(57)【要約】  抗菌活性及び抗バイオフィルム活性を有する線状リポペプチドを、本明細書に開示する。本発明の一態様では、線状リポペプチドは、親油性末端、アミン末端、及び親油性末端とアミン末端の間に入るペプチド又はその塩を含む。ペプチドは、配列番号：１〜１７又はこれらの派生体のいずれかを含み得る。リポペプチド及びそれらを使用する方法を含む製品もまた、開示する。【選択図】図１Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
線状のリポペプチドを含む抗菌性の組成物であって、前記リポペプチドが、親油性末端−Ｒ1とアミン末端−ＮＲ2Ｒ3の間に入る、配列番号：１〜１７のいずれか１つと少なくとも６６％の配列同一性を有するペプチドを含み、
Ｒ1は、置換されているか又は非置換の、分岐又は非分岐のＣ2〜Ｃ20アルカノイルを含み、
Ｒ2及びＲ3は、水素又はＣ1〜Ｃ6アルキルから独立して選択される、組成物。
【請求項２】
（ａ）前記リポペプチドが、培地中の微生物に対して８．０μｇ／ｍＬ以下の最小発育阻止濃度を有するか；
（ｂ）前記リポペプチドが、培地中の微生物に対して１６．０μｇ／ｍＬ以下の最小殺菌濃度を有するか；
（ｃ）前記リポペプチドが、１２８μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５０．０％以下の溶血百分率を有するか；
（ｄ）前記リポペプチドが、１０５μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５０．０％以上の生存百分率を有するか；
（ｅ）前記リポペプチドが、微生物に対する抗菌剤に関して１２８以上の感作因数を有するか；
（ｆ）前記組成物が、表面上の生存微生物における少なくとも２．０ ｌｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチドを有するか；又は
（ｇ）これらの組み合わせ
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記リポペプチドの最小発育阻止濃度が、培地中の微生物に対して８．０μｇ／ｍＬ以下である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記リポペプチドの最小殺菌濃度が、培地中の微生物に対して１６．０μｇ／ｍＬ以下である、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記リポペプチドの溶血百分率が、１２８μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において５０．０％以下である、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記リポペプチドの生存百分率が、１０５μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において５０．０％以上である、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記リポペプチドの感作因数が、微生物に対する抗菌剤に関して１２８以上である、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
抗菌剤が、アンピシリン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、リファンピシン、及びバンコマイシンからなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
表面上の生存微生物における少なくとも２．０ lｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチドを有する、請求項２に記載の組成物。
【請求項１０】
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、及び（ｆ）からなる群から選択される少なくとも２つの特性を有する、請求項２に記載の組成物。
【請求項１１】
前記微生物が、
（ｉ）グラム陰性菌；
（ｉｉ）グラム陽性菌；
（ｉｉｉ）薬物耐性菌；又は
（ｉｖ）（ｉ）及び（ｉｉｉ）又は（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の組み合わせ
である、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記微生物が、グラム陰性菌である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記グラム陰性菌が、大腸菌、Ａ・バウマンニ、Ｅ・クロアカ、Ｋ・ニューモニエ、及びＰ・エルジノーサからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記微生物が、グラム陽性菌である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記グラム陽性菌が、Ｅ．フェシウム及びＳ．アウレウスからなる群から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記微生物が、薬物耐性菌である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、又はポリミキシン耐性菌である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
ペプチドが、Ｒ1−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−ＮＲ2Ｒ3を含み、
Ｘ1が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ2が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｄａｐ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ3が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ4が、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ5が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ6が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ7が、ｄＶａｌ、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ8が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅｐｈｅ、及びＯｃｔｇｌｙからなる群から選択され；且つ
Ｘ9が、Ｓｅｒ及びＤａｂからなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ペプチドが、配列番号：１〜１７のいずれか１つと少なくとも８８％の配列同一性を有する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
−Ｒ1が：
Ｒ4−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ4が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、ビフェニルアルキル、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、フェニルアルキルアミン、ビフェニルアルキルアミン、アルコキシ、シクロアルコキシ、フェニルアルコキシ、若しくはビフェニルアルコキシからなる群から選択されるか、又は
Ｒ5−ＣＨ（ＮＨ2）−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ5が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、及びビフェニルアルキルからなる群から選択される、
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
Ｒ2及びＲ3が、水素から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
抗菌剤を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
（ａ）前記抗菌剤が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での微生物に対する最小発育阻止濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において該微生物に対して低い最小発育阻止濃度を有するか；
（ｂ）前記抗菌剤が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での微生物に対する最小殺菌濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において該微生物に対して低い最小殺菌濃度を有するか；
（ｃ）前記リポペプチドが、微生物に対する前記抗菌剤に関して１２８以上の感作因数を有するか；
（ｄ）前記組成物が、表面上の生存微生物における少なくとも２．０ lｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチド及び／又は前記抗菌剤を有するか；又は
（ｅ）これらの組み合わせ
である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記抗菌剤の最小発育阻止濃度が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での最小発育阻止濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において低い、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記抗菌剤の最小殺菌濃度が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での最小殺菌濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において低い、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
リポタンパク質の感作因数が、前記微生物に対する前記抗菌剤に関して１２８以上である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２７】
前記抗菌剤が、アンピシリン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、リファンピシン、及びバンコマイシンからなる群から選択される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
表面上の生存微生物における少なくとも２．０ lｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチド及び／又は前記抗菌剤を有する、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２９】
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる群から選択される少なくとも２つの特性を有する、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３０】
前記微生物が、
（ｉ）グラム陰性菌；
（ｉｉ）グラム陽性菌；
（ｉｉｉ）薬物耐性菌；又は
（ｉｖ）（ｉ）及び（ｉｉｉ）又は（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の組み合わせ
である、請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記微生物が、グラム陰性菌である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記グラム陰性菌が、大腸菌、Ａ・バウマンニ、Ｅ・クロアカ、Ｋ・ニューモニエ、及びＰ・エルジノーサからなる群から選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記微生物が、グラム陽性菌である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３４】
前記グラム陽性菌が、Ｅ．フェシウム及びＳ．アウレウスからなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記微生物が、薬物耐性菌である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３６】
前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、又はポリミキシン耐性菌である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
ペプチドが、Ｒ1−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−ＮＲ2Ｒ3を含み、
Ｘ1が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ2が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｄａｐ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ3が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ4が、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ5が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ6が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ7が、ｄＶａｌ、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ8が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅｐｈｅ、及びＯｃｔｇｌｙからなる群から選択され；且つ
Ｘ9が、Ｓｅｒ及びＤａｂからなる群から選択される、請求項２２〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ペプチドが、配列番号：１〜１８のいずれか１つと少なくとも８８％の配列同一性を有する、請求項２２〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
Ｒ1が：
Ｒ4−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ4が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、ビフェニルアルキル、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、フェニルアルキルアミン、ビフェニルアルキルアミン、アルコキシ、シクロアルコキシ、フェニルアルコキシ、若しくはビフェニルアルコキシからなる群から選択されるか、又は
Ｒ5−ＣＨ（ＮＨ2）−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ5が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、及びビフェニルアルキルからなる群から選択される、請求項２２〜３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
Ｒ2及びＲ3が、水素から選択される、請求項２２〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
治療有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の組成物、及び薬学的に許容できる賦形剤、担体、又は希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項４２】
表面への適用のために製剤化された、有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の組成物を含む、抗バイオフィルム製品。
【請求項４３】
前記表面が、医療用装置表面、医療用機器表面、医療用インプラント表面、包帯表面、創傷表面、又は皮膚である、請求項４２に記載の抗バイオフィルム製品。
【請求項４４】
スプレー、軟膏、ゲル、フォーム、ペースト、ヒドロゲル、又は親水コロイドとして製剤化されている、請求項４２又は４３に記載の抗バイオフィルム製品。
【請求項４５】
ドレッシング材及び有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の組成物を含み、創傷又は皮膚上の微生物感染又は微生物バイオフィルムを治療するか又は防止するための、包帯。
【請求項４６】
前記ドレッシング材が、布、海綿質、アルギネート、コラーゲン、フィルム、ゲルシート、創傷充填剤、ヒドロゲル、親水コロイド、又はこれらの組み合わせを含む、請求項４５に記載の包帯。
【請求項４７】
微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、又は微生物を感作する方法であって、前記微生物と、有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の組成物とを接触させることを含む、方法。
【請求項４８】
表面上でのバイオフィルムの形成を防止するか、又は前記バイオフィルムにおいて、微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、若しくは微生物を感作する方法であって、前記表面又は該表面に配置されたバイオフィルムと、有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の組成物、請求項４１に記載の医薬組成物、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品、又は請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の包帯とを接触させることを含む、方法。
【請求項４９】
前記表面が、医療用装置表面、医療用機器表面、医療用インプラント表面、包帯表面、創傷表面、又は皮膚である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
創傷若しくは皮膚上でのバイオフィルムの形成を防止するか、又は前記バイオフィルムにおいて、微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、若しくは微生物を感作する方法であって、前記創傷、前記皮膚、又は前記創傷若しくは前記皮膚のいずれかに配置されたバイオフィルムと、有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の組成物、請求項４１に記載の医薬組成物、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品、又は請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の包帯とを接触させることを含む、方法。
【請求項５１】
対象中又は対象上の微生物感染を防止するか又は微生物感染を治療する方法であって、治療有効量の請求項１〜４０のいずれか一項に記載の組成物又は請求項４１に記載の医薬組成物、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品、又は請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の包帯を投与することを含む、方法。
【請求項５２】
前記微生物又は微生物感染症が、
（ｉ）グラム陰性菌若しくはグラム陰性菌感染症；
（ｉｉ）グラム陽性菌若しくはグラム陽性菌感染症；
（ｉｉｉ）薬物耐性菌若しくは薬物耐性菌感染症；又は
（ｉｖ）（ｉ）及び（ｉｉｉ）若しくは（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の組み合わせ
である、請求項４７〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記微生物が、グラム陰性菌であるか、又は前記微生物感染症が、グラム陰性菌感染症である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５４】
前記グラム陰性菌が、大腸菌、Ａ・バウマンニ、Ｅ・クロアカ、Ｋ・ニューモニエ、及びＰ・エルジノーサからなる群から選択されるか、又は前記グラム陰性菌感染症が、大腸菌感染症、Ａ・バウマンニ感染症、Ｅ・クロアカ感染症、Ｋ・ニューモニエ感染症、及びＰ・エルジノーサ感染症からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記微生物が、グラム陽性菌であるか、又は前記微生物感染症が、グラム陽性菌感染症である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記グラム陽性菌が、Ｅ．フェシウム及びＳ．アウレウスからなる群から選択されるか、又は前記グラム陽性菌感染症が、Ｅ．フェシウム感染症及びＳ．アウレウス感染症から選択される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記微生物が、薬物耐性菌であるか、又は前記微生物感染症が、薬物耐性菌感染症である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、若しくはポリミキシン耐性菌であるか、又は前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌感染症、メチシリン耐性菌感染症、若しくはポリミキシン耐性菌感染症である、請求項５７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本特許出願は、２０１７年８月４日に出願された米国仮特許出願第６２／５４１，２００号明細書の優先権の利益を主張し、その全容が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本明細書に開示される技術は、一般に、線状リポペプチドパエニペプチン並びに抗菌薬及び増強薬としてそれらを使用する方法に関する。
【０００３】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子ファイル化されており、．ｔｘｔフォーマットで電子的に提出された配列表を含む。．ｔｘｔファイルは、２０１８年８月６日に作成された「２０１８−０８−０６＿６４０１−０００３５＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というタイトルの配列表を含み、サイズは７，９６０バイトである。本．ｔｘｔファイル中に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、その全容が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００４】
抗生物質耐性病原菌の継続的な出現及び急速な広がりは、公衆衛生に対する重大な脅威となりつつある。カルバペネム耐性腸内細菌科（Enterobacteriaceae）（ＣＲＥ）により引き起こされる感染症は、治療するのが困難であり、多くの場合において治療が不可能であり、医療施設内の患者の間で緊急の脅威の１つと認識された。薬物耐性病原菌により引き起こされる他の深刻な脅威には、多剤耐性アシネトバクター（Acinetobacter）、多剤耐性シュードモナス・エルジノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、薬物耐性カンピロバクター（Campylobacter）、バンコマイシン耐性エンテロコッカス（Enterococcus）、及びメチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）が含まれる（ＣＤＣ、２０１３年）。近年では、グラム陰性菌由来のプラスミド媒介性のポリミキシン耐性遺伝子ｍｃｒ−１が、世界中の多くの国々で報告された（Liuら、２０１６年）。これらの発見は、薬物耐性病原菌に対する最後の防御線の重大な突破を意味している。この懸念を更に強めることには、多くの細菌性病原菌がバイオフィルムを形成することが可能であり、これはマトリックスに組み込まれた細胞凝集体であり、元の宿主組織及び留置する医療用装置の両方に関して、大部分の抗生物質治療に対して本質的に耐性である（Flemmingら、２０１６年）。抗生物質耐性病原菌により引き起こされる重篤な感染症は、高い罹患率及び死亡率に関連し、著しい経済上の費用の一因となる。従って、薬物耐性及びバイオフィルム形成性の病原菌により引き起こされる感染症の治療のために、新規で、安全な、且つ効果的な抗菌剤を開発することが緊急に必要である。
【発明の概要】
【０００５】
線状リポペプチドパエニペプチン、リポペプチドを含む製品、及びそれらを使用する方法を本明細書に開示する。本発明の一態様は、抗菌性組成物を含む。抗菌性組成物は線状リポペプチドを含み得て、リポペプチドは、親油性末端−Ｒ1とアミン末端−ＮＲ2Ｒ3の間に入る、配列番号：１〜１７のいずれか１つと少なくとも６６％の配列同一性を有するペプチドを含む。Ｒ1は、置換されているか又は非置換の、分岐又は非分岐のＣ2〜Ｃ20アルカノイルを含み得て、Ｒ2及びＲ3は、水素又はＣ1〜Ｃ6アルキルから独立して選択され得る。好適には、該組成物は、１つ又は複数の以下の特性を有し得る：
（ａ）リポペプチドは、培地中の微生物に対して８．０μｇ／ｍＬ以下の最小発育阻止濃度を有する；
（ｂ）リポペプチドは、培地中の微生物に対して１６．０μｇ／ｍＬ以下の最小殺菌濃度を有する；
（ｃ）リポペプチドは、１２８μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５０．０％以下の溶血百分率を有する；
