(57)【要約】  本開示は、Ａ斑または脳アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）関連症状の少なくとも１つの症候または徴候を効果的に処置するため、またはアミロイド斑沈着またはＣＡＡの沈着を減少させるための組成物および方法を含む。本方法は、哺乳動物対象、例えばヒトに、有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を投与することを含む。
2020506162.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号２５を含む軽鎖可変領域、および／または（ｂ）配列番号８４のコンセンサス配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗ＡｐｏＥ抗体。
【請求項２】
配列番号８４のコンセンサス配列が配列番号８５である、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
軽鎖可変領域が、配列番号７８または配列番号２４から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号８０または配列番号８２から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
軽鎖可変領域が、配列番号７８、配列番号２４および配列番号２５を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号８０、配列番号８２および配列番号８４を含む、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項５】
軽鎖可変領域が、配列番号７９または配列番号２４から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号８１または配列番号８３から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項６】
軽鎖可変領域が、配列番号７９、配列番号２４および配列番号２５を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号８１、配列番号８３および配列番号８５を含む、請求項５に記載の単離された抗体。
【請求項７】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５または配列番号１９である、請求項１〜６のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項８】
重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６または配列番号２０である、請求項１〜７のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項９】
（ａ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号９であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１０であるか；（ｂ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１１であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２であるか；（ｃ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１３であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１４であるか；（ｄ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１５であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１６であるか；または（ｅ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１９であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２０である、請求項１〜８のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１０】
配列番号８４または配列番号８５のコンセンサス配列が配列番号５０である、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
軽鎖可変領域が、配列番号４７または配列番号２４から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号４８または配列番号４９から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項１０に記載の単離された抗体。
【請求項１２】
軽鎖可変領域が、配列番号４７、配列番号２４および配列番号２５を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号４８、配列番号４９および配列番号５０を含む、請求項１０に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
配列番号８４のコンセンサス配列が配列番号５４である、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
軽鎖可変領域が、配列番号５１または配列番号２４から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号５２または配列番号５３から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項１３に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
軽鎖可変領域が、配列番号５１、配列番号２４および配列番号２５を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４を含む、請求項１３に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
配列番号８４または配列番号８５のコンセンサス配列が配列番号５８である、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項１７】
軽鎖可変領域が、配列番号５５または配列番号２４から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号５６または配列番号５７から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項１６に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
軽鎖可変領域が、配列番号５５、配列番号２４および配列番号２５を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号５６、配列番号５７および配列番号５８を含む、請求項１６に記載の単離された抗体。
【請求項１９】
配列番号８４または配列番号８５のコンセンサス配列が配列番号６２である、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項２０】
軽鎖可変領域が、配列番号５９または配列番号２４から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６０または配列番号６１から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項１９に記載の単離された抗体。
【請求項２１】
軽鎖可変領域が、配列番号５９、配列番号２４および配列番号２５を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６０、配列番号６１および配列番号６２を含む、請求項１９に記載の単離された抗体。
【請求項２２】
配列番号８４または配列番号８５のコンセンサス配列が配列番号７１である、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項２３】
軽鎖可変領域が、配列番号６８または配列番号２４から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６９または配列番号７０から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項２２に記載の単離された抗体。
【請求項２４】
軽鎖可変領域が、配列番号６８、配列番号２４および配列番号２５を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６９、配列番号７０および配列番号７１を含む、請求項２２に記載の単離された抗体。
【請求項２５】
（ａ）配列番号８８を含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号９４のコンセンサス配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗ＡｐｏＥ抗体。
【請求項２６】
配列番号８８のコンセンサス配列が配列番号８９であり；および／または配列番号８４のコンセンサス配列が配列番号９５である、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項２７】
軽鎖可変領域が、配列番号８６または配列番号３０から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号９０または配列番号９２から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含む、請求項２５または２６に記載の単離された抗体。
【請求項２８】
軽鎖可変領域が、配列番号８６、配列番号３０および配列番号８８を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号９０、配列番号９２および配列番号９４を含む、請求項２７に記載の単離された抗体。
【請求項２９】
軽鎖可変領域が、配列番号８７または配列番号３０から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号９１または配列番号９３から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含む、請求項２５または２６に記載の単離された抗体。
【請求項３０】
軽鎖可変領域が、配列番号８７、配列番号３０および配列番号８９を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号９１、配列番号９３および配列番号９５を含む、請求項２９に記載の単離された抗体。
【請求項３１】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号３または配列番号１７である、請求項２５〜３０のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項３２】
重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号４または配列番号１８である、請求項２５〜３１のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項３３】
（ａ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号３であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号４であるか；または（ｂ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１７であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１８である、請求項２５〜３２のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項３４】
配列番号８８または配列番号８９のコンセンサス配列が配列番号３１であり、および／または配列番号９４または配列番号９５のコンセンサス配列が配列番号３４である、請求項２５または２６に記載の単離された抗体。
【請求項３５】
軽鎖可変領域が、配列番号２９または配列番号３０から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号３２または配列番号３３から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項３４に記載の単離された抗体。
【請求項３６】
軽鎖可変領域が、配列番号２９、配列番号３０および配列番号３１を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号３２、配列番号３３および配列番号３４を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。
【請求項３７】
配列番号８８または配列番号８９のコンセンサス配列が配列番号６４であり；および／または配列番号９４または配列番号９５のコンセンサス配列が配列番号６７である、請求項２５または２６に記載の単離された抗体。
【請求項３８】
軽鎖可変領域が、配列番号６３または配列番号３０から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６５または配列番号６６から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項３７に記載の単離された抗体。
【請求項３９】
軽鎖可変領域が、配列番号６３、配列番号３０および配列番号６４を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６５、配列番号６６および配列番号６７を含む、請求項３７に記載の単離された抗体。
【請求項４０】
配列番号１０７を含む軽鎖可変領域；および／または配列番号１１３のコンセンサス配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗ＡｐｏＥ抗体。
【請求項４１】
配列番号１０７のコンセンサス配列が配列番号１０８であり；および／または配列番号１１３のコンセンサス配列が配列番号１１４である、請求項４０に記載の単離された抗体。
【請求項４２】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５または配列番号１０６から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１０９または配列番号１１１から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含む、請求項４０または４１に記載の単離された抗体。
【請求項４３】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５、配列番号１０６および配列番号１０７を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１０９、配列番号１１１および配列番号１１３を含む、請求項４２に記載の単離された抗体。
【請求項４４】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５または配列番号１０６から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１１０または配列番号１１２から選択される１つまたはそれ以上のコンセンサス配列をさらに含む、請求項４０または４１に記載の単離された抗体。
【請求項４５】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５、配列番号１０６および配列番号１０８を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１１０、配列番号１１２および配列番号１１４を含む、請求項４４に記載の単離された抗体。
【請求項４６】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号１１５または配列番号１２１である、請求項４０〜４５のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項４７】
重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号１１６または配列番号１２２である、請求項４０〜４６のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項４８】
（ａ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１１５であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１１６であるか；または（ｂ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２１であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２２である、請求項４０〜４６のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項４９】
配列番号１０７または配列番号１０８のコンセンサス配列が配列番号１１７であり；および／または配列番号１１３または配列番号１１４のコンセンサス配列が配列番号１２０である、請求項４０または４１に記載の単離された抗体。
【請求項５０】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５または配列番号１０６から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１１８または配列番号１１９から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項４９に記載の単離された抗体。
【請求項５１】
軽鎖可変領域が、配列番号１０６、配列番号１０６および配列番号１１７を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１１８、配列番号１１９および配列番号１２０を含む、請求項５０に記載の単離された抗体。
【請求項５２】
配列番号１０７または配列番号１０８のコンセンサス配列が配列番号１２３であり；および／または配列番号１１３または配列番号１１４のコンセンサス配列が配列番号１２６である、請求項４０または４１に記載の単離された抗体。
【請求項５３】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５または配列番号１０６から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１２４または配列番号１２５から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項５２に記載の単離された抗体。
【請求項５４】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５、配列番号１０６および配列番号１２３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１２４、配列番号１２５および配列番号１２６を含む、請求項５３に記載の単離された抗体。
【請求項５５】
軽鎖可変領域が配列番号９６を含み；および／または重鎖可変領域が配列番号２８を含む、単離されたＡｐｏＥ抗体。
【請求項５６】
軽鎖可変領域が、配列番号２３または配列番号２４から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号２６または配列番号２７から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項５５に記載の単離された抗体。
【請求項５７】
軽鎖可変領域が、配列番号２３、配列番号２４および配列番号９６を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８を含む、請求項５５に記載の単離された抗体。
【請求項５８】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１であり；および／または重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２である、請求項５５〜５７のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項５９】
軽鎖可変領域が配列番号１であり、重鎖可変領域が配列番号２である、請求項５５〜５７のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項６０】
軽鎖可変領域が配列番号７４を含み；および／または重鎖可変領域が配列番号７７を含む、単離されたＡｐｏＥ抗体。
【請求項６１】
軽鎖可変領域が、配列番号７２または配列番号７３から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号７５または配列番号７６から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項６０に記載の単離された抗体。
【請求項６２】
軽鎖可変領域が、配列番号７２、配列番号７３および配列番号７４を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号７５、配列番号７６および配列番号７７を含む、請求項６０に記載の単離された抗体。
【請求項６３】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２１であり；および／または重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２２である、請求項６０〜６２のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項６４】
軽鎖可変領域が配列番号２１であり、重鎖可変領域が配列番号２２である、請求項６０〜６２のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項６５】
軽鎖可変領域が配列番号１０１を含み；および／または重鎖可変領域が配列番号１０４を含む、単離されたＡｐｏＥ抗体。
【請求項６６】
軽鎖可変領域が、配列番号９９または配列番号１００から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１０２または配列番号１０３から選択される１つまたはそれ以上の配列をさらに含む、請求項６５に記載の単離された抗体。
【請求項６７】
軽鎖可変領域が、配列番号９９、配列番号１００および配列番号１０１を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１０２、配列番号１０３および配列番号１０４を含む、請求項６５に記載の単離された抗体。
【請求項６８】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号９７であり、および／または重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号９８である、請求項６５〜６７のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項６９】
各可変領域のフレームワーク領域が、ヒトフレームワーク領域配列との少なくとも７５％の配列同一性を有する、請求項１〜６８のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項７０】
単離された抗体が、ヒト定常領域配列との配列同一性が少なくとも９０％である、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部をさらに含む、請求項１〜６９のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項７１】
抗体が、モノクローナル抗体または抗体フラグメントである、請求項１〜７０のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項７２】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜７１のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項７３】
（ａ）配列番号２５のＬ３を含む軽鎖可変領域；および／または配列番号８４のＨ３を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗ＡｐｏＥ抗体。
【請求項７４】
重鎖のＨ３が配列番号８５である、請求項７３に記載の単離された抗体。
【請求項７５】
軽鎖可変領域が、配列番号７８のＬ１、配列番号２４のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号８０のＨ１、配列番号８２のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項７３または７４に記載の単離された抗体。
【請求項７６】
軽鎖可変領域が、配列番号７８のＬ１、配列番号２４のＬ２、および配列番号２５のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号８０のＨ１、配列番号８２のＨ２、および配列番号８４のＨ３を含む、請求項７５に記載の単離された抗体。
【請求項７７】
軽鎖可変領域が、配列番号７９のＬ１、配列番号２４のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号８１のＨ１、配列番号８３のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項７３または７４に記載の単離された抗体。
【請求項７８】
軽鎖可変領域が、配列番号７９のＬ１、配列番号２４のＬ２、および配列番号２５のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号８１のＨ１、配列番号８３のＨ２、および配列番号８５のＨ３を含む、請求項７７に記載の単離された抗体。
【請求項７９】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５または配列番号１９から選択される、請求項７３〜７８のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項８０】
重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６または配列番号２０から選択される、請求項７３〜７９のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項８１】
（ａ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号９であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１０であるか；（ｂ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１１であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２であるか；（ｃ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１３であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１４であるか；（ｄ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１５であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１６であるか；または（ｅ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１９であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２０である、請求項７３〜８０のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項８２】
重鎖可変領域のＨ３が配列番号５０である、請求項７３または７４に記載の単離された抗体。
【請求項８３】
軽鎖可変領域が、配列番号４７のＬ１、配列番号２４のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号４８のＨ１、配列番号４９のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項８２に記載の単離された抗体。
【請求項８４】
軽鎖可変領域が、配列番号４７のＬ１、配列番号２４のＬ２、および配列番号２５のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号４８のＬ１、配列番号４９のＬ２、および配列番号５０のＬ３を含む、請求項８２に記載の単離された抗体。
【請求項８５】
重鎖可変領域のＨ３が配列番号５４である、請求項７３または７４に記載の単離された抗体。
【請求項８６】
軽鎖可変領域が、配列番号５１のＬ１、配列番号２４のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号５２のＨ１、配列番号５３のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項８５に記載の単離された抗体。
【請求項８７】
軽鎖可変領域が、配列番号５１のＬ１、配列番号２４のＬ２、および配列番号２５のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号５２のＨ１、配列番号５３のＨ２、および配列番号５４のＨ３を含む、請求項８６に記載の単離された抗体。
【請求項８８】
重鎖可変領域のＨ３が配列番号５８である、請求項７３または７４に記載の単離された抗体。
【請求項８９】
軽鎖可変領域が、配列番号５５のＬ１、配列番号２４のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号５６のＨ１、配列番号５７のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項８８に記載の単離された抗体。
【請求項９０】
抗ＡｐｏＥ抗体が、配列番号５５のＬ１、配列番号２４のＬ２、および配列番号２５のＬ３；および／または配列番号５６のＨ１、配列番号５７のＨ２、および配列番号５８のＨ３を含む、請求項８９に記載の単離された抗体。
【請求項９１】
重鎖可変領域のＨ３が配列番号６２である、請求項７３または７４に記載の単離された抗体。
【請求項９２】
軽鎖可変領域が、配列番号５９のＬ１、配列番号２４のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６０のＨ１、配列番号６１のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項９１に記載の単離された抗体。
【請求項９３】
軽鎖可変領域が、配列番号５９のＬ１、配列番号２４のＬ２、および配列番号２５のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６０のＨ１、配列番号６１のＨ２、および配列番号６２のＨ３を含む、請求項９２に記載の単離された抗体。
【請求項９４】
重鎖可変領域のＨ３が配列番号７１である、請求項７３または７４に記載の単離された抗体。
【請求項９５】
軽鎖可変領域が、配列番号６８のＬ１、配列番号２４のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６９のＨ１、配列番号７０のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項９４に記載の単離された抗体。
