(57)【要約】  本発明は、トチバニンジン属植物の抽出物およびその薬物組成物と使用に関する。本発明のトチバニンジン属植物の抽出物におけるＲｋ１とＲｇ５の質量比は１：１．０〜１．５であり、Ｒｇ３、Ｒｇ５およびＲｋ１の含有量が高く、慢性心不全、冠動脈性心疾患、安定狭心症、不整脈、糖尿病およびその併発症、メニエール症候群、高脂血症、脂肪肝、アルツハイマー病、生理痛、メタボリックシンドローム、痛風、腫瘍または血管漏出症候群を治療する薬物の製造に使用される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
トチバニンジン属植物の抽出物であって、ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｋ１およびジンセノサイドＲｇ５を含有し、前記ジンセノサイドＲｋ１と前記ジンセノサイドＲｇ５の質量比は１：１．０〜１．５であり、好ましくは１：１．０〜１．３であることを特徴とするトチバニンジン属植物の抽出物。
【請求項２】
前記ジンセノサイドＲｇ５、前記ジンセノサイドＲｋ１および前記ジンセノサイドＲｇ３の質量パーセントでの含有量は、０．５≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１）／Ｒｇ３≦１．５、
好ましくは０．５≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１）／Ｒｇ３≦１．０を満たすことを特徴とする請求項１に記載のトチバニンジン属植物の抽出物。
【請求項３】
前記ジンセノサイドＲｇ３は２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ３および２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ３を含み、前記２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ３と前記２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ３の質量比は１〜１．５であり、好ましくは１．１〜１．２であることを特徴とする請求項１に記載のトチバニンジン属植物の抽出物。
【請求項４】
前記トチバニンジン属植物の抽出物には、さらに、ジンセノサイドＲｇ２、ジンセノサイドＲｈ１およびジンセノサイドＲｈ２が含有され、前記ジンセノサイドＲｇ３、前記ジンセノサイドＲｇ５、前記ジンセノサイドＲｋ１、前記ジンセノサイドＲｇ２、前記ジンセノサイドＲｈ１、前記ジンセノサイドＲｈ２の質量パーセントでの含有量は、
８０％≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１＋Ｒｇ３）／（Ｒｇ５＋Ｒｋ１＋Ｒｇ３＋Ｒｇ２＋Ｒｈ１＋Ｒｈ２）＜１００％を満たすことを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載のトチバニンジン属植物の抽出物。
【請求項５】
前記ジンセノサイドＲｇ２は２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ２および２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ２を含み、前記２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ２と前記２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ２の質量比は１．５〜２．５であり、好ましくは１．８〜２．０であることを特徴とする請求項４に記載のトチバニンジン属植物の抽出物。
【請求項６】
前記トチバニンジン属植物は、オタネニンジン、コウジン、コウライニンジン、サンシチニンジン、チクセツニンジン、アメリカニンジンのうちの少なくとも１種から選択されることを特徴とする請求項１に記載のトチバニンジン属植物の抽出物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載のトチバニンジン属植物の抽出物と薬学的に許容される担体とを含むことを特徴とする薬物組成物。
【請求項８】
前記薬物組成物の剤形は、錠剤、カプセル剤、経口投与液、トローチ剤、顆粒剤、懸濁用顆粒剤、丸剤、散剤、クリーム剤、丹剤、懸濁剤、粉剤、溶液剤、注射剤、坐剤、噴霧剤、滴剤、貼付剤から選択され、前記錠剤は口腔内崩壊錠が好ましいことを特徴とする請求項７に記載の薬物組成物。
【請求項９】
慢性心不全、冠動脈性心疾患、安定狭心症、不整脈、糖尿病およびその併発症、メニエール症候群、高脂血症、脂肪肝、アルツハイマー病、生理痛、メタボリックシンドローム、痛風、腫瘍または血管漏出症候群を治療する薬物の製造における請求項１〜６のいずれか一項に記載のトチバニンジン属植物の抽出物、請求項７または８に記載の薬物組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生薬抽出物およびその製造方法、具体的には、トチバニンジン属植物の抽出物およびその薬物組成物と使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニンジンはウコギ科植物であるオタネニンジンの根で、「百草の王」と呼ばれ、「万能聖薬」と讃えられ、世界中に名を馳せた貴重な薬材で、我が中国および東アジアで数千年も使用されてきた。研究では、ニンジンは主にサポニン、ペプチドおよびアミノ酸、ビタミンなどの物質を含有し、中でも、ジンセノサイド（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）はニンジンの効能の主要成分であることが見出され、幅広く人体の心血管、神経、免疫などのシステムに作用し、心血管疾患、代謝性疾患や腫瘍などの治療においてほかと異なる、独特な効果を示す。現在同定されているジンセノサイド単量体は約４０余りで、例えば、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｇ１、Ｒｇ２、Ｒｇ３、Ｒｈ１、Ｒｈ２やＲｅなどがある。
