(57)【要約】  ペプチドおよびペプチド類似体および代謝疾患、例えば、肥満症、糖尿病の治療方法、癌の治療方法、肝疾患の治療方法、および脂肪酸代謝の調節方法が、本明細書で提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
Ｘ１−ＱＥ−Ｘ２−Ｘ３−ＹＩ−Ｘ４−Ｙ−Ｘ５−Ｒ−Ｘ６    （Ｉ）（配列番号１）
（式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷであり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立に非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ４およびＸ５は、それぞれ独立に非極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、ＫＬ−Ｘ８またはＸ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖を有するアミノ酸であり、およびＸ９は、非極性側鎖を有するアミノ酸である。）のアミノ酸配列、またはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体、または薬学的に許容可能なその塩を含み、
配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つから構成されないペプチド。
【請求項２】
Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷであり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立に、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ４およびＸ５はそれぞれ独立に、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、ＫＬ−Ｘ８またはＸ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され、またＸ９はＧ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択される、請求項１に記載のペプチド、または薬学的に許容可能なその塩。
【請求項３】
Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷであり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、ＭまたはＥであり；Ｘ２はＭ、ＡまたはＥであり；Ｘ３はＧ、ＮまたはＱであり；Ｘ４はＦまたはＡであり；Ｘ５はＰまたはＡであり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、ＫＬ−Ｘ８またはＸ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、ＲまたはＡであり、Ｘ９はＫ、Ａ、（ｄＡ）、ＮおよびＱから選択される、請求項１に記載のペプチドまたは薬学的に許容可能なその塩。
【請求項４】
ＭＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２０８）；
ＭＲＷＱＥＡＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲ（ｄＡ）ＬＲ（配列番号１４９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＮＬＲ（配列番号２１３）；
ＭＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号２１９）；
ＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２４８）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号１９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＡ（配列番号２１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＡＲＫＬＲ（配列番号１７）；
ＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＱＬＲ（配列番号２１７）；
ＭＲＷＱＥＥＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１７２）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号４５）；
ＥＲＷＱＥＡＧＹＩＡＹＰＲ（配列番号２４１）；
ＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＡＫＬＲ（配列番号１８）；
からなる群より選択される、請求項１に記載のペプチド、または薬学的に許容可能なその塩。
【請求項５】
式Ｉ：
Ｘ１−ＱＥ−Ｘ２−Ｘ３−ＹＩ−Ｘ４−Ｙ−Ｘ５−Ｒ−Ｘ６    （Ｉ）
（式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷであり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立に非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ４およびＸ５は、それぞれ独立に非極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、ＫＬ−Ｘ８またはＸ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖を有するアミノ酸であり、およびＸ９は、非極性側鎖を有するアミノ酸である。）のアミノ酸配列、または薬学的に許容可能なその塩を含み、
配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つから構成されない単離ペプチド。
【請求項６】
Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷであり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、および（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立に、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、および（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ４およびＸ５はそれぞれ独立に、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、ＫＬ−Ｘ８またはＸ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され、またＸ９はＧ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択される、請求項５に記載の単離ペプチド、または薬学的に許容可能なその塩。
【請求項７】
Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷであり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、ＭまたはＥであり；Ｘ２はＭ、ＡまたはＥであり；Ｘ３はＧ、ＮまたはＱであり；Ｘ４はＦまたはＡであり；Ｘ５はＰまたはＡであり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、ＫＬ−Ｘ８またはＸ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、ＲまたはＡであり、Ｘ９はＫ、Ａ、（ｄＡ）、ＮおよびＱから選択される、請求項５に記載の単離ペプチドまたは薬学的に許容可能なその塩。
【請求項８】
ＭＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２０８）；
ＭＲＷＱＥＡＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲ（ｄＡ）ＬＲ（配列番号１４９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＮＬＲ（配列番号２１３）；
ＭＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号２１９）；
ＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２４８）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号１９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＡ（配列番号２１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＡＲＫＬＲ（配列番号１７）；
ＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＱＬＲ（配列番号２１７）；
ＭＲＷＱＥＥＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１７２）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号４５）；
ＥＲＷＱＥＡＧＹＩＡＹＰＲ（配列番号２４１）；
ＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＡＫＬＲ（配列番号１８）；
より選択される、請求項５に記載の単離ペプチド、または薬学的に許容可能なその塩。
【請求項９】
ＭＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２０８）；
ＭＲＷＱＥＡＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲ（ｄＡ）ＬＲ（配列番号１４９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＮＬＲ（配列番号２１３）；
ＭＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号２１９）；
ＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２４８）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号１９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＡ（配列番号２１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＡＲＫＬＲ（配列番号１７）；
ＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＱＬＲ（配列番号２１７）；
ＭＲＷＱＥＥＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１７２）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号４５）；
ＥＲＷＱＥＡＧＹＩＡＹＰＲ（配列番号２４１）；
ＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＡＫＬＲ（配列番号１８）；
から選択されるペプチドを含む修飾ペプチドであって、
（ｉ）Ｄ−立体配置を有するアミノ酸、および（ｉｉ）非天然アミノ酸残基から選択される少なくとも１個のアミノ酸による置換を含む、修飾ペプチド、または薬学的に許容可能なその塩。
【請求項１０】
持続時間延長部分をさらに含み、必要に応じ、前記ペプチドと、前記持続時間延長部分とを、代謝的に切断可能なリンカーを用いてカップリングする、請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１１】
（ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）、（ｂ）ＹＩＦＹ（配列番号２９５）、または（ｃ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩＦＹ（配列番号２９５）の両方を含み、８〜２０アミノ酸長さであり、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示し、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させ、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す、ペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項１２】
前記ペプチドまたはペプチド類似体の部分（ａ）は、部分（ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸を有する、（ａ）および（ｂ）を含む、請求項１１に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項１３】
前記ペプチドまたはペプチド類似体の部分（ａ）は、部分（ｂ）に対するＮ末端であり、１、２、または３個の介在アミノ酸を有する、請求項１２に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項１４】
配列番号２９４のＡｒｇのＮ末端に隣接したＭｅｔまたは配列番号２９４のＧｌｕのＣ末端に隣接したＭｅｔを含む、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項１５】
ＭＲＷＱＥ（配列番号３５０）、ＲＷＱＥＭ（配列番号３５１）またはＭＲＷＱＥＭ（配列番号３５２）を含む、請求項１４に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項１６】
配列番号２９５の最初のアミノ酸に対するＮ末端に隣接したＧｌｙ、配列番号２９５の最後のアミノ酸に対するＣ末端に隣接したＰｒｏを含むか、またはＧＹＩＦＹＰ（配列番号３５３）を含む、請求項１１〜１５のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項１７】
ＹＩＦＹＰＲ（配列番号２９６）、ＹＩＦＹＰＲＫ（配列番号２９７）、ＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号２９８）、またはＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号２９９）を含む、請求項１１〜１６のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項１８】
下記を含む、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体：
（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列、および
（Ｂ）１個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列。
【請求項１９】
１個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列は、ＸＩＦＹ（配列番号３００）、ＹＸＦＹ（配列番号３０１）、ＹＩＸＹ（配列番号３０２）、またはＹＩＦＸ（配列番号３０３）を含み、Ｘは任意のアミノ酸である、請求項１８に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２０】
配列番号３００〜３０３のいずれか１つのＸは、小さい脂肪族アミノ酸または酸性アミノ酸である、請求項１９に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２１】
配列番号３００〜３０３のいずれか１つのＸは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される、請求項１９または２０に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２２】
（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列および（Ｂ）２個のアミノ酸修飾を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む、請求項１１〜２１のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２３】
（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列および（Ｂ）２個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２４】
ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩＡＥ（配列番号３０８）またはＥＩＦＥ（配列番号３０９）のアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２５】
ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩまたはＹＩＦのアミノ酸配列を含む、請求項１１〜２４のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２６】
（Ａ）ＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列および（Ｂ）１個のアミノ酸置換を有するＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列を含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２７】
１個のアミノ酸置換を有するＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列であって、ＸＷＱＥ（配列番号３０４）、ＲＸＱＥ（配列番号３０５）、ＲＷＸＥ（配列番号３０６）、またはＲＷＱＸ（配列番号３０７）を含み、Ｘは任意のアミノ酸であるアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２８】
Ｘは、脂肪族アミノ酸または荷電アミノ酸である、請求項２６に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項２９】
ＸＷＱＥ（配列番号３０４）を含む場合、Ｘは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（ｄＡ）、Ｇｌｕからなる群から選択される、請求項２７に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３０】
ＲＸＱＥ（配列番号３０５）を含む場合、Ｘは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕからなる群から選択される、請求項２７に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３１】
ＲＷＸＥ（配列番号３０６）を含む場合、Ｘは、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、（ｄＡ）からなる群から選択される、請求項２７に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３２】
ＲＷＱＸ（配列番号３０７）を含む場合、Ｘは、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、（ｄＡ）からなる群から選択される、請求項２７に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３３】
前記ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸を有する、請求項１４〜３２のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３４】
前記ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、１、２、または３個の介在アミノ酸を有する、請求項３３に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３５】
ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＦＹ（配列番号３１９）のアミノ酸配列を含み、各Ｘ１およびＸ２は、独立に任意のアミノ酸である、請求項１１〜３４のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３６】
Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、およびこれらの等価物からなる群から選択される、請求項３５に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３７】
Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびＣｙｓからなる群から選択される、請求項３６に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３８】
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびこれらの等価物からなる群から選択される、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項３９】
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される、請求項３５に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４０】
Ｘ１Ｘ２は、Ｍｅｔ−Ａｓｎ、Ｍｅｔ−Ｇｌｎ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｎｌｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−（ｄＡ）、（ｄＡ）−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ｇｌｕ、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ａｓｎ、またはＧｌｕ−Ｇｌｎである、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４１】
ＲＷＱＥＸ１Ｘ２Ｘ３ＩＦＹ（配列番号３２０）、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＸ３ＦＹ（配列番号３２１）、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＸ３Ｙ（配列番号３２２）またはＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＦＸ３（配列番号３２３）のアミノ酸配列を含み、各Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立に任意のアミノ酸である、請求項１１〜４１のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４２】
Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、およびこれらの等価物からなる群から選択される、請求項４２に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４３】
Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびＣｙｓからなる群から選択される、請求項４２に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４４】
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびこれらの等価物からなる群から選択される、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４５】
Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される、請求項４４に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４６】
Ｘ１Ｘ２は、Ｍｅｔ−Ａｓｎ、Ｍｅｔ−Ｇｌｎ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｎｌｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−（ｄＡ）、（ｄＡ）−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ｇｌｕ、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ａｓｎ、またはＧｌｕ−Ｇｌｎである、請求項４４に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４７】
Ｘ３は、小さい脂肪族アミノ酸または酸性アミノ酸である、請求項４１〜４５のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４８】
Ｘ３は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される、請求項４６に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項４９】
前記ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸を有する、請求項３５〜４７のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項５０】
前記ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、１、２、または３個の介在アミノ酸を有する、請求項４８に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項５１】
配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９の配列から構成されない、請求項１１〜４９のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項５２】
配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つを含むペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項５３】
配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つを含む、から本質的になる、またはからなるか、または配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７の内の１つに対する少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、から本質的になる、またはからなる、ペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項５４】
８〜２０アミノ酸長さである、請求項５２に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項５５】
（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方の性質を示す、請求項５２または５３に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項５６】
配列番号１１、１７〜１９、２１、３２、４５、１４８、１７２、２０８、２１０、２１１、２１３、２１９、および２４１のいずれか１つを含む、から本質的になる、またはからなる、請求項５２〜５４のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項５７】
式ＩＩ：
Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｑ−Ｅ−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｙ−Ｉ−Ｘ２２−Ｙ−Ｘ２３−Ｘ２４−Ｘ２５    （ＩＩ）（配列番号３７８）
（式中、Ｘ１７は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ１８は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ１９は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２０は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２１は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２２は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２３は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２４は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；およびＸ２５は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖、−ＬＫＲ、−ＫＬＸ２６、−Ｘ２７ＬＲ、−ＫＸ２８Ｒ、−ＲＸ２９Ｒおよび−ＫＲＸ３０を有するアミノ酸から選択され；Ｘ２６は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；Ｘ２７は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；Ｘ２８は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；Ｘ２９は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；およびＸ３０は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；但し、Ｘ１９が非存在の場合、Ｘ１７およびＸ１８は非存在であり；さらに、Ｘ１８が非存在の場合、Ｘ１７は非存在であり；さらに、ペプチドは、配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つからなるペプチドではない、という条件の場合である。）のアミノ酸配列、および／またはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩を含む、ペプチド。
【請求項５８】
Ｘ１７は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｎｌｅ、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ１８は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ１９は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２０は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２１は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２２は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２３は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２４は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２５は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍ、（ｄＭ）、−ＬＫＲ、−ＫＬＸ２６、−Ｘ２７ＬＲ、−ＫＸ２８Ｒ、−ＲＸ２９Ｒおよび−ＫＲＸ３０から選択され；Ｘ２６は存在しないか、または存在する場合は、−ＲＥ、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２７は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２８は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２９は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ３０は存在しないか、または存在する場合は、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択される、請求項５７に記載のペプチドまたはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩。
【請求項５９】
Ｘ１７は存在しないか、または存在する場合は、Ｍ、Ｌ、Ｇ、Ｋ、Ｅ、Ａ、（ｄＡ）またはＮｌｅであり；Ｘ１８は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｋ、Ａｉｂ、（ｄＡ）またはＥであり；Ｘ１９は存在しないか、または存在する場合は、Ｗ、Ａ、（ｄＡ）、Ｇ、またはＥであり；Ｘ２０は、Ｎｌｅ、Ｇ、Ｋ、Ｃｃｙｃ、（ｄＡ）、ＭまたはＡであり；Ｘ２１は、Ｇ、Ｎ、Ｑ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ２２は、Ｆ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ２３は、Ｐ、Ｇ、Ｅ、Ｆ、Ｃｃｙｃ、Ｋｃｙｃ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ２４は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ｇ、Ｄ、Ｌ、Ｋ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；およびＸ２５は存在しないか、または存在する場合は、−Ｋ、−Ｒ、Ｎ、Ｑ、（ｄＡ）、−ＫＬ、−ＫＲ、−Ｒ（Ｄａ）、−ＫＬＲ、−Ｋ（Ａｃ）ＬＲ、−Ｋ（ｃｙｃ）ＬＲ、−ＡＬＲ、−（ｄＡ）ＬＲ、−ＧＬＲ、−ＥＬＲ、−ＮＬＲ、−ＱＬＲ、−ＫＡＲ、−Ｋ（ｄＡ）Ｒ、−ＫＧＲ、−ＫＥＲ、−ＫＬＡ、−ＫＬ（ｄＡ）、−ＫＬＤ、−ＫＬＥ、−ＫＬＧ、−ＫＬＫ、−ＲＫＲ、−ＲＬＲ、−ＬＫＲ、−ＫＲＬ、および−ＫＬＲＥから選択される、請求項５７に記載のペプチド、そのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩。
【請求項６０】
式ＩＩＩ：
Ｘ３１−Ｘ３２−Ｘ３３−Ｘ３４−Ｘ３５−Ｘ３６−Ｘ３７−Ｘ３８−Ｘ３９−Ｘ４０−Ｘ４１−Ｘ４２−Ｘ４３−Ｘ４４−Ｘ４５−Ｘ４６−Ｘ４７    （ＩＩＩ）（配列番号３７９）
（式中、Ｘ３１は存在しないか、または存在する場合は、Ｍ、Ｌ、Ｇ、Ｋ、Ｅ、Ａ、（ｄＡ）またはＮｌｅであり；Ｘ３２は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｋ、Ａｉｂ、（ｄＡ）またはＥであり；Ｘ３３は存在しないか、または存在する場合は、Ｗ、Ａ、（ｄＡ）、Ｇ、またはＥであり；Ｘ３４は、Ｑ、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｅｃｙｃ、ＮまたはＥであり；Ｘ３５は、Ｅ、Ｅｃｙｃ、Ｄ、Ｇ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３６は、Ｎｌｅ、Ｇ、Ｋ、Ｃｃｙｃ、（ｄＡ）、ＭまたはＡであり；Ｘ３７は、Ｇ、Ｎ、Ｑ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３８は、Ｙ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３９は、Ｉ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４０は、Ｆ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４１は、Ｙ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４２は存在しないか、または存在する場合は、Ｐ、Ｇ、Ｅ、Ｆ、Ｃｃｙｃ、Ｋｃｙｃ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４３は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ｇ、Ｄ、Ｌ、Ｋ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４４は存在しないか、または存在する場合は、Ｋ、Ｋ−Ａｃ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｑ、Ｎ、Ｋｃｙｃ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４５は存在しないか、または存在する場合は、Ｌ、Ｇ、Ｒ、Ｋ、Ｄｅｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４６は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｋ、Ｇ、（ｄＡ）またはＡであり；およびＸ４７は存在しないか、または存在する場合は、Ｅであり；但し、Ｘ３３が存在しない場合、Ｘ３１およびＸ３２は存在せず；さらにＸ３２が存在しない場合、Ｘ３１は存在せず；さらにＸ４２が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、Ｘ４５、Ｘ４４、およびＸ４３は存在せず；さらにＸ４３が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、Ｘ４５、およびＸ４４は存在せず；さらにＸ４４が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、およびＸ４５は存在せず；さらにＸ４５が存在しない場合、Ｘ４７、およびＸ４６は存在せず；およびさらにＸ４６が存在しない場合、Ｘ４７は存在せず；また、ペプチドは、配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つからなるペプチドではない、という条件の場合である。）のアミノ酸配列、および／またはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩を含むペプチド。
【請求項６１】
前記ペプチドは、誘導体化される、請求項１〜６０のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項６２】
前記誘導体は、アセチル化、ペグ化、ビオチン化、またはアシル化により調製される、請求項６１に記載のペプチド。
【請求項６３】
前記誘導体は、ＰＥＧ６００、アセチル、ビオチンまたはパルミチルである、請求項６２に記載のペプチド。
【請求項６４】
本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項６５】
請求項１〜６４のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体および異種の部分を含むコンジュゲート。
【請求項６６】
請求項１〜６５のいずれか１項に記載のペプチドもしくはペプチド類似体またはコンジュゲートをコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項６７】
請求項６６に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項６８】
請求項６６に記載の核酸または請求項６７に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項６９】
請求項１〜６８のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞、ならびに担体、賦形剤、または希釈剤を含む、組成物。
【請求項７０】
請求項１〜６９のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞を、容器またはパッケージ中に含む、キット。
【請求項７１】
ペプチドまたはペプチド類似体を製造する方法であって、
ａ．ＲＷＱＥ（配列番号２９４）、
ｂ．ＹＩＦＹ（配列番号２９５）、または
ｃ．ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩＦＹ（配列番号２９５）の両方、のアミノ酸配列を含み、
前記ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さであり；
前記ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示し、
（ｉ）第１のアミノ酸を第２のアミノ酸と反応させて、前記第１のアミノ酸と前記第２のアミノ酸との間に共有結合を形成させるステップであって、前記第１のアミノ酸または前記第２のアミノ酸を、必要に応じ、別のアミノ酸に結合させるステップ、および（ｉｉ）前記ステップ（ｉ）の反応を反復し、それにより前記ペプチドまたはペプチド類似体を製造するステップを含む、方法。
【請求項７２】
実施例１に記載の１つまたは複数のステップを含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
治療を必要としている対象の代謝疾患を治療する方法であって、請求項１〜７２のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞を、前記代謝疾患を治療するための有効量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項７４】
請求項１〜７３のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞の、代謝疾患の治療のための使用。
【請求項７５】
前記代謝疾患は、肥満症、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、認知障害および／または神経変性障害、心臓血管疾患、脂肪性肝疾患、および胃腸疾患からなる群から選択される、請求項７３または７４に記載の方法または使用。
【請求項７６】
治療を必要としている対象の癌を治療する方法であって、請求項１〜７５のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞を、前記癌を治療するための有効量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項７７】
前記癌は、肺癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、または肝細胞癌である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
治療を必要としている対象の肝疾患を治療する方法であって、請求項１〜７７のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞を、前記肝疾患を治療するための有効量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項７９】
前記肝疾患は、脂肪性肝疾患である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
前記脂肪性肝疾患は、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
脂肪酸代謝の調節を必要としている対象の脂肪酸代謝を調節する方法であって、請求項１〜８０のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞を、前記脂肪酸代謝を調節するための有効量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８２】
脂肪酸代謝は、前記ペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞を前記対象に投与後に前記対象中で増加する、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
減量を必要としている対象の体重を減らす方法であって、請求項１〜８２のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞を、前記対象の体重を減らすための有効量で前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８４】
請求項１〜８３のいずれか１項に記載のペプチド、ペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞のいずれか１つの、代謝疾患、癌、肝疾患、または本明細書に記載のいずれかの疾患、障害、または医学的状態の治療処置における使用。
【請求項８５】
請求項１〜８４のいずれか１項に記載のペプチド、ペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、または宿主細胞のいずれか１つの、代謝疾患、癌、肝疾患、または本明細書に記載のいずれかの疾患、障害、または医学的状態の治療のための薬物の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
電子申請データの参照による組み込み
本明細書と同時に提出され、２０１７年９月２１日に作成された「５１１５５Ａ＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」という名称の１２４，４３７バイトのＡＣＩＩ（テキスト）ファイルとして認識されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
米国の２０歳以上の成人の内で、１／３を超える人が、２０１１〜２０１４年の間に肥満であった（Ｏｇｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｏｂｅｓｉｔｙ  Ａｍｏｎｇ  Ａｄｕｌｔｓ  ａｎｄ  Ｙｏｕｔｈ：Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ，２０１１−２０１４），ＮＣＨＳ  Ｄａｔａ  Ｂｒｉｅｆ，Ｎｏ．２１９（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１５）。米国の子供（２〜１９歳）の内で肥満症の発生率は、この期間中１７％であった（Ｏｇｄｅｎ、２０１５、前出）。肥満症は、代謝症候群、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂肪性肝疾患、心臓血管疾患、閉塞型睡眠時無呼吸、脳卒中、高血圧、変形性関節症、生殖上の問題、および癌を含む、多くの健康問題の発生のリスク因子である（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ａｒｔｉｃｌｅ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｈｌｂｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｈｅａｌｔｈ／ｈｅａｌｔｈ−ｔｏｐｉｃｓ／ｔｏｐｉｃｓ／ｏｂｅ／ｒｉｓｋｓ）。
【０００３】
肥満関連状態である糖尿病は、米国における２０１０年の７番目に大きい死亡原因であった。２０１２年には、米国集団の９．３％（または２９．１百万人）が糖尿病であり、米国の約２０８，０００人の子供が糖尿病と診断されていると推定された。毎年、米国で１４０万人が糖尿病と診断されている。糖尿病は、低血糖症、高血圧、脂質異常症、心臓血管疾患、脳卒中、失明、糖尿病性網膜症、腎疾患、および肢切断を含むいくつかの合併症および併存疾患を伴う。米国糖尿病学会によると、２０１２年の米国における診断された糖尿病の推定全体コストは、２４５０億ドルであった（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３６：１０３３−１０４６（Ａｐｒｉｌ  ２０１３））。このコストは、糖尿病が米国社会に課する実質的な負担を明確に示す。
【０００４】
米国食品医薬品局の２０００〜２０１５年に３５種を超える薬剤の認可にもかかわらず、依然として、肥満症および糖尿病に対するよりすぐれた治療薬の必要性が残されている。
【０００５】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、肝臓中のトリグリセリドの形態での過剰脂肪の蓄積の状態（脂肪症）である。ＮＡＦＬＤは、米国で最もよくある形態の慢性肝疾患で、８千万人もの多くの人が、特に４０代および５０代の人が罹患している。肝臓関連罹患率および死亡率に加えて、ＮＡＦＬＤは多臓器疾患であり、２型糖尿病、心臓血管疾患および心臓病、癌、および慢性腎疾患のリスクが高まるという証拠が増えている。ＮＡＦＬＤ患者の内で、死亡の大部分は心臓血管疾患に起因するが、米国の１千５百万人もの人が、ＮＡＳＨ（非アルコール性脂肪性肝炎）と呼ばれる状態である肝細胞損傷および炎症を罹患している。ＮＡＳＨは、米国における肝硬変の主要原因の１つにランクされている中年で体重過剰または肥満の人で発生する場合が最も多く、２０３０年までに肝移植の適応頻度が最も高くなると予測されている。現時点で、ＮＡＳＨの治療用の承認薬は存在しない。
【発明の概要】
【０００６】
本開示は、ペプチドおよびペプチド類似体ならびにＮＡＳＨ、体重、血糖値、および体脂肪量に関連する疾患、例えば、肥満症、脂肪性肝疾患および糖尿病を含む代謝疾患の治療方法におけるその使用を提供する。
【０００７】
例示的実施形態では、本開示のペプチドは、式Ｉ：
Ｘ１−Ｑ−Ｅ−Ｘ２−Ｘ３−Ｙ−Ｉ−Ｘ４−Ｙ−Ｘ５−Ｒ−Ｘ６    （Ｉ）（配列番号１）
のアミノ酸配列または薬学的に許容可能なその塩を含み；
式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷ−であり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立に非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ４およびＸ５は、それぞれ独立に非極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、−ＫＬ−Ｘ８または−Ｘ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖を有するアミノ酸であり、およびＸ９は、非極性側鎖を有するアミノ酸であり；但し、ペプチドは、ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号２）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＦＲＫＬＲ（配列番号３１６）；ＭＧＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号３１７）；および／またはＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号３１８）のいずれでもないという条件の場合である。
【０００８】
いくつかの例示的実施形態では、ペプチドは、発明を実施するための形態の項に記載の式ＩＩまたは式ＩＩＩのアミノ酸配列を含む。
【０００９】
例示的実施形態では、式Ｉ、式ＩＩ、および／または式ＩＩＩのペプチドが単離される。
【００１０】
例示的実施形態では、ペプチドは、
ＭＲＷＱＥＡＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲ（ｄＡ）ＬＲ（配列番号１４９）；
ＭＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２０８）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＮＬＲ（配列番号２１３）；
ＭＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号２１９）；
ＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２４８）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号１９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＡ（配列番号２１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＡＲＫＬＲ（配列番号１７）；
ＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＱＬＲ（配列番号２１７）；
ＭＲＷＱＥＥＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１７２）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号４５）；
ＥＲＷＱＥＡＧＹＩＡＹＰＲ（配列番号２４１）；
ＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１１）；および
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＡＫＬＲ（配列番号１８）；
（これらの修飾には、ペプチド中の少なくとも１個のアミノ酸の、（ｉ）Ｄ−立体配置を有するアミノ酸、および（ｉｉ）非天然アミノ酸残基から選択される別のアミノ酸による置換が含まれる。）から選択されるペプチド配列の修飾；または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００１１】
例示的実施形態では、ペプチドは、賦形剤を用いて処方し、患者の疾患または別の医学的状態の治療に使用できる、医薬組成物を提供する。
【００１２】
例示的実施形態では、ペプチドは、式Ｉ（式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷ−であり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立に、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ４およびＸ５はそれぞれ独立に、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、−ＫＬ−Ｘ８または−Ｘ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され、またＸ９はＧ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択される。）のアミノ酸配列、または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００１３】
例示的実施形態では、ペプチドは、式Ｉ（式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷ−であり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、ＭまたはＥであり；Ｘ２はＭ、ＡまたはＥであり；Ｘ３はＧ、ＮまたはＱであり；Ｘ４はＦまたはＡであり；Ｘ５はＰまたはＡであり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、−ＫＬ−Ｘ８または−Ｘ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、ＲまたはＡであり、Ｘ９はＫ、Ａ、（ｄＡ）、ＮおよびＱから選択される。）のアミノ酸配列または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００１４】
例示的実施形態では、ペプチドは、ＭＲＷＱＥＡＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１１）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲ（ｄＡ）ＬＲ（配列番号１４９）；ＭＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２０８）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＮＬＲ（配列番号２１３）；ＭＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号２１９）；ＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１０）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号１９）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＡ（配列番号２１）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＡＲＫＬＲ（配列番号１７）；ＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＱＬＲ（配列番号２１７）；ＭＲＷＱＥＥＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１７２）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号４５）；ＥＲＷＱＥＡＧＹＩＡＹＰＲ（配列番号２４１）；ＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１１）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＡＫＬＲ（配列番号１８）からなる群より選択される配列および薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００１５】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）、（ｂ）ＹＩＦＹ（配列番号２９５）、または（ｃ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩＦＹ（配列番号２９５）の両方を含み、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。
【００１６】
例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、Ｃ末端酸もしくはアミド、またはそのＮ−アセチル誘導体である。
【００１７】
例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド誘導体は、ＰＥＧ、アセチル、ビオチンまたはその脂肪酸誘導体である。例示的実施形態では、ペプチド誘導体は、ＰＥＧ６００、アセチル、ビオチンまたはパルミチルである。
【００１８】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列および（Ｂ）１個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、１個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列は、ＸＩＦＹ（配列番号３００）、ＹＸＦＹ（配列番号３０１）、ＹＩＸＹ（配列番号３０２）、またはＹＩＦＸ（配列番号３０３）を含み、Ｘは任意のアミノ酸である。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、部分（Ａ）と部分（Ｂ）との間に、１、２、３つまたはそれを超えるアミノ酸を含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【００１９】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列および（Ｂ）２個のアミノ酸修飾を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列および（Ｂ）２個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩＡＥ（配列番号３０８）またはＥＩＦＥ（配列番号３０９）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）および（Ｂ）切断型のＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）および（Ｂ）ＹＩまたはＹＩＦのアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、部分（Ａ）と部分（Ｂ）との間に、１、２、３個またはそれを超えるアミノ酸を含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【００２０】
