(57)【要約】  本発明は、ある二環式ビス−ヘテロアリール化合物としての式（Ｉ）の化合物、それらを含有する医薬組成物、ならびにタンパク質凝集を防止、逆転、減速又は阻害する方法を含むそれらを使用する方法、ならびに神経変性疾患、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体病、認知症を伴うパーキンソン病、前頭側頭型認知症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症及び多系統萎縮症、及び黒色腫を含むがんを含むタンパク質凝集に関連する疾患を治療する方法に関する。
2020505369.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩：
【化１】
2020505369.tif 000059
（式中、
Ｂは、それぞれ非置換であるか、又は（Ｒ１）ｍで置換された、９員もしくは１０員ヘテロアリール、又は５員もしくは６員ヘテロシクロアルキルであり；
ｍは０、１又は２であり；
各Ｒ１は、独立に、Ｃ１−４アルキル（任意に１個又は複数のハロゲン又はＯ−Ｃ１−４アルキル基で置換されている）、ハロゲン、−ＯＨ又はＯ−Ｃ１−４アルキルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−５アルキル（非置換であるか、又は１個もしくは複数のハロ置換基で置換されている）、−ＯＣ１−４アルキル、又はＳ−Ｃ１−４アルキル、又はアリール、単環式シクロアルキル、又はＣ１−４アルキル−（単環式シクロアルキル）基であり、各アリール又はシクロアルキルは非置換であるか、又はハロ、Ｃ１−４アルキルもしくはハロ−Ｃ１−４アルキルで置換されており；
Ｒ３はＨ又はＣ１−４アルキルであり；
Ａは５員ヘテロアリール環であり；
Ｃは５員又は６員環であり、Ｙは結合又はＣＨ２であり；ＸはＣ又はＮであり；
Ｄは環Ｃと縮合して二環式環系を形成する５員又は６員環であり、任意に（Ｒ４）ｎで置換され、ｎは０、１、２又は３であり；各Ｒ４は、独立に、任意に１個もしくは複数のハロゲンもしくはＯＣ１−４アルキル基で置換されたＣ１−４アルキル、ハロゲン、−ＯＨ（そのケト型＝Ｏを含む）、−ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４分岐アルキル又はＯＣ１−４アルキルである）。
【請求項２】
ｍが０である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｂが任意に置換されたインドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンズイミダゾール、ベンゾオキサゾール、ベンズイソオキサゾール、イミダゾピリジン又はピロロピリジンである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｂが任意に置換されたインドールであるか、又は任意に置換された３−インドールである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がメチル、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチル又はｎ−ブチル、ペンチル又はヘキシル基である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がｎ−ブチルである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ａがピロール、フラン、チオフェン、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール又はテトラゾールである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ａがチアゾールである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｂが置換又は非置換のインドール又は３−インドールである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｃが、任意に１個もしくは複数のハロゲンもしくはＯＣ１−４アルキル基で置換されたピロリジン、ピペリジン又はピペラジン、ハロ、−ＯＨ、−ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４分岐アルキル又はＯＣ１−４アルキルである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｄが、任意に１個もしくは複数のハロゲンもしくはＯＣ１−４アルキル基で置換されたピラゾール、イソオキサゾール、トリアゾール、イミダゾール、ピリジン、ピリミジン、ハロ、−ＯＨ（そのケト型＝Ｏを含む）、−ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４分岐アルキル又はＯＣ１−４アルキルである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
二環式部分ＣＤが、任意に１個もしくは複数のハロゲンもしくはＯＣ１−４アルキルで置換されたピラゾロピロリジン、ピラゾロピペリジン、イソオキサゾロピペリジン、トリアゾロピペラジン、ピラゾロピペラジン、イミダゾピペラジン、ピリドノピペラジン、ピリミドノピペラジン、−ＯＨ（そのケト型＝Ｏを含む）、−ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４分岐アルキルである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
以下からなる群から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物：
【表１−１】
2020505369.tif 000060
【表１−２】
2020505369.tif 000061
【表１−３】
2020505369.tif 000062
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
少なくとも１種の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
タンパク質又はペプチド凝集に関連する神経変性疾患又は状態を治療する方法であって、有効量の少なくとも１種の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、このような治療を必要とする対象に投与するステップを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ある一定のビス−ヘテロアリール誘導体、それらを含有する医薬組成物、ならびにタンパク質凝集を防止、逆転、減速又は阻害する方法を含むそれらを使用する方法、ならびに神経変性疾患、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体病、認知症を伴うパーキンソン病、前頭側頭型認知症、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症及び多系統萎縮症、及び黒色腫を含むがんを含むタンパク質凝集に関連する疾患を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、及び前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）などの老年人口の神経変性障害は、米国及び欧州連合だけで２０００万人以上が罹患し、高齢者の死因の上位を占めている。これらの神経学的障害間の共通の特徴は、神経毒性凝集体へのタンパク質の慢性的な蓄積である。各疾患は、影響を受ける特定の神経細胞集団、関与する特定のタンパク質凝集体、及び神経細胞変性から生じる臨床的特徴によって特徴付けられる。
【０００３】
研究によって、タンパク質凝集の初期段階が標的タンパク質の突然変異又は翻訳後修飾（例えば、ニトロシル化（ｎｉｔｒｏｓｉｌａｔｉｏｎ）、酸化）を伴い、それが次に同様に誤って折り畳まれたタンパク質との相互作用を促進する異常な立体配座を採用することが示唆されている。その後、異常なタンパク質が凝集して、二量体、三量体、及び「可溶性オリゴマー」とも呼ばれる高次の多量体を形成し、これらがシナプス機能を破壊し得る。さらに、その後、凝集体は細胞膜に固着し、球状オリゴマー（今度はこれが膜に孔を形成し得る）及び／又は前原線維もしくは原線維を形成し得る。これらのより大きな不溶性原線維は、生物活性オリゴマーの貯蔵庫として機能し得る。
【０００４】
多様な証拠が、タンパク質凝集体の進行性蓄積が神経変性疾患の病因に必然的に関与しているという考えを支持している。α−シヌクレイン、Ａベータタンパク質、タウ、及びＴＤＰ４３などのいくつかの他のタンパク質が神経変性の患者の脳に蓄積し得る。これらの患者の認知障害は、新皮質及び辺縁系におけるシナプス喪失と密接に関連しており、タンパク質凝集体のレベルの増加がこのシナプス喪失に寄与し得る。α−シヌクレイン及び他のアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）代謝産物の蓄積がシナプス損傷及び神経変性に寄与する機序を詳述することに多くの研究が集中している。多くの研究が、オリゴマーとしても知られる小さな凝集体の形成が神経毒性において主要な役割を果たすという仮説を支持している。これらのペプチドオリゴマーは、二量体、三量体、四量体、五量体、及び環状構造を形成することができる他のより高次の配列に組織化することができる。高レベルのこのようなオリゴマーは、患者における認知症及びシナプス喪失を予測するものである。証拠は小さい前駆体原線維よりむしろオリゴマーが毒性種であることを示しているので、特定の方法でこれらの初期凝集過程を標的とする化合物は、ＰＤ、ＡＤ及び関連状態に対する潜在的な新しい治療法として有用であろう。
【０００５】
種々の神経変性疾患は、神経毒性タンパク質ベースの凝集体の蓄積を伴う。特発性パーキンソン病（ＩＰＤ）、レビー小体型認知症（ＬＢＤ）、認知症を伴うパーキンソン病（ＰＤＤ）及び多系統萎縮症（ＭＳＡ）では、神経毒性凝集体が、正常な条件下で細胞内にあるシナプスタンパク質であるα−シヌクレイン（ＳＹＮ）で構成されている。ＦＴＤ及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）では、神経毒性凝集体がタウ、ＴＤＰ−４３、又はＳＯＤ１などの他の細胞内タンパク質に由来する。ＡＤなどの一定の疾患では、ＳＹＮが一次タンパク質（例えば、Ａベータタンパク質）と凝集する。ハンチントン病では、凝集体がＨｔｔタンパク質の切断産物から形成する。
【０００６】
α−シヌクレインの蓄積はまた、がん、特に黒色腫がん細胞に関与している。Ｐａｎら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１２、７（９）、ｅ４５１８３。よって、このような蓄積を阻害する化合物は、黒色腫を含む種々のがんの治療に有用であると判明し得る。
【０００７】
これらのタンパク質凝集過程には２つの機序が関係している。第一に、誤って折り畳まれたタンパク質及び／又は凝集タンパク質が種々の細胞膜構造に固着する。誤って折り畳まれた分子又は凝集分子の原形質膜又はオルガネラ（例えば、ミトコンドリア又はリソソーム）の膜への結合が、タンパク質転写、オートファジー、ミトコンドリア機能、及び孔形成を妨害し得る。例として、神経毒性ＳＹＮは、シヌクレインタンパク質のＣ末端領域の特定の部分によって凝集し、細胞膜中の脂質と相互作用する。この領域に結合する化合物は、タンパク質−タンパク質相互作用又はタンパク質−脂質相互作用を阻害することができ、よって、ＳＹＮ又は他のタンパク質の神経毒性オリゴマー化及びそれらの膜との相互作用を遮断するために使用することができる。第二の過程では、凝集タンパク質が固着されたサブユニットから放出され、隣接細胞に伝播する。そのため、毒性タンパク質凝集体のこの細胞間伝播が、神経変性の解剖学的進行及び症状の悪化の根底にあり得る。標的タンパク質と相互作用する小分子薬は、放出及び／又は伝播を制限することができ、したがって凝集タンパク質の神経毒性効果を低下させることができる。
【０００８】
タンパク質凝集の阻害剤である化合物は、ＰＣＴ公開番号、国際公開第２０１１／０８４６４２号パンフレット、国際公開第２０１３／１４８３６５号パンフレット、国際公開第２０１３／１３４３７１号パンフレット及び国際公開第２０１４／０１４９３７号パンフレットに記載されている。インドールアミド誘導体は、ＰＣＴ公開番号、国際公開第２０１０／１４２８０１号パンフレットに記載されている。
【０００９】
望ましい医薬特性を有するタンパク質凝集の阻害剤が依然として必要とされている。本発明の文脈において、ある一定のビス−ヘテロアリール化合物がタンパク質凝集調節活性を有することが見いだされた。
【発明の概要】
【００１０】
一側面では、本発明は、以下の式（Ｉ）の化学物質又はその薬学的に許容される塩に関する：
【化１】
2020505369.tif 000003
（式中、
Ｂは、それぞれ非置換であるか、又は（Ｒ１）ｍで置換された、９員もしくは１０員ヘテロアリール、又は５員もしくは６員ヘテロシクロアルキルであり；
ｍは０、１又は２であり；
各Ｒ１は、独立に、Ｃ１−４アルキル（任意に１個又は複数のハロゲン又はＯ−Ｃ１−４アルキル基で置換されている）、ハロゲン、−ＯＨ又はＯ−Ｃ１−４アルキルであり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−５アルキル（非置換であるか、又は１個もしくは複数のハロ置換基で置換されている）、−ＯＣ１−４アルキル、又はＳ−Ｃ１−４アルキル、又はアリール、単環式シクロアルキル、又はＣ１−４アルキル−（単環式シクロアルキル）基であり、各アリール又はシクロアルキルは非置換であるか、又はハロ、Ｃ１−４アルキルもしくはハロ−Ｃ１−４アルキルで置換されており；
Ｒ３はＨ又はＣ１−４アルキルであり；
Ａは５員ヘテロアリール環であり；
Ｃは５員又は６員環であり、Ｙは結合又はＣＨ２であり；ＸはＣ又はＮであり；
Ｄは環Ｃと縮合して、任意に（Ｒ４）ｎで置換された二環式環系を形成する５員又は６員環であり、ｎは０、１、２又は３であり；各Ｒ４は、独立に、任意に１個もしくは複数のハロゲンもしくはＯＣ１−４アルキル基で置換されたＣ１−４アルキル、ハロゲン、−ＯＨ（そのケト型＝Ｏを含む）、−ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４分岐アルキル又はＯＣ１−４アルキルである）。
【００１１】
一定の態様では、式（Ｉ）の化合物が、以下の詳細な説明において記載又は例示される種から選択される化合物である。
【００１２】
さらなる側面では、本発明は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物に関する。本発明による医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含み得る。本発明はまた、医薬品として使用するための式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩である。
【００１３】
別の側面では、本発明は、タンパク質又はペプチド凝集に関連する神経変性疾患又は状態を治療する方法であって、有効量の少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を、このような治療を必要とする対象に投与するステップを含む方法に関する。別の側面では、タンパク質又はペプチド凝集に関連する神経変性疾患又は医学的状態を治療するのに使用するための化合物又は組成物が本明細書に記載される。
【００１４】
別の側面では、本発明は、タンパク質又はペプチド凝集に関連する疾患又は医学的状態を治療する方法であって、有効量の少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を、このような治療を必要とする対象に投与するステップを含む方法に関する。本発明はまた、このような疾患及び医学的状態を治療するための、又は治療するための医薬品を調製するための式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用に関する。
【００１５】
さらに別の側面では、本発明は、細胞内のタンパク質もしくはペプチド凝集体の蓄積を妨害する、又は細胞内のタンパク質もしくはペプチド凝集を調節、防止、減速、逆転もしくは阻害する方法であって、細胞を有効量の少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物もしくはその塩、及び／又は少なくとも１種の本発明の医薬組成物と接触させるステップを含み、接触がインビトロ、エクスビボ又はインビボである方法に関する。
【００１６】
本発明のさらなる態様、特徴及び利点は、以下の詳細な説明から、及び本発明の実施を通じて明らかになろう。
【００１７】
簡潔にするために、特許を含む本明細書に引用される刊行物の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明をさらに記載する前に、本発明は記載される特定の態様に限定されず、よって当然変化し得ることが理解されるべきである。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用される用語は特定の態様を説明することのみを目的としており、限定することを意図していないことも理解されるべきである。
【００１９】
特に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書で言及されるすべての特許、出願、公開出願及び他の刊行物は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。この節に示される定義が、参照により本明細書に組み込まれる特許、出願又は他の刊行物に示される定義と相反する、又は矛盾する場合、この節に示される定義が、参照により本明細書に組み込まれる定義に優先する。
【００２０】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。特許請求の範囲は、任意選択の要素を排除するように起草され得ることにさらに留意されたい。よって、この記載は、クレーム要素の列挙、又は「否定的」な限定の使用に関連して「単独で」、「のみ」などのような排他的用語の使用の先行する基礎として役立つことを意図している。
【００２１】
本明細書で使用する場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、それらの開いた非限定的な意味で使用される。
【００２２】
より簡潔な説明を提供するために、本明細書に示される定量的表現のいくつかは、「約」という用語で修飾されていない。「約」という用語が明示的に使用されているか否かに関わらず、本明細書に示されるすべての量は実際の所与の値を指すことを意図しており、このような所与の値についての実験及び／又は測定条件による等価物及び近似値を含む、当業者が備えている技能に基づいて合理的に推論されるであろうこのような所与の値への近似も指すことを意図していることが理解される。収率が百分率として与えられるときはいつでも、このような収率は、特定の化学量論的条件下で得ることができる同じ実体の最大量に対するその収率が与えられる実体の質量を指す。別段の指示がない限り、パーセントとして示される濃度は質量比を指す。
【００２３】
特に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料も本発明の実施又は試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料をここに記載する。本明細書で言及されるすべての刊行物は、刊行物が引用されることに関連して方法及び／又は材料を開示及び記載するために参照により本明細書に組み込まれる。
【００２４】
特に明記しない限り、本態様の方法及び技術は、当技術分野で周知の従来の方法に従って、また本明細書を通して引用及び議論される種々の一般的及びより具体的な参考文献に記載されるように一般に行われる。例えば、Ｌｏｕｄｏｎ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第４版、ニューヨーク：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２００２年、３６０〜３６１頁、１０８４〜１０８５頁；Ｓｍｉｔｈ及びＭａｒｃｈ、Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、第５版、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、２００１を参照されたい。
【００２５】
本化合物を命名するために本明細書で使用される命名法を、本明細書の例に例示する。この命名法は一般に、市販のＢｉｏｖｉａ  Ｄｒａｗ  ２０１６バージョン１６．１を使用して導き出されている。
【００２６】
明確にするために別の態様の文脈で記載されている本発明の一定の特徴を、単一態様で組み合わせて提供してもよいことを理解されたい。逆に、簡潔にするために単一の態様の文脈で記載されている本発明の種々の特徴を、別々に又は任意の適切なサブコンビネーションで提供してもよい。変数によって表される化学基に関する態様のすべての組み合わせは、このような組み合わせが安定な化合物（すなわち、単離され、特徴付けられ、生物学的活性について試験され得る化合物）である化合物を包含する限り、本発明によって具体的に包含され、あたかもすべての組み合わせが個別的かつ明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。さらに、このような変数を記載する態様に列挙された化学基のすべてのサブコンビネーションもまた本発明によって具体的に包含され、あたかも化学基のそれぞれの及びすべてのこのようなサブコンビネーションが本明細書において個別的かつ明示的に開示されているかのように本明細書に開示される。
【００２７】
代表的な態様
式（Ｉ）のいくつかの態様では、すべての変数が本明細書に定義される通りであり（以下に列挙される特定の定義のいずれかを含む）、以下の制限のうちの１つ又は複数も当てはまる：
（ａ１）ｍは１又は２である；あるいは
（ａ２）ｍは１又は２であり、Ｒ１は本明細書に定義される通りであり、少なくとも１つのＲ１はＣ１−４アルキル（１個もしくは２個のハロゲン基で、又はＯＣ１−４アルキルで置換されている）、Ｃ１−４アルキル（−ＣＦ３で置換されている）、−ＯＨ又はＯＣ１−４アルキルであり；
（ｂ）Ｒ２はＨ、Ｃ１−５アルキル（非置換であるか、又は１つもしくは複数のハロ置換基で置換されている）、−ＯＣ１−４アルキル、又はＳ−Ｃ１−４アルキル、又はアリール、単環式シクロアルキル、又はＣ１−４アルキル−（単環式シクロアルキル）基であり、各アリール又はシクロアルキルは非置換であるか、又はハロ、Ｃ１−４アルキルもしくはハロ−Ｃ１−４アルキルで置換されている。
【００２８】
本明細書に記載される式のいくつかの態様では、Ｂが任意に置換された９員二環式ヘテロアリールである。他の態様では、Ｂが任意に置換されたインドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンズイミダゾール、ベンゾオキサゾール、ベンズイソオキサゾール、イミダゾピリジン又はピロロピリジンである。他の態様では、Ｂがベンゾチオフェン、ベンズイミダゾール、ベンズイソオキサゾール、イミダゾピリジン又はピロロピリジン（ピリジン窒素はピロール窒素と同じ炭素に結合していない）である。他の態様では、Ｂが任意に置換されたインドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、インダゾール、ベンズイソオキサゾール、イミダゾピリジン又はピロロピリジンである。他の態様では、Ｂが任意に置換されたインドールである。他の態様では、Ｂが任意に置換された３−インドールである。他の態様では、Ｂが置換インドール又は置換３−インドールである。他の実施側面では、Ｂが任意に置換された１０員二環式ヘテロアリールである。他の態様では、Ｂが任意に置換されたキノリン又はイソキノリンである。他の態様では、Ｂが任意に置換された単環式５員又は６員ヘテロシクロアルキルである。他の実施側面では、Ｂが任意に置換されたピロリジン、ピペリジン、ピペラジン又はモルホリンである。
