(57)【要約】  本発明は、C5抗体を用いた補体シグナル伝達の阻害に関する。具体的には、本発明は、個体を抗C5抗体と接触させることにより、個体における補体媒介性疾患または補体媒介性障害を治療する方法に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトC5に特異的に結合する抗体。
【請求項２】
前記抗体がキメラ抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体が、VH-CDRl：配列番号３；VH-CDR2：配列番号４；VH-CDR3：配列番号５；VL-CDR1：配列番号８；VL-CDR2：配列番号９；およびVL-CDR3：配列番号10から成る群より選択された少なくとも１つのCDRを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、次のCDR：VH-CDRl：配列番号３；VH-CDR2：配列番号４；VH-CDR3：配列番号５；VL-CDR1：配列番号８；VL-CDR2：配列番号９；およびVL-CDR3：配列番号10、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、VH-CDRl：配列番号13；VH-CDR2：配列番号14；VH-CDR3：配列番号15；VL-CDR1：配列番号18；VL-CDR2：配列番号19；およびVL-CDR3：配列番号20から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、次のCDR：VH-CDRl：配列番号13；VH-CDR2：配列番号14；VH-CDR3：配列番号15；VL-CDR1：配列番号18；VL-CDR2：配列番号19；およびVL-CDR3：配列番号20、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、配列番号12のアミノ酸配列を含む重鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体が、配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体が、配列番号12のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体が、VH-CDR1：配列番号23；VH-CDR2：配列番号24；VH-CDR3：配列番号25；VL-CDR1：配列番号28；およびVL-CDR2：配列番号29から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体が、次のCDR：VH-CDR1：配列番号23；VH-CDR2：配列番号24；VH-CDR3：配列番号25；VL-CDR1：配列番号28；およびVL-CDR2：配列番号29、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体が、配列番号22のアミノ酸配列を含む重鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体が、配列番号27のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体が、配列番号22のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号27のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体が、VH-CDR1：配列番号32；VH-CDR2：配列番号33；VH-CDR3：配列番号34；VL-CDR1：配列番号37；VL-CDR2：配列番号38；およびVL-CDR3：配列番号39から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体が、次のCDR：VH-CDR1：配列番号32；VH-CDR2：配列番号33；VH-CDR3：配列番号34；VL-CDR1：配列番号37；VL-CDR2：配列番号38；VL-CDR3：配列番号39、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体が、配列番号36のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号36のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、VH-CDR1：配列番号42；VH-CDR2：配列番号43；VH-CDR3：配列番号44；VL-CDR1：配列番号47；VL-CDR2：配列番号48；VL-CDR3：配列番号49から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２４】
前記抗体が、次のCDR：VH-CDR1：配列番号42；VH-CDR2：配列番号43；VH-CDR3：配列番号44；VL-CDR1：配列番号47；VL-CDR2：配列番号48；VL-CDR3：配列番号49、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２５】
前記抗体が、配列番号41のアミノ酸配列を含む重鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２６】
前記抗体が、配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体が、配列番号41のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、VH-CDR1：配列番号52；VH-CDR2：配列番号53；VH-CDR3：配列番号54；VL-CDR1：配列番号57；VL-CDR2：配列番号58；VL-CDR3：配列番号59から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、次のCDR：VH-CDR1：配列番号52；VH-CDR2：配列番号53；VH-CDR3：配列番号54；VL-CDR1：配列番号57；VL-CDR2：配列番号58；VL-CDR3：配列番号59、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、配列番号51のアミノ酸配列を含む重鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３１】
前記抗体が、配列番号56のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３２】
前記抗体が、配列番号51のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号56のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３３】
個体における補体経路媒介性疾患または障害の治療方法であって、前記個体に請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗C5抗体を投与する工程を含む方法。
【請求項３４】
前記疾患または障害が、黄斑変性（MD）、加齢性黄斑変性症（AMD）、虚血再灌流傷害、関節炎、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性結腸炎、発作、術後全身性炎症症候群、喘息、アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH)症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎（NMO）、多発性硬化症、移植片機能遅延（DGF）、抗体媒介性拒絶反応、非定型的溶血性尿毒症性（aHUS）症候群、網膜中心静脈閉塞症（CRVO）、網膜中心動脈閉塞症（CRAO）、表皮水疱症、敗血症、臓器移植、炎症（非限定的に、心肺バイパス手術と腎臓透析に関連した炎症を含む）、C3糸球体症、膜性腎症、IgA腎症、糸球体腎炎（非限定的に、抗好中球細胞質抗体(ANCA)媒介性糸球体腎炎、ループス腎炎、およびそれの合併症を含む）、ANCA媒介性脈管炎、志賀毒素誘発性HUS、および抗リン脂質抗体誘発性妊娠喪失、またはそれの組み合わせから成る群より選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
個体の補体系の活性を低下させる方法であって、腸内投与、非経口投与およびそれの組み合わせから成る群より選択された投与経路を介して、前記個体に抗体を投与することを含み、前記抗体が請求項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体である方法。
【請求項３６】
前記抗体が、Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体フラグメントである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
請求項１〜３２のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体を含む細胞。
【請求項３８】
前記細胞が請求項１〜３２のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体を産生する、請求項３７に記載の細胞。
【請求項３９】
前記細胞がハイブリドーマである、請求項３７に記載の細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
〔関連出願への相互参照〕
本出願は、2017年３月６日に出願の米国仮特許出願第62/467,498号に対する優先権を主張し、その全内容が参照として本明細書中に援用される。
〔政府支援の下の研究開発に関する陳述〕
【０００２】
本発明は、国立衛生研究所（NIH）により授与されたNIH AI44970の下に政府支援を受けて行われた。政府は本発明に関して一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
補体系は宿主の防御に重要な役割を果たす先天性免疫の一部である。しかしながら、活性化された補体は有意な組織損傷と破壊を引き起こす可能性もあり、無調節な補体活性は多数の奇病や一般的な疾病、例えば発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH）、非定型的溶血性尿毒症性症候群、関節リウマチ、加齢黄斑変性症等に関連があることが分かっている。よって、抗補体療法はそれらのヒト疾患を治療する有力な方法である。
【０００４】
補体C5は補体活性化の最終経路の中の重要なタンパク質であり、炎症促進性メディエーターC5a、および細胞溶解性膜侵襲複合体（MAC）を生成するための前駆タンパク質である。
【０００５】
多数のヒト炎症性および自己免疫性疾患がC5aおよび／またはMACにより媒介されるため、C5活性化を遮断することはC5aとMAC生成を抑制するであろうし、治療的価値があるであろう。ヒト化マウス抗ヒトC5 mAbであるエクリズマブは、２つの補体媒介性疾患、すなわち発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH）と非定型的溶血性尿毒症性症候群（aHUS）を治療するために用いられている。しかしながら、全てのPNH患者がエクリズマブ療法に反応するわけではなく、その非反応性の原因の一つは、エクリズマブに結合するエピトープが欠損したヒトC５の遺伝的多型である。
【０００６】
よって、異なる機序によって終末補体活性化を阻害することができ、かつC5上の部位と接触してそれにより補体依存性の病的状態をより効果的に治療することができる抗ヒトC5 mAbが当業界で必要とされている。本発明は、それらのおよび他のニーズに対処しそれに応える。
【発明の概要】
【０００７】
一実施形態では、本発明はC5に特異的に結合する抗体を含む。一実施形態では、C5はヒトC5である。一実施形態では、抗体がモノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体がヒト化抗体である。一実施形態では、抗体がキメラ抗体である。一実施形態では、抗体が全長抗体である。ある実施形態では、抗体が、例えば非限定的にFab、Fab′、F(ab)2、F(ab′)2およびscFvを含む抗体断片である。幾つかの実施形態では、抗体が構成物の一部、例えば、抗体と標的指向（ターゲッティング）成分またはエフェクター成分とを含む融合構成物の一部である。幾つかの実施形態では、抗体が複合体（コンジュゲート）構成物の一部、例えば抗体医薬複合体構成物の一部である。
【０００８】
一実施形態では、抗体は、VH-CDRl：配列番号３；VH-CDR2：配列番号４；VH-CDR3：配列番号５; VL-CDR1：配列番号８；VL-CDR2：配列番号９；およびVL-CDR3：配列番号10から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。一実施形態では、抗体は、次のCDRs：VH-CDRl：配列番号３；VH-CDR2：配列番号４；VH-CDR3：配列番号５；VL-CDR1：配列番号８；VL-CDR2：配列番号９；およびVL-CDR3：配列番号10から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。
【０００９】
一実施形態では、抗体は配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１０】
一実施形態では、抗体はVH-CDRl：配列番号13；VH-CDR2：配列番号14；VH-CDR3：配列番号15；VL-CDR1：配列番号18；VL-CDR2：配列番号19；およびVL-CDR3：配列番号20から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。一実施形態では、抗体は次のCDRs：VH-CDRl：配列番号13；VH-CDR2：配列番号14；VH-CDR3：配列番号15；VL-CDR1：配列番号18；VL-CDR2：配列番号19；およびVL-CDR3：配列番号20から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１１】
一実施形態では、抗体は、配列番号12のアミノ酸配列を含む重鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号12のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれらの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１２】
一実施形態では、抗体は、VH-CDR1：配列番号23；VH-CDR2：配列番号24；VH- CDR3：配列番号25；VL-CDR1：配列番号28；およびVL-CDR2：配列番号29から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。一実施形態では、抗体は、次のCDRs：VH-CDR1：配列番号23；VH-CDR2：配列番号24；VH-CDR3：配列番号25；VL-CDR1：配列番号28；およびVL-CDR2：配列番号29、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１３】
一実施形態では、抗体は、配列番号22のアミノ酸配列を含む重鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号27のアミノ酸配列を含む軽鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号22のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号27のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれらの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１４】
一実施形態では、抗体は、VH-CDR1：配列番号32；VH-CDR2：配列番号33；VH-CDR3：配列番号34；VL-CDR1：配列番号37；VL-CDR2：配列番号38；VL-CDR3：配列番号39から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。一実施形態では、抗体は、次のCDRs：VH-CDR1：配列番号32；VH-CDR2：配列番号33；VH-CDR3：配列番号34；VL-CDR1：配列番号37；VL-CDR2：配列番号38；VL-CDR3：配列番号39、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１５】
一実施形態では、抗体は、配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号36のアミノ酸配列を含む軽鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号36のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれらの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１６】
一実施形態では、抗体は、VH-CDR1：配列番号42；VH-CDR2：配列番号43；VH-CDR3：配列番号44；VL-CDR1：配列番号47；VL-CDR2：配列番号48；VL-CDR3：配列番号49から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。一実施形態では、抗体は、次のCDRs：VH-CDR1：配列番号42；VH-CDR2：配列番号43；VH-CDR3：配列番号44；VL-CDR1：配列番号47；VL-CDR2：配列番号48；VL-CDR3：配列番号49、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１７】
一実施形態では、抗体は、配列番号41のアミノ酸配列を含む重鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号41のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれらの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１８】
一実施形態では、抗体は、VH-CDR1：配列番号52；VH-CDR2：配列番号53；VH-CDR3：配列番号54；VL-CDR1：配列番号57；VL-CDR2：配列番号58；VL-CDR3：配列番号59から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。一実施形態では、抗体は、次のCDRs：VH-CDR1：配列番号52；VH-CDR2：配列番号53；VH-CDR3：配列番号54；VL-CDR1：配列番号57；VL-CDR2：配列番号58；VL-CDR3：配列番号59から成る群より選択された少なくとも１つのCDR、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む。
【００１９】
一実施形態では、抗体は、配列番号51のアミノ酸配列を含む重鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号56のアミノ酸配列を含む軽鎖またはそれの変異体を含む。一実施形態では、抗体は配列番号51のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号56のアミノ酸配列を含む軽鎖、またはそれらの１もしくは複数の変異体を含む。
【００２０】
一実施形態では、抗体は2G1、8E1、4E7、9G6、11C5および11D6から成る群より選択された少なくとも１つである。
【００２１】
一実施形態では、本発明は、個体において補体経路の媒介による疾患または障害を治療する方法であって、前記個体に本請求項記載の抗C5抗体を投与する工程を含む方法に関する。一実施形態では、黄斑変性（MD）、加齢黄斑変性症（AMD）、虚血再灌流傷害、関節炎、関節リウマチ、喘息、アレルギー性喘息、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性結腸炎、発作、術後全身性炎症症候群、喘息、アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH)症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎（NMO）、多発性硬化症、移植片機能遅延（DGF）、抗体媒介性拒絶反応、非定型的溶血性尿毒症性（aHUS）症候群、網膜中心静脈閉塞症（CRVO）、網膜中心動脈閉塞症（CRAO）、表皮水疱症、敗血症、臓器移植、炎症（非限定的に、心肺バイパス手術と腎臓透析に関連した炎症を含む）、C3糸球体症、膜性腎症、IgA腎症、糸球体腎炎（非限定的に、抗好中球細胞質抗体（ANCA)媒介性糸球体腎炎、ループス腎炎、およびそれの合併症を含む）、ANCA媒介性脈管炎、志賀毒素誘発性HUS、および抗リン脂質抗体誘発性妊娠喪失、またはそれの組み合わせから成る群より選択される。幾つかの実施形態では、AP媒介性疾患がC3糸球体症である。幾つかの実施形態では、AP媒介性疾患が黄斑変性、例えば加齢性斑変性症である。一実施形態では、抗C5抗体の投与がC5aまたはC5bタンパク質の生成を阻害する。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、個体の補体系の活性を減少させる方法であって、腸内投与、非経口投与およびそれの併用から成る群より選択された投与経路によって抗体を前記個体に投与することを含み、そして前記抗体が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号８、配列番号９および配列番号10のアミノ酸配列を有する６つの相補性決定領域、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む方法に関する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片（フラグメント）である。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、個体の補体系の活性を減少させる方法であって、腸内投与、非経口投与およびそれの併用から成る群より選択された投与経路によって抗体を前記個体に投与することを含み、そして前記抗体が、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号18、配列番号19および配列番号20のアミノ酸配列を有する６つの相補性決定領域、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む方法に関する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００２４】
一実施形態では、本発明は、個体の補体系の活性を減少させる方法であって、腸内投与、非経口投与およびそれの併用から成る群より選択された投与経路によって抗体を前記個体に投与することを含み、そして前記抗体が、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号28、配列番号29のアミノ酸配列を有する６つの相補性決定領域、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む方法に関する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００２５】
一実施形態では、本発明は、個体の補体系の活性を減少させる方法であって、腸内投与、非経口投与およびそれの併用から成る群より選択された投与経路によって抗体を前記個体に投与することを含み、そして前記抗体が、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号37、配列番号38および配列番号39のアミノ酸配列を有する６つの相補性決定領域、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む方法に関する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００２６】
一実施形態では、本発明は、個体の補体系の活性を減少させる方法であって、腸内投与、非経口投与およびそれの併用から成る群より選択された投与経路によって抗体を前記個体に投与することを含み、そして前記抗体が、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号47、配列番号48および配列番号49のアミノ酸配列を有する６つの相補性決定領域、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む方法に関する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００２７】