（ｄ）リポペプチドは、１０５μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５０．０％以上の生存百分率を有する；
（ｅ）リポペプチドは、微生物に対する抗菌剤に関して１２８以上の感作因数（sensitization factor）を有する；又は
（ｆ）該組成物は、表面上の生存微生物における少なくとも２．０ ｌｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための、有効量のリポペプチドを有する。
好適には、該組成物は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、又は（ｆ）から選択されるうち、少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、又は全ての特性を有し得る。
【０００６】
一部の実施形態では、ペプチドは、Ｒ1−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−ＮＲ2Ｒ3を含み、式中：
Ｘ1は、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され得て；
Ｘ2は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｄａｐ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され得て；
Ｘ3は、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され得て；
Ｘ4は、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され得て；
Ｘ5は、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され得て；
Ｘ6は、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され得て；
Ｘ7は、ｄＶａｌ、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され得て；
Ｘ8は、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅｐｈｅ、及びＯｃｔｇｌｙからなる群から選択され得て；且つ／又は
Ｘ9は、Ｓｅｒ及びＤａｂからなる群から選択され得る。
【０００７】
好適には、ペプチドは、配列番号：１〜１７のいずれか１つと少なくとも８８％の配列同一性を有し得る。一部の実施形態では、−Ｒ1は：Ｒ4−Ｃ（＝Ｏ）−又はＲ5−ＣＨ（ＮＨ2）−Ｃ（＝Ｏ）−を含む。好適には、Ｒ4は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、ビフェニルアルキル、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、フェニルアルキルアミン、ビフェニルアルキルアミン、アルコキシ、シクロアルコキシ、フェニルアルコキシ、若しくはビフェニルアルコキシからなる群から選択され得るか、又はＲ5は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、及びビフェニルアルキルからなる群から選択され得る。ある特定の実施形態では、Ｒ2及びＲ3は、水素から選択される。
【０００８】
本明細書に記載される組成物は、抗細菌剤などの抗菌剤を更に含んでもよい。好適には、抗菌剤を含む組成物は、１つ又は複数の以下の特性を有し得る：
（ａ）抗菌剤は、培地中で、リポペプチド非存在下での微生物に対する最小発育阻止濃度よりも、リポペプチドの存在下において、微生物に対して、より低い最小発育阻止濃度を有する；
（ｂ）抗菌剤は、培地中で、リポペプチド非存在下での微生物に対する最小殺菌濃度よりも、リポペプチドの存在下において、微生物に対して、より低い最小殺菌濃度を有する；
（ｃ）リポペプチドは、微生物に対する抗菌剤に関して１２８以上の感作因数を有する；又は
（ｄ）該組成物は、表面上の生存微生物における少なくとも２．０ ｌｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための、有効量のリポペプチド及び／又は抗菌剤を有する。
好適には、該組成物は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、又は（ｄ）から選択されるうち、少なくとも２つ、３つ、又は全ての特性を有し得る。抗菌剤は、抗細菌剤を含み得る。例示的な抗菌剤には、限定されることなく、アンピシリン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、リファンピシン、又はバンコマイシンが含まれる。
【０００９】
本発明の別の態様は、本明細書に記載される組成物のいずれかを含む抗菌性製品を含む。そのような製品の１つは、治療有効量の本明細書に記載される組成物のいずれか、及び薬学的に許容できる賦形剤、担体、又は希釈剤を含む医薬組成物である。別のそのような製品は、表面への適用のために製剤化された、有効量の本明細書に記載される組成物のいずれかを含む抗バイオフィルム製品である。好適には、抗バイオフィルム製品は、スプレー剤、軟膏剤、ゲル剤、フォーム剤、ペースト、ヒドロゲル、又は親水コロイドとして製剤化され得る。抗バイオフィルム製品の適用に好適な例示的表面には、限定されることなく、医療用装置表面、医療用機器表面、医療用インプラント表面、包帯表面、創傷表面、又は皮膚が含まれる。抗バイオフィルム製品は、本明細書に記載される組成物のいずれかをそこに配置している医療用装置、医療用機器、医療用インプラント、又は包帯を含み得る。更に別のそのような製品は、ドレッシング材及び有効量の本明細書に記載される組成物のいずれかを含み、創傷又は皮膚上の微生物感染又は微生物バイオフィルムを治療するか又は防止するための包帯である。ドレッシング材は、布、海綿質、アルギネート、コラーゲン、フィルム、ゲルシート、創傷充填剤、ヒドロゲル、親水コロイド、又はこれらの組み合わせを含み得る。
【００１０】
抗菌性組成物は、微生物の増殖を阻害し、死滅させ、又は感作する（sensitize）に効果的である。本発明の別の態様は、微生物の増殖を阻害し、死滅させ、又は感作する方法を含む。該方法は、微生物と、有効量の本明細書に記載される組成物のいずれか、又は本明細書に記載される医薬組成物、抗バイオフィルム製品、若しくは包帯のいずれかを含む、本明細書に記載される抗菌性製品のいずれかと接触させることを含み得る。
【００１１】
抗菌性組成物はまた、表面上へのバイオフィルムの形成を防止するか、又はバイオフィルム中での微生物の増殖を阻害し、死滅させ、若しくは感作するのにも効果的である。本発明の別の態様は、表面上へのバイオフィルムの形成を防止するか、又はバイオフィルム中の微生物の増殖を阻害し、死滅させ、若しくは感作する方法を含む。該方法は、表面又はそこに配置されたバイオフィルムと、有効量の本明細書に記載される組成物のいずれか、又は本明細書に記載される医薬組成物、抗バイオフィルム製品、若しくは包帯のいずれかを含む、本明細書に記載される抗菌性製品のいずれかと接触させることを含み得る。抗バイオフィルム製品の適用に好適な例示的表面には、限定されることなく、医療用装置表面、医療用機器表面、医療用インプラント表面、包帯表面、創傷表面、又は皮膚が含まれる。
【００１２】
抗菌性組成物はまた、対象中又は対象上の微生物感染を防止するか又は微生物感染を治療するのにも効果的である。本発明の別の態様は、対象中又は対象上の微生物感染を防止するか又は微生物感染を治療することを含む。その方法は、治療有効量の本明細書に記載される組成物のいずれか、又は本明細書に記載される医薬組成物、抗バイオフィルム製品、若しくは包帯のいずれかを含む、本明細書に記載される抗菌性製品のいずれかを投与することを含み得る。該組成物又は抗バイオフィルム製品は、経口、静脈内、筋肉内、皮下、局所的、及び肺の経路を介して投与され得る。
【００１３】
好適には、本明細書に記載される微生物は、バイオフィルム中に存在しても又はしなくても、例えば、グラム陰性菌又はグラム陽性菌のような細菌であり得る。一部の実施形態では、微生物は、薬物耐性菌である。これには、薬物耐性のグラム陰性菌又は薬物耐性のグラム陽性菌が含まれる。例示的なグラム陰性菌には、限定されることなく、大腸菌（E.coli）、Ａ・バウマンニ（A.baumannii）、Ｅ・クロアカ（E.cloacae）、Ｋ・ニューモニエ（K.pneumoniae）、及びＰ・エルジノーサ（P.aeruginosa）が含まれる。例示的なグラム陽性菌には、限定されることなく、Ｅ．フェシウム（E.faecium）及びＳ・アウレウス（S.aureus）が含まれる。例示的な薬物耐性菌には、限定されることなく、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、又はポリミキシン耐性菌が含まれる。好適には、バイオフィルムは、本明細書に記載される微生物により形成されるか又は本明細書に記載される微生物のいずれかを含み得る。好適には、感染症は、本明細書に記載される微生物のいずれかの感染症であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１Ａ】類似体１７への０〜３２μｇ／ｍＬにおける曝露を伴う、病原菌の時間−死滅曲線を示す。（図１Ａ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３；（図１Ｂ）スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３。値は平均として表され（実験数、３）、エラーバーは標準偏差を示す。
【図１Ｂ】類似体１７への０〜３２μｇ／ｍＬにおける曝露を伴う、病原菌の時間−死滅曲線を示す。（図１Ａ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３；（図１Ｂ）スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３。値は平均として表され（実験数、３）、エラーバーは標準偏差を示す。
【図２Ａ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでカテーテル上に確立されたバイオフィルムに対する抗生物質の相対的活性を示す。（図２Ａ）メチシリン耐性のスタフィロコッカス・アウレウスＬＡＣ菌株に対する、パエニペプチン類似体１７、セフタロリン（Ｃｅｆ）、及びダプトマイシン（Ｄａｐ）。ＬＡＣ菌株に対する各抗生物質に関するＭＩＣに相当する濃度の５倍、１０倍、又は２０倍に相当する濃度において、活性を決定した。（図２Ｂ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３に対する類似体１７及びポリミキシンＢ（ＰＭＢ）。Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３に対する各抗生物質に関するＭＩＣに相当する濃度の１０倍、２０倍、４０倍、又は８０倍に相当する濃度において、活性を決定した。７２時間の抗生物質曝露後に、結果を検討評価した。値は平均として表される（実験数、６）。異なる文字を用いた平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図２Ｂ】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでカテーテル上に確立されたバイオフィルムに対する抗生物質の相対的活性を示す。（図２Ａ）メチシリン耐性のスタフィロコッカス・アウレウスＬＡＣ菌株に対する、パエニペプチン類似体１７、セフタロリン（Ｃｅｆ）、及びダプトマイシン（Ｄａｐ）。ＬＡＣ菌株に対する各抗生物質に関するＭＩＣに相当する濃度の５倍、１０倍、又は２０倍に相当する濃度において、活性を決定した。（図２Ｂ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３に対する類似体１７及びポリミキシンＢ（ＰＭＢ）。Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３に対する各抗生物質に関するＭＩＣに相当する濃度の１０倍、２０倍、４０倍、又は８０倍に相当する濃度において、活性を決定した。７２時間の抗生物質曝露後に、結果を検討評価した。値は平均として表される（実験数、６）。異なる文字を用いた平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図３Ａ】パエニペプチン類似体１７の抗菌活性に対するリポ多糖（ＬＰＳ）及びリポテイコ酸（ＬＴＡ）の影響を示す。（図３Ａ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３、１６μｇ／ｍＬにおける類似体１７；（図３Ｂ）スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３、３２μｇ／ｍＬにおける類似体１７。値は平均として表され（実験数、少なくとも３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図３Ｂ】パエニペプチン類似体１７の抗菌活性に対するリポ多糖（ＬＰＳ）及びリポテイコ酸（ＬＴＡ）の影響を示す。（図３Ａ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３、１６μｇ／ｍＬにおける類似体１７；（図３Ｂ）スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３、３２μｇ／ｍＬにおける類似体１７。値は平均として表され（実験数、少なくとも３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図４Ａ】パエニペプチン類似体１７の存在下での、細菌膜電位における変化を示す。（図４Ａ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３；（図４Ｂ）スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３。値は平均として表され（実験数、３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図４Ｂ】パエニペプチン類似体１７の存在下での、細菌膜電位における変化を示す。（図４Ａ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３；（図４Ｂ）スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３。値は平均として表され（実験数、３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図５Ａ】パエニペプチン類似体１７の存在下での、細菌細胞からの分子内カリウムイオンの放出を示す。（図５Ａ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３；（図５Ｂ）スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３。値は平均として表され（実験数、３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図５Ｂ】パエニペプチン類似体１７の存在下での、細菌細胞からの分子内カリウムイオンの放出を示す。（図５Ａ）シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３；（図５Ｂ）スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３。値は平均として表され（実験数、３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図６Ａ】４μｇ／ｍｌにおける類似体１又は１５単独への曝露、及びトリプシンソイブロス（ＴＳＢ）中の１μｇ／ｍｌにおけるクラリスロマイシン（ＣＬＲ）又はリファンピシン（ＲＩＦ）との組み合わせの曝露を伴う、カルバペネム耐性病原菌の時間−死滅曲線を示す。（図６Ａ）アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii）ＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００６３；（図６Ｂ）クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella pneumoniae）ＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００９７。値は平均として表され（独立した生物学上の反復の数、少なくとも３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた、２４時間のエンドポイントにおける平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図６Ｂ】４μｇ／ｍｌにおける類似体１又は１５単独への曝露、及びトリプシンソイブロス（ＴＳＢ）中の１μｇ／ｍｌにおけるクラリスロマイシン（ＣＬＲ）又はリファンピシン（ＲＩＦ）との組み合わせの曝露を伴う、カルバペネム耐性病原菌の時間−死滅曲線を示す。（図６Ａ）アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii）ＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００６３；（図６Ｂ）クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella pneumoniae）ＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００９７。値は平均として表され（独立した生物学上の反復の数、少なくとも３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた、２４時間のエンドポイントにおける平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図７Ａ】４μｇ／ｍｌにおける類似体１又は１５単独への曝露、及びｉｎ  ｖｉｔｒｏでの９５％ヒト血清中の４μｇ／ｍｌにおけるクラリスロマイシン（ＣＬＲ）又はリファンピシン（ＲＩＦ）との組み合わせの曝露を伴う、カルバペネム耐性病原菌の時間−死滅曲線を示す。（図７Ａ）アシネトバクター・バウマンニ  ＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００６３；（図７Ｂ）クレブシエラ・ニューモニエ  ＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００９７。値は平均として表され（独立した生物学上の反復の数、少なくとも３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた、２４時間のエンドポイントにおける平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【図７Ｂ】４μｇ／ｍｌにおける類似体１又は１５単独への曝露、及びｉｎ  ｖｉｔｒｏでの９５％ヒト血清中の４μｇ／ｍｌにおけるクラリスロマイシン（ＣＬＲ）又はリファンピシン（ＲＩＦ）との組み合わせの曝露を伴う、カルバペネム耐性病原菌の時間−死滅曲線を示す。（図７Ａ）アシネトバクター・バウマンニ  ＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００６３；（図７Ｂ）クレブシエラ・ニューモニエ  ＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００９７。値は平均として表され（独立した生物学上の反復の数、少なくとも３）、エラーバーは標準偏差を示す。異なる文字を用いた、２４時間のエンドポイントにおける平均は、群間で有意に異なる（ｐ＜０．０５）。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
線状リポペプチドパエニペプチン、リポペプチドを含む製品、及びそれらを使用する方法を本明細書に開示する。以下の実施例で実証されるように、本開示のリポペプチドは、抗菌活性及び抗バイオフィルム活性を有する。理論に束縛されることは望まないが、本明細書に開示されるパエニペプチンは、微生物の細胞膜を破壊し且つ損傷すると考えられる。細胞膜の破壊は、微生物にとって直接的に細胞傷害性であり、結果としてパエニペプチン（paeninpeptin）は抗菌剤となり得る。他の場合には、細胞膜の破壊は、他の抗菌剤の輸送を促進し、他の薬剤の細胞傷害性を増強することができる。どちらの場合にも、本明細書に開示される組成物は、微生物の増殖を阻害し、且つ微生物感染症を治療することが可能である。
【００１６】
本明細書に開示される組成物は、薬物耐性菌を含む、グラム陰性菌に対して効果的である。グラム陰性菌は、外膜の透過性障壁の結果として、多くの抗生物質を含む大きな疎水性分子に対して本質的に耐性である。膜の外側の統合性は、細胞表面上の２価のカチオン（Ｍｇ2+及びＣａ2+）により連結されたアニオン性リポ多糖（ＬＰＳ）ネットワークにある。ＬＰＳに対する親和性を有する、本明細書に開示されるパエニペプチン（paeninpeptin）などのカチオン性リポペプチドは、外膜の体系を破壊し、抗菌活性をもたらし且つ／又は既存の抗生物質の侵入を可能にする。本開示のリポペプチドは、抗菌活性を有し且つ／又は同時投与された抗菌剤に対して微生物を感作する。結果として、線状リポペプチドは、新しい抗菌性製品及びそれらの使用を可能にする。
【００１７】
線状リポペプチド
「線状リポペプチドパエニペプチン」（「リポペプチド」又は「パエニペプチン」と表され得る）とは、親油性末端、アミン末端、及びそれらの間に入るペプチドを含むリポペプチドを意味する。線状リポペプチドパエニペプチンを特徴づける３つの構造的特色：疎水性のＮ末端鎖、正電荷を持つ残基、及び疎水性のアミノ酸がある。結果として、親油性末端の長さ若しくは親油性末端の構造を選択し；リポペプチドのカチオン性特徴を修正し；アミノ酸を置換するか、又はこれらの任意の組み合わせにより、類似体が容易に開発され得る。
【００１８】
本明細書に開示されるリポペプチドは、パエニバチルス属（Paenibacillus sp.）ＯＳＹ−Ｎにより生成される線状及び環状のリポペプチドの天然混合物と組成的に同様である［Huang、E.ら。新規なパエニバチルス菌株は、線状及び環状の抗菌性リポペプチドファミリーを生成する：環化は、それらの抗菌活性にとって必須ではない。FEMS Microbiology Letters  ２０１７年、３６４、その全容が参照により本明細書に組み込まれる］。注目すべきことに、本明細書に開示されるリポペプチドの状況における「線状」の使用は、リポペプチドが、天然の環状リポペプチドのマクロラクトン環化がなく、パエニペプチンファミリーの抗菌活性を依然として保持していることを意味する。線状リポペプチド抗生物質の開発は、合成プロセスを著しく単純化し、従ってこのファミリーのリポペプチドを製造する費用を低減させるため、経済的に有益である。最も重要なことには、これによって、標準的な固相ペプチド合成を使用して、非常に多数の線状パエニペプチン類似体に到達することができる。
【００１９】
線状リポペプチドは、式Ｒ1−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−ＮＲ2Ｒ3を含み得て、式中、Ｒ1は親油性末端であり、ＮＲ2Ｒ3はアミン末端であり；Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9は、それらの間に入る９個のアミノ酸ペプチドである。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｄａｂ−Ｉｌｅ−Ｄａｂ−ｄＰｈｅ−Ｌｅｕ−Ｄａｂ−ｄＶａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号：１）又はその派生体を含む。配列番号：１の派生体は、少なくとも１個の置換アミノ酸を含み得る。特定の実施形態では、派生体は、１個のアミノ酸置換（すなわち、配列番号：１に対して８８％の配列同一性）、独立して選択された２個のアミノ酸置換（すなわち、配列番号：１に対して７７％の配列同一性）、又は独立して選択された３個のアミノ酸置換（すなわち、配列番号：１に対して６６％の配列同一性）を含み得る。特定の実施形態では、置換アミノ酸は、親油性アミノ酸及び／又はカチオン性アミノ酸から選択される。
【００２０】
置換アミノ酸は、タンパク質原性アミノ酸又は非タンパク質原性アミノ酸であってもよい。「タンパク質原性アミノ酸」には、親油性アミノ酸［すなわち、アラニン（Ａｌａ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、又はバリン（Ｖａｌ）］、カチオン性アミノ酸［すなわち、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、又はリシン（Ｌｙｓ）］、極性無電荷のアミノ酸［すなわち、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、又はグルタミン（Ｇｌｎ）］、アニオン性アミノ酸［すなわち、アスパラギン酸（Ａｓｐ）又はグルタミン酸（Ｇｌｕ）］、システイン（Ｃｙｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セレノシステイン（Ｓｅｃ）、又はピロールリシン（Ｐｙｌ）のＬ−異性体のいずれかが含まれる。
【００２１】
