(57)【要約】   必要のある被験体において、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するのに使用するための組成物が開示される。組成物は、治療有効量のアントラキノン誘導体又はその医薬的に許容される塩；及び医薬的に許容されるビヒクルを含む。一つの実施形態において、組成物がジアセレインを含む。炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するのに使用するために併用される、ジアセレイン、アロエエモジン、エモジン、及びレインからなる群より選択されるアントラキノン誘導体、及び第１の医薬的に許容されるビヒクルを含む、第１の組成物；及びメサラジン及び第２の医薬的に許容されるビヒクルを含む第２の組成物、もまた開示される。   【選択図】図５Ａ
2020504118.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要のある被験体において炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するための医薬品の製造における、組成物の使用であって、前記組成物が：
（ａ）治療有効量の式（Ｉ）のアントラキノン誘導体：
【化３】
2020504118.tif 000009
又はその医薬的に許容される塩；及び
（ｂ）医薬的に許容されるビヒクル、
を含み、
式中：
Ｒ１が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり；
Ｒ２が、Ｈ、−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、ｎ＝１−８であり；
Ｒ３が、Ｈ、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ４が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ５が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ６が、Ｈであり；
Ｒ７が、Ｈ、ＣＨ３であり；
Ｒ８が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である、
使用。
【請求項２】
式中：
Ｒ１が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり；
Ｒ２が、Ｈ、−ＯＨ、−ＣＨ２−ＯＨ、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ３が、Ｈ、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ４が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ５が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ６が、Ｈであり；
Ｒ７が、Ｈ、ＣＨ３であり；
Ｒ８が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である、
請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記症状が、体重減少、結腸長短縮、結腸重量減少、潜血陽性、軟便、及び下痢からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記アントラキノン誘導体が、ジアセレイン、アロエエモジン、エモジン、及びレインからなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記アントラキノン誘導体がジアセレインである、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を緩和するための医薬品の製造における、治療有効量のメサラジン及び医薬的に許容されるビヒクルを含む追加の又は第２の組成物の使用と同時に併用される、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を緩和するための医薬品の製造における、治療有効量のメサラジン及び医薬的に許容されるビヒクルを含む追加の又は第２の組成物の使用と併用される、請求項５に記載の使用。
【請求項８】
必要のある被験体において炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を緩和するための医薬品の製造における、治療有効量のメサラジン及び医薬的に許容されるビヒクルを含む追加の又は第２の組成物の使用をさらに含む、請求項５に記載の使用。
【請求項９】
メサラジンを含む組成物の使用が、ジアセレインを含む組成物の使用に先立って行われる、請求項７又は８に記載の使用。
【請求項１０】
メサラジンを含む組成物の使用及びジアセレインを含む組成物の使用が、少なくとも１日離れている、請求項７又は８に記載の使用。
【請求項１１】
第１の組成物の使用であって、
前記第１の組成物が、ジアセレイン、アロエエモジン、エモジン、及びレインからなる群より選択される治療有効量のアントラキノン誘導体、及び第１の医薬的に許容されるビヒクルを含み；
前記使用が、必要のある被験体において炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するための医薬品の製造における、治療有効量のメサラジン及び第２の医薬的に許容されるビヒクルを含む第２の組成物の使用と併用される、
使用。
【請求項１２】
前記炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎が、潰瘍性大腸炎、クローン病、急性腸管大腸炎、免疫療法誘発性大腸炎、免疫療法誘発性小腸結腸炎、免疫関連大腸炎、化学療法誘発性大腸炎、タキサン誘発性（虚血性）大腸炎、化学療法誘発性好中球減少性小腸結腸炎、及び肛門又は直腸の炎症からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１又は１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記大腸炎が、顕微鏡的大腸炎、憩室症関連大腸炎、コラーゲン性大腸炎、リンパ球性大腸炎、又はベーチェット病からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１又は１１に記載の使用。
【請求項１４】
メサラジンのヒトの１日の用量が、１００ｍｇ／ｋｇ×（０．０２０（ｋｇ）／ヒト体重（ｋｇ））０．３３以上である、請求項６又は１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
ジアセレイン、アロエエモジン、エモジン、又はレインのヒトの１日の用量が、３０ｍｇ／ｋｇ×（０．０２０（ｋｇ）／ヒト体重（ｋｇ））０．３３以上である、請求項４又は１１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野
