(57)【要約】  抗神経変性、抗てんかん原性および疾患修飾医薬組成物および／または療法の有効性を決定するのに使用するための神経変性障害の非ヒト動物モデル。【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む医薬組み合わせを投与された非ヒト動物であって、前記投与によって神経変性障害を示す、非ヒト動物。
【請求項２】
前記神経変性障害が、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含む、請求項１に記載の非ヒト動物。
【請求項３】
前記神経変性障害がてんかんである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項４】
前記非ヒト動物がてんかん重積状態および／または痙攣性てんかん重積状態を示さない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項５】
前記非ヒト動物が海馬硬化および自発性海馬発症発作を示す、請求項１〜４のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項６】
前記投与される医薬組み合わせが、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項７】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物を単回投与で皮下投与し、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を単回投与で皮下投与する、請求項６に記載の非ヒト動物。
【請求項８】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を同時に投与する、請求項６〜７のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項９】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を、単一剤形で一緒に投与する、請求項６〜８のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１０】
前記非ヒト動物がラットである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の非ヒト動物。
【請求項１１】
非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせであって、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む、医薬組み合わせ。
【請求項１２】
前記神経変性障害が、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、およびハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含む、請求項１１に記載の医薬組み合わせ。
【請求項１３】
前記神経変性障害がてんかんである、請求項１１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ。
【請求項１４】
前記非ヒト動物がてんかん重積状態および／または痙攣性てんかん重積状態を示さない、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ。
【請求項１５】
前記非ヒト動物が海馬硬化および自発性海馬発症発作を示す、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ。
【請求項１６】
前記医薬組み合わせが、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む第一の組成物、および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を含む、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ。
【請求項１７】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物が単回投与で皮下投与され、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物が皮下注射用に製剤化されている、請求項１６に記載の医薬製剤。
【請求項１８】
非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法であって、
非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む医薬組み合わせを前記非ヒト動物に投与すること；
前記投与工程によって前記非ヒト動物において神経変性障害を誘発すること
を含む方法。
【請求項１９】
前記神経変性障害が、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、およびハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含む、請求項１８に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２０】
前記神経変性障害がてんかんである、請求項１８〜１９のいずれか一項に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２１】
前記非ヒト動物がてんかん重積状態および／または痙攣性てんかん重積状態を示さない、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２２】
前記非ヒト動物が海馬硬化および自発性海馬発症発作を示す、請求項１８〜２２のいずれか一項に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２３】
前記医薬組み合わせが、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を含む、請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２４】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物を単回投与で皮下投与し、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を単回投与で皮下投与する、請求項２３に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２５】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を同時に投与する、請求項２３〜２４のいずれか一項に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２６】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を、単一剤形で一緒に投与する、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２７】
前記非ヒト動物がラットである、請求項１８〜２６のいずれか一項に記載の非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法。
【請求項２８】
化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法であって、
非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む医薬組み合わせを投与された非ヒト動物に、神経変性障害を治療するための薬剤としての可能性を有すると推定される化合物または医薬組成物を投与すること、ならびに
前記非ヒト動物において誘発されたニューロン変性の発生率および／または重症度を決定し、ニューロン変性の発生率および／または重症度の低下が前記化合物または医薬組成物の抗神経変性効果に関連すること
を含む方法。
【請求項２９】
前記神経変性障害が、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含む、請求項２８に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３０】
前記神経変性障害がてんかんである、請求項２８〜２９のいずれか一項に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３１】
前記非ヒト動物がてんかん重積状態および／または痙攣性てんかん重積状態を示さない、請求項２８〜３０のいずれか一項に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３２】
前記非ヒト動物が海馬硬化および自発性海馬発症発作を示す、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３３】
前記投与される医薬組み合わせが、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を含む、請求項２８〜３２のいずれか一項に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３４】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物を単回投与で皮下投与し、前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を単回投与で皮下投与する、請求項３３に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３５】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を同時に投与する、請求項３３〜３４のいずれか一項に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３６】
前記非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸を含む前記第一の組成物および前記非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む前記第二の組成物を、単一剤形で一緒に投与する、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３７】
前記非ヒト動物がラットである、請求項２８〜３６のいずれか一項に記載の化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法。
【請求項３８】
非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む単一剤形または別々の剤形を含むキットであって、前記剤形が、同じ包装中で一緒に提供されるか、または別々に包装されて、一緒にもしくは互いに独立して販売可能であり、同時投与のために共同販売または共同販売促進される、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１２月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／４３９，４８０号に従属し、その優先権を主張するものであり、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本明細書で開示される主題は、一般に、神経変性障害の非ヒト動物モデルに関する。特に、本明細書で開示される主題は、てんかんおよび関連する発作性障害の非ヒト動物モデルに関する。より詳細には、本明細書で開示される主題は、抗神経変性、抗てんかん原性および疾患修飾医薬組成物の有効性を決定するのに使用するためのてんかんの非ヒト動物モデルに関する。
【背景技術】
【０００３】
てんかんは、再発性の非誘発性発作を特徴とする一般的な神経障害である。世界人口の約１％がてんかんに罹患しており、１年間に約２４０万人の新たな患者が診断される（例えば、Ｂｅｒｎａｒｄ  Ｓ．Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００３；３４９：１２５７−６６参照）。側頭葉てんかん（以下「ＴＬＥ」と称する）は、発作が側頭葉で発生し、一般的に脳の損傷によって引き起こされると考えられている、ヒトにおけるてんかんの最も一般的な形態である。ＴＬＥは、顕著な海馬萎縮および限られた海馬外損傷、ならびに長期の発作のない期間またはてんかん誘発事象と最初の自然発作との間の時間である「潜伏期」後に海馬および／または密接に関連する構造で発生する発作を特徴とする（例えば、Ｓｕｓａｎ  Ｓ．Ｓｐｅｎｃｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ，３５（４）：７２１−７２７，１９９４．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ参照）。
【０００４】
神経変性障害、てんかん原性、てんかんの発作および関連疾患の根底にある機構を理解すること、ならびに抗神経変性および抗てんかん性医薬組成物をさらに開発することは、ヒトを用いた臨床試験では十分に得られない。したがって、ヒト以外の動物モデルを使用することが必要である。しかしながら、非ヒト動物モデルは、ヒトの神経変性障害またはてんかんを密接におよび確実に模倣し、薬物に対するヒトの応答を予測する必要がある。したがって、非ヒト動物モデルは、ヒトと類似の臨床状態を示し、海馬硬化および潜伏期間後の自発性海馬発症発作などのヒトの神経変性またはてんかんの特徴を再現する必要がある。
【０００５】
再発性発作は、カイニン酸（以下「ＫＡ」と称する）などの化学的痙攣薬を使用することによって、ヒト以外、特にげっ歯動物において誘発されている。ＫＡは、急性発作および神経変性を誘発するグルタミン酸類似体である。ＫＡは、動物において、最も一般的にはげっ歯動物においてヒトＴＬＥをモデル化するために使用される（例えば、Ｌｅｖｅｓｑｕｅ  Ｍ．＆Ａｖｏｌｉ  Ｍ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｂｉｏｂｅｈａｙ．Ｒｅｖ．２０１３，３７，２８８７−２８９９参照）。ＫＡは、イオンチャネル型グルタミン酸受容体の一種であるカイニン酸受容体の活性化、およびまた、ＫＡが部分的アゴニストであるＡＭＰＡ受容体の活性化を介してその作用を発揮する（Ｗａｔｋｉｎｓ  Ｊ．Ｃ．＆Ｅｖａｎｓ  Ｒ．Ｈ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．１９８１，２１，１６５−２０４）。
【０００６】