【請求項９６】
軽鎖可変領域が、配列番号６８のＬ１、配列番号２４のＬ２、および配列番号２５のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６９のＨ１、配列番号７０のＨ２、および配列番号７１のＨ３を含む、請求項９４に記載の単離された抗体。
【請求項９７】
配列番号８８のＬ３を含む軽鎖可変領域；および／または配列番号９４のＨ３を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗ＡｐｏＥ抗体。
【請求項９８】
軽鎖のＬ３が配列番号８９であり、および／または重鎖のＨ３が配列番号９５である、請求項９７に記載の単離された抗体。
【請求項９９】
軽鎖可変領域が、配列番号８６のＬ１、配列番号３０のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み、および／または重鎖可変領域が、配列番号９０のＨ１、配列番号９２のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項９７または９８に記載の単離された抗体。
【請求項１００】
軽鎖可変領域が、配列番号８６のＬ１、配列番号３０のＬ２、および配列番号８８のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号９０のＨ１、配列番号９２のＨ２、および配列番号９４のＨ３を含む、請求項９９に記載の単離された抗体。
【請求項１０１】
軽鎖可変領域が、配列番号８７のＬ１、配列番号３０のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号９１のＨ１、配列番号９３のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項９７または９８に記載の単離された抗体。
【請求項１０２】
軽鎖可変領域が、配列番号８７のＬ１、配列番号３０のＬ２、および配列番号８９のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号９１のＨ１、配列番号９３のＨ２、および配列番号９５のＨ３を含む、請求項１０１に記載の単離された抗体。
【請求項１０３】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号３または配列番号１７である、請求項９７〜１０２のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１０４】
重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号４または配列番号１８である、請求項９７〜１０３のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１０５】
（ａ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号３であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号４であるか；または（ｂ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１７であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１８である、請求項９７〜１０４のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１０６】
軽鎖可変領域のＬ３が配列番号３１であり、および／または重鎖可変領域のＨ３が配列番号３４である、請求項９７または９８に記載の単離された抗体。
【請求項１０７】
軽鎖可変領域が、配列番号２９のＬ１、配列番号３０のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号３２のＨ１、配列番号３３のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１０６に記載の単離された抗体。
【請求項１０８】
軽鎖可変領域が、配列番号２９のＬ１、配列番号３０のＬ２、および配列番号３１のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号３２のＨ１、配列番号３３のＨ２、および配列番号３４のＨ３を含む、請求項１０７に記載の単離された抗体。
【請求項１０９】
軽鎖可変領域のＬ３が配列番号６４であり、および／または重鎖可変領域のＨ３が配列番号６７である、請求項９７または９８に記載の単離された抗体。
【請求項１１０】
軽鎖可変領域が、配列番号６３のＬ１、配列番号３０のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６５のＨ１、配列番号６６のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１０９に記載の単離された抗体。
【請求項１１１】
軽鎖可変領域が、配列番号６３のＬ１、配列番号３０のＬ２、および配列番号６４のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号６５のＨ１、配列番号６６のＨ２、および配列番号６７のＨ３を含む、請求項１１０に記載の単離された抗体。
【請求項１１２】
配列番号９６のＬ３を含む軽鎖可変領域；および／または配列番号２８のＨ３を含む重鎖可変領域を含む、単離されたＡｐｏＥ抗体。
【請求項１１３】
軽鎖可変領域が、配列番号２３のＬ１、配列番号２４のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号２６のＨ１、配列番号２７のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１１２に記載の単離された抗体。
【請求項１１４】
軽鎖可変領域が、配列番号２３のＬ１、配列番号２４のＬ２、および配列番号９６のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号２６のＨ１、配列番号２７のＨ２、および配列番号２８のＨ３を含む、請求項１１３に記載の単離された抗体。
【請求項１１５】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１であり；および／または重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２である、請求項１１２〜１１４のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１１６】
軽鎖可変領域が配列番号１であり、重鎖可変領域が配列番号２である、請求項１１２〜１１４のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１１７】
配列番号７４のＬ３を含む軽鎖可変領域；および／または配列番号７７のＨ３を含む重鎖可変領域を含む、単離されたＡｐｏＥ抗体。
【請求項１１８】
軽鎖可変領域が、配列番号７２のＬ１、配列番号７３のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号７５のＨ１、配列番号７６のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１１７に記載の単離された抗体。
【請求項１１９】
軽鎖可変領域が、配列番号７２のＬ１、配列番号７３のＬ２、および配列番号７４のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号７５のＨ１、配列番号７６のＨ２、および配列番号７７のＨ３を含む、請求項１１８に記載の単離された抗体。
【請求項１２０】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２１であり；および／または重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２２である、請求項１１７〜１１９のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１２１】
軽鎖可変領域が配列番号２１であり、重鎖可変領域が配列番号２２である、請求項１１７〜１２０のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１２２】
配列番号１０１のＬ３を含む軽鎖可変領域；および／または配列番号１０４のＨ３を含む重鎖可変領域を含む、単離されたＡｐｏＥ抗体。
【請求項１２３】
軽鎖可変領域が、配列番号９９のＬ１、配列番号１００のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１０２のＨ１、配列番号１０３のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１２２に記載の単離された抗体。
【請求項１２４】
軽鎖可変領域が、配列番号９９のＬ１、配列番号１００のＬ２、および配列番号１０１のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１０２のＨ１、配列番号１０３のＨ２、および配列番号１０４のＨ３を含む、請求項１２３に記載の単離された抗体。
【請求項１２５】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号９７であり；および／または重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号９８である、請求項１２２〜１２４のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１２６】
軽鎖可変領域が配列番号９７であり、重鎖可変領域が配列番号９８である、請求項１２２〜１２５のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１２７】
配列番号１０７のＬ３を含む軽鎖可変領域；および／または配列番号１１３のＨ３を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体。
【請求項１２８】
軽鎖のＬ３が配列番号１０８であり；および／または重鎖のＨ３が配列番号１１４である、請求項１２７に記載の単離された抗体。
【請求項１２９】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１０９のＨ１、配列番号１１１のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１２７または１２８に記載の単離された抗体。
【請求項１３０】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、および配列番号１０７のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１０９のＨ１、配列番号１１１のＨ２、および配列番号１１３のＨ３を含む、請求項１２９に記載の単離された抗体。
【請求項１３１】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１１０のＨ１、配列番号１１２のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１２７または１２８に記載の単離された抗体。
【請求項１３２】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、および配列番号１０８のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１１０のＨ１、配列番号１１２のＨ２、および配列番号１１４のＨ３を含む、請求項１３１に記載の単離された抗体。
【請求項１３３】
軽鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号１１５または配列番号１２１である、請求項１２７〜１３２のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１３４】
重鎖可変領域のアミノ酸配列が、配列番号１１６または配列番号１２２である、請求項１２７〜１３３のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１３５】
（ａ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１１５であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１１６であるか；または（ｂ）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２１であり、重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１２２である、請求項１２７〜１３４のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１３６】
軽鎖のＬ３が配列番号１１７であり；および／または重鎖のＨ３が配列番号１２０である、請求項１２７または１２８に記載の単離された抗体。
【請求項１３７】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１１８のＨ１、配列番号１１９のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１３６に記載の単離された抗体。
【請求項１３８】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、および配列番号１１７のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１１８のＨ１、配列番号１１９のＨ２、および配列番号１２０のＨ３を含む、請求項１３７に記載の単離された抗体。
【請求項１３９】
軽鎖可変領域のＬ３が配列番号１２３であり；および／または重鎖可変領域のＨ３が配列番号１２６である、請求項１２７または１２８に記載の単離された抗体。
【請求項１４０】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１２４のＨ１、配列番号１２５のＨ２、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、請求項１３９に記載の単離された抗体。
【請求項１４１】
軽鎖可変領域が、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、および配列番号１２３のＬ３を含み；および／または重鎖可変領域が、配列番号１２４のＨ１、配列番号１２５のＨ２、および配列番号１２６のＨ３を含む、請求項１４０に記載の単離された抗体。
【請求項１４２】
各可変領域のフレームワーク領域が、ヒトフレームワーク領域配列との少なくとも７５％の配列同一性を有する、請求項７３〜１４１のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１４３】
単離された抗体が、ヒト定常領域配列との配列同一性が少なくとも９０％である、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部をさらに含む、請求項７３〜１４２のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１４４】
抗体が、モノクローナル抗体または抗体フラグメントである、請求項７３〜１４３のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項１４５】
必要とする対象の脳においてアミロイド斑沈着および／またはＣＡＡの沈着を減少させる方法において、該方法は、少なくとも１つの抗ＡｐｏＥ抗体を処置有効量で投与することを含み、ここで、該抗体は、（ａ）ヒトＡｐｏＥ４に、約０．１ｐＭ〜約１０μＭ、または約０．１ｐＭ〜約１μＭのＫＤで結合し、（ｂ）ヒト血漿由来のＡｐｏＥ４、またはヒトＡｐｏＥ４を発現するトランスジェニックマウスの血漿由来のヒトＡｐｏＥ４と比較して、組換え無脂質付加（alipidated）ヒトＡｐｏＥ４に優先的に結合し、および（ｃ）固定化されていない脳組織中のアミロイド斑におけるヒトＡｐｏＥに結合する、方法。
【請求項１４６】
抗体を末梢投与する、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
抗体を、局所的に、場合により中枢神経系内に直接に投与する、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
アミロイド斑沈着を海馬において減少させる、請求項１４５〜１４７のいずれかに記載の方法。
【請求項１４９】
アミロイド斑沈着を大脳皮質において減少させる、請求項１４５〜１４７のいずれかに記載の方法。
【請求項１５０】
ＣＡＡの沈着を、大脳皮質表面上の穿通細動脈、および／または大脳皮質表面上の軟髄膜細動脈において減少させる、請求項１４５〜１４７のいずれかに記載の方法。
【請求項１５１】
抗体が、請求項１、３、４、７３、７５または７６のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１５２】
抗体が、請求項２、５、６、７４、７７または７８のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１５３】
抗体が、（ａ）請求項１０〜１２もしくは請求項８２〜８４；（ｂ）請求項１３〜１５もしくは請求項８５〜８７；（ｃ）請求項１６〜１８もしくは請求項８８〜８９；（ｄ）請求項１９〜２１もしくは請求項９１〜９３；または（ｅ）請求項２２〜２４もしくは請求項９４〜９６、のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１５４】
抗体が、請求項２５、２７、２８、９７、９９または１００のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１５５】
抗体が、請求項２６、２９、３０、９８、１０１または１０２のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１５６】
抗体が、（ａ）請求項３４〜３６もしくは請求項１０６〜１０８；または（ｂ）請求項３７〜３９もしくは請求項１０９〜１１１、のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１５７】
抗体が、請求項４０、４２、４３、１２７、１２９または１３０のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１５８】
抗体が、請求項４１、４４、４５、１２８、１３１または１３２のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１５９】
抗体が、（ａ）請求項４９〜５１もしくは請求項１３７〜１３９；または（ｂ）請求項５２〜５４もしくは請求項１４０〜１４１、のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１６０】
抗体が、請求項５５〜５７または請求項１１２〜１１４のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１６１】
抗体が、請求項６５〜６７または請求項１２２〜１２４のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１６２】
抗体が、請求項６０〜６２または請求項１１７〜１１９のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１４５〜１５０のいずれかに記載の方法。
【請求項１６３】
抗ＡｐｏＥ抗体の各可変領域が、ヒトフレームワーク領域配列との配列同一性が少なくとも７５％であるフレームワーク領域を含む、請求項１４５〜１６２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６４】
抗ＡｐｏＥ抗体が、ヒト定常領域配列との配列同一性が少なくとも９０％である、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部をさらに含む、請求項７３〜１４２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６５】
抗ＡｐｏＥ抗体が、モノクローナル抗体または抗体フラグメントである、請求項１４５〜１６４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６６】
必要とする対象において少なくとも１つのＡβ斑関連症状または少なくとも１つのＣＡＡ関連症状を処置する方法において、該方法は、少なくとも１つの抗ＡｐｏＥ抗体を処置有効量で投与することを含み、ここで、該抗体は、（ａ）ヒトＡｐｏＥ４に、約０．１ｐＭ〜約１０μＭ、または約０．１ｐＭ〜約１μＭのＫＤで結合し、（ｂ）ヒト血漿由来のＡｐｏＥ４、またはヒトＡｐｏＥ４を発現するトランスジェニックマウスの血漿由来のヒトＡｐｏＥ４と比較して、組換え無脂質付加ヒトＡｐｏＥ４に優先的に結合し、および（ｃ）固定化されていない脳組織中のアミロイド斑におけるヒトＡｐｏＥに結合する、方法。
【請求項１６７】
処置が、対象においてＡβ斑の少なくとも１つの症状もしくは徴候、または少なくとも１つのＣＡＡ関連症状を、防止、減弱、回復または改善することを含む、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
Ａβ斑関連症状またはＣＡＡ関連症状が、神経変性、認知機能障害、行動の変化、言語機能異常、感情制御の障害、発作、神経系構造障害、神経系機能障害、アルツハイマー病発症リスクの増加、または脳アミロイドアンギオパチー発症リスクの増加から選択される、請求項１６６または１６７に記載の方法。
【請求項１６９】
抗体を、局所的に、場合により中枢神経系内に直接に投与する、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７０】
抗体が、請求項１、３、４、７３、７５または７６のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７１】
抗体が、請求項２、５、６、７４、７７または７８のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７２】
抗体が、（ａ）請求項１０〜１２もしくは請求項８２〜８４；（ｂ）請求項１３〜１５もしくは請求項８５〜８７；（ｃ）請求項１６〜１８もしくは請求項８８〜８９；（ｄ）請求項１９〜２１もしくは請求項９１〜９３；または（ｅ）請求項２２〜２４もしくは請求項９４〜９６、のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７３】
抗体が、請求項２５、２７、２８、９７、９９または１００のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７４】
抗体が、請求項２６、２９、３０、９８、１０１または１０２のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７５】
抗体が、（ａ）請求項３４〜３６もしくは請求項１０６〜１０８；または（ｂ）請求項３７〜３９もしくは請求項１０９〜１１１、のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７６】
抗体が、請求項４０、４２、４３、１２７、１２９または１３０のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７７】
抗体が、請求項４１、４４、４５、１２８、１３１または１３２のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７８】
抗体が、（ａ）請求項４９〜５１もしくは請求項１３７〜１３９；または（ｂ）請求項５２〜５４もしくは請求項１４０〜１４１、のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１７９】
抗体が、請求項５５〜５７または請求項１１２〜１１４のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１８０】
抗体が、請求項６５〜６７または請求項１２２〜１２４のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１８１】
抗体が、請求項６０〜６２または請求項１１７〜１１９のいずれかに記載の抗ＡｐｏＥ抗体である、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１８２】
抗ＡｐｏＥ抗体の各可変領域が、ヒトフレームワーク領域配列との配列同一性が少なくとも７５％であるフレームワーク領域を含む、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１８３】
抗ＡｐｏＥ抗体が、ヒト定常領域配列との配列同一性が少なくとも９０％である、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部をさらに含む、請求項１６６〜１６８のいずれかに記載の方法。
【請求項１８４】
抗ＡｐｏＥ抗体が、モノクローナル抗体または抗体フラグメントである、請求項１５５〜１８４のいずれかに記載の方法。
【請求項１８５】
（ａ）ヒト血漿ＡｐｏＥをブロッキングタンパク質と接触させること、（ｂ）前記のタンパク質でブロックした血漿ＡｐｏＥを、被検抗ＡｐｏＥ抗体に暴露すること、および（ｃ）前記血漿ＡｐｏＥに結合した抗ＡｐｏＥ抗体の存在を検出すること、を含む、ヒト血漿ＡｐｏＥに対する抗ＡｐｏＥ抗体の結合親和性を測定する方法。
【請求項１８６】
ステップ（ｂ）において、前記のタンパク質でブロックした血漿ＡｐｏＥを、さまざまな濃度の抗ＡｐｏＥ抗体に暴露すること、および（ｄ）前記抗体のＩＣ５０結合親和性を計算すること、をさらに含む、請求項１８６に記載の方法。
【請求項１８７】
動物に投与されたとき、血漿中の薬物動態クリアランス値がアイソタイプコントロール抗体のクリアランス値の２５倍未満である、血漿由来ＡｐｏＥに特異的に結合しない単離された抗ＡｐｏＥ抗体。
【請求項１８８】
血漿クリアランス値がアイソタイプコントロールの２０、１５、１０、５または３倍未満である、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項１８９】
血漿クリアランス値がアイソタイプコントロールの３倍未満である、請求項１８９に記載の単離された抗体。
【請求項１９０】
アイソタイプコントロールが、前記動物中には存在しない抗原に結合する、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項１９１】
アイソタイプコントロールが、ウイルスまたは細菌抗原に結合する、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項１９２】
アイソタイプコントロールがＩｇＧ抗体である、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項１９３】
アイソタイプコントロールがＩｇＧ２ａ抗体である、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項１９４】
前記動物がヒトである、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項１９５】
前記動物が、ヒトＡｐｏＥを発現するよう改変されたマウスである、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項１９６】
抗体が、無脂質付加ＡｐｏＥに結合する、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項１９７】
無脂質付加ＡｐｏＥが組換えＡｐｏＥである、請求項１９８に記載の単離された抗体。
【請求項１９８】
無脂質付加ＡｐｏＥがアミロイド斑に存在する、請求項１９８に記載の単離された抗体。
【請求項１９９】
無脂質付加ＡｐｏＥが凝集形態である、請求項１９８に記載の単離された抗体。
【請求項２００】
抗体が、非凝集ＡｐｏＥよりも凝集ＡｐｏＥに優先的に結合する、請求項１９８に記載の単離された抗体。
【請求項２０１】
凝集ＡｐｏＥが、ＡｐｏＥの酸化または熱処理によって調製され、超遠心分離によって単離される、請求項２００または２０１に記載の単離された抗体。
【請求項２０２】
ＡｐｏＥがＡｐｏＥ４である、請求項１８８〜２０２のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項２０３】
抗体が無脂質付加ＡｐｏＥ４に結合する、請求項１８８〜２０３のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項２０４】
抗体が、無脂質付加ＡｐｏＥ３および／またはＡｐｏＥ４に、他の無脂質付加ＡｐｏＥアイソフォームに対するよりも優先的に結合する、請求項１８８〜２０３のいずれかに記載の単離された抗体。
【請求項２０５】
抗体が、（ａ）ヒトＡｐｏＥ４に、約０．１ｐＭ〜約１０μＭ、または約０．１ｐＭ〜約１μＭのＫＤで結合し、（ｂ）ヒト血漿由来のＡｐｏＥ４、またはヒトＡｐｏＥ４を発現するトランスジェニックマウスの血漿由来のヒトＡｐｏＥ４と比較して、組換え無脂質付加ヒトＡｐｏＥ４に優先的に結合し、および（ｃ）固定化されていない脳組織中のアミロイド斑におけるヒトＡｐｏＥに結合する、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項２０６】
抗体が、
配列番号２５を含む軽鎖可変領域、および／または配列番号８４を含む重鎖可変領域；
配列番号８８を含む軽鎖可変領域、および／または配列番号９４を含む重鎖可変領域；
配列番号７４を含む軽鎖可変領域、および／または配列番号７７を含む重鎖可変領域；
配列番号２５のＬ３を含む軽鎖可変領域、および／または配列番号８４のＨ３を含む重鎖可変領域；
配列番号８８のＬ３を含む軽鎖可変領域、および／または配列番号９４のＨ３を含む重鎖可変領域；または
配列番号７４のＬ３を含む軽鎖可変領域、および／または配列番号７７のＨ３を含む重鎖可変領域
を含む、請求項１８８に記載の単離された抗体。
【請求項２０７】
請求項２０２に記載される凝集ＡｐｏＥを含む凝集ＡｐｏＥに結合する抗ＡｐｏＥ抗体を検出するためのアッセイ。
【請求項２０８】
請求項１〜１４４または請求項１８８〜２０７のいずれかに記載の抗体、および薬学的に許容しうる担体または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項２０９】
分散剤、緩衝剤、界面活性剤、保存剤、可溶化剤、等張化剤または安定剤をさらに含む、請求項２０９に記載の医薬組成物。
【請求項２１０】
担体が、生理食塩液、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、ヒト血清アルブミン、緩衝物質、ホスフェート、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三珪酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、羊毛脂、またはそれらの組み合わせを含む、請求項２０９に記載の医薬組成物。
【請求項２１１】
医薬として使用するための、請求項１〜１４４または請求項１８８〜２０７のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１２】
ＣＮＳにおけるアミロイド斑沈着および／またはＣＡＡの沈着の減少処置において使用するための、請求項１〜１４４または請求項１８８〜２０７のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１３】
少なくとも１つのＡβ斑関連症状または少なくとも１つのＣＡＡ関連症状の処置において使用するための、請求項１〜１５４のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１４】
アルツハイマー病の処置において使用するための、請求項１〜１４４または請求項１８８〜２０７のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１５】
