(57)【要約】  組織組成物およびその調製方法が提供される。組織組成物は筋肉組織を治療または再生するために使用することができる。その組成物は、他の筋肉マトリックスと比較して強度が増すように構成することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
組織組成物を調製する方法であって、
組織サンプルを提供するステップであって、前記組織サンプルが、組織の筋膜部分から組織の筋肉部分を分離することなく採取された筋肉部分および筋膜部分を含む、ステップと、
前記組織サンプルを処理して少なくとも１の脱細胞化筋筋膜マトリックスを製造するステップとを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、
前記組織を処理することが、前記組織サンプルを、トリプシンを含有する溶液と接触させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法において、
処理の前に組織サンプル中に通常見られる筋線維の少なくとも一部を保持するために、トリプシン溶液の濃度および曝露期間を制御するステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、
前記組織サンプルがヒト筋肉組織から採取されることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法において、
前記組織サンプルがブタ筋肉組織から採取されることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法において、
前記組織サンプルを脱細胞化溶液に曝すステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法において、
前記脱細胞化溶液が、非イオン性オクチルフェノールエトキシレート界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウムおよびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートのうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする方法。
【請求項８】
組織組成物であって、
少なくとも１の脱細胞化筋肉マトリックスと、
少なくとも１の脱細胞化筋膜マトリックスとを含み、
筋肉マトリックスおよび筋膜マトリックスが、筋膜組織から筋肉組織を分離することなく採取された少なくとも１の筋肉組織および少なくとも１の結合された筋膜組織を含み、筋肉マトリックスが未処理筋サンプルに通常見られる筋線維の少なくとも一部を含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の組織組成物において、
少なくとも１の筋肉サンプルおよび少なくとも１の筋膜サンプルがヒト組織を含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項１０】
請求項８に記載の組織組成物において、
少なくとも１の筋肉サンプルおよび少なくとも１の筋膜サンプルがブタ筋肉組織を含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項１１】
請求項８に記載の組織組成物において、
少なくとも１の筋肉サンプルおよび少なくとも１の筋膜サンプルを脱細胞化溶液に曝すことによって、少なくとも１の筋肉マトリックスおよび少なくとも１の筋膜マトリックスが脱細胞化されていることを特徴とする組織組成物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の組織組成物において、
前記脱細胞化溶液が、非イオン性オクチルフェノールエトキシレート界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウムおよびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートのうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項１３】
組織組成物を調製する方法であって、
筋肉サンプルを用意するステップと、
筋肉サンプルを処理して脱細胞化筋肉マトリックスを製造するステップとを含み、筋肉マトリックスの筋線維が長手方向に向けられていることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法において、
前記組織を処理することが、前記筋肉サンプルを、トリプシンを含有する溶液と接触させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法において、
処理の前に組織サンプル中に通常見られる筋線維の少なくとも一部を保持するために、トリプシン溶液の濃度および曝露期間を制御するステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１３に記載の方法において、
筋肉サンプルがヒト筋肉組織を含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１３に記載の方法において、
筋肉サンプルがブタ筋肉組織を含むことを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１３に記載の方法において、
筋肉サンプルを処理することが、筋肉サンプルを脱細胞化溶液に曝すことを含むことを特徴とする方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法において、
前記脱細胞化溶液が、非イオン性オクチルフェノールエトキシレート界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウムおよびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートのうちの少なくとも１つを含むことを特徴とすることを特徴とする方法。
【請求項２０】
組織組成物であって、
未処理の筋肉サンプル中に通常見られる筋線維の少なくとも一部を含む少なくとも１の脱細胞化筋肉マトリックスを含み、筋線維が長手方向に向けられていることを特徴とする組織組成物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の組織組成物において、
少なくとも１の筋肉マトリックスが、ヒト筋肉組織から採取された少なくとも１の筋肉サンプルに由来することを特徴とする組織組成物。
【請求項２２】
請求項２０に記載の組織組成物において、
少なくとも１の筋肉マトリックスが、ブタの筋肉組織から採取された少なくとも１の筋肉サンプルに由来することを特徴とする組織組成物。
【請求項２３】
請求項２０に記載の組織組成物において、
少なくとも１の筋肉サンプルを脱細胞化溶液に曝すことによって少なくとも１の筋肉マトリックスが脱細胞化されていることを特徴とする組織組成物。
【請求項２４】
請求項２３に記載の組織組成物において、
前記脱細胞化溶液が、非イオン性オクチルフェノールエトキシレート界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウムおよびポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートのうちの少なくとも１つを含むことを特徴とすることを特徴とする組織組成物。
【請求項２５】
組織組成物を調製する方法であって、
一群の筋肉マトリックスを提供するステップと、
一群の筋肉マトリックスを層状にして接合し、それにより多層筋肉マトリックスを製造するステップとを含むことを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２５に記載の方法において、
筋肉マトリックスが脱水熱処理によって接合されることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２５に記載の方法において、
筋肉マトリックスが架橋によって接合されることを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の方法において、
筋肉マトリックスの層が圧縮により接合されることを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項２５に記載の方法において、
筋肉マトリックスの層が組織マトリックススラリーで接合されることを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法において、
生物学的スラリーが筋肉組織マトリックスを含むことを特徴とする方法。
【請求項３１】
請求項２５に記載の方法において、
筋肉マトリックスの層が、筋肉組織マトリックスの一部を相互連結することによって接合されることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項２５に記載の方法において、
一群の筋肉マトリックスがヒト筋肉組織から採取されることを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項２５に記載の方法において、
一群の筋肉マトリックスがブタの筋肉組織から採取されることを特徴とする方法。
【請求項３４】
組織組成物であって、
未処理の筋肉サンプルに通常見られる筋線維の少なくとも一部を含む多層の脱細胞化筋肉マトリックスを含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の組織組成物において、
筋肉マトリックスが、脱水熱処理によって接合されていることを特徴とする組織組成物。
【請求項３６】
請求項３４に記載の組織組成物において、
筋肉マトリックスが、架橋によって接合されていることを特徴とする組織組成物。
【請求項３７】
請求項３４に記載の組織組成物において、
