(57)【要約】  本発明は、前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
前頭側頭障害の治療に使用するための１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる、生物活性剤。
【請求項２】
前記前頭側頭障害が前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）である、請求項１に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項３】
前記前頭側頭葉変性がＦＴＬＤ−ＴＤＰである、請求項２に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項４】
前記前頭側頭障害が前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項５】
前記前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）が、行動異型ＦＴＤ（ＦＴＤ）、ピック病（ＰｉＤ）、運動ニューロン疾患関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−ＭＮＤ）、ユビキチン陽性封入体関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−Ｕ）、突然変異ＴＤＰ−４３関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−ＴＤＰＡ）、およびタウ陽性封入体関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−タウ）からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項６】
前記前頭側頭障害が、前記ＶＣＰ遺伝子内の突然変異に関連している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項７】
前記前頭側頭障害が、Ｒ９３Ｃ、Ｒ９５Ｇ、Ｒ９５Ｃ、Ｒ９５Ｈ、Ｉ１２６Ｆ、Ｐ１３７Ｌ、Ｒ１５５Ｓ、Ｒ１５５Ｃ、Ｒ１５５Ｈ、Ｒ１５５Ｐ、Ｒ１５５Ｌ、Ｇ１５７Ｒ、Ｒ１５９Ｃ、Ｒ１５９Ｈ、Ｒ１５９Ｇ、Ｒ１９１Ｑ、Ｌ１９８Ｗ、Ａ２３２Ｅ、Ｔ２６２Ａ、Ｎ３８７Ｈ、Ａ４３９Ｐ、Ａ４３９Ｓ、およびＤ５９２Ｎからなる群から選択される前記ＶＣＰ遺伝子内の突然変異に関連している、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項８】
前記前頭側頭障害が、ＴＤＰ−４３の誤局在化、細胞質ユビキチン凝集、運動単位の喪失、ｐ−タウ病変、ならびにｐ６２および／もしくはＬＣ３の発現、または細胞質凝集のうちの１つ以上に関連する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項９】
前記前頭側頭障害が、ストレス顆粒の形成に関連している、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１０】
前記前頭側頭障害が、早期発症ＰＤＢ（骨パジェット病）および前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）（ＩＢＭＰＦＤ）である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１１】
前記前頭側頭障害が、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１２】
前記前頭側頭障害が、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）を伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１３】
前記前頭側頭障害が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＩＢＭＰＦＤ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１４】
前記前頭側頭障害が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、散発性ＡＬＳ−ＦＴＤ、家族性ＡＬＳ−ＦＴＤ、およびｍＶＣＰに関連する家族性ＡＬＳ（ＶＣＰ−ｆＡＬＳ）からなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１５】
前記生物活性剤が、細胞質ユビキチン凝集、ＴＤＰ−４３の誤局在化、運動単位の喪失、ｐ−タウ病変、およびｐ６２および／もしくはＬＣ３の発現、または細胞質凝集、およびストレス顆粒の形成のうちの１つ以上を低減する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１６】
前記生物活性剤が、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の前記細胞内濃度および／または活性を増加させる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１７】
前記生物活性剤がＨｓｐ７０の誘導因子である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１８】
前記生物活性剤は、Ｈｓｐ７０遺伝子の発現を増幅することによりＨｓｐ７０の前記細胞内濃度を増加させることができる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項１９】
前記生物活性剤は、Ｈｓｐ７０遺伝子の発現を増幅することによりＨｓｐ７０の前記細胞内濃度を増加させることができ、前記生物活性剤が、ヒドロキシルアミン誘導体である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２０】
前記生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子などのＨｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の小分子誘導因子である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２１】
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリド（アリモクロモール）、その立体異性体およびその酸付加塩から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２２】
ａ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドのラセミ体、
ｂ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドの光学活性立体異性体、
ｃ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドのエナンチオマー、
ｄ．（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドおよび（−）−（Ｓ）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリド、
ｅ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドの酸付加塩、
ｆ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドシトラート（ＢＲＸ−３４５）、およびＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドマレアート、ならびに
ｇ．（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドシトラート；（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドシトラート；（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドマレアート；および（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドマレアート
からなる群から選択される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２３】
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドアミド、ジヒドロクロリド（ＢＧＰ−１５）、その立体異性体およびその酸付加塩である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２４】
５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジン（イロキサナジン）、その立体異性体およびその酸付加塩から選択される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２５】
ａ．５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンのラセミ体、
ｂ．５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンの光学活性立体異性体、
ｃ．５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンのエナンチオマー、
ｄ．（＋）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンおよび（−）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジン、
ｅ．５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンの酸付加塩、
ｆ．５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンシトラート、および５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンマレアート、および
ｇ．（＋）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンシトラート、（−）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンシトラート；（＋）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンマレアート；および（−）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンマレアート
からなる群から選択される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２６】
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリド（ビモクロモール）その立体異性体およびその酸付加塩から選択される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２７】
ａ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドのラセミ体、
ｂ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドの光学活性立体異性体、
ｃ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドのエナンチオマー、
ｄ．（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドおよび（−）−（Ｓ）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリド、
ｅ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドの酸付加塩、
ｆ．Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドシトラート、およびＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドマレアート、ならびに
ｇ．（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドシトラート；（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドシトラート；（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドマレアート；および（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドマレアート
からなる群から選択される、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２８】
アルキルリゾリン脂質エデルフォシン（ＥＴ−１８−ＯＣＨ３または１−オクタデシル−２−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン）などの膜相互作用化合物；セレコキシブおよびロフェコキシブなどのシクロオキシゲナーゼ１／２阻害剤、ならびにアセチルサリチル酸、サリチル酸ナトリウムおよびインドメタシンなどのＮＳＡＩＤなどの抗炎症薬；デキサメタゾン；プロスタグランジンＰＧＡ１、ＰＧｊ２および２−シクロペンテン−１−オン；ペルオキシダーゼ増殖因子活性化受容体ガンマアゴニスト；ビンクリスチンおよびパクリタキセルなどのチューブリン相互作用性抗癌剤；インスリン増感剤ピオグリタゾン；カルボプラチン、ドキソルビシン、フルダラビン、イホスファミド、およびシタラビンなどの抗腫瘍剤；ゲルダナマイシン、１７−ＡＡＧ、１７−ＤＭＡＧ、ラディシコール、ハービマイシン−Ａおよびアラキドン酸などのＨｓｐ９０阻害剤；ＭＧ１３２、ラクタシスチン、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、オプロゾミブなどのプロテアソーム阻害剤；ＤＣＩＣ、ＴＬＣＫ、およびＴＰＣＫなどのセリンプロテアーゼ阻害剤；ＳＡＨＡ／ボリノスタット、ベリノスタット／ＰＸＤ１０１、ＬＢ−２０５、ＬＢＨ５８９（パノビノスタット）、ＦＫ−２２８、ＣＩ−９９４、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）およびＰＣＩ−３４０５１などのヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＨＤＡＣｉ）；ゲラニルゲラニルアセトン（ＧＧＡ）、レバミピド、カルベノキソロンおよびポラプレジンク（亜鉛Ｌ−カルノシン）などの抗潰瘍薬；重金属（亜鉛およびスズ）；コカイン；ニコチン；アルコール；アルファアドレナリン作動薬；シクロペンテノンプロスタノイド；Ｌ型Ｃａ＋＋チャネル遮断薬（ラシジピンなどのリアノジン受容体も阻害するＬ型Ｃａ＋＋チャネル遮断薬など）；ＤＨＢＰ（１，１’−ジヘプチル−４，４’−ビピリジウムなどのリアノジン受容体拮抗薬；ならびにペオニフロリン、グリチルリチン、セラストロール、ジヒドロセラストロール、二酢酸ジヒドロセラストロール、クルクミンなどの漢方薬、亜致死温熱療法、およびベンジルアルコール、ヘプタノール、ＡＬ７２１、ドコサヘキサエン酸、脂肪族アルコール、オレイルアルコール、ジメチルアミノエタノール、Ａ２Ｃ、ファルネソールおよび麻酔薬（リドカイン、ロピバカイン、ブピバカインおよびメピバカイン）などの膜流動化剤からなる群から選択される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項２９】
Ｈｓｐ７０タンパク質、またはその機能的断片もしくは多様体である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項３０】
前記Ｈｓｐ７０は、ＨＳＰＡ１Ａ（配列番号１および配列番号２）およびＨＳＰＡ１Ｂ（配列番号４および配列番号５）、組換えＨｓｐ７０（ｒＨｓｐ７０）、またはその機能的断片もしくは機能的多様体（Ｈｓｐ７０の天然多様体、またはＨｓｐ７０の天然多様体の断片など）から選択される、請求項２８に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項３１】
Ｈｓｐ７０の前記機能的断片または多様体は、
ｉ．細胞質ユビキチン凝集を減少させること、
ｉｉ．ＴＤＰ−４３の誤局在化を減少させること、
ｉｉｉ．運動単位の喪失を減少させること、
ｉｖ．Ｔｉａ１、ＦＭＲＰ、およびＧ３ＢＰなどのストレス顆粒マーカーを減少させることなど、ストレス顆粒の形成を減少させること、
ｖ．ｐ−タウ陽性病変を減少させること、ならびに
ｖｉ．Ｐ６２および／もしくはＬＣ３の発現または細胞質凝集を減少させること
のうちの１つ以上の能力を保持する、請求項２９に記載の使用のための生物活性剤。
【請求項３２】
前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤、ならびに任意により１つ以上の薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物などの組成物。
【請求項３３】
前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤、ならびに１つ以上のさらなる活性成分を別々にまたは一緒に含む、医薬組成物などの組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、前頭側頭型認知症などの前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
熱ショックタンパク質は、タンパク質の立体配座の再構成が起こる細胞のすべての区画内に見られる。熱ショックタンパク質は、クライアントタンパク質を適切な折り畳み状態に保つのに役立つため、一般に分子シャペロンとも呼ばれる。タンパク質合成は、細胞内の折り畳まれていないペプチドの主な供給源であるが、高温、またはタンパク質を構造的に不安定にし、それによりアンフォールディングおよび凝集が起こしやすくなる他のストレス刺激による細胞への課題は、熱ショックタンパク質の産生の増加を伴う特定の細胞応答を受けることである。この応答は、原核生物から真核生物までのあらゆる細胞型において観察される現象であり、熱ショックまたはストレス応答と呼ばれる。この応答によって誘導されるタンパク質は、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）として公知であり、その中にはいくつかのファミリーが存在する。
【０００３】
ＨＳＰファミリーの主な例は、Ｈｓｐ７０タンパク質である。このファミリーは近年、分子シャペロンとしての役割を果たすのみでなく、最も顕著にはその抗アポトーシス機能、免疫内の機能、Ｈｓｐ７０の上方制御に対する癌細胞の明らかな依存性を介して、細胞の恒常性の他の側面にも関与している。さらに、Ｈｓｐ７０は、リソソームの完全性を保護する役割を担い得る。
【０００４】
ＨＳＰ遺伝子発現およびタンパク質発現は、ＨＳＰ誘導因子によって増幅され得る。Ｈｓｐ７０などの熱ショック応答の小分子誘導因子の例としては、ビモクロモール、アリモクロモール、イロキサナジンおよびＢＧＰ−１５が挙げられる。
【０００５】
前頭側頭障害という用語は、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）と総称される根本的な脳疾患によって引き起こされる行動および思考の変化を指す。ＦＴＬＤは、単一の脳疾患ではなく、神経変性疾患のファミリーであり、そのいずれもが前頭側頭障害を引き起こし得る。一方、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、考えられるいくつかの変化形態のうちの１つであり、より正確には行動異型前頭側頭型認知症（ｂｖＦＴＤ）と呼ばれる場合がある。
【０００６】
認知症の結果、思考能力が著しく失われ、個人の日常活動を行う能力を妨げる。認知症の全症例のうちの推定１０％は、ＦＴＬＤにより引き起こされ、６５歳未満の場合には、アルツハイマー病と同じくらい一般的であり得る。
【０００７】
ＦＴＬＤの主な組織学的サブタイプは、ユビキチンおよびＴＤＰ−４３陽性、タウ陰性、ＦＵＳ（肉腫内で融合／肉腫内で転座）陰性封入体を特徴とするＦＴＬＤ−ＴＤＰ（またはＦＴＬＤ−Ｕ）である。
【０００８】
バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の突然変異は、骨パジェット病（ＰＤＢ）および前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）またはＩＢＭＰＦＤに関連する封入体ミオパチー（ＩＢＭ）を含む多系統障害を引き起こす。ＩＢＭＰＦＤは、多系統障害であるが、筋肉の衰弱は、患者の半数以上で提示される症状であり、３０％において孤立した症状である。疾患の全範囲の患者は、罹患者の推定１２％を占めており、このため、神経筋クリニックにおいてＩＢＭＰＦＤを検討および認識することが重要である。筋障害の特徴に加えて、液胞の変化およびフィラメント状封入体（ｔｕｂｕｌｏｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ）が患者の部分集合に見られる。最も一貫している所見は、ＶＣＰ、ユビキチンおよびＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ−４３）陽性封入体である。
