(57)【要約】本発明は、ステビアレバウディアナ（Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）植物から食品成分を製造する方法、並びに食品、飲料及び他の消費財におけるそれらの使用に関する。得られた組成物は、風味剤、甘味剤、酸化防止剤、及び他の機能性成分として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップを含む、非ステビオール配糖体組成物の製造方法。
ａ．ステビアレバウディアナ（Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）植物材料を提供するステップ；
ｂ．抽出溶媒を用意するステップ；
ｃ．ステビアレバウディアナ植物材料及び抽出溶媒を混合してステビア植物材料及び溶媒混合物を得るステップ；
ｄ．ステビア植物材料及び溶媒混合物を分離して、ステビオール配糖体分子及び非ステビオール配糖体分子を含む濾液を得るステップ；
ｅ．濾液からステビオール配糖体分子を単離又は分離して、非ステビオール配糖体組成物を得るステップ、
ここで、得られた非ステビオール配糖体組成物が、フェノール化合物、ポリフェノール、フラボノイド、キナ酸及びコーヒー酸及びそれらの誘導体、ネオクロロゲン酸（ネオ‐ＣＧＡ；５‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は５‐ＣＱＡ）、クリプトクロロゲン酸（クリプトＣＧＡ；４‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は４‐ＣＱＡ）、ｎ‐クロロゲン酸（ｎ‐ＣＧＡ；３‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は３‐ＣＱＡ）、イソクロロゲン酸Ａ（イソ‐ＣＧＡ  Ａ；３，５‐ジカフェオイルキナ酸）イソ‐クロロゲン酸Ｂ（イソ‐ＣＧＡ  Ｂ；３，４‐ジカフェオイルキナ酸）、イソ‐クロロゲン酸Ｃ（イソ‐ＣＧＡ  Ｃ；４，５‐ジカフェオイルキナ酸）、当分野で知られている他のクロロゲン酸及びイソクロロゲン酸、レチノイド、顔料、多糖類、オリゴ糖、二糖類、単糖類、揮発性油成分、ステロール、テルペノイド、セスキテルペノイド、ジテルペン、トリテルペン、クマリン、脂肪酸及びそれらの誘導体、アミノ酸とその誘導体、ジペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質、アウストロイヌリン、ケルセチン、ステレビン、スパチュレノール、デカン酸、８，１１，１４‐エコサトリエン酸、２‐メチルオクタデカン、ペンタコサン、オクタコサン、スチグマステロール、ブシステロール、α‐及びβ‐アミリン、ルペオール、酢酸β‐アミリン、五環式トリテルペン及び／又はグリコシド及びそれらの組み合わせから選択される少なくとも１種の非ステビオール配糖体分子を含む。
【請求項２】
請求項１に記載の非ステビオール配糖体組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の非ステビオール配糖体組成物を含む消費材。
【請求項４】
請求項１に記載の非ステビオール配糖体組成物を消費財に添加するステップを含む、消費財の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、２０１６年１１月２９日に出願された米国特許出願第６２／４２７，５３９号に対する優先権を主張する。アメリカ合衆国の目的のために、この出願はまた、２０１６年１０月３日に出願された米国特許出願第１５／２８４，２６５号の一部継続出願であり、これは２０１５年４月２日に出願された米国特許出願第１４／６７７，５３８号の継続出願であり、これは現在米国特許第９，４５６，６２６号として認められており、これは２０１３年６月１２日に出願された米国特許出願第１３／９９３，４１５号の継続出願であり、これは現在米国特許第９，０２９，４２６号として認められており、これは２０１１年１２月１２日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６４３４３号の米国国内段階出願であり、これは２０１０年１２月２０日に出願された米国特許出願第６１／４２４，７９８号及び２０１０年１２月１３日に出願された米国特許出願第６１／４２２，４０３号に対する優先権を主張し、これらの各出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本出願はまた、以下の出願のそれぞれを参照によりその全体を援用する：２０１２年６月２２日に出願された米国特許出願第１３／５３０，１１３号、これは現在米国特許第８，５３０，５２７号として認められている；２０１２年１１月６日に出願された米国特許出願第１３／５８０，０９８号、これは現在米国特許第８，９８１，０８１号として認められている；２０１３年７月１６日に出願された米国特許出願第１３／９４３，７７６号；２０１３年８月１日に出願された米国特許出願第１３／９５７，０９８号、これは現在米国特許第９，５１０，６１１号として認められている；２０１４年３月３日に出願された米国特許出願第１４／１９５，８１２号；及び２０１５年８月１８日に出願された米国特許出願第１４／８２９，１２７号、これは現在米国特許第９，７７１，４３４号として認められている。
【０００２】
本発明は、ステビアレバウディアナ（Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）植物から食品成分を製造する方法、並びに食品、飲料及び他の消費財におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
高強度甘味料は、スクロースの甘味度を何度も超える甘味度を有する。それらは本質的にノンカロリーで、ダイエットや低カロリー食品の製造に広く使われている。スクロース、フルクトース、及びグルコースなどの天然カロリー甘味料は消費者に最も望ましい味を提供するが、それらは高いカロリー値を有する。高強度甘味料は血糖値に影響を与えず、栄養価をほとんど又はまったく提供しない。
【０００４】
ステビアレバウディアナ  ベルトーニ（Ｓｔｅｖｉａ  ｒｅｂａｕｄｉａｎａ  Ｂｅｒｔｏｎｉ）は南アメリカの特定地域に生息するキク科（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）（キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ））の多年生低木である。植物の葉には１０〜２０％のジテルペン配糖体が含まれており、これは砂糖の１５０〜４５０倍甘い。葉はパラグアイとブラジルで伝統的に地元のお茶や薬を甘くするために何百年もの間使われてきた。
【０００５】
現在、重要な甘味特性を持つ２３０以上のステビア種がある。植物は、その本来の亜熱帯から寒い北半球の緯度まで、広範囲の条件下でうまく育てられてきた。
【０００６】
ステビアレバウディアナ植物の抽出物は、単一の塩基‐ステビオール‐を有し、位置Ｃ１３及びＣ１９における炭水化物残基の存在によって異なる、様々な甘いジテルペン配糖体の混合物を含む。これらの配糖体（グリコシド）はステビアの葉に蓄積し、総乾燥重量の約１０％‐２０％を占める。典型的には、乾燥重量基準で、ステビアの葉に見出される４つの主要な配糖体は、ズルコシドＡ（０．３％）、レバウジオシドＣ（０．６‐１．０％）、レバウジオシドＡ（３．８％）及びステビオシド（９．１％）である。ステビア抽出物中に同定された他の配糖体には、レバウジオシドＢ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＦ、ステビオールビオシド及びルブソシドが含まれる。
【０００７】
ステビオール配糖体はカロリーがゼロで、砂糖が使用されているところならどこでも使用できる。それらは糖尿病及び低カロリー食事療法にとって理想的である。
【０００８】
他方、ステビオール配糖体と共に製造の過程において、ステビア植物の他の成分も大量に水で抽出されることに注意しなければならない。これらの他の成分は主に下流工程で分離され、環境中に廃棄される。
【０００９】
ステビアレバウディアナ植物のこれらの他の成分についてはほとんど知られていない。フェノール化合物、遊離アミノ酸などを報告した著者はほとんどいないが、それらの成分の同一性についての情報は乏しいままであり、食品、飲料及び他の消費財におけるそれらの可能な用途は記載されていない（Ｋａｒａｋｏｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ、２０１１、２０１５；Ｗｏｅｌｗｅｒ‐Ｒｉｅｃｋ、２０１２；Ｐｅｒｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ、２０１４）。
【００１０】
ステビア植物の他の抽出成分を任意の食品成分に加工することに関する今日までの報告はない。したがって、大規模に達成されれば、これはステビア植物全体を食物連鎖に含める機会を提供し、実質的に無駄のないステビア加工を生み出すことができるので、著しい経済的及び環境的利益を提供することができる。
【発明の概要】
【００１１】
したがって、ステビアレバウディアナの植物からそれらの成分を効果的に分離し、それらを異なる消費財の原料として使用する方法を開発する必要がある。
【００１２】
本発明は、既存のステビア工業用処理スキームの欠点を克服することを目的としている。本発明は、ステビアレバウディアナ植物から食品成分を製造するための方法、及び食品及び飲料を含む様々な消費財におけるその使用を記載する。
【００１３】
本発明は、一部、ステビアレバウディアナ植物由来のフェノール類及び他の非ステビオール配糖体化合物を含む組成物に関する。
【００１４】
以下、「ステビオール配糖体」という用語は、ステビアレバウディアナに天然に存在するステビオール配糖体を意味し、ステビオールモノシド、ステビオールビオシド、ルブソシド、ズルコシドＢ、ズルコシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＧ、ステビオシド、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【００１５】
以下、「ＲｅｂＡ」、「ＲｅｂＢ」、「ＲｅｂＣ」、「ＲｅｂＤ」、「ＲｅｂＥ」、「ＲｅｂＦ」、「ＲｅｂＭ」、「ＲｅｂＮ」、及び「ＲｅｂＯ」という用語は、レバウジオシドＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｍ、Ｎ、及びＯを指す。