【００２９】
いくつかの態様では、ｍが０である。他の態様では、ｍが１である。他の態様では、ｍが２である。
【００３０】
いくつかの態様では、各Ｒ１置換基が独立に、−ＯＨであるか、又はフルオロ、クロロ、ブロモもしくはヨードである。他の態様では、各Ｒ１がフルオロ又はブロモである。他の態様では、各Ｒ１置換基が独立に、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルであるか、又はＣ１−４アルキル（１個又は複数のフルオロ、クロロ、ブロモ、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ又はブトキシ基で置換されている）である。他の態様では、各Ｒ１が独立に、ハロゲン又は任意に１個もしくは複数のハロゲン基で置換されたＣ１−４アルキルである。他の態様では、各Ｒ１が独立に、ＯＭｅ、ＯＣＨＦ２、ＯＣＦ３、ＯＥｔ、ＯｉＰｒ、Ｍｅ、ＣＦ３、Ｃｌ又はＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２である。
【００３１】
一態様では、Ｒ２がメチル、エチル、プロピル、ｔｅｒｔ−ブチル又はｎ−ブチル、ペンチル又はヘキシル基である。
【００３２】
いくつかの態様では、Ｒ２が結合している炭素が、Ｒ配置である。他の態様では、Ｒ２が結合している炭素が、Ｓ配置である。
【００３３】
一態様では、Ｒ３が水素である。
【００３４】
いくつかの態様では、Ａがピロール、フラン、チオフェン、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール又はテトラゾールである。他の態様では、Ａがピロール、フラン、チオフェン、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール又はテトラゾールである。他の態様では、Ａがイミダゾール、オキサゾール又はチアゾールである。他の態様では、Ａがチアゾールである。
【００３５】
式（Ｉ）のいくつかの態様では、Ｃがピロリジン、ピペリジン又はピペラジン（これらの各々が任意に１個もしくは複数のハロゲンもしくはＯＣ１−４アルキル基で置換されている）、ハロ、−ＯＨ、−ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４分岐アルキル又はＯＣ１−４アルキルである。
【００３６】
式（Ｉ）のいくつかの態様では、Ｄが、（任意に１個もしくは複数のハロゲンもしくはＯＣ１−４アルキル基で置換された）ピラゾール、イソオキサゾール、トリアゾール、イミダゾール、ピリジン、ピリミジン、ピリミドン、ハロ、−ＯＨ（そのケト型＝Ｏを含む）、−ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４分岐アルキル又はＯＣ１−４アルキルである。
【００３７】
式（Ｉ）のいくつかの態様では、二環式部分ＣＤが、任意に１個もしくは複数のハロゲン又はＯＣ１−４アルキルで置換されたピラゾロピロリジン、ピラゾロピペリジン、イソオキサゾロピペリジン、トリアゾロピペラジン、ピラゾロピペラジン、イミダゾピペラジン、ピリジノピペラジン、ピリミジノピペラジン、−ＯＨ（そのケト型＝Ｏを含む）、−ＣＮ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４分岐アルキルである。
【表１−１】
2020505369.tif 000004
【表１−２】
2020505369.tif 000005
【表１−３】
2020505369.tif 000006
又はその薬学的に許容される塩。
【００３８】
他の態様では、式（Ｉ）の化合物が、例１〜２０、表１、及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【００３９】
化学的定義
「アルキル」という用語は、鎖中に１〜１２個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖アルキル基を指す。「Ｃｘ−ｙアルキル」は、ｘ〜ｙ個の炭素原子を有するアルキル基を指す。例えば、「Ｃ１−４アルキル」は、鎖中に１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を指す。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ヘキシル及びイソヘキシルが挙げられる。
【００４０】
「アルコキシ」という用語は、アルキルが上に定義される通りであるアルキル−Ｏ−基を指す。アルコキシ基は、酸素原子を介して親構造に結合している。「Ｃ１−４アルコキシ」は、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基が酸素に結合しているアルコキシ基を指す。
【００４１】
「アルキレン」という用語は、アルカンの基である二価基を指す。アルキレンは直鎖又は分岐鎖二価アルキル基であり得る。「Ｃ１−４アルキレン」は、１〜４個の炭素原子を有するアルキレン基を指す。
【００４２】
「アリール」という用語は、単環（フェニル基）又は多重縮合環（ナフチル、アントラセニル又はインダニルなど）を有する６〜１４個の炭素原子の一価芳香族炭素環式基を指し、縮合環は任意に芳香族であり、但し、アリール基と親構造の結合点は芳香環の原子を介している。
【００４３】
「シクロアルキル」という用語は、炭素環１個当たり３〜１２個の環原子を有する、飽和又は部分飽和の、単環式、縮合多環式、架橋多環式、又はスピロ多環式炭素環を指す。シクロアルキル基の具体的な例として以下のものが挙げられる。適切に結合した部分の形態としてである：
【化２】
2020505369.tif 000007
【化３】
2020505369.tif 000008
【化４】
2020505369.tif 000009
【００４４】
「ハロゲン」という用語は、塩素、フッ素、臭素又はヨウ素を表す。「ハロ」という用語は、クロロ、フルオロ、ブロモ又はヨードを表す。
【００４５】
「ハロアルキル」という用語は、アルキル基上の１個又は複数の水素原子がハロゲン基で置換されている、本明細書に記載されるアルキル基を指す。このような基の例としては、限定されないが、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、フルオロエチル、トリフルオロエチルなどのフルオロアルキル基が挙げられる。
【００４６】
「ハロアルコキシ」という用語は、アルキル基上の１個又は複数の水素原子がハロゲン基で置き換えられているアルキル−Ｏ−基を指し、例として、トリフルオロメトキシ、フルオロエトキシなどの基が挙げられる。
【００４７】
「ヘテロアルキレン」という用語は、１個の炭素鎖原子が−Ｓ−、−Ｏ−又はＮＲ−（式中、ＲはＨ又はＣ１−４アルキルである）によって置き換えられている二価アルキレン基を指す。
【００４８】
「ヘテロアリール」という用語は、３〜１２個の環原子を有する単環式、縮合二環式又は縮合多環式芳香族複素環（炭素原子ならびに窒素、酸素及び硫黄から選択される最大４個のヘテロ原子から選択される環原子を有する環構造）を指す。二環式ヘテロアリール基は、１個の芳香環と１個の非芳香環を有する二環式基を含む。ヘテロアリール環が−ＯＨで置換されている場合、得られる環系が対応するオキソ置換互変異性体として描かれ得ることを当業者は理解するであろう。ヘテロアリール基の具体的な例として以下のものが挙げられる。適切に結合した部分の形態としてである：
【化５】
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【化６】
2020505369.tif 000011
【化７】
2020505369.tif 000012
【化８】
2020505369.tif 000013
【化９】
2020505369.tif 000014
【化１０】
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【００４９】
「ヘテロシクロアルキル」という用語は、縮合、架橋又はスピロ環系を含む単環又は複数縮合環を有し、１〜１０個のヘテロ原子を含む３〜２０個の環原子を有する飽和又は部分不飽和基を指す。これらの環原子は、炭素、窒素、硫黄又は酸素からなる群から選択される。一定の態様では、複素環式基の１個又は複数の窒素原子及び／又は硫黄原子が任意に酸化されて、Ｎ−オキシド、−Ｓ（Ｏ）−、又はＳＯ２−部分を提供する。複素環式基の具体的な例としては以下のものが挙げられる。適切に結合した部分の形態としてである：
【化１１】
2020505369.tif 000016
【００５０】
「オキソ」という用語はカルボニル酸素を表す。例えば、オキソで置換されたシクロペンチルはシクロペンタノンである。
【００５１】
当業者であれば、本明細書に提供される定義に列挙又は例示される種が網羅的ではないこと、及びこれらの定義される用語の範囲内のさらなる種もまた選択され得ることを認識するであろう。
【００５２】
「置換された」という用語は、特定の基又は部分が１個又は複数の置換基を有することを意味する。「非置換」という用語は、特定の基が置換基を有さないことを意味する。「任意に置換された」という用語は、特定の基が非置換であるか、又は１個もしくは複数の置換基によって置換されていることを意味する。「置換された」という用語が構造系を記載するために使用される場合、置換はその系上の任意の原子価許容位置で起こることを意味する。
【００５３】
本明細書に描かれるいずれの式も、その構造式の化合物、ならびに一定の変形又は形態を表すことを意図している。例えば、本明細書に示される式は、ラセミ形態、又は１種もしくは複数のエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは幾何異性体、もしくはこれらの混合物を含むことを意図している。さらに、本明細書に示されるいずれの式も、このような化合物の水和物、溶媒和物もしくは多形、又はこれらの混合物も指すことを意図している。
【００５４】
本明細書に示されるいずれの式も、非標識形態ならびに同位体標識形態の化合物を表すことを意図している。同位体標識化合物は、１個又は複数の原子が選択された原子質量又は質量数を有する原子によって置き換えられていることを除いて、本明細書に示される式によって描かれる構造を有する。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素、塩素及びヨウ素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ及び１２５Ｉが挙げられる。このような同位体標識化合物は、薬物又は基質組織分布アッセイを含む代謝研究（好ましくは１４Ｃを使用）、反応速度論研究（例えば２Ｈ又は３Ｈを使用）、検出もしくはイメージング技術［陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）又は単一光子放出型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）など］において、又は患者の放射性治療において有用である。特に、１８Ｆ又は１１Ｃ標識化合物は、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ研究に特に好まれ得る。ＰＥＴ及びＳＰＥＣＴ研究は、例えば、Ｂｒｏｏｋｓ、Ｄ．Ｊ．、「Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｌｅ−Ｐｈｏｔｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｃｏｍｐｕｔｅｄ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ  ｉｎ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、ＮｅｕｒｏＲｘ  ２００５、２（２）、２２６〜２３６及びその中に引用されている参考文献に記載されている。さらに、重水素（すなわち、２Ｈ）などのより重い同位体による置換は、より高い代謝安定性、例えば増加したインビボ半減期又は減少した投与量要件から生じる一定の治療上の利点を与え得る。本発明の同位体標識化合物及びそのプロドラッグは、一般に、非同位体標識試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識試薬を用いることにより、スキーム又は下記の例及び調製に開示される手順を行うことによって調製することができる。
【００５５】
本明細書で置換基のクラスに適用される場合、ｊ＞ｉである「Ｃｉ−ｊ」という命名は、ｉ及びｊを含むｉからｊまでの数の炭素員のそれぞれ及びすべてが独立に実現される本発明の態様を指すことを意図している。例として、Ｃ１−３という用語は独立に、１個の炭素員を有する態様（Ｃ１）、２個の炭素員を有する態様（Ｃ２）、及び３個の炭素員を有する態様（Ｃ３）を指す。
【００５６】
本明細書で言及される任意の置換基は、このような可能性のうちの２つ以上が許容される場合、種々の結合可能性を包含することを意図している。例えば、Ａ≠Ｂである置換基−Ａ−Ｂ−への言及は、本明細書において、Ａが第１の置換員に結合し、Ｂが第２の置換員に結合しているこのような置換基を指し、Ａが第２の置換員に結合し、Ｂが第１の置換員に結合しているこのような置換基も指す。
【００５７】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物、好ましくは上記のもの及び本明細書に例示される特定の化合物の薬学的に許容される塩、ならびにこのような塩を含む医薬組成物、ならびにこのような塩を使用する方法も含む。
【００５８】
「薬学的に許容される塩」とは、非毒性、生物学的に耐容される、又は対象への投与に生物学的に適している、本明細書に表される化合物の遊離酸又は塩基の塩を意味することを意図している。一般的には、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９７７、６６、１〜１９を参照されたい。好ましい薬学的に許容される塩は、薬理学的に有効であり、過度の毒性、刺激又はアレルギー反応を伴わずに対象の組織と接触するのに適しているものである。本明細書に記載される化合物は、十分に酸性の基、十分に塩基性の基、両方の種類の官能基、又は各種類の２つ以上を有し、したがっていくつかの無機又は有機塩基、ならびに無機及び有機酸と反応して薬学的に許容される塩を形成する。
【００５９】
薬学的に許容される塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオン酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオアート、ヘキシン−１，６−ジオアート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、メチルスルホン酸塩、プロピルスルホン酸塩、ベシル酸塩、キシレンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホナート、ナフタレン−２−スルホナート、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩及びマンデル酸塩が挙げられる。他の適切な薬学的に許容される塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ペンシルベニア州イーストン、１９８５年に見られる。
【００６０】
塩基性窒素を含有する式（Ｉ）の化合物の場合、薬学的に許容される塩は、当技術分野で利用可能な任意の適切な方法、例えば遊離塩基を、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、硝酸、ホウ酸、リン酸など、又は有機酸、例えば酢酸、フェニル酢酸、プロピオン酸、ステアリン酸、乳酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、イセチオン酸、コハク酸、吉草酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、オレイン酸、パルミチン酸、ラウリン酸、ピラノシジル酸、例えばグルクロン酸又はガラクツロン酸、α−ヒドロキシ酸、例えばマンデル酸、クエン酸又は酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、ナフトエ酸又はケイ皮酸、スルホン酸、例えばラウリルスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸又はエタンスルホン酸、又は本明細書に例として示されるなどの任意の適合性のある酸の混合物、ならびにこの技術の当業者のレベルを考慮して同等又は許容される代替物とみなされる任意の他の酸及びその混合物で処理することによって調製され得る。
【００６１】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容されるプロドラッグ、及びこのような薬学的に許容されるプロドラッグを使用する治療方法に関する。「プロドラッグ」という用語は、対象への投与後に、加溶媒分解もしくは酵素的切断などの化学的もしくは生理学的過程を介してインビボで、又は生理学的条件下で（例えば、プロドラッグは生理学的ｐＨにされると式（Ｉ）の化合物に変換される）化合物をもたらす指定化合物の前駆体を意味する。「薬学的に許容されるプロドラッグ」は、非毒性であり、生物学的に耐容され、対象への投与に生物学的に適しているプロドラッグである。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製のための例示的な手順は、例えば、“  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”、編者Ｈ．  Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５年に記載されている。
【００６２】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の薬学的に活性な代謝産物、及び本発明の方法におけるこのような代謝産物の使用に関する。「薬学的に活性な代謝産物」は、式（Ｉ）の化合物又はその塩の体内における代謝の薬理学的に活性な生成物を意味する。化合物のプロドラッグ及び活性代謝産物は、当技術分野で公知の又は利用可能な日常的技術を用いて決定することができる。例えば、Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９７、４０、２０１１〜２０１６；Ｓｈａｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９９７、８６（７）、７６５〜７６７；Ｂａｇｓｈａｗｅ、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．１９９５、３４、２２０〜２３０；Ｂｏｄｏｒ、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１９８４、１３、２５５〜３３１；Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｐｒｅｓｓ、１９８５）；及びＬａｒｓｅｎ、Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎら編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９１）を参照されたい。
【００６３】
医薬組成物
治療目的のために、本明細書に記載される化合物を含む医薬組成物は、１種又は複数の薬学的に許容される賦形剤をさらに含み得る。薬学的に許容される賦形剤は、非毒性であり、対象への投与に生物学的に適している物質である。このような賦形剤は、本明細書に記載される化合物の投与を容易にし、有効成分と適合性である。薬学的に許容される賦形剤の例としては、安定化剤、潤滑剤、界面活性剤、希釈剤、抗酸化剤、結合剤、着色剤、充填剤、乳化剤又は味覚修飾剤が挙げられる。好ましい態様では、本発明による医薬組成物は無菌組成物である。医薬組成物は、当業者に公知であるか、又は利用可能になる配合技術を用いて調製することができる。
【００６４】
このような組成物を管理する国及び地方の規則と一致する組成物を含む、無菌組成物も本発明によって企図される。
【００６５】
本明細書に記載される医薬組成物及び化合物は、種々の剤形を調製するための当技術分野で公知の従来の方法による固体担体と共に、適切な医薬溶媒もしくは担体中の液剤、乳剤、懸濁剤もしくは分散液として、又は丸剤、錠剤、ロゼンジ、坐剤、サシェ、糖衣錠、顆粒剤、散剤、再構成用粉末もしくはカプセル剤として製剤化され得る。本発明の医薬組成物は、経口、非経口、直腸、経鼻、局所もしくは眼球経路などの適切な送達経路によって、又は吸入によって投与することができる。好ましくは、組成物が静脈内又は経口投与用に製剤化される。
【００６６】
経口投与のために、本発明の化合物を、錠剤もしくはカプセル剤などの固体形態で、又は液剤、乳剤もしくは懸濁剤として提供することができる。経口組成物を調製するために、本発明の化合物を、例えば、１日約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ、又は１日約０．０５〜約２０ｍｇ／ｋｇ、又は１日約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇの投与量を生じるように製剤化することができる。さらなる投与量には、１日約０．１ｍｇ〜１ｇ、１日約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、１日約１０ｍｇ〜約５０ｍｇ、１日約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、又は１日約２５０ｍｇ〜１ｇが含まれる。経口錠剤は、希釈剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、着色剤及び保存剤などの適合性の薬学的に許容される賦形剤と混合した１種又は複数の有効成分を含み得る。適切な不活性充填剤には、炭酸ナトリウム及びカルシウム、リン酸ナトリウム及びカルシウム、ラクトース、デンプン、糖、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが含まれる。例示的な液体経口賦形剤には、エタノール、グリセロール、水などが含まれる。デンプン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、デンプングリコール酸ナトリウム、微結晶セルロース及びアルギン酸が例示的な崩壊剤である。結合剤はデンプン及びゼラチンを含み得る。潤滑剤は、存在する場合、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクであり得る。所望であれば、錠剤を、胃腸管での吸収を遅らせるためにモノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリルなどの材料でコーティングしてもよく、又は腸溶性コーティングでコーティングしてもよい。
【００６７】
経口投与用のカプセル剤には、硬及び軟ゼラチンカプセルが含まれる。硬ゼラチンカプセルを調製するために、１種又は複数の有効成分を固体、半固体又は液体希釈剤と混合することができる。軟ゼラチンカプセルは、有効成分を水、油（落花生油又はオリーブ油など）、流動パラフィン、短鎖脂肪酸のモノグリセリドとジグリセリドの混合物、ポリエチレングリコール４００、又はプロピレングリコールと混合することによって調製することができる。
【００６８】