てんかんの最初のＫＡモデルは、Ｂｅｎ−Ａｒｉと同僚によって開発された（Ｂｅｎ−Ａｒｉ  Ｙ．＆Ｌａｇｏｗｓｋａ  Ｊ．，Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｈｅｂｄ．Ｓｅａｎｃｅｓ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｄ  １９７８，２８７，８１３−８１６；Ｂｅｎ−Ａｒｉ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９７９，１６３，１７６−１７９）。このモデルでは、行動発作および背側海馬における神経変性をＫＡの扁桃内注射によって誘発した。それ以来、重度の長期的発作、すなわちてんかん重積状態（以下「ＳＥ」と称する）、特に痙攣性てんかん重積状態（以下「ｃＳＥ」と称する）の期間を誘導することを目的として、いくつかのＫＡベースのてんかん動物モデルが開発されている。痙攣性であるか否かにかかわらず、ＳＥは、典型的には薬理学的介入がなければ致命的である（Ｌｅｖｅｓｑｕｅ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０１５，２６０，４５−５２）。その後開発されたモデル系は、動物間の変動性を減少させ、ｃＳＥおよびその後のてんかんを予防することなく死亡率を低下させることを目的とした（Ｈｅｌｌｉｅｒ  Ｊ．Ｌ．＆  Ｄｕｄｅｋ  Ｆ．Ｅ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５；ＰｕｂＭｅｄ  ｌｉｓｔｉｎｇ）。
【０００７】
例えば、あるモデルでは、ＫＡは大脳内、すなわち海馬に適用される（例えば、Ａｒａｂａｄｚｉｓｚ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．２００５，１９４，７６−９０参照）。この試験では、マウスに全身麻酔下で（エキテシン、４ｍｌ／ｋｇ腹腔内）、０．９％ＮａＣｌ中のＫＡの２０ｍＭ溶液５０ｎｌまたは同量のＮａＣｌ溶液（対照マウス）のいずれかを背側海馬の右ＣＡ１領域に定位注射した。このアプローチは重度の海馬硬化および自然発作を誘発する。しかしながら、この動物モデルはいくつかの難点を有する：このモデルは、薬理学的終結を必要とするｃＳＥを引き起こし、海馬傷害は変動があり、海馬外領域への広範な損傷が起こり、高い不応答率および大きなばらつきのある発作率が存在し、モデルは複雑で、その実施は費用がかかり、その結果は研究実験間で異なる傾向がある。
【０００８】
Ｂｅｎ−Ａｒｉと同僚は、全身ＫＡ注射、すなわち単回腹腔内注射または皮下注射に基づくさらに別の動物モデルを検討した（Ｂｅｎ−Ａｒｉ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １９８０，５，５１５−５２８）。この試験では、Ｗｉｓｔａｒラットをエキテシン（３ｍｌ／ｋｇ）で麻酔し、定位固定装置に入れ、定位誘導下で、ＫＡ（０．４〜２μｇを０．１〜０．４μｌのリン酸緩衝液、ｐＨ７．４に溶解した）を右扁桃体に片側注射した。動物は、高用量のジアゼパム（２０ｍｇ／ｋｇ）の投与によって終結させる必要のあるＳＥに罹患していた。ＳＥが成功裏に誘発されると、広範な両側性神経膠症、脳浮腫ならびに梨状および嗅内皮質、嗅球、黒質、視床、および中脳におけるニューロン損失を伴って広範な海馬外ニューロン損失が起こる。この動物モデルは、脳内のＫＡバイオアベイラビリティに対する制御を全く提供せず、神経病理学における高い変動性および最大３０％までの死亡率が存在するが、生き残った動物の間で未だ２０〜４０％は不応答動物である。
【０００９】
Ｈｅｌｌｉｅｒ  Ｊ．Ｌ．＆Ｄｕｄｅｋ  Ｆ．Ｅ．（Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５）は、複数回の低用量腹腔内注射に基づく別の動物モデルを記載した。このプロトコルは、５ｍｇ／ｋｇ体重の初期ＫＡ用量を使用するが、その後のＫＡ用量は、各ラットが治療プロトコルを生き残り、自発発作を発症することを確実にするように調整される。ラットは、最初の５ｍｇ／ｋｇのＫＡ注射に対して異なる応答を示すことがあり、ある動物は発作または激しい震えを示すが、別の動物は明らかな運動応答を示さない。この試験によれば、最初のＫＡ注射の１時間後に、各ラットの発作様活動の重症度および行動を用いてその後のＫＡ注射量を決定し、各ラットが連続３時間を超えるｃＳＥを経験し、治療プロトコルを生き残るために正しい量のカイナイトを確実に摂取するように、３０または６０分ごとの評価が必要である。このモデルでは、脳内のＫＡバイオアベイラビリティに対する制御は存在しない；用量が数時間にわたって投与される場合、ＫＡの量は各動物に合わせて調整されなければならず、これは個々の動物の監視を必要とする；死亡率は約１５％である。
【００１０】
Ｗｉｌｌｉａｍｓらは、「反復低用量ＫＡモデル」（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｐ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００９，２９，２１０３−２１１２）を特徴付けた。このプロトコルでは、海馬内電極を雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに移植した。移植手術の１〜２週間後、滅菌０．９％ＮａＣｌ溶液で２．５ｍｇ／ｍｌに希釈したＫＡ（５ｍｇ  ｋｇ−１  時−１）をラットに注入した。ラットを脳波発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ  ｓｅｉｚｕｒｅｓ）および痙攣運動発作について継続的に監視した。痙攣発作を起こした動物において、毎時１０回を超える痙攣発作が誘発されるまで１時間ごとのＫＡ治療を継続した。このＳＥを少なくとも３時間維持した。このモデルは、動物が過剰投与されていないことおよびさもなければ致命的であるＳＥの薬理学的終結を確実にするために、試験動物の絶え間ない監視を必要とする。
【００１１】
ヒトてんかんをモデル化するためのＫＡの使用は有益であることが判明しているが、本質的にむらがあり、制御不能なＳＥまたはｃＳＥの誘発、高い死亡率（最大５０％）、変動のある神経病理学、自発性てんかんまでの一定しない潜伏期間（最初の発作は、同一の治療を受けた動物において数週間の間隔を空けて発生し得る）、および不応答動物（生存している動物の最大５０％は一度も自発発作を示さない）を含む、実質的な難点が依然として存在する。さらに、てんかんについての既存の動物モデルは、ヒトの状態の本質的な特徴、すなわち関連する神経病理学および自発性海馬発症発作前の潜伏期の存在を確実には再現しない。さらに、ヒトの状態へのＣＳＥの関連性は、てんかんを有するほとんどのヒトが全くそれを経験しないので、疑わしい。
【００１２】
その結果として、非ヒト動物においてＳＥおよび／またはｃＳＥを誘発することを含まず、したがってその固有の合併症を予防または軽減する、神経変性障害、特にてんかんおよび／またはＴＬＥのための単純で信頼できる非ヒト動物モデルが当技術分野において継続的に必要とされている。さらに、非ヒト動物が有意な罹患率、死亡率、または大きな割合の不応答動物を有さない、非ヒト動物モデルが求められている。また、発作活動を止めずにＳＥおよび／またはｃＳＥがブロックされる非ヒト動物モデルも必要とされている。特に、急性の限局性海馬発作を含む海馬発作が数時間続き、自己終結性である、ＫＡの作用を海馬に標的化することができる非ヒト動物モデルを作製することが必要とされている。さらに、ヒトの神経変性状態、特に、海馬硬化および長期の発作のない期間後の自発性海馬発症発作などのてんかんおよび／または後天性近心ＴＬＥの決定的な特徴を確実に模倣する非ヒト動物モデルが必要とされている。
【００１３】
また、動物の集中的な監視および世話を必要とせず、ＫＡに対する応答に有意な変動性がない、ＫＡの単回投与に基づく神経変性障害、特にてんかんおよび／またはＴＬＥの非ヒト動物モデルを作製する方法も必要とされている。
【００１４】
さらに、そのような信頼できる非ヒト動物モデルを使用することによって、化合物、医薬組成物、または療法の抗神経変性効果および／または抗てんかん原性効果を検定する方法が必要とされている。
【００１５】
さらに、先に述べたように、非ヒト動物においてＳＥおよび／またはｃＳＥを誘発することを含まず、したがってその固有の合併症を予防または軽減する、非ヒト動物における神経変性障害、特にてんかん発作の誘発に使用するための医薬組み合わせおよび／または組成物が必要とされている。
【００１６】
したがって、本発明は、上記の問題の１つ以上を解決するそのような非ヒト動物モデル、医薬組み合わせ、および方法を提供する。本発明の他の特徴および利点は、以下の説明および特許請求の範囲から明らかになる。
【発明の概要】
【００１７】
以下の概要および詳細な説明は、どちらも例示的および説明的なものであり、特許請求される開示のさらなる説明を提供することを意図していることが理解される。以下の概要または説明はいずれも、本開示の範囲を概要または説明において言及される特定の特徴に規定または限定することを意図するものではない。
【００１８】
本開示のいくつかの実施形態は、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸（ＫＡ）および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む医薬組み合わせを投与された非ヒト動物を提供し、この非ヒト動物は前記投与によって神経変性障害を示す。
【００１９】
非ヒト動物の前述の実施形態のいくつかの態様では、神経変性障害は、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含む。非ヒト動物の前述の実施形態の特定の態様では、神経変性障害はてんかんを含む。非ヒト動物の前述の実施形態のいくつかの態様では、非ヒト動物はてんかん重積状態および／または痙攣性てんかん重積状態を示さない。非ヒト動物の前述の実施形態のさらなる態様では、非ヒト動物は海馬硬化および自発性海馬発症発作を示す。
【００２０】
非ヒト動物の前述の実施形態の他の態様では、投与される医薬組み合わせは、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を含む。非ヒト動物の前述の実施形態のさらなる態様では、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物を単回投与で皮下投与し、非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を単回投与で皮下投与する。非ヒト動物の前述の実施形態の特定の態様では、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を単一剤形で一緒に投与する。非ヒト動物の前述の実施形態のなおさらなる態様では、非ヒト動物はラットである。
【００２１】
本開示のいくつかの実施形態は、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡおよび非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む医薬組み合わせを提供する。
【００２２】
非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせの前述の実施形態のいくつかの態様では、神経変性障害は、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含む。非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせの前述の実施形態の特定の態様では、神経変性障害はてんかんである。非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせの前述の実施形態のいくつかの態様では、非ヒト動物はてんかん重積状態および／または痙攣性てんかん重積状態を示さない。非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせの前述の実施形態のさらなる態様では、非ヒト動物は海馬硬化および自発性海馬発症発作を示す。
【００２３】
非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせの前述の実施形態の他の態様では、投与される医薬組み合わせは、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を含む。非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせの前述の実施形態のさらなる態様では、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を皮下注射用に製剤化する。非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせの前述の実施形態のなおさらなる態様では、非ヒト動物はラットである。
【００２４】
本開示のいくつかの実施形態は、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法を提供し、前記方法は、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡおよび非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む医薬組み合わせを非ヒト動物に投与することを含み、ならびに前記投与工程によって非ヒト動物において神経変性障害を誘発することをさらに含む。
【００２５】
非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態のいくつかの態様では、神経変性障害は、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含む。非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態の特定の態様では、神経変性障害はてんかんである。非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態のいくつかの態様では、非ヒト動物はてんかん重積状態および／または痙攣性てんかん重積状態を示さない。非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態のさらなる態様では、非ヒト動物は海馬硬化および自発性海馬発症発作を示す。
【００２６】
非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態の他の態様では、投与される医薬組み合わせは、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を含む。非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態のさらなる態様では、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物を単回投与で皮下投与し、非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を単回投与で皮下投与する。非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態の特定の態様では、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を単一剤形で一緒に投与する。非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態のなおさらなる態様では、非ヒト動物はラットである。
