(57)【要約】  ヒトＩｇＥへの低結合親和性を有する抗ＩｇＥ抗体並びにその組成物及び方法が本明細書に開示される。一部の実施形態において、本発明は、１つ以上のヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物を提供する。一部の実施形態において、本発明は、対象をＩｇＥ媒介障害について治療する方法であって、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、ＩｇＥ媒介障害は、アレルギー反応である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７）を含むＶＨ鎖、並びに
ＬＱＡＥＤ（配列番号１１）と、ＡＡＰＳＶ（配列番号１２）、ＧＴＫＬ（配列番号１３）、及びＲＦＳＧＳ（配列番号１４）から選択される少なくとも１つの配列とを含むＶＬ鎖
を含むモノクローナル抗体であって、
好ましくは、ＶＬ配列は、ＬＱＡＥＤ（配列番号１１）と、（ａ）ＡＡＰＳＶ（配列番号１２）又は（ｂ）ＲＦＳＧＳ（配列番号１４）及びＧＴＫＬ（配列番号１３）とを含む、モノクローナル抗体。
【請求項２】
前記ＶＨ鎖は、ＷＶＲＱＡＰＧ（配列番号８）、及びＧＬＥＷ（配列番号９）、及び／又はＶＴＶＳＳＡ（配列番号１０）を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３】
前記ＶＨ鎖は、
【化１】
2020505334.tif 000041
であり、及び／又は前記ＶＬ鎖は、
【化２】
2020505334.tif 000042
であり、それぞれのＸは、独立して、任意のアミノ酸である、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項４】
前記ＶＨ鎖は、以下の配列ＶＱＬＸ１ＱＳＧ（配列番号１７）、ＰＧＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＣＸ６ＡＳＧＸ７ＴＦ（配列番号１８）、ＷＶＲＱＡＰＧＸ８ＧＬＥＷ（配列番号１９）、ＷＧＸ９ＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳＡ（配列番号２０）、ＳＬＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２１）、及びＲＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９ＳＸ２０Ｘ２１Ｔ（配列番号２２）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ１〜Ｘ２１は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】
前記ＶＨ鎖は、以下の配列ＶＱＬＸ１ＱＳＧ（配列番号１７）、ＰＧＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＣＸ６ＡＳＧＸ７ＴＦ（配列番号１８）、ＷＶＲＱＡＰＧＸ８ＧＬＥＷ（配列番号１９）、ＷＧＸ９ＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳＡ（配列番号２０）、ＳＬＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２１）、及びＲＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９ＳＸ２０Ｘ２１Ｔ（配列番号２２）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ１は、Ｖ又はＧ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ２は、Ａ又はＲ、好ましくは、Ａであり、Ｘ３は、Ｌ又はＶ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ４は、Ｋ又はＲ、好ましくは、Ｋであり、Ｘ５は、Ｌ又はＶ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ６は、Ａ又はＫ、好ましくは、Ｋであり、Ｘ７は、Ｆ又はＹ、好ましくは、Ｙであり、Ｘ８は、Ｋ又はＱ、好ましくは、Ｑであり、Ｘ９は、Ｒ又はＱであり、Ｘ１０は、Ｌ又はＴであり、Ｘ１１は、Ｔ、Ｋ、又はＲであり、Ｘ１２は、Ａ又はＳであり、Ｘ１３は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１４は、Ｆ又はＶであり、Ｘ１５は、Ｔ又はＶであり、Ｘ１６は、Ｉ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ１７は、Ｓ又はＴであり、Ｘ１８は、Ｌ、Ｒ、又はＴであり、Ｘ１９は、Ｎ又はＴ、好ましくは、Ｔであり、Ｘ２０は、Ｋ、Ｔ、又はＶであり、Ｘ２１は、Ｎ又はＳ、好ましくは、Ｓである、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項６】
前記ＶＨ鎖は、配列番号２に対して約７５％〜約１００％、好ましくは、約８０％〜約１００％、より好ましくは、約９０％〜１００％、よりさらに好ましくは、約９５％〜約１００％、最も好ましくは、約９９％〜１００％の同一性パーセントを有する配列を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項７】
前記ＶＨ鎖は、配列番号６８、配列番号６９、又は配列番号７０を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項８】
前記ＶＨ鎖は、配列番号１に対して少なくとも約９０％から１００％まで、好ましくは、約９１％から１００％まで、より好ましくは、約９５％から１００％まで、よりさらに好ましくは、約９７％から１００％まで、最も好ましくは、約９９％から１００％までの同一性パーセントを有する配列を含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項９】
前記ＶＬ鎖は、以下の配列ＲＦＳＧＳＸ２２ＳＧ（配列番号２４）、ＬＴＸ２３ＳＸ２４ＬＱＡＥＤＸ２５４ＡＸ２６ＹＹ（配列番号２５）、ＦＧＸ２７ＧＴＫＬ（配列番号２６）、ＡＡＰＳＶＸ２８Ｘ２９ＦＰＰＳＸ３０ＥＸ３１Ｌ（配列番号２７）、ＡＸ３２Ｘ３３ＶＣＬＸ３４Ｘ３５Ｘ３６ＦＹＰ（配列番号２８）、ＨＸ３７Ｘ３８ＹＸ３９ＣＸ４０ＶＴＨＸ４１Ｇ（配列番号２９）、ＰＸ４２ＳＸ４３Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４５ＧＸ４７Ｘ４８Ｘ４９ＴＩＸ５０Ｃ（配列番号３０）、ＱＸ５１Ｘ５２ＰＧＸ５３Ｘ５４ＰＫＬＸ５５ＩＹ（配列番号３１）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ２２〜Ｘ５５は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である、請求項１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１０】
前記ＶＬ鎖は、以下の配列ＲＦＳＧＳＸ２２ＳＧ（配列番号２４）、ＬＴＸ２３ＳＸ２４ＬＱＡＥＤＸ２５４ＡＸ２６ＹＹ（配列番号２５）、ＦＧＸ２７ＧＴＫＬ（配列番号２６）、ＡＡＰＳＶＸ２８Ｘ２９ＦＰＰＳＸ３０ＥＸ３１Ｌ（配列番号２７）、ＡＸ３２Ｘ３３ＶＣＬＸ３４Ｘ３５Ｘ３６ＦＹＰ（配列番号２８）、ＨＸ３７Ｘ３８ＹＸ３９ＣＸ４０ＶＴＨＸ４１Ｇ（配列番号２９）、ＰＸ４２ＳＸ４３Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４５ＧＸ４７Ｘ４８Ｘ４９ＴＩＸ５０Ｃ（配列番号３０）、ＱＸ５１Ｘ５２ＰＧＸ５３Ｘ５４ＰＫＬＸ５５ＩＹ（配列番号３１）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ２２は、Ｇ又はＫであり、Ｘ２３は、Ｉ又はＶであり、Ｘ２４は、Ｇ又はＳであり、Ｘ２５は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２６は、Ｄ又はＶであり、Ｘ２７は、Ｇ、Ｓ、又はＱであり、Ｘ２８は、Ｆ又はＴであり、Ｘ２９は、Ｉ又はＬであり、Ｘ３０は、Ｄ又はＳであり、Ｘ３１は、Ｅ又はＱであり、Ｘ３２は、Ｓ又はＴであり、Ｘ３３は、Ｌ又はＶであり、Ｘ３４は、Ｉ又はＬであり、Ｘ３５は、Ｎ又はＳであり、Ｘ３６は、Ｄ又はＮであり、Ｘ３７は、Ｋ又はＲであり、Ｘ３８は、Ｓ又はＶであり、Ｘ３９は、Ａ又はＳであり、Ｘ４０は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４１は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４２は、Ａ、Ｄ、又はＰであり、Ｘ４３は、Ａ、Ｌ、又はＶであり、Ｘ４４は、Ａ又はＳであり、Ｘ４５は、Ｇ又はＶであり、Ｘ４６は、Ｌ又はＰであり、Ｘ４７は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４８は、Ｒ又はＳであり、Ｘ４９は、Ａ、Ｉ、又はＶであり、Ｘ５０は、Ｎ又はＳであり、Ｘ５１は、Ｈ又はＱ、好ましくは、Ｑであり、Ｘ５２は、Ｈ又はＫであり、Ｘ５３は、Ｋ又はＱであり、Ｘ５４は、Ａ又はＰであり、Ｘ５５は、Ｌ又はＭである、請求項１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１１】
前記ＶＬ鎖は、配列番号４に対して少なくとも約６５％から１００％までの同一性パーセントを有する配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１２】
前記ＶＬ鎖は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１３】
前記ＶＬ鎖は、配列番号３２、配列番号６５、又は配列番号６７を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１４】
前記ＶＨ鎖は、配列番号２３の少なくとも１０、２０、３０、４０、又は５０個の連続アミノ酸残基を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１５】
前記ＶＨ鎖は、配列番号２３を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１６】
約１×１０−５Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、又は約５×１０−５〜約７×１０−８ＭのＫｄの結合親和性でヒトＩｇＥに結合する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１７】
Ｅ５９、Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、Ｓ９１、又はＨ６．２である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを含む組成物。
【請求項１９】
ＩｇＥ媒介障害、例えば、食物アレルギー、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、血管性浮腫、又はアナフィラキシー型過敏症について対象を治療する方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又は請求項１８に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項２０】
対象におけるアレルギー反応を治療又は阻害する方法であって、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又は請求項１８に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]  ＥＦＳ−ＷＥＢを介して提出された配列表の参照
[0002]  ８１．９ｋｂサイズの「２０１８０１０３＿０３４０４４＿１６９ＷＯｌ＿ｓｅｑ＿ＳＴ２５」と命名された配列表のＡＳＣＩＩテキストファイルの内容は、２０１８年１月３日に作成し、本出願とともにＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出され、参照により全体として本明細書に援用される。
【０００２】
[0003]  政府支援の承認
[0004]  本発明は、National Institutes of Healthにより授与された助成金番号２Ｒ４４ＡＩ１０２２７９−０３Ａ１のもと政府支援によりなされた。政府は、本発明における一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
[0005]  本発明の背景
[0006]  １．本発明の分野
[0007]  本発明は、一般に、ＩｇＧへの低親和性結合を有するヒト化抗体に関する。
【０００４】
[0008]  ２．関連分野の説明
[0009]  免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）は、ヒトにおける抗体の５つの主要なクラスの１つを構成する。ＩｇＥは、２つのε重鎖及び２つのκ軽鎖又は２つのλ軽鎖からなる単一の４鎖単位である。ＩｇＥは、μ重鎖産生からε重鎖産生への重鎖クラススイッチングを受けたＢ細胞により合成及び分泌される。ＩｇＥは血液中の総Ｉｇの１パーセント未満を占めるが、この免疫グロブリンは、アレルギー応答における中心的な役割を担うものである。
【０００５】
[0010]  即時型アレルギー応答、即時型過敏性又はＩ型アレルギー応答は、ＩｇＥ及びＦｃεＲＩ（ＩｇＥについての高親和性受容体）を含む複合体により媒介される。この複合体は、エフェクター細胞、例えば、肥満細胞及び好塩基球の表面上のＦｃεＲＩ受容体への分泌ＩｇＥ抗体のＦｃ領域の結合時に形成される。次いで、結合したＩｇＥ抗体は、Ｉ型アレルギー応答を誘発するアレルゲンと称されるそれらの抗原についてのエフェクター細胞表面受容体として機能する。抗原（例えば、アレルゲン）がＦｃεＲＩ結合ＩｇＥに結合して隣接ＩｇＥ／ＦｃεＲＩ複合体を架橋する場合、それは、エフェクター細胞にヒスタミン及び他の生物活性メディエーターをエキソサイトーシスにより放出するようにシグナリングする。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
[0012]  本発明の概要
[0013]  一部の実施形態において、本発明は、ＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７）を含むＶＨ鎖並びにＬＱＡＥＤ（配列番号１１）とＡＡＰＳＶ（配列番号１２）、ＧＴＫＬ（配列番号１３）、及びＲＦＳＧＳ（配列番号１４）から選択される少なくとも１つの配列とを含むＶＬ鎖を含むモノクローナル抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）を提供する。
【０００７】
[0014]  一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、ＷＶＲＱＡＰＧ（配列番号８）、及びＧＬＥＷ（配列番号９）、及び／又はＶＴＶＳＳＡ（配列番号１０）を含む。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、
【０００８】
【化１】
2020505334.tif 000002
である。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、以下の配列ＶＱＬＸ１ＱＳＧ（配列番号１７）、ＰＧＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＣＸ６ＡＳＧＸ７ＴＦ（配列番号１８）、ＷＶＲＱＡＰＧＸ８ＧＬＥＷ（配列番号１９）、ＷＧＸ９ＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳＡ（配列番号２０）、ＳＬＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＤＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２１）、及びＲＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９ＳＸ２０Ｘ２１Ｔ（配列番号２２）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ１〜Ｘ２１は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、以下の配列ＶＱＬＸ１ＱＳＧ（配列番号１７）、ＰＧＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＣＸ６ＡＳＧＸ７ＴＦ（配列番号１８）、ＷＶＲＱＡＰＧＸ８ＧＬＥＷ（配列番号１９）、ＷＧＸ９ＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳＡ（配列番号２０）、ＳＬＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＤＴＶＹＹＣＡＲ（配列番号２１）、及びＲＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９ＳＸ２０Ｘ２１Ｔ（配列番号２２）のいずれか１つ以上を含み、ＸＩは、Ｖ又はＧ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ２は、Ａ又はＲ、好ましくは、Ａであり、Ｘ３は、Ｌ又はＶ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ４は、Ｋ又はＲ、好ましくは、Ｋであり、Ｘ５は、Ｌ又はＶ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ６は、Ａ又はＫ、好ましくは、Ｋであり、Ｘ７は、Ｆ又はＹ、好ましくは、Ｙであり、Ｘ８は、Ｋ又はＱ、好ましくは、Ｑであり、Ｘ９は、Ｒ又はＱであり、Ｘ１０は、Ｌ又はＴであり、Ｘ１１は、Ｔ、Ｋ、又はＲであり、Ｘ１２は、Ａ又はＳであり、Ｘ１３は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１４は、Ｆ又はＶであり、Ｘ１５は、Ｔ又はＶであり、Ｘ１６は、Ｉ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ１７は、Ｓ又はＴであり、Ｘ１８は、Ｌ、Ｒ、又はＴであり、Ｘ１９は、Ｎ又はＴ、好ましくは、Ｔであり、Ｘ２０は、Ｋ、Ｔ、又はＶであり、Ｘ２１は、Ｎ又はＳ、好ましくは、Ｓである。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、配列番号２に対して約７５％〜約１００％、好ましくは、約８０％〜約１００％、より好ましくは、約９０％〜１００％、よりさらに好ましくは、約９５％〜約１００％、最も好ましくは、約９９％〜１００％の同一性パーセントを有する配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、配列番号６８、配列番号６９、又は配列番号７０を含む。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、配列番号１に対して少なくとも約９０％から１００％まで、好ましくは、約９１％から１００％まで、より好ましくは、約９５％から１００％まで、よりさらに好ましくは、約９７％から１００％まで、最も好ましくは、約９９％から１００％までの同一性パーセントを有する配列を含む。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、配列番号２３の少なくとも１０、２０、３０、４０、又は５０個の連続アミノ酸残基を含む。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、配列番号２３を含む。
【０００９】
[0015]  一部の実施形態において、ＶＬ鎖は、ＬＱＡＥＤ（配列番号１１）と（ａ）ＡＡＰＳＶ（配列番号１２）又は（ｂ）ＲＦＳＧＳ（配列番号１４）及びＧＴＫＬ（配列番号１３）とを含む。一部の実施形態において、ＶＬ鎖は、
【００１０】
【化２】
2020505334.tif 000003