【０００３】
近年、多くの研究により、ジンセノサイド系成分は特定の物理・化学的条件または生物酵素の作用において糖含有量がより少なく、人体に直接吸収されるプロサポニン、例えば、Ｒｇ３、Ｒｇ５、Ｒｈ１、Ｒｋ１、Ｒｈ２、Ｒｇ２、Ｃ−Ｋなどに代謝され、治療作用を発揮することが見出されている。そのため、Ｒｇ３、Ｒｇ５、Ｒｋ１、Ｒｈ２、Ｒｇ２、Ｃ−Ｋなどは、医療および保健の機能を発揮するためのニンジンの主要な活性成分である。
【０００４】
ジンセノサイドＲｇ３（ＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ３）、ジンセノサイドＲｇ５（ＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｇ５）および／またはジンセノサイドＲｋ１（ＧｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅＲｋ１）はジンセノサイドが部分的に加水分解、一部のグリコシル基が脱離した分解物であるプロサポニンで、強い生物薬理学活性を有する。
これに鑑み、本発明を提出した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の第一の目的は、トチバニンジン属植物の抽出物を提供することにある。
【０００６】
本発明の第二の目的は、前記トチバニンジン属植物の抽出物を含有する薬物組成物を提供することにある。
【０００７】
本発明の第三の目的は、前記トチバニンジン属植物の抽出物の使用を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の目的を実現させるため、本発明は以下のような技術方案を採用する。
【０００９】
本発明は、トチバニンジン属植物の抽出物であって、ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｋ１およびジンセノサイドＲｇ５を含有し、前記ジンセノサイドＲｋ１と前記ジンセノサイドＲｇ５の質量比は１：１．０〜１．５であり、好ましくは１：１．０〜１．３である。
【００１０】
好ましくは、前記ジンセノサイドＲｇ５、前記ジンセノサイドＲｋ１および前記ジンセノサイドＲｇ３の質量パーセントでの含有量は、０．５≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１）／Ｒｇ３≦１．５であり、好ましくは０．５≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１）／Ｒｇ３≦１．０を満たす。
【００１１】
好ましくは、前記ジンセノサイドＲｇ３は２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ３および２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ３を含み、前記２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ３と前記２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ３の質量比は１〜１．５であり、好ましくは１．１〜１．２である。
【００１２】
好ましくは、前記トチバニンジン属植物の抽出物には、さらに、ジンセノサイドＲｇ２、ジンセノサイドＲｈ１およびジンセノサイドＲｈ２が含有され、前記ジンセノサイドＲｇ３、前記ジンセノサイドＲｇ５、前記ジンセノサイドＲｋ１、前記ジンセノサイドＲｇ２、前記ジンセノサイドＲｈ１、前記ジンセノサイドＲｈ２の質量パーセントでの含有量は、６０％≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１＋Ｒｇ３）／（Ｒｇ５＋Ｒｋ１＋Ｒｇ３＋Ｒｇ２＋Ｒｈ１＋Ｒｈ２）＜１００％を満たす。
【００１３】
好ましくは、前記ジンセノサイドＲｇ２は２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ２および２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ２を含み、前記２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ２と前記２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ２の質量比は１．５〜２．５であり、好ましくは１．８〜２．０である。
【００１４】
好ましくは、前記トチバニンジン属植物は、オタネニンジン、コウジン、コウライニンジン、サンシチニンジン、チクセツニンジン、アメリカニンジンのうちの少なくとも１種から選択される。
【００１５】
本発明は、本発明のトチバニンジン属植物の抽出物と薬学的に許容される担体を含有する薬物組成物に関する。
【００１６】
好ましくは、前記薬物組成物の剤形は、錠剤、カプセル剤、経口投与液、トローチ剤、顆粒剤、懸濁用顆粒剤、丸剤、散剤、クリーム剤、丹剤、懸濁剤、粉剤、溶液剤、注射剤、坐剤、噴霧剤、滴剤、貼付剤から選択され、前記錠剤は口腔内崩壊錠が好ましい。
【００１７】
本発明のトチバニンジン属植物の抽出物及び本発明の薬学的組成物は、慢性心不全、冠動脈性心疾患、安定狭心症、不整脈、糖尿病およびその併発症、メニエール症候群、高脂血症、脂肪肝、アルツハイマー病、生理痛、メタボリックシンドローム、痛風、腫瘍または血管漏出症候群を治療する薬物の製造において使用される。
【００１８】
本発明の技術方案が実現できる有益な技術効果は、少なくとも以下のとおりである。
【００１９】
本発明によって提供されるトチバニンジン属植物の抽出物におけるジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｇ５およびジンセノサイドＲｋ１は特定の比率の含有量を有し、より優れた生物活性がある。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ニンジンの全プロサポニンのサンプルの高速液体クロマトグラムである。