【０００９】
ＶＣＰ遺伝子の突然変異は、家族性筋萎縮性側索硬化症（ｆＡＬＳ）症例のうちの１％〜２％の原因であると報告されており、散発性ＡＬＳ−ＦＴＤを引き起こす可能性がある。
【００１０】
ＲＮＡ顆粒は、タンパク質−タンパク質間およびタンパク質−ＲＮＡ間の相互作用によって凝集する、顕微鏡で見ることができる細胞構造である。ＲＮＡ顆粒の形成は、ＲＮＡおよびマルチドメインタンパク質の多様性、ならびにタンパク質とプリオン様／低複雑性ドメイン（例えば、ＦＵＳおよびＴＤＰ−４３）との間の低親和性相互作用に依存する。これらの構造のクラスとしては、核内の核小体、カハール体、核スペックルおよびパラスペックル、ならびに細胞質内のＰ体およびストレス顆粒が挙げられる。
【００１１】
他のＲＮＡ顆粒とは異なり、細胞質ストレス顆粒は構成的には存在しない。代わりに、それらの形成は、熱ショックまたは酸化ストレスなどの細胞ストレスによって誘導され、摂動が収まると分解する。特に、形態学的に類似している細胞質封入体が、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、および多くの場合、内因性ストレス顆粒との組成的重複を呈する他の加齢性神経変性疾患の患者のニューロンで観察される（１５、１６）。
【００１２】
前頭側頭型認知症の症状は、急速に、かつ安定した速度で進行する。現在、前頭側頭型認知症を予防、停止、または逆転させる治療法は存在しない。
【００１３】
国際公開第２００９／１５５９３６号には、リソソーム蓄積症を治療するためのＨｓｐ７０およびその誘導因子を開示している。国際公開第２００５／０４１９６５号には、ＡＬＳなどの神経変性疾患を治療するための熱ショックタンパク質誘導因子アリモクロモールの使用を開示している。
【発明の概要】
【００１４】
本発明者らは、突然変異ＶＣＰ（ｍＶＣＰ）マウスが、変性筋病理学のみでなく、脊髄の運動ニューロン（ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ）（運動ニューロン（ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ））の喪失（ＡＬＳ表現型）および脳内の異常ＴＤＰ−４３、ユビキチン、ｐ−タウ、ｐ６２およびＬＣ３（ＦＴＤ表現型）を伴うＣＮＳ病理学も示すことを見出した。本明細書に示すように、これらすべての特徴は、Ｈｓｐ７０およびコシャペロンなど熱ショックタンパク質誘導因子により処理したｍＶＣＰマウスにおいて軽減していることがわかる。さらに、ｍＶＣＰマウスの脳は、ストレス顆粒タンパク質マーカーを示し、かつＨｓｐ７０およびコシャペロンなどの熱ショックタンパク質の誘導因子により処理することで、ストレス顆粒タンパク質マーカーの出現が軽減することが本明細書に示されている。
【００１５】
したがって、これは、前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤を提供するための一態様である。
【００１６】
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の細胞内濃度および／または活性を増加させ、すなわち、アリモクロモール、イロキサナジン、ビモクロモール、ＢＧＰ−１５からなる群から選択される誘導因子などのＨｓｐ７０の小分子誘導因子などのＨｓｐ７０の誘導因子、それらの立体異性体およびそれらの酸付加塩である。
【００１７】
一実施形態では、前頭側頭障害は、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、およびＦＴＤ、ＰＤＢおよびＡＬＳを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）からなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】Ａ〜Ｃ）ｗｔＶＣＰ、ｍＶＣＰ、およびアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスのＥＤＬ筋肉で動員された機能的運動単位の典型的な痕跡を示す図である。Ｄ）棒グラフは、各群の運動単位の平均率を示す。ＷＴ＝非トランスジェニック対照。Ｅ）棒グラフは、麻酔されたマウスでのＥＤＬ筋肉により生じた最大の強縮力を示す。ｎ＝１０動物／群；＊＝Ｐ＜０．０５。
【図２】Ａ〜Ｃ）Ｎｉｓｓｌ（ガロシアニン）染色した脊髄断面を示す画像であり、坐骨神経のプール運動ニューロンを丸で囲んでいる。Ｄ）各実験群のマウスの平均運動ニューロン生存率（ＷＴ％）を示す棒グラフである。ＷＴ＝非トランスジェニック対照（ｎ＝５動物／群）；＊＝Ｐ＜０．０００１。Ｅ）各群のマウスの脊髄の坐骨プールからの運動ニューロンのサイズ分布を示すヒストグラムである。
【図３】ＷＴ非トランスジェニックマウス、突然変異ＶＣＰ（ｍＶＣＰ）マウス、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの坐骨プールを示し、ＴＤＰ−４３を免疫染色した、脊髄の前角の切片（緑）を示す図である。上パネル：脊髄切片のＴＤＰ−４３免疫反応性は、ＷＴ対照では核標識、ｍＶＣＰ脊髄では核および細胞質標識、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの脊髄では細胞質標識の減少のみを示している。下パネル：ＴＤＰ−４３免疫反応性（緑）および核のＤＡＰＩ標識（青）の共染色を示す対応する画像である。
【図４−１】Ａ）ＷＴ非トランスジェニックマウス、突然変異ＶＣＰマウス、およびアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスから採取した脳の皮質領域の切片を示す図である。上パネル：ＴＤＰ−４３を免疫染色した切片（緑）。下パネル：ＴＤＰ−４３免疫反応性（緑）および核標識ＤＡＰＩ（青）で共染色した切片。スケールバー＝２０μｍ。ＴＤＰ−４３免疫反応性は、ＷＴマウスの脳では、核標識、ｍＶＣＰマウスの切片では、核および細胞質の標識、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの切片では、細胞質染色の減少のみを示している。Ｂ）ｍＶＣＰマウスの脳切片におけるＴＤＰ−４３免疫反応性の高倍率画像である、ＴＤＰ−４３の異常な核クリアランスを示している。
【図４−２】Ｃ）ユビキチン（上パネル；赤）およびｐ−Ｔａｕ（下パネル；赤）を免疫染色したＷＴ非トランスジェニックマウス、突然変異ＶＣＰマウス、およびアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウス由来の脳の皮質領域の切片を示す図である。白い矢印は、ｍＶＣＰマウスの皮質の大きい細胞外病変のリン酸化タウを指し示している。ＤＡＰＩにより、核を標識している（青）／スケールバー＝１０μｍ。上パネル：脳切片内のユビキチン免疫反応性は、ＷＴ対照マウスの切片では、陽性ユビキチン標識を示さず、ｍＶＣＰマウスの切片では、細胞質ユビキチン陽性凝集体を示すが、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの切片では、ユビキチン染色はほとんどない。ＤＡＰＩにより、核を標識している。下パネル：ベータＩＩＩチューブリンにより神経細胞を標識する。ＷＴ脳切片では、細胞内、主に核内でｐ−タウ免疫染色が観察される。ｍＶＣＰマウスでは、神経細胞に囲まれたｐ−タウ陽性病変が検出された。アリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスでは、Ｐ−ｔａｕ染色はＷＴ対照の染色とほぼ同じであった。
【図５−１】ｗｔ−ＶＣＰ対照マウス、未処理ｍＶＣＰおよびアリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスの脊髄切片の免疫染色を示す図である。Ａ）ユビキチンの免疫染色（緑）および核マーカーＤＡＰＩの共染色（青）では、細胞質凝集体は、ｍＶＣＰマウスの切片のニューロンでは明らかになったが、ｗｔＶＣＰニューロンまたはアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスでは認められなかった。Ｂ）ｐ６２の脊髄切片の免疫染色およびミエリン（赤）の共染色により、以下が明らかになった；ｉ）ｗｔ−ＶＣＰマウスの切片では、ｐ６２染色がある場合であってもわずかであった。ｉｉ）ミエリン（赤）と共局在するｍＶＣＰ脊髄でのｐ６２の発現が増加していた。ｉｉｉ）アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの脊髄でのｐ６２発現のパターンは、対照マウスで観察されたパターンと類似していた。
【図５−２】ｗｔ−ＶＣＰ対照マウス、未処理ｍＶＣＰおよびアリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスの脊髄切片の免疫染色を示す図である。Ｃ）（ｉ）ｐ６２のｍＶＣＰマウスの脊髄の免疫染色は、白質でのｐ６２の発現および運動ニューロンでのｐ６２陽性凝集体の特定の増加を示す拡大図である。ｉｉ）ｍＶＣＰマウスの脊髄白質の高倍率画像は、ミエリン構造の破壊およびｐ６２発現の増加を示す図である。Ｄ）ｉ）ｗｔ−ＶＣＰマウス、ｉｉ）ｍＶＣＰマウス、ｉｉｉ）アリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスの脊髄切片でのＬＣ３の免疫染色は、ｗｔＶＣＰまたはアリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスで観察されなかったｍＶＣＰ脊髄の白質でのＬＣ３の発現の増加を示している。
【図６】ＷＴ非トランスジェニックマウス、突然変異ＶＣＰマウス、およびアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの脳の皮質領域の切片を示す図である。上パネル：切片は、ユビキチンを免疫染色し（赤）、核マーカーＤＡＰＩで共染色した（青）。ｗｔ−ＶＣＰマウスの脳切片では、ユビキチン免疫反応性はなかったが、ｍＶＣＰマウスの切片では、細胞質ユビキチン陽性凝集体が観察された。アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの切片では、ユビキチン染色がある場合であってもわずかであった。中央パネル：切片は、リン酸化タウを免疫染色し（ｐ−タウ；赤）、神経マーカーのベータＩＩＩチューブリンを共染色した（緑）。ｗｔ−ＶＣＰ対照マウスの切片では、主に核内に位置するニューロン内でｐ−タウ免疫染色が観察された。ｍＶＣＰマウスでは、神経細胞に囲まれたｐ−タウ陽性病変が検出された。ｍＶＣＰマウスの皮質のリン酸化タウ陽性の大きい細胞外病変は、白い矢印により指し示されている。アリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスでは、ｐ−タウ染色のパターンは、ＷＴ対照のパターンとほぼ同じであった。下パネル：リン酸化タウを染色し（赤）、かつ（ｉ）神経マーカーβ−ＩＩＩチューブリン（緑）、（ｉｉ）ミクログリアマーカーＩｂａ１（緑）、またはｉｉｉ）アストログリアマーカーＧＦＡＰ（赤；ｐ−タウ＝緑）のいずれかを共染色し、かつ核マーカーＤＡＰＩ（青）で共染色したｍＶＣＰマウスの皮質領域の切片。（ｉ）ｐ−タウ陽性の細胞外病変は、β−ＩＩＩチューブリン陽性ニューロンに囲まれたｍＶＣＰマウス脳でのみ観察された。（ｉｉ）ｐ−タウ凝集体は、Ｉｂａ１陽性ミクログリアおよび（ｉｉｉ）ＧＦＡＰ陽性グリア細胞と関連していた。スケールバー＝１０μｍ。
【図７−１】Ａ）Ｈｓｐ７０（緑）、神経マーカーβ−ＩＩＩチューブリン（赤）および核マーカーＤＡＰＩ（青）で免疫染色したＷＴ非トランスジェニック（ｗｔＶＣＰ）マウス、突然変異ＶＣＰマウスおよびアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウス脳の皮質領域の切片を示す図である。スケールバー＝１０μｍ。上パネル：ｗｔＶＣＰマウスは、脳でのＨＳＰ７０の発現はほとんど示さない。中央パネル：ｍＶＣＰマウスは、ＨＳＰ７０の発現が増加していることを示す。下パネル：ＨＳＰ７０の発現は、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスにおいて増大している。
【図７−２】Ｂ）アリモクロモール処理したｍＶＣＰマウスの切片の免疫染色は、ＨＳＰ７０の発現（緑）がベータＩＩＩ陰性（グリア）細胞で増強されることを示している。スケールバー＝１０μｍ
【図８−１】ｗｔ−ＶＣＰ対照マウス、未処理ｍＶＣＰおよびアリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスの脊髄切片の免疫染色を示す図である。Ａ）切片は、ＨＳＰ７０（緑）および神経マーカーβ−ＩＩＩチューブリン（赤）を染色し、核マーカーＤＡＰＩ（青）で共染色した。Ｈｓｐ７０の発現は、ｗｔＶＣＰマウスの脊髄で非常に少なく、突然変異ＶＣＰ内で増加し、アリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスの脊髄、主に非神経細胞、グリア細胞でさらに増大した（白い矢印）。スケールバー＝１０μｍ。
【図８−２】ｗｔ−ＶＣＰ対照マウス、未処理ｍＶＣＰおよびアリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスの脊髄切片の免疫染色を示す図である。Ｂ）棒グラフは、各群のマウスの脊髄におけるＨＳＰ７０免疫反応性の蛍光強度の定量化を示し、ｍＶＣＰマウスにおいてＨＳＰ７０の発現の増加が確認され、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスにおいて、増大している。Ｃ）ＨＳＰ７０（緑）およびアストログリアマーカーＧＦＡＰ（赤）のｍＶＣＰマウスの脊髄の免疫染色は、ＧＦＡＰ（赤）の隣接切片で標識されたｍＶＣＰグリア細胞（黄色の矢印）において、ＨＳＰ７０の発現が増加していることを示している。白い矢印は、ＨＳＰ７０陽性の神経細胞を指し示している。
【図９】ｗｔ−ＶＣＰ、ｍＶＣＰ、およびアリモクロモール、および処理ｍＶＣＰマウスの脳切片は、スダンブラックで染色した。Ａ）参考のために、スダンブラックで染色した脳切片の低倍率画像を示す。これは、Ｂ）の画像において高倍率で示されている運動皮質の領域を指し示したものである。Ｂ）切片をＴＵＮＥＬアッセイ（緑）で染色してアポトーシス細胞を検出し、核マーカーＤＡＰＩで共染色した。アポトーシス細胞は、陽性対照として作用するヌクレアーゼで処理した切片、およびｍＶＣＰマウスの皮質の切片（緑、白の矢印）において検出された。このアッセイでは、プログラムされた細胞死を受けている細胞の核のみを標識する。挿入画像は、対応するＤＡＰＩ標識核を示している。
【図１０】マウスの脳は、ストレス顆粒マーカーＴｉａ１、ＦＭＲＰおよびＧ３ＢＰ（緑、白の矢印）を免疫染色し、核マーカーＤＡＰＩ（挿入物；青）を共染色した。ストレス顆粒マーカーは、ｍＶＣＰマウス脳の切片に凝集した。対照マウスまたはアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの脳では、ストレス顆粒の染色は観察されなかった。スケールバー＝２０μｍ
【図１１】ｗｔ−ＶＣＰ、ｍＶＣＰおよびアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスのヒラメ筋の神経筋接合部（ＮＭＪ）の神経支配のパターンを、シナプス前マーカーの免疫染色により調べた−神経フィラメント（ＮＦ；緑）またはシナプス膀胱タンパク質ＳＶ２（緑）およびシナプス後アセチルコリン受容体を標識するα−ブンガロトキシン（α−Ｂｔｘ、赤）との共標識を示す図である。Ａ）ｗｔ−ＶＣＰマウスのヒラメ筋のＮＭＪ。典型的な神経支配された終板を示す。Ｂ）以下を示すｍＶＣＰマウスのＮＭＪの画像；ｉ）軸索（緑）と終板（赤）とが接触していない除神経ＮＭＪ、ｉｉ）およびｉｉｉ）ｍＶＣＰ  ＮＭＪの終板の破壊。Ｃ）アリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスのヒラメ筋のＮＭＪ、  ｉ）およびｉｉ）は、神経支配されたＮＭＪを示し、シナプス前マーカーとシナプス後マーカーとの間が共標識されている（黄色染色）。スケールバー＝１０μｍ
【図１２】突然変異ＶＣＰ患者および健康な対照から分化した運動ニューロン由来のヒト誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）は、ＴＤＰ−４３を免疫染色し、核マーカーＤＡＰＩで共染色した。Ａ）ＴＤＰ−４３免疫反応性（緑）が、健常な対照に由来する細胞でのｉＰＳＣ由来運動ニューロンにおけるＴＤＰ−４３の正常な核局在化、ｍＶＣＰ患者のｉＰＳＣ由来運動ニューロンにおけるＴＤＰ−４３の細胞質の誤局在化、一部の細胞におけるＴＤＰ−４３の核クリアランスを示す図である。対照的に、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰ患者細胞からのｉＰＳＣ由来の運動ニューロンでは、ＴＤＰ−４３の発現は主に核であり、健康な対照において観察された発現パターンと類似している。Ｂ）ＨＳＰ７０の免疫染色（緑）、プラスおよびマイナスの神経マーカーβ−ＩＩＩチューブリン（赤）、および核マーカーＤＡＰＩの共染色を示す図である。ＨＳＰ７０は、対照細胞では低レベルで発現していたが、ｍＶＣＰ患者由来の運動ニューロンでは増加していた。ＨＳＰ７０は、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰ患者細胞の細胞でさらに増大した。ＤＡＰＩにより、原子核（青）を標識している。スケールバー＝２０μｍ。
【図１３】運動ニューロン疾患（ＦＴＤ−ＭＮＤ）、ユビキチン陽性封入体（ＦＴＤ−Ｕ）、突然変異ＴＤＰ−４３（ＦＴＤ−ＴＤＰＡ）、またはタウ陽性封入体（ＦＴＤ−タウ）のいずれかに関連している前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）患者の死後ヒトの脳皮質の切片を健康な対照からの脳の同じ領域のサンプルと比較した図である。Ａ）切片は、ＴＤＰ−４３を免疫染色し（緑）、核マーカーＤＡＰＩで共染色した（青）。ＴＤＰ−４３の細胞質の誤局在化は、すべての患者サンプルで観察されたが、対照組織ではわずかにのみ観察された。Ｂ）切片は、ＨＳＰ７０の発現を免疫染色し（緑）、核マーカーＤＡＰＩで共染色した（青）。ＨＳＰ７０の発現は、健康な対照と比較して、すべての患者サンプルで増加した。スケールバー＝１０μｍ
【図１４】運動ニューロン疾患（ＦＴＤ−ＭＮＤ）、ユビキチン陽性封入体（ＦＴＤ−Ｕ）、突然変異ＴＤＰ−４３（ＦＴＤ−ＴＤＰＡ）、またはタウ陽性封入体（ＦＴＤ−タウ）のいずれかに関連している前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）患者の死後ヒトの脳皮質の切片を健康な対照からの脳の同じ領域のサンプルと比較した図である。切片では、オートファジーマーカーＬＣ３およびｐ６２が免疫染色された。ＬＣ３およびｐ６２の両方の細胞質凝集体が、評価したすべてのＦＴＤ患者組織で観察された（黒い矢印および挿入図）。ｐ６２の発現はＦＴＤ−Ｕ患者およびＦＴＤ−ＭＡＰＴ患者の脳の一部の神経突起でも見られ、ＦＴＤ−ＴＤＰＡでは強く標識された神経突起が観察された（白い矢印）。ＦＴＤ−ＭＡＰＴ患者の切片では、ｐ６２は神経原線維変化に関連していることが確認された。スケールバー＝１０μｍ
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明者らは、突然変異ＶＣＰマウスならびに前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）患者からの検死ヒト脳皮質におけるＴＤＰ−４３の誤局在化、ユビキチン凝集、ｐ−タウ病変、ｐ６２およびＬＣ３の発現、ならびにストレス顆粒の形成を同定した。
【００２０】
脳内の異常なＴＤＰ−４３、ユビキチン、ｐ−タウ、ｐ６２、ＬＣ３およびストレス顆粒マーカーで観察される熱ショック応答を誘導する効果（Ｈｓｐ７０およびコシャペロンなどの熱ショックタンパク質への効果など）は、前頭側頭障害、ならびにＴＤＰ−４３の誤局在化、ユビキチン凝集、ｐ−タウ病変、ｐ６２およびＬＣ３の発現、ストレス顆粒の形成のうちの１つ以上、例えば、ＶＣＰ突然変異により引き起こされるＴＤＰ−４３の誤局在化、ユビキチン凝集、ｐ−タウ病変、ｐ６２およびＬＣ３の発現、ならびにストレス顆粒の形成などに関連するＦＴＤ様の病状を伴う治療に可能性を有する。
【００２１】
したがって、本開示の態様は、前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度（またはレベル）および／または活性を増加させる本明細書で定義される生物活性剤を提供することである。
【００２２】
一実施形態では、前頭側頭障害は、前頭側頭型認知症に関連している。
【００２３】
一実施形態では、前頭側頭障害の治療のための医薬品を製造するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる本明細書で定義される生物活性剤の使用が提供される。
【００２４】
一実施形態では、前頭側頭障害を治療する方法が提供され、この方法は、それを必要とする個体に、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる、本明細書で定義される生物活性剤を投与する１つ以上のステップを含む。
【００２５】
「個体」または「対象」という用語は、脊椎動物、特に哺乳類種のメンバー、好ましくはヒトなどの霊長類を指す。好ましい実施形態では、本明細書で使用される個体は、任意の年齢の男性または女性のヒトである。
【００２６】
「それを必要とする個体」とは、本発明の治療から恩恵を受け得る個体を指す。一実施形態では、それを必要とする個体は罹患個体であり、疾患は、本明細書で定義される前頭側頭障害など、１つ以上のＴＤＰ−４３の誤局在化、ユビキチン凝集ｐ−タウ病変、ｐ６２およびＬＣ３の発現または凝集、およびストレス顆粒の形成、および／またはＶＣＰ突然変異に関連する。