【００１６】
以下、用語「Ｓｔｅｖ」、「Ｓｂｉｏ」、「ＤｕｌＡ」、「Ｒｕｂ」は、ステビオシド、ステビオールビオシド、ズルコシドＡ及びルブソシドを指す。
【００１７】
以下、「ＴＳＧ含有量」という用語は総ステビオール配糖体（ＴＳＧ）含有量を意味し、それはレバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、ステビオシド、ステビオールビオシド、ズルコシドＡ及びルブソシドの濃度の合計（ｗｔ／ｗｔ乾燥基準）として計算される。
【００１８】
以後、用語「ＣＧＡ」は、植物中に天然に存在するクロロゲン酸類及びそれらの誘導体を意味し、ネオクロロゲン酸（ネオ‐ＣＧＡ；５‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は５‐ＣＱＡ）、クリプトクロロゲン酸（クリプト‐ＣＧＡ；４‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は４‐ＣＱＡ）、ｎ‐クロロゲン酸（ｎ‐ＣＧＡ；３‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は３‐ＣＱＡ）、イソクロロゲン酸Ａ（イソ‐ＣＧＡ  Ａ；３，５‐ジカフェオイルキナ酸）イソクロロゲン酸Ｂ（イソ‐ＣＧＡ  Ｂ；３，４‐ジカフェオイルキナ酸）、イソクロロゲン酸Ｃ（イソ‐ＣＧＡ  Ｃ；４，５‐ジカフェオイルキナ酸）、及びそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない。
【００１９】
以下、「ＴＣＧＡ含有量」という用語は、総クロロゲン酸類（ＴＣＧＡ）含有量を意味し、それは、ネオ‐ＣＧＡ、クリプト‐ＣＧＡ、ｎ‐ＣＧＡ、イソ‐ＣＧＡ  Ａ、イソ‐ＣＧＡ  Ｂ及びイソ‐ＣＧＡ  Ｃの濃度の合計（ｗｔ／ｗｔ乾燥基準）として計算される。
【００２０】
本発明では、ステビアレバウディアナ植物材料、特に葉及び／又は茎を出発材料として使用した。
【００２１】
植物材料を水又は水性アルコール溶媒を用いて抽出した。
【００２２】
得られた水又は水性アルコール抽出物をさらに処理してステビオール配糖体画分を分離した。残りの画分は「非ステビオール配糖体組成物」（ＮＳＧＣ）と命名された。これは、ステビアレバウディアナ植物の水又はアルコール水溶液抽出物に存在する、ステビオール配糖体以外の化合物（以下「非ステビオール配糖体分子」）を主に含む組成物を意味する。「非ステビオール配糖体分子」の非限定的な例としては、フェノール化合物、ポリフェノール、フラボノイド、キナ酸及びカフェ酸及びそれらの誘導体、ネオクロロゲン酸（ネオ‐ＣＧＡ；５‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は５‐ＣＱＡ）、クリプト‐クロロゲン酸（クリプト‐ＣＧＡ；４‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は４‐ＣＱＡ）、ｎ‐クロロゲン酸（ｎ‐ＣＧＡ；３‐Ｏ‐カフェオイルキナ酸又は３‐ＣＱＡ）、イソクロロゲン酸Ａ（イソ‐ＣＧＡ  Ａ；３，５‐ジカフェオイルキナ酸）イソクロロゲン酸Ｂ（イソ‐ＣＧＡ  Ｂ；３，４‐ジカフェオイルキナ酸）、イソクロロゲン酸Ｃ（イソ‐ＣＧＡ  Ｃ；４，５‐ジカフェオイルキナ酸）、他のクロロゲン酸及び当業界で知られているイソクロロゲン酸、レチノイド、顔料、多糖類、オリゴ糖類、二糖類、単糖類、揮発性油成分、ステロール、テルペノイド、セスキテルペノイド、ジテルペン、トリテルペン、クマリン、脂肪酸及びそれらの誘導体、アミノ酸及びそれらの誘導体、ジペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質、アウストロイヌリン、ケルセチン、ステレビン、スパチュレノール、デカン酸、８，１１，１４‐エイコサトリエン酸（8,11,14-ecosatrienoic acid）、２‐メチルオクタデカン、ペンタコサン、オクタコサン、スチグマステロール、β‐シトステロール（bsitosterol）、α‐及びβ‐アミリン、ルペオール、β‐アミリンアセテート、五環式トリテルペン及び／又はそれらの配糖体を含む。
【００２３】
本発明のいくつかの実施形態において調製され、ＮＳＧＣと呼ばれる組成物はまた、いくつかの残存量のステビオール配糖体を含有してもよい。
【００２４】
いくつかのＮＳＧＣは、他のＮＳＧＣを得るために当技術分野で知られている任意の食品成分加工方法によってさらに精製する及び／又は他の処理をすることができる。
【００２５】
本発明のＮＳＧＣは、フレーバー、フレーバー改質剤、フレーバーエンハンサー、甘味料、保存料、抗酸化剤、乳化剤、テクスチャー化剤、増量剤、安定化剤、可溶化剤及び他の食品成分として様々な消費財、食品及び飲料に適用できる。
【００２６】
前述の一般的な説明及び以下の詳細な説明は両方とも例示的かつ説明的であり、特許請求の範囲に記載されている本発明のさらなる説明を提供することを意図していることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
添付の図面は、本発明のさらなる理解を提供するために含まれる。図面は、本発明の実施形態を示しており、その説明と共に、本発明の実施形態の原理を説明するのに役立つ。
【図１】図１はいくつかのＣＧＡの構造を示す。
【図２】図２は、ステビアレバウディアナＣＧＡのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明の利点は、以下の詳細な説明からさらに明らかになるであろう。しかしながら、この詳細な説明から、本発明の精神及び範囲内の様々な変更及び修正が当業者には明らかとなるであろうから、詳細な説明及び具体例は、本発明の好ましい実施形態を示しているが、例示としてのみ与えられていることが理解されるべきである。
【００２９】
当業者はまた、以下に記載されるさらなるプロセスステップのうちの１つ以上が省略され得ることを認識するであろう。当業者はまた、以下に記載されるプロセスが記載されたステップの特定の順序を想定するが、この順序はいくつかの場合において変更され得ることを理解するであろう。
【００３０】
抽出
本発明では、ステビアレバウディアナ植物材料、特にステビアレバウディアナ植物の葉及び／又は茎を出発材料として使用した。ステビアレバウディアナ植物材料抽出物は、米国特許第７，８６２，８４５号（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。）に記載されている抽出方法、並びに膜濾過、超臨界流体抽出、酵素支援抽出、微生物支援抽出、超音波支援抽出、マイクロ波支援抽出などの任意の方法を使用して得ることができるが、これらに限定されない。
【００３１】
一実施形態では、ステビアレバウディアナ植物材料（例えば、葉）は、約５％〜約１５％の水分含有量に達するまで、約２０℃〜約１００℃の温度で乾燥することができる。特定の実施形態において、植物材料は、約１から約２４０時間の間、約２０℃から約６０℃の間で乾燥させることができる。
【００３２】
他の特定の実施形態では、植物材料は、分解を防ぐために約２０℃から約３５℃の間の温度で乾燥させることができる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、ステビアレバウディアナ植物材料は、真空下又は減圧下で乾燥させることができる。
【００３４】
いくつかの実施形態では、ステビアレバウディアナ植物材料は、Ｎ２などの不活性ガスの存在下で乾燥させることができる。
【００３５】
いくつかの実施形態では、ステビアレバウディアナ植物材料は凍結乾燥されてもよい。
いくつかの実施形態では、乾燥植物材料は場合により粉砕される。粒径は、約０．１から約２０ｍｍの間であり得る。
【００３６】
植物材料（粉砕又は未粉砕）は、例えば、連続又はバッチ還流抽出、超臨界流体抽出、酵素支援抽出、微生物支援抽出、超音波支援抽出、マイクロ波抽出などの任意の適切な抽出プロセスによって抽出することができる。抽出に使用される溶媒は、例えば極性有機溶媒（脱気、減圧、加圧又は蒸留）、非極性有機溶媒、水（脱気、減圧、加圧、脱イオン、蒸留、炭素処理又は逆浸透）又はそれらの混合物などの任意の適切な溶媒であり得る。特定の実施形態では、溶媒は水と１以上のアルコールを含む。他の実施形態では、溶媒は水である。他の実施形態では、溶媒は１つ以上のアルコールである。アルコールは、例えば、メタノール、エタノール、ｎ‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール及びそれらの混合物から選択することができる。
【００３７】
特定の実施形態では、植物材料は連続還流抽出器中で水で抽出される。当業者は、抽出溶媒対植物材料の比が溶媒の種類及び抽出されるべき植物材料の量に基づいて変化することを認識するであろう。一般に、抽出溶媒対乾燥植物材料１キログラムの比は、約１キログラムの葉に対して約２０リットル〜約２５リットルである。
【００３８】
抽出溶媒のｐＨは、約ｐＨ２．０〜約７．０、例えば約ｐＨ２．０〜約ｐＨ５．０、約ｐＨ２．０〜約ｐＨ４．０、又は約ｐＨ２．０〜約ｐＨ３．０であり得る。特定の実施形態では、抽出溶媒は水性であり、例えば、ｐＨ約２．０〜約７．０、例えば約ｐＨ２．０〜約ｐＨ５．０、約ｐＨ２．０〜約ｐＨ４．０、又は約ｐＨ２．０〜約ｐＨ３．０の間のｐＨを提供する量の水、及び任意に酸及び／又は塩基である。例えば、ＨＣｌ、ＮａＯＨ、クエン酸などのような任意の適切な酸又は塩基を使用して、抽出溶媒に所望のｐＨを提供することができる。
【００３９】
抽出は、約２５℃〜約１００℃、例えば約３０℃〜約８０℃、約３５℃〜約７５℃、約４０℃〜約７０℃、約４５℃〜約６５℃、又は約５０℃〜約６０℃の温度で実施することができる。
【００４０】
抽出プロセスがバッチ抽出プロセスである実施形態では、抽出期間は、約０．５時間から約２４時間、例えば、約１時間から約１２時間、約１時間から約８時間、又は、約１時間から約６時間の範囲であり得る。
【００４１】
抽出プロセスが連続プロセスである実施形態では、抽出期間は約１時間から約５時間、例えば約２．５時間から約３時間の範囲であり得る。
【００４２】