「非タンパク質原性アミノ酸」には、タンパク質原性アミノ酸のＤ−異性体、タンパク質原性アミノ酸の非天然類似体、機能化アミノ酸、又は伸長した側鎖を有するアミノ酸のいずれかが含まれる。「タンパク質原性アミノ酸の非天然類似体」には、置換されたタンパク質原性アミノ酸のＬ−及びＤ−異性体、タンパク質原性アミノ酸側鎖を有するβ−アミノ酸、又はこれらの任意の組み合わせが含まれる。置換されたタンパク質原性アミノ酸は、アルキル、アリール、アシル、アジド、シアノ、ハロ、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシル、アルケニル、アルキニル（alkynl）、エーテル、チオール、スルホニル、セレノ、エステル、チオ酸、ボレート、ボロネート、ホスホ、ホスホノ、ホスフィン、ヘテロ環式、エノン、イミン、アルデヒド、ヒドロキシルアミン、ケト、アミノ、又はこれらの任意の組み合わせから選択される１つ又は複数の置換基を有し得る。「機能化アミノ酸」には、光活性化可能な架橋基を伴うアミノ酸；スピン標識アミノ酸；蛍光性アミノ酸；新規な官能基を伴うアミノ酸；別の分子と共有結合的に又は非共有結合的に相互作用するアミノ酸；金属結合性アミノ酸；金属含有性アミノ酸；放射性アミノ酸；光ケージ化及び／又は光異性化可能なアミノ酸；ビオチン又はビオチン類似体含有性のアミノ酸；グリコシル化又は炭水化物修飾されたアミノ酸；ケト含有性アミノ酸；ポリエチレングリコール又はポリエーテルを含むアミノ酸；重原子置換アミノ酸；化学的に開裂可能又は光開裂可能なアミノ酸；伸長した側鎖を伴うアミノ酸；毒性基含有性のアミノ酸；例えば糖置換セリンなどの糖置換アミノ酸；炭素連結の糖含有性のアミノ酸；酸化還元活性のアミノ酸；α−ヒドロキシル含有性の酸；アミノチオ酸含有性のアミノ酸；α，α二置換アミノ酸；β−アミノ酸；及びプロリン以外の環状アミノ酸が含まれる。非タンパク質原性アミノ酸の例には、２，４−ジアミノ酪酸（2,4-diaminobutyic acid）（Ｄａｂ）、２，３−ジアミノプロピオン酸（2,3-diaminoproprionic acid）（Ｄａｐ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、４−フェニル−フェニルアラニン（Ｐｈｅｐｈｅ）、又はオクチルグリシン（Ｏｃｔｇｌｙ）が含まれる。
【００２２】
配列番号：１の派生体には、配列番号：２〜配列番号：１７の配列（表１）のいずれかが含まれるが、これらに限定されない。配列番号：２〜配列番号：１７の配列の派生体はまた、少なくとも１つの上述の置換アミノ酸を含んで調製され得る。特定の実施形態では、派生体は、１個のアミノ酸置換、独立して選択された２個のアミノ酸置換、又は独立して選択された３個のアミノ酸置換を含み得る。
【００２３】
本発明のある特定の実施形態では、Ｘ1からＸ9までは、いくつかの異なるアミノ酸から独立して選択され得る。Ｘ1は、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇから独立して選択され得る。Ｘ2は、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｄａｐ、又はＰｈｅｐｈｅから独立して選択され得る。Ｘ3は、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、又はＴｈｒから独立して選択され得る。Ｘ4は、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ、又はＰｈｅｐｈｅから独立して選択され得る。Ｘ5は、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ又はＰｈｅｐｈｅから独立して選択され得る。Ｘ6は、Ｄａｂ、Ｄａｐ、Ｏｒｎ、Ｌｙｓ、又はＡｒｇから独立して選択され得る。Ｘ7は、ｄＶａｌ、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ又はＰｈｅｐｈｅから独立して選択され得る。Ｘ8は、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅｐｈｅ、Ｏｃｔｇｌｙから独立して選択され得る。Ｘ9は、Ｓｅｒ又はＤａｂから独立して選択され得る。ペプチドは、これらの任意の組み合わせを含み得る。
【００２４】
親油性末端は、ペプチドの末端から伸長している、置換されているか又は非置換の、分岐又は非分岐の疎水性のアルカノイル部分であり得る。親油性末端は、ペプチドのＮ末端から伸長し得る。一部の実施形態では、親油性末端は、イミド結合を介してＮ末端から伸長している、直鎖、分岐、又は環状のアルカノイルである。親油性末端は、少なくとも２個の炭素原子を有する部分であり得る。一部の実施形態では、親油性末端は、２〜約２０個（すなわち、Ｃ2〜Ｃ20アルカノイル）、約２〜約１４個（すなわち、Ｃ2〜Ｃ14アルカノイル）、約６〜約１４個（すなわち、Ｃ6〜Ｃ14アルカノイル）、又は約６〜約１０個の炭素原子（すなわち、Ｃ6〜Ｃ10アルカノイル）を有する。
【００２５】
アルカノイルは、アルキル部分、アルケニル部分、アルキニル部分、シクロアルキル部分、シクロアルケニル部分、フェニル部分、ビフェニル部分、アミノ部分、アルコキシ部分、ハロ部分、又はこれらの任意の組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態では、アルカノイルは、一般式Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−を有し、式中、Ｒは、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、ビフェニルアルキル、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、フェニルアルキルアミン、ビフェニルアルキルアミン、アルコキシ、シクロアルコキシ、フェニルアルコキシ、又はビフェニルアルコキシ（biphenphylalkoxy）である。ある特定の実施形態では、アルカノイルは、一般式Ｒ−ＣＨ（ＮＨ2）−Ｃ（＝Ｏ）−を有し、Ｒは、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、又はビフェニルアルキル部分である。親油性末端の例には、限定されることなく、エタノイル、ブタノイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、デカノイル、ベンゾイル、ベンジルオキシカルボニル、３−シクロヘキシルアラニル（3-cyclohexylanlanyl）、ビオフェニル−４−カルボキシル、４−フェニル−フェニルアラニル、又は４−ブロモ−フェニルアラニルが含まれる。
【００２６】
アミン末端は、ペプチドの末端から伸長している任意のアミノ部分であり得る。一部の実施形態では、アミン末端は、ペプチドのＣ末端から伸長する。アミン末端は、一般式−ＮＲＲ’の第１級、第２級、又は第３級のアミンであり得て、式中、Ｒ及びＲ’は、水素又はＣ1〜Ｃ6アルキル部分から独立して選択される。
【００２７】
リポペプチドは、塩として調製されてもよい。一部の実施形態では、リポペプチドは、薬学的に許容できる塩として調製され得る。
【００２８】
カチオン性リポペプチドパエニペプチンには３つの構造的特色：疎水性のＮ末端脂肪酸アシル鎖、正電荷を持つ残基、及び疎水性のアミノ酸がある。リポペプチドの例示的な実施形態を、表１に提供する。これらの類似体における構造変形には、例えば、（ｉ）Ｎ末端脂肪酸アシル鎖の長さの変形（例えば、それぞれ類似体１、３、８、及び１２における、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル及びデカノイル基）；（ｉｉ）脂肪酸アシル鎖の疎水性アシル基との置き換え（例えば、それぞれ類似体１４、１５、及び１６における、ベンゾイル、ベンジルオキシカルボニル、及び３−シクロヘキシルアラニル基）；（ｉｉｉ）正電荷を持つ残基の修飾（例えば、類似体９、１０、１１、及び１３）；並びに（ｉｖ）パエニペプチン中の疎水性アミノ酸の変化（例えば、類似体２、４、５、６、７、及び１７）が含まれる。
【００２９】
表１．パエニペプチン類似体（Ａｎ．）のリポペプチド配列
【表１−１】
2020529443.tif 000003
【表１−２】
2020529443.tif 000004
【表１−３】
2020529443.tif 000005
【表１−４】
2020529443.tif 000006
【表１−５】
2020529443.tif 000007
【表１−６】
2020529443.tif 000008
aＤａｂ：２，４−ジアミノ酪酸；
bＣ８−Ｐａｔ：リード化合物；他の類似体における置換Ｎ末端基及びアミノ酸残基は太字である；
cＯｒｎ：オルニチン
dＤａｐ：ジアミノプロピオン酸（diaminoproprionic acid）；
eＰｈｅｐｈｅ：４−フェニル−フェニルアラニル；
fＯｃｔｇｌｙ：オクチルグリシル
【００３０】
抗菌性製品
本明細書に開示される組成物は、クラリスロマイシン及びリファンピシンなどの抗菌剤の、抗菌スペクトルを拡大し且つ抗生物質活性を向上させる。結果として、リポペプチド単独又は他の抗生物質との組み合わせは、カルバペネム耐性病原菌を含む、抗生物質耐性グラム陰性菌により引き起こされる感染症を治療するための、代替の治療的選択肢であり得る。
【００３１】
本明細書に記載される構造−活性関係の研究を通して、類似体７、１２及び１７を含み、微生物の増殖を阻害するか又は微生物を死滅させることが可能な強力なリポペプチドが同定される。類似体１７は、メチシリン耐性のＳ．アウレウスバイオフィルムに対して、ダプトマイシン及びセフタロリンについて観察された活性に匹敵する強力な活性を示した。この新規な類似体はまた、確立されたＰ・エルジノーサバイオフィルムに対しても強い有効性を示した。従って、類似体１７は、浮遊性及びバイオフィルム関連の両方の条件下で、薬物耐性病原菌を標的とする、有望な広域抗菌スペクトル性の抗生物質候補である。類似体９は、非溶血性であり、強力なＰ・エルジノーサ特異性の抗菌活性を保持した。これは、本明細書に開示されるリポペプチドが、広域抗菌スペクトル性の抗菌性製品又は共生細菌に対する抗生物質圧力を低下することが可能な狭域抗菌スペクトル性の抗菌性製品として使用され得ることを実証している。
【００３２】
多くの強力な大きな疎水性抗生物質は、リファンピシン、クラリスロマイシン及びエリスロマイシンを含み、外膜透過性障壁のために、グラム陰性病原菌に対して活性ではない。グラム陰性菌の外膜におけるＬＰＳは、そのような薬物を排除する主要な透過性障壁である。多剤耐性のグラム陰性病原菌により引き起こされる感染症を治療するための緊急の必要性を考慮すると、既存の抗生物質の侵入を促進する、外膜の透過処理剤は、抗生物質耐性に対抗するための代替手法を提供する。
【００３３】
本明細書に開示されるパエニペプチンリポペプチドの中で、溶血活性をほとんど示さず且つＡ・バウマンニ及びＫ・ニューモニエに対する活性を欠いている１０の化合物を、これら２つの病原菌に対して、リファンピシンと組み合わせて試験した。４μｇ／ｍｌにおいて試験する場合、６つのパエニペプチン類似体（１、３、９、１４、１５及び１６）は、Ａ・バウマンニ及びＫ・ニューモニエに対するリファンピシンのＭＩＣを、１６μｇ／ｍＬ（１９．４２μＭ）からナノモル及びサブナノモルレベルまで減少させた（感作因数：２，０４８〜８，１９２）。同様のレベルの相乗作用は、類似体９及び１６と、タンパク質合成阻害剤クラリスロマイシンとの間でも観察された。従って、パエニペプチンは、異なる作用様式を有する異なる種類の抗生物質を増強することができる。
【００３４】
抗菌性組成物及び製品を、上述のリポペプチドから調製し得る。以下で更に十分に説明するように、リポペプチドは抗菌活性、抗バイオフィルム活性を有し、且つ微生物を他の抗菌性組成物に対して感作する。このため、バイオフィルム形成を受けやすい表面に適用するための医薬組成物又は製剤を含み、いくつかの異なる抗菌性製品の開発が可能となる。この組成物は、リポペプチドを唯一の抗菌剤として、又はリポペプチドを別の抗菌剤に加えて含んでもよい。医薬組成物はまた、線状ペプチドが単独の有効活性成分（ＡＰＩ）であるか、又は１つ若しくは複数の付加的なＡＰＩと組み合わせて使用され得る場合も、調製され得る。バイオフィルム形成を受けやすい表面に適用するための製剤に関して、線状ペプチドは、抗菌性及び／若しくは抗バイオフィルム活性を有する唯一の組成物であるか、又は抗菌性及び／若しくは抗バイオフィルム活性を有する１つ又は複数の付加的な組成物と組み合わせて使用されてもよい。
【００３５】
抗菌活性を有するリポペプチドとは、リポペプチドが、微生物の増殖を阻害することが可能で、且つ／又は微生物を死滅させることが可能であることを意味する。好適には、リポペプチドは、培地中の微生物に対して８．０μｇ／ｍＬ以下の最小発育阻止濃度及び／又は培地中の微生物に対して１６．０μｇ／ｍＬ以下の最小殺菌濃度を有する。「最小発育阻止濃度」（又は「ＭＩＣ」）とは、インキュベーション後に微生物細胞の視認できる成長をもたらすことがない、リポペプチドの最低濃度を意味する。「最小殺菌濃度」（又は「ＭＢＣ」）とは、最初の接種材料に対して、生存細菌細胞の数において少なくとも９９．９％の低減に至る、リポペプチドの最低濃度を意味する。好適には、リポペプチドは、これらの特性の一方又は両方のいずれかを保有し、抗菌活性を保有すると考えられ得る。優れた抗菌活性を有するリポペプチドを開示する。好適には、リポペプチドは、６．０μｇ／ｍＬ、４．０μｇ／ｍＬ、２．０μｇ／ｍＬ、若しくは１．０μｇ／ｍＬ以下のＭＩＣ、及び／又は１４．０μｇ／ｍＬ、１２．０μｇ／ｍＬ、１０．０μｇ／ｍＬ、８．０μｇ／ｍＬ、６．０μｇ／ｍＬ、４．０μｇ／ｍＬ、２．０μｇ／ｍＬ、若しくは１．０μｇ／ｍＬ以下のＭＢＣを有し得る。培地は、限定されることなく、トリプシンソイブロス（「ＴＢＳ」）又は血清などの身体の液体部分を含み、微生物の成長を支えるように設計された任意の好適な固体、液体又は半固体であり得る。
【００３６】
微生物は、細菌、古細菌（archeae）、及び酵母菌などの多数の異なる微小生物のいずれかであり得る。細菌は、グラム陰性菌、例えば、アシネトバクター、バルトネラ（Bartonella）、ボルデテラ（Bordetella）、ボレリア（Borrelia）、ブルセラ（Brucella）、カンピロバクター、エンテロバクター（Enterobacter）、エシェリキア（Escherichia）、フランシセラ（Franisella）、ヘモフィルス（Haemophilus）、ヘリコバクター（Helicobacter）、クレブシエラ（Klebsiella）、レジオネラ（Legionella）、レプトスピラ（Leptospira）、モラクセラ（Moraxella）、ナイセリア（Neisseria）、プロテウス（Proteus）、シュードモナス、リケッチア（Rickettsia）、サルモネラ（Salmonella）、セラチア（Serratia）、シゲラ（Shigella）、トレポネーマ（Treponema）、ビブリオ（Vibrio）、若しくはエルシニア（Yersinia）属の細菌など、グラム陽性菌、例えば、バチルス（Bacillus）、クロストリジウム（Clostridium）、コリネバクテリア（Corynebacterium）、リステリア（Listeria）、スタフィロコッカス、若しくはストレプトコッカス（Streptococcus）属の細菌など、又はグラム陰性でもグラム陽性でもない細菌、例えば、クラミジア（Chlamydia）、クラミドフィラ（Chlamydophila）、マイコバクテリウム（Mycobacterium）、若しくはマイコプラズマ（Mycoplasma）属の細菌などであり得る。
【００３７】
微生物は、薬物耐性微生物であり得る。本明細書で使用される場合、「薬物耐性」とは、抗菌剤のＭＩＣが、培地中で３２．０μｇ／ｍＬより高いことを意味する。好適には、微生物は、カルバペネム耐性微生物又はポリミキシン耐性微生物である。
【００３８】
一部の実施形態では、リポペプチドは、溶血性及び／又は細胞傷害性ではない。本明細書で使用される場合、リポペプチドは、１２８μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、溶血百分率が５０．０％以下である場合、「非溶血性」である。好適には、溶血百分率は、１２８μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、４５．０％、４０．０％、３５．０％、３０．０％、２５．０％、２０．０％、１５．０％、１０．０％、又は５．０％以下である。本明細書で使用される場合、リポペプチドは、１０５μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、ＨＥＫ２９３ヒト腎臓細胞株に対して生存百分率が５０．０％以上である場合、「非細胞傷害性（non-cytoxic）」である。好適には、生存百分率は、１０５μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５５．０％、６０．０％、又は６５．０％以上であり得る。
【００３９】
リポペプチドは、多数の異なる抗菌剤と組み合わせて使用され、抗菌剤に対して微生物を感作し得る。本明細書で使用される場合、「感作因数」とは、リポペプチドの非存在下における抗菌剤のＭＩＣの、微生物に対して４μｇ／ｍＬのリポペプチドの存在下における抗菌剤のＭＩＣに対する比を意味する。感作因数は、微生物に対する抗菌剤に関して、１２８（すなわち、２7）以上である。好適には、感作因数は、微生物に対する抗菌剤に関して、２５６（すなわち、２8）、５１２（すなわち、２9）、１０２４（すなわち、２10）、２０４８（すなわち、２11）、４０９６（すなわち、２12）、又は８１９２（すなわち、２13）以上である。リポペプチドによりもたらされる感作の結果として、抗菌剤は、微生物の増殖を阻害するために必要とされる抗菌剤の量を、１０μｇ／ｍＬ超から１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬ、又は０．００１μｇ／ｍＬ未満まで低減させるのに効果的であり得る。場合によっては、このため、抗菌剤が、カルバペネム−又はポリミキシン耐性微生物などの薬物耐性微生物に対して効果的であることが可能となる。
【００４０】
リポペプチドと組み合わせて使用される抗菌剤は、細胞経路及び／又は例えば細胞膜のような細胞性膜の構造若しくは機能を阻害する抗生物質であり得る。例えば、抗菌剤は、タンパク質合成、ＲＮＡ合成、ＤＮＡ合成、代謝、又は細胞壁合成を阻害し得る。そのような機能を実施することができる抗菌剤の例には、アミノグリコシド、テトラサイクリン、マクロライド、オキサゾリジノン、ストレプトグラミン、リコサミド（licosamide）、リファムピン、キノロン、ノボビオシン、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、β−ラクタム、グリコペプチド、ツニカマイシン、バシトラシン、ポリミキシン、又はナイシンが含まれるが、これらに限定されない。
【００４１】
抗バイオフィルム活性を有するリポペプチドとは、リポペプチドが、表面上の微生物の増殖を阻害することが可能で、且つ／又は微生物を死滅させることが可能であることを意味する。好適には、本明細書に開示される組成物は、未処置の表面と比較して、表面上に生存している微生物又はコロニー形成単位の少なくとも２．０ ｌｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための、有効量のリポペプチドを含む。好適には、リポペプチドは、表面上の生存微生物における２．５、３．０、３．５、４．０、４．５又は５．０ ｌｏｇの低減のための有効量を有し得る。
【００４２】
本明細書に記載される１つ又は複数の特性を有するリポペプチドは、医薬組成物、抗バイオフィルム製品、又は包帯を含む、抗菌性製品に製剤化され得る。
【００４３】
医薬組成物
本明細書に開示される方法に利用される化合物は：（ａ）本明細書に開示される、治療有効量の１つ又は複数の化合物；及び（ｂ）１つ又は複数の薬学的に許容できる担体、賦形剤、又は希釈剤を含む医薬組成物として製剤化され得る。薬学的な有効量は、リポペプチド単独又はリポペプチド及び抗菌剤の組み合わせのものであってもよい。医薬組成物は、約０．１〜２０００ｍｇ（好ましくは約０．５〜５００ｍｇ、より好ましくは約１〜１００ｍｇ）の範囲の化合物を含み得る。医薬組成物は、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重（好ましくは約０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重）の１日用量における化合物を提供するために投与され得る。一部の実施形態では、医薬組成物が患者に投与された後（例えば、投与後の約１、２、３、４、５、又は６時間後）、作用部位における化合物の濃度は約２〜１０μＭである。
【００４４】
本明細書に開示される方法に利用される化合物は、任意の薬学的に許容できる剤形が利用可能であるけれども、固体剤形における医薬組成物として製剤化されてもよい。例示的な固体剤形には、錠剤、カプセル剤、小袋、トローチ剤、散剤、丸剤、又は顆粒剤が含まれるが、これらに限定されず、且つ固体剤形は、例えば、速溶剤形、制御放出剤形、凍結乾燥剤形、遅延放出剤形、延長放出剤形、脈動放出剤形、即時放出及び制御放出の混合剤形、又はこれらの組み合わせであり得る。
【００４５】
本明細書に開示される方法に利用される化合物は、担体を含む医薬組成物として製剤化されてもよい。例えば、担体は、タンパク質、炭水化物、糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸カルシウム、及びデンプン−ゼラチンペーストからなる群から選択されてもよい。
【００４６】
本明細書に開示される方法に利用される化合物は、１つ又は複数の結合剤、充填剤、滑沢剤、懸濁化剤、甘味料、着香剤、防腐剤、緩衝剤、湿潤剤、崩壊剤、及び発泡剤を含む医薬組成物として製剤化されてもよい。充填剤は、ラクトース一水和物、ラクトース無水物、及び様々なデンプンを含んでもよく；結合剤の例は、様々なセルロース及び架橋したポリビニルピロリドン、例えばＡｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０１及びＡｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０２などの微結晶性セルロース、微結晶性セルロース、並びにケイ化微結晶性セルロース（ＰｒｏＳｏｌｖ  ＳＭＣＣ（商標））である。好適な滑沢剤は、圧縮される粉末の流動性に作用する薬剤を含み、Ａｅｒｏｓｉｌ（登録商標）２００などのコロイド性二酸化ケイ素、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、及びシリカゲルを含み得る。甘味料の例には、スクロース、キシリト−ル、サッカリンナトリウム、シクラメート、アスパルテーム、及びアセスルファム（acsulfame）などの任意の天然又は人工の甘味料が含まれ得る。着香剤の例は、Ｍａｇｎａｓｗｅｅｔ（登録商標）（ＭＡＦＣＯの商標）、バブルガム香料、及びフルーツ香料などである。防腐剤の例には、ソルビン酸カリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸及びその塩、例えばブチルパラベンなどのパラヒドロキシ安息香酸の他のエステル、エチルアルコール若しくはベンジルアルコールなどのアルコール、フェノールなどのフェノール化合物、又は塩化ベンザルコニウムなどの第４級化合物が含まれ得る。
【００４７】
好適な希釈剤には、薬学的に許容できる不活性充填剤、例えば微結晶性セルロース、ラクトース、リン酸水素カルシウム、糖類、及び前述のいずれかの混合物が含まれ得る。希釈剤の例には、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０１及びＡｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０２などの微結晶性セルロース；ラクトース一水和物、ラクトース無水物、及びＰｈａｒｍａｔｏｓｅ（登録商標）ＤＣＬ２１などのラクトース；Ｅｍｃｏｍｐｒｅｓｓ（登録商標）などのリン酸水素カルシウム；マンニトール；デンプン；ソルビトール；スクロース；並びにグルコースが含まれる。
【００４８】
好適な崩壊剤には、軽度に架橋されたポリビニルピロリドン、コーンデンプン、ジャガイモデンプン、メイズデンプン、及び加工デンプン、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン（cross-povidone）、デンプングリコール酸ナトリウム、及びこれらの混合物が含まれる。
【００４９】
発泡剤の例は、有機酸及び炭酸塩又は重炭酸塩などの発泡剤対である。好適な有機酸には、例えば、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸、アジピン酸、コハク酸、及びアルギン酸並びに酸の無水物及び塩が含まれる。好適な炭酸塩及び炭酸塩には、例えば、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸マグネシウム、炭酸グリシンナトリウム、Ｌ−リシン炭酸塩、及びアルギニン炭酸塩が含まれる。あるいは、発泡剤対の重炭酸ナトリウム成分のみが存在してもよい。
【００５０】
本明細書に開示される方法に利用される化合物は、任意の好適な経路を介して送達するための医薬組成物として製剤化されてもよい。例えば、医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、皮下、局所的、及び肺の経路を介して投与され得る。経口投与用の医薬組成物の例には、カプセル剤、シロップ剤、濃縮物、散剤及び顆粒剤が含まれる。
【００５１】
本明細書に開示される方法に利用される化合物は、当技術分野で周知の従来手順に基づいて、有効成分と標準的な薬学的担体又は希釈剤とを組み合わせることにより調製された、従来の剤形で投与されてもよい。これらの手順は、所望の調製に適切な原料を混合、造粒化及び圧縮又は溶解することを含み得る。
【００５２】
この化合物を含む医薬組成物は、例えば経口（バッカル若しくは舌下を含む）、直腸、経鼻、局所的（バッカル、舌下若しくは経皮を含む）、腟又は非経口的（皮下、筋肉内、静脈内若しくは皮内を含む）経路によって、任意の適切な経路による投与に適合され得る。そのような製剤は、医薬の技術分野で周知の任意の方法により、例えば有効成分と担体（複数可）又は賦形剤（複数可）とを関連付けることにより調製され得る。
【００５３】
経口投与に適した医薬組成物は、カプセル剤若しくは錠剤；散剤若しくは顆粒剤；水性若しくは非水性の液体中の溶液剤若しくは懸濁剤；食用のフォーム若しくはホイップ；又は水中油型の液体乳剤若しくは油中水型の液体乳剤などの個別単位として与えられてもよい。
【００５４】
経皮投与に適した医薬組成物は、長期的に、受容者の表皮と密接に接触した状態を維持するように意図された個別パッチとして与えられてもよい。例えば、有効成分は、イオン導入法によりパッチから送達されてもよい。
【００５５】
局所投与に適した医薬組成物は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、溶液剤、ペースト、ゲル剤、含浸ドレッシング材、スプレー剤、エアゾール剤又は油脂として製剤化されてもよく、防腐剤、薬物浸透を補助する溶媒並びに軟膏剤及びクリーム剤中の軟化剤などの適切な従来の添加剤を含有してもよい。
【００５６】
目又は例えば口及び皮膚のような他の外部組織への適用のために、医薬組成物は、好ましくは局所的な軟膏剤又はクリーム剤として塗布される。軟膏剤に製剤化される場合、化合物は、パラフィン又は水混和性の軟膏基剤のいずれかと共に利用されてもよい。あるいは、化合物は、水中油型クリーム基剤又は油中水型基剤と共にクリーム剤に製剤化されてもよい。目への局所投与に適した医薬組成物には、有効成分が、好適な担体、特に水性溶媒中に溶解しているか又は懸濁している点眼薬が含まれる。