【００２７】
一実施形態では、この治療は、予防的、治癒的または改善的であり得る。特定の一実施形態では、この治療は予防的である。別の実施形態では、この治療は治癒的である。さらなる実施形態では、この治療は改善的である。
【００２８】
Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤は、本明細書で以下に詳細に定義され、Ｈｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の誘導因子を包含する。
【００２９】
ＴＤＰ−４３の誤局在化、ユビキチン凝集、ｐ−タウ病変、ｐ６２およびＬＣ３の発現（もしくは凝集）、ならびに／またはストレス顆粒の形成、ならびに／またはＶＣＰ突然変異に関連する疾患は、本明細書で以下に詳細に定義され、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、またはＦＴＬＤ−ＴＤＰのほか、ＦＴＤ−ＭＮＤ、ＦＴＤ−Ｕ、ＦＴＤ−ＴＤＰＡおよびＦＴＤ−タウなどの前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、およびＦＴＤ、ＰＤＢおよびＡＬＳを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）を包含する。
【００３０】
前頭側頭障害
前頭側頭障害は、脳の前頭葉内および側頭葉内のニューロンが損傷した結果である。前頭側頭障害とは、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）と総称される根本的な脳疾患によって引き起こされる行動および思考の変化を指す。ＦＴＬＤは、単一の脳疾患ではなく、神経変性疾患のファミリーであり、そのいずれもが前頭側頭障害を引き起こし得る。ＦＴＬＤには、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、進行性非流暢性失語（ＰＦＮＡ）、および意味性認知症（ＳＤ）のサブグループが包含される。
【００３１】
ＦＴＬＤの主な組織学的サブタイプは、ユビキチンおよびＴＤＰ−４３陽性、タウ陰性、ＦＵＳ（肉腫内で融合／肉腫内で転座）陰性封入体を特徴とするＦＴＬＤ−ＴＤＰ（またはＦＴＬＤ−Ｕ）である。
【００３２】
したがって、前頭側頭障害は、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ＦＴＬＤ−ＴＤＰ、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、例えば、ＦＴＤ−ＭＮＤ、ＦＴＤ−Ｕ、ＦＴＤ−ＴＤＰＡおよびＦＴＤ−タウ、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、およびＦＴＤ、ＰＤＢおよびＡＬＳを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）を含む。
【００３３】
本開示の一実施形態では、前頭側頭障害の治療に使用するための、本明細書で定義される生物活性剤が提供される。一実施形態では、前頭側頭障害は、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）およびＦＴＬＤ−ＴＤＰ、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、およびＦＴＤ、ＰＤＢおよびＡＬＳを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）からなる群から選択される。
【００３４】
本開示の一実施形態では、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ＦＴＬＤ−ＴＤＰ、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、およびＦＴＤ、ＰＤＢおよびＡＬＳを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）からなる群から選択される前頭側頭障害の治療に使用するための、本明細書で定義される生物活性剤が提供される。
【００３５】
一実施形態では、前頭側頭障害または前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）に関連する（またはその症状を表示もしくは示す）。
【００３６】
一実施形態では、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、運動ニューロン疾患関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−ＭＮＤ）、ユビキチン陽性封入体関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−Ｕ）、突然変異ＴＤＰ−４３関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−ＴＤＰＡ）、およびタウ陽性封入体関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−タウ）からなる群から選択される。
【００３７】
一実施形態では、前頭側頭障害は、ＶＣＰ遺伝子内の突然変異（ｍＶＣＰ）に関連するか、またはＶＣＰ遺伝子内の突然変異（ｍＶＣＰ）を示す。一実施形態では、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ＦＴＬＤ−ＴＤＰ、ＦＴＤ−ＭＮＤ、ＦＴＤ−Ｕ、ＦＴＤ−ＴＤＰＡおよびＦＴＤ−タウなどの前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、およびＦＴＤ、ＰＤＢおよびＡＬＳを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）を含む前頭側頭障害は、ＶＣＰ遺伝子内の突然変異（ｍＶＣＰ）に関連付けられているか、ＶＣＰ遺伝子内の突然変異（ｍＶＣＰ）を表示する。
【００３８】
本文脈における「ＶＣＰ遺伝子内の突然変異に関連する」とは、所定の疾患を呈する患者がＶＣＰ遺伝子内に突然変異を有するとして特定されることを意味する。
【００３９】
本開示の一実施形態では、前頭側頭障害の治療に使用するための、本明細書で定義される生物活性剤が提供され、前頭側頭障害を有する患者は、ＶＣＰ遺伝子内に突然変異を有する（ｍＶＣＰ）。
【００４０】
一実施形態では、前頭側頭障害は、ＴＤＰ−４３の誤局在化および／もしくはユビキチン凝集および／もしくはｐ−タウ病変、ならびに／またはｐ６２およびＬＣ３の発現、ならびに／またはストレス顆粒の形成を引き起こすＶＣＰ遺伝子内の突然変異に関連する。一実施形態では、前頭側頭障害は、ＴＤＰ−４３の誤局在化、および／もしくはユビキチン凝集、および／もしくはｐ−タウ病変、ならびに／またはｐ６２およびＬＣ３の発現もしくは凝集、ならびに／またはストレス顆粒の形成に関連する。
【００４１】
一実施形態では、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、またはＦＴＬＤ−ＴＤＰのほか、ＦＴＤ−ＭＮＤ、ＦＴＤ−Ｕ、ＦＴＤ−ＴＤＰＡおよびＦＴＤ−タウなどの前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、およびＦＴＤ、ＰＤＢおよびＡＬＳを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）を含む前頭側頭障害は、ＴＤＰ−４３の誤局在化、ならびに／またはユビキチン凝集、ならびに／またはｐ−タウ病変、ならびに／またはｐ６２およびＬＣ３の発現もしくは凝集、ならびに／またはストレス顆粒の形成に関連している。
【００４２】
本文脈における「ＴＤＰ−４３の誤局在化、ならびに／またはユビキチン凝集、ならびに／またはｐ−タウ病変、ならびに／またはｐ６２およびＬＣ３の発現、ならびに／またはストレス顆粒の形成に関連する」は、所定の疾患を呈する患者が、ＴＤＰ−４３の誤局在化、ならびに／またはユビキチン凝集、ならびに／またはｐ−タウ病変、ならびに／またはｐ６２およびＬＣ３の発現、ならびに／またはストレス顆粒の形成（例えば、ＴＤＰ−４３細胞質の誤局在化、ならびに／または細胞質ユビキチン凝集、ならびに／またはｐ−タウ病変の形成、ならびに／またはｐ６２発現もしくは細胞質凝集、ならびに／またはＬＣ３の発現もしくは細胞質凝集、ならびに／またはストレス顆粒の形成など）を有すると特定されることを意味する。
【００４３】
一実施形態では、前頭側頭障害は、ストレス顆粒の形成に関連している。一実施形態では、前頭側頭障害は、ストレス顆粒マーカーＴｉａ１、ＦＭＲＰ（脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質）およびＧ３ＢＰ（ＲａｓＧＡＰ  ＳＨ３ドメイン結合タンパク質）のうちの１つ以上を含むストレス顆粒の形成に関連する。
【００４４】
本開示の一実施形態では、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭障害（ＦＴＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）、およびＦＴＤ、ＰＤＢおよびＡＬＳを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）からなる群から選択される前頭側頭障害の治療に使用するための、本明細書で定義される生物活性剤が提供され、前頭側頭障害は、ＶＣＰ遺伝子内の突然変異に関連し、かつ／または前頭側頭障害は、ＴＤＰ−４３の誤局在化、ユビキチン凝集、ｐ−タウ病変、ｐ６２もしくはＬＣ３の発現（もしくは凝集）、またはストレス顆粒の形成のうちの１つ以上に関連している。
【００４５】
ＶＣＰ（Ｕｎｉｐｒｏｔ−Ｐ５５０７２（ＴＥＲＡ＿ＨＵＭＡＮ））、または移行小胞体ＡＴＰａｓｅ（ＴＥＲ  ＡＴＰａｓｅ）は、ヒトにおいてはＶＣＰ遺伝子によってコードされる酵素である。ＶＣＰの主な機能は、タンパク質アセンブリ、オルガネラ膜、クロマチンなどの大きい細胞構造からタンパク質分子を分離し、マルチサブユニットプロテアーゼプロテアソームによる、放出されたポリペプチドの分解を促進することである。ＶＣＰ遺伝子は、ＡＡＡ−ＡＴＰａｓｅ（多様な細胞活動に関連するＡＴＰａｓｅ）スーパーファミリーのメンバーであり、かつ細胞周期制御、膜融合、ユビキチン−プロテアソーム分解経路に関与するタンパク質ＶＣＰをコードする。
【００４６】
本開示の一実施形態では、本明細書で定義される前頭側頭障害は、Ｒ９３Ｃ、Ｒ９５Ｇ、Ｒ９５Ｃ、Ｒ９５Ｈ、Ｉ１２６Ｆ、Ｐ１３７Ｌ、Ｒ１５５Ｓ、Ｒ１５５Ｃ、Ｒ１５５Ｈ、Ｒ１５５Ｐ、Ｒ１５５Ｌ、Ｇ１５７Ｒ、Ｒ１５９Ｃ、Ｒ１５９Ｈ、Ｒ１５９Ｇ、Ｒ１９１Ｑ、Ｌ１９８Ｗ、Ａ２３２Ｅ、Ｔ２６２Ａ、Ｎ３８７Ｈ、Ａ４３９Ｐ、Ａ４３９Ｓ、およびＤ５９２Ｎからなる群から選択されるＶＣＰ遺伝子の突然変異に関連する。
【００４７】
本開示の一実施形態では、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる本明細書で定義される生物活性剤が提供される。
【００４８】
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉および側頭葉に主に影響を与える珍しい障害の多様な群の用語である。ＦＴＤは、進行性のニューロンの喪失および紡錘体ニューロンの７０％以上の典型的な喪失を特徴とするが、他のニューロンの種類は損傷を受けていない。ＦＴＤは、臨床的、遺伝的、および神経病理学的に不均一であるが、症例の９５％以上はＴＤＰ−４３タンパク障害またはタウパチー（ｔａｕｐａｔｈｙ）である。ＦＴＤは、従来「ピック病（Ｐｉｃｋ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）」と呼ばれていたが、現在は、ＦＴＤの特定のタイプの１つであるピック病（Ｐｉｃｋ  ｄｉｓｅａｓｅ）に指定されている。
【００４９】
ＦＤＴ患者の中には、人格の劇的な変化を受け、社会的に不適切、衝動的、または感情的に無関心になる場合もあれば、言語を使用する能力を失う場合もある。現在、ＦＴＤの治療法はなく、症状の緩和に役立つ治療法のみが利用可能である。
【００５０】
ＦＴＤのサブタイプは、最初に最も顕著に現れる症状に従って臨床的に特定される。臨床診断としては、行動異型ＦＴＤ（ｂｖＦＴＤ）、言語に影響を与える原発性進行性失語症（ＰＰＡ）、運動障害進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）および皮質基底変性（ＣＢＤ）が挙げられる。
【００５１】
本開示の一実施形態では、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる本明細書で定義される生物活性剤が提供される。
【００５２】
本開示の一実施形態では、運動ニューロン疾患関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−ＭＮＤ）、ユビキチン陽性封入体関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−Ｕ）、突然変異ＴＤＰ−４３関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−ＴＤＰＡ）、およびタウ陽性封入体関連前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）（ＦＴＤ−タウ）からなる群から選択される前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる本明細書で定義される生物活性剤が提供される。
【００５３】
ＦＴＤの症状および病理は、特定の突然変異によって異なる。遺伝的原因を有するＦＴＤ患者の大多数は、Ｃ９ｏｒｆ７２、微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ、多くの場合、「タウ」と称される）、プログラニュリン（ＧＲＮまたはＰＧＲＮ）およびバロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）の遺伝子のいずれか１つに発生する突然変異を有する。非常にまれなＦＴＤ症例に関連付けられている３つの追加遺伝子：荷電多発空砲体タンパク質２Ｂ（ＣＨＭＰ２Ｂ）、ＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＡＲＤＢＰ）およびＦＵＳ（肉腫に融合）。
【００５４】
一実施形態では、前頭側頭障害はピック病（ＰｉＤ）である。
【００５５】
本開示の一実施形態では、ＶＣＰ遺伝子内での突然変異に関連する前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる、本明細書で定義される生物活性剤が提供される。
【００５６】
別の実施形態では、前頭側頭障害は、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを有するＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）（ＰＤＢおよびＦＴＤに関連するＩＢＭとも呼ばれる）である。
【００５７】
本開示の一実施形態では、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる本明細書で定義される生物活性剤が提供される。
【００５８】
ＩＢＭＰＦＤは、封入体ミオパチー（ＩＢＭ）を特徴とする多発性変性疾患（ｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）であり、成人期に発症する筋力低下、早期発症骨パジェット病（ＰＤＢ）、および若年性ＦＴＤを引き起こす。これは、他の系に広がり、呼吸不全または心不全を引き起こす。
【００５９】
ＰＤＢは、骨の過剰な破壊および形成によって生じ、その後に骨の再構築が乱れる。これにより、骨は通常より成長し、かつ弱くなり、その結果、影響を受けた骨の近くの関節に疼痛、変形した骨、骨折、および関節炎が生じる。ＰＤＢは、ＦＴＤと共存し得る。
【００６０】
一実施形態では、前頭側頭障害は、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）（ＩＢＭ−ＦＴＤ）である。
【００６１】
一実施形態では、前頭側頭障害は、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）（ＰＤＢ−ＦＴＤ）である。
【００６２】
ＩＢＭＰＦＤは、罹患した個体が、筋力低下、骨パジェット病および／または認知症を有し得るまれな障害である。この障害の筋力低下は、通常、封入体ミオパチー（ＩＢＭ）として公知である筋肉の疾患に起因する。ＩＢＭＰＦＤの主な遺伝的原因は、ＶＣＰ（バロシン含有タンパク質）遺伝子の突然変異である。ＶＣＰ内の突然変異は、家族性ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）を引き起こすことも報告されており、ＡＬＳはＩＢＭＰＦＤの家族で発生することがある。したがって、ＩＢＭＰＦＤおよびＡＬＳを両方とも含む状態も特定され、ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ（ＦＴＤ、ＰＤＢ、およびＡＬＳを伴うＩＢＭ）と示され得る。この状態は、多系統蛋白質症（ＭＳＰ）とも呼ばれている。
【００６３】
一実施形態では、前頭側頭障害はＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳである。
【００６４】
本開示の一実施形態では、ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳの治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる本明細書で定義される生物活性剤が提供される。
【００６５】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、主に運動系に影響する神経障害として記載されているが、しかし、現在では、脳の運動野以外が変性を受けるという事実により、多系統神経変性疾患として認識されている。ＦＴＤおよびＡＬＳは、両方とも臨床、神経病理学、および遺伝子レベルで異質であり、明確な進行性障害として理解されてはいるが、いくつかの臨床、神経病理学、および遺伝的特徴を共有しているという事実のエビデンスが増加している。
【００６６】
ＡＬＳは、ＦＴＬＤ臨床的異型のいずれかと共存し得るが、最も一般的にはＦＴＤ（行動異型ＦＴＤまたはｂｖＦＴＤとしても公知である）と関連している。
【００６７】
一実施形態では、前頭側頭障害は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＦＴＤ（ＡＬＳ−ＦＴＤ）である。
【００６８】
一実施形態では、前頭側頭障害は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うｂｖＦＴＤ（ＡＬＳ−ｂｖＦＴＤ）である。
【００６９】
本開示の一実施形態では、ＡＬＳ−ＦＴＤの治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる本明細書で定義される生物活性剤が提供される。
【００７０】
一実施形態では、前頭側頭障害は、ｍＶＣＰに関連するｆＡＬＳ（ＶＣＰ−ｆＡＬＳ）である。
【００７１】
一実施形態では、前頭側頭障害は、散発性ＡＬＳ−ＦＴＤである。
【００７２】
生物活性剤
「生物活性剤」（すなわち、生物活性物質／剤）は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて実証され得るいくつかの薬理学的効果、多くの場合有益な効果をもたらす任意の剤、薬物、物質、化合物、組成物または混合物である。本明細書で使用される場合、この用語は、個体に局所的効果または全身的効果をもたらす生理学的または薬理学的に活性な物質をさらに含む。生物活性剤のさらなる例としては、これらに限定されないが、オリゴ糖、多糖、任意によりグリコシル化されたペプチド、任意によりグリコシル化されたポリペプチド、核酸、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、脂肪酸、脂肪酸エステルおよび二次代謝産物を含むか、またはこれらからなる剤が挙げられる。
【００７３】
本明細書で定義される生物活性剤は、一実施形態では、Ｈｓｐ７０およびコシャペロンなど１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度（またはレベル）および／または活性を増加させる。一実施形態では、生物活性剤は以下から選択される：
−Ｈｓｐ７０誘導因子などのＨｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の誘導因子、
−Ｈｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の小分子誘導因子、
−ヒドロキシルアミン誘導体（例えばビモクロモール、アリモクロモール、イロキサナジンおよびＢＧＰ−１５など）、
−膜流動化剤（ベンジルアルコールなど）、
−亜致死温熱療法（≦４２度）または温熱療法
−特定の抗炎症薬および抗腫瘍薬
−細胞ストレッサー、
−活性酸素種（ＲＯＳ）；アドレナリン、ノルアドレナリン；紫外線；放射線療法、
−Ｈｓｐ７０タンパク質、またはその機能的断片もしくは多様体。
【００７４】
したがって、本明細書で定義される生物活性剤は、一実施形態では、Ｈｓｐ７０およびコシャペロンなどの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる任意の剤、化学物質または化合物であり、かつＨｓｐ７０自体、またはその機能的断片もしくは多様体を含み、任意の熱ショックタンパク質は、および当業者に公知であるあらゆるＨｓｐ７０誘導因子を含む。
