(57)【要約】  本発明は、特に白エビに影響を及ぼすビブリオ症の治療における使用のための鞘翅目の粉末に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビブリオ症の治療に使用する甲虫粉末。
【請求項２】
二枚貝類及び十脚目におけるビブリオ症の治療に使用するための、請求項１に記載の甲虫粉末。
【請求項３】
エビの腸炎の治療に使用するための、請求項２に記載の甲虫粉末。
【請求項４】
エビのエビ早期死亡症候群／急性肝膵臓壊死症候群の治療に使用するための、請求項３に記載の甲虫粉末。
【請求項５】
少なくとも６７重量％のタンパク質及び少なくとも０．１重量％のキチンを含み、ここで、％は、甲虫粉末の総重量に対するものである、請求項１〜４の何れか１項に記載の使用のための甲虫粉末。
【請求項６】
少なくとも６７重量％のタンパク質及び少なくとも５重量％のキチンを含み、ここで、％は、甲虫粉末の総重量に対するものである、請求項５に記載の使用のための甲虫粉末。
【請求項７】
少なくとも７１重量％のタンパク質を含み、０．１〜２重量％の間のキチンを含み、ここで、％は、甲虫粉末の総重量に対するものである、請求項５に記載の使用のための甲虫粉末。
【請求項８】
Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ種から得られる、請求項１〜７の何れか１項に記載の使用のための甲虫粉末。
【請求項９】
少なくとも５重量％の甲虫粉末を含み、ここで、前記甲虫粉末が、少なくとも７１重量％のタンパク質及び０．１〜２重量％の間のキチンを含み、％は、甲虫粉末の総重量に対するものである、軟体動物及び／又は甲殻類の栄養摂取レジーム。
【請求項１０】
２０重量％の甲虫粉末を含む、請求項９に記載の栄養摂取レジーム。
【請求項１１】
少なくとも６７重量％のタンパク質を含み、少なくとも０．１重量％のキチンを含み、ここで、％は、甲虫粉末の総重量に対するものである、ヒト又は動物の栄養摂取における栄養補助食品としての甲虫粉末の使用。
【請求項１２】
軟体動物及び／又は甲殻類の栄養摂取における栄養補助食品としての、請求項１１に記載の甲虫粉末の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、昆虫粉末及び特に水産養殖におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
水産養殖は、現在、食品業界で最も精力的な分野の１つである。水産養殖は、特に、魚（養魚（ｐｉｓｃｉｃｕｌｔｕｒｅ））、貝類養殖（ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ ｆａｒｍｉｎｇ）又は甲殻類（ザリガニ養殖及びエビ養殖）にも関する。
【０００３】
魚に対する高い需要は、魚、貝類及び甲殻類の飼育を目的とした飼料価格の大幅な上昇をもたらした。
【０００４】
水産養殖で最も使用されている製品の1つは、魚粉である。それは動物性タンパク質が、非常に豊富（リジン型及びメチオニン型アミノ酸が豊富である）であり、容易に消化できるミール（ｍｅａｌ）である。供給の制限に伴う需要の増加は、その価格の大幅な上昇をもたらし、水産養殖の持続可能な成長に対する危険性を生み出している。従って、水産養殖用飼料のための高品質、そして可能な限り再生可能なタンパク質代替供給源に対する高い需要がある。
【０００５】
昆虫粉末又は昆虫ミールは、最小限のエコロジカルフットプリント（ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｏｏｔｐｒｉｎｔ）で大量生産の可能性と同様に、天然の代替タンパク質源を提供する。特に、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ等の特定の甲虫は、大量生産に適しているという利点がある。
【０００６】
さらに、飼育槽（ｒｅａｒｉｎｇ ｂａｓｉｎ）で多数の固体をまとめることにより、養殖魚、貝類又は甲殻類は、例えば、特定地域の養殖エビの７０％以上の集団を死滅させたビブリオ・パラヘモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）等の細菌由来の伝染病の影響を非常に受けやすい。
【０００７】
ビブリオ・パラヘモリティカスは、主に貝類（特に、カキ及びムール貝）、甲殻類（特に、エビ）及び魚に感染する細菌である。この細菌は、特に感染した貝、甲殻類又は魚が食べられた際、ヒトに感染する可能性があり、腸炎及び胃腸炎を引き起こす。
【０００８】
故に、感染の危険性及び／又は細菌性伝染病を効果的に対処するための有効な手段に関しての必要性がある。
【発明の概要】
【０００９】
この目的のために、本発明者らは、昆虫粉末の投与が、最近感染を予防及び治療することを可能にすることを実証した。
【００１０】
従って、本発明はまた、薬剤として使用するための昆虫粉末に関する。
【００１１】
「昆虫粉末」とは、昆虫及び任意で水のみから調製された、粒子の形態の組成物を意味する。
【００１２】
昆虫粉末中の残留水分レベルは、２〜１５％の間、好ましくは５〜１０％の間、より好ましくは４〜８％の間が含まれる。この水分レベルは、例えば、２７-０１-２００９のＥＣレギュレーション１５２／２００９（１０３℃／４ｈ）に基づく方法に従って決定され得る。
【００１３】
本願の内容において、及び特段の定めが無い限り、示される値の範囲は境界を含むものとして理解されるべきであることに留意されたい。
【００１４】
出願全体を通して、規則、規格又は指令に日付が指定されていない場合、出願日に施行されている規則、規格又は指令となる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、魚粉の代わりに昆虫粉末を含むか含まないかのいずれかで、異なる栄養摂取レジームに従って給餌された白エビの最終重量を示す図である。
【図２】図２は、魚粉の代わりに昆虫粉末を含むか含まないかのいずれかで、異なる栄養摂取レジームに従って給餌された白エビの重量増加を示す図である。
【図３】図３は、ビブリオ・パラヘモリティカスに感染し、魚粉の代わりに昆虫粉末を含むか含まないかのいずれかで、異なる栄養摂取レジームに従って給餌された白エビにおける、病原体の細菌減少の関数としてのフェノールオキシダーゼの活性を示す図である。
【図４】図４は、魚粉の代わりに昆虫粉末を含むか含まないかのいずれかで、用いられた栄養摂取レジームの関数としてのビブリオ・パラヘモリティカスに感染したエビの生存率を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