【００５７】
口中への局所投与に適した医薬組成物には、トローチ剤、香錠及び口腔洗浄薬が含まれる。
【００５８】
直腸内投与に適した医薬組成物は、坐剤又は浣腸として与えられてもよい。
【００５９】
担体が固体である、経鼻投与に適した医薬組成物には、鼻吸入がとられる（すなわち、鼻の近くに保持された粉末容器から、鼻通路を通した迅速吸入による）方式で投与される、粒度（例えば、２０〜５００マイクロメートルの範囲）を有する粗粉末剤が含まれる。担体が液体である、経鼻スプレー剤として又は点鼻剤としての投与に好適な製剤には、有効成分の水性又は油性の溶液剤が含まれる。
【００６０】
吸入による投与に適した医薬組成物には、様々な種類の定用量加圧式のエアゾール、噴霧吸入器又は吹き付け器の手段により生成され得る細かい微粒子ダスト又はミストが含まれる。
【００６１】
膣内投与に適した医薬組成物は、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト、発泡剤又はスプレー製剤として与えられてもよい。
【００６２】
非経口投与に適した医薬組成物には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び製剤を意図される受容者の血液と等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性の無菌注入溶液；並びに懸濁化剤及び増稠剤を含み得る水性及び非水性の無菌懸濁剤が含まれる。製剤は、例えば密封されたアンプル及びバイアルのような単位用量又は複数回用量の容器で与えられてもよく、使用直前に注入用に、例えば水のような無菌の液体担体の添加のみを必要とする、フリーズドライ（凍結乾燥）の状態で保管され得る。即時調合の注入溶液剤及び懸濁剤は、無菌の散剤、顆粒剤及び錠剤から調製されてもよい。
【００６３】
経口投与用の錠剤及びカプセル剤は、単位用量投薬形態であり得て、結合剤、例えばシロップ、アラビアガム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、若しくはポリビニルピロリドンなど；充填剤、例えばラクトース、糖、メイズデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール若しくはグリシンなど；錠剤化滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール若しくはシリカなど；崩壊剤、例えばジャガイモデンプンなど；又はラウリル硫酸ナトリウムなどの許容される湿潤剤などの従来の賦形剤を含有してもよい。錠剤は、通常の薬務で周知の方法に基づいてコーティングされてもよい。経口液体調製剤は、例えば水性若しくは油性の懸濁剤、溶液剤、乳剤、シロップ剤若しくはエリキシル剤のような形態であってもよく、又は使用前に水若しくは他の好適なビヒクルで再構成するための乾燥製品として与えられてもよい。そのような液体調製剤は、懸濁化剤、例えばソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル剤又は水素化食用脂など、乳化剤、例えばレシチン、モノオレイン酸ソルビタン、又はアラビアガムなど；非水性ビヒクル（食用油脂を含み得る）、例えばアーモンド油、油性エステルなど、グリセリン、プロピレングリコール、又はエチルアルコールなど；防腐剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル若しくはｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル又はソルビン酸など、及び、所望ならば、従来の着香剤又は着色剤などの従来の添加剤を含有してもよい。
【００６４】
本明細書に開示される組成物及び方法に利用される化合物は、医薬組成物として投与され得て、従って、該化合物を組み込んだ医薬組成物は、本明細書に開示される組成物の実施形態であると考えられる。そのような組成物は、薬学的に許容できる任意の物理的形態を取ってもよく；例示的に、それらは経口投与される医薬組成物であり得る。そのような医薬組成物は、有効量の本開示化合物を含有し、その有効量は、投与される化合物の１日用量に関連する。各投薬単位は、所与の化合物の１日用量を含有し得るか、又は各投薬単位は、用量の２分の１又は３分の１などの、１日用量のある画分を含有し得る。各投薬単位に含有されている各化合物の量は、治療のために選択される特定の化合物の固有特性、及び付与される効能などの他の要因に部分的に依存し得る。本明細書に開示される医薬組成物は、周知の手順を利用することにより患者に投与された後、有効成分の迅速放出、持続放出、又は遅延放出を提供するために製剤化され得る。
【００６５】
本明細書に開示される方法に基づく使用のための化合物は、単一化合物又は化合物の組み合わせとして投与されてもよい。例えば、癌活性を治療する化合物は、単一化合物として、又は癌を治療するか若しくは異なる薬理学的活性を有する別の化合物と組み合わせて投与されてもよい。
【００６６】
上述のように、化合物の薬学的に許容できる塩が熟考され、且つ本開示の方法に利用されてもよい。用語「薬学的に許容できる塩」は、本明細書で使用される場合、生命体に対して実質的に無毒である、化合物の塩を指す。典型的な薬学的に許容できる塩には、本明細書に開示される化合物と、薬学的に許容できるミネラル又は有機酸又は有機若しくは無機の塩基との反応により調製される塩が含まれる。そのような塩は、酸付加塩及び塩基付加塩として公知である。本明細書に開示される大部分又は全ての化合物は塩を形成することが可能であり、且つ塩形態の医薬品は、しばしば、遊離の酸又は塩基より容易に結晶化され且つ精製されるために、一般的に使用されることが、当技術分野の読者には理解されよう。
【００６７】
酸付加塩を形成するために一般に利用される酸には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸、及びｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などの有機酸が含まれ得る。好適な薬学的に許容できる塩の例には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、塩酸塩、二塩酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−ｌ，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、アルファ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩などが含まれ得る。
【００６８】
塩基付加塩には、アンモニア又はアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩などの無機塩基に由来する塩が含まれる。そのような塩を調製するのに有用な塩基には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウムなどが含まれる。
【００６９】
本明細書に開示される化合物の任意の塩の一部を形成する特定の対イオンは、該塩が全体として薬理学的に許容できる限り、且つ対イオンが塩に対して全体的に所望されない特質をもたらさない限り、化合物の活性に対して決定的ではない可能性がある。所望されない特質には、所望されない溶解度又は毒性が含まれ得る。
【００７０】
該化合物の薬学的に許容できるエステル及びアミドもまた、本明細書に開示される組成物及び方法に利用することができる。好適なエステルの例には、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ドデシルエステル、ベンジルエステルなどのアルキル、アリール、及びアラルキルのエステルが含まれる。好適なアミドの例には、メチルアミド、ジメチルアミド、メチルエチルアミドなどの非置換アミド、一置換アミド、及び二置換アミドが含まれる。
【００７１】
加えて、本明細書に開示される方法は、化合物又はその塩、エステル及び／又はアミドの溶媒和形態を使用して実行されてもよい。溶媒和物形態には、エタノール溶媒和物、水和物などが含まれ得る。
【００７２】
抗バイオフィルム製品
本明細書に開示される方法に利用される化合物は、表面への適用のために製剤化された、表面上の微生物バイオフィルムを治療するか又は防止するために、表面への適用のために製剤化された、有効量の１つ又は複数の本明細書に開示される化合物を含む抗バイオフィルム組成物として製剤化されてもよい。有効量は、リポペプチド単独又はリポペプチド及び抗菌剤の組み合わせのものであってもよい。表面は、バイオフィルムを防止するか又は治療するのに望ましい任意の表面であってもよく、医療用装置、医療用機器、医療用インプラント、包帯、創傷、又は皮膚が含まれるが、これらに限定されない。抗バイオフィルム製品は、表面への適用に好適な任意の方式で製剤化されてもよい。製剤の例には、限定されることなく、スプレー剤、軟膏剤、ゲル剤、フォーム剤、ペースト、ヒドロゲル、又は親水コロイドが含まれる。
【００７３】
特定の実施形態では、抗バイオフィルム製品は、ドレッシング材及び有効量の１つ又は複数の本明細書に開示される化合物を含み、創傷上の微生物感染又は微生物バイオフィルムを治療するか又は防止するための包帯である。該化合物は、例えば、スプレー剤、軟膏剤、ゲル剤、フォーム剤、ペースト、ヒドロゲル、又は親水コロイドのような上述の製剤のいずれかに製剤化され、ドレッシング材の表面に適用されるか又はドレッシング材中に含浸されてもよい。ドレッシング材は、創傷への適用に好適な任意のドレッシング材であり、限定されることなく、ガーゼなどの天然及び合成の織布、海綿質、アルギン酸塩、コラーゲン、フィルム、ゲルシート、創傷充填剤、ヒドロゲル、若しくは親水コロイド、又はこれらの組み合わせを含んでもよい。
【００７４】
リポペプチドを使用する方法
本発明のリポペプチド及び組成物は、表面上における、微生物の増殖の阻害若しくは死滅、バイオフィルム形成の防止、又は創傷若しくは皮膚上における、バイオフィルム中の微生物の増殖の阻害若しくは死滅、バイオフィルム形成の防止、又は対象における、バイオフィルム中の微生物の増殖の阻害若しくは死滅、又は微生物感染の防止若しくは微生物感染の治療を含む、種々の手法で使用され得る。
【００７５】
治療方法
本明細書に記載される組成物の使用は、対象又は創傷若しくは皮膚上における、微生物感染の防止又は微生物感染の治療のためのものである。本明細書で使用される場合、用語「治療すること」又は「治療する」とは、それぞれ、一時的若しくは持続的に基づくいずれかで、症状を軽減し、結果として生じる症状の原因作用を除き、且つ／又は挙げられた疾患若しくは障害の結果として生じる症状の、出現を防止するか若しくは遅くし、又は進行若しくは重症度を逆行させることを意味する。従って、本明細書に開示される方法は、治療的及び予防的な投与の両方を包含する。
【００７６】
本明細書で使用される場合、用語「有効量」は、対象への単回投与又は複数回投与の時に、診断又は治療下において対象に所望の効果を提供する化合物の量又は用量を指す。本開示の方法は、本明細書に記載される微生物のいずれかの微生物感染症を治療するために、有効量の本開示の化合物（例えば、医薬組成物中に存在する）を投与することを含み得る。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「対象」は、「患者」又は「個体」と互換的であり得て、治療を必要とする、ヒト又は非ヒト動物であってもよい動物を意味する。「治療を必要とする対象」には、本明細書に開示されるリポペプチド又は抗菌性化合物を用いる治療に対して応答性である疾患、障害、又は状態を有する対象が含まれ得る。例えば、「治療を必要とする対象」には、微生物性の疾患又は状態を有する対象が含まれ得る。好適には、微生物性の疾患又は状態は、グラム陰性菌又はグラム陽性菌のいずれかの薬物耐性菌感染症を含む、グラム陰性菌感染症又はグラム陽性菌感染症であり得る。例示的なグラム陽性菌感染症には、限定されることなく、大腸菌、Ａ・バウマンニ、Ｅ・クロアカ、Ｋ・ニューモニエ、又はＰ・エルジノーサの感染症が含まれる。例示的なグラム陰性菌感染症には、限定されることなく、Ｅ．フェシウム及びＳ．アウレウスの感染症が含まれる。例示的な薬物耐性菌感染症には、限定されることなく、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、又はポリミキシン耐性菌の感染症が含まれる。
【００７８】
有効量は、公知の技術の使用により、且つ類似の環境下で得られた結果を観察することにより、当業者としての担当の診断専門医により、容易に決定することができる。投与される化合物の有効量又は用量の決定において：対象の種；対象の大きさ、年齢、及び総体的な健康状態；関与する疾患又は障害の関与程度又は重症度；個々の対象の応答；投与される特定の化合物；投与様式；投与される調製剤の生物学的利用能特徴；選択される投与レジメン；併用薬剤投与の使用；並びに他の関連する環境などの多数の要因が、担当の診断専門医により考慮され得る。
【００７９】
典型的な１日用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ及び／又は約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇなど）の、本治療方法において使用される各化合物を含有し得る。
【００８０】
組成物は、各投薬が約１〜約５００ｍｇのそれぞれの化合物を個々に含有する単位剤形、又は約５〜約３００ｍｇ、約１０〜約１００ｍｇ、及び／又は約２５ｍｇなどの単回単位剤形に製剤化され得る。用語「単位剤形」は、患者に一体成形投薬として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、好適な薬学的な担体、希釈剤、又は賦形剤と関連して、所望の治療効果をもたらすように算出された所定量の活性物質を含有する。
【００８１】
微生物の増殖を阻害するか又は微生物を死滅させる方法
本明細書に記載される組成物の使用は、微生物の増殖を阻害するか又は死滅させるためのものである。本明細書で使用される場合、用語「微生物の増殖を阻害する」とは、本明細書に記載される組成物を用いたインキュベーション後に、微生物細胞の成長を遅くすることを意味する。好適には、インキュベーション後に、微生物細胞の成長を遅くすることは、インキュベーション後に微生物細胞の視認できる成長がないことであり得る。本明細書で使用される場合、用語「微生物を死滅させる」とは、最初の生存微生物細胞又は接種材料の数に対して、生存微生物細胞の数に低減があることを意味する。本明細書で使用される場合、用語「有効量」は、所望の効果を提供する化合物の量又は用量を指す。有効量は、微生物の増殖を阻害するための組成物のＭＩＣ、又は微生物を死滅させるための組成物のＭＢＣであり得る。
【００８２】
本発明の代替の態様では、リポペプチドは、表面上へのバイオフィルムの形成を防止するためか、又はバイオフィルム中の微生物の増殖を阻害するか若しくは死滅させるために使用され得る。この方法は、表面又はそこに配置されたバイオフィルムと、有効量の本明細書に記載される組成物とを接触させることを含む。リポペプチドは、表面への適用に好適な任意の製剤として適用され得る。好適には、表面は創傷又は皮膚である。組成物は、創傷上への直接的適用か、又はリポペプチドをその表面に含むか若しくは内部に含浸させた包帯を介する間接的適用のいずれかにより、創傷又は皮膚に適用され得る。
【実施例】
【００８３】
パエニペプチン類似体の合成及び特徴付け
パエニペプチン類似体を、受託ペプチドサービス（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ  Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を通して合成した。固相ペプチド合成を、リンクアミド樹脂にＦｍｏｃ化学法を使用して実行した。樹脂は、使用前に１時間、ＤＭＦ中で事前膨潤させた。対応するアミノ酸、ＨＯＢＴ及びＤＩＣを添加し、続いて室温で１時間揺動することにより、アミド化反応を達成した。Ｆｍｏｃ保護基を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジン（体積／体積）で１時間処理することにより除去した。脱保護とカップリングの間に、固相ペプチド合成容器をＮ2加圧下で排液し、ＤＭＦで５回洗浄した。少量の樹脂を開裂させ、ＨＰＬＣにより分析して変換を確認した。最後に、該樹脂をＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ2Ｏ（１８：１：１、体積／体積／体積）の混合物で処理し、２時間静かに振盪した。開裂溶液を濾過し、真空中で濃縮した。粗製ペプチドを、分取スケールＣ18−ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して精製した。合成リポペプチドを、ＨＰＬＣにより均質になるまで精製して（純度９５％以上）、高分解質量分析により特徴付けした。質量スペクトル（ＭＳ）を、カリフォルニア大学リバーサイド校で、Ａｇｉｌｅｎｔ  ６２１０  Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（ＴＯＦ）  ＬＣ質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を使用して記録した。各パエニペプチン類似体の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、Ｄ2Ｏ中で、Ａｇｉｌｅｎｔ  ４００−ＭＲ  ＤＤ２分光計（４００ＭＨｚ）でテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部標準として使用して記録した。化学シフトをδ（ｐｐｍ）として、スピン−スピン結合定数をＪ（Ｈｚ）値として報告した。純度、ＨＲＭＳ及び1Ｈ  ＮＭＲデータは、補足資料中にある。
【００８４】
純度決定のためのＨＰＬＣ法
方法Ａ：ＨＰＬＣ分析を、Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８カラム（５マイクロメートル、４．６×２５０ｍｍ）を使用して、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）システムで、１．０ｍｌ／分の流量で実施した。移動相Ａ：１００％水中の０．０６５％のトリフルオロ酢酸（体積／体積）及び移動相Ｂ：１００％アセトニトリル中の０．０５％のトリフルオロ酢酸（体積／体積）を使用して、勾配溶離により分離を達成した。ＵＶモニターを２２０ｎｍの波長で使用して、溶離を検出した。標的リポペプチドの純度を、ピーク面積に基づいて算出した。方法Ｂ：ＨＰＬＣ分析を、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＢｅｔａＳｉｌ  Ｃ１８カラム（３マイクロメートル、４．６×１５０ｍｍ）を使用して、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）システムで、０．８ｍｌ／分の流量で実施した。移動相Ａ：１００％水中の０．１％のトリフルオロ酢酸（体積／体積）及び移動相Ｂ：１００％ＭｅＯＨ中の０．１％のトリフルオロ酢酸（体積／体積）を使用して、勾配溶離により分離を達成した。ＵＶモニターを２２０ｎｍの波長で使用して、溶離を検出した。標的リポペプチドの純度を、ピーク面積に基づいて算出した（表２）。
【００８５】
【表２】
2020529443.tif 000009
【００８６】
パエニペプチン（paenepeptin）類似体の核磁気共鳴及び質量分析のデータ
Ｃ６−Ｐａｔ（１）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３６  −  ７．０１（ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５８  （ｔ、Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３８  −  ４．１０  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、４．００  −  ３．９３  （ｍ、２Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．７８  −３．６７  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．０８  −  ２．８２  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７０  −  ２．４５  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１４  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１１  −  １．６６  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６０  −０．９３  （ｍ、１４Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ）、０．８５  −  ０．５８  （ｍ、２７Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ53Ｈ94Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+に関する計算値：１０８８．７１９７；実測値：１０８８．７１９４
【００８７】
Ｃ７Ｖａｌ２−Ｐａｔ  （２）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３１  −  ７．０８  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５６  （ｔ、Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３７  −  ４．０６  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、４．０２  −  ３．９１  （ｍ、２Ｈ、Ｖａｌ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．７９  −  ３．６７  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．０８  −  ２．８３  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７３  −  ２．４８  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１６  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１２  −  １．６９  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｖａｌ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６５  −  ０．９３  （ｍ、１４Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε）、０．８９  −  ０．５９  （ｍ、２７Ｈ、Ｖａｌ２−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ53Ｈ94Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+に関する計算値：  １０８８．７１９７；実測値：１０８８．７１８６
【００８８】
Ｃ７−Ｐａｔ  （３）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．４０  −７．０４  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５６  （ｔ、Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．４４  −  ４．０６  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、４．００  −  ３．９３  （ｍ、２Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．７８  −  ３．６７  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．１２  −  ２．８１  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７０  −  ２．４８  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１６  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１１  −  １．６４  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６０  −  ０．９５  （ｍ、１６Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ）、０．８８  −  ０．５９  （ｍ、２７Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ54Ｈ96Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+に関する計算値：１１０２．７３５３；実測値：１１０２．７３１６
【００８９】