例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列および（Ｂ）１個のアミノ酸置換を有するＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、１個のアミノ酸置換を有するＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列は、ＸＷＱＥ（配列番号３０４）、ＲＸＱＥ（配列番号３０５）、ＲＷＸＥ（配列番号３０６）、またはＲＷＱＸ（配列番号３０７）を含み、Ｘは任意のアミノ酸である。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、部分（Ａ）と部分（Ｂ）との間に、１、２、３個またはそれを超えるアミノ酸を含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【００２１】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＦＹ（配列番号３１９）のアミノ酸配列を含み、各Ｘ１およびＸ２は、独立に任意のアミノ酸である。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２Ｘ３ＩＦＹ（配列番号３２０）、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＸ３ＦＹ（配列番号３２１）、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＸ３Ｙ（配列番号３２２）またはＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＦＸ３（配列番号３２３）のアミノ酸配列を含み、各Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立に任意のアミノ酸である。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、表１に記載の構造および／またはアミノ酸配列を含む。
【００２２】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、アミノ酸配列：ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号２）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＦＲＫＬＲ（配列番号３１６）；ＭＧＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号３１７）；またはＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号３１８）からなるいずれかのペプチドではない。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示のペプチドは、配列番号１１、１７、１８、１９、２１、４５、１４９、１７２、２０８、２１０、２１１、２１３、２１７、２１９、２１７および２４１のアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも６６％の配列同一性を有する配列を含む。特定の実施形態では、％同一性は、例えば、所与の配列に対し、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはより高い配列同一性から選択される。特定の実施形態では、％同一性は、例えば、約６５％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、または約９０％〜約９５％；約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％および約９０％〜約９９％の配列同一性の範囲である。
【００２４】
特定の実施形態では、ペプチドは、配列番号１１、１７、１８、１９、２１、４５、１４９、１７２、２０８、２１０、２１１、２１３、２１７、２１９、２１７および２４１のアミノ酸配列のいずれか１つと少なくとも６６％の配列同一性を有する配列を含む。特定の実施形態では、％同一性は、例えば、所与の配列に対し、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはより高い配列同一性から選択される。特定の実施形態では、％同一性は、例えば、約６５％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、または約９０％〜約９５％；約７０％〜約８０％、約８０％〜約９０％および約９０％〜約９９％の配列同一性の範囲であるが、配列番号２、４２、７７〜７８、３１６〜３１８、または３２８〜３４９で示される配列は含まない。
【００２５】
本開示はさらに、本開示のペプチドまたはペプチド類似体のいずれか１個または複数および異種の部分を含むコンジュゲートを提供する。
【００２６】
本開示はさらに、本開示のペプチドまたはペプチド類似体のいずれか１個または複数をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。また、本開示の核酸を含む発現ベクターも本明細書で提供される。核酸または発現ベクターを含む宿主細胞が本開示により提供される。
【００２７】
さらに、本開示は、ペプチド、ペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、宿主細胞、またはこれらの組み合わせ、および担体、賦形剤、または希釈剤を含む組成物を提供する。例示的態様では、組成物は医薬組成物である。例示的態様では、本開示の医薬組成物は、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のアミノ酸配列を含む式Ｉのアミノ酸配列、類似体および本明細書に記載のその誘導体ならびに薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【００２８】
本開示はまた、追加の実施形態として、本明細書に記載の２種以上のペプチドまたはペプチド類似体（またはコンジュゲート、核酸、発現ベクター、など）の混合物を含む組成物も含み、場合により、賦形剤または担体をさらに含む。
【００２９】
さらに、本開示は、ペプチド、ペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、宿主細胞、またはこれらの組み合わせを含む関連キットを提供する。
【００３０】
ペプチドまたはペプチド類似体を製造する方法が本開示で提供される。例示的実施形態では、方法は、（ｉ）第１のアミノ酸を第２のアミノ酸と反応させて、第１のアミノ酸と第２のアミノ酸との間に共有結合を形成させるステップであって、第１のアミノ酸または第２のアミノ酸を、必要に応じ、別のアミノ酸に結合させるステップ、および（ｉｉ）ステップ（ｉ）の反応を反復し、それによりペプチドまたはペプチド類似体を製造するステップを含む。
【００３１】
特定の理論に拘泥するものではないが、本開示のペプチドおよびペプチド類似体は、治療薬として好適する。本明細書で提供されるデータは、このようなペプチドおよびペプチド類似体の、遊離脂肪酸、体重、血糖値、脂質分布、および体脂肪量に関連する疾患、障害、または医学的状態の治療での使用を裏付ける。
【００３２】
したがって、本開示は、脂肪酸代謝の調節を必要としている対象の脂肪酸代謝を調節する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、脂肪酸代謝を調節するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００３３】
本開示はまた、治療を必要としている対象の代謝疾患を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、代謝疾患を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００３４】
また、特定の理論に拘泥するものではないが、いくつかの代謝疾患状態が肝臓に関連するまたは肝臓に付随することを考えれば、本開示のペプチドおよびペプチド類似体は、限定されないがＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨを含む肝疾患の治療に好適する。したがって、本開示はまた、治療を必要としている対象の肝疾患を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、肝疾患を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００３５】
本開示はまた、治療を必要としている対象の癌を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、癌を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００３６】
本開示はまた、治療を必要としている対象の肥満症または過度の体重を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、肥満症または過度の体重を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００３７】
本開示はまた、治療を必要としている対象の脳卒中を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、脳卒中を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００３８】
本開示はまた、治療を必要としている対象の心臓血管疾患を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、心臓血管疾患を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００３９】
本開示はまた、治療を必要としている対象の閉塞性睡眠時無呼吸を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、閉塞性睡眠時無呼吸を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００４０】
本開示はまた、治療を必要としている対象の高血圧を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、高血圧を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【００４１】
本開示はまた、脂肪細胞（単一または複数）中の遊離脂肪酸などの脂肪酸レベルを下げるなどの、調節をする方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、該レベルを下げるための有効量で、脂肪細胞（単一または複数）と接触させることを含む。いくつかの変形例では、方法は、インビトロで、例えば、細胞培養中に実施される。いくつかの変形例では、方法は、インビボで、例えば、その物質を必要としている対象に投与することにより実施される。
【００４２】
本開示はまた、対象の血液または血清グルコースおよび／または血清トリグリセリドのレベルを下げるなどの、調節をする方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、血液／血清グルコースを下げるための有効量で、対象に投与することを含む。
【００４３】
核酸およびベクターの使用に関する本明細書に記載の実施形態の場合、方法は、インビトロまたはインビボで細胞を形質転換または細胞に遺伝子導入することを含み得る。
【００４４】
方法として本明細書に記載してきた本発明の態様はまた、「使用」として記載でき、全てのこのような使用は、本発明の態様として意図されている。同様に、本明細書に記載の「使用」を有するものとしての組成物は、代わりに使用プロセスまたは使用方法として記載でき、これは、本発明の態様として意図されている。例えば、疾患または状態の治療方法として本明細書に記載されたある実施形態はまた、疾患または状態を治療する薬剤または物質の使用、または疾患または状態を治療する薬物の製造における物質の使用に関するある実施形態も含むと理解されたい。
【００４５】
本発明の態様は、特定の目的のための２種以上の試薬の組み合わせ（または試薬の組み合わせの使用）による治療の方法として本明細書に記載される。本発明の関連する態様は、２種以上の試薬が混合されている物質の組成物；および例えば、混合物ではなく、単位用量製剤として、一緒に包装されているキットを含む。
【００４６】
本明細書を通して「一実施形態（ｏｎｅ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「いくつかの実施形態」または「ある実施形態（ａｎ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」への言及は、その実施形態に関して記載された特定の特徴、構造、または特性が本開示の少なくとも１つの実施形態に含まれているということを意味する。本明細書に記載の特定の特徴、構造、または特性は、任意の好適な方式で組み合わせてよく、全てのこのような組み合わせは本発明の態様として意図されている。
【００４７】
別段の指定がない限り、共通の対象物を記述するための、序数形容詞の「第１の」、「第２の」、「第３の」、などの使用は、対象物などの異なる実体が言及されていることを示すに過ぎず、そのように記載された対象物が、時間的に、空間的に、等級的に、または任意の他の方式で、特定の順序である必要があることを意味するように意図されているものではない。
【００４８】
本発明は、追加の態様として、上記特定の段落によりまたは元の特許請求の範囲により定められる変化よりも、多少とも狭い範囲の本発明の全ての実施形態を含む。例えば、本発明の特定の態様が類または集団として記載される場合、類または集団の全てのメンバーは個々に本発明の態様であることを理解されたい。同様に、全ての個々のサブセットは、本発明の態様として意図されている。例えば、本発明の態様が、１、２、３、および４からなる群より選択されるメンバーとして記載される場合、サブグループ（例えば、｛１，２，３｝または｛１，２，４｝または｛２，３，４｝または｛１，２｝または｛１，３｝または｛１，４｝または｛２，３｝または｛２，４｝または｛３，４｝より選択されるメンバー）が意図されており、それぞれ個々の種｛１｝または｛２｝または｛３｝または｛４｝が本発明の態様または変形として意図されている。同様に、本発明の態様が、温度範囲などの、ある範囲として、またはある範囲にわたり実施可能であるとして特徴付けられている場合、整数の部分範囲は本発明の態様または変形として意図されている。
【００４９】
本明細書の見出しは、読者の便宜のためのものであり、限定を意図するものではない。本発明の追加の態様、実施形態、および変形は、以下の発明を実施するための形態および／または図面および／または元の特許請求の範囲から明らかになるであろう。元の特許請求の範囲は、参照によりこの発明の概要に組み込まれる。
【００５０】
出願者は本明細書に記載される本発明の全範囲を発明したが、出願者は、他人の先行技術の論文に記載されている主題を特許請求することは意図していない。したがって、特許請求の範囲内の法律により定められる先行技術が、特許庁、裁判所、またはその他の団体または個人により出願者に周知される場合には、出願者は、適用特許法に基づいて補正権を行使する権利を留保し、このような特許請求の範囲の主題を再定義し、このような法定先行技術または法定先行技術の自明または非発明的変形例を、このような特許請求の範囲から明確に除外する。このような補正した特許請求の範囲により定められる本発明の変形例はまた、本発明の態様として意図される。
【発明を実施するための形態】
【００５１】
定義
本発明の記載および請求において、以下の用語は、以下に示す定義にしたがって用いられる。
【００５２】
用語の「ペプチド」は、ペプチド結合により相互に結合した２個以上のアミノ酸残基を含む分子を意味する。これらの用語は、例えば、天然および人工のタンパク質、タンパク質フラグメントおよびタンパク質配列のポリペプチド類似体（変異タンパク質、バリアント、および融合タンパク質など）ならびに翻訳後修飾、または別の方法による共有結合または非共有結合修飾ペプチドを包含する。ペプチドは、モノマーであっても、ポリマーであってもよい。特定の実施形態では、「ペプチド」は、アルファ炭素がペプチド結合を介して結合し得るアミノ酸の鎖である。したがって、鎖の一端にある末端アミノ酸（アミノ末端）は、遊離アミノ基を有し、一方、鎖の他端にある末端アミノ酸（カルボキシ末端）は、遊離カルボキシル基を有する。本明細書で使用される場合、「アミノ末端」（省略形でＮ末端）という用語は、ペプチドのアミノ末端のアミノ酸上の遊離α−アミノ基またはペプチド内の任意の他の位置のアミノ酸のα−アミノ基（ペプチド結合に関与する場合はイミノ基）を意味する。同様に、「カルボキシ末端」という用語は、ペプチドのカルボキシ末端の上の遊離カルボキシル基またはペプチド内の任意の他の位置のアミノ酸のカルボキシル基を意味する。ペプチドはまた、限定されないが、アミド結合に相対するものとしてのエーテルにより結合されたアミノ酸などのペプチド模倣体を含む基本的に任意のポリアミノ酸も含む。
【００５３】
用語の「治療用ペプチド」は、１種または複数の治療活性および／または生物活性を有するペプチドまたはそのフラグメントまたはバリアントを意味する。
【００５４】
本明細書で使用される場合、用語の「類似体」または「ペプチド類似体」は、１個または複数のアミノ酸修飾、例えば、限定されないが、任意の利用可能な位置での、いずれか１個のアミノ酸残基の、任意の天然または非天然アミノ酸、合成アミノ酸またはペプチド模倣体による置換および／または１個または複数の欠失（単一または複数）および／または１個または複数の付加（単一または複数）および／または天然または非天然アミノ酸、合成アミノ酸またはペプチド模倣体のいずれか１個への置換基の結合を含むペプチドを表す。アミノ酸残基の付加または欠失は、ペプチドのＮ末端および／またはペプチドのＣ末端で起こり得る。
【００５５】
いくつかの実施形態では、類似体は、１、２、３、４、または５個の修飾を有する。いくつかの実施形態では、類似体は元のペプチドの生物活性を保持する。いくつかの実施形態では、類似体は元のペプチドの競合的または非競合的阻害剤である。
【００５６】
ペプチド配列は、標準的な１文字または３文字の省略形を用いて示される。特に指示がない限り、ペプチド配列は、左側にアミノ末端を、右側にカルボキシ末端を有する。ペプチドの特定の部分は、アミノ酸残基番号、例えば、アミノ酸３〜６により、またはその位置の実際の残基、例えば、Ｍｅｔ３〜Ｇｌｙ６により指定できる。特定のペプチド配列はまた、それが基準配列とどのように異なるかを説明することにより表すことができる。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「天然アミノ酸」という用語は、グリシン（Ｇｌｙ  ＆  Ｇ）、プロリン（Ｐｒｏ  ＆  Ｐ）、アラニン（Ａｌａ  ＆  Ａ）、バリン（Ｖａｌ  ＆  Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ  ＆  Ｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ  ＆  Ｉ）、メチオニン（Ｍｅｔ  ＆  Ｍ）、システイン（Ｃｙｓ  ＆  Ｃ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ  ＆  Ｆ）、チロシン（Ｔｙｒ  ＆  Ｙ）、トリプトファン（Ｔｒｐ  ＆  Ｗ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ  ＆  Ｈ）、リシン（Ｌｙｓ  ＆  Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ  ＆  Ｒ）、グルタミン（Ｇｉｎ  ＆  Ｑ）、アスパラギン（Ａｓｎ  ＆  Ｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ  ＆  Ｅ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ  ＆  Ｄ）、セリン（Ｓｅｒ  ＆  Ｓ）およびトレオニン（Ｔｈｒ  ＆  Ｔ）からなる群より選択されるアミノ酸（括弧に入れた、通常の３文字コードおよび１文字コードによる）である。本明細書のどこでも、Ｇ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、ＳまたはＴを含むまたはこれらを含まないペプチド、ペプチド類似体または誘導体への言及が、さらなる指定なしに、なされる場合、アミノ酸が意図されている。別義が示されない限り、大文字の単一文字コードで示されるアミノ酸は、Ｌ−アイソフォームを示す。しかし、「（ｄＤ）」および「（ｄＥ）」などの、大文字の単一文字コードで指定されるアミノ酸の前に、括弧に入れた小文字の「ｄ」が先行する場合、このアミノ酸はそのＤ−アイソフォームとして使用／適用される。例えば、「（ｄＤ）」は、Ｄすなわちアスパラギン酸のＤ−異性体を意味し、「（ｄＡ）」は、ＡすなわちアラニンのＤ−異性体を意味し、また、「（ｄＥ）」はＥすなわちグルタミン酸のＤ−異性体を意味する。いくつかの事例では、アミノ酸のＤ−異性体は、「Ｄ−」に続く、３文字コードで指定されるアミノ酸により表される。したがって、例えば、「Ｄ−Ａｌａ」は、アラニンのＤ−異性体を意味し、「Ｄ−Ａｓｐ」は、アスパラギン酸のＤ−異性体を意味し、また、「Ｄ−Ｇｌｕ」はグルタミン酸のＤ−異性体を意味する。このようなＤ−型および前に定義した他の非保存的アミノ酸置換は、非天然アミノ酸の定義に含まれる。
【００５８】
タイプエラーのために、通常使われるコードから逸脱する場合には、通常使われるコードが適用される。ペプチド中に存在するアミノ酸は、核酸によりコードできるアミノ酸が好ましい。上記例から明らかなように、アミノ酸残基は、それらのフルネームにより、それらの１文字コードにより、および／またはそれらの３文字コードにより特定され得る。これらの３種の方法は完全に等価である。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「荷電アミノ酸」または「荷電残基」という用語は、生理学的ｐＨの水溶液中で負に帯電した（すなわち、脱プロトン化）または正に帯電した（すなわち、プロトン化）側鎖を含むアミノ酸を意味する。例えば、負に帯電したアミノ酸には、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン酸、ホモシステイン酸、およびホモグルタミン酸が含まれ、一方、正に帯電したアミノ酸には、アルギニン、リシンおよびヒスチジンが含まれる。荷電アミノ酸には、２０個のコードアミノ酸中の荷電アミノ酸、ならびに非定型または非天然または非コードアミノ酸が含まれる。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「酸性アミノ酸」という用語は、例えば、カルボン酸基またはスルホン酸基を含む、第２の酸性部分（アミノ酸のカルボン酸以外）を含むアミノ酸を意味する。
【００６１】
本明細書で使用される場合、「アシル化アミノ酸」という用語は、それが製造された手段（例えば、ペプチド中にアミノ酸を組み込む前にアシル化、またはペプチド中への組み込み後にアシル化）に関係なく、天然アミノ酸に対し非天然であるアシル基を含むアミノ酸を意味する。
【００６２】
本明細書で使用される場合、「アルキル化アミノ酸」という用語は、それが製造された手段に関係なく、天然アミノ酸に対し非天然であるアルキル基を含むアミノ酸を意味する。したがって、本開示のアシル化アミノ酸およびアルキル化アミノ酸は、非コードアミノ酸である。
【００６３】
当業者なら、本明細書で記載の活性ペプチドバリアントを、脂肪酸代謝およびその他の代謝アッセイを含む、本明細書に記載の材料と方法（例えば、合成技術および活性アッセイ）を用いて特定できるであろう。実施例セクションを参照されたい。特定の実施形態では、当業者なら、活性にとって重要でないと考えられている部位を標的とすることにより、活性を破壊することなく、変更し得る好適な分子の部分を特定し得る。他の実施形態では、当業者なら、類似のペプチド（類似の調節活性を有する本明細書に記載のペプチドなど）中で保存されている分子の残基および部分を特定できる。さらなる実施形態では、生物活性または構造に重要であり得る部分であっても、生物活性を破壊することなく、またはペプチド構造に悪影響を及ぼすことなく、保存的アミノ酸置換に供し得る。
【００６４】
さらに、当業者なら、類似のペプチド中の活性または構造に重要な残基を特定する構造−機能研究を再検討できる。このような比較を考慮すれば、当業者なら、類似のペプチド中の活性または構造に重要なアミノ酸残基に対応するペプチド中のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者ならこのような予測された重要なアミノ酸残基に対する、化学的に類似のアミノ酸置換を選択し得る。
【００６５】
また、当業者なら、類似のペプチド中のその構造に関連して、三次元構造およびアミノ酸配列を解析できる。このような情報を考慮すれば、当業者なら、ペプチドの三次元構造に関連して、そのアミノ酸残基のアライメントを予測し得る。特定の実施形態では、当業者なら、ペプチドの表面上にあると予測されるアミノ酸残基に対するラジカル変化を生じないように選択し得る。理由は、このような残基がその他の分子との重要な相互作用に関与し得るためである。さらに、当業者なら、それぞれの目的のアミノ酸残基の位置に単一アミノ酸置換を含む試験バリアントを生成し得る。その後、当業者に既知の活性アッセイを用いてバリアントをスクリーニングできる。このようなバリアントを用いて、好適なバリアントに関する情報を収集し得る。例えば、特定のアミノ酸残基への変更により活性の破壊、望ましくない活性の低下または不適切な活性を生じることがわかった場合、このような変更を有するバリアントは回避できる。換言すれば、このような定型的な実験から収集した情報に基づいて、当業者は、単独でまたはその他の変異と組み合わせてさらなる置換を回避すべきアミノ酸を容易に特定できる。
【００６６】
本明細書で使用される場合、用語の「誘導体」は、１個または複数の置換基または部分がペプチドに共有結合している化学修飾ペプチドを意味する。このような置換基または部分を有する誘導体は、従って、「誘導体化」ペプチドまたは「誘導体化」類似体となる。この用語はまた、遊離カルボキシ基のエステルおよびアミド、遊離アミノ基のアシルおよびアルキル誘導体、ホスホエステルおよび遊離ヒドロキシ基のエーテルなどの通常はペプチド分子の一部ではない、１個または複数の化学的部分を含むペプチドを意味し得る。このような修飾は、ペプチドの標的アミノ酸残基を、選択側鎖または末端残基と反応できる有機誘導体化試薬と反応させることにより、分子中に導入し得る。好ましい化学誘導体には、リン酸化、Ｃ末端アミド化またはＮ末端アセチル化されているペプチドが含まれる。この用語はまた、当該技術分野において既知の手段により、残基上の側鎖またはＮ末端基もしくはＣ末端基として存在する官能基から調製され得、それらが薬学的に許容可能である、すなわち、それらがペプチドの活性を破壊しない限り、それを含む組成物に毒性を付与しない限りおよびそれらの抗原特性に悪影響を与えない限り、本明細書に含まれる本明細書で使用されるペプチドを意味し得る。これらの誘導体には、例えば、カルボキシル基の脂肪族エステル、アンモニアまたは一級または二級アミンとの反応により製造されたカルボキシル基のアミド、アシル部分（例えば、アルカノイルまたは炭素環式アロイル基）との反応により形成されたアミノ酸残基の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体、またはアシル部分との反応により形成された遊離ヒドロキシル基（例えば、セリルまたはトレオニル残基のもの）のＯ−アシル誘導体が挙げられる。
【００６７】
修飾アミノ酸残基は、アミノ酸残基の機能が保存される限りにおいて、または機能性が変化した場合（例えば、チロシンを置換フェニルアラニンに置換）に、修飾により、修飾残基を含むペプチドの活性が損なわれない限りに置いて、任意の基または結合が欠失、異なった基または結合による付加また置換により修飾されたアミノ酸残基である。
【００６８】
本明細書で使用される場合、用語の「置換基」は、アミノ酸残基上の特に任意の利用可能な位置でアミノ酸残基に結合した、特に共有結合した任意の好適な部分を意味する。通常、好適な部分は化学部分である。
【００６９】
用語の「脂肪酸」は、飽和でも不飽和でもよい、好ましくは非分岐の４〜２８個の炭素原子を有する脂肪族モノカルボン酸を意味する。本開示では、１０〜１６個のアミノ酸を含む脂肪酸が好ましい。
【００７０】
用語の「脂肪二酸」は、上記で定義の脂肪酸であるが、オメガ位置に追加のカルボン酸基を有する脂肪酸を意味する。したがって、脂肪二酸は、ジカルボン酸である。本開示では、１４〜２０個のアミノ酸を含む脂肪酸が好ましい。
【００７１】
用語の「％配列同一性」は、本明細書では、用語の「％同一性」と同義に使用され、配列アラインメントプログラムを用いて配列させた場合に、２つ以上のペプチド配列間のアミノ酸配列同一性のレベルまたは２つ以上のヌクレオチド配列間のヌクレオチド配列同一性のレベルを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、８０％の同一性は、所定のアルゴリズムにより決定された８０％の配列同一性と同じことを意味し、所定の配列は別の長さの別の配列と少なくとも８０％同一であることを意味する。
【００７２】
用語の「％配列相同性」は、本明細書では、用語の「％相同性」と同義に使用され、配列アラインメントプログラムを用いて配列させた場合に、２つ以上のペプチド配列間のアミノ酸配列相同性のレベルまたは２つ以上のヌクレオチド配列間のヌクレオチド配列相同性のレベルを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、８０％の相同性は、所定のアルゴリズムにより決定された８０％の配列相同性と同じことを意味し、したがって、所定の配列の相同体は、所定の配列の長さにわたり８０％を超える配列相同性を有する。
【００７３】
２つの配列間の同一性または相同性の程度を判定するのに使用できる代表的コンピュータープログラムには、限定されないが、一連のＢＬＡＳＴプログラム、例えば、インターネットのＮＣＢＩウェブサイトで公的に利用できる、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、およびＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰおよびＴＢＬＡＳＴＮが挙げられる。また、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０（発表されたデフォルト設定、すなわち、パラメーター：ｗ＝４、ｔ＝１７に特に言及）およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２５：３３８９−３４０２も参照されたい。ジェンバンクタンパク質配列およびその他の公開データベースのアミノ酸配列に対して、所定のアミノ酸配列を評価する場合、配列探索は通常、ＢＬＡＳＴＰプログラムを使用して実施される。ジェンバンクタンパク質配列およびその他の公開データベースのアミノ酸配列に対して全ての読み枠中で翻訳されている核酸配列を探索する場合には、ＢＬＡＳＴＸプログラムが好ましい。ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴＸの両方とも、１１．０のオープンギャップペナルティ、および１．０の拡張ギャップペナルティーのデフォルトパラメーターを用いて実行し、ＢＬＯＳＵＭ−６２マトリックスを利用する。（前出文献）。パーセント配列同一性の計算に加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計分析も行う（例えば、Ｋａｒｌｉｎ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：５８７３−５７８７（１９９３）を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の一致が偶然により生じ得る確率の指標を提供する。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」のペプチドは、本開示および請求方法に従って対象に投与される場合に、遊離脂肪酸レベル、血清トリグリセリドレベル、血糖値、体重、体脂肪量を低下させる、または脂肪酸代謝を調節するなどの、生物活性に影響を与える。
【００７５】
用語の「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、有益な、または望ましい臨床成績を得るための手法を意味する。さらに、本明細書での「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」への言及には、治癒的、対症療法的および予防的治療への言及が含まれる。用語の「治療」は、病態（疾患、障害もしくは状態）の発症または進行を抑制、防止または停止させること、および／または、病態の軽減、寛解もしくは退行を生じさせることを意味する。当業者は、様々な方法およびアッセイを使用して、病態の発症を評価できること、また、同様に、様々な方法およびアッセイを使用して、病態の軽減、寛解もしくは退行を評価し得ることを理解するであろう。
【００７６】
用語の「細胞の生存を改善する」は、対照群と比較して、所定の条件で生き残る細胞数、例えば、治療の非存在下で同じ条件で生き残る細胞数の増加を意味する。条件は、インビトロ、インビボ、エクスビボ、またはインサイツであり得る。改善された細胞生存率は、比較値として表現でき、例えば、細胞生存率が２倍に改善される場合、２倍の細胞が生存する。改善された細胞の生存は、アポトーシスの減少、細胞寿命の増大、または細胞の機能や状態の改善に由来し得る。
【００７７】
分かりやすくするために、用語の「教示」は、一般に理解されている解釈に加えて、規制当局により認可されたラベル上の情報を含むことを意味する。
【００７８】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ｏｒ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかに別の指示がない限り、複数の指示対象を含む。本明細書に記載する開示の態様および変形形態は、態様および変形形態「からなる」および／または「から本質的になる」を含むことは理解されよう。
【００７９】
本明細書で使用される場合、用語の「約」は、示された値または示された値の範囲よりも１０％だけ大きいまたは小さい値を意味するが、このより広い定義のみに、いずれかの値または値の範囲を指定することを意図するものではない。用語の「約」が先行するそれぞれの値または値の範囲はまた、示した絶対値または絶対値の範囲の実施形態を包含することも意図している。
【００８０】
本明細書で使用される場合、用語の「予防」は、疾患の危険性があり得るが、まだ、疾患であると診断されていない、対象の疾患、障害もしくは状態を発症させないことを意味する。予防（および予防に有効な投与量）は、集団調査で実証できる。例えば、所定の疾患または医学的状態を防ぐための有効量は、未治療対照集団に比較して、治療集団における発症を減らすための有効量である。
【００８１】
本明細書中で使用される場合、用語の「対象」には、病態に罹患している任意の年齢の哺乳動物、好ましくはヒトが含まれる。好ましくは、この用語は病態を発症する危険がある個体を包含する。
【００８２】
ペプチド
本開示は、脂肪細胞中の遊離脂肪酸のレベルを低減するペプチドおよびペプチド類似体を提供する。本明細書でさらに考察するように、好都合にも、本開示のペプチドおよびペプチド類似体は、血漿中で十分な安定性を示す。
【００８３】
例示的実施形態では、本開示のペプチドは、式Ｉ：
Ｘ１−Ｑ−Ｅ−Ｘ２−Ｘ３−Ｙ−Ｉ−Ｘ４−Ｙ−Ｘ５−Ｒ−Ｘ６    （Ｉ）（配列番号１）
のアミノ酸配列または薬学的に許容可能なその塩を含み；
式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷ−であり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立に非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ４およびＸ５は、それぞれ独立に非極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、−ＫＬ−Ｘ８または−Ｘ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖を有するアミノ酸であり、およびＸ９は、非極性側鎖を有するアミノ酸であり；但し、ペプチドは、ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号２）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＦＲＫＬＲ（配列番号３１６）；ＭＧＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号３１７）；および／またはＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号３１８）のいずれでもないという条件の場合である。
【００８４】
例示的実施形態では、本開示のペプチドは、式ＩＩ：
Ｘ１７−Ｘ１８−Ｘ１９−Ｑ−Ｅ−Ｘ２０−Ｘ２１−Ｙ−Ｉ−Ｘ２２−Ｙ−Ｘ２３−Ｘ２４−Ｘ２５    （ＩＩ）（配列番号３７８）
（式中、Ｘ１７は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ１８は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ１９は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２０は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２１は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２２は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２３は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２４は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；およびＸ２５は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖、−ＬＫＲ、−ＫＬＸ２６、−Ｘ２７ＬＲ、−ＫＸ２８Ｒ、−ＲＸ２９Ｒおよび−ＫＲＸ３０を有するアミノ酸から選択され；Ｘ２６は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；Ｘ２７は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；Ｘ２８は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；Ｘ２９は非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；およびＸ３０は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖を有するアミノ酸から選択され；但し、ペプチドは、配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つからなるペプチドではなく；さらに、Ｘ１９が非存在の場合、Ｘ１７およびＸ１８は非存在であり；さらに、Ｘ１８が非存在の場合、Ｘ１７は非存在であるという条件の場合である。）のアミノ酸配列、および／またはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００８５】
例示的実施形態では、ペプチドは、式ＩＩ（式中、Ｘ１７は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｎｌｅ、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ１８は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ１９は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２０は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２１は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２２は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２３は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ａｉｂ、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２４は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２５は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍ、（ｄＭ）、−ＬＫＲ、−ＫＬＸ２６、−Ｘ２７ＬＲ、−ＫＸ２８Ｒ、−ＲＸ２９Ｒおよび−ＫＲＸ３０から選択され；Ｘ２６は存在しないか、または存在する場合は、−ＲＥ、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２７は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２８は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２９は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ３０は存在しないか、または存在する場合は、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択される。）のアミノ酸配列またはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００８６】
例示的実施形態では、ペプチドは、式ＩＩ（式中、Ｘ１７は存在しないか、または存在する場合は、Ｍ、Ｌ、Ｇ、Ｋ、Ｅ、Ａ、（ｄＡ）またはＮｌｅであり；Ｘ１８は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｋ、Ａｉｂ、（ｄＡ）またはＥであり；Ｘ１９は存在しないか、または存在する場合は、Ｗ、Ａ、（ｄＡ）、Ｇ、またはＥであり；Ｘ２０は、Ｎｌｅ、Ｇ、Ｋ、Ｃｃｙｃ、（ｄＡ）、ＭまたはＡであり；Ｘ２１は、Ｇ、Ｎ、Ｑ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ２２は、Ｆ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ２３は、Ｐ、Ｇ、Ｅ、Ｆ、Ｃｃｙｃ、Ｋｃｙｃ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ２４は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ｇ、Ｄ、Ｌ、Ｋ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；およびＸ２５は存在しないか、または存在する場合は、−Ｋ、−Ｒ、Ｎ、Ｑ、（ｄＡ）、−ＫＬ、−ＫＲ、−Ｒ（Ｄａ）、−ＫＬＲ、−Ｋ（Ａｃ）ＬＲ、−Ｋ（ｃｙｃ）ＬＲ、−ＡＬＲ、−（ｄＡ）ＬＲ、−ＧＬＲ、−ＥＬＲ、−ＮＬＲ、−ＱＬＲ、−ＫＡＲ、−Ｋ（ｄＡ）Ｒ、−ＫＧＲ、−ＫＥＲ、−ＫＬＡ、−ＫＬ（ｄＡ）、−ＫＬＤ、−ＫＬＥ、−ＫＬＧ、−ＫＬＫ、−ＲＫＲ、−ＲＬＲ、−ＬＫＲ、−ＫＲＬ、および−ＫＬＲＥから選択される。）のアミノ酸配列、そのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００８７】
例示的実施形態では、本開示のペプチドは、式ＩＩＩ：
Ｘ３１−Ｘ３２−Ｘ３３−Ｘ３４−Ｘ３５−Ｘ３６−Ｘ３７−Ｘ３８−Ｘ３９−Ｘ４０−Ｘ４１−Ｘ４２−Ｘ４３−Ｘ４４−Ｘ４５−Ｘ４６−Ｘ４７    （ＩＩＩ）（配列番号３７９）
（式中、Ｘ３１は存在しないか、または存在する場合は、Ｍ、Ｌ、Ｇ、Ｋ、Ｅ、Ａ、（ｄＡ）またはＮｌｅであり；Ｘ３２は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｋ、Ａｉｂ、（ｄＡ）またはＥであり；Ｘ３３は存在しないか、または存在する場合は、Ｗ、Ａ、（ｄＡ）、Ｇ、またはＥであり；Ｘ３４は、Ｑ、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｅｃｙｃ、ＮまたはＥであり；Ｘ３５は、Ｅ、Ｅｃｙｃ、Ｄ、Ｇ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３６は、Ｎｌｅ、Ｇ、Ｋ、Ｃｃｙｃ、（ｄＡ）、ＭまたはＡであり；Ｘ３７は、Ｇ、Ｎ、Ｑ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３８は、Ｙ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３９は、Ｉ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４０は、Ｆ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４１は、Ｙ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４２は存在しないか、または存在する場合は、Ｐ、Ｇ、Ｅ、Ｆ、Ｃｃｙｃ、Ｋｃｙｃ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４３は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ｇ、Ｄ、Ｌ、Ｋ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４４は存在しないか、または存在する場合は、Ｋ、Ｋ−Ａｃ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｑ、Ｎ、Ｋｃｙｃ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４５は存在しないか、または存在する場合は、Ｌ、Ｇ、Ｒ、Ｋ、Ｄｅｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４６は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｋ、Ｇ、（ｄＡ）またはＡであり；およびＸ４７は存在しないか、または存在する場合は、Ｅであり；但し、ペプチドは、配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つからなるペプチドではなく、さらに、Ｘ３３が存在しない場合、Ｘ３１およびＸ３２は存在せず；さらにＸ３２が存在しない場合、Ｘ３１は存在せず；さらにＸ４２が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、Ｘ４５、Ｘ４４、およびＸ４３は存在せず；さらにＸ４３が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、Ｘ４５、およびＸ４４は存在せず；さらにＸ４４が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、およびＸ４５は存在せず；さらにＸ４５が存在しない場合、Ｘ４７、およびＸ４６は存在せず；およびさらにＸ４６が存在しない場合、Ｘ４７は存在しないという条件の場合である。）のアミノ酸配列、および／またはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００８８】
例示的実施形態では、ペプチドは、式ＩＩＩ（式中、Ｘ３４はＱであり；Ｘ３５はＥであり；Ｘ３６はＭであり；Ｘ３７はＧであり；Ｘ３８はＹであり；Ｘ３９はＩであり；Ｘ４０はＦであり；Ｘ４１はＹであり；Ｘ４２はＰであり；Ｘ４３はＲであり；Ｘ４４は存在しないか、または存在する場合はＫであり；Ｘ４５は存在しないか、または存在する場合はＬであり；Ｘ４６は存在しないか、または存在する場合はＲであり；およびＸ４７は存在しない。）のアミノ酸配列、そのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００８９】
例示的実施形態では、式Ｉ〜ＩＩＩのペプチドが単離される。
【００９０】
例示的実施形態では、ペプチドは、
ＭＲＷＱＥＡＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲ（ｄＡ）ＬＲ（配列番号１４９）；
ＭＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２０８）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＮＬＲ（配列番号２１３）；
ＭＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号２１９）；
ＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１０）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号１９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＡ（配列番号２１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＡＲＫＬＲ（配列番号１７）；
ＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＱＬＲ（配列番号２１７）；
ＭＲＷＱＥＥＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１７２）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号４５）；
ＥＲＷＱＥＡＧＹＩＡＹＰＲ（配列番号２４１）；
ＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＡＫＬＲ（配列番号１８）；
（これらの修飾には、ペプチド中の少なくとも１個のアミノ酸の、（ｉ）Ｄ−立体配置を有するアミノ酸、および（ｉｉ）非天然アミノ酸残基から選択される別のアミノ酸による置換が含まれる。）から選択されるペプチド配列の修飾；または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００９１】
例示的実施形態では、ペプチドは、賦形剤を用いて処方し、患者の疾患または別の医学的状態の治療に使用できる、医薬組成物を提供する。
【００９２】
例示的実施形態では、ペプチドは、式Ｉ（式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷ−であり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ２およびＸ３はそれぞれ独立に、Ｄ、（ｄＤ）、Ｅ、（ｄＥ）、Ｋ、（ｄＫ）、Ｒ、（ｄＲ）、Ｈ、（ｄＨ）、Ｎ、（ｄＮ）、Ｑ、（ｄＱ）、Ｓ、（ｄＳ）、Ｔ、（ｄＴ）、Ｙ、（ｄＹ）、Ｃ、（ｄＣ）、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ４およびＸ５はそれぞれ独立に、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、−ＫＬ−Ｘ８または−Ｘ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択され、またＸ９はＧ、Ａ、（ｄＡ）、Ｖ、（ｄＶ）、Ｌ、（ｄＬ）、Ｉ、（ｄＩ）、Ｆ、（ｄＦ）、Ｗ、（ｄＷ）、Ｐ（ｄＰ）、Ｍおよび（ｄＭ）から選択される。）のアミノ酸配列、または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００９３】
例示的実施形態では、ペプチドは、式Ｉ（式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷ−であり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、ＭまたはＥであり；Ｘ２はＭ、ＡまたはＥであり；Ｘ３はＧ、ＮまたはＱであり；Ｘ４はＦまたはＡであり；Ｘ５はＰまたはＡであり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、−ＫＬ−Ｘ８または−Ｘ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、ＲまたはＡであり、Ｘ９はＫ、Ａ、（ｄＡ）、ＮおよびＱから選択される。）のアミノ酸配列または薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００９４】
例示的実施形態では、ペプチドは、ＭＲＷＱＥＡＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１１）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲ（ｄＡ）ＬＲ（配列番号１４９）；ＭＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２０８）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＮＬＲ（配列番号２１３）；ＭＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号２１９）；ＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１０）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号１９）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＡ（配列番号２１）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＡＲＫＬＲ（配列番号１７）；ＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＱＬＲ（配列番号２１７）；ＭＲＷＱＥＥＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１７２）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号４５）；ＥＲＷＱＥＡＧＹＩＡＹＰＲ（配列番号２４１）；ＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１１）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＡＫＬＲ（配列番号１８）からなる群より選択される配列および薬学的に許容可能なその塩を含む。
【００９５】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）、（ｂ）ＹＩＦＹ（配列番号２９５）、または（ｃ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩＦＹ（配列番号２９５）の両方を含み、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号２９４のＡｒｇのＮ末端に隣接したＭｅｔまたは配列番号２９４のＧｌｕのＣ末端に隣接したＭｅｔを含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ＭＲＷＱＥ（配列番号３５０）、ＲＷＱＥＭ（配列番号３５１）またはＭＲＷＱＥＭ（配列番号３５２）を含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号２９５の最初のアミノ酸のＮ末端に隣接したＧｌｙ、配列番号２９５の最後のアミノ酸のＣ末端に隣接したＰｒｏを含み、またはＧＹＩＦＹＰ（配列番号３５３）を含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ＹＩＦＹＰＲ（配列番号２９６）、ＹＩＦＹＰＲＫ（配列番号２９７）、ＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号２９８）、またはＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号２９９）を含む。
【００９６】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列および（Ｂ）１個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、１個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列は、ＸＩＦＹ（配列番号３００）、ＹＸＦＹ（配列番号３０１）、ＹＩＸＹ（配列番号３０２）、またはＹＩＦＸ（配列番号３０３）を含み、Ｘは任意のアミノ酸である。例示的実施形態では、配列番号３００〜３０３のいずれか１つのＸは、小さい脂肪族アミノ酸または酸性アミノ酸である。例示的実施形態では、配列番号３００〜３０３のいずれか１つのＸは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【００９７】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列および（Ｂ）２個のアミノ酸修飾を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列および（Ｂ）２個のアミノ酸置換を有するＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩＡＥ（配列番号３０８）またはＥＩＦＥ（配列番号３０９）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩまたはＹＩＦのアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【００９８】