抽出後、不溶性植物材料を濾過により溶液から分離して、「非ステビオール配糖体分子」として上述したステビオール配糖体及び他の分子を含有する濾液を得ることができる。この固液分離は、重力濾過、プレート‐アンド‐フレームフィルタープレス、クロスフローフィルター、スクリーンフィルター、ヌッチェフィルター、ベルトフィルター、セラミックフィルター、メンブランフィルター、マイクロフィルター、ナノフィルター、限外濾過又は遠心分離を含むがこれらに限定されない任意の適切な手段によって達成することができる。珪藻土、ベントナイト、ゼオライトなどのような場合により様々な濾過助剤もこの方法で使用することができる。
【００４３】
ステビオール配糖体と「非ステビオール配糖体分子」を含む濾液の前処理
いくつかの実施形態において、ステビオール配糖体及び「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液は、マクロポーラスポリマー吸着材と接触させる前に、任意選択で前処理される。前記前処理は、例えば、珪藻土、珪藻岩、珪藻土（キーゼルグール）、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）、ベントナイト、活性炭、任意の食品グレードの濾過助剤、任意の凝集剤、キレート剤、任意の酸、任意の塩基／アルカリ、当技術分野で公知の任意のイオン交換樹脂、又はそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない群から選択される少なくとも１つの剤によって達成できる。いくつかの実施形態では、前処理は、当技術分野で公知の限外濾過及び／又はナノ濾過及び／又はＲＯ濾過膜システムを介した追加の濾過によって達成することができる。
【００４４】
ステビオール配糖体の吸着
特定の実施形態では、ステビオール配糖体及び「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液をマクロポーラスポリマー吸着材と接触させる。マクロポーラスポリマー吸着材は、例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＸＡＤシリーズ（Ｒｏｈｍ  ａｎｄ  Ｈａａｓ）、Ｄｉａｉｏｎ（登録商標）ＨＰシリーズ（三菱ケミカル株式会社）、Ｓｅｐａｂｅａｄｓ（登録商標）ＳＰシリーズ（三菱ケミカル株式会社）、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ  ＹＷＤシリーズ（Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．、中国）、又は同等のものなどのステビオール配糖体を吸着することができる任意の中性、酸性又はアルカリ性マクロポーラスポリマー吸着樹脂であり得る。吸着材は、それらの全容量の約７５％から約１００％までカラムに充填することができる。
【００４５】
ステビオール配糖体及びいくつかの「非ステビオール配糖体分子」はマクロポーラスポリマー吸着材によって吸着されるが、他の「非ステビオール配糖体分子」は吸着されず、流出液中でカラムを通過する。
【００４６】
マクロポーラス吸着樹脂は、ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」が濃縮された様々な溶出画分を得るために、様々な濃度のエタノール水溶液によって溶出され得る。
【００４７】
いくつかの実施形態において、マクロポーラス吸着樹脂は、溶出溶媒のｐＨを変えることによって溶出され得る。
【００４８】
不純物の任意沈殿
テビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液のｐＨは、さらなる不純物を除去するために調整され得る。一実施形態において、濾液のｐＨは、例えば、酸化カルシウム又は水酸化カルシウム（濾液の体積から約１．０％）などの塩基でゆっくり撹拌しながら処理することによって、約８．５〜約１０．０に調整することができる。
【００４９】
上記のように、濾液を塩基で処理すると懸濁液が得られ、そのｐＨは任意の適切な凝集／凝固剤で処理することにより約３．０〜約４．０に調整することができる。適切な凝集／凝固剤には、例えば、カリウムミョウバン、硫酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、酸化アルミニウム、ＣＯ２、Ｈ３ＰＯ４、Ｐ２Ｏ５、ＭｇＯ、ＳＯ２、アニオン性ポリアクリルアミド、長鎖脂肪酸置換基を有する四級アンモニウム化合物、ベントナイト、珪藻土、ＫｅｍＴａｂ  Ｓｅｐシリーズ、Ｓｕｐｅｒｆｌｏｃシリーズ、ＫｅｍＴａｂ  Ｆｌｏｔｅシリーズ、Ｋｅｍｔａｌｏ  Ｍｅｌシリーズ、Ｍｉｄｌａｎｄ  ＰＣＳ‐３０００、Ｍａｇｎａｆｌｏｃ  ＬＴ‐２６、Ｚｕｃｌａｒ  １００、Ｐｒａｓｔａｌ  ２９３５、Ｔａｌｏｆｌｏｃ、Ｍａｇｏｘ、鉄塩又はそれらの組み合わせが含まれる。例示的な鉄塩としては、ＦｅＳＯ４、ＦｅＣｌ２、Ｆｅ（ＮＯ３）３、Ｆｅ２（ＳＯ４）３、ＦｅＣｌ３、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、第二鉄塩はＦｅＣｌ３である。濾液は、約５分〜約１時間、例えば、約５分〜約３０分、約１０分〜約２０分、又は約１０分〜約１５分の間、凝集／凝固剤で処理することができる。攪拌又はゆっくりした攪拌もまた処理を容易にするために使用することができる。場合により、得られた混合物のｐＨは、次いで、例えば、酸化カルシウム又は水酸化ナトリウムのような塩基を用いて約８．５〜約９．０の間に調整することができる。塩基による、及び場合によっては攪拌しながらの処理の期間は、約５分〜約１時間、例えば、約１０分〜約５０分、約１５分〜約４５分、約２０分〜約４０分又は約２５分〜約３５分である。特定の実施形態では、塩基はゆっくり撹拌しながら約１５〜約４０分間使用される酸化カルシウムである。
【００５０】
一実施形態では、ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液を少なくとも１種のアルコールと混合していくつかの不純物を沈殿させることができる。
【００５１】
沈殿した化合物及び不溶性粒子を濾液から分離して「非ステビオール配糖体分子」を含む組成物を得る。沈殿物の分離は、重力濾過、プレートアンドフレームフィルタープレス、クロスフローフィルター、スクリーンフィルター、ヌッチェフィルター、ベルトフィルター、セラミックフィルター、メンブランフィルター、マイクロフィルター、ナノフィルター、限外濾過又は遠心分離を含むがこれらに限定されない任意の適切な手段によって達成され得る。珪藻土、ベントナイト、ゼオライトなどのような任意の様々な濾過助剤をこの方法で使用することができる。
【００５２】
脱イオン
ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液は、例えば電気透析、濾過（ナノ又は超濾過）、逆浸透、イオン交換、混床イオン交換又はそのような方法の組み合わせを含む任意の適切な方法による脱イオン化に供することができる。一実施形態では、「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液は、樹脂処理濾液を提供するために１つ以上のイオン交換樹脂での処理によって脱イオン化される。一実施形態では、ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液を強酸カチオン交換樹脂に通す。別の実施形態では、ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液を弱塩基アニオン交換樹脂に通す。さらに別の実施形態では、ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液を強酸カチオン交換樹脂に通し、続いて弱塩基アニオン交換樹脂に通す。さらに別の実施形態では、ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液を弱塩基アニオン交換樹脂に通し、続いて強酸カチオン交換樹脂に通す。
【００５３】
カチオン交換樹脂は、官能基が例えばスルホン酸である任意の強酸カチオン交換体であり得る。適切な強酸カチオン交換樹脂は当技術分野において公知であり、これには、限定はされないが、Ｒｏｈｍ＆Ｈａａｓ  Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）１０ＦＰＣ２２Ｈ樹脂（これはスルホン化ジビニルベンゼンスチレンコポリマーである）、Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから入手可能なＤｏｗｅｘ（登録商標）イオン交換樹脂、Ｓｅｒｖａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ＧｍｂＨから入手可能な１５Ｓｅｒｄｏｌｉｔ（登録商標）イオン交換樹脂、Ｑｕａｌｉｃｈｅｍ、Ｉｎｃ．から入手可能なＴ４２強酸性カチオン交換樹脂及びＡ２３強塩基‐イオン交換樹脂、並びにＬａｎｘｅｓｓから入手可能なＬｅｗａｔｉｔ強イオン交換樹脂が含まれる。特定の実施形態では、強酸カチオン交換樹脂はＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）１０ＦＰＣ２２Ｈ樹脂（Ｈ＋）である。当業者に知られているように、本発明の実施形態と共に使用するための他の適切な強酸カチオン交換樹脂は市販されている。
【００５４】
アニオン交換樹脂は、官能基が、例えば、三級アミンである任意の弱塩基アニオン交換体であり得る。適切な弱塩基アニオン交換樹脂は当技術分野において公知であり、これらに限定されないが、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ‐ＦＰＡ５３（ＯＨ‐）、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ‐６７、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ‐９５、Ｄｏｗｅｘ  ６７、Ｄｏｗｅｘ  ７７及びＤｉａｉｏｎ  ＷＡ  ３０などの樹脂が挙げられ、使用され得る。特定の実施形態では、強酸カチオン交換樹脂はＡｍｂｅｒｌｉｔｅ‐ＦＰＡ５３（ＯＨ−）樹脂である。当業者に知られているように、本発明の実施形態と共に使用するための他の適切な弱塩基アニオン交換樹脂は市販されている。
【００５５】