本発明は一般に、炎症性腸疾患を処置するのに使用するための組成物に関するものであり、より具体的には、潰瘍性大腸炎、クローン病、急性腸管大腸炎、肛門又は直腸の炎症を処置するのに使用するための、ジアセレインを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、消化管の全部又は一部の慢性炎症を伴う状態である。痛みを伴い衰弱させることが多いＩＢＤは、生命を脅かす合併症を引き起こし、さらに結腸がんのリスクを増加させる可能性がある。免疫療法誘発性大腸炎、免疫療法誘発性小腸結腸炎、免疫関連大腸炎、化学療法誘発性大腸炎、タキサン誘発性（虚血性）大腸炎、及び化学療法誘発性好中球減少性小腸結腸炎などの他のタイプの腸管大腸炎は、様々ながん及び免疫関連疾患の処置のために、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤、及び／又は他の生物学的抗体、などの薬物による免疫療法を受けている患者によく見られる。がん患者が、単回又は複数回の、タキサンの投与などの化学療法処置を受けた後に、同様の消化管大腸炎がしばしば観察される。ＩＢＤの最も一般的な２つの形態は、潰瘍性大腸炎及びクローン病である。クローン病では、口から肛門まで、消化管のどの場所にでも炎症が起こる可能性がある。対照的に、潰瘍性大腸炎は、大腸又は結腸の炎症のみを伴う。それらは、２つの別個の状態であるが、症状及び生理機能には多くの重複がある。
【０００３】
１００万人ものアメリカ人及びヨーロッパ人がＩＢＤに罹患していると推定され、ほとんどの患者は、１５歳から３０歳の間に症状を感じ始める。加えて、上述の他のタイプの腸管大腸炎に罹患している患者の推定数は、数百万にも及ぶ可能性がある。
【０００４】
ＩＢＤでは、腸（小腸、大腸、及び腸）が、発赤、腫張、及び粘膜病変などの炎症を起こす。軽度又は重症の範囲であり得る関連の症状は、重症又は慢性の腹痛、下痢、しばしば血性、突然の体重減少、食欲不振、及び直腸出血を含む。ＩＢＤの処置は患者によって異なる。薬物治療を必要とする患者もいる可能性があり、薬物治療は、コルチコステロイドから生物学的療法及び抗生物質までの範囲であり得る。例えば、薬物メサラミンは、直腸浣腸剤、坐薬又は丸薬のいずれかとして送達され、小腸を開くように作用する。腸管大腸炎は一般に、ＩＢＤ患者で観察されるのと同様の症状をもたらすが、免疫系が損なわれていることが多い。
【０００５】
ＩＢＤ及び重症腸管大腸炎の状態は治癒できないが、患者が適切な薬物治療を続けていれば、患者は具合が良くなることができる。したがって、ＩＢＤ及び他のタイプの腸管大腸炎の両方の処置のための、よりよい薬物治療に対処することが、本分野において必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の概要
【０００７】
一つの態様において、本発明は、必要のある被験体において、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するのに使用するための組成物であって、組成物が：
（ａ）治療有効量の式（Ｉ）のアントラキノン誘導体：
【化１】
2020504118.tif 000003
又はその医薬的に許容される塩；及び
（ｂ）医薬的に許容されるビヒクル、
を含み、
式中：
Ｒ１が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり；
Ｒ２が、Ｈ、−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、ｎ＝１−８であり；
Ｒ３が、Ｈ、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ４が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ５が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ６が、Ｈであり；
Ｒ７が、Ｈ、ＣＨ３であり；
Ｒ８が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である、
組成物に関する。
【０００８】
本発明の一つの実施形態において、式中：
Ｒ１が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり；
Ｒ２が、Ｈ、−ＯＨ、−ＣＨ２−ＯＨ、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ３が、Ｈ、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ４が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ５が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ６が、Ｈであり；
Ｒ７が、Ｈ、ＣＨ３であり；
Ｒ８が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【０００９】
別の実施形態において、症状が、体重減少、結腸長短縮、結腸重量減少、潜血陽性、軟便、及び下痢からなる群より選択される少なくとも１つである。
【００１０】
別の実施形態において、アントラキノン誘導体が、ジアセレイン、アロエエモジン、エモジン、及びレインからなる群より選択される。
【００１１】
別の実施形態において、アントラキノン誘導体がジアセレインである。
【００１２】
別の実施形態において、本発明に係る使用のための組成物が、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するのに使用するための、治療有効量のメサラジン及び医薬的に許容されるビヒクルを含む追加の又は第２の組成物と同時に併用される。
【００１３】
別の実施形態において、本発明に係る使用のための組成物が、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するのに使用するための、治療有効量のメサラジン及び医薬的に許容されるビヒクルを含む追加の又は第２の組成物と併用される。
【００１４】
別の実施形態において、本発明に係る使用のための組成物が、必要のある被験体において、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するのに使用するための、治療有効量のメサラジン及び医薬的に許容されるビヒクルを含む追加の又は第２の組成物をさらに含む。
【００１５】
別の実施形態において、メサラジンを含む組成物の使用が、ジアセレインを含む組成物の使用に先立って行われる。
【００１６】
別の実施形態において、メサラジンを含む組成物の使用及びジアセレインを含む組成物の使用が、少なくとも１日離れている。
【００１７】
別の態様において、本発明は、必要のある被験体において、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するのに使用するために併用される、ジアセレイン、アロエエモジン、エモジン、及びレインからなる群より選択される治療有効量のアントラキノン誘導体、及び第１の医薬的に許容されるビヒクルを含む、第１の組成物；及び治療有効量のメサラジン及び第２の医薬的に許容されるビヒクルを含む第２の組成物に関する。
