(57)【要約】  部位特異的または局所免疫特権を与えるための方法及び化合物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療化合物であって、
ａ）例えば、ドナー標的と優先的に結合する、ドナー特異的標的化部分；または
ｂ）例えば、対象の標的組織と優先的に結合する、組織特異的標的化部分；から選択される
ｉ）特異的標的化部分及び
（ａ）免疫細胞阻害分子結合／調節部分（ＩＣＩＭ結合／調節部分）；
（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合／調節部分（ＩＩＣ結合／調節部分）；または
（ｃ）治療化合物の一部として、例えば、前記標的の近くに、前記標的の免疫系による攻撃を阻害するもしくは最小限に抑える物質を提供することにより、免疫抑制性局所微小環境を促進する、エフェクター結合／調節部分（ＳＭ結合／調節部分）から選択される、
ｉｉ）エフェクター結合／調節部分を含む、前記治療化合物。
【請求項２】
前記エフェクター結合／調節部分が、阻害性受容体と直接結合し、これを活性化する、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項３】
前記エフェクター結合／調節部分が、阻害性免疫チェックポイント分子である、請求項２に記載の治療化合物。
【請求項４】
前記エフェクター結合／調節部分が、免疫細胞により発現される、請求項３に記載の治療化合物。
【請求項５】
前記免疫細胞が、望ましくない免疫応答に寄与する、請求項４に記載の治療化合物。
【請求項６】
前記免疫細胞が、疾患病理の原因となる、請求項４に記載の治療化合物。
【請求項７】
前記治療化合物が標的に前記標的化部分を通して結合する時、前記治療化合物が標的に前記標的化部分を通して結合しない時よりも、前記治療分子の、前記エフェクター結合／調節が結合する前記分子を刺激する能力が、より大きい、例えば、２、５、１０、１００、５００、または１，０００倍大きい、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項８】
前記治療化合物が標的に前記標的化部分を通して結合する時、前記治療化合物が標的に前記標的化部分を通して結合しない時よりも、前記治療分子の、前記エフェクター結合／調節が結合する前記分子を刺激する能力が、１０、１００、５００、または１，０００倍大きい、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項９】
前記治療化合物の治療有効量で、前記エフェクター結合／調節部分が結合する前記分子の著しい、全身刺激化が見られる、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項１０】
前記治療化合物の治療有効量で、前記エフェクター結合／調節部分が結合する前記分子の前記刺激化が、実質的に前記標的化部分が結合する標的部位においてのみ生じる、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項１１】
前記標的化部分が、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体を含み、前記エフェクター結合／調節部分が、抗ＰＤ−１抗体を含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項１２】
前記エフェクター結合／調節部分のその同族リガンドへの結合が、前記エフェクター結合／調節部分の前記同族リガンドへの内因性カウンターリガンドの結合を、６０、５０、４０、３０、２０、１０、または５％未満阻害する、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項１３】
前記エフェクター結合／調節部分の前記同族リガンドへの結合が、前記エフェクター結合／調節分子の前記同族リガンドのアンタゴニズムを実質的にもたらさない、１に記載の治療化合物。
【請求項１４】
前記エフェクター結合／調節部分が、ＩＣＩＭ結合／調節部分を含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項１５】
前記エフェクター結合／調節部分が、阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子を含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含む、請求項１４のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項１６】
前記阻害性免疫分子カウンターリガンド分子が、ＰＤ−Ｌ１分子を含む、請求項１５のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項１７】
前記ＩＣＩＭが、前記阻害性免疫分子カウンターリガンド分子が、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ−４から選択される同族阻害性免疫チェックポイント分子と結合する、請求項１４に記載の治療化合物。
【請求項１８】
前記ＩＣＩＭが、抗体である、請求項１７に記載の治療化合物。
【請求項１９】
前記ＩＣＩＭが、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ−４に結合する抗体を含む、請求項１８に記載の治療化合物。
【請求項２０】
前記抗体が、ＰＤ−１に結合する抗体である、請求項１９に記載の治療化合物。
【請求項２１】
前記抗体が、ＰＤ−１に結合する抗体であり、ＰＤ−１アゴニストである、請求項１９に記載の治療化合物。
【請求項２２】
前記抗体が、ＰＤ−１に結合する抗体であり、標的部位で係留するとき、ＰＤ−１アゴニストである、請求項１９に記載の治療化合物。
【請求項２３】
前記エフェクター結合／調節部分が、細胞表面阻害分子に対する機能性抗体分子を含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項２４】
前記細胞表面阻害分子が、阻害性免疫チェックポイント分子である、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項２５】
前記阻害性免疫チェックポイント分子が、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＣＴＬＡ−４から選択されるか、または表１から選択される、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
第二のエフェクター結合／調節部分をさらに含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項２７】
前記第二のエフェクター結合／調節部分が、前記エフェクター結合／調節部分とは異なる標的と結合する、請求項２６に記載の治療化合物。
【請求項２８】
前記第二のエフェクター結合／調節部分が、ＩＩＣ結合／調節部分を含む、請求項２６または２７に記載の治療化合物。
【請求項２９】
前記第二のエフェクター結合／調節部分が、ＳＭ結合／調節部分を含む、請求項２６または２７に記載の治療化合物。
【請求項３０】
前記エフェクター結合／調節部分が、ＩＩＣ結合／調節部分を含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項３１】
前記エフェクター結合／調節部分が、ＩＩＣ結合／調節部分を含み、これが免疫抑制性免疫細胞を前記標的部位で増加させる、動員するまたは蓄積させる、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項３２】
前記エフェクター結合／調節部分が、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子と結合するまたは特異的に結合する細胞表面分子結合因子を含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項３３】
前記エフェクター結合／調節部分が、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子と結合するまたは特異的に結合する細胞表面分子リガンド分子を含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項３４】
前記エフェクター結合／調節部分が、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子と結合する抗体分子を含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項３５】
前記免疫抑制性免疫細胞が、Ｔ制御性細胞、例えばＦｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋Ｔ制御性細胞を含む、請求項３１〜３４のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項３６】
前記エフェクター結合／調節部分が、ＳＭ結合／調節部分を含む、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項３７】
ＳＭ結合／調節部分が、免疫抑制性局所微小環境を促進する、請求項３６に記載の治療化合物。
【請求項３８】
前記ＳＭ結合／調節部分が、ＣＤ３９分子を含む、請求項３６に記載の治療化合物。
【請求項３９】
前記ＳＭ結合／調節部分が、ＣＤ７３分子を含む、請求項３６に記載の治療化合物。
【請求項４０】
前記ＳＭ結合／調節部分が、抗ＣＤ３９分子を含む、請求項３６に記載の治療化合物。
【請求項４１】
前記ＳＭ結合／調節部分が、抗ＣＤ７３抗体分子を含む、請求項３６に記載の治療化合物。
【請求項４２】
前記化合物が、Ｎ末端からＣ末端方向で式：
Ｒ１−−−リンカー領域Ａ−Ｒ２またはＲ３−リンカー領域Ｂ−Ｒ４を有し、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分；特異的標的化部分を含む；または存在しない；
ただし、エフェクター結合／調節部分及び特異的標的化部分が存在することを条件とする、請求項１に記載の治療化合物。
【請求項４３】
リンカー領域Ａ及びリンカー領域ＢのそれぞれがＦｃ領域を含む、請求項４２に記載の治療化合物。
【請求項４４】
Ｒ１及びＲ２のうちの１つが抗ＰＤ−１抗体であり、Ｒ１及びＲ２のうちの１つが、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、請求項４２に記載の治療化合物。
【請求項４５】
Ｒ１のうちの１つが、抗ＰＤ−１抗体であり、１つのＲ２が、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、請求項４２に記載の治療化合物。
【請求項４６】
Ｒ１のうちの１つが、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、１つのＲ２が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項４２に記載の治療化合物。
【請求項４７】
Ｒ３及びＲ４のうちの１つが、抗ＰＤ−１抗体であり、Ｒ３及びＲ４のうちの１つが、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、請求項４２に記載の治療化合物。
【請求項４８】
Ｒ３のうちの１つが、抗ＰＤ−１抗体であり、１つのＲ４が、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、請求項４２に記載の治療化合物。
【請求項４９】
Ｒ３のうちの１つが、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、１つのＲ４が、抗ＰＤ−１抗体である、請求項４２に記載の治療化合物。
【請求項５０】
前記リンカーが、存在しない、請求項４４〜４９のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項５１】
前記リンカーが、Ｆｃ領域である、請求項４４〜４９のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項５２】
前記リンカーが、グリシン／セリンリンカーである、請求項４４〜４９のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項５３】
前記ＰＤ−１抗体が、ＰＤ−１アゴニストである、請求項４４〜４９のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項５４】
式中、
Ｒ１及びＲ３が、独立して、機能性抗ＰＤ−１抗体分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を含み；Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、請求項４４に記載の治療化合物。
【請求項５５】
式中、
Ｒ１及びＲ３が、独立して、特異的標的化部分、例えば、抗組織抗原抗体を含み；Ｒ２及びＲ４が、独立して、機能性抗ＰＤ−１抗体分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を含む、請求項５２〜５３のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項５６】
前記治療化合物が、ＰＤ−１アゴニストを含む、先行請求項のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項５７】
前記標的化部分が、ＭＡｄＣＡＭに結合する認識部分を含む、先行請求項のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項５８】
前記標的化部分が、ＭＡｄＣＡＭに結合するまたは特異的に結合する抗体を含む、先行請求項のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項５９】
前記標的化部分が、ＭＡｄＣＡＭに結合するまたは特異的に結合する抗体を含み、前記エフェクター結合／調節部分が、ＰＤ−１に結合する抗体を含む、先行請求項のいずれかに記載の治療化合物。
【請求項６０】
炎症性腸疾患を有する対象を処置する方法であって、請求項１〜５９のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与して前記炎症性腸疾患を処置することを含む、前記方法。
【請求項６１】
炎症性腸疾患を有する前記対象が、クローン病を有する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
炎症性腸疾患を有する前記対象が、潰瘍性大腸炎を有する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
自己免疫性肝炎を有する対象を処置する方法であって、請求項１〜５９のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与して前記自己免疫性肝炎を処置することを含む、前記方法。
【請求項６４】
原発性硬化性胆管炎を処置する方法であって、請求項１〜５９のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与して前記原発性硬化性胆管炎を処置することを含む、前記方法。
【請求項６５】
１型糖尿病を処置する方法であって、請求項１〜５９のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与して前記１型糖尿病を処置することを含む、前記方法。
【請求項６６】
移植対象を処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜５９のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与し、それにより移植（レシピエント）対象を処置することを含む、前記方法。
【請求項６７】
移植されたドナー組織を有する対象におけるＧＶＨＤを処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜５９のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項６８】
自己免疫障害を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象を処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜５９のいずれかに記載の治療化合物（を投与し、それにより前記対象を処置することを含む、前記方法。
【請求項６９】
請求項１〜５９のいずれかに記載の治療化合物をコードする核酸。
【請求項７０】
請求項６９に記載の核酸を含むベクター。
【請求項７１】
請求項５９に記載の核酸または請求項７０に記載のベクターを含む細胞。
【請求項７２】
請求項７１に記載の細胞を培養して前記治療化合物を作成することを含む、治療化合物の作成方法。
【請求項７３】
請求項１〜５９に記載の治療化合物をコードする核酸配列の作成方法であって、
ａ）標的化部分をコードする配列を含むベクターを提供し、エフェクター結合／調節部分をコードする前記ベクター配列へと挿入して、治療化合物をコードする配列を形成すること；または
ｂ）エフェクター結合／調節部分をコードする配列を含むベクターを提供し、標的化部分をコードする前記ベクター配列へと挿入して、治療化合物をコードする配列を形成すること、
それにより治療化合物をコードする配列を作成することを含む、前記方法。
【請求項７４】
前記対象が、自己免疫障害を有し、前記治療化合物が、前記自己免疫障害の自己抗原性ペプチドまたはポリペプチド特徴を含まない、例えば、前記対象がそれに対して自己抗体を有するペプチドまたはポリペプチドを含まない、請求項６０〜７３のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１７年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／４７１，５０９号に対する優先権を主張し、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本明細書に提供する実施形態は、例えば、局所または標的免疫特権のための方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
例えば、移植組織の拒絶反応や自己免疫障害など、望ましくない免疫応答の例は、世界中の何百万人もの人々の主要な健康問題を構成している。臓器移植の長期転帰は、慢性拒絶反応、及び移植臓器の最終的な失敗を特徴とすることがしばしばある。２０を超える自己免疫障害が知られており、身体の本質的に全ての臓器に影響を及ぼし、北米だけで５千万人を超える人々に影響を及ぼしている。両方のシナリオで病原性免疫応答と戦うために使用される広く活性な免疫抑制性医薬品は、深刻な副作用を有する。
【発明の概要】
【０００４】
部位特異的免疫特権を提供する方法及び治療化合物を本明細書に開示する。本明細書に開示する実施形態は、参照によりこの節に組み込まれる。
【０００５】
いくつかの実施形態では、本治療化合物は、
ａ）例えば、ドナー標的と優先的に結合し（レシピエント抗原への結合と比較して優先的）、ドナーからの移植組織、例えば、臓器に対する部位特異的免疫特権の提供に有用である、ドナー特異的標的化部分；または
ｂ）例えば、対象標的組織と優先的に結合し（対象非標的組織と比較して優先的）、例えば、自己免疫障害において）望ましくない免疫攻撃を受けている対象組織に対する部位特異的免疫特権の提供に有用である、組織特異的標的化部分；から選択される
１）特異的標的化部分及び
（ａ）免疫細胞阻害分子結合／調節部分（ＩＣＩＭ結合／調節部分と本明細書で称する）；
（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合／調節部分（ＩＩＣ結合／調節部分と本明細書で称する）；または
（ｃ）治療化合物の一部として、例えば、標的の近くに、標的の免疫系による攻撃を阻害するもしくは最小限に抑える物質を提供することにより、免疫抑制性局所微小環境を促進する、エフェクター結合／調節部分（ＳＭ結合／調節部分と本明細書で称する）から選択される、
２）エフェクター結合／調節部分を含む、操作多重特異性化合物、例えば、操作二重特異性分子、例えば、操作二重特異性抗体分子を含む。
【０００６】
エフェクター結合／調節部分は、クラスａ、ｂ及びｃのうちの複数に分類されることができる。例えば、下記に示すように、ＣＴＬＡ４結合分子は、カテゴリａ及びｂの両方に分類される。
【０００７】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＩＣＩＭ結合／調節部分を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＩＭ結合／調節分子は、阻害分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子と結合し、これを刺激する、またはそうでなければ、免疫細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、もしくは骨髄系細胞、例えば、好中球もしくはマクロファージの活性を阻害するもしくは低下させる。
【０００８】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、
１）特異的標的化部分、例えば、ドナー特異的標的化部分（ドナー標的と結合し、ドナーからの移植組織、例えば、臓器に対する部位特異的免疫特権の提供に有用である）または組織特異的標的化部分（対象組織標的と結合し、例えば、自己免疫障害において、望ましくない免疫攻撃を受けている対象組織に対する部位特異的免疫特権の提供に有用である）；及び
２）免疫細胞上のエフェクター分子、例えば、阻害性受容体、例えば、ＰＤ−１に結合するＩＣＩＭ結合／調節部分を含むエフェクター結合／調節部分を含む、操作多重特異性化合物、例えば、操作二重特異性分子、例えば、操作二重特異性抗体分子を含み、その標的への特異的標的化部分の結合、及び免疫細胞上のエフェクター分子へのＩＣＩＭ結合／調節部分の結合の際に、免疫細胞活性、例えば、免疫攻撃を開始する免疫細胞の能力が、例えば、免疫細胞上にあるエフェクター分子のクラスター形成に応じた阻害性シグナルを通して、下方制御される。いくつかの実施形態では、操作多重特異性化合物は、２を超える、例えば限定されないが３または４つの特定の分子と結合するように、追加の結合部分を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＩＣＩＭ結合／調節部分を含み、以下の特性の一方または両方を有する：（ａ）免疫細胞の下方制御のレベルは、治療化合物がその標的に結合しないときよりも、治療化合物がその標的に結合したときにより大きい；及び（ｂ）治療化合物は、免疫細胞上の細胞表面阻害性受容体、例えば、ＰＤ−１と係合するとき、内因性リガンドに結合する細胞表面阻害性受容体の能力を阻害しない、または実質的に阻害しない。
【００１０】
いくつかの実施形態では、免疫細胞の下方制御のレベルは、治療化合物がその標的に結合しないときよりも、治療化合物がその標的に結合したときにより大きい。実施形態では、標的に結合した治療化合物による下方制御のレベルは、その標的に結合しなかったときに見られるものと同等かまたはそれより１．５倍、２倍、４倍、８倍または１０倍大きい。実施形態では、治療化合物は、標的に結合しないとき、免疫細胞を下方制御しない、または著しく下方制御しない。ゆえに、阻害性受容体、例えば、ＰＤ−１の無差別なまたは望ましくないアゴニズムは、最小限に抑えられるまたは除去される。例えば、治療化合物が免疫細胞に結合したが、標的部分に結合しなかったとき、治療化合物による阻害性免疫チェックポイント分子の係合は、下方制御をもたらさない、または実質的な下方制御をもたらさない、例えば、治療化合物が結合する免疫細胞上の阻害性受容体が、クラスター形成しないまたは、免疫細胞の下方制御または実質的な阻害を与えるのに十分な阻害性シグナルをもたらすほど十分にクラスター形成しない。
【００１１】
実施形態では、治療化合物は、免疫細胞上の細胞表面阻害性受容体、例えば、ＰＤ−１と結合するとき、内因性リガンドに結合する細胞表面阻害性受容体の能力を阻害しない、または実質的に阻害しない。いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＰＤ−１上のＰＤ−Ｌ１／２結合部位に結合することができる。ゆえに、阻害性受容体、例えば、ＰＤ−１の無差別なまたは望ましくないアンタゴニズムは、最小限に抑えられるまたは除去される。実施形態では、免疫細胞上の阻害性受容体、例えば、ＰＤ−１への治療化合物の結合は、天然リガンド、例えば、ＰＤ−Ｌ１に結合する阻害性受容体の能力を妨害しない、または実質的に妨害しない。実施形態では、免疫上の阻害性受容体、例えば、ＰＤ−１への治療化合物の結合は、天然リガンド、例えば、ＰＤ−Ｌ１の結合を、治療化合物の非存在時に見られるものの、５０、４０、３０、２０、１０、または５％未満低下させる。
【００１２】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＩＣＩＭ結合／調節部分を含み、治療有効量で対象に投与されたとき、許容不可能なレベルの全身免疫抑制をもたらさない、これはあるタイプの全免疫細胞、例えば、全Ｔ細胞における阻害性受容体の無差別なアゴニズムが生じる場合に起こり得る、または、許容不可能なレベルの全身免疫活性化をもたらさない、これは治療化合物がその天然リガンドとの阻害性受容体の相互作用を拮抗する場合に起こり得る。
【００１３】
理論により束縛されることを望まないが、対象への投与の際、ＩＣＩＭ結合／調節部分を含む治療化合物が、４つの状態のうちのいずれか１つで存在することができると考えられている：ｉ）未結合であり自由溶液中にある；ｉｉ）免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の表面に発現される阻害性受容体にのみ、ＩＣＩＭ結合／調節部分を通して結合している；ｉｉｉ）標的移植片または対象組織の表面にのみ、標的化部分を通して結合している；及びｉｖ）標的移植片または対象組織の表面に、標的化部分を通して、そしてさらに免疫細胞、例えば、Ｔ細胞により発現される阻害性受容体に、ＩＣＩＭ結合／調節部分を通して結合している。治療化合物が、標的移植片または対象組織にのみ標的化部分を通して結合しているとき（ｉｉｉ）、標的移植片または組織に作用しない、または実質的に作用しない。治療化合物が、標的移植片または組織に標的化部分を通して結合しており、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞により発現される阻害性受容体に、ＩＣＩＭ結合／調節部分を通して結合しているとき（ｉｖ）、標的臓器または組織で免疫特権を作り出す。理論により束縛されることを望まないが、これは、例えば、複数の治療化合物分子を高密度及び結合価で固定することにより、標的移植片またはドナー組織がその表面上の治療化合物分子を多量体化することにより達成されると考えられる。治療化合物分子の多量体化により、治療化合物のＩＣＩＭ結合／調節部分が、免疫細胞、例えば、病原性Ｔ細胞の表面上に発現される阻害性受容体のクラスター形成を促進すること、及び免疫細胞を沈黙させるまたは下方制御する機能を果たす阻害性シグナルを伝達することが可能になる。例えば、Ｔ細胞の場合、ＰＤ−Ｌ１分子、または抗ＰＤ−１抗体を含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含む治療化合物を使用することができる。標的への複数の治療化合物分子の結合は、治療化合物分子の多量体化をもたらし、これが今度は、ＰＤ−Ｌ１分子、または機能性抗ＰＤ−１抗体分子によって、Ｔ細胞上のＰＤ−１のクラスター形成をもたらす。そのクラスター形成が、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体に対する、標的ＭＨＣによる抗原提示の状況で生じる場合、負のシグナルが生成され、Ｔ細胞は不活性化されることになる。実施形態では、ＩＣＩＭ結合／調節部分、例えば、機能性抗体分子は、エフェクター分子と結合するが、その天然リガンド（複数可）とのエフェクター分子の相互作用を、阻害しない、または実質的に阻害しない。
【００１４】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＩＩＣ結合／調節部分を含み、これは免疫抑制免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇ、例えば、Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇと結合し、標的組織の近くに動員する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＳＭ結合／調節部分を含み、これはＡＴＰまたはＡＭＰなどの免疫応答を調節する物質、例えば、可溶性分子を調節する、例えば、これと結合し、これを阻害する、隔離する、分解するまたはそうでなければ中和する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、免疫細胞上の標的に特異的である標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的は、本明細書に記載する通りである。いくつかの実施形態では、標的は、ＭＡｄＣＡＭである。いくつかの実施形態では、標的化部分は、ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ドナー特異的標的化部分を含み、対象に移植されたドナー移植組織に対する部位特異的免疫特権を提供する。いくつかの実施形態では、治療化合物は、組織特異的標的化部分を含み、対象の組織、例えば、自己免疫障害において望ましくない免疫応答を被る組織に対する部位特異的免疫特権を提供する。
【００１８】
標的化部分は、免疫系から保護されるべきドナー移植片または対象組織に対して特異的である。いくつかの実施形態では、エフェクター分子結合部分は、ｄｅ  ｎｏｖｏ  生成結合ドメイン、例えば、機能性抗体分子を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の表面上で発現される阻害性受容体を認識する天然リガンドに由来するアミノ酸配列を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、保護すべき移植片またはドナー組織に近い免疫細胞、例えば、Ｔ細胞を沈黙させるが、標的に近くない免疫細胞、例えば、Ｔ細胞は沈黙させない、これは治療化合物が機能するために標的移植片またはドナー組織の存在を必要とするためである。治療化合物が、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞により発現される阻害性受容体にのみ結合するとき対照的であり、この場合、機能的帰結はない。
【００２０】
本明細書に記載の方法及び治療化合物は、少なくとも一部には、部位特異的免疫特権を提供することに基づく。本明細書に記載の治療化合物及びそれの使用方法により、臨床設定、例えば、免疫応答の反転及び抑制が望まれる場合、例えば自己免疫疾患または組織、例えば、臓器、移植おける免疫抑制治療剤の非部位特異的全身投与の最小化、例えば、減少または除去が可能になる。異常な免疫系によって引き起こされる基礎となる病態生理が影響を受ける場合、臨床的に意味のある応答が可能だが、広範に作用する免疫抑制薬には、患者の全身性免疫系機能を低下させるという望ましくない効果がある。正常に機能する免疫システムの役割は、周囲の環境に存在する病原性及び日和見生物の絶え間ない攻撃に対抗し、健常個体からがん性細胞を絶えず除去することであるため、慢性免疫抑制を受けている患者は感染症やがんを発症するリスクが高くなる。本明細書に記載の方法及び治療化合物は、他の場所での正常な全身免疫系機能の阻害を最小限に抑えながら、病理部位での病原性免疫応答のみを選択的に標的とし、減弱、低下、または消滅させる治療法を提供する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、本明細書に提供するように提供する。いくつかの実施形態では、化合物は、ａ）例えば、ドナー標的と優先的に結合する、ドナー特異的標的化部分またはｂ）、例えば、対象の標的組織と優先的に結合する、組織特異的標的化部分から選択されるｉ）特異的標的化部分、及び（ａ）免疫細胞阻害分子結合／調節部分（ＩＣＩＭ結合／調節部分）；（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合／調節部分（ＩＩＣ結合／調節部分）；または（ｃ）治療化合物の一部として、例えば、標的の近くに、標的の免疫系による攻撃を阻害するもしくは最小限に抑える物質を提供することにより、免疫抑制性局所微小環境を促進する、エフェクター結合／調節部分（ＳＭ結合／調節部分）から選択される、ｉｉ）エフェクター結合／調節部分を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、ＩＣＩＭ結合／調節部分を含む。いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子を含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含む。いくつかの実施形態では、阻害性免疫分子カウンターリガンド分子は、ＰＤ−Ｌ１分子を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＩＭは、阻害性免疫分子カウンターリガンド分子が、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ−４から選択される同族阻害性免疫チェックポイント分子と結合するものである。いくつかの実施形態では、ＩＣＩＭは、抗体である。いくつかの実施形態では、ＩＣＩＭは、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ−４に結合する抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＩＭ結合／調節部分は、細胞表面阻害分子に対する機能性抗体分子を含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、細胞表面阻害分子は、阻害性免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＣＴＬＡ−４から選択されるか、または表１から選択される。
【００２４】
いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、ＩＩＣ結合／調節部分を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本化合物は、Ｎ末端からＣ末端方向で式：
Ｒ１−−−リンカー領域Ａ−Ｒ２またはＲ３−リンカー領域Ｂ−Ｒ４を有し、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分；特異的標的化部分を含む；または存在しない；ただし、エフェクター結合／調節部分及び特異的標的化部分が存在することを条件とする。
【００２６】
いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または状態を処置する方法を本明細書に提供し、該方法は、本明細書に提供する治療化合物のうちの１つまたは複数を投与することを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の疾患または状態を処置する方法を本明細書に提供し、該方法は、本明細書に提供する治療化合物のうちの１つまたは複数を投与することを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患を有する対象を処置する方法を提供し、該方法は、本明細書に提供する治療化合物を該対象に投与して、炎症性腸疾患を処置することを含む。いくつかの実施形態では、該対象は、クローン病及びまたは潰瘍性大腸炎を有する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、自己免疫性肝炎を有する対象を処置する方法を提供し、該方法は、本明細書に提供する治療化合物を該対象に投与して、自己免疫性肝炎を処置することを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、原発性硬化性胆管炎を処置する方法を提供し、該方法は、本明細書に提供する治療化合物を対象に投与して、原発性硬化性胆管炎を処置することを含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、１型糖尿病を処置する方法を提供し、該方法は、本明細書に提供する治療化合物を対象に投与して、１型糖尿病を処置することを含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、移植対象を処置する方法を提供し、該方法は、治療有効量の本明細書に提供する治療化合物を該対象に投与し、それにより移植（レシピエント）対象を処置することを含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、移植されたドナー組織を有する対象においてＧＶＨＤを処置する方法を提供し、該方法は、治療有効量の本明細書に提供する治療化合物を該対象に投与することを含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、自己免疫障害を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象を処置する方法を提供し、該方法は、治療有効量の本明細書に提供する治療化合物を投与し、それにより該対象を処置することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】標的化ｓｃＦｖドメイン及びｓｃＦｖまたは内因性リガンドに対応する配列のいずれかからなるエフェクタードメインを含有するタンデムｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマット（１５０ｋＤａ）の二重特異性治療化合物の図である。
【図２】本明細書に開示する治療化合物に結合したＴ細胞の図である。状態１では、二重特異性のエフェクタードメインは、受容体のアゴニズムまたはアンタゴニズムをいずれも発生させずに、全身循環中にＴ細胞の阻害性受容体に結合する。状態２では、二重特異性の標的化ドメインが、標的臓器に結合して、標的臓器表面上で二重特異性多量体化をもたらす。標的臓器のＴ細胞認識の間、多量体化エフェクタードメインは、Ｔ細胞阻害分子と結合、クラスター形成し、これを通してシグナル伝達する。
【図１】本明細書に提供する治療化合物の非限定的実施形態を図示する。
【図２】本明細書に提供する治療化合物がどのように機能することができるかの非限定的例を図示する。
【図３】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図３Ａ】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図４】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図５】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図６】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図７】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図８】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図９】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１０】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１１】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１２】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１３】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１４】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１５】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１６】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１７】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する。
【図１８】本明細書に提供する治療化合物の非限定的例を図示する
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本明細書で用いる場合、及び、別段の指定が無い限り、「約」という用語は、それが修飾する値の±５％を意味することを意図する。ゆえに、約１００は、９５から１０５を意味する。
【００３７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確にそうでないと示さない限り、複数の指示物を含む。
【００３８】
本明細書で用いる場合、「約」という用語は、数値が近似値であり、小さな変動が本開示の実施形態の実施に有意な影響を及ぼさないだろうことを意味する。数値の制限が使用される場合、文脈によりそうでないと示されない限り、「約」は、数値が±１０％変動することができ、本開示の実施形態の範囲内に留まることを意味する。
【００３９】
本明細書で用いる場合、「動物」という用語は、ヒト及び非ヒト脊椎動物、例えば野生、飼育、家畜動物を含むがこれらに限定されない。
【００４０】
本明細書で用いる場合、「接触させること」という用語は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ系またはｉｎ  ｖｉｖｏ系で２つの要素を一緒にすることを意味する。例えば、治療化合物を個体または患者または細胞と「接触させること」は、個体または患者、例えばヒトへの該化合物の投与、ならびに、例えば、化合物を、標的を含有する細胞または精製調製物を含有する試料へと導入することを含む。
【００４１】