筋肉マトリックスの層が、圧縮によって接合されていることを特徴とする組織組成物。
【請求項３８】
請求項３４に記載の組織組成物において、
筋肉マトリックスの層が、組織マトリックススラリーで接合されていることを特徴とする組織組成物。
【請求項３９】
請求項３８に記載の組織組成物において、
組織マトリックススラリーが筋肉組織マトリックスを含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項４０】
請求項３４に記載の組織組成物において、
筋肉マトリックスの層が、筋肉組織マトリックスの一部を相互連結することによって接合されていることを特徴とする組織組成物。
【請求項４１】
請求項３４に記載の組織組成物において、
一群の筋肉マトリックスがヒト筋肉組織から採取されることを特徴とする組織組成物。
【請求項４２】
請求項３４に記載の組織組成物において、
一群の筋肉マトリックスがブタの筋肉組織から採取されることを特徴とする組織組成物。
【請求項４３】
組織組成物を調製する方法であって、
筋肉マトリックス層を選択するステップと、
支持層を選択するステップと、
粒子状無細胞組織マトリックス（ＡＴＭ）を含むスラリーを、筋肉マトリックス層または支持層の少なくとも一方に塗布するステップと、
スラリーを用いて筋肉マトリックス層と支持層とを接合するステップとを含むことを特徴とする方法。
【請求項４４】
請求項４３に記載の方法において、
前記支持層が合成基材を含むことを特徴とする方法。
【請求項４５】
請求項４４に記載の方法において、
前記合成基材がメッシュであることを特徴とする方法。
【請求項４６】
請求項４４に記載の方法において、
前記合成基材がポリプロピレンメッシュであることを特徴とする方法。
【請求項４７】
請求項４３に記載の方法において、
スラリーが、真皮または筋肉組織マトリックスを含むことを特徴とする方法。
【請求項４８】
請求項４３に記載の方法において、
スラリーを凍結乾燥して多孔質構造を形成するステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項４９】
請求項４３に記載の方法において、
スラリーを安定化させるステップをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項５０】
請求項４３に記載の方法において、
粒子状無細胞組織マトリックス（ＡＴＭ）を含む追加のスラリーを、筋肉マトリックス層と反対側の支持層に塗布するステップと、
追加のスラリーを用いて、追加の筋肉マトリックス層を支持層に接合するステップとをさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項５１】
組織組成物であって、
少なくとも１の筋肉マトリックス層と、
少なくとも１の支持層と、
少なくとも１の筋肉層を少なくとも１の支持層に付着させる少なくとも１の粒子状無細胞組織マトリックス（ＡＴＭ）とを備えることを特徴とする組織組成物。
【請求項５２】
請求項５１に記載の組織組成物において、
少なくとも１の支持層が合成基材を含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項５３】
請求項５２に記載の組織組成物において、
前記合成基材がメッシュであることを特徴とする組織組成物。
【請求項５４】
請求項５３に記載の組織組成物において、
前記合成基材がポリプロピレンメッシュであることを特徴とする組織組成物。
【請求項５５】
請求項５１に記載の組織組成物において、
少なくとも１の粒子状ＡＴＭが、真皮または筋肉組織マトリックスを含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項５６】
請求項５１に記載の組織組成物において、
少なくとも１の粒子状ＡＴＭが再水和粒子を含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項５７】
請求項５１に記載の組織組成物において、
少なくとも１の粒子状ＡＴＭが多孔質構造を含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項５８】
請求項５１に記載の組織組成物において、
少なくとも１の粒子状ＡＴＭ層が架橋されていることを特徴とする組織組成物。
【請求項５９】
請求項５１に記載の組織組成物において、
少なくとも１の筋肉マトリックス層の反対側で少なくとも１の支持層に隣接して配置された少なくとも１の追加の粒子状ＡＴＭと、
少なくとも１の支持層の反対側で少なくとも１の追加の乾燥粒子状ＡＴＭに隣接して配置された少なくとも１の追加の筋肉マトリックス層とをさらに含むことを特徴とする組織組成物。
【請求項６０】
組織組成物を調製する方法であって、
筋肉マトリックス層を選択するステップと、
１または複数の孔を含む支持層を選択するステップと、
粒子状無細胞組織マトリックス（ＡＴＭ）を含むスラリーを、筋肉マトリックス層または支持層の少なくとも一方に塗布するステップと、
支持層を筋肉マトリックス層の第１の表面に貼り付けるステップと、
筋肉マトリックス層の第１の表面の少なくとも一部分が、１または複数の孔を介して筋肉マトリックス層の第２の表面の少なくとも一部分に付着するように、筋肉マトリックス層および支持層を巻くステップとを含むことを特徴とする方法。
【請求項６１】
請求項６０に記載の方法において、
前記支持層が合成基材を含むことを特徴とする方法。
【請求項６２】
請求項６１に記載の方法において、
前記合成基材がメッシュであることを特徴とする方法。
【請求項６３】
請求項６２に記載の方法において、
前記合成基材がポリプロピレンメッシュであることを特徴とする方法。
【請求項６４】
請求項６０に記載の方法において、
前記支持層が金属メッシュを含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は組織製品に関し、より詳細には、筋肉組織から製造された組織マトリックスに関する。
【０００２】
本出願は、米国特許法第１１９条の下で、２０１７年１月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／４５１，９８１号の優先権を主張するものであり、その全体が引用により本明細書に援用されるものとする。
【背景技術】
【０００３】
様々な傷害、病気および外科的処置は、筋肉量、特に骨格筋の喪失をもたらす。例えば、軟部組織肉腫および骨肉腫の外科的除去は、大量の筋肉を喪失させることがある。ヘルニア修復および筋肉増強などの他の外科的および美容的処置は、筋肉量の長期にわたる管理を必要とする。筋肉の損傷は、負傷、例えば、鈍器損傷や銃創などによっても発生する。
【０００４】
現在の筋肉再生処置は、筋肉同種移植片の使用（例えば、患者のドナー部位または死体からの大臀筋の採取）および完全に脱細胞化された真皮または他の組織マトリックスを含む異種移植片の使用に注目している。しかしながら、筋肉移植の利用は過剰な炎症をもたらす可能性があり（それにより瘢痕組織形成および潜在的な拒絶反応を生じることがあり）、患者から採取された場合には、ドナー部位における筋肉喪失の問題が生じる。
【０００５】
現在、部分的に脱細胞化されたマトリックスを効果的な筋肉治療のために製造することができる。しかしながら、それらのマトリックスは十分な荷重を支えることができず、応力下で壊れる可能性がある。このため、筋肉治療または再生のための改善された方法および組成物に対する必要性が残っている。
【発明の概要】
【０００６】
本明細書で教示されるのは、組織組成物を調製する方法である。この方法は、組織サンプルを提供するステップを含み、組織サンプルが、組織の筋膜部分から組織の筋肉部分を分離することなく採取された筋肉部分および筋膜部分を含む。この方法は、組織サンプルを処理して少なくとも１の脱細胞化筋筋膜マトリックスを製造するステップも含む。
【０００７】
本明細書に教示されるのは、少なくとも１の脱細胞化筋肉マトリックスおよび少なくとも１の脱細胞化筋膜マトリックスを含む組織組成物である。筋肉マトリックスおよび筋膜マトリックスは、筋膜組織から筋肉組織を分離することなく採取された少なくとも１の筋肉組織および少なくとも１の結合された筋膜組織を含む。筋肉マトリックスは、未処理の筋肉サンプルに通常見られる筋線維の少なくとも一部を含む。
【０００８】
本明細書で教示されるのは、組織組成物を調製する方法であり、この方法が、筋肉サンプルを用意するステップと、筋肉サンプルを処理して脱細胞化筋肉マトリックスを製造するステップとを含み、筋肉マトリックスの筋線維が長手方向に向けられている。
【０００９】
本明細書で教示されるのは、組織組成物であって、未処理の筋肉サンプル中に通常見られる筋線維の少なくとも一部を含む少なくとも１の脱細胞化筋肉マトリックスを含み、筋線維が長手方向に向けられている、組織組成物である。
【００１０】
本明細書で教示されるのは、組織組成物を調製する方法であって、一群の筋肉マトリックスを提供するステップと、一群の筋肉マトリックスを層状にして接合し、それにより多層筋肉マトリックスを製造するステップとを含む方法である。
【００１１】
本明細書で教示されるのは、組織組成物であって、未処理の筋肉サンプルに通常見られる筋線維の少なくとも一部を含む多層の脱細胞化筋肉マトリックスを含む組織組成物である。
【００１２】
本明細書で教示されるのは、組織組成物を調製する方法であって、筋肉マトリックス層を選択するステップと、支持層を選択するステップとを含む方法である。この方法は、粒子状無細胞組織マトリックス（ＡＴＭ）を含むスラリーを筋肉マトリックス層または支持層の少なくとも一方に塗布するステップも含む。この方法は、スラリーを用いて筋肉マトリックス層と支持層とを接合するステップも含む。
【００１３】
本明細書に教示されるのは、少なくとも１の筋肉マトリックス層と、少なくとも１の支持層とを含む組織組成物である。この組織組成物は、少なくとも１の筋肉層を少なくとも１の支持層に付着させる少なくとも１の粒子状無細胞組織マトリックス（ＡＴＭ）も含む。
【００１４】