【００１８】
一つの実施形態において、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎が、潰瘍性大腸炎、クローン病、急性腸管大腸炎、免疫療法誘発性大腸炎、免疫療法誘発性小腸結腸炎、免疫関連大腸炎、化学療法誘発性大腸炎、タキサン誘発性（虚血性）大腸炎、化学療法誘発性好中球減少性小腸結腸炎、及び肛門又は直腸の炎症からなる群より選択される少なくとも１つである。
【００１９】
別の実施形態において、大腸炎が、顕微鏡的大腸炎、憩室症関連大腸炎、コラーゲン性大腸炎、リンパ球性大腸炎、又はベーチェット病からなる群より選択される少なくとも１つである。
【００２０】
別の実施形態において、メサラジンのヒトの１日の用量が、１００ｍｇ／ｋｇ×（０．０２０（ｋｇ）／ヒト体重（ｋｇ））０．３３以上である。
【００２１】
別の実施形態において、ジアセレイン、アロエエモジン、エモジン、又はレインのヒトの１日の用量が、３０ｍｇ／ｋｇ×（０．０２０（ｋｇ）／ヒト体重（ｋｇ））０．３３以上である。
【００２２】
代替的に、本発明は、必要のある被験体において、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するための方法に関する。この方法は、必要のある被験体に組成物を投与するステップを含み、この組成物は：
（ａ）治療有効量の式（Ｉ）のアントラキノン誘導体：
【化２】
2020504118.tif 000004
又はその医薬的に許容される塩；及び
（ｂ）医薬的に許容されるビヒクル、
を含み、
式中：
Ｒ１が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３であり；
Ｒ２が、Ｈ、−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、ｎ＝１−８であり；
Ｒ３が、Ｈ、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨであり；
Ｒ４が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ５が、Ｈ、又は−ＯＨであり；
Ｒ６が、Ｈであり；
Ｒ７が、Ｈ、ＣＨ３であり；
Ｒ８が、Ｈ、又は−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３である。
【００２３】
一つの実施形態において、本方法は、必要のある被験体に、治療有効量のメサラジン及び医薬的に許容されるビヒクルを含む追加の又は第２の組成物を投与するステップをさらに含む。
【００２４】
別の実施形態において、メサラジンを含む組成物を投与するステップが、ジアセレインを含む組成物を投与するステップと同時に実施される。
【００２５】
別の実施形態において、メサラジンを含む組成物を投与するステップが、ジアセレインを含む組成物を投与するステップに先立って実施される。
【００２６】
別の実施形態において、メサラジンを含む組成物を投与するステップ及びジアセレインを含む組成物を投与するステップが、少なくとも１日離れて実施される。
【００２７】
本発明はまた、必要のある被験体において、炎症性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置及び／又は緩和するための方法に関するものであり、この方法が、
必要のある被験体に、ジアセレイン、アロエエモジン、エモジン、及びレインからなる群より選択される治療有効量のアントラキノン誘導体、及び第１の医薬的に許容されるビヒクルを含む、第１の組成物；及び治療有効量のメサラジン及び第２の医薬的に許容されるビヒクルを含む第２の組成物を投与することを含む。
【００２８】
一つの実施形態において、メサラジンを含む組成物が、必要のある被験体に、ジアセレインを含む組成物に先立って投与される。
【００２９】
別の実施形態において、メサラジンを含む組成物が、必要のある被験体に、ジアセレインを含む組成物と同時に投与される。
【００３０】
これらの及び他の態様が、以下の図面と合わせて、好ましい実施形態の以下の説明から明らかになるだろう。しかしながら、そこになされる変形及び改変は、本開示の新規の概念の精神及び範囲から逸脱することなく、影響を受け得る。
【００３１】
添付の図面は、本発明の１又は複数の実施形態を示しており、記載される説明とともに、本発明の原理を説明するのに役立つ。可能な限り、実施形態の同じ又は類似の要素を指すために、図面全体を通して、同じ参照番号が使用される。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
図面の短い説明
【００３３】
【図１】図１は、体重変化を示す。
【００３４】
【図２】図２Ａは体重を示す。   図２Ｂは結腸長を示す。   図２Ｃは結腸重量を示す。   図２Ｄは結腸重量対体重比を示す。
【００３５】
【図３Ａ−Ｂ】図３Ａは疾患活動性指標を示す。   図３Ｂは体重スコアを示す。
【００３６】
【図３Ｃ−Ｄ】図３Ｃは下痢便スコアを示す。   図３Ｄは便潜血スコアを示す。
【００３７】
【図４Ａ−Ｄ】図４Ａは結腸損傷スコアを示す。   図４Ｂは潰瘍形成スコアを示す。   図４Ｃは癒着スコアを示す。   図４Ｄは下痢スコアを示す。
【００３８】
【図４Ｅ−Ｆ】図４Ｅは厚さスコアを示す。   図４Ｆは結腸厚さの正規化された変化を示す。
【００３９】
【図５Ａ】図５Ａ−Ｃは、ＨＥ染色した結腸切片の代表的な顕微鏡写真である。
【図５Ｂ】図５Ａ−Ｃは、ＨＥ染色した結腸切片の代表的な顕微鏡写真である。
【図５Ｃ】図５Ａ−Ｃは、ＨＥ染色した結腸切片の代表的な顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
発明の詳細な説明
【００４１】
本発明は、以下の例においてより具体的に説明される。これらの例は、その多数の改変及び変形が当業者に明らかであるので、例示的なものとしてのみ意図される。本発明の様々な実施形態をここで詳細に説明する。図面を参照すると、図面全体を通して、類似の番号は類似の構成要素を示す。本明細書において及び後に続く特許請求の範囲全体を通して使用されるように、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」の意味は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数形の参照を含む。また、本明細書において及び後に続く特許請求の範囲全体を通して使用されるように、「ｉｎ」の意味は、文脈上他に明確に指示されない限り、「ｉｎ」及び「ｏｎ」を含む。さらに、読者の便宜のために、タイトル又はサブタイトルが明細書において使用され得るが、これは本発明の範囲に影響を及ぼさないものとする。加えて、本明細書で使用されるいくつかの用語は、以下により具体的に定義される。
【００４２】
定義
【００４３】
