｈ）、４．１８〜４．５１（ｍ，４Ｈ）、４．６６〜４．９２（ｍ，１Ｈ）、４．７０〜４．９０（ｍ，１Ｈ）、４．７２〜４．８８（ｍ，１Ｈ）、５．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．９３〜６．１１（ｍ，２Ｈ）、７．１０〜７．２６（ｍ，３Ｈ）、７．１４〜７．２６（ｍ，１Ｈ）、７．３０〜７．４１（ｍ，２Ｈ）、７．９４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
【０１４３】
試料２−３：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ１．００〜１．２６（ｍ，１３Ｈ）、２．０９（ｓ，３Ｈ）、３．７４〜３．８７（ｍ，２Ｈ）、４．１０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ）、４．２２〜４．５０（ｍ，３Ｈ）、４．８１（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．２８Ｈｚ，１Ｈ）、５．７１〜５．９０（ｍ，１Ｈ）、５．９６〜６．１５（ｍ，２Ｈ）、７．１２〜７．２６（ｍ，３Ｈ）、７．３１〜７．４１（ｍ，２Ｈ）、７．７９〜８．０７（ｍ，１Ｈ）
【０１４４】
試料２−４：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９１（ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，３Ｈ）、１．０１〜１．２８（ｍ，１３Ｈ）、２．０８（ｓ，２Ｈ）、３．７２〜３．８９（ｍ，２Ｈ）、４．１０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ）、４．２３〜４．４７（ｍ，３Ｈ）、４．８１（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．２５Ｈｚ，１Ｈ）、５．６９〜５．８９（ｍ，１Ｈ）、５．９４〜６．１３（ｍ，２Ｈ）、７．１４〜７．２５（ｍ，３Ｈ）、７．３２〜７．４１（ｍ，２Ｈ）、７．７９〜８．１１（ｍ，１Ｈ）
【０１４５】
試料２−５：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．８６（ｄ，Ｊ＝６．６９Ｈｚ，１Ｈ）、０．９８〜１．３３（ｍ，１３Ｈ）、２．０２〜２．０９（ｍ，１Ｈ）、４．０３〜４．１７（ｍ，１Ｈ）、４．２２〜４．５０（ｍ，３Ｈ）、４．８１（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．２５Ｈｚ，１Ｈ）、５．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．９３〜６．１５（ｍ，２Ｈ）、７．１１〜７．２７（ｍ，３Ｈ）、７．３１〜７．４１（ｍ，２Ｈ）、７．７７〜８．２１（ｍ，１Ｈ）
【０１４６】
試料２−６：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９８〜１．２８（ｍ，１５Ｈ）、２．００（ｓ，３Ｈ）、３．９９〜４．１４（ｍ，３Ｈ）、４．２１〜４．４９（ｍ，３Ｈ）、４．８１（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．２２Ｈｚ，１Ｈ）、５．８２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．９３〜６．１４（ｍ，２Ｈ）、７．１１〜７．２６（ｍ，３Ｈ）、７．２９〜７．４２（ｍ，２Ｈ）、７．７９〜８．１７（ｍ，１Ｈ）
【０１４７】
試料２−７：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．９２〜１．２８（ｍ，１７Ｈ）、１．９７（ｓ，２Ｈ）、４．０４〜４．１６（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．５１（ｍ，３Ｈ）、４．７１〜４．９３（ｍ，２Ｈ）、５．８２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．９５〜６．１４（ｍ，２Ｈ）、７．１１〜７．２８（ｍ，３Ｈ）、７．３１〜７．４３（ｍ，２Ｈ）、７．７５〜８．２１（ｍ，１Ｈ）
【０１４８】
試料２−８：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．８１〜１．１１（ｍ，１３Ｈ）、１．１９（ｓ，１Ｈ）、１．５３〜１．６６（ｍ，１Ｈ）、３．８７〜４．０１（ｍ，１Ｈ）、４．０６〜４．３２（ｍ，３Ｈ）、４．６４（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．２５Ｈｚ，１Ｈ）、５．５５〜５．７５（ｍ，１Ｈ）、５．７７〜５．９７（ｍ，２Ｈ）、６．９４〜７．１０（ｍ，３Ｈ）、７．１３〜７．２６（ｍ，２Ｈ）、７．６６〜７．９６（ｍ，１Ｈ）
【０１４９】
実施例７．非晶質マロン酸塩（化合物４）を結晶化することができないこと
実施例３に示されるように、結晶性シュウ酸塩は、化合物１に適した塩を決定する際に同定されたが、シュウ酸塩化合物４は、腎臓結石を引き起こす可能性に起因して、臨床試験において前進させることはできなかった。したがって、ヘミ硫酸塩用の溶媒と同じ１１個の溶媒を使用して、化学的に関連するマロン酸塩（化合物５）の結晶化を試みた。化合物１（１２×５０ｍｇ、試料３−１、３−２、３−３、３−４、３−５、３−６、３−７、３−８、３−９、３−１０、３−１１、及び３−１２）をｔ−ブタノール（２０倍容量）中に溶解して、続いて、溶液を１当量のマロン酸ストック溶液（ＴＨＦ中に１Ｍ）で処理した。次に、試料を凍結させて、溶媒を凍結乾燥によって除去した。試料３−１、３−２、３−３、３−４、３−５、３−６、３−７、３−８、３−９、３−１０、及び３−１１に、関連溶媒（５倍容量）を室温で添加した。ガム又は固体を２５℃から５０℃で（温度間では１℃／分、及び各温度で４時間）５日間成熟させながら、得られた全ての溶液を外気条件下で蒸発させた。固体をＸＲＰＤによって分析した（図１２Ｂ）が、試料は全て、ガムを形成することがわかったか、又は非晶質であった（図１２Ｂ）。結果を表１１に示す。固体（非晶質）試料の１つ（３−１２）を１Ｈ−ＮＭＲ及びＨＰＬＣによって分析し、約１当量のマロン酸（ピークの重なり）及び０．６当量のｔ−ＢｕＯＨを含有することがわかった。化合物は、純度９９．２％であった（図１３Ａ）。図１２Ａは、試料３−１２のＸＲＤＰであり、図１３Ａは、試料３−１２のＨＰＬＣクロマトグラフである。