特定の実施形態では、ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液を強酸カチオン交換樹脂、例えば、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）１０ＦＰＣ２２Ｈ樹脂（Ｈ＋）、続いて弱塩基アニオン交換樹脂、例えばＡｍｂｅｒｌｉｔｅ‐ＦＰＡ５３（ＯＨ−）に通して、樹脂処理濾液を得る。１つ以上のイオン交換カラムを通る比速度（ＳＶ）は、約０．０１〜約５時間−１、例えば、約０．０５〜約４時間−１、約１〜約３時間−１又は約２〜約３時間−１の間であり得る。特定の実施形態では、１つ以上のイオン交換カラムを通る比速度は約０．８時間−１である。ステビオール配糖体を含有する第２の濾液を１つ以上のイオン交換カラムに通過させた後、その１つ以上のイオン交換カラムを水、好ましくは逆浸透（ＲＯ）水で洗浄する。水洗から得られた溶液と樹脂処理された濾液とは、マルチカラム工程に進む前に混合することができる。
【００５６】
脱色
ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液の脱色は、例えば活性炭との接触などの任意の既知の方法で達成することができる。活性炭の量は、約０．１％（ｗｔ／ｖｏｌ）から約０．８％（ｗｔ／ｖｏｌ）であり得る。特定の実施形態では、活性炭の量は約０．２５％（ｗｔ／ｖｏｌ）から約０．３０％（ｗｔ／ｖｏｌ）である。懸濁液を連続的に撹拌してもよい。処理温度は、例えば約２５℃など、約２０℃〜約３０℃であり得る。処理は、例えば、約２０分〜約３時間、約２０分〜約２時間、約３０分〜１．５時間、又は約１時間〜約１．５時間など、溶出溶液を脱色するのに十分な任意の期間であり得る。処理後、使用済み炭素の分離は、例えば、重力又は吸引濾過、遠心分離又はプレートアンドフレームプレスフィルターなどの任意の既知の分離手段によって行うことができる。
【００５７】
あるいは、ステビオール配糖体及び／又は「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液を、活性炭を充填したカラムに通過させることができる。
【００５８】
炭素又は他の脱色剤での処理は脱色効果をもたらすだけでなく、味、風味、芳香及び他の官能特性の改善ももたらし得ることもまた理解されるべきである。
【００５９】
濃縮及び／又は乾燥
「非ステビオール配糖体分子」を含有する濾液から水又はアルコールは、減圧又は真空ナノ濾過、凍結乾燥、フラッシュ乾燥、噴霧乾燥又はそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない任意の適切な手段によって除去して、「非ステビオール配糖体分子」を含む濃縮又は乾燥組成物を提供することができる。乾燥組成物は、任意選択で凝集されてもよく、及び／又はコンパクト又は湿式造粒技術によって造粒されてもよい。
【００６０】
クロマトグラフィー
本発明の非ステビオール配糖体分子及びＮＳＧＣは、ペーパークロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）中圧ＬＣ（ＭＰＬＣ）、高速ＬＣ（ＨＰＬＣ）、超高速ＬＣ（ＵＨＰＬＣ）、フラッシュカラムクロマトグラフィー、置換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、膨張床吸着クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー、二次元クロマトグラフィー、擬似移動床クロマトグラフィー（ＳＭＢＣ）、向流クロマトグラフィー、及びキラルクロマトグラフィー‐分析的、分取的、パイロット的又は工業的規模で行われる、を含む様々なクロマトグラフィー技術を使用して、さらに精製及び分離され得る。
【００６１】
一実施形態では、吸着樹脂を充填したカラムを含むクロマトグラフィーシステムを使用し、濃度勾配を増加させながらアルコール（例えばエタノール）溶媒を適用することによって溶出を達成し、ステビオール配糖体又は「非ステビオール配糖体分子」のいずれかが濃縮された画分を分離する。
【００６２】
他の実施形態では、イオン交換樹脂を充填したカラムを含むクロマトグラフィーシステムを使用し、酸性又はアルカリ性溶媒を適用することによって溶出を達成し、ステビオール配糖体又は「非ステビオール配糖体分子」のいずれかで濃縮した画分を分離する。
【００６３】
別の実施形態では、参照としてその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，９８１，０８１号に記載されているものと同様に、吸着及び／又はイオン交換樹脂を充填した複数の連続接続カラムを含むクロマトグラフィーシステムが使用される。
【００６４】
さらに別の実施形態では、分離は以下の構成を有するＨＰＬＣシステムによって行われる。
・Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズＨＰＬＣ‐バイナリポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン、及びＤＡＤ検出器を装備。
・ＨＰＬＣカラム‐  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０ＳＢ‐Ｃ１８、４．６×１５０ｍｍ、２．７μｍ、４０℃。
・注入量‐５μＬ。
・検出器‐ＵＶ  ２１０ｎｍ。
・移動相Ａ‐２５：７５（％ｖ／ｖ）アセトニトリル及び緩衝液（ｐＨ２．６の１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム緩衝液）。
・移動相Ｂ‐３２：６８（％ｖ／ｖ）アセトニトリル及び緩衝液（ｐＨ２．６の１０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸ナトリウム緩衝液）。
・移動相勾配：
０分‐１００％Ａ、０％Ｂ
１２分‐１００％Ａ、０％Ｂ
１２．５分‐５０％Ａ、５０％Ｂ
１３分‐０％Ａ、１００％Ｂ
４０分‐０％Ａ、１００％Ｂ
・流速‐０．５ｍＬ／分。
・実行時間‐４５分。
・ポスト時間‐１０分。
【００６５】
結晶化
本発明の非ステビオール配糖体分子及びＮＳＧＣは、冷却結晶化、蒸発結晶化、分別結晶化、塩析などを含むがこれらに限定されない様々な結晶化技術を用いてさらに精製及び分離することができる。
【００６６】
いくつかの実施形態において、結晶化は、０．１％から９９％（ｗ／ｗ）の範囲の濃度で行われ得る。
【００６７】
いくつかの実施形態では、結晶化は、水、エタノール、メタノール、ｎ‐プロパノール、イソプロパノール、ｎ‐ブタノール、クロロホルム、トルエン、ベンゼン、キシレン、四塩化炭素、シクロヘキサン、１，２‐ジクロロエタン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジメチルホルムアミド、酢酸エチル、ヘプタン、ヘキサン、メチル‐ｔｅｒｔ‐ブチルエーテル、ペンタン、２，２，４‐トリメチルペンタン、アセトン、テトラヒドロフラン、ギ酸、酢酸、及びそれらの組み合わせを含む群から選択される少なくとも１つの溶媒を含む溶媒から行われる。
【００６８】
さらに別の実施形態では、結晶化は、塩基、アルカリ、塩、酸、又は非ステビオール配糖体分子の溶解性の低い誘導体を形成することができる任意の他の薬剤を添加することによって達成され、ここでさらなるプロセスは誘導体化された非ステビオール配糖体分子を元の状態に戻すためのステップを含むことができる。
【００６９】
他の実施形態では、結晶化温度は−２０℃から８０℃まで変動し得る。いくつかの実施形態では、温度の上昇及び／又は下降は勾配法によって行われてもよい。
【００７０】
他の実施形態では、結晶化に使用される溶媒又は溶媒混合物の極性は、無極性から極性まで様々である。誘電率が１〜８８の範囲の溶媒を含む。
【００７１】
いくつかの実施形態では、結晶化溶液のイオン強度は０ｍｏｌ／Ｌから２０ｍｏｌ／Ｌの範囲である。
他の実施形態では、結晶化溶液のｐＨは１から１２まで変動する。
【００７２】
液液及び固液抽出
本発明の非ステビオール配糖体分子又はその誘導体を含むＮＳＧＣは、分散液液抽出、直接有機抽出、連続向流抽出、多段連続向流抽出、遠心抽出、水性二相抽出、ポリマー‐ポリマー抽出、ポリマー‐塩抽出などを含むがこれらに限定されない様々な固液抽出及び液液抽出技術を用いてさらに精製及び分離され得る。
【００７３】
適切な溶媒としては、水、並びにエタノール、メタノール、ｎ‐プロパノール、イソプロパノール、ｎ‐ブタノール、クロロホルム、トルエン、ベンゼン、キシレン、四塩化炭素、シクロヘキサン、１，２‐ジクロロエタン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、ジメチルホルムアミド、酢酸エチル、ヘプタン、ヘキサン、メチル‐ｔｅｒｔ‐ブチルエーテル、ペンタン、２，２，４‐トリメチルペンタン、アセトン、テトラヒドロフラン、ギ酸、酢酸、及びそれらの組み合わせを含む群から選択される有機溶媒が挙げられる。
【００７４】
膜分離
本発明の非ステビオール配糖体分子又はその誘導体を含むＮＳＧＣは、限外濾過、ナノ濾過、逆浸透、透析、正浸透、電気透析、電気脱イオン化、電気濾過、クロスフロー濾過、接線流濾過、行き止まり濾過、スパイラル膜濾過、中空糸膜濾過、カートリッジ濾過、カスケード膜濾過などを含む様々な膜分離技術を用いてさらに精製及び分離され得る。
【００７５】
ＮＳＧＣとの消費財
本発明の一実施形態は、少なくとも１つの非ステビオール配糖体分子を含むＮＳＧＣである。
いくつかの実施形態において、ＮＳＧＣは甘味を付与する。
【００７６】
一実施形態では、本発明は、ＮＳＧＣを含む甘味料組成物である。
【００７７】
別の実施形態では、本発明は、抗酸化剤、食物繊維、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、保存料、水和剤、プロバイオティクス、プレバイオティクス、体重管理剤、骨粗鬆症管理剤、植物性エストロゲン、長鎖第一級脂肪族飽和アルコール、フィトステロール及びそれらの組み合わせの供給源として消費財において使用されるＮＳＧＣである。
【００７８】
別の実施形態では、本発明は、ＮＳＧＣを含む風味増強組成物であり、ここでＮＳＧＣは、風味増強組成物を消費財に添加したときにＮＳＧＣの閾値風味認識レベル以下の濃度を提供するのに有効な量で存在する。特定の実施形態では、ＮＳＧＣは、風味増強組成物を消費財に添加したときにＮＳＧＣの閾値風味認識レベル未満の濃度を提供するのに有効な量で存在する。一実施形態では、ＮＳＧＣは、風味増強組成物が消費財に添加されるとき、ＮＳＧＣの閾値風味認識レベルを下回り、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、又は少なくとも約２５％の濃度をもたらすのに有効な量で存在する。