を含み、それぞれのＸは、独立して、任意のアミノ酸である。一部の実施形態において、ＶＬ鎖は、以下の配列ＲＦＳＧＳＸ２２ＳＧ（配列番号２４）、ＬＴＸ２３ＳＸ２４ＬＱＡＥＤＸ２５４ＡＸ２６ＹＹ（配列番号２５）、ＦＧＸ２７ＧＴＫＬ（配列番号２６）、ＡＡＰＳＶＸ２８Ｘ２９ＦＰＰＳＸ３０ＥＸ３ｌＬ（配列番号２７）、ＡＸ３２Ｘ３３ＶＣＬＸ３４Ｘ３５Ｘ３６ＦＹＰ（配列番号２８）、ＨＸ３７Ｘ３８ＹＸ３９ＣＸ４０ＶＴＨＸ４１Ｇ（配列番号２９）、ＰＸ４２ＳＸ４３Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４５ＧＸ４７Ｘ４８Ｘ４９ＴＩＸ５０Ｃ（配列番号３０）、ＱＸ５１Ｘ５２ＰＧＸ５３Ｘ５４ＰＫＬＸ５５ＩＹ（配列番号３１）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ２２〜Ｘ５５は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である。一部の実施形態において、ＶＬ鎖は、以下の配列ＲＦＳＧＳＸ２２ＳＧ（配列番号２４）、ＬＴＸ２３ＳＸ２４ＬＱＡＥＤＸ２５４ＡＸ２６ＹＹ（配列番号２５）、ＦＧＸ２７ＧＴＫＬ（配列番号２６）、ＡＡＰＳＶＸ２８Ｘ２９ＦＰＰＳＸ３０ＥＸ３１Ｌ（配列番号２７）、ＡＸ３２Ｘ３３ＶＣＬＸ３４Ｘ３５Ｘ３６ＦＹＰ（配列番号２８）、ＨＸ３７Ｘ３８ＹＸ３９ＣＸ４０ＶＴＨＸ４１Ｇ（配列番号２９）、ＰＸ４２ＳＸ４３Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４５ＧＸ４７Ｘ４８Ｘ４９ＴＩＸ５０Ｃ（配列番号３０）、ＱＸ５１Ｘ５２ＰＧＸ５３Ｘ５４ＰＫＬＸ５５ＩＹ（配列番号３１）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ２２は、Ｇ又はＫであり、Ｘ２３は、Ｉ又はＶであり、Ｘ２４は、Ｇ又はＳであり、Ｘ２５は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２６は、Ｄ又はＶであり、Ｘ２７は、Ｇ、Ｓ、又はＱであり、Ｘ２８は、Ｆ又はＴであり、Ｘ２９は、Ｉ又はＬであり、Ｘ３０は、Ｄ又はＳであり、Ｘ３１は、Ｅ又はＱであり、Ｘ３２は、Ｓ又はＴであり、Ｘ３３は、Ｌ又はＶであり、Ｘ３４は、Ｉ又はＬであり、Ｘ３５は、Ｎ又はＳであり、Ｘ３６は、Ｄ又はＮであり、Ｘ３７は、Ｋ又はＲであり、Ｘ３８は、Ｓ又はＶであり、Ｘ３９は、Ａ又はＳであり、Ｘ４０は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４１は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４２は、Ａ、Ｄ、又はＰであり、Ｘ４３は、Ａ、Ｌ、又はＶであり、Ｘ４４は、Ａ又はＳであり、Ｘ４５は、Ｇ又はＶであり、Ｘ４６は、Ｌ又はＰであり、Ｘ４７は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４８は、Ｒ又はＳであり、Ｘ４９は、Ａ、Ｉ、又はＶであり、Ｘ５０は、Ｎ又はＳであり、Ｘ５１は、Ｈ又はＱ、好ましくは、Ｑであり、Ｘ５２は、Ｈ又はＫであり、Ｘ５３は、Ｋ又はＱであり、Ｘ５４は、Ａ又はＰであり、Ｘ５５は、Ｌ又はＭである。一部の実施形態において、ＶＬ鎖は、配列番号４に対して少なくとも約６５％から１００％までの同一性パーセントを有する配列を含む。一部の実施形態において、ＶＬ鎖は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６からなる群から選択される配列を含む。一部の実施形態において、ＶＬ鎖は、配列番号３２、配列番号６５、又は配列番号６７を含む。
【００１１】
[0016]  一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥは、ヒトＩｇＥに結合する。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥは、ヒトＦｃεＲＩ又は高親和性ＩｇＥ受容体に結合しているヒトＩｇＥに結合する。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥにより認識されるＩｇＥエピトープは、配列番号３３の少なくとも１０個の連続アミノ酸残基を含む。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥにより認識されるＩｇＥエピトープは、以下の配列：配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、及び配列番号４５の１つ以上を含み、本質的にそれからなり、又はそれからなる。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥにより認識されるＩｇＥエピトープは、以下の配列：配列番号３５、配列番号３９、配列番号４２、及び配列番号３６の少なくとも１つを含む。
【００１２】
[0017]  一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥは、ヒト化抗体である。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥは、約１×１０−５Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、又は約５×１０−５〜約７×１０−８ＭのＫｄの結合親和性でヒトＩｇＥに結合する。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥは、本明細書に開示されるＥ５９、Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、Ｓ９１、又はＨ６．２である。
【００１３】
[0018]  一部の実施形態において、本発明は、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを含む組成物を提供する。一部の実施形態において、組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含む。
【００１４】
[0019]  一部の実施形態において、本発明は、対象をＩｇＥ媒介障害について治療する方法であって、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、ＩｇＥ媒介障害は、アレルギー反応である。一部の実施形態において、アレルギー反応は、急性ＩｇＥ媒介食物アレルギー反応である。一部の実施形態において、ＩｇＥ媒介障害は、食物アレルギー、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、血管性浮腫、又はアナフィラキシー型過敏症である。一部の実施形態において、本発明は、対象を肥満細胞症について治療する方法であって、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物は、ＩｇＥ媒介アレルギー反応の発症前に投与する。一部の実施形態において、本発明による１つ以上の抗体及び所与のアレルゲンを対象に同時投与して対象をアレルゲンに対して脱感作する。
【００１５】
[0020]  一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物は、対象に３〜１０週間毎に投与する。一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物は、対象に３〜８週間毎に投与する。一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物は、対象に４〜８週間毎に投与する。一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物は、対象に４〜６週間毎に投与する。一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物は、対象に４〜５週間毎に投与する。一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又はその組成物は、対象に月１回投与する。一部の実施形態において、治療有効量の本発明による１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを対象に投与する。
【００１６】
[0021]  上記の一般的な説明及び以下の詳細な説明の両方は、例示的及び説明的なものにすぎず、特許請求される本発明のさらなる説明を提供するものとする。添付の図面を含めて本発明のさらなる理解を提供し、それは本明細書に組み込まれ、その一部を構成し、本発明のいくつかの実施形態を説明し、詳細な説明と一緒に本発明の原理を説明する。
【００１７】
[0022]  図面の説明
[0023]  本発明は、以下の図面を参照してさらに理解される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】[0024]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図１は、ＢＡＴのフローサイトメトリープロファイルを示す。
【図２】[0024]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図２は、ｈＬＡＡＩＧＥ  Ｅ５９がヒト好塩基球を活性化させ得ないことを示す正常血液好塩基球からの好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）をまとめたグラフである。
【図３】[0024]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図３は、血液好塩基球からのヒスタミン放出を誘発するｈＬＡＡＩＧＥの能力の欠落をまとめたグラフである。
【図４】[0024]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図４は、ｈＬＡＡＩＧＥによる培養皮膚肥満細胞からのβ−ヘキソアミニダーゼ−α放出の欠落をまとめたグラフである。
【図５】[0024]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図５は、ｈＬＡＡＩＧＥによる新鮮肺肥満細胞からのβ−ヘキソアミニダーゼ−α放出の欠落をまとめたグラフである。
【図６】[0024]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図６は、ｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスモデルにおける受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）の結果を示し、ｈＬＡＡＩＧＥはＰＣＡを誘導し得ない。
【図７】[0024]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図７は、ｈＬＡＡＩＧＥ  Ｅ５９が全身性アナフィラキシーを誘導し得ないことを示すｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスにおける全身性アナフィラキシーの中核温変化をまとめたグラフである。
【図８】[0024]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図８は、ｈＬＡＡＩＧＥ  Ｅ５９が全身性アナフィラキシーを誘導し得ないことを示すｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスにおける全身性アナフィラキシーの臨床スコアをまとめたグラフである。ｈＬＡＡＩＧＥ、Ｅ４．１５及びＥ７．１２、並びにポリクローナル抗ＩｇＥ（α−ＩｇＥ）を陽性対照として使用した。
【図９】[0025]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図９は、Ｅ５９が好塩基球上の活性化マーカーのＣＤ６３発現を誘発し得ないことを示す。
【図１０】[0026]いくつかのヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体（ｈＬＡＡＩＧＥ）の安全性プロファイルを示す。図１０は、Ｅ５９が、潜在的に保護性の緩徐型脱顆粒のマーカーの低レベルの好塩基球ＣＤ２０３ｃ発現を促進することを示す。
【図１１】[0027]ＢＡＴに対するｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１１は、ｈＬＡＡＩＧＥがピーナッツアレルギー対象の血液好塩基球ＢＡＴを遮断したことを証明する結果をまとめる。
【図１２】[0027]ＢＡＴに対するｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１２は、ｈＬＡＡＩＧＥがピーナッツアレルギー対象の血液好塩基球ＢＡＴを遮断したことを証明する結果をまとめる。
【図１３】[0027]ＢＡＴに対するｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１３は、ｈＬＡＡＩＧＥがネコアレルギー対象の血液好塩基球ＢＡＴを遮断したことを証明する結果をまとめる。
【図１４】[0027]ＢＡＴに対するｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１４は、ｈＬＡＡＩＧＥがネコアレルギー対象の血液好塩基球ＢＡＴを遮断したことを証明する結果をまとめる。
【図１５】[0028]ｈＦｃεＲＩαマウスモデルにおけるｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１５は、ｈＬＡＡＩＧＥがピーナッツアレルギーＩｇＥ媒介ＰＣＡを遮断したことを証明する結果をまとめる。
【図１６】[0028]ｈＦｃεＲＩαマウスモデルにおけるｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１６は、ｈＬＡＡＩＧＥがピーナッツアレルギーＩｇＥ媒介ＰＣＡを遮断したことを証明する結果をまとめる。
【図１７】[0028]ｈＦｃεＲＩαマウスモデルにおけるｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１７は、ｈＬＡＡＩＧＥがピーナッツアレルギーＩｇＥ媒介ＰＣＡを遮断したことを証明する結果をまとめる。図１７において、４組のバーにおいて、それぞれの組の最初のバーは対照である。ＡＥＲ−３７は、ＰＣＡ対照として使用される抗ヒトＦｃεＲＩα  ｍＡｂである。＊Ｐ、０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。
【図１８】[0028]ｈＦｃεＲＩαマウスモデルにおけるｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１８は、ｈＬＡＡＩＧＥがｈＦｃεＲＩａマウスにおいてダンシル−ＩｇＥ媒介全身性アナフィラキシーを減衰させたことを証明する結果をまとめる。
【図１９】[0028]ｈＦｃεＲＩαマウスモデルにおけるｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を示す。図１９は、ｈＬＡＡＩＧＥがｈＦｃεＲＩａマウスにおいてダンシル−ＩｇＥ媒介全身性アナフィラキシーを減衰させたことを証明する結果をまとめる。
【図２０】[0029]Ｅ５９媒介表面ＩｇＥの内在化を示す。図２０は、ｈＩｇＧ１対照（２μｇ／ｍｌ）及びＥ５９（２μｇ／ｍｌ）により２４時間処理された表面ＦＩＴＣ−ＩｇＥ負荷骨髄肥満細胞（ＢＭＭＣ）の共焦点画像（オーバーレイ表示）を示す。
【図２１】[0029]Ｅ５９媒介表面ＩｇＥの内在化を示す。図２１は、細胞内内在化ＩｇＥを示すＥ５９処理ＢＭＭＣの共焦点セクションを示す。
【図２２】[0030]ｈＬＡＡＩＧＥが緩徐型脱顆粒を誘導することを示す。図２２は、休眠期皮膚肥満細胞中のインタクト顆粒の表現型を示す電子顕微鏡写真である。
【図２３】[0030]ｈＬＡＡＩＧＥが緩徐型脱顆粒を誘導することを示す。図２３は、５０μｇ／ｍｌにおけるＥ５９により３０分間誘導された緩徐型脱顆粒の典型的な表現型を示す電子顕微鏡写真である。
【図２４】[0030]ｈＬＡＡＩＧＥが緩徐型脱顆粒を誘導することを示す。図２４は、ポリクローナル抗ＩｇＥにより誘導されたアナフィラキシー型脱顆粒の表現型を示す電子顕微鏡写真である。
【図２５】[0031]図２５は、ｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスにおける中核温の降下により計測されたとおり、ｈＬＡＡＩＧＥ、例えば、Ｅ１７及びＥ５９と抗ヒトＩｇＧとの架橋が全身性アナフィラキシーを誘発しないことを示すグラフである。ｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスを５０μｇのＩｇＥにより腹腔内で１６時間感作し、次いで５０μｇの対照ヒトＩｇＧ、Ｅ１７、又はＥ５９を腹腔内注射した。２時間後、マウスに５０μｇのウサギ抗ヒトＩｇＧを静脈内チャレンジし、それらの直腸温度を５分間隔において記録した。
【図２６】[0032]ｈＬＡＡＩＧＥ、例えば、Ｅ５９が、完全ＦｃεＲＩシグナリングを減衰させる部分ＦｃεＲＩシグナリングを誘導することを示すグラフである。
【図２７】[0033]有効インビトロモデルにより評価された本発明による５つのｈＬＡＡＩＧＥの予測インビボ半減期を示すグラフである。Soudersy et al. (2015)mAbs 7(5):912-921）参照。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
[0034]  定義
[0035]  特に示されない限り、本明細書において使用される全ての科学及び技術用語は、本発明が属する分野の当業者により一般に理解される意味を有する。
【００２０】
[0036]  用語「抗体」及び「免疫グロブリン」は、任意のアイソタイプの抗体又は免疫グロブリン、全抗体（例えば、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの２つの二量体から順次構成される四量体から構成される抗体）；半抗体；単鎖抗体；ＩｇＥへの特異的結合を保持する抗体の断片（例えば、全、半、又は単鎖抗体の断片）、例として、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びダイアボディ；キメラ抗体；ヒト化抗体（例えば、ヒト化全抗体、ヒト化半抗体、又はヒト化抗体断片）並びに抗体の抗原結合部分及び非抗体タンパク質を含む融合タンパク質を含む。抗体は、例えば、放射性同位体、検出可能な生成物を生成する酵素、蛍光タンパク質などにより検出可能に標識することができる。抗体は、他の部分、例えば、特異的結合ペアのメンバー、例えば、ビオチン（ビオチン−アビジン特異的結合ペアのメンバー）などにさらにコンジュゲートすることができる。抗体は、固体支持体、例として、限定されるものではないが、ポリスチレンプレート又はビーズなどに結合させることもできる。Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２及び又は抗原への特異的結合を保持する他の抗体断片、並びにモノクローナル抗体も本用語に包含される。抗体は、一価（例えば、半抗体の場合）又は二価であり得る。
【００２１】
[0037]  「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、例えば、インタクト抗体の抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体（Zapata, et al, Protein Eng. 8(10):1057-1062(1995)）；並びに抗体断片から形成される多重特異的抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化は、それぞれが単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映する表記である残留「Ｆｃ」断片とを産生する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、抗原を依然として架橋し得るＦ（ａｂ’）２断片を生じさせる。
【００２２】
[0038]  「半抗体」は、重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドの二量体から構成され、重鎖及び軽鎖は非共有及び／又は共有結合（例えば、ジスルフィド）結合により結合していてよい抗体を指す。半抗体は、ヒト重鎖定常領域を含む重鎖、及びヒト軽鎖定常領域を含む軽鎖を含み得る。２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖からなり、したがって、２つの同一の抗原結合部位を有する「全」又は「完全」抗体と対照的に、半抗体は、単一の抗原結合部位を有する（すなわち、一価である）。以下により詳述されるとおり、半抗体は、抗ＩｇＥ抗体の重鎖をコードする核酸を遺伝子改変することにより、例えば、重鎖二量体化を促進する１つ以上の重鎖アミノ酸残基（例えば、１、２、又はそれ以上のシステイン）を、そのような二量体化を促進しない（例えば、妨げる）アミノ酸で置換することにより、又はアミノ酸が異なる重鎖の残基ともはや相互作用し得ないように重鎖二量体化を促進する１つ以上の重鎖アミノ酸残基（例えば、１、２、又はそれ以上のシステイン）を翻訳後改変することにより生成することができる。
【００２３】
[0039]  抗体に関して使用される「一価」は、単一抗原結合領域を含有する抗体を指す。抗体に関して使用される「二価」は、２つの抗原結合領域を含有する抗体を指す。
【００２４】