昆虫粉末が、ヒト又は動物の栄養摂取に許容される粒子サイズに粉砕される際、後者は、「昆虫ミール」と称され得る。「ヒト又は動物の栄養摂取に許容される粒子サイズ」とは、１００μｍ〜１．５ｍｍの間、優先的には、３００μｍ〜１ｍｍの間、より優先的には５００〜８００μｍの間に含まれる粒子サイズを意味する。
【００１７】
「昆虫」とは、特に、鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、双翅目（Ｄｉｐｔｅｒａ）、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、直翅目（Ｏｒｔｈｏｐｔｅｒａ）、膜翅目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）、防翅目（Ｄｉｃｔｙｏｐｔｅｒａ）を意味し、特に等翅目（Ｉｓｏｐｔｅｒａ）、を含むゴキブリ亜目（Ｂｌａｔｔｏｐｔｅｒａ）、蟷螂目（Ｍａｎｔｏｐｔｅｒａ）、ナナフシ目（Ｐｈａｓｍｏｐｔｅｒａ）、半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、シリアゲムシ目（Ｍｅｃｏｐｔｅｒａ）、好ましくは、鞘翅目、又はそれらの混合を一緒にしたグループ分けを意味する。
【００１８】
優先的には、本発明に好ましい甲虫は、コミムシダマシ科（Ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｄａｅ）、コフキコガネ亜科（Ｍｅｌｏｌｏｎｔｈｉｄａｅ）、カツオブシムシ科（Ｄｅｒｍｅｓｔｉｄａｅ）、テントウムシ科（Ｃｏｃｃｉｎｅｌｌｉｄａｅ）、カミキリムシ科（Ｃｅｒａｍｂｙｃｉｄａｅ）、オサムシ科（Ｃａｒａｂｉｄａｅ）、タマムシ科（Ｂｕｐｒｅｓｔｉｄａｅ）、コガネムシ科（Ｃｅｔｏｎｉｉｄａｅ）、オサゾウムシ科（Ｄｒｙｏｐｈｔｈｏｒｉｄａｅ）、に属するか、又はそれらの混合である。
【００１９】
より優先的には、それらは以下の甲虫である：チャイロコメノゴミムシダマシ（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ）、ガイマイゴミムシダマシ（Ａｌｐｈｉｔｏｂｉｕｓ ｄｉａｐｅｒｉｎｕｓ）、ツヤケシオオゴミムシダマシ（Ｚｏｐｈｏｂａｓ ｍｏｒｉｏ）、コメノゴミムシダマシ（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｏｂｓｃｕｒｕｓ）、コクヌストモドキ（Ｔｒｉｂｏｌｉｕｍ ｃａｓｔａｎｅｕｍ）及びヤシオオオサゾウムシ（Ｒｈｙｎｃｈｏｐｈｏｒｕｓ ｆｅｒｒｕｇｉｎｅｕｓ）、又はそれらの混合である。
【００２０】
有利には、昆虫粉末は、上記の昆虫種の幼虫期から得られる。
【００２１】
本発明による昆虫粉末は、予防的又は治療的処置を目的として、ヒト又は動物に投与され得る。
【００２２】
この昆虫粉末は、特に、ビブリオ属の細菌によって引き起こされる細菌感染症、特にビブリオ・パラヘモリティカスによって引き起こされる細菌感染症に効果的に対処することを可能にする。
【００２３】
実際に、ビブリオ・パラヘモリティカスに感染した白エビに魚粉ではなく昆虫粉末を与えた場合、白エビの死亡率は、それによって減少する。これはおそらく、白エビの免疫系の刺激及び／又はその肝細胞の良好な発達による、白エビの免疫防御の強化に起因する（以下の実施例４を参照）。
【００２４】
より具体的には、本発明は、ビブリオ症の治療に使用するための昆虫粉末に関する。
【００２５】
「ビブリオ症」とは、水中に生育する細菌である、ビブリオ科に属するビブリオ属の細菌によって引き起こされる全ての細菌感染症を意味する。上記のように、これらの細菌は、ヒト（重度の感染症を引き起こす可能性がある）及び／又は動物、特に水生動物に対して病原性があり、従って、それらの栄養摂取を介してヒトに感染することが出来る。
【００２６】
好ましくは、これらの細菌は、カキの病気の原因であるビブリオ・エスチュアリアナス（Ｖｉｂｒｉｏ ａｅｓｔｕａｒｉａｎｕｓ）、腸炎及び胃腸炎の原因であるビブリオ・パラヘモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）又はカップカキ（ｃｕｐｐｅｄ ｏｙｓｔｅｒ）の感染症の原因であるビブリオ・スプレンディダス（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐｌｅｎｄｉｄｕｓ）である。好ましくは、昆虫粉末は、ビブリオ・パラヘモリティカスによって引き起こされるビブリオ症の治療における使用が意図される。
【００２７】
より具体的には、昆虫粉末は、軟体動物及び甲殻類のビブリオ症の治療に用いられ得る。
【００２８】
「軟体動物」とは、頭、足及び内臓塊からなる、柔らかい体を有する無脊椎動物を意味する。の軟体動物の７つの網の中で、３つの主要な枝：腹足類、二枚貝類及び頭足類が、言及され得る。
【００２９】
腹足類は、特に、カタツムリ、ナメクジ又はリンペットも一緒に分類する。二枚貝類は、特にムール貝、カキ、又はアサリを一緒に分類する。頭足類は、特にタコ、イカ又はコウイカ（ｃｕｔｔｌｅｆｉｓｈ）を一緒に分類する。
【００３０】
本発明が関連する軟体動物は、陸生動物又は水生動物、好ましくは水生動物であり得る。「水生」とは、淡水動物又は海洋動物、好ましくは海洋動物を意味する。
【００３１】
好ましくは、本発明が関連する軟体動物は、特に、クルミガイ亜網（Ｐａｌａｅｏｔａｘｏｄｏｎｔａ）、キヌタレガイ目（Ｃｒｙｐｔｏｄｏｎｔａ）、ウグイスガイ亜網（Ｐｔｅｒｉｏｍｏｒｐｈｉａ）、サンカクガイ亜網（Ｐａｌａｅｏｈｅｔｅｒｏｄｏｎｔａ）、ハマグリ亜網（Ｈｅｔｅｒｏｄｏｎｔａ）及び異靱帯類（Ａｎｏｍａｌｏｄｅｓｍａｔａ）を含む、二枚貝類の群に属する。
【００３２】
優先的に、軟体動物は、Ｍｙｔｉｌｉｄａ（ムール貝）及びＯｓｔｒｅｉｄａ（カキ）から選択される。Ｏｓｔｒｅｉｄａ群は、一緒に特にＯｓｔｒｅａ、Ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａ（カップカキ）、Ｏｓｔｒｅｏｌａ（フラットカキ（ｆｌａｔ ｏｙｓｔｅｒ））又はＳａｃｃｏｓｔｒｅａを分類する。
【００３３】
特に、関係する軟体動物種は、以下の通りである：Mytilus edulis、Mytilus galloprovincialis、Tapes rhomboides (縞模様のカーペットシェル)、Venerupis decussata (クロスカットカーペットシェル)、Venerupis philippinarum (日本カーペットシェル)、Venerupis aurea (ゴールデンカーペットシェル)、Corbicula fluminea (アジアアサリ)、Ostrea edulis (ヨーロピアンフラットカキ)、Crassostrea angulata (ポルトガルカキ)、Crassostrea gigas (日本カキ)、Ostreola conchaphila (オリンピアカキ)、Crassostrea virginica (アメリカカキ又はバージニアカキ)。