【００７９】
さらに別の実施形態では、本発明は、ＮＳＧＣを含む甘味増強組成物であって、ＮＳＧＣが消費財に添加されるとき、ＮＳＧＣの閾値甘味認識レベル以下の濃度を提供するのに有効な量で存在する。特定の実施形態では、ＮＳＧＣは、甘味増強組成物が消費財に添加されたときにＮＳＧＣの閾値甘味認識レベル未満の濃度を提供するのに有効な量で存在する。一実施形態では、ＮＳＧＣは、甘味増強組成物が消費財に添加されるとき、ＮＳＧＣの閾値甘味認識レベルを下回り、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、又は少なくとも約２５％の濃度をもたらすのに有効な量で存在する。
【００８０】
さらに別の実施形態では、本発明はＮＳＧＣを含む消費財である。適切な消費財には、それだけに限らないが、例えば、医薬組成物、食用ゲル混合物及び組成物、歯科用組成物、食品、飲料及び飲料製品などの液体ベース又は乾燥の消費財が挙げられる。
【００８１】
特定の実施形態では、本発明はＮＳＧＣを含む飲料である。特定の実施形態では、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値甘味認識濃度より高い濃度、閾値甘味認識濃度での濃度、又は閾値甘味認識濃度より低い濃度で、飲料中に存在する。
【００８２】
別の特定の実施形態では、本発明はＮＳＧＣを含む飲料製品である。特定の実施形態では、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値風味認識濃度より高い濃度、閾値風味認識濃度での濃度、又は閾値風味認識濃度より低い濃度で、飲料製品中に存在する。
【００８３】
別の態様では、本発明は、（ｉ）消費財マトリックスを提供すること、及び（ｉｉ）消費財を提供するためにＮＳＧＣを消費財マトリックスに添加することを含む、消費財の調製方法である。特定の実施形態では、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値甘味認識より高い濃度、閾値甘味認識での濃度、又は閾値甘味認識より低い濃度で、消費財中に存在する。別の特定の実施形態では、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値フレーバー認識濃度より高い濃度、閾値フレーバー認識濃度での濃度、又は閾値フレーバー認識濃度より低い濃度で、消費財中に存在する。
【００８４】
特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）飲料マトリックスを提供すること、及び（ｉｉ）飲料を提供するためにＮＳＧＣを消費財マトリックスに添加することを含む、飲料を調製する方法である。特定の実施形態では、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値甘味認識より高い濃度、閾値甘味認識での濃度、又は閾値甘味認識より低い濃度で、消費財中に存在する。別の特定の実施形態では、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値風味認識濃度より高い濃度、閾値風味認識濃度での濃度、又は閾値風味認識濃度より低い濃度で、消費財中に存在する。
【００８５】
別の態様において、本発明は、（ｉ）少なくとも１つの甘味成分を含む消費財を提供すること、及び（ｉｉ）ＮＳＧＣを消費財に添加して甘味が増強された消費財を提供することを含む消費財の甘味を増強する方法であって、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値甘味認識濃度以下の濃度で、甘味が増強された飲料中に存在する。
【００８６】
特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）少なくとも１つの甘味成分を含む飲料を提供すること、及び（ｉｉ）ＮＳＧＣを飲料に添加して甘味が増強された飲料を提供することを含む、飲料の甘味を増強する方法であって、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値甘味認識濃度未満の濃度で、甘味が増強された飲料中に存在する。一実施形態では、ＮＳＧＣの濃度は、ＮＳＧＣの閾値甘味認識濃度未満の濃度で、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％又は少なくとも約２５％以上の濃度で、甘味が増強された飲料中に存在する。
【００８７】
さらなる態様において、本発明は、（ｉ）少なくとも１つの風味成分を含む消費財を提供すること、及び（ｉｉ）ＮＳＧＣを消費財に添加して強化された風味を有する消費財を提供することを含む、消費財の風味を増強する方法であって、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値風味認識濃度以下の濃度で、増強された風味を有する消費財中に存在する。
【００８８】
特定の実施形態では、本発明は、（ｉ）少なくとも１つの風味成分を含む飲料を提供すること、及び（ｉｉ）ＮＳＧＣを飲料に添加して強化された風味を有する飲料を提供することを含む、飲料の風味を増強する方法であって、ＮＳＧＣは、ＮＳＧＣの閾値風味認識濃度以下の濃度で、風味が増強された飲料中に存在する。一実施形態では、ＮＳＧＣの濃度は、ＮＳＧＣの閾値風味認識濃度より低い濃度で、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％又は少なくとも約２５％以上の濃度で、甘味が増強された飲料中に存在する。
【００８９】
上記の方法において、ＮＳＧＣは、それ自体で、又はＮＳＧＣを含む組成物の形態で添加することができる。ＮＳＧＣが組成物として提供される場合、組成物が消費財、例えば食品や飲料に添加される場合、組成物中のＮＳＧＣの濃度は、ＮＳＧＣの閾値風味又は甘味料組成物より高い濃度、閾値風味又は甘味料組成物での濃度、又は閾値風味又は甘味料組成物より低い濃度を提供するのに有効である。
【００９０】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１つ以上のモグロシドをさらに含み、ここでモグロシドは、限定されないが、羅漢果（Ｌｕｏ  ｈａｎ  ｇｕｏ）抽出物、他のモグロシドの単離及び精製プロセスの副産物、市販の羅漢果（Ｌａｏ  ｈａｎ  ｇｕｏ）抽出物、モグロシドＩＩＥ、モグロシドＩＩＢ、モグロシドＩＩＩ、モグロシドＩＶ、モグロシドＶ、１１‐オキソ‐モグロシドＶ、モグロシドＶＩ、シアメノシドＩ、グロスモモシドＩ、ネオモグロシド、及びラカンカ（Ｓｉｒａｉｔｉａ  ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）の果実に生じる他のモグロール及びオキソモグロールグリコシド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００９１】
他の実施形態では、本発明の組成物は、１つ以上の甘味料又は追加の甘味料をさらに含む。一実施形態では、追加の甘味料は天然甘味料又は合成甘味料である。特定の実施形態では、追加の甘味料は高強度甘味料である。特定の実施形態では、追加の甘味料はモグロシドである。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物はさらに１つ以上の添加剤を含む。特定の実施形態では、添加剤は炭水化物、ポリオール、アミノ酸及びそれらの対応する塩、ポリアミノ酸及びそれらの対応する塩、糖酸及びそれらの対応する塩、ヌクレオチド、有機酸、無機酸、有機酸塩及び有機塩基塩を含む有機塩、無機塩、苦味化合物、香味料及び香味成分、収斂性化合物、タンパク質又はタンパク質加水分解物、界面活性剤、乳化剤、フラボノイド、アルコール、ポリマー及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００９３】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、１つ以上の機能性成分をさらに含む。特定の実施形態では、機能性成分は、カフェイン、サポニン、抗酸化剤、食物繊維源、脂肪酸、ビタミン、グルコサミン、ミネラル、保存料、水和剤、プロバイオティクス、プレバイオティクス、体重管理剤、骨粗鬆症管理剤、植物性エストロゲン、長鎖第一級脂肪族飽和アルコール、フィトステロール及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００９４】
特定の実施形態では、本発明は、ＮＳＧＣと１つ以上の甘味料、追加の甘味料、添加剤又は機能性成分とを含む消費財である。
【００９５】
別の特定の実施形態では、本発明は、ＮＳＧＣと１つ以上の甘味料、追加の甘味料、添加物又は機能性成分とを含む飲料である。
【００９６】