[0040]  「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含有する最小の抗体断片である。この領域は、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインのタイトな非共有結合の二量体からなる。この構成において、それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を画定する。全体として、６つのＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原について特異的な３つのみのＣＤＲを含むＦｖの半分）であっても、親和性は結合部位全体よりも低くなるが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【００２５】
[0041]  「Ｆａｂ」断片も、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ断片は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む数個の残基の付加の点で、Ｆａｂ’断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基がフリーチオール基を担持するＦａｂ’の本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元来、断片間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【００２６】
[0042]  任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に異なるタイプの１つに割り当てることができる。免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当てることができる。５つの主要なクラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在し、それらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ及びＩｇＡ２にさらに分類することができる。
【００２７】
[0043]  「単鎖Ｆｖ」又は「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖中に存在する。一部の実施形態において、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメイン及びＶＬドメイン間に、ｓＦｖの抗原結合に望ましい構造の形成を可能とするポリペプチドリンカーをさらに含む。
【００２８】
[0044]  用語「ダイアボディ」は、同一のポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結している重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指す。同一鎖上の２つのドメイン間の対合を許容しないほど短いリンカーを使用することにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと強制的に対合させ、２つの抗原結合部位を作出する。例えば、Hollinger, et al, PNAS USA, 90:6444-6448(1993)参照。
【００２９】
[0045]  本明細書において使用される用語「親和性」は、２つの作用物質の可逆的結合についての平衡定数を指し、解離定数（Ｋｄ）として表現される。親和性は、無関連アミノ酸配列についての抗体の親和性よりも少なくとも１倍大きく、少なくとも２倍大きく、少なくとも３倍大きく、少なくとも４倍大きく、少なくとも５倍大きく、少なくとも６倍大きく、少なくとも７倍大きく、少なくとも８倍大きく、少なくとも９倍大きく、少なくとも１０倍大きく、少なくとも２０倍大きく、少なくとも３０倍大きく、少なくとも４０倍大きく、少なくとも５０倍大きく、少なくとも６０倍大きく、少なくとも７０倍大きく、少なくとも８０倍大きく、少なくとも９０倍大きく、少なくとも１００倍大きく、若しくは少なくとも１，０００倍大きく又はそれ以上大きいものであり得る。標的タンパク質に対する抗体の親和性は、例えば、約１００ナノモル濃度（ｎＭ）〜約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１ピコモル濃度（ｐＭ）、若しくは約１００ｎＭ〜約１フェムトモル濃度（ｆＭ）又はそれ以上であり得る。本明細書において使用される用語「アビディティ」は、希釈後の２つ以上の作用物質の複合体の解離に対する抵抗性を指す。用語「免疫反応性」、「優先的に結合する」、及び「特異的に結合する」は、抗体及び／又は抗原結合断片に関して、本明細書において互換的に使用される。用語「結合」は、例えば、共有結合性、静電性、疎水性、並びにイオン性及び／又は水素結合相互作用、例として、塩橋及び水橋のような相互作用に起因する２つの分子間の直接的会合を指す。対象の抗ＩｇＥは、ＩｇＥポリペプチド内のエピトープに特異的に結合する。
【００３０】
[0046]  「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」は、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される不連続抗原結合部位を意味する。ＣＤＲは、Kabat, et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616(1977)；Kabat, et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, “Sequences of proteins of immunological interest”(1991)により；Chothia, et al., J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)；及びMacCallum, et al., J. Mol. Biol. 262:732-745(1996)により記載されており、この定義は互いに対して比較した場合のアミノ酸残基の重複又は下位集団を含む。
【００３１】
[0047]  本明細書において使用され、抗体可変領域に関して使用される用語「フレームワーク」は、抗体の可変領域内のＣＤＲ領域外の全てのアミノ酸残基を意味するものとする。可変領域フレームワークは、一般に、約１００〜１２０アミノ酸長の不連続アミノ酸配列であるが、ＣＤＲ外のそれらのアミノ酸のみを言及するものとする。本明細書において使用される用語「フレームワーク領域」は、ＣＤＲにより離隔されるフレームワークのそれぞれのドメインを意味するものとする。
【００３２】
[0048]  「単離」抗体は、その天然環境の構成成分から同定及び分離並びに／又は回収された抗体である。その天然環境の汚染構成成分は、抗体についての診断又は治療的使用を妨害する材料であり、それとしては、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質を挙げることができる。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥは、（１）ローリー法により決定して９０重量％超、９５重量％超、若しくは９８％重量超、例えば、９９重量％超の抗体に精製され、（２）スピニングカップシークエネーター（spinning cup sequenator）の使用によりＮ末端若しくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るために十分な程度に精製され、又は（３）クーマシーブルー若しくは銀染色を使用して還元若しくは非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により均一に精製される。単離抗体としては、組換え細胞内のインサイチューの抗体が挙げられる。それというのも、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないためである。一部の実施形態において、単離抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより精製される。
【００３３】
[0049]  本明細書において使用される用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種に由来し、ヒト抗体との類似性を増加させるように改変されたタンパク質配列を有する抗体を指す。ヒト化抗体を作製する方法は、当分野において公知である。例えば、米国特許出願第７，２５６，２７３号参照。ヒト化抗体は、レシピエント抗体中でも、インポートＣＤＲ又はフレームワーク領域中でも見出されない残基を含み得る。Queen, et al., PNAS USA 86:10029 10033(1989)、米国特許第５, ５３０，１０１号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、国際公開第９０／０７８６１号、及び米国特許第５，２２５，５３９号参照。ヒト化抗体は、天然存在ヒト抗体の配列を有し得、又はいくつかのヒト抗体のコンセンサス配列であり得る。Kettleborough, et al., Protein Engineering 4:773(1991)；Kolbinger, et al., Protein Engineering 6:971(1993)参照。
【００３４】
[0050]  本明細書において使用される用語、配列「同一性」パーセントは、下記の配列比較アルゴリズムの１つ（例えば、ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＮ又は当業者が利用可能な他のアルゴリズム）を使用して又は目視調査により計測して、最大対応について比較及びアラインして同一のヌクレオチド又はアミノ酸残基の規定の割合を有する２つ以上の配列又は下位配列を指す。用途に応じて、「同一性」パーセントは、比較される配列の領域にわたり、例えば、機能ドメインにわたり存在し、或いは、比較すべき２つの配列の全長にわたり存在し得る。
【００３５】
[0051]  配列比較のため、典型的には、ある配列は、試験配列が比較される参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列をコンピュータ中に入力し、必要により下位配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定プログラムパラメータに基づき、参照配列に対する試験配列についての配列同一性パーセントを計算する。
【００３６】
[0052]  比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482(1981)の局所相同性アルゴリズムにより、Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443(1970)の相同性アラインメントアルゴリズムにより、Pearson & Lipman, PNAS USA 85:2444(1988)の類似性検索法により、それらのアルゴリズム（Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WIにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ化実装により、又は目視調査により実施することができる。
【００３７】
[0053]  配列同一性パーセント及び配列類似性の決定に好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、それは、Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410(1990)に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、National Center for Biotechnology Information(ncbi.nlm.nih.gov)を介して公的に利用可能である。
【００３８】
[0054]  本明細書において使用される用語「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」は、ヒト及び非ヒト動物を指すために互換的に使用される。用語「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物及び非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、及びヤギ）、げっ歯類、及び他の獣医学的対象及び試験動物を含む。
【００３９】
[0055]  「生物試料」は、個体から得られる種々の試料タイプを包含し、診断又はモニタリングアッセイにおいて使用することができる。この定義は、血液及び生物起源の他の液体試料、固体組織試料、例えば、生検標本又は組織培養物若しくはそれに由来する細胞及びその子孫を包含する。この定義は、それらの調達後に任意の手法で、例えば、試薬による処理、可溶化、又はある構成成分、例えば、ポリヌクレオチドの濃縮により操作された試料も含む。用語「生物試料」は、臨床試料を包含し、それとしては、培養物中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生物体液、及び組織試料が挙げられる。一部の例において、生物試料としては、肥満細胞、好塩基球、好酸球、Ｂ細胞などが挙げられる。
【００４０】
[0056]  本明細書において使用される用語「Ｉ型アレルギー反応」、「即時型過敏症」、「アトピー性アレルギー」、「Ｉ型過敏症」などは、身体に流入した抗原が、細胞上の高親和性受容体ＦｃεＲＩに付着しているＩｇＥにより感作された肥満細胞又は好塩基球に遭遇する場合に生じる生理学的応答を指す。アレルゲンが感作肥満細胞又は好塩基球に到達した場合、それは表面結合ＩｇＥを架橋し、細胞内カルシウム（Ｃａ２＋）の増加を引き起こし、それが事前に形成されたメディエーター、例えば、ヒスタミン及びプロテアーゼ、並びに新たに合成された脂質由来メディエーター、例えば、ロイコトリエン及びプロスタグランジンの放出を誘発する。これらのオータコイドは、アレルギーの臨床症状を産生する。さらに、サイトカイン、例えば、ＩＬ−４、ＴＮＦ−アルファが脱顆粒好塩基球及び肥満細胞から放出され、ＩｇＥ反応を伴う炎症応答を増大させるように機能する（例えば、Immunology, Fifth Edition, Roitt, et al., eds., 1998, pp. 302-317参照）。感受性又はアレルギー対象における過敏症反応の具体的な顕在化は、アレルゲン曝露の部位、アレルゲン曝露の用量、対象における器官（例えば、過剰反応性の肺又は鼻腔）の反応性及びその対象におけるアレルゲンに対する免疫応答の完全武装に依存する。
【００４１】
[0057]  Ｉ型過敏症応答に伴う症状及び徴候は、関与し得る広範な組織及び器官に起因して極端に変動する。これらの症状及び徴候としては、皮膚、眼、及び咽喉の掻痒、皮膚の腫れ及び発赤（血管性浮腫及び蕁麻疹／ハイブス（hives））、声帯区域の腫れに起因する嗄声及び呼吸困難、身体のあらゆる箇所で生じ得る持続性の凹凸でかさつきを伴う赤い発疹、息切れ及び喘鳴（気道中の筋肉の緊張及び気道の閉塞、すなわち、気管支収縮から）、さらに粘液及び体液産生の増加、気道筋の構築に起因する胸部圧迫感及び疼痛、悪心、嘔吐下痢、低血圧からの眩暈及び失神、頻拍又は不整脈及びさらには気道及び／又は心臓障害の結果としての死亡を挙げることができる。
【００４２】
[0058]  ある範囲の値が提供される場合、文脈がそうでないことを明確に記述しない限り、その範囲の上限及び下限間の、下限の単位の１０分の１までのそれぞれの介在値並びにその記述範囲中の任意の他の記述又は介在値は、本発明内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、独立して、より小さい範囲に含めることができ、同様に本発明内に包含され、記述範囲中の任意の具体的に除外される限界の対象となる。
【００４３】
[0059]  本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に記述しない限り、複数の参照対象を含む。したがって、例えば、「抗体」又は「半抗体」への言及は、複数のこのような抗体又は半抗体を含み、「ＣＤＲ」への言及は、１つ以上のＣＤＲ及び当業者に公知のその等価物への言及を含む、などである。特許請求の範囲は、任意の任意選択要素を除外するように起草することができることがさらに留意される。したがって、この記述は、特許請求の範囲の要素の引用に関する「専ら」、「のみ」などのような排他的な用語の使用、又は「負の」限定の使用のための先行詞として機能するものとする。
【００４４】
[0060]  「又は」の使用は、文脈がそうでないことを記述しない限り、「及び／又は」を含む。本明細書において使用される「及び／又は」は、「及び」又は「又は」を意味する。例えば、「Ａ及び／又はＢ」は、「Ａ、Ｂ、又はＡ及びＢの両方」を意味し、「Ａ、Ｂ、Ｃ、及び／又はＤ」は、「Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、又はそれらの組合せ」を意味し、前記「それらの組合せ」は、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤの任意の下位集団、例えば、単一メンバー下位集団（例えば、Ａ又はＢ又はＣ又はＤ）、２メンバー下位集団ト（例えば、Ａ及びＢ；Ａ及びＣ；など）、又は３メンバー下位集団（例えば、Ａ、Ｂ、及びＣ；又はＡ、Ｂ、及びＤ；など）、又は４つ全てのメンバー（例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）を意味する。
【００４５】
[0061]  語句「〜を含み、本質的にそれからなり、又はそれからなる」は、過剰な頁及び翻訳料を回避するためのツールとして使用され、一部の実施形態において、当該の所与のものが何らかのものを含み、一部の実施形態において、当該の所与のものが何らかのものからなることを意味する。例えば、文章「一部の実施形態において、組成物は、Ａを含み、本質的にそれからなり、又はそれからなる」は、以下の２つの別個の文章が記載されていると解釈すべきである：「一部の実施形態において、組成物は、Ａを含む。一部の実施形態において、組成物は、本質的にＡからなる。一部の実施形態において、組成物は、Ａからなる」。同様に、一連の代替物を引用する文章は、それぞれの所与の代替物が１つの文章でそれ自体で提供されるように一連の文章が提供されるものと解釈すべきである。例えば、文章「一部の実施形態において、組成物は、Ａ、Ｂ、又はＣを含む」は、以下の３つの別個の文章が記載されているものと解釈すべきである：「一部の実施形態において、組成物は、Ａを含む。一部の実施形態において、組成物は、Ｂを含む。一部の実施形態において、組成物は、Ｃを含む」。
【００４６】
[0062]  本発明の詳細な説明
[0063]  本発明は、ヒトＩｇＥに対する約１×１０−５Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、好ましくは、約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、より好ましくは、約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−８ＭのＫｄ（「Biacore法」、すなわち、骨髄腫ＩｇＥと結合しているＣＭ５センサーチップを有するBiacore T2000機器を使用する表面プラズモン共鳴により計測（参照により全体として本明細書に援用されるZhang, et al. J. Immunol. (2017)DOI:10. 4049/j immunol. 1602022参照）の低い結合親和性を示すヒト化抗体を提供する。本発明によるヒト化低親和性抗ＩｇＥ抗体は、本明細書において「ｈＬＡＡＩＧＥ」と称される。
【００４７】
[0064]  ｈＬＡＡＩＧＥの安全性プロファイル
[0065]  本明細書に例示されるｈＬＡＡＩＧＥの安全性プロファイルを上記の複数のアプローチ及び方法により重点的に評価し、図１〜図８にまとめた。フローサイトメトリーベースの好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）については、ＢＡＴ活性化のマーカーとしての血液好塩基球の強力なＣＤ６３発現を誘導した陽性ＢＡＴ対照（Ｅ４．１５、高親和性抗ヒトＩｇＥ  ｍＡｂ、及びｆＭＬＰ、非ＩｇＥ−ＦｃεＲＩ経路を介する好塩基球アクチベーター）とは対照的に、ｈＬＡＡＩＧＥクローンＥ５９（図１）、Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、及びＳ９１（図２）は、５０μｇ／ｍｌまでの濃度で好塩基球ＣＤ６３発現も誘導せず、好塩基球ヒスタミン放出も誘発しない（図３）。Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、及びＥ５９はファウンダーＥ１７から誘導し、Ｓ９１はファウンダーＦ１１から誘導し、Ｈ６．２はファウンダーＰ６．２から誘導した。１００μｇ／ｍｌまでの濃度におけるこれらのｈＬＡＡＩＧＥは、培養皮膚肥満細胞（図４）及び新たに単離された肺肥満細胞（図５）の脱顆粒（脱顆粒マーカーとしてβ−ヘキソアミニダーゼ−αを使用）を誘発しなかった。ｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスモデルについては、ｈＬＡＡＩＧＥは、５０μｇ／ｍｌまで局所ＰＣＡ反応を誘発せず（図６）、全身性アナフィラキシー（データ示さず、一例としてＥ５９からのデータを使用、図７及び図８）も誘発しない。これらの包括的データは、選択されたｈＬＡＡＩＧＥが脱顆粒／アレルギーエフェクター細胞からのメディエーター放出を誘発する能力を欠くことを実証した。