【図２】ジンセノサイドの標準物質の混合物の高速液体クロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下は本発明の具体的な実施形態であるが、前記実施例はさらに本発明を説明するためのものであって、本発明を制限するものではない。
【００２２】
本発明の実施例はトチバニンジン属植物の抽出物に関し、主にジンセノサイド（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）からなるものであり、−Ｇｌｃ−Ｇｌｃまたは−Ｇｌｃ−Ａｒａ（ｐｙｒ）が２０位で脱グリコシル化されると、プロトパナキサジオール型ジンセノサイドＲｂ１とＲｂ２から２０（Ｓ）−Ｒｇ３と２０（Ｒ）−Ｒｇ３が生成し、２０（Ｓ）−Ｒｇ３と２０（Ｒ）−Ｒｇ３の２０位が脱水すると、Ｒｇ５とＲｋ１を生成することができる。本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物は、主に、ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｋ１、ジンセノサイドＲｇ５、ジンセノサイドＲｇ２、ジンセノサイドＲｈ１およびジンセノサイドＲｈ２を含有する。本発明の実施例におけるトチバニンジン属植物の抽出物は、トチバニンジン属植物はオタネニンジン、コウジン、コウライニンジン、サンシチニンジン、チクセツニンジン、アメリカニンジンなどのトチバニンジン属植物から選択され、その使用可能な部分はトチバニンジン属植物の根、ひげ、茎、花、または葉であり、好ましくはトチバニンジン属植物の根、ひげである。
【００２３】
ジンセノサイドＲｇ５とＲｋ１は、Ｒｇ３からＣ−２０の−ＯＨとオルト位の−ＨでＨ２Ｏが脱離してＣ−２０とＣ−２２の間に二重結合が形成された位置異性体である。その構造式は、それぞれ
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である。
【００２４】
本発明の実施例において、ジンセノサイドＲｋ１とジンセノサイドＲｇ５の質量比は１：１．０〜１．５であり、好ましくは１：１．０〜１．３、最も好ましくは１：１．１５である。本発明のトチバニンジン属植物の抽出物は、ジンセノサイドＲｋ１とジンセノサイドＲｇ５の質量比に対する制御によって、その生理活性を大幅に向上させる。
【００２５】
本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物の改良として、ジンセノサイドＲｇ５、ジンセノサイドＲｋ１およびジンセノサイドＲｇ３の質量パーセントでの含有量は、０．５≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１）／Ｒｇ３≦１．５であり、好ましくは０．５≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１）／Ｒｇ３≦１．０、より好ましくは（Ｒｇ５＋Ｒｋ１）／Ｒｇ３＝０．８５を満たす。すなわち、本発明のトチバニンジン属植物の抽出物は、ジンセノサイドＲｇ５とジンセノサイドＲｋ１の含有量の合計とジンセノサイドＲｇ３が上記比率の関係を満たし、ジンセノサイドＲｇ５、ジンセノサイドＲｋ１の含有量の合計を十分に増加させることで、その生理活性がさらに向上する。
【００２６】
ジンセノサイドＲｇ３は、２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ３および２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ３を含み、これらはＣ−２０位のエナンチオマーであり、その構造式は、それぞれ
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である。
【００２７】
本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物の改良として、２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ３と２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ３の質量比は１〜１．５であり、好ましくは１．１〜１．２、より好ましくは１．１３である。
【００２８】
ジンセノサイドＲｇ２は、２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ２および２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ２を含み、これらはＣ−２０位のエナンチオマーであり、その構造式はそれぞれ以下の通りである。
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【００２９】
本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物の改良として、２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ２と２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ２の質量比は１．５〜２．５であり、好ましくは１．８〜２．０、より好ましくは１．９２である。
【００３０】
本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物の改良として、ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｇ５、ジンセノサイドＲｋ１、ジンセノサイドＲｇ２、ジンセノサイドＲｈ１およびジンセノサイドＲｈ２は、６０％≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１＋Ｒｇ３）／（Ｒｇ５＋Ｒｋ１＋Ｒｇ３＋Ｒｇ２＋Ｒｈ１＋Ｒｈ２）＜１００％を満たす。
【００３１】
より好ましくは、８０％≦（Ｒｇ５＋Ｒｋ１＋Ｒｇ３）／（Ｒｇ５＋Ｒｋ１＋Ｒｇ３＋Ｒｇ２＋Ｒｈ１＋Ｒｈ２）＜１００％を満たす。
【００３２】