Ｃ７Ｐｈｅ２−Ｐａｔ  （４）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３８  −  ６．９６  （ｍ、１０Ｈ、Ｐｈｅ２−ＡｒＨ  ＋  Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５８  −  ４．４２  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα  ＋  Ｐｈｅ２−Ｈα）、４．３１  −  ４．１０  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、３．９５  （ｄ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．７９  −  ３．６７  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．０８  −  ２．７１  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ  ＋  Ｐｈｅ２−Ｈβ）、２．６７  −  ２．４７  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１０  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．５  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．０６  −  １．６５  （ｍ、７Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６０  −  ０．９８  （ｍ、１４Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε）、０．８４  −  ０．６０  （ｍ、２１Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ57Ｈ94Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+に関する計算値：１１３６．７１９７；実測値：１１３６．７１９６
【００９０】
Ｃ７ｄＬｅｕ７−Ｐａｔ  （５）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．４０  −  ７．０１  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５６  （ｔ、Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３７  −  ４．０６  （ｍ、７Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、３．９８  （ｄ、Ｊ  ＝  ８．１  Ｈｚ、１Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα）、３．８３  −  ３．６６  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．１１  −  ２．８２  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７２  −  ２．４７  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１６  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１２  −  １．６２  （ｍ、７Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ）、１．６２  −  ０．９４  （ｍ、１９Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ）、０．８５  −  ０．６０  （ｍ、２７Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ55Ｈ98Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+に関する計算値：１１１６．７５１０；実測値：１１１６．７５１０
【００９１】
Ｃ７Ｐｈｅ２ｄＬｅｕ７−Ｐａｔ  （６）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３３  −  ６．９９  （ｍ、１０Ｈ、Ｐｈｅ２−ＡｒＨ  ＋  Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５７  −  ４．４２  （ｍ、２Ｈ、Ｐｈｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３１  −  ４．１０  （ｍ、７Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、３．８３  −  ３．６６  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．０６  −  ２．７１  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ  ＋  Ｐｈｅ２−Ｈβ）、２．６８  −  ２．４４  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１０  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．０６  −  １．６５  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ）、１．６２  −  ０．９８  （ｍ、１７Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε）、０．８４  −  ０．６０  （ｍ、２１Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ58Ｈ96Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+に関する計算値：１１５０．７３５３；実測値：１１５０．７３３５
【００９２】
Ｃ７Ｐｈｅ２ｄＬｅｕ７Ｐｈｅ８−Ｐａｔ  （７）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３９  −  ６．９６  （ｍ、１５Ｈ、Ｐｈｅ２−ＡｒＨ  ＋  Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ  ＋  Ｐｈｅ８−ＡｒＨ）、４．６１  −  ４．４１  （ｍ、３Ｈ、Ｐｈｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα  ＋  Ｐｈｅ８−Ｈα）、４．３１  −  ３．９８  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、３．８３  −  ３．６６  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．２０  −  ２．７３  （ｍ、１０Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ  ＋  Ｐｈｅ２−Ｈβ  ＋  Ｐｈｅ８−Ｈβ）、２．６８  −  ２．４２  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．０９  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．０４  −  １．６３  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ）、１．４５  −  ０．９６  （ｍ、１４Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε）、０．７９  −  ０．５３  （ｍ、１５Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ61Ｈ94Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+に関する計算値：  １１８４．７１９７；実測値：１１８４．７２００
【００９３】
Ｃ８−Ｐａｔ  （８）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３７  −  ６．９８  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５４  （ｔ、Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３８  −  ４．０８  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、４．００  −  ３．９３  （ｍ、２Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．７８  −３．６７  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．１０  −  ２．８０  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７０  −  ２．４５  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１４  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１０  −  １．６４  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．５６  −  ０．９５  （ｍ、１８Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε、Ｈζ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ）、０．８５  −  ０．５８  （ｍ、２７Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ55Ｈ98Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１１１６．７５１０；実測値：１１１６．７５１８
【００９４】
Ｄａｂ９−Ｐａｔ  （９）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３９  −  ７．０２  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５７  （ｔ、Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３７  −  ４．１１  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｄａｂ９−Ｈα）、４．０２  −  ３．９６  （ｍ、２Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．０８  −  ２．８４  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ９−Ｈγ）、２．７３  −  ２．４６  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１６  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１２  −  １．６４  （ｍ、１０Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ９−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６３  −  １．００  （ｍ、１８Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε、Ｈζ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ）、０．８３  −  ０．６２  （ｍ、２７Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ56Ｈ101Ｎ14Ｏ10  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１１２９．７８２６；実測値：１１２９．７８２３
【００９５】
Ｄａｂ２，９−Ｐａｔ  （１０）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３９  −  ７．０７  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５９  （ｔ、Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３９  −  ４．０５  （ｍ、７Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ２−Ｈα＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｄａｂ９−Ｈα）、４．００  （ｄ、Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．０８  −  ２．８３  （ｍ、１０Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ２−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ９−Ｈγ）、２．７２  −  ２．５２  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１７  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１３  −  １．６７  （ｍ、１１Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ２−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ９−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６０  −  ０．９５  （ｍ、１６Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε、Ｈζ）、０．８９  −  ０．５７  （ｍ、２１Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ54Ｈ98Ｎ15Ｏ10  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１１１６．７６２２；実測値：１１１６．７６６０
【００９６】
Ｏｒｎ−Ｐａｔ  （１１）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３１  −  ７．０３  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５６  −  ４．４８  （ｍ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３９  −  ４．０７  （ｍ、６Ｈ、Ｏｒｎ１−Ｈα  ＋  Ｏｒｎ３−Ｈα  ＋  Ｏｒｎ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、４．０３  −  ３．９４  （ｍ、２Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．８３  −  ３．６８  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．１５  −  ２．８０  （ｍ、６Ｈ、Ｏｒｎ１−Ｈδ  ＋  Ｏｒｎ３−Ｈδ  ＋  Ｏｒｎ６−Ｈδ）、２．８０  −  ２．６４  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１５  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．０１  −  ０．９２  （ｍ、３２Ｈ、Ｏｒｎ１−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｏｒｎ３−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｏｒｎ６−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε、Ｈζ）、０．９３  −  ０．５８  （ｍ、２７Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ58Ｈ104Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１１５８．７９７９；実測値：１１５８．７９８９
【００９７】
Ｃ１０−Ｐａｔ  （１２）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３６  −  ７．０４  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５６  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３８  −  ４．１０  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、４．０２  −  ３．９５  （ｍ、２Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．８２  −  ３．６８  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．１０  −  ２．８１  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７３  −  ２．４７  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１６  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１２  −  １．６４  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６２  −  ０．９５  （ｍ、２２Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε、Ｈζ、Ｈη、Ｈθ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ）、０．８７  −  ０．６０  （ｍ、２７Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ57Ｈ102Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１１４４．７８２３；実測値：１１４４．７８４４
【００９８】
Ｃ１０Ｔｈｒ３Ｌｅｕ４−Ｐａｔ  （１３）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ４．４０  −  ３．９５  （ｍ、１０Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｔｈｒ３−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ４−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα  ＋  Ｔｈｒ３−Ｈβ）、３．８０  −  ３．６４  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．０２  −  ２．８４  （ｍ、４Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．１６  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、２Ｈ、Ｌｉｐｉｄ−Ｈα）、２．１１  −  １．７１  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６２  −  ０．９８  （ｍ、２８Ｈ、Ｄ−Ｌｅｕ４−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε、Ｈζ、Ｈη、Ｈθ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ  ＋  Ｔｈｒ３−Ｈγ）、０．８９  −  ０．６７  （ｍ、３３Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ４−Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ  ＋  Ｌｉｐｉｄ−ＣＨ3）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ54Ｈ103Ｎ12Ｏ12  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１１１１．７８１９；実測値：１１１１．７８０３
【００９９】
ベンゾイル−Ｐａｔ  （１４）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．７３  −  ７．３４  （ｍ、５Ｈ、Ｂｅｎｚｏｙｌ−ＡｒＨ）、７．３２  −  ７．０５  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．５８  −  ４．４６  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα  ＋  Ｄａｂ１−Ｈα）、４．３５  −  ４．０６  （ｍ、５Ｈ、Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、４．０２  −  ３．９５  （ｍ、２Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．８０  −  ３．６５  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．１２  −  ２．８０  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７８  −  ２．４９  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．２５  −  １．６３  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６２  −  ０．９３  （ｍ、８Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ）、０．９１  −  ０．５９  （ｍ、２４Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ54Ｈ88Ｎ13Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１０９４．６７２７；実測値：１０９４．６７４６
【０１００】
Ｃｂｚ−Ｐａｔ  （１５）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．４３  −  ７．０２  （ｍ、１０Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ  ＋  Ｃｂｚ−ＡｒＨ）、５．００  （ｓ、２Ｈ、Ｃｂｚ−ＣＨ2）、４．５４  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．９  Ｈｚ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．３９  −  ３．９８  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα）、３．８０  −  ３．６５  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．１１  −  ２．８１  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７６  −  ２．４７  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１５  −  １．６８  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．６１  −  ０．９７  （ｍ、８Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ）、０．８３  −  ０．５６  （ｍ、２４Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ55Ｈ90Ｎ13Ｏ12  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１１２４．６８３３；実測値：１１２４．６８１１
【０１０１】
Ｃｈａ−Ｐａｔ  （１６）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３７  −  ７．０７  （ｍ、５Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ）、４．６０  −  ４．５５  （ｍ、１Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα）、４．５０  −  ４．０７  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈα、Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、４．０３  −  ３．９２  （ｍ、３Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈα  ＋  Ｃｈａ−Ｈα）、３．７７  −  ３．７０  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．２０  −  ２．７８  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ）、２．７３  −  ２．３９  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．２３  −  １．６４  （ｍ、８Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈβ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈβ）、１．５９  −  ０．９４  （ｍ、２１Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｃｈａ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε、Ｈζ）、０．９０  −  ０．５３  （ｍ、２４Ｈ、Ｉｌｅ２−Ｈγ、Ｈδ  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｖａｌ７−Ｈγ  ＋  Ｌｅｕ８−Ｈδ）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ56Ｈ99Ｎ14Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１１４３．７６１９；実測値：１１４３．７６３６