【００７５】
Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤、およびＨｓｐ７０の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤は、本明細書において「Ｈｓｐ７０誘導因子」と同義的に使用できる。
【００７６】
Ｈｓｐ７０誘導因子は、Ｈｓｐ７０遺伝子発現およびタンパク質発現を、付随するストレスの有無にかかわらず増幅できる。直接的なＨｓｐ７０誘導因子は、Ｈｓｐ７０遺伝子発現およびタンパク質発現を付随するストレスなく増幅できる化合物である。間接的なＨｓｐ７０誘導因子またはＨｓｐ７０共誘導因子は、付随する（軽度の）ストレスなく、Ｈｓｐ７０遺伝子発現およびタンパク質発現を増幅できない化合物であるが、Ｈｓｐ７０レベルでのストレス誘導性の増加は、それらの存在によってさらに上昇または増強される。
【００７７】
したがって、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を直接的または間接的に増加させ得る。
【００７８】
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体である。
【００７９】
別の実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の誘導因子である。
【００８０】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の誘導因子は、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ４０、Ｈｓｐ７２およびＨｓｐ９０、ならびにコシャペロンのうちの１つ以上の誘導因子である。
【００８１】
一実施形態では、熱ショックタンパク質の誘導因子は、少なくともＨｓｐ７０の誘導因子である。
【００８２】
一実施形態では、熱ショックタンパク質の誘導因子は、Ｈｓｐ７０の誘導因子である。
【００８３】
Ｈｓｐ７０の誘導因子またはＨｓｐ７０を誘導することへの言及は、少なくともＨｓｐ７０が誘導されることを意味し、他の熱ショックタンパク質などの他のタンパク質およびエフェクターの共誘導を排除するものではない。Ｈｓｐ７０の誘導因子とは、Ｈｓｐ７０誘導因子および共誘導因子、ならびに直接的および間接的なＨｓｐ７０誘導因子を同等に指す。
【００８４】
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体、およびＨｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の誘導因子の組み合わせを含む。
【００８５】
一実施形態では、生物活性剤は、細胞質ユビキチン凝集を減少させる。別の実施形態では、生物活性剤は、トランス活性応答ＤＮＡ結合タンパク質４３ｋＤａ（ＴＤＰ−４３）細胞の誤局在化を減少させる。さらに別の実施形態では、生物活性剤は運動単位の喪失を低減する。一実施形態では、生物活性剤は、Ｔｉａ１、ＦＭＲＰおよびＧ３ＢＰなどのストレス顆粒マーカーを減少させるなど、ストレス顆粒の形成を減少させる。一実施形態では、生物活性剤は、ｐ−タウ陽性病変を減少させる。一実施形態では、生物活性剤は、Ｐ６２および／もしくはＬＣ３の発現または細胞質凝集を低減する。
【００８６】
Ｈｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の誘導因子
一実施形態では、生物活性剤は、熱ショック応答を活性化する。一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる。一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の細胞内濃度（またはレベル）および／または活性を増加させる。一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の細胞内濃度（またはレベル）を増加させる。一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の誘導因子である。一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の誘導因子である。
【００８７】
これは、前頭側頭障害の治療に使用するために、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の誘導因子を提供する本開示の態様である。
【００８８】
一実施形態では、前頭側頭障害の治療のための医薬品を製造するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の誘導因子の使用がもたらされる。
【００８９】
一実施形態では、前頭側頭障害を治療する方法が提供され、この方法は、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の誘導因子を、それを必要とする個体に投与する１つ以上のステップを含む。
【００９０】
熱ショックタンパク質の小分子誘導因子
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の誘導因子である。一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子などのＨｓｐ７０などの熱ショックタンパク質の小分子誘導因子である。
【００９１】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の誘導因子、または、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の小分子誘導因子は、Ｈｓｐ７０遺伝子の発現を増幅することなどにより、とりわけＨｓｐ７０の細胞内濃度（またはレベル）を増加させることができる化合物である。Ｈｓｐ７０の誘導因子は、他の熱ショックタンパク質も誘導し得る。
【００９２】
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０遺伝子の発現を増幅することにより、Ｈｓｐ７０の細胞内濃度（またはレベル）を増加させることができる。一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０遺伝子の発現を増幅することによってＨｓｐ７０の細胞内濃度（またはレベル）を増加させることができ、生物活性剤はヒドロキシルアミン誘導体小分子などのヒドロキシルアミン誘導体である。
【００９３】
こうしたヒドロキシルアミン誘導体の例としては、アリモクロモール、イロキサナジン、ビモクロモール、ＢＧＰ−１５、それらの立体異性体およびそれらの酸付加塩が挙げられる。
【００９４】
これは、前頭側頭障害の治療に使用するために、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の小分子誘導因子を提供する本開示の態様である。
【００９５】
一実施形態では、前頭側頭障害の治療のための医薬品を製造するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の小分子誘導因子の使用が提供される。
【００９６】
一実施形態では、前頭側頭障害を治療する方法が提供され、この方法は、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の少分子誘導因子を、それを必要とする個体に投与する１つ以上のステップを含む。
【００９７】
アリモクロモール
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリド（アリモクロモール）、その立体異性体およびその酸付加塩から選択される。アリモクロモールは、例えば、国際公開第００／５０４０３号にさらに記載されている。
【００９８】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリド（アリモクロモール）、その光学活性（＋）または（−）エナンチオマー、任意の比率のエナンチオマーの混合物、およびラセミ化合物から選択され、さらに、上記化合物のうちのいずれかと鉱酸または有機酸とから形成される酸付加塩は、本開示の目的を構成する。Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドの可能なすべての幾何異性体は、本開示の範囲に属する。用語「Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドの幾何異性体」は、化合物のすべての可能な光学異性体および幾何異性体を指す。
【００９９】
所望の場合、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドまたはその光学活性エナンチオマーの１つは、既知の方法により、鉱酸または有機酸により酸付加塩に変換させ得る。
【０１００】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドのラセミ体である。
【０１０１】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドの光学活性立体異性体である。
【０１０２】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドのエナンチオマーである。
【０１０３】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドおよび（−）−（Ｓ）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドからなる群から選択される。
【０１０４】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドの酸付加塩である。
【０１０５】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドシトラート（ＢＲＸ−３４５）、およびＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドマレアート（ＢＲＸ−２２０）からなる群から選択される。
【０１０６】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドシトラート；（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドシトラート；（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドマレアート；および（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドマレアートからなる群から選択される。
【０１０７】
ＢＧＰ−１５
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドアミド、ジヒドロクロリド（ＢＧＰ−１５）、その立体異性体およびその酸付加塩である。
【０１０８】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドアミド、ジヒドロクロリド（ＢＧＰ−１５）、その光学活性（＋）または（−）エナンチオマー、任意の比率のエナンチオマーの混合物、およびラセミ化合物から選択され、さらに、上記化合物のうちのいずれかと鉱酸または有機酸とから形成される酸付加塩は、本開示の目的を構成する。Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドアミド、ジヒドロクロリドの可能なすべての幾何異性体は、開示の範囲に属する。用語「Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドアミド、ジヒドロクロリドの立体異性体」は、化合物のすべての可能な光学異性体および幾何異性体を指す。
【０１０９】
イロキサナジン
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジン（イロキサナジン）、その立体異性体およびその酸付加塩から選択される。イロキサナジンは、例えば、国際公開第９７／１６４３９号および国際公開第００／３５９１４号にさらに記載されている。
【０１１０】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジン（イロキサナジン）、その光学活性（＋）または（−）エナンチオマー、任意の比率のエナンチオマーの混合物、およびラセミ化合物から選択され、さらに、上記化合物のうちのいずれかと鉱酸または有機酸とから形成される酸付加塩は、本開示の目的を構成する。５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンの可能なすべての幾何異性体は、開示の範囲に属する。用語「５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンの立体異性体」は、化合物のすべての可能な光学異性体および幾何異性体を指す。
【０１１１】
所望の場合、５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジン、またはその光学活性エナンチオマーのうちの１つは、既知の方法により、鉱酸または有機酸により酸付加塩に変換できる。
【０１１２】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンのラセミ体である。
【０１１３】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンの光学活性立体異性体である。
【０１１４】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンのエナンチオマーである。
【０１１５】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、（＋）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンおよび（−）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンからなる群から選択される。
【０１１６】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンの酸付加塩である。
【０１１７】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンシトラート、および５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンマレアートからなる群から選択される。
【０１１８】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、（＋）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンシトラート；（−）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンシトラート；（＋）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンマレアート；および（−）−５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジンマレアートからなる群から選択される。
【０１１９】
ビモクロモール
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリド（ビモクロモール）その立体異性体およびその酸付加塩から選択される。ビモクロモールは、例えば、国際公開第１９９７／１６４３９号にさらに記載されている。
【０１２０】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリド（ビモクロモール）、その光学活性（＋）または（−）エナンチオマー、任意の比率のエナンチオマーの混合物、およびラセミ化合物から選択され、さらに、上記化合物のいずれかと鉱酸または有機酸とから形成される酸付加塩は、本開示の目的を構成する。Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドの可能なすべての幾何異性体は、開示の範囲に属する。用語「Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドの立体異性体」は、化合物のすべての可能な光学異性体および幾何異性体を指す。
【０１２１】
必要な場合、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドまたはその光学活性エナンチオマーのうちの１つは、既知の方法により、鉱酸または有機酸により酸付加塩に変換できる。
【０１２２】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドのラセミ体である。
【０１２３】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドの光学活性立体異性体である。
【０１２４】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドのエナンチオマーである。
【０１２５】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドおよび（−）−（Ｓ）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドからなる群から選択される。
【０１２６】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドの酸付加塩である。
【０１２７】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドシトラート、およびＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドマレアートからなる群から選択される。
【０１２８】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の小分子誘導因子は、（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドシトラート；（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドシトラート；（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドマレアート；および（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリドマレアートからなる群から選択される。
【０１２９】
治療のための誘導因子
一実施形態では、Ｈｓｐ７０遺伝子発現を増幅することによりＨｓｐ７０の細胞内濃度を増加させることができる生物活性剤が提供され、生物活性剤は、ヒドロキシルアミン誘導体であり、
生物活性剤は、前頭側頭障害の治療に使用するための、
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリド（アリモクロモール）、その立体異性体およびその酸付加塩、
５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジン（イロキサナジン）、その立体異性体およびその酸付加塩、
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリド（ビモクロモール）、その立体異性体およびその酸付加塩、ならびに
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドアミド、ジヒドロクロリド（ＢＧＰ−１５）、その立体異性体およびその酸付加塩からなる群から選択される。
【０１３０】
一実施形態では、前頭側頭障害は、ＶＣＰ遺伝子内の突然変異に関連し、かつ／またはＴＤＰ−４３の誤局在化、細胞質ユビキチン凝集、ｐ−タウ病変、ｐ６２およびＬＣ３の発現もしくは凝集、またはストレス顆粒の形成のうちの１つ以上に関連する。
【０１３１】
一実施形態では、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＩＢＭＰＦＤ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）、およびＡＬＳ−ＦＴＤからなる群から選択される前頭側頭障害の治療に使用するために、Ｈｓｐ７０遺伝子発現を増幅することによりＨｓｐ７０の細胞内濃度を増加させることができる生物活性剤が提供され、生物活性剤は、ヒドロキシルアミン誘導体であり、
生物活性剤は、
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリド（アリモクロモール）、その立体異性体およびその酸付加塩、
５，６−ジヒドロ−５−（１−ピペリジニル）メチル−３−（３−ピリジル）−４Ｈ−１，２，４−オキサジアジン（イロキサナジン）、その立体異性体およびその酸付加塩、
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドイルクロリド（ビモクロモール）、その立体異性体およびその酸付加塩、ならびに
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）プロポキシ］−３−ピリジンカルボキシイミドアミド、ジヒドロクロリド（ＢＧＰ−１５）、その立体異性体およびその酸付加塩、
からなる群から選択される。