本明細書で用いる場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに、含むの任意の形態、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」）、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに、有するの任意の形態、例えば「有する（ｈａｖｅ）」及び「有する（ｈａｓ）」）、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに、含むの任意の形態、例えば「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」）、または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに、含有するの任意の形態、例えば「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」）という用語は、包括的またはオープンエンドであり、追加の、明記されていない要素または方法工程を除外しない。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を記載する任意の組成物または方法はさらに、明記された構成要素または要素を構成する、からなる、または本質的にからなる組成物も説明すると理解されるべきである。
【００４２】
本明細書で用いる場合、「個体」、「対象」、または「患者」、という用語は、互換可能に使用され、任意の動物を意味し、哺乳類、例えばマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、例えばヒトを含む。
【００４３】
本明細書で用いる場合、「阻害する」という用語は、結果、症状、または活性を阻害する化合物の非存在時の活性または結果と比較して、結果、症状、または活性が低下されることを指す。いくつかの実施形態では、結果、症状、または活性は、約、または、少なくとも、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％阻害される。結果、症状、または活性は、完全に除去または消滅した場合も、阻害されることができる。
【００４４】
本明細書で用いる場合、「それを必要とする」という語句は、対象が、特定の方法または処置に対する必要性を有すると同定されていることを意味する。いくつかの実施形態では、同定は、任意の手段の診断によることができる。本明細書に記載の方法及び処置のいずれにおいても、対象は、それを必要としている可能性がある。いくつかの実施形態では、対象は、特定の疾患、障害、または状態が蔓延している環境にあるまたは環境に行く予定である。
【００４５】
本明細書で用いる場合、「ＸからＹまでの整数」という語句は、端点を含む任意の整数を意味する。例えば、「ＸからＹまでの整数」という語句は、１、２、３、４、または５を意味する。
【００４６】
本明細書で用いる場合、「哺乳類」という用語は、げっ歯類（すなわち、マウス、ラット、またはモルモット）、サル、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、またはヒトを意味する。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【００４７】
本明細書で用いる場合、「眼科的に許容され得る」という語句は、処置された眼もしくはその機能、または処置されている対象の全身健康状態に対して、持続的な有害作用がないことを意味する。しかしながら、軽度の刺激や「刺すような」感覚などの一過性の作用は、薬物の局所点眼投与では一般的であり、そのような一過性の作用の存在は、本明細書に定義する「眼科的に許容され得る」とされる問題において、組成、製剤、または成分（例えば、賦形剤）と矛盾しないと認識されるだろう。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、眼科的に許容され得るか、眼科投与に好適であることができる。
【００４８】
特定の抗原、標的、またはエピトープ「と特異的に結合する」または「に特異的に結合する」または「に対して特異的」は、非特異的相互作用とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般的に結合活性を有さない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較して分子の結合を決定することにより、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子との競合により決定することができる。
【００４９】
特定の抗原、標的またはエピトープに対する特異的結合は、例えば、少なくとも約１０-4M、少なくとも約１０-5M、少なくとも約１０-6M、少なくとも約１０-7M、少なくとも約１０-8M、少なくとも約１０-9M、あるいは少なくとも約１０-10M、少なくとも約１０-11M、少なくとも約１０-12M、またはより大きい抗原またはエピトープに対するＫDを有する抗体により呈されることができ、ここでＫDは、特定の抗体−標的相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原または標的と特異的に結合する抗体は、抗原またはエピトープに比べて、対照分子に対して、少なくとも、２倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５、０００倍、１０、０００倍、またはそれ以上のＫDを有するだろう。
【００５０】
いくつかの実施形態では、特定の抗原、標的またはエピトープに対する特異的結合は、例えば、対照に比べて、標的、抗原、またはエピトープに対して、少なくとも２倍、４倍、５倍、２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍またはより大きい標的、抗原、またはエピトープに対するＫAまたはＫaを有する抗体により呈されることができ、ここでＫAまたはＫaは、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指す。
【００５１】
本明細書で提供するように、本治療化合物及び組成物は、本明細書に提供する処置の方法において使用することができる。本明細書で用いる場合、「処置する」、「処置された」、または「処置すること」という用語は、治療的処置及び予防的手段の両方を意味し、その目的は、望ましくない生理学的状態、障害もしくは疾患を減速させる（軽減する）、または有益もしくは所望の臨床結果を得ることである。これらの実施形態の目的のために、有益または所望の臨床結果には、症状の緩和；状態、障害もしくは疾患の程度の減弱；状態、障害もしくは疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状態；状態、障害もしくは疾患進行の発症を遅延するもしくはこれらを遅くする；検出可能もしくは検出不可能な状態、障害もしくは疾患状態の回復もしくは寛解（部分的もしくは全体的）；患者によって認識される必要はないが、少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの回復；または状態、障害もしくは疾患の向上もしくは改善が含まれるが、これらに限定されない。処置には、過剰なレベルの副作用を伴わずに臨床的に有意な応答を引き出すことを含む。処置は、処置を受けない場合に予想される生存と比較して延長した生存も含む。ゆえに、「疼痛の処置」または「疼痛を処置すること」は、疼痛または本明細書に記載の他の状態に関連する主要な現象または二次的な症状のいずれかを緩和するまたは回復させる活動を意味する。
【００５２】
標的化部分及びエフェクター結合／調節部分を、典型的には別々のドメインとして含む、治療化合物、例えば、治療タンパク質分子、例えば、融合タンパク質を本明細書に提供する。治療化合物を使用及び作成する方法も提供する。標的化部分は、治療化合物、ゆえに、エフェクター結合／調節部分を、免疫特権が所望される部位へと局在化させる役割を果たす。エフェクター結合／調節部分は、（ａ）免疫細胞阻害分子結合／調節部分（ＩＣＩＭ結合／調節部分）：（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合／調節部分（ＩＩＣ結合／調節部分）；または（ｃ）可溶性分子結合／調節部分（ＳＭ結合／調節部分）のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、治療化合物は、（ａ）及び（ｂ）；（ａ）及び（ｃ）；（ｂ）及び（ｃ）；または（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）を含む。
【００５３】
本開示は、例えば、ＰＤ−１アゴニストとして作用することができる分子を提供する。いずれの特定の理論にも束縛されないが、ＰＤ−１のアゴニズムは、Ｔ細胞の活性化／シグナル伝達を阻害し、さまざまな機序によって達成されることができる。例えば、架橋は、アゴニズムにつながることができ、ビーズ結合、機能性ＰＤ−１アゴニストが記載されている（Ａｋｋａｙａ．Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ：Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＤ−１  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｃｈｒｉｓｔ  Ｃｈｕｒｃｈ  Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ，２０１２）、これは参照により本明細書に組み込まれる。重複しないエピトープと結合する２つのｍＡｂとＰＤ−１の架橋は、ＰＤ−１シグナル伝達を誘導する（Ｄａｖｉｓ，ＵＳ２０１１／０１７１２２０）、これは参照により本明細書に組み込まれる。別の例は、参照により本明細書に組み込まれるヤギ抗ＰＤ−１抗血清（例えば、ＡＦ１０８６、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の使用を通して例示され、これは可溶性の場合にアゴニストとして作用する（Ｓａｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ  Ｍｅｄ）、これは参照により本明細書に組み込まれる。本実施形態にて使用することができるＰＤ−１アゴニストの非限定的な例としては、ＵＣＢクローン１９もしくはクローン１０、ＰＤ１ＡＢ−１、ＰＤ１ＡＢ−２、ＰＤ１ＡＢ−３、ＰＤ１ＡＢ−４及びＰＤ１ＡＢ−５、ＰＤ１ＡＢ−６（Ａｎａｐｔｙｓ／Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＰＤ１−１７、ＰＤ１−２８、ＰＤ１−３３及びＰＤ１−３５（Ｃｏｌｌｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，ＵＳ２００８／０３１１１１７Ａ１  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＰＤ−１  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｆｏｒ、これは参照により組み込まれる）が挙げられるがこれらに限定されない、または二重特異性、一価抗ＰＤ−１／抗ＣＤ３（Ｏｎｏ）などであることができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１アゴニスト抗体は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を遮断する抗体であることができる。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１アゴニスト抗体は、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１への結合を遮断しない抗体であることができる。
【００５４】
ＰＤ−１アゴニズムは、任意の方法、例えば実施例に記載の方法により測定することができる。例えば、ｂ−ガラクトシダーゼ「酵素ドナー」に融合したヒトＰＤ−１ポリペプチド及び２）ｂ−ガラクトシダーゼ「酵素アクセプター」に融合したＳＨＰ−２ポリペプチドを含む構築物を発現する、例えば安定的に発現する細胞を構築することができる。いずれの理論にも束縛されないが、ＰＤ−１が係合するとき、ＳＨＰ−２が、ＰＤ−１に動員される。酵素アクセプター及び酵素ドナーは、アッセイすることができる完全に活性なｂ−ガラクトシダーゼ酵素を形成する。ただし、アッセイは、ＰＤ−１アゴニズムを直接的には示さず、ＰＤ−１シグナル伝達の活性化を示す。ＰＤ−１アゴニズムは、Ｔ細胞活性化の阻害を測定することにより測定することもできるが、これはいずれの理論にも束縛されないが、ＰＤ−１アゴニズムが、抗ＣＤ３誘導性Ｔ細胞活性化を阻害するからである。例えば、ＰＤ−１アゴニズムは、Ｔ細胞をＰＨＡ（ヒトＴ細胞に関して）またはＣｏｎＡ（マウスＴ細胞に関して）で予め活性化して、それらにＰＤ−１を発現させることにより測定することができる。細胞を次いで、ＰＤ−１アゴニズムアッセイのために、抗ＰＤ−１（またはＰＤ−Ｌ１）の存在下で抗ＣＤ３を用いて再活性化することができる。抗ＣＤ３の存在下でＰＤ−１アゴニストシグナルを受けるＴ細胞は、抗ＣＤ３刺激単独と比較して、活性化の低減を示すだろう。活性化は、増殖またはサイトカイン産生（ＩＬ−２、ＩＦＮｇ、ＩＬ−１７）または他のマーカー、例えばＣＤ６９活性化マーカーにより読み出すことができる。ゆえに、ＰＤ−１アゴニズムは、サイトカイン産生または細胞増殖のいずれかにより測定することができる。他の方法を使用して、ＰＤ−１アゴニズムを測定することもできる。
【００５５】
ＰＤ−１は、活性化Ｔ細胞及び他の免疫細胞上で発現されるＩｇスーパーファミリーメンバーである。ＰＤ−１に対する天然リガンドは、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２であると思われる。いずれの特定の理論にも束縛されないが、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２が活性化Ｔ細胞上のＰＤ−１に結合するとき、阻害性シグナル伝達カスケードが開始され、活性化Ｔエフェクター細胞機能の減弱をもたらす。ゆえに、Ｔ細胞上のＰＤ−１、及び別の細胞（例えば、腫瘍細胞）上のＰＤ−Ｌ１／２とＰＤ−１アンタゴニストとの間の相互作用の遮断は、チェックポイント阻害として知られており、Ｔ細胞を阻害から解放する。対照的に、ＰＤ−１アゴニスト抗体は、ＰＤ−１に結合し、阻害性シグナルを送り、Ｔ細胞の機能を減弱することができる。ゆえに、ＰＤ−１アゴニスト抗体は、本明細書に記載の様々な実施形態へとエフェクター分子結合／調節部分として組み込まれることができ、標的化部分と対合したときに、局在化組織特異的免疫調節を達成することができる。
【００５６】
エフェクター分子結合／調節部分は、免疫抑制性シグナルまたは環境をさまざまな方法において提供することができる。いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、疾患病理を駆動する原因となる免疫細胞により発現される阻害性受容体と直接的に結合し、（本明細書に記載する適切な状態下で）阻害性受容体を活性化するＩＣＩＭ結合／調節部分を含む。別の実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、ＩＩＣ結合／調節部分を含み、免疫抑制性免疫細胞と結合して蓄積させる。いくつかの実施形態では、蓄積した免疫抑制細胞は、免疫特権を促進する。別の実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、周囲の微小環境を操作して、免疫細胞、例えば、疾患病理を駆動する免疫細胞の機能を許容しにくくするＳＭ結合／調節部分を含む。いくつかの実施形態では、ＳＭ結合／調節部分は、免疫攻撃または活性化を促進する実体を枯渇させる。
【００５７】
標的化部分及びエフェクター結合／調節部分は、共有結合的にまたは非共有結合的に、直接的にまたはリンカー実体を通して、互いに、例えば、治療タンパク質分子中の同一タンパク質分子のメンバーとして、物理的に係留している。いくつかの実施形態では、標的化及びエフェクター部分は、治療タンパク質分子、例えば、融合タンパク質中に、典型的には別々のドメインとして提供される。いくつかの実施形態では、標的化部分、エフェクター結合／調節部分、または両方は、それぞれ単一ドメイン抗体分子、例えば、ラクダ抗体ＶＨＨ分子またはヒト可溶性ＶＨドメインを含む。それは、一本鎖フラグメント可変（ｓｃＦｖ）またはＦａｂドメインも含有し得る。いくつかの実施形態では、治療タンパク質分子、または治療タンパク質分子をコードする核酸、例えば、ｍＲＮＡまたはＤＮＡを、対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、標的化及びエフェクター分子結合／調節部分は、第三の実体、例えば、担体、例えば、ポリマー担体、デンドリマー、または粒子、例えば、ナノ粒子に連結している。治療化合物を使用して、全身的な免疫抑制機能を有さないまたは実質的に少なくしながら、免疫応答を組織でまたは組織内で選択した標的もしくは部位にて下方制御することができる。標的または部位は、ドナー組織または自家組織を含むことができる。
【００５８】
移植されたドナー組織、例えば、同種移植組織、例えば、本明細書に記載の組織、例えば、同種移植肝臓、同種移植腎臓、同種移植心臓、同種移植膵臓、同種移植胸腺もしくは胸腺組織、同種移植皮膚、または同種移植肺に対して、本明細書に開示の治療化合物を用いて、部位特異的免疫特権を提供する方法を本明細書に提供する。実施形態では、処置は、ドナー移植組織の拒絶反応を最小限に抑える、ドナー移植組織に対する免疫エフェクター細胞が媒介する損傷を最小限に抑える、ドナー移植組織の許容を延長する、またはドナー移植組織の機能性寿命を延長する。
【００５９】
本明細書に開示の治療化合物を用いて、ドナー免疫細胞、例えば、ドナーＴ細胞が、レシピエント組織の免疫攻撃を媒介する能力を最小限に抑えることによる、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を阻害する方法も本明細書に提供する。
【００６０】
本明細書に開示の治療化合物を投与して、例えば、免疫系の部位または組織特異的調節を提供することより、対象における自己免疫障害または応答を、処置する、例えば、治療的に処置するまたは予防的に処置する（または予防する）方法も本明細書に提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、対象組織に対する寛容、対象組織の拒絶反応の最小化、対象組織に対する免疫エフェクター細胞が媒介する損傷の最小化または対象組織の機能の延長を提供する。いくつかの実施形態では、治療化合物は、例えば、自己免疫攻撃下にある、またはそのリスクがある組織を標的とする、例えば、特異的に標的とする標的化部分を含む。非限定的な例示的な組織としては、膵臓、ミエリン、唾液腺、滑膜細胞、及び筋細胞が含まれるがこれらに限定されない。
【００６１】
本明細書で用いる場合、治療的処置に関する「処置する」、「処置された」、または「処置すること」という用語は、望ましくない生理学的状態、障害もしくは疾患を減速させる（軽減する）、または有益なもしくは所望の臨床結果を得ることを目的とする。例えば、有益なまたは所望の臨床結果には、症状の緩和；状態、障害もしくは疾患の程度の減弱；状態、障害もしくは疾患の安定化（すなわち、悪化しない）状態；状態、障害もしくは疾患進行の発症を遅延するもしくはこれらを遅くする；検出可能もしくは検出不可能な状態、障害もしくは疾患状態の回復もしくは寛解（部分的もしくは総合的）；患者によって認識される必要はないが、少なくとも１つの測定可能な身体的パラメータの回復；または状態、障害もしくは疾患の向上もしくは改善が含まれるが、これらに限定されない。処置には、過剰なレベルの副作用を伴わずに臨床的に有意な応答を引き出すことを含む。処置は、処置を受けない場合に予想される生存と比較して延長した生存も含む。ゆえに、「自己免疫疾患／障害の処置」は、自己免疫疾患／障害または本明細書に記載の他の状態に関連する任意の主要な現象または二次的な症状を緩和するまたは回復させる活動を意味する。種々の疾患または状態を本明細書に提供する。治療的処置は、発症前に疾患または状態を予防するまたは低下させるために予防的に投与することもできる。
【００６２】
いくつかの実施形態では、治療化合物の投与は、障害が明らかになった後で開始される。いくつかの実施形態では、治療化合物の投与は、障害の発症、または完全な発症の前に開始する。いくつかの実施形態では、治療化合物の投与は、障害を有する対象、ハイリスク対象、障害のリクスまたは存在に関するバイオマーカーを有する対象、障害の家族歴または障害のリスクの他の兆候もしくは無症候性存在を有する対象において、障害の発症、または完全な発症の前に開始する。例えば、いくつかの実施形態では、膵島細胞損傷を有するが、まだ糖尿病ではない対象を処置する。
【００６３】
理論により束縛されることを望まないが、標的化部分は、治療剤と結合し、免疫特権が所望される解剖的部位で選択的に発現される標的に治療剤を蓄積させるように機能すると考えられている。いくつかの実施形態では、例えば、ドナー組織移植の状況では、標的化部分は、ドナー組織に存在するが、レシピエントには存在しない、標的、例えば、対立遺伝子産物に結合する。自己免疫障害の処置に関しては、標的化部分は、免疫特権が所望される解剖学的部位、例えば、膵臓において優先的に発現される標的と結合する。ＧＶＨＤの処置に関しては、標的化部分は、宿主組織を標的とし、宿主を移植された組織に由来する移植された免疫エフェクター細胞からの攻撃から保護する。
【００６４】
再度、理論により束縛されることを望まないが、エフェクター結合／調節部分が、免疫抑制性シグナルを送達するまたはそうでなければ免疫特権環境を作り出す機能を果たすと考えられる。
【００６５】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、これらの実施形態が属する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法及び材料を本実施形態の実施または試験に使用することができるが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本書にて言及する全ての出版物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。さらに、材料、方法、及び例は例示のみであり、限定することを意図しない。見出し、小見出し、または（ａ）、（ｂ）、（ｉ）等の番号付きまたは文字付きの要素は、読みやすくするためだけに提示している。この文書で見出しまたは番号付きもしく文字付き要素を使用する場合、ステップもしくは要素をアルファベット順に実行する、またはステップもしくは要素が必ずしも互いに独立している必要はない。実施形態の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面、ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【００６６】
追加の定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本実施形態が関係する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本実施形態の説明及び請求において、以下の用語及び他に本出願を通して参照される用語は、定義が提供される場合、それがどのように定義されるかにしたがって使用されるだろう。
【００６７】
本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を説明するためのものであり、限定することを意図するものではないことも理解されたい。
【００６８】
抗体分子は、該用語を本明細書で使用する場合、ポリペプチド、例えば、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメントを指し、少なくとも１つの機能性免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む。抗体分子は、抗体（例えば、完全長抗体）及び抗体フラグメントを包含する。いくつかの実施形態では、抗体分子は、完全長抗体の抗原結合もしくは機能性フラグメント、または完全長免疫グロブリン鎖を含む。例えば、完全長抗体は、天然に生じるまたは正常な免疫グロブリン遺伝子フラグメント組み換えプロセスにより形成される）免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（例えば、ＩｇＧ抗体）である。実施形態では、抗体分子は、免疫学的に活性な、免疫グロブリン分子の抗原結合部分、例えば抗体フラグメントを指す。抗体フラグメント、例えば、機能性フラグメントは、抗体の一部分、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、可変フラグメント（Ｆｖ）、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、または一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。機能性抗体フラグメントは、インタクト（例えば、完全長）抗体により認識されるものと同じ抗原に結合する。「抗体フラグメント」または「機能性フラグメント」という用語は、可変領域からなる単離されたフラグメント、例えば、重鎖及び軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」フラグメントまたは軽鎖及び重鎖可変領域がペプチドリンカーにより連結された組み換え一本鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）も含む。いくつかの実施形態では、抗体フラグメントは、抗原結合活性を有さない抗体の部分、例えばＦｃフラグメントまたは単一アミノ酸残基を含まない。例示的な抗体分子は、完全長抗体及び抗体フラグメント、例えば、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２フラグメント、ならびに一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。
【００６９】
「抗体分子」という用語は、ドメイン全体もしくはドメインの抗原結合フラグメント、または単一ドメイン、抗体も包含し、これは「ｓｄＡｂ」または「ＶＨＨ」と称することもできる。ドメイン抗体は、スタンドアロンの、抗体フラグメントとして作用することができるＶHまたはＶLのいずれかを含む。加えて、ドメイン抗体は、重鎖のみ抗体（ＨＣＡｂ）を含む。ドメイン抗体は、その中にＣＤＲループが移植されるベースとなる足場としてＩｇＧのＣＨ２ドメインも含む。それは一般的に、３つの相補性決定領域が離断する４つのフレームワーク領域から構成されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはタンパク質としても定義されることができる。これは、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４と表される。ｓｄＡｂは、ラクダ、例えばリャマにおいて産生されることができるが、当該技術分野で周知の技術を使用して合成的に生成することもできる。ｓｄＡｂまたはポリペプチドのアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら（参照により本明細書に組み込まれる、“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”ＵＳ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１）により付与されるＶＨドメインに関する一般的な番号付けに従う。この番号付けに従い、ｓｄＡｂのＦＲ１は、アミノ酸残基を位置１〜３０で含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ１は、アミノ酸残基を位置３１〜３６で含み、ｓｄＡｂのＦＲ２は、アミノ酸を位置３６〜４９で含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ２は、アミノ酸残基を位置５０〜６５で含み、ｓｄＡｂのＦＲ３は、アミノ酸残基を位置６６〜９４で含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ３は、アミノ酸残基を位置９５〜１０２で含み、ｓｄＡｂのＦＲ４は、アミノ酸残基を位置１０３〜１１３で含む。ドメイン抗体は、そのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００４０４１８６２及びＷＯ２０１６０６５３２３にも記載されている。ドメイン抗体は、本明細書に記載の標的化部分であることができる。
【００７０】
抗体分子は、単一特異性（例えば、一価または二価）、二重特異性（例えば、二価、三価、四価、五価、または六価）、三重特異的（例えば、三価、四価、五価、六価）であることができる、またはより高次の特異性（例えば、四重特異的）及び／または六価を超えるより高次の結合価を有することができる。抗体分子は、軽鎖可変領域の機能性フラグメント及び重鎖可変領域の機能性フラグメントを含むことができる、または重鎖及び軽鎖は、単一のポリペプチドへと１つに融合され得る。
【００７１】
多重特異性治療化合物、例えば、二重特異性抗体分子のフォーマットの例を、以下の非限定的な例に示す。抗体分子を用いて図示しているが、これらは、他の非抗体部分を特異的結合またはエフェクター部分として含む治療分子に関するプラットフォームとして使用することができる。いくつかの実施形態では、これらの非限定的な例は、対称または非対称Ｆｃフォーマットのいずれかに基づく。
【００７２】
例えば、図は、非限定的及び多様な対称ホモ二量体アプローチを図示する。いくつかの実施形態では、二量体形成面は、ヒトＩｇＧ１ＣＨ２−ＣＨ３ドメインを中心とし、これはＣＨ２／ＣＨ２及びＣＨ３／ＣＨ３の両方にわたる接触面を介して二量体化する。示す結果得られる二重特異性抗体は、２つの同一の結合ユニットを二量体の各側のＮ末端に有し、２つの同一のユニットを二量体の各側のＣ末端に有する４つの結合ユニットから構成される総合結合価を有する。いずれの場合でも、ホモ二量体のＮ末端にある結合ユニットは、ホモ二量体のＣ末端にあるそれとは異なる。このタイプの、分子のいずれかの末端にある阻害性Ｔ細胞受容体の両方の二価性及び組織係留抗原の二価性を使用することは、分子のいずれの端でも達成することができる。
【００７３】
例えば、図３では、非限定的な実施形態を図示する。ホモ二量体のＮ末端は、別々のポリペプチドである、２つの同一の軽鎖から構成される２つの同一のＦａｂドメインを含有し、ＶＨ／ＶＬ相互作用及びＣＨ１とのＣカッパまたはＣラムダ相互作用を介して各重鎖のｎ末端ＶＨ−ＣＨ１ドメインと接触する。ＣＨ１とＣカッパまたはＣラムダとの間の天然のジスルフィド結合は、軽鎖及び重鎖間の共有結合アンカーを提供するように存在する。この設計のＣ末端には、２つの同一のｓｃＦｖユニットがあり、ここでは（この例では）ＦｃのＣＨ３ドメインのＣ末端の後に、典型的にはセリン、グリシン、アラニン、及び／またはトレオニン残基から構成される（がこれらに限定されない）可動性、親水性リンカーが続き、その後、各ｓｃＦｖユニットのＶＨドメインが続き、その後にグリシン／セリンリッチリンカー、その後ＶＬドメインが続く。これらのタンデムＶＨ及びＶＬドメインは結合して、ＦｃのＣ末端で付加した一本鎖フラグメント可変（ｓｃＦｖ）を形成する。２つのこのようなユニットは、Ｆｃを中心とするホモ二量体の特性のために、この分子のＣ末端に存在する。ｓｃＦｖのドメインの順序は、ＮからＣ末端の方向で、ＶＨ−リンカー−ＶＬまたはＶＬ−リンカー−ＶＨのいずれかで構成され得る。
【００７４】
異なる端部上に異なる結合領域を有する分子の非限定的な例は、一方の端部がＰＤ−１アゴニストであり、標的特異性を提供する抗体が抗ＭＡｄＣＡＭ−１抗体である場合である。これは、例えば、分子を異なる配向で図示する図３Ａに示すように図示することができる。
【００７５】
いくつかの実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、本明細書の他の箇所に記載するようなブロッキングまたは非ブロッキング抗体である。いずれの理論にも束縛されないが、ＭＡｄＣＡＭは、その２つのＩｇスーパーファミリーＩ−ｓｅｔドメイン内の複数の残基を介してリンパ球上で発現されるインテグリンα４β７のヘッドピースと相互作用すると示されており、その相互作用に関する原子レベル構造基盤が記載されている（Ｖｉｎｅｙ  ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７，２４８８−２４９７；Ｙｕ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ（２０１３）．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８８，６２８４−６２９４；Ｙｕ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ（２０１２）．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９６，１３１−１４６，このそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。優れた構造的、機構的及び機能的に詳細に、ヒト（Ｃｈｅｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ（２００３）．Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ．１０，９９５−１００１；ｄｅ  Ｃｈａｔｅａｕ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ（２００１）．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４０，１３９７２−１３９７９）及びマウス（Ｄａｙ  ＥＳ  ｅｔ  ａｌ（２００２）．Ｃｅｌｌ  Ｃｏｍｍｕｎ  Ａｄｈｅｓ．９，２０５−２１９；Ｈｏｓｈｉｎｏ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ（２０１１）．Ｊ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．５９，５７２−５８３）分子系の両方において示されており、ＭＡｄＣＡＭとα４β７の相互作用はいずれも、インテグリンベータ７サブユニットＩ様ドメインに存在する３つのジカチオン結合部位に依存し、これらの金属結合部位は、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、及びＭｇ２＋を用いて配位することができる。細胞接着アッセイ、フローサイトメトリー、及び／またはフローチャンバーアッセイを、Ｍｇ２＋またはＭｎ２＋を伴うまたは伴わない高レベルのＣａ２＋の存在下で使用して、ＭＡｄＣＡＭ／α４β７相互作用は、低機能性親和性であると示され、リンパ球のローリング接着を可能とするが、一方で低Ｃａ２＋だが高Ｍｇ２＋またはＭｎ２＋ではインテグリンが活性化され、ＭＡｄＣＡＭ／α４β７相互作用は、より高い機能性親和性であり、堅固なリンパ球接着を媒介する（Ｃｈｅｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ（２００３）．Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ．１０，９９５−１００１）。多くのグループが、種々の細胞：細胞、細胞：膜調製物、及び／または細胞：タンパク質をベースとする接着／相互作用アッセイを使用して、ＦＡＣＳ、細胞フローチャンバーに基づく計数、またはＩＨＣに基づく読み取りを用いて、ＭＡｄＣＡＭとα４β７の相互作用の際の抗ＭＡｄＣＡＭまたは抗α４β７抗体の影響をモニターすることができ、それによりブロッキングまたは非ブロッキング抗体を同定することが可能であると示している（Ｎａｋａｃｈｅ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）．Ｎａｔｕｒｅ．３３７，１７９−１８１；Ｓｔｒｅｅｔｅｒ，ＰＲ  ｅｔ  ａｌ（１９８８）．Ｎａｔｕｒｅ．３３１．４１−４６；Ｙａｎｇ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）．Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２．２３５−２４７；Ｌｅｕｎｇ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ（２００４）．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．８２．４００−４０９；Ｐｕｌｌｅｎ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ（２００９）．Ｂ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１５７．２８１−２９３；Ｓｏｌｅｒ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ（２００９）．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．３３０．８６４−８７５；Ｑｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ（２０１２）．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８７．１５７４９−１５７５９）。
【００７６】
これは、抗マウスＭＡｄＣＡＭ抗体、例えばＭＥＣＡ−８９（非ブロッキング）及びＭＥＣＡ−３６７（ブロッキング）の同定を用いてマウス系設定において例示されている）Ｎａｋａｃｈｅ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）．Ｎａｔｕｒｅ．３３７，１７９−１８１；Ｓｔｒｅｅｔｅｒ，ＰＲ  ｅｔ  ａｌ（１９８８）．Ｎａｔｕｒｅ．３３１．４１−４６；Ｙａｎｇ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ（１９９５）．Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２．２３５−２４７）。ヒト系では、ヒトα４β７とヒトＭＡｄＣＡＭの相互作用を遮断する抗体、例えば抗ヒトＭＡｄＣＡＭ  ＰＦ−００５４７６５９（Ｐｕｌｌｅｎ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ（２００９）．Ｂ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１５７．２８１−２９３）及び抗ヒトα４β７ベドリズマブ（Ｓｏｌｅｒ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ（２００９）．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．３３０．８６４−８７５）、ならびに相互作用を遮断しない抗体、例えば抗ヒトＭＡｄＣＡＭクローン１７Ｆ５（Ｓｏｌｅｒ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ（２００９）．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．３３０．８６４−８７５）、及び抗ヒトα４β７クローンＪ１９（Ｑｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ（２０１２）．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８７．１５７４９−１５７５９）が同定されている。ゆえに、抗体は、所望の効果に基づいてブロッキングまたは非ブロッキングのいずれかであることができる。いくつかの実施形態では、抗体は、非ブロッキングＭＡｄＣＡＭ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ブロッキングＭＡｄＣＡＭ抗体である。抗体がブロッキングまたは非ブロッキングであるかどうかを実証する一非限定的な例は、実施例６に見出すことができるが、任意の方法を使用することができる。本明細書に記載される参考文献はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００７７】
別の例では、図４に図示するように、ホモ二量体のＮ末端は、２つの同一の軽鎖から構成される２つの同一のＦａｂドメインを含有し、これらはＶＨ／ＶＬ相互作用及びＣＨ１とのＣカッパまたはＣラムダ相互作用を介して各重鎖のｎ末端ＶＨ−ＣＨ１ドメインと接面する別々のポリペプチドである。ＣＨ１とＣカッパまたはＣラムダとの間の天然ジスルフィド結合は、軽鎖及び重鎖間の共有結合アンカーを提供するように存在する。この設計のＣ末端には、２つの同一のＶＨユニットがあり（しかし、非抗体部分はここまたは４つの末端付着／融合点のいずれかでも置換され得る）、ここでは（この例では）ＦｃのＣＨ３ドメインのＣ末端の後に、典型的にはセリン、グリシン、アラニン、及び／またはトレオニン残基から構成される（がこれらに限定されない）可動性、親水性リンカーが続き、その後、可溶性の独立したＶＨ３生殖細胞系列ファミリーをベースとするＶＨドメインが続く。２つのこのようなユニットは、Ｆｃを中心とするホモ二量体の特性のために、この分子のＣ末端に存在する。
【００７８】
別の非限定的な例では、図５に図示するように、ホモ二量体のＮ末端は、図３及び図４とは異なり、ＣカッパまたはＣラムダのＣ末端及びＶＨのＮ末端間でリンカーを介してＮ末端で重鎖と物理的に連合した２つの同一の軽鎖から構成される２つの同一のＦａｂドメインを含有する。リンカーは、３６〜８０アミノ酸長であってよく、セリン、グリシン、アラニン及びトレオニン残基から構成されてよい。物理的に連合したｎ末端軽鎖は、各重鎖のｎ末端ＶＨ−ＣＨ１ドメインと、ＶＨ／ＶＬ相互作用及びＣＨ１とのＣカッパまたはＣラムダ相互作用を介して接面する。ＣＨ１とＣカッパまたはＣラムダとの間の天然ジスルフィド結合は、軽鎖及び重鎖間のさらなる安定性を提供するように存在する。この設計のＣ末端では、２つの同一のＦａｂユニットがあり、ここでは（この例では）ＦｃのＣＨ３ドメインのＣ末端の後に、典型的にセリン、グリシン、アラニン、及び／またはトレオニン残基から構成される（がこれらに限定されない）可動性、親水性リンカーが続き、その後、ＣＨ１ドメインが続き、Ｃ末端でＶＨドメインが続く。ｃ末端ＣＨ１／ＶＨドメインと対合するように設計されている軽鎖は、別々のポリペプチドとして発現され、記載するｎ末端ＶＨ／ＣＨ１ドメインに連合するＮ末端軽鎖とは異なる。Ｃ末端軽鎖は、ＶＨ／ＶＬ及びＣＨ１とＣカッパまたはＣラムダとの間で接触面を形成する。天然ジスルフィドは、この軽鎖を重鎖に繋留する。再度、４つの付着／融合点のいずれかにある抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分と置換されることができる。
【００７９】