ＣＮＳにおけるアミロイド斑沈着および／またはＣＡＡの沈着を減少させる医薬の製造において使用するための、請求項１〜１４４または請求項１８８〜２０７のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１６】
少なくとも１つのＡβ斑関連症状または少なくとも１つのＣＡＡ関連症状を処置する医薬の製造において使用するための、請求項１〜１４４または請求項１８８〜２０７のいずれかに記載の抗体。
【請求項２１７】
アルツハイマー病を処置する医薬の製造において使用するための、請求項１〜１４４または請求項１８８〜２０７のいずれかに記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府の権利
本発明は、国立衛生研究所により認可されたＲ０１ＡＧ０４７６４４の下で政府支援によりなされたものである。政府は本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本願は、２０１６年１０月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／４１４，４１３号、および２０１７年７月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／５３３，３３６号の優先権を主張し、これらの各出願は参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本発明の分野
本発明は、抗ＡｐｏＥ抗体およびその組成物に関する。本発明はまた、Ａβアミロイドーシスを遅延および／または予防する組成物および方法に関する。本発明はまた、Ａβ斑に関連する症状および／または脳アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）に関連する症状（対象におけるアルツハイマー病（ＡＤ）またはＣＡＡに関連する症状など）を遅延および／または予防する組成物および方法に関する。特に、本発明は、対象の脳においてアミロイドβ（Ａβ）の濃度を調節することに関する。
【０００４】
配列表の参照
紙のコピーの配列表およびコンピューターで読み取り可能な形式の同じ配列表が以下に添付され、参照によって本明細書に組み込まれる。コンピューターで読み取り可能な形式で記録された情報は、米国特許施行規則第１．８２１条第（ｆ）項に従って記載された配列表と同一である。
【背景技術】
【０００５】
アルツハイマー病（ＡＤ）は認知症の最も一般的な原因であり、ますます増大している公衆の健康問題である。現在、米国では５００万人を超える人々が罹患していると推定され、２０５０年までに１３００万人に増加すると予想されている。アルツハイマー病は、記憶喪失、認知機能の喪失、および最終的に自立の喪失を導く。これは対象および家族に著しい個人的損害および金銭的損害を与える。疾患の重症度および人口における有病率の増加のため、より良い処置法を開発することが急務である。
【０００６】
脳アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）はＡＤを発症する個体の約９０％に発生し、いくつかの個体においてＡＤとは独立に発生する。ＣＡＡは虚血性脳卒中および出血性脳卒中を導き得、重度の障害または死亡を引き起し得る。現在、ＣＡＡに対する処置法は存在しない。
【０００７】
生化学的証拠、遺伝的証拠および動物モデルの証拠は、アミロイドβ（Ａβ）をＡＤおよびほとんどの場合のＣＡＡにおける病原性ペプチドとして意味付けている。ＡＤの神経病理学的特徴および神経化学的特徴には、シナプスの減少および選択的神経細胞死、特定の神経伝達物質の減少、ならびにニューロン内（神経線維変化）および細胞外空間（脳血管、びまん性および老人斑）における異常なタンパク質性沈着物の存在が含まれる。ＣＡＡの特徴には、大脳皮質の表面上の貫通性細動脈および軟膜細動脈における線維形状のＡβの蓄積が含まれる。ＣＡＡは虚血性脳卒中または出血性脳卒中を導き得る。ＡＤおよびＣＡＡに見られる斑の主成分はＡβであり、Ａβはアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から切断された３８〜４３アミノ酸配列のペプチドである。
【０００８】
生涯を通して、可溶性Ａβは主にニューロンによって分泌されるが、他の細胞型によっても分泌される。過剰なＡβ沈着は、（例えば、家族性早発型ＡＤおよび一部の家族性早発型ＣＡＡにおいて生じる）Ａβ合成の増加、脳内のＡβクリアランスの減少、またはＡβ線維形成の増加に起因し得る。Ａβの過剰産生がより一般的な遅発型のＡＤで起こるという説得力のある証拠の欠如は、不十分なＡβのクリアランスがＡβの沈着およびアミロイド斑の形成ならびにＣＡＡを推進し得ることを示唆する。
【０００９】
アポリポタンパク質Ｅ遺伝子（ＡｐｏＥ）は、遅発型ＡＤおよびＣＡＡについて最も広範に複製されている遺伝的危険因子のままであり、３〜１５倍高い疾患発症のリスクおよびより早い疾患発症年齢を有するε４対立遺伝子のキャリアを有する。ＡｐｏＥ４キャリアはＡＤの集団の６０％を超えているが、ε２対立遺伝子はＡＤにおいて最も少なく提示されており、いくつかの集団において保護的であり得る。ヒトＡｐｏＥアイソフォームは、アミノ酸位置１１２または１５８において異なっている（ε２はＣｙｓ１１２、Ｃｙｓ１５８を有する；ε３はＣｙｓ１１２、Ａｒｇ１５８を有する；ε４はＡｒｇ１１２、Ａｒｇ１５８を有する）。マウスＡｐｏＥとヒトＡｐｏＥは約７０％のアミノ酸相同性を共有する。ヒトＡｐｏＥアイソフォームにおけるアミノ酸の差異は、タンパク質の構造および安定性に影響を与える。例えば、ＡｐｏＥ４は、ＡｐｏＥ２およびＡｐｏＥ３と比較して非構造化モルテングロビュール状態への傾向がより大きく、凝集体を形成する可能性がより高い。
【００１０】
脳において、ＡｐｏＥは主にグリアによって産生され、主にコレステロールおよび脂質をニューロンに分配するように機能する。ＣＮＳにおけるＡｐｏＥの大部分はＨＤＬ様リポタンパク質粒子上に見出され、ＡｐｏＥの脂質付加はＡＢＣＡ１およびＡＢＣＧ１トランスポーターによって調節される。トランスジェニックＡＤマウスと交配したＡＢＣＡ１ノックアウトマウスは、脂質付加が不十分なＡｐｏＥを産生し、これらのマウスはＡβ斑が増加している。逆に、ＡＢＣＡ１を過剰発現するＡＤトランスジェニックマウスの脳は十分に脂質付加されたａｐｏＥリポタンパク質粒子を含み、Ａβ斑の沈着が減少している。ＡｐｏＥの、ＬＤＬＲ、ＬＲＰ１、ａｐｏＥＲ２およびＶＬＤＬＲ（これらは様々な神経細胞型上に発現している）への結合は、受容体依存性エンドサイトーシス、脂質カーゴのプロセシング、および非結合受容体のリサイクリングを介したリポタンパク質粒子の取り込みを可能にする。ＡｐｏＥ２の１５８位のアミノ酸の差異はＬＤＬＲへの受容体結合の減少をもたらし、ε２／ε２遺伝子型を持つヒトはＩＩＩ型高リポタンパク血症のリスクが増加している。
【００１１】
ＡＤ患者におけるＡβ斑の沈着はＡｐｏＥアイソフォーム依存的（Ｅ４＞Ｅ３＞Ｅ２）であり、ＡｐｏＥとＡβとの間の相互作用の程度およびそれらの相互作用の機能は未だ議論の余地がある。有力な証拠によって、Ａβ沈着の差異がａｐｏＥアイソフォーム依存的なＡβのクリアランスおよび凝集における差異に続発することが示唆されている。ＡＤトランスジェニックマウスの脳からのＡβ単量体のクリアランスもまた、ＡｐｏＥアイソフォーム依存的（Ｅ２＞Ｅ３＞Ｅ４）であり、最近の研究は、ＡｐｏＥ４がＡβを除去するように機能する受容体への結合について競合することによって潜在的にクリアランスを妨げ得ることを示唆している。また、ＡｐｏＥ脂質付加の程度は、ε４／ε４のＡＤ患者においてε３／ε３よりも高いレベルでＡβオリゴマーの形成に影響を及ぼし得る。本開示は、特定の特徴を有する抗ＡｐｏＥ抗体がＡβアミロイドーシスを有する対象のための処置を提供するという発見を記述する。
【発明の概要】
【００１２】
本発明のある態様は、（ａ）配列番号８６のＬ１、配列番号３０のＬ２、配列番号８８を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号９０を含むＨ１、配列番号９２を含むＨ２、配列番号９４を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００１３】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号８７のＬ１、配列番号３０のＬ２、配列番号８９を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号９１を含むＨ１、配列番号９３を含むＨ２、配列番号９５を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００１４】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号７８のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号８０を含むＨ１、配列番号８２を含むＨ２、配列番号８４を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００１５】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号７９のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号８１を含むＨ１、配列番号８３を含むＨ２、配列番号８６を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００１６】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、配列番号１０７を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号１０９を含むＨ１、配列番号１１１を含むＨ２、配列番号１１３を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００１７】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、配列番号１０８を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号１１０を含むＨ１、配列番号１１２を含むＨ２、配列番号１１４を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００１８】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号２３のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号２６を含むＨ１、配列番号２７を含むＨ２、配列番号２８を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００１９】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号２９のＬ１、配列番号３０のＬ２、配列番号３１を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号３２を含むＨ１、配列番号３３を含むＨ２、配列番号３４を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２０】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号４７のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号４８を含むＨ１、配列番号４９を含むＨ２、配列番号５０を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２１】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号５１のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号５２を含むＨ１、配列番号５３を含むＨ２、配列番号５４を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２２】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号５５のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号５６を含むＨ１、配列番号５７を含むＨ２、配列番号５８を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２３】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号５９のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号６０を含むＨ１、配列番号６１を含むＨ２、配列番号６２を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２４】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号６３のＬ１、配列番号３０のＬ２、配列番号６４を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号６５を含むＨ１、配列番号６６を含むＨ２、配列番号６７を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２５】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号６８のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号６９を含むＨ１、配列番号７０を含むＨ２、配列番号７１を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２６】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号７２のＬ１、配列番号７３のＬ２、配列番号７４を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号７５を含むＨ１、配列番号７６を含むＨ２、配列番号７７を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２７】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、配列番号１２３を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号１２４を含むＨ１、配列番号１２５を含むＨ２、配列番号１２６を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２８】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号９９のＬ１、配列番号１００のＬ２、配列番号１０１を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号１０２を含むＨ１、配列番号１０３を含むＨ２、配列番号１０４を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００２９】
本発明の別の態様は、（ａ）配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、配列番号１１７を含むＬ３またはそれらのあらゆる組合せを含む軽鎖可変領域；および／または（ｂ）配列番号１１８を含むＨ１、配列番号１１９を含むＨ２、配列番号１２０を含むＨ３またはそれらのあらゆる組合せを含む重鎖可変領域を含む単離された抗ＡｐｏＥ抗体を包含する。抗体を含む組成物（限定されないが、医薬組成物を含む）が本明細書において想定される。ある実施態様において、抗体はヒト化抗体である。
【００３０】
本発明の別の態様は、有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を生きたヒト対象に投与することを含む、Ａβアミロイドーシスの臨床徴候を改善する方法を包含する。別の態様において、本発明は、有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を生きたヒト対象に投与することを含む、少なくとも１つの臨床的に検出可能なＡβ斑に関連する症状および／またはＣＡＡに関連する症状を効果的に処置する方法を包含する。別の態様において、本発明は、有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を生きたヒト対象に投与することを含む、アルツハイマー病を処置する方法を包含する。別の態様において、本発明は、有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を生きたヒト対象に投与することを含む、ＣＡＡを処置する方法を包含する。上記の各態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は上述の抗体であり得る。
【００３１】
本発明のさらに別の態様は、少なくとも１つの臨床的に検出可能なＡβ斑に関連する症状を処置するのに有用な医薬組成物を包含する。組成物は、生きたヒト対象への投与に適した薬学的有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を含む。抗ＡｐｏＥ抗体は上述の抗体であり得る。ある態様において、医薬品組成物は生きた対象に効果的に全身投与される。
【００３２】
本発明のさらに別の態様は、少なくとも１つの臨床的に検出可能なＣＡＡに関連する症状を処置するのに有用な医薬組成物を包含する。組成物は、生きたヒト対象への投与に適した薬学的有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を含む。抗ＡｐｏＥ抗体は上述の抗体であり得る。ある態様において、医薬組成物は生きた対象に効果的に全身投与される。
【００３３】
本発明のさらに別の態様は、アルツハイマー病を処置するのに有用な医薬組成物を包含する。組成物は、生きたヒト対象への投与に適した薬学的有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を含む。抗ＡｐｏＥ抗体は上述の抗体であり得る。ある態様において、医薬組成物は生きた対象に効果的に全身投与される。
【００３４】
本発明のさらに別の態様は、ＣＡＡを処置するのに有用な医薬組成物を包含する。組成物は、生きたヒト対象への投与に適した薬学的有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を含む。抗ＡｐｏＥ抗体は上述の抗体であり得る。ある態様において、医薬組成物は生きた対象に効果的に全身投与される。
【００３５】
本発明のさらなる別の態様は、生きたヒト対象への投与に適した薬学的有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を含む医薬組成物を含む容器および前記投与に使用される任意の医療機器を含むキットを包含する。抗ＡｐｏＥ抗体は上述の抗体であり得る。
【００３６】
本発明の他の態様および反復が以下に詳述される。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
本出願書類は、カラーで作成された少なくとも１つの写真を含む。カラーの写真を含む本特許出願の公報の写しが請求および必要な手数料の納付によって官庁により提供される。
【００３８】
【図１】図１はウエスタンブロットの画像を示す。ＡｐｏＥ ＫＯマウス、またはＡｐｏＥ３、ＡｐｏＥ４もしくはマウスＡｐｏＥを発現するマウス由来の脳溶解物を、ＧＡ−５０、ＨＪ１５１またはＨＪ１５２で免疫ブロットした。ウエスタンブロットは、ＨＪ１５１がＡｐｏＥ４特異的であり、ＨＪ１５２がＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４の両方を認識することを示す。ＧＡ−５０はポジティブコントロールである。
【００３９】
【図２】図２はウエスタンブロットの画像を示す。ＡｐｏＥ ＫＯマウス、またはＡｐｏＥ３、ＡｐｏＥ４もしくはマウスＡｐｏＥを発現するマウス由来の脳溶解物を、ＨＪ１５３またはＨＪ１５４で免疫ブロットした。ウエスタンブロットは、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４がＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４の両方を認識することを示す。
【００４０】
【図３】図３は、ビオチン化ＨＪ１５３またはＨＪ１５４抗体を用いて染色された、種々のヒトＡｐｏＥアイソフォームを発現する５ＸＦＡＤ ＡＰＰトランスジェニックマウス由来の脳組織の画像を示す。図は、これら２つの抗体がニューロピル、星状膠細胞、およびアミロイド斑が存在する場合にはアミロイド斑においてＡｐｏＥを染色することを示す。ＡｐｏＥ ＫＯマウス由来の脳組織をネガティブコントロールとして用いた。
【００４１】
【図４】図４はいくつかの免疫ブロットの写真を示す。ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３またはＡｐｏＥ４を含むサンプルを、ＨＪ１５２、ＨＪ１５３またはＨＪ１５４を用いて免疫沈降させた。抗ＡｐｏＥ抗体で免疫沈降させた物質（ＩＰと表示）および免疫沈降後の溶液（ＩＰ後と表示）をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに流し、ニトロセルロース膜に転写した後、ＧＡ−５０（市販の抗ＡｐｏＥ抗体）を用いて免疫ブロットした。ヒトＡｐｏＥに対するモノクローナル抗体であるＷＵＥ４をポジティブコントロールとして用いた。結果は、ＨＪ１５２が一部のＡｐｏＥをサンプルから免疫沈降できたが、ＩＰ後の産物中にいくらかのＡｐｏＥが未だ残存していたことを示した。ＨＪ１５３およびＨＪ１５４はサンプルから全てのＡｐｏＥを免疫沈降できた。
【００４２】
【図５】図５Ａ〜Ｈは様々な抗体の特徴を示すグラフである。具体的には、図５Ａ〜Ｄは、様々な抗体を用いたＥＬＩＳＡの結果をグラフに示す。ＥＬＩＳＡプレートを０．５μｇ／ｍｌの組換えａｐｏＥ２（四角）、ａｐｏＥ３（白丸）またはａｐｏＥ４（黒丸）でコーティングした。次に、種々の濃度の（Ａ）ＨＪ１５１、（Ｂ）ＨＪ１５３、（Ｃ）ＨＪ１５４または（Ｄ）ＨＪ１５６をプレートにロードした。西洋ワサビペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウス二次抗体を用いて結合を検出した。結果は、ＥＬＩＳＡにおいて検出されるように、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４がＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４に結合することを示す。ＨＪ１５１はＡｐｏＥ４に特異的であり、ＨＪ１５６はＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４にのみ結合する。図５Ｅ〜Ｈは、様々な抗体についての表面プラズモン共鳴プロファイルを示すグラフである。ストレプトアビジンチップ上に捕捉されたビオチン化組換えａｐｏＥ４への結合を検出するために、抗ＡｐｏＥ抗体を３倍段階希釈した（ＨＪ１５３（Ｅ）では１００ｎＭ、ＨＪ１５１（Ｆ）およびＨＪ１１５６（Ｇ）では１０００ｎＭから開始した）。サンプルを３０μｌ／分の流速で注入した。（Ｈ）ＨＪ１５１、ＨＪ１５３およびＨＪ１５６の見かけのＫＤ値をＳＰＲ実験に基づいて計算した。
【００４３】
【図６】図６は、いくつかの抗ＡｐｏＥ抗体がＩＣＶ注入後にＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスにおいてＡβ斑を減少させることを示すグラフである。ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスは、２ヶ月齢において開始されたＰＢＳ（ネガティブコントロール）、マウスＩｇＧ２ａｂ（ネガティブコントロール）、ＨＪ５．１（抗Ａβ抗体、ポジティブコントロール）または抗ａｐｏＥ抗体（ＨＪ１５１、ＨＪ１５４およびＨＪ１５６）の脳室内（ＩＣＶ）持続注入を受けた。抗ＡｐｏＥ抗体またはコントロール抗体（２ｍｇ／ｍｌ）を皮下浸透圧ミニポンプ(Alzet、モデル２００６)に充填し、外科的に埋め込まれたカテーテルを通して左側脳室（ブレグマ−０．４ｍｍ、正中線に対して側方１．０ｍｍ、頭蓋骨の下２．５ｍｍ）に、１．２μｌ／分の速度で６週間を注入した。３．５ヶ月齢において、マウスを灌流し、切片を抗Ａβ抗体ＨＪ３．４Ｂを用いてＡβ斑について染色した。海馬の背側の大脳皮質において斑によって覆われた面積の割合を定量した。一元配置分散分析およびその後のＴｕｋｅｙの事後検定を用いてデータを分析した（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１；＊＊＊、ｐ＜０．００１；ｎ＝１０〜１２／群）。
【００４４】
【図７】図７は、いくつかの抗ＡｐｏＥ抗体が、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスにおいてＩＣＶ注入後に線維斑の量を減少させることを示すグラフである。ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスは、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、マウスＩｇＧ２ａｂ（ネガティブコントロール）、ＨＪ５．１（抗Ａβ抗体、ポジティブコントロール）または抗ａｐｏＥ抗体（ＨＪ１５１、ＨＪ１５４およびＨＪ１５６）の脳室内（ＩＣＶ）持続注入を２ヶ月齢から受けた。抗ＡｐｏＥ抗体またはコントロール抗体（２ｍｇ／ｍｌ）を皮下浸透圧ミニポンプ(Alzet、モデル２００６)に充填し、外科的に埋め込まれたカテーテルを通して左側脳室（ブレグマ−０．４ｍｍ、正中線に対して側方１．０ｍｍ、頭蓋骨の下２．５ｍｍ）に１．２μｌ／分の速度で６週間注入した。３．５ヶ月齢において、マウスを灌流し、脳の切片をチオフラビンＳを用いて線維斑について染色した。海馬の背側の大脳皮質において斑によって覆われた面積を定量した。一元配置分散分析およびその後のＴｕｋｅｙの事後検定を用いてデータを分析した（＊、ｐ＜０．０５；ｎ＝１０〜１２／群）。
【００４５】
【図８】図８Ａ〜Ｆは、抗ＡｐｏＥ抗体がＩＣＶ注入後にＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスにおいて不溶性Ａβ４２を減少させることを示すグラフである。ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスは、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、マウスＩｇＧ２ａｂ（ネガティブコントロール）、ＨＪ５．１（抗Ａβ抗体、ポジティブコントロール）または抗ａｐｏＥ抗体（ＨＪ１５１、ＨＪ１５４およびＨＪ１５６）の脳室内（ＩＣＶ）持続注入を２ヶ月齢から受けた。抗ＡｐｏＥ抗体またはコントロール抗体（２ｍｇ／ｍｌ）を皮下浸透圧ミニポンプ(Alzet、モデル２００６)に充填し、外科的に埋め込まれたカテーテルを通して左側脳室（ブレグマ−０．４ｍｍ、正中線に対して側方１．０ｍｍ、頭蓋骨の下２．５ｍｍ）に１．２μｌ／分の速度で６週間注入した（ｎ＝１０〜１２／群）。３．５ヶ月齢においてマウスを灌流し、皮質組織をＰＢＳ、トリトンおよび５Ｍグアニジン中で順次ホモジナイズした。可溶性画分（Ａ、Ｄ）および不溶性画分（Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ）中のＡβレベルを測定した（Ａβ４０のデータはＡ〜Ｃに示され、Ａβ４２のデータはＤ〜Ｆに示される）。スチューデントのｔ検定をデータの分析に用いた。抗ａｐｏＥ抗体は種々の画分においてＡβ４２レベルを減少させた（＊、ｐ＜０．０５；＊＊、ｐ＜０．０１）。
【００４６】
【図９】図９は、抗ＡｐｏＥ抗体を腹腔内注射（１週間に１回、７週間の注射）したＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスの体重を示すグラフである。
【００４７】
【図１０】図１０は、ＨＪ１５１、ＨＪ１５５およびＨＪ１５６が、抗ＡｐｏＥ抗体を腹腔内注射（１週間に１回、７週間の注射）したＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスの脳組織ホモジネートのＰＢＳ画分において、可溶性Ａβ４０を有意に減少させないことを示すグラフである。
【００４８】
【図１１】図１１は、ＨＪ１５１、ＨＪ１５５およびＨＪ１５６が、抗ＡｐｏＥ抗体を腹腔内注射（１週間に１回、７週間の注射）したＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスの脳組織ホモジネートのＰＢＳ画分において、可溶性Ａβ４２を有意に減少させないことを示すグラフである。
【００４９】
【図１２】図１２は、ＨＪ１５６が、抗ＡｐｏＥ抗体を腹腔内注射（１週間に１回、７週間の注射）したＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスの脳組織ホモジネートの５Ｍ グアニジン画分において、不溶性Ａβ４０を有意に減少させることを示すグラフである（＊ｐ＜０．０５）。
【００５０】
【図１３】図１３は、ＨＪ１５６が、抗ＡｐｏＥ抗体を腹腔内注射（１週間に１回、７週間の注射）したＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスの脳組織ホモジネートの５Ｍ グアニジン画分において、不溶性Ａβ４２を有意に減少させることを示すグラフである（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
【００５１】
【図１４】図１４は、組換え（ｒ）ＨＪ１５１、Ｄ２６５Ａ変異（Δ）を有するｒＨＪ１５１、ｒＨＪ１５６およびｒＨＪ１５６Δを発現するＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスの皮質中の相対的な抗体濃度を示すグラフである。ＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスに、Ｄ２６５Ａ変異を有する、または有さない全長ｒＨＪ１５１およびｒＨＪ１５６を発現するＡＡＶ２／８をＰ０において注射した。３．５ヶ月齢において、皮質のＰＢＳ可溶性画分中の抗体濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。各抗体の相対レベルを、そのハイブリドーマ由来の精製抗体を基準として用いることによって計算した。
【００５２】
【図１５】図１５は、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）２／８ベクターを用いて脳内に発現させる抗ＡｐｏＥ抗体を注射したＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスの脳組織ホモジネートのグアニジン画分において、不溶性Ａβ４２を有意に減少させることを示すグラフである。Ｄ２６５Ａ変異を有するＨＪ１５１およびＨＪ１５６（ＨＪ１５１ΔおよびＨＪ１５６Δ）は効果を有しない。
【００５３】
【図１６】図１６は、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）２／８ベクターを用いて脳内に発現させる抗ＡｐｏＥ抗体を注射したＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスの脳組織ホモジネートのグアニジン画分において、不溶性Ａβ４０を減少させることを示すグラフである。Ｄ２６５Ａ変異を有するＨＪ１５１およびＨＪ１５６（ＨＪ１５１ΔおよびＨＪ１５６Δ）は効果を有しない。
【００５４】
【図１７】図１７Ａ〜Ｂは、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６が、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）２／８ベクターを用いて脳内に発現させる抗ＡｐｏＥ抗体を注射したＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウス由来の脳切片において、アミロイドβ斑の面積（Ａ）および線維斑の面積（Ｂ）を有意に減少させることを示すグラフである。Ｄ２６５Ａ変異を有するＨＪ１５１およびＨＪ１５６（ＨＪ１５１ΔおよびＨＪ１５６Δ）は効果を有しない。