一実施形態では、本発明は、個体の補体系の活性を減少させる方法であって、腸内投与、非経口投与およびそれの併用から成る群より選択された投与経路によって抗体を前記個体に投与することを含み、そして前記抗体が、配列番号52、配列番号53、配列番号54、配列番号57、配列番号58および配列番号59のアミノ酸配列を有する６つの相補性決定領域、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む方法に関する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００２８】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号２に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する重鎖可変（vH）領域を有する。一実施形態では、前記抗体断片がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００２９】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号７に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する軽鎖可変（vL）領域を有する。一実施形態では、前記抗体断片がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３０】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は重鎖可変（vH）領域と軽鎖可変（vL）領域とを有し、ここで前記vH領域は配列番号２に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有し、そして前記vL領域は配列番号７に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３１】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号12に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する重鎖可変（vH）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３２】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号17に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する軽鎖可変（vL）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３３】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は重鎖可変（vH）領域と軽鎖可変（vL）領域とを有し、ここで前記vH領域は配列番号12に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有し、そして前記vL領域は配列番号17に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３４】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号22に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する重鎖可変（vH）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３５】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号27に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する軽鎖可変（vL）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３６】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は重鎖可変（vH）領域と軽鎖可変（vL）領域とを有し、ここで前記vH領域は配列番22に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有し、そして前記vL領域は配列番号27に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３７】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号31に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）同一性であるアミノ酸配列を有する重鎖可変（vH）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３８】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号36に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する軽鎖可変（vL）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００３９】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は重鎖可変（vH）領域と軽鎖可変（vL）領域とを有し、ここで前記vH領域は配列番号31に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有し、そして前記vL領域は配列番36に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００４０】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号41に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する重鎖可変（vH）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００４１】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号46に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する軽鎖可変（vL）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００４２】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は重鎖可変（vH）領域と軽鎖可変（vL）領域とを有し、ここで前記vH領域は配列番41に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有し、そして前記vL領域は配列番46に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００４３】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号51に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する重鎖可変（vH）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００４４】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は配列番号56に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する軽鎖可変（vL）領域を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００４５】
幾つかの実施形態では、本発明はヒトC5に対する抗体であり、該抗体は重鎖可変（vH）領域と軽鎖可変（vL）領域とを有し、ここで前記vH領域は配列番号51に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有し、そして前記vL領域は配列番号56に対する同一性が約90％より大きい（例えば91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のいずれかより大きい）アミノ酸配列を有する。一実施形態では、前記抗体がFab、Fab'、F(ab)2、F(ab')2、scFvおよびそれの組み合わせから成る群より選択された抗体断片である。
【００４６】
一実施形態では、本発明は、本明細書中に記載の抗体の少なくとも１つを含む細胞に関する。幾つかの実施形態では、該細胞が本明細書中に記載の抗体の少なくとも１つの抗体を産生する。一実施形態では、該細胞がハイブリドーマである。
【００４７】
一実施形態では、本発明は、本明細書中に記載の抗体の少なくとも１つを含む細胞系に関する。幾つかの実施形態では、該細胞系が本明細書中に記載の抗体の少なくとも１つを産生する。一実施形態では、該細胞系がハイブリドーマ細胞系である。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
上記の要約および下記の本発明の例示的な実施形態の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むとより良く理解されよう。しかしながら、本発明はその図面に示された実施態様の正確な配置と手段に限定されないと理解すべきである。
【図１】図１は、ヒトC5への抗ヒトC5 mAbs 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9および8E1の結合を証明するELISAアッセイからの結果を示す。精製ヒトC5がコーティングされたマイクロタイタープレートを交差する形でmAbが系列希釈される抗原結合ELISAを示す。６つのmAb全てがヒトC5との高い反応性を示した。
【図２】図２は、C5への抗C5 mAb 2G1の結合親和性を測定した実験の結果を示す。精製抗ウサギIgG（RAMFc）mAbをアミンカップリング法を使ってCM4チップ上にカップリングさせた。次いで、固定化されたRAMFc上で抗C5 mAbを捕捉した。Biacore-2000装置上でBiacore分析を実施した。
【図３】図３は、C5への抗C5 mAb 8E1の結合親和性を測定した実験の結果を示す。
【図４】図４は、C5への抗C5 mAb 4E7の結合親和性を測定した実験の結果を示す。
【図５】図５は、C5への抗C5 mAb 9G6の結合親和性を測定した実験の結果を示す。
【図６】図６は、C5への抗C5 mAb 11C5の結合親和性を測定した実験の結果を示す。
【図７】図７は、C5への抗C5 mAb 11D9の結合親和性を測定した実験の結果を示す。
【図８】図８は、抗ヒトC5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D6および8E1によるLPS誘導性C5a生産の用量依存的阻害を示す。LPS誘導C5a生産に対する抗ヒトC5 mAbの効果を評価するために、２つのアッセイの組み合わせを用いた：LPS誘導C5a生産およびヒトC5aサンドイッチELISA。６つのmAb全てが、12.5μg/mLの最終濃度で10％正常ヒト血清（NHS）に添加するとLPS誘導C5a生産を効果的に阻害した。
【図９】図９Ａと図９Ｂを含む図９は、補体媒介溶血反応に対する抗ヒトC5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D6および8E1の効果を示す。図９Ａは、抗体感作ヒツジ赤血球（RBC）を各抗C5 mAbの系列希釈液を含む50％NHSと共に37℃で１時間インキュベートした後でOD405 の吸光度を測定することにより決定された赤血球（RBC）溶解を示す。RBC溶解はOD405 nmでの吸光度を測定することにより求めた。120μg/mLで、全てのmAbがNHS媒介ヒツジ赤血球溶解を50％阻害した。より低用量（例えば30〜60μg/mL）では、9G6は別のmAbよりも溶血を防止する効力が低かった。図９Ｂは30μg/mLで、mAb 2G1と8E1が4E7、9G6、11C5および11D9よりも補体媒介溶血反応を阻害する効力が大きかったことを示す。
【図１０】図10は、異なる動物種からの血清を使って補体媒介溶血反応に対する抗ヒトC5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9、8E1の効果を評価する実験の結果を示す。抗体感作したニワトリRBCを、各抗C5 mAb（最終濃度：50μg/mL）を含む50％NHS、正常ウサギ血清、アカゲザル血清またはカニクイザル血清と共に37℃で１時間インキュベートした。OD405 nmでの吸光度を測定することによりRBC溶解を測定し、そして陰性対照（ネガティブコントロール）（０％）としての血清＋EDTA、および陽性対照（ポジティブコントロール）（100％）としての血清＋抗体なしに対して正規化した。NHSを使った溶血アッセイでは、６つの抗ヒトC5 mAbのうちの５つが有意に、すなわち50％より大きく、溶血反応を阻害した。特に、2G1を含むNHS試料は、溶血のほとんど完全な阻害を示した。mAb 9G6または2G1で処置した時、ウサギ血清の溶血活性が有意に減少した。一方で、サル（アカゲザルとカニクイザル）血清を使った場合は全てのmAbが補体媒介溶血を有意には阻害しなかった。
【図１１】図11は、補体媒介溶血に対する抗ヒトC5 mAbs 2G1と8E1の効果を評価する実験の結果を表す。抗体感作したニワトリRBCを、2G1もしくは8E1の系列希釈液または対照mAb（MOPC、マウスIgG1）の系列希釈液を含む50％NHSと共に37℃で１時間インキュベートした。RBC溶解はOD405nmでの吸光度を測定することにより評価した。mAb 2G1と8E1はこのアッセイにおいて同様な活性を有した。
【図１２】図12は、PNH RBCの溶血に対する抗ヒトC5 mAb 2G1の効果を評価する実験の結果を示す。発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH）患者からのRBCを、mAb 2G1の存在下または非存在下にてハムの酸性化血清試験に供した。RBCを2G1の系列希釈液を含む50％NHSと共に37℃で１時間インキュベートした。RBC溶解はOD405 nmでの吸光度を測定することにより評価した。mAbの非存在下ではRBCの約35％が酸性化血清により溶解されたのに対し、mAb 2G1処置は25μg/mLの用量で溶血活性の70％減少を引き起こし、そして40μg/mLの用量で85％の減少を引き起こした。
【図１３】図13は、mAb 2G1の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。
【図１４】図14は、mAb 8E1の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。
【図１５】図15は、mAb 4E7の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。
【図１６】図16は、mAb 9G6の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。
【図１７】図17は、mAb 11C5の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。
【図１８】図18は、mAb 11D9の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。
【図１９】図19は、セリン228からプロリンへの変異（すなわちS228P）を有するヒトIgG4重鎖定常領域と、ヒトκ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を示す。それらの配列は、キメラ（マウス可変領域＋ヒト定常領域）およびヒト化（ヒト化マウス可変領域＋ヒト定常領域）抗ヒトC5抗体（2G1）を作製するのに使用した。
【図２０】図20は、2G1ヒトIgG4キメラmAbとヒトC5との反応性を評価する実験の結果を示す。mAb 2G1の可変領域を、S228P変異を担持するヒトIgG4重鎖定常領域とヒトκ軽鎖定常領域を連結させることにより、キメラ2G1を作製した。プレートをヒトC5でコーティングした。系列希釈したキメラ2G1 mAb と共にインキュベートした後、結合したキメラmAbをHRP接合抗ヒトIgG4により検出した。ヒトC5に結合したキメラ2G1は用量依存的にヒトC5に結合した。
【図２１】図21は、古典的経路の補体媒介溶血に対するヒトIgG4-2G1キメラmAbの効果を評価する実験の結果を表す。感作したヒツジRBCを、系列希釈したキメラ2G1を含む50％NHSと共に37℃で１時間インキュベートした。RBC溶解は、OD405 nmでの吸光度を測定することにより評価した。30μg/mLおよびそれ以上の濃度で、キメラ2G1 mAbがNHS媒介性ヒツジ赤血球溶解を効果的に阻害したことを示す。
【図２２】図22は、mAb 2G1のヒト化可変重鎖（VH）（ヒト化2G1 VH-1 1801）のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。ヒト化は、マウスmAb 2G1 VHから生殖細胞系列でコードされるヒトVHフレーム（11801）中にCDR移植することにより達成された。シグナルペプチドのアミノ酸配列は下線部分であり、そしてCDR1、CDR2およびCDR3の配列は太字の陰影を付けた部分である。
【図２３】図23は、mAb 2G1の別のヒト化VH（ヒト化2G1 VH-16901）のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。ヒト化は、マウスmAb 2G1 VHから生殖細胞系列でコードされるヒトHLフレーム（16901）中にCDR移植することにより達成された。シグナルペプチドのアミノ酸配列は下線部分であり、そしてCDR１、CDR2およびCDR3の配列は太字の陰影を付けた部分である。
【図２４】図24は、mAb 2G1のヒト化可変軽鎖（VL）（ヒト化2G1 VL-1901）のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。ヒト化は、マウスmAb 2G1 VLから生殖細胞系列でコードされるヒトHLフレーム（1901）中にCDR移植することにより達成された。シグナルペプチドのアミノ酸配列は下線部分であり、そしてCDR１、CDR2およびCDR3の配列は太字の陰影を付けた部分である。
【図２５】図25は、ヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）とヒトC5との反応性を評価する実験の結果を示す。ヒト化2G1（NH-11801/VL-1901）は、Fcドメイン中にS228P変異を有するヒトIgG4 mAbとして発現された。プレートをヒトC5でコーティングした。系列希釈したヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）と共にインキュベーションした後、結合したmAbをHRP接合抗ヒトIgG4により検出した。ヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）は用量依存形式でヒトC5を結合した。
【図２６】図26は、ヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）とヒトC5の反応性を評価する実験の結果を示す。ヒト化2G1（NH-16901/VL-1901）は、Fcドメイン中にS228P変異を有するヒトIgG4 mAbとして発現された。プレートをヒトC5でコーティングした。系列希釈したヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）と共にインキュベーションした後、結合したAbをHRP接合抗ヒトIgG4により検出した。ヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）は用量依存形式でヒトC5を結合した。
【図２７】図27は、古典的経路の補体媒介溶血に対するヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）の効果を評価する実験の結果を表す。ヒト化2G1（NH-11801/VL-1901）は、Fcドメイン中にS228P変異を有するヒトIgG4 mAbとして発現された。抗体感作したヒツジRBCを、系列希釈したヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）を含む10％NHSと共に37℃で１時間インキュベートした。RBC溶解は、OD405 nmでの吸光度を測定することにより評価した。ヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）は、10μg/mLおよびそれ以上のmAb濃度で、10％NHS媒介性ヒツジ赤血球溶解を有意に阻害した。
【図２８】図28は、古典的経路の補体媒介溶血に対するヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）の効果を評価する実験の結果を表す。ヒト化2G1（NH-16901/VL-1901）は、Fcドメイン中にS228P変異を有するヒトIgG4 mAbとして発現された。抗体感作したヒツジRBCを、系列希釈したヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）を含む10％NHSと共に37℃で１時間インキュベートした。RBC溶解は、OD405 nmでの吸光度を測定することにより評価した。ヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）は、10μg/mLおよびそれ以上のmAb濃度で、10％NHS媒介性ヒツジ赤血球溶解を有意に阻害した。
【図２９】図29Ａと図29Ｂを含む図29は、mAb 2G1-3（図29Ａ）と対照のmAb QDC5（図29Ｂ）を使ってウエスタンブロットを用いてヒトC5を検出した実験の結果を示し、mAb 2G1-3がヒトC5のβ鎖に結合することを示す。ヒトC5（１レーンあたり△gを使用、Comptechより、カタログ番号A120）を非還元（NR）または還元（R）条件下でSDS-PAGE上で泳動した。対照のmAb QDC5は、Thomas他（Mol Immunol. 1996 Dec; 33 (17-18):1389-401）中に記載されたようなヒト化マウス抗ヒトC5 mAbのVHおよびVL配列を有する組み換えヒトIgG4 mAbである。このmAbは、ヒトC5のα鎖中のエピトープに結合することが知られている。予想通り、mAb 2G1-3とQDC5の両方が非還元型ヒトC5に同様に結合した。還元条件下では、予想通りQDC5がヒトC5のα鎖に結合し、その一方でmAb 2G1-3はヒトC5のβ鎖に相当する異なるバンドに結合した。SDS-PAGE後、タンパク質をPVDF膜上に移行し、TBS中の５％脱脂粉乳で室温で１時間ブロックした。膜を１0μg/mLの2G1-3またはQDC5と共に室温で１時間インキュベートした。0.1％Tween-20（TBST）を含むTBSで５分×６回洗浄した後、ウサギ抗マウスIgG-HRPまたは抗ヒトIgG-HRPの１：4000希釈液を膜に添加し、室温で１時間インキュベートした。最終洗浄後、Pierce（商標）ECL2ウエスタンブロット用基質を使って、製造業者の教示に従ってタンパク質を検出した。
【図３０】図30Ａと図30Ｂを含む図30は、ヒトC5のドメイン構造と配列を描写する。ヒトC5は、C5活性化時に遊離される小さなC5aセグメントにより隔てられたα鎖とβ鎖から構成される（図30Ａ）。ヒトC5β鎖は、列挙されるようなアミノ酸配列を有する6つのMGドメインから構成される（図30Ｂ）。
【図３１】図31Ａと図31Ｂを含む図31は、ヒトC5β鎖のおよび各MGドメインを欠いているヒトC5β鎖欠失変異体のウエスタンブロット検出を示す（図31Ａ）。ヤギ抗ヒトC5ポリクローナル抗体を使ったウエスタンブロッティングは、HEK細胞中で一時的に発現させた完全体のβ鎖および６つのMGドメイン欠失変異体を検出した。トランスフェクトしたHEK細胞の上清を分析用に使用した。数字１，２，３，４，５，６は、それぞれMG1、MG2、MG3、MG4、MG5およびMG6欠失変異体を表す。非トランスフェクトHEK細胞からの上清（ブランク）は陰性対照（ネガティブコントロール）として使用した。それらの結果は、全ての欠失変異体が発現されたことを証明する（図31Ｂ）。ヒトC5β鎖と６つのMG欠失変異体の計算分子量（kDa）は、ウエスタンブロット上の検出されたバンドと一致する。
【図３２】図32は、mAb 2G1-3結合についてヒトC5β鎖中の重要なMGドメインを評価するためのサンドイッチELISAアッセイの結果を示す。mAb 2G1-3を96ウェルプレート上にコーティングし、非トランスフェクトまたはトランスフェクトHEK細胞からの上清を添加した。インキュベーションと洗浄後、結合したβ鎖または欠失変異体タンパク質を、第二の抗ヒトC5 mAb SKY59（Fukuzawa他、Sci. Rep. 2017 Apr 24; 7(1):1080. doi: 10.1038/s41598-017-01087-7)（これはヒトC5のMG1ドメイン内の配列と結合することが知られている）により検出した。このデータは、MG2、MG3、MG5およびMG6欠失変異体のシグナルがまだ検出されたことを表し、それらのドメインが2G1-3またはSKY59のいずれかの結合に関与しなかったことを示唆する。他方で、MG1とMG4欠失変異体は結合を失い、2G1-3もしくはSKY59またはその両方によるヒトC5結合にとってそれらのドメインが重要であることを示唆する。正常ヒト血清（NHS）および完全なβ鎖でトランスフェクトされた細胞上清を陽性対照として用い、そして非トランスフェクトHEK細胞上清（ブランク）を陰性対照として用いた。
【図３３】図33は、検出にポリクローナル抗C5抗体を使ったサンドイッチELISAアッセイの結果を示し、これはヒトC5β鎖中のMG4ドメインがmAb 2G1-3結合にとって重要であることを証明する。2G1-3を96ウェルプレート上にコーティングし、そして非トランスフェクトまたはトランスフェクトHEK細胞を添加した。インキュベーションと洗浄後、トランスフェクション上清中の結合したβ鎖または欠失変異体タンパク質を、ヤギ抗ヒトC5ポリクローナル抗体により検出した。正常ヒト血清（NHS）と完全ヒトβ鎖の上清およびMG1欠失変異体の上清中ではシグナルが検出されたが、MG4欠失変異体の上清中には検出されなかった。このことは、β鎖中のMG4が2G1-3結合にとって重要であり、MG1は重要でないことを示唆する。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明は、抗C5抗体を使った補体シグナル伝達の阻害に関する。様々な実施形態において、本発明は、個体を抗C5抗体と接触させることにより、該個体における補体媒介疾患または補体媒介障害を治療するための組成物と方法に向けられる。本発明の組成物と方法を用いて治療することができる補体媒介性の病変や状態としては、限定されないが、黄斑変性（MD）、加齢性黄斑変性症（AMD）、虚血再灌流傷害、関節炎、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性結腸炎、発作、術後全身性炎症症候群、喘息、アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH)症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎（NMO）、多発性硬化症、移植片機能遅延（DGF）、抗体媒介性拒絶反応、非定型的溶血性尿毒症性（aHUS）症候群、網膜中心静脈閉塞症（CRVO）、網膜中心動脈閉塞症（CRAO）、表皮水疱症、敗血症、臓器移植、炎症（非限定的に、心肺バイパス手術と腎臓透析に伴う炎症を含む）、C3糸球体症、膜性腎症、IgA腎症、糸球体腎炎（非限定的に、抗好中球細胞質抗体（ANCA)媒介性糸球体腎炎、ループス腎炎、およびそれの合併症を含む）、ANCA媒介性脈管炎、志賀毒素誘発性HUS、および抗リン脂質抗体誘発性妊娠喪失、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００５０】
定義
異なって定義されない限り、本明細書中で用いる全ての技術用語と科学用語は、本発明の属する分野の当業者により一般に解釈されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載のものと同様なまたは同等の方法と材料はいずれも、本発明の実施または試験に使用することができるが、例示的な方法と材料が記載される。
【００５１】
本明細書中で用いる場合、次の各用語は、本項目中でそれに関連した意味を有する。
【００５２】
冠詞「a」と「an」は、その冠詞の文法上の対象物の１または複数（すなわち少なくとも１つ）を指すために用いられる。一例として、「１つの要素」は１要素または複数の要素を意味する。
【００５３】
用語「阻害する」および「阻害」は、本明細書中で用いる場合、対照値に関して少なくとも約10％活性または機能を減少させる、抑制する、減縮するまたは阻止することを意味する。幾つかの実施形態では、活性が対照値の少なくとも約50％抑制または阻止される。幾つかの実施形態では、活性が対照値の少なくとも約75％抑制または阻止される。幾つかの実施形態では、活性が対照値の少なくとも約95％抑制または阻止される。
【００５４】
用語「有効量」および「薬学的有効量」は、所望の生物学的結果を与えるのに十分な薬剤の量を指す。その結果は、疾病または障害の徴候、症状もしくは原因の軽減および／または緩和、または生物学的系の任意の他の望ましい変化であることができる。いずれかの個々の症例における適当な有効量は、日常的な実験を使って当業者により決定することができる。
【００５５】
用語「患者」、「対象」、「個体」等は、本明細書中では互換的に用いられ、そして任意の動物、幾つかの実施形態では哺乳類、そして幾つかの実施形態では補体系を有するヒト、例えば、ある状態またはその続発症の治療が必要なまたはそれに罹患しやすいヒトを指す。
【００５６】