経口投与用の液剤は、懸濁剤、液剤、乳剤もしくはシロップの形態であってもよく、又は凍結乾燥する、もしくは使用前に水もしくは他の適切なビヒクルで再構成するための乾燥製品として提供してもよい。このような液体組成物は、任意に、懸濁化剤（例えば、ソルビトール、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルなど）；非水性ビヒクル、例えば油（例えば、アーモンド油又は分留ヤシ油）、プロピレングリコール、エチルアルコール又は水；保存剤（例えば、メチルもしくはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾアート又はソルビン酸）；レシチンなどの湿潤剤；及び所望であれば香味剤又は着色剤などの薬学的に許容される賦形剤を含有し得る。
【００６９】
本発明の組成物は坐剤として直腸投与用に製剤化することができる。静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内又は皮下経路を含む非経口使用のために、本発明の薬剤を、適切なｐＨ及び等張性に緩衝された無菌水溶液もしくは懸濁液で、又は非経口的に許容される油で提供することができる。適切な水性ビヒクルには、リンゲル液及び等張塩化ナトリウムが含まれる。このような形態は、アンプルもしくは使い捨て注射装置などの単位用量形態、適切な用量を引き出すことができるバイアルなどの複数用量形態、又は注射用製剤を調製するために使用することができる固体形態もしくは前濃縮物（ｐｒｅ−ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ）で提示することができる。例示的な注入用量は、数分〜数日間に及ぶ期間にわたって、約１〜１０００μｇ／ｋｇ／分の医薬担体と混和された薬剤に及ぶ。
【００７０】
経鼻、吸入又は経口投与の場合、本発明の医薬組成物を、例えば、同様に適切な担体を含有するスプレー製剤を使用して投与することができる。
【００７１】
局所施用の場合、本発明の化合物を、好ましくはクリームもしくは軟膏又は局所投与に適した同様のビヒクルとして製剤化する。局所投与の場合、本発明の化合物を、ビヒクルに対して約０．１％〜約１０％の薬物の濃度で医薬担体と混合することができる。本発明の薬剤を投与する別の様式は、経皮送達をもたらすためにパッチ製剤を利用し得る。
【００７２】
本明細書で使用する場合、「治療する」又は「治療」という用語は、「予防的」治療と「治療的」治療の両方を包含する。「予防的」治療は、疾患の発症、疾患の症状もしくは医学的状態の延期、出現する可能性のある症状の抑制、又は疾患もしくは症状の発症もしくは再発のリスクの低減を示すことを意図している。「治療的」治療は、既存の疾患、症状又は状態の重症度の軽減、又は悪化の抑制を含む。よって、治療は、既存の疾患症状の悪化を改善もしくは防止すること、追加の症状が生じるのを防止すること、症状の根本的な全身原因を改善もしくは防止すること、障害もしくは疾患を抑制すること、例えば障害もしくは疾患の発症を阻止すること、障害もしくは疾患を軽減すること、障害もしくは疾患の後退を引き起こすこと、疾患もしくは障害によって引き起こされた状態を軽減すること、又は疾患もしくは障害の症状を停止することを含む。
【００７３】
「対象」という用語は、このような治療を必要とする哺乳動物患者、例えばヒトを指す。
【００７４】
タンパク質凝集を特徴とする例示的な神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症、認知症を伴うパーキンソン病、多系統萎縮症、筋萎縮性側索硬化症及びハンチントン病ならびにがん及び炎症性疾患、例えばクローン病が含まれる。
【００７５】
一側面では、本発明の化合物及び医薬組成物が、α−シヌクレイン、β−アミロイド及び／又はタウタンパク質凝集体を特異的に標的とする。よって、これらの化合物及び医薬組成物は、α−シヌクレイン、β−アミロイド及び／又はタウタンパク質の凝集を調節、防止、逆転、遅延又は阻害するために使用することができ、例えばα−シヌクレイン、β−アミロイド及び／又はタウタンパク質の凝集などの凝集に関連する又は凝集によって引き起こされる変性神経疾患を治療するために本発明の方法に使用される。好ましくは、本発明の方法は、α−シヌクレイン、β−アミロイド及び／又はタウタンパク質の凝集に関連する神経変性疾患を標的とする。好ましい態様では、治療方法が、パーキンソン病、アルツハイマー病、レビー小体病又は多系統萎縮症を標的とする。他の態様では、方法が、がん又は黒色腫を標的とする。本発明の化合物、組成物及び方法はまた、神経細胞死などのタンパク質凝集に次ぐ有害効果を軽減するために使用される。
【００７６】
いくつかの側面では、本発明の化合物、組成物及び方法が、α−シヌクレイン（ＳＹＮ）凝集を標的とするために使用される。別の側面では、本発明の化合物、組成物及び方法がＡβ凝集を標的とするために使用される。
【００７７】
本発明の阻害方法において、「有効量」は、タンパク質又はペプチド凝集を減少させる、その進行を遅延させる、又は逆転させるのに十分な量を意味する。凝集量の測定は、以下に記載されるものなどの日常的な分析方法によって実施され得る。このような調節は、インビトロアッセイを含む種々の設定において有用である。このような方法では、細胞が好ましくは神経細胞である。
【００７８】
本発明による治療方法において、「有効量」は、このような治療を必要とする対象において所望の治療的利益を一般にもたらすのに十分な量又は用量を意味する。本発明の化合物の有効量又は用量は、日常的な因子、例えば投与又は薬物送達の様式又は経路、薬剤の薬物動態学、感染症の重症度及び経過、対象の健康状態、状態及び体重、ならびに治療を行っている医師の判断を考慮して、モデル化、用量漸増又は臨床試験などの日常的な方法によって確認することができる。例示的な用量は、１日当たり対象の体重１キログラム当たり約１μｇ〜２ｍｇの活性剤、好ましくは約０．０５〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、又は約１〜３５ｍｇ／ｋｇ／日、又は約０．１ｍｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。代替態様では、例示的な用量が、１日当たり約１ｍｇ〜約１ｇ、又は１日当たり約１〜５００、１〜２５０、１〜１００、１〜５０、５０〜５００又は２５０〜５００ｍｇの範囲である。総投与量が単一投与単位又は分割投与単位（例えば、ＢＩＤ、ＴＩＤ、ＱＩＤ）で与えられてもよい。
【００７９】
いったん患者の疾患が改善したら、予防又は維持療法のために用量を調整することができる。例えば、投与量もしくは投与頻度、又はその両方を、症状の関数として、所望の治療的又は予防的効果が維持されるレベルまで減少させることができる。当然、症状が適切なレベルに緩和された場合、治療は中止され得る。しかしながら、患者は、症状の再発で長期的に断続的な治療を必要とする場合がある。患者はまた長期的には慢性的治療を必要とする場合がある。
【００８０】
薬物組み合わせ
本明細書に記載される本発明の化合物は、神経変性障害の治療において、１種又は複数の追加の有効成分と組み合わせて医薬組成物又は方法に使用することができる。がん用途のためのさらなる追加の有効成分には、他のがん治療薬又はがん化学療法薬の有害効果を軽減する薬剤が含まれる。このような組み合わせは、有効性を増加させる、他の疾患症状を寛解させる、１つもしくは複数の副作用を減少させる、又は本発明の化合物の必要量を減少させるのに役立ち得る。追加の有効成分は、本発明の化合物とは別の医薬組成物で投与されてもよいし、又は単一医薬組成物中に本発明の化合物と共に含まれてもよい。追加の有効成分は、本発明の化合物の投与と同時に、その前に、又はその後に投与することができる。
【００８１】
組み合わせ薬剤には、それだけに限らないが、ａ）タンパク質の誤った折り畳みに対処する化合物（例えば、これらのタンパク質の産生を減少させる薬物、そのクリアランスを増加する薬物あるいはその凝集及び／又は伝播を変化させる薬物）；ｂ）このような障害の症状を治療する化合物（例えば、ドーパミン補充療法）；及びｃ）相補的機序によって神経保護剤として作用する薬物（例えば、オートファジーを標的とするもの、抗酸化剤であるもの、及びアデノシンＡ２Ａアンタゴニストなどの他の機序によって作用するもの）などの、疾患に関連する別の標的に対する活性剤を含む、神経変性障害の治療において有効であることが知られている又は発見されている追加の有効成分が含まれる。
【００８２】
例えば、本発明の組成物及び製剤、ならびに治療方法は、他の薬物又は医薬品、例えばタンパク質凝集、例えばシヌクレイン、β−アミロイド及び／又はタウタンパク質凝集に関連するあるいはこれによって引き起こされる変性神経疾患、例えばパーキンソン病、アルツハイマー病（ＡＤ）、レビー小体病（ＬＢＤ）及び多系統萎縮症（ＭＳＡ）、又は関連する症状もしくは状態を治療又は緩和するのに有用な他の活性剤をさらに含むことができる。例えば、本発明の医薬組成物は、１種又は複数のこのような活性剤をさらに含んでもよく、治療方法は、有効量の１種又は複数のこのような活性剤を投与するステップをさらに含んでもよい。一定の態様では、追加の活性剤が、抗生物質（例えば、抗菌性又は静菌性のペプチド又はタンパク質）、例えば、グラム陽性又は陰性細菌に対して有効なもの、流体、サイトカイン、免疫調節剤、抗炎症剤、補体活性化剤、例えばコラーゲン様ドメイン又はフィブリノーゲン様ドメイン（例えば、フィコリン）、炭水化物結合ドメインを含むペプチド又はタンパク質など、及びこれらの組み合わせであり得る。追加の活性剤には、ドーパミン治療薬、カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害剤、モナミンオキシダーゼ阻害剤、認識促進剤（アセチルコリンエステラーゼ阻害剤又はメマンチンなど）、アデノシン２Ａ受容体アンタゴニスト、β−セクレターゼ及びγ−セクレターゼ阻害剤を含む、このような組成物及び方法に有用なものが含まれる。特定の態様では、少なくとも１種の本発明の化合物が、タクリン（Ｃｏｇｎｅｘ）、ドネペジル（Ａｒｉｃｅｐｔ）、リバスチグミン（Ｅｘｅｌｏｎ）、ガランタミン（Ｒｅｍｉｎｙｌ）、フィゾスチグミン、ネオスチグミン、イコペジル（ＣＰ−１１８９５４、５，７−ジヒドロ−３−（２−（１−（２−フルオロベンジル）−４−ピペリジニル）エチル）−６Ｈ−ピロロ（３，２，ｆ）−１，２−ベンズイソオキサゾール−６−オンマレアート）、ＥＲ−１２７５２８（４−［（５，６−ジメトキシ−２−フルオロ−１−インダノン）−２−イル］メチル−１−（３−フルオロベンジル）ピペリジン塩酸塩）、ザナペジル（ＴＡＫ−１４７；３−［１−（フェニルメチル）ピペリジン−４−イル］−１−（２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−１−ベンザゼピン−８−イル）−１−プロパンフマラート）、メトリホナート（Ｔ−５８８；（−）−Ｒ−α−［［２−（ジメチルアミノ）エトキシ］メチル］ベンゾ［ｂ］チオフェン−５−メタノール塩酸塩）、ＦＫ−９６０（Ｎ−（４−アセチル−１−ピペラジニル）−ｐ−フルオロベンズアミド−水和物）、ＴＣＨ−３４６（Ｎ−メチル−Ｎ−２−ピロピニルジベンゾ［ｂ，ｆ］オキセピン−１０−メタンアミン）、ＳＤＺ−２２０−５８１（（Ｓ）−α−アミノ−５−（ホスホノメチル）−［１，１’−ビフェニル］−３−プロピオン酸）、メマンチン（Ｎａｍｅｎｄａ／Ｅｘｉｂａ）、１，３，３，５，５−ペンタメチルシクロヘキサン−１−アミン（Ｎｅｒａｍｅｘａｎｅ）、タレンフルルビル（Ｆｌｕｒｉｚａｎ）、トラミプロサート（Ａｌｚｈｅｍｅｄ）、クリオキノール、ＰＢＴ−２（８−ヒドロキシキニロン誘導体）、１−（２−（２−ナフチル）エチル）��４−（３−トリフルオロメチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン、フペルジンＡ、ポサチレリン、リュープロリド又はその誘導体、イソプロニクリン、（３−アミノプロピル）（ｎ−ブチル）ホスフィン酸（ＳＧＳ−７４２）、Ｎ−メチル−５−（３−（５−イソプロポキシピリジニル））−４−ペンテン−２−アミン（イソプロニクリン）、１−デカンアミニウム、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−Ｎ−メチル−Ｎ−オクチル−、内塩（ｚｔ−１）、サリチル酸塩、アスピリン、アモキシプリン、ベノリラート、コリンマグネシウムサリチラート、ジフルニサル、ファイスラミン（ｆａｉｓｌａｍｉｎｅ）、サリチル酸メチル、サリチル酸マグネシウム、サリチル酸サリチル、ジクロフェナク、アセクロフェナク、アセメタシン、ブロムフェナク、エトドラク、インドメタシン、ナブメトン、スリンダク、トルメチン、イブプロフェン、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、ケトロラク、ロキソプロフェン、ナプロキセン、チアプロフェン酸、スプロフェン、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フェニルブタゾン、アザプロパゾン、メタミゾール、オキシフェンブタゾン、スルフィンプラゾン、ピロキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム、テノキシカム、セレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、ニメスリド、アリールアルカン酸、２−アリールプロピオン酸（プロフェン）、Ｎ−アリールアントラニル酸（フェナム酸）、ピラゾリジン誘導体、オキシカム、ＣＯＸ−２阻害剤、スルホンアニリド、必須脂肪酸及びミノザック（２−（４−（４−メチル−６−フェニルピリダジン−３−イル）ピペラジン−１−イル）ピリミジン二塩酸塩水和物）、ならびにこれらの組み合わせからなる群から選択される１種又は複数の薬物を用いた医薬組成物又は治療方法に組み合わせられ得る。
【００８３】
がん治療のための潜在的な併用剤には、例えば、プロテイン及び脂質キナーゼ阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋ、Ｂ−ｒａｆ、ＢＣＲ／ＡＢＬ）、放射線治療促進剤、微小管結合剤（例えば、タキソール、ビンブラスチン）、細胞代謝阻害剤、ＤＮＡインターカレーター、トポイソメラーゼ阻害剤（例、ドキソルビシン）、及びＤＮＡアルキル化剤が含まれ得る。
【００８４】
アッセイ
本明細書に記載される化合物は、インビトロ、インビボ又はエキソビボ実験系を含む研究用途に使用することができる。実験系には、限定されないが、細胞試料、組織試料、細胞成分もしくは細胞成分の混合物、全体もしくは部分臓器、又は生物が含まれ得る。研究用途には、限定されないが、アッセイ試薬としての使用、生化学的経路の解明、又は本明細書に記載される１種もしくは複数の化合物の存在下もしくは非存在下での実験系に対する他の薬剤の効果の評価が含まれる。
【００８５】
本明細書に記載される化合物は生化学アッセイにも使用することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される化合物を、対象の組織又は細胞試料とインキュベートして、化合物投与に対する対象の潜在的反応を評価する、又はどの本明細書に記載される化合物が特定の対象もしくは対象のセットにおいて最適な効果をもたらすかを決定することができる。１つのこのようなアッセイは、（ａ）対象から１種又は複数のバイオマーカーの調節をアッセイすることができる細胞試料又は組織試料を得ること；（ｂ）１種又は複数の本明細書に記載される化合物を細胞試料又は組織試料に投与すること；及び（ｃ）化合物の投与前のバイオマーカーの状態と比較した、化合物の投与後の１種又は複数のバイオマーカーの調節量を決定することを含む。任意に、ステップ（ｃ）の後に、アッセイは、ステップ（ｃ）で決定された調節量に基づいてタンパク質凝集に関連する疾患又は医学的状態を治療するのに使用するための化合物を選択するさらなるステップ（ｄ）を含むだろう。
【００８６】
化学合成
本発明の方法で有用な例示的な化学物質を、以下のそれらの一般的な調製のための例示的な合成スキーム及び続く具体的な例を参照することによってここで説明する。当業者であれば、本明細書の種々の化合物を得るために、最終的に所望の置換基が、所望の生成物をもたらすのに適するように保護の有無に関わらず反応スキームを通して運ばれるように、出発材料を適切に選択することができることを認識するだろう。あるいは、最終的に所望の置換基の代わりに、反応スキームを通して運ばれ、適宜所望の置換基で置換され得る適切な基を使用することが必要又は望ましくあり得る。さらに、当業者であれば、以下のスキームに示される変換が特定のペンダント基の官能性と適合する任意の順序で行われ得ることを認識するであろう。一般スキームに描かれる反応の各々が、好ましくは約０℃〜使用される有機溶媒の還流温度の温度で行われる。特に指定しない限り、変数は、式（Ｉ）に関して上に定義される通りである。本明細書に記載される同位体標識化合物は、適切に標識された出発材料を用いて、以下に記載される方法に従って調製される。このような材料は一般に、放射性標識化学試薬の商業的供給業者から入手可能である。
【化１２】
2020505369.tif 000017
式（Ｉ）のある一定の化合物をスキームＡに示されるように調製する。置換誘導体Ａ１（式中、Ｘは脱離基、例えばハロゲン、例えばＢｒである）は市販されている又は公知の方法、例えば国際公開第２０１５１１６６６３号パンフレットに概説されている方法に従って調製される。化合物Ａ１をアミンＡ２とカップリングさせて式（Ｉ）の化合物を得る。適切な条件には、適切な溶媒、例えばＭｅＣＮを適切な塩基、例えばＫ２ＣＯ３と共に適切な温度、例えば１００〜１２０℃で、圧力下で、適切な時間、例えば１６〜４８時間用いることが含まれる。あるいは、反応を、適切な塩基、例えばＤＩＰＥＡを用いて、別の溶媒、例えばジオキサン中で高温、例えば１２０℃及び圧力下で、適切な時間、例えば２０〜１２０時間行ってもよい。あるいは、Ｐｄ触媒、例えば適切な配位子、例えばＲｕＰｈｏｓ又はＢｒｅｔｔｐｈｏｓを有するＰｄ２（ｄｂａ）３を、ジオキサンなどの適切な溶媒中、高温高圧下、例えば１００〜１１０℃で、適切な塩基、例えばＣｓ２ＣＯ３又はＮａＯｔＢｕの存在下で、適切な期間、例えば３〜１６時間使用することができる。
アミンＡ２は市販されている、又は当業者に公知の任意の方法に従って調製することができる。
【００８７】
例
分析方法
【００８８】
質量分析（ＭＳ）スペクトルは、Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８−２．１×３０ｍｍ、２．５μｍ（Ｗａｔｅｒｓ）カラムを使用して、ＨＰＬＣモジュラーＰｒｏｍｉｎｅｎｃｅ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）に連結されたエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）を用いるＬＣＭＳ−２０１０ＥＶ質量分析計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）で記録した。濃度約１ｍｇ／ｍｌの３μＬ量の試料溶液を注入した。塩基性条件の移動相は、Ａ）水中５ｍＭギ酸アンモニウム＋  ０．１％アンモニア、Ｂ）アセトニトリル中５％移動相Ａ＋０．１％アンモニアの混合物であった。使用した勾配は以下の通りで：４分で５：９５（Ｂ／Ａ）から９５：５（Ｂ／Ａ）、次の１分間９５：５（Ｂ／Ａ）を保持した。
【００８９】
順相クロマトグラフィーは、シリカゲルカラム（１００：２００メッシュシリカゲル又はフラッシュクロマトグラフィーシステム用のカートリッジ、例えばＴｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ  ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標））を使用して行った。
【００９０】
ＮＭＲスペクトルは、取得時間（ａｔ）＝２．０秒、緩和遅延（ｄ１）＝２．０秒及び線広がり（ｌｂ）＝０．５Ｈｚで、Ｖａｒｉａｎ  ４００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光計で記録した。化学シフトは、重水素化溶媒（ＤＭＳＯ−ｄ６又はＣＤＣｌ３）の残留プロトンに由来するシグナルを基準とする。化学シフトは百万分率（ｐｐｍ）及びカップリング定数（Ｊ）（ヘルツ（Ｈｚ））で与えられる。スピン多重度は、ブロード（ｂｒ）、一重項（ｓ）、二重項（ｄ）、三重項（ｔ）、四重項（ｑ）及び多重項（ｍ）として与えられる。
【００９１】
略語／再現試薬
【００９２】
Ａｃ：アセチル
【００９３】
ＡＣＮ又はＭｅＣＮ：アセトニトリル
【００９４】
ＢｒｅｔｔＰｈｏｓプレ触媒：クロロ［２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−３，６−ジメトキシ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル］［２−（２−アミノエチル）フェニル］パラジウム（ＩＩ）
【００９５】
生理食塩水：飽和塩化ナトリウム水溶液
【００９６】
ｎＢｕ：ｎ−ブチル
【００９７】
ｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチル
【００９８】
ＤＣＭ：ジクロロメタン
【００９９】
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
【０１００】
ＤＭＡＰ：４−（ジメチルアミノ）ピリジン
【０１０１】
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
【０１０２】
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
【０１０３】
ＥＳ＋：エレクトロスプレー陽イオン化
【０１０４】
ＥＳ−：エレクトロスプレー陰イオン化
【０１０５】
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化
【０１０６】
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
【０１０７】
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
【０１０８】
ＨＡＴＵ：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスファート
【０１０９】
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
【０１１０】
ｈ：時間
【０１１１】
ＬＣ：液体クロマトグラフィー
【０１１２】
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析
【０１１３】
ＬｉＨＭＤＳ：リチウムビス（トリメチルシリル）アミド
【０１１４】
Ｍｅ：メチル
【０１１５】
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
【０１１６】
ＭｅＯＨ：メタノール
【０１１７】
ＭＳ：質量分析
【０１１８】
ｍｉｎ：分
【０１１９】
ＮＭＲ：核磁気共鳴
【０１２０】
ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）：［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）
【０１２１】
Ｐｄ２（ｄｂａ）３：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
【０１２２】
ｒｔ：室温
【０１２３】
ＲｕＰｈｏｓ：２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジイソプロポキシビフェニル
【０１２４】
ＴＢＡＦ：テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド
【０１２５】
ＴＥＡ：トリエチルアミン
【０１２６】
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
【０１２７】
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