ＮＳＧＣは、単独で、又は食品、飲料、医薬組成物、タバコ、栄養補助食品、口腔衛生組成物、又は化粧品を含む消費財中の少なくとも１つの他の甘味料と組み合わせて使用することができる。他の甘味料は、スクロース、グリセルアルデヒド、ジヒドロキシアセトン、エリトロース、トレオース、エリトルロース、アラビノース、リキソース、リボース、キシロース、リブロース、キシルロース、アロース、アルトロース、アルロース、ガラクトース、グルコース、グロース、イドース、マンノース、タロース、フルクトース、プシコース、ソルボース、タガトース、マンノヘプツロース、セドヘルツロース、オクトロース、フコース、ラムノース、アラビノース、チュラノース、シアロース、イヌリン、イヌロオリゴ糖、フルクトオリゴ糖、高フルクトースコーンシロップ（ＨＦＣＳ）、マルトデキストリン、カップリングシュガー、ハチミツ、ステビア、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＢ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、レバウジオシドＧ、レバウジオシドＨ、レバウジオシドＩ、レバウジオシドＪ、レバウジオシドＫ、レバウジオシドＬ、レバウジオシドＭ、レバウジオシドＮ、レバウジオシドＯ、ズルコシドＡ、ズルコシドＢ、ルブソシド、ステビオールビオシド、ステビオシド、ステビアレバウディアナ植物に存在する他のステビオール配糖体、生合成ステビオール配糖体、グリコシル化ステビオール配糖体、グルコシル化ステビオール配糖体（ＧＳＧ）、モグロシドＩＶ、モグロシドＶ、モグロシドＶＩ、羅漢果（Ｌｕｏ  ｈａｎ  ｇｕｏ）、シアメノシド、他のラカンカ（Ｓｉｒａｉｔｉａ  ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）の果実に存在するモグロシド、モナチンとその塩、クルクリン、グリチルリチン酸とその塩、タウマチン、モネリン、マビンリン、ブラゼイン、ヘルナンズルチン、フィロズルチン、グリシフィリン、フロリジン、トリロバチン、バイユノシド、オスラジン、ポリポドシドＡ、プテロカリオシドＡ、プテロカリオシドＢ、ムクロジオシド、フロミソシドＩ、ペリアンドリンＩ、アブルソシドＡ、及びシクロカリオシドＩ、糖アルコール、スクラロース、アセスルファムカリウム、アセスルファム酸及びその塩、アスパルテーム、アリテーム、サッカリン及びその塩、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、シクラメート、シクラミン酸及びその塩、ネオテーム、アドバンテーム、及びそれらの組み合わせを含む群から選択される。
【００９７】
以下の実施例は本発明の好ましい態様を説明する。本発明は実施例に示される材料、割合、条件及び手順に限定されず、これらは例示にすぎないことが理解されるであろう。
【実施例】
【００９８】
例１
ＮＳＧＣの調製
５キログラムの乾燥ステビアレバウディアナ葉（約８％（ｗ／ｗ）の水分含有量及び約１０％（ｗ／ｗ、乾燥基準）の総ステビオール配糖体を有する）を１０〜２０ｍｍ粒子に粉砕した。乾燥した葉材料を抽出タンクに入れ、抽出を１００ＬのＲＯ水を用いて６５℃で１０分間行った。不溶物を濾去した。黄色がかった濾液を集め、約５０Ｌ／時の流速で、８．５Ｌの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＹＷＤ‐０３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ、中国）を充填したカラムに供給した。濾過完了後、カラムをさらに４５Ｌの水で洗浄し、両方の流出液を合した。合わせた溶液を真空下、３０℃〜３５℃の間の温度で、最終体積１０Ｌまで蒸発させた。
【００９９】
ステビオール配糖体の大部分はマクロポーラス吸着材樹脂上に吸収され、約４５Ｌの７０％エタノール水溶液で溶出された。エタノール水溶液溶出液をさらに処理して、約９６％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体含有量を有する約４００ｇのステビア抽出物を得た。
【０１００】
上述の１０Ｌの合わせて蒸発させた溶液を９０Ｌの純粋なエタノールと混合し、混合物をゆっくり撹拌しながら１０分間維持した。生じた沈殿物を真空濾過により除去した。濾液を集め、次いで真空蒸発（３０℃〜３５℃）に付してエタノールを除去し、さらに２２％ｗ／ｗ固形分を含有するシロップ形態のＮＳＧＣ約４Ｌに濃縮した。この溶液のＨＰＬＣアッセイは約１．３％の残留ステビオール配糖体を示し、ここで個々のステビオール配糖体の％比は以下の通りであった：レバウジオシドＥ  ０．４１％、レバウジオシドＯ  １０．５２％、レバウジオシドＤ  ５．９５％、レバウジオシドＮ  １．４９％、レバウジオシドＭ  ３．０７％、レバウジオシドＡ  ５６．９８％、ステビオシド  １１．６６％、レバウジオシドＦ  ０．８９％、レバウジオシドＣ  ４．３７％、ズルコシドＡ  ０．１１％、及びレバウジオシドＢ  ０．３５％。濃縮物を真空蒸発を用いて乾燥させ、続いて真空オーブン中で３０℃〜３５℃で乾燥させた。
【０１０１】
例２
エタノール水溶液によるＮＳＧＣの抽出
５０ｋｇの乾燥ステビアレバウディアナ葉（約８％（ｗ／ｗ）の水分含有量及び約８．５％（ｗ／ｗ）の総ステビオール配糖体を有する）を１０〜２０ｍｍ粒子に粉砕した。この葉のＨＰＬＣアッセイはまた、１．３４％のＣＧＡ（ネオ‐ＣＧＡ、ｎ‐ＣＧＡ及びクリプト‐ＣＧＡ）、及び１．８６％のイソ‐ＣＧＡ（イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ）を含む約３．２％ｗ／ｗの総ＣＧＡ含有量を示す。乾燥した葉材料を抽出タンクに入れ、６５℃で３０分間、８００Ｌの３０％（ｖ／ｖ）エタノールで抽出を行った。混合物を珪藻土８００ｇを通して濾過した。黄色がかった濾液を集め、３０℃に冷却した。０．５〜０．８ＭＰａの圧力下、４５℃でナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）によって濾液からＥｔＯＨを除去した。
【０１０２】
約１．５７ｋｇの総ＣＧＡ及び４．１ｋｇの総ステビオール配糖体を含有すると推定されるナノ濾過から得られた３２０Ｌの保持液を、１２５Ｌの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＹＷＤ‐０３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ、中国）を充填したカラムに、１２５Ｌ／時の流量で供給した。保持液を供給した後、カラムをさらに６２．５Ｌの水で洗浄し、両方の流出液を合わせて貫流生成物を作製し、これをナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）を用いて全固形分２０％までさらに濃縮した。濃縮された貫流生成物の凝集は９容量のエタノールを用いて行われた。凝集した沈殿物を濾過により分離し、エタノールを上述のようにナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）により除去した。濃縮物を凍結乾燥機を用いて乾燥した。精製された貫流生成物は、１２．２４％ｗ／ｗ（乾燥基準）の総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ２．６５％、ｎ‐ＣＧＡ  ７．４６％、クリプト‐ＣＧＡ  １．８４％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ０．０７％、イソ‐ＣＧＡ‐ＣＧＡ‐Ａ  ０．１６％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ０．０６％を含み、並びに０．７０％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含んでいた。
【０１０３】
６９０Ｌの２５％（ｖ／ｖ）エタノールを使用して、吸着したＣＧＡをマクロポーラス吸着材樹脂から溶出した。溶液をナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）に通してエタノールを除去し、次いで上記のように凍結乾燥機で乾燥して２５％エタノール生成物を得た。２５％エタノール生成物は、１９．５２％ｗ／ｗの総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ０．７８％、ｎ‐ＣＧＡ  ３．５９％、クリプト‐ＣＧＡ  １．０４％、イソ‐ＣＧＡ  Ｂ  ２．６４％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ４．１４％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ７．３３％を含み、並びに１２．２８％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含み、これはレバウジオシドＥ  １．４３％、レバウジオシドＤ  １．５４％、レバウジオシドＡ  ５．３１％、ステビオシド２．４９％などを含んでいた。
【０１０４】
残りのステビオール配糖体を約３８０Ｌの７０％エタノール水溶液でマクロポーラス吸着材樹脂から溶出し、さらに処理して７１％のＴＳＧ含有量を有するステビア抽出物を得た。
【０１０５】
例３
水によるＮＳＧＣの抽出
例２で使用したものと同様の５０ｋｇのステビアレバウディアナ乾燥葉材料を抽出タンクに装入し、抽出を９０℃で３０分間８００Ｌの水で実施した。混合物を珪藻土８００ｇを通して濾過した。黄色がかった濾液を集め、３０℃に冷却し、１２５Ｌの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＹＷＤ‐０３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ、中国）を充填したカラム中に供給した。その後の工程は、実施例２に記載したものと同様であった。
【０１０６】
貫流生成物は１４．４７％ｗ／ｗの総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ４．６７％、ｎ‐ＣＧＡ  ５．６７％、クリプト‐ＣＧＡ  ３．４４％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ０．２４％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ０．２１％、及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ０．２４％を含み、並びに０．５９％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含んでいた。２５％エタノール生成物は、１７．９７％ｗ／ｗの総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ０．７８％、ｎ‐ＣＧＡ  １．５６％、クリプト‐ＣＧＡ  ０．９１％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ５．３６％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ３．２１％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ６．１５％を含み、並びに１３．８３％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含み、これはレバウジオシドＥ  ２．８９％、レバウジオシドＤ  １．５２％、レバウジオシドＡ  ５．３１％、ステビオシド２．４９％などを含んでいた。