【００３４】
「甲殻類」とは、体がキチン及び多くの場合炭酸カルシウムで含侵されている外皮と称されるタンパク質の外骨格で覆われている動物を意味する。この群は、Ｂｒａｎｃｈｉｏｐｏｄａ、Ｃｅｐｈａｌｏｃａｒｉｄａ、Ｍａｌａｃｏｓｔｒａｃａ、Ｍａｘｉｌｌｏｐｏｄａ、Ｏｓｔｒａｃｏｄａ、Ｒｅｍｉｐｅｄｉａ等の下位の網に属する様々なサイズの動物を含む。
【００３５】
さらにより優先的には、本発明が関連する甲殻類は、十脚目（Ｄｅｃａｐｏｄａ）に属する。
【００３６】
「十脚目」とは、５対の足を持つ甲殻類を意味する。十脚目は、クルマエビ亜目（Ｄｅｎｄｒｏｂｒａｎｃｈｉａｔａ）及びエビ亜目（Ｐｌｅｏｃｙｅｍａｔａ）の２つのサブクラスに一緒に分類される。
【００３７】
クルマエビ亜目の中で、その一般名によりクルマエビ上科に属するエビが挙げられ得る。
【００３８】
エビ亜目の中で、それら一般名により、Ａｎｏｍｕｒａ下目に属するスクワットロブスター、Ｈｅｔｅｒｏｔｒｅｍａｔａ亜節、又はＢｒａｃｈｙｕｒａ若しくはＰａｇｕｒｏｉｄｅａに属するカニ、Ｃａｒｉｄｅａ下目に属するエビ、Ａｓｔａｃｉｄｅａ下目に属するザリガニ及びロブスター、又はＣｈｅｌａｔａ下目に属するイセエビも言及され得る。
【００３９】
好ましくは、本発明が関連する甲殻類はエビである。エビは、海洋種又は淡水種であり得る。有利には、それらは、エビ養殖又は淡水養殖に適したエビの種である。
【００４０】
有利には、本発明が関連するエビの種は、クルマエビ科（Ｐｅｎａｅｉｄａｅ）、特にＰｅｎａｅｕｓ属に属する。
【００４１】
優先的には、本発明が関連するエビの種類は以下の通りである：バナメイエビ（Ｐａｃｉｆｉｃ ｗｈｉｔｅ ｓｈｒｉｍｐ (Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ)）、ウシエビ（Ａｓｉａｎ ｔｉｇｅｒ ｓｈｒｉｍｐ (Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ)）、ブルーシュリンプ（ｂｌｕｅ ｓｈｒｉｍｐ (Ｐｅｎａｅｕｓ ｓｔｙｌｉｒｏｓｔｒｉｓ)）、タイショウエビ（ｆｌｅｓｈｙ ｐｒａｗｎ (Ｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ)）、クルマエビ（ｉｍｐｅｒｉａｌ ｐｒａｗｎ又はｋｕｒｕｍａ ｐｒａｗｎ (Ｐｅｎａｅｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ)）、インディアンエビ（Ｉｎｄｉａｎ ｐｒａｗｎ (Ｐｅｎａｅｕｓ ｉｎｄｉｃｕｓ)）、テンジククルマエビ（ｂａｎａｎａ ｐｒａｗｎ (Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｅｒｇｕｉｅｎｓｉｓ)）、アキアミ（ａｋｉａｍｉ ｐａｓｔｅ ｓｈｒｉｍｐ (Ｍｅｔａｐｅｎａｅｕｓ ｓｐｐ)）及びオニテナガエビ（ｇｉａｎｔ ｒｉｖｅｒ ｐｒａｗｎ (Ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍ ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉｉ)）、また優先的には、バナメイエビ。
【００４２】
エビにはいくつかの発達段階がある：３つの幼生期、すなわち、ノープリウス、ゾエア、ミシスの段階の後に後期幼生へと変態する。昆虫粉末は、後期幼生期及び／又は成体期に特に適している。
【００４３】
従って、本発明は、特に、二枚貝類及び十脚目のビブリオ症の治療に使用するための昆虫粉末に関する。
【００４４】
本発明はまた、エビの腸炎の治療に使用するための昆虫粉末にも関する。
【００４５】
特に、昆虫粉末は、エビにおけるエビ早期死亡症候群／急性肝膵壊死症候群の治療における使用のために利用され得る。
【００４６】
エビにおけるエビ早期死亡症候群／急性肝膵壊死症候群（「ＥＭＳ／ＡＨＰＮＳ」として知られる）は、ビブリオ・パラヘモリティカスに感染したエビの７０％を超える死亡原因となっている。
【００４７】
感染すると、エビは、弱まり、混乱したように見える。それは、いくつかの場合、クチクラに黒い病変を有する。特定の非常に毒性が強い細菌株は、ウシエビ（Ａｓｉａｎ ｔｉｇｅｒ ｓｈｒｉｍｐ）及びバナメイエビ（Ｐａｃｉｆｉｃ ｗｈｉｔｅ ｓｈｒｉｍｐ）等の養殖エビの最大８０％を死滅させ得る。
【００４８】
有利には、本発明によって使用される昆虫粉末は、少なくとも６７重量％のタンパク質及び少なくとも０．１重量％のキチンを含み、ここで、％は、昆虫粉末の総重量に対するものである。
【００４９】
「タンパク質」とは、粗タンパク質の量を意味する。粗タンパク質の定量化は、当業者に周知である。例として、デュマ法（Ｄｕｍａｓ ｍｅｔｈｏｄ）又はケルダール法（Ｋｊｅｌｄａｈｌ ｍｅｔｈｏｄ）が挙げられる。好ましくは、標準ＮＦ ＥＮ ＩＳＯ１６６３４-１（２００８）に相当するデュマ法が使用される。
【００５０】
そのような粉末の例は、以下の実施例１〜３に記載される。
【００５１】
優先的には、昆虫粉末は、６８重量％の粗タンパク質、より優先的には、７０重量％の粗タンパク質、さらに優先的には、７１重量％の粗タンパク質を含み、ここで、重量％は昆虫粉末の総重量に対するものである。
【００５２】
本発明によれば、「キチン」とは、何れかのタイプのキチン誘導体、すなわち、Ｎ-アセチル-グルコサミンユニット及びD-グルコサミンユニット、特に、キチン-ポリペプチドコポリマー（「キチン／ポリペプチド複合体」と称される場合がある）を含む何れかの型の多糖誘導体を意味する。これらのコポリマーはまた、多くの場合、メラニン型の顔料と組み合わせられ得る。
【００５３】
キチンは、セルロースに次いで、世界で２番目に合成されているポリマーであると考えられる。実際に、キチンは生物界の多くの種によって合成される。それは、部分的に甲殻類及び昆虫の外骨格、及び真菌を囲んで保護する側壁を構成する。より具体的には、昆虫において、キチンはそれゆえに、それらの外骨格の３〜６０％を構成する。
【００５４】
キチン含有量は、その抽出により決定される。そのような方法は、AOAC９９１．４３方法であり得る。
【００５５】
第１の実施形態によれば、本発明によって使用される昆虫粉末は、少なくとも６７重量％のタンパク質及び少なくとも５重量％のキチンを含み、ここで、％は、昆虫粉末の総重量に対するものである。