【０１３２】
一実施形態では、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、早期発症ＰＤＢおよびＦＴＤを伴うＩＢＭ（ＩＢＭＰＦＤ）、ＦＴＤを伴う封入体ミオパチー（ＩＢＭ）、ＦＴＤを伴う骨パジェット病（ＰＤＢ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を伴うＩＢＭＰＦＤ（ＩＢＭＰＦＤ−ＡＬＳ）、およびＡＬＳ−ＦＴＤからなる群から選択される前頭側頭障害などの前頭側頭障害の治療に使用するため、（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドシトラート；（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドシトラート；（＋）−Ｒ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドマレアート；および（−）−Ｓ−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロリドマレアートからなる群から選択される化合物が提供される。
【０１３３】
熱ショックタンパク質の他の誘導因子
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の誘導因子である。Ｈｓｐ７０発現を誘導するための任意の手段が本明細書に包含されると想定され、そのいくつかは本明細書で以下に概説する。
【０１３４】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の誘導因子は、亜致死温熱療法である。個体の体温の上昇は、Ｈｓｐ７０などのＨＳＰの強力な誘導因子であり、そのため、亜致死温熱療法はＨｓｐ７０を誘導する手段である。一実施形態では、亜致死温熱療法は、約３８℃、約３９℃など、例えば約４０℃、約４１℃など、例えば約４２℃、約４３℃などのコア温度まで個体の温度を上昇させることを含む。
【０１３５】
略奪的恐怖および感電などの心理的ストレスは、ストレスによって誘導されるｅＨｓｐ７０の放出を引き起こし得る。このプロセスは、カテコールアミンのシグナル伝達に依存することが示唆されている。さらに、アドレナリンおよびノルアドレナリンは、Ｈｓｐ７０の放出を引き起こし得る。
【０１３６】
Ｈｓｐ７０などの複数の化合物がＨＳＰを誘導（または共誘導）することが示されている。一実施形態では、Ｈｓｐ７０の誘導因子は、アルキルリゾリン脂質エデルフォシン（ＥＴ−１８−ＯＣＨ３または１−オクタデシル−２−メチル−ｒａｃ−グリセロ−３−ホスホコリン）などの膜相互作用化合物；セレコキシブおよびロフェコキシブなどのシクロオキシゲナーゼ１／２阻害剤、ならびにアセチルサリチル酸、サリチル酸ナトリウムおよびインドメタシンなどのＮＳＡＩＤなどの抗炎症薬；デキサメタゾン；プロスタグランジンＰＧＡ１、ＰＧｊ２および２−シクロペンテン−１−オン；ペルオキシダーゼ増殖因子活性化受容体ガンマアゴニスト；ビンクリスチンおよびパクリタキセルなどのチューブリン相互作用性抗癌剤；インスリン増感剤ピオグリタゾン；カルボプラチン、ドキソルビシン、フルダラビン、イホスファミド、およびシタラビンなどの抗腫瘍剤；ゲルダナマイシン、１７−ＡＡＧ、１７−ＤＭＡＧ、ラディシコール、ハービマイシン−Ａおよびアラキドン酸などのＨｓｐ９０阻害剤；ＭＧ１３２、ラクタシスチン、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、オプロゾミブなどのプロテアソーム阻害剤；ＤＣＩＣ、ＴＬＣＫ、およびＴＰＣＫなどのセリンプロテアーゼ阻害剤；ＳＡＨＡ／ボリノスタット、ベリノスタット／ＰＸＤ１０１、ＬＢ−２０５、ＬＢＨ５８９（パノビノスタット）、ＦＫ−２２８、ＣＩ−９９４、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）およびＰＣＩ−３４０５１などのヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＨＤＡＣｉ）；ゲラニルゲラニルアセトン（ＧＧＡ）、レバミピド、カルベノキソロンおよびポラプレジンク（亜鉛Ｌ−カルノシン）などの抗潰瘍薬；重金属（亜鉛およびスズ）；コカイン；ニコチン；アルコール；アルファアドレナリン作動薬；シクロペンテノンプロスタノイド；Ｌ型Ｃａ＋＋チャネル遮断薬（ラシジピンなどのリアノジン受容体も阻害するＬ型Ｃａ＋＋チャネル遮断薬など）；ＤＨＢＰ（１，１’−ジヘプチル−４，４’−ビピリジウムなどのリアノジン受容体拮抗薬；ならびにペオニフロリン、グリチルリチン、セラストロール、ジヒドロセラストロール、二酢酸ジヒドロセラストロールおよびクルクミンなどの漢方薬からなる群から選択される。
【０１３７】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の誘導因子は、プロテアソーム阻害剤である。一実施形態では、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、オプロゾミブ、ＭＧ１３２、およびラクタシスチンからなる群から選択される。
【０１３８】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の誘導因子は、ＨＤＡＣ阻害剤である。一実施形態では、ＨＤＡＣｉは、ＳＡＨＡ／ボリノスタット、ベリノスタット／ＰＸＤ１０１、ＬＢ−２０５、ＬＢＨ５８９（パノビノスタット）、ＦＫ−２２８、ＣＩ−９９４、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）およびＰＣＩ−３４０５１からなる群から選択される。
【０１３９】
膜流動化剤
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の誘導因子は、膜流動化剤である。膜流動化剤による治療は、脂質療法とも呼ばれ得る。
【０１４０】
加熱中の細胞タンパク質の一部の変性（タンパク質毒性）に加えて、膜の流動性の変化は、熱ショック応答を開始し、ＨＳＰを誘導する細胞温度センサーとしても提唱されている。実際、化学的に誘導された膜の摂動は、熱によって誘導された細胞膜の流動化と同様に、タンパク質の変性を引き起こすことなくＨＳＰを活性化できる。
【０１４１】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の誘導因子は、ベンジルアルコール、ヘプタノール、ＡＬ７２１、ドコサヘキサエン酸、脂肪族アルコール、オレイルアルコール、ジメチルアミノエタノール、Ａ２Ｃ、ファルネソールおよび麻酔薬（リドカイン、ロピバカイン、ブピバカインおよびメピバカイン）、ならびに当業者に公知である他のものからなる群から選択される膜流動化剤である。
【０１４２】
熱ショックタンパク質７０
また、これは、前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体を提供する一態様である。
【０１４３】
一実施形態では、前頭側頭障害の治療のための医薬品を製造するための、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体の使用が提供される。
【０１４４】
一実施形態では、前頭側頭障害を治療する方法が提供され、この方法は、それを必要とする個体にＨｓｐ７０またはその機能的断片もしくは多様体を投与する１つ以上のステップを含む。
【０１４５】
本明細書で定義されるＨｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体は、任意の天然または合成生成物であり得、また当業者に公知である任意の従来の技術により生成され得ることが理解される。
【０１４６】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体は、天然源から精製される。天然源は、それを必要とする個体への投与に好適である形態でＨｓｐ７０を発現させるか、またはＨｓｐ７０を発現させるように誘導され得る任意の植物、動物または細菌であり得る。
【０１４７】
特定の実施形態では、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体は合成的に作製される。一実施形態では、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体は、従来の技術によって作製された組換えタンパク質であり、したがってｒＨｓｐ７０と示される。
【０１４８】
本明細書で定義される合成または天然のＨｓｐ７０は、植物、動物または細菌の任意の好適な種に由来する配列を有し得る。一実施形態では、ｒＨｓｐ７０は、哺乳動物に由来する。哺乳動物は、ヒト（ホモサピエンス）、マウス（ハツカネズミ）、ウシ、イヌ、ラット、フェレット、ブタ、ヒツジ、およびサルからなる群から選択され得る。別の実施形態では、ｒＨｓｐ７０は、細菌に由来する。
【０１４９】
Ｈｓｐ７０は、一部、種間で非常に高度な配列保存を有することを特徴とするため、有害な免疫応答を引き起こすことなく、ある種に由来するＨｓｐ７０を別の種で使用できる可能性がある。
【０１５０】
特定の一実施形態では、ｒＨｓｐ７０は、ヒトＨｓｐ７０に由来する配列を有する。
【０１５１】
特定の一実施形態では、ｒＨｓｐ７０は、２つ以上の種に由来する配列を有する。したがって、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体は、一実施形態ではキメラであり得る。
【０１５２】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０は、遺伝子座名ＨＳＰＡ１ＡおよびＨＳＰＡ１Ｂを有する２つの誘導性Ｈｓｐ７０ファミリーメンバーのいずれかを示すことを意味する。
【０１５３】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０は、ＨＳＰＡ１Ａ（配列番号１および２）およびＨＳＰＡ１Ｂ（配列番号４および５）、またはその機能的断片もしくは多様体から選択される。配列番号２では、配列番号１の開始メチオニン（１位のＭ）が除去されている。配列番号５では、配列番号４の開始メチオニン（１位のＭ）が除去されている。Ｉｎ  ｖｉｖｏでは、これは翻訳後処理によって生じる。
【０１５４】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０は、分子プロセシングおよび／またはアミノ酸修飾（任意のアセチル化、リン酸化、およびメチル化など）に由来する多様体などの、配列番号１、２、４および５のうちのいずれか１つ、またはその機能的断片もしくは多様体（その天然に存在する任意の多様体など）から選択される。
【０１５５】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０タンパク質は、野生型Ｈｓｐ７０タンパク質と１００％の同一性を有する。別の実施形態では、Ｈｓｐ７０タンパク質は、野生型Ｈｓｐ７０タンパク質に対して１００％未満の同一性、野生型タンパク質に対して、例えば、９９．９％〜９５％の同一性など、例えば９５〜９０％の同一性、９０〜８５％の同一性など、例えば８５〜８０％の同一性、８０〜７５％の同一性など、例えば７５〜６０％の同一性を有する。同一性の程度に関係なく、関連する生物学的効果を保持するＨｓｐ７０の任意の断片または多様体は、本明細書に包含される。
【０１５６】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の多様体は、ＨＳＰＡ１Ａ（配列番号１および２）ならびにＨＳＰＡ１Ｂ（配列番号４および５）から選択されるＨｓｐ７０またはその断片に対して、９９．９〜９９％の同一性、例えば、９９〜９８％の同一性、９８〜９７％の同一性など、例えば、９７〜９６％の同一性、９６〜９５％の同一性など、例えば、９５〜９４％の同一性、９４〜９３％の同一性など、例えば、９３〜９２％の同一性、９２〜９１％の同一性など、例えば、９１〜９０％の同一性、９０〜８５％の同一性など、例えば、８５〜８０％の同一性、８０〜７５％の同一性など、例えば、７５〜７０％の同一性、７０〜６５％の同一性など、例えば、６５〜６０％の同一性を有する。
【０１５７】
一実施形態では、生物活性剤はＨｓｐ７０である。一実施形態では、Ｈｓｐ７０は完全長Ｈｓｐ７０である。一実施形態では、Ｈｓｐ７０は、ＨＳＰＡ１Ａ、またはその機能的断片もしくは多様体である。一実施形態では、Ｈｓｐ７０は、配列番号１もしくは２、またはその機能的断片もしくは多様体である。
【０１５８】
これは、Ｈｓｐ７０の機能的断片または多様体を提供する実施形態でもある。本明細書で定義されるように、機能的な断片または多様体は、以下の１つ以上の機能を保持するＨｓｐ７０の任意の断片または多様体である：
ｉ）細胞質ユビキチン凝集を減少させること、
ｉｉ）トランス活性応答ＤＮＡ結合タンパク質４３ｋＤａ（ＴＤＰ−４３）細胞の誤局在化を減少させること、
ｉｉｉ）運動単位の喪失を減少させること、
ｉｖ）Ｔｉａ１、ＦＭＲＰ、およびＧ３ＢＰなどのストレス顆粒マーカーを減少させることなど、ストレス顆粒の形成を減少させること、
ｖ）ｐ−タウ陽性病変を減少させること、ならびに
ｖｉ）Ｐ６２および／もしくはＬＣ３の発現または細胞質凝集を減少させること。
【０１５９】
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の機能的断片または多様体である。
【０１６０】
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の機能的断片または多様体であり、Ｈｓｐ７０は、野生型Ｈｓｐ７０の１つ以上の欠失、付加または置換によって修飾される。
【０１６１】
一実施形態では、生物活性剤は、Ｈｓｐ７０の天然に存在する多様体、またはＨｓｐ７０の天然に存在する多様体の断片である。
【０１６２】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の多様体は、１０位のＤ→Ａ、１１０位のＥ→Ｄ、１９９位のＤ→Ａ、５６１位のＫ→Ｒ、２位のＮ−アセチルアラニン、１０８位のＮ６−アセチルリジン、２４６位のＮ６−アセチルリジン、３４８位のＮ６−アセチルリジン、５６１位のＮ６，Ｎ６，Ｎ６−トリメチルリジン、６３１位のホスホセリン、６３３位のホスホセリン、および６３６位のホスホトレオニンのうちの１つ以上を含む。一実施形態では、Ｈｓｐ７０の天然に存在する多様体は、９６位〜１５０位のアミノ酸が欠落しているアイソフォーム１である（Ｐ０ＤＭＶ８−２）。
【０１６３】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０の機能的断片または多様体は、１つ以上のアミノ酸が置換（または突然変異）されているＨｓｐ７０の多様体である。置換（複数可）は、等価もしくは保存的置換（複数可）、または非等価もしくは非保存的置換（複数可）を含む。用語Ｈｓｐ７０およびその多様体は、当技術分野において公知である化学または酵素触媒反応によって導入された翻訳後修飾、ならびにユビキチン化、標識化、ペグ化、グリコシル化、アミド化、アルキル化およびエステル化などの化学修飾も包含する。一実施形態では、Ｈｓｐ７０は、任意の位置でのアセチル化、リン酸化、メチル化など、翻訳後修飾されている。
【０１６４】
一実施形態では、野生型Ｈｓｐ７０のアミノ酸残基の０．１〜１％、１〜２％など、例えば２〜３％、３〜４％など、例えば４〜５％、５〜１０％など、例えば１０〜１５％、１５〜２０％など、例えば２０〜３０％、３０〜４０％など、例えば４０〜５０％、５０〜６０％など、例えば６０〜７０％、７０〜８０％など、例えば８０〜９０％、９０〜１００％などのアミノ酸残基が置換されている。
【０１６５】
一実施形態では、１〜２個、２〜３個、３〜４個、４〜５個の野生型Ｈｓｐ７０のアミノ酸残基、５〜１０個など、例えば１０〜１５個、１５〜２０個など、例えば２０〜３０個、３０〜４０個など、例えば４０〜５０個、５０〜７５個など、例えば７５〜１００個、１００〜１５０個など、例えば１５０〜２００個、２００〜３００個など、例えば３００〜４００個、４００〜５００個のアミノ酸残基が置換されている。
【０１６６】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０またはＨｓｐ７０の機能的断片または多様体は、融合タンパク質である。一実施形態では、Ｈｓｐ７０またはＨｓｐ７０の機能的断片または多様体は、タグに融合される。
【０１６７】
「同等のアミノ酸残基」とは、ポリペプチドの構造および／または機能性を実質的に変えることなく、ポリペプチド中の別のアミノ酸残基を置換できるアミノ酸残基を指す。したがって、同等のアミノ酸は、側鎖のかさ高さ、側鎖極性（極性または非極性）、疎水性（疎水性または親水性）、ｐＨ（酸性、中性または塩基性）、および炭素分子の側鎖組織（芳香族／脂肪族）などの同様の特性を有する。したがって、「同等のアミノ酸残基」は「保存的アミノ酸置換」とみなされ得る。
【０１６８】
同等のアミノ酸の分類は、一実施形態では、以下のクラスを指す：１）ＨＲＫ、２）ＤＥＮＱ、３）Ｃ、４）ＳＴＰＡＧ、５）ＭＩＬＶおよび６）ＦＹＷ。
【０１６９】
本明細書で適用される「同等のアミノ酸置換」という用語の意味内で、一実施形態では、あるアミノ酸は、本明細書で以下に示されるアミノ酸の群内で別のアミノ酸に置換され得る：
ｉ）極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、およびＣｙｓ）、
ｉｉ）非極性側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、およびＭｅｔ）、
ｉｉｉ）脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇｌｙ、Ａｌａ  Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）、
ｉｖ）環状側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ）、
ｖ）芳香族側鎖を有するアミノ酸（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）、
ｖｉ）酸性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、
ｖｉｉ）塩基性側鎖を有するアミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ）、
ｖｉｉｉ）アミド側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｎ、Ｇｌｎ）、
ｉｘ）ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）、
ｘ）硫黄含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃｙｓ、Ｍｅｔ）、
ｘｉ）中性の弱疎水性アミノ酸（Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）、
ｘｉｉ）親水性の酸性アミノ酸（Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ）、および
ｘｉｉｉ）疎水性アミノ酸（Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ）。
【０１７０】
野生型Ｈｓｐ７０タンパク質は、全長は６４１個のアミノ酸を有する（１位で開始メチオニンを除去した後の６４０個のアミノ酸）。一実施形態では、Ｈｓｐ７０の断片は、Ｈｓｐ７０由来の、５〜２５個のアミノ酸、２５〜５０個のアミノ酸など、例えば、５０〜７５個のアミノ酸、７５〜１００個のアミノ酸など、例えば、１００〜１２５個のアミノ酸、１２５〜１５０個のアミノ酸など、例えば、１５０〜１７５個のアミノ酸、１７５〜２００個のアミノ酸など、例えば、２００〜２２５個のアミノ酸、２２５〜２５０個のアミノ酸など、例えば、２５０〜２７５個のアミノ酸、２７５〜３００個のアミノ酸など、例えば、３００〜３２５個のアミノ酸、３２５〜３５０個のアミノ酸など、例えば、３５０〜３７５個のアミノ酸、３７５〜４００個のアミノ酸など、例えば、４００〜４２５個のアミノ酸、４２５〜４５０個のアミノ酸など、例えば、４５０〜４７５個のアミノ酸、４７５〜５００個のアミノ酸など、例えば、５００〜５２５個のアミノ酸、５２５〜５５０個のアミノ酸など、例えば、５５０〜５７５個のアミノ酸、５７５〜６００個のアミノ酸など、例えば、６００〜６２５個のアミノ酸、６２５〜６４０個のアミノ酸などの全長を有する、野生型タンパク質よりも短い全長を有する任意の断片を含むことを意味する。
【０１７１】
Ｈｓｐ７０の断片は、一実施形態では、野生型タンパク質が切断されたものである。断片は、タンパク質のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかからタンパク質を短縮することによって切断され得るか、または任意のサイズのタンパク質の１つ以上の内部領域を削除することによって切断され得る。
【０１７２】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０は、断片の多様体、すなわち、１つ以上のアミノ酸が本明細書で定義されるように置換されている、本明細書で定義されるＨｓｐ７０の断片である。
【０１７３】
機能的断片または多様体の正確な定量的効果は、完全長分子の効果とは異なり得ることが理解される。場合によっては、機能的断片または多様体は、完全長分子よりも実際により効果的であり得る。
【０１７４】
本開示はまた、置換がタンパク質機能に影響を及ぼすか否かを予測するために配列相同性を使用する計算分析により設計されているＨｓｐ７０の多様体またはその断片に関する（例えば、Ｐａｕｌｉｎｅ  Ｃ．Ｎｇ  ａｎｄ  Ｓｔｅｖｅｎ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第１１巻、Ｉｓｓｕｅ  ５、８６３−８７４、２００１年５月）。