例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（Ａ）ＹＩＦＹ（配列番号２９５）のアミノ酸配列および（Ｂ）１個のアミノ酸置換を有するＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、１個のアミノ酸置換を有するＲＷＱＥ（配列番号２９４）のアミノ酸配列は、ＸＷＱＥ（配列番号３０４）、ＲＸＱＥ（配列番号３０５）、ＲＷＸＥ（配列番号３０６）、またはＲＷＱＸ（配列番号３０７）を含み、Ｘは任意のアミノ酸である。例示的実施形態では、Ｘは、脂肪族アミノ酸または荷電アミノ酸である。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体がＸＷＱＥ（配列番号３０４）を含む場合、Ｘは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（ｄＡ）、Ｇｌｕからなる群から選択される。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体がＲＸＱＥ（配列番号３０５）を含む場合、Ｘは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕからなる群から選択される。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体がＲＷＸＥ（配列番号３０６）を含む場合、Ｘは、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、（ｄＡ）からなる群から選択される。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体がＲＷＱＸ（配列番号３０７）を含む場合、Ｘは、Ｇｌｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、（ｄＡ）からなる群から選択される。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【００９９】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＦＹ（配列番号３１９）のアミノ酸配列を含み、各Ｘ１およびＸ２は、独立に任意のアミノ酸である。例示的態様では、Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、およびこれらの等価物からなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびＣｙｓからなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびこれらの等価物からなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される。例示的態様では、−Ｘ１Ｘ２−は、Ｍｅｔ−Ａｓｎ、Ｍｅｔ−Ｇｌｎ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｎｌｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−（ｄＡ）、（ｄＡ）−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ｇｌｕ、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ａｓｎ、またはＧｌｕ−Ｇｌｎである。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号２の配列から構成されない。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【０１００】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥＸ４８Ｘ４９Ｘ５０ＩＦＹ（配列番号３７３）のアミノ酸配列を含み、各Ｘ４８、Ｘ４９およびＸ５０は、独立に任意のアミノ酸である。例示的態様では、Ｘ４８は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、Ｃｙｓおよびこれらの等価物からなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ４８は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびＣｙｓからなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ４９は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびこれらの等価物からなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ４９は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される。例示的実施形態では、Ｘ５０は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕ、ならびにこれらの等価物からなる群から選択される。例示的実施形態では、Ｘ５０は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号２の配列から構成されない。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【０１０１】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２Ｘ３ＩＦＹ（配列番号３２０）、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＸ３ＦＹ（配列番号３２１）、ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＸ３Ｙ（配列番号３２２）またはＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＦＸ３（配列番号３２３）のアミノ酸配列を含み、各Ｘは、独立に任意のアミノ酸である。例示的態様では、Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、およびこれらの等価物からなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびＣｙｓからなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびこれらの等価物からなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ１Ｘ２は、Ｍｅｔ−Ａｓｎ、Ｍｅｔ−Ｇｌｎ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｎｌｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−（ｄＡ）、（ｄＡ）−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ｇｌｕ、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ａｓｎ、またはＧｌｕ−Ｇｌｎである。例示的実施形態では、Ｘ３は、小さい脂肪族アミノ酸または酸性アミノ酸である。例示的実施形態では、Ｘ３は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【０１０２】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、ＲＷＱＥＸ４８Ｘ４９Ｘ５０ＩＦＹ（配列番号３７３）、ＲＷＱＥＸ４８Ｘ４９ＹＸ５１ＦＹ（配列番号３７４）、ＲＷＱＥＸ４８Ｘ４９ＹＩＸ５２Ｙ（配列番号３７５）またはＲＷＱＥＸ４８Ｘ４９ＹＩＦＸ５３（配列番号３７６）のアミノ酸配列を含み、各Ｘ４８、Ｘ４９、Ｘ５０、Ｘ５１、Ｘ５２およびＸ５３は、独立に任意のアミノ酸である。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、表１に記載の構造および／またはアミノ酸配列を含む。例示的態様では、Ｘ４８は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、Ｃｙｓおよびこれらの等価物からなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ４８は、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびＣｙｓからなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ４９は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、Ｇｌｕ、およびこれらの等価物からなる群から選択される。例示的態様では、Ｘ４９は、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される。例示的態様では、−Ｘ４８Ｘ４９−は、Ｍｅｔ−Ａｓｎ、Ｍｅｔ−Ｇｌｎ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｎｌｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−（ｄＡ）、（ｄＡ）−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ｇｌｕ、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ａｓｎ、またはＧｌｕ−Ｇｌｎである。例示的実施形態では、各Ｘ５０、Ｘ５１、Ｘ５２およびＸ５３は、小さい脂肪族アミノ酸または酸性アミノ酸である。例示的実施形態では、各Ｘ５０、Ｘ５１、Ｘ５２およびＸ５３は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、（ｄＡ）、およびＧｌｕからなる群から選択される。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【０１０３】
本開示のそれぞれの実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列：ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号２）；ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＦＲＫＬＲ（配列番号３１６）；ＭＧＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号３１７）；またはＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号３１８）からなるペプチドではない。本開示のそれぞれの実施形態では、ペプチドはまた、配列番号４２、７７、７８、３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つからなるペプチドではない。例示的実施形態では、本開示のペプチドは、さらに、天然起源のペプチドではない。例示的態様では、ペプチドは、配列番号３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つからなるペプチドではない。その他の例示的実施形態では、ペプチドは、上述の配列のいずれかを含まない。本発明のペプチド実施形態は、次の文献中のアミノ酸配列により具体的に記載されたペプチドを含まない：米国特許出願公開第２０１４／０２９６１３９号、国際公開第０１／７６５３２号、およびＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ２１：４４３−４５４（２０１５）。これらのそれぞれは、ペプチドおよびペプチド配列のそれらの開示に対する参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０４】
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、表１に記載のアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【０１０５】
ペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つを含む、から本質的になる、またはからなるか、または配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７の内の１つに対する、少なくともまたは約７５％、少なくともまたは約８０％、少なくともまたは約８５％、少なくともまたは約９０％、または少なくともまたは約９５％の配列同一性を有する配列を含む、から本質的になる、またはからなる。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、１、２、３、または４個のアミノ酸置換を有する、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つの配列を含む、から本質的になる、またはからなる。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、１または２個のアミノ酸置換を有する、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つの配列を含む、から本質的になる、またはからなる。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、配列番号１１、１７〜１９、２１、３２、４５、１４８、１７２、２０８、２１０、２１１、２１３、２１９、および２４１のいずれか１つを含む、から本質的になる、またはからなるか、または配列番号１１、１７〜１９、２１、３２、４５、１４８、１７２、２０８、２１０、２１１、２１３、２１９、および２４１の内の１つに対する、少なくともまたは約７５％、少なくともまたは約８０％、少なくともまたは約８５％、少なくともまたは約９０％、または少なくともまたは約９５％の配列同一性を有する配列を含む、から本質的になる、またはからなる。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、８〜２０アミノ酸長さである。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体の部分（Ａ）は、部分（Ｂ）に対するＮ末端であり、０〜１０個の介在アミノ酸、特に、１、２、３、４、または５個のアミノ酸の介在アミノ酸を有する。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、（ｉｉｉ）または（ｉ）と（ｉｉ）の両方を示す。
【０１０６】
【表１−１】
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【０１０７】
【表１−２】
2020501514.tif 000003
【０１０８】
【表１−３】
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【０１０９】
【表１−４】
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【０１１０】
【表１−５】
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【０１１１】
【表１−６】
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【０１１２】
【表１−７】
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【０１１３】
【表１−８】
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【０１１４】
【表１−９】
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【０１１５】
生物活性
例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、脂肪細胞、例えば、ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低減する。例示的態様では、遊離脂肪酸レベルは、対照に比較して、少なくともまたは約５％低減する。例示的態様では、対照に比較して、遊離脂肪酸レベルを、少なくともまたは約１０％、少なくともまたは約２０％、少なくともまたは約３０％、少なくともまたは約４０％、少なくともまたは約５０％、少なくともまたは約６０％、少なくともまたは約７０％、少なくともまたは約８０％、少なくともまたは約９０％低減する。例示的態様では、遊離脂肪酸レベルを、対照に比較して、９０％超低減する。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、脂肪細胞、例えば、ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを、ＭＯＴＳ−ｃペプチド（例えば、配列番号２からなるペプチド）により達成されるレベル、またはそれと関連するレベルより良好な程度まで低減する。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、脂肪細胞、例えば、ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを、ＭＯＴＳ−ｃペプチド（例えば、配列番号２からなるペプチド）に起因するまたはそれに関連する低減より、少なくともまたは約１０％、少なくともまたは約２０％、少なくともまたは約３０％、少なくともまたは約４０％、少なくともまたは約５０％、少なくともまたは約６０％、少なくともまたは約７０％、少なくともまたは約８０％、少なくともまたは約９０％低い程度まで、低減する。脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルをアッセイする好適な方法が知られており、そのいくつかの例示的方法が本明細書の実施例２〜５および１７に記載されている。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、本明細書の実施例２〜５および１７の内の１つに記載の方法によりアッセイして、脂肪細胞、例えば、ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低減する。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、本明細書の実施例２〜５および１７の内の１つに記載の単回投与アッセイによりアッセイして、脂肪細胞、例えば、ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低減する。
【０１１６】
例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、哺乳動物、例えば、ＤＩＯマウス、ヒトの、体重、血糖値、および／または体脂肪量を低減する。例示的態様では、体重、血糖値、および／または体脂肪量を、対照に比較して、哺乳動物で少なくともまたは約５％低減する。例示的態様では、対照に比較して、哺乳動物の体重、血糖値、および／または体脂肪量を、少なくともまたは約１０％、少なくともまたは約２０％、少なくともまたは約３０％、少なくともまたは約４０％、少なくともまたは約５０％、少なくともまたは約６０％、少なくともまたは約７０％、少なくともまたは約８０％低減する。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、哺乳動物、例えば、ＤＩＯマウス、ヒトの体重、血糖値、および／または体脂肪量を、ＭＯＴＳ−ｃペプチド（例えば、配列番号２からなるペプチド）により達成されるレベル、またはそれと関連するレベルより良好な程度まで低減する。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、哺乳動物、例えば、ＤＩＯマウス、ヒトの体重、血糖値、および／または体脂肪量を、ＭＯＴＳ−ｃペプチド（例えば、配列番号２からなるペプチド）に起因するまたはそれに関連する低減より、少なくともまたは約１０％、少なくともまたは約２０％、少なくともまたは約３０％、少なくともまたは約４０％、少なくともまたは約５０％、少なくともまたは約６０％、少なくともまたは約７０％、少なくともまたは約８０％、少なくともまたは約９０％低い程度まで、低減する。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、血清トリグリセリドレベルおよび／または肝障害の酵素マーカー（例えば、ＡＳＴ、ＡＬＴ）の血清レベルを低減する。例示的態様では、血清トリグリセリドレベルおよび／または肝障害の酵素マーカー（例えば、ＡＳＴ、ＡＬＴ）の血清レベルを、対照に比較して、哺乳動物で少なくともまたは約５％低減する。例示的態様では、対照に比較して、哺乳動物で、血清トリグリセリドレベルおよび／または肝障害の酵素マーカー（例えば、ＡＳＴ、ＡＬＴ）の血清レベルを、少なくともまたは約１０％、少なくともまたは約２０％、少なくともまたは約３０％、少なくともまたは約４０％、少なくともまたは約５０％、少なくともまたは約６０％、少なくともまたは約７０％、少なくともまたは約８０％、少なくともまたは約９０％低減する。例示的態様では、血清トリグリセリドレベルおよび／または肝障害の酵素マーカー（例えば、ＡＳＴ、ＡＬＴ）の血清レベルを、対照に比較して、哺乳動物で、９０％超低減する。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、血清トリグリセリドレベルおよび／または肝障害の酵素マーカー（例えば、ＡＳＴ、ＡＬＴ）の血清レベルを、ＭＯＴＳ−ｃペプチド（例えば、配列番号２からなるペプチド）により達成されるレベルまたはそれに関連するレベルより良好な程度まで低減する。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、血清トリグリセリドレベル、および／または肝障害の酵素マーカー（例えば、ＡＳＴ、ＡＬＴ）の血清レベルを、ＭＯＴＳ−ｃペプチド（例えば、配列番号２からなるペプチド）に起因するまたはそれに関連する低減より、少なくともまたは約１０％、少なくともまたは約２０％、少なくともまたは約３０％、少なくともまたは約４０％、少なくともまたは約５０％、少なくともまたは約６０％、少なくともまたは約７０％、少なくともまたは約８０％、少なくともまたは約９０％低い程度まで、低減する。体重、血糖値、体脂肪量、血清トリグリセリドレベル、および肝障害の酵素マーカーの血清レベルを哺乳動物でアッセイする好適な方法が当技術分野において知られており、そのいくつかの例示的方法が本明細書の実施例６〜９および１８〜２０に記載されている。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、実施例６〜９および１８〜２０の１つに記載の方法、例えば、１５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量で皮下または腹腔内注入により１日１回または１日２回を１０日間（実施例６）、１５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量を適切な経路により１日２回を２１日間（実施例７）、５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量を適切な経路により１日１回を２１日間（実施例８）、１５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量を適切な経路により１日２回を２１日間（実施例９）などによりアッセイして、哺乳動物、例えば、ＤＩＯマウス、ヒトの体重、血糖値、および／または体脂肪量を低減する。
【０１１７】
例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す。換言すれば、３７℃のマウス血漿中で６０分間インキュベートした後に、ペプチドまたはペプチド類似体のアッセイ開始時の量の少なくとも１０％が無傷の状態で存在する（例えば、分解、切断、等を受けない）。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、３７℃の血漿中６０分間で、少なくとも２０％の安定性、少なくともまたは約３０％の安定性、少なくともまたは約４０％の安定性、少なくともまたは約５０％の安定性、少なくともまたは約６０％の安定性、少なくともまたは約７０％の安定性、少なくともまたは約８０％の安定性、または少なくともまたは約９０％の安定性を示す。血漿（マウス血漿を含む）中でペプチドの安定性をアッセイする好適な方法が当技術分野で知られており、そのいくつかの例示的方法が本明細書の実施例１４〜１６に記載されている。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、実施例１４〜１６の１つに記載の方法によりアッセイして、３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、実施例１４記載の単一ペプチド投与／濃度アッセイによりアッセイして、３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す。
【０１１８】
ペプチド長さ
例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、本明細書に記載のペプチド結合またはその他の共有結合を介して結合した少なくとも４個のアミノ酸を含むペプチドまたはペプチド類似体である。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、約４〜約５０アミノ酸長さである。４〜５０アミノ酸の全ての整数の部分範囲は、本明細書では、ペプチドとして、特に、考慮されている。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、約５〜約３５アミノ酸長さ、約５〜約３０アミノ酸長さ、約５〜約２５アミノ酸長さ、または約５〜約２０アミノ酸長さである。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、約６〜約３５アミノ酸長さ、約７〜約３０アミノ酸長さ、約６〜約２５アミノ酸長さ、または約６〜約２０アミノ酸長さである。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、約７〜約３５アミノ酸長さ、約７〜約３０アミノ酸長さ、約７〜約２５アミノ酸長さ、または約７〜約２０アミノ酸長さである。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、約８〜約３５アミノ酸長さ、約８〜約３０アミノ酸長さ、約８〜約２５アミノ酸長さ、または約８〜約２０アミノ酸長さである。例示的態様では、ペプチドは、約８〜約１７もしくは１８アミノ酸長さ、または約９〜約１６または１７アミノ酸長さである。例示的態様では、ペプチドは、約１０〜約１７または約１２〜約１６もしくは１７または約１４〜約１６アミノ酸長さである。いくつかの実施形態では、ペプチドは、５マー、６マー、７マー、８マー、９マー、１０マー、１１マー、１２マー、１３マー、１４マー、１５マー、１６マー、１７マー、１８マー、１９マー、または２０マーである。
【０１１９】
ペプチド修飾
本開示のペプチドは、任意の方法で、任意の理由で、例えば、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させるために、（２）結合親和性を変えるために、および（３）その他の物理化学的または機能的特性を付与または変更するために修飾が行われているペプチドを含む。例えば、配列中で、単一または複数のアミノ酸置換（例えば、等価、保存的または非保存的置換、欠失または付加）を行い得る。例示的態様では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、表１に記載の配列またはその修飾配列を含む。本開示の例示的実施形態では、さらに本明細書で記載のように、ペプチドまたはペプチド類似体は、脂質付加（例えば、ミリストイル化、パルミトイル化、Ｃ７〜Ｃ２０脂質部分に連結）、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、アシル化、アセチル化、環化、ペグ化（例えば、５〜２０ｋＤａ  ＰＥＧに連結、５ｋＤａ  ＰＥＧ、１２ｋＤａ  ＰＥＧ、２０ｋＤａ  ＰＥＧに連結）して、酸付加塩にされるか、または酸付加塩に変換され、および／または必要に応じ、二量体化もしくは重合化され、またはコンジュゲート化される。２００〜４６００分子量のサイズのＰＥＧも、本発明のペプチドの修飾に有用であろう。直鎖、分岐および星形の形状のＰＥＧも、本発明のペプチドの修飾に有用であろう。ＰＥＧ６００はＰＥＧ１２としても知られる。本開示の例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、Ｎ末端でアセチル化、Ｃ末端でアミド化、および／またはＴｙｒ残基上でリン酸化される。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、内部残基のＮ末端または側鎖で脂質部分に連結される。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、脂質部分に直接連結される。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、脂質部分に間接的に連結される。例えば、脂質部分は、リンカーを介してペプチドに連結され得る。リンカーはアミノ酸であってよい。例示的態様では、脂質部分は、εアミンを介して必要に応じ結合されたＧｌｕ残基を介して、ペプチドまたはペプチド類似体のＬｙｓ残基に結合される。本発明の修飾ペプチドの例は、表１で見出される。
【０１２０】
いくつかの実施形態のペプチドは、直鎖型が好ましいが、環化がペプチドの特性を大きく妨害しない場合には、ペプチドの環型も利用可能であり、本開示の実施形態として意図されていることが理解されよう。
【０１２１】
例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、環化されている。例えば、ペプチドまたはペプチド類似体は、２個のＣｙｓ残基を含み、その硫黄原子は、ジスルフィド架橋の形成に関与する。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、末端残基としてＣｙｓ残基を含む。ペプチドをジスルフィド架橋または硫黄ベース環化で修飾する好適な方法は、例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１３：９３９１−９３９２（１９９１）およびＲｕｄｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｊｏｓｔ，Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ  ２０：５７０−５７１（１９６４）に記載されている。
【０１２２】
別の選択肢として、ペプチドまたはペプチド類似体を、他のペプチド環化方法により安定化でき、この方法は、Ｄａｖｉｅｓ，Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｓｃｉ．９：４７１−５０１（２００３）で概説されている。ペプチドまたはペプチド類似体は、アミド架橋、チオエーテル架橋、チオエステル架橋、尿素架橋、カルバメート架橋、スルホンアミド架橋、ラクタム架橋、ラクトン架橋、などの形成を介して安定化できる。例えば、チオエステル架橋は、Ｃｙｓ残基のＣ末端と側鎖との間で形成できる。あるいは、チオエステルは、チオール（Ｃｙｓ）およびカルボン酸（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）を有するアミノ酸の側鎖を介して形成できる。別の方法では、ジカルボン酸、例えば、スベリン酸（オクタン二酸）、などの架橋剤により、遊離アミノ、ヒドロキシル、チオール基、およびこれらの組み合わせなどのアミノ酸側鎖の２個の官能基の間に連結部を導入できる。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ラクタム架橋を介して環化できる。ラクタム架橋を形成できるアミノ酸対の例には、オルニチン（Ｏｒｎ）とＧｌｕ、ＬｙｓとＡｓｐ、ＬｙｓとＧｌｕ、ホモリシンとＡｓｐ、Ｏｒｎとホモグルタミン酸、４−アミノＰｈｅとＡｓｐ、ホモリシンとＧｌｕ、Ｌｙｓとホモグルタミン酸、および４−アミノＰｈｅとＧｌｕが挙げられるが、これらに限定されない。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ラクトン架橋を介して環化できる。ラクトン架橋を形成できるアミノ酸対の例には、ホモｓｅｒ−ホモｇｌｕ、ＴｙｒとＧｌｕ、およびＴｙｒとＡｓｐが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２３】
例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、表１に記載のアミノ酸配列を含む、から本質的になる、またはからなる。本開示の代替実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、表１に記載の配列に対する修飾配列を含む、から本質的になる、またはからなる。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、表１のアミノ酸配列のいずれか１つに、少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的実施形態では、本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、表１のアミノ酸配列のいずれか１つに、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または９０％超の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、表１に記載の配列に対する修飾配列を含む、から本質的になる、またはからなり、ペプチドまたはペプチド類似体は、１個または複数（例えば、２、３、または４個）のアミノ酸置換を有する表１に記載の配列を含む、から本質的になる、またはからなる。例示的態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換または等価アミノ酸置換である。
【０１２４】
保存的アミノ酸置換は、ペプチド中のアミノ酸の、類似の特性、例えば、サイズ、電荷、疎水性、親水性、および／または芳香族性を有する機能的に類似のアミノ酸による置換を意味する。下表２の６つのグループは、それぞれ、相互に保存的置換であるアミノ酸を含む。
【０１２５】
【表２】
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【０１２６】
さらに、本明細書で適用される用語の「等価アミノ酸置換」の意味で、一実施形態では、本明細書中の下記に示すアミノ酸のグループ内で、１個のアミノ酸が、別のアミノ酸と置換され得る。
極性側鎖を有するアミノ酸    Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、およびＣｙｓ
小さい非極性またはわずかに極性の残基を有するアミノ酸    Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ
非極性側鎖を有するアミノ酸    Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｐｒｏ、およびＭｅｔ
大きな脂肪族の非極性残基を有するアミノ酸    Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモシステイン
脂肪族側鎖を有するアミノ酸    Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
環状側鎖を有するアミノ酸    Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ
芳香族側鎖を有するアミノ酸    Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ
酸性側鎖を有するアミノ酸    Ａｓｐ、Ｇｌｕ
塩基性側鎖を有するアミノ酸    Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ
アミド側鎖を有するアミノ酸    Ａｓｎ、Ｇｌｎ
ヒドロキシ側鎖を有するアミノ酸    Ｓｅｒ、Ｔｈｒ
硫黄含有側鎖を有するアミノ酸    Ｃｙｓ、Ｍｅｔ
中性の弱疎水性のアミノ酸    Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ
親水性の酸性アミノ酸    Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ
疎水性アミノ酸    Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ
【０１２７】
その他のアミノ酸置換を表３に示す。
【０１２８】
【表３】
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【０１２９】
例示的実施形態では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換ではなく、例えば、非保存的アミノ酸置換である。このクラスは通常、対応するＤ−アミノ酸、ホモアミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、ベータアミノ酸およびその他の非天然アミノ酸を含む。非保存的アミノ酸置換は、依然として、上記の等価アミノ酸置換［例えば、極性、非極性、など］に対して区別した記載の範囲内に入る。「非保存的アミノ酸置換」はまた、これらのクラスの１個のメンバーを別のクラスのメンバーと置換することを意味する。このような変更の実施では、特定の実施形態では、アミノ酸のヒドロパシーインデックスが考慮され得る。それぞれのアミノ酸は、その疎水性および電荷特性に基づいてヒドロパシーインデックスが割り付けされている。それらは：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；トレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リシン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）である。タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与する上でのヒドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当該技術分野において理解されている（例えば、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３１を参照されたい）。特定のアミノ酸は、類似のヒドロパシーインデックスまたはスコアを有する他のアミノ酸と置換可能で、その場合でも、類似の生物活性を保持するということがわかっている。ヒドロパシーインデックスに基づく変更の実施の場合、特定の実施形態では、ヒドロパシーインデックスが±２以内のアミノ酸の置換が含まれる。特定の実施形態では、±１以内のヒドロパシーインデックスのアミノ酸の置換が含まれ、さらに、特定の実施形態では、±０．５以内のヒドロパシーインデックスのアミノ酸の置換が含まれる。また、類似のアミノ酸の置換は、それにより作製された、生物学的に機能するタンパク質またはペプチドが、本明細書で開示のように、免疫学的な実施形態での使用が意図される場合には特に、親水性を基準にして効果的に行うことができることも当該技術分野において理解されている。特定の実施形態では、その隣接アミノ酸の親水性により制御される、タンパク質の最大の局所平均親水性は、その免疫原性および抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的性質と相関する。次の親水性値がこれらのアミノ酸残基に対し割り付けられている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０．±０．１）；グルタミン酸（＋３．０．±０．１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５．±０．１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−��．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）およびトリプトファン（−３．４）。類似の親水性値に基づく変更の実施の場合、特定の実施形態では、±２以内の親水性値のアミノ酸の置換が含まれ、特定の実施形態では、±１以内の親水性値のアミノ酸の置換が含まれ、および特定の実施形態では、±０．５以内の親水性値のアミノ酸の置換が含まれる。
【０１３０】
非保存的アミノ酸の例を下記に示す。
アラニン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｄ−アラニン［Ｄａｌａ、（ｄＡ）、ａ］、Ｎ−アセチル−３−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｄ−アラニン、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｈ−β−Ａｌａ−β−ナフタレン、Ｌ−（−）−２−アミノ−３−ウレイドプロピオン酸、（Ｒ）−（＋）−α−アリルアラニン、（Ｓ）−（−）−α−アリルアラニン、Ｄ−２−アミノ酪酸、Ｌ−２−アミノ酪酸、ＤＬ−２−アミノ酪酸、２−アミノイソ酪酸、α−アミノイソ酪酸、（Ｓ）−（＋）−２−アミノ−４−フェニル酪酸エチルエステル、ベンジルα−アミノイソ酪酸、Ａｂｕ−ＯＨ、Ａｉｂ−ＯＨ、β−（９−アントリル）−Ａｌａ−ＯＨ、β−（３−ベンゾチエニル）−Ａｌａ−ＯＨ、β−（３−ベンゾチエニル）−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｃｈａ−ＯＨ、Ｃｈａ−ＯＭｅ、β−（２−フリル）−Ａｌａ−ＯＨ、β−（２−フリル）−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、β−ヨード−Ａｌａ−ＯＢｚｌ、β−ヨード−Ｄ−Ａｌａ−ＯＢｚｌ、３−ヨード−Ｄ−Ａｌａ−ＯＭｅ、β−ヨード−Ａｌａ−ＯＭｅ、１−Ｎａｌ−ＯＨ、Ｄ−１−Ｎａｌ−ＯＨ、２−Ｎａｌ−ＯＨ、Ｄ−２−Ｎａｌ−ＯＨ、（Ｒ）−３−（２−ナフチル）−β−Ａｌａ−ＯＨ、（Ｓ）−３−（２−ナフチル）−β−Ａｌａ−ＯＨ、β−フェニル−Ｐｈｅ−ＯＨ、３−（２−ピリジル）−Ａｌａ−ＯＨ、３−（３−ピリジル）−Ａｌａ−ＯＨ、３−（３−ピリジル）−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、（Ｓ）−３−（３−ピリジル）−β−Ａｌａ−ＯＨ、３−（４−ピリジル）−Ａｌａ−ＯＨ、３−（４−ピリジル）−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、β−（２−キノリル）−Ａｌａ−ＯＨ、３−（２−キノリル）−ＤＬ−Ａｌａ−ＯＨ、３−（３−キノリル）−ＤＬ−Ａｌａ−ＯＨ、３−（２−キノキサリル）−ＤＬ−Ａｌａ−ＯＨ、β−（４−チアゾリル）−Ａｌａ−ＯＨ、β−（２−チエニル）−Ａｌａ−ＯＨ、β−（２−チエニル）−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、β−（３−チエニル）−Ａｌａ−ＯＨ、β−（３−チエニル）−Ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、３−クロロ−Ｄ−アラニンメチルエステル、Ｎ−［（４−クロロフェニル）スルホニル］−β−アラニン、３−シクロヘキシル−Ｄ−アラニン、３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニン、（−）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−メチル−Ｌ−アラニン、３，３−ジフェニル−Ｄ−アラニン、３，３−ジフェニル−Ｌ−アラニン、Ｎ−［（Ｓ）−（＋）−１−（エトキシカルボニル）−３−フェニルプロピル］−Ｌ−アラニン、Ｎ−［１−（Ｓ）−（＋）−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル］−Ｌ−アラニルカルボキシ無水物、Ｎ−（３−フルオロベンジル）アラニン、Ｎ−（３−インドリルアセチル）−Ｌ−アラニン、メチル（ＲＳ）−２−（アミノメチル）−３−フェニルプロピオン酸、３−（２−オキソ−１，２−ジヒドロ−４−キノリニル）アラニン、３−（１−ピラゾリル）−Ｌ−アラニン、３−（２−ピリジル）−Ｄ−アラニン、３−（２−ピリジル）−Ｌ−アラニン、３−（３−ピリジル）−Ｌ−アラニン、３−（４−ピリジル）−Ｄ−アラニン、３−（４−ピリジル）−Ｌ−アラニン、３−（２−キノリル）−ＤＬ−アラニン、３−（４−キノリル）−ＤＬ−アラニン、Ｄ−スチリルアラニン、Ｌ−スチリ���アラニン、３−（２−チエニル）−Ｌ−アラニン、３−（２−チエニル）−ＤＬ−アラニン、３−（２−チエニル）−ＤＬ−アラニン、３，３，３−トリフルオロ−ＤＬ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン、３−ウレイドプロピオン酸、Ａｉｂ−ＯＨ、Ｃｈａ−ＯＨ、デヒドロ−Ａｌａ−ＯＭｅ、デヒドロ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｄ−２−Ｎａｌ−ＯＨ、β−Ａｌａ−ＯＮｐ、β−ホモａｌａ−ＯＨ、β−Ｄ−ホモａｌａ−ＯＨ、β−アラニン、β−アラニンエチルエステル、β−アラニンメチルエステル、（Ｓ）−ジフェニル−β−ホモａｌａ−ＯＨ、（Ｒ）−４−（４−ピリジル）−β−ホモａｌａ−ＯＨ、（Ｓ）−４−（４−ピリジル）−β−ホモａｌａ−ＯＨ、β−Ａｌａ−ＯＨ、（Ｓ）−ジフェニル−β−ホモａｌａ−ＯＨ、Ｌ−β−ホモアラニン、（Ｒ）−４−（３−ピリジル）−β−ホモａｌａ−ＯＨ、α−メチル−α−ナフチルアラニン［Ｍａｎａｐ］、Ｎ−メチル−シクロヘキシルアラニン［Ｎｍｃｈｅｘａ］、シクロヘキシルアラニン［Ｃｈｅｘａ］、Ｎ−メチル−シクロペンチルアラニン［Ｎｍｃｐｅｎ］、シクロペンチルアラニン［Ｃｐｅｎ］、Ｎ−メチル−α−ナフチルアラニン［Ｎｍａｎａｐ］、α−ナフチルアラニン［Ａｎａｐ］、Ｌ−Ｎ−メチルアラニン［Ｎｍａｌａ］、Ｄ−Ｎ−メチルアラニン［Ｄｎｍａｌａ］、α−メチル−シクロヘキシルアラニン［Ｍｃｈｅｘａ］、α−メチル−シクロペンチルアラニン［Ｍｃｐｅｎ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３１】
アルギニン非保存的アミノ酸の非限定的例は：ホモアルギニン（ｈＡｒｇ）、Ｎ−メチルアルギニン（ＮＭｅＡｒｇ）、シトルリン、２−アミノ−３−グアニジノプロピオン酸、Ｎ−イミノエチル−Ｌ−オルニチン、Ｎω−モノメチル−Ｌ−アルギニン、Ｎω−ニトロ−Ｌ−アルギニン、Ｄ−アルギニン、２−アミノ−３−ウレイドプロピオン酸、Ｎω，ω−ジメチル−Ｌ−アルギニン、Ｎω−ニトロ−Ｄ−アルギニン、Ｌ−α−メチルアルギニン［Ｍａｒｇ］、Ｄ−α−メチルアルギニン［Ｄｍａｒｇ］、Ｌ−Ｎ−メチルアルギニン［Ｎｍａｒｇ］、Ｄ−Ｎ−メチルアルギニン［Ｄｎｍａｒｇ］、β−ホモａｒｇ−ＯＨ、Ｌ−ホモアルギニン、Ｎ−（３−グアニジノプロピル）グリシン［Ｎａｒｇ］、およびＤ−アルギニン［Ｄａｒｇ、（ｄＲ）、ｒ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３２】
アスパラギン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｌ−α−メチルアスパラギン［Ｍａｓｎ］、Ｄ−α−メチルアスパラギン［Ｄｍａｓｎ］、Ｌ−Ｎ−メチルアスパラギン［Ｎｍａｓｎ］、Ｄ−Ｎ−メチルアスパラギン［Ｄｎｍａｓｎ］、Ｎ−（カルバミルメチル）グリシン［Ｎａｓｎ］およびＤ−アスパラギン［Ｄａｓｎ、（ｄＮ）、ｎ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３３】
アスパラギン酸非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｌ−α−メチルアスパラギン酸［Ｍａｓｐ］、Ｄ−α−メチルアスパラギン酸［Ｄｍａｓｐ］、Ｌ−Ｎ−メチルアスパラギン酸［Ｎｍａｓｐ］、Ｄ−Ｎ−メチルアスパラギン酸［Ｄｎｍａｓｐ］、Ｎ−（カルボキシメチル）グリシン［Ｎａｓｐ］およびＤ−アスパラギン酸［Ｄａｓｐ、（ｄＤ）、ｄ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３４】
システイン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｌ−システイン酸、Ｌ−システインスルフィン酸、Ｄ−エチオニン、Ｓ−（２−チアゾリル）−Ｌ−システイン、ＤＬ−ホモシステイン、Ｌ−ホモシステイン、Ｌ−ホモシスチン、Ｌ−α−メチルシステイン［Ｍｃｙｓ］、Ｄ−α−メチルシステイン［Ｄｍｃｙｓ］、Ｌ−Ｎ−メチルシステイン［Ｎｍｃｙｓ］、Ｄ−Ｎ−メチルシステイン［Ｄｎｍｃｙｓ］、Ｎ−（チオメチル）グリシン［Ｎｃｙｓ］およびＤ−システイン［Ｄｃｙｓ、（ｄＣ）、ｃ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３５】
グルタミン酸非保存的アミノ酸の非限定的例は：γ−カルボキシ−ＤＬ−グルタミン酸、４−フルオロ−ＤＬ−グルタミン酸、β−グルタミン酸、Ｌ−β−ホモグルタミン酸、Ｌ−α−メチルグルタミン酸［Ｍｇｌｕ］、Ｄ−α−メチルグルタミン酸［Ｄｍｇｌｕ］、Ｌ−Ｎ−メチルグルタミン酸［Ｎｍｇｌｕ］、Ｄ−Ｎ−メチルグルタミン酸［Ｄｎｍｇｌｕ］、Ｎ−（２−カルボキシエチル）グリシン［Ｎｇｌｕ］、およびＤ−グルタミン酸［Ｄｇｌｕ、（ｄＥ）、ｅ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３６】
グルタミン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｃｉｔ−ＯＨ、Ｄ−シトルリン、チオ−Ｌ−シトルリン、β−Ｇｌｎ−ＯＨ、Ｌ−β−ホモグルタミン、Ｌ−α−メチルグルタミン［Ｍｇｌｎ］、Ｄ−α−メチルグルタミン［Ｄｍｇｌｎ］、Ｌ−Ｎ−メチルグルタミン［Ｎｍｇｌｎ］、Ｄ−Ｎ−メチルグルタミン［Ｄｎｍｇｌｎ］、Ｎ−（２−カルバミルエチル）グリシン［Ｎｇｌｎ］、およびＤ−グルタミン［Ｄｇｌｎ、（ｄＱ）、ｑ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３７】
グリシン非保存的アミノ酸の非限定的例は：ｔＢｕ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｄ−アリルグリシン、Ｎ−［ビス（メチルチオ）メチレン］グリシンメチルエステル、Ｃｈｇ−ＯＨ、Ｄ−Ｃｈｇ−ＯＨ、Ｄ−シクロプロピルグリシン、Ｌ−シクロプロピルグリシン、（Ｒ）−４−フルオロフェニルグリシン、（Ｓ）−４−フルオロフェニルグリシン、イミノ二酢酸、（２−インダニル）−Ｇｌｙ−ＯＨ、（±）−α−ホスホノグリシントリメチルエステル、Ｄ−プロパルギルグリシン、プロパルギル−Ｇｌｙ−ＯＨ、（Ｒ）−２−チエニルグリシン、（Ｓ）−２−チエニルグリシン、（Ｒ）−３−チエニルグリシン、（Ｓ）−３−チエニルグリシン、２−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−ＤＬ−グリシン、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−α−（カルボキシシクロプロピル）グリシン、Ｎ−（クロロアセチル）グリシンエチルエステル、（Ｓ）−（＋）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステル、Ｎ−（２−クロロフェニル）−Ｎ−（メチルスルホニル）グリシン、Ｄ−α−シクロヘキシルグリシン、Ｌ−α−シクロプロピルグリシン、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−イミノジカルボキシレート、アセトアミドシアノ酢酸エチル、Ｎ−（２−フルオロフェニル）−Ｎ−（メチルスルホニル）グリシン、Ｎ−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−（メチルスルホニル）グリシン、Ｎ−（２−フルフリリデンアセチル）グリシンメチルエステル、Ｎ−（２−フロイル）グリシン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸、Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）グリシン、イミノ二酢酸、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｌ−α−ネオペンチルグリシン、Ｎ−（ホスホノメチル）グリシン、Ｄ−プロパルギルグリシン、Ｌ−Ｃ−プロパルギルグリシン、サルコシン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシンエチルエステル、Ｄ−Ｃｈｇ−ＯＨ、α−ホスホノグリシントリメチルエステル、Ｎ−シクロブチルグリシン［Ｎｃｂｕｔ］、Ｌ−α−メチルエチルグリシン［Ｍｅｔｇ］、Ｎ−シクロヘプチルグリシン［Ｎｃｈｅｐ］、Ｌ−α−メチル−ｉ−ブチルグリシン［Ｍｔｂｕｇ］、Ｎ−メチルグリシン［Ｎｍｇｌｙ］、Ｌ−Ｎ−メチル−エチルグリシン［Ｎｍｅｔｇ］、Ｌ−エチルグリシン［Ｅｔｇ］、α，α−ジエチルグリシン［Ｄｅｇ］、Ｌ−Ｎ−メチル−ｔ−ブチルグリシン［Ｎｍｔｂｕｇ］、Ｌ−ｔ−ブチルグリシン［Ｔｂｕｇ］、Ｎ−シクロヘキシルグリシン［Ｎｃｈｅｘ］、Ｎ−シクロデシルグリシン［Ｎｃｄｅｃ］、Ｎ−シクロドデシルグリシン［Ｎｃｄｏｄ］、Ｎ−シクロオクチルグリシン［Ｎｃｏｃｔ］、Ｎ−シクロプロピルグリシン［Ｎｃｐｒｏ］、Ｎ−シクロウンデシルグリシン［Ｎｃｕｎｄ］、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン［Ｎａｅｇ］、Ｎ−（Ｎ−（２，２−ジフェニルエチル）ジフェニルエチル）グリシン［Ｎｎｂｈｍ］、Ｎ−（２，２−カルバミルメチル−グリシン［Ｎｂｈｍ］、Ｎ−（Ｎ−（３，３−ジフェニルプロピル）ジフェニルプロピル）グリシン［Ｎｎｂｈｅ］およびＮ−（３，３−カルバミルメチル−グリシン［Ｎｂｈｅ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３８】
ヒスチジン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｌ−α−メチルヒスチジン［Ｍｈｉｓ］、Ｄ−α−メチルヒスチジン［Ｄｍｈｉｓ］、Ｌ−Ｎ−メチルヒスチジン［Ｎｍｈｉｓ］、Ｄ−Ｎ−メチルヒスチジン［Ｄｎｍｈｉｓ］、Ｎ−（イミダゾリルエチル）グリシン［Ｎｈｉｓ］、およびＤ−ヒスチジン［Ｄｈｉｓ、（ｄＨ）、ｈ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１３９】
イソロイシン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｎ−メチル−Ｌ−イソロイシン［Ｎｍｉｌｅ］、Ｎ−（３−インドリルアセチル）−Ｌ−イソロイシン、アロ−イソロイシン、Ｄ−アロ−イソロイシン、Ｌ−β−ホモイソロイシン、Ｌ−α−メチルイソロイシン［Ｍｉｌｅ］、Ｄ−α−メチルイソロイシン［Ｄｍｉｌｅ］、Ｄ−Ｎ−メチルイソロイシン［Ｄｎｍｉｌｅ］、Ｎ−（１−メチルプロピル）グリシン［Ｎｉｌｅ］、およびＤ−イソロイシン［Ｄｉｌｅ、（ｄＤ）、ｉ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４０】
ロイシン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｄ−ロイシン［Ｄｌｅｕ、（ｄＬ）、ｌ］、シクロロイシン、ＤＬ−ロイシン、Ｎ−ホルミル−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｄ−ｔｅｒｔ−ロイシン、Ｌ−ｔｅｒｔ−ロイシン、ＤＬ−ｔｅｒｔ−ロイシン、Ｌ−ｔｅｒｔ−ロイシンメチルエステル、５，５，５−トリフルオロ−ＤＬ−ロイシン、Ｄ−β−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｌ−β−ロイシン、ＤＬ−β−ロイシン、Ｌ−β−ホモロイシン、ＤＬ−β−ホモロイシン、Ｌ−Ｎ−メチル−ロイシン［Ｎｍｌｅｕ］、Ｄ−Ｎ−メチル−ロイシン［Ｄｎｍｌｅｕ］、Ｌ−α−メチル−ロイシン［Ｍｌｅｕ］、Ｄ−α−メチル−ロイシン［Ｄｍｌｅｕ］、Ｎ−（２−メチルプロピル）グリシン［Ｎｌｅｕ］、Ｄ−ロイシン［Ｄｌｅｕ、ｌ］、Ｄ−ノルロイシン、Ｌ−ノルロイシン、ＤＬ−ノルロイシン、Ｌ−Ｎ−メチルノルロイシン［Ｎｍｎｌｅ］およびＬ−ノルロイシン［Ｎｌｅ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４１】
リシン非保存的アミノ酸の非限定的例は：ＤＬ−５−ヒドロキシリシン、（５Ｒ）−５−ヒドロキシ−Ｌ−リシン、β−Ｌｙｓ−ＯＨ、Ｌ−β−ホモリシン、Ｌ−α−メチル−リシン［Ｍｌｙｓ］、Ｄ−α−メチル−リシン［Ｄｍｌｙｓ］、Ｌ−Ｎ−メチル−リシン［Ｎｍｌｙｓ］、Ｄ−Ｎ−メチル−リシン［Ｄｎｍｌｙｓ］、Ｎ−（４−アミノブチル）グリシン［Ｎｌｙｓ］、およびＤ−リシン［Ｄｌｙｓ、（ｄＫ）、ｋ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４２】
メチオニン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｌ−β−ホモメチオニン、ＤＬ−β−ホモメチオニン、Ｌ−α−メチルメチオニン［Ｍｍｅｔ］、Ｄ−α−メチルメチオニン［Ｄｍｍｅｔ］、Ｌ−Ｎ−メチルメチオニン［Ｎｍｍｅｔ］、Ｄ−Ｎ−メチルメチオニン［Ｄｎｍｍｅｔ］、Ｎ−（２−メチルチオエチル）グリシン［Ｎｍｅｔ］、およびＤ−メチオニン［Ｄｍｅｔ、（ｄＭ）、ｍ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４３】