本明細書で教示されるのは、組織組成物を調製する方法である。この方法は、筋肉マトリックス層を選択するステップと、１または複数の孔を含む支持層を選択するステップとを含む。この方法は、粒子状無細胞組織マトリックス（ＡＴＭ）を含むスラリーを筋肉マトリックス層または支持層の少なくとも一方に塗布するステップを含む。この方法は、支持層を筋肉マトリックス層の第１の表面に貼り付けるステップを含む。この方法は、筋肉マトリックス層の第１の表面の少なくとも一部分が、１または複数の孔を介して筋肉マトリックス層の第２の表面の少なくとも一部分に付着するように、筋肉マトリックス層および支持層を巻くステップも含む。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、組織製品を作り出すために採取することができる筋肉および筋膜組織供給源の斜視図を示している。
【図２】図２は、様々な実施形態に係る層状の筋肉組織組成物の側面図を示している。
【図３】図３Ａは、様々な実施形態に係る筋肉層およびスラリーを含む組織組成物の側面図を示している。図３Ｂは、様々な実施形態に係る筋肉層、支持層およびスラリーを含む組織組成物の側面図を示している。
【図４】図４は、様々な実施形態に係る筋肉層、支持層およびスラリーを含むロール状の組織組成物の側面図を示している。
【図５】図５は、開示発明の様々な実施形態に係る、様々な方向に切断されかつ様々な配向の筋線維を有するブタ腰筋の正規化最大荷重値の棒グラフである。
【図６】図６は、本開示の様々な実施形態に係る、長手方向または断面方向に切断されたブタの腹直筋の正規化最大荷重値の棒グラフである。
【図７】図７は、本開示の様々な実施形態に係る、断面方向を向く筋線維および長手方向を向く筋線維を有するブタ腰筋の正規化最大荷重値の棒グラフであり、筋膜を有する場合と有さない場合を示している。
【図８】図８は、本開示の様々な実施形態に係る、長手方向または断面方向に切断されたブタ外腹斜筋の正規化最大荷重値の棒グラフであり、筋膜を有する場合と有さない場合を示している。
【図９】図９は、本開示の様々な実施形態に係る、単一の筋肉マトリックス層または２層の筋肉マトリックス層を含む断面方向に切断された腰筋片から得られたブタ筋肉マトリックス組成物についての正規化最大荷重値の棒グラフである。
【図１０】図１０は、本開示の様々な実施形態に係る、Ｘ方向およびＹ方向に測定された長手方向に切断された腰筋片から得られた単層および二層のブタ筋肉マトリックス組成物の正規化最大荷重値の棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
ここで、本開示に係る特定の例示的な実施形態を詳細に参照する。その特定の例が添付図面に示されている。同一または類似の部分を指すために、可能な限り、図面全体を通して同じ符号を使用するものとする。
【００１７】
本出願において、単数形の使用は、特に明記しない限り、複数形を含む。本出願において、「または」の使用は、特に明記しない限り、「および／または」を意味する。さらに、「含んでいる」という用語、並びに、「含む」および「含まれる」などの他の形態の使用は限定的なものではない。本明細書に記載の任意の範囲は、両端点と、両端点間の全ての値を含むものと理解されたい。
【００１８】
本明細書で使用されている節の見出しは、編成目的のためだけであり、記載されている主題を限定するものとして解釈されるべきではない。特許、特許出願、論文、書籍および論文に限定される訳ではないが、それらを含む、本出願で引用したすべての文書または文書の一部は、如何なる目的に対しても、その全体が引用により本明細書に明示的に援用されるものとする。
【００１９】
患者を治療するための製品を製造するために、様々なヒトおよび動物の組織を使用することができる。例えば、様々な疾患および／または構造的損傷に起因して（例えば、外傷、手術、萎縮、および／または長期の摩耗や変性により）損傷または喪失したヒト組織の再生、修復、増加、補強および／または治療のための様々な組織製品が製造される。そのような製品は、例えば、無細胞組織マトリックス、組織同種移植片または異種移植片、および／または再構成組織（すなわち、成長できる材料をもたらすために細胞が播種された、少なくとも部分的に脱細胞化された組織）を含むことができる。
【００２０】
本明細書において、「筋線維」は、筋収縮に関与する棒状構造であり、ミオシン、トロポニン、トロポミオシンおよびアクチニンなどのタンパク質を含む。長い筋線維鎖は、細長い筋肉細胞（筋細胞）の中と間にある。
【００２１】
本明細書において、「筋肉欠損」は、移植された筋肉マトリックスによる修復、向上、増強、再生、改善および／または治療に適したあらゆる筋肉の異常または損傷である。筋肉欠損には、筋肉の変質を引き起こす病気、外傷または外科的介入に起因するあらゆる異常または損傷が含まれる。本明細書中において、「大量の（bulk）」筋肉組織の除去または喪失とは、筋肉組織の相当量および測定可能な量、例えば、少なくとも約０．５ｃｍ３の量の喪失をいう。
【００２２】
本明細書において、「脱細胞化組織」とは、組織の細胞外マトリックス中で増殖することが通常見出される細胞の大部分または全部が除去された任意の組織（例えば、ネイティブ細胞の約８０、８５、９０、９５、９９、９９．５または１００％を欠く組織、またはそれらの間の任意のパーセントを欠く組織）である。
【００２３】
本明細書に提供される材料および方法は、生体適合性インプラントを作製するために使用することができる。本明細書において、「生体適合性」インプラントとは、移植後に周囲の組織から組成物へのネイティブ細胞の移動および増殖をサポートする能力を有し、そのような細胞活性を妨げる実質的な免疫応答を誘発しない組成物である。本明細書において、「実質的な免疫応答」とは、移植材料の部分的または完全な再吸収および／またはネイティブ細胞による移植物の部分的または完全な再増殖を妨げるものである。
【００２４】
本明細書において、「ネイティブ細胞」および「ネイティブ組織」という用語は、筋肉移植片の移植前にレシピエント組織または器官に存在する細胞および組織、あるいは移植後にホスト動物によって産生される細胞または組織を意味する。
【００２５】
図１は、組織サンプルを作製するために採取することができる筋肉および筋膜組織供給源の斜視図である。例示的な組織供給源では、筋肉組織１１０が筋膜組織１２０によって取り囲まれている。組織供給源は、脱細胞化およびその後の治療部位への移植に適した、任意のヒトまたは動物骨格筋およびそれに付随する筋膜であり得る。一旦移植されると、組織供給源から生成された脱細胞化筋筋膜マトリックスは、移植された領域に対する強度を増加させることができ、かつ／または筋肉細胞の内方成長および筋肉組織の再生を促進することができる。
【００２６】
例示的な実施形態において、本明細書に記載の組織組成物および脱細胞化筋筋膜マトリックスは、以前に知られているものよりも高い初期強度を有することができ、引き裂かれることなくより高い荷重に耐えることができる。いくつかの実施形態では、筋膜マトリックスは、ネイティブ細胞（例えば、線維芽細胞など）が中に移動することができる足場を提供することができ、筋肉マトリックスによって誘導される再構築筋肉とともに筋膜および／または真皮の再構築を可能にする。
【００２７】
特定の実施形態では、組織サンプルが、組織の筋膜部分１２０（周囲の筋膜の一部またはすべてを含む）から組織の筋肉部分１１０を分離することなく採取された筋肉部分および筋膜部分を含む。筋肉組織を周囲の筋膜組織とともに採取することによって、筋肉組織のみまたは大部分が筋肉組織からなる組織組成物よりも高い最大荷重に耐えることができる組織組成物を調製することが可能になる。筋肉マトリックスの調製は、以下により詳細に説明する。また、それは、２０１４年１２月２２日に出願されて米国特許公開第２０１５／０２８２９２５号として公開された係属中の米国特許出願第１４／４１０，２０４号にも記載されている。この出願の内容はその全体が引用により本明細書に援用されるものとする。
【００２８】
種々の実施形態において、組織サンプルは、血液、または赤血球のような血液成分を除去するために処理することができる。例えば、組織サンプルを細胞溶解液に曝して赤血球などの細胞を除去することができる。例えば、塩化アンモニウム、低張または高張食塩水、洗浄剤または他の既知の脱血組成物などの溶液を含む、様々な血液細胞除去または溶解溶液を使用することができる。さらに、溶液は、いくつかのインキュベーションステップおよび／または洗浄ステップで使用することができ、それには、例えば、１乃至１０回の洗浄ステップ、またはその間の任意の適切な回数の洗浄ステップが含まれる。
【００２９】