【００４８】
[0066]  好塩基球活性化を誘導するポリクローナル抗ＩｇＥとは対照的に、Ｅ５９は、ＣＤ６３発現を誘導しなかった（図９）。Ｅ５９は、弱いＣＤ２０３ｃ発現も誘発した（図１０）。
【００４９】
[0067]  ｈＬＡＡＩＧＥの治療効果
[0068]  ピーナッツ及びネコアレルギー対象の血液好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）、ヒトＦｃεＲＩαトランスジェニックマウスモデルにおけるピーナッツアレルギーＩｇＥ媒介受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）並びにダンシル−ＩｇＥ媒介全身性アナフィラキシーを用いてｈＬＡＡＩＧＥの治療効果を評価した。図１１〜図１４に提示されるＢＡＴデータは、ピーナッツ（図１１及び図１２）及びネコ（図１３及び図１４）アレルギー対象ＢＡＴの両方がｈＬＡＡＩＧＥにより用量依存的にかなり抑制されることを示し、それらの選択されたｈＬＡＡＩＧＥがピーナッツ及びネコアレルギーＢＡＴの両方に対するかなりの遮断効果を示すことを実証した。ｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスモデルにおいて、ｈＬＡＡＩＧＥは、ピーナッツアレルギーＩｇＥ媒介ＰＣＡ（図１５〜図１７）及びダンシル−ＩｇＥ媒介全身性アナフィラキシー（図１８及び図１９）を抑制した。
【００５０】
[0069]  ｈＬＡＡＩＧＥの作用機序の確認
[0070]  ｈＬＡＡＩＧＥクローンＥ５９が優れた安全性プロファイル及び治療効果を呈したため、Ｅ５９を使用してｈＬＡＡＩＧＥの作用機序を確認した。ＦＩＴＣ標識ヒトＩｇＥ感作ｈＦｃεＲＩα陽性骨髄由来肥満細胞（ＢＭＭＣ）については、ＩｇＥは大部分が細胞表面中で確認され、対照ｈＩｇＧ１処理ＢＭＭＣにおいて細胞内緑色シグナルは最小であった。対照的に、Ｅ５９処理ＢＭＭＣは、共焦点セクションにおける全てのレベルを介して分散した有意な細胞内ＩｇＥ（緑色シグナル）を呈したが、ｈＩｇＧ１対照処理ＢＭＭＣは呈さず（図２０及び図２１）、Ｅ５９は表面ＩｇＥの内在化を誘発するが、対照ｈＩｇＧ１は誘発しないことを実証した。
【００５１】
[0071]  皮膚肥満細胞の顆粒の表現型の電子顕微鏡観察試験において、ＰＢＳ（対照として）処理皮膚肥満細胞は、大部分が、インタクトな電子密度顆粒（緑色矢印）を示し、緩徐型脱顆粒（ＰＤ、赤色矢印）の徴候は最小であり（図２２）、正常皮膚肥満細胞も肥満細胞の生物学的な正常機能として低レベルのＰＤを受けることを示した。Ｅ５９処理肥満細胞（３０分間５０μｇ／ｍｌ）は、顆粒の見かけ上典型的なＰＤ変化を呈し（図２３）、Ｅ５９が顆粒のＰＤ様変化を誘導することを示した。アナフィラキシー型脱顆粒についての陽性対照として、ポリクローナル抗ＩｇＥ抗体により処理された皮膚肥満細胞は、細胞内顆粒のほとんどを融合した明らかなアナフィラキシー型脱顆粒を示し、ＰＤ表現型の残留量は電子顕微鏡観察において可視的であった（図２４）。まとめると、これらのデータは、ｈＬＡＡＩＧＥ  Ｅ５９が表面ＩｇＥ内在化、及び緩徐型脱顆粒を誘発することを実証した。
【００５２】
[0072]  ＢＬＡＳＴ配列アラインメントツール及び分析の使用を使用してヒト化クローンＥ５９、Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、及びＳ９１の配列を分析した。ヒト化クローンのＶＨ配列の最小同一性パーセント（配列全体にわたる）は、約９１％である。したがって、一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、以下の配列番号１に対して少なくとも約９０％から１００％まで、好ましくは、約９１％から１００％まで、より好ましくは、約９５％から１００％まで、よりさらに好ましくは、約９７％から１００％まで、最も好ましくは、約９９％から１００％までの同一性パーセントを有するＶＨ配列を有する：
【００５３】
【化３】
2020505334.tif 000004
[0073]  ヒト化クローン間で、ＶＨ配列の一部の同一性パーセントは変動した。例えば、ヒト化クローンの同一性パーセントは、ＶＨ配列の以下の一部について約７５％〜１００％の範囲であった：
【００５４】
【化４】
2020505334.tif 000005
[0074]  したがって、一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、配列番号２に対して約７５％〜約１００％、好ましくは、約８０％〜約１００％、より好ましくは、約９０％〜１００％、よりさらに好ましくは、約９５％〜約１００％、最も好ましくは、約９９％〜１００％の同一性パーセントを有するＶＨ配列の一部を有する。
【００５５】
[0075]  したがって、一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、配列番号１に対して少なくとも約９０から１００％までの同一性パーセントを有するＶＨ配列を有し、ＶＨ配列の一部は、配列番号２に対して約７５％〜約１００％、好ましくは、約８０％〜約１００％、より好ましくは、約９０％〜１００％、よりさらに好ましくは、約９５％〜約１００％、最も好ましくは、約９９％〜１００％の同一性パーセントを有する。
【００５６】
[0076]  ５つのヒト化クローンの４つは、
【００５７】
【化５】
2020505334.tif 000006
と約９９％の同一性パーセントを有するＶＬ配列（配列全体にわたる）を有する。
【００５８】
[0077]  したがって、一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、配列番号３に対して少なくとも約９９％から１００％までの同一性パーセントを有するＶＬ配列を有する。
【００５９】
[0078]  しかしながら、第５のヒト化クローンは、ＶＬ配列の一部、すなわち、以下の配列番号４にわたり４つのヒト化クローンと約６５％〜約６８％の同一性パーセントを有する：
ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＹＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ（配列番号４）。
【００６０】
[0079]  したがって、一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、配列番号４に対して少なくとも約６５％から１００％までの同一性パーセントを有するＶＬ配列の一部を有する。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、配列番号４に対して約６５％〜約７０％の同一性パーセントを有するＶＬ配列の一部を有する。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、
ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＹＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ（配列番号４）
ＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＹＡＳＮＬＫＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳ（配列番号５）
ＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＥＶＳＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳ（配列番号６）
からなる群から選択されるＶＬ配列の一部を有する。
【００６１】
[0080]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、配列番号３に対して少なくとも約９９％から１００％までの同一性パーセントを有するＶＬ配列、及び配列番号２に対して約７５％〜約１００％、好ましくは、約８０％〜約１００％、より好ましくは、約９０％〜１００％、よりさらに好ましくは、約９５％〜約１００％、最も好ましくは、約９９％〜１００％の同一性パーセントを有するＶＨ配列を有する。
【００６２】
[0081]  ＢＬＡＳＴアラインメントを使用するさらなる配列分析は、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥが、ＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７）、ＷＶＲＱＡＰＧ（配列番号８）、ＧＬＥＷ（配列番号９）、及びＶＴＶＳＳＡ（配列番号１０）を含むＶＨ鎖、並びにＬＱＡＥＤ（配列番号１１）、ＡＡＰＳＶ（配列番号１２）、ＧＴＫＬ（配列番号１３）、及びＲＦＳＧＳ（配列番号１４）を含むＶＬ鎖を含むことを明らかにした。
【００６３】
[0082]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、
【００６４】
【化６】
2020505334.tif 000007
を有するＶＨ鎖及び
【００６５】
【化７】
2020505334.tif 000008
を有するＶＬ鎖を含み、それぞれのＸは、独立して、任意のアミノ酸である。
【００６６】
[0083]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、ＶＱＬＸ１ＱＳＧ（配列番号１７）、ＰＧＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＣＸ６ＡＳＧＸ７ＴＦ（配列番号１８）、ＷＶＲＱＡＰＧＸ８ＧＬＥＷ（配列番号１９）、ＷＧＸ９ＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳＡ（配列番号２０）、ＳＬＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２１）、及びＲＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９ＳＸ２０Ｘ２１Ｔ（配列番号２２）を含むＶＨ鎖を含み、Ｘ１〜Ｘ２１は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である。一部の実施形態において、Ｘ１は、Ｖ又はＧ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ２は、Ａ又はＲ、好ましくは、Ａであり、Ｘ３は、Ｌ又はＶ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ４は、Ｋ又はＲ、好ましくは、Ｋであり、Ｘ５は、Ｌ又はＶ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ６は、Ａ又はＫ、好ましくは、Ｋであり、Ｘ７は、Ｆ又はＹ、好ましくは、Ｙであり、Ｘ８は、Ｋ又はＱ、好ましくは、Ｑであり、Ｘ９は、Ｒ又はＱであり、Ｘ１０は、Ｌ又はＴであり、Ｘ１１は、Ｔ、Ｋ、又はＲであり、Ｘ１２は、Ａ又はＳであり、Ｘ１３は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１４は、Ｆ又はＶであり、Ｘ１５は、Ｔ又はＶであり、Ｘ１６は、Ｉ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ１７は、Ｓ又はＴであり、Ｘ１８は、Ｌ、Ｒ、又はＴであり、Ｘ１９は、Ｎ又はＴ、好ましくは、Ｔであり、Ｘ２０は、Ｋ、Ｔ、又はＶであり、Ｘ２１は、Ｎ又はＳ、好ましくは、Ｓである。一部の実施形態において、ＶＨ鎖は、
【００６７】
【化８】
2020505334.tif 000009
の少なくとも１０、２０、３０、４０、又は５０個の連続アミノ酸残基を含む。
【００６８】
[0084]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、ＲＦＳＧＳＸ２２ＳＧ（配列番号２４）、ＬＴＸ２３ＳＸ２４ＬＱＡＥＤＸ２５４ＡＸ２６ＹＹ（配列番号２５）、ＦＧＸ２７ＧＴＫＬ（配列番号２６）、ＡＡＰＳＶＸ２８Ｘ２９ＦＰＰＳＸ３０ＥＸ３１Ｌ（配列番号２７）、ＡＸ３２Ｘ３３ＶＣＬＸ３４Ｘ３５Ｘ３６ＦＹＰ（配列番号２８）、ＨＸ３７Ｘ３８ＹＸ３９ＣＸ４０ＶＴＨＸ４１Ｇ（配列番号２９）、ＰＸ４２ＳＸ４３Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４５ＧＸ４７Ｘ４８Ｘ４９ＴＩＸ５０Ｃ（配列番号３０）、ＱＸ５１Ｘ５２ＰＧＸ５３Ｘ５４ＰＫＬＸ５５ＩＹ（配列番号３１）を含むＶＬ鎖を含み、Ｘ２２〜Ｘ５５は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である。一部の実施形態において、Ｘ２２は、Ｇ又はＫであり、Ｘ２３は、Ｉ又はＶであり、Ｘ２４は、Ｇ又はＳであり、Ｘ２５は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２６は、Ｄ又はＶであり、Ｘ２７は、Ｇ、Ｓ、又はＱであり、Ｘ２８は、Ｆ又はＴであり、Ｘ２９は、Ｉ又はＬであり、Ｘ３０は、Ｄ又はＳであり、Ｘ３１は、Ｅ又はＱであり、Ｘ３２は、Ｓ又はＴであり、Ｘ３３は、Ｌ又はＶであり、Ｘ３４は、Ｉ又はＬであり、Ｘ３５は、Ｎ又はＳであり、Ｘ３６は、Ｄ又はＮであり、Ｘ３７は、Ｋ又はＲであり、Ｘ３８は、Ｓ又はＶであり、Ｘ３９は、Ａ又はＳであり、Ｘ４０は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４１は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４２は、Ａ、Ｄ、又はＰであり、Ｘ４３は、Ａ、Ｌ、又はＶであり、Ｘ４４は、Ａ又はＳであり、Ｘ４５は、Ｇ又はＶであり、Ｘ４６は、Ｌ又はＰであり、Ｘ４７は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４８は、Ｒ又はＳであり、Ｘ４９は、Ａ、Ｉ、又はＶであり、Ｘ５０は、Ｎ又はＳであり、Ｘ５１は、Ｈ又はＱ、好ましくは、Ｑであり、Ｘ５２は、Ｈ又はＫであり、Ｘ５３は、Ｋ又はＱであり、Ｘ５４は、Ａ又はＰであり、Ｘ５５は、Ｌ又はＭである。一部の実施形態において、ＶＬ鎖は、
【００６９】
【化９】
2020505334.tif 000010
を含み、Ｘ５６は、Ａ又はＳであり、Ｘ５７は、Ｅ又はＫであり、Ｘ５８は、Ａ又はＳである。
【００７０】
[0085]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、約１×１０−５Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ（Biacore法により計測）の低親和性でヒトＩｇＥに結合する。具体的には、本明細書において例示されるｈＬＡＡＩＧＥは、約５×１０−５Ｍ〜約７×１０−８ＭのＫｄの親和性でヒトＩｇＥに結合する。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥにより認識されるＩｇＥエピトープは、
【００７１】
【化１０】
2020505334.tif 000011
の少なくとも１０個の連続アミノ酸残基を含む。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥにより認識されるＩｇＥエピトープは、以下の配列ＹＱＣＲＶＴＨＰＨＬＰＲ（配列番号３４）、ＹＱＣＲＶＴＨＰＨＬＰＲＡＬＭ（配列番号３５）、ＥＹＱＣＲＶＴＨＰＨＬＰＲ（配列番号３６）、ＥＴＹＱＣＲＶＴＨＰＨＬＰＲＡＬＭ（配列番号３７）、ＰＲＧＶＳＡＹＬＳＲ（配列番号３８）、ＮＰＲＧＶＳＡＹＬＳＲ（配列番号３９）、ＰＳＰＦＤＬＦＩＲＫ（配列番号４０）、ＲＰＳＰＦＤＬＦＩ（配列番号４１）、ＲＰＳＰＦＤＬＦＩＲＫ（配列番号４２）、ＰＲＧＶＳＡＹＬＳＲＰＳＰＦＤＬＦＩ（配列番号４３）、ＰＲＧＶＳＡＹＬＳＲＰＳＰＦＤＬＦＩＲＫ（配列番号４４）、及びＮＰＲＧＶＳＡＹＬＳＲＰＳＰＦＤＬＦＩＲＫ（配列番号４５）の１つ以上を含み、又は本質的にそれからなり、又はそれからなる。
【００７２】
[0086]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、ＦｃεＲＩを発現するエフェクター細胞、例えば、肥満細胞、好塩基球、好酸球などの活性化（例えば、脱顆粒）を阻害する。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、ＦｃεＲＩ結合ＩｇＥに結合することによりエフェクター細胞の活性化（例えば、脱顆粒）を阻害する。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、受容体結合ＩｇＥへの結合時、それ自体、細胞活性化をもたらさない（例えば、隣接ＩｇＥ−ＦｃεＲＩ複合体の架橋をもたらさない）。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、循環及び受容体結合ＩｇＥに特異的に結合し、低親和性でＩｇＥに結合し、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）を発現する細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）を発現する細胞の表面に結合しているＩｇＥの量を低減させる。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、エフェクター細胞（例えば、好塩基球、肥満細胞、好酸球など）によるＩｇＥ（例えば、ＩｇＥ−ＦｃεＲＩ複合体として存在し得る）の内在化を誘発することにより表面結合ＩｇＥの量を低減させる。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、細胞（例えば、エフェクター細胞）の表面上の高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）の量を低減させる。このようなｈＬＡＡＩＧＥは、例えば、エフェクター細胞（例えば、好塩基球、肥満細胞、好酸球など）によるＦｃεＲＩ（例えば、ＩｇＥ−ＦｃεＲＩ複合体として存在し得る）の内在化を誘発することにより表面ＦｃεＲＩの量を低減させ得る。
【００７３】
[0087]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、エフェクター細胞（例えば、好塩基球、肥満細胞、好酸球など）における緩徐型脱顆粒を活性化させる。「緩徐型脱顆粒」において、顆粒タンパク質は、（ｉ）エキソサイトーシスにおけるような顆粒含有物の大規模分泌を含まず；（ｉｉ）部分的に空の膜結合顆粒の房（granule chamber）を置き去りにし；（ｉｉｉ）小ベシクルのトラフィッキングに依存する機序により動員及び放出される。例えば、Bandeira-Melo & Weller(2005)Mem. Inst. Oswaldo Cruz 100(Supp. I):73-81参照。緩徐型脱顆粒は、アレルギー／エフェクター細胞の脱感作を伴うが、アナフィラキシー型脱顆粒を伴わない。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、エフェクター細胞（例えば、好塩基球、肥満細胞、好酸球など）において緩徐型脱顆粒を活性化させるが、アナフィラキシー型脱顆粒を活性化させない。抗体が緩徐型脱顆粒を活性化させるか否かを決定するために好適なアプローチは公知であり、それとしては、例えば、抗体に曝露される細胞におけるＣＤ２０３ｃの上方調節についてのアッセイが挙げられる。具体的には、エクスビボ好塩基球上のＣＤ２０３ｃの上方調節は、緩徐型脱顆粒についてのバイオマーカーとして機能し得る。ＣＤ２０３ｃ上方調節は、治療潜在性のバイオマーカーとしても機能し得る一方、好塩基球からのＣＤ６３発現を誘発するｈＬＡＡＩＧＥの能力喪失を使用してｈＬＡＡＩＧＥの安全性をモニタリングすることができる。
【００７４】
[0088]  一部の実施形態において、循環及び受容体結合ＩｇＥに結合する本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、膜ＩｇＥ（又は「ｍＩｇＥ」）にも結合する。ＩｇＥは、Ｂ細胞膜固定形態（膜ＩｇＥ）で、及びいくつかの分泌形態で存在する。Zhang, et al. (1994)J. Biol. Chem. 269:456-462参照。これらの区別される形態は、スプライスバリアントである。ＩｇＥの主な分泌形態は、一般に、Ｃε４ドメインにおいて本質的に終結するＦｃ領域を有するより短い形態である一方、膜ＩｇＥは、Ｍ１／Ｍ１’及びＭ２として公知のエキソンによりコードされるペプチドを含む追加のＣ末端残基を含む。本発明による抗ＩｇＥのｈＬＡＡＩＧＥは、循環及び受容体結合ＩｇＥにおける結合にも利用可能であるｍＩｇＥの任意のエピトープに結合し得る。例えば、抗ＩｇＥ抗体は、循環、受容体結合及び膜ＩｇＥにおける結合に利用可能なＣε１、Ｃε２、Ｃε３、又はＣε４ドメインのいずれかにおけるエピトープに結合し得る。膜ＩｇＥへの結合において、抗体は、例えば、ＩｇＥ発現Ｂ細胞の成熟を阻害することによりＩｇＥ産生を阻害し得る。