すなわち、本発明において、Ｒｇ５、Ｒｋ１、Ｒｇ３の質量の合計は、Ｒｇ５、Ｒｋ１、Ｒｇ３、Ｒｇ２、Ｒｈ１、Ｒｈ２の質量の合計の８０％以上である。すなわち、本発明の実施例は、Ｒｇ５、Ｒｋ１、Ｒｇ３の含有量の合計を十分に増加させることで、その生理活性がさらに向上する。
【００３３】
本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物の改良として、Ｒｇ５、Ｒｋ１、Ｒｇ３、Ｒｇ２、Ｒｈ１、Ｒｈ２の質量の合計がトチバニンジン属植物の抽出物の合計質量の５０〜８０％を占める。残りの成分は、水分、灰分、色素、糖類物質などである。
【００３４】
本発明の実施例におけるトチバニンジン属植物の抽出物は、以下の方法によって製造することができる。
（１）トチバニンジン属植物の原料を有機溶媒で抽出して濃縮する。
【００３５】
（２）濃縮液を２０〜９０％の酢酸と混合し、４０℃〜５５℃、０．１１Ｍｐａ〜０．１５ＭＰａの条件下で５〜６０分間処理した後、０℃〜５℃、０．１３ＭＰａ〜０．１８ＭＰａの条件下で５〜６０分間処理した後、６０〜１１０℃に昇温して０．５〜５時間加熱し、加水分解液を得る。
【００３６】
（３）樹脂吸着、不純物除去、溶離、濃縮、乾燥を経た後、前記トチバニンジン属植物の抽出物を得る。
【００３７】
本発明の実施例の製造方法の改良として、工程（１）において、有機溶媒はアルコール系有機溶媒、好ましくはエタノールを使用してもよい。
【００３８】
本発明の実施例の製造方法の改良として、工程（２）において、酢酸の体積百分率濃度は、下限が２０％、２２％、２５％、２７％、３０％、３２％であり、上限が９０％、８７％、８５％、８２％、８０％、７５％、７０％、６５％であり、その具体的な濃度は上限と下限の間の任意の数値からなる。
【００３９】
本発明の実施例の製造方法の改良として、工程（３）において、樹脂吸着の具体的な手順は、加水分解液をマクロ孔質樹脂によって吸着させることである。
【００４０】
本発明の実施例の製造方法の改良として、工程（３）において、不純物除去の具体的な手順は、マクロ孔質吸着樹脂を通過した吸着カラムを水で溶離し、アルカリ水で溶離し、濃度が１８％以下のエタノールで不純物を溶離・除去することである。
【００４１】
本発明の実施例の製造方法の改良として、工程（３）において、溶離の具体的な手順は、濃度が３２％以上のエタノールで吸着カラムを溶離することである。
【００４２】
本発明の実施例の製造方法の改良として、工程（３）において、濃縮は減圧濃縮を使用してもよい。
【００４３】
本発明の実施例の製造方法の改良として、工程（３）において、乾燥は真空乾燥、加熱乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥から選択されてもよい。
【００４４】
本発明の実施例で製造されたトチバニンジン属植物の抽出物を以下のクロマトグラフィー条件下で分析する。
【００４５】
実験材料：２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ２、２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ２、２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｈ１、２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｈ１、２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｇ３、２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｇ３、ジンセノサイドＲｋ１、ジンセノサイドＲｇ５およびジンセノサイドＲｈ２の対照品、含有量９８％；メタノール、ＨＰＬＣ級；アセトニトリル、ＨＰＬＣ級；精製水。
実験装置：島津ＬＣ−２０１０Ａ、超音波装置、遠心機、ボルテックスミキサー。
【００４６】
対照品溶液の調製：各対照品１０ｍｇを精密に量って５ｍｌメスフラスコに入れ、メタノールに溶解させて目盛まで希釈し、濃度が２ｍｇ／ｍｌのストック液を調製し、各ストック液５００μｌを精密に吸い取り、５ｍｌメスフラスコに入れ、メタノールで目盛まで希釈し、濃度が０．２ｍｇ／ｍｌの混合溶液を調製した。
【００４７】
被験品溶液の調製：実施例１で製造されたトチバニンジン属植物の抽出物のサンプルを約１０ｍｇ精密に量って５ｍｌメスフラスコに入れ、メタノールに溶解させて目盛まで希釈し、重量を量り、３０ｍｉｎ超音波で処理した後、さらに重量を量って損失重量をメタノールで補い、１０ｍｌ遠心管に移した後、４５００ｒｐｍで１０ｍｉｎ遠心し、上清を取って０．４５μｍフィルターに通して注入分析した。
【００４８】
クロマトグラフィーカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ，５μｍ）；移動相：アセトニトリル（Ａ）−水（Ｂ）；勾配：１〜１０ｍｉｎ  １８〜２５％Ａ、１０〜２５ｍｉｎ  ２５〜４５％Ａ、２５〜４５ｍｉｎ  ４５〜６５％Ａ、４５〜５７ｍｉｎ  ６５〜９０％Ａ、５７〜５８ｍｉｎ  ９０〜１８％Ａ、５８〜６５ｍｉｎ  １８％Ａ；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；カラム温度：４０℃；検出波長：２０３ｎｍ；注入量：１０μｌ。
【００４９】
分析によって得られた指紋スペクトルを図１に示す。ここで、図２はジンセノサイドミックスである。外部標準法を用いて計算した含有量を表１に示す。
【００５０】
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【００５１】
本発明の実施例の製造方法の改良として、さらに収率を向上させるため、工程（１）において、まず、トチバニンジン属植物の原料を真空膨張処理する。
【００５２】
好ましくは、真空膨張処理の手順は、トチバニンジン属植物の原料を膨張タンクに入れ、加熱し、膨張タンク内の温度は３０〜１００℃で、圧力を０．１〜０．９ＭＰａに上げ、時間は５〜４０分間維持した後、すぐに膨張タンクと真空タンクを連結する減圧弁を開け、瞬時に圧力を−０．０４〜−０．０８ＭＰａに降下させ、冷却し、５〜４０分間維持し、真空タンクを事前に真空に吸引する。収率を５％〜３０％増加させることができる。