【００５５】
【図１８】図１８Ａ〜Ｇは、ビオチン化（「Ｂ」）抗体ＨＪ３．４Ｂ（Ａ）、ＨＪ１５１Ｂ（Ｂ）、ＨＪ１５２Ｂ（Ｃ）、ＨＪ１５３Ｂ（Ｄ）、ＨＪ１５４Ｂ（Ｅ）、ＨＪ１５５Ｂ（Ｆ）およびＨＪ１５６Ｂ（Ｇ）を用いて染色された、ＡＰＰＰＳ１−２１／ａｐｏＥ４／４（ＡＰＰＰＳ１−２１／Ｅ４）、５ＸＦＡＤ／ａｐｏＥノックアウト（５ＸＦＡＤ／ＥＫＯ）マウスおよびヒトａｐｏＥ４／４（ヒトＥ４）脳由来の未固定の組織切片（厚さ２０μｍ）を示す。
【００５６】
【図１９】図１９Ａ〜Ｄは、ヒト血漿リポタンパク質粒子中のＡｐｏＥの抗体検出を示す。（Ａ）は、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングされたヒト血漿由来のリポタンパク質粒子中のＡｐｏＥの検出を実証するために使用される血漿結合アッセイの概略図を示す。（Ｂ〜Ｄ）はそれぞれ、様々な抗体についての結合アッセイからの結果のグラフを示す。ＡｐｏＥの検出は、ＨＪ１５３、ＨＪ１５４、ＨＪ１５１０、ＨＪ１５１１、ＨＪ１５１７、ＨＪ１５３０およびＨＪ１５３４を用いた場合に観察される。
【００５７】
【図２０】図２０Ａ〜Ｃは、競合ＥＬＩＳＡにおけるＡｐｏＥの抗体検出を示す。（Ａ）は、ヒト血漿の様々な希釈物中でのプレインキュベーションの後において、コーティングされた組換え無脂質付加ＡｐｏＥ４（ｒｅｃＡｐｏＥ；０．５μｇ／ｍＬ）への抗体結合の優先度を評価するのに使用される血漿競合アッセイの概略図を示す。（Ｂ〜Ｃ）はそれぞれ、様々な抗体についての競合ＥＬＩＳＡからの結果のグラフを示す。「ｘ ＡｐｏＥ」は「抗ＡｐｏＥ抗体」の略称である。
【００５８】
【図２１】図２１Ａ〜Ｄは、２０μｇ／ｍｌ（Ａ、Ｃ）または５０μｇ／ｍｌ（Ｂ、Ｄ）の抗ＡｐｏＥ抗体ＨＪ１５６Ｂを用いてＡｐｏＥについて免疫染色された、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ２／Ｅ２マウス由来の未固定の凍結脳切片の、２つの異なる倍率での画像を示す。スケールバーは４００μｍである。
【００５９】
【図２２】図２２Ａ〜Ｄは、２０μｇ／ｍｌ（Ａ、Ｃ）または５０μｇ／ｍｌ（Ｂ、Ｄ）の抗ＡｐｏＥ抗体ＨＪ１５６Ｂを用いてＡｐｏＥについて免疫染色された、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ３／Ｅ３マウス由来の未固定の凍結脳切片の、２つの異なる倍率での画像を示す。スケールバーは４００μｍである。
【００６０】
【図２３】図２３Ａ〜Ｄは、２０μｇ／ｍｌ（Ａ、Ｃ）または５０μｇ／ｍｌ（Ｂ、Ｄ）の抗ＡｐｏＥ抗体ＨＪ１５６Ｂを用いてＡｐｏＥについて免疫染色された、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウス由来の未固定の凍結脳切片の、２つの異なる倍率での画像を示す。スケールバーは４００μｍである。
【００６１】
【図２４】図２４Ａ〜Ｄは、抗ＡｐｏＥ ｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体ＨＪ１５３およびビオチン化ウサギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を用いてＡｐｏＥについて免疫染色された、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウス由来の未固定の凍結脳切片の画像を示す。（Ａ）０．４μｇ／ｍＬ、（Ｂ）２μｇ／ｍＬ、（Ｃ）２０μｇ／ｍＬ、および（Ｄ）５０μｇ／ｍＬの一次抗体希釈物を使用した。スケールバーは４００μｍである。
【００６２】
【図２５】図２５Ａ〜Ｄは、抗ＡｐｏＥ ｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体ＨＪ１５６およびビオチン化ウサギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を用いてＡｐｏＥについて免疫染色された、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウス由来の未固定の凍結脳切片の画像を示す。（Ａ）０．４μｇ／ｍＬ、（Ｂ）２μｇ／ｍＬ、（Ｃ）２０μｇ／ｍＬ、および（Ｄ）５０μｇ／ｍＬの一次抗体希釈物を使用した。スケールバーは４００μｍである。
【００６３】
【図２６】図２６Ａ〜Ｄは、抗ＡｐｏＥ ｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体ＨＪ１５１４およびビオチン化ウサギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を用いてＡｐｏＥについて免疫染色された、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウス由来の未固定の凍結脳切片の画像を示す。（Ａ）０．４μｇ／ｍＬ、（Ｂ）２μｇ／ｍＬ、（Ｃ）２０μｇ／ｍＬ、および（Ｄ）５０μｇ／ｍＬの一次抗体希釈物を使用した。スケールバーは４００μｍである。
【００６４】
【図２７】図２７Ａ〜Ｄは、抗ＡｐｏＥ ｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体ＨＪ１５１８およびビオチン化ウサギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を用いてＡｐｏＥについて免疫染色された、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウス由来の未固定の凍結脳切片の画像を示す。（Ａ）０．４μｇ／ｍＬ、（Ｂ）２μｇ／ｍＬ、（Ｃ）２０μｇ／ｍＬ、および（Ｄ）５０μｇ／ｍＬの一次抗体希釈物を使用した。スケールバーは４００μｍである。
【００６５】
【図２８】図２８Ａ〜Ｄは、２μｇ／ｍＬの抗ＡｐｏＥ ｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体（（Ａ）ＨＪ１５３キメラ、（Ｂ）ＨＪ１５６キメラ、（Ｃ）ＨＪ１５１４キメラ、（Ｄ）ＨＪ１５１８キメラ）を用いてＡｐｏＥについて免疫染色された、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウス由来の未固定の凍結脳切片の画像を示す。スケールバーは４００μｍである。
【００６６】
【図２９】図２９は、２ヶ月齢から３．５ヶ月齢までにおいてＰＢＳ、ＨＪ１６．６（ＩｇＧネガティブコントロール）、ならびに抗ＡｐｏＥ抗体ＨＪ１５１、ＨＪ１５５およびＨＪ１５６の毎週の腹腔内（ＩＰ）注射で処理されたＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスにおけるＡβ沈着（これはＡβ染色の％面積として測定される）を示すグラフである。全ての抗体を５０ｍｇ／ｋｇで投与した。２ヶ月齢の未処理のマウスおよび３．５ヶ月齢の処理されたマウス由来の脳切片を抗Ａβ抗体ＨＪ３．４−ビオチンで染色した。Ａβ染色を皮質から定量した。群毎にｎ＝１０であった。ＰＢＳおよびＨＪ１６．６群と比較して＊ｐ＜０．０５であった。
【００６７】
【図３０】図３０は、２ヶ月齢から３．５ヶ月齢までにおいてＰＢＳ、ＨＪ１６．６（ＩｇＧネガティブコントロール）、ならびに抗ＡｐｏＥ抗体ＨＪ１５１、ＨＪ１５５およびＨＪ１５６の毎週の腹腔内（ＩＰ）注射で処理されたＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスにおけるＡβ斑数を示すグラフである。全ての抗体を５０ｍｇ／ｋｇで投与した。２ヶ月齢の未処理のマウスおよび３．５ヶ月齢の処理されたマウス由来の脳切片を抗Ａβ抗体ＨＪ３．４−ビオチンで染色した。Ａβ斑染色によって検出されたＡβ斑数を皮質から定量した。群毎にｎ＝１０であった。ＰＢＳおよびＨＪ１６．６群と比較して＊ｐ＜０．０５であった。
【００６８】
【図３１】図３１は、２ヶ月齢から３．５ヶ月齢までにおいてＰＢＳ、ＨＪ１６．６（ＩｇＧネガティブコントロール）、ならびに抗ＡｐｏＥ抗体ＨＪ１５１、ＨＪ１５５およびＨＪ１５６の毎週の腹腔内（ＩＰ）注射で処理されたＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスにおける線維Ａβ斑沈着（これはＸ−３４染色の％面積として測定される）を示すグラフである。全ての抗体を５０ｍｇ／ｋｇで投与した。２ヶ月齢の未処理のマウスおよび３．５ヶ月齢の処理されたマウス由来の脳切片を、線維斑を染色する色素であるＸ−３４で染色した。Ｘ−３４を皮質から定量した。群毎にｎ＝１０であった。ＰＢＳおよびＨＪ１６．６群と比較して＊ｐ＜０．０５であった。
【００６９】
【図３２】図３２は、２ヶ月齢から３．５ヶ月齢までにおいてＰＢＳ、ＨＪ１６．６（ＩｇＧネガティブコントロール）、ならびに抗ＡｐｏＥ抗体ＨＪ１５１、ＨＪ１５５およびＨＪ１５６の毎週の腹腔内（ＩＰ）注射で処理されたＡＰＰ／ＰＳ１−２１ Ｅ４／Ｅ４マウスにおける線維Ａβ斑数を示すグラフである。全ての抗体を５０ｍｇ／ｋｇで投与した。２ヶ月齢の未処理のマウスおよび３．５ヶ月齢の処理されたマウス由来の脳切片を、線維斑を染色する色素であるＸ−３４で染色した。Ｘ−３４染色によって検出された線維Ａβ斑数を皮質から定量した。群毎にｎ＝１０であった。ＰＢＳおよびＨＪ１６．６群と比較して＊ｐ＜０．０５であった。
【００７０】
【図３３】図３３Ａ〜Ｆは、抗Ａβ抗体（ＨＪ３．４−ビオチン）を用いてＡβについて免疫染色された脳切片の画像を示す。（Ａ、Ｄ）Ａβ斑が発生する前の未処理の２ヶ月齢マウス由来の脳切片。（Ｂ、Ｅ）ＰＢＳで処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。（Ｃ、Ｆ）５０ｍｇ／ｋｇのネガティブコントロールＩｇＧ（ＨＪ１６．６）で処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。スケールバーは３００μｍであり、群毎にｎ＝１０であった。
【００７１】
【図３４】図３４Ａ〜Ｆは、抗Ａβ抗体（ＨＪ３．４−ビオチン）を用いてＡβについて免疫染色された脳切片の画像を示す。（Ａ、Ｄ）５０ｍｇ／ｋｇのＨＪ１５１で処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。（Ｂ、Ｅ）５０ｍｇ／ｋｇのＨＪ１５５で処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。（Ｃ、Ｆ）５０ｍｇ／ｋｇのＨＪ１５６で処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。スケールバーは３００μｍであり、群毎にｎ＝１０であった。
【００７２】
【図３５】図３５Ａ〜Ｆは、線維斑を認識するＸ−３４色素で染色された脳切片の画像を示す。（Ａ、Ｄ）Ａβ斑が発生する前の未処理の２ヶ月齢マウス由来の脳切片。（Ｂ、Ｅ）ＰＢＳで処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。（Ｃ、Ｆ）５０ｍｇ／ｋｇのネガティブコントロールＩｇＧ（ＨＪ１６．６）で処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。スケールバーは３００μｍであり、群毎にｎ＝１０であった。
【００７３】
【図３６】図３６Ａ〜Ｆは、線維斑を認識するＸ−３４色素で染色された脳切片の画像を示す。（Ａ、Ｄ）５０ｍｇ／ｋｇのＨＪ１５１で処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。（Ｂ、Ｅ）５０ｍｇ／ｋｇのＨＪ１５５で処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。（Ｃ、Ｆ）５０ｍｇ／ｋｇのＨＪ１５６で処理された３．５ヶ月齢マウス由来の脳切片。スケールバーは３００μｍであり、群毎にｎ＝１０であった。
【００７４】
【図３７】図３７Ａ〜Ｆは、脂質付加されたａｐｏＥとのＨＪ１５１、ＨＪ１５３およびＨＪ１５６の結合プロファイルを示すグラフである。（Ａ、Ｂ）プレート上への血漿のコーティング後のＥＬＩＳＡ。ａｐｏＥ ＫＯ、ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３およびＡＰＯＥ４マウス由来の血漿をプレート上にコーティングした。種々の濃度のｃｈｉ１５３およびｃｈｉ１５６をロードした。捕捉された抗体をＨＲＰヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体で検出した。（Ｃ、Ｄ）プレート上への抗体のコーティング後のＥＬＩＳＡ。プレートをＨＪ１５３およびＨＪ１５６でコーティングした。種々の遺伝子型を有するマウス由来の血漿をロードした。捕捉されたＡｐｏＥをＨＲＰヤギポリクローナル抗ＡｐｏＥで検出した。（Ｅ）血漿競合実験をＥＬＩＳＡ形式により実施した。組換えＡｐｏＥ４をプレート上にコーティングした。ＡＰＯＥ４ ＫＩマウス由来の段階希釈された血漿とともにプレインキュベートされたＨＪ１５１（５０ｎＭ）、ＨＪ１５３（４ｎＭ）、およびＨＪ１５６（５０ｎＭ）をプレートにロードした。プレートに結合したＨＪ１５抗体をＨＲＰ−ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体で検出した。（Ｆ）ＡＰＯＥ４ ＫＩまたはＥＫＯマウスへのＩＰ注射後のＨＪ１５３、ＨＪ１５６、またはコントロールＩｇＧの血漿抗体濃度。ＨＪ１５６を２、１０および５０ｍｇ／ｋｇ投与し、血漿試料を顎下穿刺により採取した。ＨＪ１５３を１０ｍｇ／ｋｇ投与した。コントロールマウスＩｇＧ２ａ（ｍｓＩｇＧ２ａ）は抗Ｈｅｒ２であり、１０ｍｇ／ｋｇで投与された。血漿中の投与された抗体の定量化は、抗原捕捉ＥＬＩＳＡによって、ＨＪ１５３またはＨＪ１５６を検出するためにはコーティングされた組換えａｐｏＥ４を用いて、コントロールＩｇＧを検出するためには組換えＨｅｒ２を用いて行われた。ＨＪ１５６の末梢のクリアランスは、１４日目までに観察された標的仲介性のクリアランスを示すコントロールＩｇＧと同様である。ＨＪ１５３は高いクリアランスを示し、４８時間後までに下限に達した。
【００７５】
【図３８】図３８Ａ〜Ｅは、未固定のマウスの脳切片中のアミロイド斑におけるＨＪ１５１およびＨＪ１５６のＡｐｏＥ４との結合、およびＡｐｏＥ４の熱誘導性凝集物に対する特異性を示す図である。（Ａ）ＡＰＰＰＳ１／ＡＰＯＥ４またはＡＰＰＰＳ１／ＡＰＯＥ ＫＯマウス由来の未固定の凍結脳切片を抗Ａβ抗体ＨＪ３．４、抗ＡｐｏＥ抗体ＨＪ１５１およびＨＪ１５６で染色した（スケールバー＝４００μｍ）。（Ｂ）ＨＪ１５１、ＨＪ１５３およびＨＪ１５６の、未処理の組換えＡｐｏＥ４（未処理）および４０℃で２４時間インキュベートされたＡｐｏＥ４（４０Ｃ）への結合。（Ｃ）ＡｐｏＥ４の４０℃で２４時間のインキュベーションは、１８６，０００ｇで１時間の超遠心分離後にペレット画分中に回収された凝集体の形成をもたらす。１：未処理のＡｐｏＥ４。２：４０℃で２４時間インキュベートされたＡｐｏＥ４。超遠心分離からの上清（Ｓ）およびペレット（Ｐ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、クーマシーブルーで染色した。（Ｄ）ＨＪ１５６の、ＥＬＩＳＡプレート上に同じ濃度でロードしたＡｐｏＥ４の種々の調製物への結合。未処理の上清：未処理のＡｐｏＥ４の、超遠心分離からの上清画分。２４ｈ ４０Ｃの上清／ペレット：４０℃で２４時間インキュベートされたＡｐｏＥ４の上清／ペレット画分。（Ｅ）未処理のＡｐｏＥ４および４０℃でインキュベートされたＡｐｏＥ４を、１％ＳＤＳまたは４Ｍ塩酸グアニジンで変性したもの、および変性していないものへの、ＨＪ１５６の結合。
【００７６】
【図３９】図３９Ａ〜Ｄは、生きているマウスの脳においてヒトＡｐｏＥ４に結合するＨＪ１５１、ＨＪ１５６およびコントロール抗体の画像である。Ａｌｅｘａ５９４と結合した（Ａ）ネガティブコントロールＩｇＧ２ａｂ、（Ｂ）ＨＪ１５１および（Ｃ）ＨＪ１５６を、６ヶ月齢であった生きているＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスの脳の表面に直接適用し、抗体の結合を二光子顕微鏡下で観察した。アミロイドをｍｅｔｈｏｘｙ−Ｘ０４を用いて標識した。中段のパネルは上段のパネルの白い枠内の領域の高倍率画像である。矢印は斑を示す。下段のパネルは、上段のパネルの黄色い枠内の領域の高倍率画像である。矢印はＣＡＡを示す。（Ｄ）５０ｍｇ／ｋｇ体重（ｉ．ｐ．）のコントロールｈｕＩｇＧまたはｃｈｉ１５６を１回（０時間）または２回（０および４８時間）注射したＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスを、最後の注射の４８時間後に屠殺した。脳内の抗体をビオチン化ウサギ抗ヒトＩｇＧおよびその後のＤＡＢによって検出した（左のパネル：バー＝１ｍｍ、右のパネル：左のパネルにおいて指定された領域の高倍率画像。バー＝３００μｍ）。
【００７７】
【図４０】図４０は、ＨＪ１５６がミクログリアを活性化し、斑のクリアランスを促進することを示すグラフである。既存の斑を既に有していた４ヶ月齢のＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスに、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６抗体の短期間での処理を投与した（３日毎にＩＰ注射による４回の投与）。染色された切片を、線維斑の量に対するＣＤ４５＋ミクログリアの面積について分析した。ＨＪ１５１は活性化ミクログリアの量に影響を及ぼさなかった。＊ｐ＜０．０５。
【００７８】
【図４１】図４１は、ＨＪ１５６の急性の免疫化後のミクログリアおよび斑の染色を示す。４ヶ月齢において、ＡＰＰＰＳ１／ＡＰＯＥ４マウスに３日毎に５０ｍｇ／ｋｇ体重の抗体を４回ＩＰ注射した。マウスを最後の注射の２４時間後に屠殺し、斑をＸ３４で染色し、活性化ミクログリアをＣＤ４５で染色した（バー＝１ｍｍ）。
【００７９】
【図４２】図４２Ａ〜Ｂは、長期間の用量範囲有効性試験の結果をグラフに示す。２ヶ月齢のＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスに、ＩｇＧ２ａｂ（５０ｍｇ／ｋｇ）、抗Ａβ ＨＪ３．４（５０ｍｇ／ｋｇ）またはＨＪ１５６（２、１０および５０ｍｇ／ｋｇ）の毎週の投与量で１２回腹腔内注射した（ｎ＝１７〜１８／群、雌雄混合）。２ヶ月齢の動物の群（ｎ＝１２）を回収し、Ａβのベースラインレベルを決定した。４．５ヶ月齢（最後の投与の３日後）において、マウスに０．３％ヘパリンを含む氷冷のＰＢＳを灌流した。大脳皮質を、１×プロテアーゼ阻害剤混合物の存在下に冷ＰＢＳおよび５Ｍグアニジン緩衝液と共に順次ホモジナイズした。グアニジン画分中の（Ａ）Ａβ４０および（Ｂ）Ａβ４２をＥＬＩＳＡによって決定した。一元配置分散分析およびその後のＴｕｃｋｙの事後検定を行い、種々の群を比較した。データを平均値±ＳＥＭとして表した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００８０】
【図４３】図４３Ａ〜Ｃは、（Ａ）ＨＪ１５１、（Ｂ）ＨＪ１５４および（Ｃ）ＨＪ１５６抗体の、ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３、およびＡｐｏＥ４の未処理の組換え体および熱誘導性凝集体への結合をグラフに示す。１ｍｇ／ｍｌ濃度のＡｐｏＥを４０℃で２４時間インキュベートすることによって、凝集したＡｐｏＥを誘導した。次いで、凝集体を１８６，０００ｇでの１時間の超遠心分離後にペレット画分中に回収した。ＥＬＩＳＡのために、未処理のＡｐｏＥまたはＡｐｏＥの熱誘導性凝集体を０．５μｇ／ｍｌで４℃において一晩、ＥＬＩＳＡプレートに直接コーティングした。ＰＢＳで３回洗浄した後、ウェルを５００ｒｐｍで振盪しながら室温において１時間、１％ＢＳＡ−ＰＢＳでブロックした。ブロックしたウェルをＰＢＳで１回洗浄し、次いで段階的な濃度（１００ｎＭから開始し、その後５倍希釈）で抗体をロードした。結合した抗体をＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ(Jackson Immunoresearch)で検出し、ＴＭＢ基質を用いてＯＤ６５０において可視化した（反応をＢｉｏＦＸ停止溶液で停止させた）。結果は、ＨＪ１５１がＡｐｏＥ４のみを検出し、熱処理されたＡｐｏＥ４に対していくらかの優先性を示し、ＨＪ１５４がＡｐｏＥの３つ全てのアイソフォームを検出し、コンフォメーションを問わず、ＨＪ１５６がＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４の両方を検出し、熱処理されたＡｐｏＥに対し優先性を示したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００８１】
詳細な説明
出願人は、抗ＡｐｏＥ抗体、およびＡβアミロイドーシスの処置のために該抗ＡｐｏＥ抗体を使用する方法を見出した。該方法は、（ａ）ヒトＡｐｏＥ４に、約０．１ｐＭ〜約１０μＭ、または約０．１ｐＭ〜約１μＭのＫＤで結合し、（ｂ）ヒト血漿由来ＡｐｏＥ４、またはヒトＡｐｏＥ４を発現するトランスジェニックマウスの血漿由来のヒトＡｐｏＥ４と比較して、組換え無脂質付加（alipidated）ヒトＡｐｏＥ４に優先的に結合し、かつ、（ｃ）固定化されていない脳組織中のアミロイド斑におけるヒトＡｐｏＥに結合する、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を、生体対象に効果的に投与することを含む。本発明は、これら特徴を有する抗ＡｐｏＥ抗体が、以下の対象を包含するがそれに限定されない、Ａβアミロイドーシスを有する対象（本書において包括的に「処置を必要とする対象」と称する）の処置を提供するという発見を含む：脳Ａβ斑によって特徴付けられる疾患を有すると診断された対象、脳における血管Ａβ斑によって特徴付けられる疾患を有すると診断された対象、Ａβ斑に関連する症状を有すると診断された対象、ＣＡＡに関連する症状を有すると診断された対象、Ａβ斑に関連する症状および／またはＣＡＡに関連する症状を有するかまたは有しない、Ａβアミロイドーシスの臨床徴候を有すると診断された対象、アルツハイマー病を有すると診断された対象、ならびにＣＡＡを有すると診断された対象。無症候性の患者においてＡβアミロイドーシスの臨床徴候を判定する方法は、当分野において知られており、本書においても後述する。
【００８２】
Ｉ．定義
用語「対象」は、ヒト、またはヒトＡｐｏＥを発現する非ヒト動物を指す。
【００８３】
本書において、用語「処置する」、「処置すること」、「処置」は、治療的な処置および予防的な手段の両方を指し、ここで目的とされるのは、望ましくない生理学的変化または疾患／障害を防ぐ、またはその進行を遅らせる（軽減する）ことである。有益な、または望ましい臨床的結果には、検出可能であろうとなかろうと、症状の軽減、疾患の程度の低減、疾患状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）、疾患進行の遅延または緩徐化、疾患状態の改善または緩和、および緩解（部分的または完全）が含まれるが、それに限定されない。「処置」は、処置を受けないと仮定した場合に予想されるものと比較して、生存が延長されることも意味しうる。処置を必要とするものには、疾患、症状または障害を既に有するもの、および疾患、症状または障害を有する傾向を有するもの、または疾患、症状または障害を防止すべきものが包含される。
【００８４】
用語「Ａβ」は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と称されるより大きいタンパク質のカルボキシ末端の領域に由来するペプチドを指す。ＡＰＰをコードする遺伝子は、２１番染色体に存在する。Ａβには多くの形態があり、毒性作用を有するものがある：Ａβペプチドは典型的には３７〜４３アミノ酸配列長を有するが、その全体的サイズを変化させるトランケーションおよび修飾を有しうる。それらは、可溶性および不溶性のコンパートメントにおいて、モノマー、オリゴマーおよび凝集形態で、細胞内または細胞外に見られ、また、他のタンパク質または分子と複合体を形成しうる。Ａβの有害または毒性作用は、上記形態のいくつかまたはすべて、また、特に具体的に記載していない他の形態によるものでありうる。例えば、そのようなＡβアイソフォームの２つにＡβ４０およびＡβ４２があり、Ａβ４２アイソフォームは特に凝集性（fibrillogenic）または不溶性であり、疾患状態に関連する。
【００８５】
「Ａβアミロイドーシス」は、典型的にはアミロイド斑またはＣＡＡの形態での、脳または脳血管におけるＡβ沈着の証拠として臨床的に定義される。Ａβアミロイドーシスに関連する疾患には、アルツハイマー病の発症前段階、アルツハイマー病（ＡＤ）、脳アミロイドアンギオパチー（ＣＡＡ）、レヴィ小体認知症および封入体筋炎が包含されるが、それに限定されない。「Ａβアミロイドーシス関連疾患発症のリスクが高い」とは、対象の年齢、家族歴、遺伝的状態および他の既知のリスク因子から予測されるリスクよりもリスクが高いことを言う。
【００８６】
「Ａβアミロイドーシスの臨床徴候」とは、当分野で知られるＡβ沈着の判定を指す。Ａβアミロイドーシスの臨床徴候は、アミロイドの画像化（例えばＰｉＢ ＰＥＴ、フロルベタピル、または当分野で既知の他の画像化方法）によって、または脳脊髄液（ＣＳＦ）Ａβ４２またはＡβ４２／４０比の低下によって判定されるＡβ沈着を包含するが、それに限定されない。例えば、Klunk WE et al. Ann Neurol 55(3) 2004、およびFagan AM et al. Ann Neurol 59(3) 2006を参照されたい（これら文献は、引用により、全体が本書に組み込まれる）。Ａβアミロイドーシスの臨床徴候は、Ａβの代謝の測定、とりわけ、単独での、または他のＡβバリアント（例えばＡβ３７、Ａβ３８、Ａβ３９、Ａβ４０、および／または総Ａβ）の代謝測定との比較においての、Ａβ４２代謝の測定をも含みうる。これについては、米国特許出願第14/366831号、第14/523148号および第14/747453号を参照されたい（これら文献は、引用により、全体が本書に組み込まれる）。さらなる方法が、Albert et al. Alzheimer’s & Dementia 2007 Vol. 7, pp. 170-179; McKhann et al., Alzheimer’s & Dementia 2007 Vol. 7, pp. 263-269; およびSperling et al. Alzheimer’s & Dementia 2007 Vol. 7, pp. 280-292に記載されている（これら文献は、引用により、全体が本書に組み込まれる）。重要なことに、Ａβアミロイドーシスの臨床徴候を有する対象は、Ａβ沈着に関連する症状を有することも有しないこともある。しかしながら、Ａβアミロイドーシスの臨床徴候を有する対象は、Ａβアミロイドーシスに関連する疾患を発症するリスクが高い。
【００８７】
「Ａβ斑に関連する症状」または「ＣＡＡに関連する症状」とは、それぞれ、アミロイド斑またはＣＡＡ（アミロイド線維と称される規則的に並んだ線維凝集物で構成される）の形成によって、またはそれに関連して引き起こされる任意の症状を指す。Ａβ斑に関連する症状の例には、神経変性、認知機能障害、記憶障害、行動の変化、感情制御の障害、発作、神経系の構造または機能の障害、およびアルツハイマー病またはＣＡＡの発症または悪化のリスクの増加が含まれるが、それに限定されない。神経変性は、ニューロン構造の変化（分子の変化、例えば毒性タンパク質、タンパク質凝集物等の細胞内蓄積、およびマクロレベルの変化、例えば軸索または樹状突起の形状または長さの変化、ミエリン鞘組成の変化、ミエリン鞘の損失を包含する）、ニューロン機能の変化、ニューロン機能の低下、ニューロンの死滅、またはそれらの任意の組み合わせを包含しうる。認知機能障害は、記憶、注意、集中、言語、抽象的思考、創造性、実行機能、計画および体系的思考における障害を包含しうるが、それに限定されない。行動の変化は、乱暴な行動または言葉、、衝動、抑制の低下、無関心、発動性の低下、人格変化、アルコール、煙草または薬物の濫用、および他の耽溺関連行動を包含しうるが、それに限定されない。感情制御の障害は、抑うつ、不安、躁病、過敏、および感情失禁を包含しうるが、それに限定されない。発作は、全般強直間代発作、複雑部分発作、および非てんかん性の心因性発作を包含しうるが、それに限定されない。神経系の構造または機能の障害は、それに限定されないが、水頭症、パーキンソン病、睡眠障害、精神病、バランスと協調の障害を包含しうる。これは、単不全麻痺、片不全麻痺、四肢不全麻痺、運動失調、バリスムス、震せんのような運動障害を包含しうる。これはまた、嗅覚、触覚、味覚、視覚および聴覚を含む感覚の消失または機能障害をも包含しうる。これはさらに、腸および膀胱の機能障害、性機能障害、血圧および体温の調節障害のような自律神経系の障害を包含しうる。これはさらに、成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、ゴナドトロピン放出ホルモン、プロラクチンならびに他の多くのホルモンおよびモジュレーターの欠乏および調節不全のような、視床下部および下垂体の機能障害に起因するホルモン障害をも包含しうる。
【００８８】
「ＡｐｏＥ」（NP_000032.1, UniProtKB Identifier P02649）は、１９番染色体に存在するＡＰＯＥ遺伝子（例えば、GenBank Accession Number NM_000041またはNCBI Reference Sequence: NC_000019.10として同定されるヌクレオチド配列）から発現されるアポリポタンパク質で、ＡｐｏＥ２（Cys112、Cys158）、ＡｐｏＥ３（Cys112、Arg158）、ＡｐｏＥ４（Arg112、Arg158）の３つの主要な多形形態がある。特記しない限り、「ＡｐｏＥ」は「ヒトＡｐｏＥ」を指し、機能的フラグメントを包含する。「組換えＡｐｏＥ」とは、核酸の発現およびタンパク質へのその翻訳を支持する系（例えば、原核生物細胞、真核生物細胞、または無細胞発現系）に導入された核酸によってコードされるＡｐｏＥを指す。組換えタンパク質を製造する方法は当分野でよく知られており、本書に開示される組換えＡｐｏＥの製造は特定の系に限定されない。しかしながら、当業者は、系の選択が、組換え産生されるとき、どのように「脂質の無い」ＡｐｏＥが産生されるかに影響しうることを認識しうる。本書において、用語「無脂質付加（alipidated）ＡｐｏＥ」とは、原核生物細胞において組換え産生されたＡｐｏＥを指す。
【００８９】
本書において、用語「抗体」は、最も広い意味で用いられ、完全長モノクローナル、ポリクローナルおよび多重特異的（二重特異的、三重特異的等）抗体、ならびに重鎖抗体および抗体フラグメント（ただし、所望の抗原結合活性を示すもの）を含むがそれに限定されない、さまざまな抗体および抗体様構造を包含する。抗原結合に与る抗体ドメインは、「可変領域」または「可変ドメイン」と称され、本書において詳細に後述する。抗原結合特異性を与えるのに、単一の可変ドメインで十分でありうる。本発明に有用な抗体は組換えによって産生されるのが好ましいが、それは必ずしも必要ではない。抗体はグリコシル化されていても、されていなくてもよいが、好ましいのはグリコシル化抗体でありうる。「単離された」抗体とは、その天然の環境における成分から分離されている抗体である。いくつかの態様において、抗体は、当分野で知られる方法により測定される９５％または９９％を上回る純度まで精製される。
【００９０】
本書に記載される抗体に加え、本発明の抗体と実質的に同様に機能する抗体模倣物またはアプタマーを、当分野で知られる方法を用いて設計することが可能でありうる。「抗体模倣物」とは、抗原に特異的に結合することができるが構造的には抗体に関連しないポリペプチドまたはタンパク質を指す。抗体模倣物は、約３ｋＤａ〜約２０ｋＤａの分子量を有する。抗体模倣物の非限定的な例は、アフィボディ分子、アフィリン（affilin）、アフィマー（affimer）、アルファボディ（alphabody)、アンチカリン（anticalin）、アビマー（avimer）、DARPin、およびモノボディ（monobody）である。アプタマーとは、ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドからなる一群の小核酸リガンドであり、その標的に対し高い特異性および親和性を有する。アプタマーは、抗原−抗体反応プロセスと同様のプロセスである構造認識によって、その標的と相互作用およびその標的に結合する。アプタマーは、典型的には約８〜２５ｋＤａの、抗体よりも小さい分子量を有する。