【０１２８】
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
【０１２９】
化合物名は、Ｂｉｏｖｉａ  Ｄｒａｗ  ２０１６バージョン１６．１を使用して描かれる構造から作成した。以下の例は説明のために提供されるが、本発明を限定するものではない。当業者であれば、式（Ｉ）の他の化合物にアクセスするために、適切な出発材料及び試薬の選択によって、以下の合成反応及びスキームを修正することができることを認識するであろう。
例１：２−（４，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化１３】
2020505369.tif 000018
【化１４】
2020505369.tif 000019
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び１，４，５，６−テトラヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（０．１３ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．３４ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０．１％〜８％ＭｅＯＨ）によって精製すると、２−（４，６−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．１２ｇ、５６％）が灰白色固体として得られた。
【０１３０】
ＨＰＬＣ純度：９９．１％
【０１３１】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４３５．００／２．６３／９８．５％
【０１３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１２−１．３３（ｍ，４Ｈ）１．４０−１．６３（ｍ，２Ｈ）２．７７−２．９８（ｍ，２Ｈ）４．１１−４．４９（ｍ，４Ｈ）６．９１−６．９９（ｍ，１Ｈ）７．０３（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．０９（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）７．２９（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．６１（ｓ，１Ｈ）７．８６（ｓ，１Ｈ）７．９５（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）１０．７４（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．８０（ｓ，１Ｈ）．
【０１３３】
例２：２−（６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）］ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化１５】
2020505369.tif 000020
【化１６】
2020505369.tif 000021
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．３０ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及び５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン（０．１１ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．３０ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を密封管中１２０℃で４８時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣を分取ＨＰＬＣにより精製すると、２−（６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０２５ｇ、８％）が灰白色固体として得られた。
【０１３４】
ＨＰＬＣ純度：９８．０％
【０１３５】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４５０．００／２．４７／９７．５％
【０１３６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，３Ｈ）１．１７−１．３３（ｍ，４Ｈ）１．４４−１．５６（ｍ，２Ｈ）２．７６−２．９４（ｍ，２Ｈ）３．９４（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．０８−４．１６（ｍ，１Ｈ）４．２０（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．８３（ｓ，２Ｈ）６．９１−６．９６（ｍ，１Ｈ）７．０２（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．０８（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）７．２９（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．８６（ｓ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）８．５１（ｓ，１Ｈ）１０．７４（ｂｒｓ，１Ｈ）
【０１３７】
例３：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（１，４，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化１７】
2020505369.tif 000022
【化１８】
2020505369.tif 000023
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン（０．０９ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．３４ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０．１％〜８％ＭｅＯＨ）によって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（１，４，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（０．０６ｇ、２７％）が灰白色固体として得られた。
【０１３８】
ＨＰＬＣ純度：９６．６％
【０１３９】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４４９．００／２．７１／９５．８％
【０１４０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８２（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，３Ｈ）１．１６−１．３３（ｍ，４Ｈ）１．４４−１．５８（ｍ，２Ｈ）２．７３−２．９３（ｍ，４Ｈ）３．８０−３．８４（ｍ，２Ｈ）４．０４−４．１２（ｍ，１Ｈ）４．３９−４．５７（ｍ，２Ｈ）６．９１−６．９７（ｍ，１Ｈ）７．０２（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．０８（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）７．２９（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，２Ｈ）７．５６（ｄ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．８１（ｓ，１Ｈ）７．９３（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）１０．７３（ｂｒｓ，１Ｈ）１２．５６（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１４１】
例４：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（２−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化１９】
2020505369.tif 000024
【化２０】
2020505369.tif 000025
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び２−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン（０．０９ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．３４ｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０．１％〜８％ＭｅＯＨ）によって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（２−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（０．０３ｇ、１３％）が灰白色固体として得られた。
【０１４２】
ＨＰＬＣ純度：９９．７％
【０１４３】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４６３．００／２．８５／９９．０％
【０１４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，３Ｈ）１．１５−１．３５（ｍ，４Ｈ）１．３８−１．６０（ｍ，２Ｈ）２．１２（ｓ，３Ｈ）２．７９−２．９７（ｍ，２Ｈ）３．９１−４．０２（ｍ，２Ｈ）４．０８−４．１８（ｍ，３Ｈ）４．６７（ｓ，２Ｈ）５．９５（ｓ，１Ｈ）６．９０−６．９８（ｍ，１Ｈ）７．０３（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．０９（ｄ，Ｊ＝１．４７Ｈｚ，１Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．８６（ｓ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１４５】
例５：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化２１】
2020505369.tif 000026
【化２２】
2020505369.tif 000027
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び１−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール（０．０９ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．２０ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０．２〜３．２％ＭｅＯＨ）によって精製し、ＤＣＭ：ペンタン（１：１０、２０ｍＬ）で研和すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（１−メチル−４，６−ジヒドロピロロ［３，４−ｃ］ピラゾール−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（０．０８ｇ、３６％）が灰白色固体として得られた。
【０１４６】
ＨＰＬＣ純度：９８．５％
【０１４７】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４４９．００／２．７２／９６．７％
【０１４８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３  Ｈ）１．１７−１．３８（ｍ，４Ｈ）１．４３−１．５９（ｍ，２Ｈ）２．７５−２．９４（ｍ，２Ｈ）３．８０（ｓ，３Ｈ）４．０８−４．１８（ｍ，１Ｈ）４．４６（ｓ，２Ｈ）４．６５（ｓ，２Ｈ）６．９２−７．００（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．１０（ｄ，Ｊ＝１．４７Ｈｚ，１Ｈ）７．２８−７．３１（ｍ，１Ｈ）７．３２（ｓ，１Ｈ）７．５８（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．８８（ｓ，１Ｈ）７．９７（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１４９】
例６：２−（６，７−ジヒドロ−４Ｈ−トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン−５−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化２３】
2020505369.tif 000028
【化２４】
2020505369.tif 000029
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び４，５，６，７−テトラヒドロトリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン（０．０７ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍＬ）中溶液に、ＮａＯｔＢｕ（０．０７ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０５ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴンで２０分間パージし、引き続いてＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０５ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加し、再びアルゴンで２０分間パージした。反応混合物を１００℃で３時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＣｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）、食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中４％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、２−（６，７−ジヒドロ−４Ｈ−トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン−５−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０７ｇ、３２％）が灰白色固体として得られた。
【０１５０】
ＨＰＬＣ純度：９９．６％
【０１５１】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４５０．００／２．５３／９９．８％
【０１５２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１８−１．３７（ｍ，４Ｈ）１．４２−１．６２（ｍ，２Ｈ）２．８４−２．９６（ｍ，２Ｈ）４．０４（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．１０−４．１８（ｍ，１Ｈ）４．５３（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．８４（ｓ，２Ｈ）６．９１−６．９８（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．１０（ｓ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．６８（ｓ，１Ｈ）７．８８（ｓ，１Ｈ）８．０５（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）１０．７５（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１５３】
例７：２−（６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン−７−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）］ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化２５】
2020505369.tif 000030
【化２６】
2020505369.tif 000031
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び５，６，７，８−テトラヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン（０．０７ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．２４ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０５ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴンで２０分間パージし、引き続いてＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０５ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加し、再びアルゴンで２０分間パージした。反応混合物を１００℃で３時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＣｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）、食塩水（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中１〜４％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、２−（６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン−７−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０４ｇ、１８％）が灰白色固体として得られた。
【０１５４】
ＨＰＬＣ純度：９９．４％
【０１５５】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４５０．００／２．５８／９７．４％
【０１５６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８２（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１２−１．３６（ｍ，４Ｈ）１．４２−１．６５（ｍ，２Ｈ）２．８２−２．９４（ｍ，２Ｈ）３．９９−４．１８（ｍ，３Ｈ）４．３０（ｔ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，２Ｈ）４．８１（ｓ，２Ｈ）６．９３−６．９９（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．１０（ｓ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．８８（ｓ，１Ｈ）８．０１（ｓ，１Ｈ）８．０６（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１５７】
例８：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（２−メチル−６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］）ピラジン−７−イル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化２７】
2020505369.tif 000032
【化２８】
2020505369.tif 000033
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び２−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン（０．０８ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）のジオキサン（８ｍＬ）中溶液に、ＮａＯｔＢｕ（０．０７ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０５ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴンで２０分間パージし、引き続いてＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０５ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加し、再びアルゴンで１０分間パージした。反応混合物を１００℃で１５時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）、食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中２．５〜６％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（２−メチル−６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピラジン−７−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（０．０７ｇ、３０％）が灰白色固体として得られた。
【０１５８】
ＨＰＬＣ純度：９９．６％
【０１５９】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４６４．００／２．５９／９８．６％
【０１６０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１５−１．３５（ｍ，４Ｈ）１．４６−１．５８（ｍ，２Ｈ）２．２４（ｓ，３Ｈ）２．７８−２．９４（ｍ，２Ｈ）４．０４（ｔ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，２Ｈ）４．０６−４．１６（ｍ，１Ｈ）４．２１（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．７４（ｓ，２Ｈ）６．９１−６．９８（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．０９（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．８７（ｓ，１Ｈ）８．０４（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）１０．７４（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１６１】
例９：２−（６，８−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化２９】
2020505369.tif 000034
【化３０】
2020505369.tif 000035