【００５３】
また、本発明の実施例は、本発明のトチバニンジン属植物の抽出物を含有する薬物組成物に関する。
【００５４】
本発明の実施例の薬物組成物は、必要によって、薬学的に許容される担体を含有してもよく、ここで、ニンジンのプロサポニン抽出物を薬物の活性成分とし、製剤における重量百分率は０．１〜９９．９％で、残りは薬学的に許容される担体でもよい。本発明の実施例の薬物組成物は、単位製剤の形態で存在し、単位製剤の形態とは製剤の単位であり、例えば、錠剤の１錠、カプセルの１粒、経口投与液の１本、顆粒剤の１袋、注射剤の１本などが挙げられる。
【００５５】
本発明の実施例の薬物組成物は、任意の薬用の剤形でもよく、これらの剤形は、錠剤（口腔内崩壊錠、糖衣錠剤、薄膜コーティング錠剤、腸衣錠剤を含む）、カプセル剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、経口投与液、トローチ剤、顆粒剤、懸濁用顆粒剤、丸剤、散剤、クリーム剤、丹剤、懸濁剤、粉剤、溶液剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、噴霧剤、滴剤、貼付剤を含む。
【００５６】
本発明の実施例の薬物組成物は、その経口投与の製剤が通常の賦形剤、例えば、バインダー、充填剤、希釈剤、打錠剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、調味剤や湿潤剤を含有してもよく、必要な場合、錠剤をコーティングしてもよい。
【００５７】
適用できる充填剤は、セルロース、マンニトール、乳糖および他の類似の充填剤を含む。適切な崩壊剤は、デンプン、ポリビニルピロリドンおよびデンプン誘導体、例えば、デンプングリコール酸ナトリウムを含む。適切な潤滑剤は、例えば、ステアリン酸マグネシウムを含む。適切な薬学的に許容される湿潤剤は、ドデシル硫酸ナトリウムを含む。
【００５８】
混合、充填、打錠などの通常の方法によって固体の経口投与組成物を製造することができる。混合を繰り返すことによって活性物質を大量の充填剤を使用するその組成物全体に分布させることができる。
【００５９】
経口投与液体製剤の形態は、例えば、水性または油性の懸濁液、溶液、乳剤、シロップ剤またはエリキシル剤でもよく、あるいは使用前に水または他の適切な担体で再調製できる乾燥製品でもよい。このような液体製剤は、通常の添加剤、例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルや水添食用脂肪のような懸濁化剤、レシチン、ソルビタンモノオレアートやアラビアゴムのような乳化剤、杏仁油、分留ヤシ油、グリセリンのエステルの油性エステル、プロピレングリコールやエタノールのような非水性担体（食用油を含んでもよい）、パラオキシ安息香酸エステルやｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルやソルビン酸のような防腐剤を含有してもよく、そして必要によって、通常の芳香剤または着色剤を含有してもよい。
【００６０】
注射剤について、製造される液体単位剤形は本発明の実施例の活性物質および無菌担体を含有する。担体および濃度によって、この化合物を懸濁または溶解させることができる。溶液の調製は、通常、活性物質を一つの担体に溶解させ、それをろ過・消毒して適切な小瓶またはアンプル瓶に入れた後、密封した。補助剤、例えば、一つの局部麻酔剤、防腐剤や緩衝剤もこの担体に溶解させてもよい。その安定性を向上させるため、小瓶に入れた後、この組成物を凍結し、そして真空で水を除去してもよい。
【００６１】
本発明の実施例の薬物組成物は、薬剤にする場合、選択的に適切な薬学的に許容される担体を入れてもよいが、前記薬学的に許容される担体は、マンニトール、ソルビトール、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩酸システイン、メルカプト酢酸、メチオニン、ビタミンＣ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡカルシウムナトリウム、１価のアルカリ金属の炭酸塩、酢酸塩、リン酸塩またはその水溶液、塩酸、酢酸、硫酸、リン酸、アミノ酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、乳酸ナトリウム、キシリトール、マルトース、グルコース、フルクトース、デキストラン、グリシン、デンプン、ショ糖、乳糖、マンニトール、ケイ素誘導体、セルロースおよびその誘導体、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、グリセリン、ツイン８０、寒天、炭酸カルシウム、炭酸水素ナカルシウム、界面活性剤、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、リン脂質系材料、カオリン、タルク粉、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムなどから選択される。
【００６２】
本発明の実施例の薬物組成物は、使用時、患者の様子によって使用法、使用量が決まり、１日に３回、毎回１〜２０単位の製剤、例えば、１〜２０袋または粒または錠で、１ｍｇ〜１０００ｍｇ／製剤でもよい。
【００６３】
本発明において、上記薬物製剤は当業者によって本分野で公知の通常の方法で製造されることができる。
【００６４】
また、本発明の実施例は、慢性心不全、冠動脈性心疾患、安定狭心症、不整脈、糖尿病およびその併発症、メニエール症候群、高脂血症、脂肪肝、アルツハイマー病、生理痛、メタボリックシンドローム、痛風、腫瘍または血管漏出症候群を治療する薬物の製造における当該トチバニンジン属植物の抽出物の使用に関する。
【００６５】
実験例１：アルツハイマー病の有効性実験
１．試験材料：本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物を正確に４ｇ量り、薬物補助剤を入れ、１００錠を製造し、各錠にトチバニンジン属植物の抽出物が４０ｍｇ含まれる。
【００６６】
２．試験方法：