【００９１】
用語「完全長抗体」および「インタクト抗体」は、互換的に用いられることがあり、天然の抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本書において定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。天然の抗体の基本構造単位は四量体を含む。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖の対からなり、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。軽鎖は、γ、μ、αおよびλに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δおよびεに分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥとして抗体アイソタイプを決定する。各軽鎖および重鎖のアミノ末端部分は、約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の配列の、抗原認識に主として与る可変領域（それぞれ、ＶＬおよびＶＨ）を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主として与る定常領域を規定する。軽鎖および重鎖中で、可変および定常領域は、約１２またはそれ以上のアミノ酸の配列の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖の場合は約１０アミノ酸の配列の「Ｄ」領域をも含む。インタクト抗体は、当分野で知られるように、ジスルフィド結合で正しく架橋されている。
【００９２】
抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメインは一般に、同様の構造を有し、各ドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照されたい）。抗原結合特異性を与えるのに、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分でありうる。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、当該抗原に結合するある抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを利用して単離して、それぞれ、相補性ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリのスクリーニングを行いうる（例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照されたい）。
【００９３】
「フレームワーク領域」または「ＦＲ」とは、超可変領域（ＨＶＲ）部分以外の可変ドメインの部分を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、４つのＦＲドメインＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲおよびＦＲの配列は一般に、ＦＲ１−ＨＶＲ１−ＦＲ２−ＨＶＲ２−ＦＲ３−ＨＶＲ３−ＦＲ４の配列で現れる。当分野で知られているように、重鎖および軽鎖のＦＲドメインは異なりうる。
【００９４】
本書において用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」は、配列が大きく異なる可変ドメインの領域（一般に「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも称される）のそれぞれ、および／または構造的に限定されるループ（「超可変ループ」）を形成する可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般に、抗体は、ＶＨ中に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、およびＶＬ中に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、６つのＨＶＲを有する。本書において、「可変領域由来のＨＶＲ」とは、元の可変領域の対応するＨＶＲと比較して、２つ以下のアミノ酸置換を有するＨＶＲを指す。ＨＶＲの例には、以下のものが含まれる：（ａ）アミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）および９６−１０１（Ｈ３）において生じる超可変ループ（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）；（ｂ）アミノ酸残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）、８９−９７（Ｌ３）、３１−３５ｂ（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）および９５−１０２（Ｈ３）において生じるＣＤＲ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）；（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ−３６（Ｌ１）、４６−５５（Ｌ２）、８９−９６（Ｌ３）、３０−３５ｂ（Ｈ１）、４７−５８（Ｈ２）および９３−１０１（Ｈ３）において生じる抗原コンタクト（antigen contact）（MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）；ならびに（ｄ） （ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）の組み合わせであって、本開示のさまざまな抗体について本書において下記に規定するもの。本書において、異なる指定をしない限り、可変ドメイン中のＨＶＲ部分および他の部分（例えばＦＲ部分）の番号付けは、Kabat et al.の前掲書に従う。
【００９５】
本書において、用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖Ｃ末端領域を規定するよう使用される。この用語は、天然の配列のＦｃ領域、およびバリアントＦｃ領域を包含する。一態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から、重鎖カルボキシル末端までである。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在してもしなくてもよい。本書において、異なる指定をしない限り、Ｆｃ領域または定常領域のアミノ酸配列の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991に記載されるように、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも称される）に従う。
【００９６】
「バリアントＦｃ領域」は、天然のＦｃ領域または元のポリペプチドのＦｃ領域と比較における、１つまたはそれ以上のアミノ酸置換により、および／またはグリコシル化パターンの変更により、天然のＦｃ領域のものとは異なりうるアミノ酸配列を含む。一例において、バリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または元のポリペプチドのＦｃ領域における、約１〜約１０のアミノ酸置換、または約１〜約５のアミノ酸置換を有しうる。バリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または元のポリペプチドのＦｃ領域との、少なくとも約８０％の同一性、少なくとも約９０％の同一性、少なくとも約９５％の同一性を有しうる。
【００９７】
「抗体フラグメント」とは、インタクト抗体が結合する抗原に結合する、インタクト抗体の一部分を含む、インタクト抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの非限定的な例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；一本鎖形態の抗体およびその高次バリアント；シングルドメイン抗体；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異的抗体が含まれるが、それに限定されない。
【００９８】
一本鎖形態の抗体およびその高次形態は、シングルドメイン抗体、一本鎖バリアントフラグメント（scFv）、二価scFv（di-scFv）、三価scFv（tri-scFv）、四価scFv（tetra-scFv）、ディアボディ（diabody）、ならびにトリアボディ（triabody）およびテトラボディ（tetrabody）を包含するが、それに限定されない。ＳｃＦｖは、リンカーで連結された重鎖および軽鎖可変領域を含む。すべてではないが多くの例において、リンカーはペプチドでありうる。リンカーペプチドは、好ましくは、約５〜３０アミノ酸鎖長、または約１０〜２５アミノ酸鎖長である。典型的には、リンカーは、活性結合部位の適正な折り畳みおよび形成を妨げることなく、可変領域の安定化を可能にする。好ましい態様において、リンカーペプチドは、グリシン、およびセリンまたはスレオニンに富む。ＳｃＦｖは、ファージディスプレイを促進するために使用することができ、またはフローサイトメトリー、免疫組織化学のため、もしくは標的化ドメインとして使用することができる。ＳｃＦｖを調製する方法および使用する方法は、当分野で知られている。ＳｃＦｖはまた、ヒトの定常領域にコンジュゲート化しうる（例えば、重鎖定常ドメインを、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４のようなＩｇＧのドメインから誘導するか、または重鎖定常ドメインをＩｇＡ、ＩｇＭもしくはＩｇＥから誘導する）。ディアボディ、トリアボディおよびテトラボディならびにより高次のバリアントは、典型的には、リンカーペプチドの長さをゼロから数個のアミノ酸に変化させることによって作製される。あるいは、多価結合抗体バリアントは、可変ドメインに連結された自己集合ユニットを用いて作製できることも、当分野でよく知られている。
【００９９】
「シングルドメイン抗体」とは、単一の可変抗体ドメインモノマーからなる抗体フラグメントを指す。
【０１００】
多重特異的抗体は、二重特異的抗体、三重特異的抗体、または特異性が四重もしくはそれ以上である抗体を包含する。多重特異的抗体は、１つの抗体の重鎖および軽鎖を、１つまたはそれ以上の他の抗体の重鎖および軽鎖と組み合わせることによって作製しうる。それら鎖は共有結合により連結することができる。
【０１０１】
「モノクローナル抗体」とは、例えば任意の真核生物、原核生物またはファージのクローンを包含する単一のコピーまたはクローンに由来する抗体を指す。「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって産生される抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、当分野でよく知られるハイブリドーマ技術を用いて産生することも、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術またはそのような技術の組み合わせ、および当分野で容易に知られる他の技術によって産生することもできる。さらに、モノクローナル抗体は、当分野で知られた方法にしたがって、検出可能なラベルで標識し、固相に固定化し、および／または異種化合物（例えば、酵素または毒素）にコンジュゲート化しうる。
【０１０２】
「重鎖抗体」は、２本の重鎖からなる抗体を指す。重鎖抗体は、ラクダ、ラマ、アルパカ、サメ等に由来するＩｇＧ様抗体、または軟骨魚類由来のＩｇＮＡＲでありうる。
【０１０３】
「ヒト化抗体」は、ヒトにおいて投与後に免疫応答を引き起こす非ヒト抗体のリスクを低減するように改変されているが、元のものと同様の結合特異性および親和性を維持している、非ヒト抗体を指す。ヒト化抗体は、その非ヒト抗体と同じかまたは同様のエピトープに結合する。用語「ヒト化抗体」は、非ヒト超可変領域（「ＨＶＲ」）を有する抗体の配列が変更されたことにより、一部または全部がヒト抗体系列由来アミノ酸配列からなる抗体を包含する。そのような変更の最も単純なものは、マウスの定常領域をヒト抗体の定常領域で単に置き換えて、薬学的使用のために許容しうるよう十分に低い免疫原性を有しうるヒト／マウスキメラを得ることから成りうる。好ましくは、当分野でこれまでによく知られている技術によって、抗体の可変領域もヒト化する。例えば、１個、数個または６個すべての非ヒトＨＶＲを維持して、可変領域のフレームワーク領域を、対応するヒトフレームワーク領域で置換することができる。例えばヒト化抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、いくつかのフレームワーク部分を、非ヒトＶＬドメインまたはＶＨドメイン（例えば、当該ＨＶＲ部分が由来する非ヒト抗体）に由来する対応する部分で置換することができる。実質的に、ヒトフレームワーク領域は、ある知られているヒトフレームワーク配列と少なくとも約７５％の同一性（すなわち、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％の配列同一性）を有する。ＨＶＲはまた、フレームワーク領域が完全にヒト系列であるかまたは実質的にヒトである場合に、抗原との結合活性および親和性を維持または向上するように、ランダムに変異させうる。上述のように、本発明の方法における使用のために、抗体フラグメントを使用することは十分である。さらに、本書において、用語「ヒト化抗体」は、実質的にヒトのフレームワーク領域、少なくとも１つの非ヒト抗体由来ＨＶＲを含み、その中に存在する任意の定常領域が実質的にヒトである、抗体を指す。実質的にヒトの定常領域は、ある知られているヒト定常配列と少なくとも約９０％の同一性（すなわち、約９０％、約９５％または約９９％の配列同一性）を有する。したがって、おそらくＨＶＲを除く、ヒト化抗体のすべての部分が、１つまたはそれ以上の系列のヒト免疫グロブリンの配列の対と、実質的に同一である。
【０１０４】
所望により、ヒト化免疫グロブリンの設計は、下記のようにして、または当業者に知られる同様の方法を用いて、行いうる（例えば、Almagro, et al. Front. Biosci. 2008, 13(5):1619-33参照）。マウス抗体可変領域を、最も類似するヒト系列の配列に対してアラインする（例えば、ＢＬＡＳＴまたは同様のアルゴリズムを用いて）。マウス抗体配列由来のＣＤＲ部分を、同様のヒト「アクセプター」系列にグラフトする。次いで、ヒト化抗体に元のマウス抗体と同様の結合親和性を持たせるために、ＣＤＲに近いかまたはフレームワーク内の１つまたはそれ以上の位置（例えば、Vernier位置）を、元のマウスのアミノ酸に復帰させうる。典型的には、異なる復帰変異を有するいくつかのバージョンのヒト化抗体を生成し、活性を実験により試験する。元のマウス抗体に最も近い特性を有し、かつ、マウスフレームワーク復帰の最も少ないヒト化抗体バリアントを、最終的なヒト化抗体候補として選択する。
【０１０５】
ＩＩ．抗ＡｐｏＥ抗体
本書に開示する抗ＡｐｏＥ抗体は、それが認識または結合するエピトープに関して説明または特定することができる。抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用する標的ポリペプチドの部分が「エピトープ」である。ＡｐｏＥは、該タンパク質の由来（例えば、マウス、ラット、カニクイザル、ヒト等）、アイソフォーム（例えば、ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３、ＡｐｏＥ４）、アイソフォームのコンフォメーションの状態（例えば、線維状、凝集、不溶性、可溶性、モノマー、オリゴマー、酸化型、翻訳後修飾等）、およびアイソフォームの存在場所（例えば、細胞内、細胞外、粒子中で他のタンパク質または分子との複合体を形成、アミロイド斑中、等）によって、任意の数のエピトープを有しうる。さらに、ＡｐｏＥ上の「エピトープ」は一次構造（linear）エピトープまたは立体構造（conformational）エピトープであり、いずれの場合も非ポリペプチド要素を含みうること、例えば、エピトープは炭水化物または脂質の側鎖を含みうることに注意すべきである。用語「親和性」は、個々のエピトープの、抗体の抗原結合部位との結合の強さの尺度を言う。
【０１０６】
本書において「抗ＡｐｏＥ抗体」とは、組換えＡｐｏＥ４、またはヒト脳から単離されたＡｐｏＥ４に、約０．１ｐＭ〜約１０μＭ、好ましくは約０．１ｐＭ〜約１μＭ、より好ましくは約０．１ｐＭ〜約１００ｎＭの親和定数または相互作用の親和性（ＫＤ）で結合する、単離された抗体を指す。抗体の抗原に対する親和性を決定する方法は、当分野で知られており、実施例においてもさらに説明する。本発明において有用な抗ＡｐｏＥ抗体は、処置有効量で対象に投与するのに適当なものを包含する。
【０１０７】
本書に開示する抗ＡｐｏＥ抗体は、交差反応性に関しても記述または特定することができる。用語「交差反応性」は、ある１つの抗原に特異的な抗体が第２の抗原と反応する能力；２つの異なる抗原性物質の間の関連性の尺度、を指す。すなわち、抗体は、その生成をもたらしたものとは別のエピトープに結合するならば、交差反応性である。交差反応性のエピトープは通常、抗体生成をもたらしたエピトープと同じ相補性の構造的特徴の多くを含み、いくつかの場合には実際に、元のエピトープよりもよくフィットしうる。例えば、ある抗体は、関連するが同一ではないエピトープ（例えば、参照エピトープとの同一性（当分野で知られた方法で計算される）が少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％であるエピトープ）を結合する場合に、ある程度の交差反応性を有する。ある抗体は、参照エピトープとの同一性が約９５％未満、約９０％未満、または約８５％未満のエピトープを結合しないならば、交差反応性がほとんど無いか、または無いと言うことができる。ある抗体は、あるエピトープの任意の他のアナログ、オルソログまたはホモログを結合しないならば、該エピトープに対して「高度に特異的」を見なすことができる。
【０１０８】
本開示の抗ＡｐｏＥ抗体が結合するエピトープは、ＡｐｏＥ４に独特のものでありうるか、ＡｐｏＥ４および他のＡｐｏＥアイソフォーム（例えばＡｐｏＥ２および／またはＡｐｏＥ３）に共通のものでありうるか、または別のアイソフォームのエピトープと関連するが同一ではないＡｐｏＥ４エピトープでありうる。いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３またはＡｐｏＥ４に優先的に結合しない。他のいくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、ＡｐｏＥ４に優先的に結合するか、またはＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４に優先的に結合する。あるＡｐｏＥアイソフォームに優先的に結合する抗体は、そのアイソフォームに、異なるＡｐｏＥアイソフォームよりも容易に結合する。「優先的に結合する」とは、抗体が、第１の抗原のあるエピトープに、第１の抗原の別のエピトープまたは第２の抗原の別のエピトープに対するよりも容易に特異的結合することを意味する。一例において、ある抗体が、第２のエピトープに対するよりも小さいオフレート［off rate（k(off)）］で第１のエピトープに結合するならば、該抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると見なすことができる。別の一例において、ある抗体が、第２のエピトープに対するよりも小さい解離定数（ＫＤ）で第１の抗体に結合するならば、該抗体は第１のエピトープに優先的に結合すると見なすことができる。さらに別の一例において、ある抗体が、あるＡｐｏＥアイソフォームに、他のアイソフォームに結合する場合と比較して、ＥＬＩＳＡまたは同様のアッセイで測定して少なくとも約１０分の１、５０分の１または１００分の１の５０％効果濃度（ＥＣ５０）で結合するならば、該抗体は該ＡｐｏＥアイソフォームに優先的に結合すると見なすことができる。あるいは、ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４のそれぞれに対するある抗体の結合のＥＣ５０の差が１０倍未満である場合は、該抗体はそれらアイソフォームに優先的に結合しないと見なすことができる。
【０１０９】
本開示の単離された抗ＡｐｏＥ抗体のさらなる側面は、それが、固定化されていない脳組織におけるアミロイド斑においてヒトＡｐｏＥに結合するということである。「固定化されていない脳組織」とは、パラホルムアルデヒドまたは他の固定剤で固定化されていない脳組織を指す。該抗ＡｐｏＥ抗体は、その染色パターンが、脳実質内アミロイド斑におけるＡβ、またはＣＡＡの形態の脳内血管周囲沈着物におけるＡβとの結合と一致する場合に、「固定化されていない脳組織中におけるアミロイド斑においてヒトＡｐｏＥに結合する」と見なすことができる。
【０１１０】
本開示の単離された抗ＡｐｏＥ抗体のさらなる側面は、それが、ヒト血漿由来ＡｐｏＥ４、またはヒトＡｐｏＥ４を発現するトランスジェニックマウスの血漿に由来するヒトＡｐｏＥ４と比較して、組換え無脂質付加ヒトＡｐｏＥ４に優先的に結合するということである。簡潔に述べると、これは、（ａ）組換え無脂質付加ヒトＡｐｏＥ４をＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、（ｂ）さまざまな希釈度のヒト血漿、またはヒトＡｐｏＥ４発現トランスジェニックマウス由来血漿（例えば、約１〜５μＭのＡｐｏＥを含む２０倍〜１００倍希釈の血漿）の存在下に、抗ＡｐｏＥ抗体をインキュベートして、各希釈度についてプレインキュベート抗体−血漿混合物を調製し、（ｃ）プレインキュベート抗体−血漿混合物を（ａ）のＥＬＩＳＡプレートに加えて、プレート上にコーティングされた組換え無脂質付加ＡｐｏＥ４と平衡化させ、（ｄ）混合物中の抗ＡｐｏＥ抗体の、プレート上にコーティングされた組換え無脂質付加ＡｐｏＥ４に対する結合を測定する、ことによって測定することができる。組換え無脂質付加ＡｐｏＥ４に優先的に結合する抗体は、約１０００倍から約２０倍までの間の血漿希釈度において、プレートに対し、同様の結合を示しうる（すなわち、結合シグナルの低下が２０％を超えず、好ましくは１０％を超えない）。より詳細な説明は実施例１３において行う。いくつかの態様において、単離された抗ＡｐｏＥ抗体は、血漿由来ＡｐｏＥに特異的に結合しない。クリアランス（ＣＬ）は、全身循環からの薬物の不可逆的排出の効率を示す薬物動態パラメータで、単位時間当たりの薬物除去される血液／血漿／血清の体積として示される。抗ＡｐｏＥ抗体は、例えば、それがヒトＡｐｏＥ発現動物に投与され、そのクリアランス値がアイソタイプコントロール抗体のクリアランス値の２５倍未満であれば、血漿由来ＡｐｏＥに特異的に結合しない（両抗体の動物への投与量は同様）。例えば、図３７Ｆおよび実施例１９を参照されたい。
【０１１１】
本開示の単離された抗ＡｐｏＥ抗体のさらなる側面は、それがバリアントＦｃ領域を有するか、または有さないということである。例えば、Ｆｃ領域は、ミクログリア細胞のＦｃ受容体に対するその親和性を増加または減少するように、および／または改変されたグリコシル化パターンを有するように、改変することができる。
【０１１２】
本開示の抗ＡｐｏＥ抗体のさらなる側面を、以下、より詳細に説明する。
【０１１３】
（ａ）ＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４に優先的に結合する抗ＡｐｏＥ抗体：グループＩ
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号９４を含む重鎖可変領域を有する。いくつかの態様において、重鎖可変領域はさらに、配列番号９０および／または配列番号９２を含む。他のいくつかの態様において、重鎖可変領域はさらに、配列番号９１および／または配列番号９３を含む。上記態様のいくつかにおいて、抗体は、配列番号８８または配列番号８９を含む軽鎖可変領域を有する。軽鎖可変領域はさらに、（ａ）配列番号８６または配列番号８７；および／または（ｂ）配列番号３０を含みうる。
【０１１４】
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号９５を含む重鎖可変領域を有する。いくつかの態様において、重鎖可変領域はさらに、配列番号９０および／または配列番号９２を含む。他のいくつかの態様において、重鎖可変領域はさらに、配列番号９１および／または配列番号９３を含む。上記態様のいくつかにおいて、抗体は、配列番号８８または配列番号８９を含む軽鎖可変領域を有する。軽鎖可変領域はさらに、（ａ）配列番号８６または配列番号８７；および／または（ｂ）配列番号３０を含みうる。
【０１１５】
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は表Ａから選択される。
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【０１１６】
ある例示態様において、この群の抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号３に由来する１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号４に由来する１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号３に由来するＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号２９のＬ１、配列番号３０のＬ２、配列番号３１のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｂの抗体１〜７）。配列番号４に由来するＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号３２のＨ１、配列番号３３のＨ２、配列番号３４のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｂの抗体８〜１４）。配列番号４に由来する１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号３に由来する１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号２９のＬ１、配列番号３０のＬ２、配列番号３１のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｂの抗体１５〜６３）。上記のさまざまな態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号３との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号４との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号３、４、２９、３０、３１、３２、３３および３４の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１１７】
他の１つの例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１７由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号１８由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号１７由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号６３のＬ１、配列番号３０のＬ２、配列番号６４のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｂの抗体６４〜７０）。配列番号１８由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号６５のＨ１、配列番号６６のＨ２、配列番号６７のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｂの抗体７１〜７７）。配列番号１８由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号１７由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。好ましい態様において、このＶＬは、配列番号６３のＬ１、配列番号３０のＬ２、配列番号６４のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｂの抗体７８〜１２６）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号１７との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号１８との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号１７、１８、６３、３０、６４、６５、６６および６７の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１１８】
いくつかの態様において、上記例示抗体はそれぞれ、ミクログリアＦｃＲとの天然の相互作用を変化するよう改変されたバリアントＦｃ領域を包含するがそれに限定されない、バリアントＦｃ領域をも有しうる。
【０１１９】
他のいくつかの態様において、グループＩの単離された抗体は、例えば、例示抗体ＨＪ１５２またはＨＪ１５１４について説明するように、表４〜７に挙げるエピトープを認識する。
【０１２０】
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【０１２１】
（ｂ）グループＩＩ：ＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４に優先的に結合する抗ＡｐｏＥ抗体
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号８４を含む重鎖可変領域を有する。いくつかの態様において、重鎖可変領域はさらに、配列番号８０および／または配列番号８２を含む。他のいくつかの態様において、重鎖可変領域はさらに、配列番号８１および／または配列番号８３を含む。上記態様のいくつかにおいて、抗体は、配列番号２５を含む軽鎖可変領域を有する。軽鎖可変領域はさらに、（ａ）配列番号７８または配列番号７９、および／または（ｂ）配列番号２４を含みうる。
【０１２２】
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号８５を含む重鎖可変領域を有する。いくつかの態様において、重鎖可変領域はさらに、配列番号８０および／または配列番号８２を含む。他のいくつかの態様において、重鎖可変領域はさらに、配列番号８１および／または配列番号８３を含む。上記態様のいくつかにおいて、抗体は、配列番号２５を含む軽鎖可変領域を有する。軽鎖可変領域はさらに、（ａ）配列番号７８または配列番号７９、および／または（ｂ）配列番号２４を含みうる。
【０１２３】
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、表Ｃから選択される。
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【０１２４】