【０１０７】
例４
水によるＮＳＧＣの抽出
例２で使用したものと同様の５０ｋｇのステビアレバウディアナ乾燥葉材料を抽出タンクに入れ、６５℃で３０分間８００Ｌの水で抽出を行った。混合物を珪藻土８００ｇを通して濾過した。黄色がかった濾液を集め、３０℃に冷却し、１２５Ｌの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＹＷＤ‐０３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ、中国）を充填したカラム中に供給した。その後の工程は例２に記載したものと同様であった。
【０１０８】
２５％エタノール生成物は、１９．９０％ｗ／ｗの総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ０．３５％、ｎ‐ＣＧＡ  ４．３０％、クリプト‐ＣＧＡ  １．２３％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ０．８１％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ８．１９％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ５．０２％を含み、並びに１３．４７％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含み、これはレバウジオシドＤ  １．８６％、レバウジオシドＡ  ７．４５％、ステビオシド２．１３％などを含んでいた。
【０１０９】
例５
ＮＳＧＣの精製
例３の乾燥した２５％エタノール生成物６グラムを水２０ｍＬに溶解した。純粋なエタノール１８０ｍＬを混合物に加え、室温で１時間撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、濾液に活性炭０．７２ｇを添加し、室温でさらに１時間撹拌した。混合物を再度濾過して活性炭を除去した。得られた濾液をロータリーエバポレーターを用いて４０℃で濃縮し、４０℃の真空オーブン中で乾燥して、３．６ｇの処理された２５％エタノール生成物を得た。処理された２５％エタノール生成物は、２２．３２％ｗ／ｗの総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ０．８４％、ｎ‐ＣＧＡ  １．２６％、クリプト‐ＣＧＡ  ０．９１％、イソ‐ＣＧＡ  Ｂ  ６．８５％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ４．９９％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ７．４８％を含み、並びに２３．２６％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含み、これはレバウジオシドＤ  ２．０３％、レバウジオシドＡ  １２．１８％、ステビオシド６．７０％などを含んでいた。
【０１１０】
例６
ＮＳＧＣの膜精製
例５の処理した２５％エタノール生成物１ｇを１００ｍＬのＲＯ水に溶解し、その溶液を２０℃で、５０ｍＬの透過液が集まるまでＳｔｅｒｌｉｔｅｃｈ  ＨＰ４７５０高圧撹拌セル濾過システム（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＵＳＡ）に供給した。保持液と透過液の両方を凍結乾燥し、ＨＰＬＣで試験した。
【０１１１】
Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ＵＳＡ）から入手した異なる４７  ｍｍ膜ディスクを用いて実験を繰り返した。特にＧＥ  ２０００  ＵＦＧＨ（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈカタログ番号ＹＭＧＨＳＰ４７５）、ＧＥ  １０００（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈカタログ番号ＹＭＧＥＳＰ４７５）、Ｓｙｎｄｅｒ  ＮＦＧ（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈカタログ番号ＹＭＮＦＧ４７５）、Ｍｉｃｒｏｄｙｎ  Ｎａｄｉｒ  ＮＰ０１０（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈカタログ番号ＹＭＮＰ０１０４７５）、Ｅｖｏｎｉｋ  Ｄｕｒａｍｅｍ（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈカタログ番号１１２０７７３）及びＳｙｎｄｅｒ  ＸＴ、ＰＥＳ、ＵＦ（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈカタログ番号ＹＭＸＴ４７５）。
【０１１２】
透過液及び保持液の分析結果を表１にまとめる。
【表１】
2020505907.tif 000002
【０１１３】
膜ＧＥ  １０００をさらなる実験のために選択した。
【０１１４】
例７
透析濾過工程を有する膜を用いたＮＳＧＣの精製
例５の処理した２５％エタノール生成物１グラムを１００ｍＬのＲＯ水と混合し、ＧＥ１０００（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈカタログ番号ＹＭＧＥＳＰ４７５）を取り付けたＳｔｅｒｌｉｔｅｃｈ  ＨＰ４７５０高圧撹拌セル濾過システム（Ｓｔｅｒｌｉｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＵＳＡ）に、５０ｍＬの透過液が集められるまで２０℃で、供給した。５０ｍＬの透過液を集めた後、５０ｍＬのＲＯ水をセルに加え、濾過を繰り返してさらに５０ｍＬの透過液を集めた。このプロセスを繰り返して１０個の透過液画分を得た。保持液及び透過液を凍結乾燥し、ＨＰＬＣで試験した。
【０１１５】
保持液については、総ＣＧＡは１６．５１％（ｗ／ｗ、乾燥基準）であり、これはネオ‐ＣＧＡ  ０．３５％、ｎ‐ＣＧＡ  ０．６５％、クリプト‐ＣＧＡ  １．１１％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ５．５２％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ２．７５％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ６．１３％を含み、総ステビオール配糖体含有量は３７．６９％ｗ／ｗであり、これはレバウジオシドＤ  ２．７５％、レバウジオシドＡ  ２０．４８％、ステビオシド１０．３９％、レバウジオシドＣ  １．３５％などを含んでいた。１０個の透過液サンプルの組み合わせたサンプルについて、総ＣＧＡは３０．３３％（ｗ／ｗ、乾量基準）であり、これはネオ‐ＣＧＡ  ０．９７％、ｎ‐ＣＧＡ  ２．５２％、クリプト‐ＣＧＡ  ２．２８％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ８．２３％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ８．２４％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ８．０８％を含み、総ステビオール配糖体含有量は５．９９％ｗ／ｗであり、これはレバウジオシドＡ  ２．６６％、ステビオシド２．８９％などを含んでいた。
【０１１６】
例８
吸着クロマトグラフィーシステムを用いたＮＳＧＣの精製
例４からの１０．０７ｇの２５％エタノール生成物を含有する１００ｍＬ水溶液を、室温で約３００ｍＬ／時の流速で、３００ｍＬの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＴＦ３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ、中国）を充填したカラムに供給した。装填完了後、カラムをさらに６００ｍＬの水で洗浄し、両方の流出液を合わせて貫流生成物として集めた。貫流生成物をナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）によって濃縮し、次いで噴霧乾燥機を使用して乾燥させて、２７．８２％ｗ／ｗ（乾燥基準）の総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ４．１１％、ｎ‐ＣＧＡ  １７．２１％、クリプト‐ＣＧＡ  ６．２５％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ０．０４％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ０．１７％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ０．０４％を含み、並びに０．１２％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含む１．９ｇの乾燥貫流生成物を得た。
【０１１７】
吸着したＣＧＡを１，５００ｍＬの２０％（ｖ／ｖ）エタノールを用いてマクロポーラス吸着材樹脂から溶出した。溶液をナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）に通してエタノールを除去し、濃縮した。濃縮物をスプレードライヤーを用いて乾燥し、乾燥サンプル４．３ｇを２０％エタノール生成物として集めた。この生成物は２１．９９％ｗ／ｗの総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ０．０３％、ｎ‐ＣＧＡ  ０．２３％、クリプト‐ＣＧＡ  ０．１６％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ２．３９％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  １１．９３％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ７．２５％を含み、並びに２．１８％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含んでいた。