本明細書で使用される用語は一般に、本発明の文脈内で、及び各用語が使用される特定の文脈において、本分野におけるそれらの通常の意味を有する。本発明を説明するために使用されるある特定の用語は、以下で、又は明細書の他の場所で論じられて、本発明の説明に関して実務者に追加の指針を提供する。便宜上、ある特定の用語は、例えばイタリック及び／又は引用符を使用して、強調表示され得る。強調表示の使用は、用語の範囲及び意味に影響を及ぼさない。用語の範囲及び意味は、それが強調表示されているかどうかに関わらず、同じ文脈において同じである。同じことを複数の方法で言い表すことができるということを理解されたい。その結果として、代替の言葉及び同義語を、本明細書で論じられた用語のうちの任意の１又は複数について使用することができ、用語が本明細書において詳細に述べられている又は論じられているかどうかに特別な意味はない。ある特定の用語についての同義語が提供される。１又は複数の同義語の言及は、他の同義語の使用を除外しない。本明細書で論じられる任意の用語の例を含む、本明細書中の任意の場所での例の使用は、例示的なものにすぎず、本発明の又は任意の例示される用語の範囲及び意味を限定するものでは決してない。同様に、本発明は、本明細書に記載の様々な実施形態に限定されない。
【００４４】
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本文書が統制する。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「約（ａｒｏｕｎｄ）」、「約（ａｂｏｕｔ）」又は「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は一般に、所与の値又は範囲の２０パーセント以内、好ましくは１０パーセント以内、及びより好ましくは５パーセント以内を意味するものとする。本明細書に記載の数値量はおおよそのものであり、明確に述べられていない場合、用語「約」、「約」又は「およそ」が推測され得ることを意味する。
【００４６】
「有効量」は、処置される被験体に治療的効果を与えるのに必要とされる、活性薬剤の量を指す。当業者に認識されるように、投与の経路、添加剤の使用、及び他の治療的処置との併用の可能性に応じて、有効用量は変わるだろう。
【００４７】
用語「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、疾患、疾患の症状、又は疾患に向かう素因を、治療、緩和、軽減、修復、改善、又は防止する目的で、疾患、又はそのような疾患に向かう症状又は素因を有する被験体に、有効量の治療剤を投与することを指す。
【００４８】
米国保健福祉省食品医薬品局から出版された、「Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｒｅｖｉｅｗｅｒｓ  Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ（成人健康ボランティアの治療薬の臨床試験における安全な開始用量を推定する産業界及び審査者のためのガイダンス）」は、「ヒト等価用量」を開示しており、これは、以下の式からの計算によって得ることができる。
ＨＥＤ＝動物用量（ｍｇ／ｋｇ）×（動物体重（ｋｇ）／ヒト体重（ｋｇ））０．３３
【００４９】
本発明は、マウスのデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性急性大腸炎に対する、試験物質（ジアセレイン及びメサラジンなど）の薬理的効果の発見に関する。本発明は、必要のある患者において過敏性腸疾患、大腸炎、及び／又は小腸結腸炎の症状を処置又は緩和するのに使用するための、ジアセレイン及びその類縁体に関する。一つの実施形態において、本発明は、潰瘍性大腸炎、クローン病、急性腸管大腸炎、免疫療法誘発性大腸炎、免疫療法誘発性小腸結腸炎、免疫関連大腸炎、化学療法誘発性大腸炎、タキサン誘発性（虚血性）大腸炎、化学療法誘発性好中球減少性小腸結腸炎、又は肛門又は直腸の炎症の症状を処置又は緩和するのに使用するための、ジアセレイン単独又はメサラジンと併用されたジアセレインに関する。
【００５０】
表１に示す例示された試験物質は以下のとおりである：アロエエモジン（１，８−ジヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）アントラキノン、３−ヒドロキシメチルクリサジン）；ジアセレイン（１，８−ジアセトキシ−３−カルボキシアントラキノン）；エモジン（１，３，８−トリヒドロキシ−６−メチル−９，１０−アントラセンジオン、１，３，８−トリヒドロキシ−６−メチルアントラキノン、６−メチル−１，３，８−トリヒドロキシアントラキノン）；レイン（４，５−ジヒドロキシアントラキノン−２−カルボン酸、９，１０−ジヒドロ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸）；メサラジン（５−アミノ−２−ヒドロキシ安息香酸、５−ＡＳ、５−アミノサリチル酸、メサラミン）。
【００５１】
【表１】
2020504118.tif 000005
【００５２】
略語。ＤＡＩ：疾患活動性指標；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＨＥ：ヘマトキシリン及びエオシン；ＰＯ：経口；ＰＥＧ：ポリエチレングリコール；ＱＤ：１日１回；ＳＥＭ：平均値の標準誤差
【実施例】
【００５３】
例
【００５４】
本発明の範囲を限定することを意図するものではないが、本発明の実施形態に係る例示的な機器、装置、方法及びそれらの関連する結果を以下に示す。読者の便宜のために、タイトル又はサブタイトルが実施例において使用され得るが、これは決して本発明の範囲を限定しないことに留意されたい。さらに、ある特定の理論が本明細書中において提案及び開示されている。しかしながら、特定の理論又は行動計画を考慮せずに、本発明に従って本発明が実施される限りは、理論は、正しいか間違っているかに関わらず、決して本発明の範囲を限定しない。
【００５５】
材料及び方法
【００５６】
試験物質。ジアセレイン及びメサラジンは、ＴａｉＲｘ，  Ｉｎｃから提供された。投与溶液を調製するために、ジアセレイン及びメサラジンを秤量し、ビヒクル［２％ＤＭＳＯ／３０％ＰＥＧ４００／０．５％ツイーン（登録商標）８０／水（ｖ／ｖ）］で懸濁した。
【００５７】
急性大腸炎の誘発。急性大腸炎は、マウスに、飲用水中２．５％ＤＳＳ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を５日間連続して与えることによって誘発した。ＤＳＳ投与は連続しない２日間で行い、ここで、ＤＳＳ投与の日の前に、体重に基づいてマウスを２つの群に分けた。
【００５８】
薬物投与の経路。ジアセレイン、メサラジン、及びビヒクルを、経口経路を介して５ｍＬ／ｋｇの投与量で投与した。
【００５９】
処置用量。ジアセレインを、３０及び６０ｍｇ／ｋｇの２つの用量レベルで、５日間１日１回投与した。メサラジンを、２０及び１００ｍｇ／ｋｇの２つの用量レベルで、５日間１日１回投与した。ジアセレイン（３０ｍｇ／ｋｇ）及びメサラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを、５日間１日１回投与した。