種々の実施形態では、組織サンプルを処理して脱細胞化筋筋膜マトリックスを製造することができる。例えば、筋肉組織内の細胞外マトリックスの生物学的および／または構造的完全性を損なうことなく、筋肉組織から生存細胞および生存不能細胞を除去するために、組織サンプルを脱細胞化溶液に曝すことができる。脱細胞化溶液は、適切な緩衝剤、塩、抗生物質、１または複数の界面活性剤（例えば、ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００（商標）または他の非イオン性オクチルフェノールエトキシレート界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、デオキシコール酸ナトリウム、またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、架橋を防止するための１または複数の薬剤、１または複数のプロテアーゼ阻害剤、および／または１または複数の酵素を含むことができる。いくつかの実施形態では、脱細胞化溶液が、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％またはそれらの中間パーセンテージのＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００（商標）を含むことができ、任意選択的に、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭまたはそれらの中間濃度のＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）を含むことができる。特定の実施形態では、脱細胞化溶液が、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％または任意の中間パーセンテージのデオキシコール酸ナトリウムを含むことができ、任意選択的に、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭまたはそれらの中間濃度のＥＤＴＡを含有する１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭまたは２０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）を含むことができる。いくつかの実施形態では、筋肉組織を、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または４２℃（またはそれらの間の任意の温度）で脱細胞化溶液中でインキュベートすることができ、任意選択的には、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０または１５０ｒｐｍ（またはそれらの間の任意のｒｐｍ）で軽く揺することができる。インキュベーションは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２４、３６、４８、６０、７２、８４または９６時間（またはそれらの間の任意の時間）行うことができる。
【００３０】
脱細胞化の程度および／または筋組織からの筋線維除去の程度を制御するために、脱細胞化溶液に曝す時間の長さおよび／または洗浄剤もしくは他の脱細胞化剤の濃度を調整することができる。特定の実施形態では、筋肉組織から細胞を除去するために追加の洗浄剤を使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、デオキシコール酸ナトリウム、ＳＤＳおよび／またはＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００（商標）を使用して、細胞外組織マトリックスから望ましくない組織成分を脱細胞化および分離することができる。
【００３１】
いくつかの実施形態では、（例えば、筋線維中のミオシン分子を切断することによって）筋線維束を破壊するために、組織サンプルを、トリプシンを含む溶液と接触させることができる。いくつかの実施形態では、溶液が、パパイン、ブロメライン、フィシンまたはアルカラーゼなどの追加の酵素を含むことができる。いくつかの実施形態では、トリプシンが、その後の脱細胞化中の筋線維分解および筋細胞除去の速度および／または程度を増加させることによって脱細胞化プロセスを促進することができる。いくつかの実施形態では、筋肉サンプルを、トリプシンに約１０−１０−０．５％の範囲内の濃度（例えば、約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５または０．５パーセント）で曝すことができ、または１０−８−１０−４％または１０−７−１０−５％またはその間の任意のパーセントで曝すことができる。上述した濃度は、１０−６％が約１２０−１３０ＢＡＥＥ単位に相当するような酵素活性を有する酵素に適切であると考えることができ、ＢＡＥＥ単位は、基材としてＮα−ベンゾイル−Ｌ−アルギニンエチルエステル（ＢＡＥＥ）を用いて、トリプシン活性についての仕様を有する酵素について決定される。この手順は、以下の反応に基づく連続分光光度法による速度測定（ΔＡ２５３、光路＝１ｃｍ）である。
【００３２】
2020505137.tif 000002
【００３３】
ここで、
ＢＡＥＥ  ＝  Ｎα−ベンゾイル−Ｌ−アルギニンエチルエステル
である。
【００３４】
ＢＡＥＥ単位は、トリプシン活性の１のＢＡＥＥ単位が、３．２０ｍｌの反応量において、２５℃、ｐＨ７．６で、基材としてＢＡＥＥを用いて１分あたり０．００１のΔＡ２５３を生じるように定義される。
【００３５】
数多くの適当なトリプシンを使用することができるが、適切であろう１の例示的なトリプシンは、例えばＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ社のウシ膵臓トリプシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製品Ｔ１４２６）を含む。
【００３６】
特定の実施形態では、筋肉サンプルを、少なくとも約１５分間または最大で約２４時間まで（例えば、約１５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、４時間、８時間、１２時間、２４時間またはそれらの中間時間）トリプシンに曝すことができる。特定の実施形態では、筋膜を含む筋肉サンプルを、少なくとも約１５分間または最大で約４８時間まで（例えば、約１５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、４時間、８時間、１２時間、２４時間、４８時間またはそれらの中間時間）トリプシンに曝すことができる。様々な実施形態では、脱細胞化を、トリプシン処理の前、トリプシン処理の後、またはトリプシン処理の前後の両方で行うことができる。
【００３７】
組織サンプルを脱細胞化する手順は、いくつかの実施形態では、処理前に組織サンプルに通常見られる少なくともいくつかの筋線維を保持するように制御することができる。例えば、脱細胞化溶液および／またはトリプシン溶液の濃度およびそれらに曝す長さは、筋線維の除去の程度を制御するために調整することができる。いくつかの実施形態では、継続時間および／または濃度が、トリプシン処理および脱細胞化の前に筋肉組織に通常見られる筋線維の約２０−８０％を除去するように選択される。特定の実施形態では、継続時間および／または濃度が、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０パーセント（またはそれらの間の任意のパーセンテージ）の筋線維を除去するように選択される。いくつかの実施形態では、１０−１０−０．５％の範囲の濃度のトリプシンに１５分間−２４時間または４８時間にわたって組織サンプルを曝すことによって、かつ／または、約０．１−２．０％の脱細胞化剤（例えば、ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００（商標）または他の非イオン性オクチルフェノールエトキシレート界面活性剤、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウムまたはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）に０．１−７２時間にわたって筋肉組織サンプルを曝すことによって、約２０−８０％の筋線維が除去される。
【００３８】
他の実施形態では、処理前に組織サンプル中に通常見られる少なくとも一部の筋線維を保持しながら組織サンプルを脱細胞化する手順は、脱細胞化またはトリプシン処理溶液の体積に対する組織質量の比率（例えば、トリプシンおよび／または脱細胞化剤を含有する溶液の体積当たりの組織の質量）を調節することによって制御できる。いくつかの実施形態では、溶液の体積に対する組織の比率が低くなると、筋線維除去プロセスの効率が高まり、その結果、無傷の筋線維をより少なく保持する脱細胞化筋筋膜マトリックスが得られる。他の実施形態では、溶液の体積に対する組織の比率が高くなると、筋線維除去プロセスの効率が低下し、その結果、無傷の筋線維をより多く保持する脱細胞化筋筋膜マトリックスが得られる。
【００３９】
種々の実施形態では、脱細胞化筋肉または筋筋膜組織内の細胞外足場が、コラーゲン（特に、コラーゲンＩ型またはＩＩＩ型）、エラスチン、筋線維および／または他の繊維、並びに、プロテオグリカン、多糖類および／または成長因子（例えば、ＩＧＦ、ＥＧＦ、Ａｎｇ２、ＨＧＦ、ＦＧＦおよび／またはＶＥＧＦ）を含むことができる。筋肉または筋筋膜マトリックスは、脱細胞化の前に筋肉内に自然に見られる細胞外マトリックス成分の一部またはすべてを保持することができるか、または様々な望ましくない成分は、化学的、酵素的および／または遺伝的手段によって除去することができる。一般に、筋肉細胞外マトリックスは、繊維、プロテオグリカン、多糖類および成長因子を含む構造的足場を提供し、その中に、ネイティブ細胞および血管系が、患者への移植後に移動、成長および増殖することができる。細胞外マトリックスの正確な構造成分は、選択された筋肉および／または筋膜の種類と、脱細胞化組織を調製するために使用される方法とに依存するものとなる。
【００４０】
特定の実施形態では、筋肉および筋膜組織を含む組織サンプルを、細胞除去の前、最中または後に、化学的に処理して組織を安定化させ、それにより生化学的および／または構造的劣化を回避することができる。様々な実施形態では、安定化溶液が、浸透性、低酸素性、自己分解および／またはタンパク質分解を阻止および防止することができ、微生物汚染から保護することができ、かつ／または脱細胞化中に生じ得る機械的損傷を軽減することができる。安定化溶液は、適切な緩衝剤、１または複数の抗酸化剤、１または複数の膠質剤、１または複数の抗生物質、１または複数のプロテアーゼ阻害剤および／または、１または複数の平滑筋弛緩剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、安定化溶液が、グルタチオン、ｎ−アセチルシステイン、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼまたはグルタチオンペルオキシダーゼに限定されるものではないが、これらを含む１または複数のフリーラジカル捕捉剤を含むことができる。
【００４１】