【０１７５】
Ｈｓｐ７０の異所性発現
一実施形態では、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体は、ベクターから発現される。一実施形態では、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体は、ベクターの形態でそれを必要とする個体に投与される。
【０１７６】
Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体を発現させるために使用されるベクターは、一実施形態では、ウイルスベクター（レトロウイルスおよびアデノウイルス）または非ウイルスベクター（例えば、プラスミド、コスミド、バクテリオファージ）からなる群から選択される。
【０１７７】
一実施形態では、ベクターは、複製起点、選択マーカー、および制限エンドヌクレアーゼの１つ以上の認識部位のうちの１つ以上を含む。別の実施形態では、このベクターは、好適な宿主細胞においてＨｓｐ７０またはその機能的断片もしくは多様体の転写を制御する調節配列に作動可能に連結される。
【０１７８】
一実施形態では、本明細書に記載されるように、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体を産生するための方法が提供される。この方法は、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体をコードするベクターを提供するステップ、好適な宿主生物においてｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかでベクターを発現させるステップ、これにより、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体を産生するステップを含む。
【０１７９】
一実施形態では、本明細書で定義されるＨｓｐ７０またはその機能的断片もしくは多様体をコードするベクターを含む単離された組換えまたはトランスジェニック宿主細胞が提供される。
【０１８０】
一実施形態では、組換えまたはトランスジェニック宿主細胞を生成するための方法が提供され、この方法は、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体をコードするベクターを提供するステップと、組換えまたはトランスジェニック宿主細胞にベクターを導入し、任意により組換えまたはトランスジェニック宿主細胞においてもベクターを発現させるステップと、これにより、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体を産生する組換えまたはトランスジェニック宿主細胞を生成するステップとを含む。
【０１８１】
別の実施形態では、Ｈｓｐ７０またはその機能的断片もしくは多様体を産生する宿主細胞を含むトランスジェニック哺乳動物が提供される。さらなる実施形態では、本開示による組換えまたはトランスジェニック宿主細胞を含むトランスジェニック哺乳動物は、非ヒトである。トランスジェニック宿主細胞は、哺乳動物、植物、細菌、酵母または真菌の宿主細胞からなる群から選択することができる。
【０１８２】
細胞へのＤＮＡの送達を改善するには、ＤＮＡを損傷から保護する必要があり、かつ細胞へのＤＮＡの侵入を促進する必要がある。トランスフェクションプロセス中の望ましくない分解からＤＮＡを保護する能力を有するリポプレックスおよびポリプレックスが作製された。プラスミドＤＮＡは、ミセルまたはリポソームなどの組織化された構造内で、脂質により被覆されている。組織化された構造がＤＮＡと複合している場合、リポプレックスと称される。リポソームの形成に使用できる脂質には、陰イオン（負に帯電）、中性、または陽イオン（正に帯電）の３つの種類がある。ＤＮＡとポリマーとの複合体は、ポリプレックスと呼ばれる。ほとんどのポリプレックスは、カチオン性ポリマーで構成されており、その産生は、イオン相互作用によって調節される。
【０１８３】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体を含むベクターは、遺伝子治療に使用され得る。遺伝子治療とは、有害な突然変異対立遺伝子が機能的対立遺伝子に置換される遺伝性疾患などの疾患を治療するために、個体の細胞および組織に遺伝子を挿入することである。
【０１８４】
別の実施形態では、Ｈｓｐ７０、またはその機能的断片もしくは多様体は、裸のＤＮＡとして投与され得る。これは、非ウイルストランスフェクションの最も単純な形式である。裸のＤＮＡの送達は、エレクトロポレーション、ソノポレーション、または高圧ガスを使用してＤＮＡコーティングされた金粒子を細胞内に発射する「遺伝子銃」を使用することによって実行され得る。
【０１８５】
組成物
生物活性剤を未加工の化学物質として投与することは可能であるが、いくつかの実施形態では、それらを医薬配合物の形態で提示することが好ましい。したがって、本明細書で定義される生物活性剤を含む医薬組成物、すなわち医薬的に安全な組成物などの組成物も本明細書で提供される。一実施形態では、本組成物は、薬学的および／または生理学的に許容される担体または賦形剤を含む。
【０１８６】
本開示の生物活性剤を含む医薬組成物は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第２０版、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、２０００年）に記載されている、従来の技術によって調製され得る。
【０１８７】
したがって、これは、前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤を含む、医薬組成物などの組成物を提供する一態様である。
【０１８８】
投与および投与量
本明細書で定義されるものを含む生物活性剤または組成物は、一実施形態では、それを必要とする個体に薬学的有効量または治療的有効量で投与される。
【０１８９】
生物活性剤の治療的有効量とは、一実施形態では、所定の疾患または障害およびその合併症の臨床症状を治癒、予防、リスク低減、軽減または部分的に停止させるのに十分な量である。特定の治療目的に有効な量は、障害の重症度および種類、ならびに対象の体重および全身状態に依存する。これを達成するのに十分な量は、「治療有効量」と定義される。
【０１９０】
一実施形態では、組成物は、１μｇ／日〜１００ｍｇ／日、１μｇ〜１０μｇ／日など、１０μｇ／日〜１００μｇ／日など、１００μｇ／日〜２５０μｇ／日など、２５０μｇ／日〜５００μｇ／日など、５００μｇ／日〜７５０μｇ／日など、７５０μｇ／日〜１ｍｇ／日など、１ｍｇ／日〜２ｍｇ／日など、２ｍｇ／日〜５ｍｇ／日など、または、５ｍｇ／日〜１０ｍｇ／日など、１０ｍｇ／日〜２０ｍｇ／日など、２０ｍｇ／日〜３０ｍｇ／日など、３０ｍｇ／日〜４０ｍｇ／日など、４０ｍｇ／日〜５０ｍｇ／日など、５０ｍｇ／日〜７５ｍｇ／日など、または、７５ｍｇ／日〜１００ｍｇ／日など、１００ｍｇ／日〜１５０ｍｇ／日など、１５０ｍｇ／日〜２００ｍｇ／日など、または２００ｍｇ／日〜２５０ｍｇ／日など、２５０ｍｇ／日〜３００ｍｇ／日など、３００ｍｇ／日〜４００ｍｇ／日など、４００ｍｇ／日〜５００ｍｇ／日など、５００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日など、６００ｍｇ／日〜７００ｍｇ／日など、７００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日など、８００ｍｇ／日〜９００ｍｇ／日など、９００ｍｇ／日〜１０００ｍｇ／日などの用量で投与される。
【０１９１】
一実施形態では、生物活性剤または組成物は、１μｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、１〜１０μｇ／ｋｇ体重など、１０〜１００μｇ／日など、１００〜２５０μｇ／ｋｇ体重など、２５０〜５００μｇ／ｋｇ体重など、５００〜７５０μｇ／ｋｇ体重など、７５０μｇ／ｋｇ体重〜１ｍｇ／ｋｇ体重など、１ｍｇ／ｋｇ体重〜２ｍｇ／ｋｇ体重など、２〜５ｍｇ／ｋｇ体重など、５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重など、１０〜２０ｍｇ／ｋｇ体重など、２０〜３０ｍｇ／ｋｇ体重など、３０〜４０ｍｇ／ｋｇ体重など、４０〜５０ｍｇ／ｋｇ体重など、５０〜７５ｍｇ／ｋｇ体重など、または７５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重などの用量で投与される。
【０１９２】
一実施形態では、用量は、１回または数回／日、１〜６回／日など、１〜５回／日など、１〜４回／日など、１〜３回／日など、１〜２回／日など、２〜４回／日など、２〜３回／日などが投与される。一実施形態では、用量は、１日１回未満、例えば２日おきに１回または週１回投与される。
【０１９３】
投与経路
好ましい投与経路は、治療される対象の一般的な状態および年齢、治療される状態の性質、体内の治療される組織の位置、および選択される活性成分に依存することが理解されるであろう。
【０１９４】
全身治療
一実施形態では、投与経路により、生物活性剤を血流に導入して、最終的に所望の作用部位を標的にすることが可能になる。
【０１９５】
一実施形態では、投与経路は、経腸経路（経口、直腸、鼻、肺、頬、舌下、経皮、大槽内および腹腔内投与など）および／または非経口経路（皮下、筋肉内、くも膜下腔内、静脈内および皮内投与など）などの任意の好適な経路である。
【０１９６】
こうした投与のための適切な剤形は、従来の技術により調製され得る。
【０１９７】
非経口投与
非経口投与は、経口／経腸経路ではない任意の投与経路であり、これにより生物活性剤は、肝臓での初回通過分解が回避される。したがって、非経口投与としては、例えば、静脈内投与、筋肉内投与または皮下投与などのボーラス注射または連続注入などの任意の注射および注入が挙げられる。さらに、非経口投与としては、吸入および局所投与が挙げられる。
【０１９８】
したがって、一実施形態では、生物活性剤または組成物は、鼻内、膣内、目内、口内、生殖管内、肺内、胃腸管内、または直腸内の、例えば鼻または口の粘膜など、動物の任意の粘膜を通過するように局所投与される。したがって、非経口投与としては、頬側または舌下、鼻、直腸、膣および腹腔内投与、ならびに吸入または設置による肺および気管支投与も挙げることができる。いくつかの実施形態では、生物活性剤は、皮膚を通過するために局所投与される。
【０１９９】
一実施形態では、非経口投与の静脈内、皮下および筋肉内形態が使用される。
【０２００】
局所治療
一実施形態では、生物活性剤または組成物は局所治療として使用される、すなわち、作用部位（複数可）に直接導入される。したがって、生物活性剤は、皮膚または粘膜に直接適用されてもよく、または生物活性剤は、作用部位、例えば病変組織または病変組織に直接つながる末端動脈に注入されてもよい。
【０２０１】
併用治療
これは、また、他の治療法と組み合わせて、前頭側頭障害の治療に使用するための、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤を提供する態様でもある。
【０２０２】
したがって、一実施形態では、生物活性剤は、前頭側頭障害の従来のまたは既知の治療法などの少なくとも１つの他の治療法と組み合わせて、それを必要とする個体に投与される。
【０２０３】
複数の治療法を組み合わせて投与することは、同時または連続のいずれかにより行ってもよい。同時投与は、同じ組成物に含まれるまたは別々の組成物に含まれる２つの化合物であってもよく、または１つの組成物と１つの他の治療法が本質的に同時に行われてもよい。連続投与とは、１つの治療法を最初に投与し、その後に２番目の治療法を投与するなど、複数の治療法が異なる時点で投与されることを意味する。複数の治療法を連続して投与するための時間枠は、最適な効果を達成するために当業者によって決定されてもよく、一実施形態では３０分〜７２時間であり得る。
【０２０４】
化学化合物の形態の治療法は、それぞれ最も効果的な投与量で、一緒にまたは別々に投与され得る。複数の化合物を投与することは、相乗効果を有し得るため、各薬物の必要な投与量を効果的に減少させる。
【０２０５】
これも、前頭側頭障害の治療に使用するための、ｉ）Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤、ならびにｉｉ）他の治療法を、別々にまたは一緒に含む組成物を提供する一態様である。
【０２０６】
一実施形態では、前頭側頭障害のための他の治療法、または従来のもしくは既知の治療法。
【０２０７】
一実施形態では、Ｈｓｐ７０などの１つ以上の熱ショックタンパク質の細胞内濃度および／または活性を増加させる生物活性剤は、１つ以上のさらなる活性成分と組み合わせて投与され、かつ／または組み合わせ生成物として配合される。
【０２０８】
配列
配列番号１：ホモサピエンス熱ショック７０ｋＤａタンパク質１Ａのタンパク質配列（ＨＳＰＡ１Ａ＿ＨＵＭＡＮ）（ＮＭ＿００５３４５．５／ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０ＤＭＶ８）：
MAKAAAIGIDLGTTYSCVGVFQHGKVEIIANDQGNRTTPSYVAFTDTERLIGDAAKNQVALNPQNTVFDAKRLIGRKFGDPVVQSDMKHWPFQVINDGDKPKVQVSYKGETKAFYPEEISSMVLTKMKEIAEAYLGYPVTNAVITVPAYFNDSQRQATKDAGVIAGLNVLRIINEPTAAAIAYGLDRTGKGERNVLIFDLGGGTFDVSILTIDDGIFEVKATAGDTHLGGEDFDNRLVNHFVEEFKRKHKKDISQNKRAVRRLRTACERAKRTLSSSTQASLEIDSLFEGIDFYTSITRARFEELCSDLFRSTLEPVEKALRDAKLDKAQIHDLVLVGGSTRIPKVQKLLQDFFNGRDLNKSINPDEAVAYGAAVQAAILMGDKSENVQDLLLLDVAPLSLGLETAGGVMTALIKRNSTIPTKQTQIFTTYSDNQPGVLIQVYEGERAMTKDNNLLGRFELSGIPPAPRGVPQIEVTFDIDANGILNVTATDKSTGKANKITITNDKGRLSKEEIERMVQEAEKYKAEDEVQRERVSAKNALESYAFNMKSAVEDEGLKGKISEADKKKVLDKCQEVISWLDANTLAEKDEFEHKRKELEQVCNPIISGLYQGAGGPGPGGFGAQGPKGGSGSGPTIEEVD
【０２０９】
配列番号２：配列番号１の開始メチオニン（１位のＭ）を除去して、６４０個のアミノ酸長の配列（２〜６４１位）を得る：
AKAAAIGIDLGTTYSCVGVFQHGKVEIIANDQGNRTTPSYVAFTDTERLIGDAAKNQVALNPQNTVFDAKRLIGRKFGDPVVQSDMKHWPFQVINDGDKPKVQVSYKGETKAFYPEEISSMVLTKMKEIAEAYLGYPVTNAVITVPAYFNDSQRQATKDAGVIAGLNVLRIINEPTAAAIAYGLDRTGKGERNVLIFDLGGGTFDVSILTIDDGIFEVKATAGDTHLGGEDFDNRLVNHFVEEFKRKHKKDISQNKRAVRRLRTACERAKRTLSSSTQASLEIDSLFEGIDFYTSITRARFEELCSDLFRSTLEPVEKALRDAKLDKAQIHDLVLVGGSTRIPKVQKLLQDFFNGRDLNKSINPDEAVAYGAAVQAAILMGDKSENVQDLLLLDVAPLSLGLETAGGVMTALIKRNSTIPTKQTQIFTTYSDNQPGVLIQVYEGERAMTKDNNLLGRFELSGIPPAPRGVPQIEVTFDIDANGILNVTATDKSTGKANKITITNDKGRLSKEEIERMVQEAEKYKAEDEVQRERVSAKNALESYAFNMKSAVEDEGLKGKISEADKKKVLDKCQEVISWLDANTLAEKDEFEHKRKELEQVCNPIISGLYQGAGGPGPGGFGAQGPKGGSGSGPTIEEVD
【０２１０】
配列番号３：ホモサピエンス熱ショック７０ｋＤａタンパク質１Ａの核酸（ＤＮＡ）配列（ＨＳＰＡ１Ａ）（ＮＭ＿００５３４５．５）：
1 ataaaagccc aggggcaagc ggtccggata acggctagcc tgaggagctg ctgcgacagt
61 ccactacctt tttcgagagt gactcccgtt gtcccaaggc ttcccagagc gaacctgtgc
121 ggctgcaggc accggcgcgt cgagtttccg gcgtccggaa ggaccgagct cttctcgcgg
181 atccagtgtt ccgtttccag cccccaatct cagagcggag ccgacagaga gcagggaacc
241 ggcatggcca aagccgcggc gatcggcatc gacctgggca ccacctactc ctgcgtgggg
301 gtgttccaac acggcaaggt ggagatcatc gccaacgacc agggcaaccg caccaccccc
361 agctacgtgg ccttcacgga caccgagcgg ctcatcgggg atgcggccaa gaaccaggtg
421 gcgctgaacc cgcagaacac cgtgtttgac gcgaagcggc tgattggccg caagttcggc
481 gacccggtgg tgcagtcgga catgaagcac tggcctttcc aggtgatcaa cgacggagac
541 aagcccaagg tgcaggtgag ctacaagggg gagaccaagg cattctaccc cgaggagatc
601 tcgtccatgg tgctgaccaa gatgaaggag atcgccgagg cgtacctggg ctacccggtg
661 accaacgcgg tgatcaccgt gccggcctac ttcaacgact cgcagcgcca ggccaccaag
721 gatgcgggtg tgatcgcggg gctcaacgtg ctgcggatca tcaacgagcc cacggccgcc
781 gccatcgcct acggcctgga cagaacgggc aagggggagc gcaacgtgct catctttgac
841 ctgggcgggg gcaccttcga cgtgtccatc ctgacgatcg acgacggcat cttcgaggtg
901 aaggccacgg ccggggacac ccacctgggt ggggaggact ttgacaacag gctggtgaac
961 cacttcgtgg aggagttcaa gagaaaacac aagaaggaca tcagccagaa caagcgagcc
1021 gtgaggcggc tgcgcaccgc ctgcgagagg gccaagagga ccctgtcgtc cagcacccag
1081 gccagcctgg agatcgactc cctgtttgag ggcatcgact tctacacgtc catcaccagg
1141 gcgaggttcg aggagctgtg ctccgacctg ttccgaagca ccctggagcc cgtggagaag
1201 gctctgcgcg acgccaagct ggacaaggcc cagattcacg acctggtcct ggtcgggggc
1261 tccacccgca tccccaaggt gcagaagctg ctgcaggact tcttcaacgg gcgcgacctg
1321 aacaagagca tcaaccccga cgaggctgtg gcctacgggg cggcggtgca ggcggccatc
1381 ctgatggggg acaagtccga gaacgtgcag gacctgctgc tgctggacgt ggctcccctg
1441 tcgctggggc tggagacggc cggaggcgtg atgactgccc tgatcaagcg caactccacc
1501 atccccacca agcagacgca gatcttcacc acctactccg acaaccaacc cggggtgctg
1561 atccaggtgt acgagggcga gagggccatg acgaaagaca acaatctgtt ggggcgcttc
1621 gagctgagcg gcatccctcc ggcccccagg ggcgtgcccc agatcgaggt gaccttcgac
1681 atcgatgcca acggcatcct gaacgtcacg gccacggaca agagcaccgg caaggccaac
1741 aagatcacca tcaccaacga caagggccgc ctgagcaagg aggagatcga gcgcatggtg
1801 caggaggcgg agaagtacaa agcggaggac gaggtgcagc gcgagagggt gtcagccaag
1861 aacgccctgg agtcctacgc cttcaacatg aagagcgccg tggaggatga ggggctcaag
1921 ggcaagatca gcgaggcgga caagaagaag gtgctggaca agtgtcaaga ggtcatctcg
1981 tggctggacg ccaacacctt ggccgagaag gacgagtttg agcacaagag gaaggagctg
2041 gagcaggtgt gtaaccccat catcagcgga ctgtaccagg gtgccggtgg tcccgggcct