軽度から中程度のアルツハイマー病の患者９９例で、男性は４７例で、女性は５２例で、年齢は５５〜８５（７３．５±７．６）歳で、ＭＭＳＥスコアは１０〜２４（１６．３±２．６）点であった。
【００６７】
ＡＤ患者はいずれも錠剤を使用し、１日に３回、毎回１錠、連続して１２週間施用した。
投与前および投与後、４週ごとに１回検査し、検査方法は以下の通りである。
【００６８】
（１）ＭＭＳＥによるＡＤのスクリーニング：患者の認知機能（方向、記憶力、計算力、言語能力、視空間認知の応用能力など）を検査した。
【００６９】
（２）臨床的認知症尺度（ＣＤＲ）で患者の認知症の重症度を検査した。
【００７０】
（３）日常生活自立尺度（ＡＤＬ）で患者の日常生活自立度を検査した。検査の結果はＳＰＳＳ統計ソフトによって処理し、治療前後およびジンセノサイドＲｇ３点鼻液群とプラセボ対照はいずれもｔ検定を使用した。
【００７１】
ＡＤ患者のＭＭＳＥ、ＣＤＲおよびＡＤＬの評価結果は表２に示す。
【００７２】
2020506909.tif 000007
注：自身対照群の治療前と治療後の比較、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【００７３】
認知機能（ＭＭＳＥスコアで）：治療１２週後、治療前と比べて有意に向上し、ＭＭＳＥスコアは４．３点上がり（Ｐ＜０．０１）、かつ投与４週の時ＭＭＳＥスコアは有意に改善した（Ｐ＜０．０５）。認知症重症度（ＣＤＲスコアで）：治療１２週後、治療前と比べて有意に低下し、ＣＤＲ点数は０．８点下がった（Ｐ＜０．０５）。日常生活自立度（ＡＤＬスコアで）：治療後は、治療前と比べて有意に低下し、ＡＤＬ点数は８．３点低下した（Ｐ＜０．０１）。
【００７４】
上記のように、本発明のトチバニンジン属植物の抽出物の使用はＡＤ患者の軽度、中程度認知機能障害、生活自立度の低下および認知症重症度の改善に安全で有効である。
【００７５】
実験例２：血糖降下の比較実験
１．実験材料
１．１  薬物と試薬
試験薬物：本発明の実施例で製造されたトチバニンジン属植物の抽出物
比較製剤１：組成は表３に示すように、標準物質で調製した。
【００７６】
2020506909.tif 000008
試験薬物および比較製剤１はそれぞれ０．５％のカルボキシメチルセルロースで溶液にして胃内投与に使用された。
ストレプトゾシン：（ｓｉｇｍａ社）
１．２  動物
Ｗｉｓｔａｒラットで、体重１８０±２０ｇで、山東大学医学部実験動物センターから購入した。
【００７７】
２、実験方法
２．１  高血糖モデルの構築
合格ラットを２０匹選び、正常対照群、モデル動物群、本発明群および対照群の４群に分け、その中で、モデル動物群、本発明群および対照群のラットは実験開始の３日前に、ストレプトゾシン６５ｍｇ／ｋｇを尾静脉注射し、血糖検出でモデル構築に成功したことが示された。
【００７８】
２．２  投与
正常対照群：等量の純水を経口投与した。
モデル動物群：等量の純水をモデル構築に成功した動物に経口投与した。
本発明群：モデル構築に成功した動物に本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物を２００ｍｇ／ｋｇ／ｄで、連続して１４日投与した。
対照群：モデル構築に成功した動物に比較製剤１を２００ｍｇ／ｋｇ／ｄで、連続して１４日投与した。
【００７９】
実験期間中、飼料と水を自由に摂取させた。各群の動物は投与後０日（投与前）、７日目および１４日目でそれぞれ血糖を測定した。毎回午前１０：００に、無麻酔の条件下で、ラットの尾静脈から採血し、その血液における血糖濃度を測定した。
【００８０】
３．試験結果
ＳＰＳＳ１１．０で処理し、すべてのデータに正規性と等分散性の検定を行った。各群のラットの血液における血糖濃度の測定結果の比較は一元配置分散分析を使用し、群間同士の比較はＳＮＫ−ｑ検定を使用し、検定レベルはα＝０．０５で、測定結果は表４に示す。
【００８１】
表４．ラットの血糖に対するトチバニンジン属植物の抽出物の影響（ｍｇ／ｄＬ）（ｘ±ｓ、ｎ＝５）
2020506909.tif 000009
注：モデル群との比較は＃Ｐ＜０．０５で、対照群との比較は＊  Ｐ＜０．０５である。
【００８２】
実験例３：血脂降下の比較実験
１．実験材料
１．１  薬物と試薬
試験薬物：本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物
比較製剤１：組成は実験例１と同様である。
試験薬物および比較製剤１はそれぞれ０．５％のカルボキシメチルセルロースで溶液にして胃内投与に使用された。
ＴＣ、ＴＧキット
【００８３】
１．２  動物
Ｗｉｓｔａｒラットで、体重１８０±２０ｇで、山東大学医学部実験動物センターから購入した。
【００８４】
１．３  装置
ＵＶ８５紫外分光光度計（上海天美）、日立７１７０Ａ全自動生化学分析装置
【００８５】
２、実験方法
２．１  高血脂モデルの構築
Ｗｉｓｔａｒラットを２０匹選び、正常対照群、モデル動物群、本発明群および対照群の４群に分け、その中で、モデル動物群、本発明群および対照群のラットは高脂質飼料を投与し、正常対照群は通常の飼料を投与した。週に１回体重を測定し、４、６、８週目にランダムに脂肪肝モデル群の動物を１〜２匹選び、尾静脈から１ｍｌ採血して血脂を検査し、血脂の動的変化を観察し、８週目の末に脂肪肝モデル群は血脂が有意に上昇し、肝臓は中程度から重度の脂肪硬変が現れ、モデルの構築に成功した。
高脂飼料の配合：通常の飼料＋１％コレステロール＋１４％豚脂
【００８６】
２．２  投与方法：
正常対照群とモデル動物群：蒸留水を胃内投与した。
対照群：２００ｍ  ｇ／ｋｇ／ｄで比較製剤１を連続して１４日投与した。
本発明群：２００ｍｇ／ｋｇ／ｄで本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物を連続して１４日投与した。
投与期間で通常の飼料を投与した。
【００８７】
２．３  サンプルの調製：
８週目の末、最後の摂食の１２時間後、首を切って採血し、低温で遠心し、血清を分離し、密封し、−２０℃で凍結保存して検出に備えた。
【００８８】
２．４  指標の検出