【０１５０】
試料３−１２：
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ０．８１〜１．１１（ｍ，１３Ｈ）、１．１９（ｓ，１Ｈ）、１．５３〜１．６６（ｍ，１Ｈ）、３．８７〜４．０１（ｍ，１Ｈ）、４．０６〜４．３２（ｍ，３Ｈ）、４．６４（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．２５Ｈｚ，１Ｈ）、５．５５〜５．７５（ｍ，１Ｈ）、５．７７〜５．９７（ｍ，２Ｈ）、６．９４〜７．１０（ｍ，３Ｈ）、７．１３〜７．２６（ｍ，２Ｈ）、７．６６〜７．９６（ｍ，１Ｈ）
【０１５１】
【表１３】
2020505423.tif 000026
【０１５２】
実施例８．液体補助粉砕（ＬＡＧ）を使用した適正な塩形成ができないこと
液体補助粉砕（ＬＡＧ）研究を、表１２の１４個の酸性対イオンを使用して実施し、ヘミ硫酸塩以外の適切な塩を決定した。
【０１５３】
【表１４】
2020505423.tif 000027
【０１５４】
化合物１（３０ｍｇ）を、２つの３ｍｍのボールベアリングを備えたＨＰＬＣバイアルに入れた。材料を溶媒で湿らせて（エタノール１５μｌ、試料４−１、４−２、４−３、４−４、４−５、４−６、４−７、４−８、４−９、４−１０、４−１１、４−１２、４−１３、及び４−１４）、１当量の酸対イオンを添加した。次に、Ａｕｔｏｍａｘｉｏｎアダプターを備えたＦｒｉｔｓｃｈミリングシステムを使用して、試料を６５０ｒｐｍで２時間粉砕した。粉砕後の試料のほとんどが、透明なガムであることがわかり、更に分析しなかった（表１３）。固体を含有することが観察されたものは、ＸＲＰＤによって分析し、全ての事例において、得られたパターンは、更なるピークを伴わずに、結晶性酸対イオンのパターンに一致することがわかった（図１３Ｂ）。
【０１５５】
【表１５】
2020505423.tif 000028
【０１５６】
実施例９．メチルエチルケトン（ＭＥＫ）を使用して適正な塩形成を得ることができないこと
次に、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）を溶媒として利用して、ヘミ硫酸塩以外の適切な塩を研究した。表１２の１４個の酸性対イオンを使用して、化合物１（５０ｍｇ）をＭＥＫ（２０倍容量）中に室温で溶解することによって、研究を実施した。溶液を、選択した対イオン（表１２）１当量で処理した。続いて、試料を０．１℃／分で５℃まで冷却して、この温度で一晩攪拌した。試料は全て、外気条件下で蒸発させて、観察された任意の固体をＸＲＰＤによって分析した。この蒸発により主に、ガムが生じたが、ガラス状溶媒を生じたステアリン酸（試料４−１２）及びパルミチン酸（試料５−１３）を用いた試料は除く。これらの固体は、ＸＲＰＤによると非晶質であり、塩の結晶性形態は得られなかった。結果を表１４に示す（図１３Ａ）。
【０１５７】
【表１６】
2020505423.tif 000029
【０１５８】
試料が全て、非晶質であったため、試料は全て、ＭＥＫ（５倍容量）に再溶解して、シクロヘキサンを室温で添加した（貧溶媒２０倍容量）後、２５℃で１時間攪拌した。次に、試料を５０℃から５℃で（温度間では１℃／分、各温度で４時間）２日間成熟させた後、サイクルを、更に４日間、５０℃から２５℃に変更した。成熟後に、試料を目視で観察した。結果を表１５に示す。成熟後、５−１（パモ酸を用いた場合）を除く全ての試料が、ガムであることがわかった。黄色固体の試料５−１をＸＲＰＤによって分析し、パターンが、パモ酸の既知の形態に一致することがわかり（図１４Ｂ）、したがって、塩の結晶性形態は得られなかった。
【０１５９】
【表１７】
2020505423.tif 000030
【０１６０】
実施例１０．酢酸エチルを使用して適正な塩形成を得ることができないこと
次に、酢酸エチルを使用して、ヘミ硫酸塩以外の適切な塩を研究した。表１２の１４個の酸性対イオンを利用して、化合物１（５０ｍｇ）を５０℃で酢酸エチル（２０倍容量）中に溶解することによって、研究を実施した。溶液を、選択した対イオン（表１２）１当量で処理した。続いて、試料を０．１℃／分で５℃まで冷却して、この温度で４日間攪拌した。溶液を外気条件下で蒸発させ、さらに、任意の固体をＸＲＰＤによって分析した。酢酸エチルを使用した結晶化の結果を表１６に示す。ＭＥＫが溶媒である実施例８とは対照的に、試料の大部分が、酸：化合物の混合物の冷却後に懸濁液であると観察された（溶液であったものは、外気条件下で蒸発させた）。しかしながら、ＸＲＰＤディフラクトグラムは概して、結晶性化合物１に一致することがわかった。試料６−２、６−４、及び６−５は、幾らかわずかに異なっている（図１４Ａ及び図１５Ａ）。塩の結晶性形態は得られなかった。
【０１６１】
【表１８】
2020505423.tif 000031
【０１６２】
実施例１１．ＨＰＬＣによる化学的純度の決定
ダイオードアレイ検出器を装備したＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰ１１００シリーズのシステムで、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェアｖＢ．０４．０３を使用し、表１７に示す方法を使用して、実施例２及び実施例４における純度分析を実施した。
【０１６３】
【表１９】
2020505423.tif 000032
【０１６４】
実施例１２．Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）技法