特定の実施形態では、筋肉または筋筋膜インプラントが、１または複数の追加の薬剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、追加の薬剤が、抗炎症薬、鎮痛薬または任意の他の所望の治療薬または有益な薬剤を含むことができる。特定の実施形態では、追加の薬剤が少なくとも１の追加の成長またはシグナル伝達因子（例えば、小細胞成長因子、血管新生因子、分化因子、サイトカイン、ホルモンおよび／またはケモカイン）を含むことができる。これらの追加の薬剤は、ネイティブ筋肉の移動、増殖および／または血管新生を促進することができる。いくつかの実施形態では、成長因子またはシグナル伝達因子が、発現ベクター内に含まれる核酸配列によってコードされている。本明細書中において、「発現ベクター」という用語は、細胞によって取り込まれることができる核酸構築物であって、所望のタンパク質をコードする核酸配列を含み、さらに他の必要な核酸配列（例えば、プロモータ、エンハンサ、開始コドンおよび終止コドンなど）を含んで細胞による所望のタンパク質の少なくとも最小の発現を確保する核酸構築物を指している。
【００４２】
特定の実施形態では、筋肉または筋筋膜マトリックスを調製するために使用される筋肉および／または筋膜組織を、１または複数の酵素で処理して、望ましくない抗原、例えばレシピエント動物によって通常発現されない抗原であって、免疫反応や拒絶反応を引き起こす抗原を除去することができる。例えば、特定の実施形態では、筋肉および／または筋膜組織を、アルファ−ガラクトシダーゼ（α−ｇａｌ）部分を除去するためにアルファ−ガラクトシダーゼで処理することができる。いくつかの実施形態では、α−ｇａｌエピトープを酵素的に除去するために、筋肉組織を生理食塩水で徹底的に洗浄した後、組織に１または複数の酵素処理を施し、サンプル中にα−ｇａｌ抗原が存在する場合はそれを除去する。特定の実施形態では、筋肉および／または筋膜組織をα−ガラクトシダーゼ酵素で処理して、α−ｇａｌエピトープを実質的に除去することができる。さらに、アルファ−１，３−ガラクトース部分を低減または除去するために組織を処理する特定の例示的方法は、Ｘｕ等による「Ａ  Ｐｏｒｃｉｎｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｄｅｒｍａｌ  Ｓｃａｆｆｏｌｄ  Ｔｈａｔ  Ｓｕｐｐｏｒｔｓ  Ｓｏｆｔ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：Ｒｅｍｏｖａｌ  ｏｆ  Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｇａｌａｃｔｏｓｅ−α−（１，３）−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ  ａｎｄ  Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ」、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐａｒｔ  Ａ、Ｖｏｌ．１５（７）、１８０７−１８１９（２００９）に記載されており、その全体が引用により本明細書中に援用されるものとする。
【００４３】
いくつかの実施形態では、組織供給源がブタである。代替の実施形態では、組織供給源がヒトである。特定の実施形態では、筋肉組織が骨格筋から採取される。脱細胞化筋筋膜マトリックスは、１または複数（例えば、１、２、３、４、５またはそれ以上）の異なる筋肉からの筋肉組織を含むことができる。
【００４４】
筋筋膜マトリックス中の脱細胞化筋肉組織は、意図されるレシピエント動物と同じ種の１または複数のドナー動物に由来するものとすることができるが、必ずしもそうである必要はない。このため、例えば、脱細胞化筋肉組織は、ブタ組織から調製されて、ヒト患者に移植され得る。脱細胞化筋組織のドナーおよび／またはレシピエントとしての機能を果たすことができる種には、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒまたはチンパンジー）、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ラットまたはマウスなどの哺乳動物が含まれるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、複数のドナー動物由来の筋肉組織を使用することができる。
【００４５】
特定の実施形態では、１または複数の抗原性エピトープを欠くように遺伝的に改変されている動物が、筋肉マトリックスのための組織供給源として選択され得る。例えば、末端α−ガラクトース部分の発現を欠くように遺伝子改変されている動物（例えば、ブタ）を組織供給源として選択することができる。異種移植のための適切な動物およびトランスジェニック動物の生成方法の説明については、米国特許出願第１０／８９６，５９４号および米国特許第６，１６６，２８８号を参照されたい。両方とも引用によりその全体が本明細書に援用されるものとする。
【００４６】
本明細書に記載の脱細胞化筋筋膜マトリックスを含む筋肉または筋筋膜インプラントを製造することができる。そのようなインプラントは、筋肉組織の修復、改変、再生および／または増強が望まれる様々な筋肉の欠陥および関連する障害を治療するために使用することができる。例えば、現在の標準治療が、機能的筋肉の再生よりも筋膜再生の促進においてより効果的である完全脱細胞化真皮マトリックスまたは無傷筋肉移植の使用を一般に含む、ヘルニアおよび他の腹壁筋肉損傷を治療するために、インプラントを使用することができる。別の実施例では、発砲などによる外傷性腹壁損傷または他の鈍器損傷を修復するために、インプラントを使用することができる。さらに別の例では、大量の組織の外科的除去後に（例えば、軟部組織肉腫または骨肉腫の除去後に）インプラントを使用することができる。様々な実施形態では、大臀筋、直筋、大腿二頭筋または腓腹筋に限定されるものではないが、それらを含む任意の種類の骨格筋の欠損を修復するために、インプラントを使用することができる。
【００４７】
いくつかの実施形態では、大量の筋肉組織の外科的除去後（例えば、肉腫または骨肉腫を除去するための外科的介入後）に、インプラントを使用することもできる。インプラントを受けていない患者、または残留筋線維を有していない無細胞化組織または無傷の筋肉を含むインプラントを受けている患者にとって、筋肉修復の速度および全体的な量は低くなり得る。反対に、本開示に係るインプラントは、患者の筋肉修復経路を増強する機能を果たすのに十分な（しかし過剰ではない）レベルの炎症（例えば、マクロファージ／筋芽細胞の増強と衛星細胞の活性化）を誘発することによって筋肉修復の速度および全体量を開始および／または改善することができる。同様に、筋肉および／または筋膜組織が患者の別の場所への移植のためにある筋肉および／または筋膜から採取される外科的処置において、本明細書に記載のインプラントは、移植処置後の採取部位での筋肉および／または筋膜の修復の速度および全体的な程度を促進するのを助けるために採取部位に配置することができる。
【００４８】
いくつかの実施形態では、インプラントを使用して本来の筋肉量を増強することができる。例えば、インプラントは、筋肉消耗性疾患の治療の一部として使用することができ、それによって修復および再生の速度を高め、かつ／またはインプラント部位における筋肉の全体量を増加させることができる。別の例では、インプラント部位で追加の筋肉量の成長を促進することによって、筋肉組織の外観を美容的に高めるために、インプラントを使用することができる。
【００４９】
１または複数の脱細胞化筋肉マトリックスおよび／または１または複数の脱細胞化筋膜マトリックスを含むインプラントを使用した場合、インプラント内の筋肉マトリックスが筋肉再生を促進することができる一方で、インプラント内の筋膜マトリックスが近傍の筋膜の修復または再生を促進することができる。対照的に、現在の外科的処置（例えば、縫合糸の使用および／または筋線維のない移植脱細胞化組織マトリックスの使用）は、筋膜の修復をもたらすことができるが、根本的な筋肉の修復または再生が最小となる。現在の外科的処置における根本的な筋肉再生の結果的な欠如は、隆起、瘢痕化および他の合併症の割合の増加に繋がり得る。
【００５０】
筋膜を伴う筋肉マトリックスを製造することに加えて、またはその代わりに、脱細胞化筋骨格マトリックスおよび組織組成物の強度を改善するいくつかの技術が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、組織サンプル中の筋線維の向きが、得られる組織マトリックスの強度に影響を及ぼし得る。
【００５１】
いくつかの実施形態では、脱細胞化筋筋膜マトリックスの筋線維が特定の方向を向くように組織サンプルを選択することによって、組織組成物を調製することができる。いくつかの実施形態では、切断の向きが、組織内の筋線維の向きと同じでも異なっていてもよい。
【００５２】
例えば、直筋のようないくつかの筋肉は、筋線維が筋肉の力発生の長軸または方向に沿って向く傾向があり、一方、腹壁の傾筋または腰筋のような他の筋肉は、繊維が筋肉の力発生の長軸または方向に対して斜めにまたは異なる方向に向くことがある。様々な実施形態によれば、組織サンプル中の筋線維の向きは、得られる組織組成物が耐えることができる最大荷重に影響を及ぼし得る。このため、いくつかの実施形態において、本開示は、選択された方向に沿って複数の部分に切断された筋肉から形成された組織マトリックスを組み込んだデバイスを含む。例えば、そのデバイスは、長手方向に又は横断面で切断された筋肉からの組織マトリックスを含むことができ、多層のデバイスの場合、組織マトリックスタイプの組合せを含むことができる。
【００５３】
本明細書に開示の筋肉および筋筋膜インプラントは、非粒子形態とすることができる。非粒子形態にある場合、インプラントは、任意の望ましい形状、例えば、シート、立方体、球または他の望ましい形状とすることができる。いくつかの実施形態では、非粒子状の筋肉または筋筋膜インプラントが、単層で最大約２０ｍｍの厚さ（例えば、約２、５、１０、１５または２０ｍｍの厚さ、またはそれらの間の任意の厚さ）を有することができる。多層を有するインプラントの厚さは、含まれる層の数に依存し得る。