フェニルアラニン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｎ−アセチル−２−フルオロ−ＤＬ−フェニルアラニン、Ｎ−アセチル−４−フルオロ−ＤＬ−フェニルアラニン、４−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、３−［３，４−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−Ｌ−アラニン、Ｂｐａ−ＯＨ、Ｄ−Ｂｐａ−ＯＨ、４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｐｈｅ−ＯＨ、４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｄ−Ｐｈｅ−ＯＨ、４−（アミノ）−Ｌ−フェニルアラニン、ｒａｃ−β２−ホモフェニルアラニン、２−メトキシ−Ｌ−フェニルアラニン、（Ｓ）−４−メトキシ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、２−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン、ペンタフルオロ−Ｄ−フェニルアラニン、ペンタフルオロ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｐｈｅ（４−Ｂｒ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｂｒ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２，４−Ｃｌ２）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２，４−Ｃｌ２）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３，４−Ｃｌ２）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−ＣＮ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−ＣＮ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−ＣＮ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−ＣＮ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−ＣＮ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−ＮＨ２）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−Ｆ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−Ｆ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３−Ｆ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−Ｆ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３，４−Ｆ２）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３，４−Ｆ２）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３，５−Ｆ２）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−Ｆ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−Ｉ）−ＯＨ、Ｄ−３，４，５−トリフルオロフェニルアラニン、ｐ−ブロモ−ＤＬ−フェニルアラニン、４−ブロモ−Ｌ−フェニルアラニン、β−フェニル−Ｄ−フェニルアラニン、４−クロロ−Ｌ−フェニルアラニン、ＤＬ−２，３−ジフルオロフェニルアラニン、ＤＬ−３，５−ジフルオロフェニルアラニン、３，４−ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニン、３−（３，４−ジメトキシフェニル）−Ｌ−アラニン、Ｎ−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−２−メトキシ−Ｌ−フェニルアラニン、ｏ−フルオロ−ＤＬ−フェニルアラニン、ｍ−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニン、ｍ−フルオロ−ＤＬ−フェニルアラニン、ｐ−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−フルオロ−ＤＬ−フェニルアラニン、４−フルオロ−Ｄ−フェニルアラニン、２−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル、ｐ−フルオロ−ＤＬ−Ｐｈｅ−ＯＭｅ、Ｄ−３−ブロモフェニルアラニン、Ｄ−４−ブロモフェニルアラニン、Ｌ−β−（６−クロロ−４−ピリジニル）アラニン、Ｄ−３，５−ジフルオロフェニルアラニン、Ｌ−３−フルオロフェニルアラニン、Ｌ−４−フルオロフェニルアラニン、Ｌ−β−（１Ｈ−５−インドリル）アラニ��、２−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン、ペンタフルオロ−Ｌ−フェニルアラニン、ｐｈｅ（３−ｂｒ）−ｏｈ、Ｐｈｅ（４−Ｂｒ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−ＣＦ３）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２，４−Ｃｌ２）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２，４−Ｃｌ２）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３，４−Ｃｌ２）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３，４−Ｃｌ２）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｃｌ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−ＣＮ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−ＣＮ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−ＣＮ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−ＣＮ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（２−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−Ｍｅ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−ＮＯ２）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（２−Ｆ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３−Ｆ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（３−Ｆ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３，４−Ｆ２）−ＯＨ、Ｐｈｅ（３，５−Ｆ２）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｆ）−ＯＨ、Ｐｈｅ（４−Ｉ）−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｅ（４−Ｉ）−ＯＨ、４−（ホスホノメチル）−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｌ−４−トリフルオロメチルフェニルアラニン、３，４，５−トリフルオロ−Ｄ−フェニルアラニン、Ｌ−３，４，５−トリフルオロフェニルアラニン、６−ヒドロキシ−ＤＬ−ＤＯＰＡ、４−（ヒドロキシメチル）−Ｄ−フェニルアラニン、Ｎ−（３−インドリルアセチル）−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ヨード−Ｄ−フェニルアラニン、４−ヨード−Ｌ−フェニルアラニン、α−メチル−Ｄ−フェニルアラニン、α−メチル−Ｌ−フェニルアラニン、α−メチル−ＤＬ−フェニルアラニン、α−メチル−ＤＬ−フェニルアラニンメチルエステル、４−ニトロ−Ｄ−フェニルアラニン、４−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン、４−ニトロ−ＤＬ−フェニルアラニン、（Ｓ）−（＋）−４−ニトロフェニルアラニンメチルエステル、２−（トリフルオロメチル）−Ｄ−フェニルアラニン、２−（トリフルオロメチル）−Ｌ−フェニルアラニン、３−（トリフルオロメチル）−Ｄ−フェニルアラニン、３−（トリフルオロメチル）−Ｌ−フェニルアラニン、４−（トリフルオロメチル）−Ｄ−フェニルアラニン、３，３’，５−トリヨード−Ｌ−チロニン、（Ｒ）−４−ブロモ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ  Ｎ−アセチル−ＤＬ−β−フェニルアラニン、（Ｓ）−４−ブロモ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−クロロ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−クロロ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−クロロ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−クロロ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−２−シアノ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−シアノ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−シアノ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−３−シアノ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−シアノ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−シアノ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−３，４−ジメトキシ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−３，４−ジメトキシ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−フルオロ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−フルオロ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−ヨード−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、���Ｓ）−３−シアノ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−３，４−ジフルオロ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−フルオロ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−β２−ホモフェニルアラニン、（Ｒ）−３−メトキシ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−３−メトキシ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−メトキシ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−メチル−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−２−メチル−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−２−メチル−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−３−メチル−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−３−メチル−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−メチル−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−メチル−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、β−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｄ−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−３−（トリフルオロメチル）−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−（トリフルオロメチル）−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−２−（トリフルオロメチル）−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−３−（トリフルオロメチル）−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−３−（トリフルオロメチル）−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｒ）−４−（トリフルオロメチル）−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−４−（トリフルオロメチル）−β−Ｐｈｅ−ＯＨ、β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、Ｄ−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−２−メチル−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−３−メチル−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、β−Ｐｈｅ−ＯＨ、β−Ｄ−Ｐｈｅ−ＯＨ、（Ｓ）−３−（トリフルオロメチル）−β−ホモｐｈｅ−ＯＨ、Ｌ−β−ホモフェニルアラニン、ＤＬ−β−ホモフェニルアラニン、ＤＬ−β−フェニルアラニン、ＤＬ−ホモフェニルアラニンメチルエステル、Ｄ−ホモフェニルアラニン、Ｌ−ホモフェニルアラニン、ＤＬ−ホモフェニルアラニン、Ｄ−ホモフェニルアラニンエチルエステル、（Ｒ）−β２−ホモフェニルアラニン、Ｌ−α−メチル−ホモフェニルアラニン［Ｍｈｐｈｅ］、Ｌ−α−メチルフェニルアラニン［Ｍｐｈｅ］、Ｄ−ａ−メチルフェニルアラニン［Ｄｍｐｈｅ］、Ｌ−Ｎ−メチル−ホモフェニルアラニン［Ｎｍ  ｐｈｅ］、Ｌ−ホモフェニルアラニン［Ｈｐｈｅ］、Ｌ−Ｎ−メチルフェニルアラニン［Ｎｍｐｈｅ］、Ｄ−Ｎ−メチルフェニルアラニン［Ｄｎｍｐｈｅ］、Ｎ−ベンジルグリシン［Ｎｐｈｅ］およびＤ−フェニルアラニン［Ｄｐｈｅ、（ｄＦ）、ｆ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４４】
プロリン非保存的アミノ酸の非限定的例は：ホモプロリン（ｈＰｒｏ）、（４−ヒドロキシ）Ｐｒｏ（４ＨｙＰ）、（３−ヒドロキシ）Ｐｒｏ（３ＨｙＰ）、ガンマ−ベンジル−プロリン、ガンマ−（２−フルオロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−フルオロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−フルオロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（２−クロロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−クロロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−クロロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（２−ブロモ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−ブロモ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−ブロモ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（２−メチル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−メチル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−メチル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（２−ニトロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−ニトロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−ニトロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（１−ナフタレニルメチル）−プロリン、ガンマ−（２−ナフタレニルメチル）−プロリン、ガンマ−（２，４−ジクロロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３，４−ジクロロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３，４−ジフルオロ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（２−トリフルオロ−メチル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−トリフルオロ−メチル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−トリフルオロ−メチル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（２−シアノ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−シアノ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−シアノ−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（２−ヨード−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−ヨード−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−ヨード−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−フェニル−アリル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（３−フェニル−プロピル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−プロリン、ガンマ−ベンズヒドリル−プロリン、ガンマ−（４−ビフェニル−メチル）−プロリン、ガンマ−（４−チアゾリル−メチル）−プロリン、ガンマ−（３−ベンゾチエニル−メチル）−プロリン、ガンマ−（２−チエニル−メチル）−プロリン、ガンマ−（３−チエニル−メチル）−プロリン、ガンマ−（２−フラニル−メチル）−プロリン、ガンマ−（２−ピリジニル−メチル）−プロリン、ガンマ−（３−ピリジニル−メチル）−プロリン、ガンマ−（４−ピリジニル−メチル）−プロリン、ガンマ−アリル−プロリン、ガンマ−プロピニル−プロリン、アルファ−修飾プロリン残基、ピペコリン酸、アゼチジン−３−カルボン酸、Ｌ−β−ホモプロリン、Ｌ−β３−ホモプロリン、Ｌ−β−ホモヒドロキシプロリン、ヒドロキシプロリン［Ｈｙｐ］、Ｌ−□−メチルプロリン［Ｍｐｒｏ］、Ｄ−□−メチルプロリン［Ｄｍｐｒｏ］、Ｌ−Ｎ−メチルプロリン［Ｎｍｐｒｏ］、Ｄ−Ｎ−メチルプロリン［Ｄｎｍｐｒｏ］、およびＤ−プロリン［Ｄｐｒｏ、（ｄＰ）、ｐ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４５】
セリン非保存的アミノ酸の非限定的例は：（２Ｒ，３Ｓ）−３−フェニルイソセリン、Ｄ−シクロセリン、Ｌ−イソセリン、ＤＬ−イソセリン、ＤＬ−３−フェニルセリン、Ｌ−β−ホモセリン、Ｄ−ホモセリン、Ｄ−ホモセリン、Ｌ−３−ホモセリン、Ｌ−ホモセリン、Ｌ−α−メチルセリン［Ｍｓｅｒ］、Ｄ−α−メチルセリン［Ｄｍｓｅｒ］、Ｌ−Ｎ−メチルセリン［Ｎｍｓｅｒ］、Ｄ−Ｎ−メチルセリン［Ｄｎｍｓｅｒ］、Ｄ−セリン［Ｄｓｅｒ、（ｄＳ）、ｓ］、Ｎ−（ヒドロキシメチル）グリシン［Ｎｓｅｒ］およびホスホセリン［ｐＳｅｒ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４６】
トレオニン非保存的アミノ酸の非限定的例は：Ｌ−アロ−トレオニン、Ｄ−チロキシン、Ｌ−β−ホモトレオニン、Ｌ−α−メチルトレオニン［Ｍｔｈｒ］、Ｄ−α−メチルトレオニン［Ｄｍｔｈｒ］、Ｌ−Ｎ−メチルトレオニン［Ｎｍｔｈｒ］、Ｄ−Ｎ−メチルトレオニン［Ｄｎｍｔｈｒ］、Ｄ−トレオニン［Ｄｔｈｒ、（ｄＴ）、ｔ］、Ｎ−（１−ヒドロキシエチル）グリシン［Ｎｔｈｒ］およびホスホトレオニン［ｐＴｈｒ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４７】
トリプトファン非保存的アミノ酸の非限定的例は：５−フルオロ−Ｌ−トリプトファン、５−フルオロ−ＤＬ−トリプトファン、５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトファン、５−メトキシ−ＤＬ−トリプトファン、Ｌ−アブリン、５−メチル−ＤＬ−トリプトファン、Ｈ−Ｔｐｉ−ＯＭｅ、β−ホモｔｒｐ−ＯＭｅ、Ｌ−β−ホモトリプトファン、Ｌ−α−メチルトリプトファン［Ｍｔｒｐ］、Ｄ−α−メチルトリプトファン［Ｄｍｔｒｐ］、Ｌ−Ｎ−メチルトリプトファン［Ｎｍｔｒｐ］、Ｄ−Ｎ−メチルトリプトファン［Ｄｎｍｔｒｐ］、Ｎ−（３−インドリルエチル）グリシン［Ｎｈｔｒｐ］、Ｄ−トリプトファン［Ｄｔｒｐ、（ｄＷ）、ｗ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４８】
チロシン非保存的アミノ酸の非限定的例は：３，５ジヨードチロシン（３，５−ｄＩＴｙｒ）、３，５ジブロモチロシン（３，５−ｄＢＴｙｒ）、ホモチロシン、Ｄ−チロシン、３−アミノ−Ｌ−チロシン、３−アミノ−Ｄ−チロシン、３−ヨード−Ｌ−チロシン、３−ヨード−Ｄ−チロシン、３−メトキシ−Ｌ−チロシン、３−メトキシ−Ｄ−チロシン、Ｌ−チロキシン、Ｄ−チロキシン、Ｌ−チロニン、Ｄ−チロニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−メチル−Ｄ−チロシン、Ｄ−チロニン、Ｏ−エチル−Ｌ−チロシン、Ｏ−エチル−Ｄ−チロシン、３，５，３’−トリヨード−Ｌ−チロニン、３，５，３’−トリヨード−Ｄ−チロニン、３，５−ジヨード−Ｌ−チロニン、３，５−ジヨード−Ｄ−チロニン、Ｄ−メタ−チロシン、Ｌ−メタ−チロシン、Ｄ−オルト−チロシン、Ｌ−オルト−チロシン、フェニルアラニン、置換フェニルアラニン、Ｎ−ニトロフェニルアラニン、ｐ−ニトロフェニルアラニン、３−クロロ−Ｄｔｙｒ−ｏｈ、Ｔｙｒ（３，５−ジヨード）、３−クロロ−Ｌ−チロシン、Ｔｙｒ（３−ＮＯ２）−ＯＨ、Ｔｙｒ（３，５−ジヨード）−ＯＨ、Ｎ−Ｍｅ−Ｔｙｒ−ＯＨ、α−メチル−ＤＬ−チロシン、３−ニトロ−Ｌ−チロシン、ＤＬ−ｏ−チロシン、β−ホモｔｙｒ−ＯＨ、（Ｒ）−β−Ｔｙｒ−ＯＨ、（Ｓ）−β−Ｔｙｒ−ＯＨ、Ｌ−α−メチルチロシン［Ｍｔｙｒ］、Ｄ−α−メチルチロシン［Ｄｍｔｙｒ］、Ｌ−Ｎ−メチルチロシン［Ｎｍｔｙｒ］、Ｄ−Ｎ−メチルチロシン［Ｄｎｍｔｙｒ］、Ｄ−チロシン［Ｄｔｙｒ、（ｄＹ）、ｙ］、Ｏ−メチル−チロシン、およびホスホチロシン［ｐＴｙｒ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１４９】
バリン非保存的アミノ酸の非限定的例は：３−フルオロ−ＤＬ−バリン、４，４，４，４’，４’，４’−ヘキサフルオロ−ＤＬ−バリン、Ｄ−バリン［Ｄｖａｌ、（ｄＶ）、ｖ］、Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ−ＯＨ［Ｎｍｖａｌ］、Ｎ−Ｍｅ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｌ−α−メチルバリン［Ｍｖａｌ］、Ｄ−α−メチルバリン［Ｄｍｖａｌ］、（Ｒ）−（＋）−α−メチルバリン、（Ｓ）−（−）−α−メチルバリンおよびＤ−Ｎ−メチルバリン［Ｄｎｍｖａｌ］である。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１５０】
非保存的置換として置換し得るその他の非天然アミノ酸には、下記が挙げられる。オルニチンおよびその修飾物：Ｄ−オルニチン［Ｄｏｒｎ］、Ｌ−オルニチン［Ｏｒｎ］、ＤＬ−オルニチン、Ｌ−α−メチルオルニチン［Ｍｏｒｎ］、Ｄ−α−メチルオルニチン［Ｄｍｏｒｎ］、Ｌ−Ｎ−メチルオルニチン［Ｎｍｏｒｎ］、Ｄ−Ｎ−メチルオルニチン［Ｄｎｍｏｒｎ］およびＮ−（３−アミノプロピル）グリシン［Ｎｏｒｎ］。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１５１】
脂環式アミノ酸：Ｌ−２，４−ジアミノ酪酸、Ｌ−２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−Ｍｅ−Ａｉｂ−ＯＨ、（Ｒ）−２−（アミノ）−５−ヘキシン酸、ピペリジン−２−カルボン酸、アミノノルボルニル−カルボキシレート［Ｎｏｒｂ］、アルファ−アミノ酪酸［Ａｂｕ］、アミノシクロプロパン−カルボキシレート［Ｃｐｒｏ］、（ｃｉｓ）−３−アミノビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−カルボン酸、エキソ−ｃｉｓ−３−アミノビシクロ［２．２．１］ヘプタ−５−エン−２−カルボン酸、１−アミノ−１−シクロブタンカルボン酸、ｃｉｓ−２−アミノシクロヘプタンカルボン酸、１−アミノシクロヘキサンカルボン酸、ｃｉｓ−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、ｔｒａｎｓ−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、ｃｉｓ−６−アミノ−３−シクロヘキセン−１−カルボン酸、２−（１−アミノシクロヘキシル）酢酸、ｃｉｓ−２−アミノ−１−シクロオクタンカルボン酸、ｃｉｓ−２−アミノ−３−シクロオクテン−１−カルボン酸、（１Ｒ、２Ｓ）−（−）−２−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸、（１Ｓ、２Ｒ）−（＋）−２−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸、ｃｉｓ−２−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸、２−（１−アミノシクロペンチル）酢酸、ｃｉｓ−２−アミノ−２−メチルシクロヘキサンカルボン酸、ｃｉｓ−２−アミノ−２−メチルシクロペンタンカルボン酸、３−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）プロピオン酸、３−アゼチジンカルボン酸、ａｍｃｈｃ−ｏｈ、１−アミノシクロブタンカルボン酸、１−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、ｃｉｓ−２−（アミノ）−シクロヘキサンカルボン酸、ｔｒａｎｓ−２−（アミノ）−シクロヘキサンカルボン酸、ｃｉｓ−４−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、ｔｒａｎｓ−４−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、（±）−ｃｉｓ−２−（アミノ）−３−シクロヘキセン−１−カルボン酸、（±）−ｃｉｓ−６−（アミノ）−３−シクロヘキセン−１−カルボン酸、２−（１−アミノシクロヘキシル）酢酸、ｃｉｓ−［４−（アミノ）シクロヘキシル］酢酸、１−（アミノ）シクロペンタンカルボン酸、（±）−ｃｉｓ−２−（アミノ）シクロペンタンカルボン酸、（１Ｒ、４Ｓ）−（＋）−４−（アミノ）−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（±）−ｃｉｓ−２−（アミノ）−３−シクロペンテン−１−カルボン酸、２−（１−アミノシクロペンチル）酢酸、１−（アミノ）シクロプロパンカルボン酸、エチル１−アミノシクロプロパンカルボキシレート、１，２−ｔｒａｎｓ−ａｃｈｅｃ−ｏｈ、１−（アミノ）シクロブタンカルボン酸、１−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、ｃｉｓ−２−（アミノ）−シクロヘキサンカルボン酸、ｔｒａｎｓ−２−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、ｃｉｓ−４−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、ｔｒａｎｓ−４−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、ｃｉｓ−［４−（アミノ）シクロヘキシル］酢酸、１−（アミノ）シクロペンタンカルボン酸、（１Ｒ、４Ｓ）−（＋）−４−（アミノ）−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、（１Ｓ、４Ｒ）−（−）−４−（アミノ）−２−シクロペンテン−１−カルボン酸、１−（アミノ）シク���プロパンカルボン酸、ｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸、β−Ｄａｂ−ＯＨ、３−アミノ−３−（３−ブロモフェニル）プロピオン酸、３−アミノブタン酸、ｃｉｓ−２−アミノ−３−シクロペンテン−１−カルボン酸、ＤＬ−３−アミノイソ酪酸、（Ｒ）−３−アミノ−２−フェニルプロピオン酸、（±）−３−（アミノ）−４−（４−ビフェニリル）酪酸、ｃｉｓ−３−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、（１Ｓ，３Ｒ）−（＋）−３−（アミノ）シクロペンタンカルボン酸、（２Ｒ，３Ｒ）−３−（アミノ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸、（２Ｓ，３Ｒ）−３−（アミノ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル酪酸、２−（アミノメチル）フェニル酢酸、（Ｒ）−３−（アミノ）−２−メチルプロピオン酸、（Ｓ）−３−（アミノ）−２−メチルプロピオン酸、（Ｒ）−３−（アミノ）−４−（２−ナフチル）酪酸、（Ｓ）−３−（アミノ）−４−（２−ナフチル）酪酸、（Ｒ）−３−（アミノ）−５−フェニルペンタン酸、（Ｒ）−３−（アミノ）−２−フェニルプロピオン酸、エチル３−（ベンジルアミノ）プロピオネート、ｃｉｓ−３−（アミノ）シクロヘキサンカルボン酸、（Ｓ）−３−（アミノ）−５−ヘキセン酸、（Ｒ）−３−（アミノ）−２−メチルプロピオン酸、（Ｓ）−３−（アミノ）−２−メチルプロピオン酸、（Ｒ）−３−（アミノ）−４−（２−ナフチル）酪酸、（Ｓ）−３−（アミノ）−４−（２−ナフチル）酪酸、（Ｒ）−（−）−ピロリジン−３−カルボン酸、（Ｓ）−（＋）−ピロリジン−３−カルボン酸、Ｎ−メチル−γ−アミノ酪酸［Ｎｍｇａｂｕ］、γ−アミノ酪酸［Ｇａｂｕ］、Ｎ−メチル−α−アミノ−α−メチル酪酸［Ｎｍａａｂｕ］、α−アミノ−α−メチル酪酸［Ａａｂｕ］、Ｎ−メチル−α−アミノイソ酪酸［Ｎｍａｉｂ］、α−アミノイソ酪酸［Ａｉｂ］、α−メチル−ｙ−アミノ酪酸［Ｍｇａｂｕ］。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１５２】
フェニルグリシンおよびその修飾物：Ｐｈｇ−ＯＨ、Ｄ−Ｐｈｇ−ＯＨ、２−（ピペラジノ）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）酢酸、２−（ピペラジノ）−２−（２−フルオロフェニル）酢酸、２−（４−ピペラジノ）−２−（３−フルオロフェニル）酢酸、２−（４−ピペラジノ）−２−（４−メトキシフェニル）酢酸、２−（４−ピペラジノ）−２−（３−ピリジル）酢酸、２−（４−ピペラジノ）−２−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］酢酸、Ｌ−（＋）−２−クロロフェニルグリシン、（±）−２−クロロフェニルグリシン、（±）−４−クロロフェニルグリシン、（Ｒ）−（−）−２−（２，５−ジヒドロフェニル）グリシン、（Ｒ）−（−）−Ｎ−（３，５−ジニトロベンゾイル）−α−フェニルグリシン、（Ｓ）−（＋）−Ｎ−（３，５−ジニトロベンゾイル）−α−フェニルグリシン、２，２−ジフェニルグリシン、２−フルオロ−ＤＬ−α−フェニルグリシン、４−フルオロ−Ｄ−α−フェニルグリシン、４−ヒドロキシ−Ｄ−フェニルグリシン、４−ヒドロキシ−Ｌ−フェニルグリシン、２−フェニルグリシン、Ｄ−（−）−α−フェニルグリシン、Ｄ−（−）−α−フェニルグリシン、ＤＬ−α−フェニルグリシン、Ｌ−（＋）−α−フェニルグリシン、Ｎ−フェニルグリシン、（Ｒ）−（−）−２−フェニルグリシンメチルエステル、（Ｓ）−（＋）−２−フェニルグリシンメチルエステル、２−フェニルグリシノニトリル塩酸塩、α−フェニルグリシノニトリル、３−（トリフルオロメチル）−ＤＬ−フェニルグリシン、および４−（トリフルオロメチル）−Ｌ−フェニルグリシン。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１５３】
ペニシラミンおよびその修飾物：Ｎ−アセチル−Ｄ−ペニシラミン、Ｄ−ペニシラミン、Ｌ−ペニシラミン［Ｐｅｎ］、ＤＬ−ペニシラミン、α−メチルペニシラミン［Ｍｐｅｎ］、Ｎ−メチルペニシラミン［Ｎｍｐｅｎ］。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１５４】
β−ホモピロリジン。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１５５】
芳香族アミノ酸：３−アセトアミド安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、４−アセトアミド−２−メチル安息香酸、Ｎ−アセチルアントラニル酸、３−アミノ安息香酸、３−アミノ安息香酸塩酸塩、４−アミノ安息香酸、４−アミノ安息香酸、４−アミノ安息香酸、４−アミノ安息香酸、４−アミノ安息香酸、４−アミノ安息香酸、２−アミノベンゾフェノン−２’−カルボン酸、２−アミノ−４−ブロモ安息香酸、２−アミノ−５−ブロモ安息香酸、３−アミノ−２−ブロモ安息香酸、３−アミノ−４−ブロモ安息香酸、３−アミノ−５−ブロモ安息香酸、４−アミノ−３−ブロモ安息香酸、５−アミノ−２−ブロモ安息香酸、２−アミノ−３−ブロモ−５−メチル安息香酸、２−アミノ−３−クロロ安息香酸、２−アミノ−４−クロロ安息香酸、２−アミノ−５−クロロ安息香酸、２−アミノ−５−クロロ安息香酸、２−アミノ−６−クロロ安息香酸、３−アミノ−２−クロロ安息香酸、３−アミノ−４−クロロ安息香酸、４−アミノ−２−クロロ安息香酸、４−アミノ−３−クロロ安息香酸、５−アミノ−２−クロロ安息香酸、５−アミノ−２−クロロ安息香酸、４−アミノ−５−クロロ−２−メトキシ安息香酸、２−アミノ−５−クロロ−３−メチル安息香酸、３−アミノ−２，５−ジクロロ安息香酸、４−アミノ−３，５−ジクロロ安息香酸、２−アミノ−４，５−ジメトキシ安息香酸、４−（２−アミノエチル）安息香酸塩酸塩、２−アミノ−４−フルオロ安息香酸、２−アミノ−５−フルオロ安息香酸、２−アミノ−６−フルオロ安息香酸、４−アミノ−２−フルオロ安息香酸、２−アミノ−５−ヒドロキシ安息香酸、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸、４−アミノ−３−ヒドロキシ安息香酸、２−アミノ−５−ヨード安息香酸、５−アミノイソフタル酸、２−アミノ−３−メトキシ安息香酸、２−アミノ−４−メトキシ安息香酸、２−アミノ−５−メトキシ安息香酸、３−アミノ−２−メトキシ安息香酸、３−アミノ−４−メトキシ安息香酸、３−アミノ−５−メトキシ安息香酸、４−アミノ−２−メトキシ安息香酸、４−アミノ−３−メトキシ安息香酸、５−アミノ−２−メトキシ安息香酸、２−アミノ−３−メチル安息香酸、２−アミノ−５−メチル安息香酸、２−アミノ−６−メチル安息香酸、３−（アミノメチル）安息香酸、３−アミノ−２−メチル安息香酸、３−アミノ−４−メチル安息香酸、４−（アミノメチル）安息香酸、４−アミノ−２−メチル安息香酸、４−アミノ−３−メチル安息香酸、５−アミノ−２−メチル安息香酸、３−アミノ−２−ナフトエ酸、６−アミノ−２−ナフトエ酸、２−アミノ−３−ニトロ安息香酸、２−アミノ−５−ニトロ安息香酸、２−アミノ−５−ニトロ安息香酸、４−アミノ−３−ニトロ安息香酸、５−アミノ−２−ニトロ安息香酸、３−（４−アミノフェニル）プロピオン酸、３−アミノフタル酸、４−アミノフタル酸、３−アミノサリチル酸、４−アミノサリチル酸、５−アミノサリチル酸、５−アミノサリチル酸、２−アミノテレフタル酸、２−アミノ−３，４，５，６−テトラフルオロ安息香酸、４−アミノ−２，３，５，６−テトラフルオロ安息香酸、（Ｒ）−２−アミノ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−２−カルボン酸、（Ｓ）−２−アミノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフタレンカルボン酸、２−アミノ−３−（トリフルオロメチル）安息香酸、２−アミノ−３−（トリフルオロメチル）安息香酸、３−アミノ−５−（トリフルオロメチル）安息香酸、５−アミノ−２，４，６−トリヨードイソフタル酸、２−アミノ−３，４，５−トリメトキシ安息香酸、２−アニリノフェニル酢酸、２−Ａｂｚ−ＯＨ、３−Ａｂｚ−ＯＨ、４−Ａｂｚ−ＯＨ、２−（アミノメチル）安息香酸、３−（アミノメチル）安息香酸、４−（アミノメチル）安息香酸、ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ安息香酸、ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ安息香酸、ｔｅｒｔ−ブチル４−アミノ安息香酸、４−（ブチルアミノ）安息香酸、２，３−ジアミノ安息香酸、３，４−ジアミノ安息香酸、３，５−ジアミノ安息香酸、３，５−ジアミノ安息香酸、３，５−ジクロロアントラニル酸、４−（ジエチルアミノ）安息香酸、４，５−ジフルオロアントラニル酸、４−（ジメチルアミノ）安息香酸、４−（ジメチルアミノ）安息香酸、３，５−ジメチルアントラニル酸、５−フルオロ−２−メトキシ安息香酸、２−Ａｂｚ−ＯＨ、３−Ａｂｚ−ＯＨ、４−Ａｂｚ−ＯＨ、３−（アミノメチル）安息香酸、４−（アミノメチル）安息香酸、４−（２−ヒドラジノ）安息香酸、３−ヒドロキシアントラニル酸、３−ヒドロキシアントラニル酸、メチル３−アミノ安息香酸、３−（メチルアミノ）安息香酸、４−（メチルアミノ）安息香酸、メチル２−アミノ−４−クロロ安息香酸、メチル２−アミノ−４，５−ジメトキシ安息香酸、４−ニトロアントラニル酸、Ｎ−フェニルアントラニル酸、Ｎ−フェニルアントラニル酸、および４−アミノサリチル酸ナトリウム。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１５６】
その他のアミノ酸：（Ｓ）−α−アミノ−γ−ブチロラクトン、ＤＬ−２−アミノカプリル酸、７−アミノセファロスポラン酸、４−アミノケイ皮酸、（Ｓ）−（＋）−α−アミノシクロヘキサンプロピオン酸、（Ｒ）−アミノ−（４−ヒドロキシフェニル）酢酸メチルエステル、５−アミノレブリン酸、４−アミノ−ニコチン酸、３−アミノフェニル酢酸、４−アミノフェニル酢酸、２−アミノ−２−フェニル酪酸、４−（４−アミノフェニル）酪酸、２−（４−アミノフェニルチオ）酢酸、ＤＬ−α−アミノ−２−チオフェン酢酸、５−アミノ吉草酸、８−ベンジル（Ｓ）−２−アミノオクタンジオエート、４−（アミノ）−１−メチルピロール−２−カルボン酸、４−（アミノ）テトラヒドロチオピラン−４−カルボン酸、（１Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−２−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸、Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸、アゼチジン−３−カルボン酸、４−（アミノ）ピペリジン−４−カルボン酸、ジアミノ酢酸、Ｉｎｐ−ＯＨ、（Ｒ）−Ｎｉｐ−ＯＨ、（Ｓ）−４−オキソピペリジン−２−カルボン酸、２−（４−ピペラジノ）−２−（４−フルオロフェニル）酢酸、２−（４−ピペラジノ）−２−フェニル酢酸、４−ピペリジンアセトアルデヒド、４−ピペリジル酢酸、（−）−Ｌ−チオプロリン、Ｔｌｅ−ＯＨ、３−ピペリジンカルボン酸、Ｌ−（＋）−カナバニン、（±）−カルニチン、クロラムブシル、２，６−ジアミノピメリン酸、ｍｅｓｏ−２，３−ジアミノコハク酸、４−（ジメチルアミノ）ケイ皮酸、４−（ジメチルアミノ）フェニル酢酸、エチル（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−ピペリジン−３−カルボキシレート、エチル−ピペラジノ酢酸、４−［２−（アミノ）エチル］ピペラジン−１−イル酢酸、（Ｒ）−４−（アミノ）−５−フェニルペンタン酸、（Ｓ）−アゼチジン−２−カルボン酸、アゼチジン−３−カルボン酸、グバシン、Ｉｎｐ−ＯＨ、（Ｒ）−Ｎｉｐ−ＯＨ、ＤＬ−Ｎｉｐ−ＯＨ、４−フェニル−ピペリジン−４−カルボン酸、１−ピペラジン酢酸、４−ピペリジン酢酸、（Ｒ）−ピペリジン−２−カルボン酸、（Ｓ）−ピペリジン−２−カルボン酸、（Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン酸、Ｔｉｃ−ＯＨ、Ｄ−Ｔｉｃ−ＯＨ、イミノ二酢酸、インドリン−２−カルボン酸、ＤＬ−キヌレニン、Ｌ−アジリジン−２−カルボキシレート、メチル４−アミノブチレート、（Ｓ）−２−ピペラジンカルボン酸、２−（１−ピペラジニル）酢酸、（Ｒ）−（−）−３−ピペリジンカルボン酸、２−ピロリドン−５−カルボン酸、（Ｒ）−（＋）−２−ピロリドン−５−カルボン酸、（Ｒ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−３−イソキノリンカルボン酸、（Ｓ）−１，２，３，４−テトラヒドロ−３−イソキノリンカルボン酸、Ｌ−４−チアゾリジンカルボン酸、（４Ｒ）−（−）−２−チオキソ−４−チアゾリジンカルボン酸、ヒドラジノ酢酸、および３，３’，５−トリヨード−Ｌ−チロニン。それぞれの可能性は、別々の実施形態を表す。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、位置１または２、また配置１および２の両方に、ペプチダーゼ切断に対し耐性を獲得するアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、位置１に、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノヒスチジン、ヒドロキシル−ヒスチジン、アセチル−ヒスチジン、ホモ−ヒスチジン、Ｎ−メチルヒスチジン、α−メチルヒスチジン、イミダゾール酢酸、またはα，α−ジメチルイミダゾール酢酸（ＤＭＩＡ）からなる群より選択されるアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、位置２に、Ｄ−セリン、Ｄ−アラニン、バリン、グリシン、Ｎ−メチルセリン、Ｎ−メチルアラニン、またはαアミノイソ酪酸からなる群より選択されるアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、位置２に、ペプチドまたはペプチド類似体がペプチダーゼに対する耐性を獲得するアミノ酸を含み、ペプチドまたはペプチド類似体がペプチダーゼに対する耐性を獲得するアミノ酸は、Ｄ−セリンではない。いくつかの実施形態では、この共有結合は、ラクタム架橋以外の分子内架橋である。例えば、好適な共有結合法は、オレフィンメタセシス、ランチオニンベースの環化、ジスルフィド架橋または修飾硫黄含有架橋形成、α，ω−ジアミノアルカンテザーの使用、金属原子架橋の形成、およびその他のペプチド環化手段の内のいずれか１種または複数を含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、荷電アミノ酸を類似体のＣ末端部に導入するアミノ酸置換および／または付加により修飾される。いくつかの実施形態では、このような修飾は、安定性と溶解度を高める。本明細書で使用される場合、「荷電アミノ酸」または「荷電残基」という用語は、生理学的ｐＨの水溶液中で負に帯電した（すなわち、脱プロトン化）または正に帯電した（すなわち、プロトン化）側鎖を含むアミノ酸を意味する。いくつかの態様では、荷電アミノ酸修飾を導入するこれらのアミノ酸置換および／または付加は、Ｃ末端位置であってよい。いくつかの実施形態では、１、２または３個の（いくつかの事例では、３個より多い）荷電アミノ酸を、Ｃ末端位置に導入し得る。例示的実施形態では、１、２個または全ての荷電アミノ酸が、負に帯電していてもよい。いくつかの実施形態では、負に帯電したアミノ酸には、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン酸、ホモシステイン酸、またはホモグルタミン酸である。いくつかの態様では、これらの修飾は溶解度を高める。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示のペプチドまたはペプチド類似体は、１または２個のアミノ酸残基分のＣ末端の短縮化により修飾してもよい。この点に関して、例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、１または２個のアミノ酸残基がＣ末端で短縮された、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つの配列を、本明細書に記載のいずれかの修飾の必要に応じた追加と共に、含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、Ｃ末端アミノ酸のカルボン酸が、アミドまたはエステルなどの中性電荷の基で置換されている配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７の内のいずれかの修飾された配列を含む。したがって、いくつかの実施形態では、ペプチドは、アミド化ペプチドであり、それにより、Ｃ末端残基は、アミノ酸のαカルボキシレートの代わりにアミドを含む。本明細書で使用される場合、ペプチドまたは類似体への一般的な言及は、修飾アミノ末端、修飾カルボキシ末端、またはアミノおよびカルボキシ末端の両方の修飾を有するペプチドを包含することが意図されている。例えば、末端カルボン酸の代わりに、アミド基で構成されるアミノ酸鎖は、標準的アミノ酸と称するアミノ酸配列により包含されることが意図されている。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示のペプチドは、少なくとも１個のアミノ酸残基へのコンジュゲートにより修飾され得る。この点に関して、例示的態様では、ペプチドは、本明細書に記載の異種の部分にコンジュゲートした、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つの配列を含む。
【０１６２】
ペプチド類似体
本開示は、限定されないが、ペプチド模倣化合物などのペプチド類似体を提供し、これは、改善された安定性および細胞透過特性を有し得る。例示的実施形態では、ペプチド模倣化合物は、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つによる配列を含み、そのペプチド中の１個または複数のペプチド結合（−ＣＯ−ＮＨ−）が、例えば、Ｎ−メチル化アミド結合（−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＯ−）、エステル結合（−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−）、ケトメチレン結合（−ＣＯ−ＣＨ２−）、スルフィニルメチレン結合（−Ｓ（＝Ｏ）−ＣＨ２−）、α−アザ結合（−ＮＨ−Ｎ（Ｒ）−ＣＯ−）（Ｒは任意のアルキル（例えば、メチル））、アミン結合（−ＣＨ２−ＮＨ−）、スルフィド結合（−ＣＨ２−Ｓ−）、エチレン結合（−ＣＨ２−ＣＨ２−）、ヒドロキシエチレン結合（−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−）、チオアミド結合（−ＣＳ−ＮＨ−）、オレフィン系二重結合（−ＣＨ＝ＣＨ−）、フッ化オレフィン系二重結合（−ＣＦ＝ＣＨ−）、または古典的なアミド結合（−ＮＨ−ＣＯ−）、ペプチド誘導体（−Ｎ（Ｒｘ）−ＣＨ２−ＣＯ−）（Ｒｘは、炭素原子上で天然に存在する「通常の」側鎖）により置換される。これらの修飾は、ペプチド鎖に沿った結合のいずれかで生じ、さらには、同時に、いくつか（２〜３個）の結合で生じ得る。
【０１６３】
例示的態様では、ペプチド類似体は、ペプチド模倣体である。ペプチド模倣体ならびにこの製造方法は、当技術分野において既知である。例えば、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｍｉｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２，ｅｄ．，Ａｂｅｌｌ，Ａ．，ＪＡＩ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｇｒｅｅｎｗｉｃｈ，ＣＴ，２００６を参照されたい。例示的態様では、ペプチド模倣体は、Ｄ−異性体アミノ酸を含むＤ−ペプチドペプチド模倣体である。例示的態様では、ペプチド模倣体は、アミノ酸の側鎖がペプチド骨格のα窒素原子に連結されるペプトイドである。ペプトイドの製造方法は、当技術分野において既知である。例えば、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＡＣＳ  １１４（２６）：１０６４６−１０６４７（１９９２）およびＤｅｓｉｇｎ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  Ｐｅｐｔｏｉｄｓ，Ｆｏｗｌｅｒ，Ｓａｒａｈ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ−Ｍａｄｉｓｏｎ，２００８、を参照されたい。いくつかの態様では、ペプチド模倣体は、α炭素ではなく、β−炭素に結合したアミノ基を有するβアミノ酸を含むβ−ペプチドである。β−ペプチドの製造方法は、当技術分野において既知である。例えば、Ｓｅｅｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ  ７９（４）：９１３−９４１（１９９６）、を参照されたい。
【０１６４】
コンジュゲート
本開示は、異種の部分にコンジュゲートした、連結した、架橋した、付加した、または結合した本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体をさらに提供する。したがって、本開示は、１個または複数の本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体および異種の部分を含むコンジュゲートを提供する。本明細書で使用される場合、「異種の部分」という用語は、「コンジュゲート部分」という用語と同義であり、本明細書に記載のペプチドとは異なる任意の分子（化学的または生化学的、天然のまたは非タンパク質分子）を意味する。本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体のいずれかに連結できる例示的コンジュゲート部分には、限定されないが、異種のペプチドまたはポリペプチド（例えば、血漿タンパク質を含む）、標的化薬剤、免疫グロブリンまたはその一部（例えば、可変領域、ＣＤＲ、またはＦｃ領域）、放射性同位元素、フルオロフォアまたは酵素標識などの診断薬標識、水溶性ポリマーを含むポリマー、またはその他の治療薬もしくは診断薬が挙げられる。いくつかの実施形態では、ペプチドおよび血漿タンパク質を含むコンジュゲートが提供され、血漿タンパク質は、アルブミン、トランスフェリン、フィブリノーゲンおよびグロブリンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、コンジュゲートの血漿タンパク質部分は、アルブミンまたはトランスフェリンである。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、１個または複数の本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体および異なるペプチド（本明細書に記載のペプチドとは異なる）、ポリペプチド、核酸分子、抗体またはそのフラグメント、ポリマー、量子ドット、小分子、毒素、診断薬、炭水化物、またはアミノ酸の内の１個または複数を含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、異種の部分はポリマーである。いくつかの実施形態では、ポリマーは、次記からなる群から選択される：ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレートを含むポリアルキレンおよびこれらの誘導体、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）を含むアクリル酸およびメタクリル酸エステルのポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリ（ビニルアセテート）およびポリビニルピロリドンを含むポリビニルポリマー、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびこれらのコポリマー、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、セルロースアセテート、セルロースプロピオネート、セルロースアセテートブチレート、セルロースアセテートフタレート、カルボキシルエチルセルロース、セルローストリアセテート、およびセルロースサルフェートナトリウム塩を含むセルロース、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、およびポリ（エチレンテレフタレート）を含むポリエチレン、およびポリスチレン。いくつかの態様では、ポリマーは、合成生分解性ポリマー（例えば、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、およびポリ（ラクチド−ｃｏカプロラクトン））および天然の生分解性ポリマー（例えば、アルギネートおよびデキストランおよびセルロースを含む他の多糖類、コラーゲン、これらの化学的誘導体（化学基の置換体、付加物、例えば、アルキル、アルキレン、ヒドロキシル化物、酸化物、および当業者により定常的に作製される他の修飾物）、アルブミンおよび他の親水性タンパク質（例えば、ゼインならびに他のプロラミンおよび疎水性タンパク質））、ならびにこれらの任意のコポリマーまたは混合物を含む生分解性ポリマーである。一般に、これらの材料は、インビボでの酵素的加水分解または水への曝露により、表面またはバルク浸食により、分解する。いくつかの態様では、ポリマーは、Ｈ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．Ｐａｔｈａｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ａ．Ｈｕｂｂｅｌｌ  ｉｎ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１９９３，２６，５８１−５８７（この教示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の生体内分解性ヒドロゲルなどの生体付着性ポリマー、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギネート、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート���、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）である。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、ポリマーは、水溶性ポリマーまたは親水性ポリマーである。親水性ポリマーは、本明細書の「親水性部分」項でさらに記載される。好適な水溶性ポリマーは当技術分野で知られており、例えば、次記が挙げられる。ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ；Ｋｌｕｃｅｌ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ；Ｍｅｔｈｏｃｅｌ）、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルブチルセルロース、ヒドロキシプロピルペンチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース（Ｅｔｈｏｃｅｌ）、ヒドロキシエチルセルロース、種々のアルキルセルロースおよびヒドロキシアルキルセルロース、種々のセルロースエーテル、セルロースアセテート、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルシウムカルボキシメチルセルロース、酢酸ビニル／クロトン酸コポリマー、ポリ−ヒドロキシアルキルメタクリレート、ヒドロキシメチルメタクリレート、メタクリル酸コポリマー、ポリメタクリル酸、ポリメチルメタクリレート、無水マレイン酸／メチルビニルエーテルコポリマー、ポリビニルアルコール、ナトリウムおよびカルシウムポリアクリル酸、ポリアクリル酸、酸性カルボキシポリマー、カルボキシポリメチレン、カルボキシビニルポリマー、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンコポリマー、ポリメチルビニルエーテルｃｏ−無水マレイン酸、カルボキシメチルアミド、カリウムメタクリレートジビニルベンゼンコポリマー、ポリオキシエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、およびこれらの誘導体、塩および組み合わせ。特定の実施形態では、ポリマーは、ポリアルキレングリコールであり、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、異種の部分は炭水化物である。いくつかの実施形態では、炭水化物は、単糖（例えば、グルコース、ガラクトース、フルクトース）、二糖（例えば、ショ糖、ラクトース、マルトース）、オリゴ糖（例えば、ラフィノース、スタキオース）、ポリサッカライド（デンプン、アミラーゼ、アミロペクチン、セルロース、キチン、カロース、ラミナリン、キシラン、マンナン、フコイダン、またはガラクトマンナン）である。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、異種の部分は脂質である。いくつかの実施形態では、脂質は、脂肪酸、エイコサノイド、プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサン、Ｎ−アシルエタノールアミン、グリセロ脂質（例えば、モノ、ジ、トリ置換グリセロール）、グリセロリン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン）、スフィンゴ脂質（例えば、スフィンゴシン、セラミド）、ステロール脂質（例えば、ステロイド、コレステロール）、プレノール脂質、サッカロ脂質、またはポリケチド、油、ワックス、コレステロール、ステロール、脂肪可溶性ビタミン、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、またはリン脂質である。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、異種の部分は、非共有結合または共有結合を介して、本開示のペプチドまたはペプチド類似体に結合される。特定の態様では、異種の部分は、リンカーを介して、本開示のペプチドまたはペプチド類似体に結合される。結合は、共有化学結合、静電気的、水素、イオン、ファンデルワールス、または疎水性もしくは親水性相互作用などの物理的力により達成できる。ビオチン−アビジン、リガンド／受容体、酵素／基質、核酸／核酸結合タンパク質、脂質／脂質結合タンパク質、細胞接着性分子パートナー間、または相互に親和性を有する任意の結合パートナーまたはそのフラグメント間、を含む種々の非共有結合系を使用し得る。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、類似体の標的アミノ酸残基を、これらの標的アミノ酸の選択側鎖またはＮ末端残基もしくはＣ末端残基と反応できる有機誘導体化剤と反応させることによる直接共有結合を介してコンジュゲート部分に連結される。類似体またはコンジュゲート部分の反応性基には、例えば、アルデヒド、アミノ、エステル、チオール、α−ハロアセチル、マレイミドまたはヒドラジノ基が含まれる。有機誘導体化剤には、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介してコンジュゲート）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介して）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸または当該技術分野で既知のその他の薬剤が挙げられる。あるいは、コンジュゲート部分は、ポリサッカライドまたはポリペプチド担体などの介在担体を介して、類似体に間接的に連結できる。ポリサッカライド担体の例には、アミノデキストランが挙げられる。好適なポリペプチド担体の例には、得られる担持担体に望ましい溶解度特性を付与するための、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、これらのコポリマー、およびこれらのアミノ酸と、その他のもの、例えば、セリンとの混合ポリマーが挙げられる。システイニル残基は、クロロ酢酸、クロロアセトアミドなどのα−ハロアセテート（および対応するアミン）を反応させて、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体を得るのに最もよく用いられる。システイニル残基はまた、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリ安息香酸、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノール、またはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールと反応させることにより、誘導体化され得る。ヒスチジル残基は、ジエチルピロカーボネートと、ｐＨ５．５〜７．０で反応させることにより誘導体化され得る。理由は、この試薬がヒスチジル側鎖と比較的に特異性を有するためにである。ｐ−ブロモフェナシルブロミドも有用で、その反応は０．１Ｍのカコジル酸ナトリウム中、ｐＨ６．０で実施されるのが好ましい。リシニル残基およびアミノ末端残基は、コハク酸またはその他のカルボン酸無水物と反応させ得る。これらの試薬を用いた誘導体化は、リシニル残基の電荷を反転させる効果を有する。α−アミノ含有��基を誘導体化するために好適な他の試薬には、メチルピコリンイミデートなどのイミドエステル、ピリドキサールホスフェート、ピリドキサール、クロロボロヒドリド、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ−メチルイソ尿素、２，４−ペンタンジオン、およびグリオキシレートとのアミノ基転移酵素が触媒する反応が挙げられる。アルギニル残基は、１種またはいくつかの従来の試薬、例えば、フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオン、およびニンヒドリンなどとの反応により修飾され得る。アルギニン残基の誘導体化には、グアニジン官能基の高ｐＫａのために、反応をアルカリ性条件で実施することが必要である。さらに、これらの試薬は、リシンならびにアルギニンε−アミノ基と反応させ得る。分光標識をチロシル残基に導入するという特定の目的がある場合、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応により、チロシル残基の特異的修飾を行い得る。最も一般的には、Ｎ−アセチルイミジゾールおよびテトラニトロメタンが、Ｏ−アセチルチロシル化学種および３−ニトロ誘導体をそれぞれ形成するために使用される。カルボキシル側鎖（アスパルチルまたはグルタミル）は、カルボジイミド（Ｒ−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）との反応により選択的に修飾され得る。式中、ＲおよびＲ’は、異なるアルキル基、例えば、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドなどである。さらに、アスパルチルおよびグルタミル残基は、アンモニウムイオンとの反応により、アスパラギニルおよびグルタミニル残基に変換され得る。他の修飾には、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルまたはトレオニル残基の水酸基のリン酸化、リシン、アルギニンおよびヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ７９−８６（１９８３））、アスパラギンまたはグルタミンの脱アミド化、Ｎ末端アミンのアセチル化、および／またはＣ末端カルボン酸基のアミド化またはエステル化が挙げられる。別のタイプの共有結合修飾には、化学的または酵素的なグリコシドのペプチドまたはペプチド類似体へのカップリングが含まれる。糖（類）は、（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）システインのものなどの遊離スルフヒドリル基、（ｄ）セリン、トレオニン、またはヒドロキシプロリンのものなどの遊離ヒドロキシル基、（ｅ）チロシン、またはトリプトファンのものなどの芳香族残基、または（ｆ）グルタミンのアミド基、に結合し得る。これらの方法は、１９８７年９月１１日に公示された国際公開第８７／０５３３０号、およびＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｐｐ．２５９−３０６（１９８１）に記載されている。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ペプチドのアミノ酸の側鎖と異種の部分との間の共有結合を介して異種の部分にコンジ���ゲートされる。いくつかの態様では、異種の部分に共有結合されたアミノ酸（例えば、異種の部分を含むアミノ酸）は、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ホモＣｙｓ、またはＡｃ−Ｐｈｅであり、アミノ酸の側鎖が異種の部分に共有結合される。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、ペプチドまたはペプチド類似体を異種の部分に結合するリンカーを含む。いくつかの態様では、リンカーは、１〜約６０つ、または１〜３０原子もしくはそれより多い原子、２〜５原子、２〜１０原子、５〜１０原子、または１０〜２０原子の長さの鎖を含む。いくつかの実施形態では、鎖の原子は、全て炭素原子であってよい。いくつかの実施形態では、リンカーの骨格中の鎖の原子は、Ｃ、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択され得る。鎖の原子およびリンカーは、より可溶性のコンジュゲートが得られるように、それらの予測される溶解度（親水性）に従って選択し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、標的組織または器官または細胞中で見出される酵素またはその他の触媒または加水分解条件により切断を受ける官能基を与える。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、立体障害の可能性を減らすのに十分な長さである。リンカーが共有結合またはペプチジル結合で、コンジュゲートがポリペプチドである場合、全体コンジュゲートを融合タンパク質とすることができる。このようなペプチジルリンカーは、任意の長さであってよい。例示的リンカーは、約１〜５０アミノ酸長さ、５〜５０、３〜５、５〜１０、５〜１５、または１０〜３０アミノ酸長さであり得る。このような融合タンパク質は、別の選択肢として、当業者に既知の組み換え遺伝子工学法により生成し得る。