【００５６】
優先的には、この昆虫粉末は、５〜１６重量％のキチン、より優先的には、８〜１４％のキチンを含み、ここで、重量％は、昆虫粉末の総重量に対するものである。
【００５７】
有利には、この昆虫粉末は、昆虫粉末の総重量に対して４重量％以下、さらにより有利には、３．５％以下の灰分含有量を有する。
【００５８】
灰分は、本発明による組成物の燃焼から生じる残差を構成する。
【００５９】
灰分含有量を決定するための方法は、当業者に周知である。好ましくは、灰分は、２７-０１-２００９のＥＣレギュレーション１５２／２００９に規定された方法に従って決定された。
【００６０】
この昆虫粉末の脂肪含有量は、昆虫粉末の総重量に対して、好ましくは、５〜２０重量％、より好ましくは９〜１７重量％である。
【００６１】
脂肪含有量を決定するための方法は、当業者に周知である。例としての及び好ましい方法では、この含有量は、ECレギュレーション１５２／２００９の方法に従って決定されるだろう。
【００６２】
有利には、この昆虫粉末のタンパク質は、粗タンパク質の総重量に対して８５重量％以上の消化率を有する。
【００６３】
消化率は、指令７２／１９９／ＥＣに記載される方法によって測定されるペプシン消化率である。
【００６４】
好ましくは、消化率は、８６％以上、より優先的には８８％以上である。
【００６５】
有利には、本発明によって使用される昆虫粉末は、タンパク質の総重量に対して３５〜６５重量％の間の可溶性タンパク質を含み、及び可溶性タンパク質の少なくとも５０％は、１２，４００ｇ／ｍｏｌ以下のサイズを有する。
【００６６】
「タンパク質の総重量」とは、本発明による昆虫粉末中に存在する粗タンパク質の重量を意味する。
【００６７】
「可溶性タンパク質」とは、粗タンパク質中の、ｐＨが６〜８、有利には、７．２〜７．６に含まれる水性溶液可溶であるものを意味する。
【００６８】
好ましくは、水性溶液は、緩衝液であり、そのｐＨは、６〜８の間、有利には、７．２〜７．６の間が含まれる。優先的には、緩衝液は、リン酸ナトリウム緩衝液であり、そのｐＨは、７．４±０．２に等しい。
【００６９】
有利には、この昆虫粉末は、粗タンパク質の総重量に対して、３８〜６０重量％の間、好ましくは、４３〜５５重量％の間の可溶性タンパク質を含む。
【００７０】
好ましくは、可溶性タンパク質の少なくとも６０％、優先的には、少なくとも７０％が、１２，４００ｇ／ｍｏｌ以下のサイズを有する。
【００７１】
より具体的には、可溶性タンパク質は、６，５００〜１２，４００ｇ／ｍｏｌの間のサイズを含む。
【００７２】
有利には、１０％未満、好ましくは８％未満、より優先的には６％未満の可溶性タンパク質は、２９，０００ｇ／ｍｏｌ以上のサイズを有する。
【００７３】
この昆虫粉末は、以下：
ｉ）昆虫を殺傷する工程、
ｉｉ）プレスケーキを得るために昆虫をプレスする工程、及び
ｉｉｉ）プレスケーキを粉砕する工程、
を含む方法によって調製され得る。
【００７４】
昆虫は、以下の実施例１においてより詳細に記載されるように、熱傷又は湯通し（ｂｌａｎｃｈｉｎｇ）することによって殺傷される。
【００７５】
同様に、プレス及び破砕工程は、この実施例においてより詳細に記載される。
【００７６】
最後に、本発明による調製方法は、プレスケーキを乾燥する工程も含み得る。
【００７７】
乾燥工程は、プレス工程の後かつ、粉砕工程の前に行われることが有利であり、及び以下の実施例１にさらに詳細に記載される。
【００７８】
第２の実施形態によれば、本発明によって使用される昆虫粉末は、少なくとも７１重量％のタンパク質を含み、０．１〜２重量％の間のキチンを含む、ここで、％は、昆虫粉末の総重量に対してのものである。
【００７９】
好ましくは、この昆虫粉末は、粉末の総乾燥重量に対して、７２重量％以上、より優先的には、７４重量％以上、さらにより優先的には７５重量％以上のタンパク質含有量を有する。
【００８０】
より具体的には、この粉末は、粉末の総乾燥重量に対して、０．５〜３重量％の間、より優先的には、０．８〜２重量％の間、さらにより優先的には、０．８〜１．７重量％の間のキチン含有量を有する。
【００８１】
好ましくは、この粉末は、粉末の総乾燥重量に対して、５〜２０重量％の間、好ましくは７〜１７重量％の間の脂質を含む。
【００８２】
より具体的には、この粉末は、粉末の総乾燥重量に対して、１〜１０重量％の間、好ましくは２〜６重量％の間の灰分を含む。
【００８３】
有利には、この昆虫粉末のタンパク質は、粗タンパク質の総重量に対して、８５重量％以上の消化率を有する。
【００８４】
好ましくは、消化率は、８８％以上、より優先的には、９２％以上である。
【００８５】
この昆虫粉末は、以下：
-  昆虫の殺傷工程、
-  昆虫の軟部からクチクラを分離する工程、
-  昆虫の軟部を固体画分、脂肪画分、及び水性画分に分離する工程、
-  乾燥固体画分を得るために固体画分を乾燥させる工程、及び
-  昆虫粉末を得るために乾燥固体画分を粉砕する工程、
を含む方法によって調製され得る。
【００８６】
昆虫は、以下の実施例１に記載されるように、熱傷又は湯通しすることによって殺傷され得る。
【００８７】
クチクラは、昆虫の表皮によって分泌される外層（又は外骨格）である。それは一般的に、表角皮、外角皮及び内角皮の３つの層で形成される。
【００８８】
「軟部」とは、昆虫の肉（特に筋肉及び内臓を含む）及び搾汁（特に、体液、水及び血リンパを含む）を意味する。特に、軟部は、昆虫の搾汁から構成されない。
【００８９】
昆虫の軟部由来のクチクラを分離することは、フィルタープレス、又はベルトセパレータを使用して実施され得る。
【００９０】
「ベルトセパレータ」とは、圧搾ベルト（ベルトプレスフィルタ）及び有孔ドラムを含む装置を意味する。
【００９１】
有利には、本出願において、昆虫粉末は、本発明の実施形態にかかわらず、鞘翅目に属する昆虫種、好ましくは、チャイロコメノゴミムシダマシ（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ）種から得られる。昆虫粉末は、甲虫粉末、より具体的には、チャイロコメノゴミムシダマシの粉末である。
【００９２】
従って、本発明は、以下：
-  薬剤として、
-  特に、二枚貝類及び十脚類におけるビブリオ症の治療において、
-  エビの腸炎の治療において、及び／又は
-  エビにおけるエビ早期死亡症候群／急性肝膵臓壊死症候群の治療において、
の使用のため、より詳細には甲虫粉末、特にチャイロコメノゴミムシダマシの粉末に関する。
【００９３】