【００５４】
粒子状インプラント（例えば、切断、混合、低温破砕または他の方法で均質化されたインプラント）も製造することができ、乾燥状態（例えば、凍結乾燥）で貯蔵するか、またはゲル（例えば、ゼラチン）、ヒドロゲルまたは水溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水または他の任意の生体適合性食塩水）中に懸濁することができる。粒子状インプラントは、様々な形状に成形可能であるパテのような質感を有するように加工することができる粉末またはスラリーの形態をとることができる。粒子状材料は、本明細書で述べるように、スラリー材料を製造するために使用することができる。
【００５５】
組織組成物の強度を向上させるために、組織組成物は多層の脱細胞化筋肉を含むことができる。本明細書の教示によれば、組織組成物は、未処理の筋肉サンプル中に通常見られる筋線維の少なくとも一部を含むことができる。組織組成物は、一群の筋肉マトリックスを提供するステップと、一群の筋肉マトリックスを層状にして接合し、それにより多層筋肉マトリックスを製造するステップとにより製造することができる。
【００５６】
図２は、本明細書に記載の様々な実施形態に係る層状筋肉組織組成物２００の側面図である。層状筋肉組織組成物２００は、層状にされて接合された複数の脱細胞化筋肉マトリックス層２１０を含むことができる。いくつかの実施形態では、層が少なくとも１のスペーサ２２０によって接合されるようにしてもよいが、例えば、機械的アンカー、生物学的適合性接着剤または架橋（例えば、化学的または酵素的接合）を含む任意の適切な接合方法を使用することができる。
【００５７】
複数の脱細胞化筋肉マトリックス層２１０は、上述したように実質的に形成することができる。いくつかの実施形態では、層状筋肉組織組成物２００が、向きの異なる筋線維を有する筋肉マトリックス層２１０を含むことができる。例えば、層状筋肉組織組成物２００のある筋肉マトリックス層２１０は、断面方向の筋線維の向きを有することができ、一方、異なる筋肉マトリックス層２１０は、長手方向の筋線維の向きを有することができる。いくつかの実施形態では、層状筋肉組織組成物２００が、互いに対して回転した筋線維の向きを有する筋肉マトリックス層２１０を含むことができる。例えば、第１および第２の筋肉マトリックス層２１０は、長手方向の筋線維向きを有することができるが、第２の筋肉マトリックス層は、第１の筋肉マトリックス層に対して回転し、第１の層における筋線維の長軸が、第２の層の筋線維の長軸に対して垂直になるようにしてもよい。
【００５８】
スペーサ２２０は、使用される場合、組織組成物全体にわたって均一な間隔または不規則な間隔で配置することができる。いくつかの実施形態では、スペーサ２２０を、リベット、ネジ、ステープル、タックまたは他の種類の手段とすることができる。いくつかの実施形態では、スペーサ２２０を生分解性とすることができる。腹壁および同様の欠陥の修復中に、リベットまたはタックなどのスペーサ２２０を有する層状筋組織組成物２００を組織インプラントの一部として使用すると、スペーサ２２０は比較的高い初期耐荷重能力を提供することができる。時が経つに連れて、筋肉の再生が進み、スペーサ２２０が劣化すると、耐荷重能力がスペーサ２２０からインプラントの筋肉部分（最初は弱い）に移転されるものとなる。
【００５９】
筋肉マトリックスは、様々な技術を使用して、層状にし、接合することができる。いくつかの実施形態では、一群の筋肉マトリックス２１０を、脱水熱処理または圧縮を使用して接合することができる。いくつかの実施形態では、第１の筋肉マトリックス２１０の一部を第２の筋肉マトリックス２１０の一部と相互連結することによって、一群の筋肉マトリックス２１０を接合することができる。いくつかの実施形態では、スペーサ２２０が接着剤、架橋剤または変性剤を含むことができるか、または組織マトリックススラリーを含むことができる。組織マトリックススラリーは、脱細胞化筋肉組織、脱細胞化筋筋膜組織、または脱細胞化真皮組織などの他の脱細胞化組織を含むことができる。
【００６０】
いくつかの実施形態では、スペーサ２２０が、トランスグルタミナーゼを含み、隣接する組織マトリックスを互いに、または他の構成要素に接着させることができる。トランスグルタミナーゼは、グルタミン残基のガンマ−カルボキシアミド基とリジン残基のアミノ基または他の第一級アミノ基との結合を触媒する、細菌、植物および動物において発現される酵素である。様々な実施形態では、トランスグルタミナーゼを使用して、２またはそれ以上の筋肉マトリックス層の相互の結合を触媒することができる。いくつかの実施形態では、トランスグルタミナーゼが、ある筋肉マトリックス層２１０内のコラーゲンと別の筋肉マトリックス層２１０内のコラーゲンとの結合を触媒することができる。
【００６１】
層状筋肉組織組成物２００は、個々の筋肉マトリックス層２１０と比較して高い強度を有することが可能である。図９および図１０を参照して後述するように、二層筋組織組成物は、単層の筋肉マトリックスよりも大きな荷重に耐えることができる。
【００６２】
図２は、２層の脱細胞化筋肉マトリックス層２１０を含む層状筋肉組織組成物２００を例示するものであるが、当業者であれば、層状組成物を形成するために任意の数の筋肉マトリックス層を使用できることを理解するであろう。例えば、組成物は、所望の用途および必要な機械的特性に応じて、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０または５０の層（またはそれらの間の任意の数）を含むことができる。
【００６３】
いくつかの実施形態では、多層筋肉マトリックスが、追加の筋肉マトリックス、支持層、合成材料、金属、他の生分解性材料、または無細胞組織マトリックスを含むことができる。特定の実施形態では、層状筋肉組織組成物が、粒子状無細胞組織マトリックスを使用して支持層に付着された筋肉マトリックス層を含むことができる。
【００６４】
図３Ａは、筋肉マトリックス層３１０およびスラリー３２０を含む組織組成物３００の側面図である。筋肉マトリックス層３１０は、前述したように筋肉マトリックスから作製することができる。いくつかの実施形態では、スラリー３２０が、粒子状筋肉マトリックスまたは他の組織マトリックス粒子を含む粒子状無細胞組織マトリックスを含むことができる。
【００６５】
図３Ｂは、筋肉マトリックス層３１０、支持層３３０およびスラリー３２０を含む組織組成物３００の側面図である。筋肉マトリックス層３１０は、前述したように筋肉マトリックスから作製することができる。いくつかの実施形態では、スラリー３２０が、粒子状無細胞組織マトリックスを含むことができる。
【００６６】
支持層３３０は、金属、ポリプロピレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエステル、テレフタレート、ポリグリコリドまたはポリ−４−ヒドロキシブチレートに限定されるものではないが、これらを含むスラリー３２０に（例えば、層３３０の孔によって浸透されるか又は混ぜ合わされることによって）固定または付着することができる任意の材料とすることができる。いくつかの実施形態では、支持層３３０が合成基材を含む。更なる実施形態では、支持層３３０がメッシュを含む。いくつかの実施形態では、支持層３３０がポリプロピレンメッシュを含む。特定の実施形態では、支持層３３０が、多孔質フォーム、平面メッシュ、マルチフィラメント織布材料、モノフィラメント織布材料、多レベル層または多方向層のうちの少なくとも１つを含むことができる。図示のように、支持層は、メッシュ、例えば織布または編みメッシュの断面部分を意味するスポットとして示されるが、支持層の他の構成も支持層の範囲内である。
【００６７】
支持層３３０は、支持層３３０の両側の筋肉マトリックス層３１０間の接続性を改善するために孔または開口部３３５を含むことができる。いくつかの実施形態では、孔径が少なくとも２ｍｍである。支持層３３０の孔または開口部３３５の使用は、支持層３３０内への組織の内方成長を促進することができる。いくつかの実施形態では、支持層３３０が組織組成物３００内に埋め込まれる。
【００６８】
いくつかの実施形態では、筋肉マトリックス層３１０を互いにおよび／または支持層に接合するために、スラリー３２０を使用することができる。いくつかの実施形態では、スラリー３２０を使用して筋肉マトリックスを支持層３３０と接合することができる。いくつかの実施形態では、スラリー３２０中の粒子状無細胞組織マトリックス（ＡＴＭ）が真皮または筋肉組織を含むことができる。いくつかの実施形態では、粒子状無細胞組織マトリックスが乾燥粒子を含み、スラリー３２０で使用するために再水和されるようにしてもよい。更なる実施形態では、粒子状無細胞組織マトリックスが多孔質構造を有する。いくつかの実施形態では、粒子状無細胞組織マトリックスが架橋されているか又は他の方法で安定化されている。いくつかの実施形態では、組織組成物３００の層３１０、３２０、３３０が圧縮によって接合されている。
【００６９】
支持層３３０を筋肉マトリックス層３１０に付着させるために、スラリー３２０を支持層３３０の表面上に配置することができる。第２の筋肉マトリックス層３１０を付着させるために、追加のスラリー３２０を支持層３３０の反対側の表面上に配置することができる。
【００７０】
上述したように、組織組成物は、実質的に平らにすることができるか、または平らに置くことができる可撓性材料とすることができる。そのような組成物は、組織の再生、増強、支持または他の治療を可能にするために様々な状況で使用することができる。しかしながら、本明細書に記載の組織組成物は他の三次元構造を含むことができる。場合によっては、組織組成物はそれ自体に付着する筋肉マトリックスのみを含むことができる。
【００７１】