ある例示態様において、この群の抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号９に由来する１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号１０に由来する１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号９に由来するＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号４７のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体１〜７）。配列番号１０に由来するＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号４８のＨ１、配列番号４９のＨ２、配列番号５０のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体８〜１４）。配列番号１０に由来する１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号９に由来する１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号４７のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体１５〜６３）。上記のさまざまな態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または、抗体は、配列番号９との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号１０との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号９、１０、４７、２４、２５、４８、４９および５０の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１２５】
他の１つの例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１１由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号１２由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号１１由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号５１のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体６４〜７０）。配列番号１２由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号５２のＨ１、配列番号５３のＨ２、配列番号５４のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体７１〜７７）。配列番号１２由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号１１由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号５１のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体７８〜１２６）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号１１との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号１２との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号１１、１２、５１、２４、２５、５２、５３および５４の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１２６】
他の１つの例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１３由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号１４由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号１３由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号５５のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体１２７〜１３３）。配列番号１４由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号５６のＨ１、配列番号５７のＨ２、配列番号５８のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体１３４〜１４０）。配列番号１４由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号１３由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号５５のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体１４１〜１８９）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号１３との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号１４との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号１３、１４、５５、２４、２５、５６、５７および５８の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１２７】
他の１つの例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１５由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号１６由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号１５由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号５９のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体１９０〜１９６）。配列番号１６由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号６０のＨ１、配列番号６１のＨ２、配列番号６２のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体１９７〜２０３）。配列番号１６由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号１５由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号５９のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体２０４〜２５２）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号１５との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号１６との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号１５、１６、５９、２４、２５、６０、６１および６２の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１２８】
他の１つの例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１９由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号２０由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号１９由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号６８のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体２５３〜２５９）。配列番号２０由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号６９のＨ１、配列番号７０のＨ２、配列番号７１のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体２０６〜２６６）。配列番号２０由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号１９由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号６８のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号２５のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｄの抗体２６７〜３１５）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号１９との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号２０との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号１９、２０、６８、２４、２５、６９、７０および７１の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１２９】
いくつかの態様において、上記例示抗体はそれぞれ、ミクログリアＦｃＲとの天然の相互作用を変化するよう改変されたバリアントＦｃ領域を包含するがそれに限定されない、バリアントＦｃ領域をも有しうる。
【０１３０】
他のいくつかの態様において、グループＩＩの単離された抗体は、例えば、例示抗体ＨＪ１５５、ＨＪ１５６、ＨＪ１５９、ＨＪ１５１３またはＨＪ１５１８について説明するように、表４〜７に挙げるエピトープを認識する。
【０１３１】
2020506162.tif 000017
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【０１３２】
（ｃ）グループＩＩＩ：ＡｐｏＥ４、ＡｐｏＥ３またはＡｐｏＥ２に優先的に結合しない抗ＡｐｏＥ抗体
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１１３を含む重鎖可変領域を有する。いくつかの態様において、重鎖可変領域は、配列番号１０９および／または配列番号１１１をさらに含む。他のいくつかの態様において、重鎖可変領域は、配列番号１１０および／または配列番号１１２をさらに含む。上記態様のいくつかにおいて、抗体は、配列番号１０７を含む軽鎖可変領域を有する。軽鎖可変領域は、（ａ）配列番号１０５、および／または（ｂ）配列番号１０６をさらに含みうる。
【０１３３】
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１１４を含む重鎖可変領域を有する。いくつかの態様において、重鎖可変領域は、配列番号１０９および／または配列番号１１１をさらに含む。他のいくつかの態様において、重鎖可変領域は、配列番号１１０および／または配列番号１１２をさらに含む。上記態様のいくつかにおいて、抗体は、配列番号１０８を含む軽鎖可変領域を有する。軽鎖可変領域は、（ａ）配列番号１０５、および／または（ｂ）配列番号１０６をさらに含みうる。
【０１３４】
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、表Ｅから選択される。
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【０１３５】
他の１つの例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１１５由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号１１６由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号１１５由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、配列番号１１７のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｆの抗体１〜７）。配列番号１１６由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号１１８のＨ１、配列番号１１９のＨ２、配列番号１２０のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｆの抗体８〜１４）。配列番号１１６由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号１１５由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、配列番号１１７のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｆの抗体１５〜６３）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号１１５との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号１１６との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号１１５、１１６、１０５、１０６、１１７、１１８、１１９および１２０の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１３６】
他の１つの例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１２１由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号１２２由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号１２１由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、配列番号１２３のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｆの抗体６４〜７０）。配列番号１２２由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号１２４のＨ１、配列番号１２５のＨ２、配列番号１２６のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｆの抗体７１〜７７）。配列番号１２２由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号１２１由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号１０５のＬ１、配列番号１０６のＬ２、配列番号１２３のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｆの抗体７８〜１２６）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号１２１との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号１２２との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号１２１、１２２、１０５、１０６、１２３、１２４、１２５および１２６の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１３７】
いくつかの態様において、上記例示抗体はそれぞれ、ミクログリアＦｃＲとの天然の相互作用を変化するよう改変されたバリアントＦｃ領域を包含するがそれに限定されない、バリアントＦｃ領域をも有しうる。
【０１３８】
他のいくつかの態様において、グループＩＩＩの単離された抗体は、表４〜７に挙げるエピトープを認識する。
【０１３９】
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【０１４０】
（ｄ）ＡｐｏＥ３またはＡｐｏＥ２よりもＡｐｏＥ４に優先的に結合する抗ＡｐｏＥ抗体
例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号１由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号２由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号１由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号２３のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号９６のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｇの抗体１〜７）。配列番号２由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いく態様において、ＶＨは、配列番号２６のＨ１、配列番号２７のＨ２、配列番号２８のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｇの抗体８〜１４）。配列番号２由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号１由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号２３のＬ１、配列番号２４のＬ２、配列番号９６のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｇの抗体１５〜６３）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号１との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号２との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号１、２、２３、２４、９６、２６、２７および２８の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１４１】
いくつかの態様において、上記例示抗体はそれぞれ、ミクログリアＦｃＲとの天然の相互作用を変化するよう改変されたバリアントＦｃ領域を包含するがそれに限定されない、バリアントＦｃ領域をも有しうる。
【０１４２】
他のいくつかの態様において、グループＩＶの単離された抗体は、例えば、例示抗体ＨＪ１５１について説明するように、表４〜７に挙げるエピトープを認識する。
【０１４３】
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【０１４４】
（ｅ）ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３またはＡｐｏＥ４に優先的に結合しない、さらなる抗ＡｐｏＥ抗体
例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号２１由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号２２由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号２１由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号７２のＬ１、配列番号７３のＬ２、配列番号７４のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｈの抗体１〜７）。配列番号２２由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号７５のＨ１、配列番号７６のＨ２、配列番号７７のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｈの抗体８〜１４）。配列番号２２由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号２１由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号７２のＬ１、配列番号７３のＬ２、配列番号７４のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｈの抗体１５〜６３）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号２１との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号２２との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号２１、２２、７２、７３、７４、７５、７６および７７の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１４５】
例示態様において、このグループの抗ＡｐｏＥ抗体は、配列番号９７由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＬ、または配列番号９８由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを有するＶＨを含む。配列番号９７由来のＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＬは、配列番号９９のＬ１、配列番号１００のＬ２、配列番号１０１のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｈの抗体６４〜７０）。配列番号９８由来のＨＶＲは、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。いくつかの態様において、ＶＨは、配列番号１０２のＨ１、配列番号１０３のＨ２、配列番号１０４のＨ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｈの抗体７１〜７７）。配列番号９８由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む抗体は、配列番号９７由来の１つまたはそれ以上のＨＶＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）をさらに含みうる。このＨＶＲは、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３またはそれらの任意の組み合わせでありうる。ある好ましい態様において、このＶＬは、配列番号９９のＬ１、配列番号１００のＬ２、配列番号１０１のＬ３、またはそれらの任意の組み合わせを含みうる（例えば、表Ｈの抗体７８〜１２６）。さまざまな上記態様において、抗体はヒト化抗体でありうるか、または抗体は、配列番号９７との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＬ、および／または配列番号９８との同一性が９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％であるＶＨを有しうる。上記態様のそれぞれにおいて、抗ＡｐｏＥ抗体は任意に、実質的にヒトである（すなわち、既知のヒトフレームワーク配列との配列同一性が少なくとも９０％、９５％または９９％である）、１つまたはそれ以上の定常領域、または定常領域の一部を含みうる。本開示は、配列番号９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３および１０４の対応する核酸配列をも含み、これは、当業者が容易に決定しうるものであり、また、本開示の抗体の発現のためにベクターまたは他の大きなＤＮＡ分子、例えば染色体に組み込まれうるものである。
【０１４６】
いくつかの態様において、上記例示抗体はそれぞれ、ミクログリアＦｃＲとの天然の相互作用を変化するよう改変されたバリアントＦｃ領域を包含するがそれに限定されない、バリアントＦｃ領域をも有しうる。
【０１４７】
他のいくつかの態様において、グループＶの単離された抗体は、例えば、例示抗体ＨＪ１５２６について説明するように、表４〜７に挙げるエピトープを認識する。
【０１４８】
2020506162.tif 000037
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2020506162.tif 000039
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【０１４９】
（ｆ）グループＶ
他の１つの側面において、抗ＡｐｏＥ抗体は、参照抗体がそのエピトープに結合するのを競合的に阻害する。抗体は、ある特定のエピトープに、該エピトープへの参照抗体の結合を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％阻害するように優先的に結合するならば、該エピトープへの参照抗体の結合を競合的に阻害するという。競合的阻害は、当分野で知られた任意の方法、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイによって決定することができる。いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、ヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５２および／またはＨＪ１５１４の結合を競合的に阻害する。他のいくつかの態様においては、抗ＡｐｏＥ抗体は、ヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５５、ＨＪ１５６、ＨＪ１５９、ＨＪ１５１３および／またはＨＪ１５１８の結合を競合的に阻害する。さらに別のいくつかの態様においては、抗ＡｐｏＥ抗体は、ヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５１の結合を競合的に阻害する。さらに別のいくつかの態様においては、抗ＡｐｏＥ抗体は、ヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５２６の結合を競合的に阻害する。他の一態様においては、抗ＡｐｏＥ抗体は、ヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５８の結合を競合的に阻害する。他の一態様においては、抗ＡｐｏＥ抗体は、ヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５３１および／またはＨＪ１５３６の結合を競合的に阻害する。
【０１５０】
ＩＩＩ．処置方法
本開示は、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を必要とする対象に投与することを含む、Ａβアミロイドーシスを処置する方法を提供する。本開示はまた、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を必要とする対象に投与することを含む、脳内のＡβ斑によって特徴付けられる疾患を有すると診断された対象を処置する方法を提供する。本開示はまた、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を必要とする対象に投与することを含む、脳における血管Ａβ斑によって特徴付けられる疾患を有すると診断された対象を処置する方法を提供する。本開示はまた、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を必要とする対象に投与することを含む、脳内Ａβ斑によって特徴付けられる疾患の進行を阻止する方法を提供する。本開示はまた、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を必要とする対象に投与することを含む、アルツハイマー病と診断された対象を処置する方法を提供する。本開示はまた、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を必要とする対象に投与することを含む、ＣＡＡと診断された対象を処置する方法を提供する。適当な抗ＡｐｏＥ抗体はセクションＩＩに記載されている。対象がヒトである態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は生体ヒト対象への投与に適合する（例えば、ヒト化されている）。
【０１５１】
一態様において、本開示は、脳内Ａβ斑によって特徴付けられる疾患の進行を阻止するか、または進行速度を低下する方法を提供する。該方法は、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を、必要とする対象に投与することを含む。適当な抗ＡｐｏＥ抗体は、本書に開示されるものを包含する。脳内Ａβ斑によって特徴付けられる疾患の進行は、Ａβアミロイドーシスの臨床徴候、Ａβ斑に関連する症状、またはＣＡＡに関連する症状の悪化を包含するものであり、当分野で知られた方法によって評価することができ、本書においても説明する。例示態様において、前記臨床徴候はアミロイド斑の沈着である。
【０１５２】
他の一態様においては、本開示は、Ａβアミロイドーシスの臨床徴候を改善するための方法を提供する。該方法は、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を、必要とする対象に投与することを含む。適当な抗ＡｐｏＥ抗体は、本書に開示されるものを包含する。Ａβアミロイドーシス臨床徴候の改善の非限定的な例は、アミロイド斑沈着量の減少、アミロイド斑沈着の安定化（すなわち、さらなる増加が無いこと）、ＣＳＦ  Ａβ４２濃度の増加、ＣＳＦ  Ａβ４２／Ａβ４０比の増加、安定同位体標識カイネティクスにより測定されるＡβ４２／Ａβ４０ピークタイム比の低下（例えば、１に近づく）、安定同位体標識カイネティクスにより測定されるＡβ４２／Ａβ４０ＦＴＲ比の低下（例えば、１に近づく）、および安定同位体標識後の相対的なＡβ４０標識に対する相対的なＡβ４２標識の比の変化（例えば、１に近づく）を包含しうる。上記態様のそれぞれにおいて、臨床徴候の改善（すなわち、変化）は、少なくとも統計学的に有意である。いくつかの態様において、該変化は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０％でありうる。いくつかの態様において、該変化は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％でありうる。他のいくつかの態様において、該変化は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも１００、１２５、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００または４５０％でありうる。
【０１５３】
他の一態様においては、本開示は、対象の脳内アミロイド斑沈着量を減少させるための方法を提供する。該方法は、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を、必要とする対象に投与することを含む。適当な抗ＡｐｏＥ抗体は、本書に開示されるものを包含する。本発明の方法は、対象の海馬におけるアミロイド斑沈着量を減少させ、および／または対象の大脳皮質におけるアミロイド斑沈着量を減少させうる。上記態様のそれぞれにおいて、アミロイド斑沈着量は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０％減少しうる。いくつかの態様においては、アミロイド斑沈着量は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％減少しうる。他のいくつかの態様において、アミロイド斑沈着量は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも１００、１２５、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００または４５０％減少しうる。
【０１５４】