【００７５】
[0089]  本発明によるｈＬＡＡＩＧＥのエピトープは、ＩｇＥが受容体に結合（例えば、ＦｃεＲＩ又はＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）に結合）している結合にエピトープがアクセス可能である限り、ＩｇＥの任意の好適な領域中に存在し得る。ＩｇＥの構造に関する詳細は、開示が全ての目的のために参照により全体として本明細書に援用されるZheng, et al.(Biochemistry(1991)30:9125-9132)、Wan, et al.(Nature Immunology(2002)3:681-686)及びGould and Sutton(Nature Reviews Immunology(2008)8:205-217)に見出される。ＩｇＥのε重鎖は５つのドメインに分割することができ、Ｃ末端からＮ末端まで、Ｃε４ドメイン、Ｃε３ドメイン、Ｃε２ドメイン、Ｃε１ドメイン、及び可変重鎖領域／ドメイン（ＶＨ）を含む。本開示による抗体は、例えば、ＩｇＥのＣε４ドメイン、Ｃε３ドメイン、Ｃε２ドメイン、又はＣε１ドメイン中のエピトープを認識し得る。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、ヒトＩｇＥのＣε３ドメイン中のエピトープを認識しない。
【００７６】
[0090]  ５つのｈＬＡＡＩＧＥにより結合される２つのＩｇＥエピトープを、ＣＬＩＰ技術（Pepscan Inc）によりマッピングした。線形及び単一ループエピトープ模倣体を含有するPepscanアレイを使用して抗体を試験した。線形エピトープ候補は、Ｅ１７、Ｅ５９、及びＳ９１について決定した。Ｈ６．２により結合されるＩｇＥエピトープは、決定することができなかった。検出に使用されたＨＲＰコンジュゲートは陰性対照として試験し、アレイ上のいくつかのペプチドに弱く結合した。抗体Ｅ１７及びＥ５９は、一般に、比較的低い強度の１つの優勢なピークを有する極めて類似の結合プロファイルを生じさせた。特筆すべきことに、両方の抗体について、配列ＹＱＣＲＶＴＨＰＨＬＰＲＡＬＭ（配列番号３５）を含有する単一ループペプチドを用いて記録されたシグナル強度は、一般に、それらの線形アナログを用いて記録されたシグナル強度よりも高かった。抗体Ｓ９１は、類似のシグナル強度の複数のピークを有する結合プロファイルを繰り返し呈した。このような結果は、不連続エピトープ、例えば、立体構造エピトープの認識を示す。しかしながら、記録データは３つのエピトープ候補の提案を可能とし、その１つはＥ１７及びＥ５９について同定されたエピトープと部分的に重複する。
【００７７】
[0091]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、循環及び受容体結合ＩｇＥに特異的に結合し、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）を発現するエフェクター細胞、例えば、好塩基球、肥満細胞、及び／又は好酸球の抗原媒介（例えば、アレルゲン媒介）活性化（例えば、脱顆粒）を阻害する。例えば、抗体は、エフェクター細胞活性化を、抗体の不存在下でのエフェクター細胞活性化の程度と比較して５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、又は９５％以上だけ阻害し得る。エフェクター細胞活性化は、目的エフェクター細胞についての任意の慣用のアプローチ、例として、実施例セクションにより詳細に以下に記載される好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）及び受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）アッセイを使用して決定することができる。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、０．０１〜５μｇ／ｍｌ、例えば、０．０３〜２．５μｇ／ｍｌ、例えば、０．０５〜１μｇ／ｍｌの濃度において存在する場合、エフェクター細胞活性化を遮断し、又は低減させる。
【００７８】
[0092]  架橋、すなわち、抗ｈＬＡＡＩＧＥ／ｈＬＡＡＩＧＥ複合体が活性化／有害反応を誘導するか否かを試験するため、ｈＦｃεＲＩα  ＴｇマウスにヒトＩｇＥを全身負荷し、それをｈＬＡＡＩＧＥ（ヒトＩｇＧ１）により全身処理した。次いで、動物にポリクローナル抗ヒトＩｇＧを与えてｈＬＡＡＩＧＥを架橋させた。全身反応性は生じず（図２５）、すなわち、架橋はアナフィラキシー型脱顆粒を誘導しなかった。さらに、ヒト肥満細胞を、ｈＬＡＡＩＧＥ又は抗ヒトＩｇＧとインキュベート／架橋したｈＬＡＡＩＧＥによりインビトロ処理し、いずれの条件下でも活性化の証拠もメディエーター放出の証拠も観察されなかった。このデータは、インビトロ、エクスビボ、及びインビボでｈＬＡＡＩＧＥが脱顆粒／アレルギーエフェクター細胞からのメディエーター放出を誘発する能力を欠くことを実証する。
【００７９】
[0093]  したがって、一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、循環及び受容体結合ＩｇＥに特異的に結合し、エフェクター細胞、例えば、好塩基球、肥満細胞又は好酸球などの表面上の隣接ＩｇＥ／ＦｃεＲＩ複合体の抗原媒介（例えば、アレルゲン媒介）架橋を低減させ、又は排除する。例えば、抗体は、隣接ＩｇＥ／ＦｃεＲＩ複合体の架橋を、抗体の不存在下でのＩｇＥ／ＦｃεＲＩ複合体架橋の程度と比較して５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、又は９５％以上だけ低減させ得る。
【００８０】
[0094]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、ＦｃεＲＩを発現する細胞の表面上のＩｇＥの量を、抗体の不存在下での細胞の表面に結合しているＩｇＥの量と比較して１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、又は９５％以上だけ低減させる。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、０．０１〜１０μｇ／ｍｌ、例えば、０．０５〜５μｇ／ｍｌ、例えば、０．１〜２μｇ／ｍｌの濃度において存在する場合、細胞の表面に結合しているＩｇＥの量を低減させ得る。
【００８１】
[0095]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、低用量のアレルゲンの投与から得られるもののような完全ＦｃεＲＩ活性化シグナリングを減衰させるアンタゴニストとして機能する部分ＦｃεＲＩ経路シグナリングを誘導する。例えば、Rotiroti, et al.(2012)J Allergy Clin Immunol. 130:918参照。ｓｙｋ、ＥＲＫ、ｐ３８−ＭＡＰＫ、及びＡＫＴの適切なリン酸化は、アナフィラキシー型脱顆粒をもたらすＦｃεＲＩ活性化シグナリングを伴う。Ｅ５９は、ＦｃεＲＩ活性化シグナリングを減衰させる部分的ＦｃεＲＩ経路シグナリングを誘導することが見出された。Ｅ５９は、比較的高濃度（１０〜５０μｇ／ｍｌ）において、ポリクローナル抗ＩｇＥ  Ａｂ誘導リン酸化のものと比較してｓｙｋ、ＥＲＫ、ｐ３８−ＭＡＰＫ、及びＡＫＴのリン酸化を弱く誘導する（１０μｇ／ｍｌにおけるＥ５９、図２６）。ヒト好塩基球は、Ｅ５９により３０分間前処理した場合、続いて高親和性ポリクローナル抗ＩｇＥ抗体により刺激した場合、ｓｙｋ、ＥＲＫ、ｐ３８−ＭＡＰＫ、及びＡＫＴのリン酸化の減衰を示す（ＰＡＥ対２μｇ／ｍｌにおけるＥ５９、図２６）。このリン酸化の減衰は、好塩基球をＥ５９及び高親和性ポリクローナル抗ＩｇＥ抗体により並行して刺激した場合、観察されなかった。Ｅ５９はＦｃεＲＩシグナリングの部分的活性化を誘導し、それはそれらのアレルギーエフェクター細胞をＦｃεＲＩ架橋を介する後の完全活性化に対して不応性にした。
【００８２】
[0096]  したがって、一部の実施形態において、本発明による１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを対象に投与してＦｃεＲＩ活性化シグナリング及び／又はアナフィラキシー型脱顆粒を減衰させる。一部の実施形態において、本発明による１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを対象に投与してｓｙｋ、ＥＲＫ、ｐ３８−ＭＡＰＫ、及び／又はＡＫＴのリン酸化を減衰させる。
【００８３】
[0097]  本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、１つ以上の（例えば、１又は２つの）重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は１つ以上（例えば、１又は２つ）の軽鎖可変領域（ＶＬ）、又はエピトープに結合し得るそれらの下位断片を含み得る。ＶＨ及びＶＬ領域は、ＣＤＲよりも保存される領域であるフレームワーク領域（ＦＲ）が散在している超可変性の領域である相補性決定領域（ＣＤＲ）にさらに下位分類することができる。ＣＤＲ及びＦＲの範囲は、正確に定義されている（Kabat, et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Chothia, et al. (1987)J. Mol. Biol. 196:901-917参照）。ＶＨは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含み得、Ｎ末端からＣ末端まで以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置されている。同様に、ＶＬは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含み得、Ｎ末端からＣ末端まで以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置されている。
【００８４】
[0098]  抗体のＶＨ又はＶＬ鎖は、重鎖又は軽鎖定常領域の全部又は一部をさらに含み、それにより重鎖又は軽鎖免疫グロブリン鎖をそれぞれ形成し得る。一部の実施形態において、ｈＬＡＡＩＧＥは、２つの重鎖及び２つの軽鎖の四量体であり、重鎖及び軽鎖は、例えば、ジスルフィド結合により連結されている。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合領域を含む。抗体の定常領域は、典型的には、宿主組織及び因子、例として、免疫系及び補体系の第１成分の種々の細胞への抗体の結合を媒介する。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）アイソタイプ抗体である。
【００８５】
[0099]  用語「免疫グロブリン」は、免疫グロブリン遺伝子により実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を指し得る。認識されるヒト免疫グロブリン遺伝子としては、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロン、及びミュー定常領域遺伝子；並びに多数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。全長免疫グロブリン軽鎖（約２５ｋＤ又は２１４個のアミノ酸）は、Ｎ末端における可変領域遺伝子（約１１０個のアミノ酸）及びＣ末端におけるカッパ又はラムダ定常領域によりコードされる。全長免疫グロブリン重鎖（約５０ｋＤ又は４４６個のアミノ酸）は、Ｎ末端における可変領域遺伝子（約１１６個のアミノ酸）及びＣ末端における他の上記定常領域遺伝子の１つ、例えば、ガンマ（約３３０個のアミノ酸をコード）によりコードされる。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、全長免疫グロブリン重鎖及び全長免疫グロブリン軽鎖を含む。
【００８６】
[0100]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、全長免疫グロブリン重鎖及び全長免疫グロブリン軽鎖を含まないが、代わりに全長免疫グロブリン重鎖及び／又は全長免疫グロブリン軽鎖の抗原結合断片を含む。一部の実施形態において、抗原結合断片は、別個のポリペプチド鎖上に含有され；他の実施形態において、抗原結合断片は、単一ポリペプチド鎖内に含有される。例えば、一部の実施形態において、ＩｇＥ結合断片は、循環及び受容体結合ＩｇＥに特異的に結合し、低親和性でＩｇＥに結合し、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）を発現する細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態によれば、ＩｇＥ結合断片は、循環及び受容体結合ＩｇＥに特異的に結合し、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）を発現する細胞の活性化を阻害する。
【００８７】
[0101]  抗原結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋により結合している２つのＦａｂ断片を含む二価断片）；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片（ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなる）；（ｉｖ）Ｆｖ断片（抗体の単一アームのＶＨ及びＶＬドメインからなる）；（ｖ）ｄＡｂ断片（ＶＨドメインからなる）；（ｖｉ）単離ＣＤＲ；（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（ＶＨ及びＶＬドメインが対合して一価分子を形成するように組換え手段を使用する合成リンカーにより結合している抗体の単一アームのＶＨ及びＶＬドメインからなる）；（ｖｉｉｉ）ダイアボディ（ＶＨ及びＶＬドメインが対合して一価分子を形成しないように結合している２つのｓｃＦｖからなる；ｓｃＦｖのそれぞれの１つのＶＨは、他のｓｃＦｖのＶＬドメインと対合して二価分子を形成する）；（ｉｘ）二重特異的抗体（それぞれの領域が異なるエピトープに結合する少なくとも２つの抗原結合領域からなる）が挙げられる。一部の実施形態において、断片は、Ｆａｂ断片であり、又は単鎖抗体（ｓｃＦｖ）である。
【００８８】
[0102]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、組換え又は改変抗体、例えば、キメラ、脱免疫化（deimmunized）、及び／又はインビトロ生成抗体である。抗体に適用され、本明細書において使用される用語「組換え」又は「改変」は、組換え手段により調製、発現、作出、又は単離された全ての抗体、例えば、（ｉ）宿主細胞中に形質移入された組換え発現ベクターを使用して発現された抗体；（ｉｉ）組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離された抗体；（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体；又は（ｉｖ）他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、作出、又は単離された抗体を含むものとする。このような組換え抗体としては、ヒト化、ＣＤＲグラフト化、キメラ、脱免疫化、及びインビトロ生成抗体が挙げられ；任意選択的に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する定常領域を含み得る。
【００８９】
[0103]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、ｓｃＦｖ多量体を含む。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、免疫グロブリンの定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含む。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、カルボキシル末端におけるフリーチオール（−ＳＨ）基を含み、そのフリーチオール基を使用して抗体を第２のポリペプチド（例えば、別の抗体、例として、対象抗体）、足場、担体などに付着することができる。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、１つ以上の非天然存在アミノ酸を含む。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、それに付着している目的部分、例えば、検出可能標識、薬物、毒素、半減期延長部分などを有する。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、グリコシル化されており、例えば、ｈＬＡＡＩＧＥは、共有結合炭水化物又は多糖部分を含む。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、例えば、グルタルアルデヒド、ホモ二官能性架橋剤、又はヘテロ二官能性架橋剤を使用して第２の部分（例えば、脂質、対象抗体以外のポリペプチド、合成ポリマー、炭水化物など）に共有結合している。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、固体支持体上で固定化されている。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、検出可能標識を含む。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、造影剤又は放射性同位体を含む。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、「放射線不透過性」標識、例えば、例えばｘ線を使用して容易に可視化することができる標識を含む。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、融合パートナー、例えば、リガンド；エピトープタグ；ペプチド；抗体以外のタンパク質などに（例えば、共有又は非共有結合）結合している。一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、炭水化物部分に共有結合している。一部の実施形態において、本発明のｈＬＡＡＩＧＥは、脂質部分に共有結合している。一部の実施形態において、本発明のｈＬＡＡＩＧＥは、リポソーム中に取り込まれる。これらの及び他の実施形態は、国際公開第２０１５／０１３６６８号に記載の抗体について企図されるとおり、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥについて本明細書において企図される。
【００９０】
[0104]  抗体を産生する方法
[0105]  本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、当分野における任意の方法、例えば、タンパク質合成、組換え技術などにより産生することができる。
【００９１】
[0106]  本発明によるｈＬＡＡＩＧＥの産生に組換え技術を使用することができる。例えば、任意選択的に定常領域に結合している軽鎖及び重鎖可変領域をコードする核酸は、発現ベクター中に挿入される。軽鎖及び重鎖は、同一又は異なる発現ベクター中でクローニングすることができる。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確保する発現ベクター中の制御配列に作動可能に結合している。発現制御配列としては、プロモーター（例えば、天然関連又は異種プロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメント、及び転写終結配列が挙げられる。発現制御配列は、真核生物宿主細胞（例えば、ＣＯＳ又はＣＨＯ細胞）を形質転換又は形質移入し得るベクター中の真核生物プロモーター系であり得る。ベクターが適切な宿主中に取り込まれたら、宿主はヌクレオチド配列の高レベル発現、並びに抗体の回収及び精製に好適な条件下で維持される。
【００９２】