【０１７１】
例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、非天然類似体のヒューマニンにコンジュゲートされる。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ＮまたはＣ末端でヒューマニン類似体、ＨＮＧ１７にコンジュゲートされる。このＨＮＧ１７は、Ｓ→Ｇ置換を有するヒューマニンの１７マー短縮類似体である。例示的態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ＮまたはＣ末端でヒューマニン類似体、ＨＮＧにコンジュゲートされる。このＨＮＧは、Ｓ→Ｇ置換を有するヒューマニンの２４マー短縮類似体である。ヒューマニン類似体に結合したペプチドまたはペプチド類似体を含むコンジュゲートは、配列番号９８〜１０２として本開示で提供される。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、免疫グロブリンまたはその部分（例えば、可変領域、ＣＤＲ、またはＦｃ領域）にコンジュゲート、例えば、融合され得る。免疫グロブリン（Ｉｇ）の既知のタイプには、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭが含まれる。Ｆｃ領域は、Ｉｇ重鎖のＣ末端領域であり、これは、再利用（半減期を延長する）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および補体依存細胞毒性（ＣＤＣ）などの活動を実行するＦｃ受容体への結合に関与する。例えば、いくつかの定義によると、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、重鎖のＣｙｓ２２６からＣ末端で広がる。「ヒンジ部」は通常、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６からＰｒｏ２３０まで広がる（その他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ部は、システイン結合に関与するシステインを位置合わせすることにより、ＩｇＧ１配列と整列させ得る）。ＩｇＧのＦｃ領域は、２個の定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。ヒトＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインは通常、アミノ酸２３１からアミノ酸３４１に広がる。ヒトＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ３ドメインは通常、アミノ酸３４２から４４７に広がる。免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメント、または領域に対してなされたアミノ酸ナンバリングへの参照は全て、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ、に基づいている。関連実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＨ１以外の免疫グロブリン重鎖、例えば、ＩｇＧおよびＩｇＡのＣＨ２およびＣＨ３領域、またはＩｇＥのＣＨ３およびＣＨ４領域由来の１つまたは複数の天然または修飾定常領域を含み得る。好適なコンジュゲート部分には、ＦｃＲｎ結合部位を含む免疫グロブリン配列の一部が含まれる。サルベージ受容体であるＦｃＲｎは、免疫グロブリンの再利用およびそれらを血液中の循環に戻すことに関与する。ＦｃＲｎ受容体に結合するＩｇＧのＦｃ部分の領域は、Ｘ線結晶解析に基づいて特性が解明されている（Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：３７９）。ＦｃのＦｃＲｎとの主要な接触領域は、ＣＨ２とＣＨ３ドメインの接合部近傍である。Ｆｃ−ＦｃＲｎ接触は、全て単一のＩｇ重鎖内である。主要接触部位には、ＣＨ２ドメインのアミノ酸残基２４８、２５０〜２５７、２７２、２８５、２８８、２９０〜２９１、３０８〜３１１、および３１４ならびにＣＨ３ドメインのアミノ酸残基３８５〜３８７、４２８、および４３３〜４３６が含まれる。いくつかのコンジュゲート部分は、ＦｃγＲ結合部位（単一または複数）を含んでも、含まなくてもよい。ＦｃγＲは、ＡＤＣＣおよびＣＤＣに関与する。ＦｃγＲと直接接触をするＦｃ領域内の位置の例は、アミノ酸２３４〜２３９（下部ヒンジ部）、アミノ酸２６５〜２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７〜２９９（Ｃ’／Ｅループ）、およびアミノ酸３２７〜３３２（Ｆ／Ｇループ）である（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４０６：２６７−２７３，２０００）。ＩｇＥの下部ヒンジ部も同様に、ＦｃＲＩ���合に結びつけられている（Ｈｅｎｒｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３６，１５５６８−１５５７８，１９９７）。ＩｇＡ受容体結合に関与する残基は、Ｌｅｗｉｓら（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５：６６９４−７０１，２００５）に記載されている。ＩｇＥ受容体結合に関与するアミノ酸残基は、Ｓａｙｅｒｓら（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７９（３４）：３５３２０−５，２００４）に記載されている。アミノ酸修飾は、免疫グロブリンのＦｃ領域になされ得る。このようなバリアントＦｃ領域は、Ｆｃ領域のＣＨ３ドメイン（残基３４２〜４４７）に少なくとも１個のアミノ酸修飾および／またはＦｃ領域のＣＨ２ドメイン（残基２３１〜３４１）に少なくとも１個のアミノ酸修飾を含む。ＦｃＲｎに対する増大した親和性を付与すると考えられている変異には、Ｔ２５６Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、およびＮ４３４Ａが含まれる（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１）。その他の変異は、ＦｃＲｎに対する親和性を大きく低下させることなく、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、および／またはＦｃγＲＩＩＩＡに対するＦｃ領域の結合を弱め得る。例えば、Ｆｃ領域の位置２９７のＡｓｎをＡｌａまたは別のアミノ酸によって置換すると、高度に保存されたＮ−グリコシル化部位が取り除かれ、Ｆｃ領域の半減期延長と共に免疫原性の低下、ならびに、ＦｃγＲｓへの結合の低下を生じ得る（Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．１９９５，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０：８４７；Ｆｒｉｅｎｄ  ｅｔ  ａｌ．１９９９，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６８：１６３２；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１）。ＦｃγＲｓへの結合を低下されるＩｇＧ１の位置２３３〜２３６でのアミノ酸修飾が行われている（Ｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｇｈｅｔｉｅ  １９９５，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２：７７  ａｎｄ  Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：２６１３）。いくつかの例示的アミノ酸置換は、米国特許第７，３５５，００８号および同第７，３８１，４０８号に記載されている。これらの特許のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体は、免疫グロブリン分子内のループ領域に挿入される。他の実施形態では、本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体は、免疫グロブリン分子内のループ領域の１個または複数のアミノ酸を置換する。
【０１７３】
本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体は、生物活性を保持しながら、生理学的ｐＨの水溶液中の溶解度および安定性を改善するためにさらに修飾できる。ＰＥＧ基などの親水性部分は、タンパク質を活性化ポリマー分子と反応させるのに使用される任意の好適な状態下で類似体に結合できる。アシル化、還元的アルキル化、マイケル付加、チオールアルキル化またはＰＥＧ部分上の反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、エステル、チオール、α−ハロアセチル、マレイミド、またはヒドラジノ基）を介した、目標化合物上の反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、エステル、チオール、α−ハロアセチル、マレイミド、またはヒドラジノ基）への他の化学選択的コンジュゲーション／連結反応法を含む、当該技術分野で既知の任意の手段を使用できる。水溶性ポリマーを１個または複数のタンパク質に連結するために使用できる活性化基には、限定されないが、スルホン、マレイミド、スルフヒドリル、チオール、トリフレート、トレシレート、アジジリン、オキシラン、５−ピリジル、およびα−ハロゲン化アシル基（例えば、α−ヨード酢酸、α−ブロモ酢酸、α−クロロ酢酸）が挙げられる。類似体を還元的アルキル化により結合する場合、選択ポリマーは、重合度を制御するように、単一反応性アルデヒドを有するべきである。例えば、Ｋｉｎｓｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．５４：４７７−４８５（２００２）；Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．５４：４５９−４７６（２００２）；およびＺａｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１６：１５７−１８２（１９９５）を参照されたい。特定の態様では、チオールを有するペプチドまたはペプチド類似体のアミノ酸残基は、ＰＥＧなどの親水性部分で修飾される。いくつかの実施形態では、チオールは、マイケル付加反応において、マレイミド活性化ＰＥＧで修飾され、チオエーテル結合を含むペグ化類似体を生ずる。いくつかの実施形態では、チオールは、求核置換反応において、ハロアセチル活性化ＰＥＧで修飾され、チオエーテル結合を含むペグ化類似体を生ずる。好適な親水性部分には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、ＰＯＧ）、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）、ポリオキシアルキレン、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、モノ−（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、ポリアセタール、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリ（β−アミノ酸）（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）ホモポリマー（ＰＰＧ���および他のポリアルキレン（ｐｏｌｙａｋｙｌｅｎｅ）酸化物、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、コロン酸、またはその他の多糖類ポリマー、フィコールまたはデキストランおよびそれらの混合物が挙げられる。デキストランは、主にα１〜６により連結されたグルコースサブユニットの多糖類ポリマーである。デキストランが多くの分子量範囲、例えば、約１ｋＤ〜約１００ｋＤ、または約５、１０、１５または２０ｋＤ〜約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０ｋＤのものが利用できる。直鎖または分岐鎖ポリマーが意図されている。得られたコンジュゲート配合物は、基本的に単分散のまたは多分散であってよく、類似体当たり、約０．５、０．７、１、１．２、１．５または２個のポリマー部分を有し得る。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ペプチドまたはペプチド類似体のアミノ酸の側鎖と、親水性部分との間の共有結合を介して親水性部分にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、Ｃ末端延長部、またはＣ末端アミノ酸内の位置、またはこれらの位置の組み合わせの位置で、アミノ酸の側鎖を介して親水性部分にコンジュゲートされる。いくつかの態様では、親水性部分に共有結合されたアミノ酸（例えば、親水性部分を含むアミノ酸）は、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ホモＣｙｓ、またはＡｃ−Ｐｈｅであり、アミノ酸の側鎖が親水性部分（例えば、ＰＥＧ）に共有結合される。いくつかの実施形態では、本開示のコンジュゲートは、国際公開第２００９／０２３２７０号および米国特許出願公開第２００８／０２８６８０８号に記載のものなどの、化学的ＰＥＧ（例えば、組換えＰＥＧ（ｒＰＥＧ）分子）に類似の拡張構造を形成できる補助類似体に融合したペプチドまたはペプチド類似体を含む。いくつかの態様では、ｒＰＥＧ分子は、グリシン、セリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、またはプロリンの内の１個または複数を含むポリペプチドである。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、ホモポリマー、例えば、ポリ−グリシン、ポリ−セリン、ポリ−グルタミン酸、ポリ−アスパラギン酸、ポリ−アラニン、またはポリ−プロリンである。他の実施形態では、ｒＰＥＧは、２種のアミノ酸反復、例えば、ポリ（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ）、ポリ（Ｇｌｙ−Ｇｌｕ）、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｌａ）、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｓｐ）、ポリ（Ｇｌｙ−Ｐｒｏ）、ポリ（Ｓｅｒ−Ｇｌｕ）、などを含む。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、３種の異なるタイプのアミノ酸、例えば、ポリ（Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ）を含む。特定の態様では、ｒＰＥＧは、ペプチドまたはペプチド類似体の半減期を延長する。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、正味の正電荷または正味の負電荷を含む。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、二次構造を欠いている。いくつかの実施形態では、ｒＰＥＧは、１０アミノ酸長さ以上であり、いくつかの実施形態では、約４０〜約５０アミノ酸長さである。いくつかの態様では、補助ペプチドは、ペプチド結合またはプロテイナーゼ切断部位を介して、本開示のペプチドまたはペプチド類似体のＮまたはＣ末端に融合されるか、または本開示のペプチドまたはペプチド類似体のループ中に挿入される。いくつかの態様では、ｒＰＥＧは、親和性タグを含むか、またはｒＰＥＧは、５ｋＤａより大きいＰＥＧに結合される。いくつかの実施形態では、ｒＰＥＧは、本開示のペプチドまたはペプチド類似体の流体力学半径を増大し、血清半減期を延長し、プロテアーゼ耐性を高め、または溶解度を高め、いくつかの態様では、類似体の免疫原性を減らす。
【０１７５】
必要に応じ本明細書に記載のいずれかのコンジュゲーションを有する表１に記載の配列（配列番号３〜２９３および３５４〜３７７）を含むペプチドまたはペプチド類似体は、１つの実施形態として意図されている。
【０１７６】
本開示は、本明細書で開示のペプチドまたはペプチド類似体の、ホモもしくはヘテロマルチマーまたはホモもしくはヘテロダイマーを含むマルチマーまたはダイマーをさらに提供する。２個以上のペプチドまたはペプチド類似体は、当業者に既知の標準的な連結剤および手順を用いて一緒に結合できる。例えば、ダイマーは、二官能性チオール架橋剤および二官能性のアミン架橋剤を用いて、２個のペプチドまたはペプチド類似体の間で形成でき、システイン、リシン、オルニチン、ホモシステインまたはアセチルフェニルアラニン残基で置換されている類似体の場合は特に、これらの間で形成できる。ダイマーは、ホモダイマーであってよく、あるいは、ヘテロダイマーであってもよい。特定の実施形態では、２個（以上）のペプチドまたはペプチド類似体を結合するリンカーは、ＰＥＧ、例えば、５ｋＤａのＰＥＧ、２０ｋＤのＰＥＧである。いくつかの実施形態では、リンカーはジスルフィド結合である。例えば、ダイマーの各モノマーは、Ｃｙｓ残基（例えば、末端または内部に位置するＣｙｓ）を含み得、各Ｃｙｓ残基のイオウ原子は、ジスルフィド結合の形成に関与する。いくつかの態様では、モノマーは、モノマーの末端アミノ酸（例えば、Ｎ末端またはＣ末端）を介して、内部アミノ酸を介して、または少なくとも１個の末端アミノ酸および少なくとも１個の他のモノマーの内部アミノ酸を介して、連結され得る。特定の態様では、モノマーは、Ｎ末端アミノ酸を介して連結されない。いくつかの態様では、マルチマーのモノマーは、「尾−尾」配向で一緒に結合し得、この場合、各モノマーのＣ末端アミノ酸が一緒に結合され得る。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体のいずれかを含むコンジュゲートは、半減期延長または細胞浸透の増大のために異種の部分にコンジュゲートされる。例えば、半減期延長部分は、ペプチドまたはタンパク質であり得、コンジュゲートは融合タンパク質またはキメラポリペプチドである。あるいは、半減期延長部分は、ポリマー、例えば、ポリエチレングリコールであり得る。本開示は、本明細書に記載のペプチドおよび類似体のいずれかを含むダイマーおよびマルチマーをさらに提供する。
【０１７８】
ペプチドの細胞中への透過性を能動的にまたは受動的に促進する、または高める当該技術分野で既知の任意の異種の部分は、ペプチドコアとのコンジュゲーションのために使用し得る。非限定的例には、脂肪酸、ステロイド類およびバルクの芳香族または脂肪族化合物などの疎水性部分；ステロイド、ビタミンおよび糖、天然および非天然アミノ酸および輸送体ペプチドなどの細胞膜受容体または担体を有し得る部分が含まれる。好ましい実施形態では、疎水性部分は、脂質部分またはアミノ酸部分である。透過性向上部分は、直接にまたはスペーサーまたはリンカーを介して、ペプチド部分の任意の位置に、好ましくはペプチド部分のアミノ末端に結合され得る。疎水性部分は、脂質部分またはアミノ酸部分を含むのが好ましい場合がある。特定の実施形態では、疎水性部分は、リン脂質、ステロイド、スフィンゴシン、セラミド、オクチル−グリシン、２−シクロヘキシルアラニン、ベンゾリルフェニルアラニン、プロピオノイル（Ｃ３）；ブタノイル（Ｃ４）；ペンタノイル（Ｃ５）；カプロイル（Ｃ６）；ヘプタノイル（Ｃ７）；カプリロイル（Ｃ８）；ノナノイル（Ｃ９）；カプリル（Ｃ１０）；ウンデカノイル（Ｃｎ）；ラウロイル（Ｃ１２）；トリデカノイル（Ｃ１３）；ミリストイル（Ｃ１４）；ペンタデカノイル（Ｃ１５）；パルミトイル（Ｃ１６）；フタノイル（（ＣＨ３）４）；ヘプタデカノイル（Ｃ１６）；ステアロイル（Ｃ１８）；ノナデカノイル（Ｃ１９）；アラキドイル（Ｃ２０）；ヘニエコサノイル（Ｃ２１）；ベヘノイル（Ｃ２２）；トルシサノイル（Ｃ２３）；およびリグノセロイル（Ｃ２４）からなる群から選択され、前記疎水性部分は、アミド結合、スルフヒドリル、アミン、アルコール、フェノール基、または炭素−炭素結合で、前記キメラポリペプチドに結合される。使用し得る脂質部分の他の例には、下記が挙げられる：リポフェクタミン、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｃｅ、トランスフェクタム、サイトフェクチン、ＤＭＲＩＥ、ＤＬＲＩＥ、ＧＡＰ−ＤＬＲＩＥ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＰＥ、ＤＭＥＡＰ、ＤＯＤＭＰ、ＤＯＰＣ、ＤＤＡＢ、ＤＯＳＰＡ、ＥＤＬＰＣ、ＥＤＭＰＣ、ＤＰＨ、ＴＭＡＤＰＨ、ＣＴＡＢ、ｌｙｓｙｌ−ＰＥ、ＤＣ−Ｃｈｏ、−アラニルコレステロール；ＤＣＧＳ、ＤＰＰＥＳ、ＤＣＰＥ、ＤＭＡＰ、ＤＭＰＥ、ＤＯＧＳ、ＤＯＨＭＥ、ＤＰＥＰＣ、プルロニック、ツイーン、ＢＲＩＪ、プラスマロゲン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、グリセロール−３−エチルホスファチジルコリン、ジメチルアンモニウムプロパン、トリメチルアンモニウムプロパン、ジエチルアンモニウムプロパン、トリエチルアンモニウムプロパン、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、スフィンゴ脂質、スフィンゴミエリン、リゾ脂質、糖脂質、スルファチド、スフィンゴ糖脂質、コレステロール、コレステロールエステル、コレステロール塩、油、Ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール、１，３−ジパルミトイル−２−スクシニルグリセロール、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−３−スクシニルグリセロール、１−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロホスファチジルエタノールアミン、パルミトイルホモシステイン、Ｎ，Ｎ’−ビス（ドデシアミノカルボニルメチレン）−Ｎ，Ｎ’−ビス（（−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムエチル−アミノカルボニルメチレン）エチレンジアミンテトラヨージド；Ｎ，Ｎ”−ビス（ヘキサデシルアミノカルボニルメチレン）−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−トリス（（−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム−エチルアミノカルボニルメチレンジエチレントリアミンヘキサヨージド；Ｎ，Ｎ’−ビス（ドデシルアミノカルボニルメチレン）−Ｎ，Ｎ”−ビス（（−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムエチルアミノカルボニルメチレン）シクロヘキシレン−１，４−ジアミンテトラヨージド；１，７，７−テトラ−（（−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルアンモニウムエチルアミノ−カルボニルメチレン）−３−ヘキサデシルアミノ（ａｒｎｉｎｏ）カルボニル−メチレン−１，３，７−トリアザヘプタンヘプタヨージド；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ（（−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム−エチルアミノカルボニルメチレン）−Ｎ’−（１，２−ジオレオイルグリセロ−３−ホスホエタノールアミノカルボニルメチレン）ジエチレントリアミンテトラヨージド；ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸、リゾ脂質、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴ脂質、糖脂質、グルコリピド、スルファチド、スフィンゴ糖脂質、ホスファチジン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、オレイン酸、ポリマー含有脂質、スルホン化糖類含有脂質、コレステロール、トコフェロールヘミコハク酸、エーテル結合脂肪酸を有する脂質、エステル結合脂肪酸を有する脂質、重合脂質、ジアセチルホスフェート、ステアリルアミン、カルジオリピン、６〜８炭素長の脂肪酸を有するリン脂質、不斉アシル鎖を有するリン脂質、６−（５−コレステン−３ｂ−イルオキシ）−１−チオ−ｂ−Ｄ−ガラクトピラノシド、ジガラクトシルジグリセリド、６−（５−コレステン−３ｂ−イルオキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシ−１−チオ−ｂ−Ｄ−ガラクトピラノシド、６−（５−コレステン−３ｂ−イルオキシ）ヘキシル−６−アミノ−６−デオキシル−１−チオ−ａ−Ｄ−マンノピラノシド、１２−（（（７’−ジエチルアミノ−クマリン−３−イル）カルボニル）メチルアミノ）−オクタデカン酸；Ｎ−［１２−（（（７’−ジエチルアミノクマリン−３−イル）カルボニル）メチル−アミノ）オクタデカノイル］−２−アミノパルミチン酸；コレステリル）４’−トリメチル−アンモニオ）ブタノエート；Ｎ−スクシニルジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン；１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロール；１，２−ジパルミトイル−３−スクシニル−グリセロール；１，３−ジパルミトイル−２−スクシニルグリセロール、１−ヘキサデシル−２−パルミトイルグリセロ−ホスホエタノールアミン、およびパルミトイルホモシステイン。
【０１７９】
本明細書で開示のペプチドまたはペプチド類似体は、コンジュゲートをプロドラッグとして機能させる１個または複数の異種の部分にコンジュゲートし得る。例えば、米国特許第８，９６９，２８８号および米国特許出願公開第２０１６／００５８８８１号に記載のＮ−アミノ酸関連部分は、本明細書で開示のペプチドまたはペプチド類似体にコンジュゲートでき、このようなコンジュゲートはこの開示に含まれる。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、浸透剤に結合（共有結合または非共有結合で）し得る。本明細書で使用される場合、語句の「浸透剤」は、いずれかの結合したペプチドが細胞膜を通って移動するのを強化する薬剤を意味する。通常、ペプチドベース浸透剤は、高い相対存在量の正に帯電した、リシンまたはアルギニンなどのアミノ酸を含むアミノ酸組成物を有するか、または極性／荷電アミノ酸と、非極性の疎水性のアミノ酸との交互パターンを含む配列を有する。非限定的例として、細胞内の浸透を高めるために、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）配列を用い得る。ＣＰＰは、短いおよび長いバージョンの、ＨＩＶ  ＴＡＴタンパク質のタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）、例えば、ＹＡＲＡＡＡＲＱＡＲＡ（配列番号３２４）、ＹＧＲＫＫＲＲ（配列番号３２５）、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号３２６）、またはＲＲＱＲＲ（配列番号３２７）を含み得る。しかし、本開示はそれに限定されず、当業者に既知の任意の好適な浸透剤を使用し得る。細胞浸透を高める別の方法は、Ｎ末端ミリストイル化を介するものである。このたんぱく質修飾では、ミリストイル基（ミリスチン酸から誘導される）が、アミド結合を介して、ペプチドまたはペプチド類似体のＮ末端アミノ酸のα−アミノ基に共有結合される。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、持続時間延長部分を含むように修飾される。持続時間延長部分は、水溶性ポリマー、または長鎖脂肪族基であり得る。いくつかの実施形態では、複数の持続時間延長部分は、ペプチドまたはペプチド類似体に結合され得、いずれの場合も、それぞれの持続時間延長部分に対するそれぞれのリンカーは、本明細書に記載のリンカーから独立に選択される。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体のアミノ末端は、修飾、例えば、アシル化される。さらなる実施形態では、カルボキシ末端は、修飾される、例えば、カルボキシ末端は、アシル化、アミド化，還元またはエステル化され得る。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、アシル化アミノ酸（例えば、非コードアシル化アミノ酸（例えば、天然アミノ酸に対し非天然であるアシル基を含むアミノ酸））を含む。一実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、循環中の半減期を延長するおよび／または作用の開始を遅らせるおよび／または作用の持続時間を延長させるおよび／またはプロテアーゼに対する耐性を改善するために、エステル、チオエステル、またはアミド結合を介して、ペプチドまたはペプチド類似体に結合したアシル基を含む。アシル化は、活性が高められないとしても、維持される限りにおいて、ペプチドまたはペプチド類似体内の任意の位置（例えば、Ｃ末端のアミノ酸）で実施できる。いくつかの実施形態では、ペプチドは、親水性部分が結合されているのと同じアミノ酸位置で、または異なるアミノ酸位置でアシル化できる。アシル基は、ペプチドまたはペプチド類似体のアミノ酸に直接に、またはスペーサーを介して、ペプチドのアミノ酸に間接的に共有結合でき、この場合、スペーサーは、ペプチドのアミノ酸と、アシル基との間に位置する。
【０１８３】
特定の態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ペプチドのアミノ酸の側鎖のアミン、ヒドロキシル、またはチオールの直接アシル化によるアシル基を含むように修飾される。この点に関して、アシル化ペプチドは、アシル基を含むように修飾された、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれかのアミノ酸配列を含むことができる。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、類似体とアシル基との間にスペーサーを含む。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、スペーサーに共有結合し、スペーサーは、アシル基に共有結合する。いくつかの実施形態では、スペーサーは、側鎖アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含むアミノ酸であるか、または側鎖アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含むアミノ酸を含むジペプチドまたはトリペプチドである。スペーサーが結合したアミノ酸は、スペーサーへの結合を可能とする部分を含む任意のアミノ酸（例えば、単一または２重α−置換アミノ酸）であり得る。例えば、側鎖ＮＨ２、−ＯＨ、または−ＣＯＯＨを含むアミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、またはＧｌｕ）が好適する。いくつかの実施形態では、スペーサーは、側鎖アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含むアミノ酸であるか、または側鎖アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含むアミノ酸を含むジペプチドまたはトリペプチドである。アミン基のスペーサーを介してアシル化が起こる場合、アシル化は、アミノ酸のαアミンまたは側鎖アミンを介して起こり得る。αアミンがアシル化される場合には、スペーサーのアミノ酸は、任意のアミノ酸であり得る。例えば、スペーサーのアミノ酸は、疎水性のアミノ酸、例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸、および８−アミノオクタン酸であり得る。あるいは、スペーサーのアミノ酸は、酸性の残基、例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、ホモグルタミン酸、ホモシステイン酸、システイン酸、γ−グルタミン酸であり得る。スペーサーのアミノ酸の側鎖アミンがアシル化される場合には、スペーサーのアミノ酸は、側鎖アミンを含むアミノ酸である。この場合には、スペーサーのアミノ酸のαアミンと側鎖アミンの両方がアシル化可能であり、その結果、ペプチドまたはペプチド類似体はジアシル化される。実施形態は、このようなジアシル化分子も含む。スペーサーのヒドロキシル基を介してアシル化が起こる場合、ジペプチドまたはトリペプチドのアミノ酸または複数アミノ酸の１個は、Ｓｅｒであり得る。スペーサーのチオール基を介してアシル化が起こる場合、ジペプチドまたはトリペプチドのアミノ酸または複数アミノ酸の１個は、Ｃｙｓであり得る。いくつかの実施形態では、スペーサーは親水性の二官能性スペーサーである。特定の実施形態では、親水性の二官能性スペーサーは、２個以上の反応性基、例えば、アミン、ヒドロキシル、チオール、およびカルボキシル基または任意のこれらの組み合わせを含む。特定の実施形態では、親水性の二官能性スペーサーは、ヒドロキシル基およびカルボキシレートを含む。他の実施形態では、親水性の二官能性スペーサーは、アミン基およびカルボキシレートを含む。他の実施形態では、親水性の二官能性スペーサーは、チオール基およびカルボキシレートを含む。
【０１８５】
特定の実施形態では、スペーサーは、アミノポリ（アルキルオキシ）カルボキシレートを含む。これに関して、スペーサーは、例えば、ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨを含むことができ、式中、ｍは１〜６の任意の整数であり、ｎは２〜１２の任意の整数であって、例えば、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸であり、これは、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，Ｋｙ．）から市販されている。いくつかの実施形態では、スペーサーは疎水性の二官能性スペーサーである。疎水性の二官能性スペーサーは、当技術分野において既知である。例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，１９９６）を参照されたい。この文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、疎水性の二官能性スペーサーは、２個以上の反応性基，例えば、アミン、ヒドロキシル、チオール、およびカルボキシル基または任意のこれらの組み合わせを含む。特定の実施形態では、疎水性の二官能性スペーサーは、ヒドロキシル基およびカルボキシレートを含む。他の実施形態では、疎水性の二官能性スペーサーは、アミン基およびカルボキシレートを含む。他の実施形態では、疎水性の二官能性スペーサーは、チオール基およびカルボキシレートを含む。カルボキシレートおよびヒドロキシル基またはチオール基を含む好適な疎水性の二官能性スペーサーは、当技術分野で既知であり、例えば、８−ヒドロキシオクタン酸および８−メルカプトオクタン酸が含まれる。いくつかの実施形態では、二官能性スペーサーは、カルボキシレート基の間の１〜７個の炭素原子の非分岐のメチレンを含むジカルボン酸ではない。いくつかの実施形態では、二官能性スペーサーは、カルボキシレート基の間の１〜７個の炭素原子の非分岐のメチレンを含むジカルボン酸である。特定の実施形態では、スペーサー（例えば、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、親水性の二官能性スペーサー、または疎水性の二官能性スペーサー）は、３〜１０原子（例えば、６〜１０原子（例えば、６、７、８、９、または１０原子））の長さである。さらに特定の実施形態では、スペーサーは、約３〜１０原子（例えば、６〜１０原子）長さであり、アシル基は、Ｃ１２〜Ｃ１８脂肪族アシル基，例えば、Ｃ１４脂肪族アシル基、Ｃ１６脂肪族アシル基であり、スペーサーとアシル基の合計長さは、１４〜２８原子、例えば、約１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８原子である。いくつかの実施形態では、スペーサーとアシル基の長さは、１７〜２８（例えば、１９〜２６、１９〜２１）原子である。特定の前述の実施形態では、二官能性スペーサーは、３〜１０原子長さのアミノ酸骨格を含む合成または天然のアミノ酸（限定されないが、本明細書に記載のいずれかのものを含む）であり得る（例えば、６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸、および８−アミノオクタン酸）。あるいは、スペーサーは、３〜１０原子（例えば、６〜１０原子）長さのペプチド骨格���有するジペプチドまたはトリペプチドスペーサーであり得る。ジペプチドまたはトリペプチドスペーサーのそれぞれのアミノ酸は、ジペプチドまたはトリペプチドのその他のアミノ酸（単一または複数）と同じまたは異なってよく、例えば、天然アミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ）のいずれかのＤまたはＬ異性体、または下記からなる群より選択される非天然または非コードアミノ酸のいずれかのＤまたはＬ異性体を含む、天然またはコードおよび／または非コードまたは非天然アミノ酸からなる群より独立に選択することができる：β−アラニン（β−Ａｌａ）、Ｎ−α−メチル−アラニン（Ｍｅ−Ａｌａ）、アミノ酪酸（Ａｂｕ）、γ−アミノ酪酸（７−Ａｂｕ）、アミノヘキサン酸（ε−Ａｈｘ）、アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、アミノメチルピロールカルボン酸、アミノピペリジンカルボン酸、アミノセリン（Ａｍｓ）、アミノテトラヒドロピラン−４−カルボン酸、アルギニンＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド、β−アスパラギン酸（β−Ａｓｐ）、アゼチジンカルボン酸、３−（２−ベンゾチアゾリル）アラニン、α−ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、２−アミノ−５−ウレイド−ｎ−吉草酸（シトルリン、Ｃｉｔ）、β−シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、アセトアミドメチル−システイン、ジアミノブタン酸（Ｄａｂ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）、ジメチルチアゾリジン（ＤＭＴＡ）、γ−グルタミン酸（γ−Ｇｌｕ）、ホモセリン（Ｈｓｅ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、イソロイシンＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド、メチル−イソロイシン（ＭｅＩｌｅ）、イソニペコチン酸（Ｉｓｎ）、メチル−ロイシン（ＭｅＬｅｕ）、メチル−リシン、ジメチル−リシン、トリメチル−リシン、メタノプロリン、メチオニン−スルホキシド（Ｍｅｔ（Ｏ））、メチオニン−スルホン（Ｍｅｔ（Ｏ２））、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチル−ノルロイシン（Ｍｅ−Ｎｌｅ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、パラ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、ペニシラミン（Ｐｅｎ）、メチルフェニルアラニン（ＭｅＰｈｅ）、４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｃｌ））、４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｆ））、４−ニトロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−ＮＯ２））、４−シアノフェニルアラニン（（Ｐｈｅ（４−ＣＮ））、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、ピペリジニルアラニン、ピペリジニルグリシン、３，４−デヒドロプロリン、ピロリジニルアラニン、サルコシン（Ｓａｒ）、セレノシステイン（Ｓｅｃ）、Ｏ−ベンジル−ホスホセリン、４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸（Ｓｔａ）、４−アミノ−５−シクロヘキシル−３−ヒドロキシペンタン酸（ＡＣＨＰＡ）、４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンタン酸（ＡＨＰＰＡ）、１，２，３，４、−テトラヒドロ−イソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、テトラヒドロピラングリシン、チエニルアラニン（Ｔｈｉ）、Ｏ−ベンジル−ホスホチロシン、Ｏ−ホスホチロシン、メトキシチロシン、エトキシチロシン、Ｏ−（ビス−ジメチルアミノ−ホスホノ）−チロシン、チロシンスルフェートテトラブチルアミン、メチル−バリン（ＭｅＶａｌ）、およびアルキル化３−メルカプトプロピオン酸。いくつかの実施形態では、スペーサーは、全体で負電荷を含み、例えば、１または２個の負に帯電したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ジペプチドは、一般的構造Ａ−Ｂのいずれかのジペプチドではない。ここでＡは、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、およびＰｒｏからなる群から選択され、Ｂは、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ジペプチドスペーサーは、Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、γ−アミノ酪酸−γ−アミノ酪酸、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、およびγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕからなる群から選択される。
【０１８６】
アミン、ヒドロキシル、およびチオールを介したペプチドアシル化の好適な方法は、当技術分野において既知である。例えば、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２１８：３７７−３８２（１９９６）；Ｓｈｉｍｏｈｉｇａｓｈｉ  ａｎｄ  Ｓｔａｍｍｅｒ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ  １９：５４−６２（１９８２）；およびＰｒｅｖｉｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ２６３：７−１３（１９７２）（ヒドロキシルを介したアシル化の方法）；およびＳａｎ  ａｎｄ  Ｓｉｌｖｉｕｓ，Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｒｅｓ  ６６：１６９−１８０（２００５）（チオールを介したアシル化の方法）；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｈｉｓｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”  ｐａｇｅｓ  １，２−１２（１９９０）；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓ．“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐａｌｍｉｔｏｙｌ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ”  Ｖｏｌ．６，Ｎｏ：２  ｐｐ．１７１−１７６（１９８９）を参照されたい。アシル化アミノ酸のアシル基は、任意のサイズ、例えば、任意の長さの炭素鎖であってよく、直鎖または分岐鎖であってよい。いくつかの特定の実施形態では、アシル基はＣ４〜Ｃ３０脂肪酸である。例えば、アシル基は、Ｃ４脂肪酸、Ｃ６脂肪酸、Ｃ８脂肪酸、Ｃ１０脂肪酸、Ｃ１２脂肪酸、Ｃ１４脂肪酸、Ｃ１６脂肪酸、Ｃ１８脂肪酸、Ｃ２０脂肪酸、Ｃ２２脂肪酸、Ｃ２４脂肪酸、Ｃ２６脂肪酸、Ｃ２８脂肪酸、またはＣ３０脂肪酸のいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、アシル基はＣ８〜Ｃ２０脂肪酸、例えば、Ｃ１４脂肪酸またはＣ１６脂肪酸である。代替実施形態では、アシル基は胆汁酸である。胆汁酸は、限定されないが、コール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、リトコール酸、タウロコール酸、グリココール酸、およびコレステロール酸を含む、任意の好適な胆汁酸であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ペプチドまたはペプチド類似体上の長鎖アルカンのアシル化によるアシル化アミノ酸を含む。特定の態様では、長鎖アルカンは、ペプチドまたはペプチド類似体のカルボキシル基、またはその活性化型と反応するアミン、ヒドロキシル、またはチオール基を含む（例えば、オクタデシルアミン、テトラデカノール、およびヘキサデカンチオール）。ペプチドまたはペプチド類似体のカルボキシル基、またはその活性化型は、ペプチドのアミノ酸（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）の側鎖の一部または類似体骨格の一部であり得る。特定の実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ペプチドまたはペプチド類似体に結合したスペーサーによる長鎖アルカンのアシル化によるアシル基を含むように修飾される。特定の態様では、長鎖アルカンは、スペーサーのカルボキシル基、またはその活性化型と反応するアミン、ヒドロキシル、またはチオール基を含む。カルボキシル基、またはその活性化型を含む好適なスペーサーは、本���細書に記載されており、例えば、二官能性スペーサー、例えば、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、親水性の二官能性スペーサーおよび疎水性の二官能性スペーサーを含む。
【０１８７】
本明細書で使用される場合、カルボキシル基の「活性化型」という用語は、一般式Ｒ（Ｃ＝Ｏ）Ｘａを有するカルボキシル基を意味し、Ｘａは脱離基であり、Ｒはペプチドまたはスペーサーである。例えば、活性化型のカルボキシル基には、限定されないが、アシルクロリド、無水物、およびエステルが挙げられる。いくつかの実施形態では、活性化カルボキシル基は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）脱離基を有するエステルである。
【０１８８】
長鎖アルカンがペプチドまたはスペーサーによりアシル化されるこれらの態様に関して、長鎖アルカンは、任意のサイズであってよく、任意の長さの炭素鎖を含み得る。長鎖アルカンは、直鎖または分枝状であり得る。特定の態様では、長鎖アルカンはＣ４〜Ｃ３０アルカンである。例えば、長鎖アルカンは、Ｃ４アルカン、Ｃ６アルカン、Ｃ８アルカン、Ｃ１０アルカン、Ｃ１２アルカン、Ｃ１４アルカン、Ｃ１６アルカン、Ｃ１８アルカン、Ｃ２０アルカン、Ｃ２２アルカン、Ｃ２４アルカン、Ｃ２６アルカン、Ｃ２８アルカン、またはＣ３０アルカンのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、長鎖アルカンは、Ｃ８〜Ｃ２０アルカン、例えば、Ｃ１４アルカン、Ｃ１６アルカン、またはＣ１８アルカンを含む。
【０１８９】
また、いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体のアミン、ヒドロキシル、またはチオール基は、コレステロール酸でアシル化される。特定の実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、アルキル化デス−アミノＣｙｓスペーサー、すなわち、アルキル化３−メルカプトプロピオン酸スペーサーを介してコレステロール酸に連結される。アルキル化デス−アミノＣｙｓスペーサーは、例えば、ドデカエチレングリコール部分を含むデス−アミノ−Ｃｙｓスペーサーであり得る。
【０１９０】
本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体は、親水性部分を含むようにさらに修飾できる。いくつかの特定の実施形態では、親水性部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含み得る。親水性部分の組み込みは、本明細書記載のいずれかの方法などの任意の好適な手段により実現できる。この点に関して、アシル化ペプチドは、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれかであり得、本明細書に記載のいずれかの修飾を含み、少なくとも１個のアミノ酸は、アシル基を含み、少なくとも１個のアミノ酸は親水性部分（例えば、ＰＥＧ）に共有結合している。いくつかの実施形態では、アシル基は、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ホモＣｙｓ、またはＡｃ−Ｐｈｅを含むスペーサーを介して結合され、親水性部分はＣｙｓ残基の位置に組み込まれる。
【０１９１】
あるいは、ペプチドまたはペプチド類似体は、スペーサーを含み得、このスペーサーは、親水性部分を含むようにアシル化および修飾の両方がなされている。好適なスペーサーの非限定的例には、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ホモＣｙｓ、およびＡｃ−Ｐｈｅからなる群より選択される１個または複数のアミノ酸を含むスペーサーが挙げられる。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、アルキル化アミノ酸（例えば、非コードアルキル化アミノ酸（例えば、天然アミノ酸に対し非天然であるアルキル基を含むアミノ酸））を含む。アルキル化は、生物活性が保持される限りにおいて、アシル化用の部位として本明細書に記載のいずれかの位置を含み、限定されないが、Ｃ末端延長部内の位置、またはＣ末端のいずれかのアミノ酸位置を含む、ペプチドまたはペプチド類似体内の任意の位置で実施できる。アルキル基は、ペプチドまたはペプチド類似体のアミノ酸に直接に、またはスペーサーを介して、ペプチドまたはペプチド類似体のアミノ酸に間接的に共有結合でき、この場合、スペーサーは、ペプチドのアミノ酸と、アルキル基との間に位置する。ペプチドまたはペプチド類似体は、親水性部分が結合されているのと同じアミノ酸位置で、または異なるアミノ酸位置でアルキル化され得る。特定の態様では、ペプチドまたはペプチド類似体は、ペプチドのアミノ酸の側鎖のアミン、ヒドロキシル、またはチオールの直接アルキル化によるアルキル基を含むように修飾され得る。これに関しては、アルキル化ペプチドは、側鎖アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含むいずれかのアミノ酸へ修飾された少なくとも１種のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含むことができる。さらに他の実施形態では、側鎖アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含むアミノ酸は、二置換アミノ酸である。いくつかの実施形態では、アルキル化ペプチドは、ペプチドとアルキル基との間にスペーサーを含む。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、スペーサーに共有結合し、スペーサーは、アルキル基に共有結合する。いくつかの例示的実施形態では、ペプチドは、スペーサーのアミン、ヒドロキシル、またはチオールのアルキル化によるアルキル基を含むように修飾され、このスペーサーは、アミノ酸の側鎖に結合している。スペーサーが結合したアミノ酸は、スペーサーへの結合を可能とする部分を含む任意のアミノ酸であり得る。例えば、側鎖ＮＨ２、−ＯＨ、または−ＣＯＯＨを含むアミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、またはＧｌｕ）が好適する。いくつかの実施形態では、スペーサーは、側鎖アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含むアミノ酸であるか、または側鎖アミン、ヒドロキシル、またはチオールを含むアミノ酸を含むジペプチドまたはトリペプチドである。スペーサーのアミン基を介してアルキル化が起こる場合、アルキル化は、アミノ酸のαアミンまたは側鎖アミンを介して起こり得る。αアミンがアルキル化される場合には、スペーサーのアミノ酸は、任意のアミノ酸であり得る。例えば、スペーサーのアミノ酸は、疎水性のアミノ酸、例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸、および８−アミノオクタン酸であり得る。あるいは、スペーサーのアミノ酸は、アルキル化が酸性の残基のαアミン上で起こる限りにおいて、酸性の残基、例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕであり得る。スペーサーのアミノ酸の側鎖アミンがアルキル化される場合には、スペーサーのアミノ酸は、側鎖アミンを含むアミノ酸、例えば、式Ｉのアミノ酸（例えば、ＬｙｓまたはＯｒｎ）である。この場合には、スペーサーのアミノ酸のαアミンと側鎖アミンの両方がアルキル化可能であり、その結果、ペプチドまたはペプチド類似体はジアルキル化される。実施形態は、このようなジアルキル化分子も含む。スペーサーのヒドロキシル基を介してアルキル化が起こる場合、アミノ酸はＳｅｒであり得る。スペーサーのチオール基を介してアルキル化が起こる場合、アミノ酸はＣｙｓであり得る。いくつかの実施形態では、スペーサーは親水性の二官能性スペーサーである。特定の実施形態では、親水性の二官能性スペーサーは、２個以上の反応性基，例えば、アミン、ヒドロキシル、チオール、およびカルボキシル基または任意のこれらの組み合わせを含む。特定の実施形態では、親水性の二官能性スペーサーは、ヒドロキシル基およびカルボキシレートを含む。他の実施形態では、親水性の二官能性スペーサーは、アミン基およびカルボキシレートを含む。他の実施形態では、親水性の二官能性スペーサーは、チオール基およびカルボキシレートを含む。特定の実施形態では、スペーサーは、アミノポリ（アルキルオキシ）カルボキシレートを含む。これに関して、スペーサーは、例えば、ＮＨ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨを含むことができ、式中、ｍは１〜６の任意の整数であり、ｎは２〜１２の任意の整数であって、例えば、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸であり、これは、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，Ｋｙ．）から市販されている。カルボキシレートおよびヒドロキシル基またはチオール基を含む好適な疎水性の二官能性スペーサーは、当技術分野で既知であり、例えば、８−ヒドロキシオクタン酸および８−メルカプトオクタン酸が含まれる。特定の実施形態では、スペーサー（例えば、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、親水性の二官能性スペーサー、または疎水性の二官能性スペーサー）は、３〜１０原子（例えば、６〜１０原子（例えば、６、７、８、９、または１０原子））の長さである。さらに特定の実施形態では、スペーサーは、約３〜１０原子（例えば、６〜１０原子）長さであり、アルキルは、Ｃ１２〜Ｃ１８アルキル基、例えば、Ｃ１４アルキル基、Ｃ１６アルキル基であり、スペーサーとアルキル基の合計長さは、１４〜２８原子、例えば、約１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８原子である。いくつかの実施形態では、スペーサーとアルキルの長さは、１７〜２８（例えば、１９〜２６、１９〜２１）原子である。特定の前述の実施形態では、二官能性スペーサーは、３〜１０原子長さのアミノ酸骨格を含む合成または非天然または非コードアミノ酸であり得る（例えば、６−アミノヘキサン酸、５−アミノ吉草酸、７−アミノヘプタン酸、および８−アミノオクタン酸）。あるいは、スペーサーは、３〜１０原子（例えば、６〜１０原子）長さのペプチド骨格を有するジペプチドまたはトリペプチドスペーサーであり得る。ジペプチドまたはトリペプチドスペーサーは、例えば、本明細書で教示のいずれかのアミノ酸を含む、天然またはコードおよび／��たは非コードまたは非天然アミノ酸から構成され得る。いくつかの実施形態では、スペーサーは、全体で負電荷を含み、例えば、１または２個の負に帯電したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、ジペプチドスペーサーは、Ａｌａ−Ａｌａ、β−Ａｌａ−β−Ａｌａ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、γ−アミノ酪酸−γ−アミノ酪酸、およびγ−Ｇｌｕ−γ−Ｇｌｕからなる群から選択される。アミン、ヒドロキシル、およびチオールを介したペプチドアルキル化の好適な方法は、当技術分野において既知である。例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎエーテル合成を用いて、ペプチドのヒドロキシル基とアルキル基との間でエーテル結合を形成できる。同様に、ペプチドまたはペプチド類似体のハロゲン化アルキルを用いた求核置換反応によっても、エーテル、チオエーテル、またはアミノ結合のいずれかを得ることができる。アルキル化ペプチドまたはペプチド類似体のアルキル基は、任意のサイズ、例えば、任意の長さの炭素鎖であってよく、直鎖または分岐鎖であってよい。いくつかの実施形態では、アルキル基はＣ４〜Ｃ３０アルキルである。例えば、アルキル基は、Ｃ４アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ８アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１８アルキル、Ｃ２０アルキル、Ｃ２２アルキル、Ｃ２４アルキル、Ｃ２６アルキル、Ｃ２８アルキル、またはＣ３０アルキルのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、アルキル基はＣ８〜Ｃ２０アルキル、例えば、Ｃ１４アルキルまたはＣ１６アルキルである。本開示のいくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、求核性長鎖アルカンのペプチドまたはペプチド類似体との反応によるアルキル化アミノ酸を含み、ペプチドまたはペプチド類似体は求核置換に好適する脱離基を含む。特定の態様では、長鎖アルカンの求核基は、アミン、ヒドロキシル、またはチオール基（例えば、オクタデシルアミン、テトラデカノール、およびヘキサデカンチオール）を含む。ペプチドまたはペプチド類似体の脱離基は、アミノ酸の側鎖の一部またはペプチド骨格の一部であり得る。好適な脱離基には、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ハロゲン、およびスルホネートエステルが挙げられる。特定の実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、求核性長鎖アルカンとペプチドまたはペプチド類似体に結合したスペーサーとの反応によるアルキル基を含むように修飾され、このスペーサーは脱離基を含む。特定の態様では、長鎖アルカンは、アミン、ヒドロキシル、またはチオール基を含む。特定の実施形態では、脱離基を含むスペーサーは、本明細書で考察のいずれかのスペーサー、例えば、好適な脱離基をさらに含むアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、親水性の二官能性スペーサーおよび疎水性の二官能性スペーサーであり得る。長鎖アルカンがペプチドまたはスペーサーによりアルキル化される本開示のこれらの態様に関して、長鎖アルカンは、任意のサイズであってよく、任意の長さの炭素鎖を含み得る。長鎖アルカンは、直鎖または分枝状であり得る。特定の態様では、長鎖アルカンはＣ４〜Ｃ３０アルカンである。例えば、長鎖アルカンは、Ｃ４アルカン、Ｃ６アルカン、Ｃ８アルカン、Ｃ��０アルカン、Ｃ１２アルカン、Ｃ１４アルカン、Ｃ１６アルカン、Ｃ１８アルカン、Ｃ２０アルカン、Ｃ２２アルカン、Ｃ２４アルカン、Ｃ２６アルカン、Ｃ２８アルカン、またはＣ３０アルカンのいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、長鎖アルカンは、Ｃ８〜Ｃ２０アルカン、例えば、Ｃ１４アルカン、Ｃ１６アルカン、またはＣ１８アルカンを含む。また、いくつかの実施形態では、アルキル化は、ペプチドとコレステロール部分との間で起こり得る。例えば、コレステロールのヒドロキシル基は、長鎖アルカン上の脱離基を置換し、コレステロール−ペプチド生成物を形成することができる。本明細書に記載のアルキル化ペプチドは、親水性部分を含むようにさらに修飾できる。いくつかの特定の実施形態では、親水性部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を含み得る。親水性部分の組み込みは、本明細書記載のいずれかの方法などの任意の好適な手段により実現できる。あるいは、アルキル化ペプチドは、スペーサーを含み得、このスペーサーは、親水性部分を含むようにアルキル化および修飾の両方がなされている。好適なスペーサーの非限定的例には、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、ホモＣｙｓ、およびＡｃ−Ｐｈｅからなる群より選択される１個または複数のアミノ酸を含むスペーサーが挙げられる。