用語「異常な」とは、生物体、組織、細胞またはその成分に関して用いる場合、少なくとも１つの観察可能なまたは検出可能な特性（例えば年齢、処置、時刻など）の点で、「正常の」（期待される／恒常性の）各特性を示すそれらの生物体、組織、細胞またはその成分とは異なっている、生物体、組織、細胞またはその成分を指す。ある１つの細胞、組織型または対象にとって正常であるまたは期待される特性は、別の細胞または組織型にとっては異常であるかもしれない。
【００５７】
「疾病」は、対象が恒常性を維持することのできない対象の健康状態であり、そして該疾病が緩和されなければ、対象の健康が悪化し続ける状態である。
【００５８】
対照的に、対象の「障害」とは、該対象が恒常性を維持できるが、患者の健康状態が該障害の非存在下であるよりも良好でない健康状態である。未処置のままでも、障害は必ずしも対象の健康状態の更なる悪化を引き起こすわけではない。
【００５９】
疾病または障害は、その疾病または障害の徴候もしくは症状の重篤度、そのような兆候もしくは症状、患者により経験される頻度、またはその双方が低減されるならば、「緩和される」。
【００６０】
化合物の「有効量」または「治療有効量」は、化合物が投与される対象に有益な効果を提供するのに十分である化合物の量である。
【００６１】
本明細書中で用いる時、「教材」は、本明細書中に言及される様々な疾病または障害の緩和を果たすためのキットにおいて、本発明の化合物、組成物、ベクターまたは送達系（デリバリーシステム）の有用性を伝えるために用いることができる刊行物、記録、図面または他の任意の表現媒体を包含する。場合により、または代替的に、教材は哺乳類の細胞または組織において疾病または障害を緩和する１もしくは複数の方法を記載することができる。本発明のキットの教材は、例えば、該特定された化合物、組成物、ベクターまたは送達系を含む容器に例えば添付することができ、または該特定された化合物、組成物、ベクターまたは送達系を含む容器と一緒に輸送することができる。あるいは、教材は、受領者により教材と化合物とを協同的に使用することができるような状態で本発明の容器とは別々に輸送することができる。
【００６２】
本明細書中で用いられる「作動可能に連結された」または「作動可能なように連結された」とは、一遺伝子の発現が、それと空間的に連結されているプロモーターの制御下にあることを意味しうる。プロモーターは、その制御下に遺伝子の５′（上流）側または３′（下流）側に置くことができる。プロモーターと遺伝子との距離は、該プロモーターが由来する遺伝子においてそのプロモーターが制御する遺伝子と該プロモーターとの距離とほぼ同じであることができる。当業界で周知のように、この距離の変更は、プロモーター機能の低下を伴うことなく調整することができる。
【００６３】
「治療処置」は、疾病または障害の徴候を示す対象に、それらの徴候を低減または除去する目的で投与される処置である。
【００６４】
本明細書中で用いる場合、「疾病または障害を治療する」とは、患者により経験される該疾病または障害の徴候および／または症状の頻度および／または重篤度を軽減することを意味する。
【００６５】
本明細書中で用いる「生物学的試料」、「試料（サンプル）」または「検体」は、核酸またはポリペプチドの発現を検出することができる細胞、組織または体液を含む任意の試料を含むものである。生物学的試料は、所望のバイオマーカーを検出するのに適当な任意の生物学的物質を含むことができ、そして個体から得られた細胞および／または非細胞性物質を含むことができる。そのような生物学的試料の例としては、限定されないが、血液、リンパ液、骨髄、生検およびスメア（標本）が挙げられる。本来液体である試料は、本明細書中では「体液」と呼称される。
【００６６】
生物学的試料は、例えば、一領域を細片化する（scrapping）またはぬぐい取る（swabbing）することにより、あるいは注射針を使って体液を採取することにより、等の様々な技術によって患者から採取することができる。様々な体試料を採取する方法が当業界で周知である。
【００６７】
本明細書中で用いる場合の「抗体」という用語は、抗原の特定のエピトープに特異的に結合することができる免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然源または組み換え源から誘導された完全な免疫グロブリンであることができ、そして完全免疫グロブリンの免疫反応性部分であることができる。本発明の抗体は、様々な形態、例えばポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、細胞内抗体（「intrabody」）、Fv、Fab、Fab′、F(ab)2およびF(ab′)2、並びに一本鎖抗体（scFv）、重鎖抗体、例えばラクダ科抗体、およびヒト化抗体として存在することができる（Harlow他, 1999, Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow他, 1989, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston他, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird他, 1988, Science 242:423-426）。
【００６８】
本明細書中で用いる用語「合成抗体」とは、組み換えDNA技術を使って作製される抗体、例えばバクテリオファージによって発現された抗体を意味する。この用語は、抗体をコードするDNA分子の合成によって作製された抗体、およびDNA分子が抗体タンパク質を発現する抗体、または該抗体を特定するアミノ酸配列を意味し、ここでDNAまたはアミノ酸配列は、当業界で利用可能な周知である合成DNAまたはアミノ酸配列技術を使って得られたものである。
【００６９】
本明細書中で用いる場合、（１または複数の）「重鎖抗体」は、ペプチドによる免疫処置とそれに続く血清の単離により、またはそのような抗体をコードする核酸配列のクローニングと発現により、ラクダ科の種より誘導された免疫グロブリン分子を含む。用語（１または複数の）「重鎖抗体」は、重鎖病を有する対象から単離された、または対象からのVH（可変重鎖免疫グロブリン）遺伝子のクローニングと発現により調製された、免疫グロブリン分子を更に包含する。
【００７０】
「キメラ抗体」は、受容体側抗体に由来する軽鎖および重鎖定常領域と会合された、供与体側抗体に由来する天然の可変領域（軽鎖と重鎖）を含む、ある型の改変抗体を指す。
【００７１】
「ヒト化抗体」は、非ヒト供与体免疫グロブリンに由来するそれのCDRを有し、該分子の残りの免疫グロブリン由来部分は１つ（または複数の）ヒト免疫グロブリンに由来する、１つの型の改変抗体を指す。その上、フレームワーク支持残基は、結合親和性を保持するように変更することができる（例えば、1989, Queen他, Proc. Natl. Acad Sci USA, 86:10029-10032; 1991, Hodgson他, Bio/Technology, 9:421)。適当なヒト受容体側抗体は、供与体側抗体のヌクレオチド配列とアミノ酸配列に対する相同性により、汎用データベース、例えばKABATデータベース、Los Alamosデータベース、およびSwissタンパクデータベースより選択されたものであって良い。供与体側抗体のフレームワーク領域に対する相同性によって（アミノ酸ベースで）特徴づけられたヒト抗体は、供与体側CDRの挿入のための重鎖定常領域および／または重鎖可変フレームワーク領域を提供するのに適当であるだろう。軽鎖定常または可変フレームワーク領域を提供することができる適当な受容体側抗体は、同様な方法で選択することができる。受容体抗体重鎖および軽鎖は、同じ供与体側抗体に由来する必要はないことに注意すべきである。従来技術は、そのようなヒト化抗体を生産する幾つかの方法を記載している（例えばEP-A-0239400およびEP-A-054951参照）。
【００７２】
用語「供与体側抗体」は、改変された免疫グロブリンコード領域を提供するように、それの可変領域、CDRまたは別の機能性断片もしくは類似体のアミノ酸配列を第一の免疫グロブリン相手に供与し、その結果供与体側抗体に特徴的な抗原特異性および中和活性を有する改変抗体の発現をもたらす抗体（モノクローナルおよび／または組み換え）を指す。
【００７３】
用語「受容体側抗体」は、供与体側抗体に対し異種であり、その重鎖および／または軽鎖フレームワーク領域および／またはその重鎖および／または軽鎖定常領域をコードするアミノ酸配列の全部（または任意の部分、ただし幾つかの実施形態では全部）を、第一の免疫グロブリン相手に供与する抗体（モノクローナルおよび／または組み換え）を指す。ある実施形態では、ヒト抗体が受容体側抗体である。
【００７４】
「CDR」は、免疫グロブリン重鎖と軽鎖の超可変領域である抗体の相補性決定領域アミノ酸配列として定義される。例えば、Kabat他、Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)参照。免疫グロブリンの可変部分には３つの重鎖CDRと３つの軽鎖CDR（またはCDR領域）が存在する。よって、本明細書中で用いられる「CDR」は、３つの重鎖CDRの全部、または３つの軽鎖CDR全部（または適当ならば、全重鎖および全軽鎖CDRの両方）を指すために用いられる。抗体の構造とタンパク質折り畳みは、他の残基が抗原結合領域の一部分であると考えられることを意味し、そして当業者によりそうであると理解されるだろう。例えば、Chothia他 (1989) Conformations of immunoglobulin hypervariable regions; Nature 342, p 877-883を参照のこと。
【００７５】
本明細書中で用いる場合、「イムノアッセイ」は、標的分子を特異的に結合することができる抗体を用いて該標的分子を検出しそして定量する、任意の結合アッセイを指す。
【００７６】
用語「特異的に結合する」とは、抗体に関連して本明細書中で用いる場合、特定の標的分子を認識しそれを結合するが、試料中の別の分子は実質的に認識または結合しない抗体を意味する。ある場合には、用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、その認識と結合が標的分子上の特定構造の存在に依存することを意味するために用いられる。例えば、抗体がエピトープ「Ａ」に特異的に結合するならば、標識された「Ａ」と該抗体とを含有する反応液中にエピトープ「Ａ」を含む未標識分子（遊離の未標識Ａ）の存在は、該抗体に結合する標識されたＡの量を減少させるだろう。
【００７７】
遺伝子の「コード領域」は、該遺伝子のコード鎖のヌクレオチド残基と該遺伝子の非コード鎖のヌクレオチドとから成り、それらはそれぞれ、該遺伝子の転写によって生産されるmRNA分子のコード領域と相同であるかまたはそれと相補的である。
【００７８】
mRNA分子の「コード領域」は、mRNA分子の翻訳の間に転移RNA（t-RNA）分子のアンチコドン領域と一致するmRNA分子のヌクレオチド残基、または終止コドンをコードするmRNA分子のヌクレオチド残基から成る。よって、コード領域は、mRNA分子によりコードされる成熟タンパク質中に存在しないアミノ酸残基のコドンを含むヌクレオチド残基を含むことができる（例えばタンパク質移行シグナル配列中のアミノ酸残基）。
【００７９】
「差次的に減少される発現」または「下方制御（ダウンレギュレーション）」とは、対照の少なくとも10％以上、例えば、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％以下もしくは未満である、および／または対照よりも2.0倍、1.8倍、1.6倍、1.4倍、1.2倍、1.1倍またはそれ未満だけ低い、バイオマーカー生成物レベル、およびその間の全ての全または部分増分（インクレメント）を指す。
【００８０】
本明細書中で核酸に言及するときに用いられる「相補的」は、２本の核酸鎖の領域間のまたは同一核酸鎖の２領域間の配列相補性という広い概念を指す。第一の核酸領域のアデニン残基は、ある１残基がチミンまたはウラシルであるならば第一領域に対し逆平行である第二の核酸領域のその残基と特異的水素結合（「塩基対」）を形成することができることは知られている。同様に、第一の核酸鎖のシトシン残基は、１残基がグアニンであるならば第一鎖に逆平行である第二の核酸鎖のその残基と塩基対を形成することができることは知られている。核酸の第一領域は、２つの領域が逆平行の形で配置されると、第一領域の少なくとも１つの核酸残基が第二領域の１残基と塩基対を形成することができるならば、同一または異なる核酸の第二領域に対して相補的であると言える。幾つかの実施形態では、第一領域が第一部分を含みそして第二領域が第二部分を含み、ここで第一部分と第二部分とが逆平行の形で配置されると、第一部分のヌクレオチド残基の少なくとも約50％、および／または少なくとも約75％、または少なくとも約90％、または少なくとも約95％が、第二部分のヌクレオチド残基と塩基対を形成することができる。幾つかの実施形態では、第一部分の全てのヌクレオチド残基が第二部分のヌクレオチド残基と塩基対を形成することができる。
【００８１】
本明細書中で用いられる用語「DNA」は、デオキシリボ核酸として定義される。
【００８２】
「コードする」とは、生物学的過程において別のポリマーや高分子の合成のための鋳型として働く、限定されたヌクレオチド配列（すなわちrRNA、tRNAおよびmRNA）または限定されたアミノ酸配列、およびそれらから生じる生物学的性質を有する、ポリヌクレオチド、例えば遺伝子、cDNAもしくはmRNA中の特定のヌクレオチド配列の固有の性質を指す。よって、ある遺伝子に相当するmRNAの転写と翻訳が細胞または別の生物学的系においてタンパク質を生産するならば、その遺伝子はタンパク質をコードすると言う。コード鎖、すなわちmRNA配列に同一でありかつ通常は配列表に与えられるヌクレオチド配列、および遺伝子またはcDNAの転写のための鋳型として用いられる非コード鎖の両方について、その遺伝子もしくはcDNAのタンパク質産物または他の産物をコードすると言及することができる。
【００８３】
特に断らない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重形でありそして同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。タンパク質またはRNAをコードするヌクレオチド配列という表現は、該タンパク質をコードするヌクレオチド配列が幾つかの変形でイントロンを含んでもよいという程度にイントロンを包含することも可能である。
【００８４】
「単離された」とは、本来の状態から変更されているかまたは分離されていることを意味する。例えば、生存している対象において本来の状況で存在する核酸またはペプチドは「単離された」ものではなく、その本来の状況で共存する物質から部分的にまたは完全に分離されている同核酸またはペプチドは「単離された」ものである。単離された核酸またはペプチドは実質的に純粋な形で存在することができ、または例えば宿主細胞のような非天然の環境で存在することができる。
【００８５】
本明細書中で用いる用語「ハイブリドーマ」は、Ｂリンパ球と骨髄腫細胞のような融合相手との融合から生じる細胞を指す。ハイブリドーマは細胞培養においてクローニングされ無限に維持することができ、そしてモノクローナル抗体を産生することができる。ハイブリドーマはハイブリッド細胞であると考えることもできる。
【００８６】
「単離された核酸」は、天然に存在する状態でそれと隣接する配列、すなわちDNA断片に通常は隣接する配列から分離されている核酸セグメントまたは断片、すなわちそれが天然に存在するゲノム中の該断片に隣接した配列から分離されているDNA断片を指す。この用語は、本来核酸に付随する別の成分、例えば細胞中では本来核酸に付随するRNAまたはDNAまたはタンパク質、から実質的に精製されている核酸にも適用される。従って、この用語は、ベクター中に、自己複製性プラスミドもしくはウイルス中に、または原核もしくは真核生物のゲノムDNA中に組み込まれているか、あるいは他の配列から独立した別個の分子として存在する（すなわちPCRによりまたは制限酵素消化により生産されるcDNAまたはゲノムDNAまたはcDNA断片として存在する）組み換えDNAを含む。それは追加のポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組み換えDNAも包含する。
【００８７】
本発明では、普通の核酸塩基については次の略語を使用する。「Ａ」はアデノシンを指し、「Ｃ」はシトシンを指し、「Ｇ」はグアノシンを指し、「Ｔ」はチミジンを指し、そして「Ｕ」はウリジンを指す。
【００８８】
本明細書中で用いる用語「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチドの鎖として定義される。更に核酸はヌクレオチドのポリマーである。よって、本明細書中で用いられる核酸とポリヌクレオチドは互換性である。当業者は、核酸が単量体の「ヌクレオチド」に加水分解することができるポリヌクレオチドであるという一般知識を有する。単量体ヌクレオチドは、更にヌクレオシドに加水分解されうる。本明細書中で用いられるポリヌクレオチドには、限定されないが、当業界で利用可能である任意の手段、すなわち通常のクローニング技術やＰＣＲ等を使った組み換えライブラリーまたは細胞ゲノムからの核酸配列のクローニングによって得られる、および合成手段によって得られる、全ての核酸配列が含まれる。
【００８９】
本明細書中で用いる時、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」は互換的に用いられ、そしてペプチド結合により共有結合的に連結されたアミノ酸残基から構成された化合物を指す。タンパク質またはペプチドは少なくとも２個のアミノ酸を含まなければならないが、タンパク質のまたはペプチドの配列を含むことができるアミノ酸の最大数に関しては何も制限が設けられない。ポリペプチドには、ペプチド結合により互いに連結された２個以上のアミノ酸を含む任意ペプチドまたはタンパク質が含まれる。本明細書中で用いる時、この用語は、通常は当業界でペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称される短鎖のものと、通常は当業界でタンパク質と称される長鎖のものの両方を包含し、それらには様々なタイプがある。「ポリペプチド」としては、例えば特に、ポリペプチドの生物学的活性断片、実質的に相同のポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチド変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質、が挙げられる。ポリペプチドは天然ペプチド、組み換えペプチド、合成ペプチドまたはその組み合わせを含む。
【００９０】
用語「子孫」は、本明細書中で用いる時、末裔または子孫を指し、そして哺乳類の子孫を含み、また親細胞から派生した分化または未分化の子孫細胞も包含する。１つの用法として、子孫という用語は、親と遺伝学的に同じである子孫細胞を指す。別の用法としては、子孫という用語は親と遺伝学的にかつ表現型的に同じである子孫細胞を指す。更に別の用法では、子孫という用語は親細胞から分化された子孫細胞を指す。
【００９１】
本明細書で用いられる用語「RNA」はリボ核酸として定義される。
【００９２】
本明細書中で用いられる用語「組み換えDNA」は、異なる源からのDNAの小片を連結することにより産生されたDNAとして定義される。
【００９３】
本明細書中で用いられる用語「組み換えポリペプチド」は、組み換えDNA法を使うことによって産生されたポリペプチドとして定義される。
【００９４】
本明細書中で用いられる「複合化（コンジュゲート）」とは、１つの分子の第二の分子への共有結合を指す。
【００９５】
本明細書中で用いられる「変異体」は、参照の（比較対象の）核酸配列またはペプチド配列それぞれから配列が異なっているが、参照分子の必須の生物学的性質を保持している核酸配列またはペプチド配列である。核酸変異体の配列中の変化は、参照核酸によりコードされるペプチドのアミノ酸配列を変更しなくてもよく、またはアミノ酸置換、付加、欠失、融合および先端切除をもたらしてもよい。ペプチド変異体の配列の変化は、典型的には、参照ペプチドの配列と変異体の配列とが全体的に近接に類似し、そして多くの領域で同一であるように、限定的または保存的である。変異型および参照ペプチドは、任意の組み合わせでの１つ以上の置換、付加、欠失によりアミノ酸配列が異なることができる。核酸またはペプチドの変異体は、天然の変異体、例えば対立遺伝子変異体、または天然に存在することが知られていない変異体であることができる。核酸およびペプチドの非天然変異体は、突然変異誘発技術により、または直接合成により作製することができる。様々な実施形態において、変異体配列は参照配列に対して少なくとも99％、少なくとも98％、少なくとも97％、少なくとも96％、少なくとも95％、少なくとも94％、少なくとも93％、少なくとも92％、少なくとも91％、少なくとも90％、少なくとも89％、少なくとも88％、少なくとも87％、少なくとも86％、少なくとも85％同一である。
【００９６】
本明細書中で用いられる用語「調節する」は、ある物質のレベルまたは活性を変化させる任意の方法を意味することができる。タンパク質に関する調節の非限定例は、発現（転写および／または翻訳を含む）に作用すること、折り畳みに作用すること、分解またはタンパク質代謝回転（ターンオーバー）に作用すること、およびタンパク質の局在化に作用することを含む。「調節因子（レギュレーター）」は、その活性がある物質のレベルまたは活性に作用することを含む分子を指す。調節因子は直接または間接であることができる。調節因子はその基質を活性化または抑制するかあるいは別の形で調節する働きをすることができる。
【００９７】
本明細書中で用いる「走査域（scanning window）」は、任意の隣接配列とは独立的に１つの配列を評価することができる多数の連続した位置の１セグメントを指す。走査域は、一般に、各新しいセグメントを独立的に評価していきながら、評価すべき１つの配列の長さに沿って増加的にシフトされる。増加的なシフトは、１または複数の位置のシフトである。
【００９８】
「ベクター」は、複製開始点を含有する核酸配列を意味することができる。ベクターはプラスミド、バクテリオファージ、細菌人工染色体、または酵母人工染色体であることができる。ベクターはDNAベクターであってもRNAベクターであってもよい。ベクターは自己複製性染色体外ベクターまたは宿主ゲノム中に統合するベクターのいずれであってもよい。
【００９９】
範囲：本開示全体を通して、本発明の様々な態様がある範囲の形式で与えられうる。
範囲形式での記載は、単に利便性と簡潔さのためであり、本発明の範囲に対する不動の限定として解釈すべきでないことは理解されるだろう。従って、ある範囲の記載は、可能な部分的範囲の全てとその範囲に入る個々の数値を具体的に開示していると見なされるべきである。例えば、１〜６のような範囲の記載は、例えば１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６等といった部分範囲に加えて、その範囲に入る個々の数字、例えば１、２、2.7、３、４、５、5.3および６を具体的に開示していると見なされるべきである。これはその範囲の幅に関係なく適用される。
説明
【０１００】
本発明は、抗ヒトC5抗体を使った補体シグナル伝達および補体関連障害の阻害に関する。一実施形態では、本発明は、補体成分C5タンパク質またはC5aもしくはC5bタンパク質の断片を特異的にターゲティングすることにより、補体シグナル伝達カスケードを阻害することに向けられる。一実施形態では、本発明は、望ましくない、未調節の、過剰な補体活性化により媒介される炎症や自己免疫疾患を治療および予防する方法に向けられる。一実施形態では、本発明は、個体を抗C5抗体と接触させることにより、該個体の補体媒介性疾患または補体媒介性障害を治療することに向けられる。
【０１０１】
一実施形態では、本発明は、個体の補体媒介疾患または障害を治療する方法であって、前記個体に抗C5抗体を投与し、それによりC5aまたはC5bタンパク質の生成およびMACの形成を阻害する工程を含む方法に関する。本発明の方法を用いて治療することができる補体媒介性病変の例としては、黄斑変性（MD）、加齢黄斑変性症（AMD）、虚血性再灌流障害、関節炎、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性大腸炎、脳卒中、術後全身性炎症症候群、喘息、アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH）症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎（NMO）、多発性硬化症、遅延移植反応、抗体媒介拒絶反応、非定型的溶血性尿毒症（aHUS）症候群、網膜中心静脈閉塞症（CRVO）、網膜中心動脈閉塞症（CRAO）、表皮水疱症、敗血症、臓器移植、炎症（非限定的に、心肺バイパス術と腎臓透析に関連する炎症を含む）、C3糸球体症、膜性腎症、IgA腎症、糸球体腎炎（非限定的に、抗好中球細胞質抗体（ANCA）媒介性糸球体腎炎、ループス腎炎、およびそれの合併症を含む）、ANCA媒介性脈管炎、志賀毒素誘発性HUS、および抗リン脂質抗体誘発性妊娠喪失、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。幾つかの実施形態では、本発明の組成物および方法は、エクリズマブ（eculizumab）による治療に反応しないPNHを有する被験者を含む対象の治療に有用である。非限定的な例として、一部の対象は、エクリズマブの治療に対して抵抗性にする、C5のアルファ鎖中の変異を持つ可能性がある（“Genetic variants in C5 and poor response to eculizumab.”Nishimura J他、N Engl J Med. 2014年2月13日; 370(7)：632-9を参照のこと）。
【０１０２】
「自己抗原」と「非自己抗原」とを区別する免疫系の能力は、侵入する微生物に対する特異的防御としての免疫系の機能にとって不可欠である。「非自己抗原」とは、対象者自身の成分とは検出可能に異なるまたは異物である、体内に入ったり体内に存在する物質上の抗原であるのに対し、「自己抗原」とは、健全な対象者では自身の成分と検出可能に異ならないまたは異物ではないものである。 本方法の様々な実施形態において、阻害される補体活性化は、微生物抗原、非生物学的異物表面、変化した自己組織、またはそれらの組み合わせからなる群の少なくとも１つによって引き起こされたものである。非生物学的異物表面の一例は、心肺バイパス術や腎臓透析で使用されるような血液チューブである。変化した自己組織の例としては、アポトーシス、壊死および虚血ストレスを受けた組織や細胞、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１０３】