【００２７】
いくつかの実施形態は、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法を提供し、前記方法は、
非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡおよび非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む医薬組み合わせを投与された非ヒト動物に、神経変性障害を治療するための薬剤としての可能性を有すると推定される化合物または医薬組成物を投与すること、ならびに
前記非ヒト動物において誘発されたニューロン変性の発生率および／または重症度を決定し、ニューロン変性の発生率および／または重症度の低下が化合物または医薬組成物の抗神経変性効果に関連すること
を含む。
【００２８】
化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法の前述の実施形態のいくつかの態様では、神経変性障害は、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含む。化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法の前述の実施形態の特定の態様では、神経変性障害はてんかんである。化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法の前述の実施形態のいくつかの態様では、非ヒト動物はてんかん重積状態および／または痙攣性てんかん重積状態を示さない。非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法の前述の実施形態のさらなる態様では、非ヒト動物は海馬硬化および自発性海馬発症発作を示す。
【００２９】
化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法の前述の実施形態の態様では、投与される医薬組み合わせは、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を含む。化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法の前述の実施形態のさらなる態様では、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物を単回投与で皮下投与し、非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を単回投与で皮下投与する。化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法の前述の実施形態の特定の態様では、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのＫＡを含む第一の組成物および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む第二の組成物を単一剤形で一緒に投与する。化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法の前述の実施形態のなおさらなる態様では、非ヒト動物はラットである。
【００３０】
いくつかの実施形態は、非ヒト動物１ｋｇ当たり１０．０〜３０．３ｍｇのカイニン酸および非ヒト動物１ｋｇ当たり０．２５〜１．４ｍｇのロラゼパムを含む単一剤形または別々の剤形を含むキットを提供し、前記剤形は、同じ包装中で一緒に提供されるか、または別々に包装されて、一緒にもしくは互いに独立して販売可能であり、同時投与のために共同販売または共同販売促進される。
【００３１】
本発明のこれらおよびさらなる態様および特徴は、本明細書に記載の図面および詳細な説明を参照することによって明らかにされる。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１Ａ〜図１Ｉは、１５ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび３ｍｇ／ｋｇまたは０．７５ｍｇ／ｋｇのいずれかのロラゼパムの全身同時投与後の急性および慢性の海馬神経病理学を示す。図１Ａ〜図１Ｉに示すように、より少ないロラゼパムを摂取した動物はより多くの神経変性を有し、逆もまた同様であった。図１Ａは、Ｆｌｕｏｒｏ−Ｊａｄｅ  Ｂ（ＦＪＢ）染色を示す。図１Ｂは、ＮｅｕＮ免疫反応性を描画する。図１Ｃは、未処置対照ラットからの背側海馬におけるＴｉｍｍ染色を示し、正常な神経解剖学的構造を実証する。図１Ｄは、明らかな神経変性がないことを示す、処置後４日目（３ｍｇ／ｋｇのロラゼパム）のＦＪＢ染色を示す。図１Ｅは、見かけ上正常な神経解剖学的構造を示す、処置後１０週間目（３ｍｇ／ｋｇのロラゼパム）のＮｅｕＮ免疫染色を示す。図１Ｆは、処置後１０週間目（１ｍｇのロラゼパム）のＴｉｍｍ染色を示し、正常な顆粒細胞遠心性、すなわち苔状線維発芽がないことを確認する。図１Ｇは、歯状門、ＣＡ３、およびＣＡＬにおける広範な神経変性を示す処置後４日目（０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパム）のＦＪＢ染色を示す。一方、図１Ｈは、処置後１０週間目のＮｅｕＮ免疫染色（０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパム）を示し、歯状門、ＣＡ３、およびＣＡＩにおける広範なニューロン損失、すなわち古典的な海馬硬化を明らかにする。図１Ｉは、処置後１０週間目のＴｉｍｍ染色（０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパム）を示し、顆粒細胞軸索の異常な再編成、すなわち苔状線維発芽を実証する。（図１Ａ〜図１Ｉのスケールバーは２００μｍである）。  図２Ａ〜図２Ｄは、自由に動くＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの歯状回から記録した、カイナート誘発性（１５ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび３ｍｇ／ｋｇまたは０．７５ｍｇ／ｋｇのいずれかのロラゼパムの全身同時投与による）ならびに自然発生の両方を含む、海馬発作の連続ビデオＥＥＧモニタリングを示す。
【図２Ａ】図２Ａは、カイナートおよびロラゼパム投与（それぞれ１５ｍｇ／ｋｇおよび０．７５ｍｇ／ｋｇ）の４４分後に記録した、５８秒の活動を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、図２Ａからの８００ミリ秒の抽出を示し、海馬顆粒細胞のてんかん性放電を実証する。
【図２Ｃ】図２Ｃは、カイナート（１５ｍｇ／ｋｇ）およびロラゼパム（０．７５ｍｇ／ｋｇ）投与の１０日後のラットの最初の自発（焦点）発作を示す。描かれているトレースは５８秒の自発活動を表す。
【図２Ｄ】図２Ｄは、図２Ｃからの８００ミリ秒の抽出を表し、海馬顆粒細胞のてんかん性放電を示す。自発発作中の行動は凝視に限定された；ＥＥＧ信号がベースラインに戻った後、少数の激しい震えが見られた。（図２Ａ〜図２Ｄの較正バー：図２Ａ〜図２Ｄにおいて２ｍＶ；図２Ａおよび図２Ｃでは４秒、図２Ｂおよび図２Ｄでは５５ミリ秒；サンプリング周波数２ｋＨｚ）。  図３Ａ〜図３Ｄは、１５ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパムの全身同時投与後の自発発作の特徴を示す。
【図３Ａ】図３Ａは、背側歯状回に配置した電極を用いた連続ビデオＥＥＧ記録によって決定した、処置から最初の自発発作までの潜伏期を示す。てんかんまでの平均時間は１２．１±（標準偏差）１．７日であった。
【図３Ｂ】図３Ｂは自発発作の頻度を示す。動物は、自発てんかんの最初の２週間に１日当たり平均７．８±５．１回の発作を示した。
【図３Ｃ】図３Ｃは、日中（６：００〜１７：５９）および夜間（１８：００〜５：５９）の発作の分布を示す。発作の大部分（７２％）が日中に発生した。
【図３Ｄ】図３Ｄは発作行動を示す。処置後最初の２週間に発生したすべての自発発作は非痙攣性であった。３週目から、痙攣運動発作が見られた。図３Ａ〜図３Ｄのデータは平均±ＳＥＭとして提示している；図３Ｂの段階はＲａｃｉｎｅスケールに従っている（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒａｃｉｎｅ  ＲＪ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｉｚｕｒｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ：ＩＩ．Ｍｏｔｏｒ  ｓｅｉｚｕｒｅ．（電気的刺激による発作活動の修正：ＩＩ．運動発作）Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  １９７２；３２：２８１−２９４参照）。  図４Ａ〜図４Ｂは、年齢がマッチするナイーブラット（全海馬、ＤＧ、ＣＡ、およびＩＭＬの各サブグループの左のバー）と比較した、１５ｍｇ／ｋｇのカイナートおよび３ｍｇ／ｋｇ（全海馬、ＤＧ、ＣＡ、およびＩＭＬの各サブグループの中央のバー）または０．７５ｍｇ／ｋｇ（全海馬、ＤＧ、ＣＡ、およびＩＭＬの各サブグループの右のバー）のいずれかのロラゼパムの全身同時投与の少なくとも１０週間後の海馬における形態学的変化の定量化を示す。
【図４Ａ】図４Ａは、ＮｅｕＮ免疫染色またはＮｉｓｓｌ染色脳切片から得られた、対照と比較した、歯状回（ＤＧ）およびアンモン角（ＣＡ）サブフィールドに細分した海馬領域を示す。０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパム処置群の４つの海馬のうち３つはＤＧ肥大を示した。
【図４Ｂ】図４Ｂは、Ｔｉｍｍ染色した脳切片の内分子層（ＩＭＬ）から得られた平均グレー値を示す。数字が大きいほどより暗いグレー値、すなわちＩＭＬへのより多くの苔状線維発芽を示す。図４Ａ〜図４Ｂのデータは平均±ＳＥＭとして提示しており、統計解析はスチューデントｔ検定を用いて実施している。図４Ａ〜図４Ｂに関して、各群について４つの脳からの合計ｎ＝１８〜２０切片、すべてのＰ値≦０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
特定の態様についての以下の説明は、本質的に単なる例示であり、本発明、その用途、または使用の範囲を限定することを意図するものではなく、当然ながらそれらは変化し得る。本発明は、本明細書に含まれる非限定的な定義および用語に関連して記述される。これらの定義および用語は、本発明の範囲または実施に対する限定として機能することを意図されておらず、例示および説明目的のためにのみ提示される。工程および組成物は、特定のまたは特定の順序の個々の工程または特定の材料を使用すると記載されているが、当業者に容易に理解されるように、本発明の説明が多くの方法で配置された複数の工程または部分を含み得るように、工程または材料は交換可能であり得ることが理解される。
【００３４】
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態／態様のみを説明するためのものであり、限定的であることを意図しない。本明細書で使用される場合、単数形「１つの」、および「その」は、内容から明らかに異なる指示が為されない限り、「少なくとも１つ」を含む複数形を包含することを意図する。「または」は、「および／または」を意味する。本明細書で使用される場合、「および／または」という用語は、関連する列挙された項目の１つ以上のありとあらゆる組み合わせを含む。さらに、「含む」および／もしくは「含むこと」または「包含する」および／もしくは「包含すること」という用語は、本明細書で使用される場合、記述される特徴、領域、整数、工程、操作、要素、および／または成分の存在を特定するが、１つ以上の他の特徴、領域、整数、工程、操作、要素、成分、および／またはそれらの群の存在または追加を排除するものではないことがさらに理解されるであろう。「またはそれらの組み合わせ」という用語は、前述の要素のうちの少なくとも１つを含む組み合わせを意味する。
【００３５】
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての用語（技術用語および科学用語を含む）は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。一般的に使用される辞書に定義されているような用語は、関連技術および本開示の文脈におけるそれらの意味と一致する意味を有すると解釈されるべきであり、本明細書で明示的に定義されない限り、理想的なまたは過度に正式な意味で解釈されないことがさらに理解されるであろう。
【００３６】
本明細書で開示されるデータは、低用量のロラゼパムと同時投与された単回用量のＫＡが、ＳＥおよび／またはｃＳＥとそれに関連する問題、例えば有意な変動性と死亡率を回避しながら、非ヒト動物における後天性ヒトＴＬＥの基本的特徴を忠実に再現するために使用できることを実証する。より具体的には、本結果は、０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇのロラゼパムと同時投与した１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇのＫＡが、ｃＳＥおよびその固有の問題を回避しながら、ラットにおける後天性近心ＴＬＥの基本的特徴を忠実に再現するために使用できることを実証する。いくつかの態様では、非ヒト動物への０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇのロラゼパムおよび１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇのＫＡの剤形の投与は、ＳＥおよび／またはｃＳＥをブロックするが、急性海馬発作（３〜４時間持続し、自己終結する）、神経変性、またはてんかん原性はブロックしない。いくつかの態様では、動物は、すべての動物において有効であったＫＡおよびロラゼパムの単回同時皮下注射を受け、さらなる注意は必要なく、各個々の動物について投与量を滴定する必要はない。これは、しばしば複数回の注射および／または実質的な緩和ケアを必要とするｃＳＥベースのモデルとは異なる。この結果は、以下のさらなる利点を明らかにする：単純なプロトコル、３〜４時間持続し、自己終結性である急性海馬発作、実質的な海馬神経変性、１０〜１５日の発作のない潜伏期間後の自発性海馬発作、および罹患率と死亡率の両方の欠如。
【００３７】