[0107]  一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、単鎖ポリペプチドであり、当分野における化学ペプチド合成法を使用して合成することができる。例えば、固相合成についての技術は、Barany and Merrifield, Solid-Phase Peptide Synthesis; pp. 3-284 in The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology. Vol. 2: Special Methods in Peptide Synthesis, Part A., Merrifield, et al. J. Am. Chem. Soc., 85:2149-2156(1963);Stewart, et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed. Pierce Chem. Co., Rockford, III.(1984);及びGanesan A. 2006 Mini Rev. Med Chem. 6:3-10及びCamarero JA, et al. 2005 Protein Pept Lett. 12:723-8により記載されている。
【００９３】
[0108]  本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、（化学的に又は組換えにより）合成されたら、当分野における方法、例として、硫酸アンモニウム沈殿、親和性カラム、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）精製、ゲル電気泳動などを使用して精製することができる（一般に、Scopes, Protein Purification（Springer-Verlag, N.Y., (1982)参照）。本明細書において使用される「合成」抗体は、当分野において公知の化学合成法又は組換え法のいずれかを使用して作製された抗体又はその結合断片を指す。
【００９４】
[0109]  核酸分子
[0110]  一部の実施形態において、本発明は、ｈＬＡＡＩＧＥの１つ以上のアミノ酸配列をコードする核酸分子を対象とする。このような核酸分子は、目的標的細胞（例えば、コード抗体を合成するように遺伝子改変された細胞）中でのヌクレオチド配列の発現を可能とする１つ以上の調節エレメント、例えば、プロモーター及びエンハンサーに作動可能に結合させることができる。好適なプロモーター及びエンハンサーは、当分野において公知である。
【００９５】
[0111]  ベクター
[0112]  一部の実施形態において、核酸分子は、発現ベクター及び／又はクローニングベクター中に存在する。本発明のｈＬＡＡＩＧＥが２つの別個のポリペプチドを含む場合、その２つのポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を同一又は別個のベクター中でクローニングすることができる。好適なベクターは、当分野において公知であり、それとしては、選択マーカー、複製起点、並びにベクターの複製及び／又は維持を提供する他の特徴部を挙げることができる。
【００９６】
[0113]  細胞
[0114]  一部の実施形態において、本発明による宿主細胞は、本発明による１つ以上の核酸分子を含有する。一部の実施形態において、宿主細胞は、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥを産生し得る。一部の実施形態において、宿主細胞は、ハイブリドーマである。
【００９７】
[0115]  組成物
[0116]  一部の実施形態において、本発明による組成物は、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを含む。一部の実施形態において、組成物は、有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを含む。一部の実施形態において、組成物は、実質的に純粋、例えば、少なくとも約８０％〜８５％純粋、少なくとも約８５％〜９０％純粋、少なくとも約９０％〜９５％純粋、又は９８％〜９９％以上純粋であり、例えば、汚染物質、例えば、細胞残屑、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥの合成から生じる副生物、及びｈＬＡＡＩＧＥ以外の生体分子を有さない。一部の実施形態において、本発明による組成物は、塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４など；緩衝剤、例えば、トリス緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エンタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；洗浄剤、例えば、非イオン性洗浄剤、例えば、Tween-20など；プロテアーゼ阻害剤；グリセロールなどの１つ以上を含む。
【００９８】
[0117]  一部の実施形態において、本発明による組成物は、医薬組成物である。一部の実施形態において、医薬組成物は、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを含む。本明細書において使用される「医薬組成物」は、対象における医薬使用に好適な組成物を指す。医薬組成物は、一般に、有効量の活性剤及び薬学的に許容可能な担体、例えば、緩衝剤、アジュバントなどを含む。本明細書において使用される「薬学的に許容可能な担体」は、活性成分と適合性であり、適用可能な規格及び規制、例えば、医薬投与のためにUnited States Pharmacopeia and the National Formulary（ＵＳＰ−ＮＦ）書籍に記載の薬局方規格に従う溶媒、分散媒、コーティング、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などを指す。したがって、例えば、非滅菌水は、少なくとも静脈内投与のための薬学的に許容可能な担体から除外される。薬学的に許容可能なビヒクルとしては、当分野において公知のものが挙げられる。例えば、REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY. 20th ed.(2000)Lippincott Williams & Wilkins. Baltimore, MD参照。
【００９９】
[0118]  本明細書において使用される「有効量」は、所望の結果を産生するために十分な投与量又は量を指す。所望の結果は、例えば、例えばインビトロアッセイにおける対照群と比較した処理群における客観的又は主観的応答を含み得る。一部の実施形態において、有効量は、「治療有効量」である。本明細書において使用される「治療有効量」は、対象における有益な又は所望の治療（予防を含む）結果、例えば、対照又は治療前の症状のベースライン計測値と比較したＩｇＥ媒介障害の症状の低減を提供するために十分な量を指す。治療有効量は、単一用量として、又は一連のいくつかの用量として投与することができる。当業者は、ある因子、例として、症状の程度、前治療、対象の全身健康状態及び年齢などが、対象を有効に治療するために要求される投与量に影響し得ることを認識する。これにもかかわらず、有効量及び治療有効量は、当分野において公知の方法を使用して容易に決定することができる。
【０１００】
[0119]  一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇである。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．３ｍｇ〜約１０ｍｇである。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．４ｍｇ〜約７ｍｇである。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ〜約５ｍｇである。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ〜約３ｍｇである。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを対象に投与する。
【０１０１】
[0120]  一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象に３〜１０週間毎に投与する。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象に３〜８週間毎に投与する。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象に４〜８週間毎に投与する。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象に４〜６週間毎に投与する。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象に４〜５週間毎に投与する。一部の実施形態において、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、対象に月１回投与する。
【０１０２】
[0121]  一部の実施形態において、組成物は、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを約１ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、又は約１５０ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌの濃度において含む。一部の実施形態において、組成物は、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１０００ｍｇ／ｍｌ、例えば、約２５ｍｇ／ｍｌ〜約５００ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ〜約２５０ｍｇ／ｍｌ、約７５ｍｇ／ｍｌ〜約２００ｍｇ／ｍｌ、又は約１００ｍｇ／ｍｌ〜約１５０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約１２５ｍｇ／ｍｌ）の濃度において含む。
【０１０３】
[0122]  本発明の医薬組成物は、当分野において公知の方法を使用して目的の送達経路、例として、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、眼内、髄腔内、関節内、滑液嚢内、脳槽内、肝内、病巣内注射、頭蓋内注射、注入、及び／又は吸入の投与経路のために配合することができる。本発明による医薬組成物は、以下の１つ以上：ｐＨ緩衝溶液、アジュバント（例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤）、リポソーム配合物、ナノ粒子、分散液、懸濁液又はエマルション及び無菌注射液又は分散液への再構成のための無菌粉末を含み得る。本発明の組成物及び配合物は、当分野において公知の方法を使用して安定性及び効力の増加について最適化することができる。
【０１０４】
[0123]  投与量及びレジメン
[0124]  本発明の医薬組成物は、単位剤形で提供することができる。本明細書において使用される「単位剤形」は、治療すべき対象のための単位投与量として適合された物理的に区別される単位を指し；それぞれの単位は、要求される薬学的に許容可能な担体との関連で所望の治療効果を産生するように計算された所定量の活性成分を含有する。本発明の単位剤形についての仕様は、活性成分の特有の特徴及び達成すべき特定の治療効果、並びに個体の治療のためのそのような活性成分の配合の分野における固有の制限により定められる。
【０１０５】
[0125]  本発明による組成物の毒性及び治療効力は、細胞培養又は実験動物における標準的医薬手順により決定することができる。例えば、致死用量ＬＣ５０（集団の５０％の致死である濃度×曝露時間として表現される用量）又はＬＤ５０（集団の５０％の致死用量）、及びＥＤ５０（集団の５０％における治療有効用量）を当分野において公知の方法により決定することができる。毒性及び治療効果間の用量比は治療指数であり、それは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表現することができる。大きな治療指数を示す組成物が好ましい。毒性副作用を示す組成物を使用することができる一方、そのような組成物を罹患組織の部位に標的化する送達系を使用して副作用を低減させることに留意すべきである。
【０１０６】
[0126]  細胞培養アッセイ及び動物試験から得られるデータは、ヒトにおける使用のための１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥの種々の組合せについての投与量の範囲の配合において使用することができる。投与量は、好ましくは、毒性をほとんど有さず、又は有さないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。投与量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。治療有効用量は、細胞培養アッセイから推定することができる。用量は、細胞培養物中で決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の半最大阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて配合することができる。このような情報を使用してヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、当分野において公知の方法を使用して計測することができる。
【０１０７】
[0127]  さらに、所与の対象についての好適な投与量は、医師又は別の有資格医療専門家により、種々の臨床学的因子に基づき決定することができる。医学分野において周知のとおり、任意の１つの対象についての投与量は、多くの因子、例として、対象のサイズ、体表面積、年齢、投与すべき特定の化合物、対象の性別、投与の時間及び経路、全身健康状態、並びに並行投与される他の薬物に依存する。１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを、１用量当たり体重１ｋｇ当たり１ｎｇ〜体重１ｋｇ当たり２０ｍｇ、例えば、体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり０．５ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり８ｍｇ、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり６ｍｇ、例えば、体重１ｋｇ当たり２ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり５ｍｇの量で投与することができるが、特に上記因子を考慮してそれらの範囲未満又はそれを超える用量が想定される。レジメンが連続注入である場合、それは、１分当たり体重１キログラム当たり１μｇ〜１０ｍｇの範囲であってもよい。１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを、単一用量として、又は複数用量で投与することができる。例えば、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、１日当たり２回、１日当たり１回、２日毎に１回、３日毎に１回、１週間当たり１回、２週間毎に１回、１ヵ月当たり１回、２ヵ月毎に１回などで投与することができる。
【０１０８】
[0128]  当業者は、用量レベルが規定の抗体、症状の重症度及び副作用に対する対象の感受性に応じて変動し得ることを容易に認識する。これにもかかわらず、好ましい投与量は、当業者により容易に決定することができる。
【０１０９】
[0129]  ＩｇＥ媒介障害を治療する方法
[0130]  一部の実施形態において、本発明は、ＩｇＥにより媒介される疾患又は障害を治療する方法を提供する。本方法は、一般に、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを単独で（例えば、単剤療法で）又は１つ以上の追加の治療剤との組合せで（組合せ療法で）対象に投与することを含む。一部の実施形態において、１つ以上の抗体は、医薬組成物の形態で投与する。「治療すること」、「治療する」、又は「治療」は、ＩｇＥ媒介障害及び／又はその付随症状の少なくとも１つを軽減させ、又は解消することを意味する。本明細書において使用される、疾患、障害、又は病態を「軽減させる」ことは、その疾患、障害、又は病態の症状の重症度及び／又は発生頻度を低減させることを意味する。本明細書における「治療すること」、「治療する」、又は「治療」への言及は、治癒的、緩和的、及び予防的治療への言及を含むことが理解される。一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥの治療有効量は、単独で（例えば、単剤療法で）又は１つ以上の追加の治療剤との組合せで（例えば、組合せ療法で）投与される場合、対象におけるＩｇＥ媒介障害の症状を、対照又は治療前に取られたベースライン計測値と比較して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％又はそれ以上だけ低減させる量である。
【０１１０】
[0131]  本明細書において使用される「ＩｇＥ媒介障害」は、ＩｇＥ受容体、例として、高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）及び／又は低親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩＩ；ＣＤ２３）を介するシグナル伝達により特徴づけられる障害、病態、又は疾患である。ＩｇＥ媒介障害としては、Ｉ型アレルギー反応又はＩ型過敏症が主な事象であるもの、例えば、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、食物アレルギー、アレルギー性結膜炎、アトピー性皮膚炎、アナフィラキシー又はアナフィラキシー型過敏症、好酸球性食道炎／胃腸炎、肥満細胞症、ハチ刺され反応、薬物反応、特発性蕁麻疹、血管性浮腫などが挙げられる。ＩｇＥ媒介障害としては、Ｉ型アレルギー反応又はＩ型過敏性が発病機序における重要な二次的役割を担うそれらの障害、例えば、アレルギー性肺アスペルギルス症、アレルギー性紫斑症、高ＩｇＥ免疫欠損症候群（ＨＩＥＳ又はヨブ症候群）、関節リウマチ、ＩｇＥ骨髄腫、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、不確定大腸炎、及び感染性大腸炎）、乾癬、水疱性類天疱瘡なども挙げられる。
【０１１１】
[0132]  一部の実施形態において、本発明の方法は、喘息を有する対象を治療する方法であって、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを対象に投与することを含む方法である。喘息は、感受性個体における喘鳴、息切れ、胸部圧迫感、及び／又は咳嗽の再発エピソードを引き起こす気道の慢性炎症障害である。当業者は、種々のタイプの喘息、例として、環境アレルゲンに対する過敏性を発症した対象において生じると考えられるアレルギー性喘息；典型的にはアスピリン又は他のＣＯＸ阻害剤に対する感受性により誘発される薬物誘発性喘息；運動誘発性喘息；亜致死性及び超急性喘息；夜間喘息；一般に仕事場におけるある化学物質に対する曝露により引き起こされる職業性喘息を区別する。したがって、喘息は、種々の刺激、例として、空中アレルゲン（例えば、イエダニ、花粉、動物の鱗屑、真菌胞子、羽毛）、非特異的刺激物質、例えば、タバコの煙、化学物質の煙霧、汚染、二酸化硫黄などにより誘発され得る。
【０１１２】
[0133]  一部の実施形態において、本発明の方法は、アレルギー性鼻炎を有する対象を治療する方法であって、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを対象に投与することを含む方法である。アレルギー性鼻炎は、典型的には、一群の症状、例として、主に、空中粒子に対する曝露後に生じる鼻腔、副鼻腔、及び眼球における炎症症状を含む。症状としては、くしゃみ；鼻詰まり；鼻水（及び場合により鼻血）；咳嗽；頭痛；アレルゲンに曝露された鼻腔、口腔、眼、咽喉、皮膚、又は任意の区域の掻痒；嗅覚障害（及びしたがって、香味料に対する感受性）；鼻詰まり（鼻閉）；結膜炎；流涙；咽喉炎；及び喘鳴が挙げられる。アレルギー性鼻炎は、通年性及び／又は季節性であり得る。通年性アレルギー性鼻炎は、１年を通して継続するアレルギー性鼻炎である。これは、典型的には、アレルゲン、例えば、動物の鱗屑、室内のカビ胞子、又はイエダニへの連続的曝露により引き起こされる。季節性アレルギー性鼻炎は、１年のある時期の間にのみ生じるアレルギー性鼻炎である。これは、一般に、季節的に産生される木、草、及び雑草花粉に対するアレルギーにより引き起こされる。
【０１１３】