二重特異性抗体は、以下の非限定的な例に示すように非対称であることもできる。非限定的な例は、図６、図７、及び図８にも図示されており、これらは、非対称／ヘテロ二量体アプローチを図示する。再度、これらのフォーマットのいずれにおいても、４つの付着／融合点のいずれかにある抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分と置換されることができる。いくつかの実施形態では、二量体形成面は、ヒトＩｇＧ１  ＣＨ２−ＣＨ３ドメインを中心とし、これはＣＨ２／ＣＨ２及びＣＨ３／ＣＨ３の両方にわたる接触面を介して二量体化する。しかしながら、各重鎖のホモ二量体化の代わりにヘテロ二量体化を達成するために、突然変異が各ＣＨ３ドメインに導入される。ヘテロ二量体形成突然変異には、１つのＣＨ３ドメインにおいてＴ３６６Ｗ突然変異（ｋａｂａｔ）、ならびに他のＣＨ３ドメインにおいてＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ｋａｂａｔ）突然変異が含まれる。ヘテロ二量体形成面は、ＣＨ３／ＣＨ３接触面の反対側にあるＳ３５４及びＹ３４９などのシステイン残基への天然残基の突然変異を介してｄｅ  ｎｏｖｏ  ジスルフィド結合でさらに安定化され得る。示す結果得られる二重特異性抗体は、４つの結合ユニットから構成される総合結合価を有する。このアプローチでは、全体の分子は、一端のみで二重特異性を有し、他の末端で単一特異性を有する（全体で三重特異性）ように、またはいずれかの末端で二重特異性を有し、２または４の全体分子特異性を伴うように設計されることができる。下記の例示的な例では、Ｃ末端は、例えば、組織係留標的に対して二価単一特異性を提供し得る、２つの同一結合ドメインを含む。全３つの例示的な例のＮ末端で、両方の結合ドメインは、異なる認識エレメント／パラトープを含み、これは、同じエフェクター部分標的上の２つの異なるエピトープの認識を達成し得る、または例えばＴ細胞阻害性受容体及びＣＤ３を認識し得る。いくつかの実施形態では、Ｎ末端結合部分は、例えば、他の単一ポリペプチドフォーマット、例えばｓｃＦｖ、一本鎖Ｆａｂ、タンデムｓｃＦｖ、ＶＨまたはＶＨＨドメイン抗体構成などと交換され得る。他のタイプの認識エレメント、例えば線状または環状ペプチドも使用してよい。
【００８０】
非対称分子の例を図６に図示する。図６を参照すると、分子のＮ末端は、ＶＨ／ＶＬ及びＣカッパまたはＣラムダ／ＣＨ１相互作用ならびに天然重鎖／軽鎖ジスルフィド結合から構成される共有結合係留を介して第一の重鎖と対をなす第一の軽鎖から構成される。このヘテロ二量体分子の反対側ではＮ末端は、ＣカッパまたはＣラムダのＣ末端とＶＨのＮ末端間のリンカーを介して物理的に連合した第二の軽鎖及び第二の重鎖である。リンカーは、３６〜８０アミノ酸長であってよく、セリン、グリシン、アラニン及びトレオニン残基から構成されてよい。物理的に連合したｎ末端軽鎖は、ＶＨ／ＶＬ相互作用及びＣＨ１とのＣカッパまたはＣラムダ相互作用を介して各重鎖のｎ末端ＶＨ−ＣＨ１ドメインと接面する。ＣＨ１とＣカッパまたはＣラムダとの間の天然ジスルフィド結合は、軽鎖及び重鎖間にさらなる安定性を提供するように存在する。分子のＣ末端では、Ｎ末端グリシン／セリン／アラニン／トレオニンをベースとするリンカーを介して、重鎖１及び重鎖２両方のＣＨ３ドメインのＣ末端に結合した２つの同一可溶性ＶＨ３生殖細胞系列ファミリーＶＨドメインがある。
【００８１】
いくつかの実施形態では、非対称分子は、図７に図示して描写する通りであることができる。例えば、分子のＮ末端は、グリシン／セリン／アラニン／トレオニンをベースとするリンカーを介してヒトＩｇＧ１ヒンジ領域に連結した２つの異なるＶＨ３生殖細胞系列（ｇｅｒｍｌｉｎｅｄ）をベースとする可溶性ＶＨドメインから構成される。第一の重鎖に連結したＶＨドメインは、第二の重鎖に連結したＶＨドメインとは異なる。各重鎖のＣ末端は、追加の可溶性ＶＨ３生殖細胞系列をベースとするＶＨドメインであり、これは２つの重鎖のそれぞれで同一である。重鎖は、ＦｃモジュールのＣＨ３境界面に存在する以前に記載したノブイントゥホール突然変異を介してヘテロ二量体化する。
【００８２】
いくつかの実施形態では、非対称分子は、図８に図示する通りであることができる。この例は、図７に示す分子と類似しているが、両方のＮ末端Ｆａｂユニットが、軽鎖１及び軽鎖２が、ＣカッパまたはＣラムダのＣ末端と各それぞれのＶＨのＮ末端との間のリンカーを介して重鎖１及び重鎖２と物理的に連合するように構成される点を除く。リンカーは各事例において、３６〜８０アミノ酸長であってよく、セリン、グリシン、アラニン及びトレオニン残基から構成されてよい。物理的に連合したｎ末端軽鎖は、ＶＨ／ＶＬ相互作用及びＣＨ１とのＣカッパまたはＣラムダ相互作用を介して、各重鎖のｎ末端ＶＨ−ＣＨ１ドメインと接面する。ＣＨ１とＣカッパまたはＣラムダとの間の天然ジスルフィド結合は、軽鎖及び重鎖間にさらなる安定性を提供するように存在する。
【００８３】
二重特異性分子は、混合フォーマットを有することもできる。これを、例えば、図９、図１０、及び図１１に図示する。
【００８４】
例えば、図９に図示するように、図７の部分フォーマット選択と組み合わせて、それにより総合分子結合価が４であるが、特異性は２つの特異性に制限されている、ホモ二量体Ｆｃをベースとするアプローチ（図３、４、及び５を参照されたい）を図示する。Ｎ末端は、２つの同一可溶性ＶＨ３生殖細胞系列をベースとするＶＨドメインから構成され、Ｃ末端は、Ｎ末端とは異なる特異性の２つの同一可溶性ＶＨ３生殖細胞系列（ｇｅｒｍｌｉｎｅｄ）をベースとするＶＨドメインから構成される。それゆえ、各特異性は、２の結合価を有する。再度、このフォーマットでは、４つの付着／融合点のいずれかにある抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分と置換されることができる。
【００８５】
図１０は、別の例を図示する。この例では、分子は、４つのＶＨ３生殖細胞系列をベースとする可溶性ＶＨドメインから構成される。最初の２つのドメインは、同じ特異性を有し（例えば阻害性受容体）、Ｎ末端から３番目のドメインは、組織抗原に対する特異性を有し得、Ｎ末端から４番目のドメインは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対する特異性を有し得、それによりＩｇ  Ｆｃドメインの非存在下で分子の半減期を延長する。３つのグリシン、セリン、アラニン及び／またはトレオニンリッチリンカーは、ドメイン１及び２、ドメイン２及び３、ならびにドメイン３及び４の間に存在する。このフォーマットは、最大で四重特異性、しかし各場合で一価を伴うように、または各場合で二価を伴って二重特異性を有するように構成され得る。ドメインの順序は、変更することができる。再度、このフォーマットでは、抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分と置換されることができる。
【００８６】
図１１は、なおも別のアプローチを図示する。この例は、Ｆｃホモ二量体をベースとし、２つの同一のＦａｂユニット（二価単一特異性）を分子のＮ末端で有するという点で、図３及び４に類似している。この例は、各重鎖のＣ末端にタンデム−ｓｃＦｖが添付されているという点で異なる。ゆえに、各場合で、ＦｃのＣＨ３ドメインのＣ末端は、グリシン／セリン／アラニン／トレオニンをベースとするリンカーを介して、第一のＶＨドメインのＮ末端に連結しており、これはＣ末端を介して１２〜１５アミノ酸グリシン／セリンリッチリンカーにより、第一のＶＬドメインのＮ末端に連結しており、これは、２５〜３５アミノ酸グリシン／セリン／アラニン／トレオニンをベースとするリンカーを介してＣ末端で第二のＶＨドメインのＮ末端に連結し、これはＣ末端を介して１２〜１５アミノ酸グリシン／セリンをベースとするリンカーで第二のＶＬドメインのＮ末端に連結している。このＦｃホモ二量体をベースとする分子では、それゆえ、２つの同一のタンデムｓｃＦｖが分子のＣ末端にあり、例えば、単一の組織抗原に対して四価性または２つの異なる分子に二価性のいずれかを与える。このフォーマットは、ヘテロ二量体Ｆｃコアで適用することもでき、ＦＣのＣ末端での２つの異なるタンデム−ｓｃＦｖが可能となり、これは、図５、６、及び７のような一本鎖Ｆａｂ構成の使用を介して、Ｎ末端での二価単一特異性またはＮ末端での一価二重特異性を保持しながらＣ末端での一価四重特異性を可能にする。この分子は、それゆえ、２、３、４、５、または６つの特異性を有するように構成されることができる。タンデム−ｓｃＦｖユニットにおけるｓｃＦｖのドメイン順序は、ＮからＣ末端方向で、ＶＨ−リンカー−ＶＬまたはＶＬ−リンカー−ＶＨのいずれかで構成され得る。再度、このフォーマットでは、４つの付着／融合点のいずれかにある抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分と置換されることができる。
【００８７】
二重特異性抗体は、例えば、組織浸透度を増加させる一方でより短い全身ＰＫを有するように構築されることもできる。これらのタイプの抗体は、例えば、ヒトＶＨ３をベースとするドメイン抗体フォーマットに基づくことができる。これらは、例えば、図１２、１３、及び１４に図示される。図１２、１３、及び１４は、それぞれ可溶性ＶＨ３生殖細胞系列ファミリーをベースとするＶＨドメインモジュールを含んだ。各ドメインは、おおよそ１２．５ｋＤａであり、全体の分子量は小さくあることが可能であり、いずれの特定の理論にも束縛されないが、これは、組織浸透の向上に有益であるはずである。これらの例では、ＶＨドメインはいずれも、いずれの半減期延長標的、例えばＦｃＲｎまたはＨＳＡを認識しない。図１２に図示するように、分子は、第一のドメインのＣ末端及び第二のドメインのＮ末端間の可動性親水性グリシン／セリンをベースとするリンカーで接合された２つのＶＨドメインから構成される。この例では、第一のドメインは、Ｔ細胞共刺激性受容体を認識し得、第二のドメインは、組織係留抗原を認識し得る。図１３に図示するように、分子は、親水性グリシン／セリンをベースとするリンカーのＮ−Ｃ末端連結を伴う３つのＶＨドメインから構成される。分子は、三重特異的であるが、各標的に関して一価であるように構成され得る。それは、二重特異性で、１つの標的に関して二価性を伴い、別の標的に関して一価性を伴ってよい。図１４に図示するように、分子は、各ドメイン間にＮ−Ｃ末端グリシン／セリンリッチリンカーを伴う４つのＶＨドメインから構成される。この分子は、四重特異性、三重特異性、または二重特異性であるように構成されてよく、各場合において変動する抗原結合価を伴ってよい。再度、このフォーマットでは、抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分で置換されることができる。
【００８８】
二重特異性抗体の他の実施形態を、図１５及び１６に図示する。図１５及び１６は、相互作用を共有結合的に繋留するｃ末端重鎖／軽鎖ジスルフィド結合を含む、ヒトＩｇＧ  ＣＨ１／Ｃカッパ接触面の天然にヘテロ二量体形成するコアから構成される。このフォーマットは、半減期延長のためのＦｃまたは任意の部分を含有しない。図１５に図示するように、分子は、定常カッパドメインのＮ末端で、ｓｃＦｖフラグメントが添付し、これは、Ｎ末端ＶＨドメインがそのＣ末端でＶＬドメインのＮ末端に１２〜１５アミノ酸グリシン／セリンをベースとするリンカーを介して連結してなり、これはそのＣ末端により定常カッパドメインのＮ末端へと天然ＶＬ−Ｃカッパエルボー（ｅｌｂｏｗ）配列を介して連結する。ＣＨ１ドメインは、Ｎ末端で、ｓｃＦｖフラグメントが添付し、これはＮ末端ＶＬドメインがそのＣ末端で１２〜１５アミノ酸グリシン／セリンリンカーを介してＶＨドメインのＮ末端に連結してなり、これはそのＣ末端でＣＨ１ドメインのＮ末端に天然ＶＨ−ＣＨ１エルボー配列を介して連結する。図１６に図示するように、分子は、実施例１３と同じＮ末端構成を有する。しかしながら、定常カッパ及びＣＨ１ドメインのＣ末端は、ｓｃＦｖモジュールが添付しており、これは、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ構成のいずれかの構成であってよく、同じ抗原に対して特異的かまたは２つの異なる抗原に対して特異的かのいずれかであってよい。ＶＨ／ＶＬドメイン間リンカーは、１２〜１５アミノ酸長であり、グリシン／セリン残基からなってよい。ｓｃＦｖ結合サブユニットは、可溶性ＶＨドメイン、またはペプチド認識エレメント、またさらにはタンデム−ｓｃＦｖエレメントと入れ替わってよい。このアプローチは、可変ラムダ及び／または定常ラムダドメインを使用するように構成されることもできる。再度、このフォーマットでは、付着／融合点のいずれかにある、抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分と置換されることができる。
【００８９】
図１７は、別の実施形態を図示する。図１７は、タンデムｓｃＦｖフォーマットを表し、これは、第一のＮ末端ＶＬドメインがそのＣ末端で第一のＶＨドメインのＮ末端に１２〜１５アミノ酸グリシン／セリンリッチリンカーで連結し、その後第一のＶＨ  Ｃ末端で２５〜３０アミノ酸グリシン／セリン／アラニン／トレオニンをベースとするリンカーにより第二のＶＬドメインのＮ末端に連結してなる。第二のＶＬドメインは、Ｃ末端で第二のＶＨドメインのＮ末端に１２〜１５アミノ酸グリシン／セリンリンカーにより連結する。各ｓｃＦｖは、異なる標的抗原、例えば共刺激性Ｔ細胞分子及び組織係留標的を認識する。再度、このフォーマットでは、抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分と置換されることができる。
【００９０】
図１８は、別の実施形態を図示する。図１８は、Ｆ（ａｂ’）２ｓｃＦｖ融合体である。これは、２つのジスルフィド結合を介してヒトＩｇＧ  ＣＨ１ドメインの天然ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域ｃ末端にて接合した２つの同一のＦａｂ構成要素からなる。ヒトＩｇＧ１  ＣＨ２及びＣＨ３ドメインは存在しない。重鎖１及び２のＣ末端には、グリシン／セリン／アラニン／トレオニンリッチリンカーを介して、ｈｕＩｇＧ１ヒンジ領域のＣ末端へと連結された２つの同一のｓｃＦｖフラグメントがある。示す構成では、ＶＨは、各ｓｃＦｖユニットのＮ末端であり、１２〜１５アミノ酸グリシン／セリンリッチリンカーを介してＶＬドメインのＮ末端に連結する。代替の構成は、Ｎ末端−ＶＬ−リンカー−ＶＨ−Ｃ末端であるだろう。この設計では、構築物は、二重特異性であり、リーチ標的に関して二価性である。再度、このフォーマットでは、４つの付着／融合点のいずれかにある抗体部分はいずれも、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まないエフェクター結合／調節部分と置換されることができる。
【００９１】
ＣＤ３９分子は、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の一部として、ＡＴＰをＡＭＰへとリン酸加水分解する、十分なＣＤ３９配列を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ３９分子は、天然に生じるＣＤ３９、例えば、ＣＤ３９分子が由来したＣＤ３９に等しい、またはその速度の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、もしくは９５％でＡＴＰをＡＭＰへとリン酸加水分解する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３９分子は、天然に生じるＣＤ３９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
【００９２】
任意の機能性アイソフォームを使用することができる（ＣＤ３９または本明細書に考察する他のタンパク質を用いる）。例示的なＣＤ３９配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１７６７．３または以下の配列：
ＭＥＤＴＫＥＳＮＶＫＴＦＣＳＫＮＩＬＡＩＬＧＦＳＳＩＩＡＶＩＡＬＬＡＶＧＬＴＱＮＫＡＬＰＥＮＶＫＹＧＩＶＬＤＡＧＳＳＨＴ
ＳＬＹＩＹＫＷＰＡＥＫＥＮＤＴＧＶＶＨＱＶＥＥＣＲＶＫＧＰＧＩＳＫＦＶＱＫＶＮＥＩＧＩＹＬＴＤＣＭＥＲＡＲＥＶＩＰＲＳＱＨＱＥＴＰＶＹＬＧＡＴＡＧＭＲＬＬＲＭＥＳＥＥＬＡＤＲＶＬＤＶＶＥＲＳＬＳＮＹＰＦＤＦＱＧＡＲＩＩＴＧＱＥＥＧＡＹＧＷＩＴＩＮＹＬＬＧＫＦＳＱＫＴＲＷＦＳＩＶＰＹＥＴＮＮＱＥＴＦＧＡＬＤＬＧＧＡＳＴＱＶＴＦＶＰＱＮＱＴＩＥＳＰＤＮＡＬＱＦＲＬＹＧＫＤＹＮＶＹＴＨＳＦＬＣＹＧＫＤＱＡＬＷＱＫＬＡＫＤＩＱＶＡＳＮＥＩＬＲＤＰＣＦＨＰＧＹＫＫＶＶＮＶＳＤＬＹＫＴＰＣＴＫＲＦＥＭＴＬＰＦＱＱＦＥＩＱＧＩＧＮＹＱＱＣＨＱＳＩＬＥＬＦＮＴＳＹＣＰＹＳＱＣＡＦＮＧＩＦＬＰＰＬＱＧＤＦＧＡＦＳＡＦＹＦＶＭＫＦＬＮＬＴＳＥＫＶＳＱＥＫＶＴＥＭＭＫＫＦＣＡＱＰＷＥＥＩＫＴＳＹＡＧＶＫＥＫＹＬＳＥＹＣＦＳＧＴＹＩＬＳＬＬＬＱＧＹＨＦＴＡＤＳＷＥＨＩＨＦＩＧＫＩＱＧＳＤＡＧＷＴＬＧＹＭＬＮＬＴＮＭＩＰＡＥＱＰＬＳＴＰＬＳＨＳＴＹＶＦＬＭＶＬＦＳＬＶＬＦＴＶＡＩＩＧＬＬＩＦＨＫＰＳＹＦＷＫＤＭＶ（配列番号１）からの成熟形態を含む。
【００９３】
いくつかの実施形態では、ＣＤ３９分子は、ヒトまたはマウス血清において循環すると見出された可溶性触媒活性形態のＣＤ３９を含み、例えば、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ＡＤＰ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄｓｔｒｅａｍ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｖｉａ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ−１  ａｎｄ  ＮＴＰＤａｓｅ１／ＣＤ３９  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，Ｙｅｇｕｔｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２０１２Ｓｅｐ；２６（９）：３８７５−８３を参照されたい。可溶性組み換えＣＤ３９フラグメントは、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｅｃｔｏ−ＡＤＰａｓｅ／ＣＤ３９，Ｇａｙｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１９９８Ｍａｙ１；１０１（９）：１８５１−１８５９にも記載されている。
【００９４】
ＣＤ７３分子、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の一部として、細胞外ＡＭＰをアデノシンへと脱リン酸化する、十分なＣＤ７３配列を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ７３分子は、天然に生じるＣＤ７３、例えば、ＣＤ７３分子が由来するＣＤ７３と等しい、またはその速度の少なくとも、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、もしくは９５％で細胞外ＡＭＰをアデノシンへと脱リン酸化する。いくつかの実施形態では、ＣＤ７３分子は、天然に生じるＣＤ７３と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。例示的なＣＤ７３配列は、ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ６５９３７．１  ５’−ヌクレオチダーゼ、エクト（ＣＤ７３）［ホモサピエンス］または以下の配列、ＭＣＰＲＡＡＲＡＰＡＴＬＬＬＡＬＧＡＶＬＷＰＡＡＧＡＷＥＬＴＩＬＨＴＮＤＶＨＳＲＬＥＱＴＳＥＤＳＳＫＣＶＮＡＳＲＣＭＧＧＶＡＲＬＦＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬＬＬＤＡＧＤＱＹＱＧＴＩＷＦＴＶＹＫＧＡＥＶＡＨＦＭＮＡＬＲＹＤＡＭＡＬＧＮＨＥＦＤＮＧＶＥＧＬＩＥＰＬＬＫＥＡＫＦＰＩＬＳＡＮＩＫＡＫＧＰＬＡＳＱＩＳＧＬＹＬＰＹＫＶＬＰＶＧＤＥＶＶＧＩＶＧＹＴＳＫＥＴＰＦＬＳＮＰＧＴＮＬＶＦＥＤＥＩＴＡＬＱＰＥＶＤＫＬＫＴＬＮＶＮＫＩＩＡＬＧＨＳＧＦＥＭＤＫＬＩＡＱＫＶＲＧＶＤＶＶＶＧＧＨＳＮＴＦＬＹＴＧＮＰＰＳＫＥＶＰＡＧＫＹＰＦＩＶＴＳＤＤＧＲＫＶＰＶＶＱＡＹＡＦＧＫＹＬＧＹＬＫＩＥＦＤＥＲＧＮＶＩＳＳＨＧＮＰＩＬＬＮＳＳＩＰＥＤＰＳＩＫＡＤＩＮＫＷＲＩＫＬＤＮＹＳＴＱＥＬＧＫＴＩＶＹＬＤＧＳＳＱＳＣＲＦＲＥＣＮＭＧＮＬＩＣＤＡＭＩＮＮＮＬＲＨＡＤＥＴＦＷＮＨＶＳＭＣＩＬＮＧＧＧＩＲＳＰＩＤＥＲＮＮＧＴＩＴＷＥＮＬＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱＬＫＧＳＴＬＫＫＡＦＥＨＳＶＨＲＹＧＱＳＴＧＥＦＬＱＶＧＧＩＨＶＶＹＤＬＳＲＫＰＧＤＲＶＶＫＬＤＶＬＣＴＫＣＲＶＰＳＹＤＰＬＫＭＤＥＶＹＫＶＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬＬＲＨＤＳＧＤＱＤＩＮＶＶＳＴＹＩＳＫＭＫＶＩＹＰＡＶＥＧＲＩＫＦＳＴＧＳＨＣＨＧＳＦＳＬＩＦＬＳＬＷＡＶＩＦＶＬＹＱ（配列番号２）からの成熟形態を含む。
【００９５】
いくつかの実施形態では、ＣＤ７３分子は、タンパク質切断または剪断応力によるＧＰＩアンカーの加水分解により内皮細胞の膜から放出されることができるＣＤ７３の可溶性形態を含む、例えば、参考文献：Ｙｅｇｕｔｋｉｎ  Ｇ，Ｂｏｄｉｎ  Ｐ，Ｂｕｒｎｓｔｏｃｋ  Ｇ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｈｅａｒ  ｓｔｒｅｓｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｅｃｔｏ−ｅｎｚｙｍｅｓ  ＡＴＰａｓｅ  ａｎｄ５’−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ  ａｌｏｎｇ  ｗｉｔｈ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ＡＴＰ  ｆｒｏｍ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ２０００；１２９：９２１−６を参照されたい。ＣＤ７３機能に関しては、Ｃｏｌｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｆｏｒ  ｅｃｔｏ−５’−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ（ＣＤ７３）、Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，Ｊｕｎｅ２００６，２：３５１を参照されたい。
【００９６】
細胞表面分子結合因子は、該用語を本明細書で使用する場合、例えば、特異的に、細胞、例えば、免疫抑制性免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇ上の細胞表面分子に結合する、分子、典型的にはポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、細胞表面結合因子は、細胞表面分子と特異的に結合できる、細胞表面分子の天然に生じるリガンドからの十分な配列を有する（細胞表面分子リガンド）。いくつかの実施形態では、細胞表面結合は、細胞表面分子と結合する、例えば、特異的に結合する抗体分子である。
【００９７】
ドナー特異的標的化部分は、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の構成要素として、治療化合物を、レシピエントの組織とは対照的に、移植されたドナー組織へと優先的に局在化させる部分、例えば、抗体分子を指す。治療化合物の構成要素として、ドナー特異的標的化部分は、ドナーからの移植組織、例えば、臓器に対して部位特異的免疫特権を提供する。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、それは、遺伝子座に存在する対立遺伝子の産物、例えば、ポリペプチド産物に結合し、この対立遺伝子は、（レシピエント）対象の遺伝子座には存在しない。いくつかの実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、産物上のエピトープに結合し、このエピトープは、（レシピエント）対象には存在しない。
【００９９】
いくつかの実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、治療化合物の構成要素として、ドナー標的または抗原に優先的に結合する、例えば、ドナー抗原または組織に関してより大きい、例えば、対象抗原または組織に関するその親和性よりも、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍大きいドナー標的に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、対象に存在する遺伝子座の対立遺伝子（この対立遺伝子は、ドナー組織には存在しない）の産物に関するその親和性より、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍大きい、ドナー組織に存在する遺伝子座の対立遺伝子（しかし対象には存在しない）の産物に対する結合親和性を有する。ドナー特異的部分が構成要素である治療化合物の親和性は、細胞懸濁液中で測定することができる、例えば、対立遺伝子を有する懸濁細胞に対する親和性を、対立遺伝子を有さない懸濁細胞に対するその親和性と比較する。いくつかの実施形態では、ドナー対立遺伝子細胞に対する結合親和性は、１０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、ドナー対立遺伝子細胞に対する結合親和性は、１００ｐＭ、５０ｐＭ、または１０ｐＭ未満である。
【０１００】
いくつかの実施形態では、ドナー対立遺伝子の産物に対する特異性は、ドナー特異的標的化部分が免疫下方制御エフェクターに連結するとき、ｉ）移植された組織の免疫攻撃が、これは例えば、組織学的炎症反応、浸潤Ｔエフェクター細胞、もしくは臓器機能により、臨床設定にて測定される−例えば、腎臓のクレアチニンが、他の点では同様であるがドナー特異的標的化部分が免疫下方制御エフェクターに連結することを欠く移植において見られるだろうものと比較して、実質的に低下する；及び／またはｉｉ）移植された組織の外側またはそこから離れたレシピエントの免疫機能が、実質的に維持されるほどに十分である。いくつかの実施形態では、以下のうちの１つまたは複数が見られる：治療レベルの治療化合物で、末梢血リンパ球数が、実質的に影響を受けない、例えば、Ｔ細胞のレベルは、通常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内である、Ｂ細胞のレベルは、通常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内である、及び／または顆粒球（ＰＭＮ）細胞のレベルは、通常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内である、または単球のレベルは、通常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内である；治療レベルの治療化合物で、非疾患関連抗原に対するＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）のｅｘ  ｖｉｖｏ増殖性機能は、実質的に通常であるまたは通常の７０、８０、もしくは９０％以内である；治療レベルの治療化合物で、免疫抑制に関連する日和見感染及びがんの発生率またはリスクのリスクは、通常よりも実質的に増加しない；あるいは治療レベルの治療化合物で、免疫抑制に関連する日和見感染及びがんの発生率またはリスクのリスクは、標準治療、または非標的、免疫抑制を用いて見られるだろうものより実質的に少ない。いくつかの実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、抗体分子、標的特異的結合ポリペプチド、または標的リガンド結合分子を含む。
【０１０１】
エフェクターは、該用語を本明細書で使用する場合、免疫応答を媒介する、実体、例えば、細胞または分子、例えば、可溶性または細胞表面分子を指す。
【０１０２】
エフェクターリガンド結合分子は、本明細書で用いる場合、エフェクター結合／調節分子として機能することができるほど十分な特異性を伴ってエフェクターと結合することができる、エフェクターの天然に生じるカウンターリガンドからの十分な配列を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、それは、エフェクターに、天然に生じるカウンターリガンドの少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９５％の親和性で結合する。いくつかの実施形態では、それは、エフェクターに対する天然に生じるカウンターリガンドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
【０１０３】
エフェクター特異的結合ポリペプチドは、本明細書で用いる場合、エフェクター結合／調節部分として機能することができるほど十分な特異性を伴って結合することができるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、特異的結合ポリペプチドは、エフェクターリガンド結合分子を含む。
【０１０４】
リスクが高いとは、本明細書で用いる場合、対象における障害のリスクを指し、ここで対象は、障害もしくは障害の症状の病歴、障害もしくは障害の症状に関連するバイオマーカー、または障害もしくは障害の症状の家族歴のうちの１つまたは複数を有する。
【０１０５】
エフェクターまたは阻害性免疫チェックポイント分子に対する機能性抗体分子は、該用語を本明細書で使用する場合、多量体化治療化合物のＩＣＩＭ結合／調節部分として存在するとき、エフェクターまたは阻害性免疫チェックポイント分子と結合する及び刺激することができる抗体分子を指す。いくつかの実施形態では、抗エフェクターまたは阻害性免疫チェックポイント分子抗体分子は、エフェクターまたは阻害性免疫チェックポイント分子に、単量体として結合する（または治療化合物が多量体化されていないときに結合する）とき、阻害性免疫チェックポイント分子に対する阻害性免疫チェックポイント分子分子の内因性カウンターリガンドを拮抗しない、実質的に拮抗しない、結合を防がない、または実質的な結合を防がない。いくつかの実施形態では、抗エフェクターまたは阻害性免疫チェックポイント分子抗体分子は、阻害性免疫チェックポイント分子に、単量体として結合する（または治療化合物が多量体化されていないときに結合する）とき、エフェクターまたは阻害分子を刺激しないまたは実質的に刺激しない。
【０１０６】
ＩＣＩＭ結合／調節部分は、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の一部として、細胞表面阻害分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ−１と結合及び刺激する、または、結合するもしくは細胞シグナル伝達を調節する、例えば、ＦＣＲＬ、例えば、ＦＣＲＬ１〜６と結合する、または免疫機能を促進する分子と結合し、これを拮抗する、エフェクター結合／調節部分を指す。
【０１０７】
ＩＩＣ結合／調節部分は、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の一部として、免疫抑制性免疫細胞と結合するエフェクター結合／調節部分を指す。いくつかの実施形態では、ＩＩＣ結合／調節部分は、免疫抑制性免疫細胞の数または濃度を結合部位で増加させる。
【０１０８】
「阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子」は、該用語を本明細書で使用する場合、十分な阻害性免疫チェックポイント分子リガンド配列を有するポリペプチドを指し、例えば、ＰＤ−Ｌ１分子の場合は、多量体化治療化合物のＩＣＩＭ結合／調節部分として存在するとき、その同族阻害性免疫チェックポイント分子、例えば、再度ＰＤ−Ｌ１分子の場合は、ＰＤ−１と結合し、刺激することができる十分なＰＤ−Ｌ１配列を有する。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子、例えば、ＰＤ−Ｌ１分子は、その同族リガンド、例えば、ＰＤ−１に、単量体として結合する（または治療化合物が多量体化されていないときに結合する）とき、阻害性免疫チェックポイント分子に対する内因性阻害性免疫チェックポイント分子リガンドを拮抗しないもしくは実質的に拮抗しない、または結合を防がない、もしくは実質的な結合を防がない。例えば、ＰＤ−Ｌ１分子の場合、ＰＤ−Ｌ１分子は、ＰＤ−１に対する内因性ＰＤ−Ｌ１の結合を拮抗しない。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子リガンドは、その同族阻害性免疫チェックポイント分子に、単量体として結合するとき、阻害性免疫チェックポイント分子を刺激または実質的に刺激しない。例として、例えば、ＰＤ−Ｌ１分子は、ＰＤ−１に結合するとき、ＰＤ−１を刺激または実質的に刺激しない。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子は、天然に生じる阻害性免疫チェックポイント分子リガンドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
【０１１２】
例示的な阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子は、ＰＤ−Ｌ１分子を含み、これは阻害性免疫チェックポイント分子ＰＤ−１に結合し、実施形態では、天然に生じるＰＤ−Ｌ１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する、例えば、ＰＤ−Ｌ１分子は、ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号３）の配列、またはその活性フラグメントを含む；いくつかの実施形態では、活性フラグメントは、ＰＤ−Ｌ１配列の残基１９から２９０を含む；；ＨＬＡ−Ｇ分子を含み、これは阻害性免疫チェックポイント分子ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、及びＬＩＬＲＢ２のいずれかに結合し、実施形態では、天然に生じるＨＬＡ−Ｇと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。例示的なＨＬＡ−Ｇ配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｐ１７６９３．１ＲｅｃＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＨＬＡクラスＩ組織適合性抗原、アルファ鎖Ｇ；ＡｌｔＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＨＬＡ  Ｇ抗原；ＡｌｔＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＭＨＣクラスＩ抗原Ｇ；フラグ：前駆体での配列、または配列ＭＶＶＭＡＰＲＴＬＦＬＬＬＳＧＡＬＴＬＴＥＴＷＡＧＳＨＳＭＲＹＦＳＡＡＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＭＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＳＡＣＰＲＭＥＰＲＡＰＷＶＥＱＥＧＰＥＹＷＥＥＥＴＲＮＴＫＡＨＡＱＴＤＲＭＮＬＱＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＳＳＨＴＬＱＷＭＩＧＣＤＬＧＳＤＧＲＬＬＲＧＹＥＱＹＡＹＤＧＫＤＹＬＡＬＮＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＴＡＡＱＩＳＫＲＫＣＥＡＡＮＶＡＥＱＲＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＨＲＹＬＥＮＧＫＥＭＬＱＲＡＤＰＰＫＴＨＶＴＨＨＰＶＦＤＹＥＡＴＬＲＣＷＡＬＧＦＹＰＡＥＩＩＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＶＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＥＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＥＰＬＭＬＲＷＫＱＳＳＬＰＴＩＰＩＭＧＩＶＡ（配列番号４）において見出される成熟形態を含む。
【０１１３】
阻害分子カウンターリガンド分子は、該用語を本明細書で使用する場合、多量体化治療化合物のＩＣＩＭ結合／調節部分として存在するとき、同族阻害分子と結合しこれを刺激することができる十分な阻害分子カウンターリガンド配列を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、阻害分子カウンターリガンド分子は、阻害分子に、単量体として結合する（または治療化合物が多量体化されていないときに結合する）とき、阻害分子に対する阻害分子の内因性カウンターリガンドを拮抗しないもしくは実質的に拮抗しない、または結合を防がない、もしくは実質的な結合を防がない。いくつかの実施形態では、阻害分子カウンターリガンド分子は、阻害分子に、単量体として結合する（または治療化合物が多量体化されていないときに結合する）とき、阻害分子を刺激しないまたは実質的に刺激しない。
【０１１４】
配列同一性、パーセンテージ同一性、及び関連する用語は、本明細書で使用する場合、２つの配列、例えば、２つの核酸配列または２つのアミノ酸もしくはポリペプチド配列の関連性を指す。アミノ酸配列の文脈において、「実質的に同一」という用語は、本明細書において、第一と第二のアミノ酸配列が共通の構造ドメイン及び／または共通の機能的活性を有することができるように、第二のアミノ酸配列における整列させたアミノ酸残基に対してｉ）同一である、またはｉｉ）その保存的置換である、十分なまたは最小限の数のアミノ酸残基を含有する第一のアミノ酸を指すために使用される。例えば、アミノ酸配列は、参照配列、例えば、本明細書に提供する配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する共通の構造ドメインを含有する。
【０１１５】
ヌクレオチド配列の文脈において、「実質的に同一」という用語は、本明細書において、第一と第二のヌクレオチド配列が共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、または共通の構造ポリペプチドドメインもしくは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするように、第二の核酸配列における整列させたヌクレオチドに対して同一である十分なまたは最小限の数のヌクレオチドを含有する第一の核酸配列を指すために使用される。例えば、ヌクレオチド配列は、参照配列、例えば、本明細書に提供する配列に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する。
【０１１６】
「機能的変種」という用語は、天然に生じる配列に対して実質的に同一のアミノ酸配列を有する、または実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされ、天然に生じる配列の１つまたは複数の活性を有することができるポリペプチドを指す。
【０１１７】
配列間の相同性または配列同一性（これらの用語は本明細書において互換可能に使用される）の計算は、以下のように実施する。
【０１１８】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列のパーセント同一性を決定するために、配列を最適な比較目的のために整列させる（例えば、最適なアライメントのために第一及び第二のアミノ酸または核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、非相同配列を比較目的のために廃棄することができる）。好ましい実施形態では、比較目的のために整列させる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、及びさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第一の配列における位置が、第二の配列における対応する位置で同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占有されている場合、分子はその位置で同一である（本明細書において使用されるアミノ酸または核酸「同一性」は、アミノ酸または核酸「相同性」と同等である）。
【０１１９】
２つの配列間のパーセント同一性は、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要がある、ギャップの数、及びそれぞれのギャップの長さを考慮に入れた、配列が共有する同一の位置の数の関数である。
【０１２０】
２つの配列間の配列の比較及びパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して実行することができる。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれている、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、及びギャップ加重１６、１４、１２、１０、８、６、または４、及びギャップ長加重１、２、３、４、５、または６を使用して決定される。なお別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列、及びギャップ加重４０、５０、６０、７０、または８０、及びギャップ長加重１、２、３、４、５、または６を使用して決定される。特に好ましい組のパラメータ（及びそれ以外であると明記されている場合を除き使用すべきであるパラメータ）は、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２スコア行列、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、及びフレームシフトギャップペナルティ５である。
【０１２１】
２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）の中に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０加重残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用して決定することができる。
【０１２２】