検出時、凍結保存された血清を３７℃の恒温水浴槽で解凍し、適量の血清を取り、それぞれキットの要件に従い、ＴＣ（トリグリセリド）、ＴＧ（コレステロール）の含有量を測定した。
【００８９】
３  実験結果
キットの要件に従ってラットの肝臓におけるＴＣ、ＴＧの含有量を測定し、測定結果は表５に示す。
【００９０】
表５．実験ラットの肝臓におけるＴＣ、ＴＧに対するトチバニンジン属植物の抽出物の影響（Ｘ±Ｓ、ｎ＝６）
2020506909.tif 000010
注：モデル群との比較は＃Ｐ＜０．０５で、対照群との比較は＊  Ｐ＜０．０５である。
【００９１】
実験例４：生理痛の比較実験
１．実験材料
１．１  薬品と試薬
試験薬物：本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物
比較製剤２は、組成は表６の通りである。
【００９２】
2020506909.tif 000011
試験薬物および比較製剤１はそれぞれ０．５％のカルボキシメチルセルロースで溶液にして胃内投与に使用された。
ジエチルスチルベストロール注射液、上海通用薬業有限公司
オキシトシン注射液、南京生物化学制薬工場
【００９３】
１．２  動物
雌ＳＤラットで、１６０〜１８０ｇで、山東大学医学部実験動物センターから購入した。
【００９４】
１．３  装置
ＰＢ３０３−Ｎ電子天秤、メトラー・トレド機械（上海）有限公司
ＰｏｗｅｒＬａｂ／８ｓ、付属ソフトとともに、オーストラリアＡＤ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社によって提供された。
【００９５】
２．方法・結果
２．１  動物モデルの構築
雌ＳＤラット４０を、ランダムにブランク対照群、モデル群、対照群、本発明群の４群に分けた。ブランク対照群以外、各群のラットはいずれもジエチルスチルベストロールを連続して１０日、毎日１回、皮下注射し、１日目および１０日目に０．８ｍｇ／匹で注射し、２〜９日目に０．２ｍｇ／匹で注射した。
【００９６】
２．２  投与方法：
ブランク対照群およびモデル群は等量の蒸留水を投与した。
対照群：５日目から、２００ｍｇ／ｋｇ／ｄで比較製剤２を投与した。
本発明群：５日目から、２００ｍｇ／ｋｇ／ｄで本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物を投与した。
【００９７】
９日目に最後にジエチルスチルベストロールを投与してから１時間後、ラットの腹腔にオキシトシンを２ｕ／匹注射し、３０分間内に各群のラットの疼痛反応を観察し、悶え反応でラットの腹部が収縮して凹み、躯幹と後肢が伸展し、臀部と一方の側の肢体が内側によじれることを子宮収縮生理痛の指標とし、３０分間内に各群のラットの生理痛の生理痛悶えの匹数および平均悶え回数を観察して記録し、生理痛の発生率を計算し、結果は表７に示す。
【００９８】
2020506909.tif 000012
モデル群との比較は＃Ｐ＜０．０５で、対照群との比較は＊  Ｐ＜０．０５である。
【００９９】
実験例５：血栓の比較実験
１．実験材料
ＳＤラット４０匹で、雌雄半々で、体重２５０〜３００ｇで、山東大学医学部実験動物センターから購入した。
試験薬物：本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物
比較製剤１の組成は表３の通りである。
比較製剤２の組成は表６の通りである。
試験薬物、比較製剤１および比較製剤２はそれぞれ０．５％のカルボキシメチルセルロースで溶液にして胃内投与に使用された。
【０１００】
２．実験方法：
ラットをランダムに４群（モデル群、対照群１、対照群２、実験群）に分け、各群に１０匹で、具体的な投与状況は以下の通りである。
対照群１：２００ｍｇ／ｋｇ／ｄで比較製剤１を投与した。
対照群２：２００ｍｇ／ｋｇ／ｄで比較製剤２を投与した。
実験群：２００ｍｇ／ｋｇ／ｄで本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物を投与した。
モデル群：純水
上記薬物を７ｄ胃内投与した。
【０１０１】
２．血栓形成抑制率の測定：
投与７日目に、各ラットに投与してから３０ｍｉｎ後ペントバルビタールトンナトリウムで麻酔し、左外頸静脈と右総頚動脈を分離し、３本のポリエチレン管からなる套管を取り、その中間に１本の５ｃｍの重量が量られた４番手術糸を置き、ヘパリン生理食塩水（５０Ｕ／ｍｌ）でポリエチレン管を充満させ、管の一端に外頸静脈を挿入した後、管の一端を挟んで糸が固定された一端の管に右総頚動脈を挿入し、手術完了後、すぐに血流を開放し、１５ｍｉｎ後血流を止め、すぐに糸を取り出して重量を測定した。合計重量から糸の重量を引くと、血栓の湿重量になる。
【０１０２】
抑制率＝（モデル群の血栓の湿重量−実験群の血栓の湿重量）／モデル群の血栓の湿重量
各群の血栓重量の平均値に対して統計学的処理を行い、ｔ検定で薬物の有意な効果を判断し、抑制率で薬物の作用強度を判定した。
【０１０３】
３．実験結果
【０１０４】
表８に示す。
2020506909.tif 000013
注：対照群１との比較は＃Ｐ＜０．０５で、対照群２との比較は＊  Ｐ＜０．０５である。
【０１０５】
実験例６：腫瘍の比較実験
１．実験材料
使用された腫瘍細胞株：Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌細胞、ＭＧＣ８０−３ヒト胃癌細胞、ＭＣＦ−７人乳癌細胞の３つのヒト腫瘍細胞系（使用された細胞培養液はそれぞれＲＰＭＩ  １６４０培養液、ＤＭＥＭ培養液、ＭＥＭ培養液）
試験薬物：本発明の実施例のトチバニンジン属植物の抽出物
比較製剤１の組成は表３の通りである。
比較製剤２の組成は表６の通りである。
【０１０６】
本発明の実施例のトチバニンジン属植物抽出物群はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶解させ、それぞれＲＰＭ  Ｉ−１６４０培養液、ＤＭＥＭ培養液、ＭＥＭ培養液で所要の濃度：１、２５、５０、１００、２００μｇ／Ｌに希釈し、細胞の培養に使用した。
【０１０７】