[0134]  一部の実施形態において、本発明の方法は、１つ以上のＩｇＥ媒介食物アレルギーを有する対象を治療する方法であって、治療有効量の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを対象に投与することを含む方法である。ＩｇＥ媒介食物アレルギーは、卵、ピーナッツ、牛乳、又は一部の他の規定の食物により誘発される過剰免疫応答である。あらゆる食物がアレルギー反応を引き起こし得るが、いくつかの食物が主な原因である。小児において、最も一般的な食物アレルギーは、卵、ピーナッツ、牛乳、ダイズ、木堅果、小麦、及び甲殻類（例えば、エビ、カニ、ロブスター、カタツムリ、及びハマグリ）に対するものである。年長児及び成人において、最も一般的な食物アレルギーは、ピーナッツ、木堅果、甲殻類、及び魚類である。症状は、主に胃及び腸に限定され得、又は食物が消化若しくは吸収された後には身体の多くの部分に関わり得る。症状としては、炎症気味の咽喉、アナフィラキシー（死亡をもたらし得る重度の全身アレルギー反応）；腹痛；下痢；悪心；嘔吐；胃痙攣；口腔、咽喉、眼、皮膚、又は任意の区域の掻痒；ハイブス；血管性浮腫（特に瞼、顔面、口唇、及び舌の腫れ）；立ち眩み又は失神；鼻閉；鼻水；息切れ；喘鳴；嚥下困難；口腔アレルギー症候群を挙げることができる。口腔アレルギー症候群は、典型的には、口唇、舌、及び咽喉の掻痒、並びに時に口唇の腫れも含む。
【０１１４】
[0135]  一部の実施形態において、治療方法は、１つ以上の追加の治療剤を対象に投与することをさらに含む。好適な追加の治療剤としては、第２の抗ＩｇＥ抗体、例えば、オマリズマブ、ルミリキシマブ、及び／又は抗体ＣＩＡ−Ｅ−７．１２（ＡＴＣＣアクセッション番号ＨＢ−２３６））、免疫抑制剤、抗炎症剤などが挙げられる。一部の実施形態において、追加の治療剤は、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥと同時投与又は同時配合することができる。一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥは、ステロイド、例として、コルチコステロイド（吸入、経口）；気管支拡張剤（例えば、長時間作用型ベータ−２アゴニスト；短時間作用型ベータ−２アゴニスト）；ロイコトリエンアンタゴニスト／阻害剤；メチルキサンチン；気道炎症に関与するインターロイキンに対して指向される抗体、例えば、ＩＬ−４又はＩＬ−１３又はＴＮＦに対して指向されるｈＬＡＡＩＧＥ；クロモリン、例えば、クロモリンナトリウム；ネドクロミルナトリウム；並びに抗コリン作動薬及びＰＤＥ阻害剤からなる群から選択される１つ以上の成分と同時投与又は同時配合する。本発明による組合せ治療としては、同時（並行）及び任意の順序での連続投与が挙げられる。
【０１１５】
[0136]  一部の実施形態において、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥにより治療すべき対象は、それが必要とされる対象である。一般に、ｈＬＡＡＩＧＥによる治療が「必要とされる」対象は、ＩｇＥ媒介障害を有する対象である。治療が必要とされる対象としては、ＩｇＥ媒介障害を有し、又は有しやすい可能性が高い対象、及びＩｇＥ媒介障害を予防すべき対象も挙げられる。ＩｇＥ媒介障害を有しやすい対象は、総及び／又はアレルゲン特異的ＩｇＥの決定、アレルゲン皮膚試験、臨床及び／又は家族歴などにより同定することができる。
【０１１６】
[0137]  Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、Ｅ５９、及びＳ９１のインビボ半減期は、ＦｃＲｎベース結合アッセイを使用して決定した。Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、及びＥ５９は、約４０日間超（約９６０時間超）の顕著に長い半減期を示す一方、Ｓ９１の半減期は約２５日間であった（図２７）。したがって、一部の実施形態において、対象に、治療有効量の本発明による１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを約３週間〜約６週間の間隔において投与する。一部の実施形態において、対象に、治療有効量の本発明による１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを約４週間〜約５週間の間隔において投与する。一部の実施形態において、対象に、治療有効量の本発明による１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥに約１ヵ月間の間隔において投与する。
【０１１７】
[0138]  本明細書に開示されるｈＬＡＡＩＧＥの潜在的な免疫原性（Ｂ及びＴ細胞エピトープ）は、La Jolla Institute of Allergy and Immunology（tools.immuneepitope.org）により開発されたＩＥＢＤツールを使用してインシリコで決定して陰性である。
【０１１８】
[0139]  キット
[0140]  一部の実施形態において、本発明は、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを含むキット（例えば、治療キット）である。このようなキットは、例えば、本発明による方法の実施において有用である。
【０１１９】
[0141]  一部の実施形態において、キットは、１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ、１つ以上の抗体をコードする核酸分子、又はその核酸を含む細胞の１つ以上を含み得る。一部の実施形態において、１つ以上の抗体は、医薬組成物として、例えば、単一用量、２つ以上の投与量単位などで提供される。
【０１２０】
[0142]  本発明によるキットは、例えば、本発明による治療方法を実施するためにキットの構成成分を使用するための説明書を含み得る。説明書は、添付文書として、キット又はその構成成分の容器のラベリング（例えば、包装又は下位包装に伴う）などにおいてキット中に存在し得る。一部の実施形態において、説明書は、好適なコンピュータ可読記憶媒体、例えば、コンパクトディスク読取専用メモリ（ＣＤ−ＲＯＭ）、デジタルバーサタイルディスク（ＤＶＤ）、フラッシュドライブなどに存在する電子記憶データファイルとして存在する。一部の実施形態において、実物の説明書はキット中に存在しないが、遠隔源から、例えば、インターネットを介して説明書を得る手段が提供される。この実施形態の一例は、説明書を閲覧することができ、及び／又は説明書をダウンロードすることができるウェブアドレスを含むキットである。説明書と同様、説明書を入手するこの手段は好適な基板上に記録される。
【０１２１】
[0143]  以下の実施例は、本発明を説明するものであり、限定するものではない。
【実施例】
【０１２２】
[0144]  実施例
[0145]  以下の実施例は、当業者に本発明を作製及び使用する方法の完全な開示及び説明を提供するために記載され、本発明者らが発明としてみなすものの範囲を限定するものではなく、本発明者らが以下の実験が全て又は実施された唯一の実験であることを表すものでもない。使用数字（例えば、量、温度など）に関して精度を確保するための労力がなされてきたが、いくらかの実験誤差及び偏差を考慮すべきである。特に示されない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧又はほぼ大気圧である。標準的な略語を使用することができ、例えば、ｂｐ、塩基対；ｋｂ、キロベ−ス；ｐｌ、ピコリットル；ｓ又はｓｅｃ、秒；ｍｉｎ、分；ｈ又はｈｒ、時間；ａａ、アミノ酸；ｋｂ、キロベース；ｂｐ、塩基対；ｎｔ、ヌクレオチド；ｉ．ｍ．、筋肉内（筋肉内に）；ｉ．ｐ．、腹腔内（腹腔内に）；ｓ．ｃ．、皮下（皮下に）；〜、約、など、及びアミノ酸一文字及び三文字コード。
【０１２３】
[0146]  本実施例に言及される市販の試薬は、特に示されない限り、製造業者の説明書に従って使用した。例示的な方法及び材料が以下に記載されるが、本明細書に記載のものと類似又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験において使用することもできる。材料、方法、及び実施例は説明にすぎず、範囲を限定するものではない。
【０１２４】
[0147]  実施例１
ヒト化抗ヒトＩｇＥ抗体の生成
[0148]  低親和性抗ヒトＩｇＥ（ＬＡＡＩＧＥ）ファウンダーマウスｍＡｂ、すなわち、ファウンダーＥ１７、ファウンダーＦ１１、及びファウンダーＰ６．２を産生するハイブリドーマ細胞系を、国際公開第２０１５／０１３６６８号に開示の方法に従って作製した。
【０１２５】
[0149]  ファウンダーＥ１７のｃＤＮＡ及び予測タンパク質配列は、以下である：
ファウンダーＥ１７  ＶＨ  ｃＤＮＡ：
【０１２６】
【化１１】
2020505334.tif 000012
ファウンダーＥ１７  ＶＨタンパク質：
【０１２７】
【化１２】
2020505334.tif 000013
ファウンダーＥ１７  ＶＬ  ｃＤＮＡ：
【０１２８】
【化１３】
2020505334.tif 000014
ファウンダーＥ１７  ＶＬタンパク質：
【０１２９】
【化１４】
2020505334.tif 000015
[0150]  ファウンダーＦ１１のｃＤＮＡ及び予測タンパク質配列は、以下である：
ファウンダーＦ１１  ＶＨ  ｃＤＮＡ：
【０１３０】
【化１５】
2020505334.tif 000016
ファウンダーＦ１１  ＶＨタンパク質：
【０１３１】
【化１６】
2020505334.tif 000017
ファウンダーＦ１１  ＶＬ  ｃＤＮＡ：
【０１３２】
【化１７】
2020505334.tif 000018
ファウンダーＦ１１  ＶＬタンパク質：
【０１３３】
【化１８】
2020505334.tif 000019
[0151]  ファウンダーＰ６．２のｃＤＮＡ及び予測タンパク質配列は、以下である：
ファウンダーＰ６．２  ＶＨ  ｃＤＮＡ：
【０１３４】
【化１９】
2020505334.tif 000020
ファウンダーＰ６．２  ＶＨタンパク質：
【０１３５】
【化２０】
2020505334.tif 000021
ファウンダーＰ６．２  ＶＬ  ｃＤＮＡ：
【０１３６】
【化２１】
2020505334.tif 000022
ファウンダーＰ６．２  ＶＬタンパク質：
【０１３７】
【化２２】
2020505334.tif 000023
[0152]  ファウンダーＦ１１、ファウンダーＥ１７、及びファウンダーＰ６．２は、それぞれ約６．９２×１０−７、８．１９×１０−８、及び約２．５４×１０−６ΜのヒトＩｇＥについての結合親和性を有する。それぞれの重鎖可変（ＶＨ）及び軽鎖可変（ＶＬ）領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列及び特異性決定領域（ＳＤＲ）を、最も相同的なヒト生殖系列配列のフレームワーク（ＦＲ）領域中に移植した。全ての組換えｍＡｂを、スモールスケール（５０ｍｌの形質移入容量）で２９３細胞中で一過的に発現させ、下流適用のためにプロテインＡ親和性カラムにより精製した。組換え抗体を発現せず、又は＜１μｇ／ｍｌの組換え抗体を発現するヒト化ｍＡｂを排除した。α−ＩｇＥへのヒト化ＬＡＡＩＧＥ（ｈＬＡＡＩＧＥ）の親和性は、アミンカップリングにより骨髄腫ＩｇＥと結合しているＣＭ５センサーチップを有するBiacore T2000機器（Biacore AB, Uppsala, Sweden）を使用する表面プラズモン共鳴により決定した。０．１５ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．００５％のポリソルベート２０を含有するＨＢＳ−ＥＰアッセイ緩衝液中で精製ｈＬＡＡＩＧＥを溶解させた。溶液は結合分析のために５０μｌ／分の流量においてセンサを横断させた。結合結果は、共鳴単位で表現した。速度論的試験をBIAevaluation Software Version 4.1により分析した。Biacore T2000の感度限界（＜５×１０−５Ｍ）よりも低いＩｇＥに対する親和性を有するクローンはさらに分析せず、約７×１０−６Ｍ〜約７×１０−８Ｍの範囲のＩｇＥ親和性を有する抗体を、それらの治療潜在性及び安全性プロファイルのさらなる評価のために選択した。細胞表面結合ＩｇＥへの選択ｈＬＡＡＩＧＥの結合は、骨髄腫ＩｇＥにより感作されたヒトＦｃεＲＩα発現３Ｄ１０細胞を使用して確認した。
【０１３８】
[0153]  ｈＬＡＡＩＧＥのタンパク質配列は、以下のとおりである：
Ｅ５９  ＶＨ：
【０１３９】
【化２３】
2020505334.tif 000024
Ｅ５９  ＶＬ：
【０１４０】
【化２４】
2020505334.tif 000025
Ｅ１４  ＶＨ：
【０１４１】
【化２５】
2020505334.tif 000026
Ｅ１４  ＶＬ：
【０１４２】
【化２６】
2020505334.tif 000027
Ｅ１７  ＶＨ：
【０１４３】
【化２７】
2020505334.tif 000028
Ｅ１７  ＶＬ：
【０１４４】
【化２８】
2020505334.tif 000029
Ｅ２３  ＶＨ：
【０１４５】
【化２９】
2020505334.tif 000030
Ｅ２３  ＶＬ：
【０１４６】
【化３０】
2020505334.tif 000031
Ｓ９１  ＶＨ：
【０１４７】
【化３１】
2020505334.tif 000032
Ｓ９１  ＶＬ：
【０１４８】
【化３２】
2020505334.tif 000033
Ｈ６．２  ＶＨ：
【０１４９】
【化３３】
2020505334.tif 000034
Ｈ６．２  ＶＬ：
【０１５０】
【化３４】
2020505334.tif 000035
[0154]  Biacore法により計測されたヒトＩｇＥに対するｈＬＡＡＩＧＥの結合親和性は、以下である：Ｅ２３＝１．０９×１０−７Ｍ、Ｅ１４＝６．７２×１０−８Ｍ、Ｅ５９＝１．６４×１０−７Ｍ、Ｅ１７＝１．４×１０−７Ｍ、Ｓ９１＝７．４１×１０−６Ｍ、及びＨ６．２約５×１０−５ＭのＫｄ。
【０１５１】
[0155]  したがって、一部の実施形態において、本発明によるｈＬＡＡＩＧＥは、
【０１５２】
【化３５】
2020505334.tif 000036
、
【０１５３】
【化３６】
2020505334.tif 000037
、又は
【０１５４】
【化３７】
2020505334.tif 000038
を含むＶＨ鎖を有する。
【０１５５】
[0156]  実施例２
活性及び効力アッセイ
[0157]  所与のｈＬＡＡＩＧＥの活性及び治療効力は、１）ピーナッツ及びネコアレルギー対象の血液好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）の阻害；２）ｈＦｃεＲＩαトランスジェニックマウスモデルにおけるピーナッツアレルギーＩｇＥ媒介受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）の阻害；及び３）ｈＦｃεＲＩαトランスジェニックマウスモデルにおけるダンシル−ＩｇＥ媒介全身性アナフィラキシーの阻害により決定した。
【０１５６】
[0158]  １）好塩基球活性化試験アッセイ
[0159]  好塩基球活性化試験（ＢＡＴ）アッセイを実施して種々の濃度における好塩基球活性化を誘導するそれぞれのヒト化ｍＡｂの能力を決定した。所与のｈＬＡＡＩＧＥが好塩基球を活性化させるか否かを試験するため、ネコ又はピーナッツアレルギー対象からの血液（１００μｌ）を、１〜５０μｇ／ｍｌの範囲の変動量の所与のｈＬＡＡＩＧＥと３７℃において２０分間インキュベートした。活性化反応をＥＤＴＡにより停止させ、次いで細胞を氷上でＣＤ１２３−ＦＩＴＣ／ＣＤ６３−ＰＥ  ＨＬＡ−Ｄｒ−ＰｅｒＣＰのカクテルにより２０分間染色した。次いで赤血球の溶解を行い、染色細胞をフローサイトメトリーにより分析した。好塩基球集団をＣＤ１２３陽性ＨＬＡ−Ｄｒ陰性集団においてゲーティングした。好塩基球集団におけるＣＤ６３発現を計算及び分析した。
【０１５７】
[0160]  所与のヒト化ｍＡｂがアレルゲン誘発好塩基球活性化を遮断するか否かの決定のため、血液試料を一定で振盪させてヒト化ｍＡｂと３７℃において２４時間及び／又は４８時間インキュベートし、次いでネコアレルゲンＦｅｌ  ｄ１（０．０２〜０．２μｇ／ｍｌ）又はピーナッツアレルゲン（Ａｒａ  ｈ１、２及び６の組合せ、０．１〜１．０μｇ／ｍｌ）を血液中に３７℃における１５分間のインキュベーションの間添加して好塩基球を活性化させた。
【０１５８】
[0161]  ２）受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）アッセイ
[0162]  受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）アッセイを実施してピーナッツ及びネコアレルギーＩｇＥ媒介ＰＣＡを遮断するそれぞれのヒト化ｍＡｂの能力を調査した。ｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスの背中皮膚に、一晩〜４日間の局所感作のためにピーナッツアレルギー対象の血漿から精製されたＩｇＥを皮内注射した（１つのマウス皮膚当たり８〜１０個のスポット）。所与のｈＬＡＡＩＧＥが肥満細胞を活性化させるか否かを試験するため、感作スポットに、種々の量の所与のｈＬＡＡＩＧＥ（１〜１００μｇ／ｍｌの範囲）の局所注射を与え、ＰＢＳ陰性対照；及び陽性対照としてのポリクローナルウサギ抗ヒトＩｇＥ（０．１〜１μｇ／ｍｌ）を用いた。１５分後、１００μｌの２％のエバンスブルー色素を静脈内注射して局所アレルギー反応性を評価した。
【０１５９】
[0163]  所与のｈＬＡＡＩＧＥがアレルゲン媒介ＰＣＡを遮断するか否かを試験するため、ｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスを精製ピーナッツアレルギーＩｇＥ及び組換えダンシル特異的ＩｇＥにより２、１、０．５、及び０．１２５μｇ／ｍｌにおいて背中皮膚上の皮内注射を介して２時間感作し、次いでマウスに所与のｈＬＡＡＩＧＥを体重１グラム当たり２μｇにおいて腹腔内注射し、アイソタイプ対照として同量のヒトＩｇＧ１を用いた。４又は５日後、生理食塩水中で溶解させた１００μｌの２％のエバンスブルー色素（ＥＢＤ）と混合したＡｒａ  ｈ１、２、及び６の組合せ又は粗製ピーナッツ抽出物（ＣＰＥ、１０μｇ）、又はダンシル−ＢＳＡ（１００μｇ）を動物に静脈内チャレンジした。マウスを写真撮影によるＰＣＡ反応の評価のためにアレルゲンチャレンジの３０分後に安楽死させた。マウス皮膚を一晩乾燥させ、注射皮膚区域を切り取り、秤量し、ＥＢＤをホルムアミドにより５５℃において一晩抽出した。溢出ＥＢＤを分光光度計により６２０ｎｍ又は６５０ｎｍのいずれかの波長においてマイクロタイターＥＬＩＳＡリーダーにより定量した。両方の方法からの定量的結果は十分フィットした。それぞれのＰＣＡスポットからのＥＢＤ量を、皮膚組織１ミリグラム当たりとして正規化した。
【０１６０】
[0164]  ３）全身性アナフィラキシーアッセイ
[0165]  ＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスを、合計４０μｇ（１６時間間隔において２０μｇを２回）の組換えダンシル特異的ＩｇＥにより一晩（約２４時間）感作し、次いで所与のｈＬＡＡＩＧＥ又は対照としてのヒトＩｇＧ１アイソタイプを体重１グラム当たり２μｇにおいて注射した。４日後、マウスにダンシル−ＢＳＡ（１００μｇ／マウス）を静脈内チャレンジして全身性アナフィラキシーを誘導した。中核温変化及びアナフィラキシー臨床指数（スコア）を全身性アナフィラキシー反応性の指標として計測した。中核温変化は、ダンシル−ＢＳＡチャレンジ後の最初の１時間、５分毎にモニタリングした。温度変化を比較及び統計分析のためにプロットして全身性アナフィラキシーに対する所与のｈＬＡＡＩＧＥ及び対照ＩｇＧ１の効果を決定した。
【０１６１】
[0166]  実施例３
ｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスからの骨髄由来肥満細胞（ＢＭＭＣ）
[0167]  ０．２２μｍフィルターフラッシング培地（１０％のウシ胎児血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０Ｕ／ｍｌのペニシリン及び５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、５×１０−５Ｍのβ−メルカプトエタノールが補給されたＤＭＥＭ）によりｈＦｃεＲＩα  Ｔｇマウスの大腿骨及び脛骨から骨髄をフラッシュアウトした。回収した骨髄細胞を、１０ｍｌの培養培地（フラッシング培地と１０ｎｇ／ｍｌの組換えマウスＩＬ−３）を有する２つのＴ７５フラスコ中でそれぞれ培養した。３日後、それぞれのフラスコからの懸濁細胞を、新鮮培養培地を有する２つのフラスコ中に移し、拡張した。１週間後、それぞれのフラスコからの懸濁細胞を、約１×１０６個の細胞／ｍｌの細胞密度を維持しながら２〜３つのフラスコ中に拡張した。培養培地の半分を新鮮培地と３〜４日毎に交換し、接着細胞が観察されなくなるまで懸濁細胞を新たなフラスコに移した。６週間後、懸濁細胞を抗マウスＣＤ１１７−ＦＩＴＣ及び抗ヒトｈＦｃεＲＩα−ＰＥにより染色して培養ＢＭＭＣの成熟性を評価した。
【０１６２】
[0168]  実施例４
共焦点顕微鏡観察