さらに、本明細書で開示されるデータは、神経変性障害、特にてんかんおよび／またはＴＬＥの動物モデルの核心が、ｃＳＥの誘発ではなく、むしろ、発作が常に有意な行動要素を有するわけではないので、長期の脳波発作（ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｐｈｉｃ  ｓｅｉｚｕｒｅ）活動の誘発であるべきであることを実証する。実際に、ヒトのてんかん重積状態はしばしば非痙攣性である。これらの線に沿って、ＳＥを終結させることは、研究室および臨床の両方において、適切な治療および発作が停止したことのＥＥＧ確認の両方を必要とする。
【００３８】
最後に、本明細書で開示されるデータは、（１）介入のための新規の異なる標的を明らかにし、および（２）これらの新規機構を利用する治療を発見するために、本開示の非ヒト動物モデルが使用できることを実証する。より少ない有害な薬物相互作用または過敏反応などの、てんかんの管理におけるより新しい抗発作薬の利点にもかかわらず、それらの有効性および忍容性は過去２５年間にわたってあまり改善されていない。その結果、てんかんを有する患者の〜３０％が薬物療法に十分に反応せず、この数字もこの間に変わっていない。この持続的な問題の１つの理由は、ごくわずかな例外を除いて、同じ動物モデルがすべての抗発作薬を発見していることである。したがって、本結果は、本開示が、新規のてんかん原性（てんかんの発症）および発作原性（個々の発作の発現）機構を標的とする物質を発見するための努力の一環として、薬物スクリーニングレパートリにおける使用のための非ヒト動物モデルを提供することを明らかにする。本発明のモデルは、難治性ＴＬＥおよび神経変性に焦点を合わせた創薬の取り組みにおいて特に有用である。
【００３９】
したがって、ここで、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための本明細書で開示される非ヒト動物モデル、医薬組み合わせまたは医薬組成物の様々な実施形態、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットについて詳細に述べる。
【００４０】
様々な実施形態では、非ヒト動物にグルタミン酸受容体アゴニストを含む第一の組成物と治療薬を含む第二の組成物とを含む医薬組み合わせを投与し、前記非ヒト動物が前記投与によって神経変性障害を示す、動物モデルが提供される。
【００４１】
他の実施形態では、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための、グルタミン酸受容体アゴニストを含む第一の組成物と治療薬を含む第二の組成物とを含む医薬組み合わせが提供される。
【００４２】
さらなる実施形態では、非ヒト動物において神経変性障害を誘導するための方法であって、グルタミン酸受容体アゴニストを含む第一の組成物と治療薬を含む第二の組成物とを含む医薬組み合わせを非ヒト動物に投与し、前記投与工程によって非ヒト動物において神経変性障害を誘発することを含む方法が提供される。
【００４３】
様々な実施形態では、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法であって、神経変性障害を治療するための薬剤としての可能性を有すると推定される化合物または医薬組成物を、グルタミン酸受容体アゴニストを含む第一の組成物と治療薬を含む第二の組成物とを含む医薬組み合わせを投与された非ヒト動物に投与すること、ならびに前記非ヒト動物において誘発されたニューロン変性の発生率および／または重症度を決定することを含み、ニューロン変性の発生率および／または重症度の低下が化合物または医薬組成物の抗神経変性効果に関連する方法が提供される。
【００４４】
他の実施形態では、グルタミン酸受容体アゴニストを含む第一の組成物および治療薬を含む第二の組成物を含む単一剤形または別々の剤形を含むキットであって、単一または別々の剤形が同じ包装中で一緒に提供されるか、または別々に包装されて、一緒にもしくは互いに独立して販売可能であり、同時投与のために共同販売または共同販売促進される、キットが提供される。
【００４５】
したがって、本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、および化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法の様々な実施形態では、医薬組み合わせ（例えば医薬組成物）は、グルタミン酸受容体アゴニストを含む第一の組成物および治療薬を含む第二の組成物を含む。本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、非ヒト動物は医薬組み合わせの投与によって神経変性障害を示す。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「非ヒト動物」という用語は、すべての非トランスジェニックおよびトランスジェニック非ヒト脊椎動物、例えば非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、げっ歯動物、両生動物、爬虫類動物などの哺乳動物および非哺乳動物を指す。任意で、本明細書に記載の様々な実施形態の特定の態様では、本発明による非ヒト動物は非トランスジェニック動物であり、任意で非トランスジェニックげっ歯動物である。任意で、本明細書に記載の様々な実施形態の特定の態様では、げっ歯動物はラットである。任意で、本明細書に記載の様々な実施形態のより特定の態様では、非ヒト動物は非トランスジェニックＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットである。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「医薬組み合わせ」という用語は、同時に、別々に、および／または連続的に投与される１つ以上のグルタミン酸受容体アゴニストおよび１つ以上の治療薬を指す。例えば、本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、１つ以上のグルタミン酸受容体アゴニストを含む第一の組成物および１つ以上の治療薬を含む第二の組成物は、単一の医薬組成物の一部であり得るか（例えば単一剤形で投与するため）、または別々の医薬組成物中に存在することができる（例えば同時にまたは連続的に、別々の剤形で投与するため）。したがって、「医薬組み合わせ」という用語は医薬組成物を含む。「成分」という用語は、本発明による医薬組み合わせ中の活性成分（例えばグルタミン酸受容体アゴニスト、治療薬）を指す。医薬組み合わせの成分は、独立して、または区別された量の成分との異なる固定された組み合わせの使用によって、すなわち同時にまたは異なる時点で投与することができる。その後、医薬組み合わせの成分は、例えば、しかし限定されることなく、同時にまたは時系列的に、すなわち異なる時点でおよび任意の成分について等しいまたは異なる時間間隔で、投与することができる。
【００４８】
本明細書中で使用される場合、「グルタミン酸受容体」という用語は、神経伝達物質グルタマートと結合し、それによって活性化される任意の受容体を指す。グルタミン酸受容体は２つの群に分類することができる：イオンチャネル型グルタミン酸受容体および代謝型グルタミン酸受容体。イオンチャネル型グルタミン酸受容体には、カイナート、ＮＭＤＡ、およびＡＭＰＡ受容体が含まれる。代謝型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）は、Ｇタンパク質を含むシグナル伝達カスケードを介して原形質膜上のイオンチャネルを間接的に活性化する。任意で、態様では、本発明のグルタミン酸受容体はカイニン酸受容体である。任意で、態様では、本発明のグルタミン酸受容体はＮＭＤＡ受容体である。任意で、態様では、本発明のグルタミン酸受容体はＡＭＰＡ受容体である。
【００４９】
本明細書で使用される場合、「グルタミン酸受容体アゴニスト」という用語は、任意のグルタミン酸受容体アゴニスト（直接アゴニストまたはアロステリックアゴニスト）を指し、非ヒト動物への投与時に、さもなければその天然リガンド（グルタミン酸）のグルタミン酸受容体への結合から生じる下流の生物学的作用のいずれかを含む、非ヒト動物におけるグルタミン酸受容体の活性化に関連する生物学的活性の活性化または上方調節をもたらす任意の化学的実体を含む。グルタミン酸受容体アゴニストは、グルタミン酸受容体活性化またはグルタミン酸受容体活性化の下流の生物学的作用のいずれかを誘導することができる任意の作用物質を含む。
【００５０】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、本発明のグルタミン酸受容体アゴニストは、例えばカイニン酸（ＫＡ）、イボテン酸、ドモイン酸、キスカル酸、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸もしくはＮ−メチル−Ｄ−アスパルタート（ＮＭＤＡ）、ａ−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソオキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）、Ｌ−２−アミノ−４−ホスホノ酪酸（Ｌ−ＡＰ４）、１−アミノ−１，３−ジカルボキシシクロペンタン（ＡＣＰＤ）、またはそれらの任意の組み合わせである。
【００５１】
本明細書で使用される場合、「治療薬」という用語は、薬物、分子、核酸、タンパク質、もしくはそれらの任意の組み合わせ、または神経保護および／もしくは抗神経変性および／もしくは抗てんかん物質および／もしくは神経変性障害、特にてんかんを治療する目的で使用される物質である他の物質を指す。本明細書で使用される場合、「抗てんかん原性」治療薬という用語は、薬剤が被験体（例えば非ヒト動物）に投与された場合にてんかん原性（例えばてんかんの発症）を阻害することができる治療薬を指す。
【００５２】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、「治療」等の用語は、疾患、障害、もしくは状態の根本的な原因を減少させる、抑制する、減弱させる、軽減する、停止させること、または疾患、障害、状態、および／もしくはそれに関連する症状の発症もしくは進行を安定化することを意味する。したがって、これらの用語は、被験体における発作の頻度、重症度、および／または持続期間を防止または低減することを含む。
【００５３】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットの特定の実施形態では、本発明の治療薬は、１つ以上のＧＡＢＡモジュレータ、そのプロドラッグ、ならびにＧＡＢＡモジュレータの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグである。
【００５４】
本明細書で使用される場合、「ＧＡＢＡ」という用語は「γ−アミノ酪酸」という用語と同義である。これらの用語は互換的に使用され得る。
【００５５】
本明細書で使用される場合、「ＧＡＢＡモジュレータ」という用語は、神経伝達物質ＧＡＢＡと構造的に関連するがＧＡＢＡ受容体と相互作用しない、またはＧＡＢＡ受容体と相互作用する、または代謝的にＧＡＢＡもしくはＧＡＢＡアゴニストに変換される、またはＧＡＢＡの取り込みもしくは分解の阻害剤である、またはＧＡＢＡ受容体サブタイプ選択的アンタゴニストおよび／もしくはアゴニストである化合物を指す。この定義は、薬学的に許容される塩、プロドラッグ、または前記プロドラッグの薬学的に許容される塩を含む。本発明のＧＡＢＡモジュレータは、ベンゾジアゼピン、そのプロドラッグ、ならびにベンゾジアゼピンの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグを含む。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「ベンゾジアゼピン」という用語は、ベンゾジアゼピン、およびそれ自体が通常ベンゾジアゼピンとして分類されるベンゾジアゼピンの誘導体を指す。ベンゾジアゼピンという用語はまた、ベンゾジアゼピン受容体サブタイプ化合物、ならびにベンゾジアゼピンの薬学的に許容される塩、ベンゾジアゼピンのプロドラッグ、およびベンゾジアゼピンのプロドラッグの薬学的に許容される塩を指す。
【００５７】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、ベンゾジアゼピンとしては、ロラゼパム、ムシモール、プロガビド、リルゾール、バクロフェン、ガバペンチン、ビガバトリン、チアガビン、ラモトリギン、プレガバリン、トピラマート、ジアゼパム、クロナゼパム、オキサゼパム、クロラゼパート二カリウム、クロラゼパート、クロルジアゼポキシド、メダゼパム（ｍｅｄｉａｚｅｐａｍ）、フルラゼパム、クロバサム、ニトラゼパム、フルニトラゼパム、エスタゾラム（ａｓｔａｚｏｒａｍ）、ブロマゼパム、アルプラゾラム、ロルメタゼパム、テマゼパム、ブロチゾラム、トリアゾラム、クロロジアゼパム、ハラゼパム、プラゼパム、フェルバマート、ネモトリジン、ネモトリジン、またはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグ、または前記プロドラッグの薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５８】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、ＧＡＢＡモジュレータは、ロラゼパム、そのプロドラッグ、ロラゼパムの薬学的に許容される塩、またはロラゼパムの薬学的に許容される塩のプロドラッグである。
【００５９】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、ＧＡＢＡモジュレータとしては、ムシモール、プロガビド、リルゾール、バクロフェン、ガバペンチン（Ｎｅｕｒｏｎｔｉｎ（登録商標））、ビガバトリン、バルプロ酸、チアガビン（Ｇａｂｉｔｒｉｌ（登録商標））、ラモトリギン（Ｌａｍｉｃｔａｌ（登録商標））、プレガバリン、フェニトイン（Ｄｉｌａｎｔｉｎ（登録商標））、カルバマゼピン（Ｔｅｇｒｅｔｏｌ（登録商標））、トピラマート（Ｔｏｐａｍａｘ（登録商標））、そのプロドラッグおよびＧＡＢＡモジュレータのプロドラッグの薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、１つ以上の抗痙攣薬、そのプロドラッグ、抗痙攣薬の薬学的に許容される塩、または抗痙攣薬のプロドラッグの薬学的に許容される塩である。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「抗痙攣薬」治療薬という用語は、治療薬が非ヒト動物に投与された場合に、発作原性（例えば発作の発生）を阻害する（例えば予防する、遅らせる、停止させるまたは逆転させる）ことができる治療薬を指す。
【００６２】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、抗痙攣薬には、バルビツラート、ウレタン、フェニトイン（Ｄｉｌａｎｔｉｎ（登録商標））、メフェニトイン（Ｍｅｓａｎｔｏｉｎ（登録商標））などのヒダントイン、エトスクシミド（Ｚａｒｏｎｔｉｎ（登録商標））などのスクシンイミド、トリメタジオン（Ｔｒｉｄｉｏｎｅ（登録商標））などのオキサゾリジンジオン、カルバマゼピン（Ｔｅｇｒｅｔｏｌ（登録商標））、プリミドン（Ｍｙｓｏｌｉｎｅ０）、バルプロ酸（Ｄｅｐａｋｏｔｅ（登録商標））、そのプロドラッグ、ならびに抗痙攣薬の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグが含まれるが、これらに限定されない。