図４に示すように、組織組成物４００は、単一の筋肉マトリックス層４１０、支持層４３０およびスラリー４２０から形成することができる。様々な実施形態によれば、支持層４３０は１または複数の孔４３５を含むことができる。スラリー４２０および支持層４３０は、筋肉マトリックス層４１０の同じ側に取り付けられるようにしてもよい。その後、支持層４３０が筋肉マトリックス層４１０の内側に配置されるように筋肉マトリックス層４１０を巻くことができる。筋肉マトリックス層４１０および支持層４３０が巻かれると、筋肉マトリックス層４１０の第１の表面が孔４３５を介して筋肉マトリックス層の第２の表面に付着することができる。このようにして、支持層４３０は組織組成物４００の外側に露出することはなく、筋肉マトリックス層４１０は、支持層４３０の孔４３５または開口部を介してそれ自体に結合することができる。
【００７２】
いくつかの実施形態では、スラリー３２０（または４２０）が（粒子状組織マトリックスの有無にかかわらず）トランスグルタミナーゼを含むことができる。トランスグルタミナーゼは、支持層３３０と筋肉マトリックス層３１０および／または別の支持層３３０との結合を触媒することができる。例えば、支持層３３０は、有機材料または有機由来（すなわち、非合成）材料であり、トランスグルタミナーゼが、支持層のコラーゲンと筋肉層のコラーゲンとの間の結合の形成を引き起こすことができる。別の例として、合成支持層３３０が、表面に露出したジペプチドを有するように官能化することができる。
【００７３】
いくつかの実施形態では、スラリー３２０が、トランスグルタミナーゼおよび粒子状無細胞組織マトリックスを含むことができる。トランスグルタミナーゼは、粒子状無細胞組織マトリックスの個々の粒子の互いの結合および／または筋肉層との結合を触媒することができる。いくつかの実施形態では、トランスグルタミナーゼが、粒子状無細胞組織マトリックスの個々の粒子中のコラーゲン間の結合を触媒することができる。
【００７４】
前述した教示によれば、様々なトランスグルタミナーゼは、生物学的に適合性がある任意のものを含むスラリー３２０に使用することができ、患者に埋め込むことができ、かつ所望の時間枠内に所望の触媒結果を提供するのに十分な活性を有する。トランスグルタミナーゼは、微生物、植物、動物、または組み換え技術により製造された酵素を含むことができる。使用される特定の酵素に応じて、補因子の追加、ｐＨの制御、または温度もしくは他の環境条件の制御などの変更が、適切な酵素活性を可能にするために必要とされることがある。微生物トランスグルタミナーゼは、金属イオンの存在を必要としないことがあるため有効であり得るが、任意の適切なトランスグルタミナーゼを使用することができる。
【００７５】
２またはそれ以上の材料を結合または接合するためのトランスグルタミナーゼの使用は、組織の表面またはその近傍でコラーゲンの部分変性を引き起こし、それによりコラーゲンアミノ酸のアミン基およびアシル基を酵素架橋により利用しやすくすることによって、改善される可能性がある。材料の表面またはその近傍に含まれるコラーゲンを部分的に変性させることによって、変性コラーゲンは組織製品のフィブリル状コラーゲンネットワークに結合されたままとなり、他の組織製品または移植部位の組織などの他の材料との結合を助けるために外因性ゼラチンが必要なくなる。種々の実施形態によれば、筋肉基質層、支持層またはスラリーのうちの１または複数は、それらにトランスグルタミナーゼを適用する前に、変性プロセスを受けることができる。
【００７６】
変性プロセスは、いくつかの方法で実行することができる。組織マトリックスコラーゲンの制御された変性のための方法は、物理的または機械的プロセス（例えば、剥離）、熱的プロセス、化学的プロセス（例えば、酸、塩基または他のタンパク質変性剤）、酵素変性、光の照射（例えば、加熱またはエネルギーを付与するレーザ）、またはそれらの組合せを含むことができる。
【００７７】
図３Ｂに示す組織組成物３００は、２層の筋肉マトリックス層３１０と、１層の支持層３３０と、２層の粒子状無細胞組織マトリックススラリー３２０とを含むが、当業者は、組織組成物３００を構築するために、それらの層の各々をいくつでも組み合わせて使用することができることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、組織組成物が、少なくとも１の筋肉マトリックス層の反対側で少なくとも１の支持層に隣接する少なくとも１のスラリー３２０を含む。いくつかの実施形態では、組織組成物が、少なくとも１の支持層の反対側で少なくとも１の追加の乾燥粒子状無細胞組織マトリックスに隣接して配置される少なくとも１の追加の筋肉マトリックス層を含むことができる。
【００７８】
筋肉および／または筋筋膜インプラントは、上述したように、凍結、凍結乾燥、水和および／または脱水製品として、包装および／または保存することができる。特定の実施形態では、包装された筋肉または筋筋膜インプラントがバイオバーデンが減少しているか、または無菌である。特定の実施形態では、１または複数の包装された筋肉インプラントと、そのインプラントを調製および／または使用するための説明書とを含むキットが提供される。
【００７９】
いくつかの実施形態では、筋肉または筋筋膜インプラントは、バイオバーデンを減少させるように処理することができる（すなわち、インプラントが無菌であるか又は殺菌されている）。適切なバイオバーデン低減方法は、当業者に知られており、筋肉または筋筋膜インプラントを酸などの化合物または放射線に曝すことや、エチレンオキシド（ＥＯ）または超臨界二酸化炭素処理の使用を含むことができる。放射線はバイオバーデンを低減するか又は実質的に排除することができる。いくつかの実施形態では、バイオバーデンを低減または実質的に排除するために、約１５−２２ｋＧｙの電子ビーム放射線の吸収線量が照射される。様々な実施形態では、筋肉インプラントが、約５Ｇｙ−５０ｋＧｙの放射線（例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｋＧｙ、またはそれらの間の任意の値）に曝される。適切な形態の放射線には、ガンマ放射線、電子ビーム放射線およびＸ線放射線が含まれる。
【００８０】
本明細書に記載の多層インプラントは、腹部ヘルニア修復中に移植することができる。移植後、筋形成および線維芽細胞浸潤の程度を測定し、インプラントの不存在下、または無傷の筋肉もしくは完全に脱細胞化された組織（例えば、筋線維のない脱細胞化組織）を含むインプラントの存在下における筋形成および線維芽細胞浸潤と比較する。
【００８１】
様々なインプラントおよび組織組成の有効性を評価するために、複数種類のインプラントを試験して荷重能力を測定した。図５は、様々な方向に切断されて様々な向きの筋線維を有するブタ腰筋の最大荷重値を示す棒グラフである。上述したように、腰筋の筋線維は、筋肉の力発生の長軸または方向に対して主に斜めに向けられている。筋線維に沿って切断された筋肉は、約６Ｎ／ｃｍの最大荷重を示した。また、筋肉の長手方向軸に沿って切断された筋肉の部分、または断面方向に（すなわち、長手方向軸に対して垂直に）切断された筋肉の部分も試験した。筋線維に対して特定の方向に沿って筋肉を切断すると、得られる組織に与えることができる最大荷重が増大することが発見された。具体的には、断面方向の切断は約８Ｎ／ｃｍの最大荷重をもたらし、長手方向の切断は約１０Ｎ／ｃｍの最大荷重をもたらす。これらの結果によって示されるように、断面方向または長手方向を向く筋線維を有する筋肉を用いて調製されたインプラントは、筋線維に沿って（腰筋に対して斜めに）筋肉を切断したものよりも高い最大荷重に耐えることができる。
【００８２】
図６は、筋線維に沿ってまたは筋線維に対して切断されたブタ腹直筋の最大荷重値を試験した結果を示している。前述したように、腹直筋の筋線維は、主に筋肉の力発生の長軸または方向に沿って向けられている。筋線維に沿って（すなわち、長手方向に沿って）切断された筋肉は、約６Ｎ／ｃｍの最大荷重に耐えた。筋線維に対して（すなわち、断面方向に沿って）切断された筋肉は、約４Ｎ／ｃｍの最大荷重に耐えた。このため、いくつかの実施形態では、筋線維に沿って切断された筋肉が、筋線維に対して切断された筋肉よりも高い荷重に耐えることができる。
【００８３】
図７は、筋膜が有る場合と無い場合の、断面方向および長手方向に切断したブタ腰筋の最大荷重値を試験した結果を示している。断面方向に沿って切断した組織は、筋膜無しで約７．５Ｎ／ｃｍ、筋膜有りで約１５Ｎ／ｃｍの最大荷重に耐えた。長手方向に沿って切断した組織は、筋膜無しで約１０Ｎ／ｃｍ、筋膜有りで２５Ｎ／ｃｍの最大荷重に耐えた。様々な実施形態において、付着する筋膜を伴う筋肉は、筋膜を伴わない筋肉よりも高い荷重に耐えることができる。さらに、長手方向を向く方向に沿って切断された筋肉は、断面方向に切断された筋肉よりも高い最大荷重に耐えることができる。いくつかの実施形態では、長手方向に切断された、付着する筋膜を伴う筋肉は、最も大きな最大荷重に耐えることができる。いくつかの実施形態では、未処理の筋肉が耐えることができる最大荷重が大きいほど、処理済みの筋肉マトリックスが耐えることができる最大荷重も大きくなる。
【００８４】
図８は、筋膜が有る場合と無い場合の、断面方向または長手方向に切断された外斜筋の最大荷重値を試験した結果を示している。長手方向に切断された組織は、筋膜無しで約１７．５Ｎ／ｃｍ、筋膜有りで約２７．５Ｎ／ｃｍの最大荷重に耐えた。断面方向に切断された組織は、筋膜無しで約１２Ｎ／ｃｍ、筋膜有りで２１Ｎ／ｃｍの最大荷重に耐えた。様々な実施形態によれば、付着する筋膜を伴う筋肉は、筋膜の無い筋肉よりも高い荷重に耐えることができる。さらに、長手方向に切断された筋肉は、断面方向に切断された筋肉よりも高い最大荷重に耐えることができる。様々な実施形態によれば、長手方向に切断された、付着する筋膜を伴う筋肉は、最も大きい最大荷重に耐えることができる。
【００８５】
図９は、断面方向に切断された腰筋片から得られた単層および２層を含むブタ筋肉マトリックスの最大荷重値を試験した結果を示している。単層の筋肉マトリックスは、約３．５Ｎ／ｃｍの最大荷重に耐えた。反対に、二層の筋肉マトリックスは、約８Ｎ／ｃｍの最大荷重に耐えた。いくつかの実施形態では、２層以上の筋肉マトリックスを含む筋肉サンプルが、１層のみの筋肉マトリックスを含むサンプルよりも大きな荷重に耐えることができる。