本明細書に記載の核酸及びタンパク質配列は、例えば他のファミリーメンバーまたは関連配列を同定するための公共のデータベースに対して検索を実行するための「クエリ配列」として使用することができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、例えば本明細書に提供する任意の核酸配列に対して相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実行することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書に提供するタンパク質分子に対して相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実行することができる。比較目的のためのギャップを有するアライメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載されるＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
【０１２３】
本明細書で用いる場合、「低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、高ストリンジェンシー、または超高ストリンジェンシー条件でハイブリダイズする」という用語は、ハイブリダイゼーション及び洗浄のための条件を説明する。ハイブリダイゼーション反応を実施するための指針は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出され得る。水溶性方法及び非水溶性方法が、その参考文献に記述されており、いずれも使用することができる。本明細書において言及される特異的ハイブリダイゼーション条件は、以下のとおりである：１）６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃での低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件後に、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、少なくとも５０℃での２回の洗浄（洗浄温度は低ストリンジェンシー条件の場合、５５℃に増加させることができる）；２）６×ＳＳＣ、約４５℃での中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６０℃での１回または複数回の洗浄；３）６×ＳＳＣで約４５℃での高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃での１回または複数回の洗浄；及び好ましくは４）超高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳで６５℃の後に０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ中、６５℃での１回または複数回の洗浄である。超高ストリンジェンシー条件（４）が、好ましい条件であり、別段の指定がない限り、使用すべき条件である。
【０１２４】
本実施形態の分子及び化合物は、その機能に実質的な効果を及ぼさない追加の保存的または非必須アミノ酸置換を有してもよいことが理解されたい。
【０１２５】
「アミノ酸」という用語は、アミノ官能性及び酸官能性の両方を含み、天然に生じるアミノ酸のポリマーに含まれることができる、天然または合成であるかによらない、全ての分子を包含すると意図される。例示的なアミノ酸には、天然に生じるアミノ酸；その類似体、誘導体、及び同属種；変種側鎖を有するアミノ酸類似体；ならびに前述のいずれかのいずれかの（ａｎｙ  ｏｆ  ａｎｙ  ｏｆ）全ての立体異性体が含まれる。本明細書で使用する場合、「アミノ酸」という用語は、Ｄ−またはＬ−光学異性体及びペプチド模倣体の両方を含む。
【０１２６】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に交換される置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。ＣＤ３９分子、ＣＤ７３分子、細胞表面分子結合因子、ドナー特異的標的化部分エフェクターリガンド結合分子、ＩＣＩＭ結合／調節部分ＩＩＣ結合／調節部分、阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子、阻害分子カウンターリガンド分子、ＳＭ結合／調節部分、
【０１２７】
ＳＭ結合／調節部分は、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の一部として、例えば、標的の近くに、標的の免疫系による攻撃を阻害するまたは最小限に抑える物質を提供することにより、免疫抑制性局所微小環境を促進するエフェクター結合／調節部分を指す。いくつかの実施形態では、ＳＭ結合／調節部分は、標的の免疫系による攻撃を阻害するまたは最小限に抑える分子を含む、またはこれと結合する。いくつかの実施形態では、治療化合物は、免疫抑制機能を有する可溶性物質、例えば、内因性または外因性物質と結合し、蓄積させるＳＭ結合／調節部分を含む。いくつかの実施形態では、治療化合物は、免疫攻撃を促進する物質、例えば、可溶性物質、典型的には及び内因性可溶性物質と結合し、これを阻害する、隔離する、分解するまたはそうでなければ中和するＳＭ結合／調節部分を含む。いくつかの実施形態では、治療化合物は、免疫抑制物質、例えば、免疫抑制性であると知られているタンパク質のフラグメントを含むＳＭ結合／調節部分を含む。例としては、ＡＴＰまたはＡＭＰなどの免疫エフェクター細胞機能を促進させる構成要素を枯渇させる物質、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子と結合する、またはこれを含むエフェクター分子結合部分。
【０１２８】
特異的標的化部分は、該用語を本明細書で使用する場合、ドナー特異的標的化部分または組織特異的標的化部分を指す。
【０１２９】
対象は、該用語を本明細書で使用する場合、哺乳類対象、例えば、ヒト対象を指す。いくつかの実施形態では、対象は、非ヒト哺乳類、例えば、ウマ、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギまたはブタである。
【０１３０】
標的リガンド結合分子は、本明細書で用いる場合、特異的標的化部分として機能できるほどに十分な特異性を伴って標的組織（例えば、ドナー組織または対象標的組織）上の標的リガンドと結合できる、標的リガンドの天然に生じるカウンターリガンドからの十分な配列を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、それは、標的組織または細胞に、天然に生じるカウンターリガンドの親和性の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９５％で結合する。いくつかの実施形態では、それは、標的リガンドに対する天然に生じるカウンターリガンドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
【０１３１】
標的部位は、該用語を本明細書で使用する場合、標的化部分により結合される実体、例えば、エピトープを含有する部位を指す。いくつかの実施形態では、標的部位は、免疫特権が確立される部位である。
【０１３２】
組織特異的標的化部分は、該用語を本明細書で使用する場合、治療分子の構成要素として、治療分子を、対象の他の組織とは対照的に、標的組織に優先的に局在化させる部分、例えば、抗体分子を指す。治療化合物の構成要素として、組織特異的標的化部分は、自己免疫攻撃を受けているまたはそのリスクがある標的組織、例えば、臓器または組織に対して部位特異的免疫特権を提供する。いくつかの実施形態では、組織特異的標的化部分は、標的組織の外側には存在しない、または治療分子の治療濃度で許容不可能なレベルの免疫抑制が生じないまたは実質的に生じないほど十分に低いレベルで存在する、産物、例えば、ポリペプチド産物に結合する。いくつかの実施形態では、組織特異的標的化部分は、エピトープに結合し、このエピトープは、標的部位の外側に存在しない、または外側に実質的に存在しない。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、組織特異的標的化部分は、治療化合物の構成要素として、標的組織または標的組織抗原に優先的に結合する、例えば、標的抗原または組織に対してより大きい、例えば、非標的組織または標的組織の外側に存在する抗原に対するその親和性より、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍大きい、標的組織または抗原に対する結合親和性を有する。組織特異的部分が構成要素である治療化合物の親和性は、細胞懸濁液中で測定することができる、例えば、標的抗原を有する懸濁細胞に対する親和性を、標的抗原を有さない懸濁細胞に対するその親和性と比較する。いくつかの実施形態では、標的抗原を有する細胞に対する結合親和性は、１０ｎＭ未満である。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、標的抗原を有する細胞に対する結合親和性は、１００ｐＭ、５０ｐＭ、または１０ｐＭ未満である。いくつかの実施形態では、標的抗原に対する特異性は、組織特異的標的化部分が免疫下方制御エフェクターに連結するとき、ｉ）標的組織の免疫攻撃が、これは例えば、組織学的炎症反応、浸潤Ｔエフェクター細胞、もしくは臓器機能により、臨床設定にて測定される−例えば、腎臓のクレアチニンが、例えば、他の点では同様であるが組織特異的標的化部分が免疫下方制御エフェクターに連結することを欠く移植において見られるだろうものと比較して、実質的に低下する；及び／またはｉｉ）標的組織の外側またはそこから離れたレシピエントの免疫機能が、実質的に維持されるほどに十分である。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、以下のうちの１つまたは複数が見られる：治療レベルの治療化合物で、末梢血リンパ球数が、実質的に影響を受けない、例えば、Ｔ細胞のレベルは、通常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内である、Ｂ細胞のレベルは、通常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内である、及び／または顆粒球（ＰＭＮ）細胞のレベルは、通常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内である、または単球のレベルは、通常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であるｌ；治療レベルの治療化合物で、非疾患関連抗原に対するＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）のｅｘ  ｖｉｖｏ増殖性機能は、実質的に通常であるまたは通常の７０、８０、もしくは９０％以内である；治療レベルの治療化合物で、免疫抑制に関連する日和見感染及びがんの発生率またはリスクのリスクは、通常よりも実質的に増加しない；あるいは治療レベルの治療化合物で、免疫抑制に関連する日和見感染及びがんの発生率またはリスクのリスクは、標準治療、または非標的、免疫抑制を用いて見られるだろうものより実質的に少ない。いくつかの実施形態では、組織特異的標的化部分は、抗体分子を含む。いくつかの実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、抗体分子、標的特異的結合ポリペプチド、または標的リガンド結合分子を含む。いくつかの実施形態では、組織特異的標的化部分は、標的組織上に排他的にまたは実質的に排他的に存在するまたは発現される、産物、または産物上の部位と結合する。
【０１３６】
ＩＣＩＭ結合／調節部分：阻害性受容体と結合するエフェクター結合／調節部分
本明細書に記載の方法及び化合物は、免疫細胞の表面上にある阻害性受容体と直接結合し、これを活性化して、例えば、免疫攻撃を媒介する免疫細胞の能力を低下させるもしくは排除する、または実質的に排除する、ＩＣＩＭ結合／調節部分を含むエフェクター結合／調節部分を有する治療化合物を提供する。ＩＣＩＭ結合／調節部分の標的化実体への結合は、免疫細胞応答の部位特異的または局所下方制御を促進する、例えば、標的化部分に対する結合部位を有する場所に実質的に限局する。ゆえに、正常な全身免疫機能は、実質的に保持される。いくつかの実施形態では、ＩＣＩＭ結合／調節部分は、阻害性免疫チェックポイント分子カウンターリガンド分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子の天然リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＨＬＡ−Ｇ）、または天然リガンドのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＩＭ結合／調節部分は、機能性抗体分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子と結合するｓｃＦｖ結合ドメインを含む機能性抗体分子を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、例えば、機能性抗体分子、または阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子を含むＩＣＩＭ結合／調節部分は、阻害性受容体と結合するが、阻害性受容体の天然リガンドの阻害性受容体への結合を防がない。実施形態では、標的化部分が、例えば、ｓｃＦｖドメインを含むＩＣＩＭ結合／調節部分に結合している、例えば、融合しており、溶液中での（例えば、血液またはリンパ中）（及びおそらくは単量体フォーマットで）阻害性受容体の結合の際に、治療分子が、ｉ）免疫細胞上の阻害性受容体の刺激に失敗する、もしくは実質的に刺激に失敗する（例えば、完全な刺激分子で見られるレベルの３０、２０、１５、１０、または５％未満で刺激する）；及び／またはｉｉ）免疫細胞上の阻害性受容体の拮抗に失敗する、もしくは実質的に拮抗に失敗する（例えば、完全拮抗分子で見られるレベルの３０、２０、１５、１０、または５％未満で拮抗する）ように構成されるフォーマットを使用する。候補分子は、標的が発現されていないｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞ベースアッセイにおいて、例えば、ＭＬＲベースアッセイ（混合リンパ球反応）を使用して、免疫応答を増加させるまたは低減させるその能力のいずれかにより刺激するまたは刺激しないその能力に関して評価されることができる。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、候補ＩＣＩＭ結合／調節部分は、全身免疫抑制及び全身免疫活性化を、低下、完全にまたは実質的に排除することができる。いくつかの実施形態では、治療化合物の標的化ドメインは、標的に結合したときに、免疫保護が望ましい組織の表面上で治療化合物をクラスター化するまたは多量体化する機能を果たすだろう。いくつかの実施形態では、ＩＣＩＭ結合／調節部分、例えば、ｓｃＦｖドメインを含むＩＣＩＭ結合／調節部分は、刺激性及び免疫抑制性シグナル、または実質的なレベルのかかるシグナルの局所免疫細胞への送達を可能にするために、クラスター化または多量体状態を必要とする。この種の治療剤は、例えば、全身性免疫系をかき乱すことなく、または実質的にかき乱すことなく、局所免疫抑制を提供することができる。つまり、免疫抑制は、全身及び特定の領域または組織タイプに局在化されない場合とは対照的に、抑制が必要とされる場所に局在化する。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、標的、例えば、標的臓器、組織または細胞タイプへの結合の際、治療化合物は、標的、例えば、標的臓器、組織または細胞タイプをコーティングする。循環リンパ球が標的と結合し、破壊しようと試みるとき、この治療剤は、治療化合物が蓄積する部位のみで、または該部位でより大きい程度に、「オフ」シグナルを提供するだろう。
【０１４０】
候補治療化合物は、その標的と結合する、例えば、特異的に結合する能力を、例えば、ＥＬＩＳＡ、細胞ベースアッセイ、または表面プラズモン共鳴により評価することができる。より。この特性はそれが免疫特権の部位特異性及び局所性質を媒介するために、概して最大化されるべきである。候補治療化合物は、標的に結合したときに免疫細胞を下方制御する能力を、例えば、細胞ベース活性アッセイにより評価することができる。この特性は、免疫特権の部位特異性及び局所性質を媒介するために、概して最大化されるべきである。単量体（または非結合）形態の候補治療化合物により作用される下方制御のレベルは、例えば、細胞ベース活性アッセイにより、評価することができる。この特性は、免疫系の全身下方制御を媒介し得るために、概して最小限に抑えられるべきである。単量体（または非結合）形態の候補治療化合物により作用される細胞表面阻害分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニズムのレベルは、例えば、細胞ベース活性アッセイにより、評価することができる。この特性は、免疫系の全身の望ましくない活性化を媒介し得るために、概して最小限に抑えられるべきである。概して、特性は、十分に強力な位特異的免疫特権を、阻害性免疫チェックポイント分子の許容不可能なレベルの非部位特異的アゴニズムまたはアンタゴニズムを伴わずに、産生するように選択され、バランスをとるべきである。
【０１４１】
例示的な阻害性免疫チェックポイント分子
例示的な阻害分子（例えば、阻害性免疫チェックポイント分子）（そのカウンターリガンドも一緒である）を表１に見出すことができる。この表は、例示的なＩＣＩＭ結合部分が結合することができる分子を列挙する。
【表１】
2020513855.tif 000003
【０１４２】
ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路
プログラムされた細胞死タンパク質１（しばしばＰＤ−１と称される）は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞表面受容体である。ＰＤ−１は、Ｔ細胞及びＢ細胞、骨髄系細胞、樹状細胞、単球、Ｔ制御性細胞、ｉＮＫ  Ｔ細胞を含むがこれらに限定されない他の細胞タイプ上に発現される。ＰＤ−１は、２つのリガンド、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２に結合し、阻害性免疫チェックポイント分子である。同族リガンド、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２との結合は、抗原負荷ＭＣＨとＴ細胞上のＴ細胞受容体との結合の状況において、Ｔ細胞の活性化及び機能を最小限に抑えるまたは予防する。ＰＤ−１の阻害性効果は、リンパ節の抗原特異的Ｔ細胞のアポトーシス（プログラムされた細胞死）の促進及び制御性Ｔ細胞（抑制性Ｔ細胞）のアポトーシスの減少の両方を含むことができる。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＰＤ−１阻害を刺激するＩＣＩＭ結合／調節部分を含む。ＩＣＩＭ結合／調節部分は、例えば、ＰＤ−１のリガンドのフラグメント（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のフラグメント）を含む阻害分子カウンターリガンド分子または別の部分、例えば、ＰＤ−１と結合するｓｃＦｖドメインを含む、例えば、機能性抗体分子を含むことができる。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、対象に存在しない、実質的に低いレベルで存在するドナー抗原、例えば、表２からのドナー抗原と優先的に結合し、対象のドナー移植組織に局在化する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、それは、他の組織と結合しない、または実質的に結合しない。いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＨＬＡ−Ａ２に対して特異的であり、ドナー同種移植組織と特異的に結合するが、宿主組織と結合しない、または実質的に結合しない標的化部分を含むことができる。いくつかの実施形態では、治療化合物は、例えば、ＰＤ−１のリガンドのフラグメント（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のフラグメント）を含むＩＣＩＭ結合／調節部分、例えば、阻害分子カウンターリガンド分子、または別の部分、例えば、ＰＤ−１と結合するｓｃＦｖドメインを含む、例えば、機能性抗体分子を含み、それにより治療化合物は、例えば、標的に結合したときに、ＰＤ−１を活性化する。治療化合物は、同種移植片を標的とし、同種移植片に局所免疫特権を提供する。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、表３の抗原に優先的に結合し、対象、例えば、自己免疫障害、例えば、表３の自己免疫障害を有する対象の標的に局在化される標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、それは、他の組織と結合しない、または実質的に結合しない。いくつかの実施形態では、治療化合物は、例えば、ＰＤ−１のリガンドのフラグメント（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２のフラグメント）を含むＩＣＩＭ結合／調節部分、例えば、阻害分子カウンターリガンド分子、または別の部分、例えば、ＰＤ−１と結合するｓｃＦｖドメインを含む、例えば、機能性抗体分子を含み、それにより治療化合物は、例えば、標的に結合したときに、ＰＤ−１を活性化する。治療化合物は、自己免疫攻撃の対象となる組織対象を標的とし、該組織に局所免疫特権を提供する。
【０１４６】
ＰＤ−Ｌ１及びＰＤＬ２、またはそれらに由来するポリペプチドは、候補ＩＣＩＭ結合部分を提供することができる。しかしながら、単量体形態では、例えば、治療化合物が血液またはリンパ内を循環しているとき、この分子は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路を拮抗する望ましくない作用を有する可能性があり、標的、例えば、標的臓器の表面上でクラスター化または多量体化するときにのみ、ＰＤ−１経路を刺激し得る。いくつかの実施形態では、治療化合物は、機能性抗体分子、例えば、ｓｃＦｖドメインを含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含み、これはＰＤ−１経路に可溶性形態で挿入される、または実質的に挿入されるが、組織の表面上で（標的化部分により）多量体化するとき阻害性シグナルを刺激する及び駆動する。
【０１４７】
ＨＬＡ−Ｇ：ＫＩＲ２ＤＬ４／ＬＩＬＲＢ１／ＬＩＬＲＢ２経路
ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、及びＬＩＬＲＢ２は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び骨髄系細胞上に見出される阻害分子である。ＨＬＡ−Ｇは、それぞれに対するカウンターリガンドである。
【０１４８】
ＫＩＲ２ＤＬ４は、ＣＤ１５８Ｄ、Ｇ９Ｐ、ＫＩＲ−１０３ＡＳ、ＫＩＲ１０３、ＫＩＲ１０３ＡＳ、ＫＩＲ、ＫＩＲ−２ＤＬ４、キラー細胞免疫グロブリン受容体、２つのＩｇドメイン及び長細胞質尾４としても知られている。ＬＩＬＲＢ１は、ＬＩＬＲＢ１、ＣＤ８５Ｊ、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ２、ＬＩＲ−１、ＬＩＲ１、ＭＩＲ−７、ＭＩＲ７、ＰＩＲ−Ｂ、ＰＩＲＢ、白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ１としても知られている。ＬＩＬＲＢ２は、ＣＤ８５Ｄ、ＩＬＴ−４、ＬＩＲ−２、ＬＩＲ２、ＭＩＲ−１０、ＭＩＲ１０、及びＩＬＴ４としても知られている。
【０１４９】
ＨＬＡ−Ｇ分子を含む治療化合物を使用して、阻害性シグナルを、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、及びＬＩＬＲＢ２のいずれかを含む免疫細胞に、例えば、ＨＬＡ−Ｇ分子を含む多量体化治療化合物分子を用いて提供する、ゆえに部位特異的免疫特権を提供することができ。
【０１５０】
刺激性抗ＫＩＲ２ＤＬ４、抗ＬＩＬＲＢ１、または抗ＬＩＬＲＢ２抗体分子を含む治療化合物を使用して、阻害性シグナルを、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、及びＬＩＬＲＢ２のいずれかを含む免疫細胞に提供することができる。
【０１５１】
ＨＬＡ−Ｇは、多量体化したときにのみ、例えば、細胞の表面上に発現されるときまたはビーズの表面にコンジュゲートしたときにのみ、阻害性シグナルを送達する。実施形態では、治療化合物が溶液中で多量体化しない（または有意なレベルの阻害分子刺激化をもたらすほど十分に多量体化しない）ＨＬＡ−Ｇ分子を含む治療化合物が提供される。溶液中での多量体化を最小限に抑えるＨＬＡ−Ｇ分子の使用により、免疫細胞の全身刺激化及び望ましくない免疫抑制が最小限に抑えられるだろう。
【０１５２】
理論により束縛されることを望まないが、ＨＬＡ−Ｇは、多量体化しない限り、下方制御に有効ではないと考えられ、治療化合物の標的化部分を通した標的への結合は、ＩＣＩＭ結合実体を多量体化し、多量体化したＩＣＩＭ結合実体は、免疫細胞の表面上の阻害分子と結合し、これをクラスター化し、ゆえに、免疫細胞を下方制御する負のシグナルを媒介する。ゆえに、抗原提示細胞ならびに他の骨髄細胞、ＮＫ細胞及びＴ細胞を含む標的組織を損傷しようとする浸潤免疫細胞は下方制御される。
【０１５３】
ＨＬＡ−Ｇ分子は単量体の形態が望ましい場合に拮抗作用を最小限に抑えるが、ＬＩＲＬＢ１とＬＩＬＲＢ２の重複性は、単量体の拮抗作用があっても全身への影響を最小限に抑えるだろう。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＨＬＡ−Ｇ分子、例えば、Ｂ２Ｍ不含アイソフォーム（例えば、ＨＬＡ−Ｇ５）を含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含む、Ｃａｒｏｓｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１５，１２７：３３を参照されたい。Ｂ２Ｍ不含フォーマットでは、ＨＬＡ−Ｇは、ＬＩＬＲＢ２と優先的に結合する。
【０１５５】
ＨＬＡ−Ｇ分子の構築に好適な配列には、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｐ１７６９３．１ＲｅｃＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＨＬＡクラスＩ組織適合性抗原、アルファ鎖Ｇ；ＡｌｔＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＨＬＡ  Ｇ抗原；ＡｌｔＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＭＨＣクラスＩ抗原Ｇ；フラグ：前駆体、またはＭＶＶＭＡＰＲＴＬＦＬＬＬＳＧＡＬＴＬＴＥＴＷＡＧＳＨＳＭＲＹＦＳＡＡＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＭＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＳＡＣＰＲＭＥＰＲＡＰＷＶＥＱＥＧＰＥＹＷＥＥＥＴＲＮＴＫＡＨＡＱＴＤＲＭＮＬＱＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＳＳＨＴＬＱＷＭＩＧＣＤＬＧＳＤＧＲＬＬＲＧＹＥＱＹＡＹＤＧＫＤＹＬＡＬＮＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＴＡＡＱＩＳＫＲＫＣＥＡＡＮＶＡＥＱＲＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＨＲＹＬＥＮＧＫＥＭＬＱＲＡＤＰＰＫＴＨＶＴＨＨＰＶＦＤＹＥＡＴＬＲＣＷＡＬＧＦＹＰＡＥＩＩＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＶＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＥＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＥＰＬＭＬＲＷＫＱＳＳＬＰＴＩＰＩＭＧＩＶＡＧＬＶＶＬＡＡＶＶＴＧＡＡＶＡＡＶＬＷＲＫＫＳＳＤ（配列番号５）が含まれる。候補ＨＬＡ−Ｇ分子を、例えば、“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ＨＬＡ−Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”ＬｅＭａｏｕｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３Ｔｈｅ  ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ２７：３６４３に記載のものと類似の方法により、方法及び化合物における使用に関する適合性について検査することができる。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、対象に存在しない、実質的に低いレベルで存在するドナー抗原、例えば、表２からのドナー抗原と優先的に結合し、対象のドナー移植組織に局在化する標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、それは、他の組織と結合しない、または実質的に結合しない。いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＨＬＡ−Ａ２に対して特異的であり、ドナー同種移植片と特異的に結合するが、宿主組織と結合せず、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、またはＬＩＬＲＢ２と結合するＨＬＡ−Ｇ分子を含むＩＣＩＭ結合／調節部分と組み合わされる標的化部分を含むことができ、それにより治療化合物は、例えば、標的に結合したときに、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、またはＬＩＬＲＢ２を活性化する。治療化合物は、同種移植片を標的とし、同種移植片に局所免疫特権を提供する。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、組織特異的抗原、例えば、表３からの抗原と優先的に結合し、対象、例えば、自己免疫障害、例えば、表３からの自己免疫障害を有する対象の標的部位に局在化する、標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、それは、他の組織と結合しない、または実質的に結合しない。実施形態では、治療化合物は、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、またはＬＩＬＲＢ２と結合するＨＬＡ−Ｇ分子を含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含み、それにより治療化合物は、例えば、標的に結合したときに、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、またはＬＩＬＲＢ２を活性化する。治療化合物は、自己免疫攻撃の対象となる組織を標的とし、該組織に局所免疫特権を提供する。
【０１５８】
ＬＩＬＲＢ１にも結合できる安定した可溶性のＨＬＡ−Ｇ−Ｂ２Ｍ融合タンパク質を操作することはおそらく可能である。例えば、ＨＬＡ−Ｇの結晶構造は、ＨＬＡ−Ｇ／Ｂ２Ｍ単量体を使用して決定された（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ  ｅｔ  ａｌ．２００５ＰＮＡＳ１０２：３３６０）
【０１５９】
ＦＣＲＬファミリー
ＦＣＲＬ１〜６は、一般的に、Ｂ細胞活性化または機能を阻害する。これらの１型膜貫通糖タンパク質は、異なる組み合わせの５種の免疫グロブリン様ドメインから構成され、各タンパク質は、３〜９ドメインからなり、ＦＣＲＬタンパク質全部を通して保存される個々のドメインタイプはない。一般に、ＦＣＲ発現は、リンパ球に限定され、Ｂリンパ球にて主に発現する。一般的に、ＦＣＲＬは、Ｂ細胞の活性化を抑制するように機能する。
【０１６０】
ＩＣＩＭ結合／調節部分は、刺激性抗ＢＣＭＡ抗体分子を含むことができる。いくつかの実施形態では、治療化合物は、抗ＦＣＲＬ抗体分子及び抗Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）抗体分子を含む。理論により束縛されることを望まないが、両方の特異性の抗体分子を含む治療化合物は、ＦＣＲＬをＢＣＲに近接させ、ＢＣＲシグナル伝達を阻害すると考えられている。
【０１６１】
ブチロフィリン及びブチロフィリン様分子
エフェクター結合／調節部分は、ブチロフィリンのアゴニストまたはアンタゴニストを含むことができる。いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、刺激性のまたは機能性ＢＴＮ１Ａ１分子、ＢＴＮ２Ａ２分子、ＢＴＮＬ２分子、またはＢＴＮＬ１分子。
【０１６２】
機能性ＢＴＮＸｉ分子（ここでＸｉ＝１Ａ１、２Ａ２、Ｌ２またはＬ１）は、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の一部として、Ｔ細胞を阻害するのに十分なＢＴＮＸｉ配列を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＢＴＮＸｉ分子は、天然に生じるブチロフィリンまたはブチロフィリン様分子と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、拮抗性ＢＴＮＬ８分子。
【０１６４】
拮抗性ＢＴＮＬ８分子は、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の一部として、それが休止Ｔ細胞によるサイトカインの活性化、増殖、または分泌を阻害するのに十分なＢＴＮＬ８配列を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＢＴＮＬ８分子は、天然に生じるブチロフィリンと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
【０１６５】
ＩＩＣ結合／調節部分：免疫抑制性Ｔ細胞を動員するエフェクター結合／調節部分
いくつかの実施形態では、治療化合物は、部位特異的免疫特権を提供する標的化部分により媒介される部位で、免疫抑制細胞、例えば、免疫抑制性Ｔ細胞と結合する、これを活性化する、または保持するエフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＩＣ結合／調節部分を含む。ＩＩＣ結合／調節部分、例として、例えば、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む、抗体分子を含むＩＩＣ結合／調節部分は、免疫抑制細胞タイプ、例えば、Ｔｒｅｇ、例えば、Ｆｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇと結合する。臓器、組織または特異的細胞タイプ寛容は、標的臓器近位のＴｒｅｇの圧倒的な増加及び浸潤を伴う；実施形態では、本明細書に記載の方法及び化合物は、この生理学的状態を、人工的に再現し、模倣する。Ｔｒｅｇの蓄積の際に、免疫抑制性微小環境が作り出され、これは免疫系から関心対象の臓器を保護するように機能する。
【０１６６】
ＴＲＥＧ及びＴＧＦＢ標的化分子としてのＧＡＲＰ結合因子
ＧＡＲＰは、活性化Ｔｒｅｇの表面上に発現される潜在型ＴＧＦ−ベータに対する膜タンパク質受容体である（Ｔｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．２００９ＰＮＡＳ１０６：１３４４５及びＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００９ＰＮＡＳ１０６：１３４３９）。いくつかの実施形態では、治療化合物は、可溶性ＧＡＲＰ及びＧＡＲＰ発現細胞、例えば活性化ヒトＴｒｅｇの一方または両方と結合するＩＩＣ結合実体、ならびに関心対象の標的組織に対して治療化合物を標的とする標的化部分を含む。ＧＡＲＰ結合因子を含むＩＩＣ結合／調節部分は、例えば、抗ＧＡＲＰ抗体分子、例えば、抗ＧＡＲＰ  ｓｃＦｖドメインを含むＩＩＣ結合／調節部分を含む。理論により束縛されることを望まないが、ＧＡＲＰ結合因子を含む治療化合物は、ＧＡＲＰ発現Ｔｒｅｇの、治療化合物の標的化部分により標的とされる部位、例えば、移植片または臓器傷害の部位での蓄積に作用すると考えられている。再度、理論により束縛されることを望まないが、ＧＡＲＰ結合因子を含む治療化合物は、可溶性ＧＡＲＰの臓器傷害の部位での蓄積に作用することもできると考えられ、これは、ＴＧＦＢ１、免疫抑制性サイトカインと、局所様式で結合し、これを活性化する機能を果たすだろう（Ｆｒｉｄｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．２０１６  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ１１：ｅ０１５３２９０；ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５３２９０及びＨａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１３  Ｂｌｏｏｄ１５：１１８２）。ゆえに、ＧＡＲＰ結合因子を含むエフェクター結合／調節部分は、ＩＩＣ結合／調節部分またはＳＭ結合／調節部分のいずれとしても作用することができる。
【０１６７】
ＴＲＥＧ標的化及びＴエフェクター細胞サイレンシング分子としてのＣＴＬＡ４
いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、Ｔｒｅｇの表面上に発現されるＣＴＬＡ４と結合する、例えば、抗体分子、例えば、ｓｃＦｖドメインを含む。治療分子は、ＣＴＬＡ４＋Ｔｒｅｇを標的部位にて蓄積または保持し、局所免疫抑制の結果を伴う。
【０１６８】
Ｔｒｅｇ上でより高く発現するが、ＣＴＬＡ４は、活性化Ｔ細胞上でも発現する。エフェクター結合／調節部分、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体、または機能性抗ＣＴＬＡ４抗体を含む治療化合物は、ＣＴＬＡ４発現Ｔ細胞を下方制御することができる。ゆえに、ＣＴＬＡ４と結合するエフェクター結合／調節部分を含む治療化合物では、エフェクター部分は、ＩＣＩＭ結合／調節部分としても作用することができる。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４結合因子は、単量体フォーマットでは拮抗も刺激もせず、標的への結合の際にクラスター化または多量体化するときにのみ刺激する。
【０１７０】
理論により束縛されることを望まないが、治療化合物の、標的化部分を介した、標的への結合が、治療化合物の多量体化に作用すると考えられる。メモリー及び活性化Ｔ細胞の場合では、治療化合物のエフェクター結合／調節部分により結合されたＣＴＬＡ４は、クラスター形成し、ＣＴＬＡ４の結合による阻害性シグナルがメモリー及び活性化Ｔ細胞により発現される
【０１７１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ４結合因子は、単量体フォーマットでは拮抗も刺激もせず、標的への結合の際にクラスター化または多量体化するときにのみ刺激する。
【０１７２】
ＧＩＴＲ結合因子
ＧＩＴＲ（ＣＤ３５７）は、Ｔｒｅｇ上に存在する細胞表面マーカーである。ＧＩＴＲ−ＧＩＴＲＬ相互作用の遮断により、Ｔｒｅｇ機能は維持される。いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＧＩＴＲ発現Ｔｒｅｇ細胞と結合するＩＩＣ結合実体及び関心対象の標的組織に対して治療化合物を標的とする標的化部分を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、抗ＧＩＴＲ抗体分子、例えば、ＧＩＴＲのＧＩＴＲＬへの結合を阻害する抗ＧＩＴＲ抗体分子を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、抗ＧＩＴＲ抗体分子、ＧＩＴＲのＧＩＴＲＬへの結合を阻害する抗ＧＩＴＲ抗体分子、及びＰＤ−１アゴニストまたは本明細書に記載の他のエフェクターを含む。
【０１７５】
理論により束縛されることを望まないが、ＧＩＴＲ結合因子を含む治療化合物は、ＧＩＴＲ発現Ｔｒｅｇの、治療化合物の標的化部分により標的とされる部位、例えば、移植片または臓器傷害の部位での蓄積に作用すると考えられている。
【０１７６】
ブチロフィリン／ブチロフィリン様分子
エフェクター結合／調節部分は、刺激性のＢＴＮＬ２分子を含むことができる。理論により束縛されることを望まないが、刺激性のＢＮＬ２分子は、Ｔｒｅｇ細胞を誘導すると考えられている。
【０１７７】
刺激性のＢＴＮＬ２分子は、該用語を本明細書で使用する場合、治療化合物の一部として、Ｔｒｅｇ細胞を誘導するのに十分なＢＴＮＬ２配列を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＢＴＮＬ２分子は、天然に生じるブチロフィリンと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、エフェクター結合／調節部分は、拮抗性ＢＴＮＬ８分子。
【０１７９】
ＳＭ結合／調節部分を含む治療化合物：局所微小環境の操作
治療化合物は、例えば、標的の近くに、標的の免疫系による攻撃を阻害するまたは最小限に抑える物質を提供することにより、免疫抑制性局所微小環境を促進するエフェクター結合／調節部分を含むことができ、これは本明細書ではＳＭ結合／調節部分と称される。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、ＳＭ結合／調節部分は、標的の免疫系による攻撃を阻害するまたは最小限に抑える分子を含む（本明細書ではＳＭ結合／調節部分と称する）。いくつかの実施形態では、治療化合物は、免疫抑制機能を有する可溶性物質、例えば、内因性または外因性物質と結合し、これを蓄積させるＳＭ結合／調節部分を含む。いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＳＭ結合／調節部分、例えば、ＣＤ３９分子もしくはＣＤ７３分子またはアルカリホスファターゼ分子を含み、これは、免疫攻撃を促進する可溶性物質、典型的には及び内因性可溶性物質、例えば、ＣＤ３９分子もしくはアルカリホスファターゼ分子の場合はＡＴＰ、またはＣＤ７３分子の場合はＡＭＰと結合する、阻害する、隔離する、分解するまたはそうでなければ中和する。いくつかの実施形態では、治療化合物は、免疫抑制物質、例えば、免疫抑制性であるタンパク質のフラグメントを含むＳＭ結合／調節部分を含む。
【０１８１】
ドナー組織