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．４０ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）及び５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン（０．１８ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のジオキサン（１６ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．９６ｇ、２．９６ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０９ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴンで３０分間パージした。Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．０９ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を密封管中１１０℃で１６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中０〜５％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、２−（６，８−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−７−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０７ｇ、１４％）が白色固体として得られた。
【０１６２】
ＨＰＬＣ純度：９８．３％
【０１６３】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４４９．００／２．７６／９６．０％
【０１６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ、３Ｈ）１．１８−１．３５（ｍ，４Ｈ）１．４４−１．６０（ｍ，２Ｈ）２．８２−２．９２（ｍ，２Ｈ）３．８９（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．１１（ｄ，Ｊ＝４．４０Ｈｚ，１Ｈ）４．１９（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．７１（ｓ，２Ｈ）６．８３（ｓ，１Ｈ）６．９３−６．９８（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．１０（ｄ，Ｊ＝１．４７Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．６５（ｓ，１Ｈ）７．８７（ｓ，１Ｈ）８．０１（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１６５】
例１０：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（３−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化３１】
2020505369.tif 000036
【化３２】
2020505369.tif 000037
ステップ−１：ｔｅｒｔ−ブチル３−アセチル−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソピペリジン−１−カルボキシラート（４．００ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）中溶液に、１Ｍ  ＬｉＨＭＤＳ（３．６９ｇ、２２．１ｍｍｏｌ）を−２０℃で滴加し、反応混合物を同じ温度で５分間撹拌した。ＣＨ３ＣＯＣｌ（１．８９ｇ、２４．１ｍｍｏｌ）を−２０℃で滴加し、反応混合物を同じ温度で５分間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を氷水（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（７５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン中０〜１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル３−アセチル−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボキシラート（１．６２ｇ、３３％）が黄色液体として得られた。
【０１６６】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ］＋／Ｒｔ／％：１４２．００／１．４３／７８．３％
【０１６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１．４９（ｓ，９Ｈ）２．１４（ｓ，３Ｈ）２．４５（ｔ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，２Ｈ）３．５９（ｔ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，２Ｈ）４．１９（ｓ，２Ｈ）１５．７（ｓ，１Ｈ）．
【０１６８】
ステップ−２：ｔｅｒｔ−ブチル７ａ−ヒドロキシ−３−メチル−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ−［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル３−アセチル−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボキシラート（１．６０ｇ、６．６３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１６ｍＬ）中溶液に、ＮＨ２ＯＨ．ＨＣｌ（０．７８ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。ＴＥＡ（１．３４ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）を滴加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。反応混合物を１６時間加熱還流した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣を氷Ｈ２Ｏ（７０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（７５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン中０〜３０％ＥｔＯＡｃ）によって精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル７ａ−ヒドロキシ−３−メチル−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．８０ｇ、４７％）が黄色固体として得られた。
【０１６９】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：２５７．００／１．４７／９６．５％
【０１７０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３７（ｓ，９Ｈ）１．８７（ｓ，３Ｈ）１．９５−２．０３（ｍ，２Ｈ）２．９２−１．９６（ｍ，１Ｈ）３．０９−３．２２（ｍ，２Ｈ）３．４０−３．４６（ｍ，１Ｈ）３．６２−３．６８（ｍ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ）。
【０１７１】
ステップ−３：ｔｅｒｔ−ブチル３−メチル−６，７−ジヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５（４Ｈ）−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル７ａ−ヒドロキシ−３−メチル−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．８０ｇ、３．１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１６ｍＬ）中溶液に、ピリジン（０．５４ｇ、６．８７ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応混合物を同じ温度で２０分間撹拌した。ＳＯＣｌ２（０．８１ｇ、６．８７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を氷Ｈ２Ｏ（８０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×８０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（８０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮すると、ｔｅｒｔ−ブチル３−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．６１ｇ、８２％）が黄色固体として得られた。
【０１７２】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０１７３】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：２３９．００／１．７９／９９．３％
【０１７４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１．４９（ｓ，９Ｈ）２．２４（ｓ，３Ｈ）２．７７（ｔ，Ｊ＝５．１４Ｈｚ，２Ｈ）３．７０−３．７８（ｍ，２Ｈ）４．３０（ｓ，２Ｈ）。
【０１７５】
ステップ−４：３−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩の合成
ｔｅｒｔ−ブチル３−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．３０ｇ、１．２６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（０．６９ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）を０℃で滴加し、反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた粗残渣をＥｔ２Ｏ（２×１０ｍＬ）で研和することによって精製し、真空中で乾燥させると、３−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩（０．２９ｇ、９１％）が灰白色固体として得られた。
【０１７６】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：１３９．００／１．１６／９８．２％
【０１７７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．２１（ｓ，３Ｈ）３．００（ｔ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，２Ｈ）３．４５（ｔ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，２Ｈ）４．１０（ｓ，２Ｈ），９．３７（ｂｒｓ，２Ｈ）。
【０１７８】
ステップ−５：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（３−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２５ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）及び３−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩（０．１７ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．４２ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。反応混合物を１１０℃で２０時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を氷Ｈ２Ｏ（７５ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（７５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０〜２％ＭｅＯＨ）によって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（３−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（０．０９ｇ、３２％）が白色固体として得られた。
【０１７９】
ＨＰＬＣ純度：９８．６％
【０１８０】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４６４．００／２．９８／９６．０％
【０１８１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１５−１．３５（ｍ，４Ｈ）１．４０−１．６０（ｍ，２Ｈ）２．２２（ｓ，３Ｈ）２．７９−２．９４（ｍ，４Ｈ）３．８５（ｔ，Ｊ＝５．６２Ｈｚ，２Ｈ）４．０４−４．１４（ｍ，１Ｈ）４．４０（ｓ，２Ｈ）６．９１−６．９７（ｍ，１Ｈ）７．０３（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．０８（ｓ，１Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．８４（ｓ，１Ｈ）７．９８（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）１０．７４（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１８２】
例１１：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イルチアゾール−５−カルボキサミド
【化３３】
2020505369.tif 000038
【化３４】
2020505369.tif 000039
ステップ−１：ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−３−（２，２，２−トリフルオロアセチル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソピペリジン−１−カルボキシラート（５．００ｇ、２５．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液に、１Ｍ  ＬｉＨＭＤＳ（４．６１ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）を−７８℃で添加し、反応混合物を同じ温度で４５分間撹拌した。ＣＦ３ＣＯＯＥｔ（４．２７ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）を−７８℃で滴加し、反応混合物を同じ温度で３０分間撹拌した。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を氷Ｈ２Ｏ（１５０ｍＬ）でクエンチし、１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン中０〜５％ＥｔＯＡｃ）によって精製すると、ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−３−（２，２，２−トリフルオロアセチル）ピペリジン−１−カルボキシラート（４．６８ｇ、６３％）が黄色固体として得られた。
【０１８３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．４８（ｓ，９Ｈ）２．６０（ｔ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，２Ｈ）３．６４（ｔ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，２Ｈ）４．３６（ｂｒｓ，２Ｈ）１４．７７（ｓ，１Ｈ）．
【０１８４】
ステップ−２：ｔｅｒｔ−ブチル７ａ−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメチル）−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート及びｔｅｒｔ−ブチル３−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメチル）−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−オキソ−３−（２，２，２−トリフルオロアセチル）ピペリジン−１−カルボキシラート（２．００ｇ、６．７７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、ＮＨ２ＯＨ．ＨＣｌ（０．８０ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。ＴＥＡ（１．３７ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）を滴加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。反応混合物を１６時間加熱還流した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳは２つの位置異性体の形成を示した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣を氷Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（７５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。両異性体をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン中０〜１７％ＥｔＯＡｃ）によって分離すると、白色固体（より極性のスポット）としてのｔｅｒｔ−ブチル７ａ−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメチル）−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（１．１２ｇ、５３％）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３５（ｓ，９Ｈ）２．１７（ｂｒｓ，２Ｈ）３．１３−３．２４（ｍ，２Ｈ）３．４２（ｂｒｓ，１Ｈ）３．５２（ｍ，１Ｈ）３．６９−３．８９（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｔ，１Ｈ）、及び白色固体（あまり極性でないスポット）としてのｔｅｒｔ−ブチル３−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメチル）−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．６２ｇ、３０％）
【０１８５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．４２（ｓ，９Ｈ）２．３８（ｍ，１Ｈ）２．６２（ｍ，１Ｈ）２．７０−２．７８（ｍ，１Ｈ）３．００−３．１２（ｍ，１Ｈ）３．３７（ｍ，１Ｈ）４．１０−４．２２（ｍ，２Ｈ）８．４３（ｓ、１Ｈ）として得られた。
【０１８６】
ステップ−３：ｔｅｒｔ−ブチル３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル７ａ−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメチル）−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（１．１０ｇ、３．５５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２２ｍＬ）中溶液に、ピリジン（０．６１ｇ、７．８０ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応混合物を同じ温度で２０分間撹拌した。ＳＯＣｌ２（０．９２ｇ、７．８０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を氷Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮すると、ｔｅｒｔ−ブチル３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．８２ｇ、７９％）が黄色液体として得られた。
【０１８７】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０１８８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１．５０（ｓ，９Ｈ）２．９２−２．９６（ｍ，２Ｈ）３．７８−３．８６（ｍ，２Ｈ）４．４６（ｓ，２Ｈ）．
【０１８９】
ステップ−４：３−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩の合成
ｔｅｒｔ−ブチル３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．８０ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１６ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（１．５１ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）を−５℃で滴加し、反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた粗残渣をＥｔ２Ｏ（２×２０ｍＬ）で研和することによって精製し、真空中で乾燥させると、３−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩（０．６５ｇ、８３％）が白色固体として得られた。
【０１９０】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：１９３．００／１．６２／９６．２％
【０１９１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．１３（ｔ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，２Ｈ）３．４７（ｔ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，２Ｈ）４．４４（ｓ，２Ｈ）、９．５８（ｂｒｓ，２Ｈ）。
【０１９２】
ステップ−５：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル］チアゾール−５−カルボキサミドの合成