【０１０２】
ＣｈａＰｈｅ２Ｌｅｕ７Ｐｈｅ８−Ｐａｔ  （１７）
1Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ、Ｄ2Ｏ）  δ  ７．３５  −  ６．９５  （ｍ、１５Ｈ、Ｐｈｅ２−ＡｒＨ  ＋  Ｄ−Ｐｈｅ４−ＡｒＨ  ＋  Ｐｈｅ８−ＡｒＨ）、４．６２  −  ４．００  （ｍ、９Ｈ、Ｐｈｅ２−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈα  ＋  Ｐｈｅ８−Ｈα  ＋  Ｄａｂ１−Ｈα  ＋  Ｄａｂ３−Ｈα  ＋  Ｄａｂ６−Ｈα  ＋  Ｌｅｕ５−Ｈα  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈα  ＋  Ｓｅｒ９−Ｈα）、３．８９  −  ３．８１  （ｍ、１Ｈ、Ｃｈａ−Ｈα）、３．７９  −  ３．６５  （ｍ、２Ｈ、Ｓｅｒ９−Ｈβ）、３．１９  −  ２．７２  （ｍ、１０Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈγ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈγ  ＋  Ｐｈｅ２−Ｈβ  ＋  Ｐｈｅ８−Ｈβ）、２．６５  −  ２．４０  （ｍ、２Ｈ、Ｄ−Ｐｈｅ４−Ｈβ）、２．１０  −  １．６１  （ｍ、６Ｈ、Ｄａｂ１−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ３−Ｈβ  ＋  Ｄａｂ６−Ｈβ）、１．６０  −  ０．７３  （ｍ、１９Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈβ、Ｈγ  ＋  Ｃｈａ−Ｈβ、Ｈγ、Ｈδ、Ｈε、Ｈζ）、０．７０  −  ０．５５  （ｍ、１２Ｈ、Ｌｅｕ５−Ｈδ  ＋  Ｄ−Ｌｅｕ７−Ｈδ）  ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ−ＥＳＩ  （ｍ／ｚ）  Ｃ63Ｈ97Ｎ14Ｏ11  （Ｍ＋Ｈ）+  に関する計算値：１２２５．７４６２；実測値：１２２５．７４７１
【０１０３】
抗菌薬感受性試験
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）
パエニペプチン類似体の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を、微量液体希釈法（Ｗｉｒｋｅｒ、Ｍ．Ａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  ｔｈａｔ  Ｇｒｏｗ  Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ：承認規格Ｍ０７−Ａ８；Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｗａｙｎｅ、ＰＡ、２００９）を使用して決定した。７つの参照菌株（アシネトバクター・バウマンニ  ＡＴＣＣ１９６０６、大腸菌（Escherichia coli）ＡＴＣＣ２５９２２、クレブシエラ・ニューモニエ  ＡＴＣＣ１３８８３、シュードモナス・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）ＡＴＣＣ１９４３４、スタフィロコッカス・アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３及びメチシリン耐性のＳ．アウレウス  ＡＴＣＣ４３３００）に、ＭＩＣ試験を施した。
【０１０４】
パエニペプチン類似体をトリプシンソイブロス（ＴＳＢ；Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）中で２倍希釈し、清澄なＵＶ−無菌化９６ウェルのマイクロタイタープレート（ＮＢＳ、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）中で、およそ１．５×１０5コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬを含有する、ＴＳＢ中の同体積の細菌懸濁剤と混合した。合計体積は１００μＬであり、最終パエニペプチン濃度は０．５〜３２μｇ／ｍＬの範囲であった。マイクロタイタープレートを、３７℃で１８〜２０時間インキュベートした。各菌株に関するＭＩＣは、インキュベーション後に、細菌細胞の視認できる成長がもたらされない、各パエニペプチン類似体の最低濃度と定義された。
【０１０５】
これらの１７のパエニペプチン類似体の抗細菌活性を、４つのグラム陰性及び３つのグラム陽性の菌株に対して、各菌株に関する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の決定に基づいて決定した。試験細菌種に対する全てのパエニペプチン類似体のＭＩＣ値を表３に列記する。抗細菌活性は、類似体１、３、８及び１２において脂肪酸鎖の長さがＣ６からＣ１０まで増加すると共に、増加した。脂質鎖がＣ８より短い類似体１及び３は、類似体８より有意に活性が低かった。逆に、Ｃ１０脂質尾部を含有する類似体１２は、抗細菌活性に注目すべき増加を示した。脂質鎖をベンゾイル又はベンジルオキシカルボニル基で置き換えると（類似体１４及び１５）、抗菌活性は低下したが、類似体１６中の３−シクロヘキシルアラニル置換基は、大腸菌及びＰ・エルジノーサに対するその活性を保持した（表３）。
【０１０６】
【表３】
2020529443.tif 000010
【０１０７】
化合物８は、正電荷を持つ３個の２，４−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）残基から成る。３個の全てのＤａｂ残基を、側鎖に追加の炭素を保有するオルニチン（Ｏｒｎ）により置き換えると（類似体１１）、予期に反して抗細菌活性が消失した。正電荷を持つ残基の数の変化もまた抗菌活性に相当な効果を与えた。例えば、９位においてＣ末端ＳｅｒをＤａｂに変更すると（類似体９）、Ｐ・エルジノーサを除く全ての細菌種に関するＭＩＣに増加がもたらされた。同様に、１個の追加のＤａｂを２位に加えると（類似体１０）、又はＤａｂ電荷を３位で低減させると（類似体１３）、ほとんど全ての抗細菌活性の消失がもたらされた。対照的に、疎水性の増加に関連する変化は、抗細菌活性の増加に関連した。例えば、類似体３及び４は、より疎水性の残基（Ｉｌｅ又はＰｈｅ）を２位に有し、同じ位置にＶａｌ残基を有する類似体２より強力であった。７位においてＶａｌをＬｅｕにより置き換えても（類似体５）、また抗菌活性における増加を示した。類似体６、７、及び１７における疎水性の更なる増加は、全ての試験細菌株に対する抗細菌活性を有意に向上させた（表３）。
【０１０８】
抗生物質耐性菌株に関する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）
上記の参照菌株に加えて、９つのカルバペネム耐性単離株及び６つのポリミキシン耐性菌株（表４及び表５）の感受性を、ＦＤＡ−ＣＤＣ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｂａｎｋからの臨床単離株を含み、選択されたパエニペプチン類似体１７に関して試験した。各実験において１回の反復を伴う、少なくとも３回の独立した実験を行った。
【０１０９】
パエニペプチン類似体１７は、合理的設計された１７の類似体の中で最も活性のある化合物である。そのため、薬物耐性のグラム陰性菌に対するそのｉｎ  ｖｉｔｒｏの有効性に関して、この類似体を更に評価した。パエニペプチン類似体１７は、Ａ・バウマンニ、エンテロバクター・クロアカ（Enterobacter cloacae）、大腸菌、Ｋ・ニューモニエ、及びＰ・エルジノーサを含み、ＦＤＡ−ＣＤＣ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｂａｎｋからの９つのカルバペネム耐性臨床単離株に対して０．５〜２μｇ／ｍｌのＭＩＣを伴う強力な活性を示した（表４）。加えて、類似体１７は、ポリミキシン耐性遺伝子ｍｃｒ−１を保有する菌株を含む、ポリミキシン耐性の大腸菌及びＫ・ニューモニエ菌株に対して活性であった（表５）。
【０１１０】
【表４】
2020529443.tif 000011
a様々な種類のβ−ラクタマーゼの産生
【０１１１】
【表５】
2020529443.tif 000012
a細菌株は、ＦＤＡ−ＣＤＣ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｂａｎｋから得られ、大腸菌ＡＲ  ０４９４は、プラスミドにコードされているポリミキシン耐性遺伝子、ｍｃｒ−１を保有する；b菌株は、大腸菌  ＡＴＣＣ２５９２２の派生体である；c菌株は、Ｋ・ニューモニエ  ＡＴＣＣ１３８８３の派生体である。
【０１１２】
最小殺菌濃度（ＭＢＣ）
パエニペプチン類似体の最小殺菌濃度（ＭＢＣ）を、ＭＩＣ試験の終点において、ＭＩＣ試験に使用された９６ウェルマイクロタイタープレートから、５０μＬの細胞懸濁液のアリコートを継代培養することにより決定した。視認できる成長がない、各抗菌薬濃度からの残存細胞を、トリプシンソイ寒天（ＴＳＡ）にプレーティングすることにより数え上げた。ＭＢＣは、最初の接種材料に対して、生存細菌細胞の数において少なくとも９９．９％の低減に導く、抗菌剤の最低濃度と定義された。各実験において１回の反復を伴う、３回の独立した実験を行った。
【０１１３】
強力で且つ広範な抗細菌活性を示す６つのパエニペプチン類似体（５、６、７、８、１２、及び１７）を選択し、同じ４つのグラム陰性及び３つのグラム陽性の菌株に対するそれらの最小殺菌活性（ＭＢＣ）を決定した。類似体９及び１６は、シュードモナスに対して狭域活性を示し；従って、これらの類似体のＭＢＣは、Ｐ・エルジノーサに対してのみ決定された。選択されたパエニペプチン類似体のＭＢＣ値を表６に列記する。リード化合物（類似体８）と比較して、３つの新規なパエニペプチン類似体（７、１２、及び１７）は、大部分の試験細菌株に対して、それらの殺菌活性において２〜８倍の増加を示した（表６）。
【０１１４】
【表６】
2020529443.tif 000013
【０１１５】
時間死滅アッセイ
類似体１７の時間−死滅動態を、３つの濃度（８、１６及び３２μｇ／ｍｌ）において、参照菌株Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３及びＳ．アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３を使用して決定した。抗菌薬処置後の残存細胞を、０、２、４、６及び２４時間において、ＴＳＡにプレーティングすることにより数え上げた。各実験において１回の反復を伴う、３回の独立した実験を行った
時間−死滅アッセイを、Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３及びＳ．アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３の両方に対して最も効果的な類似体である、類似体１７を用いて実施した。これは、３つの異なる濃度（８、１６及び３２μｇ／ｍｌ）において行われた。類似体１７は、両方の病原菌に対して濃度依存性の殺菌効果を示した。例えば、生存Ｐ・エルジノーサ細胞の数は、それぞれ３２μｇ／ｍｌ及び１６μｇ／ｍｌにおける類似体１７に曝露された場合、２時間内に５．１ ｌｏｇ及び３．７ ｌｏｇ低減し、いずれの濃度においても２４時間の曝露後に、生存細胞は検出されなかった。８μｇ／ｍｌにおける類似体１７は、２時間内に生存Ｐ・エルジノーサ細胞の２．２ ｌｏｇの低減をもたらしたが、有意な細菌再成長が２４時間で観察された（図１Ａ）。類似体１７が、生存Ｓ．アウレウス細胞の数における同様の低減を達成するには、より長い時間がかかった。詳細には、３２μｇ／ｍｌ及び１６μｇ／ｍｌにおける類似体１７への曝露により、生存Ｓ．アウレウス細胞の数が、それぞれ５．４ ｌｏｇ及び３．１ ｌｏｇ低減したが、４時間後のみであった。Ｓ．アウレウス細胞が類似体１７に８μｇ／ｍｌにおいて曝露された場合もまた、Ｓ．アウレウスの再成長が観察された（図１Ｂ）。
【０１１６】
抗細菌活性及び安定性に対するヒト血清の影響
選択されたパエニペプチン類似体の抗細菌活性に対するヒト血清の影響を、微生物培地をヒト血清（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、Ｓｏｌｏｎ、ＯＨ）により置き換えたことを除いて、上述のＭＩＣ決定に使用されたものと同様の手順を使用して決定した。パエニペプチン類似体を、１００％のヒト血清中で２倍希釈し、およそ１．５×１０5ＣＦＵ／ｍＬの大腸菌  ＡＴＣＣ２５９２２又はＳ．アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３を含有する同体積の９０％血清と混合した。最終のパエニペプチン濃度は、９５％血清中で０．５〜６４μｇ／ｍＬの範囲であった。次に、血清存在下でのＭＩＣを上述のように試験した。
【０１１７】
ヒト血清中のペプチドの安定性を決定するために、パエニペプチン類似体を、１００％のヒト血清中に６４μｇ／ｍｌの最終濃度まで添加した。この混合物を３７℃でインキュベートし、試料を０、６、１２及び２４時間に取り出した。処理したパエニペプチン類似体を、１００％のヒト血清中で２倍希釈し、ＭＩＣ決定のためにＴＳＢ中の同体積の大腸菌  ＡＴＣＣ２５９２２細胞（およそ１．５×１０5ＣＦＵ／ｍＬ）と混合した。ヒト血清中でのインキュベーション後の残留抗細菌活性を、非処置対照と比較した。
【０１１８】
ヒト血清は、Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３及びＫ・ニューモニエ  ＡＴＣＣ１３８８３の成長を阻害し（データは示さず）；そのため、９５％血清中で成長した他の参照菌株（大腸菌  ＡＴＣＣ２５９２２及びＳ．アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３）を使用して、ヒト血清の存在下でのパエニペプチン類似体の抗細菌有効性を試験した。ヒト血清中で、類似体９及び１６は、大腸菌に対して強力な活性を示し、一方、類似体９は、Ｓ．アウレウスに対して活性にわずかな増加を示した（表７）。しかしながら、他の類似体は、ヒト血清の存在下で抗菌活性の低減を示した。例えば、類似体１７は、大腸菌及びＳ．アウレウスの両方に対するＭＩＣに８〜１６倍の増加を示し、これはその活性の８８〜９４％の低減に相当する。ヒト血清タンパク質は、ある特定のリポペプチド抗生物質と結合することができ、その抗細菌活性を制限すると一般に考えられている。例えば、リポペプチドＭＸ−２４０１のＳ．アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３に対するＭＩＣは、微生物培地における２μｇ／ｍｌから、９５％マウス血清における１２８μｇ／ｍｌまで増加し；これは９８．９％のタンパク質結合に相当する。しかしながら、タンパク質結合の程度を使用して、抗生物質の最終的な治療性能を正確に予測することはできない。例えば、ダプトマイシンは、血漿タンパク質と高度に結合する（９４％）リポペプチドであるが、メチシリン耐性のＳ．アウレウスにより引き起こされる感染症を治療するために近年承認された効果的な薬物である。
【０１１９】
９５％のヒト血清の存在下で試験した、８つのパエニペプチン類似体の中で、４つの類似体（８、９、１６及び１７）は、大腸菌に対して相対的に高い活性を示し（表７）、従ってこれらの４つの類似体を、ヒト血清中で３７℃におけるそれらの安定性に関して更に試験した。類似体１６は、血清中での６時間のインキュベーション後、そのＭＩＣに１〜２μｇ／ｍｌから３２μｇ／ｍｌ超まで増加を示し、これは、類似体１６がヒト血清中で３７℃において安定ではない可能性があることを示している（表８）。詳細には、類似体１６は、ヒト血清中で大腸菌に対して相対的に低いＭＩＣ（２μｇ／ｍｌ）を示したが（表７）、血清中で３７℃におけるインキュベーション時間を延長した後、その有効性を消失した。これは、類似体１６は、細菌細胞を急速に死滅させ得るが、血清成分により経時的に不活性化されることを示唆している。重要なことに、他の３つの試験類似体（８、９、及び１７）は、ヒト血清中で３７℃において２４時間までインキュベートした後、抗細菌活性にほとんど減少を示さなかった（表８）。類似体８は、Ｎ末端修飾において類似体１６とは異なる。これに基づいて、類似体８中のＮ末端脂質鎖が、ヒト血清中でのその高安定性に関連し得る。しかしながら、類似体１６中の疎水性基（３−シクロヘキシルアラニル）は、血清中で不活性化されることから保護することはなかった。類似体１６及び１７は、同じＮ末端修飾を共有しているが、２、７、及び８位における３つのアミノ酸がより疎水性の残基で置換された場合、類似体１７はより安定となった。
【０１２０】
【表７】
2020529443.tif 000014
【０１２１】
【表８】
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a大腸菌  ＡＴＣＣ２５９２２に対するＭＩＣを決定した。
【０１２２】
溶血活性
溶血活性を、既に記載した９６ウェルプレート中で、フィブリン除去したウサギ血液を使用して評価した。赤血球（ＲＢＣ）を溶解することが可能な、非イオン性界面活性剤Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を、正の対照として０．１％で使用した。簡潔に言えば、ウサギ血液（Ｈａｒｄｙ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｓａｎｔａ  Ｍａｒｉａ、ＣＡ）を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ；ｐＨ７．２）で１：１９比（体積／体積）に希釈し、ＲＢＣを洗浄して１，０００×ｇにおいて４℃で５分間、遠心分離に４回かけることにより遊離ヘモグロビンを除去した。１５０μＬのパエニペプチン類似体の２倍希釈物を１６〜１２８μｇ／ｍＬの最終濃度で用いて、洗浄ＲＢＣのアリコート（５０μＬ）を３７℃で３０分間、マイクロタイタープレート（ＮＢＳ、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．）中でインキュベートした。インキュベーション後、処置したＲＢＣを、繰り返しピペッティングすることにより静かに混合した。細胞懸濁液のアリコート（２０μＬ）を、新しい９６ウェルプレート中で２００μＬのＰＢＳと混合し、２，２０４×ｇで１０分間遠心分離にかけた。Ｃｅｌｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｃｙｔａｔｉｏｎ  ３、ＢｉｏＴｅｋ；  Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）を使用して、４１５ｎｍにおける吸光度を測定するために、上清を新しい９６ウェルプレートに移した。各パエニペプチン類似体に曝露した後に観察された溶血百分率をＸ−１００に対して算出した。各実験において１回の反復を伴う、少なくとも３回の独立した実験を行った。
【０１２３】
Ｎ末端脂質鎖の改変は、パエニペプチン溶血活性に対して実質的な影響をもたらした。類似体１、３、８、及び１２の中で、ウサギ赤血球に対する溶血活性は、脂質鎖長がＣ６からＣ１０まで増加するにつれて増加した。詳細には、Ｃ６及びＣ７脂質鎖をそれぞれ伴う類似体１及び３は、１２８μｇ／ｍＬにおいて溶血をほとんど示さず、一方、同じ濃度において、Ｃ１０脂質鎖を保有する類似体１２は、強い溶血活性を示した（表９）。重要なことに、これらの同じ傾向は、相対的抗細菌活性に反映され、これらもまた鎖長の増加と共に増加した。対照的に、類似体１４、１５、及び１６において、脂肪酸鎖を疎水性基で置き換えると、その溶血活性は大きく低減した。これらの結果は、脂肪酸鎖を芳香族基で置き換えることにより、リポペプチドポリミキシンの毒性が低減するというこれまでの報告と一致している。しかしながら、上述のように、類似体１４及び１５において脂肪酸鎖を疎水性基で置き換えることによって、また抗細菌活性の低減をもたらした。
【０１２４】
類似体９及び１６は、Ｐ・エルジノーサに対するそれらの活性を保持し、１２８μｇ／ｍＬにおいて非溶血性であり（表９）、従ってこれらの２つのパエニペプチン派生体は、狭域抗菌スペクトル性の抗シュードモナス剤として更に開発され得る。Ｃ７パエニペプチン派生体（類似体２〜７）の中で、より疎水性のアミノ酸がペプチド鎖に導入された場合、溶血活性は増加した。１つの例外は類似体６であり、類似体５より疎水性であるが溶血性はかなり低かった。化合物８と比較して、類似体１７は、Ａ・バウマンニ及びＫ・ニューモニエに対する抗細菌活性において少なくとも４倍の改善を示したが（表３）、溶血活性における３７％の増加という損失を伴った（表９）。
【０１２５】
【表９】
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a溶血百分率を、正の対照Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００に対して算出した。
【０１２６】
細胞傷害性
ヒト腎臓細胞株（ＨＥＫ  ２９３）に対するパエニペプチン類似体の細胞傷害性を、ＭＴＴアッセイ（Huang E、Yousef AE.2014 Paenibacterin,a novel broad-spectrum lipopeptide,neutralises endotoxins and promotes survival in a murine model of Pseudomonas aeruginosa-induced sepsis.Int J Antimicrob Agents 44:74〜77）を使用して決定した。細胞生存率を、３０〜１０５μｇ／ｍｌの間の濃度におけるリポペプチド添加の２４時間後に測定した。ヒト胚腎臓細胞（ＨＥＫ  ２９３）の生存率は、パエニペプチン濃度の増加と共に低下した。１０５μｇ／ｍｌにおけるパエニペプチン類似体１及び１５の存在下での、ＨＥＫ２９３細胞の生存率は、それぞれ、６１％及び６７％であった（表１０）。パエニペプチン類似体１及び１５の相対的に低い細胞傷害性は、赤血球に対するそれらの低溶血活性と相関していた。
【０１２７】
【表１０】
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【０１２８】
抗バイオフィルム活性
確立されたＳ．アウレウス又はＰ・エルジノーサのカテーテル−関連バイオフィルムに対するパエニペプチン類似体１７の効果を、既に記載したようにわずかな修正を伴ってｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定した18。簡潔に言えば、フッ素化エチレンプロピレンカテーテル（１４ゲージ；Ｉｎｔｒｏｃａｎ  安全カテーテル；Ｂ．Ｂｒａｕｎ、Ｂｅｔｈｌｅｈｅｍ、ＰＡ）の１−ｃｍのセグメント（ｎ＝６）を、２４ウェルのマイクロタイタープレート（超低付着表面；Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．）のウェル中の、２ｍＬのバイオフィルム培地（０．５％のグルコース及び３．０％のＮａＣｌを補充したＴＳＢ）に入れる前に、２０％のヒト血漿で終夜事前コーティングした。各ウェルに、メチシリン耐性のＳ．アウレウス菌株ＬＡＣ又はＰ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３を、０．０５のＯＤ600nmまで接種した。３７℃における２４時間のインキュベーション後、確立されたバイオフィルムを伴うカテーテルを、Ｓ．アウレウスＬＡＣ菌株に関するそのＭＩＣの５、１０、及び２０倍、又はＰ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３に関するそのＭＩＣの１０、２０、４０、及び８０倍に相当する濃度におけるパエニペプチン類似体１７を伴うか又は伴わず、新しく作製されたバイオフィルム培地に移した。ＬＡＣ及びＰ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３に対する類似体１７のＭＩＣ値は、それぞれ、８μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍｌであった。各菌株でコロニー化され且つ各濃度に曝露された６つのカテーテルを、１日間隔で取り出し、同じ濃度の類似体１７を含有する新鮮培地に移した。７２時間の曝露後、カテーテルをＰＢＳで洗い、続いて超音波処理する（Ｓ．アウレウスに関して）か、又は強くボルテックスして（Ｐ・エルジノーサに関して）、定量的に粘着性細菌を回収した。生存しているＳ．アウレウス又はＰ・エルジノーサ細胞を、連続希釈物をＴＳＡにプレーティングすることにより数え上げた。セフタロリン及びダプトマイシンを、各抗生物質に関するＭＩＣの２０倍の濃度で、Ｓ．アウレウス菌株ＬＡＣを用いて形成されたバイオフィルムの状況における正の対照として使用した。ポリミキシンＢを、そのＭＩＣの２０倍の濃度で（１０μｇ／ｍｌ）、Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３により形成されたバイオフィルムの状況における正の対照として使用した。
【０１２９】