一部の実施形態では、本発明の抗C5抗体は、補体活性化第２経路（AP）、古典的経路（CP）、またはレクチン経路（LP）の活性化の下流効果を阻害する。一般に、CPは抗原−抗体複合体によって開始され、LPは微生物表面上の糖分子へのレクチンの結合によって活性化され、APは低レベルでは構成的に活性であるが、細菌、ウイルスおよび寄生虫細胞では調節タンパク質の欠如のために迅速に増幅されうる。宿主細胞は通常、調節タンパク質によりAP補体活性化から保護されている。しかし、調節タンパク質が欠損または欠如している場合など、状況によっては、APが宿主細胞上で制御不能に活性化され、補体媒介性疾患または障害を引き起こしうる。CPは構成要素CI、C2、C4から構成され、C3活性化ステップにおいてAPに収束する。LPは、マンノース結合レクチン（MBL）およびMBL関連セリンプロテアーゼ（Masp）からなり、CPと構成要素C4とC2を共有する。APは、構成要素C3と、Ｂ因子、Ｄ因子、プロパージン、C5、および液相調節Ｈ因子などの幾つかの因子から成る。補体活性化は、(a)認識、(b)酵素活性化、および(c)細胞死に至る膜攻撃、の３段階から構成される。CP補体活性化の第一相はCIから始まる。CIは３種の異なるタンパク質から構成される：認識サブユニットC1q、およびセリンプロテアーゼサブコンポーネントC1rとCls、これらはカルシウム依存性四量体複合体Clr2 s2に一緒に会合される。CIを生理学的に活性化するためには完全なCI複合体が必要である。完全なCI複合体が抗原と複合体化した免疫グロブリンに結合すると、活性化が起こる。この結合がClsを活性化し、それがC4とC2タンパク質の両者を切断して、C4aとC4b、並びにC2aとC2bを生成する。C4b断片とC2a断片が会合してC3転換酵素C4b2aを形成し、それが次いでC3を開裂させてC3aとC3bを形成する。LPの活性化は、標的表面上の特定の糖へのMBL結合によって開始され、これがMBL結合セリンプロテアーゼ（MASP）の活性化を触発し、それが次いでCPのCls活性に類似した方法でC4とC2を開裂させ、C3転換酵素C4b2aの生成をもたらす。このように、CPとLPは異なるメカニズムにより活性化されるが、それらは同じ構成成分C4とC2を共有し、そして両経路は同じC3転換酵素C4b2aの生成に至る。C4b2aによるC3からC3bとC3aへの開裂は、次の２つの理由で補体経路の中心的事象である。表面に付着したC3bはAPの中心的中間体であるため、それはAPの増幅ループを開始させる。C3aとC3bは両方とも生物学的に重要である。C3aは炎症誘発性であり、C5aと一緒にアナフィラトキシンと呼ばれる。C3bとそれの更なる開裂生成物は、好中球、好酸球、単球およびマクロファージ上に存在する補体受容体に結合し、それによりC3bオプソニン化粒子の貧食作用とクリアランスを促進する。最終的に、C3bはC4b2aと会合してCPとLPのC5転換酵素を形成し、終末補体配列を活性化し、有力な炎症促進性メディエーターであるC5aの生成と、細胞溶解性膜侵襲複合体（MAC）C5-C9の集成をもたらす。
【０１０４】
一実施形態では、本発明の方法を用いて阻害される補体経路の活性は、リポ多糖（LPS）、リポオリゴ糖（LOS）、病原体関連分子パターン（PAMP）および危険関連分子パターン（DAMP）から選択される少なくとも１つの群により誘導される補体経路活性化である。別の実施形態では、本発明の方法を用いて阻害される補体シグナル伝達の活性は、C5aタンパク質の生成である。別の実施形態では、本発明の方法を用いて阻害される補体シグナル伝達の活性は、C5bタンパク質の生成である。別の実施形態では、本発明の方法を用いて阻害される補体シグナル伝達の活性は、MACの形成である。別の実施形態では、本発明の方法を用いて阻害される補体経路の活性はC5依存性である。
【０１０５】
一実施形態では、本発明は、個体において終末補体活性化の開始を阻害する方法であって、抗C5抗体を前記個体に投与し、それにより個体におけるCP、LPまたはAP活性化に由来する終末補体活性化の開始を阻害する工程を含む方法である。これらの実施形態の例は、補体媒介性溶血を患っているPNH患者、並びに補体媒介性aHUS、喘息、虚血／再灌流傷害、関節リウマチおよびANCA媒介性腎疾患を患っている個体である。本発明の様々な実施形態では、本発明の組成物および方法を使用して治療できる疾患や障害としては、補体媒介性溶血、補体媒介性aHUS、C3糸球体症、視神経脊髄炎、重症筋無力症、喘息、虚血／再灌流障害、関節リウマチ、ANCA媒介性腎疾患または障害が挙げられる。
【０１０６】
様々な他の実施形態では、補体シグナル伝達に対して阻害効果を有する潜在的抗C5抗体を同定する方法が提供される。そのような方法の１つは、次の工程を含む：a）プレートをリポ多糖（LPS）でコーティングし；b）プレートを洗浄して未結合LPSを除去し；c）ウシ血清アルブミン（BSA）をリン酸緩衝生理食塩水（PBS）に加え；d）プレートを洗浄して未結合BSAを除去し；e）血清と共にプレインキュベートしておいた、正常ヒト血清と混合された抗C5抗体候補化合物の混合物を添加し；f）プレートを洗浄し；g）HRP接合抗ヒトC3抗体を添加し；h）プレートを洗浄して未結合抗体を除去し；i）HRP基質試薬を添加し；j）硫酸を加えて反応を停止させ；k）450 nmで光学濃度を測定し；l）抗C5抗体候補化合物を含むプレートの光学濃度を、陽性比較対照および陰性比較対照の光学濃度と比較し；ここで陽性比較対照と比較して光学濃度が減少する場合、抗C5抗体が同定される。
【０１０７】
抗C5抗体
幾つかの実施形態では、本発明は、C5に特異的に結合する抗体を含む組成物に関する。一実施形態では、抗C5抗体がポリクローナル抗体である。別の実施形態では、抗C5抗体がモノクローナル抗体である。幾つかの実施形態では、抗C5抗体がキメラ抗体である。さらなる実施形態において、抗C5抗体がヒト化抗体である。幾つかの実施形態では、抗体が抗体断片である。幾つかの実施形態では、C5がヒトC5である。
【０１０８】
幾つかの実施形態では、ヒトC5への抗体または抗体断片の結合は、完全な生物体の補体活性化経路におけるC5aまたはC5bの生成の減少およびMACの形成の減少と関連がある。幾つかの実施形態では、本発明は、ヒトC5に結合することができるタンパク質またはポリペプチドである。幾つかの実施形態では、抗体または抗体断片；タンパク質またはポリペプチドは、ヒトC5の関連部分もしくは画分またはエピトープに結合し；そして抗体もしくはその抗体断片、またはタンパク質もしくはポリペプチドのヒトC5の関連部分への結合は、完全な生物体におけるC5aまたはC5bの生成およびMACの形成の減少に関連がある。
【０１０９】
幾つかの実施形態では、ヒトC5結合抗体またはそのC5結合抗体断片は、タンパク質、ペプチドまたは別の化合物に更に結合（コンジュゲート）される。幾つかの実施形態では、ヒトC5結合抗体またはその抗体断片は、タンパク質、ペプチドまたは他の化合物に結合される。幾つかの実施形態において、ヒトC5結合抗体またはその抗体断片が結合されるタンパク質、ペプチドまたは他の化合物は、ターゲティング成分である（すなわち、ターゲティング成分は、ヒトC5以外の分子に特異的に結合する）。幾つかの実施形態では、ヒトC5結合抗体またはその抗体断片が結合するタンパク質、ペプチドまたは他の化合物は、エフェクター分子（例えば細胞傷害性分子）である。
【０１１０】
一実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群より選択された少なくとも１つのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号３；VH-CDR2：配列番号４；VH-CDR3：配列番号５；VL-CDR1：配列番号８；VL-CDR2：配列番号９；およびVL-CDR3：配列番号10、またはそれの１もしくは複数の変異体。別の実施形態では、抗C5抗体は、以下からなる群のCDRのすべてを含む：VH-CDR1：配列番号３；VH-CDR2：配列番号４；VH-CDR3：配列番号５；VL-CDR1：配列番号８；VL-CDR2：配列番号９；およびVL-CDR3：配列番号10、またはそれの１もしくは複数の変異体。
【０１１１】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含むVH-CDR1または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR1（配列番号８）または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含むVH-CDR1と、VL-CDR1（配列番号８）とを含む。
【０１１２】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含むVH-CDR2または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR2（配列番号９）または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列を含むVH-CDR2と、VL-CDR2（配列番号９）とを含む。
【０１１３】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含むVH-CDR3または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR3（配列番号10）または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含むVH-CDR3と、VL-CDR3（配列番号10）とを含む。
【０１１４】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号４のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号５のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号８のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号９のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３個以下（例えば１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号10のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１１５】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号４のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号５のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号８のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号９のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号10のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１１６】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含むVH-CDR1；配列番号４のアミノ酸配列を含むVH-CDR2；配列番号５のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号８のアミノ酸配列を含むVL-CDR1；配列番号９のアミノ酸配列を含むVL-CDR2；および配列番号10のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１１７】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。他の実施形態では、抗C5抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体はmAb 2G1またはその変異体である。モノクローナル抗C5抗体 mAb 2G1は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。幾つかの実施形態では、モノクローナル抗C5抗体はヒト化されている。幾つかの実施形態では、モノクローナル抗C5抗体はキメラ抗体である。
【０１１８】
一実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群から選択されたCDRの少なくとも１つを含む：VH-CDR1：配列番号13；VH-CDR2：配列番号14；VH-CDR3：配列番号15；VL-CDR1：配列番号18；VL-CDR2：配列番号19；およびVL-CDR3：配列番号20、またはそれの１もしくは複数の変異体。別の実施形態において、抗C5抗体は、以下からなる群の全てのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号13；VH-CDR2：配列番号14；VH-CDR3：配列番号15；VL-CDR1：配列番号18；VL-CDR2：配列番号19；およびVL-CDR3：配列番号20、またはそれの１もしくは複数の変異体。
【０１１９】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号13のアミノ酸配列を含むVH-CDR1または約３個以下（例えば約１、２または３）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR1：配列番号18、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号13のアミノ酸配列を含むVH-CDR1と、VL-CDR1：配列番号18とを含む。
【０１２０】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号14のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR2：配列番号19、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号14のアミノ酸配列を含むVH-CDR2と、VL-CDR2：配列番号19とを含む。
【０１２１】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号15のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３個以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR3：配列番号20、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号15のアミノ酸配列を含むVH-CDR3と、VL-CDR3：配列番号20とを含む。
【０１２２】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号13のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号14のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号15のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号18のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号19のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号20のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含んでなる。
【０１２３】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号13のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号14のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号15のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号18のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号19のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号20のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１２４】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号13のアミノ酸配列を含むVH-CDR1；配列番号14のアミノ酸配列を含むVH-CDR2；配列番号15のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号18のアミノ酸配列を含むVL-CDR1；配列番号19のアミノ酸配列を含むVL-CDR2；および配列番号20のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１２５】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号12のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体は、配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。他の実施形態では、抗C5抗体がmAb 8E1またはその変異体である。モノクローナル抗C5抗体 mAb 8E1は、配列番号12のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。幾つかの態様において、モノクローナル抗C5抗体はヒト化されている。幾つかの実施形態では、モノクローナル抗C5抗体はキメラ抗体である。
【０１２６】
一実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群より選択された少なくとも１つのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号23；VH-CDR2：配列番号24；VH-CDR3：配列番号25；VL-CDR1：配列番号28；およびVL-CDR3：配列番号29、またはそれの１もしくは複数の変異体。別の実施形態では、抗C5抗体は、以下からなる群の全てのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号23；VH-CDR2：配列番号24；VH-CDR3：配列番号25；VL-CDR1：配列番号28；およびVL-CDR3：配列番号29、またはそれの１もしくは複数の変異体。
【０１２７】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号23のアミノ酸配列を含むVH-CDR1または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR1：配列番号28または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号23のアミノ酸配列を含むVH-CDR1と、配列番号28のアミノ酸配列を含むVL-CDR1を含む。
【０１２８】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR2：配列番号29または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2と、配列番号29のアミノ酸配列を含むVL-CDR2とを含む。
【０１２９】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号25のアミノ酸配列を含むVH-CDR3または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号25のアミノ酸配列を含むVH-CDR3を含む。
【０１３０】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号23のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）を含むその変異体；配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号25のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号28のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号29のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１３１】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号23のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号15のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号28のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号29のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１３２】
幾つかの態様において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号23のアミノ酸配列を含むVH-CDR1；配列番号24のアミノ酸配列を含むVH-CDR2；配列番号25のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号28のアミノ酸配列を含むVL-CDR1；および配列番号29のアミノ酸配列を含むVL-CDR2を含む。
【０１３３】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号22のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体は、配列番号27のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体がmAb 4E7またはその変異体である。モノクローナル抗C5抗体 mAb 4E7は、配列番号22のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号27のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はヒト化されている。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はキメラ抗体である。
【０１３４】
一実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群より選択された少なくとも１つのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号32；VH-CDR2：配列番号33；VH-CDR3：配列番号34；VL-CDR1：配列番号37；VL-CDR2：配列番号38；およびVL-CDR3：配列番号39、またはそれの１もしくは複数の変異体。別の実施形態では、抗C5抗体は、以下から成る群の全てのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号32；VH-CDR2：配列番号33；VH-CDR3：配列番号34；VL-CDR1：配列番号37；VL-CDR2：配列番号38；およびVL-CDR3：配列番号39、またはその１もしくは複数の変異体。
【０１３５】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号32のアミノ酸配列を含むVH-CDR1または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を有するその変異体；およびVL-CDR1：配列番号37または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号32のアミノ酸配列を含むVH-CDR1と、VL-CDR1：配列番号37とを含む。
【０１３６】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号33のアミノ酸配列を含むVH-CDR2または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を有するその変異体；およびVL-CDR2：配列番号38または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号33のアミノ酸配列を含むVH-CDR2とVL-CDR2：配列番号38とを含む。
【０１３７】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号34のアミノ酸配列を含むVH-CDR3または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を有するその変異体；およびVL-CDR3：配列番号39または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号34のアミノ酸配列を含むVH-CDR3とVL-CDR3：配列番号39とを含む。
【０１３８】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号32のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号33のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号34のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号37のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号38のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号39のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含んでなる。
【０１３９】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号32のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号33のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号34のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号37のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号38のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号39のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１４０】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号32のアミノ酸配列を含むVH-CDR1；配列番号33のアミノ酸配列を含むVH-CDR2；配列番号34のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号37のアミノ酸配列を含むVL-CDR1；配列番号38のアミノ酸配列を含むVL-CDR2；および配列番号39のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１４１】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体は、配列番号36のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体がmAb 9G6またはその変異体である。モノクローナル抗C5抗体 mAb 9G6は、配列番号31のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号36のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はヒト化されている。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はキメラ抗体である。
【０１４２】