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．３０ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）及び３−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩（０．２６ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）のジオキサン（１５ｍＬ）中溶液に、ＮａＯｔＢｕ（０．２１ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０７ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をアルゴンで３０分間パージした。Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．０７ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃で２時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０〜１％ＭｅＯＨ）によって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０９８ｇ、２６％）が淡黄色固体として得られた。
【０１９３】
ＨＰＬＣ純度：９９．７％
【０１９４】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：５１８．００／３．５０／９７．８％
【０１９５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１４−１．３４（ｍ，４Ｈ）１．４０−１．６６（ｍ，２Ｈ）２．８２−２．９２（ｍ，２Ｈ）３．０６−３．１８（ｍ，２Ｈ）３．９０（ｔ，Ｊ＝５．６２Ｈｚ，２Ｈ）４．０４−４．１９（ｍ，１Ｈ）４．６２（ｓ，２Ｈ）６．９２−６．９９（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．０９（ｄ，Ｊ＝１．４７Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．８５（ｓ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）１０．７５（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０１９６】
例１２：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化３５】
2020505369.tif 000040
【化３６】
2020505369.tif 000041
ステップ−１：ｔｅｒｔ−ブチル３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル３−ヒドロキシ−３−（トリフルオロメチル）−３ａ，４，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（例１１、ステップ２に記載されるように調製）（０．６０ｇ、１．９３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１２ｍＬ）中溶液に、ピリジン（０．３３ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、反応混合物を同じ温度で２０分間撹拌した。ＳＯＣｌ２（０．５０ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を氷Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮すると、ｔｅｒｔ−ブチル３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．４０ｇ、７１％）が黄色液体として得られた。
【０１９７】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０１９８】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ］＋／Ｒｔ／％：１９３．００／２．０３／９９．２％
【０１９９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１．５０（ｓ，９Ｈ）２．９１（ｔ，Ｊ＝５．６２Ｈｚ，２Ｈ）３．７３（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．６１（ｓ，２Ｈ）。
【０２００】
ステップ−２：３−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩の合成
ｔｅｒｔ−ブチル３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．３９ｇ、１．３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ０．７３ｇ、６．４８ｍｍｏｌ）を−５℃で滴加し、反応混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた粗残渣をＥｔ２Ｏ（２×１０ｍＬ）で研和することによって精製し、真空中で乾燥させると、（３−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩（０．３１ｇ、８１％）が灰白色固体として得られた。
【０２０１】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：１９３．００／１．４９／９７．７％
【０２０２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．１３（ｔ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，２Ｈ）３．４７（ｔ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，２Ｈ）４．４４（ｓ，２Ｈ）、９．４２（ｂｒｓ，２Ｈ）。
【０２０３】
ステップ−３：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］チアゾール−５−カルボキサミドの合成
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．３０ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）及び３−（トリフルオロメチル）−４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジントリフルオロ酢酸塩（０．２６ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）のジオキサン（１５ｍＬ）中溶液に、ＮａＯｔＢｕ（０．２１ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０７ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をアルゴンで３０分間パージした。Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．０７ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃で２時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０〜０．８％ＭｅＯＨ）によって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［３−（トリフルオロメチル）−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０９ｇ、２４％）が淡黄色固体として得られた。
【０２０４】
ＨＰＬＣ純度：９８．８％
【０２０５】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：５１８．００／３．５４／９７．８％
【０２０６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８２（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１７−１．３０（ｍ，４Ｈ）１．４７−１．５８（ｍ，２Ｈ）２．７４−２．９４（ｍ，２Ｈ）３．０４（ｔ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，２Ｈ）３．８６（ｔ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，２Ｈ）４．１１（ｄ，Ｊ＝４．４０Ｈｚ，１Ｈ）４．７９（ｄ，Ｊ＝０．９８Ｈｚ，２Ｈ）６．９１−６．９７（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．０９（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．８５（ｓ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０２０７】
例１３：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［６−オキソ−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化３７】
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【化３８】
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ステップ−１：２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−６−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジンの合成
ＫＯｔＢｕ（７．７８ｇ、６８．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中撹拌懸濁液に、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中２，６−ジクロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン（１０．０ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）溶液を０℃で滴加し、反応混合物を同じ温度で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによって監視した。完了後、反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）溶液でクエンチし、ヘキサン（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン）によって精製すると、２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−６−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン（７．００ｇ、６０％）が無色液体として得られた。
【０２０８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．５７（ｓ，９Ｈ）７．０８（ｓ，１Ｈ）７．４５（ｓ，１Ｈ）．
【０２０９】
ステップ−２：６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボニトリルの合成
２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−６−クロロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン（７．００ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に、Ｚｎ（ＣＮ）２（６．４９ｇ、５５．３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１．２６ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）（０．５１ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴンで２０分間パージした。反応混合物を９０℃で４時間加熱した。反応の進行をＴＬＣによって監視した。完了後、反応混合物をヘキサン中１０％ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で希釈した。有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、食塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン中０〜１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製すると、６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボニトリル（４．４０ｇ、６５％）が淡黄色液体として得られた。
【０２１０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．５７（ｓ，９Ｈ）７．４６（ｓ，１Ｈ）８．０７（ｓ，１Ｈ）．
【０２１１】
ステップ−３：［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メタンアミンの合成
６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボニトリル（５．６０ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２５０ｍＬ）及びＮＨ４ＯＨ（６５ｍＬ）中溶液に、ラネーＮｉ（２８ｇ）を添加し、反応混合物を６０ｐｓｉの水素圧下、室温で６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによって監視した。完了後、反応混合物をＣｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄し、濾液を真空中で濃縮すると、［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メタンアミンが褐色液体として得られた。
【０２１２】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０２１３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．５６（ｓ，９Ｈ）２．０１（ｂｒｓ，２Ｈ）３．７８（ｓ，２Ｈ）６．８０（ｓ，１Ｈ）７．２８（ｓ，１Ｈ）．
【０２１４】
ステップ−４：Ｎ−［［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドの合成
［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メタンアミン（５．００ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（５．２０ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）を添加し、引き続いてＤＣＭ（２０ｍＬ）中２−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（５．３６ｇ、２４．１ｍｍｏｌ）溶液を添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣによって監視した。完了後、反応混合物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ）溶液で洗浄した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ（３００ｍＬ）、食塩水（３００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン中５〜１５％ＥｔＯＡｃ）によって精製すると、Ｎ−［［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（４．００ｇ、４６％）が黄色半固体として得られた。
【０２１５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．５２（ｓ，９Ｈ）４．３０（ｓ，２Ｈ）６．８１（ｓ，１Ｈ）７．０９（ｓ，１Ｈ）７．７１−７．７７（ｍ，１Ｈ）７．８１（ｔ，Ｊ＝７．０９，１Ｈ）７．８９（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．９４（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）８．７８（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０２１６】
ステップ−５：Ｎ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−［［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドの合成
【０２１７】
Ｎ−［［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（４．０ｇ、９．２３ｍｍｏｌ）及びＢｒＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ（１７．３ｇ、９３．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２５．４ｇ、１８４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を６０℃で３時間加熱した。反応の進行をＴＬＣによって監視した。完了後、反応混合物をヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ（４５０ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ（４５０ｍＬ）、食塩水（４５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン中１０〜２０％ＥｔＯＡｃ）によって精製すると、Ｎ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−［［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（２．７０ｇ、５４％）が淡褐色固体として得られた。
【０２１８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．５３（ｓ，９Ｈ）３．５１（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，２Ｈ）３．７９（ｔ，Ｊ＝７．０９Ｈｚ，２Ｈ）４．７２（ｓ，２Ｈ）６．９０（ｓ，１Ｈ）７．１６（ｓ，１Ｈ）７．７６−７．８２（ｍ，１Ｈ）７．８８（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．９８（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）８．０３（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２１９】
ステップ−６：Ｎ−（２−ブロモエチル）−２−ニトロ−Ｎ−［［６−オキソ−４−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピリジン−２−イル］メチル］ベンゼンスルホンアミドの合成
Ｎ−（２−ブロモエチル）−Ｎ−［［６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］メチル］−２−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（２．７０ｇ、５．００ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を滴加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた粗残渣をヘキサンで研和することによって精製すると、Ｎ−（２−ブロモエチル）−２−ニトロ−Ｎ−［［６−オキソ−４−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピリジン−２−イル］メチル］ベンゼンスルホンアミド（３．００ｇ粗）が淡褐色固体として得られた。
【０２２０】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４８４．００／２．０５／６０．９％
【０２２１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．５９（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，２Ｈ）３．８２（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，２Ｈ）４．５６（ｓ，２Ｈ）６．２６（ｂｒｓ，１Ｈ）６．６２（ｂｒｓ，１Ｈ）７．７８−７．８５（ｍ，１Ｈ）７．９０（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）８．００（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）８．０８（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２２２】
ステップ−７：２−（２−ニトロフェニル）スルホニル−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−オンの合成
Ｎ−（２−ブロモエチル）−２−ニトロ−Ｎ−［［６−オキソ−４−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピリジン−２−イル］メチル］ベンゼンスルホンアミド（３．００ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２．５７ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴンで２０分間パージした。反応混合物を室温で４時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮すると、２−（２−ニトロフェニル）スルホニル−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−オン（１．５０ｇ粗）が褐色固体として得られた。
【０２２３】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０２２４】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４０４．００／２．８５／８３．５％
【０２２５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．７４（ｔ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，２Ｈ）４．０９（ｔ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，２Ｈ）４．６４（ｓ，２Ｈ）６．６０（ｓ，１Ｈ）６．７１（ｓ，１Ｈ）７．８２−７．８８（ｍ，１Ｈ）７．９２（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）８．０１（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）８．１０（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）。
【０２２６】
ステップ−８：ｔｅｒｔ−ブチル６−オキソ−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−カルボキシラートの合成