本発明はまた、少なくとも５重量％の昆虫粉末を含む、軟体動物及び／又は甲殻類のための栄養摂取レジーム（ｒｅｇｉｍｅ）に関する。
【００９４】
「栄養摂取レジーム」とは、軟体動物及び／又は甲殻類によって摂取されることを意図した、与えられた割合の一連の栄養成分（又は構成成分）を意味する。
【００９５】
本発明によると、昆虫粉末は、軟体動物及び甲殻類の栄養摂取レジームで一般に投与される魚粉の代わりとして使用され得る。それは、部分的又は全体的に魚粉に置き換えられ得る。優先的に、昆虫粉末は、魚粉の５０重量％以上、さらにより優先的には７５重量％以上で魚粉に置き換えられる。
【００９６】
魚粉を昆虫粉末で代用することは、有利には、特に、昆虫粉末のタンパク質及び脂質の高い消化性のために、軟体動物及び／又は甲殻類の免疫系を高めることを可能にする。さらに、これは、特に白エビにおいて、肝細胞のサイズを増大させながら、腸絨毛の密度並びに長さを増大させる。従って、この昆虫粉末による魚粉の置換は、非常に高価でなく、タンパク質及び脂質に富む代替物を提示し、エビのビブリオ症等の特定の病気を予防及び／又は治療することを可能にする。
【００９７】
軟体動物又は甲殻類に投与される栄養摂取レジームは、有利には、少なくとも１０重量％の昆虫粉末、優先的には、少なくとも１５重量％の昆虫粉末、さらにより優先的には少なくとも２５重量％の昆虫粉末を含む。
【００９８】
本発明の有利な実施形態によると、軟体動物又は甲殻類に投与される栄養摂取レジームは、２０重量％の昆虫粉末を含む。
【００９９】
優先的には、昆虫粉末は、一般的に、軟体動物及び甲殻類に投与される魚粉を完全に置き換える。従って、軟体動物及び甲殻類に投与される栄養摂取レジームは、有利には、２５重量％の昆虫粉末を含む。
【０１００】
このレジームは、２０１１年にＮａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ（ＮＲＣ）が発行したマニュアル「魚及びエビの栄養要求量」に定義されている、エビ、そのレジームの他の構成要素、及びそれらの比率に特に適している。
【０１０１】
有利には、本発明による栄養摂取レジームは、少なくとも７１重量％のタンパク質を含み、及び０・１〜２重量％の間のキチンを含む昆虫粉末を含み、ここで、％は、昆虫粉末の総乾燥重量に対してのものである。
【０１０２】
好ましくは、昆虫粉末は、甲虫粉末、より優先的には、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの粉末である。
【０１０３】
本発明はまた、少なくとも６７重量％のタンパク質を含み、及び少なくとも０．１重量％のキチン（ここで、％は、昆虫粉末の総重量に対するものである）を含む昆虫粉末のヒト又は動物における栄養補助食品としての使用に関する。
【０１０４】
ヒト又は動物の栄養摂取において栄養補助食品として使用される昆虫粉末は、少なくとも６７重量％のタンパク質及び少なくとも５重量％のキチンを含むことができ、ここで、％は、昆虫粉末の総重量に対するものである。そしてこれは、上記の第１の実施形態の昆虫粉末であり、全ての有利な、特定の、及び好ましい特徴、並びにそれを得るための方法を含む。
【０１０５】
あるいは、ヒト又は動物の栄養摂取において栄養補助食品として使用される昆虫粉末は、少なくとも７１重量％のタンパク質を含み、０．１重量％〜２重量％の間のキチンを含むことができ、ここで、％は、昆虫粉末の総重量に対するものである。そしてこれは、上記の第２の実施形態の昆虫粉末であり、全ての有利な、特定の、及び好ましい特徴、並びにそれを得るための方法を含む。
【０１０６】
有利には、昆虫粉末は、甲虫粉末、より好ましくは、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの粉末である。
【０１０７】
有利には、本発明は、軟体動物及び／又は甲殻類の栄養摂取における栄養補助食品としての昆虫粉末、特に上記のものの使用に関する。
【０１０８】
最終的に、本発明は、上記のような昆虫粉末を含む栄養補助食品に関する。
【０１０９】
有利には、昆虫粉末は、エビ、特に養殖エビの栄養摂取における栄養補助食品として使用される。
【０１１０】
本発明の特徴及び利点は、例示として挙げられている以下の実施例と共に以下の図面を参照することで明らかになるだろう。
図１は、魚粉の代わりに昆虫粉末を含むか含まないかのいずれかで、異なる栄養摂取レジームに従って給餌された白エビの最終重量を示す図である。
図２は、魚粉の代わりに昆虫粉末を含むか含まないかのいずれかで、異なる栄養摂取レジームに従って給餌された白エビの重量増加を示す図である。
図３は、ビブリオ・パラヘモリティカスに感染し、魚粉の代わりに昆虫粉末を含むか含まないかのいずれかで、異なる栄養摂取レジームに従って給餌された白エビにおける、病原体の細菌減少の関数としてのフェノールオキシダーゼの活性を示す図である。
図４は、魚粉の代わりに昆虫粉末を含むか含まないかのいずれかで、用いられた栄養摂取レジームの関数としてのビブリオ・パラヘモリティカスに感染したエビの生存率を示す図である。
【実施例】
【０１１１】
実施例１：昆虫粉末の調製方法
本発明による組成物は、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの幼虫から調製される。幼虫を受領した後、幼虫は殺傷される前に大きな変化なしに、それらは飼育タンク中で０〜１５日間４℃で貯蔵され得る。使用される幼虫の齢に対する体重は様々であり、その結果、それらの組成は、以下の表１に示されるように変化し得る。
【０１１２】
【表１】
2020505453.tif 000002
【０１１３】
工程１：昆虫の湯通し（Ｂｌａｎｈｉｎｇ）工程
生きている幼虫（＋４℃〜＋２５℃）は、有孔コンベアベルト（１ｍｍ）上で２〜１０ｃｍの間の厚さの層にして湯通しチャンバへと運ばれる。従って、昆虫は、９８℃の水蒸気（水蒸気ノズル又はベッド）又は１００℃の水（水＋水蒸気）で湯通しされる。湯通しチャンバ内の滞留時間は、１〜１５分の間、理想的には５分である。
【０１１４】
湯通しチャンバの後、幼虫の温度は、７５℃〜９８℃の間である。
【０１１５】
工程２：プレス工程
湯通しされると、幼虫は、連続的な一軸プレス供給ホッパーに運ばれる。プレスに入る間、幼虫は、脱油収率を上げるために７０℃を超える温度で維持される。脱油の仕組みは、中心軸上に配置されたねじとリングの配置によって円筒型保持器の内側の原料を加圧することである。保持器の内側には、セクションごとに配置されたバーが並んでおり、作業領域に応じて厚さの異なるスペースで隔たれている。このように配置された隙間は、油性画分の流れを可能にし、いわゆる「乾」物、すなわち「プレスケーキ」と呼ばれるタンパク質画分の通過を制限するため、加圧に関与する。