実施例２、実施例３、実施例４、実施例５、実施例６、実施例７、実施例８、及び実施例９におけるＸＲＰＤパターンを、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ  Ｅｍｐｙｒｅａｎ回折計で、透過型配置でＣｕ  Ｋα照射（４５ｋＶ、４０ｍＡ）を使用して収集した。集光ミラーを有する０．５°のスリット、４ｍｍのマスク、及び０．４ｒａｄのソーラースリットを入射ビームで使用した。回折ビーム上に配置したＰＩＸｃｅｌ３Ｄ検出器に、受信スリット及び０．０４ｒａｄのソーラースリットを取り付けた。ケイ素粉末を使用して、毎週、機器の性能検査を行う。データ収集に使用したソフトウェアは、Ｘ’Ｐｅｒｔ  Ｄａｔａ  Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ  ｖ．５．３であり、データは、Ｄｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡ  ｖ．１５．０．０．０又はＨｉｇｈｓｃｏｒｅ  Ｐｌｕｓ  ｖ．４．５を使用して、分析及び表示した。試料を調製して、金属又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  ９６ウェルプレートのいずれかにおいて、透過型モードで分析した。金属ウェル−プレート上の金属シートと、受け止められ、使用される粉末（約１ｍｇ〜２ｍｇ）との間に、Ｘ線透明フィルムを使用した。Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅプレートを使用して、少量の懸濁液を直接プレートに添加した後、わずかな真空下で濾過することによって、固体を懸濁液から単離及び分析した。
【０１６５】
金属プレートに関するスキャンモードは、ゴニオスキャン軸を使用した一方で、Ｍｉｌｌｌｉｐｏｒｅプレートに関しては、２θスキャンを利用した。性能検査は、ケイ素粉末を使用して実行した（金属ウェル−プレート）。データ収集の詳細は、角度範囲２．５°２θ〜３２．０°２θ、ステップ幅０．０１３０°２θ、及び総収集時間２．０７分であった。
【０１６６】
試料はまた、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８回折計で、Ｃｕ  Ｋα照射（４０ｋＶ、４０ｍＡ）、θ〜２θのゴニオメーター、及び発散Ｖ４及び受信スリット、Ｇｅモノクロメーター及びＬｙｎｘｅｙｅ検出器を使用して収集した。認定コランダム標準物質（ＮＩＳＴ  １９７６）を使用して、機器の性能検査を行う。データ収集に使用したソフトウェアは、ＤｉｆｆｒａｃＰｌｕｓ  ＸＲＤ  Ｃｏｍｍａｎｄｅｒ  ｖ２．６．１であり、データは、Ｄｉｆｆｒａｃ  Ｐｌｕｓ  ＥＶＡ  ｖ１５．０．０．０を使用して分析及び表示した。
【０１６７】
受け止められた粉末を使用して、試料を平坦なプレート検体として外気条件下で処理した。試料を、研磨加工したバックグラウンドゼロ（５１０）のシリコンウェハーにカットした空洞に、そっと充填した。試料を、分析中にそれ自体の平面で回転させた。データ収集の詳細は、角度範囲２°２θ〜４２°２θ、ステップ幅０．０５°２θ、及び収集時間０．５秒／ステップであった。
【０１６８】
実施例１３．非晶質化合物２の合成
【化１１】
2020505423.tif 000033
【０１６９】
２５０ｍＬ容のフラスコに、ＭｅＯＨ（１５１ｍＬ）を入れて、溶液を０℃〜５℃に冷却した。濃Ｈ２ＳＯ４溶液を、１０分かけて滴加した。別のフラスコに化合物１（１５１ｇ）及びアセトン（９１０ｍＬ）を入れて、Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨ溶液を、２５℃〜３０℃で２．５時間かけて滴加した。大量の固体が沈殿した。溶液を２５℃〜３０℃で１２時間〜１５時間攪拌した後、混合物を濾過して、ＭｅＯＨ／アセトン（２５ｍＬ／１５０ｍＬ）で洗浄して、５５℃〜６０℃で、真空中で乾燥させて、化合物２（１２１ｇ、７４％）を得た。
【０１７０】
化合物２に関する分析方法：化合物２の純度は、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｈｅｎｙｌ  ５μｍ  ４．６＊２５０ｍｍカラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムを使用して、下記条件：流速１ｍＬ／分、２５４ｎｍで読み取り、カラム温度３０℃、注入容量１０μＬ、実行時間３０分で得られた。試料は、ＡＣＮ：水（９０：１０、ｖ／ｖ）中に溶解した。分離のための勾配方法を以下に示す。化合物２のＲ１（分）は、約１２．０分であった。
【０１７１】
【表２０】
2020505423.tif 000034
【０１７２】
１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．４１（ｂｒ，１Ｈ）、７．９７（ｓ，１Ｈ）、７．３６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、７．１７（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．７３（ｓ，２Ｈ）、６．０７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．００（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．８１（ｂｒ，１Ｈ）、４．８４〜４．７３（ｍ，１Ｈ）、４．４４〜４．２８（ｍ，３Ｈ）、４．１０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．８５〜３．７４（ｍ，１Ｈ）、２．９５（ｓ，３Ｈ）、１．２１（ｓ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，３Ｈ）、１．１５〜１．１０（ｍ，９Ｈ）。
【０１７３】
実施例１４：化合物２の特性評価
化合物２を、目視、１ＨＮＭＲ、１３ＣＮＭＲ、１９ＦＮＭＲ、ＭＳ、ＨＰＬＣ及びＸＲＰＤで更に特性評価した（図１５Ｂ）。残留溶媒をＧＣによって測定した。含水量は、Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定によって測定し、含水量は、ほんの０．７０％であった。データを表１８にまとめる。
【０１７４】
【表２１】
2020505423.tif 000035
【０１７５】
実施例１５．化合物１及び化合物２の溶解度
化合物１及び化合物２はともに、疑似胃酸（ＳＧＦ）、絶食状態疑似胃酸（ＦａＳＳＩＦ）、及び摂食状態胃酸（ＦｅＳＳＩＦ）を含む生体関連試験媒質中での溶解度に関して試験した。化合物１に関する結果を表１９に示し、化合物２に関する結果を表２０に示す。試料は、室温（２０℃〜２５℃）で攪拌した。化合物２は、水中で２時間では、化合物１よりも４０倍を超えて溶解性が高く、２４時間では、２５倍を超えて溶解性が高かった。ＳＧＦ条件では、２４時間での化合物１が溶解度１５．６ｍｇ／ｍＬであるのに対し、同じ時点での化合物２は、溶解度８４．２ｍｇ／ｍＬを有した。化合物２はまた、ＳＧＦ条件において２時間では、化合物１よりも高い溶解性であり、４８時間後でさえ、実験が可能なほど十分に溶解性であったのに対して、化合物１を用いた場合は、４８時間での実験は行わなかった。