【００６３】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、１つ以上のＮ−メチル−Ｄ−アスパルタート（以下「ＮＭＤＡ」と称する）受容体アンタゴニスト、そのプロドラッグ、ならびにＮＭＤＡアンタゴニストの薬学的に許容される塩、およびそのプロドラッグを含む。態様では、本発明のＮＭＤＡ受容体アンタゴニストには、例えばデキストロメトルファンまたはデキストロルファンなどのモルフィナン、ケタミン、ｄ−メタドンが含まれる。それはまた、ＮＭＤＡ受容体活性化の主要な細胞内帰結をブロックする治療薬、例えばＧＭ１もしくはＧＴ１ｂなどのガングリオシド、トリフルオペラジンなどのフェノチアジン、またはＮ−（６−アミノヘキシル）−５−クロロ−１−ナフタレンスルホンアミドなどのナフタレンスルホンアミドも含む。
【００６４】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、１つ以上のＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト、そのプロドラッグ、ＡＭＰＡアンタゴニスト受容体の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグを含む。
【００６５】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、ＣＢ１、ＣＢ２、および５−ＨＴ１ａ受容体の１つ以上のアゴニスト、ならびにμおよびδ−オピオイド受容体のアロステリックモジュレータを含む。
【００６６】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、カンナビジオール、そのプロドラッグ、ならびにカンナビジオールの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグを含む。
【００６７】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、混合系統キナーゼファミリー、例えばｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）を阻害する。任意で、治療薬はＣＥＰ−１３４７である。ＣＥＰ−１３４７は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２００１  Ｊｕｌ  ６；２７６（２７）：２５３０２８．Ｅｐｕｂ  ２００１  Ａｐｒ  ２６，Ｃｅｐ−１３４７  （ＫＴ７５１５），ａ  ｓｅｍｉｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｉｘｅｄ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｆａｍｉｌｙ  ｂｙ  Ｍａｒｏｎｅｙ  ＡＣ  ｅｔ  ａｌ（Ｍａｒｏｎｅｙ  ＡＣらによる混合系統キナーゼファミリーの半合成阻害剤）に開示されている。本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、ＣＥＰ−１３４７、そのプロドラッグ、ならびにＣＥＰ−１３４７の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグである。
【００６８】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、γ−セクレターゼモジュレータおよび抗炎症薬を含み、後者はミクログリアに作用することを介して働く。任意で、本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬はＣＨＦ  ５０７４を含む。ＣＨＦ５０７４は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｉｖｉｌｉａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｌｔｉ−ｔａｒｇｅｔ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉ−Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ＣＨＦ５０７４：ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｔｇ２５７６  ｍｉｃｅ．（新規な抗アルツハイマー化合物ＣＨＦ５０７４の複合ターゲット作用：Ｔｇ２５７６マウスにおける長期処置のインビボ研究）ＢＭＣ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１３；１４：４４に開示されている。本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、ＣＨＦ  ５０７４、そのプロドラッグ、ならびにＣＨＦ  ５０７４の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグを含む。
【００６９】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は鉄をキレート化し、例えばデフェリプロンである。本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、デフェリプロン、そのプロドラッグ、ならびにデフェリプロンの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグを含む。
【００７０】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬はニューロンカリウムチャネル開口薬、例えばフルピルチンを含む。本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、フルピルチン、そのプロドラッグ、ならびにフルピルチンの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグを含む。
【００７１】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は電位依存性カリウムチャネルを活性化し、例えばレチガビンまたはエゾガビンである。本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、レチガビンまたはエゾガビン、そのプロドラッグ、ならびにレチガビンまたはエゾガビンの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグを含む。
【００７２】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、以下のうちの２つ以上の任意の組み合わせを含む：ＧＡＢＡモジュレータ、そのプロドラッグ、ならびにＧＡＢＡモジュレータの薬学的許容される塩およびそのプロドラッグ；抗痙攣薬、そのプロドラッグ、ならびに抗痙攣薬の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、そのプロドラッグ、ならびにＮＭＤＡアンタゴニスト受容体の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；ＡＭＰＡ受容体アンタゴニスト、そのプロドラッグ、ＡＭＰＡアンタゴニスト受容体の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；ＣＢ１、ＣＢ２、および５−ＨＴ１ａ受容体のアゴニスト、ならびにＩＩおよび６−オピオイド受容体のアロステリックモジュレータ；混合系統キナーゼファミリーを阻害する治療薬；γ−セクレターゼモジュレータおよび抗炎症薬；鉄をキレート化する治療薬；ニューロンカリウムチャネル開口薬；ならびに電位依存性カリウムチャネル活性化剤。
【００７３】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、治療薬は、以下のうちの２つ以上の任意の組み合わせを含む：ロラゼパム、そのプロドラッグ、ならびにロラゼパムの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；カンナビジオール、そのプロドラッグ、ならびにカンナビジオールの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；ＣＥＰ−１３４７、そのプロドラッグ、ならびにＣＥＰ−１３４７の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；ＣＨＦ  ５０７４、そのプロドラッグ、ならびにＣＨＦ  ５０７４の薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；デフェリプロン、そのプロドラッグ、ならびにデフェリプロンの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；フルピルチン、そのプロドラッグ、ならびにフルピルチンの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ；ならびにレチガビンまたはエゾガビン、そのプロドラッグ、ならびにレチガビンまたはエゾガビンの薬学的に許容される塩およびそのプロドラッグ。
【００７４】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせ（例えば医薬組成物）は、ａ）ＫＡ、イボテン酸、ドモイン酸、キスカル酸、ＮＭＤＡ、ＡＭＰＡ、Ｌ−ＡＰ４、もしくはＡＣＰＤ、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグ、またはそれらの任意の組み合わせ；ならびにｂ）ロラゼパム、カンナビジオール、ＣＥＰ−１３４７、ＣＨＦ  ５０７４、デフェリプロン、フルピルチン、レチガビン、もしくはエゾガビン、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【００７５】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは、ａ）ＫＡ、そのプロドラッグ、ＫＡの薬学的に許容される塩および／またはそのプロドラッグ；ならびにｂ）ロラゼパム、そのプロドラッグ、ロラゼパムの薬学的に許容される塩および／またはそのプロドラッグを含む。
【００７６】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは以下を含む：ａ）約１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇ、約１０．０〜２５．０ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜３０．３ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜２５．０ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜１５．１ｍｇ／ｋｇ、任意で約１０．０ｍｇ／ｋｇ、約１３．２ｍｇ／ｋｇ、約１３．３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１４．２ｍｇ／ｋｇ、約１４．７ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１５．１ｍｇ／ｋｇ、約２０．０ｍｇ／ｋｇ、約２５．０ｍｇ／ｋｇ、約３０．０ｍｇ／ｋｇ、または約３０．３ｍｇ／ｋｇ、および約１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇの間の任意の値または範囲のＫＡ、そのプロドラッグ、ＫＡの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグ（ｋｇは非ヒト動物の体重である）；ならびにｂ）約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．４ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、または約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇの間の任意の値または範囲のロラゼパム、そのプロドラッグ、ロラゼパムの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグ（ｋｇは非ヒト動物の体重である）。本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットの特定の実施形態では、医薬組み合わせは、表１に列挙される、ＫＡ、そのプロドラッグ、ＫＡの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグ、ならびにロラゼパム、そのプロドラッグ、ロラゼパムの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグの有効投与量の組み合わせを含む。
【００７７】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせ（例えば医薬組成物）は、ａ）約１５．０ｍｇ／ｋｇのＫＡ、そのプロドラッグ、ＫＡの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグ（ｋｇは非ヒト動物の体重である）；ならびにｂ）約０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパム、そのプロドラッグ、ロラゼパムの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグ（ｋｇは非ヒト動物の体重である）を含む。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「プロドラッグ」という用語は、投与後に、化学的または生理的工程を介してインビボで薬物を放出する薬物前駆体である化合物を指す（例えば、生理的ｐＨに供されるかまたは酵素の作用を介して、プロドラッグは所望の薬物形態に変換される）。「プロドラッグ」は、そのようなプロドラッグが非ヒト動物を含む被験体に投与されたときにインビボで本発明の活性親薬物を放出する任意の共有結合担体を含むことが意図されている。
【００７９】