【０１９３】
ペプチドおよびペプチド類似体の製造方法
本明細書で開示のペプチドおよびペプチド類似体は、限定されないが、実施例１に記載のいずれかの方法を含む種々の方法で作製される。好適なペプチドの新規合成方法は、例えば、Ｎ．Ｌｅｏ  Ｂｅｎｏｉｔｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００６；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，８５，２１４９（１９６３）；Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．，１０，３９４−４１４（１９８５）；Ｌａｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１１５，６２４７（１９９３）；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，４４，１８３（１９９４）；Ｏ’  Ｄｏｎｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１１８，６０７０（１９９６）；Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｆｒｅｅｍａｎ（１９６９）；Ｆｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，３  ｅｄ．，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１０５−２５３（１９７６）；Ｅｒｉｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，３ｒｄ  ｅｄ．，ｖｏｌ．２，ｐｐ．２５７−５２７（１９７６）；およびＣｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｍｏｃ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ，２００５に記載されている。本開示は合成ペプチドを意図している。ペプチドの製造方法はそれ自体が本発明の実施形態である。したがって、本開示は、ペプチドまたはペプチド類似体の製造方法を提供する。例示的実施形態では、方法は、（ｉ）第１のアミノ酸を第２のアミノ酸と反応させて、第１のアミノ酸と第２のアミノ酸との間に共有結合を形成させるステップであって、第１のアミノ酸または第２のアミノ酸を、必要に応じ、別のアミノ酸に結合させるステップ、および（ｉｉ）ステップ（ｉ）の反応を反復し、それによりペプチドまたはペプチド類似体を製造するステップを含む。例示的態様では、方法は、固相合成の１つまたは複数のステップを含む。例示的態様では、方法は、実施例１に記載の１つまたは複数のステップを含む。
【０１９４】
あるいは、ペプチドは、ペプチドをコードする核酸を宿主細胞中に導入することにより、組み換えで発現させることができ、これは、標準的組換え方法を用いて、培養してペプチドを発現させ得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１；およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，１９９４を参照されたい。このようなペプチドは、培地または細胞ペレットから精製し得る。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを単離できる。いくつかの実施形態では、本開示のペプチドを精製し得る。「純度」は、相対的な用語であり、必ずしも、絶対的な純度または絶対的な濃縮または絶対的な選択と解釈されるべきではないことは、理解されよう。いくつかの態様では、純度は、少なくともまたは約５０％であり、少なくともまたは約６０％、少なくともまたは約７０％、少なくともまたは約８０％、少なくともまたは約９０％（例えば、少なくともまたは約９１％、少なくともまたは約９２％、少なくともまたは約９３％、少なくともまたは約９４％、少なくともまたは約９５％、少なくともまたは約９６％、少なくともまたは約９７％、少なくともまたは約９８％、少なくともまたは約９９％）でありまたは約１００％である。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ），Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｇａｒｄｎｅｒ，ＭＡ），およびＣＰＣ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ），Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍｄ．），およびＭｕｌｔｉｐｌｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）などの会社により商業的に合成できる。この態様では、ペプチドは、合成、組換え、単離、および／または精製できる。
【０１９７】
核酸
本明細書に記載のいずれかのペプチドまたはコンジュゲート（そのペプチド類似体を含む）をコードするヌクレオチド配列を含む核酸が本明細書で提供される。核酸は、いずれかのペプチド、またはその類似体、またはコンジュゲートをコードするいずれかのヌクレオチド配列を含み得る。
【０１９８】
本明細書で使用される場合、「核酸」は、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、および「核酸分子」を含み、一般に、ＤＮＡまたはＲＮＡのポリマーを意味する。これは、一本鎖または二本鎖で、合成または天然起源から得る（例えば、単離および／または精製により）ことができ、天然、非天然または改変ヌクレオチドを含むことができ、また、非修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間に認められるリン酸ジエステルの代わりに、天然、非天然または改変ヌクレオチド間結合、例えば、ホスホロアミデート結合またはホスホロチオエート結合を含むことができる。いくつかの実施形態では、核酸は、いずれの挿入、欠失、逆位、および／または置換も含まない。別の実施形態では、核酸は、１個または複数の挿入、欠失、逆位、および／または置換を含む。
【０１９９】
いくつかの態様では、本開示の核酸は、組換え型である。本明細書で使用される場合、「組換え」という用語は、（ｉ）天然または合成核酸セグメントを生細胞中で複製できる核酸分子に連結することにより生細胞の外側で構築される分子、または（ｉｉ）上記（ｉ）で記載の分子の複製により得られる分子、を意味する。本明細書の目的に対しては、複製はインビトロ複製またはインビボ複製であり得る。
【０２００】
いくつかの態様では、核酸は、当技術分野で既知の手順を使用して、化学合成および／または酵素連結反応に基づいて構築される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、前出；およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、前出を参照されたい。例えば、核酸は、天然のヌクレオチド、または分子の生物学的安定性を高めるように、もしくはハイブリダイゼーション時に形成される二本鎖の物理的安定性を高めるように設計された様々に修飾されたヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチド）を使って化学的に合成することができる。核酸を生成するために使用できる修飾ヌクレオチドの例には、限定されないが、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−キオロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリドム、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルクェオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ−置換アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアンモメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクェオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ウィブトキソシン、プソイドウラシル（ｕｒａｔｉｌ）、クェオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、および２，６−ジアミノプリンが挙げられる。あるいは、本発明の１個または複数の核酸は、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（Ｆｏｒｔ  Ｃｏｌｌｉｎｓ，ＣＯ）およびＳｙｎｔｈｅｇｅｎ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）などの会社から購入できる。
【０２０１】
発現ベクター
いくつかの態様では、本開示の核酸は、発現ベクターに組み込まれる。これに関しては、本開示は、本開示の核酸のいずれかを含む発現ベクターを提供する。本明細書の目的に対しては、用語の「発現ベクター」は、構築物がｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを細胞内で発現させるのに十分な条件下で、ベクターを細胞と接触させる場合に、宿主細胞によるｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドの発現を可能とする遺伝子改変オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド構築物を意味する。本開示のベクターは、全体として、天然起源ではない。しかし、ベクターの一部は、天然起源であり得る。本明細書で開示の発現ベクターは、限定されないが、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む、任意のタイプのヌクレオチドを含んでよく、これは、一本鎖または二本鎖の、合成されたまたは一部分は天然資源から得られてもよく、天然、非天然または改変ヌクレオチドを含み得る。発現ベクターは、天然または非天然ヌクレオチド間結合、または両方のタイプの結合を含み得る。いくつかの態様では、改変ヌクレオチドまたは非天然ヌクレオチド間結合は、ベクターの転写または複製を妨げない。
【０２０２】
本開示の発現ベクターは、任意の好適な発現ベクターであり得、また、任意の好適な宿主への形質転換または遺伝子導入に用いることができる。好適なベクターには、感染するように、および増殖もしくは発現または両方をするように設計されたもの、例えば、プラスミドおよびウイルスが含まれる。ベクターは、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏＩＩａ，ＣＡ）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、およびｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）からなる群より選択できる。バクテリオファージベクター、例えば、λＧＴＩＯ、λＧＴｌ  １、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、λＥＭＢＬ４、およびλＮＭｌ  １４９、も使用できる。植物発現ベクターの例には、ｐＢＩＯｌ、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１およびｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。動物発現ベクターの例には、ｐＥＵＫ−Ｃｌ、ｐＭＡＭおよびｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。いくつかの態様では、組換え発現ベクターはウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクターである。
【０２０３】
本開示の発現ベクターは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、前出；およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、前出、に記載の標準的組換えＤＮＡ技術を用いて調製できる。環状または直鎖状である発現ベクターの構築物は、原核生物または真核生物の宿主細胞中で機能的な複製システムを含むように調製できる。複製システムは、例えば、ＣｏＩＥｌ、２  μプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、などから誘導することができる。
【０２０４】
いくつかの態様では、発現ベクターは、転写および翻訳開始ならびに終止コドンなどの調節配列を含み、これは、ベクターが導入される宿主のタイプ（例えば、細菌、真菌、植物、または動物）に特異的であり、また、ベクターがＤＮＡまたはＲＮＡ系であるかどうかを考慮して、適切な方を含める。
【０２０５】
発現ベクターは、１個または複数のマーカー遺伝子を含み得、これは、形質転換または遺伝子導入宿主の選択を可能とする。マーカー遺伝子には、殺生物剤耐性、例えば、抗生物質、重金属などに対する耐性、原栄養性を得るための栄養要求性宿主の補足性、などが挙げられる。本明細書で開示の発現ベクターのための好適なマーカー遺伝子には、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ヒグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、およびアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。
【０２０６】
発現ベクターは、ペプチドをコードするヌクレオチド配列に、またはペプチドをコードするヌクレオチド配列に相補的またはハイブリッド形成するヌクレオチド配列に作動可能に連結された本来のまたは標準的プロモーターを含むことができる。プロモーター、例えば、強い、弱い、誘導性、組織特異的および発達段階に特異的なプロモーターの選択は、当業者の範囲内にある。同様に、ヌクレオチド配列とプロモーターを組み合わせることも当業者の範囲内である。プロモーターは、非ウイルスプロモーターまたはウイルスプロモーター、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター、およびマウス幹細胞ウイルスの長端末反復中で見出されたプロモーターであってよい。
【０２０７】
本明細書で開示の発現ベクターは、一時的な発現のために、安定発現のために、または両方のために設計され得る。また、発現ベクターは、構成的発現のため、または誘導性発現のために作製され得る。さらに発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製され得る。本明細書で使用される場合、「自殺遺伝子」という用語は、細胞に死滅するための自殺遺伝子を発現させる遺伝子を意味する。いくつかの態様では、自殺遺伝子は、その遺伝子が発現されている細胞に、作用薬、例えば、薬物に対する感受性を付与する遺伝子であり、その作用薬と接触すると、またはそれに曝露されると、細胞死を引き起こす遺伝子である。自殺遺伝子は、当技術分野において既知であり（例えば、Ｓｕｉｃｉｄｅ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃａｒｏｌｉｎｅ  Ｊ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＵＫ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｕｔｔｏｎ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２００４を参照）、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼＴＫ遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシド過リン酸分解酵素、およびニトロ還元酵素が挙げられる。
【０２０８】
宿主細胞
本開示は、本明細書に記載の核酸または発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、本明細書で開示の発現ベクターを収容することができる任意のタイプの細胞を意味する。いくつかの態様では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、植物、動物、真菌、または藻類であるか、または原核細胞、例えば、細菌または原虫類であり得る。いくつかの態様では、宿主細胞は、培養した細胞または一次細胞、すなわち、生物、例えば、ヒトから直接単離した細胞である。いくつかの態様では、宿主細胞は、付着細胞または懸濁細胞、すなわち、懸濁液で増殖させた細胞である。好適な宿主細胞は、当技術分野で既知であり、例えば、ＤＨ５α大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルベロ細胞、コス細胞、ＨＥＫ２９３細胞、などが挙げられる。いくつかの態様では、発現ベクターを増幅または複製する目的のためには、宿主細胞は、原核細胞、例えば、ＤＨ５α細胞である。いくつかの態様では、ペプチドを製造する目的のためには、宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞である。宿主細胞は、任意の細胞型であってよく、任意のタイプの組織を起源とすることができ、また、任意の発育段階のものとすることができる。
【０２０９】
また、少なくとも１種の本明細書に記載の宿主細胞を含む細胞集団も本発明により提供される。いくつかの態様では、細胞集団は、本明細書に記載のいずれかの核酸または発現ベクターを含む宿主細胞を、そのいずれかの核酸または発現ベクターを含まない少なくとも１種の他の細胞と共に含む、異種集団である。あるいは、いくつかの態様では、細胞集団は、実質的に均一な集団であり、その集団は、発現ベクターを含む宿主細胞から主になる（例えば、から本質的になる）。いくつかの態様では、集団は細胞のクローン集団であり、集団の全ての細胞は、発現ベクターを含む単一宿主細胞のクローンであり、それにより、集団の全ての細胞は、発現ベクターを含む。本発明の一実施形態では、細胞集団は、本明細書に記載の核酸または発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。
【０２１０】
医薬組成物および製剤
ペプチド、ペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、発現ベクター、宿主細胞、またはこれらの組み合わせ、および担体、賦形剤、または希釈剤を含む組成物が本明細書で提供される。例示的態様では、組成物は医薬組成物である。「医薬組成物」は、動物またはヒトにおける医薬用途のために好適する組成物を意味する。医薬組成物は、薬理学的および／または治療有効量の活性薬剤および薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含む。医薬組成物およびその調製方法は、当業者にはすぐに分かるであろう。このような組成物およびその調製方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）に見出し得る。医薬組成物は、一般に滅菌され、実質的に等張性のものとして配合され、米国食品医薬品局の全てのＧＭＰ規制を完全に遵守している。この用語はまた、ヒトを含む動物における使用のための米国薬局方の記載のいずれかの試薬を包含する。好適な医薬担体および製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２１ｓｔ  Ｅｄ．２００５，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎに記載されている。「薬学的に許容可能な担体」または「薬学的に許容可能な賦形剤」は、動物またはヒトに投与された場合、有害な、アレルギー性、またはその他の不都合な反応を生じない組成物を意味する。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容可能な担体」または「薬学的に許容可能な賦形剤」は、生理学的に適合性のある任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張性剤ならびに吸収遅延剤、などを含む。薬学的に許容可能な賦形剤のいくつかの例は、水、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、ならびにこれらの組み合わせである。多くの場合、賦形剤は、組成物中の、等張性剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコールまたは塩化ナトリウムを含む。薬学的に許容可能な賦形剤の追加の例は、湿潤剤または少量の補助的な物質、例えば、湿潤または乳化剤、防腐剤または緩衝液であり、これは、ペプチドの貯蔵寿命または有効性を高める。
【０２１１】
例示的態様では、医薬組成物は、次記を含む任意の薬学的に許容可能な成分を含む：例えば、酸性化剤、添加剤、吸着剤、エアゾール噴射剤、排気剤、アルカリ化剤、固化防止剤、抗凝固剤、抗菌性保存剤、酸化防止剤、防腐剤、塩基、結合物質、緩衝剤、キレート化剤、コーティング剤、着色料、乾燥剤、合成洗剤、希釈剤、消毒剤、崩壊剤、分散剤、溶解促進剤、染料、皮膚軟化剤、乳化剤、エマルジョン安定剤、フィラー、フィルム形成剤、風味相乗剤、香味剤、流動促進剤、ゲル化剤、造粒剤、保水剤、潤滑剤、粘膜付着剤、軟膏基剤、軟膏、油性ビークル、有機塩基、トローチ基剤、顔料、可塑剤、研磨剤、防腐剤、封鎖剤、皮膚浸透剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、坐剤基剤、界面活性剤、界面活性剤、沈殿防止剤、甘味剤、治療薬、増粘剤、等張化剤、毒性剤、増粘剤、吸水剤、水混和性共溶媒、硬水軟化剤、または湿潤剤。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、前述の構成成分（単一または複数）は、医薬組成物中に任意の濃度、例えば、少なくともＡで存在してよく、Ａは、０．０００１％ｗ／ｖ、０．００１％ｗ／ｖ、０．０１％ｗ／ｖ、０．１％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、６０％ｗ／ｖ、７０％ｗ／ｖ、８０％ｗ／ｖ、または９０％ｗ／ｖである。いくつかの実施形態では、前述の構成成分（単一または複数）は、医薬組成物中に任意の濃度、例えば、最大でＢで存在してよく、Ｂは、９０％ｗ／ｖ、８０％ｗ／ｖ、７０％ｗ／ｖ、６０％ｗ／ｖ、５０％ｗ／ｖ、４０％ｗ／ｖ、３０％ｗ／ｖ、２０％ｗ／ｖ、１０％ｗ／ｖ、５％ｗ／ｖ、２％ｗ／ｖ、１％ｗ／ｖ、０．１％ｗ／ｖ、０．００１％ｗ／ｖ、または０．０００１％である。他の実施形態では、前述の構成成分（単一または複数）は、医薬組成物中に、任意の濃度範囲、例えば、約Ａ〜約Ｂの範囲で存在してよい。いくつかの実施形態では、Ａは０．０００１％、Ｂは９０％である。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、いずれかの本明細書で開示のペプチドまたはペプチド類似体を、患者への投与に好適する純度レベルで含む。いくつかの実施形態では、類似体は、少なくとも約９０％、好ましくは約９５％超、より好ましくは約９９％超の純度レべル、および薬学的に許容可能な希釈剤、担体または賦形剤を有する。例示的態様では、医薬組成物は無菌である。
【０２１４】
医薬組成物は、生理学的に適合性のあるｐＨを達成するように処方され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは、製剤および投与経路に応じて、少なくとも２、または少なくとも３、または少なくとも４、または少なくとも５、または少なくとも６、または少なくとも７、または少なくとも８であってよい。いくつかの実施形態では、医薬組成物のｐＨは、３〜９であってよい。
【０２１５】
ある実施形態では、ペプチドは、遺伝子治療法により、それらのヌクレオチド当量として投与され得る。一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドは、プラスミドまたはベクター中でコードされ、これは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）由来であり得る。ＡＡＶは、組換えＡＡＶウイルスであり得、例えば、限定されないが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ９（ｈｕ１４）、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ−ＤＪ、およびＡＡＶ−ＤＪ８などのカプシド血清型を含み得る。非限定的例として、組換えＡＡＶウイルスのカプシドは、ＡＡＶ２である。非限定的例として、組換えＡＡＶウイルスのカプシドは、ＡＡＶｒｈ１０である。非限定的例として、組換えＡＡＶウイルスのカプシドは、ＡＡＶ９（ｈｕ１４）である。非限定的例として、組換えＡＡＶウイルスのカプシドは、ＡＡＶ−ＤＪである。非限定的例として、組換えＡＡＶウイルスのカプシドは、ＡＡＶ９．４７である。非限定的例として、組換えＡＡＶウイルスのカプシドは、ＡＡＶ−ＤＪ８である。ある実施形態は、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のペプチド配列のヌクレオチド当量を含む。
【０２１６】
当業者なら、標的細胞は、限定されないが、種特異的、誘導性、組織特異的、または細胞周期特異的であるプロモーターを含む特定のプロモーターを必要とすることを理解するであろう（Ｐａｒｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３：１１４５−９（１９９７）；この文献の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２１７】
本明細書で使用される場合、「ベクター」は、本発明のポリヌクレオチドなどの異種分子の担体として、輸送、形質導入または別の方法で作用する、任意の分子または部分である。「ウイルスベクター」は、目的のペイロード分子、例えば、導入遺伝子、単一ポリペプチドまたは複数ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチド領域を含むベクター、またはその目的のペイロード分子を含むベクターである。本発明のウイルスベクターは、組換えで製造してもよく、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）親または基準配列に基づいてもよい。本発明に有用であり得る血清型には、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ９（ｈｕｌ４）、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ  １２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈｌＯ、ＡＡＶ−ＤＪ、およびＡＡＶ−ＤＪ８から生じるいずれかのものが含まれる。
【０２１８】
一実施形態では、本発明に有用であり得る血清型は、ＡＡＶ−ＤＪ８であり得る。ＡＡＶ−ＤＪ８のアミノ酸配列は、ヘパリン結合ドメイン（ＨＢＤ）を除去するために２個以上の変異を含み得る。非限定的例として、米国特許第７，５８８，７７２号（参照によりその内容の全体が本明細書に組み込まれる）の配列番号１として記載のＡＡＶ−ＤＪ配列は、２個の変異：（１）アミノ酸５８７の位置のアルギニン（Ｒ：ａｒｇ）がグルタミン（Ｑ；ｇｌｎ）に置換されるＲ５８７Ｑ、および（２）アミノ酸５９０の位置のアルギニン（Ｒ；ａｒｇ）がトレオニン（Ｔ；ｔｈｒ）に置換されるＲ５９０Ｔを含み得る。別の非限定的例は、３個の変異：（１）アミノ酸４０６の位置のリシン（Ｋ；ｌｙｓ）がアルギニン（Ｒ；ａｒｇ）に置換されるＫ４０６Ｒ、（２）アミノ酸５８７の位置のアルギニン（Ｒ；ａｒｇ）がグルタミン（Ｑ；ｇｌｎ）に置換されるＲ５８７Ｑ、および（３）アミノ酸５９０の位置のアルギニン（Ｒ；ａｒｇ）がトレオニン（Ｔ；ｔｈｒ）に置換されるＲ５９０Ｔを含み得る。
【０２１９】
ＡＡＶベクターはまた、自己相補的ＡＡＶベクター（ｓｃＡＡＶ）を含み得る。ｓｃＡＡＶベクターは、一緒にアニーリングして二重鎖ＤＮＡを形成する両ＤＮＡ鎖を含む。第２の鎖合成をスキップすることにより、ｓｃＡＡＶは細胞中で迅速な発現を可能とする。
【０２２０】
一実施形態では、医薬組成物は、ＡＡＶカプシドおよびＡＡＶベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。ＡＡＶベクターゲノムは、限定されないが、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７またはこれに少なくとも９５％同一性を有するバリアントなどの本明細書に記載の少なくとも１個のペプチド関連ポリヌクレオチドを含み得る。医薬組成物中の組換えＡＡＶベクターは、少なくとも７０％のＡＡＶベクターゲノムを含有し得る。
【０２２１】
一実施形態では、医薬組成物は、ＡＡＶカプシドおよびＡＡＶベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。ＡＡＶベクターゲノムは、限定されないが、配列番号１、３〜４１、４３〜７６、７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７またはこれに少なくとも９５％の同一性の配列および追加のＮ末端プロリンを有するバリアントなどの本明細書に記載の少なくとも１個のペプチド関連ポリヌクレオチドを含み得る。医薬組成物中の組換えＡＡＶベクターは、少なくとも７０％のＡＡＶベクターゲノムを含有し得る。
【０２２２】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、欧州特許出願公開第ＥＰ１８５７５５２号に記載のＡＡＶビリオンの送達方法を用いて、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２３】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、欧州特許出願公開第ＥＰ２６７８４３３号に記載のＡＡＶベクターを用いたタンパク質の送達方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２４】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、米国特許第５８５８３５１号に記載のＡＡＶベクターを用いたＤＮＡ分子の送達方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２５】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、米国特許第６２１１１６３号に記載のＤＮＡを血流に送達する方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２６】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、米国特許第６３２５９９８号に記載のＡＡＶビリオンの送達方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２７】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、米国特許第７５８８７５７号に記載の中枢神経系へのペイロードの送達方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２８】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、米国特許第８２８３１５１号に記載のペイロードの送達方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２２９】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、国際公開第２００１０８９５８３号に記載のグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）送達ベクターを用いたペイロードの送達方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２３０】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、国際公開第２０１２０５７３６３号に記載の神経細胞へのペイロードの送達方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２３１】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、米国特許第９５８５９７１号に記載のペイロードの細胞への送達方法を使って、投与または送達され得る。この特許の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２３２】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、Ｄｅｖｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３４，２０４−０９（２０１６）に記載のペイロードの細胞への送達方法を使って、投与または送達され得る。
【０２３３】
一実施形態では、ペプチド関連ポリヌクレオチドを含むウイルスベクターは、米国特許第７１９８９５１号［アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）血清型９配列、それを含むベクター、およびそのための使用］、米国特許第９２１７１５５号［新規ＡＡＶの単離およびその使用］、国際公開第２０１１１２６８０８号［薬理学的に誘導される導入遺伝子アブレーション系］、米国特許第６０１５７０９号［転写活性化因子、および組成物およびそれに関連する使用］、米国特許第７０９４６０４号［偽型組換えＡＡＶビリオンの製造］、国際公開第２０１６１２６９９３号［抗タウ構築物］、米国特許第７０９４６０４号［組換えＡＡＶカプシドタンパク質］、米国特許第８，２９２，７６９号［トリアデノ随伴ウイルス（ａａａｖ）およびその使用］、米国特許第９１０２９４９号［ＣＮＳターゲティングａａｖベクターおよびその使用方法］、米国特許出願公開第２０１６０１２０９６０号［中枢神経系へのアデノ随伴ウイルス媒介遺伝子導入］、国際公開第２０１６０７３６９３号［パーキンソン病の治療のためのＡＡＤＣポリヌクレオチド］、国際公開第２０１５１６８６６６号［網膜およびＣＮＳ遺伝子治療用ＡＡＶベクター］、米国特許出願公開第２００９０１１７１５６号［Ａ型ニーマン・ピック病のための遺伝子治療］または国際公開第２００５１２０５８１号［神経代謝病のための遺伝子治療］に記載のＡＡＶビリオンの送達方法を使って、投与または送達され得る。
【０２３４】
本明細書に記載のウイルスベクターの医薬組成物は、バイオアベイラビリティ、治療濃度域、および／または分布容積の内の１つまたは複数を特徴とし得る。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、本発明のペプチド関連ヌクレオチドおよび／またはペプチド関連ヌクレオチド組成物は、装置と組み合わせる、その上にコーティングするまたはそれに埋め込むことが可能である。装置には、限定されないが、ステント、ポンプ、および／またはその他の埋め込み型治療装置が挙げられる。さらに、対象が圧縮装置、例えば、限定されないが、対象の深部静脈血栓症（ＤＶＴ）の可能性を減らす圧縮装置を用いている間に、ペプチド関連ヌクレオチドおよび／またはペプチド関連ヌクレオチド組成物を、対象に送達可能である。本発明は、１個または複数のペプチド関連ポリヌクレオチドペイロード分子をコードするウイルスベクターを組み込み得る装置を提供する。これらの装置は、安定な製剤中に、それを必要とするヒト患者などの対象に直ちに送達され得るウイルスベクターを含む。
【０２３６】
投与装置を用いて、本明細書で教示の、単一、複数または分割投与計画に従って、本発明のペプチド関連ヌクレオチドを含むウイルスベクターを送達し得る。
【０２３７】
脳投与
本発明のペプチドまたは組成物のＣＮＳへの送達は、本発明のいくつかの実施形態では、全身投与、ＣＳＦ経路への注入、または脳への直接注入によってであり得、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、これらの内のいくつかの経路のために処方される。一実施形態では、本発明の組成物は、ＣＮＳ中で標的とする作用のために、ＣＮＳへの全身または直接投与により投与され、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、これらの内のいくつかの経路のために処方される。一実施形態では、本明細書に記載の組成物は、脳特異的送達用として処方され、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、これらの内のいくつかの経路のために処方される。一実施形態では、脳への薬物送達戦略には、血液脳関門（ＢＢＢ）の浸透圧的および化学的開口部、ならびに輸送または担体システム、酵素、および血液脳関門内皮中への分子の浸透を制御する受容体の使用を含み、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、これらの内のいくつかの経路のために処方される。別の実施形態では、受容体媒介トランスサイトーシスは、ペプチドおよびタンパク質をＢＢＢを通って輸送でき、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、これらの内のいくつかの経路のために処方される。別の実施形態では、脳への薬物送達戦略は、ＢＢＢの迂回を含み、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、これらの内のいくつかの経路のために処方される。いくつかの実施形態では、種々の薬理学的試薬を用いてＢＢＢを開かせ、いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、これらの内のいくつかの経路のために処方される。別の実施形態では、投与経路は、神経変性の状態により影響を受けるものとは異なる器官またはシステムに向けられ得る。例えば、化合物は、神経変性状態を治療するために非経口的に投与され得る。したがって、本発明は、当業者により理解されるように、本明細書で記載のいずれかの経路、およびこのような材料をＣＮＳに利用する任意の経路を用いた投与用の好適する種々の剤形の使用を提供する。
【０２３８】
薬学的に許容可能な塩
本開示は、本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体の薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。本明細書で使用される場合、用語の「薬学的に許容可能な塩」は、親ペプチドの生物活性を保持し、生物学的にまたは別の理由で望ましくないことがないペプチドの塩を意味する。本明細書で開示の多くのペプチドは、アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれらに類似の基が存在するために、酸および／または塩基の塩を形成できる。薬学的に許容可能な塩基付加塩は、無機および有機塩基から調製できる。無機塩基由来の塩には、例示の目的のみで挙げると、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウムおよびマグネシウム塩が含まれる。有機塩基由来の塩には、限定されないが、一級、二級および三級アミンの塩が挙げられる。
【０２３９】
薬学的に許容可能な酸付加塩は、無機および有機酸から調製できる。代表的酸付加塩には、限定されないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、二グルコン酸塩、グリセロ燐酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イソチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。無機酸由来の塩には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、などが挙げられる。有機酸由来の塩には、酢酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、ピルビン酸塩、シュウ酸塩、リンゴ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、ケイ皮酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ｐ−トルエン−スルホン酸塩、サリチル酸塩、などが挙げられる。薬学的に許容可能な酸付加塩の形成に採用できる酸の例には、例えば、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸、ならびに有機酸、例えば、シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸が挙げられる。
【０２４０】
塩基性付加塩はまた、サリチル酸原料の最終単離および精製中にインサイツで調製でき、またはカルボン酸含有部分と、薬学的に許容可能な金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩などの好適な塩基との反応により、またはアンモニアもしくは、有機一級、二級、もしくは三級アミンとの反応により調製できる。薬学的に許容可能な塩には、限定されないが、アルカリ金属またはアルカリ土類金属ベースカチオン、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム塩など、および特に、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、およびエチルアンモニウムを含む、無毒性四級アンモニアおよびアミンカチオンが挙げられる。塩基付加塩の形成に有用なその他の代表的有機アミンには、例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、ピペラジン、などが挙げられる。有機塩基由来の塩には、限定されないが、一級、二級および三級アミンの塩が挙げられる。
【０２４１】
さらに、塩基性窒素含有基は、メチル、エチル、プロピル、およびブチル塩化物、臭化物、およびヨウ化物などの低級アルキルハロゲン化物；デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリル塩化物、臭化物、およびヨウ化物などの長鎖ハロゲン化物；ベンジルおよびフェネチル臭化物などのアリールアルキルハロゲン化物として、本開示の類似体と四級化できる。水または油可溶性または分散性生成物がそれにより得られる。
【０２４２】
ペプチドの対応する溶媒和物を調製、精製、および／または取り扱うことは、好都合または望ましいことであり得る。本明細書で使われる場合、用語の「溶媒和物」は、従来の意味で使用され、溶質（例えば、ペプチド、ペプチドの塩）と溶媒との複合体を意味する。溶媒が水の場合、溶媒和物は、便宜的に水和物、例えば、一水和物、二水和物、三水和物と呼ばれ得る。別段の指定がない限り、特定のペプチドへの言及は、その溶媒和物および水和物形態も包含する。
【０２４３】
本明細書で使用される場合、「共結晶」または「共結晶塩」は、室温で２種以上の特有の固体から構成される結晶質物質を意味し、それぞれの物質は、構造、融点、および融解熱、吸湿性、溶解度、および安定性などの特有の物理的特性を有する。共結晶または共結晶塩は、それ自体既知の共結晶化方法により製造できる。共結晶（ｃｏ−ｃｒｙｓｔａｌまたはｃｏｃｒｙｓｔａｌ）または共結晶塩という用語はまた、式ＩのペプチドなどのホストＡＰＩ（有効活性成分）分子（単一または複数）、およびゲスト（または共形成物）分子（単一または複数）が存在する多成分系を意味する。
【０２４４】
投与経路、投与量、および投与計画
医薬組成物は通常、非経口的投与に好適する。本明細書で使用される場合、医薬組成物の「非経口的投与」には、対象の組織の物理的な穴の開設およびその穴を通る組織への医薬組成物の投与により、通常、血流中、筋肉中、または内部臓器中への直接投与をもたらすことを特徴とする任意の投与経路が含まれる。したがって、非経口的投与には、限定されないが、組成物の注入、外科的切開による組成物の適用、組織貫通性非外科的創傷を介した組成物の適用などによる医薬組成物の投与が含まれる。特に、非経口的投与は、限定されないが、皮下注入、腹腔内注入、筋肉注入、胸骨内注入、静脈内注入、動脈内注入、髄腔内注入、脳室内注入、尿道内注入、頭蓋内注入、滑液嚢内注入、または輸注；または腎臓透析注入技術を含むことが意図されている。
【０２４５】
種々の実施形態では、ペプチドは、薬学的に許容可能な賦形剤と混合され、経口でまたは静脈内注入、筋肉注入、皮下注入、腹腔内注入、経皮注入、動脈内注入、胸骨内注入、髄腔内注入、脳室内注入、尿道内注入、頭蓋内注入、滑液嚢内注入によりまたは輸注により、対象に全身的に投与できる医薬組成物が形成される。医薬組成物は、天然には認められない少なくとも１種の成分を含むのが好ましい。
【０２４６】
非経口的投与に好適する医薬組成物製剤は通常、滅菌水または無菌等張生理食塩水などの薬学的に許容可能な賦形剤と混合した有効成分を含む。このような製剤は、ボーラス投与または継続投与に好適する形態で、調製、包装、または販売され得る。注入可能製剤は、単位剤形、例えば、アンプル、または防腐剤を含む複数回投与用容器で、調製、包装、または販売され得る。非経口的投与用の製剤には、限定されないが、懸濁剤、溶液、油中または水性ビークル中のエマルジョン、ペーストなどが含まれる。このような製剤は、限定されないが、懸濁剤、安定化剤、または分散剤を含む、１種または複数の追加の成分をさらに含み得る。非経口的投与用の製剤の一実施形態では、有効成分は、再構成された組成物の非経口的投与の前に、好適なビークル（例えば、無菌発熱性物質非含有水）を用いて再構成するための乾燥形態（すなわち、粉末または顆粒状形態）で提供される。非経口製剤はまた、塩、炭水化物および緩衝剤（好ましくはｐＨ３〜９にするための）などの担体を含有し得る水溶液も含むが、いくつかの適用において、無菌の非水溶液として、または無菌の発熱物質非含有水などの適切なビークルと共に使用される乾燥形態として、より好適に処方し得る。例示的非経口的投与形態には、無菌水溶液、例えば、水性のプロピレングリコールまたはデキストロース溶液中の溶液剤または懸濁剤が含まれる。このような剤形は、必要に応じ、好適に緩衝できる。有用なその他の非経口的に投与可能な製剤には、微結晶形態、またはリポソーム調製物形態の有効成分を含むものが含まれる。非経口的投与用の製剤は、即時放出および／または放出調節されるように処方し得る。放出調節製剤には、遅延、持続、パルス、制御、標的化およびプログラム放出が含まれる。
【０２４７】
本開示は、適用ポイントで局所的に作用する、または身体の血液循環に入ると、全身的に作用する、経皮または局所的の送達のための組成物および方法を含む。これらのシステムでは、送達は、軟膏などの形の物質または薬物の直接局所投与、または薬物（または他の物質）を保持し、それを時間制御方式で皮膚に放出する、貯蔵容器などを備えた貼付剤の接着、などの技術により実現され得る。局所投与の場合、組成物は、エマルジョン、ローション、ゲル、クリーム、ゼリー、溶液、懸濁液、軟膏、および経皮パッチの形態であり得る。いくつかの局所送達組成物は、ポリエニルホスファチジルコリン（本明細書では「ＰＰＣ」と省略）を含有し得る。いくつかの事例では、ＰＰＣを用いて、表皮浸透を高めることができる。本明細書で使用される場合、用語の「ポリエニルホスファチジルコリン」は、２個の脂肪酸部分を有する任意のホスファチジルコリンを意味し、２個の脂肪酸の内の少なくとも１個は、構造中に少なくとも２個の二重結合を有するリノール酸などの不飽和脂肪酸である。このような局所製剤は、１種または複数の乳化剤、１種または複数の界面活性剤、１種または複数のポリグリコール、１種または複数のレシチン、１種または複数の脂肪酸エステル、または１種または複数の経皮浸透増強剤を含み得る。製剤は、無菌水溶液または非水性溶液、懸濁液、および乳剤を含むことができ、特定の実施形態では、これは、対象の血液と等張性であり得る。非水溶媒の例は、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油、ゴマ油、ヤシ油、ラッカセイ油、ピーナッツオイルなどの植物油、鉱物油、オレイン酸エチル等の有機エステル、または合成モノまたはジグリセリドを含む不揮発性油である。水性溶媒には、水、アルコール／水溶液、乳剤あるいは懸濁液が挙げられ、生理食塩水および緩衝性溶媒を含む。非経口ビークルとしては、塩化ナトリウム溶液、１，３−ブタンジオール、リンゲルデキストロース、デキストロース、および塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または不揮発性油が挙げられる。静脈内ビークルとしては、流体、および栄養補充液、電解質補充液（リンゲルデキストロース系の補充液など）、などが挙げられる。保存剤および他の添加物は、例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤、および不活性ガスなどが存在してもよい。
【０２４８】
例えば、一態様では、無菌注入可能溶液は、必要な量のペプチドを、上記成分の１種または複数の組み合わせとともに、適切な溶媒に組み込み、続けて、必要に応じて、濾過滅菌することにより調製できる。一般に、分散製剤は、活性ペプチドを、塩基性分散媒および上記のもの由来の必要な他の成分を含有する無菌ビークル中に混合することにより調製される。無菌の注入可能溶液を調製用の無菌粉末の場合、真空乾燥および凍結乾燥などの調製方法により、活性成分粉末と、予め滅菌濾過したその溶液由来の任意の追加の目的成分の混合物が得られる。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散製剤の場合には必要な粒径の維持により、また界面活性剤の使用により、維持することができる。注入可能組成物の持続的吸収は、組成物中に、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることにより、もたらさすことができる。種々の実施形態では、注入可能組成物は、市販の使い捨て型の注入可能装置を用いて投与される。
【０２４９】
非経口製剤は、単位用量または複数回投与用シール容器、例えば、アンプルおよびバイアルで提供でき、また、使用直前に、無菌液体賦形剤、例えば、注射用蒸留水を添加するだけでよい、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で保存できる。即時の注入溶液および懸濁液は、当該技術分野において既知の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製できる。注入可能製剤は、本開示による。注入可能組成物のための効果的な医薬賦形剤に対する要件は、当業者にはよく知られている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，Ｂａｎｋｅｒ  ａｎｄ  Ｃｈａｌｍｅｒｓ，ｅｄｓ．，ｐａｇｅｓ  ２３８−２５０（１９８２）、およびＡＳＨＰ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｎ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｄｒｕｇｓ，Ｔｏｉｓｓｅｌ，４ｔｈ  ｅｄ．，ｐａｇｅｓ  ６２２−６３０（１９８６）を参照されたい）。
【０２５０】
さらに、本開示のペプチドは、種々の基材、例えば、乳化基材または水溶性基剤を混合することにより、直腸投与用の坐剤として作製できる。腟投与に好適する製剤は、有効成分に加えて、当技術分野において適切であるとわかっている担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡または噴霧配合物として提供できる。
【０２５１】
当業者なら、上述した医薬組成物に加えて、本開示のペプチドは、シクロデキストリン包接複合体などの包接複合体、またはリポソームとして処方できることを理解するであろう。
【０２５２】
ペプチドは、鼻腔内に、または吸入により、通常、乾燥粉末の形態で（単独で、混合物として、または混合成分粒子として、例えば、好適な薬学的に許容可能な担体と混合して）、ドライパウダー吸入器から、加圧型容器、ポンプ、噴霧、アトマイザー（好ましくは、電気流体力学を用いて微細ミストを生成するアトマイザー）、または噴霧器からのエアロゾル噴霧として、好適な噴射剤を使用または使用せずに、または点鼻薬として、投与できる。加圧型容器、ポンプ、噴霧、アトマイザー、または噴霧器は通常、例えば、有効成分の分散、可溶化、または放出の延長のための好適な薬剤、溶媒としての噴射剤（単一または複数）を含むペプチドの溶液または懸濁液を含む。乾燥粉末または懸濁製剤としての使用前に、製剤は通常、吸入による送達に好適なサイズ（通常５ミクロン未満）に微粒子化される。これは、任意の適切な粉砕法、例えば、スパイラルジェットミル、流動床ジェットミル、ナノ粒子を形成するための超臨界流体処理、高圧ホモジナイゼーション、またはスプレー乾燥により達成され得る。吸入器または吹き入れ器で使用するための、カプセル、ブリースターパックおよびカートリッジは、ペプチド、好適な粉末基剤および機能調節剤の粉末混合物を含むように処方され得る。メントールおよびレボメントールなどの好適な香味料、またはサッカリンまたはサッカリンナトリウムなどの甘味料は、これらの吸入／鼻腔内投与向け製剤に添加し得る。吸入／鼻腔内投与用の製剤は、即時放出および／または放出調節されるように処方し得る。放出調節製剤には、遅延、持続、パルス、制御、標的化およびプログラム放出が含まれる。ドライパウダー吸入器およびエアロゾルの場合、投与単位は、計測量を送達するバルブにより決定される。単位は通常、ペプチドの定量または「ひと吹き」を投与するように構成される。全一日量は、通常、単一用量、または、より一般的には、その日全体にわたる分割量で投与される。
【０２５３】
投与量
したがって、当業者なら、本明細書で提供される本開示に基づいて、投与量および投与計画が治療技術においてよく知られた方法により調節されることを理解するであろう。すなわち、最大耐量は容易に確定でき、対象に対する検出可能な治療効果を与えるためにそれぞれの薬剤を投与するための時間的要件と同様に、対象に対する検出可能な治療効果を与える有効量も決定し得る。したがって、特定の投与量および投与計画が本明細書で例示されるが、これらの例は、本開示の実施において対象に提供され得る投与量および投与計画を決して限定するものではない。
【０２５４】
投与量値は、回復される状態のタイプと重症度で変化し得るものであり、単回または複数回用量を含み得ることに留意されたい。いずれの特定の対象についても、具体的な投与計画は、個々の必要性および組成物を投与するヒトまたはその投与を監督する人の専門的判断に従い経時的に調整されるべきであること、および本明細書で記載の投与量範囲は、例示的なものに過ぎず、請求された組成物の範囲または実施を限定する意図はないことをさらに理解されたい。さらに、本開示の組成物を用いた投与計画は、疾患のタイプ、年齢、体重、性別、対象の医学的状態、状態の重症度、投与経路および用いた特定のペプチドなどの種々の要因に基づくものであろう。したがって、投与計画は、広い範囲で変わる可能性があるが、標準的方法を使って定常的に決定することができる。例えば、投与量は、薬物動態学的または薬力学的パラメーターに基づいて調節することが可能で、これには、毒作用および／または検査室値などの臨床的効果が含まれ得る。したがって、本開示は、当業者により測定される対象内用量漸増試験を包含する。適切な投与量および投与計画の決定は、当該技術においてよく知られており、本明細書で開示の教示が与えられると、当業者により成し遂げられると理解されるであろう。
【０２５５】
本開示のペプチドの投与量はまた、特定の本開示のペプチドの投与に付随する可能性のある任意の有害副作用の存在、性質および程度により決定できる。通常、主治医は、種々の要因、例えば、年齢、体重、総体的な健康、食事、性別、投与される本開示のペプチド、投与経路、および治療される状態の重症度を考慮して、それぞれの個々の患者を治療する本開示のペプチドの投与量を決定する。例として述べるのであって、限定するものではないが、本開示のペプチドの投与量は、約０．０００１〜約１００ｍｇ／治療される対象のｋｇ体重／日、約０．００１〜約１０ｍｇ／治療される対象のｋｇ体重／日、または約０．０１〜約１ｍｇ／治療される対象のｋｇ体重／日であり得る。ペプチドは、１つまたは複数の用量、例えば、１〜３用量で投与できる。
【０２５６】
種々の実施形態では、医薬組成物の単一または複数回の投与が、対象に必要で、耐容される投与量と頻度に応じて投与される。いずれにせよ、組成物は、対象を効果的に治療するのに十分な量の少なくとも１種の本明細書で開示のペプチドを提供すべきである。投与量は、１回で投与できるが、治療結果が達成されるまで、または副作用が治療の中断の理由になるまで、定期的に提供してよい。
【０２５７】
ペプチド医薬組成物の投与頻度は、治療の種類と治療される特定の疾患に依存する。投与は、ペプチドを、１日１回、２回、３回または４回でよい。治療有効量のペプチドによる対象の治療には、単一治療、または好ましくは一連の治療を含むことができる。好ましい例では、対象は、毎日、毎週１回または２週で１回、ペプチドで治療される。
【０２５８】
併用療法