【０１７６】
【表２２】
2020505423.tif 000036
【０１７７】
【表２３】
2020505423.tif 000037
【０１７８】
実施例１６．化合物２の化学的安定性
有機物純度、含水量、１ＨＮＭＲ、ＤＳＣ、及びラマンＩＲをモニタリングすることによって、化合物２を６ヵ月間かけて、２５℃及び４０℃で化学的安定性に関して試験した。研究用の容器密封系は、パウチ上に医薬ラミネートフィルムを、また２つの層間に乾燥剤シリカゲルを有する複合医療用バルブバッグであった。化合物２（１ｇ）を各容器に計量した。続いて、バッグを２５℃／６０％ＲＨ（相対湿度）及び４０℃／７５％ＲＨ（相対湿度）で保管した。有機物純度、含水量、１ＨＮＭＲ、ＤＳＣ及びラマンを、時間０、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月及び６ヵ月で測定した。
【０１７９】
化合物２の純度は、Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｈｅｎｙｌ、５μｍ、４．６×２５０ｍｍカラムを備えたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−２０ＡＤシステムを使用して、下記条件：流速１ｍＬ／分、２５４ｎｍで読み取り、カラム温度３５℃、及び注入容量１０μＬで得られた。試料をアセトニトリル−水（９０：１０）（ｖ／ｖ）中に溶解した。勾配方法を以下に示す。
【０１８０】
【表２４】
2020505423.tif 000038
【０１８１】
化合物２（２５０ｍｇ）の含水量は、Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定方法を使用する水滴定装置によって決定した。
【０１８２】
結果を表２１及び表２２に示す。化合物２を２５℃及び４０℃で６ヵ月間保管した場合に、分解速度は最小であった。３ヵ月では、化合物２は、２５℃条件で純度９９．７５％であり、４０℃条件では純度９９．５８％であった。６ヵ月では、化合物２は、２５℃条件では、依然として純度９９．７４％であり、４０℃条件では純度９９．３０％であった。２５℃では、分解生成物のパーセントは、０日目の０．０３％から６ヵ月後の０．０８％まで増加した。４０℃では、分解生成物のパーセントは、０．０３％から０．３９％まで増加した。６ヵ月にわたって、水のパーセントは、２５℃で約０．６％増加し、４０℃で約０．７％増加した。
【０１８３】
１ヵ月目、２ヵ月目、３ヵ月目、及び６ヵ月目の化合物２の１ＨＮＭＲ、ラマン、及びＤＳＣによる特性評価は、両方の温度条件で０日目の化合物２の特性評価と同じであり（表２２）、化合物２の長期安定性を強調した。
【０１８４】
【表２５】
2020505423.tif 000039
【０１８５】
【表２６】
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【０１８６】
化合物２の更なる化学的安定性研究を行い（measured）、不純物及び水のレベルを決定した。３つの条件を試験した：６ヵ月間にわたる加速安定性（４０℃±２℃／７５％±５％ＲＨ）、９ヵ月間にわたる外気安定性（２５℃±２℃／６０％±５％ＲＨ）、及び９ヵ月間にわたる冷蔵条件（５℃±３℃）下での安定性。加速安定性、外気安定性、及び冷蔵条件に関する結果を、それぞれ表２３、表２４、及び表２５に示す。これらの研究の結果に基づくと、化合物２は、非常に化学的に安定である。
【０１８７】
加速安定性研究（表２３）において、化合物２を測定した各時点（１ヵ月目、３ヵ月目、及び６ヵ月目）で、化合物２の外観は常に白色固体であり、ＩＲは、参照標準物質に一致した。６ヵ月後、関連物質１の不純物は全体で、ほんの０．０８％であり、関連物質２及び異性体は検出されなかった。
【０１８８】
【表２７】
2020505423.tif 000041
【０１８９】
外観、ＩＲ、水及び不純物のレベルを９ヵ月間測定した外気安定性研究では、化合物２の外観は、常に白色固体であり、ＩＲは常に、参照試料に符合した。結果（表２４）は、化合物２がどれほど化学的に安定であるかを強調している。９ヵ月後、試料中の水のパーセントは、ほんの０．２０％であり、関連物質１の不純物は全体で、ほんの０．０２％であった。加速安定性研究と同様に、関連物質２及び化合物２の如何なる異性体も検出されなかった。
【０１９０】
【表２８】
2020505423.tif 000042
【０１９１】
冷蔵条件下での安定性を測定した結果を表２５に示す。９ヵ月後でさえ検出された不純物は、関連物質１由来のもの及び水だけであった。９ヵ月後の含水量は０．３２％であり、関連物質１の不純物は全体で、試料のほんの０．０１％であった。化合物２は、冷蔵条件下で非常に化学的に安定である。
【０１９２】
【表２９】
2020505423.tif 000043
【０１９３】
実施例１７．単回経口用量の化合物２後の代謝産物の血漿レベル
単回経口用量の化合物２を、ラット、イヌ、及びサルに投与して、スキーム１に示される或る特定の代謝産物の血漿レベルを測定した。
【０１９４】
化合物２から化合物１及び代謝産物１−７への変換を表２６に示し、代謝産物１−８及び代謝産物１−２に関する結果を表２７に示す。ラットにおいて、低レベルの化合物１曝露が観察されたが、高レベルの、活性トリホスフェート（代謝産物１−６）のヌクレオシド代謝産物である代謝産物１−７が観察された。サルにおいて、化合物１のほぼ用量に比例した曝露が測定された。イヌにおいて、肝臓における初回通過代謝クリアランスを示す比例を超える化合物１曝露が測定された。研究全体にわたって、サル（高用量群の１／５）よりもイヌ（高用量群の５／５）において、より著しい嘔吐が観察された。
【０１９５】
【表３０】
2020505423.tif 000044
【０１９６】
【表３１】
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【０１９７】
実施例１８．経口用量の化合物２後の活性トリホスフェートの組織曝露