【００８６】
長手方向に沿って切断された部分から得られた筋肉マトリックスの強度がすべての方向において同等であるかどうかを判定するために、サンプルを直交する２方向に沿って試験した。図１０は、Ｘ方向およびＹ方向の両方で測定された、単層および二層の長手方向に切断されたブタ筋肉マトリックス組成物の最大荷重値を示している。単層の筋肉マトリックスの場合、一方向（例えば、ｙ方向）は、他の方向（例えば、ｘ方向）の約３倍高い最大荷重値をもたらした。これらの異方性の結果は、同じ方向に整列した２つの筋肉マトリックスを用いて製造された二層の組織組成物においても維持されていた。対照的に、互いに対して９０度回転させた２つの筋肉マトリックスを用いて製造された二層の組織組成物は、どちらの方向で測定しても同様の最大荷重値を示した。いくつかの実施形態では、複数の筋肉マトリックスを含む多層組織組成物において、個々の筋肉マトリックスにおける切断方向を互いに対して整列またはオフセットさせることにより、異方性を維持または除去することができる。
【００８７】
長手方向および断面方向に切断された腰筋の両方に由来する単層インプラントは、腓腹筋欠損モデルにおいて骨格筋修復を誘導することができる。そのデータは、筋肉の再生がインプラントの筋線維の向きに依存しないことを示している。
【００８８】
様々な実施形態では、結合された筋肉および筋膜の同じ領域から採取された脱細胞化組織を含むインプラントが使用される。様々な実施形態では、脱細胞化組織の筋膜部分が、脱細胞化筋膜組織を含まないインプラントと比較して、インプラントの強度を増大させる。いくつかの実施形態において、増大した強度は、再生プロセス中にインプラントが受ける引張力、ねじり力および他の力に対してインプラントがより良好に抵抗することを可能にする。いくつかの実施形態では、インプラントの脱細胞化筋膜部分が、ネイティブ細胞（例えば、線維芽細胞など）が中に移動することができるコラーゲン足場を提供し、インプラントの脱細胞化筋肉部分によって誘導される再構築筋肉とともに筋膜の再構築を可能にする。
【００８９】
本明細書に開示されるのは、筋肉および／または筋筋膜インプラントを製造する方法である。様々な実施形態では、筋肉および／または筋筋膜インプラントが、１または複数の脱細胞化筋肉および／または筋膜マトリックスを含み、それが、適切な筋肉および／または筋筋膜サンプルを選択するステップと、サンプルを洗浄して赤血球および他の破片を取り除くステップと、筋肉および／または筋筋膜のサンプルをトリプシンに曝すステップと、筋肉および／または筋筋膜のサンプルを脱細胞化溶液に曝すステップと、任意選択的に、脱細胞化筋肉および／または筋筋膜サンプルをＤＮａｓｅおよび／またはアルファ−ガラクトシダーゼと接触させるステップと、脱細胞化筋肉および／または筋筋膜サンプルを洗浄するステップと、任意選択的に、サンプルを滅菌するステップとによって、調製される。
【００９０】
様々な実施形態では、脱細胞化筋肉マトリックスの製造に含まれる全体的ステップが、ドナー（例えば、ヒトの死体または動物の組織供給源）から筋肉組織、筋膜組織または移行領域組織のサンプルを提供するステップと、サンプル中の細胞外マトリックスの生物学的および／または構造的機能の一部またはすべておよび筋線維の少なくとも一部を保持する条件下で細胞材料を除去するステップとを含む。
【００９１】
いくつかの実施形態では、筋肉組織および筋膜組織のサンプルが提供されて、あらゆる残留凍結防止剤、赤血球および／または他のあらゆる汚染物質を除去するために、サンプルが洗浄される。洗浄に使用される溶液は、生理学的に適合する任意の溶液とすることができる。適切な洗浄液の例には、蒸留水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）または他の任意の生体適合性食塩水が含まれる。
【００９２】
一実施形態では、（例えば、筋線維内のミオシン分子を切断することによって）筋線維束を分解するために、少なくとも１の筋肉サンプルおよび少なくとも１の筋膜サンプルをトリプシン含有溶液と接触させる。いくつかの実施形態では、トリプシンが、その後の脱細胞化中の筋線維分解および筋細胞除去の速度および／または程度を増加させることによって脱細胞化プロセスを促進することができる。いくつかの実施形態では、筋肉サンプルがトリプシンに約１０−１０−０．５％の濃度（例えば、約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５パーセント、またはそれらの間の任意のパーセンテージ）で曝される。いくつかの実施形態では、トリプシン濃度が１０−８−１０−４％の範囲である。特定の実施形態では、筋肉サンプルが、少なくとも約１５分間および／または最大約２４時間まで（例えば、約１５、３０、４５、６０、７５、９０、１０５、１２０分、４時間、８時間、１２時間、２４時間またはそれらの間の任意の期間）トリプシンに曝される。特定の実施形態では、筋膜を含む筋肉サンプルが、少なくとも約１５分間および／または最大約４８時間まで（例えば、約１５分、３０分、４５分、６０分、７５分、９０分、１０５分、１２０分、４時間、８時間、１２時間、２４時間、４８時間または任意の中間時間）トリプシンに曝される。トリプシン処理および脱細胞化後に筋肉サンプルおよび筋膜サンプル中の筋線維の少なくとも一部を保持するように筋肉組織からの筋線維除去の程度を制御するために、トリプシンに曝す時間の長さおよび／またはトリプシンの濃度を調整することができる。
【００９３】
様々な実施形態では、筋線維除去の程度を制御するために、脱細胞化溶液および／またはトリプシン溶液の濃度および／または曝す時間を調整することができる。いくつかの実施形態では、継続時間および／または濃度が、トリプシン処理および脱細胞化の前に筋肉サンプル中に通常見られる筋線維の約２０−８０％を除去するように選択される。特定の実施形態では、継続時間および／または濃度が、約２０、３０、４０、５０、６０、７０または８０％の筋線維（またはそれらの間の任意のパーセンテージ）を除去するように選択される。いくつかの実施形態では、筋組織サンプルを１０−１０−０．５％の範囲の濃度のトリプシンに１５分間−４８時間にわたり曝すことによって、かつ／または、筋組織サンプルを約０．１−２．０％の脱細胞化剤（例えば、ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００（商標）、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートなど）に１−７２時間にわたり曝すことによって、筋線維の約２０−８０％が除去される。
【００９４】
様々な実施形態では、筋肉サンプル中に通常見られる筋線維の約２０−８０％が、組織対体積比（例えば、トリプシンおよび／または脱細胞化剤を含有する溶液の体積当たりの組織の質量）を制御することによって除去される。いくつかの実施形態において、より低い組織／体積比が、筋線維除去プロセスの効率を高め、その結果、より少ない無傷の筋線維を保持する筋肉マトリックスをもたらす。他の実施形態では、より高い組織／体積比が、筋線維除去プロセスの効率を低下させ、その結果、より多くの無傷の筋線維を保持する筋肉マトリックスをもたらす。
【００９５】
いくつかの実施形態では、脱細胞化後、筋肉および／または筋筋膜組織を徹底的に洗浄する。任意の生理学的に適合する溶液を洗浄に使用することができる。適切な洗浄液の例には、蒸留水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）または他の任意の生体適合性食塩水が含まれる。いくつかの実施形態では、洗浄液が殺菌剤を含むことができる。特定の実施形態では、殺菌剤が過酢酸（ＰＡＡ）であり、その濃度が、例えば、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．４または０．５％（またはそれらの間の任意のパーセンテージ）である。特定の実施形態では、例えば、異種または同種材料を使用する場合、脱細胞化筋肉組織がデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）溶液で（例えば、室温で一晩）処理される。いくつかの実施形態では、組織サンプルが、ＤＮａｓｅ緩衝剤中で調製されたＤＮａｓｅ溶液で処理される。任意選択的には、抗生物質溶液（例えば、ゲンタマイシン）をＤＮａｓｅ溶液に添加するようにしてもよい。緩衝剤および／または抗生物質が適切なＤＮａｓｅ活性を提供する限り、任意の適切なＤＮａｓｅ緩衝剤および／または抗生物質を使用することができる。
【００９６】
上述した実施例は、本開示を例示することを意図したものであり、決して限定することを意図したものではない。開示した装置および方法の他の実施形態は、本明細書の検討および本明細書に開示した装置および方法の実施から当業者には明らかであろう。
【００９７】
上述した説明および実施形態は例示的なものに過ぎず、本発明の主旨および範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【図１】
2020505137.tif 000003
【図２】
2020505137.tif 000004
【図３Ａ】
2020505137.tif 000005
【図３Ｂ】
2020505137.tif 000006
【図４】
2020505137.tif 000007
【図５】
2020505137.tif 000008
【図６】
2020505137.tif 000009
【図７】
2020505137.tif 000010
【図８】
2020505137.tif 000011
【図９】
2020505137.tif 000012
【図１０】
2020505137.tif 000013
【国際調査報告】
2020505137.tif 000014
2020505137.tif 000015
2020505137.tif 000016
2020505137.tif 000017