本明細書に記載の治療化合物及び方法は、対象へのドナー組織の移植と併せて使用することができ、ドナー移植組織の拒絶反応を最小限に抑える、ドナー移植組織に対する免疫エフェクター細胞が媒介する損傷を最小限に抑える、ドナー移植組織の許容を延長する、またはドナー移植組織の機能性寿命を延長することができる。組織は、異種移植または同種移植組織であることができる。移植された組織は、臓器、例えば、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、胸腺、皮膚または肺の全部または一部を含むことができる。実施形態では、本明細書に記載の治療化合物は、全身免疫抑制の必要性を低下させる、または排除する。本明細書に記載の治療化合物及び方法は、ＧＶＨＤを処置するためにも使用することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、エフェクター結合／調節部分として、ＰＤ−Ｌ１分子を含む治療化合物でコーティングされる。
【０１８２】
表２は、移植適応症に関する標的分子を提供する。標的分子は、標的化部分が結合する標的である。本明細書の他の部分で考察するように、いくつかの実施形態では、標的化部分は、ドナー組織上に存在し、対象（レシピエント）により発現されないまたは異なる（例えば、低下したまたは実質的に低下した）レベルで発現される対立遺伝子の産物と結合するように選択される。
【表２】
2020513855.tif 000004
【０１８３】
自己免疫障害
本明細書に記載の治療化合物及び方法を使用して、望ましくない自己免疫応答、例えば、１型糖尿病、多発性硬化症、心筋炎、白斑、脱毛症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ、例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）、シェーグレン症候群、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、強皮症／全身性硬化症（ＳＳｃ）または関節リウマチにおける自己免疫応答を有するまたはこれを有するリスクがある対象を処置することができる。いくつかの実施形態では、処置は、自己免疫攻撃を受けている、またはそのリスクがある対象組織の拒絶反応を最小限に抑える、該対象組織に対する免疫エフェクター細胞が媒介する損傷を最小限に抑える、該対象組織の寿命を延長する。表３は、いくつかの自己免疫適応症に関する標的分子及び臓器／細胞タイプを提供する。標的分子は、標的化部分が結合する標的である。
【表３】
2020513855.tif 000005
【表４】
2020513855.tif 000006
【０１８４】
本明細書に記載の化合物を用いて処置することができる自己免疫障害及び疾患の他の例としては、心筋炎、心筋梗塞後症候群症候群、心膜切開後症候群、亜急性細菌性心内膜炎、抗糸球体基底膜腎炎、間質性膀胱炎、ループス腎炎、膜性糸球体腎症、慢性腎臓疾患（「ＣＫＤ」）、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、抗合成酵素症候群、円形脱毛症、自己免疫血管浮腫、自己免疫プロゲステロン皮膚炎、自己免疫蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、瘢痕性類天疱瘡、疱疹状皮膚炎、円板状エリテマトーデス、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、妊娠性類天疱瘡、化膿性汗腺炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、リニアＩｇＡ病（ｌａｄ）、モルフェア、尋常性天疱瘡、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、ムッハ・ハーベルマン病、乾癬、全身強皮症、白斑、アジソン病、多腺性自己免疫症候群（ＡＰＳ）１型、多腺性自己免疫症候群（ＡＰＳ）２型、多腺性自己免疫症候群（ＡＰＳ）３型、自己免疫膵炎（ＡＩＰ）、１型糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、オード甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫卵巣炎、子宮内膜症、自己免疫精巣炎、シェーグレン症候群、自己免疫腸疾患、小児脂肪便症、クローン病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性大腸炎、血小板低下症、有痛、脂肪症、成人発症スティル、病、強直性、脊椎炎、クレスト症候群、薬剤誘発性ループス、付着部炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、フェルティ症候群、ＩｇＧ４関連疾患、若年性、関節炎、ライム病（慢性）、複合性結合織疾患（ＭＣＴＤ）、回帰性リウマチ、パリーロムベルグ症候群、パーソネイジ・ターナー症候群、乾癬性関節炎、反応性関節炎、再発性多発性軟骨炎、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュニッツラー症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、未分化型結合組織病（ＵＣＴＤ）、皮膚筋炎、筋線維痛、封入体筋炎、筋炎、重症筋無力症、神経性筋強直症、傍腫瘍性小脳変性症、多発性筋炎、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、急性運動性軸索型ニューロパチー、抗Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸塩（抗ＮＭＤＡ）受容体脳炎、バロー同心円性硬化症、ビッカースタッフ脳炎、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、ギランバレー症候群、橋本脳症、特発性炎症性脱髄性疾患、ランバート・イートン型筋無力症候群、多発性硬化症、オシュトラン症候群、レンサ球菌感染性小児自己免疫神経精神障害（ＰＡＮＤＡＳ）、進行性炎症性ニューロパチー、下肢静止不能症候群、スティッフパーソン症候群、シデナム舞踏病、横断性脊髄炎、自己免疫網膜症、自己免疫ぶどう膜炎、コーガン症候群、グレーブス眼症、中間部ぶどう膜炎、木質性結膜炎、モーレン潰瘍、視神経脊髄炎、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、強膜炎、スザック症候群、交感性眼炎、トロサ−ハント症候群、自己免疫内耳疾患（ＡＩＥＤ）、メニエール病、ベーチェット病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）、巨細胞性動脈炎、多発血管炎性肉芽腫症（Ｇｒａｎｕｌｍａｔｏｓｉｓ）（ＧＰＡ）、ＩｇＡ血管炎（ＩｇＡＶ）、川崎病、白血球破砕性血管炎、ループス血管炎、リウマチ性血管炎、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、結節性多発動脈炎（ＰＡＮ）、リウマチ性多発筋痛症、血管炎、原発性免疫不全、などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８５】
本明細書に記載の化合物を用いて処置することができる潜在的な自己免疫障害及び疾患、ならびに自己免疫併存症の他の例としては、慢性疲労症候群、複合性局所疼痛症候群、好酸球性食道炎、胃炎（Ｇａｓｔｉｒｔｉｓ）、間質性肺疾患、ＰＯＥＭＳ症候群、レイノー現象、原発性免疫不全症、壊疽性膿皮症、無ガンマグロブリン血症、アニロイドーシス（ａｎｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）、筋萎縮性側索硬化症（Ａｎｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、抗尿細管基底膜腎炎、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性末梢ニューロパチー、ブラウ症候群、キャッスルマン病、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患、慢性再発性多発性骨髄炎、補体成分２欠乏症、接触性皮膚炎、クッシング症候群、皮膚白血球破砕性血管炎、デゴス病（Ｄｅｇｏ’ｄｅｉａｓｅ）、湿疹、好酸球性胃腸炎、好酸球性肺炎、胎児赤芽球症（Ｅｒｙｔｈｒｏｂｌａｓｔｏｓｉｓ  ｆｅｔａｌｓｉｓ）、進行性骨化性線維異形成症（Ｆｉｂｒｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  ｏｓｓｉｆｉｃａｎｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ）、消化管類天疱瘡、低ガンマグロブリン血症、特発性巨細胞心筋炎、特発性肺線維症、ＩｇＡ腎症、免疫制御性リポタンパク質、ＩＰＥＸ症候群、木質性結膜炎（Ｌｉｇｅｎｏｕｓ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ）、マジード症候群、ナルコレプシー、ラスムッセン脳炎、統合失調症、血清病、脊椎関節症（Ｓｐｏｎｄｙｌｏａｔｈｒｏｐａｔｈｙ）、スウィート症候群、高安動脈炎、等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、自己免疫障害は、尋常性天疱瘡、天疱瘡を含まない。いくつかの実施形態では、自己免疫障害は、落葉状天疱瘡を含まない。いくつかの実施形態では、自己免疫障害は、水疱性類天疱瘡を含まない。いくつかの実施形態では、自己免疫障害は、グッドパスチャー疾患を含まない。いくつかの実施形態では、自己免疫障害は、乾癬を含まない。いくつかの実施形態では、自己免疫障害は、皮膚障害を含まない。いくつかの実施形態では、該障害は、新生物障害、例えば、がんを含まない。
【０１８７】
治療化合物
治療化合物は、エフェクター結合／調節部分と機能的に関連する特異的標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、特異的標的化部分及びエフェクター結合／調節部分は、互いに共有結合または非共有結合により連結している、例えば、一方を他方に共有結合または非共有結合的に直接連結している。他の実施形態では、特異的標的化部分及びエフェクター結合／調節部分は、例えば、共有結合的にまたは非共有結合的に、リンカー部分を通して連結している。例えば、融合ポリペプチドの場合、特異的標的化部分を含むポリペプチド配列及びポリペプチド配列は、互いに直接連結するかまたは１つもしくは複数のリンカー配列を通して連結することができる。いくつかの実施形態では、リンカー部分は、ポリペプチドを含む。リンカーは、しかしながら、ポリペプチドに限られない。いくつかの実施形態では、リンカー部分は、他の骨格、例えば、非ペプチドポリマー、例えば、ＰＥＧポリマーを含む。いくつかの実施形態では、リンカー部分は、粒子、例えば、ナノ粒子、例えば、ポリマーナノ粒子を含むことができる。いくつかの実施形態では、リンカー部分は、分岐状分子、またはデンドリマーを含むことができる。しかしながら、実施形態では、標的結合の非存在下でクラスター形成をもたらす、エフェクター結合／調節部分がＩＣＩＭ結合／調節部分（エフェクター様ＰＤ−１と結合する）を含む構造は、それらが標的結合の非存在下でクラスター形成を引き起こす可能性があるために回避されるべきである。ゆえに、実施形態では、治療化合物は、例えば、ＩＣＩＭのコピーが、標的結合の非存在下でのクラスター形成が最小限に抑えられるまたは実質的に排除される、もしくは排除されるほど十分に制限される、あるいは実質的な全身免疫抑制が生じないほど十分に最小限に抑えられる構造を有する。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、エフェクター結合／調節部分に共有結合的にまたは非共有結合的にコンジュゲートした特異的標的化部分を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、治療分子は、エフェクター結合／調節部分に、例えば、直接的にまたは１つもしくは複数のアミノ酸残基を含む連結部分を通して、融合した特異的標的化部分を有して含む融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、治療分子は、エフェクター結合／調節部分に、非共有結合または共有結合、例えば、ペプチド結合以外の共有結合、例えば、スルフヒドリル結合により、連結した特異的標的化部分を含むポリペプチドを含む。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、
１．ａ）標的特異的結合ポリペプチドを含む特異的標的化部分；
１．ｂ）標的リガンド結合分子を含む特異的標的化部分；
１．ｃ）抗体分子を含む特異的標的化部分；
１．ｄ）一本鎖抗体分子、例えば、ｓｃＦｖドメインを含む特異的標的化部分；または
１．ｅ）抗体分子の軽鎖もしくは重鎖可変領域の第一を含む特異的標的化部分、ここで他の可変領域は、第一と共有結合的にまたは非共有結合的に会合する；
及び
２．ａ）エフェクター特異的結合ポリペプチドを含むエフェクター結合／調節部分；
２．ｂ）エフェクターリガンド結合分子を含むエフェクター結合／調節部分；
２．ｃ）抗体分子を含むエフェクター結合／調節部分；
２．ｄ）一本鎖抗体分子、例えば、ｓｃＦｖドメインを含むエフェクター結合／調節部分；または
２．ｅ）抗体分子の軽鎖もしくは重鎖可変領域の第一を含むエフェクター結合／調節部分、ここで他の可変領域は、共有結合的にまたは非共有結合的に第一と会合している、
を含むポリペプチド、例えば、融合ポリペプチドを含む。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ａ及び２．ａを含む。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ａ及び２．ｂを含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ａ及び２．ｃを含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ａ及び２．ｄを含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ａ及び２．ｅを含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｂ及び２．ａを含む。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｂ及び２．ｂを含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｂ及び２．ｃを含む。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｂ及び２．ｄを含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｂ及び２．ｅを含む。
【０２００】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｃ及び２．ａを含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｃ及び２．ｂを含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｃ及び２．ｃを含む。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｃ及び２．ｄを含む。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｃ及び２．ｅを含む。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｄ及び２．ａを含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｄ及び２．ｂを含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｄ及び２．ｃを含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｄ及び２．ｄを含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｄ及び２．ｅを含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｅ及び２．ａを含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｅ及び２．ｂを含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｅ及び２．ｃを含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｅ及び２．ｄを含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、１．ｅ及び２．ｅを含む。
【０２１５】
本明細書に開示の治療化合物は、例えば、複数のエフェクター結合／調節及び特異的標的化部分を含むことができる。任意の好適なリンカーまたはプラットフォームを使用して、複数の部分を提示することができる。リンカーは、典型的には、１つまたは複数のエフェクター結合／調節及び標的化部分に連結または融合される。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、２つ（またはそれ以上）のリンカーは、共有結合的にまたは非共有結合的に、のいずれかで会合して、例えば、ヘテロまたはホモ二量体治療化合物を形成する。例えば、リンカーは、Ｆｃ領域及び互いに会合する２つのＦｃ領域を含むことができる。２つのリンカー領域を含む治療化合物のいくつかの実施形態では、リンカー領域は、例えば、２つの同一のＦｃ領域として自己会合することができる。２つのリンカー領域を含む治療化合物のいくつかの実施形態では、リンカー領域は、自己会合できないまたは実質的な自己会合できない、例えば、２つのＦｃ領域は、ノブアンドホール対のメンバーであることができる。
【０２１７】
治療化合物の非限定的例示的な構成は、以下（例えば、ＮからＣ末端の順番で）、
Ｒ１−−−リンカー領域Ａ−Ｒ２
Ｒ３−−−リンカー領域Ｂ−−−Ｒ４を含み、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分；特異的標的化部分を含む；または存在せず；
リンカー領域Ａ及びリンカーＢは、互いに会合することができる部分を含み、例えば、リンカーＡ及びリンカーＢは、それぞれＦｃ部分を含む、ただしエフェクター結合／調節部分及び特異的標的化部分が存在することを条件とする。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１は、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分を含む、または存在しない；
Ｒ２は、特異的標的化部分を含む、または存在しない；
Ｒ３は、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分を含む、または存在しない；
Ｒ４は、特異的標的化部分を含む、または存在しない；
リンカー領域Ａ及びリンカーＢは、互いに会合することができる部分を含み、例えば、リンカーＡ及びリンカーＢは、それぞれＦｃ部分を含む、ただしＲ１またはＲ３のうちの一方が存在する及びＲ２またはＲ４のうちの一方が存在することを条件とする。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１は、特異的標的化部分を含む、または存在しない；
Ｒ２は、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分を含む、または存在しない；
Ｒ３は、特異的標的化部分を含む、または存在しない；
Ｒ４は、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分を含む、または存在しない；
リンカー領域Ａ及びリンカーＢは、互いに会合することができる部分を含み、例えば、リンカーＡ及びリンカーＢは、それぞれＦｃ部分を含む、ただしＲ１またはＲ３のうちの一方が存在する及びＲ２またはＲ４のうちの一方が存在することを条件とする。
【０２２０】
非限定的な例には、限定されないが、以下を含む。
【表５】
2020513855.tif 000007
【表６】
2020513855.tif 000008
【０２２１】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞もしくはＢ細胞上の阻害性受容体、例えば、ＰＤ−Ｌ１分子もしくは機能性抗ＰＤ−１抗体分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を活性化するエフェクター結合調節部分；特異的標的化部分を含む；または存在しない；
ただし、エフェクター結合部分及び特異的標的化部分が存在することを条件とする。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分）を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、独立して、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＢ細胞上の阻害性受容体、例えば、ＰＤ−Ｌ１分子または機能性抗ＰＤ−１抗体分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を活性化するエフェクター結合調節部分を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分）を含む。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、独立して、機能性抗ＰＤ−１抗体分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分）を含む。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、独立して、特異的標的化部分、例えば、抗組織抗原抗体を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、機能性抗ＰＤ−１抗体分子（ＰＤ−１のアゴニスト）、例えば、ｓｃＦｖ分子を含む。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分）を含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、独立して、ＰＤ−Ｌ１分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含み；
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分）を含む。
【０２３０】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、独立して、特異的標的化部分、例えば、抗組織抗原抗体を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、ＰＤ−Ｌ１分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分）を含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、ＡＴＰもしくはＡＭＰなどの免疫応答を調節する物質、例えば、可溶性分子を、調節する、例えば、これと結合し、これを阻害する、隔離する、分解するもしくはそうでなければ中和するＳＭ結合／調節部分、例えば、ＣＤ３９分子もしくはＣＤ７３分子；特異的標的化部分を含む；または存在しない；ただし、ＳＭ結合／調節部分及び特異的標的化部分が存在することを条件とする。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２３４】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、独立して、ＡＴＰもしくはＡＭＰなどの免疫応答を調節する物質、例えば、可溶性分子を、調節する、例えば、これと結合し、これを阻害する、隔離する、分解するもしくはそうでなければ中和するＳＭ結合／調節部分、例えば、ＣＤ３９分子もしくはＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、独立して、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、それぞれ、ＣＤ３９分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む；
【０２３９】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、それぞれ、ＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３のうちの一方は、ＣＤ３９分子を含み、他方は、ＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、ＨＬＡ−Ｇ分子；特異的標的化部分を含む；または存在しない；
ただし、ＨＬＡ−Ｇ分子及び特異的標的化部分が存在することを条件とする。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、それぞれ、ＨＬＧ−Ａ分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、それぞれ、刺激性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、それぞれ、刺激性抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、それぞれ、刺激性抗ＬＩＬＲＢ２抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、それぞれ、刺激性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３のうちの一方が、拮抗性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子、刺激性抗ＫＲ２ＤＬ４抗体分子、及び刺激性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子から選択される第一の部分を含み、他方がこれらから選択される異なる部分を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３のうちの一方が、拮抗性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み、他方が、刺激性抗ＫＲ２ＤＬ４抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３のうちの一方が、拮抗性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み、他方が、刺激性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、Ｂ細胞上の阻害性受容体、例えば、抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子を活性化するエフェクター結合調節部分；特異的標的化部分を含む；または存在しない；
ただし、エフェクター結合部分及び特異的標的化部分が存在することを条件とする。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２６４】
実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は、ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６に指向する抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、それぞれ、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２６７】
実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は、ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６に指向する抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ３は、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対する抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４は、それぞれ、抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、ｓｃＦｖ分子を含む。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２７０】
実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は、ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６に指向する抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つが、抗ＢＣＲ抗体分子、例えば、拮抗性抗ＢＣＲ抗体分子を含み、１つが抗ＦＣＲＬ抗体分子を含み、１つが特異的標的化部分を含む。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は、ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６に指向する抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つが、抗ＢＣＲ抗体分子、例えば、拮抗性抗ＢＣＲ抗体分子及び抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む二重特異性抗体分子を含み、１つが特異的標的化部分を含む；
【０２７５】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０２７６】
実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は、ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６に指向する抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、
ｉ）Ｔ細胞活性、拡大、もしくは機能を最小化もしくは阻害する、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、ＩＣＳＭ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分（Ｔ細胞エフェクター結合／調節部分）；
ｉｉ）Ｂ細胞活性、拡大、もしくは機能を最小化もしくは阻害するエフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、ＩＣＳＭ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分（Ｂ細胞エフェクター結合／調節部分）；
ｉｉｉ）特異的標的化部分を含む；または
ｉｖ）存在しない；
ただし、Ｔ細胞エフェクター結合／調節部分、Ｂ細胞エフェクター結合／調節部分、及び特異的標的化部分が存在することを条件とする。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分）を含む。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、刺激性抗ＰＤ−１抗体を含み、１つがＨＬＡ−Ｇ分子を含む。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、ＳＭ結合／調節部分、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、制御性免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇ細胞またはＢｒｅｇ細胞と結合し、これを活性化または維持する実体を含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、刺激性抗ＰＤ−１抗体を含む、または１つがＨＬＡ−Ｇ分子を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、刺激性抗ＰＤ−１抗体を含み、１つがＨＬＡ−Ｇ分子を含み、１つがＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含む。
【０２８２】
リンカー領域
本明細書の他の箇所に考察するように、特異的標的化及びエフェクター結合／調節部分は、リンカー領域により連結されることができる。本明細書に記載の任意のリンカー領域を、リンカーとして使用することができる。例えば、リンカー領域Ａ及びＢは、Ｆｃ領域を含むことができる。いくつかの実施形態では、治療化合物は、自己会合することができるリンカー領域を含む。いくつかの実施形態では、治療化合物は、自己会合を最小限に抑える部分を有するリンカー領域を含み、典型的にはリンカー領域Ａ及びリンカー領域Ｂは、ヘテロ二量体である。リンカーは、グリシン／セリンリンカーも含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つまたは複数のＧＧＧＧＳ（配列番号６）の反復を含むことができる。いくつかの実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、または５反復を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８）を含む。これらのリンカーは、本明細書に提供する治療化合物または組成物のいずれにおいても使用することができる。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ポリペプチドである治療化合物を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端で、ＩｇＧ  Ｆｃ骨格のＣ末端上のｓｃＦｖと融合したＩｇＧ１Ｆｃ骨格上のＦ（ａｂ’）２から構成される抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ  Ｆｃ骨格は、ＩｇＧ１Ｆｃ骨格である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１骨格は、ＩｇＧ４骨格、ＩｇＧ２骨格、または他の同様のＩｇＧ骨格と置き換えられる。本段落に記載されるＩｇＧ骨格は、Ｆｃ領域が、本治療化合物の一部であると称される場合に本出願全体を通して使用することができる。ゆえに、いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１Ｆｃ骨格上のＦ（ａｂ’）２から構成される抗体は、ＩｇＧ１Ｆｃ上の抗ＭＡｄＣＡＭ抗体もしくは抗ＰＤ−１抗体または本明細書に提供する任意の他の標的化部分またはエフェクター結合／調節部分であることができる。いくつかの実施形態では、Ｃ末端に融合したｓｃＦＶセグメントは、Ｎ末端領域が抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である場合、抗ＰＤ−１抗体であり得る、またはＮ末端領域が抗ＰＤ−１抗体抗である場合、ＭＡｄＣＡＭ抗体であり得る。この非限定的な例では、Ｎ末端は、本明細書に提供されるもののいずれか１つなどの標的化部分であることができ、Ｃ末端は、本明細書に提供されるもののいずれかなどのエフェクター結合／調節部分であることができる。あるいは、いくつかの実施形態では、Ｎ末端は、本明細書に提供されるもののいずれか１つなどのエフェクター結合／調節部分であることができ、Ｃ末端は、本明細書に提供されるもののいずれかなどの標的化部分であることができる。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、Ｎ末端は、本明細書に提供されるもののいずれか１つなどの標的化部分であることができ、Ｃ末端は、本明細書に提供されるもののいずれかなどのエフェクター結合／調節部分であることができる。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、ホモ二量体形成する２つのポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドのＮ末端は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメイン（例えば、ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメイン）に融合しているエフェクター結合／調節部分を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインのＣ末端は、標的化部分に融合している別のリンカーである。ゆえに、いくつかの実施形態では、分子は、Ｒ１−リンカーＡ−Ｆｃ領域−リンカーＢ−Ｒ２の式を使用して表すことができ、式中、Ｒ１は、エフェクター結合／調節部分であることができ、Ｒ２は、標的化部分であり、リンカーＡ及びリンカーＢは、独立して、本明細書に提供するリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカー１及びリンカー２は、異なる。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、分子は、Ｒ１−リンカーＡ−Ｆｃ領域−リンカーＢ−Ｒ２の式を使用して表すことができ、式中、Ｒ１は、標的化部分があることができ、Ｒ２は、エフェクター結合／調節部分であり、リンカーＡ及びリンカーＢは、独立して、本明細書に提供するリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、異なる。リンカーは、本明細書に提供する非限定的な例から選出されることができる。いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｆ（ａｂ’）２及びｓｃＦＶ抗体ドメインから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、異なる抗体ドメインである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、ＶＬ−ＶＨドメイン配向にある。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、以下：
鎖１：ｎｔ−ＶＨ１−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３−リンカーＡ−ｓｃＦｖ［ＶＬ２−リンカーＢ−ＶＨ２］−ｃｔ
鎖２：ｎｔ−ＶＨ１−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３−リンカーＡ−ｓｃＦｖ［ＶＬ２−リンカーＢ−ＶＨ２］−ｃｔ
鎖３：ｎｔ−ＶＬ１−ＣＬ−ｃｔ
鎖４：ｎｔ−ＶＬ１−ＣＬ−ｃｔ、
を含む４本のポリペプチド鎖から構成され、
式中、鎖１及び２は、互いに同一であり、鎖３及び４は、互いに同一であり、
式中、鎖１は、鎖２とホモ二量体を形成し；鎖３及び４は、鎖１及び鎖２と会合する。つまり、各軽鎖が各重鎖と会合するとき、ＶＬ１はＶＨ１と会合し、ＣＬはＣＨ１と会合して、２つの機能性Ｆａｂユニットを形成する。いずれの特定の理論にも束縛されないが、各ｓｃＦｖユニットは、ＶＬ２及びＶＨ２が本明細書に提供するリンカー（例えば、ＧＧＧＧＳＧ（配列番号６）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７）でタンデムにて共有結合的に連結するために、本質的に機能性である。リンカーＡ及びリンカーＢの配列は、互いに独立しており、同一または異なる場合があり、本出願を通して別様に記載されている。ゆえに、いくつかの実施形態では、リンカーＡは、ＧＧＧＧＳ（配列番号６）ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーＢは、ＧＧＧＧＳ（配列番号６）ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９）を含む。ｓｃＦｖは、ＮＴ−ＶＨ２−ＶＬ２−ＣＴまたはＮＴ−ＶＬ２−ＶＨ２−ＣＴ配向に配置されてよい。ＮＴまたはｎｔは、タンパク質のＮ末端を表し、ＣＴまたはｃｔは、タンパク質のＣ末端を表す。ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３は、ＩｇＧ  Ｆｃ領域からのドメインであり、ＣＬは、定常軽鎖を表し、これは、カッパまたはラムダファミリー軽鎖のいずれかであることができる。他の定義は、当該技術分野で通常使用される方法を表す。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１ドメインは、エフェクター分子に由来し、ＶＨ２及びＶＬ２ドメインは、標的化部分に由来する。いくつかの実施形態ではＶＨ１及びＶＬ１ドメインは、標的化部分に由来し、ＶＨ２及びＶＬ２ドメインは、エフェクター結合／調節部分に由来する。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１ドメインは、抗ＰＤ−１抗体に由来し、ＶＨ２及びＶＬ２ドメインは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１ドメインは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体に由来し、ＶＨ２及びＶＬ２ドメインは、抗ＰＤ−１抗体に由来する。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、リンカーＡは、１、２、３、４、または５ＧＧＧＧＳ（配列番号６）反復を含む。いくつかの実施形態では、リンカーＢは、１、２、３、４、または５ＧＧＧＧＳ反復を含む。誤解を避けるために、リンカーＡ及びリンカーＢの配列は、本出願全体を通して使用され、互いに独立している。それゆえ、いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、同一または異なる場合がある。いくつかの実施形態では、リンカーＡは、ＧＧＧＧＳ（配列番号６）ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーＢは、ＧＧＧＧＳ（配列番号６）ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号９）を含む。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、軽鎖及び重鎖を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖及び重鎖は、Ｎ末端で標的化部分のＶＨドメインから開始し、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１ドメインが続き、これはヒトＩｇＧ１のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２−ＣＨ３）に融合する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＣ末端は、本明細書に提供するリンカー、例えば限定されないが、ＧＧＧＧＳ（配列番号６）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号８）に融合している。次いで、リンカーは本明細書に提供するエフェクター部分のいずれか１つなどのエフェクター結合／調節部分に融合することができる。ポリペプチドは、ホモ二量体形成することができるが、それはなぜなら、重鎖ホモ二量体化を通して、２つのエフェクター部分、例えば２つの抗ＰＤ−１抗体を有する治療化合物がもたらされるからである。この配向では、標的化部分は、ＩｇＧフォーマットであり、それぞれが標的化部分の結合パートナーを認識する２つのＦａｂアームがある、例えば、ＭＡｄＣＡＭは、抗ＭＡｄＣＡＭ標的化部分により結合される。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、治療化合物が、Ｆｃ部分を含む場合、Ｆｃドメイン、（部分）は、Ｆｃ領域を「エフェクターレス」にする突然変異を有し、ＦｃＲと結合することができない。Ｆｃ領域をエフェクターレスにする突然変異は公知である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域内の突然変異は、公知の番号付けシステムに従い、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３６Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｌ２３５Ｆ、Ｌ２３６Ｅ、Ｎ２９７、Ｐ３３１Ｓ、またはその任意の組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ突然変異は、突然変異をＬ２３５及び／またはＬ２３６及び／またはＧ２３７にて含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ突然変異は、Ｌ２３５Ａ及び／またはＬ２３６Ａ突然変異を含み、これはと称される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ突然変異は、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３６Ａ、及びＧ２３７Ａ突然変異を含む。