化合物２の活性トリホスフェート（ＴＰ）（代謝産物１−６）の心臓及び肝臓組織レベルを、経口用量の化合物２の４時間後に測定した。肝臓及び心臓の試料を、単回用量の化合物２の４時間後に採取して、急速冷凍して、均質化して、活性ＴＰの細胞内レベルに関して、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。図１６Ａに示されるように、組織レベルを、ラット、イヌ、及びサルにおいて測定した。高レベルの活性ＴＰが、試験した全ての種の肝臓で測定された。初回肝代謝の飽和に起因してイヌの心臓において、比較的低レベルの活性ＴＰが測定され、ラット及びサルの心臓では、数量化不能なレベルのＴＰが測定され、活性ＴＰの肝臓特異的な形成を示した。図示していないが、化合物１の投薬と比較して、化合物２の投薬は、ＴＰ分布を改善した。
【０１９８】
実施例１９．イヌにおける化合物１及び化合物２の薬理学的比較
化合物１及び化合物２を投薬したイヌの直接の比較を行った。研究により、化合物１（２５ｍｇ／ｋｇ）及び化合物２（３０ｍｇ／ｋｇ）を投薬した４時間後に、化合物１及び代謝産物１−７（スキーム１から）の血漿レベルが測定され（表２８）、代謝産物１−７のＡＵＣ（０時間〜４時間）は、化合物１と比較して、化合物２を用いた場合には２倍程度大きかった。化合物１及び代謝産物１−７に対する用量で正規化した曝露を表２８に示す。化合物１、代謝産物１−７、及び化合物１＋代謝産物１−７の合計に関するＡＵＣ（０時間〜４時間）に関する値は、化合物２を投薬した後でより高かった。
【０１９９】
【表３２】
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【０２００】
表２９に示されるように、トリホスフェート濃度の肝臓／心臓比により、化合物２による投薬は、化合物１と比較した場合に、トリホスフェートの肝臓への選択的送達を増加させることが示される。心臓で測定された化合物１の投与後の活性グアニン代謝産物（１−６）のＡＵＣ（０時間〜４時間）は、１７４μＭ＊ｈｒであったのに対して、心臓で測定された化合物２の投与後の活性グアニン代謝産物（１−６）のＡＵＣ（０時間〜４時間）は、２８μＭ＊ｈｒであった。化合物１に関する肝臓／心臓比が３．１であるのに対し、化合物２に関する肝臓／心臓比は２０であった。
【０２０１】
【表３３】
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【０２０２】
化合物１と比較し化合物２を投与した場合に心臓を上回る肝臓に対する選択性の増加の効果もまた、図１６Ｂに示す。化合物２（３０ｍｇ／ｋｇ）の投薬後の活性トリホスフェートの心臓及び肝臓組織レベルを、化合物１（２５ｍｇ／ｋｇ）の投薬後の活性トリホスフェートの組織レベルと比較した。活性ＴＰの濃度は、化合物１及び化合物２の両方に関して、心臓よりも肝臓において高かったが、活性ＴＰは、化合物１と比較して、化合物２を投薬した場合に、心臓よりも肝臓に対してより選択的であった。
【０２０３】
実施例２０．ラット及びサルにおける化合物２の代謝産物の血漿プロファイル
雄スプラーグドーリーラット及びカニクイザル（用量１つにつき動物３匹）に、単回経口用量の化合物２を付与した。ジクロルボスで処理した血液試料から調製した血漿の分取量を、化合物１及び代謝産物１−７（スキーム１に示される化合物２の活性トリホスフェートのヌクレオシド代謝産物）の濃度に関して、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析し、薬物動態パラメーターを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎを使用して決定した。ラットにおける単回５００ｍｇ／ｋｇ用量に関する結果を図１７に示し、サルにおける単回３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、又は３００ｍｇ／ｋｇ用量に関する結果を図１８に示す。また、結果を表３０に概要する。
【０２０４】
化合物２の活性トリホスフェート（ＴＰ）のヌクレオシド代謝産物である代謝産物１−７の高い血漿レベルは、ラット血液中での化合物１の短い半減期（２分未満）に起因して、非常に低い血漿レベルの親ヌクレオチドプロドラッグが観察されるラットにおいてさえ、高レベルのＴＰの形成を示している。代謝産物１−７の持続的な血漿レベルは、ＴＰの長い半減期を反映している。
【０２０５】
サルにおいては、化合物１の血漿曝露（ＡＵＣ）は、ほぼ用量に比例していたのに対して、代謝産物１−７曝露は、用量に比例しているとは言えなかったが、親薬物及び活性ＴＰのヌクレオシド代謝産物の両方に関するＡＵＣ値は、試験した最も高い用量（３００ｍｇ／ｋｇ）にまで増加し続ける。
【０２０６】
ラット及びサルにおける化合物２の経口投与は、代謝産物１−７（化合物２の細胞内活性トリホスフェートのヌクレオシド代謝産物）に対する高くて用量依存的な血漿曝露をもたらし、代謝産物１−７曝露は、試験した最も高い用量にまで増加し続け、これらの種において活性ＴＰの実質的な形成を反映していた。
【０２０７】
【表３４】
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【０２０８】
実施例２１．ミトコンドリア完全性に対する化合物１及び化合物２の活性トリホスフェートの効果
ヒトミトコンドリアＲＮＡポリメラーゼによる化合物１及び化合物２、代謝産物１−６（スキーム１）の活性トリホスフェート（ＴＰ）の取込みの相対的効率を、ソホスブビルの活性ＴＰ及びＩＮＸ−１８９の活性ＴＰの相対的効率と比較した。化合物１及び化合物２は、それらの活性トリホスフェートが、ソホスブビルのトリホスフェートの効率と類似した効率で、ヒトミトコンドリアＲＮＡポリメラーゼによってあまり取り込まれないため、ミトコンドリア完全性に影響を及ぼす可能性は低く、ＩＮＸ−１８９のトリホスフェートの取込みの相対的効率は、最大５５倍高かった。結果を表３１に示す。ヒトミトコンドリアＲＮＡ依存性ポリメラーゼ（ＰＯＬＲＭＴ）によるこれらのアナログの組込みは、Arnoldら（Sensitivity of Mitochondrial Transcription and Resistance of RNA Polymerase II Dependent Nuclear Transcription to Antiviral Ribonucleotides. PLoS Pathog., 2012, 8, e1003030）に従って決定した。
【０２０９】
【表３５】
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【０２１０】