本明細書で使用される場合、化合物の「薬学的に許容される塩」という用語は、薬学的に許容され、親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。薬学的に許容される塩には、比較的非毒性の酸または塩基を用いて調製される親化合物の塩が含まれ、そのような化合物は、その酸性塩または塩基性塩を生成することによって修飾される。薬学的に許容される塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩等が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩には、従来の非毒性の塩または、例えば非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の第四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、そのような従来の非毒性の塩には、２−アセトキシ安息香酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、炭酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、１，２−エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコリルアルサニル酸、ヘキシルレゾルシン酸、ヒドラバミン酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフトエ酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ナプシル酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、セバシン酸、コハク酸、スルファニル酸、スルファニル酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、および一般的に生じるアミノ酸、例えばグリシン、アラニン、フェニルアラニン、アルギニン等から選択される無機酸および有機酸から誘導されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【００８０】
本明細書で開示されるグルタミン酸受容体アゴニスト（例えば、限定されないが、ＫＡ）、治療薬（例えば、限定されないが、ロラゼパム）、その薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグへのすべての言及は、本明細書で定義される溶媒付加形態（溶媒和物）または結晶形態（多形体）を包含することが理解されるべきである。
【００８１】
本明細書で使用される場合、「結晶多形体」または「多形体」または「結晶形態」という用語は、化合物（またはその塩もしくは溶媒和物）が異なる結晶充填配置で結晶化することができる結晶構造を意味し、それらはすべて同じ元素組成を有する。異なる結晶形態は通常、異なるＸ線回折パターン、赤外スペクトル、融点、密度硬度、結晶形状、光学的および電気的性質、安定性ならびに溶解度を有する。再結晶溶媒、結晶化速度、保存温度、および他の因子により、１つの結晶形態が支配的になり得る。化合物の結晶多形体は、異なる条件下での結晶化によって調製することができる。さらに、本発明の化合物、例えばグルタミン酸受容体アゴニスト（例えば、限定されないが、ＫＡ）、治療薬（例えば、限定されないが、ロラゼパム）、その薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグは、水和もしくは非水和（無水）形態で、または他の溶媒分子との溶媒和物として存在し得る。水和物の非限定的な例としては、一水和物、二水和物等が挙げられる。溶媒和物の非限定的な例としては、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物等が挙げられる。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「溶媒和物」とは、化学量論量または非化学量論量のいずれかの溶媒を含有する溶媒付加形態を意味する。いくつかの化合物または塩は、結晶性固体状態で固定モル比の溶媒分子を捕捉する傾向があり、それによって溶媒和物を形成する。溶媒が水である場合、形成される溶媒和物は水和物であり、溶媒がアルコールである場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は、水の１つ以上の分子と、その中で水がＨ２０としてその分子状態を保持している物質の１つとの組み合わせによって形成され、そのような組み合わせは１つ以上の水和物を形成することができる。
【００８３】
本明細書で使用される場合、数値ｘに関連して「約」という用語は、本明細書および付属の特許請求の範囲で使用される場合、例えばｘ＋／−１０％を意味する。
【００８４】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、前記実施形態のいずれかによる医薬組み合わせの投与後に、非ヒト動物は急性海馬発作、神経変性、および／またはてんかん原性を示す；任意で、非ヒト動物はＳＥおよび／またはｃＳＥを示さない；任意で、非ヒト動物はＳＥおよび／またはｃＳＥを有さず、海馬発作、神経変性、またはてんかん原性を示す；任意で、非ヒト動物は後天性ヒトてんかん、任意でＴＬＥの特徴を示す；任意で、非ヒト動物は、てんかんに対する国際抗てんかん連盟［ＩＬＡＥ］Ｉ型として分類されるヒト近心ＴＬＥの特徴を示す（例えば、その全体が参照により組み込まれる、Ｉｎｇｍａｒ  Ｂｌｕｅｍｃｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ、５７（３）：３４８−３５８、２０１６参照）；任意で、非ヒト動物は、３〜４時間持続し、自己終結性である海馬発作を示す；任意で、非ヒト動物は、１０〜１５日の発作のない期間の後に自発性海馬発作を示し、ならびに任意で、病的状態および死亡の両方を欠く。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、上記特徴のうちのいずれか１つまたは２つ以上の組み合わせを示す。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「投与すること」等の用語は、被験体への、経口投与、坐剤としての投与、局所接触、静脈内、腹腔内、筋肉内、病巣内、髄腔内、鼻腔内もしくは皮下投与、または徐放装置、例えばミニ浸透圧ポンプの移植を指し、これらを含む。任意で、本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態による投与経路は、皮下または腹腔内である。任意で、本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態による投与経路は皮下注射である。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「疾患」または「状態」または「障害」という用語は、抗神経変性物質または抗てんかん物質で治療することができる非ヒト動物またはヒトの存在状態または健康状態を指す。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「神経変性障害」という用語は、神経損傷を特徴とする任意の疾患を含み、てんかん、脳損傷、脊髄損傷、双極性障害、三叉神経痛、注意欠陥多動性障害、部分発作、部分、ミオクローヌスおよび強直・間代発作のための補助療法、統合失調症、神経因性疼痛、発作、トゥレット症候群、アルツハイマー病、自閉症、不安障害、躁病、幻肢症候群、複合局所疼痛症候群、発作性激痛症、神経筋緊張症、間欠性爆発性障害、境界性人格障害、先天性筋緊張症、前頭側頭型認知症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、外傷性脳損傷、ならびに心的外傷後ストレス障害を含むが、これらに限定されない。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「てんかん性障害」、「てんかん障害」、「発作性障害」、または「てんかん」という用語は、ほとんどの場合非誘発性発作の存在を特徴とする、一連の慢性神経障害を含む。本明細書で使用されるてんかんは、脳への損傷（例えば外傷、脳卒中、もしくは癌による）または遺伝子変異を含む。２回以上の非誘発性発作を経験している非ヒト動物は、てんかんを有するとみなされ得る。
【００８９】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態によるてんかん性障害の種類には、例えば、良性ローランドてんかん、前頭葉てんかん、側頭葉てんかん（ＴＬＥ）；点頭痙攣、若年性ミオクローヌスてんかん、若年性欠神てんかん、ウェスト症候群、小児期欠神てんかん（例えばピクノレプシー）、熱性痙攣、ラフォラ型進行性ミオクローヌスてんかん、レノックス‐ガストー症候群、ランドー‐クレッフナー症候群、ドラベ症候群、熱性痙攣を伴う全身てんかん、乳児期の重症ミオクローヌスてんかん、ウンフェルリヒト‐ルントボルク病、良性新生児家族性痙攣、早期ミオクロニー脳症、移動性部分てんかん、小児期てんかん性脳症、結節性硬化症複合体、限局性皮質形成異常、ミラー‐ディカー症候群、アンジェルマン症候群、脆弱Ｘ症候群、大田原症候群、自閉症スペクトラム障害におけるてんかん、皮質下帯状異所性灰白質、Ｉ型脳回欠損、ウォーカー‐ワールブルグ症候群、アルツハイマー病、外傷後てんかん、進行性ミオクローヌスてんかん、反射性てんかん、ラスムッセン症候群、側頭葉てんかん、辺縁系てんかん、てんかん重積状態、腹部てんかん、両側汎発性ミオクローヌス、月経関連性てんかん、光過敏性てんかん、またはジャクソン発作障害が含まれる。
【００９０】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは、（ａ）前記実施形態のいずれかによるグルタミン酸受容体アゴニストを含む第一の組成物、および（ｂ）前記実施形態のいずれかによる治療薬を含む第二の組成物を含む別々の剤形を含む。任意で、組成物（ａ）および（ｂ）は、異なる製剤で、すなわち別々の剤形で提供される。任意で、組成物（ａ）および（ｂ）は、同時に投与される（共投与される）かまたは続いて投与される。任意で、組成物（ａ）および（ｂ）は単一剤形で提供される。
【００９１】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、別々の剤形は、同じ包装中でまたはキットとして一緒に提供されるか、または別々に包装されて互いに独立して販売可能であるが、同時および／もしくはその後の投与のため、特に非ヒト動物において急性海馬発作、神経変性、および／もしくはてんかんを誘発するのに使用するため、ならびに／または化合物もしくは医薬組成物および／もしくは療法の抗神経変性障害をスクリーニングもしくは検定するのに使用するために、共同販売または共同販売促進される。
【００９２】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、本発明の医薬組み合わせは、前記実施形態のいずれかによるグルタミン酸受容体アゴニストおよび前記実施形態のいずれかによる治療薬を含む単一剤形を含む。
【００９３】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、単一剤形は、非ヒト動物において急性海馬発作、神経変性、および／もしくはてんかんを誘発するのに使用するため、ならびに／または化合物もしくは医薬組成物および／もしくは抗神経変性障害療法の抗神経変性障害をスクリーニングもしくは検定するのに使用するために市販または販売促進される。
【００９４】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、単一剤形は、非ヒト動物への投与の前に、治療有効量の前記実施形態のいずれかによるグルタミン酸受容体アゴニストと治療有効量の前記実施形態のいずれかによる治療薬とを混合することを含む。
【００９５】
前記実施形態のいずれかによるグルタミン酸受容体アゴニストおよび治療薬の投与量の選択は、前記実施形態のいずれかによる状態、特に非ヒト動物における急性海馬発作、神経変性、および／またはてんかんを誘発するのに十分である。
【００９６】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは（ａ）ＫＡを含む第一の組成物および（ｂ）前記実施形態のいずれかによる１つ以上の治療薬を含む第二の組成物を含む別々の剤形を含む。
【００９７】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは、（ａ）ＫＡを含む第一の組成物および（ｂ）ベンゾジアゼピンを含む第二の組成物を含む別々の剤形を含む。
【００９８】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは、（ａ）ＫＡを含む第一の組成物および（ｂ）ロラゼパムを含む第二の組成物を含む別々の剤形を含む。
【００９９】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは、（ａ）約１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇ、約１０．０〜２５．０ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜３０．３ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜１５．１ｍｇ／ｋｇ、任意で約１０．０ｍｇ／ｋｇ、約１３．２ｍｇ／ｋｇ、約１３．３ｍｇ／ｋｇ、約１４．０ｍｇ／ｋｇ、約１４．２ｍｇ／ｋｇ、約１４．７ｍｇ／ｋｇ、約１５．０ｍｇ／ｋｇ、約１５．１ｍｇ／ｋｇ、約２０．０ｍｇ／ｋｇ、約２５．０ｍｇ／ｋｇ、または約３０．３ｍｇ／ｋｇ、および約１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇの間の任意の値または範囲のＫＡ、そのプロドラッグ、ＫＡの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグを含む第一の組成物（ｋｇは非ヒト動物の体重である）；ならびに（ｂ）約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．４ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、または約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇの間の任意の値または範囲のロラゼパム、そのプロドラッグ、ロラゼパムの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグを含む第二の組成物（ｋｇは非ヒト動物の体重である）を含む別々の剤形を含む。本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットの特定の実施形態では、医薬組み合わせは、表１に列挙される、（ａ）ＫＡ、そのプロドラッグ、ＫＡの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグ、ならびに（ｂ）ロラゼパム、そのプロドラッグ、ロラゼパムの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグを含む別々の剤形を含む。