別の実施形態では、ペプチドは、その他の既知の治療薬と同時投与または同時処方される。本開示のさらなる態様では、薬理学的有効量の本開示によるペプチドまたはペプチド類似体、または薬学的に許容可能なその塩を、必要に応じて薬学的に許容可能な希釈剤または担体と一緒に、またこれに加えて、次記：（１）インスリンおよびインスリン類似体；（２）スルホニル尿素（例えば、グリピジド）を含むインスリン分泌促進物質および食事グルコース制御因子（「短時間作用型分泌促進物質」と呼ばれることもある）、例えば、メグリチニド（例えば、レパグリニドおよびナテグリニド）；（３）インクレチン作用を改善する薬剤、例えば、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−４）阻害剤（例えば、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、およびシタグリプチン）、およびグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アゴニスト（例えば、エキセナチド）；（４）インスリン増感薬、例えば、チアゾリジンジオン（例えば、ピオグリタゾンおよびロシグリタゾン）などのペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）アゴニスト、およびＰＰＡＲα、γおよびδ活性の任意の組み合わせを有する薬剤；（５）肝臓グルコースバランスを調節する薬剤、例えば、ビグアニド（例えば、メトホルミン）、フルクトース１，６−ビスホスファターゼ阻害剤、グリコーゲンホプスホリラーゼ阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼ阻害剤、およびグルコキナーゼ活性化因子；（６）腸からのグルコースの吸収を減らす／遅らせるように設計された薬剤、例えば、α−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、ミグリトールおよびアカルボース）；および（７）グルカゴンの作用と拮抗するまたはグルカゴンの分泌を減らす薬剤、例えば、アミリン類似体（例えば、プラムリンチド）；（７）腎臓によるグルコースの再吸収を防ぐ薬剤、例えば、ナトリウム依存性グルコーストランスポーター２（ＳＧＬＴ−２）阻害剤（例えば、ダパグリフロジン）；（８）長期の高血糖の合併症を治療するように設計された薬剤、例えば、アルドース還元酵素阻害剤（例えば、エパルレスタットおよびラニレスタット）；および細小血管症に関連する合併症を治療するために使用される薬剤；（９）抗脂質異常症剤、例えば、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（スタチン、例えば、ロスバスタチン）およびその他のコレステロール低下薬；ＰＰＡＲａアゴニスト（フィブラート、例えば、ゲムフィブロジルおよびフェノフィブレート）；胆汁酸封鎖剤（例えば、コレスチラミン）；（１０）コレステロール吸収阻害剤（例えば、植物ステロール（すなわち、フィトステロール）、合成阻害剤）；コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤；回腸胆汁酸輸送システムの阻害剤（Ｉ  ＢＡＴ阻害剤）；胆汁酸結合樹脂；ニコチン酸（ナイアシン）およびその類似体；酸化防止剤、例えば、プロブコール；およびω−３脂肪酸；（１１）β遮断薬などのアドレナリン受容体アンタゴニストを含む降圧薬、（例えば、アテノロール）、α遮断薬（例えば、ドキサゾシン）、およびα／β混合遮断薬（例えば、ラベタロール）；α−２アゴニストを含むアドレナリン受容体アゴニスト（例えば、クロニジン）；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻���剤（例えば、リシノプリル）、カルシウムチャネル遮断薬、例えば、ジヒドロピリジン（例えば、ニフェジピン）、フェニルアルキルアミン（例えば、ベラパミル）、およびベンゾチアゼピン（例えば、ジルチアゼム）；アンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト（例えば、カンデサルタン）；アルドステロン受容体アンタゴニスト（例えば、エプレレノン）；中枢性アドレナリン作動薬、例えば、中枢αアゴニスト（例えば、クロニジン）；および利尿薬（例えば、フロセミド）；（１２）フィブリン溶解活性化因子などの抗血栓薬を含む止血モジュレーター；トロンビンアンタゴニスト；第ＶＩＩａ因子阻害剤；抗凝固剤、例えば、ビタミンＫアンタゴニスト（例えば、ワーファリン）、ヘパリンおよびその低分子量類似体、因子Ｘａ阻害剤、および直接トロンビン阻害薬（例えば、アルガトロバン）；抗血小板薬、例えば、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えば、アスピリン）、アデノシンジホスフェート（ＡＤＰ）受容体阻害剤（例えば、クロピドグレル）、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、シロスタゾール）、糖タンパク質Ｉ  ＩＢ／Ｉ  Ｉ  Ａ阻害剤（例えば、チロフィバン）、およびアデノシン再取り込み阻害剤（例えば、ジピリダモール）；（１４）ノルアドレナリン作動薬（例えば、フェンテルミン）およびセロトニン作動薬（例えば、シブトラミン）を含む抗肥満薬、例えば、食欲抑制薬（例えば、エフェドリン）、膵リパーゼ阻害剤（例えば、オルリスタット）、マイクロソーム輸送タンパク質（ＭＴＰ）モジュレーター、ジアシルグリセロールアシル転移酵素（ＤＧＡＴ）阻害剤、およびカンナビノイド（ＣＢ１）受容体アンタゴニスト（例えば、リモナバン）；（１５）摂食行動変性剤、例えば、オレキシン受容体モジュレーターおよびメラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）モジュレーター；（１６）グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）受容体モジュレーター；（１７）神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）／ＮＰＹ受容体モジュレーター；（１８）ピルビン酸脱水素酵素キナーゼ（ＰＤＫ）モジュレーター；（１９）セロトニン受容体モジュレーター；（２０）レプチン／レプチン受容体モジュレーター；（２１）グレリン／グレリン受容体モジュレーター；または（２２）モノアミン透過調節薬、例えば、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）（例えば、フルオキセチン）、ノルアドレナリン再取り込み阻害剤（ＮＡＲＩ）、ノルアドレナリン−セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）、トリプルモノアミン再取り込み遮断薬（例えば、テソフェンシン）、およびモノアミンオキシダーゼ阻害剤（ＭＡＯＩ）（例えば、トロキサトンおよびアミフラミン）、もしくは薬学的に許容可能な塩、このような塩の溶媒和物、溶媒和物またはこれらのプロドラッグ、から選択される１種または複数の薬剤を、必要に応じ、薬学的に許容可能な担体と一緒に、同時、逐次または別々に、このような治療処置を必要とするヒトなどの哺乳動物に投与することを含む併用療法が本明細書で提供される。
【０２５９】
別の実施形態では、ペプチドは、その他の既知のＮＡＳＨを治療するための治療薬と同時投与または同時処方される。本開示のさらなる態様では、薬理学的有効量の本開示によるペプチドまたはペプチド類似体、または薬学的に許容可能なその塩を、必要に応じて薬学的に許容可能な希釈剤または担体と一緒に、（ｍｉＲ−１０３／１０７アンタゴニスト、ＦＸＲアゴニスト、ガレクチン−１／３アゴニスト、ＡＣＣ阻害剤、ＣＢ−１阻害剤、ケトヘキサキナーゼ阻害剤、ＰＤＥ４阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、Ａ３ＡＲアゴニスト、ＰＤＥ阻害剤、フルオロケトライド、ｍＴＯＴインスリン増感剤、カスパーゼ阻害剤、レプチン類似体、ガレクチン−１／３アゴニスト、ＳＣＤ１阻害剤、ＰＰＡＲαδアゴニスト、ＬＯＸＬ２抗体、ＡＳＫ１阻害剤、１１β−ＨＳＤ１阻害剤、ＰＰＡＲαδγアゴニスト、ＴＨＲ−βアゴニスト、アルドステロン阻害剤、ＦＧＦ−１９類似体、ＳＢＡＴ阻害剤、ＣＣＲ２／ＣＣＲ５阻害剤、ＧＬＰ−１アゴニスト、およびＰＰＡＲαγアゴニスト）から選択される１種または複数の薬剤を、同時、逐次または別々に投与することを含む併用療法が本明細書で提供される。次の化合物と一緒の組み合わせも、本発明の実施形態として意図されている。アストラゼネカＡＺＤ４０７６、Ｅｎａｎｔａ  ＥＤＰ−３０５、Ｇａｌｅｃｔｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ＧＲ−ＭＤ−０２、ゲムカベン、ギリアドＧＳ−０９７６、ギリアドＧＳ−９６７４、メルクＭＫ−４０７４、ピオグリタゾン、ファイザーＰＦ−０６８３５９１９、ファイザーＣＰ−９４５５９８、アステラスＡＳＰ９８３１、ベーリンガーインゲルハイムＢＩ  １４６７３３５、ブリストル・マイヤーズスクイブＢＭＳ−９８６０３６、アバンディア、メトホルミン、ロサルタン、キャンファイトＣＦ１０２、ペントキシフィリン、ソリスロマイシン、Ｃｉｒｉｕｓ  ＭＳＤＣ−０６０２Ｋ、エムリカサン、Ｃｏｎａｔｕｓ  ＩＤＮ−６５５６、メトレレプチン、アラムコール、Ｇｅｎｆｉｔ  ＧＦＴ５０５、シムツズマブ、ギリアドＧＳ−４９９７、ギリアドＧＳ−９４５０、ロシュＴＲＯ１９６２２、ロシュＲＯ５０９３１５１、Ｉｍｍｕｒｏｎ  ＩＭＭ−１２４Ｅ、オベチコール酸、Ｉｎｖｅｎｔｉｖａ  ＩＶＡ３３７、Ｍａｄｒｉｇａｌ  ＭＧＬ−３１９６、ＭＮ−００１、田辺三菱製薬ＭＴ−３９９５、持田製薬ＥＰＡ−Ｅ、ＮＧＭ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ  ＮＧＭ２８２、ノバルティスＬＭＢ７６３、ノバルティスＬＪＮ４５２、Ｓｈｉｒｅ  ＳＨＰ６２６、セニクリビロック、リラグルチド、およびサログリタザル。
【０２６０】
肥満症に関連する合併症−単剤療法または併用療法
例えば、体重過剰または肥満に加えて、対象または患者は、体重過剰または肥満症関連合併症、すなわち、体重過剰または肥満であることに関連する、それにより悪化する、またはそれにより誘発される疾患およびその他の有害健康状態を有する場合がある。本発明の開示ペプチドが単独で、または以前にこれらの体重過剰または肥満症関連状態を治療することが示されている少なくとも１種の他の薬剤と組み合わせて投与されることが本明細書で意図されている。
【０２６１】
例えば、ＩＩ型糖尿病は肥満症に関連付けられてきた。ＩＩ型糖尿病の特定の合併症、例えば、身体障害および早死には、持続的減量により、防止、回復、またはなくすことができる（Ａｓｔｒｕｐ，Ａ．Ｐｕｂ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｎｕｔｒ（２００１）４：４９９−５  １５）。ＩＩ型糖尿病の治療に投与される薬剤には、スルホニル尿素（例えば、クロルプロパミド、グリピジド、グリブリド、グリメピリド）；メグリチニド（例えば、レパグリニドおよびナテグリニド）；ビグアニド（例えば、メトホルミン）；チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン、トログリタゾン、およびピオグリタゾン）；ジペプチジルペプチダーゼ−４阻害剤（例えば、シタグリプチン、ビルダグリプチン、およびサキサグリプチン）；グルカゴン様ペプチド−１模倣体（例えば、エキセナチドおよびリラグルチド）；およびαグルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボースおよびミグリトール）が挙げられる。
【０２６２】
心機能障害および状態、例えば、高血圧、脂質異常症、虚血性心疾患、心筋症、心筋梗塞、脳卒中、静脈血栓塞栓症および肺高血圧症は、体重過剰または肥満症に関連付けられてきた。例えば、高血圧は、肥満症に関連付けられてきた。理由は、過剰脂肪組織が腎臓の作用を受ける物質を分泌し、高血圧を生ずるためである。さらに、肥満症であると、一般により多量のインスリンが産生され（過剰脂肪組織のために）、この過剰のインスリンも血圧を上昇させる。高血圧の主要な治療選択肢は、減量である。高血圧を治療するために投与される薬剤には、クロルタリドン；ヒドロクロロチアジド；インダパミド、メトラゾン；ループ利尿薬（例えば、ブメタニド、エタクリン酸、フロセミド、ラシックス、トルセミド）；カリウム保持性利尿薬（例えば、アミロライド塩酸塩、ベンザミル、スピロノラクトン、およびトリアムテレン）；末梢性薬剤（例えば、レセルピン）；中枢αアゴニスト（例えば、クロニジン塩酸塩、グアナベンズ酢酸塩、グアンファシン塩酸塩、およびメチルドパ）；α遮断薬（例えば、ドキサゾシンメシレート、プラゾシン塩酸塩、およびテラゾシン塩酸塩）；β遮断薬（例えば、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロールフマル酸塩、カルテオロール塩酸塩、メトプロロール酒石酸塩、メトプロロールコハク酸塩、ナドロール、ペンブトロール硫酸塩、ピンドロール、プロプラノロール塩酸塩、およびチモロールマレイン酸塩）；αおよびβ混合遮断薬（例えば、カルベジロールおよびラベタロール塩酸塩）；直接血管拡張薬（例えば、ヒドララジン塩酸塩およびミノキシジル）；カルシウムアンタゴニスト（例えば、ジルチアゼム塩酸塩およびベラパミル塩酸塩）；ジヒドロピリジン（例えば、アムロジピンベシル酸塩、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、およびニソルジピン）；ＡＣＥ阻害薬（ベナゼプリル塩酸塩、カプトプリル、エナラプリルマレイン酸塩、フォシノプリルナトリウム、リシノプリル、モエキシプリル、キナプリル塩酸塩、ラミプリル、トランドラプリル）；アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬（例えば、ロサルタンカリウム、バルサルタン、およびイルベサルタン）；レニン阻害剤（例えば、アリスキレン）；およびこれらの組み合わせが挙げられる。これらの化合物は、当該技術分野において既知の投与計画および投与量で投与される。
【０２６３】
Ｃａｒｒら（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２００４）Ｖｏｌ．８９，Ｎｏ．６  ２６０１−２６０７）は、体重過剰または肥満であることと、脂質異常症との間の関連を考察している。脂質異常症は通常、スタチンで治療される。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤であるスタチンは、対象のコレステロールの産生を遅くする、および／または動脈からコレステロールの蓄積を取り除く。スタチンには、メバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、ベロスタチン、ジヒドロコンパクチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ダルバスタチン、カルバスタチン、クリルバスタチン、ベバスタチン、セフバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチン、およびグレンバスタチンが挙げられる。これらの化合物は、当該技術分野において既知の投与計画および投与量で投与される。Ｅｃｋｅｌ（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（１９９７）９６：３２４８−３２５０）は、体重過剰または肥満であることと、虚血性心疾患との間の関連について考察している。虚血性心疾患を治療するために投与される薬剤には、スタチン、硝酸塩（例えば、イソソルビド二硝酸塩およびイソソルビド一硝酸塩）、β遮断薬、およびカルシウムチャネルアンタゴニストが挙げられる。これらの化合物は、当該技術分野において既知の投与計画および投与量で投与される。
【０２６４】
Ｗｏｎｇら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００７）４：４３６−４４３）は、体重過剰または肥満であることと、心筋症との間の関連について考察している。心筋症を治療するために投与される薬剤には、強心剤（例えば、ジゴキシン）、利尿薬（例えば、フロセミド）、ＡＣＥ阻害剤、カルシウムアンタゴニスト、抗不整脈薬（例えば、ソトロール（Ｓｏｔｏｌｏｌ）、アミオダロンおよびジソピラミド）、およびβ遮断薬が挙げられる。これらの化合物は、当該技術分野において既知の投与計画および投与量で投与される。Ｙｕｓｅｆら（Ｌａｎｃｅｔ（２００５）３６６（９４９７）：１６４０−１６４９）は、体重過剰または肥満であることと、心筋梗塞との間の関連について考察している。心筋梗塞を治療するために投与される薬剤には、ＡＣＥ阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、直接血管拡張薬、β遮断薬、抗不整脈薬および血栓溶解薬（例えば、アルテプラーゼ、レタプラーゼ（Ｒｅｔａｐｌａｓｅ）、テネクテプラーゼ、アニストレプラーゼ、およびウロキナーゼ）が挙げられる。これらの化合物は、当該技術分野において既知の投与計画および投与量で投与される。
【０２６５】
Ｓｕｋら（Ｓｔｒｏｋｅ（２００３）３４：１５８６−１５９２）は、体重過剰または肥満であることと、脳卒中との間の関連について考察している。脳卒中を治療するために投与される薬剤には、抗血小板薬（例えば、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、およびチクロピジン）、抗凝固薬（例えば、ヘパリン）、および血栓溶解薬が挙げられる。Ｓｔｅｉｎら（Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５）１８（９）：９７８−９８０）は、体重過剰または肥満であることと、静脈血栓塞栓症との間の関連について考察している。静脈血栓塞栓症を治療するために投与される薬剤には、抗血小板薬、抗凝固薬、および血栓溶解薬が挙げられる。Ｓｚｔｒｙｍｆら（Ｒｅｖ  Ｐｎｅｕｍｏｌ  Ｃｌｉｎ（２００２）５８（２）：１０４−１０）は、体重過剰または肥満であることと、肺高血圧症との間の関連について考察している。肺高血圧症を治療するために投与される薬剤には、強心剤、抗凝固剤薬、利尿薬、カリウム（例えば、Ｋ−ｄｕｒ）、血管拡張剤（例えば、ニフェジピンおよびジルチアゼム）、ボセンタン、エポプロステノール、およびシルデナフィルが挙げられる。呼吸器疾患障害および状態、例えば、肥満低換気症候群、喘息、および閉塞性睡眠時無呼吸は、体重過剰または肥満であることと関連付けられてきた。Ｅｌａｍｉｎ（Ｃｈｅｓｔ（２００４）１２５：１９７２−１９７４）は、体重過剰または肥満であることと、喘息との間の関連について考察している。喘息を治療するために投与される薬剤には、気管支拡張薬、抗炎症剤、ロイコトリエン遮断薬、および抗Ｉｇｅ薬が挙げられる。特定の喘息薬には、ザフィルルカスト、フルニソリド、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、テルブタリン、フルチカゾン、フォルモテロール、ベクロメタゾン、サルメテロール、テオフィリン、およびゾペネックスが挙げられる。
【０２６６】
Ｋｅｓｓｌｅｒら（Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ（１９９６）９：７８７−７９４）は、体重過剰または肥満であることと、閉塞性睡眠時無呼吸との間の関連について考察している。睡眠時無呼吸を治療するために投与される薬剤には、モダフィニルおよびアンフェタミンが挙げられる。
【０２６７】
肝障害および状態、例えば、非アルコール性脂肪性肝疾患は、体重過剰または肥満であることと関連付けられてきた。Ｔｏｌｍａｎら（Ｔｈｅｒ  Ｃｌｉｎ  Ｒｉｓｋ  Ｍａｎａｇ（２００７）６：１１５３−１１６３）は、体重過剰または肥満であることと、非アルコール性脂肪性肝疾患との間の関連について考察している。非アルコール性脂肪性肝疾患を治療するために投与される薬剤には、酸化防止剤（例えば、ビタミンＥおよびＣ）、インスリン増感剤（メトホルミン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン、およびベタイン）、肝臓保護剤、および脂質低下薬が挙げられる。
【０２６８】
骨障害および状態、例えば、荷重関節の背部痛および変形性関節症は、体重過剰または肥満であることと関連付けられてきた。ｖａｎ  Ｓａａｓｅ（Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ（１９８８）１５（７）：１１５２−１１５８）は、体重過剰または肥満であることと、荷重関節の変形性関節症との間の関連について考察している。荷重関節の変形性関節症を治療するために投与される薬剤には、アセトアミノフェン、非ステロイド性抗炎症剤（例えば、イブプロフェン、エトドラク、オキサプロジン、ナプロキセン、ジクロフェナク、およびナブメトン）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、ステロイド、栄養補助剤（例えば、グルコサミンおよびコンドロイチン硫酸）、および人工滑液が挙げられる。
【０２６９】
代謝障害および状態、例えば、プラダー・ウィリー症候群および多嚢胞性卵巣症候群は、体重過剰または肥満であることと関連付けられてきた。Ｃａｓｓｉｄｙ（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９７）３４：９１７−９２３）は、体重過剰または肥満であることと、プラダー・ウィリー症候群との間の関連について考察している。プラダー・ウィリー症候群を治療するために投与される薬剤には、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）、ソマトロピン、および抗肥満薬（例えば、オルリスタット、シブトラミン、メタンフェタミン、イオナミン、フェンテルミン、ブプロピオン、ジエチルプロピオン、フェンジメトラジン、ベンズフェタミンおよびトパマックス）が挙げられる。
【０２７０】
Ｈｏｅｇｅｒ（Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ（２００１）２８（１）：８５−９７）は、体重過剰または肥満であることと、多嚢胞性卵巣症候群との間の関連について考察している。多嚢胞性卵巣症候群を治療するために投与される薬剤には、インスリン増感剤、合成エストロゲンとプロゲステロンの併用、スピロノラクトン、エフロルニチン、およびクロミフェンが挙げられる。繁殖障害および状態、例えば、性的機能不全、勃起不全、不妊症、分娩合併症、および胎児異常は、体重過剰または肥満であることと関連付けられてきた。Ｌａｒｓｅｎら（Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）（２００７）８：１１８９−１１９８）は、体重過剰または肥満であることと、性的機能不全との間の関連について考察している。Ｃｈｕｎｇら（Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ（１９９９）３６（ｌ）：６８−７０）は、体重過剰または肥満であることと、勃起不全との間の関連について考察している。勃起不全の治療に投与される薬剤には、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、タダラフィル、クエン酸シルデナフィル、およびバルデナフィル）、プロスタグランジンＥ類似体（例えば、アルプロスタジル）、アルカロイド（例えば、ヨヒンビン）、およびテストステロンが挙げられる。Ｐａｓｑｕａｌｉら（Ｈｕｍ  Ｒｅｐｒｏｄ（１９９７）１：８２−８７）は、体重過剰または肥満であることと、不妊症との間の関連について考察している。不妊症を治療するために投与される薬剤には、クロミフェン、クロミフェンクエン酸塩、ブロモクリプチン、ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）、ＧｎＲＨアゴニスト、ＧｎＲＨアンタゴニスト、タモキシフェン／ノルバデックス、ゴナドトロピン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、ヒト閉経期ゴナドトロピン（ＨｍＧ）、プロゲステロン、組換え卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ウロフォリトロピン、ヘパリン、フォリトロピンα、およびフォリトロピンβが挙げられる。
【０２７１】
Ｗｅｉｓｓら（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ（２００４）１９０（４）：１０９１−１０９７）は、体重過剰または肥満であることと、分娩合併症との間の関連について考察している。分娩合併症を治療するために投与される薬剤には、ブピバカイン塩酸塩、ジノプロストンＰＧＥ２、メペリジン塩酸塩、Ｆｅｒｒｏ−ｆｏｌｉｃ−５００／ｉｂｅｒｅｔ−ｆｏｌｉｃ−５００、メペリジン、メチルエルゴノビンマレイン酸塩、ロピバカイン塩酸塩、ナルブフィン塩酸塩、オキシモルホン塩酸塩、オキシトシン、ジノプロストン、リトドリン、スコポラミン臭化水素酸塩、スフェンタニルクエン酸塩、および分娩誘発剤が挙げられる。
【０２７２】
精神障害および状態、例えば、体重関連うつおよび不安症は、体重過剰または肥満であることと関連付けられてきた。Ｄｉｘｓｏｎら（Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ（２００３）１６３：２０５８−２０６５）は、体重過剰または肥満であることと、うつとの間の関連について考察している。うつを治療するために投与される薬剤には、セロトニン再取り込み阻害剤（例えば、フルオキセチン、エスシタロプラム、シタロプラム、パロキセチン、セルトラリン、およびベンラファキシン）；三環系抗うつ剤（例えば、アミトリプチリン、アモキサピン、クロミプラミン、デシプラミン、ドスレピン塩酸塩、ドキセピン、イミプラミン、イプリンドール、ロフェプラミン、ノルトリプチリン、オピプラモール、プロトリプチリン、およびトリミプラミン）；モノアミンオキシダーゼ阻害剤（例えば、イソカルボキサジド、モクロベミド、フェネルジン、トラニルシプロミン、セレギリン、ラサギリン、ニアラミド、イプロニアジド、イプロクロジド、トロキサトン、リネゾリド、ジエノリドカバピロンデスメトキシヤンゴニン、およびデキストロアンフェタミン）；覚醒剤（例えば、アンフェタミン、メタンフェタミン、メチルフェニデート、およびアレコリン）；抗精神病薬（例えば、ブチロフェノン、フェノチアジン、チオキサンテン、クロザピン、オランザピン、リスペリドン、クエチアピン、ジプラシドン、アミスルプリド、パリペリドン、シンビアックス、テトラベナジン、およびカンナビジオール）；および気分安定剤（例えば、炭酸リチウム、バルプロ酸、ジバルプロエクスナトリウム、バルプロ酸ナトリウム、ラモトリギン、カルバマゼピン、ガバペンチン、オクスカルバゼピン、およびトピラマート）が挙げられる。
【０２７３】
Ｓｉｍｏｎら（Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ（２００６）６３（７）：８２４−８３０）は、体重過剰または肥満であることと、不安症との間の関連について考察している。不安症を治療するために投与される薬剤には、セロトニン再取り込み阻害剤、気分安定剤、ベンゾジアゼピン（例えば、アルプラゾラム、クロナゼパム、ジアゼパム、およびロラゼパム）、三環系抗うつ剤、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、およびβ遮断薬が挙げられる。
【０２７４】
本発明の別の態様は、対象の減量を促進および維持する方法を提供し、該方法は、対象に、対象の減量をもたらすのに効果的な一定量の開示化合物を投与すること；および対象の減量を維持するための治療有効量の異なる抗肥満薬を投与することを含む。抗肥満薬には、セロトニンおよびノルアドレナリン作動性再取り込み阻害剤；ノルアドレナリン作動性再取り込み阻害剤；選択的セロトニン再取り込み阻害剤；および腸内リパーゼ阻害剤が挙げられる。特定の抗肥満薬には、リラグルチド、オルリスタット、シブトラミン、メタンフェタミン、イオナミン、フェンテルミン、ブプロピオン、ジエチルプロピオン、フェンジメトラジン、ベンズフェタミン、ブロモクリプチン、ロルカセリン、トピラマート、またはグレリンの作用を遮断すること、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴｌ）活性を阻害すること、ステアロイルＣｏ  Ａデサチュラーゼ１（ＳＣＤ１）活性を阻害すること、神経ペプチドＹ受容体１機能を阻害すること、神経ペプチドＹ受容体２または４機能を活性化すること、またはナトリウム−グルコース共輸送体１もしくは２の活性を阻害すること、による食物摂取量を調節する作用をする薬剤が挙げられる。これらの化合物は、当該技術分野において既知の投与計画および投与量で投与される。
【０２７５】
治療方法
本明細書で提供するデータは、本明細書で開示のペプチドの、脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低減する能力を示し、体重、血糖値、および／または体脂肪量を減らすための、このようなペプチドを必要としている哺乳動物における使用を支援するものである。本明細書で提示するデータはまた、血漿中でのこのようなペプチドの安定性を示し、哺乳動物に対する投与に好適する治療用ペプチドとしてのそれらの使用を支援する。したがって、本開示は、体重、血糖値、および体脂肪量に関連する疾患、例えば、肥満症、脂肪性肝疾患および糖尿病を含む代謝疾患の治療方法を提供する。
【０２７６】
特定の理論に束縛されるものではないが、ペプチドによる脂肪細胞の治療後の細胞培養培地中の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）は、脂質または脂肪酸レベルの細胞調節に関与する経路の調節を示す。培地中の脂肪酸レベルの減少は、限定されないが、シグナル伝達経路の阻害、細胞の脂質生合成の低下、脂肪分解の低下、または脂肪酸酸化の増加を含む、いくつかのプロセスから生じ得る。遊離脂肪酸の正味濃度に対する作用を有するペプチドは、代謝障害の治療に対し、潜在的に有用性がある。したがって、本開示は、治療を必要としている対象の脂肪酸代謝を調節する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、脂肪酸代謝を調節するための有効量でその対象に投与することを含む。例示的態様では、方法は、脂肪酸代謝を高めることを必要としている対象の脂肪酸代謝を高める方法である。本開示はまた、細胞の脂肪酸代謝を調節する方法を提供し、該方法は、その細胞と、脂肪酸代謝を調節するのに効果的な量の、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞とを接触させることを含む。例示的態様では、方法は、細胞の脂肪酸代謝を高める方法である。
【０２７７】
リポジストロフィーは、種々の身体領域からの脂肪組織（体脂肪）の選択的減少、および／または他の部位における過剰脂肪の蓄積を特徴とする障害の慣用名である。１つの部位、例えば、顔面からの局在型脂肪減少は、脂肪萎縮症と呼ばれる。脂肪減少の程度は、身体の一部の非常に小さい領域から、全身からの脂肪組織のほぼ全体的欠如までの範囲で変動する可能性がある。さらに、患者は、重篤な代謝合併症を有する場合もあり、または美容上の問題のみの場合もある。重篤な脂肪減少に関連するリポジストロフィーは、糖尿病、高レベルの血清トリグリセリドおよび脂肪肝（肝脂肪症）などのインスリン抵抗性に関連する代謝合併症の一因となり得る。リポジストロフィーは、先天性（例えば、家族性部分型リポジストロフィーまたはベラールディネリ・セイプ症候群）または後天性（例えば、様々な種類の疾病または薬物に関連する）のどちらかであり得る。後天性リポジストロフィーは、薬物、自己免疫機序により引き起こされるか、または特発性の場合もある。後天性リポジストロフィーには、高活性抗レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）により誘導され得るＨＩＶ感染患者のリポジストロフィー（ＬＤ−ＨＩＶ）、後天性全身性リポジストロフィー（ＡＧＬ）、後天性部分型リポジストロフィー（ＡＰＬ）および局在型リポジストロフィーが挙げられる。後天性リポジストロフィーは、直接遺伝学的基礎を有さない。いくつかの実施形態では、本発明は、リポジストロフィーを低減する、回復するまたは防止する方法を提供する。
【０２７８】
ペプチドは、異常な血中グルコースレベル、活性酸素種（ＲＯＳ）および／または遊離脂肪酸（ＦＦＡ）により顕在化するアンバランスな代謝状態に関連する状態の治療に有用である。好ましい代謝状態は、健康な対象と等価である（健康集団の平均レベルの範囲内の）血中グルコースレベル、ＲＯＳおよびＦＦＡを特徴とする、バランスのとれたエネルギー恒常性として定義される。したがって、本明細書で使用される場合、好ましくない代謝状態は、異常である、すなわち、健康な対照である対象のそれぞれのレベルと比較（例えば、医師または当業者により評価して）して、大きく変化している血中グルコースレベル、ＲＯＳおよび／またはＦＦＡを意味する。いくつかの実施形態では、用語の好ましくない代謝状態は、異常である、すなわち、健康な対照である対象のそれぞれのレベルと比較（例えば、医師または当業者により評価）して、大きく上昇している血中グルコースレベル、ＲＯＳおよび／またはＦＦＡを意味する。好ましくない代謝状態は、グルコース（炭水化物）および／または脂肪酸酸化経路を伴い得る異常な代謝に起因する場合がある。脂肪酸酸化経路における異常が関与する場合、好ましくない代謝状態は通常、健康な対照である対象に比べて、大きく上昇したＲＯＳ血中レベルおよび／または異常なＦＦＡ血中レベルにより顕在化する。これらの異常はまた、酸化低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の高血中レベルにより顕在化し得る。グルコース代謝の異常が関わる場合、血中グルコースレベルは通常、健康な対照である対象に比べて、大きく高められる。本明細書で使用される場合、前記上昇が異常な血液ＲＯＳおよび／またはＦＦＡ値を伴う場合、アンバランスの血糖管理のための閾値を超えない大きく高められた血糖値を有する患者は、好ましくない代謝状態を有すると定義される。アンバランスの代謝状態はまた、当技術分野において既知のように、エネルギー摂取ならびに種々のエネルギー消費および利用パラメーターを考慮に入れて、前記医師または当業者により評価され得る。例えば、限定されないが、細胞（例えば、血小板）ＡＴＰ産生および細胞酸化などの細胞レベルでのパラメーター、および呼吸商（ＲＱ）などの全身レベルでのパラメーターを評価して、対象の代謝状態を決定し得る。例えば、健康な患者と病気の患者との間でこのようなパラメーターの相対比率を比較することにより、当業者なら、健康な対照に比べて、対象の代謝状態を評価し得る。好ましくない代謝状態は、好適な治療法により適切に治療されていないまたはバランスされていない慢性代謝疾患および／または炎症性疾患に罹患している患者で認められ得る。
【０２７９】
したがって、本開示は、治療を必要としている対象の代謝疾患を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、代謝疾患を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【０２８０】
用語の「代謝疾患」または「代謝障害」は、グルコース（炭水化物）、脂肪酸および／またはタンパク質酸化経路が伴い得る、代謝異常、代謝のアンバランス、または準最適な代謝が起こる、一連の特定された障害を意味する。したがって、アンバランスの場合、これらの障害は通常、健康な対照である対象のそれぞれのレベルに比べて、本明細書に記載の異常な血中グルコースレベル、ＲＯＳおよび／またはＦＦＡを特徴とする、好ましくない代謝状態により顕在化する。このような障害には、限定されないが、糖尿病および栄養または内分泌アンバランスに関連する障害が挙げられる。
【０２８１】
好ましくない代謝状態はまた、慢性炎症性疾患の結果として起こり得、治療抵抗性でアンバランスな炎症プロセスに、健康な対照である対象のそれぞれのレベルに比べて、異常な血中グルコースレベル、ＲＯＳおよび／またはＦＦＡにより顕在化する、二次性代謝合併症が付随して起こる。このような障害の非限定的例は、敗血症および自己免疫疾患である。
【０２８２】
症候群Ｘ（または代謝症候群）は、腹部の脂肪蓄積に関連する一連の兆候および症状を意味する。この形態の脂肪分布は、中年の男性によくあり、ビール腹または太鼓腹としてよく見られる。症候群Ｘは、痛風、グルコース代謝の障害（糖尿病罹患性の上昇）、血圧上昇、および血中コレステロールレベルの上昇を含む、いくつかの障害を特徴とする。症候群Ｘの人は、心臓疾患のリスクが高い。症候群Ｘは、米国臨床内分泌学会により、血清または血漿中インスリン／グルコースレベル比率、脂質、尿酸レベル、血管生理、および凝固因子アンバランスにおける一群の代謝異常として定義されている。したがって、本明細書で使用される場合、用語の「症候群Ｘ」は、非インスリン依存性糖尿病、正常と見なされるレベルを超える血圧、正常と見なされるレベルを超えるインスリンレベル、脂質異常症、および肥満症、の内の少なくとも２つの確定診断を特徴とする状態を意味する。
【０２８３】
ペプチドは、次の代謝疾患に有用であり得る：
（ａ）高血糖、２型糖尿病、耐糖能異常、１型糖尿病、インスリン非依存性糖尿病、ＭＯＤＹ（若年発症成人型糖尿病）、妊娠糖尿病などの全ての型の糖尿病の予防および／または治療および／またはＨｂＡｌＣを下げるために；
（ｂ）２型糖尿病の進行などの糖尿病の疾患進行の遅延化または防止、インスリン依存型２型糖尿病に対する耐糖能異常（ＩＧＴ）の進行の遅延化、インスリン抵抗性の遅延化または予防、および／またはインスリン非依存型２型糖尿病のインスリン依存型２型糖尿病への進行の遅延化；
（ｃ）β−細胞アポトーシスの低減、β−細胞機能および／またはβ−細胞量の増大、および／またはβ−細胞に対するグルコース感受性の復元のために、などのβ−細胞機能の改善；
（ｄ）アルツハイマー病、パーキンソン病、および／または多発性硬化症などの、認知障害および／または神経変性障害の予防および／または治療；
（ｅ）食物摂取量の低減、体重減少、食欲抑制、満腹感の誘導による肥満症などの摂食障害の予防および／または治療；過食性障害、神経性過食症、および／または抗精神病薬またはステロイドの投与により誘導された肥満症の治療または予防；胃運動の低減；胃内容物排出の遅延化；身体可動性の増大；および／または変形性関節症および／または尿失禁などの肥満症に対する合併症の予防および／または治療；
（ｆ）血管障害などの糖尿病の合併症；末梢神経障害を含む神経障害；腎症；および／または網膜症の予防および／または治療；
（ｇ）脂質異常症の予防および／または治療などの脂質パラメーターの改善：総血清脂質の低下；ＨＤＬの増加；小型高密度ＬＤＬの低下；ＶＬＤＬの低下；トリグリセリドの低下；コレステロールの低下；ヒトのリポタンパク質（Ｌｐ（ａ））の血漿中濃度の低下；インビトロおよび／またはインビボでのアポリポタンパク質（ａｐｏ（ａ））の生成の抑制；
（ｈ）症候群Ｘ、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、冠状動脈性心疾患、再潅流傷害、脳卒中、低酸素、脳虚血、初期心臓または初期心臓血管疾患、左室肥大、冠動脈疾患、高血圧、本態性高血圧、高血圧性緊急症、心筋症、心不全、運動不耐性、急性および／または慢性心不全、不整脈、不整脈、失神、狭心症、心臓バイパスおよび／またはステント再閉塞、間欠性跛行（閉塞性動脈硬化症）、拡張障害、および／または収縮不全などの心臓血管疾患；および／または収縮期血圧の低下などの血圧の低下の予防および／または治療；
（ｉ）炎症性腸疾患、短腸症候群、またはクローン病または大腸炎；消化不良、および／または胃潰瘍などの胃腸疾患；および／または乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、および／または全身性エリテマトーデスなどの炎症の予防および／または治療；
（ｊ）重病の患者、重病ポリ腎症（ＣＩＰＮＰ）患者、および／または潜在的ＣＩＰＮＰ患者の治療などの重症疾患の予防および／または治療；重病またはＣＩＰＮＰの発症の予防；患者の全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）の予防、治療および／または治癒；患者が入院中に菌血症、敗血症、および／または敗血性ショックを罹患する可能性の阻止または低減、および／または急性疾患の集中治療室患者の血糖、インスリンバランスおよび、場合により、代謝の安定化；
（ｋ）多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）の予防および／または治療；
（ｌ）脳虚血、脳出血、および／または外傷性脳損傷などの脳疾患の予防および／または治療；
（ｍ）睡眠時無呼吸の予防および／または治療；
（ｎ）アルコール乱用および／または薬物乱用などの乱用の予防および／または治療；
（ｏ）限定されないが、脂肪性肝疾患（ＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む、脂肪肝状態の予防または治療；および／または
（ｐ）活性酸素種（ＲＯＳ）の細胞内産生の治療。
【０２８４】
さらなる態様では、有効量のペプチドを治療を必要としている患者に投与することによる、糖尿病および／または糖尿病関連合併症の治療方法が本明細書で提供される。好都合にも、本明細書で提供される方法による糖尿病および／または関連合併症を治療するために使用されるペプチドは、膵臓β細胞に対する抗アポトーシス性活性を有し、および／または膵臓β細胞の増殖を刺激し、その結果、ペプチドの投与により、インスリン産生β細胞の数および患者により産生されるインスリンの量が増大する。
【０２８５】
肝疾患
本開示はまた、治療を必要としている対象の肝疾患を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、肝疾患を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、疾患または医学的状態は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）である。ＮＡＦＬＤは、単純な脂肪肝（脂肪症）から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝硬変（肝臓の不可逆性進行瘢痕形成）にまで及ぶ広範囲にわたる肝疾患を意味する。ＮＡＦＬＤの全てのステージは、共通して、肝臓細胞（肝細胞）中に脂肪の蓄積（脂肪浸潤）を有する。単純な脂肪肝は、肝臓細胞中の特定のタイプの脂肪、トリグリセリドの異常蓄積であり、炎症または瘢痕形成は存在しない。ＮＡＳＨでは、脂肪蓄積は、種々の度合いの肝臓の炎症（肝炎）および瘢痕形成（繊維化）が伴う。炎症細胞は、肝臓細胞を破壊できる（肝細胞壊死）。用語の「脂肪性肝炎（ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）」および「脂肪壊死（ｓｔｅａｔｏｎｅｃｒｏｓｉｓ）」におけるｓｔｅａｔｏは、脂肪浸潤を意味し、ｈｅｐａｔｉｔｉｓは、肝臓中の炎症を意味し、ｎｅｃｒｏｓｉｓは、破壊された肝臓細胞を意味する。ＮＡＳＨは、最終的に肝臓の瘢痕形成（繊維化）につながり、その後、不可逆性進行瘢痕形成（肝硬変）に至る。ＮＡＳＨに起因する肝硬変は、ＮＡＦＬＤの範囲の、最後の、最も重篤なステージである。（Ｍｅｎｄｌｅｒ，Ｍｉｃｈｅｌ，“Ｆａｔｔｙ  Ｌｉｖｅｒ：Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｆａｔｔｙ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＡＦＬＤ）ａｎｄ  Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ（ＮＡＳＨ），”  ｅｄ．Ｓｃｈｏｅｎｆｉｅｌｄ，Ｌｅｓｌｉｅ  Ｊ．，ＭｅｄｉｃｉｎｅＮｅｔ．ｃｏｍ，Ａｕｇｕｓｔ  ２９，２００５）。
【０２８７】
アルコール性肝疾患、またはアルコール誘導肝疾患は、アルコールの過度の摂取に関連するまたはそれが原因の３種の病理学的に別々の肝疾患：脂肪肝（脂肪症）、慢性または急性肝炎、および肝硬変を包含する。アルコール性肝炎は、臨床検査値異常変動は疾患を示すのみの軽度の肝炎から、黄疸（ビリルビン貯留に起因する黄色皮膚）、肝性脳症（肝不全に起因する神経学的機能不全）、腹水（腹部の体液蓄積）、出血性食道静脈瘤（食道の静脈瘤）、異常血液凝固および昏睡などの合併症を伴う重篤な肝機能障害にまで及ぶ。組織学的には、アルコール性肝炎は、肝細胞の気球状変性を有する特徴的外見、好中球および時にはマロリー小体（細胞の中間径フィラメントタンパク質の異常凝集）を伴う炎症がある。肝硬変は、繊維化で合体した肝臓中の広範囲にわたる結節により解剖学的に特徴付けられる。（Ｗｏｒｍａｎ，Ｈｏｗａｒｄ  Ｊ．，“Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｗｅｂｓｉｔｅ）。
【０２８８】
いずれか特定の理論に束縛されるものではないが、本明細書に記載のペプチドおよびペプチド類似体は、アルコール性肝疾患、ＮＡＦＬＤ、または、例えば、脂肪症、脂肪性肝炎、肝炎、肝臓炎症、ＮＡＳＨ、肝硬変、またはその合併症を含む、これらのいずれかのステージの治療に有用である。したがって、本開示は、対象のアルコール性肝疾患、ＮＡＦＬＤ、またはこれらのいずれかのステージを予防または治療する方法を提供し、該方法は、アルコール性肝疾患、ＮＡＦＬＤ、またはこれらのそのステージを予防または治療するための有効量で本明細書に記載のペプチドまたはペプチド類似体を対象に投与することを含む。このような治療方法には、次記：肝臓脂肪含量、肝硬変の発生率または進行、肝細胞癌の発生率、炎症の徴候、例えば、異常肝酵素（例えば、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼＡＳＴおよび／またはアラニンアミノトランスフェラーゼＡＬＴ、またはＬＤＨ）レベル、高い血清フェリチン、高い血清ビリルビン、および／または繊維化の徴候、例えば、高いＴＧＦβレベルの内の１つ、２つ、３つまたはそれ超を低減させることを含む。例示的実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体は、単純な脂肪肝（脂肪症）よりさらに進行し、炎症または肝炎の徴候を示す患者の治療に使用される。このような方法は、例えば、ＡＳＴおよび／またはＡＬＴレベルの低下をもたらし得る。
【０２８９】
癌治療
いくつかの実施形態では、ペプチドは抗癌活性を有する。例えば、いくつかの態様では、ペプチドは、限定されないが、前立腺癌細胞および／または乳癌細胞などの癌細胞に対してアポトーシス促進活性を有する。さらなる態様では、ペプチドは、限定されないが、前立腺癌細胞および／または乳癌細胞などの癌細胞に対して抗増殖活性を有する。
【０２９０】
本開示はまた、治療を必要としている対象の癌を治療する方法を提供し、該方法は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体、コンジュゲート、核酸、組換え発現ベクター、または宿主細胞を、癌を治療するための有効量でその対象に投与することを含む。本開示はまた、癌を治療する方法を含み、該方法は、有効量のペプチドまたはそのバリアントを、治療を必要としている対象に投与することを含む。本明細書で提供されるペプチドは、種々の抗癌作用を発揮し、広範囲の癌およびその他の増殖性障害の治療に使用できる。本明細書で提供されるペプチドは、限定されないが、癌細胞のアポトーシスの誘導、腫瘍血管新生の抑制、腫瘍転移の抑制、細胞周期の調節、癌細胞増殖の抑制、癌細胞分化の促進、活性酸素種の産生の抑制および／またはそれに対する保護、およびストレス耐性の強化などの種々の抗癌活性を有し得る。「癌」は通常、無制御、異常細胞成長および増殖を特徴とする疾患を意味する。「腫瘍」または「新生物」は、無制御の過剰進行性細胞分裂から生じる異常な組織塊である。本明細書に記載の方法は、限定されないが、癌腫、肉腫、軟組織肉腫、リンパ腫、血液癌、白血病、生殖細胞腫瘍、および固形腫瘍を含まない癌（例えば、造血器癌）を含む任意の型の癌および増殖性障害の治療に有用である。種々の態様では、ペプチドは、限定されないが、肺、乳房、上皮、大腸、直腸、精巣、膀胱、甲状腺、胆嚢、胆管、胆道系、前立腺、結腸、胃、食道、膵臓、肝臓、腎臓、子宮、子宮頸部、卵巣、および脳組織を含む任意の組織由来のおよび／または任意の組織を生じさせる癌および／または腫瘍の治療に使用できる。ペプチドで治療可能な特定の癌の非限定的例には、限定されないが、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、副腎皮質癌、エイズ関連リンパ腫、肛門癌、星状細胞腫、脳基底細胞癌、胆管癌、肝外膀胱癌、膀胱癌、骨癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、視経路および視床下部膠腫、乳癌、雄気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、未知の原発性中枢神経系リンパ腫の消化管癌腫、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、菌状息肉腫およびセザリー症候群、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、生殖細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、胆嚢癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ（ｓｔｏｍａｃｈ）ｃａｎｃｅｒ）、消化管カルチノイド腫瘍、卵巣妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠腫、視床下部の皮膚癌（黒色腫）、皮膚癌（非黒色腫）、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部肉腫、扁平上皮細胞癌、原発不明の頸部扁平上皮癌、転移性胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｉｃ））癌、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｉｃ））癌、Ｔ細胞性リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺癌、腎盂の移行細胞癌、尿管絨毛性腫瘍、移行細胞癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、腟癌、視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウイルムス腫瘍、毛様細胞性白血病、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、膵島細胞癌腫（膵臓内分泌腺）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、腎臓癌、喉頭癌、ヘアリー細胞口唇癌および口腔癌、肝臓癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨／骨肉腫のワルデンストレーム悪性線維性組織球腫、髄芽腫、眼内（目）メルケル細胞癌、中皮腫、悪性中皮腫、原発不明転移性頸部扁平上皮癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、多発性骨髄増殖性疾患、慢性鼻腔および副鼻腔癌、上咽頭癌、胸膜肺芽腫、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、褐色細胞腫、松果体芽腫、およびテント上原始神経外胚葉腫瘍が挙げられる。いくつかの好ましい態様では、癌は乳癌である。いくつかの好ましい態様では、癌は前立腺癌である。
【０２９１】
いくつかの態様では、本明細書で提供される方法によるペプチドの投与は、確定した癌治療の効力を高める。さらなる態様では、本明細書で提供される方法によるペプチドの投与は、照射または化学療法などの別の癌治療の抗癌活性を高める。いくつかの態様では、癌細胞および／または腫瘍細胞の細胞死を誘導する方法が本明細書で提供され、該方法は、癌細胞死および／または腫瘍細胞死を誘導するのに十分な量で、本明細書に記載のペプチドを投与することを含む。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、ペプチドは１種または複数の細胞防御活性または細胞保護活性を有する。例えば、いくつかの態様では、ペプチドは、細胞損傷を防ぐ、細胞の生存を改善する、および／または、限定されないが、ヒートショック、血清回収、化学療法、および／または照射などの環境ストレスに対する耐性を高めることができる。
【０２９３】
いくつかの態様では、本明細書で提供される方法によるペプチドの投与は、確定した癌治療の有害作用を減らす。
【０２９４】
さらに好ましい医用用途には、変性疾患、特に神経変性障害、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、運動失調、例えば、脊髄小脳失調症、ケネディ病、筋強直性ジストロフィー、レヴィー小体認知症、多系統萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、プリオン関連疾患、例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病、多発性硬化症、毛細血管拡張症、バッテン病、大脳皮質基底核変性症、大脳皮質基底核変性症、脊髄の亜急性連合変性症、脊髄癆、テイ・サックス病、毒性脳症、乳児レフスム病、レフスム病、神経有棘赤血球症、ニーマン・ピック病、ライム病、マシャド・ジョセフ病、サンドホフ病、シャイ・ドレーガー症候群、ハリネズミふらつき症候群、プロテオパチー、脳β−アミロイド血管障害、緑内障の網膜神経節細胞変性、シヌクレイン病、タウオパチー、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、認知症、カダシル症候群、アミロイド症を伴う遺伝性脳出血、アレキサンダー病、セイピノパシー、家族性アミロイド神経障害、老人性全身性アミロイドーシス、セルピノパシー、ＡＬ（軽鎖）アミロイドーシス（原発性全身性アミロイドーシス）、ＡＨ（重鎖）アミロイドーシス、ＡＡ（二次）アミロイドーシス、大動脈内側アミロイドーシス、ＡｐｏＡＩアミロイドーシス、ＡｐｏＡＩＩアミロイド症、ＡｐｏＡＩＶアミロイドーシス、フィンランドタイプの家族性アミロイドーシス（ＦＡＦ）、リゾチームアミロイドーシス、フィブリノーゲンアミロイドーシス、透析アミロイドーシス、封入体筋炎／筋疾患、白内障、ロドプシン変異を有する網膜色素変性症、甲状腺髄様癌、心房性アミロイドーシス、下垂体プロラクチノーマ、遺伝性格子状角膜ジストロフィー、皮膚苔癬アミロイドーシス、マロリー小体、角膜ラクトフェリンアミロイドーシス、肺胞タンパク症、歯原性（ピンドボルグ）腫瘍アミロイド、嚢胞性繊維症、鎌状赤血球症または重病筋疾患（ＣＩＭ）などの治療または予防が挙げられる。特定の理論に制約されるものではないが、本明細書で提供されるペプチドは、神経細胞および／またはその他の細胞型の神経変性損傷を修復および／または予防することができる１種または複数の活性を有すると考えられている。本明細書で提供される方法により治療可能な「神経変性疾患」は、例えば、神経細胞死（アポトーシス）に起因するニューロンの変性および／または減少をもたらす進行性疾患である。神経変性疾患の例には、限定されないが、脳変性疾患（例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病、進行性核上麻痺、およびハンチントン病（ＨＤ））、および脊髄変性疾患／運動ニューロン変性疾患（例えば、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、（ＳＭＡ：ウェルドニッヒ・ホフマン病またはクーゲルベルグウェランダー病）、脊髄小脳失調症、球脊髄性筋萎縮症（ＢＳＭＡ：ケネディー・オルター・スン症候群））が挙げられる。「運動ニューロン変性疾患」は、身体の運動を制御する上位および下位運動ニューロンの進行性逆方向障害を特徴とする神経変性疾患である。さらなる態様では、ペプチドおよびその組成物はまた、筋萎縮、筋力低下、球麻痺（顔面、咽頭、および舌状、舌の筋萎縮または筋力低下、およびそれに起因する失語症また���嚥下障害）、筋線維束性攣縮、および呼吸器疾患などの運動ニューロン変性疾患から生じた状態を回復させるのに効果的である。
【０２９５】
さらなる使用には、ミトコンドリア機能障害に関連する疾患または状態の予防および治療が挙げられる。代謝プロセスの中心であるミトコンドリアは、エネルギー産生、プログラム細胞死、および活性酸素種（ＲＯＳ）生成に関与する。従来、ミトコンドリアは、エネルギー産生および細胞死を調節する膨大な量の細胞シグナルの受け取りおよび処理を行う「最後の役割」のオルガネラと見なされてきた。ペプチドおよびペプチド類似体およびその医薬製剤を用いて、ミトコンドリアの機能障害に関連する種々の加齢随伴病を治療できる。また、それらは、ミトコンドリア呼吸、グルコース輸送、グルコース利用、解糖、インスリン調節および細胞増殖／生存などの代謝プロセスに影響を与えることが、インビトロおよびインビボによる種々の方法において示されてきた。ミトコンドリア機能障害は、限定されないが、代謝障害、神経変性疾患、慢性炎症性疾患、および加齢に伴う病気に関連する。いくつかのミトコンドリア疾患は、ミトコンドリアゲノムの変異または欠失に起因する。ミトコンドリアは、それらの宿主細胞より速い代謝回転率で分裂および増殖し、それらの複製は、核ゲノムの制御下にある。細胞中の閾比率のミトコンドリアが欠陥である場合に、組織内の閾比率のこのような細胞が欠陥ミトコンドリアを有すると、組織または臓器不全の症状が生じる可能性がある。事実上、いずれの組織も影響を受ける可能性があり、異なる組織が関与する程度に応じて、多種多様の症状が存在し得る。遺伝的欠損ミトコンドリアを含む先天性の障害に加えて、後天性ミトコンドリア機能障害も、疾患、特に加齢に関連するパーキンソン病、アルツハイマー病およびハンチントン病などの神経変性障害の一因となる。ミトコンドリアのＤＮＡ中の体細胞変異の発生率は、年齢と共に指数関数的に上昇し、高齢者では呼吸鎖活性の減少が広く認められる。ミトコンドリア機能障害はまた、発作または虚血に関連するものなどの興奮毒性のニューロン傷害にも結びつけられている。ミトコンドリア機能障害に関連するその他の障害には、慢性炎症性疾患および代謝障害が挙げられる。
【０２９６】
細胞保護的であるペプチドは、培養中に細胞の生存率を高める潜在的有用性を有する。ペプチドは、タンパク質、抗体などを含む生物学的製品の製造に有用である。本開示は、一般に、ＣＨＯ細胞培養、または大腸菌細胞培養などの哺乳動物細胞培養を含む、細胞培養の１つまたは複数の特性を調節するためのペプチドおよびプロセスに関する。一実施形態では、組換えタンパク質を発現する哺乳動物細胞培養の比生産性を高める方法を提供し、該方法は、培地中で哺乳動物細胞培養を確立すること、細胞培養液を、ペプチドを含む培地と接触させることにより細胞増殖生存率を高めること、および培養液をペプチドを含む培地と接触させることにより細胞培養液を維持すること、を含む。
【０２９７】
キット
本開示のペプチドまたはペプチド類似体は、キットの一部として一実施形態により提供できる。したがって、いくつかの実施形態では、ペプチドまたはペプチド類似体を、それを必要としている患者に投与するためのキットが提供され、キットは本明細書に記載のペプチドを含む。
【０２９８】
一実施形態では、キットは、組成物を患者に投与する機器、例えば、シリンジニードル、ペン型デバイス、噴射式注射器または別の無針注射器と共に提供される。代わりにまたは追加して、キットには、１個または複数の容器、例えば、バイアル、チューブ、ボトル、単一室または多室プレフィルシリンジ、カートリッジ、注入ポンプ（外部または埋め込み型）、噴射式注射器、プレフィルペン型デバイスなどを含むことができ、場合により、凍結乾燥型または水溶液中のペプチドを含む。キットは、いくつかの実施形態では、使用説明書を含む。一実施形態では、キットの機器は、エアロゾル分注装置であり、この場合、組成物はエアロゾル装置内にあらかじめ収容されている。別の実施形態では、キットは、シリンジおよびニードルを含み、一実施形態では、無菌組成物はシリンジ中に収容されている。
【０２９９】
次の実施例は、本発明を例示するためにのみで提供されており、本発明の範囲を限定するものでは全くない。
【０３００】
実施例
次の実施例では、試験ペプチドは、表１（補足資料参照）およびこれと共に提出した配列表に記載のものに対応する、特有の配列番号で参照される。
【０３０１】
実施例１
この実施例は、本開示のペプチドまたはペプチド類似体の合成の例示的方法を示す。
ペプチドは、特に指示がない限り、ｔ−ＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学またはその他の十分に確立されている技術（例えば、Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．，１９８４；Ｅ．Ａｔｈｅｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｒ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ−ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９，Ｆｌｏｒｅｎｃｉｏ  Ｚａｒａｇｏｚａ  Ｄｏｒｗａｌｄ，”Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｎ  ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ”，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇ  ＧｍｂＨ，２０００、および”Ｆｍｏｃ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｗ．Ｃ．Ｃｈａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｗｈｉｔｅ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００を参照されたい）を用いて、以降に記載のものと類似の方法により、好適な樹脂に基づく固相合成により調製される。
【０３０２】
固相合成は、Ｎ末端保護アミノ酸をそのカルボキシ末端で、切断可能リンカーを有する不活性の固体支持体に結合させることにより開始される。この固体支持体は、最初のアミノ酸の結合を可能とする任意のポリマー、例えば、Ｐａｍ樹脂、トリチル樹脂、クロロトリチル樹脂、Ｗａｎｇ樹脂またはＲｉｎｋ樹脂であってよく、カルボキシ基（またはＲｉｎｋ樹脂の場合はカルボキサミド）の樹脂との結合は、酸感受性（Ｆｍｏｃ戦略を用いる場合）である。ポリマー支持体は、ペプチド合成中にα−アミノ基を脱保護するために使用される条件下で安定である。第１のアミノ酸が固体支持体に結合された後で、このアミノ酸のα−アミノ保護基は除去される。残りの保護アミノ酸はその後、適切なアミドカップリング剤、例えば、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウム）、ＨＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３，−テトラメチル−ウロニウム）、ＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンズトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウム）またはＤＩＣ（Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド）／ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、を用いて、ペプチド配列により表される順に、順次カップリングされる。この場合、ＢＯＰ、ＨＢＴＵおよびＨＡＴＵは、三級アミン塩基と共に用いられる。あるいは、遊離したＮ末端は、アミノ酸以外の基、例えば、カルボン酸などを用いて官能化できる。通常、アミノ酸の反応性側鎖基は、好適なブロック基で保護される。これらの保護基は目的のペプチドが組み上げられた後で取り外される。それらは、目的の生成物の樹脂からの切断と同時に同一条件下で取り外される。保護基および保護基を導入する手順は、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｄ  ｅｄ．，Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：１９９９）で見つけることができる。いくつかの事例では、ほかの側鎖保護基がそのまま残されている間に選択的に取り外し得る側鎖保護基を有するのが望ましいことがある。この場合、遊離した官能基は、選択的に官能化できる。例えば、リシンは、ｉｖＤｄｅ保護基で保護し得（Ｓ．Ｒ．Ｃｈｈａｂｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３９，（１９９８），１６０３）、これは、非常に求核性の塩基、例えば、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中４％のヒドラジンに対し不安定である。したがって、Ｎ末端アミノ基および全ての側鎖官能基が酸に不安定な保護基で保護される場合、ｉｖＤｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−メチルブチル）基は、ＤＭＦ中の４％ヒドラジンを用いて選択的に除去でき、対応する遊離アミノ基は、その後、例えば、アシル化により、さらに修飾できる。あるいは、リシンを、保護アミノ酸にカップリングでき、このアミノ酸のアミノ基は、その後、脱保護して、別の遊離アミノ基が得られ、これは、アシル化またはさらにアミノ酸に結合させることができる。最終的に、ペプチドは樹脂から切断される。これは、ＨＦまたはＫｉｎ��の反応混液を用いて実現できる（Ｄ．Ｓ．Ｋｉｎｇ，Ｃ．Ｇ．Ｆｉｅｌｄｓ，Ｇ．Ｂ．Ｆｉｅｌｄｓ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３６，１９９０，２５５−２６６）。原材料はその後、必要に応じ、クロマトグラフィー、例えば、分取ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製できる。