【０１１６】
得られたプレス収率は、４８〜５５％の間である。
Yケーキ＝（質量ケーキ／質量搾汁＋質量ケーキ）
【０１１７】
得られたプレスケーキは、３５〜４０％の乾物、６７〜７５％のタンパク質及び１３〜１７％の脂肪を含み、ここで、％は、プレスケーキの総乾燥重量に対してのものである。
【０１１８】
工程３：乾燥工程
次いで、プレスケーキをトレイ上に薄い層（約２ｃｍ）で配置し、９２％を超える乾物含量を有するプレスケーキを得るために、換気／攪拌空気中で９０℃５時間乾燥させる。
【０１１９】
この工程により、殺傷後に発生したコンタミネーションを防ぐことが出来る。
【０１２０】
乾燥後のＷａ（水分活性）は、０．３５である。微生物学的結果は、サルモネラ属菌（方法：ＩＲＩＳサルモネラＢＫＲ２３／０７−１０／１１）及び１０ＣＦＵ／ｇ未満の腸内細菌値（方法：ＮＦ ＩＳＯ２１２８−２、２００４年１２月、３０℃及び３７℃）の欠如を示す。
【０１２１】
工程４：粉砕工程
主にタンパク質を含む乾燥プレスケーキは、最後に連続ハンマーミル（６つの可逆可動部-厚さ８ｍｍ）を用いて粉砕される。粉砕機は、流量制御フラップを備えたホッパーによって供給を受ける（１８０ｋｇ／ｈ）。出力粒度分布を制御するために使用される穿孔グリルは、０．８ｍｍである。モーターの回転速度は、３０００ｒｐｍ（電気動力、吸収電力４ｋＷ（５．５Ｖ））である。
【０１２２】
実施例２：実施例１で得られた昆虫粉末の特徴付け
実施例１で調製された昆虫粉末が特徴付けられた。
【０１２３】
１．  分析
１．１  水分含有量の測定
水分含有量は、２７−０１−２００９のＥＣレギュレーション１５２／２００９から得られる方法に従って決定される。
【０１２４】
１．２  粗タンパク質の質量の測定
粗タンパク質は、デュマ法と呼ばれる方法に従って決定され、標準ＮＦ ＥＮ ＩＳＯ１６６３４−１（２００８）に相当する。
【０１２５】
１．３  キチン量の測定
昆虫粉末からの食物繊維は、本質的にキチンから構成されるため、後に、ＡＤＡＣ９９１．４３の方法に従って測定された。このようにして得られた値は、結果としてわずかに過大に評価される。
【０１２６】
１．４  脂肪量の測定
脂肪は、ＥＣレギュレーション１５２／２００９の方法に従って測定された。
【０１２７】
１．５  灰分量の測定
粗灰分は、２７−０１−２００９のＥＣレギュレーション１５２／２００９の方法に従って測定された。
【０１２８】
１．６  リン量の測定
リンは、内部較正を伴うＩＣＰ（誘導結合プラズマ）によって測定される。
【０１２９】
１．７  エネルギーの測定
エネルギー値は、ＥＵレギュレーション１１６９／２０１の係数で得られる。
【０１３０】
１．８  アミノ酸及び脂肪酸の量の測定
この測定は、それぞれのアミノ酸及び脂肪酸の加水分解及び誘導体化の後にガスクロマトグラフィーによって行われた。
【０１３１】
１．９  ペプシン消化率
ペプシン消化率は、指令７２／１９９／ＥＣに記載されている方法によって測定される。
【０１３２】
２．  結果
昆虫粉末は、以下の表２に詳述される。
【表２】
2020505453.tif 000003
【０１３３】
実施例３：昆虫粉末を調製するための代替方法
２００ｇのＴ．ｍｏｌｉｔｏｒ幼虫をビーカーに入れ、予め沸騰した２００ｍＬの水を含む、１００℃の水浴に設置した。５分後、ビーカーを水浴から取り出し、幼虫は、排液され、次いで２００ｍＬの容量の水と混合される。このようにして得られた液体は、二軸スクリュープレスに通される。このようにして得られたプレスケーキは、オーブン中７０℃で２４時間乾燥され、次いで２５０μｍに粉砕される。こうして昆虫粉末が得られる。
【０１３４】
実施例４：実施例１で得られた昆虫粉末の白エビに対する、特に、病原性細菌ビブリオ・パラヘモリティカスに対するそれらの体性に対する効果
３つの実験は、エビにおける食欲を評価するため（実験１）、エビにおける昆虫粉末のタンパク質の消化性、脂質及びエネルギーを評価するため（実験２）及び白エビの成長及び免疫に対する昆虫粉末の有効性を評価するため（実験３）に行われた。
【０１３５】
１．  実施した実験の材料及び方法
これらすべての実験に使用された魚粉は、５６％（前記魚粉の総重量に対してを表す）の粗タンパク質含有量を含む、タイ産の魚粉である。
【０１３６】
同様に、使用された昆虫粉末は、これら全ての実験に対して同一であり、実施例１で得られた昆虫粉末に相当する。
【０１３７】
統計
これらの実験は、完全にランダムな方法（ＣＭＣＡ）で設計された。全てのデータは、ＡＮＯＶＡ（分散分析）によって分析された。Ｄｕｎｃａｎの複数範囲検定を使用して、異なる栄養摂取レジームの平均値の違いを調べた。アルファベット表記を使用して、差異をアルファ０．０５の有意水準でマークした。実験２及び３に関する全ての研究は、タイのバンコクのカセサート大学水産学部水産養殖部の水生動物性食品及び栄養研究室で行われた。
【０１３８】
実験１：  １５％の魚粉で構成された栄養摂取レジームに対する白エビの昆虫粉末の食欲の試験
ａ．実験の種々の栄養摂取レジーム
白エビに対する昆虫粉末の誘引力が、それぞれ４反復で以下の５つのレジームを使用して完全にランダムな方法で評価された。
-  レジーム１（Ｒ１）：コントロール３０％魚粉（以下、ＦＭと称する）；
-  レジーム２（Ｒ２）：ネガティブコントロール１５％ＦＭ； ０％昆虫粉末（以下、ＩＮＳＭと称する）；
-  レジーム３（Ｒ３）：ネガティブコントロール１０％ＦＭ； ５％ＩＮＳＭ；
-  レジーム４（Ｒ４）：ネガティブコントロール５％ＦＭ； １０％ＩＮＳＭ；
-  レジーム５（Ｒ５）：ネガティブコントロール０％ＦＭ； １５％ＩＮＳＭ；
【０１３９】
食欲を評価するために、それぞれのレジームで４回の反復実験が行われた。
【０１４０】
ｂ．栄養摂取レジームの処方及び産生
当該レジームは、特に２０１１年に発行された国立研究評議会（ＮＣＲ）のリファレンスマニュアルに記載されている、白エビの既知の必須栄養に応じて有用である成分で処方された。
【０１４１】
実験的栄養摂取レジームで用いた昆虫粉末は、実施例１で得られたものである。
【０１４２】
白エビに対する昆虫粉末の誘引力は、以下に詳述する５つの栄養摂取レジームで評価され、その組成は以下の表３に示される。
【０１４３】
水分、タンパク質、脂質、繊維、灰分等の試験された飼料のおおよその組成は、国際標準法であるＡＯＡＣ（２０００）の記述に従って分析された。
【０１４４】
【表３】
2020505453.tif 000004
【０１４５】
ｃ．  白エビの栄養摂取プロトコル