【０１００】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、非ヒト動物において神経変性障害、てんかん発作または類似の障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせは、ＫＡおよび前記実施形態のいずれかによる治療薬の１つ以上を含む単一剤形を含む。
【０１０１】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは、（ａ）約１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇ、約１０．０〜２５．０ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜３０．３ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜２５ｍｇ／ｋｇ、約１３．２〜１５．１ｍｇ／ｋｇ、任意で約１０．０ｍｇ／ｋｇ、約１３．２ｍｇ／ｋｇ、約１３．３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１４．２ｍｇ／ｋｇ、約１４．７ｍｇ／ｋｇ、約１５．０ｍｇ／ｋｇ、約１５．１ｍｇ／ｋｇ、約２０．０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、または約３０．３ｍｇ／ｋｇ、および約１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇの間の任意の値または範囲のＫＡ、そのプロドラッグ、ＫＡの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグを含む第一の組成物（ｋｇは非ヒト動物の体重である）；ならびに（ｂ）約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇ、０．６〜１．４ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、または約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇの間の任意の値または範囲のロラゼパム、そのプロドラッグ、ロラゼパムの薬学的に許容される塩、および／またはそのプロドラッグを含む第二の組成物（ｋｇは非ヒト動物の体重である）を含む単一剤形を含む。
【０１０２】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは、約１０〜３０．３ｍｇ／ｋｇのＫＡ（非ヒト動物の体重に依存する）および約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇのベンゾジアゼピン（非ヒト動物の体重に依存する）を含む単一剤形を含む。
【０１０３】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせ（例えば医薬組成物）は、：ａ）ＫＡ、イボテン酸、ドモイン酸、キスカル酸、ＮＭＤＡ、ＡＭＰＡ、Ｌ−ＡＰ４、もしくはＡＣＰＤ、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグ、またはそれらの任意の組み合わせ；ならびにｂ）ロラゼパム、カンナビジオール、ＣＥＰ−１３４７、ＣＨＦ  ５０７４、デフェリプロン、フルピルチン、レチガビン、もしくはエゾガビン、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
【０１０４】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせ（例えば医薬組成物）は、ａ）ＫＡ、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグ；ならびにｂ）ロラゼパム、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグを含む。
【０１０５】
本明細書で開示される非ヒト動物モデル、非ヒト動物において神経変性障害を誘発するのに使用するための医薬組み合わせまたは医薬組成物、非ヒト動物において神経変性障害を誘発する方法、化合物または医薬組成物の抗神経変性障害効果を検定する方法、およびキットのいくつかの実施形態では、医薬組み合わせは、ａ）約１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇのＫＡ、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグ（ｋｇは非ヒト動物の体重である）ならびに；ｂ）約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇのロラゼパム、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグ（ｋｇは非ヒト動物の体重である）を含む。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「剤形」という用語は医薬品の特定の形式（例えば本明細書に記載の医薬組み合わせ）を指し、これは投与経路に依存する。例えば、剤形は液体、例えば注射用食塩水、カプセル、錠剤、丸剤、フィルム、軟膏、クリーム、液剤、懸濁剤、エアロゾル、ペースト、点滴剤、坐剤、再構成用粉末、注射剤、静脈内投与液等であり得る。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「医薬組み合わせ」という用語は、本発明の成分、および任意で、担体を構成する不活性成分（薬学的に許容される賦形剤）を含む製品、ならびに直接的または間接的に、任意の２つ以上の成分の組み合わせ、錯化、もしくは凝集から、または１つ以上の成分の解離から、または１つ以上の成分の他の種類の反応または相互作用から生じる任意の製品を包含することが意図されている。したがって、本発明の医薬組み合わせは、本発明の化合物と、任意で、薬学的に許容される賦形剤とを混合することによって製造される任意の組成物を包含する。
【０１０８】
本発明の別の態様では、化合物、医薬組成物、または療法の抗神経変性効果および／または抗てんかん効果をスクリーニングまたは検定する方法が提供される。例えば、本発明の方法は、装置、方法、アッセイ、抗体が有益な作用を有するかどうかを決定するために使用することができる。
【０１０９】
一実施形態では、本発明の方法は、神経変性障害、てんかんまたは他の発作関連障害を治療するために使用される化合物または医薬組成物を、前記実施形態のいずれかによるグルタミン酸受容体アゴニストおよび治療薬を含む医薬組み合わせを投与された非ヒト動物に投与すること、前記非ヒト動物において誘発された障害の状態、任意で、ニューロン変性および／または任意の発作の発生率および／または重症度を決定することを含み、ニューロン変性および／もしくは発作の発生率および／もしくは重症度の低下ならびに／または障害の状態の改善が、化合物または医薬組成物の抗神経変性、抗てんかんまたは関連障害に対する効果に関連し、任意で、それによってヒトにおける神経変性障害、てんかんまたは他の発作関連障害を治療するために使用される有効な化合物または医薬組成物を選択することができる。
【０１１０】
一実施形態では、本方法は、神経変性障害、てんかんまたは他の発作関連障害を治療するために使用される化合物または医薬組成物を、前記実施形態のいずれかによる、ａ）ＫＡ、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグならびにｂ）ロラゼパム、そのプロドラッグ、その薬学的に許容される塩およびプロドラッグを含む医薬組み合わせを投与された非ヒト動物に投与すること；前記非ヒト動物において誘発された障害の状態、任意で、ニューロン変性および／または任意の発作の発生率および／または重症度を決定することを含み、ニューロン変性および／もしくは発作の発生率および／もしくは重症度の低下ならびに／または障害の状態の改善が、化合物または医薬組成物の抗神経変性、抗てんかんまたは関連障害に対する効果に関連し、任意で、それによってヒトにおける神経変性障害、てんかんまたは他の発作関連障害を治療するために使用される有効な化合物または医薬組成物を選択することができる。
【０１１１】
本発明の他の態様では、非ヒト動物において発作、神経変性、および／またはてんかんを誘発するのに使用するためのキットが提供される。
【０１１２】
一実施形態では、キットは、前記実施形態のいずれかによるグルタミン酸受容体アゴニストの１つ以上および前記実施形態のいずれかによる治療薬の１つ以上を含む医薬組み合わせを含む。
【０１１３】
別の実施形態では、キットは、前記実施形態のいずれかによるＫＡおよびロラゼパムを含む医薬組み合わせを含む。任意で、キットは、約１０．０〜３０．３ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇのロラゼパムを含む別々の剤形を含む。
【０１１４】
一実施形態では、本発明のキットは、本発明および前記実施形態のいずれかによる医薬組み合わせの成分の別々の剤形を含むが、別々の包装中で一緒に提供されるかまたは別々に包装されて互いに独立して販売可能であるが、同時および／もしくはその後の投与のため、特に非ヒト動物において急性海馬発作、神経変性、および／もしくはてんかんを誘発するのに使用するため、ならびに／または化合物もしくは医薬組成物の抗神経変性障害をスクリーニングもしくは検定するのに使用するために共同販売または共同販売促進される。
【０１１５】
例
以下の例は説明のために提供されるものであり、決して本発明の範囲を限定することを意図しない。
【０１１６】
例１
材料および方法
他に特定されない限り、以下の実験技術を例において使用した。
【０１１７】
動物：
体重約３３０ｇ（３１８〜３４４ｇの範囲）の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ−Ｗｉｎｋｅｌｍａｎｎ，Ｂｏｒｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を、欧州共同体のガイドライン（ＥＵＶＤ  ８６／６０９／ＥＥＣ）に従って処置した。ラットを、１２：１２の明／暗サイクル下で飼料および水を自由に摂取させて、現地の動物施設（２１〜２５℃；湿度３１〜４７％）に収容した。
【０１１８】
カイニン酸＋ロラゼパムの投与：
カイニン酸一水和物（Ｋ０２５０、リン酸緩衝生理食塩水中１０ｍｇ／ｍｌ；  Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびロラゼパム（２ｍｇ／ｍｌ；Ｐｆｉｚｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の様々な皮下注射を、表１および表２に従ってイソフルラン鎮静下で投与した。ラットを、鎮静が達成されるまで（１５〜３０秒）酸素中５％のイソフルランを含むアクリル箱に入れ、その後取り出し、注射を行う清浄な台の上に置いた。注射後、ラットを透明なアクリル箱に収容し、自由に運動させて目視観察した。
【０１１９】
表１（有効投与量、全投与量についてｎ≧４）
【表１】
2020513772.tif 000002
【０１２０】
表２（無効投与量、比較試験、全投与量についてｎ≧４）
【表２】
2020513772.tif 000003
【０１２１】
発作モニタリング（連続ビデオＥＥＧ）：
ＥＥＧデータは、（１）歯状回に位置する尖端を有する記録電極（おおよその座標はブレグマから２ｍｍ側方、３ｍｍ尾側、および脳表面から３．５ｍｍ下）または（２）脳表面上に先端を有するネジのいずれかを介して取得した。基準接地面は、常に記録部位の尾側および内側に位置するネジであり、海馬に対して背側ではなかった。電極および接地ネジを、動物の側腹部の皮下に埋め込んだ小型無線送信機（ＦＴ２０；Ｄａｔａ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）に接続した。すべての手術は、イソフルラン麻酔下（酸素中３〜５％）で定位固定装置（Ｄａｖｉｄ  Ｋｏｐｆ）内で行った。自発的活動を連続的に記録し（２４／７）、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｎｏｒｗｏｏｄ  ＢＡ，Ｂｕｍａｎｇｌａｇ  ＡＶ，Ｏｓｃｕｌａｔｉ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｌａｓｓｉｃ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ−ｏｎｓｅｔ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ“ｃｒｙｐｔｉｃ”ｅｐｉｓｏｄｅ  ｏｆ  ｆｏｃａｌ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｗａｋｅ  ｒａｔｓ．（覚醒したラットにおける焦点海馬興奮の単一の「潜在的」エピソードにより生じた古典的海馬硬化症及び海馬発症てんかん）Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２０１０；５１８：３３８１−３４０７；およびＨａｒｖｅｙ  ＢＤ，Ｓｌｏｖｉｔｅｒ  ＲＳ．Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｇｒａｎｕｌｅ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｃ−Ｆｏｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｓｅｉｚｕｒｅｓ  ｉｎ  ａｗａｋｅ，ｃｈｒｏｎｉｃａｌｌｙ  ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ，ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｒａｔｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｅｐｉｌｅｐｔａｇｅｎｅｓｉｓ．（覚醒した慢性てんかん性ピロカルピン処置ラットにおける自発的発作の間の海馬顆粒細胞活性及びｃ−Ｆｏｓ発現：海馬てんかん発生への影響）Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒａｌ  ２００５；４８８：４４２−４６３に記載されているように、ＬａｂＣｈａｒｔ  ７ソフトウェア（ＡＤ  ｌｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）を用いて３時間のエポックで、デジタル形式で自動的に保存した。すべてのファイルは少なくとも２人の経験豊富な査読者によって評価された；少なくとも１人の査読者は治療に対して盲検化された。記録を視覚的に評価し、ベースラインより明らかに大きい振幅を有するすべての事象を分析した。同時ビデオモニタリングは、Ｅｄｉｍａｘ  ＩＣ−７１１０Ｗ赤外線カメラ（Ｔａｉｗａｎ）を使用した。ＳｅｃｕｒｉｔｙＳｐｙ監視ソフトウェア（Ｂｅｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）を使用してビデオファイルを１５フレーム／秒でキャプチャーし、ＥＥＧデータと統合するためにタイムスタンプを付け、デジタル保存した。発作は、Ｒａｃｉｎｅスケール（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒａｃｉｎｅ  ＲＪ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｉｚｕｒｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ：ＩＬ  Ｍｏｔｏｒ  ｓｅｉｚｕｒｅ．（電気的刺激によ��発作活動の修正：ＩＬ．運動発作）Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏ１１９７２；３２：２８１−２９４）に従って採点した。