他の一態様においては、本開示は、対象の脳においてＣＡＡの沈着量を減少させるための方法を提供する。該方法は、大脳皮質表面上の穿通および／または軟髄膜細動脈内に線維状形態のＡβを有する対象に、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を投与することを含む。適当な抗ＡｐｏＥ抗体は、本書に開示されるものを包含する。本発明の方法は、対象の大脳皮質表面上の穿通および／または軟髄膜細動脈内のＣＡＡの沈着量を減少させうる。上記態様のそれぞれにおいて、ＣＡＡの沈着量は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０％減少しうる。いくつかの態様において、アミロイド斑沈着量は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％減少しうる。他のいくつかの態様において、アミロイド斑沈着量は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも１００、１２５、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００または４５０％減少しうる。
【０１５５】
他の一態様は、必要とする対象において脳内の不溶性Ａβ４２レベルを低下する方法を含む。該方法は、処置有効量の抗ＡｐｏＥ抗体を対象に投与することを含む。一態様において、該方法は、対象の脳内の不溶性Ａβ４０レベルを低下することをさらに含む。他の一態様において、該方法は、対象の脳内において、可溶性のＡβ４０、Ａβ４２のレベル、またはそれらの組み合わせと比較して、選択的に不溶性Ａβ４０レベルを低下すること、不溶性Ａβ４２レベルを低下すること、またはそれらの組み合わせを含む。
【０１５６】
Ａβレベルは、当分野で知られた任意の適当な方法で評価することができ、例えば、以下から選択される１つまたはそれ以上の方法でＡβを解析することによって評価することができる：ウエスタンブロット、免疫沈降、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、二次元ゲル電気泳動、質量分析（ＭＳ）、マトリックス支援レーザー脱離イオン化 飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）、表面エンハンス型レーザー脱離イオン化 飛行時間型質量分析（surface-enhanced laser desorption ionization-time of flight（ＳＥＭＩ−ＴＯＥ））、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）、多次元液体クロマトグラフィ（ＬＣ）とそれに続くタンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳ）、ならびにレーザーデンシトメトリー。アミロイド斑沈着の評価には、Ａβのインビボ画像化が特に適当である。インビボ画像化方法の非限定的な例は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、近赤外（ＮＩＲ）光学イメージング、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を包含する。適当な造影剤も当分野で知られている（例えばＰＩＢ）。
【０１５７】
他の一態様においては、本開示は、対象におけるＡβ斑に関連する症状および／またはＣＡＡに関連する症状を改善するための方法を提供する。該方法は、少なくとも１つのＡβ斑関連症状および／または少なくとも１つのＣＡＡ関連症状を有する対象に、ＡｐｏＥに特異的に結合する抗ＡｐｏＥ抗体を処置有効量で投与することを含む。適当な抗ＡｐｏＥ抗体は、本書に開示されるものを包含する。Ａβ斑関連症状の改善の非限定的な例は、前記した。いくつかの態様において、Ａβ斑関連症状の改善は、神経変性、認知機能障害、行動の変化、感情制御の障害および／または発作の減少を包含しうる。上記態様のそれぞれにおいて、症状の改善（すなわち、変化）は、少なくとも統計学的に有意である。いくつかの態様において、変化は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０％でありうる。いくつかの態様において、変化は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％でありうる。他のいくつかの態様において、変化は、未処置対象またはネガティブコントロール処置対象との比較で少なくとも１００、１２５、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００または４５０％でありうる。
【０１５８】
前記態様のそれぞれにおいて、適当な抗ＡｐｏＥ抗体は、セクションＩＩに記載される。いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、（ａ）表Ａ〜Ｈに挙げられる抗体から選択されるか、（ｂ）ヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５２および／またはＨＪ１５１４の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体であるか、または（ｃ）ヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５５、ＨＪ１５６、ＨＪ１５９、ＨＪ１５１３および／またはＨＪ１５１８の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体である。いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、表Ａ〜Ｂに挙げられる抗体から選択されるか、またはヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５２および／またはＨＪ１５１４の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体である。いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、表Ｃ〜Ｄに挙げられる抗体から選択されるか、またはヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５５、ＨＪ１５６、ＨＪ１５９、ＨＪ１５１３および／またはＨＪ１５１８の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体である。いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、表Ｅ〜Ｆに挙げられる抗体から選択されるか、またはヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５３１および／またはＨＪ１５３６の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体である。いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、表Ｇに挙げられる抗体から選択されるか、またはヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５１の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体である。いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体は、表Ｈに挙げられる抗体から選択されるか、またはヒトＡｐｏＥへのＨＪ１５８またはＨＪ１５２６の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体である。
【０１５９】
本書に開示される抗ＡｐｏＥ抗体はまた、処置剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、生体応答調節物質、医薬またはＰＥＧにコンジュゲート化しうる。いくつかの態様において、処置剤は、薬物、放射性同位体、レクチンまたは毒素でありうる。免疫毒素であるコンジュゲートは、当分野で広く論じられている。従来のカップリング技術によって毒素を抗体にカップリングするか、またはタンパク質毒素部分を有する免疫毒素を融合タンパク質として製造することができる。放射性同位体でコンジュゲート化した抗ＡｐｏＥ抗体を免疫療法に用いる場合、白血球分布ならびに安定性および放出性のようなファクターに応じて、ある同位体を選択することができる。自己免疫応答に応じて、いくつかの放射体を使用することができる。免疫療法において一般に、αおよびβ粒子を放出する放射性同位体が用いられる。いくつかの態様において、短距離の高エネルギーα放射体、例えば２１２Ｂｉを使用することができる。処置の目的で本書に開示される抗ＡｐｏＥ抗体に結合しうる放射性同位体の例は、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、１１１Ｉｎ、２１２Ｂｉ、２１２Ａｔ、２１１Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄおよび１８８Ｒｅを包含するが、それに限定されない。抗ＡｐｏＥ抗体にカップリングしうる他の処置剤、ならびにエクスビボおよびインビボ処置プロトコルは、当業者に知られているか、または当業者が容易に確認することができる。
【０１６０】
抗ＡｐｏＥ抗体、または抗ＡｐｏＥ抗体を含む組成物の投与は、末梢的なもの（すなわち、中枢神経系への投与によらないもの）、または中枢神経系への局所的なものを含む、標準的な有効な方法を用いて行う。末梢投与は、静脈内、腹腔内、皮下、肺、経皮、筋肉内、鼻内、口腔内、舌下または坐剤投与を包含するが、それに限定されない。中枢神経系（ＣＮＳ）への直接的なものを包含する局所投与は、腰部、脳室内または実質内カテーテルを通しての投与、または外科的に埋め込まれる制御放出製剤を用いる投与を包含するが、それに限定されない。
【０１６１】
有効な投与のための医薬組成物は、選択した投与法に適合するように注意深く設計され、薬学的に許容しうる賦形剤、例えば適合する分散剤、緩衝剤、界面活性剤、保存剤、可溶化剤、浸透圧調節剤、安定剤等が必要に応じて使用される。Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton Pa., 16Ed ISBN: 0-912734-04-3の最新版（引用により全体を本書の一部とする）に、実務者に一般に知られるような製剤化方法の概要が記載されている。本発明に有用な抗体を、例えばリポソームへの封入または極性基のブロッキングによって、より親油性とすることで、溶解性を変化させることが特に有効でありうる。
【０１６２】
投与する製剤中の抗体の濃度は、有効量であって、約０．１重量％の低濃度ないし約１５または約２０重量％の高濃度の範囲であり、必要に応じて選択された特定の投与方法にしたがって、主に流体の体積、粘度等に基づいて選択されうる。生体対象への典型的注射用組成物は、１ｍｌの滅菌緩衝水またはリン酸緩衝食塩液と、約１〜１０００ｍｇの本開示の任意の抗体またはその組み合わせを含むように調製しうる。製剤は、調製後に滅菌濾過するか、または他の方法で微生物学的に許容しうるものとすることができる。典型的な静脈内注入用の組成物は、１〜２５０ｍｌの体積の液体、例えば滅菌リンゲル液と、１〜１００ｍｇ／ｍｌまたはそれ以上の濃度の抗ＡｐｏＥ抗体を含みうる。本開示の抗ＡｐｏＥ抗体は、貯蔵のために凍結または凍結乾燥し、使用前に適当な滅菌担体中に再構成することができる。凍結乾燥および再構成によって、さまざまな程度の抗体活性低下が生じうる（例えば、従来の免疫グロブリンでは、ＩｇＧ抗体よりもＩｇＭ抗体において活性低下が大きい傾向がある）。投与される量は、有効な用量であり、補うよう調節する必要がありうる。製剤のｐＨは一般に医薬等級であり、抗体の安定性（化学的および物理的）および投与時の対象の快適性との兼ね合いで選択しうる。一般に、４〜８のｐＨが許容される。用量は、有効な投与を受ける個体の体格、体重および他の生理生物学的特徴に基づいて、個体毎に変えうる。
【０１６３】
本書において、用語「処置有効量」とは、物質（例えば抗ＡｐｏＥ抗体）の、測定可能な有益な効果（すなわち、有意な効果）を投与対象にもたらす量を意味する。本発明に従って投与される化合物の処置有効量または用量は、標準的な臨床的手法を用いて決定され得、投与する抗体、投与経路、処置する症状の状態および他の考慮すべき条件を包含する、症例を取り巻く状況によって、変えられうる。典型的な用量は、本書に記載する抗ＡｐｏＥ抗体を約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ含みうる。用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの範囲でありうる。投与頻度は、症状の有効な処置のために必要に応じて、毎日、または週もしくは月に１回、２回、３回もしくはそれ以上でありうる。
【０１６４】
疾患に関する処置の投与のタイミング、および処置期間は、症例を取り巻く状況に応じて決定されうる。処置期間は、単回ベースでの単回投与から生涯にわたる処置までの範囲でありうる。
【０１６５】
前述の方法は、ヒト化抗体のようなタンパク質の投与のために、適当に調整されて、最も簡便かつ最も好適で効果的であると考えられるが、本発明において、他の有効な投与方法、例えば脳室内投与、経皮投与および経口投与を、それに適当な剤形を用いて行ってもよい。さらに、当業者は、任意の前記抗体をコードする本発明のポリヌクレオチドを、該タンパク質材料自体を使用する代わりに、使用することができる。例えば、
【０１６６】
さらに、生分解性フィルムおよびマトリックスを使用した制御放出製剤、または浸透圧ミニポンプ、またはデキストランビーズ、アルギネートもしくはコラーゲンをベースとする送達システムを使用することが有利でありうる。
【０１６７】
ＩＶ．診断または追跡方法
本開示は、検出可能なシグナル（すなわち、測定可能な物質、または測定可能シグナルを発する物質）にコンジュゲート化された抗ＡｐｏＥ抗体をも提供する。非限定的な例としては、さまざまな酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、陽電子放出断層撮影を用いる場合に陽電子放出金属、および非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。例えば、本開示に従う診断に使用するために抗体にコンジュゲートすることのできる金属イオンについて、米国特許第４７４１９００号を参照されたい。適当な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。適当な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチン、およびアビジン／ビオチンが挙げられる。適当な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン・フルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリスリンが挙げられる。発光物質の例としては、ルミノールが挙げられる。生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびイクオリンが挙げられる。適当な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎまたは９９Ｔｃが挙げられる。そのような物質の発するシグナルは、例えば単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）または陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）によって測定することができる。
【０１６８】
検出可能シグナルにコンジュゲート化された抗ＡｐｏＥ抗体は、診断的に、例えば、神経変性疾患の発症または進行をモニターするために、例えばある治療および／または予防処置法の効果を決定するための、臨床的検査手順の一部として使用しうる。神経変性疾患の進行のレベルに基づいて、患者の処置を調節することができる。
【０１６９】
いくつかの態様において、脳アミロイド斑により特徴付けられる神経変性疾患または脳における血管アミロイド斑により特徴付けられる神経変性疾患が処置される対象において疾患進行を評価する、以下を含む方法が提供される：（ａ）本書に記載されるような測定可能シグナルを発する物質で標識された本書に開示される抗ＡｐｏＥ抗体（すなわち、「標識抗ＡｐｏＥ抗体」）を投与すること、ここで、該投与後に患者においてシグナルを測定する；（ｂ）（ａ）の投与の後、１つまたはそれ以上の時間間隔で、標識抗ＡｐｏＥまたはその抗原結合フラグメントを投与すること、ここで、該投与後に患者においてシグナルを測定する；（ｃ）（ａ）の投与の後、前記１つまたはそれ以上の時間間隔で患者において測定されたシグナルの変化に基づき、患者における疾患の進行を評価すること、ここで、シグナルの増加は患者における神経変性疾患の進行を示す。いくつかの態様において、対象は、同じ抗ＡｐｏＥ抗体の、標識されていない形態のものによって処置される。いくつかの態様において、対象は、ヒトＡｐｏＥへの該標識抗ＡｐｏＥ抗体の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体で処置される。いくつかの態様において、対象は、ヒトＡｐｏＥへの該標識抗ＡｐｏＥ抗体の結合を競合的に阻害しない抗ＡｐｏＥ抗体で処置される。いくつかの態様において、対象は、当分野で知られる他の薬剤で処置される。
【０１７０】
他のいくつかの態様において、脳アミロイド斑により特徴付けられる神経変性疾患または脳における血管アミロイド斑により特徴付けられる神経変性疾患が処置される対象において疾患進行を評価する、以下を含む方法が提供される：（ａ）本書に記載されるような測定可能シグナルを発する物質で標識された本書に開示される抗ＡｐｏＥ抗体（すなわち、「標識抗ＡｐｏＥ抗体」）を投与すること、ここで、該投与後に患者においてシグナルを測定する；（ｂ）対象において測定されたシグナルと、１体またはそれ以上のコントロール対象への該標識抗体またはその抗原結合フラグメントの投与後に測定されたシグナルとの比較の検討に基づき、対象の疾患状態を評価すること、ここで、コントロール対象と比較して患者において発生したシグナルが大きいことは、脳アミロイド斑の増加と関連し；（ｃ）患者を、患者の疾患状態に適する処置方法で処置すること。「コントロール対象」とは、任意の健常な対象（もしくは複数の対象）、疾患の程度が異なる対象もしくは複数の対象、または疾患状態がより初期であった時点の被験対象自身を指す。いくつかの態様において、処置法は、同じ抗ＡｐｏＥ抗体の、標識されていない形態のものである。いくつかの態様において、処置法は、ヒトＡｐｏＥに対する該標識抗ＡｐｏＥ抗体の結合を競合的に阻害する抗ＡｐｏＥ抗体である。いくつかの態様において、治療法は、ヒトＡｐｏＥに対する該標識抗ＡｐｏＥ抗体の結合を競合的に阻害しない抗ＡｐｏＥ抗体である。いくつかの態様において、処置は、抗Ａβ抗体、抗ｔａｕ抗体、γ−セクレターゼ阻害剤、β−セクレターゼ阻害剤、コリンエステラーゼ阻害剤、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、または当分野で知られる他の薬剤による。
【０１７１】
本開示は、被験対象において脳アミロイド斑の量を測定するため、神経変性疾患が処置される患者において疾患進行を評価するため、または処置を必要とする患者において脳アミロイド斑により特徴付けられる神経変性疾患を処置するための、本書に開示される抗ＡｐｏＥ抗体の使用をも提供する。
【０１７２】
Ｖ．医薬組成物
本開示は、セクションＩＩに開示した抗ＡｐｏＥ抗体を、その投与を促進し、安定性を高めるように含む、医薬組成物を包含する。例えば、本開示の抗ＡｐｏＥ抗体を、少なくとも１つの薬学的に許容しうる担体または賦形剤と組み合わせて、生体対象、例えば適当な対象（すなわち、「処置を必要とする対象」または「それを必要とする対象」）に好適かつ有効に投与される医薬組成物としうる。本開示の抗ＡｐｏＥ抗体を調製し、必要とする対象に投与する方法は、当業者によく知られているか、または容易に決定される。抗ＡｐｏＥ抗体の投与経路は、例えば末梢、経口、非経口、吸入または局所でありうる。
【０１７３】
有効な投与のための医薬組成物は、選択された投与方法に適するように注意深く設計され、薬学的に許容しうる賦形剤、例えば適合性の担体、分散剤、緩衝剤、界面活性剤、保存剤、可溶化剤、浸透圧調節剤、安定剤等を適当に使用する。
【０１７４】
薬学的に許容しうる担体の非限定的な例としては、生理食塩液、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばホスフェート、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三珪酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースをベースとする物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、羊毛脂、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１７５】
微生物活動の阻止を、さまざまな抗細菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等によって達成することができる。多くの場合、組成物に等張化剤を含めることができ、その例は、糖、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムである。
【０１７６】
吸収を遅延させる物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物に含めることにより、注射用組成物の持続的な吸収をもたらすことができる。
【０１７７】
本開示の組成物は、貯蔵のために凍結または凍結乾燥し、使用時に適当な滅菌担体中に再構成することができる。
【０１７８】
いくつかの態様において、抗ＡｐｏＥ抗体を、非経口投与用に製剤化しうる。非経口投与用製剤は、無菌の水性または非水性の溶液、懸濁液およびエマルジョンを包含する。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体は、水、アルコール性／水性の溶液、エマルジョンまたは懸濁液、例えば食塩液および緩衝された媒体を包含する。非経口投与用の賦形剤は、塩化ナトリウム溶液、ブドウ糖加リンゲル液、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液、または不揮発油を包含する。静脈内投与用の賦形剤は、体液栄養補充剤、電解質補充剤（例えば、ブドウ糖加リンゲル液をベースとするもの）等を包含する。保存剤および他の添加剤、例えば抗微生物剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガス等も含めることができる。非経口投与用製剤は、単回ボーラス用量、点滴剤、または負荷ボーラス用量とその後の維持用量でありうる。このような組成物を、特定の一定の間隔もしくは可変の間隔で、例えば１日１回、または「必要時」に、投与しうる。
【０１７９】
本書に開示する医薬組成物のいくつかは、許容される用量形態で、例えばカプセル剤、錠剤、水性懸濁液または溶液として、経口投与することができる。いくつかの医薬組成物は、鼻内エーロゾルまたは吸入によって投与することができる。そのような組成物は、ベンジルアルコールまたは他の適当な保存剤、バイオアベイラビリティを高める吸収促進剤、および／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、食塩液中の溶液として調製することができる。
【０１８０】
単一用量形態を製造するために担体材料と組み合わせる抗ＡｐｏＥ抗体の量は、処置の対象者および特定の投与方法に基づいて変更されうる。組成物は、単回用量もしくは多回用量として、または設定された期間にわたる注入として投与することができる。投与計画はまた、最適な所望の応答（例えば、治療または予防の応答）を提供するように調節することができる。
【０１８１】
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を示すために記載するものである。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能することが本発明者に見出された技術を表すことを、当業者は認識すべきである。しかしながら、当業者は本開示に照らして、開示される特定の態様において、本発明の精神および範囲を逸脱することなく多くの変更を加えることができ、それでも同様の結果をもたらすことができること、したがって、実施例および図面に記載され、または示される事項はいずれも説明のためのものと解釈すべきであり、限定的な意味で解釈すべきではないことを認識すべきである。
【０１８２】
実施例
以下の実施例は、本発明のさまざまな態様を説明するものである。
【実施例１】
【０１８３】
ＡｐｏＥに対するマウスモノクローナル抗体を製造し、配列決定した。すなわち、該抗体を製造するために、ヒト組換えＡｐｏＥタンパク質（２９９アミノ酸）を、Ｂ６Ｃ３バックグラウンドの野生型マウスに腹腔内（ＩＰ）注射した。１００μｇの抗原（２００μｌ  ＰＢＳ＋２００μｌ完全フロイントアジュバント中）を、０日目、１４日目および２８日目に注射した。マウスの脾細胞を骨髄腫細胞と融合させる３日前に、ＰＢＳ中５０μｇの抗原の最後のＩＰ注射を行った。２１日目および３５日目に、ＡｐｏＥ４に対する直接ＥＬＩＳＡにより血清を試験した。力価が１：１００００を超えた場合、標準的プロトコルに従いマウス脾細胞を骨髄腫細胞と融合させ、次いでハイブリドーマクローンを単離した。
【０１８４】
【表１】
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【実施例２】
【０１８５】
ａｐｏＥ  ＫＯマウス、またはヒトａｐｏＥ３、ヒトａｐｏＥ４またはマウスａｐｏＥを発現するマウスに由来する脳溶解物を、ＨＪ１５１、ＨＪ１５２、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４で免疫ブロットした。ポジティブコントロールとして、市販のａｐｏＥ抗体であるＧＡ−５０を使用した。図１および図２は、ウエスタンブロットにおいて、ＨＪ１５２、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４はＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４の両方を認識し、ＨＪ１５１はＡｐｏＥ４に特異的であることを示している。
【実施例３】
【０１８６】
種々のヒトＡｐｏＥアイソフォームを発現する５ＸＦＡＤ  ＡＰＰトランスジェニックマウス由来の脳組織を、ビオチン化ＨＪ１５３およびＨＪ１５４を用いて染色した。ＡｐｏＥ  ＫＯマウス由来の脳組織をネガティブコントロールとして使用した。図３に示すように、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４は、ニューロピル、星状膠細胞、およびアミロイド斑（アミロイド斑が存在する場合）において、ＡｐｏＥを染色する。
【実施例４】
【０１８７】
ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３またはＡｐｏＥ４を含む大脳皮質組織のリン酸緩衝食塩液溶解物を、ＨＪ１５２、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４を用いる免疫沈降に付した。抗体で免疫沈降された物質（ＩＰと表示）、および免疫沈降後の溶液を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに掛け、ニトロセルロース膜に転写した後に、市販ａｐｏＥ抗体ＧＡ−５０を用いて免疫ブロットした。ヒトａｐｏＥに対するモノクローナル抗体であるＷＵＥ４をポジティブコントロールとして使用した。図４に示すように、ＨＪ１５２は、サンプル由来のａｐｏＥのいくつかを免疫沈降することができるが、いくつかのａｐｏＥは免疫沈降後のサンプル中に留まる（ＩＰとＩＰ後の比較）。図４はまた、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４はサンプル由来のすべてのＡｐｏＥを免疫沈降できることを示している。
【実施例５】
【０１８８】
ＥＬＩＳＡプレートを、０．５μｇ／ｍｌの組換えａｐｏＥ２、ａｐｏＥ３またはａｐｏＥ４でコーティングした。次いで、さまざまな濃度のＨＪ１５１（図５Ａ）、ＨＪ１５３（図５Ｂ）、ＨＪ１５４（図５Ｃ）またはＨＪ１５６（図５Ｄ）をプレートに導入した。結合を検出するために、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したヤギ抗マウス二次抗体を使用した。図５Ａ〜Ｄは、ＥＬＩＳＡでの検出として、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４がＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４に結合することを示している。ＨＪ１５１はＡｐｏＥ４に特異的であり、ＨＪ１５６はＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４のみに結合する。さまざまな抗体について表面プラズモン共鳴プロファイルをも得た。ストレプトアビジンチップ上に捕捉されたビオチン化組換えａｐｏＥ４との結合の検出のために、抗ＡｐｏＥ抗体を３倍連続希釈した（ＨＪ１５３（図５Ｆ）については１００ｎＭ、ＨＪ１５１（図５Ｅ）およびＨＪ１５６（図５Ｇ）については１０００ｎＭで開始）。サンプルを３０μｌ／分の流速で注入した。図５Ｈに、ＳＰＲ試験に基づいて計算したＨＪ１５１、ＨＪ１５３およびＨＪ１５６の見掛けのＫＤ値を示す。
【実施例６】
【０１８９】
ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４マウスに、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、マウスＩｇＧ２（ネガティブコントロール）、ＨＪ５．１（抗Ａβ抗体、ポジティブコントロール）、または抗ａｐｏＥ抗体（ＨＪ１５１、ＨＪ１５４またはＨＪ１５６）の連続的な脳室内（ＩＣＶ）注入を、２箇月齢で開始して行った（ｎ＝１０〜１２／群）。抗ＡｐｏＥ抗体またはコントロール抗体（２ｍｇ／ｍｌ）を皮下浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ、モデル２００６）に入れ、外科的に埋め込んだカテーテルを通して左側脳室内に（ブレグマ−０．４ｍｍ、正中線に対し１．０ｍｍ側方、頭蓋の２．５ｍｍ下）、１．２μｌ／分の速度で６週間にわたり注入した。
【０１９０】
マウスを３．５箇月齢で灌流し、脳切片を、Ａβ斑については抗Ａβ抗体ＨＪ３．４Ｂを用いて、線維斑についてはチオフラビンＳを用いて、染色した。海馬に対して背側の大脳皮質における、斑で覆われた面積のパーセントを定量した。データの解析には、一元ＡＮＯＶＡとその後のTurkeyの事後検定を用いた。図６および図７に示すように、いくつかの抗ＡｐｏＥ抗体のＩＣＶ注入により、Ａβ斑および線維斑で覆われた面積パーセントにおける統計学的に有意な低下が見られた。海馬背側の大脳皮質における可溶性および不溶性Ａβ量のＥＬＩＳＡによる定量も行った。すなわち、大脳皮質組織を逐次ＰＢＳ、Ｔｒｉｔｏｎおよび５Ｍグアニジン中でホモジナイズし、各フラクション中のＡβレベルを測定した。ＨＪ１５１およびＨＪ１５６による不溶性Ａβ４２の統計学的に有意な減少（Ｔｒｉｔｏｎおよびグアニジンのフラクション）が観察された（図８）。
【実施例７】
【０１９１】
ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４マウスに、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、マウスＩｇＧ（ネガティブコントロール）、または抗ａｐｏＥ抗体（ＨＪ１５１、ＨＪ１５４またはＨＪ１５６）の腹腔内注射を、２箇月で開始して行った（ｎ＝１０／群）。抗体は、５０ｍｇ／ｋｇで週１回注射した。注射時に各マウスの体重を測定した。図９に示すように、処置群間に体重の差は無かった。７回目の注射の３日後にマウスを灌流した。脳の左半球を４℃の４％ＰＦＡ中で４８時間固定化し、次いでＰＢＳに移して４℃で保存した。脳右半球は、生化学的解析用に切開し凍結した。
【０１９２】