白エビに、飼料をトレイに置き、１日当たり３回給餌することにより、１日当たりエビの平均体重の約５％（すなわち、飼料当たり、体重の１．５〜２％）量で３６％の粗タンパク質及び７％の粗脂質を含有するペレットを供給した。
【０１４６】
１０日間、１３．００時間の飼料に限っては、エビが最初に飼料を摂取するのに必要な時間、トレイ上に飼料を入れたのち１５分以内に飼料に達するエビの数、及び飼料当たりの飼料の摂取量を記録した。
【０１４７】
誘引力を評価するために、それぞれのレジームで４回の反復実験が行われた。
【０１４８】
摂取されていない飼料を、その堆積の１時間後にトレイから集め、そして−４０℃で凍結乾燥し、次いで総栄養摂取消費量を測定するために秤量した。
【０１４９】
１０日間の研究にわたって、飼料を摂取するために必要な時間、摂取される飼料の量、及び飼料を摂取するエビの数に焦点を当てて、食欲を測定するために、各レジームにおける各トレイの飼料摂取量が計算された。
【０１５０】
実験２：白エビにおける昆虫粉末のタンパク質、脂質及びエネルギーの消化率の研究
白エビの昆虫粉末のタンパク質、脂質及びエネルギーのインビボ消化率は、間接法により測定された。平均体重５〜８ｇの３００匹のエビが、２０個の水槽の各々にランダムに分布された。１０匹のエビで１０回繰り返し、それぞれに、２５％魚粉及び５％イカミール、６３．７％の小麦粉、グルテン及びソーヤ抽出物及びソーヤレシチン、マグロ油とソーヤ油の３％混合物、３．３％ビタミン類プレミックス及び消化率のマーカーとして１％酸化クロムで構成された基準栄養摂取レジームで給餌した。
【０１５１】
１％の酸化クロムをマーカーとして含む３０％昆虫粉末、６３．７％小麦粉、グルテン及びソーヤ抽出物及びソーヤレシチン、３％のマグロ油とソーヤ油の混合物、３．３％ビタミン類プレミックス及び消化率のマーカーとして１％酸化クロムを含む、他の栄養摂取レジームが、他の２００匹のエビ（１０匹のエビの２０回繰り返し）に与えられた。
【０１５２】
順応期間は１週間であった。この期間の後、エビは、１日当たり３回の過剰（４％）に割り当てられた栄養摂取レジームで給餌された。給餌の２時間後に水槽は洗浄され、次いで次の給餌の３０分前に糞便を１〜２週間回収した。
【０１５３】
分析のための十分な資料を得るために、各栄養摂取レジームに由来する飼料が、実験の終わりに一緒に回収された。それらは、６５℃の熱風オーブン中で乾燥された。飼料及び糞便のサンプルは、脂質及びタンパク質について分析された（ＡＯＡＣ、２０００）。酸化クロムが測定された（Ｓｃｏｔｔ、１９７８）。見かけの消化率係数（ＡＤＣ）は、Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．（１９８５）によって記載されるように計算された。
【０１５４】
・見かけの消化率（ＡＤＣ％）＝１００−（％単位での栄養摂取レジームの指標）／％単位の糞便中の指標
・見かけの栄養素消化率係数（ＡＤＣ Ｎｕ％）＝１００−（％単位での糞便中の％Ｘにおける栄養摂取レジームの指標）／％単位での栄養摂取レジームにおける％Ｘ栄養における糞便中の指標
【０１５５】
実験３：白エビ（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎａｍｍｅｉ）の成長能力及び免疫性に対する昆虫粉末の効果
ａ．試験の計画
実験は、４回の反復で５つのレジームを用いて完全にランダムな方法（ＣＭＣＡ）で計画された。
【０１５６】
種々の栄養摂取レジームが、以下の表４に示される。
【表４】
2020505453.tif 000005
【０１５７】
実験は、それぞれが１００リットルの容量を有する２０個のガラス水槽で、１５ｐｐｔ（１兆分の１）の７０リットルの塩水で行われた。幼若エビ（約３〜４ｇ）が、４０匹のエビ／ｍ2（水槽当たり１０匹）の密度で生育された。昆虫粉末は、魚油を徐々に減らしながら栄養物に混ぜられた。このようにして調製された飼料は、エビの平均体重の３〜５％の間の量で、１日当たり３回、エビに８週間与えられた。２〜３日毎に、飼料廃棄物は吸い上げられ、水の１５〜２０％が新しくなった。
【０１５８】
種々の栄養摂取レジームの成分が、１５０〜２５０ミクロンに粉砕され、一緒に混合され、次いでホバートチョッパー（Ｈｏｂａｒｔ ｃｈｏｐｐｅｒ）を通過させる前に２５％の水を加えた。
【０１５９】
次いで、得られたペレットは、熱風乾燥機で乾燥された。
【０１６０】
水分、タンパク質、脂質、繊維、灰分、エネルギー等の試験された栄養摂取レジームのおおよその組成は、ＡＯＡＣ（２０００）の記述に従って分析された。
【０１６１】
【表５】
2020505453.tif 000006
【０１６２】
ｂ．パラメーター
この実験に必要なデータは、試験条件下でのエビの成長能力に関するものである。以下を含む：
成長能力
・エビの実体重又は平均体重、体重の増加
・比増殖率（ＳＧＲ：｛（８週のＬｎ重量）−（０週のＬｎ重量）｝×１００）／（培養期間日数）
・飼料転換率（ＦＣＲ：飼料摂取量／エビ生産量）
・生存率（通常の検査法による）／死亡率
免疫状態
免疫状態は、血球総数、フェノールオキシダーゼ活性、血リンパタンパク質を数えることによって研究の終了時点で測定される。
腸繊毛及び肝膵臓の形態
研究の終了時点で腸繊毛及び肝膵臓の組織病理学的解析を行った。
病原体ビブリオ・パラヘモリティカスに対する耐性試験
病原性細菌に抵抗するエビの能力を測定するために、ビブリオ・パラヘモリティカスに対するバナメイエビの耐性を調べた。
【０１６３】
エビに実験的な栄養摂取レジームで８週間給餌した後、各レジーム上の３０匹のエビをサンプリングし、そして病原体、すなわち、ビブリオ・パラヘモリティカス、４．３／１０５ＣＦＵ（コロニー形成単位）／ｍｌ（４．６ｌｏｇＣＦＵ／ｍｌ）の筋肉内注射の対象とした。死亡率は、１０日間記録された。細菌減少能力が測定された。
【０１６４】
２．  実験１、２及び３の結果
実験１の結果
白エビ（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ）の栄養摂取レジームにおける昆虫粉末への食欲が、エビによる飼料の摂取の開始時間、１５分以内に飼料を摂取するエビの数、及び観察された飼料中に摂取された飼料の量に焦点を当てて、調べられた。昆虫粉末の誘引力の結果を、以下の表６に示した。観察された飼料中で摂取された飼料の量に関する誘引力、飼料の摂取の開始時間及び飼料を摂取するエビの数は、異なる栄養摂取レジームの間で有意に異ならない。３０％の魚粉（Ｒ１）を与えたエビの飼料当たりの１日の栄養物摂取量は、安定しているように見えるが、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ（Ｒ２−Ｒ５）の昆虫粉末の有無にかかわらず、１５％の魚粉を与えた群は、飼料当たりの飼料の摂取量に広い変動を示した。エビが飼料の摂取を開始するために必要な時間及び飼料を摂取するエビの数は、研究開始５日後も完全に安定している。これらの要素は、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの昆虫粉末に基づく飼料が、白エビの栄養摂取レジームに大きな魅力を示さなかったことを意味し得る。加えて、これはまた、白エビの栄養摂取レジームにおける魚粉の減少が、エビの栄養摂取に大きな影響を及ぼさないことを示唆する。