実施例２２．ＮＳ５Ｂ配列を含有するレプリコンに対する化合物１の活性
６つの実験室参照株（ＧＴ１ａ、１ｂ、２ａ、３ａ、４ａ及び５ａ）（図１９）から、及び８つのＨＣＶ患者血漿試料（ＧＴ１ａ、１ｂ、２ａ、２ｂ、３ａ−１、３ａ−２、４ａ及び４ｄ）（図２０）から得られる各種ＨＣＶ遺伝子型由来のＮＳ５Ｂ配列を含有するレプリコンのパネルを使用して、化合物１及びソホスブビルの効力を決定した。
【０２１１】
化合物１は、ＨＣＶの臨床株及び実験室株に対して、ソホスブビルよりも強力であった。化合物１は、８０ｎＭ未満のＥＣ９５で、野生型臨床分離株に対して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで強力な汎遺伝子型抗ウイルス活性を示し、それは、ソホスブビルよりも４倍〜１４倍強力である。図２０に示されるように、化合物１に関するＥＣ９５値は、試験した全てのＨＣＶ遺伝子型の臨床分離株に対して、ソホスブビルよりも７倍〜３３倍低かった。化合物１に関するＥＣ５０値は、ＨＣＶ遺伝子型１〜５の実験室株に対して、ソホスブビルよりも６倍〜１１倍低かった（図１９）。
【０２１２】
実施例２３．健常なボランティア（パートＡ）及びＧＴ１−ＨＣＶ感染患者（パートＢ）における化合物２の単回用量漸増（ＳＡＤ）研究
化合物２を、単回用量漸増（ＳＡＤ）研究において試験して、健常な対象（パートＡ）におけるその安全性、忍容性、及び薬物動態を測定した。パートＡは、無作為化の二重盲検のプラセボ対照ＳＡＤ研究であった。パートＡにおける健常な対象に、絶食状態で単回用量の化合物２又はプラセボを付与した。対象は、−１日目から６日目まで診療所からの外出を禁じた（confined）。
【０２１３】
各コホートにおける投薬は、２人の対象（活性１：プラセボ１）を投薬の４８時間後に評価した後、コホートの残部に投薬するように調整した。各コホートに、昇順で化合物２を付与した。続くコホートの投薬は、先のコホートの利用可能な安全性データ（５日目まで）及び血漿薬物動態データ（２４時間まで）を検討した上で行われた。
【０２１４】
用量増加は、これらのデータを十分検討した後に開始した。先のコホートの薬物動態データ及び安全性データが出たら、コホート３ａ〜４ａで評価される用量を、１００ｍｇ以下の増分で調節した。パートＡで評価される総最大用量は、８００ｍｇを超えなかった。パートＡに関する投薬レジメンを表３２に示す。
【０２１５】
【表３６】
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【０２１６】
研究のパートＡ部分における健常なボランティアは、１８歳〜６５歳の男性及び女性対象であった。活性レシピエント及びプラセボレシピエントは、各パートＡコホート内でプールされて、研究盲検を保存した。
【０２１７】
また、化合物２を、単回用量漸増（ＳＡＤ）研究において試験して、ＧＴ１−ＨＣＶ感染患者（パートＢ）におけるその安全性、忍容性、薬物動態、及び抗ウイルス活性を測定した。パートＢにおける対象に、絶食状態で単回用量の化合物２を付与した。患者は、−１日目から６日目まで診療所からの外出を禁じた。
【０２１８】
パートＢは、パートＡにおけるコホート３ａからの安全性データ（５日目まで）データ及び血漿薬物動態データ（２４時間まで）を検討した後に開始した。利用可能な安全性データ（５日目まで）及び血漿薬物動態データ（２４時間まで）を、パートＢにおける第１のコホート（コホート１ｂ）に関して検討した後、続くパートＢコホートを登録した。続くパートＢコホートは、パートＡにおける各々の用量からの利用可能な安全性データ及び薬物動態データ並びに先のパートＢコホートからの利用可能な安全性データ（５日目まで）を検討した後にのみ投薬された。
【０２１９】
ＨＣＶ感染患者における最大６００ｍｇの用量増加は、これらのデータを十分検討した後に開始した。パートＢに関する投薬レジメンを表３３に示す。
【０２２０】
【表３７】
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【０２２１】
ＨＣＶに感染した患者は、５ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬ以上のウイルス負荷を伴う治療ナイーブな非肝硬変ＧＴ１感染対象であった。
【０２２２】
重度の有害事象は記録されず、パートＡもパートＢも、早期中断は必要とされなかった。有害事象は全て、強度が軽度から中程度であり、実験室パラメーター、バイタルサイン、及びＥＣＧを含む用量関連パターンは、明らかではなかった。
【０２２３】
実施例２４．化合物２の単回用量漸増（ＳＡＤ）研究の結果
化合物１及びヌクレオシド代謝産物１−７の薬物動態を、単回用量の化合物２後に測定した。６００ｍｇ用量の化合物２後のＨＣＶ感染患者における代謝産物１−７のＣ２４トラフ血漿濃度（Ｃ２４ｈ）は、２５．８ｎｇ／ｍＬであり、それは、３００ｍｇ用量の化合物２後の血漿濃度用量の２倍を上回る。代謝産物１−７（スキーム１に示される）は、細胞内ホスフェート代謝産物１−４、代謝産物１−５、及び活性種である代謝産物１−６の脱リン酸化によってのみ生成することができる。したがって、代謝産物１−７は、活性種の代替物とみなすことができる。全てのコホートに関する薬物動態データを表３４及び表３５に示す。値は、平均値±ＳＤとして報告し、但し、メジアン（範囲）を報告しているＴｍａｘは除く。薬物動態パラメーターは、健常及びＨＣＶ感染患者において同等であった。
【０２２４】
【表３８】
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【０２２５】
【表３９】
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【０２２６】
化合物１及び代謝産物１−７の平均血漿濃度−時間プロファイルもまた、研究のパートＡ及びパートＢの全てのコホートに関して算出した。図２１は、単回用量の化合物２後の化合物１の平均血漿濃度であり、図２２は、単回用量の化合物２後の代謝産物１−７の平均血漿濃度である。図２１に示されるように、化合物１は、パートＢからの全てのコホートにおいて、速やかに吸収されて、迅速に／広く代謝された。図２２に示されるように、代謝産物１−７は、主な代謝産物であり、持続した血漿濃度を示した。化合物１の血漿曝露は、用量に関連していたのに対して、代謝産物１−７の曝露は、用量に比例していた。
【０２２７】