2101 gggggcttcg gggctcaggg tcccaaggga gggtctgggt caggccccac cattgaggag
2161 gtagattagg ggcctttcca agattgctgt ttttgttttg gagcttcaag actttgcatt
2221 tcctagtatt tctgtttgtc agttctcaat ttcctgtgtt tgcaatgttg aaattttttg
2281 gtgaagtact gaacttgctt tttttccggt ttctacatgc agagatgaat ttatactgcc
2341 atcttacgac tatttcttct ttttaataca cttaactcag gccatttttt aagttggtta
2401 cttcaaagta aataaacttt aaaattcaaa aaaaaaaaaa aaaaa
【０２１１】
配列番号４：ホモサピエンス熱ショック７０ｋＤａタンパク質１Ｂのタンパク質配列（ＨＳＰＡ１Ｂ＿ＨＵＭＡＮ）（ＮＭ＿００５３４６．４／ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０ＤＭＶ９）：
MAKAAAIGIDLGTTYSCVGVFQHGKVEIIANDQGNRTTPSYVAFTDTERLIGDAAKNQVALNPQNTVFDAKRLIGRKFGDPVVQSDMKHWPFQVINDGDKPKVQVSYKGETKAFYPEEISSMVLTKMKEIAEAYLGYPVTNAVITVPAYFNDSQRQATKDAGVIAGLNVLRIINEPTAAAIAYGLDRTGKGERNVLIFDLGGGTFDVSILTIDDGIFEVKATAGDTHLGGEDFDNRLVNHFVEEFKRKHKKDISQNKRAVRRLRTACERAKRTLSSSTQASLEIDSLFEGIDFYTSITRARFEELCSDLFRSTLEPVEKALRDAKLDKAQIHDLVLVGGSTRIPKVQKLLQDFFNGRDLNKSINPDEAVAYGAAVQAAILMGDKSENVQDLLLLDVAPLSLGLETAGGVMTALIKRNSTIPTKQTQIFTTYSDNQPGVLIQVYEGERAMTKDNNLLGRFELSGIPPAPRGVPQIEVTFDIDANGILNVTATDKSTGKANKITITNDKGRLSKEEIERMVQEAEKYKAEDEVQRERVSAKNALESYAFNMKSAVEDEGLKGKISEADKKKVLDKCQEVISWLDANTLAEKDEFEHKRKELEQVCNPIISGLYQGAGGPGPGGFGAQGPKGGSGSGPTIEEVD
【０２１２】
配列番号５：配列番号４の開始メチオニン（１位のＭ）を除去して、６４０個のアミノ酸長の配列（２〜６４１位）を得る：
AKAAAIGIDLGTTYSCVGVFQHGKVEIIANDQGNRTTPSYVAFTDTERLIGDAAKNQVALNPQNTVFDAKRLIGRKFGDPVVQSDMKHWPFQVINDGDKPKVQVSYKGETKAFYPEEISSMVLTKMKEIAEAYLGYPVTNAVITVPAYFNDSQRQATKDAGVIAGLNVLRIINEPTAAAIAYGLDRTGKGERNVLIFDLGGGTFDVSILTIDDGIFEVKATAGDTHLGGEDFDNRLVNHFVEEFKRKHKKDISQNKRAVRRLRTACERAKRTLSSSTQASLEIDSLFEGIDFYTSITRARFEELCSDLFRSTLEPVEKALRDAKLDKAQIHDLVLVGGSTRIPKVQKLLQDFFNGRDLNKSINPDEAVAYGAAVQAAILMGDKSENVQDLLLLDVAPLSLGLETAGGVMTALIKRNSTIPTKQTQIFTTYSDNQPGVLIQVYEGERAMTKDNNLLGRFELSGIPPAPRGVPQIEVTFDIDANGILNVTATDKSTGKANKITITNDKGRLSKEEIERMVQEAEKYKAEDEVQRERVSAKNALESYAFNMKSAVEDEGLKGKISEADKKKVLDKCQEVISWLDANTLAEKDEFEHKRKELEQVCNPIISGLYQGAGGPGPGGFGAQGPKGGSGSGPTIEEVD
【０２１３】
配列番号６ホモサピエンス熱ショック７０ｋＤａタンパク質１Ｂの核酸（ＤＮＡ）配列（ＨＳＰＡ１Ｂ）（ＮＭ＿００５３４６．４）：
1 ggaaaacggc cagcctgagg agctgctgcg agggtccgct tcgtctttcg agagtgactc
61 ccgcggtccc aaggctttcc agagcgaacc tgtgcggctg caggcaccgg cgtgttgagt
121 ttccggcgtt ccgaaggact gagctcttgt cgcggatccc gtccgccgtt tccagccccc
181 agtctcagag cggagcccac agagcagggc accggcatgg ccaaagccgc ggcgatcggc
241 atcgacctgg gcaccaccta ctcctgcgtg ggggtgttcc aacacggcaa ggtggagatc
301 atcgccaacg accagggcaa ccgcaccacc cccagctacg tggccttcac ggacaccgag
361 cggctcatcg gggatgcggc caagaaccag gtggcgctga acccgcagaa caccgtgttt
421 gacgcgaagc ggctgatcgg ccgcaagttc ggcgacccgg tggtgcagtc ggacatgaag
481 cactggcctt tccaggtgat caacgacgga gacaagccca aggtgcaggt gagctacaag
541 ggggagacca aggcattcta ccccgaggag atctcgtcca tggtgctgac caagatgaag
601 gagatcgccg aggcgtacct gggctacccg gtgaccaacg cggtgatcac cgtgccggcc
661 tacttcaacg actcgcagcg ccaggccacc aaggatgcgg gtgtgatcgc ggggctcaac
721 gtgctgcgga tcatcaacga gcccacggcc gccgccatcg cctacggcct ggacagaacg
781 ggcaaggggg agcgcaacgt gctcatcttt gacctgggcg ggggcacctt cgacgtgtcc
841 atcctgacga tcgacgacgg catcttcgag gtgaaggcca cggccgggga cacccacctg
901 ggtggggagg actttgacaa caggctggtg aaccacttcg tggaggagtt caagagaaaa
961 cacaagaagg acatcagcca gaacaagcga gccgtgaggc ggctgcgcac cgcctgcgag
1021 agggccaaga ggaccctgtc gtccagcacc caggccagcc tggagatcga ctccctgttt
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【０２１４】
実施例
アリモクロモールによる突然変異ＶＣＰマウスおよびＶＣＰ患者ｉＰＳＣ由来運動ニューロンの治療はＦＴＤおよびＡＬＳ病理を改善する
【０２１５】
緒言
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、６５歳未満で最も一般的なタイプの認知症であり、英国では１００，０００人あたり約３．５人の発生率であり、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は１００，０００人あたり２人の発生率である。残念ながら、今日まで、これらの衰弱性疾患の治療法は存在していない。これらの疾患の原因を特定することに、広範な研究努力が向けられているが、折り畳み不全凝集タンパク質の存在を有する脳および脊髄内のタンパク質恒常性異常の明確なエビデンスが存在する（１）。バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）は、通常のタンパク質分解経路の中心的なタンパク質である。このタンパク質内の突然変異は、ユビキチン陽性のタンパク質様凝集体と、細胞質に移行するＲＮＡ調節タンパク質である核ＴＤＰ−４３の誤局在化を引き起こし得る。これらは両方ともＦＴＤおよびＡＬＳの両方の顕著な病理学的特徴であるため、タンパク質のミスハンドリングを標的にすることは、これらの疾患の効果的な治療アプローチになり得る。
【０２１６】
この可能性を調査するために、早期発症パジェット病および前頭側頭型認知症（ＩＢＭＰＦＤ）を伴う封入体ミオパチーとしても公知である多系統タンパク蓄積症のトランスジェニックマウスモデルの神経組織における熱ショック応答（ＨＳＲ）の増強効果を調べた。これらのマウスの病理は、突然変異ヒトＶＣＰ（Ａ２３２Ｅ突然変異）の過剰発現によって引き起こされ、これは患者においても最も重篤な形態の多系統タンパク蓄積症を引き起こす。さらに、ｍＶＣＰ患者のヒトｉＰＳＣ由来の運動ニューロンにおけるアリモクロモールの効果も調べ、確認した。
【０２１７】
ＨＳＲは、細胞のストレスに対する内因性の細胞保護応答であり、これは、タンパク質のハンドリングの改善および細胞のタンパク質の恒常性の回復の試みにおける、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）と呼ばれる重要な分子シャペロンの発現の上方制御を伴う。本発明者らは、アリモクロモールと呼ばれるＨＳＲの共誘導物質による熱ショック応答（ＨＳＲ）の薬理学的上方制御により、ＡＬＳ（２）および脊髄球状筋萎縮（３）などの神経変性疾患のマウスモデルにおいて疾患が軽減されることを以前示した。
【０２１８】
さらに、最近、アリモクロモールによる処理により、突然変異ＶＣＰ（ｍＶＣＰ）マウスの筋肉の病理が軽減され、これにより、骨格筋の炎症性ミオパチー封入体ミオパチー（ＩＢＭ）の特徴が再現されることを示した（４、５）。これらの結果は、ｍＶＣＰマウスをアリモクロモールにより処理することで、タンパク質の凝集の減少、ＴＤＰ−４３の誤局在化の低下、ならびに筋線維の萎縮および変性の減少をもたらすことを示した。野生型ヒトＶＣＰ（ｗｔ−ＶＣＰ）を有するトランスジェニックマウスでは、生後４か月〜１４か月の間に体重に対する握力の有意な低下は観察されなかったが、ｍＶＣＰマウスでは、この期間中に握力の４４．１％の大幅な低下が示された。興味深いことに、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスでは、研究期間内において握力の有意な低下はなかった。さらに、月齢１４ヶ月のマウスの後肢長指伸（ＥＤＬ）筋の最大強縮力のｉｎ  ｖｉｖｏ評価により、ｗｔ−ＶＣＰ対照と比較して、ｍＶＣＰマウスのＥＤＬ筋によって生じる力の有意な減少が明らかになった。しかし、アリモクロモールによるｍＶＣＰマウスの処理では、この筋力の低下が防止された。これらの結果は、月齢４ヶ月から１４ヶ月の間にｍＶＣＰマウスにおいて筋力の有意な喪失があり、これがアリモクロモールによる慢性治療によって防止されることを示している。
【０２１９】
ｍＶＣＰマウスの筋肉病理に対するアリモクロモールのこれらの有益な効果により、少なくとも部分的には、ＨＳＰの発現の増加がもたらされる可能性がある。これは、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの筋肉のウェスタンブロット分析では、未処置のｍＶＣＰマウスと比較して、ＨＳＰ７０の発現が２倍増加したことを示したためである。
【０２２０】
方法
トランスジェニックマウスコロニー：突然変異バロシン含有タンパク質（ＶＣＰ）（Ａ２３２Ｅ）および対照野生型ＶＣＰ（ｗｔＶＣＰ）トランスジェニックマウスのコロニーは、英国内務省のライセンス下でのＵＣＬ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙにおいて維持された。
【０２２１】
アリモクロモール処理：突然変異ＶＣＰ（ｍＶＣＰ）雄マウスを、アリモクロモール（１２０ｍｇ／ｋｇ／日；飲料水で経口）で、４ヶ月での症状発現の開始から１４ヶ月での末期に近くなるまで処理した。野生型ヒトＶＣＰ（ｗｔ−ＶＣＰ）を過剰発現するトランスジェニックマウスを対照として使用し、１０匹／群の雄マウスを調べた。サンプルサイズは、単一の性別群、Ｐ＜０．０５において、統計的有意性をテストするのに十分であった。
【０２２２】
運動単位数：すべての実験群のマウスの後肢長指伸（ＥＤＬ）筋の運動単位の数を定量化するために、ｉｎ  ｖｉｖｏ生理学は、月齢１４ヶ月の最終麻酔マウスにおいて急性的に実施した。簡潔に言えば、電極を介して０．０２ｍｓの持続時間および超最大強度のパルスを使用して長指伸（ＥＤＬ）運動神経を刺激することにより、等尺性収縮を誘発した。坐骨神経の刺激により、収縮が誘発された。ＥＤＬ筋内の運動単位の数は、強さを増大する刺激により運動神経を刺激することにより決定され、運動軸索が連続的に動員されることにより、単収縮張力の段階的な増加となる。
【０２２３】
運動ニューロン数および面積測定：Ｌ３〜Ｌ６からの２０μｍの脊髄切片をガロシアニンで染色して、定量化のためにニューロンを可視化した（マウス５匹／群）。Ｌｅｉｃａ光学顕微鏡で見られるように、坐骨プールの運動ニューロンを３番目のセクションから数えた。動物ごとに脊髄の坐骨プール領域の２０枚の画像を撮影し、この領域に存在する運動ニューロンのサイズ分布を測定した（倍率２０倍）。実験群ごとに最低３匹のマウスを評価した。運動ニューロンの体細胞領域は、脊髄のＬ４〜Ｌ５領域の断面画像において、個々のニッスル染色した（ガロシアニン）運動ニューロン細胞体を描くことにより決定した。これは、Ｌｅｉｃａ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｕｉｔｅ  Ｖ３．８分析ソフトウェアを使用して記録され、群あたりの運動ニューロンの総数の割合として提示した。
【０２２４】
免疫組織化学：生理食塩水、およびその後に４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いた経心臓灌流後、すべての実験群のマウスから脳および脊髄を採取した。次に、脳および脊髄を４％ＰＦＡ中に１２時間保持し、その後３０％スクロース溶液に移した。脳および脊髄の断面を２０μｍで切断し、０．１％Ｔｒｉｔｏｎｘ１００を含む１０％正常ヤギ血清含有ＰＢＳでブロックした後、一次抗体を室温で１時間添加した。一次抗体：ウサギ抗ＴＤＰ−４３［１：５００］、ウサギ抗ユビキチン［１：５００］、マウス抗ホスホタウ（ＡＴ８）［１：１００］、ウサギ／マウス抗ベータ３チューブリン［１：１００］、マウス抗−ＨＳＰ７０［１：１００］、マウス抗−ｐ６２［１：２００］、ウサギ抗−ＬＣ３［１：５００］ウサギ抗−Ｉｂａ１［１：１００］、抗ニューロフィラメント２Ｈ３［１：２０］、シナプス小胞タンパク質［１：２０］、フルオロミエリン赤ミエリン染色［１：３００］。蛍光標識またはビオチン化二次抗体を、室温で２時間、１：１０００で使用した。４’６−ジアミジノ−２−フェニルインドール、ジヒドロクロリド（ＤＡＰＩ）を使用して、すべての蛍光画像の核を対比染色した。組織の画像化には、標準のＬｅｉｃａ光学／蛍光顕微鏡またはＬＳＭ７８０共焦点顕微鏡を使用した。
【０２２５】
α−ブンガロトキシン−テトラメチルローダミンを使用して、神経筋接合部終板をＲＴＰで１時間蛍光標識した。
【０２２６】
蛍光画像は、Ｌｅｉｃａ蛍光顕微鏡で可視化し、Ｌｅｉｃａ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｕｉｔｅソフトウェアを使用して分析した（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）。
【０２２７】
ヒトｉＰＳＣ由来の運動ニューロンの生成：ｉＰＳＣは、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ８培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含むＧｅｌｔｒｅｘ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で維持し、ＥＤＴＡを使用して継代させた（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、０．５ｍＭ）。すべての細胞培養は、３７℃および５％二酸化炭素で維持した。以前に公開されたプロトコルを使用して、運動ニューロン（ＭＮ）の分化を実行した（Ｈａｌｌら、２０１７年）。簡潔に言うと、ｉＰＳＣは、ＤＭＥＭ／Ｆ１２  Ｇｌｕｔａｍａｘ、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ、Ｌグルタミン、Ｎ２サプリメント、非必須アミノ酸、Ｂ２７サプリメント、β−メルカプトエタノール（すべてＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）およびインスリン（Ｓｉｇｍａ）からなる化学的に定義された培地に１００％コンフルエントになるようにプレーティングすることにより、最初に神経上皮に分化させた。０〜７日目の小分子による処理は以下のとおりであった：１μＭドルソモルフィン（Ｓｉｇｍａ）、２μＭＳＢ４３１５４２（Ｓｉｇｍａ）、および３μＭＣＨＩＲ９９０２１（Ｓｉｇｍａ）。８日目に、ディスパーゼ（ＧＩＢＣＯ、１ｍｇ／ｍｌ）を使用して神経上皮層を酵素的に解離し、Ｇｅｌｔｒｅｘコーティングプレートにプレーティングし、次に、０．５μＭレチノイン酸および１μＭプルモルファミンで７日間パターニングした。１４日目に脊髄ＭＮ前駆体を０．１μＭプルモルファミンでさらに４日間処理した後、細胞周期の終了を促進するために０．１μＭの化合物Ｅ（Ｓｉｇｍａ）中で最終分化させた。細胞を最終分化後２４時間、１０μＭアリモクロモールで処理し、免疫標識のためにＰＦＡで固定した。
【０２２８】
ヒトの脳サンプル：凍結したヒト脳サンプルは、Ｑｕｅｅｎ  Ｓｑｕａｒｅ  Ｂｒａｉｎ  Ｂａｎｋ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ（ＵＣＬ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ）から入手した。皮質切片は、ガラススライド上で、１２μｍ凍結切片で受けた。免疫組織化学および免疫蛍光染色は、標準的な組織学プロトコルを用いて行った。使用した一次抗体は以下のとおりである：ウサギ抗−ＴＤＰ−４３［１：５００］、マウス抗−ＨＳＰ７０［１：１００］、マウス抗−ｐ６２［１：２００］、ウサギ抗−ＬＣ３［１：５００］。ＤＡＰＩは、１：１０００を使用して核を標識した。
【０２２９】
結果
ｍＶＣＰマウスの運動単位およびニューロンの喪失は、アリモクロモール処理によって防止される。
本発明者らのｉｎ  ｖｉｖｏ研究から得られた生理学的データは、野生型ＶＣＰ対照と比較して、ｍＶＣＰマウスの後肢筋を神経支配する運動単位の数が減少していること、およびこの運動単位生存率の低下がアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスにおいては防止されていることを示している（図１）。これらの発見は、ｍＶＣＰマウスにおいて顕著な運動ニューロンの変性があり、これがｍＶＣＰマウスで検出される、観察された筋力低下に寄与する可能性があることを示唆している。
【０２３０】
脊髄の坐骨プール（Ｌ３〜６）の運動ニューロンの数を定量化することにより、対照と比較して、ｍＶＣＰマウスの運動ニューロンの生存率が有意に低下することが明らかである（図２）。運動ニューロンの生存率のこの低下は、アリモクロモールで処理されたマウスにおいては、防止される。運動ニューロンの体細胞サイズの評価では、対照と比較して、ｍＶＣＰマウスにおいてより小さい運動ニューロンサイズへの明確な移行が示され、より大きい（アルファ）運動ニューロンの喪失が示唆された。この移行は、アリモクロモール処理マウスでは見られない。
【０２３１】
ｍＶＣＰマウスのＴＤＰ−４３病理は、アリモクロモール処理により軽減する。
核タンパク質ＴＤＰ−４３のＣ末端部分は、ｍＶＣＰマウスの脳および脊髄の細胞質での誤局在化となり、ＡＬＳおよびＦＴＤ患者の双方において、病理学的特徴であるＴＤＰ−４３の核クリアランスが、脳組織において観察された（図３および図４）。ＴＤＰ−４３の誤局在化は、アリモクロモール処理したｍＶＣＰマウスにおいて減少した。ｗｔＶＣＰまたは非トランスジェニック対照では、細胞質ＴＤＰ−４３の免疫染色は観察されなかった。
【０２３２】
ｍＶＣＰマウスで検出された細胞内ユビキチンタンパク質の凝集および細胞外ｐ−タウは、アリモクロモール処理したｍＶＣＰマウスでは検出されていない。
ｍＶＣＰマウスは、脳組織および脊髄組織の両方でユビキチン陽性の細胞内凝集体を発達させる（図５および図６）。ｐ６２陽性凝集体は、脊髄運動ニューロンでも観察される。リン酸化タウ陽性（ｐ−ｔａｕ）細胞外凝集体／病変は、ｍＶＣＰマウスの脳に存在するが、野生型対照では観察されない（図６）。これらの病変は、ミクログリアマーカーＩｂａ１またはアストログリアマーカーＧＦＡＰでは免疫反応性であるグリア細胞に関連しており、脳による病理改善の試みを示唆している。アリモクロモール処理は、ｍＶＣＰマウスにおいて、これらのタンパク質凝集体の形成を防止する。非トランスジェニック対照と比較して、ｗｔＶＣＰ対照では、ユビキチンまたはｐ−タウの免疫反応性に差異は観察されなかった。
【０２３３】
灰白質および白質のタンパク質分解の増加およびｍＶＣＰ脊髄でのミエリン変性は、アリモクロモール処理によって改善される。