【００６０】
動物。８週齢のメスＣ５７ＢＬ／６マウスを、Ｊａｐａｎ  ＳＬＣ，  Ｉｎｃ．（日本）から得た。研究に用いた全ての動物は、日本薬理学会の動物実験ガイドラインに従って飼養した。
【００６１】
環境。動物は、動物施設において、慣習的な条件下で維持した。
【００６２】
動物の飼育。動物は、ＴＰＸケージ（ＣＬＥＡ  Ｊａｐａｎ）において、１ケージ当たり最大４匹のマウスで飼育した。床敷には滅菌したペパークリーン（Ｊａｐａｎ  ＳＬＣ）を使用し、１週間に１回交換した。
【００６３】
飲食。ケージの上部にある金属製の蓋に入れて、滅菌した固形の普通食を動物に自由に与えた。また、ゴム栓及び先管を備えた給水瓶から、純水又はＤＳＳ水を自由に与えた。
【００６４】
動物及びケージ識別。マウスは耳パンチによって識別した。各ケージは、特定の識別コードでラベルした。
【００６５】
疾患活動性指標スコアの測定。以下のパラメーターを合計することによって、疾患活動性指標（ＤＡＩ）を毎日計算した。
（ｉ）  体重減少（０＝体重減少なし；１＝１〜５％の体重減少；２＝６〜１０％の体重減少；３＝１１〜１５％の体重減少；及び４＝＞１５％の体重減少）；
（ｉｉ）  潜血陽性（０＝出血なし；１＝潜血検査（＋）；２＝潜血検査（＋＋）；３＝潜血検査（＋＋＋）；及び４＝肛門からのひどい出血）；及び
（ｉｉｉ）  便粘稠度（０＝普通便；２＝軟便；４＝下痢）
【００６６】
結腸組織の肉眼でのスコア付け。公表されている測定の判定基準（Wallace et al, Gastroenterology, 1992, 102, 18-27）を使用して、結腸損傷をスコア付けした。
【００６７】
組織学的分析。ＨＥ染色のために、１０％中性緩衝ホルマリン（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、日本）中で前固定し、リリーマイヤーヘマトキシリン（Ｍｕｔｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．、日本）及びエオシン溶液（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）で染色した結腸組織のパラフィンブロックから、切片を切り出した。観察された変化の代表的な写真を各群から得た。
【００６８】
統計検定。統計解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６  （ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．、アメリカ合衆国）で、対応のない片側スチューデントｔ検定を使用して実施した。Ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。結果は幾何平均±ＳＥＭとして表した。
【００６９】
実験計画及び処置
【００７０】
試験群
【００７１】
グループ１：正常Ｓｈａｍ。８匹の正常マウスに、４日目まで何の処置もせずに、普通の通常食及び純粋な飲用水を自由に与えた。
【００７２】
グループ２：ビヒクル。８匹のＤＳＳ誘発性大腸炎マウスに、０日目から４日目まで、１日１回、５ｍＬ／ｋｇの投与量で、ビヒクル［２％ＤＭＳＯ／３０％ＰＥＧ４００／０．５％ツイーン８０／水、ｖ／ｖ］を経口投与した。
【００７３】
グループ３：ジアセレイン３０ｍｇ／ｋｇ。８匹のＤＳＳ誘発性大腸炎マウスに、０日目から４日目まで、１日１回、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、ジアセレインを補充したビヒクルを経口投与した。
【００７４】
グループ４：ジアセレイン６０ｍｇ／ｋｇ。８匹のＤＳＳ誘発性大腸炎マウスに、０日目から４日目まで、１日１回、６０ｍｇ／ｋｇの用量で、ジアセレインを補充したビヒクルを経口投与した。
【００７５】
グループ５：ジアセレイン＋メサラジン。８匹のＤＳＳ誘発性大腸炎マウスに、０日目から４日目まで、１日１回、ジアセレイン（３０ｍｇ／ｋｇ）及びメサラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを補充したビヒクルを経口投与した。
【００７６】
グループ６：メサラジン２０ｍｇ／ｋｇ。８匹のＤＳＳ誘発性大腸炎マウスに、０日目から４日目まで、１日１回、２０ｍｇ／ｋｇの用量で、メサラジンを補充したビヒクルを経口投与した。
【００７７】
グループ７：メサラジン１００ｍｇ／ｋｇ。８匹のＤＳＳ誘発性大腸炎マウスに、０日目から４日目まで、１日１回、１００ｍｇ／ｋｇの用量で、メサラジンを補充したビヒクルを経口投与した。
【００７８】
以下の表２では、処置スケジュールを要約する。マウスの平均体重は約１８〜２２グラムである。
【００７９】
【表２】
2020504118.tif 000006
【００８０】
動物モニタリング及び屠殺
【００８１】
生存、臨床徴候及び挙動を毎日モニターした。処置前に体重を記録した。各投与のおよそ６０分後に、毒性、瀕死及び死亡の顕著な臨床徴候について、マウスを観察した。イソフルラン麻酔（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）下での直接心臓穿刺による大量失血によって、マウスを屠殺した。結腸長及び結腸重量は、盲腸の端から肛門までを測定した。
【００８２】
アロエエモジン、エモジン、及びレインの薬理的効果もまた、上述の同じプロトコルを使用してそれぞれ試験した。
【００８３】
結果
【００８４】
体重変化及び全身状態（図１）
【００８５】
ビヒクル群における平均急性体重減少は、２日目の正常Ｓｈａｍ群のものより３．６％差で有意であった。ビヒクル群における平均体重減少（−７．７％）は、５日目の正常Ｓｈａｍ群のもの（０日目から約１．４％の増加）と比較して、有意であった。これは、ＤＳＳによる誘発後のこれらの動物における有意な体重減少を示唆している（ｐ＝０．００２）。
【００８６】
両方のメサラジン群は、５日間の処置後に、−８．５％〜−９．０％の、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と同様の有意な体重減少を示した（ｐ＝０．００３）が、一方でジアセレイン群は、メサラジン処置マウスと比較して体重減少がはるかに少なく、Ｓｈａｍ動物に近い体重を維持するようであった。
【００８７】
処置期間中、すべての群において、死亡した動物はいなかった。本研究では、いずれの動物も、全身の健康状態の明らかな悪化を示さなかった。
【００８８】
屠殺の日の体重（図２Ａ及び表３）
【００８９】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群よりも７．７％だけ、屠殺の日の体重の有意な減少を示した。両方のジアセレイン群及びジアセレイン＋メサラジン群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも、それぞれ６．６及び６．０％だけ、屠殺の日の体重の有意な増加を示した。正常Ｓｈａｍ動物（約１８．１ｇ）と比較すると、メサラジンの２０及び１００ｍｇ／ｋｇの両群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群（１６．７ｇ）で観察されたものと同様に、屠殺の日の有意な体重減少（約１６．７ｇ）を示した。