一実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群より選択された少なくとも１つのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号42；VH-CDR2：配列番号43；VH-CDR3：配列番号44；VL-CDR1：配列番号47；VL-CDR2：配列番号48；およびVL-CDR3：配列番号49、またはそれの１もしくは複数の変異体。別の実施形態では、抗C5抗体は、以下から成る群のCDRを全て含む：VH-CDR1：配列番号42；VH-CDR2：配列番号43；VH-CDR3：配列番号44；VL-CDR1：配列番号47；VL-CDR2：配列番号48；およびVL-CDR3：配列番号49、またはその１もしくは複数の変異体。
【０１４３】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR1：配列番号47、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号42のアミノ酸配列を有するVH-CDR1とVL-CDR1：配列番号47とを含む。
【０１４４】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号43のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR2：配列番号48、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号43のアミノ酸配列を含むVH-CDR2とVL-CDR2：配列番号48とを含む。
【０１４５】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR3：配列番号49、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR3とVL-CDR3：配列番号49とを含む。
【０１４６】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号43のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号47のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号48のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号49のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１４７】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号43のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号47のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号48のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号49のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１４８】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号42のアミノ酸配列を含むVH-CDR1；配列番号43のアミノ酸配列を含むVH-CDR2；配列番号44のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号47のアミノ酸配列を含むVL-CDR1；配列番号48のアミノ酸配列を含むVL-CDR2；および配列番号49のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１４９】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号41のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体は、配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体がmAb 11C5またはその変異体である。mAb 11C5と称するモノクローナル抗C5抗体は、配列番号41のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号46のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はヒト化されている。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はキメラ抗体である。
【０１５０】
一実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群より選択された少なくとも１つのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号52；VH-CDR2：配列番号53；VH-CDR3：配列番号54；VL-CDR1：配列番号57；VL-CDR2：配列番号58；およびVL-CDR3：配列番号59、またはそれの１もしくは複数の変異体。別の実施形態では、抗C5抗体は、以下から成る群のCDRを全て含む：VH-CDR1：配列番号52；VH-CDR2：配列番号53；VH-CDR3：配列番号54；VL-CDR1：配列番号57；VL-CDR2：配列番号58；およびVL-CDR3：配列番号59、またはその１もしくは複数の変異体。
【０１５１】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号52のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR1：配列番号57、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号52のアミノ酸配列を含むVH-CDR1と、VL-CDR1：配列番号57とを含む。
【０１５２】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号53のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR2：配列番号58、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号53のアミノ酸配列を含むVH-CDR2と、VL-CDR2：配列番号58とを含む。
【０１５３】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号54のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR3：配列番号59、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号54のアミノ酸配列を含むVH-CDR3と、VL-CDR3：配列番号59とを含む。
【０１５４】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号52のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号53のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号54のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号57のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号58のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号59のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含んでなる。
【０１５５】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号52のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号53のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号54のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号57のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号58のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号59のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１５６】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号52のアミノ酸配列を含むVH-CDR1；配列番号53のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号54のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号57のアミノ酸配列を含むVL-CDR1；配列番号58のアミノ酸配列を含むVL-CDR2；および配列番号59のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１５７】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号51のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体は、配列番号56のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体がmAb 11D9またはその変異体である。mAb 11D9と称するモノクローナル抗C5抗体は、配列番号51のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号56のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はヒト化されている。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はキメラ抗体である。
【０１５８】
一実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群より選択された少なくとも１つのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号64；VH-CDR2：配列番号65；VH-CDR3：配列番号66；VL-CDR1：配列番号74；VL-CDR2：配列番号75；およびVL-CDR3：配列番号76、またはそれの１もしくは複数の変異体。別の実施形態では、抗C5抗体は、以下から成る群のCDRを全て含む：VH-CDR1：配列番号64；VH-CDR2：配列番号65；VH-CDR3：配列番号66；VL-CDR1：配列番号74；VL-CDR2：配列番号75；およびVL-CDR3：配列番号76、またはその１もしくは複数の変異体。
【０１５９】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR1または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR1：配列番号74、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR1と、VL-CDR1：配列番号74とを含む。
【０１６０】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号65のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR2：配列番号75、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号65のアミノ酸配列を含むVH-CDR2と、VL-CDR2：配列番号75とを含む。
【０１６１】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR3：配列番号76、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3と、VL-CDR3：配列番号76とを含む。
【０１６２】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号65のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号75のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含んでなる。
【０１６３】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号65のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号75のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１６４】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号64のアミノ酸配列を含むVH-CDR1；配列番号65のアミノ酸配列を含むVH-CDR2；配列番号66のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR1；配列番号75のアミノ酸配列を含むVL-CDR2；配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１６５】
一実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、以下からなる群より選択された少なくとも１つのCDRを含む：VH-CDR1：配列番号69；VH-CDR2：配列番号70；VH-CDR3：配列番号71；VL-CDR1：配列番号74；VL-CDR2：配列番号75；およびVL-CDR3：配列番号76、またはそれの１もしくは複数の変異体。別の実施形態では、抗C5抗体は、以下から成る群のCDRを全て含む：VH-CDR1：配列番号69；VH-CDR2：配列番号70；VH-CDR3：配列番号71；VL-CDR1：配列番号74；VL-CDR2：配列番号75；およびVL-CDR3：配列番号76、またはその１もしくは複数の変異体。
【０１６６】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号69のアミノ酸配列を含むVH-CDR1または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR1：配列番号74、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号69のアミノ酸配列を含むVH-CDR1と、VL-CDR1：配列番号74とを含む。
【０１６７】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号70のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR2：配列番号75、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号70のアミノ酸配列を含むVH-CDR2と、VL-CDR2：配列番号75とを含む。
【０１６８】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号71のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；およびVL-CDR3：配列番号76、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含む。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号71のアミノ酸配列を含むVH-CDR3と、VL-CDR3：配列番号76とを含む。
【０１６９】
幾つかの実施形態において、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号69のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号70のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号71のアミノ酸配列を含むVH-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号75のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；および配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体を含んでなる。
【０１７０】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号69のアミノ酸配列を含むVH-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号70のアミノ酸配列を含むVH-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号71のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR1、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号75のアミノ酸配列を含むVL-CDR2、または約３以下（例えば約１、２または３のいずれか）のアミノ酸置換を含むその変異体；配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１７１】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号69のアミノ酸配列を含むVH-CDR1；配列番号70のアミノ酸配列を含むVH-CDR2；配列番号71のアミノ酸配列を含むVH-CDR3；配列番号74のアミノ酸配列を含むVL-CDR1；配列番号75のアミノ酸配列を含むVL-CDR2；配列番号76のアミノ酸配列を含むVL-CDR3を含む。
【０１７２】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号68のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体は、配列番号73のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体がmAb 2G1またはその変異体である。モノクローナル抗C5抗体 mAb 2G1は、配列番号68のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号73のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はヒト化されている。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はキメラ抗体である。幾つかの実施形態では、抗C5抗体またはその抗原結合断片は、配列番号63のアミノ酸配列を含む重鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体は、配列番号73のアミノ酸配列を含む軽鎖またはその変異体を含む。別の実施形態では、抗C5抗体がmAb 2G1またはその変異体である。モノクローナル抗C5抗体 mAb 2G1は、配列番号63のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号73のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はヒト化されている。幾つかの実施形態では、該モノクローナル抗C5抗体はキメラ抗体である。
【０１７３】
幾つかの実施形態では、抗体はキメラ抗体である。幾つかの実施形態では、抗ヒトC5抗体は、上記明細書に記載の可変領域CDR配列と組み合わせてヒト軽鎖およびヒト重鎖の定常領域を含んでよい。当業者は、着目の特定抗体の関連ドメインを交換する既知技術を用いてキメラ抗体を調製し取得することができるだろう。このような抗体は、本願明細書に記載の１つ以上のCDR配列を組み込んだ異種抗体ドメインを移植することにより容易に調製される。既知組み換え技術を使用して、ヒト重鎖と軽鎖の定常領域の核酸配列によりコードされる重鎖と軽鎖の定常領域；および本開示に記載のCDR配列に相当する核酸配列によりコードされるCDRを含む重鎖と軽鎖の可変領域を含む組み換え抗体を取得し調製することが可能である。当業者は、本開示に記載の１または複数のCDR配列を含む抗ヒトC5抗体を調製することができ、ここで軽鎖のみの部分または重鎖のみの部分が、別の種、例えばヒトに属する抗体由来の領域で置換される。配列番号３〜５、８〜10、13〜15、18〜20、23〜25、28〜29、32〜34、37〜39、42〜44、47〜49、52〜54および57〜59から選択された１もしくは複数のCDR配列または１もしくは複数のその変異体を有する可変領域を含むヒト抗ヒトC5抗体は、前記CDR領域の外側のネズミまたは非ネズミ抗体構造要素と組み合わせて、当業界で既知の常法により調製することができる。幾つかの実施形態において、抗体または抗体断片（フラグメント）は、当該分野で公知の技術を使用して更にヒト化される。
【０１７４】
様々な実施形態において、本明細書に記載の可変領域のいずれかを有する本明細書に記載の本発明の抗体はいずれも、ヒトIgG4定常重鎖を含むだろう。配列番号104は、ヒトIgG4定常重鎖の例示的アミノ酸配列である。幾つかの実施形態では、本発明の抗体は、S228P変異を有するヒトIgG4定常重鎖を含む。配列番号60は、S228P変異を有するヒトIgG4定常重鎖の例示的アミノ酸配列である。
【０１７５】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体は、配列番号３〜５、８〜10、13〜15、18〜20、23〜25、28〜29、32〜34、37〜39、42〜44、47〜49、52〜54および57〜59に列挙された本明細書に記載のCDR配列に対して、少なくとも約85％（例えば少なくとも約85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、または100％のいずれか）のアミノ酸同一性を有する抗体を含む。
【０１７６】
一実施形態では、本開示は、上記CDR配列に対して少なくとも約85％（例えば少なくとも約85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、または100％）の同一性を有するCDR配列を有する抗C5抗体を包含する。一実施形態では、ヒトC5に対する抗体は、重鎖可変（vH）領域と軽鎖可変（vL）領域を有し、ここでvH領域は配列番号２、12、22、31、41、51、63および68から選択された配列に対して約90％を超える（例えば約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、または100％のいずれかを超える）同一性のアミノ酸配列を有し、そしてvL領域は配列番号７、17、27、36、46、56および73から選択された配列に対して約90％を超える（例えば約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、または100％のいずれかを超える）同一性のアミノ酸配列を有する。
【０１７７】
幾つかの実施形態では、抗体または抗体断片は修飾されている。幾つかの実施形態では、修飾として、抗体またはその抗原結合断片と別のタンパク質またはタンパク質断片の一部との融合が含まれる。幾つかの実施形態では、本発明の抗体またはその抗体断片は、生体内（in vivo）でのそれの血中半減期を延長するために修飾される。例えば、抗体の断片をFcRn分子と融合させることができ、これはin vivoで抗体を安定化するための新生児Fc受容体としても知られている（Nature Reviews Immunology 7：715-725）。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、エフェクター分子および／または別のターゲティング成分（例えば異なる分子、異なる抗原または異なるエピトープを認識する抗体または抗体断片）に結合（例えば融合）されている。
【０１７８】
当業者は、配列番号３〜５、８〜10、13〜15、18〜20、23〜25、28〜29、32〜34、37〜39、42〜44、47〜49、52〜54および57〜59から選択された少なくとも１つの特定CDR配列、またはそれの１もしくは複数の変異体を含む、ヒトC5結合性一本鎖可変フラグメント（scFv）を調製することができるだろう。scFvは、配列番号３〜５で示される重鎖可変領域配列、またはその（１もしくは複数の）変異体と、配列番号８〜10で示される軽鎖可変領域配列、またはその（１もしくは複数の）変異体とを含み得る。scFvは、配列番号13〜15で示される重鎖可変領域配列またはその（１もしくは複数の）変異体と、配列番号18〜20で示される軽鎖可変領域またはその（１もしくは複数の）変異体とを含み得る。scFvは配列番号23〜25に示される重鎖可変領域配列またはその（１もしくは複数の）変異体と、配列番号28〜29に示される軽鎖可変領域配列またはその（１もしくは複数の）変異体とを含みうる。
【０１７９】
scFvは、配列番号32〜34で示される重鎖可変領域配列またはその（１もしくは複数の）変異体と、配列番号37〜39で示される軽鎖可変領域またはその（１もしくは複数の）変異体とを含み得る。scFvは、配列番号42〜44で示される重鎖可変領域配列またはその（１もしくは複数の）変異体と、配列番号47〜49で示される軽鎖可変領域またはその（１もしくは複数の）変異体を含み得る。scFvは、配列番号52〜54で示される重鎖可変領域配列またはその（１もしくは複数の）変異体と、配列番号57〜59で示される軽鎖可変領域またはその（１もしくは複数の）変異体とを含み得る。本開示に記載のCDR配列に対して少なくとも約85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％のアミノ酸配列同一性を有するscFvの中に組み込まれたCDR配列は、本開示の範囲内に含まれる。
【０１８０】
幾つかの実施形態では、単離された抗体はヒトC5に結合し、該抗体はヒトC5のエピトープに結合する。幾つかの実施形態では、本発明のヒトC5抗体は、ヒトC5の特定のエピトープに結合するものである。幾つかの実施形態では、エピトープがC5のα鎖中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープがC5のβ鎖中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。
【０１８１】
幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のα鎖のMG7ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のα鎖のCUBドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のα鎖のC5dドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のα鎖のMG8ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のα鎖のC345Cドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。