【０２９３】
リンカー領域ポリペプチド、治療用ペプチド、及びポリペプチド（例えば、治療化合物）をコードする核酸、該核酸配列を含むベクター、及び該核酸またはベクターを含む細胞を本明細書に開示する。
【０２９４】
治療化合物は、複数の特異的標的化部分を含むことができる。いくつかの実施形態では、治療化合物は、複数の１つの特異的標的化部分、ドナー特異的標的化部分の複数のコピーまたは複数の組織特異的標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、治療化合物は、第一の及び第二のドナー特異的標的化部分、例えば、第一のドナー標的に対して特異的な第一のドナー特異的標的化部分及び第二のドナー標的に対して特異的な第二のドナー特異的標的化部分を含み、例えば、第一の及び第二の標的は、同じドナー組織上で見出される。いくつかの実施形態では、治療化合物は、例えば、組織特異的標的のための第一の特異的標的化部分及び第二の標的のための第二の特異的標的化部分を含み、例えば、第一の及び第二の標的は、同じまたは異なる標的組織上で見出される、
【０２９５】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、それぞれがＩＣＩＭ結合／調節部分を含む複数のエフェクター結合／調節部分を含み、ＩＣＩＭ結合／調節部分の数は、（標的結合の非存在下で）免疫細胞上のＩＣＩＭ結合／調節部分のリガンドのクラスター形成が最小限に抑えられて、例えば、標的への治療化合物の結合の非存在下での免疫細胞の全身刺激を回避するように、十分に少ない。
【０２９６】
参照由来のポリペプチド、例えば、ヒトポリペプチド
いくつかの実施形態では、治療分子の構成要素は、参照分子に由来するまたはこれをベースとし、例えば、ヒトにおいて使用するための治療分子の場合、天然に生じるヒトポリペプチドに由来する。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ３９分子、ＣＤ７３分子、細胞表面分子結合因子、ドナー特異的標的化部分、エフェクターリガンド結合分子、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子、阻害分子カウンターリガンド分子、ＳＭ結合／調節部分、特異的標的化部分、標的リガンド結合分子、または組織特異的標的化部分の全部または一部が、天然に生じるヒトポリペプチドをベースとするまたはこれに由来することができる。例えば、ＰＤ−Ｌ１分子は、ヒトＰＤ−Ｌ１配列をベースとするまたはこれに由来することができる。
【０２９７】
いくつかの実施形態では、治療化合物構成要素、例えば、ＰＤ−Ｌ１分子は、
ａ）例えば、ヒトポリペプチドの天然に生じる形態の、活性部分の全部もしくは一部を含む；
ｂ）例えば、データベース、例えば、２０１７年１月１１日のＧｅｎＢａｎｋデータベースに現れる配列を有するヒトポリペプチド、疾患状態と関連しないヒトポリペプチドの天然に生じる形態の、活性部分の全部もしくは一部を含む；
ｃ）ａ）もしくはｂ）の配列から１、２、３、４、５、１０、２０、もしくは３０個以下のアミノ酸残基で異なる配列を有するヒトポリペプチドを含む；
ｄ）ａ）もしくはｂ）の配列から１、２、３、４、５  １０、２０、もしくは３０％以下のそのアミノ酸残基で異なる配列を有するヒトポリペプチドを含む；
ｅ）ａ）もしくはｂ）の配列から実質的に異ならない配列を有するヒトポリペプチドを含む；または
ｆ）ａ）もしくはｂ）の配列を有するヒトポリペプチドから、生物学的活性、例えば、免疫応答を亢進もしくは阻害する能力において、実質的に異ならないｃ）、ｄ）、もしくはｅ）の配列を有するヒトポリペプチドを含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、治療化合物は、複数のエフェクター結合／調節部分を含むことができる。例えば、治療化合物は、
（ａ）ＩＣＩＭ結合／調節部分；（ｂ）ＩＩＣ結合／調節部分；または（ｃ）ＳＭ結合／調節部分から選択される２つ以上を含むことができる。いくつかの実施形態では、例えば、治療化合物は、複数、例えば、２つの、ＩＣＩＭ結合／調節部分（これらは同一であるかまたは異なる）；例として、ＰＤ−１を活性化するもしくは刺激する２つ；複数、例えば、２つの、ＩＩＣ結合／調節部分；（これらは同一であるかまたは異なる）；または複数、例えば、２つの、ＳＭ結合／調節部分（これらは同一であるかまたは異なる）を含むことができる。いくつかの実施形態では、治療化合物は、ＩＣＩＭ結合／調節部分及びＩＩＣ結合／調節部分；ＩＣＩＭ結合／調節部分及びＳＭ結合／調節部分；ＩＩＣ結合／調節部分及びＳＭ結合／調節部分を含むことができる。いくつかの実施形態では、治療化合物は、複数の標的化部分を含む。いくつかの実施形態では、標的化部分は、同一であるかまたは異なることができる。
【０２９９】
医薬組成物及びキット
別の態様では、本実施形態は、薬学的に許容され得る担体と共に製剤化された本明細書に記載の治療化合物を含む組成物、例えば、薬学的に許容され得る組成物を提供する。本明細書で用いる場合、「薬学的に許容され得る担体」には、生理的に適合性であるありとあらゆる溶媒、分散媒体、等張剤、及び吸収遅延剤などが含まれる。
【０３００】
担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、直腸、局所、眼、局所性、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）にとって好適であり得る。本明細書で用いる場合、「担体」という用語は、化合物と共に投与される、希釈剤、補助剤、または賦形剤を意味する。いくつかの実施形態では、薬学的担体は、液体、例えば水及び油であることもでき、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等を含む。薬学的担体は、食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、尿素、等であることもできる。加えて、補助剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤、着色剤を使用することができる。担体は、本明細書に提供する治療化合物を含む医薬組成物において使用することができる。
【０３０１】
本明細書に提供する実施形態の組成物及び化合物は、多様な剤形であってよい。これらには、例えば、液体、半固体、及び固体投与剤形、例えば液体溶液（例えば、注射可能及び注入可能溶液）、分散剤または懸濁剤、リポソーム及び坐剤が含まれる。好ましい剤形は、意図される投与様式及び治療用途に依存する。典型的な組成物は、注射可能または注入可能溶液の剤形である。いくつかの実施形態では、投与様式は非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。いくつかの実施形態では、治療分子は、静脈内注入または注射により投与される。別の実施形態では、治療分子は、筋肉内または皮下注射により投与される。別の実施形態では、治療分子は、局所的に、例えば、注射により、または局所適用により標的部位に、投与される。
【０３０２】
本明細書で用いる場合、「非経口投与」及び「非経口的に投与される」という語句は、通常、注射による、腸及び局所性投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊椎内、硬膜外、及び胸骨内注射及び注入を含むがこれらに限定されない。
【０３０３】
治療組成物は典型的に、製造及び保存条件下で無菌かつ安定しているべきである。組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散剤、リポソーム、または高い治療分子濃度にとって適した他の規則正しい構造に製剤化することができる。滅菌注射可能溶液は、活性化合物（すなわち、治療分子）を必要量で、上記で列挙した成分の１つまたは組み合せと共に適切な溶媒に組み入れた後、必要に応じて、濾過滅菌することによって調製することができる。一般的に、分散剤は、基本の分散媒体と、上記で列挙した成分からの必要な他の成分とを含有する滅菌ビヒクルに活性化合物を組み入れることによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め濾過滅菌したその溶液から、活性成分に加えて任意の追加の望ましい成分の粉末を生じる真空乾燥及び凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要な粒子径を維持することによって、及び界面活性剤を使用することによって維持することができる。注射可能組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物に含めることによってもたらされ得る。
【０３０４】
当業者によって理解されるように、投与経路及び／または投与様式は、所望の結果に応じて変化するだろう。ある特定の実施形態では、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤などの、急速な放出に対して化合物を保護するだろう担体と共に調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの、生分解性で生体適合性のポリマーを使用することができる。そのような製剤を調製する多くの方法が特許取得されているか、または一般的に当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【０３０５】
ある特定の実施形態では、抗体分子は、例えば不活性希釈剤または同化可能な食用担体と共に経口投与することができる。化合物（及び他の成分、望ましければ）はまた、硬または軟ゼラチンカプセルに封入してもよく、錠剤に圧縮してもよく、または対象の食事に直接組み入れてもよい。経口治療投与の場合、化合物を賦形剤に組み入れて、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェーハ等の剤形で使用してよい。化合物を非経口投与以外で投与するために、化合物を、その不活化を防止する材料でコーティングする必要があり得るか、またはその材料と共に同時投与する必要があり得る。治療組成物はまた、当技術分野で公知の医療用デバイスを用いて投与することができる。
【０３０６】
最適な望ましい応答（例えば、治療応答）を提供するために、投与レジメンを調整する。例えば、単回ボーラスを投与してよく、複数回の分割用量を経時的に投与してよく、または用量を、治療状況の緊急性に応じてそれに比例して低減もしくは増加させてよい。投与の容易さ及び投与量の均一性のために、非経口組成物を単位投与剤形で製剤化することは特に有用である。本明細書で用いる単位投与剤形は、それぞれの単位が、必要な薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された活性化合物の既定量を含有する、処置される対象にとって単位用量として適した物理的に個別の単位を指す。本発明の単位投与剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の独自の特徴及び達成されるべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の処置のためにそのような活性化合物を合成する技術分野における固有の制限、に左右され、直接依存する。
【０３０７】
治療化合物の治療または予防有効量の例示的な非制限的な範囲は、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜２５ｍｇ／ｋｇである。治療化合物の投与量及び治療レジメンは、当業者が決定することができる。ある特定の実施形態では、治療化合物は、注射（例えば、皮下または静脈内）によって、約１〜４０ｍｇ／ｋｇ、例えば１〜３０ｍｇ／ｋｇ、例えば約５〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、約１〜５ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、５〜１５ｍｇ／ｋｇ、１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、１５〜２５ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。投与スケジュールは、例えば１週間に１回から２、３、または４週間毎に１回まで変化し得る。一実施形態では、治療化合物は、約１０〜２０ｍｇ／ｋｇの用量で２週間毎に１回投与される。治療化合物は、静脈内注入により、２０ｍｇ／分を超える速度、例えば、２０〜４０ｍｇ／分にて、典型的には４０ｍｇ／分を超えるまたはこれに等しい速度で、約３５〜４４０ｍｇ／ｍ２、典型的には約７０〜３１０ｍｇ／ｍ２、及びより典型的には、約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ２の用量に達するまで投与されることができる。実施形態では、約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ２の注入速度は、約３ｍｇ／ｋｇのレベルを達成する。他の実施形態では、治療化合物は、静脈内注入により、１０ｍｇ／分未満、例えば、５ｍｇ／分未満またはこれに等しい速度にて、約１〜１００ｍｇ／ｍ２、例えば、約５〜５０ｍｇ／ｍ２、約７〜２５ｍｇ／ｍ２、または、約１０ｍｇ／ｍ２の用量に達するまで投与されることができる。いくつかの実施形態では、治療化合物は、約３０分間かけて注入される。投与量の値は、緩和される状態のタイプ及び重症度によって変化し得ることに留意されたい。任意の特定の対象に関して、特定の投与レジメンを、個体の必要性及び組成物を投与するまたは投与を管轄する人の専門的判断にしたがって、経時的に調整すべきであること、及び本明細書において設定した投与量の範囲は、例示的に過ぎず、特許請求される組成物の範囲または実践を限定しないと意図されることをさらに理解されたい。
【０３０８】
本医薬組成物は、治療分子の「治療有効量」または「予防有効量」を含み得る。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために必要な投与量及び期間にて有効である量を指す。治療分子の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重などの要因、ならびに治療化合物が個体において所望の反応を誘発する能力にしたがって変動し得る。治療有効量はまた、治療分子の任意の毒性または有害な効果を、治療上有益な効果が上回る量でもある。「治療有効投与量」は、無処置対象と比較して、好ましくは、測定可能なパラメータ、例えば免疫攻撃を、少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、及びなおもより好ましくは少なくとも８０％阻害する。化合物の、測定可能なパラメータ、例えば免疫攻撃を阻害する能力は、移植拒絶反応または自己免疫障害における有効性を予測する動物モデル系において評価することができる。あるいは、組成物のこの特性は、化合物の、阻害する能力、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害の能力を当業者に公知のアッセイによって調べることによって評価することができる。
【０３０９】
「予防有効量」は、所望の予防的結果を達成するために必要な投与量及び期間にて有効である量を指す。典型的には、予防用量が対象において疾患の前または疾患の初期で使用されることから、予防有効量は、治療有効量より低いだろう。
【０３１０】
さらに、本明細書に記載の治療化合物を含むキットも本実施形態の範囲内である。キットは、使用説明書；他の試薬、例えば標識、治療剤、あるいは治療分子を標識または他の治療剤、もしくは放射線保護組成物にキレート化またはそうでなければ結合するために有用な薬剤；投与のための治療分子を調製するためのデバイスまたは他の材料；薬学的に許容され得る担体；及び対象に投与するためのデバイスまたは他の材料を含む１つまたは複数の他の要素を含むことができる。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供する実施形態は、以下を含むが、これらに限定されない。
１．治療化合物であって、
ａ）例えば、ドナー標的と優先的に結合する、ドナー特異的標的化部分；または
ｂ）例えば、対象の標的組織と優先的に結合する、組織特異的標的化部分；から選択される
ｉ）特異的標的化部分及び
（ａ）免疫細胞阻害分子結合／調節部分（ＩＣＩＭ結合／調節部分）；
（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合／調節部分（ＩＩＣ結合／調節部分）；または
（ｃ）治療化合物の一部として、例えば、前記標的の近くに、前記標的の免疫系による攻撃を阻害するもしくは最小限に抑える物質を提供することにより、免疫抑制性局所微小環境を促進する、エフェクター結合／調節部分（ＳＭ結合／調節部分）から選択される、
ｉｉ）エフェクター結合／調節部分を含む、前記治療化合物。
【０３１２】
２．前記エフェクター結合／調節部分が、阻害性受容体と直接結合し、これを活性化する、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３１３】
３．前記エフェクター結合／調節部分が、阻害性免疫チェックポイント分子である、実施形態２に記載の治療化合物。
【０３１４】
４．前記エフェクター結合／調節部分が、免疫細胞により発現される、実施形態１〜３に記載の治療化合物。
【０３１５】
５．前記免疫細胞が、望ましくない免疫応答に寄与する、実施形態４に記載の治療化合物。
【０３１６】
６．前記免疫細胞が、疾患病理の原因となる、実施形態４または５に記載の治療化合物。
【０３１７】
７．前記治療化合物が標的に前記標的化部分を通して結合する時、前記治療化合物が標的に前記標的化部分を通して結合しない時よりも、前記治療分子の、前記エフェクター結合／調節が結合する前記分子を刺激する能力が、より大きく、例えば、２、５、１０、１００、５００、または１，０００倍大きい、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３１８】
８．その同族リガンドに、単量体として結合する（または前記治療化合物が多量体化していないときに結合する）とき、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子が、前記同族リガンドを刺激しないまたは実質的に刺激しない、実施形態（ｅｍｂｏｄｉｅｎｔｓ）１〜７に記載の治療化合物。
【０３１９】
９．前記治療化合物の治療有効量で、前記エフェクター結合／調節部分が結合する前記分子の有意な、全身刺激化が見られる、実施形態１〜８に記載の治療化合物。
【０３２０】
１０．前記治療化合物の治療有効量で、前記エフェクター結合／調節部分が結合する前記分子の前記刺激化が、実質的に前記標的化部分が結合する標的部位においてのみ生じる、実施形態１〜９に記載の治療化合物。
【０３２１】
１１．前記治療化合物のその同族リガンド、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子への結合が、内因性カウンターリガンドの前記同族リガンド、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子への結合を阻害しない、または実質的に阻害しない、実施形態１〜９に記載の治療化合物。
【０３２２】
１２．前記エフェクター結合／調節部分のその同族リガンドへの結合が、前記エフェクター結合／調節部分の前記同族リガンドへの内因性カウンターリガンドの結合を、６０、５０、４０、３０、２０、１０、または５％未満阻害する、実施形態１〜１１に記載の治療化合物。
【０３２３】
１４．前記エフェクター結合／調節部分の前記同族リガンドへの結合が、前記エフェクター結合／調節分子の前記同族リガンドのアンタゴニズムを実質的にもたらさない、実施形態１〜１１に記載の治療化合物。
【０３２４】
１５．前記エフェクター結合／調節部分が、ＩＣＩＭ結合／調節部分を含む、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３２５】
１６．前記エフェクター結合／調節部分が、阻害性免疫チェックポイント分子リガンド分子を含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含む、実施形態１５に記載の治療化合物。
【０３２６】
１７．前記阻害性免疫分子カウンターリガンド分子が、ＰＤ−Ｌ１分子を含む、実施形態１６に記載の治療化合物。
【０３２７】
１８．前記ＩＣＩＭが、前記阻害性免疫分子カウンターリガンド分子が、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ−４から選択される同族阻害性免疫チェックポイント分子と結合する、実施形態１５に記載の治療化合物。
【０３２８】
１９．前記ＩＣＩＭが、抗体である、実施形態１８に記載の治療化合物。
【０３２９】
２０．前記ＩＣＩＭが、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ−４に結合する抗体を含む、実施形態１８に記載の治療化合物。
【０３３０】
２１．前記抗体が、ＰＤ−１に結合する抗体である、実施形態２０に記載の治療化合物。
【０３３１】
２２．前記抗体が、ＰＤ−１に結合する抗体であり、ＰＤ−１アゴニストである、実施形態２０に記載の治療化合物。
【０３３２】
２３．前記抗体が、ＰＤ−１に結合する抗体であり、標的部位で係留するとき、ＰＤ−１アゴニストである、実施形態２０に記載の治療化合物。
【０３３３】
２４．前記阻害性免疫分子カウンターリガンド分子が、ＨＬＡ−Ｇ分子を含む、実施形態１６に記載の治療化合物。
【０３３４】
２５．前記ＩＣＩＭが、前記阻害性免疫分子カウンターリガンド分子が、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ−４から選択される同族阻害性免疫チェックポイント分子と結合する、実施形態１５に記載の治療化合物。
【０３３５】
２６．前記阻害性免疫分子カウンターリガンド分子が、表１から選択される同族阻害性免疫チェックポイント分子と結合する、実施形態１５に記載の治療化合物。
【０３３６】
２７．単量体として、その同族阻害性免疫チェックポイント分子に結合するとき、前記阻害性免疫チェックポイント分子を刺激しないまたは実質的に刺激しない、実施形態１５に記載の治療化合物。
【０３３７】
２８．前記阻害性免疫分子カウンターリガンドが、天然に生じる阻害性免疫チェックポイント分子リガンドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、または１００％相同性を有する、実施形態１５に記載の治療化合物。
【０３３８】
２９前記エフェクター結合／調節部分が、細胞表面阻害分子に対する機能性抗体分子を含むＩＣＩＭ結合／調節部分を含む、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３３９】
３０．前記細胞表面阻害分子が、阻害性免疫チェックポイント分子である、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３４０】
３１．前記阻害性免疫チェックポイント分子が、ＰＤ−１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＣＴＬＡ−４から選択されるか、または表１から選択される、実施形態３０に記載の化合物。
【０３４１】
３２．前記治療化合物の治療有効量での全身免疫抑制のレベルが、（関連する場合）全身免疫抑制剤を用いた標準治療によりとく与えられるもの未満であるか、等モル量の遊離（治療化合物の構成要素としてではない）、エフェクター結合／調節分子により与えられるもの未満である、実施形態１〜３１のいずれかに記載の治療化合物。
【０３４２】
３３．全身免疫活性化のレベルが、例えば、前記治療化合物の治療有効量で、等モル量の遊離（治療化合物の構成要素としてではない）、エフェクター結合／調節分子により与えられるもの未満である、実施形態１〜３２に記載の治療化合物。
【０３４３】
３４．第二のエフェクター結合／調節部分をさらに含む、実施形態１〜３３のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３４４】
３５．前記第二のエフェクター結合／調節部分が、前記エフェクター結合／調節部分とは異なる標的と結合する、実施形態３４に記載の治療化合物。
【０３４５】
３６．前記第二のエフェクター結合／調節部分が、ＩＩＣ結合／調節部分を含む、実施形態３４または３５に記載の治療化合物。
【０３４６】
前記第二のエフェクター結合／調節部分が、ＳＭ結合／調節部分を含む、実施形態３４または３５に記載の治療化合物。
【０３４７】
３７．前記エフェクター結合／調節部分が、ＩＩＣ結合／調節部分を含む、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３４８】
３８．前記エフェクター結合／調節部分が、ＩＩＣ結合／調節部分を含み、これが免疫抑制性免疫細胞を前記標的部位で増加させる、動員するまたは蓄積させる、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３４９】
３９．前記エフェクター結合／調節部分が、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子と結合するまたは特異的に結合する細胞表面分子結合因子を含む、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３５０】
４０．前記エフェクター結合／調節部分が、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子と結合するまたは特異的に結合する細胞表面分子リガンド分子を含む、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３５１】
４１．前記エフェクター結合／調節部分が、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子と結合する抗体分子を含む、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３５２】
４２．前記免疫抑制性免疫細胞が、Ｔ制御性細胞、例えばＦｏｘｐ３＋ＣＤ２５＋Ｔ制御性細胞を含む、実施形態３８〜４１のいずれかに記載の治療化合物。
【０３５３】
４３．前記エフェクター結合／調節部分が、ＧＡＲＰと結合する、例えば、ＧＡＲＰ発現免疫抑制細胞、例えば、Ｔｒｅｇ上のＧＡＲＰと結合する抗体分子を含む、実施形態１〜４２のいずれかに記載の治療化合物。
【０３５４】
４４．前記エフェクター結合／調節部分が、ＳＭ結合／調節部分を含む、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３５５】
４５．ＳＭ結合／調節部分が、免疫抑制性局所微小環境を促進する、実施形態４４に記載の治療化合物。
【０３５６】
４６．前記エフェクター分子結合部分が、例えば、免疫細胞機能を阻害する物質、例えば、免疫細胞の活性化または活性化免疫細胞の前記機能を阻害する物質の、局所濃度または量を増加させることにより、利用可能性を増加させる、実施形態４４及び４５のいずれかに記載の治療化合物。
【０３５７】
４７．前記エフェクター分子結合部分が、免疫抑制機能を有する可溶性物質、例えば、内因性または外因性物質と結合し、これを蓄積させる、実施形態４４〜４６のいずれかに記載の治療化合物。
【０３５８】
４８．前記エフェクター分子結合部分が、例えば、免疫細胞機能を促進する物質、例えば、免疫細胞の活性化または活性化免疫細胞の前記機能を促進する物質の、局所濃度もしくは量を低減させる、またはこれを隔離することにより、利用可能性を低減させる、実施形態４４〜４７のいずれかに記載の治療化合物。
【０３５９】
４９．ＳＭ結合／調節部分が、例えば、前記標的の近くに、前記標的の免疫系による攻撃を阻害するまたは最小限に抑える物質を提供することにより、免疫抑制性局所微小環境を促進する、実施形態４４〜４８のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６０】
５０．前記ＳＭ結合／調節部分が、前記標的の免疫系による攻撃を阻害するまたは最小限に抑える分子を含む、実施形態４４〜４９のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６１】
５１．前記ＳＭ結合／調節部分が、免疫抑制機能を有する可溶性物質、例えば、内因性または外因性物質と結合する及び／またはこれを蓄積させる、実施形態４４〜５０のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６２】
５２．前記ＳＭ結合／調節部分が、免疫攻撃を促進させる物質、例えば、可溶性物質、典型的には及び内因性可溶性物質と結合する及び／またはこれを阻害する、隔離する、分解するまたはそうでなければ中和する、実施形態４４〜５１のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６３】
５３．前記エフェクター分子結合部分が、ＡＴＰまたはＡＭＰの利用可能性を低減させる、実施形態４４〜５２のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６４】
５４．ＳＭ結合／調節部分が、免疫エフェクター細胞機能を促進する構成要素、例えば、ＡＴＰまたはＡＭＰを枯渇させる物質、例えば、ＣＤ３９またはＣＤ７３と結合する、またはこれを含む、実施形態４４〜５３のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６５】
５５．前記ＳＭ結合／調節部分が、ＣＤ３９分子を含む、実施形態４４〜５４のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６６】
５６．前記ＳＭ結合／調節部分が、ＣＤ７３分子を含む、実施形態４４〜５４のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６７】
５７．前記ＳＭ結合／調節部分が、抗ＣＤ３９分子を含む、実施形態４４〜５４のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６８】
５８．前記ＳＭ結合／調節部分が、抗ＣＤ７３抗体分子を含む、実施形態４４〜５４のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３６９】
５９．前記エフェクター分子結合部分が、免疫抑制物質、例えば、フラグメント免疫抑制タンパク質を含む、実施形態４４〜５４のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３７０】
６０．ＳＭ結合／調節部分が、アルカリホスファターゼ分子を含む、実施形態４４〜５４のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０３７１】
６１．前記化合物が、Ｎ末端からＣ末端方向で式：
Ｒ１―――リンカー領域Ａ−Ｒ２またはＲ３−リンカー領域Ｂ−Ｒ４を有し、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、もしくはＳＭ結合／調節部分；特異的標的化部分を含む；または存在しない；ただし、エフェクター結合／調節部分及び特異的標的化部分が存在することを条件とする、実施形態１に記載の治療化合物。
【０３７２】
６２．リンカー領域Ａ及びリンカー領域ＢのそれぞれがＦｃ領域を含む、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３７３】
６３．Ｒ１及びＲ２のうちの１つが抗ＰＤ−１抗体であり、Ｒ１及びＲ２のうちの１つが、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３７４】
６４．Ｒ１のうちの１つが、抗ＰＤ−１抗体であり、１つのＲ２が、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３７５】
６５．Ｒ１のうちの１つが、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、１つのＲ２が、抗ＰＤ−１抗体である、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３７６】
６６．Ｒ３及びＲ４のうちの１つが、抗ＰＤ−１抗体であり、Ｒ３及びＲ４のうちの１つが、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３７７】
６７．Ｒ３のうちの１つが、抗ＰＤ−１抗体であり、１つのＲ４が、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３７８】
６８．Ｒ３のうちの１つが、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、１つのＲ４が、抗ＰＤ−１抗体である、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３７９】
６９．前記リンカーが、存在しない、実施形態６１〜６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０３８０】
７０．前記リンカーが、Ｆｃ領域である、実施形態６１〜６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０３８１】
７１．前記リンカーが、グリシン／セリンリンカー、例えば１、２、３、４、または５反復のＧＧＧＧＳ（配列番号６）である、実施形態６１〜６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０３８２】
７２．前記リンカーが、Ｆｃ領域及びグリシン／セリンリンカー、例えば１、２、３、４、または５反復のＧＧＧＧＳ（配列番号６）を含む、実施形態６１〜６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０３８３】
７３．前記ＰＤ−１抗体が、ＰＤ−１アゴニストである、実施形態６１〜７２のいずれかに記載の治療化合物。
【０３８４】
７４．式中、
Ｒ１及びＲ３が、独立して、機能性抗ＰＤ−１抗体分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を含み；Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３８５】
７５．式中、
Ｒ１及びＲ３が、独立して、特異的標的化部分、例えば、抗組織抗原抗体を含み；Ｒ２及びＲ４が、独立して、機能性抗ＰＤ−１抗体分子（ＰＤ−１のアゴニスト）を含む、実施形態７３及び７４のいずれかに記載の治療化合物。
【０３８６】
７６．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立して：免疫応答を調節する物質、例えば、可溶性分子、例えば、ＡＴＰまたはＡＭＰを、調節する、例えば、これと結合し、これを阻害する、隔離する、分解するもしくはそうでなければ中和するＳＭ結合／調節部分、例えば、ＣＤ３９分子もしくはＣＤ７３分子；特異的標的化部分を含む；または存在しない；ただし、ＳＭ結合／調節部分及び特異的標的化部分が存在することを条件とする、実施形態７３及び７４のいずれかに記載の治療化合物。
【０３８７】
７７．式中、
Ｒ１及びＲ３が、独立して、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３８８】
７８．式中、
Ｒ１及びＲ３が、それぞれＣＤ３９分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態７７に記載の治療化合物。
【０３８９】
７９．式中、
Ｒ１及びＲ３が、それぞれ、ＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態６１または７７に記載の治療化合物。
【０３９０】
８０．式中、
Ｒ１及びＲ３のうちの一方が、ＣＤ３９分子を含み、他方が、ＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３９１】
８１．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立して、ＨＬＡ−Ｇ分子；特異的標的化部分を含む；または存在しない；
ただし、ＨＬＡ−Ｇ分子及び特異的標的化部分が存在することを条件とする、実施形態６１に記載の治療化合物。
【０３９２】
８２．式中、
Ｒ１及びＲ３が、それぞれ、ＨＬＧ−Ａ分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態６１または８１に記載の治療化合物。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０３９４】
８３．式中、
Ｒ１及びＲ３が、それぞれ、刺激性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態８１及び８２のいずれかに記載の治療化合物。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０３９６】
８４．式中、
Ｒ１及びＲ３が、それぞれ、刺激性抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体分子を含み；及び
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態８１及び８２のいずれかに記載の治療化合物。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、リンカーＡ及びリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合Ｆｃ部分、または自己対合しないもしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
【０３９８】
８５．式中、
Ｒ１及びＲ３が、それぞれ、刺激性抗ＬＩＬＲＢ２抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態８１〜８４のいずれかに記載の治療化合物。
【０３９９】
８６．式中、
Ｒ１及びＲ３が、それぞれ、刺激性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態８１〜８４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４００】
８７．式中、
Ｒ１及びＲ３のうちの一方が、拮抗性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子、刺激性抗ＫＲ２ＤＬ４抗体分子、及び刺激性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子から選択される第一の部分を含み、他方がこれらから選択される異なる部分を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態８１〜８４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４０１】
８８．式中、
Ｒ１及びＲ３のうちの一方が、拮抗性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み、他方が、刺激性抗ＫＲ２ＤＬ４抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態８１〜８４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４０２】
８９．式中、
Ｒ１及びＲ３のうちの一方が、拮抗性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み、他方が、刺激性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子を含み；
Ｒ２及びＲ４が、独立して、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、実施形態８１〜８４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４０３】
９０．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４のうちの１つが、抗ＢＣＲ抗体分子、例えば、拮抗性抗ＢＣＲ抗体分子を含み、１つが抗ＦＣＲＬ抗体分子を含み、１つが特異的標的化部分を含む、実施形態８１〜８４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４０４】