【００９０】
結腸長、結腸重量及び結腸重量対体重比（図２Ｂ−Ｄ及び表３）
【００９１】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群よりも２６．９％だけ（６．７ｃｍから４．９ｃｍへ）、結腸長の有意な減少を示した。３０及び６０ｍｇ／ｋｇのジアセレイン群及びジアセレイン＋メサラジン群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも１１〜１６％だけ、結腸長の有意な改善を示した。両方のメサラジン群は、ほんの３〜９％だけ結腸長を改善する効果を示したが、観察された効果は統計的に有意ではなかった。
【００９２】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群よりも１０．２％だけ（１９７ｍｇから２１７ｍｇへ）、結腸重量の有意な増加を示した。全ての処置群は、ＤＳＳによって増加した結腸重量を減少させるいくらかの効果を示した（約２．８〜６．９％）が、この効果は統計的に有意ではなかった。
【００９３】
しかしながら、体重によって正規化した場合、ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群よりも約１９．６％だけ、結腸重量対体重比の有意な増加を示した。ジアセレイン＋メサラジン併用群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも１０．６％だけ、結腸重量対体重比の有意な減少を示した（ｐ＝０．０４９）。両方のジアセレイン群及び両方のメサラジン群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも７〜９％だけ、わずかに低い結腸重量対体重比に対する効果を示したが、観察された効果は統計的に有意ではなかった。表３は、各群における体重、結腸長及び結腸重量の結果を示す。
【００９４】
【表３】
2020504118.tif 000007
【００９５】
疾患活動性指標（図３Ａ−Ｄ）
【００９６】
ＤＡＩ（図３Ａ）
【００９７】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、５日間の誘発期間全てにおいて、正常Ｓｈａｍ群よりも、ＤＡＩの有意な増加を示した。ビヒクル群におけるＤＡＩ測定値は、正常Ｓｈａｍ群（正常指標約０．３〜０．５）と比較して、１日目（２．６）から４／５日目（６．４／７．１）に顕著に増加した。ジアセレイン３０及び６０ｍｇ／ｋｇ群は、４日目（約５．１）及び５日目（約６．３）に観察されたＤＡＩの有効な減少を示した。一方で、低用量のメサラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）は、５日間の処置を通して効果を示さず、高用量のメサラジン（１００ｍｇ／ｋｇ）群は、４日目又は５日目にはＤＡＩの明らかな減少を示さなかったが、２日目及び３日目には有意な減少を示した。ジアセレイン＋メサラジン併用処置は、２〜３日目にはＤＡＩ減少に効果を示さなかったが、４〜５日目にはいくらかの効果を示した。
【００９８】
ＤＡＩの結果から、ＤＳＳ誘発動物に対するジアセレイン及びメサラジンの処置は両方共有効であったが、おそらく異なる発症パターンを有していたことが明らかになった。メサラジンは、処置の最初の２〜３日間で良好な効果を示し、その後その活性を徐々に弱めた一方で、ジアセレインは、処置の初期段階よりも、処置の後半部分（４〜５日目）で、より有効であるようだった。ジアセレインは、より低い有効用量レベルで、メサラジンよりも有効であるようだった。
【００９９】
体重スコア（図３Ｂ）
【０１００】
体重スコアに対する投与の効果は、処置の末期（４及び５日目）で明らかになった。ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ（０．４〜０．５）と比較して、４／５日目に、より高い体重スコア（１．０／１．１）を有した。ジアセレイン処置群は、体重スコアを、４日目の０．１〜０．３（ｐ＜０．０５）及び５日目の０．６〜０．９に減少させることができた。対照的に、両方のメサラジン群は、体重スコアを、４日目の１．０〜１．３及び５日目の１．６〜１．９に増加させ、ＤＤＳ誘発動物よりも重症であった。
【０１０１】
ジアセレイン＋メサラジン併用群は、体重スコアを、正常Ｓｈａｍ動物に近い０．５〜０．８の範囲に維持することができるようであった。
【０１０２】
体重スコアの結果は、このＤＤＳ誘発性急性大腸炎モデルにおいて、メサラジンよりも優れたジアセレインの効果を示した。ジアセレインは、処置を通して正常体重を維持する能力を示した一方で、メサラジンは体重スコアを減少させる効果を有しなかったが、ＤＤＳ誘発対照動物よりも大きい体重スコアの増加を引き起こした。
【０１０３】
下痢便スコア（図３Ｃ）
【０１０４】
ビヒクル群において測定された下痢便スコアは、正常Ｓｈａｍ群と比較して、５日間の誘発期間全てにおいて、有意に高かった。全ての処置群の中で、高用量のメサラジン（１００ｍｇ／ｋｇ）群のみが、２及び３日目に観察された下痢便スコアの有意な減少を示したが、下痢便スコアを減少させる効果は、４及び５日目には明らかに減少した。ビヒクル群と、他の処置群のいずれかとの間で、下痢便スコアに有意差はなかった。
【０１０５】
便潜血スコア（図３Ｄ）
【０１０６】
ＤＤＳ誘発性大腸炎動物において、有意な便潜血が観察された。ＤＤＳ誘発ビヒクル群において測定された便潜血スコアは、正常Ｓｈａｍ群と比較して、１日目から５日目までで有意に増加した。低用量のジアセレイン（３０ｍｇ／ｋｇ）は、便潜血をわずかに減少させ、高用量のジアセレイン（６０ｍｇ／ｋｇ）群は、処置中に観察されたビヒクル群と比較して、便潜血スコアのより有意な減少を示した。便潜血の同様の有意な減少が、ジアセレイン＋メサラジン併用群においても観察された。低用量メサラジン２０ｍｇ／ｋｇ群は、１日目にのみ観察されたビヒクル群と比較して、便潜血スコアの有意な減少を示した。高用量のメサラジン１００ｍｇ／ｋｇ群は、１〜３日目に観察されたビヒクル群と比較して、便潜血スコアの有意な減少を示した。要約すると、ジアセレイン及びメサラジンの両方が、ＤＤＳ誘発性急性大腸炎動物における便潜血の減少に対して、用量に比例した有意な効果を示した。
【０１０７】
処置の最後に、ジアセレイン＋メサラジン併用群は、５日目に、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも１４．３％だけ、便潜血スコアの有意な減少を示した。両方のジアセレイン群及び両方のメサラジン群は、５日目に、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも１１．４％だけ、便潜血スコアを減少させる効果を示したが、観察された効果は統計的に有意ではなかった。