【０１８２】
幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のβ鎖のMG1ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のβ鎖のMG2ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のβ鎖のMG3ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のβ鎖のMG4ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のβ鎖のMG5ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。幾つかの実施形態では、エピトープが、C5のβ鎖のMG6ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を含む。
【０１８３】
幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のα鎖のMG7ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のα鎖のCUBドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のα鎖のC5dドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のα鎖のMG8ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のα鎖のC345Cドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。
【０１８４】
幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のβ鎖のMG1ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のβ鎖のMG2ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のβ鎖のMG3ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のβ鎖のMG4ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のβ鎖のMG5ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合部分は、C5のβ鎖のMG6ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。
【０１８５】
一実施形態において、配列番号84のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）がヒトC5抗体のエピトープ内にある。一実施形態では、配列番号85のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３、または４つ）がヒトC5抗体のエピトープ内にある。一実施形態において、配列番号86のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）がヒトC5抗体のエピトープ内にある。一実施形態では、配列番号87のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）がヒトC5抗体のエピトープ内にある。一実施形態では、配列番号88のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）がヒトC5抗体のエピトープ内にある。一実施形態では、配列番号89のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）がヒトC5抗体のエピトープ内にある。
【０１８６】
一実施形態では、本発明の抗体またはその結合断片は、配列番号84のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）に結合する。本発明の抗体、またはその結合断片は、配列番号85のアミノ酸の少なくとも１つ（少なくとも１、２、３または４つ）に結合する。一実施形態において、本発明の抗体またはその結合断片は、配列番号86のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）に結合する。一実施形態において、本発明の抗体またはその結合断片は、配列番号87のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）に結合する。一実施形態では、本発明の抗体またはその結合断片は、配列番号88のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）に結合する。一実施形態では、本発明の抗体またはその結合断片は、配列番号89のアミノ酸の少なくとも１つ（例えば少なくとも１、２、３または４つ）に結合する。
【０１８７】
スクリーニングアッセイ
本発明は、抗C5抗体候補が補体活性を阻害できるかどうかを決定することを含む、様々なスクリーニングアッセイに応用される。
【０１８８】
幾つかの実施形態では、抗C5抗体候補の存在下での補体活性のレベルが、陽性比較対照において検出された補体活性と比較される。陽性比較対照（ポジティブコントロール）は、試験化合物を加えない時の補体活性化を成す。幾つかの実施形態では、抗C5抗体候補の存在下での補体活性が陽性比較対照において検出された補体活性の約70％未満である場合に、抗C5抗体候補が補体の阻害剤として同定される。これは、試験化合物の存在下での補体活性の約30％超の阻害に相当する。別の実施形態では、抗C5抗体候補の存在下での補体活性が陽性比較対照において検出された補体活性の約80％未満である場合に、抗C5抗体候補が補体の阻害剤として同定される。これは、試験化合物の存在下での補体活性の約20％超の阻害に相当する。更に他の実施形態では、抗C5抗体候補の存在下での補体活性が陽性比較対照において検出された補体活性の約90％未満である場合に、抗C5抗体候補が補体の阻害剤として同定される。これは、試験化合物の存在下での補体活性の約10％超の阻害に相当する。幾つかの実施形態では、抗C5抗体候補による補体阻害のレベルが、陰性比較対照（ネガティブコントロール）において検出された阻害のレベルと比較される。
【０１８９】
競合および非競合イムノアッセイ法、抗原捕捉アッセイ、二抗体サンドイッチアッセイ、および三抗体サンドイッチアッセイをはじめとする様々なイムノアッセイ法が、本発明の有用な方法である（Self他、1996、Curr. Opin. Biotechnol. 7：60-65）。本発明は、アッセイが補体の阻害を検出できることを前提として、既知のまたは今まで未知のアッセイのいずれか１つのタイプに限定されると解釈すべきではない。
【０１９０】
酵素結合免疫吸着検査法（ELISA）は本発明の方法において有用である。限定されるものではないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはウレアーゼといった酵素を、例えば、本発明の方法で使用するために抗C3抗体または二次抗体に結合させることができる。西洋ワサビペルオキシダーゼ検出系は、例えば、過酸化水素の存在下で可溶性生成物（450 nmで検出可能である）を生成する発色性基質テトラメチルベンジジン（TMB）と共に使用することができる。他の便利な酵素結合検査法としては、例えばアルカリホスファターゼ検出系が挙げられ、これは、発色基質ｐ−ニトロフェニルホスフェートと共に使用し、405 nmで容易に検出可能な可溶性生成物を生成させることができる。同様に、β−ガラクトシダーゼ検出系を発色性基質о−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ONPG）と共に使用し、410 nmで検出可能な可溶性生成物を生成させることができる。あるいは、ウレアーゼ検出系を尿素−ブロモクレゾールパープル（Sigma Immunochemicals、St. Louis、MO）のような基質と共に使用することができる。有用な酵素結合一次抗体および二次抗体は、様々な商業的供給源から入手することができる。
【０１９１】
化学発光検出法も、APの阻害を検出するのに有用である。化学発光二次抗体は、様々な商業的供給源から入手することができる。
【０１９２】
蛍光検出法も、APの阻害を検出するのに有用である。有用な蛍光色素としては、限定されないが、DAPI、フルオレセイン、Hoechst 33258、Ｒ−フィコシアニン、Ｂ−フィコエリトリン、Ｒ−フィコエリトリン、ローダミン、テキサスレッド、リサミングリーン、フルオレセインまたはローダミン−標識抗体が挙げられる。
【０１９３】
ラジオイムノアッセイ（放射免疫測定法；RIA）も本発明の方法に有用である。そのようなアッセイは当技術分野で周知であり、例えばBrophy他（1990、Biochem. Biophys. Res. Comm. 167：898-903）およびGuechot他（1996、Clin. Chem. 42：558-563）に記載されている。ラジオイムノアッセイは、例えばヨウ素-125で標識された一次または二次抗体を用いて行われる（Harlow他、前掲、1999）。
【０１９４】
検出可能抗体から発せられた信号は、例えば、発色性基質からの色を検出するための分光光度計；放射線を検出するための放射線計測器、例えばヨウ素-125を検出するためのガンマカウンターなど；または、特定の波長の光の存在下で蛍光を検出するための蛍光計、を使って分析される。酵素結合アッセイが使用される場合、分光光度計を使用して定量分析が実行される。本発明のアッセイは手動で実施することができるが、必要に応じて自動化することができ、市販されている多数のシステムにおいて、多数のサンプルから発せられる信号を同時に検出できることは理解される。
【０１９５】
本発明の方法はまた、必要であれば自動化することができるキャピラリー電気泳動ベースのイムノアッセイ（CEIA）の使用も包含する。イムノアッセイは、例えば、Schmalzing 他（1997、Electrophoresis 18:2184-2193）およびBao（1997、J. Chromatogr. B. Biomed. Sci. 699：463-480）に記載のようにレーザー誘起蛍光と共に使用することもできる。フローインジェクション・リポソームイムノアッセイおよびリポソームイムノセンサーなどのリポソームイムノアッセイも、本発明の方法に従って使用することができる（Rongen他、1997、J. Immunol. Methods 204：105-133）。
【０１９６】
本発明の方法において補体阻害のレベルを決定するために、定量的ウエスタンブロット法を使用することもでき。ウエスタンブロットは、走査型デンシトメトリー法などの周知の方法を使用して定量される（Parra他、1998、J. Vase. Surg. 28：669-675）。
【０１９７】
投与方法
本発明の方法は、治療有効量の少なくとも１つの抗C5抗体またはその結合断片（例えば本明細書に記載の抗体またはその断片のいずれか）を補体媒介性疾患または障害を有すると特定された個体に投与することを含む。一実施形態では、個体は補体系をもつ哺乳動物である。一実施形態では、個体はヒトである。様々な実施形態では、少なくとも１つの抗C5抗体またはその結合断片は、局所的、局部的または全身的に投与される。
【０１９８】
様々な実施形態において、疾患または障害は、少なくとも、黄斑変性（MD）、加齢性黄斑変性症（AMD）、虚血再灌流傷害、関節炎、関節リウマチ、喘息、アレルギー性喘息、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性結腸炎、発作、術後全身性炎症症候群、喘息、アレルギー性喘息、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH)症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎（NMO）、多発性硬化症、遅延移植反応、抗体媒介性拒絶反応、非定型的溶血性尿毒症性（aHUS）症候群、網膜中心静脈閉塞症（CRVO）、網膜中心動脈閉塞症（CRAO）、表皮水疱症、敗血症、臓器移植、炎症（非限定的に、心肺バイパス手術と腎臓透析に関連した炎症を含む）、C3糸球体症、膜性腎症、IgA腎症、糸球体腎炎（非限定的に、抗好中球細胞質抗体（ANCA)媒介性糸球体腎炎、ループス腎炎、およびそれの合併症を含む）、ANCA媒介性脈管炎、志賀毒素誘発性HUS、および抗リン脂質抗体誘発性妊娠喪失、、またはそれらの組み合わせから選択される。幾つかの実施形態では、AP媒介性疾患はC3糸球体症である。幾つかの実施形態では、AP媒介性疾患は、加齢黄斑変性症のような黄斑変性である。一実施形態では、抗C5抗体の投与は、C5aまたはC5bタンパク質の生成を阻害する。幾つかの実施形態では、本発明の組成物と方法は、エクリズマブ（eculizmab）による治療に反応しないPNHを有する患者などの対象の治療に有用である。非限定的な例として、一部の対象は、C5のアルファ鎖に、エクリズマブの治療に対する耐性を付与しうる変異を持つ可能性がある（C5の遺伝的変異体およびエクリズマブに対する反応不応答性については、Nishimura J他、N Engl J Med. 2014 Feb 13; 370(7): 632-9を参照のこと）。
【０１９９】
本発明の方法は、少なくとも１つの抗C5抗体またはその結合断片の投与を含むことができるが、本発明は、本明細書に記載の抗C5抗体に限定されると決して解釈すべきではなく、むしろ補体活性化を減少または軽減させる既知と未知の両方の任意の抗C5抗体を包含すると解釈すべきである。
【０２００】
本発明の方法は、少なくとも１つの抗C5抗体またはその結合断片の治療有効量を個体に投与することを含み、本発明の組成物は、単独でまたは少なくとも１つの別の治療薬と組み合わせて、少なくとも１つの抗C5抗体またはその結合断片を含む。本発明は、例えば抗炎症療法などの他の治療法と併用することができる。本発明の方法と併用することができる抗炎症療法の例としては、例えば、ステロイド薬を使用する療法、および非ステロイド薬を使用する療法が挙げられる。
【０２０１】
本発明の方法は、少なくとも１つの抗C5抗体またはその結合断片の治療有効量を対象に投与することを含む。幾つかの実施形態では、本発明は、対象においてC5aまたはC5bまたはMACの形成の低減が達成されるように、本発明の抗体の治療有効量またはその抗体断片の治療有効量を投与することによる、補体シグナル伝達の無調節を伴うC5関連疾患の治療方法を包含する。幾つかの実施形態では、本発明は、抗体または抗体断片の治療有効量を投与することによる、補体シグナル伝達の無調節を伴うC5関連疾患の治療方法を包含する。幾つかの実施形態では、本発明は、対象において補体活性化経路の活性化が低減されるように、有効量の抗体、抗体断片、ポリペプチド、ペプチド、複合体ペプチドを対象に投与することによる、補体シグナル伝達の無調節を伴うC5関連疾患の治療方法を包含する。幾つかの実施形態では、治療方法は、全身的有効量の抗体または抗体断片を対象に投与することを含み、それにより対象においてC5aまたはC5bまたはMAC形成の全身的低減がもたらされる。
【０２０２】
本発明の実施に有用な医薬組成物は、少なくとも約1 ng/kg、少なくとも約5 ng/kg、少なくとも約10 ng/kg、少なくとも約25 ng/kg、少なくとも約50 ng/kg、少なくとも約100 ng/kg、少なくとも約500 ng/kg、少なくとも約1μg/kg、少なくとも約5μg/kg、少なくとも約10μg/kg、少なくとも約25μg/kg、少なくとも約50μg/kg、少なくとも約100μg/kg、少なくとも約500μg/kg、少なくとも約1 mg/kg、少なくとも約5 mg/kg、少なくとも約10 mg/kg、少なくとも約25 mg/kg、少なくとも約50 mg/kg、少なくとも約100 mg/kg、少なくとも約200 mg/kg、少なくとも約300 mg/kg、少なくとも約400 mg/kg、および少なくとも約500 mg/kg対象の体重の用量を送達させるために投与することができる。一実施形態では、本発明は、少なくとも約1 pM、少なくとも約10 pM、少なくとも約100 pM、少なくとも約1 nM、少なくとも約10 nM、少なくとも約100 nM、少なくとも約1μM、少なくとも約2μM、少なくとも約3μM、少なくとも約4μM、少なくとも約5μM、少なくとも約6μM、少なくとも約7μM、少なくとも約8μM、少なくとも約9μM、少なくとも約10μMの本発明の抗C5抗体の濃度をもたらす用量を個体に投与する。別の実施形態では、本発明は、個体の血漿中少なくとも約1 pM、少なくとも約10 pM、少なくとも約100 pM、少なくとも約1 nM、少なとも約10 nM、少なくとも約100 nM、少なくとも約1μM、少なくとも約2μM、少なくとも約3μM、少なくとも約4μM、少なくとも約5μM、少なくとも約6μM、少なくとも約7μM、少なくとも約8μM、少なくとも約9μMおよび少なくとも約10μMの間の本発明の抗C5抗体の濃度をもたらす用量の投与を包含する。
【０２０３】
幾つかの実施形態では、本発明の実施に有用な医薬組成物は、対象の体重kgあたり、約1 ng/kg未満、約5 ng/kg未満、約10 ng/kg未満、約25 ng/kg未満、約50 ng/kg未満、約100 ng/kg未満、約500 ng/kg未満、約1μg/kg未満、約5μg/kg未満、約10μg/kg未満、約25μg/kg未満、約50μg/kg未満、約100μg/kg未満、約500μg/kg未満、約1 mg/kg未満、約5 mg/kg未満、約10 mg/kg未満、約25 mg/kg未満、約50 mg/kg未満、約100 mg/kg未満、約200mg/kg未満、約300 mg/kg未満、約400 mg/kg未満、および約500 mg/kg未満の用量を送達させるために投与することができる。一実施形態では、本発明は、約1 pM未満、約10 pM未満、約100 pM未満、約1 nM未満、約10 nM未満、約100 nM未満、約1 μM未満、約2μM未満、約3μM未満、約4μM未満、約5μM未満、約6μM未満、約7μM未満、約8μM未満、約9μM未満、約10μM未満の本発明の抗C5抗体の濃度をもたらす用量を患者に投与する。別の実施形態では、本発明は、本発明の抗C5抗体の濃度が個体の血漿中約1 pM未満、約10 pM未満、約100 pM未満、約1 nM未満、約10 nM未満、約100 nM未満、約1μM未満、約2μM未満、約3μM未満、約4μM未満、約5μM未満、約6μM未満、約7μM未満、約8μM未満、約9μM未満、約10μM未満の本発明の抗C5抗体の濃度をもたらす用量の投与を包含する。本明細書に開示されたいずれかの用量の間の用量範囲も考えられる。
【０２０４】
典型的には、本発明の方法で対象、ある実施形態ではヒト、に投与できる用量は、その対象の体重１キログラムあたり0.5μgから約50 mgの量に及ぶ。投与される正確な投与量は、限定されるものではないが、対象のタイプおよび治療される病状のタイプ、対象の年齢、および投与経路をはじめとする様々な要因に応じて変動する。幾つかの実施形態では、化合物の投与量は、対象の体重１キログラムあたり約１μgから約10 mgまで異なるだろう。他の実施形態では、投与量は、対象の体重１キログラムあたり約3μgから約1 mgまで異なるだろう。
【０２０５】
抗体は、１日に数回の頻度で対象に投与することができ、あるいは１日１回、１日２回、１日３回、週１回、週２回、週３回、２週毎に１回、２週毎に２回、２週毎に３回、１か月に１回、１か月に２回、１か月に３回、またはそれより低頻度、例えば数か月に１回もしくは１年に１回もしくは数回、またはそれより低頻度で投与してもよい。投与の頻度は、当業者に容易に明らかであり、限定されないが、治療される疾患のタイプおよび重症度、対象のタイプおよび年齢などといった様々な要因に依存する。医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で既知のまたは今後開発される任意の方法によって調製することができる。一般に、そのような調製方法は、有効成分を担体または１つ以上の他の補助成分と会合させ、その後、必要または望ましい場合、製品を所望の単回投与または複数回投与単位へと成形または包装するステップを含む。
【０２０６】
本明細書で提供される医薬組成物の説明は、主にヒトへの倫理的投与に適した医薬組成物に向けられるが、そのような組成物は一般にあらゆる種類の対象への投与に適していることを当業者は理解するだろう。組成物を様々な対象への投与に適したものにするためのヒトへの投与に適した医薬組成物の改変は十分理解されており、通常の獣医薬理学者は、もしあったとしても単に通常の実験だけによってそのような改変を設計・実行することが可能である。本発明の医薬組成物の投与が企図される個体としては、ヒトおよび他の霊長類、商業的に関連する哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコおよびイヌのような哺乳動物が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０７】
本発明の方法において有用な医薬組成物は、眼、経口、直腸、膣内、非経口、局所、肺、鼻腔内、口腔、眼内、硝子体内、筋肉内、皮内および静脈内の投与経路に適した製剤において調製、包装、または販売することができる。他の考えられる製剤には、創製ナノ粒子、リポソーム製剤、活性成分を含む再封入赤血球（ゴースト）、および免疫学系製剤が含まれる。
【０２０８】
本発明の医薬組成物は、１単位用量として、または複数の単位用量として、大量に調製、包装、または販売され得る。単位用量とは、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別量である。活性成分の量は、一般に、個体に投与される活性成分の投与量、またはそのような投与量の便利な分数、例えばそのような投与量の２分の１または３分の1に等しい。
【０２０９】
本発明の医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容される担体および任意の追加成分の相対量は、治療する個体の素性、サイズ、および状態に応じて、更に組成物が投与される予定の経路に応じて異なるだろう。例として、組成物は、0.1％から100％（w/w）の活性成分を含んでよい。様々な実施形態では、組成物は、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約６％、少なくとも約７％、少なくとも約８％、少なくとも約９％、少なくとも約10％、少なくとも約11％、少なくとも約12％、少なくとも約13％、少なくとも約14％、少なくとも約15％、少なくとも約16％、少なくとも約17％、少なくとも約18％、少なくとも約19％、少なくとも約20％、少なくとも約21％、少なくとも約22％、少なくとも約23％、少なくとも約24％ 、少なくとも約25％、少なくとも約26％、少なくとも約27％、少なくとも約28％、少なくとも約29％、少なくとも約30％、少なくとも約31％、少なくとも約32％、少なくとも約33％、少なくとも約34％、少なくとも約35％、少なくとも約36％、少なくとも約37％、少なくとも約38％、少なくとも約39％、少なくとも約40％、少なくとも約41％、少なくとも約42％、少なくとも約43％、少なくとも約44％、少なくとも約45％、少なくとも約46％、少なくとも約47％、少なくとも約48％、少なくとも約49％、少なくとも約50％、少なくとも約51％、少なくとも約52％、少なくとも約53％、少なくとも約54％、少なくとも約55％、少なくとも約56％、少なくとも約57％、少なくとも約58％、少なくとも約59％、少なくとも約60％、少なくとも約61％、少なくとも約62％、少なくとも約63％、少なくとも約64％ 、少なくとも約65％、少なくとも約66％、少なくとも約67％、少なくとも約68％、少なくとも約69％、少なくとも約70％、少なくとも約71％、少なくとも約72％、少なくとも約73％、少なくとも約74％、少なくとも約75％、少なくとも約76％、少なくとも約77％、少なくとも約78％、少なくとも約79％、少なくとも約80％、少なくとも約81％、少なくとも約82％、少なくとも約83％、少なくとも約84％、少なくとも約85％、少なくとも約86％、少なくとも約87％、少なくとも約88％、少なくとも約89％、少なくとも約90％、少なくとも約91％、少なくとも約92％、少なくとも約93％、少なくとも約94％、少なくとも約95％、少なくとも約96％、少なくとも約97％、少なくとも約98％、少なくとも約99％、または少なくとも約100％（w/w）の活性成分を含んでよい。
【０２１０】
活性成分に加えて、本発明の医薬組成物は１つ以上の追加の医薬活性剤を更に含んでもよい。
【０２１１】
本発明の医薬組成物の徐放性製剤または持続放出製剤は、従来の技術を使用して作製することができる。
【０２１２】
医薬組成物の非経口投与には、個体の組織の物理的破壊を特徴とする任意の投与経路と組織の破壊を経由する医薬組成物の投与を特徴とする任意の投与経路が含まれる。非経口投与は局所、局部または全身であることができる。非経口投与としては、組成物の注入による、外科切開を介した組成物の適用による、組織透過性の非外科的創傷による組成物の適用による、医薬組成物の投与が含まれるが、これらに限定されない。特に、非経口投与は静脈内、眼内、硝子体内、皮下、腹腔内、筋肉内、皮内、胸骨内注射および腫瘍内を含むと考えられるが、これらに限定されない。
【０２１３】
非経口投与に適した医薬組成物の製剤は、滅菌水または滅菌等張生理食塩水などの薬学的に許容される担体と組み合わせた活性成分を含有する。そのような製剤は、ボーラス投与または連続投与に適した形態で調製、包装、または販売することができる。注射用製剤は、アンプル中または防腐剤を含む複数回投与容器中などの単位剤形で調製、包装、または販売することができる。非経口投与用製剤としては、限定されないが、懸濁液剤、溶剤、油性または水性賦形剤中の乳剤、ペースト、および移植可能な徐放性または生分解性製剤が挙げられる。そのような製剤は、懸濁化剤、安定剤または分散剤を含むがこれらに限定されない１つ以上の追加の成分を更に含んでもよい。非経口投与用製剤の一実施形態では、再構成された組成物の非経口投与の前に、適切な賦形剤（例えば発熱物質を含まない滅菌水）で再構成するために、活性成分が乾燥（すなわち、粉末または顆粒）形態で提供される。
【０２１４】
医薬組成物は、無菌の注射可能な水性または油性の懸濁液剤または液剤の形で調製、包装または販売することができる。この懸濁液剤または液剤は、既知の技術に従って製剤化することができ、活性成分に加えて、分散剤、湿潤剤または懸濁剤といった追加の成分を含むことができる。そのような滅菌注射製剤は、非毒性の非経口的に受け入れられる希釈剤または溶剤、例えば水または１，３−ブタンジオールを使用して調製することができる。他の許容される希釈剤および溶剤には、限定されないが、リンガー液、等張性塩化ナトリウム溶液、および合成モノまたはジグリセリドなどの固定油が含まれる。有用な他の非経口投与可能な製剤として、微結晶形態、リポソーム製剤または生分解性ポリマー系の一成分として活性成分を含有するものが挙げられる。徐放または移植用組成物は、乳剤、イオン交換樹脂、難溶性ポリマー、または難溶性塩などの薬学的に許容されるポリマーまたは疎水性材料を含んでもよい。
【０２１５】