ｐ６２（セクエストソーム）は、異常なタンパク質をプロテアソームに、および分解のためのオートファジーのためにシャトルし、ＬＣ３はオートファジーのマーカーである。本発明者らの結果は、対照と比較して、ｍＶＣＰマウスの脊髄白質および灰白質におけるｐ６２発現の実質的な増加を示している（図５Ｂおよび図５Ｃ）。運動ニューロンには、ｐ６２凝集体が観察され、フルオロミエリンで共標識されたオリゴデンドロサイトでは強いｐ６２染色が観察された。これらのオリゴデンドロサイトの高倍率画像により、軸索周囲の髄鞘形成の大きい破壊が明らかになり、これにより、軸索またはミエリンの変性が示唆される。ｐ６２発現のこのパターンは、対照では見られなかった。
【０２３４】
分解を受けるタンパク質に関連する場合に通常取り除かれるｐ６２の蓄積は、ｍＶＣＰマウスのオートファジーの欠陥の可能性が示唆される。このため、オートリソソーム内腔で分解される前に、オートファゴソーム膜に動員されるタンパク質であるＬＣ３の発現を調べた。これにより、細胞内でのオートファジー活性が示された（９）。ｍＶＣＰ脊髄では、異常なミエリンに関連するオリゴデンドロサイトでＬＣ３の発現の大幅な増加が検出され、これらの細胞内でのオートファジーの欠陥のさらなるエビデンスが得られた（図５Ｄ）。ＬＣ３の発現および異常な髄鞘形成のこのパターンは、トランスジェニック対照動物では観察されなかった。しかし、ｐ６２の蓄積、ミエリン異常、およびＬＣ３の発現の増加は、アリモクロモール処理したｍＶＣＰマウスにおいて、有意に改善された。
【０２３５】
アリモクロモール処理は、ｍＶＣＰマウスの脳および脊髄におけるＨＳＰ７０の発現を促進する。
熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）の発現は、細胞における熱ショック応答の重要なマーカーである。このタンパク質は、ｍＶＣＰマウスの脳および脊髄内で増加し、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの脳および脊髄内でさらに増加している（図７および図８）。これは、熱ショック応答が誘導されていることを示す。アリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスの脊髄および脳内のグリア細胞も、ＨＳＰ７０の発現の増加を示しており、このことは、神経支持ネットワークが熱ショック応答を介して、神経細胞の生存にも寄与し得ることを示唆している。トランスジェニックおよび非トランスジェニック対照マウスでは、ＨＳＰ７０の発現の差異は観察されなかった。
【０２３６】
アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの脳内では細胞死が防止される。
ＶＣＰでの突然変異は、すべてのＦＴＤ症例の１％未満を引き起こし２０、ＶＣＰ内の突然変異によって引き起こされた多系統蛋白蓄積症（ＭＳＰ）と診断された患者の３分の１はＦＴＤを発症し続ける８。このため、ＦＴＤ様病理学について、ｍＶＣＰマウスの脳を調べた。
【０２３７】
脳内のアポトーシスは、アポトーシス細胞のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）ｄＵＴＰニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）アッセイによって評価した。このアッセイでは、ＤＮＡ内に二本鎖切断を含む核は、緑の蛍光を発する（フルオレセインタグ）。このことは、アポトーシスの後期でのＤＮＡ分解を示す（図９）。一部のｍＶＣＰマウスでは、皮質のレイヤーＩの小さい領域でＴＵＮＥＬ陽性核が検出されたが、これは対照動物では見られず、このことは、アポトーシスを起こしている脳細胞を示している。アリモクロモールによるｍＶＣＰマウスの処理は、これらのマウスの脳内でのアポトーシス細胞の出現を防止した。
【０２３８】
アリモクロモール処理動物では見られないｍＶＣＰ細胞の凝集体で検出されたストレス顆粒マーカー
ストレス顆粒の３つのマーカー、Ｔｉａ１、ＦＭＲＰ、およびＧ３ＢＰを使用して、これらのＲＮＡ含有構造の存在を検出した（図１０）。３つのマーカーはすべて、ｍＶＣＰマウスの脳内で異常に凝集していることがわかったが、対照動物の脳またはアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスでは観察されなかった。
【０２３９】
神経筋接合部（ＮＭＪ）の欠陥は、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウス内で防止される。
ＮＭＪは、運動ニューロンを神経線維に結合する化学シナプスであり、神経支配するため、その形態および機能の保持は、筋収縮を誘発するために重要である。ｍＶＣＰマウスでは、ＮＭＪの破壊および除神経の明確なエビデンスがあり（図１１）、これは同じ群のマウスの筋肉機能欠損の発見と一致している。ＮＭＪおよび除神経のこれらの欠陥は、アリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスの筋肉では観察されなかった。これらの破壊されたＮＭＪ構造は、対照マウスまたはアリモクロモール処理したｍＶＣＰマウスでは見られなかった。
【０２４０】
ＶＣＰ病理の病理学的特質は、ｍＶＣＰ患者由来のｉＰＳＣ運動ニューロン内に存在し、アリモクロモールによる処理後に改善される。
ＴＤＰ−４３の誤局在化は、ＦＴＤおよびＡＬＳの両方の病理の特徴的な特質である。この研究では、ＶＣＰ内に突然変異を有する患者に由来するｉＰＳＣ由来の運動ニューロンにおけるＴＤＰ−４３の発現パターンを評価した（図１２Ａ）。ｍＶＣＰ  ｉＰＳＣ運動ニューロンにおいて、ＴＤＰ−４３の細胞質の誤局在化を検出した。これは、対照細胞では見られなかった。誤局在ＴＤＰ−４３は、アリモクロモール処理による処理後、ｉＰＳＣ由来の運動ニューロン内で改善された。重要なことに、この病状は、ＨＳＰ７０発現レベルの増加と関連しており（図１１Ｂ）、このことは、これらの細胞においてＨＳＲがトリガーされたことを示している。アリモクロモール処理後、ＨＳＰ７０の発現が大幅に増加した。このことにより、この薬物がＨＳＲを共誘導し、これらのヒト由来細胞におけるＨＳＰ７０の存在を増大できることが示唆される。
【０２４１】
ＴＤＰ−４３の誤局在化およびＨＳＰ７０レベルの増加は、ヒトＦＴＤ患者の脳組織内に存在する。
この病理学がｍＶＣＰマウスの脳および脊髄、ならびにｍＶＣＰ患者のｉＰＳＣ由来運動ニューロンで観察されること、およびこれらの特徴に対するアリモクロモールの有益な効果が臨床的に関連していることを確認するために、前頭側頭型認知症の様々な形態を有する患者の死後組織（ｐｏｒｔ−ｍｏｒｔｅｍ  ｔｉｓｓｕｅ）におけるＴＤＰ−４３の発現のパターンも評価した（ＦＴＤ；図１２）。これらの患者は、様々な形態のＦＴＤ、すなわちＭＮＤを伴うＦＴＤ、ユビキチン陽性封入体、ＴＤＰ−４３突然変異またはタウ病理に関連するＦＴＤを有していた。４名の患者すべての皮質組織では、脳細胞内にＴＤＰ−４３の細胞質の誤局在化が頻繁に観察された。これは、年齢適合対照個体由来の脳組織ではほとんど見られなかった。さらに、対照組織内のＨＳＰ７０レベルは、低レベルでのみ検出可能であったが、４つの患者の脳サンプルすべてにおいて、ＨＳＰ７０の発現が顕著に上方制御された。このことにより、細胞ストレスに応答したＨＳＲの刺激が示唆された。
【０２４２】
ｍＶＣＰマウスで見られるタンパク質分解マーカーは、ＦＴＤ患者の脳内にも存在する。
また、ＦＴＤ患者の脳内でタンパク質分解マーカーｐ６２およびＬＣ３の発現を評価した。これらのマーカーは、両方ともｍＶＣＰマウスの脳内で変化した。ｐ６２およびＬＣ３は両方とも、４つの患者サンプルすべてにおいて、細胞質凝集体中に存在していた（図１３）。ｐ６２は、ＦＴＤ−ＵおよびＦＴＤ−ＴＤＰＡの神経突起内に存在し、ＦＴＤ−ＭＡＰＴ（タウ）内の神経原線維変化に関連していた。ＬＣ３もこれらの構造と異常に関連していた。このことは、折り畳み不全のタウタンパク質をおそらく分解して病理を引き起こす、細胞による試みを示唆している。
【０２４３】
考察
本発明者らは、アリモクロモールによる処理後、ｍＶＣＰマウスの筋肉病理が軽減することを以前に示した（５）。この研究では、これらの発見を拡張して、重要なタンパク質ハンドリングタンパク質ＶＣＰ内に突然変異を有するこれらのマウスの脳および脊髄に対するアリモクロモールの効果を調べ、ＶＣＰ患者由来のｉＰＳＣ運動ニューロンでの発見を裏付けた。さらに、アリモクロモールによる処理後に改善される、ｍＶＣＰマウス脊髄および脳内で観察される疾患の重要な病理学的特徴は、複数のＦＴＤ型を有する患者からの死後のヒト脳組織における病理の特徴でもある。
【０２４４】
ｍＶＣＰマウスでは、骨格筋は、ユビキチン化凝集体の形成、ＴＤＰ−４３の誤局在化、およびミトコンドリアの形態、機能、筋線維の変性など、炎症性ミオパチー封入体筋炎の特徴を再現する。これらのミオパチーの変化は、対照と比較してｍＶＣＰマウスの握力の低下と相関していた。アリモクロモールによる処理により、ｍＶＣＰマウスにおけるこれらの疾患の特徴をすべて軽減した（５）。
【０２４５】
ｍＶＣＰマウスの電気生理学的評価では、筋力および筋力の発生の低下が運動単位の数の減少に対応していることが示されている。これらの研究では、最大の強縮力の発生に関して、ｍＶＣＰマウスの後肢筋ＥＤＬを評価したところ、力の３１．５％の減少が明らかになり（５）、ＥＤＬ運動単位の数の３０％の減少と相関している（図１）。これと一致して、後肢の筋肉を神経支配するｍＶＣＰマウスの坐骨プール内の生存運動ニューロンの数は、約３０％減少した（図２）。
【０２４６】
２つの運動ニューロンサブタイプが脊髄運動プールに存在する。骨格筋の錘外筋線維を神経支配し、それらの収縮の開始に直接関与する大きいアルファニューロンと、特殊な感覚器官である筋紡錘の錘内筋線維を神経支配する小さいガンマニューロンとである。アルファ運動ニューロンは、ＡＬＳにおいて選択的に脆弱である。坐骨神経運動ニューロンのサイズ分布を調べることにより、ｍＶＣＰマウスにおいて生存運動ニューロンのサイズ分布が、ＷＴおよびｗｔＶＣＰ対照と比較して小さいニューロンに向かって明確に移行していることがわかる（図２）。この発見は、ＡＬＳのＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスモデルで報告されているように、これは、ｍＶＣＰマウスで変性する大きいアルファ運動ニューロンであることを示している（２）。
【０２４７】
４ヶ月齢での症状の発現開始から１４ヶ月齢までのアリモクロモールにより処理したｍＶＣＰマウスでは、運動ニューロンの生存が改善され、運動単位数が維持される。また、対照と比較して、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスの運動ニューロンのサイズ分布に有意な変化はなく、対照と比較してサイズ分布の移行はほとんどまたはまったくない。その結果、アリモクロモール処理したｍＶＣＰマウスでＥＤＬ筋肉によって発生した筋力は、未処理のマウスよりも有意に大きくなる（図１）。
【０２４８】
ｍＶＣＰマウスの運動ニューロンの死および筋肉機能の低下に関与している可能性のある病理学的変化を調査するために、これらのマウスのコホートで神経変性疾患の特質である重要な病理学的変化を調査した。
【０２４９】
ＴＤＰ−４３（トランス活性応答ＤＮＡ結合タンパク質４３ｋＤａ）は、ＲＮＡ代謝に関与するタンパク質であり、通常は細胞核内のほとんどの組織において遍在的に発現している（６）。このＲＮＡ結合タンパク質は、細胞ストレス細胞質に続く活性化されたカスパーゼ３／７によって切断される（７）。ＴＤＰ−４３の転座したＣ末端は、ＡＬＳおよびＦＴＤ患者の脳および脊髄内で検出される。ｍＶＣＰマウスでは、対照マウスと比較して、脳および脊髄内での誤局在化ＴＤＰ−４３の増加が観察された。しかし、アリモクロモールで処理したマウスでは、ＴＤＰ−４３の細胞質染色が明らかに減少した（図３および図４）。ＴＤＰ−４３の核クリアランスは、脳細胞内でも観察され、これは封入体形成に先行する病原性プロセスであると考えられており（１０）、タンパク質凝集をＴＤＰ−４３の誤局在化に結び付けるものである。
【０２５０】
タンパク質の恒常性異常は、タンパク質の凝集が一般的に観察される神経変性疾患の病因に重要な役割を果たすことが提唱されている（１）。ｍＶＣＰマウスのタンパク質凝集の分析により、脊髄および脳内に細胞質ユビキチン陽性凝集体、ならびに皮質および中脳内に凝集体が見られた（図５および図６）。アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスでは、これらの凝集体は検出されなかった。ＶＣＰ内での突然変異により、タンパク質の恒常性を維持し、そのために細胞内の異常なタンパク質の凝集を防止するために不可欠である重要なタンパク質分解プロセスであるオートファジーが損なわれることが示されている（１１）。ＶＣＰ内での突然変異は、オートファゴソームの成熟を防止し、それによって未分解のタンパク質の蓄積を引き起こすことが確認されている。この研究では、ＬＣ３と呼ばれるオートファゴソーム機能に関連する重要なタンパク質が、オリゴデンドロサイトに蓄積されることを示している（図５Ｄ）。オリゴデンドロサイトにより、脊髄軸索の髄鞘形成を行い、その周囲を断面で見られる典型的な「タマネギ球根」構造に包み込み、軸索変性が、髄鞘形成の破壊が原因で生じ得る（１２）。しかし、本発明者らの研究では、オリゴデンドロサイトは、オートファジーの欠陥の結果であり得る構造異常を有するｍＶＣＰマウスで見られる。ｐ６２は、プロテアソーム分解よる分解およびオートファジーによる分解のために異常なタンパク質をシャトルするタンパク質である。ｍＶＣＰマウスでは、ｐ６２はニューロン内で凝集体として、および脊髄内のミエリン標識オリゴデンドロサイト内でますます発現していることが見られ、これは、これらの動物およびタンパク質凝集体内での欠陥オートファジーの画像を裏付けるものである（図５Ｂおよび図５Ｃ）。アリモクロモール処理では、ｍＶＣＰマウスでのこれらの病理学的特徴が改善され、おそらくシャペロン活動による細胞内の異常なタンパク質負荷を減少させることにより、ＨＳＲの上方制御が有益であることを示している。
【０２５１】
ＦＴＤは、一般に、ＦＴＤ患者の脳内に過剰リン酸化タウ（ｐ−タウ）病変が存在するため、タウオパチーと呼ばれる（８）。興味深いことに、ｍＶＣＰマウスの脳では、リン酸化タウ（抗体ＡＴ８）の免疫染色により、皮質内での大きい細胞外病変が明らかになった。これは、対照動物には存在しなかった（図６）。これらの病変は、局所損傷に対する脳の迅速な反応の一部であるＩｂａ１陽性ミクログリアなどのグリア細胞に関連していることがわかった（１３）。アリモクロモールにより処理したｍＶＣＰマウスでは、ｐ−タウ病変は検出されず、これは、認知症のこの重要な特質の改善を示すものである。
【０２５２】
興味深いことに、ＴＵＮＥＬアポトーシスアッセイ後にｍＶＣＰマウスの脳で細胞死が認められ、これにより、皮質のレイヤー１で死にかけている細胞が明らかになり（図９）、さらに、脳内での病理学的変化によって引き起こされるストレスが示唆されている。アポトーシス細胞は、対照およびアリモクロモール処理動物では検出されなかった。細胞ストレスを評価するために、マウスの脳内のストレス顆粒のマーカーを調べた。ストレス顆粒とは、ストレス中に細胞によって隔離されるＲＮＡ結合タンパク質と重要なＲＮＡ分子との比較的一時的な複合体である（１４）。ストレス顆粒の組み立ておよび分解は、オートファジーによって調節され、細胞質内の永続的なストレス顆粒が凝集体を生じさせ得ることが示唆されている。したがって、オートファジー経路での破壊は、細胞内に存在しているストレス顆粒の一助となり、タンパク質の凝集につながり得る。発明者らの研究では、ストレス顆粒マーカーのパネルを使用して脳内のこれらの複合体を研究し、ｍＶＣＰマウスにおいて、Ｔｉａ１、Ｇ３ＢＰ、ＦＭＲＰの３つすべてのマーカーを含む凝集体を検出した。これらは、対照動物またはアリモクロモールで処理した動物では見られなかった（図１０）。この結果は、突然変異ＶＣＰが破壊的オートファジーを引き起こし、ＲＮＡおよびタンパク質の恒常性に影響を与え、タンパク質凝集などの病理学的変化を引き起こすという兆候を裏付けるものである。実際に、ｍＶＣＰマウス内で誤局在化するＲＮＡ結合タンパク質自体のＴＤＰ−４３は、細胞質内のストレス顆粒の既知の成分であり、したがって細胞のストレス応答の一部である（１４）。
【０２５３】
アリモクロモール処理ｍＶＣＰマウスで観察された脳および脊髄の病状の改善がＨＳＲの共誘導の結果であるかを判断するために、これらの組織ではＨＳＰ７０を免疫染色した。ＨＳＰ７０の発現は、対照動物と比較して、ｍＶＣＰマウスの脳および脊髄内で上方制御された（図７および図８）。しかし、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスでは、ＨＳＰ７０の発現がさらに増大した。このことは、ＨＳＲが増幅していることを示し、かつこのマウスモデルの筋肉における本発明者らの研究からのデータを裏付けるものであった。興味深いことに、アリモクロモール処理したｍＶＣＰマウスの脊髄および脳の両方において、ＨＳＰ７０は、グリア細胞ならびにニューロン内で上方制御された。
【０２５４】
本発明者らの結果は、ｍＶＣＰマウスの脳および脊髄内での神経細胞死の明確な兆候を示し、ヒトＦＴＤおよびＡＬＳを連想させ、この変性をｍＶＣＰマウスの筋肉の病理も示す以前に公開されたデータに関連付けるものである。脊髄運動ニューロンに見られる病理が神経筋接合部での筋線維との界面に影響を与えるかを判断するために、神経筋接合部を調べた。本発明者らの結果は、ｍＶＣＰマウスの筋肉切片における終板構造の破壊および除神経のエビデンスを示している（図１１）。これは、対照動物またはアリモクロモールで処理したｍＶＣＰマウスでは見られなかった。
【０２５５】
Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍＶＣＰマウス研究からのデータがヒト細胞で裏付けられたかをテストするために、ｍＶＣＰ患者由来のｉＰＳＣ運動ニューロンを調べた。ＡＬＳおよびＦＴＤでの主要な病理学的結果測定としてのＴＤＰ−４３細胞質の誤局在化、およびｍＶＣＰマウス（筋肉、脊髄、皮質）においてｉｎ  ｖｉｖｏで評価した３つすべての組織の病理学的特徴に注目した。基礎的条件下では、ｍＶＣＰ患者のｉＰＳＣ運動ニューロンは、ＴＤＰ−４３の細胞質の誤局在化を示したが、これは健康な対照の細胞または重要なことに、アリモクロモールで処理した細胞では観察されなかった。さらに、ｍＶＣＰ  ＭＮでのＨＳＰ７０レベルは、健康な対照と比較して基礎的条件下で増加し、アリモクロモールで処理したｍＶＣＰ患者ｉＰＳＣ運動ニューロンにおいて増加した。これは、ヒトニューロンでのアリモクロモールによるＨＳＲの共誘導が成功したことを示すものである。
【０２５６】
アリモクロモールによる処理によって改善されるｍＶＣＰマウスの組織およびｍＶＣＰ患者のｉＰＳＣ由来運動ニューロンで観察される重要な病理学的特徴がヒト疾患の優れた読み出し（ｒｅａｄｏｕｔ）であることを確認するために、ＦＴＤ−ＭＮＤ患者などのＦＴＤサブタイプの範囲の患者からの脳の死後サンプル中のＴＤＰ−４３およびＨＳＰ７０の発現も調べた。すべての患者の脳において、誤局在化したＴＤＰ−４３およびＨＳＰ７０レベルの上方制御を含む細胞を特定した。さらに、ＦＴＤ患者の脳サンプルでのオートファジーの破壊およびタンパク質のミスハンドリングの兆候も調べ、ニューロンおよびグリア内で細胞質ＬＣ３およびｐ６２凝集体のエビデンスを発見し、また、ｐ６２は、ＦＴＤ−ＭＡＰＴ患者の脳内の神経原線維変化にも関連している。これらの所見は、一般的な病態がこれらすべての患者の疾患の原因であり得ることを示している。
【０２５７】
結論として、この研究の結果は、トランスジェニックマウスにおける突然変異ＶＣＰの発現が、それぞれＦＴＤおよびＡＬＳを連想させる脳および脊髄の病理をもたらし、ＴＤＰ−４３の誤局在化、ユビキチン陽性、およびｐ６２陽性タンパク質凝集、ならびに脳内におけるリン酸化タウの病変、ならびに脊髄および脳の両方における細胞死など、これらの神経変性疾患の主要な病理学的特質を再現することを示している。ＮＭＪでの除神経および異常な終板構造は、ニューロンの所見を以前に見られたミオパチーに結び付け、個々の患者において、ＦＴＤ、ＡＬＳ、ＩＢＭがすべて共存し得る多系統タンパク質蓄積症（ＭＳＰ）の患者で観察されるように、複数の組織がｍＶＣＰマウスで影響を受け得ることを示す。重要なことに、この研究では、マウスモデルおよび患者由来のＭＮの両方で、アリモクロモールによる処理が、観察されたすべての病理学的変化の改善につながることを示した。同じ病理学的特徴がＦＴＤ患者の死後脳組織でも観察されるため、これらの結果は、ＦＴＤ患者におけるアリモクロモールによる処理によって例示されるＨｓｐ７０の誘導が有益な治療戦略であり得ることを示唆している。
【０２５８】
参考文献
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１５．Ｉｔｏ，  Ｈａｔａｎｏ，  Ｓｕｚｕｋｉ  （２０１７）  Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．  ９，  Ｉｓｓｕｅ  ４１５，  ｅｅａｈ５４３６
１６．Ａｌｂｅｒｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１７）  Ｆｒｏｎｔ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｖｏｌ．  １０：８４
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年1月27日(2020.1.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020520947000001.app
【国際調査報告】
2020520947.tif 000020
2020520947.tif 000021