【０１１８】
マクロポーラス樹脂に吸収された残りのステビオール配糖体を約９００ｍＬの６０％エタノール水溶液で溶出し、さらに処理して６０．５０％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含有する３．６ｇのステビア抽出物を得た。
【０１１９】
例９
吸着クロマトグラフィーシステムを用いたＮＳＧＣの精製
例４からの９．０ｇの２５％‐エタノール生成物を含有する１００ｍＬ水溶液を、室温で約３００ｍｌ／時の流速で、３００ｍＬの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＴＦ３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙａｎｅｗｅｉ、中国）を充填したカラムに供給した。装填完了後、カラムをさらに９００ｍＬの水で洗浄し、両方の流出液を合わせて貫流生成物として集めた。生成物をナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）を用いて濃縮し、次いで噴霧乾燥して、３１．２７％ｗ／ｗ（乾燥基準）の総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ４．１９％、ｎ‐ＣＧＡ  １９．３５％、クリプト‐ＣＧＡ  ７．１０％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ０．１１％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ０．４３％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ０．１０％を含み、並びに０．０１％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含む１．５１ｇの乾燥貫流生成物を得た。
【０１２０】
次いで、マクロポーラス吸着材樹脂を９００ｍＬの１５％（ｖ／ｖ）エタノール、９００ｍＬの２０％（ｖ／ｖ）エタノール、９００ｍＬの２５％（ｖ／ｖ）エタノール及び９００ｍＬの６０％（ｖ／ｖ）エタノールで順次洗浄した。集めた溶液をすべてナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）を用いて濃縮し、次いで噴霧乾燥機を用いて乾燥して１５％エタノール生成物、２０％エタノール生成物、２５％エタノール生成物及び６０％エタノール生成物をそれぞれ得た。これらの画分のＨＰＬＣアッセイは表２に要約されている。
【０１２１】
【表２】
2020505907.tif 000003
【０１２２】
例１０
吸着クロマトグラフィーシステムを用いたＮＳＧＣの精製
例４からの２５％エタノール生成物９．０ｇを含有する１００ｍＬ水溶液を、室温で約３００ｍｌ／時の流速で、３００ｍＬの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＴＦ３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ、中国）を充填したカラムに供給した。装填完了後、カラムをさらに６００ｍＬの水で洗浄し、両方の流出液を合わせて貫流生成物として収集した。貫流生成物をナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）を使用することによって濃縮し、次いで乾燥させて、１８．０４％ｗ／ｗ（乾燥基準）の総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ２．１２％、ｎ‐ＣＧＡ  １３．４０％、クリプト‐ＣＧＡ  ２．４７％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ０．０４％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ０．０１％を含み、並びに０．７４％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含む１．４５ｇの乾燥貫流生成物を得た。
【０１２３】
次いで、マクロポーラス吸着材樹脂を、１５００ｍＬの２０％（ｖ／ｖ）エタノール及び９００ｍＬの６０％（ｖ／ｖ）エタノールで順次洗浄した。集めた溶液をすべて、ナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）を用いて濃縮し、次いで乾燥して、それぞれ２０％エタノール生成物及び６０％エタノール生成物を得た。
【０１２４】
これらの画分のＨＰＬＣアッセイは表３に要約されている。
【表３】
2020505907.tif 000004
【０１２５】
例１１
吸着クロマトグラフィーシステムを用いたＮＳＧＣの精製
例４からの２５％エタノール生成物の５００ｍｇ／Ｌ水溶液を、室温で約１５０ｍＬ／時の流速で、１５０ｍＬの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＴＦ３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙａｎｅｗｅｉ、中国）を充填したカラムに供給した。流出液を集め、その甘さを官能的方法により定期的に分析した。甘味が流出液中に検出されたときに供給を停止した。流出液を合わせ、濃縮し、次いで噴霧乾燥機を使用して乾燥して、２１．６５％ｗ／ｗ（乾燥基準）の総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  １．３７％、ｎ‐ＣＧＡ  ５．４２％、クリプト‐ＣＧＡ  １．９７％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  １．９０％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ６．１２％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ４．８７％を含み、並びに０．４２％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含有する流出液生成物を得た。
【０１２６】
次いで、マクロポーラス吸着材樹脂を３００ｍＬの２０％（ｖ／ｖ）エタノール及び４５０ｍＬの６０％（ｖ／ｖ）エタノールで順次洗浄した。集めた溶液をすべて、ナノ濾過膜（ＮＦ９０‐４００、ダウケミカルカンパニー、米国）を用いて濃縮し、次いで噴霧乾燥機を用いて乾燥して、それぞれ２０％エタノール生成物及び６０％エタノール生成物を得た。
【０１２７】
これらの画分のＨＰＬＣアッセイは表４に要約されている。
【表４】
2020505907.tif 000005
【０１２８】
例１２
結晶化を用いたＮＳＧＣの精製
例３の１グラムの乾燥した２５％エタノール生成物を２０ｍＬの水に溶解した。１００ｍｇのＣａ（ＯＨ）２を添加し、沈殿物が形成されるまで混合物を１時間保持した。得られた懸濁液を濾過し、沈殿物を水に再懸濁し、溶解するまで酢酸で滴定し、１００ｍＬの高分子マクロポーラス吸着材樹脂（ＹＷＤ‐０３、Ｃａｎｇｚｈｏｕ  Ｙｕａｎｗｅｉ、中国）を充填したカラムに供給した。その後の工程は例２に記載したものと同様であった。
【０１２９】
２５％エタノール生成物は４２．９０％ｗ／ｗの総ＣＧＡを含み、これはネオ‐ＣＧＡ  ０．５１％、ｎ‐ＣＧＡ  １．３０％、クリプト‐ＣＧＡ  ０．３４％、イソ‐ＣＧＡ‐Ｂ  ５．７８％、イソ‐ＣＧＡ‐Ａ  ６．８９％及びイソ‐ＣＧＡ‐Ｃ  ２８．０８％を含み、並びに０．３％ｗ／ｗの総ステビオール配糖体を含み、これはレバウジオシドＡ  ０．２％、ステビオシド０．１％などを含んでいた。
【０１３０】
例１３
ＮＳＧＣを含む消費財
炭酸飲料サンプルを表５に示す配合に従って調製した。
【表５】
2020505907.tif 000006
【０１３１】
処方中の「甘味料組成物」として、以下のサンプルを用いた。（ｉ）レバウジオシドＡ（純度９７％）の市販のサンプル、及び（ｉｉ）市販のレバウジオシドＡ（純度９７％）及び例３に従って調製されたＮＳＧＣの混合物（９５：５ｗ／ｖ比）。飲料サンプルの官能評価は２０名のパネリストによって実施された。結果を表６にまとめる。
【０１３２】
【表６】
2020505907.tif 000007
【０１３３】
結果は、ＮＳＧＣを含む甘味料組成物を使用して調製された飲料が最良の官能特性を有することを示した。
【０１３４】
例１４
新規ＮＳＧＣを含む消費財
チョコレートサンプルを表７の配合に従って調製した。
【０１３５】
【表７】
2020505907.tif 000008
【０１３６】
チョコレートリカー、カカオバター、ミルクパウダー、ソルビトール、塩、及び「甘味料組成物」を十分に混練した後、混合物を精製機に入れて２４時間その粒径を小さくした。その後、内容物をコンシェに移し、レシチンを加え、組成物を５０℃で４８時間混練した。その後、内容物を成形装置に入れて固化させた。
【０１３７】
以下のサンプルを表３の配合中の「甘味料組成物」として使用した。（ｉ）レバウジオシドＡの市販のサンプル（純度９７％）、及び（ｉｉ）市販のレバウジオシドＡ（純度９７％）及び例３に従って調製したＮＳＧＣの混合物（９５：５ｗ／ｖ比を有する）。チョコレートサンプルの官能評価は、２０人のパネリストによって行われた。結果を表８にまとめる。
【０１３８】
【表８】
2020505907.tif 000009
【０１３９】
結果は、ＮＳＧＣを含む甘味料組成物を使用して調製されたチョコレートサンプルが最良の官能特性を有することを示した。
【０１４０】
上記で本発明の１つ又は複数の実施形態を説明してきたが、本発明の真の範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修正を行うことができ、均等物をその要素又は組成に置き換えることができることが、当業者により理解されるであろう。したがって、本発明は開示された特定の実施形態に限定されず、本発明は添付の特許請求の範囲内に含まれるすべての実施形態を含むことを意図している。
【図１】
2020505907.tif 000010
【図２】
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【国際調査報告】
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