バイオフィルム中の細菌細胞は、抗生物質処置に対して浮遊性細胞より耐性であり、従って、確立されたバイオフィルムの状況において最大有効性を有するこれらの抗生物質を同定することが重要となる。これまでの研究により、ダプトマイシン及びセフタロリンは、この状況において多くの他の抗生物質より活性であることが実証された。この理由から、確立されたバイオフィルムの状況における類似体１７の評価は、これらの２つの抗生物質に対する比較に基づいた。図２Ａに示されるように、類似体１７の活性は、メチシリン耐性のＳ．アウレウス菌株ＬＡＣにより形成された、確立されたカテーテル−関連バイオフィルムの状況においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験した場合、これらの抗生物質の両方に匹敵するものであった。詳細には、４０μｇ／ｍＬ（ＭＩＣの５倍）又は１６０μｇ／ｍＬ（ＭＩＣの２０倍）における類似体１７を用いた処置により、生存バイオフィルム−関連Ｓ．アウレウス細胞の、それぞれ、３ ｌｏｇ及び５ ｌｏｇの低減がもたらされた。その上、そのＭＩＣの２０倍に等しい濃度において、類似体１７への曝露により、６つのカテーテルの生存細菌の３つが完全に排除され（５０％）、一方、そのＭＩＣの同じ倍数におけるダプトマイシンへの曝露により、６つのカテーテルの１つのみが排除され（１７％）、等しい濃度セフタロリンによっては１つも排除されなかった。Ｓ．アウレウス菌株ＬＡＣの浮遊性細胞を使用して検討評価した場合、最低ＭＩＣを有した類似体１２は、確立されたカテーテル−関連バイオフィルムの状況において、活性を持たなかった（データは示さず）。類似体１７もまた、Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３により形成されたバイオフィルムに対して、同じｉｎ  ｖｉｔｒｏでのカテーテル−関連バイオフィルムモデルを使用して試験した。ＭＩＣの４０倍（４０μｇ／ｍｌ）における類似体１７への曝露後、確立されたバイオフィルム中の生存Ｐ・エルジノーサ細胞の数において２．６ ｌｏｇの低減が観察された（図２Ｂ）。
【０１３０】
リファンピシン及びクラリスロマイシンに対するグラム陰性病原菌の増強
アシネトバクター及びクレブシエラを含むグラム陰性菌は、疎水性抗生物質リファンピシンに対して本質的に耐性である。Ａ・バウマンニ  ＡＴＣＣ１９６０６及びＫ・ニューモニエＡＴＣＣ１３８８３に対するリファンピシンのＭＩＣは、１６μｇ／ｍＬであった（表１１）。単独で使用した場合に、アシネトバクター及びクレブシエラに対する直接的抗細菌活性を欠いている１０のパエニペプチン類似体を、リファンピシンとの可能性のある相乗効果に関して調査した。パエニペプチン類似体１３は、リファンピシンとの相乗作用を示さなかった唯一の試験化合物であった。これは、ペプチドの３位において、正電荷を持つＤａｂをＴｈｒと置き換えたことによると考えられる。この置換により、ペプチドの全般的電荷が低減し、従って、グラム陰性菌中のＬＰＳとの相互作用を減少させ得る。従って、類似体１３は、リファンピシンのグラム陰性病原菌内への侵入を促進することができない可能性がある。９つの類似体は、リファンピシンと様々な程度の相乗効果を示した。４μｇ／ｍＬで試験した場合、６つのパエニペプチン類似体（１、３、９、１４、１５及び１６）は、アシネトバクター及びクレブシエラの両方に対するリファンピシンのＭＩＣを、１６μｇ／ｍＬから、０．０００９８μｇ／ｍＬと０．００７８μｇ／ｍＬの間未満の範囲まで減少させ、これは、リファンピシンの抗細菌活性における２，０４８〜８，１９２倍の増加に相当する（表１１）。
【０１３１】
【表１１】
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【０１３２】
リファンピシンと有望な相乗作用を示した２つのパエニペプチン類似体（９及び１６）を更なる試験用に選択し、異なる作用機序を有する４つの追加の抗生物質と組み合わせた。詳細には、クラリスロマイシン及びエリスロマイシンはタンパク質合成を遮断し、一方、バンコマイシン及びアンピシリンは細胞壁生合成を阻害する。これらの４つの抗生物質は、単独で試験した場合、グラム陰性病原菌に対して効果的ではなかった（ＭＩＣ≧３２μｇ／ｍｌ）。４μｇ／ｍｌにおける類似体９及び１６と組み合わせた場合、クラリスロマイシンは、Ａ・バウマンニ  ＡＴＣＣ１９６０６及びＫ・ニューモニエ  ＡＴＣＣ１３８８３に対するその活性に２，０４８〜８，１９２倍の増加を示した（表１２）。４μｇ／ｍｌにおける類似体９及び１６の存在下で、エリスロマイシンは、これらの２つの病原菌に対して中等度の増加を示した（６４〜５１２倍）。興味深いことに、類似体９及び１６は、バンコマイシンの活性をＡ・バウマンニに対しては増強したが、Ｋ・ニューモニエに対しては増強しなかった。類似体９又は１６とアンピシリンとの間に相乗効果は観察されなかった（表１２）。
【０１３３】
【表１２】
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【０１３４】
パエニペプチン類似体と、リポ多糖及びリポテイコ酸との相互作用
細胞表面上でのパエニペプチンの最初の結合標的を特定するために、パエニペプチン類似体１７の殺菌活性に対する影響に関して、精製ＬＰＳ又はＬＴＡを調査した。ＬＰＳを用いた研究用に、Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３を、およそ１０6ＣＦＵ／ｍＬ含有するようにＴＳＢで希釈した。大腸菌Ｏ１１１：Ｂ４（Ｓｉｇｍａ）から精製したＬＰＳを、細胞懸濁液に、１０、２５、５０、又は１００μｇ／ｍＬの最終濃度で添加した。これに続いて、パエニペプチン類似体１７を１６μｇ／ｍＬの最終濃度まで添加した。この混合物を、３７℃において２００ｒｐｍで撹拌しながら、６０分間インキュベートした。残存細胞を、ＴＳＡにプレーティングすることにより定量化した。各実験において１回の反復を伴う、３回の独立した実験を行った。ＬＴＡを用いた実験用に、Ｓ．アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３を約１０6ＣＦＵ／ｍＬまで希釈し、Ｓ．アウレウスから単離されたＬＴＡ（Ｓｉｇｍａ）と、１０、２５、５０、又は１００μｇ／ｍＬの最終濃度で混合した。類似体１７を３２μｇ／ｍＬの最終濃度で添加し、３７℃において２００ｒｐｍで撹拌しながら６０分間インキュベートした後、残存Ｓ．アウレウス細胞を、ＴＳＡにプレーティングすることにより数え上げた。各実験において１回の反復を伴う、４回の独立した実験を行った。
【０１３５】
精製ＬＰＳは、パエニペプチン類似体１７のＰ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３に対する抗菌活性に対して有意な影響を及ぼした。高濃度（１００μｇ／ｍｌ）における精製ＬＰＳの添加により、１７の殺菌活性は無力化された（図３Ａ）。同様の傾向が、類似体７、８、９、及び１２に関して観察された（データは示さず）。これらの結果は、パエニペプチンが、グラム陰性菌の外膜からのＬＰＳに関して高親和性を有することを示唆している。従って、グラム陰性細胞表面上のＬＰＳが、パエニペプチンの最初の結合標的であると考えられる。グラム陽性菌では、負電荷を持つリポテイコ酸（ＬＴＡ）が細胞表面上の重要な成分である。図３Ｂに示されるように、１００μｇ／ｍＬにおいて、精製ＬＴＡは類似体１７のＳ．アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３に対する抗細菌活性を有意に低減させた。５０μｇ／ｍｌにおけるＬＴＡは、いくらかの阻害を示したが、その効果は、ＬＴＡを伴わない対照と統計的に異なるものではなかった。これらの結果は、グラム陽性菌中のＬＴＡもまた、おそらく静電気的相互作用を通して、パエニペプチンに関するドッキング分子として役立ち得ることを示唆している。これは、負電荷を持つＬＴＡが、ナイシン及びブレビバシリン（brevibacillin）を含む、いくつかのカチオン性ペプチドの最初の標的と報告された観察と一致している。
【０１３６】
細胞膜完全性アッセイ
パエニペプチン処置後の膜電位の変動を、蛍光プローブ３，３’−ジプロピルチアジカルボシアニンヨウ化物［ＤｉＳＣ3（５）；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ］を使用して決定した。ＤｉＳＣ3（５）は、分極細胞膜中に蓄積し、自己消光する膜電位感受性色素である。各アッセイに関して、Ｐ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３又はＳ．アウレウス  ＡＴＣＣ２９２１３の終夜培養物をＴＳＢ中で１／１００に希釈し、３７℃において２００ｒｐｍで撹拌しながら約５時間成長させた。インキュベーション後、細菌細胞を３，６６０×ｇにおいて４℃で１０分間遠心分離にかけることにより収集し、５ｍＭのグルコースを補充した５ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝剤（ｐＨ７．２、Ｓｉｇｍａ）（緩衝剤Ａ）を使用して２回洗浄した。Ｓ．アウレウスの細胞を緩衝剤Ａに再懸濁させ、一方、Ｐ・エルジノーサ細胞を緩衝剤Ｂ（０．２ｍＭのＥＤＴＡを補充した緩衝剤Ａ）に再懸濁させ、これはグラム陰性菌によるＤｉＳＣ3（５）の取り込みを促進することで公知である。ＤｉＳＣ3（５）を、細胞懸濁液に０．５μＭの最終濃度で添加し、続いて１５分間室温でインキュベートした。インキュベーション後、ＫＣｌを１００ｍＭの最終濃度で添加した。細胞懸濁液のアリコート（９０μＬ）を組み合わせたＤｉＳＣ3（５）と共に、黒色ＮＢＳマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．）のウェルに添加した。これに続いて、１０μＬのパエニペプチン類似体１７を８〜６４μｇ／ｍＬの最終濃度で添加した。膜脱分極及びＤｉＳＣ3（５）プローブの細菌細胞からの放出による蛍光シグナルの増加を、Ｃｅｌｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｃｙｔａｔｉｏｎ  ３、ＢｉｏＴｅｋ）を使用して６２２ｎｍの励起及び６７０ｎｍの発光において記録した。各実験において１回の反復を伴う、３回の独立した実験を行った。
【０１３７】
カリウムイオン放出アッセイ
パエニペプチン処置した細菌細胞から漏出するカリウムイオンを、健康な細菌細胞に対して不透過性である、Ｋ+−感受性プローブ（ＰＢＦＩ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して測定した。Ｓ．アウレウスＡＴＣＣ２９２１３及びＰ・エルジノーサ  ＡＴＣＣ２７８５３の細胞懸濁液を、緩衝剤Ａ中で、細胞膜完全性アッセイで前述した手順と同じ手順を使用して調製した。細菌細胞のアリコート（９０μＬ）を、黒色ＮＢＳマイクロプレートのウェルに分注した。ＰＢＦＩ  Ｋ+−感受性プローブを、細胞懸濁液に２μＭの最終濃度で添加した。これに続いて、１０μＬのパエニペプチン類似体１７を８〜６４μｇ／ｍＬの最終濃度で添加した。緩衝剤中のカリウムイオン濃度に対応する蛍光の変化を、Ｃｅｌｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｃｙｔａｔｉｏｎ  ３、ＢｉｏＴｅｋ）を使用して、３４６ｎｍの励起波長及び５０５ｎｍの発光波長で記録した。各実験において１回の反復を伴う、３回の独立した実験を行った。
【０１３８】
電位勾配がプロトン駆動力の主な要因である場合、細菌細胞は、細胞膜全体にわたりプロトン勾配を維持する。図４Ａ〜４Ｂに示されるように、１６μｇ／ｍＬにおけるパエニペプチン類似体１７は、健康な分極細胞膜中にのみ蓄積するＤｉＳＣ3（５）プローブの放出による蛍光の増加によって立証されるように、膜電位を脱分極させた。その上、３２〜６４μｇ／ｍＬにおける類似体１７は、処置したＰ・エルジノーサ及びＳ．アウレウス細胞から分子内カリウムイオンを著しく放出した（図５Ａ−５Ｂ）。従って、パエニペプチンの殺菌活性は、細胞膜の破壊及び損傷に起因すると考えられ得る。
【０１３９】
統計分析。
細菌不活性化アッセイに関して、各実験の最後の残存細胞数を分析した。蛍光測定に関して、類似体１７を添加する前及び後の蛍光強度の変化を分析した。全てのデータに、分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続いて、ＳＰＳＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（バージョン２４；ＳＰＳＳ、Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、ＵＳＡ）を使用してテューキーの真の有意差（Tukey’s honest significant difference）（ＨＳＤ）検定を施した。
【０１４０】
カルバペネム耐性病原菌に対するクラリスロマイシン及びリファンピシンの増強
上述の構造−活性相関（ＳＡＲ）研究を通して、１２８μｇ／ｍｌにおいて非溶血性である２つの類似体（１及び１５）を同定した。パエニペプチン類似体１は、パエニペプチンＣ’と比較してより短い脂質鎖（Ｃ６）を保有し、一方、類似体１５は、脂質鎖を疎水性のカルボキシベンジル基で置換している。これらの２つの類似体は、２つの参照菌株、アシネトバクター・バウマンニ  ＡＴＣＣ１９６０６及びクレブシエラ・ニューモニエ  ＡＴＣＣ１３８８３に対して、リファンピシンを増強した。パエニペプチン類似体のカチオン性は、グラム陰性病原菌の外膜を破壊し得て、それは分子内薬物標的を攻撃する疎水性抗生物質の侵入を促進する。本研究では、我々はパエニペプチン類似体（１及び１５）の細胞傷害性を評価することを目的とし、且つＦＤＡ−ＣＤＣ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｉｓｏｌａｔｅ  Ｂａｎｋからのアシネトバクター・バウマンニ及びクレブシエラ・ニューモニエを含む、１０のカルバペネム耐性菌株に対する、クラリスロマイシン又はリファンピシンについての潜在的な増強を決定した。
【０１４１】
クラリスロマイシン（タンパク質合成阻害剤）、リファンピシン（ＲＮＡ合成阻害剤）、ポリミキシンＢノナペプチド、パエニペプチン類似体又はこれらの組み合わせの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を、微量液体希釈法を使用して、１０のカルバペネム耐性菌株に対して決定した。パエニペプチン類似体１又は１５は単独で、ＡＲ００３７、ＡＲ００５２、ＡＲ００６３、及びＡＲ００７０などの特定のＡ・バウマンニ単離物に対して阻害活性を示し、これはまたリファンピシンにも感受性が高かった（表１３）。これらの単離物の感受性増加は、Ａ・バウマンニに高率で菌株依存性であり得て；５つのＫ・ニューモニエ試験菌株はどれも、パエニペプチンにもリファンピシンにも感受性ではなかった。パエニペプチン１及び１５は、細胞傷害性アッセイに関する組織培養実験に使用された、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）の存在下で同様のＭＩＣを示した。ポリミキシンＢノナペプチドは、抗生物質増強薬として公知であり、単独で使用した場合、１０全ての試験菌株に対して効果的ではなかった（ＭＩＣ＞３２μｇ／ｍｌ）（表１３）。表１４に示されるように、ポリミキシンＢノナペプチドとクラリスロマイシン又はリファンピシンとの組み合わせは、パエニペプチン類似体と比較すると、中等度の増強効果を示した。対照的に、パエニペプチン類似体は、クラリスロマイシン及びリファンピシンの抗細菌活性を劇的に増加させた。例えば、４μｇ／ｍＬにおけるパエニペプチン類似体１及び１５は、クラリスロマイシンのＡ・バウマンニＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ  ００３７に対するＭＩＣを、それぞれ、１６μｇ／ｍｌから０．０３１３及び０．００１９μｇ／ｍｌまで減少させ、これはその抗生物質活性における５１２〜８１９２倍の増加に相当する（表１４）。これらの結果は、パエニペプチン類似体が、抗生物質感受性の参照菌株に対する抗生物質の有効性を増加させたという我々の前述の所見と一致した。
【０１４２】
【表１３】
2020529443.tif 000020
【０１４３】
【表１４】
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【０１４４】
時間−死滅動態アッセイを使用して、パエニペプチン類似体存在下での、クラリスロマイシン又はリファンピシンの静菌活性又は殺菌活性を決定した。パエニペプチン類似体、クラリスロマイシン、及びリファムピンを、時間−死滅動態アッセイにおいて治療上適切な濃度で使用した。細菌生存数を、抗菌薬処置の０、２、４、６、及び２４時間後に決定した。２４時間のエンドポイントにおける細菌残存数に、分散分析（ＡＮＯＶＡ）、続いて、ＳＰＳＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（バージョン２４；ＳＰＳＳ、Ｉｎｃ．、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ、ＵＳＡ）を使用してテューキーの真の有意差（ＨＳＤ）検定を施した。図６Ａに示されるように、単独で使用した場合、４μｇ／ｍｌにおけるパエニペプチン類似体及び１μｇ／ｍｌにおけるクラリスロマイシン又はリファンピシンは、トリプシンソイブロス中で３７℃において、Ａ・バウマンニＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ  ００６３の成長を阻害せず；細菌集団は、２４時間内に２．１〜３．０ ｌｏｇ増加した。逆に、細胞集団は、クラリスロマイシン又はリファンピシンと組み合わせたパエニペプチン類似体１又は１５によって処置した場合、経時的に着実に低減した。併用処置は、２４時間内に４．７〜５．１ ｌｏｇの低減をもたらした。同様の傾向が、第２のカルバペネム耐性病原菌、Ｋ・ニューモニエＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ  ００９７に関して観察された（図６Ｂ）。パエニペプチン類似体、クラリスロマイシン又はリファンピシンは単独では、試験濃度においてＫ・ニューモニエＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ  ００９７に対して殺菌性ではなく；パエニペプチン類似体とクラリスロマイシンとの組み合わせは、細胞数を２４時間内に２．１〜２．５ ｌｏｇ低減させ、一方、リファンピシンとの組み合わせは、２４時間内にトリプシンソイブロス中で４．９ ｌｏｇの低減を生じた（図６Ｂ）。従って、クラリスロマイシン又はリファンピシンをプラスしたパエニペプチン類似体は、トリプシンソイブロス中でＡ・バウマンニ及びＫ・ニューモニエの両方に対して、どちらかの単一薬剤より有意に優れていた。
【０１４５】
パエニペプチン類似体の治療的可能性を更に試験するために、パエニペプチン単独又は他の抗生物質との組み合わせの時間−死滅動態アッセイを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで９５％のヒト血清中で実施した。抗菌薬処置なしでは、Ａ・バウマンニＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ  ００６３の集団は、２４時間内に５．８ ｌｏｇ〜９．３ ｌｏｇ増加した。４μｇ／ｍｌにおけるリファンピシンは、２４時間内に細胞集団の１．４ ｌｏｇの低減をもたらしたが、他の単一抗生物質処置は効果的ではなかった（図７Ａ）。リファンピシン単独もまた、クラリスロマイシン及びパエニペプチン類似体１又は１５の間の併用処置と比較した場合、同様の又はわずかに良好の活性を示した。その上、リファンピシンとパエニペプチン類似体１又は１５との組み合わせは、細菌集団を２．７ ｌｏｇ減少させ、これは、それぞれの単一薬剤処置より有意に良好であった。同様に、パエニペプチン類似体１及び１５は、Ａ・バウマンニＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ  ００６３に対してクラリスロマイシンを有意に増強し、２４時間内に９５％のヒト血清中で、それぞれ、１．３及び０．７ ｌｏｇの低減をもたらした（図７Ａ）。
【０１４６】
ヒト血清は、Ｋ・ニューモニエＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００９７に対して静菌効果を示し；２４にわたる細菌細胞数は最初の細菌集団を一度も越えなかった。また、ヒト血清が、参照菌株、Ｋ・ニューモニエ  ＡＴＣＣ１３８８３の成長を阻害したことも観察した（データは示さず）。同様に、他の研究者らは、特定のＫ・ニューモニエ菌株に対するヒト血清の阻害効果を報告した（７、８）。ヒト血清の存在は、パエニペプチン類似体１の殺菌有効性を向上させ、それは２４時間内に４．２ ｌｏｇのＫ・ニューモニエ細胞を不活性化した（図７Ｂ）。類似体１とクラリスロマイシン又はリファンピシンとの組み合わせは、併用処置が、９５％のヒト血清中での類似体１単独ほど統計的に良好でなかったけれども、２４時間内に細菌集団における４．９ ｌｏｇの低減をもたらした。Ｎ末端において類似体１と異なるパエニペプチン類似体１５は、ヒト血清中でＫ・ニューモニエＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００９７に対して、殺菌活性を示すこともクラリスロマイシンを増強することもなかった。しかしながら、類似体１５をリファンピシンと組み合わせると、２４時間内に４．６ ｌｏｇの低減を達成した（図７Ｂ）。従って、類似体１５とリファンピシンとの間の組み合わせは、９５％のヒト血清中でのＫ・ニューモニエに対するそれぞれの単一処置より有意に良好であった。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年4月6日(2020.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
線状のリポペプチドを含む抗菌性の組成物であって、前記リポペプチドが、親油性末端−Ｒ1とアミン末端−ＮＲ2Ｒ3の間に入る、配列番号：１〜１７のいずれか１つと少なくとも６６％の配列同一性を有するペプチドを含み、
Ｒ1は、置換されているか又は非置換の、分岐又は非分岐のＣ2〜Ｃ20アルカノイルを含み、
Ｒ2及びＲ3は、水素又はＣ1〜Ｃ6アルキルから独立して選択される、組成物。
【請求項２】
（ａ）前記リポペプチドが、培地中の微生物に対して８．０μｇ／ｍＬ以下の最小発育阻止濃度を有するか；
（ｂ）前記リポペプチドが、培地中の微生物に対して１６．０μｇ／ｍＬ以下の最小殺菌濃度を有するか；
（ｃ）前記リポペプチドが、１２８μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５０．０％以下の溶血百分率を有するか；
（ｄ）前記リポペプチドが、１０５μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５０．０％以上の生存百分率を有するか；
（ｅ）前記リポペプチドが、微生物に対する抗菌剤に関して１２８以上の感作因数を有するか；
（ｆ）前記組成物が、表面上の生存微生物における少なくとも２．０ ｌｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチドを有するか；又は
（ｇ）これらの組み合わせ
である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、及び（ｆ）からなる群から選択される少なくとも２つの特性を有する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記微生物が、
（ｉ）グラム陰性菌；
（ｉｉ）グラム陽性菌；
（ｉｉｉ）薬物耐性菌；又は
（ｉｖ）（ｉ）及び（ｉｉｉ）又は（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の組み合わせ
である、請求項２〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記微生物が、グラム陰性菌である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記グラム陰性菌が、大腸菌、Ａ・バウマンニ、Ｅ・クロアカ、Ｋ・ニューモニエ、及びＰ・エルジノーサからなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記微生物が、グラム陽性菌である、請求項４に記載の組成物。
【請求項８】
前記グラム陽性菌が、Ｅ．フェシウム及びＳ．アウレウスからなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記微生物が、薬物耐性菌である、請求項４に記載の組成物。
【請求項１０】
前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、又はポリミキシン耐性菌である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
ペプチドが、Ｒ1−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−ＮＲ2Ｒ3を含み、
Ｘ1が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ2が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｄａｐ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ3が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ4が、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ5が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ6が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ7が、ｄＶａｌ、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ8が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅｐｈｅ、及びＯｃｔｇｌｙからなる群から選択され；且つ
Ｘ9が、Ｓｅｒ及びＤａｂからなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ペプチドが、配列番号：１〜１７のいずれか１つと少なくとも８８％の配列同一性を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
−Ｒ1が：
Ｒ4−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ4が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、ビフェニルアルキル、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、フェニルアルキルアミン、ビフェニルアルキルアミン、アルコキシ、シクロアルコキシ、フェニルアルコキシ、若しくはビフェニルアルコキシからなる群から選択されるか、又は
Ｒ5−ＣＨ（ＮＨ2）−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ5が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、及びビフェニルアルキルからなる群から選択される、