【０１６５】
【表６】
2020505453.tif 000007
【０１６６】
実験２の結果
白エビにおけるＴｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの昆虫粉末のインビボ消化率は、Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．（１９８５）に従った間接法によって測定された。見かけの栄養消化率が、以下の表７に示される。結果は、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの昆虫粉末が９６〜０７％の高いタンパク質及び脂質含有量及びエネルギー消化率を持つことを示した。
【表７】
2020505453.tif 000008
【０１６７】
実験３の結果
白エビの能力に対する昆虫粉末の有効性
白エビ（L. vannamei）の能力に対する昆虫粉末の影響を８週間調べた。エビの成長能力に関する結果は、表８並びに図１及び２に示される。結果は、第８週から、最終体重、体重増加、１日の平均体重増加及び比成長率の観点からのエビの成長能力が、コントロールに対して有意に大きいことを示した（ｐ＜０．０５）。昆虫粉末を給餌したエビは、コントロール（昆虫粉末を補給しないで、２５％の魚粉を有する前記コントロール）よりも優れた成長速度を示した。しかしながら、８週間にわたる栄養摂取量は、有意差がなかった（ｐ＞０．０５）。８週間にわたる生存率も有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。試料転換率は、コントロールレジームと比較してＴ２〜Ｔ５について８週目から有意に低かった（ｐ＜０．０５）。タンパク質効率比は、有意差がなかった（ｐ＞０．０５）。
【０１６８】
結果として、昆虫粉末は、栄養摂取レジームにおけるエビの成長速度を促進し、魚粉を１００％の置き換え量まで減ずることが出来る（コントロールレジームにおいて魚粉の含有率２５％）。その理由は、昆虫粉末のタンパク質及び脂質の高い消化率である。
【０１６９】
【表８】
2020505453.tif 000009
【０１７０】
・エビの免疫
通常条件下でのエビの免疫を8週間の実験にわたり調べた。表９に示した結果は、血球の総数、血リンパのタンパク質含有量及びフェノールオキシダーゼ活性に関して有意差がないことを示した（ｐ＞０．０５）。その結果、昆虫粉末は、エビの免疫性に望ましくない影響を与えることなく、最大１００％（魚粉２５％の栄養処方に含まれる割合）の魚粉に置き換えることが出来る。
【０１７１】
ビブリオ・パラヘモリティカスの注射後の耐性状態を６時間にわたり試験する。表９のエビの免疫は、魚粉の５０〜１００％（１０．３〜２０．６％の栄養摂取レジームにおける魚粉の含有率）を置き換える昆虫粉末を給餌したエビの群において高い（ｐ＜０．０５）フェノールオキシダーゼ活性を示す。より具体的には、図３において、細菌の存在とフェノールオキシダーゼの活性との間に負の相関が見られる。加えて、細菌の減少と栄養摂取レジームにおける昆虫粉末の包含量の増加との間に強い負の相関がある（ｐ＜０．０５）。
【０１７２】
【表９】
2020505453.tif 000010
【０１７３】
・エビの死亡率
ビブリオ・パラヘモリティカス（４．３×１０5ｕｆｃ／ｍｌ）に曝した後のエビの死亡率が、表１０、並びに図４に示される。魚粉が減らされ（５０〜１００％）、Ｔｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの昆虫粉末を補給した（魚粉を５０〜１００％置き換える）栄養摂取レジームで給餌したエビは、２５％の魚粉を含むコントロール栄養摂取レジーム（Ｔ１）及び魚粉が減らされ昆虫粉末が補給された栄養摂取レジームで給餌したエビの群よりも有意に低い死亡率（Ｐ＜０．０５）を示した。これは、昆虫粉末の高い脂質及びタンパク質消化率、並びにソーヤ油に対する脂質のより良い品質の可能性に起因し得、エビがより多くの栄養素を得ることを可能にする。
【０１７４】
【表１０】
2020505453.tif 000011
【０１７５】
・肝膵臓及びエビの腸繊毛の組織学
コントロール栄養摂取レジームで給餌したエビ及び昆虫粉末含むレジームで給餌したエビの肝膵臓組織学は、より大きなＢ細胞及びR細胞を示した。これらの細胞は、栄養素調節酵素を産生する。栄養状態Ｔ２〜Ｔ５において、Ｂ（分泌）細胞及びＲ（予備）細胞は、コントロールレジームＴ１よりも大きく拡大した。これは、より多くのの栄養素を蓄積した幹細胞が、昆虫粉末の高いタンパク質消化性又は脂質消化性の結果として、グリコーゲン及び／又は脂質の蓄積となり得ることを意味する。腸繊毛の密度と長さは、全ての栄養摂取レジームで高かった。
【０１７６】
３．結論
特にＴｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ由来の昆虫粉末は、魚粉及び／又は昆虫粉末を含む栄養摂取レジーム間で同等の栄養プロフィールを有する小型エビ（１〜５ｇ）中の成長性能、エビの健康並びに肝膵臓組織学及び小腸の組織学に悪影響を及ぼすことなく、魚粉の１００％までの交換が可能である。昆虫粉末が、エビの栄養管理において魚粉の２５〜１００％を、６週間を超える期間で入れ替えると、エビは、最良の成長率と高い消化率を示すことが出来る。魚粉の代用品としてＴｅｎｅｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒ由来の昆虫粉末を５０又は１００％で給餌したエビの群は、病原体ビブリオ・パラヘモリティカスに対してより良い耐性を示した。
【図１】
2020505453.tif 000012
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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2020505453.tif 000018
2020505453.tif 000019
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