【０３０３】
非天然アミノ酸および／または共有結合Ｎ末端モノまたはジペプチド模倣体を含む、これらのペプチド、類似体または誘導体は、実験の部で記載のように作製し得、または、例えば、Ｈｏｄｇｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ：”Ｔｈｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｎｏｎ−ｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ”、およびＣｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，ｖｏｌ．３３，ｎｏ．７（２００４），ｐ．４２２−４３０を参照されたい。
【０３０４】
ペプチドは、下記で言及するペプチド合成に従って調製され、表１に示した配列は、特に指示がない限り、下記で言及する合成と同様に調製できる。
【０３０５】
ペプチド合成の１つの方法は、Ｌｉｂｅｒｔｙペプチドシンセサイザー（ＣＥＭ  Ｃｏｒｐ．，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）によるマイクロ波ベースのＦｍｏｃ化学によるものである。樹脂は、Ｔｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ  ＲＡＭで、使用量は、約０．２５ｍｍｏｌ／ｇ、またはＰＡＬ−ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘで、使用量は約０．４３ｍｍｏｌ／ｇ、またはＰＡＬ  ＡＭ  ｍａｔｒｉｘで、使用量は、０．５〜０．７５ｍｍｏｌ／ｇである。カップリング化学は、０．３Ｍおよび６〜８倍のモル過剰のアミノ酸溶液を用いた、ＮＭＰまたはＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＡｔまたはＤＩＣ／Ｏｘｙｍａである。カップリング条件は、最大７０℃で５分である。脱保護は、最大７０℃で、ＮＭＰ中の１０％ピペリジンを用いる。使用した保護アミノ酸は、標準的Ｆｍｏｃアミノ酸である（例えば、ＡｎａｓｐｅｃまたはＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍまたはＰｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した）。
【０３０６】
ペプチド合成の別の方法は、Ｐｒｅｌｕｄｅペプチドシンセサイザー（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ａｒｉｚｏｎａ）によるＦｍｏｃ化学によるものである。樹脂は、Ｔｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ  ＲＡＭで、使用量は、約０．２５ｍｍｏｌ／ｇ、またはＰＡＬ−ＣｈｅｍＭａｔｒｉｘで、使用量は約０．４３ｍｍｏｌ／ｇ、またはＰＡＬ  ＡＭで、使用量は、０．５〜０．７５ｍｍｏｌ／ｇである。カップリング化学は、０．３Ｍおよび６〜８倍のモル過剰のアミノ酸溶液を用いた、ＮＭＰまたはＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＡｔまたはＤＩＣ／Ｏｘｙｍａである。カップリング条件は、室温で１または２時間の単一または二重カップリングである。脱保護は、ＮＭＰ中の２０％ピペリジンを用いる。使用した保護アミノ酸は、標準的Ｆｍｏｃアミノ酸である（例えば、ＡｎａｓｐｅｃまたはＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍまたはＰｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した）。粗製ペプチドを、５ｕｍまたは７ｕｍ  Ｃ−１８シリカを充填した２０ｍｍｘ２５０ｍｍカラムを用いたセミ分取ＨＰＬＣなどにより精製する。ペプチド溶液をＨＰＬＣカラムに圧送し、沈殿したペプチドを５ｍｌの５０％酢酸Ｈ２Ｏに溶解し、Ｈ２Ｏで２０ｍｌに希釈し、カラムに注入した後、０．１％ＴＦＡ中４０〜６０％のＣＨ３ＣＮの勾配で、１０ｍｌ／分の流速により４０℃で５０分間溶出した。画分を含むペプチドを収集した。水で溶出液を希釈後、精製ペプチドを凍結乾燥した。
【０３０７】
特に指示がない限り、本明細書に記載のＣ末端アミドを有する全てのペプチドを、下記と類似の方法により調製する。ＭＢＨＡ樹脂（ペプチド合成中、４−メチルベンズヒドリルアミンポリスチレン樹脂を用いた。ＭＢＨＡ樹脂、１００〜１８０メッシュ、１％ＤＶＢ架橋ポリスチレン；使用量０．７〜１．０ｍｍｏｌ／ｇ）、Ｂｏｃ保護およびＦｍｏｃ保護アミノ酸は、Ｍｉｄｗｅｓｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈから購入できる。Ｂｏｃ保護アミノ酸を用いた固相ペプチド合成をＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  ４３０Ａペプチドシンセサイザーで実施した。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸合成は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｏｄｅｌ  ４３３ペプチドシンセサイザーを用いて実施した。
【０３０８】
ペプチドの合成を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  Ｍｏｄｅｌ  ４３０Ａペプチドシンセサイザーで実施した。合成ペプチドは、２ｍｍｏｌのＢｏｃ保護アミノ酸を含むカートリッジへのアミノ酸の逐次付加により製造される。具体的には、合成は、Ｂｏｃ  ＤＥＰＢＴ活性化単一カップリングを用いて実施される。カップリングステップの最後で、ペプチジル樹脂をＴＦＡで処理して、Ｎ末端Ｂｏｃ保護基を取り外す。これをＤＭＦで繰り返し洗浄し、この反復サイクルを目的の数のカップリングステップの間繰り返す。構築後、側鎖保護、Ｆｍｏｃを２０％ピペリジン処理により取り外し、ＤＩＣを使ってアシル化を行う。全体合成の終わりに、ペプチジル樹脂をＤＣＭを用いて乾燥し、無水ＨＦを用いてペプチドを樹脂から切断する。ペプチジル樹脂を無水ＨＦで処理し、これにより、典型的には、約３５０ｍｇ（約５０％収率）の粗製脱保護ペプチドを得た。具体的には、ペプチジル樹脂（３０ｍｇ〜２００ｍｇ）を切断用のフッ化水素（ＨＦ）反応容器中に置く。カルボニウムイオン除去剤として、５００μＬのｐ−クレゾールをこの容器に加えた。容器をＨＦシステムに取り付け、メタノール／ドライアイス混合物中に浸す。容器を真空ポンプで排気し、１０ｍｌのＨＦを蒸留して反応容器中に滴加する。このペプチジル樹脂とＨＦの反応混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、真空にして、ＨＦを素早く排出する（１０〜１５分）。容器を注意深く取り出し、約３５ｍｌのエーテルで満たし、ペプチドを沈殿させて、ｐ−クレゾールおよびＨＦ処理から生じた小分子有機保護基を抽出する。この混合物をテフロンフィルターで濾過し、全ての過剰クレゾールを除去するために２回繰り返す。この濾液を破棄する。沈殿したペプチドを約２０ｍｌの１０％酢酸（水溶液）に溶解する。この目的のペプチドを含む濾液を収集し凍結乾燥する。
【０３０９】
実施例２
この実施例は、例示的ペプチドの、培養したマウス脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルに対する効果を実証する。
マウス３Ｔ３−Ｌ１細胞を１，０００〜２０，０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレート、４８ウェルプレート、または２４ウェルプレートの前脂肪細胞培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に播種し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃で集密度まで増殖させた。集密度到達の２日後、細胞を、脂肪細胞分化培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に入れ、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃でさらに３日間培養した。その後、培地を、脂肪細胞維持培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に置き換え、１日おきに部分的な培地置換を行いながら、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、細胞を３７℃でさらに９〜１４日間維持した。分化の１２〜１７日後、試験ペプチドを、２５μＭの最終濃度で加え、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃の脂肪細胞維持培地中で１８〜２０時間インキュベートした。１８〜２０時間後、培地を試験ペプチドを含む新しい脂肪細胞維持培地と交換し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした。１時間後、培地を、イソプロテレノール（１ｎＭ）および試験ペプチドを含むアッセイバッファー（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に交換した（未処理対照以外の全ての試料を加えた）。細胞を５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃でさらに３時間インキュベートした。製造業者の説明書に従い、プレートリーダー（５４０ｎｍ）を用いて、培地中の遊離脂肪酸濃度を遊離脂肪酸アッセイキット（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）により決定した。
【０３１０】
吸光度値を未処理バックグラウンドに対して補正し、イソプロテレノール処理細胞に対する値として示した。イソプロテレノール（１ｎＭ）のみによる処理を、遊離脂肪酸レベル刺激対照として使用した。イソプロテレノール対照の相対標準偏差は１０％未満であった。インスリンを、減少する遊離脂肪酸レベルの極めて強力なポジティブコントロールとし使用した。インスリン（１００ｎＭ）処理の遊離脂肪酸レベルは、５％未満のイソプロテレノール対照値であった。結果を表４に示す。
【０３１１】
【表４−１】
2020501514.tif 000013
【０３１２】
【表４−２】
2020501514.tif 000014
【０３１３】
【表４−３】
2020501514.tif 000015
【０３１４】
【表４−４】
2020501514.tif 000016
【０３１５】
実施例３
この実施例は、例示的ペプチドの、培養したマウス脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルに対する効果を実証する。
マウス３Ｔ３−Ｌ１細胞を１，０００〜２０，０００細胞／ウェルで、９６ウェルプレート、４８ウェルプレート、または２４ウェルプレートの前脂肪細胞培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に播種し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃で集密度まで増殖させた。集密度到達の２日後、細胞を、脂肪細胞分化培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に入れ、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃でさらに３日間培養した。その後、培地を、脂肪細胞維持培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に置き換え、１日おきに部分的な培地置換を行いながら、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、細胞を３７℃でさらに９〜１４日間維持した。分化の１２〜１７日後、試験ペプチドを、２５μＭの最終濃度で加え、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃の脂肪細胞維持培地中で１８〜２０時間インキュベートした。１８〜２０時間後、培地を試験ペプチドを含む新しい脂肪細胞維持培地と交換し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした。１時間後、培地を、フォルスコリン（１μＭ）および試験ペプチドを含むアッセイバッファー（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に交換した（未処理対照以外の全ての試料を加えた）。細胞を５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃でさらに３時間インキュベートした。製造業者の説明書に従い、プレートリーダー（５４０ｎｍ）を使って、培地中の遊離脂肪酸濃度を遊離脂肪酸アッセイキット（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）により決定した。吸光度値を未処理バックグラウンドに対して補正し、フォルスコリン処理細胞に対する値として示した。フォルスコリン（１μＭ）のみによる処理を、遊離脂肪酸レベル刺激対照として使用した。フォルスコリン対照の相対標準偏差は１０％未満であった。インスリンを、減少する遊離脂肪酸レベルの極めて強力なポジティブコントロールとし使用した。インスリン（１００ｎＭ）処理の遊離脂肪酸レベルは、９％未満のフォルスコリン対照値であった。結果を表５に示す。
【０３１６】
【表５】
2020501514.tif 000017
【０３１７】
実施例４
この実施例は、例示的ペプチドの、培養したヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルに対する効果を実証する。ヒト初代脂肪細胞を５，０００〜１００，０００細胞／ウェルで、９６ウェルプレート、４８ウェルプレート、または２４ウェルプレートの前脂肪細胞培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に播種し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃で集密度まで増殖させた。集密度到達の２日後、細胞を、脂肪細胞分化培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に入れ、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃でさらに３日間培養した。その後、培地を、脂肪細胞維持培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に置き換え、１日おきに部分的な培地置換を行いながら、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、細胞を３７℃でさらに１１〜２１日間維持した。分化の１４〜２４日後、試験ペプチドを２５μＭの最終濃度で加え、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃の脂肪細胞維持培地中で１８〜２０時間インキュベートした。１８〜２０時間後、培地を試験ペプチドを含む新しい脂肪細胞維持培地と交換し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした。１時間後、培地を、イソプロテレノール（１ｎＭ）および試験ペプチドを含むアッセイバッファー（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に交換した（未処理対照以外の全ての試料を加えた）。細胞を５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃でさらに３時間インキュベートした。製造業者の説明書に従い、プレートリーダー（５４０ｎｍ）を使って、培地中の遊離脂肪酸濃度を遊離脂肪酸アッセイキット（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）により決定した。吸光度値を未処理バックグラウンドに対して補正し、イソプロテレノール処理細胞に対する値として示した。イソプロテレノール（１ｎＭ）のみによる処理を、遊離脂肪酸レベル刺激対照として使用した。イソプロテレノール対照の相対標準偏差は１４％未満であった。インスリンを、減少する遊離脂肪酸レベルの極めて強力なポジティブコントロールとし使用した。インスリン（１００ｎＭ）処理の遊離脂肪酸レベルは、５％未満のイソプロテレノール対照値であった。その結果を表６に示す。
【０３１８】
【表６】
2020501514.tif 000018
【０３１９】
実施例５
この実施例は、例示的ペプチドの、培養したヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルに対する効果を実証する。ヒト初代脂肪細胞を５，０００〜１００，０００細胞／ウェルで、９６ウェルプレート、４８ウェルプレート、または２４ウェルプレートの前脂肪細胞培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に播種し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃で集密度まで増殖させた。集密度到達の２日後、細胞を、脂肪細胞分化培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に入れ、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃でさらに３日間培養した。その後、培地を、脂肪細胞維持培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に置き換え、１日おきに部分的な培地置換を行いながら、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、細胞を３７℃でさらに１１〜２１日間維持した。分化の１４〜２４日後、試験ペプチドを２５μＭの最終濃度で加え、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃の脂肪細胞維持培地中で１８〜２０時間インキュベートした。１８〜２０時間後、培地を試験ペプチドを含む新しい脂肪細胞維持培地と交換し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした。１時間後、培地を、フォルスコリン（１μＭ）および試験ペプチドを含むアッセイバッファー（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に交換した（未処理対照以外の全ての試料を加えた）。細胞を５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃でさらに３時間インキュベートした。製造業者の説明書に従い、プレートリーダー（５４０ｎｍ）を使って、培地中の遊離脂肪酸濃度を遊離脂肪酸アッセイキット（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）により決定した。吸光度値を未処理バックグラウンドに対して補正し、フォルスコリン処理細胞に対する値として示した。フォルスコリン（１μＭ）のみによる処理を、遊離脂肪酸レベル刺激対照として使用した。フォルスコリン対照の相対標準偏差は２０％未満であった。インスリンを、減少する遊離脂肪酸レベルの極めて強力なポジティブコントロールとし使用した。インスリン（１００ｎＭ）処理の遊離脂肪酸レベルは、８％未満のフォルスコリン対照値であった。結果を表７に示す。
【０３２０】
【表７】
2020501514.tif 000019
【０３２１】
実施例６
この実施例は、例示的ペプチドの、食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスの体重、血糖値、および体脂肪量に対する効果を実証する。雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを高脂肪食で１８週間維持し、食餌誘導性肥満症を発症させた。動物を、血糖値および体重に基づいて治療群に無作為化した。本発明のペプチドを、雄ＤＩＯマウスの２つの群に対し、皮下または腹腔内注入により、１５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量で１０日間にわたり１日１回または２回投与した（治療群当たりＮ＝８匹の動物）。追加の雄ＤＩＯマウス（ｎ＝８）群は、ビークル（水または生理食塩水）のみの投与を受けた。体重、血糖値および食物摂取量をモニターした。投与の前および投与終了時に、体重分布（太ったマウス対痩せたマウス）を、定量的全身ＮＭＲにより測定した。本発明のペプチドの投与は、ビークル単独で治療された動物に比べて、ベースライン値から、より大きな体重減少、より大きな血糖の減少、およびより大きな体脂肪量の減少をもたらした（表８）。
【０３２２】
【表８】
2020501514.tif 000020
【０３２３】
実施例７
この実施例は、食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスの体重、および体脂肪量に対する例示的ペプチドの効果を決定することを目的とする２１日間試験を示す。雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを高脂肪食で１２〜２２週間維持し、食餌誘導性肥満症を発症させた。動物を、血糖値および体重に基づいて治療群に無作為化した。ペプチド（配列番号２０８および配列番号２１０）をそれぞれ、雄ＤＩＯマウス群に対し、適切な経路により、１５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量で２１日間にわたり１日２回投与した（治療群当たりＮ＝８〜１２匹の動物）。追加の雄ＤＩＯマウス群（ｎ＝８／群）は、対照試験品（リラグルチドまたはピオグリタゾン）またはビークル（水または生理食塩水）単独の投与を受けた。体重、血糖値および食物摂取量を含む代謝パラメーターをモニターした。投与の前および投与終了時に、必要に応じ、体重分布（太ったマウス対痩せたマウス）を定量的全身ＮＭＲにより測定した。ペプチドの投与は、配列番号２のペプチド、対照試験品（ピオグリタゾンまたはリラグルチド）またはビークル単独で治療された動物に比べて、ベースライン値から、より大きな体重減少、より大きな血糖の減少、および／またはより大きな体脂肪量の減少をもたらした（表９）。
【０３２４】
【表９】
2020501514.tif 000021
【０３２５】
実施例８
この実施例は、食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスの体重および体脂肪量に対する本開示の例示的ペプチドおよび市販の抗糖尿病治療薬を含む併用療法の効果を決定することを目的とする２１日間試験を示す。
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを高脂肪食で１２〜２２週間維持し、食餌誘導性肥満症を発症させた。動物を、血糖値および体重に基づいて治療群に無作為化した。ペプチド（配列番号２０８および配列番号２１０）のそれぞれを、リラグルチド（１０ナノモル／ｋｇ／日）の腹腔内の投与と併せて、雄ＤＩＯマウス群に対し、５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量で２１日間にわたり、適切な経路により毎日１回投与した（治療群当たりＮ＝８匹の動物）。追加の雄ＤＩＯマウス群（ｎ＝８／群）は、対照試験品（リラグルチド単独）またはビークル（水または生理食塩水）単独の投与を受けた。体重、血糖値および食物摂取量を含む代謝パラメーターをモニターした。投与の前および投与終了時に、必要に応じ、体重分布（太ったマウス対痩せたマウス）を定量的全身ＮＭＲにより測定した。リラグルチドと併せたペプチドの投与は、リラグルチド単独またはビークル単独で治療された動物に比べて、ベースライン値から、より大きな体重減少、より大きな血糖の減少、および／またはより大きな体脂肪量の減少をもたらした（表１０）。
【０３２６】
【表１０】
2020501514.tif 000022
【０３２７】
実施例９
この実施例は、例示的ペプチドの、トリグリセリドレベルおよび肝障害マーカーに対する効果を実証する。
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを高脂肪食で１２〜２２週間維持し、食餌誘導性肥満症を発症させた。動物を、血糖値および体重に基づいて治療群に無作為化した。ペプチド（配列番号２０８および配列番号２１０）をそれぞれ、雄ＤＩＯマウス群に対し、適切な経路により、１５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量で２１日間にわたり１日２回投与した（治療群当たりＮ＝８〜１２匹の動物）。追加の雄ＤＩＯマウス群（ｎ＝８／群）は、対照試験品（リラグルチド）またはビークル（水または生理食塩水）単独の投与を受けた。血清試料を２１日目の最初の投与後２時間の終結時に取得した。当該技術分野において周知の方法により、試料の標準的臨床化学パラメーターを分析した。配列番号２０８および配列番号２１０のペプチドの投与は、対照試験品（リラグルチド）またはビークル単独で治療された動物に比べて、血清トリグリセリド、ＡＬＴおよびＡＳＴのより大きな減少をもたらした（表１１）。
【０３２８】
【表１１】
2020501514.tif 000023
【０３２９】
実施例１０
この実施例は、カニクイザルにおける本開示の例示的ペプチドの薬物動態学を示す。
雄カニクイザル（２〜６ｋｇ）を投与前８時間にわたり絶食させた。動物に試験ペプチド（０．１〜１５ｍｇ／ｋｇ）の単回静脈内または皮下急速投与を注入する。静脈内注入を、伏在静脈または別の好適な静脈を介して投与する。皮下注入を、肩甲部に投与する。血液試料を間隔を置いて２４時間にわたり採取し、血漿試料用の処理を行う。注入の４時間後、食物を戻す。血漿試料中のペプチドおよび／または代謝物の濃度を好適な分析方法（例えば、ＬＣＭＳ）により測定し、薬物動態学的パラメーターを非コンパートメント法により計算する。本発明のペプチドは、配列番号２に比べて、曝露の増加（例えば、増加したＣｍａｘ、ＡＵＣ、および／または半減期）を示す。
【０３３０】
実施例１１
この実施例は、非ヒト肥満症霊長類モデルにおける本開示の例示的ペプチドの効力を示す。
自然発症的肥満の雄カニクイザルを投与および取り扱いに少なくとも３週間順化させる。ベースライン動物特性を測定し、体重およびトリグリセリドレベルなどのベースライン代謝パラメーターに基づいて、動物を治療群に無作為化する。無作為化後、サル群は、１日１回または１日２回の本発明のペプチドの好適な経路により４週間以上にわたる投与を受ける。サルの対照群は、ビークルまたはポジティブコントロールの毎日の投与を受ける。試験中、食物摂取量および体重を間隔を置いて測定する。投与したペプチドの、体重、食物摂取量、ＢＭＩおよび／または代謝パラメーターに対する効果を、ビークル治療対照動物と比較する。
【０３３１】
実施例１２
この実施例は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のＳＴＡＭ（登録商標）マウスモデルにおける本開示の例示的ペプチドの効力を示す。
ＮＡＳＨのＳＴＡＭモデルでは、Ｃ５７／ｂｌ６にストレプトトキシン（ｓｔｒｅｐｔｏｔｏｘｉｎ）を単回皮下投与により注入し、誕生の３日後に膵臓β−細胞を破壊する。４週齡時に、動物を高脂肪食で太らせる。この複合処理により、高血糖および中等度の高脂血症と共に、脂肪症、繊維化、肝硬変および最終的に肝細胞癌（ＨＣＣ）を発症し、したがって、ヒトＮＡＳＨに極めて類似している。５週齡のはじめに、ＳＴＡＭ動物群（８匹の動物／群）を本発明のペプチドを１日１回または１日２回、適切な経路により試験終了まで投与して治療する。対照群の動物は、好適なポジティブコントロール化合物（例えば、テルミサルタン）の投与を毎日受ける。約１０週齡時に、代謝パラメーターを測定し、動物を屠殺する。肝臓試料を取得し、固定して、パラフィン中に包埋し、ヘマトキシリンおよびエオシンまたはマッソントリクロームで染色し、光学顕微鏡で検査する。脂肪症および非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコア（ＮＡＳ）の大きさを当該技術分野で既知の方法により病理組織学的に決定する。
【０３３２】
実施例１３
この実施例は、異種移植担癌マウスモデルにおける腫瘍増殖に対する本開示の例示的ペプチドの効力を示す。
マウス異種移植モデルは、当該技術分野において周知の方法により作製される。例えば、ＳＣＩＤマウスに、ヒト腫瘍細胞（例えば、ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＰＣ−３、など）を注入し、腫瘍増殖をモニターする。腫瘍が十分なサイズになると、動物を治療群に無作為化し、本発明のペプチド、ビークル対照、ポジティブコントロール（例えば、ゲムシタビンまたはパクリタキセル）または本発明のペプチド＋ポジティブコントロールの組み合わせを、毎日、１日おきに、または毎週投与する。腫瘍増殖、体重、および生存を、１４〜２８日間にわたりモニターする。本発明のペプチド単独および／またはポジティブコントロールとの組み合わせ投与について、ビークル対照で治療した動物と比較して、腫瘍増殖の減少および／または生存の延長を検査する。
【０３３３】
実施例１４
この実施例は、マウス血漿中での本開示の例示的ペプチドの安定性を示す。
ペプチド（１００μＭ）をプールしたマウス血漿中、３７℃でインキュベートし、試料を取り出して、直ちに無処理のペプチド濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより３時間にわたり分析した。各時点で血漿中に残っているペプチドのパーセントを、初期ピーク面積に対して計算した（表１２）。
【０３３４】
【表１２】
2020501514.tif 000024
【０３３５】
実施例１５
この実施例は、マウス血漿中での本開示の例示的ペプチドの安定性を示す。
ペプチド（１０μＭ）をプールしたマウス血漿中、３７℃でインキュベートし、試料を取り出して、直ちに無処理のペプチド濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより３時間にわたり分析した。各時点で血漿中に残っているペプチドのパーセントを、初期ピーク面積に対して計算した（表１３）。
【０３３６】
【表１３】
2020501514.tif 000025
【０３３７】
実施例１６
この実施例は、サルおよびヒト血漿中での本開示の例示的ペプチドの安定性を示す。ペプチド（１０μＭ）をプールしたマウスまたはヒト血漿中、３７℃でインキュベートし、試料を取り出して、直ちに無処理のペプチド濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより３時間にわたり分析した。各時点で血漿中に残っているペプチドのパーセントを、初期ピーク面積に対して計算した（表１４）。
【０３３８】
【表１４】
2020501514.tif 000026
【０３３９】
実施例１７
この実施例は、例示的ペプチドの、培養したマウス脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルに対する効果を実証する。マウス３Ｔ３−Ｌ１細胞を１，０００〜２０，０００細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレート、４８ウェルプレート、または２４ウェルプレートの前脂肪細胞培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に播種し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃で集密度まで増殖させた。集密度到達の２日後、細胞を、脂肪細胞分化培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ）中に入れ、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃でさらに３日間培養した。その後、培地を、脂肪細胞維持培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に置き換え、１日おきに部分的な培地置換を行いながら、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、細胞を３７℃でさらに９〜１４日間維持した。分化の１２〜１７日後、試験ペプチドを２５〜５０μＭの最終濃度で加え、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃の脂肪細胞維持培地中で１８〜２０時間インキュベートした。培地インキュベーション後、培地を取り出し、イソプロテレノール（１ｎＭ）および試験ペプチドを含むアッセイバッファー（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）に交換した（未処理対照以外の全ての試料を加えた）。細胞を５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃でさらに３時間インキュベートした。製造業者の説明書に従い、プレートリーダー（５４０ｎｍ）を用いて、培地中の遊離脂肪酸濃度を遊離脂肪酸アッセイキット（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ）により決定した。
【０３４０】
吸光度値を未処理バックグラウンドに対して補正し、イソプロテレノール処理細胞に対する値として示した。イソプロテレノール（１ｎＭ）のみによる処理を、遊離脂肪酸レベル刺激対照として使用した。イソプロテレノール対照の相対標準偏差は１０％未満であった。インスリンを、減少する遊離脂肪酸レベルの極めて強力なポジティブコントロールとし使用した。インスリン（１００ｎＭ）処理の遊離脂肪酸レベルは、５％未満のイソプロテレノール対照値であった。結果を表１５に示す。
【０３４１】
【表１５】
2020501514.tif 000027
【０３４２】
実施例１８
この実施例は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のＳＴＡＭ（登録商標）マウスモデルにおける本開示の例示的ペプチドの効力を示す。ＮＡＳＨのＳＴＡＭ（登録商標）モデルでは、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに２００μｇのストレプトトキシンを単回皮下投与により注入し、誕生の２日後に膵臓β−細胞を破壊した。４週齡時に、動物を高脂肪食（脂肪由来キロカロリーが５７％）で太らせ、試験全体を通して同じ食餌で維持した。この複合処理により、高血糖および中等度の高脂血症と共に、脂肪症、繊維化、肝硬変および最終的に肝細胞癌（ＨＣＣ）を発症し、したがって、ヒトＮＡＳＨに極めて類似していた。６週齡のはじめに、ＳＴＡＭ動物群（８匹の動物／群）を本発明のペプチドを１日２回、腹腔内注入により試験終了まで投与して治療した。対照群のＳＴＡＭ動物（ｎ＝８）は、テルミサルタン対照化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）を毎日投与された。追加の正常マウス群（ｎ＝８）は、治療を受けなかった。９週齡の、２１日の投与後、代謝パラメーターを測定し、動物を屠殺した。肝臓試料を取得し、固定して、パラフィン中に包埋し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、光学顕微鏡で検査した。脂肪症および非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）活動性スコア（ＮＡＳ）の大きさを当該技術分野で既知の方法により病理組織学的に決定した。得られたＮＡＳスコアを表１６に示す。
【０３４３】
【表１６】
2020501514.tif 000028
【０３４４】
実施例１９
この実施例は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のＳＴＡＭ（登録商標）マウスモデルの肝臓トリグリセリドレベルおよび血漿ＡＬＴレベルの低減における本開示の例示的ペプチドの効力を示す。ＮＡＳＨのＳＴＡＭ（登録商標）モデルでは、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに２００μｇのストレプトトキシンを単回皮下投与により注入し、誕生の２日後に膵臓β−細胞を破壊した。４週齡時に、動物を高脂肪食（脂肪由来キロカロリーが５７％）で太らせ、試験全体を通して同じ食餌で維持した。この複合処理により、高血糖および中等度の高脂血症と共に、脂肪症、繊維化、肝硬変および最終的に肝細胞癌（ＨＣＣ）を発症し、したがって、ヒトＮＡＳＨに極めて類似していた。６週齡のはじめに、ＳＴＡＭ動物群（８匹の動物／群）を本発明のペプチドを１日２回、腹腔内注入により試験終了まで投与して治療した。対照群のＳＴＡＭ動物（ｎ＝８）は、テルミサルタン対照化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）を毎日投与された。追加の正常マウス群（ｎ＝８）は、治療を受けなかった。９週齡の、２１日の投与後、代謝パラメーターを測定し、動物を屠殺した。肝臓トリグリセリドレベルを、クロロホルム−メタノール中でのホモジナイゼーションおよび室温での一晩のインキュベーションにより決定した。クロロホルム−メタノール−水で洗浄後、抽出物を蒸発乾固させて、イソプロパノールに溶解した。その後、肝臓トリグリセリド含量をトリグリセリドＥ−テスト（和光純薬工業、日本）により測定した。血漿ＡＬＴレベルをＦｕｊｉ  Ｄｒｉ−Ｃｈｅｍ  ７０００（富士フイルム、日本）を用いて測定した。結果を表１７に示す。
【０３４５】
【表１７】
2020501514.tif 000029
【０３４６】
実施例２０
この実施例は、例示的ペプチドの、食餌誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスの体重、血糖値、および体脂肪量に対する効果を実証する。
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを高脂肪食で１８週間維持し、食餌誘導性肥満症を発症させた。動物を、血糖値および体重に基づいて治療群に無作為化した。本発明のペプチドを、雄ＤＩＯマウスの２つの群に対し、腹腔内または皮下注入により、５〜１５ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量で１０日間にわたり毎日１回または２回投与した（治療群当たりＮ＝８匹の動物）。追加の雄ＤＩＯマウス（ｎ＝８）群は、ビークル（水または生理食塩水）のみの投与を受けた。体重、血糖値および食物摂取量をモニターした。投与の前および投与終了時に、体重分布（太ったマウス対痩せたマウス）を、定量的全身ＮＭＲにより測定した。本発明のペプチドの投与は、ベースライン値から、体重減少、および／または体脂肪量の減少をもたらした（表１８）。
【０３４７】
【表１８】
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【０３４８】
実施例２１−グルコース利用
グルコース代謝に対するペプチドの効果を、マウス筋芽細胞などの培養細胞におけるグルコース利用アッセイを用いて評価できる。ペプチドは、最初にＤＭＳＯ中の１０ｍＭストックとして調製し、１０μＭ（０．１％ＤＭＳＯ）の最終濃度で使用する。Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞の細胞株をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入する。Ｃ２Ｃ１２培養液を５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で維持し、２日ごとに培地を交換する。Ｃ２Ｃ１２細胞を、１０％ＦＢＳで補充した、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ（１ｇ／Ｌグルコース）中で増殖させる。Ｃ２Ｃ１２細胞を、７，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、集密度まで培養する。細胞が集密度に達すると、培地を２％ＨＳで補充した１００ＩＵ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ（１ｇ／Ｌグルコース）に交換し、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気中、３７℃で維持する。分化の誘導５日後に、２％ＨＳで補充した、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含む新しいＤＭＥＭ（１ｇ／Ｌグルコース）を培養液に加えた。細胞を５％ＣＯ２および９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で５時間維持する。５時間後、新しい分化培地中で調製した１０μＭの試験ペプチドまたは対照（１％ＤＭＳＯ中の０．５ｍＭまたは１ｍＭのメトホルミン）を細胞に加え、培養液を５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で１８〜２２時間維持する。インキュベーションの終わりに、培地を細胞から取り出し、残りのグルコース濃度を、製造業者の説明書に従い、グルコースアッセイキット（Ａｂｃａｍ）を用いてＣｙｔａｔｉｏｎ  ３プレートリーダーにより５７０ｎｍで測定する（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）。培地中のグルコース濃度を０．１％ＤＭＳＯ治療対照細胞に対して、計算する。メトホルミンをグルコースレベルの低減に対するポジティブコントロールとして用いる。本発明のペプチド単独および／またはポジティブコントロールとの組み合わせ投与により、ビークル対照で治療したものよりも、Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞のグルコース利用が増加または低減する。
【０３４９】
実施例２２−スタウロスポリンに曝露した細胞のＡＴＰレベル
細胞生存率に対するペプチドの潜在的細胞保護効果または潜在的相乗的効果を、スタウロスポリン曝露などの好適なストレスに曝露したヒト神経芽腫などの培養細胞のＡＴＰレベルのアッセイを用いて評価できる。ペプチドは、最初にＤＭＳＯ中の１０ｍＭストックとして調製し、１０μＭ（０．１％ＤＭＳＯ）の最終濃度で試験する。スタウロスポリンを、細胞のＡＴＰレベルを低減するアポトーシス／細胞死の極めて強力な誘導因子として使用する。スタウロスポリンを１０ｎＭ〜１μＭの範囲の濃度で使用する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイキットをＰｒｏｍｅｇａから購入する。ＳＨ−ＳＹ５Ｙヒト神経芽腫細胞株をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入し、メモリアル・スローン・ケタリング癌センター（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）から認可される。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、１０％ＦＢＳで補充した、１００ＩＵ／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２培地中で増殖させる。培養液を５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で維持する。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、３０，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種する。翌日、細胞を０．１％ＤＭＳＯ中１０μＭの試験ペプチドおよびスタウロスポリン（４０μＭ）と共にインキュベートし、５％ＣＯ２／９５％空気の加湿雰囲気下、３７℃で１８〜２０時間維持する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、製造業者の説明書に従って、ＡＴＰレベルを測定する。プレート上の各試料ウェルの発光をＣｙｔａｔｉｏｎ  ３プレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）を用いて測定する。４０μＭのスタウロスポリンでの処理によるＡＴＰの減少に対して活性を計算する。１００％未満の値は、細胞保護効果を示すが、１００％を超える値は、生存率に対する相乗的効果を示す。４０μＭのスタウロスポリン処理対照細胞に対する結果の相対標準偏差は、５％未満である。本発明のペプチド単独および／またはポジティブコントロールとの組み合わせ投与により、ビークル対照で治療したものよりも、スタウロスポリンに曝露した培養ＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経芽腫細胞中のＡＴＰレベルは、増加または低減する。
【０３５０】
本明細書で開示し請求した全ての物品および方法は、本開示を考慮すると、過度な実験をすることなく作製および実施できる。本開示の物品および方法が好ましい実施形態の観点から説明されてきたが、本開示の趣旨と範囲から逸脱することなしに、多くの変形例がこれらの物品と方法に適用され得ることが、当業者には理解されよう。当業者に明らかな全てのこのような変形例および等価物は、現時点で存在しているか、またはこれから開発されるかに関わらず、添付の特許請求の範囲により定められる本開示の趣旨と範囲内にあると見なされる。例えば、本明細書に記載の使用方法としての全ての態様および／または実施形態もまた、記載されているように使用するための組成物として、または特定の用途のための薬物での使用のための組成物として意図されている。本明細書で言及した全ての特許、特許出願、および刊行物は、本開示が属する当業者のレベルを示すものである。本明細書で例示的に適切に記載した本開示は、本明細書で具体的に開示されない任意の（単一または複数の）要素の非存在下で実行され得る。したがって、例えば、本明細書の各事例において、「含む」、「から本質的になる」および「からなる」という用語のいずれも、他の２つの用語のいずれかと置き換え得る。使用された用語および表現は、説明の用語として、制限なく使用され、記載される特徴の任意の等価物またはその一部を排除するこのような用語および表現の使用は意図しないが、本開示の特許請求の範囲内で、様々な変更が可能であることは理解される。したがって、本開示は、好ましい実施形態および任意の特徴によって具体的に開示されているが、当業者は、本明細書に開示される概念の修正および変形を行うことが可能であり、このような修正および変形は、添付の特許請求の範囲によって定められる、本開示の範囲に入ると見なされることを理解されたい。
【０３５１】
刊行物、特許出願および特許を含め、本明細書に引用される全ての参考文献は、各参考文献が個々に、具体的にその全体が参照により組み込まれることが示され、また、その全体が本明細書に記載されているのと同じ程度に、その全体が参照により組み込まれる（法律により許容される最大程度まで）。見出しおよび小見出しは全て本明細書では単に便宜上使用され、何ら限定すると解釈されるべきでない。本明細書に記載されるあらゆる具体例または例示語（例えば、「などの」）の使用は、単に本開示の理解を容易にすることを意図したものであり、別段の請求がなされない限り、本開示の範囲を限定するものではない。本明細書に記載されている用語は、本開示の実施に不可欠であるが特許請求されていない要素を表すものとして解釈されるべきではない。本明細書での特許文献の引用および組み込みは単に便宜上行われるものであり、このような特許文献の妥当性、特許性および／または実施可能性のいずれの見解をも反映するものではない。
【０３５２】
本開示は、準拠法によって、認められる、本明細書に添付の態様に記載される主題の修正物および等価物のすべてを包含する。
【配列表】
2020501514000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年5月23日(2019.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
Ｘ１−ＱＥ−Ｘ２−Ｘ３−ＹＩ−Ｘ４−Ｙ−Ｘ５−Ｒ−Ｘ６    （Ｉ）（配列番号１）（式中、Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷであり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ２およびＸ３は、それぞれ独立に非極性側鎖または極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ４およびＸ５は、それぞれ独立に非極性側鎖を有するアミノ酸であり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、ＫＬ−Ｘ８またはＸ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、非極性側鎖を有するアミノ酸であり、およびＸ９は、非極性側鎖を有するアミノ酸である。）のアミノ酸配列、またはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体、または薬学的に許容可能なその塩を含み、
配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つから構成されないペプチド。
【請求項２】
Ｘ１は存在しないか、または存在する場合は、Ｘ７−ＲＷであり、Ｘ７は存在しないか、または存在する場合は、ＭまたはＥであり；Ｘ２はＭ、ＡまたはＥであり；Ｘ３はＧ、ＮまたはＱであり；Ｘ４はＦまたはＡであり；Ｘ５はＰまたはＡであり；Ｘ６は存在しないか、または存在する場合は、ＫＬ−Ｘ８またはＸ９−ＬＲであり、Ｘ８は存在しないか、または存在する場合は、ＲまたはＡであり、Ｘ９はＫ、Ａ、（ｄＡ）、ＮおよびＱから選択される、請求項１に記載のペプチドまたは薬学的に許容可能なその塩。
【請求項３】
ＭＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２０８）；
ＭＲＷＱＥＡＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲ（ｄＡ）ＬＲ（配列番号１４９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＮＬＲ（配列番号２１３）；
ＭＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号２１９）；
ＲＷＱＥＭＮＹＩＦＹＰＲ（配列番号２４８）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＡＬＲ（配列番号１９）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬＡ（配列番号２１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＡＲＫＬＲ（配列番号１７）；
ＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＱＬＲ（配列番号２１７）；
ＭＲＷＱＥＥＧＹＩＦＹＰＲＫＬＲ（配列番号１７２）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＲＫＬ（配列番号４５）；
ＥＲＷＱＥＡＧＹＩＡＹＰＲ（配列番号２４１）；
ＲＷＱＥＭＱＹＩＦＹＰＲ（配列番号２１１）；
ＭＲＷＱＥＭＧＹＩＦＹＰＡＫＬＲ（配列番号１８）；
からなる群より選択される、請求項１に記載のペプチド、または薬学的に許容可能なその塩。
【請求項４】
持続時間延長部分をさらに含み、必要に応じ、前記ペプチドと、前記持続時間延長部分とを、代謝的に切断可能なリンカーを用いてカップリングする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項５】
（ａ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）、（ｂ）ＹＩＦＹ（配列番号２９５）、または（ｃ）ＲＷＱＥ（配列番号２９４）およびＹＩＦＹ（配列番号２９５）の両方を含み、８〜２０アミノ酸長さであり、
（ｉ）３７℃のマウス血漿中６０分間で、少なくとも１０％の安定性を示す、
（ｉｉ）ヒト初代脂肪細胞中の遊離脂肪酸レベルを低下させる、または
（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の両方である、ペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項６】
ＲＷＱＥＸ１Ｘ２ＹＩＦＹ（配列番号３１９）のアミノ酸配列を含み、各Ｘ１およびＸ２は、独立に任意のアミノ酸である、請求項５に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項７】
Ｘ１Ｘ２は、Ｍｅｔ−Ａｓｎ、Ｍｅｔ−Ｇｌｎ、Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ａｌａ、Ｎｌｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−（ｄＡ）、（ｄＡ）−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ｇｌｕ、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−Ａｓｎ、またはＧｌｕ−Ｇｌｎである、請求項６に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項８】
式ＩＩＩ：
Ｘ３１−Ｘ３２−Ｘ３３−Ｘ３４−Ｘ３５−Ｘ３６−Ｘ３７−Ｘ３８−Ｘ３９−Ｘ４０−Ｘ４１−Ｘ４２−Ｘ４３−Ｘ４４−Ｘ４５−Ｘ４６−Ｘ４７    （ＩＩＩ）（配列番号３７９）
（式中、Ｘ３１は存在しないか、または存在する場合は、Ｍ、Ｌ、Ｇ、Ｋ、Ｅ、Ａ、（ｄＡ）またはＮｌｅであり；Ｘ３２は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｋ、Ａｉｂ、（ｄＡ）またはＥであり；Ｘ３３は存在しないか、または存在する場合は、Ｗ、Ａ、（ｄＡ）、Ｇ、またはＥであり；Ｘ３４は、Ｑ、Ｇ、Ａ、（ｄＡ）、Ｅｃｙｃ、ＮまたはＥであり；Ｘ３５は、Ｅ、Ｅｃｙｃ、Ｄ、Ｇ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３６は、Ｎｌｅ、Ｇ、Ｋ、Ｃｃｙｃ、（ｄＡ）、ＭまたはＡであり；Ｘ３７は、Ｇ、Ｎ、Ｑ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３８は、Ｙ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ３９は、Ｉ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４０は、Ｆ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４１は、Ｙ、Ｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４２は存在しないか、または存在する場合は、Ｐ、Ｇ、Ｅ、Ｆ、Ｃｃｙｃ、Ｋｃｙｃ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４３は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ｇ、Ｄ、Ｌ、Ｋ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４４は存在しないか、または存在する場合は、Ｋ、Ｋ−Ａｃ、Ｇ、Ｒ、Ｌ、Ｑ、Ｎ、Ｋｃｙｃ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４５は存在しないか、または存在する場合は、Ｌ、Ｇ、Ｒ、Ｋ、Ｄｅｇ、Ｅ、（ｄＡ）またはＡであり；Ｘ４６は存在しないか、または存在する場合は、Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｋ、Ｇ、（ｄＡ）またはＡであり；およびＸ４７は存在しないか、または存在する場合は、Ｅであり；但し、Ｘ３３が存在しない場合、Ｘ３１およびＸ３２は存在せず；さらにＸ３２が存在しない場合、Ｘ３１は存在せず；さらにＸ４２が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、Ｘ４５、Ｘ４４、およびＸ４３は存在せず；さらにＸ４３が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、Ｘ４５、およびＸ４４は存在せず；さらにＸ４４が存在しない場合、Ｘ４７、Ｘ４６、およびＸ４５は存在せず；さらにＸ４５が存在しない場合、Ｘ４７、およびＸ４６は存在せず；およびさらにＸ４６が存在しない場合、Ｘ４７は存在せず；また、ペプチドは、配列番号２、４２、７７、７８、３１６〜３１８、および３２８〜３４９のアミノ酸配列のいずれか１つからなるペプチドではない、という条件の場合である。）のアミノ酸配列、および／またはそのＣ末端酸もしくはアミド、またはＮ−アセチル誘導体；または薬学的に許容可能なその塩を含むペプチド。
【請求項９】
配列番号１、３〜４１、４３〜７６、および７９〜２９３、３１０〜３１５、３１９〜３２３および３５４〜３７７のいずれか１つを含む、請求項８に記載のペプチドまたはペプチド類似体。
【請求項１０】
前記ペプチドは、誘導体化される、請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記誘導体は、アセチル化、ペグ化、ビオチン化、またはアシル化により調製される、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記誘導体は、ＰＥＧ６００、アセチル、ビオチンまたはパルミチルである、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のペプチドまたはペプチド類似体および異種の部分を含むコンジュゲート。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のペプチドもしくはペプチド類似体または請求項１３に記載のコンジュゲートをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、該ペプチドは遺伝的にコードされるアミノ酸からなる、核酸。
【請求項１５】
請求項１４に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１６】
請求項１４に記載の核酸または請求項１５に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のペプチドもしくはペプチド類似体、請求項１３に記載のコンジュゲート、請求項１４に記載の核酸、請求項１５に記載の発現ベクター、または請求項１６に記載の宿主細胞、ならびに担体、賦形剤、または希釈剤を含む、組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のペプチドもしくはペプチド類似体、請求項１３に記載のコンジュゲート、請求項１４に記載の核酸、請求項１５に記載の発現ベクター、または請求項１６に記載の宿主細胞を、容器またはパッケージ中に含む、キット。
【請求項１９】
請求項５に記載のペプチドまたはペプチド類似体を製造する方法であって、
（ｉ）第１のアミノ酸を第２のアミノ酸と反応させて、前記第１のアミノ酸と前記第２のアミノ酸との間に共有結合を形成させるステップであって、前記第１のアミノ酸または前記第２のアミノ酸を、必要に応じ、別のアミノ酸に結合させるステップ、および
（ｉｉ）前記ステップ（ｉ）の反応を反復し、それにより前記ペプチドまたはペプチド類似体を製造するステップ
を含む、方法。
【請求項２０】
肝疾患を治療するための医薬であって、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のペプチドもしくはペプチド類似体、請求項１３に記載のコンジュゲート、請求項１４に記載の核酸、請求項１５に記載の発現ベクター、または請求項１６に記載の宿主細胞を含む、医薬。
【請求項２１】
前記肝疾患は、脂肪性肝疾患である、請求項２０に記載の医薬。
【請求項２２】
前記脂肪性肝疾患は、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨである、請求項２１に記載の医薬。
【請求項２３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のペプチドもしくはペプチド類似体、請求項１３に記載のコンジュゲート、請求項１４に記載の核酸、請求項１５に記載の発現ベクター、または請求項１６に記載の宿主細胞の、代謝疾患、癌、または肝疾患の治療薬の製造における使用。
【国際調査報告】
2020501514.tif 000031
2020501514.tif 000032
2020501514.tif 000033
2020501514.tif 000034
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2020501514.tif 000036