【０１０８】
疾患活動性指標（図４Ａ−Ｆ及び表４）
【０１０９】
結腸損傷スコア（図４Ａ）
【０１１０】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群よりも７８０％だけ、結腸損傷スコアの有意な増加を示した。ジアセレイン６０ｍｇ／ｋｇ、メサラジン２０ｍｇ／ｋｇ及びジアセレイン＋メサラジン群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも、それぞれ１３．６、２０．５及び１５．９％だけ、結腸損傷スコアの有意な減少を示した（ｐ＜０．０５）。ジアセレイン３０ｍｇ／ｋｇ及びメサラジン１００ｍｇ／ｋｇ群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも、それぞれ６．８及び９．１％だけ、結腸損傷スコアに対しより低い効果を示したが、観察された効果は統計的に有意ではなかった。
【０１１１】
潰瘍形成スコア（図４Ｂ）
【０１１２】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群よりも、潰瘍形成スコアの有意な増加を示した。全ての処置群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも８．７〜１３．０％だけ、潰瘍形成スコアに対しより低い効果を示したが、観察された効果は統計的に有意ではなかった。ＤＤＳによって誘発された腸潰瘍形成に対する、最大１００ｍｇ／ｋｇのメサラジンを含む、試験化合物の薬理的効果は、この疾患モデルでは検出不能のようであった。
【０１１３】
癒着スコア（図４Ｃ）
【０１１４】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群と同様の癒着スコアを示した。全ての処置群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と同様の癒着スコアを示した。
【０１１５】
上記の潰瘍形成減少測定と同様に、腸癒着に対する、メサラジンを含む試験化合物の効果は、この疾患モデルでは検出不能だった。
【０１１６】
下痢スコア（図４Ｄ）
【０１１７】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群よりも、下痢スコアの有意な増加を示した。メサラジン２０ｍｇ／ｋｇ及びジアセレイン＋メサラジン群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも、下痢スコアの有意な減少を示した。ジアセレイン６０ｍｇ／ｋｇ群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも、下痢スコアに対するより低い効果を示したが、観察された効果は統計的に有意ではなかった。ジアセレイン３０ｍｇ／ｋｇ及びメサラジン１００ｍｇ／ｋｇ群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と同様の下痢スコアを示した。
【０１１８】
厚さスコア（図４Ｅ）
【０１１９】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群は、正常Ｓｈａｍ群よりも１００％だけ、厚さスコアの有意な増加を示した。全ての処置群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも−１０〜１０％だけ、厚さスコアに対するより低い又はより高い効果を示したが、観察された効果は統計的に有意ではなかった。
【０１２０】
体重で正規化された厚さスコアを分析することを提案する。表４は結腸損傷スコアを示す。
【０１２１】
【表４】
2020504118.tif 000008
【０１２２】
組織学的分析
【０１２３】
ＨＥ染色（図５Ａ−Ｃ）
【０１２４】
ＨＥ染色した結腸切片の代表的な顕微鏡写真を図５Ａ−Ｃに示す。ビヒクル群からの結腸切片は、陰窩及び上皮の喪失及び炎症性細胞浸潤を示した。
【０１２５】
図５Ａは、ビヒクル群と比較して、ジアセレイン処置群及びジアセレイン＋メサラジン群において、陰窩及び上皮のより少ない喪失が観察されたことを示す。メサラジン処置単独では、腸陰窩及び上皮の喪失の防止に対する有意な効果は観察されなかった。結腸の膜でのＨＥ染色からの知見は、大腸炎膜損傷の治癒における、メサラジンよりもはるかに高い、ジアセレインの効力を示した。
【０１２６】
図５Ｂ−Ｃは、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と比較して、メサラジン処置群並びにアロエエモジン群、レイン群、レイン＋メサラジン群及びジアセレイン＋メサラジン群において、陰窩及び上皮のより少ない喪失が観察されたことを示す。
【０１２７】
総括
【０１２８】
本研究において、ビヒクル群は、正常群と比較して、ＤＡＩ及び結腸損傷スコアの有意な増加を示した。加えて、結腸切片の検査は、陰窩及び上皮の喪失及び粘膜における炎症性細胞の炎症性細胞浸潤を示した。したがって、マウスのＤＳＳ誘発性急性大腸炎モデルがこの研究で確立され、全てのＤＳＳ誘発マウスにおいて死亡は観察されなかった。
【０１２９】
ＤＳＳ誘発ビヒクル群の動物で、有意な体重減少が観察された。ジアセレインによる処置は、ＤＳＳ誘発による体重減少を防止することができた一方で、同様の効果はメサラジン処置動物では観察されなかった。
【０１３０】
ジアセレイン群（３０及び６０ｍｇ／ｋｇ）及びジアセレイン＋メサラジン併用群は、結腸長の有意な改善を示した一方で、メサラジン処置単独群は、結腸長の改善にわずかな効果しか示さなかった。ジアセレイン＋メサラジン併用処置は、結腸重量対体重比の有意な減少を示し、ジアセレイン又はメサラジン処置単独よりも有効であった。
【０１３１】
ＤＳＳ誘発は、５日間の誘発期間全てにおいて、正常Ｓｈａｍ群よりも、疾患活動性指標（ＤＡＩ）を有意に増加させた。ＤＡＩの結果から、ＤＳＳ誘発動物に対するジアセレイン及びメサラジンの処置は両方共有効であったが、おそらく異なる発症パターンを示していたことが明らかになった。メサラジンは、処置の最初の２〜３日間で良好な効果を示し、その後その活性を徐々に弱めた一方で、ジアセレインは、処置の後半部分（４〜５日目）で、より有効であるようだった。ジアセレインは、より低い有効用量レベルで、メサラジンよりも有効であるようだった。
【０１３２】
さらに、ジアセレインは、処置を通して正常体重を維持することにおいて、メサラジンよりも優れていることが示された一方で、メサラジンは体重スコアを減少させる効果を有しなかった。ジアセレイン及びメサラジンの両方は、これらの急性大腸炎動物において便潜血を減少させる有意な効果を示した。高用量のジアセレイン（６０ｍｇ／ｋｇ）、低用量のメサラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）、及びジアセレイン＋メサラジン併用は、ＤＳＳによって誘発された結腸損傷の有意な減少を示した。結腸損傷スコアの改善は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と比較して、下痢スコア及びおそらく厚さスコアの減少に起因した。