[0169]  ＢＭＭＣを１５００ＲＰＭにおいて３分間遠心分離し、上清を慎重に吸引し、細胞ペレットをＰＢＳにより２回洗浄し、次いで１０％の正常マウス血清によりブロッキングし、氷上で３０分間インキュベートし、次いで感作のために希釈ＦＩＴＣ標識骨髄腫ＩｇＥ（ＰＳ  ＩｇＥ）を５μｇ／ｍｌにおいて２時間添加した。洗浄後、ＦＩＴＣ−ＩｇＥ感作ＢＭＭＣ（１×１０６個の細胞／ｍｌ）を、対照ｍＩｇＧ１及びｈＬＡＡＩＧＥとそれぞれ２μｇ／ｍｌにおいて３７℃において２４又は４８時間インキュベートした。ＢＭＭＣを０．５ｍｌの２％のホルムアルデヒドにより３０分間固定した。上記の染色手順を完了した後、チューブを室温（暗所）において２０分間保持した。細胞をＰＢＳにより２回洗浄し、次いで５０μｌの透過化培地を、Alexa 647標識抗ｈＦｃεＲＩαとともに３０分間の室温におけるインキュベーションのために添加した。次いで、洗浄した細胞を０．５ｍｌの２％のホルムアルデヒドにより固定し、サイトスピンを５００ｒｐｍにおいて５分間使用してポリリジンコートスライドガラスにスピンさせた。スライド上の細胞をＤＡＰＩを有する１滴のprolong gold褪色防止試薬により染色した。スライドを、Leica SP2-1P-FCS共焦点顕微鏡により試験した。
【０１６３】
[0170]  追加の実施形態
[0171]  実施形態１．配列番号１に対して少なくとも約９０％から１００％まで、好ましくは、約９１％から１００％まで、より好ましくは、約９５％から１００％まで、よりさらに好ましくは、約９７％から１００％まで、最も好ましくは、約９９％から１００％までの同一性パーセントを有するＶＨ配列を含む抗体。
【０１６４】
[0172]  実施形態２．ＶＨ配列の一部は、配列番号２に対して約７５％〜約１００％、好ましくは、約８０％〜約１００％、より好ましくは、約９０％〜１００％、よりさらに好ましくは、約９５％〜約１００％、最も好ましくは、約９９％〜１００％の同一性パーセントを有する、実施形態１に記載の抗体。
【０１６５】
[0173]  実施形態３．配列番号４に対して少なくとも約６５％から１００％までの同一性パーセントを有するＶＬ配列の一部をさらに含む、実施形態１又は実施形態２に記載の抗体。
【０１６６】
[0174]  実施形態４．ＶＬ配列の一部の配列同一性は、配列番号４の約６５％〜約７０％である、実施形態１又は実施形態２に記載の抗体。
【０１６７】
[0175]  実施形態５．ＶＬ配列の一部の配列は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６からなる群から選択される、実施形態４に記載の抗体。
【０１６８】
[0176]  実施形態６．モノクローナル抗体である、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の抗体。
【０１６９】
[0177]  実施形態７．ヒト化抗体である、実施形態６に記載の抗体。
【０１７０】
[0178]  実施形態８．約１×１０−５Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、又は約５×１０−５Ｍ〜約７×１０−８Ｍの結合親和性でヒトＩｇＥに結合する、実施形態７に記載の抗体。
【０１７１】
[0179]  実施形態９．Ｅ５９、Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、又はＳ９１である、実施形態１に記載の抗体。
【０１７２】
[0180]  実施形態１０．実施形態１〜９のいずれか１つに記載の１つ以上の抗体を含む組成物。
【０１７３】
[0181]  実施形態１１．実施形態１〜９のいずれか１つに記載の１つ以上の抗体、及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
【０１７４】
[0182]  実施形態１２．対象をＩｇＥ媒介障害について治療する方法であって、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の１つ以上の抗体、実施形態１０に記載の組成物、又は実施形態１１に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む方法。
【０１７５】
[0183]  実施形態１３．ＩｇＥ媒介障害は、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、血管性浮腫、又はアナフィラキシー型過敏症である、実施形態１２に記載の方法。
【０１７６】
[0184]  実施形態１４．対象におけるアレルギー反応を治療又は阻害する方法であって、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の１つ以上の抗体、実施形態１０に記載の組成物、又は実施形態１１に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む方法。
【０１７７】
[0185]  実施形態１５．１つ以上の抗体を治療有効量で前記対象に投与する、実施形態１２〜１４のいずれか１つに記載の方法。
【０１７８】
[0186]  実施形態１６．ＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７）を含むＶＨ鎖を含むＶＨ鎖、並びにＬＱＡＥＤ（配列番号１１）とＡＡＰＳＶ（配列番号１２）、ＧＴＫＬ（配列番号１３）、及びＲＦＳＧＳ（配列番号１４）から選択される少なくとも１つの配列とを含むＶＬ鎖を含み、好ましくは、ＶＬ配列は、ＬＱＡＥＤ（配列番号１１）と（ａ）ＡＡＰＳＶ（配列番号１２）又は（ｂ）ＲＦＳＧＳ（配列番号１４）及びＧＴＫＬ（配列番号１３）とを含むモノクローナル抗体。
【０１７９】
[0187]  実施形態１７．ＶＨ鎖は、
【０１８０】
【化３８】
2020505334.tif 000039
であり、及び／又はＶＬ鎖は、
【０１８１】
【化３９】
2020505334.tif 000040
であり、それぞれのＸは、独立して、任意のアミノ酸である、実施形態１６に記載のモノクローナル抗体。
【０１８２】
[0188]  実施形態１８．ＶＬ鎖は、以下の配列ＲＦＳＧＳＸ２２ＳＧ（配列番号２４）、ＬＴＸ２３ＳＸ２４ＬＱＡＥＤＸ２５４ＡＸ２６ＹＹ（配列番号２５）、ＦＧＸ２７ＧＴＫＬ（配列番号２６）、ＡＡＰＳＶＸ２８Ｘ２９ＦＰＰＳＸ３０ＥＸ３ＩＬ（配列番号２７）、ＡＸ３２Ｘ３３ＶＣＬＸ３４Ｘ３５Ｘ３６ＦＹＰ（配列番号２８）、ＨＸ３７Ｘ３８ＹＸ３９ＣＸ４０ＶＴＨＸ４１Ｇ（配列番号２９）、ＰＸ４２ＳＸ４３Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４５ＧＸ４７Ｘ４８Ｘ４９ＴＩＸ５０Ｃ（配列番号３０）、ＱＸ５１Ｘ５２ＰＧＸ５３Ｘ５４ＰＫＬＸ５５ＩＹ（配列番号３１）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ２２〜Ｘ５５は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である、実施形態１６に記載のモノクローナル抗体。
【０１８３】
[0189]  実施形態１９．ＶＬ鎖は、以下の配列ＲＦＳＧＳＸ２２ＳＧ（配列番号２４）、ＬＴＸ２３ＳＸ２４ＬＱＡＥＤＸ２５４ＡＸ２６ＹＹ（配列番号２５）、ＦＧＸ２７ＧＴＫＬ（配列番号２６）、ＡＡＰＳＶＸ２８Ｘ２９ＦＰＰＳＸ３０ＥＸ３ＩＬ（配列番号２７）、ＡＸ３２Ｘ３３ＶＣＬＸ３４Ｘ３５Ｘ３６ＦＹＰ（配列番号２８）、ＨＸ３７Ｘ３８ＹＸ３９ＣＸ４０ＶＴＨＸ４１Ｇ（配列番号２９）、ＰＸ４２ＳＸ４３Ｘ４４Ｘ４５ＳＸ４５ＧＸ４７Ｘ４８Ｘ４９ＴＩＸ５０Ｃ（配列番号３０）、ＱＸ５１Ｘ５２ＰＧＸ５３Ｘ５４ＰＫＬＸ５５ＩＹ（配列番号３１）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ２２は、Ｇ又はＫであり、Ｘ２３は、Ｉ又はＶであり、Ｘ２４は、Ｇ又はＳであり、Ｘ２５は、Ｅ又はＶであり、Ｘ２６は、Ｄ又はＶであり、Ｘ２７は、Ｇ、Ｓ、又はＱであり、Ｘ２８は、Ｆ又はＴであり、Ｘ２９は、Ｉ又はＬであり、Ｘ３０は、Ｄ又はＳであり、Ｘ３１は、Ｅ又はＱであり、Ｘ３２は、Ｓ又はＴであり、Ｘ３３は、Ｌ又はＶであり、Ｘ３４は、Ｉ又はＬであり、Ｘ３５は、Ｎ又はＳであり、Ｘ３６は、Ｄ又はＮであり、Ｘ３７は、Ｋ又はＲであり、Ｘ３８は、Ｓ又はＶであり、Ｘ３９は、Ａ又はＳであり、Ｘ４０は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４１は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４２は、Ａ、Ｄ、又はＰであり、Ｘ４３は、Ａ、Ｌ、又はＶであり、Ｘ４４は、Ａ又はＳであり、Ｘ４５は、Ｇ又はＶであり、Ｘ４６は、Ｌ又はＰであり、Ｘ４７は、Ｅ又はＱであり、Ｘ４８は、Ｒ又はＳであり、Ｘ４９は、Ａ、Ｉ、又はＶであり、Ｘ５０は、Ｎ又はＳであり、Ｘ５１は、Ｈ又はＱ、好ましくは、Ｑであり、Ｘ５２は、Ｈ又はＫであり、Ｘ５３は、Ｋ又はＱであり、Ｘ５４は、Ａ又はＰであり、Ｘ５５は、Ｌ又はＭである、実施形態１６に記載のモノクローナル抗体。
【０１８４】
[0190]  実施形態２０．ＶＬ鎖は、配列番号４に対して少なくとも約６５％から１００％までの同一性パーセントを有する配列を含む、実施形態１６に記載のモノクローナル抗体。
【０１８５】
[0191]  実施形態２１．ＶＬ鎖は、配列番号４、配列番号５、及び配列番号６からなる群から選択される配列を含む、実施形態１６に記載のモノクローナル抗体。
【０１８６】
[0192]  実施形態２２．ＶＬ鎖は、配列番号３２、配列番号６５、又は配列番号６７を含む、実施形態１６に記載のモノクローナル抗体。
【０１８７】
[0193]  実施形態２３．ＶＨ鎖は、ＷＶＲＱＡＰＧ（配列番号８）、ＧＬＥＷ（配列番号９）、及び／又はＶＴＶＳＳＡ（配列番号１０）を含む、実施形態１６〜２２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１８８】
[0194]  実施形態２４．ＶＨ鎖は、以下の配列ＶＱＬＸ１ＱＳＧ（配列番号１７）、ＰＧＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＣＸ６ＡＳＧＸ７ＴＦ（配列番号１８）、ＷＶＲＱＡＰＧＸ８ＧＬＥＷ（配列番号１９）、ＷＧＸ９ＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳＡ（配列番号２０）、ＳＬＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２１）、及びＲＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９ＳＸ２０Ｘ２１Ｔ（配列番号２２）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ１〜Ｘ２１は、それぞれ独立して、任意のアミノ酸である、実施形態１６〜２２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１８９】
[0195]  実施形態２５．ＶＨ鎖は、以下の配列ＶＱＬＸ１ＱＳＧ（配列番号１７）、ＰＧＸ２ＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＳＣＸ６ＡＳＧＸ７ＴＦ（配列番号１８）、ＷＶＲＱＡＰＧＸ８ＧＬＥＷ（配列番号１９）、ＷＧＸ９ＧＴＸ１０ＶＴＶＳＳＡ（配列番号２０）、ＳＬＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＤＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２１）、及びＲＸ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８ＤＸ１９ＳＸ２０Ｘ２１Ｔ（配列番号２２）のいずれか１つ以上を含み、Ｘ１は、Ｖ又はＧ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ２は、Ａ又はＲ、好ましくは、Ａであり、Ｘ３は、Ｌ又はＶ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ４は、Ｋ又はＲ、好ましくは、Ｋであり、Ｘ５は、Ｌ又はＶ、好ましくは、Ｖであり、Ｘ６は、Ａ又はＫ、好ましくは、Ｋであり、Ｘ７は、Ｆ又はＹ、好ましくは、Ｙであり、Ｘ８は、Ｋ又はＱ、好ましくは、Ｑであり、Ｘ９は、Ｒ又はＱであり、Ｘ１０は、Ｌ又はＴであり、Ｘ１１は、Ｔ、Ｋ、又はＲであり、Ｘ１２は、Ａ又はＳであり、Ｘ１３は、Ｅ又はＤであり、Ｘ１４は、Ｆ又はＶであり、Ｘ１５は、Ｔ又はＶであり、Ｘ１６は、Ｉ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ１７は、Ｓ又はＴであり、Ｘ１８は、Ｌ、Ｒ、又はＴであり、Ｘ１９は、Ｎ又はＴ、好ましくは、Ｔであり、Ｘ２０は、Ｋ、Ｔ、又はＶであり、Ｘ２１は、Ｎ又はＳ、好ましくは、Ｓである、実施形態１６〜２２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９０】
[0196]  実施形態２６．ＶＨ鎖は、配列番号２に対して約７５％〜約１００％、好ましくは、約８０％〜約１００％、より好ましくは、約９０％〜１００％、よりさらに好ましくは、約９５％〜約１００％、最も好ましくは、約９９％〜１００％と同一性パーセントを有する配列を含む、実施形態１６〜２２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９１】
[0197]  実施形態２７．ＶＨ鎖は、配列番号６８、配列番号６９、又は配列番号７０を含む、実施形態１６〜２２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９２】
[0198]  実施形態２８．ＶＨ鎖は、配列番号１に対して少なくとも約９０％から１００％まで、好ましくは、約９１％から１００％まで、より好ましくは、約９５％から１００％まで、よりさらに好ましくは、約９７％から１００％まで、最も好ましくは、約９９％から１００％までの同一性パーセントを有する配列を含む、実施形態１６〜２２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９３】
[0199]  実施形態２９．ＶＨ鎖は、配列番号２３の少なくとも１０、２０、３０、４０、又は５０個の連続アミノ酸残基を含む、実施形態１６〜２８のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９４】
[0200]  実施形態３０．ＶＨ鎖は、配列番号２３を含む、実施形態１６〜２８のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９５】
[0201]  実施形態３１．モノクローナル抗体により認識されるＩｇＥエピトープは、配列番号３３の少なくとも１０個の連続アミノ酸残基を含む、実施形態１６〜３０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９６】
[0202]  実施形態３２．モノクローナル抗体により認識されるＩｇＥエピトープは、以下の配列：配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、及び配列番号４５の１つ以上を含み、本質的にそれからなり、又はそれからなる、実施形態１６〜３０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９７】
[0203]  実施形態３３．モノクローナル抗体により認識されるＩｇＥエピトープは、以下の配列：配列番号３５、配列番号３９、配列番号４２、及び配列番号３６の少なくとも１つを含む、実施形態１６〜３０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９８】
[0204]  実施形態３４．ヒト化抗体である、実施形態１６〜３３のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０１９９】
[0205]  実施形態３５．ヒトＦｃεＲＩ又は高親和性ＩｇＥ受容体に結合しているヒトＩｇＥに結合する、実施形態１６〜３４のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０２００】
[0206]  実施形態３６．約１×１０−５Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、約１×１０−６Ｍ〜約１×１０−９ＭのＫｄ、又は約５×１０−５〜約７×１０−８ＭのＫｄの結合親和性でヒトＩｇＥに結合する、実施形態１６〜３４のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０２０１】
[0207]  実施形態３７．Ｅ５９、Ｅ１４、Ｅ１７、Ｅ２３、Ｓ９１、又はＨ６．２である、実施形態１６〜３６のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
【０２０２】
[0208]  実施形態３８．実施形態１６〜３７のいずれか１つに記載の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥを含む組成物。
【０２０３】
[0209]  実施形態３９．薬学的に許容可能な担体をさらに含む、実施形態３８に記載の組成物。
【０２０４】
[0210]  実施形態４０．対象をＩｇＥ媒介障害について治療する方法であって、実施形態１６〜３７のいずれか１つに記載の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又は実施形態３８若しくは実施形態３９に記載の組成物を対象に投与することを含む方法。
【０２０５】
[0211]  実施形態４１．ＩｇＥ媒介障害は、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、血管性浮腫、又はアナフィラキシー型過敏症である、実施形態４０に記載の方法。
【０２０６】
[0212]  実施形態４２．対象におけるアレルギー反応を治療又は阻害する方法であって、実施形態１６〜３７のいずれか１つに記載の１つ以上のｈＬＡＡＩＧＥ又は実施形態３８若しくは実施形態３９に記載の組成物を対象に投与することを含む方法。
【０２０７】
[0213]  実施形態４３．１つ以上の抗体を治療有効量で対象に投与する、実施形態４０〜４２のいずれか１つに記載の方法。
【０２０８】
[0214]  本発明の開示を理解し、又は完結させるために必要な程度に、本明細書に挙げられる全ての刊行物、特許、及び特許出願は、それぞれが個々に本明細書に援用されるのと同程度に参照により本明細書に明示的に援用される。
【０２０９】
[0215]  このように本発明の例示的な実施形態を記載してきたが、本開示内のものは例示にすぎないこと、並びに種々の他の代替、適合、及び改変を本発明の範囲内で行うことができることが当業者により留意されるべきである。したがって、本発明は、本明細書に説明される具体的な実施形態に限定されるものではなく、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図１】
2020505334.tif 000043
【図２】
2020505334.tif 000044
【図３】
2020505334.tif 000045
【図４】
2020505334.tif 000046
【図５】
2020505334.tif 000047
【図６】
2020505334.tif 000048
【図７】
2020505334.tif 000049
【図８】
2020505334.tif 000050
【図９】
2020505334.tif 000051
【図１０】
2020505334.tif 000052
【図１１】
2020505334.tif 000053
【図１２】
2020505334.tif 000054
【図１３】
2020505334.tif 000055
【図１４】
2020505334.tif 000056
【図１５】
2020505334.tif 000057
【図１６】
2020505334.tif 000058
【図１７】
2020505334.tif 000059
【図１８】
2020505334.tif 000060
【図１９】
2020505334.tif 000061
【図２０】
2020505334.tif 000062
【図２１】
2020505334.tif 000063
【図２２】
2020505334.tif 000064
【図２３】
2020505334.tif 000065
【図２４】
2020505334.tif 000066
【図２５】
2020505334.tif 000067
【図２６−１】
2020505334.tif 000068
【図２６−２】
2020505334.tif 000069
【図２７】
2020505334.tif 000070
【配列表】
2020505334000001.app
【国際調査報告】
2020505334.tif 000071
2020505334.tif 000072
2020505334.tif 000073
2020505334.tif 000074