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
Ｒ2及びＲ3が、水素から選択される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
抗菌剤を更に含む、請求項１又は４〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
（ａ）前記抗菌剤が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での微生物に対する最小発育阻止濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において該微生物に対して低い最小発育阻止濃度を有するか；
（ｂ）前記抗菌剤が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での微生物に対する最小殺菌濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において該微生物に対して低い最小殺菌濃度を有するか；
（ｃ）前記リポペプチドが、微生物に対する前記抗菌剤に関して１２８以上の感作因数を有するか；
（ｄ）前記組成物が、表面上の生存微生物における少なくとも２．０ lｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチド及び／又は前記抗菌剤を有するか；又は
（ｅ）これらの組み合わせ
である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる群から選択される少なくとも２つの特性を有する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
治療有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物、及び薬学的に許容できる賦形剤、担体、又は希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
表面への適用のために製剤化された、有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物を含む、抗バイオフィルム製品。
【請求項２０】
前記表面が、医療用装置表面、医療用機器表面、医療用インプラント表面、包帯表面、創傷表面、又は皮膚である、請求項１９に記載の抗バイオフィルム製品。
【請求項２１】
スプレー、軟膏、ゲル、フォーム、ペースト、ヒドロゲル、又は親水コロイドとして製剤化されている、請求項１９又は２０に記載の抗バイオフィルム製品。
【請求項２２】
ドレッシング材及び有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物を含み、創傷又は皮膚上の微生物感染又は微生物バイオフィルムを治療するか又は防止するための、包帯。
【請求項２３】
前記ドレッシング材が、布、海綿質、アルギネート、コラーゲン、フィルム、ゲルシート、創傷充填剤、ヒドロゲル、親水コロイド、又はこれらの組み合わせを含む、請求項２２に記載の包帯。
【請求項２４】
インビトロで、微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、又は微生物を感作する方法であって、前記微生物と、有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物とを接触させることを含む、方法。
【請求項２５】
インビトロで、表面上でのバイオフィルムの形成を防止するか、又は前記バイオフィルムにおいて、微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、若しくは微生物を感作する方法であって、前記表面又は該表面に配置されたバイオフィルムと、有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品とを接触させることを含む、方法。
【請求項２６】
前記表面が、医療用装置表面、医療用機器表面、医療用インプラント表面、包帯表面、創傷表面、又は皮膚である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
創傷若しくは皮膚上でのバイオフィルムの形成を防止するか、又は前記バイオフィルムにおいて、微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、若しくは微生物を感作するための使用のための組成物、製品、又は包帯であって、有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物、請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品、又は請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の包帯を含む、組成物、製品、又は包帯。
【請求項２８】
対象中又は対象上の微生物感染を防止するか又は微生物感染を治療するための使用のための組成物、製品、又は包帯であって、治療有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物又は請求項１８に記載の医薬組成物、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品、又は請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の包帯を含む、組成物、製品、又は包帯。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４６】
ヒト血清は、Ｋ・ニューモニエＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００９７に対して静菌効果を示し；２４にわたる細菌細胞数は最初の細菌集団を一度も越えなかった。また、ヒト血清が、参照菌株、Ｋ・ニューモニエ  ＡＴＣＣ１３８８３の成長を阻害したことも観察した（データは示さず）。同様に、他の研究者らは、特定のＫ・ニューモニエ菌株に対するヒト血清の阻害効果を報告した（７、８）。ヒト血清の存在は、パエニペプチン類似体１の殺菌有効性を向上させ、それは２４時間内に４．２ ｌｏｇのＫ・ニューモニエ細胞を不活性化した（図７Ｂ）。類似体１とクラリスロマイシン又はリファンピシンとの組み合わせは、併用処置が、９５％のヒト血清中での類似体１単独ほど統計的に良好でなかったけれども、２４時間内に細菌集団における４．９ ｌｏｇの低減をもたらした。Ｎ末端において類似体１と異なるパエニペプチン類似体１５は、ヒト血清中でＫ・ニューモニエＦＤＡ−ＣＤＣ  ＡＲ００９７に対して、殺菌活性を示すこともクラリスロマイシンを増強することもなかった。しかしながら、類似体１５をリファンピシンと組み合わせると、２４時間内に４．６ ｌｏｇの低減を達成した（図７Ｂ）。従って、類似体１５とリファンピシンとの間の組み合わせは、９５％のヒト血清中でのＫ・ニューモニエに対するそれぞれの単一処置より有意に良好であった。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕線状のリポペプチドを含む抗菌性の組成物であって、前記リポペプチドが、親油性末端−Ｒ1とアミン末端−ＮＲ2Ｒ3の間に入る、配列番号：１〜１７のいずれか１つと少なくとも６６％の配列同一性を有するペプチドを含み、
Ｒ1は、置換されているか又は非置換の、分岐又は非分岐のＣ2〜Ｃ20アルカノイルを含み、
Ｒ2及びＲ3は、水素又はＣ1〜Ｃ6アルキルから独立して選択される、組成物。
〔２〕（ａ）前記リポペプチドが、培地中の微生物に対して８．０μｇ／ｍＬ以下の最小発育阻止濃度を有するか；
（ｂ）前記リポペプチドが、培地中の微生物に対して１６．０μｇ／ｍＬ以下の最小殺菌濃度を有するか；
（ｃ）前記リポペプチドが、１２８μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５０．０％以下の溶血百分率を有するか；
（ｄ）前記リポペプチドが、１０５μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において、５０．０％以上の生存百分率を有するか；
（ｅ）前記リポペプチドが、微生物に対する抗菌剤に関して１２８以上の感作因数を有するか；
（ｆ）前記組成物が、表面上の生存微生物における少なくとも２．０ ｌｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチドを有するか；又は
（ｇ）これらの組み合わせ
である、前記〔１〕に記載の組成物。
〔３〕前記リポペプチドの最小発育阻止濃度が、培地中の微生物に対して８．０μｇ／ｍＬ以下である、前記〔２〕に記載の組成物。
〔４〕前記リポペプチドの最小殺菌濃度が、培地中の微生物に対して１６．０μｇ／ｍＬ以下である、前記〔２〕に記載の組成物。
〔５〕前記リポペプチドの溶血百分率が、１２８μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において５０．０％以下である、前記〔２〕に記載の組成物。
〔６〕前記リポペプチドの生存百分率が、１０５μｇ／ｍＬのリポペプチド濃度において５０．０％以上である、前記〔２〕に記載の組成物。
〔７〕前記リポペプチドの感作因数が、微生物に対する抗菌剤に関して１２８以上である、前記〔２〕に記載の組成物。
〔８〕抗菌剤が、アンピシリン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、リファンピシン、及びバンコマイシンからなる群から選択される、前記〔７〕に記載の組成物。
〔９〕表面上の生存微生物における少なくとも２．０ lｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチドを有する、前記〔２〕に記載の組成物。
〔１０〕（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、及び（ｆ）からなる群から選択される少なくとも２つの特性を有する、前記〔２〕に記載の組成物。
〔１１〕前記微生物が、
（ｉ）グラム陰性菌；
（ｉｉ）グラム陽性菌；
（ｉｉｉ）薬物耐性菌；又は
（ｉｖ）（ｉ）及び（ｉｉｉ）又は（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の組み合わせ
である、前記〔２〕〜〔１０〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔１２〕前記微生物が、グラム陰性菌である、前記〔１１〕に記載の組成物。
〔１３〕前記グラム陰性菌が、大腸菌、Ａ・バウマンニ、Ｅ・クロアカ、Ｋ・ニューモニエ、及びＰ・エルジノーサからなる群から選択される、前記〔１２〕に記載の組成物。
〔１４〕前記微生物が、グラム陽性菌である、前記〔１１〕に記載の組成物。
〔１５〕前記グラム陽性菌が、Ｅ．フェシウム及びＳ．アウレウスからなる群から選択される、前記〔１４〕に記載の組成物。
〔１６〕前記微生物が、薬物耐性菌である、前記〔１１〕に記載の組成物。
〔１７〕前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、又はポリミキシン耐性菌である、前記〔１６〕に記載の組成物。
〔１８〕ペプチドが、Ｒ1−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−ＮＲ2Ｒ3を含み、
Ｘ1が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ2が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｄａｐ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ3が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ4が、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ5が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ6が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ7が、ｄＶａｌ、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ8が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅｐｈｅ、及びＯｃｔｇｌｙからなる群から選択され；且つ
Ｘ9が、Ｓｅｒ及びＤａｂからなる群から選択される、前記〔１〕〜〔１７〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔１９〕前記ペプチドが、配列番号：１〜１７のいずれか１つと少なくとも８８％の配列同一性を有する、前記〔１〕〜〔１８〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔２０〕−Ｒ1が：
Ｒ4−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ4が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、ビフェニルアルキル、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、フェニルアルキルアミン、ビフェニルアルキルアミン、アルコキシ、シクロアルコキシ、フェニルアルコキシ、若しくはビフェニルアルコキシからなる群から選択されるか、又は
Ｒ5−ＣＨ（ＮＨ2）−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ5が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、及びビフェニルアルキルからなる群から選択される、
前記〔１〕〜〔１９〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔２１〕Ｒ2及びＲ3が、水素から選択される、前記〔１〕〜〔２０〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔２２〕抗菌剤を更に含む、前記〔１〕に記載の組成物。
〔２３〕（ａ）前記抗菌剤が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での微生物に対する最小発育阻止濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において該微生物に対して低い最小発育阻止濃度を有するか；
（ｂ）前記抗菌剤が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での微生物に対する最小殺菌濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において該微生物に対して低い最小殺菌濃度を有するか；
（ｃ）前記リポペプチドが、微生物に対する前記抗菌剤に関して１２８以上の感作因数を有するか；
（ｄ）前記組成物が、表面上の生存微生物における少なくとも２．０ lｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチド及び／又は前記抗菌剤を有するか；又は
（ｅ）これらの組み合わせ
である、前記〔２２〕に記載の組成物。
〔２４〕前記抗菌剤の最小発育阻止濃度が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での最小発育阻止濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において低い、前記〔２３〕に記載の組成物。
〔２５〕前記抗菌剤の最小殺菌濃度が、培地中で、前記リポペプチド非存在下での最小殺菌濃度よりも、前記リポペプチドの存在下において低い、前記〔２３〕に記載の組成物。
〔２６〕リポタンパク質の感作因数が、前記微生物に対する前記抗菌剤に関して１２８以上である、前記〔２３〕に記載の組成物。
〔２７〕前記抗菌剤が、アンピシリン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、リファンピシン、及びバンコマイシンからなる群から選択される、前記〔２６〕に記載の組成物。
〔２８〕表面上の生存微生物における少なくとも２．０ lｏｇの低減という抗バイオフィルム活性のための有効量の前記リポペプチド及び／又は前記抗菌剤を有する、前記〔２３〕に記載の組成物。
〔２９〕（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）からなる群から選択される少なくとも２つの特性を有する、前記〔２３〕に記載の組成物。
〔３０〕前記微生物が、
（ｉ）グラム陰性菌；
（ｉｉ）グラム陽性菌；
（ｉｉｉ）薬物耐性菌；又は
（ｉｖ）（ｉ）及び（ｉｉｉ）又は（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の組み合わせ
である、前記〔２３〕〜〔２９〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔３１〕前記微生物が、グラム陰性菌である、前記〔３０〕に記載の組成物。
〔３２〕前記グラム陰性菌が、大腸菌、Ａ・バウマンニ、Ｅ・クロアカ、Ｋ・ニューモニエ、及びＰ・エルジノーサからなる群から選択される、前記〔３１〕に記載の組成物。
〔３３〕前記微生物が、グラム陽性菌である、前記〔３０〕に記載の組成物。
〔３４〕前記グラム陽性菌が、Ｅ．フェシウム及びＳ．アウレウスからなる群から選択される、前記〔３３〕に記載の組成物。
〔３５〕前記微生物が、薬物耐性菌である、前記〔３０〕に記載の組成物。
〔３６〕前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、又はポリミキシン耐性菌である、前記〔３５〕に記載の組成物。
〔３７〕ペプチドが、Ｒ1−Ｘ1−Ｘ2−Ｘ3−Ｘ4−Ｘ5−Ｘ6−Ｘ7−Ｘ8−Ｘ9−ＮＲ2Ｒ3を含み、
Ｘ1が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ2が、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｄａｐ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ3が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｔｈｒ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ4が、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ、及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ5が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ6が、Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ及びＡｒｇからなる群から選択され；
Ｘ7が、ｄＶａｌ、ｄＬｅｕ、ｄＰｈｅ及びＰｈｅｐｈｅからなる群から選択され；
Ｘ8が、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｈｅｐｈｅ、及びＯｃｔｇｌｙからなる群から選択され；且つ
Ｘ9が、Ｓｅｒ及びＤａｂからなる群から選択される、前記〔２２〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔３８〕前記ペプチドが、配列番号：１〜１８のいずれか１つと少なくとも８８％の配列同一性を有する、前記〔２２〕〜〔３７〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔３９〕Ｒ1が：
Ｒ4−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ4が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、ビフェニルアルキル、アルキルアミン、シクロアルキルアミン、フェニルアルキルアミン、ビフェニルアルキルアミン、アルコキシ、シクロアルコキシ、フェニルアルコキシ、若しくはビフェニルアルコキシからなる群から選択されるか、又は
Ｒ5−ＣＨ（ＮＨ2）−Ｃ（＝Ｏ）−を含み、且つＲ5が、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、フェニルアルキル、及びビフェニルアルキルからなる群から選択される、前記〔２２〕〜〔３８〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔４０〕Ｒ2及びＲ3が、水素から選択される、前記〔２２〕〜〔３９〕のいずれか一項に記載の組成物。
〔４１〕治療有効量の前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載の組成物、及び薬学的に許容できる賦形剤、担体、又は希釈剤を含む、医薬組成物。
〔４２〕表面への適用のために製剤化された、有効量の前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載の組成物を含む、抗バイオフィルム製品。
〔４３〕前記表面が、医療用装置表面、医療用機器表面、医療用インプラント表面、包帯表面、創傷表面、又は皮膚である、前記〔４２〕に記載の抗バイオフィルム製品。
〔４４〕スプレー、軟膏、ゲル、フォーム、ペースト、ヒドロゲル、又は親水コロイドとして製剤化されている、前記〔４２〕又は〔４３〕に記載の抗バイオフィルム製品。
〔４５〕ドレッシング材及び有効量の前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載の組成物を含み、創傷又は皮膚上の微生物感染又は微生物バイオフィルムを治療するか又は防止するための、包帯。
〔４６〕前記ドレッシング材が、布、海綿質、アルギネート、コラーゲン、フィルム、ゲルシート、創傷充填剤、ヒドロゲル、親水コロイド、又はこれらの組み合わせを含む、前記〔４５〕に記載の包帯。
〔４７〕微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、又は微生物を感作する方法であって、前記微生物と、有効量の前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載の組成物とを接触させることを含む、方法。
〔４８〕表面上でのバイオフィルムの形成を防止するか、又は前記バイオフィルムにおいて、微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、若しくは微生物を感作する方法であって、前記表面又は該表面に配置されたバイオフィルムと、有効量の前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載の組成物、前記〔４１〕に記載の医薬組成物、前記〔４２〕〜〔４４〕のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品、又は前記〔４５〕〜〔４７〕のいずれか一項に記載の包帯とを接触させることを含む、方法。
〔４９〕前記表面が、医療用装置表面、医療用機器表面、医療用インプラント表面、包帯表面、創傷表面、又は皮膚である、前記〔４８〕に記載の方法。
〔５０〕創傷若しくは皮膚上でのバイオフィルムの形成を防止するか、又は前記バイオフィルムにおいて、微生物の増殖を阻害する、微生物を死滅させる、若しくは微生物を感作する方法であって、前記創傷、前記皮膚、又は前記創傷若しくは前記皮膚のいずれかに配置されたバイオフィルムと、有効量の前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載の組成物、前記〔４１〕に記載の医薬組成物、前記〔４２〕〜〔４４〕のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品、又は前記〔４５〕〜〔４７〕のいずれか一項に記載の包帯とを接触させることを含む、方法。
〔５１〕対象中又は対象上の微生物感染を防止するか又は微生物感染を治療する方法であって、治療有効量の前記〔１〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載の組成物又は前記〔４１〕に記載の医薬組成物、前記〔４２〕〜〔４４〕のいずれか一項に記載の抗バイオフィルム製品、又は前記〔４５〕〜〔４７〕のいずれか一項に記載の包帯を投与することを含む、方法。
〔５２〕前記微生物又は微生物感染症が、
（ｉ）グラム陰性菌若しくはグラム陰性菌感染症；
（ｉｉ）グラム陽性菌若しくはグラム陽性菌感染症；
（ｉｉｉ）薬物耐性菌若しくは薬物耐性菌感染症；又は
（ｉｖ）（ｉ）及び（ｉｉｉ）若しくは（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の組み合わせ
である、前記〔４７〕〜〔５１〕のいずれか一項に記載の方法。
〔５３〕前記微生物が、グラム陰性菌であるか、又は前記微生物感染症が、グラム陰性菌感染症である、前記〔５３〕に記載の方法。
〔５４〕前記グラム陰性菌が、大腸菌、Ａ・バウマンニ、Ｅ・クロアカ、Ｋ・ニューモニエ、及びＰ・エルジノーサからなる群から選択されるか、又は前記グラム陰性菌感染症が、大腸菌感染症、Ａ・バウマンニ感染症、Ｅ・クロアカ感染症、Ｋ・ニューモニエ感染症、及びＰ・エルジノーサ感染症からなる群から選択される、前記〔５３〕に記載の方法。
〔５５〕前記微生物が、グラム陽性菌であるか、又は前記微生物感染症が、グラム陽性菌感染症である、前記〔５２〕に記載の方法。
〔５６〕前記グラム陽性菌が、Ｅ．フェシウム及びＳ．アウレウスからなる群から選択されるか、又は前記グラム陽性菌感染症が、Ｅ．フェシウム感染症及びＳ．アウレウス感染症から選択される、前記〔５５〕に記載の方法。
〔５７〕前記微生物が、薬物耐性菌であるか、又は前記微生物感染症が、薬物耐性菌感染症である、前記〔５２〕に記載の方法。
〔５８〕前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌、メチシリン耐性菌、若しくはポリミキシン耐性菌であるか、又は前記薬物耐性菌が、カルバペネム耐性菌感染症、メチシリン耐性菌感染症、若しくはポリミキシン耐性菌感染症である、前記〔５７〕に記載の方法。
【国際調査報告】
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