２−（２−ニトロフェニル）スルホニル−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−オン（０．７５ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１６ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．７７ｇ、５．５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。ＰｈＳＨ（０．２５ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）を滴加し、反応混合物を室温で１．５時間撹拌し、引き続いて（Ｂｏｃ）２Ｏ（１．２２ｇ、５．５８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を１０％クエン酸溶液（５０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、Ｈ２Ｏ（２×１００ｍＬ）、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ヘキサン中０〜４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製すると、（ｔｅｒｔ−ブチル６−オキソ−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−カルボキシラート（０．３５ｇ、６０％）が黄色固体として得られた。
【０２２７】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：３１９．００／２．９１／８８．６％
【０２２８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１．５１（ｓ，９Ｈ）３．７１（ｔ，Ｊ＝５．６２Ｈｚ，２Ｈ）４．２５（ｔ，Ｊ＝５．６２Ｈｚ，２Ｈ）４．５６（ｓ，２Ｈ）６．２５（ｓ，１Ｈ）６．７９（ｓ，１Ｈ）．
【０２２９】
ステップ−９：８−（トリフルオロメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−オン塩酸塩の合成
ｔｅｒｔ−ブチル６−オキソ−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−カルボキシラート（０．３５ｇ、１．１０ｍｍｏｌ）のジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ（５ｍＬ）中撹拌溶液を室温で３時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏ（１５ｍＬ）で研和し、真空中で乾燥させると、８−（トリフルオロメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−オン塩酸塩（０．２４ｇ、８７％）が黄色固体として得られた。
【０２３０】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０２３１】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：２１９．００／１．８６／９３．１％
【０２３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．４９（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．１０（ｔ，Ｊ＝５．６２Ｈｚ，２Ｈ）４．３７（ｓ，２Ｈ）６．６５（ｓ，１Ｈ）６．８２（ｓ，１Ｈ）９．９４（ｓ，１Ｈ）．
【０２３３】
ステップ−１０：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［６−オキソ−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］チアゾール−５−カルボキサミドの合成
８−（トリフルオロメチル）−１，２，３，４−テトラヒドロピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−オン塩酸塩（０．１４ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）及び２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．１５ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のジオキサン（９ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を密封管中１２０℃で２０時間加熱した。さらなるＤＩＰＥＡ（０．２４ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を密封管中で９６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（７０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０〜２％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［６−オキソ−８−（トリフルオロメチル）−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０１４ｇ、５％）が灰白色固体として得られた。
【０２３４】
ＨＰＬＣ純度：９９．１％
【０２３５】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：５４４．００／２．９７／９５．５％
【０２３６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，３Ｈ）１．１８−１．３８（ｍ，４Ｈ）１．５１（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，２Ｈ）２．７９−２．９６（ｍ，２Ｈ）３．７３（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．０４−４．１０（ｍ，１Ｈ）４．３４（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．８２（ｓ，２Ｈ）６．７４（ｓ，１Ｈ）６．７６（ｓ，１Ｈ）６．９２−６．９９（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．１０（ｓ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．８９（ｓ，１Ｈ）８．０１（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０２３７】
例１４：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（３−メチル−６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化３９】
2020505369.tif 000044
【化４０】
2020505369.tif 000045
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．４０ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）のジオキサン（１６ｍＬ）中溶液に、ＮａＯｔＢｕ（０．２８ｇ、２．９６ｍｍｏｌ）、３−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン（０．１６ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０９ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴンで３０分間パージし、引き続いてＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０９ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１１０℃で５時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＣｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製した。化合物をＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解し、引き続いてペンタン（１０ｍＬ）を添加した。沈殿した固体を濾過し、真空中で乾燥させると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（３−メチル−６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（０．０３５ｇ、８％）が淡褐色固体として得られた。
【０２３８】
ＨＰＬＣ純度：９６．５％
【０２３９】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４６４．００／２．４３／９４．７％
【０２４０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１７−１．３１（ｍ，４Ｈ）１．４４−１．５８（ｍ，２Ｈ）２．３１（ｓ，３Ｈ）２．８１−２．９３（ｍ，２Ｈ）３．９８（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．０４（ｔ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，２Ｈ）４．０８−４．１２（ｍ，１Ｈ）４．８１（ｓ，２Ｈ）６．９１−６．９９（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．１０（ｄ，Ｊ＝１．４７Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．８７（ｓ，１Ｈ）８．０４（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ）１０．７５（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０２４１】
例１５：２−（６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化４１】
2020505369.tif 000046
【化４２】
2020505369.tif 000047
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２５ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）及び４，５，６，７−テトラヒドロイソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン塩酸塩（０．１２ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．６０ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０６ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴンで２０分間パージした。Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．０６ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴンで２０分間パージした。反応混合物を１００℃で３時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）で洗浄し、濾液を真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中１〜４％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、２−（６，７−ジヒドロ−４Ｈ−イソオキサゾロ［４，５−ｃ］ピリジン−５−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０４ｇ、１４％）が白色固体として得られた。
【０２４２】
ＨＰＬＣ純度：９７．６％
【０２４３】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４５０．００／２．８５／９６．６％
【０２４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）１．１８−１．３８（ｍ，４Ｈ）１．４３−１．５６（ｍ，２Ｈ）２．７７−２．９７（ｍ，４Ｈ）３．８５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）４．０８−４．１４（ｍ，１Ｈ）４．６１（ｓ，２Ｈ）６．９５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）６．９９−７．１２（ｍ，２Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）７．８４（ｓ，１Ｈ）７．９８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）８．７７（ｓ，１Ｈ）１０．７４（ｓ，１Ｈ）．
【０２４５】
例１６：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（１−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化４３】
2020505369.tif 000048
【化４４】
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ステップ−１：ｔｅｒｔ−ブチル１，４，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｅ）−３−（ジメチルアミノメチレン）−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボキシラート（１．００ｇ、３．９３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中溶液に、Ｎ２Ｈ４．Ｈ２Ｏ（０．２４ｇ、４．９０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を４時間加熱還流した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮及び乾燥させた。得られた粗残渣をペンタン（８０ｍＬ）で洗浄すると、ｔｅｒｔ−ブチル１，４，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（１．１ｇ粗）が褐色液体として得られた。
【０２４６】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：２２４．００／２．３５／７４．７％
【０２４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１．４９（ｓ，９Ｈ）２．７６−２．８４（ｍ，２Ｈ）３．６８−３．７８（ｍ，２Ｈ）４．５０（ｓ，２Ｈ）６．５０（ｂｒｓ，１Ｈ）７．３７（ｓ，１Ｈ）．
【０２４８】
ステップ−２：ｔｅｒｔ−ブチル１−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル１，４，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（１．００ｇ粗、前のステップから、３．９３ｍｍｏｌと仮定）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中溶液に、ＮａＨ（０．２１ｇ、５．００ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、引き続いてＣＨ３Ｉ（０．７６ｇ、５．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（４０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮すると、ｔｅｒｔ−ブチル１−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（１．００ｇ粗）が褐色液体として得られた。
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０２４９】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：２３８．００／２．５２／８１．７％
【０２５０】
ステップ−３：１−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジンビス（トリフルオロ酢酸）塩の合成
ｔｅｒｔ−ブチル１−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（１．００ｇ、粗、前のステップから、３．９３ｍｍｏｌと仮定）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（４ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた粗残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）と共蒸発させ、真空中で乾燥させると、１−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジンビス（トリフルオロ酢酸）塩（化学量論を仮定）（０．８５ｇ粗）が褐色半固体として得られた。
【０２５１】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０２５２】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：１３８．００／１．５１／９７．７％
【０２５３】
ステップ−４：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（１−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成
１−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジンビス（トリフルオロ酢酸）塩（化学量論を仮定）（０．２８ｇ、０．７７ｍｏｌ）及び２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．４０ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．６８ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中２〜４％ＭｅＯＨ）及びキラル分取ＨＰＬＣによって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（１−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（０．０２５ｇ、６％）が白色固体として得られた。
【０２５４】
ＨＰＬＣ純度：９７．５％
【０２５５】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４６３．００／２．７６／９７．６％
【０２５６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）１．１８−１．３６（ｍ，４Ｈ）１．４３−１．５６（ｍ，２Ｈ）２．７６−２．９４（ｍ，４Ｈ）３．６８（ｓ，３Ｈ）３．８４（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）４．０８−４．１４（ｍ，１Ｈ）４．４６（ｓ，２Ｈ）６．９１−７．１１（ｍ，３Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）７．５８（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）７．８２（ｓ，１Ｈ）７．９６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｓ，１Ｈ）．
【０２５７】
例１７：２−（６，８−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−７−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化４５】
2020505369.tif 000050
【化４６】
2020505369.tif 000051
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２５ｇ、０．６１ｍｍｏｌ）及び５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジン（０．０９ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍＬ）中溶液に、ＮａＯｔＢｕ（０．０９ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０６ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴンで２０分間パージし、引き続いてＰｄ２（ｄｂａ）３（０．０６ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１１０℃で６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（７０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（７５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、２３０〜４００メッシュ、ＤＣＭ中０〜６％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、２−（６，８−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］ピラジン−７−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０６ｇ、１９％）が灰白色固体として得られた。
【０２５８】
ＨＰＬＣ純度：９８．７％
【０２５９】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４４９．００／２．２４／９９．２％
【０２６０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１６−１．３０（ｍ，４Ｈ）１．４７−１．６２（ｍ，２Ｈ）２．７８−２．９４（ｍ，２Ｈ）３．９２−３．９８（ｍ，２Ｈ）４．０４−４．１４（ｍ，３Ｈ）４．６６（ｓ，２Ｈ）６．９１（ｓ，１Ｈ）６．９５（ｄ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．０３（ｔ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ）７．０９（ｂｒｓ，１Ｈ）７．１４（ｓ，１Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．８６（ｓ，１Ｈ）８．０１（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）１０．７４（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０２６１】