９１．抗ＦＣＲＬ分子が、ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６に指向する抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、刺激性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む、実施形態９０に記載の治療化合物。
【０４０５】
９２．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が、それぞれ独立して：
ｉ）エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、またはＳＭ結合／調節部分、これはＴ細胞活性、拡大、または機能を最小限に抑えるまたは阻害する（Ｔ細胞エフェクター結合／調節部分）；
ｉｉ）エフェクター結合／調節部分、例えば、ＩＣＩＭ結合／調節部分、ＩＩＣ結合／調節部分、またはＳＭ結合／調節部分、これはＢ細胞活性、拡大、または機能を最小限に抑えるまたは阻害する（Ｂ細胞エフェクター結合／調節部分）；
ｉｉｉ）特異的標的化部分を含む；または
ｉｖ）存在しない；ただし、Ｔ細胞エフェクター結合／調節部分、Ｂ細胞エフェクター結合／調節部分、及び特異的標的化部分が存在することを条件とする、実施形態８１〜８４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４０６】
９３．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、刺激性抗ＰＤ−１抗体を含み、１つがＨＬＡ−Ｇ分子を含む、実施形態９２に記載の治療化合物。
【０４０７】
９４．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、ＳＭ結合／調節部分、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含む、実施形態９２〜９３に記載の治療化合物。
【０４０８】
９５．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、制御性免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇ細胞またはＢｒｅｇ細胞と結合する、これを活性化する、または維持する実体を含む、実施形態９２〜９４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４０９】
９６．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、刺激性抗ＰＤ−１抗体を含むかまたは１つがＨＬＡ−Ｇ分子を含む、実施形態９２〜９５のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１０】
９７．式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つが、刺激性抗ＰＤ−１抗体を含み、１つがＨＬＡ−Ｇ分子を含み、１つがＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含む、実施形態９６に記載の治療化合物。
【０４１１】
９８．前記エフェクター結合／調節部分が、ポリペプチドを含む、実施形態１〜９７のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１２】
９９．前記エフェクター結合／調節部分が、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、１５０、２００または２５０個のアミノ酸残基を有するポリペプチドを含む、実施形態１〜９８のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１３】
１００．前記エフェクター結合／調節部分が、５、１０、１５、２０、または４０Ｋｄの分子量を有する、実施形態１〜９９のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１４】
１０１．前記エフェクター結合／調節部分が、アポリポプロテイン（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｉｅｎ）ＣＩＩＩ、プロテインキナーゼＡ、Ｓｒｃキナーゼ、またはベータ１インテグリンの発現の阻害剤を含まない、実施形態１〜１００のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１５】
１０２．前記エフェクター結合／調節部分が、アポリポプロテイン（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｉｅｎ）ＣＩＩＩ、プロテインキナーゼＡ、Ｓｒｃキナーゼ、またはベータ１インテグリンの前記活性の阻害剤を含まない、実施形態１〜１００のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１６】
１０３．前記治療化合物が、肺、皮膚、膵臓、網膜、前立腺、卵巣、リンパ節、副腎、肝臓または腸組織から選択された組織を特異的に標識しない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１７】
１０４．前記治療化合物が、尿細管細胞、例えば、近位尿細管上皮細胞を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１８】
１０５．前記治療化合物が、ＴＩＥ−２、ＡＰＮ、ＴＥＭ４、ＴＥＭ６、ＩＣＡＭ−１、ヌクレオリンＰ２Ｚ受容体、Ｔｒｋ−Ａ、ＦＬＪ１０８４９、ＨＳＰＡ１２Ｂ、ＡＰＰ、またはＯＸ−４５を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４１９】
１０６．前記治療化合物が、管腔発現タンパク質を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２０】
１０７．前記ドナー標的が、心臓特異的標的を含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２１】
１０８．前記治療化合物が、肺組織を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２２】
１０９．前記治療化合物が、腎臓組織を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２３】
１１０．前記治療化合物が、膵臓肺組織を特異的にしない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２４】
１１１．前記治療化合物が、腸組織を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２５】
１１２．前記治療化合物が、前立腺組織を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２６】
１１３．前記治療化合物が、脳組織を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２７】
１１４．前記治療化合物が、ＣＤ７１を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２８】
１１５．前記治療化合物が、ＣＤ９０を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４２９】
１１６．前記治療化合物が、ＭＡｄＣＡＭを特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３０】
１１７．前記治療化合物が、アルブミンを特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３１】
１１８．前記治療化合物が、炭酸脱水酵素ＩＶを特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３２】
１１９．前記治療化合物が、ＺＧ１６−ｐを特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３３】
１２０．前記治療化合物が、ジペプチジルペプチダーゼＩＶを特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３４】
１２１．前記治療化合物が、血管内皮細胞膜の前記管腔表面を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３５】
１２１．前記治療化合物が、心臓組織を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３６】
１２２．前記治療化合物が、腫瘍、固形腫瘍、または固形腫瘍の血管を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３７】
１２３．前記治療化合物が、皮膚組織を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３８】
１２４．前記治療化合物が、上皮組織を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４３９】
１２５．前記治療化合物が、基底膜を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４０】
１２６．前記治療化合物が、Ｄｓｇポリペプチドを特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４１】
１２７．前記治療化合物が、Ｄｓｇ１を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４２】
１２８．前記治療化合物が、Ｄｓｇ３を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４３】
１２９．前記治療化合物が、ＢＰ１８０を特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４４】
１３０．前記治療化合物が、デスモグレインを特異的に標的としない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４５】
１３１．前記治療化合物が、補体調節因子、例えば、補体阻害剤、例えば限定されないが、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許番号８，４５４，９６３号に記載のものを含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４６】
１３３．前記治療化合物が、イメージング剤を含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４７】
１３４．前記治療化合物が、放射性作用物質、放射性同位体、放射性薬剤、造影剤、ナノ粒子；酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、及び生物発光物質、例えば限定されないがその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許番号８，８１５，２３５号に記載のものの群から選択されるイメージング剤を含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４８】
１３５．前記治療化合物が、放射性核種、例えば限定されないが、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許番号６，２３２，２８７号に記載のものを含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４４９】
１３６．それが結合するドナー細胞によって内在化されていない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５０】
１３７．前記治療化合物が、前記特異的標的化部分により標的とされる前記細胞に入らない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５１】
１３８．前記治療化合物が、前記特異的標的化部分により標的とされる前記細胞を殺傷しない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５２】
１３９．前記治療化合物が、前記エフェクター結合／調節部分が結合する前記細胞に入らない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５３】
１４０．前記治療化合物が、前記エフェクター結合／調節部分が結合する前記細胞を殺傷しない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５４】
１４１．前記治療化合物が、自己抗原性ペプチドまたはポリペプチドを含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５５】
１４２．前記治療化合物が、自己抗原性ペプチドまたはポリペプチドを含まない、例えば、前記対象がそれに対して自己抗体を有するペプチドまたはポリペプチドを含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５６】
１４３．前記治療化合物が、自己免疫障害を有する哺乳類、例えば、ヒトに由来する抗体分子を含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５７】
１４４．前記治療化合物が、急性粘膜皮膚型尋常性天疱瘡（ａｃｕｔｅ  ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ＰＶ）を有する哺乳類、例えば、ヒトに由来する抗体分子を含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５８】
１４５．前記前記治療化合物が、グッドパスチャー疾患を有する哺乳類、例えば、ヒトに由来する抗体分子を含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４５９】
１４６．前記前記治療化合物が、尋常性天疱瘡を有する哺乳類、例えば、ヒトに由来する抗体分子を含まない、実施形態１〜１０１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４６０】
１４１．ドナー特異的標的化部分を含む、実施形態１〜１４６のいずれかに記載の治療化合物。
【０４６１】
１４２．レシピエントの組織とは対照的に、移植されたドナー組織に優先的に局在化する、実施形態１４１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４６２】
１４３．前記ドナー特異的標的化部分が、ドナーからの移植組織、例えば、臓器、に対して部位特異的免疫特権を提供する、実施形態１４１〜１４２に記載の治療化合物。
【０４６３】
１４４．前記ドナー特異的標的化部分が、前記ドナーの遺伝子座に存在する対立遺伝子の産物、例えば、ポリペプチドに結合し、この対立遺伝子が前記レシピエントの遺伝子座に存在しない、実施形態１４１〜１４３に記載の治療化合物。
【０４６４】
１４５．前記ドナー特異的標的化部分が、対象組織上に発現する遺伝子の対立遺伝子と比較して、ドナー組織、例えば、移植組織、例えば、臓器上に発現される遺伝子の対立遺伝子に優先的に結合する、実施形態１４１〜１４４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４６５】
１４６．前記ドナー特異的標的化部分が、ドナー組織、例えば、移植組織、例えば、臓器上で発現される遺伝子の対立遺伝子に対して結合親和性を有し、それが、対象組織上で発現される遺伝子の対立遺伝子に対するその親和性より、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍大きい、実施形態１４１〜１４５に記載の治療化合物。
【０４６６】
１４７．前記ドナー特異的標的化部分が、前記ドナーの遺伝子座に存在する対立遺伝子の前記産物、例えば、ポリペプチドに結合し、その対立遺伝子が前記レシピエントの遺伝子座に存在しない、実施形態１４１〜１４６のいずれかに記載の治療化合物。
【０４６７】
１４８．前記結合が、例えば、前記治療化合物の臨床有効量で、望ましくない、実質的な、または臨床的に許容不可能な、全身免疫抑制が生じるほど十分に特異的である、実施形態１４１〜１４７のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４６８】
１４９．前記治療化合物が、前記標的部位で蓄積する、例えば、前記ドナー特異的標的化部分の結合が、前記治療化合物の前記標的部位での蓄積をもたらす、実施形態１４１〜１４８のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４６９】
１５０．前記ドナー特異的標的化部分が、表２から選択される遺伝子座、例えば、前記ＨＬＡ遺伝子座、例えば、前記ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱまたはＨＬＡ−ＤＲ遺伝子座の対立遺伝子の産物と結合し、その対立遺伝子が前記ドナーには存在するが、前記レシピエント。ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱまたはＨＬＡ−ＤＲ遺伝子座。には存在しない、実施形態１４１〜１４９のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４７０】
１５１．前記ドナー特異的標的化部分が、ＨＬＡ  Ａの対立遺伝子、ＨＬＡ−Ｂの対立遺伝子、ＨＬＡ−Ｃの対立遺伝子、ＨＬＡ−ＤＰの対立遺伝子、ＨＬＡ−の対立遺伝子、またはＨＬＡ−の対立遺伝子と結合する、実施形態１４１〜１５０のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４７１】
１５２．前記治療化合物が、移植を有する、有することになる、または必要とする対象の処置に好適である、実施形態１４１〜１５１のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４７２】
１５３．前記移植が、臓器、例えば、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、胸腺、皮膚または肺の全部または一部を含む、実施形態１５２に記載の治療化合物。
【０４７３】
１５４．前記ドナー特異的標的化部分が、抗体分子を含む、実施形態１４１〜１５３のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４７４】
１５５．前記ドナー特異的標的化部分が、標的特異的結合ポリペプチド、または標的リガンド結合分子を含む、実施形態１４１〜１５３のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４７５】
１５６．組織特異的標的化部分を含む、実施形態１〜１５５のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４７６】
１５７．前記組織特異的標的化部分が、ＭＡｄＣＡＭに特異的に結合する分子である、実施形態１５６に記載の治療化合物。
【０４７７】
１５８．前記組織特異的標的化部分が、ＭＡｄＣＡＭに特異的に結合する抗体である、実施形態１５６に記載の治療化合物。
【０４７８】
１５９．前記治療化合物が、自己免疫障害、例えば、本明細書に記載の自己免疫障害を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態、１５６〜１５８のいずれか一項に記載の治療化合物。
【０４７９】
１６０．前記治療化合物が、前記標的部位で蓄積する、例えば、前記組織特異的標的化部分の結合が、前記治療化合物の前記標的部位での蓄積をもたらす、実施形態１５６〜１５９のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８０】
１６１．前記治療化合物は、対象の他の組織とは対照的に、標的組織に優先的に局在化する、実施形態１５６〜１６０のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８１】
１６２．前記治療化合物が、例えば、自己免疫障害において、望ましくない免疫攻撃を受けている、またはそのリスクがある、もしくはそのリスクが高い、例えば、対象標的組織に対して、部位特異的免疫特権を提供する、実施形態１５６〜１６１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８２】
１６３．前記組織特異的標的化部分が、前記治療化合物の構成要素として、例えば、自己免疫障害において、望ましくない免疫攻撃を受けている対象標的組織と優先的に結合する、実施形態１５６〜１６１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８３】
１６４．組織特異的標的化部分が、前記標的組織の外側に存在しない、または治療分子の治療濃度で、許容不可能なレベルの免疫抑制が存在しないもしくは実質的に存在しないほど十分に低いレベルで存在する、前記産物、例えば、ポリペプチドに結合する、実施形態１５６〜１６３のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８４】
１６５．前記組織特異的標的化部分が、非標的組織より標的組織においてより豊富である、産物、または産物上の部位と結合する、実施形態１５６〜１６４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８５】
１６６．治療化合物が、標的組織上に実質的に排他的に存在するまたは発現される、産物、または産物上の部位と結合する、実施形態１５６〜１６５のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８６】
１６７前記特異的標的化部分が結合する、前記産物、または産物上の部位が、治療化合物の治療有効レベルで、前記対象が許容不可能なレベル、例えば、臨床的に有意なレベル、の全身免疫抑制を被らないほどに、前記標的組織に十分に限定されている、実施形態１５６〜１６６のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８７】
１６８．前記治療化合物が、標的組織または標的組織抗原に優先的に結合する、例えば、前記標的組織の外側に存在する非標的組織または抗原に対するその親和性よりも標的抗原または組織に対してより大きい、例えば、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍大きい、前記標的組織または抗原に対する結合親和性を有する、実施形態１５６〜１６７のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８８】
１６９．前記組織特異的標的化部分が、予め選択した部位、例えば、自己免疫障害における望ましくない免疫応答の部位に存在する、産物、例えば、ポリペプチド産物、または産物上の部位に結合する、実施形態１５６〜１６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０４８９】
１７０．治療化合物が、１型糖尿病を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態１５６〜１６９のいずれかに記載の治療化合物。
【０４９０】
１７１．前記標的組織が、膵臓組織、例えば、膵島もしくは膵臓ベータ細胞、腸組織（例えば、腸内皮細胞）、腎臓組織（例えば、腎臓上皮細胞）、または肝臓組織（例えば、肝臓上皮細胞）を含む、実施形態１５６〜１７０のいずれかに記載の治療化合物。
【０４９１】
１７２．前記エフェクター結合／調節部分または標的化部分が、本明細書に記載のもの、例えば表３に列挙するもの、例えば、ＳＥＺ６Ｌ２、ＬＲＰ１１、ＤＩＳＰ２、ＳＬＣ３０Ａ８、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、またはＴＭＥＭ２７から選択されるポリペプチドと結合する、実施形態１５６〜１７１のいずれかに記載の治療化合物。
【０４９２】
１７３．治療化合物が、多発性硬化症を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態１５６〜１６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０４９３】
１７４．前記標的組織が、ＣＮＳ組織、ミエリン鞘、または乏突起膠細胞のミエリン鞘を含む、実施形態１７３に記載の治療化合物。
【０４９４】
１７５．前記エフェクター結合／調節部分または標的化部分が、表３を含むがこれらに限定されない本明細書に記載のもの、例えば、ＭＯＧ、ＰＬＰ、またはＭＢＰから選択されるポリペプチドと結合する、実施形態１７３〜１７４のいずれかに記載の治療化合物。
【０４９５】
１７６．治療化合物が、心筋炎を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態１５６〜１６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０４９６】
１７７．前記標的組織が、心筋細胞、単球、マクロファージ、または骨髄系細胞を含む、実施形態１７６に記載の治療化合物。
【０４９７】
１７８．前記エフェクター結合／調節部分が、または前記標的化部分、表３から選択されるもの、例えば、ＳＩＲＰＡ（ＣＤ１７２ａ）を含むがこれらに限定されない本明細書に記載のポリペプチドと結合する、実施形態１７６〜１７７に記載の治療化合物。
【０４９８】
１７９．治療化合物が、炎症性腸疾患、自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）；原発性胆汁性肝硬変；（ＰＢＣ）；または移植を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態１５６〜１６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０４９９】
１８０．前記対象が、クローン病または潰瘍性大腸炎を有する、有するリスクがあるまたは有するリスクが高い、実施形態１５６〜１６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０５００】
１８１．前記標的組織が、腸細胞、例えば、腸上皮細胞または肝臓細胞、例えば肝臓上皮細胞を含む、実施形態１７９または１８０に記載の治療化合物。
【０５０１】
１８２．前記エフェクター結合／調節部分が、表３から選択されるもの、例えば、ＰＤ−１を含むがこれに限定されない本明細書に記載のポリペプチドと結合する、実施形態１７９〜１８１に記載の治療化合物。
【０５０２】
１８２．前記標的化部分が、ＭＡｄＣＡＭを含むがこれに限定されない本明細書に記載のポリペプチドと結合する、実施形態１７９〜１８１に記載の治療化合物。
【０５０３】
１８３．治療化合物が、関節リウマチを有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態１５６〜１６８のいずれかに記載の治療化合物。
【０５０４】
１８４．前記標的組織が、心筋細胞、単球、マクロファージ、または骨髄系細胞を含む、実施形態１８３に記載の治療化合物。
【０５０５】
１８５．前記エフェクター結合／調節部分または標的化部分が、表３から選択されたポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰＡ（ＣＤ１７２ａ）と結合する、実施形態１８３または１８４に記載の治療化合物。
【０５０６】
１８６．前記組織特異的標的化部分が、抗体分子を含む、実施形態１５６〜１８５のいずれかに記載の治療化合物。
【０５０７】
１８７．前記組織特異的標的化部分が、標的特異的結合ポリペプチド、または標的リガンド結合分子を含む、実施形態１５６〜１８５のいずれかに記載の治療化合物。
【０５０８】
１８８．前記組織特異的標的化部分が、ＭＡｄＣＡＭに結合する標的特異的結合ポリペプチドを含む、実施形態１５６〜１８５のいずれかに記載の治療化合物。
【０５０９】
１８９．前記治療化合物が、免疫促進（ｐｒｏ−ｉｍｍｕｎｅ）応答を伝搬させる、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または他の免疫細胞の細胞表面分子と結合する、実施形態１〜１８８のいずれかに記載の治療化合物。
【０５１０】
１９０．前記治療化合物が、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または他の免疫細胞の免疫促進応答を伝搬する能力を低下させる、実施形態１〜１８９のいずれかに記載の治療化合物。
【０５１１】
１９１．前記特異的標的化部分が、哺乳類標的、例えば、哺乳類ポリペプチドを標的とし、前記エフェクター結合／調節部分が、哺乳類免疫構成要素、例えば、ヒト免疫細胞、例えば、哺乳類Ｂ細胞、Ｔ細胞、またはマクロファージと結合／これを調節する、実施形態１〜１９０のいずれかに記載の治療化合物。
【０５１２】
１９２．前記特異的標的化部分が、ヒト標的、例えば、ヒトポリペプチドを標的とし、前記エフェクター結合／調節部分が、ヒト免疫構成要素、例えば、ヒト免疫細胞、例えば、ヒトＢ細胞、Ｔ細胞、またはマクロファージと結合／これを調節する、実施形態１〜１９２のいずれかに記載の治療化合物。
【０５１３】
１９３．前記治療化合物が、ヒトにおける使用のために構成される、実施形態１〜１９３のいずれかに記載の治療化合物。
【０５１４】
１９４．前記治療化合物が、非ヒト哺乳類における使用のために構成される、実施形態１〜１９１のいずれかに記載の治療化合物。
【０５１５】
１９５．前記治療化合物、例えば、前記エフェクター結合／調節部分が、ＰＤ−１アゴニストを含む、実施形態１〜１９４のいずれかに記載の治療化合物。
【０５１６】
１９６．炎症性腸疾患を有する対象を処置する方法であって、実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与して、前記炎症性腸疾患を処置することを含む、前記方法。
【０５１７】
１９７．炎症性腸疾患を有する前記対象が、クローン病を有する、実施形態１９６に記載の方法。
【０５１８】
１９８．炎症性腸疾患を有する前記対象が、潰瘍性大腸炎を有する、実施形態１９６に記載の方法。
【０５１９】
１９９．自己免疫性肝炎を有する対象を処置する方法であって、実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与して、前記自己免疫性肝炎を処置することを含む、前記方法。
【０５２０】
２００．原発性硬化性胆管炎を処置する方法であって、実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与して、前記原発性硬化性胆管炎を処置することを含む、前記方法。
【０５２１】
２０１．１型糖尿病を処置する方法であって、実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物を投与し、それにより前記対象を処置して、前記１型糖尿病を処置することを含む、前記方法。
【０５２２】
２０２．移植対象を処置する方法であって、治療有効量の実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与し、それにより移植（レシピエント）対象を処置することを含む、前記方法。
【０５２３】
２０３．移植されたドナー組織を有する対象におけるＧＶＨＤを処置する方法であって、治療有効量の実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【０５２４】
２０４．前記治療化合物が、前記対象に：前記移植を受ける前；ＧＶＨＤの症状を発症する前；前記移植を受けた後もしくは移植と同時；またはＧＶＨＤの症状の発症後もしくは発症と同時に、投与される、実施形態２０３に記載の方法。
【０５２５】
２０５．自己免疫障害を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象を処置する方法であって、治療有効量の実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物を投与し、それにより前記対象を処置することを含む、前記方法。
【０５２６】
２０６．前記対象が、同種移植ドナー組織を受けている、受けることになっている、またはその必要がある、実施形態２０５に記載の方法。
【０５２７】
２０７．前記ドナー組織が、固形臓器、例えば、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、胸腺、または肺を含む、実施形態２０５〜２０６のいずれかに記載の方法。
【０５２８】
２０８．前記ドナー組織が、臓器、例えば、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、胸腺、または肺の全部または一部を含む、実施形態２０５〜２０６のいずれかに記載の方法。
【０５２９】
２０９．前記ドナー組織が、皮膚を含む、実施形態２０５〜２０６のいずれかに記載の方法。
【０５３０】
２１０．前記ドナー組織が、皮膚を含まない、実施形態２０５〜２０６のいずれかに記載の方法。
【０５３１】
２１１．前記ドナー組織が、遺伝子座遺伝子座の対立遺伝子の産物を提示または発現し、その対立遺伝子が前記対象に存在しないまたは発現されない、実施形態２０５〜２１０のいずれかに記載の方法。
【０５３２】
２１２．前記ドナー組織が、表２から選択される遺伝子座、例えば、前記ＨＬＡ遺伝子座、例えば、前記ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱまたはＨＬＡ−ＤＲ遺伝子座の対立遺伝子の産物を提示または発現し、その対立遺伝子が前記対象において存在しないまたは発現されない、実施形態２０５〜２１０のいずれかに記載の方法。
【０５３３】
２１３前記移植組織を前記対象へと導入することを含む、実施形態２０５〜２１２のいずれかに記載の方法。
【０５３４】
２１４．前記対象を、免疫細胞不活性化に関して（例えば、免疫阻害性チェックポイント分子の望ましくない刺激化をモニターするために）、前記標的部位から離れた部位で、例えば、末梢循環またはリンパ系においてモニタリングすることを含む、実施形態１９６〜２１３のいずれかに記載の方法。
【０５３５】
２１５．前記対象を、免疫細胞活性化に関して（例えば、免疫阻害性チェックポイント分子の望ましくない拮抗化をモニターするために）、前記標的部位から離れた部位で、例えば、末梢循環またはリンパ系においてモニタリングすることを含む、実施形態１９６〜２１４のいずれかに記載の方法。
【０５３６】
２１６．モニタリングの結果に応じて、前記対象に関する処置過程を選択する、例えば、前記治療化合物の前記用量を増加させる、前記治療化合物の前記用量を低減させる、用量を変化させずに前記治療化合物を用いる処置を継続する、実施形態１９６〜２１５のいずれかに記載の方法。
【０５３７】
２１７．実施形態１〜１９５に記載の化合物を、前記レシピエントに投与することを含む、実施形態１９６〜２１６のいずれかに記載の方法。
【０５３８】
２１８．投与することが、例えば、末梢循環系への全身投与を含む、実施形態１９６〜２１６のいずれかに記載の方法。
【０５３９】
２１９．投与することが、例えば、前記標的組織、前記ドナー組織または前記標的組織もしくは前記ドナー組織が位置するもしくは位置することになる部位への局所投与を含む、実施形態１９６〜２１６のいずれかに記載の方法。
【０５４０】
２２０．前記治療化合物を、前記レシピエントに、前記レシピエントへの前記ドナー組織の導入前に投与することを含む、実施形態２１９のいずれかに記載の方法。
【０５４１】
２２１．前記治療化合物を、前記レシピエントに、前記レシピエントへの前記ドナー組織の導入後に投与することを含む、実施形態２１９のいずれかに記載の方法。
【０５４２】
２２２．前記治療化合物を、前記レシピエントに、前記レシピエントへの前記ドナー組織の導入と同時に投与することを含む、実施形態２１３のいずれかに記載の方法。
【０５４３】
２２３．前記治療化合物を、前記ドナー組織と、前記レシピエントへの前記ドナー組織の導入前に接触させることを含む、実施形態２１３に記載の方法。
【０５４４】
２２４．前記治療化合物を前記対象に提供することを含み、前記移植組織が、治療化合物と、前記対象への導入前に接触している、実施形態２１３のいずれかに記載の方法。
【０５４５】
２２５．前記治療化合物を、前記ドナー組織と、前記レシピエントへの前記ドナー組織の導入後に、例えば、前記ドナー組織への局所投与により接触させることを含む、実施形態２１３のいずれかに記載の方法。
【０５４６】
２２６．本明細書に提供する治療化合物を、治療レベルが少なくとも１、５、１０、１４、または２８日間、例えば、連続または非連続した日にわたって存在するように、投与することを含む、実施形態１９６〜２２６のいずれかに記載の方法。
【０５４７】
２２７．前記対象が、非標的免疫抑制剤を受けない、実施形態１９６〜２２６のいずれかに記載の方法。
【０５４８】
２２８．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記治療化合物の初回投与前少なくとも１、１５、３０、６０、または９０日間にわたって受けていない、実施形態１９６〜２２６のいずれかに記載の方法。
【０５４９】
２２９．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記移植組織の導入前少なくとも１、１５、３０、６０、または９０日間にわたって受けていない、実施形態２１３のいずれかに記載の方法。
【０５５０】
２３０．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記治療化合物の初回投与後少なくとも１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間にわたって受けない、実施形態１９６〜２２９のいずれかに記載の方法。
【０５５１】
２３１．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記移植組織の導入後少なくとも１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間にわたって受けない、実施形態１９６〜２２９のいずれかに記載の方法。
【０５５２】
２３２．非標的免疫抑制剤を前記対象に投与することを含む、実施形態１９６〜２３１のいずれかに記載の方法。
【０５５３】
２３３．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記治療化合物の初回投与の前少なくとも１、１５、３０、６０、または９０日間にわたって受ける、実施形態１９６〜２３２のいずれかに記載の方法。
【０５５４】
２３４．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記移植組織の導入前少なくとも１、１５、３０、６０、または９０日間にわたって受ける、実施形態２１３に記載の方法。
【０５５５】
２３５．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記治療化合物の初回投与の後少なくとも１、１５、３０、６０、９０または１８０日間にわたって受ける、実施形態２３４に記載の方法。
【０５５６】
２３６．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記移植組織の導入後少なくとも１、１５、３０、６０、９０または１８０日間にわたって受ける、実施形態１９６〜２３５のいずれかに記載の方法。
【０５５７】
２３７．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記治療化合物の初回投与の前に受けるが、１、１５、３０、６０、９０または１８０日間以下である、実施形態１９６〜２３５のいずれかに記載の方法。
【０５５８】
２３８．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記移植組織の導入の前に受けるが、１、１５、３０、６０、９０または１８０日間以下である、実施形態２１３に記載の方法。
【０５５９】
２３９．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記治療化合物の初回投与後に受けるが、１、１５、３０、６０、９０または１８０日間以下である、実施形態１９６〜２３８のいずれかに記載の方法。
【０５６０】
２４０．前記対象が、非標的免疫抑制剤を、前記移植組織の導入後に受けるが、１、１５、３０、６０、９０または１８０日間以下である、実施形態２１３に記載の方法。
【０５６１】
２４１．前記対象が、前記移植組織の拒絶反応についてモニターされる、実施形態２１３に記載の方法。
【０５６２】
２４２．非標的免疫抑制剤の投与量が選択される、または前記モニタリングに応答して、非標的免疫抑制剤の投与量が選択される、実施形態１９６〜２４２のいずれかに記載の方法。
【０５６３】
２４３．前記投与量が、投与される、実施形態２４２に記載の方法。
【０５６４】
２４４．前記選択投与量が、ゼロである、すなわち、非標的免疫抑制剤が投与されない、実施形態２４３に記載の方法。
【０５６５】
２４５．前記選択投与量が、ゼロでない、すなわち、非標的免疫抑制剤が投与される、実施形態２４３に記載の方法。
【０５６６】
２４６．前記投与量が、治療化合物の投与が無い場合に投与され得るもの未満である、実施形態２４３に記載の方法。
【０５６７】
２４７．前記対象が、哺乳類、例えば、非ヒト哺乳類である、実施形態１９６〜２４６のいずれかに記載の方法。
【０５６８】
２４８．前記対象が、ヒトである、実施形態１９６〜２４６のいずれかに記載の方法。
【０５６９】
２４９．前記ドナー及び対象が、ＨＬＡ遺伝子座、例えば、メジャーまたはマイナー遺伝子座にて、不一致である、実施形態２１３に記載の方法。
【０５７０】
２５０．前記対象が、哺乳類、例えば、非ヒト哺乳類である、実施形態２４９に記載の方法。
【０５７１】
２５１．前記対象が、ヒトである、実施形態２４９に記載の方法。
【０５７２】
２５２．自己免疫障害を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象を処置する方法であって、治療有効量の実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物を投与すること、それにより前記対象を処置することを含む、前記方法。
【０５７３】
２５３．前記治療化合物の供給が、前記自己免疫障害の症状の、発症前、または発症の同定前に開始される、実施形態２５２に記載の方法。
【０５７４】
２５４．前記治療化合物の供給が、前記自己免疫障害の症状の、発症後、または発症の同定後に開始される、実施形態２５２〜２５３のいずれかに記載の方法。