比較製剤はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶解させ、それぞれＲＰＭ  Ｉ−１６４０培養液、ＤＭＥＭ培養液、ＭＥＭ培養液で所要の濃度：１、２５、５０、１００、２００μｇ／Ｌに希釈し、細胞の培養に使用した。
【０１０８】
比較製剤はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶解させ、ＲＰＭ  Ｉ−１６４０培養液、ＤＭＥＭ培養液、ＭＥＭ培養液で所要の濃度：１、２５、５０、１００、２００μｇ／Ｌに希釈し、細胞の培養に使用した。
【０１０９】
２．方法
対数生長期の細胞を取り、０．２５％トリプターゼを入れて消化し、６００ｒ／ｍｉｎで１０ｍｉｎ遠心し、細胞濃度が６×１０４個／ｍＬになるように調整し、９６ウェル培養プレート（周縁ウェルに無菌ＰＢＳで充填）に９０μＬ／ウェル接種した。２４ｈ培養した後、それぞれ異なる濃度の実験サンプルを含有する培養液を入れ、かつ細胞に入れた薬液のＤＭＳＯ最終濃度が１％未満で、各群にいずれも３つの平行ウェルを設けた。３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで共に４８ｈ培養した。各ウェルに２０μＬのＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍＬ、ＰＢＳに溶解）を入れ、続いて４ｈ培養した後、培養を停止した。留意して上清液を吸い取り、各ウェルに１５０μＬのＤＭＳＯを入れ、１０ｍｉｎ振とうし、結晶物を十分に溶解させた。マイクロプレートリーダーによって５７０ｎｍで各ウェルの吸光値（Ａ）を測定し、細胞生存率を算出した：
細胞生存率％＝仕込みサンプルＡ値／対照細胞Ａ値×１００％。
【０１１０】
３．結果
実験結果から、本発明のトチバニンジン属植物の抽出物は３つのヒト腫瘍細胞系のいずれにも強い細胞殺傷作用を有し、比較例のトチバニンジン属植物の抽出物と比べ、効果が有意に増強した。結果を表９−１１に示す。
【０１１１】
表９．Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌細胞に対するトチバニンジン属植物の抽出物の影響
2020506909.tif 000014
【０１１２】
表１０．ＭＧＣ８０−３ヒト胃癌細胞に対するトチバニンジン属植物の抽出物の影響
2020506909.tif 000015
【０１１３】
表１１．ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞に対するトチバニンジン属植物の抽出物の影響
2020506909.tif 000016
【０１１４】
実施例１
トチバニンジン属植物の抽出物の製造方法は、以下の工程を含む。
（１）ニンジンの小片を６０％のエタノールで還流して３回抽出し、毎回４倍量の溶媒を使用し、毎回３時間で、抽出液を得、抽出液を合わせて減圧で濃縮した。
【０１１５】
（２）濃縮液を６０％の酢酸と等体積で混合し、４０℃、０．１１Ｍｐａの条件下で２０分間浸漬した後、５℃、０．１５ＭＰａの条件下で２０分間浸漬し、９０℃に昇温して２時間加熱し、加水分解液を得た。
【０１１６】
（３）Ｄ１０１マクロ孔質樹脂カラムに加水分解液を通過させた。
【０１１７】
（４）マクロ孔質吸着樹脂を通過した吸着カラムを水で溶離した後、０．５％の水酸化ナトリウム溶液で溶離し、中性まで水で溶離して１５％のエタノールで不純物を溶離・除去した。
【０１１８】
（５）５０％エタノールで溶離し、溶離液を収集し、減圧でエキスに濃縮し、７０℃で真空乾燥し、本発明のトチバニンジン属植物の抽出物を得た。
【０１１９】
製造されたトチバニンジン属植物の抽出物は上記高速液相クロマトグラフィーによって分析したところ、得られたスペクトルは図１と同様であった。他のニンジン系植物：コウジン、コウライニンジン、サンシチニンジン、チクセツニンジン、アメリカニンジンなどを使用し、本実施例の具体的な条件で製造し、得られたトチバニンジン属植物の抽出物の高速液相クロマトグラフィーのスペクトルは図１と同様であった。
【０１２０】
実施例２
トチバニンジン属植物の抽出物の製造方法は、以下の工程を含む。
【０１２１】
（１）真空膨張処理：サンシチニンジンの小片を膨張タンクに入れ、加熱し、膨張タンク内の温度は８０℃で、圧力を０．５ＭＰａに上げ、時間は２０分間維持し、真空タンクを事前に真空に吸引し、すぐに膨張タンクと真空タンクを連結する減圧弁を開け、瞬時に圧力を−０．０４ＭＰａに降下させ、冷却し、そして２０分間維持した。
【０１２２】
（２）膨張したサンシチニンジンの小片を５０％のエタノールで還流して３回抽出し、毎回２倍量の溶媒を使用し、毎回２時間で、抽出液を得た。
【０１２３】
（３）抽出液を８０％の酢酸と等体積で混合し、５５℃、０．１５Ｍｐａの条件下で１５分間浸漬した後、０℃、０．１８  ＭＰａの条件下で２５分間浸漬した。
（３）Ｄ１０１マクロ孔質樹脂カラムに加水分解液を通過させた。
【０１２４】
（４）マクロ孔質吸着樹脂を通過した吸着カラムを水で溶離した後、０．５％の水酸化ナトリウム溶液で溶離し、中性まで水で溶離して１２％のエタノールで不純物を溶離・除去した。
【０１２５】
（５）５５％エタノールで溶離し、溶離液を収集し、減圧でエキスに濃縮し、７０℃で真空乾燥し、本発明のトチバニンジン属植物の抽出物を得た。
【０１２６】
製造されたトチバニンジン属植物の抽出物は上記高速液相クロマトグラフィーによって分析したところ、得られたスペクトルは図１と同様であった。他のニンジン系植物：コウジン、コウライニンジン、チクセツニンジン、アメリカニンジンなどを使用し、本実施例の具体的な条件で製造し、得られたトチバニンジン属植物の抽出物の高速液相クロマトグラフィーのスペクトルは図１と同様であった。
【図１】
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【図２】
2020506909.tif 000018
【国際調査報告】
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2020506909.tif 000020
2020506909.tif 000021
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