例１８：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［３−（トリフルオロメチル）−６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化４７】
2020505369.tif 000052
【化４８】
2020505369.tif 000053
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．３０ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）及び３−（トリフルオロメチル）−５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン（０．１７ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．７３ｇ、２．２２ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ（０．０７ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴンで３０分間パージした。Ｐｄ２（ｄｂａ）３（０．０７ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を密封管中１１０℃で６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中０〜２％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−［３−（トリフルオロメチル）−６，８−ジヒドロ−５Ｈ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジン−７−イル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０３５ｇ、９％）が灰白色固体として得られた。
【０２６２】
ＨＰＬＣ純度：９９．１％
【０２６３】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：５１８．００／２．８４／９８．４％
【０２６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）１．１７−１．３３（ｍ，４Ｈ）１．４４−１．５６（ｍ，２Ｈ）２．７８−２．９６（ｍ，２Ｈ）４．０３（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）４．０８−４．１４（ｍ，１Ｈ）４．３０（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）４．９５（ｓ，２Ｈ）６．９４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）６．９９−７．１１（ｍ，２Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）７．５６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）７．８８（ｓ，１Ｈ）８．０７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｓ，１Ｈ）．
【０２６５】
例１９：２−（６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−５−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド
【化４９】
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【化５０】
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２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン塩酸塩（０．０８ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のジオキサン（１２ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．４６ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）及びＢｒｅｔｔｐｈｏｓプレ触媒（０．０４ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴンで２０分間パージした。反応混合物を１１０℃で１６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ（３５ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、濾液を真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中１〜４％ＭｅＯＨ）及び分取ＨＰＬＣによって精製すると、２−（６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−５−イル）−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．０３ｇ、１４％）が褐色固体として得られた。
【０２６６】
ＨＰＬＣ純度：９６．１％
【０２６７】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４４９．００／２．７３／９６．６％
【０２６８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，３Ｈ）１．１８−１．３４（ｍ，４Ｈ）１．４４−１．５８（ｍ，２Ｈ）２．８２−２．９８（ｍ，２Ｈ）４．０２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）４．０８−４．１２（ｍ，１Ｈ）４．２４（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）４．７５（ｓ，２Ｈ）６．２０（ｓ，１Ｈ）６．９５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）７．００−７．１２（ｍ，２Ｈ）７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）７．４６（ｓ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）７．８８（ｓ，１Ｈ）８．０４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）１０．７６（ｓ，１Ｈ）．
【０２６９】
例２０：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（２−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド
【化５１】
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【化５２】
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ステップ−１：ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラートの合成
ｔｅｒｔ−ブチル（３Ｅ）−３−（ジメチルアミノメチレン）−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボキシラート（０．２０ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中溶液に、メチルヒドラジン（０．０４ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を２時間加熱還流した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮すると、ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．２０ｇ粗）が褐色液体として得られた。
【０２７０】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０２７１】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：２３８．００／２．５２／８８．２％
【０２７２】
ステップ−２：２−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジンビス（トリフルオロ酢酸）塩の合成
ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−カルボキシラート（０．２０ｇ、粗、前のステップから、０．７８ｍｍｏｌと仮定）のＤＣＭ（８ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を０℃で添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた粗残渣を真空中で乾燥させると、２−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジンビス（トリフルオロ酢酸）塩（化学量論を仮定）（０．２８ｇ粗）が褐色液体として得られた。
【０２７３】
この化合物をさらに精製することなく次の反応にそのまま使用した。
【０２７４】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：１３８．００／１．４８／８７．５％
【０２７５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．８０−２．８４（ｍ，２Ｈ）３．３５（ｄ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ，２Ｈ）３．７７（ｓ，３Ｈ）４．１１（ｄ，Ｊ＝４．４０Ｈｚ，２Ｈ）７．５５（ｓ，１Ｈ）８．８９（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０２７６】
ステップ−３：Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（２−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミドの合成
２−ブロモ−Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］チアゾール−５−カルボキサミド（０．２０ｇ、０．４９ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（０．２０ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を添加し、引き続いて２−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジンビス（トリフルオロ酢酸）塩（化学量論を仮定）（０．１０ｇ、粗、前のステップから、０．２５ｍｍｏｌと仮定）を添加し、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ及びＬＣＭＳによって監視した。完了後、反応混合物をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ１００〜２００メッシュ、ＤＣＭ中２〜４％ＭｅＯＨ）によって精製すると、Ｎ−［１−（１Ｈ−インドール−３−イルメチル）ペンチル］−２−（２−メチル−６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］ピリジン−５−イル）チアゾール−５−カルボキサミド（０．０８ｇ、３５％）が灰白色固体として得られた。
【０２７７】
ＨＰＬＣ純度：９７．３％
【０２７８】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ［Ｍ＋Ｈ］＋／Ｒｔ／％：４６３．００／２．７１／９７．５％
【０２７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ０．８１（ｔ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ）１．１９−１．２８（ｍ，４Ｈ）１．４４−１．６２（ｍ，２Ｈ）２．７３（ｔ，Ｊ＝５．６２Ｈｚ，２Ｈ）２．８０−２．９１（ｍ，２Ｈ）３．７７（ｓ，３Ｈ）３．８０−３．８６（ｍ，２Ｈ）４．１０−４．２０（ｍ，１Ｈ）４．４９（ｓ，２Ｈ）６．９２−６．９９（ｍ，１Ｈ）７．０４（ｔ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ）７．０９（ｄ，Ｊ＝１．４７Ｈｚ，１Ｈ）７．３０（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．５２（ｓ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ）７．８２（ｓ，１Ｈ）７．９２（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ）１０．７３（ｂｒｓ，１Ｈ）．
【０２８０】
生物学的例１：α−シヌクレインペプチドフラグメント（４Ｆ）を用いたインビトロ蛍光偏光アッセイ．
蛍光偏光アッセイは、化合物がα−シヌクレインペプチドフラグメントの自己凝集を阻害する能力を試験するものである。試験化合物の存在下又は非存在下（化合物濃度は３３．３〜０．０１５μＭであった）で、ペプチドを室温で１２０分間インキュベートした。試料を、４８５ｎｍでの励起及び５２０ｎｍでの発光を用いて蛍光偏光モードでＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＤＴＸ  ８８０プレートリーダーで読み取った。データを、４係数ロジスティックあてはめ（ＸＬＦｉｔ、ＩＤＢＳ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて分析した。ペプチド４Ｆ（ＣＴＧＦＶＫＫＤＱＬＧＫ（配列番号１））は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅによって調製された。新鮮なペプチド試料を５ｍＭで精製水中で再構成し、５０ｍＭ  ＮａＣｌを含む５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４に１００ｎＭの最終濃度まで希釈した。固体化合物をＤＭＳＯ（１０ｍＭ）に溶解し、次いで、ＤＭＳＯ（３００×）で連続的に希釈し、引き続いて緩衝液（１×）に希釈して、０．３３％の一貫した最終ＤＭＳＯ濃度を有する溶液を得た。試験した化合物についてのデータを表１に提示する。
【表２】
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【０２８１】
生物学的例２：脂質膜とのα−シヌクレイン相互作用に対する試験化合物の効果についてのＮＭＲアッセイ
脂質膜の存在下での試験化合物と全長ＡＳＹＮの相互作用を測定するために、ＮＭＲアッセイを行う。ＮＭＲ測定を、ロック溶媒（ｌｏｃｋ  ｓｏｌｖｅｎｔ）として１０％Ｄ２Ｏを用いて、Ｖａｒｉａｎ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｄｒｉｖｅ  ６００ＭＨｚ及びＶａｒｉａｎ  Ｉｎｏｖａ  ８００ＭＨｚ分光計で、２０ｍＭリン酸、ｐＨ＝７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ中で行う。ＮＭＲＰｉｐｅ（Ｆ．Ｄｅｌａｇｌｉｏ、Ｓ．Ｇｒｚｅｓｉｅｋ、Ｇ．Ｗ．Ｖｕｉｓｔｅｒ、Ｇ．Ｚｈｕ、Ｊ．Ｐｆｅｉｆｅｒ、Ａ．Ｂａｘ、Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  ＮＭＲ  １９９５、６、２７７〜２９３参照）を用いて、スペクトルを処理する。α−シヌクレインを０．１２ｍＭで使用し、存在する場合には、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＰＯＰＧ）−リポソームを０．８ｍｇ／ｍｌで添加する。すべての１Ｈ−１５Ｎ相関スペクトルを、ＳＯＦＡＳＴパルスシーケンスを用いて記録する（Ｐ．Ｓｃｈａｎｄａ、Ｅ．Ｋｕｐｃｅ、Ｂ．Ｂｒｕｔｓｃｈｅｒ、Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  ＮＭＲ  ２００５、３３、１９９〜２１１参照）。生理学的条件付近での共鳴帰属は、以前の刊行物から容易に利用可能である（ＢＭＲＢ  ＩＤ  １６３００；Ｊ．Ｎ．Ｒａｏ、Ｙ．Ｅ．Ｋｉｍ、Ｌ．Ｓ．Ｐａｒｋ、Ｔ．Ｓ．Ｕｌｍｅｒ、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２００９、３９０、５１６〜５２９参照）。リガンド滴定のために、試験化合物をリポソーム／ＡＳＹＮ混合物に段階的に添加する。各ステップについて１５Ｎ−１Ｈ相関スペクトルを記録し、シグナル強度は、希釈効果を考慮しながら、遊離型のＡＳＹＮを基準とする。入手可能なデータ中のノイズを減らすために、ＡＳＹＮのいくつかのアミド位置についての強度比を、以前に観察されたＳＬ１及びＳＬ２結合モードに対応するように選択した２つの領域について平均する（Ｃ．Ｒ．Ｂｏｄｎｅｒ、Ａ．Ｓ．Ｍａｌｔｓｅｖ、Ｃ．Ｍ．Ｄｏｂｓｏｎ、Ａ．Ｂａｘ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１０、４９、８６２〜８７１参照）。
【０２８２】
ＡＳＹＮの異種核一量子相関（ＨＳＱＣ）分光法シグナル強度は、ＡＳＹＮが脂質膜に埋め込まれると減衰する。試験化合物によるＨＳＱＣシグナルの脂質誘導減衰の逆転は、試験化合物がＡＳＹＮと脂質膜との会合を破壊する能力を示す。試験化合物は、ＡＳＹＮと１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＰＯＰＧ）（０．８  ｍｇ／ｍＬ）リポソームとの相互作用を濃度依存的に逆転させることができる。ＡＳＹＮ残基６６〜７６についての結果も分析した。
【０２８３】
生物学的例３：脂質膜中の環状オリゴマーに対する試験化合物の効果
電子顕微鏡を使用して、脂質膜中のＡＳＹＮオリゴマーの形成に対する試験化合物の効果を直接可視化する。脂質単層を有するフォルムバールグリッドを、５０％ＥｔＯＨ中飽和酢酸ウラニル溶液で２５分間対比染色する。次いで、グリッドを２％亜硝酸ビスマスの液滴上に１０分間浮遊させ、再び再蒸留水で３回慎重にすすぎ、完全に乾燥させる。グリッドをＺｅｉｓｓ  ＥＭ１０透過型電子顕微鏡Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを用いて画像化する。各試料グリッドから、倍率１００００倍で５〜１０個の電子顕微鏡写真及び４００００倍で５〜１０個の画像が得られる。最高のネガをＩｍａｇｅＪ  １．４３プログラムでスキャン及び分析して、高倍率視野（１００×１００ｎｍ）当たりの環状オリゴマーの数を推定する（Ｒａｓｂａｎｄ，Ｗ．Ｓ．、ＩｍａｇｅＪ、米国国立衛生研究所、米国メリーランド州ベセスダ、ｈｔｔｐ：／／ｉｍａｇｅｊ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／、１９９７〜２０１４）。
【０２８４】
オリゴマー型及び脂質結合型のＡＳＹＮと相互作用する試験化合物は、脂質膜に対するＡＳＹＮオリゴマーの親和性を低下させるように相互作用し得る。化合物は、ＡＳＹＮオリゴマー化、ＡＳＹＮの脂質膜への結合、及びこれらの膜中の環状の環様オリゴマー（「孔」）の形成を妨げることができ、これによりＡＳＹＮの凝集が変化し、パーキンソン病における誤って折り畳まれたオリゴマー化ＡＳＹＮの神経毒性に寄与すると考えられる特定のオリゴマー構造の形成を防止することができる。
【０２８５】
生物学的例４：細胞内のα−シヌクレインに対する試験化合物の効果
ヒトＡＳＹＮを過剰発現しているＢ１０３神経芽細胞腫細胞におけるＡＳＹＮの蓄積に対する試験化合物の効果を試験する。レンチウイルス発現系を使用してこれらの細胞中でＧＦＰタグ付きＡＳＹＮを発現させる。発現が開始されてから４８時間後に、ビヒクル又は試験化合物をさらに２４時間添加する。次いで、蓄積されたＧＦＰ−ＡＳＹＮの量を可視化して、ＡＳＹＮ過剰発現細胞におけるＡＳＹＮ−ＧＦＰの濃度の低下を決定する。
【０２８６】
生物学的例５：インビボ有効性試験
パーキンソン病（ＰＤ）は、オリゴマー型のα−シヌクレイン（ＡＳＹＮ）の異常な蓄積を特徴とする。これらの毒性型のＡＳＹＮは、一部は細胞膜中の孔様構造の形成を介して、ＰＤ及び他のシヌクレイン病で観察されるニューロン機能不全及び細胞死に寄与すると仮定されている。本明細書に記載される化合物は、これらの毒性ＡＳＹＮ種の形成及び蓄積を選択的に遮断することによって、ＰＤ関連症状及び病状を改善するように設計された。
【０２８７】
Ａ）パーキンソン病のトランスジェニックマウスモデル  ３ヶ月間、１日１回（１週間当たり５日間）、０、１又は５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）で試験化合物を投与し、次いで、ＰＤ関連感覚運動能力、生化学的変化ならびにＡＳＹＮ及び関連タンパク質の神経病理学的変化を評価することによって、試験化合物をＴｈｙ−１プロモーター下でヒト野生型ＡＳＹＮを過剰発現するＰＤのトランスジェニックマウスモデル（Ｌｉｎｅ  ６１  ＡＳＹＮトランスジェニックマウスとも呼ばれる）で評価する。
【０２８８】
ラウンドビームタスク（Ｒｏｕｎｄ  Ｂｅａｍ  Ｔａｓｋ）を使用して、主な結果の尺度としてスリップ数を使用して、感覚運動障害を評価する。ＡＳＹＮトランスジェニックマウス及び非トランスジェニックマウスを試験し、ビヒクル処置非トランスジェニック対照の対象と比較した、ビヒクル処置トランスジェニック対象についてのスリップ数の増加における統計学的有意性を計算する。
【０２８９】
大脳皮質及び海馬脳ホモジナートのウエスタンブロット分析を行い、トランスジェニックＡＳＹＮタンパク質レベルの低下の統計学的有意性を計算する。皮質ホモジナートにおいてＡ１１抗体ドットブロット法（ＡＳＹＮを含む）を使用してオリゴマータンパク質の生化学的評価を行う。
【０２９０】
Ｂ）Ｌｉｎｅ  ６１  ＡＳＹＮトランスジェニックマウスモデル．  Ｍａｓｌｉａｈ及び同僚らによる以前の免疫標識研究により、Ｌｉｎｅ  ６１  ＡＳＹＮトランスジェニックマウスで皮質ニューロピルにおけるＡＳＹＮ免疫標識の統計学的に有意な増加が実証されている（Ｍａｓｌｉａｈ  Ｅ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０００、２８７（５４５６）：１２６５〜９）。これらの神経病理学的所見を、Ｍａｓｌｉａｈ及び同僚らによって記載される方法を用いて、現在の研究において再確認することができる。チロシンヒドロキシラーゼ、ＮｅｕＮ及びＧＦＡＰを含む神経変性関連マーカーを監視する。
【０２９１】
Ｌｉｎｅ  ６１  ＡＳＹＮトランスジェニックマウスの感覚運動障害に対する種々の投与量での試験化合物の効果を、上記のラウンドビーム運動能力（Ｒｏｕｎｄ  Ｂｅａｍ  Ｍｏｔｏｒ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ）アッセイを用いて試験し、ビヒクル処置非トランスジェニック対照の対象と比較した、ビヒクル処置ＡＳＹＮトランスジェニック対照マウスにおけるスリップ数の増加における統計学的有意性を計算する。これらの試験は、トランスジェニックマウスモデルパーキンソン病／レビー小体型認知症（ＰＤ／ＤＬＢ）における感覚運動、生化学、行動及び神経病理学的結果の改善を評価する。
【国際調査報告】
2020505369.tif 000063
2020505369.tif 000064
2020505369.tif 000065