パートＢのＨＣＶ感染対象に関して、ＨＣＶ  ＲＮＡ定量化の測定を、化合物２の投与前、投与中、及び投与後に実施した。血漿ＨＣＶ  ＲＮＡの決定は、確証された市販のアッセイを用いて実施した。ベースラインは、−１日目及び１日目の平均値（プレ用量）として定義した。単回３００ｍｇ用量の化合物２（化合物１  ２７０ｍｇと同等）は、ＧＴ１ｂ−ＨＣＶ感染対象において著しい抗ウイルス活性をもたらした。単回３００ｍｇ用量後の投薬の２４時間後の平均最大ＨＣＶ  ＲＮＡ減少は、１．７ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬであり、これを、ＧＴ１ａ  ＨＣＶ感染対象における４００ｍｇのソホスブビル単剤療法の１日後の−２ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬ減少と比較する。単回１００ｍｇ用量後の投薬の２４時間後の平均最大ＨＣＶ  ＲＮＡ減少は、０．８ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬであった。単回４００ｍｇ用量後の平均最大ＨＣＶ  ＲＮＡ減少は、２．２ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬであった。研究のパートＢ由来の個々の対象に関する個々の薬物動態／薬力学分析を図２３Ａ〜図２３Ｆに示す。代謝産物１−７濃度を、ＨＣＶ  ＲＮＡ減少濃度に対してプロットし、図２３Ａ〜図２３Ｆに示されるように、血漿ＨＣＶ  ＲＮＡ減少は、血漿代謝産物１−７曝露と相関する。ウイルス応答は、ＧＴ１ｂに対してＥＣ９５値よりも大きい代謝産物１−７血漿濃度で持続される。血漿濃度とＨＣＶ  ＲＮＡ減少レベルとの間の相関関係から、より高い用量の化合物２を用いた場合に、より高い応答が達成可能であることが示される。
【０２２８】
実施例２５．代謝産物１−７の予測定常状態トラフレベルは、ＨＣＶ  ＧＴ１〜４の臨床分離株に対する化合物１のＥＣ９５値を超える
図２４に示されるように、ヒトにおける化合物２の投薬（６００ｍｇ  ＱＤ（遊離塩基５５０ｍｇと同等）及び４５０ｍｇ  ＱＤ（遊離塩基４００ｍｇと同等））後の代謝産物１−７の定常状態トラフ血漿レベル（Ｃ２４，ｓｓ）を予測して、試験した全ての臨床分離株に対してｉｎ  ｖｉｔｒｏで化合物１のＥＣ９５と比較して、定常状態血漿濃度がＥＣ９５よりも一貫して高く、ｉｎ  ｖｉｖｏで試験した任意又は全ての臨床分離株に対して高い有効性をもたらすかどうかを決定した。化合物１に関するＥＣ９５は、化合物２のＥＣ９５と同じである。化合物２が有効であるためには、代謝産物１−７の定常状態トラフ血漿レベルが、ＥＣ９５を超えるべきである。
【０２２９】
図２４に示されるように、試験した全ての臨床分離株に対する化合物２のＥＣ９５は、約１８ｎＭ〜２４ｎＭの範囲であった。
【０２３０】
図２４に示されるように、ヒトにおける４５０ｍｇ  ＱＤ（遊離塩基４００ｍｇと同等）の用量の化合物２は、予測定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）約４０ｎｇ／ｍＬをもたらす。ヒトにおける６００ｍｇ  ＱＤ（遊離塩基５５０ｍｇと同等）の用量の化合物２は、予測定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）約５０ｎｇ／ｍＬをもたらす。
【０２３１】
したがって、代替物である代謝産物１−７の予測定常状態血漿濃度は、試験した全ての臨床分離株（治療するのが困難であるＧＴ３ａでさえ）に対してほぼ２倍のＥＣ９５であり、優れた性能を示している。
【０２３２】
対比して、治療ヌクレオチドソホスブビルの標準物質のＥＣ９５は、試験した全てのＨＣＶ臨床分離株に対して５０ｎＭ〜２６５ｎＭであり、ＥＣ９５は、２つの分離株ＧＴ２ａ及びＧＴ２ｂのみに関して、市販投与量４００ｍｇでの予測定常状態濃度未満である。ソホスブビルの市販投与量４００ｍｇに関するＥＣ９５は、他の臨床分離株ＧＴ１ａ、ＧＴ１ｂ、ＧＴ３ａ、ＧＴ４ａ、及びＧＴ４ｄに関する予測定常状態濃度よりも高い。
【０２３３】
化合物２  ４５０ｍｇの定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を、３００ｍｇの定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を使用して予測した。３００ｍｇでの平均定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）は、２６．４ｎｇ／ｍＬであり、したがって、計算値は、２６．４＊４５０／３００＝３９．６ｎｇ／ｍＬであった。
【０２３４】
６００ｍｇ定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）を、３つのアプローチを使用して予測した：１）６００ｍｇ１日目のＣ２４平均値は、２５．８ｎｇ／ｍＬであり、定常状態に到達するには６０％増加が想定された。したがって、計算値は、２５．８＊１．６＝４１．３ｎｇ／ｍＬであった；２）４００ｍｇ１日目のＣ２４平均値は、２２．５ｎｇ／ｍＬであり、定常状態に到達するには６０％増加が想定された。用量に比例したＰＫを考慮すると、計算値は、２２．５＊１．６＊６００／４００＝５４ｎｇ／ｍＬであった；及び３）３００ｍｇの定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）は、２６．４ｎｇ／ｍＬであり、比例したＰＫが想定された。したがって、計算値は、２６．４＊２＝５２．８ｎｇ／ｍＬであった。６００ｍｇの定常状態トラフ血漿濃度（Ｃ２４，ｓｓ）は、３つのデータ点の平均値である（（４１．３＋５４＋５２．８）／３＝４９．３ｎｇ／ｍＬ）。単回用量後のＣ２４と比較して、一般的に、定常状態でのＣ２４において約６０％増加がみられる。
【０２３５】
図２４における有効性及び薬物動態定常状態パラメーターを比較するデータは、Ｃ型肝炎の治療用の化合物２の予想外の治療的重要性を実証している。実際に、化合物２の投与後の予測定常状態血漿レベルは、試験した全ての遺伝子型に関してＥＣ９５よりも少なくとも２倍高いと予測され、ＧＴ２に対しては３倍〜５倍強力である。このデータにより、化合物２が、ヒトにおいて強力な汎遺伝子型抗ウイルス活性を有することが示される。図２４に示されるように、ＧＴ１、ＧＴ３、及びＧＴ４でのソホスブビルのＥＣ９５は、１００ｎｇ／ｍＬよりも高い。したがって、驚くべきことに、化合物２は、類似した剤形のソホスブビルによって達成される定常状態トラフ濃度（約１００ｎｇ／ｍＬ）よりも低い定常状態トラフ濃度（４０ｎｇ／ｍＬ〜５０ｎｇ／ｍＬ）を送達する剤形で、ＨＣＶに対して活性である。