本発明の医薬組成物は、口腔を介した肺投与に適した製剤において調製、包装または販売することができる。そのような製剤は、活性成分を含み、かつ約0.5〜約７ナノメートル（nm）、いくつかの実施形態では約１〜約６ナノメートルの範囲の直径を有する乾燥粒子を含む。そのような組成物は、噴射剤の流れを指し向けて粉末を分散させることができる乾燥粉末リザーバーを含む装置を使用する投与のための、または自己噴射性溶剤／粉末を分散させた容器、例えば密封容器内に有効成分が低沸点噴射剤中に溶解または懸濁されている装置を使用する投与のための、乾燥粉末の形である。幾つかの実施形態において、そのような粉末は、重量で少なくとも98％の粒子が0.5 nm超の直径を有し、数で少なくとも95％の粒子が7 nm未満の直径を有する粒子を含む。幾つかの実施形態では、重量で少なくとも95％の粒子が1 nm超の直径を有し、数で少なくとも90％の粒子が6 nm未満の直径を有する。幾つかの実施形態では、乾燥粉末組成物は、砂糖などの固体微粉末希釈剤を含み、単位用量形態で便利に提供される。
【０２１６】
低沸点噴射剤は一般に、大気圧で沸点が65°F（18.3℃）未満の液体噴射剤を含む。一般に、噴射剤は組成物の50〜99.9％（w/w）を占め、活性成分は組成物の0.1〜20％（w/w）を占める。噴射剤は、液体非イオン性もしくは固体陰イオン性界面活性剤または固体希釈剤などの追加成分を更に含んでもよい（幾つかの実施形態では、活性成分を含む粒子と同じオーダーの粒径を有する）。
【０２１７】
肺送達用に処方された本発明の医薬組成物は、有効成分を溶液または懸濁液の液滴の形で提供することもできる。そのような製剤は、活性成分を含む、随意に無菌である水性または希アルコール性の液剤または懸濁液剤として調製、包装または販売することができ、任意の噴霧または散布装置を使用して便利に投与することができる。そのような製剤は１つ以上の追加の成分、例えば限定されないが、サッカリンナトリウムなどの香味剤、揮発性油、緩衝剤、界面活性剤、またはメチルヒドロキシ安息香酸エステルなどの防腐剤を含んでよい。いくつかの実施形態では、この投与経路によって提供される液滴は、約0.1μm〜約200 nmの範囲の平均直径を有する。
【０２１８】
該製剤は本発明の医薬組成物の鼻腔内送達にも有用である。
【０２１９】
鼻腔内投与に適した別の製剤は、活性成分を含み、かつ約0.2〜500マイクロメートル（μm）の平均粒径を有する粗粉末である。そのような製剤は、嗅ぎ薬が摂取される方法で、すなわち鼻孔の近くに保持された粉末の容器から、鼻腔を通した急速吸引によって投与される。
【０２２０】
経鼻投与に適した製剤は、例えば、わずか約0.1％(w/w)ほどの少量から100％(w/w）ほど多量まで活性成分を含むことができ、そして１つ以上の追加の成分を更に含んでよい。
【０２２１】
本発明の医薬組成物は、口腔投与に適した製剤において調製、包装または販売することができる。そのような製剤は、例えば、従来の方法を使用して製造された錠剤またはロゼンジ錠の形であることができ、例えば、0.1〜20％(w/w)の活性成分を含み、残りは経口溶解性または分解性の組成物、および場合により１つ以上の追加の成分を含むことができる。あるいは、口腔投与に適した製剤は、活性成分を含む粉末またはエアロゾル化もしくは噴霧化された溶液または懸濁液を含んでもよい。いくつかの実施形態では、そのような粉末、エアロゾル化、または噴霧化された製剤は、分散されると、約0.1μmから約200μmの範囲の平均粒径または液滴粒度を有する。本明細書で使用される「追加の成分」には、以下のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない：界面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒剤および崩壊剤；結合剤；潤滑剤；甘味剤；香料；着色剤；防腐剤；ゼラチンなどの生理学的に分解性の組成物；水性賦形剤および溶剤；油性賦形剤および溶剤；懸濁化剤；分散剤または湿潤剤；乳化剤、粘滑剤；緩衝剤；塩；増粘剤；充填剤；乳化剤；抗酸化剤；抗生物質；抗真菌剤；安定化剤；および薬学的に許容される高分子材料または疎水性材料。本発明の医薬組成物に含めることができる他の「追加成分」は当技術分野で公知であり、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences（1985、Genaro編、Mack Publishing Co.、Easton、PA）に記載されている。これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２２】
抗体およびその抗原結合断片を産生する細胞
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗C5抗体または抗原結合断片（フラグメント）の少なくとも１つを産生する細胞または細胞株（宿主細胞など）である。一実施形態では、細胞または細胞株は、本明細書に記載の抗C5抗体または抗原結合断片の少なくとも１つを産生する遺伝子改変細胞である。一実施形態では、細胞または細胞株は、本明細書に記載の抗C5抗体または抗原結合断片の少なくとも１つを産生するハイブリドーマである。
【０２２３】
ハイブリッド細胞（ハイブリドーマ）は一般に、Ｂリンパ球に富むマウス脾細胞と、骨髄腫「融合パートナー細胞」（Alberts他、Molecular Biology of the Cell（Garland Publishing、Inc. 1994））との大量融合から生成される。Harlow他、Antibodies. A Laboratory Manual（Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor、1988）。その後、融合細胞はプールへと分配され、それを所望の特異性を有する抗体の産生について分析することができる。所望の特異性の抗体を産生する単細胞クローンが同定されるまで、試験陽性のプールを更に細分割することができる。そのようなクローンによって産生される抗体は、モノクローナル抗体と呼ばれる。
【０２２４】
本明細書に開示される抗体または抗体断片のいずれかをコードする核酸、並びに該核酸を含むベクターも提供される。従って、本発明の抗体および断片は、組み換えまたはヒト化免疫グロブリンの発現に典型的に用いられる細胞株などの細胞または細胞株中で核酸を発現させることにより産生することができる。従って、本発明の抗体および断片は、核酸を１または複数の発現ベクター中にクローニングし、該ベクターを用いて組み換えまたはヒト化免疫グロブリンの発現に典型的に用いられる細胞株などの細胞株を形質転換せしめることによって産生することができる。
【０２２５】
免疫グロブリンの重鎖と軽鎖またはその断片をコードする遺伝子は、限定されないが、当該分野で公知のポリメラーゼ連鎖反応（PCR）を含む方法に従って遺伝子操作することができる（例えば、Sambrook他、Molecular Cloning：A Laboratory Manual、第2版、Cold Spring Harbor、NY、1989；Berger＆Kimmel、Methods in Enzymology、第152巻：Guide to Molecular Cloning Techniques、Academic Press、Inc.、San Diego、Calif、1987；Co他、1992、J. Immunol. 148：1149を参照されたい）。例えば、重鎖および軽鎖またはその断片をコードする遺伝子は、細胞のゲノムDNAを分泌する抗体からクローン化することができ、または細胞のRNAの逆転写によりcDNAが産生される。クローニングは、クローニングされる遺伝子または遺伝子セグメントに隣接するかまたは重複する配列にハイブリダイズするPCRプライマーの使用を含む従来技術によって達成される。
【０２２６】
本発明の抗体、その重鎖もしくは軽鎖またはその断片をコードする核酸は、様々な宿主細胞または試験管内（in vitro）翻訳系において、特定の免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片もしくは変異体の生産のための組み換え核酸技術に従って取得し利用することができる。例えば、抗体をコードする核酸またはその断片を、適当な原核または真核ベクター（例えば発現ベクター）中に配置し、そして適当な方法、例えば形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、感染などにより、ベクター中でまたは宿主細胞ゲノムに組み込んだ形で、該核酸が１もしくは複数の発現調節配列に作動可能に連結されるように、適当な宿主細胞中に導入することができる。
【０２２７】
幾つかの実施形態では、重鎖と軽鎖またはその断片は、２つの異なる発現ベクター中に集成することができ、その２ベクターを用いて受容細胞を同時トランスフェクトすることができる。幾つかの実施形態では、各ベクターは、１つは細菌系での選択用でもう１つは真核細胞系での選択用である、２以上の選択可能遺伝子を含むことができる。それらのベクターは、細菌系での該遺伝子の産生と増幅、それに続く真核細胞の同時トランスフェクション、および同時トランスフェクト細胞の選択を可能にする。選択手順を用いて２つの異なるDNAベクター上に導入された抗体核酸の真核細胞中での発現について選択することができる。
【０２２８】
あるいは、重鎖と軽鎖またはその断片をコードする核酸を１つのベクターから発現させてもよい。軽鎖と重鎖は別々の遺伝子によりコードされるが、それらは組み換え法を使って結合させることができる。例えば、２つのポリペプチドは、それらを単一のタンパク質として生産させることができる合成リンカーにより一緒に結合させることができ、ここでVL領域とVH領域が対合して一価の分子を形成する（一本鎖Fv（scFv）として知られる；例えばBird他、1988、Science 242：423-426；およびHuston他、1988、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85：5879-5883参照）。
【０２２９】
本発明は、重鎖および／または軽鎖をコードする核酸配列またはその断片を含む単離された核酸分子を提供する。軽鎖と重鎖の両方をコードする配列またはその断片を含む核酸分子は、細胞内で産生されると、抗体またはその断片の分泌のための合成シグナル配列を含むように改変することができる。更に、核酸分子は、別の抗体配列の挿入を可能にしかつ抗体配列に通常見られるアミノ酸を変更しないように翻訳解読枠を維持できる、特定のDNAリンカー配列を含むことができる。
【０２３０】
本発明によれば、抗体をコードする核酸配列を適当な発現ベクター中に挿入することができる。様々な実施形態において、発現ベクターは、抗体またはその断片の形成のため抗体配列の発現を指令する組み換えDNA分子を生産するために、挿入抗体をコードする核酸の転写と翻訳に必要な要素を含む。
【０２３１】
抗体をコードする核酸またはその断片は、部位特異的突然変異誘発などの当業者に知られている様々な組み換え核酸技術に供することができる。
【０２３２】
細胞中で核酸を発現させるには様々な方法が利用できる。核酸は多様なタイプのベクター中でクローン化できる。しかしながら、本発明は、何か特定のベクターに限定されると解釈すべきではない。代わりに、本発明は、容易に入手可能であるおよび／または当技術分野で知られている多種多様なベクターを包含すると解釈すべきである。例えば、本発明の核酸は、限定されないが、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスおよびコスミドを含むベクター中にクローン化することができる。特に着目のベクターには、発現ベクター、複製ベクター、プローブ産生ベクター、および配列決定ベクターが含まれる。
【０２３３】
特定の実施形態では、発現ベクターは、ウイルスベクター、細菌ベクターおよび哺乳動物細胞ベクターから成る群より選択される。上述の組成物の少なくとも一部または全部を含む多数の発現ベクター系が存在する。原核生物および／または真核生物ベクター系を本発明と共に使用して、ポリヌクレオチドまたはそれらの同族ポリペプチドを生産することができる。多数のそのような系が商業的におよび広範に入手可能である。
【０２３４】
ウイルスベクター技術は当業界で周知であり、例えばSambrook他（2012）およびAusubel他（1999）中、並びに他のウイルス学および分子生物学マニュアル中に記載されている。ベクターとして有用であるウイルスには、限定されないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスが含まれる。幾つかの実施形態では、所望の核酸を発現させるのにマウス幹細胞ウイルス（MSCV）ベクターが用いられる。MSCVベクターは、細胞中で所望の核酸を効率的に発現することが証明されている。しかしながら、本発明はMSCVベクターを使用することのみに限定されるのではなく、むしろ任意のレトロウイルス発現法が本発明に含まれる。ウイルスベクターの他の例は、モロニーマウス白血病ウイルス（MoMuLV）およびHIVをベースにしたものである。幾つかの実施形態では、適当なベクターは、少なくとも１つの生物体中で機能的な複製開始点、プロモーター配列、便利な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つ以上の選択可能マーカーを含有する（例えば、WO 2001/96584; WO 2001/29058および米国特許第6,326,193号を参照のこと）。
【０２３５】
追加の調節要素、例えばエンハンサーを使って転写開始の頻度を調節することができる。プロモーターは、ある遺伝子または核酸配列に本来付随しているものであってよく、コードセグメントおよび／またはエキソンの上流に置かれた５′非コード配列を単離することにより得ることができる。そのようなプロモーターは「内因性」と称される。同様に、エンハンサーは、その配列の下流または上流のいずれかに置かれた核酸配列に本来付随しているものであってよい。あるいは、コード核酸セグメントを組み換えまたは異種プロモーターの制御下に置くことによって、何らかの利点が得られるだろう。異種（組み換え）プロモーターとは、それの本来の環境においては核酸配列と通常関連していないプロモーターを言う。そのようなプロモーターまたはエンハンサーは、別の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、任意の他の原核細胞、ウイルスもしくは真核細胞から単離されたプロモーターまたはエンハンサー、および「天然の」ものではない、例えば異なる転写調節領域の異なる要素、および／または発現を改変する変異を含むプロモーターまたはエンハンサーを含みうる。プロモーターとエンハンサーの核酸配列を合成的に生産することに加えて、本明細書に開示される組成物に関連して、組み換えクローニング技術および／または核酸増幅技術（PCRを含む）を使って配列を生産することができる（米国特許第4,683,202号、米国特許第5,928,906号）。更に、ミトコンドリア、クロロプラスト等といった非核の細胞小器官（オルガネラ）内での配列の転写および／または発現を指令する調節配列も同様に使用することができる。
【０２３６】
当然、細胞タイプ、細胞小器官および生物体でのDNAセグメントの発現を効率的に指令するプロモーターおよび／またはエンハンサーを使用することが重要であろう。分子生物学の分野の当業者は、一般に、タンパク質発現のためにプロモーター、エンハンサーおよび細胞タイプの組み合わせをどのように使用するかを知っているだろう。例えばSambrook他（2012）を参照のこと。使用されるプロモーターは、構成的、組織特異的、誘導性、および／または導入されたDNAセグメントの高レベル発現を指令するのに適した条件下で有用であり、例えば、組み換えタンパク質およびその断片の大規模生産において有利である。
【０２３７】
プロモーターの一例は、前初期サイトメガロウイルス（CMV）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、それに作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベル発現を指令することのできる強力な構成的プロモーター配列である。しかしながら、別の構成的プロモーター配列も使用でき、例えば、限定されないが、シミアンウイルス40（SV40）初期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（MMTV）、ヒト免疫不全症ウイルス（HIV）LTR（long terminal repeat）プロモーター、モロニーウイルスプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バー（Epstein-Barr）ウイルス前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、並びにヒト遺伝子プロモーター、例えば限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、および筋クレアチンプロモーターを使用できる。更に、本発明は構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターも本発明の一部として期待される。本発明における誘導性プロモーターの使用は、そのような発現を所望する時に、それに作動可能に連結されているポリペプチド配列の発現を開始させることができる、または発現を所望しない時にその発現を停止させることができる、分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例としては、限定されないが、メタロチオネインプロモーター、糖質コルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。更に、本発明は、組織特異的プロモーターまたは細胞型特異的プロモーター（所望の組織または細胞中でのみ活性であるプロモーターである）の使用を包含する。組織特異的プロモーターは当業界で周知であり、例えば限定されないが、HER-2プロモーターおよびPSA関連プロモーター配列を含む。
【０２３８】
核酸の発現を評価するために、細胞中に導入された発現ベクターは、選択可能マーカーもしくはレポーター遺伝子のいずれか一方またはその双方を含み、それによってウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染しようと試みた細胞の集団からの発現細胞の同定と選択を容易にすることができる。別の実施形態では、選択マーカーを別個の核酸上に担持させて同時トランスフェクション操作に使用することができる。選択可能マーカーとレポーター遺伝子は両方とも、宿主細胞中での発現を可能にする適当な調節配列により隣接させることができる。有用な選択可能マーカーは当業界で周知であり、例えば、抗生物質耐性遺伝子、例えばneo等を包含する。
【０２３９】
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定するためおよび調節配列の機能性を評価するために用いられる。容易に分析できるタンパク質をコードするレポーター遺伝子が当業界で周知である。一般に、レポーター分子は、受容生物体または組織中に存在しないかまたは発現されない遺伝子であり、かつ何らかの容易に検出可能な特性、例えば酵素活性により、その発現が明らかになるタンパク質をコードしている遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、DNAが受容細胞中に導入された後に適当な時点で分析される。
【０２４０】
適当なレポーター分子としては、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼまたは分泌型アルカリホスファターゼをコードする遺伝子、または緑蛍光タンパク質遺伝子（例えば、Ui-Tei他、2000 FEBS Lett. 479:79-82）が挙げられる。適当な発現系は公知であり、周知技術を使って調製することができ、または商業的に入手することができる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベル発現を示す最小の５′隣接領域を有する構成物がプロモーターとして同定される。そのようなプロモーター領域をレポーター遺伝子に連結させ、プロモーターにより駆動される転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用することができる。
【０２４１】
核酸を細胞中に導入し発現させる方法は技術の現状で知られている。発現ベクターに関しては、ベクターは、従来技術の任意方法により、宿主細胞、例えば哺乳類、細菌、酵母または昆虫細胞中に容易に導入することができる。例えば、発現ベクターは物理的、化学的または生物学的手段により宿主細胞中に移入することができる。
【０２４２】
ポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入する物理的方法としては、リン酸カルシウム沈澱、リポフェクション、粒子衝突法、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、レーザーポレーション等が挙げられる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を生産する方法は当業界で周知である。例えば、Sambrook他（2012）およびAusubel他（1999）を参照されたい。
【０２４３】
着目の核酸を宿主細胞中に導入する生物学的方法としては、DNAおよびRNAベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、遺伝子を哺乳類、例えばヒト細胞中に挿入するために最も広く利用されている方法である。別のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス等から誘導することができる。例えば米国特許第5,350,674号および同第5,585,362号明細書を参照されたい。
【０２４４】
核酸を宿主細胞中に導入するための化学的手法としては、コロイド分散系、例えば高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、および水中油型乳剤を含む脂質ベースの系、ミセル、混合ミセル、およびリポソームが挙げられる。試験管内および生体内での送達媒体としての使用に好ましいコロイド系は、リポソーム（例えば人工膜小胞）である。そのような系の調製および使用は当業界で周知である。
【０２４５】
宿主細胞中に外因性核酸を導入するためにまたは他の方法で細胞を本発明の核酸に暴露するために使用する方法にかかわらず、宿主細胞中の組み換えDNA配列の存在を確認するために、様々なアッセイを実施することができる。そのようなアッセイとしては、例えば、当業界で周知である「分子生物学的」アッセイ、例えば、サザンおよびノーザン・ブロット法、RT-PCRおよびPCR；「生化学的」アッセイ、例えば特定のペプチドの存否を検出するもの、例えば免疫学的手段（ELISAおよびウエスタンブロット）によるまたは本発明の範囲内に入る薬剤を同定するための本明細書に記載のアッセイによるものが挙げられる。
【０２４６】
キット
本発明は、本発明の抗C5a抗体またはその組み合わせ、および例えば該抗C5a抗体またはその組み合わせを本明細書中に記載のような治療処置もしくは非治療用途として個体に投与することを記載している教材を含むキットにも関する。一実施形態では、このキットは、例えば本発明の抗体を個体に投与する前に、本発明の抗C5a抗体またはその組み合わせを含む治療用組成物を溶解もしくは懸濁するのに適当な、薬学的に許容される担体を更に含む。所望により、該キットは抗体を投与するためのアプリケーターを含む。
【実施例】
【０２４７】
次の実施例を参照しながら本発明を説明することにする。これらの実施例は例示目的のみで提供され、本発明がいかなる形でもそれらの実施例に限定されると解釈すべきではなく、むしろその中に提供される教示の結果として明らかになるあらゆる変形を包含するものであると見なすべきである。
【０２４８】
更に説明しなくても、当業者は今までの説明と下記の例示的実施例を使って、本発明の化合物を作製および使用し、そして請求項記載の方法を実施することができると確信する。従って、下記の実施例は本開示の残りの部分を決して限定するものとして解釈してはならない。
【０２４９】
実施例１
補体系は、宿主防御において重要な役割を果たす先天性免疫の一部である。しかしながら、補体の活性化は、有意な組織損傷と破壊を引き起こす可能性があり、無調節の補体活性は多数の奇病や一般的な病気、例えば発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH）、非定型溶血性尿毒症症候群、関節リウマチ、加齢黄斑変性症等に関連があることが知られている。よって、抗補体療法はそれらのヒト疾患を治療する有望な方法である。
【０２５０】
補体C5は、補体活性化の終末経路における重要なタンパク質であり、有力な炎症促進性メディエーターC5a並びに細胞溶解性膜侵襲複合体（MAC）を生成するための前駆タンパク質である。
【０２５１】
６種のマウス抗ヒトC5モノクローナル抗体を作製し、特徴づけ、それらがヒトC5に対して機能を阻止するmAbであることを確認した。それらの抗体は補体が古典経路、レクチン経路または副経路（第二経路）のいずれかによって活性化されるとC5a生産とMAC形成の両方を抑制する。それらのmAbの素性は次の通りである：mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9および8E1。
【０２５２】
更に、上記抗体の重鎖と軽鎖のIgサブタイプを決定し、そして６つのmAbの重鎖の可変領域のcDNAをクローニングした。
本実施例に使用する方法と材料を以下に記載する。
【０２５３】
抗C5 mAbのアフィニティー分析：
表面プラズモン共鳴分析を用いて、BIAcore 3000装置（Biacore AB, Uppsala, Sweden）を使ってそれらの抗C5 mAbへのヒトC5の結合についての会合速度定数と解離速度定数を測定した。全てのBiacore実験は25℃で実施した。CM5センサーチップのカルボキシル化デキストランマトリックスを使用し、アミンカップリング化学により、精製amRabbit IgG（RAMFc）mAbとカップリングさせ、1000 RUの表面密度を与え、抗C5 mAbを固定化RAMFc上に捕集した。抗C5 mAb結合の安定化後、100、50、25、12.5、6.25および０ nMに及ぶ変動濃度のヒトC5をHBSET（Tween 20を含むHEPES緩衝液−生理食塩水−EDTA）緩衝液中で表面上に注入し、そしてサンプルを30μL／分で180秒間（60μL注入量）抗体表面上に注入し、そして結合した被検物質（analyte）の解離を900秒間進行させた。データは、１：１結合モデルを仮定したBIA評価ソフト3.2 により解析した。表面の再生は10 mM Glycone HCl, pH 1.5の50μL注入（50μL／分）によって達成された。
【０２５４】
LPS誘導C5a生産アッセイ：
10％正常ヒト血清（NHS）を種々の濃度の4E7、9G6、11C5、2G1、11D9および8E1と共に4℃で１時間予備インキュベートした。抗体で処置したサンプルをMg-EDTA GVB2＋中で37℃にて１時間インキュベートし、次いで40 mM EDTA／PBS中で反応を停止させた。
【０２５５】
ヒトC5aの検出用のサンドイッチELISA：
96ウェルプレートをマウス抗ヒトC5a特異的抗体（R&D systems #MAB2037）により△△g/mLの最終濃度になるように４℃で一晩コーティングした。0.05％Tween-20を含むPBSで３回洗浄した後、プレートを1/8希釈した血清試料（LPS誘導C5a生産アッセイから）と共に室温で１時間インキュベートした。もう１回洗浄した後、プレートを対応するビオチン化抗ヒトC5a mAb（R&D systems #BAM20371）と共に室温で１時間インキュベートし、再び洗浄し、そして西洋わさびペルオキシダーゼに接合したストレプトアビジン（BD pharmagen #554058）と共に室温で１時間インキュベートした。最終洗浄後、プレートをHRP基質で６〜10分間発色させた。2N H2SO4を用いて反応を停止させ、プレートをマイクロプレートリーダー中で450 nmで読み取った。