【０１２２】
灌流固定：
ラットに過剰量のケタミン（＞１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を投与し、次に大動脈を介して０．９％食塩水で９０秒間重力灌流して、血管内の血液を除去した。これに続いて、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中のパラホルムアルデヒド（４％）で８分間の大動脈灌流を行った。脳を直ちに頭蓋から取り出し、少なくとも４８時間、４％パラホルムアルデヒド溶液中に置いた後、凍結ミクロトームで切片（３０ｕｒｎ）にした。
【０１２３】
蛍光顕微鏡および光学顕微鏡検査
得られた切片に関して、Ｎｉｓｓｌ染色、Ｆｌｕｏｒｏ−Ｊａｄｅ  Ｂ染色、Ｔｉｍｍ染色、および神経核抗原（ＮｅｕＮ）免疫細胞化学検査を行った（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｎｏｒｗｏｏｄ  ＢＡ，Ｂｕｍａｎｇｌａｇ  ＡＶ，Ｏｓｃｕｌａｔｉ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｌａｓｓｉｃ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ−ｏｎｓｅｔ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ  ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ“ｃｒｙｐｔｉｃ”ｅｐｉｓｏｄｅ  ｏｆ  ｆｏｃａｌ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｗａｋｅ  ｒａｔｓ．（覚醒したラットにおける焦点海馬興奮の単一の「潜在的」エピソードにより生じた古典的海馬硬化症及び海馬発症てんかん）Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ２０１０；５１８：３３８１−３４０７に記載されているように）。画像は、ＤＣＦ３６０ＦＸカメラを装備したＤＭＩ６０００Ｂ顕微鏡（Ｌｅｉｃａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて取得した。
【０１２４】
神経変性の定量化：
Ｆｌｕｏｒｏ−Ｊａｄｅ  Ｂ陽性ニューロンを、Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳ６のＣｏｕｎｔ  Ｔｏｏｌを使用して、背側海馬からのマッチするＦｌｕｏｒｏ−Ｊａｄｅ  Ｂ染色切片（動物当たり１切片）において計数した。
【０１２５】
海馬領域の定量化：
背側海馬全体からの５つのマッチする隣接していないＮｅｕＮ免疫染色またはＮｉｓｓｌ染色切片の面積を、Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳ６拡張測定機能を用いて測定し、不規則な境界で囲まれた面積を計算した（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｔｋｉｎｓ  ＪＣ，Ｅｖａｎｓ  ＲＨ．Ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｓ．（興奮性アミノ酸トランスミッター）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  １９８１；２１：１６５−２０４に記載されているように）。値は、海馬全体（海馬采を除く）、歯状回、およびアンモン角について得られた。スチューデントｔ検定を用いて群平均を比較した。
【０１２６】
苔状線維発芽の定量化、すなわちＴｉｍｍ染色：
背側海馬全体に均等に分布する５つのＴｉｍｍ染色切片を、選択した領域の平均グレー値を計算するＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳ６ヒストグラム機能を用いて評価した。カラー画像をグレースケールに変換して反転した。分子間層の６４ピクセル四方の平均グレー値を記録し、平均化した。バックグラウンドは、放射状層の無細胞領域から計算し、分子間層の値から差し引いた。スチューデントｔ検定を用いて群平均を比較した。
【０１２７】
例２
より少ないロラゼパム用量は海馬神経変性を増加させる
ロラゼパムの様々な用量を評価し（０．２５〜１．５ｍｇ／動物；体重に依存して約０．６〜４．５ｍｇ／ｋｇ）、一方ＫＡの用量は一定に保持した（５ｍｇ／動物；体重に依存して１３．２〜３０．３ｍｇ／ｋｇに相当）。ロラゼパムのこれらの用量は、げっ歯動物における実験的ＳＥを終結させるために典型的に使用される用量（６〜８ｍｇ／ｋｇ）よりはるかに少ない。急性海馬発作は３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）および４．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５）のＫＡによって誘発されたが、神経変性もその後の自発発作も検出されなかった。図１Ａ〜図１Ｉに示すように、より少ないロラゼパムを摂取した動物はより多くの神経変性を有し、その逆もまた同様であった。本発明に従ってロラゼパム用量を体系的に減少させることにより、最適量は約０．２５〜１．４ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．６〜０．８ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは約０．７５ｍｇ／ｋｇであることが認められる。１５ｍｇ／ｋｇのＫＡと約０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパムを投与して４日後に犠死させた動物からの背側海馬切片では、１５ｍｇ／ｋｇのＫＡと３ｍｇ／ｋｇのロラゼパムを投与した動物における０．０±０．０と比較して、平均５６５．４±（標準偏差）４３．７のＦｌｕｏｒｏ−Ｊａｄｅ  Ｂ陽性ニューロンが計数された。海馬サブフィールドに分類すると、平均値は、ＣＡ１では２５５．４±３１．７、ＣＡ３では２７３．０±２９．１、門部では３７±７．７であった。ＫＡおよびロラゼパム投与直後の２４時間に、連続ビデオＥＥＧモニタリングによって決定されたように、ｃＳＥは言うまでもなく、いずれの群の１匹の動物も痙攣発作を示さなかった。いずれの動物も全く罹患の徴候を示さない；すなわち生存率は１００％であった。
【０１２８】
例３
低用量のロラゼパムはカイニン酸誘発痙攣発作をブロックするが、海馬発作活動はブロックしない
１５ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパムの同時皮下投与後、背側歯状回に配置した電極で測定されたように、異常な電位記録が数分以内に検出され、３０〜４０分後に最初の海馬発作が検出された。海馬顆粒細胞のてんかん性放電（図２Ａ〜図２Ｄ）は、すべての動物において少なくとも３時間持続し、平均３．３±０．４時間であった。処置の間、発作行動は時折の激しい震えに限定され、これは、すべてではないが一部のラットで観察された。発作は自己終結したので、追加のロラゼパムは投与しなかった。処置後３日目に、動物は正常に見え、正常に行動した。罹患の徴候、例えば１０％の体重減少、落ち着きのなさ、または運動性の低下を示す動物はいなかった。その結果、緩和ケアを必要とする動物はいなかった。１５ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび３ｍｇ／ｋｇのロラゼパムを投与された動物は、平均１２±７分の海馬発作を示した。
【０１２９】
例４
自発性海馬発作は個別の潜伏期後に起こる
連続ビデオＥＥＧモニタリングは、非痙攣性である最初の自発発作が、１５ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパムの投与後平均１２．１日（１０〜１５日の範囲）で起こることを明らかにした（図３Ａ）。自発発作はすべての動物で検出され、典型的には４５〜６０秒の長さであり（図２Ａ）、自発性てんかんの最初の２週間に１日当たり各動物につき７．８回の頻度で発生した（図３Ｂ）。７２％の発作は明期（午前６時から午後５時５９分まで）に起こった（図３Ｃ）。歯状回から得られた脳内記録は、海馬の関与、例えば顆粒細胞のてんかん性放電を示した（図２Ｂ）。対応するタイムスタンプ付きビデオファイルは明白な発作様行動を示さず、むしろ擬死／凝視のみを明らかにした。処置後最初の２週間に発生したすべての自発発作は非痙攣性であったが、３週目から始まって、痙攣性の運動発作が観察された（図３Ｄ）。その後の自発発作（処置後３週間）には、行動的徴候、例えば、Ｒａｃｉｎｅスケールのステージ３〜５に対応する咀嚼および前肢クローヌスも含まれた（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒａｃｉｎｅ  ＲＪ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｉｚｕｒｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ：ＩＩ．Ｍｏｔｏｒ  ｓｅｉｚｕｒｅ．（電気的刺激による発作活動の修正：ＩＩ．運動発作）Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  １９７２；３２：２８１−２９４）。１５ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび３ｍｇ／ｋｇのロラゼパムを投与されたいずれのラットにおいても自発発作は検出されなかった（４週間の連続ビデオＥＥＧモニタリング）。
【０１３０】
例５
神経病理学は海馬硬化を伴う（難治性）近心ＴＬＥに類似する
本発明の非ヒト動物モデルの海馬神経病理学は、発作が薬物治療に対して難治性である近心ＴＬＥを有する患者のサブセットにおいて見られるものを密接に模倣する（国際抗てんかん連盟［ＩＬＡＥ］Ｉ型（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｌｕｅｍｃｋｅ  Ｉ，Ｔｈｏｍ  Ｍ，Ａｒｏｎｉｃａ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｌｏｂｅ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ：ａ  Ｔａｓｋ  Ｆｏｒｃｅ  ｒｅｐｏｒｔ  ｆｒｏｎｔ  ｔｈｅ  ＩＬＡＥ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．（側頭葉てんかんにおける海馬硬化症の国際合意分類：診断方法についてのＩＬＡＥコミッションからのタスクフォースレポート）Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ２０１３；５４：Ｌ３１５−１３２９参照））。実際に、ＩＬＡＥ  Ｉ型は最も一般的なＴＬＥの病態である。１５ｍｇ／ｋｇのＫＡおよび０．７５ｍｇ／ｋｇのロラゼパムの投与後、急激に、歯状門の多くのニューロンと同様に、ＣＡ３領域およびＣＡ１領域の錐体ニューロンが事実上一掃された（図１Ｂ）。長期組織学  ２ヶ月）は、古典的な海馬硬化（図１Ｄおよび図４Ａ）および苔状線維発芽（図１Ｆおよび図４Ｂ）などの近心ＴＬＥの顕著な特徴を明らかにした。対照試料と比較して、萎縮は海馬全体（−４０．０±９．６％ｍｍ２）、特に固有海馬（−７４．３±７．６％ｍｍ２）において顕著であり、一方歯状回は、４つの試料のうち３つにおいて少なくとも３４％拡大した（すべてのｐ値＜０．０１）。
顆粒細胞層の厚さは一貫して拡大した（対照の１２４．７±２５．０％）が、「顆粒分散」と呼ばれる現象であり、この拡大は、分子層で見られる全体的拡大を促進するようには見えない（図１Ｄ）。
【０１３１】
本明細書で示し、説明したものに加えて、本発明の様々な変更は、上記説明の当業者には明らかであろう。そのような変更もまた、付属の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図されている。
【０１３２】
特に明記しない限り、すべての試薬は当技術分野で公知の商業的供給源から入手可能であることが理解される。
【０１３３】
本明細書で言及される特許、刊行物、および出願は、本発明が関連する当業者のレベルを示す。これらの特許、刊行物、および出願は、あたかもそれぞれの個々の特許、刊行物、または出願が具体的および個別に参照により本明細書に組み込まれるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３４】
前記説明は、本発明の特定の態様の例示であるが、その実施に対する限定であることを意図しない。
【図１ａ】
2020513772.tif 000004
【図１ｂ】
2020513772.tif 000005
【図１ｃ】
2020513772.tif 000006
【図１ｄ】
2020513772.tif 000007
【図２】
2020513772.tif 000008
【図３Ａ】
2020513772.tif 000009
【図３Ｂ】
2020513772.tif 000010
【図３Ｃ】
2020513772.tif 000011
【図３Ｄ】
2020513772.tif 000012
【図４Ａ】
2020513772.tif 000013
【図４Ｂ】
2020513772.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】令和1年12月23日(2019.12.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2020513772.tif 000015
【図２Ａ】
2020513772.tif 000016
【図２Ｂ】
2020513772.tif 000017
【図２Ｃ】
2020513772.tif 000018
【図２Ｄ】
2020513772.tif 000019
【図３Ａ】
2020513772.tif 000020
【図３Ｂ】
2020513772.tif 000021
【図３Ｃ】
2020513772.tif 000022
【図３Ｄ】
2020513772.tif 000023
【図４Ａ】
2020513772.tif 000024
【図４Ｂ】
2020513772.tif 000025
【国際調査報告】
2020513772.tif 000026
2020513772.tif 000027