【０２３６】
実施例２６．化合物２の配合の説明及び製造
化合物２の錠剤（５０ｍｇ及び１００ｍｇ）に関する代表的な非限定的バッチ配合を表３６に提示する。錠剤は、図２５に示されるように、直接的な圧縮プロセスを使用して、共通ブレンドから生産された。活性医薬成分（ＡＰＩ）は、現状のままのアッセイに基づいて調節され、調節は、結晶セルロースのパーセントで行われる。ＡＰＩ及び賦形剤（結晶セルロース、ラクトース一水和物、及びクロスカルメロースナトリウム）を篩にかけて、Ｖ−ブレンダー（PK Blendmaster、０．５Ｌ容のボウル）に入れて、２５ｒｐｍで５分間混合した。次に、ステアリン酸マグネシウムを篩にかけて、添加して、ブレンドを更に２分間混合した。共通ブレンドは、５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠を生産する際に使用するために分割した。続いて、滑沢ブレンドを、シングルパンチリサーチ錠剤プレス（Korsch XP1）及び重力粉末供給機を使用して、１０錠／分の速度で圧縮した。丸型標準凹面６ｍｍツーリング及び３．５ｋＮの力を使用して、５０ｍｇ錠を生産した。８ｍｍ丸型標準凹面ツーリング及び３．９ｋＮ〜４．２ｋＮの力を使用して、１００ｍｇ錠を生産した。
【０２３７】
【表４０】
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【０２３８】
化合物２は、現状のままのアッセイに基づいて調節され、調節は、結晶セルロースのパーセントで行われた。化合物２及び賦形剤（結晶セルロース、ラクトース一水和物、及びクロスカルメロースナトリウム）を篩にかけて、Ｖ−ブレンダー（PK Blendmaster、０．５Ｌ容のボウル）に入れて、２５ｒｐｍで５分間混合した。次に、ステアリン酸マグネシウムを篩にかけて、添加して、ブレンドを更に２分間混合した。共通ブレンドは、５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠を生産する際に使用するために分割した。続いて、滑沢ブレンドを、シングルパンチリサーチ錠剤プレス（Korsch XP1）及び重力粉末供給機を使用して、１０錠／分の速度で圧縮した。丸型標準凹面６ｍｍツーリング及び３．５ｋＮの力を使用して、５０ｍｇ錠を生産した。８ｍｍ丸型標準凹面ツーリング及び３．９ｋＮ〜４．２ｋＮの力を使用して、１００ｍｇ錠を生産した。５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠の緒元を表３７に示す。
【０２３９】
【表４１】
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【０２４０】
上述するように生産した５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠を、３つの条件：５℃（冷蔵）、２５℃／６０％ＲＨ（外気）、及び４０℃／７５％（加速）下で６ヵ月の安定性研究に付した。５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠はともに、試験した３つ全ての条件下で、化学的に安定であった。
【０２４１】
冷蔵条件（５℃）下で、５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠はともに、Ｔ＝０からＴ＝６ヵ月まで外観が変化しない白色固体のままであった。６ヵ月の研究全体にわたって、５０ｍｇ錠又は１００ｍｇ錠の何れにも０．０５％を超える不純物は報告されなかった。６ヵ月後の含水量もまた、両方の錠剤に関して３．０％ｗ／ｗ未満であった。錠剤を外気条件（２５℃／６０％ＲＨ）に付した場合にも、同様の結果が報告され、６ヵ月全体にわたって、両方の錠剤に関して０．０５％を超える不純物は報告されず、含水量は、６ヵ月時点で３．０％ｗ／ｗを超えなかった。錠剤を加速条件（４０℃／７５％ＲＨ）に付した場合、５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠の外観は、白色の丸型錠剤から変化しなかった。３ヵ月後に１つの不純物が報告されたが、不純物は、ほんの０．０９％であった。第２の不純物が６ヵ月後に報告されたが、不純物パーセントは全体で、５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠の両方に関して、ほんの０．２１％であった。含水量は、６ヵ月で、５０ｍｇ錠に関しては３．４％ｗ／ｗ、また１００ｍｇ錠に関しては３．２％ｗ／ｗであった。
【０２４２】
別個の研究において、外気条件（２５℃／６０％ＲＨ）での化合物２の５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠の安定性を、９ヵ月にわたって測定した。５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠の外観は、９ヵ月にわたって白色丸型錠剤から変化しなかった。５０ｍｇ錠中の不純物は、９ヵ月後に０．１０％未満であり、１００ｍｇ錠中の不純物は、０．０５％未満であった。９ヵ月後の５０ｍｇ錠及び１００ｍｇ錠の含水量は、それぞれ、ほんの２．７％ｗ／ｗ及び２．６％ｗ／ｗであった。
【０２４３】
本明細書は本発明の実施形態を参照して記載されている。しかしながら、添付の特許請求の範囲に記載されるような本発明の範囲を逸脱することなく、様々な修正及び変更を行うことができることが当業者には理解される。したがって、本明細書は限定的意味ではなく例示的意味で考えられ、全てのかかる修正が本発明の範囲に含まれることが意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２３Ｄ】
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【図２３Ｅ】
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【図２３Ｆ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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