【０２５６】
ヒトC5およびmAb結合アッセイ：
ポリスチレンマイクロタイタープレートを、PBS中の精製ヒトC5（50 ng/ウエル）で37℃にて１時間コーティングした。C5溶液を吸引して除いた後、ウェルを室温で１時間、PBS中１％BSAでブロックした。C5コーティングのないウェルはバックグラウンド対照として働いた。ブロック溶液中の50μL/ウェルの4E7、9G6、11C5、2G1、11D9および8E1の種々の濃度をウェルに添加した。室温で１時間インキュベーション後、ウェルをPBSTで十分に洗浄した。ヒトC5結合mAbは、ブロック溶液中の抗マウスIgG HRPまたは抗ヒトIgG4 HRP（1:4000希釈液）の添加により検出し、これを室温で１時間インキュベートした。PBSTで洗浄した後、プレートをHRP基質で６〜10分間発色させた。2N H2SO4を用いて反応を停止させ、プレートをマイクロプレートリーダー中で450 nmで読み取った。
【０２５７】
抗ヒトC5 mAbの生成：
B10.D2/oSnJ メス（Stock # 000461, Jackson laboratory）マウスを、アジュバントで乳化した30μgの精製ヒトC5（# A120, Complement Technology Inc)を用いて免疫処置した。14日目に、マウスをアジュバントで乳化した30μgの精製ヒトC5で再免疫処置した。融合前に33μgの精製ヒトC5により３回マウスを追加免疫処置した。次いで、頸椎脱臼によりマウスを犠牲にし、機械的破壊による単細胞懸濁液の調製のために 脾臓を単離した。脾臓懸濁液をHYB-SFM（Invitrogen）＋10％FBS培地で１回洗浄し、細胞をカウントし、X63-Ag8.653 骨髄腫細胞 (ATCC) と2 : 1比において混合した。細胞混合物をHYB-SFM培地で再洗浄し、そして遠心分離（1000 rpm×５分）により細胞ペレットを調製した。細胞ペレットを穏やかに振盪してバラバラにし、次いでポリエチレングリコール（PEG 1500）（３×108細胞あたり1.5 mL PEG）をゆっくり加えることにより細胞融合を誘導した。細胞を37℃で１分間静置し、次いで該細胞に20 mLのHYB-SFM培地を３分間に渡り添加した（最初の１分は1 mL、次の１分は3 mL、そして最後の１分は16 mL）。その混合物を1000 rpmで５分間遠心分離し、24ウェルプレート中にHAT培地(500 mLのHYB-SFM培地中の10mL HAT [Sigma H0262]、5 mL Pen/Strep、500μL ゲンタマイシンおよび10％FBS)中で播種した。２週間後、ウェルから目に見えるコロニーを有する上清を、ELISAによる精製ヒトC5との反応性のスクリーニングのために取り出した。陽性クローンを選択し、限界希釈法により96ウェルプレート中に播種し、ELISAによる２回のスクリーニング後に単一クローンを得た。陽性クローンをHT培地（500 mL HYB-SFM培地中、10 mL HT、5 mL Pen/Strep、500μLゲンタマイシンおよび10％FBS）中で増殖させた。抗体収集の前に、ハイブリドーマ細胞を無血清培地（HYB-SFM）に２〜３日間移した。プロテインＧアフィニティークロマトグラフィーによるmAb精製のために細胞培養培地を収集した。
【０２５８】
mAbクローニング：
4E7、9G6、11C5、2G1、11D9および8E1のcDNAをクローニングするために、ハイブリドーマ細胞からTRizol試薬（Sigma）により全RNAを単離した。第一鎖cDNAを、オリゴ（dT）プライマーを用いて逆転写により合成した。重鎖cDNAを増幅するために（IgG1, IgG2a/bの場合）、次のプライマーをPCR反応において使用した：5'-GAGGTGAAGCTGGTGGAG(T/A)C(T/A)GG-3 ' (配列番号77) および 5'-GGGGCCAGTGGATAGAC-3' (配列番号78)。κ軽鎖を増幅するためには、次のプライマーを使用した：４つの上流プライマーの混合物：
5'-CCAGTTCCGAGCTCCAGATGACCCAGACTCCA-3' (配列番号79)；
5'-CCAGTTCCGAGCTCGTGCTCACCCAGTCTCCA-3' (配列番号80)；
5'-CCAGTTCCGAGCTCCAGATGACCCAGTCTCCA-3' (配列番号81)；
5'-CCAGTTCCGAGCTCGTGATGACACAGTCTCCA-3' (配列番号82)；下流プライマー：
5'-GTTGGTGCAGCATCAGC-3' (配列番号83)。PCRアンプリコンをpCR TOPO TA 2.1ベクター（Invitrogen）中にクローニングし、配列決定した。mAbのシグナルペプチド（リーダー）配列を得るために、Invitrogenからのキット（GeneRacer）を用いて5'-RACE法を使用した。5’RACE法と最初の配列分析データから決定された特異的プライマーを使って、完全な可変領域cDNAを増幅させた。
【０２５９】
キメラ2G1 mAbの構築と発現：
mAb 2G1の可変領域をpFUSE-CHIg-hG4ベクター（InvivoGenより；IgG4重鎖定常領域を含むが、セリン229がプロリンに変異されている（配列番号60））中にEcoRI/NheI部位を使ってクローニングすることにより、キメラ2G1重鎖cDNAを作製した。mAb 2G1の可変領域をpFUSE2-CLIg-hkベクター (invivoGenより；ヒトκ軽鎖定常領域を含む (配列番号61)）中にAgeI/BsiWI部位を使ってクローニングすることにより、キメラ2G1軽鎖cDNAを作製した。CHO細胞を、リポフェクタミン試薬を用いて、2G1のキメラ重鎖と軽鎖または2G1のヒト化重鎖と軽鎖により同時トランスフェクトした（２つのヒト化重鎖が同じヒト化軽鎖と対合された）。トランスフェクション後、CHO細胞をゲオシン（1 mg/mL）およびブラストシジン（10μg/mL）を用いて約７日間選択した。薬剤耐性細胞コロニーを取り出し、トリプシン処理し、そして同じ選択薬の存在下で96ウェル中で限界希釈にかけた。細胞が96ウェル中で集密になった後、培地をELISAによりヒトC5との反応性について試験し、陽性クローンを増殖させた。抗体産生のため、トランスフェクトCHO細胞の安定な系列を、150 cmの培養フラスコ中でDMEM：F12培地中で培養させ、そして集密に達した後、それらを無血清CD-CHO培地（Invitrogen）に移した。３日後、培地を収集し、プロテインＧクロマトグラフィーによりAbを精製した。精製したAbのアリコートをSDS-PAGEにより分析した。
【０２６０】
ヒト化2G1 mAbの作製と発現：
VHとVLのmAb 2G1 CDRを、ヒトIg重鎖と軽鎖の生殖細胞系列の可変および連結（V, J）遺伝子セグメントをそれぞれ、ヒト免疫グロブリンとmAb 2G1との間のCDR相同性に基づいて選択した（Hwang他、Method、2005）。このアプローチの利点は、それらの同種抗原に対する結合親和性を維持しているヒト化Abを作製できること、および、フレームワーク領域中の全ての残基がヒトAbに由来するために非ヒトAbsの潜在的免疫原性を大幅に低減できることである。ヒト化2G1重鎖cDNAは、2G1のヒト化重鎖可変領域（Genescriptにより合成された）をpFUSE-CHIg-hG4ベクター（InvivoGenより；ヒトIgG4重鎖定常領域を含むが、セリン229がプロリンに変異されている（配列番号60））中にEcoRI/NheI部位を使ってクローニングすることにより作製した。ヒト化2G1軽鎖cDNAは、2G1のヒト化軽鎖可変領域（Genescriptにより合成されたもの）をpFUSE2-CLIg-hkベクター（InvivoGenより；ヒトκ軽鎖定常領域を含む (配列番号61)）中にAgeI/BsiWI部位を使ってクローニングすることにより作製した。CHO細胞を、リポフェクタミン試薬を用いて、2G1のキメラ重鎖と軽鎖または2G1のヒト化重鎖と軽鎖により同時トランスフェクトした（２つのヒト化重鎖が同じヒト化軽鎖と対合された）。トランスフェクション後、CHO細胞をゲオシン（1 mg/mL）およびブラストシジン（10μg/mL）を用いて約７日間選択した。薬剤耐性細胞コロニーを取り出し、トリプシン処理し、そして同じ選択薬の存在下で96ウェル中で限界希釈にかけた。細胞が96ウェル中で集密になった後、培地をELISAによりヒトC5との反応性について試験し、陽性クローンを増殖させた。抗体産生のため、トランスフェクトCHO細胞の安定な系列を、150 cmの培養フラスコ中でDMEM：F12培地中で培養させ、そして集密に達した後、それらを無血清CD-CHO培地（Invitrogen）に移した。３日後、培地を収集し、プロテインＧクロマトグラフィーによりAbを精製した。精製したAbのアリコートをSDS-PAGEにより分析した。
【０２６１】
溶血アッセイ：
ヒツジ赤血球（RBC）溶解アッセイ：ヒツジRBC（１×107細胞または１×108細胞、Complement Technology Inc.）を、ゼラチン・ベロナール緩衝液（GVB2+、Sigma）中で37℃で20分間、10％または50％NHS（Complement Technology Inc）と共にインキュベートした。ヒツジRBCへの添加前に、NHSをmAb（4E7, 9G6, 11C5, 2G1, 11D9, 8E1および対照mAb 7A12）、またはキメラ2G1および7A12、またはヒト化2G1と共に４℃にて１時間インキュベートした。溶解反応はPBS中氷冷40 mM EDTAの添加により停止させた。インキュベーション混合物を1500 rpmで５分間遠心分離し、上清を収集し、OD 405 nmを測定した。NHSを含まないサンプルまたはEDTAを添加したサンプルを陰性溶解対照として使用し、蒸留水で完全に溶解させたヒツジRBCのサンプルを陽性対照（100％溶解）として使用し、その値に対して別のサンプル中の％溶解を正規化した。
【０２６２】
ニワトリRBC溶解アッセイ：ニワトリRBC（１×107細胞または１×108細胞、Complement Technology Inc) を、GVB2+中の50％血清（Complement Technology Inc）と共に37℃で１時間インキュベートした。ニワトリRBCへの添加前に、ヒト、イヌ、ウサギ、ハムスター、ヤギ、ブタ、ヒツジ、アカゲザルまたはカニクイザルといった様々な動物種からの血清を、50μg/mLの4E7、9G6、11C5、2G1、11D9または8E1と共に４℃で１時間プレインキュベートした。幾つかの実験では、NHSを系列希釈した2G1または8E1と共に４℃で１時間プレインキュベートした。溶解反応はPBS中の氷冷40 mM EDTAの添加により停止させた。インキュベーション混合物を1500 rpmで５分間遠心分離し、上清を収集し、そしてOD405 nmを測定した。収集したデータを、陰性対照（０％）としてのEDTA含有血清（血清＋EDTA）に対してと、陽性対照（100％）としての抗体不含有血清（血清＋抗体なし）に対して正規化した。
【０２６３】
PNH RBC溶解アッセイ：NHSをGVB2+緩衝液で希釈し、pH 6.4に酸性化し（酸性化正常ヒト血清：aNHS）、そしてPNH RBCによるアッセイに使用した。５×106個の細胞を50％aNHS中に添加した。37℃でインキュベートし、30分後、200μLの冷20 mM EDTA/PBSを加えることにより反応を停止させた。mAb 2G1をaNHSと共に４℃で30分間インキュベートした後、PNH RBCに加えた。遠心分離によりRBCをペレット化し、回収された上清のアリコートの405 nmでの光学濃度を測定し、それを用いて溶解率を算出した。水中で溶解させたPNH RBCを100％溶解標準として使用した。
【０２６４】
ヒトC5β鎖とドメイン欠失変異体の発現：
ベクターpGEM-T中のヒトC5（hC5）cDNAは、Sino Biologicals Inc. (カタログNo. HG13416-G）から購入した。Sino Biologicals Inc. から入手したC5ヌクレオチド配列を、遺伝子およびベクター特異的プライマーを使って確認した。hC5β鎖ヌクレオチドとタンパク質配列は、PubMed（NM_001735.2）およびUniprot Id-P01031を用いて同定された。hC5からのβ鎖をpCAGGSベクター中で増幅させクローニングした。β鎖のマクログロブリン（MG）ドメイン欠失変異体（MG1, MG2, MG3, MG4, MG5およびMG6）を、逆PCRによりhC5-pGEM-Tベクター中に作製し、そして配列分析により欠失を確認した。hC5β鎖のMGドメイン変異体も同様にpCAGGSベクター中にクローニングした。MG欠失変異体の作製とクローニングに使用したプライマーを下記の表１に列挙する。
【０２６５】
【表１】
2020511448.tif 000003
【０２６６】
hC5βおよびhC5p-MG欠失体のトランスフェクション：
完全なβ鎖と種々のMGドメイン欠失変異体cDNAを、リポフェクタミン2000（Invitrogen）を使ってHEK細胞中にトランスフェクトした。48時間後、上清を収集し、アッセイに使用した。
【０２６７】
SDS-PAGEとウエスタンブロッティング：
ウエスタンブロット分析用に、hC5β鎖でおよびMGドメイン欠失変異体でトランスフェクトされたHEK細胞からの40μL上清または非トランスフェクトHEK細胞の上清（陰性対照；ネガティブコントロール）を、試料緩衝液とβ−メルカプトエタノールを含むチューブに添加した。精製したヒトC5を陽性対照（ポジティブコントロール）として使用した。サンプルを100℃で７分間煮沸し、4-12％グラジェントゲル上にロードし、0.2μmの孔径のPVDF膜上にタンパク質を移行させた。PBS中５％脱脂粉乳を用いて室温で１時間膜をブロックした。次いで膜を第一抗体（Comptechからのヤギ抗hC5ポリクローナル抗体、カタログNo. A220、またはビオチン化mAb 2G1-3またはQDC5）と共にTBST中５％脱脂粉乳中で４℃で一晩インキュベートした。膜を0.1％Tween-20（TBST）含有TBSを用いて６回×５分間洗浄し、そしてウサギ抗ヤギHRP（Bio-Rad、カタログNo. 172-1034）の1：4000希釈液と共に室温で１時間インキュベートした。Pierce（商標）ECL 2ウエスタンブロット用基質を使って、製造業者の教示に従ってタンパク質を検出した。mAb QDC5は、Thomas他（Mol Immunol, 1996 Dec; 33 (17-18):1389-401）に記載されたヒト化マウス抗ヒトC5 mAbのVHおよびVL配列を有する組み換えヒトIgG4 mAbである。それをExpi-CHO細胞（Invitrogen）中で発現させ、そしてプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。
【０２６８】
hC5β鎖およびMG欠失変異体の検出用のサンドイッチELISA：
サンドイッチELISA用に、２μg/mLの最終濃度で４℃にて一晩96ウェルプレートを2G1-3 mAbでコーティングした。0.05％Tween-20を含むPBSで３回洗浄した後、プレートを３％ウシ血清アルブミン（BSA）で室温にて１時間ブロックした。洗浄後、プレートを200μLのトランスフェクトしたHEK細胞上清または20％NHSと共に室温で１時間インキュベートした。再度洗浄した後、プレートを2μg/mLの最終濃度の検出抗体SKY59と共に室温で１時間インキュベートし、再洗浄し、そしてHRP-接合第二ヒトIgG4特異的抗体（Invitrogen #MAI-34437）と共に室温で１時間インキュベートした。公表されたVH/VL配列（Fukuzawa他、Sci Rep., 2017 Apr 24:7(1): 1080. doi: 10.1038/s41598-017-1087-7）に基づいたIgG4組み換えmAbとしてmAb SKY59を発現させた。ポリクローナルヤギ抗ヒトC5抗体を用いるウエスタンブロッティングの場合、該抗体は1：500希釈度で室温にて１時間使用した。更に洗浄した後、ウェルをウサギ抗ヤギIgG HRP（1：4000）と共に１時間インキュベートした。プレートをHRP基質により６〜10分間発色させた。2N H2SO4を用いて反応を停止させ、マイクロタイタープレートリーダー中で450 nmにて読み取った。
【０２６９】
本実施例の結果を以下に記載する。
ヒトC5への抗ヒトC5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9および8E1の結合を証明するELISAアッセイの結果が図１に示される。精製ヒトC5がコーティングされたマイクロタイタープレートを交差するようにmAbが連続希釈される、直接抗原結合ELISA法。６つのmAb全てがヒトC5との高反応性を示した。
【０２７０】
C5への抗C5 mAb 2G1、8E1、4E7、9G6、11C5および11D9の結合親和性を証明するELISAアッセイの結果が図２〜図７に示される。精製amRabbit IgG（RAMFc）mAbをアミンカップリング法を使ってCM4チップ上にカップリングした。次いで、固定化されたRAMFc上に抗C5 mAbを捕捉した。Biacore分析は、Biacore-2000装置を使って実施した。
【０２７１】
抗ヒトC5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9および8E1によるLPS誘導性C5a生産の用量依存性阻害が、図８に描写される。LPS誘導性C5a生産に対する抗ヒトC5 mAbの効果を評価するために、２つのアッセイの組み合わせを使用した：LPS誘導性C5a生産およびヒトC5aサンドイッチELISA。６つのmAb全てが、12.5μg/mLの最終濃度で10％正常ヒト血清（NHS）に添加すると、効果的にLPS誘導性C5a生産を阻害した。
【０２７２】
補体媒介溶血に対する抗ヒトC5 mAb 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9および8E1の効果が図９に示される。図９Ａは、各抗C5 mAbの系列希釈液を含む50％NHSと共にヒツジRBCを37℃で１時間インキュベートした後でOD405 nmでの吸光度を測定することにより決定されたRBC溶解を示す。RBC溶解はOD405 nmでの吸光度を測定することにより決定した。120μg/mLにおいて、全てのmAbがNHS媒介ヒツジ赤血球溶解を50％阻害した。より低用量（例えば30〜60μg/mL）では、9G6が他のmAbよりも溶血阻害に関してより低い効力であった。図９Ｂは、30μg/mLでは、mAb 2G1と8E1が4E7、11C5および11D9よりも補体媒介性溶血を阻害する効力がより高かったことを示す。
【０２７３】
異なる動物種の血清を使用した補体媒介性溶血に対する抗ヒトC5 mAbs 4E7、9G6、11C5、2G1、11D9、8E1の効果が図10に示される。ニワトリRBCを、各抗C5 mAb（最終濃度50μg/mL）を含有する50％NHS、正常ウサギ血清、アカゲザル血清またはカニクイザル血清と共に37℃で１時間インキュベートした。OD405 nmでの吸光度を測定することによりRBC溶解を決定し、陰性対照（0％）としての血清＋EDTA、および陽性対照（100％）としての血清＋抗体なしに対して正規化した。NHSを使用した溶血アッセイでは、６つの抗ヒトC5 mAbのうち５つが溶血を有意に、すなわち50％以上抑制した。特に、2G1を含むNHSサンプルは、溶血のほぼ完全な阻害を示した。mAb 9G6または2G1で処置すると、ウサギ血清の溶血活性は有意に低下した。一方、全てのmAbが、サル（アカゲザルとカニクイザル）、ヤギ、ブタおよびヒツジの血清を用いた補体媒介性溶血を阻害することができなかった。
【０２７４】
補体媒介性溶血に対する抗ヒトC5 mAbs 2G1および8E1の効果を図11に示す。ニワトリRBCを、2G1もしくは8E1または対照mAb（MOPC、マウスIgG1）の連続希釈液を含む50％NHSと共に37℃で１時間インキュベートした。RBC溶解は、OD405 nmでの吸光度を測定することにより決定した。
【０２７５】
PNH RBCの溶血に対する抗ヒトC5 mAb 2G1の効果を図12に示す。発作性夜間ヘモグロビン尿症（PNH）患者のRBCを、mAb 2G1の存在下または非存在下でハム（Ham)の酸性化血清検査に供した。2G1の連続希釈液を含む50％NHSと共にRBCを37℃で１時間インキュベートしました。RBC溶解はOD405 nmでの吸光度を測定することにより決定した。mAbの非存在下では、RBCの約35％が酸性化血清により溶解されたが、mAb 2G1処置は25μg/mlで溶血活性の70％減少を引き起こし、40μg/mlで85％減少を引き起こした。
【０２７６】
６種の抗体の抗体配列を図13から図18に示す。図13は、mAb 2G1の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。図14は、mAb 8E1の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。図15は、mAb 4E7の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。図16は、mAb 9G6の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。図17は、mAb 11C5の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。図18は、mAb 11D9の重鎖と軽鎖の可変領域配列を示す。
【０２７７】
セリン228からプロリンへの突然変異（すなわちS228P）を有するヒトIgG4定常重鎖領域およびヒトκ定常軽鎖領域のアミノ酸配列を図19に示す。これらの配列を使用して、キメラ（マウス可変領域＋ヒト定常領域）およびヒト化（ヒト化マウス可変領域＋ヒト定常領域）抗ヒトC5抗体（2G1）を構築した。
【０２７８】
2G1ヒトIgG4キメラmAbとヒトC5との反応性を図20に示す。キメラ2G1は、mAb 2G1の可変領域を、S228P変異を有するヒトIgG4重鎖定常領域およびヒトκ軽鎖定常領域と連結させることにより作製した。プレートをヒトC5でコーティングした。系列希釈したキメラ2G1とインキュベートした後、結合したキメラmAbを、HRP接合抗ヒトIgG4を用いて検出した。キメラ2G1は用量依存的にヒトC5に結合した。
【０２７９】
古典経路の補体媒介性溶血に対する2G1ヒトIgG4キメラmAbの効果を図21に示す。感作したヒツジRBCを、系列希釈したキメラ2G1を含むNHSと共に37℃で1時間インキュベートした。RBC溶解は、OD405 nmでの吸光度を測定することにより決定した。その結果は、30μg/ml以上の濃度で、キメラ2G1 mAbがNHS媒介ヒツジ赤血球溶解の50％を阻害したことを示す。
【０２８０】
mAb 2G1（ヒト化2G1 VH-11801）のヒト化可変重鎖（VH）のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を図22に示す。ヒト化は、生殖細胞系列にコードされるヒトVHフレーム領域（11801）へのマウスmAb 2G1 VHからのCDR移植によって達成された。シグナルペプチドのアミノ酸配列には下線が引かれ、CDR1、CDR2およびCDR3の配列は太字で陰影が付けられている。
【０２８１】
mAb 2G1（ヒト化2G1 VH-16901）の別のヒト化VHのヌクレオチド配列とアミノ酸配列を図23に示す。ヒト化は、生殖細胞系列にコードされるヒトVHフレーム領域（16901）へのマウスmAb 2G1 VHからのCDR移植によって達成された。シグナルペプチドのアミノ酸配列には下線が引かれ、CDR1、CDR2およびCDR3の配列は太字で陰影が付けられている。
【０２８２】
mAb 2G1（ヒト化2G1 VL-1901）のヒト化可変軽鎖（VL）のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を図24に示す。ヒト化は、生殖細胞系列にコードされるヒトVLフレーム（1901）へのCDR移植によって達成された。シグナルペプチドのアミノ酸配列には下線が引かれ、CDR1、CDR2およびCDR3のアミノ酸配列は太字で陰影が付けられている。
【０２８３】
ヒト化2G1（VH-1180l/VL-1901）とヒトC5との反応性を図25に示す。ヒト化2G1（VH-1 180l/VL-1901）は、Fcドメイン中にS228P変異を有するヒトIgG4 mAbとして発現された。プレートをヒトC5でコーティングした。系列希釈したヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）とのインキュベーション後、結合したmAbを、HRP接合抗ヒトIgG4によって検出した。ヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）は、用量依存的にヒトC5に結合した。
【０２８４】
ヒト化2G1（VH-1690l/VL-1901）とヒトC5との反応性を図26に示す。ヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）は、Fcドメイン中にS228P変異を有するヒトIgG4 mAbとして発現された。プレートをヒトC5でコーティングした。系列希釈したヒト化2G1（VH-1690l/VL-1901）とのインキュベーション後、結合したAbを、HRP接合抗ヒトIgG4によって検出した。ヒト化2G1（VH-1690l/VL-1901）は、用量依存的にヒトC5に結合した。
【０２８５】
古典経路の補体媒介性溶血に対するヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）の効果を図27に示す。ヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）は、Fcドメイン中にS228P変異を有するヒトIgG4 mAbとして発現された。感作したヒツジRBCを、系列希釈したヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）を含む10％NHSとともに37℃で1時間インキュベートした。RBC溶解は、OD405 nmでの吸光度を測定することにより決定した。ヒト化2G1（VH-11801/VL-1901）は、10μg/mL以上のmAb濃度で、10％NHS媒介ヒツジ赤血球溶解を有意に阻害した。
【０２８６】
古典的経路の補体媒介性溶血に対するヒト化2G1（VH-1690l/VL-1901）の効果を図28に示す。ヒト化2G1（VH-1690l/VL-1901）は、Fcドメイン中にS228P変異を有するヒトIgG4 mAbとして発現された。感作したヒツジRBCを、系列希釈したヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）を含む10％NHSとともに37℃で１時間インキュベートした。RBC溶解は、OD405 nmでの吸光度を測定することにより決定した。ヒト化2G1（VH-16901/VL-1901）は、10μg/mL以上のmAb濃度で、10％NHS媒介ヒツジ赤血球溶解を有意に阻害した。
【０２８７】
本明細書中に言及されるあらゆる特許、特許出願、および刊行物の開示は、それらの全内容が参考により本明細書に組み込まれる。
【０２８８】
本発明を特定の実施形態に関して開示してきたが、本発明の他の実施形態と変形が、本発明の真の精神や範囲から逸脱することなく、当業者によって考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、そのようなすべての実施形態および同等の変形を含むものと解釈されることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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