【０１３３】
結腸組織の切片の顕微鏡検査の知見は、ＤＳＳによって誘発された陰窩及び上皮の損傷が、ジアセレイン処置及びジアセレイン＋メサラジン併用によって明確に減少した一方で、メサラジン単独は、腸膜の損傷の治癒に効果がなかったことを証明した。
【０１３４】
メサラジン（６０ｍｇ／ｋｇ）及びジアセレイン＋メサラジン併用での処置は、ＤＳＳ誘発による体重減少を防止することができた一方で、メサラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）処置動物では同様の効果は観察されなかった。メサラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）群及びジアセレイン＋メサラジン併用群は、結腸重量の有意な改善を示した一方で、メサラジン（６０ｍｇ／ｋｇ）群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群よりも、結腸重量に対するより低い効果を示した。メサラジン（２０及び６０ｍｇ／ｋｇ）処置群及びジアセレイン＋メサラジン併用群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と比較して、結腸重量対体重比の有意な減少を示した。ＤＳＳ誘発は、５日間の誘発期間全てにおいて、正常Ｓｈａｍ群よりも、ＤＡＩを有意に増加させた。ＤＡＩの結果から、ＤＳＳ誘発動物に対するメサラジン（６０ｍｇ／ｋｇ）及びジアセレイン＋メサラジン併用の処置は、両方共有効であったことが明らかになった。
【０１３５】
メサラジンは、処置の最初の２〜３日間で良好な効果を示し、その後その活性を徐々に弱めた。特に、下痢便スコア及び便潜血スコアは、２及び３日目で有意に減少した。メサラジン（６０ｍｇ／ｋｇ）群及びジアセレイン＋メサラジン併用群は、これらの急性大腸炎動物において体重スコアを減少させる有意な効果を示した。結腸組織の切片の顕微鏡検査の知見は、ＤＳＳによって誘発された陰窩及び上皮の損傷が、メサラジン処置（２０及び６０ｍｇ／ｋｇ）及びジアセレイン＋メサラジン併用処置によって明確に減少したことを証明した。
【０１３６】
アロエエモジン及びアロエエモジン＋メサラジン併用での処置は、ＤＳＳ誘発による体重減少を防止することができた。アロエエモジン群は、結腸重量対体重比の有意な改善を示した。ＤＡＩの結果から、アロエエモジン及びアロエエモジン＋メサラジンの処置が両方共有効であったことが明らかになった。アロエエモジン及びアロエエモジン＋メサラジン併用の両方が、これらの急性大腸炎動物において体重スコアを減少させる有意な効果を示した。アロエエモジン単独は、便潜血スコアを減少させる有意な効果を示した。アロエエモジン＋メサラジン併用は、ＤＳＳによって誘発された結腸損傷の有意な減少を示した。結腸損傷スコアの改善は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と比較して、下痢スコア及び厚さスコアの減少に起因した。
【０１３７】
結腸組織の切片の顕微鏡検査の知見は、ＤＳＳによって誘発された陰窩及び上皮の損傷がアロエエモジン処置によって明確に減少した一方で、アロエエモジン＋メサラジン併用は、腸膜の損傷の治癒に効果がなかったことを証明した。
【０１３８】
エモジン及びエモジン＋メサラジン併用での処置は、ＤＳＳ誘発による体重減少を防止することができた。エモジン群は、結腸重量の有意な改善を示した。エモジン及びエモジン＋メサラジン併用群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と比較して、結腸重量対体重比の有意な減少を示した。ＤＡＩの結果から、エモジン及びエモジン＋メサラジンの処置が両方共有効であったことが明らかになった。エモジン単独は、これらの急性大腸炎動物において体重スコア、下痢便スコア及び便潜血スコアを減少させる有意な効果を示した。エモジン＋メサラジン併用はまた、これらの急性大腸炎動物において体重スコア及び便潜血スコアを減少させる有意な効果を示した。エモジン＋メサラジン併用は、ＤＳＳによって誘発された結腸損傷の有意な減少を示した。結腸損傷スコアの改善は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と比較して、厚さスコア及びおそらく下痢スコアの減少に起因した。
【０１３９】
レイン及びレイン＋メサラジン併用での処置は、ＤＳＳ誘発による体重減少を防止することができた。レイン群単独は、結腸重量の有意な改善を示した。レイン群及びレイン＋メサラジン併用群は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と比較して、結腸重量対体重比の有意な減少を示した。ＤＡＩの結果から、レイン及びレイン＋メサラジンの処置が両方共有効であったことが明らかになった。レイン及びレイン＋メサラジン併用の両方が、これらの急性大腸炎動物において体重スコアを減少させる有意な効果を示した。レイン単独はまた、下痢便スコアを減少させる有意な効果を示した。レイン＋メサラジン併用群は、ＤＳＳによって誘発された結腸損傷の有意な減少を示した。結腸損傷スコアの改善は、ＤＳＳ誘発ビヒクル群と比較して、下痢スコア及びおそらく厚さスコアの減少に起因した。結腸組織の切片の顕微鏡検査の知見は、ＤＳＳによって誘発された陰窩及び上皮の損傷がレイン処置及びレイン＋メサラジン併用処置によって明確に減少したことを証明した。
【０１４０】
本発明の例示的な実施形態の前述の説明は、例示及び説明の目的のためにのみ提示されたものであり、包括的であること、又は開示される正確な形態に本発明を限定することを意図するものではない。上記の教示に照らして、多くの改変及び変形が可能である。
【０１４１】
実施形態及び実施例は、他の当業者が本発明及び様々な実施形態を予期される特定の用途に適した様々な改変を加えて利用することができるように、本発明の原理及びそれらの実用的な用途を説明する目的で、選択及び説明された。代替の実施形態が、その精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の属する分野の当業者に、明らかになるであろう。したがって、本発明の範囲は、前述の説明及びそこに記載される例示的な実施形態ではなく、添付の特許請求の範囲によって規定される。
【図１】
2020504118.tif 000010
【図２】
2020504118.tif 000011
【図３Ａ−Ｂ】
2020504118.tif 000012
【図３Ｃ−Ｄ】
2020504118.tif 000013
【図４Ａ−Ｄ】
2020504118.tif 000014
【図４Ｅ−Ｆ】
2020504118.tif 000015
【図５Ａ】
2020504118.tif 000016
【図５Ｂ】
2020504118.tif 000017
【図５Ｃ】
2020504118.tif 000018
【国際調査報告】
2020504118.tif 000019
2020504118.tif 000020
2020504118.tif 000021