【０５７５】
２５５．自己免疫障害が、１型糖尿病を含む、実施形態２５２〜２５４に記載の方法。
【０５７６】
２５６．前記標的組織が、膵島もしくは膵臓ベータ細胞、腸組織（例えば、腸内皮細胞）、腎臓組織（例えば、腎臓上皮細胞）、または肝臓組織（例えば、肝臓上皮細胞）を含む、実施形態２５２〜２５５のいずれかに記載の治療化合物。
【０５７７】
２５７．前記エフェクター結合／調節部分または標的化部分が、表３から選択されたポリペプチド、例えば、ＭＡｄＣＡＭ、ＳＥＺ６Ｌ２、ＬＲＰ１１、ＤＩＳＰ２、ＳＬＣ３０Ａ８、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、またはＴＭＥＭ２７ポリペプチドと結合する、実施形態２５２〜２５６のいずれかに記載の治療化合物。
【０５７８】
２５８．前記治療化合物の供給が、１型糖尿病の症状の、発症前、または発症の同定前に開始される、実施形態２５２〜２５７のいずれかに記載の方法。
【０５７９】
２５９．前記治療化合物の供給が、前記対象が、予め選択した特徴または症状を有する前、または有すると同定される前に開始される、実施形態２５２〜２５８のいずれかに記載の方法。
【０５８０】
２６０．前記治療化合物の供給が、１型糖尿病の症状の、発症後、または発症の同定後に開始される、実施形態２５２〜２５９のいずれかに記載の方法。
【０５８１】
２６１．前記治療化合物の供給が、前記対象が、予め選択した特徴または症状を有する後、または有すると同定された後に開始される、実施形態２５２〜２６０のいずれかに記載の方法。
【０５８２】
２６２，前記治療化合物が、実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物である、実施形態２５２〜２６１のいずれかに記載の方法。
【０５８３】
２６３治療化合物が、多発性硬化症を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態２５２〜２５７のいずれかに記載の方法。
【０５８４】
２６４．前記標的組織が、ＣＮＳ組織、ミエリン鞘、または乏突起膠細胞のミエリン鞘を含む、実施形態２６３に記載の方法。
【０５８５】
２６５．前記エフェクター結合／調節部分または標的化部分が、表３から選択されたポリペプチド、例えば、ＭＯＧ、ＰＬＰ、またはＭＢＰポリペプチドと結合する、実施形態２６３または２６４のいずれかに記載の方法。
【０５８６】
２６６．前記治療化合物の供給が、多発性硬化症の症状の、発症前、または発症の同定前に開始される、実施形態２６３〜２６５のいずれかに記載の方法。
【０５８７】
２６７．前記治療化合物の供給が、前記対象予め選択した特徴または症状の前、または同定の前に開始される、実施形態２６３〜２６５のいずれかに記載の方法。
【０５８８】
２６８．前記治療化合物の供給が、多発性硬化症の症状の、発症後、または発症の同定後に開始される、実施形態２６３〜２６５のいずれかに記載の方法。
【０５８９】
２６９．前記治療化合物の供給が、対象が予め選択した特徴または症状を有する後、または有すると同定された後に開始される、実施形態２６３〜２６５のいずれかに記載の方法。
【０５９０】
２７０．前記治療化合物が、実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物である、実施形態２６３〜２６９のいずれかに記載の方法。
【０５９１】
２７１．前記治療化合物が、心筋炎を有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態２５２〜２５７のいずれかに記載の方法。
【０５９２】
２７２．前記標的組織が、心筋細胞、単球、マクロファージ、または骨髄系細胞を含む、実施形態２７１に記載の方法。
【０５９３】
２７３．前記エフェクター結合／調節部分または標的化部分が、表３から選択されたポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰＡ（ＣＤ１７２ａ）ポリペプチドと結合する、実施形態２７１または２７２に記載の方法。
【０５９４】
２７４．前記治療化合物の供給が、心筋炎の症状の、発症前、または発症の同定前に開始される、実施形態２７１〜２７３のいずれかに記載の方法。
【０５９５】
２７５．前記治療化合物の供給が、前記対象が、予め選択した特徴または症状を有する前、または有すると同定される前に開始される、実施形態２７１〜２７３のいずれかに記載の方法。
【０５９６】
２７６．前記治療化合物の供給が、心筋炎の症状の、発症後、または発症の同定後に開始される、実施形態２７１〜２７３のいずれかに記載の方法。
【０５９７】
２７７．前記治療化合物の供給が、前記対象が、予め選択した特徴または症状を有する後、または有すると同定された後に開始される、実施形態２７１〜２７３のいずれかに記載の方法。
【０５９８】
２７８．前記治療化合物が、実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物である、実施形態２７１〜２７７のいずれかに記載の方法。
【０５９９】
２７９．治療化合物が、関節リウマチを有する、または有するリスクがある、もしくは有するリスクが高い対象の処置に好適である、実施形態２５２〜２５７のいずれかに記載の方法。
【０６００】
２８０．前記標的組織が、心筋細胞、単球、マクロファージ、または骨髄系細胞を含む、実施形態２７９に記載の方法。
【０６０１】
２８１．前記エフェクター結合／調節部分または標的化部分が、表３から選択されたポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰＡ（ＣＤ１７２ａ）ポリペプチドと結合する、実施形態２７９または２８０に記載の方法。
【０６０２】
２８２．前記治療化合物の供給が、関節リウマチの症状の、発症前、または発症の同定前に開始される、実施形態２７９〜２８１に記載の方法。
【０６０３】
２８３．前記治療化合物の供給が、前記対象が、予め選択した特徴または症状を有する前、または有すると同定される前に開始される、実施形態２７９〜２８１に記載の方法。
【０６０４】
２８４．前記治療化合物の供給が、関節リウマチの症状の、発症後、または発症の同定後に開始される、実施形態２７９〜２８１に記載の方法。
【０６０５】
２８５．前記治療化合物の供給が、前記対象が、予め選択した特徴または症状を有する後、または有すると同定された後に開始される、実施形態２７９〜２８１に記載の方法。
【０６０６】
２８６．前記治療化合物が、実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物である、実施形態２７９〜２８５に記載の方法。
【０６０７】
２８７．前記対象を、免疫細胞不活性化に関して（例えば、免疫阻害性チェックポイント分子の望ましくない刺激化をモニターするために）、前記標的部位から離れた部位で、例えば、末梢循環またはリンパ系で、モニタリングすることを含む、実施形態１９６〜２８６のいずれかに記載の方法。
【０６０８】
２８８．前記対象を、免疫細胞活性化に関して（例えば、免疫阻害性チェックポイント分子の望ましくない拮抗化をモニターするために）、前記標的部位から離れた部位で、例えば、末梢循環またはリンパ系で、モニタリングすることを含む、実施形態１９６〜２８７のいずれかに記載の方法。
【０６０９】
２８９．モニタリングの結果に応じて、前記対象の処置過程を選択する、例えば、前記治療化合物の前記用量を増加させる、前記治療化合物の前記用量を低減させる、用量を変化させずに前記治療化合物を用いる処置を継続する、実施形態１９６〜２８８のいずれかに記載の方法。
【０６１０】
２９０．前記対象を、前記標的組織の自己免疫攻撃に関してモニターする、実施形態１９６〜２８９のいずれかに記載の方法。
【０６１１】
２９１．前記モニタリングに応じて、前記治療化合物の投与量が選択される、実施形態２９０に記載の方法。
【０６１２】
２９２．前記投与量が、投与される、実施形態２９１に記載の方法。
【０６１３】
２９３．前記選択投与量が、ゼロである、すなわち、治療化合物の投与が中止される、実施形態２９０に記載の方法。
【０６１４】
２９４．前記選択投与量が、ゼロでない、実施形態２９０に記載の方法。
【０６１５】
２９５．前記選択投与量が、増加した投与量である、実施形態２９０に記載の方法。
【０６１６】
２９６．前記選択投与量が、低下した投与量である、実施形態２９０に記載の方法。
【０６１７】
２９７．投与することが、例えば、末梢循環系への全身投与を含む、実施形態１９６〜２９６のいずれかに記載の方法。
【０６１８】
２９８．投与することが、例えば、前記標的組織への局所投与を含む、実施形態１９６〜２９７のいずれかに記載の方法。
【０６１９】
２９９．本明細書に提供する治療化合物を、治療レベルが少なくとも１、５、１０、１４、または２８日間、例えば、連続または非連続した日にわたって存在するように、投与することを含む、実施形態１９６〜２９８のいずれかに記載の方法。
【０６２０】
３００．前記対象が、哺乳類、例えば、非ヒト哺乳類である、実施形態１９６〜２９９のいずれかに記載の方法。
【０６２１】
３０１．前記対象が、ヒトである、実施形態１９６〜２９９のいずれかに記載の方法。
【０６２２】
３０２．実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物をコードする１つの核酸分子または複数の核酸分子。
【０６２３】
３０３．実施形態３０２に記載の核酸分子を含む１つのベクターまたは複数のベクター。
【０６２４】
３０４．実施形態３０２に記載の核酸分子または実施形態３０３に記載のベクターを含む細胞。
【０６２５】
３０５．治療化合物を作成する方法であって、実施形態３０４に記載の細胞を培養して前記治療化合物を作成することを含む、前記方法。
【０６２６】
３０６．実施形態１〜１９５のいずれかに記載の治療化合物をコードする核酸配列の作成方法であって、
ａ）標的化部分をコードする配列を含むベクターを提供し、エフェクター結合／調節部分をコードする前記ベクター配列へと挿入して、治療化合物をコードする配列を形成すること；または
ｂ）エフェクター結合／調節部分をコードする配列を含むベクターを提供し、標的化部分をコードする前記ベクター配列へと挿入して、治療化合物をコードする配列を形成すること、
それにより治療化合物をコードする配列を作成することを含む、前記方法。
【０６２７】
３０７．前記標的化部分が、対象の必要性に応じて選択される、実施形態３０６に記載の方法。
【０６２８】
３０８．前記エフェクター結合／調節部分が、対象の必要性に応じて選択される、実施形態３０６または３０７に記載の方法。
【０６２９】
３０９．前記治療化合物をコードする前記配列を発現させて、前記治療化合物を産生することをさらに含む、実施形態３０６または３０７のいずれかに記載の方法。
【０６３０】
３１０．前記配列、または前記配列から作成されたポリペプチドを、前記治療化合物を対象に投与するだろう別の実体に、例えば医療提供者に移入することをさらに含む、実施形態３０６〜３０９のいずれかに記載の方法。
【０６３１】
３１１．対象を処置する方法であって、
実施形態３０６〜３１０に限られないが、本明細書に提供するいずれかの方法により作成された、治療化合物、または治療化合物をコードする核酸を、獲得すること、例えば、別の実体から受けること；
前記治療化合物、または治療化合物をコードする核酸を、前記対象に投与すること、
それにより前記対象を処置することを含む、前記方法。
【０６３２】
３１２．前記治療化合物、または治療化合物をコードする核酸を、別の実体、例えば、前記治療化合物、または治療化合物をコードする核酸を作成するだろう前記実体に対して同定することをさらに含む、実施形態３１１に記載の方法。
【０６３３】
３１３．別の実体、例えば、前記治療化合物、または治療化合物をコードする核酸を作成した前記実体から、前記治療化合物、または治療化合物をコードする核酸を要求することをさらに含む、実施形態３１１または３１２に記載の方法。
【０６３４】
３１４．前記対象が、自己免疫障害を有し、前記治療化合物が、前記自己免疫障害の自己抗原性ペプチドまたはポリペプチド特徴を含まない、例えば、前記対象がそれに対して自己抗体を有するペプチドまたはポリペプチドを含まない、実施形態３１１〜３３３のいずれかに記載の方法。
【０６３５】
以下の実施例は、本明細書に記載の化合物、組成物及び方法の例示であるが、限定しない。当業者に公知の他の好適な改変及び適応は、以下の実施形態の範囲内である。
【実施例】
【０６３６】
実施例１：ＨＬＡ標的ＰＤ−１刺激治療化合物。
ＨＬＡ標的ＰＤ−１刺激治療薬の操作
ＨＬＡ−Ａ２に特異的な結合ドメインを、ＢＢ７．２ハイブリドーマ（ＡＴＣＣ）からのＩｇ重鎖及び軽鎖の可変領域をクローニングし、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）へと変換することにより得る。ｓｃＦｖの活性及び特異性を、他のＨＬＡ−Ａ対立遺伝子を発現する細胞と比較して、ＨＬＡ−Ａ２発現細胞へのＢＢ７．２の結合を評価することにより確認することができる。ＰＤ−１結合活性のために必要とされる最小ＰＤ−Ｌ１残基は、アミノ酸６８〜１１４に対応するＰＤ−Ｌ１ＩｇＶドメインのアミノ酸３’及び５’の必要性を系統的に評価することにより同定される。発現構築物を設計し、タンパク質合成及び精製し、ＰＤ−１結合活性をＢｉａｃｏｒｅにより試験した。ＰＤ−Ｌ１ＩｇＶドメインによりＰＤ−１結合に必要とされる最小限必須アミノ酸は、ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶと称される。ＢＢ７．２ｓｃＦｖ及びＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ二重特異性分子を生成するために、ドメイン配置はＶＬBB7.2−ＶＨBB7.2−ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ−ＩｇＧ４Ｆｃとして、二重特異性一本鎖抗体ＢＢ７．２×ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶをコードするＤＮＡフラグメントを合成し、ＤＨＦＲ選択カセットを含有する発現ベクターへとクローニングした。
【０６３７】
発現ベクタープラスミドＤＮＡを、２９３Ｔ細胞へと一過的にトランスエフェクトし、ＢＢ７．２×ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ二重特異性抗体を、上清から、プロテインＡ／Ｇカラムを使用して精製した。ＢＢ７．２×ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ二重特異性抗体の完全性を、ポリアクリルアミドゲルにより評価する。ＢＢ７．２  ｓｃＦｖドメインのＨＬＡ−Ａ２への及びＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶドメインのＰＤ−１への結合を、ＥＬＩＳＡ及び細胞ベースのＦＡＣＳアッセイにより評価する。
【０６３８】
ＢＢ７．２×ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ二重特異性抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能を、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して評価する。９６ウェルプレートフォーマットで、ＨＬＡ−Ａ２+ドナーからの１００，０００個の被照射ヒトＰＢＭＣを、ウェル毎に分割し、アクチベーターとして使用した。次いで、ＨＬＡ−Ａ１-レスポンダーＴ細胞を、漸増量のＢＢ７．２×ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ二重特異性抗体と一緒に加えた。レスポンダーＴ細胞の７２時間にわたって増殖する能力を、ＢｒｄＵ取り込みによって評価し、ＩＦＮｇ及びＩＬ２サイトカイン産生を、ＥＬＩＳＡによって評価して、共培養上清において追加で評価した。ＢＢ７．２×ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ二重特異性抗体は、ＭＬＲ反応を抑制すると見出され、これは、ＨＬＡ−Ａ２-レスポンダーＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を阻害することにより実証された。
【０６３９】
ＢＢ７．２×ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ二重特異性抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ機能を、皮膚同種移植寛容のマウスマウスモデルを使用して評価する。Ｃ５７ＢＬ／６−Ｔｇ（ＨＬＡ−Ａ２．１）１Ｅｎｇｅ／Ｊ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｍａｉｎｅ）系統のマウスを、Ｂａｌｂ／ｃＪと交配させ、Ｆ１子孫がＨＬＡ−Ａ２．１導入遺伝子を発現し、同種移植ドナーとして機能する。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを剃毛し、安楽死させたＣ５７ＢＬ／６−Ｔｇ（ＨＬＡ−Ａ２．１）１Ｅｎｇｅ／Ｊ×Ｂａｌｂ／ｃＪ  Ｆ１マウスから除去した皮膚を外科的に移植した。同時に、宿主マウスは、マウスＩｇＧ１ＦｃまたはＢＢ７．２のみもしくはＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶのみの対照を含有するように操作されたＢＢ７．２×ＰＤ−Ｌ１−ＩｇＶ二重特異性抗体の腹腔内注射を受け始める。皮膚同種移植拒絶または許容を、３０日間にわたってモニターし、ここで宿主を安楽死させ、リンパ節及び同種移植片に存在するリンパ球集団を定量化した。
【０６４０】
実施例２：エフェクタードメインとしてのＣＤ３９及び／またはＣＤ７３は、関心対象の細胞タイプまたは組織を取り囲むプリン作動性ハローを作り出す
ＣＤ３９及び／またはＣＤ７３の触媒活性フラグメントを標的化ドメインに融合させる。標的部位での結合及び蓄積の際に、ＣＤ３９は、ＡＴＰをＡＭＰへとリン酸加水分解する。標的部位での結合及び蓄積の際に、ＣＤ７３は、細胞外ＡＭＰをアデノシンへと脱リン酸化する。本明細書での使用に好適なＣＤ３９の可溶性触媒活性形態は、ヒト及びマウス血液中を循環することが見出されている、例えば、Ｙｅｇｕｔｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２０１２  Ｓｅｐ；２６（９）：３８７５−８３を参照されたい。可溶性組み換えＣＤ３９フラグメントは、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｅｃｔｏ−ＡＤＰａｓｅ／ＣＤ３９，Ｇａｙｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１９９８  Ｍａｙ  １；１０１（９）：１８５１−１８５９にも記載されている。好適なＣＤ７３分子は、せん断応力によるＧＰＩアンカーのタンパク質分解切断または加水分解により内皮細胞の膜から脱落することができるＣＤ７３の可溶性形態を含む、例えば、参考文献：Ｙｅｇｕｔｋｉｎ  Ｇ，Ｂｏｄｉｎ  Ｐ，Ｂｕｒｎｓｔｏｃｋ  Ｇ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｈｅａｒ  ｓｔｒｅｓｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｅｃｔｏ−ｅｎｚｙｍｅｓ  ＡＴＰａｓｅ  ａｎｄ５’−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ  ａｌｏｎｇ  ｗｉｔｈ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ＡＴＰ  ｆｒｏｍ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２０００；１２９：９２１−６を参照されたい。
【０６４１】
ＡＴＰからＡＭＰまたはＡＭＰからアデノシンの局所触媒作用により、劇症Ｔエフェクター細胞機能に必要な局所エネルギー貯蔵が枯渇することになる。Ｔｒｅｇ機能は、エネルギー需要に関して酸化的リン酸化（必要とするＡＴＰが少ない）に依存しているため、ＡＴＰ枯渇の影響を受けないはずであり、Ｔメモリー及び他のエフェクター細胞は、劇症機能に関して解糖作用（高いＡＴＰ使用を必要とする）に依存しているため影響を受けるはずである。
【０６４２】
実施例３：抗体誘導性ＰＤ−１シグナル伝達の測定。
２つの構築物、１）ｂ−ガラクトシダーゼに融合したヒトＰＤ−１ポリペプチド、これは「酵素ドナー」と称することができる、及び２）ｂ−ガラクトシダーゼに融合したＳＨＰ−２ポリペプチド、これは「酵素アクセプター」と称することができる、を安定して発現するＪｕｒｋａｔ細胞。ＰＤ−１抗体を、該細胞と接触させ、ＰＤ−１が結合すると、ＳＨＰ−２がＰＤ−１に動員される。酵素アクセプター及び酵素ドナーは、アッセイすることができる完全に活性なｂ−ガラクトシダーゼ酵素を形成する。このアッセイを使用して、ＰＤ−１シグナル伝達の活性化を示すことができる。
【０６４３】
実施例４：ＰＤ−１アゴニズムの測定。ＰＤ−１アゴニストは、Ｔ細胞活性化を阻害する。いずれの特定の理論にも束縛されないが、ＰＤ−１アゴニズムは、抗ＣＤ３誘導性Ｔ細胞活性化を阻害する。ヒトまたはマウス細胞は、ＰＨＡ（ヒトＴ細胞に関して）またはＣｏｎＡ（マウスＴ細胞に関して）を用いて、それらがＰＤ−１を発現するように、前もって活性化される。次いで、ＰＤ−１アゴニズムアッセイのために、抗ＰＤ−１（またはＰＤ−Ｌ１）の存在下で抗ＣＤ３を用いてＴ細胞を「再活性化」する。抗ＣＤ３の存在下でＰＤ−１アゴニストシグナルを受けるＴ細胞は、抗ＣＤ３刺激単独と比較して活性化の低減を示すだろう。活性化は、増殖またはサイトカイン産生（ＩＬ−２、ＩＦＮｇ、ＩＬ−１７）及び場合によっては他のマーカー、例えばＣＤ６９活性化マーカーにより読み出すことができる。
【０６４４】
実施例５．抗ＭＡｄＣＡＭ／マウスＰＤ−Ｌ１融合タンパク質の発現及び機能は、分子構成により影響されない。
抗マウスＭＡｄＣＡＭ抗体／マウスＰＤ−Ｌ１分子を含む二重特異性融合分子を、２つの配向で発現させた。第一の配向は、マウスＰＤ−Ｌ１をその重鎖のＣ末端で融合させた抗マウスＭＡｄＣＡＭ  ＩｇＧからなる。第二の配向は、Ｉｇ  ＦｃドメインのＮ末端で融合したマウスＰＤ−Ｌ１と、ｃ末端で融合した抗マウスＭＡｄＣＡＭ  ｓｃＦｖからなる。両方の分子は、哺乳類の発現系で十分に発現されることがわかった。また、分子がそれぞれの結合パートナーであるＭＡｄＣＡＭまたはＰＤ−１に両方の配向で同時に結合できることもわかった。これらの結果は、ＰＤ−Ｌ１に融合した抗ＭＡｄＣＡＭ抗体からなる分子が、ＰＤ−Ｌ１がＦｃにＮまたはＣ末端で融合する構成で発現され、適切な機能的結合活性を保持できることを実証する。
【０６４５】
簡潔には、ヒトＩｇＧ１ＦｃドメインのＮ末端に融合したマウスＰＤ−Ｌ１及びｃ末端に融合した抗ＭＡｄＣＡＭ  ｓｃＦｖ  ＭＥＣＡ−８９を有する単一ポリペプチドをコードする単一遺伝子を含有するｐＴＴ５ベクターを、ＨＥＫ２９３  Ｅｘｐｉ細胞にトランスフェクトした。あるいは、２つのプラスミドを等モル比で同時トランスフェクトした。第一のプラスミドはＭＥＣＡ−８９の軽鎖をコードし、第二のプラスミドはｃ末端にマウスＰＤ−Ｌ１が融合したＭＥＣＡ−８９の完全長ＩｇＧ１重鎖をコードした。５〜７日後、該分子を発現する細胞培養上清を回収し、遠心分離及び０．２２ｕｍろ過装置を通してろ過することにより清澄化した。二重特異性分子は、ｐｒｏＡレジンで捕捉した。該レジンをＰＢＳ  ｐＨ７．４で洗浄し、１０分の１容量の１Ｍ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．５を使用して中和しながら、１００ｍＭグリシンｐＨ２．５を使用して捕捉分子を溶出した。タンパク質をＰＢＳ  ｐＨ７．４に緩衝液交換し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  ３．２／３００でサイズ排除クロマトグラフィーにより分析した。Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ４〜１２％ゲルでの還元及び非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる１ｕｇの精製物質の分析を実施した。
【０６４６】
配向に関係なく、両方のタンパク質は１０ｍｇ／Ｌを超えて発現し、サイズ排除クロマトグラフィー及び還元／非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥで示されるように、精製後に９５％を超えて単分散した。したがって、これは、ＦｃドメインのＮ及びＣ末端に異なる免疫調節因子及び組織標的化部分を備えた二重機能二重特異性分子の産生及び活性を実証する。これは、ＰＤ−１アゴニスト及び結合パートナーがＩｇ  ＦｃドメインのＮまたはＣ末端で発現できることも具体的に実証する。
【０６４７】
実施例６．ＭＡｄＣＡＭに係留したＰＤ−１アゴニストプロトタイプを含む二重特異性分子は、ＭＡｄＣＡＭ及びＰＤ−１と同時に結合することができる。
簡潔には、免疫吸着プレートを、マウスＰＤ−１を用いて、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中１ｕｇ／ｍＬの濃度、７５ｕｌ／ウェルでコーティングし、一晩４℃でインキュベートした。ウェルを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ  ｐＨ７．４（洗浄緩衝液）で３回洗浄し、次いで、２００ｕｌ／ウェル１％ＢＳＡを含むＰＢＳ  ｐＨ７．４（ブロック緩衝液）を用いて、２時間室温でブロックした。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、Ｎ末端またはＣ末端のいずれかにＰＤ−１アゴニストプロトタイプを含む２つの二重特異性分子を、１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳ（アッセイ緩衝液）中１ｎＭ、１０ｎＭ、及び１００ｎＭに希釈した。希釈した物質を、マウスＰＤ−１でコーティングプレートに、７５ｕｌ／ウェルで１時間にわたり室温で加えた。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、マウスＭＡｄＣＡＭを、プレートに７５ｕｌ／ウェルで、アッセイ緩衝液中１０ｎＭの濃度にて１時間にわたり室温で加えた。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、ヤギビオチン化抗マウスＭＡｄＣＡＭポリクローナル抗体を、アッセイ緩衝液中０．５ｕｇ／ｍＬに希釈し、これをプレートに７５ｕｌ／ウェルで１時間にわたり室温で加えた。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、高感度ストレプトアビジンＨＲＰをアッセイ緩衝液中に１：５０００で希釈し、これをプレートに７５ｕｌ／ウェルで１５分間にわたり室温で加えた。洗浄緩衝液で３回洗浄し、洗浄緩衝液（ｔｗｅｅｎ−２０を含まない）で１回洗浄した後、アッセイを、ＴＭＢを用いて展開し、１Ｎ  ＨＣＬで停止させた。ＯＤ４５０ｎｍを測定した。実験には、マウスＰＤ−１の非存在下でプレート／ブロックに対する非特異的結合のための適切な対照、ならびにマウスＰＤ−１及びマウスＭＡｄＣＡＭ間で架橋を形成することができない、無ＭＡｄＣＡＭ対照、及び単一特異性対照を含んだ。
【０６４８】
結果は、１ｎＭ、１０ｎＭ、及び１００ｎＭの濃度で、両方の二重特異性分子がマウスＭＡｄＣＡＭ及びマウスＰＤ−Ｌ１と同時に相互作用できる一方で、単一特異性対照は架橋シグナルを生成しなかったことを実証した。加えて、マウスＰＤ−１がプレート表面に存在しない場合、試験したいずれの濃度でもＭＡｄＣＡＭへのいずれの化合物の結合もなく、試験化合物がプレート表面と非特異的に相互作用していないことが示された。ゆえに、これらの結果は、ＭＡｄＣＡＭとＰＤ−１の両方への結合を標的としている二重特異性分子が両方の分子にうまく結合できることを実証する。実験は、ＰＤ−１抗体の代替としてＰＤ−Ｌ１を使用して行ったが、ＰＤ−１抗体も同様に機能すると予想される。
【０６４９】
実施例７．二重特異性ＰＤ−Ｌ１プロトタイプ分子は、ＰＤ−１アゴニストアッセイにおいてＴ細胞を阻害する。
ＰＤ−１アゴニスト抗体を模倣する二重特異性分子を試験して、ＰＤ−１アゴニズムがＴ細胞を阻害できることを実証した。簡潔には、７週齢の雌Ｃ５７ＬＢ／６マウスを屠殺し、その脾細胞を単離した。脾細胞をＣｏｎＡに３日間曝露し、次いでＰＤ−１型分子、これはこの例では抗ヒトＩｇＧを使用してプレートに係留されたＰＤ−Ｌ１二重特異性分子とした、の存在下または非存在下で抗ＣＤ３に曝露した。次いで、Ｔ細胞をＰＤ−Ｌ１二重特異性分子に導入した。ＰＤ−１抗体を模倣するＰＤ−Ｌ１は、Ｔ細胞アゴニストであり、Ｔ細胞活性化を阻害すると見出された。同じ実験を、ＭＡｄＣＡＭコーティングプレートと相互作用することによりプレートに係留された抗ＭＡｄＣＡＭ抗体と融合したＰＤ−Ｌ１二重特異性分子を使用して繰り返した。ＰＤ−１アゴニストの模倣体、ＰＤ−Ｌ１／抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は、Ｔ細胞活性の効果的なアゴニストであることが見出された。これらの結果は、ＰＤ−１抗体／ＭＡｄＣＡＭ抗体融合タンパク質を模倣する二重特異性分子は、分子の端にてＭＡｄＣＡＭ抗体成分を介して該分子が捕捉されると、初代マウスＴ細胞芽細胞へと機能的な阻害性シグナルを発することができることを実証する。
【０６５０】
実施例８：異なる組織係留を有する二重特異性ＰＤ−１プロトタイプ分子は、ＰＤ−１アゴニストアッセイにおいてＴ細胞を阻害することができる。ＰＤ−Ｌ１の融合分子をＰＤ−１抗体の代替として使用し、クラスＩ  Ｈ−２Ｋｋ抗体に連結させた。ＭＨＣクラスＩ  Ｈ−２Ｋｋ係留ＰＤ−Ｌ１分子は、実施例６及び７に記載のデータと同様の機能的結合を有した。簡潔には、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスの脾細胞をコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）及びＩＬ−２で３日間刺激した。プレートを、抗ＣＤ３（２Ｃ１１）を用いて一晩４℃でコーティングし、洗浄した。プレートを、抗ヒトＩｇＧを用いて３時間３７℃でコーティングし、洗浄した。単一特異性抗Ｈ−２Ｋｋ（１６−３−２２）または二重特異性抗Ｈ−２Ｋｋ：ｍＰＤ−Ｌ１を加えて、３時間３７℃でインキュベートし、洗浄した。全ての試験品は、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃ部分を含有した。ＰＢＳ（Ｔｘなし）を加えて、アッセイのバックグラウンドを決定した。ＣｏｎＡ芽球を２回洗浄し、プレートに加え、３７℃でインキュベートした。２４時間後に上清を除去した。ＩＦＮｇレベルをＭＳＤによって決定した。４８時間後、細胞生存率／代謝をＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−ｇｌｏにより分析した。ＩｇＧ  Ｆｃドメインを介して捕捉された場合、ＭＨＣクラスＩ係留ＰＤ−Ｌ１二重特異性は、マウスＰＤ−１アゴニズムアッセイにおいてＴ細胞活性化を減弱させることができる。それゆえ、この実施例は、異なる二重特異性プロトタイプ分子が、分子が異なる組織係留を介して捕捉された場合、初代マウスＴ細胞芽細胞へと機能的な阻害シグナルを発することができることを実証する。この場合、ＭＨＣクラスＩ  Ｈ−２Ｋｋに対するマウス抗体である。したがって、このデータは、係留は、ＭＡｄＣＡＭに対して特異的でなく、本明細書に提供する標的化部分として作用することができる他の分子で可能であるということを実証する。
【０６５１】
実施例９．ＰＤ−１アゴニストは、Ｊｕｒｋａｔ細胞においてシグナル伝達を誘導することができる
ベータ−ガラクトシダーゼ酵素ドナーに融合したヒトＰＤ−１とベータ−ガラクトシダーゼ酵素アクセプターに融合したＳＨＰ−２の両方を発現するＪｕｒｋａｔ細胞をプレートの試験条件に加え、２時間インキュベートした。アゴニストＰＤ−１抗体は、シグナル伝達とＳＨＰ−２の動員、酵素の補完、及び活性ベータ−ガラクトシダーゼ酵素の形成を誘導する。ベータ−ガラクトシダーゼ基質を追加し、化学発光を標準的な発光プレートリーダーで測定することができる。アゴニズムは化学発光によって測定され、測定される化学発光が多いほどアゴニズムが大きいことを示す。
【０６５２】
ＰＤ−１／ＭＡｄＣＡＭ二重特異性分子のアゴニズムをこのアッセイにて測定した。Ｃｌ１０（ＵＣＢ）及びＣＣ−９０００６（Ｃｅｌｇｅｎｅ／Ａｎａｐｔｙｓ）をＰＤ−１アゴニスト抗体として使用した。Ｉｇ捕捉アッセイフォーマットの機能性アッセイにおいて、どちらも活性でありＰＤ−１アゴニズムを呈する。簡潔には、プレートを、抗ヒトＩｇＧを用いて一晩４℃でコーティングし、洗浄した。抗破傷風毒素（ＴＴ）またはベンチマークアゴニスト抗ＰＤ−１モノクローナル抗体、Ｃ１．１０またはＣＣ−９０００６を加え、１時間３７℃でインキュベートし、洗浄した。全ての試験品は、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃを含有した。培地（Ｔｘなし）を加えて、アッセイのバックグラウンドを決定した。プレートを３回洗浄した。ｂ−ガラクトシダーゼ酵素ドナーに融合したヒトＰＤ−１とｂ−ガラクトシダーゼ酵素アクセプターに融合したＳＨＰ−２の両方を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を加え、２時間インキュベートした。アゴニストＰＤ−１抗体は、シグナル伝達とＳＨＰ−２の動員、酵素の補完及び活性β−ガラクトシダーゼ酵素の形成を誘導する。Ｂ−ガラクトシダーゼ基質を加え、化学発光を標準的な発光プレートリーダーで測定した。２つのヒトＰＤ−１アゴニスト抗体（Ｃｌ１０及びＣＣ−９０００６）は、改変Ｊｕｒｋａｔレポーターアッセイにおいて結合し、シグナル伝達（アゴニズムの代理）を誘導する。ゆえに、このアッセイは、機能性ＰＤ−１アゴニズムアッセイである。Ｃｌ１０：ＭＥＣＡ８９（ＭＥＣＡ８９は既知のＭＡｄＣＡＭ抗体である）は、ＭＡｄＣＡＭ抗体、ＭＥＣＡ８９［ｓｃＦｖ］を、Ｃｌ１０の重鎖のＣ末端に融合することによって作成された新しい二重特異性分子である。この融合タンパク質は、Ｃｌ１０のみのタンパク質と同様に、ＩｇＧ  Ｆｃドメインを介して捕捉された場合、機能アッセイにおいて活性であり、ＰＤ−１アゴニズムを呈することが見出された。しかしながら、ＭＡｄＣＡＭタンパク質をキャプチャとして使用する機能性アッセイフォーマットでは、Ｃｌ１０：ＭＥＣＡ８９のみが活性である（単一特異性構成要素はシグナルを発さない）。
【０６５３】
簡潔には、プレートを抗ヒトＩｇＧまたは組み換えｍＭＡｄＣＡＭ−１のいずれかを用いて一晩４℃でコーティングし、洗浄した。単一特異性抗破傷風毒素（ＴＴ）、抗ＭＡｄＣＡＭ−１（ＭＥＣＡ３９）もしくはアゴニスト抗ＰＤ−１（Ｃｌ１０）または二重特異性Ｃｌ１０：ＭＥＣＡ８９を加え、１時間３７℃でインキュベートし、洗浄した。全ての試験品は、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃ部分を含有した。ＰＢＳ（Ｔｘなし）を加えて、アッセイのバックグラウンドを決定した。プレートを２回洗浄した。ｂ−ガラクトシダーゼ酵素ドナーに融合したヒトＰＤ−１とｂ−ガラクトシダーゼ酵素アクセプターに融合したＳＨＰ−２の両方を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を加え、２時間インキュベートした。アゴニストＰＤ−１抗体は、シグナル伝達とＳＨＰ−２の動員、酵素の補完、及び活性ｂ−ガラクトシダーゼ酵素の形成を誘導する。Ｂ−ガラクトシダーゼ基質を追加し、化学発光を標準的な発光プレートリーダーで測定した。結果：プレートが抗ＩｇＧ  Ｆｃキャプチャでコーティングされている場合は、Ｃｌ１０、及びＭＡｄＣＡＭ係留Ｃｌ１０二重特異性分子は両方とも、ＪｕｒｋａｔレポーターアッセイにおいてＰＤ−１シグナル伝達を誘導することができるが、プレートが組み換えＭＡｄＣＡＭタンパク質でコーティングされている場合は、ＭＡｄＣＡＭ係留二重特異性分子のみが、該レポーターアッセイにおいてＰＤ−１シグナル伝達を誘導することができる。これらの結果は、ＭＡｄＣＡＭと係留し、ＰＤ−１アゴニスト抗体を含有する分子が、機能的であることを実証し、これは、ＰＤ−１アゴニストの代理としてＰＤ−Ｌ１で示される結果と同様である。
【０６５４】
実施例１０：ＰＤ−１アゴニスト抗体の生成
ＰＤ−１欠損マウスを、ＰＤ−１に対する免疫応答を生成する条件下でマウスＰＤ−１を用いて、免疫化した。マウスＰＤ−１と結合する５４ハイブリドーマを生成し、同定した。実施例４及び６に記載の方法にしたがって、異なるハイブリドーマによって産生された抗体を、Ｔ細胞アゴニズムに関して分析した。５４個のハイブリドーマのうち、少なくとも６個がＰＤ−１アゴニストとして同定された。抗体はＰＤ−１への結合についても試験され、ＰＤ−Ｌ１結合部位と同じ部位で結合することが見出された。
【０６５５】
簡潔には、ＰＤ−Ｌ１結合部位への結合を以下のアッセイを使用して決定した。免疫吸着プレートを、一晩７５μＬの組み換えマウスＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ（２μｇ／ｍＬ）を用いて１×ＰＢＳ、ｐＨ７．４中でコーティングした。次いで、プレートを、１×ＰＢＳで３回洗浄し、２時間室温にて１％ＢＳＡを補充した１×ＰＢＳを用いてブロックした。組み換えマウスＰＤ−１−Ｆｃ（１ｎＭ）を、１００ｎＭの示した抗マウスＰＤ−１抗体と、１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を補充した１×ＰＢＳ（アッセイ緩衝液）中で、１時間室温で、振とうしながらインキュベートした。ブロッキング後、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０ＰＢＳＴを補充した１×ＰＢＳを用いて３回洗浄し、抗体−ＰＤ−１コンジュゲートを、プレート結合マウスＰＤ−Ｌ１とインキュベートした。未結合ＰＤ−１をＰＢＳＴで洗い流した後、プレートを、７５μＬのビオチン化ポリクローナル抗ＰＤ−１抗体（０．５μｇ／ｍＬ）とアッセイ緩衝液中でインキュベートし、その後、１：５０００ストレプトアビジンＨＲＰ、これもアッセイ緩衝液中に希釈されている、を用いて増幅した。プレートを、ＰＢＳＴで３回洗浄し、その後１×ＰＢＳで３回洗浄してから、１００μＬ  ＴＭＢを加え、その後１００μＬ  １Ｍ  ＨＣｌを加えて、展開を停止させた。４５０ｎｍで吸光度を読み取り、抗体の非存在下でＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１への結合に対して正規化した。結果は、活性抗体がＰＤ−Ｌ１結合部位に結合することを示した。不活性な抗体は、ＰＤ−Ｌ１結合部位に結合しなかった。それゆえ、この実施例は、本明細書に記載の以前に同定されたＰＤ−１アゴニスト抗体に加えて、アゴニストである抗ＰＤ−１抗体を産生する能力を実証する。
【０６５６】
実施例１１：係留抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１アゴニストとして作用する。
ヒト抗体ｓｃＦｖファージライブラリーを、反復選択ラウンドにわたって、組み換えヒト、マウス、及びカニクイザルＰＤ−１タンパク質に対してパンニングして、ＰＤ−１の３つの前述の種オルソログを全て認識する抗体クローンについて富化した。ｓｃＦｖクローンは、ｎｔ−ＶＨ−リンカー−ＶＬ−ｃｔフォーマットで構成し、ｐＩＩＩコートタンパク質を介してＭ１３ファージ表面に融合させた。選択後、ＣＨＯ細胞の細胞表面に発現したヒト、マウス、及びカニクイザルＰＤ−１への結合について、クローンｓｃＦｖをスクリーニングした。３つの細胞表面発現ＰＤ−１種オルソログ全てに対して交差反応性であることが判明したクローンを、標準的な分子生物学技術を使用して、各分子が合計４本のポリペプチド鎖（２本の重鎖、及び２本の軽鎖）から構成されたヒトＩｇＧ１フォーマットへと変換した。提供するように、２本の軽鎖は、互いに同一であり、２本の重鎖は互いに同一であった。
【０６５７】
２本の同一の重鎖は、ホモ二量体形成し、２本の同一の軽鎖は、各重鎖と対となって、インタクトヒトＩｇＧ１を形成する。Ｆｃドメインは、ＦｃｙＲ相互作用を除去するために、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３６Ａ、及びＧ２３７Ａ突然変異を含有する。変換されたヒトＩｇＧ１抗ＰＤ−１抗体をトランスフェクトし、ＨＥＫ２９３Ｅｘｐｉ細胞において発現させ、プロテインＡクロマトグラフィーにより精製した。タンパク質濃度は、ナノドロップ分光光度計を抗体特異的吸光係数と組み合わせて使用して決定した。抗体はＰＢＳ  ｐＨ７．４中で製剤化した。
【０６５８】
次に、抗ＰＤ−１抗体を、アゴニスト活性について本明細書に記載のＪｕｒｋａｔアッセイで試験した。簡潔には、組織培養プレートを抗ＩｇＧでコーティングするか、コーティングしないままとした。捕捉フォーマットについては、試験品または対照を抗ＩｇＧコーティングウェルに１００ｎＭ、２５ｎＭまたは１２．５ｎＭで加え、３時間３７℃でインキュベートした。プレートを洗浄し、Ｊｕｒｋａｔ  ＰＤ−１細胞を加えた。可溶性フォーマットについては、可溶性試験品または対照を、すでにＪｕｒｋａｔ  ＰＤ１細胞を含有するウェルに１００ｎＭ、２５ｎＭまたは１２．５ｎＭで加えた。発光をプレートリーダーで測定した。結果は、１２のうち９のヒト／マウス交差反応性ＰＤ−１抗体が、抗ＰＤ−１抗体が抗ＩｇＧを介して捕捉されたが、可溶性フォーマットではない場合に、Ｊｕｒｋａｔアッセイにおいて用量依存性活性を示したことを実証した。このデータは、抗ＰＤ−１抗体が、標的化部分によりその標的に係留するとき、アゴニストとして作用することができることを実証する。
【０６５９】
結論として、いずれの特定の理論にも束縛されないが、本明細書に提示するデータは、ＰＤ−１アゴニスト／ＭＡｄＣＡＭ二重特異性分子が、ＭＡｄＣＡＭとＰＤ−１の両方に結合し、さらにＴ細胞活性を刺激することができることを実証する。ゆえに、本分子を使用して、本明細書に提供する様々な状態を処置し、局所的及び／または組織特異的免疫調節ならびにＴ細胞応答の下方制御を提供することができる。
【０６６０】
本明細書において引用したありとあらゆる特許、特許出願、及び刊行物の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。様々な実施形態が、特定の態様を参照して開示されているが、これらの実施形態の他の態様及び変形が、本実施形態の真の精神及び範囲から逸脱することなく当業者によって考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、そのような全ての態様及び同等の変形を含むと解釈されることを意図している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図３Ａ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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