海馬背側の大脳皮質における可溶性および不溶性Ａβの量をＥＬＩＳＡにより測定した。すなわち、大脳皮質組織を逐次ＰＢＳおよび５Ｍグアニジン中でホモジナイズし、可溶性（ＰＢＳ）および不溶性（グアニジン）フラクション中のＡβレベルを測定した。図１０〜１３に示すように、ＨＪ１５６は不溶性Ａβ４０およびＡβ４２を有意に減少したが（ｐ＜０．０００１）、可溶性Ａβに対しては統計学的に有意な効果を示さなかった。不溶性Ａβ４０および４２のレベルは、ＨＪ１５５およびＨＪ１５１によっても低下したが、その低下は有意ではなかった。
【実施例８】
【０１９３】
ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４マウスに、抗ａｐｏＥ抗体（ＨＪ１５１、ＨＪ１５１ΔまたはＨＪ１５６）またはコントロール（ＨＪ１６．５およびＰＢＳ）を産生するＡＡＶ２／８ベクターを注射した（ｎ＝２４／群）。ＡＡＶ血清型はＡＡＶ２／８であり、プロモーターはニワトリβアクチン（ＣＢＡ）プロモーターであった。注射は、Ｐ０マウスに両側の脳室内注射として行った。ＨＪ１５１Δ抗体は、Ｆｃドメイン中にＦｃγ受容体への結合を阻止する変異を有するＨＪ１５１抗体である。抗体ＨＪ１６．５は、ヒトタンパク質ＰＬＤ３に結合し、マウスＰＬＤ３または他のマウスタンパク質には結合しない。マウスを３．５箇月齢で灌流した。脳の左半球を４℃の４％ＰＦＡ中で４８時間固定化し、次いで３０％スクロースに移して４℃で保存した。脳の右半球は、生化学的解析用に切開し凍結した。
【０１９４】
海馬背側の大脳皮質における可溶性および不溶性Ａβの量をＥＬＩＳＡにより測定した。すなわち、大脳皮質組織を逐次ＰＢＳおよび５Ｍグアニジン中でホモジナイズし、可溶性（ＰＢＳ）および不溶性（グアニジン）フラクション中のＡβレベルを測定した。図１５および１６に示すように、抗体ＨＪ１５１およびＨＪ１５６は不溶性Ａβ４０およびＡβ４２を有意に減少したが、ＨＪ１５１ΔおよびＨＪ１５６Δは効果を示さなかった。いずれの抗体も、可溶性Ａβ４０またはＡβ４２に対し有意な効果を示さなかった（図示せず）。図１４に示すように、組換え（ｒ）ＨＪ１５１、Ｄ２６５Ａ変異（Δ）を有するｒＨＪ１５１、ｒＨＪ１５６およびｒＨＪ１５６Δを発現するＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスの大脳皮質における相対抗体濃度を、抗原捕捉ＥＬＩＳＡによって測定した。各抗体の相対レベルを、そのハイブリドーマ由来の精製抗体を標準として使用して計算した。同様のレベルの発現が見られ、異なる抗体間に統計学的な差は無かった。
【０１９５】
全体として、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４マウスモデルにおいて、ＡＡＶによるＨＪ１５１およびＨＪ１５６の発現は、不溶性Ａβ４０およびＡβ４２を有意に低下した。Ｆｃエフェクターの変異（Ｄ２６５Ａ）は、ＨＪ１５１が不溶性Ａβを減少させる能力を完全に失わせた。これらの結果は、抗ａｐｏＥ抗体によるＡβ凝集物のクリアランスは、ミクログリア仲介Ａβクリアランスを伴う抗体オプソニン化および食ステップを必要としうることを示している。
【実施例９】
【０１９６】
ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４（ＡＰＰＰＳ１−２１／Ｅ４）、５ＸＦＡＤ／ａｐｏＥノックアウト（５ＸＦＡＤ／ＥＫＯ）マウス、およびアミロイド沈着で死亡した患者からのヒトａｐｏＥ４／４（ヒトＥ４）脳に由来する固定化されていない組織切片（厚さ２０μｍ）を、ビオチン化抗体ＨＪ３．４Ｂ（抗Ａβ）、ＨＪ１５１Ｂ、ＨＪ１５２Ｂ、ＨＪ１５３Ｂ、ＨＪ１５４Ｂ、ＨＪ１５５ＢおよびＨＪ１５６Ｂ（抗ａｐｏＥ抗体）を用いて染色した（ここで、「Ｂ」は「ビオチン化」を意味する）。使用したすべてのマウスは、大脳皮質中に有意量のＡβを有するのに十分な齢に達していた（ＡＰＰＰＳ１−２１／ａｐｏＥ４／４、＞６箇月齢；５ＸＦＡＤ／ａｐｏＥノックアウト（５ＸＦＡＤ／ＥＫＯ）、＞６箇月齢）。マウスおよびヒトの切片の画像はいずれも、大脳皮質からのものである。図１８に示す結果は、ＨＪ３．４Ｂ、ＨＪ１５１Ｂ、ＨＪ１５２Ｂ、ＨＪ１５３Ｂ、ＨＪ１５４Ｂ、ＨＪ１５５ＢおよびＨＪ１５６Ｂが、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４およびヒトａｐｏＥ４／４の脳において、斑および脳アミロイドアンギオパチーを染色することを示している。抗ａｐｏＥ特異的抗体による染色は、５ＸＦＡＤ／ＥＫＯの脳においては観察されない。
【実施例１０】
【０１９７】
いくつかの抗ＡｐｏＥ抗体のＡｐｏＥ４に対する親和性を、BIAcore T200を用いる表面プラズモン共鳴によって決定した。抗ビオチンモノクローナルマウス抗体を、Biacore Series S CM5センサーチップ上に固定した。次いで、該チップ上に、ビオチン化組換え無脂質付加ＡｐｏＥ４を捕捉した。各抗体の連続希釈物を３０μｌ／分の流速で注入した。各サンプルを、例えば３分間の結合および１０分間の解離で分析した。各注入の後、３Ｍ  ＭｇＣｌ２または他の適当な緩衝液でチップを再生した。無関係のＩｇＧを同様の密度で捕捉するフローセルからのレスポンスユニット（ＲＵ）を差し引くことによって、結合レスポンスを補正した。カイネティクス解析のために、ｋｏｎおよびｋｏｆｆの同時フィッテイングの１：１ Languirモデルを使用した。データを表２に示す。組換え無脂質付加ａｐｏＥ４は、大腸菌において可溶性形態で発現させ、次いで精製したか、または供給業者から購入した。
【０１９８】
【表２】
2020506162.tif 000042
【実施例１１】
【０１９９】
いくつかの抗ＡｐｏＥ４抗体について、ＥＬＩＳＡ用量応答曲線を作成した。すなわち、プレートを、完全長組換え無脂質付加ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３またはＡｐｏＥ４（０．５μｇ／ｍｌ）で一晩コーティングした。翌日、プレートを洗い、ブロックし、次いで抗ＡｐｏＥ抗体とインキュベートした。二次的な検出のために、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ抗体を用いた。データを表３に示す。組換え無脂質付加ＡｐｏＥは、大腸菌において可溶性形態で発現させ、次いで精製したか、または供給業者から購入した。
【０２００】
【表３】
2020506162.tif 000043
【実施例１２】
【０２０１】
コーティング血漿ＥＬＩＳＡ（図１９Ａ）によって、ヒト血漿リポタンパク質由来ＡｐｏＥの検出について、抗ＡｐｏＥ抗体を試験した。ヒト血漿（１つまたはそれ以上のｅ４アレルを有することが、ＨＪ１５１を用いるウエスタンブロットアッセイによって確認されており、１〜５μＭのＡｐｏＥ４を含むことが確認されている）をＰＢＳで１００倍希釈し、ハーフウェルＥＬＩＳＡマイクロタイタープレート上に、４℃で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳでよく洗い、５％ＢＳＡ／ＰＢＳで１時間ブロックした。ウェルに抗体を、４００〜５００ｎＭの出発濃度と、そこからの連続５倍希釈で加え、１時間作用させた。抗体の結合を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲート化した抗マウスＩｇＧ二次抗体により検出した。検出基質はＴＭＢ、停止液は４Ｎ硫酸であった。
【０２０２】
ＨＪ１５３およびＨＪ１５４と比較して、ＨＪ１５６はコーティングしたヒト血漿ＡｐｏＥに対する結合性が低かった（図１９Ｂ）。コントロールＩｇＧおよび市販抗ＡｐｏＥ抗体ＷＵＥ４の結合性は極めて低かった。これらのデータは、ＨＪ１５３およびＨＪ１５４はヒト血漿由来リポタンパク質粒子中に含まれる脂質付加ＡｐｏＥをしっかりと検出することを示している。図１９ＣおよびＤに、コーティングしたヒト血漿に対する他の抗体の結合プロファイルを示す。ＨＪ１５９、ＨＪ１５１４、ＨＪ１５１８、ＨＪ１５２６（図１９Ｃ）、ＨＪ１５８、ＨＪ１５３１およびＨＪ１５３６（図１９Ｄ）は、最高抗体濃度で血漿の脂質付加ＡｐｏＥをしっかりとは検出せず、その１つ前の段階の希釈において、検出は極くわずかであった。
【実施例１３】
【０２０３】
固定化した血漿由来ヒトＡｐｏＥを検出しなかった抗体を、競合ＥＬＩＳＡによってさらに試験した。これは、プラスチックウェルとの相互作用のせいで、コーティングされた血漿ＡｐｏＥのエピトープが結合のために利用不可能であった可能性を除外するためである（図２０Ａ）。ＰＢＳ中０．５μｇ／ｍｌの組換え無脂質付加ＡｐｏＥを、ハーフウェルＥＬＩＳＡマイクロタイタープレート上に、４℃で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳでよく洗い、５％ＢＳＡ／ＰＢＳで１時間ブロックした。ＨＪ１５３、およびコーティングしたヒト血漿ＡｐｏＥを検出しなかった抗体クローンを、ヒト血漿（約１〜５μＭのＡｐｏＥを含む）／５％ＢＳＡ／ＰＢＳの希釈系列（５倍希釈で出発し、そこから２倍希釈）中で、抗体４ｎＭまたは５０ｎＭで、プレインキュベートした。１時間のプレインキュベーション後、混合物を、前記ブロックしたプレートに加え、１時間インキュベートした。コーティングした無脂質付加組換えＡｐｏＥ４（希釈血漿中のＡｐｏＥによって競合されない）への結合のために利用可能な抗体の検出を、抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰおよびＴＭＢを用いて行った。反応を４Ｎ硫酸で停止した。
【０２０４】
この競合ＥＬＩＳＡにより、コーティングＡｐｏＥへの結合における４ｎＭのＨＪ１５３の、血漿希釈度の増加に伴うタイトレーションが示された（図２０Ｂ）。先のアッセイで血漿を結合しなかった抗体は、コーティング組換え無脂質付加ＡｐｏＥへの結合のタイトレーションを、抗体濃度４ｎＭでも５０ｎＭでも示さなかった。これらの結果は、血漿中の脂質付加ＡｐｏＥを検出しない抗体は、組換え無脂質付加ＡｐｏＥに優先的に結合しうることを示している。
【実施例１４】
【０２０５】
ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ２／Ｅ２、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ３／Ｅ３、ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４マウス由来の固定化していない組織切片を、ＡｐｏＥについて、ビオチン化抗体ＨＪ１５６（「ＨＪ１５６Ｂ」）を用いて染色した。染色時において、マウスは９箇月齢であった。切片の厚さは２０ミクロンであった。脳摘出に先立ち、すべてのマウスをＰＢＳにより４℃で経心臓的に灌流した。結果を図２１〜２３に示す。画像はいずれも大脳皮質からのものである。
【実施例１５】
【０２０６】
ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４マウス由来の固定化していない組織切片を、ＡｐｏＥについて、抗ＡｐｏＥｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体Ｈ１５３、抗ＡｐｏＥｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体Ｈ１５６、抗ＡｐｏＥｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体Ｈ１５１４、または抗ＡｐｏＥｍｓＩｇＧ／ｈｕＦｃキメラ抗体Ｈ１５１８を用いて染色した。二次抗体として、ビオチン化ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗体を使用した。染色時において、マウスは９箇月齢であった。切片の厚さは２０ミクロンであった。脳摘出に先立ち、すべてのマウスをＰＢＳにより４℃で経心臓的に灌流した。結果を図２４〜２８に示す。画像はいずれも大脳皮質からのものである。
【実施例１６】
【０２０７】
ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４マウスへの、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）、ＨＪ６．６（ＩｇＧネガティブコントロール）、または抗ａｐｏＥ抗体（ＨＪ１５１、ＨＪ１５５、およびＨＪ１５６）の腹腔内注射による投与を、２箇月齢で開始した（ｎ＝１０／群）。３．５箇月齢になるまで、抗体を５０ｍｇ／ｋｇで週１回注射した。脳摘出に先立ち、マウスをＰＢＳにより４℃で経心臓的に灌流した。脳を４％パラホルムアルデヒド中で固定した。５０ミクロンの厚さの切片を切り出し、所定の試薬で染色した。
【０２０８】
２箇月齢の未処置マウスおよび３．５箇月齢の処置マウスから得た脳切片を、抗Ａβ抗体ＨＪ３．４−ビオチンで免疫染色するか、Ｘ−３４（線維斑を染色する色素）で染色し、大脳皮質における染色を定量した。ＡＰＰ／ＰＳ１−２１  Ｅ４／Ｅ４マウスをＨＪ１５６で処置した場合、Ａβ沈着面積％（図２９）または斑の数（図３０）として測定される、統計学的に有意なＡβ斑沈着の減少がもたらされた。ＨＪ１５５を腹腔内投与した場合も、Ａβ斑の数における統計学的に有意な減少がもたらされた（図３０）；Ａβ沈着（Ａβ染色面積％として測定される）の減少も見られたが、有意ではなかった（図２９）。線維Ａβ斑の沈着量および数における同様の減少が、Ｘ−３４染色によっても見られた（図３１および３２）。脳切片の代表的画像を図３３〜３６に示す。
【実施例１７】
【０２０９】
Ａβ斑におけるコンフォメーションの異なる形態のＡｐｏＥを認識する能力が、より強力に斑を減少させる抗体につながるかを調べるために、ＨＪ１５１、ＨＪ１５３およびＨＪ１５６をさらに特徴付けた。
【０２１０】
ＨＪ１５３またはＨＪ１５６をプレートにコーティングし、ＡｐｏＥ  ＫＯ（ＥＫＯ）、ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４マウス由来の血漿を加えた（図３７Ｃおよび図３７Ｄ）。その結果、ＨＪ１５３は脂質付加ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４に結合するが（図３７Ｃ）、ＨＪ１５６は結合しない（図３７Ｄ）ことが示された。次に、脂質付加されていないＡｐｏＥ４をプレートにコーティングし、ＨＪ１５１、ＨＪ１５３およびＨＪ１５６を、ＡＰＯＥ４マウス由来血漿の希釈系列とプレインキュベートした。その結果、脂質付加ＡｐｏＥは、脂質付加されていないＡｐｏＥと、ＨＪ１５３に対して競合できることが示されたので、ＨＪ１５３はＡｐｏＥの脂質付加された形態および脂質付加されていない形態の両方に結合することが示された（図３７Ｅ）。一方、脂質付加されていないａｐｏＥとＨＪ１５１またはＨＪ１５６との間の結合については、脂質付加ＡｐｏＥは競合できなかったので、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６は脂質付加されていない形態のＡｐｏＥに優先的に結合することが示された（図３７Ｅ）。
【０２１１】
ＨＪ１５３およびＨＪ１５６のキメラバージョンも特徴付けた。ＥＫＯ、ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３およびＡＰＯＥ４ ＫＩマウス由来の血漿をＥＬＩＳＡプレートにコーティングした（存在する血漿リポタンパク質を伴って）。マウスＩｇＧ抗体の結合ドメインとヒトＩｇＧバックボーンを含む、ＨＪ１５３のキメラバージョン（ｃｈｉ１５３）およびＨＪ１５６のキメラバージョン（ｃｈｉ１５６）を調製した。キメラ抗体をさまざまな濃度で前記プレートに加えた。プレートに結合したｃｈｉ１５３およびｃｈｉ１５６を、抗ヒトＩｇＧを用いて検出した（図３７Ａ、図３７Ｂ）。その結果、ｃｈｉ１５３は脂質付加ＡｐｏＥ２、ＡｐｏＥ３およびＡｐｏＥ４を結合するが（図３７Ａ）、ｃｈｉ１５６は結合しない（図３７Ｂ）ことが示された。
【０２１２】
ＡＰＯＥ４およびＡＰＯＥ ＫＯマウスにＩＰ注射（１０ｍｇ／ｋｇ体重）したＨＪ１５３およびＨＪ１５６の薬物動態の比較も行った（図３７Ｆ）。注射の４８時間後の時点で、血漿中のＨＪ１５３は検出限界未満であったが、ＨＪ１５６は注射の１４日後に血漿中に存在した（図３７Ｆ）。本発明におけるＥＬＩＳＡデータは、ＨＪ１５６は脂質付加されていないＡｐｏＥに優先的に結合するが、ＨＪ１５３は脂質付加されたＡｐｏＥおよび脂質付加されていないＡｐｏＥの両方に結合することを示している。このことは、薬物動態の考えられる説明と一致する。ＨＪ１５３は、血漿中に豊富に存在する脂質付加ＡｐｏＥに結合し、したがってＨＪ１５３のクリアランス速度はより大きい。一方、ＨＪ１５６が、血漿中にあまり存在しないかまたは存在しない脂質付加されていないＡｐｏＥにのみ結合するという事実により、ＨＪ１５６のより低いインビボクリアランスがもたらされる。
【０２１３】
ＨＪ１５１およびＨＪ１５６が何らかの形態のＡｐｏＥに脳内において結合するかを調べるために、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６を使用する、ＡＰＰＰＳ１／ＡＰＯＥ４またはＡＰＰＰＳ１／ＥＫＯマウス由来の固定化されていない凍結脳切片（図３８Ａ）。同じ脳に由来する切片において、抗Ａβ抗体ＨＪ３．４を用いるＡβ免疫染色により、Ａβ斑の存在が確認された。結果は、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６は斑内のＡｐｏＥに結合できることを示した（図３８Ａ）。次に、ＨＪ１５６が、４０℃でのインキュベーションにより誘導される凝集形態のＡｐｏＥに結合する能力を調べた。ＨＪ１５１、ＨＪ１５３またはＨＪ１５６との未処理ＡｐｏＥの結合を、ＨＪ１５１、ＨＪ１５３またはＨＪ１５６との、４０℃でインキュベートしたＡｐｏＥの結合と比較した。ＨＪ１５３は、未処理ＡｐｏＥまたは４０℃でインキュベートしたＡｐｏＥに同様に結合したが、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６は、４０℃でインキュベートしたＡｐｏＥに優先的に結合した（図３８Ｂ）。さらに、４０℃でのインキュベーションにより凝集物が形成されることが、１８６０００×ｇで１時間超遠心後のペレット画分において確認された（図３８Ｃ）。上清または該ペレットからのＡｐｏＥをＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、ＨＪ１５６で検出すると、上清からのＡＰＯＥは低い結合性を示し、ペレットのＡｐｏＥは高い結合性を示した（図３８Ｄ）。ペレットからのＡｐｏＥと、インキュベートしたＡｐｏＥ全体は、ＨＪ１５６との結合が同程度であったので（図３８Ｄ）、ＨＪ１５６の、４０℃への処理暴露後のＡｐｏＥ種への結合は、ペレット中のＡｐｏＥ種への結合であることがわかる。ＡｐｏＥ凝集物を可溶化すると、ＨＪ１５６との結合が減少した。具体的には、ＡｐｏＥ凝集物を１％ＳＤＳまたは４Ｍグアニジンに暴露すると、４０℃でのインキュベーションにより誘導されたＡｐｏＥ凝集物へのＨＪ１５６の結合は減少した（図３８Ｅ）。したがって、データは、ＨＪ１５６は、単量体ＡｐｏＥと比較して凝集形態のＡｐｏＥに優先的に結合することを示した。それは、ＡＰＰＰＳ１マウス脳切片における斑中のＡｐｏＥにも結合した。
【０２１４】
ＨＪ１５１およびＨＪ１５６が、生きたマウスの脳においてＡｐｏＥに結合するかを調べるために、インビボ二光子顕微鏡を用いる実験を行った。コントロールマウスＩｇＧ抗体、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６をＡｌｅｘａ５９４にコンジュゲートし、６箇月齢のＡＰＰＰＳ１／ＡＰＯＥ４マウスの脳の表面に適用した（１ｍｇ／ｍｌで４０μｌ）。抗体のＡｐｏＥへの結合を二光子顕微鏡を用いて頭蓋の窓（cranial window）から観察した（図３９Ａ〜Ｃ）。その結果、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６は、アミロイド斑およびＣＡＡにおけるＡｐｏＥに結合することが示された。末梢投与されたＡｐｏＥ抗体が脳に入ってＡｐｏＥに結合できるかを調べるために、ｃｈｉ１５６またはコントロールヒトＩｇＧをＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスに１または２用量でＩＰ注射した（５０ｍｇ／ｋｇ体重）。最後の注射の２日後に、ｃｈｉ１５６が、１または２回の抗体注射を受けたマウスの斑に結合しているのが検出された（図３９Ｄ）。したがって、データは、ＨＪ１５６は、生きた動物において脳に入って、Ａβ斑におけるＡｐｏＥに結合できることを示した。
【０２１５】
ＨＪ１５１およびＨＪ１５６抗体が活性化ミクログリアを増加させることができるかを調べるために、４箇月齢で既に斑を有していたＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウスにおいて、ＨＪ１５１およびＨＪ１５６抗体による短期間の処置（３日毎の４用量のＩＰ注射）の後のＣＤ４５＋ミクログリアの量を繊維斑の量に対して測定した（図４０Ａ、図４１）。短期の受動免疫の後、ＨＪ１５１は活性化ミクログリアの量に対して何ら影響しなかったが、ＨＪ１５６はコントロールと比較してＣＤ４５＋ミクログリアを有意に増加した（図４０）。抗体は両方とも斑のＡｐｏＥに結合できることから、短期の末梢注射後のミクログリア活性化効果は、抗体の効力および用量と関係しうる。
【０２１６】
ＨＪ１５６の用量範囲有効性プロファイルを決定するために、ＨＪ１５６を３つの用量レベル（２、１０および５０ｍｇ／ｋｇ）の１つで、２．５箇月にわたり週１回、ＡＰＰＰＳ１−２１／ＡＰＯＥ４マウス（雌雄を含み、ｎ＝１７〜１８／群）に２箇月齢で開始して、ＩＰ注射した。コントロール群には、ＩｇＧ２ａｂ（５０ｍｇ／ｋｇ）または抗Ａβ ＨＪ３．４（５０ｍｇ／ｋｇ）を週１回投与した。１２回目の注射の３日後にマウスを深く麻酔して灌流した。脳の右半球を切開し、海馬の背側の大脳皮質における可溶性および不溶性Ａβの量をＥＬＩＳＡにより測定した。大脳皮質組織をＰＢＳおよび５Ｍグアニジン中で逐次ホモジナイズし、可溶性（ＰＢＳ）および不溶性（グアニジン）フラクション中のＡβレベルを測定した。脳内不溶性Ａβ４０およびＡβ４２レベルの低下に対する、ＨＪ１５６の有意な用量依存的効果が示された（図４２Ａ〜Ｂ）。
【０２１７】
前記のデータは全体として、Ａβ斑減少のための本開示の抗体の重要な特徴は、アミロイド斑においてみられるコンフォメーションが変化した形態のＡｐｏＥに選択的に結合する能力であることを示している。脂質付加されていないＡｐｏＥがインビボ総ＡｐｏＥに占める割合が極くわずかである場合、そのプールのＡｐｏＥを標的としていることが、ＡｐｏＥレベルまたは脂質代謝に対する効果が見られないことの説明となりうる。さらに、そのような抗体の無脂質付加ＡｐｏＥに対する優先的結合は、脂質付加ＡｐｏＥと結合する抗ＡｐｏＥ抗体との比較において、血漿中半減期の延長に寄与すると考えられる（図３７Ｆ）。この半減期の延長は、脳に入って標的に結合することのできる抗体の濃度を顕著に高めうる。
【実施例１８】
【０２１８】
さまざまな抗ＡｐｏＥ抗体のエピトープ結合を複数の方法で調べた。ヒトＡｐｏＥのさまざまな配列を、異なるプラスミドを用いる酵母ディスプレイによって酵母表面上に発現させた。次いで、さまざまな抗ＡｐｏＥ抗体を、さまざまなＡｐｏＥ配列への結合を、酵母細胞表面の免疫蛍光により決定するように調べた（表４）。ここで試験した抗ＡｐｏＥ抗体はいずれもマウスＡｐｏＥを認識しないので、表４および表５に示すように、マウスとヒトのＡｐｏＥ配列の比較によってエピトープをさらに絞り込んだ。表６および表７のデータは、次のようにして得たものである。ｍｙｃタグを付けたさまざまなＡｐｏＥ４領域を含むＤＮＡコンストラクトで酵母細胞を形質転換した。酵母細胞を、結合を検出するためにＨＪ１５ｘと共にインキュベートするか、または発現を検出するために抗ｍｙｃ抗体と共にインキュベートした。ＨＪ１５３は酵母において発現させたヒトＡｐｏＥ４に結合しないことがわかったので、本試験においてＨＪ１５３の評価は行わなかった。
【０２１９】
【表４】
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【０２２０】
【表５】
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【０２２１】
【表６】
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【０２２２】
【表７】
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【実施例１９】
【０２２３】
クリアランス（ＣＬ）は、全身循環からの薬物の不可逆的排出の効率を示す薬物動態パラメータで、単位時間当たりの薬物除去される血液／血漿／血清の体積として示される。血漿中の脂質付加ＡｐｏＥに結合する抗ＡｐｏＥ抗体は、循環中に存在する脂質付加ＡｐｏＥが非常に高濃度である故に、高いクリアランスを示す。一方、無脂質付加ＡｐｏＥに特異的に結合する抗体は、低いクリアランス、および抗原に結合しないアイソタイプコントロール抗体と同様の他の薬物動態学的性質を示すと予想される。そのような抗体については、クリアランスは用量依存的ではないであろう。
【０２２４】
本開示より前に、脂質付加ＡｐｏＥよりも無脂質付加ＡｐｏＥに優先的に結合する能力を有する抗体は知られていなかった。驚くべきことに、本発明者は、脂質付加ＡｐｏＥよりも無脂質付加ＡｐｏＥに優先的に結合する、ある抗体を見出した。さらに、ある抗体は、非凝集ＡｐｏＥよりも凝集ＡｐｏＥに高い親和性で結合することが見出された。凝集ＡｐｏＥは、ＡｐｏＥ（例えば組換えＡｐｏＥ）の酸化および／または熱処理によって調製することができる。凝集ＡｐｏＥは、非凝集ＡｐｏＥから超遠心（少なくとも１８６０００ｇ）によって分離することができる。
【０２２５】
マウスに抗体を所定の用量で腹腔内注射により投与し、３０分後、４時間後、１日後、２日後、４日後および７日後に顎下採血を行った。血漿サンプル中の抗ＡｐｏＥ薬物レベルを、ＨＪ１５６に対しては組換えａｐｏＥ４を、コントロールＩｇＧ抗体（抗Ｈｅｒ２）に対してはヒトＨｅｒ２タンパク質を捕捉抗原として使用するＥＬＩＳＡアッセイによって決定した。実験の全期間にわたる全体的な抗体の薬物動態に基づいて、クリアランス値を計算した。
【０２２６】
【表８】
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【図１】
2020506162.tif 000049
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
2020506162.tif 000056
【図５Ｅ】
2020506162.tif 000057
【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
2020506162.tif 000060
【図６】
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【図７】
2020506162.tif 000062
【図８Ａ】
2020506162.tif 000063
【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図９】
2020506162.tif 000069
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
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【図１８Ｅ】
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【図１８Ｆ】
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【図１８Ｇ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２２Ｄ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２３Ｄ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２４Ｄ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２５Ｄ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２６Ｄ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２７Ｄ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２８Ｄ】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３３Ｃ】
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【図３３Ｄ】
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【図３３Ｅ】
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【図３３Ｆ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３４Ｃ】
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【図３４Ｄ】
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【図３４Ｅ】
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【図３４Ｆ】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３５Ｃ】
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【図３５Ｄ】
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【図３５Ｅ】
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【図３５Ｆ】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３６Ｃ】
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【図３６Ｄ】
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【図３６Ｅ】
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【図３６Ｆ】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３７Ｃ】
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【図３７Ｄ】
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【図３７Ｅ】
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【図３７Ｆ】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３８Ｃ】
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【図３８Ｄ】
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【図３８Ｅ】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図３９Ｃ】
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【図３９Ｄ】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４３Ａ】
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【図４３Ｂ】
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【図４３Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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